(57)【要約】  本発明は、慢性炎症に関連する腸状態を患っている患者を治療するための組成物であって、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む組成物に関する。本発明のさらなる態様は、薬物としてのこのような組成物の使用に関する。【選択図】図１
2021511310.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するための組成物であって、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む組成物。
【請求項２】
前記ＤＮＡザイムが配列ｈｇｄ４０（ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ）を有することを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物中の前記ＤＮＡザイムの濃度が０．７５ｍｇ／ｍｌ〜７５ｍｇ／ｍｌであることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
水溶液の形態であることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも１つの塩を含むことを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記塩が塩化ナトリウムおよび／または塩化カリウムおよび／またはリン酸塩であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
直腸投与に適していることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ｎ日の所望の治療期間の場合、ｎ日以下の投与期間、特にｎ／２日以下の投与期間にわたって投与されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するための薬物としての、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１０】
前記組成物が坐剤の形態で投与されることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記組成物が浣腸および／または注腸フォームの形態で投与されることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、前記ＤＮＡザイムの投与用量が１日当たり１患者当たり１０ｍｇ〜５００ｍｇとなるように投与されることを特徴とする、請求項９から１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記組成物が、ｎ日の所望の治療期間の場合、ｎ日以下の投与期間、特にｎ／２日以下の投与期間にわたって投与されることを特徴とする、請求項９から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者の治療に使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１に記載の慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するための組成物、および請求項９に記載の薬物としてのこのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
特に指示しない限り、「発現」および「遺伝子発現」という用語は、以下で同義的に使用される。
【０００３】
慢性炎症は医学において極めて重要である。したがって、例えば慢性炎症に関連する腸疾患などの疾患の治療法を見出すことが重要である。このような腸疾患の既知の例は、潰瘍性大腸炎である。
【０００４】
クローン病に加えて、潰瘍性大腸炎は、世界中で最も一般的に発生する特発性および炎症依存性腸疾患の１つである。これは、大腸または結腸の炎症性攻撃を特徴とし、例えばクローン病の場合とは異なり、大腸のみに限定され、腸粘膜のみに限定される。
【０００５】
慢性炎症反応および自己免疫疾患（しばしば炎症依存性でもある）の発生は、とりわけ、Ｔｈ１細胞特異的転写因子ＴｂｅｔおよびＴｈ２細胞特異的転写因子ＧＡＴＡ−３の２つの転写因子を伴う。これに関連して、ＴｂｅｔはＴｈ１細胞の特異的発達を誘導する；対照的に、ＧＡＴＡ−３はＴｈ２細胞の特異的発達を誘導する。したがって、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞との間のバランスは、ＧＡＴＡ−３の発現および／またはＴｂｅｔの阻害によってＴｈ２細胞に有利にシフトする。同様に、ＧＡＴＡ−３の阻害および／またはＴｂｅｔの発現により、Ｔｈ１細胞レベルの上昇が保証される。潰瘍性大腸炎は、例えば、そのＧＡＴＡ−３  ｍＲＮＡレベルが有意に上昇（＝ＧＡＴＡ−３発現が増加）し、したがってＴｈ２依存性である大腸粘膜の炎症領域に基づく。
【０００６】
ＧＡＴＡ−３とＴｂｅｔとの間、またはＴｈ１細胞とＴｈ２細胞との間の特定の平衡に関連して、多数の科学刊行物が公開されている。結果として、近年、転写因子ＧＡＴＡ−３およびＴｂｅｔを特異的に阻害または「オフにする」試みがなされてきた。これを達成する１つの方法は、これらの２つの転写因子の遺伝子発現を阻害することであり、現代の遺伝子技術がこの目的のための種々の「ツール」を提供している。これらのツールの１つには、ＤＮＡザイムが含まれる。
【０００７】
ＤＮＡザイムは、比較的新しいクラスのアンチセンス分子を表す。アンチセンス分子は、一本鎖核酸（一般にｍＲＮＡ）に結合することができる分子を指す。同時に、ＤＮＡザイムの特性は、これらがこの結合機能だけでなく、触媒機能も示すことである。よって、これらは一本鎖標的ＤＮＡまたは標的ＲＮＡを特異的に切断し、よってそれらを分解することができる（Ｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８）。この場合、遺伝子発現の阻害はｍＲＮＡレベルで、すなわちｍＲＮＡのタンパク質への翻訳が続き得る前にさえ行われるので、転写後阻害も参照される。
【０００８】
通常、この目的には１０〜２３型のＤＮＡザイムが使用される（Ｓｏｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。このようなＤＮＡザイムは、２つの基質結合ドメインが隣接する１５ヌクレオチドの触媒ドメインを有する。前記触媒ドメインは、特に保存された配列ｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａ（配列番号１５４）を含むことができる。指定される配列ｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａは、単なる好ましい実施形態である。当業者であれば、修飾された触媒ドメインを有する１０〜２３型のＤＮＡザイムが同等の生物学的活性を有し得ることを認識している。対照的に、基質結合ドメインの長さは可変的であり、２つの対応する基質結合ドメインが互いに異なることも可能である。好ましい実施形態では、基質結合ドメインの長さが、６〜１４ヌクレオチドであり、９ヌクレオチド長が特に好ましい。このようなＤＮＡザイムは、例えば、ｎｎｎｎｎｎｎｎｎｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａｎｎｎｎｎｎｎｎｎなどの特定の配列を有する。一般に、基質結合ドメインは、標的ｍＲＮＡの意図した切断部位に隣接する領域に完全に相補的であるが、標的ＲＮＡに結合し、これを切断するために、ＤＮＡザイムが完全に相補的であることは必ずしも必要ではない。１０〜２３型のＤＮＡザイムは、プリンおよびピリミジンを順に含有する配列で標的ｍＲＮＡを切断する。ＤＮＡザイムはもっぱら化学的に産生されるため、生物活性成分とは見なされない。
【０００９】
ＤＮＡザイムは、ＧＡＴＡ−３またはＴｂｅｔの発現を特異的に阻害する用途で知られている。例えば、国際公開第２００５／０３３３１４Ａ２号パンフレットは、種々のＤＮＡザイムの作用様式を記載している。国際公開第２００５／０３３３１４号パンフレットの開示内容は、本発明の技術的背景であると考えられる。
【００１０】
ＤＮＡザイムを有効成分として使用する際に生じ得る問題は、通常、核酸の比較的高い不安定性および感受性に起因する。これらが生理学的に好ましい溶液中に存在しない場合、核酸は、例えば酵素分解または物理的ストレスによって急速に分解する傾向があり、これは、特にＤＮＡザイムを含む一本鎖核酸にも当てはまる。さらに、ＤＮＡザイムは、その特異性が異なり得るので、有効成分としての有効性が異なり得る。さらに、ＤＮＡザイムの安定性は、特にＤＮＡザイム含有溶液のｐＨの変化によって損なわれ得る。例えば、低ｐＨ（酸性環境）は、ＤＮＡザイム分子の加水分解を引き起こし得る。過度に高いｐＨ（塩基性環境）も、例えば分子の二次構造を変化させることにより、ＤＮＡザイムの安定性、よって機能性に影響を及ぼし得る。
【００１１】
例えば、潰瘍性大腸炎などの腸疾患を有する患者のためのこれまでの一般的な治療戦略は、疾患の活動性、発生（直腸炎、左側大腸炎および広範囲大腸炎）およびパターン（疾患経過、以前の投薬に対する反応、療法の副作用の可能性等）によって決定される。治療上の決定の問題に有意に影響を及ぼすさらなる因子は、疾患の持続期間、開始時の年齢、および患者の付随する疾患である。疾患の活動性はまた、患者を病院に入院させる必要性の重要な指標である。
【００１２】
一般に、潰瘍性大腸炎を患っている患者は、直腸および経口投与可能なメサラジン（５−アミノサリチル酸）で最初に治療される。疾患の症状がその後も続く場合は、コルチコステロイドが一般的に投与され、重度の潰瘍性大腸炎を有する患者は、通常、コルチコステロイド療法を強化するために病院で治療を受ける必要がある。コルチコステロイドでさえ機能せず、患者の状態が改善されない場合、現在の最後の手段の選択肢として実行できるのは、例えば、シクロスポリンもしくはタクロリムスを使用する、または例えばＴＮＦに対するモノクローナル抗体を使用するカルシニューリン阻害療法である。
【００１３】
それにもかかわらず、前記治療方法のいずれも、炎症に関連する腸疾患を特異的に治療するのに適していない。それどころか、使用される物質は免疫抑制作用が高いことで知られている。さらに、これらの物質は、例えば、ほんの数例を挙げれば、免疫抑制の増加、肝毒性、心筋肥大、胃腸愁訴、疲労およびめまい、下痢、嘔吐、腎毒性、神経毒性、振戦、高血圧、不眠症、うつ病、痙攣、感染症のマスキング、高カリウム血症、高血糖、腫瘍のリスク増加などの一般的に発生する有害効果と関連している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３３３１４Ａ２号パンフレット
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．２００８
【非特許文献２】Ｓｏｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
よって、先行技術の欠点を排除し、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するのに適した組成物を提供することが本発明の目的である。特に、これに関連して提供されるのは、同時に相当な続発的愁訴を引き起こすことなく潰瘍性大腸炎を有効に治療するのに適した有効成分である。さらに、保証されるべきことは改善された寛解である。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明によると、この目的は、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するための組成物であって、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む組成物によって達成される。特異的ＤＮＡザイムは、インビボで、タンパク質として、Ｔｈ２依存性慢性炎症性疾患の発生において中心的な役割を有する転写因子ＧＡＴＡ−３のｍＲＮＡに結合し、これを切断する。この切断の結果として、ｍＲＮＡをもはや機能的タンパク質に翻訳することができない。結果として、ＧＡＴＡ−３タンパク質レベルが有意に最小化される。
当業者であれば、発現の下方制御が、発現の部分的な阻害または完全な阻害のいずれかを意味すると理解され得ることを認識している。いずれにせよ、自然な発現レベルと比較して、発現が有意に減少する。
【００１８】
これに関連して、好ましい実施形態により提供することができるのは、ＤＮＡザイムが配列ｈｇｄ４０（ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ）を有するものである。この配列は特に高い酵素活性を示し、ＧＡＴＡ−３  ｍＲＮＡを極めて高い特異性および効率で切断する。結果として、配列ｈｇｄ４０を有するＤＮＡザイムは、Ｔｈ２依存性である、すなわちＧＡＴＡ−３レベル上昇に対応する、腸疾患の特異的かつ有効な治療に著しく適している。しかしながら、ＧＡＴＡ−３の発現が同様に特異的に阻害され得る他の配列を有するＤＮＡザイムもまた考えられる。
【００１９】
本発明の有利な実施形態によると、提供されるのは、組成物中のＤＮＡザイムの濃度が０．７５ｍｇ／ｍｌ〜７５ｍｇ／ｍｌであるものである。これに関連して特に提供されるのは、組成物中のＤＮＡザイムの濃度がおよそ７．５ｍｇ／ｍｌであるものである。このような濃度が特に効率的であることが証明されている。０．７５ｍｇ／ｍｌ未満のＤＮＡザイム濃度は、組成物の作用の高い喪失に関連し得る。同時に、組成物を投与する際に存在し得る毒性のリスクが、７５ｍｇ／ｍｌ超の濃度の場合に増加し得る。絶対量に関して、本発明により提供することができるのは、ＤＮＡザイムｈｇｄ４０が、１日当たり１患者当たり１０ｍｇ〜５００ｍｇの用量で投与されるものである。特に提供することができるのは、１日当たり１患者当たり５０ｍｇ〜２５０ｍｇの用量である。驚くべきことに、このような組成物は、組成物の投与の数週間後にも有効成分のプラスの効果を依然として観察することができるという結果を有する。したがって、この方法で投与されたＤＮＡザイムは長期間にわたってその作用を示すので、組成物は慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するのに著しく適している。よって、本発明による組成物は、組成物で治療された患者において高程度の寛解をもたらす。
組成物が水溶液の形態である場合も有利である。このような溶液の製造は、経済的かつ単純である。さらに、水溶液は増加した毒性を有さず、このことはこれが療法に使用するのに適していることを意味する。
【００２０】
さらなる利点は、組成物が少なくとも１つの塩を含む設計変形から生じる。これに関連して特に提供されるのは、塩が塩化ナトリウムおよび／または塩化カリウムおよび／またはリン酸塩であるものである。本発明によると、ｈｇｄ４０は使用するためにＰＢＳに溶解した状態で存在することが意図されているので、組成物は、本質的にＤＮＡザイムを有効成分として含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。しかしながら、生化学で一般的な他の緩衝液も考えられる。さらに、例えば、ＥＤＴＡなどのさらなる添加剤を添加することができる。
【００２１】
本発明の有利なさらなる発展によると、提供されるのは、組成物が直腸投与に適しているものである。これは、ＤＮＡザイム有効成分ｈｇｄ４０が炎症部位、すなわち大腸の表面粘膜で直接作用することができるという利点を有する。そこでは、有効成分が炎症粘膜によって取り込まれる。その結果、治療薬の迅速かつ効率的な作用がもたらされる。しかしながら、例えば、カプセル剤、丸剤または錠剤などの経口投与形態も考えられる。
【００２２】
組成物のさらなる特徴として、提供することができるのは、組成物が、ｎ日の所望の治療期間の場合、ｎ日以下の投与期間にわたって投与されるものである。これに関連して意図することができるのは、投与期間が、ｎ日の所望の治療期間の場合、所望の治療期間の３ｎ／４日以下を含むものである。特に提供することができるのは、所望の治療期間ｎ／２日以下の投与期間である。前記治療期間は、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者が治療されるべき期間（すなわち、組成物の有効成分が患者において作用し、したがって疾患症状を制御する期間）を意味すると理解されるべきである。
【００２３】
組成物が、ｎ日の所望の治療期間の場合、ｎ日以下の投与期間にわたって投与されるこのような投薬スキームは、特に組成物が、治療された患者において高程度の寛解をもたらすので可能である。これにより、必要以上に長く治療する必要がない患者の有利な効果がもたらされる。これは、治療される患者に救済をもたらすので望ましい。
【００２４】
本発明のさらなる態様は、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するための薬物としての組成物の使用にある。組成物は、薬物として使用される場合、ＳＢ０１２と呼ばれることもある。これに関連して本発明によって特に提供することができるのは、組成物が坐剤の形態で投与されるものである。あるいは、提供することができるのは、組成物が浣腸または注腸フォーム（ｒｅｃｔａｌ  ｆｏａｍ）の形態で投与されるものである。よって、有利には、組成物ＳＢ０１２を使用して、支持療法内の薬物として、またはそれ自体の療法の過程で、罹患した患者を治療することができる。したがって、組成物または坐剤、浣腸もしくは注腸フォームとしての薬物の形態から特に生じるのは、薬物の単純かつ迅速な投薬適応性（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｂｉｌｉｔｙ）である。結果として、薬物を外来患者扱いで、また必要に応じて、熟練したスタッフの助けがなくても投与することができる。
【００２５】
好ましい使用変形では、組成物が、ＤＮＡザイムの投与用量が１日当たり１患者当たり１０ｍｇ〜５００ｍｇとなるように投与される。これに関連して特に提供することができるのは、１日当たり１患者当たり５０ｍｇ〜２５０ｍｇの用量である。驚くべきことに、組成物のこのような使用は、組成物の投与の数週間後にも有効成分のプラスの効果を依然として観察することができるという結果を有する。したがって、この方法で投与されたＤＮＡザイムは長期間にわたってその作用を示すので、前記使用は慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するのに著しく適している。よって、好ましい使用は、組成物で治療された患者において高程度の寛解をもたらす。
【００２６】
さらに、本発明による使用で提供することができるのは、組成物が、ｎ日の所望の治療期間の場合、ｎ日以下の投与期間にわたって投与されるものである。これに関連して意図することができるのは、投与期間が、ｎ日の所望の治療期間の場合、治療期間の３ｎ／４日以下を含むものである。特に提供することができるのは、所望の治療期間のｎ／２日以下の投与期間である。この理由は、組成物の高程度の寛解である。このような投与スキームによって投与される薬物（すなわち、薬物が、ｎ日の所望の治療期間の場合、好ましくはｎ／２日以下の投与期間にわたって投与される）は、必要以上に長く治療する必要がない慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者のプラスの効果を有する。より短い投与期間は、治療される患者へのストレスを最小化し、したがって有利である。
【００２７】
上記の利点および効果は、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者の治療に本発明による組成物を使用する場合に特に生じる。
本発明のさらなる特徴、詳細および利点は、特許請求の範囲の文言から、ならびに例示的な実施形態および図面の以下の説明から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
（図１）本発明による組成物を試験するための一連の実験からの合計ＭＡＹＯスコアの平均値をグラフで示す図である。
（図２）図１の一連の実験の合計ＭＡＹＯスコアの平均値を表で示す図である。
（図３）本発明による組成物を試験するための一連の実験からのシグモイド内視鏡ＭＡＹＯスコアの平均値を棒グラフとして示す図である。
（図４）図３の一連の実験からの内視鏡ＭＡＹＯスコアの平均値を表で示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
一実施形態では、ＤＮＡザイムｈｇｄ４０を含有する組成物が、賦形剤および／または充填剤と共に、あるいは溶媒としての、薬理学的に適合性の担体中に存在する。
そのため、組成物は、例えば、坐剤、滴剤、マウススプレー、鼻腔スプレー、丸剤、錠剤、フィルムコーティング錠、層状錠剤、坐剤、ゲル、軟膏、シロップ、吸入用粉末、顆粒剤、乳剤、分散剤、マイクロカプセル、カプセル剤、散剤、または注射用溶液の形態で製造および投与することができる。さらに、薬理学的に適合性の担体の群は、有効成分の制御放出および／または連続放出、ならびに特定の剤形としてのマイクロカプセル化のための層状錠剤などの製剤も包含する。
【００３０】
このような製剤は直腸投与に極めて適している。しかしながら、例えば、吸入または静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、皮膚粘膜、経口、経真皮、局所、頬側、真皮内、胃内、皮内、鼻腔内、頬内、経皮または舌下投与などの他の投与形態も提供することができる。
【００３１】
賦形剤の添加は、特定の用途のための組成物の医薬特性を改善する。使用することができる薬理学的に適合性の賦形剤の例は、ラクトース、デンプン、ソルビトール、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコールなどである。前記担体は、最大９５％（ｗ／ｗ）の程度までこのような賦形剤からなることができる。坐剤を調製するためには、低融点ワックス、脂肪酸エステルおよび／またはグリセリドを使用することが好ましい。
【００３２】
少量から極めて少量を処理する場合、充填剤が通常必要とされ、これにより、本発明による組成物が必要なサイズ／質量を受け取り、問題なく使用することができることが保証される。使用される充填剤は、デンプン（トウモロコシ、ジャガイモおよびコムギデンプン）、ラクトース、グルコース、マンニトール、ソルビトールおよびフルクトースを含む群の物質である。
さらに、崩壊剤、着色剤、香味剤および／または結合剤を組成物にさらに添加することができる。使用される崩壊剤は、デンプン（トウモロコシ、ジャガイモおよびコムギデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム）、例えばローカストビーンガム、カラヤ、グアー、トラガカントなどの天然および合成ガム、寒天、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶性セルロースなどのセルロース誘導体、アルギン酸塩、アルミナ、ベントナイト、ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）、Ｃａｒｂｏｐｏｌおよび過酸化マグネシウムを含む群の物質である。これらの構成成分は、最大３０％（ｗ／ｗ）の量で使用することができる。崩壊剤は、粒子付着を改善することによって、組成物の優れた圧縮性を保証する。崩壊剤はまた、例えば胃腸管における後の崩壊を促進する。崩壊剤は、水分を吸収し、毛管現象および膨潤を増加させる、またはガスの発生および水分の影響下での泡立ち、または親水化剤として錠剤の水和性を増加させることによって機能する。結合剤は、顆粒の凝集、および印加された圧力と共に錠剤強度を保証する。
【００３３】
液体製剤は、例えば、注射用水溶液または非経口注射用の水およびプロピレングリコールに基づく溶液などの、溶液、懸濁液、スプレーおよび乳濁液を包含する。
【００３４】
潤滑剤も提供することができる。潤滑剤は、流動剤、潤滑剤および離型剤の総称である。流動剤は一般に、バルク材料の粒子間の摩擦力および付着力を減少させることによって流動特性を改善する。流動剤は粒子間摩擦を減少させ、表面水分を減少させる。
使用される潤滑剤は、ホウ酸、ステアリン酸塩（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸カリウム）、ステアリン酸、高融点ワックス、および塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウムを含む群の水溶性物質、ポリエチレングリコールおよびアミノ酸（例えば、ロイシン）を含む群の物質であり得る。潤滑剤は、最大１５％（ｗ／ｗ）の量で使用することができる。
【００３５】
図１〜図４は、それぞれ同じ一連の実験に基づく。一連の実験では、患者を、配列ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ（ｈｇｄ４０）を有し、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害または下方制御するＤＮＡザイムで処置した。しかしながら、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害または下方制御する他のＤＮＡザイムによる処置も考えられる。ＤＮＡザイムｈｇｄ４０による処置と並行して、ＰＢＳ緩衝液を対照群に投与した。結果として、前記対照群はＤＮＡザイムを投与されなかった。
【００３６】
図１および図２は共に同じ結果を示している。図１では、本発明による組成物を試験するための前記一連の実験からの合計ＭＡＹＯスコアの平均値がグラフで示されている。図２では、図１の一連の実験からの合計ＭＡＹＯスコアの平均値が表で示されている。ＭＡＹＯスコアは、潰瘍性大腸炎の疾患活動性を決定するための指標として、特に臨床試験で使用される。この４レベル指標は、排便回数、直腸出血の重症度、粘膜の内視鏡評価、および医師による全体的な評価を含む。グラフでは、一連の実験からの患者のＭＡＹＯスコアの平均値（Ｙ軸）が、日単位の処置期間（Ｘ軸）に対してプロットされている。
【００３７】
図１および図２に示されるＭＡＹＯスコアに対応する一連の実験では、患者を、配列ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧを有し、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害または下方制御するＤＮＡザイムで処置した（図１および図２、ｈｇｄ４０）。ＤＮＡザイムｈｇｄ４０による処置と並行して、ＰＢＳ緩衝液を対照群に投与した（図１および図２、プラセボ）。結果として、対照群はＤＮＡザイムを投与されなかった。患者と対照群がそれぞれ有効成分とプラセボで処置された期間は、図１で灰色で強調表示されている（２８日間）。ＭＡＹＯスコアを３回測定した：投与期間の開始７日前（−７）、投与期間の開始２８日後（２８）および投与期間の終了２８日後（５６）。
【００３８】
図１では、図２の表のＭＡＹＯスコアがグラフとして示されている。ここで印象的に明らかになるのは、ｈｇｄ４０で処置された患者のＭＡＹＯスコアの平均値が、対照群のＭＡＹＯスコアの平均値よりも有意に高程度に減少していることである。一連の実験の開始時（−７）に、処置された患者の平均ＭＡＹＯスコアがまだおよそ８．４である場合、投与期間の開始から２８日後、このスコアは既におよそ６．５である。一連の実験の最後（５６）では、ｈｇｄ４０で処置された患者の平均ＭＡＹＯスコアはおよそ５．０である（図２参照）。よって、全体として、およそ３．４の患者の平均ＭＡＹＯスコアの減少を観察することができる。比較して、対照群の平均ＭＡＹＯスコアは、おおそ１．０しか減少していない（１０．０から９．０；図２）。
図１および図２に示される結果は、本発明による組成物が慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するのに適していることを印象的に実証している。
【００３９】
これに関連して特に有利なことは、組成物の最後の投与の終了後、少なくとも２８日の期間にわたって、有効成分のプラスの効果を依然として観察することができることである。この効果は、処置された患者のＭＡＹＯスコアが２８日目（投与期間の最終日）後もさらに少なくとも４週間の期間にわたって減少するという事実から明らかになる。したがって、本発明による組成物は、驚くべきことに、処置された患者において高程度の寛解をもたらす。
図３および図４は、図１および図２と同じ一連の実験に基づく。しかしながら、図３および図４に対応する結果は、別の観点から得られたものである。図３では、シグモイド内視鏡ＭＡＹＯスコアの平均値が棒グラフで示されている。関連する測定データは図４に見られ得る。当業者であれば、「シグモイド」という用語が、ヒトの大腸の最後の部分であるＳ状結腸を意味すると理解する。内視鏡ＭＡＹＯスコアの場合、内視鏡所見は疾患の典型的な特徴に関して評価される。
【００４０】
図１および図２と同様に、図３および図４に示される内視鏡ＭＡＹＯスコアに対応する一連の実験では、患者を、配列ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧを有し、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害または下方制御するＤＮＡザイムで処置した（図３および図４、「ｈｇｄ４０」）。しかしながら、図３および図４の場合、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害または下方制御する他のＤＮＡザイムによる処置も考えられる。ＤＮＡザイムｈｇｄ４０による処置と並行して、ＰＢＳ緩衝液を対照群に投与した（図３および図４、プラセボ）。結果として、前記対照群はＤＮＡザイムを投与されなかった。患者と対照群がそれぞれ有効成分とプラセボで処置された期間は２８日間であった。ＭＡＹＯスコアを２回測定した：投与期間の開始７日前（−７）および投与期間の２８日目の最終日（２８）。
【００４１】
図３の棒グラフは、一連の実験の全体的な経過の概要を提供している。濃い灰色で描かれているのは、対照群の内視鏡ＭＡＹＯスコアに対応する棒である（図３、プラセボ）。図３の白色棒は、ｈｇｄ４０で処置された患者のＭＡＹＯスコアに対応する（図３、ｈｇｄ４０）。図３では、各場合で比較されるのは、最初の時点（投与期間の開始７日前；−７）でのＭＡＹＯスコアの平均値と、投与期間の終了時（投与期間の２８日目；２８）のＭＡＹＯスコアの平均値である。対照群の場合、ここでは有意差は見られない（図３、灰色棒参照）。ＭＡＹＯスコアの平均値は、−７日目でおよそ２．６、２８日目でおよそ２．５であった（図４、プラセボ参照）。
【００４２】
これは、ｈｇｄ４０で処置された患者の所見と対照的である。ｈｇｄ４０で処置された患者の場合も、ＭＡＹＯスコアを最初の時点（−７）と投与期間の終了時（２８日）で同様に与えた。これらのＭＡＹＯスコアの平均値を図３で比較する（図３、白色棒）。ここでｈｇｄ４０で処置された患者の群で明確に分かるのは、−７日目の平均値と２８日目の平均値との間に有意差があることである。よって、平均ＭＡＹＯスコアは、およそ２．２（−７日目）からおよそ１．５まで減少している（図４、ｈｇｄ４０）。
【００４３】
よって、図１〜図４に示される結果は、ＧＡＴＡ−３の発現を特異的に阻害する少なくとも１つのＤＮＡザイムを含む本発明による組成物が、慢性炎症に関連する腸疾患を患っている患者を治療するのに適していることを印象的に実証している。特に、結果は、慢性炎症性腸疾患に関連して通常発生する愁訴を有効に減少させることができることを示している。同時に、図１および図２の結果は、特に、組成物が改善された寛解を保証することを示している。
【図１】
2021511310.tif 000003
【図２】
2021511310.tif 000004
【図３】
2021511310.tif 000005
【図４】
2021511310.tif 000006
【配列表】
2021511310000001.app
【国際調査報告】
2021511310.tif 000007
2021511310.tif 000008
2021511310.tif 000009
2021511310.tif 000010
2021511310.tif 000011
2021511310.tif 000012
2021511310.tif 000013
2021511310.tif 000014