(57)【要約】  本発明は、全般的には、ポリシアル酸などのポリマーを含むナノカプセルまたはその他のナノ実体を含む、粒子に関する。この粒子は、細胞内部にアクセスし、かつ／または結合した薬物の細胞内での放出をもたらすことができる。５一態様では、本発明は、ポリシアル酸などのポリマーを含む外面または表面を有する、ナノカプセルまたはその他の実体に関する。いくつかの場合には、例えば、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドまたはその他のリンカーを用いて、Ｌｙｐ−１またはｔＬｙｐ−１ペプチドなどの標的化部分をポリマーと結合させる。これらは、例えば、ポリマー上のカルボキシラート部分と、アミノアルキルマレイミド（Ｃ１〜Ｃ４）またはアミノアルキル１０（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとを反応させ、得られたアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドまたはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタシルラミド（ｍｅｔｈａｃｙｒｌａｍｉｄｅ）と、システイン基またはその他の硫黄基とを反応させることによって生じ得る。標的化部分は、例えば、ポリマー上のカルボキシラート部分と、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはカルボジイミドとを反応させ、形成された中間体と、標的化ペプチド上のリジン基またはアルギニン基とを反応させて、ポリマー−アミド−ペプチドを得ることによって、ポリマーに結合させる。本発明の他の１５態様は、全般的には、このような組成物、このような組成物を含むキットなど作製法または使用法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
外殻に取り囲まれた内側部分を含み、前記外殻がポリマーと標的化部分とを含み、前記内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含む、複数のナノ実体
を含む、組成物。
【請求項２】
前記ポリマーが、
ポリシアル酸（ＰＳＡ）、
ヒアルロン酸（ＨＡ）、
ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）および／またはペグ化−ポリグルタミン酸（ＰＧＡ−ＰＥＧ）、
ポリ乳酸（ＰＬＡ）および／またはペグ化ポリ乳酸（ＰＬＡ−ＰＧＥ）、
ポリ（アスパラギン酸）（ＰＡＳＰ）および／またはペグ化−ポリ（アスパラギン酸）（ＰＡＳＰ−ＰＥＧ）、
ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＧＬＡ）および／またはペグ化ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＧＬＡ−ＰＥＧ）、
ポリアスパラギン酸および／またはペグ化ポリアスパラギン酸、
アルギン酸および／またはペグ化アルギン酸、
ポリリンゴ酸および／またはペグ化ポリリンゴ酸ならびに
その混合物
からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記標的化部分が、細胞浸透性ペプチドおよび／または腫瘍／組織浸透性ペプチドを含む、請求項１〜２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
前記標的化部分が、Ｌｙｐ１、ｔＬｙｐ１、ｃＬｙｐ１、ｉＮＧＲ、ｉＲＧＤ、ＲＰＡＲＰＡＲ、ＴＴ１、直鎖状ＴＴ１、ＲＧＤ−４Ｃ、ｃＲＧＤ、シレンジタイド、Ｆ３、９−ＲＧＤ、ＲＧＤ４Ｃ、デルタ２４−ＲＧＤ、デルタ２４−ＲＧＤ４Ｃ、ＲＧＤ−Ｋ５、非環状ＲＧＤ４Ｃ、二環式ＲＧＤ４Ｃ、ｃ（ＲＧＤｆＫ）、ｃ（ＲＧＤｙＫ）、Ｅ−［ｃ（ＲＧＤｆＫ）２］、Ｅ［ｃ（ＲＧＤｙＫ）］２、ＫＬＷＶＬＰＫＧＧＧＣ、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ、ＬＡＢＬ、アンジオペプチン−２、抗体、ナノボディ、トランスフェリン、アンキリン反復タンパク質、アフィボディ、葉酸、トリフェニルホスホニウム、ＡＣＵＰＡ、ＰＳＭＡ、炭水化物部分、およびアプタマーからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記標的化部分が、Ｌｙｐ−１、ｔＬｙｐ、またはｃＬｙｐ−１を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記標的化部分がＣｅｎｄＲペプチドを含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記標的化部分が、前記ポリマーと静電気的に結合している、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記標的化部分が、リンカーを介して前記ポリマーと結合している、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリマーの少なくとも一部が疎水性部分と結合している、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記疎水性部分が、アルキル基、シクロアルカン、胆汁酸塩および誘導体、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、および脂溶性ビタミンから選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記疎水性部分がＣ２〜Ｃ２４直鎖アルキル基を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記疎水性部分が直鎖Ｃ１６アルキル基またはＣ１２アルキル基を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記外殻の少なくとも約９０重量％がポリマーを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記複数のナノ実体の少なくとも一部が、平均径が１マイクロメートル未満のナノカプセルである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記複数のナノ実体の少なくとも一部が、１つまたは複数の界面活性剤をさらに含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリマーがポリシアル酸である、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドリンカーを介して、またはアミド基により直接、前記ポリシアル酸と結合している、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカーが、ＥＤＣ／ＮＨＳ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）によって、またはＤＭＴＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド）カップリング反応によって生じるものである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記標的化部分が、アミノエチルマレイミドリンカーを介して前記ポリシアル酸と結合している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソ−プロピルリンカーを介して、またはアミド基により直接、前記ポリシアル酸と結合している、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
前記アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカーが、ＥＤＣ／ＮＨＳ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）カップリング反応によって生じるものである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記標的化部分が、アミノエチルスクシンイミドリンカーを介して前記ポリシアル酸と結合している、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記標的化部分が、前記ポリシアル酸と化学的に結合した細胞浸透性ペプチドを含む、請求項１６〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
前記標的化部分がＣｅｎｄＲペプチドを含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ポリマーがヒアルロン酸であり、前記ヒアルロン酸の少なくとも一部が疎水性部分と結合している、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
前記ポリマーがＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰであり、前記標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドリンカーを介して、またはアミド基により直接、前記ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
前記標的化部分が、アミノエチルマレイミドリンカーを介して前記ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
外殻に取り囲まれた内側部分を含み、前記外殻がポリマーを含み、前記内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含み、ただし、前記ポリマーの少なくとも約９０％がヒアルロン酸ではない、複数のナノ実体
を含む、組成物。
【請求項３０】
前記ナノ実体が医薬品を含む、請求項１〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
前記医薬品がモノクローナル抗体である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記医薬品が抗癌剤である、請求項３０〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
前記医薬品が、前記ナノ実体の前記内側部分の中に含まれている、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
薬剤として使用する、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２０１７年１１月２日に出願された「Ｓｉｓｔｅｍａｓ  ｄｅ  Ｌｉｂｅｒａｃｉｏｎ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｏｓ  ｄｅ  Ａｃｉｄｏ  Ｐｏｌｉｓｉａｌｉｃｏ  ｙ  Ｍｅｔｏｄｏｓ」と題するスペイン特許出願第Ｐ２０１７３１２７７号の優先権を主張するものである。米国およびその他の国では、該当する場合、本願はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は全般的には、ポリシアル酸などのポリマーを含むナノカプセルもしくはナノ実体を含み、細胞の内部に薬物もしくはその他の活性物質を送達する担体としての役割を果たす、またはその他の用途のための粒子に関する。
【背景技術】
【０００３】
医薬品を標的化して体内に送達することが現在も課題となっている。例えば、多数の薬物が、標的細胞へのアクセスが困難であるためにその作用を効率的に発揮できない。
【０００４】
このため、医薬品送達の改善が必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は全般的には、ポリシアル酸（本明細書では、以降「ＰＳＡ」）などのポリマーを含むナノカプセルまたはその他のナノ実体を含む、粒子に関する。この粒子は、細胞内部にアクセスすることができ、そこで粒子の内容物を放出する。本発明の主題は、いくつかの場合には、１つまたは複数のシステムおよび／または物品の相互に関連する製品、特定の問題点に対する代替的解決法、および／または複数の異なる使用を含む。
【０００６】
本発明者らは、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリシアル酸（ＰＳＡ）を含み、ＰＳＡが標的化部分、具体的には細胞浸透性ペプチドＬｙｐ−１またはｃＬｙｐ−１と結合している、ナノカプセルなどのナノ実体を作製した。このことは実施例１にみることができる。本発明者らはまた、これらのナノカプセルがパクリタキセルおよびドセタキセルなどの医薬品を含有できることを明らかにした。さらに、本発明者らは、前記ナノカプセルが同所性肺腫瘍モデルでは、腫瘍組織内への薬剤の送達が増強されるため、医薬品単独よりも高い効果を示すことを明らかにする（実施例２を参照されたい）。本発明者らはまた、他の標的化部分、例えばＣｅｎｄＲも使用できることを明らかにした（実施例３を参照されたい）。実施例５では、パクリタキセルおよびその他の抗癌剤と結合したＰＳＡナノカプセルの製剤化について説明する。実施例６、７および１３に示すように、ＰＳＡおよびヒアルロン酸などのポリマーを疎水性部分、例えばＣ１６アルキル基と結合させることができる。
【０００７】
本発明者らはまた、実施例８〜１０にみられるように、モノクローナル抗体である医薬品と結合したナノカプセルの作製に成功を収め、ここでは、様々なポリマーおよびナノカプセル、すなわち、ＰＳＡ、ｔＬｙｐ−１を有するＰＳＡ、Ｃ１２アルキル基で官能化したＰＳＡ、Ｃ１６およびｔＬｙｐで官能化したヒアルロン酸、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）、ＰＧＡ／ＰＥＧ、ならびにポリアスパラギン酸／ＰＥＧを使用している。試験した抗体はＩｇＧ２およびベバジムマブ（ｂｅｖａｚｉｍｕｍａｂ）である。ナノカプセルを例えば、その毒性、安定性、および搭載能力との関連で特徴付けた（実施例１０および１１を参照されたい）。さらに、作製したナノカプセルは、細胞と相互作用し、さらに、結合した抗体の細胞内部移行を誘発することが明らかになった、すなわち、ナノカプセルが細胞膜によって包み込まれて細胞内に引き込まれ、そこで抗体が放出された（実施例１２を参照されたい）。
【０００８】
したがって、一態様では、本発明は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリマーと標的化部分とを含み、内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含む、複数のナノ実体を含む、組成物に関する。
【０００９】
別の態様では、本発明は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリマーを含み、内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含み、ただし、ポリマーの少なくとも約９０％がヒアルロン酸ではない、複数のナノ実体を含む、組成物に関する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、複数のナノ実体を含み、薬剤として使用する、組成物に関する。
【００１１】
一態様では、本発明は全般的には、組成物に関する。ある一連の実施形態では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分（または核）を含む複数のナノ実体、例えばナノカプセルを含む。いくつかの場合には、外殻は、ＰＳＡなどのポリマーを含む。内側部分は、少なくとも１つの疎水性化合物を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、外殻は、標的化部分、すなわち、ナノ構造の標的化または選択的標的化を可能にする分子を含む。ある特定の実施形態では、外殻は、細胞浸透性および／または腫瘍／組織浸透性ペプチドを含む。いくつかの場合には、標的化部分および／または細胞浸透性ペプチドおよび／または腫瘍／組織浸透性ペプチドは、ＰＳＡと化学的に結合している。
【００１３】
組成物は、別の一連の実施形態では、外殻に取り囲まれた内側部分を含む、複数のナノカプセルを含む。いくつかの実施形態では、外殻は、ＰＳＡと、ＰＳＡと化学的に結合した標的化部分とを含む。いくつかの場合には、標的化部分は、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２を有し、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、ペプチドを含む。いくつかの場合には、ペプチドは、配列ＲＧＤまたは配列ＮＧＲを含む。例えば、ペプチドは、配列Ｊ１ＲＧＤ、Ｊ１ＲＧＤＪ２、ＲＧＤＪ２、Ｊ１ＮＧＲ、Ｊ１ＮＧＲＪ２、ＮＧＲＪ２などを含む。（これらのＫ、Ｒ、Ｎ、Ｇ、Ｄなどの略号は、当業者が用いる標準的なアミノ酸残基の一文字コードであり；詳細については下を参照されたい）。いくつかの場合には、標的化部分は、Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２配列とＲＧＤ配列の両方（例えば、ｉＲＧＤペプチド）またはＺ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２配列とＮＧＲ配列の両方（例えば、ｉＮＧＲ）を有する、ペプチドを含む。
【００１４】
別の態様の別の一連の実施形態では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がＰＳＡなどのポリマーを含み、ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれるモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む。
【００１５】
別の態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ＰＳＡと、ＰＳＡと化学的に結合した標的化部分とを含み、標的化部分が、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２および／または配列ＲＧＤおよび／または配列ＮＧＲを有するペプチドを含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、複数のナノカプセルを含む。
【００１６】
別の態様のまた別の一連の実施形態では、組成物は、最大平均径が約１マイクロメータ未満である、実体を含む。この実体は、いくつかの実施形態では、ＰＳＡなどのポリマーと標的化部分とを含む、表面を有する。いくつかの場合には、この実体は、リポソームではない（リポソームに関する検討については下を参照されたい）。
【００１７】
また別の一連の実施形態は、全般的には、外殻に取り囲まれた内側部分を含む複数のナノ実体、例えばナノカプセルを含む、組成物に関する。外殻は、任意選択で疎水性部分と、例えば共有結合、静電気的結合などにより結合した、ＰＳＡなどのポリマーを含む。内側部分は、特定の場合には少なくとも１つの疎水性化合物を含む。いくつかの実施形態では、外殻は、ＰＳＡなどのポリマーと、標的化部分と、疎水性部分とを含む。いくつかの場合には、ＰＳＡの少なくとも一部が、標的化部分および／または疎水性部分と結合している。いくつかの実施形態では、疎水性部分は、Ｃ２〜Ｃ２４またはＣ１２などのアルキル基である。
【００１８】
別の態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ＰＳＡと、ＰＳＡと化学的に結合した細胞浸透性ペプチドを含む標的化部分とを含む、複数のナノ実体を含む。
【００１９】
別の態様の別の一連の実施形態では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含む複数のナノ実体、例えばナノカプセルを含む。いくつかの場合には、外殻は、ＰＳＡなどのポリマーから実質的になる。特定の場合には、内側部分は少なくとも１つの疎水性化合物を含む。
【００２０】
一態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がヒアルロン酸を含み、ナノ実体の少なくとも一部がモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む。
【００２１】
別の態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと標的化部分とを含む、複数のナノ実体を含む。
【００２２】
組成物は、さらに別の態様では、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと標的化部分とを含み、標的化部分が、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２および／または配列ＲＧＤおよび／または配列ＮＧＲを有するペプチドを含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、複数のナノカプセルを含む。
【００２３】
さらに別の態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰを含み、ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれるモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む。
【００２４】
一態様では、組成物は、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、疎水性部分と結合したヒアルロン酸を含む、複数のナノ実体を含む。
【００２５】
組成物は、別の態様では、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ポリ酸、ポリエステル、ポリアミド、またはその混合物からなる群より選択されるポリマーを含み、ナノ実体の少なくとも一部が、モノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む。
【００２６】
組成物は、さらに別の態様では、外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、疎水性部分と結合したヒアルロン酸を含み、小分子をさらに含むナノ実体の少なくとも一部が、１０００Ｄａ未満の分子量を有する、複数のナノ実体を含む。
【００２７】
別の一連の実施形態では、組成物は医薬組成物である。
【００２８】
本発明のさらなる実施形態は、全般的には、上記のいずれかの組成物または本明細書に記載される任意の組成物の薬剤としての使用に関する。さらに、本発明のいくつかの実施形態は、全般的には、上記のいずれかの組成物または本明細書の任意の組成物をヒトなどの生物体に投与する方法に関する。いくつかの場合には、生物体は、癌またはその他の疾患を有する１つの対象である。例えば、上記のいずれかの組成物（または本明細書に記載される任意の組成物）は、抗癌剤または抗体などの適切な治療剤をさらに含み得る。
【００２９】
本発明の別の態様は、全般的には、ある方法に関する。いくつかの実施形態では、この方法は、ＰＳＡ上のカルボキシラート部分と、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとを反応させ、得られたアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドと、標的化部分上のチオール基（例えば、システイン基由来のもの）とを反応させて、ＰＳＡ−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミド−ペプチドおよび／またはＰＳＡ−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソプロピル−ペプチド組成物を得る行為を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ＰＳＡ上のカルボキシラート部分と、活性化剤、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド、トリアジン、またはカルボジイミドとを反応させ、形成された中間体と、標的化部分上のアミノ基（例えば、リジン基またはアルギニン基由来のもの）とを反応させて、ＰＳＡ−アミド−ペプチドを得る行為を含む。
【００３０】
対象に特定の病態の予防または治療のための化合物を投与するいくつかの方法が本明細書に開示される。本発明のこのような各態様では、本発明は、具体的には、その特定の病態の治療または予防に使用する化合物、およびその特定の病態の治療または予防のための薬剤の製造への化合物の使用も含むことを理解するべきである。
【００３１】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される実施形態のうちの１つまたは複数のもの、例えばナノカプセルの作製法を包含する。さらに別の態様では、本発明は、本明細書に記載される実施形態のうちの１つまたは複数のもの、例えばナノカプセルを使用法を包含する。
【００３２】
本発明のその他の利点および新規な特徴については、以下に記載する本発明の様々な非限定的な実施形態の詳細な説明を添付図面とともに検討すれば明らかになるであろう。
【００３３】
本発明の非限定的な実施形態について、模式的であり、正確な比率にする意図のない添付図面を参照しながら例として記載する。図面では、図示される同一またはほぼ同一の構成要素を通常、単一の数字で表す。当業者に本発明を理解させるのに図示が必要でない場合には、明確にする目的で、あらゆる構成要素をあらゆる図面に表示することはせず、また、示される本発明の各実施形態の構成要素をすべて表示することもしない。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】シアル酸と、標的化部分として作用させるペプチドとのカップリング反応を示す図である。
【図２】図２Ａ−図２Ｂ。本発明の特定の実施形態による、マウスへのナノカプセルの送達を示すデータを示す図である。
【図３】本明細書に記載される特定のナノカプセルとＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（ｎａｂ−パクリタキセル）の送達の比較を示す図である。
【図４】本発明のさらに別の実施形態の特定のナノカプセルで処置したマウスの体重変化を示す図である。
【図５】図５Ａ−図５Ｂ。本発明の別の実施形態による特定のナノカプセルのｉｎ  ｖｉｖｏ効果を示す図である。
【図６】本発明の別の実施形態による、修飾ＰＳＡを作製する方法を示す図である。
【図７】本発明のまた別の実施形態の様々なポリマーナノカプセルの細胞毒性を示す図である。
【図８】図８Ａ−図８Ｄ。本発明の一実施形態による、細胞へのポリマーナノカプセルの送達の効果を示す図である。
【図９】図９Ａ−図９Ｂ。本発明の別の実施形態における、ＤＬＳにより測定した様々なｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの安定性を示す図である。
【図１０】図１０Ａ−図１０Ｃ。本発明のさらに別の実施形態における、ＮＴＡにより測定した様々なｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの安定性を示す図である。
【図１１】本発明のさらに別の実施形態の様々なポリマーナノカプセルとインキュベートした陽性細胞を示す図である。
【図１２】図１２Ａ−図１２Ｂ。本発明のさらに別の実施形態のナノカプセルを負荷した細胞を示す図である。
【図１３】図１３Ａ−図１３Ｃ。本発明のある特定の実施形態のＰＳＡ、ｔＬｙｐ１、およびコンジュゲートＰＳＡ−ｔＬｙｐ１の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
（発明の詳細な説明）
本発明は、全般的には、ポリシアル酸（ＰＳＡ）などのポリマーを含むナノカプセルまたはその他のナノ実体を含む、粒子に関する。この粒子は、細胞内部にアクセスし、かつ／または結合した薬物の細胞内での放出を生じさせることができる。一態様では、本発明は、ＰＳＡなどのポリマーを含む外面または表面を有する、ナノカプセルまたはその他の実体に関する。いくつかの場合には、例えばアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドまたはその他のリンカーを用いて、Ｌｙｐ−１またはｔＬｙｐ−１ペプチドなどの標的化部分をポリマーに結合させる。これらは、例えば、ポリマー上のカルボキシラート部分と、アミノアルキルマレイミド（Ｃ１〜Ｃ４）またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとを反応させ、得られたアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドまたはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタシルラミド（ｍｅｔｈａｃｙｒｌａｍｉｄｅ）と、システイン基またはその他の硫黄基とを反応させることによって生じる。例えば、ポリマー上のカルボキシラート部分とＮ−ヒドロキシスクシンイミドまたはカルボジイミドとを反応させ、形成された中間体と、標的化ペプチド上のリジン基またはアルギニン基とを反応させて、ポリマー−アミド−ペプチドを得ることによって、標的化部分をポリマーに結合させる。本発明のその他の態様は、全般的には、このような組成物、このような組成物を含むキットなどの作製法または使用法に関する。
【００３６】
諸実体の用途
一態様では、本発明は、全般的には、ＰＳＡなどのポリマーを含む、粒子またはその他の実体に関する。このような粒子または実体を、例えば薬物送達用途に使用する。例えば、このような粒子を対象が罹患している腫瘍に到達するように対象内に送達する。粒子は、例えば、Ｌｙｐ−１もしくはｔＬｙｐ−１などの細胞浸透性もしくは組織浸透性ペプチド、または本明細書で検討するその他のペプチド（例えば、ＣｅｎｄＲペプチド）としての能力も有する、標的化部分によって促進されて、腫瘍細胞内に送達される。その他のペプチド、抗体（例えば、完全長抗体、ナノボディ、一本鎖可変フラグメントなど）、またはアプタマー標的化部分についても、例えば本明細書で検討するように、ある特定の実施形態で使用する。粒子は、送達された後、標的細胞、例えば腫瘍細胞にアクセスし、中に含まれる薬物（例えば、治療剤または抗癌剤など）を放出できる。これまで、標的化部分を有する修飾ＰＳＡを含む粒子またはその他の実体が薬物の選択的放出および細胞内放出に使用されたことはない。
【００３７】
いくつかの場合には、実体は、本明細書で検討するように、薬学的に許容される担体内に存在し、例えば、実体を、例えば対象に投与するために、液体またはゲルに懸濁させる。実体は、実質的に固体であるか、または例えばカプセル内でのように、内部空間を画定するものであり得る。実体はまた、いくつかの実施形態ではミセルまたはリポソームであるが、ある特定の場合には、実体は、本明細書で検討するように、リポソームではない。
【００３８】
諸実体−ナノ実体
「実体」は、例えば、カプセル剤、粒子、およびミセルを含む。いくつかの場合には、実体はナノ実体である。本明細書で使用される「ナノ実体」は通常、平均径が１，０００ｎｍ未満、例えば、７５０ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、３００ｎｍ未満、２５０ｎｍ未満、２００ｎｍ未満、１５０ｎｍ未満、または１００ｎｍ未満の実体である。いくつかの場合には、実体は、平均径が少なくとも１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、５００ｎｍ、または１，０００ｎｍである。上記のいずれかの直径の組合せも可能であり、例えば、実体は、直径の平均範囲が１００ｎｍ〜３００ｎｍ、１，０００ｎｍ〜１ｎｍ、１，０００ｎｍ〜１０ｎｍ、７５０ｎｍ〜１ｎｍ、５００ｎｍ〜１０ｎｍ、３００ｎｍ〜１０ｎｍ、２５０ｎｍ〜１０ｎｍ、２００ｎｍ〜１０ｎｍ、１５０ｎｍ〜１０ｎｍ、１００ｎｍ〜１０ｎｍなどである。いくつかの実施形態では、２つ以上の実体も存在し、このような場合には、複数の実体の平均（算術平均）径は、ここに記載される寸法を有する。いくつかの場合には、一定の範囲の直径を有する実体が存在する。このような実体は、動的またはレーザー光散乱法などの様々な方法によって決定される。ナノ実体の非限定的な例としては、ナノ粒子、ナノカプセル、ミセル、またはその他の実体、例えば本明細書に記載される実態などが挙げられる。このようなナノ実体は、いくつかの場合には、この段落に記載される寸法を有する。
【００３９】
いくつかの場合には、実体は、外殻、例えば実体を取り囲む環境に露出した外殻に取り囲まれた内側部分を含む。内側部分は、実体内に対称または非対称に位置している。内側部分には、例えば、液体（例えば、非水性または水性のもの）、固体、および／またはその組合せが含まれている。いくつかの実施形態では、内側部分には、１つまたは複数の医薬品または薬物、例えば、本明細書に記載されるいずれかのものが含まれている。例えば、内側部分には、モノクローナル抗体または小分子、例えばドセタキセルなどが含まれている。いくつかの場合には、内側部分（含まれている部分を含む）を、例えば外殻によって、外部環境に露出しないようにする。
【００４０】
諸実体−カプセル／ナノカプセル、粒子／ナノ粒子
いくつかの場合には、実体はカプセル（例えば、ナノカプセル）である。カプセルは、実質的に固体であるか、またはコム様またはゲル様の殻を有する。さらに、いくつかの場合には、実体は、ナノ粒子などの粒子である。粒子は、固体であり、明確な形状を有する。いくつかの場合には、粒子は、外殻に取り囲まれた内側部分を有する実体であり、例えば、粒子はカプセルである。ナノカプセルは、大きさがナノメートルの範囲内にある。ナノ粒子が概ね球状である場合、それをナノスフェアと呼ぶことがある。ナノカプセルは、実質的に均一であるが、ほかの表面的特徴、例えば本明細書に記載されるものを含めた標的化部分、浸透促進剤、抗体などを有する。
【００４１】
いくつかの場合には、粒子は、外殻に取り囲まれた内側部分を有する実体であり、例えば、粒子はカプセルまたはナノカプセルである。いくつかの場合には、ナノカプセルは、内核と、内核と識別可能な組成を有する外殻とを含む、ナノメートルの範囲内の大きさを有する。内核は、例えば液体または固体材料であり得る。必ずというわけではないが、多くの場合、内核は油である。外殻は、連続する材料から形成され、通常、内核とは共有結合していない。いくつかの場合には、外殻は、平均の厚さが少なくとも１ｎｍ、少なくとも２ｎｍ、少なくとも３ｎｍ、少なくとも５ｎｍ、少なくとも１０ｎｍ、少なくとも２０ｎｍ、少なくとも３０ｎｍ、少なくとも５０ｎｍ、少なくとも１００ｎｍ、または少なくとも２００ｎｍである。
【００４２】
いくつかの場合には、ナノ実体は外殻を１つだけ含む。
【００４３】
諸実体−ミセル
いくつかの場合には、実体はミセルである。ミセルは通常、内側部分と外面を画定する複数の界面活性剤または両親媒性分子から形成される。例えば、界面活性剤分子は、例えば、界面活性剤または両親媒性分子の単層から形成される、相対的に親水性の外面と相対的に疎水性の内側部分とを有するよう配置される。いくつかの場合には、ミセルは、大きさがナノメートルの範囲内にある。ミセルは、いくつかの実施形態では、外相に分散させたとき、ＣＭＣ（臨界ミセル濃度）を上回る濃度の両親媒性分子によって構成される。外部の液相が水性である場合、両親媒性分子の親水性部分が外相の方を向く。両親媒性分子の濃度によっては、ミセル自体が組織化して、ミセルのクラスターというさらに大きい構造を形成することがある。ミセルは、例えば、親水性部分が表面にあり、疎水性部分が内部を向いている（または、いくつかの場合にはその逆である）界面活性剤分子から形成される。
【００４４】
諸実体−リポソーム
リポソームは、類似した構造を有し得るが、通常、界面活性剤または両親媒性分子の二重層（例えば、脂質二重層）から形成され、それにより内側部分、中間部分、および外殻が画定され得るものであり、例えば、内側部分が相対的に親水性となり、中間部分（例えば、界面活性剤または両親媒性分子の二層構造によって形成される、リポソームの外殻）が相対的に疎水性となり、リポソームの外部が水性または親水性の環境となる。
【００４５】
本明細書で使用される「親水性」であるという特性は、分子または官能基が水相に入り込む、またはそこに留まるという本質的な特性であると理解される。したがって、「疎水性」であるという特性は、分子または官能基が水に対して外側に向かう挙動を示す、すなわち、水に入り込まない、または水相を離れる傾向を示すという本質的な特性であると理解される。さらなる詳細については、Ｒｏｍｐｐ  Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｌａｃｋｅ  ｕｎｄ  Ｄｒｕｃｋｆａｒｂｅｎ，Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｎ．Ｙ．，１９９８，“Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ”，“Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ”，２９４および２９５ページを参照されたい。いくつかの場合には、親水性（または水溶性）の実体とは、ｌｏｇ  Ｐが１．５未満である実体のことであり、疎水性（または脂溶性）の実体とは、ｌｏｇ  Ｐが１．５を上回る実体のことであり、ここでは、ｌｏｇ  Ｐは実体のオクタノール−水分配係数である。
【００４６】
内側部分が実体内に存在する場合、内側部分には液体が含まれており、いくつかの場合には、液体は水性または非水性である。いくつかの場合には、液体には生理食塩水または塩水溶液が含まれている。液体は任意選択で、例えば対象に送達するための、薬物またはその他の医薬品を含有し得る。薬物またはその他の医薬品の非限定的な例については、本明細書で検討される。例えば、内側部分には、モノクローナル抗体または小分子、例えばドセタキセルなどが含まれている。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ナノ実体は、ＰＳＡなどのポリマーを含む材料の単層から実質的になる、外殻を含む。他の実施形態では、ナノ実体は、ＰＳＡなどのポリマーを含む単殻を含む。他の実施形態では、外殻は複数の層を含み、その層のうちの１つがＰＳＡなどのポリマーを含む。さらなる実施形態では、ポリマーを含む層が最外層である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、ナノ実体、例えば、ナノカプセル、ナノ粒子、ミセル、またはリポソームの内側部分は、固体、半固体（例えば、ゲル）、液体、気体、またはその組合せを含む。内側部分は、水性もしくは非水性であるか、または水性部分と非水性部分をともに含む。いくつかの実施形態では、内側部分は、１つまたは複数の医薬品、薬物などを含む。
【００４９】
他の実施形態では、内側部分は非水性部分を含む。さらなる実施形態では、非水性部分は非水性液体である。さらなる実施形態では、非水性液体は疎水性化合物、例えば油を含む。さらなる実施形態では、非水性液体は、油と界面活性剤とを含む。さらなる実施形態では、内側部分は脂肪酸を含む。さらなる実施形態では、内側部分はモノグリセリドを含む。さらなる実施形態では、内側部分はジグリセリドを含む。さらなる実施形態では、内側部分はトリグリセリドを含む。さらなる実施形態では、内側部分は中鎖トリグリセリドを含む。さらなる実施形態では、内側部分は長鎖トリグリセリドを含む。
【００５０】
疎水性化合物
実体（例えば、カプセル、粒子、ミセル、またはその他のナノ実体、例えば本明細書で検討されるものなど）の内側部分が非水性である場合、内側部分を形成している非水性液体は、例えば、油、脂肪酸、アルカン、シクロアルカン、胆汁酸塩、胆汁酸塩誘導体、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、および脂溶性ビタミンから選択される、１つまたは複数の疎水性化合物、ならびに／あるいは少なくとも１つの界面活性剤を含む。これらの油は、製薬に使用する天然油、半合成油、および合成油、例えば植物もしくは動物源由来の油、炭化水素油、またはシリコーン油などから選択され得る。本発明の特定の実施形態を実施するのに適した油としては、特に限定されないが、鉱油、スクアレン油、香味油、シリコーン油、精油、非水溶性ビタミン、ステアリン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸オクチル、パルミチン酸セチル、ベヘン酸トリデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジオクチル、アントラニル酸メンチル、オクタン酸セチル、サリチル酸オクチル、ミリスチン酸イソプロピル、ジカプリン酸ネオペンチルグリコールケトール、オレイン酸デシル、乳酸Ｃ１２〜Ｃ１５アルキル、乳酸セチル、乳酸ラウリル、ネオペンタン酸イソステアリル、乳酸ミリスチル、ステアロイルステアリン酸イソセチル、ステアロイルステアリン酸オクチルドデシル、炭化水素油、イソパラフィン、流動パラフィン、イソドデカン、石油ゼリー、アルガン油、ナタネ油、ラー油、ヤシ油、トウモロコシ油、綿実油、アマニ油、ブドウ種子油、カラシ油、オリーブ油、パーム油、分画パーム油、ラッカセイ油、ヒマシ油、松の実油、芥子油、カボチャ種子油、米ぬか油、ベニバナ油、ティーツリー油、トリュフ油、植物油、キョウニン油、ホホバ油、マカダミアナッツ油、コムギ胚芽油、アーモンド油、ダイズ油、ゴマ種子油、ハシバミ油、ヒマワリ油、麻実油、シタン油、ククイナッツ油、アボカド油、クルミ油、魚油、ベリー油、オールスパイス油、杜松油、種子油、アーモンド種子油、アニス種子油、セロリ種子油、クミン種子油、ナツメグ種子油、バジル葉油、ベイリーフ油、桂皮葉油、セージ葉油、ユーカリ葉油、レモン葉油、メラレウカ葉油、オレガノ油、パチョリ葉油、ハッカ葉油、マツ葉油、ローズマリー葉油、スペアミント油、ティーツリー葉油、タイム油、花精油、カミツレ油、クラリーセージ油、チョウジ油、ゼラニウム花精油、ヒソップ花精油、ジャスミン油、ラベンダー油、マウカ花精油、マジョラム花精油、オレンジ花精油、バラ花精油、イランイラン花精油、樹皮油、カッシア樹皮油、桂皮油、ササフラス樹皮油、桐油、クスノキ木油、シダーウッド油、シタン油、ビャクダン油、生姜油、トール油、ヒマシ油、ミルラ油、果皮油、ベルガモット果皮油、グレープフルーツ果皮油、レモン果皮油、ライム果皮油、オレンジ果皮油、タンジェリン果皮油、根油、吉草油、オレイン酸、リノール酸、オレイルアルコール、イソステアリルアルコール、オレイン酸エチル、中鎖トリグリセリド、例えばデカノイルグリセリドとオクタノイルグリセリドの混合物（Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１０Ｎ、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２Ｎ、Ｋｏｌｌｉｓｏｌｖ（登録商標）ＭＣＴ、Ｃａｐｔｅｘ（登録商標）３００、Ｃａｐｔｅｘ（登録商標）３５５、Ｌａｂｒａｆａｃ（登録商標）Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ１３４９）、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ  ２１２５  ＣＳ（リノレオイルマクロゴール−６グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ２１３０  ＣＳ（ラウロイルマクロゴール−６グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ  １９４４  ＣＳ（オレオイルポリオキシル−６グリセリド）、Ｌａｂｒａｆａｃ（登録商標）ＰＧ（プロピレングリコールジカプリロカプラート）、Ｒｙｌｏ（登録商標）（脂肪酸の混合物）、Ｐｅｃｅｏｌ（登録商標）（グリセロールモノオレアート）およびＭａｉｓｉｎｅ（登録商標）（グリセロールモノリノレアート）など、その合成または半合成誘導体、ならびにその組合せが挙げられる。
【００５１】
いくつかの場合には、油は、ラッカセイ油、綿実油、オリーブ油、ヒマシ油、ダイズ油、ベニバナ油、ゴマ油、トウモロコシ油、パーム油、アルファ−トコフェロール（ビタミンＥ）、ミリスチン酸イソプロピル、スクアレン、Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）、Ｌａｂｒａｆａｃ（登録商標）、Ｐｅｃｅｏｌ（登録商標）、Ｃａｐｔｅｘ（登録商標）、Ｋｏｌｌｉｓｏｌｖ（登録商標）ＭＣＴ、およびＭａｉｓｉｎｅ（登録商標）、またはその混合物のうちの１つまたは複数のものである。その他の適切な油としては、イソプレン単位（２−メチルブタ−１，３−ジエン）によって形成され、その炭素原子に従って細分されるテルペンファミリー、すなわち、ヘミテルペン（Ｃ５）、モノテルペン（Ｃ１０）、セスキテルペン（Ｃ１５）、ジテルペン（Ｃ２０）、セスタテルペン（Ｃ２５）、トリテルペン（Ｃ３０）、テトラテルペン（Ｃ４０、カロテノイド）およびポリテルペンに由来する油、ビタミンＡ、スクアレンなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、内側部分を形成する非水性液体は、製剤の安定性を最大限にするため、非水溶性の安定剤、保存剤、界面活性剤、有機溶媒、およびその混合物を含有し得る。様々な実施形態では、これらの油および／またはその他の油のうちの１つまたは複数のものの組合せも可能である。
【００５２】
実体（例えば、カプセル剤、粒子、ミセル、またはその他のナノ実体、例えば本明細書で検討されるものなど）の内側部分が水性である場合、内側部分を形成する水性液体は、ある特定の実施形態では、少なくとも１つの塩を含有する水からなるものであり得る。
【００５３】
さらに、いくつかの実施形態では、内側部分を形成する水性液体は、１つまたは複数の水溶性の安定剤、保存剤、界面活性剤、グリコール、ポリオール、糖、増粘剤、ゲル化剤、およびこれらの組合せ、ならびに／あるいはその他の適切な補形剤を含有し得る。これらの補形剤は、例えば、製剤の安定性を改善するため、最終組成物の粘度を調整するため、内部水相からの放出速度を制御するためなどに使用される。
【００５４】
ポリマー
ある一連の実施形態では、実体（例えば、カプセル剤、粒子、ミセル、またはその他のナノ実体、例えば本明細書で検討されるものなど）は、ＰＳＡなどのポリマーを含む。ポリマーは、実体全体に均等に分布するか、または、実体の特定の領域内に、例えば、カプセルの外殻もしくは実体のその他の外表面に濃縮される。いくつかの場合には、実体の一部分、例えば殻などの少なくとも５０重量％がポリマーを含み、特定の場合には、実体の一部分の少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも７５重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも８５重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、または少なくとも９９重量％がポリマーを含み得る。いくつかの場合には、実体の一部分は、ポリマーから実質的になるものであり得る。
【００５５】
本発明の特定の実施形態では、様々なポリマーを使用する。例えば、ポリマーは、ある一連の実施形態では、ポリ酸、ポリ（アミノ酸）、またはポリエステルである。これらのポリマーの非限定的な例としては、ＰＳＡ、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）、ペグ化ポリグルタミン酸（ＰＧＡ−ＰＥＧ）、ポリ（アスパラギン酸）（ＰＡＳＰ）、ペグ化ポリアスパラギン酸（ＰＡＳＰ−ＰＥＧ）、ポリ乳酸、ペグ化ポリ乳酸（ＰＬＡ−ＰＥＧ）、ペグ化ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）、ポリアスパラギン酸、ペグ化ポリアスパラギン酸、アルギン酸、ペグ化アルギン酸、ポリリンゴ酸、ペグ化ポリリンゴ酸などが挙げられる。ある特定の実施形態では、これらのポリマーおよび／またはその他のポリマーの組合せも使用される。例えば、このようなポリマーは、例えばナノ実体の内側部分の中に含まれるモノクローナル抗体または小分子を含有する、ナノ実体を形成するために、または本明細書に記載される用途などのその他の用途に使用される。
【００５６】
ポリマー−ポリシアル酸、ＰＳＡ
ある一連の実施形態では、ポリマーはＰＳＡを含む。ＰＳＡは一般に、複数のシアル酸単位から構成され、シアル酸単位は多くの場合、２−−＞８および／または２−−＞９結合を介して一緒に結合して、ポリマーを形成するが、その他の結合配置も可能である。通常、一緒に結合してＰＳＡを形成するシアル酸単位が少なくとも２個、少なくとも４個、少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、少なくとも７５個、少なくとも１００個、少なくとも２００個、少なくとも３００個、少なくとも４００個、または少なくとも５００個存在する。いくつかの場合には、ＰＳＡは、一緒に結合してＰＳＡを形成するシアル酸単位を１０００個以下、５００個以下、２００個以下、１００個以下、５０個以下、３０個以下、または１０個以下有する。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ＰＳＡは、一緒に結合したシアル酸単位を２〜１００個有する。シアル酸単位は同一である必要はなく、同じＰＳＡ分子内であっても独立に同じものまたは異なるものであり得ることに留意するべきである。また、ＰＳＡは必ずしも一直線の（直鎖状の）鎖である必要はなく、様々な分岐配置も可能であることに留意するべきである。例えば、あるシアル酸単位が３つ以上の異なるシアル酸単位と結合し、それにより、ＰＳＡ分子内に分岐点が生じる。
【００５７】
非限定的な例として、ＰＳＡは、分子量が様々であり、例えば、４ｋＤａ、３０ｋＤａ、９５ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ＰＳＡは３００個超のシアル酸単位を含む。ほかの非限定的な例として、ＰＳＡは、分子量が少なくとも１ｋＤａ、少なくとも３ｋＤａ、少なくとも５ｋＤａ、少なくとも１０ｋＤａ、少なくとも２０ｋＤａ、少なくとも２５ｋＤａ、少なくとも３０ｋＤａ、少なくとも４０ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも６０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａ、少なくとも７５ｋＤａ、少なくとも８０ｋＤａ、少なくとも９０ｋＤａ、少なくとも１００ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ＰＳＡは、分子量が１００ｋＤａ以下、９０ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、７５ｋＤａ以下、７０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下、５０ｋＤａ以下、４０ｋＤａ以下、３０ｋＤａ以下、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、５ｋＤａ以下、３ｋＤａ以下、または１ｋＤａ以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ＰＳＡは、分子量が約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａなどである（別途明示されない限り、本明細書に記載される分子量は数平均分子量である）。
【００５８】
また、ポリシアル酸は必ずしも同一である必要はないことに留意するべきである。例えば、いくつかの実施形態では、ＰＳＡは、シアル酸単位の数が様々であり、かつ／または、存在する様々なＰＳＡ分子中に様々なシアル酸単位が存在する。いくつかの場合には、１種類または数種類のＰＳＡ分子が存在してよく、例えば、１つまたは複数の形態が、存在するＰＳＡ分子を、すなわち、モルベースで、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上含む。
【００５９】
ＰＳＡ内に存在するシアル酸単位の非限定的な例としては、特に限定されないが、Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ）、２−ケト−３−デオキシノン酸（ｄｅｏｘｙｎｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｋｄｎ）、ラクタミン酸、Ｎ−シアル酸、および／またはＯ−シアル酸が挙げられる。その他の例としては、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）、９−Ｏ−アセチル−８−Ｏ−メチル−Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５，９Ａｃ２８Ｍｅ）、および７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−Ｎ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ７，８，９Ａｃ３）が挙げられる。「Ｓｉａ」は一般に、不特定のシアル酸単位を表す。いくつかの実施形態では、シアル酸単位は、天然に通常みられる４３種類の誘導体を含めたノイラミン酸（９炭素糖）の任意の誘導体を含む。このようなものとしては、特に限定されないが、Ｎｅｕ；Ｎｅｕ５Ａｃ；Ｎｅｕ４，５Ａｃ２；Ｎｅｕ５，７Ａｃ２；Ｎｅｕ５，８Ａｃ２；Ｎｅｕ５，９Ａｃ２；Ｎｅｕ４，５，９Ａｃ３；Ｎｅｕ５，７，９Ａｃ３；Ｎｅｕ５，８，９Ａｃ３；Ｎｅｕ５，７，８，９Ａｃ４；Ｎｅｕ５Ａｃ９Ｌｔ；Ｎｅｕ４，５Ａｃ２９Ｌｔ；Ｎｅｕ５Ａｃ８Ｍｅ；Ｎｅｕ５，９Ａｃ２８Ｍｅ；Ｎｅｕ５Ａｃ８Ｓ；Ｎｅｕ５Ａｃ９Ｐ；Ｎｅｕ２ｅｎ５Ａｃ；Ｎｅｕ２ｅｎ５，９Ａｃ２；Ｎｅｕ２ｅｎ５Ａｃ９Ｌｔ；Ｎｅｕ２，７ａｎ５Ａｃ；Ｎｅｕ５Ｇｃ；Ｎｅｕ４Ａｃ５Ｇｃ；Ｎｅｕ７Ａｃ５Ｇｃ；Ｎｅｕ８Ａｃ５Ｇｃ；Ｎｅｕ９Ａｃ５Ｇｃ；Ｎｅｕ７，９Ａｃ２５Ｇｃ；Ｎｅｕ８，９Ａｃ２５Ｇｃ；Ｎｅｕ７，８，９Ａｃ３５Ｇｃ；Ｎｅｕ５Ｇｃ９Ｌｔ；Ｎｅｕ５Ｇｃ８Ｍｅ；Ｎｅｕ９Ａｃ５Ｇｃ８Ｍｅ；Ｎｅｕ７，９Ａｃ２５Ｇｃ８Ｍｅ；Ｎｅｕ５Ｇｃ８Ｓ；Ｎｅｕ５ＧｃＡｃ；Ｎｅｕ５ＧｃＭｅ；Ｎｅｕ２ｅｎ５Ｇｃ；Ｎｅｕ２ｅｎ９Ａｃ５Ｇｃ；Ｎｅｕ２ｅｎ５Ｇｃ９Ｌｔ；Ｎｅｕ２ｅｎ５Ｇｃ８Ｍｅ；Ｎｅｕ２，７ａｎ５Ｇｃ；Ｎｅｕ２，７ａｎ５Ｇｃ８Ｍｅ；Ｋｄｎ；およびＫｎｄ９Ａｃが挙げられる。ある一連の実施形態では、シアル酸単位（重合してＰＳＡを形成する前）はそれぞれ独立に、以下の構造を有し得る：
【化１】
2021516211.tif 000002
Ｒ１は、Ｈ；Ｇａｌ（３／４／６）、ＧａｌＮＡｃ（６）（Ｎ−アセチルガラクトサミン）、ＧｌｃＮＡｃ（４／６）、Ｓｉａ（８／９）、もしくは５−Ｏ−Ｎｅｕ５Ｇｃとのアルファ結合；２，７−アンヒドロ分子中のＣ−７と結合した酸素；またはＮｅｕ２ｅｎ５Ａｃで除去されるアノマーヒドロキシル（Ｃ−３との二重結合）である。Ｒ２は、Ｈ；Ｇａｌ（３／４／６）、ＧａｌＮＡｃ（６）、ＧｌｃＮＡｃ（４／６）、Ｓｉａ（８／９）、または５−Ｏ−Ｎｅｕ５Ｇｃとのアルファ結合；２，７−アンヒドロ分子中のＣ−７との結合した酸素；またはＮｅｕ２ｅｎ５Ａｃで除去されるアノマーヒドロキシル（Ｃ−３との二重結合）である。Ｒ４は、Ｈ；−アセチル；Ｃ−８とのアンヒドロ；Ｆｕｃ（フコース）；またはＧａｌ（ガラクトース）である。Ｒ５は、アミノ；Ｎ−アセチル；Ｎ−グリコリル；ヒドロキシル；Ｎ−アセトイミドイル；Ｎ−グリコリル−Ｏ−アセチル；Ｎ−グリコリル−Ｏ−メチル；またはＮ−グリコリル−Ｏ−２−Ｎｅｕ５Ｇｃである。Ｒ７は、Ｈ；−アセチル；Ｃ−２とのアンヒドロである；またはＬｅｇ（レジオナミン酸）においてアミノおよびＮ−アセチルによって置換されている。Ｒ８は、Ｈ；−アセチル；Ｃ−４とのアンヒドロ；−メチル；−硫酸；Ｓｉａ（シアル酸）；またはＧｌｃ（グルコース）である。Ｒ９は、Ｈ；−アセチル；−ラクチル；−リン酸；−硫酸；Ｓｉａ；またはＬｅｇにおいてＨによって置換されたＯＨである。いくつかの場合には、ＰＳＡはコロミン酸（２−−＞８結合だけが存在する場合）である。
【００６０】
本明細書で使用されるシアル酸は、シアル酸の水溶性塩および水溶性誘導体を含む。例えば、シアル酸塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、または亜鉛塩である。一実施形態では、シアル酸の少なくとも一部がナトリウム塩として存在する。複数の種類のシアル酸の組合せを例えば、ＰＳＡのサブユニットとして、および／または異なる分子のＰＳＡとして使用してもよい。
【００６１】
ある一連の実施形態では、ＰＳＡ内のシアル酸の少なくとも一部が修飾されている（ただし、他の実施形態では、ＰＳＡが必ずしも修飾されているわけではないことを理解するべきである）。例えば、いくつかの場合には、１つまたは複数のシアル酸単位が、例えば、ポリエチレングリコール、アルキル、またはその他の疎水性部分などとの結合によって修飾されている。疎水性部分は、疎水性分子またはその一部分、例えば、本明細書で検討されるものなどのアルキル基を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ナノ実体はポリアルギニンもプロタミンも含まない。
【００６３】
ただし、例えばＰＳＡに加えて、かつ／またはこれに代えて、他のポリマーも使用し得ることを理解するべきである。
【００６４】
ポリマー−ヒアルロン酸、ＨＡ
ある一連の実施形態では、ポリマーはヒアルロン酸を含む。ヒアルロン酸は、下の式に示すように、交互に存在するベータ−１，４グリコシド結合とベータ−１，３グリコシド結合によって結合したＤ−グルクロン酸とＤ−Ｎ−アセチルグルコサミンを交互に付加することによって形成される二糖構造の反復を含む、直鎖状ポリマーである：
【化２】
2021516211.tif 000003
式中、整数ｎは重合度、すなわち、ヒアルロン酸鎖中の二糖単位の数を表す。例えば、ｎは、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、または少なくとも５００である。いくつかの場合には、ｎは、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、３０以下、または１０以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ｎは２〜１００である。ヒアルロン酸単位は同一である必要はなく、同じヒアルロン酸鎖内であっても独立に同じものまたは異なるものであり得ることに留意するべきである。また、ヒアルロン酸は必ずしも一直線の（直鎖状の）鎖である必要はなく、様々な分岐配置も可能であることに留意するべきである。
【００６５】
したがって、広範囲にわたる分子量のヒアルロン酸を使用できる。分子量の大きいヒアルロン酸は市販されているのに対し、分子量の小さいヒアルロン酸は、例えばヒアルロニダーゼ酵素を用い、高分子量ヒアルロン酸を断片化することによって入手できる。非限定的な例として、ヒアルロン酸は、分子量が様々であり、例えば、４ｋＤａ、３０ｋＤａ、９５ｋＤａなどである。例えば、ヒアルロン酸は、分子量が少なくとも１ｋＤａ、少なくとも３ｋＤａ、少なくとも５ｋＤａ、少なくとも１０ｋＤａ、少なくとも２０ｋＤａ、少なくとも２５ｋＤａ、少なくとも３０ｋＤａ、少なくとも４０ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも６０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａ、少なくとも７５ｋＤａ、少なくとも８０ｋＤａ、少なくとも９０ｋＤａ、少なくとも１００ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ヒアルロン酸は、分子量が１００ｋＤａ以下、９０ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、７５ｋＤａ以下、７０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下、５０ｋＤａ以下、４０ｋＤａ以下、３０ｋＤａ以下、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、５ｋＤａ以下、３ｋＤａ以下、または１ｋＤａ以下である。これらのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ヒアルロン酸は、分子量が約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａなどである。
【００６６】
本明細書で使用されるヒアルロン酸はまた、その共役塩基（ヒアルロン酸塩）を含む。この共役塩基は、無機塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、アルミニウム塩、およびリチウム塩など、有機塩、例えば中性ｐＨの塩基性アミノ酸塩などを含めたヒアルロン酸のアルカリ塩であり得る。いくつかの場合には、塩は薬学的に許容されるものである。一実施形態では、アルカリ塩は、ヒアルロン酸のナトリウム塩である。また、複数の種類のヒアルロン酸の組み合わせを例えば、ヒアルロン酸鎖のサブユニットとして、および／または異なる分子のヒアルロン酸として使用する。
【００６７】
したがって、ヒアルロン酸は必ずしも同一である必要はない。例えば、いくつかの実施形態では、ヒアルロン酸は、ヒアルロン酸単位（上記のものなど）の数が様々であり、かつ／または、存在する様々なヒアルロン酸鎖中に様々なヒアルロン酸単位が存在する。いくつかの場合には、１つまたは複数の種類のヒアルロン酸分子が存在し、例えば、１つまたは複数の形態が、存在するヒアルロン酸分子を、すなわち、モルベースで、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上含む。
【００６８】
いくつかの実施形態では、ヒアルロン酸単位の少なくとも一部が修飾されている（ただし、他の実施形態では、ヒアルロン酸が必ずしも修飾されているわけではないことを理解するべきである）。例えば、いくつかの場合には、１つまたは複数のヒアルロン酸単位が、例えば、ポリエチレングリコール、アルキル、またはその他の疎水性部分などとの結合によって修飾されている。疎水性部分は、疎水性分子またはその一部分、例えば、本明細書で検討されるものなどのアルキル基を含む。
【００６９】
ポリマー−ポリグルタミン酸、ＰＧＡ
別の一連の実施形態では、ポリマーはポリグルタミン酸（ＰＧＡ）を含む。ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）は、負荷電のグルタミン酸単位からなる親水性で生分解性のポリマーである。これは以下の式によってあらわされ得る：
【化３】
2021516211.tif 000004
式中、整数ｎは重合度、すなわち、グルタミン酸単位の数を表す。例えば、ｎは、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、または少なくとも５００である。いくつかの場合には、ｎは、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、３０以下、または１０以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ｎは２〜１００である。ヒアルロン酸グルタミン酸単位は同一である必要はなく、同じポリグルタミン酸内であっても独立に同じものまたは異なるものであり得ることに留意するべきである。このようなグルタミン酸単位の例としては、のちに検討するものなどが挙げられる。また、グルタミン酸単位は必ずしも一直線の（直鎖状の）鎖である必要はなく、様々な分岐配置も可能であることに留意するべきである。
【００７０】
したがって、広範囲にわたる分子量のポリグルタミン酸を使用できる。非限定的な例として、ポリグルタミン酸は、分子量が様々であり、例えば、４ｋＤａ、３０ｋＤａ、９５ｋＤａなどである。例えば、ポリグルタミン酸は、分子量が少なくとも１ｋＤａ、少なくとも３ｋＤａ、少なくとも５ｋＤａ、少なくとも１０ｋＤａ、少なくとも２０ｋＤａ、少なくとも２５ｋＤａ、少なくとも３０ｋＤａ、少なくとも４０ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも６０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａ、少なくとも７５ｋＤａ、少なくとも８０ｋＤａ、少なくとも９０ｋＤａ、少なくとも１００ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ヒアルロン酸は、分子量が１００ｋＤａ以下、９０ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、７５ｋＤａ以下、７０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下、５０ｋＤａ以下、４０ｋＤａ以下、３０ｋＤａ以下、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、５ｋＤａ以下、３ｋＤａ以下、または１ｋＤａ以下である。これらのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ポリグルタミン酸は、分子量が約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａなどである。
【００７１】
本明細書で使用されるポリグルタミン酸（またはＰＧＡ）は、特に限定されないが、その共役塩基（グルタミン酸塩）、ならびに／あるいはアンモニウム塩のようなＰＧＡの水溶性塩、およびリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩などのようなＰＧＡの金属塩を含む。一実施形態では、ＰＧＡは、例えば、ポリ−Ｄ−グルタミン酸、ポリ−Ｌ−グルタミン酸Ｌ−グルタミン酸、ポリ−Ｄ酸、ポリ−グルタミン酸、ポリ−Ｄ−グルタミン酸、グルタミン酸ポリ−およびポリ−アルファ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ−アルファ−Ｄ酸、Ｌ−グルタミン酸、ポリ−ガンマ−Ｄ−グルタミン酸、ポリ−ガンマ−Ｌ−グルタミン酸およびポリ−ガンマ−Ｄ、Ｌ−グルタミン酸、ならびにその混合物を含む。別の実施形態では、ＰＧＡはポリ−Ｌ−グルタミン酸として存在する。いくつかの場合には、ＰＧＡはポリ−Ｌ−グルタミン酸のナトリウム塩として存在する。別の実施形態では、ＰＧＡはポリ−アルファ−グルタミン酸として存在する。さらに別の実施形態では、ＰＧＡはポリ−ａ−グルタミン酸のナトリウム塩として存在する。上記の通り、複数の種類のポリグルタミン酸の組合せを例えば、ポリグルタミン酸鎖のサブユニットとして、および／または異なる分子のポリグルタミン酸として使用してもよい。
【００７２】
したがって、ポリグルタミン酸は必ずしも同一である必要はない。例えば、いくつかの実施形態では、ポリグルタミン酸は、グルタミン酸単位（上記のものなど）の数が様々であり、かつ／または、存在する様々なポリグルタミン酸鎖中に様々なポリグルタミン酸が存在する。いくつかの場合には、１つまたは複数の種類のポリグルタミン酸分子が存在し、例えば、１つまたは複数の形態が、存在するポリグルタミン酸を、すなわち、モルベースで、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、またはそれ以上含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ポリグルタミン酸単位の少なくとも一部が修飾されている（ただし、他の実施形態では、ポリグルタミン酸が必ずしも修飾されているわけではないことを理解するべきである）。例えば、いくつかの場合には、１つまたは複数のポリグルタミン酸単位が、例えば、ポリエチレングリコール、アルキル、またはその他の疎水性部分などとの結合によって修飾されている。疎水性部分は、疎水性分子またはその一部分、例えば、本明細書で検討されるものなどのアルキル基を含む。
【００７４】
ポリマー−ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧ
ある一連の実施形態では、ポリマーはポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含む。いくつかの場合には、ＰＥＧがＰＧＡとコンジュゲートされて、例えば、ポリグルタミン酸−ポリエチレングリコール酸コポリマー（ＰＧＡ−ＰＥＧ）を形成する。ただし、他の場合には、ＰＥＧが存在する、すなわち、ＰＧＡとコンジュゲートされていない。
【００７５】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、その最も一般的な形態では、式：
Ｈ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−ＯＨ
を有するポリマーであり、式中、ｎは、ＰＥＧ重合度を表す整数である。コンジュゲートＰＧＡ−ＰＥＧの形成には、２つの末端ヒドロキシル基のうち１つまたは２つのヒドロキシル基を修飾する。修飾されたＰＥＧは、例えば、以下の通りであり：
Ｘ１−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−Ｘ２
式中、Ｘ１は、水素、またはのちの反応のためのＯＨラジカル基をブロックするヒドロキシル保護基である。例えば、ｎは、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、または少なくとも５００である。いくつかの場合には、ｎは、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、３０以下、または１０以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ｎは２〜１００である。
【００７６】
ヒドロキシルラジカルの保護基は当該技術分野で周知であり、代表的な（酸素を含む）保護基には、例えば、シリルエーテル、例えばトリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテル、トリエチルジメチルシリルエーテル、トリフェニルシリルエーテル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリルエーテルなど；アルキルエーテル、例えばメチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ベンジルエーテル、３，４−ジメトキシベンジルエーテルのｐ−メトキシベンジルエーテル、トリエチルエーテル、アリルエーテル；アルコキシメチルエーテル、例えばメトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルエーテルなど；テトラヒドロピラニルエーテルおよびそれに関連するエーテル；メチルチオメチルエーテル；エステル、例えば酢酸エステル、安息香酸エステル、ピバル酸エステル、メトキシ酢酸エステル、クロロ酢酸エステル、レブリン酸エステルなど；炭酸エステル、例えば炭酸ベンジル、炭酸ｐ−ニトロベンジル、炭酸ｔｅｒｔ−ブチル、炭酸２，２，２−トリクロロエチル、炭酸２−（トリメチルシリル）エチルアリルなどがある。具体例として、保護基は、メチルエーテルなどのアルキルエーテルである。Ｘ２は、ポリグルタミン酸基およびそれから誘導される基への固定を可能にする架橋基である。いくつかの場合には、Ｘ２は、他のＰＧＡおよびその誘導体との固定を可能にする基であり得る。
【００７７】
ポリマー−ＰＧＡ／ＰＥＧ
いくつかの場合には、ＰＥＧは、ＰＧＡおよびその誘導体のアミン基および／またはカルボン酸を介して、ＰＧＡおよびその誘導体と結合している。ポリマーのＰＥＧ化は、当該技術分野で利用可能な任意の適切な方法を用いて実施できる。
【００７８】
このようなポリマーは、様々な分子量で用いることができる。例えば、適切なＰＥＧまたはＰＧＡ−ＰＥＧの分子量は、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、および約３５ｋＤａである。
【００７９】
別の例として、適切なＰＥＧまたはＰＧＡ−ＰＥＧおよびその水溶性誘導体の分子量は、約１ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａ、約３ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、または約４ｋＤａ、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、約２３ｋＤａ、約２４ｋＤａ、約２５ｋＤａ、もしくは約３０ｋＤａであり得る。
【００８０】
ほかの非限定的な例として、ＰＥＧまたはＰＧＡ−ＰＥＧは、分子量が少なくとも１ｋＤａ、少なくとも３ｋＤａ、少なくとも５ｋＤａ、少なくとも１０ｋＤａ、少なくとも２０ｋＤａ、少なくとも２５ｋＤａ、少なくとも３０ｋＤａ、少なくとも４０ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも６０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａ、少なくとも７５ｋＤａ、少なくとも８０ｋＤａ、少なくとも９０ｋＤａ、少なくとも１００ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ＰＥＧまたはＰＧＡ−ＰＥＧは、分子量が１００ｋＤａ以下、９０ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、７５ｋＤａ以下、７０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下、５０ｋＤａ以下、４０ｋＤａ以下、３０ｋＤａ以下、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、５ｋＤａ以下、３ｋＤａ以下、または１ｋＤａ以下である。これらのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ＰＥＧまたはＰＧＡ−ＰＥＧは、分子量が約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａなどである。
【００８１】
いくつかの場合には、ＰＧＡ−ＰＥＧポリマーおよびその水溶性誘導体は、様々なＰＥＧ化度で用いることができる。このＰＥＧ化度がＰＧＡの官能基の割合と定義される、または官能基ＰＧＡ誘導体がＰＥＧで官能化される。したがって、ＰＥＧ化ＰＧＡ−ＰＥＧポリマーおよびその水溶性誘導体の適切な度数は、例えば、約０．１％〜約１０％、約０．２％〜約５％、約０．５％〜約２％、または約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、もしくは約２％であり得る。
【００８２】
いくつかの実施形態では、ＰＧＡ−ＰＥＧおよびその誘導体水溶性ポリマー中のＰＥＧの割合は、ポリマーの総重量に対して約１０％〜９０％（ｗ／ｗ）、約１５％〜８０％、約２０％〜７０％、または約２０％、約２２％、約２４％、約２６％、約２８％、約３０％、約３２％、約３４％、約３６％、約３８％、約４０％、約４２％、約４４％、約４６％、約４８％、約５０％、約５２％、約５４％、約５６％、約５８％、もしくは約６０％であり得る。
【００８３】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、ＰＧＡが１つまたは複数の利用可能な位置、例えばアミン基および／またはカルボン酸において、必要に応じて１つまたは複数の基で置換されている、ＰＧＡまたはＰＧＡ−ＰＥＧの水溶性誘導体を含む。適切なＰＧＡおよびＰＧＡ−ＰＥＧ誘導体の誘導体としては、ポリ（アルキルグルタミン）および誘導体ＰＥＧ−ポリ（アルキルグルタミン）、例えばポリ（Ｎ−２−（２’−ヒドロキシエトキシ）エチル−Ｌ−グルタミン）（ＰＥＥＧ）、ＰＥＧ−ＰＥＥＧ、ポリ（Ｎ−３−（ヒドロキシプロピル）−Ｌ−グルタミン）（ＰＨＰＧ）、ＰＥＧ−ＰＨＰＧ、ポリ（Ｎ−２−（ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミン）（ＰＨＥＧ）、ＰＥＧ−ＰＨＥＧ、ポリ（アルファ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸）（ＰＢＧ）、ＰＥＧ−ＰＢＧ、ポリ（ガンマ−トリクロロエチル−Ｌ−グルタミン酸）（ｐＴＣＥＧ）、ＰＥＧ−ｐＴＣＥＧ、ポリ（ジメチルアミノエチル−Ｌ−グルタミン）（ｐＤＭＡＥＧ）、ＰＥＧ−ｐＤＭＡＥＧ、ポリ（ピリジノエチル−Ｌ−グルタミン）（ｐＰｙＡＥＧ）、ＰＥＧ−ｐＰｙＡＥＧ、ポリ（アミノエチル−Ｌ−グルタミン）（ＰＡＥＧ）、ＰＥＧ−ＰＡＥＧ、ポリ（ヒスタミノ−Ｌ−グルタミン）（ｐＨｉｓＧ）、ＰＥＧ−ｐＨｉｓＧ、ポリ（アグマチン−Ｌ−グルタミン）（ｐＡｇｍＧ）、およびＰＥＧ−ｐＡｇｍＧ、ならびにその混合物が挙げられる。
【００８４】
ポリマー−ポリ（アスパラギン酸）、ＰＡＳＰ
また別の一連の実施形態では、ポリマーは、アミノ酸であるアスパラギン酸のポリマー、例えば（ＰＡｓｐ）ｎである、ポリ（アスパラギン酸）（ＰＡＳＰ）を含む。ポリマー内には任意の数のアスパラギン酸単位が存在する。例えば、ｎは、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、または少なくとも５００である。いくつかの場合には、ｎは、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、３０以下、または１０以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ｎは２〜１００である。また、ＰＡＳＰ鎖内には他のアミノ酸が存在し、ポリマーは直鎖状または分岐鎖状であることに留意するべきである。さらに、本明細書で使用されるＰＡＳＰは、水溶性塩および水溶性ＰＡＳＰおよび／またはＰＡＳＰ誘導体を含む。
【００８５】
ポリ（アスパラギン酸）は、任意の適切な分子量を有する。例えば、ポリ（アスパラギン酸）は、分子量が少なくとも１ｋＤａ、少なくとも３ｋＤａ、少なくとも５ｋＤａ、少なくとも１０ｋＤａ、少なくとも２０ｋＤａ、少なくとも２５ｋＤａ、少なくとも３０ｋＤａ、少なくとも４０ｋＤａ、少なくとも５０ｋＤａ、少なくとも６０ｋＤａ、少なくとも７０ｋＤａ、少なくとも７５ｋＤａ、少なくとも８０ｋＤａ、少なくとも９０ｋＤａ、少なくとも１００ｋＤａなどである。いくつかの場合には、ポリ（アスパラギン酸）は、分子量が１００ｋＤａ以下、９０ｋＤａ以下、８０ｋＤａ以下、７５ｋＤａ以下、７０ｋＤａ以下、６０ｋＤａ以下、５０ｋＤａ以下、４０ｋＤａ以下、３０ｋＤａ以下、２５ｋＤａ以下、２０ｋＤａ以下、１０ｋＤａ以下、５ｋＤａ以下、３ｋＤａ以下、または１ｋＤａ以下である。これらのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ポリ（アスパラギン酸）は、分子量が約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａなどである。
【００８６】
さらに、いくつかの場合には、ポリ（アスパラギン酸）は、例えば１つまたは複数のＰＥＧ部分でペグ化されている。ＰＥＧは、本明細書に記載されるいずれかの式を有する。例えば、ＰＥＧは、コンジュゲートＰＡＳＰ−ＰＥＧの形成が可能なように修飾されている。修飾ＰＥＧは、例えば以下のもの：
Ｘ１−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−Ｘ２
であり、式中、Ｘ１は、水素、またはのちの反応のためのＯＨラジカル官能基をブロックするヒドロキシル保護基である。例えば、ｎは、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７５、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、または少なくとも５００である。いくつかの場合には、ｎは、１０００以下、５００以下、２００以下、１００以下、５０以下、３０以下、または１０以下である。これらのうちのいずれかの組合せも可能であり、例えば、ｎは２〜１００である。
【００８７】
疎水性部分と結合したポリマー
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）は疎水性部分と結合している。いくつかの場合には、ナノ実体はミセルである。いくつかの場合には、ナノ実体は、外側の親水性表面と疎水性の内側部分とを有する。疎水性部分はアルキル基、例えば直鎖アルキル基を含む。いくつかの実施形態では、疎水性部分は少なくとも２個の炭素原子を含む。他の実施形態では、疎水性部分は少なくとも３個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、疎水性部分はＣ２〜Ｃ２４直鎖アルキル基（例えば、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、および／またはＣ２４）を含む。特定の実施形態では、疎水性部分は直鎖Ｃ１２アルキル基を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）と共有結合した脂肪族炭素鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、脂肪族炭素鎖はＣ２〜Ｃ２４脂肪族炭素鎖（例えば、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、および／またはＣ２４）を含む。
【００８８】
疎水性部分の非限定的な例としては、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、またはその他のアルキル基（例えば、直鎖または分岐鎖アルキル基、例えばイソアルキル基）が挙げられる。いくつかの場合には、疎水性部分は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、または少なくとも２４個の炭素原子を含む。疎水性部分は、飽和であるか、または、例えば１つもしくは複数の炭素間二重結合もしくは三重結合を含む、不飽和である。疎水性部分を結合させる技術の１つが、非限定的な例としてＣ１２を用いて実施例７で検討される。いくつかの場合には、疎水性部分（例えば、Ｃ１２のドデシルアミンなどのアルキルアミン）との反応の前に、第四級アンモニウム塩（例えば、水酸化テトラブチルアンモニウム）およびテトラフルオロホウ酸（例えば、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸）による活性化を用いて疎水性部分を結合させる。他の実施形態では、例えばクリックケミストリー、グリニャール反応などを用いる、疎水性部分を結合させるその他の方法も用いる。
【００８９】
付加する疎水性部分のほかの非限定的な例としては、シクロアルカン（例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シルコヘキサン（ｃｙｌｃｏｈｅｘａｎｅ）など）、胆汁酸塩、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、および脂溶性ビタミン、例えばビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋなど、ならびにその誘導体が挙げられる。胆汁酸塩の非限定的な例としては、非誘導体化胆汁酸塩、例えばコール酸塩、デオキシコール酸塩、ケノデオキシコール酸塩、およびウロソデオキシコール酸塩などが挙げられる。誘導体化胆汁酸塩の非限定的な例としては、タウロコール酸塩、タウロデオキシコール酸塩、タウロウルソデオキシコール酸塩、タウロケノデオキシコール酸塩、グリコール酸塩、グリコデオキシコール酸塩、グリコウルソデオキシコール酸塩、グリコケノデオキシコール酸塩、タウロリトコール酸塩、およびグリコリトコール酸塩などが挙げられる。
【００９０】
別の一連の実施形態では、ポリマーのシアル酸またはその他のモノマーの少なくとも一部がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と結合しているが、ＰＥＧがいずれの実施形態でも必要なものであるというわけではないことを理解するべきである。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、その最も一般的な形態では、以下の式：
Ｈ−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−ＯＨ
のポリマーであり、式中、ｐは、ＰＥＧ重合度を表す整数である。いくつかの場合には、ＰＥＧはまた、修飾されて、例えば：
Ｘ３−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ−Ｘ４
を含み、式中、Ｘ３は、水素、またはのちの反応のためのＯＨ官能基をブロックするヒドロキシル保護基である。ヒドロキシルラジカルの保護基は当該技術分野で周知であり、代表的な（保護する酸素を既に含む）保護基としては、特に限定されないが、シリルエーテル、例えばトリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、ｔｅｒｔブチルジメチルシリルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテル、テトラジメチルシリルエーテル、トリフェニルシリルエーテル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリルエーテルなど、アルキルエーテル、例えばメチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、３，４−ジメトキシベンジルエーテル、トリチルエーテル、アリルエーテルなど；アルコキシメチルエーテル、例えばメトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルエーテルなど、テトラヒドロピラニルエーテルおよびそれに関連するエーテル；メチルチオメチルエーテル、エステル、例えば酢酸エステル、安息香酸エステル、ピバル酸エステル、メトキシ酢酸エステル、クロロ酢酸エステル、レブリン酸エステル、炭酸エステル、例えば炭酸ベンジル、炭酸ｐ−ニトロベンジル、炭酸ｔｅｒｔ−ブチル、炭酸２，２，２−トリクロロエチル、２−（トリメチルシリル）エチル、炭酸アリルなどが挙げられる。一実施形態では、保護基は、メチルエーテルなどのアルキルエーテルである。
【００９１】
Ｘ４は、ポリマーのシアル酸または別のモノマーへの固定を表し、共有結合または架橋部分、例えばＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＮＨＳ）、マレイミド基、ビオチンなど（これらはそれぞれ、修飾されたシアル酸またはその他のモノマー上で、例えば第一級アミンなどのアミン、スルフィドリル部分、またはアビジンもしくはストレプトアビジンと結合し得る）である。いくつかの場合には、Ｘ３はまた、例えばシアル酸または別のモノマーへの固定を可能にする基である。さらに、いくつかの場合には、Ｘ３は、本明細書で検討される、疎水修飾されたＰＳＡまたはその他のポリマーを含む。例えば、ある一連の実施形態では、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）と結合した疎水性部分、例えばＣ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、または別のアルキル基（例えば、直鎖または分岐鎖アルキル基、例えば、イソアルキル基）などを使用する。いくつかの場合には、疎水性部分は、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、または少なくとも２４個の炭素原子を含む。いくつかの実施形態では、疎水性部分は、疎水性が十分高いため、Ｘ４基を有さない未修飾ＰＳＡと比較して、Ｘ４を有するＰＳＡの方が疎水性が高く、例えば、Ｘ４基を有さない場合よりもオクタノール／水分配系のオクタノールに多く分配される。
【００９２】
ある一連の実施形態では、ＰＥＧは、アミン基および／またはカルボン酸基を介してポリマーと結合している。ＰＥＧ化は、当該技術分野で利用可能任意の適切な方法を用いて実施できる。例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ａｎｄ  Ｖａｉｌｌａｒｄ，“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｍＰＥＧ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１７（９）：９７５−９９８，２０１３、およびＧｉｏｒｇｉ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ，ａｎ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｏｔｅｎｃｙ，”Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１０：１４３３−４４，２０１４を参照されたい。ＰＥＧは、様々な分子量で用いることができ、所与の使用に適した分子量は、当業者によって容易に決定される。したがって、例えば、適切なＰＥＧの分子量は、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約８０ｋＤａ、または約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、例えば、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、または約３５ｋＤａである。
【００９３】
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ化度は、官能基またはＰＥＧで官能化されているポリマー中の官能基の割合と定義される。適切なＰＥＧ化度の例は、約０．１％〜約１０％、約０．２％〜約５％、または約０．５％〜約２％、例えば、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％；約０．９％、約１％、約１．１％；約１．２％、約１．３％、約１．４％；約１．５％、約１．６％、約１．７％；約１．８％；約１．９％；約２％であり得る。
【００９４】
いくつかの実施形態では、最終的なポリマー中のＰＥＧの割合は、ポリマーの総重量に対して約１０％〜９０％（ｗ／ｗ）、約１５％〜８０％、約２０％〜７０％、または約２０％〜６０％、例えば、約２２％、約２４％、約２６％、約２８％、約３０％、約３２％、約３４％、約３６％、約３８％、約４０％、約４２％、約４４％、約４６％、約４８％、約５０％、約５２％、約５４％、約５６％、約５８％、または約６０％であり得る。
【００９５】
標的化部分
一態様では、実体はまた、標的化部分を含むが、いくつかの実施形態では標的化部分が存在しないことに留意するべきである。標的化部分（存在する場合）は、実体の送達を、例えば対象内の特定の細胞集団に標的化するのに使用される。例えば、標的化部分は、１種類の細胞、例えば、癌細胞、内皮細胞、または免疫細胞へのナノ実体のアクセスを促進する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、対象内の特定の場所、例えば、特定の器官または特定の細胞型（例えば、腫瘍または癌細胞）への実体の標的化を可能にする。いくつかの場合には、実体は、標的化部分を必要とせずに細胞によって取り込まれ、いくつかの他の場合には、標的化部分（例えば、標的化部分は細胞浸透性ペプチドおよび／または組織浸透性ペプチド、例えば、Ｌｙｐ−１もしくはｔＬｙｐ−１、または本明細書で検討されるＣｅｎｄＲペプチドもしくはその他のペプチドである）が内部移行を促進する。ただし、ある特定の実施形態では、標的化部分が必ずしも内部移行も促進するわけではないことがあることを理解するべきである。いくつかの実施形態では、２種類以上の標的化部分が存在する。いくつかの実施形態では、標的化部分は細胞浸透性ペプチドおよび／または腫瘍／組織浸透性ペプチドを含む。
【００９６】
対象は、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。対象の例としては、特に限定されないが、哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ、ブタ、マウス、ラット、イヌ、ネコ、霊長類（例えば、サル、チンパンジーなど）などが挙げられる。いくつかの場合には、対象は、鳥類、両生類、または魚類などの非哺乳動物である。
【００９７】
多種多様な標的化部分を様々な実施形態に使用し得る。例えば、標的化部分としては、ペプチド、タンパク質、アプタマー、抗体（モノクローナル抗体、ナノボディ、および抗体フラグメントを含む）、核酸、有機分子、リガンドなどが挙げられる。非限定的な具体例としては、インスリンまたはトランスフェリンが挙げられる。
【００９８】
例えば、ある一連の実施形態では、標的化部分は、例えば、長さが５０アミノ酸以下、４０アミノ酸以下、３０アミノ酸以下、または１０アミノ酸以下のペプチドである。ある特定の実施形態では、標的化部分は、ＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）を含む配列などの細胞認識配列を含む。ある特定の実施形態では、標的化部分は、ＮＧＲ（アスパラギン−グリシン−アルギニン）を含む配列などの細胞認識配列を含む。
【００９９】
「アミノ酸」は、生化学の分野で用いられる通常の意味を有する。単離アミノ酸は、（例えば、プロリンの場合のように）必ずというわけではないが、一般構造：
【化４】
2021516211.tif 000005
を有するのが通常である。この構造では、アルファ（α）は任意の適切な部分であり；例えば、アルファ（α）は、水素原子、メチル基、またはイソプロピル基である。あるアミノ酸の−ＮＨ２と別のアミノ酸の−ＣＯＯＨが反応してペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）を形成することによって一連の単離アミノ酸が連結して、ペプチドまたはタンパク質を形成し得る。このような場合、ペプチドまたはタンパク質上にあるＲ基をそれぞれアミノ酸残基と呼ぶことがある。本明細書で使用される「天然アミノ酸」とは、自然界に、通常Ｌ−異性体の形で一般にみられる、２０種類のアミノ酸、すなわち、アラニン（「Ａｌａ」または「Ａ」）、アルギニン（「Ａｒｇ」または「Ｒ」）、アスパラギン（「Ａｓｎ」または「Ｎ」）、アスパラギン酸（「Ａｓｐ」または「Ｄ」）、システイン（「Ｃｙｓ」または「Ｃ」）、グルタミン（「Ｇｌｎ」または「Ｑ」）、グルタミン酸（「Ｇｌｕ」または「Ｅ」）、グリシン（「Ｇｌｙ」または「Ｇ」）、ヒスチジン（「Ｈｉｓ」または「Ｈ」）、イソロイシン（「Ｉｌｅ」または「Ｉ」）、ロイシン（「Ｌｅｕ」または「Ｌ」）、リジン（「Ｌｙｓ」または「Ｋ」）、メチオニン（「Ｍｅｔ」または「Ｍ」）、フェニルアライン（ｐｈｅｎｙｌａｌａｉｎｅ）（「Ｐｈｅ」または「Ｆ」）、プロリン（「Ｐｒｏ」または「Ｐ」）、セリン（「Ｓｅｒ」または「Ｓ」）、トレオニン（「Ｔｈｒ」または「Ｔ」）、トリプトファン（「Ｔｒｐ」または「Ｗ」）、チロシン（「Ｔｙｒ」または「Ｙ」）、およびバリン（「Ｖａｌ」または「Ｖ」）のことである。
【０１００】
ある一連の実施形態では、標的化部分は、細胞浸透性ペプチドおよび／または組織浸透性ペプチドである。様々な細胞浸透性ペプチドを用いることができる。例えば、ペプチドは、Ｃ末端「Ｃ−ｅｎｄ  Ｒｕｌｅ」（ＣｅｎｄＲ）配列モチーフ（Ｒ／Ｋ）ＸＸ（Ｒ／Ｋ）を含む。細胞浸透性ペプチドは、細胞膜を透過する能力を有する。いくつかの場合には、細胞浸透性ペプチドおよび／または組織浸透性ペプチドはまた、細胞へのナノ実体の標的化を促進する。この配列中のＸはそれぞれ独立に、アミノ酸または非アミノ酸である。
【０１０１】
いくつかの場合には、標的化部分は、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２を含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれ独立に、アミノ酸残基または非アミノ酸残基である。いくつかの場合には、ペプチドの一方または両方の末端が、例えば、構造Ｊ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２、Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２、またはＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２のように他のアミノ酸を含み、構造中、Ｊ１およびＪ２はそれぞれ独立に、アミノ酸配列（例えば、アミノ酸残基を１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはそれ以上含むもの）または脂肪族炭素鎖である。脂肪族炭素鎖は、任意の適切な配列で、例えば直鎖状または分岐状に炭素原子および水素原子を含み、飽和または不飽和である。例えば、ある一連の実施形態では、脂肪族炭素鎖は、ある式、例えば、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはその他の正の整数である−（ＣＨ２）ｎ−を有する、直鎖アルキルである。さらに、いくつかの場合には、配列は、例えば、ＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２、ＣＺ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２、またはＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２のように、システイン残基で終わる。
【０１０２】
ＣｅｎｄＲペプチドの非限定的な例としては、Ｌｙｐ−１、ｔＬｙｐ−１、ｉＮＧＲ、ｃＬｙｐ１、ｉＲＧＤ、ＲＰＡＲＰＡＲ、ＴＴ１、または直鎖状ＴＴ１が挙げられる。任意選択で、ペプチド中に他のアミノ酸も存在する。Ｌｙｐ−１は配列ＣＧＮＫＲＴＲＧＣ（配列番号１）を有する。いくつかの実施形態では、２つのＣｙｓ残基がジスルフィド架橋を介して互いに結合し、それにより環状構造を形成する。いくつかの場合には、例えば、ｔＬｙｐ−１（ＣＧＮＫＲＴＲ）（配列番号２）の場合のように、Ｌｙｐ−１配列の一部分だけが存在する。ｃＬｙｐ１は配列ＣＧＮＫＲＴＲＧＣ（配列番号３）を有し、２つのシステインが互いに結合している。ｉＮＧＲは配列ＣＲＮＧＲＧＰＤＣ（配列番号４）を有し、２つのシステインが互いに結合している。ｉＲＧＤは配列（ＣＲＧＤＫＧＰＤＣ）（配列番号５）または配列ＣＲＧＤＲＧＰＤＣ（配列番号６）を有し、２つのシステインが互いに結合している。ＲＰＡＲＰＡＲは配列ＲＰＡＲＰＡＲ（配列番号７）を有する。ＴＴ１は配列ＣＫＲＧＡＲＳＴＣ（配列番号８）を有し、２つのシステインが互いに結合している。直鎖状ＴＴ１は配列ＡＫＲＧＡＲＳＴＡ（配列番号９）を有する。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、標的化部分は配列ＲＧＤを含む。任意選択で、ペプチド中に他のアミノ酸も存在し得る。ＲＧＤペプチドの非限定的な例としては、ＲＧＤ、ＲＧＤ−４Ｃ、ｃＲＧＤ、またはシレンジタイドが挙げられる。任意選択で、ペプチド中に他のアミノ酸も存在し得る。ＲＧＤは配列ＲＧＤ（配列番号１０）を有する。ＲＧＤ−４Ｃは配列ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号１１）を有する。ｃＲＧＤは配列ｃＲＧＤｆ（ＮＭｅＶ）（配列番号１２）またはｃ（ＲＧＤｙＫ）（配列番号１３）を有する。シレンジタイドは配列、環状−（Ｎ−Ｍｅ−ＶＲＧＤｆ−ＮＨ）（配列番号１４）を有する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、標的化部分は配列ＮＧＲを含む。任意選択で、ペプチド中に他のアミノ酸も存在し得る。
【０１０５】
例えば、Ｂｅｒｔｒａｎｄ  Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｐａｓｓｉｖｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｒａ  ｏｆ  ｍｏｄｅｒｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６６（２０１４）２−２５、Ｇｉｌａｄ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｃｅｎｔ  ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂａｓｅｄ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，４（２０１６）、およびＺｈｏｕ  Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｐｔａｍｅｒｓ：Ａ  ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，７（２０１６）１３４４６−１３４６３に標的化部分がいくつかみられる。標的化部分は、ペプチド、例えば、ＣｅｎｄＲペプチド（例えば、Ｌｙｐ１、ｃＬｙｐ１、ｔＬｙｐ１、ｉＲＧＤ、ｉＮＧＲ、ＴＴ１、直鎖状ＴＴ１、ＲＰＡＲＰＡ、Ｆ３など）、ＲＧＤペプチド（例えば、９−ＲＧＤ、ＲＧＤ４Ｃ、デルタ２４−ＲＧＤ、デルタ２４−ＲＧＤ４Ｃ、ＲＧＤ−Ｋ５、シレンジタイド、非環状ＲＧＤ４Ｃ、二環式ＲＧＤ４Ｃ、ｃ（ＲＧＤｆＫ）、ｃ（ＲＧＤｙＫ）、Ｅ−［ｃ（ＲＧＤｆＫ）２］、Ｅ［ｃ（ＲＧＤｙＫ）］２）、ＮＧＲペプチド、ＫＬＷＶＬＰＫＧＧＧＣ（配列番号１５）、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（配列番号１６）、ＬＡＢＬ、アンジオペプチン−２；タンパク質、例えば、トランスフェリン、アンキリン反復タンパク質、アフィボディ；小分子、例えば、葉酸、トリフェニルホスホニウム、ＡＣＵＰＡ、ＰＳＭＡ、炭水化物部分（例えば、マンノース、グルコース、ガラクトース、およびその誘導体）；およびアプタマーから選択されるが、これらに限定されない。
【０１０６】
上に開示したいずれかの配列を含めたペプチドは、いくつかの実施形態では、特に腫瘍組織において、細胞浸透活性または組織浸透活性を示す。ある一連の実施形態は全般的には、対象に非全身投与（例えば、腫瘍内投与、経鼻投与、局所投与、腹膜内投与、経膣投与、経直腸投与、経口投与、経肺投与、眼内投与など）する場合、または、例えば生きている細胞または組織に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ  ｖｉｖｏに投与する場合に、細胞浸透性ペプチドと非標的化特性とを結びつけて、例えば、ナノ実体の少なくとも一部に細胞浸透活性または組織浸透活性を与えることに関する。いくつかの場合には、例えば非共有結合によって、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）の一部を細胞浸透性ペプチドと結合させる。
【０１０７】
例えば、Ｚｈａｎｇ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇ−ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２２９（２０１６）Ｐａｇｅｓ  １３０−１３９、およびＲｅｇｂｅｒｇ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，５（２０１２）９９１−１００７に細胞浸透性ペプチドがいくつかみられる。本発明の特定の実施形態に有用な細胞浸透性ペプチドは、ＴＡＴ、ｍＴＡＴ（Ｃ−５Ｈ−ＴＡＴ−５Ｈ−Ｃ）、Ｇ３Ｒ６ＴＡＴ、ＴＡＴ（４９−５７）、ＴＡＴ（４８−６０）、ＭＰＳ、ＶＰ２２、Ａｎｔｐ、ｇＨ６２５、アルギニンリッチＣＰＰ（例えば、オクタアルギニン、ポリアルギニン、ステアリル−ポリアルギニン、ＨＩＶ−１  Ｒｅｖ３４−５０、ＦＨＶ  ｃｏａｔ３５−４９）ペネトラチン、ペネトラチン−Ａｒｇ、ペネトラチン−Ｌｙｓ、ＳＲ９、ＨＲ９、ＰＲ９、Ｈ（７）Ｋ（Ｒ（２））、Ｐｅｐ−１、Ｐｅｐ−３、トランスポータン、トランスポータン１０、ｐｅｐＦｅｃｔ、ｐＶＥＣ、ＪＢ５７７、ＴＤ−１、ＭＰＧ８、ＣＡＤＹ、ＹＴＡ２、ＹＴＡ４、ＳｙｎＢ１、ＳｙｎＢ３、ＰＴＤ−４、ＧＡＬＡ、ＳＰＡＣＥなどから選択されるが、これらに限定されない。標的化部分と結合した細胞浸透性ペプチドは、ＰＥＧＡ（ＣＰＧＰＥＧＡＧＣ）（配列番号１８）、ＣＲＥＫＡ（配列番号１９）、ＲＶＧ（ＹＴＩＷＭＰＥＮＰＲＰＧＴＰＣＤＩＦＴＮＳＲＧＫＲＡＳＮＧ）（配列番号２０）、ＤＶ３（ＬＧＡＳＷＨＲＰＤＫＧ）（配列番号２１）、ＤＥＶＤＧ（配列番号２２）、ＡＣＰＰ−ＭＭＰ−２／９（ＰＬＧＬＡＧ）（配列番号２３）、ＡＣＰＰ−ＭＭＰ−２（ＩＡＧＥＤＧＤＥＦＧ）（配列番号２４）、Ｒ８−ＧＲＧＤ（配列番号２５）、ペネトラチン−ＲＧＤなどから選択されるが、これらに限定されない。
【０１０８】
例えば、Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ  Ｅ．，Ｔｕｍｏｒ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １１０−１１１（２０１７）Ｐａｇｅｓ  ３−１２に腫瘍／組織浸透性ペプチドがいくつかみられる。本発明の特定の実施形態に有用な腫瘍／組織浸透性ペプチドは、ＣｅｎｄＲペプチド、例えば、ｉＲＧＤ（ＣＲＧＤＫＧＰＤＣ）（配列番号２６）、Ｌｙｐ−１（ＣＧＮＫＲＴＲＧＣ）（配列番号２７）、ｔＬｙｐ−１（ＣＧＮＫＲＴＲ）（配列番号２８）、ＴＴ１（ＣＫＲＧＡＲＳＴＣ）（配列番号２９）、直鎖状ＴＴ１（ＡＫＲＧＡＲＳＴＡ）（配列番号３０）、ｉＮＧＲ（ＣＲＮＧＲＧＰＤＣ）（配列番号３１）、ＲＰＡＲＰＡＲ、Ｆ３（ＫＤＥＰＱＲＲＳＡＲＬＳＡＫＰＡＰＰＫＰＥＰＫＰＫＫＡＰＡＫＫ）（配列番号３２）などから選択されるが、これらに限定されない。一実施形態では、腫瘍／組織浸透性ペプチドは、配列番号１〜配列番号２２からなる群より選択される配列を含む。さらなる実施形態では、腫瘍／組織浸透性ペプチドは、配列番号１〜配列番号２２からなる群より選択される配列からなる。
【０１０９】
いくつかの場合には、実体、例えばナノカプセルまたは本明細書に記載されるその他の実体などの表面または外殻に抗体（ナノボディ、抗体フラグメント、モノクローナル抗体、またはその他の抗体を含む）を結合させる。
【０１１０】
ポリマーと標的化部分との間の結合
ある特定の態様では、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）の一部が、例えば共有結合によって、標的化部分と結合している。ポリマーを標的化部分と直接、または例えば、リンカー、例えばアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカー（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、およびＣ４を含む）もしくはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソプロピルリンカー（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、およびＣ４を含む）などを介して間接的に結合させる。いくつかの場合には、その他のアミノアルキルスクシンイミドまたはアミノアルキルアミド−イソ−プロピルリンカーを使用する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、例えば結合するためのＣ末端を含む。いくつかの場合には、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカーは、アミノエチルスクシンイミドリンカー、アミノプロピルスクシンイミド、アミノブチルスクシンイミドなどである。アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカーは、例えば、ＥＤＣ／ＮＨＳ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）カップリング反応を用いてマレイミド部分とモノマー単位（例えば、シアル酸単位）上のカルボン酸部分とを結合させて生じさせることができる。いくつかの場合には、Ｎ−アミノエチルマレイミド部分などのＮ−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミド部分とモノマー単位上のカルボン酸部分とを反応させてアミド結合を生じさせ、それによりマレイミド部分とポリマー（例えば、ＰＳＡ）とを連結する。アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソ−プロピルリンカーは、例えば、ＢＯＰ／ＴＢＡ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチル−アミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート／水酸化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）の存在下でアミノエチルメタクリルアミドまたはＮ−（３−アミノプロピル）メタクリルアミドを用いて生じさせることができる。次いで、例えばマイケル型付加により、マレイミド部分またはメタクリロイル部分と、ペプチド内のシステイン、チオール基、またはその他の硫黄含有部分とを反応させて、アミノエチルスクシンイミドリンカーなどのアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドを介して（例えば、図１を参照されたい）、またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソ−プロピルリンカーを介してペプチドをポリマー（例えば、ＰＳＡ）と結合させることができる。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）をアミド基により標的化部分と直接結合させる。例えば、Ｍｏｊａｒｒａｄｉ，“Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｍｉｎｅ  ｔｏ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｖｉａ  ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｍｉｄａｔｉｏｎ，”Ｍａｓｔｅｒ’ｓ  Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｐｐｓａｌａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍａｒｃｈ，２０１１を参照されたい。アミド基は、例えば、モノマー単位（例えば、シアル酸単位）上のカルボン酸部分と、ペプチド内のリジン、アルギニン、またはその他の第一級アミン含有部分とを反応させることによって生じさせることができ、具体的には、第一級アミン基は、標的化上のリジンまたはアルギニンアミノ酸部分にある。いくつかの実施形態では、中間体、例えば、カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、またはＤＭＴＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド）を形成させるため、反応内に活性化剤が存在する（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，１０８，（２０１４），２３９−２４６）。
【０１１２】
さらに、本発明のある特定の実施形態では、実体は、細胞内部移行または組織浸透を促進することができる浸透促進剤を含む。
【０１１３】
したがって、ある一連の実施形態は、全般的には、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）上のカルボキシラート部分とアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとを反応させ、得られたアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとペプチド上のシステイン基とを反応させて、ポリマー−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミド−ペプチドおよび／またはポリマー−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミドイソプロピル−ペプチド組成物を得る方法に関する。
【０１１４】
別の一連の実施形態は、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）上のカルボキシラート部分とＮ−ヒドロキシスクシンイミドまたはカルボジイミドとを反応させ、形成された中間体とペプチド上のリジン基またはアルギニン基とを反応させて、ポリマー−アミド−ペプチドを得る方法に関する。
【０１１５】
医薬品／薬物
ナノ実体は、様々な実施形態では、実施形態に応じてナノ実体の内部および／または表面に位置し得る任意の様々な医薬品または薬物を含む。１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の医薬品または薬物が、例えばナノ実体の内側部分の中に存在し得る。例えば、医薬品または薬物は、それがナノ実体の内側部分の中に含まれるのを可能にする大きさまたは分子量を有する。例えば、医薬品または薬物は、例えば、分子量が２０００Ｄａ未満の小分子である。いくつかの場合には、小分子は、分子量が１０００Ｄａ未満である。いくつかの実施形態では、分子量は５００Ｄａまたは２００Ｄａ未満である。
【０１１６】
いくつかの場合には、医薬品は、製剤の製造に使用することを目的とし、薬物の製造に使用する場合には製剤中の有効成分となる、任意の物質または物質の混合物を含む。このような物質は、疾患の診断、治癒、緩和、治療、または予防において薬理活性および／またはその他の直接作用をもたらすか、または身体の構造および機能に影響を及ぼすものである。
【０１１７】
医薬品の例には、何らかの薬理作用をもたらし、病態の治療または予防に使用される任意の薬学的に活性な化学的または生物学的化合物、任意の薬学的に許容されるその塩、およびその任意の混合物を含むものがある。薬学的に許容される塩の例としては、特に限定されないが、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パモ酸塩、ラウリン酸塩、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩、オレイン酸塩、ミリスチン酸塩、ラウリル硫酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、リノール酸塩、リノレン酸塩などが挙げられる。いくつかの場合には、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩などである。
【０１１８】
医薬品または薬物は、脂溶性、水溶性、または両親媒性（非極性基および極性基の両方を同時に含み、水性媒体中でミセルを形成する傾向がある）であると考えられる。医薬品または薬物をその溶解性だけに基づいて分類することの複雑さを考慮すると、簡略化するため、決して限定するわけではないが、以下の２種類の薬物、すなわち、脂溶性（油および／または脂質および／または有機溶媒を含有する媒体中である程度の溶解性を示し、ｌｏｇ  Ｐが１．５を超える化合物）および水溶性（水性媒体中である程度の溶解性を示し、ｌｏｇ  Ｐが１．５未満である化合物）に言及し、ここでは、ｌｏｇ  Ｐはオクタノール−水分配係数と定義される。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、医薬品または薬物は、例えば、ナノカプセルまたはその他の実体の非水性の内側部分の中、例えば、油、脂質、および／または有機溶媒、例えば、油と混合した有機溶媒の中に含ませることができる、脂溶性のものである。さらに、いくつかの場合には、脂溶性の医薬品または薬物は、実体の外表面または殻上に存在する。有機溶媒の非限定的な例としては、特に限定されないが、エタノール、ブタノール、２−エチルヘキサノール、イソブタノール、イソプロパノール、メタノール、プロパノール、プロピレングリコール、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、メチルイソプロピルケトン、メシチルオキシド、トリクロロエチレン、臭化エチレン、クロロホルム、塩化エチレン、ジクロロメタン、テトラクロロエチレン、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド、１，４−ジオキサン、ブチルエーテル、ジメチルホルムアミドエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジメチルスルホキシド、ピリジン、シクロヘキサン、ヘキサン、アセトニトリル、酢酸エチル、トルエン、キシレンおよびこれらの組合せ、ならびに／あるいはその他の有機溶媒が挙げられる。いくつかの場合には、脂溶性薬物は一般に、本来疎水性であり、例えば、ｌｏｇ  Ｐが１．５より大きく、Ｐは固有オクタノール−水分配係数である。
【０１２０】
使用できる脂溶性の医薬品または薬物の非限定的な例としては、特に限定されないが、以下のもの：化学療法剤または抗癌剤、例えばタキソイド（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、カバジタキセル）、トムデックス、ダウノマイシン、アクラルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ラパマイシン、エピルビシン、バルルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、エレスクロモル、インゲノールメブテート、プリカマイシン、カリケアマイシン、エスペラマイシン、デガレリクス、エムタンシン、マイタンシン、マイタンシノイド（例えば、マイタンシノイドＤＭ１、マイタンシノイド２、マイタンシノイドＤＭ４）、マイトマイシン、アウリスタチン、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、エストラムスチン、シスプラチン疎水性誘導体、クロラムブシル、ベンダムスチン、カルムスチン、アマンタジン、リマンタジン、ロムスチン、セムスチン、アムサクリン、ラドリビン（ｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シタラビン、（Ｃ１２〜Ｃ１８）−ゲムシタビン、テガフール、トリメトレキサート、エポチロンＡ〜Ｅ（例えば、サゴピロン、イクサペビロン（ｉｘａｐｅｂｉｌｏｎｅ）、パツピロン）、エリブリン、カンプトテシン、アミノグルテチミド、ジアジクオン、レバミソール、メチル−ＧＡＧ、ミトタン、ミトザントロン、テストラクトン、ミケラミンＢ、ブリオスタチン−１、ハロモン、ジデムニン（例えば、プリチデプシン）、トラベクテジン、ルルビネクテジン、ボリノスタット、ロミデプシン、イリノテカン、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲチフィニブ（ｇｅｔｉｆｉｎｉｂ）、イマチニブ、ベムラフェニブ、クリゾチニブ、ビスモデギブ、トレチノイン、アリトレチノイン、ベキサロテンなど；または免疫調節剤／免疫抑制剤、例えばイミキモド、シクロスポリン、タクロリムス、ピメクロリムス、エベロリムス、シロリムス、テンシロリムス（ｔｅｎｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、アザチオプリン、レフルノミド、ミコフェノール酸塩など；またはステロイド薬、例えばエンザルタミド、アビテロン（ａｂｉｔｅｒｏｎｅ）、エキセメスタン、フルベストラント、２−メトキシエストラジオール、ホルメスタン、アタメスタン、ギムネステロール（ｇｙｍｎｅｓｔｅｒｏｌ）、メチルプロトジオシン、フィサリンＢ、フィサリンＤ、フィサリンＦ、ウィタフェリンＡ、ジンセノサイド、アザステロイド、シノブファギン、ブファリン、ジエノゲストなど；またはステロイドと細胞毒性薬（例えば、ヌクレオシド、パクリタキセル、クロラムブシル、および金属錯体）のコンジュゲート、例えばパクリタキセル−エストラジオールなどが挙げられる。
【０１２１】
脂溶性の性質を有し、生物学的に活性な分子のその他の例示的な非限定的な例としては、以下のもの：鎮痛剤および抗炎症剤（例えば、アロキシプリン、オーラノフィン、アザプロパゾン、ベノリラート、ジフルニサル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダクなど）；駆虫剤（例えば、アルベンダゾール、ヒドロキシナフトエ酸ベフェニウム、カンベンダゾール、ジクロロフェン、イベルメクチン、メベンダゾール、オキサムニキン、オクスフェンダゾール、オキサンテルエンボナート、プラジカンテル、ピランテルエンボナート、チアベンダゾールなど）；抗糖尿病剤（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリピジド、トラザミド、トルブタミドなど）；抗うつ剤（例えば、アモキサピン、マプロチリン、ミアンセリン、ノルトリプチリン、トラゾドン、トリミプラミンなど）；抗真菌剤（例えば、アンホテリシン、硝酸ブトコナゾール、クロトリマゾール、硝酸エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、グリセオフルビン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ナタマイシン、ナイスタチン、硝酸スルコナゾール、テルビナフィン、テルコナゾール、チオコナゾール、ウンデセン酸など）；抗マラリア剤（例えば、アモジアキン、クロロキン、クロルプログアニル、ハロファントリン、メフロキン、プログアニル、ピリメタミン、硫酸キニーネなど）；抗片頭痛剤（例えば、ジヒドロエルゴタミン、エルゴタミン、メチセルジド、ピゾチフェン、スマトリプタンなど）；抗原虫剤（例えば、ベンズニダゾール、クリオキノール、デコキネート、ジヨードヒドロキシキノリン、フロ酸ジロキサニド、ジニトルミド、フルゾリドン（ｆｕｒｚｏｌｉｄｏｎｅ）、メトロニダゾール、ニモラゾール、ニトロフラゾン、オルニダゾール、チニダゾールなど）；抗甲状腺剤（例えば、カルビマゾール、プロピルチオウラシルなど）；抗不整脈剤（例えば、アミオダロン、ジソピラミド、フレカイニド酢酸塩、硫酸キニジンなど）；抗菌剤（例えば、ベネタミンペニシリン、シノキサシン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クロファジミン、クロキサシリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、エリスロマイシン、エチオナミド、イミペネム、ナリジクス酸、ニトロフラントイン、リファンピシン、スピラマイシン、スルファベンザミド、スルファドキシン、スルファメラジン、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファフラゾール、スルファメトキサゾール、スルファピリジン、テトラサイクリン、トリメトプリムなど）；抗凝固剤（例えば、ジクマロール、ジピリダモール、ニクマロン、フェニンジオンなど）；抗不安剤、神経遮断剤、鎮静剤、および睡眠剤（例えば、アルプラゾラム、アミロバルビトン、バルビトン、ベンタゼパム、ブロマゼパム、ブロムペリドール、ブロチゾラム、ブトバルビトン、カルブロマール、クロルジアゼポキシド、クロルメチアゾール、クロルプロマジン、クロバザム、クロチアゼパム、クロザピン、ジアゼパム、ドロペリドール、エチナメート、フルナニゾン（ｆｌｕｎａｎｉｓｏｎｅ）、フルニトラゼパム、フルオプロマジン、フルペンチキソールデカノアート、フルフェナジンデカノアート、フルラゼパム、ハロペリドール、ロラゼパム、ロルメタゼパム、メダゼパム、メプロバメート、メタカロン、ミダゾラム、ニトラゼパム、オキサゼパム、ペントバルビトン、ペルフェナジンピモジド、プロクロルペラジン、スルピリド、テマゼパム、チオリダジン、トリアゾラム、ゾピクロンなど）；副腎皮質ステロイド（例えば、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、酢酸コルチゾン、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、フルニソリド、フルコルトロン、プロピオン酸フルチカゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンなど）；抗痛風剤（例えば、アロプリノール、プロベネシド、スルフィンピラゾンなど）；利尿剤（例えば、アセタゾラミド、アミロライド、ベンドロフルアジド、ブメタニド、クロロチアジド、クロルタリドン、エタクリン酸、フロセミド、メトラゾン、スピロノラクトン、トリアムテレンなど）；ベータ遮断剤（例えば、アセブトロール、アルプレノロール、アテノロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロールなど）；心変力作用剤（例えば、アムリノン、ジギトキシン、ジゴキシン、エノキシモン、ラナトシドＣ、メジゴキシンなど）；抗パーキンソン病剤（例えば、ブロモクリプチン、リスリドなど）；ヒスタミン受容体アンタゴニスト（例えば、アクリバスチン、アステミゾール、シンナリジン、シクリジン、シプロヘプタジン、ジメンヒドリナート、フルナリジン、ロラタジン、メクロジン、オキサトミド、テルフェナジンなど）；脂質調整剤（例えば、ベザフィブラート、クロフィブラート、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、プロブコールなど）；硝酸塩およびその他の抗狭心症剤（例えば、硝酸アミル、三硝酸グリセリン、二硝酸イソソルビド、一硝酸イソソルビド、四硝酸ペンタエリスリトールなど）；栄養剤（例えば、ベータカロチン、ビタミンＡ、ビタミンＢ２、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫなど）；オピオイド鎮痛剤（例えば、コデイン、デキストロプロピオキシフェン（ｄｅｘｔｒｏｐｒｏｐｙｏｘｙｐｈｅｎｅ）、ジアモルフィン、ジヒドロコデイン、メプタジノール、メサドン、モルヒネ、ナルブフィン、ペンタゾシンなど）；性ホルモン（例えば、クエン酸クロミフェン、ダナゾール、エチニルエストラジオール、酢酸メドロキシプロゲステロン、メストラノール、メチルテストステロン、ノルエチステロン、ノルゲストレル、エストラジオール、コンジュゲートエストロゲン、プロゲステロン、スタノゾロール、スチベストロール（ｓｔｉｂｅｓｔｒｏｌ）、テストステロン、チボロンなど）などが挙げられる。当然のことながら、ある特定の実施形態では、治療効果がある場合には脂溶性薬物の混合物を使用し得る。
【０１２２】
ただし、他の実施形態では、医薬品または薬物は、例えば、ナノカプセルの水性の内側部分の中に含ませるか、または前記ナノカプセルの表面に結合させることができる、水溶性のものである。いくつかの場合には、水溶性薬物は、水性媒体中である程度の溶解性を示す（例えば、ｌｏｇ  Ｐが１．５より小さく、Ｐは固有オクタノール−水分配係数である）。例としては、特に限定されないが、上記の脂溶性薬物のあらゆる薬学的に許容される塩、例えば、ドセタキセルまたはドセタキセル三水和物が挙げられ；例えば、塩は、塩化物塩、硫酸塩、臭化物塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、塩酸塩；ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メグルミン塩、アンモニア塩などである。様々な実施形態では、本明細書で検討するように、ナノカプセル内の適切な溶媒中に含ませることができる任意の適切な薬剤または薬物を使用する。
【０１２３】
使用し得る水溶性医薬品または薬物のその他の例としては、特に限定されないが、以下のもの：化学療法剤（例えば、トポテカン、テニポシド、エトポシド、プララトレキサート、オマセタキシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、プロカルバジン、ヒドロキシダウノルビシン、ヒドロキシウレア、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フロクスウリジンまたは５−フルオロデオキシウリジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、チオテパ、ゲムシタビン、ペントスタチン、メクロレタミン、ピボブロマン（ｐｉｂｏｂｒｏｍａｎ）、シクロホスファミド、イホスファミド、ブスルファン、カルボプラチン、ピコプラチン、テトラプラチン、サトラパリン（ｓａｔｒａｐａｌｉｎ）、白金−ＤＡＣＨ、オルマプラチン、オキサプラチン、メルファラン、アミノグルテチミドなど）；抗菌剤（例えば、トリクロサン、塩化セチルピリジウム、臭化ドミフェン、第四級アンモニウム塩、亜鉛化合物、サンギナリン、フッ化物、アレキシジン、オクトニジン（ｏｃｔｏｎｉｄｉｎｅ）、ＥＤＴＡなど）；非ステロイド性抗炎症剤および疼痛軽減剤（例えば、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ジフルニサル、フェノプロフェンカルシウム、フルルビプロフェンナトリウム、ナプロキセン、トルメチンナトリウム、インドメタシン、セレコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブなど）；鎮咳剤（例えば、ベンゾナタート、カラミフェンエジシル酸塩、メントール、デキストロメトルファン臭化水素酸塩、クロフェジアノール塩酸塩など）；抗ヒスタミン剤（例えば、ブロムフェニラミンマレイン酸塩、クロルフェニラミンマレイン酸塩、カルビノキサミンマレイン酸塩、クレマスチンフマル酸塩、デクスクロルフェニラミンマレイン酸塩、ジフェニルヒドラミン塩酸塩、アザタジンマレイン酸塩、ジフェンヒドラミンクエン酸塩、ジフェンヒドラミン塩酸塩、ジフェニルピラリン塩酸塩、ドキシラミンコハク酸塩、プロメタジン塩酸塩、ピリラミンマレイン酸塩、トリペレナミンクエン酸塩、トリプロリジン塩酸塩、アクリバスチン、ロラタジン、デスロラタジン、ブロムフェニラミン、デクスブロフェニラミン（ｄｅｘｂｒｏｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）、フェキソフェナジン、セチリジン、モンテルカストナトリウムなど）；去痰剤（例えば、グアイフェネシン、トコン、ヨウ化カリウム、テルピン水和物など）；鎮痛−解熱剤（例えば、サリチル酸塩、フェニルブタゾン、インドメタシン、フェナセチンなど）；抗片頭痛薬（例えば、スミトリプタン（ｓｕｍｉｔｒｉｐｔａｎ）コハク酸塩、ゾルミトリプタン、バルプロ酸エレトリプタン臭化水素酸塩など）；Ｈ２−アンタゴニストおよび／またはプロトンポンプ阻害剤（例えば、ラニチジン、ファモチジン、オメプラゾールなど）などが挙げられる。
【０１２４】
いくつかの場合には、内側部分は、ペプチド、タンパク質、またはヌクレオチドを含んでよく、これらの多くが本来親水性である。さらに、いくつかの場合には、水溶性医薬品または薬物は、実体の外表面または殻上に存在する。ペプチド、タンパク質、またはヌクレオチドは、任意の種類の活性、例えば抗腫瘍性、抗血管新生性、免疫調節性／免疫抑制性、抗原性、抗炎症性、抗疼痛性、抗片頭痛性、抗肥満性、抗糖尿病性、抗菌性、創傷治癒性、駆虫性、抗不整脈性、抗ウイルス剤活性、抗凝固剤活性、抗うつ性、抗てんかん性、抗真菌性、抗痛風性、抗高血圧性、抗マラリア性、抗ムスカリン性、抗原虫性、抗甲状腺性、抗不安性、鎮静性、催眠性、神経遮断剤活性、ベータ遮断剤活性、心変力性、細胞接着阻害活性、副腎皮質ステロイド活性、サイトカイン受容体活性調節性、利尿性、抗パーキンソン病性、ヒスタミンＨ受容体アンタゴニスト活性、角質溶解性、脂質調整性、筋弛緩剤活性、抗狭心症性、栄養性、刺激剤活性、抗勃起不全性などを有する。
【０１２５】
ペプチドおよびタンパク質の例としては、特に限定されないが、ＩＬ−２７インターロイキン、インターフェロン（例えば、インターフェロンアルファＩＩ、インターフェロンアルファコン−１、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンガンマ）、パラスポリン２、エンドスタチンフラグメント、マクロモマイシン、アクチノキサンチン、ヒスチジンリッチ糖タンパク質、カルボキシペプチダーゼＧ２、膵リボヌクレアーゼ、ミトマルシン、アルギニンデイミナーゼ、タンパク質Ｐ−３０またはオンコナーゼ、メタロプロテイナーゼ阻害剤、グアニル酸キナーゼ、ベクリン−１、アロフェロン、リボヌクレアーゼミトギリン、アウレイン、ＣＤ２７６抗原、デルマセプチン−Ｂ２、ラクトフェリシンＢ、プランタリシンＡ、マクシミン、セクロピン、ヒト好中球ペプチド、カエリン、ナイシン、マクラチン、ｍＣＲＡＭＰ、ＢＭＡＰ−２７、ＢＭＡＰ−２８、シトロピン、ヒトインスリン、組換えインスリン、インスリン類似体（例えば、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、インスリングルリジン、インスリンデテミル、インスリンデグルデク、インスリングラルギン、ＮＰＨインスリンなど）、ＧＬＰ−１類似体（例えば、エクセナチド、リラグルチド、リキシセナチド、アルビグルチド、デュラグルチド、タスポグルチド、セマグルチドなど）、ＧＬＰ−２類似体（例えば、テデュグルチド）、ソマトロピン、アナキンラ、ドルナーゼアルファ、乳清酸性タンパク質、ＳＰＡＲＣまたはオステオネクチンタンパク質、プロテインＣ、ケラチンサブファミリーＡ、ヒト成長ホルモンまたはソマトトロピン、ゴナドトロピン、アンジオポエチン、コロニー刺激因子（例えば、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子など）、上皮成長因子、エリスロポエチン、線維芽細胞増殖因子、リガンドのＧＤＮＦファミリー、成長分化因子−９、肝細胞成長因子、肝細胞癌由来成長因子、インスリン様成長因子、ケラチノサイト成長因子、マクロファージ刺激タンパク質、ニューロトロフィン、胎盤成長因子、血小板由来成長因子、トロンボポエチン、トランスフォーミング成長因子、血管内皮成長因子、ケモカイン、インターロイキン、リンホカイン、腫瘍壊死因子（例えば、腫瘍壊死因子アルファ）、Ｆｃ融合タンパク質、コンツラキンＧペプチドおよび誘導体、アンチフラミン、オピオイドペプチド、リポペプチド（例えば、スロトマイシン）、抗原、例えば破傷風およびジフテリアトキソイド、Ｂ型肝炎など、ならびに抗体、例えばモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などが挙げられる。したがって、非限定的な例として、ナノカプセルなどのナノ実体は、例えば、実体の内側部分の中、外側部分の中、またはその両方の中にモノクローナル抗体または小分子を含む。当然のことながら、ある特定の実施形態では、治療効果がある場合には水溶性薬物の混合物を使用し得る。
【０１２６】
本明細書で使用される「抗体」は、実質的に免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによってコードされる１つまたは複数のポリペプチドを有する、タンパク質または糖タンパク質を指す。認識されている免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖はカッパまたはラムダに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、これらがさらに、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥをそれぞれ定める。典型的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含むことが知られている。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は１つの「軽鎖」（約２５ｋＤ）と１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、主として抗原認識を担い、約１００〜１１０以上のアミノ酸からなる、可変領域を定める。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語はそれぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。抗体は、インタクトの免疫グロブリンとして、または、様々なペプチダーゼで消化することによって得られ、よく特徴付けられた多数のフラグメントとして存在する。したがって、例えば、ペプシンにより抗体のヒンジ領域内のジスルフィド結合の下部（すなわち、Ｆｃドメインに向かう部分）が消化されて、Ｆａｂの二量体であるＦ（ａｂ）’２が生じ、それ自体は、ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１と結合した軽鎖である。このＦ（ａｂ）’２を穏やかな条件下で還元してヒンジ領域内のジスルフィド結合を切断し、それにより（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に転換する。このＦａｂ’単量体は基本的に、ヒンジ領域の一部分を有するＦａｂである。インタクト抗体の消化の点から様々な抗体フラグメントが定義されるが、これらのフラグメントおよびその他のフラグメントはまた、例えば、組換えＤＮＡ法の利用、「ファージディスプレイ」法などによって化学的に、ｄｅ  ｎｏｖｏ合成される。抗体の例としては、一本鎖抗体、例えば、可変重鎖および可変軽鎖が（直接、またはペプチドリンカーを介して）結合して、連続するポリペプチドを形成している、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体が挙げられる。抗体のほかの非限定的な例としては、ナノボディ、抗体フラグメント、モノクローナル抗体、キメラ抗体、逆キメラ抗体などが挙げられる。抗原結合フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、ユニボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、ナノボディ、プロボディ、ドメインボディ、ユニボディ、二特異性一本鎖可変フラグメント（ｂｉ−ｓｃＦｖ）などが挙げられる。
【０１２７】
抗体の例としては、特に限定されないが、トラスツズマブ、ベバジズマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、イノツズマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、オララツマブ、アテゾリズマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、ブリナツモマブ、ラムシルマブ、オビヌツズマブ、デノスマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブ、オファツムマブ、およびその組合せが挙げられる。
【０１２８】
ヌクレオチドの例としては、特に限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＰＮＡなどが挙げられる。ヌクレオチドは、様々な実施形態では、センスまたはアンチセンスである。
【０１２９】
医薬品は、システムの成分の総乾燥重量に対して最大約５０重量％存在する。ただし、適切な割合は、組み込む医薬品、それを使用する適応症、投与効率などの様々な因子によって決まる。例えば、いくつかの場合には、医薬品は、最大約１０重量％または最大約５重量％存在する。ある特定の実施形態では、組み込む活性医薬成分の性質に応じて、同じ溶液中に、または別個に溶解させ得る、２つ以上の医薬品が存在する。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、ナノ実体は１つまたは複数の界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、ナノ実体の殻は１つまたは複数の界面活性剤を含む。他の実施形態では、ナノ実体の内側部分は１つまたは複数の界面活性剤を含む。界面活性剤（存在する場合）は、製剤の親油性部分および親水性部分と同時に相互作用することを可能にする構造および／または官能基を有する、様々な成分のいずれかを含む。界面活性剤の例としては、特に限定されないが、以下のもの：モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（ポリソルベート８０；Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）；ＨＬＢ１５）、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、ＨＬＢ１４．９およびＴｗｅｅｎ  ６１（登録商標）；ＨＬＢ９．６）、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ  ８１（登録商標）；ＨＬＢ１０）、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ  ６５（登録商標）；ＨＬＢ１０．５）、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ  ８５（登録商標）；ＨＬＢ１１）、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ＨＬＢ１６．７およびＴｗｅｅｎ  ２１（登録商標）；ＨＬＢ１３．３）、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、ＨＬＢ１５．６）；ペグ化脂肪酸エステルおよびＰＥＧとの混合物、モノステアリン酸ポリエチレングリコール（ＨＬＢ１１．６）、ステアリン酸ポリエチレングリコール、ステアリン酸ポリエチレングリコール４０（ＨＬＢ１７）、ステアリン酸ポリエチレングリコール１００（ＨＬＢ１８．８）、ジラウリン酸ポリエチレングリコール４００（ＨＬＢ９．７）、ジラウリン酸ポリエチレングリコール２００（ＨＬＢ５．９）、モノパルミチン酸ポリエチレングリコール（ＨＬＢ１１．６）、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（登録商標）（ＨＬＢ１５）、ポリエチレングリコール−１５−ヒドロキシステアラート（ＨＬＢ１４−１６）、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコールスクシナート（ＴＰＧＳ；ＨＬＢ１３．２）、オレイン酸トリエタノールアンモニウム（ＨＬＢ１２）、オレイン酸ナトリウム（ＨＬＢ１８）、コール酸ナトリウム（ＨＬＢ１８）、デオキシコール酸ナトリウム（ＨＬＢ１６）、ラウリン酸ナトリウム（ＨＬＢ４０）、グリコール酸ナトリウム（ＨＬＢ１６−１８）、オレイン酸トリエタノールアミン（ＨＬＢ１２）、トラガントゴム（ＨＬＢ１１．９）、ならびにドデシル硫酸ナトリウム（ＨＬＢ４０）；ポロキサマー１２４（ＨＬＢ１６）、ポロキサマー１８８（ＨＬＢ２９）、ポロキサマー２３７（ＨＬＢ２９）、ポロキサマー２３８（ＨＬＢ２８）、ポロキサマー２７８（ＨＬＢ２８）、ポロキサマー３３８（ＨＬＢ２７）およびポロキサマー４０７（ＨＬＢ２２）、モノオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）８０、ＨＬＢ４．３）、モノラウリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）２０、ＨＬＢ８．６）、モノステアリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）６０、ＨＬＢ４．７）、トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）８５、ＨＬＢ１．８）、セスキオレイン酸ソルビタ���（Ｓｐａｎ（登録商標）８３、ＨＬＢ３．７）、モノパルミチン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）４０、ＨＬＢ６．７）、イソステアリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）１２０、ＨＬＢ４．７）、ラウロイルマクロゴールグリセリド（例えば、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）４４／１４、ＨＬＢ１４、およびＬａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ２１３０ＣＳ、ＨＬＢ４）、ステアロイルマクロゴールグリセリド（例えば、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）５０／１３、ＨＬＢ１３）、リノレオイルマクロゴールグリセリド（例えば、Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ２１２５ＣＳ、ＨＬＢ４）、オレオイルマクロゴールグリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ（登録商標）Ｍ１９４４ＣＳ、ＨＬＢ４）、カプリロカプロイルマクロゴールグリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）、ＨＬＢ１４）、レシチン（例えば、卵レシチン、ダイズレシチン、非ＧＭＯレシチン、菜種レシチン、ヒマワリレシチン、リゾレシチンなど）、リン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質、合成リン脂質、水素化リン脂質、ペグ化リン脂質、ホスファチジルコリン、リソホスファジチルコリン（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｄｉｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、ホスファジジルエタノールアミン（ｐｈｏｓｐｈａｄｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）、ホスファチジルセリンなど）、Ｐｈｏｓａｌ（登録商標）、Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ（登録商標）、あるいはこれらのいずれかの界面活性剤および／またはその他の界面活性剤の任意の組合せが挙げられる。いくつかの場合には、界面活性剤は陽イオン性のもの、例えば、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、ＣＴＡＢ（臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム）、セトリミド、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウムなどである。いくつかの場合には、陽イオン界面活性剤はアンモニウム塩を、例えば頭部基として含む。例えば、頭部基は、第一級、第二級、第三級、または第四級アンモニウム塩を含む。さらに、このような界面活性剤が全部の実施形態で必要とされるわけではないことを理解するべきである。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、実体は、少なくとも１つの陽イオン界面活性剤、例えば上記のものなどを含む。例えば、全般的にナノカプセルに関する本発明の特定の実施形態は、いくつかの場合には、陽イオン界面活性剤などの界面活性剤を含み得る。例えば、全般的にナノカプセルに関し、標的化部分を有する本発明の特定の実施形態は、陽イオン界面活性剤をさらに含み得る。
【０１３２】
実体の組成物を作製する方法
本発明の様々な態様はまた、全般的には、本明細書に記載される組成物などの組成物、例えば、ナノ粒子、ナノカプセル、ミセル、またはその他のナノ実体を作製するシステムおよび方法に関する。いくつかの場合には、組成物は医薬組成物である。
【０１３３】
一例として、ある一連の実施形態では、１段階の溶媒拡散法を用いてナノ実体、例えばナノカプセルを作製する。いくつかの場合には、これには、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）と、任意選択で１つまたは複数の水溶性界面活性剤とを含む、水溶液を調製すること、油性溶液（例えば、油と、１つまたは複数の界面活性剤と、有機溶媒などとを含むもの）を調製すること、および溶液を混合することが含まれる。いくつかの場合には、有機溶媒を完全に、または部分的に蒸発させる。
【０１３４】
別の一連の実施形態では、２段階の溶媒拡散法を用い得る。例えば、いくつかの場合には、この方法は、油性溶液（例えば、油と、１つまたは複数の界面活性剤と、有機溶媒などとを含むもの）を調製すること、およびそれを水相に加えること（または油相の上に水相を加えること）を含む。水相は任意選択で、１つまたは複数の水溶性界面活性剤を含有する。溶液を攪拌してナノエマルションを形成する。いくつかの場合には、有機溶媒を完全に、または部分的に蒸発させる。ナノエマルションが形成された後、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）を含む水溶液を攪拌下で加えて、ナノカプセルを作製する。
【０１３５】
また別の一連の実施形態では、超音波処理法を用いる。例えば、いくつかの場合には、この方法は、油と、１つまたは複数の界面活性剤と、任意選択で有機溶媒とを含む、油性溶液を調製すること、およびそれを水相に加えること（または油相の上に水相を加えること）を含む。水相は任意選択で、１つまたは複数の水溶性界面活性剤を含有する。溶液に超音波処理を実施しながら混合して、ナノエマルションを形成する。いくつかの場合には、有機溶媒を完全に、または部分的に蒸発させる。既に溶媒拡散法で記載した通り、超音波処理の前（１段階のナノカプセル形成）または超音波処理によりナノエマルションを得た後（２段階の工程）に、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）を水相に溶かす。
【０１３６】
別の実施形態では、本発明は、医薬品を封入する方法に関する。一実施形態では、ナノ実体を調製する前に、医薬品を水相に溶かし得る。別の実施形態では、医薬品をナノ実体とインキュベートし得る。
【０１３７】
別の実施形態では、医薬品はモノクローナル抗体であり、これをナノカプセルを調製する前に水相に溶かすことによって封入する。
【０１３８】
また別の一連の実施形態では、ホモジナイゼーション法を用いる。例えば、いくつかの場合には、この方法は、油と、１つまたは複数の界面活性剤と、任意選択で有機溶媒とを含む、油性溶液を調製すること、およびそれを水相に加えること（または油相の上に水相を加えること）を含む。水相は任意選択で、１つまたは複数の水溶性界面活性剤を含有する。溶液をホモジナイズしながら混合して、ナノエマルションを形成する。いくつかの場合には、有機溶媒を完全に、または部分的に蒸発させる。既に溶媒拡散法および超音波処理法の両方で記載した通り、ホモジナイゼーションの前（１段階のナノカプセル形成）またはホモジナイゼーションによりナノエマルションを得た後（２段階の工程）に、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）を水相に溶かす。
【０１３９】
別の実施形態では、例えば本明細書で検討するように、自己乳化法を用いてエマルションを作製する。例えば、いくつかの場合には、この方法は、油と、１つまたは複数の界面活性剤（および任意選択で共溶媒）とを含む、油性溶液を調製すること、およびそれを水相に加えること（または油相に水相を加えること）を含む。水相は任意選択で、１つまたは複数の水溶性界面活性剤を含有する。ある一連の実施形態では、共溶媒（例えば、エタノール、ＰＥＧ、グリセリン、プロピレングリコールなど）を使用せずにエマルションを調製する。既に記載した通り、自己乳化の前（１段階のナノカプセル形成）またはナノエマルションを得た後（２段階の工程）に、ポリマー（例えば、ＰＳＡ）を水相に溶かす。
【０１４０】
別の実施形態では、本発明は、ナノ実体を作製する方法であって、保管中にナノ実体を保護し得る追加の凍結乾燥段階を含む、方法に関する。いくつかの場合には、凍結乾燥時に凍結保護物質を使用する必要はない。いくつかの実施形態では、ナノ実体が凍結乾燥物の再構成時に凝集体を形成することはないため、凍結乾燥の前にコロイド系を希釈する必要はない。いくつかの場合には、１つまたは複数の糖、例えば、凍結保護物質作用を示す糖を加えることが可能である。凍結保護物質の例としては、特に限定されないが、以下のもの：トレハロース、グルコース、スクロース、マンニトール、マルトース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、グリセロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、２−メチル−２，４−ペンタンジオール（ＭＰＤ）、ラフィノース、デキストラン、フルクトース、スタキオースなどが挙げられる。いくつかの場合には、凍結保護物質またはその他の添加剤は、例えばｐＨを制御する緩衝剤として、他の作用を有する。凍結乾燥形態では、ナノ実体を長期間保管し、例えば水を加えることによって、再生できる。
【０１４１】
組成物の投与
別の態様は、本明細書で検討する任意の組成物を生物体に投与する方法を提供する。本発明の組成物を投与する場合、それを薬学的に許容される製剤として、治療有効量で適用する。本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、製剤が、生物体への投与に必要とされる形態と適合性があり、有害作用を引き起こさない薬剤または補形剤を含有することを意味する。本発明の組成物はいずれも、治療有効量で生物体に投与する。本明細書で使用される「治療有効」または「有効」は、治療する具体的な病態の発症を遅らせる、その進行を阻害する、その発症または進行を完全に停止させる、それを診断する、または別の方法で医学的に望ましい結果を得るのに必要な量を意味する。「治療する」、「治療される」、「治療すること」などの用語は一般に、生物体への本発明の組成物の投与を指す。生物体に投与する場合、有効量は、治療する具体的な病態および所望の転帰によって決まる。治療有効量は、例えば、のちに詳細に記載する因子などの諸因子を用い、日常の範囲を超えない実験を用いて、当業者により決定される。例えば、一実施形態では、本明細書で組成物を用いて、生物体へのドセタキセルの投与、例えば静脈内投与により癌を治療する。
【０１４２】
本発明のいくつかの実施形態は、全般的には、薬剤の調製への本明細書に開示される組成物の使用に関する。例えば、ある特定の実施形態は、癌治療に使用する、本明細書に開示される組成物を指す。
【０１４３】
本発明の組成物を生物体に投与するにあたっては、これらの組成物の既知の活性に影響を及ぼすよう投与量、投与スケジュール、投与経路などを選択する。任意選択で本発明の組成物に関するアッセイの結果と組み合わせて、実験モデルの結果に基づき、用量を推定する。局所または全身に所望の薬物レベルが得られるよう、投与様式に応じて用量を適宜調整する。投与は、１日、１週間、または１か月につき１回または複数回の投与で実施する。
【０１４４】
生物体への組成物の投与は、治療有効量の組成物が生物体内の組成物の作用部位に到達するものとする。投薬は、いくつかの場合には、生物体内で起こり得る有害な副作用を回避しながら、または最小限に抑えながら、最大量で実施する。投与する組成物の用量は、作用部位で望まれる最終濃度、生物体への投与方法、組成物の効果、生物体内での組成物の耐久性、投与のタイミング、現在実施している治療の影響などの因子によって決まる。送達する用量はまた、生物体に関連する状態によって決まることもあり、いくつかの場合には生物体によって異なり得る。例えば、年齢、性別、体重、大きさ、環境、物理的条件、または生物体の現在の健康状態が、必要な用量および／または作用部位での組成物の濃度に影響を及ぼすこともある。異なる個体間で、または同じ個体であっても日によって、投与の変動がみられることがある。いくつかの場合には、最大用量、すなわち、妥当な医学的判断による最大安全用量を用いる。いくつかの場合には、剤形は、実質的に生物体に悪影響を及ぼさないものとする。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、癌を有する生物体に本発明の組成物を投与する。本発明の組成物の投与は、組成物をその標的まで到達させる任意の医学的に許容される方法によって達成される。選択する具体的な様式は、当然のことながら、既に記載した因子など、例えば、具体的な組成物、治療する生物体の状態の重症度、治療効果を得るのに必要な用量などの因子によって決まる。本明細書で使用される「医学的に許容される」治療様式とは、臨床的に許容されない有害作用を引き起こさずに、生物体内に有効レベルの組成物がもたらされる様式のことである。
【０１４６】
組成物を生物体に投与するのに、任意の医学的に許容される方法を用いる。投与は、治療する病態に応じて、限局されるもの（すなわち、特定の領域、生理系、組織、器官、または細胞型に限局されるもの）または全身投与となる。例えば、組成物を経口的に、またはその他の技術により、例えば経膣的に、直腸内に、頬側的に、経肺的に、局所的に、経鼻的に、経皮的に、腫瘍内に、非経口注射もしくは埋植により、外科的投与、または本発明の組成物による標的へのアクセスが得られる任意の他の方法により投与する。経口投与に適した組成物は、それぞれが所定量の活性化合物を含有する別個の単位、例えば硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤、丸剤、サシェ剤、錠剤、トローチ剤、またはロゼンジ剤などとして提供する。本発明とともに使用するのに適したその他の経口組成物としては、シロップ剤などの水性もしくは非水性液体を用いた液剤もしくは懸濁剤、エリキシル剤、または乳剤が挙げられる。別の一連の実施形態では、組成物を用いて食品または飲料の栄養価を高める。いくつかの実施形態では、経直腸投与を例えば、浣腸、坐剤、またはフォーム剤の形態で使用し得る。
【０１４７】
ある一連の実施形態では、組成物の投与は、非経口、腫瘍内、または経口である。いくつかの実施形態では、組成物を注射または注入によって投与する。一実施形態では、注射は、腫瘍内注射、皮下注射、筋肉内注射、または静脈内注射から選択される。別の実施形態では、組成物を髄腔内への注射または注入により投与する。
【０１４８】
本発明のある特定の実施形態では、一定期間、例えば、数時間、数日間、数週間、数か月間、または数年間にわたって、組成物への連続的な曝露がもたらされるように、本発明の組成物の投与を設計する。このことは、例えば、上記の方法のうちの１つにより本発明の組成物を反復投与することによって、達成される。組成物の投与は、単独であっても、あるいは他の治療剤および／または組成物との併用であってもよい。
【０１４９】
本発明のある特定の実施形態では、組成物を例えば、ポリマー放出システム内に組み込んで、または液体に懸濁させて、例えば、溶解した形態またはコロイド形態で、適切な薬学的に許容される担体と組み合わせ得る。本発明での使用に適した薬学的に許容される担体は一般に、当業者に周知のものである。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、投与する活性化合物（１つまたは複数）の生物活性の効果にあまり干渉しないが、例えば、使用前の組成物中の活性化合物（１つまたは複数）を安定化または保護する、製剤成分として使用される、無毒性材料を指す。「担体」という用語は、本明細書で検討するように、本発明の１つまたは複数の活性化合物と組み合わせて、組成物の適用を促進する、天然または合成の有機成分または無機成分を意味する。担体は、実質的に所望の医薬効果を減じる可能性のある相互作用が全くみられないように、本発明の１つまたは複数の組成物と、および互いに混ぜ合わせる、または別の方法で混合する。担体は、用途に応じて可溶性または不溶性のものにする。よく知られた担体の例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然セルロースおよび修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、および磁鉄鉱が挙げられる。担体の性質は、可溶性であっても不溶性であってもよい。当業者であれば、その他の適切な担体については知っているか、あるいは日常的な実験のみを用いてそれを確認できる。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容される担体を、活性化合物と使用する製剤成分、例えば塩、担体、緩衝剤、乳化剤、希釈剤、補形剤、キレート剤、充填剤、乾燥剤、抗酸化剤、抗菌剤、保存剤、結合剤、増量剤、シリカ、可溶化剤、または安定剤などとともに含み得る。例えば、製剤が液体である場合、担体は、溶媒、部分溶媒、または非溶媒であり得、水性または有機系のものであり得る。適切な製剤成分の例としては、希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、カオリン、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムなど；コーンスターチまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチン、またはアラビアゴムなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクなどの滑沢剤；グリセロールモノステアラートまたはグリセロールジステアラートなどの遅延物質；懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンなど；レシチンまたはその他の天然のリン脂質などの分散剤または湿潤剤；セチルアルコールまたはミツロウなどの増粘剤；緩衝剤、例えば酢酸およびその塩、クエン酸およびその塩、ホウ酸およびその塩、またはリン酸およびその塩など；あるいは保存剤、例えば塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン、またはチメロサールなどが挙げられる。適切な担体濃度は、日常の範囲を超えない実験を用いて、当業者により決定され得る。本明細書で検討する組成物は、固体、半固体、液体、またはガス状の形態の調製物、例えば錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、保管所、吸入剤、または注射剤などに製剤化できる。当業者であれば、その他の適切な製剤成分については知っているか、あるいは日常的な実験のみを用いてそれを確認できる。
【０１５１】
調製物は、ある特定の実施形態では、生物体の血液と等張であり得る無菌の水性または非水性液剤、懸濁剤および乳剤を含む。非水性溶媒の例には、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、ゴマ油、ヤシ油、ラッカセイ油、鉱油など、注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチル、または合成モノグリセリドもしくはジグリセリドを含めた不揮発性油がある。水性担体としては、生理食塩水および緩衝媒体を含めた水、アルコール溶液／水溶液、乳剤、または懸濁剤が挙げられる。非経口媒体としては、塩化ナトリウム溶液、１，３−ブタンジオール、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発性油が挙げられる。静脈内媒体としては、体液および栄養補充液、電解質補充液（リンゲルデキストロースをベースとするものなど）などが挙げられる。保存剤およびその他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなども存在する。当業者であれば、過度の実験を用いずに、本明細書で検討する組成物を調製および製剤化するための様々なパラメータを容易に決定することができる。
【０１５２】
本発明はまた、上記のいずれかの組成物を、任意選択で癌またはその他の疾患の治療のための組成物を使用するための指示書を含む、キットの形で提供する。組成物を既に記載した任意の適切な技術によって、例えば経口的に、または静脈内に投与するための指示書を提供してもよい。
【０１５３】
本発明の組成物は、キットの形態であり得る。キットは通常、既に記載した本発明の組成物およびその他の成分のうちのいずれか１つ、またはその組合せを含む、パッケージを定義するものである。キットはまた、１つまたは複数の溶媒、界面活性剤、保存剤、および／または希釈剤（例えば、通常の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）または５％デキストロース）を含む他の容器、ならびに組成物を混合する、希釈する、または生物体に投与するための容器を含み得る。
【０１５４】
キットの組成物は、液体溶液または乾燥粉末として提供し得る。組成物を乾燥粉末として提供する場合、適切な溶媒の添加によって組成物を再構成し得る。液体形態の組成物を使用する実施形態では、液体形態は、濃縮されているか、またはすぐに使用できるものであり得る。溶媒は、組成物および使用または投与の様式によって決まる。
【０１５５】
米国およびその他の国では、該当する場合、２０１７年１１月２日に出願された「Ｓｉｓｔｅｍａｓ  ｄｅ  Ｌｉｂｅｒａｃｉｏｎ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｏｓ  ｄｅ  Ａｃｉｄｏ  Ｐｏｌｉｓｉａｌｉｃｏ  ｙ  Ｍｅｔｏｄｏｓ」と題するスペイン特許出願第Ｐ２０１７３１２７７号が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
本明細書には、本発明の実施形態が複数記載および説明されているが、当業者には、機能を実施し、かつ／あるいはまたは本明細書に記載される結果および／または１つもしくは複数の利点を得るための様々な他の手段ならびに／あるいは構造が容易に想像され、このような変形および／または修正はそれぞれ、本発明の範囲内にあると見なされる。さらに一般的には、当業者には、本明細書に記載されるパラメータ、寸法、材料、および配置はいずれも例示的を意図するものであり、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または配置は、本発明の教示を用いる１つまたは複数の具体的用途によって決まることが容易に理解されよう。当業者には、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物が認識されるか、あるいは日常の範囲を超えない実験を用いてそれを確認できよう。したがって、上記の実施形態は単なる例として記載されるものであり、本発明は、添付の請求項およびそれに対する均等物の範囲内で、特異的に記載および特許請求されるもの以外の方法で実施され得ることが理解されるべきである。本発明は、本明細書に記載される個々の特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法のそれぞれに関するものである。さらに、このような特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法が互いに相容れないものでなければ、２つ以上のこのような特徴、システム、物品、材料、キット、および／または方法の任意の組合せが本発明の範囲内に含まれる。
【０１５７】
本明細書および参照により組み込まれる文献に、矛盾する開示および／または相容れない開示が含まれる場合、本明細書が支配的な位置にある。参照により組み込まれる２つ以上の文献に、それぞれに対して相容れない開示および／または矛盾する開示が含まれる場合、発行日が新しい方の文献が支配的な位置にあるものとする。
【０１５８】
本明細書で定義および使用される定義はいずれも、定義される用語の辞書での定義、参照により組み込まれる文献での定義、および／または通常の意味に対して支配的な位置にあるものとする。
【０１５９】
本明細書および請求項で使用される不定冠詞「ａ」および「ａｎ」は、そうでないことが明記されない限り、「少なくとも１つ」を意味するものと理解されるべきである。
【０１６０】
本明細書および請求項で使用される「および／または」という語句は、そのように等位結合される要素、すなわち、いくつかの場合には接続的に存在し、別の場合には選言的に存在する要素のうちの「一方または両方」を意味するものと理解されるべきである。「および／または」を用いて列挙される複数の要素も同じように、すなわち、「１つまたは複数の」要素がそのように等位結合されていると解釈されるべきである。「および／または」節によって具体的に特定される要素以外にも、具体的に特定されるその要素と関係があるか、無関係であるかを問わず、任意選択で他の要素が存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「含む」などの制限のない言葉とともに「Ａおよび／またはＢ」と言う場合、それは、一実施形態ではＡのみ（任意選択でＢ以外の要素を含む）；別の実施形態ではＢのみ（任意選択でＡ以外の要素を含む）；さらに別の実施形態ではＡとＢの両方（任意選択で他の要素を含む）などを指し得る。
【０１６１】
本明細書および請求項で使用される「または」は、上で定義される「および／または」と同じ意味を有するものと理解されるべきである。例えば、１つのリストのなかの項目を分ける場合、「または」または「および／または」は、包括的なものである、すなわち、多数の要素または要素のリストのうち少なくとも１つの要素を含むだけでなく、２つ以上の要素、および任意選択で、列挙されていない他の項目を含むものと解釈されるべきである。「〜のうちの１つのみ」もしくは「〜のうちのちょうど１つ」、または請求項で使用される「〜よりなる」など、そうでないことが明記される用語に限り、多数の要素または要素のリストのうちちょうど１つの要素が含まれることを指す。一般に、本明細書で使用される「または」という用語は、「いずれか」、「〜のうちの１つ」、「〜のうちの１つのみ」、または「〜のうちのちょうど１つ」などの排他的用語が先行する場合、排他的選択肢（すなわち、「一方または他方であって、両方ではない」）を示すものとのみ解釈されるべきである。
【０１６２】
本明細書および請求項で１つまたは複数の要素のリストを指して使用される「少なくとも１つ」という語句は、要素のリストのなかの要素のうちの任意の１つまたは複数のものから選択される、少なくとも１つの要素を意味するが、要素のリストのなかに具体的に列挙されている少なくとも１つの要素および全要素を必ずしも含むものではなく、要素のリストのなかの要素の任意の組合せを除外するものではないことが理解されるべきである。この定義はまた、任意選択で、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリストのなかで具体的に特定される要素以外の要素が、具体的に特定される要素と関係があるか、無関係であるかを問わず存在し得ることを認めるものである。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」も同様に、もしくは「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」も同様に）一実施形態では、任意選択で２つ以上を含む少なくとも１つのＡが存在し、Ｂは存在しないこと（および任意選択で、Ｂ以外の要素を含む）；別の実施形態では、任意選択で２つ以上を含む少なくとも１つのＢが存在し、Ａは存在しないこと（および任意選択で、Ａ以外の要素を含む）；さらに別の実施形態では、任意選択で２つ以上を含む少なくとも１つのＡと、任意選択で２つ以上を含む少なくとも１つのＢ（および任意選択で、他の要素を含む）などを指し得る。
【０１６３】
本明細書で、ある数を指して「約」という単語が使用される場合、本発明のさらに別の実施形態が、「約」という単語の存在によって修飾されていないその数を含むことが理解されるべきである。
【０１６４】
また、本明細書で特許請求され、２つ以上の段階または行為を含む方法ではいずれも、そうでないことが明記されない限り、その方法の段階または行為の順序は、必ずしもその方法の段階または行為が記載されている順序に限定されないことが理解されるべきである。
【０１６５】
請求項では、上の明細書と同じく、あらゆる移行句、例えば「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、「ｃａｒｒｙｉｎｇ（有する）」、「ｈａｖｉｎｇ（有する）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）、「ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ（含む）」、「ｈｏｌｄｉｎｇ（有する）」、「から構成され（〜から構成される）」などは、制限のないものである、すなわち、特に限定されないが〜を含むという意味であることが理解されるべきである。「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（〜からなる」および「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（から実質的になる）」という移行句に限り、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｅｘａｍｉｎｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、２１１１．０３節に記載されているように、それぞれクローズドまたはセミクローズドの移行句とするべきである。
【０１６６】
いわゆる請求項形式の本発明の態様／実施形態：
１．（態様１）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリシアル酸を含み、内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０１６７】
２．複数のナノ実体の少なくとも一部が、標的化部分および／または細胞浸透性ペプチドおよび／または腫瘍／組織浸透性ペプチドをさらに含む、請求項１の組成物。
【０１６８】
３．標的化部分が、ポリシアル酸と静電気的に結合している、請求項２の組成物。
【０１６９】
４．標的化部分が、リンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項２の組成物。
【０１７０】
５．標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドリンカーを介して、またはアミド基により直接、ポリシアル酸と結合している、請求項２の組成物。
【０１７１】
６．アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカーが、ＥＤＣ／ＮＨＳ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）によって、またはＤＭＴＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド）カップリング反応によって生じるものである、請求項５の組成物。
【０１７２】
７．標的化部分が、アミノエチルマレイミドリンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項５の組成物。
【０１７３】
８．標的化部分がペプチドまたはタンパク質を含む、請求項２〜７のいずれか１項の組成物。
【０１７４】
９．標的化部分がアプタマーを含む、請求項２〜８のいずれか１項の組成物。
【０１７５】
１０．標的化部分が核酸を含む、請求項２〜９のいずれか１項の組成物。
【０１７６】
１１．標的化部分が抗体またはそのフラグメントを含む、請求項２〜１０のいずれか１項の組成物。
【０１７７】
１２．標的化部分が、ナノボディ、ユニボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トライアボディ、および／またはテトラボディを含む、請求項２〜１１のいずれか１項の組成物。
【０１７８】
１３．標的化部分が有機分子を含む、請求項２〜１２のいずれか１項の組成物。
【０１７９】
１４．標的化部分がリガンドを含む、請求項２〜１３のいずれか１項の組成物。
【０１８０】
１５．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項２〜１４のいずれか１項の組成物。
【０１８１】
１６．細胞浸透性ペプチドが、ポリシアル酸と化学的に結合している、請求項１５の組成物。
【０１８２】
１７．標的化部分がＣｅｎｄＲペプチドを含む、請求項２〜１６のいずれか１項の組成物。
【０１８３】
１８．標的化部分がアミノ酸配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２を含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、請求項２〜１７のいずれか１項の組成物。
【０１８４】
１９．標的化部分がアミノ酸配列ＲＧＤを含む、請求項２〜１８のいずれか１項の組成物。
【０１８５】
２０．標的化部分がアミノ酸配列ＮＧＲを含む、請求項２〜１９のいずれか１項の組成物。
【０１８６】
２１．標的化部分がアミノ酸配列ＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２を含み、Ｊ１がアミノ酸配列である、請求項２〜２０のいずれか１項の組成物。
【０１８７】
２２．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１ＲＧＤを含み、Ｊ１がアミノ酸配列である、請求項２〜２１のいずれか１項の組成物。
【０１８８】
２３．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項２〜２２のいずれか１項の組成物。
【０１８９】
２４．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１ＲＧＤＪ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項２〜２３のいずれか１項の組成物。
【０１９０】
２５．標的化部分がアミノ酸配列ＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項２〜２４のいずれか１項の組成物。
【０１９１】
２６．標的化部分がＬｙｐ−１を含む、請求項２〜２５のいずれか１項の組成物。
【０１９２】
２７．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項２〜２６のいずれか１項の組成物。
【０１９３】
２８．標的化部分がｃＬｙｐ１を含む、請求項２〜２７のいずれか１項の組成物。
【０１９４】
２９．標的化部分がｉＮＧＲを含む、請求項２〜２８のいずれか１項の組成物。
【０１９５】
３０．標的化部分がｉＲＧＤを含む、請求項２〜２９のいずれか１項の組成物。
【０１９６】
３１．標的化部分がＲＰＡＲＰＡＲを含む、請求項２〜３０のいずれか１項の組成物。
【０１９７】
３２．標的化部分がＴＴ１を含む、請求項２〜３１のいずれか１項の組成物。
【０１９８】
３３．標的化部分が直鎖状ＴＴ１を含む、請求項２〜３２のいずれか１項の組成物。
【０１９９】
３４．標的化部分がＲＧＤ−４Ｃを含む、請求項２〜３３のいずれか１項の組成物。
【０２００】
３５．標的化部分がｃＲＧＤを含む、請求項２〜３４のいずれか１項の組成物。
【０２０１】
３６．標的化部分がシレンジタイドを含む、請求項２〜３５のいずれか１項の組成物。
【０２０２】
３７．標的化部分が、Ｌｙｐ１、ｔＬｙｐ１、ｃＬｙｐ１、ｉＮＧＲ、ｉＲＧＤ、ＲＰＡＲＰＡＲ、ＴＴ１、直鎖状ＴＴ１、ＲＧＤ−４Ｃ、ｃＲＧＤ、シレンジタイド、Ｆ３、９−ＲＧＤ、ＲＧＤ４Ｃ、デルタ２４−ＲＧＤ、デルタ２４−ＲＧＤ４Ｃ、ＲＧＤ−Ｋ５、非環状ＲＧＤ４Ｃ、二環式ＲＧＤ４Ｃ、ｃ（ＲＧＤｆＫ）、ｃ（ＲＧＤｙＫ）、Ｅ−［ｃ（ＲＧＤｆＫ）２］、Ｅ［ｃ（ＲＧＤｙＫ）］２、ＫＬＷＶＬＰＫＧＧＧＣ、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ、ＬＡＢＬ、アンジオペプチン−２、抗体、ナノボディ、トランスフェリン、アンキリン反復タンパク質、アフィボディ、葉酸、トリフェニルホスホニウム、ＡＣＵＰＡ、ＰＳＭＡ、炭水化物部分、およびアプタマーからなる群より選択される、請求項２〜３６のいずれか１項の組成物。
【０２０３】
３８．外殻が浸透促進剤をさらに含む、請求項１〜３７のいずれか１項の組成物。
【０２０４】
３９．ポリシアル酸の少なくとも一部が疎水性部分と結合している、請求項１〜３８のいずれか１項の組成物。
【０２０５】
４０．疎水性部分が、アルキル基、シクロアルカン、胆汁酸塩および誘導体、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、ならびに脂溶性ビタミンから選択される、請求項３９の組成物。
【０２０６】
４１．疎水性部分が直鎖アルキル基を含む、請求項３９または４０のいずれか１項の組成物。
【０２０７】
４２．疎水性部分が、少なくとも２個の炭素原子を含む、請求項３９〜４１のいずれか１項の組成物。
【０２０８】
４３．疎水性部分が、少なくとも３個の炭素原子を含む、請求項３９〜４２のいずれか１項の組成物。
【０２０９】
４４．疎水性部分がＣ２〜Ｃ２４直鎖アルキル基を含む、請求項３９〜４３のいずれか１項の組成物。
【０２１０】
４５．疎水性部分が直鎖Ｃ１２アルキル基を含む、請求項３９〜４４のいずれか１項の組成物。
【０２１１】
４６．ポリシアル酸と共有結合した脂肪族炭素鎖をさらに含む、請求項１〜４５のいずれか１項の組成物。
【０２１２】
４７．脂肪族炭素鎖がＣ２〜Ｃ２４脂肪族炭素鎖を含む、請求項４６の組成物。
【０２１３】
４８．外殻の少なくとも約９０重量％がポリシアル酸を含む、請求項１〜４７のいずれか１項の組成物。
【０２１４】
４９．複数のナノ実体の少なくとも一部が実質的に固体である、請求項１〜４８のいずれか１項の組成物。
【０２１５】
５０．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項１〜４９のいずれか１項の組成物。
【０２１６】
５１．ポリシアル酸の少なくとも一部がＮ−アセチルノイラミン酸を含む、請求項１〜５０のいずれか１項の組成物。
【０２１７】
５２．ポリシアル酸の少なくとも一部が２−ケト−３−デオキシノン酸（ｄｅｏｘｙｎｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）を含む、請求項１〜５１のいずれか１項の組成物。
【０２１８】
５３．ポリシアル酸の少なくとも一部がラクタミン酸を含む、請求項１〜５２のいずれか１項の組成物。
【０２１９】
５４．ポリシアル酸の少なくとも一部がＮ−シアル酸を含む、請求項１〜５３のいずれか１項の組成物。
【０２２０】
５５．ポリシアル酸の少なくとも一部がＯ−シアル酸を含む、請求項１〜５４のいずれか１項の組成物。
【０２２１】
５６．ポリシアル酸の少なくとも一部が、少なくとも２つのシアル酸単位を含む、請求項１〜５５のいずれか１項の組成物。
【０２２２】
５７．ポリシアル酸の少なくとも一部が、少なくとも４個のシアル酸単位を含む、請求項１〜５６のいずれか１項の組成物。
【０２２３】
５８．ポリシアル酸の少なくとも一部が、少なくとも８個のシアル酸単位を含む、請求項１〜５７のいずれか１項の組成物。
【０２２４】
５９．ポリシアル酸の少なくとも一部が、２−−＞８結合を介して結合したシアル酸単位を含む、請求項１〜５８のいずれか１項の組成物。
【０２２５】
６０．ポリシアル酸の少なくとも一部が、２−−＞９結合を介して結合したシアル酸単位を含む、請求項１〜５９のいずれか１項の組成物。
【０２２６】
６１．内側部分が非水性である、請求項１〜６０のいずれか１項の組成物。
【０２２７】
６２．内側部分が医薬品を含む、請求項１〜６１のいずれか１項の組成物。
【０２２８】
６３．医薬品が脂溶性である、請求項６２の組成物。
【０２２９】
６４．医薬品が両親媒性である、請求項６２の組成物。
【０２３０】
６５．医薬品が水溶性である、請求項６２の組成物。
【０２３１】
６６．医薬品がモノクローナル抗体である、請求項６２の組成物。
【０２３２】
６７．医薬品がポリヌクレオチドである、請求項６２の組成物。
【０２３３】
６８．医薬品がドセタキセルである、請求項６２の組成物。
【０２３４】
６９．医薬品が抗癌剤である、請求項６２の組成物。
【０２３５】
７０．医薬品が、ゲムシタビン、パクリタキセル、カバジタキセル、トムデックス、ダウノマイシン、アクラルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ラパマイシン、エピルビシン、バルルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、エレスクロモル、インゲノールメブテート、プリカマイシン、カリケアマイシン、エスペラマイシン、デガレリクス、エムタンシン、マイタンシン、マイタンシノイドＤＭ１、マイタンシノイド２、マイタンシノイドＤＭ４、マイトマイシン、アウリスタチン、ビノレルビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、エストラムスチン、シスプラチン疎水性誘導体、クロラムブシル、ベンダムスチン、カルムスチン、アマンタジン、リマンタジン、ロムスチン、セムスチン、アムサクリン、ラドリビン（ｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、シタラビン、（Ｃ１２〜Ｃ１８）−ゲムシタビン、テガフール、トリメトレキサート、サゴピロン、イクサペビロン（ｉｘａｐｅｂｉｌｏｎｅ）、パツピロン、エリブリン、カンプトテシン、アミノグルテチミド、ジアジクオン、レバミソール、メチル−ＧＡＧ、ミトタン、ミトザントロン、テストラクトン、ミケラミンＢ、ブリオスタチン−１、ハロモン、ジデムニン、プリチデプシン、トラベクテジン、ルルビネクテジン、ボリノスタット、ロミデプシン、イリノテカン、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲチフィニブ（ｇｅｔｉｆｉｎｉｂ）、イマチニブ、ベムラフェニブ、クリゾチニブ、ビスモデギブ、トレチノイン、アリトレチノイン、ベキサロテン、タクロリムス、エベロリムス、トポテカン、テニポシド、エトポシド、プララトレキサート、オマセタキシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、プロカルバジン、ヒドロキシダウノルビシン、ヒドロキシウレア、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フロクスウリジンまたは５−フルオロデオキシウリジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、チオテパ、ペントスタチン、メクロレタミン、ピボブロマン（ｐｉｂｏｂｒｏｍａｎ）、シクロホスファミド、イホスファミド、ブスルファン、カルボプラチン、ピコプラチン、テトラプラチン、サトラパリン（ｓａｔｒａｐａｌｉｎ）、白金−ＤＡＣＨ、オルマプラチン、オキサプラチン、メルファラン、アミノグルテチミド、トラスツズマブ、ベバジズマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、イノツズマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、オララツマブ、アテゾリズマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、ブリナツモマブ、ラムシルマブ、オビヌツズマブ、デノスマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブ、オファツムマブ、およびその組合せからなる群より選択される、請求項６９の組成物。
【０２３６】
７１．内側部分が、少なくとも２つの医薬品を含む、請求項６２〜７０のいずれか１項の組成物。
【０２３７】
７２．外殻が医薬品を含む、請求項１〜７１のいずれか１項の組成物。
【０２３８】
７３．外殻の医薬品が脂溶性である、請求項７２の組成物。
【０２３９】
７４．外殻の医薬品が両親媒性である、請求項７２の組成物。
【０２４０】
７５．外殻の医薬品が水溶性である、請求項７２の組成物。
【０２４１】
７６．外殻の医薬品がポリヌクレオチドである、請求項７２の組成物。
【０２４２】
７７．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項１〜７６の組成物。
【０２４３】
７８．複数のナノ実体が、平均径が２５０ｎｍ未満である、請求項１〜７７のいずれか１項の組成物。
【０２４４】
７９．複数のナノ実体が、平均径が１５０ｎｍ未満である、請求項１〜７８のいずれか１項の組成物。
【０２４５】
８０．複数のナノ実体がミセルを含む、請求項１〜７９のいずれか１項の組成物。
【０２４６】
８１．複数のナノ実体がリポソームではない、請求項１〜８０のいずれか１項の組成物。
【０２４７】
８２．複数のナノ実体がプロタミンを含まない、請求項１〜８１のいずれか１項の組成物。
【０２４８】
８３．複数のナノ実体がポリアルギニンを含まない、請求項１〜８２のいずれか１項の組成物。
【０２４９】
８４．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項１〜８３のいずれか１項の組成物。
【０２５０】
８５．（態様２）：薬剤として使用する、請求項１〜８４のいずれか１項の組成物。
【０２５１】
８６．請求項１〜８５のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０２５２】
８７．生物体がヒトである、請求項８６の方法。
【０２５３】
８８．（態様３）：ポリシアル酸上のカルボキシラート部分とアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドとを反応させること；ならびに得られたアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドおよび／またはアミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドと標的化部分上のチオール基とを反応させて、ポリシアル酸−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミド−ペプチドおよび／またはポリシアル酸−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミドイソプロピル−ペプチド組成物を得ることを含む、方法。
【０２５４】
８９．ポリシアル酸−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミド−ペプチド組成物および／またはポリシアル酸−アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミドイソプロピル−ペプチド組成物を含むエマルションを形成すること；ならびにエマルションから複数のナノ粒子を形成することをさらに含む、請求項８８の方法。
【０２５５】
９０．複数のナノ粒子の少なくとも一部が、露出した外殻に取り囲まれた内側部分を含む、請求項８９の方法。
【０２５６】
９１．（態様４）：ポリシアル酸上のカルボキシラート部分とＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび／またはカルボジイミドとを反応させて中間体を形成すること；ならびに中間体と標的化部分上のリジン基またはアルギニン基とを反応させて、ポリシアル酸−アミド−ペプチドを得ることを含む、方法。
【０２５７】
９２．ポリシアル酸−アミド−ペプチドを含むエマルションを形成すること；およびエマルションから複数のナノ粒子を形成することをさらに含む、請求項９１の方法。
【０２５８】
９３．複数のナノカプセルの少なくとも一部が、露出した外殻に取り囲まれた内側部分を含む、請求項９２の方法。
【０２５９】
９４．（態様５）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリシアル酸を含み、ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分中に含まれるモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０２６０】
９５．モノクローナル抗体が、ナノ実体の外部に露出していない、請求項９４の組成物。
【０２６１】
９６．複数のナノ実体の少なくとも一部が、１つまたは複数の界面活性剤をさらに含む、請求項９４または９５のいずれか１項の組成物。
【０２６２】
９７．複数のナノ実体の少なくとも一部が、標的化部分および／または細胞浸透性ペプチドおよび／または腫瘍／組織浸透性ペプチドをさらに含む、請求項９４〜９６のいずれか１項の組成物。
【０２６３】
９８．標的化部分が、ポリシアル酸と静電気的に結合している、請求項９７の組成物。
【０２６４】
９９．標的化部分が、リンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項９７の組成物。
【０２６５】
１００．標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アミド−イソ−プロピルリンカーを介して、またはアミド基により直接、ポリシアル酸と結合している、請求項９７の組成物。
【０２６６】
１０１．アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカーが、ＥＤＣ／ＮＨＳ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）カップリング反応によって生じるものである、請求項１００の組成物。
【０２６７】
１０２．標的化部分が、アミノエチルスクシンイミドリンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項９９の組成物。
【０２６８】
１０３．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項９７〜１０２のいずれか１項の組成物。
【０２６９】
１０４．細胞浸透性ペプチドが、ポリシアル酸と化学的に結合している、請求項１０３の組成物。
【０２７０】
１０５．標的化部分がアミノ酸配列ＲＧＤを含む、請求項９７〜１０４のいずれか１項の組成物。
【０２７１】
１０６．標的化部分がアミノ酸配列ＮＧＲを含む、請求項９７〜１０５のいずれか１項の組成物。
【０２７２】
１０７．標的化部分がＬｙｐ−１を含む、請求項９７〜１０６のいずれか１項の組成物。
【０２７３】
１０８．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項９７〜１０７のいずれか１項の組成物。
【０２７４】
１０９．標的化部分がｃＬｙｐ１を含む、請求項９７〜１０８のいずれか１項の組成物。
【０２７５】
１１０．外殻が浸透促進剤をさらに含む、請求項９４〜１０９のいずれか１項の組成物。
【０２７６】
１１１．ポリシアル酸の少なくとも一部が疎水性部分と結合している、請求項９４〜１０９のいずれか１項の組成物。
【０２７７】
１１２．外殻の少なくとも約９３重量％がポリシアル酸を含む、請求項９４〜１１１のいずれか１項の組成物。
【０２７８】
１１３．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項９４〜１１２のいずれか１項の組成物。
【０２７９】
１１４．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項９４〜１１３のいずれか１項の組成物。
【０２８０】
１１５．複数のナノ実体が、平均径が２５０ｎｍ未満である、請求項９４〜１１４のいずれか１項の組成物。
【０２８１】
１１６．複数のナノ実体が、平均径が１５０ｎｍ未満である、請求項９４〜１１５のいずれか１項の組成物。
【０２８２】
１１７．複数のナノ実体がリポソームではない、請求項９４〜１１６のいずれか１項の組成物。
【０２８３】
１１８．複数のナノ実体がプロタミンを含まない、請求項９４〜１１７のいずれか１項の組成物。
【０２８４】
１１９．複数のナノ実体がポリアルギニンを含まない、請求項９４〜１１８のいずれか１項の組成物。
【０２８５】
１２０．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項９４〜１１９のいずれか１項の組成物。
【０２８６】
１２１．（態様６）：薬剤として使用する、請求項９４〜１２０のいずれか１項の組成物。
【０２８７】
１２２．請求項９４〜１２０のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０２８８】
１２３．（態様７）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がポリシアル酸から実質的になり、内側部分が少なくとも１つの疎水性化合物を含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０２８９】
１２４．外殻が、少なくとも９０重量％のポリシアル酸である、請求項１２３の組成物。
【０２９０】
１２５．複数のナノ実体の少なくとも一部が、内側部分と外殻との間に位置する界面活性剤をさらに含む、請求項１２３または１２４のいずれか１項の組成物。
【０２９１】
１２６．複数のナノ実体の少なくとも一部が、ポリシアル酸と化学的に結合した細胞浸透性ペプチドを含む標的化部分をさらに含む、請求項１２３〜１２５のいずれか１項の組成物。
【０２９２】
１２７．標的化部分がＣｅｎｄＲペプチドを含む、請求項１２６の組成物。
【０２９３】
１２８．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項１２６または１２７のいずれか１項の組成物。
【０２９４】
１２９．標的化部分が、リンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項１２６〜１２８のいずれか１項の組成物。
【０２９５】
１３０．標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）スクシンイミドリンカーを介してポリシアル酸と結合している、請求項１２６〜１２９のいずれか１項の組成物。
【０２９６】
１３１．複数のナノ実体がリポソームではない、請求項１２３〜１３０のいずれか１項の組成物。
【０２９７】
１３２．複数のナノ実体がプロタミンを含まない、請求項１２３〜１３１のいずれか１項の組成物。
【０２９８】
１３３．複数のナノ実体がポリアルギニンを含まない、請求項１２３〜１３２のいずれか１項の組成物。
【０２９９】
１３４．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項１２３〜１３３のいずれか１項の組成物。
【０３００】
１３５．（態様８）：薬剤として使用する、請求項１２３〜１３４のいずれか１項の組成物。
【０３０１】
１３６．請求項１２３〜１３４のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０３０２】
１３７．（態様９）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ポリシアル酸と、ポリシアル酸と化学的に結合した細胞浸透性ペプチドを含む標的化部分とを含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３０３】
１３８．複数のナノ実体がリポソームではない、請求項１３７の組成物。
【０３０４】
１３９．（態様１０）：薬剤として使用する、請求項１３７または１３８のいずれか１項の組成物。
【０３０５】
１４０．請求項１３７または１３８のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０３０６】
１４１．（態様１１）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ポリシアル酸と、ポリシアル酸と化学的に結合した標的化部分とを含み、標的化部分が、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２および／または配列ＲＧＤおよび／または配列ＮＧＲを有するペプチドを含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、複数のナノカプセルを含む、組成物。
【０３０７】
１４２．複数のナノ実体がリポソームではない、請求項１４１の組成物。
【０３０８】
１４３．（態様１２）：薬剤として使用する、請求項１４１または１４２のいずれか１項の組成物。
【０３０９】
１４４．請求項１４１または１４２のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０３１０】
１４５．（態様１３）：最大平均径が約１マイクロメートル未満である複数の実体を含み、実体が、ポリシアル酸と標的化部分とを含む表面を有し、ただし、実体がリポソームではない、組成物。
【０３１１】
１４６．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項１４５の組成物。
【０３１２】
１４７．複数のナノ実体の少なくとも一部がミセルである、請求項１４５または１４６のいずれか１項の組成物。
【０３１３】
１４８．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項１４５〜１４７のいずれか１項の組成物。
【０３１４】
１４９．複数の実体がリポソームではない、請求項１４５〜１４８のいずれか１項の組成物。
【０３１５】
１５０．（態様１４）：薬剤として使用する、請求項１４５〜１４９のいずれか１項の組成物。
【０３１６】
１５１．請求項１４５〜１４９のいずれか１項の組成物を生物体に投与することを含む、方法。
【０３１７】
１５２．（態様１５）：請求項１〜８４、９４〜１２０、１２３〜１３４、１３７、１３８、１４１、１４２、または１４５〜１４９のいずれか１項の組成物を含む、キット。
【０３１８】
１５３．（態様１６）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がヒアルロン酸を含み、ナノ実体の少なくとも一部がモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３１９】
１５４．外殻の少なくとも約９０重量％がヒアルロン酸を含む、請求項１５３の組成物。
【０３２０】
１５５．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項１５３または１５４のいずれか１項の組成物。
【０３２１】
１５６．内側部分が非水性である、請求項１５３〜１５５のいずれか１項の組成物。
【０３２２】
１５７．モノクローナル抗体が、内側部分の中に含まれている、請求項１５３〜１５６のいずれか１項の組成物。
【０３２３】
１５８．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項１５３〜１５７のいずれか１項の組成物。
【０３２４】
１５９．ナノ実体がミセルである、請求項１５３〜１５８のいずれか１項の組成物。
【０３２５】
１６０．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項１５３〜１５９のいずれか１項の組成物。
【０３２６】
１６１．（態様１７）：薬剤として使用する、請求項１５３〜１６０のいずれか１項の組成物。
【０３２７】
１６２．（態様１８）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと標的化部分とを含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３２８】
１６３．標的化部分が、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと静電気的に結合している、請求項１６２の組成物。
【０３２９】
１６４．標的化部分が、リンカーを介してＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１６２または１６３のいずれか１項の組成物。
【０３３０】
１６５．標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドリンカーを介して、またはアミド基により直接、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１６２または１６３のいずれか１項の組成物。
【０３３１】
１６６．標的化部分が、アミノエチルマレイミドリンカーを介してＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１６５の組成物。
【０３３２】
１６７．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項１６２〜１６６のいずれか１項の組成物。
【０３３３】
１６８．細胞浸透性ペプチドが、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと化学的に結合している、請求項１６２〜１６７のいずれか１項の組成物。
【０３３４】
１６９．標的化部分がＣｅｎｄＲペプチドを含む、請求項１６２〜１６８のいずれか１項の組成物。
【０３３５】
１７０．標的化部分がＬｙｐ−１を含む、請求項１６２〜１６９のいずれか１項の組成物。
【０３３６】
１７１．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項１６２〜１７０のいずれか１項の組成物。
【０３３７】
１７２．標的化部分がｃＬｙｐ１を含む、請求項１６２〜１７１のいずれか１項の組成物。
【０３３８】
１７３．外殻の少なくとも約９０重量％がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰを含む、請求項１６２〜１７２のいずれか１項の組成物。
【０３３９】
１７４．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項１６２〜１７３のいずれか１項の組成物。
【０３４０】
１７５．内側部分が非水性である、請求項１６２〜１７４のいずれか１項の組成物。
【０３４１】
１７６．内側部分が医薬品を含む、請求項１６２〜１７５のいずれか１項の組成物。
【０３４２】
１７７．医薬品がモノクローナル抗体である、請求項１７６の組成物。
【０３４３】
１７８．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項１６２〜１７７のいずれか１項の組成物。
【０３４４】
１７９．ナノ実体がミセルである、請求項１６２〜１７８のいずれか１項の組成物。
【０３４５】
１８０．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項１６２〜１７９のいずれか１項の組成物。
【０３４６】
１８１．ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰの少なくとも一部が疎水性部分と結合している、請求項１６２〜１８０のいずれか１項の組成物。
【０３４７】
１８２．（態様１９）：薬剤として使用する、請求項１６２〜１８１のいずれか１項の組成物。
【０３４８】
１８３．（態様２０）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと標的化部分とを含み、標的化部分が、配列Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２および／または配列ＲＧＤおよび／または配列ＮＧＲを有するペプチドを含み、Ｚ１がＲまたはＫであり、Ｚ２がＲまたはＫであり、Ｘ１およびＸ２がそれぞれアミノ酸残基である、複数のナノカプセルを含む、組成物。
【０３４９】
１８４．標的化部分が、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと静電気的に結合している、請求項１８３の組成物。
【０３５０】
１８５．標的化部分が、リンカーを介してＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１８３または１８４のいずれか１項の組成物。
【０３５１】
１８６．標的化部分が、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）マレイミドリンカー、アミノアルキル（Ｃ１〜Ｃ４）メタクリルアミドリンカーを介して、またはアミド基により直接、ＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１８３または１８５のいずれか１項の組成物。
【０３５２】
１８７．標的化部分が、アミノエチルマレイミドリンカーを介してＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰと結合している、請求項１８６の組成物。
【０３５３】
１８８．外殻の少なくとも約９０重量％がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰを含む、請求項１８３〜１８７のいずれか１項の組成物。
【０３５４】
１８９．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項１８３〜１８８のいずれか１項の組成物。
【０３５５】
１９０．内側部分が非水性である、請求項１８３〜１８９のいずれか１項の組成物。
【０３５６】
１９１．内側部分が医薬品を含む、請求項１８３〜１９０のいずれか１項の組成物。
【０３５７】
１９２．医薬品がモノクローナル抗体である、請求項１９１の組成物。
【０３５８】
１９３．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項１８３〜１９２のいずれか１項の組成物。
【０３５９】
１９４．ナノ実体がミセルである、請求項１８３〜１９３のいずれか１項の組成物。
【０３６０】
１９５．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項１８３〜１９４のいずれか１項の組成物。
【０３６１】
１９６．標的化部分がアミノ酸配列ＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２を含み、Ｊ１がアミノ酸配列である、請求項１８３〜１９５のいずれか１項の組成物。
【０３６２】
１９７．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１ＲＧＤを含み、Ｊ１がアミノ酸配列である、請求項１８３〜１９６のいずれか１項の組成物。
【０３６３】
１９８．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項１８３〜１９７のいずれか１項の組成物。
【０３６４】
１９９．標的化部分がアミノ酸配列Ｊ１ＲＧＤＪ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項１８３〜１９８のいずれか１項の組成物。
【０３６５】
２００．標的化部分がアミノ酸配列ＣＪ１Ｚ１Ｘ１Ｘ２Ｚ２Ｊ２を含み、Ｊ１およびＪ２がそれぞれ独立にアミノ酸配列である、請求項１８３〜１９９のいずれか１項の組成物。
【０３６６】
２０１．（態様２１）：薬剤として使用する、請求項１８３〜２００のいずれか１項の組成物。
【０３６７】
２０２．（態様２２）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰを含み、ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれているモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３６８】
２０３．外殻の少なくとも約９０重量％がＰＧＡおよび／またはＰＡＳＰを含む、請求項２０２の組成物。
【０３６９】
２０４．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項２０２または２０３のいずれか１項の組成物。
【０３７０】
２０５．内側部分が非水性である、請求項２０２〜２０４のいずれか１項の組成物。
【０３７１】
２０６．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項２０２〜２０５のいずれか１項の組成物。
【０３７２】
２０７．ナノ実体がミセルである、請求項２０２〜２０６のいずれか１項の組成物。
【０３７３】
２０８．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項２０２〜２０７のいずれか１項の組成物。
【０３７４】
２０９．（態様２３）：薬剤として使用する、請求項２０２〜２０８のいずれか１項の組成物。
【０３７５】
２１０．（態様２４）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、疎水性部分と結合したヒアルロン酸を含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３７６】
２１１．ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれているモノクローナル抗体をさらに含む、請求項２１０の組成物。
【０３７７】
２１２．ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれている医薬品をさらに含む、請求項２１０または２１１のいずれか１項の組成物。
【０３７８】
２１３．ナノ実体の少なくとも一部が、内側部分の中に含まれている小分子をさらに含む、請求項２１０〜２１２のいずれか１項の組成物。
【０３７９】
２１４．疎水性部分が、アルキル基、シクロアルカン、胆汁酸塩および誘導体、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、ならびに脂溶性ビタミンから選択される、請求項２１０〜２１３のいずれか１項の組成物。
【０３８０】
２１５．疎水性部分が直鎖アルキル基を含む、請求項２１０〜２１４のいずれか１項の組成物。
【０３８１】
２１６．疎水性部分がＣ２〜Ｃ２４直鎖アルキル基を含む、請求項２１０〜２１５のいずれか１項の組成物。
【０３８２】
２１７．疎水性部分が直鎖Ｃ１６アルキル基を含む、請求項２１０〜２１６のいずれか１項の組成物。
【０３８３】
２１８．複数のナノ実体の少なくとも一部が、標的化部分をさらに含む、請求項２１０〜２１７のいずれか１項の組成物。
【０３８４】
２１９．標的化部分がＬｙｐ−１を含む、請求項２１８の組成物。
【０３８５】
２２０．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項２１８または２１９のいずれか１項の組成物。
【０３８６】
２２１．標的化部分がｃＬｙｐ１を含む、請求項２１８〜２２０のいずれか１項の組成物。
【０３８７】
２２２．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項２１８〜２２１のいずれか１項の組成物。
【０３８８】
２２３．外殻の少なくとも約９０重量％がヒアルロン酸を含む、請求項２１０〜２２２のいずれか１項の組成物。
【０３８９】
２２４．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項２１０〜２２３のいずれか１項の組成物。
【０３９０】
２２５．内側部分が非水性である、請求項２１０〜２２４のいずれか１項の組成物。
【０３９１】
２２６．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項２１０〜２２５のいずれか１項の組成物。
【０３９２】
２２７．ナノ実体がミセルである、請求項２１０〜２２６のいずれか１項の組成物。
【０３９３】
２２８．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項２１０〜２２７のいずれか１項の組成物。
【０３９４】
２２９．（態様２５）：薬剤として使用する、請求項２１０〜２２８のいずれか１項の組成物。
【０３９５】
２３０．（態様２６）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、ポリ酸、ポリエステル、ポリアミド、またはその混合物からなる群より選択されるポリマーを含み、ナノ実体の少なくとも一部がモノクローナル抗体をさらに含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０３９６】
２３１．モノクローナル抗体が、内側部分の中に含まれている、請求項２３０の組成物。
【０３９７】
２３２．外殻の少なくとも約９０重量％がポリマーを含む、請求項２３０または２３１のいずれか１項の組成物。
【０３９８】
２３３．ポリマーがポリシアル酸を含む、請求項２３０〜２３２のいずれか１項の組成物。
【０３９９】
２３４．ポリマーがヒアルロン酸を含む、請求項２３０〜２３３のいずれか１項の組成物。
【０４００】
２３５．ポリマーがポリグルタミン酸および／またはＰＧＡ−ＰＥＧを含む、請求項２３０〜２３４のいずれか１項の組成物。
【０４０１】
２３６．ポリマーがＰＡＳＰおよび／またはＰＡＳＰ−ＰＥＧを含む、請求項２３０〜２３５のいずれか１項の組成物。
【０４０２】
２３７．ポリマーがポリ乳酸−ポリエチレングリコール（ＰＬＡ−ＰＥＧ）を含む、請求項２３０〜２３６のいずれか１項の組成物。
【０４０３】
２３８．ポリマーがポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）および／またはペグ化ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）を含む、請求項２３０〜２３７のいずれか１項の組成物。
【０４０４】
２３９．ポリマーがポリ乳酸および／またはペグ化ポリ乳酸を含む、請求項２３０〜２３８のいずれか１項の組成物。
【０４０５】
２４０．ポリマーがポリアスパラギン酸および／またはペグ化ポリアスパラギン酸を含む、請求項２３０〜２３９のいずれか１項の組成物。
【０４０６】
２４１．ポリマーがアルギン酸および／またはペグ化アルギン酸を含む、請求項２３０〜２４０のいずれか１項の組成物。
【０４０７】
２４２．ポリマーがポリリンゴ酸および／またはペグ化ポリリンゴ酸を含む、請求項２３０〜２４１のいずれか１項の組成物。
【０４０８】
２４３．ポリマーが疎水性部分と結合している、請求項２３０〜２４２のいずれか１項の組成物。
【０４０９】
２４４．ナノ実体の少なくとも一部が標的化部分をさらに含む、請求項２３０〜２４３のいずれか１項の組成物。
【０４１０】
２４５．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項２３０〜２４４のいずれか１項の組成物。
【０４１１】
２４６．内側部分が非水性である、請求項２３０〜２４５のいずれか１項の組成物。
【０４１２】
２４７．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項２３０〜２４６のいずれか１項の組成物。
【０４１３】
２４８．ナノ実体がミセルである、請求項２３０〜２４７のいずれか１項の組成物。
【０４１４】
２４９．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項２３０〜２４８のいずれか１項の組成物。
【０４１５】
２５０．（態様２７）：薬剤として使用する、請求項２３０〜２４９のいずれか１項の組成物。
【０４１６】
２５１．（態様２８）：外殻に取り囲まれた内側部分を含み、外殻が、疎水性部分と結合したヒアルロン酸を含み、ナノ実体の少なくとも一部が、分子量が１０００Ｄａ未満である小分子をさらに含む、複数のナノ実体を含む、組成物。
【０４１７】
２５２．小分子が、内側部分の中に含まれている、請求項２５１の組成物。
【０４１８】
２５３．小分子が医薬品である、請求項２５１または２５２のいずれか１項の組成物。
【０４１９】
２５４．小分子がドセタキセルである、請求項２５１〜１５３のいずれか１項の組成物。
【０４２０】
２５５．疎水性部分が、アルキル基、シクロアルカン、胆汁酸塩および誘導体、テルペノイド、テルペン、テルペン由来部分、ならびに脂溶性ビタミンから選択される、請求項２５１〜２５４のいずれか１項の組成物。
【０４２１】
２５６．疎水性部分が直鎖アルキル基を含む、請求項２５１〜２５５のいずれか１項の組成物。
【０４２２】
２５７．疎水性部分がＣ２〜Ｃ２４直鎖アルキル基を含む、請求項２５１〜２５６のいずれか１項の組成物。
【０４２３】
２５８．疎水性部分が直鎖Ｃ１６アルキル基を含む、請求項２５１〜２５７のいずれか１項の組成物。
【０４２４】
２５９．外殻の少なくとも約９０重量％がヒアルロン酸を含む、請求項２５１〜２５８のいずれか１項の組成物。
【０４２５】
２６０．複数のナノ実体の少なくとも一部がナノカプセルである、請求項２５１〜２５９のいずれか１項の組成物。
【０４２６】
２６１．ナノ実体の少なくとも一部が標的化部分をさらに含む、請求項２５１〜２６０のいずれか１項の組成物。
【０４２７】
２６２．標的化部分がＬｙｐ−１を含む、請求項２５１〜２６１のいずれか１項の組成物。
【０４２８】
２６３．標的化部分がｔＬｙｐ−１を含む、請求項２５１〜２６２のいずれか１項の組成物。
【０４２９】
２６４．標的化部分がｃＬｙｐ１を含む、請求項２５１〜２６３のいずれか１項の組成物。
【０４３０】
２６５．標的化部分が細胞浸透性ペプチドを含む、請求項２５１〜２６４のいずれか１項の組成物。
【０４３１】
２６６．標的化部分がヒアルロン酸と結合している、請求項２５１〜２６５のいずれか１項の組成物。
【０４３２】
２６７．内側部分が非水性である、請求項２５１〜２６６のいずれか１項の組成物。
【０４３３】
２６８．複数のナノ実体が、平均径が１マイクロメートル未満である、請求項２５１〜２６７のいずれか１項の組成物。
【０４３４】
２６９．ナノ実体がミセルである、請求項２５１〜２６８のいずれか１項の組成物。
【０４３５】
２７０．複数のナノ実体が２つ以上の外殻は含まない、請求項２５１〜２６９のいずれか１項の組成物。
【０４３６】
２７１．（態様２９）：薬剤として使用する、請求項２５１〜２７０のいずれか１項の組成物。
【０４３７】
２７２．（態様３０）：請求項１５３〜１６０、１６２〜１８１、１８３〜２００、２０２〜２０８、２１０〜２２９８、２３０〜２４９、または２５１〜２７０のいずれか１項に記載の組成物を含む、キット。
【０４３８】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を説明することを意図するものであるが、本発明の全範囲を例示するものではない。
【０４３９】
実施例１
この実施例では、腫瘍浸透性ペプチドｔＬｙｐ１で官能化した、または官能化していない、ポリシアル酸（ＰＳＡ）ナノカプセルを説明する。
【０４４０】
ナノカプセルの組成は以下の通りであった。ナノカプセルは、ｔＬｙｐ１ペプチドで官能化したＰＳＡまたはＰＳＡのポリマー殻に取り囲まれ、界面活性剤によって安定化した油性核から形成した。ナノカプセルは、水中油型乳剤の相間でＰＳＡと正荷電界面活性剤が相互作用することにより形成された。特に明記されない限り、使用したＰＳＡは分子量が約３０ｋＤａであった（２６〜３０ｋＤａ、Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａ社）。
【０４４１】
使用したＰＳＡの共有結合により、ペプチドｔＬｙｐ１のチオール基とＰＳＡのカルボキシラート基との間の選択的共有結合が可能になる。この合成法では、ヘテロ二官能性リンカー、アミノエチルマレイミドを使用し、このリンカーにより、２段階の工程に従って、最初にそのリンカーのアミン基からＰＳＡのカルボキシラート基への取込み（カルボジイミド化学を用いる）、次に、リンカーのマレイミド基へのペプチドのチオール基（システイン残基）の付加（マイケル型付加）によるペプチド結合が可能になる（図１）。この戦略により、ｔＬｙｐ１ペプチドの生物学的に活性な基の保護が可能となった。さらに、置換度を容易に制御できる。
【０４４２】
ポリマーナノカプセル、例えばＰＳＡナノカプセルを様々な技術によって作製できる。ナノカプセル表面のｔＬｙｐ１分子の数は、化学反応に用いる様々なモル比によって修正することができた（ＰＳＡ：ＥＤＣ：ＮＨＳ：ＡＥＭのカルボン酸（ＣＯＯＨ）の供給モル比を示す表１を参照されたい）。そのような技術の１つに、水相で極性溶媒を混合する溶媒置換技術がある。また別の技術として、有機溶媒の使用が不要な自己乳化技術がある。
【０４４３】
ポリマーナノカプセル、例えばＰＳＡナノカプセルをｔＬｙｐ１で官能化することができた。ナノカプセル表面のｔＬｙｐ１分子の数を制御することができた。形成されたｔＬｙｐ１官能化ナノカプセルは、大きさが約１３０ｎｍで、負ゼータ電位が負（−４４ｍＶ）であった。ｔＬｙｐ１官能化ナノカプセルは、血漿中、３７℃でインキュベートしても安定であることがわかった。さらに、ｔＬｙｐ１官能化ナノカプセルに任意の適切な疎水性薬物のほかにも水溶性分子を搭載することができた。ある実験では、ｔＬｙｐ１官能化ナノカプセルにドセタキセル、例えば無水ドセタキセル（Ｍｗ８０７．２８９ｇ／ｍｏｌ；ＬｏｇＰ２．６）を搭載した。ｔＬｙｐ１に加えて、ＣｅｎｄＲペプチドなどの他の組織浸透性ペプチド（例えば、Ｌｙｐ１およびｉＲＧＤ）をＰＳＡ鎖に結合させ得る。
【０４４４】
ＰＳＡをＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩で修飾した。ＰＳＡのカルボン酸基と、ＥＤＣ、ＮＨＳ、ＡＥＭ、およびｔＬｙｐ１との間の様々なモル比を試験した（表１）。この目的のために、ＰＳＡをｐＨ６の０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に最終濃度２ｍｇ／ｍＬで溶かし、対応する量のＥＤＣ、ＮＨＳ、およびＡＥＭも０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に溶かし、ＰＳＡ溶液に加え、室温で４時間、磁気攪拌下で維持した。マレイミド官能化ＰＳＡ（ＰＳＡ−Ｍａｌ）を最初にＮａＣｌ  ５０ｍＭに対して、次いでＭｉｌｌｉＱ水に対して透析（再生セルロース、ＳｎａｋｅＳｋｉｎ  ７ＫＤａ  ＭＷＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）することにより精製した。第二の反応には、ＰＳＡ−Ｍａｌを０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液とＮａＣｌ  ５０ｍＭの溶液に最終ＰＳＡ濃度１ｍｇ／ｍＬで溶かした。この溶液にペプチドを加え、反応混合物を室温で４時間、磁気攪拌下で維持し、最終ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１生成物を既に記載した通りに透析することによって精製し、凍結乾燥させ（Ｐｉｌｏｔ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ  ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ２５  ＥＳ）、４℃で保管した。
【０４４５】
【表１】
2021516211.tif 000006
【０４４６】
ＰＳＡナノカプセルを以下の通りに調製した。様々な比の（例えば、８ｋＤａ、２６〜３０ｋＤａ、および９４ｋＤａの異なるＭｗを有する）ＰＳＡまたはＰＳＡ−ｔＬｙｐ１のポリマーコーティングを有するナノカプセルを溶媒置換技術により調製した。有機相は、ドセタキセル搭載ナノカプセルの場合、アセトン４．７５ｍＬと、０．７５ｍｇ／ｍＬのレシチン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ  １４５Ｖ、Ｃａｒｇｉｌｌ社）、０．１５ｍｇ／ｍＬの臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）、２．９６ｍｇ／ｍＬのカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２、ＩＯＩ  Ｅｌｅｏ社）、および１５０マイクログラム／ｍＬのドセタキセル（Ｈａｏ  Ｒｕｉ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社）を含有するエタノール０．２５ｍＬとから構成されるものとした。水相は、０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳＡまたはＰＳＡ−ｔＬｙｐ１溶液１０ｍＬから構成されるものとした。有機相を磁気攪拌下で水相に滴加したところ、ナノ液滴が直ちに形成され、その周囲にポリマーが沈着した。ナノカプセル形成後、回転蒸発により有機溶媒を除去した。結果を３回の反復の平均＋／−ＳＤとして表す（表２）。
【０４４７】
Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒ（登録商標）Ｂｅｎｃｈｔｏｐマイクロ流体工学機器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いることにより、様々な比のＰＳＡまたはＰＳＡ−ｔＬｙｐ１のポリマーコーティングを有するナノカプセルを以下の通りに調製した。水相は、０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳＡまたはＰＳＡ−ｔＬｙｐ１溶液１０ｍＬから構成されるものとした。有機相は、ドセタキセル搭載ナノカプセルの場合、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００（Ｌｉｐｏｉｄ社）３．７５ｍｇ塩化ベンゼトニウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）０．７５ｍｇ、Ｌａｂｒａｆａｃ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ  １３４９（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社）１５．３ｍｇ、および無水ドセタキセル（Ｈａｏ  Ｒｕｉ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社）０．７５ｍｇを含有するエタノール１ｍＬから構成されるものとした。簡潔に述べれば、チャネル内に設計された微視的特徴が２つの流れの迅速かつ均一な混合を制御するＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒカートリッジの各注入口に、水相および有機相の両方を調節可能な流速で注入して、ナノカプセルを作製した。ナノカプセル形成後、回転蒸発によりエタノールを除去した。作動流速の増大がナノカプセルの大きさの減少と直接相関していた（表３、ＰＳＡ  ＮＣ−Ａ〜Ｃ）。結果を３回の反復の平均＋／−ＳＤとして表す（表３）。
【０４４８】
ナノカプセルの単離／濃縮。ナノカプセルを８４０３５ｇ、１５℃で０．５時間超遠心分離（Ｏｐｔｉｍａ（商標）Ｌ−９０Ｋ  Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社；フラートン、カリフォルニア州）することにより単離した。次いで、媒体から下澄みを除去した。ナノカプセル（上清）を収集し、既知の濃度まで希釈した。
【０４４９】
ナノカプセルの物理化学的特徴付け。ナノカプセルを光子相関分光法（ＰＣＳ）による平均粒子径および多分散指数（ＰＩ）の観点から特徴付けた。試料をＭｉｌｌｉＱ水で希釈し、解析を角度検出１７３°、２５℃で実施した。レーザードップラー流速測定（ＬＤＡ）によりゼータ電位測定を実施し、試料をＭｉｌｌｉＱ超純水で希釈した。ＮａｎｏＺＳ（登録商標）（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、マルバーン、イギリス）を用いて、ＰＣＳおよびＬＤＡ解析を三重反復で実施した。
【０４５０】
ドセタキセルの結合効率（ＡＥ％）。ドセタキセルの結合効率を総ドセタキセル量の点から、封入された薬物の割合として表した。したがって、一定分量の単離ナノカプセル中に封入された薬物を求め、一定分量の非単離ナノカプセル中の総薬物量を推定した。パクリタキセルを内部標準に用いて、ＵＰＬＣまたは液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）により薬物の定量化を実施した。ＵＰＬＣシステムには、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｈクラスシステム（Ｗａｔｅｒｓ社）およびカラムコンパートメント（ＢＥＨ  Ｃ１８カラム２．１×１００ｍｍ、１．７マイクロメートル、Ｗａｔｅｒｓ社）を含めた。実験解析条件を以下の通りとした：移動相にはＭｉｌｌｉＱ水（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含めた。Ａ５５％およびＢ４５％のイソクラティックプログラムを用いた。流速を０．４ｍＬ／分とし、実行時間を３．５分とした。カラムの温度を４０℃に維持し、オートサンプラーを４℃の一定温度にした。注入体積を１０マイクロリットルとした。これらの条件下、ＤＣＸを１．８＋／−０．０２分に溶出させた。ＬＣ−ＭＳシステムには、ＵＰＬＣシステム（Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｈクラスシステム（Ｗａｔｅｒｓ社）；エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）インターフェースを備えたＸｅｖｏ（登録商標）Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＴＱＤ）（Ｗａｔｅｒｓ社、ミルフォード、米国）と連動したカラムコンパートメント（ＢＥＨ  Ｃ１８カラム２．１×１００ｍｍ、１．７マイクロメートル、Ｗａｔｅｒｓ社）を含めた。質量分析検出をポジティブモードで稼働させ、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）に設定して、ｍ／ｚ８３０．４〜ｍ／ｚ３０４．１およびｍ／ｚ８３０．４〜ｍ／ｚ５４９．２の推移をモニターした。発生源の温度には５２５℃、脱溶媒和温度には１５０℃を選択し、キャピラリー電圧を３．１ｋＶとし、コーン電圧を４０Ｖとした。脱溶媒和およびコーンガスには窒素をそれぞれ流速６００Ｌ／時および８０Ｌ／時で使用した。衝突ガスにはアルゴンを使用した。最適化衝突エネルギーを３０ｅＶとした。実験分析条件を以下の通りとした：移動相には０．１％ギ酸水溶液（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含めた。０〜５分にわたる８０％〜２０％の移動相Ａから開始し、次いで、５〜５．５分にわたって８０％のＡに戻し、それを６分まで一定に維持して、初期条件に達する、直線勾配プログラムを用いた。流速を０．６ｍＬ／分とし、総実行時間を６分とした。カラムの温度を４０℃に維持し、オートサンプラーを４℃の一定温度にした。注入体積を１０マイクロリットルとした。これらの条件下、ＤＣＸを４．１１＋／−０．０２分に溶出させた。ＴａｒｇｅｔＬｙｎｘ  ｖ４．１ソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ社）を用いてデータの収集および解析を実施した。
【０４５１】
【表２】
2021516211.tif 000007
【０４５２】
【表３】
2021516211.tif 000008
【０４５３】
ＰＳＡ−ｔｌｙｐ１コンジュゲートの特徴付け。一部のＮＭＲ実験をＶａｒｉａｎ  Ｉｎｏｖａ  ７５０分光計で実施した。化学シフトをｐｐｍで報告した。酸化ジュウテリウム：ＭｉｌｌｉＱ水が１０：９０の混合物中、ポリマー濃度０．４〜０．８ｍｇ／ｍＬでスペクトルを記録した。１Ｈ−ＮＭＲ解析を７５０ＭＨｚ、スキャン回数２５６、各スキャン間の遅延時間１０秒で実施した。ＭｅｓｔｒｅＮｏｖａ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｅｓｔｒｅｌａｂ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）をスペクトルの処理に用いた。ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１スペクトル中のペプチド由来の特徴的な１Ｈ−ＮＭＲシグナルの存在を確認することによって、ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１コンジュゲートの形成を確認した。さらに、ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの６．５〜８．５ｐｐｍにｔＬｙｐ１ペプチドのアミノ酸に由来するアミンプロトンに特徴的なシグナルの存在が観察され（図１３）、したがって、ＰＳＡとｔＬｙｐ１との間の共有結合が確認された。
【０４５４】
実施例２
この実施例では、実施例１に記載した粒子を用いたｉｎ  ｖｉｖｏデータを示す。ＰＳＡをｔＬｙｐ１で官能化することによって、同所性肺腫瘍モデルに正の標的化効果が得られた（肺に抗腫瘍薬、ドセタキセルが大量に蓄積した）。図２Ａに示す生体内分布のデータから、ペプチドをＰＳＡと結合させる（例えば、共有結合させる）と、未結合ｔＬｙｐ１を（ＰＳＡナノカプセルおよびｔＬｙｐ１を例えば別個に）投与する場合、および（ｔＬｙｐ１のない）未修飾ＰＳＡナノカプセルを投与する場合と比較して、この標的化効果が著明にみられることがわかる。図２Ｂに示す生体内分布のデータから、上記の官能化ナノカプセル（ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１  ＮＣ）では、２４時間後に腫瘍（肺）内に蓄積したドセタキセルの量が、市販のドセタキセル、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）で得られた量の約２６倍であったことがわかる。
【０４５５】
実施例１に記載した液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）を用いて、組織および血漿試料中のドセタキセルの定量化を実施した。組織試料の重量を測定し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社）を用いて、組織１ｇ当たり８ｍＬの０．０１Ｍ  ＰＢＳ中でホモジナイズした。アセトニトリルを用いて、タンパク質沈殿法により薬物抽出を実施した。これを実施するため、内部標準のパクリタキセル９ｎｇを含有するアセトニトリル９００マイクロリットルを血漿またはホモジナイズ組織の試料１００マイクロリットルに加えた。次いで、この混合物を２０分間ボルテックスし、２０８１７ｇで５分間遠心分離し、得られた上清８００マイクロリットルを収集し、４０℃で蒸発（ＭｉＶａｃ  Ｄｕｏ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ、Ｇｅｎｅｖａｃ社）させることによって乾燥させた。最後に、得られた乾燥試料を移動相１００マイクロリットルに溶かし、０．２２マイクロメートルの孔径（Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ  ４ｍｍ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過し、ＬＣバイアルに移した。ブランクの血漿または組織にドセタキセル標準溶液を添加することにより、較正標準物質も同様に作製した。これらの条件下、内部標準のパクリタキセルを４．１７＋／−０．０１分に溶出させ、８５４．６〜２８６および８５４．６〜５６９の推移をモニターした。ＴａｒｇｅｔＬｙｎｘ  ｖ４．１ソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ社）を用いて、データの収集および解析を実施した。
【０４５６】
この実施例では、ＰＤＸ（患者由来移植）膵癌マウスモデルでｔＬｙｐ１官能化ＰＳＡナノカプセルの効果を市販製剤、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（パクリタキセル）の効果と比較した。図３の結果から、ｔＬｙｐ１官能化ＰＳＡナノカプセル（比２）の方がＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）よりも効果が高かったことがわかる。腫瘍の成長が有意に低下し、マウスの生存期間が有意に長くなった（４２日対５６日）。さらに、ナノカプセルは、健常マウスの体重減少からみたｉｎ  ｖｉｖｏ毒性（図４）および血液毒性が低かった。
【０４５７】
図２に、等しいドセタキセル用量７．５ｍｇ／ｋｇのＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（市販のドセタキセル）、ＰＳＡ  ＮＣ、ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１  ＮＣ、およびｔＬｙｐ１＋ＰＳＡ  ＮＣのＩＶ投与から１時間後（図２Ａ）および２４時間後（図２Ｂ）のドセタキセルの蓄積を示す。データは５回の反復の平均＋／−標準偏差（ＳＤ）で示されている。処置間の有意差（＊）ｐ＜０．０１。
【０４５８】
図３に、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（パクリタキセル用量１５０ｍｇ／Ｋｇ）およびドセタキセル搭載ｔＬｙｐ１−ＰＳＡナノカプセル（ドセタキセル用量６０ｍｇ／ｋｇ）のＩＶ投与後の相対腫瘍体積を示す。いずれのデータも５回の反復の平均＋／−標準誤差（ＳＥＭ）で示されている。マウスは、疾患状態の進行を理由に、第４２日（対照およびＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）処置）または第５６日に死亡するか、屠殺した。
【０４５９】
図４に、等しい総ドセタキセル用量７５ｍｇ／ｋｇのｔＬｙｐ１−ＰＳＡナノカプセルで処置したマウスの体重変化を示す。いずれのデータも５回の反復の平均＋／−標準偏差（ＳＤ）で示されている。
【０４６０】
実施例３
ｔＬｙｐ１に加えて、その他の標的化ペプチドおよび／または組織浸透性ペプチド、例えばＣｅｎｄＲペプチド（例えば、ｃＬｙｐ１およびｉＲＧＤ）などをポリマー鎖、例えばＰＳＡと結合させ得る。
【０４６１】
ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１に用いたのとほぼ同じ化学的戦略を用いて、ｃＬｙｐ１をＰＳＡと共有結合させた。最初に、ＰＳＡをＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩で修飾した。ＰＳＡのカルボン酸基とＥＤＣ、ＮＨＳ、ＡＥＭ、およびペプチド（ｃＬｙｐ１）との間のモル比を変えて試験した（表４）。この目的のために、ＰＳＡをｐＨ６の０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に最終濃度２ｍｇ／ｍＬで溶かし、対応する量のＥＤＣ、ＮＨＳ、およびＡＥＭも０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に溶かし、ＰＳＡ溶液に加え、室温で４時間、磁気攪拌下で維持した。マレイミド官能化ＰＳＡ（ＰＳＡ−Ｍａｌ）を最初にＮａＣｌ  ５０ｍＭに対して、次いでＭｉｌｌｉＱ水に対して、実施例１に記載した通りに透析することにより精製した。第二の段階では、ＰＳＡ−Ｍａｌを０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液とＮａＣｌ  ５０ｍＭの溶液にＰＳＡ濃度１ｍｇ／ｍＬで溶かした。この溶液に、システイン２および１０にアセトアミドメチル保護基があり、システイン１に保護基がない直鎖型のペプチド、（Ｈ−ＣＣ（Ａｃｍ）ＧＮＫＲＴＲＧＣ（Ａｃｍ）−ＯＨ）を加え、反応混合物を室温で２４時間、磁気攪拌下で維持した。保護された直鎖型のペプチドで修飾したＰＳＡを上記の同じ条件で透析することにより精製した。最終的な環状型のペプチドを得るため、１ＭのＨＣｌ  １ｍＬをＰＳＡ−ペプチド溶液に加えることによってペプチドのシステイン２および１０の脱保護を実施し、次に、ペプチドに対して１モル当量のＩ２（メタノール中５．１０−３Ｍ）を含有するヨウ素のメタノール溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を磁気攪拌下で１時間、コンジュゲートに加えてシステイン酸化反応を実施し、次いで、この溶液に水中１Ｍのアスコルビン酸（Ｐａｎｒｅａｃ社）を１滴加えて、過剰であると考えられる媒体由来のＩ２を中和した。最終ＰＳＡ−ｃＬｙｐ１生成物を既に実施例１に記載した通りに透析によって精製し、凍結乾燥させ、４℃で保管した。
【０４６２】
ＰＳＡ−ｃＬｙｐ１コンジュゲートの特徴付けを１Ｈ−ＮＭＲにより実施した。
【０４６３】
【表４】
2021516211.tif 000009
【０４６４】
自己乳化技術によるＰＳＡ−ｃＬｙｐ１およびＰＳＡ−ｔＬｙｐ１を用いたナノカプセルの調製。簡潔に述べれば、Ｌａｂｒａｆａｃ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ１３４９（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社）１１８ｍｇ、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｍｅｒｃｋ社）１１６ｍｇ、Ｍａｃｒｏｇｏｌ  １５  Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅａｒａｔｅ（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（登録商標）、ＢＡＳＦ社）５ｍｇ、塩化ベンゼトニウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）０．４ｍｇ、ドセタキセル無水物（Ｈａｏ  Ｒｕｉ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社）２ｍｇ、およびエタノール５０マイクロリットルを含有する磁気攪拌下の有機相に、ＰＳＡ−ｃＬｙｐ１  ５．９５ｍｇを含有する水相１．７５ｍＬを加えた。
【０４６５】
上記の実施例１の方法に従い、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、およびゼータ電位の観点から特徴付けた。一定分量の非単離ナノカプセル中の総ドセタキセル含有量を推定した。既に実施例１に記載した方法に従い、薬物の定量化をＵＰＬＣにより実施した。結果を３回の反復の平均＋／−ＳＤとして表す（表５）。
【０４６６】
【表５】
2021516211.tif 000010
【０４６７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ効果に関する予備試験。マウス（ｎ＝３〜４個体／グループ）の転移性同所性肺癌モデル（Ａ５４９細胞）で、ｃＬｙｐ１官能化およびｔＬｙｐ１官能化ＰＳＡナノカプセル（５ｍｇ／ｋｇドセタキセル）の効果を市販製剤のＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（パクリタキセル、１５ｍｇ／ｋｇ）およびＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル、５ｍｇ／ｋｇ）のものと比較した。図５に、様々な処置（ＴＡＸＯ、ｔａｘｏｔｅｒｅ；ＡＢＲＡＸ、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）；Ａ、ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１ナノカプセル  比３０；Ｂ、ＰＳＡ−ｃＬｙｐ１  比２０；Ｃ１９、第１９日の未処置対照；Ｃ３７、第３７日の未処置対照）の後の（ｉ）肺（図５Ａ）および（ｉｉ）縦隔リンパ節（図５Ｂ）におけるｅｘ  ｖｉｖｏのルシフェラーゼ活性の定量化を示す。
【０４６８】
図５の結果から、官能化製剤では２種類とも、肺および縦隔（転移）リンパ節における腫瘍細胞の減少の点で応答が類似していることがわかる。興味深いことに、官能化ナノカプセルの方がＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）およびＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）よりも転移を抑える効果が高かった。さらに、体重減少、血液像、および重要な臓器の組織病理の解析では、ナノカプセルに毒性の徴候は全くみられなかった（データ不掲載）。
【０４６９】
実施例４
この実施例では、ナノカプセルのバッチ生産量を増大できる可能性を示し、拡張可能な技術を確立する。したがって、例えば、さらに大きなＰＳＡナノカプセルのバッチを溶媒置換により１０倍規模（１１０ｍＬのバッチ）で調製した。
【０４７０】
有機相には、ホスファチジルコリン（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００、Ｌｉｐｏｉｄ社）３７．５ｍｇ、塩化ベンゼトニウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）７．５ｍｇ、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（Ｌａｂｒａｆａｃ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ  １３４９、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社）１５２．８ｍｇ、およびドセタキセル無水物（Ｈａｏ  Ｒｕｉ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社）７．５ｍｇを含有するエタノール１０ｍＬを含めた。水相は、０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳＡ溶液１００ｍＬから構成されるものとした。上部取付型プロペラ攪拌機（Ｉｋａ  ＲＷ  ２０デジタル）に４枚羽のプロペラ（１０Ｍ／Ｍ−Ｐ１５）を７００ｒｐｍで用いて水相を維持し、蠕動ポンプ（Ｍｉｎｉｐｕｌｓ  ３、Ｇｉｌｓｏｎ社）を２５ｒｐｍで用いて、有機相を蠕動ポンプ管（１．６×４．８×１．６白金硬化シリコーン、Ｆｒｅｕｄｅｍｂｅｒｇ社）から水相に注入した。ナノカプセル形成後、回転蒸発により有機溶媒を除去した。
【０４７１】
上記の方法に従い、超遠心分離による単離／濃縮の後、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、およびゼータ電位の観点から特徴付けた。既に実施例１でＡＥ％について記載した方法に従い、薬物の定量化をＵＰＬＣにより実施した。３回の独立した反復に対応する結果を表６に示す。
【０４７２】
【表６】
2021516211.tif 000011
【０４７３】
さらに、超遠心分離の代替法としてタンジェンシャルフローろ過により単離／濃縮を評価した。タンジェンシャルフローろ過は、回転蒸発段階を理想的に省くことができる拡張可能な方法である。したがって、Ｓａｒｔｏｆｌｏｗ  Ｓｍａｒｔ  Ｃｒｏｓｓｆｌｏｗ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）を用いてクロスフロー試験を実施した。これらの試験では、体積１Ｌのドセタキセル含有ＰＳＡナノカプセル（回転蒸発していない１１０ｍＬの個々のバッチを１０バッチプールしたもの）をカセットＨｙｄｒｏｓａｒｔ  １００ｋＤａで少なくとも２０倍に濃縮することに成功した。平均流速（ＬＭＨ）は１２０．６Ｌ／ｈｍ２であった。単離時間、濃縮倍数、最終ドセタキセル濃度、およびドセタキセル結合効率（ろ液中で測定した間接的ＡＥ％）の３回の反復の結果を表７に示す。
【０４７４】
【表７】
2021516211.tif 000012
【０４７５】
自己乳化技術を用いて、バッチ生産量の増大も評価した（バッチサイズ１００ｍＬ）。これには、上部取付型プロペラ攪拌機（ＩＫＡ  ＲＷ  ２０デジタル）に４枚羽のプロペラ（１０Ｍ／Ｍ−Ｐ１５）を１０００ｒｐｍで用いて、Ｌａｂｒａｆａｃ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ１３４９（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社）５９００ｍｇ、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｍｅｒｃｋ社）５８００ｍｇ、Ｍａｃｒｏｇｏｌ  １５  Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅａｒａｔｅ（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（登録商標）２５０ｍｇ、ＢＡＳＦ社）、塩化ベンゼトニウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）２０ｍｇ、ドセタキセル無水物（Ｈａｏ  Ｒｕｉ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ社）１００ｍｇ、およびエタノール５００ｕＬを含む有機相に、ポリマー２９７．５ｇおよび水８７．５ｇを含有する水相を加えた。
【０４７６】
上記の実施例１の方法に従い、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、およびゼータ電位の観点から特徴付けた。一定分量の非単離ナノカプセル中の総ドセタキセル含有量／濃度を推定した。既に実施例１に記載した方法に従い、薬物の定量化をＵＰＬＣにより実施した。３回の反復（ＰＳＡナノカプセル）および１回の反復（ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１  ＮＣ  比１０および比２０）に対応する結果を表８に示す。
【０４７７】
【表８】
2021516211.tif 000013
【０４７８】
１００ｍＬの１０バッチからなる１つのプールの単離／濃縮に関するタンジェンシャルフローろ過（Ｓａｒｔｏｆｌｏｗ  Ｓｍａｒｔ  Ｃｒｏｓｓｆｌｏｗ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）による予備試験を既に記載した条件に従って実施した。一定分量の単離ナノカプセル（残余分）中の総ドセタキセル含有量／濃度を推定したのに対して、ＡＥ％は２つの異なる方法で、すなわち、（ｉ）直接的に（残余分の解析）、および（ｉｉ）間接的に（ろ液の解析）求めた。既に実施例１に記載した方法に従い、薬物の定量化をＵＰＬＣにより実施した。結果を表９に示す。
【０４７９】
【表９】
2021516211.tif 000014
【０４８０】
実施例５
この実施例では、他の脂溶性小分子、例えば、抗癌剤のパクリタキセル（８５６．９０３ｇ／ｍｏｌ；ＬｏｇＰ３．２；Ｔｅｖａ社）およびパツピロン（５０７．６８６ｇ／ｍｏｌ；ＬｏｇＰ３．７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）と結合するＰＳＡナノカプセルの製剤を説明する。
【０４８１】
以下のように、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒ（登録商標）Ｂｅｎｃｈｔｏｐマイクロ流体工学機器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いることによってパクリタキセル搭載ＰＳＡナノカプセルを調製した。水相は、０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳＡ溶液に１０ｍＬから構成されるものとした。有機相は、Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００（Ｌｉｐｏｉｄ社）３．７５ｍｇ、塩化ベンゼトニウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）０．７５ｍｇ、Ｌａｂｒａｆａｃ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ  １３４９（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社）１５．３ｍｇ、およびパクリタキセル（Ｔｅｖａ社）０．７５ｍｇを含有するエタノール１ｍＬから構成されるものとした。簡潔に述べれば、水相および有機相の両方をＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒカートリッジの各注入口に総流速８ｍＬ／分で注入した。ナノカプセル形成後、回転蒸発によりエタノールを除去した。
【０４８２】
上の条件を用い、パクリタキセルだけパツピロン０．７５ｍｇに置き換えて、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒ（登録商標）Ｂｅｎｃｈｔｏｐマイクロ流体工学機器（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いることにより、パツピロン搭載ＰＳＡナノカプセルも調製した。
【０４８３】
上記の実施例１の方法に従い、超遠心分離によりナノカプセルを単離／濃縮後の平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、およびゼータ電位の観点から特徴付けた。ＡＥ％を求める薬物の定量化を２つの異なる解析法により実施し、簡潔に述べれば：
（ｉ）パクリタキセル：薬物の定量化をＵＰＬＣにより実施した。ＵＰＬＣシステムには、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）Ｈクラスシステム（Ｗａｔｅｒｓ社）およびカラムコンパートメント（ＢＥＨ  Ｃ１８カラム、２．１×１００ｍｍ、１．７マイクロメートル、Ｗａｔｅｒｓ社）を含めた。実験解析条件を以下の通りとした：移動相には、ＭｉｌｌｉＱ水（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含めた。Ａ５５％およびＢ４５％のイソクラティックプログラムを用いた。流速を０．６ｍＬ／分とし、実行時間を４分とした。カラムの温度を４０℃に維持し、オートサンプラーを４℃の一定温度にした。注入体積を１０マイクロリットルとした。これらの条件下、パクリタキセルを１．３分に溶出させた。
（ｉｉ）パツピロン；薬物の定量化をＨＰＬＣにより実施した。ＨＰＬＣシステムには、ＶＷＲ  Ｈｉｔａｃｈｉ  ＥＬＩＴＥ  ＬａＣｈｒｏｍ（日立社）およびカラムコンパートメントＡＣＥ  Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ逆相Ｃ１８（５マイクロメートル×２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）を含めた。実験解析条件を以下の通りとした：移動相には、０．１％のギ酸で酸性化したＭｉｌｌｉＱ水（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含めた。Ａ８０％およびＢ２０％のイソクラティックプログラムを用いた。流速を１ｍｌ／分とし、実行時間を７．０分とした。カラムの温度を３０℃に維持した。注入体積を５０マイクロリットルとした。検出波長を２４８ｎｍに設定した。これらの条件下、パツピロンを３．５５分に溶出させた。
【０４８４】
パクリタキセル製剤およびパツピロン製剤の両方の３回の反復に対応する結果を表１０に示す。
【０４８５】
【表１０】
2021516211.tif 000015
【０４８６】
実施例６
Ｃ１２官能化ＰＳＡの調製に関する１つの例に以下のものがある。ここではＣ１２（ドデシル）を使用するが、他の実験ではこれ以外のアルキル基も同様に使用し得る。図５を参照すると、ＰＳＡナトリウム塩（３０ｋＤａ）をＤｏｗｅｘ、次いで、水酸化テトラブチルアンモニウムで処理した。限外ろ過による濃縮／精製および濃縮物の凍結乾燥の後、ＤＭＦに易溶性のＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩が得られた。
【０４８７】
次いで、この酸を２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸で活性化し、次いでドデシルアミンと反応させた。沈殿により生成物を単離した後、テトラブチルアンモニウム陽イオンをナトリウム陽イオンにより置換した。限外ろ過による濃縮／精製および濃縮物の凍結乾燥により、目的のドデシルアミド官能化ＰＳＡナトリウム塩を得た。１Ｈ−ＮＭＲによる解析で構造および４％の範囲内の置換度を確認した。
【０４８８】
数回の試験反応を実施して、２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸の量をさらに最適化した。５％の２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸を用いた最初の試験では、ポリマー内へのドデシルアミンの取込みが極めて低い（１％未満）となった。１当量の２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸を用いた実験では、水に溶けにくい生成物が得られた。３０％の２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸を用いたところ、４％の範囲内の置換度が得られた。次いで、この反応を官能化ポリマー１グラムまでスケールアップした。
【０４８９】
限外ろ過。限外ろ過を用いて、ＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩および誘導体化ＰＳＡを濃縮（および脱塩）した。Ｃａｓｓｅｔｔｅ（Ｐａｌｌ社）１０Ｋ  Ｏｍｅｇａ  ｃｅｎｔｒａｍａｔｅ  Ｔシリーズ０．０１９ｍ２（部品番号ＯＳ０１０Ｔ０２、シリアル番号３６０４９０７６Ｒ、膜ロット番号Ｈ５２５７Ｅ）を使用するＰａｌｌ社製のＭｉｎｉｍ  ＩＩ  Ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ（ＴＦＦ）Ｓｙｓｔｅｍを用いて、限外ろ過を実施した。ダイアフィルトレーションでは、リザーバー内に継続的に水を供給し、透過流が外に出る。塩および低分子量の不純物が膜を透過し、このため、ＰＳＡ溶液から除去された。
【０４９０】
ＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩（２）。ＰＳＡナトリウム塩（１ｇ）を純水（１００ｍＬ）に溶かし、Ｄｏｗｅｘ  ５０ＷＸ８（２００−４００、Ｈ＋型；水、次いでメタノール、次いで水で新たに洗浄したもの）（２０ｍＬ）とともに３０分間攪拌し、樹脂をろ過除去し、脱イオン水で洗浄した。溶液のｐＨは４未満であった。溶液をｐＨが約１２になるまで水酸化テトラブチルアンモニウム（４０重量％水溶液）で処理した。この手順全体を２回反復し、次いで、ＣＯ２のバブリング、次いでＮ２のバブリングにより最終ｐＨを７．５〜８に調整した。
【０４９１】
限外ろ過。ＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩の溶液をリザーバー（４００ｍＬ）に入れ、溶液を体積１００ｍＬまで濃縮した。ダイアフィルトレーションでは、リザーバー（３００ｍＬ）内に継続的に水を供給した。透過流量を１２ｍＬ／分とした。ダイアフィルトレーション終了時、溶液を最小限の体積までさらに濃縮し、リザーバーから取り出した。ダイアフィルトレーション時の膜間圧を０．６ｂａｒ、Ｐ１＝１．２ｂａｒとした。濃縮物を凍結乾燥させて、表題化合物（１．６ｇ）を白色の固体として得た。
【０４９２】
ドデシルアミド官能化ＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩（３）。ＰＳＡテトラブチルアンモニウム塩２（１．３ｇ、２．４３ｍｍｏｌ当量）のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に室温、Ｎ２下で２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸（２３３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、０．３５当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を加え、溶液を１時間攪拌した。１−アミノドデカン（２７０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（０．５７６ｍＬ、４．１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を反応に加え、混合物を４０時間攪拌した。反応混合物をＥｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）とアセトン（１５ｍＬ）の溶液に滴加した。沈殿をろ過により収集し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、減圧下で乾燥させた。
【０４９３】
ドデシルアミド官能化ＰＳＡナトリウム塩。白色の沈殿を脱イオン水（１００ｍＬ）に溶かし、溶液をＤｏｗｅｘ  ５０ＷＸ８（２００−４００、Ｈ＋型；水、次いでメタノール、次いで水で新たに洗浄したもの）（２０ｍＬ）とともに３０分間攪拌し、樹脂をろ過除去し、脱イオン水で洗浄した。溶液のｐＨは４未満であった。溶液をｐＨが１２になるまで水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ）で処理した。この手順全体を２回反復し、次いで、ＣＯ２のバブリング、次いでＮ２のバブリングにより最終ｐＨを７．５〜８に調整した。
【０４９４】
限外ろ過。誘導体化ＰＳＡナトリウム塩の溶液をリザーバー（５００ｍＬ）に入れ、溶液を体積１００ｍＬまで濃縮した。ダイアフィルトレーションでは、リザーバー（５００ｍＬ）内に継続的に水を供給した。透過流量を１０．４ｍＬ／分とした。ダイアフィルトレーション終了時、溶液を最小限の体積までさらに濃縮し、リザーバーから取り出した。ダイアフィルトレーション時の膜間圧を０．６〜０．７ｂａｒ（Ｐ１＝１．２〜１．３ｂａｒ）とした。
【０４９５】
濃縮物を凍結乾燥させて、ドデシルアミド官能化ＰＳＡナトリウム塩４（８００ｍｇ）を白色の固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲにより、置換度が約４％であることがわかった。
【０４９６】
実施例７
二官能化ポリマーを以下の通りに調製したが、他の実験ではこれ以外のアルキル基および標的化ペプチドも同様に使用し得る。Ｃ１６−ＨＡ−ｔＬｙｐ−１の調製には、市販のＣ１６−ＨＡを出発物質（Ｍｗ  ５５ｋＤａ、置換度Ｓ．Ｄ．７％、Ｃｏｎｔｉｐｒｏ社）として使用し、ｔＬｙｐ１をＨＡ主鎖のカルボキシラート基と化学的に結合させた。ＨＡのカルボキシラート基に対するＥＤＣ：ＮＨＳ：ＡＥＭ：ｔＬｙｐ１のモル比１：２．１６：０．３６：０．０７２：０．０３２６（比４）を用いた。最初に、Ｃ１６−ＨＡをＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩で修飾した。この目的のために、Ｃ１６−ＨＡをｐＨ６の０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に最終濃度２ｍｇ／ｍＬで溶かし、対応する量のＥＤＣ、ＮＨＳ、およびＡＥＭも０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液に溶かし、Ｃ１６−ＨＡ溶液に加え、室温で４時間、磁気攪拌下で維持した。得られた生成物を実施例１でＰＳＡ−ｔＬｙｐ１について記載した通りに透析によって精製した。第二の段階では、Ｃ１６−ＨＡ−Ｍａｌを０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液とＮａＣｌ  ５０ｍＭの溶液に濃度１ｍｇ／ｍＬで溶かした。次いで、この溶液にｔＬｙｐ１を加え、反応混合物を室温で２４時間、磁気攪拌下で維持した。最終生成物を既に記載した通りに透析によって精製し、凍結乾燥させた。
【０４９７】
このコンジュゲートの特徴付けを１Ｈ−ＮＭＲにより実施した。
【０４９８】
実施例８
この実施例では、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の効率的な結合および送達のための様々なポリマーナノカプセルの製剤を説明する。非限定的な例として、生分解性のポリ酸またはポリアミドによってポリマー形成殻を作製することができ、これを標的化リガンドおよび／または腫瘍／組織浸透性リガンド、例えばｔＬｙｐ−１でさらに官能化することができる。ＰＳＡ（８ｋＤａ、３０ｋＤａ、または９４ｋＤａ、Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａ社）、またはＰＳＡ−ｔＬｙｐ１  比２０、またはＣ１２−ＰＳＡ（実施例６）、またはＨＡ（３３０ｋＤａ、Ｌｅｈｖｏｓｓ  Ｉｂｅｒｉｃａ社）、またはＣ１６−ＨＡ（様々なＭｗおよびアルキル置換度：５５ｋＤａ−Ｓ．Ｄ．７％；２１６ｋＤａ−Ｓ．Ｄ５％；２１６ｋＤａ−Ｓ．Ｄ．１１％、Ｃｏｎｔｉｐｒｏ社）、またはＣ１６−ＨＡ−ｔＬｙｐ１（実施例７）、またはポリグルタミン酸（ＰＧＡ、１１．９ＫＤａ、Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社）、またはＰＧＡ−ＰＥＧ（ＰＧＡ  ６．６８ＫＤａ／ＰＥＧ  ５ＫＤａ、Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社）、またはポリアミドポリアスパラギン酸（ＰＡＳＰ、ポリ−Ｌ−アスパラギン酸、２００単位、平均Ｍｗ  ２７ｋＤａ、Ａｌａｍａｎｄａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ社）、またはＰＡＳＰ−ＰＥＧ（メトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム塩、ｍＰＥＧ５Ｋ−ｂ−ＰＬＤ２００、平均ＭＷ  ３２ｋＤａ、Ａｌａｍａｎｄａ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ社）のポリマーコーティングを有するナノカプセルを自己乳化技術により調製した。
【０４９９】
（抗体のない）ブランクナノカプセルの調製。最初に、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ社）５９ｍｇおよび５８ｍｇ  カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（Ｍｙｇｌｉｏｌ（登録商標）８１２Ｎ、ＩＯＩ  Ｏｌｅｏｃｈｅｍｉｃａｌ社）を秤量して容量２ｍＬのガラスバイアルに入れた（油相）。次いで、非疎水性に修飾したポリマーまたは非両親媒性ポリマーを殻として含む製剤では、油相（予めエタノール中で可溶化させたベンゼトニウム４マイクロリットル、５０ｍｇ／ｍＬ）に陽イオン界面活性剤を加えた。油相の全成分を磁気攪拌（５００ｒｐｍ）下で維持した。これと並行して、各ポリマーを様々な濃度（例えば、ＰＳＡ系製剤は３ｍｇ／ｍＬ、ＨＡ系製剤は０．２５ｍｇ／ｍＬ、ＰＧＡは３ｍｇ／ｍＬ、ＰＧＡ−ＰＥＧは６ｍｇ／ｍＬ、ＰＡＳＰは３ｍｇ／ｍＬ、ＰＡＳＰ−ＰＥＧは６ｍｇ／ｍＬ）で２５ｍＭ、ｐＨ７．３のＰＢＳ中で別個に可溶化させることにより水相を調製し、Ｍａｃｒｏｇｏｌ  １５  Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅａｒａｔｅ（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（登録商標）、ＢＡＳＦ社）も２５ｍＭ、ｐＨ７．３のＰＢＳ中、濃度２０ｍｇ／ｍＬで可溶化させた。そののち、ポリマー溶液０．７５ｍＬとＫｏｌｌｉｐｈｏｒ溶液１２５マイクロリットルとを適宜混合し、この水相を磁気攪拌（１１００ｒｐｍ）下で油相に加えた。
【０５００】
ｍＡｂの結合。２つの異なる方法を用いた：
（ｉ）１段階法：所望の最終ｍＡｂ濃度（一例として０．５ｍｇ／ｍＬ）を得るのに必要な濃度のｍＡｂ溶液を必要な体積だけ水相に加えた後、油相と混合した。１段階法によりナノカプセルと結合させるｍＡｂは、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ（ラット抗マウスＩｇＧ２ａ、ＢｉｏＸｃｅｌｌ（登録商標））およびベバシズマブ（ヒト化ＩｇＧ１、Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）とした。
（ｉｉ）２段階法：予め形成したナノカプセルに所望の濃度（一例として１ｍｇ／ｍＬ）のｍＡｂを含有する溶液を回転攪拌（５５０ｒｐｍ）下で加えて、最終ｍＡｂ濃度、例えば０．５ｍｇ／ｍＬにした。ｍＡｂを室温で４時間、ナノカプセルとインキュベートした。２段階法によりナノカプセルと結合させるｍＡｂの非限定的な例として、抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ（ラット抗マウスＩｇＧ２ａ、ＢｉｏＸｃｅｌｌ（登録商標））がある（表１４）。
【０５０１】
上記の方法に従い、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、およびゼータ電位の観点から特徴付けた。３つの反復に対応する結果を表１３（１段階法、抗ＰＤ−Ｌ１）、表１４（２段階法、抗ＰＤ−Ｌ１）、および表１６（１段階法、ベバシズマブ）に示す。
【０５０２】
モノクローナル抗体の結合効率。ｍＡｂのナノカプセルとの結合を判定するため、異なるそれぞれの製剤１ｍＬ量を１ｂａｒの窒素圧下、４℃にてＡｍｉｃｏｎ  Ｓｔｉｒｒｅｄ  Ｃｅｌｌｓ（登録商標）（ポリエーテルスルホンＢｉｏｍａｘ（登録商標）５００ＫＤａ  Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  Ｄｉｓｃｓ、Ｍｅｒｃｋ社）でろ過した。この単離工程の後、遊離ｍＡｂを含有するろ液を採取し、対応するＥＬＩＳＡアッセイにより解析した。結合効率を（総ｍＡｂ−遊離ｍＡｂ）／総ｍＡｂ×１００として間接的に算出した。結果を表１１（１段階法、抗ＰＤ−Ｌ１）、表１４（２段階法、抗ＰＤ−Ｌ１）、および表１６（１段階法、ベバシズマブ）に示す。
【０５０３】
室温（ＲＴ）での希釈時の漏出しやすさに関する試験。ｍＡｂが強固にナノ構造内に封入されるかどうかを評価するため、ｍＡｂ結合効率について上に記載した方法に従い、ＲＴでｐＨ７．３のＰＢＳ（２５ｍＭ）で希釈（１：２−＞１：１６）したときのｍＡｂ結合を評価した。異なるｍＡｂ結合方法で得られた結果を１段階の製剤化については表１２および表１６に、２段階の製剤化については表１５に示す。
【０５０４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出試験。ｍＡｂ搭載ナノカプセルをｐＨ７．３のＰＢＳ（２５ｍＭ）中、３７℃でインキュベートした（１：１０希釈）。所定の時間（１時間および２時間）に、上記の方法に従って試料を採取し、ろ過して、放出されたｍＡｂをＥＬＩＳＡにより定量化した（表１３、１段階法、抗ＰＤ−Ｌ１）。
【０５０５】
表１１〜１６から、様々なｍＡｂに適した物理化学的特性および高い結合効率を示す様々なポリマーナノカプセルの製剤化が可能であることがわかる。ｍＡｂの結合は、例えば、上で説明した１段階法および２段階法によって実施できるが、実施した希釈時のｍＡｂの漏出しやすさに関する試験から推定できるように、１段階法の方がナノ構造内へのｍＡｂの封入に優れている（１段階については表１２；２段階については表１５）。
【０５０６】
【表１１】
2021516211.tif 000016
【０５０７】
【表１２】
2021516211.tif 000017
【０５０８】
【表１３】
2021516211.tif 000018
【０５０９】
【表１４】
2021516211.tif 000019
【０５１０】
【表１５】
2021516211.tif 000020
【０５１１】
【表１６】
2021516211.tif 000021
【０５１２】
（ｍＡｂのない）様々な空ブランクポリマーナノカプセルの細胞毒性。クリスタルバイオレットアッセイを細胞生存能の指標に用いて細胞毒性を明らかにした。９６ウェル組織培養プレートに播種したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞と、（様々な濃度で）分散させた上記の製剤とを細胞培地で２時間、共インキュベートした後、細胞生存能を評価した。図７にみられるように、いずれの場合も、６ｍｇ／ｍＬまでの濃度で細胞生存能が８０％を超えていた。
【０５１３】
ｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの形態学的解析。ｍＡｂ（ベバシズマブ）搭載ナノカプセルの形態学的解析を透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ、ＣＭ１２、Ｐｈｉｌｉｐｓ社、オランダ）で実施した。ＴＥＭ観察には、試料をリンタングステン酸（２％、ｗ／ｖ）溶液で染色し、Ｆｏｒｍｖａｒｄ（登録商標）を張った銅グリッド上に置いた。ベバシズマブ（最終濃度３ｍｇ／ｍＬ）を含有するＰＳＡナノカプセル（Ａ）およびＨＡ  ２１６  ＳＤ５％（Ｂ）のＴＥＭ写真を図８に示す（大きさを示すバーは、図８Ａおよび８Ｃが１マイクロメートル、図８Ｂおよび８Ｄが２００ｎｍ）。
【０５１４】
凍結乾燥試験。さらに、ｍＡｂ含有ナノカプセル懸濁液を長期保管用に粉末に加工できるかどうかを評価するため、凍結乾燥試験を実施した。非限定的な例として、上で説明した１段階法により様々なベバシズマブ搭載ポリマーナノカプセルを調製し、ナノカプセル懸濁液にトレハロースとマンニトールの濃縮溶液を加えた（最終濃度、トレハロース５％ｗ／ｖおよびマンニトール２．５％ｗ／ｖ）後、凍結乾燥させた（約５０時間のサイクル；Ｐｉｌｏｔ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ  ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｙｓ  ２５  ＥＳ）。４℃で４か月間保管した凍結乾燥ナノカプセルの安定性を、粒子径、ＰＩ、ｐＨ、ゼータ電位、および総ｍＡｂ含有量を（ＥＬＩＳＡにより）測定することによって解析し、最初（凍結乾燥前）の値と比較した。測定は上に記載したものと同じ方法で実施した。３回の反復に対応する結果を表１７に示し、この表では、４か月間保管した後、物理化学的特性に有意な変化はなかったのに対して、総ｍＡｂパーセントは約８０〜９０％であったことがわかる。
【０５１５】
【表１７】
2021516211.tif 000022
【０５１６】
実施例９
この実施例では、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の効率的な結合および送達のための代替ポリマーナノカプセルの製剤を説明する。ポリマー形成殻をペグ化ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧ−ＰＥＧ）またはペグ化ポリ乳酸（ＰＬＡ−ＰＥＧ）などの生分解性非水溶性ポリマーによって作製でき、これを標的化リガンドおよび／または腫瘍／組織浸透性リガンド、例えばｔＬｙｐ−１でさらに官能化することができる。
【０５１７】
ＰＬＡ−ＰＥＧのポリマーコーティングを有するナノカプセルを溶媒置換法によって調製し、１段階法によって抗体を結合させた。５ｍＬバッチの調製について簡潔に述べれば、
（１）油相の調製：ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ社）２９０ｍｇおよびＭｙｇｌｉｏｌ（登録商標）８１２Ｎ（ＩＯＩ  Ｏｌｅｏｃｈｅｍｉｃａｌ社）２９５ｍｇを秤量して２５ｍＬのガラスバイアルに入れ、磁気攪拌（５００ｒｐｍ）下で混合した。ＰＬＡ−ＰＥＧポリマーをアセトン１２．５ｍＬで可溶化し、先の溶液に加え、磁気攪拌（５００ｒｐｍ）下で維持した；
（２）水相の調製：Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（登録商標）の溶液（ｐＨ７．３、２５ｍＭのＰＢＳ中２０ｍｇ／ｍＬ）６２５マイクロリットルを容量１００ｍＬのガラスバイアル、対応する量のｍＡｂを含有するｐＨ７．３、２５ｍＭのＰＢＳ  ４．４ｍＬおよび水２５ｍＬと混合した。
【０５１８】
次いで、２０ｍＬシリンジ（１２０×４０ｍｍ針）を用いて油相を磁気攪拌（１２５０ｒｐｍ）下で水相に加えたところ、ナノ液滴が直ちに形成され、その周囲にポリマーが沈着した。最終ＮＣ懸濁液を５ｍＬに達するまで回転蒸発させた。上記の方法に従い、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、ゼータ電位、および１：１６希釈での結合の観点から特徴付けた。３回の反復に対応する結果を表１８に示す。
【０５１９】
【表１８】
2021516211.tif 000023
【０５２０】
実施例１０
ナノ担体の主な制約の１つに、臨床に転換できる用量での薬物の結合効率および搭載能力が低いということがある。このため、ｍＡｂモデルとしてベバシズマブ（Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）について、抗体濃度が例えばＰＳＡナノカプセルの物理化学的特性ならびにそのｍＡｂ結合効率および封入に及ぼす影響を評価した。ｍＡｂ結合に用いる方法は１段階法とした。
【０５２１】
上記の方法（実施例８）に従い、ナノカプセルを平均粒子径、多分散指数（ＰＩ）、ゼータ電位、結合効率、および１：１６希釈での結合の観点から特徴付けた。３回の反復に対応する結果を表１９に示す。
【０５２２】
ナノカプセルの特性に有意な影響を及ぼさず、７０％という高い結合効率を維持しながら、少なくとも５ｍｇ／ｍＬの最終ベバシズマブ濃度が達成され、これは、ｍＡｂ搭載含有量約３％（ｍＡｂ搭載含有量＝結合したｍＡｂの重量／ナノカプセル成分の総重量）に相当する。
【０５２３】
【表１９】
2021516211.tif 000024
【０５２４】
実施例１１
多くの場合、ナノ担体で効果が得られないのは、それが複雑な培地中で凝集した結果であり、このことは、生物学的培地のイオン強度が高いこと、および／または生物学的培地中にタンパク質が存在することに起因するものと思われる。このため、ｍＡｂの非経口投与の可能性の指標として、様々なｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの血漿中での安定性を検討した。
【０５２５】
血漿中での安定性。実施例８の１段階法により調製したベバシズマブ搭載ナノカプセルをマウス血漿（１：１０希釈、３７℃）中、水平振盪（３００ｒｐｍ、Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社）下でインキュベートした。所定の時間に、インキュベーション環境の試料を採取し、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａ−Ｓｉｚｅｒによる粒子径の解析ならびにＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＮＴＡ）による大きさおよび大きさ分布の解析に供した。試料を適宜さらに希釈した（ＮＴＡにはｐＨ７．４、１０ｍＭのＰＢＳで１：１０．０００；ＤＬＳには水で１：１０００）後、解析した。
【０５２６】
ＤＬＳによって測定した様々なｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの安定性を図９に示す（図９Ａ：Ｃ１６−ＨＡ系ナノカプセル；図９Ｂ：ＰＳＡ系ナノカプセル）。結果は３回の反復の平均である。
【０５２７】
ＮＴＡによって測定した様々なｍＡｂ搭載ポリマーナノカプセルの安定性を図１０に示す（図１０Ａ：Ｃ１６−ＨＡ系ナノカプセル；図１０Ｂ：ＰＳＡ系ナノカプセル；図１０Ｃ：ＰＧＡ系ナノカプセルおよびＰＬＡナノカプセル；ｎ＝１）。
【０５２８】
いずれのｍＡｂ搭載ナノカプセルも少なくとも２４時間は血漿などの複雑な培地中で十分な安定性を示し、このことは、対象に非経口投与するのに重要な利点である。
【０５２９】
実施例１２
この実施例では、様々なポリマーナノカプセルがｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞と相互作用し、さらに、結合した抗体の細胞内部移行誘発できることを示す。この試験を実施するため、蛍光抗体モデル（ＦＩＴＣ−ＩｇＧ、純度９８％超、Ｅｌａｂｓｃｉｅｎｃｅｓ社）と結合する様々なナノカプセルを実施例８で説明した通りに、１段階法により調製し、大きさ、ＰＩ、およびゼータ電位の観点から特徴付けた（表２０）。
【０５３０】
【表２０】
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【０５３１】
最初に、フローサイトメーターによる試験を実施して、ナノカプセルが細胞と相互作用できるかどうかを明らかにした。様々なポリマーナノカプセル（最終濃度がナノカプセル７ｍｇ／ｍＬ、ＩｇＧ−ＦＩＴＣ  １０５マイクログラム／ｍＬになるよう細胞培地で希釈）を培養ＭＢＤ−ＭＢ−２３１細胞（６６，５００個／ウェル）に加え、３７℃（３７℃、５％ＣＯ２の加湿恒温器）でインキュベートしながら２時間放置した。インキュベーション後、細胞をＰＢＳで穏やかに２回洗浄し、次いで、トリプシン処理して、フローサイトメトリー解析を実施した。様々なポリマーナノカプセルと２時間インキュベートした後の陽性細胞のパーセントを３回の反復について図１１に示す。陽性細胞のパーセントは、いずれのＦＩＴＣ−ＩｇＧ搭載ナノカプセルも約４０〜５５％であり、このことは、短時間（２時間）で細胞と相互作用するというナノカプセルの優れた能力を示している。
【０５３２】
次に、より進歩したイメージングフローサイトメーター（ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ（登録商標））でさらに試験を実施して、ナノカプセルが、結合した抗体の効果的な細胞内部への移行を誘発できるかどうかを明らかにした。簡潔に述べれば、試験する時点（例えば、０分、３０分、２時間、４時間、６時間、および２４時間）毎に別個のウェルを用いて、ＦＩＴＣ−ＩｇＧ搭載ナノカプセルを６ウェルプレートでＡ５４９細胞（１ウェル当たり６ｍｇ／ｍＬのナノカプセルを含むＤＭＥＭ  １ｍＬ）とインキュベートした。所定の各時点で、細胞をトリプシン処理し、ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ（登録商標）装置で画像を取得して、ナノカプセルの陽性細胞のパーセント（図１２Ａ）および対応するＦＩＴＣ−ＩｇＧ内部移行スコア（図１２Ｂ）を求めた。生細胞の蛍光マーカー、Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ（登録商標）で細胞質酸性オルガネラを標識し、さらに共焦点顕微鏡法により確認することによって、効果的な内部移行を判定した（データ不掲載）。
【０５３３】
図１２にみられるように、ＦＩＴＣ−ＩｇＧ搭載ＰＳＡ、ＰＳＡ−ｔＬｙｐ１、およびＣ１６−ＨＡ２１６  ＳＤ５％ナノカプセルは、結合した抗体モデルの細胞内部への効果的な移行を時間依存性に陽性細胞１００％まで誘発した。
【０５３４】
したがって、この実施例は、ポリマーナノカプセルが、結合したｍＡｂの細胞内部移行を促進する可能性があることを示している。
【０５３５】
実施例１３
この実施例では、性質および大きさが大きく異なる２つの活性物質を同じナノカプセル内で結合できる可能性を示す。非限定的な例として、ｍＡｂベバシズマブ（水溶性高分子）およびパクリタキセル（脂溶性小分子）の両方を用いて、自己乳化技術によりＣ１６−ＨＡ  ２１６  ＳＤ５％、Ｃ１６−ＨＡ  ５５  ＳＤ７％−ｔｌｙｐナノカプセル、およびＰＳＡナノカプセルを製剤化した。
【０５３６】
簡潔に述べれば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ社）２９０ｍｇ、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（Ｌａｂｒａｆａｃ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ  ＷＬ  １３４９（登録商標）、Ｇａｔｔｅｆｏｓｅ社）２９５ｍｇ、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＨＳ１５（ＢＡＳＦ社）１２．５ｍｇ、およびパクリタキセル５ｍｇを秤量してガラスバイアルに入れ、全成分を７００ｒｐｍの磁気攪拌下で攪拌して、それらを完全に混合し、可溶化することによって油相を調製した。ＰＳＡナノカプセルの場合、既に実施例８で非両親媒性ポリマーについて報告した通りに、油相にさらに塩化ベンゼトニウムを含ませた。
【０５３７】
これと並行して、ポリマーをｐＨ７．３のＰＢＳ（２５ｍＭ）中で別個に可溶化し（Ｃ１６−ＨＡ系ナノカプセルは０．２５ｍｇ／ｍｌ、ＰＳＡナノカプセルは３ｍｇ／ｍＬ）、製剤の最終濃度が０．５ｍｇ／ｍｌになるよう対応する量のベバシズマブを加えることによって水相を調製した。そののち、水相４．４１５ｍＬを磁気攪拌（１２５０ｒｐｍ、１０分）下で油相（５９７．５ｍｇ）に加えた。
【０５３８】
薬物の定量化をＨＰＬＣにより実施した。ＨＰＬＣシステムには、ＶＷＲ  Ｈｉｔａｃｈｉ  ＥＬＩＴＥ  ＬａＣｈｒｏｍ（日立社、東京、日本）およびカラムコンパートメントＡＣＥ  Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ逆相Ｃ−１８（５マイクロメートル×２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；Ａｂｅｒｄｅｅｎ社、スコットランド）を含めた。実験解析条件を以下の通りとした：移動相にはＭｉｌｌｉＱ水（Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）を含めた。０．１％のトリフルオロ酢酸で酸性化したＡ４０％およびＢ６０％のイソクラティックプログラムを用いた。流速を１．５ｍｌ／分とし、実行時間を１０．０分とした。カラムの温度を３０℃に維持し、注入体積を２５マイクロリットルとし、ＵＶ検出器を２２７ｎｍとした。これらの条件下、ＰＣＸを４．２１＋／−０．０２分に溶出させた。
【０５３９】
既にｍＡｂ搭載ナノカプセルについて記載した（実施例８）ものと同じ方法で、大きさ、ＰＤＩ、ゼータ電位、および結合したｍＡｂの測定を実施した。非単離ナノカプセル試料中のｍＡｂおよびパリタキセル（ｐａｌｉｔａｘｅｌ）の総量を、それぞれ対応するＥＬＩＳＡ法およびＨＬＰＣ法により解析した。結果を表２１に示す。
【０５４０】
【表２１】
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【０５４１】
参考文献リスト
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
2021516211.tif 000037
【図９】
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【図１０】
2021516211.tif 000039
【図１１】
2021516211.tif 000040
【図１２】
2021516211.tif 000041
【図１３Ａ】
2021516211.tif 000042
【図１３Ｂ】
2021516211.tif 000043
【図１３Ｃ】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年12月7日(2020.12.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021516211000001.app
【国際調査報告】
2021516211.tif 000045
2021516211.tif 000046