(57)【要約】  ある態様において、本発明は、ポリマーナノ粒子組成物(ｐＮＰ)に係る組成物、方法およびデバイス、治療剤を含むｐＮＰ組成物、本発明の治療剤を含むｐＮＰを含む薬物被覆バルーンを含むデバイスおよび本発明の組成物およびデバイスを使用する末梢動脈疾患を処置する方法に関する。さらなる態様において、ｐＮＰは、バルーンマトリクスへの強固な結合、続く血管壁の負荷電二層への接着のために正電荷を有する乳酸グリコール酸共重合体を含む。なおさらなる態様において、治療剤はレスベラトロールまたはその誘導体、ケルセチンまたはその誘導体またはそれらの組み合わせを含む。この要約は、特定の分野の検索を目的とする走査ツールとして意図され、本開示を限定する意図はない。
2021511891.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一ポリマー、第二ポリマー、第一治療剤および所望により第二治療剤を含むナノ粒子組成物であって；
ここで、第一ポリマーはポリマー鎖あたり１以上の正荷電部分を含むアクリレートポリマーであり；
ここで、第二ポリマーはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択され；
ここで、第一治療剤はレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択され；そして
ここで、第二治療剤はケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される、
ナノ粒子組成物。
【請求項２】
第一ポリマーがアクリレートを含むコポリマーである、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項３】
アクリレートを含むコポリマーが約６０重量％メチルメタクリレート、３０重量％エチルアクリレートおよび１０重量％２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドを含む、請求項２に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項４】
第二ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択される、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項５】
第二ポリマーがポリ(ラクチド−コ−グリコリド)である、請求項４に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項６】
第一治療剤がトリアセチルレスベラトロールである、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項７】
第二治療剤がケルセチンである、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項８】
第一治療剤および第二治療剤が約１：１〜約１：５の比で存在する、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項９】
直径約１００nm〜約３００nmを有するナノ粒子を含む、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項１０】
約０.３５mV〜約０.６０mVのｐＨ非依存的ゼータ電位を有するナノ粒子を含む、請求項１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【請求項１１】
外側表面を有する膨張可能バルーン；および本発明のｐＮＰ組成物を含む膨張可能バルーンの外側表面をコーティングする請求項１のナノ粒子を含み、ここで、膨張可能バルーンの外側表面の少なくとも一部の第一活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲であり、そしてバルーンの表面積に基づく第二活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲であるである、薬物被覆バルーンカテーテル。
【請求項１２】
バルーン外側表面がポリアミドブロックコポリマーを含む、請求項１１に記載の薬物被覆バルーンカテーテル。
【請求項１３】
対象を請求項１１に記載の薬物被覆バルーンカテーテル薬物被覆バルーンカテーテルで処置することを含む、血管疾患を処置する方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の薬物被覆バルーンカテーテルおよび血管疾患の処置に該薬物被覆バルーンカテーテルを使用するための指示を含む、キット。
【請求項１５】
請求項１１に記載のポリマーナノ粒子組成物、膨張可能バルーン上に該ポリマーナノ粒子組成物をコーティングするための指示および：
(ａ)膨張可能バルーンを含むバルーンカテーテル；または
(ｂ)バルーンカテーテルに使用するのに適する膨張可能バルーン
を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、引用により本明細書に全体として包含させる、２０１８年２月１日出願の米国仮出願６２／６２５,０２６の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
背景
アテローム性動脈硬化症などの心血管疾患(ＣＶＤ)は、血管壁内のコレステロールに富んだプラークの形成により、動脈の狭小化をもたらす。これらの病変は、最終的に組織への血流を遮断する。このようなＣＶＤの一つは、末梢動脈疾患(ＰＡＤ)であり、これは、四肢、特に脚への血液を供給する動脈の狭小化により特徴づけられる。世界的に、約２億人がＰＡＤに罹患している(Fowkes, F.G., et al., Lancet. 2013; 382(9901):1329-40)。ＰＡＤは、疼痛、創傷治癒の低下、介入しなければ、四肢欠損、そして時には死に至る、四肢の動脈閉塞を特徴とする。ＰＡＤはしばしば命を脅かす状態および事象と関連する。例えば、最近の研究は、安定しているが、症状のあるＰＡＤの患者の１１〜１２％は、３６か月のフォローアップ中、死亡するか、心筋梗塞または卒中を発症することを示した(Bonaca, M.P., et al., Circulation. 2013; 127(14):1522-9)。
【０００３】
臨床医は、通常、血管形成術として知られる、患部内でバルーンを膨脹させる方法により、動脈閉塞を矯正する。血管形成術は、しばしば血流を長期に維持することを意図する金属管状器具であるステントの留置を伴う。しかしながら、冠動脈疾患とは異なり、ＰＡＤでは、末梢動脈の直径が一般に小さく、ステントの有用性が限定されるため、バルーン血管形成術がステント留置を超える第一選択治療となっている(Thukkani A.K. and Kinlay S. Circ Res. 2015; 116(9):1599-613)。さらに、ステントは炎症、後期血栓症およびステントの破損を伴う(ibid.)。全ての形態の血管形成術の合併症は、バルーン膨張中の血管の過伸長であり、しばしば血管壁に歪みをもたらす。この障害は、結果的に新規病変形成、そして最終的に、再狭小化または管腔「再狭窄」となる、一連の細胞事象を誘発する。これらの事象は、機能的内皮喪失、内皮を欠く領域の血小板と炎症性細胞の接着、最後に、血管平滑筋細胞(ＶＳＭＣ)増殖を含む。後者の事象は、結果的に、血流を妨げる高度に肥厚した血管壁をもたす。
【０００４】
パクリタキセルまたはシロリムス誘導体などの有糸分裂阻害剤を放出する薬物溶出ステントが冠血管介入後の再狭窄を抑制するために開発されたが、その有用性は、小血管では限定的である(ibid.)。チップ(遠位)からコネクター(近位)に伸びるシャフトおよび拡張可能であり、標的病変に直接薬物を溶出するために、薬物で被覆または浸漬されたバルーンを含む薬物被覆バルーン(ＤＣＢ)カテーテルもある。パクリタキセルを放出するＤＣＢカテーテルは現在使用が承認されているが、特に、現在の製品が相当量のパクリタキセル負荷量を、病変部位到達前に放出することを考慮すれば、パクリタキセルの早過ぎる放出が全身毒性をもたらす懸念がある(De Labriolle A, et al. Catheter Cardiovasc Interv. 2009; 73(5):643-52; Byrne, R.A., et al., Nat Rev Cardiol. 2014; 11(1):13-23)。これは、これらの製品が、組織吸収を促進するために、イオプロミドなどの親水性添加物と共に、薬物のバルーン表面への直接適用を使用しているためであるが(De Labriolle, A., op. cit.)、薬物喪失の予防はほとんどなされていない。さらに、パクリタキセルはＶＳＭＣ増殖を減少させるが、再内皮化も阻害し、二重抗血小板療法を、凝固阻止のために同時に講じなければならない(Nakazawa, G., et al., Am J Cardiol. 2007; 100(8B):36M-44M)。残念ながら、これらの治療は出血のリスクおよび患者のケアに関連する費用を増大させる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
薬物溶出バルーンに関する方法およびデバイスの改善に向けた研究の進歩にも関わらず、パクリタキセルおよび他の有糸分裂阻害剤と関連する負の副作用を伴わない薬物溶出バルーンへの要請は満たされないままである。これらの要請および他の要請が本発明により満たされる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
概要
ここに具体化し、広く記載する本発明の目的により、本発明は、ある態様において、ポリマーナノ粒子組成物(ｐＮＰ)に関連する組成物、方法およびデバイス、１以上の治療剤を含むｐＮＰ組成物、１以上の治療剤を含む本発明ｐＮＰを含む薬物被覆バルーンを含むデバイスならびに本発明の組成物およびデバイスを使用する末梢動脈疾患を処置する方法に関する。さらなる態様において、ｐＮＰは正電荷を有する乳酸グリコール酸共重合体である。また、さらなる態様において、１以上の治療剤は、レスベラトロールまたはその誘導体、ケルセチンまたはその誘導体またはそれらの組み合わせを含む。
【０００７】
開示されるのは、第一ポリマー、第二ポリマー、第一治療剤および所望により第二治療剤を含むナノ粒子組成物であり、ここで、第一ポリマーはポリマー鎖あたり１以上の正荷電部分を含むアクリレートポリマーであり、第二ポリマーはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択され、第一治療剤はレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択され、そして、第二治療剤はケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体である。
【０００８】
また開示されるのは、外側表面を有する膨張可能バルーンおよび本発明のナノ粒子組成物を含むバルーンカテーテルの外側表面をコーティングするナノ粒子を含む薬物被覆バルーンカテーテルであって、ここで、バルーンの表面積に基づく第一活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲であり、そしてバルーンの表面積に基づく第二活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲である。
【０００９】
また開示されるのは、対象を本発明の薬物被覆バルーンカテーテルで処置することを含む、血管疾患を処置する方法である。
【００１０】
また開示されるのは、本発明の薬物被覆バルーンカテーテルおよび血管疾患の処置に該薬物被覆バルーンカテーテルを使用するための指示を含む、キットである。
【００１１】
また開示されるのは、本発明のポリマーナノ粒子組成物、膨張可能バルーン上に該ポリマーナノ粒子組成物をコーティングするための指示および(ａ)膨張可能バルーンを含むバルーンカテーテルまたは(ｂ)バルーンカテーテルに使用するのに適する膨張可能バルーンを含む、キットである。
【００１２】
本発明の態様を、特定の法令による分類、例えば当該システムの法令による分類で記載し、請求しているとしても、これは単に便宜上の目的によるものであり、当業者は、本発明のそれぞれの態様を如何なる法令による分類のよっても記載し、請求し得ることを理解する。特に断らない限り、ここに記載するあらゆる方法または態様を、その工程が特定の順番で実施されることを必要とするものとして解釈されることは全く意図しない。従って、方法の請求項がその請求項でまたは明細書で、その工程が特定の順番に限定されることを明示していない限り、いかなる点においても、順番を暗示することを意図しない。これは、工程の配置や操作の流れに関する論理上の問題、文法上の構成や句読点から導き出された明白な意味または本明細書に記載されている態様の数やタイプを含む、解釈の可能なあらゆる非明示的な事項に適用される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
本明細書に包含され、本明細書の一部を構成する添付する図面は、いくつかの態様を説明し、明細書と共に、本発明の原理を説明するために提供する。
【００１４】
【図１】ポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)およびカチオン性ポリメタクリル酸エステルを含む本発明の代表的ナノ粒子の代表的画像を示す。本画像は、下記方法を使用して、透過型電子顕微鏡を使用して得た。
【００１５】
【図２】代表的な本発明のポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)／カチオン性ポリメタクリル酸エステルナノ粒子組成物(図ではナノ粒子は「ｐＮＰ」として示される)からのトリアセチルレスベラトロールおよびケルセチン(図ではそれぞれ「ＴＡＲ」および「ＱＵＥＲ」と表示)の放出の代表的薬物放出データを示す。透析膜外側に拡散するトリアセチルレスベラトロール(ＴＡＲ)、レスベラトロール(図では「ＲＥＳＶ」と表示)およびケルセチン(ＱＵＥＲ)のレベルを、下記方法を使用して、高速液体クロマトグラフィーを使用して評価した。データはｎ＝６の平均±ＳＥＭである。
【００１６】
【図３】代表的な本発明のポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)／カチオン性ポリメタクリル酸エステルナノ粒子組成物(図ではナノ粒子は「ｐＮＰ」として示される)からのトリアセチルレスベラトロール、レスベラトロールおよびケルセチン(図ではそれぞれ「ＴＡＲ」、「ＲＥＳＶ」、「ＱＵＥＲ」として示す)の血管平滑筋細胞による取り込みの代表的細胞取り込みデータを示す。血管平滑筋細胞をトリアセチルレスベラトロールおよびケルセチンを含むナノ粒子で負荷するかまたはトリアセチルレスベラトロールおよびケルセチン単独に曝した。次いで細胞を抽出し、薬物レベル(トリアセチルレスベラトロール、レスベラトロールおよびケルセチン)について０〜７２時間ＨＰＬＣで分析した。データはｎ＝３実験の平均±ＳＥＭである。
【００１７】
【図４】トリアセチルレスベラトロールおよびケルセチンを含む代表的な本発明のポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)／カチオン性ポリメタクリル酸エステルナノ粒子組成物の代表的生体適合性データを示す。生体適合性を、記載するナノ粒子濃度で、陽性対照(Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００)と比較した％ＲＢＣ溶解として決定した。データはｎ＝３実験の平均±ＳＥＭである。ＡＮＯＶＡは、顕著な影響のないことを確認した。
【００１８】
【図５】トリアセチルレスベラトロールおよびケルセチンを含む代表的な本発明のポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)／カチオン性ポリメタクリル酸エステルナノ粒子組成物で処理後の代表的細胞生存能データを示す。細胞生存能を、６〜７２時間細胞ＡＴＰレベルの観点で評価した。ＡＴＰレベルを対照(ナノ粒子処理無)のパーセンテージとして表す。データはｎ＝３実験の平均±ＳＥＭである。＊対照と比較したｐ＜０.０５。
【００１９】
【図６】１以上の治療剤を含む本発明のｐＮＰを含むコーティングでＤＣＢカテーテルバルーンをコーティングするための代表的エレクトロスプレーシステムを示す。本図は、コーティング特徴を最適化するために変え得る典型的パラメータを示す。
【００２０】
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、ディップコーティング(図７Ａ)またはエレクトロスプレーコーティング(図７Ｂ)によりコートしたＤＣＢカテーテルバルーンの代表的蛍光顕微鏡写真を示す。各場合のコーティングは、ＲＥＳＶおよびＱＵＥＲを含むｐＮＰ組成物であった。バルーン材はＰＥＢＡＸ(登録商標)からなった。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明のさらなる利点は、続く記載に示され、かつ、一部、記載から明らかであり、または本発明の実施により習得され得る。本発明の利点は、特に添付する特許請求の範囲に示す要素および組み合わせの手段により実現および達成される。先の一般的記載および次の詳細な記載の何れも単なる例示および説明であり、請求する本発明を限定するものではないことは理解されるべきである。
【００２２】
詳細な記載
本発明を、可能な実施態様の全てではなく、一部が示されている、次の本発明の詳細な記載およびそれに含まれる実施例を参照してより容易に理解することができる。実際、本発明は種々の異なる形態で具現化でき、ここに示す実施態様に限定されると解釈されてはならない；むしろ、これらの実施態様は、本発明が適用される法的要件を満たすように提供される。全体として、同じ番号は同じ要素をいう。
【００２３】
上の記載および添付する図面に示される教示の利益を有するここに開示する多くの修飾および他の実施態様が、本発明組成物および方法の分野の当業者には想起される。それ故に、本発明は、開示される特定の実施態様に限定されず、修飾および他の実施態様が添付する特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図されることは理解される。ここで特定的な用語が使用されているが、それらは一般的かつ説明的な意味でのみ使用し、限定する目的では使用されていない。
【００２４】
ここで使用する学術用語は、特定の態様を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。本明細書および特許請求の範囲で使用される、用語「含む」は、「からなる」の態様も含み得る。他に定義しない限り、ここで使用する全ての技術的および科学的用語は、本発明組成物および方法が属する分野の当業者に共通して理解されるのと同じ意味を有する。本明細書および添付する特許請求の範囲において、ここに定義すべきいくつかの用語が参照される。
【００２５】
本明細書を読んだ当業者には明らかなとおり、ここに記載し、説明する各個々の実施態様は、個別的な要素および特性を有し、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他のいくつかの実施態様の何れかの特性と容易に分離するまたは組み合わせすることができる。記載するあらゆる方法を、記載する事象の順番でまたは論理的に可能な何れかの他の順番で実施してよい。
【００２６】
ここに記載する全ての刊行物は、刊行物の引用と関連する方法および／または材料を開示または記載するように、本明細書に包含される。ここに記載する刊行物は、本願出願日前のその開示を単に示すだけである。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する権利を与えられないことを認めるとして解釈されるべきではない。さらに、ここに記載する公開日は実際の公開日と異なることがあり、個々に確認が必要であり得る。
【００２７】
種々の実施態様を記載する前に、次の定義を提供し、特に断らない限り使用すべきである。
【００２８】
Ａ. 定義
他に定義しない限り、ここで使用する全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通して理解される意味を有する。一般的に使用される辞書に定義されるような用語は、ここで明らかに定義されない限り、本明細書および関連技術の状況の意味と一致する意味を有するとして解釈されるべきであり、理想化されたまたは過度に形式的な意味で解釈されるべきではない。
【００２９】
ここで使用する有機化合物を含む化合物の命名は、一般名、ＩＵＰＡＣ、ＩＵＢＭＢまたはＣＡＳ推奨命名法を使用して付与され得る。１以上の立体化学特性が存在するとき、立体化学のカーン・インゴルド・プレローグ則を用いて、立体化学優先性、Ｅ／Ｚ表記などを指定し得る。当業者は、命名規則を使用する化合物構造の系統的簡略化(systemic reduction)により、またはCHEMDRAWTM(Cambridgesoft Corporation, U.S.A.)などの市販のソフトウェアにより、名称が与えられた場合、化合物の構造を容易に確認できる。
【００３０】
ここで使用する「含む」は、言及されるとおり、記載する特性、整数、工程または要素の存在を特定するが、１以上の特性、整数、工程または要素またはそれらの群の存在または付加を除外しない。さらに、用語「含む」は、用語「本質的にからなる」および「からなる」により包含される例を含むことを意図する。同様に、用語「本質的にからなる」は、用語「からなる」により包含される例を含むことを意図する。ここで使用する用語「による」、「含む」、「含み」、「からなり」、「包含する」、「包含し」、「含まれる」、「関与する」、「関与し」、「包含される」および「例えば」は、その開放的、非限定的意味で使用される。
【００３１】
本明細書および添付する特許請求の範囲で使用される単数表現は、文脈に明らかに反しない限り、複数表現を含む。故に、例えば、「官能基」、「アルキル」または「残基」は、２以上のこのような官能基、アルキルまたは残基などの混合物を含む。
【００３２】
「一つの」化合物への言及は、化合物単一分子の限定ではなく、化合物の１以上の分子をいう。さらに、１以上の分子は、化合物のカテゴリーに属する限り、同一でも同一でなくてもよい。故に、例えば、「一つの」ＰＬＧＡは、ＰＬＧＡの１以上のポリマー分子を含むと解釈され、ここで、ポリマー分子は同一でも同一でなくてもよい(例えば、異なる分子量および／または異性体)。
【００３３】
比率、濃度、量および他の数値データは、ここで範囲として記載され得ることは注意すべきである。記載の範囲が限度の一端または両端を含むとき、これらに包含される限度のいずれかまたは両方以外の範囲も本開示に含まれ、例えば用語「ｘ〜ｙ」は、‘ｘ’〜‘ｙ’の範囲および‘ｘ’より大きく、かつ‘ｙ’より小さい範囲も含む。範囲はまた上限、例えば‘約ｘ、ｙ、ｚまたはそれ以下’としても表され得て、‘約ｘ’、‘約ｙ’および‘約ｚ’の特定の範囲ならびに‘ｘ未満’、‘ｙ未満’および‘ｚ未満’の範囲を含むと解釈すべきである。同様に、用語‘約ｘ、ｙ、ｚまたはそれ以上’は、‘約ｘ’、‘約ｙ’および‘約ｚ’の特定の範囲ならびに‘ｘを超える’、ｙを超える’および‘ｚを超える’範囲を含むと解釈すべきである。さらに、用語「約‘ｘ’〜‘ｙ’」であって、‘ｘ’および‘ｙ’が数値であるとき、「約‘ｘ’〜約‘ｙ’」を含む。このような範囲の方法は勘弁さのおよび簡潔さために使用され、故に、範囲の限度として明示した数値だけでなく、各数値および下位範囲が明示されているかのように、全ての個々の数値または下位範囲も含むと、柔軟に解釈されるべきである。説明のために、「約０.１％〜５％」の数値範囲は、約０.１％〜約５％の明示された値だけでなく、示す範囲内の個々の値(例えば、１％、２％、３％および４％)および下位範囲(例えば、０.５％、１.１％、２.４％、３.２％および４.４％)も含むと解釈されるべきである。
【００３４】
ここで使用する用語「約」、「近似」および「正確にまたは約」は、問題の量または値が、指定した正確な値または特許請求の範囲に記載するまたはここに教示するのと同等な結果または効果を提供する値であり得る。すなわち、量、サイズ、製剤、パラメータおよび他の量値および特徴が正確ではなく、正確である必要はなく、同等な結果または効果が得られるような、公差、変換率、四捨五入、測定誤差などおよび当業者に知られる他の因子を反映した、所望により近似および／または大きいまたは小さいものであり得ると理解されるべきである。ある状況で、同等な結果または効果を提供する値は合理的に決定できない。このような場合、一般に、ここで使用する「約」および「正確にまたは約」は、特に示されるか推測されない限り記載する数値±１０％変動を意味する。一般に、量、サイズ、製剤、パラメータまたは他の量値または特徴は、そうであると記載されていてもいなくても、「約」、「近似」または「正確にまたは約」である。「約」、「近似」または「正確にまたは約」が量値の前に記載されているとき、特に断らない限り、パラメータは、特定の量値自体も含むと理解される。
【００３５】
組成物の特定の要素または成分の重量部が明細書および添付する特許請求の範囲で記載されているとき、組成物または物品中の重量部が示されるこれら要素または成分および何れかの他の要素または成分の重量相関を意味する。故に、２重量部の成分Ｘおよび５重量部成分Ｙを含む化合物で、ＸおよびＹは２：５の重量比で存在し、該化合物がさらなる要素を含むか否かにかかわらず、この比で存在する。
【００３６】
開示されるのは、本発明の組成物の製造に使用する要素およびここに開示する方法内で使用する組成物自体である。これらおよび他の材料はここに開示され、これらの材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などが開示されているとき、これら化合物の各種々の個々のおよび集合的組み合わせおよび順列は明示的に開示され得なくても、各々が特に考慮され、ここに開示されると理解されるべきである。例えば、ある特定の化合物が開示および記載され、化合物に含まれる多数の分子になし得る多数の修飾が記載されているならば、反する指示がない限り、化合物および可能な修飾の各および全ての組み合わせおよび順列が特に考慮される。故に、一群の分子Ａ、ＢおよびＣが開示され、同時に一群の分子Ｄ、ＥおよびＦおよび組み合わせ分子Ａ〜Ｄが開示されるならば、各々が個々に記載されていなくても、各々は、個々に集合的に組み合わせを意味し、Ａ〜Ｅ、Ａ〜Ｆ、Ｂ〜Ｄ、Ｂ〜Ｅ、Ｂ〜Ｆ、Ｃ〜Ｄ、Ｃ〜ＥおよびＣ〜Ｆが開示されると考えられる。同様に、これらのあらゆるサブセットまたは組み合わせも開示される。故に、例えば、Ａ〜Ｅ、Ｂ〜ＦおよびＣ〜Ｅのサブグループが開示されると考えられる。この考えは、本発明の組成物の製造および使用方法の工程を含むが、これらに限定されない、本出願の全ての態様に適用可能である。故に、実際できる多様なさらなる工程があるならば、これらさらなる工程の各々を、本発明の方法の何らかの特定の態様または態様の組み合わせと共に実施できると理解されるべきである。
【００３７】
組成物または物品の特定の要素または成分の重量部が明細書および添付する特許請求の範囲で記載されているとき、組成物または物品中の重量部が示されるこれら要素または成分および何れかの他の要素または成分の重量間の相互関係を意味する。故に、２重量部の成分Ｘおよび５重量部成分Ｙを含む化合物で、ＸおよびＹは２：５の重量比で存在し、該化合物がさらなる要素を含むか否かにかかわらず、この比で存在する。
【００３８】
ここで使用する用語「重量パーセント」、「ｗｔ％」および「ｗｔ.％」は、相互交換可能に使用でき、特に断らない限り、組成物の総重量に基づく、ある成分の重量パーセントを示す。すなわち、特に断らない限り、全てのｗｔ％値は組成物の総重量に基づく。本発明組成物または製剤の全要素のｗｔ％値の合計は１００に等しいことは理解されるべきである。
【００３９】
化合物は標準命名法を使用して記載する。例えば、記載する基の何れでも置換されていないあらゆる位置は、示す結合または水素原子により原子価が充足されていると理解される。２つの文字または記号の間にないダッシュ(「−」)は、置換基の結合点を示す。例えば、−ＣＨＯはカルボニル基の炭素で結合する。他に定義しない限り、ここで使用する技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００４０】
ここで使用する用語「アルキル基」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどの、１〜２４炭素原子の分岐または非分岐飽和炭化水素基をいう。「低級アルキル」基は、１〜６炭素原子を含むアルキル基である。
【００４１】
本明細書および添付する特許請求の範囲で使用する化学種の残基は、特定の反応スキームまたはその後の製剤または化学生成物における得られた生成物の化学種である部分を、該部分が該化学種から実際に得られたものであるか否かに関わらずそれを意味する。故に、ポリエステルのエチレングリコール残基は、ポリエステルにおける１以上の−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−単位を、エチレングリコールが該ポリエステルの製造に使用されたか否かに関らず、それを意味する。同様に、ポリエステルのセバシン酸残基は、ポリエステルにおける１以上の−ＣＯ(ＣＨ２)８ＣＯ−部分を、該ポリエステルを得るために該残基がセバシン酸またはそのエステルの反応により得られたか否かに関らずそれを意味する。
【００４２】
ここで使用する用語「置換」は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことを意図する。広い態様において、許容される置換基は、有機化合物の非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式およびヘテロ環式および芳香族および非芳香族置換基を含む。説明的置換基は、例えば、下記のものを含む。許容される置換基は適切な有機化合物について１以上であってよく、同一でも異なってもよい。本開示の目的で、窒素などのヘテロ原子は、該ヘテロ原子の原子価を充足する水素置換基および／またはここに記載する何れかの有機化合物の許容される置換基を含む。この開示は、有機化合物の許容される置換基により、いかなる方法でも限定されることを意図しない。また、用語「置換する」または「で置換」は、このような置換が置換原子および置換基の許容される原子価に従い、置換が安定な化合物、例えば、再配置、環化、排除などの変換を自然に受けない化合物をもたらすなどの限定を含意することを含む。ある態様において、反する記載がない限り、個々の置換基は、さらに場合により置換されていてよい(すなわち、さらに置換または非置換)。
【００４３】
ここで使用する用語「数平均分子量」または「Ｍｎ」は交換可能に使用でき、サンプルの全ポリマー鎖の統計平均分子量をいい、式
【数１】
2021511891.tif 000003
〔式中、Ｍｉは鎖の分子量であり、Ｎｉその分子量の鎖の数である。〕により定義される。Ｍｎは、ポリマーについて、例えば、ポリカーボネートポリマーについて、当業者により周知の方法、分子量標品、例えばポリカーボネート標品またはポリスチレン標品、好ましくは証明されたまたは追跡可能分子量標品により規定され得る。
【００４４】
ここで使用する「ポリマー」は、反復「構成単位」からなる分子である。構成単位は、モノマーの反応による。構成単位それ自体は、他の化合物の反応産物であり得る。ポリマーは、２以上の異なるモノマーの重合に由来し得て、それ故に２以上の異なる構成単位を含み得る。このようなポリマーは「コポリマー」と称される。「ターポリマー」は「コポリマー」の一部であり、３つの異なる構成単位がある。当業者は、特定のポリマーを考慮して、そのポリマーの構成単位を容易に認識し、構成単位が由来するモノマーの構造を容易に認識できる。ポリマーは、直鎖、分枝鎖、星型または樹状であり得る。一つのポリマーを他のポリマーに結合(移植)し得る。ポリマーの構成単位は、ポリマー鎖に沿って無作為に配置されてよく、個別的なブロックとして存在してよく、ポリマー鎖に沿って濃度勾配を形成するように配置されてよくまたはこれらの組み合わせであってよい。ポリマーは架橋してネットワークを形成し得る。
【００４５】
ここで使用する用語「単位」は、例えば、グリコリド反復単位がポリマーの個々のスチレン(コ)モノマー単位をいうように、個々の(コ)モノマー単位をいうように使用され得る。さらに、用語「単位」は、例えば、「グリコリド反復単位」がグリコリドブロック；「ポリラクチド単位」がポリラクチドブロック単位をいう；「ポリグリコリド単位」がポリグリコリドブロック単位をいうなどのように、重合ブロック単位をいうために使用され得る。このような使用は文脈から明らかである。
【００４６】
用語「コポリマー」は、２以上のモノマー種を有するポリマーをいい、ターポリマー(すなわち、３モノマー種を含むコポリマー)を含む。
【００４７】
ここで使用するナノ粒子またはｐＮＰに「取り込まれる」(incorporated)または「封入される」(encapsulated)は、ナノ粒子が形成するポリマーにより形成されるマトリクス内に物理的に捕捉される治療剤をいう。
【００４８】
ここで使用する用語「対象」は、脊椎動物、例えば哺乳類、魚類、鳥類、爬虫類または両生類であり得る。故に、ここに開示する方法の対象はヒト、非ヒト霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ネコ、モルモットまたは他の齧歯類であり得る。本用語は特定の年齢または性別を示さない。故に、雄性であれ雌性であれ、成熟および新生対象ならびに胎児が包括されることが意図される。ある態様において、対象は哺乳動物である。患者は、疾患または障害を有する対象をいう。用語「患者」はヒトおよび獣医対象を含む。
【００４９】
ここで使用する用語「処置」は、疾患、病態または障害を治癒、軽減、安定化または予防する意図を伴う患者の医学的管理をいう。この用語は積極的処置、すなわち、特に疾患、病態または障害の改善に向けた処置を含みまた原因処置、すなわち、関連疾患、病態または障害の原因の排除に向けた処置も含む。さらに、この用語は軽減的処置、すなわち、疾患、病態または障害の治癒ではなく、症状のために考慮される処置；予防的処置、すなわち、関連疾患、病態または障害の発症を最小化するまたは部分的もしくは完全に阻止するための処置；および支持的処置、すなわち、関連疾患、病態または障害の関連に向けた他の特定の治療を補うために用いる処置；および支持的処置、すなわち、関連疾患、病態または障害の関連に向けた他の特定の治療を補うために用いる処置を含む。種々の態様において、本用語は哺乳動物(例えば、ヒト)を含む対象のあらゆる処置を包含し、(ｉ)疾患の素因があり得るがまだそれを有するとして診断されていない対象において疾患が発症するのを予防する；(ii)疾患を阻止する、すなわち、その進展を停止させる；または(iii)疾患を無くす、すなわち、疾患の退行を起こすことを含む。ある態様において、対象は霊長類などの哺乳動物であり、さらなる態様において、対象はヒトである。用語「対象」は家庭用動物(例えば、ネコ、イヌなど)、家畜、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど)および実験動物(例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ミバエ(fruit fly)など)も含む。
【００５０】
ここで使用する用語「予防」または「予防する」は、特に、前もっての行動により、起こることを発生を防止、回避、予防、未然防止、停止または妨害することをいう。ここで軽減、阻止または予防が使用されるとき、特に断らない限り、他の２つの単語も明示的に開示されると理解される。
【００５１】
ここで使用する用語「診断」は、技術者、例えば、医師による身体検査を受けており、ここに開示する化合物、組成物または方法で診断または処置され得る状態を有することが判明していることを意味する。
【００５２】
ここで使用する用語「接触」は、開示する化合物および細胞、標的タンパク質または他の生物学的実体を、直接的に(すなわち、細胞、標的タンパク質または他の生物学的実体自体と相互作用することにより)または間接的に(すなわち、細胞、標的タンパク質または他の生物学的実体自体の活性が依存する他の分子、補因子、因子またはタンパク質と相互作用することにより)、化合物が標的の活性に影響し得るようにすることをいう。
【００５３】
ここで使用する用語「有効量」および「有効である量」は、所望の結果の達成または望ましくない症状に影響するのに十分な量をいう。例えば、「治療有効量」は、所望の治療結果の達成または望ましくない状態に影響するのに十分であるが、一般に有害副作用を起こすには不十分である量をいう。ある特定の患者についての特定の治療有効用量レベルは、処置する障害および障害の重症度；用いる特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的健康、性別および食習慣；投与の時間；投与経路；用いる特定の化合物の排泄速度；処置期間；用いる特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物および医学分野で周知のその他の因子を含む、多様な因子による。例えば、化合物を所望の治療効果の達成より低いレベルの用量で開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に投与量を増やすのは、十分に当業者の技術範囲内である。所望により、有効１日用量を投与の目的で複数用量に分割してよい。結果として、一用量組成物は、その量または１日用量を構成するその分割量を含み得る。投与量は、何らかの懸念がある場合には、個々の医師により調節され得る。投与量は変わってよく、１〜数日間、連日１以上の用量投与により投与され得る。あるクラスの医薬品についての適切な投与量のガイダンスを文献で見ることができる。さらに種々の態様において、製剤を「予防有効量」、すなわち、疾患または状態の予防に有効な量で投与し得る。
【００５４】
ここで使用する「治療剤」は、塩、エステル、アミド、水和物、溶媒和物などを含むが、これらに限定されない、レスベラトロールおよびケルセチンなどのここに開示する治療剤の薬学的に許容される、薬理学的に活性な誘導体もいう。
【００５５】
ここで使用する「キット」は、キットを構成する少なくとも２つの要素の集合をいう。合わせて、これら要素はある目的のための機能的単位を構成する。個々のメンバー要素は物理的に一緒にまたは別々に包装され得る。例えば、キットの使用指示を含むキットは、該指示を他の個々のメンバー要素と物理的一緒に含んでも含まなくてもよい。むしろ、指示は、文書の形でまたはコンピューター読み取り可能記憶デバイスもしくはインターネットウェブサイトからダウンロードしてまたは記録した映像として提供され得る電子的形態で、独立した要素として提供され得る。
【００５６】
ここで使用する「指示」は、キットに関係する妥当な材料または方法を記載する文書を意味する。これらの物は、次のものの何れかの組み合わせを含み得る：背景情報、要素一覧およびその入手可能性情報(購入情報など)、キットを使用するための短縮版または詳細プロトコール、トラブルシューティング、参考文献、技術的サポートおよび何れかの他の関連文書。指示はキットと共にまたは別のメンバー要素として、紙の形でまたはコンピューター読み取り可能記憶デバイスもしくはインターネットウェブサイトからダウンロードしてまたは記録した映像として提供され得る電子的形態提供され得る。指示は１以上の文書を含んでよく、将来的アップデートを含むことを意図する。
【００５７】
ここで使用する用語「治療剤」は、生物(ヒトまたは非ヒト動物)に投与したとき、局所および／または全身作用により、所望の薬理学的、免疫原性および／または生理的効果を誘発する、あらゆる合成または天然に存在する生物学的に活性な化合物または組成物を含む。
【００５８】
ここで使用する用語「誘導体」は、親化合物(例えば、ここに開示する化合物)の構造に由来する構造を有し、その構造が個々に開示するものに十分類似し、その類似性から、当業者が本願発明化合物と同等または類似の活性および有用性を発揮すると予測するまたは前駆体として本願発明化合物と同等または類似の活性および有用性を誘発すると予測する、化合物をいう。誘導体の例は、親化合物の塩、エステル、アミド、エステルまたはアミドの塩およびＮ−オキシドを含む。
【００５９】
ここで使用する「心血管疾患」は、心臓、循環系または心臓および循環系両方に影響する疾患、状態または障害である。循環系は、心血管系およびリンパ系を含む。リンパ系はリンパを分配する。心血管系は、血管系、主に動脈および静脈であり、これは、血液を心臓、脳および、腕、脚、腎臓および肝臓などの、しかしこれに限定されない末梢臓器に輸送し、そこから輸送する。冠動脈系は心臓に血液を供給する。頸動脈系は脳に血液を供給する。末梢血管系は、血液を、手、脚、腎臓および肝臓などの、しかしこれに限定されない末梢臓器に(動脈により)およびそこから(静脈により)運搬する。冠動脈系、頸動脈系および末梢動脈系を含む末梢血管系は、心血管系の下位組織である。
【００６０】
ここで使用する「血管疾患」は、一般に循環系に影響する疾患、状態または障害をいう。特に「血管疾患」は、冠血管系、頸動脈系および末梢血管系の疾患、障害または状態をいう。
【００６１】
「血管疾患」は「心血管疾患」の一部である。
【００６２】
心血管疾患の例は、心臓弁疾患、不整脈、心不全および先天性心疾患を含むが、これらに限定されない心臓の疾患ならびにアテローム性動脈硬化症、血栓症、再狭窄、出血、血管切開または穿孔、不安定プラーク、慢性完全閉塞、跛行、血管と人工移植片の吻合増殖、末梢動脈疾患、頸動脈疾患、冠動脈疾患、大動脈瘤、腎臓(腎)動脈疾患、レイノー症候群、ハージャー病、末梢静脈疾患、静脈瘤、静脈の血餅、凝血障害およびリンパ浮腫を含むが、これらに限定されない血管疾患を含む。
【００６３】
ここで使用する「埋込型医療機器」は、外科的にまたは内科的に患者体内にまたは医学的介入により自然開口部に完全にまたは一部導入され、この過程の後にそこにとどまることが意図される、あらゆるタイプの機器をいう。埋め込み期間は本質的に永久であり、すなわち、患者が亡くなるまでその場所に残ることが意図されるか、または物理的に除かれるまでである。埋込型医療機器の例は、血管移植片、自己膨張可能ステント、バルーン膨張可能ステントおよびステント移植片を含むが、これらに限定されない。
【００６４】
埋込型医療機器の１タイプはステントである。ステントは、一般に円筒形であり、冠動脈疾患、頸動脈疾患および末梢動脈性疾患を含むが、これらに限定されない疾患または障害により血管が狭小化または閉塞したとき、患者体内の血管または他の管腔または管の一部を、開放したままおよび時には拡張するために機能する、埋込型医療機器である。ステントは、限定されないが、神経、頸動脈、冠血管、肺、腎臓、胆管、回腸、大腿および膝窩、ならびに他の末梢脈管構造ならびに他の身体管腔で使用され得る。ステントは、血管障害および他の障害の処置または予防に使用され得る。ステントについて、「外側表面」は管腔内部に面した管腔表面、管腔壁に面した反管腔側表面および存在するならば反管腔側表面と管腔表面を結ぶ側壁表面を含む。
【００６５】
「カテーテル」は、自然の体腔、導管または管に挿入するための、薄い、可撓性チューブであり、流体の導入または除去、血管膨張または血管もしくは腔の開放維持に使用できる。
【００６６】
「血管カテーテル」は、挿入可能医療機器の一例である。血管カテーテルは、患者体外にある一端に操作手段および患者の動脈または血管に挿入された他端もしくはその近辺に操作可能デバイスを備えた薄い、可撓性チューブである。カテーテルは、標的部位への、しばしば薬物を含む、流体の導入に使用され得る。カテーテルは、ステントの標的部位への送達に使用できまたは血管形成術に使用するバルーンの送達に使用され得る。カテーテルは複数の機能を発揮し得る。
【００６７】
ここで使用する「バルーン」は管状膜を形成する比較的薄い、可撓性材料であり、通常血管カテーテルを伴う。患者の管の特定の位置に配置されたとき、それが配置される血管の内径または管腔直径と本質的に同じである外径まで拡張または膨張され得る。バルーンは水または生理食塩水(ここで食塩水は塩、一般に塩化ナトリウムを含むことを意図する)、すなわち、血液と本質的に等張である食塩水などの液体媒体を使用して膨張され得るが、これに限定されない。
【００６８】
「バルーンカテーテル」は、カテーテルの一端にバルーンを備えたカテーテルのシステムである医療機器をいう。
【００６９】
ＤＣＢカテーテルバルーンに関して、「外側表面」は、いずれにしても血管壁または体液などの身体組織と接触する空間的配向の何れかの表面をいう。
【００７０】
特に断らない限り、ここでいう温度は大気圧(すなわち１気圧)に基づく。
【００７１】
ここで使用するある略語を次に定義する。
・  ｄは日であり；
・  ＤＣＢは薬物被覆バルーンであり；
・  ｍｉｎは分であり；
・  ｐＮＰは本明細書をとおして開示する本発明のポリマーナノ粒子であり、所望によりＴＡＲおよびＱＵＥＲを含むポリフェノール組成物などの治療剤を含み；
・  ＱＵＥＲはケルセチンでありそして
・  ＲＥＳＶはレスベラトロールであり；
・  ｓおよびｓｅｃは相互交換可能使用でき、秒をいい；そして
・  ＴＡＲはトリアセチルレスベラトロールである。
【００７２】
Ｂ. ポリマーナノ粒子(ＰＮＰ)組成物
生理活性剤の血管細胞への送達は、血管組織を標的とでき、臨床的効果のために治療剤を放出するシステムを必要とする。現在利用可能なＤＣＢカテーテルバルーンは、組織内への送達を促進するために、尿素、シトレートまたはイオプロミドなどの親水性添加物のみを使用しているが、接着および最大送達の促進のためにはほとんど何もされていない。生理活性剤の適切な沈着および送達のために、本発明がここに開示するのは、２つの新規要素：(１)疎水性ポリマーナノ粒子マトリクスに捕捉または封入された血管再狭窄を阻止し、かつ血管壁の再内皮化も促進する１以上の抗増殖性治療剤、例えば、レスベラトロールまたはその誘導体および／またはケルセチンまたはその誘導体および(２)生理学的ｐＨでカチオン性部分を有するポリマーを含むナノ粒子を含む、１以上の治療剤を含む新規ポリマーナノ粒子(ｐＮＰ)組成物である。特定の理論に拘束されることを意図しないが、ポリマーカチオン性部分を有するポリマーは、少なくとも一部、外側カチオン性層を形成すると考えられる。カチオン性部分が永久荷電、例えば、４級アンモニウム部分を含むならば、外側カチオン性層は局所ｐＨにかかわらず荷電される。故に、レスベラトロールおよびケルセチンを封入する本発明のｐＮＰ(例えば、トリアセチルレスベラトロールおよびケルセチン捕捉ｐＮＰ)は、バルーンの膨張後放出され、バルーン表面との接触により、脈管構造への付着が促進される。
【００７３】
ある態様において、本発明は、ポリマーナノ粒子組成物(ｐＮＰ)および１以上の治療剤を含むｐＮＰ組成物に関する。本発明の１以上の治療剤を含むｐＮＰ組成物を、薬物被覆バルーンを含むデバイスと共に使用でき、本発明の組成物およびデバイスを使用する末梢動脈疾患を処置する方法に使用できる。さらなる態様において、ｐＮＰは、例えば、４級アンモニウム部分により提供される、正電荷を有する少なくとも一つのポリマーを含む。特定の理論に拘束されることを意図しないが、正電荷を有するポリマーを含むｐＮＰは、バルーンマトリクスへの強固な結合、続く血管壁の負荷電二層への接着を可能とする。なおさらなる態様において、正電荷を有する少なくとも一つのポリマーは正電荷を有する乳酸グリコール酸共重合体である。なおさらなる態様において、ｐＮＰは、レスベラトロールまたはその誘導体、ケルセチンまたはその誘導体またはそれらの組み合わせを含む１以上の治療剤を含む。
【００７４】
ある態様において、本発明は、１以上の治療剤を封入するｐＮＰに関する。さらなる態様において、ｐＮＰは、レスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される治療剤を封入する。さらなる態様において、ｐＮＰは、ケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される治療剤を封入する。さらに他の態様において、ｐＮＰは、レスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第一治療剤および、所望によりケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第二治療剤を封入する。
【００７５】
種々の態様において、これら治療剤の比は、重量パーセントで約１：５、約１：２および約１：１レスベラトロール対ケルセチンからなる群から選択される範囲内である。本発明は、さらに第一活性剤および第二活性剤を重量パーセントで約１：１、約１：２、約２：１、約１：２.５、約２.５：１、約１：４、約４：１、約１：５、約５：１、約１：１０、約１０：１、約１：２０、約２０：１、約１：２５、約２５：１、約１：５０、約５０：１、約１：１００、約１００：１、約１：２００、約２００：１、約１：２５０、約２５０：１、約１：５００および約５００：１からなる群から選択される比で含むｐＮＰを提供する。
【００７６】
種々の態様において、ｐＮＰはポリマー鎖あたり少なくとも１つの正電荷を有する第一ポリマーおよび第二ポリマーを含む。
【００７７】
さらなる態様において、第一ポリマーは、ポリマー鎖あたり１以上の正荷電部分を含むアクリレートポリマーである。種々の態様において、「正荷電部分」は、４級アンモニウム基などの生理学的ｐＨで正荷電であるか、共有結合構造により正電荷を担持できる官能基を含む。さらなる態様において、正電荷を有する部分はアンモニウム部分、４級アンモニウム部分またはそれらの組み合わせである。さらなる態様において、第一ポリマーはポリマー鎖あたり１以上の正荷電部分を含むアクリレートポリマーである。さらに他の態様において、アクリレートポリマーはメタクリレートポリマーである。さらに他の態様において、第一ポリマーは、４級化アンモニウム基が低割合であるアクリル酸とメタクリル酸のコポリマーである。なおさらなる態様において、第一ポリマーは、８５〜９８重量％アクリル酸またはメタクリル酸のフリーラジカル重合Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステルおよび１５〜２重量％アルキル基に４級アンモニウム基を有する(メタ)アクリレートモノマーからなるコポリマーまたはコポリマーの混合物からなる。さらに他の態様において、第一ポリマーは、４級アンモニウム基を有するモノマーを含む(メタ)アクリレートコポリマー、例えばＥＰ−Ａ−１８１５１５およびＤＥ１６１７７５１に記載のもののようなトリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドである。なおさらなる態様において、第一ポリマーは４級化ジメチルアミノエチルメタクリレートコポリマーである。
【００７８】
さらなる態様において、アクリル酸またはメタクリル酸のＣ１〜Ｃ４アルキルエステルを含む第一ポリマーは、メチルアクリレート、エチルアクリレート、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレートおよびメチルメタクリレートである。さらに他の態様において、４級アンモニウム基を有する(メタ)アクリレートモノマーを含む第一ポリマーは、２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドである。
【００７９】
さらなる態様において、第一ポリマーは、例えば、９３〜９８重量％アクリル酸またはメタクリル酸のフリーラジカル重合Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステルおよび７〜２重量％２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドから製造されたコポリマーである。さらに他の態様において、このようなポリマーは、５０〜７０重量％メチルメタクリレート、２０〜４０重量％エチルアクリレートを含む。なおさらなる態様において、第一ポリマーは、例えば、６５重量％メチルメタクリレート、３０重量％エチルアクリレートおよび５重量％２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドからなるコポリマーを含む。このタイプの適切なポリマーは、Evonikから商品名EUDRAGIT(登録商標)RSの下に利用可能である。
【００８０】
さらなる態様において、第一ポリマーは、例えば、８５〜９３重量％未満のアクリル酸またはメタクリル酸のフリーラジカル重合Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステルおよび１５〜７重量％を超える２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドから製造されたコポリマーを含む。さらに他の態様において、このようなポリマーは、５０〜７０重量％メチルメタクリレート、２０〜４０重量％エチルアクリレートを含む。なおさらなる態様において、第一ポリマーは、例えば、６０重量％メチルメタクリレート、３０重量％エチルアクリレートおよび１０重量％２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドからなるコポリマーを含む。このタイプの適切なポリマーは、Evonikから商品名EUDRAGIT(登録商標)RLの下に利用可能である。
【００８１】
第一ポリマーは、モノマー混合物に溶解したフリーラジカル開始剤存在下のバルク重合により製造できる。ポリマーは同様に溶液または沈殿重合によっても製造できる。ポリマーは、この方法で、微粉末の形態で得ることができ、これは、バルク重合の場合、粉砕、溶液および沈殿重合の場合、例えば噴霧乾燥により達成可能である。
【００８２】
種々の態様において、第二ポリマーはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択される。さらに他の態様において、第二ポリマーはＡ−Ｂブロックコポリマーであり、ここで、ブロックＡはポリ乳酸、ポリグリコール酸またはポリ(カプロラクトン)であってよく、ブロックＢは独立してブロックＡと異なるポリマーであり、ポリ乳酸、ポリグリコール酸またはポリ(カプロラクトン)から選択される。なおさらなる態様において、第二ポリマーはターポリマーである。ターポリマーは交互、ランダム交互または純粋ランダムコポリマーまたはブロックコポリマーであり得る。
【００８３】
さらなる態様において、第二ポリマーは、ラクチドとグリコリドのコポリマー、すなわち、ＰＬＧＡと略されるポリ(ラクチド−コ−グリコリド)である。さらに他の態様において、第二ポリマーはＰＬＧＡであり、該ＰＬＧＡのラクチド対グリコリドのモル比は９０：１０〜１０：９０であり得る。なおさらなる態様において、第二ポリマーは、７５：２５〜２５：７５のラクチド対グリコリドのモル比のＰＬＧＡである。なおさらなる態様において、第二ポリマーは、６０：４０〜４０：６０のラクチド対グリコリドのモル比のＰＬＧＡである。ある態様において、第二ポリマーは、５０：５０のラクチド対グリコリドのモル比のＰＬＧＡである。ＰＬＧＡの例は、Resomer(登録商標)RG504Hポリ(乳酸−コ−グリコール酸)ＰＬＧＡ  ５０：５０などの商品名Resomer(登録商標)の下に商業的に入手可能である。
【００８４】
さらなる態様において、第二ポリマーは、約５,０００〜約１００,０００ダルトンの分子量のＰＬＧＡである。さらに他の態様において、第二ポリマーは、約３０,０００〜約６０,０００ダルトンの分子量のＰＬＧＡである。なおさらなる態様において、第二ポリマーは、約３５,０００〜約５７,０００ダルトンの分子量のＰＬＧＡである。さらに他の態様において、第二ポリマーは、約３８,０００〜約５４,０００ダルトンの分子量のＰＬＧＡである。ここで使用する用語「分子量」は、「重量平均分子量」をいう。
【００８５】
本発明のｐＮＰは、本発明の第一ポリマーおよび第二ポリマーを含むナノ粒子の形成に適する種々の技術、例えば、単一エマルジョン蒸発技術により形成され得る。簡潔には、有機相を、適当な有機溶媒の存在下、第一ポリマーおよび第二ポリマーの混合により作る。第一ポリマー対第二ポリマーの重量比は、約１：１〜約１：１０であり得る。さらなる態様において、第一ポリマー対第二ポリマーの重量比は約１：２〜約１：４である。適当な溶媒は、約８：２の体積比の酢酸エチル対アセトンを含む。撹拌したら、第一治療剤および所望により第二治療剤を、上記のとおり製造した有機相に加える。次いで、１以上の治療剤を封入するナノ粒子の形成を、前記に、所望によりTween 80などの洗剤を含み得る水相に滴加して、達成し得る。製造は、さらにこうして形成したエマルジョンのマイクロフルイダイジングを含む。次いで、エマルジョンまたはマイクロフルイダイズエマルジョンの有機相を減圧下蒸発により除去し(例えば、「回転蒸発」)、続いて、得られたナノ粒子懸濁液を、適当な量のトレハロースなどの薬剤、例えば、ナノ粒子懸濁液対トレハロース１：２質量比で混合し得る。混合は、さらに適当な凝集破壊剤、例えば、ポリビニルアルコールを含んでよく、約１：４〜約１：１０の凝集破壊剤対ナノ粒子懸濁液の質量比で加えられ得る。
【００８６】
種々の態様において、第一ポリマー対第二ポリマーの重量比は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０；前記比の何れかの組み合わせまたは前記比の何れかの二つに含まれる何れかの範囲であり得る。さらなる態様において、第一ポリマー対第二ポリマーの重量比は、約１.０：１.０、１.０：１.１、１.０：１.２、１.０：１.３、１.０：１.４、１.０：１.５、１.０：１.６、１.０：１.７、１.０：１.８、１.０：１.９、１.０：２.０、１.０：２.１、１.０：２.２、１.０：２.３、１.０：２.４、１.０：２.５、１.０：２.６、１.０：２.７、１.０：２.８、１.０：２.９、１.０：３.０、１.０：３.１、１.０：３.２、１.０：３.３、１.０：３.４、１.０：３.５、１.０：３.６、１.０：３.７、１.０：３.８、１.０：３.９、１.０：４.０、１.０：４.１、１.０：４.２、１.０：４.３、１.０：４.４、１.０：４.５、１.０：４.６、１.０：４.７、１.０：４.８、１.０：４.９、１.０：５.０、１.０：５.１、１.０：５.２、１.０：５.３、１.０：５.４、１.０：５.５、１.０：５.６、１.０：５.７、１.０：５.８、１.０：５.９、１.０：６.０、１.０：６.１、１.０：６.２、１.０：６.３、１.０：６.４、１.０：６.５、１.０：６.６、１.０：６.７、１.０：６.８、１.０：６.９、１.０：７.０、１.０：７.１、１.０：７.２、１.０：７.３、１.０：７.４、１.０：７.５、１.０：７.６、１.０：７.７、１.０：７.８、１.０：７.９、１.０：８.０、１.０：８.１、１.０：８.２、１.０：８.３、１.０：８.４、１.０：８.５、１.０：８.６、１.０：８.７、１.０：８.８、１.０：８.９、１.０：９.０、１.０：９.１、１.０：９.２、１.０：９.３、１.０：９.４、１.０：９.５、１.０：９.６、１.０：９.７、１.０：９.８、１.０：９.９、１.０：１０.０；前記比の何れかの組み合わせまたは前記比の何れかの二つに含まれる何れかの範囲であり得る。
【００８７】
種々の態様において、本発明のナノ粒子は、直径約５０nm〜約５００nmである。さらなる態様において、本発明のナノ粒子は、直径約１００nm〜約５００nm、直径約１００nm〜約４００nm、直径約１００nm〜約３００nmまたは直径約１００nm〜約２００nmである。さらに他の態様において、本発明のナノ粒子は直径約１５０nm〜約５００nm、直径約１５０nm〜約４００nm、直径約１５０nm〜約３００nmまたは直径約１５０nm〜約２００nmである。なおさらなる態様において、本発明のナノ粒子は、直径約５０nm、１００nm、１２０nm、１３０nm、１５０nm、１６０nm、１７０nm、１８０nm、１９０nm、２００nm、２１０nm、２２０nm、２３０nm、２４０nm、２５０nm、前記値の何れかの組み合わせまたは前記に含まれる何れかの範囲を有する。
【００８８】
種々の態様において、本発明のナノ粒子は、多分散指数約０.０５〜約０.２５を有する。さらなる態様において、本発明のナノ粒子は、約０.１０、０.１１、０.１２、０.１３、０.１４、０.１５、０.１６、０.１７、０.１８、０.１９、０.２０、０.２１、０.２２、０.２３、０.２４または０.２５未満の多分散指数を有する。さらに他の態様において、本発明のナノ粒子は約０.１０、０.１１、０.１２、０.１３、０.１４、０.１５、０.１６、０.１７、０.１８、０.１９、０.２０、０.２１、０.２２、０.２３、０.２４、０.２５、前記値の何れかの組み合わせまたは前記に含まれる何れかの範囲の多分散指数を有する。
【００８９】
種々の態様において、本発明のナノ粒子は、生理学的ｐＨで正ゼータ電位を有する。さらなる態様において、本発明のナノ粒子は、生理学的ｐＨで約０.１０、０.１１、０.１２、０.１３、０.１４、０.１５、０.１６、０.１７、０.１８、０.１９、０.２０、０.２１、０.２２、０.２３、０.２４、０.２５、０.２６、０.２７、０.２８、０.２９、０.３０、０.３１、０.３２、０.３３、０.３４、０.３５、０.３６、０.３７、０.３８、０.３９、０.４０、０.４１、０.４２、０.４３、０.４４、０.４５、０.４６、０.４７、０.４８、０.４９、０.５０、前記値の何れかの組み合わせまたは前記に含まれる何れかの範囲のゼータ電位(mVで表す)を有する。
【００９０】
種々の態様において、本発明のナノ粒子は、ｐＨ非依存的正ゼータ電位を有する。さらなる態様において、本発明のナノ粒子は、約０.１０、０.１１、０.１２、０.１３、０.１４、０.１５、０.１６、０.１７、０.１８、０.１９、０.２０、０.２１、０.２２、０.２３、０.２４、０.２５、０.２６、０.２７、０.２８、０.２９、０.３０、０.３１、０.３２、０.３３、０.３４、０.３５、０.３６、０.３７、０.３８、０.３９、０.４０、０.４１、０.４２、０.４３、０.４４、０.４５、０.４６、０.４７、０.４８、０.４９、０.５０、前記値の何れかの組み合わせまたは前記に含まれる何れかの範囲のｐＨ非依存的ゼータ電位(mVで表す)を有する。
【００９１】
Ｃ. レスベラトロール
種々の態様において、本発明は、再狭窄および／または冠動脈心疾患の進行もしくは再発を予防するための対象へのレスベラトロールまたはその誘導体の投与に関する。
【００９２】
レスベラトロールはその天然形態で、すなわち、ブドウの皮、ワインまたは他の植物由来組成物から単離して投与できまたは実験室で化学合成して(例えば、Moreno-Manas et al., (1985) Anal. Quim 81:157-61; Jeandet et al., (1991) Am. J. Enol. Vitic. 42:41-46;またはGoldberg et al. (1994) Anal. Chem. 66:3959-63の方法使用)または商業的に、例えば、Sigma-Aldrich Corporation(St. Louis, Mo.)から入手して投与できる。
【００９３】
レスベラトロール活性剤は、薬理学的に許容される塩、エステル、アミド、プロドラッグもしくはアナログの形態またはこれらの組み合わせとして投与され得る。しかしながら、不活性エステル、アミド、プロドラッグまたはアナログから活性形態への変換は、標的組織または細胞への到達前にまたは到達により生じなければならない。活性剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグおよびアナログは、合成有機化学の当業者に知られ、例えば、J. March, “Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure,” 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992)に記載の方法を使用して、製造され得る。例えば、塩基付加塩は、活性剤の１以上の遊離ヒドロキシル基と適当な塩基の反応を含む、慣用手段を使用して、中性薬物から製造される。一般に、中性形態の薬物をメタノールまたはエタノールなどの極性有機溶媒に溶解し、塩基をそこに加える。得られた塩は沈殿するかまたは低極性溶媒の付加により溶液から析出させ得る。塩基付加塩の形成に適当な塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなどの無機塩基を含むが、これらに限定されない。エステルの製造は、薬物の分子構造内に存在し得るヒドロキシル基の官能化を含む。エステルは、一般に遊離アルコール基、すなわち、式ＲＣＯＯＨ(ここで、Ｒはアルキルおよび好ましくは低級アルキルである)のカルボン酸由来の部分のアシル置換誘導体である。エステルを、所望により、慣用の水素化分解または加水分解法を使用して、遊離酸に変換し得る。アミドおよびプロドラッグの製造は類似法で実施され得る。活性剤の他の誘導体およびアナログは、合成有機化学の当業者に知られる標準技術を使用して製造できまたは関連文献を参照して推定され得る(米国特許６,０２２,９０１参照)。
【００９４】
レスベラトロールは、化学的に３,４’,５−トリヒドロキシ−ｔｒａｎｓ−スチルベン、５−[(１Ｅ)−２−(４−ヒドロキシフェニル)エテニル]−１,３−ベンゼンジオールとして知ら得る。それは、式Ｉの構造を有する。
【化１】
2021511891.tif 000004
【００９５】
ｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−レスベラトロールの誘導体の非限定的例は、化合物のヒドロキシル基の１以上の水素が置換されてエステルまたはエーテルを形成するものを含む(例えば、式Ｉ参照)。エーテル形成例は、メチル基およびエチル基などのアルキル鎖ならびにグルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトースおよびスクロースなどのコンジュゲート単糖または二糖の付加を含むが、これらに限定されない。ヒドロキシル基のさらなる修飾は、グルクロン酸抱合または硫酸化を含む。
【００９６】
ｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−レスベラトロールの誘導体の非限定的例は、化合物のヒドロキシル基の１以上の水素が置換されてエステルまたはエーテルを形成するものを含む(例えば、式Ｉ参照)。エーテル形成例は、メチル基およびエチル基などのアルキル鎖の付加ならびにグルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトースおよびスクロースなどのコンジュゲート単糖または二糖を含むが、これらに限定されない。ヒドロキシル基のさらなる修飾は、グルクロン酸抱合または硫酸化を含む。
【００９７】
エステル化生成物は、ＲＧＤまたはＫＧＤなどのアミノ酸セグメントの付加により形成した化合物またはレスベラトロールヒドロキシル基と他のカルボン酸の反応に由来する他の化合物を含むが、これらに限定されない。
【００９８】
さらなる誘導体は、親レスベラトロール化合物または官能化レスベラトロールバリアントの酸化的二量体化または官能基付加に由来する化合物を含むが、これらに限定されない。これらの化合物の例は、４位、２’位および３’位へのヒドロキシル、メトキシおよびエトキシ基の付加に由来する物質を含む。二量体化は、縮合環系を形成する１つのレスベラトロール分子のエタン結合と第二レスベラトロール分子のヒドロキシル基の一つの反応に由来する。４位、２’位および３’位のアルキル化は、メチル、エチルおよびプロピルを含むが、これらに限定されない基の付加ならびに４−メチル−２−ペンテン、４−メチル−３−ペンテンおよびイソペンタジエンなどの大きな炭素鎖の付加により、他の誘導体を形成する。
【００９９】
さらなる誘導体は、親分子のヒドロキシル基の何れかの喪失、別の位置へのヒドロキシル基付加に由来する化合物および脱ヒドロキシル化化合物の官能化バリアントを提供する前記反応に由来し得る何らかの化合物を含むが、これらに限定されない。
【０１００】
例示的レスベラトロール誘導体の構造を、下記式II−VIIに示す。トリアセチルレスベラトロール(ＴＡＲ)の構造は式VIIに示す。
【化２】
2021511891.tif 000005
【０１０１】
レスベラトロールは、再狭窄の多くの経路に関与し得る。故に、本発明の組成物、デバイスおよび方法で使用される限り、レスベラトロールは、再狭窄の問題の原因の全てではないにしても多くに対処し得る。例えば、それは抗炎症性利益を提供し、内皮細胞機能を促進する。レスベラトロールが、インビボおよびインビトロ両者で、内皮前駆細胞の細胞増殖を刺激するとの報告がある(J. Gu, et al., 2006, J Cardiovasc Pharmacol., 47(5): 711-721参照)。特定の理論に拘束されることを意図しないが、これが再内皮化の重要な過程であり得る可能性がある。
【０１０２】
レスベラトロールは、内皮一酸化窒素合成酵素活性も増加させる(Wallerath T et al., Circulation. 2002 Sep. 24; 106(13):1652-8参照)。さらに、レスベラトロールは、内皮依存性血管弛緩も増強する(Rush J W, Quadrilatero J, Levy A S, Ford R J. Exp Biol Med (Maywood). 2007 June; 232(6):814-22)。それ故に、本発明によるＤＣＢおよび／または他の医療機器へのレスベラトロールの使用は、ステント埋め込み後の再狭窄低減および血流改善のための多面的アプローチを提供する。
【０１０３】
薬物溶出ステント以外の方法を介する再狭窄処置におけるレスベラトロールの使用のさらなる情報は、引用により全体として本明細書に包含させる、“Administration of resveratrol to prevent or treat restenosis following coronary intervention”なる名称のDavid William Goodmanの米国特許６,０２２,９０１に記載されている。
【０１０４】
レスベラトロールは、赤ワイン摂取による心保護の報告と関連しているポリフェノールである。赤ワイン摂取により報告される心保護効果は、フランス南西部のＣＨＤによる死亡率の低さを記載する新しい用語である、「フレンチ・パラドックス」を報告する疫学調査により注目された。この地区の住民は血清コレステロールおよび血圧が高く、アメリカ人より多くラードおよびバターを食するにも関わらず、他の西洋社会よりＣＨＤによる死亡が４０％少ない。この逆説的効果は、赤ワインの毎日の摂取が寄与している。疫学調査は、定期的にアルコールを摂取する集団のＣＨＤリスク減少を示唆するが、かなりのデータが、他のアルコール飲料よりワインが大きな保護を提供することを示す。
【０１０５】
レスベラトロールは、ブドウ、マルベリー、ピーナツおよびブドウの木などの食品に見られるフィトアレキシンポリフェノールである。ブドウ自体の中で、レスベラトロールは皮に最も豊富である(約５０〜１００μg／gm)。１液量オンスの赤ワインは、約１６０μgレスベラトロールを提供する。レスベラトロールがすぐに接合して、グルクロニドおよびスルフェートを形成することは、経口投与レスベラトロール濃度が治療に有用なレベルに達し得ない証拠として議論されている。しかしながら、摂取直後、レスベラトロールは血漿、心臓、肝臓および腎臓で測定され得る。慢性摂取は、さらに心臓および肝臓などの組織のレスベラトロールのレベルを増加させる。
【０１０６】
他の研究者らによる先の報告は、レスベラトロールが、血管の健康を促進するために多様な機構を介して作用することを示している。抗酸化剤ポリフェノールとして、低密度リポタンパク質の酸化を制限し、そうして脂肪線条形成を阻止する。さらにＮＦκＢ活性化阻害を介する抗炎症性効果を示す。いくつかの研究所で、レスベラトロールがｅＮＯＳ活性増加により内皮機能を促進することが証明されており、最近の報告は、この効果の機構がｅＮＯＳリン酸化増加であることを示唆している。レスベラトロールは、おそらく、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性化阻害により、酸化因子傷害に対して内皮保護も促進する。最後に、レスベラトロールは、接着分子発現阻害により、炎症性細胞の血管内皮への接着を阻害する。
【０１０７】
先の報告は、血管平滑筋細胞(ＶＳＭＣ)増殖阻害におけるレスベラトロールの有効性を示す。例えば、有糸分裂促進因子エンドセリン−１および血小板由来増殖因子で刺激したＶＳＭＣで、レスベラトロールは細胞周期トラバースを阻害し、冠動脈平滑筋において、レスベラトロールは、エンドセリン−１誘発マップキナーゼ刺激を阻害した。
【０１０８】
これらの効果の機構は、一部、テトラヒドロバイオプテリン(ＢＨ４)生合成生合成の上方制御に至るレスベラトロール介在ＥＲ活性化による。本発明者らは、ＮＯＳ補因子として知られるＢＨ４レベルの結果的な増加が、細胞周期停止に至るＮＯ濃度上昇を促進することを示している。ＮＯ濃度の効果は、誘導型一酸化窒素合成酵素(ｉＮＯＳ)活性増加に依存するが、その発現には依存しない。この新規ＥＲ依存的経路に加えて、本発明は、レスベラトロールがＮＦκＢ活性化を極めて強力に阻害することも示す。
【０１０９】
故に、本発明によって、レスベラトロールは、ＶＳＭＣ増殖に多面的効果を発揮し、ＮＯ産生をＥＲ依存性経路介して増加させるだけでなく、ＥＲ非依存的経路を介してＮＦκＢ活性化を阻害もする。ＶＳＭＣ増殖に対して観察される効果をもたらすのは、これら２経路間の協同性である。
【０１１０】
レスベラトロールはエストラジオールと同じ結合部位を有し、ＥＲ−アルファアゴニストとして挙動するが、エストラジオールより低い結合親和性である。これは、女性月経周期異常および男性の女性化副作用などのエストロゲン副作用に対する保護を提供する。
【０１１１】
Ｄ. ケルセチン
種々の態様において、本発明は、再狭窄および／または冠動脈心疾患の進行もしくは再発を予防するための対象へのケルセチンまたはその誘導体の投与に関する。
【０１１２】
ケルセチンは、一般に植物でグリコンまたは炭水化物コンジュゲートとして見られる。ケルセチン自体、アグリコンまたはアグルコンである。すなわち、ケルセチンは、その構造に炭水化物部分を有しない。ケルセチンのアナログは、ルチンおよびツジンを含むそのグリコンコンジュゲートを含む。ルチンはケルセチン−３−ルチノシドとしても知られる。ツジンはクエルシトリン、ケルセチン−３−Ｌ−ラムノシドおよび３−ラムノシルケルセチンとしても知られる。玉ねぎはケルセチンコンジュゲートおよび炭水化物イソラムネチンを含み、ケルセチン−３,４’−ジ−Ｏ−ベータグルコシド、イソラムネチン−４’−Ｏ−ベータ−グルコシドおよびケルセチン−４’−Ｏ−ベータ−グルコシドを含む。ケルセチン自体は、水に実質的に不溶性である。ケルセチン炭水化物コンジュゲートは、ケルセチンよりはるかに高い水溶解度を有する。
【０１１３】
ケルセチンは、化学的に２−(３,４−ジヒドロキシフェニル)−３,５,７−トリヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンおよび３,３’,４’５,７−ペンタヒドロキシフラボンとして知られる。それは、構造式VIIIの構造を有する。
【化３】
2021511891.tif 000006
【０１１４】
ケルセチンは、フェノール性抗酸化剤であり、脂質過酸化反応を阻害することが示されている。インビトロおよび動物試験で、ケルセチンは肥満細胞、好塩基球および好中球の脱顆粒を阻害することが示されている。このような活性は、一部、ケルセチンの抗炎症および免疫調節活性の理由である。他のインビトロおよび動物試験は、ケルセチンがチロシンキナーゼを阻害し、炎症性メディエーター、ＮＦ−κＢの活性化を減少することを示す。ケルセチンのさらなる活性は、抗ウイルスおよび抗癌活性を含む。ケルセチンは、さらにアルドースレダクターゼを阻害することが知られる。本発明で使用するケルセチンまたはそのアナログは、チロシンキナーゼの阻害剤であり得る。ケルセチンの最も重要な生物学的活性は、その血小板活性化阻害とその抗炎症性性質であり、これら２つの効果の相互作用が、現在のＤＥＳと関連する血栓形成の発生を減少できる。ケルセチンは血小板活性化および血小板凝集両者を阻害する。血小板由来一酸化窒素を増強して、プロテインキナーゼＣ依存性ＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化を阻害する。さらに、ケルセチンは、ホスホイノシチドキナーゼ阻害により血小板凝集を阻害する。本発明の状況に妥当なケルセチンまたはそのアナログのさらなる性質は、細胞周期阻害、平滑筋細胞増殖および／または遊走阻害を含む。適当なケルセチンのアナログ／誘導体は、そのグリコンコンジュゲートルチンおよびツジンを含む(米国特許出願公開２００７／０２１２３８６(Patravale et al.)参照)。
【０１１５】
ケルセチンおよび／またはそのアナログは、単独で使用したとき、上記活性を発揮できる。しかしながら、ケルセチンおよび／またはそのアナログの上記性質は、ケルセチンおよび／またはそのアナログおよびレスベラトロールおよび／またはその誘導体などのさらなる治療剤(ここに開示するとおり)の相乗効果の利用により、さらに増強され得る。
【０１１６】
ある実施態様において、ポリマーおよび薬学的活性剤の組み合わせは、薬学的活性剤の組み合わせを含む。１を超える薬学的活性剤が使用されるならば、それらは同じ層または別のポリマー層に組み合わせて存在し得る。組み合わせの例は、１以上のコーティングに別々にまたは組み合わせたレスベラトロール＋ケルセチンと１以上のコーティングのレスベラトロールまたはケルセチン単独もしくは組み合わせである。
【０１１７】
ケルセチンの誘導体の例は、化合物のヒドロキシル基の１以上の水素、最も一般には３ヒドロキシルが置換されてエステルまたはエーテルを形成するものである(例えば式VIII参照)。エーテル形成例は、メチル基およびエチル基などのアルキル鎖の付加ならびにフコースおよびラムノースなどのデオキシ糖の付加を含むが、これらに限定されない。エステル化生成物は、酢酸、プロピオン酸およびパルミチン酸などのカルボン酸含有物質の反応により形成される化合物を含むが、これらに限定されない。ケルセチンのウレタン誘導体は、ベンジル２−イソシアナートアセテートおよび(Ｓ)−メチル２−イソシアナートプロパノエートなどの物質の付加により形成されるアミノ酸エステルカルバメートを含むが、これらに限定されない。
【０１１８】
さらなるケルセチン誘導体は、ヒドロキシル位置の何れかでのグルクロニル基などの糖様誘導体の付加により形成される代謝物として記載され得る化合物を含むが、これらに限定されない。これら代謝物の例は、７−Ｏ−グルクロニル−ケルセチンおよび３’−Ｏ−グルクロニル−ケルセチンを含む。
【０１１９】
さらなる誘導体は、親分子のヒドロキシル基の何れかの喪失、別の位置へのヒドロキシル基付加に由来する化合物および脱ヒドロキシル化化合物の官能化バリアントを提供する前記反応に由来し得る何らかの化合物を含むが、これらに限定されない。
【０１２０】
ケルセチンもまた赤ワインに存在するポリフェノールであり、同様にアテローム性動脈硬化症に対する保護を発揮することが報告されている。薬理学的観点から、本発明の薬物組み合わせ、レスベラトロールおよびケルセチンの例は、合理的であると考えられ、赤ワインは、実際に相乗作用して、長期赤ワイン摂取により臨床的に観察される効果を発揮する、低レベルの多くの生物活性ポリフェノール組み合わせである。
【０１２１】
ケルセチンは、血小板およびＮＦκＢ活性化両者の阻害剤である。本発明のＤＥＳへのケルセチンの付加は、ＮＦκＢ活性化の阻害性効果の後押しにより、ＶＳＭＣ増殖に対するレスベラトロールの効果を増強する。さらに、強力なＮＦκＢ阻害はまた再狭窄の炎症性成分のレスベラトロール介在阻害も増強する。ケルセチンの付加は、また再狭窄に至るバルーン血管形成術およびステント埋め込みの炎症性応答の一部である血小板活性化を限定する。あるいは、血小板活性化および／または凝集を阻害する他の１以上の薬剤をケルセチンの代わりにレスベラトロールと使用し得る。このような代替的選択肢は、アスピリン、チクロピジン、クロピドグレル、ジピリダモールなどを含むが、これらに限定されない。
【０１２２】
ある態様において、使用されるケルセチンはアセチル化ケルセチンである。特定の理論に拘束されることを意図しないが、アセチル化ケルセチンは、レスベラトロールまたはアセチル化レスベラトロールに類似するタイムコースで、組織部位でケルセチン薬物レベルを維持できる。
【０１２３】
例示的ケルセチン誘導体の構造を、式IX−XIIに示す。
【化４】
2021511891.tif 000007
【０１２４】
Ｅ. レスベラトロールおよびケルセチン
種々の態様において、本発明の治療剤は、レスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第一治療剤および所望によりケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第二治療剤を含む。
【０１２５】
さらなる態様において、第一治療剤を、低量の第二治療剤と組み合わせて使用し得る。さらに他の態様において、第一治療剤は、第二治療剤に対して約１：１〜約５：１の比率で存在する。なおさらなる態様において、第一治療剤は、第二治療剤に対して約１：１〜約２.５：１の比率で存在する。なおさらなる態様において、第一治療剤は、第二治療剤に対して約１.５：１〜約２.５：１の比率で存在する。
【０１２６】
種々の態様において、第一治療剤を、低量の第二治療剤と組み合わせて、第一治療剤が第二治療剤に対して１.１、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６、１.７、１.８、１.９、２.０、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６、２.７、２.８、２.９、３.０、３.１、３.２、３.３、３.４、３.５、３.６、３.７、３.８、３.９、４.０、４.１、４.２、４.３、４.４、４.５、４.６、４.７、４.８、４.９、５.０、５.１；前記値の何れかの組み合わせ；または前記値の２つによって定まる何れかの範囲の比で存在するように、使用され得る。
【０１２７】
種々の態様において、第一治療剤を、低量の第二治療剤と組み合わせて、第一治療剤が第二治療剤に対して１.１０、１.１１、１.１２、１.１３、１.１４、１.１５、１.１６、１.１７、１.１８、１.１９、１.２０、１.２１、１.２２、１.２３、１.２４、１.２５、１.２６、１.２７、１.２８、１.２９、１.３０、１.３１、１.３２、１.３３、１.３４、１.３５、１.３６、１.３７、１.３８、１.３９、１.４０、１.４１、１.４２、１.４３、１.４４、１.４５、１.４６、１.４７、１.４８、１.４９、１.５０、１.５１、１.５２、１.５３、１.５４、１.５５、１.５６、１.５７、１.５８、１.５９、１.６０、１.６１、１.６２、１.６３、１.６４、１.６５、１.６６、１.６７、１.６８、１.６９、１.７０、１.７１、１.７２、１.７３、１.７４、１.７５、１.７６、１.７７、１.７８、１.７９、１.８０、１.８１、１.８２、１.８３、１.８４、１.８５、１.８６、１.８７、１.８８、１.８９、１.９０、１.９１、１.９２、１.９３、１.９４、１.９５、１.９６、１.９７、１.９８、１.９９、２.００、２.０１、２.０２、２.０３、２.０４、２.０５、２.０６、２.０７、２.０８、２.０９、２.１０、２.１１、２.１２、２.１３、２.１４、２.１５、２.１６、２.１７、２.１８、２.１９、２.２０、２.２１、２.２２、２.２３、２.２４、２.２５、２.２６、２.２７、２.２８、２.２９、２.３０、２.３１、２.３２、２.３３、２.３４、２.３５、２.３６、２.３７、２.３８、２.３９、２.４０、２.４１、２.４２、２.４３、２.４４、２.４５、２.４６、２.４７、２.４８、２.４９、２.５０；前記値の何れかの組み合わせ；または前記値の２つによって定まる何れかの範囲の比で存在するように、使用され得る。
【０１２８】
Ｆ. 薬物被覆バルーン
本発明はまた１以上の治療剤を含むｐＮＰコーティングを含むＤＣＢカテーテルバルーンを提供する。ある態様において、第一コーティングを、ＤＣＢカテーテルバルーンの外側表面に直接適用する。特定の理論に拘束されることを意図しないが、１以上の治療剤を含むｐＮＰ組成物とリン脂質層の間の強いイオン性相互作用が、バルーンにｐＮＰを保持する吸着力に打ち勝つ。このような強いイオン性相互作用は、膨張中の限定的接触時間内に、バルーンからｐＮＰの脱離を達成するための引き金を提供し得る。
【０１２９】
さらなる態様において、本発明は、外側表面を有する膨張可能バルーンカテーテル；およびレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択されるｐＮＰを含むバルーンカテーテル上の接着層(ここで、ｐＮＰは該治療剤を封入する)を含む、埋込型医療機器に関する。
【０１３０】
さらなる態様において、本発明は、外側表面を有する膨張可能バルーンカテーテル；およびケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択されるｐＮＰを含むバルーンカテーテル上の接着層(ここで、ｐＮＰは該治療剤を封入する)を含む、埋込型医療機器に関する。
【０１３１】
さらなる態様において、本発明は、外側表面を有する膨張可能バルーンカテーテル；およびレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第一治療剤および、所望によりケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される何れかの第二治療剤を含むｐＮＰを含むバルーンカテーテル上の接着層(ここで、ｐＮＰは該第一治療剤および第二治療剤を封入する)を含む、埋込型医療機器に関する。
【０１３２】
さらなる態様において、本発明は、外側表面を有する膨張可能バルーンカテーテル；およびレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第一治療剤および、所望によりケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択される第二治療剤を含むｐＮＰを含むバルーンカテーテル上の接着層(ここで、ｐＮＰは該第一治療剤および第二治療剤を封入する)を含む、埋込型医療機器に関する。
【０１３３】
種々の態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、強度、柔軟性および摩擦特性の適当な組み合わせの適当な医薬グレードポリマーからなる。ある態様において、バルーンはナイロンを含む。さらなる態様において、バルーンは、カルボン酸ポリアミド(ＰＡ６、ＰＡ１１、ＰＡ１２)と、アルコール端末ポリエーテル(ポリテトラメチレングリコールＰＴＭＧ)、ＰＥＧ)の重縮合により得たポリアミドブロックコポリマーを含む。ナイロンの例は、商品名ＰＥＢＡＸ(登録商標)(Arkema)およびVESTAMID(登録商標)E(Evonik Industries)の下に入手可能なものを含む。さらなる態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、負ゼータ電位を有する１以上のポリマー、例えば、ＰＥＢＡＸ(登録商標)などのナイロンブロックコポリマーを含む。別の態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、ポリエチレン、ポリウレタン、ポリプロピレンおよび類似材料の１以上を含む。
【０１３４】
種々の態様において、バルーンは、平滑な壁であってよくまたはある態様において溝または孔を備え、バルーン部分の表面積を部分的に増加させる。ＤＣＢカテーテルバルーンは、一般に予定したサイズまで膨張可能であり、好ましくは狭窄動脈をその元の直径まで拡張させて戻すことができるように、耐圧である。
【０１３５】
さらなる態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、所望によりさらに１以上のポリマーコーティング材を含む１以上の層を含む第一コーティングを含み得る。ある態様において、第一コーティングはＤＣＢカテーテルバルーンの外側表面に適用され、その上にｐＮＰコーティングが提供される。種々の態様において、第一コーティングは、ポリＬ−ラクチドポリマー(ＰＬＬＡ)、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)(ＰＬＧＡ)、ポリ(ｌ−ラクチド−コ−トリメチレンカーボネート)、ポリ(ｄ,ｌ−ラクチド−コ−トリメチレンカーボネート)、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)およびポリアルキレングリコール(ＰＡＧ)、例えばポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖、フィブリノゲン、ポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド)、ポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)、ポリグリコール酸、ポリ(ヒドロキシブチレート)、ポリ(アルキルカーボネート)およびポリ(オルトエステル)の１以上を含み得る。選択したポリマーコーティングを、何れかの所望の濃度の選択した薬物の選択した生物活性薬物と、混合しても、組み合わせても、共有結合させてもよい。２以上のポリマーを互いに組み合わせて、第二コーティングに使用するポリマーマトリクスを形成し得る。第二コーティングは、このようなポリマーの複数コーティングまたは複数層を含み得る。
【０１３６】
さらなる態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、１以上のポリマーコーティング材を含む１以上の層を含む第二コーティングを所望によりさらに含み得る。ある態様において、第二コーティングはｐＮＰコーティングに適用される。さらに他の態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、ＤＣＢカテーテルバルーン表面を第一コーティングでコーティングし、次いで、１以上の治療剤を含む本発明のｐＮＰの１以上の層でコーティングし、さらに第二ポリマーコーティングでコーティングし得る。あるいは、ＤＣＢカテーテルバルーンは、バルーンの外側表面をｐＮＰコーティングでコーティングし、次いでその上に第二コーティングでコーティングし得る。種々の態様において、第二コーティングは、ポリＬ−ラクチドポリマー(ＰＬＬＡ)、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)(ＰＬＧＡ)、ポリ(ｌ−ラクチド−コ−トリメチレンカーボネート)、ポリ(ｄ,ｌ−ラクチド−コ−トリメチレンカーボネート)、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)およびポリアルキレングリコール(ＰＡＧ)、例えばポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖、フィブリノゲン、ポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド)、ポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド)、ポリグリコール酸、ポリ(ヒドロキシブチレート)、ポリ(アルキルカーボネート)およびポリ(オルトエステル)の１以上を含み得る。２以上のポリマーを互いに組み合わせて、第二コーティングに使用するポリマーマトリクスを形成し得る。第二コーティングは、このようなポリマーの複数コーティングまたは複数層を含み得る。
【０１３７】
ｐＮＰコーティングは、ここに記載するとおり、その中に１以上の治療剤が封入されたｐＮＰを含む。ｐＮＰに封入され得て、次いで、ＤＣＢカテーテル上のｐＮＰコーティングに含まれる１以上の治療剤の例は、バルーンカテーテルのコーティング中／その上に使用するためのレスベラトロールおよびケルセチンを含むが、これらに限定されない。
【０１３８】
ディップコーティング技術を、バルーン表面のコーティングに使用できるが、噴霧コーティングまたはエレクトロスプレーコーティング方法などの他の方法も使用し得る。さらなる態様において、エレクトロスプレー方法を使用して、ｐＮＰコーティング、第一コーティングおよび／または第二コーティングを提供する。コーティングは、一般に一層を含むが、コーティングに含まれる薬物の含量および放出プロファイルにより複数層も含み得る。
【０１３９】
種々の態様において、本発明は、外側表面を有する膨張可能バルーン；およびバルーンの表面積に基づく第一活性剤の濃度が約１〜約５μg／mm２の範囲であり、そしてバルーンの表面積に基づく第二活性剤の濃度が約１〜約５μg／mm２の範囲であるように、本発明のｐＮＰ組成物を含む膨張可能バルーンの外側表面をコーティングするナノ粒子を含む、薬物被覆バルーンカテーテルに関する。
【０１４０】
さらなる態様において、膨張可能バルーンの外側表面をコーティングするナノ粒子は、本発明のｐＮＰ組成物を、第一活性剤の濃度がμg／mm２単位で約１.０、１.１、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６.、１.７、１.８、１.９、２.０、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６.、２.７、２.８、２.９、３.０、３.１、３.２、３.３、３.４、３.５、３.６.、３.７、３.８、３.９、４.０、４.１、４.２、４.３、４.４、４.５、４.６.、４.７、４.８、４.９、５.０；前記値の何れかの組み合わせ；または前記値の何れかの２つで定まる範囲；および第二活性剤の濃度が、μg／mm２単位で約１.０、１.１、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６.、１.７、１.８、１.９、２.０、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６.、２.７、２.８、２.９、３.０、３.１、３.２、３.３、３.４、３.５、３.６.、３.７、３.８、３.９、４.０、４.１、４.２、４.３、４.４、４.５、４.６.、４.７、４.８、４.９、５.０；前記値の何れかの組み合わせで含む。
【０１４１】
本発明のＤＣＢカテーテルバルーンは、血管再生、カテーテル留置、バルーン膨張およびステント送達過程およびここに記載する方法に有用である。ステント送達過程において、例えば、本発明の薬物被覆バルーンは、偶発的にステント埋め込みの局所部位に位置しない管領域に薬物を送達し得る。バルーン表面からのこのような薬物の偶発的送達は、目的部位に至る小さくかつ蛇行状管通路に特に有用であり得る。さらに、治癒および抗増殖剤を持たないステント部位の再内皮化が薬物被覆バルーンの使用により促進され得る。
【０１４２】
ＤＣＢカテーテルを用いて、バルーン壁は、膨張したとき血管壁と接触し、薬物が放出される。それ故に、薬物は、実際の膨張中または血管壁との接触時に放出され得る。実施に際し、薬物の治療量が血管壁に送達され、一方、全身送達は限定的であるかまたは低減される。故に、バルーンの表面と血管壁の、ステント送達またはその他の結果としての圧接により、治療剤を含むｐＮＰが血管壁表面に接着し、治療剤が、例えば、数秒、数分または数時間まで放出される。
【０１４３】
種々の態様において、膨張後最初の３時間以内に送達される治療剤の用量は、薬物負荷量(デバイスあたりの薬物の総含量または薬物の量)の少なくとも約１０％、総薬物負荷量の少なくとも約２５％、薬物負荷量の少なくとも約５０％であってよく、総薬物負荷量の少なくとも約７５％が放出される。ある態様において、薬物負荷量の少なくとも約１０％、総薬物負荷量の少なくとも約２５％、薬物負荷量の少なくとも約５０％および総薬物負荷量の少なくとも約７５％が膨張後最初の５分以内に放出される。ある態様において、ＤＣＢカテーテルは薬物の２５％以上を膨張開始後最初の３分で放出してよくまたは薬物の２５％以上を膨張開始後最初の２分で放出してよい。ＤＣＢカテーテルについて、未放出薬物は、患者から抜去したときに、デバイスに残存する薬物であり、その残りの量は放出されており、好ましくは限定的量(総含量の５０％を超えない)が全身性に放出される。全身性に放出される薬物の量は、ＤＣＢに付着した薬物の特定の薬物動態および薬力学による。
【０１４４】
種々の態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンの表面は、デバイス表面、例えば、膨張可能バルーン外側表面の平方ミリメートルあたり０.１〜１５μgのレスベラトロールおよび／またはケルセチンを含むｐＮＰを含み、膨張による薬物の即時放出を可能とする。さらなる態様において、ＤＣＢカテーテルバルーンは、バルーンカテーテルの表面積に基づいて、第一治療剤を約１〜約５μg／mm２範囲で含み、バルーン表面積に基づく何れかの第二活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２範囲である。
【０１４５】
さらなる態様において、膨張可能バルーンの外側表面をコーティングするナノ粒子は、本発明のｐＮＰ組成物を、第一活性剤の濃度、レスベラトロール(またはその薬学的に許容される塩または誘導体)、μg／mm２単位で、約１.０、１.１、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６.、１.７、１.８、１.９、２.０、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６.、２.７、２.８、２.９、３.０、３.１、３.２、３.３、３.４、３.５、３.６.、３.７、３.８、３.９、４.０、４.１、４.２、４.３、４.４、４.５、４.６.、４.７、４.８、４.９、５.０；前記値の何れかの組み合わせ；または前記値の何れかの２つで定まる範囲；および第二活性剤、ケルセチン(またはその薬学的に許容される塩または誘導体)の濃度を、μg／mm２単位で、約１.０、１.１、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６.、１.７、１.８、１.９、２.０、２.１、２.２、２.３、２.４、２.５、２.６.、２.７、２.８、２.９、３.０、３.１、３.２、３.３、３.４、３.５、３.６.、３.７、３.８、３.９、４.０、４.１、４.２、４.３、４.４、４.５、４.６.、４.７、４.８、４.９、５.０；前記値の何れかの組み合わせで含む。
【０１４６】
種々の態様において、ＤＣＢカテーテルおよび／または他の医療機器の表面の治療剤を含むｐＮＰの放出プロファイルは、約２０〜約４０秒、約１分〜１００分、約１時間〜２０時間、約１日〜１か月、約１日〜１０日、約１日〜約３０日、約１日〜約２か月、約１日〜約６か月、約１日〜約６か月、約１日〜約１年の時間である。遅延プロファイルコーティングの非限定的例は、１活性剤および／または複数活性剤を、埋め込み後少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも６か月または少なくとも１年放出の期間にわたり放出する。
【０１４７】
実施例に進む前に、この開示は、記載する特定の態様に限定されず、そのようなものとして、当然変わり得ることは理解されるべきである。組成物を形成するおよびその要素の他のシステム、方法、特性および利点は当業者には明らかであるかまたは次の図面および詳細な記載の考察により、明らかとなる。このようなさらなるシステム、方法、特性および利点の全ては本記載に包含され、本開示の範囲内であり、添付する特許請求の範囲により保護されることが意図される。ここで使用する用語は特定の態様を記載する目的のみであり、限定する意図はない。当業者はここに記載する態様の多くのバリアントおよび適応を認識する。これらのバリアントおよび適応は、本開示の教示に含まれ、本特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【０１４８】
Ｇ. 血管疾患を処置する方法
本発明はまた、本発明の薬物被覆バルーンで対象を処置することを含む、血管疾患を処置する方法にも関する。さらなる態様において、本発明の方法は、血管傷害または血管形成術と関連する少なくとも１つの疾患または状態を処置する方法である。血管形成術は、コレステロール、脂肪、カルシウムおよび瘢痕組織からなるプラークが血管壁に構築され、管腔を狭小化し、血流を妨害する疾患を意味するとしてここで使用する「アテローム性動脈硬化」のための「血管再生」処置の一部として使用される。ここで使用する「血管再生」は、狭小化動脈を通る活発な血流を再建する何らかの処置を意味し、バイパス手術、血管形成術、ステント留置および他の介入性過程を含む。血管再生後の二次的合併症は、再狭窄、新生内膜、新生内膜過形成および血栓症を含み得る。ここで使用する「再狭窄」は、先の処置と同じ位置の動脈の再狭小化として定義される；臨床的再狭窄は、通常再発性狭心症の形態での虚血性事象の顕在化である。ここで使用する「新生内膜」は、自然の治癒過程の一部として、血管形成術またはステント留置後の管傷害の結果としてしばしば形成される、細胞および細胞分泌物からなる瘢痕組織として定義される。ここで使用する「新生内膜過形成」は、動脈内層からの平滑筋細胞の過剰増殖を意味する。血管形成術および／またはステント留置後、これら細胞の過剰増殖は動脈を再狭窄し得る。ここで使用する「血栓症」は、血管または心臓腔自体内部の血餅の形成を意味し、「血栓」は血餅である。
【０１４９】
血管再生後、３つの病態生理学的相が区別され得る。ステージＩ、血栓性相(血管再生後０〜３日目)。このステージは、迅速血栓形成からなる。動脈性傷害に対する最初の応答は、爆発的活性化、接着、凝集および血小板沈着である。血小板血栓は、しばしば大きい可能性があり、心筋梗塞で生じるように、血管を閉塞させるのに十分な大きさまで成長し得る。２４時間以内に、富フィブリン血栓が血小板部位周囲に蓄積する。２つの形態的特性が顕著である：１)血小板／フィブリンおよび２)フィブリン／赤血球血栓。血小板は傷害部位で高密度で凝集し、フィブリン／赤血球血栓が血小板塊に結合する。ステージII、動員相(３〜８日目)。動脈性傷害部位の血栓が内皮細胞層を発生させる。内皮細胞出現直後、激しい細胞浸潤が生じる。浸潤は、主に単球であり、これは、マクロファージとなり、血流に放出されて、内皮下壁在血栓に移動する。リンパ球も存在し、両タイプの細胞が血流から出る。この浸潤は、傷害動脈の管腔側から発達し、細胞は壁在血栓深くに徐々に移動する。ステージIII、増殖性相：(８日目〜最終治癒)。アクチン陽性細胞が管腔からの残存血栓に定着し、この最終段階で壁在血栓頂部に「キャップ」を形成する。細胞は傷害された中膜に向かい徐々に増殖し、血栓を完全になくなるまで分解し、新生内膜細胞に置き換える。この時点で、治癒が完了する。ブタで、この過程は残存血栓厚により、２１〜４０日間かかる。退化血栓への平滑筋細胞遊走および増殖は新生内膜体積を増加させ、血栓単独より大きくなる。平滑筋細胞は、傷害位置の遠位部位から遊走し、分解された血栓は新生内膜細胞のための生体吸収性「増殖マトリクス」となり、遊走し、置き換える。血栓は、新生内膜治癒が完了するまで、徐々に深いレベルまで定着する。
【０１５０】
さらなる態様において、本発明の方法を使用して、上記３段階のいずれか、例えば、活性化、接着、凝集、血小板沈着、血栓症、血小板凝集、増殖および内膜新生後の状態などの、血管再生後のこれらの状態を処置し得る。
【０１５１】
さらなる態様において、第一治療剤および第二治療剤は、血管形成術後の新生内膜過形成阻害などの血管形成術後の再狭窄の予防または処置のためである。
【０１５２】
さらなる態様において、本発明の方法は、血管形成術と関連する急性、亜急性および慢性二次的合併症の予防に関する。このような血管形成術の後および／または関連する二次的合併症は上に定義され、例えば、再狭窄、新生内膜、新生内膜過形成、血栓症および炎症を含む。
【０１５３】
さらなる態様において、本発明の方法は、しばしば多くの疾患過程の要素である、望ましくない細胞増殖の処置に関する。望ましくない細胞増殖は、矯正手術後の再狭窄、狭窄再発または動脈狭窄の要素であり得る。再狭窄は、冠動脈バイパス(ＣＡＢ)、血管内膜切除、心臓移植後または血管形成術、アテローム切除術、レーザーアブレーションまたはステント留置後に起こる。再狭窄は、管腔開放過程中の血管壁の傷害の結果である。一部患者において、傷害は、血管形成術により外傷を受けた領域の「過形成」と称される、平滑筋細胞増殖により特徴づけられる修復応答を開始する。この平滑筋細胞増殖は、数週間〜数か月内に血管形成術で開けた管腔を再狭窄し、それにより、再狭窄を軽減する反復血管形成術または他の過程が必要である。
【０１５４】
さらなる態様において、本発明の方法は、高用量全身送達による副作用を低減するための、本発明の治療剤の局所送達を提供する。
【０１５５】
Ｈ. 態様
次の例示的態様の一覧はここに提供する開示を支持し、かつ本発明はそれらにより支持される。
【０１５６】
態様１.第一ポリマー、第二ポリマー、第一治療剤および所望により第二治療剤を含むナノ粒子組成物であって、ここで、第一ポリマーはポリマー鎖あたり１以上の正荷電部分を含むアクリレートポリマーであり、第二ポリマーはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択され、第一治療剤はレスベラトロール、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体からなる群から選択され、そして、第二治療剤はケルセチン、その薬学的に許容される塩および薬学的に許容される誘導体から所望により選択される、ナノ粒子組成物。
【０１５７】
態様２. 第一ポリマーがアクリレートを含むコポリマーである、態様１に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１５８】
態様３. アクリレートを含むコポリマーが約６０重量％メチルメタクリレート、３０重量％エチルアクリレートおよび１０重量％２−トリメチルアンモニウムエチルメタクリレートクロライドを含む、態様２に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１５９】
態様４. 第二ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド)、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(ラクチド−コ−カプロラクトン)、ポリ(グリコリド−コ−カプロラクトン)およびポリ(Ｄ,Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド−コ−ε−カプロラクトン)からなる群から選択される、態様１〜態様３の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６０】
態様５. 第二ポリマーがポリ(ラクチド−コ−グリコリド)である、態様４に記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６１】
態様６. 第一治療剤がトリアセチルレスベラトロールである、態様１〜態様５の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６２】
態様７. 第二治療剤がケルセチンである、態様１〜態様６の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６３】
態様８. 第一治療剤および第二治療剤が約１：１〜約１：５の比で存在する、態様１〜態様７の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６４】
態様９. 直径約１００nm〜約３００nmを有するナノ粒子を含む、態様１〜態様８の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６５】
態様１０. 約０.３５mV〜約０.６０mVのｐＨ非依存的ゼータ電位を有するナノ粒子を含む、態様１〜態様９の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物。
【０１６６】
態様１１. 外側表面を有する膨張可能バルーン；および本発明のｐＮＰ組成物を含む膨張可能バルーンの外側表面をコーティングする態様１〜態様１０の何れかに記載のナノ粒子を含み、ここで、膨張可能バルーンの外側表面の少なくとも一部の第一活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲であり、そしてバルーンの表面積に基づく第二活性剤の濃度は約１〜約５μg／mm２の範囲である、薬物被覆バルーンカテーテル。
【０１６７】
態様１２. バルーン外側表面がポリアミドブロックコポリマーを含む、態様１１に記載の薬物被覆バルーンカテーテル。
【０１６８】
態様１３. 対象を態様１１〜態様１２の何れかに記載の薬物被覆バルーンカテーテルで処置することを含む、血管疾患を処置する方法。
【０１６９】
態様１４. 態様１１〜態様１２の何れかに記載の薬物被覆バルーンカテーテル態様１１〜態様１２および血管疾患の処置に該薬物被覆バルーンカテーテルを使用するための指示を含む、キット。
【０１７０】
態様１５. 態様１〜態様１０の何れかに記載のポリマーナノ粒子組成物、膨張可能バルーン上に該ポリマーナノ粒子組成物をコーティングするための指示、および(ａ)膨張可能バルーンを含むバルーンカテーテル；または(ｂ)バルーンカテーテルに使用するのに適する膨張可能バルーン
を含む、キット。
【０１７１】
前記から、ここに記載する態様が明らかであり、本構造に内在する他の利点と共に、上記目標および目的の全てを達成するために十分に適応されていることが分かる。
【０１７２】
特定の要素および工程を互いに結び付けて記載しているが、ここに提供される何れかの要素および／または工程は、明示がなくても、何れかの他の要素および／または工程と組み合わせ可能であることが意図され、なおここに提供される範囲内であると理解されるべきである。
【０１７３】
ある特性および何れかの下位の組み合わせが有用であり、他の特性および下位の組み合わせを引用せずに用い得ることは理解される。これは、特許請求の範囲により考慮され、その範囲内である。
【０１７４】
多くの可能な態様が範囲を逸脱することなくなすことができるため、ここに示すまたは添付の図面および詳細な記載に示す全ての事項は、説明的であると解釈すべきであり、限定的意味はない。
【０１７５】
また、ここで使用する用語は特定の態様を記載する目的のみであり、限定する意図はない。当業者はここに記載する態様の多くのバリアントおよび適応を認識する。これらのバリアントおよび適応は、本開示の教示に含まれ、本特許請求の範囲により包含されることが意図される。
【０１７６】
ここで、本発明の態様を記載しているが、一般に、次の実施例は、いつくかのさらなる本発明の態様を記載する。本発明の態様を次の実施例および対応する文章および図面とむつび付けて記載しているが、本発明の態様をこの記載に限定する意図はない。それどころか、本発明の精神および範囲内に含まれる全ての代替物、修飾および等価物をカバーする意図がある。
【０１７７】
Ｉ. 実施例
実施例
ここで、本発明の態様を記載しているが、一般に、次の実施例は、いつくかのさらなる本発明の態様を記載する。次の実施例は、本開示の完全に例示的であり、本発明がその開示として考える範囲を限定する意図はない。本発明の態様を次の実施例および対応する記載および図面と結び付けて記載しているが、本発明の態様をこの記載に限定する意図はない。むしろ、本発明の精神および範囲内に含まれる全ての代替物、修飾および等価物をカバーすることを意図している。数値(例えば、量、温度など)は精度を確実にする努力をしているが、ある程度の誤差および偏差は考慮すべきである。特に断らない限り、部は重量部であり、温度は℃または環境温度であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。
【実施例】
【０１７８】
実施例１. ナノ粒子合成法。
ここに記載する実施例および下記他の実施例において、ある材料を試験に使用し、次のとおり、得た：Resomer(登録商標)RG504Hポリ(乳酸−コ−グリコール酸)ＰＬＧＡ  ５０：５０、ケルセチン(ＱＵＥＲ)およびアセトニトリルはSigma Aldrich Corp. (St. Louis, MO)から得た；酢酸エチル、Tween 80、レスベラトロール(ＲＥＳＶ)およびトリアセテートレスベラトロール(ＴＡＲ)はThermo Fisher Scientific(Waltham, MA)から得た；そしてEudragit RL100はEvonik Industries AG(Essen, Germany)から得た。ポリマーナノ粒子合成は、単一エマルジョン蒸発技術に従った(Astete C.E. and Sabliov C.M. J. Biomater Sci Polym Ed. 2006;17(3):247-89)。
【０１７９】
簡潔には、有機相を、Eudragit RL100(６０mg)とＰＬＧＡ(２００mg)を酢酸エチル対アセトン(８：２)溶液(６mL)中、室温で３０分間穏やかに撹拌することにより混合して、製造した。次に、１：２モル比のケルセチンおよびトリアセテートレスベラトロール(ＴＡＲ)を有機相に加えた。アセチル化レスベラトロールを、その捕捉効率がレスベラトロールより大きいことがパイロット試験で示された後、利用した。さらに、１：２モル比は、先の試験で化合物間の最大生物学的相乗性を誘発することが示された１２。１５分間、室温で連続撹拌後、有機相を４mg／mL  Tween 80を含む６０mLの水相に滴加した。液滴サイズを小さくするために、エマルジョンをMicrofluidizer M-110P (Microfluidics Corp, Westwood, MA)で４℃、３０,０００  ＰＳＩおよび４回通過で微小流体化した。懸濁液中のを、Rotavapor Buchi R-300(Buchi Corp., New Castle, DE)を使用して、減圧下、３２℃で２時間蒸発させた。最後に、ナノ粒子懸濁液をトレハロースと１：２質量比で混合し、懸濁液をFreeZone 2.5(Labconco Corp., Kansas City, MO)で−８０℃で２日間凍結乾燥した。ポリマーナノ粒子再懸濁後の凝集を最小化するために、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)(３０mg)２mL溶液を加えて、その後乾燥した。粉末化サンプルをさらなる特徴づけおよび使用まで、−２０℃で保存した。
【０１８０】
実施例２. 薬物負荷および捕捉効率を決定する方法。
薬物負荷および捕捉効率をＨＰＬＣを使用して決定した。まず標準曲線を、抽出溶媒ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)で作成した。最初の試験は、ケルセチンは分解を最少にするためにアスコルビン酸が必要であることを示したが、ＴＡＲは、アスコルビン酸を加えることなく、ＤＭＦ中で測定した。薬物負荷を、負荷ポリマーナノ粒子をＤＭＦ中、３.９mg／mL濃度で懸濁することにより測定した。各２００μLサンプルを採り、８０μLのアスコルビン酸をそれぞれに加えた。サンプルを遠心により浄化し、次いでＨＰＬＣを使用して分析した。アスコルビン酸添加サンプルをケルセチンについて測定したが、無添加のものをＴＡＲおよびレスベラトロールについて測定した。分析をトリプリケートで実施した。理論的負荷を、合成中に加えたケルセチンおよびＴＡＲの最初の量に対して計算した。
【０１８１】
実施例３. 薬物放出プロファイルを評価する方法。
薬物放出プロファイルを実施して、１０日間にわたるｐＮＰからの両薬物の放出を測定した。放出試験を、生理学的条件を模倣するため、模擬血液でｐＨ７.４で実施した。ナノ粒子を１９.５mg／Ｌ濃度で懸濁した。この懸濁液を透析バッグに移し、これを密閉し、模擬血液に入れた１３。システム全体を、１０日間ロッキングインキュベーターに入れた。各日に、サンプルを透析バッグ内部から採り、サンプルを薬物負荷の決定に使用したのに類似するプロトコールを使用して、ＨＰＬＣにより分析した。
【０１８２】
実施例４. 薬物の細胞取り込みの方法。
ラット大動脈平滑筋細胞を６ウェルプレートでコンフルエントまで増殖させた。第一群について、細胞をケルセチン(ＱＵＥＲ)またはＴＡＲでそれぞれ１２.５μMおよび２５μMで処理し、先の試験で最大相乗性を示した１：２モル比を目的とした１２。第二群について、細胞を、捕捉ＱＵＥＲおよびＴＡＲを含む１.４mg／mL  ｐＮＰで処理した。処理後、細胞を、予備試験で最大取り込みが生じることが示された６時間インキュベートした。メタノールおよびアスコルビン酸を使用してタンパク質を沈殿させ、細胞の全ての他の成分を保持した。ＨＰＬＣを実施して、細胞に存在するケルセチンおよびＴＡＲの量を決定し、データをＢＣＡタンパク質アッセイを使用して定量した細胞タンパク質に対して標準化した。
【０１８３】
実施例５. 薬物レベル定量法。
ナノ粒子から放出されたおよび細胞内の薬物を、逆相ＨＰＬＣで、Waters 2487二重波長吸光度検出器および４チャネルESA 5600A CoulArray電気化学検出器(Chelmsford, MA)に接続した、Waters 2695 Alliance分離モジュール(Milford, MA)を使用して、定量した。分離は、Targa C18  ３μM  １５０×４mmカラム(Higgins Analytical, Mountain View, CA)を使用して、達成した。移動相Ａは、７５mM  クエン酸および２５mM  酢酸アンモニウム含有１０：９０  アセトニトリル／水からなった。移動相Ｂは、７５mM  クエン酸および２５mM  酢酸アンモニウム含有５０：５０  アセトニトリル／水からなった。相を、カラムに０.５３mL／分で、次の線形勾配を使用して行った：７０％Ａ／３０％Ｂ〜１０％Ａ／９０％Ｂを３５分間かけて、１０％Ａ／９０％Ｂを１２分間、続く３分間にわたる最初の条件への再平衡化。ＱＵＥＲを、合わせた２００mV、５８０mVおよび７５０mVチャネルで検出されたピーク面積で定量した。ＴＡＲを７５０mVチャネルで定量した。ＲＥＳＶを検出し、合わせた１００mV、２００mV、５８０mVおよび７５０mVチャネルで定量した。サンプルピークは、保持時間に基づき、認められた標品に適合した。
【０１８４】
実施例６. 生体適合性の評価法。
ｐＮＰ存在下の赤血球溶解を生体適合性指標として測定した。溶血性アッセイについて１４、トリアセチルレスベラトロール(ＴＡＲ)およびケルセチン含有ポリマーナノ粒子を使用した。ナノ粒子溶液を、ＰＢＳを使用して次の濃度に希釈した：０.１mg／mL、０.３mg／mL、０.９mg／mL、１.５mg／mLおよび２.０mg／mL。使用した血液は、Institutional Care and Use Committee at the Louisiana State University School of Veterinary Medicineにより承認された他の試験で屠殺したマウスから採った。血中ヘモグロビン濃度１４０mg／mLを考慮して、血液を、ＰＢＳを使用して１０mg／mLに希釈した。次に、７００μLのＰＢＳ、１００μLの希釈血液および１００μLの各ナノ粒子濃度を合わせた。陽性対照として、ナノ粒子溶液の代わりに１００μLの１０％Triton X溶液を加えた。さらに、陰性対照はナノ粒子溶液を欠いた。次いでサンプルを３７℃水浴に約３時間入れた。インキュベーション後、サンプルを１５分間、８００ｘｇで室温遠心分離した。遠心分離後、各サンプルからの上清１００μLを９６ウェルプレートにトリプリケートで加えた。次に、１００μlのcyanmetヘモグロビンを各ウェルに加え、サンプルを１０分間インキュベートした。標準曲線をcyanmetヘモグロビン試薬を使用して、作成した１４。試薬の連続希釈を、リン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)を使用して作製し、１〜１５０mg／mL濃度範囲に変換した。２００μLの各希釈サンプルを９６ウェルプレートにトリプリケートで加えた。Biotek Citation ３分光光度計(Winooski, VA)を使用して、５３２nmでサンプル吸光度を測定した。最後に、吸光度を、BioTek分光光度計で５３２nmで測定した。
【０１８５】
実施例７. 細胞毒性を決定する方法。
ＡＴＰの相対レベルを評価する発光細胞生存能アッセイ(Promega, Madison, WI)を、ナノ粒子アッセイの細胞毒性を試験するために使用した。ラット大動脈平滑筋細胞を４つの別々の時点で試験すべき不培養培地中、透明壁９６ウェルプレートで播種した。コンフルエントまで増殖後、第一群の細胞を、元のナノ粒子で０.１mg／mL、０.３mg／mL、０.９mg／mL、１.５mg／mLおよび２.０mg／mL濃度で処理し、第二群の細胞を、ナノ粒子で０〜１.５mg／mL濃度で処理した。各濃度のナノ粒子をトリプリケートで試験し、実験を３回実施した。６時間、２４時間、４８時間および７２時間インキュベーションで、プレートをインキュベーターから出して、室温に３０分間置いた。CellTiter-Glo(登録商標)試薬を各ぅえるに加えた。内容物を、２分間、オービタルシェーカーで振盪して、細胞溶解を誘発した。プレートを室温で１０分間インキュベートして、発光シグナルを安定させた。次いで、ルミネセンスをBiotek Synergyマイクロプレートリーダーで読んだ。
【０１８６】
実施例８. ＱＵＥＲおよびＲＥＳＶを含むナノ粒子の特徴づけ。
例示的ナノ粒子を上記方法を使用して製造し、上記の種々の方法を使用して、特徴づけした。捕捉ＱＵＥＲおよびＲＥＳＶを含む例示的ナノ粒子組成物は、狭いサイズ分布の球形を示した(図１)。ナノ粒子は、超純水に再懸濁後平均サイズ１８５±１２nmを有し、ゼータ電位＋４８±４.５mVであった(表１)。特定の理論に拘束されることを意図しないが、正ゼータ電位はメタクリレートポリマー(Eudragit RL100)のアミノアルキル側鎖基による可能性がある。
【表１】
2021511891.tif 000008
【０１８７】
理論的負荷を、合成中に加えたＱＵＥＲおよびＴＡＲの最初の量に対して計算した。次いで、薬物負荷、捕捉効率およびＱＵＥＲ対ＴＡＲモル比を計算した(表１)。観察された比(１：１.０９)は、１：２モル比のＱＵＥＲ：ＴＡＲの設計目標を満たす近似であった。
【０１８８】
１０日にわたり測定した薬物放出プロファイルで、８２％のケルセチンおよび７６％のｐＮＰ捕捉ＴＡＲが１０日目までに放出された。両薬物は、爆発的放出を第一日目内に示したが、ｐＮＰは、両薬物を全１０日期間放出し続けた(図２)。
【０１８９】
レスベラトロールを細胞処理に使用しなかったが、アセチル化薬物は常在エステラーゼの作用により、細胞内でエステル加水分解されることが知られる(Davis, B.H., et al., Int J Lab Hematol. 2010. 32(2):139-41)。故に、ＴＡＲ自体ではなくＲＥＳＶが６時間のＨＰＬＣで観察されたのは当然である。ポリフェノール捕捉ｐＮＰ処理細胞は、ナノ粒子ではない直接薬物処理した細胞より、高い細胞内ＲＥＳＶ、ＱＵＥＲおよびＴＡＲ量を示した(図３)。直接薬物処理と比較したｐＮＰを利用する薬物細胞取り込みをより徹底的に比較するために、各検体の曲線下面積(ＡＵＣ)をGraphPad Prism version 6 software(La Jolla, CA)を使用して計算した。得られたＡＵＣは、薬物をｐＮＰに捕捉して送達したとき、ＲＥＳＶおよびＱＵＥＲについてそれぞれ約２０４０および３６１であったが、薬物をｐＮＰを用いずに送達したとき９４.４および０.０１１６であった。故に、ｐＮＰを使用する捕捉は、細胞への薬物送達を、ＲＥＳＶで＞２０倍およびＱＵＥＲで＞４桁増強した。
【０１９０】
生体適合性を、赤血球溶血を増加させるポリフェノール捕捉ｐＮＰの能力として評価した。試験した全用量(０〜１.５mg／mL)で、薬物捕捉ｐＮＰ存在下の溶血は、ベースラインで約２４％の媒体を超えなかった(図４)。
【０１９１】
ポリフェノール捕捉ｐＮＰが細胞生存能を変えるかを、平滑筋細胞で、これらが膨張によりバルーンが内皮を剥がす際、粒子と密接に結合する細胞であるため、使用して評価した。ｐＮＰ処理していない細胞と比較したＡＴＰレベルとして評価する生存能は、最大用量で維持されまたは増加すらした。しかしながら、１.５mg／mL濃度で、ＡＴＰレベルは、６時間、４８時間および７２時間時点で１２〜２４％減少した(図５)。それにも関わらず、臨床使用のために、ｐＮＰ濃度は、血中でこのレベルに到達するとは想定されない。
【０１９２】
ここに記載する試験で、ポリフェノール組成物含有ナノ粒子を特徴づけした。これらのナノ粒子は、バルーンカテーテルに適する新規ナノ捕捉薬物溶出送達システムを提供する。記載するポリフェノール組成物を含むナノ粒子は、パクリタキセルおよび他の有糸分裂阻害剤を利用する薬物被覆バルーン(ＤＣＢ)と現在関連するリスクを最小化する、ＰＡＤの理想的代替処置を提供する。Panyam and Labhasetwar (Panyam J. and Labhasetwar V. Pharm Res. 2003. 20(2):212-20)により推奨される、エンドサイトーシスを確実にするのに必要なナノ粒子径は１００〜５００nmであることは留意すべきである。ここで製造した本発明のｐＮＰは、平均１８５nmのサイズであり、細胞によるエンドサイトーシスが予測される。ここでの開示に基づき、条件および方法をさらに最適化して、薬物負荷を１：２  ＱＵＥＲ：ＴＡＲ比に調節した。合成および試験したナノ粒子は、ここで、最小細胞毒性で生体的合成であることが示された。さらに、本発明のナノ粒子は、ここで細胞取り込みに理想的であり、長期放出を提供することが示された。ここで示される１０日間までの放出反応速度は、再狭窄を促進する細胞事象が、一般に血管形成術後最初の１０〜１４日間以内に生じることが示されているため、これらデバイスでの使用に理想的である(Finn, A.V., et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2007. 27(7):1500-10)。
【０１９３】
実施例９. バルーンコーティングのための前向きエレクトロスプレー法。
ＲＥＳＶおよびＱＵＥＲを含むポリフェノール捕捉ｐＮＰを、上記のとおり合成する。バルーンカテーテルを、エレクトロスプレーを使用してｐＮＰでコーティングし、乾燥させる。コーティング品質をスペクトロスコピーおよびＳＥＭならびに総薬物負荷および放出のＨＰＬＣ指標を使用して特徴づけする。
【０１９４】
バルーンへのｐＮＰ結合を最適化するために、しばしば市販の、負ゼータ電位を有するＰＥＢＡＸ(登録商標)を使用するバルーンポリマーを最初に選択する。ＰＥＢＡＸの電気陰性度は、正荷電ＴＡＲ：Ｑ捕捉ｐＮＰの結合のための良好なマトリクスを提供する。ｐＮＰをディップコーティングまたはエレクトロスプレー方法により適用できる。エレクトロスプレー方法は、種々の化学的および生物学的剤と共に使用でき、均一性を増加させ、数層の適用を可能とし、既に生物医薬分野で６０を超える溶媒、医薬化合物およびポリマーで使用されている。
【０１９５】
エレクトロスプレーは、電圧源からの電気エネルギーを使用して、溶液中の分子を励起し、気相に入る。エレクトロスプレーシステムの主な物理要素は、電圧源、シリンジポンプおよび接地された回転式コレクターである。分子を気体状態に移行させるための３工程には、液滴を帯電させて細かいスプレーを達成すること、溶液中の溶媒を(乾燥ガスを使用して)蒸発させることおよび正に帯電した液滴からイオンを放出することが含まれる。粒子サイズを変えるために、流量、電圧供給、コレクター距離および溶液粘度を変更できる(図６)。コレクター距離を増減することにより、乾燥、ほぼ乾燥または湿潤のコーティングを実現でき、さまざまな表面プロファイルが可能になる。
【０１９６】
図６に示すとおり、ＴＡＲ：ＱＵＥＲ捕捉ｐＮＰおよびポリエチレングリコール(ＰＥＧ；溶液粘性増強のため)を含む溶液を、粒子が電荷を帯びるように、電圧をかけるTaylorコーンから一定流速で適用できる。液滴が電界を通過してコーンチップから離れ、不活性ガスが適用されると、液滴は脱溶媒和され、その結果、徐々に小さくなる。それらは最終的に反対の電荷の領域、この場合はそれらが沈着するバルーン表面に引き付けられる。スプレープロセス中にバルーンカテーテルを回転させて、すべての面に均一なコーティングを塗布し、吹き付け後、フローフード内でバルーンを乾燥させる。
【０１９７】
パイロット試験により、ＴＡＲ：ＱＵＥＲ捕捉ｐＮＰは蛍光性であり、蛍光イメージングとImageJソフトウェアを使用した分析を使用する表面被覆率の決定が可能となった。ＴＡＲ：Ｑ捕捉ｐＮＰが合成され、バルーンカテーテルにエレクトロスプレーまたはディップコーティングされ、フローフード下で乾燥された。バルーンをカテーテルから取り外し、蛍光顕微鏡を使用して画像化した。同等のサイズの視野を選択し、ある視野の緑色蛍光の明るさと相関する分布プロットを作成した。エレクトロスプレーされた表面の蛍光強度ははるかに大きく、ディップコーティングされたＤＣＢで観察されたのは最小限の強度のみであった。各バルーンのすべてのセグメントを分析した後、被覆率を計算した。ディップコーティングされたバルーン(図７Ａ)と比較して、エレクトロスプレーされたバルーン(図７Ｂ)は、約６５％大きい表面被覆率を生成し、バルーンの７０％がＴＡＲ：ＱＵＥＲ捕捉ｐＮＰで被覆された。
【０１９８】
上記単一エマルジョン蒸発技術をｐＮＰ合成に使用できる。方法は、２相  −  水および有機を含む。有機相を、Eudragit RL100およびＰＬＧＡを、酢酸エチル：アセトン溶液中、室温で２０分間、穏やかな撹拌下に混合することにより製造する。次に、１：２モル比のＱＵＥＲおよびＴＡＲを有機相に加える。撹拌後、有機相を、室温で撹拌下、Tween 80含有水相に滴加する。次に、エマルジョンをマイクロフルイダイザーで、４〜８℃および３回通過でマイクロフルイダイズして、液滴サイズを小さくする。有機溶媒を、減圧下、３２℃で２時間蒸発させる。最後に、ＮＰ懸濁液をトレハロースと混合し、凍結乾燥し、−８０℃で保存する。凝集を最小化するために、糖凍結保護剤と共にポリビニルアルコールを加えて、その後凍結乾燥する。
【０１９９】
ｐＮＰシステムにＴＡＲおよびＱＵＥＲを充填し、ｐＮＰ特徴づけをＦＴＩＲ、Ｈ−ＮＭＲ、ＤＬＳおよびＴＥＭを使用して行う。薬物負荷および放出反応速度論を、上記に類似するＨＰＬＣ方法を使用して、生理学的に妥当な条件下で測定する。簡潔には、サンプルを、ESA Coularray 4チャネル電子化学検出器と連結したWaters 2695 HPLCシステムに注入する。検体を、先に記載した勾配分離を使用して、分離する。
【０２００】
溶液で満たされたハミルトンシリンジがシリンジポンプに配置され、供給源が所望のコレクター距離に配置される。エレクトロスプレーノズルは、溶液中の分子を励起するための電圧源に接続される。設置が適用される。バルーンは一定の回転速度を供給するアルドゥイーノに取り付けられる。図６に示すとおり、溶液の流速、粘度(ＰＥＧを使用して調整)、電圧、回転速度、コレクターの距離などを変更して、最大の薬物負荷で均一なコーティングを提供する。上記の予備調査で説明したとおり、約７０％の被覆率がすでに達成されている(図７Ｂ)。
【０２０１】
バルーンコーティングを、LSUのShared Instrumentation Facilityに設置された機器を使用して、ＳＥＭ下に試験する。被覆率、均一性および亀裂は、バルーンごとの複数の視野にわたる画像の観察と、コーティングおよび乾燥後の最大１４日間の観察によって評価される。均一性は、上記の蛍光イメージング技術を使用して計算される。
【０２０２】
４つの異なる品質試験が実施される。(１)５つのバルーンのサブセットから、エタノールを使用して薬物捕捉ｐＮＰを除去し、ＨＰＬＣに注入して総薬物負荷を測定する(通常、ＤＣＢ製品の薬物負荷は約２〜３μg／mm2);(２)各５つのバルーンを縦方向および横方向に切断し、次いでエタノールで溶出して薬物負荷を評価する(セクション間の±１０％の変動性は成功と見なす);(３)５つのバルーンを実験室に設置したバルーン膨張装置を使用して膨張させ、エタノールを使用して薬物捕捉ｐＮＰをバルーンから抽出し、抽出物をＨＰＬＣに注入して残存薬物負荷量を決定する(市販のＤＣＢは最大１１％の乾燥した薬物を示し；したがって、２０％未満の結果を肯定的な結果と見なすことに注意)；(４)５つのバルーンのそれぞれを、循環水浴を使用して流れをシミュレートした血液溶液に挿入し、薬物溶液中のレベルを０〜６時間で測定する。血管形成術の手技で３０秒の経過時間と２分間の膨張時間を考慮に入れて、２０％以上の６時間までのバルーン残存薬剤を成功と見なす。これは、輸送中に薬物の８０％を失う現在のＤＣＢと比較して大幅な進歩である。
【０２０３】
実施例１０. バルーン血管形成術の動物モデルでの前向きインビボ試験。
ＤＣＢを成功させるための重要なパラメータは、生物学的に適切な時点での治療効果のあるレベルの治療薬の送達である。故に、適切な動物モデル、すなわち、退役したSprague Dawleyの繁殖動物を使用したラット頸動脈モデルを使用した試験を行い、重要な時間枠内のバルーン膨張部位内およびその周辺の薬物レベルを示す。血管形成術後に発生し、再狭窄を促進する重要な細胞事象は、最初の１４日以内に発生する。最適には、再内皮化もこのウィンドウ内で行われるべきである。本前向き試験では、バルーン膨張後の１〜１４日間における組織薬物レベルを試験した。これらの試験費用を低く抑えるために、Dugas研究所ですでに確立されているラット頸動脈モデルを利用した。引退したSprague Dawley繁殖動物の頸動脈は、バルーンカテーテルを膨張させるのに十分な大きさであることは留意すべきである。腸骨動脈や大腿骨などの末梢動脈を使用するのが望ましいこともあるが、ラットのこれらの管径は、購入またはカスタム設計できる最小のバルーンカテーテルの半分のサイズであるが＜１mmである。時々、研究者はラットの試験にFoley塞栓術カテーテルを利用するが、それらを使用しても、ＰＥＢＡＸオーバーザワイヤーバルーンプロトタイプの開発を進めない。
【０２０４】
インビボ動物実験は、雄性と雌性のSprague Dawleyラットを使用し、１２ラット／群が性別に均等に層別化される。ポリフェノール捕捉ｐＮＰコーティングバルーンを、上記のとおり製造する。コーティングバルーンは、標準的な方法でエチレンオキシド滅菌される。血栓症を抑えるために、手術の１週間前から飲料水にアスピリンを加える。アスピリン自体が血管の治癒を変える可能性があるが、その使用は、処置中／処置後の損傷した動脈での致命的な血栓形成を回避するために必要である。手術当日、イソフルラン／Ｏ２を添加したペントバルビタールを使用して、実験動物を麻酔する。腹側の首の部分を剃り、洗う。正中線切開により、左総頸動脈、外頸動脈、内頸動脈を露出させる。動脈の下に絹の縫合糸を挿置し、血流を約５分間遮断する。左外頸動脈に動脈横向き切開術を行う。薬物捕捉ｐＮＰコーティングバルーンを総頸動脈に挿入し、１０気圧で２分間膨らませ、空気を抜いて引き出す。外頸動脈を動脈切開の遠位で結紮し、総頸動脈を通して血流を回復させる。血流を回復させた後、ヘパリンを腹腔内注射する。筋膜と皮膚を縫合する。ガス麻酔を辞め、ラットをモニターする。１日目、２日目、７日目、１０日目および１４日目に、ラットを屠殺する。大静脈から血液を採取し、組織を切除して急速冷凍する。ＦＤＡのガイダンスに従って、薬物レベルを、バルーンの膨張部位、血漿、膨張部位の近位および遠位の組織、肝臓、肺、腎臓、心臓などで測定する。
【０２０５】
組織を均質化し、メタノールで２回抽出し、Ｎ２下に濃縮し、上記のＨＰＬＣ法を使用して、またはそのような方法と同様に分析する。より高濃度のレスベラトロールおよびケルセチンは、工程後１〜２日以内に検出され、その後は低レベルになると予想される。
【０２０６】
GraphPad Prismソフトウェアを使用した反復測定ＡＮＯＶＡを適用して、組織の薬物レベルの経時的な大幅な増加を評価する。ラットの頸動脈に埋め込まれたＲＱ溶出薬剤溶出ステント(ＤＥＳ)試験で収集されたデータを使用して、G*Power(Dusseldorf)による力分析が以前に行われた。仮定は次のとおりである。効果＝０.０５、効果サイズ＝０.５μg／cm2、検出力＝０.９および５測定。この先の試験に基づいて、ここに記載する試験は、８匹のラット／群で経時的な組織薬物レベルの有意な増加を検出できるはずであると予想される。しかしながら、１)手術中にラットの約１０％が失われる可能性があり、２)ＤＣＢからの薬物の蓄積がＤＥＳよりも少ない場合がある。故に、ここに記載する試験は、１２匹のラット／群で開始する。試験アプローチの厳格さと特定の操作の状況によるバイアスの低減を確実にするために、これらの動物は２回の手術試験をとおして分配する。血管壁内の薬物の蓄積は性別によって異ならないことが予想される。この前向き試験で得られたデータがヒトの母集団を表すことを保証することが重要である。故に、性別に均等に階層化することが提案されている。
【０２０７】
ポリフェノール、すなわち、ＲＥＳＶおよびＱＵＥＲを、血管形成術後最初の数日検出できることは明らかであるが、７日目の測定可能レベルは、相当高いと考えられる。
【０２０８】
当業者には、種々の修飾および変動を、開示する範囲または精神から逸脱することなく、本開示になし得ることは明らかである。本発明の他の実施態様は、明細書の考察およびここに開示する発明の実施により当業者には明らかである。明細書および実施例は単なる例であり、本開示の真の範囲および精神は添付する特許請求の範囲により示されることが意図される。
【図１】
2021511891.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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