(57)【要約】ＣＤ４７タンパク質、特にヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を調節、例えば、阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻害することを含み、重大なレベルのヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こさない、モノクローナル、ヒト、霊長類、齧歯類、哺乳動物、キメラ抗体、ヒト化、及びＣＤＲ移植抗体を含む抗体、その抗原結合フラグメント、及び抗原結合誘導体。抗体は、ＲＢＣの貪食を高めないものであり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの抗体−抗原結合部位を含み、前記抗体は、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害し、細胞の重大な凝集を引き起こさず、前記抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、二重特異性抗体、コンジュゲート抗体、小モジュラー免疫薬、単鎖抗体、カメロイド抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは抗原結合機能的バリアントである、抗ＣＤ４７抗体。
【請求項２】
前記抗体が、ヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こさない、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗ＣＤ４７抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）との相互作用をブロックする、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、前記抗ＣＤ４７抗体の非存在下のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用と比較するとき、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％をブロックする、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
重大未満のレベルの凝集が、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下の細胞の凝集のレベルである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体の存在下の前記細胞の凝集のレベルが、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下の前記細胞の凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％減少する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、約０．３μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌの抗体量で、細胞の重大なレベルの細胞凝集を引き起こさない、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、約１００μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌの抗体濃度で、細胞の重大なレベルの細胞凝集を引き起こさない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が強力な抗腫瘍活性を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１０】
前記強力な抗腫瘍活性が、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下でのマクロファージが腫瘍細胞を貪食する能力と比較して、前記抗体の存在下で、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％増加する、マクロファージが腫瘍細胞を貪食する能力によって測定される、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体がＣＤ４７陽性細胞株の凝集を促進しない、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２から選択される可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６から選択される可変軽鎖とを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のうちの１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちの１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変軽鎖とを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性が、前記抗体の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、少なくとも５０％、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％減少する、請求項１〜２のいずれか１項または請求項５〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性が、前記抗体の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％減少する、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体がＩｇＧアイソタイプである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体がアミノ酸Ａｓｎ２９７で修飾された定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体がＮ２９７Ａのアミノ酸修飾を有する定常領域を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体がアミノ酸Ｌｅｕ２３５またはＬｅｕ２３４で修飾された定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記定常領域が、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）のアミノ酸修飾及び／またはＬｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）のアミノ酸修飾を有する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体がアミノ酸Ａｒｇ４３５でアミノ酸が修飾されたヒトＩｇＧ３定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２２】
前記ヒトＩｇＧ３定常領域がＡｒｇ４３５Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ）のアミノ酸修飾を有する、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、鎖交換を防止または低減するようにヒンジ領域内で修飾されたヒトＩｇＧ４定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体がＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）のアミノ酸修飾を有するヒトＩｇＧ４定常領域を含む、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
前記ヒトＩｇＧ４定常領域がアミノ酸２３５でさらに修飾されている、請求項２３または請求項２４に記載の抗体。
【請求項２６】
前記ヒトＩｇＧ４定常領域がＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）のアミノ酸修飾を有する、請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、ＦｃＲｎ結合を増強するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含み、前記ヒトＩｇＧ定常領域が、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、またはＮ４３４Ｓ）のうちの１つ以上のアミノ酸修飾を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を改変するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、ヘテロ二量体化を誘導するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含み、前記抗体が、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｓのアミノ酸修飾、及び／またはＬ３６８Ａ、もしくはＹ４０７Ｖ、Ｓ３５４Ｃ、もしくはＹ３４９Ｃのアミノ酸修飾を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号３６１〜３７３、３７５〜３７９、３８１〜３８３、３８５〜３８７、３８９〜３９２、３９４〜３９６、３９９〜４０４からなる群から選択される、可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有する、ヒト化抗体またはヒト抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、配列番号３６１〜３７３、３７５〜３７９、３８１〜３８３、３８５〜３８７、３８９〜３９２、３９４〜３９６、３９９〜４０４からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である、可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有する、ヒト化抗体またはヒト抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３２】
前記抗体がヒト化抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３３】
前記抗体がヒト抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸を含むベクター。
【請求項３５】
配列番号３３７〜３４８、４１３〜４２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である、
抗体の重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）をコードする核酸を含むベクター。
【請求項３６】
請求項３５に記載のベクターを含み、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体を発現する、原核細胞、酵母細胞、植物細胞、または哺乳動物細胞株。
【請求項３７】
請求項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項３８】
がんまたは他の腫瘍性状態を有するヒト患者におけるがんまたは他の腫瘍性状態の治療、進行の遅延、再発の予防、または症状の緩和の方法であって、前記患者に、治療有効量の、少なくとも１つの抗体−抗原結合部位を含み、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害、ブロック、拮抗、中和、もしくはさもなくば、妨害し、細胞の重大な凝集を引き起こさない抗体を投与すること、または、前記患者に、治療有効量の、前記抗体と医薬賦形剤とを含む医薬組成物を投与すること、を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記抗体が請求項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記医薬組成物が、請求項３７に記載の医薬組成物である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記がんまたは他の腫瘍性状態がＣＤ４７＋腫瘍である、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記がんまたは他の腫瘍性状態が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群から選択される、請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記がんまたは他の腫瘍性状態が、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎臓腫瘍からなる群から選択される、請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記がんまたは他の腫瘍性状態が血液癌である、請求項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記血液癌が白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記血液癌が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成からなる群から選択される白血病である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記血液癌が、ホジキンリンパ腫、緩慢性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞及び大細胞）からなる群から選択されるリンパ腫である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記血液癌が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫からなる群から選択される骨髄腫である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
１つ以上の追加の薬剤を前記患者に投与することをさらに含む、請求項３８〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記追加の薬剤が治療薬である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記治療薬が抗がん剤である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が、
（ａ）
ｉ．配列番号４９、５１、５３、５５、５７、５９、６２〜６５、８６〜８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５８〜１６１、１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５４〜２５７、２７８〜２７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｂ）
ｉ．配列番号５０、５２、５４、５６、５８、６０、７６〜７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１７２〜１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２６８〜２７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
をそれぞれ含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５３】
前記抗体が、以下の：
（１）ＶＨが、それぞれ配列番号４９、１４５、及び２４１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５０、１４６、及び２４２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（２）ＶＨが、それぞれ配列番号５１、１４７、及び２４３のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ配列３を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５２、１４８、及び２４４のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（３）ＶＨが、それぞれ配列番号５３、１４９、及び２４５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５４、１５０、及び２４６のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（４）ＶＨが、それぞれ配列番号５５、１５１、及び２４７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（５）ＶＨが、それぞれ配列番号５７、１５３、及び２４９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５８、１５４、及び２５０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（６）ＶＨが、それぞれ配列番号５９、１５５、及び２５１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号６０、１５６、及び２５２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（７）ＶＨが、それぞれ配列番号６２、１５８、及び２５４のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（８）ＶＨが、それぞれ配列番号６３、１５９、及び２５５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７７、１７３、及び２６９のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（９）ＶＨが、それぞれ配列番号６４、１６０、及び２５６のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７８、１７４、及び２７０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１０）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７９、１７５、及び２７１のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１１）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１２）ＶＨが、それぞれ配列番号８６、１８２、及び２７８のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１３）ＶＨが、それぞれ配列番号８７、１８３、及び２７９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
のうちのいずれか１つを含む、請求項５２に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月２４日に出願された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０７４０５５の優先権を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表の組み込み
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年１月２３日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、５２００−００２Ｐ１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、２２３，３６７バイトのサイズである。
【０００３】
この開示は、免疫生物学とがんを含む疾患の分野に関する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ４７（表面抗原分類４７）は、インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても知られ、アミノ末端免疫グロブリンドメイン及びカルボキシル末端増殖膜貫通領域を持つ５０ｋＤａの膜タンパク質である。これは、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）、ＳＩＲＰγ、インテグリン、及びトロンボスポンジン−１（ＴＳＰ−１）を含むが、これらに限定されない、複数のリガンドと相互作用する。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、骨髄樹状細胞（ＤＣ）、顆粒球、マスト細胞、及び造血幹細胞を含むそれらの前駆体を含む骨髄性細胞上に主として発現する。ＣＤ４７／ＳＩＲＰαの相互作用は、「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを送信し、自家貪食を防ぐ。
【０００５】
患者の腫瘍及び隣接正常（非腫瘍）のマッチ組織の分析により、ＣＤ４７タンパク質ががん細胞上で過剰発現し、それらが貪食の自然免疫監視及び排除を抑制することを効率的に助けることが明らかになった。抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の遮断は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍細胞の貪食を誘導し、ｉｎ  ｖｉｖｏで様々な血液腫瘍及び固形腫瘍の増殖を阻害するのに効果的であることが示されている。したがって、ＣＤ４７は、がん治療の有効な標的であり、その適切なアンタゴニストは、ヒトの治療薬を作るために必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本開示は、ＣＤ４７タンパク質、特にヒトＣＤ４７を認識して結合する、モノクローナル、ヒト、霊長類、齧歯類、哺乳動物、キメラ抗体、ヒト化、及びＣＤＲ移植抗体を含む抗体、その抗原結合フラグメント、及び抗原結合誘導体を提供する。開示された抗体は、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を調節、例えば、阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害することができ、これらの抗体は、重大なレベルのヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こさない。開示された抗体、そのフラグメント及び誘導体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）との相互作用を、調整、例えば、阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害することができる。開示された抗体、そのフラグメント及び誘導体は、まとめて「本開示の抗ＣＤ４７抗体」または「開示された抗ＣＤ４７抗体」、「開示された抗体」などと呼ぶことができる。
【０００７】
単離された抗体であってもよい開示された抗体は、少なくとも１つの抗体−抗原結合部位を含み、抗体はヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害することができ、細胞の重大な凝集を引き起こさない。
【０００８】
特定の態様では、開示された抗ＣＤ４７抗体をコードするベクターを含む核酸コンストラクト及び分子が提供される。
【０００９】
特定の態様では、開示された抗ＣＤ４７抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。
【００１０】
特定の態様では、がんまたは他の腫瘍性状態の治療、進行の遅延、再発の予防、または症状の緩和のための、例えば、血液悪性腫瘍及び／または腫瘍、例えば、血液悪性腫瘍及び／または腫瘍の治療のための、開示された抗ＣＤ４７抗体、医薬組成物、及びキットを使用する方法が開示される。特定の実施形態では、開示されたＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７＋腫瘍を治療するのに有用である。非限定的な例として、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫を治療するのに使用される。固形腫瘍には、例えば、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎臓腫瘍が含まれる。
【００１１】
開示を限定することなく、本開示の多数の実施形態は、例示の目的のために以下に記載されている。
【００１２】
条項１．少なくとも１つの抗体−抗原結合部位を含み、前記抗体は、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害し、細胞の重大な凝集を引き起こさず、前記抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、二重特異性抗体、コンジュゲート抗体、小モジュラー免疫薬、単鎖抗体、カメロイド抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはその抗原結合フラグメントもしくは抗原結合機能的バリアントである、抗ＣＤ４７抗体。
【００１３】
条項２．前記抗体が、ヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こさない、条項１に記載の抗体。
【００１４】
条項３．前記抗ＣＤ４７抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）との相互作用をブロックする、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００１５】
条項４．前記抗体が、前記抗ＣＤ４７抗体の非存在下のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のレベルと比較するとき、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％をブロックする、条項３に記載の抗体。
【００１６】
条項５．重大未満のレベルの凝集が、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下の細胞の凝集のレベルである、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００１７】
条項６．前記抗体の存在下の前記細胞凝集のレベルが、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下の前記細胞の凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％減少する、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００１８】
条項７．前記抗体が、約０．３μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌの抗体量で、細胞の重大なレベルの細胞凝集を引き起こさない、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００１９】
条項８．前記抗体が、約１００μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌの抗体濃度で、細胞の重大なレベルの凝集を引き起こさない、条項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【００２０】
条項９．前記抗体が強力な抗腫瘍活性を有する、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２１】
条項１０．前記強力な抗腫瘍活性が、抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下でのマクロファージが腫瘍細胞を貪食する能力と比較して、前記抗体の存在下で、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％増加する、マクロファージが腫瘍細胞を貪食する能力によって測定される、条項９に記載の抗体。
【００２２】
条項１１．前記抗体がＣＤ４７陽性細胞株の凝集を促進しない、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２３】
条項１２．前記抗体が、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２から選択される可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６から選択される可変軽鎖とを含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２４】
条項１３．前記抗体が、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のうちの１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちの１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変軽鎖とを含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２５】
条項１４．前記抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性が、前記抗体の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、少なくとも５０％、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％減少する、条項１〜２のうちの１項のいずれか１項または条項５〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【００２６】
条項１５．前記抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性が、前記抗体の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％減少する、条項１４に記載の抗体。
【００２７】
条項１６．前記抗体がＩｇＧアイソタイプである、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２８】
条項１７．前記抗体がアミノ酸Ａｓｎ２９７で修飾された定常領域を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【００２９】
条項１８．前記抗体がＮ２９７Ａのアミノ酸修飾を有する定常領域を含む、条項１７に記載の抗体。
【００３０】
条項１９．前記抗体がアミノ酸Ｌｅｕ２３５またはＬｅｕ２３４で修飾された定常領域を含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００３１】
条項２０．前記定常領域が、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）のアミノ酸修飾及び／またはＬｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）のアミノ酸修飾を有する、条項１９に記載の抗体。
【００３２】
条項２１．前記抗体がアミノ酸Ａｒｇ４３５でアミノ酸が修飾されたヒトＩｇＧ３定常領域を含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００３３】
条項２２．前記ヒトＩｇＧ３定常領域がＡｒｇ４３５Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ）のアミノ酸修飾を有する、条項２１に記載の抗体。
【００３４】
条項２３．前記抗体が、鎖交換を防止または低減するようにヒンジ領域内で修飾されたヒトＩｇＧ４定常領域を含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００３５】
条項２４．前記抗体がＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）のアミノ酸修飾を有するヒトＩｇＧ４定常領域を含む、条項２３に記載の抗体。
【００３６】
条項２５．前記ヒトＩｇＧ４定常領域がアミノ酸２３５でさらに修飾されている、条項２３または条項２４に記載の抗体。
【００３７】
条項２６．前記ヒトＩｇＧ４定常領域がＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）のアミノ酸修飾を有する、条項２５に記載の抗体。
【００３８】
条項２７．前記抗体が、ＦｃＲｎ結合を増強するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含み、前記ヒトＩｇＧ定常領域が、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、またはＮ４３４Ｓ）のうちの１つ以上のアミノ酸修飾を有する、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００３９】
条項２８．前記抗体が、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を改変するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４０】
条項２９．前記抗体が、ヘテロ二量体化を誘導するように修飾されたヒトＩｇＧ定常領域を含み、前記抗体が、Ｔ３６６ＷまたはＴ３６６Ｓのアミノ酸修飾、及び／またはＬ３６８Ａ、もしくはＹ４０７Ｖ、Ｓ３５４Ｃ、もしくはＹ３４９Ｃのアミノ酸修飾を有する、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４１】
条項３０．前記抗体が、配列番号３６６、３６７、３６８、３６９、３７３、３７７、３７８、３７９、３８１、３８２、３８３、３８５、３８６、３８７、３９９、４００、４０１、４０２、または４０３からなる群から選択される、可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有する、ヒト化抗体またはヒト抗体である、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４２】
条項３１．前記抗体が、配列番号３６６〜３７３、３７５、３７７〜３７９、３８１〜３８３、３８５、３８９〜３９２、３９４〜３９６、３９９〜４０３からなる群から選択されるうちの１つに示される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である、可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有する、ヒト化抗体またはヒト抗体である、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４３】
条項３２．前記抗体がヒト化抗体である、先行条項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４４】
条項３３．前記抗体がヒト抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【００４５】
条項３４．条項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸を含むベクター。
【００４６】
条項３５．配列番号３３７〜３４８、４１３〜４２１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上（１００％を含む）同一である、抗体の重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）をコードする核酸を含むベクター。
【００４７】
条項３６．条項３４または条項３５に記載のベクターを含み、条項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体を発現する、原核細胞、酵母細胞、植物細胞、または哺乳動物細胞株。
【００４８】
条項３７．条項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【００４９】
条項３８．がんまたは他の腫瘍性状態を有するヒト患者におけるがんまたは他の腫瘍性状態の治療、進行の遅延、再発の予防、または症状の緩和の方法であって、前記患者に、治療有効量の、少なくとも１つの抗体−抗原結合部位を含み、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害、ブロック、拮抗、中和、もしくはさもなくば、妨害し、細胞の重大な凝集を引き起こさない抗体を投与すること、または、前記患者に、治療有効量の、前記抗体と医薬賦形剤とを含む医薬組成物を投与すること、を含む、前記方法。
【００５０】
条項３９．前記抗体が条項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体である、条項３８に記載の方法。
【００５１】
条項４０．前記医薬組成物が、条項３７に記載の医薬組成物である、条項３８に記載の方法。
【００５２】
条項４１．前記がんまたは他の腫瘍性状態がＣＤ４７＋腫瘍である、条項３８〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【００５３】
条項４２．前記がんまたは他の腫瘍性状態が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群から選択される、条項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【００５４】
条項４３．前記がんまたは他の腫瘍性状態が、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎臓腫瘍からなる群から選択される、条項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【００５５】
条項４４．前記がんまたは他の腫瘍性状態が血液癌である、条項３８〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【００５６】
条項４５．前記血液癌が白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、条項４４に記載の方法。
【００５７】
条項４６．前記血液癌が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成からなる群から選択される白血病である、条項４４に記載の方法。
【００５８】
条項４７．前記血液癌が、ホジキンリンパ腫、緩慢性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞及び大細胞）からなる群から選択されるリンパ腫である、条項４４に記載の方法。
【００５９】
条項４８．前記血液癌が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫からなる群から選択される骨髄腫である、条項４４に記載の方法。
【００６０】
条項４９．１つ以上の追加の薬剤を前記患者に投与することをさらに含む、条項３８〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【００６１】
条項５０．前記追加の薬剤が治療薬である、条項４９に記載の方法。
【００６２】
条項５１．前記治療薬が抗がん剤である、条項５０に記載の方法。
【００６３】
条項５２．前記抗体が以下を含む、先行条項のいずれか１項に記載の抗体：
（ａ）以下を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）
ｉ．配列番号４９、５１、５３、５５、５７、５９、６２〜６５、８６〜８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５８〜１６１、１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５４〜２５７、２７８〜２７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｂ）以下を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
ｉ．配列番号５０、５２、５４、５６、５８、６０、７６〜７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
ｉｉ．配列番号１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１７２〜１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
ｉｉｉ．配列番号２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２６８〜２７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３。
【００６４】
条項５３．前記抗体が、以下のうちのいずれか１つを含む、条項５２に記載の抗体：
（１）ＶＨが、それぞれ配列番号４９、１４５、及び２４１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５０、１４６、及び２４２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（２）ＶＨが、それぞれ配列番号５１、１４７、及び２４３のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５２、１４８、及び２４４のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（３）ＶＨが、それぞれ配列番号５３、１４９、及び２４５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５４、１５０、及び２４６のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（４）ＶＨが、それぞれ配列番号５５、１５１、及び２４７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（５）ＶＨが、それぞれ配列番号５７、１５３、及び２４９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５８、１５４、及び２５０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（６）ＶＨが、それぞれ配列番号５９、１５５、及び２５１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号６０、１５６、及び２５２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（７）ＶＨが、それぞれ配列番号６２、１５８、及び２５４のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（８）ＶＨが、それぞれ配列番号６３、１５９、及び２５５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７７、１７３、及び２６９のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（９）ＶＨが、それぞれ配列番号６４、１６０、及び２５６のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７８、１７４、及び２７０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１０）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７９、１７５、及び２７１のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１１）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１２）ＶＨが、それぞれ配列番号８６、１８２、及び２７８のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１３）ＶＨが、それぞれ配列番号８７、１８３、及び２７９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【００６５】
本発明のこれら及び他の態様に従って、多数の他の態様が提供される。本発明の他の特徴及び態様は、以下の詳細な説明及び添付の特許請求の範囲からより完全に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１Ａ】ＥＬＩＳＡによる精製されたマウス抗体の一部へのＣＤ４７タンパク質の結合を示す一連のグラフである。
【図１Ｂ】抗体によるＲａｊｉ細胞上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである（図１Ｂ）。２Ｄ３は、陽性対照として使用した。
【図２Ａ】精製されたマウス抗体によるＲＢＣ赤血球凝集を示すグラフである。市販のＢ６Ｈ１２抗体及び２Ｄ３はそれぞれ、陽性対照及び陰性対照として使用した。
【図２Ｂ】精製されたマウス抗体によるＲＢＣ赤血球凝集を示すグラフである。市販のＢ６Ｈ１２抗体及び２Ｄ３はそれぞれ、陽性対照及び陰性対照として使用した。
【図３】フローサイトメトリーによって評価されるときの、マウス抗体によるＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７細胞株上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである。ＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７タンパク質を過剰発現する改変された細胞株である。
【図４Ａ】フローサイトメトリーによって評価されるときの、マウスＣＤ４７抗体によるＣＨＯ−Ｋ１／ｃｙｎｏ  ＣＤ４７細胞株上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである。ＣＨＯ−Ｋ１／ｃｙｎｏ  ＣＤ４７は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ４７を過剰発現する改変された細胞株である。
【図４Ｂ】フローサイトメトリーによって評価されるときの、マウスＣＤ４７抗体によるＣＨＯ−Ｋ１／ｃｙｎｏ  ＣＤ４７細胞株上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである。ＣＨＯ−Ｋ１／ｃｙｎｏ  ＣＤ４７は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ４７を過剰発現する改変された細胞株である。
【図５】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価されるときの、精製されたマウスＣＤ４７抗体に対するＣＤ４７−ｈｉｓタンパク質の結合を示す一連のグラフである。
【図６】ＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７細胞株を使用するフローサイトメトリーによるＳＩＲＰαをブロックするマウスＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。Ｂ６Ｈ１２を陽性対照として使用した。
【図７Ａ】ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるヒト腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を促進するマウスＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞は、実験におけるＣＤ４７標的細胞株として使用した。Ｂ６Ｈ１２を陽性対照として使用した。
【図７Ｂ】ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるヒト腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を促進するマウスＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞は、実験におけるＣＤ４７標的細胞株として使用した。Ｂ６Ｈ１２を陽性対照として使用した。
【図８】フローサイトメトリーによって評価されるときの、マウスＣＤ４７抗体による赤血球上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである。Ｂ６Ｈ１２を陽性対照として使用した。
【図９】ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるヒト赤血球（ＲＢＣ）の貪食を促進するマウスＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。全てのマウス抗体は、ＲＢＣの明白な貪食活性を示した。Ｂ６Ｈ１２を陽性対照として使用した。
【図１０】キメラ抗体によるＲＢＣ赤血球凝集がないことを示すグラフである。
【図１１】ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）によるヒト腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を促進するキメラＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。
【図１２】ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプによるＲＢＣ赤血球凝集がないことを示すグラフである。
【図１３】ＳＰＲによって評価されるときの、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプに対するＣＤ４７−ｈｉｓタンパク質の結合を示す一連のグラフである。マウス抗ＣＤ４７抗体１０８Ｃ１０Ａ６は、陽性対照として使用した。
【図１４】フローサイトメトリーによって評価されるときの、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプによるＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７細胞株上のＣＤ４７の結合を示す一連のグラフである。
【図１５】フローサイトメトリーによって評価される、ＲＢＣに対するヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの結合を示す一連のグラフである。
【図１６】フローサイトメトリーによって評価される、ＣＨＯ−Ｋ１／ｃｙｎｏＣＤ４７に対するヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの結合を示す一連のグラフである。
【図１７】ＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７細胞株を使用するフローサイトメトリーによる、ＳＩＲＰαをブロックするヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの能力を示す一連のグラフである。
【図１８】ヒトＭＤＭによるヒト腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を促進するヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの能力を示す一連のグラフである。
【図１９】ヒトＭＤＭによるヒト腫瘍細胞株Ｒａｊｉの貪食を促進するヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの能力を示す一連のグラフである。
【図２０】ヒトＭＤＭによるＲＢＣの貪食を促進するヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの能力を示す一連のグラフである。
【図２１】Ｒａｊｉ腫瘍モデルにおける、マウスＢ６Ｈ１２抗体と共に、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示すグラフである。このモデルでは、マウスを、週に３回、１０ｍｇ／ｋｇ抗体用量で処理した。
【図２２】マウスモデルにおける、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの薬物動態を示すグラフである。薬物動態パラメーターは、表２に列挙される。
【図２３】ＳＨＰ−７７腫瘍モデルにおける、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ４ＰＥアイソタイプのｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示すグラフである。このモデルでは、マウスを、週に３回、１０ｍｇ／ｋｇ抗体用量で処理した。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本明細書で使用されるとき、ＣＤ４７、インテグリン会合タンパク質（ＩＡＰ）、卵巣癌抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原、及びＭＥＲ６という用語は同義語であり、互換可能に使用することができる。
【００６８】
赤血球（複数可）（ＲＢＣ）及び赤血球（複数可）という用語は同義語であり、本明細書で互換可能に使用される。
【００６９】
凝集という用語は細胞の凝集を指し、赤血球凝集という用語は細胞の特定のサブセット、すなわち赤血球の凝集を指す。したがって、赤血球凝集は、凝集の一種である。
【００７０】
抗体は、免疫グロブリンの構造的及び機能的な特性、特に抗原結合の特性を含むポリペプチド（例えば、四量体または単鎖ポリペプチド）を指す。典型的に、ヒト抗体は、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖を含む。各鎖は、可変領域を含む。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、「抗体」または「抗体分子」という用語は、免疫グロブリン重鎖可変領域からの抗原に特異的に結合するのに十分な配列及び／または免疫グロブリン軽鎖可変領域からの抗原に特異的に結合するのに十分な配列を含む、ポリペプチドまたはポリペプチドの組み合わせを意味する。この用語は、全長抗体及びそのフラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントを含む。典型的には、抗体分子は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む。抗体分子には、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、及びその抗原結合フラグメントが含まれる。
【００７２】
ＣＤＲ移植抗体は、タンパク質またはポリペプチドが抗体のＣＤＲを含み、なおも抗原に結合するように、組換えＤＮＡ技術によって作られた抗体である。ＣＤＲ移植抗体は、構造またはアミノ酸配列について、ＣＤＲの起源である抗体と同一ではない。
【００７３】
特定の実施形態では、抗体分子は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域セグメント、例えば、免疫グロブリン可変ドメインを提供するアミノ酸配列または免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を含む。「抗体」という用語には、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化またはキメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、脱免疫化抗体、及び完全ヒト抗体が含まれる。抗体は、様々な種、例えば、ヒトなどの哺乳動物、非ヒト霊長類（例えば、オランウータン、ヒヒ、またはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラット、及びマウスのいずれかから作られ得るか、またはそれらに由来し得る。抗体は、精製された抗体または組換え抗体であってよい。抗体はまた、少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む改変されたタンパク質または抗体様タンパク質（例えば、融合タンパク質）であってよい。改変されたタンパク質または抗体様タンパク質はまた、二重特異性抗体もしくは三重特異性抗体、または二量体、三量体、もしくは多量体抗体、またはダイアボディ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＣＯＤＶ−Ｉｇ、アフィボディ（登録商標）、またはナノボディ（登録商標）であってよい。
【００７４】
本明細書において使用されるとき、抗体または抗体分子という用語は、無傷のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそれらのフラグメント））、少なくとも２つの無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物活性を示す限りの抗体フラグメントをも含む。このように、「抗体」という用語は、機能的変異体を含む。
【００７５】
抗体または抗体分子は、哺乳動物、例えば、げっ歯類、例えば、マウスもしくはラット、ウマ、ブタ、またはヤギに由来し得る。特定の実施形態では、抗体または抗体分子は、組換え細胞を用いて製造される。特定の実施形態では、抗体または抗体分子は、ヒト定常領域及び／または可変領域ドメインを持つ、例えば、マウス、ラット、ウマ、ブタ、または他の種に由来する、キメラ抗体である。
【００７６】
適切な抗体（機能的変異体を含む）には、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、コンジュゲート抗体（例えば、他のタンパク質、放射性標識、もしくはサイトカインにコンジュゲートまたは融合された抗体）、小モジュラー免疫薬（「ＳＭＩＰ」）、単一鎖抗体、ラクダ抗体、及び抗体フラグメントが含まれるが、これらには限定されない。
【００７７】
特定の実施形態では、抗体分子はヒト化抗体である。ヒト化抗体は、ヒトフレームワーク領域及び非ヒト、例えば、マウスまたはラットの免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲを含む、免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは、しばしば「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、しばしば「アクセプター」と呼ばれるが、実施形態では、供給源もプロセスの制限も示唆されない。典型的に、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖とヒト化重鎖との免疫グロブリンを含む。
【００７８】
抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）と、軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）と、を含み得る。抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域、またはその抗体結合断片を含んでもよい。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパまたはラムダのタイプであってもよい。抗体分子は、グリコシル化されてもよい。
【００７９】
抗体分子のＶＨまたはＶＬの鎖は、重鎖または軽鎖の定常領域の全てまたは一部をさらに含み得、それによって、それぞれ、重鎖または軽鎖の免疫グロブリン鎖を形成することができる。抗体分子は、２つの重免疫グロブリン鎖と２つの軽免疫グロブリン鎖との典型的な四量体であり、２つの重鎖は必要に応じて少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結され、重鎖と軽鎖の各ペアはジスルフィド結合によって連結される。抗体分子はまた、重（または軽）鎖免疫グロブリン可変領域セグメントの１つまたは両方を含むことができる。本明細書で使用されるとき、「免疫グロブリン重（または軽）鎖可変領域セグメント」という用語は、その抗原に結合することができる、全体重（または軽）鎖免疫グロブリン可変領域、またはそのフラグメントを指す。抗原に結合する重鎖または軽鎖セグメントの能力はそれぞれ、軽鎖または重鎖と対になったセグメントで測定される。特定の実施形態では、全長可変領域未満である重鎖または軽鎖セグメントは、適切な鎖と対になったときに、全長の鎖がそれぞれ軽鎖または重鎖と対になるときに観察されるものの少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％の親和性で結合する。
【００８０】
可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに分割され得る。ヒト抗体は、フレームワーク領域ＦＲ１〜ＦＲ４で分離された３つのＶＨ  ＣＤＲ及び３つのＶＬ  ＣＤＲを有する。ＦＲ及びＣＤＲの範囲は正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，  ＦＩＦＴＨ  ＥＤＩＴＩＯＮ，  Ｕ．  Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２；ａｎｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．  ＭＯＬ．  ＢＩＯＬ．１９６：９０１−９１７）。各々のＶＨ及びＶＬは、典型的には、アミノ末端からカルボキシル末端に向けて以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。
【００８１】
抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される、重鎖定常領域を有してもよい。抗体分子は、例えば、カッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有し得る。
【００８２】
抗体の定常領域は、抗体の特性を修飾する（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、及び／または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させる）ために改変、例えば変異させることができる。特定の実施形態では、抗体はエフェクター機能を有し、補体を固定することができる。他の実施形態では、抗体はエフェクター細胞を動員せず、補体を固定しない。他の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているか、または全く有さない。例えば、それは、Ｆｃ受容体への結合をサポートしないアイソタイプまたはサブタイプ、フラグメントまたは他の変異体であり、例えば、それは変異または欠失したＦｃ受容体結合領域を有する。
【００８３】
特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかのさらなる実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は野生型定常領域である。他の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、変異、例えば、ＥＵ付番（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．、前出）に従って、例えば、Ｓ２２８ＰとＬ２３５Ｅのうちの１つまたは両方を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＩｇＧ１定常領域を含む。
【００８４】
本明細書に開示される組成物及び方法は、特定の配列、またはそれらと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を有するポリペプチド及び核酸を包含する。
【００８５】
アミノ酸配列との関連で、本明細書で使用されるとき、「実質的に同一」という用語は、以下のいずれかである十分または最小数のアミノ酸残基を含む第１のアミノ酸配列を指す：ｉ）第１及び第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメイン及び／または共通の機能的活性を有することができるように、第２のアミノ酸配列中のアライメントしたアミノ酸残基と同一である、またはｉｉ）その保存的置換。例えば、共通の構造ドメインを含むアミノ酸配列は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。
【００８６】
ヌクレオチド配列の文脈において、本明細書で使用されるとき、「実質的に同一」という用語は、第１及び第２の核酸配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造的ポリペプチドドメインもしくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように第２の核酸配列中のアライメントされたヌクレオチドに同一である、十分または最小数のヌクレオチドを含む第１の核酸配列を指す。例えば、ヌクレオチド配列は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対して、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。
【００８７】
「機能的変異体」という用語は、天然に存在する配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、天然に存在する配列の１つ以上の活性を有するポリペプチドを指す。
【００８８】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要のあるギャップの数と各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
【００８９】
配列の比較と２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して実行できる。いくつかの実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．  ＭＯＬ．  ＢＩＯＬ．  ４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかを使用し、１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップの重みで、１、２、３、４、５、または６の長さの重みで、決定される。さらに他の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用して、４０、５０、６０、７０、または８０のギャップの重みで、１、２、３、４、５、または６の長さの重みで決定される。特に好ましいパラメーターのセット（及び特に指定されていない限り使用するパラメーター）は、１２のギャップペナルティ、４のギャップ拡張ペナルティ、及び５のフレームシフトギャップペナルティでのＢｌｏｓｕｍ  ６２スコアリングマトリックスである。
【００９０】
２つのアミノ酸またはヌクレオチドの配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重量残基テーブル、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．  Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．  Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定できる。
【００９１】
本明細書で開示された分子は、その機能に実質的な影響を及ぼさない、さらなる保存的置換または非必須アミノ酸置換を有し得る。
【００９２】
「抗体」という用語はまた、「抗原結合フラグメント」及び「抗体フラグメント」など、例えば、目的の標的抗原に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の１つ以上のフラグメントを含む。全長抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれる抗原結合フラグメントの例には、以下が含まれる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）またはＦ（ａｂ’）２フラグメント、すなわち、ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ポリペプチドリンカーを介して一緒に連結されて単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を生成する抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるｓｃＦｖ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ  ３４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉｉ）機能を保持する単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）。
【００９３】
抗体フラグメントまたは抗原結合フラグメントには、例えば、単鎖抗体、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントが含まれる。ｓｃＦｖ断片は、ｓｃＦｖが由来する抗体の重鎖と軽鎖の可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。さらに、イントラボディ、ミニボディ、トリアボディ、及びジアボディも抗体の定義に含まれており、本明細書に記載の方法での使用に適合している。例えば、Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８（１）：４７−６６；Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１（１）：１７７−１８９；Ｐｏｌｊａｋ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２（１２）：１１２１−１１２３を参照されたい。抗原結合フラグメントはまた、重鎖ポリペプチドの可変領域及び軽鎖ポリペプチドの可変領域を含み得る。したがって、抗原結合フラグメントは、抗体の軽鎖及び重鎖ポリペプチドのＣＤＲを含むことができる。
【００９４】
「抗体フラグメント」という用語はまた、例えば、ラクダ化単一ドメイン抗体などの単一ドメイン抗体を含むことができる。例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  ２６：２３０−２３５；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９４／０４６７８及びＷＯ９４／２５５９１；ならびに、米国特許第６，００５，０７９号を参照されたい。「抗体フラグメント」という用語はまた、単一ドメイン抗体が形成されるような修飾を有する２つのＶＨドメインを含む単一ドメイン抗体を含む。
【００９５】
「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に区別することができる様々な広いクラスのポリペプチドを包む。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として分類され、その中にいくつかのサブクラス（例えば、γ１〜γ４）がある。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などは、十分に特性評価されており、機能的な特殊化を付与することが知られている。これらのクラス及びアイソタイプのそれぞれの修飾型は、本開示を考慮すると当業者には容易に識別可能であり、したがって本開示の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスは、本開示の範囲内にある。軽鎖はカッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各々の重鎖クラスはカッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合することができる。
【００９６】
免疫グロブリン可変領域セグメントは、参照またはコンセンサス配列と異なっていてもよい。本明細書中で使用されるとき、「異なる」ということは、参照配列またはコンセンサス配列中の残基が異なる残基で置き換えられているか、または存在しないか、または挿入された残基のいずれかで置き換えられていることを意味する。
【００９７】
重及び軽の免疫グロブリン鎖はジスルフィド結合によって接続することができる。重鎖定常領域は、典型的には、３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。軽鎖定常領域は、典型的には、ＣＬドメインを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主の組織または因子に対する抗体の結合を媒介する。
【００９８】
「免疫グロブリンドメイン」は、免疫グロブリン分子の可変ドメインまたは定常ドメインからのドメインを指す。免疫グロブリンドメインは、典型的には、約７つのベータ鎖から形成される２つのベータシート、及び保存されたジスルフィド結合を含む（例えば、Ａ．  Ｆ．  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ａ．  Ｎ．  Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）ＡＮＮ．  ＲＥＶ．  ＩＭＭＵＮＯＬ．  ６：３８１−４０５を参照されたい）。
【００９９】
本明細書で使用されるとき、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全てまたは部分を含んでもよい。例えば、配列は、１、２、もしくはそれ以上のＮ末端もしくはＣ末端のアミノ酸、内部アミノ酸を省略してもよく、１つ以上の挿入もしくは追加の末端アミノ酸を含んでもよく、または他の改変を含んでもよい。一実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合して、標的結合構造（または「抗原結合部位」）、例えば、標的抗原と相互作用する構造を形成することができる。
【０１００】
抗体定常領域を改変する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１コンポーネントなどのエフェクターリガンドに対する改変された親和性などの修飾された機能を有する抗体は、抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることによって生成できる（例えば、ＥＰ３８８，１５１  Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号、及び米国特許第５，６４８，２６０号）。改変の同様のタイプは、マウスに適用した場合について説明することができ、または他の種の免疫グロブリンは、これらの機能を低減または排除する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、開示された抗体は融合タンパク質である。融合タンパク質は、融合タンパク質が融合タンパク質をコードする核酸から発現するように組換え的に構築することができる。融合タンパク質は、１つ以上のＣＤ４７結合セグメント、及びＣＤ４７結合セグメント（複数可）に相同である１つの以上のセグメントを含むことができる。異種配列は、例えば、抗原性タグ（例えば、ＦＬＡＧ、ポリヒスチジン、ヘマグルチニン（「ＨＡ」）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）、またはマルトース結合タンパク質（「ＭＢＰ」））などの任意の適切な配列であり得る。異種配列はまた、診断用または検出可能なマーカーとして有用なタンパク質、例えば、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（「ＧＦＰ」）、またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（「ＣＡＴ」）であり得る。いくつかの実施形態では、異種配列は、細胞、組織、または目的の微小環境に対するＣＤ４７結合セグメントを標的とする標的化部分であり得る。組換えＤＮＡ技術によるものなどの、このような融合タンパク質を、構築する方法は、当該技術分野で周知である。
【０１０２】
本明細書で使用されるとき、名詞の前の単語「ａ」または「複数の」は、特定の名詞の１つ以上を表す。文脈で特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、「対象」及び「患者」という用語は、互換可能に使用される。患者または対象は、ヒト患者またはヒト対象であり得る。
【０１０４】
「例えば」及び「のような」という用語ならびに文法的等価物に関して、「非限定的に」という語句は、明示的に別段の記載がない限り従うと理解される。本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、実験誤差による変動を説明することを意味する。本明細書で報告される全ての測定値は、特に明記されていない限り、用語が明示的に使用されているかどうかに関係なく、「約」という用語によって修飾されていると理解される。
【０１０５】
別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。方法及び材料が本発明における使用のために本明細書に記載されている；当該技術分野で既知の他の適切な方法及び材料を使用することもできる。物質、方法、及び例は、例示にすぎず、限定を意図しない。
【０１０６】
本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優位となるであろう。
【０１０７】
一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質及びオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法及びその技術は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションなど）には標準的な技術が使用される。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様に従って、当該技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載の技術及び手順は、一般に、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書全体にわたって引用及び議論される様々な一般的でより具体的な参考文献に記載されているように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ（２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．）を参照されたい。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、及び医薬化学及び薬学化学に関連して使用される命名法、ならびに実験室手順及び技術は、当該技術分野で周知であり一般的に使用されるものである。標準的な手法は、化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化、送達、及び患者の治療に使用される。
【０１０８】
ＣＤ４７
ＣＤ４７は、インテグリン会合タンパク質（ＩＡＰ）、卵巣癌抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原、及びＭＥＲ６とも呼ばれ、免疫グロブリンスーパーファミリーに属するマルチスパニング膜貫通型受容体である。ＣＤ４７の発現及び／または活性は、多くの疾患及び障害、例えば、がんに関与している。ＣＤ４７はマクロファージ上のＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）と相互作用し、それにより貪食を阻害する。これは、腫瘍免疫回避の新たに発見された機構であり、ＣＤ４７を治療標的とすることは、多くのがんにおいて広範な用途を有する。
【０１０９】
ＣＤ４７の発現は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、神経膠腫、卵巣癌、神経膠芽腫などを含む、多くの種々の悪性腫瘍における悪化した臨床転帰と相関している。さらに、ＣＤ４７は、白血病と固形腫瘍の両方におけるがん幹細胞のマーカーとして同定されている（Ｊａｉｓｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９  Ｃｅｌｌ，１３８（２）：２７１−８５；Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｕｒｏｌ，２０（５）：３９３−  ７；Ｍａｊｅｔｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，３０（９）：１００９−１９）。
【０１１０】
ＣＤ４７ブロッキング抗体は、複数のマウス腫瘍モデルで抗腫瘍活性を実証した。さらに、これらの抗体は、腫瘍モデルにおけるハーセプチン（登録商標）及びリツキサン（登録商標）を含む他の治療用抗体と相乗作用することが示されている。
【０１１１】
ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることは、マクロファージによるＣＤ４７発現細胞の貪食を増強し得る（Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２４（２）：２２５−３２で総説される）。ＣＤ４７を欠くマウスは、放射線療法に著しく耐性があり、放射線療法と組み合わせてＣＤ４７を標的とする役割を示唆している（Ｍａｘｈｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９  Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ，  １（３）：３ｒａ７）。
【０１１２】
しかしながら、ＣＤ４７に対する先行技術の既存の抗体は、ヒトＲＢＣの赤血球凝集及び貧血を引き起こすことが報告されている。赤血球凝集はホモタイプの相互作用の例であり、２つのＣＤ４７発現細胞は、２価のＣＤ４７結合実体で処理されると凝集または凝集する。例えば、完全なＩｇＧまたはＦ（ａｂ’）２としてのＣＤ４７抗体、ＭＡＢＬは、赤血球の重大な赤血球凝集を引き起こすことが報告されており、ＭＡＢＬがｓｃＦｖまたは２価ｓｃＦｖに改変されたときにのみ、この効果が軽減された（例えば、Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｙ，  Ａｚｕｍａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ  ２００７；１７：  １１８９−９４；Ｋｉｋｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２００４；３１５：９１２−８を参照されたい）。ＣＣ２Ｃ６、Ｂ６Ｈ１２、及びＢＲＣ１２６を含むＣＤ４７に対する他の既知の抗体はまた、ＲＢＣの重大な赤血球凝集を引き起こす。
【０１１３】
したがって、ＲＢＣの凝集及び貧血は、既存の完全ＩｇＧ抗体及び／またはＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質によりＣＤ４７を治療標的とすることの主要な制限を表す。
【０１１４】
本開示の抗ＣＤ４７抗体
本開示は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、二重特異性抗体、コンジュゲート抗体、小モジュラー免疫薬、単鎖抗体、カメロイド抗体、ＣＤＲ移植抗体、及び抗ＣＤ４７抗体の機能的変異体（例えば、融合タンパク質など）、ならびにそれらのフラグメント及び誘導体を含む、抗ＣＤ４７抗体を提供する。これらの抗体は、ＣＤ４７タンパク質、特にヒトＣＤ４７を認識して結合する。これらの抗体は、ＣＤ４７発現、活性、及び／またはシグナル伝達を調節、例えば、阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害することができ、これらの抗体は、重大なレベルの、赤血球の赤血球凝集を含む細胞の凝集（細胞凝集とも呼ばれる）を引き起こさない。これらの抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）（例えば、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰα）間の相互作用を調節、例えば、阻害、ブロック、拮抗、中和、またはさもなくば、妨害することができる。これらの抗体は、その断片、機能的変異体、及び誘導体を含み、「本開示の抗ＣＤ４７抗体」、「開示された抗ＣＤ４７抗体」、「開示された抗体」、「本開示のＣＤ４７抗体」などと総称され得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、開示された抗体は、全長ＩｇＧ抗体を含む。いくつかの実施形態では、開示された抗体は、二価または多価の実体を含む。
【０１１６】
開示された抗ＣＤ４７抗体は、ヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こす、従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体（例えば、Ｋｉｋｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２００４；３１５：９１２−８を参照されたい）と比べて顕著に改善されている。従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体は、例えば、Ｂ６Ｈ１２、ＣＣ２Ｃ６、及びＢＲＣ１２６を含む（例えば、米国特許第９，０４５，５４１号、Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｙ，  Ａｚｕｍａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＯＮＣＯＬ．  ＲＥＰ．  １７：  １１８９−９４；Ｋｉｋｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＢＩＯＣＨＥＭ．  ＢＩＯＰＨＹＳ．  ＲＥＳ．  ＣＯＭＭＵＮ．  ３１５：９１２−８）。従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体は、ＳＩＲＰαをブロックするが、ＲＢＣの重大な赤血球凝集を引き起こすものである。開示された全長ＩｇＧ抗ＣＤ４７抗体は、重大なレベルで細胞を凝集させない。
【０１１７】
抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２は市販されている。これは、例えば、ＡＢＳＣＡＭ（ａｂｓｃａｍ．ｃｏｍ／ｃｄ４７）及びＢｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ．ｃｏｍ）によって販売されている。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、重大なレベルの細胞の凝集は、先行技術の既存の抗ＣＤ４７抗体の存在下での凝集のレベルを指す。他の実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下での凝集のレベルが、Ｂ６Ｈ１２、ＣＣ２Ｃ６、ＢＲＣ１２６などの従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体の存在下での凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％減少するとき、重大なレベルの凝集を引き起こさない。（例えば、米国特許第９，０４５，５４１号、Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｙ，  Ａｚｕｍａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＯＮＣＯＬ．  ＲＥＰ．１７：  １１８９−９４；Ｋｉｋｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＢＩＯＣＨＥＭ．  ＢＩＯＰＨＹＳ．  ＲＥＳ．  ＣＯＭＭＵＮ．３１５：９１２−８）。さらなる実施形態において、開示された抗ＣＤ４７抗体は、約０μｇ／ｍｌ超〜約１００μｇ／ｍｌ超、または約０μｇ／ｍｌ超〜約２００μｇ／ｍｌの抗体濃度で、例えば、０．３μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、２．４μｇ／ｍｌ、７μｇ／ｍｌ、２２μｇ／ｍｌ、６７μｇ／ｍｌ、及び２００μｇ／ｍｌなどの抗体濃度で、重大なレベルの細胞の凝集を引き起こさない。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、開示された抗体は、赤血球の重大な凝集及び貧血を引き起こさない。
【０１２０】
赤血球凝集はホモタイプの相互作用の例であり、２つのＣＤ４７発現細胞は、２価のＣＤ４７結合実体で処理されると凝集または凝集する。開示された抗ＣＤ４７抗体は、例えば、Ｒａｊｉ細胞及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞などのＣＤ４７陽性細胞株の凝集を促進しない方法でＣＤ４７に結合する。重大な赤血球凝集の欠如は、ＣＤ４７を治療標的とすることの有効性を高める。
【０１２１】
特定の実施形態では、開示された抗体は、（顕著に）マクロファージによるＲＢＣの貪食を増強しない。
【０１２２】
開示された抗ＣＤ４７抗体は、ヒトＣＤ４７及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ４７に結合すること、重大なレベルの血球凝集を引き起こすことなく、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を強力にブロックすること、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの強力な抗腫瘍活性などの多数の望ましい特性を示す。
【０１２３】
開示された抗体は、従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体と比較して、腫瘍モデルにおいて腫瘍を減少させる点でも顕著に強力である。特定の実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下でのマクロファージの腫瘍細胞を貪食する能力は、Ｂ６Ｈ１２、ＣＣ２Ｃ６、ＢＲＣ１２６などの従来技術の既存の抗ＣＤ４７抗体の存在下でのマクロファージの腫瘍細胞を貪食する能力と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％増加する（例えば、米国特許第９，０４５，５４１号、Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｙ，  Ａｚｕｍａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＯＮＣＯＬ．  ＲＥＰ．１７：  １１８９−９４；Ｋｉｋｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｕｎｏ  Ｓ，  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＢＩＯＣＨＥＭ．  ＢＩＯＰＨＹＳ．  ＲＥＳ．  ＣＯＭＭＵＮ．３１５：９１２−８）。いくつかの実施形態では、開示された抗体は強力な抗腫瘍剤である。いくつかの実施形態では、開示された抗体は、腫瘍を減少させる。いくつかの実施形態では、開示された抗体は、腫瘍細胞を貪食するマクロファージの能力を増大させる。
【０１２４】
特定の実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体の非存在下のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のレベルと比較するとき、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％をブロックする。
【０１２５】
過度の実験をすることなく、凝集のレベル、例えば、ＲＢＣの赤血球凝集のレベルを定量化することが可能である。例えば、当業者は、以下の実施例に記載されるように、赤血球凝集のレベルが、開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下で赤血球凝集アッセイを行った後、ＲＢＣドットの面積を測定することにより確認されることを認識するであろう。特定の実施形態では、本明細書で開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下でのＲＢＣドットの面積は、抗ＣＤ４７抗体の非存在下での、すなわち、ゼロの血球凝集の存在下でのＲＢＣドットの面積と比較される。このように、赤血球凝集は、ベースライン対照に対して定量化される。より大きいＲＢＣドット面積は、赤血球凝集のより高いレベルに対応する。大きいＲＢＣ赤色ドット面積はヘイズとして現れ得る。代替的に、ＲＢＣドットのデンシトメトリーも赤血球凝集を定量化するために利用することができる。比較はまた、開示された抗体と、Ｂ６Ｈ１２などの従来技術の抗体との間でも実施できる。
【０１２６】
特定の実施形態では、重大な赤血球凝集未満では、本明細書で開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下でのヒトＲＢＣの血球凝集であり、抗ＣＤ４７抗体非存在下とほぼ同一である。他の実施形態では、重大な赤血球凝集未満では、本明細書で開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下でのヒトＲＢＣの血球凝集であり、抗ＣＤ４７抗体非存在下の約５％、１０％、１５％、２０％、または２５％である。
【０１２７】
特定の実施形態では、配列番号４９、５１、５３、５５、５７、５９、６２〜６５、８６〜８７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；配列番号１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５８〜１６１、１８２〜１８３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；及び、配列番号２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５４〜２５７、２７８〜２７９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアントを有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；配列番号５０、５２、５４、５６、５８、６０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；配列番号１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１７２〜１７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；及び、配列番号２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２６８〜２７１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、または、約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアントを有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む抗ＣＤ４７抗体が提供される。特定の実施形態では、配列番号４９、５１、５３、５５、５７、５９、６２〜６５、８６〜８７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５８〜１６１、１８２〜１８３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及び、配列番号２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５４〜２５７、２７８〜２７９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；配列番号５０、５２、５４、５６、５８、６０、７６〜７９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１７２〜１７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；及び、配列番号２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２６８〜２７１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、を含む抗ＣＤ４７抗体が提供される。
【０１２８】
特定の実施形態では、前述の単離された抗ＣＤ４７抗体のいずれか１つによると、上記抗体は、以下のうちのいずれか１つを含む：
（１）ＶＨが、それぞれ配列番号４９、１４５、及び２４１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５０、１４６、及び２４２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（２）ＶＨが、それぞれ配列番号５１、１４７、及び２４３のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５２、１４８、及び２４４のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（３）ＶＨが、それぞれ配列番号５３、１４９、及び２４５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５４、１５０、及び２４６のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（４）ＶＨが、それぞれ配列番号５５、１５１、及び２４７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（５）ＶＨが、それぞれ配列番号５７、１５３、及び２４９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５８、１５４、及び２５０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（６）ＶＨが、それぞれ配列番号５９、１５５、及び２５１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号６０、１５６、及び２５２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（７）ＶＨが、それぞれ配列番号６２、１５８、及び２５４のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（８）ＶＨが、それぞれ配列番号６３、１５９、及び２５５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７７、１７３、及び２６９のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（９）ＶＨが、それぞれ配列番号６４、１６０、及び２５６のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７８、１７４、及び２７０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（１０）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７９、１７５、及び２７１のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（１１）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；
（１２）ＶＨが、それぞれ配列番号８６、１８２、及び２７８のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント；ならびに
（１３）ＶＨが、それぞれ配列番号８７、１８３、及び２７９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；または、ＣＤＲ領域内に約３（１、２、もしくは３のいずれかなど）までのアミノ酸置換を含むそのバリアント。
【０１２９】
特定の実施形態では、前述の単離された抗ＣＤ４７抗体のいずれか１つによると、上記抗体は、以下のうちのいずれか１つを含む：
（１）ＶＨが、それぞれ配列番号４９、１４５、及び２４１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５０、１４６、及び２４２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（２）ＶＨが、それぞれ配列番号５１、１４７、及び２４３のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５２、１４８、及び２４４のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（３）ＶＨが、それぞれ配列番号５３、１４９、及び２４５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５４、１５０、及び２４６のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（４）ＶＨが、それぞれ配列番号５５、１５１、及び２４７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（５）ＶＨが、それぞれ配列番号５７、１５３、及び２４９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５８、１５４、及び２５０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（６）ＶＨが、それぞれ配列番号５９、１５５、及び２５１のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号６０、１５６、及び２５２のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（７）ＶＨが、それぞれ配列番号６２、１５８、及び２５４のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（８）ＶＨが、それぞれ配列番号６３、１５９、及び２５５のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７７、１７３、及び２６９のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（９）ＶＨが、それぞれ配列番号６４、１６０、及び２５６のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７８、１７４、及び２７０のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（１０）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７９、１７５、及び２７１のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（１１）ＶＨが、それぞれ配列番号６５、１６１、及び２５７のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号７６、１７２、及び２６８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む；
（１２）ＶＨが、それぞれ配列番号８６、１８２、及び２７８のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、
（１３）ＶＨが、それぞれ配列番号８７、１８３、及び２７９のアミノ酸配列を有する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、ＶＬが、それぞれ配列番号５６、１５２、及び２４８のアミノ酸配列を有する、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【０１３０】
特定の実施形態では、本開示は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２から選択される可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６から選択される可変軽鎖と、を含む抗ＣＤ４７抗体を提供する。特定の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のうちの少なくとも１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちの少なくとも１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変軽鎖と、を含む。
【０１３１】
本明細書で提供される抗ＣＤ４７抗体は、例えば、ＣＤ４７の発現、活性、及び／またはシグナル伝達を阻害する（例えば、ＣＤ４７の細胞表面発現を阻害する）ことによって、またはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を妨害することによって阻害活性を示す。本明細書で提供される抗体は、ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７と結合、またはさもなくば相互作用する際に、ＣＤ４７発現を完全にまたは部分的に低減、またはさもなくば調節する。ＣＤ４７の生物学的機能の低下または調節は、抗体とヒトＣＤ４７ポリペプチド及び／またはペプチドとの間の相互作用の際に、完全、有意、または部分的である。
【０１３２】
抗体は、例えば、本明細書に記載の抗体との相互作用、例えば結合の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルが少なくとも９５％、例えば９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％低下すると、ＣＤ４７の発現または活性を完全に阻害すると考えられる。
【０１３３】
抗ＣＤ４７抗体は、例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体との結合の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、ＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルが少なくとも５０％、例えば５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％低下すると、ＣＤ４７の発現または活性を顕著に阻害すると考えられる。抗体は、例えば、本明細書に記載の抗体との相互作用、例えば結合の非存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルと比較するとき、抗体の存在下でのＣＤ４７の発現または活性のレベルが９５％未満、例えば１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％低下すると、ＣＤ４７の発現または活性を部分的に阻害すると考えられる。
【０１３４】
例えば、対象におけるがんを治療または予防するのに十分な抗体の量は、ＣＤ４７シグナル伝達を減少させるのに十分な量である。例えば、対象におけるがんを治療または予防するために十分な抗体の量は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達軸でのＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用によって生成されるマクロファージの貪食抑制シグナルを低減するのに十分な量であり、すなわち、開示された抗体は、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介性貪食を促進する。
【０１３５】
本明細書で使用されるとき、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達軸におけるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用によって生成されるマクロファージの貪食抑制シグナルに関して、「低減された」という用語は、開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下での低減されたＣＤ４７シグナル伝達を指す。開示された抗ＣＤ４７抗体の存在下におけるＣＤ４７シグナル伝達のレベルが、ＣＤ４７シグナル伝達の対照レベル（すなわち、抗体の非存在下におけるＣＤ４７シグナル伝達のレベル）よりも、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％以上であると、ＣＤ４７媒介シグナル伝達は低減される。ＣＤ４７シグナル伝達のレベルは、非限定的な例として、下流遺伝子活性化の測定、及び／またはＣＤ４７活性化に応答するルシフェラーゼレポーターアッセイなどの様々な標準技術のいずれかを使用して測定される。当業者は、ＣＤ４７シグナル伝達のレベルが、例えば、市販のキットを含む様々なアッセイを使用して測定できることを理解するであろう。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体またはその免疫学的に活性なフラグメントは、ＩｇＧアイソタイプである。いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプである。
【０１３７】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０８）
【０１３８】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するために、アミノ酸Ａｓｎ２９７（箱で囲まれる、Ｋａｂａｔ付番）において、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）のように修飾されている。いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を改変するために、アミノ酸Ｌｅｕ２３５（Ｋａｂａｔ付番）において、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）のように修飾されている。いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を改変するために、アミノ酸Ｌｅｕ２３４（Ｋａｂａｔ付番）において、例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）のように修飾されている。いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、例えばＬｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａのように、アミノ酸２３４と２３５の両方で改変されている（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９１  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ２アイソタイプである。
【０１４０】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０９）
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するために、アミノ酸Ａｓｎ２９７（箱で囲まれる、Ｋａｂａｔ付番）において、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）のように修飾されている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は、半減期を延長するために、アミノ酸４３５において、例えば、Ａｒｇ４３５Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ）のように修飾されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９１  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプである。
【０１４３】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４１０）
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、鎖交換を防止または低減するために、ヒンジ領域内、例えば、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）で修飾されている。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を改変するために、アミノ酸２３５において、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）のように修飾されている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ内及びアミノ酸２３５において、例えば、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）のように修飾され、以下のアミノ酸配列を有する：
【０１４５】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４１１）
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、ＦｃＲｎ結合を増強するように修飾されている。ＦｃＲｎへの結合を増強するＦｃ変異の例は、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ（それぞれＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ）（Ｋａｂａｔ付番、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．２００６／．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  Ｖｏｌ  ２８１（３３）２３５１４−２３５２４）、またはＭｅｔ４２８Ｌｅｕ及びＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（Ｚａｌｅｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，  Ｖｏｌ  ２８（２）１５７−１５９）である（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９９１  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために修飾され、例えば、アミノ酸修飾は、Ｎａｔｓｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６８（１０）：３８６３−７２；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６６（４）：２５７１−５；Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０  ｍＡｂｓ，２（２）：１８１−１８９；Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６  ＰＮＡＳ，１０３（１１）：４００５−４０１０，  Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１  ＪＢＣ，２７６（９）：６５９１−６６０４；Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６７（１８）：８８８２−８８９０；Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８  Ａｄｖａｎ．  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．，  ４８：１５２−１６４；Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８：３４６１−３４６８に記載され；Ｋａｎｅｋｏ  ａｎｄ  Ｎｉｗａ，  ２０１１  Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，２５（１）：１−１１に総説されている。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヘテロ二量体化を誘導するように修飾されている。例えば、ＣＨ３ドメイン内のＴｈｒ３６６においてアミノ酸修飾があり、これをよりかさばるアミノ酸、例えば、Ｔｒｙで置き換えると（Ｔ３６６Ｗ）、位置Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、及びＴｙｒ４０７において、よりかさばらないアミノ酸、例えばそれぞれＳｅｒ、Ａｌａ、及びＶａｌ（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）へのアミノ酸修飾を有する第２のＣＨ３ドメインと優先的に対形成することができる。ＣＨ３修飾によるヘテロ二量化は、ジスルフィド結合の導入により、例えば、反対のＣＨ３ドメイン上のＳｅｒ３５４をＣｙｓ（Ｓ３５４Ｃ）に、及びＹ３４９をＣｙｓ（Ｙ３４９Ｃ）に変更することで、さらに安定化できる（Ｃａｒｔｅｒ，２００１  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４８：７−１５において総説される）。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２からなる群から選択される可変重（ＶＨ）鎖領域を含む。開示された抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４−３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６からの配列からなる群から選択される可変軽（ＶＬ）鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２からの配列からなる群からＶＨ鎖領域と、必要に応じて、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４−３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６からの配列からなる群から選択されるＶＬ鎖領域と、を含む。開示された抗体はまた、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のうちの少なくとも１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４−３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちの少なくとも１つに示される配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である可変軽鎖と、を有する抗体を含む。
【０１４９】
他の実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のうちのいずれか１つに提供されるＶＨ領域と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４−３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちのいずれか１つに提供されるＶＬ領域との対を含む。
【０１５０】
他の実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２のいずれか１つに提供されるＶＨ領域と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４−３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６のうちのいずれか１つに提供されるＶＬ領域との対を含む。
【０１５１】
特定の実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、頭部から側部への方向でＣＤ４７に結合して重鎖をＣＤ４７発現細胞の膜の近くに配置し、一方、軽鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位をふさぐ。他の実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、頭部から側部への方向でＣＤ４７に結合して軽鎖をＣＤ４７発現細胞の膜の近くに配置し、一方、重鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位をふさぐ。
【０１５２】
同様に提供されるのは、ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用するのを防ぐために本明細書に記載のＣＤ４７抗体と競合する、単離された抗体またはその免疫学的に活性なフラグメントである。
【０１５３】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は、ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻害し、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα媒介シグナル伝達を減少させ、腫瘍細胞の貪食を促進し、腫瘍の増殖及び／または遊走を阻害する能力を有する。阻害は、実施例において、例えば、本明細書に記載の細胞アッセイを用いて決定される。
【０１５４】
本明細書に記載の例示的な抗体には、マウスＣＤ４７抗体、９８Ｅ２Ｅ１２、１０７Ｆ１１Ｆ１０、及び１０８Ｃ１０Ａ６のキメラバージョン、ならびに１０８Ｃ１０Ａ６のヒト化バリアントが含まれる。
【０１５５】
本開示の例示的なモノクローナル抗体には、例えば、以下の配列に示される可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有するマウス抗体が含まれる。
【０１５６】
配列番号３４９−５５Ｆ２Ｃ４−ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＷＭＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＱＦＫＤＫＡＴＬＡＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０１５７】
配列番号３５０−５５Ｆ２Ｃ４−ＶＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＹＶＳＶＧＥＲＶＴＬＩＣＲＡＳＥＩＶＧＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＲＳＡＴＤＦＳＬＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＤＹＬＣＧＱＳＹＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１５８】
配列番号３５１−９８Ｅ２Ｅ７／９８Ｅ２Ｅ１２−ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＨＷＭＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＱＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＦＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０１５９】
配列番号３５２−９８Ｅ２Ｅ７／９８Ｅ２Ｅ１２−ＶＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＶＳＶＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＤＩＶＧＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＲＳＡＴＤＦＳＬＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＤＹＬＣＧＱＳＹＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１６０】
配列番号３５３−９８Ｇ５Ｆ６／９８Ｇ５Ｆ１１−ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＷＭＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＱＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＦＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０１６１】
配列番号３５４−９８Ｇ５Ｆ６／９８Ｇ５Ｆ１１−ＶＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＶＳＶＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＥＩＶＧＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＦＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＲＳＡＴＤＦＳＬＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＤＹＬＣＧＱＳＹＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１６２】
配列番号３５５−１０７Ｆ１１Ｂ１１／１０７Ｆ１１Ｃ４／１０７Ｆ１１Ｆ１０−ＶＨ
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＦＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＭＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＡＮＧＫＴＫＹＧＰＲＦＱＤＫＡＴＶＴＡＤＴＳＳＮＴＡＮＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＤＧＩＧＹＹＶＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
【０１６３】
配列番号３５６−１０７Ｆ１１Ｂ１１／１０７Ｆ１１Ｃ４／１０７Ｆ１１Ｆ１０−ＶＬ
ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１６４】
配列番号３５７−１０８Ｃ１０Ａ６／１０８Ｃ１０Ｆ５−ＶＨ
ＱＭＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＡＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＰＴＳＥＤＳＡＬＹＦＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０１６５】
配列番号３５８−１０８Ｃ１０Ａ６／１０８Ｃ１０Ｆ５−ＶＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＲＳＭＳＭＳＶＧＥＲＶＴＬＳＣＫＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＤＹＨＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１６６】
配列番号３５９−１１２Ｅ５Ｄ９／１１２Ｅ５Ｆ２／１１２Ｅ５Ｈ７−ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＮＷＭＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＱＦＲＤＫＡＴＬＴＶＤＫＴＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＬＧＴＴＬＴＶＳＳ
【０１６７】
配列番号３６０−１１２Ｅ５Ｄ９／１１２Ｅ５Ｆ２／１１２Ｅ５Ｈ７−ＶＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＶＳＶＧＥＲＶＴＭＮＣＲＡＳＥＩＶＧＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＦＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＲＳＧＴＤＦＳＬＮＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＤＹＬＣＧＱＳＹＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１６８】
例示的な開示された抗ＣＤ４７モノクローナル抗体には、例えば、以下の配列に示される可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有するキメラ抗体が含まれる。
【０１６９】
配列番号３９７−１０８Ｃ１０Ａ６＿ＶＨ−ｈｕＩｇＧ１ＣＨ
ＱＭＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＡＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＰＴＳＥＤＳＡＬＹＦＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１７０】
配列番号３９８−１０８Ｃ１０Ａ６＿ＶＬ−ｈＩｇＫＣＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＲＳＭＳＭＳＶＧＥＲＶＴＬＳＣＫＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＤＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＤＹＨＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１７１】
配列番号４０４−９８Ｅ２Ｅ１２＿ＶＨ−ｈｕＩｇＧ１ＣＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＱＬＶＲＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＨＷＭＨＷＭＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＱＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＦＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１７２】
配列番号４０５−９８Ｅ２Ｅ１２＿ＶＬ−ｈＩｇＫＣＬ
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＶＳＶＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＤＩＶＧＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＲＳＡＴＤＦＳＬＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＤＹＬＣＧＱＳＹＤＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１７３】
配列番号４０６−１０７Ｆ１１Ｆ１０−ＶＨ−ｈｕＩｇＧ１ＣＨ
ＥＶＱＬＱＱＳＧＡＥＦＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＴＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＭＨＷＶＫＱＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＡＮＧＫＴＫＹＧＰＲＦＱＤＫＡＴＶＴＡＤＴＳＳＮＴＡＮＬＱＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＤＧＩＧＹＹＶＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１７４】
配列番号４０７−１０７Ｆ１１Ｆ１０−ＶＬ−ｈＩｇＫＣＬ
ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１７５】
例示的な開示された抗ＣＤ４７抗体には、例えば、以下の配列に示される可変重鎖領域（ＶＨ）及び／または可変軽鎖領域（ＶＬ）を有するヒト化抗体が含まれる。
【０１７６】
配列番号３６６−１０８ＶＨ１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１７７】
配列番号３６７−１０８ＶＨ２
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＭＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１７８】
配列番号３６８−１０８ＶＨ３
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＭＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１７９】
配列番号３６９−１０８Ｖｈａ
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＭＫＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１８０】
配列番号３７３−１０８ＶＨ４．Ｍ４
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＡＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１８１】
配列番号３７７−１０８ＶＬ１．Ｍ１
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０１８２】
配列番号３７８−１０８ＶＬ２．Ｍ１
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＨＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０１８３】
配列番号３７９−１０８ＶＬ３．Ｍ１
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＥＰＥＤＦＡＶＹＨＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１８４】
配列番号３９９−１０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈｕＩｇＧ１
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＡＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１８５】
配列番号４００−１０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ２
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＡＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１８６】
配列番号４０１−１０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ４ＰＥ
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＡＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
【０１８７】
配列番号４０３−１０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ４Ｐ
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＨＨＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＡＳＤＳＥＴＲＬＳＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＲＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
【０１８８】
配列番号４０２−１０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＮＶＧＴＹＩＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＧＥＳＹＧＨＬＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１８９】
配列番号３８１−１０７ＶＨ１
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＤＰＡＮＧＫＴＫＹＧＰＲＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＩＧＹＹＶＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１９０】
配列番号３８２−１０７ＶＨ２
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＡＮＧＫＴＫＹＧＰＲＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＤＧＩＧＹＹＶＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１９１】
配列番号３８３−１０７ＶＨ３
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＦＮＩＥＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＡＮＧＫＴＫＹＧＰＲＦＱＤＲＡＴＶＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＤＧＩＧＹＹＶＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【０１９２】
配列番号３８５−１０７ＶＬ１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０１９３】
配列番号３８６−１０７ＶＬ１−Ｍ１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
【０１９４】
配列番号３８７−１０７ＶＬ２．Ｍ１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＩＴＩＴＣＲＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＮＬＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＨＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
【０１９５】
当該技術分野で既知の任意の適切な手順が、ＣＤ４７に対する、またはその誘導体、フラグメント、アナログホモログ、もしくはオルソログに対するモノクローナル抗体を作製するために使用され得る（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ，  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ｄ，  １９８８，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹを参照されたい）。完全ヒト抗体は、ＣＤＲを含む、軽鎖と重鎖の両方の配列全体が、ヒト遺伝子から生じた抗体分子である。このような抗体は、本明細書では「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載の手順を用いて調製される。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２）；及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．，  ｐｐ．７７−９６）を使用して調製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を使用することができ、ヒトハイブリドーマ（Ｃｏｔｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０）を使用することによって、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトＢ細胞をエプスタインバーウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５  Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．，  ｐｐ．７７−９６）、産生することができる。
【０１９６】
ヒトＣＤ４７のＤＮＡ配列は当該技術分野で既知である。ヒトＣＤ４７のＤＮＡ配列は、配列番号４１２として提供される。
【０１９７】
抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィーなど、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する周知の技術によって精製され得る。続いて、または代替的に、求められる免疫グロブリンの標的である特異的抗原、またはそのエピトープは、免疫親和性クロマトグラフィーによって免疫特異的抗体を精製するためにカラムに固定化され得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎによって議論されている（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，  Ｉｎｃ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ，  Ｖｏｌ．  １４，  Ｎｏ．  ８  （Ａｐｒｉｌ  １７，  ２０００），  ｐｐ．２５−２８）。
【０１９８】
ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７／ＳＩＲＰαを介した細胞シグナル伝達を調節、ブロック、阻害、低減、拮抗、中和、またはさもなくば妨害するモノクローナル抗体が、例えば、膜結合型及び／または可溶性ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７またはその免疫原性フラグメント、誘導体、もしくはバリアントで動物を免疫することにより、生成される。
【０１９９】
代替的に、ＣＤ４７が発現し、トランスフェクトされた細胞の表面と会合するように、ＣＤ４７をコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクトされた細胞で動物を免疫する。代替的に、抗体は、ＣＤ４７に結合するための抗体または抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーをスクリーニングすることによって得られる。このライブラリーは、例えば、組み立てられたファージ粒子の表面に発現するバクテリオファージコートタンパク質へのタンパク質またはペプチドの融合として、及びファージ粒子内に含まれるコードＤＮＡ配列として、バクテリオファージ内で調製される（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）。骨髄腫／Ｂ細胞融合から生じるハイブリドーマは、ＣＤ４７に対する反応性についてスクリーニングされる。
【０２００】
モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５（１９７５）に記載されるものなどの、ハイブリドーマ法を用いて調製される。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は、典型的には、免疫化剤により免疫されて、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生できるリンパ球を誘発する。代替的に、リンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化できる。
【０２０１】
免疫剤は、典型的には、タンパク質抗原、そのフラグメント、またはその融合タンパク質を含むことになる。一般に、ヒト由来細胞が望まれる場合は、いずれかの末梢血リンパ球を使用するか、または、非ヒト哺乳類源が望まれる場合は脾臓細胞もしくはリンパ節細胞を使用する。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して不死化細胞株と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｃｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。不死化細胞株は、通常は、形質転換された哺乳類細胞、特に、げっ歯類、ウシ及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞株が用いられる。ハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の不死化細胞の増殖または生存を阻害する１種または２種以上の物質を含む適切な培養培地中に、播種し、増殖することができる。例えば、親細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマ用の培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ物質である、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含む（「ＨＡＴ培地」）。
【０２０２】
効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である不死化細胞株を使用し得る。他の使用され得る不死化細胞株はマウス骨髄腫株であり得、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから得ることができる。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、モノクローナル抗体の作製について記載されている。（Ｋｏｚｂｏｒ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８７）  ｐｐ．５１−６３））。
【０２０３】
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、続いて、抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイできる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降法により、または、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定する。このような手法及びアッセイ法は、当該技術分野において既知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ｔｈｅ  Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｒｄ，  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）によって決定することができる。さらに、モノクローナル抗体の治療用途では、標的抗原に対する高度の特異性と高い結合親和性を有する抗体を同定することが重要である。
【０２０４】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈手順によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法により増殖させることができる。（Ｃｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）この目的のために好適な培地として、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地またはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。代替的に、ハイブリドーマ細胞を哺乳類中の腹水としてｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させることもできる。
【０２０５】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または腹水から単離または精製することができる。
【０２０６】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているような組換えＤＮＡ法によって作製することもできる。開示されたモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することのできるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離してシーケンシングすることができる。開示された抗体を産生するハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの優れた供給源として役立つ。単離されたＤＮＡは発現ベクターに入れられ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、サルＣＯＳ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０、または他の方法で免疫グロブリンタンパク質を生成しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞でのモノクローナル抗体の合成をもたらす。ＤＮＡはまた、例えば、マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖の定常ドメインのコード配列を置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８，８１２−１３（１９９４）を参照されたい）、または免疫グロブリンコード配列を非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部に共有結合することにより、修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、開示された抗体の定常ドメインの代わりになり得るか、または開示された抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりになり得、キメラ二価抗体を作製し得る。
【０２０７】
本明細書で開示された抗体には、完全ヒト抗体またはヒト化抗体が含まれる。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒトによる免疫応答を引き起こすことなく、ヒトへの投与に適している。
【０２０８】
抗ＣＤ４７抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載の手順を用いて生成される。例えば、開示された抗ＣＤ４７抗体はマウス及びその後のハイブリドーマ作製における修飾免疫化戦略を使用して同定される。
【０２０９】
代替的な方法では、抗ＣＤ４７抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を用いるファージディスプレイ法を使用して開発される。このようなアプローチは、当該技術分野で周知であり、ＷＯ９２／０１０４７及び米国特許第６，５２１，４０４号に記載される。このアプローチでは、軽鎖と重鎖のランダムなペアを運ぶファージのコンビナトリアルライブラリーが、ｃｄ４７またはそのフラグメントの天然または組換え供給源を使用してスクリーニングされる。別のアプローチでは、抗ＣＤ４７抗体は、プロセスの少なくとも１つのステップが、トランスジェニック非ヒト動物をヒトＣＤ４７タンパク質で免疫することを含むプロセスによって生成することができる。このアプローチでは、この異種非ヒト動物の内因性重鎖及び／またはカッパ軽鎖の遺伝子座の一部が無効にされており、抗原に応答して免疫グロブリンをコードする遺伝子を生成するために必要な再構成が不可能である。さらに、少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座及び少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座が動物に安定にトランスフェクトされている。したがって、投与された抗原に応答して、ヒト遺伝子座は再構成して、抗原に免疫特異的なヒト可変領域をコードする遺伝子を提供する。したがって、免疫すると、異種マウスは完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。
【０２１０】
異種の非ヒト動物を作製するための様々な技術が当該技術分野で周知である。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい。１９９４年に公表されたように、この一般的な戦略は、最初のＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）株を用いて実証された。Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：  １３−２１（１９９４）を参照されたい。同様に、米国特許第６，１６２，９６３号、同第６，１５０，５８４号、同第６，１１４，５９８号、同第６，０７５，１８１号、及び同第５，９３９，５９８号ならびに日本国特許３０６８１８０  Ｂ２、同３０６８５０６  Ｂ２、及び同３０６８５０７  Ｂ２、ならびに欧州特許ＥＰ０４６３１５１Ｂ１、ならびに国際特許出願ＷＯ９４／０２６０２、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ００／７６３１０、ならびに関連するファミリー出願を参照されたい。
【０２１１】
別のアプローチでは、他のものは、外因性Ｉｇ遺伝子座がＩｇ遺伝子座からの小片（個々の遺伝子）を含めることによって模倣される「ミニ遺伝子座」アプローチを利用する。したがって、１つ以上のＶＨ遺伝子、１つ以上のＤＨ遺伝子、１つ以上のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域、及び第２の定常領域（好ましくはガンマ定常領域）は、動物への挿入のためのコンストラクトへと形成される。例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５４５，８０７号、同第５，５９１，６６９号、同第５，６１２，２０５号、同第５，６２５，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６４３，７６３号、同第５，６６１，０１６号、同第５，７２１，３６７号、同第５，７７０，４２９号、同第５，７８９，２１５号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８７７号、同第３９７号、同第５，８７４，２９９号、同第６，０２３，０１０号、及び同第６，２５５，４５８号、ならびに欧州特許０５４６０７３Ｂ１、ならびに国際特許出願ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９２／２２６４５、ＷＯ９２／２２６４７、ＷＯ９２／２２６７０、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／００５６９、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９６／１４４３６、ＷＯ９７／１３８５２、及びＷＯ９８／２４８８４、ならびに関連するファミリー出願を参照されたい。
【０２１２】
マイクロセル融合により染色体の大きな断片、または染色体全体が導入されたマウスからのヒト抗体の生成も実証されている。欧州特許出願第７７３２８８号及び同第８４３９６１号を参照されたい。ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答は、キメラまたはその他のヒト化抗体を調製するように、業界を導いてきた。キメラ抗体はヒト定常領域及び免疫可変領域を有するが、特定のヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答が、特に抗体の慢性または複数用量の利用において観察されることが予想される。したがって、本開示は、ＣＤ４７に対する完全ヒト抗体を提供して、ＨＡＭＡまたはＨＡＣＡ応答の懸念及び／または影響を無効にするか、またはさもなくば軽減する。
【０２１３】
免疫原性が低下した抗体の産生は、適切なライブラリーを使用したヒト化、キメラ化、及びディスプレイ技術によっても達成される。マウス抗体または他の種に由来する抗体は、当該技術分野で周知の技術を使用してヒト化または霊長類化できることが理解されよう。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：４３  ４６（１９９３）、及びＷｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔ，  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２１２５−１６８（１９９２）を参照されたい。目的の抗体は、組換えＤＮＡ技術によって操作して、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン、及び／またはフレームワークドメインを対応するヒト配列で置換するよう改変できる（ＷＯ９２１０２１９０、ならびに米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７９２号、同第５，７１４，３５０号、同第及び５，７７７，０８５号を参照されたい。）。また、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築のためのＩｇ  ｃＤＮＡの使用は、当該技術分野で既知である（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９（１９８７）、及びＪ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ｍＲＮＡは、抗体を産生するハイブリドーマまたは他の細胞から単離し、ｃＤＮＡを産生するために使用される。目的のｃＤＮＡは、特定のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって増幅することができる（米国特許第４，６８３，１９５号及び同第４，６８３，２０２号）。代替的に、ライブラリーを作製し、目的の配列を単離するためにスクリーニングされる。抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列は、次いで、ヒト定常領域配列に融合される。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｎ．Ｉ．Ｈ．  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２に見出すことができる。ヒトＣ領域遺伝子は、既知のクローンから容易に入手可能である。アイソタイプの選択は、補体結合、または抗体依存性細胞傷害性の活性のような所望のエフェクター機能によって導かれる。好ましいアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４である。いずれかのヒト軽鎖の定数領域、カッパまたはラムダを使用してもよい。キメラ、ヒト化抗体は、次いで、従来の方法によって発現する。
【０２１４】
例えば、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦａｂなどの抗体フラグメントは、例えば、プロテアーゼまたは化学的切断によって、無傷タンパク質の切断によって調製することができる。代替的に、短縮型遺伝子を設計する。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの部分をコードするキメラ遺伝子は、短縮型分子を得るために翻訳終止コドンが後に続くＨ鎖のＣＨＩドメイン及びヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むであろう。
【０２１５】
Ｈ、Ｌ、及びＪ領域のコンセンサス配列を使用して、Ｖ領域セグメントをヒトＣ領域セグメントに結合するための有用な制限部位をＪ領域に導入するためのプライマーとして使用するオリゴヌクレオチドを設計することができる。Ｃ領域ｃＤＮＡは、部位特異的変異導入によって修飾して、ヒト配列の類似の位置に制限部位を配置することができる。
【０２１６】
発現ベクターには、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来エピソームなどが含まれる。有益なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードし、ＶＨまたはＶＬ配列を容易に挿入及び発現できるように適切な制限部位が改変されている、ベクターである。このようなベクターでは、スプライシングは通常、挿入されたＪ領域のスプライスドナーサイトと、ヒトＣ領域に先行するスプライスアクセプターサイトの間、及びヒトＣＨエクソン内で発生するスプライス領域で発生する。ポリアデニル化及び転写終結は、コード領域の下流の天然の染色体部位で起こる。得られたキメラ抗体は、レトロウイルスＬＴＲを含む、任意の強力なプロモーター、例えば、ＳＶ−４０初期プロモーター、（Ｏｋａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２））、及びモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  ４１：８８５（１９８５））に結合することができる。また、天然のＩｇプロモーター等を用いることができる。
【０２１７】
さらに、ヒト抗体または他の種由来の抗体は、当該分野で周知の技術を使用して、非限定的に、ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイ、及び他の技術を含むディスプレイタイプの技術を介して生成され得、そして、得られた分子が親和性成熟などのさらなる成熟に供され得るが、そのような技術は、当技術分野で周知である。Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔ，  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５−１６８（１９９２），  Ｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９４：４９３７−４９４２（１９９７）（リボソームディスプレイ），  Ｐａｒｍｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  ７３：３０５−３１８（１９８８）（ファージディスプレイ），Ｓｃｏｔｔ，  ＴＩＢＳ，  ｖｏｌ．１７：２４１−２４５（１９９２），Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：６３７８−６３８２（１９９０），  Ｒｕｓｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：１０８１−１０８５  （１９９３），Ｈｏｇａｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３０：４３−  ６８（１９９２），  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ＴＩＢＴＥＣＨ；１０：８０−８Ａ（１９９２）、及び米国特許第５，７３３，７４３号。ディスプレイ技術を利用してヒトではない抗体を生成する場合、そのような抗体は前述のようにヒト化することができる。
【０２１８】
これらの技術を使用して、ＣＤ４７発現細胞、ＣＤ４７の可溶型、そのエピトープまたはペプチド、及びそれらに対する発現ライブラリー（例えば、米国特許第５，７０３，０５７号を参照されたい）に対する抗体を作製し、その後、本明細書に記載の活性について前述のようにスクリーニングすることができる。
【０２１９】
開示された抗ＣＤ４７抗体は、前述の単鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントなどのＤＮＡセグメントを含むベクターにより発現することができる。任意の適切なベクターを使用することができる。
【０２２０】
これらには、ベクター、リポソーム、ネイキッドＤＮＡ、アジュバントアシストＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどが含まれ得る。ベクターには、ＷＯ９３／６４７０１に記載されているような、標的化部分（例えば、細胞表面受容体に対するリガンド）及び核酸結合部分（例えば、ポリリジン）などの化学的コンジュゲート、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡウイルスベクター）、ＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載されているような、標的化部分（例えば、標的細胞に特異的な抗体）及び核酸結合部分（例えば、プロタミン）を含む融合タンパク質などの融合タンパク質、プラスミド、ファージなどが含まれる。ベクターは、染色体、非染色体、または合成であり得る。
【０２２１】
例示的なベクターには、ウイルスベクター、融合タンパク質、及び化学的コンジュゲートが含まれる。レトロウイルスベクターには、モロニーマウス白血病ウイルスが含まれる。ＤＮＡウイルスベクターを使用してもよい。これらのベクターには、オルソポックスまたはアビポックスベクターなどのポックスベクター、単純ヘルペスＩウイルス（ＨＳＶ）ベクターなどのヘルペスウイルスベクター（Ｇｅｌｌｅｒ，  Ａ．  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，  ６４：４８７（１９９５）；Ｌｉｍ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｄ．  Ｇｌｏｖｅｒ，  Ｅｄ．（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９９５）；Ｇｅｌｌｅｒ，  Ａ．  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．：  Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：７６０３（１９９３）；Ｇｅｌｌｅｒ，  Ａ．  Ｉ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８７：１１４９（１９９０）を参照されたい）、アデノウイルスベクター（ＬｅＧａｌ  ＬａＳａｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ  ３：２１９（１９９３）；Ｙａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）を参照されたい）、及びアデノ随伴ウイルスベクター（Ｋａｐｌｉｔｔ，  Ｍ．  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）を参照されたい）が含まれる。
【０２２２】
ポックスウイルスベクターは、細胞質中に遺伝子を導入する。アビポックスウイルスベクターは、核酸の短期的な発現のみをもたらす。神経細胞への核酸の導入には、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが好ましい。アデノウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（約４ヶ月）よりも短期間の発現（約２ヶ月）をもたらし、結果としてＨＳＶベクターよりも短い。選択される特定のベクターは、標的細胞及び処理される状態に依存するであろう。導入は、標準的な技術、例えば感染、トランスフェクション、形質導入、または形質転換によるものであってよい。遺伝子導入のモードの例には、例えば、ネイキッドＤＮＡ、ＣａＰ０４沈殿、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、プロトプラスト融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクション、及びウイルスベクターが含まれる。
【０２２３】
ベクターは、本質的に任意の所望の標的細胞を標的化するために使用することができる。例えば、定位注射を所望の位置にベクター（例えば、アデノウイルス、ＨＳＶ）を誘導するために使用することができる。さらに、ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄ注入システムなどのミニポンプ注入システムを使用して、脳室内（ｉｃｖ）注入によって粒子を送達することができる。対流と呼ばれるバルクフローに基づく方法も、脳の拡張領域に大きな分子を送達するのに効果的であることが証明されており、標的細胞へのベクターの送達に役立つ可能性がある。（Ｂｏｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：２０７６−２０８０（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６６：２９２−３０５（１９９４）を参照されたい。）使用できる他の方法には、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内、及び皮下注射、ならびに経口または他の既知の投与経路が含まれる。
【０２２４】
これらのベクターは、種々の方法で使用することができる抗体を大量に発現することができる。例えば、試料中のＣＤ４７の存在を検出する。抗体は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７／ＳＩＲＰαの相互作用、ならびにＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介シグナル伝達に結合して破壊しようとするのにも使用できる。
【０２２５】
開示された抗体をコードする核酸を含むベクターを有する、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＢａｃｉｌｌｕｓなどの原核細胞、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの酵母細胞、ならびに植物細胞が提供される。いくつかの実施形態では、そのような細胞は、開示された抗体を発現する。開示された抗体をコードする核酸を通常は有さない哺乳動物細胞株もまた提供される。これらの哺乳動物細胞株は、開示された抗体をコードする核酸を含むベクターを有する。いくつかの実施形態では、そのような細胞株は、開示された抗体を発現する。
【０２２６】
本開示の抗原性タンパク質に特異的な単鎖抗体の産生に技術を適合させることができる（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。）。さらに、Ｆａｂ発現ライブラリー（例えば、Ｈｕｓｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１を参照されたい）の構築に適合し得る方法を使用して、タンパク質に対する所望の特異性を持つモノクローナルＦａｂフラグメント、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログを迅速かつ効果的に同定できる。タンパク質抗原に対するイディオタイプを含む抗体フラグメントは、以下を含むがこれらに限定されない、当技術分野で既知の技術によって生成することができる：（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって生成されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生成されたＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）抗体分子をパパイン及び還元剤で処理することにより生成されるＦａｂフラグメント、ならびに（ｉｖ）Ｆｖフラグメント。
【０２２７】
開示された抗ＣＤ４７抗体にはまた、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２ＣＤ４７フラグメント、単鎖ＣＤ４７抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディまたはＶＨＨ）、二重特異性ＣＤ４７抗体、及びヘテロコンジュゲートＣＤ４７抗体が含まれる。
【０２２８】
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に結合特異性を持つ抗体である。この場合、結合特異性の１つはＣＤ４７に対するものである。第２の結合標的は任意の他の抗原であり、有利には、細胞表面タンパク質または受容体もしくは受容体サブユニットである。
【０２２９】
二重特異性抗体の作製方法は、当該技術分野で既知である。
【０２３０】
伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの重鎖が異なる特異性を持つ２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，  Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の無作為の組み合わせにより、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的な混合物を生成し、そのうちの１つだけが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は通常、アフィニティークロマトグラフィーのステップで達成される。同様の手順は、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２３１】
所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。融合のうちの少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む、第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合、及び必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に共トランスフェクトされる。二重特異性抗体の生成のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【０２３２】
ＷＯ９６／２７０１１に記載される別の手法に従い、一対の抗体分子間の界面を、組み換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大化するように改変し得る。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きい側鎖（複数可）と同一または類似のサイズの代償「空洞」は、大きいアミノ酸側鎖を小さいもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることにより、第２の抗体分子の界面に作成される。これは、ホモ二量体などの他の不要な最終産物よりもヘテロ二量体の収量を増やすためのメカニズムを提供する。
【０２３３】
二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメントとして調製できる（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）。二重特異性抗体を抗体フラグメントから生成するための技法は、文献において記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、無傷抗体を、タンパク質分解により切断して、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成する手順を記載する。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防ぐ。次いで、生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体のうちの１つは、メルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ’−チオールに再変換され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて二重特異性抗体を形成する。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化用の薬剤として使用され得る。
【０２３４】
さらに、Ｆａｂ’フラグメントはＥ．ｃｏｌｉから直接回収でき、化学的に結合して二重特異性抗体を形成できる。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別個に分泌され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの指向性化学的カップリングにかけられて、二重特異性抗体が形成された。このように形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞、及び正常なヒトＴ細胞に結合すると共に、ヒト乳腺腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０２３５】
二重特異性抗体フラグメントを組換え細胞培養物から直接作製及び単離するための様々な技術についても記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合により２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元して単量体を形成し、次いで、再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成した。この方法は、抗体ホモ二量体を作成するためにも利用できる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ジアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替メカニズムを提供した。フラグメントは、同一の鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメインに接続された重鎖可変ドメインを含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対になることを強いられ、それにより２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体で二重特異性抗体フラグメントを作製する別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）
【０２３６】
２を超える価数を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２３７】
例示的な二重特異性抗体は、少なくとも１つがＣＤ４７抗原タンパク質に由来する、２つの異なるエピトープに結合することができる。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、またはＢ７）などの白血球上のトリガー分子に結合するアーム、またはＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃｙＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃｙＲ）と組み合わせて、特定の抗原を発現する細胞に細胞防御機構を集中させることができる。二重特異性抗体を使用して、特定の抗原を発現する細胞に細胞毒性剤を誘導することもできる。これらの抗体は、抗原結合アームと、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＴＥＴＡなどの細胞毒性剤または放射性核種キレート剤を結合するアームとを有する。別の目的の二重特異性抗体は、本明細書に記載のタンパク質抗原に結合し、さらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０２３８】
ヘテロコンジュゲート抗体も範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、共有結合した２つの抗体からなる。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞に標的化する（米国特許第４，６７６，９８０号を参照されたい）ため、及びＨＩＶ感染の治療のために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９を参照されたい）提案されている。抗体は、架橋剤を含むものを含む合成タンパク質化学における既知の方法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製できると考えられる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的に適した試薬の例には、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示されているものが含まれる。
【０２３９】
例えば、異常なＣＤ４７シグナル伝達に関連する疾患及び障害の治療における抗体の有効性を増強するために、エフェクター機能に関して開示された抗体を改変することが望ましくあり得る。例えば、システイン残基（複数可）をＦｃ領域に導入することができ、それにより、この領域での鎖間ジスルフィド結合の形成が可能になる。このようにして生成されたホモ二量体抗体は、内在化能力を改善し、及び／または補体媒介性細胞殺傷及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増加させることができる。（Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）、及びＳｈｏｐｅｓ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい。）代替的に、二重のＦｃ領域を有し、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力を増強することができる抗体を改変することができる。（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，  ３：２１９−２３０（１９８９）を参照されたい。）
【０２４０】
毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、もしくはそれらのフラグメント）、または放射性同位元素（すなわち、放射性複合体）などの細胞毒性剤に結合した、本明細書に開示された抗体を含む免疫複合体もまた、提供される。
【０２４１】
使用可能な酵素的に活性な毒素及びそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エクソトクシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ダイアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトジェリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンが含まれる。放射性標識抗体を作製するために、様々な放射性核種が利用可能である。例には、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、及び１８６Ｒｅが含まれる。
【０２４２】
抗体と細胞毒性剤のコンジュゲートは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタレルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作成される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４標識ｌ−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドと抗体のコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。（ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい）
【０２４３】
多種多様な可能性のある部分を、本開示の得られた抗体に結合させることができる。（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｊ．  Ｍ．  Ｃｒｕｓｅ  ａｎｄ  Ｒ．  Ｅ．  Ｌｅｗｉｓ，  Ｊｒ  （ｅｄｓ），  Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい。）
【０２４４】
結合は、抗体と他の部分がそれぞれの活性を保持している限り、２つの分子を結合する任意の化学反応によって達成できる。この結合には、多くの化学的メカニズム、例えば共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、及び錯化が含まれ得る。しかしながら、好ましい結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合または外部の架橋分子の取り込みのいずれかによって達成することができる。多くの二価または多価の結合剤は、例えば開示された抗体のようなタンパク質分子を他の分子に結合するのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤には、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、及びヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物が含まれ得る。このリストは、当該技術分野で既知の様々な種類のカップリング剤を網羅することを意図したものではなく、より一般的なカップリング剤の例示である。（Ｋｉｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，  Ｊｏｕｒ．  Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６２：１８５−２１６（１９８２）；及びＶｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）を参照されたい。他のリンカーは文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用を記載するＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４４：２０１−２０８（１９８４）を参照されたい）。オリゴペプチドリンカーを介して抗体に結合されたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載している米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。例示的なリンカーには以下が含まれる：（ｉ）ＥＤＣ（ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−プリジル−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．、カタログ番号（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミドヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．、カタログ番号２１６５１０）；（ｉｖ）Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピアンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．、カタログ番号２１６５−Ｇ）；及び（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートされたｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．、カタログ番号２４５１０）。
【０２４５】
前述のリンカーは、異なる属性を持つ構成要素を含んでいるため、異なる物理化学的特性を持つコンジュゲートをもたらす。例えば、カルボン酸アルキルのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボン酸のスルホ−ＮＨＳエステルよりも安定している。ＮＨＳ−エステル含有リンカーは、スルホ−ＮＨＳエステルよりも溶解性が低くなる。さらに、リンカーＳＭＰＴは立体障害のあるジスルフィド結合を含み、安定性が向上したコンジュゲートを形成できる。ジスルフィド結合は一般に、ジスルフィド結合がｉｎ  ｖｉｔｒｏで切断されるために他の結合よりも安定性が低く、利用できるコンジュゲートが少なくなる。特に、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳは、カルボジイミドカップリングの安定性を高めることができる。カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）をスルホＮＨＳと組み合わせて使用すると、カルボジイミドカップリング反応のみの場合よりも加水分解に対して耐性のあるエステルが形成される。
【０２４６】
組成物及び製剤
開示された抗ＣＤ４７抗体と、薬学的に許容される賦形剤（担体）と、を含む医薬組成物が提供される。
【０２４７】
任意の適切な賦形剤／担体を使用することができる。開示された抗体または開示された抗体を含む医薬組成物の任意の適切な投与経路、投与量、及び投薬レジメンを使用することができる。
【０２４８】
開示された抗ＣＤ４７抗体（本明細書では「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにその誘導体、フラグメント、アナログ及びホモログは、患者への投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。このような組成物を調製する際に関する原則及び考慮事項、ならびに構成要素の選択に関するガイダンスが、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １９ｔｈ  ｅｄ．（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，  Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，  Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，  Ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ，  Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，  Ｐａ．，  １９９４；ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｖｏｌ．４），１９９１，  Ｍ．  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに提供される。
【０２４９】
抗体フラグメントが用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害フラグメントが使用されてもよい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成することができ、及び／または組換えＤＮＡ技術によって生成することができる。（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３）を参照されたい。）
【０２５０】
本明細書において使用されるとき、「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、医薬投与と適合する任意の及び全ての溶媒、分散媒、被覆、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図する。適切な担体／賦形剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。そのような担体または希釈剤の例には、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２５１】
リポソーム及び固定油などの非水性ビヒクルを使用して、開示された抗ＣＤ４７抗体を含む組成物を製剤化することもできる。薬学的に活性な材料のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が開示された抗ＣＤ４７抗体と不適合である場合を除き、治療用の組成物におけるその使用が意図されている。
【０２５２】
開示された抗体はまた、免疫リポソームとして製剤化され得る。抗体を含むリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号、及び同第４，５４４，５４５号に記載されるような、当該技術分野で既知の方法によって調製される。
【０２５３】
循環時間が延長されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物による逆相蒸発法によって生成できる。リポソームは、所定の細孔サイズのフィルターを通して押し出されて、所望の直径を有するリポソームが得られる。開示された抗体のＦａｂ’フラグメントは、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるように、ジスルフィド交換反応によってリポソームにコンジュゲートすることができる。
【０２５４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、滅菌される必要がある。これは、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。
【０２５５】
医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。１つ以上の開示された抗ＣＤ４７抗体を含む医薬組成物（追加の薬剤を含むまたは含まない、ならびに追加の薬剤を含む医薬組成物）の投与経路の例には、非経口、例えば静脈内（ＩＶ）、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、及び直腸投与が含まれる。非経口、皮内、または皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性を調整するための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、またはガラスもしくはプラスチック製の複数回投与用バイアルに封入することができる。
【０２５６】
注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）、または分散液、及び滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、適切な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ＢＡＳＦ，  Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，  Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合において、組成物は、滅菌されていなければならず、かつ容易に注射が可能である程度まで流体でなければならない。それは製造及び貯蔵の条件下で安定であるべきであり、そして細菌及び真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体／賦形剤は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防御は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アルコルビン酸、チメロサールなどによっても達成できる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムが組成物中に含まれる。注射可能な組成物の長期の吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
【０２５７】
滅菌されている注射可能な溶液は、必要な量の開示された抗ＣＤ４７抗体を適切な溶媒に、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせと共に組み込み、その後濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散剤は活性化合物を、基礎的な分散媒及び上に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルへと混合することによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、以前に滅菌濾過されたその溶液から活性成分と任意の追加の所望の成分との粉末が得られる、真空乾燥及び凍結乾燥である。
【０２５８】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入するか、錠剤に圧縮することができる。経口治療投与の目的のために、開示された抗ＣＤ４７抗体は、賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ、またはカプセル剤の形態で使用することができる。経口組成物はまた、液体担体中の化合物が、経口的に適用され、口の中ですすがれて吐き出されるか、または飲み込まれる、うがい薬としての使用のために、流体担体を用いて調製することができる。薬学的に適合性のある結合剤、及び／またはアジュバント材料を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、以下の成分、または同様の性質の化合物のうちのいずれかを含むことができる：微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；または、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ風味などの香味剤。
【０２５９】
吸入による投与の場合、開示された抗ＣＤ４７抗体は、適切な噴霧剤、例えば二酸化炭素などのガス、またはネブライザーを含む加圧容器またはディスペンサーからのエアロゾルスプレーの形で送達される。
【０２６０】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。
【０２６１】
経粘膜または経皮投与の場合、浸透する障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。このような浸透剤は、当該技術分野で周知であり、例えば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成することができる。経皮投与のために、活性化合物は、当該技術分野で周知の軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。
【０２６２】
開示された抗ＣＤ４７抗体はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、カカオバター及び他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含む）または停留浣腸の形態で調製することもできる。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む徐放性／制御放出製剤など、開示された抗ＣＤ４７抗体を身体からの急速な排除から保護する担体と共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者には明らかであろう。
【０２６４】
例えば、活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって調製されたマイクロカプセル中に、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルション中に、捕捉され得る。
【０２６５】
持続放出製剤を調製することができる。持続放出製剤の適切な例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、マトリックスは、成形品の形態、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニルや乳酸−グリコール酸などのポリマーは１００日以上にわたって分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲルはより短い時間でタンパク質を放出する。
【０２６６】
材料は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的とするリポソームを含む）は、薬学的に許容される担体として使用できる。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように、これらは、当業者に既知の方法に従って調製することができる。
【０２６７】
経口または非経口組成物は、投与の容易性及び投与量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用されるとき、単位剤形は、処理される対象のための単一用量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。単位剤形形態の仕様は、活性化合物の固有の特徴及び達成すべき特定の治療効果、ならびに個体における治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。医薬組成物は、投与のための説明書と共に、容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。
【０２６８】
これらの医薬組成物は、例えば、診断キットなどのキットに含めることができる。
【０２６９】
組み合わせ療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４７抗体は、１つ以上の追加の薬剤と共に患者に投与される。任意の適切な薬剤が意図されている。
【０２７０】
適切な追加の薬剤には、例えばがんなどの意図された用途のための現在の薬物療法及び／または外科療法が含まれる。例えば、抗ＣＤ４７抗体は、１つ以上の追加の化学療法剤または抗腫瘍剤とともに投与することができる。代替的に、追加の化学療法剤は、放射線治療である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は細胞死誘導剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、原形質膜を横切るリン脂質非対称性の喪失を誘導し、例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の細胞表面露出を引き起こす。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、小胞体（ＥＲ）ストレスを誘導する。いくつかの実施形態では、化学療法剤はプロテアソーム阻害剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＥＲタンパク質の細胞表面への移行を誘導する。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、カルレティキュリンの移行及び細胞表面露出を誘導する。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は単一の治療用組成物へと製剤化され、開示された抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は同時に投与される。代替的に、開示された抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は互いに分離され、例えば、それぞれが別々の治療用組成物へと製剤化され、開示された抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は、同時に、または治療レジメン中の異なる時間に投与される。例えば、抗ＣＤ４７抗体は、追加の薬剤の投与の前または後に投与されるか、または抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は、交互に投与される。開示された抗ＣＤ４７抗体及び追加の薬剤は、単回用量または複数回用量で投与することができる。
【０２７２】
製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な場合に１つを超える活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含むことができる。代替的に、またはさらに、組成物は、例えば、細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などの、その機能を増強する薬剤を含むことができる。そのような分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
【０２７３】
特定の実施形態では、活性化合物（開示された抗ＣＤ４７抗体を含む）は、組み合わせ療法で、すなわち、様々な形態のがん、自己免疫疾患及び炎症性疾患などの病的状態または障害の治療に有用な他の薬剤、例えば治療薬と組み合わせて投与される。この文脈における「組み合わせて」という用語は、薬剤が実質的に同時に、同時にまたは逐次的のいずれかで与えられることを意味する。逐次的に投与する場合、第２の化合物の投与開始時に、２つの化合物のうちの第１の化合物が治療部位で有効濃度においていまだ検出可能であり得る。
【０２７４】
例えば、組み合わせ療法は、以下に詳述されるように、１つ以上の追加の治療剤、例えば、１つ以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／または細胞毒性もしくは細胞増殖抑制剤と共製剤化及び／または共投与される１つ以上の開示される抗ＣＤ４７抗体を含むことができる。そのような組み合わせ療法は有利には、低用量の投与される治療薬を利用することができ、これにより様々な単独療法に関連する起こり得る毒性または合併症を回避する。
【０２７５】
他の実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、自己免疫障害、炎症性疾患などに対するワクチンアジュバントとして使用される。これらのタイプの障害の治療のためのアジュバントの組み合わせは、標的化された自己抗原由来の多種多様な抗原、すなわち自己免疫に関与する自己抗原、例えばミエリン塩基性タンパク質；炎症性自己抗原、例えばアミロイドペプチドタンパク質、または移植抗原、例えば同種抗原と組み合わせて使用するのに適している。抗原は、タンパク質に由来するペプチドまたはポリペプチド、及び以下のいずれかのフラグメントを含み得る：サッカリド、タンパク質、ポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン、または他の高分子成分。いくつかの例では、１つを超える抗原は、抗原性組成物中に含まれている。
【０２７６】
当該技術分野で既知の遺伝子治療ベクターもまた開示される抗ＣＤ４７抗体をコードする核酸を持つベクターと共に使用することができ、抗体は、ヒト患者内の適切な発現系で発現できる。
【０２７７】
開示された抗ＣＤ４７抗体及び組成物の使用方法
抗ＣＤ４７抗体は、がんまたは他の腫瘍性状態の治療、進行の遅延、再発の予防、または症状の緩和において、例えば、血液悪性腫瘍及び／または腫瘍の治療などにおいて有用である。
【０２７８】
本開示は、がんまたは他の腫瘍性状態を有するヒト患者におけるがんまたは他の腫瘍性状態の症状の治療、進行の遅延、再発の予防、または症状の緩和の方法を提供する。方法は、開示される抗ＣＤ４７抗体の治療有効量を患者に投与すること、または開示される抗ＣＤ４７抗体と医薬賦形剤及び／もしくは担体とを含む医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む。方法は、１つ以上の追加の薬剤を患者に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、追加の薬剤（複数可）は治療薬である。特定のさらなる実施形態では、治療薬（複数可）は抗がん剤である。
【０２７９】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７＋腫瘍の治療に使用される。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、開示された抗ＣＤ４７抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫の治療において使用される。固形腫瘍には、例えば、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎臓腫瘍が含まれる。
【０２８１】
本明細書で使用されるとき、「血液癌」は、血液のがんを指し、とりわけ、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫を含む。
【０２８２】
「白血病」とは、感染との闘いに効果のない白血球が過剰に作られ、したがって、血小板及び赤血球など、血液を構成する他の部分を押しのける血液のがんを指す。白血病の症例は急性または慢性に分類されることが理解されている。白血病の特定の形態には、非限定的な例として、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成が含まれる。
【０２８３】
「リンパ腫」は、とりわけ、ホジキンリンパ腫、緩慢性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞及び大細胞）を指し得る。
【０２８４】
骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫を指し得る。
【０２８５】
他の態様では、がんまたは他の腫瘍性状態の症状を緩和するための方法であって、それ必要とする対象に１つ以上の開示される抗ＣＤ４７抗体を投与することによる方法が提供される。抗体は、投与後、赤血球の重大なレベルの赤血球凝集を引き起こさない。抗体は、対象のがんまたは他の腫瘍性状態の症状を緩和するのに十分な量で投与される。
【０２８６】
治療的実体の投与は、適切な賦形剤、及び改善された移送、送達、耐性などを提供するために製剤に組み込まれる他の薬剤を含むであろう。多数の適切な製剤は、全ての製薬化学者に既知の処方で見つけることができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （１５ｔｈ  ｅｄ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ（１９７５））、特にその中のＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる８７章。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（リポフェクチン（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油及び油中水エマルション、エマルションカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混合物が含まれる。製剤中の有効成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路に生理学的に適合性及び耐容性がある場合、前述の混合物はいずれも治療及び療法に適切であり得る。製薬化学者に周知の製剤、賦形剤及び担体に関する追加情報については、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．  Ｒｅｇｕｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ３２（２）：２１０−８（２０００），  Ｗａｎｇ  Ｗ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），  Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００），  Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ５２：２３８−３１１（１９９８）、及びその中の引用を参照されたい。
【０２８７】
がん及び他の腫瘍性障害に関連する症状には、例えば、炎症、発熱、全身倦怠感、発熱、しばしば炎症部位に限局する疼痛、食欲不振、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下、筋肉疲労、及び例えば腹痛、下痢、または便秘などの腹部症状が含まれる。
【０２８８】
開示された抗ＣＤ４７抗体の治療有効量は、一般に、治療目的を達成するために必要な量に関係する。前述のように、これは、抗体とその標的抗原との間の結合相互作用であり得、特定の場合には、標的の機能を妨害する。治療目的には、例えば、がんの退縮、がんの治癒、がんの１つ以上の症状の緩和、及び患者の死亡を少なくとも１日遅延させることが含まれる。
【０２８９】
投与する必要のある開示された抗ＣＤ４７抗体の量は、その特定の抗原に対する抗体の結合親和性に依存し、投与された抗体が、それが投与される他の対象の自由体積から枯渇する速度にも依存する。開示された抗ＣＤ４７抗体の治療有効用量の一般的な範囲は、非限定的な例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。いくつかの実施形態では、開示された抗体は、対象に０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上の用量で投与される。一般的な投与頻度は、例えば、一日２回〜週に一度の範囲であり得る。
【０２９０】
治療の有効性は、がんなどの疾患を診断または治療するための任意の既知の方法に関連して決定される。疾患の１つ以上の症状の緩和は、抗体が臨床的利益をもたらし、したがって治療的に有効であることを示す。
【０２９１】
特定の実施形態では、モノクローナル抗体を含む開示された抗ＣＤ４７抗体は、治療剤として使用することができる。そのような薬剤は、対象における異常なＣＤ４７発現、活性及び／またはシグナル伝達に関連する疾患または病理を診断、予後、モニター、治療、緩和、及び／または予防するために使用され得る。治療レジメンは、対象、例えば、異常なＣＤ４７の発現、活性、及び／またはシグナル伝達に関連する疾患または障害、例えば、がんまたは他の腫瘍性障害に罹患している（または発症するリスクがある）ヒト患者を、標準的な方法を使用して特定することにより実施される。抗体調製物、好ましくはその標的抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有するものが、対象に投与され、一般に、標的とのその結合により効果を有する。抗体の投与は、標的（例えば、ＣＤ４７）の発現、活性、及び／またはシグナル伝達機能を無効にするか、または阻害するか、または妨害することができる。抗体の投与は、標的（例えば、ＣＤ４７）とそれが天然に結合する内因性リガンド（例えば、ＳＩＲＰα）との結合を無効、または阻害、または妨害し得る。例えば、抗体は標的に結合し、ＣＤ４７の発現、活性及び／またはシグナル伝達を調節、ブロック、阻害、低減、拮抗、中和、またはさもなくば妨害する。
【０２９２】
異常なＣＤ４７の発現、活性、及び／またはシグナル伝達に関連する疾患または障害には、非限定的な例として、血液癌及び／または固形腫瘍が含まれる。血液癌には、例えば、白血病、リンパ腫及び骨髄腫が含まれる。白血病の特定の形態には、非限定的な例として、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成が含まれる。リンパ腫の特定の形態には、非限定的な例として、ホジキンリンパ腫、緩慢性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞及び大細胞）が含まれる。特定の形態の骨髄腫には、非限定的な例として、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫が含まれる。固形腫瘍には、例えば、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎臓腫瘍が含まれる。
【０２９３】
所望の特異性を有する抗体をスクリーニングする方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及び当該技術分野で既知の他の免疫学的媒介技術が含まれるが、これらに限定されない。
【０２９４】
他の実施形態では、ＣＤ４７に対する抗体は、ＣＤ４７の局在化及び／または定量に関連する当該技術分野で既知の方法で使用されてもよい（例えば、適切な生理学的試料内のＣＤ４７及び／またはＣＤ４７とＳＩＲＰαの両方のレベルの測定での使用、診断方法での使用、タンパク質の画像化での使用など）。
【０２９５】
他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体を使用して、免疫親和性、クロマトグラフィー、または免疫沈降などの標準的な技術によって、ＣＤ４７ポリペプチドを単離することができる。ＣＤ４７タンパク質（またはそのフラグメント）に対する抗体を診断的に使用して、例えば、所定の治療レジメンの有効性を判定するために、臨床試験手順の一部として組織中のタンパク質レベルをモニターすることができる。
【０２９６】
検出は、抗体を検出可能な物質に結合する（すなわち、物理的に連結する）ことによって促進することができる。検出可能な物質の例には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、及び放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれ；適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれ；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが含まれ；発光材料の例には、ルミノールが含まれ；生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが含まれ、適切な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが含まれる。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、またはモノクローナルであってもよい。無傷抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２）が使用される。「標識」という用語は、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をプローブまたは抗体にカップリング（すなわち、物理的に連結）することによるプローブまたは抗体の直接標識、及び直接標識された別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含することを意図している。間接標識の例には、蛍光標識された二次抗体を使用した一次抗体の検出、及び蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できるようにビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が含まれる。
【０２９８】
「生体試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、及び生物流体、ならびに対象内に存在する組織、細胞、及び流体を含むことが意図されている。したがって、「生体試料」という用語の用法に含まれるのは、血液、及び血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または成分である。すなわち、この検出方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで、生体試料中の分析物のｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出するために使用することができる。例えば、分析物のｍＲＮＡの検出のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術には、ノーザンハイブリダイゼーション及びｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが含まれる。分析物タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、及び免疫蛍光法が含まれる。分析物ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。イムノアッセイを実施するための手順は、例えば、“ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，  Ｖｏｌ．  ４２，  Ｊ．  Ｒ．  Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  １９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，  Ｅ．  Ｄｉａｍａｎｄｉｓ  ａｎｄ  Ｔ．  Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  １９９６；及び“Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，  Ｐ．  Ｔｉｊｓｓｅｎ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。さらに、分析物タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｖｏ技術には、標識された抗分析物タンパク質抗体を対象に導入することが含まれる。例えば、抗体は、対象におけるその存在及び位置が標準的な画像化技術によって検出され得る放射性マーカーで標識され得る。
【０２９９】
他の治療薬の設計と生成
【０３００】
ＣＤ４７に関して本明細書で生成され特性評価された抗体の活性に基づいて、抗体部分以外の他の治療モダリティの設計が促進される。そのようなモダリティには、非限定的に、二重特異性抗体、免疫毒素、及び放射標識治療などの高度な抗体治療、ペプチド治療、遺伝子治療、特に細胞内抗体、アンチセンス治療、及び小分子の生成が含まれる。
【０３０１】
（ｉ）１つがＣＤ４７に特異性を持ち、別のものが第２の分子に特性を持ち、一緒にコンジュゲートされた２つの抗体、（ｉｉ）ＣＤ４７に特異的な１つの鎖と、第２の分子に特異的な第２の鎖とを有する単一の抗体、または（ｉｉｉ）ＣＤ４７と第２分子とに対して特異性を有する単鎖抗体、を含む二重特異性抗体を生成できる。そのような二重特異性抗体は、よく知られている技術を使用して生成される（例えば、Ｆａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１（１９９４）及びＷｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｒｉｔ，  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２１２５−１６８（１９９２），  Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ（Ｓｕｐｐｌ．）７：５１−５２（１９９２）を参照されたい）。
【０３０２】
抗体は、当該技術分野で周知の技術を利用して免疫毒素として作用するように修飾することができる。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １４：２５２（１９９３）を参照されたい。米国特許第５，１９４，５９４号も参照されたい。
【０３０３】
放射性標識抗体の調製、そのような修飾抗体は、当該技術分野で周知の技術を利用して容易に調製することもできる。例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ６５５−６８６  （２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｈａｆｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ，  ｅｄｓ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｒａｖｅｎ（１９９６））を参照されたい。米国特許第４，６８１，５８１号、同第４，７３５，２１０号、同第５，１０１，８２７号、同第５，１０２，９９０号（ＲＥ３５，５００）、同第５，６４８，４７１号、及び同第５，６９７，９０２号も参照されたい。
【０３０４】
免疫毒素と放射性標識分子の各々は、ＣＤ４７を発現する細胞を殺傷する可能性がある。
【０３０５】
開示される抗ＣＤ４７抗体などのＣＤ４７及びその抗体に関する構造情報の利用、またはペプチドライブラリーのスクリーニングにより、ＣＤ４７に対する治療用ペプチドを生成することができる。ペプチド治療薬の設計及びスクリーニングは、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２−４２１（１９９２），Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８２：５１３１−５１３５（１９８５），Ｐｉｎａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：９０１−９０５（１９９２），Ｂｌａｋｅ  ａｎｄ  Ｌｉｔｚｉ−Ｄａｖｉｓ  ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：５１０−５１３（１９９２）で議論されている。
【０３０６】
免疫毒素、放射性標識分子、及びペプチド部分も調製することができる。ＣＤ４７分子（またはスプライスバリアントもしくは代替形態などの形態）が疾患プロセスにおいて機能的に活性であると仮定すると、従来の技術を通じて遺伝子及びアンチセンス治療薬を設計することも可能である。このようなモダリティは、ＣＤ４７の機能を調節するために利用できる。開示された抗ＣＤ４７抗体は、それに関連する機能アッセイの設計及び使用を促進する。アンチセンス治療法の設計及び戦略は、国際特許出願ＷＯ９４／２９４４４で詳細に議論されている。遺伝子治療のための設計及び戦略は周知である。細胞内抗体を含む遺伝子治療技術の使用も提供される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：５９５−６０１（１９９４）及びＭａｒａｓｃｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：１１−１５（１９９７）を参照されたい。遺伝子治療の一般的な設計及び考慮事項はまた、国際特許出願ＷＯ９７／３８１３７で議論されている。
【０３０７】
ＣＤ４７分子の構造及びＳＩＲＰα及び／または開示された抗ＣＤ４７抗体などの他の分子とのその相互作用から収集された知識ならびにその他を利用して、追加の治療モダリティを合理的に設計できる。この点で、Ｘ線結晶学、コンピューター支援（または支援）分子モデリング（ＣＡＭＭ）、定量的または定性的構造活性相関（ＱＳＡＲ）、及び同様の技術などの合理的な薬物設計技術を利用して、創薬の取り組みに注力することができる。合理的な設計により、ＩＬ−６Ｒｃの活性を修飾または調節するために使用できる分子またはその特定の形態と相互作用できるタンパク質または合成構造の予測が可能になる。このような構造は、化学的に合成するか、生物系で発現させることができる。このアプローチは、Ｃａｐｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ（１９８８））で総説されている。さらに、コンビナトリアルライブラリーを設計及び合成して、ハイスループットスクリーニングの試みなどのスクリーニングプログラムで使用できる。
【０３０８】
スクリーニング法
特定の実施形態では、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を破壊する化合物を同定することにより、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を妨害する化合物を同定することを含む方法が提供される。これらの方法（本明細書では「スクリーニングアッセイ」とも呼ばれる）は、モジュレーター、すなわちＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の結合を調節、またはさもなくば妨害する候補もしくは試験化合物もしくは薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、もしくは他の薬物）、またはＣＤ４７及び／またはＣＤ４７−ＳＩＲＰαのシグナル伝達機能を調節、さもなくば妨害する候補化合物もしくは試験化合物もしくは薬剤を同定するために使用される。異常なＣＤ４７及び／またはＣＤ４７−ＳＩＲＰαの発現、活性、及び／またはシグナル伝達に関連する障害を治療するのに有用な化合物を同定する方法も提供される。スクリーニング方法は、当該技術分野で知られる、または使用されている方法、または本明細書に記載の方法を含むことができる。例えば、ＣＤ４７をマイクロタイタープレートに固定化し、ＳＩＲＰαの存在下で候補または試験化合物、例えばＣＤ４７抗体とインキュベートすることができる。その後、結合したＳＩＲＰαは二次抗体を使用して検出でき、吸光度はプレートリーダーで検出できる。
【０３０９】
特定の実施形態では、マクロファージに対する腫瘍細胞の貪食を促進する化合物を同定することを含む方法が提供される。これらの方法は、当該技術分野で知られる、または使用されている方法、または本明細書に記載の方法を含むことができる。例えば、マクロファージは、候補化合物、例えば、ＣＤ４７抗体の存在下で、標識された腫瘍細胞と共にインキュベートされる。一定の期間の後、マクロファージは、貪食を同定するための腫瘍ラベルの内部移行について観察することができる。これらの方法に関するさらなる詳細、例えば、ＳＩＲＰαブロッキングアッセイ及び貪食アッセイは、実施例に提供されている。
【０３１０】
特定の実施形態では、ＣＤ４７のシグナル伝達機能を調節する候補または試験化合物をスクリーニングすることを含むアッセイが提供される。試験化合物は、生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な並列固相または溶液相ライブラリー；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリー法；「ワンビーズ一化合物」ライブラリー法；及びアフィニティークロマトグラフィー選択を使用した合成ライブラリー法を含む、当該技術分野で既知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチのいずれかを使用して得ることができる。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されているが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマー、または化合物の小分子ライブラリーに適用できる。（例えば、Ｌａｍ，  １９９７．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １２：１４５を参照されたい。）
【０３１１】
本明細書で使用されるとき、「小分子」は、約５ｋＤ未満、最も好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物を指すことを意味する。小分子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質または他の有機または無機分子であり得る。真菌、細菌、または藻類抽出物などの化学的及び／または生物学的混合物のライブラリーは、当該技術分野で既知であり、本明細書に開示されているかまたは当該技術分野で既知のアッセイのいずれかによってスクリーニングできる。
【０３１２】
分子ライブラリーの合成方法の例は、当該技術分野、例えば、ＤｅＷｉｔｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３．Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９０：６９０９；Ｅｒｂ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４．Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９１：１１４２２に見出すことができる。
【０３１３】
化合物のライブラリーは、溶液（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，１９９２．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：  ４１２−４２１を参照されたい）、またはビーズ上（Ｌａｍ，  １９９１．Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：  ８２−８４を参照されたい）、またはチップ上（Ｆｏｄｏｒ，  １９９３．Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６を参照されたい）、細菌（米国特許第５，２２３，４０９号を参照されたい）、胞子（米国特許第５，２３３，４０９号を参照されたい）、プラスミド（Ｃｕｌｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２．Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９を参照されたい）、またはファージ上（Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，  １９９０．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０、及び米国特許第５，２３３，４０９号を参照されたい）で提供され得る。
【０３１４】
特定の実施形態では、抗ＣＤ４７／ＣＤ４７複合体を破壊する化合物を同定することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、候補化合物を抗体−抗原複合体に導入し、候補化合物が抗体−抗原複合体を破壊するかどうかを判定し、この複合体の破壊は、候補化合物がＣＤ４７のシグナル伝達機能及び／またはＣＤ４７とＳＩＲＰαの間の相互作用を調節することを示す。他の実施形態では、可溶性ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７とＳＩＲＰαタンパク質の両方が提供され、少なくとも１つの中和モノクローナル抗体に曝露される。抗体−抗原複合体の形成が検出され、１つ以上の候補化合物が複合体に導入される。抗体−抗原複合体が１つ以上の候補化合物の導入後に破壊される場合、候補化合物は、異常なＣＤ４７及び／またはＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達に関連する障害を治療するのに有用である。
【０３１５】
抗体−抗原複合体を妨害または破壊する試験化合物の能力の決定は、例えば、試験化合物を放射性同位元素または酵素標識と結合させ、試験化合物の抗原または生物活性部分への結合を、複合体中の標識化合物を検出することによって決定できるようにして、達成することができる。例えば、試験化合物を直接または間接的にＩ１２５、Ｓ３５、Ｃ１４、またはＨ３で標識し、放射性同位元素を放射能の直接計数またはシンチレーション計数により検出することができる。代替的に、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識することができ、酵素標識は、適切な基質の生成物への変換の決定によって検出される。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、アッセイは、抗体−抗原複合体を試験化合物と接触させることと、試験化合物が抗原と相互作用するか、またはさもなくば既存の抗体−抗原複合体を破壊する能力を決定することと、を含む。試験化合物が抗原と相互作用し、及び／または抗体−抗原複合体を破壊する能力を決定することは、試験化合物が、抗体と比較して、抗原またはその生物学的に活性な部分に優先的に結合する能力を決定することを含む。
【０３１７】
他の実施形態では、アッセイは、抗体−抗原複合体を試験化合物と接触させることと、試験化合物が抗体−抗原複合体を調節する能力を決定することと、を含む。試験化合物が抗体−抗原複合体を調節する能力を決定することは、例えば、試験化合物の存在下で、抗原が抗体に結合または相互作用する能力を決定することによって達成することができる。
【０３１８】
本明細書に開示されるスクリーニング方法のいずれかにおいて、抗体は、ＣＤ４７活性及び／またはシグナル伝達を調節するか、またはさもなくば妨害する中和抗体であり得る。
【０３１９】
本明細書に開示されるスクリーニング方法は、細胞ベースのアッセイとして、または無細胞アッセイとして実施され得る。無細胞アッセイは、可溶型または膜結合型のいずれかのＣＤ４７及びそのフラグメントの使用に適している。膜結合型のＣＤ４７を含む無細胞アッセイの場合、可溶化剤を使用して、膜結合型のタンパク質が溶液中に維持されるようにすることができる。そのような可溶化剤の例には、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３−コルミドプロピル）ジメチルアンミニオール−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳＯ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０３２０】
特定の実施形態では、抗体または抗原のいずれかが固定化されて、候補化合物の導入後の非複合形態からの一方または両方の複合体の分離が容易になり、アッセイの自動化に対応する。候補化合物の存在下及び非存在下での抗体−抗原複合体の観察は、反応物を含めるのに適した任意の容器で実施することができる。そのような容器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、及び微小遠心管が含まれる。いくつかの実施形態では、タンパク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質を提供することができる。例えば、ＧＳＴ抗体融合タンパク質またはＧＳＴ抗原融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレートに吸着され得、次いで、試験化合物と混合され、混合物は、複合体形成を助長する条件下で（例えば、塩及びｐＨについて生理学的条件で）インキュベートされる。
【０３２１】
インキュベーション後、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄していずれもの未結合の成分を除去し、ビーズの場合の固定化されたマトリックスは、直接または間接的に複合体を決定する。代替的に、複合体をマトリックスから解離させることができ、抗体−抗原複合体形成のレベルを標準的な技術を使用して決定することができる。
【０３２２】
マトリックス上にタンパク質を固定化する他の技術もスクリーニングアッセイで使用できる。例えば、いずれかの抗体（例えば、配列番号３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１〜３７３、３８０〜３８３、３８８〜３９２から選択される可変重鎖と、配列番号３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３７４〜３７９、３８４〜３８７、及び３９３〜３９６から選択される可変軽鎖とを有する抗体）、または抗原（例えば、ＣＤ４７タンパク質）を、ビオチンとストレプトアビジンの結合を利用して固定化できる。ビオチン化抗体分子またはビオチン化抗原分子は、当該技術分野で周知の技術（ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  １Ｌ，  ＵＳＡ）を使用してビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から調製し、ストレプトアビジンをコーティングした９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）のウェルに固定化することができる。代替的に、目的の抗体または抗原と反応するが、目的の抗体−抗原複合体の形成を妨害しない他の抗体をプレートのウェルに誘導体化し、非結合抗体または抗原を抗体結合によりウェルにトラップすることができる。そのような複合体を検出するための方法は、ＧＳＴ固定化複合体について前述したものに加えて、抗体または抗原と反応するそのような他の抗体を使用する複合体の免疫検出を含む。
【０３２３】
これらのスクリーニングアッセイによって同定された化合物も提供される。
【０３２４】
診断的製剤及び予防的製剤
開示された抗ＣＤ４７抗体は、診断的製剤及び予防的製剤において使用することができる。いくつかの実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、例えば、非限定的に、がんまたは他の腫瘍性状態などの、前述の疾患のうちの１つ以上を発症するリスクがある患者に投与される。前述のがんまたは他の腫瘍性状態の１つ以上に対する患者または臓器の素因は、遺伝子型、血清学的、または生化学的マーカーを使用して判定することができる。
【０３２５】
他の実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、例えば、非限定的に、がんまたは他の腫瘍性状態などの、前述の疾患のうちの１つ以上と関連した臨床的兆候と診断されたヒト個体に投与される。診断されると、開示された抗ＣＤ４７抗体を投与して、前述の疾患の１つ以上に関連する臨床的兆候の影響を緩和または回復させる。
【０３２６】
開示された抗ＣＤ４７抗体はまた、患者試料中のＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαの検出に有用であり、したがって診断として有用である。例えば、開示された抗ＣＤ４７抗体は、患者の試料中のＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαレベルを検出するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡで使用されてもよい。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、開示される抗ＣＤ４７抗体は、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（複数可））上に固定化される。固定化された抗体は、試験試料中に存在する可能性のあるＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαの捕捉抗体として機能する。固定化された抗体を患者の試料と接触させる前に、固体支持体をすすぎ、ミルクタンパク質やアルブミンなどのブロッキング剤で処理して、分析物の非特異的吸着を防ぐ。
【０３２８】
続いて、ウェルは、抗原を含むと疑われる試験試料、または標準量の抗原を含む溶液で処理される。そのような試料は、例えば、病理の診断であると考えられる循環抗原のレベルを有することが疑われる対象からの血清試料である。試験試料または標準をすすいだ後、固体支持体は、検出可能に標識された二次抗体で処理される。標識された二次抗体は、検出抗体としての役割を果たす。検出可能な標識のレベルが測定され、試験試料中のＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαの濃度が、標準試料から作成された標準曲線との比較により決定される。
【０３２９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断アッセイにおいて開示された抗ＣＤ４７抗体を用いて得られた結果に基づいて、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαの発現レベルに基づいて対象における疾患（例えば、虚血、自己免疫、または炎症性障害に関連する臨床的兆候）を病気分類することが可能である。所与の疾患について、血液の試料は、疾患の進行の様々な段階にあると診断された対象、及び／または疾患の治療的処置の様々な時点にある対象から採取される。進行または治療の各段階について統計的に有意な結果を提供する試料の母集団を使用して、各段階の特性と考えられる可能性がある抗原の濃度の範囲が指定される。
【０３３０】
出版物及び特許文献の引用は、いずれかが適切な先行技術であることの承認として意図されておらず、その内容または日付に関するいかなる承認も構成していない。
【０３３１】
本発明を書面で説明したが、当業者は、本発明を様々な実施形態で実施することができ、前述の記載及び以下の実施例は例示を目的とし、以下に続く特許請求の範囲を限定するものではないことを認識するであろう。
【実施例】
【０３３２】
実施例１  抗ＣＤ４７抗体の生成及び選択
抗ＣＤ４７抗体は、Ｆｃタグを持つ組換えヒトＣＤ４７の細胞外ドメイン（ＣＤ４７−Ｆｃ）でマウスを免疫することによって生成された。等しく混合した５０μｇのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質と完全フロイトアジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の２００μｌを使用して、マウスを皮下免疫した。続いて、これらのマウスを、等しく混合された２５μｇのＣＤ４７−Ｆｃタンパク質と不完全フロイトアジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の２００μｌで、２週間ごとに３回、腹腔内と皮下を交互にブーストした。融合の４日前に、選択したマウスを腹腔内にアジュバントなしで２５μｇのＣＤ４７−Ｆｃでブーストした。免疫化スケジュールに従って、全てのマウスのリンパ節を採取して分離し、これによってＢ細胞の単離とその後のマウス骨髄腫細胞への融合を可能にした。ハイブリドーマ上清と精製されたマウスＣＤ４７モノクローナル抗体の両方を、ＣＤ４７への結合についてＥＬＩＳＡ（図１Ａ）及びＲａｊｉ細胞のフローサイトメトリー（図１Ｂ）でスクリーニングした。
【０３３３】
実施例２  マウスＣＤ４７抗体のＩｎ  ｖｉｔｒｏ特性評価
抗ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性
マウス抗体の赤血球凝集能を評価するために、ヒトＲＢＣを、抗ＣＤ４７抗体または対照の用量範囲と共に９６ウェルプレート中でインキュベートした。血球凝集の証拠は、非血球凝集ＲＢＣの点状のドットと比較してヘイズとして見える、非定着ＲＢＣの存在によって実証された。図２Ａ及び図２Ｂに示すように、ほとんどのマウス抗体は、血球凝集を引き起こすことが知られているＢ６Ｈ１２抗体の存在にもかかわらず、試験したどの濃度でも血球凝集活性を示さなかった。
【０３３４】
簡潔に述べると、実験の日に、健康なドナーからヒト赤血球（ＲＢＣ）が単離された。細胞をＰＢＳで数回洗浄し、ＲＢＣをアッセイ緩衝液で１ｍｌあたり２億個の細胞に希釈した。５０μｌの細胞溶液と２×抗体溶液を丸底の９６ウェルプレートに入れ、穏やかに混合した。３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで２時間プレートをインキュベートした後、アッセイプレートの写真を撮った。
【０３３５】
ヒトＣＤ４７に対する結合
ヒトＣＤ４７に結合するマウスＣＤ４７抗体の能力を評価した。図３に示すように、マウスＣＤ４７抗体はヒトＣＤ４７に結合する。
【０３３６】
ヒトＣＤ４７を発現する細胞に対する結合は、ヒトＣＤ４７過剰発現ＣＨＯ細胞（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｍ００５８１）で評価された。抗ＣＤ４７抗体希釈系列をＦＡＣＳ緩衝液で調製した。ＣＨＯ−Ｋ１／ヒトＣＤ４７細胞を９６ウェルＵ底プレートに移し、抗ＣＤ４７抗体希釈液を添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ−２１４４５）を添加するか、またはＰＥヤギ抗マウスＩｇＧ（最小交差反応性）抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０５３０７）を添加し、４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄した。細胞は、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）、及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアによって結合について分析した。
【０３３７】
カニクイザルＣＤ４７に対する結合
カニクイザルＣＤ４７（ｃｙｎｏ）に結合するマウスＣＤ４７抗体の能力を評価した。図４Ａ及び図４Ｂに示されるように、マウスＣＤ４７抗体は、ｃｙｎｏ  ＣＤ４７に結合する。
【０３３８】
簡潔に述べると、カニクイザルＣＤ４７発現細胞に対する結合を、カニクイザルＣＤ４７過剰発現ＣＨＯ細胞で評価した。抗ＣＤ４７抗体希釈系列をＦＡＣＳ緩衝液で調製した。ＣＨＯ−Ｋ１／カニクイザルＣＤ４７細胞を９６ウェルＵ底プレートに移し、ＣＤ４７抗体希釈液を添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ａ−２１４４５）を添加するか、またはＰＥヤギ抗マウスＩｇＧ（最小交差反応性）抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０５３０７）を添加し、反応物を４℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、次いで、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結合について分析した。
【０３３９】
抗ＣＤ４７抗体のＳＰＲ親和性
ＳＰＲ分析はＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ｔ２００計器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施し、反応速度定数は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して決定した。実験パラメーターは、最高の抗原濃度で飽和に到達し、Ｒｍａｘ値が１００ＲＵ未満に維持されるように選択された。ＧＥ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的、約７，０００ＲＵ）を、ＥＤＣ活性化アミンカップリング化合物を使用して、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ＣＭ５チップ上に固定化した。抗ＣＤ４７抗体（５μｇ／ｍＬ、６０秒捕捉時間）は、この表面を使用して捕捉した。次に、ヒトＣＤ４７−Ｈｉｓタンパク質は連続希釈系列の濃度を使用して捕捉抗体上に流した。捕捉抗体及び抗原は、抗原の各濃度について、新鮮な結合表面を確保するために、５０ｍＭのＨＣｌを使用して、各サイクルの間に除去した。得られたセンサーグラムは、結合速度及び解離速度（それぞれｋａ及びｋｄ）と親和性（ＫＤ）を計算するために、１：１バインディングモデルを使用してグローバルに近似した。結果を図５に示す。
【０３４０】
ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰαブロッキング活性
ＳＩＲＰαは、ＣＤ４７の天然リガンドである。ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用をブロックするマウス抗体の能力は、フローサイトメトリーベースのアッセイを用いて測定した。ヒトＣＤ４７を過剰発現するＣＨＯ−Ｋ１／ｈｕＣＤ４７を、マウスＣＤ４７抗体または対照抗体（Ｂ６Ｈ１２）と共にインキュベートした。図６に示すように、マウス抗体は、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を強力にブロックした。
【０３４１】
簡潔に述べると、ヒトＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ細胞（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｍ００５８１）を、ヒトＳＩＲＰα（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号４５４６−ＳＡ−０５０）及びアンダンテＣＤ４７抗体希釈液と共にインキュベートした。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した。次いで、ヒトＳＩＲＰアルファＰＥ−コンジュゲート抗体（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＦＡＢ４５４６Ｐ）を添加し、４℃で３０分間インキュベートし、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、細胞の結合について分析した。
【０３４２】
標的がん細胞株の貪食
ＣＤ４７は、腫瘍細胞で上方制御される細胞表面受容体であり、天然リガンドＳＩＰＲαとの相互作用を通じて免疫回避に寄与するとも考えられている。標的細胞の貪食に対するマウス抗体の効果を評価した。
【０３４３】
簡潔に述べると、標的細胞（ＰＫＨ２６標識ＣＣＲＦ／ＣＥＭ）を抗ＣＤ４７抗体またはアイソタイプ対照で１時間処理し、次いで１：５の比率で、エフェクター細胞（ヒト末梢血から単離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで１２〜１４日間、Ｍ−ＣＳＦで分化した一次ヒトマクロファージ）と、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで１時間共培養した。共培養の後、細胞をトリプシン処理し、抗ＣＤ１１−ＡＰＣで染色してフローサイトメトリーで分析した。
【０３４４】
貪食のパーセンテージ（％）は、フローサイトメトリーによって測定された総ＰＫＨ２６＋細胞のパーセントとしての、ＣＤ１１＋ＰＫＨ２６＋事象として測定された。
【０３４５】
さらに、図７Ａ及び図７Ｂに示されるように、これらのマウスＣＤ４７抗体は、腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を増加させた。
【０３４６】
赤血球の貪食
マウスＣＤ４７抗体の貪食の能力を評価するために、マウス抗ＣＤ４７抗体のＲＢＣ上のＣＤ４７に結合する能力を最初に評価した（図８）。全てのマウスＣＤ４７抗体は、ＲＢＣに結合する。図９に示すように、全てのマウス抗体は、マクロファージによる貪食の取り込みを増加させた。
【０３４７】
簡潔に述べると、健康なドナーからヒト赤血球（ＲＢＣ）が単離され、ＣＦＳＥで標識された。標識された赤血球を抗ＣＤ４７抗体またはアイソタイプ対照と共に１時間プレインキュベートし、次いで、ヒトマクロファージ（ヒト末梢血から単離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＭ−ＣＳＦで１２〜１４日間分化させた）と５：１のターゲットとエフェクター比で、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで１時間共培養した。共培養の後、細胞をトリプシン処理し、抗ＣＤ１１−ＡＰＣで染色してフローサイトメトリーで分析した。
【０３４８】
貪食％は、フローサイトメトリーによって測定された総ＣＦＳＥ＋細胞のパーセントとしての、ＣＤ１１＋ＣＦＳＥ＋事象として定量化された。
【０３４９】
実施例３  抗ＣＤ４７抗体のシークエンシング
【０３５０】
１３のマウス抗体（５５Ｆ２Ｃ４、９８Ｅ２Ｅ７、９８Ｅ２Ｅ１２、９８Ｇ５Ｆ６、９８Ｇ５Ｆ１１、１０７Ｆ１１Ｂ１１、１０７Ｆ１１Ｃ４、１０７Ｆ１１Ｆ１０、１０８Ｃ１０Ａ６、１０８Ｃ１０Ｆ５、１１２Ｅ５Ｄ９、１１２Ｅ５Ｆ２、１１２Ｅ５Ｈ７）の重鎖の可変領域（ＶＨ）及び軽鎖の可変領域（ＶＬ）の配列を同定するために、全ＲＮＡをハイブリドーマ細胞から単離し、ｃＤＮＡに逆転写した。重鎖の可変領域及び軽鎖の可変領域は、混合された特異的プライマーによって増幅した。配列は、ＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴによって分析した。配列は、配列番号３４９〜３６０に開示される。
【０３５１】
実施例４  キメラ抗体の生成
前述のマウス抗体のＤＮＡは、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖の定常ドメインのコード配列を置き換えることにより修飾されて、キメラ抗体を生成した（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９８４，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１を参照されたい）。コンストラクトは、キメラ抗体の発現のための哺乳動物細胞株にトランスフェクトした。培養上清中に分泌された抗体は、プロテインＡカラム上にロードした。数回の洗浄及び溶離ステップの後に、精製されたキメラ抗体は、１×ＰＢＳ緩衝液に緩衝液交換した。精製されたキメラ抗体タンパク質の濃度及び純度は、それぞれＯＤ２８０とＳＥＣ−ＨＰＬＣによって決定した。
【０３５２】
３つのキメラ抗体（１０８Ｃ１０Ａ６、９８Ｅ２Ｅ１２、及び１０７Ｆ１１Ｆ１０）の重鎖配列は、配列番号３９７、４０４及び４０６に開示される。３つのキメラ抗体（１０８Ｃ１０Ａ６、９８Ｅ２Ｅ１２、及び１０７Ｆ１１Ｆ１０）の軽鎖配列は、配列番号３９８、４０５、及び４０７に開示される。
【０３５３】
図１０及び図１１に示されるように、これらのキメラＣＤ４７抗体は、ＲＢＣ赤血球凝集なしで腫瘍細胞株ＣＣＲＦ−ＣＥＭの貪食を増加させた。
【０３５４】
実施例５  抗体のヒト化
１０８Ｃ１０Ａ６、１０７Ｆ１１Ｂ１１、及び９８Ｅ２Ｅ７抗体は、ＣＤＲ移植技術を用いてヒト化された（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい）。簡潔に述べると、マウス抗体１０８Ｃ１０Ａ６、１０７Ｆ１１Ｂ１１、及び９８Ｅ２Ｅ７の可変鎖配列は、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（ＲＣＳＢ）タンパク質データバンクで入手可能なものと比較された。１０８Ｃ１０Ａ６、１０７Ｆ１１Ｂ１１、及び９８Ｅ２Ｅ７の相同性モデルは、最も近いＶＨ及びＶＫの構造に基づいて生成された１０８Ｃ１０Ａ６、１０７Ｆ１１Ｂ１１、及び９８Ｅ２Ｅ７に最高の同一性を有するヒト配列を同定し、分析した。Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２４：４８７−４９９（１９９２）；Ｍｏｒｅａ  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−２７９（２０００）；Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １８６：６５１−６６３（１９８５）。ＣＤＲ移植重鎖及び軽鎖を構築するための最も適切なヒトフレームワークが同定された。
【０３５５】
重鎖について、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＢＡＨ０４５３９によってコードされるフレームワークは、全ての３つの抗体のために最も適切であると判定された。軽鎖について、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＡＣ４１９９２、ＡＡＺ０９０９６、及びＡＤＵ３２６１１によってコードされるフレームワークは、それぞれ、１０８Ｃ１０Ａ６、１０７Ｆ１１Ｂ１１、及び９８Ｅ２Ｅ７のために最も適切であると判定された。各鎖の発現コンストラクトを生成するために、直線移植を実行した。１０８ＶＨ１、１０８ＶＬ１、１０７ＶＨ１、１０７ＶＬ１、９８ＶＨ１、及び９８ＶＬ１のＤＮＡ及びタンパク質の配列は、配列表に開示される（配列番号１８、２７、３３、３７、４１、及び４６）。
【０３５６】
ヒト化抗体の親和性喪失の場合、いくつかのフレームワーク残基を変異させてそれらのマウス対応物に戻し、抗体の結合親和性を回復させた。１０８Ｃ１０Ａ６のＶＨについて、ヒト化バリアント１０８ＶＨ２、１０８ＶＨ３、１０８ＶＨ４、及び１０８ＶＨａを作製した（配列番号９、１９、２０、２２、及び２１）。１０８ＶＨ４のＣＤＲ２のプロリン５３をアラニンに変異させ、潜在的な酸に不安定なＡｓｐ−Ｐｒｏホットスポット（すなわち、１０８ＶＨ４．Ｍ４、配列番号２５）を削除した。１０８Ｃ１０Ａ６のＶＬについて、ヒト化バリアント１０８ＶＬ１．Ｍ１、１０８ＶＬ２．Ｍ１、及び１０８ＶＬ３．Ｍ１（配列番号１０、２９、３０、３１）を作製した。これらのヒト化ＶＬバリアントにおいて、ＶＬ−ＣＤＲ１のリジン２４を、アルギニンに変異させた。
【０３５７】
ヒト化抗体の親和性喪失の場合、いくつかのフレームワーク残基を変異させてそれらのマウス対応物に戻し、抗体の結合親和性を回復させた。１０７Ｆ１１Ｂ１１のＶＨについて、ヒト化バリアント１０７ＶＨ２及び１０７ＶＨ３を作製した（配列番号７、３４、３５）。１０７Ｆ１１Ｂ１１のＶＬについて、ヒト化バリアント１０７ＶＬ１．Ｍ１及び１０７ＶＬ２．Ｍ１（配列番号８、３８、３９）を作製した。これらのヒト化ＶＬバリアントにおいて、ＶＬ−ＣＤＲ１のヒスチジン２４を、アルギニンに変異させた。
【０３５８】
ヒト化抗体の親和性喪失の場合、いくつかのフレームワーク残基を変異させてそれらのマウス対応物に戻し、抗体の結合親和性を回復させた。９８Ｅ２Ｅ７のＶＨについて、ヒト化バリアント９８ＶＨ２、９８ＶＨ３、及び９８ＶＨａを作製した（配列番号３、４２、４３、４４）。９８Ｅ２Ｅ７のＶＬについて、ヒト化バリアント９８ＶＬ２及び９８ＶＬ３（配列番号４、４７、４８）を作製した。
【０３５９】
同一の抗体のヒト化重鎖及び軽鎖を混合し、一連のヒト化抗体を作製するためにマッチングした。これらの抗体は、ＨＥＫ２９３細胞を用いて一過性に生成した。上清を収集し、ＳＰＲを用いる親和性評価に供した。最終的に、ヒト化抗体１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１及び１０８ＶＨ１＿ＶＬ１．Ｍ１を、大規模生成及び機能的プロファイリングのために選択した。
【０３６０】
ヒト化抗体の４つのバージョン、すなわち、ＩｇＧ４Ｐ（安定化Ａｄａｉｒ変異（Ａｎｇａｌ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｏｌ．３０：１０５−１０８（１９９３））を有する、ここでセリン２２８（Ｋａｂａｔ付番）はプロリンに変換されている）、ＩｇＧ４ＰＥ（さらに抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）効果を低減するために、追加のＬ２３５Ｅ変異を有するＩｇＧ４Ｐ）、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ１が構築された。ヒト化抗体の、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの重鎖配列は、配列番号３９９、４００、４０３、及び４０１に開示される。軽鎖配列は、配列番号４０２に開示される。
【０３６１】
実施例６ヒト化抗ＣＤ４７抗体のＩｎ  ｖｉｔｒｏ特性評価
抗ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性
ヒト化抗ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性を評価するために、標的としてヒトＲＢＣを使用して、前述の実施例２に記載のものと同様の赤血球凝集アッセイを実施した。図１２に示すように、全てのヒト化ＣＤ４７抗体は、赤血球凝集活性を示さなかった。
【０３６２】
抗ＣＤ４７抗体のＳＰＲ親和性
ヒト化抗ＣＤ４７抗体の結合親和性を測定するために、前述の実施例２に記載のものと同様のＳＰＲアッセイを実施した。図１３及び表１に示すように、全てのヒト化ＣＤ４７抗体は、１〜２ｎＭのＫＤを示す。
【０３６３】
ヒトＣＤ４７に対する結合
ヒト化抗ＣＤ４７抗体の結合親和性を測定するために、前述の実施例２に記載のものと同様のフローサイトメトリーアッセイを実施した。図１４及び図１５に示すように、全てのヒト化抗ＣＤ４７抗体は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（図１４）及びＲＢＣ（図１５）で過剰発現するヒトＣＤ４７に結合する。
【０３６４】
カニクイザルＣＤ４７に対する結合
カニクイザルＣＤ４７に対するヒト化抗ＣＤ４７抗体の結合を評価するために、前述の実施例２に記載のものと同様のフローサイトメトリーアッセイを実施した。図１６に示すように、ヒト化抗ＣＤ４７抗体はカニクイザルＣＤ４７に結合する。
【０３６５】
抗ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰαブロッキング活性
ヒト化抗ＣＤ４７抗体のＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用をブロックする能力を評価するために、前述の実施例２に記載のものと同様のフローサイトメトリーアッセイを実施した。図１７に示されるように、ヒト化抗ＣＤ４７抗体はＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用をブロックした。
【０３６６】
標的がん細胞株の貪食
標的細胞株の貪食を増強するヒト化抗ＣＤ４７抗体の能力を評価するために、実施例２に記載されているものと同様の貪食アッセイを実施した。図１８及び図１９に示されるように、ヒト化抗ＣＤ４７抗体は、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（図１８）及びＲａｊｉ細胞（図１９）の貪食を増強した。
【０３６７】
赤血球の貪食
ヒト化ＣＤ４７抗体がＲＢＣの貪食を増強するかどうかを評価するために、実施例２に記載されているものと同様の貪食アッセイを実施した。図２０に示されるように、予想外に、ヒト化１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１のＩｇＧ２及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプは、ＲＢＣの貪食を増強しなかった。
【０３６８】
実施例７  マウスモデルにおけるヒト化抗ＣＤ４７抗体の抗腫瘍活性
ヒト化抗ＣＤ４７抗体の抗腫瘍活性を、リンパ腫のＲａｊｉモデルで評価した。Ｒａｊｉ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下に移植し、５つの群へと無作為化した（群あたり８匹のマウス、０日目）。群１：ビヒクル（ＰＢＳのみ）；群２：Ｂ６Ｈ１２（陽性対照）；群３：１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ１−Ｋａ；群４：１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ２−Ｋａ；群５：１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ４ＰＥ−Ｋａ。各抗体またはビヒクル（ＰＢＳのみ）による治療は、腫瘍が触知可能（１００ｍｍ３）になったときに開始し、腫瘍体積が約３０００ｍｍ３に達したときにマウスを安楽死させた。腫瘍体積は週に３回測定した。抗体を腹腔内（ｉ．ｐ．）に１０ｍｇ／ｋｇで週３回３週間投与した（マウスあたり合計９用量）。
【０３６９】
図２１に示すように、ヒト化抗体のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプは、このリンパ腫の動物モデルで抗腫瘍活性を実証した。
【０３７０】
データは、ヒト化抗ＣＤ４７抗体が、ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの結合をブロックし、ヒトがんのマウスモデルの腫瘍増殖を抑制することが知られている陽性抗体Ｂ６Ｈ１２よりも顕著に強力であることを示した。
【０３７１】
これらのヒト化ＣＤ４７抗体の抗腫瘍活性は、そのＣＤ４７を結合する効力、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用をブロックする効力、または腫瘍細胞の貪食を増強する効力と相関することが観察されなかった。
【０３７２】
ヒト化抗ＣＤ４７抗体１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ４ＰＥの抗腫瘍活性を、小細胞肺癌のＳＨＰ−７７モデルで評価した。
【０３７３】
図２３に示されるように、ヒト化抗体のＩｇＧ４ＰＥアイソタイプは、小細胞肺癌の動物モデルで抗腫瘍活性を実証した。
【０３７４】
実施例８  マウスにおけるヒト化ＣＤ４７抗体の薬物動態研究
薬物動態研究
マウスのＰＫ研究は、７〜８週齢（平均体重、２０ｇ）のＳＰＦグレードの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスで実施された。ヒト化抗ＣＤ４７抗体をマウスに３ｍｇ／Ｋｇ（容量１０ｍｌ／ｋｇ）で外側尾静脈を介したｉ．ｖ．ボーラス注入により投与した。ｉ．ｖ．注射後、時間間隔（注射後１５分、１時間、２時間、４時間、１０時間、１２時間、２４時間、ならびに２、３、５、７、１０、１４、２１、２８、及び３５日）で、血液試料を各群ｎ＝３）で後眼窩を介して採取した。全血はすぐに毛細管を通して採取され、各時点でヘパリンを含むマイクロ遠心チューブに収集された。血漿を抽出し、アッセイするまで−８０℃で保存した。
【０３７５】
血漿中の抗ＣＤ４７抗体の測定
血漿中の抗ＣＤ４７抗体は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定された。マイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ，  Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の捕捉抗体、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃフラグメント特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でコーティングした。検出システムは、基質としてテトラメチルベンジジンを用いたペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆ（ａｂ’）２フラグメント特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）からなった。発色を室温で進行させた後、１Ｍ  ＨＣｌで終了させた。ＭＫ３マイクロプレートリーダー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、全てのウェルの４５０ｎｍでの吸光度を決定した。標準曲線を生成し、試料を標準曲線から補間によって定量した。血漿標準は、既知量の抗ＣＤ４７抗体を血漿に添加することにより調製された。これらの標準を使用して、血漿中のアッセイによって回収された抗ＣＤ４７抗体の割合を計算した。ＥＬＩＳＡで測定した抗ＣＤ４７抗体濃度と追加の抗体濃度の線形回帰を行い、計算された勾配を部分回収率として使用した。次いで、試料中の抗ＣＤ４７抗体の血漿濃度を回収のために補正した。
【０３７６】
薬物動態分析
標準曲線を使用して、吸光度単位を各抗体のミリリットルあたりのマイクログラム（μｇ／ｍｌ）に変換した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖｅｒ．  ５．２，  Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏ．）を使用して、採血の時間に対して非コンパートメントモデルを血漿濃度（μｇ／ｍｌ）に近似することにより、薬物動態パラメーターを取得した。これらには、次のパラメーターが含まれる：ｔ１／２、終末相半減期；ＣＬ、クリアランス；Ｃｍａｘ、最大濃度；Ｖｓｓ、定常状態での分布の体積；ＭＲＴ、平均滞留時間；ＡＵＣ、曲線下面積。試験された抗体の薬物動態を図２２に示した。
【０３７７】
【表１】
2021511064.tif 000002
【０３７８】
【表２】
2021511064.tif 000003
【０３７９】
核酸及びアミノ酸の配列
【表３】
2021511064.tif 000004
2021511064.tif 000005
2021511064.tif 000006
2021511064.tif 000007
2021511064.tif 000008
【０３８０】
例示的な開示された抗体の核酸配列（ＶＨ／ＶＬ）
【表４】
2021511064.tif 000009
2021511064.tif 000010
【０３８１】
例示的な開示された抗体のアミノ酸配列（ＶＨ／ＶＬ）；ＣＤＲは下線を付している；ヒトＣＤ４７
【表５】
2021511064.tif 000011
2021511064.tif 000012
2021511064.tif 000013
2021511064.tif 000014
2021511064.tif 000015
2021511064.tif 000016
【０３８２】
本開示の例示的な抗体の核酸配列
【０３８３】
ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ２
セット１：
＞１０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ２（配列番号４１３）
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｃｇｇａｇｃｔｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃａｇｇａｔｃｃａｇｃｇｔｇａａｇｇｔｇａｇｃｔｇｃａａｇｇｃｔａｇｃｇｇｃｔａｃｔｃｔｔｔｃａｃｃｃａｃｃａｔｔｇｇａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｇａｇｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｇａｃａｇｇｇａｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇｃａｔｇａｔｃｇａｃｇｃｔｔｃｃｇａｔａｇｃｇａｇａｃａａｇａｃｔｇｔｃｔｃａｇａａｇｔｔｔａａｇｇａｃｃｇｃｇｔｇａｃｃａｔｃａｃａｇｃｃｇａｔａａｇｔｃｔａｃｃｔｃｃａｃａｇｃｔｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇｔｃｔｔｃｃｃｔｇａｇａｔｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｇｃｃｇｔｇｔａｃｔａｔｔｇｔｇｃｔａｇｇｃｔｇｇｇｃｃｇｇｔａｃｔａｔｔｔｃｇａｔｔａｔｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃａｃａｇｔｇａｃａｇｔｇａｇｃｔｃｔｇｃｃｔｃｃａｃｃａａｇｇｇａｃｃｔａｇｃｇｔｇｔｔｔｃｃｃｃｔｇｇｃｔｃｃｔｔｇｃａｇｃｃｇｇｔｃｔａｃａｔｃｃｇａｇａｇｃａｃｃｇｃｃｇｃｔｃｔｇｇｇａｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇａｔｔａｔｔｔｃｃｃｔｇａｇｃｃａｇｔｇａｃａｇｔｇｔｃｔｔｇｇａａｃｔｃｃｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃａａｇｃｇｇａｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｔｃｃａｇｃｔｇｔｇｃｔｇｃａｇｔｃｔｔｃｃｇｇｃｃｔｇｔａｔｔｃｔｃｔｇａｇｃｔｃｔｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃａｇｃａａｔｔｔｃｇｇｃａｃｃｃａｇａｃａｔａｃａｃｃｔｇｃａａｃｇｔｇｇａｃｃａｔａａｇｃｃａｔｃｃａａｔａｃａａａｇｇｔｇｇａｔａａｇａｃｃｇｔｇｇａｇａｇａａａｇｔｇｃｔｇｃｇｔｇｇａｇｔｇｃｃｃａｃｃｔｔｇｔｃｃｔｇｃｔｃｃａｃｃａｇｔｇｇｃｔｇｇａｃｃａａｇｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｔｔｃｃｔｃｃａａａｇｃｃｃａａｇｇａｃａｃａｃｔｇａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｃａｃａｃｃｔｇａｇｇｔｇａｃｃｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａｇｇａｔｃｃｃｇａｇｇｔｇｃａｇｔｔｔａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｔｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｔａａｇａｃｃａａｇｃｃｔａｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔｔｃａａｃｔｃｔａｃａｔｔｔｃｇｇｇｔｇｇｔｇｔｃｃｇｔｇｃｔｇａｃｃｇｔｇｇｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｇｔｃｔａａｔａａｇｇｇｃｃｔｇｃｃｃｇｃｔｃｃｔａｔｃｇａｇａａｇａｃａａｔｃｔｃｃａａｇａｃｃａａｇｇｇｃｃａｇｃｃａａｇａｇａｇｃｃｃｃａｇｇｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔａｇｃｃｇｃｇａｇｇａｇａｔｇａｃａａａｇａａｃｃａｇｇｔｇｔｃｔｃｔｇａｃｃｔｇｔｃｔｇｇｔｇａａｇｇｇｃｔｔｃｔａｃｃｃａｔｃｔｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇｔｃｃａａｔｇｇｃｃａｇｃｃｃｇａｇａａｃａａｔｔａｔａａｇａｃｃａｃａｃｃａｃｃｃａｔｇｃｔｇｇａｃａｇｃｇａｔｇｇｃｔｃｔｔｔｃｔｔｔｃｔｇｔａｃａｇｃａａｇｃｔｇａｃａｇｔｇｇａｔａａｇｔｃｔａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｃａａｃｇｔｇｔｔｔｔｃｔｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｔｃａｔｔａｃａｃｃｃａｇａａｇａｇｃｃｔｇｔｃｔｃｔｇｔｃｃｃｃｔｇｇｃａａｇ
【０３８４】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１４）
ｇａｇａｔｃｇｔｇｃｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｇｃｃａｃａｃｔｇｔｃｔｃｔｇｔｃｃｃｃａｇｇａｇａｇａｇｇｇｃｃａｃｃｃｔｇａｇｃｔｇｃｃｇｇｇｃｔｔｃｔｇａｇａａｃｇｔｇｇｇｃａｃａｔａｃａｔｃｔｃｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａｇｃｃａｇｇａｃａｇｇｃｔｃｃｔａｇｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｇｇｃｇｃｔａｇｃａａｔａｇａｔａｔａｃｃｇｇｃａｔｃｃｃｔｇｃｔｃｇｃｔｔｃａｇｃｇｇａｔｃｔｇｇａｔｃｃｇｇｃａｃａｇａｃｔｔｔａｃｃｃｔｇａｃａａｔｃｔｃｃａｇｃｃｔｇｇａｇｃｃａｇａｇｇａｔｔｔｃｇｃｃｇｔｇｔａｃｔａｔｔｇｔｇｇｃｇａｇｔｃｃｔａｃｇｇｃｃａｃｃｔｇｔａｔａｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｃａａａｇｇｔｇｇａｇａｔｃａａｇｃｇａａｃｇｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ
【０３８５】
セット２：
＞  ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ２（配列番号４１５）
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【０３８６】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１６）
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【０３８７】
セット３：
＞  ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ２（配列番号４１７）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＧＣＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＴＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＧＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＧＡＴＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＣＡＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＡＴＴＴＣＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＴＣＣＡＡＴＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＣＧＧＡＡＧＴＧＣＴＧＴＧＴＧＧＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＡＧＴＧＧＣＡＧＧＣＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＴＡＧＡＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＣＣＧＣＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＴＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧ
【０３８８】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１８）
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＡＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＣＡＴＡＣＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＡＧＣＡＡＧＣＡＡＴＡＧＧＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＡＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＧＣＧＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＴ
【０３８９】
１０８ＶＨ４．Ｍ４＿ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＧ４ＰＥ
セット１：
＞  ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ４ＰＥ（配列番号４１９）
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【０３９０】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１４）
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【０３９１】
セット２：
＞  ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ４ＰＥ（配列番号４２０）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＴＴＣＣＧＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＧＡＴＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＣＡＴＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＣＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＡＡＧＴＡＣＧＧＡＣＣＡＣＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＴＡＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＣＧＣＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
【０３９２】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１６）
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＡＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＣＡＴＡＣＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＡＧＣＡＡＧＣＡＡＴＡＧＧＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＡＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＧＣＧＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＴ
【０３９３】
セット３：
＞  ＶＨ  １０８ＶＨ４．Ｍ４−ｈＩｇＧ４ＰＥ（配列番号４２１）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＣＡＣＡＣＡＣＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＧＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＴＴＣＣＧＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＴＡＡＧＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＧＡＴＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＴＡＣＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＡＧＴＣＣＡＣＣＧＣＡＧＣＡＣＴＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＧＡＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＧＣＧＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＡＡＧＴＡＣＧＧＡＣＣＡＣＣＴＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＴＡＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＣＧＣＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＡＡＴＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＡＴＣＣＴＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＧＡＣＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＡＴＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＴＣＴＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＡＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＡＴＴＣＴＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
【０３９４】
＞  ＶＬ  １０８ＶＬ１．Ｍ１−ｈＩｇＫＣＬ（配列番号４１８）
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＣＡＡＣＡＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＧＡＧＣＡＡＧＣＧＡＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＣＡＴＡＣＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＧＡＧＣＡＡＧＣＡＡＴＡＧＧＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＡＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＧＣＧＡＧＡＧＣＴＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＴＣＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＴＡＧＣＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＡＴＡＴＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＴＧＣＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＡＧＴＣＴＴＴＴＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＴＧＴ
【０３９５】
他の実施形態
前述の説明は、本発明の例示的な実施形態のみを開示する。
【０３９６】
本発明は、それらの詳細な説明と共に記載されてきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図し、それを限定することを意図しないことを理解されたい。他の態様、利点、及び修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。したがって、本発明の特定の特徴のみを図示し説明してきたが、当業者は多くの修正及び変更に想到するであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨に含まれる全てのそのような修正及び変更を網羅することを意図していることを理解されたい。
【図１Ａ】
2021511064.tif 000017
【図１Ｂ】
2021511064.tif 000018
【図２Ａ】
2021511064.tif 000019
【図２Ｂ】
2021511064.tif 000020
【図３】
2021511064.tif 000021
【図４Ａ】
2021511064.tif 000022
【図４Ｂ】
2021511064.tif 000023
【図５】
2021511064.tif 000024
【図６】
2021511064.tif 000025
【図７Ａ】
2021511064.tif 000026
【図７Ｂ】
2021511064.tif 000027
【図８】
2021511064.tif 000028
【図９】
2021511064.tif 000029
【図１０】
2021511064.tif 000030
【図１１】
2021511064.tif 000031
【図１２】
2021511064.tif 000032
【図１３】
2021511064.tif 000033
【図１４】
2021511064.tif 000034
【図１５】
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【図１６】
2021511064.tif 000036
【図１７】
2021511064.tif 000037
【図１８】
2021511064.tif 000038
【図１９】
2021511064.tif 000039
【図２０】
2021511064.tif 000040
【図２１】
2021511064.tif 000041
【図２２】
2021511064.tif 000042
【図２３】
2021511064.tif 000043
【配列表】
2021511064000001.app
【国際調査報告】
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2021511064.tif 000045
2021511064.tif 000046
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