(57)【要約】本開示は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供する。抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、例えばＢ７−Ｈ４を検出するのに有用である。免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いてＢ７−Ｈ４の検出することができる。本開示はまた、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を投与することによって、Ｂ７−Ｈ４の増加が検出されているがんを治療する方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１と、配列番号２６、２７または２８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３とを含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号６、７または８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号６、７または８のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）それぞれ配列番号６及び９；
（ｂ）それぞれ配列番号６及び１０；
（ｃ）それぞれ配列番号６及び１１；
（ｄ）それぞれ配列番号７及び９；
（ｅ）それぞれ配列番号７及び１０；
（ｆ）それぞれ配列番号７及び１１；
（ｇ）それぞれ配列番号８及び９；
（ｈ）それぞれ配列番号８及び１０；または
（ｉ）それぞれ配列番号８及び１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合断片がさらに重鎖定常領域を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記重鎖定常領域がマウスＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａの重鎖定常領域である、請求項７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体または抗原結合断片がさらに軽鎖定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記軽鎖定常領域がマウスＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１６、１７、１８、８９、９０または９１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１９、３０または３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜６または１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体または抗原結合断片が、
（ａ）それぞれ配列番号１６及び１９；
（ｂ）それぞれ配列番号１６及び３０；
（ｃ）それぞれ配列番号１６及び３１；
（ｄ）それぞれ配列番号１７及び１９；
（ｅ）それぞれ配列番号１７及び３０；
（ｆ）それぞれ配列番号１７及び３１；
（ｇ）それぞれ配列番号１８及び１９；
（ｈ）それぞれ配列番号１８及び３０；
（ｉ）それぞれ配列番号１８及び３１；
（ｊ）それぞれ配列番号８９及び１９；
（ｋ）それぞれ配列番号９０及び１９；または
（ｌ）それぞれ配列番号９１及び１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｊ５１２、Ｊ５１３、Ｊ５１４、Ｊ５１５、Ｊ５１６、Ｊ５１７、Ｊ５１８、Ｊ５１９、Ｊ５２０、Ｊ５２１、及びＪ５２２から成る群から選択される抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記ＣＤＲがＫａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と同じヒトＢ７−Ｈ４のエピトープに特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片のヒトＢ７−Ｈ４への結合を  競合して阻害する、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片がマウスの抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
完全長抗体である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
抗原結合断片である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、ダイアボディ、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、請求項２０に記載の抗原結合断片。
【請求項２２】
さらに、検出可能な標識を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記核酸分子が配列番号６、７もしくは８のＶＨをコードする、または配列番号１６、１７もしくは１８の重鎖をコードする請求項２３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２５】
前記核酸分子が配列番号１２、１３、１４、９３、９４または９５の配列を含む、請求項２４に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記核酸分子が配列番号９、１０もしくは１１のＶＬをコードする、または配列番号１９、３０もしくは３１の軽鎖をコードする、請求項２６に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記核酸分子が配列番号１５、９６または９７の配列を含む、請求項２７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖と、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖とをコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３０】
請求項２３〜２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。
【請求項３１】
請求項２３〜２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項３０に記載のベクター、または請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクターと請求項２６〜２８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３２】
ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ細胞である、請求項３１に記載の宿主細胞。
【請求項３３】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を産生させる方法であって、前記核酸分子が発現され、前記抗体またはその抗原結合断片が産生されるように請求項３１または３２に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項３４】
ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、且つ請求項２３〜２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされる、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３５】
試料にてＢ７−Ｈ４を検出する方法であって、前記試料を請求項１〜２２または３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、任意で、前記方法はさらに、前記抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４に対する結合を検出することを含む、前記方法。
【請求項３６】
前記試料が対象におけるがんから得られる請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
Ｂ７−Ｈ４が検出された後、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
対象にてＢ７−Ｈ４を発現するがんを治療する方法であって、前記方法が治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することを含み、その際、Ｂ７−Ｈ４の発現が、前記対象から得られた試料にて請求項１〜２１または３３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片を用いて検出された、前記方法。
【請求項３９】
前記がんから得られた前記試料にて前記Ｂ７−Ｈ４を検出することをさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記検出されたＢ７−Ｈ４が細胞膜Ｂ７−Ｈ４である、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記検出されたＢ７−Ｈ４が細胞質Ｂ７−Ｈ４である、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
Ｂ７−Ｈ４が細胞全体において検出される、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記Ｂ７−Ｈ４が循環腫瘍細胞で検出される、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記試料が、対象に由来する固形組織、生検、腹水、血漿、血清、リンパ液、または腫瘍である、請求項３５〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記がんが、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌及び膀胱癌から成る群から選択される、請求項３６〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記乳癌がトリプルネガティブ乳癌であり、または前記非小細胞肺癌が扁平上皮癌である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記検出方法が、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ、または免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用する、請求項３５〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記検出方法がＩＨＣを使用し、請求項１〜２１または３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片の濃度が約１〜約５０μｇ／ｍＬである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体またはその抗原結合断片の濃度が約１〜約２０μｇ／ｍＬである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体またはその抗原結合断片の濃度が約１０μｇ／ｍＬである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記検出方法がＩＨＣを使用し、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）が検出に使用される、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象がヒトである、請求項３６〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
請求項１〜２１または３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、（ａ）検出試薬、（ｂ）Ｂ７−Ｈ４抗原、（ｃ）治療用抗Ｂ７−Ｈ４抗体、または（ｄ）（ｃ）（ａ）〜（ｃ）の組み合わせのいずれかとを含む、キット。
【請求項５４】
前記治療用の抗体または抗原結合断片が、２０５０２または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、請求項３７〜５３のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項５５】
前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである請求項５４に記載の方法またはキット。
【請求項５６】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ配列番号３２〜３７のアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号５８〜６３のアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載の方法またはキット。
【請求項５７】
前記治療用の抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号５４または配列番号６４のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項５８】
前記治療用の抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５５または配列番号６５のアミノ酸配列を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項５９】
前記治療用の抗体または抗原結合断片が、（ｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、または（ｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項６０】
前記治療用の抗体またはその抗原結合断片が、配列番号５６または配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項６１】
前記治療用の抗体またはその抗原結合断片が、配列番号５７または配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【請求項６２】
前記治療用の抗体またはその抗原結合断片が（ｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、または（ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法またはキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体、及び、例えば、Ｂ７−Ｈ４を検出するためにそのような抗体を作製する及び使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７−Ｓ１、及びＶＴＣＮ１としても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１を含む他のＢ７ファミリーメンバーと相同性を共有する免疫調節分子である。それは、ＩｇＶとＩｇＣ双方の細胞外ドメインで構成されるＩ型の膜貫通タンパク質である。健康な組織におけるＢ７−Ｈ４の発現はタンパク質レベルでは比較的限定されている一方で、Ｂ７−Ｈ４は乳房、卵巣、子宮内膜の婦人科がんのようないくつかの固形腫瘍にて発現する。腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現は予後不良と相関する傾向がある。Ｂ７−Ｈ４の受容体は不明であるが、Ｔ細胞に発現していると考えられている。Ｂ７−Ｈ４はＴ細胞活性を直接阻害すると考えられている。
【０００３】
Ｂ７−Ｈ４の発現と機能を考えると、Ｂ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体と、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いてがん試料中のＢ７−Ｈ４を検出することを含む、Ｂ７−Ｈ４を検出するためのこれらの抗体の使用とが必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体、及び、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いてがん試料中のＢ７−Ｈ４を検出することを含む、Ｂ７−Ｈ４を検出するためのこれら抗体の使用である。
【０００５】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１と配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２と配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３と配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１と配列番号２６、２７または２８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２と配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【０００６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６、７または８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０００７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であり、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号６、７または８のアミノ酸配列を含む。
【０００８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であり、抗体は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含む。
【０００９】
特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、（ａ）それぞれ配列番号６及び９；（ｂ）それぞれ配列番号６及び１０；（ｃ）それぞれ配列番号６及び１１；（ｄ）それぞれ配列番号７及び９；（ｅ）それぞれ配列番号７及び１０；（ｆ）それぞれ配列番号７及び１１；（ｇ）それぞれ配列番号８及び９；（ｈ）それぞれ配列番号８及び１０；（ｉ）それぞれ配列番号８及び１１；（ｊ）それぞれ配列番号８９及び１９；（ｋ）それぞれ配列番号９０及び１９；またはそれぞれ配列番号９１及び１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００１０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はさらに重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域はマウスＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａの重鎖定常領域である。
【００１１】
特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片はさらに軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、軽鎖定常領域はマウスＩｇＧκ軽鎖定常領域である。
【００１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、１８、８９、９０または９１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、３０または３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００１３】
特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、（ａ）それぞれ配列番号１６及び１９；（ｂ）それぞれ配列番号１６及び３０；（ｃ）それぞれ配列番号１６及び３１；（ｄ）それぞれ配列番号１７及び１９；（ｅ）それぞれ配列番号１７及び３０；（ｆ）それぞれ配列番号１７及び３１；（ｇ）それぞれ配列番号１８及び１９；（ｈ）それぞれ配列番号１８及び３０；または（ｉ）それぞれ配列番号１８及び３１のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であり、抗体またはその抗原結合断片は、Ｊ５１２、Ｊ５１３、Ｊ５１４、Ｊ５１５、Ｊ５１６、Ｊ５１７、Ｊ５１８、Ｊ５１９、Ｊ５２０、Ｊ５２１、及びＪ５２２から成る群から選択される抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである。
【００１５】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に提供されている抗体またはその抗原結合断片と同じヒトＢ７−Ｈ４のエピトープに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００１６】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている別の抗体またはその抗原結合断片の抗体またはその抗原結合断片のヒトＢ７−Ｈ４への結合を競合して阻害する単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００１７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片はマウスの抗体またはその抗原結合性断片である。
【００１８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は完全長抗体である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は抗原結合断片である。特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、ダイアボディ、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【００１９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はさらに検出可能な標識を含む。
【００２０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、核酸分子は配列番号６、７もしくは８のＶＨまたは配列番号１６、１７もしくは１８の重鎖をコードする
【００２１】
特定の実施形態では、核酸分子は配列番号１２、１３、１４、９３、９４、または９５の配列を含む。
【００２２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、核酸分子は配列番号９、１０もしくは１１のＶＬまたは配列番号１９、３０もしくは３１の軽鎖をコードする。特定の実施形態では、核酸分子は配列番号１５、９６または９７の配列を含む。
【００２３】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に提供されている抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域または重鎖及び本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む単離されたポリヌクレオチドである。
【００２４】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されているポリヌクレオチドを含む単離されたベクターである。
【００２５】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されているポリヌクレオチド、本明細書で提供されているベクター、または本明細書で提供されている軽鎖可変領域もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び本明細書で提供されている重鎖可変領域もしくは重鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む宿主細胞（例えば、単離された宿主細胞）である。特定の実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞またはＨＥＫ細胞である。
【００２６】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、核酸分子が発現され、抗体またはその抗原結合断片が産生されるように本明細書で提供されている宿主細胞を培養することを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法である。
【００２７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、本明細書で提供されているポリヌクレオチドによってコードされる単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００２８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片と試料を接触させることを含む、試料にてＢ７−Ｈ４を検出する方法である。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と試料を接触させ、抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４への結合を検出することを含む、試料にてＢ７−Ｈ４を検出する方法である。特定の実施形態では、試料は、対象におけるがんから得られる。特定の実施形態では、方法はさらに、Ｂ７−Ｈ４が検出された後に、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含む。
【００２９】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象にてＢ７−Ｈ４を発現するがんを治療する方法であり、該方法は、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含み、その際、Ｂ７−Ｈ４は、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片を用いて、がんから得られた試料において検出された。
【００３０】
特定の実施形態では、方法はさらに、がんから得られた試料にてＢ７−Ｈ４を検出することを含む。
【００３１】
特定の実施形態では、検出されたＢ７−Ｈ４は細胞膜Ｂ７−Ｈ４である。特定の実施形態では、検出されたＢ７−Ｈ４は細胞質Ｂ７−Ｈ４である。特定の実施形態では、検出されたＢ７−Ｈ４は全細胞Ｂ７−Ｈ４である。
【００３２】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４は循環腫瘍細胞で検出される。
【００３３】
特定の実施形態では、試料は、対象に由来する固形組織、生検、腹水、吸引液、流体抽出物、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部切片、呼吸器、腸管、または尿生殖路、涙液、唾液、乳、腫瘍、または臓器である。
【００３４】
特定の実施形態では、がんは、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、及び膀胱癌から成る群から選択される。特定の実施形態では、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である、または非小細胞肺癌は扁平上皮癌である。
【００３５】
特定の実施形態では、検出方法は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ、または免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用する。特定の実施形態では、検出方法はＩＨＣを使用し、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の濃度は約１〜約５０μｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の濃度は、約１〜約２０μｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片の濃度は約１０μｇ／ｍＬである。
【００３６】
特定の実施形態では、対象はヒトである。
【００３７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片と（ａ）検出試薬、（ｂ）Ｂ７−Ｈ４抗原、（ｃ）治療用抗Ｂ７−Ｈ４抗体、または（ｄ）それらの組み合わせとを含むキットである。
【００３８】
本明細書で提供されている方法またはキットの特定の実施形態では、治療用の抗体または抗原結合断片は、２０５０２または２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである。
【００３９】
特定の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３２〜３７のアミノ酸配列またはそれぞれ配列番号５８〜６３のアミノ酸配列を含む特定の実施形態では、治療用の抗体または抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、重鎖可変領域は配列番号５４または配列番号６４のアミノ配列を含む。特定の実施形態では、治療用の抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、軽鎖可変領域は配列番号５５または配列番号６５のアミノ配列を含む。特定の実施形態では、治療用の抗体または抗原結合断片は、（ｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、または、（ｉｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、治療用の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５６または配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、治療用の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５７または配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、治療用の抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、または（ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】抗Ｂ７−Ｈ４抗体Ａ５７．１、ＡＥＴ＿ＡＢ＿Ｊ５１６及びＡＥＴ＿ＡＢ＿Ｊ５１２を用いて生成されたＩＨＣ染色画像を示す図である。（実施例４を参照）
【図２】ＩＨＣ染色のコンピューター画像解析（Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ）を示す図である。（実施例４を参照）
【図３】異なる強度レベルの陽性細胞の区分けを示す図である。（実施例４を参照）
【図４】抗Ｂ７−Ｈ４抗体Ａ５７．１、ＡＥＴ＿ＡＢ＿Ｊ５１６、及びＡＥＴ＿ＡＢ＿Ｊ５１２を用いて得られた各染色強度レベルに関連する細胞の数と割合を示す図である（実施例４を参照）
【図５Ａ】Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の細胞全体、膜、及び細胞質におけるＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）の比較を示す図である。Ａ５７．１抗体を使用したＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）を示す図である。
【図５Ｂ】Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の細胞全体、膜、及び細胞質におけるＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）の比較を示す図である。Ｊ５１２抗体を使用したＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）を示す図である。
【図５Ｃ】Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の細胞全体、膜、及び細胞質におけるＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）の比較を示す図である。Ｊ５１６抗体を使用したＢ７−Ｈ４発現（ＤＡＢ強度）を示す図である。（実施例４を参照）
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、例えば、がん試料に対する免疫組織化学を用いてＢ７−Ｈ４を検出するのに使用することができる。
【００４２】
提供されるのはまた、そのような抗体及びその抗原結合断片をコードする相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）のような単離された核酸（ポリヌクレオチド）である。さらに提供されるのは、そのような抗体及びその抗原結合断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）である。提供されるのはまた、そのような抗体及びその抗原結合断片を作製する方法である。他の態様では、本明細書で提供されるのは、例えば、がん試料にてＢ７−Ｈ４を検出する方法である。関連する組成物（例えば、検出組成物）、及びキットも提供される。
【００４３】
用語
本明細書で使用されるとき、「Ｂ７−Ｈ４」という用語は、ネイティブのＢ７−Ｈ４ポリペプチド及びＢ７−Ｈ４ポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４」は完全長、未処理のＢ７−Ｈ４ポリペプチド、と同様に細胞内の処理から生じるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用されるとき、「ヒトＢ７−Ｈ４」という用語は、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４ポリヌクレオチド」、「Ｂ７−Ｈ４ヌクレオチド」、または「Ｂ７−Ｈ４核酸」はＢ７−Ｈ４をコードするポリヌクレオチドを指す。
【００４４】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせのような標的を認識しこれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、インタクトのポリクローナル抗体、インタクトのモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び当該抗体が所望の生物活性を示す限り任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの独自性に基づいて、免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元構造を有する。抗体は裸であることができ、毒素、放射性同位元素等のような他の分子に結合することができる。
【００４５】
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に特異的に結合するインタクトな抗体の一部を指す。抗原結合断片は、インタクトな抗体の抗原認識部位（例えば、抗原を特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有することができる。抗体の抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトのような任意の動物種に由来することができ、または人工的に作製することができる。
【００４６】
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」、「Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」という用語は、抗体がＢ７−Ｈ４を標的とすることにおいて診断薬及び／または治療薬として有用であるように、十分な親和性でＢ７−Ｈ４を特異的に結合することができる抗体を指す。本明細書で使用されるとき、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合断片の文脈において類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープの間にある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種（例えば、カニクイザル、マウス及び／またはラットのＢ７−Ｈ４）及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＢ７−Ｈ４タンパク質にも結合してもよく、ただし関連のない非Ｂ７−Ｈ４タンパク質（例えば、ＰＤ−Ｌ１のような他のＢ７タンパク質ファミリーメンバー）への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合の程度は、例えば放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）により測定されたときＢ７−Ｈ４に対する抗体の結合の約１０％未満である。
【００４７】
「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片とは、単一の抗原決定基、すなわち、エピトープの抗原特異性の高い認識及び結合に関与する均質な抗体または抗原結合断片集団を指す。これは、通常は異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、インタクトかつ完全長のモノクローナル抗体同様、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異型、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、及びトランスジェニック動物を含むが、これらに限定されないあらゆる方法で作製されるそのような抗体及びその抗原結合断片を指す。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は相互交換可能に使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は通常、抗体の一部、一般に軽鎖または重鎖の一部を指し、通常、成熟重鎖のアミノ末端約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸及び成熟した軽鎖の約９０〜１１５アミノ酸を指し、それらは抗体間で配列が異なり、特定の抗体の特定の抗原に対する結合と特異性に使用される。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中している一方で、可変ドメインにおけるさらに高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定のメカニズムまたは理論に束縛されることを望まないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性に主として関与すると考えられている。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域はげっ歯類またはマウス可変領域である。
【００４９】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００５０】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００５１】
「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域におけるアミノ酸残基の番号付けの方式を指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付け方式に従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ，（１９７１），Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，ＥＡ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体重鎖分子内のＣＤＲは通常、３５に続く１または２の追加のアミノ酸を任意で含めることができる（Ｋａｂａｔの番号付けスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）アミノ酸の３１〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の９５〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは通常、アミノ酸の２４〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の８９〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
【００５２】
Ｃｏｔｈｉａは代わりに構造ループの位置を参照する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。
【表Ａ】
2021516051.tif 000002
【００５３】
本明細書で使用されるとき、「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は相互交換可能であり、当該技術分野でのそれらの共通の意味を有する。定常領域は、抗体の一部であり、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような、さまざまなエフェクター機能を発揮できる軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べてさらに保存されたアミノ酸配列を有する。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分である定常領域またはその一部を含む。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、任意の異なる種類、例えば、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指すことができ、それらは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のようなＩｇＧのサブクラスを含む、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスの抗体を生じる。重鎖アミノ酸配列は当該技術分野で周知である。具体的な実施形態では、重鎖はヒト重鎖である。具体的な実施形態では、重鎖はげっ歯類またはマウスの重鎖である。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）のような異なる種類を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野で周知である。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。具体的な実施形態では、軽鎖はげっ歯類またはマウスの軽鎖である。
【００５６】
「キメラ」抗体という用語またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。通常、軽鎖及び重鎖双方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び機能を持つ哺乳類の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応する一方で、その定常領域は、別の種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断の配列に対して相同であり、その種での免疫反応の誘発を回避する。
【００５７】
「ヒト化」抗体またはその抗原結合断片という用語は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含む特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらの断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片を指す。通常、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンであって、その相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラフト」）（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７，（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６，（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）は、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種由来の抗体または断片における対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合断片を、Ｆｖフレームワーク領域にて及び／または非ヒトＣＤＲ残基内にてさらなる残基の置換によってさらに修飾し、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または機能を改良する及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメインを含むのに対して、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、通常はヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むことができる。ヒト化抗体を生成するのに使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９−９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は表面再形成抗体である。
【００５８】
「ヒト」抗体という用語またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片を意味し、そのような抗体または抗原結合断片は当該技術分野で既知の任意の技法を用いて作製される。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義には、インタクトなまたは完全長の抗体及びその断片が含まれる。
【００５９】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の単一結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。特に指示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合断及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の多数の方法で親和性を測定することができ、及び／または表現することができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるのに対して、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原からの解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡのような当業者に既知の技法によって決定することができる。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局在領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線状または隣接エピトープ）であることができ、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（単数）またはポリペプチド（複数）の２以上の非隣接領域から集まることができる（立体構造的、非線状、不連続、または非隣接のエピトープ）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と併せた水素／重水素交換、アレイ系のオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例：部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学については、結晶化は当該技術分野で既知の方法のいずれかを用いて達成されてもよい（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９９０），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８９：１−２３；Ｃｈａｙｅｎ，ＮＥ．（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５：１２６９−１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９７６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５１：６３００−６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を用いて研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲのようなコンピューターソフトウェアを用いて改良することができる（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｂｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５），ｖｏｌｕｍｅ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４），ａｎｄ  ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９３），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４９（Ｐｔ１）：３７−６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９７），Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５６，（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３）。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を用いて達成することができる。アラニン走査突然変異誘発技法を含む突然変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ，（１９８９），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５）を参照のこと。
【００６１】
参照Ｂ７−Ｈ４抗体と「同じエピトープに結合する」Ｂ７−Ｈ４抗体は、参照Ｂ７−Ｈ４抗体と同じＢ７−Ｈ４アミノ酸残基に結合する抗体を指す。参照Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合するＢ７−Ｈ４抗体の能力は水素／重水素交換アッセイによって決定される（Ｃｏａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２００９；２３：６３９−６４７）。
【００６２】
抗体は、それが当該エピトープへの参照抗体の結合をある程度阻止するように、それが参照抗体の同じエピトープ、または重複エピトープに結合するならば、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を「競合して阻害する」といわれる。競合阻害は、当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって測定されてもよい。抗体は、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合して阻害するといわれてもよい。
【００６３】
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然には見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが自然界で見られる形態ではない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離されている抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用される、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９８％である材料を指す。
【００６４】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために相互交換可能に使用される。該ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断され得る。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。その定義内に含まれるのはまた、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１以上の類似体を含有するポリペプチド、と同様に当該技術分野で既知の他の修飾である。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているので、特定の実施形態では、該ポリペプチドは一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。
【００６５】
「同一性パーセント」とは、２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性の程度を指す。同一性パーセントは、２つの配列を並べ、ギャップを導入して配列間の同一性を最大化することによって決定することができる。配列比較は当該技術分野で知られているプログラムを用いて生成することができる。本明細書の目的で、ヌクレオチド配列の配列比較は初期設定のパラメーターで設定されたｂｌａｓｔｎプログラムで実施することができ、アミノ酸配列の配列比較は初期設定のパラメーターで設定されたｂｌａｓｔｐプログラムで実施することができる（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖでの全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）を参照）。
【００６６】
本明細書中で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株由来の細胞であることができる。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子で形質移入された細胞及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、次の世代または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みにおいて起こり得る突然変異または環境の影響に起因して、核酸分子で形質移入された親細胞と同一ではなくてもよい。
【００６７】
特定の腫瘍、組織、または細胞試料におけるＢ７−Ｈ４の「過剰発現」という用語は、同じ種類または起源の病気ではない組織もしくは細胞、または腫瘍もしくはがんの近傍での他の細胞に存在するレベルよりも高いレベルで存在するＢ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドまたはそのようなポリペプチドをコードする核酸）を指す。そのような過剰発現は、例えば、突然変異、遺伝子の増幅、転写の増加または翻訳の増加によって引き起こされ得る。
【００６８】
本明細書の用語「一次」抗体またはその抗原結合断片は、試料における標的抗原に特異的に結合する抗体または断片を指す。一次抗体は一般に、免疫組織化学（ＩＨＣ）の手順で使用される最初の抗体である。一実施形態では、一次抗体はＩＨＣ手順で使用される唯一の抗体である。本明細書の用語「二次」抗体またはその抗原結合断片は、一次抗体に特異的に結合する抗体または断片を指し、それによって、存在する場合、一次抗体と後続の試薬との間で橋を形成する。二次抗体は一般に、免疫組織化学の手順で使用される第２の抗体である。本明細書における「三次抗体」という用語は、二次抗体に特異的に結合する抗体を指し、それによって、存在する場合、二次抗体と後続の試薬との間で架橋を形成する。
【００６９】
本発明の「試料」は生物学的起源のものである。好ましい実施形態では、試料はヒト試料であるが、動物試料も本発明の実践に使用することができる。本発明で使用するための試料の非限定的な供給源には、例えば、固形組織、生検、腹水、吸引液、流体抽出物、血液（循環腫瘍細胞を含む）、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部切片、呼吸器、腸管、及び尿生殖路、涙液、唾液、乳、腫瘍、臓器、細胞培養物及び／または細胞培養成分が挙げられる。「がん性試料」は、がん性細胞を含有する試料である。
【００７０】
本明細書の目的では、組織試料の「切片」は、組織試料の単一部分または単一片、例えば、組織試料から切り出された組織または細胞の薄片を指す。組織試料の複数の切片が採取され、本発明に従って分析に供されてもよいことが理解される。場合によっては、組織の選択された部分または切片は細胞の均一な集団を含む。他の場合には、選択された部分は、非限定的な例として組織の領域、例えば、管腔を含む。選択された部分は、細胞１つまたは細胞２つのように小さくすることができ、または、例えば、数千の細胞を表し得る。ほとんどの場合、細胞の回収が重要であり、本発明は細胞成分の検出での使用について記載されている一方で、その方法は生物の非細胞成分（例えば、非限定的な例としての血液中の可溶性成分）の検出にも使用されてもよい。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、「標識」という単語は、「標識された抗体を生成するように抗体に直接的に、または間接的にコンジュゲートされる、検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体が検出可能（例えば、放射性同位元素標識または蛍光標識）であることができ、または酵素標識の場合、検出可能である基質の化合物もしくは組成物の化学改変を触媒することができる。
【００７２】
「医薬製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、且つ製剤が投与される対象に許容できない程度に毒性であるさらなる成分を含有しない調製物を指す。製剤は無菌であることができる。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、「投与する」、「投与すること」、「投与」等のような用語は、生物作用の所望の部位への薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の送達を可能にするのに使用されてもよい方法を指す（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載されている作用剤及び方法とともに採用することができる投与技法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．にて見いだされる。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「対象」及び「患者」という用語は相互交換可能に使用される。対象は動物であることができる。いくつかの実施形態では、対象は非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類等）のような哺乳類である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【００７５】
「治療上有効な量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の量を指す。がんの場合、治療上有効な量の薬剤はがん細胞の数を減らすことができ；腫瘍のサイズまたは負担を軽減することができ；末梢臓器へのがん細胞の浸潤をある程度阻害することができ；ある程度、腫瘍転移を阻害することができ；ある程度、腫瘍の成長を阻害することができ；がんに関連する症状の１以上をある程度緩和することができ；及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、場合によっては安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患の減少（ＰＤ）、進行までの時間の短縮（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせのような良好な反応をもたらすことができる。薬剤が既存のがん細胞の成長の防止及び／またはそれらの殺傷する範囲で、薬剤は細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であることができる。
【００７６】
「治療すること」、「治療」、「治療すること」、「緩和すること」、及び「緩和すること」のような用語は、病的状態または障害を治癒させ、その症状を減速し、軽減する及び／またはその進行を止める治療手段を指す。したがって、治療を必要とするものには、すでにその障害があると診断された、またはその疑いがあるものが含まれる。特定の実施形態では、患者が以下：がん細胞の数の減少または完全な非存在；腫瘍サイズの低下；例えば、軟組織及び骨へのがんの広がりを含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または非存在；腫瘍転移の阻害または非存在；腫瘍増殖の阻害または非存在；特定のがんに関連する１以上の症状の緩和；罹患率と死亡率の低下；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能の低下；腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低下；腫瘍原性細胞の非腫瘍原性状態への分化；増加した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行時間の短縮（ＴＴＰ）、またはその任意の組み合わせの１以上を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんについて首尾よく「治療」されている。
【００７７】
「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が制御されていない細胞増殖を特徴とする哺乳類における生理学的状態を指す、または記載する。がんの例には、婦人科癌（例えば、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、乳管癌、卵巣癌、及び子宮内膜癌）、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）が挙げられるが、これらに限定されない。がんは、「Ｂ７−Ｈ４を発現するがん」または「Ｂ７−Ｈ４を発現しているがん」であることができる。そのような用語は、Ｂ７−Ｈ４を発現している細胞を含むがんを指す。がんはＢ７−Ｈ４を発現する固形腫瘍であることができる。がんは原発腫瘍であってもよいし、または進行性がんまたは転移性がんであってもよい。
【００７８】
「不応性」がんとは、化学療法剤のような抗腫瘍治療ががん患者に投与されているにもかかわらず進行するがんである。
【００７９】
「再発性」がんとは、初期療法に応答した後に、初期の部位または遠位部位で再増殖しているがんである。
【００８０】
本開示及びクレームで使用されるとき、単数形態「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００８１】
実施形態が本明細書で「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」という言葉で説明される場合は常に、そうでなければ「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（から成る）」及び／または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」という用語で説明される類似の実施形態も提供されることが理解される。本開示では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含むこと）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有すること）」、及び「ｈａｖｉｎｇ（有すること）」等は、米国特許法においてそれらに帰せられる意味を有することができ、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含むこと）」等を意味することができ；「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（本質的に成る）」は同様に、米国特許法において帰せられる意味を有し、用語は制限がなく、引用されるものの基本的または新規の特徴が引用されるもの以上のものの存在によって変化しない限り、引用されるもの以上のものの存在を許容するが、先行技術の実施形態は除外する。
【００８２】
具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される、用語「または」は、包括的であることが理解される。「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような表現で使用されるとき、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」の双方を含むことが意図される。同様に、「及び／または」という用語は「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用されるとき、以下の各実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡとＣ；ＡとＢ；ＢとＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を変更するために使用される場合、値または範囲の５％〜１０％を上回る及び５％〜１０％を下回る逸脱は引用された値または範囲の意図された意味の範囲内にとどまることを示す。
【００８４】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１以上と組み合わせることができる。
【００８５】
抗体
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片である。ヒトＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は、当該技術分野で知られており、配列番号１によって表されるように本明細書でも提供されている。
ヒトＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ（配列番号１）
【００８６】
特定の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、表１に開示された抗体である、または表１に開示されている抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変重鎖及び／または可変軽鎖、及び／または重鎖及び／または抗体の軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片である。
【表１】
2021516051.tif 000003
【００８７】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表２でリストにされている６つのＣＤＲ、すなわち配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６〜２８から成る群から選択される配列、及び配列番号２９の６つのＣＤＲを含む。
【表２】
2021516051.tif 000004
【００８８】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、例えば、ＶＬとの組み合わせで表３でリストにされているＶＨを含む。
【表３】
2021516051.tif 000005
【００８９】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、例えば、ＶＨとの組み合わせで表４でリストにされているＶＬを含む。
【表４】
2021516051.tif 000006
【００９０】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３でリストにされたＶＨ及び表４でリストにされたＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３でリストにされた配列を含むまたはそれから成るＶＨ、及び表４でリストにされものを含むまたはそれから成るＶＬを含む。
【００９１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列を含むＶＬを含む。
【００９２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも８０％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも８０％同一の配列から成るＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも８５％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも８５％同一の配列から成るＶＬを含む。
【００９３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９５％同一の配列を含むＶＬを含む。
【００９４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列を含むＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列を含むＶＬを含む。
【００９５】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９６％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９６％同一の配列から成るＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９７％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９７％同一の配列から成るＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９８％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９８％同一の配列から成るＶＬを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３のＶＨ配列と少なくとも９９％同一の配列から成るＶＨ及び表４のＶＬ配列と少なくとも９９％同一の配列から成るＶＬを含む。
【００９６】
特定の態様では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、そのＶＬドメインのみ、そのＶＨドメインのみによって、その３つのＶＬ  ＣＤＲのみ、またはその３つのＶＨ  ＣＤＲのみによって記載される。例えば、ヒト軽鎖または重鎖のライブラリーからそれぞれ相補性の軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性と同じかそれより高い親和性を有するヒト化抗体変異型を生じることによってマウス抗αｖβ３抗体のヒト化を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｒａｄｅｒ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９８），ＰＮＡＳ，９５：８９１０−８９１５を参照のこと。特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用し，相補性のＶＨドメイン（またはＶＬドメイン）についてライブラリーをスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ．，（１９９１），Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８も参照のこと。このスクリーニングは、ＥＬＩＳＡで判定したところ、特定のＶＨドメインについて１４の新しいパートナーと特定のＶＬドメインについて１３の新しいパートナーを作り出し、それらは強力なバインダーだった。特定のＶＨドメインを使用し、相補性ＶＬドメインについてライブラリー（例えば、ヒトＶＬライブラリー）をスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｉｍ，ＳＪ及びＨｏｎｇ，ＨＪ，（２００７），Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４５：５７２−５７７も参照のこと；選択されたＶＬドメインを次に用いて追加の相補性（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を導き得る。
【００９７】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ及びＬｅｓｋ，ＡＭ，（１９８７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５−８２；ならびに米国特許第７，７０９，２２６号を参照のこと）。通常、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在する一方で、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。
【００９８】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つ抗体のＣｈｏｔｈｉａのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、且つＣｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲが同じアミノ酸配列を有する１以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＫａｂａｔのＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片である。
【００９９】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，（１９９９），Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２−１３６及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２７：２０９−２１２に記載されているようなＩＭＧＴ番号付け方式に従って決定することができる。ＩＭＧＴ番号付けスキームによれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は、２６〜３５位であり、ＶＨ−ＣＤＲ２は５１〜５７位であり、ＶＨ−ＣＤＲ３は９３〜１０２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ１は２７〜３２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ２は５０〜５２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ３は８９〜９７位である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び４でリストにされた、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，ＭＰ（１９９９），上記及びＬｅｆｒａｎｃ，ＭＰ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）上記に記載されているような抗体のＩＭＧＴのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片である。
【０１００】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９６），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５に従って決定することができる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照のこと。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，の方法によって判定される抗体またはその抗原結合断片である。
【０１０１】
ある特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングスキームに従って決定することができ、それは、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物を表すＡｂＭの超可変領域を参照し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されている。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＡｂＭ番号付けスキームによって決定される抗体またはその抗原結合断片である。
【０１０２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、例えば、軽鎖との組み合わせで表５にてリストにされている重鎖を含む。
【表５−１】
2021516051.tif 000007
【表５−２】
2021516051.tif 000008
【表５−３】
2021516051.tif 000009
【表５−４】
2021516051.tif 000010
【０１０３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、例えば、重鎖との組み合わせで、表６にてリストにされている軽鎖を含む。
【表６−１】
2021516051.tif 000011
【表６−２】
2021516051.tif 000012
【０１０４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表５でリストにされている重鎖及び表６でリストにされている軽鎖を含む。
【０１０５】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは重鎖及び軽鎖を含む抗体である。重鎖に関して、特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）の重鎖であることができる。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含む、且つ、重鎖の定常領域がマウスＩｇＧ２ａの重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む、重鎖を含む。
【０１０６】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、その際、重鎖の定常領域は配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
ＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＥＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＰＲＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号８７）
【０１０７】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、その際、重鎖の定常領域は、マウスＩｇＧ１の重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、その際、重鎖の定常領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
ＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＥＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＰＲＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＮＴＮＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号９２）
【０１０９】
軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体の軽鎖はカッパ軽鎖またはラムダ軽鎖である。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、その際、重鎖の定常領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
ＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（配列番号８８）
【０１１０】
別の具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、（ｉ）ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含み、且つ重鎖の定常領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）ＶＬドメインのアミノ酸配列が表４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ重鎖の定常領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１１１】
別の具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、（ｉ）ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含み、且つ重鎖の定常領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｉｉ）ＶＬドメインのアミノ酸配列が表４で示されるアミノ酸配列を含み、且つ重鎖の定常領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１１２】
具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、本明細書に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、且つ、定常領域はＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹの免疫グロブリン分子またはマウスのＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＡの免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、本明細書に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、且つ定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２，ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、定常領域は、マウスのＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＡの免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、本明細書に記載されている任意のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインとマウス定常ドメインとを含む。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体は、本明細書に記載されている任意のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインとウサギ定常ドメインとを含む。
【０１１３】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号６及び９のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、配列番号６及び９のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む、抗体またはその抗原結合断片の操作された変異型における抗体またはその抗原結合断片、その際、操作は、例えば、１以上のＣＤＲ（例えば、ＶＬ−ＣＤＲ２）における１以上のグリコシル化部位を取り除く。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号６及び１０のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号６及び１１のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号６のＶＨ及び配列番号９、１０または１１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）はさらに、マウスＩｇＧ１重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１１）を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号６のＶＨ及び配列番号９、１０または１１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）は、マウスＩｇＧ２ａ重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１２）をさらに含む。
【０１１４】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号７及び９アミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、配列番号７及び９のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む、抗体またはその抗原結合断片の操作された変異型における抗体またはその抗原結合断片、その際、操作は、例えば、１以上のＣＤＲ（例えば、ＶＬ−ＣＤＲ２）における１以上のグリコシル化部位を取り除く。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号７及び１０のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号７及び１１のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号７のＶＨ及び配列番号９、１０または１１ｍのＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）はさらに、マウスＩｇＧ１重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１３）を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号７のＶＨ及び配列番号９、１０または１１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）はさらに、マウスＩｇＧ２ａ  重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１４）を含む。
【０１１５】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号８及び９のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、配列番号８及び９のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む抗体またはその抗原結合断片の操作された変異型における抗体またはその抗原結合断片、その際、操作は、例えば、１以上のＣＤＲ（例えば、ＶＬ−ＣＤＲ２）における１以上のグリコシル化部位を取り除く。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号８及び１０のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号８及び１１のアミノ酸配列のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号８のＶＨ及び配列番号９、１０または１１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）はさらに、マウスＩｇＧ１重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１５）を含む。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号８のＶＨ及び配列番号９、１０または１１のＶＬを含む抗体またはその抗原結合断片）はさらに、マウスＩｇＧ２ａ重鎖の定常ドメイン（例えば、Ｊ５１６）を含む。
【０１１６】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）Ｍ６のＣＤＲ配列（例えば、配列番号２２〜２６及び２９のアミノ酸配列）、（ｉｉ）Ｍ６またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型のＶＨ及びＶＬ配列（例えば、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含むＶＬ）、（ｉｉｉ）マウスＩｇＧ２ａ  Ｍ６またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型の重鎖及び軽鎖の配列（例えば、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９、３０または３１のアミノ酸配列を含む軽鎖）または（ｉｖ）マウスＩｇＧ１  Ｍ６の重鎖及び軽鎖の配列（例えば、配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖）を含む。
【０１１７】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）Ｍ１１のＣＤＲ配列（例えば、配列番号２２〜２５、２７及び２９のアミノ酸配列）、（ｉｉ）Ｍ１１またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型のＶＨ及びＶＬの配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含むＶＬ）、（ｉｉｉ）マウスＩｇＧ２ａ  Ｍ１１またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型の重鎖及び軽鎖の配列（例えば、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９、３０または３１のアミノ酸配列を含む軽鎖）、または（ｉｖ）マウスＩｇＧ１  Ｍ１１の重鎖及び軽鎖の配列（例えば、配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖）を含む。
【０１１８】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）Ｍ１５のＣＤＲ配列（例えば、配列番号２２〜２５、２８及び２９のアミノ酸配列、（ｉｉ）Ｍ１５またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型のＶＨ及びＶＬの配列（例えば、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９、１０または１１のアミノ酸配列を含むＶＬ）、（ｉｉｉ）マウスＩｇＧ２ａ  Ｍ１５またはその脱Ｎ−グリコシル化変異型の重鎖及び軽鎖の配列（例えば、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９、３０または３１のアミノ酸配列を含む軽鎖）、または（ｉｖ）マウスＩｇＧ１  Ｍ１５の重鎖及び軽鎖配の配列（例えば、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖）を含む。
【０１１９】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表１でリストにされている抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列（例えば、配列番号２２〜２４）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表１でリストにされている同じ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列（例えば、配列番号２５、２６及び２９、２５、２７及び２９または２５、２８及び２９）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖がさらに、マウスＩｇＧ１の定常ドメイン（例えば、配列番号９２のアミノ酸配列を含む）またはマウスＩｇＧ２ａの定常ドメイン（例えば、配列番号８７のアミノ酸配列を含む）を含み；且つ（ｉｖ）軽鎖がさらに、マウスカッパの定常ドメイン（例えば、配列番号８８のアミノ酸配列を含む）を含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１２０】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表１でリストにされている抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号６〜８）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表１でリストにされている同じ抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号９〜１１）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖がさらに、マウスＩｇＧ１の定常ドメイン（例えば、配列番号９２のアミノ酸配列を含む）またはマウスＩｇＧ２ａの定常ドメイン（例えば、配列番号８７のアミノ酸配列を含む）を含み；且つ（ｉｖ）軽鎖がさらに、マウスカッパの定常ドメイン（例えば、配列番号８８のアミノ酸配列を含む）を含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１２１】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、表７に示されている抗体について本明細書に記載されているアミノ酸配列（例えば、配列番号３８〜４９）を有する１、２、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、表７に示される抗体について本明細書に記載されているアミノ酸配列（例えば、配列番号５０〜５３）を有する１、２、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、上記の表７に示される抗体について本明細書に記載されているアミノ酸配列を有する１、２、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域、及び表７に示される同じ抗体について本明細書に記載されているアミノ酸配列を有する１、２、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域（例えば、配列番号３８〜４１及び５０〜５３；配列番号４２〜４５及び５０〜５３；または配列番号：４６〜４９及び５０〜５３）を含む。
【表７】
2021516051.tif 000013
【０１２２】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、表７にて本明細書に記載されているＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、表７にて本明細書に記載されているＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、上記表７にて本明細書に記載されているＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域と、表７にて本明細書に記載されているＶＬフレームワーク領域に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域とを含む。
【０１２３】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｊ５１１〜Ｊ５２２）と同じ、Ｂ７−Ｈ４のエピトープ（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４のエピトープ）を結合する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１２４】
競合結合アッセイを用いて、２つの抗体が重複するエピトープに結合するかどうかを判定することができる。競合結合は、試験中の免疫グロブリンがＢ７−Ｈ４のような共通する抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイで判定することができる。多数の種類の競合結合アッセイ、例えば、固相での直接または間接放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相での直接または間接の酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８３），Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，９：２４２−２５３を参照のこと）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８６），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−９を参照のこと）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ及びＬａｎｅ  Ｄ，（１９８８），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと）；Ｉ−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８８），Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７−１５）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１７６：５４６−５２）及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，１９９０），Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）が知られている。通常、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４のようなＢ７−Ｈ４）またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識試験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、それは参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％以上阻害するであろう。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを用いて、多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的な型では、抗原は９６ウェルプレートに不動化される。次いで、標識された抗体の抗原への結合を阻止する非標識抗体の能力が、放射性標識または酵素標識を用いて測定される。詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８３），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０：２３０８−２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８４），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６８：２６９−２７４；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：４８７２−４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１：５２３−５３８；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１１：３９１−４０７  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ，Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ  ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３８６−３８９Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８３），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０：２３０８−２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８４），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６８：２６９−２７４；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：４８７２−４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１：５２３−５３８；Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１１：３９１−４０７  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ，Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ  ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３８６−３８９を参照のこと。
【０１２５】
一実施形態では、競合アッセイは、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ．ｅｔ  ａｌ．，（２００９），Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８６：１７２−１８０によって記載されているもののような「タンデムアプローチ」によって、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて実施され、これによって、Ｂ７−Ｈ４抗原がチップ表面、例えば、ＣＭ５センサーチップに不動化され、と抗Ｂ７−Ｈ４抗体がチップ上に流される。抗体またはその抗原結合断片が本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体と競合するかどうかを判定するには、まず抗Ｂ７−Ｈ４抗体をチップ表面に流して飽和を達成し、次に競合する可能性のある抗体を加える。次いで、競合する抗体またはその抗原結合断片の結合を判定することができ、非競合対照と比較して定量することができる。
【０１２６】
一実施形態では、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  競合結合を用いて、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が別のＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４への結合を競合して阻害することを判定する。
【０１２７】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載されているアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、またはサスペンションアレイまたは表面プラズモン共鳴アッセイ）を用いて判定されるように、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｊ５１１−Ｊ５２２）がＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に結合するのを競合して（例えば、用量依存性に）阻害する抗体である。
【０１２８】
具体的な態様では、本明細書に提供されるのは、配列番号６で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号９で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的して（例えば、用量依存性に）阻害する抗体または抗原結合断片である。
【０１２９】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号７で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号９で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合して（例えば、依存的用量）阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３０】
具体的な態様では、本明細書に提供されるのは、配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号９で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的して（例えば、用量依存性に）阻害する抗体または抗原結合断片である。
【０１３１】
具体的な態様では、本明細書に提供されるのは、配列番号６で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的して（例えば、用量依存性に）阻害する抗体または抗原結合断片である。
【０１３２】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号７で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合して（例えば、依存的用量）阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３３】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合して（例えば、依存的用量）阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３４】
具体的な態様では、本明細書に提供されるのは、配列番号６で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１１で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合的して（例えば、用量依存性に）阻害する抗体または抗原結合断片である。
【０１３５】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号７で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１１で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合して（例えば、依存的用量）阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３６】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、配列番号８で示されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号１１で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への結合を競合して（例えば、依存的用量）阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３７】
具体的な態様では、本明細書で提供されるのは、Ｊ５１１〜Ｊ５２２のいずれかのそれと同じＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）エピトープに免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１３８】
具体的な態様では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びｓｃＦｖから成る群から選択され、その際、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載されているような抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、以下のセクション５．３で論じられるものを含むが、これらに限定されない、当業者に既知の任意の技術によって生成することができる。
【０１３９】
抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な標識または物質に融合するまたはコンジュゲートする（例えば、共有結合または非共有結合する）ことができる。検出可能な標識または物質の例には、例えば、グルコースオキシダーゼのような酵素標識；例えばヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、イオウ（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）のような放射性同位元素；ルミノールのような発光標識；フルオレセインやローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。そのような標識された抗体またはその抗原結合断片を用いて、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）タンパク質を検出することができる。例えば、以下のセクション５．４．１を参照のこと。
【０１４０】
抗体産生
Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片は、抗体及びその抗原結合断片の合成について当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技術によって作り出すことができる。本明細書に記載されている方法は、特に指示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成及び修飾、核酸のハイブリッド形成、及び当該技術の範囲内の関連分野における従来の技法を採用する。これらの技法は、例えば、本明細書に引用される参考文献に記載されており、文献で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ，ＦＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９），Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。
【０１４１】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている細胞または宿主細胞を培養することを含む、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体または抗原結合断片を作製する方法である。特定の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を用いて抗体または抗原結合断片を発現（例えば、組換え発現）させることを含む、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法である。特定の実施形態では、細胞は単離された細胞である。特定の実施形態では、外来性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。特定の実施形態では、方法はさらに、細胞または宿主細胞から得られた抗体または抗原結合断片を精製する工程を含む。
【０１４２】
ポリクローナル抗体の製造方法は当該技術分野で既知である（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ  １１  ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２），５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ．ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【０１４３】
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ法、組換え法、及びファージディスプレイ法、酵母ベースの提示技術、またはそれらの組み合わせを含む、当該技術分野で既知の多種多様な技法を用いて調製することができる。例えば、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、当該分野で既知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ及びＬａｎｅ  Ｄ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ．ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，５６３，６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）にて教示された、またはＫｏｈｌｅｒ  Ｇ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ，（１９７５），Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載されたようなものを含むハイブリドーマ法を用いて産生させることができる。本明細書に記載されている抗体を選択し、生成するために採用することができる酵母ベースの提示方法の例には、例えば、そのそれぞれが全体として参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８にて開示されたものが挙げられる。
【０１４４】
具体的な実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、上記で言及されたようなＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製されてもよい。ハイブリドーマ法において、マウス、または別の適切な宿主動物が、上述のように免疫化されて、免疫に使用されるタンパク質、例えば、Ｂ７−Ｈ４細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（配列番号２０）に特異的に結合するであろう抗体を産生する、または産生することができるリンパ球を導き出す。次いで、ポリエチレングリコールのような好適な融合剤を用いてリンパ球を骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０１４５】
具体的な実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、クローン細胞（例えば、組換え抗体または抗原結合断片を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体または抗原結合断片であり、その際、抗体または抗原結合断片は、例えば、ＥＬＩＳＡもしくは当該技術分野で既知の他の抗原結合アッセイによって、または本明細書で提供されている実施例において判定されるように、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片はげっ歯類またはマウスの抗体またはその抗原結合性断片であることができる。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片はキメラ抗体またはヒト化抗体またはその抗原結合性断片であることができる。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ断片または（Ｆａｂ’）２断片であることができる。本明細書に記載されているモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５），Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５に記載されているようなハイブリドーマ法によって作製することができ、または  例えば、本明細書に記載されているような技術を用いてファージライブラリーから単離することができる。クローン細胞株ならびにそれによって発現されるモノクローナル抗体及びその抗原結合断片を調製するための他の方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ  １１  ｉｎ：Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２），５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ，ＦＭ．ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａを参照のこと）。
【０１４６】
本明細書に記載されている抗体の抗原結合断片は、当業者に既知の任意の技術によって生成することができる。例えば、本明細書に記載されているＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２の断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を生成するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するため）のような酵素を用いた免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成することができる。Ｆａｂ断片は、四量体抗体分子の２つの同一アームの１つに対応し、重鎖のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと対になっている完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域にてジスルフィド結合によって連結された四量体抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０１４７】
さらに、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野で既知の種々のファージディスプレイ法及び／または酵母ベースの提示法を用いて生成することもできる。ファージディスプレイ法では、タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を運ぶファージ粒子の表面にタンパク質が提示される。特に、ＶＨ及びＶＬのドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、冒された組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨ及びＶＬのドメインをコードするＤＮＡはｓｃＦｖリンカーと一緒にＰＣＲによって組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターはＥ．ｃｏｌｉでエレクトロポレーションされ、Ｅ．ｃｏｌｉはヘルパーファージに感染させられる。これらの方法で使用されるファージは通常、ｆｄ及びＭ１３を含む糸状ファージであり、ＶＨ及びＶＬのドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合される。特定の抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を発現するファージは、例えば、標識した抗原、または固体表面もしくはビーズに結合されたまたは捕捉された抗原を用いて、抗原で選択するまたは特定することができる。本明細書に記載されている抗体または断片を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例には、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８２：４１−５０；Ａｍｅｓ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｇｅｎｅ，１８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ．＆  Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ．（１９９４），Ａｄｖａｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９，ＷＯ９１／１０７３７，ＷＯ９２／０１０４７，ＷＯ９２／１８６１９，ＷＯ９３／１１２３６，ＷＯ９５／１５９８２，ＷＯ９５／２０４０１，及びＷＯ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号，同第５，２２３，４０９号，同第５，４０３，４８４号，同第５，５８０，７１７号，同第５，４２７，９０８号，同第５，７５０，７５３号，同第５，８２１，０４７号，同第５，５７１，６９８号，同第５，４２７，９０８号，同第５，５１６，６３７号，同第５，７８０，２２５号，同第５，６５８，７２７号，同第５，７３３，７４３号，及び同第５，９６９，１０８にて開示されたものが挙げられる。
【０１４８】
抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含むアイソタイプから選択することができる。
【０１４９】
ポリヌクレオチド
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）抗原に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及びベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ及び哺乳類細胞）における組換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターである。
【０１５０】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合し、且つ本明細書に記載されているようなアミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合断片、ならびにＢ７−Ｈ４ポリペプチドへの結合についてそのような抗体もしくは抗原結合断片と（例えば、用量依存性な様式で）競合する、またはそのような抗体もしくは抗原結合断片と同じエピトープに結合する抗体もしくは抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１５１】
本明細書で提供されるのはまた、配列番号６〜８から成る群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０１５２】
本明細書で提供されるのはまた、配列番号９〜１１から成る群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０１５３】
本明細書に提供されるのはまた、配列番号２２〜２４から成る群から選択される配列を含むポリペプチド、または配列番号２２〜２４のすべてのアミノ酸を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。本明細書で提供されるのはまた、配列番号２５〜２９から成る群から選択される配列を含むポリペプチド、または配列番号２５、２６、及び２９のすべて、配列番号２５、２７、及び２９のすべて、または配列番号２５、２８、及び２９のすべてを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０１５４】
本明細書で提供されるのはまた、配列番号１６〜１８、８９、９０及び９１から成る群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０１５５】
本明細書で提供されるのはまた、配列番号１９、３０及び３１から成る群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、そのポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に免疫特異的に結合する。
【０１５６】
本明細書で提供されるのはまた、表８に示す重鎖及び／または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであり、その際、コードされた重鎖または軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片はＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。
【表８−１】
2021516051.tif 000014
【表８−２】
2021516051.tif 000015
【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
2021516051.tif 000022
【０１５７】
本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１２の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１３の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は、配列番号１４の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９３の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９４の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９５の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。
【０１５８】
本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１５の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９６の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９７の３つのＣＤＲをコードする配列を含む。
【０１５９】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１２または９３の３つのＣＤＲをコードする配列を含む重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６または９７の３つのＣＤＲをコードする配列を含む軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６０】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１３または９４の３つのＣＤＲをコードする配列を含む、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６または９７の３つのＣＤＲをコードする配列を含む、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６１】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１４または９５の３つのＣＤＲをコードする配列を含む、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６または９７の３つのＣＤＲをコードする配列を含む、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６２】
本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１２の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１３の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１４の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９３の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９４の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、重鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９５の可変ドメインをコードする配列を含む。
【０１６３】
本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号１５の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９６の可変ドメインをコードする配列を含む。本明細書で提供されるのはまた、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドであり、その際、軽鎖可変ドメインをコードする核酸は配列番号９７の可変ドメインをコードする配列を含む。
【０１６４】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１２または９３の可変ドメインをコードする配列を含む、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６または９７の可変ドメインをコードする配列を含む、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６５】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１３または９４の可変ドメインをコードする配列を含む、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６、または９７の可変ドメインをコードする配列を含む、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６６】
本明細書で提供されるのはまた、（ｉ）重鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１４または９５の可変ドメインをコードする配列を含む、重鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドと、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインをコードする核酸が配列番号１５、９６または９７の可変ドメインをコードする配列を含む、軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含むポリヌクレオチドとを含む組成物である。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じポリヌクレオチドにあってもよいし、または異なるポリヌクレオチドにあってもよい。重鎖可変ドメインをコードする核酸及び軽鎖可変ドメインをコードする核酸は、同じベクター内にあってもよいし、または異なるベクター内にあってもよい。
【０１６７】
本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１６８】
本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約８０％、８５％または９０％同一であるポリヌクレオチドである。
【０１６９】
本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９５％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９６％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９７％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９８％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。本明細書で提供されるのはまた、それぞれ配列番号６、７、８、９、１０、１１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、または２９をコードするヌクレオチド配列と少なくとも約９９％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１７０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されているポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせを含み、その際、抗体またはその抗原結合断片は重鎖を含み、重鎖は表３に示されるアミノ酸配列（例えば、配列番号６〜８）を含む重鎖可変ドメインと、マウスガンマ（γ）重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａ）のアミノ酸配列を含む定常領域とを含む。
【０１７１】
特定の実施形態では、本明細書で提供されているポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの組み合わせは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の組み合わせを含み、その際、抗体またはその抗原結合断片は軽鎖を含み、軽鎖は表４に示されるアミノ酸配列（例えば、配列番号９〜１１）を含む軽鎖可変ドメインと、マウスカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む定常領域とを含む。
【０１７２】
具体的な実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で指定されている、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドである。例えば、表１を参照のこと。
【０１７３】
本明細書で提供されるのはまた、例えば、コドン／ＲＮＡの最適化、異種シグナル配列による置換、ｍＲＮＡ不安定要素の排除によって最適化されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドである。コドンの変化（例えば、遺伝子コードの縮重に起因した同じアミノ酸をコードするコドンの変化）を導入することによって及び／またはｍＲＮＡにおける阻害性領域を排除することによって抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする、組換え発現のために最適化された核酸を生成する方法は、例えば、適切に米国特許第５，９６５，７２６号；同第６，１７４，６６６号；同第６，２９１，６６４号；同第６，４１４，１３２号；及び同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適合させることによって実施することができる。
【０１７４】
本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング法）を用いて好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）に由来する核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’末端及び５’末端とハイブリッド形成可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅は、対象とする抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを用いて実施することができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合断片の可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、宿主細胞での発現及びさらなるクローニングのためにベクターにクローニングされて、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体またはその抗原結合断片を生成することができる。
【０１７５】
本明細書で提供されているポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であることができる。ＤＮＡにはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが含まれ、ＤＮＡは二本鎖または一本鎖であることができる。一本鎖の場合、ＤＮＡはコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であることができる。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは１以上の内在性イントロンを欠くｃＤＮＡまたはＤＮＡである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然に存在しないポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えにより産生される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然成分から精製される。
【０１７６】
細胞及びベクター
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、宿主細胞、好ましくは哺乳類細胞における組換え発現のための、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）である。本明細書で提供されるのはまた、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を組換え発現するためのそのようなベクターを含む細胞、例えば宿主細胞である。特定の態様では、本明細書で提供されるのは、宿主細胞でそのような抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含む、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片を作製する方法である。
【０１７７】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載されている重鎖または軽鎖）の組換え発現は、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を含む。本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖または軽鎖の可変ドメインを含む）をコードするポリヌクレオチドが一旦得られれば、抗体またはその抗原結合断片の産生のためのベクターは、当該技術分野で周知の技術を用いた組み換えＤＮＡ技術によって作製することができる。したがって、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）をコードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを発現させることによってタンパク質を調製する方法は本明細書に記載されている。当業者に周知の方法を用いて、抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）をコードする配列と、適切な転写及び翻訳の制御シグナルとを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、試験管内の組換えＤＮＡ技術、合成技術、及び生体内の遺伝子組換えが挙げられる。提供されるのはまた、プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断、重鎖もしくは軽鎖、重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターである。そのようなベクターは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７及びＷＯ８９／０１０３６；及び米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）、抗体またはその抗原結合断片の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体と軽鎖全体の双方の発現のためにそのようなベクターにクローニングすることができる。
【０１７８】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に移すことができ、次いで得られた細胞を従来の技法によって培養して、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７、または２８、及び２９の６つのＣＤＲ、配列番号６〜８のＶＨ、配列番号９〜１１のＶＬ、配列番号６〜８のＶＨと配列番号９〜１１のＶＬ、配列番号１６〜１８、８９、９０、または９１の重鎖、配列番号１９、３０、３１の軽鎖、または配列番号１６〜１８、８９、９０、または９１の重鎖ならびに配列番号１９、３０、または３１の軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片）を産生させることができる。したがって、本明細書で提供されるのは、宿主細胞におけるそのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結されている本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片、例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７、または２８、及び２９の６つのＣＤＲ、配列番号６〜８のＶＨ、配列番号９〜１１のＶＬ、配列番号６〜８のＶＨと配列番号９〜１１のＶＬ、配列番号１６〜１８、８９、９０、または９１の重鎖、配列番号１９、３０、３１の軽鎖、または配列番号１６〜１８、８９、９０、または９１の重鎖と配列番号１９、３０、または３１の軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞である。特定の実施形態では、二本鎖の抗体またはその抗原結合断片の発現のために、重鎖及び軽鎖の双方を個別にコードするベクターを、以下に詳述するように、免疫グロブリン全体の発現のために宿主細胞で同時発現させることができる。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載されている抗体またはそのドメインの重鎖及び軽鎖の双方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な実施形態では、宿主細胞は、２つの異なるベクター、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載されている抗体（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９の６つのＣＤＲを含む抗体）、またはそのドメインの軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含有する。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を形成する、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合する第１の細胞によって発現される重鎖／重鎖可変領域。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、そのような第１の宿主細胞及びそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団である。
【０１７９】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含むベクターの集団である。あるいは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの双方をコードする、及び発現することができる単一のベクターを使用することができる。
【０１８０】
さまざまな宿主・発現ベクター系を利用して、本明細書に記載されている抗体及びその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照のこと）。このような宿主・発現系は、それによって対象とするコーディング配列を生成し、その後精製することができる媒体を表すが、適切なヌクレオチドコーディング配列で形質転換または形質移入すると、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片を原位置で発現することができる細胞も表す。これらには、微生物、例えば、抗体のコーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドのＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体のコーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体のコーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染するか、または抗体のコーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（たとえば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉのような緑藻）；あるいは哺乳類細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳類ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を内部に含む哺乳類細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体及びその抗原結合断片（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な実施形態では、哺乳類発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に組換え抗体分子全体の発現のために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉのような細菌細胞、または真核細胞（例えば、哺乳類細胞）が組換え抗体分子の発現に使用される。例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーターエレメントのようなベクタ���と併用して、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ，ＭＫ．及びＨｏｆｓｔｅｔｔｅｒ，Ｈ．（１９８６），Ｇｅｎｅ，４５：１０１−１０５；ならびにＣｏｃｋｅｔｔ，ＭＩ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：６６２−６６７）。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片はＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片のＶＨまたはＶＬを含有するベクターを構築するのに使用される。具体的な一実施形態では、ＶＨ配列の発現ベクターを構築するのに使用されるシグナルペプチドのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、それぞれ配列番号で２及び４にて提供されている。別の具体的な実施形態では、ＶＬ配列の発現ベクターを構築するのに使用されるシグナルペプチドのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、配列番号３及び５で提供されている。
【０１８２】
具体的な一実施形態では、ＶＨシグナルペプチドのヌクレオチド配列は、ＡＴＧＧＧＣ  ＡＧＧＣＴＴ  ＡＣＴＴＣＴ  ＴＣＡＴＴＣ  ＣＴＧＣＴＡ  ＣＴＧＡＴＴ  ＧＴＣＣＣＴ  ＧＣＡＴＡＴ  ＧＴＣＣＴＧ  ＴＣＣ（配列番号２）として提供されている。別の具体的な実施形態では、ＶＨシグナルペプチドのアミノ酸配列は、ＭＧＲＬＴＳＳＦＬＬＬＩＶＰＡＹＶＬＳ（配列番号４）として提供されている。
【０１８３】
具体的な一実施形態では、ＶＬシグナルペプチドのヌクレオチド配列は、ＡＴＧＡＡＧ  ＴＴＧＣＣＴ  ＧＴＴＡＧＧ  ＣＴＧＴＴＧ  ＧＴＧＣＴＧ  ＡＴＧＴＴＣ  ＴＧＧＡＴＴ  ＣＣＴＧＣＴ  ＴＣＣＧＧＣ  ＡＧＴ（配列番号３）として提供されている。別の具体的な実施形態では、ＶＬシグナルペプチドのアミノ酸配列は、ＭＫＬＰＶＲＬＬＶＬＭＦＷＩＰＡＳＧＳ（配列番号５）として提供されている。
【０１８４】
加えて、挿入された配列の発現を調節する、または所望の具体的な様式で遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に寄与することができる。この目的のために、一次転写物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化のための細胞機構を持っている真核宿主細胞を使用することができる。このような哺乳類宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリン鎖を内在性に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、ＢＷ、ＬＭ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔの細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、ＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞にて産生される。
【０１８５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、配列番号２２〜２５、２６、２７または２８及び２９のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）のＣＨＯＫ１ＳＶ細胞にて産生される。
【０１８６】
本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片が組換え発現によっていったん産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製について当該技術分野で既知の任意の方法、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインＡ後の特定の抗原に対するアフィニティー、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差によって、またはタンパク質精製のためのその他の標準的な技法によって精製することができる。さらに、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載されている、またはそうでなければ当該技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合されて、精製を円滑にすることができる。
【０１８７】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は単離されるまたは精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を持つ他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞性物質及び／または化学前駆物質を実質的に含まない。
【０１８８】
使用及び方法
検出及び診断での使用
本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、セクション５．２を参照）を用い、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫沈降、及びウエスタンブロッティングのような免疫アッセイを含む、当業者に既知の方法を用いて生体試料におけるＢ７−Ｈ４タンパク質のレベルをアッセイすることができる。
【０１８９】
好適な抗体アッセイの標識は当該技術分野で知られており、それには西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）及びグルコースオキシダーゼのような酵素標識；放射性同位元素、例えばヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、イオウ（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）；ハプテン、蛍光標識、リン光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、着色粒子及び／またはビオチンのようなリガンドが挙げられる。いくつかの実施形態では、酵素（酵素タグ）は発色性基質との接触時に着色生成物を生成するであろう。好適な酵素の例には、ウレアーゼ、アルカリホスファターゼ及び（西洋ワサビ）水素ペルオキシダーゼ及び／またはグルコースオキシダーゼが挙げられる。
【０１９０】
そのような標識を用いて、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片を標識することができる。あるいは、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を認識する二次抗体またはその抗原結合断片を標識し、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて用いてＢ７−Ｈ４タンパク質のレベルを検出することができる。いくつかの実施形態では、そのような二次抗体またはその抗原結合断片、例えば、抗マウスまたは抗げっ歯類抗体は、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）で標識され、酵素の基質（例えば、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ））で検出される。
【０１９１】
抗体のそのコンジュゲート部分への連結またはコンジュゲートのためのいくつかの方法が当該技術分野において既知である。一部の連結方法は、例えば、抗体に連結される有機キレート剤、例えば、ジエチレントリアミンペンタ酢酸無水物（ＤＴＰＡ）、エチレントリアミン四酢酸、Ｎ−クロロ−ｐ−トルエンスルホンアミド、及び／またはテトラクロロ−３α−６α−ジフェニルグリコウリル−３を採用する金属キレート錯体の使用を含む（それぞれ参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第４，４７２，５０９号及び同第４，９３８，９４８号）。モノクローナル抗体はまた、グルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩のようなカップリング剤の存在下で酵素と反応させてもよい。フルオレセインマーカーとのコンジュゲートは、これらのカップリング剤の存在下でまたはイソチオシアネートとの反応によって調製される。米国特許第４，９３８，９４８号では、例えば、乳房腫瘍の画像化はモノクローナル抗体を用いて達成され、検出可能な画像化部分は、例えば、メチル―ｐ−ヒドロキシベンズイミデートまたはＮ−スクシンイミジル―３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸塩のようなリンカーを用いて抗体に結合される
【０１９２】
他の実施形態では、抗体結合部位を変化させない反応条件を用いて免疫グロブリンのＦｃ領域にスルフヒドリル基を選択的に導入することによる免疫グロブリンの誘導体化が企図される。この方法論に従って生成される抗体コンジュゲートは、改善された長寿命、特異性及び感度を示すことが開示されている（参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９６，０６６号）。レポーターまたはエフェクターの分子がＦｃ領域の炭水化物残基にコンジュゲートされている、エフェクター分子またはレポーター分子の部位特異的連結も文献に開示されている（Ｏ’Ｓｈａｎｎｅｓｓｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８７，Ｄｅｃ；９（６）：４８８−９６）．
【０１９３】
Ｂ７−Ｈ４タンパク質の発現レベルをアッセイすることは、第１の生体試料にてＢ７−Ｈ４タンパク質のレベルを直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定するまたは推定することにより）、または相対的に（例えば、第２の生体試料または標準試料におけるＢ７−Ｈ４タンパク質レベルと比較して）定性的または定量的に測定するまたは推定することを含むように意図される。第１の生体試料におけるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの発現レベルを測定または推定し、標準のＢ７−Ｈ４タンパク質レベルと比較することができ、標準は、罹患していない第２の生体試料から決定される、または罹患していない試料集団のレベルを平均して決定される。当該技術分野で十分に理解されるように、いったん「標準」Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドのレベルが判明すると、比較のための標準としてそれを繰り返し使用することができる。
【０１９４】
本明細書で使用されるとき、「生体試料」という用語は、Ｂ７−Ｈ４を発現している可能性のある対象、細胞株、組織、またはその他の細胞源から得られる生体試料を指す。本発明で使用するための生体試料の非限定的な供給源には、例えば、固形組織、生検、腹水、吸引液、流体抽出物、血液（循環腫瘍細胞を含む）、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部セクション、呼吸器、腸管、尿生殖路、涙液、唾液、乳、腫瘍、臓器、細胞培養物及び／または細胞培養成分が挙げられる。動物（例えば、ヒト）から組織生検及び体液を得る方法は、当該技術分野で周知である。循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）を得る例示的な方法は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＦｅｒｒｅｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１０：３７４−３９４にて開示されている。例えば、ＣＴＣは免疫親和性ベースまたは生物物理学ベースの戦略を用いて血液試料から濃縮することができる。ＣＴＣは直接画像化モダリティを用いて得ることもできる。免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイで使用することができる生検を得て処理する例示的な方法は、実施例４にて本明細書で提供されている。
【０１９５】
本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、当業者に周知であり、標準であり、且つ本説明に基づいた試験管内の適用を含む診断適用に使用することができる。Ｂ７−Ｈ４の試験管内評価のための診断アッセイ及びキットは、がんを有することが知られている、またはがんを有する疑いがあるものを含む患者の試料を評価するのに利用されてもよい。予後と診断のモニタリング及び評価のこのタイプは、実際には、例えば、アッセイを用いてＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を用いた抗体療法を評価する、乳癌におけるＨＥＲ２タンパク質に対する抗体を利用すること（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、Ｄａｋｏ）である。
【０１９６】
本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、検出可能な標識または機能的な標識を携えることができる。蛍光標識が使用される場合、現在利用可能な顕微鏡法及び蛍光活性化セルソーター解析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野で既知の双方の方法手順の組み合わせを利用して、特異的な結合メンバーを同定し、且つ定量してもよい。本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は蛍光標識を携えることができる。例示的な蛍光標識には、例えば、反応性プローブ及びコンジュゲートプローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン及びテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素及びＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、例えば、同位体  ３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ及び１８６Ｒｅのような放射性標識を携えることができる。放射性標識を使用する場合、当該技術分野で既知の現在利用可能な計数手順を利用して、抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片のＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）への特異的結合を同定し、且つ定量してもよい。標識が酵素である場合、検出は、当該技術分野で既知であるように、現在利用されている比色分析、分光光度分析、蛍光分光光度分析、電流測定技術またはガス分析技術のいずれかによって達成されてもよい。これは、試料または対照試料を、抗体またはその抗原結合断片とＢ７−Ｈ４との間での複合体の形成を可能にする条件下で抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と接触させることによって達成することができる。抗体またはその抗原結合断片とＢ７−Ｈ４との間で形成された複合体が検出され、試料と対照で比較される。Ｂ７−Ｈ４に対する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片の特異的結合を踏まえて、抗体またはその抗原結合断片を用いて、例えば、細胞全体における、細胞膜上または細胞質内におけるＢ７−Ｈ４の発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片を用いて、免疫親和性精製を介してＢ７−Ｈ４を精製することもできる。
【０１９７】
本明細書に含まれるのはまた、例えば、Ｂ７−Ｈ４の存在の程度を定量的に分析するための試験キットの形態で調製されてもよいアッセイシステムである。システムまたは試験キットは、標識された成分、例えば、標識された抗体または抗原結合断片、及び１以上のさらなる免疫化学試薬を含んでもよい。キットの詳細については、例えば、以下のセクション５．４．３を参照のこと。
【０１９８】
いくつかの態様では、試験管内で試料にてＢ７−Ｈ４を検出する方法は、試料を本明細書で提供されているような抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、試験管内の試料にてＢ７−Ｈ４を検出するための、本明細書で提供されているような抗体またはその抗原結合断片の使用である。一態様では、本明細書で提供されるのは、対象または対象から得られた試料におけるＢ７−Ｈ４の検出に使用するために本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片である。一態様では、本明細書で提供されるのは、診断薬として使用するための本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片である。一実施形態では、抗体は検出可能な標識を含む。好ましい一実施形態では、Ｂ７−Ｈ４はヒトＢ７−Ｈ４である。好ましい一実施形態では、対象はヒトである。さらなる実施形態では、対象、例えば、ヒト対象はがんを有する。
【０１９９】
いくつかの態様では、本発明はＢ７−Ｈ４を結合する及び検出するための免疫検出法を企図する。本発明に従って調製される抗体はＢ７−Ｈ４を検出するために採用されてもよい。いくつかの免疫検出法には、少し記述するだけでも、免疫組織化学、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、免疫放射性アッセイ、蛍光免疫アッセイ、化学発光アッセイ、生物発光アッセイ、及びウエスタンブロットが挙げられる。種々の有用な免疫検出法の工程は、例えば、それぞれ参照によって本明細書に組み込まれるＤｏｏｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．Ｈ．及びＢｅｎ−Ｚｅｅｖ，Ｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９９；１０９：２１５−３７；Ｇｕｌｂｉｓ，Ｂ．及びＧａｌａｎｄ，Ｐ，Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９３，Ｄｅｃ；２４（１２）：１２７１−８５；ならびにＤｅ  Ｊａｇｅｒ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．１９９３，Ａｐｒ；２３（２）：１６５−７９のような科学文献に記載されている。
【０２００】
一般に、免疫結合法には、試料、例えば、Ｂ７−Ｈ４を含むことが疑われる試料を取得すること、及び免疫複合体の形成を可能にするのに効果的な条件下で本発明に従って第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体と試料を接触させることが含まれる。
【０２０１】
選択した生体試料を抗体と効果的な条件下で、且つ免疫複合体（一次免疫複合体）の形成を可能にするのに十分な時間接触させることは一般に、抗体組成物を試料に添加すること、及び抗体が存在する任意のＢ７−Ｈ４と免疫複合体を形成する、すなわち特異的に結合するのに十分な期間、混合物をインキュベートすることを含む。この時間の後、例えば、組織切片、ＥＬＩＳＡプレート、ドットブロットまたはウエスタンブロットのような試料・抗体組成物は一般に、洗浄されて非特異的に結合した抗体種を取り除き、一次免疫複合体内にて特異的に結合した抗体のみが検出されるようにするであろう。
【０２０２】
一般に、免疫複合体形成の検出は当該技術分野で周知であり、多数のアプローチの適用を介して達成されてもよい。これらの方法は一般に、例えば、放射性タグ、蛍光タグ、生物タグ、及び酵素タグのいずれかのような標識またはマーカーの検出に基づく。そのような標識の使用に関する米国特許には、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；及び同第４，３６６，２４１号が挙げられ、それぞれ参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、二次抗体のような二次結合剤及び／またはビオチン／アビジンのリガンド結合配置は当該技術分野で既知の方法論に従って使用されてもよい。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、一次免疫複合体内で結合されるようになる第１の抗体は、抗体に対して結合親和性を有する第２の結合剤によって検出されてもよい。これらの場合、第２の結合剤は検出可能な標識に連結されてもよい。二次結合剤はそれ自体が抗体であることが多く、したがって「二次」抗体と呼ばれてもよい。一次免疫複合体は、効果的な条件下で、且つ二次免疫複合体の形成を可能にするのに十分な期間、標識された二次の結合剤または抗体と接触させる。次いで、二次免疫複合体は一般に洗浄されて、非特異的に結合した標識された二次の抗体またはリガンドを取り除き、次いで、二次免疫複合体にて残っている標識が検出される。
【０２０４】
さらなる方法には、２段階のアプローチによる一次免疫複合体の検出が含まれる。上記に記載されているように、抗体に対して結合親和性を有する、例えば、抗体のような第２の結合剤を用いて二次免疫複合体を形成する。洗浄後、二次免疫複合体は、再び効果的な条件下で、且つ免疫複合体（三次免疫複合体）の形成を可能にするのに十分な時間、二次抗体に対して結合親和性を有する三次の結合剤または抗体と接触させる。第３のリガンドまたは抗体は検出可能な標識に連結され、こうして形成された三次免疫複合体の検出を可能にする。これが望ましい場合、このシステムはシグナル増幅を提供してもよい。
【０２０５】
別の実施形態では、ビオチン化したモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を用いて標的抗原（複数可）を検出し、次いで第２段階の抗体を用いて複合抗体に連結されたビオチンを検出する。その方法では、調べられる試料は第１段階の抗体を含む溶液にて先ずインキュベートされる。標的抗原が存在する場合、一部の抗体は抗原に特異的に結合してビオチン化された抗体／抗原の複合体を形成する。次いで、抗体／抗原複合体は、ストレプトアビジン（またはアビジン）及びビオチン化ＤＮＡ及び／または相補性ビオチン化ＤＮＡの連続溶液でのインキュベートによって増幅され、各工程は追加のビオチン部位を抗体／抗原複合体に付加する。増幅工程は好適なレベルの増幅が達成されるまで繰り返され、その時点で、試料はビオチンに対する第２段階の抗体を含む溶液にてインキュベートされる。この第２段階の抗体は、例えば、発色性基質を用いた組織酵素学によって抗体／抗原複合体の存在を検出するのに使用できる酵素で標識される。好適な増幅により、肉眼で見えるコンジュゲートを生成することができる。
【０２０６】
一実施形態では、免疫組織化学（ＩＨＣ）が免疫学的検出に使用される。ＩＨＣを使用して、試料におけるＢ７−Ｈ４の検出は、結合剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片によって試料を標的にすることによって達成することができる。結合剤は、検出可能な標識に直接的または間接的に連結することができ、または検出可能な標識に直接的または間接的に連結される別の結合剤によって検出することができる。一実施形態では、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）をＩＨＣアッセイで用いて、Ｂ７−Ｈ４に結合した一次抗体を検出する。一実施形態では、ＩＨＣアッセイにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の濃度は約１μｇ／ｍＬ〜約５０μｇ／ｍＬである。一実施形態では、ＩＨＣアッセイにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の濃度は約１μｇ／ｍＬ〜約２０μｇ／ｍＬである。一実施形態では、ＩＨＣアッセイにおける抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の濃度は約１０μｇ／ｍＬである。
【０２０７】
ＩＨＣは、細胞、細胞ペレット、組織；血液、血漿、血清、またはリンパ液からの調製物等で実施することができる。いくつかの実施形態では、試料は固定された試料である。いくつかの実施形態では、試料はパラフィン包埋試料である。いくつかの実施形態では、試料はホルマリン固定し、パラフィン包埋した試料である。
【０２０８】
一実施形態では、フローサイトメトリーが免疫学的検出に使用される。したがって、例えば、細胞当たりの結合した抗体（ＡＢＣ）の数はフローサイトメトリーを用いて評価することができる。
【０２０９】
治療上の使用及び治療方法
一態様では、本明細書で提示されるのは、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象にてＢ７−Ｈ４を発現するがんを治療する方法であり、その際、Ｂ７−Ｈ４の発現は、本明細書で提供されている抗体またはその抗原結合断片を用いて対象から得られた試料にて検出されている。いくつかの実施形態では、方法はさらに、対象から得られる試料にてＢ７−Ｈ４を検出することを含む。
【０２１０】
本明細書で提供される特定の実施形態では、がんは乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌、または乳管癌）、子宮内膜癌腫、卵巣癌、非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮癌）、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）から成る群から選択される。
【０２１１】
治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片には、例えば、２０５０２及び２２２１３及びその抗原結合断片が挙げられる。２０５０２抗体及び２２２１３抗体のアミノ酸及びヌクレオチド配列を表９及び１０にて提供する。
【表９−１】
2021516051.tif 000023
【表９−２】
2021516051.tif 000024
【表９−３】
2021516051.tif 000025
【表１０−１】
2021516051.tif 000026
【表１０−２】
2021516051.tif 000027
【表１０−３】
2021516051.tif 000028
【０２１２】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、２０５０２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲであることができる。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、２２２１３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲであることができる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３２〜３７のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号５８〜６３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、重鎖可変領域は配列番号５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、重鎖可変領域は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、軽鎖可変領域は配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、その際、軽鎖可変領域は配列番号６５のアミノ酸配列を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０２２１】
キット
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている１以上の抗体またはその抗原結合断片またはそのコンジュゲート（例えば、検出コンジュゲート）を含むキットである。本明細書で提供されるように、キットは診断方法で使用することができる。一実施形態では、キットは１以上の容器にて本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合性断片、好ましくは精製された抗体またはその抗原結合性断片を含む。
【０２２２】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されているキットは、対照として使用できる実質的に単離されたＢ７−Ｈ４抗原（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）を含有する。具体的な実施形態では、本明細書で提供されているキットは、組換えにより生成された、または化学的に合成されたＢ７−Ｈ４抗原を含むことができる。キットにて提供されるＢ７−Ｈ４抗原は固体支持体に付着させることもできる。
【０２２３】
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されているキットはさらに、Ｂ７−Ｈ４抗原と反応しない対照抗体またはその抗原結合断片を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されているキットは、抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４抗原への特異的結合を検出するための１以上の要素を含有する（例えば、抗体またはその抗原結合断片を、例えば、蛍光化合物、酵素、酵素基質、放射性化合物、もしくは発光化合物のような検出可能な基質にコンジュゲートすることができ、または一次抗体もしくはその抗原結合断片を認識する二次抗体もしくはその抗原結合断片を検出可能な基質にコンジュゲートすることができる）。さらに具体的な実施形態では、上記に記載されているキットの検出要素はＢ７−Ｈ４抗原が付着する固体支持体を含む。そのようなキットは、非付着性のレポーターで標識した抗マウス／げっ歯類抗体またはその抗原結合断片も含むことができる。この実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のＢ７−Ｈ４抗原への結合は、前記レポーターで標識した抗体またはその抗原結合断片の結合によって検出することができる。
【０２２４】
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されているキットはさらに、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片、及び／または本明細書で提供される抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を用いて試料にてＢ７−Ｈ４が検出される場合、治療用の抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片が投与されるべきであるという情報を含む。
【０２２５】
下記の実施例は、例示の目的で提供されており、限定を目的とするものではない。
【実施例】
【０２２６】
このセクション（すなわち、セクション６）における実施例は、例示を目的として提供されるのであって、限定を目的とするものではない。
【０２２７】
実施例１：ハイブリドーマの生成
Ｂ７−Ｈ４細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質の組換え可溶性型を用いて、Ｂ７−Ｈ４を選択的に結合する抗体のパネルを生成した。
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０）
【０２２８】
ＮＺＢ／Ｗマウスの各後足蹠に、Ｓｉｇｍａ  ＡｄｊｕｖａｎｔＳｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）に再懸濁したＢ７−Ｈ４  ＥＣＤタンパク質を注射した。最初の追加免疫から２１日後に血清を採取し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）と蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）とフローサイトメトリーとによって力価測定し、マウスが良好な免疫反応を有することを確認した。ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによるスクリーニングはそれぞれ実施例２及び３にて詳細に記載されている。最終追加免疫の３日後、力価陽性マウスの膝窩リンパ節細胞をマウス骨髄腫細胞株と融合させた（例えば、Ｃｈｕｎｔｈａｒａｐａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８８：１５−２７を参照）。約２８８０のラットハイブリドーマのクローンが生成された。
【０２２９】
このプロセスで生成されたハイブリドーマのクローンを次いで、Ｂ７−Ｈ４  ＥＣＤタンパク質（配列番号２０）、Ｂ７−Ｈ４  Ｎ末端ＩｇＶドメイン（アミノ酸１−１５１）−ｈｕＩｇＧ  Ｆｃ融合タンパク質（配列番号２１）、及び完全長のヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）をその表面上で安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞に結合するモノクローナル抗体の産生についてスクリーニングした。
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１）
【０２３０】
実施例２：ＥＬＩＳＡスクリーニング
実施例１で生成したハイブリドーマのクローンをスクリーニングするために、Ｂａｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０：１４９−１５６に記載されているように一般にＥＬＩＳＡを実施した。
【０２３１】
簡単に言えば、コーティング緩衝液（０．０５Ｍ炭酸緩衝液、ｐＨ９．６）における２μｇ／ｍＬの濃度でのＢ７−Ｈ４  ＥＣＤタンパク質（配列番号２０）またはＢ７−Ｈ４Ｎ末端Ｆｃ融合タンパク質（配列番号２１）５０μＬで９６ウェルプレートをコーティングし、密封し、４０℃で一晩保存した。コーティング溶液を除去した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）−２０とを含有する２００μＬのアッセイ／ブロッキング溶液（ＥＬＩＳＡ希釈液）を９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。プレートを撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。次いで、ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）−２０（洗浄緩衝液）３００μＬでウェルを３回洗浄した。洗浄後、ＥＬＩＳＡ希釈液中のハイブリドーマ上清１００μＬを各ウェルに加え、プレートを撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。前述のように、ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄した。洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させたヒツジ抗マウスＩｇＧのＥＬＩＳＡ希釈液での１：１０００希釈液１００μＬを各ウェルに添加した。プレートを撹拌しながら室温で１時間インキュベートし、前に記載されたように洗浄緩衝液で３回洗浄し、軽く叩いて乾燥させた。１００μＬのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質を各ウェルに添加し、室温で５〜１０分間、または良好な色の変化が観察されるまでインキュベートすることによって、ウェルを発色させた。１００μＬのＴＭＢ停止液を各ウェルに加えることによって発色を止めた。プレートを６５０ｎｍで分析した。
【０２３２】
事前採血血清及びポリ血清を対照として使用した。事前採血試料は免疫前のマウス血清を含有し、ポリ血清試料は免疫後に得られたマウス抗血清を含有した。ＥＬＩＳＡシグナルが陽性となった抗体をさらなるスクリーニングのために蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって選択した。
【０２３３】
実施例３：ＦＡＣＳスクリーニング
実施例１で生成されたハイブリドーマのクローンをさらにスクリーニングするために、完全長のヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）を安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を用いて蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を実施した。普通のＨＥＫ２９３細胞株は陰性対照として役立った。細胞を再浮遊させ、４０℃にて５分間５００ｇで遠心分離した。培地を吸引し、１％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を伴ったＢＤ  ＦＡＣＳＦｌｏｗ（商標）染色緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）（細胞染色緩衝液）に４０℃で細胞を再浮遊させた。前述のように細胞を遠心分離し、培地を吸引し、２×１０６個／ｍＬの最終濃度で４０℃にて細胞を細胞染色緩衝液に再浮遊させた。次いで細胞を９６ウェルの丸底プレートに５０μＬ／ウェルで加えた。各ハイブリドーマ上清がＢ７−Ｈ４を安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞株または陰性対照細胞株のいずれかを含有するウェル１つとインキュベートされるように各ハイブリドーマクローン由来の上清１００μＬを各ウェルに加えた。プレートを氷上で３０分間インキュベートし、前述のように遠心分離機にかけた。次いで上清を吸引した。各ウェルで４０℃にて２００μＬの細胞染色緩衝液に再浮遊させた。続いて、前述のようにプレートを遠心分離機にかけ、細胞染色緩衝液を吸引した。洗浄工程の後、４０℃で細胞染色緩衝液にてＲ−フィコエリスリン（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）に結合させたヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃの１：１０００希釈液１００μＬに各ウェルの細胞を再浮遊させ、プレートを氷上の暗所で３０分間インキュベートした。前述のようにプレートを遠心分離機にかけ、上清を吸引した。各ウェルで４０℃にて２００μＬの細胞染色緩衝液に再浮遊させ、前述のようにプレートを遠心分離機にかけた。細胞染色緩衝液を吸引した。各ウェルの細胞を４０℃で細胞染色緩衝液２００μＬに再浮遊させ、１．２ｍＬのマイクロタイターチューブに移した。ＦＡＣＳは、ＦＡＣＳｃａｎ（商標）またはＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で実施した。免疫組織化学（ＩＨＣ）によるさらなるスクリーニングのために、ＦＡＣＳアッセイで細胞結合を示した抗体を選択した。
【０２３４】
実施例４：ＩＨＣスクリーニング
実施例１で生成したハイブリドーマのクローンをさらにスクリーニングするために、浸潤性乳管癌の乳房腫瘍のある対象から得た切片に対して免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を実施した。ホルマリン固定しパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）した切片を５ミクロンで切断し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓを加えたスライドで風乾し、６０℃で１時間ベークした。切片を脱パラフィンし、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｕｌｔｒａ自動染色機（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）で染色した。９５℃でのＵｌｔｒａ  ＣＣ１を用いた１時間の抗原の回収の後、抗Ｂ７−Ｈ４マウス一次抗体によって室温で１時間、その後、製造元の指示書どおりのＯｍｎｉ−Ｍａｐ抗マウスＨＲＰ、ＣｈｒｏｍｏＭａｐ３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）検出系とヘマトキシリン対比染色とが続いてＢ７−Ｈ４が検出された。
【０２３５】
７つの抗Ｂ７−Ｈ４一次抗体：対照として使用したＡ５７．１（米国特許第７，６１９，０６８号を参照）（１．２５μｇ／ｍＬ）とともに実施例１で生成した６つの組換え抗体（１０μｇ／ｍＬ）を使用した。図１及び２に示すように、２つの組換え抗体（Ｊ５１６及びＪ５１２）は、Ａ５７．１と同様のパターンで細胞膜及び細胞質にてＢ７−Ｈ４を検出し、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の大半は腫瘍区画で観察された。図３及び４によって示されるように、組み換え抗体は１＋シグナル強度で、Ａ５７．１より少ないＢ７−Ｈ４発現細胞を検出した（Ｊ５１２による３５％対Ｊ５１６％による３５％対Ａ５７．１による５８％）。Ｂ７−Ｈ４発現がコンピューター画像解析（Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）によって測定された場合、Ｊ５１６及びＪ５１２は図５Ａ〜５Ｃに示すように、Ａ５７．１に類似する細胞コンパートメントを横切るＢ７−Ｈ４シグナルの分布を示した。
【０２３６】
実施例５：配列決定
そのすべてがＩＨＣ染色を示した重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）抗Ｂ７−Ｈ４抗体Ｍ６、Ｍ１１、及びＭ１５の配列は以下の手順に従って決定した。
【０２３７】
ＲＮＡはハイブリドーマからＴｒｉｚｏｌ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて回収し、ｃＤＮＡはＳＳｍａｒｔｓｃｒｉｂｅ逆転写酵素（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）及びＡｄｖａｎｔａｇｅ２ポリメラーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）を用いて調製した。標準的なＰＣＲ条件下でＰｈｕｓｉｏｎ  Ｔａｑポリメラーゼ（ＮＥＢ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）を用いてＰＣＲを行った。次いで、Ｚｅｒｏ  Ｂｌｕｎｔ（登録商標）ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングキット（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いてＰＣＲ産物をクローニングした。クローンを挿入物についてスクリーニングし、複数のクローンを配列決定して、元の重鎖及び軽鎖の遺伝子配列を検証した。重鎖及び軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列は上記の表８に提供されている。
【０２３８】
次いで、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の可変ドメインを異なるＦｃ領域を持つ発現ベクターにサブクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ及びマウスＩｇＧ１の定常領域を持つ抗体を生成した。次いで、抗Ｂ７−Ｈ４重鎖可変ドメインを異なるＦｃ領域を持つ発現ベクターにクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ及びマウスＩｇＧ１の定常領域を持つ抗体を生成した。抗Ｂ７−Ｈ４軽鎖可変ドメインを、マウスＩｇＫ定常領域を持つ発現ベクターにクローニングした。配列検証の際、単離された抗体には、上記の表１で指定されたＩＤ  Ｊ５１１〜Ｊ５１６が割り当てられた。
＊  ＊  ＊
【０２３９】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。そのような改変は、添付のクレームの範囲内に含まれることが意図される。
【０２４０】
本明細書で引用されている全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が、あらゆる目的でその全体が参照によって組み込まれるように具体的かつ個別に指示されたかのような同じ程度に、あらゆる目的でその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２４１】
他の実施形態は以下のクレームの範囲内にある。
【図１】
2021516051.tif 000029
【図２】
2021516051.tif 000030
【図３】
2021516051.tif 000031
【図４】
2021516051.tif 000032
【図５Ａ】
2021516051.tif 000033
【図５Ｂ】
2021516051.tif 000034
【図５Ｃ】
2021516051.tif 000035
【配列表】
2021516051000001.app
【国際調査報告】
2021516051.tif 000036
2021516051.tif 000037
2021516051.tif 000038