(57)【要約】  本発明はビタミンＣを含有したポリカプロラクトン微粒球、それを含むフィラーとその製造方法に関するものであり、ビタミンＣを封入させたポリカプロラクトン微粒球に封入させることによって、生体に注入する場合、コラーゲン形成効果が速やかに発現しながらも高い組織修復特性を示すだけでなく、長期間の間前記効果が維持され、頬、胸、鼻、唇およびお尻などのような軟組織の修復または体積拡大およびシワ改善特性に優れたポリカプロラクトン微粒球フィラーを提供することができる。
2021511300.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリカプロラクトン微粒球にビタミンＣを含有した微粒球の全体１００重量％を基準として０．０１〜６．５重量％のビタミンＣを含み、平均粒度が１０〜１００μｍであるポリカプロラクトン微粒球。
【請求項２】
前記ポリカプロラクトンの固有粘度が０．１６〜１．９０ｄＬ／ｇであることを特徴とする、請求項１に記載のポリカプロラクトン微粒球。
【請求項３】
前記微粒球のスパン値（Ｓｐａｎ  ｖａｌｕｅ）が１．０以下であることを特徴とする、請求項１に記載のポリカプロラクトン微粒球。
【請求項４】
前記ビタミンＣは、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、ナトリウムアスコルビルホスファート（Ｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、マグネシウムアスコルビルホスファート（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、カルシウムアスコルビルホスファート（Ｃａｌｃｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アスコルビン酸ポリペプチド（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、エチルアスコルビルエーテル（Ｅｔｈｙｌ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、アスコルビルジパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｄｉｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルグルコシド（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）およびアスコルビルエチルシラノールペクチネート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｌ  ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）からなる群より選ばれた１種以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリカプロラクトン微粒球。
【請求項５】
（ａ）ポリカプロラクトンを第１溶媒に溶解してビタミンＣを第２溶媒に溶解させてそれぞれの溶液を製造した後前記二つの溶液を均一に混ぜて単一溶液に製造して分散相を製造する工程、
（ｂ）前記分散相を界面活性剤を含有した水溶液（連続相）と混合してエマルションを製造する工程、
（ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたエマルション中の分散相から有機溶媒を連続相に抽出および蒸発させて微粒球を形成させる工程、および、
（ｄ）前記工程（ｃ）の連続相から微粒球を回収してポリカプロラクトン微粒球を製造する工程を含む、ビタミンＣを含有したポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項６】
前記ポリカプロラクトンは、固有粘度が０．１６〜１．９０ｄＬ／ｇであることを特徴とする請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項７】
前記ビタミンＣは、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、ナトリウムアスコルビルホスファート（Ｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、マグネシウムアスコルビルホスファート（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、カルシウムアスコルビルホスファート（Ｃａｌｃｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アスコルビン酸ポリペプチド（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、エチルアスコルビルエーテル（Ｅｔｈｙｌ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、アスコルビルジパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｄｉｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルグルコシド（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）およびアスコルビルエチルシラノールペクチネート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｌ  ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）からなる群より選ばれた一つ以上であることを特徴とする請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項８】
前記（ａ）工程の第１溶媒は、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、メチルエチルケトンおよびこれらの混合物からなる群より選ばれる一つ以上であることを特徴とする請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項９】
前記（ａ）工程の第２溶媒は、ジメチルスルホキシド、メチルアルコール、エチルアルコール、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、酢酸およびこれらの混合物からなる群より選ばれる一つ以上であることを特徴とする請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項１０】
前記工程（ｂ）の界面活性剤は、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、レシチン、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンひまし油誘導体およびこれらの混合物からなる群より選ばれる一つ以上であることを特徴とする請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）の界面活性剤は、界面活性剤を含む水溶液の全体体積を基準として、０．０１ｗ／ｖ％〜２０ｗ／ｖ％である、請求項５に記載のポリカプロラクトン微粒球の製造方法。
【請求項１２】
全体ポリカプロラクトン微粒球フィラー１００重量％に対して、ビタミンＣ含有量が全体微粒球重量に対して０．０１〜６．５重量％で、平均粒度が１０〜１００μｍであるポリカプロラクトン微粒球２〜５０重量％、溶質０．１〜５重量％、潤滑剤０〜４８重量％、および薬学的に許容可能な水性担体１５〜９７．９重量％、を含むポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１３】
前記ビタミンＣがＬ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、ナトリウムアスコルビルホスファート（Ｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、マグネシウムアスコルビルホスファート（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、カルシウムアスコルビルホスファート（Ｃａｌｃｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アスコルビン酸ポリペプチド（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、エチルアスコルビルエーテル（Ｅｔｈｙｌ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、アスコルビルジパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｄｉｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルグルコシド（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）およびアスコルビルエチルシラノールペクチネート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｌ  ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）からなる群より選ばれた一つ以上であることを特徴とする請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１４】
前記溶質がカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒアルロン酸、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、ポリデオキシリボヌクレオチド（ＰＤＲＮ）、ポリヌクレオチド（ＰＮ）およびこれらの混合物からなる群より選ばれる一つ以上であることを特徴とする請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１５】
前記潤滑剤がグリセリンであることを特徴とする請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１６】
前記薬学的に許容可能な水性担体が精製水、生理食塩水またはリン酸緩衝液であることを特徴とする請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１７】
前記フィラーは、シワ改善、軟組織修復または体積拡大、または輪郭較正用である、請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１８】
前記フィラーは、注射剤用である、請求項１２に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラー。
【請求項１９】
請求項１２〜１８のいずれか一項に記載のポリカプロラクトン微粒球フィラーが充填されたプレフィルドシリンジ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願との相互引用］
本出願は、２０１８年１月１０日付韓国特許出願第１０−２０１８−０００３５８４号に基づいた優先権の利益を主張し、当該韓国特許出願の文献に開示されたすべての内容は本明細書の一部として含まれる。
【０００２】
本発明は、ビタミンＣを含有するポリカプロラクトン微粒球フィラーとその製造方法に関し、より詳細には、ビタミンＣを含有してビタミンＣの生体内の安定性問題を解決しただけでなく、生体への適用時施術後のコラーゲン再生効果およびボリューム増加効果が速やかに発現しながらも効果の維持時間が長いビタミンＣを含むポリカプロラクトン微粒球フィラーとその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
皮膚用フィラーは人体に安全な材料を顔の真皮層に注入してシワを改善して美観上ボリュームを取り戻すなど皮膚組織を補充する注射タイプの医療機器としてボツリヌストキシン（ボトックス）、自家脂肪移植、スレッドリフト、マイクロニードル、レーザ治療、薄皮術などをはじめとする、いわゆるアンチエイジング施術に使用される。
【０００４】
最初に開発された第１世代皮膚用フィラーは、動物由来のコラーゲンフィラーで施術後効果の持続期間が２〜４ヶ月で短く、施術１ヶ月前に皮膚過敏反応検査をしなければならないという、煩わしさのために最近ではほとんど使われていない。
【０００５】
第２世代皮膚用フィラーは、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）フィラーでコラーゲンフィラーより効果の持続時間が長く、人体の構成成分と類似する多糖質で構成されて皮膚過敏反応などの副作用が顕著に少なくコラーゲンフィラーのように皮膚反応検査を要しない点で現在最も多く使用されるフィラーである。特に、ヒアルロン酸は、施術および除去が容易で、粘弾性（ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）に優れ、皮膚の水分を維持して皮膚のボリュームおよび弾力性を維持して皮膚用フィラーの原料として非常に適する。最近ではヒアルロン酸の架橋結合（ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋ）を誘導して粒子の大きさおよび分子量を増加させることによって持続期間を延長させる研究が活発であるが、維持時間が６〜１２ヶ月で比較的短いので、６〜１２ヶ月ごとに繰り返して施術しなければならない煩わしさがある。
【０００６】
第３世代フィラーは、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ，ＰＬＡ）またはポリカプロラクトン（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ，ＰＣＬ）などの合成高分子フィラーで、人体で非常に徐々に分解されるので吸水性フィラーであるコラーゲン、ヒアルロン酸フィラーに比べてより長期間にわたる効果を有する目的で使われている。特にポリカプロラクトンは、人体に１００％吸収されて安全な成分であり、皮膚内に移植後ポリ乳酸より吸収される速度が遅く、コラーゲンの生成を促進して異物感のないやわらかい感じの組織で効果が１〜４年持続する長所がある。しかし、ポリカプロラクトンフィラーは微粒球形態のフィラーで、カルボキシメチルセルロース（Ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，ＣＭＣ）などのようなゲルキャリアに懸濁して投与しなかればならず皮膚内に注入後６〜８週以後に効果が現れて施術後の即刻効果が現れるヒアルロン酸フィラーよりは施術の満足度が落ちる短所がある。
【０００７】
一方、ビタミンＣまたはＬ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、その誘導体およびそれらの塩は人体の免疫機能を高め、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の生成を促進してヒアルロン酸生産の維持または亢進効果を現わすことによって、年齢が重なることによる皮膚のシワ、小ジワ、しみ、たるみなどを予防または改善するアンチエイジング効果を発揮すると知られている。しかし、ビタミンＣは生体内外で非常に不安定で空気、特に酸素と熱、光などの外部環境に敏感に反応して酸化によって簡単に分解される問題を有しており、様々な誘導体など安定化された形態を利用してコラーゲン形成、シワ改善などの目的としては化粧品などに限定して使用している実情である。
【０００８】
したがって、従来のポリカプロラクトン微粒球フィラーの特性を活用し、ポリカプロラクトン微粒球でビタミンＣを封入することによってビタミンＣの生体内の安定性問題を解決してより効能が改善された新しいポリカプロラクトン微粒球フィラーの開発が求められる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、前記のような従来のビタミンＣの生体内の安定性問題を解決してポリカプロラクトン微粒球フィラーの効能を改善するために案出されたものであり、生体に適用時施術後の効果が速やかに発現しながらも効果の維持時間が長いビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球、それを含むフィラーとそれを製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記課題を解決するための手段として、
本発明は、ビタミンＣ含有量がポリカプロラクトン微粒球にビタミンＣを含有した微粒球の全体１００重量％を基準として０．０１〜６．５重量％のビタミンＣを含み、平均粒度が１０〜１００μｍであるポリカプロラクトン微粒球を提供する。
【００１１】
本発明の他の側面によれば、（ａ）ポリカプロラクトンを第１溶媒に溶解してビタミンＣを第２溶媒に溶解させてそれぞれの溶液を製造した後、前記二つの溶液を均一に混ぜて単一溶液に製造して分散相を製造する工程、（ｂ）前記分散相を界面活性剤を含有した水溶液（連続相）と混合してエマルションを製造する工程、（ｃ）前記製造されたエマルション中の分散相から有機溶媒を連続相に抽出および蒸発させて微粒球を作る工程、および（ｄ）前記工程（ｃ）の連続相から微粒球を回収する工程を含む、ビタミンＣを含有するポリカプロラクトン微粒球を製造する方法が提供される。
【００１２】
本発明のまた他の側面によれば、前記本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球、および薬剤学的に許容可能な水性担体およびポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーが提供される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によるビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーは、生体に適用時コラーゲン形成効果が速やかに発現し、高い組織修復特性を現わすだけでなく、長期間の間前記効果が維持され、頬、胸、鼻、唇およびお尻などのような軟組織の修復または体積拡大およびシワ改善特性のようなフィラーとしての効果が優れる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１ａ】実施例１−４により製造されたアスコルビン酸含有ポリカプロラクトン微粒球の形状を光学顕微鏡で撮影した写真である。写真で確認できるように、生成された微粒球は表面に多孔性の形態学的特性を有しながらも球形を維持していることを確認することができる。
【図１ｂ】比較例１−１により過量のアスコルビン酸を使用して製造されたポリカプロラクトン微粒球の形状を光学顕微鏡で撮影した写真である。生成された微粒球は球形の形態を維持できず微粒球が固まったり崩れた形態学的特性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００１６】
本発明で「ビタミンＣ」とは、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）だけでなくその誘導体およびそれらの塩を総称する用語として使用される。ビタミンＣは、Ｌ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、ナトリウムアスコルビルホスファート（Ｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、マグネシウムアスコルビルホスファート（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、カルシウムアスコルビルホスファート（Ｃａｌｃｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、アスコルビン酸ポリペプチド（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、エチルアスコルビルエーテル（Ｅｔｈｙｌ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、アスコルビルジパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｄｉｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、アスコルビルグルコシド（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）およびアスコルビルエチルシラノールペクチネート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｏｌ  ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）からなる群より選ばれるが、これに制限されるものではない。好ましくはＬ−アスコルビン酸（Ｌ−ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）を使用することができる。
【００１７】
一実施形態で、本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球中のビタミンＣの封入量は、微粒球合計１００重量％を基準として０．０１〜６．５重量％、好ましくは０．０２〜６．０重量％でありうる。このような封入量は、ビタミンＣの生体内安定性を確保しながらもビタミンＣに特徴的に生理活性が注入部位で上昇的な効果を奏するように最適化したものである。
【００１８】
本発明ではこのようなビタミンＣをポリカプロラクトン微粒球に封入させて共にフィラーに使用し、ヒアルロン酸の生産とコラーゲン合成のような多様な生物学的機能を促進させることを特徴とする
【００１９】
本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球は、生分解性高分子であるポリカプロラクトンの固有粘度が０．１６〜１．９０ｄＬ／ｇのポリカプロラクトンを使用して製造する。本発明で使用したポリカプロラクトンの固有粘度は、ウベローデ（Ｕｂｂｅｌｏｈｄｅ）粘度計を利用して２５℃でクロロホルムで測定されたものをいう。上記したポリカプロラクトン高分子の例としては、エボニック（Ｅｖｏｎｉｋ）社のレソマー（Ｒｅｓｏｍｅｒ）Ｃ２０９、Ｃ２１２およびＣ２１７とコービオン（Ｃｏｒｂｉｏｎ）社のＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０２、ＰＣ  ０４、ＰＣ０８、ＰＣ  １２およびＰＣ１７などが挙げられる。
【００２０】
本発明によるビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球は、平均粒度が１０μｍ以上であり、１００μｍ以下、例えば、１０〜３０μｍ、１０〜５０μｍ、または１０〜１００μｍ、２０〜５０μｍ、３０〜６０μｍ、または４０〜７０μｍであることが好ましい。本願で使用した平均粒度とは粒度分布曲線で体積％の５０％に該当する粒度として、平均粒径（Ｍｅｄｉａｎ  Ｄｉａｍｅｔｅｒ）を意味し、Ｄ５０またはＤ（ｖ，０．５）で表す。
【００２１】
ビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球の平均粒度が１０μｍ未満の場合は、生体内に投与時大食細胞によってどん食され得、１００μｍより大きい場合は、注射器で注入時の注射能が落ちて注射針が厚くなることにより注射時痛みが大きくなって好ましくない。
本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球は、均一な粒子分布を有することが好ましい。均一な粒子分布を有する微粒球は、不均一な微粒球に比べて注射時の残留量の偏差も小さく目詰まり現象も少ないため、より細い注射針を使用することができる。本発明のポリカプロラクトン微粒球の大きさ分布度またはＳｐａｎ  ｖａｌｕｅが１．０以下であることが好ましい。より好ましくは、大きさ分布度が０以上０．８以下であることが好ましい。本願で使用した大きさ分布度またはスパン値（Ｓｐａｎ  ｖａｌｕｅ）とは微粒球の粒子大きさの均一性を表す指標として、大きさ分布度（Ｓｐａｎ  ｖａｌｕｅ）＝（Ｄｖ０．９−Ｄｖ０．１）／Ｄｖ０．５の数式により求めた値を意味する。ここでＤｖ０．１は微粒球の粒度分布曲線で体積％の１０％に該当する粒度、Ｄｖ０．５は微粒球の粒度分布曲線で体積％の５０％に該当する粒度、Ｄｖ０．９は微粒球の粒度分布曲線で体積％の９０％に該当する粒度を意味する。本発明によるビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球は、１０μｍ以上、１００μｍ以下の粒度を示しながらも均一な大きさ分布度を示して注射針の目詰まりが減少して注射能が向上することを特徴とする。以上のような粒径範囲とスパン値は、ポリカプロラクトン微粒球中のビタミンＣが適切な量で長期間溶出されるようにする封入量を含み得るように最適化したものである。
【００２２】
本発明によるビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球は、一例として「溶媒抽出および蒸発法」を用いて製造できるが、これに限定されない。
【００２３】
本発明によるビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球製造方法の具体的な一例として、このような製造方法は、（ａ）ポリカプロラクトンを第１溶媒に溶解してビタミンＣを第２溶媒に溶解させてそれぞれの溶液を製造した後、前記二つの溶液を均一に混ぜて単一溶液に製造して分散相を製造する工程、（ｂ）前記分散相を界面活性剤を含有した水溶液（連続相）と混合してエマルションを製造する工程、（ｃ）前記工程（ｂ）で製造されたエマルション中の分散相から有機溶媒を連続相に抽出および蒸発させて微粒球を形成させる工程、および（ｄ）前記工程（ｃ）の連続相から微粒球を回収してビタミンＣを含有したポリカプロラクトン微粒球を製造する工程を含む。
【００２４】
前記工程（ａ）でポリカプロラクトンの固有粘度は、０．１６〜１．９０ｄＬ／ｇの範囲が好ましい。
【００２５】
前記工程（ａ）でポリカプロラクトンを溶解させるのに使用される第１溶媒は、水と混和されない性質を有することが好ましい。有機溶媒の水と混和されない性質を利用することによって、後述する工程（ｂ）で連続相である界面活性剤を含有した水溶液に分散相を均質に混合および分散させてエマルションを形成することができる。このようなポリカプロラクトンを溶解させる溶媒の種類は、特に制限されないが、好ましくはジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、メチルエチルケトン、およびこれらの混合溶媒からなる群から選ばれ得、より好ましくはジクロロメタン、酢酸エチルまたはこれらの混合溶媒を使用することができる。
【００２６】
前記工程（ａ）でビタミンＣを溶解させる第２溶媒は、ジメチルスルホキシド、メチルアルコール、エチルアルコール、アセトン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、酢酸およびこれらの混合物からなる群より選ばれ得、好ましくはジメチルスルホキシド、メチルアルコールまたはこれらの混合溶媒を使用することができる。
【００２７】
前記工程（ａ）でポリカプロラクトンとビタミンＣ溶液を混ぜて均一な混合溶液を作って分散相を製造する。ポリカプロラクトンとビタミンＣ混合溶液は均質に溶解することが好ましい。一例として、ポリカプロラクトン溶媒としてジクロロメタンを使用し、ビタミンＣ溶媒としてジメチルスルホキシドを使用する場合、ジメチルスルホキシドの使用量はジクロロメタンの３重量％〜４０重量％が好ましい。ジメチルスルホキシドの量が３重量％未満の場合は、ビタミンＣがジクロロメタンによって溶解度が劣り析出される可能性が高く、４０重量％を超える場合は、分散相の疎水性性質が減少して過量のジメチルスルホキシドが連続相に急激に放出されて連続相と混合されない液滴形態の分散相の形成が難しいため好ましくない。
【００２８】
前記工程（ｂ）で分散相と界面活性剤を含有した水溶液を均質に混合する方法は特に制限されないが、好ましくは高速攪拌機、インラインミキサ、メンブレンエマルション法、マイクロフルイディクスエマルション法などを利用して遂行することができる。一例としてメンブレンエマルション法を利用して混合する場合、前記工程（ａ）で製造された分散相を均一な大きさの微細孔を有する膜を通過させて界面活性剤を含有した連続相に移動させてエマルションを作る。膜の微細孔は５〜５０μｍの大きさが好ましい。
【００２９】
前記工程（ｂ）で使用される界面活性剤の種類は特に制限されず、分散相が連続相内で安定した液滴のエマルションを形成できるように助けられるものであれば、いかなるものでも使用することができる。前記界面活性剤は、好ましくは、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、レシチン、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンひまし油誘導体およびこれらの混合物からなる群より選ばれることができ、最も好ましくはポリビニルアルコールを使用することができる。
【００３０】
前記工程（ｂ）で、界面活性剤を含む連続相中の界面活性剤の含有量は、界面活性剤を含む連続相の全体体積を基準として、０．０１ｗ／ｖ％〜２０ｗ／ｖ％、好ましくは０．１ｗ／ｖ％〜５ｗ／ｖ％でありうる。界面活性剤の含有量が０．０１ｗ／ｖ％未満の場合は、連続相内に液滴形態の分散相またはエマルションが形成されず、界面活性剤の含有量が２０ｗ／ｖ％を超える場合には、過量の界面活性剤によって連続相内に微粒子が形成された後、界面活性剤を除去するのに困難性があり得る。本発明の一実施例では１〜５ｗ／ｖ％のポリビニルアルコールを使用してビタミンＣを含むポリカプロラクトン微粒球を製造した。
【００３１】
前記工程（ｃ）で、液滴形態の分散相および界面活性剤を含有した連続相を含むエマルションを有機溶媒の沸騰点未満の温度で一定時間、例えば、２時間〜４８時間維持または攪拌すると、分散相である液滴形態のポリカプロラクトン−ビタミンＣ溶液から連続相に有機溶媒が抽出され得る。連続相から抽出された有機溶媒の一部は連続相表面から蒸発され得る。液滴形態の溶液から有機溶媒が除去されることにより、前記液滴形態の分散相は固形化して微粒球が形成されることになって、微粒球を含む懸濁液（微粒球懸濁液）形態が得られる。
【００３２】
前記工程（ｃ）で有機溶媒を追加的に効率的に除去するために連続相の温度を一定時間熱を加え得る。例えば、これに制限されるものではないが、５〜３９．６℃、好ましくは１０〜３５℃、より好ましくは１５〜３０℃で温度を維持して４８時間以内、好ましくは１〜３６時間、より好ましくは３〜２４時間程度攪拌等により有機溶媒を除去することができる。
【００３３】
前記工程（ｄ）で、ポリカプロラクトン微粒球を回収する方法は、様々な公知技術を用いて行われ得、例えば濾過または遠心分離などの方法を利用することができる。
前記工程（ｃ）および工程（ｄ）の間に、濾過および洗浄により残留する界面活性剤を除去し、再び濾過させて微粒球を回収することができる。
【００３４】
残存する界面活性剤を除去するための洗浄工程は、通常水を利用して行うことができ、前記洗浄工程は数回にわたって繰り返すことができる。
【００３５】
また、前述したように、前記工程（ｂ）で高速攪拌機、インラインミキサを利用してエマルションを形成した場合、前記工程（ｃ）および工程（ｄ）の間に、篩過工程を追加的に使用することで均一な微粒球を得ることができる。公知技術を用いて篩過工程を行うことができ、大きさが互いに異なる篩膜を利用して小さい粒子と大きい粒子の微粒球を濾して均一な大きさの微粒球を得ることができる。
【００３６】
本発明の他の側面によれば、前記本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球、および薬剤学的に許容可能な水性担体およびビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーが提供される。
【００３７】
前記薬剤学的に許容可能な水性担体としては、例えば、精製水、生理食塩水、またはリン酸緩衝液などの注射用水溶液を使用することができる。また、前記フィラーは、ビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球および薬剤学的に許容可能な水性担体とともに必要に応じてカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）などのセルロース誘導体、ヒアルロン酸、リドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）、ポリデオキシリボヌクレオチド（ＰＤＲＮ）、ポリヌクレオチド（ＰＮ）などの溶質、グリセリンなどの潤滑剤を一つ以上さらに含み得るが、これに限定されない。好ましくはヒアルロン酸であり、ヒアルロン酸をさらに含んで組み合わせる場合、初期投与時のボリュームがより長く維持されることができる。
【００３８】
一具体例で、本発明のビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーに含まれる各成分の含有量は、フィラー剤形合計１００重量％を基準として、前記ビタミンＣ含有ポリカプロラクトン微粒球２〜５０重量％（ポリカプロラクトン微粒球内のビタミンＣ含有量は０．０１〜６重量％）、薬学的に許容可能な水性担体１５〜９７．９重量％、溶質０．１〜５重量％、潤滑剤０〜４８重量％であり得るが、これに限定されない。ヒアルロン酸を溶質に追加する場合は架橋率が０〜５％のヒアルロン酸を使用することができる。
【００３９】
このような本発明によるビタミンＣを含有するポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーは、施術直後から施術部位でコラーゲン形成効果が速やかに発現し、自然で理想的なボリューム感を有する組織修復特性を現わすだけでなく、ビタミンＣの生体内の安定性が維持され、注射投与能も良く維持期間も長い卓越した特性を現わすため、美容または治療目的で非常に有用に使用されることができる。
【００４０】
具体的な例示として、このようなポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーは、生物学的組織のフィリング（ｆｉｌｌｉｎｇ）、シワのフィリング（ｆｉｌｌｉｎｇ  ｗｒｉｎｋｌｅ）によるシワ改善、顔面のリモデリング（ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｃｅ）または唇、鼻、お尻、頬または胸のような軟組織の容積（ｖｏｌｕｍｅ）の修復または増加などに使用されることができる。前記ポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーは、このような用途に適する投与形態で投与されることができ、好ましくは注射剤でありうる。
【００４１】
また他の様態として、本発明は前記ポリカプロラクトン微粒球を含むフィラーが充填されたプレフィルドシリンジを提供する。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明する。しかし、これら実施例は本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれら実施例に限定されるものではない。
【００４３】
実施例１：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．９９７５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．００２５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１９．９９ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）１．７０ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００４４】
連続相は１ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１２００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００４５】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００４６】
実施例１−１：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．９８５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．０１５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１９．９４ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）１．７０ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
連続相は１ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１２００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００４７】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００４８】
実施例１−２：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．８５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．１５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１９．４ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）１．７６ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００４９】
連続相は１ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１２００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００５０】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００５１】
実施例１−３：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００５２】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００５３】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００５４】
実施例１−４：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．０ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）１．０ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１６ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）５．２３ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００５５】
連続相は３ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１０００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００５６】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００５７】
実施例２：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０２（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１２．８５ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１２００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００５８】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００５９】
実施例２−１：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  １２（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）２５ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００６０】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１５００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００６１】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００６２】
実施例２−２：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  １７（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）３７．５ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００６３】
連続相は５ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相２２５０ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００６４】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００６５】
実施例３：高速攪拌機を利用したアスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００６６】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、調製容器に連続相１１００ｍＬを入れて装置された高速ミキサを４５００ｒｐｍ速度で攪拌しながら分散相を分当り７ｍＬ流速で注入した。微粒球懸濁液は１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００６７】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して２５μｍと１５０μｍふるい目を有するメッシュを同時に使用して微粒球を選別した後凍結乾燥した。
【００６８】
実施例４：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００６９】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径５μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００７０】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００７１】
実施例４−１：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００７２】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径３０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００７３】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００７４】
実施例４−２：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径５０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００７５】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００７６】
実施例５：ナトリウムアスコルビルホスファート（Ｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびｓｏｄｉｕｍ  ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（製造会社：ＢＡＳＦ  Ｃａｒｅ  Ｃｒｅａｔｉｏｎｓ、ドイツ）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）３．１５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００７７】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００７８】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００７９】
実施例５−１：アスコルビルパルミテート（Ａｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ）が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびＡｓｃｏｒｂｙｌ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ（製造会社：Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）１．６ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００８０】
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１１００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００８１】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００８２】
実施例６：カルボキシメチルセルロースを溶質として使用したポリカプロラクトン微粒球フィラーの製造
ポリカプロラクトン微粒球フィラーは微粒球懸濁のための溶液を製造後微粒球を混合して製造した。カルボキシメチルセルロース（製造会社：Ａｓｈｌａｎｄ、米国）２ｇは７５℃リン酸緩衝液に入れて３時間１００ｒｐｍで攪拌して溶かして冷却させる。溶液温度が２５℃になるとグリセリン１８ｇを入れて実施例１−３で製造した微粒球を３０％（ｗ／ｗ）で混ぜてポリカプロラクトン微粒球フィラーを完成した。
【００８３】
実施例６−１：ヒアルロン酸を溶質として使用したポリカプロラクトン微粒球フィラーの製造
ポリカプロラクトン微粒球フィラーは微粒球懸濁のための溶液を製造後微粒球を混合して製造した。ヒアルロン酸（製造会社：Ｂｌｏｏｍａｇｅ  Ｆｒｅｄａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ、中国）１ｇは５５℃リン酸緩衝液に入れて溶かして冷却させる。溶液温度が２５℃になるとグリセリン１８ｇを入れて実施例１−３で製造した微粒球を３０％（ｗ／ｗ）で混ぜてポリカプロラクトン微粒球フィラーを完成した。
【００８４】
比較例１：ポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）５ｇをジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）２０ｇに混合して準備した。
【００８５】
連続相は１ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１２００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００８６】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００８７】
比較例１−１：アスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）３．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）１．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１４ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）９．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
【００８８】
連続相は３ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、連続相１０００ｍＬを直径１０μｍの多孔性メンブレンを装着した乳化装置に供給すると同時に準備された分散相を注入して微粒球を製造した。製造された微粒球懸濁液は調製容器に入れて１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、メンブレン乳化装置および調製容器の温度は２５℃を維持した。
【００８９】
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して収得して微粒球を凍結乾燥した。
【００９０】
比較例２：高速攪拌機を利用したアスコルビン酸が封入されたポリカプロラクトン微粒球の製造
分散相は生体適合性高分子であるＰｕｒａｓｏｒｂ  ＰＣ  ０４（製造会社：Ｃｏｒｂｉｏｎ、オランダ）４．５ｇおよびアスコルビン酸（製造会社：Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）０．５ｇをそれぞれジクロロメタン（製造会社：Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ、米国）１８ｇとジメチルスルホキシド（製造会社：シグマアルドリッチ、米国）２．９５ｍＬに溶かして二つの溶液を混合して準備した。
連続相は２ｗ／ｖ％ポリビニルアルコール（粘度：４．８〜５．８ｍＰａ・ｓ）水溶液を使用し、調製容器に連続相１１００ｍＬを入れて装置された高速ミキサを４５００ｒｐｍ速度で攪拌しながら分散相を分当り７ｍＬ流速で注入した。微粒球懸濁液は１５０ｒｐｍ速度で攪拌し、調製容器の温度は２５℃を維持した。
分散相注入が完了すると微粒球懸濁液を１２時間２５℃で１５０ｒｐｍ速度で攪拌して有機溶媒を除去した。有機溶媒の除去が完了すると微粒球懸濁液を３次蒸溜水で数回繰り返し洗浄して残余ポリビニルアルコールを除去して微粒球を凍結乾燥した。
【００９１】
比較例３：カルボキシメチルセルロースを溶質として使用したポリカプロラクトン微粒球フィラーの製造
ポリカプロラクトン微粒球フィラーは微粒球懸濁のための溶液を製造後微粒球を混合して製造した。カルボキシメチルセルロース（製造会社：Ａｓｈｌａｎｄ、米国）２ｇは７５℃リン酸緩衝液に入れて３時間１００ｒｐｍで攪拌して溶かして冷却させる。溶液温度が２５℃になるとグリセリン１８ｇを入れて比較例１で製造した微粒球を３０％（ｗ／ｗ）で混ぜてポリカプロラクトン微粒球フィラーを完成した。
【００９２】
比較例３−１：ヒアルロン酸を溶質として使用したポリカプロラクトン微粒球フィラーの製造
ポリカプロラクトン微粒球フィラーは微粒球懸濁のための溶液を製造後微粒球を混合して製造した。ヒアルロン酸（製造会社：Ｂｌｏｏｍａｇｅ  Ｆｒｅｄａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ、中国）１ｇは５５℃リン酸緩衝液に入れて溶かして冷却させる。溶液温度が２５℃になるとグリセリン１８ｇを入れて比較例１で製造した微粒球を３０％（ｗ／ｗ）で混ぜてポリカプロラクトン微粒球フィラーを完成した。
【００９３】
実験例１：光学顕微鏡を活用した微粒球形態の観察
微粒球の形態学的分析のために、光学顕微鏡を用いて実施例１−４および比較例１−１でそれぞれ製造された微粒球の形態を観察しようとした。具体的には、スライドガラスに微粒球懸濁液を落として光学顕微鏡（製造会社：オリンパスＢＨ−２，日本）載物台にスライドガラスを位置させてｘ１００倍率（対物レンズｘ１０，対眼レンズｘ１０）で微粒球形態を観察した。
【００９４】
図１ａおよび図１ｂに示すように実施例１−４は微粒球表面に多孔性の形態学的特性を有していながらも球形の形態を維持していることに対し、比較例１−１の微粒球は球形の形態を維持できず微粒球が固まったり崩れた形態学的特性を観察することができた。これは比較例１−１に使用された過量のジメチルスルホキシドが連続相に急激に放出されて連続相と混合されない分散相の特性を減少させて完全な微粒球維持を難しくするものであると予測された。
【００９５】
実験例２：レーザ回折法を用いた微粒球粒度の分析
本実験は微粒球の平均粒度および分布度を定量的に測定して粒子の均一性を確認するために実施した。実験手順は次のとおりである。
【００９６】
微粒球５０ｍｇを１ｍＬ超純水と混合して２０秒間ボルテックスミキサで混合した後１分間超音波発生器に入れて分散させた。微粒球分散液を粒度分析装置（Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ  Ｂｌｕｅｗａｖｅ，Ｊａｐａｎ）に入れて２０秒間測定した。粒度大きさ均一性の指標としてスパン値は下記のような数式１で求めた。
【００９７】
［数１］
スパン値（Ｓｐａｎ  Ｖａｌｕｅ）＝（Ｄｖ，０．９-Ｄｖ，０．１）／Ｄｖ，０．５
【００９８】
【表１】
2021511300.tif 000003
【００９９】
上記の表１のように実施例１、実施例１−１、実施例１−２、実施例１−３、実施例１−４および比較例１は、それぞれ多様な量のアスコルビン酸を使用して製造したが、平均粒度は約３５μｍで類似の粒度を有していた。したがって、分散相の製造に使用されたアスコルビン酸は粒度に大きい影響を及ぼさないことが確認された。
【０１００】
実施例４、実施例４−１および実施例４−２は乳化装置に取り付けられた多孔性メンブレン変化に応じた粒度調節が可能であることを確認することができた。
【０１０１】
実施例１−３と比較例２は、微粒球製造過程で分散相と界面活性剤を含有した水溶液を均質に混合する方法の差異を有しており、これらによって製造された微粒球は相異する平均粒度およびスパン値の差を示した。より詳しくは比較例２の場合、高速攪拌機を用いて製造した微粒球として実施例１−３と比較して相対的に平均粒度は減少し、かつスパン値は１．４３で広い粒度分布を有するものを確認することができた。
【０１０２】
実験例３：ポリカプロラクトン微粒球に封入されたアスコルビン酸の分析
本実験はポリカプロラクトン微粒球に封入されたアスコルビン酸定量分析のために高性能液体クロマトグラフィを活用して実施した。詳しい実験手順は次のとおりである。
高性能液体クロマトグラフィに使用された移動相は、０．１ｖ／ｖ％トリクロロ酢酸が含まれた４０ｖ／ｖ％アセトニトリル溶液を０．５ｍＬ／ｍｉｎ流速で流し、Ｃ１８充填剤が充填されたカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３，５ｕｍ、４．５ｘ１５０ｍｍ、製造会社：ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、日本）を用いた。微粒球１０ｍｇをＮ−メチルピロリドンとアセトニトリル混合液（８：２，ｖ／ｖ）に希釈して高性能液体クロマトグラフィに注入して２４５ｎｍ波長でＵＶ吸光検出器を用いて測定した。
【０１０３】
【表２】
2021511300.tif 000004
【０１０４】
上記の表２に示すように実施例１、実施例１−１、実施例１−２、実施例１−３および実施例１−４は、分散相の製造に使用されたアスコルビン酸量の増加により含有量も比例して増加することを確認することができた。特に実施例１−４は完全な微粒球形態を維持しながら最大アスコルビン酸比封入量は５．６０重量％を示した。
【０１０５】
これに対し、比較例１−１は、７．５４％で相対的により高いアスコルビン酸が封入量を示したが、微粒球の形態が一定でなく固まる現象があり、アスコルビン酸の封入および伝達製剤としては適しないことを確認した。
【０１０６】
実験例４：ポリカプロラクトン微粒球フィラーの持続性評価
本実験はポリカプロラクトン微粒球フィラーの持続性評価のために実験動物にフィラー投与後体積を分析した。
【０１０７】
ポリカプロラクトン微粒球フィラーは、実施例６、実施例６−１、比較例３および比較例３−１のように製造し、生後６週のＳＫＨ１−Ｈｒｈｒ  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅに１００μＬずつ皮下に注射してあらかじめ定めた期間（投与直後、１週、４週および８週）に投与部位の容量分析を実施した。体積測定はＰＲＩＭＯＳＬＩＴＥ（ＧＦＭｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋＧｍｂＨ、ドイツ）を用いて分析プログラムはＰＲＩＭＯＳ  ５．６を用いた。
【０１０８】
【表３】
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【０１０９】
上記の表３に示すように実施例６および実施例６−１は、注射剤用フィラー組成の差によって体積変化に差があることを確認した。実施例６−１に使用されたヒアルロン酸はカルボキシメチルセルロースより体積維持に相対的により効果的であることが確認された。
実施例６−１と比較例３−１の結果に示されたようにアスコルビン酸が封入された微粒球が使用された実施例６−１の場合、投与後８週間の体積減少が相対的に少なく、初期体積の増加現象を確認することができた。これは微粒球に封入されたアスコルビン酸がヒアルロン酸の生産、コラーゲンの合成のような多様な生物学的機能を促進すると予測された。
【図１ａ】
2021511300.tif 000006
【図１ｂ】
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【国際調査報告】
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