(57)【要約】【課題】本発明は、オリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、タンパク質、二つ、複数または多くのサブユニットで構成されるタンパク質複合体を最も効果的に示すための新規ポリペプチドスキャフォールドの設計と製造に関する。【解決手段】本発明のポリペプチドスキャフォールドに示されるこれらオリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、タンパク質は、免疫反応を誘引するよう免疫システムを刺激する抗原体を含み、例えば、ワクチン目的用、または、抗体または細胞培養中の他の結合因子の調整用、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ、の抗原体である。好ましい態様では、本発明のポリペプチドは、感染因子又は腫瘍に対するワクチンに関して使用できる抗原の表示用に最適化されたウイルス様粒子（Ｖｉｒｕｓ  Ｌｉｋｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ，ＶＬＰ）に会合される。【選択図】図１
2021532836.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）の構造を有するポリペプチドであって、
［式１］
2021532836.tif 000037
ここで、
Ａはアデノウイルスペントンベースタンパク質のＮ末端アミノ酸ストレッチ；
Ｂはアデノウイルスペントンベースタンパク質のアミノ酸ストレッチ；
ＣはアデノウイルスペントンベースのＣ末端アミノ酸ストレッチ；であり、
ここで、Ｂは前記アデノウイルスペントンベースの配列中のＡおよびＣの間に位置するアミノ酸ストレッチであり、
ここで、Ａ、ＢおよびＣは、前記アデノウイルスペントンベースタンパク質のゼリーロールフォールドドメインを形成し、
Ｌ１およびＬ２は、互いに独立に、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質複合体からなる群から選ばれ、
ここで、前記オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質複合体はそれぞれ、本質的に非アデノウイルスであるか、または、アデノウイルスである場合は前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルスの血清型と比して異なる血清型を有するアデノウイルス由来である、
ことを特徴とするポリペプチド。
【請求項２】
前記アミノ酸ストレッチＡが、前記アデノウイルスのゼリーロールフォールドドメインのβシート１，２および３を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記アミノ酸ストレッチＢが前記アデノウイルスのゼリーロールフォールドドメインのβシート４および５を含む、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記アミノ酸ストレッチＣが前記アデノウイルスのゼリーロールフォールドドメインのβシート６，７および８を含む、請求項１から３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが、ヒトアデノウイルス血清型２、ヒトアデノウイルス血清型３、ヒトアデノウイルス血清型４、ヒトアデノウイルス血清型５、ヒトアデノウイルス血清型７、ヒトアデノウイルス血清型１１、ヒトアデノウイルス血清型１２、ヒトアデノウイルス血清型１７、ヒトアデノウイルス血清型２５、ヒトアデノウイルス血清型３５、ヒトアデノウイルス血清型３７、ヒトアデノウイルス血清型４１、ゴリラアデノウイルス、チンパンジーアデノウイルス、サルアデノウイルス血清型１８、サルアデノウイルス血清型２０、サルアデノウイルス血清型４９、アカゲザルアデノウイルス血清型５１、アカゲザルアデノウイルス５２、アカゲザルアデノウイルス５３、のペントンベースからなる群からそれぞれ独立に選ばれるアミノ酸配列を有する、
請求項１から４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記アミノ酸ストレッチＡが次のコンセンサス配列（配列番号２１）
［配２１］
2021532836.tif 000038
を有し、
ここで、アミノ酸ストレッチＡは、Ｃ末端のＺ１の前のＴ残基またはＺ１からＺ１５のアミノ酸で終わり、
Ｕ  は、いずれのアミノ酸であるかアミノ酸ではなく、
Ｘ１  は、ＥまたはＧ  であり、
Ｘ２  は、ＥまたはＳ  であり、
Ｘ３  は、ＬまたはＶ  であり、
Ｘ４  は、ＡまたはＳ  であり、
Ｘ５  は、ＬまたはＱ  であり、
Ｘ６  は、ＹまたはＥ  であり、
Ｘ７  は、ＲまたはＫ  であり、
Ｘ８  は、ＶまたはＬ  であり、
Ｘ９  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ１０  は、ＦまたはＹ  であり、
Ｘ１１  は、ＴまたはＳ  であり、
Ｘ１２  は、ＡまたはＴまたはＩまたはＧ  であり、
Ｘ１３  は、ＳまたはＧ  であり、
Ｘ１４  は、ＦまたはＬ  であり、
Ｘ１５  は、ＥまたはＤ  であり、
Ｘ１６  は、ＡまたはＧ  であり、
Ｘ１７  は、ＤまたはＱ  であり、
Ｘ１８  は、ＬまたはＭ  であり、
Ｘ１９  は、ＨまたはＲ  であり、
Ｚ１  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ２  は、もし存在するのであれば、Ｍ  であり、
Ｚ３  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｚ４  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ５  は、もし存在するのであれば、ＶまたはＩ  であり、
Ｚ６  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ７  は、もし存在するのであれば、ＥまたはＤ  であり、
Ｚ８  は、もし存在するのであれば、ＹまたはＦ  であり、
Ｚ９  は、もし存在するのであれば、Ｍ  であり、
Ｚ１０  は、もし存在するのであれば、ＦまたはＳまたはＹ  であり、
Ｚ１１  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＳ  であり、
Ｚ１２  は、もし存在するのであれば、ＳまたはＮ  であり、
Ｚ１３  は、もし存在するのであれば、Ｋ  であり、
Ｚ１４  は、もし存在するのであれば、Ｆ  であり、
Ｚ１５  は、もし存在するのであれば、Ｋ  である、
請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記アミノ酸ストレッチＡが、次の配列；
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の１から４８位から選ばれるアミノ酸から１２９から１４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ０３２７６の１から４８位から選ばれるアミノ酸から１２９から１４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２ＫＳＦ３の１から４４位から選ばれるアミノ酸から１２５から１４０位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ１２５３８の１から４８位から選ばれるアミノ酸から１２９から１４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９ＪＦＴ６の１から４８位から選ばれるアミノ酸から１２９から１４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｄ２ＤＭ９３の１から４８位から選ばれるアミノ酸から１２９から１４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ３６７１６の１から３８位から選ばれるアミノ酸から１１９から１３４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ１ＤＴ６５の１から３５位から選ばれるアミノ酸から１１６から１３１位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｍ０ＱＵＫ０の１から４３位から選ばれるアミノ酸から１２４から１３９位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ７Ｔ９４１の１から４９位から選ばれるアミノ酸から１３０から１４５位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９１２Ｊ１の１から３５位から選ばれるアミノ酸から１１６から１３１位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ８ＷＱＮ４の１から４６位から選ばれるアミノ酸から１２７から１４２位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｅ５Ｌ３Ｑ９の１から４９位から選ばれるアミノ酸から１３０から１４５位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｇ９Ｇ８４９の１から４４位から選ばれるアミノ酸から１２５から１４０位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｈ８ＰＦＺ９の１から４６位から選ばれるアミノ酸から１２７から１４２位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ６ＫＳＵ４の１から４５位から選ばれるアミノ酸から１２６から１４１位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ２ＷＴＫ５の１から４６位から選ばれるアミノ酸から１２７から１４２位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１の１から４３位から選ばれるアミノ酸から１２４から１３９位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７の１から４３位から選ばれるアミノ酸から１２４から１３９位から選ばれるアミノ酸、
および
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７の１から４４位から選ばれるアミノ酸から１２５から１４０位から選ばれるアミノ酸、
からなる群から選ばれる請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記一般式（Ｉ）の前記アミノ酸ストレッチＢが次のコンセンサス配列（配列番号２２）
［配２２］
2021532836.tif 000039
を有し、
ここで、
アミノ酸ストレッチＢは、Ｎ末端のＺ１７からＺ２７またはＺ２７の後のアミノ酸Ｑで始まり、
アミノ酸ストレッチＢは、Ｃ末端のＺ２８の前のアミノ酸またはＺ２８からＺ３０のアミノ酸で終わり、
Ｚ１７  は、もし存在するのであれば、ＬまたはＳ  であり
Ｚ１８  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＰまたはＣ  であり、
Ｚ１９  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＰ  であり、
Ｚ２０  は、もし存在するのであれば、ＰまたはＳまたはＡまたはＲ  であり、
Ｚ２１  は、もし存在するのであれば、ＮまたはＤ  であり、
Ｚ２２  は、もし存在するのであれば、ＧまたはＶ  であり、
Ｚ２３  は、もし存在するのであれば、ＨまたはＴ  であり、
Ｚ２４  は、もし存在するのであれば、Ｃ  であり、
Ｚ２５  は、もし存在するのであれば、Ｇ  であり、
Ｚ２６  は、もし存在するのであれば、ＡまたはＶまたはＳ  であり、
Ｚ２７  は、もし存在するのであれば、ＥまたはＱ  であり、
Ｘ２０  は、ＬまたはＭ  であり、
Ｘ２１  は、ＱまたはＫ  であり、
Ｘ２２  は、ＱまたはＲまたはＳ  であり、
Ｘ２３  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ２４  は、ＳまたはＮ  であり、
Ｘ２５  は、ＹまたはＦ  であり、
Ｘ２６  は、ＡまたはＶ  であり、
Ｚ２8  は、もし存在するのであれば、ＭまたはＬ  であり、
Ｚ２9  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｚ３０  は、もし存在するのであれば、ＶまたはＦ  である、
請求項５から７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記アミノ酸ストレッチＢが、次の配列； 
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の３９８から４０９位から選ばれるアミノ酸から４４０から４４３位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ０３２７６の４２５から４３６位から選ばれるアミノ酸から４６７から４７０位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２ＫＳＦ３の３７９から３９０位から選ばれるアミノ酸から４２１から４４４位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ１２５３８の４２５から４３６位から選ばれるアミノ酸から４６７から４７０位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９ＪＦＴ６の３９８から４０９位から選ばれるアミノ酸から４４０から４４３位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｄ２ＤＭ９３の４１５から４２６位から選ばれるアミノ酸から４５７から４６０位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ３６７１６の３５１から３６２位から選ばれるアミノ酸から３９３から３９７位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ１ＤＴ６５の３７０から３８１位から選ばれるアミノ酸から４１３から４１６位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｍ０ＱＵＫ０の３８８から３９９位から選ばれるアミノ酸から４４０から４４３位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ７Ｔ９４１の４４５から４５６位から選ばれるアミノ酸から４９７から５００位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９１２Ｊ１の３７２から３８３位から選ばれるアミノ酸から４１４から４１７位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ８ＷＱＮ４の３６２から３７３位から選ばれるアミノ酸から４０４から４０７位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｅ５Ｌ３Ｑ９の４１６から４２７位から選ばれるアミノ酸から４５８から４６１位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｇ９Ｇ８４９の３７２から３８３位から選ばれるアミノ酸から４２０から４２３位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｈ８ＰＦＺ９の３５３から３６４位から選ばれるアミノ酸から３９５から３９８位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ６ＫＳＵ４の３５８から３６９位から選ばれるアミノ酸から４００から４０３位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ２ＷＴＫ５の３５６から３６７位から選ばれるアミノ酸から３９８から４０１位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１の３５２から３６３位から選ばれるアミノ酸から３９４から３９７位から選ばれるアミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７の３５０から３６１位から選ばれるアミノ酸から３９２から３９５位から選ばれるアミノ酸、
および
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７の３５１から３６２位から選ばれるアミノ酸から３９３から３９６位から選ばれるアミノ酸、
からなる群から選ばれる請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記一般式（Ｉ）のアミノ酸ストレッチＣは次の配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２３）
［配２３］
2021532836.tif 000040
を有し、
ここで、
アミノ酸ストレッチＣは、Ｎ末端のＺ３１からＺ３３またはＺ３３の後のアミノ酸Ａで始まり、
Ｚ３１  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ３２  は、もし存在するのであれば、Ｖ  であり、
Ｚ３３  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｘ２７  は、ＲまたはＳまたはＧ  であり、
Ｘ２８  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ２９  は、ＹまたはＨ  であり、
Ｘ３０  は、ＡまたはＳ  であり、
Ｘ３１  は、ＲまたはＫ  である、
請求項５から９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記アミノ酸ストレッチＣが、次の配列； 
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の４９２から４９５位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ０３２７６の５１９から５２２位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２ＫＳＦ３の４６６から４６９位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ１２５３８の４９２から４９５位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９ＪＦＴ６の４６５から４６８位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｄ２ＤＭ９３の４８２から４８５位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ３６７１６の４１９から４２２位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ１ＤＴ６５の４３８から４４１位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｍ０ＱＵＫ０の４５５から４５８位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ７Ｔ９４１の５２２から５２５位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９１２Ｊ１の４３９から４４２位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ８ＷＱＮ４の４２９から４３２位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｅ５Ｌ３Ｑ９の４８３から４８６位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｇ９Ｇ８４９の４４５から４４８位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｈ８ＰＦＺ９の４２０から４２３位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ６ＫＳＵ４の４２５から４２８位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ２ＷＴＫ５の４２３から４２６位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１の４１９から４２２位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７の４１７から４２０位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
および
ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７の４１８から４２１位から選ばれるアミノ酸からＣ末端アミノ酸、
からなる群から選ばれる請求項１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記アミノ酸ストレッチＡが、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の１から１３２位の配列を有し、
前記アミノ酸ストレッチＢが、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の４０７から４４２位の配列を有し、
前記アミノ酸ストレッチＣが、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９の４９３から５４４位の配列を有する、
請求項１から１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記Ｌ１および/またはＬ２がアミノ酸ＧおよびＳから選ばれる４から４０アミノ酸の配列を有するオリゴペプチドである、
請求項１から１２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記Ｌ１および/またはＬ２が独立にＧＧＧＳ（配列番号２４）およびＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５）からなる群から選ばれる、
請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記Ｌ１は、前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルス血清型と比して異なるアデノウイルス血清型を有するアデノウイルスペントンベースのＲＧＤループを含むアデノウイルス配列である、および/または
前記Ｌ２は、前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルス血清型と比して異なるアデノウイルス血清型を有するアデノウイルスペントンベースの可変ループを含むアデノウイルス配列である、
請求項１から１２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記Ｌ１は、前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルス血清型と比して異なるアデノウイルス血清型を有するアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインの大きなフラグメントであり、
前記Ｌ２は、前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルス血清型と比して異なるアデノウイルス血清型を有するアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインの小さなフラグメントである、
請求項１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
前記大きなフラグメントおよび前記小さなフラグメントが、同じアデノウイルスのペントンベースタンパク質に由来する、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記大きなフラグメントおよび前記小さなフラグメントが、異なるアデノウイルスのペントンベースタンパク質に由来する、請求項１６に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記ＲＧＤループおよび/または前記可変ループに、一以上のアデノウイルスでない配列が挿入された、請求項１５から１８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記Ｌ１および/またはＬ２が抗原を含む、請求項１から１９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
前記抗原が、感染因子の抗原および腫瘍抗原からなる群から選ばれる、請求項２０に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
前記Ｌ１および/又はＬ２に、核酸、薬剤、ラベル、および/又は、生物的結合対の結合パートナーが結合する、請求項１から２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項２４】
次の一般式（ＩＩ）を有する配列を有する核酸であって、
［式２］
2021532836.tif 000041
ここで
ａ  は一般式（Ｉ）のＡをコードする核酸配列であり、
ｂ  は一般式（Ｉ）のＢをコードする核酸配列であり、
ｃ  は一般式（Ｉ）のＣをコードする核酸配列であり、
Ｉ１、Ｉ２  はそれぞれ核酸配列であり、
ｉｓ１からｉｓ４  はそれぞれ独立に、少なくとも一つの挿入部を有する核酸配列である、
ことを特徴とする核酸。
【請求項２５】
前記ｉｓ１からｉｓ４が、制限酵素の認識配列およびホーミングエンドヌクレアーゼの認識配列からなる群から選ばれる、請求項２４に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
前記ｉｓ１がＥｃｏＲＩ部位、前記ｉｓ２がＲｓｒII部位、前記ｉｓ３がＳａｃＩ部位、および前記ｉｓ４がＸｂａＩ部位を含む、請求項２５に記載の核酸。
【請求項２７】
請求項２３から２６のいずれか１項に記載の核酸を有するベクター。
【請求項２８】
請求項２３から２６のいずれか１項に記載の核酸を発現カセット内に含む、請求項２７に記載のベクター。
【請求項２９】
請求項２３から２６のいずれか１項に記載の核酸または請求項２７または２８に記載のベクターを含む、組み換え宿主細胞。
【請求項３０】
請求項１から２２のいずれかに記載のポリペプチドの五量体複合体。
【請求項３１】
請求項３０に記載の１２個の五量体複合体を含む、ウイルス様粒子（Ｖｉｒｕｓ  Ｌｉｋｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  （ＶＬＰ））。
【請求項３２】
請求項１から２２のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２３に記載の核酸、請求項２７または２８に記載のベクター、請求項２９に記載の宿主細胞、または請求項３１に記載のＶＬＰの医薬品としての使用。
【請求項３３】
請求項１から２２のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２３に記載の核酸、請求項２７または２８に記載のベクター、請求項２９に記載の宿主細胞、または請求項３１に記載のＶＬＰを、薬学的に許容可能な担体、賦形剤および/または希釈剤の少なくとも一つ、とともに含む、薬学組成物。
【請求項３４】
請求項２９に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、請求項１から２２のいずれか１項に記載のポリペプチドの製造方法であって、
請求項２９に記載の宿主細胞を培養する工程を含み、
前記宿主細胞は、請求項２３に記載の核酸を含む請求項２８に記載のベクターを有し、
前記ポリペプチドの発現が可能である状態下である、
ことを特徴とする、ポリペプチドの製造方法。
【請求項３５】
請求項３１に記載のＶＬＰの製造方法であって、請求項１から１２のいずれか１項に記載のポリペプチドがＶＬＰに会合することが可能な状態下で、前記ポリペプチドの溶液をインキュベートする工程を含む、ＶＬＰの製造方法。
【請求項３６】
請求項１から２２のいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項２３に記載の核酸、請求項２７または２８に記載のベクター、請求項２９に記載の宿主細胞、または請求項３１に記載のＶＬＰの、感染症、免疫疾患、癌または腫瘍の治療および/または予防への使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、タンパク質、および/又は、二個、いくつか、又は多くのサブユニットによって構成されるタンパク質複合体を最も効果的に示すための新規ポリペプチドスキャフォールドの設計と作製に関する。本発明のポリペプチドスキャフォールドにより示されるこれらオリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、および/又はタンパク質は、免疫反応を誘引するように免疫システムを刺激する抗原体を含み、例えば、ワクチン目的用または、抗体または細胞培養中の他の結合分子の調製用、ｉｎ  ｖｉｖｏ、試験管内ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、の抗原体である。好ましい実施形態では、本発明のポリペプチドは、感染因子または腫瘍に対するワクチンとして利用できる抗原の表示用に最適化されたウイルス様粒子（Ｖｉｒｕｓ  Ｌｉｋｅ  Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  （ＶＬＰ））に会合される。
【背景技術】
【０００２】
オリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、タンパク質および/又はタンパク質複合体の提示のためのタンパク質スキャフォールドの設計を成功させるために必要な条件は、前記オリゴペプチド、ポリペプチド配列、タンパク質ドメイン、タンパク質および/又はタンパク質複合体を収容することができ、柔軟で露出するループ構造を表すことができる、コンパクトで安定な多量体化ドメインである。好ましくは、これら表示された物質は、免疫システムに現れる免疫原性抗原を表すことができる。いくつかのアデノウイルス（Ａｄ）血清型からのペントンベースタンパク質（プロトマー）は、五量体に会合され、のちに十二量体を形成し、ウイルス様粒子に似たものとなる。生きたウイルスとは対照的に、これらは遺伝的材料を有しないので、これらＶＬＰは安全性を考慮するにあたり有益である。
【０００３】
アデノウイルスはヒトにおいて、最も普通に用いられる遺伝子治療ベクターのひとつである。アデノウイルスの殻は、ヘキソンタンパク質とペントンベースタンパク質という二つの異なるタンパク質でできており、後者は五量体集合（会合）を形成しこのウイルスの特徴であるファイバーに付着する。特定のアデノウイルス血清型のペントンベースタンパク質は、他のアデノウイルスの構成成分がない状態で組み換え的に発現させたとき、継続的に自己集合して多量体化超構造になることが示された。この超構造は十二量体を示し、６０個のアデノウイルスベースタンパク質が１２個の同一コピーの五量体「クラウン型（ｃｒｏｗｎ−ｓｈａｐｅｄ）」集合体（会合体）（図１）に配置されて形成される。アデノウイルスベースタンパク質自体は、二つのドメイン構造を採用しており、一つのドメインはβバレルを表し、αヘリックスによって安定化される二つ目のドメインに結合する（図１Ｂ）。前者は、変異研究で証明されたように、十二量体への多量体化を媒介し、一方、後者は十二量体表面上の溶媒へ延びるループを表している。これらループは、異なるアデノウイルス血清型において、長さと配列内容で非常に変異しやすく、一方、ベースタンパク質の残りは、種全体にわたって高く保存されている。アデノウイルス十二量体は、例えば、ループに挿入され、自然に発生する配列を置換することができる免疫原性ペプチドのような、非常に可変性のディスプレイスキャフォールドを表す。もしすべての挿入部位が使用された場合、文字通り百の異なるペプチドが一つの十二量体に効果的に表示されることができる。十二量体は、組み換え的に非常に多くの量作成されることができ、これは非常に安定で、限定されない時間、周囲の温度で保存されることができる。これら非常に有益な特徴を用いて、腫瘍免疫学および新興感染症を含む適用に用いるために、露出したループに免疫原性ペプチドを表示する合成十二量体をベースとした粒子を作成する。
【０００４】
国際公開第２０１７/１６７９８８には、露出ループへのエピトープ挿入を容易にする合成アデノウイルス十二量体の記載があり、アデノウイルスベースタンパク質の作成についても記載がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１７/１６７９８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本願発明の解決しようとする課題は、ＶＬＰ構造に会合することができるタンパク質スキャフォールドを介して抗原または他のカーゴを表示する新規システムを提供することである。
【０００７】
上述の技術的課題は、請求項において定義される本願発明の実施形態同様、ここにさらに述べられ、付随する図に描写によって提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明は、少なくとも一部は、アデノウイルスペントンベースタンパク質の構成が遺伝子融合による進化過程で起こることがある本物の二つのドメイン構造を表すという発見を基にしている（図１Ｂ）。前記二つのドメインは二つの異なるコンパクトな物質、すなわち、多量化体情報を有するβバレルおよび「クラウン」に似たαヘリックスドメイン、に簡単に分けることができる。
【０００９】
したがって、本願発明によると、抗原または最も可変で柔軟な物体を運ぶ他のカーゴに結合することができる「最小の」多量体化ポリペプチドが提供される。つまり、本願発明の作成されたポリペプチドは、アデノウイルスペントンベース（ここではまた「ペントンベースプロトマー」と記載されることもある）のβバレルドメインを形成するアデノウイルスペントンベースのアミノ酸配列に由来する。前記アデノウイルスペントンベースのβバレルドメインは８つのβシート１から８（図２参照）を含む、いわゆるゼリーロールフォールドドメインを形成する（Ｚｕｂｉｅｔａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｍｏ．  Ｃｅｌｌ  １７，  １２１−１３５参照）。本願発明によると、効果的多量体化のためには、結合カーゴの表示が、完全に、または他の実施形態では部分的に、所望の非アデノウイルス配列により置換されることができることが、驚いたことに発見された。ここで、表示される結合カーゴは、例えば、薬剤、ラベル、核酸、ゼリーフォールドドメインを形成するアミノ酸ストレッチの間の配列に点在する前記２つのループ（「クラウン」ドメインを形成する）であり、所望の非アデノウイルス配列は、オリゴペプチドリンカー（抗原または他のカーゴが代わりに結合する）やポリペプチド、タンパク質、タンパク質ドメイン、タンパク質複合体などの所望のアミノ酸配列などである。
【００１０】
したがって、本願の好ましい形態では、核酸、薬剤、ラベル、および/又は、生物的結合対の結合パートナー、がＬ１および/又はＬ２に結合する。本願発明に係る「生物的結合」対は、それぞれ、生物的物質または化合物の対であり、典型的には自然界で見られるか、少なくとも自然界で検出された結合対由来、である。例としては、これに限定されないが、抗原、抗体、抗体断片、ジアボディ、抗体ミメティック、レセプターおよびそのリガンド、ビオチン、ストレプトアビジンのようなものが含まれる。
【００１１】
このような物質は、当該技術分野で知られている手段を介してＬ１および/又はＬ２に結合してもよい。もし必要であれば、いずれのタイプのリンカーもＬ１および/又はＬ２の位置で適切な基に結合することができ、そしてリンカーは所望の物質に結合する。化学結合に用いられるＬ１および/又はＬ２に示される典型的な基は、Ｌ１および/又はＬ２に示されるアミノ酸残基のＮＨ２基およびＳＨ基を含む。しかしながら、Ｌ１および/又はＬ２へのカーゴの結合は、化学結合に限定されず、イオン結合、水素結合およびファンデルワールス結合のようないずれかの他の結合を含む。
【００１２】
本願発明にかかるゼリーロールフォールドドメインは、三つのアミノ酸のストレッチ（これは例えば「セグメント」または「領域」と記載されることもある）：Ｎ末端ストレッチ、中間ストレッチおよびＣ末端ストレッチ、により形成される。本来のアデノウイルスペントンベースプロトマーにおいて、ループセグメントはＮ末端アミノ酸ストレッチと中間ストレッチ（ラージループ）の間、および、中間ストレッチとＣ末端アミノ酸ストレッチ（スモールループ）の間に見いだされる。上述の概略のように、本発明のポリペプチドの典型的非アデノウイルス配列、ここでは「リンカー」と示されることもある、は、本来のアデノウイルスペントンベースプロトマーのループセグメントに置き換えられる。本発明の他の態様では、本来のペントンベースのラージループとスモールループの一つは、本発明のポリペプチドに示され、Ｌ１又はＬ２を形成する。
【００１３】
したがって、本発明に係るポリペプチドは一般に次の一般式（Ｉ）によってあらわされる構造を有する。
［式１］
2021532836.tif 000003
ここで、
Ａはアデノウイルスペントンベースタンパク質のＮ末端アミノ酸ストレッチ、
Ｂはアデノウイルスペントンベースタンパク質のアミノ酸ストレッチ、
ＣはアデノウイルスペントンベースのＣ末端アミノ酸ストレッチ；
ここで、Ｂは前記アデノウイルスペントンベースの配列にＡおよびＣの間に位置するアミノ酸ストレッチであり、
ここでＡ、ＢおよびＣは、前記アデノウイルスペントンベースタンパク質のゼリーロールフォールドドメインを形成する。
【００１４】
上記に概略したように、Ｌ１およびＬ２はリンカーである。したがって、Ｌ１およびＬ２は、（ポリペプチドの多量体化を邪魔しない限り）ほぼすべてのアミノ酸配列から選ぶことができる。したがって、Ｌ１およびＬ２は、同一または異なってよく、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、タンパク質複合体で構成されるグループから選ばれる他の一つから独立している。Ｌ１およびＬ２の配列は典型的には、非アデノウイルスであり、たとえば、少なくとも５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸のアミノ酸配列を有し、この配列はいずれのアデノウイルス血清型の知られているペントンベースプロトマー配列、より好ましくはいずれのアデノウイルスタンパク質、にも存在せず、生じない。
【００１５】
本発明の他の態様では、リンカーＬ１およびＬ２は、アデノウイルスペントンベースのループ配列、（例えば、第一および第２ＲＧＤループ、および/又は、ＷＯ２０１７/１６７９８８で定義されるさまざまなループ、を含む領域）から選ばれる。しかしながら、この態様では、ループセグメントの配列は、前記アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣが由来するアデノウイルスの血清型に比較して、異なる血清型を有するアデノウイルスに由来する。これにより、本発明のこの態様では、ペントンベースプロトマーのキメラを提供し、このキメラは、βバレル、ゼリーロールフォールドドメインは一つのアデノウイルス血清型に由来し、一方、Ｌ１およびＬ２はＲＧＤループセグメントおよび/または、ＶＬ可変ループセグメント（「クラウン」ドメインを形成する）を含むポリペプチドであり、ゼリーロールフォールドドメインが由来するアデノウイルスの血清型とは異なるアデノウイルスの血清型に由来する。
【００１６】
好ましくは、アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣはアデノウイルスペントンベースプロトマーのゼリーロールフォールドドメインのβシート１，２および３を含み、アミノ酸ストレッチＢは前記アデノウイルスペントンベースプロトマーのゼリーロールフォールドドメインのβシート４および５を含み、アミノ酸ストレッチＣは前記アデノウイルスペントンベースプロトマーのゼリーロールフォールドドメインのβシート６、７および８を含む。それぞれのセグメントＡ、ＢおよびＣは独立に同一または異なるアデノウイルスに由来することができる。
【００１７】
好ましくは、アミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）を含むグループから選ばれるペントンベース配列にそれぞれ独立に由来するアミノ酸配列を有する。
【００１８】
上記したアデノウイルスペントンベースの好ましいアミノ酸配列は、例えばＵｎｉＰｒｏｔやＵｎｉＰｒｏｔＥのような一般的にアクセスできるデータベースに記載されており、ここに参照する上記したアデノウイルスペントンベースの特に好ましい配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９（ヒトアデノウイルス血清型３；配列番号１）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ０３２７６（ヒトアデノウイルス血清型２；配列番号２）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２ＫＳＦ３（ヒトアデノウイルス血清型４；配列番号３）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ１２５３８（ヒトアデノウイルス血清型５；配列番号４）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９ＪＦＴ６（ヒトアデノウイルス血清型７；配列番号５）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｄ２ＤＭ９３（ヒトアデノウイルス血清型１１；配列番号６）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ３６７１６（ヒトアデノウイルス血清型１２；配列番号７）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ１ＤＴ６５（ヒトアデノウイルス血清型１７；配列番号８）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｍ０ＱＵＫ０（ヒトアデノウイルス血清型２５；配列番号９）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ７Ｔ９４１（ヒトアデノウイルス血清型３５；配列番号１０）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９１２Ｊ１（ヒトアデノウイルス血清型３７；配列番号１１）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ８ＷＱＮ４（ヒトアデノウイルス血清型４１；配列番号１２）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｅ５Ｌ３Ｑ９（ゴリラアデノウイルス；配列番号１３）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｇ９Ｇ８４９（チンパンジーアデノウイルス；配列番号１４）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｈ８ＰＦＺ９（サルアデノウイルス血清型１８；配列番号１５）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ６ＫＳＵ４（サルアデノウイルス血清型２０；配列番号１６）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ２ＷＴＫ５（サルアデノウイルス血清型４９；配列番号１７）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１（アカゲザルアデノウイルス血清型５１；配列番号１８）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７（アカゲザルアデノウイルス血清型５２；配列番号１９）およびＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７（アカゲザルアデノウイルス血清型５３；配列番号２０）に記載される。
【００１９】
上記ペントンベースのアミノ酸配列を以下に示す（各ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．は括弧内に示す）。
【００２０】
ヒトアデノウイルス血清型３ペントンベースｈＡｄ３（Ｑ２Ｙ０Ｈ９）；配列番号１
［配１］
2021532836.tif 000004
【００２１】
ｈＡｄ２（Ｐ０３２７６）；配列番号２：
［配２］
2021532836.tif 000005
【００２２】
ｈＡｄ４（Ｑ２ＫＳＦ３）；配列番号３：
［配３］
2021532836.tif 000006
【００２３】
ｈＡｄ５（Ｐ１２５３８）；配列番号４：
［配４］
2021532836.tif 000007
【００２４】
ｈＡｄ７（Ｑ９ＪＦＴ６）；配列番号５：
［配５］
2021532836.tif 000008
【００２５】
ｈＡｄ１１ (Ｄ２ＤＭ９３); 配列番号 6:
［配６］
2021532836.tif 000009
【００２６】
ｈＡｄ１２（Ｐ３６７１６）；配列番号７：
［配７］
2021532836.tif 000010
【００２７】
ｈＡｄ１７（Ｆ１ＤＴ６５）；配列番号８：
［配８］
2021532836.tif 000011
【００２８】
ｈＡｄ２５（Ｍ０ＱＵＫ０）；配列番号９：
［配９］
2021532836.tif 000012
【００２９】
ｈＡｄ３５（Ｑ７Ｔ９４１）；配列番号１０：
［配１０］
2021532836.tif 000013
【００３０】
ｈＡｄ３７（Ｑ９１２Ｊ１）；配列番号１１：
［配１１］
2021532836.tif 000014
【００３１】
ｈＡｄ４１（Ｆ８ＷＱＮ４）；配列番号１２：
［配１２］
2021532836.tif 000015
【００３２】
ゴリラアデノウイルスペントンベース  ｇｏｒＡｄ（Ｅ５Ｌ３Ｑ９）；配列番号１３
［配１３］
2021532836.tif 000016
【００３３】
チンパンジーアデノウイルスペントンベース  ｃｈｉｍｐＡｄ（Ｇ９Ｇ８４９）；配列番号１４
［配１４］
2021532836.tif 000017
【００３４】
サルアデノウイルスペントンベース血清型１８、ｓＡｄ１８（Ｈ８ＰＦＺ９）；配列番号１５
［配１５］
2021532836.tif 000018
【００３５】
ｓＡｄ２０（Ｆ６ＫＳＵ４）；配列番号１６
［配１６］
2021532836.tif 000019
【００３６】
ｓＡｄ４９（Ｆ２ＷＴＫ５）；配列番号１７
［配１７］
2021532836.tif 000020
【００３７】
アカゲザルアデノウイルス血清型５１ペントンベース  ｒｈＡｄ５１（Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１）；配列番号１８
［配１８］
2021532836.tif 000021
【００３８】
ｒｈＡｄ５２（Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７）；配列番号１９
［配１９］
2021532836.tif 000022
【００３９】
ｒｈＡｄ５３（Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７）；配列番号２０
［配２０］
2021532836.tif 000023
【００４０】
本発明のポリペプチドは、それぞれ、上記参照のアデノウイルスサブタイプおよび血清型の多量体化ゼリーロールフォールドドメインを形成するアミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣのための知られている特定の配列に限定されない。アミノ酸セグメントＡ、ＢおよびＣは、Ａ、ＢおよびＣの配列が結果として生じるポリペプチドがゼリーロールフォールドを採用し、更に下記に概略する適切な環境下で順々に自己集合して十二量体超複合体（本発明のＶＬＰ）を形成する１２の五量体複合体（「ペントンタンパク質」とも記載される）に会合する限り、既知のアデノウイルスペントンベースプロトマーの配列に類似したアミノ酸配列を有することができる。一般に、このようなセグメントＡ、ＢおよびＣの類似配列は少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは９５％、特に好ましくは少なくとも９８％、最も好ましくは少なくとも９９％、既知のアデノウイルスペントンベースのそれぞれのアミノ酸配列、好ましくは配列番号１から２０のアミノ酸配列、より好ましくは下記表１から３に示すアミノ酸ストレッチＡ、ＢおよびＣと相同である。
【００４１】
ここでは、他に特別に示さない限り、アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端までＩＵＰＡＣの一文字表記を用いて記載される。
【００４２】
本発明の好ましい形態によると、アミノ酸ストレッチＡは次のコンセンサス配列（配列番号２１）を有する。
［配２１］
2021532836.tif 000024
ここで、
アミノ酸ストレッチＡは、Ｃ末端のＺ１の前のＴ残基またはＺ１からＺ１５のアミノ酸で終わり、
Ｕ  は、いずれのアミノ酸であるかアミノ酸が存在せず、
Ｘ１  は、ＥまたはＧ  であり、
Ｘ２  は、ＥまたはＳ  であり、
Ｘ３  は、ＬまたはＶ  であり、
Ｘ４  は、ＡまたはＳ  であり、
Ｘ５  は、ＬまたはＱ  であり、
Ｘ６  は、ＹまたはＥ  であり、
Ｘ７  は、ＲまたはＫ  であり、
Ｘ８  は、ＶまたはＬ  であり、
Ｘ９  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ１０  は、ＦまたはＹ  であり、
Ｘ１１  は、ＴまたはＳ  であり、
Ｘ１２  は、ＡまたはＴまたはＩまたはＧ  であり、
Ｘ１３  は、ＳまたはＧ  であり、
Ｘ１４  は、ＦまたはＬ  であり、
Ｘ１５  は、ＥまたはＤ  であり、
Ｘ１６  は、ＡまたはＧ  であり、
Ｘ１７  は、ＤまたはＱ  であり、
Ｘ１８  は、ＬまたはＭ  であり、
Ｘ１９  は、ＨまたはＲ  であり、
Ｚ１  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ２  は、もし存在するのであれば、Ｍ  であり、
Ｚ３  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｚ４  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ５  は、もし存在するのであれば、ＶまたはＩ  であり、
Ｚ６  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ７  は、もし存在するのであれば、ＥまたはＤ  であり、
Ｚ８  は、もし存在するのであれば、ＹまたはＦ  であり、
Ｚ９  は、もし存在するのであれば、Ｍ  であり、
Ｚ１０  は、もし存在するのであれば、ＦまたはＳまたはＹ  であり、
Ｚ１１  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＳ  であり、
Ｚ１２  は、もし存在するのであれば、ＳまたはＮ  であり、
Ｚ１３  は、もし存在するのであれば、Ｋ  であり、
Ｚ１４  は、もし存在するのであれば、Ｆ  であり、
Ｚ１５  は、もし存在するのであれば、Ｋ  である。
【００４３】
本発明に係るポリペプチドのセグメントＡのより好ましいアミノ酸配列は、次の表１に概略される。
【表１】
2021532836.tif 000025
【００４４】
本発明の好ましい形態によると、上記一般式（Ｉ）のアミノ酸ストレッチＢは次の配列（配列番号２２）を有する。
［配２２］
2021532836.tif 000026
ここで、
アミノ酸ストレッチＢは、Ｎ末端のＺ１７からＺ２７またはＺ２７の後のアミノ酸Ｑで始まり、
アミノ酸ストレッチＢは、Ｃ末端のＺ２８の前のアミノ酸ＬまたはＺ２８からＺ３０のアミノ酸で終わり、
Ｚ１７  は、もし存在するのであれば、ＬまたはＳ  であり
Ｚ１８  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＰまたはＣ  であり、
Ｚ１９  は、もし存在するのであれば、ＴまたはＰ  であり、
Ｚ２０  は、もし存在するのであれば、ＰまたはＳまたはＡまたはＲ  であり、
Ｚ２１  は、もし存在するのであれば、ＮまたはＤ  であり、
Ｚ２２  は、もし存在するのであれば、ＧまたはＶ  であり、
Ｚ２３  は、もし存在するのであれば、ＨまたはＴ  であり、
Ｚ２４  は、もし存在するのであれば、Ｃ  であり、
Ｚ２５  は、もし存在するのであれば、Ｇ  であり、
Ｚ２６  は、もし存在するのであれば、ＡまたはＶまたはＳ  であり、
Ｚ２７  は、もし存在するのであれば、ＥまたはＱ  であり、
Ｘ２０  は、ＬまたはＭ  であり、
Ｘ２１  は、ＱまたはＫ  であり、
Ｘ２２  は、ＱまたはＲまたはＳ  であり、
Ｘ２３  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ２４  は、ＳまたはＮ  であり、
Ｘ２５  は、ＹまたはＦ  であり、
Ｘ２６  は、ＡまたはＶ  であり、
Ｚ２８  は、もし存在するのであれば、ＭまたはＬ  であり、
Ｚ２９  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｚ３０  は、もし存在するのであれば、ＶまたはＦ  である。
【００４５】
本発明に係るポリペプチドのセグメントＢのより好ましいアミノ酸配列は、次の表２に概略される。
【表２】
2021532836.tif 000027
【００４６】
本発明の好ましい形態によると、上記一般式（Ｉ）のアミノ酸ストレッチＣは次の配列（配列番号２３）を有する。
［配２３］
2021532836.tif 000028
ここで、
アミノ酸ストレッチＣは、Ｎ末端のＺ３１からＺ３３またはＺ３３の後のアミノ酸Ａで始まり、
Ｚ３１  は、もし存在するのであれば、Ｎ  であり、
Ｚ３２  は、もし存在するのであれば、Ｖ  であり、
Ｚ３３  は、もし存在するのであれば、Ｐ  であり、
Ｘ２７  は、ＲまたはＳまたはＧ  であり、
Ｘ２８  は、ＶまたはＩ  であり、
Ｘ２９  は、ＹまたはＨ  であり、
Ｘ３０  は、ＡまたはＳ  であり、
Ｘ３１  は、ＲまたはＫ  である。
【００４７】
本発明に係るポリペプチドのセグメントＣのより好ましいアミノ酸配列は、次の表３に概略される。
【表３】
2021532836.tif 000029
【００４８】
本発明の特に好ましいポリペプチドは、ｈＡｄ３のペントンベースプロトマーのゼリーロールフォールドドメインに基づく。特に、アミノ酸ストレッチＡが、アミノ酸１から４８から選択される位置、より好ましいアミノ酸位置は１で始まり、１２９から１４４の位置から選択されるアミノ酸位置、最も好ましいアミノ酸位置は１３２、までであるアミノ酸配列を有し、アミノ酸ストレッチＢが、３９８から４０９の位置から選択される位置、最も好ましいアミノ酸位置は４０７、で始まり、４４０から４４３の位置から選択されるアミノ酸位置、最も好ましいアミノ酸位置は４４２、までであるアミノ酸配列を有し、アミノ酸ストレッチＣが、４９２から４９５の位置から選択される位置、最も好ましいアミノ酸位置は４９３から始まり、アミノ酸位置５４４４まで、であるアミノ酸配列を有し、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９（配列番号１）に記載される配列を参照するアミノ酸配列位置である、ポリペプチドが好ましい。
【００４９】
本発明に係るポリペプチドのリンカーセグメントＬ１およびＬ２は、例えば、好ましくはアミノ酸ＧおよびＳを有する、４から１０アミノ酸を有するオリゴペプチドのようなオリゴペプチドリンカーから選択されてもよい。好ましい例としては、ＧＧＧＳ（配列番号２４）である。他の例としては、リンカーは、ＧおよびＳで構成され２、３、４、５またそれ以上のＧＧＳリピートのような複数のＧＧＳリピートを有するリンカーである。このタイプの特に好ましいリンカーはＧＧＳＧＧＳ（配列番号２５）である。
【００５０】
他の好ましい態様では、Ｌ１は前記アミノ酸ストレッチＡ，ＢおよびＣに由来するアデノウイルスの血清型と比較して異なる血清型を有するアデノウイルスペントンベースのＲＧＤループを含むポリペプチド配列であり、および/または、Ｌ２は前記アミノ酸ストレッチＡ，ＢおよびＣに由来するアデノウイルスの血清型と比較して異なる血清型を有するアデノウイルスペントンベースの可変ループを含むポリペプチド配列である。
【００５１】
本発明のさらに好ましい態様では、Ｌ１はＲＧＤループであり、Ｌ２は好ましくは４から２０アミノ酸、より好ましくは４から１０アミノ酸の、好ましくはアデノウイルスではないオリゴペプチド、特に好ましくは上記に定義したＧおよびＳで構成されるオリゴペプチドリンカーである。同様の態様では、Ｌ２は可変ループであるか可変ループを含み、Ｌ１は以前に定義したようなオリゴペプチドリンカーである。本発明によると、Ｌ２はＲＧＤループであるか、ＲＧＤループを含み、Ｌ１はオリゴペプチドリンカーである、ことも想像でき、Ｌ１は可変ループであり、Ｌ２はオリゴペプチドリンカーであることも考えられる。
【００５２】
他の好ましい態様では、以前述べたように、Ｌ１およびＬ２それぞれの配列は、多量体化ドメインが由来するアデノウイルス、ではないアデノウイルス由来のペントンベースタンパク質のクラウンドメイン配列から選択されてよい。一般に、クラウン―多量体化ドメインキメラの組み合わせは限定されない。好ましいキメラは、上記に概略したようにクラウンと多量体化ドメインの組み合わせから選択される。適宜、および好ましくは、それぞれのクラウンドメインのＲＧＤループおよび/または可変ループに挿入された、アデノウイルスではない配列を含むクラウンドメインは、より好ましくは国際公開第２０１７/１６７９８８Ａ１で開示されている。
【００５３】
これによって、アデノウイルスペントンベースのクラウンドメインは、典型的には、大きなフラグメントおよび小さなフラグメントと呼ばれる２つのアミノ酸ストレッチによって構成されことが理解される。クラウンドメインの大きなフラグメントは、それぞれのアデノウイルスペントンベースのアミノ酸配列においてよりＮ末端側に位置し、一方、クラウンドメインの小さなフラグメントはよりＣ末端側に位置する。本発明によると、大きなフラグメント（上述したようにＲＧＤループを含む）が一般式（Ｉ）のＬ１に対応する時が好ましく、小さなフラグメント（可変ループを含む）が一般式（Ｉ）のＬ２に対応することがさらに好ましい。本発明の特定の態様では、大小フラグメントは同じアデノウイルスペントンベースに由来する。本発明の他の態様では、大きなフラグメントおよび小さなフラグメントは異なるアデノウイルスペントンベースに由来し、または、大きなフラグメントおよび小さなフラグメントのうち一つだけ、例えばアミノ酸ストレッチＡ，ＢおよびＣのような多量体化ドメインが由来するアデノウイルスとは異なるアデノウイルスのペントンベースプロテインに由来する。
【００５４】
本発明のキメラ構築物（コンストラクト）に用いられる好ましいクラウンドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）のペントンベースのグループから選択されるクラウンドメインを含む。
【００５５】
クラウンドメインに用いる上に示したアデノウイルスペントンベースの好ましいアミノ酸配列は、例えばＵｎｉＰｒｏｔやＵｎｉＰｒｏｔＥのような一般的にアクセスできるデータベースに記載されており、上記したアデノウイルスサブタイプのためのここで参照される特に好ましい配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２Ｙ０Ｈ９（ヒトアデノウイルス血清型３；配列番号１）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ０３２７６（ヒトアデノウイルス血清型２；配列番号２）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ２ＫＳＦ３（ヒトアデノウイルス血清型４；配列番号３）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ１２５３８（ヒトアデノウイルス血清型５；配列番号４）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９ＪＦＴ６（ヒトアデノウイルス血清型７；配列番号５）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｄ２ＤＭ９３（ヒトアデノウイルス血清型１１；配列番号６）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｐ３６７１６（ヒトアデノウイルス血清型１２；配列番号７）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ１ＤＴ６５（ヒトアデノウイルス血清型１７；配列番号８）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｍ０ＱＵＫ０（ヒトアデノウイルス血清型２５；配列番号９）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ７Ｔ９４１（ヒトアデノウイルス血清型３５；配列番号１０）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｑ９１２Ｊ１（ヒトアデノウイルス血清型３７；配列番号１１）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ８ＷＱＮ４（ヒトアデノウイルス血清型４１；配列番号１２）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｅ５Ｌ３Ｑ９（ゴリラアデノウイルス；配列番号１３）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｇ９Ｇ８４９（チンパンジーアデノウイルス；配列番号１４）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｈ８ＰＦＺ９（サルアデノウイルス血清型１８；配列番号１５）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ６ＫＳＵ４（サルアデノウイルス血清型２０；配列番号１６）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ｆ２ＷＴＫ５（サルアデノウイルス血清型４９；配列番号１７）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＷ１（アカゲザルアデノウイルス血清型５１；配列番号１８）、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＸ７（アカゲザルアデノウイルス血清型５２；配列番号１９）およびＵｎｉＰｒｏｔ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．Ａ０Ａ０Ａ１ＥＷＺ７（アカゲザルアデノウイルス血清型５３；配列番号２０）に記載される。
【００５６】
本発明のキメラ構築物に用いられるクラウンドメインの大きなフラグメントの最も好ましい配列は次の表４に概略される。
【表４】
2021532836.tif 000030
【００５７】
本発明のキメラ構築物に用いられるクラウンドメインの大きなフラグメントの最も好ましい配列は次の表５に概略される。
【表５】
2021532836.tif 000031
【００５８】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００５９】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６０】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６１】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６２】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６３】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６４】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６５】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６６】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６７】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６８】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００６９】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７０】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ），サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７１】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７２】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７３】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７４】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７５】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７６】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７７】
本発明の好ましい態様はキメラであり、当該キメラにおいて、アカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）の多量体化ドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）から選択されるアデノウイルスペントンベースのクラウンドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００７８】
本発明のキメラを供給するための特に好ましいクラウンドメインは、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）のペントンベースタンパク質のクラウンドメインである。配列番号１のアミノ酸位置に関して好ましい配列は、表４（大きなフラグメント）と表５（小さなフラグメント）を参照する。
【００７９】
本発明の更により好ましいキメラにおいて、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）のペントンベースタンパク質のクラウンドメインは、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスのペントンベースの多量体化ドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００８０】
本発明のキメラを供給するための特に好ましいクラウンドメインは、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）のペントンベースのクラウンドメインである。配列番号：１４のアミノ酸位置に関して好ましい配列は、表４（大きなフラグメント）と表５（小さなフラグメント）を参照する。
【００８１】
本発明の更により好ましいキメラにおいて、チンパンジーアデノウイルス（ＣｈｉｍｐＡｄ）のペントンベースタンパク質のクラウンドメインは、ヒトアデノウイルス血清型３（ｈＡｄ３）、ヒトアデノウイルス血清型２（ｈＡｄ２）、ヒトアデノウイルス血清型４（ｈＡｄ４）、ヒトアデノウイルス血清型５（ｈＡｄ５）、ヒトアデノウイルス血清型７（ｈＡｄ７）、ヒトアデノウイルス血清型１１（ｈＡｄ１１）、ヒトアデノウイルス血清型１２（ｈＡｄ１２）、ヒトアデノウイルス血清型１７（ｈＡｄ１７）、ヒトアデノウイルス血清型２５（ｈＡｄ２５）、ヒトアデノウイルス血清型３５（ｈＡｄ３５）、ヒトアデノウイルス血清型３７（ｈＡｄ３７）、ヒトアデノウイルス血清型４１（ｈＡｄ４１）、ゴリラアデノウイルス（ｇｏｒＡｄ）、サルアデノウイルス血清型１８（ｓＡｄ１８）、サルアデノウイルス血清型２０（ｓＡｄ２０）、サルアデノウイルス血清型４９（ｓＡｄ４９）、アカゲザルアデノウイルス血清型５１（ｒｈＡｄ５１）、アカゲザルアデノウイルス血清型５２（ｒｈＡｄ５２）およびアカゲザルアデノウイルス血清型５３（ｒｈＡｄ５３）から選択されるアデノウイルスのペントンベースの多量体化ドメインに結合する。このような組み合わせのために選択される多量体化ドメインとクラウンドメインの特定の配列に関しては、表１から５に係る特定の例を参照する。
【００８２】
すでに上に概略したように、本発明の一つの主たる態様は、抗原、より特に、ウイルス、バクテリア又は他の病原体の抗原、又は、腫瘍又は癌抗原をＬ１およびＬ２の一つ又は両方に含むことである。アデノウイルスクラウンドメインのＲＧＤループ、および/または、可変ループにおいて抗原を含む好ましい部分に関しては、国際公開第２０１７/１６７９８８に明記されている。ここで用いられたように、「抗原」という用語は、例えば抗体やＴ細胞受容体（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  ＴＣＲ）など免疫反応分子によって認識される構造を指す。
【００８３】
感染因子の抗原には、これに限らないが、例えば、ＨＩＶ、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ肝炎ウイルスのような肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、風疹ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、フラビウイルス（ジカウイルス）、インフルエンザウイルス、マールブルグ病ウイルス、エボラウイルスおよびチクングニアウイルスのようなアーボウイルス、のようなウイルス感染因子を含む。バクテリア感染因子の抗原には、これに限らないが、例えば、レジオネラ、ヘリコバクター、感染性大腸菌株、ブドウ球菌、サルモネラおよび連鎖球菌の抗原を含む。感染性原生動物病原体の抗原には、これに限らないが、プラスモジウム、トリパノソーマ、リーシュマニア、トキソプラズマの抗原を含む。病原体因子の抗原のさらなる例には、クリプトコッカス  ネオフォルマンス、ヒトプラスマ  カプスラーツム、コクシジオイデス  イチミス、ブラストマイセス  デルマチチジス、カンジダ  アルビカンスのような真菌病原体の抗原を含む。
【００８４】
本発明に係る使用できる腫瘍抗原の特定の例は、これに限らないが、７０７−ＡＰ、ＡＦＰ、ＡＲＴ−４、ＢＡＧＥ、βカテニン/ｍ、Ｂｃｒ−ａｂｌ、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、ＣＡＳＰ−８、ＣＤＣ２７/ｍ、ＣＤＫ４/ｍ、ＣＥＡ、ＣＴ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＤＡＭ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇｐ１００、ＨＡＧＥ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７０ｌ、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＡＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ｉＣＥ、ＫＩＡＡ０２０５、ＬＡＧＥ、ＬＤＬＲ/ＦＵＴ、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１/Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＣ１Ｒ、ミオシン/ｍ、ＭＵＣ１、ＭＵＭ−１、−２、−３、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、Ｐｍｌ/ＲＡＲ．α．、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＭ、ＲＡＧＥ、ＲＵ１またはＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１またはＳＡＲＴ−３、ＴＥＬ/ＡＭＬ１、ＴＰｌ/ｍ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＲＰ−２/ＩＮＴ２およびＷＴ１を含む。
【００８５】
特にＬ１および/またはＬ２のような本発明のポリペプチドに含まれる抗原において、またレセプター−リガンド結合のようないずれかのタンパク質−タンパク質相互作用に関しても、免疫反応の改善に用いる最適化した抗原のような、標的への結合に最適化した配列を供給するための選別および/または進化工程を含むことができる。好ましい工程は、Ｓｃｈａｆｆｉｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）：Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，  Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｍａｎｕａｌ：  Ｉｎｖｉｔｒｏ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  （Ｇｏｌｅｍｉｓ  Ｅ．，  ｅｄ．）  ｐｐ５３５−５６７，  Ｃｏｌｄ  Ａｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、に詳細が概略されているようなリボソームディスプレイである。リボソームディスプレイプロトコルには、選別工程の全てのステップをｉｎ  ｖｉｔｒｏで完全に行うという利点がある。さらに可能性のある選別工程は、当該技術分野で知られているものであり、ファージディスプレイ（Ｓｍｉｔｈ  （１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８，  １３１５−１３１７；  Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔａｌ．  （１９８４）Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２，  ４３３−４５５）、イーストツーハイブリッド法（Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  Ｓｏｎｇ  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４０，  ２４５−２４６；  Ｃｈｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．  Ａ．  ８８，  ９５７８−９５８２）および細胞表面ディスプレイ法（Ｇｅｏｒｇｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １１，  ６−１０；  Ｂｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｔｔｒｕｐ  （１９９７）  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １５，  ５５３−５５７）を含む。
【００８６】
リボソームディスプレイ工程は、本発明のポリペプチドの使用によって特定の分子を標的とすることに用いられる抗原または他のアミノ酸配列の最適化のために、基本的には二つの方法で用いられる。抗原（または他の結合剤）配列は、１０１４個の個別の配列、より典型的には１０９から１０１０配列、のポリペプチド配列の最初のライブラリーから初めに選別されることができ、上記のＳｃｈａｆｆｉｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）に詳細が記載されている進化工程を適宜用いる。最適化した抗原配列を選別した後、それをコードするヌクレオチド配列を、本発明の適切なベクターにクローニングする。ここで、適切なベクターとは、最適化した抗原が上記式（Ｉ）のＬ１および/またはＬ２に含まれる、またはＬ１および/またはＬ２を表す、ところでポリペプチドが発現されるようはベクターである。
【００８７】
本発明のこの見地の他の態様によると、配列をコードする抗原候補のライブラリーは、各配列が上記式（Ｉ）で定義されるＬ１およびＬ２の一つまたは両方の一部または全部であるポリペプチドをそれぞれコードするように、本発明の核酸に直接クローニングされる。抗原配列（または他の態様では、他の結合剤配列）の最初のライブラリーを含む発明のポリペプチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで発現され、最適化された抗原（又は他の結合剤）配列の選別は、上記Ｓｃｈａｆｆｉｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）に詳細が記載されているリボソームディスプレイ法によって行われる。
【００８８】
本発明のポリペプチドのさらなる態様は、Ｌ１および/またはＬ２それぞれが、抗原配列または抗体断片のような抗体の一部である、または抗原配列または抗体の一部に結合するポリペプチドに結合する、ポリペプチドに関する。本発明において、用語「抗体」は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリンである。
【００８９】
用語「抗体断片」は、抗原へ特異的に結合する完全な抗体の能力を有する抗体の一部を意味する。抗体断片の例には、これに限定されないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、重鎖抗体、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ｓｃＦｖフラグメント、可変フラグメント（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｖａｒｉａｂｌｅｓ、Ｆｖ），ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ナノボディ、ＩｇＮＡＲｓ（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｌｉｎ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，新規抗原受容体）ｄｉ−ｓｃＦｖ、二重特異性Ｔ細胞（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒｓ、ＢｉＴＥｓ）、二重親和性再標的（ｄｕａｌ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、ＤＡＲＴ）分子、トリプルボディ、ジアボディ、単鎖ジアボディのようなものを含む。
【００９０】
「ジアボディ」は融合タンパク質または異なる抗原に結合することができる二価の抗体である。ジアボディは、それぞれが抗体の可変フラグメントを含む二つの単一のタンパク質鎖（一般には二つのｓｃＦｖフラグメント）によって構成される。ジアボディはしたがって、二つの抗原結合部位を含み、同じ抗原を標的とする（単一特異性ジアボディ）または異なる抗原を標的とする（二重特異性ジアボディ）ことができる。
【００９１】
本発明の内容で用いられる用語「シングルドメイン抗体」は、一つの抗体の単量体可変ドメインで構成される抗体断片を指す。簡単には、このような抗体断片は、ラクダ類または軟骨魚類によって作られる重鎖抗体の単量体重鎖可変領域のみを含む。抗体断片の起源の違いにより、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、可変新規抗原受容体）断片をさす。代替えとしては、シングルドメイン抗体を、遺伝子工学の使用による従来のマウスまたはヒト抗体の可変領域の単量体化によって得ることができる。それらの分子量はおよそ１２ｋＤａから１５ｋＤａであり、したがって、抗原認識のできる最小の抗体断片である。さらなる例は、ナノボディやナノ抗体を含む。
【００９２】
本発明の内容で用いられる抗原結合物質は、ここでは、抗体のように抗原に特異的に結合する化合物を指す「抗体ミメティック」を含み、この化合物は構造的に抗体から離れないものである。一般に、抗体ミメティックは、モル質量がおよそ３から２０ｋＤａで、抗原に特異的に結合する一つ以上の露出ドメインを有する合成ペプチド又はタンパク質である。例には、特にＬＡＣＩ−Ｄ１（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、リポプロテイン関連凝固阻害剤）；ヒトγＢクリスタリンまたはヒトユビキチンなどのアフィリン；シスタチン；スルフォロブス  アシドカルダリウスからのＳａｃ７Ｄ；リポカリンおよびリポカリン由来アンチカリン；ＤＡＲＰｉｎｓ（Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ａｎｋｙｒｉｎ  ｒｅｐｅａｔ  ｄｏｍａｉｎｓ）；ＦｙｎのＳＨ３ドメイン；プロテアーゼインヒビターのクニッツドメイン；フィブロネクチンの３型１０番目；アドネクチン；ノッチン（システイン  ノット  ミニプロテイン）；Ａｔｒｉｍｅｒ；ＣＴＬＡ４ベース結合剤などのＥｖｉｂｏｄｉｅｓ；黄色ブドウ球菌のプロテインＡのＺドメインの３ヘリックスバンドルなどのアフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）；ヒトトランスフェリンなどの細胞透過性抗体（Ｔｒａｎｓｂｏｄｙ）；単量体または三量体ヒトＣ型レクチンドメインなどテトラネクチン；トリプシンインヒビターＩＩなどのミクロボディ；アフィリン；アルマジロリピートタンパク質、が含まれる。
【００９３】
本来のペントンベースタンパク質がするように、本発明のポリペプチドは五量体複合体に会合し、１２個のこれらがｐＨ５．０から８．０のバッファー溶液中で会合してウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）になる。好ましい例では、ＰＢＳ  ｐＨ７．４またはＴＢＳ  ｐＨ７．２のようなバッファー状態または生理的に近い状態である。このような環境下で、本発明のポリペプチドは約２０℃から４２℃の気温でＶＬＰを形成する。本発明はこのような五量体複合体とＶＬＰにも向けられる。
【００９４】
本発明のさらなる対象事項は、ここで定義されるようなポリペプチドをコードする核酸である。
【００９５】
本発明によると、用語「核酸」および「ポリヌクレオチド」は交換可能に用いられ、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは一以上のヌクレオチド類似体を含む種を指す。本発明の好ましい核酸またはポリヌクレオチドは、ＤＮＡであり、最も好ましくは二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡである。本発明のヌクレオチド配列は、他に示さない限り、５’から３’に表され、ＩＵＰＡＣ塩基一文字コードが用いられる。
【００９６】
他の態様は、一般式（Ｉ）に定義された多目的に利用できるセグメントＬ１およびＬ２の挿入に調製される核酸に関する。つまり、核酸のこの態様はセグメントＡ、ＢおよびＣをコードするが、ＡおよびＢをコードするセグメントの間、およびＢおよびＣをコードするセグメントの間に挿入部を有する。
【００９７】
したがって、この態様は次の一般式（ＩＩ）によって表される。
［式２］
2021532836.tif 000032
ここで
ａ  は一般式（Ｉ）のＡをコードする核酸配列であり、
ｂ  は一般式（Ｉ）のＢをコードする核酸配列であり、
ｃ  は一般式（Ｉ）のＣをコードする核酸配列であり、
Ｉ１、Ｉ２  はそれぞれ核酸配列であり、
ｉｓ１からｉｓ４  はそれぞれ独立に、少なくとも一つの挿入部を有する核酸配列である。
【００９８】
本発明のこの態様の内容における挿入部は、好ましくは、制限酵素またはホーミングエンドヌクレアーゼの認識配列である。より好ましくは、ｉｓ１からｉｓ４はそれぞれ異なる挿入部であり、より好ましくは各ｉｓ１からｉｓ４は異なる制限酵素の認識配列である。Ｌ１およびＬ２をコードするヌクレオチド配列の挿入を調製する核酸の好ましい態様は、ｉｓ１がＥｃｏＲＩ部位を有し、ｉｓ２がＲｓｒＩＩ部位を有し、ｉｓ３がＳａｃＩ部位を有し、ｉｓ４がＸｂａＩ部位を有する。
【００９９】
制限酵素部位は、当業者に一般によく知られているものである。好ましい例は上に示したようであるが、多種多様なものから選ぶことができ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｉｐｓｗｉｃｈ，  ＭＡ，  ＵＳＡのような制限酵素を製造するさまざまな会社で手引きを見つけることができる。
【０１００】
このようなホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）部位の例には、これに限らないが、ＰＩ−ＳｃｅＩ、Ｉ−ＣｅｕＩ、Ｉ−ＰｐｏＩ、Ｉ−ＨｍｕＩ、Ｉ−ＣｒｅＩ、Ｉ−ＤｍｏＩ、ＰＩ−ＰｆｕＩおよびＩ−ＭｓｏＩ、ＰＩ−ＰｓｐＩ、Ｉ−ＳｃｅＩ、他のＬＡＧＬＩＤＡＧグループメンバーおよびそれらの変異、ＳｅｇＨ、Ｈｅｆ、又は他のＧＩＹ−ＹＩＧホーミングエンドヌクレアーゼ、Ｉ−ＡｐｅＩＩ、ＩａｎｉＩ、チトクロームｂ  ｍＲＮＡマチュラーゼ  ｂｌ３、ＰＩ−ＴｌｉＩおよびＰＩ−ＴｆｕＩＩ、ＰＩＴｈｙＩおよび他の認識部位を含む。Ｓｔｏｄｄａｒｄ  Ｂ．Ｌ．（２００５）Ｑ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ３８，  ４９−９５．を参照のこと。対応する酵素は、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｉｐｓｗｉｃｈ，  ＭＡ，  ＵＳＡなどで購入できる。
【０１０１】
本発明の好ましい態様では、上記で定義した核酸はさらに、ベクターまたは宿主細胞に核酸を挿入するための少なくとも一つの部位を含む。その挿入部位では、一過性導入または遺伝子導入することができる。
【０１０２】
ベクターへの挿入、特にプラスミド又はウイルス、に関しては、挿入部位は、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、自律性パルボウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、レトロウイルス、ラディノウイルス、エプスタイン−バールウイルス、レンチウイルス、セミリキフォレストウイルス、またはバキュロウイルス、への核酸の挿入を適合できることが好ましい。
【０１０３】
本発明の核酸に導入できる特に好ましい挿入部位は、Ｔｎ７トランスポゾンエレメント、λ-インテグラーゼ特異的アタッチメントサイト、部位特異的リコンビナーゼ（ＳＳＲ）、特にＬｏｘＰサイトやＦＬＰリコンビナーゼ特異的組み換え（ＦＲＴ）サイト、から選ぶことができる。本発明に係る核酸の導入のためのさらに好ましい機構は、ｌｅｆ２−６０３／Ｏｒｆ１６２９のような特異的相同組み換え配列である。
【０１０４】
本発明のさらに好ましい態様では、ここで述べる核酸は、さらに、他の有毒物質に対して選別する一つ以上の耐性マーカーを含む。本発明の内容で用いられる耐性マーカーの好ましい例は、これに限らないが、アンピシリン、クロラムフェニコール、ゲンタマイシン、スペクチノマイシンおよびカナマイシン体制マーカーを含む。
【０１０５】
本発明の核酸は、一つ以上のリボソーム結合部位（ＲＢＳ）を含んでよい。
【０１０６】
本発明のさらなる対象事項は、上記した核酸を含むベクターに関する。
【０１０７】
本発明の好ましいベクターは、プラスミド、発現ベクター、トランスファーベクター、より好ましくは真核生物遺伝子トランスファーベクター、トランジエントまたはウイルス介在遺伝子トランスファーベクター、である。本発明に係る他のベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、自律性パルボウイルスベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、ラディノウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、レンチウイルスベクター、セミリキフォレストウイルスベクター、またはバキュロウイルスベクターのようなウイルスベクターである。
【０１０８】
本発明に係る核酸の挿入に適したバキュロウイルスベクター（例えば、トランスファーベクターのような適したプラスミドにある）もまた本発明の対象事項であり、好ましくは、Ｔｎ７アタッチメントサイト（有効な挿入の青白スクリーニングのためのｌａｃＺ遺伝子に埋め込まれてよい）および/またはＬｏｘＰサイトを含む。本発明に係るさらに好ましいバキュロウイルスは、（上記した挿入部位の代わり、または追加として）相同組み換えのための配列に隣接するホストに毒である薬剤を発現する遺伝子を含む。毒物を発現する遺伝子の例は、ジフテリアトキシンＡ遺伝子である。相同組み換えの配列の好ましい対は、例えば、ｌｅｆ２−６０３／Ｏｒｆ１６２９である。前記バキュロウイルスは上記したようにさらにマーカー遺伝子を有することもでき、ＧＦＰ、ＹＦＰなどのような蛍光マーカーもまた含む。バキュロウイルスに関する特別な例は、例えば、国際公開第２０１０/１００２７８に開示されているものである。
【０１０９】
本発明で使用するためにさらに採用可能なベクターは、国際公開第２００５/０８５４５６に開示されている。
【０１１０】
原核生物宿主細胞において使用できるベクターは、好ましくは、上記に例を挙げたマーカー遺伝子（それらの一つ以上）に加えて、複製起点（ｏｒｉ）を含む。例えば、ＢＲ３２２、ＣｏｌＥ１およびＯｒｉＶやＲ６Ｋｙのような条件複製起点であり、Ｒ６Ｋｙは、原核生物宿主細胞においてｐｉｒ遺伝子に依存する本願のベクターの増殖を行わせる好ましい条件複製起点である。ＯｒｉＶは、原核生物宿主細胞においてｔｒｆＡ遺伝子に依存する本願のベクターの増殖を行うわせる。
【０１１１】
さらに、本発明は、本発明の核酸及び/または本発明のベクターを含む宿主細胞につながる。
【０１１２】
宿主細胞は原核生物または真核生物であってよい。真核生物宿主細胞は、例えば、哺乳類細胞、好ましくはヒト細胞であってよい。ヒト宿主細胞の例には、これに限らないが、ＨｅＬａ、Ｈｕｈ７、ＨＥＫ２９３、ＨｅｐＧ２、ＫＡＴＯ−III、ＩＭＲ３２、ＭＴ−２、膵β細胞、ケラチノサイト、骨髄線維芽細胞、ＣＨＰ２１２、初代神経系細胞、Ｗ１２、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、Ｓａｏｓ−２、ＷＩ３８、初代肝細胞、ＦＬＣ４、１４３ＴＫ、ＤＬＤ−１、胚性肺線維芽細胞、初代包皮肺線維芽細胞、ＭＲＣ５およびＭＧ６３が含まれる。本発明のさらに好ましい宿主細胞は、ブタ細胞、好ましくはＣＰＫ、ＦＳ−１３、ＰＫ−１５細胞、ウシ細胞、好ましくはＭＤＢ、ＢＴ細胞、ウシ細胞、ＦＬＬ−ＹＦＴのようなヒツジ細胞、である。本発明の内容で用いられる真核生物の細胞はＣ．ｅｌｅｇａｎｓ細胞である。さらなる真核生物細胞は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、  Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓのような酵母細胞を含む。さらに、本発明では宿主細胞として昆虫細胞を用いることができ、昆虫細胞は、より好ましくはＳｆ９、Ｓｆ２１、Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｆ＋、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ  Ｈ５細胞であるＳ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａからの細胞および、特にＳ２  ＳｃｈｎｅｉｄｅｒであるＤ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからの細胞を含む。さらに宿主細胞は、Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ細胞およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｓｐｅｃのような寄生虫からの細胞を含む。
【０１１３】
本発明に係る原核生物宿主は、バクテリア、特にＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、ＢＬ２１（ＤＥ３）などのような購入可能な大腸菌Ｅ．Ｃｏｌｉを含む。
【０１１４】
当業者は、容易に、適切なベクター構築物（コンストラクト）/宿主細胞の対を適切な増殖、および/又は、本発明に係る核酸エレメントを適切な宿主にトランスファーするために選択することができる。適切なベクターエレメントとベクターを適切な宿主細胞に導入する特定の方法は、同様に当該分野で知られており、方法はＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄ）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳＡの最新版で見つけることができる。
【０１１５】
本発明の好ましい態様では、上に定義したベクターはさらに部位特異的リコンビナーゼ（ＳＳＲ）のための部位を有し、好ましくはＣｒｅ−ｌｏｘ特異的組み換え用のＬｏｘＰサイトを一つ以上含む。さらに好ましい態様では、本発明のベクターはトランスポゾンエレメントを含み、好ましくはＴｎ７アタッチメントサイトを含む。
【０１１６】
上に定義されたアタッチメントサイトはマーカー遺伝子内に位置することがさらに好ましい。このような配置によりトランスポジションによってアタッチメントサイトに挿入された配列を成功的に選別することが容易になる。好ましい態様によると、このようなマーカー遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ＧＡＬ、ＣＡＴ、好ましくはＧＦＰ、ＢＦＰ、ＹＦＰ、ＣＦＰである蛍光タンパク質をコードする遺伝子およびその変異物およびＬａｃＺα遺伝子から選ばれる。
【０１１７】
さらに、本発明は、本発明の核酸および/または本発明のベクターを含む宿主細胞につながる。
【０１１８】
宿主細胞は原核生物または真核生物であってよい。真核生物宿主細胞は、例えば、哺乳類細胞、好ましくはヒト細胞であってよい。ヒト宿主細胞の例には、これに限らないが、ＨｅＬａ、Ｈｕｈ７、ＨＥＫ２９３、ＨｅｐＧ２、ＫＡＴＯ−ＩＩＩ、ＩＭＲ３２、ＭＴ−２、膵β細胞、ケラチノサイト、骨髄線維芽細胞、ＣＨＰ２１２、初代神経系細胞、Ｗ１２、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、Ｓａｏｓ−２、ＷＩ３８、初代肝細胞、ＦＬＣ４、１４３ＴＫ、ＤＬＤ−１、胚性肺線維芽細胞、初代包皮肺線維芽細胞、ＭＲＣ５およびＭＧ６３が含まれる。本発明のさらに好ましい宿主細胞は、ブタ細胞、好ましくはＣＰＫ、ＦＳ−１３、ＰＫ−１５細胞、ウシ細胞、好ましくはＭＤＢ、ＢＴ細胞、ウシ細胞、ＦＬＬ−ＹＦＴのようなヒツジ細胞、である。本発明の内容で用いられる真核生物の細胞はＣ．ｅｌｅｇａｎｓ細胞である。さらなる真核生物細胞は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、  Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓのような酵母細胞を含む。さらに、本発明では宿主細胞として昆虫細胞を用いることができ、昆虫細胞は、より好ましくはＳｆ９、Ｓｆ２１、Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｆ＋、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ  Ｈ５細胞であるＳ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａからの細胞および、特にＳ２  ＳｃｈｎｅｉｄｅｒであるＤ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからの細胞を含む。さらに宿主細胞は、Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ  ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ細胞およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｓｐｅｃのような寄生虫からの細胞を含む。
【０１１９】
本発明に係る原核生物宿主細胞は、バクテリア、特にＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、ＢＬ２１（ＤＥ３）などのような購入可能な大腸菌Ｅ．Ｃｏｌｉを含む。
【０１２０】
当業者は、容易に、適切なベクター構築物（コンストラクト）/宿主細胞の対を適切な増殖、および/又は、本発明に係る核酸エレメントを適切な宿主にトランスファーするために選択することができる。適切なベクターエレメントとベクターを適切な宿主細胞に導入する特定の方法は、同様に当該分野で知られており、方法はＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄ）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳＡの最新版で見つけることができる。
【０１２１】
本発明はまた、ポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、ポリペプチドをコードする核酸を含むベクター、そのようなベクターを含む宿主細胞と同様に、薬剤への使用のための上に定義したＶＬＰ、特に感染症、免疫疾患、腫瘍または癌の治療および/または予防に用いられる薬剤への使用を含む。
【０１２２】
したがって、本願発明は、ここで定義したポリペプチド、そのようなポリペプチドをコードする核酸、ポリペプチドをコードする核酸を含むベクター、そのようなベクターを含む宿主細胞または上記したＶＬＰと同様に少なくとも一つの薬学的に許容される担体、賦形剤および/または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【０１２３】
一般に、本発明の内容に関して、医薬組成物の調製、それらの投与量、それらの投与方法は当業者に知られたものであり、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｍａｃｋ  ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｅｒｎ，  ＰＡ，  ＵＳＡ）の最新版に手引きを見つけることができる。
【０１２４】
本発明の医薬組成物は、上記に概説した有効成分の治療に有効な量を含む。治療に有効な量は有効成分に依存し、特に投与方法に依存する。本発明にかかる医薬組成物は、好ましくは非経口投与によって、特に静脈内、動脈内または骨内注入のような注入、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮膚内、皮下またはクモ膜下注射のような注射によって、投与される。抗腫瘍治療において、本発明にかかるＶＬＰを含む医薬組成物のような医薬組成物は、腫瘍内注射によって投与されることができる。
【０１２５】
注射や注入のための発明の溶液は、典型的には、水またはまたはバッファー溶液、好ましくは生理学的ｐＨの等張バッファー、に発明のＶＬＰを含む。本発明の液体医薬組成物は、薬学的に許容可能な安定剤、懸濁材、乳化剤のような材料をさらに含んでよい。本発明の医薬組成物のさらなる材料は、特にワクチン目的のための本発明の構築物（コンストラクト）の適用に関しては、アジュバントである。
【０１２６】
本発明のさらなる対象事項は、本発明のポリペプチド、核酸宿主細胞、ベクターおよび/またはＶＬＰの有益な特徴を利用する治療法である。好ましい態様では、発明は、好ましくはヒトである対象に、上に定義したような医薬品組成物の治療に効果的な量投与する工程を含む感染症の予防予防法および/または治療法を提供することであり、ここで、医薬品組成物は感染症を引き起こす感染因子の抗原（特に上に定義した発明のポリペプチドのＬ１および/またはＬ２を含む）を含む発明のＶＬＰを含む。別の態様は、腫瘍または癌を予防するおよび/または治療する方法であり、好ましくはヒトである対象に上で定義した医薬組成物の治療に有効な量を投与する工程を含み、医薬組成物は、（特に上に定義した発明のポリペプチドのＬ１および/またはＬ２を含む）一つ以上の腫瘍抗原を含む。
【０１２７】
本発明はさらに、適切な培地において組み換え宿主細胞を培養する工程を含むここで述べたポリペプチドを作成する方法に関してであり、ここで宿主細胞は、前記ポリペプチドが発現できる環境下で、ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを有する。
【０１２８】
好ましくは、本発明のポリペプチドの作成のための方法は、宿主細胞および/または培地から発現したポリペプチドを回収する工程をさらに含む。さらにより好ましくは、その方法は、遠心分離、ゲルクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーのような当該分野で知られている精製手段によって回収したポリペプチドを精製する工程も含む。
【０１２９】
本発明はまた、以前説明したように、ＶＬＰへのポリペプチドの会合を可能にする環境下でポリペプチドの溶液をインキュベートする工程を含む、ここで定義したＶＬＰを作成する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１３０】
【図１】図１（Ａ）は、可変性スキャフォールドを表す所定のアデノウイルス血清型のベースタンパク質によって形成した十二量体を示す。図１（Ｂ）は、十二量体がクラウンドメイン（オレンジ色）および多量体化ドメイン（青色）に分けられることができるアデノウイルスベースタンパク質の６０のコピーを含むことを示す。多量体化ドメイン内では、分割によって生じた末端が、連続したポリペプチド鎖をもたらす短いオリゴペプチドリンカーによって再結合することができる。ベースタンパク質のＮ末端およびＣ末端の両方が多量体化ドメインに含まれる。
【図２】図２は、ｈＡｄ３のペントンベースプロトマーを基にした発明のポリペプチドの好ましい態様の一つのゼリーロールフォールドドメインの概略図を示す。
【図３】アデノウイルスベースタンパク質を最も左に示す。クラウンドメイン（図１参照）は黄色で色付けられ、多量体化ドメインは青色に色付けられる。ベースタンパク質のＮ末端およびＣ末端は多量体化ドメインに含まれ、五量体および十二量体の形成することを媒介する。クラウンドメインの除去は、自律的多量体化ドメインをもたらし、中央から右に向かって図示するように、以前クラウンドメインであった場所に、今、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質またはタンパク質複合体を含む。多量体化ドメインは今、その表面にこれらの物質が存在するウイルス様粒子を生じる。自然に、クラウンドメインとアデノウイルス血清型の範囲に由来して作製されたクラウンドメインは、多量体化ドメインスキャフォールドの外側にはまることができ、これには、異なるペプチドやポリペプチド配列を含む作製されたクラウンドメインも含まれる。
【図４】アデノウイルス由来十二量体ディスプレイプラットフォーム（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｄｏｄｅｃｈｅｄｒａｌ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ，  ＡＤＤｏｍｅｒ）を図として表す。オリジナル粒子を左に示す。ベースタンパク質は多量体化ドメイン（青）とクラウンドメイン（黄色）によって形成される。６０個のベースタンパク質がウイルス様粒子（ｖｉｒｕｓ−ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ，ＶＬＰ）を形成する。オリゴヌクレオチド、ポリペプチド、および、タンパク質ドメイン、タンパク質またはタンパク質複合体の複数のコピーを表示するＡＤＤｏｍｅｒを右に示す。色の規定は図３と同様である。
【図５】図５は、ｐＡＣＥＢａｃ＿ＶＡＪＢ−ＣＨＩＫベクターの図示である。
【発明を実施するための形態】
【０１３１】
本発明を、次の限定されない例によってさらに説明する。
【実施例】
【０１３２】
ＤＮＡｓｅｇＶＡＪＢ−ＣＨＩＫ（配列番号２６；５’末端でＢａｍＨＩに隣接し、３’末端でＨｉｎｄＩＩＩに隣接する；下記、下線配列を参照）は、商用製造業者によって合成された。
［配２６］
2021532836.tif 000033
【０１３３】
コンストラクトは、ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄIII切断部位を用いてｐＡＣＥＢａｃ（Ｇｅｎｅｖａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  Ｇｅｎｅｖａ，  Ｓｗｉｔｅｒｌａｎｄ）トランスファープラスミドにクローニングし、ｐＡＣＥＢａｃ＿ＶＡＪＢ−ＣＨＩＫ（配列番号２７）コンストラクトを作成した。
［配２７］
2021532836.tif 000034
2021532836.tif 000035
【０１３４】
ＤＮＡシーケンシングによって適切な挿入が行われたかどうかを確認した。オープンリーディングフレームは、ループＬ１に、チクングニアウイルスＳＴＫＤＮＦＮＶＹＫＡＴＲＰＹＬＡＨ（配列番号２９）から主な中和エピトープを含む、ＶＡＪＢ−ＣＨＩＫ（配列番号２８）タンパク質をコードする。
ＶＡＪＢ−ＣＨＩＫ (配列番号 28):
［配２８］
2021532836.tif 000036
【０１３５】
ｐＡＣＥＢａｃ＿ＶＡＪＢ−ＣＨＩＫを、人工染色体としてＥＭＢａｃＹバキュロウイルスゲノムを内部に持つＤＨ１０ＥＭＢａｃＹ細胞（Ｇｅｎｅｖａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  Ｇｅｎｅｖａ，  Ｓｗｉｔｅｒｌａｎｄ）に形質転換するために用いた（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ＤＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００６  Ｄｅｃ；  ３（１２）：１０２１−３２  ＰＭＩＤ：１７１１７１５５に記載）。ＤＨ１０ＥＭＢａｃＹ細胞にＴｎ７トランスポジションによって挿入されたＶＡＪＢ１のための遺伝子発現カセットを有する複合バキュロウイルスを青/白スクリーニングによって特定し、述べたように組み換えバキュロウイルスを生成した（上記と同一参照文献）。Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ  ｌｉｎｅ  ２１  （Ｓｆ２１）昆虫細胞培養をバキュロウイルスに感染させ、上記Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００６）によって述べられたように生成した。
【０１３６】
ラージスケール（１００ｍlから５００ｍｌ）発現をシェイカーフラスコ内でＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ  Ｈｉ５細胞にて行い、組み換えタンパク質を発現し、黄色蛍光タンパク質（Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ＹＦＰ）の蛍光をＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ＤＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００６  Ｄｅｃ；  ３（１２）：１０２１−３２  ＰＭＩＤ：１７１１７１５５に記載のように測定した。ＹＦＰの蛍光がプラトーに達したとき（通常７２時間細胞増殖後、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００６を参照のこと）、昆虫細胞培養を回収し、遠心（４０００ｇ、１０分）によって細胞をペレットにした。細胞を液体窒素によって凍結し、−８０℃で保存した。
【０１３７】
タンパク質調製のために、全プロテアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ）を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中で凍結融解によって溶解した。タンパク質を１５％  ｗ/ｖから４０％  ｗ/ｖショ糖のショ糖密度勾配と１００，０００gでのオーバーナイト超遠心分離で精製した。勾配を回収し、タンパク質の量を変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）法とその後のクマシーブリリアントブルー染色によって特定した。ＶＡＪＢ１を含むフラクションを集め、ＰＢＳ（またはＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、ｐＨ  ７．４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に対して透析した。第２の精製ステップは、５０ｍＭから５００ｍＭの直線勾配を用いて５ｍｌ  ＨｉＱ  カラム（ＢｉｏＲＡＤ）で行った。五量体および十二量体の形成は、ネガティブ染色（酢酸ウラニル）電子顕微鏡法によって確認した。
【図１】
2021532836.tif 000042
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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