(57)【要約】ＣＤ４７に特異的に結合するマスクされた抗体を含むヒト化抗体が、提供される。ＣＤ４７発現細胞に関連する１つ以上の疾患または障害（例えば、がん）の治療と同様に、ＣＤ４７発現細胞の活性を調節する（例えば、増殖を阻害する）ための、マスクされた抗体を含む、抗ＣＤ４７抗体を使用する方法が、提供される。
2021503927.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ｃ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｄ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
前記重鎖可変領域が配列番号１６、１７、及び１８、配列番号１９、２０、及び１８、配列番号２１、２２、及び１８、配列番号１６、２０、及び１８、ならびに配列番号２３、２４、及び１８から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項１または請求項２に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記軽鎖可変領域が配列番号３１、３２、及び３３、配列番号３１、３２、及び３６、ならびに配列番号３４、３５、及び３３から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３６、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３６、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３６、１６、２０、１８、３１、３２、及び３６、ならびに配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３６から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ｃ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｄ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記重鎖可変領域が配列番号２５、２６、及び２７、配列番号２８、２６、及び２７、配列番号２９、３０、及び２７、ならびに配列番号２９、２６、及び２７から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項６または請求項７に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記軽鎖可変領域が配列番号３７、３８、及び３９、配列番号４０、３８、及び３９、ならびに配列番号３７、３８、及び４１から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、２６、２７、４０、３８、及び３９、ならびに配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び４１から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項６〜９のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７及び８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が配列番号２及び１０、配列番号３及び１１、配列番号３及び１２、配列番号３及び１３、配列番号３及び１４、配列番号４及び１１、配列番号４及び１２、配列番号４及び１３、配列番号４及び１４、配列番号５及び１１、配列番号５及び１２、配列番号５及び１３、配列番号５及び１４、配列番号６及び１１、配列番号６及び１２、配列番号６及び１３、配列番号６及び１４、配列番号７及び１１、配列番号７及び１２、配列番号７及び１３、配列番号７及び１４、配列番号８及び１１、配列番号８及び１２、配列番号８及び１３、配列番号８及び１４、配列番号３及び１５を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６であるＨＣＤＲ１、配列番号１７であるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１であるＬＣＤＲ１、配列番号３２であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３であるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号３への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１３への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記抗体がＡｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
前記重鎖可変領域が配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
Ｋａｂａｔ番付に従うＨ２９がＦであり、Ｈ４４がＲまたはＧであり、Ｈ４９がＡであり、Ｈ８２がＭまたはＩであり、Ｈ８９がＩまたはＶであり、Ｈ９１がＦまたはＹであり、Ｈ９４がＲである、請求項１６に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
前記軽鎖可変領域が、
ａ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｂ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
Ｋａｂａｔ番付に従うＬ４がＭであり、Ｌ２１がＬであり、Ｌ４９がＫであり、Ｌ６９がＴまたはＳであり、Ｌ８５がＶまたはＴである、請求項１８に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を有する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合断片がインビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
その親抗体と比較して、低下したコアフコシル化を有する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
フコシル化されていない、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記抗体または抗原結合断片がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２９】
前記抗体または抗原結合断片がＡｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片をコードする、核酸配列。
【請求項３１】
請求項２９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項３２】
請求項３０に記載の核酸または請求項２８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を発現する、宿主細胞。
【請求項３４】
請求項３２または請求項３３に記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を産生する方法。
【請求項３５】
前記抗体またはその抗原結合断片を単離することをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、前記対象に請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体または抗原結合断片の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項３７】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項３８】
ステップａ）が、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項４０】
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記マクロファージ染色が抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＣＤ４７発現癌が血液癌または固形癌である、請求項３６〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＤ４７発現癌が、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌、癌腫、頭頸部癌、皮膚癌、黒色腫、前立腺癌、下垂体癌、胃癌、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び乳癌から選択される、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される、請求項３６〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わされて投与される、請求項３６〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体が低いフコシル化レベルを有するか、またはフコシル化されていない、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされて投与され、前記ＡＤＣの前記抗体ががん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、前記抗体が細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される、請求項３６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記細胞傷害性薬剤がアウリスタチンである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＡＤＣの前記抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、前記細胞を請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。
【請求項５３】
前記細胞がインビトロにある、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞がインビボにある、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記ヒトＣＤ４７タンパク質及び少なくとも１つのマスキングドメインに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むマスクされた抗体であって、少なくとも１つのマスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、前記マスクされた抗体。
【請求項５６】
前記少なくとも１つのマスキングドメインが、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７タンパク質への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる、請求項５５に記載のマスクされた抗体。
【請求項５７】
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、少なくとも約１００倍低下する、請求項５６に記載のマスクされた抗体。
【請求項５８】
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、約２００倍〜約１５００倍低下する、請求項５６に記載のマスクされた抗体。
【請求項５９】
前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結されるか、または前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結されるか、または前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結され、前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結される、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項６０】
前記第１のマスキングドメインが配列番号４４、４６、４８、５０、５２、５４、７５、７７、７９、８１、８３、８５、及び９４から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２のマスキングドメインが配列番号４５、４７、４９、５１、５３、５５、７６、７８、８０、８２、８４、８６、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載のマスクされた抗体。
【請求項６１】
前記第１のマスキングドメイン及び前記第２のマスキングドメインが、配列番号４４及び４５、配列番号４６及び４７、配列番号４８及び４９、配列番号５０及び５１、配列番号５２及び５３、配列番号５４及び５５、配列番号７５及び７６、配列番号７７及び７８、配列番号７９及び８０、配列番号８１及び８２、配列番号８３及び８４、配列番号８５及び８６、ならびに配列番号９４及び９５から選択されるマスキングドメインの対である、請求項６０に記載のマスクされた抗体。
【請求項６２】
前記第１のマスキングドメインが前記重鎖のＮ末端に連結され、前記第２のマスキングドメインが前記軽鎖のＮ末端に連結される、請求項５９〜６１のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項６３】
各マスキングドメインが、プロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーを介して前記重鎖または軽鎖に連結される、請求項５９〜６２のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項６４】
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、請求項６３に記載のマスクされた抗体。
【請求項６５】
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、請求項６４に記載のマスクされた抗体。
【請求項６６】
ＭＭＰによる切断に続き、前記抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖及び／または軽鎖が前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを含む、請求項６４または請求項６５に記載のマスクされた抗体。
【請求項６７】
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲを含む、請求項６６に記載のマスクされた抗体。
【請求項６８】
前記抗体またはその抗原結合断片が請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片である、請求項５５〜６７のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項６９】
第１のマスキングドメインに連結された、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖及び第２のマスキングドメインに連結された、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項５５〜６８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項７０】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片及び少なくとも１つのマスキングドメインを含む、マスクされた抗体。
【請求項７１】
少なくとも１つのマスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載のマスクされた抗体。
【請求項７２】
各マスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載のマスクされた抗体。
【請求項７３】
前記少なくとも１つのマスキングドメインが、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７タンパク質への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる、請求項７０〜７２のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項７４】
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、少なくとも約１００倍低下する、請求項７３に記載のマスクされた抗体。
【請求項７５】
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、約２００倍〜約１５００倍低下する、請求項７３に記載のマスクされた抗体。
【請求項７６】
前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結されるか、または前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結されるか、または前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結され、前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結される、請求項７０〜７５のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項７７】
前記第１のマスキングドメインが配列番号４４、４６、４８、５０、５２、５４、７５、７７、７９、８１、８３、８５、及び９４から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２のマスキングドメインが配列番号４５、４７、４９、５１、５３、５５、７６、７８、８０、８２、８４、８６、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７６に記載のマスクされた抗体。
【請求項７８】
前記第１のマスキングドメイン及び前記第２のマスキングドメインが、配列番号４４及び４５、配列番号４６及び４７、配列番号４８及び４９、配列番号５０及び５１、配列番号５２及び５３、配列番号５４及び５５、配列番号７５及び７６、配列番号７７及び７８、配列番号７９及び８０、配列番号８１及び８２、配列番号８３及び８４、配列番号８５及び８６、ならびに配列番号９４及び９５から選択されるマスキングドメインの対である、請求項７７に記載のマスクされた抗体。
【請求項７９】
前記第１のマスキングドメインが前記重鎖のＮ末端に連結され、前記第２のマスキングドメインが前記軽鎖のＮ末端に連結される、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項８０】
各マスキングドメインが、プロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーを介して前記重鎖または軽鎖に連結される、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
【請求項８１】
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、請求項８０に記載のマスクされた抗体。
【請求項８２】
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、請求項８１に記載のマスクされた抗体。
【請求項８３】
ＭＭＰによる切断に続き、前記抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖及び／または軽鎖が前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを含む、請求項８１または請求項８２に記載のマスクされた抗体。
【請求項８４】
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲを含む、請求項８３に記載のマスクされた抗体。
【請求項８５】
請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体をコードする、核酸配列。
【請求項８６】
請求項８５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項８７】
請求項８６に記載の核酸または請求項７８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項８８】
請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体を発現する、宿主細胞。
【請求項８９】
請求項８７または請求項８８に記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項４９〜７６のいずれか一項に記載のマスクされた抗体を産生する方法。
【請求項９０】
前記マスクされた抗体を単離することをさらに含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、前記対象に請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項９２】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）前記がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）前記対象に請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与するステップであって、前記マスクされた抗体の各マスキングドメインがプロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含むステップと、を含む、前記方法。
【請求項９３】
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記ＭＭＰが、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１３からなる群から選択される、請求項９２または請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び前記非がん組織においてＭＭＰを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、請求項９２〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項９７】
ステップａ）が、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に請求項５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項９９】
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記マクロファージ染色が抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ＣＤ４７発現癌が血液癌または固形癌である、請求項９１〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ＣＤ４７発現癌が、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される、請求項９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、皮膚癌、前立腺癌、下垂体癌、胃癌、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される、請求項９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び乳癌から選択される、請求項９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗ＣＤ４７抗体が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される、請求項９１〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わされて投与される、請求項９１〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体が低いフコシル化レベルを有するか、またはフコシル化されていない、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされて投与され、前記ＡＤＣの前記抗体ががん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、前記抗体が細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される、請求項９１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記細胞傷害性薬剤がアウリスタチンである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＡＤＣの前記抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記マスクされた抗体がプロテアーゼ切断可能リンカーを含む少なくとも１つのマスキングドメインを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーが腫瘍微小環境において切断される、請求項９１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記腫瘍微小環境における前記プロテアーゼ切断可能リンカーの切断に続いて、前記マスキングドメインが前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片から放出される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがアミノ酸配列ＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含む、請求項１１１または請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがＭＭＰ切断部位を含む、請求項１１１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位からなる群から選択される、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の放出に続いて、前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が前記プロテアーゼ切断可能リンカーのスタブアミノ酸レムナントを有する、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記腫瘍微小環境における切断に続いて、前記放出された抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がＣＤ４７に対する前記マスクされた抗体の前記親和性よりも少なくとも約１００倍強力な親和性でＣＤ４７に結合する、請求項１１１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記腫瘍微小環境における切断に続いて、前記放出された抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がＣＤ４７に対する前記マスクされた抗体の前記親和性よりも２００〜１５００倍強力な親和性でＣＤ４７に結合する、請求項１１１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片または前記マスクされた抗体の前記抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片がその親抗ＣＤ４７抗体と比較してインビトロで低下した赤血球凝集を呈する、請求項３６〜５１及び９１〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記親抗体がＡｂ４７である、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体の投与が前記対象における赤血球凝集を誘導しない、請求項３６〜５１及び９１〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体がインビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、請求項３６〜５１及び９１〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体がインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記ＣＤ４７発現細胞ががん細胞である、請求項１２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月１日に出願された米国仮出願第６２／５９３，７１２号の優先権の利益を主張するものであり、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、抗体ベースのがん治療薬の分野に関する。特に、本発明は、任意選択で除去可能なマスキング薬剤に関連し得る、新規のヒト化抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片または複合体、ならびにＣＤ４７発現癌の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても知られる分化抗原群４７（ＣＤ４７）は、タンパク質の免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通受容体である。ＣＤ４７は、細胞上に遍在的に発現され、自己認識のためのマーカーとして働き、「私を食べないで」信号として働くことにより貪食を防止する。ＣＤ４７は、トロンボスポンジン（ＴＳＰ）及びシグナル調節性タンパク質−アルファ（ＳＩＲＰα）を含むいくつかの他のタンパク質との相互作用を通じてその作用を媒介する。貪食細胞上のＳＩＲＰαと標的細胞上のＣＤ４７との相互作用は、標的細胞が貪食されないことを確実にするのに役立つ。
【０００４】
ある特定のがんは、がん細胞の細胞表面上のＣＤ４７の発現を増加させ、したがって免疫系による排除を避けることによって、細胞のＣＤ４７ベースの免疫回避機構を取り込む。しかし、対象におけるＣＤ４７発現細胞を標的化する当該分野で既知の療法は、がん性及び非がん性細胞の両方を標的化し、末梢赤血球及び血小板枯渇のような、対象における毒性を引き起こす。したがって、非がん性細胞を標的化することなくがん細胞においてＣＤ４７を選択的に標的化する組成物及び方法に対する必要性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、新規のヒト化抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片の発見に基づく。本発明のある特定の態様では、ＣＤ４７タンパク質への抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の結合を防止する除去可能なマスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）を含む、ヒト化抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が、提供される。ある特定の実施形態では、マスキング薬剤は、がん細胞環境において存在する１個以上の分子（例えば、プロテアーゼ）によって除去（例えば、切断）され得る。マスキング薬剤の除去は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片のＣＤ４７に結合する能力を復元し、したがって、がん細胞の文脈において抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片のＣＤ４７への特異的標的化を可能にする。
【０００６】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ａ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｂ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１６、１７、及び１８、配列番号１９、２０、及び１８、配列番号２１、２２、及び１８、配列番号１６、２０、及び１８、ならびに配列番号２３、２４、及び１８から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号３１、３２、及び３３、配列番号３１、３２、及び３６、ならびに配列番号３４、３５、及び３３から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３６、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３６、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３６、１６、２０、１８、３１、３２、及び３６、ならびに配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３６から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ａ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｂ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２５、２６、及び２７、配列番号２８、２６、及び２７、配列番号２９、３０、及び２７、ならびに配列番号２９、２６、及び２７から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号３７、３８、及び３９、配列番号４０、３８、及び３９、ならびに配列番号３７、３８、及び４１から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、２６、２７、４０、３８、及び３９、ならびに配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び４１から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２、３、４、５、６、７及び８から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、配列番号２及び１０、配列番号３及び１１、配列番号３及び１２、配列番号３及び１３、配列番号３及び１４、配列番号４及び１１、配列番号４及び１２、配列番号４及び１３、配列番号４及び１４、配列番号５及び１１、配列番号５及び１２、配列番号５及び１３、配列番号５及び１４、配列番号６及び１１、配列番号６及び１２、配列番号６及び１３、配列番号６及び１４、配列番号７及び１１、配列番号７及び１２、配列番号７及び１３、配列番号７及び１４、配列番号８及び１１、配列番号８及び１２、配列番号８及び１３、配列番号８及び１４、配列番号３及び１５を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号１６であるＨＣＤＲ１、配列番号１７であるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が配列番号３１であるＬＣＤＲ１、配列番号３２であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３であるＬＣＤＲ３を含み、重鎖可変領域が配列番号３への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号１３への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体がＡｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は配列番号３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
本明細書に提供されるヒト化抗体またはその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含む。
いくつかのかかる実施形態では、Ｋａｂａｔ番付に従うＨ２９がＦであり、Ｈ４４がＲまたはＧであり、Ｈ４９がＡであり、Ｈ８２がＭまたはＩであり、Ｈ８９がＩまたはＶであり、Ｈ９１がＦまたはＹであり、Ｈ９４がＲである。
【００１５】
本明細書に提供されるヒト化抗体またはその抗原結合断片のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、
ａ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｂ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む。
いくつかのかかる実施形態では、Ｋａｂａｔ番付に従うＬ４がＭであり、Ｌ２１がＬであり、Ｌ４９がＫであり、Ｌ６９がＴまたはＳであり、Ｌ８５がＶまたはＴである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、その親抗体と比較して、増強された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、インビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、その親抗体と比較して、低下したコアフコシル化を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化されていない（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ａｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体または抗原結合断片をコードする核酸配列が、提供される。いくつかの実施形態では、核酸配列を含む発現ベクターが、提供される。いくつかの実施形態では、核酸または発現ベクターを含む宿主細胞が、提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体または抗原結合断片を発現させる宿主細胞が、提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体または抗原結合断片を産生する方法は、宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗体またはその抗原結合断片を単離することをさらに含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）対象に本明細書に提供される抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、対象におけるＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
いくつかのかかる実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）対象に本明細書に提供される抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、対象におけるＣＤ４７発現癌を治療するための方法が、提供される。
いくつかのかかる実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織に対してがん組織における染色の量を比較することと、を含む。いくつかの実施形態では、マクロファージ染色は、抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、ＣＤ４７発現癌と、がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤と、を有するものとして対象を特定することを含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、細胞を本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、ＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する方法が、提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、インビトロにある。いくつかの実施形態では、細胞は、インビボにある。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４７タンパク質及び少なくとも１つのマスキングドメインに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むマスクされた抗体が、提供され、少なくとも１つのマスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片及び少なくとも１つのマスキングドメインを含む、マスクされた抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのマスキングドメインは、配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのマスキングドメインは、少なくとも１つのマスキングドメインを有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７タンパク質への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる。いくつかの実施形態では、結合親和性は、少なくとも１つのマスキングドメインを有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、少なくとも約１００倍低下する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、少なくとも１つのマスキングドメインを有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、約２００倍〜約１５００倍低下する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が第１のマスキングドメインに連結されるか、または軽鎖が第２のマスキングドメインに連結されるか、または重鎖が第１のマスキングドメインに連結され、軽鎖が第２のマスキングドメインに連結される。いくつかの実施形態では、第１のマスキングドメインは、配列番号４４、４６、４８、５０、５２、５４、７５、７７、７９、８１、８３、８５、及び９４から選択されるアミノ酸配列を含み、第２のマスキングドメインは、配列番号４５、４７、４９、５１、５３、５５、７６、７８、８０、８２、８４、８６、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のマスキングドメイン及び第２のマスキングドメインは、配列番号４４及び４５、配列番号４６及び４７、配列番号４８及び４９、配列番号５０及び５１、配列番号５２及び５３、配列番号５４及び５５、配列番号７５及び７６、配列番号７７及び７８、配列番号７９及び８０、配列番号８１及び８２、配列番号８３及び８４、配列番号８５及び８６、ならびに配列番号９４及び９５から選択されるマスキングドメインの対である。いくつかの実施形態では、第１のマスキングドメインは重鎖のＮ末端に連結され、第２のマスキングドメインは軽鎖のＮ末端に連結される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、各マスキングドメインは、プロテアーゼ切断可能リンカーを含み、プロテアーゼ切断可能リンカーを介して重鎖または軽鎖に連結される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭＰ切断部位は、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＭＰによる切断に続き、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び／または軽鎖は、ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを含む。いくつかの実施形態では、スタブアミノ酸レムナントは、抗体のＮ末端で配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、マスクされた抗体は、第１のマスキングドメインに連結され、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖及び第２のマスキングドメインに連結され、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスクされた抗体をコードする核酸配列が、提供される。いくつかの実施形態では、核酸配列を含む発現ベクターが、提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスクされた抗体を発現させる宿主細胞が、提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスクされた抗体を産生する方法は、宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、マスクされた抗体を単離することをさらに含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるマスクされた抗体の治療有効量を対象に投与することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、
ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有するものとして対象を特定することと、
ｂ）対象に本明細書に提供されるマスクされた抗体の治療有効量を投与することであって、マスクされた抗体の各マスキングドメインがプロテアーゼ切断可能リンカーを含み、プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、該投与することと、を含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。いくつかの実施形態では、ＭＭＰ切断部位は、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＭＰは、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１３から選択される。いくつかの実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び前記非がん組織においてＭＭＰを検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織に対してがん組織における染色の量を比較することと、を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）対象に本明細書に提供されるマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
いくつかの実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）対象に本明細書に提供されるマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
いくつかの実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織に対してがん組織における染色の量を比較することと、を含む。いくつかの実施形態では、マクロファージ染色は、抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、（ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰ、及び（ｂ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰ、及び（ｂ）がん組織において非がん組織に対しての上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）ＣＤ４７発現癌、及び（ｂ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。いくつかの実施形態では、（ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰ、（ｂ）ＣＤ４７発現癌、及び（ｃ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することを含む、対象においてＣＤ４７発現癌を治療する方法が、提供される。
【００３４】
いくつかの実施形態では、マスクされた抗体は、プロテアーゼ切断可能リンカーを含む少なくとも１つのマスキングドメインを含み、プロテアーゼ切断可能リンカーは腫瘍微小環境において切断される。いくつかの実施形態では、腫瘍微小環境におけるプロテアーゼ切断可能リンカーの切断に続いて、マスキングドメインは、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片から放出される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、アミノ酸配列ＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、ＭＭＰ切断部位を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭＰ切断部位は、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の放出に続いて、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、プロテアーゼ切断可能リンカーのスタブアミノ酸レムナントを有する。いくつかの実施形態では、スタブアミノ酸レムナントは、抗体のＮ末端でＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む。
【００３５】
様々な実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、血液癌または固形癌である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、癌腫、頭頸部癌、皮膚癌、黒色腫、前立腺癌、下垂体癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、肺癌、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び乳癌から選択される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片、またはマスクされた抗体は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片、またはマスクされた抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わされて投与される。いくつかの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、低いフコシル化レベルを有するか、またはフコシル化されていない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片、またはマスクされた抗体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされて投与され、ＡＤＣの抗体ががん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、抗体が細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される。いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤は、アウリスタチンである。いくつかの実施形態では、ＡＤＣの抗体は、ｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦから選択される薬物リンカーに複合体化される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片またはマスクされた抗体の抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片は、その親抗ＣＤ４７抗体と比較してインビトロで低下した赤血球凝集を呈する。いくつかの実施形態では、親抗体は、Ａｂ４７である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体の投与は、対象における赤血球凝集を誘導しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体は、インビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体は、インビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７発現細胞は、がん細胞である。
【００３８】
一態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変が配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークが配列番号８８［図１Ａ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である。
【００３９】
別の態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変が配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークが配列番号８９［図１Ｂ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である。
【００４０】
さらに別の態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変が配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークが配列番号９０［図１Ｃ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である。
【００４１】
さらに別の態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変が配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークが配列番号９１［図１Ｄ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である。
【００４２】
さらに別の態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号３１（ＲＡＳＱＴＩＳＤＹＬＨ）、３２（ＦＡＳＱＳＩＳ）、及び３３（ＱＮＧＨＧＦＰＲＴ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークが配列番号９２［図１Ｇ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である。
【００４３】
さらに別の態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、重鎖可変が配列番号３１（ＲＡＳＱＴＩＳＤＹＬＨ）、３２（ＦＡＳＱＳＩＳ）、及び３３（ＱＮＧＨＧＦＰＲＴ）として示されたＣＤＲを含み、ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークが配列番号９３［図１Ｈ］において示され、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である。
【００４４】
実施形態では、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４はＭによって占有され、Ｌ２１はＬによって占有され、Ｌ４９はＫによって占有され、Ｌ６９はＴまたはＳによって占有され、Ｌ８５はＶまたはＴによって占有される。
【００４５】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む。
【００４６】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｋａｂａｔ番付に従うＬＣＤＲ３においてＧ９１Ａ変異をさらに含む。
【００４７】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【００４８】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。
【００４９】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を有する。
【００５０】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、その親抗体と比較して、低下したコアフコシル化を有する。
【００５１】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する。
【００５２】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、その親抗体と比較して、低下した赤血球の赤血球凝集を有する。
【００５３】
一態様では、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列が、提供される。
【００５４】
実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【００５５】
一態様では、マスキング薬剤（「マスキングドメイン」としても称される）を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与することを含む、対象におけるＣＤ４７発現癌を治療するための方法が提供され、該マスキング薬剤は、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較してヒトＣＤ４７への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる１個以上のコイルドコイルペプチドを含む。
【００５６】
実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、マスキング薬剤を抗体またはその抗原結合断片に結合させる。
【００５７】
実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、ＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含むアミノ酸配列を有する。
【００５８】
実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む。
【００５９】
実施形態では、ＭＭＰ切断部位は、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される。
【００６０】
実施形態では、マスキング薬剤は、ＭＭＰによる腫瘍微小環境におけるＭＭＰ切断部位の切断の後、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片から放出される。
【００６１】
実施形態では、切断された抗ＣＤ４７抗体は、ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを有する。
【００６２】
実施形態では、スタブアミノ酸レムナントは、抗体のＮ末端でＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む。
【００６３】
実施形態では、１個以上のコイルドコイルペプチドは、配列番号４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、及び５５から選択される１個以上の配列を含む。実施形態では、１個以上のコイルドコイルペプチドは、配列番号７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、及び８６から選択される１個以上の配列を含む。実施形態では、１個以上のコイルドコイルペプチドは、配列番号９４及び９５から選択される１個以上の配列を含む。
【００６４】
実施形態では、ＣＤ４７に結合する抗体または抗原結合断片は、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して少なくとも約１００倍低下する。
【００６５】
実施形態では、ＣＤ４７に結合する抗体または抗原結合断片は、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して約２００倍〜約１５００倍低下する。
【００６６】
実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、固形癌の原因となる血液癌である。
【００６７】
実施形態では、血液癌は、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される。
【００６８】
実施形態では、ＣＤ４７発現癌は、固形腫瘍である。
【００６９】
実施形態では、固形腫瘍は、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、皮膚癌、前立腺癌、下垂体癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される。
【００７０】
実施形態では、固形腫瘍は、肺癌、肉腫、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、及び乳癌から選択される。
【００７１】
実施形態では、対象は、固形癌に罹患しているヒトである。
【００７２】
実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される。
【００７３】
一態様では、マスキング薬剤を含むヒトＣＤ４７タンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が提供され、該マスキング薬剤が配列番号９５（ＱＧＡＳＴＴＶＡＱＬＥＥＫＶＫＴＬＲＡＥＮＹＥＬＫＳＥＶＱＲＬＥＥＱＶＡＱＬＧＳ）及び／または配列番号９４（ＱＧＡＳＴＳＶＤＥＬＱＡＥＶＤＱＬＥＤＥＮＹＡＬＫＴＫＶＡＱＬＲＫＫＶＥＫＬＧＳ）を含む１個以上のコイルドコイルペプチドを含み、１個以上のコイルドコイルペプチドが、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較してヒトＣＤ４７タンパク質への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる。
【００７４】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む。
【００７５】
実施形態では、マスキング薬剤は、プロテアーゼ切断可能リンカーを介して抗体またはその抗原結合断片に結合される。
【００７６】
実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、ＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含むアミノ酸配列を有する。
【００７７】
実施形態では、プロテアーゼ切断可能リンカーは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む。
【００７８】
実施形態では、ＭＭＰ切断部位は、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される。
【００７９】
実施形態では、マスキング薬剤は、ＭＭＰによるＭＭＰ切断部位の切断後、抗ＣＤ４７抗体から除去される。
【００８０】
実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、ＭＭＰによるＭＭＰ切断部位の切断後、ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを有する。
【００８１】
実施形態では、スタブアミノ酸レムナントは、抗体のＮ末端でＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む。
【００８２】
実施形態では、結合は、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して少なくとも約１００倍低下する。
【００８３】
実施形態では、結合は、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して約２００倍〜約１５００倍低下する。
【００８４】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号４２の重鎖配列及び配列番号４３の軽鎖配列を含む。
【００８５】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性から選択される増強されたエフェクター機能を付与する変異型Ｆｃ領域を含む。
【００８６】
実施形態では、抗体または抗原結合断片は、フコシル化されていない。
【００８７】
一態様では、抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【００８８】
実施形態では、抗体は、増強されたＡＤＣＣ、増強されたＡＤＣＰ、及び／または増強されたＣＤＣ活性を含む。
【００８９】
一態様では、対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与するステップであって、対象ががんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有する場合、マスキング薬剤が、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させるコイルドコイルペプチドを含む、該投与するステップと、を含む、方法が提供される。
【００９０】
実施形態では、ＭＭＰは、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１３からなる群から選択される。
【００９１】
実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び前記非がん組織においてＭＭＰを検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織に対してがん組織における染色の量を比較することと、を含む。
【００９２】
一態様では、対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＣＤ４７を有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与するステップであって、対象ががんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＣＤ４７を有する場合、マスキング薬剤が、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させるコイルドコイルペプチドを含む、該投与するステップと、を含む、方法が提供される。
【００９３】
実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）単離されたがん組織及び周囲の非がん組織においてＣＤ４７を検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織を染色するＣＤ４７に対してがん組織において染色するＣＤ４７の量を比較することと、を含む。
【００９４】
一態様では、対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与するステップであって、対象ががんにおいて非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有する場合、マスキング薬剤が、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる１個以上のコイルドコイルペプチドを含む、該投与するステップと、を含む、方法が提供される。
【００９５】
実施形態では、ステップａ）は、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）非がん組織に対してがん組織における染色の量を比較することと、を含む。
【００９６】
実施形態では、マクロファージ染色は、抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される。
【００９７】
一態様では、配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体はＨＣＶＲ及び／またはＬＣＶＲのＮ末端で配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲをさらに含む。
【００９８】
一態様では、本発明のマスクされたＣＤ４７抗体のアゴニストＣＤ４０抗体との組み合わせを投与することによってがんを治療する方法。
【００９９】
実施形態では、アゴニストＣＤ４０抗体は、低いフコシル化レベル、例えば、ＳＥＡ−ＣＤ４０抗体を有する。
【０１００】
一態様では、請求項３７に記載のマスクされたＣＤ４７抗体の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）との組み合わせを投与することによってがんを治療する方法が提供され、ＡＤＣの抗体はがん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、抗体は細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される。
【０１０１】
実施形態では、細胞傷害性薬剤は、アウリスタチンである。
【０１０２】
実施形態では、ＡＤＣの抗体は、ｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦから選択される薬物リンカーに複合体化される。
【０１０３】
上に記載される開示の要約は非限定的であり、開示される抗体ならびに抗体を作製及び使用する方法は、以下の図面、発明を実施するための形態、実施例及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１−１】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＨＶ３−２３／ＨＪ４を有するｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−２】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＨＶ３−４８／ＨＪ４を有するｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−３】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＨＶ３−６６／ＨＪ４を有するｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−４】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＨＶ３−７４／ＨＪ４を有するｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−５】抗体配列アラインメントを示す。ｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−６】抗体配列アラインメントを示す。ｍＢ６Ｈ１２及びＡｂ４７と比較したｈＢ６Ｈ１２．３重鎖（ｈｖＨ１）の配列アラインメントを示す。
【図１−７】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＫＶ１−３／ＫＪ２を有するｈＢ６Ｈ１２軽鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−８】抗体配列アラインメントを示す。ヒトＶＨドナー配列、ＫＶ１−２７／ＫＪ２を有するｈＢ６Ｈ１２軽鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−９】抗体配列アラインメントを示す。ｈＢ６Ｈ１２軽鎖変異型の配列アラインメントを示す。
【図１−１０】抗体配列アラインメントを示す。ｍＢ６Ｈ１２及びＡｂ４７と比較したｈＢ６Ｈ１２．３軽鎖（ｈｖＫ３）の配列アラインメントを示す。
【図２−１】抗体結合親和性及び動態を示す。例示的な抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７飽和細胞ＦＡＣＳを示す。
【図２−２】抗体結合親和性及び動態を示す。例示的な抗ＣＤ４７抗体によるＣＤ４７飽和ＥＬＩＳＡを示す。
【図２−３】抗体結合親和性及び動態を示す。例示的な抗ＣＤ４７抗体を有するＣＤ４７結合動態を示す。
【図３−１】抗体媒介性貪食を示す。例示的な抗ＣＤ４７抗体を有するＣＤ４７＋ヒト赤血球（ＲＢＣ）の抗体媒介性貪食を示す。
【図３−２】抗体媒介性貪食を示す。例示的な抗ＣＤ４７抗体を有するＣＤ４７＋ヒト赤血球（ＲＢＣ）の抗体媒介性貪食を示す。
【図４−１】抗体媒介性赤血球凝集を示す。分散した非沈降ＲＢＣの形成の撮像画像を示す。
【図４−２】抗体媒介性赤血球凝集を示す。抗ＣＤ４７抗体Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３を有するＲＢＣの赤血球凝集パーセントを示す。
【図５−１】ＦＣγ受容体の抗体媒介性活性を示す。ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター活性を、ＦｃγＲＩ（図５Ａ）または高親和性ＦｃγＲＩＩＩａ−Ｈ（図５Ｂ）でトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ細胞から測定し、漸増濃度のマウスＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７またはｈＢ６Ｈ１２．３のいずれかで被覆されたＷＩＬ２Ｓ細胞に曝露した。
【図５−２】ＦＣγ受容体の抗体媒介性活性を示す。ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター活性を、ＦｃγＲＩ（図５Ａ）または高親和性ＦｃγＲＩＩＩａ−Ｈ（図５Ｂ）でトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ細胞から測定し、漸増濃度のマウスＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７またはｈＢ６Ｈ１２．３のいずれかで被覆されたＷＩＬ２Ｓ細胞に曝露した。
【図６−１】ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ及びＦｃγＲＩＩＩａの活性化を示す。ｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７、またはｈＢ６Ｈ１２．３で被覆されたクロム負荷ＷＩＬ２Ｓ細胞を、ＦｃγＲＩＩＩａの高親和性Ｖ／Ｖ変異型を安定的に発現するＪｕｒｋａｔ細胞に曝露し、受容体活性化を、ＮＦＡＴ促進ルシフェラーゼ活性として評価した。ＡＤＣＣ（図６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩａ活性化（図６Ｂ）を、ｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の間で比較した。
【図６−２】ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ及びＦｃγＲＩＩＩａの活性化を示す。ｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７、またはｈＢ６Ｈ１２．３で被覆されたクロム負荷ＷＩＬ２Ｓ細胞を、ＦｃγＲＩＩＩａの高親和性Ｖ／Ｖ変異型を安定的に発現するＪｕｒｋａｔ細胞に曝露し、受容体活性化を、ＮＦＡＴ促進ルシフェラーゼ活性として評価した。ＡＤＣＣ（図６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩａ活性化（図６Ｂ）を、ｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の間で比較した。
【図７−１】抗ＣＤ４７抗体の抑制因子機能を示す。腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）表現型を有する分化した単球は、抗ＣＤ４７抗体に曝露される際、マクロファージ活性化マーカーＣＤ８６の増加したレベルを示した。
【図７−２】抗ＣＤ４７抗体の抑制因子機能を示す。腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）表現型を有する分化した単球は、抗ＣＤ４７抗体に曝露される際、ＭＨＣＩＩの増加したレベルを示した。
【図７−３】抗ＣＤ４７抗体の抑制因子機能を示す。ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞活性化を、Ｔ細胞におけるＭＨＣＩＩの上方調節を検出することによって評価した。
【図７−４】抗ＣＤ４７抗体の抑制因子機能を示す。ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞活性化を、Ｔ細胞におけるＩＦＮγ分泌の上方調節を検出することによって評価した。
【図８−１】ｈＢ６Ｈ１２．３と抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９との間の比較を示す。ＦｃγＲＩの活性化を、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターＪｕｒｋａｔ細胞において検出した。
【図８−２】ｈＢ６Ｈ１２．３と抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９との間の比較を示す。ＦｃγＲＩＩの活性化を、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターＪｕｒｋａｔ細胞において評価した。
【図８−３】ｈＢ６Ｈ１２．３と抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９との間の比較を示す。ＮＫ媒介性ＡＤＣＣ活性を、決定した。
【図８−４】ｈＢ６Ｈ１２．３と抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９との間の比較を示す。Ｔ細胞ＩＦＮγ分泌を、評価した。
【図９−１】ＭＭＰ２再活性化マスクされた抗体についての質量分析データを示す。組換えヒトＭＭＰ２での切断前（図９Ａ）及び後（図９Ｂ）のＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３についてのデコンボリューションされた軽鎖質量。無傷の軽鎖についてのｍ／ｚ予想値は、２８６８１である（観察値：２８６８０．８）。ＭＭＰ２切断された抗体（ＬＲＳＧ−ｈＢ６Ｈ１２．３）についてのｍ／ｚ予想値は、２３９６９である（観察値：２３９６８．４）。
【図９−２】ＭＭＰ２再活性化マスクされた抗体についての質量分析データを示す。組換えヒトＭＭＰ２での切断前（図９Ａ）及び後（図９Ｂ）のＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３についてのデコンボリューションされた軽鎖質量。無傷の軽鎖についてのｍ／ｚ予想値は、２８６８１である（観察値：２８６８０．８）。ＭＭＰ２切断された抗体（ＬＲＳＧ−ｈＢ６Ｈ１２．３）についてのｍ／ｚ予想値は、２３９６９である（観察値：２３９６８．４）。
【図１０】抗ＣＤ４７抗体のＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への飽和結合を示す。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、予め活性化されたＭＭＰ２対照薬と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ抗体は、抗体Ｎ末端でレムナントＬＲＳＧ配列を保有した。
【図１１】抗ＣＤ４７抗体のＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への飽和結合を示す。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、予め活性化されたＭＭＰ２対照薬と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ及びスタブＩＰＶ抗体は、抗体Ｎ末端でレムナントＬＲＳＧ配列を保有した。切断された抗体をＭＭＰ２を有する切断を通じて生成した一方、スタブＩＰＶ抗体を組み換えて生成した。
【図１２】抗ＣＤ４７抗体のヒト赤血球への飽和結合を示す。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、再活性化された対照薬（スタブＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３またはＭＭＰ２切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３）と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ及びスタブＩＰＶ抗体は、抗体Ｎ末端でレムナントＬＲＳＧ配列を保有した。切断された抗体をＭＭＰ２での切断を通じて生成した一方、スタブＩＰＶ抗体を組み換えて生成した。
【図１３】ＥＬＩＳＡによって検出した時の、抗ＣＤ４７抗体のｒｈＣＤ４７への飽和結合を示す。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、顕著に減損した結合を表示した。結合は、ｒｈＭＭＰ２による切断時に復元されることができた。
【図１４】ＥＬＩＳＡによって検出した時の、抗ＣＤ４７抗体のｒｈＣＤ４７への飽和結合を示す。ｈＢ６Ｈ１２．３及びｈＢ６Ｈ１２．３  Ｇ９１Ａの両方は、Ａｂ４７よりも高いＢ最大値を表示する。
【図１５】抗ＣＤ４７抗体のＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への飽和結合を示す。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の結合を、ＣＤＲ−Ｌ３においてＧ９１Ａ変異を有する変異型と比較した。
【図１６】抗ＣＤ４７抗体のヒト赤血球への飽和結合を示す。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の結合を、ＣＤＲ−Ｌ３においてＧ９１Ａ変異を有する変異型と比較した。
【図１７】ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。抗体を、１または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかで４つの用量を４日ごとに（ｑ４ｄ×４）腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した（図１７Ａ）。抗Ｆ４／８０  マクロファージマーカーを使用する腫瘍組織の分析は、Ｌ４２８異種移植腫瘍モデルにおけるマウスマクロファージの存在を示した（図１７Ｂ）。
【図１８−１】ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。抗体を、１または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。
【図１８−２】ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。抗Ｆ４／８０マクロファージマーカーを使用する腫瘍組織の分析は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２異種移植腫瘍モデルにおけるマウスマクロファージの存在を明らかにした。
【図１８−３】ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。ＮＳＧマウスにおけるＳＵＤＨＬ８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性も、分析する
【図１８−４】ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。抗体を、１または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。抗Ｆ４／８０マクロファージマーカーを使用する腫瘍組織の分析は、ＳＵＤＨＬ８異種移植腫瘍モデルにおけるマウスマクロファージの存在を示した。
【図１９−１】低い固有マクロファージ含有量を有する腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。ＨＴ１０８０線維肉腫癌モデルが示される。抗体を、１０ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。
【図１９−２】低い固有マクロファージ含有量を有する腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。ＨＴ１０８０線維肉腫癌モデルが示される。抗体を、１０ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。抗Ｆ４／８０マクロファージマーカーを使用する腫瘍組織の分析は、ＨＴ１０８０線維肉腫癌モデルにおける、マウスマクロファージの存在を示した。
【図１９−３】低い固有マクロファージ含有量を有する腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。ＨｅｐＧ２肝細胞癌モデルが示される。抗体を、１０ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。
【図１９−４】低い固有マクロファージ含有量を有する腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。ＨｅｐＧ２肝細胞癌モデルが示される。抗体を、１０ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。抗Ｆ４／８０マクロファージマーカーを使用する腫瘍組織の分析は、ＨｅｐＧ２肝細胞癌モデルにおける、マウスマクロファージの存在を示した。
【図２０】低い固有マクロファージ含有量を有し、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされる際（マクロファージ浸潤を促進することが知られている）に増幅され得る、腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を示す。抗ＣＤ４７抗体を５ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した一方、ＭＭＡＥと共にＡＤＣを１ｍｇ／ｋｇで１回与えた。
【図２１】マウス反応性抗ＣＤ４７抗体、ｍＩＡＰ３０１が、ヒトｈＢ６Ｈ１２．３抗体に対して使用された同じＶＥＬ及びＩＰＶ配列を使用してマスクされ得ることを示す（図２１Ａ）。これらの構築物でのマスキングは、マウスＣＤ４７陽性腫瘍へ結合する抗体を遮断し（図２１Ｂ）、ＲＢＣ貪食によって測定されるような機能性を防止した。低い固有マクロファージ含有量を有する腫瘍モデルでは、抗ＣＤ４７抗体を、５ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した一方、ＭＭＡＥと共にＡＤＣを１ｍｇ／ｋｇで１回与えた。
【図２２】ＢＡＬＢ／ｃマウスに投与された３Ｈ標識された親抗体及びマスクされた抗体を示す。抗体を、シンチレーション計数によって監視した。マウス血小板数（図２２Ａ）及びマウス抗体薬物動態（図２２Ｂ）が示される。図２２Ｂでは、ｍＩＡＰ３０１抗体の分析のための時点は、抗体の最終用量２４時間後であった。
【図２３−１】抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、Ａ２０リンパ腫モデルにおいて抗腫瘍活性を促進したが、同時ＲＢＣ枯渇の原因となった。
【図２３−２】マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１抗体は、同様の活性を付与したが、ＲＢＣ枯渇への影響を抑止した。
【図２３−３】Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１は、ＲＢＣ抗原シンクを避けたが、腫瘍結合を維持した。
【図２３−４】Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１は、ＲＢＣ抗原シンクを避けたが、腫瘍結合を維持した。
【図２４】抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１が免疫腫瘍学（Ｉ／Ｏ）薬剤に応答性であることが知られているＭＣ３８結腸癌モデルにおける抗腫瘍活性を促進することを示す。このモデルにおけるマスクされたｍＩＡＰ３０１抗体の活性は、完全な応答を呈する動物によって表されるような優れた有効性を示した。この動物の再投与は、腫瘍の完全な拒絶を生じ、長期間生存するメモリーＴ細胞応答の誘導を実証した。
【図２５−１】親抗体及びマスクされた抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、抗ＰＤ−１代替抗体と組み合わされて増加した抗腫瘍活性を促進し、４／６の動物が完全寛解（ＣＲ）を呈することを生じた
【図２５−２】親抗体及びマスクされた抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、ＳＥＡ増強代替抗体１Ｃ１０に標的化されたマクロファージ活性化ＣＤ４０と組み合わされて増加した抗腫瘍活性を促進した。
【図２６】投薬後３日目でのＢＡＬＢ／ｃマウスにおける様々なコイルドコイル、ヒト化Ｂ６Ｈ１２の安定性を示す。還元されたＳＤＳ−ＰＡＧＥによるマスクされた及びアンマスクされた重鎖の分離に続き、安定性をウェスタンブロット濃度測定により評価した。
【図２７】ヒト化ＩｇＧ１  ｈＢ６Ｈ１２「Ａｂ４７」の０．１、１、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投薬に続く赤血球レベルを、検出した（図２７Ａ）。１ｍｇ／ｋｇ超の用量は忍容性を示さず、動物は全ての用量レベルで溶血及び試験製品での治療に起因する臨床徴候を呈した。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされた代替的ヒト化ＩｇＧ１  ｈＢ６Ｈ１２「Ａｂ４７」の０．１、１、または１０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投薬に続く赤血球レベルが示され、試験された最大用量レベルでおよそ１０倍増加した忍容性を実証した（図２７Ｂ）。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７の全ての用量は忍容性を示し、臨床徴候はいかなる用量レベルでも検出されなかった。
【図２８】Ａｂ４７及びＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７の１ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投薬に続く循環抗体レベルを示す。Ａｂ４７の１ｍｇ／ｋｇ用量は研究３日目にＧｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ（総抗体）アッセイについての検出の限界値未満であったが、１ｍｇ／ｋｇのＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７は研究１５日目に終了する研究の全体経過を通して検出可能であった。
【図２９】Ａｂ４７、ｈＢ６Ｈ１２．３、または対照の１ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投薬に続く赤血球レベルを示す。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の両方が、赤血球の枯渇を実証した。
【図３０】Ａｂ４７、ｈＢ６Ｈ１２．３、または対照の１ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス用量に続く血小板レベルを描写する。Ａｂ４７は投薬前血小板レベルにおいて６０％の減少を実証した一方、ｈＢ６Ｈ１２．３は２０％超の血小板減少を有しておらず、このことは対照群についても観察された。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の両方が、７日目から研究の終了である１５日目まで上昇した血小板を生じた。
【図３１】Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の１０または２０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投薬に続く赤血球レベルを描写し、１ｍｇ／ｋｇでアンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３を上回るおよそ２０倍増加した忍容性を示した。血液学的パラメータによる増強された忍容性に加えて、臨床徴候は、マスクされた抗体治療群において観察されなかった一方、アンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３について１ｍｇ／ｋｇで観察された。
【図３２】２０ｍｇ／ｋｇのＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３、２０ｍｇ／ｋｇのＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３、１ｍｇ／ｋｇのｈＢ６Ｈ１２．３、及び参照のための対照の単回ＩＶボーラス投薬に続く赤血球レベルを示す。ＳＥＡマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３抗体及びＳＥＡマスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３抗体は、抗体操作を通じてエフェクター機能性を増強するにもかかわらず、同様に忍容性を示した。
【図３３】乳癌及び正常な乳房組織試料における抗ＣＤ１６３抗体を使用する免疫組織化学を介したマクロファージ検出を示す。
【図３４】Ｍ１１、Ｍ１５、及びＶｅｌコイルドコイル配列を示す。ＭＭＰ２切断配列も示される。
【図３５−１】細胞培養系内に存在するものに対する選択マウス及びヒトのがんにおける腫瘍ＭＭＰレベル。
【図３５−２】細胞培養系内に存在するものに対する選択マウス及びヒトのがんにおける腫瘍ＭＭＰレベル。
【図３６−１】Ｌｉｖ１Ａ  ＡＤＣについての乳癌異種移植モデルＭＣＳＦ７及びＣＤ３０  ＡＤＣについてのＬ４２８リンパ腫モデルにおける抗ＣＤ４７抗体と組み合わされた選択ＭＭＡＥ含有アウリスタチン（ＬＩＶ１Ａ及びＣＤ３０）を示す。
【図３６−２】Ｌｉｖ１Ａ  ＡＤＣについての乳癌異種移植モデルＭＣＳＦ７及びＣＤ３０  ＡＤＣについてのＬ４２８リンパ腫モデルにおける抗ＣＤ４７抗体と組み合わされた選択ＭＭＡＥ含有アウリスタチン（ＬＩＶ１Ａ及びＣＤ３０）を示
【図３７−１】血漿におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３７−２】血漿におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３７−３】脾臓におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３７−４】脾臓におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３７−５】腫瘍におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３７−６】腫瘍におけるｍＩＡＰ３０１ならびにマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１ならびにＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１の濃度を示す。
【図３８】血漿、肝臓、及び腫瘍における切断された抗体パーセントを示す（図３８Ａ）。マウスから収集されＡｂ４７またはＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７で４または７日間処理されたＨＴ１０８０腫瘍を、フローサイトメトリーに供し、腫瘍発現ＣＤ４７に結合し腫瘍発現ＣＤ４７を飽和させることができる抗体の程度を決定した（図３８Ｂ）。
【図３９−１】マスクされたＡｂ４７を、循環血漿サイトカイン単球走化性因子タンパク質−１（ＭＣＰ−１）を測定することによって決定した。
【図３９−２】マスクされたｈＢ６Ｈ１２．３を、循環血漿サイトカイン単球走化性因子タンパク質−１（ＭＣＰ−１）を測定することによって決定した。
【図３９−３】マスクされたｈＢ６Ｈ１２．３及びマスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３に対して、Ｇｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ  ＥＬＩＳＡを使用して薬物動態分析を実行した。
【図４０】高（Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２）（図４０Ａ）及び低（ＨＴ１０８０）（図４０Ｂ）マクロファージモデルにおけるフコシル化されたＳＥＡ  ｈＢ６Ｈ１２．３及びフコシル化されていないＳＥＡ  ｈＢ６Ｈ１２．３と同様に、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３及びＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の異種移植モデルにおける平均腫瘍体積を測定することによる相対的抗腫瘍活性を示す。
【図４１】Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３及びＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３抗体での循環ＭＣＰ−１サイトカインレベルの測定を示す（図４１Ａ）。ＳＥＡ及び非ＳＥＡ  Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３抗体の間でＧｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ  ＥＬＩＳＡを使用して薬物動態分析を実行した（図４１Ｂ）。
【図４２】ｈＢ６Ｈ１２．３（「抗ＣＤ４７」）、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３（「マスクされた抗ＣＤ４７」）、ＭＭＰ切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３（「ＭＭＰ活性化マスクされた抗ＣＤ４７」）、または抗体なし（「未処理」）でのインキュベーションに続く、ＣＤ４７陽性ヒト赤血球の貪食の測定を示す。
【図４３】Ｖｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７（「マスクされたＡｂ４７」）、ＭＭＰ切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７（「ＭＭＰ切断されマスクされたＡｂ４７」）、または抗体なし（「未処理」）でのインキュベーションに続く、丸底プレートにおけるヒト赤血球を示す。
【図４４】ｈＢ６Ｈ１２．３、５Ｆ９、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照でのインキュベーションに続く、アネキシンＶ陽性細胞の測定を示す。
【図４５−１】１７名中１６名の患者試料を代表する全血試料へのＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３−ＦＩＴＣ及びｈＢ６Ｈ１２．３−ＦＩＴＣの結合の測定を示す。
【図４５−２】１７名中１名の外れ値試料を代表する全血試料へのＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３−ＦＩＴＣ及びｈＢ６Ｈ１２．３−ＦＩＴＣの結合の測定を示す。
【図４５−３】組換えＣＤ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３（「ドナー１−ｈＢ６Ｈ１２．３スパイク」）またはＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３（肉腫Ｐｔ１−１０）との血漿のインキュベーションに続くＥＬＩＳＡを使用して得られたＥＣ５０値を示す。
【図４６−１】３７℃で２０時間ｈＢ６Ｈ１２．３またはＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３とインキュベートされたがん患者全血試料のインキュベーションにより誘導された代表的なサイトカイン産生を示す。ＩＰ−１０の産生を示す。
【図４６−２】３７℃で２０時間ｈＢ６Ｈ１２．３またはＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３とインキュベートされたがん患者全血試料のインキュベーションにより誘導された代表的なサイトカイン産生を示す。ＩＬ−１ＲＡの産生を示す。
【図４７】ｈＢ６Ｈ１２．３、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照（「ｈ００アイソタイプ」）を投与されたＨＴ１０８０異種移植モデルマウスからのＨＴ１０８０腫瘍細胞に対するアネキシンＶ染色を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０５】
出願時点で当該分野で既知の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ３抗体は、例えば、ＣＤ４７発現癌のようなＣＤ４７関連障害に対する効果的な治療薬としてのそれらの有用性を減少させる、末梢赤血球枯渇及び血小板枯渇のような毒性を呈する。出願人は、特異的にＣＤ４７発現固形癌に本発明の抗体及びその抗原結合断片を効果的に標的化させるために、腫瘍微小環境の文脈においてアンマスクすることによって活性化され得る新規の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体及びその抗原結合断片を驚くべきことに発見した。本明細書に記載されるヒト化抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片（マスクされたまたはアンマスクされたのいずれか）は、例えば、ＣＤ４７発現癌のようなＣＤ４７関連障害を治療するために有用である。
【０１０６】
ある特定の例示的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のその抗原標的への結合を遮断する除去可能なマスク（例えば、コイルドコイルマスク）を含む、抗体及びその抗原結合断片が提供される。ある特定の実施形態では、除去可能なマスクは、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）切断可能リンカー配列を介して抗体及びその抗原結合断片の重鎖及び／または軽鎖のうちの１つ以上のＮ末端に結合される。
【０１０７】
腫瘍微小環境では、改変されたタンパク質分解は、調節されない腫瘍成長、組織リモデリング、炎症、組織浸潤、及び転移（Ｋｅｓｓｅｎｂｒｏｃｋ（２０１１）Ｃｅｌｌ  １４１：５２）を引き起こす。ＭＭＰは腫瘍形成に関連したプロテイナーゼの最も顕著なファミリーを代表し、ＭＭＰは腫瘍進行中に微小環境の変化の多くを媒介する。同上。本発明の抗体または抗原結合断片のＭＭＰへの曝露時に、ＭＭＰリンカー配列は切断され、したがって、コイルドコイルマスクの除去を可能にし、腫瘍微小環境特異的様式で抗体またはその抗原結合断片がその標的抗原に結合することを可能にする。
【０１０８】
本発明の新規の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体及びその抗原結合断片（マスクされた及びアンマスクされた両方）は、出願時点で当該分野で既知の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ３抗体と比較して増加した薬物動態及び減少したオフターゲット作用を有利に実証する。本明細書に記載される新規のヒト化抗ＣＤ４７抗体は、１）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された抗原結合、２）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、３）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された貪食（例えば、増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ））、４）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して低下した赤血球の赤血球凝集（ＨＡ）、５）同じ三次元的（すなわち、非直線的）ＣＤ４７エピトープへの結合、のうちの１つ以上を有利に呈する。
【０１０９】
本発明がより容易に理解され得るために、ある特定の技術的及び科学的用語は、以下に具体的に定義される。本文書における他の箇所で具体的に定義されない限り、本明細書で使用される他の技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味を有する。
【０１１０】
Ｉ．定義
添付の特許請求の範囲を含む、本明細書で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」のような単語の単数形は、文脈が別途明示しない限りそれらの対応する複数の参照を含む。
【０１１１】
「抗体薬物複合体」は、細胞傷害性薬剤または細胞増殖阻害薬剤に複合体化された抗体を指す。典型的に、抗体薬物複合体は、細胞表面上の標的抗原（例えば、ＣＤ４７）に結合し、抗体薬物複合体の細胞への内在化及びその後の薬物の細胞への放出が後に続く。
【０１１２】
「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」は、天然にまたは合成的に産生されるかにかかわらず、ペプチド結合によって連結されるアミノ酸残基の重合体である。約１０未満のアミノ酸残基のポリペプチドは、一般に「ペプチド」と称される。
【０１１３】
「タンパク質」は、１個以上のポリペプチド鎖を含む高分子である。タンパク質は、炭水化物基のような非ペプチド性構成要素を含むこともできる。炭水化物及び他の非ペプチド性置換基は、タンパク質が中で産生される細胞によってタンパク質に添加され得、細胞の型によって異なるであろう。タンパク質は、それらのアミノ酸骨格構造の観点から本明細書に定義される。炭水化物基のような置換基は、一般的に明記されないが、それにもかかわらず存在し得る。
【０１１４】
用語「アミノ末端」及び「カルボキシ末端」は、ポリペプチド内の位置を表す。文脈が許す場合、これらの用語は、近接性または相対的位置を表すためにポリペプチドの特定の配列または部分に関して使用される。例えば、ポリペプチド内で参照配列に対してカルボキシ末端に配置されたある特定の配列は、参照配列のカルボキシ末端に近接して位置付けられるが、必ずしも完全ポリペプチドのカルボキシ末端である必要はない。
【０１１５】
アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、以下のアミノ酸置換が保存的置換とみなされる：トレオニン、アラニン、またはアスパラギンによって置換されるセリン；プロリンまたはセリンによって置換されるトレオニン；アスパラギン酸、ヒスチジン、またはセリンによって置換されるアスパラギン；グルタミン酸またはアスパラギンによって置換されるアスパラギン酸；グルタミン、リジン、またはアスパラギン酸によって置換されるグルタミン酸；アルギニン、リジン、またはグルタミン酸によって置換されるグルタミン；チロシンまたはアスパラギンによって置換されるヒスチジン；リジンまたはグルタミンによって置換されるアルギニン；イソロイシン、ロイシン、またはバリンによって置換されるメチオニン；ロイシン、バリン、またはメチオニンによって置換されるイソロイシン；バリン、イソロイシン、またはメチオニンによって置換されるロイシン；チロシンまたはトリプトファンによって置換されるフェニルアラニン；トリプトファン、ヒスチジン、またはフェニルアラニンによって置換されるチロシン；トレオニンによって置換されるプロリン；セリンによって置換されるアラニン；グルタミン酸、グルタミン、またはアルギニンによって置換されるリジン；メチオニン、イソロイシン、またはロイシンによって置換されるバリン；及びフェニルアラニンまたはチロシンによって置換されるトリプトファン。保存的置換は、同じクラスにおけるアミノ酸間の置換も意味することができる。クラスは以下の通りである：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０１１６】
２個のアミノ酸配列は、２個のアミノ酸配列のアミノ酸残基が、最大限の対応のために整合される際に同じである場合に、「１００％のアミノ酸配列同一性」を有する。配列比較は、ＤＮＡＳＴＡＲ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）によって生産されるＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクスコンピューティングスイートに含まれるもののような標準ソフトウェアプログラムを使用して実行され得る。最適なアラインメントを決定することにより２個のヌクレオチドまたはアミノ酸配列を比較するための他の方法は、当業者に既知である。（例えば、Ｐｅｒｕｓｋｉ  ａｎｄ  Ｐｅｒｕｓｋｉ，Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎｅｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９７）；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），“Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｈｉｇｈｗａｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｄａｔａｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２３−１５１（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９７）；Ｂｉｓｈｏｐ（ｅｄ．），Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（２ｎｄ  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９８）を参照されたい。）２個のアミノ酸配列は、２個の配列が互いに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する場合に、「実質的な配列同一性」を有するとみなされる。
【０１１７】
配列同一性パーセンテージは、Ｋａｂａｔ番付規則により最大限に整合された抗体配列により決定される。アラインメント後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の可変ドメイン全体）が参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間の配列同一性パーセンテージは、ギャップは計数されず、２つの領域の整合された位置の総数で除され、１００を乗じてパーセンテージに変換された、対象及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸により占有される位置の数である。
【０１１８】
１つ以上の列記される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列記されない他の要素を含むことができる。例えば、抗体を含む組成物は、抗体を単独でまたは他の成分との組み合わせで含有することができる。
【０１１９】
値の範囲の表示は、範囲内または範囲を定義する全ての整数を含む。
【０１２０】
本明細書に記載される抗体または他のタンパク質では、配列番号によって明記されるものに対応するアミノ酸残基への参照は、かかる残基の翻訳後修飾を含む。
【０１２１】
用語「抗体」は、抗原の存在に応答して体によって産生される免疫グロブリンタンパク質、ならびに抗原に結合する免疫グロブリンタンパク質、同様にその抗原結合断片及び操作された変異型を表す。したがって、用語「抗体」は、例えば、無傷のモノクローナル抗体（例えば、ハイブリドーマ技術を使用して産生される抗体）と、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃのような抗原結合抗体断片と、を含む。遺伝学的に、キメラ抗体、ヒト化抗体、１本鎖Ｆｖ断片、１本鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、線形抗体、多価または多特異性（例えば、二重特異性）ハイブリッド抗体などのような操作された無傷の抗体及び断片も含まれる。したがって、用語「抗体」は、抗体の抗原結合部位を含み、その抗原に特異的に結合することができる任意のタンパク質も含むように広義に使用される。
【０１２２】
抗体またはその抗原結合断片という用語は、本発明のマスキング化合物に結合（すなわち、共有結合または非共有結合）していない「裸の」抗体またはその抗原結合断片を含む。抗体という用語は、本明細書にさらに記載されるように、例えば、コイルドコイルペプチドのような１個以上のマスキング化合物に共有結合または非共有結合する「マスクされた」抗体またはその抗原結合断片も包含する。抗体またはその抗原結合断片という用語は、「複合体化」抗体もしくはその抗原結合断片または抗体もしくはその抗原結合断片が医薬品に、例えば、細胞増殖阻害薬物もしくは細胞傷害性薬物に共有結合もしくは非共有結合する「抗体薬物複合体（ＡＤＣ）」を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬品に、例えば、細胞増殖阻害薬物または細胞傷害性薬物に任意選択で複合体化された裸の抗体または抗原結合断片である。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、医薬品に、例えば、細胞増殖阻害薬物または細胞傷害性薬物に任意選択で複合体化されたマスクされた抗体または抗原結合断片である。
【０１２３】
用語「遺伝学的に操作された抗体」は、アミノ酸配列が天然または親抗体のものから変化した抗体を指す。可能性のある変形例は、多数あり、単に１個または少数のアミノ酸を変化させることから、例えば、可変または定常領域の完全な再設計までの範囲にわたる。一般に、定常領域の変化は、例えば、補体結合及び他のエフェクター機能のような特徴を改善または改変するためになされる。典型的には、可変領域の変化は、抗原結合特徴を改善し、可変領域の安定性を改善し、及び／または免疫原性の危険を低下させるためになされる。
【０１２４】
用語「キメラ抗体」は、所望の生物学的活性を呈する限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種（例えば、ヒト）に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種（例えば、マウス）に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、同様にかかる抗体の断片における対応する配列と同一または相同である抗体を指す。
【０１２５】
「抗体の抗原結合部位」は、その抗原に結合するのに十分な抗体のその部分である。最低限のかかる領域は、典型的には、可変ドメインまたはその遺伝学的に操作された変異型である。単一ドメイン結合部位は、ラクダ科抗体（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ａｎｄ  Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ，Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇ．１２：１３１−１４０，１９９９、Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９：９２１−９３０，２０００を参照されたい）または単一ドメイン抗体を産生する他の種のＶＨドメイン（「ｄＡｂ」、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌへの米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）から生成され得る。一般的に、抗体の抗原結合部位は、共通エピトープに結合する、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの両方を含む。本発明の文脈内で、抗体は、抗原結合部位に加えて、例えば、抗体の第２の抗原結合部位（同じエピトープもしくは異なるエピトープ、または同じ抗原もしくは異なる抗原に結合することができる）、ペプチドリンカー、免疫グロブリン定常領域、免疫グロブリンヒンジ、両親媒性ヘリックス（Ｐａｃｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１：１５７９−１５８４，１９９２）、非ペプチドリンカー、オリゴヌクレオチド（Ｃｈａｕｄｒｉ  ｅｔ  ａｌ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４５０：２３−２６，１９９９を参照されたい）、細胞増殖阻害薬物または細胞傷害性薬物などのような、１つ以上の構成要素を含むことができ、単量体または多量体タンパク質であり得る。抗体の抗原結合部位を含む分子の例は、当該分野で既知であり、例えば、Ｆｖ、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ融合物、二重特異性（ｓｃＦｖ）４−ＩｇＧ、及び二重特異性（ｓｃＦｖ）２−Ｆａｂを含む。（例えば、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３３：１３０１−１３１２，１９９６、Ｃａｒｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：４４９−４５４，１９９７、Ｚｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １３：３６１−３６７，２０００、及びＬｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２６７：２１３−２２６，２００２を参照されたい。）
【０１２６】
用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリン遺伝子（複数可）によって実質的にコードされる１個以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。免疫グロブリンの一形態は、脊椎動物において天然（すなわち、自然または親）抗体の基本構造単位を構成する。この形態は、四量体であり、免疫グロブリン鎖の２個の同一の対からなり、各対は１個の軽鎖及び１個の重鎖を有する。各対では、軽鎖及び重鎖可変領域（ＶＬ及びＶＨ）は、一緒になって、抗原への結合の中心的役割を果たし、定常領域は、抗体エフェクター機能の中心的役割を果たす。免疫グロブリンタンパク質の５つのクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）は、高等脊椎動物において特定されている。ＩｇＧは主要なクラスを含み、通常、血漿中に見出される２番目に豊富なタンパク質として存在する。ヒトでは、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４と表示される４つのサブクラスからなる。各免疫グロブリン重鎖は、種における所与のサブクラスに関して本質的に不変である定常領域タンパク質ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３。ＩｇＧ３はＣＨ４ドメインも含有する）からなる定常領域を保有する。
【０１２７】
ヒト及び非ヒト免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡは当該技術分野で既知である。（例えば、Ｅｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，ＤＮＡ  １：１１−１８，１９８１、Ｅｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：４０７１−４０７９，１９８２、Ｋｅｎｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｔ  ＵＳＡ  ７９：６６６１−６６６５，１９８２、Ｓｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：７１９−７２６，１９８３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ａｍｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．８：２０５５−２０６５，１９８０、Ｒｕｓｃｏｎｉ  ａｎｄ  Ｋｏｈｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：３３０−３３４，１９８５、Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：３７９１−３８０６，１９８４、Ｂｏｔｈｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２９８：３８０−３８２，１９８２、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４２：３３３−３４１，１９９５、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．２２：１９５−２０８，１９８５、Ｋｉｎｄｓｖｏｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  １：３３５−３４３，１９８２、Ｂｒｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８：１６５−１７４，１９８２、Ｋｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２４５−２４９，１９９３、及びＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｊ００２２８を参照されたい。）免疫グロブリン構造及び機能の概説については、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ  Ｖ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，４９−１４０，１９８７、及びＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９−２１７，１９９４を参照されたい。用語「免疫グロブリン」は、その一般的な意味に対して本明細書で使用され、文脈に応じて、無傷の抗体、その構成要素鎖、または鎖の断片を表す。
【０１２８】
完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは２１４個のアミノ酸）は、アミノ末端で可変領域遺伝子によって（約１１０個のアミノ酸をコードする）、及びカルボキシル末端でカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは４４６個のアミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸をコードする）、及びガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン定常領域遺伝子（約３３０個のアミノ酸をコードする）によってコードされ、後者は、抗体のアイソタイプを、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。（一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，２ｎｄ  ｅｄ．１９８９）、Ｃｈ．７を参照されたい）。
【０１２９】
免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域（本明細書では、それぞれ、「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも称される）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって遮られる「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整合させるよう働く。したがって、用語「ＣＤＲ」は、抗原結合に中心的役割を果たす抗体のアミノ酸残基を指す。アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＶＬドメイン及びＶＨドメインの両方は、以下のフレームワーク（ＦＲ）及びＣＤＲ領域を含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【０１３０】
各可変領域ドメインへのアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖可変領域間または異なる軽鎖可変領域間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く使用されている番付規則（Ｋａｂａｔ番付）も提供する。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２、及び３は、本明細書では、それぞれ、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３とも称される。ＶＨドメインのＣＤＲ１、２、及び３は、本明細書では、それぞれ、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３とも称される。そのように記述されている場合には、ＣＤＲの割当は、Ｋａｂａｔの代わりにＩＭＧＴ（登録商標）（Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ＆  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２７：５５−７７；２００３）に従うことができる。
【０１３１】
重鎖定常領域の番付は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）に示されるＥＵインデックスを介する。
【０１３２】
文脈が別途示さない限り、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通じて産生された抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」は、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む、単一クローンに由来する抗体を含むことができる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１３３】
「ヒト化ＶＨドメイン」または「ヒト化ＶＬドメイン」は、完全にまたは実質的に非ヒトドナー免疫グロブリン（例えば、マウスまたはラット）からのいくつかのまたは全てのＣＤＲと、ヒト免疫グロブリン配列に完全にまたは実質的に由来する可変ドメインフレームワーク配列とを含む、免疫グロブリンＶＨまたはＶＬドメインを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。いくつかの事例では、ヒト化抗体は、適当な結合特徴を増強するためにヒト可変ドメインフレームワーク領域内にいくつかの非ヒト残基を保持するであろう（例えば、フレームワークにおける変異は、抗体がヒト化される際に結合親和性を保存するよう求められ得る）。
【０１３４】
「ヒト化抗体」は、ヒト化ＶＨドメイン及びヒト化ＶＬドメインの一方または両方を含む抗体である。免疫グロブリン定常領域（複数可）は、存在する必要はないが、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域に完全にまたは実質的に由来する。
【０１３５】
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列に移植される遺伝学的に操作された抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合物、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。ヒトアクセプター配列は、他の基準の間でアクセプター及びドナーＣＤＲの中でカノニカル形態を一致させるための、可変領域フレームワークにおけるドナー配列との配列同一性の高い程度について選択され得る。したがって、ヒト化抗体は、ドナー抗体及び可変領域フレームワーク配列及び定常領域に完全にまたは実質的に由来し、存在する場合、ヒト抗体配列に完全にまたは実質的に由来するＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、典型的には、ドナー抗体重鎖ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域に完全にまたは実質的に由来し、存在する場合、ヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する３つのＣＤＲ全てを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、典型的には、ドナー抗体軽鎖ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域に完全にまたは実質的に由来し、存在する場合、ヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に実質的に由来する３つのＣＤＲ全てを有する。ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔ番付により定義されるような）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％が、または対応する残基（Ｋａｂａｔ番付により定義されるような）の約１００％が、それぞれのＣＤＲ間で同一である際に、非ヒト抗体において対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、対応する残基（可変領域についてはＫａｂａｔ番付、定常領域についてはＥＵ番付により定義されるような）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％が、または対応する残基（可変領域についてはＫａｂａｔ番付、定常領域についてはＥＵ番付により定義されるような）の約１００％が同一である際に、それぞれヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に実質的に由来する。
【０１３６】
ヒト化抗体は、多くの場合、マウス抗体からの６つのＣＤＲ全て（好ましくはＫａｂａｔまたはＩＭＧＴ（登録商標）により定義されるように）を組み込むが、それらは、マウス抗体からの６つ全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３つ、４つ、または５つ）でも作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５−４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２−１４４１，２０００）。
【０１３７】
ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔ（またはＩＭＧＴ）により定義される通り）の少なくとも６０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、非ヒト抗体において対応するＣＤＲに「実質的に由来」する。ＣＤＲが非ヒト免疫グロブリンに実質的に由来するヒト化ＶＨまたはＶＬドメインの特定の変形例では、ヒト化ＶＨまたはＶＬドメインのＣＤＲは、対応する非ヒトＶＨまたはＶＬ  ＣＤＲに対して、３つ全てのＣＤＲにわたって、６個以下（例えば、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下）のアミノ酸置換（好ましくは保存的置換）を有する。抗体ＶＨまたはＶＬドメインの可変領域フレームワーク配列、または、存在する場合、免疫グロブリン定常領域の配列は、対応する残基（可変領域についてはＫａｂａｔ番付、定常領域についてはＥＵ番付により定義されるような）の少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％が、または対応する残基（可変領域についてはＫａｂａｔ番付、定常領域についてはＥＵ番付により定義されるような）の約１００％が同一である際に、それぞれヒトＶＨまたはＶＬフレームワーク配列またはヒト定常領域に「実質的に由来」する。したがって、ヒト化抗体の全ての部分は、ＣＤＲを除いて、典型的に、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に完全にまたは実質的に由来する。
【０１３８】
抗体は、典型的には、単離された形態で提供される。このことは、抗体が典型的にはその産生または精製から生じる干渉タンパク質及び他の汚染物の少なくとも約５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、その抗体がその使用を促進することを意図された過剰の薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。抗体は、産生または精製からの干渉タンパク質及び汚染物から少なくとも約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約９９％ｗ／ｗ純粋である場合がある。単離された抗体を含む抗体は、細胞傷害性薬剤に複合体化され、抗体薬物複合体として提供され、及び／または関連するコイルドコイルでマスクされ得る。
【０１３９】
抗体のその標的抗原に対する特異的結合は、典型的には少なくとも約１０６、約１０７、約１０８、約１０９、または約１０１０Ｍ−１の親和性を指す。特異的結合は、検出可能に規模が高く、少なくとも１個の非特異的標的に生じる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、錠及び鍵の型）の結果であり得る一方、非特異的結合は、典型的には、ファンデルワールス力の結果である。
【０１４０】
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸、または１個以上のタンパク質の３次折り畳みが並置される隣接しないアミノ酸から形成され得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性薬剤、例えば、溶媒への曝露で保持される一方、３次折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性薬剤、例えば、溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも約３個、さらに通常は少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、または約８〜１０個のアミノ酸を、特有の空間的立体構造に含む。エピトープの空間的立体構造を決定する方法は、例えば、Ｘ線結晶学及び二次元核磁気共鳴を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
【０１４１】
同じであるかまたは重複しているエピトープを認識する抗体は、一方の抗体が標的抗原への他方の抗体の結合と競合する能力を示す単純な免疫アッセイにおいて特定され得る。抗体のエピトープは、接触残基を特定するためのその抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によっても定義され得る。
【０１４２】
代替的には、２個の抗体は、一方の抗体の結合を低下させるかまたは排除する抗原におけるアミノ酸変異が、他方の結合を低下させるかまたは排除する場合に（かかる変異が抗原構造における全体的な改変を生産しないことを条件とする）、同じエピトープを有する。２個の抗体は、一方の抗体の結合を低下させるかまたは排除するいくつかのアミノ酸変異が他の抗体の結合を低下させるかまたは排除する場合に、重複しているエピトープを有する。
【０１４３】
抗体間の競合は、試験抗体が参照抗体の共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイによって決定され得る（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０を参照されたい）。試験抗体は、過剰な試験抗体が参照抗体の結合を阻害する場合に、参照抗体と競合する。
【０１４４】
競合アッセイによって特定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるように参照抗体によって結合されるエピトープに十分近位にある隣接するエピトープに結合する抗体を含む。競合アッセイによって特定される抗体は、標的タンパク質における立体構造変化の原因となることにより、参照抗体が試験抗体によって結合されるものとは異なるエピトープに結合することを防止することによって参照抗体と間接的に競合するものも含む。
【０１４５】
抗体エフェクター機能は、ＩｇのＦｃ領域が寄与する機能を指す。かかる機能は、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）であり得る。かかる機能は、例えば、食作用もしくは溶解作用を有する免疫細胞上のＦｃ領域のＦｃ受容体への結合によって、またはＦｃ領域の補体系の構成要素への結合によって引き起こされ得る。典型的には、Ｆｃ結合細胞または補体構成要素のよって媒介される作用（複数可）は、ＣＤ４７標的細胞の阻害及び／または枯渇を生じる。抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）発現細胞を動員し、それらを抗体被覆された標的細胞と並置することができる。ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ６４）を含む、ＩｇＧに対する表面ＦｃＲを発現する細胞は、ＩｇＧ被覆された細胞の破壊のためのエフェクター細胞として作用することができる。かかるエフェクター細胞は、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及び好酸球を含む。ＩｇＧによるＦｃγＲの会合は、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰを活性化する。ＡＤＣＣは、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通じてＣＤ１６＋エフェクター細胞によって媒介され、一方で貪食は、ＣＤ３２＋及びＣＤ６４＋エフェクター細胞によって媒介される（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｐａｕｌ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｎ．Ｙ．，１９９７，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３，１７  ａｎｄ  ３０、Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９：１６５９−６９，２００４、Ａｋｅｗａｎｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４０６１−６５，２００１、Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．５３：１９９−２０７，１９９９を参照されたい）。
【０１４６】
ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰに加えて、細胞に結合した抗体のＦｃ領域は、補体古典的経路を活性化して、ＣＤＣを励起することもできる。それらが抗原と複合体化される際に、補体系のＣ１ｑは抗体のＦｃ領域に結合する。Ｃ１ｑの細胞結合抗体への結合は、Ｃ４及びＣ２のタンパク質分解活性化に関与する事象のカスケードを開始し、Ｃ３転化酵素を生成することができる。Ｃ３転化酵素によるＣ３のＣ３ｂへの切断は、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９を含む末端補体構成要素の活性化を可能にする。まとめて、これらのタンパク質は、抗体被覆細胞上に膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔が、細胞膜の統合性を分断して、標的細胞を殺滅する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２を参照されたい）。
【０１４７】
用語「抗体依存性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、抗体被覆された標的細胞の溶解活性を保有する免疫細胞（エフェクター細胞とも称される）との相互作用に依存する細胞死を誘導するための機序を指す。かかるエフェクター細胞は、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージ、及び好中球を含む。エフェクター細胞は、標的細胞に結合したＩｇのＦｃ領域に、それらの抗原結合部位を介して結合する。抗体被覆された標的細胞の死滅は、エフェクター細胞活性の結果として生じる。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体は、親抗体に対して、及び／または抗ＣＤ４７  ＩｇＧ３抗体に対して同等のまたは増加したＡＤＣＣを媒介する。
【０１４８】
用語「抗体依存性細胞貪食」または「ＡＤＣＰ」は、抗体被覆された細胞が、ＩｇのＦｃ領域に結合する貪食免疫細胞によって（例えば、マクロファージ、好中球、及び／または樹状細胞によって）全体または部分のいずれかに内在化されるプロセスを指す。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体は、親抗体に対して、及び／または抗ＣＤ４７  ＩｇＧ３抗体に対して同等のまたは増加したＡＤＣＰを媒介する。
【０１４９】
用語「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃ領域が一連の酵素反応を活性化して標的細胞膜における孔の形成をもたらす、細胞死を誘導するための機序を指す。
【０１５０】
典型的には、抗体被覆された標的細胞上のもののような抗原抗体複合体は、補体構成要素Ｃ１ｑに結合して補体構成要素Ｃ１ｑを活性化し、今度は標的細胞死を引き起こす補体カスケードを活性化する。補体の活性化は、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によってＡＤＣＣを促進する、標的細胞表面上の補体構成要素の堆積も生じ得る。
【０１５１】
「細胞傷害性作用」は、標的細胞の枯渇、排除、及び／または殺滅を指す。「細胞傷害性薬剤」は、細胞に対して細胞傷害性作用を有し、それによって標的細胞の枯渇、排除、及び／または殺滅を媒介する化合物を指す。ある特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、抗体に複合体化されるか、または抗体と組み合わせて投与される。好適な細胞傷害性薬剤は、本明細書にさらに記載される。
【０１５２】
「細胞増殖阻害作用」は、細胞増殖の阻害を指す。「細胞増殖阻害薬剤」は、細胞に対して細胞増殖阻害作用を有し、それによって細胞の特定の細胞型及び／またはサブセットの成長及び／または拡大の阻害を媒介する化合物を指す。好適な細胞増殖阻害薬剤は、本明細書にさらに記載される。
【０１５３】
「発現単位」及び「発現カセット」は、本明細書で互換的に使用され、宿主細胞において目的のポリペプチドをコードし核酸セグメントの発現を提供することができる核酸セグメントを表す。発現単位は、典型的には、作動可能に連結された転写プロモーター、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、及び転写ターミネーターを含む。転写プロモーター及びターミネーターに加えて、発現単位は、例えば、エンハンサーまたはポリアデニル化シグナルのような、他の核酸セグメントをさらに含むことができる。
【０１５４】
用語「発現ベクター」は、１つ以上の発現単位を含む線形または環形の核酸分子を指す。１個以上の発現単位に加えて、発現ベクターは、例えば、１個以上の複製起点または１個以上の選択可能なマーカーのような、追加的な核酸セグメントも含むことができる。
【０１５５】
発現ベクターは、一般に、プラスミドもしくはウイルスＤＮＡに由来するか、または両方の要素を含有することができる。
【０１５６】
用語「患者」または「対象」は、予防的または治療的処置のいずれかを受ける、非ヒト霊長類、ウサギ、ラット、マウスなど、及びそれらのトランスジェニック種のような、ヒト及び他の哺乳動物対象を含む。ある特定の例示的な実施形態では、対象は、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体のマスキングドメイン（例えば、コイルドコイルマスキングドメイン）を切断することができる１個以上のプロテアーゼを任意選択で分泌するがん、例えば、固形腫瘍を罹患するまたは発症する危険があるヒト患者である。
【０１５７】
本明細書に記載されるような抗ＣＤ４７抗体の投与によるＣＤ４７発現障害の治療の文脈における用語「有効量」は、ＣＤ４７関連障害（例えば、ＣＤ４７発現癌）の１つ以上の症状を阻害するかまたはそれを緩和するのに十分なかかる抗体の量を指す。有効量の抗体は、「有効なレジメン」において投与される。用語「有効なレジメン」は、障害の予防的または治療的処置（例えば、ＣＤ４７発現癌の予防的または治療的処置）を達成するのに適切な投与される抗体の量及び投薬頻度の組み合わせを指す。
【０１５８】
用語「薬学的に許容される」は、連邦もしくは州政府の規制機関により承認されたもしくは承認可能である、または動物における、より具体的にはヒトにおける使用のための米国薬局方もしくは他の一般に認識される薬局方に列記されていることを意味する。用語「薬学的に相溶性の成分」は、抗ＣＤ４７抗体と共に製剤化される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
【０１５９】
語句「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩は、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレンビス−（２ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））の塩を含む。薬学的に許容される塩は、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンのような、追加的な分子をさらに含み得る。対イオンは、親化合物上で電荷を安定させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、２個以上の荷電原子をその構造内に有することができる。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の部分である事例は、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１個以上の荷電原子及び／または１個以上の対イオンを有することができる。
【０１６０】
文脈から別途明らかでない限り、値が「約」Ｘまたは「およそ」Ｘと表される際に、Ｘの表示値は、±１０％まで正確であると理解されるであろう。
【０１６１】
本発明の文脈における溶媒和物は、溶媒分子との配位を通じて固体または液体状態において複合体を形成する本発明の化合物のそれらの形態である。水和物は、溶媒和物の１つの特定の形態であり、配位は水で起きる。ある特定の例示的な実施形態では、本発明の文脈における溶媒和物は、水和物である。
【０１６２】
用語「赤血球凝集」は、赤血球が一緒に凝集されるプロセスを指す。赤血球凝集は、当該分野で既知である、抗ＣＤ４７抗体の望ましくない副作用である。本発明のヒト化抗ＣＤ４７抗体は、任意選択で、マウス親抗ＣＤ４７抗体に対して及び／または当該分野で既知の１つ以上の抗ＣＤ４７抗体に対して低下した赤血球凝集を媒介する。
【０１６３】
ＩＩ．抗ＣＤ４７抗体及び抗原結合断片
本発明は、１個の抗ＣＤ４７抗体分子の少なくとも部分をコードする少なくとも１個のポリヌクレオチドを含む組成物及び核酸分子と同様に、単離された、組換え及び／または合成抗ＣＤ４７ヒト、霊長類、げっ歯類、哺乳動物、キメラ、ヒト化及び／またはＣＤＲ移植抗体及びその抗原結合断片を提供する。本発明は診断用及び治療用組成物、方法及びデバイスを含むかかる核酸及び抗体を作製及び使用する方法をさらに含むが、これらに限定されない。ある特定の例示的な実施形態では、ヒト化抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体が提供される。他の例示的な実施形態では、マスクされたヒト化抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体が提供される。さらに他の例示的な実施形態では、スタブを含むヒト化抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体が提供される。
【０１６４】
本発明の特定の実施形態では、以下の活性、１）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された抗原結合、２）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、３）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して増強された貪食（例えば、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ））、４）参照抗体（例えば、マウス親抗体）に対して低下した赤血球赤血球凝集（ＨＡ）、５）三次元的（すなわち、非直線的）ＣＤ４７エピトープへの結合、の１つ以上を有するヒト化抗ＣＤ４７抗体が、提供される。
【０１６５】
本発明の例示的な抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片は、以下のＣＤ４７抗体重鎖／軽鎖対を含む：ｈＢ６Ｈ１２．１−ｈｖＨ１／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．２−ｈｖＨ１／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．３−ｈｖＨ１／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．４−ｈｖＨ１／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．５−ｈｖＨ２／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．６−ｈｖＨ２／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．７−ｈｖＨ２／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．８−ｈｖＨ２／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．９−ｈｖＨ３／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．１０−ｈｖＨ３／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．１１−ｈｖＨ３／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．１２−ｈｖＨ３／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．１３−ｈｖＨ４／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．１４−ｈｖＨ４／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．１５−ｈｖＨ４／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．１６−ｈｖＨ４／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．１７−ｈｖＨ５／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．１８−ｈｖＨ５／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．１９−ｈｖＨ５／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．２０−ｈｖＨ５／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．２１−ｈｖＨ６／ｈｖＫ１；ｈＢ６Ｈ１２．２２−ｈｖＨ６／ｈｖＫ２；ｈＢ６Ｈ１２．２３−ｈｖＨ６／ｈｖＫ３；ｈＢ６Ｈ１２．２４−ｈｖＨ６／ｈｖＫ４；ｈＢ６Ｈ１２．３（脱アミド変異体）−ｈｖＨ１／ｈｖＫ３  Ｇ９１Ａ；Ａｂ４７−ＨＶ３−７／ＨＪ４／ＫＶ３Ｄ−１１／ＫＪ１；及びｍＢ６Ｈ１２−ｖＨ１／ｖＬ。例示的な抗ＣＤ４７抗体重鎖可変領域配列、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲは、表１〜表６において見出され得る。例示的なヒト化抗ＣＤ４７抗体の重鎖及び軽鎖のためのアミノ酸配列は、表７で見出され得る。
表１．重鎖可変配列はマウスＢ６Ｈ１２抗体に由来する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲには下線が引かれ、ＩＭＧＴ  ＣＤＲは太字である。
【表１−１】
2021503927.tif 000003
【表１−２】
2021503927.tif 000004
表２．軽鎖可変配列はマウスＢ６Ｈ１２抗体に由来する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲには下線が引かれ、ＩＭＧＴ  ＣＤＲは太字である。
【表２】
2021503927.tif 000005
表３．変異型抗体の重鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔ）。
【表３−１】
2021503927.tif 000006
【表３−２】
2021503927.tif 000007
表４．変異型抗体の重鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴ）。
【表４】
2021503927.tif 000008
表５．変異型抗体の軽鎖ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔ）。
【表５】
2021503927.tif 000009
表６．変異型抗体の軽鎖ＣＤＲ配列（ＩＭＧＴ）。
【表６】
2021503927.tif 000010
表７．本発明の好ましい実施形態に従うマスクされた抗ＣＤ４７抗体の完全な重鎖及び軽鎖配列。重鎖及び軽鎖配列は平文であり（それぞれ配列番号４２及び４３）、マスキング配列は太字であり、プロテアーゼ切断配列は下線が引かれている。
【表７】
2021503927.tif 000011
【０１６６】
ｈＢ６Ｈ１２．１
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１６７】
ｈＢ６Ｈ１２．２
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１６８】
ｈＢ６Ｈ１２．３
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１６９】
ｈＢ６Ｈ１２．４
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７０】
ｈＢ６Ｈ１２．５
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７１】
ｈＢ６Ｈ１２．６
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲ及を含みび／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７２】
ｈＢ６Ｈ１２．７
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７３】
ｈＢ６Ｈ１２．８
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７４】
ｈＢ６Ｈ１２．９
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７５】
ｈＢ６Ｈ１２．１０
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７６】
ｈＢ６Ｈ１２．１１
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７７】
ｈＢ６Ｈ１２．１２
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７８】
ｈＢ６Ｈ１２．１３
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１７９】
ｈＢ６Ｈ１２．１４
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８０】
ｈＢ６Ｈ１２．１５
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８１】
ｈＢ６Ｈ１２．１６
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１、２２、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、３０、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８２】
ｈＢ６Ｈ１２．１７
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８３】
ｈＢ６Ｈ１２．１８
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８４】
ｈＢ６Ｈ１２．１９
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８５】
ｈＢ６Ｈ１２．２０
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、２０、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８６】
ｈＢ６Ｈ１２．２１
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１１として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３、２４、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８／配列番号１１であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８７】
ｈＢ６Ｈ１２．２２
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１２として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３、２４、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８／配列番号１２であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８８】
ｈＢ６Ｈ１２．２３
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１３として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３、２４、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８／配列番号１３であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１８９】
ｈＢ６Ｈ１２．２４
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１４として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３、２４、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８／配列番号１４であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含む及び／または配列番号１４への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１９０】
ｈＢ６Ｈ１２．３  Ｇ９１Ａ
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１５として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３４、３５、及び３６の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号４０、３８、及び４１の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３／配列番号１５であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１５への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１９１】
Ａｂ４７
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号１０として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２／配列番号１０であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号１０への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１９２】
ｍＢ６Ｈ１２
ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１として示されるＨＣＶＲからのＣＤＲ及び／または配列番号９として示されるＬＣＶＲからのＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６、１７、及び１８の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３１、３２、及び３３の軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５、２６、及び２７の重鎖ＣＤＲ及び／または配列番号３７、３８、及び３９の軽鎖ＣＤＲを含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１／配列番号９であるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む。他の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＨＣＶＲを含み及び／または配列番号９への少なくとも約８０％相同性または同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するＬＣＶＲを含む。
【０１９３】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片は、修飾された形態で発現され得る。例えば、追加的なアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域は、精製中、またはその後の取り扱い及び保管中に、宿主細胞において安定性及び残留性を改善させるために抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片のＮ末端に添加され得る。また、ペプチド部分は、精製を促進するために本発明の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片に添加され得る。かかる領域は、抗体分子またはその少なくとも１個の断片の最終調製前に除去され得る。かかる方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｓｕｐｒａ、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．（１９８７−２００１）のような多くの標準実験室マニュアルにおいて記載される。
【０１９４】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、標準結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅベースの結合アッセイを使用して測定される場合、典型的には、１μＭ以下、例えば、１００ｎＭ以下、好ましくは１０ｎＭ以下、より好ましくは１ｎＭ以下の平衡結合定数を有するＣＤ４７に結合する。
【０１９５】
本発明の抗体分子は、参照抗ＣＤ４７抗体、例えば、Ｂ６Ｈ１２、２Ｄ３、ＭＡＢＬ、ＣＣ２Ｃ６、またはＢＲＩＣ１２６に対して特徴付けられ得る。抗体Ｂ６Ｈ１２は、例えば、米国特許第５０５７６０４号及び同第９０１７６７５号に記載され、Ａｂｃａｍ、ＰＬＣ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．及びｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．から市販されている。
【０１９６】
グリコシル化変異型
抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片は、それらの定常領域における保存された位置でグリコシル化され得る（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８、Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９９７）ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８；Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０）と、糖タンパク質の立体構造及び提示された三次元表面に影響することができる糖タンパク質の部分間の分子内相互作用（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，ｓｕｐｒａ、Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６）とに影響する。オリゴ糖は、特異的認識構造に基づいてある特定の分子に対して所与の糖タンパク質を標的化するよう働くことができる。例えば、非ガラクトシル化（ａｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｅｄ）ＩｇＧにおいて、オリゴ糖部分がＣＨ２間の空間外に「反転」し、末端Ｎ−アセチルグルコサミン残基が利用可能になり、マンノース結合タンパク質に結合することが報告されている（Ｍａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：２３７−２４３）。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において産生されたＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からのグリコペプチダーゼによるオリゴ糖の除去は、補体媒介性溶解（ＣＭＣＬ）における完全な低下を生じた（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８）が、ノイラミニダーゼを使用するシアル酸残基の選択的除去は、ＤＭＣＬの喪失を生じなかった。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することも報告されている。特に、バイセクトＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼである、α（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節された発現を伴うＣＨＯ細胞は改善されたＡＤＣＣ活性を有することが、報告されている（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０１９７】
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ連結またはＯ連結のいずれかである。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸であるトリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−トレオニンは、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作成する。Ｏ連結グリコシル化は、糖類Ｎ−アセイルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
【０１９８】
抗体のグリコシル化変異型は、抗体のグリコシル化パターンが改変される変異型である。改変することとは、抗体に見出される１つ以上の炭水化物部分を削除し、１つ以上の炭水化物部分を抗体に添加し、グリコシル化の組成物（グリコシル化パターン）、グリコシル化の程度などを変更することを意味する。
【０１９９】
グリコシル化部位の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片への添加は、それが（Ｎ連結グリコシル化部位について）上記のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することにより達成され得る。改変は、（Ｏ連結グリコシル化部位について）元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはトレオニン残基の添加、またはセリンまたはトレオニン残基による置換によっても行われ得る。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然のグリコシル化部位内でのアミノ酸改変により達成され得る。
【０２００】
アミノ酸配列は、通常、基礎の核酸配列を改変することにより改変される。これらの方法は、天然源からの単離（天然に生じるアミノ酸配列変異型の場合）、またはオリゴヌクレオチド媒介性（または部位指向性）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及び抗体の先に調製された変異型または非変異型バージョンのカセット変異誘発による調製を含む。
【０２０１】
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）も、アミノ酸配列または基礎のヌクレオチド配列を改変することなく改変され得る。グリコシル化は、抗体を発現させるために使用される宿主細胞に大きく依存する。可能な治療薬としての組換え糖タンパク質、例えば、抗体の発現に使用される細胞型が天然の細胞であることは稀であり、抗体のグリコシル化パターンにおける顕著な変動が予想され得る。例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０を参照されたい。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生中のグリコシル化に影響する要因は、成長モード、培地製剤、培養密度、酸素負荷、ｐＨ、精製スキームなどを含む。オリゴ糖の産生に関与するある特定の酵素を導入または過剰発現させることを含む、特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを改変するための種々の方法が、提案されている（米国特許第５０４７３３５号、同第５５１０２６１号、同第５２７８２９９号）。グリコシル化、またはある特定の型のグリコシル化は、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去され得る。加えて、組換え宿主細胞は、遺伝子操作、例えば、ある特定の型の多糖を加工する際に欠損され得る。これらの及び同様の技法は、当該技術分野で周知である。
【０２０２】
抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖組成分析、連続酵素消化、及び電荷に基づいてオリゴ糖を分離するための高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィーを使用するＨＰＡＥＣ−ＰＡＤを含む、炭水化物分析の従来の技法によって容易に分析され得る。分析目的のためのオリゴ糖を放出する方法は、酵素処理（一般的にペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ／エンド−β−ガラクトシダーゼを使用して実行される）、主にＯ連結構造を放出するための厳しいアルカリ性環境を使用しての排除、ならびにＮ連結及びＯ連結オリゴ糖の両方を放出するための無水ヒドラジンを使用する化学的方法を含む。
【０２０３】
抗体のグリコシル化の修飾の好ましい形態は、低下したコアフコシル化である。「コアフコシル化」は、Ｎ連結グリカンの還元末端でのフコース（「フコシル化」）のＮ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）への添加を指す。
【０２０４】
「Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖」は、典型的には、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号に従う）に結合される。本明細書で使用される場合、Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖は、主に以下の構造：
【化１】
2021503927.tif 000012
を有する二分岐複合物糖鎖を有し、式中、＋／−は糖分子が存在するか、または不在であり得ることを示し、数字は糖分子間の連結の位置を示す。上の構造では、アスパラギンに結合する糖鎖末端は還元末端（右記）と呼ばれ、反対側は非還元末端と呼ばれる。フコースは、通常、典型的には、α１，６結合（ＧｌｃＮＡｃの６位がフコースの１位に連結される）により還元末端のＮ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に結合される。「Ｇａｌ」はガラクトースを指し、「Ｍａｎ」はマンノースを指す。
【０２０５】
「Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖」は、１）コア構造の非還元末端側がガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１つ以上の分岐を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が任意選択で、シアル酸、バイセクトＮ−アセチルグルコサミンなどを有する複合型、または２）コア構造の非還元末端側が高マンノースＮ−グリコシド連結糖鎖及びＮ−グリコシド連結複合型糖鎖の両分岐を有するハイブリッド型を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、「Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側がガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０、１つ以上の分岐を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が任意選択で、シアル酸、バイセクトＮ−アセチルグルコサミンなどのような構造をさらに有する複合型を含む。
【０２０７】
本方法に従うと、典型的には、少量のフコースのみが、ヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５抗体のＮ−グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、様々な実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体の分子は、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％の抗体の分子は、フコースによるコアフコシル化を有する。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、少量のフコース類似体のみ（またはフコース類似体の代謝物または産物）が、Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、様々な実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満のヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７またはＳＧ１６．４５抗体は、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％のヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体は、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。
【０２０９】
抗体産生細胞をフコース類似体と共にインキュベートすることによりフコシル化されていない抗体を作製する方法は、例えば、ＷＯ２００９／１３５１８１に記載される。簡潔に、ヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体を発現するように操作された細胞は、フコース類似体、またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物の存在下でインキュベートされる。細胞内代謝物は、例えば、ＧＤＰ修飾された類似体または完全にもしくは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。産物は、例えば、完全にまたは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。いくつかの実施形態では、フコース類似体は、フコースサルベージ経路において酵素（複数可）を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコキナーゼまたはＧＤＰ−フコース−ピロホスホリラーゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコシルトランスフェラーゼ（好ましくは、１，６−フコシルトランスフェラーゼ、例えば、ＦＵＴ８タンパク質）を阻害する。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコースの新規合成経路において酵素の活性を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼまたは／またはＧＤＰ−フコースシンセターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコース輸送体（例えば、ＧＤＰ−フコース輸送体）を阻害することができる。
【０２１０】
一実施形態では、フコース類似体は、２−フルロフコース（２−ｆｌｕｒｏｆｕｃｏｓｅ）である。成長培地中におけるフコース類似体、及び他のフコース類似体の使用方法は、例えば、ＷＯ／２００９／１３５１８１（参照により本明細書に組み込まれる）に開示される。
【０２１１】
コアフコシル化を低下させるために細胞系を操作するための方法は、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン、及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含んだ。遺伝子ノックアウトでは、ＦＵＴ８をコードする遺伝子（アルファ１，６−フコシルトランスフェラーゼ酵素）が不活性化される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ−フコースからＮ−グリカンのＡｓｎ連結（Ｎ連結）ＧｌｃＮａｃの６位へのフコシル残基の移動を触媒する。ＦＵＴ８は、フコースをＡｓｎ２９７でのＮ−連結二分岐炭水化物へ添加する役割を果たす唯一の酵素であると報告される。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩまたはゴルジアルファマンノシダーゼＩＩのような酵素をコードする遺伝子を添加する。細胞におけるかかる酵素のレベルの増加は、フコシル化経路からモノクローナル抗体を転用し（コアフコシル化の減少を引き起こす）、バイセクトＮ−アセチルグルコサミンの量を増加させる。ＲＮＡｉは、典型的には、ＦＵＴ８遺伝子発現も標的化し、減少したｍＲＮＡ転写レベルを引き起こすか、または遺伝子発現を完全にノックアウトする。これらの方法のいずれかは、フコシル化されていない抗体、例えば、ヒト化、キメラ、またはベニヤＳＧ１６．１７抗体を産生することができるであろう細胞系を生成するために使用され得る。
【０２１２】
抗体上のフコシル化の量を決定するための多くの方法が、利用可能である。方法は、例えば、ＰＬＲＰ−Ｓクロマトグラフィーを介するＬＣ−ＭＳ及びエレクトロスプレーイオン化四重極ＴＯＦ  ＭＳを含む。
【０２１３】
コイルドコイルマスキング薬剤
本発明のある特定の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片のＣＤ４７への結合を防止するコイルドコイルマスキング薬剤（「コイルドコイルマスキングドメイン」または「マスキングドメイン」とも称される）と会合する。様々な実施形態では、マスキングドメインと会合した抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片は、「マスクされた抗体」と称される。
【０２１４】
コイルドコイルは、２個以上のアルファ螺旋が互いに巻きあってスーパーコイルを形成するタンパク質及びペプチドにおける構造モチーフである。コイルドコイルバンドルにおいて２個、３個または４個の螺旋があり得、螺旋は同じ（平行）または反対（逆平行）方向に続くことができる。
【０２１５】
コイルドコイルは、典型的には、疎水性パターン及び残基組成物が両親媒性アルファ螺旋の構造と相溶性である３個及び４個の残基の配列要素を含む。交互の３個及び４個の残基配列要素は、アミノ酸が「ａ」、「ｂ」、「ｃ」、「ｄ」、「ｅ」、「ｆ」、及び「ｇ」と表示される７アミノ酸反復（ｈｅｐｔａｄ  ｒｅｐｅａｔ）を構成する。位置「ａ」及び「ｄ」における残基は、一般に疎水性であり、別の鎖状の同様のパターンと連動するノブ及び孔のジグザグパターンを形成し、タイトフィッティング疎水性コアを形成する。残りの残基のうち、「ｂ」、「ｃ」及び「ｆ」が荷電する傾向にある。したがって、７アミノ酸反復の形成は、特定のアミノ酸上ではなく、特定の位置で要求された疎水性及び電荷の物理特性に依存する。ある特定の例示的な実施形態では、本発明のコイルドコイルは、２個のコイルドコイル形成ペプチドから形成される。
【０２１６】
コイルドコイル形成ペプチドにおける７アミノ酸反復についてのコンセンサス式の例は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる、第ＷＯ２０１１０３４６０５号によって提供される。
【０２１７】
ある特定の実施形態に従う例示的なコンセンサス式が、以下に示される。
式１：（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７）ｎ、式中、
Ｘ１は疎水性アミノ酸またはアスパラギンであり、
Ｘ２、Ｘ３及びＸ６は任意のアミノ酸であり、
Ｘ４は疎水性アミノ酸であり、
Ｘ５及びＸ７は各々荷電したアミノ酸残基であり、
ｎは正の整数である。
式２：（Ｘ１’、Ｘ２’、Ｘ３’、Ｘ４’、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７）ｎ、式中、
Ｘ１’は疎水性アミノ酸またはアスパラギンであり、
Ｘ２’、Ｘ’３及びＸ’６は各々任意のアミノ酸残基であり、
Ｘ４’は疎水性アミノ酸であり、
Ｘ５’及びＸ７’は各々荷電したアミノ酸残基であり、
式１及び２におけるｎは２以上であり、
ｎは正の整数である。
【０２１８】
式１及び式２のペプチドがコイルドコイルを形成するある特定の実施形態では、式１のＸ５は電荷において式２のＸ’７の反対であり、Ｘ７または式１は電荷において式２のＸ’５の反対である。コイルドコイル形成ペプチド内の７アミノ酸反復は、式１及び／または２に従う間は同じであり得るか、または互いに異なり得る。
【０２１９】
コイルドコイルは、ホモ二量体またはヘテロ二量体であり得る。ある特定の例示的な実施形態に従うコイルドコイルを形成することができるペプチドの例が、表８に示される。ペプチド配列はそのまま使用され得るか、またはそれらの構成要素は他の組み合わせにおいて使用され得る。例えば、Ｖｅｌコイルドコイル形成ペプチドは、他のリンカー配列で使用され得る。軽鎖について示された配列は重鎖でも使用され得、その逆も同様である。
【０２２０】
ある特定の例示的な実施形態では、２個の軽鎖及び重鎖の対を含む二価抗体が提供され、軽鎖及び／または重鎖のうちの１つ以上のＮ末端は、プロテアーゼ切断部位を含むリンカーを介してコイルドコイルを形成するよう会合するコイルドコイル形成ペプチドに連結され、標的への軽鎖及び重鎖の対の結合親和性を低下させる。任意選択で、ペプチドは、ジスルフィド架橋を形成せずに会合する。
【０２２１】
任意選択で、２個の軽鎖及び重鎖の対は同じである。任意選択で、２個の軽鎖及び重鎖の対は異なる。任意選択で、軽鎖は軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含み、重鎖は重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含む。任意選択で、重鎖領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。任意選択で、２個の軽鎖は第１の異種ペプチドに連結され、２個の重鎖は第２の異種ペプチドに連結される。
【０２２２】
任意選択で、プロテアーゼ切断部位は、ＭＭＰ１またはＭＭＰ２切断部位である。
【０２２３】
任意選択で、標的はＣＤ４７である。
【０２２４】
任意選択で、抗原結合は、マスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）の存在によって少なくとも１００倍低下する。任意選択で、抗原結合は、マスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）の存在によって２００〜１５００倍低下する。任意選択で、複合体の細胞傷害は、マスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）の存在によって少なくとも１００倍低下する。任意選択で、複合体の細胞傷害は、マスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）の存在によって２００〜１５００倍低下する。
【０２２５】
任意選択で、コイルドコイル形成ペプチドは、同じ配向で重鎖及び軽鎖のＮ末端に連結される。任意選択で、コイルドコイル形成ペプチドは、対向する配向で重鎖及び軽鎖のＮ末端に連結される。任意選択で、コイルドコイル形成ペプチドの複数のコピーは、直列に重鎖及び軽鎖のＮ末端に連結される。
【０２２６】
本発明のある特定の実施形態に従う例示的なコイルドコイル形成ペプチドリンカー及びプロテアーゼ部位は、図３４に示される。
【０２２７】
ある特定の例示的な実施形態では、配列番号５１（表８におけるＶｅｌ  ＬＣ）を含むか、または配列番号５１からなるペプチドは、プロテアーゼ切断部位と軽鎖のＮ末端に連結されるコイルドコイル形成ペプチドとを含むリンカーを提供するために使用されるか、配列配列番号５０（表８におけるＶｅｌ  ＨＣ）のペプチドは、プロテアーゼ切断部位と重鎖のＮ末端に連結されるコイルドコイル形成ペプチドとを含むリンカーを提供するために使用されるか、逆も同様である。これらの配列を含むペプチドは、本明細書に開示される抗体のいずれかに連結され得る。
【０２２８】
ある特定の例示的な実施形態では、コイルドコイルを形成する変異型ペプチドにおけるアミノ酸置換は、保存的置換である。他の例示的な実施形態では、反復する７アミノ酸パターンは変異型ペプチドにおいて保持され、コイルドコイル形成ペプチドは、式１及び／または式２におけるような、アミノ酸型によって該式の位置を占めるアミノ酸を分類する式に従う同種７アミノ酸セグメントに下位分割され得る。ある特定の実施形態では、７アミノ酸当たり１個または２個以下の置換があり、任意のかかる置換は保存的である。他の実施形態では、変異型は、本明細書に記載されるコイルドコイル形成ペプチドへの少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有することができ、コイルドコイルを形成することができる。
【０２２９】
コイルドコイルを形成する例示的なペプチドは、表８Ａ及び表８Ｂに示される。
表８Ａ．ある特定の例示的な実施形態に従うマスキングドメイン配列。切断配列には下線が引かれている。
【表８Ａ】
2021503927.tif 000013
表８Ｂ．ある特定の例示的な実施形態に従うマスキングドメイン配列。切断配列には下線が引かれている。ＥＡＣ残基が含まれる。
【表８Ｂ−１】
2021503927.tif 000014
【表８Ｂ−２】
2021503927.tif 000015
【０２３０】
リンカー及び切断部位
本発明のある特定の実施形態では、リンカーは、コイルドコイルマスキング薬剤を抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片に結合させるために使用される。リンカーは、ペプチドドメインを連結するためのリンカーとして従来使用されているアミノ酸の任意のセグメントであり得る。好適なリンカーは、１〜２０、２〜１５、３〜１２、４〜１０、５、６、７、８、９または１０のように、長さにおいて異なる。いくつかのかかるリンカーは、ポリグリシンのセグメントを含む。いくつかのかかるリンカーは、多くの場合、グリシン残基に隣接する位置で、１個以上のセリン残基を含む。他のリンカーは、１個以上のアラニン残基を含む。グリシン及びグリシン−セリンポリマーは、比較的非構造的であり、したがって成分間の中立的テザーとして働くことができ得る。グリシンは、アラニンよりもさらにファイ−プサイ空間にかなり多くアクセスし、より長い側鎖を有する残基ほど制限がない（例えば、Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。いくつかの例示的なリンカーは、形態Ｓ（Ｇ）ｎＳであり、ｎは５〜２０である。他の例示的なリンカーは、（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ［（ＧＳＧＧＳ）は配列番号５９である）及び（ＧＧＧＳ）ｎ、［（ＧＧＧＳ）は配列番号６０である）、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及び当該分野で既知の他の可撓性リンカーである。リンカーのいくつかの例は、Ｓｅｒ−（Ｇｌｙ）１０−Ｓｅｒ（配列番号６１）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号６２）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号６３）、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号６４）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号６５）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６６）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号６７）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６８）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号６９）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号７０）などである。
【０２３１】
プロテアーゼ部位は、好ましくは、細胞外で発現されるプロテアーゼにより認識及び切断されるため、それがマスクされた抗体に接触し、マスクされた抗体を放出し、それを受容体細胞外ドメインまたは可溶性リガンドのようなその標的に接触することを可能にする。いくつかのマトリックスメタロプロテイナーゼ部位（ＭＭＰ１−２８）は、好適である。ＭＭＰは、組織リモデリングにおいて役割を果たしており、形態形成、血管新生及び転移のような新生物プロセスに関与する。いくつかの例示的なプロテアーゼ部位は、ＰＬＧ−ＸＸＸ（配列番号７１）、ＭＭＰについて周知の内因性配列、ＰＬＧ−ＶＲ（配列番号７２）（ＷＯ２０１４１９３９７３）及びＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）（Ｔｕｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００１，１９，６６１−６６７）、ＬＳＧＲＳＤＮＹ（配列番号７４）（Ｃｙｔｏｍｙｘ）及びＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１２  Ｊａｎ  １；１８（１）：２３８−４７）である。ＭＭＰの追加的な例は、ＵＳ２０１３／０３０９２３０、ＷＯ２００９／０２５８４６、ＷＯ２０１０／０８１１７３、ＷＯ２０１４／１０７５９９、ＷＯ２０１５／０４８３２９、ＵＳ２０１６０１６０２６３、及びＲａｔｎｉｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１１１：Ｅ４１４８−Ｅ４１５５（２０１４）に提供される。
表９．プロテアーゼ切断配列。ＭＭＰ切断部位は＊で示されるが、ｕＰＡ／マトリプターゼ／レグマイン切断部位は＊＊で示される。
【表９】
2021503927.tif 000016
【０２３２】
コイルドコイルマスキング薬剤の抗ＣＤ４７抗体への連結
コイルドコイル形成ペプチドは、プロテアーゼ部位を含むリンカーを介して抗体可変領域のＮ末端に連結される。典型的な抗体は重鎖及び軽鎖可変領域を含み、どの場合もコイルドコイル形成ペプチドが各々のＮ末端に連結される。二価抗体は、同じであってもなくてもよい２つの結合部位を有する。正常な単一特異性抗体では、結合部位は同じであり、抗体は２個の同一の軽鎖及び重鎖の対を有する。この場合、各重鎖は同じコイルドコイル形成ペプチドに連結され、各軽鎖は同じコイルドコイル形成ペプチドに連結される（重鎖に連結されるペプチドと同じであってもなくてもよい）。ダイアボディでは、結合部位は、異なり、２個の異なる重鎖及び軽鎖の対から形成される。かかる場合、１つの結合部位の重鎖及び軽鎖可変領域は、他の結合部位の重鎖及び軽鎖可変領域のようなコイルドコイル形成ペプチドにそれぞれ連結される。典型的には、両方の重鎖可変領域は、両方の軽鎖可変領域のような同じ型のコイルドコイル形成ペプチドに連結される。
【０２３３】
コイルドコイル形成ペプチドは、プロテアーゼ部位を含むリンカーを介して抗体可変領域に連結され得る。典型的には、同じプロテアーゼ切断部位を有する同じリンカーは、コイルドコイルペプチドに抗体の各重鎖または軽鎖可変領域を連結するために使用される。プロテアーゼ切断部位は、リンカーの切断が、抗体が細胞表面抗原または可溶性リガンドのような、その意図された標的に結合することを可能にするその活性をマスキングするコイルドコイルから抗体を放出するように、がんのような、意図された標的組織または病理学において細胞外で提示されるプロテアーゼにより切断されやすいものであるべきである。
【０２３４】
可変領域と同様に、マスクされた抗体は、典型的には、軽鎖定常領域、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域のいずれかまたは全てを含むことができる定常領域の全てまたは部分を含む。他の抗体と同様に、１個以上のＣ末端残基は、タンパク質分解的に加工または誘導体化され得る。
【０２３５】
コイルドコイルは、ホモ二量体を形成する同じペプチドまたはヘテロ二量体を形成する２個の異なるペプチドから形成され得る。ホモ二量体の形成のために、軽鎖及び重鎖抗体は、同じコイルドコイル形成ペプチドに連結される。ヘテロ二量体の形成のために、軽鎖及び重鎖抗体は、異なるコイルドコイルペプチドに連結される。ペプチドを形成するコイルドコイルのいくつかの対について、逆配向も可能であるが、対の一方が重鎖に結合され、他方が抗体の軽鎖に結合されることが好ましい。
【０２３６】
各抗体鎖は、単一のコイルドコイル形成ペプチドまたは複数のかかるペプチドに直列に連結され得る（例えば、ペプチドの２個、３個、４個または５個のコピー）。後者の場合、直列連結におけるペプチドは、通常、同じである。直列連結が採用される場合にも、軽鎖及び重鎖は、通常、同じ数のペプチドに連結される。
【０２３７】
抗体鎖のコイルドコイル形成ペプチドへの結合は、かかる連結を有しないまたはかかる連結の切断後の同じ抗体に対して、抗体の結合親和性を少なくとも約１０倍、約５０倍、約１００倍、約２００倍、約５００倍、約１０００倍、または約１５００倍低下させることができる。いくつかのかかる抗体では、結合親和性は、約５０〜１５００倍、約１００〜１５００倍、約２００〜１５００倍、約５００〜１５００倍、約５０〜１０００倍、約１００〜１０００倍、約２００〜１０００倍、約５００〜１０００倍、約５０〜５００倍、または約１００〜５００倍低下する。抗体薬物複合体中における薬物への連結の結果としてのＡＤＣＣ、貪食、及びＣＤＣまたは細胞傷害のような、抗体のエフェクター機能は、同じ因子または範囲によって低下され得る。抗体をアンマスクするか、さもなければ抗体からマスクを除去するよう働くタンパク質分解切断の際に、復元された抗体は、典型的には、マスクされたことがなく、それ以外の点では同一の対照抗体と比較して、２倍、１．５倍以内であるか、または好ましくは不変である親和性または作用機能を有する。
【０２３８】
抗体薬物複合体
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ４７抗体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされ得る。特定のＡＤＣは、細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法薬剤）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物、または毒素（これらの部分はまとめて、治療薬剤と称される）を含むことができる。例えば、ＡＤＣは、化学療法薬剤のような細胞傷害性薬剤、または毒素（例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、もしくはジフテリア毒素のような細胞増殖阻害もしくは殺細胞薬剤）と複合体化され得る。細胞傷害性薬剤の有用なクラスの例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合剤、ＤＮＡアルキル化薬剤、及びチューブリン阻害剤を含む。例示的な細胞傷害性薬剤は、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ２、ＤＭ３、ＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン、例えばピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体）、ならびにビンカアルカロイドを含む。
【０２３９】
ＡＤＣは、プロドラッグ変換酵素に複合体化され得る。プロドラッグ変換酵素は、既知の方法を使用して、抗体に組換えによって融合されるか、または抗体に化学的に複合体化され得る。例示的なプロドラッグ変換酵素は、カルボキシペプチダーゼＧ２、ベータ−グルクロニダーゼ、ペニシリン−Ｖ−アミダーゼ、ペニシリン−Ｇ−アミダーゼ、β−ラクタマーゼ、β−グルコシダーゼ、ニトロレダクターゼ、及びカルボキシペプチダーゼＡである。
【０２４０】
治療薬をタンパク質に、及び特に抗体に複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１０  １４：１−９；Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４−１６９を参照されたい。）治療薬は、抗体から切断されない限り（例えば、加水分解、タンパク質分解、または切断剤によって）、その活性を低減する様式で複合体化され得る。いくつかの態様では、治療薬は、それがＣＤ４７発現癌細胞によって内在化される際に複合体が抗体から切断されるように（例えば、エンドソーム環境において、または例えば、ｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性により、リソソーム環境において、またはカベオラ環境において）、ＣＤ４７発現癌細胞の細胞内環境における切断に感受性であるが、細胞外環境に実質的に感受性ではない切断可能なリンカーによって抗体に結合される。いくつかの実施形態では、治療薬はまた、切断不可能なリンカーによって抗体に結合され得る。
【０２４１】
ある特定の例示的な実施形態では、ＡＤＣは、細胞傷害性薬剤または細胞増殖阻害薬剤と抗体との間にリンカー領域を含むことができる。上記のように、典型的には、リンカーは、リンカーの切断が細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内）において抗体から治療薬を放出するように、細胞内条件下で切断可能であり得る。リンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。切断剤は、カテプシンＢ及びＤ、ならびにプラスミンを含み得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３，１９９９を参照されたい）。最も典型的なものは、ＣＤ４７発現細胞に存在する酵素により切断可能であるペプチジルリンカーである。例えば、がん性組織において高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼカテプシンＢにより切断可能であるペプチジルリンカー（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＶａｌ−Ｃｉｔペプチドを含むリンカー）を使用することができる。
【０２４２】
切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性、すなわち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性であり得る。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解性である。例えば、リソソーム中で加水分解性である酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス−アコニックアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）が使用され得る。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号、同第５，８２４，８０５号、同第５，６２２，９２９号、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３，１９９９、Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１，１９８９を参照されたい。）かかるリンカーは、血液中のような中性ｐＨ条件下で比較的安定しているが、リソソームのおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満で不安定である。
【０２４３】
他のリンカーは還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。ジスルフィドリンカーは、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）及びＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢ、及びＳＭＰＴを使用して形成され得るものを含む。（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１，１９８７、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７を参照されたい。また米国特許第４，８８０，９３５号を参照されたい。）
【０２４４】
リンカーはまた、マロン酸塩リンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３，１９９５）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３：１２９９−１３０４，１９９５）、または３’−Ｎ−アミド類似体（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３：１３０５−１２，１９９５）でもあり得る。
【０２４５】
リンカーは、治療薬に直接結合され、抗体のタンパク質分解により放出されるマレイミド−アルキレンまたはマレイミド−アリールリンカーのような切断不可能なリンカーでもあり得る。
【０２４６】
典型的には、リンカーは、細胞外環境に実質的に感受性ではなく、ＡＤＣが細胞外環境（例えば、血漿中）に存在する際に、ＡＤＣの試料中のリンカーの約２０％以下、典型的には約１５％以下、より典型的には約１０％以下、さらにより典型的には約５％以下、約３％以下、または約１％以下が切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に実質的に感受性でないかは、例えば、（ａ）ＡＤＣ（「ＡＤＣ試料」）及び（ｂ）等モル量の複合体化されていない抗体または治療薬（「対照試料」）の両方を、所定の期間（例えば、２、４、８、１６、または２４時間）、個別に血漿と共にインキュベートし、次いで、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定して、ＡＤＣ試料中に存在する複合体化されていない抗体または治療薬を、対照試料中に存在するものと比較することによって決定され得る。
【０２４７】
リンカーはまた、細胞内在化を促進することができる。リンカーは、治療薬に複合体化される際に（すなわち、本明細書に記載されるＡＤＣまたはＡＤＣ誘導体のリンカー−治療薬部分の環境において）、細胞内在化を促進することができる。代替的には、リンカーは、治療薬及び抗体の両方に複合体化される際に（すなわち、本明細書に記載されるＡＤＣの環境において）、細胞内在化を促進することができる。
【０２４８】
抗体は、抗体のヘテロ原子を介してリンカーに複合体化され得る。これらのヘテロ原子は、その天然の状態で抗体上に存在し得るか、または抗体に導入され得る。いくつかの態様では、抗体は、リジン残基の窒素原子を介してリンカーに複合体化されるであろう。他の態様では、抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーに複合体化されるであろう。リンカー及び薬物リンカーを抗体に複合体化する方法は、当該技術分野において既知である。
【０２４９】
例示的な抗体−薬物複合体は、アウリスタチンベースの抗体−薬物複合体を含み、薬物構成要素がアウリスタチン薬物であることを意味する。アウリスタチンは、チューブリンに結合し、微小管動態ならびに核及び細胞分裂に干渉することが示されており、抗がん活性を有する。典型的には、アウリスタチンベースの抗体−薬物複合体は、アウリスタチン薬物と抗ＣＤ４７抗体との間にリンカーを含む。リンカーは、例えば、切断可能なリンカー（例えば、ペプチジルリンカー）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解により放出されるリンカー）であり得る。アウリスタチンは、ＭＭＡＦ及びＭＭＡＥを含む。例示的なアウリスタチンの合成及び構造は、米国公開第７，６５９，２４１号、同第７，４９８，２９８号、同第２００９−０１１１７５６号、同第２００９−００１８０８６号、及び同第７，９６８，６８７号に記載されており、それらの各々は、その全体が参照により、及び全ての目的のために、本明細書に組み込まれる。
【０２５０】
他の例示的な抗体−薬物複合体は、薬物構成要素がメイタンシノイド薬物であることを意味するメイタンシノイド抗体−薬物複合体と、薬物構成要素がベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体）であることを意味するベンゾジアゼピン抗体薬物複合体と、を含む。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ４７抗体は、異なる標的への結合特異性を有するＡＤＣと組み合わされ得る。抗ＣＤ４７抗体と組み合わされ得る例示的なＡＤＣは、ブレンツキシマブベドチン（抗ＣＤ３０ＡＤＣ）、エンフォルツマブベドチン（抗ネクチン−４  ＡＤＣ）、ラジラツズマブベドチン（抗ＬＩＶ−１  ＡＤＣ）、デニンツズマブマフォドチン（抗ＣＤ１９  ＡＤＣ）、グレンベツマブベドチン（抗ＧＰＮＭＢ  ＡＤＣ）、抗ＴＩＭ−１  ＡＤＣ、ポラツズマブベドチン（抗ＣＤ７９ｂ  ＡＤＣ）、抗ＭＵＣ１６  ＡＤＣ、デパツキシズマブマフォドチン、テリソツズマブベドチン、抗ＰＳＭＡ  ＡＤＣ、抗Ｃ４．４ａ  ＡＤＣ、抗ＢＣＭＡ  ＡＤＣ、抗ＡＸＬ  ＡＤＣ、チソツマブベドチン（抗組織因子  ＡＤＣ）を含む。
【０２５２】
抗体分子発現
本発明の核酸は、本発明の抗体またはマスクされた抗体をコードする内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞において発現され得る。かかる方法は、例えば、米国特許第５，５８０，７３４号、同第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号、及び同第５，７３３，７６１号に記載されるような、当該分野において周知である。また、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ、及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａを参照されたい。当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系に精通している。抗体、マスクされた抗体、それらの明記された部分または変異型の産生のために有用な細胞培養物の例示は、哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は、多くの場合、細胞の単層の形態であろうが、哺乳動物細胞懸濁液またはバイオリアクターもまた使用され得る。無傷のグリコシル化タンパク質を発現することができるいくつもの好適な宿主細胞株は、当該技術分野で開発されており、ＣＯＳ−１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）及びＢＳＣ−１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６）細胞株、ｈｅｐ  Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、ＨｅＬａ細胞などを含み、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから容易に入手可能である。酵母及び細菌宿主細胞も使用され得、当業者に周知である。本発明の核酸またはタンパク質の産生に有用な他の細胞は、既知であり、及び／または例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ及びハイブリドーマまたは他の既知のものまたは商業的供給源から入手可能である。
【０２５３】
発現ベクターは、以下、複製起点であるが限定されることのないような発現制御配列、プロモーター（例えば、後期または初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号、同第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロモーター、エンハンサー、及び／またはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシング部位、ポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０ラージＴ  ＡｇポリＡ付加部位）、及び転写ターミネーター配列のようなプロセシング情報部位）の１つ以上を含むことができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａを参照されたい。
【０２５４】
発現ベクターは、任意選択で、少なくとも１個の選択可能なマーカーを含む。かかるマーカーは、例えば、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、同第４，６５６，１３４号、同第４，９５６，２８８号、同第５，１４９，６３６号、同第５，１７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸、またはグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，７７０，３５９号、及び同第５，８２７，７３９号）、真核細胞培養物に対する耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉ及び他の細菌または原核生物において培養するためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含むが、これらに限定されない。適切な培養培地及び上に記載される宿主細胞のための条件は、当技術分野で既知である。好適なベクターは、当業者には容易に明らかであろう。宿主細胞へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染または他の既知の方法によってなされ得る。かかる方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記のような、当該分野に記載される。
【０２５５】
核酸インサートは、適切なプロモーターに動作可能に連結すべきである。発現構築物は、翻訳のための転写領域、リボソーム結合部位において転写開始、終止のための部位をさらに含有するであろう。構築物により発現される成熟転写物のコーディング部分は、先頭で開始する翻訳と、ＵＡＡ及びＵＡＧが哺乳類または真核細胞発現のために好ましい、翻訳されるｍＲＮＡの末端で適切に位置する終止コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を好ましくは含むであろう。
【０２５６】
核酸インサートは、任意選択で、コイルドコイル配列及び／またはＭＭＰ切断配列の、例えば、１個以上の重鎖及び／または軽鎖配列のＮ末端でのインフレームである。代替的には、コイルドコイル配列及び／またはＭＭＰ切断配列は、例えば、ジスルフィド結合などを介して、抗体またはその抗原結合断片に翻訳後付加され得る。
【０２５７】
真核宿主細胞が採用される際に、ポリアデニル化または転写ターミネーター配列は、典型的にはベクターに組み込まれる。ターミネーター配列の例は、ウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列も含まれ得る。スプライシング配列の例は、ＳＶ４０からのＶＰ１イントロンである（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１）。追加的に、宿主細胞において複製を制御するための遺伝子配列は、当技術分野で既知のように、ベクターに組み込まれ得る。
【０２５８】
抗体単離及び精製
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含むが、これらに限定されない周知の方法によって組換え細胞培養物から回収及び精製され得る。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）も精製のために使用され得る。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、またはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９７−２００１）を参照されたい。
【０２５９】
本明細書に記載される抗体及びマスクされた抗体は、精製産物、化学的合成手順の産物、ならびに、例えば、酵母、高等植物、昆虫及び哺乳動物細胞を含む、真核生物宿主から組換え技術により産生された産物を含むことができる。組換え産生手順において採用される宿主に依存して、本発明の抗体またはマスクされた抗体は、グリコシル化され得るか、または非グリコシル化され得、グリコシル化が好ましい。かかる方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，上記のような、多くの標準実験室マニュアルに記載される。
【０２６０】
核酸分子
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態のようなＲＮＡの形態、あるいはクローニングか、もしくは合成的に産生されるか、またはそれらの組み合わせによって得られるｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡを含むがこれらに限定されないＤＮＡの形態またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ＤＮＡは、３本鎖、２本鎖、もしくは１本鎖、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ＤＮＡまたはＲＮＡの少なくとも１個の鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られるコード鎖であり得るか、またはそれは、アンチセンス鎖としても称される非コード鎖であり得る。
【０２６１】
本発明の単離された核酸分子は、少なくとも１個の重鎖または軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３としての少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１個の明記された部分で、例えば、これらに限定されないが、任意選択で、１個以上のイントロンを有するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む核酸分子と、抗ＣＤ４７抗体もしくはマスクされた抗体に対するコード配列、または抗ＣＤ４７抗体もしくはマスクされた抗体可変領域を含む核酸分子と、上に記載されたものとは実質的に異なるヌクレオチド配列を含むが、汎用コードの縮重により、本明細書に記載される及び／または当該分野で既知の少なくとも１個の抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体をコードする核酸分子と、を含むことができる。汎用コードが当該分野で周知であると仮定した場合、本発明の抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体についてコードするかかる縮重した核酸変異型を生成することは、当業者にとって決まった手順である。
【０２６２】
本明細書に示されるように、抗ＣＤ４７抗体分子をコードする核酸を含む本発明の核酸分子は、それ自体で抗体断片のアミノ酸配列をコードするものと、抗体全体またはその部分に対するコード配列と、スプライシング及びポリアデニル化シグナルを含む（例えば、リボソーム結合及びｍＲＮＡの安定性）、転写、ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割を果たす転写され、翻訳されない配列のような、非コード５’及び３’配列を含むがこれらに限定されない追加的な、非コード配列とともに少なくとも１個のイントロンのような、マスキング薬剤（例えば、コイルドコイルマスキング薬剤）及び／またはＭＭＰ切断配列の一方または両方のような、または前述の追加的なコード配列の有無にかかわらず、少なくとも１個のシグナルリーダーもしくは融合ペプチドのコード配列のような、追加的な配列と同様の、抗体、断片または部分に対するコード配列、追加的な機能性を提供するもののような、追加的なアミノ酸についてコードする追加的なコード配列と、を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗体をコードする配列は、抗体断片または部分を含む融合した抗体の精製を促進するペプチドをコードする配列のようなマーカー配列に融合され得る。
【０２６３】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、（ａ）組換え法、（ｂ）合成技法、（ｃ）精製技法、またはそれらの組み合わせを使用して作製され得る。核酸は、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を簡便に含むことができる。例えば、１つ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含むマルチクローニング部位は、ポリヌクレオチドの単離を補助するために核酸に挿入され得る。また、翻訳可能な配列は、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を補助するために挿入され得る。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を生成するための簡便な手段を提供する。本発明の核酸−コード配列を除く−は、任意選択で、本発明のポリヌクレオチドのクローニング及び／または発現のためのベクター、アダプター、またはリンカーである。追加的な配列は、クローニング及び／または発現におけるそれらの機能を最適化するため、ポリヌクレオチドの単離を補助するため、またはポリヌクレオチドの細胞への導入を改善するためにかかるクローニング及び／または発現配列に付加され得る。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター及びリンカーの使用は、当該分野で周知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｓｕｐｒａ、またはＳａｍｂｒｏｏｋ，ｓｕｐｒａ）
【０２６４】
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはそれらの任意の組み合わせのような、本発明の単離された核酸組成物は、当業者に既知の任意の数のクローニング方法論を使用して、生物学的供給源から得られることができる。いくつかの実施形態では、ストリンジェントな条件下で本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブは、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリーにおける所望の配列を特定するために使用される。ＲＮＡの単離、ならびにｃＤＮＡ及びゲノムライブラリの構築は、当業者に周知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｓｕｐｒａ、またはＳａｍｂｒｏｏｋ，ｓｕｐｒａ。）
【０２６５】
ＩＩＩ．治療用途
本発明は、ＣＤ４７を発現する細胞、例えば、がんに関連する障害を治療する方法を提供する。細胞は、目的の障害に関連しない細胞に対して上昇したレベルのＣＤ４７を発現してもしなくてもよい。結果として、本発明は、本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体を使用して、対象、例えば、がんを有する対象を治療する方法を提供する。方法は、有効量の抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体または抗ＣＤ４７抗体もしくはマスクされた抗体を含む組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。
【０２６６】
本明細書で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本発明の方法によって治療される生物を指す。かかる生物は、好ましくは哺乳動物（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）を含み、より好ましくはヒトを含むがこれらに限定されない。本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療」及び「治療すること」は、任意の作用、例えば、状態、疾患、障害などの改善を生じる、軽減すること、低下させること、調節すること、緩和することまたは排除すること、あるいは、例えば、がん細胞数の低下、腫瘍サイズの低下、がん細胞浸潤の末梢器官への速度の低下、または腫瘍転移もしくは腫瘍成長の速度の低下のような、その症状を緩和することを含む。
【０２６７】
がんにおける正の治療的作用は、いくつもの方法において測定され得る（Ｗ．Ａ．Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．Ｎｕｌｌ．Ｍｅｄ．５０：１Ｓ−１０Ｓ（２００９）、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａを参照されたい）。いくつかの好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体への応答は、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を使用して評価される。いくつかの実施形態では、治療有効量によって達成される治療は、部分寛解（ＰＲ）、完全寛解（ＣＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、奏効（ＯＲ）または全生存期間（ＯＳ）のいずれかである。原発性または二次肝癌患者を治療するのに有効である本明細書に記載される療法の投薬レジメンは、患者の病状、年齢、及び体重、ならびに対象において抗ガン応答を誘発する療法の能力のような因子に従って異なり得る。本発明の治療方法、医薬及び使用の実施形態があらゆる対象において正の治療効果を達成するのに有効であることはあり得ないが、それは、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、カイ２乗検定、Ｍａｎｎ及びＷｈｉｔｎｅｙによるＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定ならびにＷｉｌｃｏｘｏｎ検定のような当該分野で既知の任意の統計学的検定によって決定されるような統計学的に有意な数の対象においてはそうなるはずである。
【０２６８】
本明細書で使用される「ＲＥＣＩＳＴ  １．１  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ」は、標的病変または非標的病変についてＥｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４５：２２８−２４７（２００９）に示された定義を意味し、適宜、応答が測定される文脈に基づく。
【０２６９】
「腫瘍」は、それが原発性もしくは二次肝癌と診断されたか、または原発性もしくは二次肝癌を有することが疑われた対象に適用される場合、任意のサイズの悪性新生物または潜在的悪性新生物または組織塊を指す。固形腫瘍は、嚢胞または液状領域を通常含有しない組織の異常な成長または塊である。異なる型の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の型について名付けられる。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫、及びリンパ腫である。白血病（血液のがん）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｒｍｓ）。非限定的な例示的な肉腫は、軟部組織肉腫及び骨肉腫を含む。
【０２７０】
「腫瘍負荷」とも呼ばれる「腫瘍量」は、身体全体に分布した腫瘍物質の総量を指す。腫瘍量は、リンパ節及び骨髄を含む全身のがん細胞の総数または腫瘍（複数可）の総サイズを指す。腫瘍量は、例えば、ノギスを使用して、例えば、対象からの除去時に腫瘍（複数可）の寸法を測定することにより、または体内において、画像化技法、例えば、超音波、骨スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）もしくは磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンを使用するような、当該分野で既知の様々な方法によって決定され得る。
【０２７１】
用語「腫瘍サイズ」は、腫瘍の長さ及び幅として測定され得る腫瘍の総サイズを指す。腫瘍サイズは、例えば、ノギスを使用して、例えば、対象からの除去時に腫瘍（複数可）の寸法を測定することにより、または体内において、画像化技法、例えば、骨スキャン、超音波、ＣＴもしくはＭＲＩスキャンを使用するような、当該分野で既知の様々な方法によって決定され得る。
【０２７２】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な化合物（例えば、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体）の量を指す。有効量は、１回以上の投与、適用、または投薬において投与され得、特定の製剤または投与経路に限定されることを意図されない。一般に、有効成分の治療有効量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。投与される投薬は、特定の薬剤の薬力学的特徴ならびにその様式及び投与経路、レシピエントの年齢、健康及び体重、治療される疾患または徴候の型及び程度、症状の性質及び程度、同時治療の種類、治療の頻度、ならびに所望の効果のような、既知の因子に依存して変動し得る。初期投薬は、所望の血液レベルまたは組織レベルを急速に達成するために、上位レベルを超えて増加され得る。代替的には、初期投薬は最適値より小さくなり得、毎日の投薬は治療の過程中に次第に増加され得る。ヒト投薬は、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇで実行するように設計された従来の第Ｉ相用量漸増研究において、最適化され得る。投与頻度は、投与経路、投薬量、抗体の血清半減期、及び治療される疾患のような因子に依存して、変動し得る。例示的な投薬頻度は、１日１回、１週間に１回及び２週間ごとに１回である。モノクローナル抗体ベースの薬物の製剤は、当業者の範囲内である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、凍結乾燥され、次いで、投与時に、緩衝生理食塩水中で再構成される。
【０２７３】
ある特定の例示的な実施形態では、本発明は、細胞、組織、器官、動物または患者におけるがんを治療するための方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ヒトにおける固形癌を治療するための方法を提供する。例示的ながんは、がんを有する細胞においてＣＤ４７発現を保有するものである（すなわち、「ＣＤ４７発現癌」）。がんの例は、固形腫瘍、軟部組織腫瘍、固形腫瘍を生じさせる造血器腫瘍、及び転移性病変を含むが、これらに限定されない。固形腫瘍を生じさせる可能性を有する造血器腫瘍の例は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、リヒター症候群（Ｒｉｃｈｔｅｒ’ｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（リヒター症候群（Ｒｉｃｈｔｅｒ’ｓ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ））などを含むが、これらに限定されない。固形腫瘍の例は、悪性腫瘍、例えば、肉腫（軟部組織肉腫及び骨肉腫を含む）、腺癌、ならびに頭頸部（咽頭を含む）、甲状腺、肺（小細胞または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳房、リンパ系、消化管（例えば、口腔、食道、胃、肝臓、膵臓、小腸、結腸及び直腸、肛門管）、性器及び泌尿生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱、卵巣、子宮、子宮頸部、子宮内膜、前立腺、精巣）、中枢神経系（例えば、神経またはグリア細胞、例えば、神経芽細胞腫または神経膠腫）、皮膚（例えば、黒色腫）などのような、様々な器官系の癌腫を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、固形腫瘍は、ＮＭＤＡ受容体陽性奇形腫である。他の実施形態では、がんは、乳癌、結腸癌、膵臓癌（例えば、膵神経内分泌腫瘍（ＰＮＥＴ）または膵管腺癌（ＰＤＡＣ））、胃癌、子宮癌、及び卵巣癌から選択される。
【０２７４】
ある特定の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、及び急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）のような白血病から選択されるが、これらに限定されない。
【０２７５】
一実施形態では、がんは、腹水に関連する固形腫瘍である。腹水は、多くの型のがんの症状であり、進行性肝疾患のような、幾つもの状態によっても引き起こされ得る。腹水の原因となる可能性のあるがんの型は、乳房、肺、大腸（結腸）、胃、膵臓、卵巣、子宮（子宮内膜）などの癌を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、腹水に関連した固形腫瘍は、乳癌、結腸癌、膵臓癌、胃癌、子宮癌、及び卵巣癌から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、胸水、例えば、肺癌と関連する。
【０２７６】
固形腫瘍を引き起こす追加の血液癌は、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（±絨毛リンパ球）、形質細胞骨髄腫／形質細胞腫、ＭＡＬＴ型の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（±単球様Ｂ細胞）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔ成人Ｔ細胞リンパ腫（ＨＴＬＶ  １陽性）、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾γ−δＴ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、菌状息肉症／セザリー症候群、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、皮膚原発型、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ヌル細胞、全身原発型、末梢Ｔ細胞リンパ腫、他に特徴付けられない型、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、真性多血症または骨髄線維症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、辺縁帯リンパ腫、ＣＮＳリンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫などを含むが、これらに限定されない。
【０２７７】
特定の実施形態では、がんは、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び／または乳癌である。
【０２７８】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体及びマスクされた抗体は、がんに関連する障害、例えば、がん誘導性脳症を治療するために使用され得る。
【０２７９】
本発明の方法及び組成物は、他の治療薬及び／またはモダリティと組み合わされて使用され得る。本明細書で使用される「組み合わせて」投与されるという用語は、患者に対する治療の効果がある時点で重複するように、２つ（以上）の異なる治療が障害に伴う対象の苦痛の経過中に対象に送達されることを意味するように理解される。ある特定の実施形態では、第２のものの送達が始まる際に、投与の観点で重複があるように、１つの治療の送達はまだ生じている。このことは、本明細書で「同時」または「同時送達」と称される場合がある。他の実施形態では、他の治療の送達が始まる前に、一方の治療の送達が終了する。いずれの場合のいくつかの実施形態では、治療は、併用投与のためより効果的である。例えば、第２の治療はより効果的であり、例えば、同等の効果が少量の第２の治療と共に見られるか、または第２の治療は第２の治療が第１の治療がなく投与される場合に見られるであろうよりも大きな程度症状を低下させるか、または類似の状況が第１の治療と共に見られる。いくつかの実施形態では、送達は、症状または障害に関連する他のパラメータの低下が一方の治療が他方がなく送達される際に観察されるであろうものよりも大きいようになされる。２つの治療の効果は、部分的に相加的、全体的に相加的、または相加的よりも大きく（すなわち、相乗的応答）であり得る。送達は、送達された第１の治療の効果が第２のものが送達される際にまだ検出可能であるようになされ得る。
【０２８０】
一実施形態では、本発明の方法は、本明細書に記載されるような抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体、例えば、組成物または調製物を、１つ以上の追加的な療法、例えば、手術、放射線療法、または別の治療用調製物の投与と組み合わせて対象に投与することを含む。一実施形態では、追加的な療法は、化学療法、例えば、細胞傷害性薬剤を含むことができる。一実施形態では、追加的な療法は、標的療法、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、またはプロテアーゼ阻害剤を含むことができる。一実施形態では、追加的な療法は、抗炎症、抗血管新生、抗線維、または抗増殖化合物、例えば、ステロイド、免疫チェックポイント分子の阻害剤としての生物学的免疫調節、モノクローナル抗体、抗体断片、アプタマー、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、融合タンパク質、サイトカイン、サイトカイン受容体、気管支拡張薬、スタチン、抗炎症薬剤（例えば、メトトレキサート）、またはＮＳＡＩＤを含むことができる。別の実施形態では、追加的な療法は、異なるクラスの治療法を組み合わせることを含むことができた。抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体調製物及び追加的な療法は、同時にまたは順次投与され得る。
【０２８１】
本明細書で使用される「免疫チェックポイント分子」は、シグナルを大きくする（刺激性分子）またはシグナルを小さくする（阻害性分子）のいずれかである、免疫系における分子を指す。多くのがんは、Ｔ細胞シグナル伝達を阻害することによって免疫系を回避する。
【０２８２】
例示的な免疫チェックポイント分子は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、ＴＧＦＲ、アデノシン２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１とも呼ばれる）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、２Ｂ４、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）などを含むが、これらに限定されない。
【０２８３】
本明細書で使用される「免疫チェックポイント阻害剤」は、１個以上の阻害性チェックポイント分子を阻害及び／または遮断する分子（例えば、小分子、モノクローナル抗体、抗体断片など）を指す。
【０２８４】
例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、以下のモノクローナル抗体、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ，Ｍｅｒｃｋ）及びニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）のようなＰＤ−１阻害剤、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ，Ｐｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ，ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）のようなＰＤ−Ｌ１阻害剤、及びイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ，Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）のようなＣＴＬＡ−１阻害剤を含むが、これらに限定されない。
【０２８５】
例示的な細胞傷害性薬剤は、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、タンパク質合成及び分解阻害剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、白金製剤、核酸合成の阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤、例えば、ボリノスタット（ＳＡＨＡ，ＭＫ０６８３））、エンチノスタット（ＭＳ−２７５）、パノビノスタット（ＬＢＨ５８９）、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ロミデプシン（ＦＫ２２８、デプシペプチド））、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、エチレンイミン、アルキルスルホネート、トリアゼン、葉酸類似体、ヌクレオシド類似体、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、エポチロン、挿入剤、シグナル伝達経路を妨害できる薬剤、アポトーシスと放射線を促進する薬剤、または表面タンパク質に結合して毒性薬剤を送達する抗体分子複合体を含む。一実施形態では、本明細書に記載される調製物と共に投与され得る細胞傷害性薬剤は、白金ベースの薬剤（シスプラチンのような）、シクロホスファミド、ダカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ヒドロキシ、トポテカン、イリノテカン、アザシチジン、ボリノスタット、イクサベピロン、ボルテゾミブ、タキサン（例えば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、コルヒチン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシンもしくはエピルビシン）ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、リシン、またはメイタンシノイドである。
【０２８６】
本発明の方法及び組成物は、ＣＤ４７陽性癌を有する対象の治療に使用され得る。一実施形態では、ＣＤ４７陽性癌は、１個以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を発現する。例示的なＭＭＰは、ＭＭＰ１〜ＭＭＰ２８を含むが、これらに限定されない。特に例示的なＭＭＰは、ＭＭＰ２及びＭＭＰ９を含む。一実施形態では、ＣＤ４７陽性癌は、浸潤マクロファージが存在する腫瘍である。
【０２８７】
本発明の方法及び組成物は、１個以上のＭＭＰを発現し浸潤マクロファージを含有するＣＤ４７陽性癌を有する対象の治療に使用され得る。
【０２８８】
ＣＤ４７陽性癌の存在、ＭＭＰ発現、及び腫瘍浸潤マクロファージの存在を決定する方法は当該分野で既知である。
【０２８９】
対象におけるＣＤ４７陽性癌の評価は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、またはＲＮＡ配列決定法を含む従来の方法によって決定され得る。ＩＨＣ、ウェスタンブロット、及びフローサイトメトリーは、本明細書に開示される抗ＣＤ４７抗体と同様に、当該分野で既知の任意の抗ＣＤ４７抗体を用いて分析され得る。
【０２９０】
組織におけるマクロファージの浸潤の評価は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、またはＲＮＡ配列決定法を含む従来の方法によるＦ４／８０マウスマクロファージまたはＣＤ１６３、ＣＤ６８、またはＣＤ１１ｂを含む、マクロファージの表面マーカーを監視することによって行われ得る。
【０２９１】
組織におけるプロテアーゼの評価は、タンパク質分解活性を検出することができるものと同様に、プロテアーゼ活性を監視するものとの両方を含む、様々な技法を使用して監視され得る。プロテアーゼの不活性及び活性形態の両方を含むことができる、組織におけるプロテアーゼの存在を検出することができる従来の方法は、ＩＨＣ、ＲＮＡ配列決定、ウェスタンブロット、またはＥＬＩＳＡベースの方法を含む。追加的な技法は、組織におけるプロテアーゼ活性を検出するために使用され得、ザイモグラフィー、蛍光顕微鏡によるインサイツザイモグラフィー、または蛍光タンパク質分解基質の使用を含む。加えて、蛍光タンパク質分解基質の使用は、特定のプロテアーゼの免疫捕捉と組み合わされ得る。追加的に、プロテアーゼの活性部位に対して指向された抗体は、ＩＨＣ、蛍光顕微鏡、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、またはフローサイトメトリーを含む様々な技法によって使用され得る（Ｓｅｌａ−Ｐａｓｓｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１８：１４３−１４７．２０１２、ＬｅＢｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７５：１２２５−１２３５．２０１５、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４２：８９２−９００．２００３、Ｓｈｉｒｙａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．２：ｅ８０．２０１３を参照されたい。）
【０２９２】
説明を通して、組成物及びキットが特定の構成要素を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と説明されるか、またはプロセス及び方法が特定のステップを有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、追加的に、列記される構成要素から本質的になるか、もしくはそれからなる本発明の組成物及びキットが存在することと、列記される加工及び方法ステップから本質的になるか、もしくはそれらからなる本発明に従うプロセス及び方法が存在することと、が企図される。
【０２９３】
ＩＶ．薬学的組成物及び製剤
治療的使用のために、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体は、好ましくは、薬学的に許容される担体と組み合わされる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触する使用に好適であり、妥当な利益／リスク比に見合う緩衝液、担体、及び賦形剤を意味する。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合し、かつレシピエントに有害でないという意味において「許容可能」であるべきである。薬学的に許容される担体は、医薬品の投与と適合する、緩衝液、溶媒、分散媒、コーティング、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質のためのこのような培体及び薬剤の使用は、当該分野において既知である。
【０２９４】
したがって、本発明の抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体組成物は、これらに限定されないが、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝液、塩、親油性溶媒、保存剤、アジュバントなどのような任意の好適な賦形剤のうちの少なくとも１つを含むことができる。薬学的に許容される賦形剤が、好ましい。かかる滅菌溶液を調整する非限定的な例及び方法は、これらに限定されないが、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）１９９０に記載されるもののように、当該分野で周知である。当該分野で周知の、または本明細書に記載されるような投与の様式、抗体分子の可溶性及び／安定性、変異型組成物の断片に好適な、薬学的に許容される担体は、決まった手順で選択され得る。
【０２９５】
本組成物において有用な薬学的賦形剤及び添加剤は、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、炭水化物（例えば、単糖、ジ−、トリ−、テトラ−、及びオリゴ糖を含む糖、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などのような誘導体化糖、ならびに多糖または糖ポリマー）を含むが、これらに限定されず、単一または組み合わされて存在し、単独または組み合わされて１〜９９．９９％重量または体積を含み得る。例示的なタンパク質賦形剤は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどのような血清アルブミンを含む。緩衝能力においても機能することができる代表的なアミノ酸／抗体分子構成要素は、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどを含む。
【０２９６】
本発明における使用に好適な炭水化物賦形剤は、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどのような単糖、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどのような二糖、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどのような多糖及び、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのようなアルジトールを含む。本発明における使用のために好ましい炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、及びラフィノースである。
【０２９７】
抗体分子組成物は緩衝液またはｐＨ調整剤を含むこともでき、典型的には、緩衝液は有機酸または塩基から調製される塩である。代表的な緩衝液は、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、またはフタル酸の塩のような有機酸塩、トリス、塩酸トロメタミン、またはリン酸緩衝液を含む。
【０２９８】
追加的に、本発明の抗体分子組成物は、ポリビニルピロリドンのようなポリマー賦形剤／添加剤、フィコール（ポリマー糖）、デキストレート（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのような、シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香味剤、抗菌剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ２０」及びＴＷＥＥＮ（登録商標）  ８０」のようなポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、ならびにキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）を含むことができる。
【０２９９】
本発明に従う抗体分子組成物における使用に好適なこれらの及び追加的な既知の薬学的賦形剤及び／添加剤は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）において、及び“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，”５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９９８）において列挙されるように、当該分野で既知である。好ましい担体または賦形剤物質は、炭水化物（例えば、糖類及びアルジトール）ならびに緩衝液（例えば、クエン酸塩）またはポリマー剤である。
【０３００】
本発明は、薬学的に許容される製剤において少なくとも１個の抗ＣＤ４７抗体分子を含む、安定的な組成物を提供する。保存された製剤は、少なくとも１つの既知の保存剤を含有する。任意選択で、少なくとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、または水性希釈剤におけるそれらの混合物から選択される。任意の好適な濃度または混合物は、０．００１〜５％、または、これらに限定されないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中の任意の範囲もしくは値のような、またはその中の任意の範囲もしくは値のような、当該分野で既知のように使用され得る。非限定的な例は、保存剤なし、０．１〜２％のｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、または１．０％）、０．１〜３％のベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、または２．５％）、０．００１〜０．５％のチメロサール（例えば、０．００５または０．０１％）、０．００１〜２．０％のフェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、または１．０％）、０．０００５〜１．０％のアルキルパラベン（類）（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、または１．０％）などを含む。
【０３０１】
本明細書に開示される抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体を含有する薬学的組成物は、投薬単位形態で提示され得、任意の好適な方法によって調製され得る。薬学的組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化されるべきである。投与経路の例は、静脈内（ＩＶ）、皮内、吸入、経皮、局所、経粘膜、及び直腸投与である。モノクローナル抗体についての好ましい投与経路は、ＩＶ注入である。有用な製剤は、薬学分野で既知の方法によって調製され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）ｓｕｐｒａを参照されたい。非経口投与に好適な製剤構成要素は、注入用水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤、アスコルビン酸及び亜硫酸水素ナトリウムのような酸化防止剤、ＥＤＴＡのようなキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩のような緩衝液、ならびに塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性の調節のための薬剤を含む。
【０３０２】
静脈内投与のために、好適な担体は、生理学的生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。担体は、製造及び保管の条件下で安定的であるべきで、微生物に対して保護されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）を含有する、溶媒または分散媒、ならびにその好適な混合物であり得る。
【０３０３】
薬学的製剤は、好ましくは滅菌である。滅菌は、任意の好適な方法、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって達成され得る。組成物が凍結乾燥される場合、フィルタ滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前または後に行われ得る。
【０３０４】
本発明の組成物は、様々な形態にあり得る。これらは、例えば、液体溶液（例えば、注射可能及び注入可能な溶液）、分散または懸濁液、ならびにリポソームのような、液体、半固形及び固形剤形を含む。好ましい形態は、投与及び治療用途の意図される様式に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態にある。好ましい投与の様式は非経口（例えば、静脈内、皮下、眼内、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態では、調製物は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、調製物は、筋肉内または皮下注射によって投与される。
【０３０５】
本明細書で使用される語句「非経口投与」及び「非経口で投与された」は、通常、注射による、経腸及び局所投与以外の投与の様式を意味し、限定することなく、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、髄腔内、包内、眼窩内、硝子体内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、吸入された、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入を含む。
【０３０６】
本発明は、包装材料と、任意選択で、水性希釈剤中にある、処方された緩衝液及び／または保存剤を有する少なくとも１個の抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体の溶液を含む少なくとも１個のバイアルと、を含むキットを提供する。水性希釈剤は、任意選択で、薬学的に許容される保存剤をさらに含む。保存剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、またはそれらの混合物から選択されるものを含む。製剤において使用される保存剤の濃度は、抗微生物作用を得るのに十分な濃度である。かかる濃度は、選択された保存剤に依存し、当業者により容易に決定される。
【０３０７】
他の賦形剤、例えば等張剤、緩衝液、酸化防止剤、保存剤エンハンサーは、任意選択で、かつ好ましくは、希釈剤に添加され得る。グリセリンのような等張剤は、一般に既知の濃度で使用される。生理学的に許容される緩衝液は、好ましくは、改善されたｐＨ制御を提供するために添加される。製剤は、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ１０．０、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ９．０、または約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０のような、広い範囲のｐＨを網羅することができる。
【０３０８】
ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ＴＷＥＥＮ（登録商標）  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、及びＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような薬学的に許容される可溶化剤あるいはポリソルベート２０もしくは８０またはポロキサマー１８４もしくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ｐｏｌｙｌｓ、他のブロックコポリマーのような非イオン性界面活性剤、ＥＤＴＡ及びＥＧＴＡのようなキレート剤は、任意選択で、凝集を低下させるために製剤または組成物に添加され得る。これらの添加剤は、ポンプまたはプラスチック容器が製剤を投与するために使用される場合に、特に有用である。薬学的に許容される界面活性剤の存在は、タンパク質の凝集する傾向を和らげる。
【０３０９】
様々な送達系は、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体を対象に投与するために使用され得る。ある特定の例示的な実施形態では、抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体の投与は、静脈内注入による。いくつかの実施形態では、投与は、２時間の静脈内注入による。
【０３１０】
上に記載される製剤のいずれかは、液体または凍結形態で保存され得、任意選択で、保存プロセスに供され得る。いくつかの実施形態では、上に記載される製剤は凍結乾燥され、すなわち、それらは凍結乾燥に供される。いくつかの実施形態では、上に記載される製剤は、保存プロセス、例えば、凍結乾燥に供され、その後、好適な液体、例えば、水で再構成される。凍結乾燥されること（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）とは、組成物が真空下で凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）されていることを意味する。凍結乾燥は、典型的には、溶質が溶媒（複数可）から分離されるように、特定の製剤を凍結することによって達成される。次いで、溶媒は、昇華（すなわち、一次乾燥）により、そして次に脱着（すなわち、二次乾燥）によって除去される。
【０３１１】
本発明の製剤は、本明細書に記載される方法を用いて、または疾患を治療するための他の方法を用いて使用され得る。抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体製剤は、対象への投与前にさらに希釈され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、生理食塩水で希釈され、対象への投与前に、ＩＶバッグまたはシリンジ内に保持される。したがって、いくつかの実施形態では、対象におけるＣＤ４７発現癌を治療するための方法は、それを必要とする対象に抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体を含む薬学的組成物の毎週の用量を投与することを含むであろう。
【０３１２】
本明細書に記載される方法の他の好適な改変及び適応は、本明細書に開示される実施形態の範囲から逸脱することなく好適な均等物を使用してなされ得ることは、当業者には容易に明らかであろう。ここで詳細にある特定の実施形態を説明したが、同じことは、例示の目的のみのために含まれ限定することが意図されない以下の実施例への参照によってより明確に理解されるであろう。本明細書に記載される全ての特許、特許出願、及び参照文献は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０３１３】
実施例１：抗体生成
マウスＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体のヒト化変異型を生成した。ＤＮＡ及びベクター生成について、非テンプレートＰＣＲを使用して抗体可変ドメイン配列を合成した。要するに、仮想遺伝子配列は、ＡＴＵＭの商標のソフトウェアスイートを使用してオリゴヌクレオチド配列に変換される。オリゴヌクレオチドは、合成され、プールされ、ＰＣＲを使用して増幅される。ＰＣＲ反応からの完全長アンプリコンは、ＳａｐＩ部位を使用してベクターにクローン化され、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換され、特有のコロニーは単離される。コロニーは液体培地中で一晩成長し、プラスミドＤＮＡは単離され、精製され（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ  Ｍｉｄｉ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔ）、配列はＳａｎｇｅｒ配列決定を使用して検証される。軽鎖可変ドメインはＫａｐｐａ−Ｈｓベクターにクローン化され、重鎖ドメインはＩｇＧ１．０１−Ｆｃ−Ｈｓベクターにクローン化される。抗体発現について、１：１比率の抗体重鎖及び軽鎖ベクターは、ＰｏｌｙＰｌｕｓ  ＦｅｃｔｏＰｒｏトランスフェクション試薬を含むＬｉｆｅＴｅｃｈ  Ｏｐｔｉｍｅｍ培地中に希釈される。次いで、ＤＮＡ／トランスフェクション試薬は、ＬｉｆｅＴｅｃｈ  ＥｘｐｉＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ培地においてＡｔｕｍ特異的ＨＥＫ２９３細胞に添加され、５日間培養される。培養物は、遠心分離及び０．２ｕｍ濾過により収集される。抗体精製について、ＧＥ  ｍＡｂ  ｓｅｌｅｃｔ  ｓｕｒｅを、ＩｇＧの精製に使用する。溶出前に、樹脂は、ＰＢＳ中の１０ＣＶの１ＭのＮａＣｌ、及びＰＢＳの１０ＣＶで洗浄される。ＩｇＧは、２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．２緩衝液を使用して溶出される。試料は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｚｅｂａカラムを使用してＰＢＳに緩衝液交換される。次いで、試料は、試料が特徴付けのために採取される前にフィルタ滅菌される。特徴付けは、Ａ２８０  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎと、ｐ２００  Ｔａｐｅｓｃｒｅｅｎｓを有するＡｇｉｌｅｎｔ  Ｐ２００  Ｔａｐｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ２２００を使用する還元及び非還元電気泳動と、を含む。
【０３１４】
親Ｂ６Ｈ１２抗体の特異的変異は、以下に示されるように表１０〜１３に記載される。
表１０．ｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型におけるヒト化変異
【表１０】
2021503927.tif 000017
表１１．ｈＢ６Ｈ１２カッパ軽鎖変異型におけるヒト化変異
【表１１−１】
2021503927.tif 000018
【表１１−２】
2021503927.tif 000019
表１２．ｈＢ６Ｈ１２重鎖変異型における特異的マウスフレームワーク変異
【表１２】
2021503927.tif 000020
＊マウス残基。
表１３．ｈＢ６Ｈ１２カッパ軽鎖変異型における特異的マウスフレームワーク変異
【表１３】
2021503927.tif 000021
＊マウス残基。
【０３１５】
実施例２：ヒト化抗ＣＤ４７抗体
抗体産生
抗体を、Ｅｘｐｉ  ＨＥＫもしくはＥｘｐｉ  ＣＨＯ細胞の一過性トランスフェクションまたはＣＨＯ−ＤＧ４４の安定的トランスフェクションを介して発現させ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する追加的な調製用のサイズ排除クロマトグラフィー精製を、９０％未満単量体であったマスクされた抗体について実行した。
【０３１６】
フローサイトメトリー及びＥＬＩＳＡによる飽和結合
変化する重鎖及び軽鎖配列を有するヒト化抗ＣＤ４７  Ｂ６Ｈ１２抗体を、飽和ＥＬＩＳＡ、または細胞ＦＡＣＳ分析のいずれかによってヒトＣＤ４７への結合親和性について評価し、ＥＣ５０またはＫｄを計算した。重鎖１配列（ｈｖＨ１）（ビンＡ、抗体１〜４）または重鎖５配列（ｈｖＨ５）（ビンＢ、抗体１７〜２０）で構成される抗体のみが、ＣＤ４７に結合することができた。これらのビンからの抗体は、マウス抗体ｍＢ６Ｈ１２、及び、代替的には、ヒト化抗体Ａｂ４７のような同様のＫｄ（図２Ａ）及びＥＣ５０（図２Ｂ）親和性で結合した。
【０３１７】
細胞ＦＡＣＳ分析について、Ｌ４５０ｃｙ癌リンパ腫細胞を、ＣＤ４７への結合を保持することが見出された高濃度のヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体を用いて処理し、Ｋｄ値を決定した。交互のヒト化フレームワークは、マウス親及び交互のヒト化抗体Ａｂ４７と同様の結合Ｋｄを保持した（図２Ａ）。
【０３１８】
細胞結合に加えて、ＣＤ４７に対するヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体の親和性の評価を、ＥＬＩＳＡによって決定した。ヒトＣＤ４７で被覆されたプレートを、ＣＤ４７への結合を保持することが見出された高濃度のヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体を用いて処理し、ＥＣ５０値を決定した。交互のヒト化フレームワークは、マウス親及び交互のヒト化抗体Ａｂ４７と同様の結合Ｋｄを保持した（図２Ｂ）。
【０３１９】
ＥＬＩＳＡアッセイにおける結合ＥＣ５０を評価することに加えて、結合動態も評価した。予想外に、ビンＡにおける抗体（ｈＢ６Ｈ１２．３及びｈＢ６Ｈ１２．４）は、親抗体、ｍＢ６Ｈ１２、ビンＢにおける抗体（ｈＢ６ｈ１２．１９及びｈＢ６Ｈ１２．２０）、または交互のヒト化抗体、Ａｂ４７よりも顕著に高い最大結合（ＢＭＡＸ）を表示した（図２Ｃ）。
【０３２０】
フローサイトメトリーによる飽和結合
２×１０５の示された細胞（ＳＷ７８０またはヒト赤血球）を、染色緩衝液（ＰＢＳ、５％ＦＢＳ、０．２％ＮａＮ３）中で示された抗体の連続希釈と組み合わせた。試料を、氷上で１時間インキュベートし、氷冷した染色緩衝液で２回洗浄した。細胞を、氷上で１時間、抗ヒトＩｇＧ−ＡＦ６４７（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、染色緩衝液中で１：２００希釈）と共に再懸濁させた。細胞を、氷冷した染色緩衝液で２回洗浄し、染色緩衝液に再懸濁させた。標識された細胞を、非生存細胞を除外するためにゲートされたＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター上でのフローサイトメトリーによって検討し、ＦｌｏｗＪｏ  １０ソフトウェアを使用して分析した。Ｋｄを、非線形回帰を使用するＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を使用して計算した。
【０３２１】
ＥＬＩＳＡによる飽和結合
可溶性組換えヒトＣＤ４７−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、５０ｍＭの炭酸塩緩衝液、ｐＨ９．６中で適当な濃度に希釈した。９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｂ  ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに、１００μＬの可溶性抗原を添加した。プレートを、密封し、一晩４℃で保管した。次いで、プレートを、ＰＢＳ−Ｔ、緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０）を用いて３〜５回洗浄した。ウェルを、３００μＬ／ウェルのＢＳＡを含むＰＢＳ−Ｔ緩衝液を使用して室温で１時間ブロックし、次いで、ＰＢＳ−Ｔを用いて３〜５回洗浄した。抗体の希釈液を、ブロッキング緩衝液中で調製し、１００μＬの体積で各ウェルに添加した。抗体を、室温で１時間インキュベートし、次いで、ＰＢＳ−Ｔを用いて３〜５回洗浄した。次いで、ＨＲＰ複合体化二次抗体（抗ヒトＦｃまたは抗ヒトカッパ軽鎖のいずれか）を、添加して、室温で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて３〜５回洗浄した。ＥＬＩＳＡを、１００μＬのＴＭＢ溶液を添加し、室温で３〜１５分インキュベートすることにより展開した。反応を停止させるために、１００μＬの１Ｎ硫酸を、各ウェルに添加した。４５０ｎｍでの吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘ  １９０プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して決定し、データをＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を使用してプロットした。
【０３２２】
Ｂ６Ｈ１２媒介性貪食
ヒトの赤血球のヒト貪食及び赤血球凝集を含む、ヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体の機能的特徴付けを、実施した。蛍光赤色ＰＫＨ染料で標識されたヒト赤血球を、ビンＡ及びＢからの高濃度のヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体を用いて３０分間オプソニン化した。ＲＢＣを洗浄し、１０：１比率で単球マクロファージに２時間与えた。試料を、取り込まれていない赤血球の溶解及び除去を可能にするＡＣＫ低張溶解緩衝液を用いて３回洗浄した。試料をフローサイトメトリーに供し、貪食を評価した。ビンＡ及びＢからの抗体は、ヒト赤血球の貪食を媒介する同様の能力を呈した。驚くべきことに、ビンＡからの抗体ｈＢ６Ｈ１２．３は、マウス親抗体より良く、代替のヒト化抗体Ａｂ４７と同等の貪食を媒介した。
【０３２３】
抗体ビンＡ及びＢからのヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体は、同様に、ＣＤ４７陽性ヒト赤血球の貪食を媒介する。ｈＢ６Ｈ１２．３は、マウスｍＢ６Ｈ１２と比較して１μｇ／ｍｌで優れた貪食促進活性を刺激し、Ａｂ４７と比較して同様の貪食促進活性を刺激した（図３Ａ及び図３Ｂ）。
【０３２４】
Ｂ６Ｈ１２媒介性赤血球凝集
Ｂ６Ｈ１２の特筆すべき特徴は、ヒト赤血球の赤血球凝集を促進する能力である。赤血球凝集は、ＣＤ４７抗体で処理される際に、２個のＣＤ４７発現細胞が凝集または凝塊することを可能にする同型相互作用の例である。凝集格子は、画像分析により、またはフローサイトメトリーにより監視されるような凝集のレベルにより視覚的に定量化され得る懸濁分布においてＲＢＣを維持する。ヒト赤血球をＰＢＳ中に懸濁し、丸底９６ウェルプレートに播種し、、高濃度の抗ＣＤ４７抗体に曝露した。３７℃で３０分後、赤血球凝集を、ＲＢＣ密度の変化により、細胞凝集の増加としてフローサイトメトリーにより光学的に監視した。特にｈＢ６Ｈ１２．３においてビンＡ内の抗体は、親抗体ｍＢ６Ｈ１２及び代替のヒト化抗体Ａｂ４７と比較して、赤血球凝集の低下を示した（図４Ａ）。
【０３２５】
血球凝集を評価するために、標準画像捕捉を実行し、分散した非沈降ＲＢＣの形成を評価した。加えて、プレートをＧＥ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ分析装置を使用して走査し、ウェル内の明らかな斑点の直径を評価した。臨床モニタリングされやすいアッセイにおいて赤血球凝集を評価するために、フローサイトメトリーを使用し、凝集を監視するための方法である、見かけのＲＢＣのＳＳＣ／ＦＳＣの全体的な増加として赤血球凝集を評価した。この方法を、ヒト化抗ＣＤ４７抗体ｈＢ６Ｈ１２．３及びＡｂ４７によって誘導される赤血球凝集を評価するために使用した（図４Ａ及び図４Ｂ）。
【０３２６】
Ｆｃγ受容体のＢ６Ｈ１２媒介性活性化
インビボでは、単球、マクロファージ、好中球及び樹状細胞は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩａを介して、ＡＤＣＰを媒介することができる。３個の受容体全てがＡＤＣＰに関与することができるが、ＦｃγＲＩＩａは、このプロセスに関与する主要なＦｃγ受容体であると考えられている。ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター構築物に連結されたヒトＦｃγＲＩまたは高親和性ＦｃγＲＩＩａ−Ｈで安定的にトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ細胞を、高濃度のマウスＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７、またはｈＢ６Ｈ１２．３のいずれかで被覆されたＷＩＬ２Ｓ細胞に曝露した。ＦｃγＲ活性化を、ルシフェラーゼ産生により監視した。結果は、図５Ａ及び５Ｂに示される。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の両方で被覆された細胞用量は、ＦｃγＲＩ受容体を依存的に活性化したが、ｈＢ６Ｈ１２．３だけは、ＡＤＣＰ活性を直接媒介することに最も密接に関連する受容体である、ＦｃγＲＩＩａ−Ｈの活性化を促進することができた。
【０３２７】
抗体媒介性細胞食作用に関与するＦｃγ受容体の抗体媒介性活性化を、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａ−Ｈ（高親和性Ｈ１３１変異型）を安定的発現する操作されたＪｕｒｋａｔ細胞と、エフェクター細胞としてホタルルシフェラーゼの発現を促進するＮＦＡＴ応答要素と、を使用して評価した。抗体の生物学的活性は、ＮＦＡＴ経路の活性化の結果として産生されたルシフェラーゼを通じて定量化され、エフェクター細胞におけるルシフェラーゼ活性は、発光読み出しを用いて定量される（図５Ａ及び図５Ｂ）。
【０３２８】
ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性
ＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と、ｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７、及びｈＢ６Ｈ１２．３によるＦｃγＲＩＩＩａの活性化と、を検討した。高濃度の抗体で被覆されたクロム負荷Ｗｉｌｓ−２細胞を初代ヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に４時間曝露し、特異的溶解を組織培養培地中への放射性クロムの放出によって評価した。代替的には、高濃度のｍＢ６Ｈ１２、Ａｂ４７、またはｈＢ６Ｈ１２．３で被覆されたＷｉｌｓ−２細胞をＦｃγＲＩＩＩａの高親和性Ｖ／Ｖ変異型を安定的に発現するＪｕｒｋａｔ細胞に曝露し、受容体活性をＮＦＡＴ促進ルシフェラーゼ活性として評価した。ｈＢ６Ｈ１２．３は、Ａｂ４７またはマウスＢ６Ｈ１２親抗体の両方と比較して、優れたＡＤＣＣ及びＦｃγＲＩＩＩａ活性化を呈した。結果は、図６Ａ及び６Ｂに示される。ｈＢ６Ｈ１２．３のＩｇＧ１骨格は、ＡＤＣＣ活性を媒介し、現在のＩｇＧ４臨床抗体には不在である機能性であるＦｃγＲＩＩＩシグナル伝達を促進する。
【０３２９】
ＡＤＣＣアッセイを実行するために、Ａｓｔａｒｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓから負の選択による精製されたヒトＮＫ細胞を、解凍し、７．２×１０５ＣＤ１６＋細胞／Ｍｌの濃度でＲＰＭＩ／１％のＦＢＳ中に再懸濁させた（７０μＬがおよそ５×１０４エフェクター細胞を含有するように）。５×１０６個の標的細胞（ＷＩＬ２Ｓ細胞）を、採取し、遠心分離し、１００μＬのＦＢＳ中に再懸濁させた。１００μＬ（およそ１００μＣｉ）のＣｒ−５１を、細胞に添加し、穏やかに混合した。細胞を、３７℃のＣＯ２加湿インキュベーター中に配置して１時間標識した。細胞を、時折軽く叩いて懸濁を保った。細胞を、ＲＰＭＩ／１％のＦＢＳを用いて３回洗浄し、適切な廃棄物容器に放射性上清を注意して廃棄した。次いで、細胞を、１０ｍＬのＲＰＭＩ／１％のＦＢＳに再懸濁させ、計数した。７．２×１０５個の細胞を、７０μＬがおよそ５×１０３標的細胞と同等となるように、総体積の１０ｍＬのアッセイ培地に懸濁させた。
【０３３０】
抗体希釈及びプレートアセンブリのために、抗体を、アッセイ培地において希釈した（３倍での調製）。抗体を、Ｃｒ標識標的細胞の添加直前にプレートに添加した。対照ウェルに、７０μＬ及び１４０μＬのアッセイ培地を、抗体の代わりに添加した。これらのウェルは、それぞれ、合計及び自発的放出対照を表す。標的細胞を混合し、７０μＬを９６ウェルプレートの各試験及び対照ウェルに添加した。抗体を有する標的を、３７℃のインキュベーター中で３０分間インキュベートした。７０μＬ（５×１０４）個のエフェクター細胞を、各試験ウェルに添加した。総放出ウェルに、７０μＬの３％トリトンＸ−１００を添加し、３回上下にピペットで移して混合した。プレートを、３７℃、ＣＯ２加湿インキュベーターに４時間戻した。
【０３３１】
まとめると、データは、本発明の新規のヒト化抗ＣＤ４７抗体がマウス親抗体に対して優れた及び予想外の特性を保有することを実証する。ヒト化抗ＣＤ４７抗体は、ＲＢＣ貪食（図３Ｂ）及びＦｃγＲＩＩシグナル伝達（図５Ｂ）によって実証されるように、優れた貪食／ＡＤＣＰ能力を表示する。ヒト化抗ＣＤ４７抗体は、ＮＫ細胞媒介性細胞溶解（図６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩシグナル伝達（図６Ｂ）によって実証されるように、優れた細胞溶解／ＡＤＣＣを表示する。ヒト化抗ＣＤ４７抗体は、優れたＦｃγＲＩシグナル伝達を表示する（図５Ａ）。最後に、ヒト化抗ＣＤ４７抗体は、赤血球凝集アッセイで実証されるような、低下した赤血球凝集によって実証されるように、優れた毒性プロファイルも表示する（図４Ａ及び図４Ｂ）。ヒト化抗ＣＤ４７抗体、ｈＢ６Ｈ１２．３は、特に有効であることが見出された。
【０３３２】
抗ＣＤ４７抗体の抑制因子機能
貪食活性を遮断することに加えて、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用は、ＳＨＰ１の活性化及びＶａｖのような下流シグナルの不活性化を通じて炎症性サイトカイン産生を低下させる。ヒト単球を、親及び様々なヒト化抗ＣＤ４７抗体の不在または存在におけるサイトカイン産生を促進するためにＬＰＳ処理した。全てのＣＤ４７標的抗体を用いた処理は、ＬＰＳ促進サイトカインを顕著に増強することができた。より良いサイトカイン産生と生得的な細胞活性化の結果の１つは、二次Ｔ細胞応答を促進する能力である。腫瘍関連マクロファージは、積極的に二次Ｔ細胞活性化を支持することができず、また抑制することができる抑制性表現型を呈することが知られている。ヒト単核細胞を、ＩＬ１０及びＭＳＣＦと共に分化及び極性化させ、免疫抑制性ＴＡＭ様表現型に向けてそれらを促進した。これらの分化した単球は、自己Ｔ細胞のＣＤ３／ＣＤ２８促進増殖を抑制することができる。このパラダイムにおける抗ＣＤ４７処理の添加は、ＴＡＭを活性化し、よりＭ０／Ｍ１表現型の方へそれらを移動させることができた（ＣＤ８６／ＭＨＣＩＩ増加）。例えば、図７Ａ  ７Ｂ、及び７Ｃを参照されたい。ＴＡＭ様表現型のこの変化は、ＣＤ３／ＣＤ２８媒介性Ｔ細胞増殖及び活性化を支持する能力と相関した。例えば、図７Ｄを参照されたい。
【０３３３】
ＩＬ−１０を有する腫瘍様マクロファージに分化したヒト単球を利用する抑制因子アッセイを自己Ｔ細胞と共に共培養し、Ｔ細胞受容体媒介性活性化を支持する能力を評価した。ＣＤ４７は、培養物に添加され、ＣＤ８６及びＭＨＣＩＩの上方調節によって測定されるようなマクロファージの活性化マーカーの上方調節の原因となることが見出された。加えて、ＴＣＲ媒介性Ｔ細胞活性化の支持を、Ｔ細胞上のＭＨＣＩＩの上方調節及びＩＦＮγの分泌によって評価した（図７Ａ〜図７Ｄ）。
【０３３４】
他の抗ＣＤ４７抗体との比較
ｈＢ６Ｈ１２．３を、他の既知のＣＤ４７抗体、５Ｆ９及びＣＣ−９００２に対して比較した（ＷＯ２０１１／１４３６２４を参照されたい）。比較では、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩ活性を、上記に記載されるのと同じＮＦＡＴ−ルシフェラーゼＪｕｒｋａｔ細胞アッセイにおいて測定した。ｈＢ６Ｈ１２．３は、５Ｆ９及びＣＣ−９０００２  ＩｇＧ４抗体に対してＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩを活性化する優れた能力を表示した（図８Ａ及び図８Ｂ）。
【０３３５】
加えて、ＮＫ媒介性ＡＤＣＣ及びＩＦＮγ分泌を、上記に記載されるように測定した。再び、ｈＢ６Ｈ１２．３は、５Ｆ９及びＣＣ−９０００２に対してＡＤＣＣを媒介しＩＦＮγ分泌を刺激する優れた能力を表示した（図８Ｃ及び図８Ｄ）。
【０３３６】
実施例３：マスクを有するヒト化抗ＣＤ４７抗体
結合及び機能研究のための組換えヒトＭＭＰを使用するマスクされた抗体の切断
組換えＭＭＰを、１〜２時間３７℃で１．２５ｍＭの４−アミノフェニル水銀アセテート（ＡＰＭＡ）と共にインキュベーションを介して全て活性化した。典型的には、１〜２μｇの活性化されたｒｈＭＭＰ２を、０．２５〜０．５ｍｇのマスクされた抗体に添加し、３７℃で４〜１６時間インキュベートした。抗体切断の程度を、ＰＬＲＰ−ＭＳの３μｍカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ）を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ／Ｘｅｖｏ  ＵＰＬＣを使用する逆相ＬＣ−ＭＳを還元された抗体によって使用して評価した。データを、ＵＮＩＦＩソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ）を使用して分析した。ＭＭＰを用いた再活性化は、意図された切断部位でマスクの部位特異的切断を生じる。マスクされた抗体の完全な再活性化の際に、切断された産物を、結合アッセイにおける使用の前にＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅプロテインＡ樹脂を使用して精製した。
【０３３７】
質量分析データを、ＭＭＰ２再活性化されマスクされた抗体について生成した。組換えヒトＭＭＰ２での切断前（図９Ａ）及び後（図９Ｂ）のＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３についてのデコンボリューションされた軽鎖質量。無傷の軽鎖についてのｍ／ｚ予想値は、２８６８１である（観察値：２８６８０．８）。ＭＭＰ２切断された抗体（ＬＲＳＧ−ｈＢ６Ｈ１２．３）についてのｍ／ｚ予想値は、２３９６９である（観察値：２３９６８．４）。
【０３３８】
タンパク質分解後に残るであろうＮ末端で「スタブ」配列を有する抗ＣＤ４７抗体も、Ｅｘｐｉ−ＨＥＫまたはＥｘｐｉ−ＣＨＯ細胞のいずれかにおける一過性発現を通じて生成した。例えば、ＩＰＶＳ−ＬＲＳＧ  ＭＭＰ切断配列を採用するマスクされた抗体について、ＬＲＳＧ配列は、ＭＭＰの活性化の後に残る。
【０３３９】
ＭＭＰベースの切断配列のプロテアーゼ特異性の評価
ＭＭＰを、１時間及び最大２４時間３７℃で１．２５ｍＭの４−アミノフェニル水銀アセテート（ＡＰＭＡ）と共にインキュベーションを介して活性化した。レグマインを、５０ｍＭの酢酸ナトリウム、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ４．０中、３７℃で２時間のインキュベートを介して活性化した。
【０３４０】
切断配列の切断プロファイルを評価するために、抗体（１０μｇ）を、製造業者が報告した値によって示されるような、４００ｐｍｏｌ／ｍｉｎの正規化されたプロテアーゼと共に、３７℃で一晩インキュベートした。抗体切断の程度を、ＰＬＲＰ−ＭＳの３μｍカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ）を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ／Ｘｅｖｏ  ＵＰＬＣを使用する逆相ＬＣ−ＭＳを還元された抗体によって使用して評価した。データを、ＵＮＩＦＩソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ）を使用して分析した。
【０３４１】
２つのプロテアーゼ切断部位（ＩＰＶ及びＭ２）のプロテアーゼ切断プロファイルを、ヒト及びマウス／ラットＭＭＰ、ＡＤＡＭファミリー、ｕＰＡ、マトリプターゼ、ならびにレグマインのような腫瘍関連プロテアーゼのパネルに対して試験した。追加的に、細胞外プロテアーゼｔＰＡ及び第Ｘａ因子による配列の切断も、試験した。これら３個のプロテアーゼ切断部位でのプロテアーゼ切断プロファイルは、表１４に示される。
【０３４２】
ペプチド（ｈＢＵ１２抗体骨格にＮ末端で融合された）を、４００ｐｍｏｌ／ｍｉｎの正規化されたプロテアーゼと共に一晩３７℃でインキュベートし、切断について評価した。Ｍ２部位を、ｕＰＡ及びマトリプターゼと同様にＭＭＰの大半によって切断した。ＩＰＶ部位を、ＭＭＰ１３を除くほぼ全てのＭＭＰによって切断し、他のプロテアーゼクラスによって接触することはなかった。
表１４．２つの異なるプロテアーゼ切断部位でのプロテアーゼ切断プロファイル。
【表１４−１】
2021503927.tif 000022
【表１４−２】
2021503927.tif 000023
ＭＭＰ切断部位は＊で示されるが、ｕＰＡ／マトリプターゼ／レグマイン切断部位は＊＊で示される。いずれかの部位での切断は、抗体結合を復元するのに十分である
【０３４３】
マスクされた抗ＣＤ４７抗体の飽和結合
抗ＣＤ４７抗体のＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への飽和結合を、実行した。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、予め活性化されたＭＭＰ２対照薬と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ抗体は、抗体Ｎ末端でレムナント−ＬＲＳＧ配列を保有した（図１０及び表１５）。
表１５．飽和結合によって得られたＳＷ７８０細胞への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１０）。
【表１５】
2021503927.tif 000024
【０３４４】
Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、予め活性化されたＭＭＰ２対照薬と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ及びスタブＩＰＶ抗体は、抗体のＮ末端でレムナント−ＬＲＳＧ配列を保有した。切断された抗体をＭＭＰ２での切断を通じて生成した一方、スタブＩＰＶ抗体を組み換えて生成した（図１１及び表１６）。本明細書で使用される場合、「スタブ」、「スタブ抗体」または「スタブ抗原結合断片」は、ＭＭＰによる切断後の抗体または抗原結合断片または組み換えて生成された、すなわち、コイルドコイルドメインを用いず産生され、したがって、切断が実行されない、抗体もしくは抗原結合断片を指す。ＭＭＰ切断は、短いアミノ酸配列レムナントを生じる。ＩＰＶ切断部位について、レムナント、またはスタブ配列は、ＬＲＳＧまたはＳＧであるべきである。Ｍ２切断部位について、レムナント、またはスタブ配列は、ＶＲであるべきである。
表１６．飽和結合によって得られたＳＷ７８０細胞への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１１）。
【表１６】
2021503927.tif 000025
【０３４５】
抗ＣＤ４７抗体のヒト赤血球への飽和結合を実行した。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクされたｈＢ６Ｈ１２抗体を、再活性化された対照薬（スタブＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３またはＭＭＰ２切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３）と共に試験した。切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ及びスタブＩＰＶ抗体は、抗体のＮ末端でレムナント−ＬＲＳＧ配列を保有した。切断された抗体をＭＭＰ２を有する切断を通じて生成した一方、スタブＩＰＶ抗体を組み換えて生成した（図１２及び表１７）。
表１７．飽和結合によって得られたヒト赤血球への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１２）。
【表１７】
2021503927.tif 000026
【０３４６】
ＥＬＩＳＡによる抗ＣＤ４７抗体のｒｈＣＤ４７への飽和結合を、実行した。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、顕著に減損した結合を表示した。結合は、ｒｈＭＭＰ２による切断時に復元されることができた（図１３及び表１８）。
表１８．ＥＬＩＳＡによるｒｈＣＤ４７への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１３）。
【表１８】
2021503927.tif 000027
【０３４７】
ＥＬＩＳＡによる抗ＣＤ４７抗体のｒｈＣＤ４７への飽和結合を、ＬＣＤＲ３においてＧ９１Ａ点変異を有するｈＢ６Ｈ１２．３  Ｇ９１Ａを用いて実行した。ｈＢ６Ｈ１２．３及びｈＢ６Ｈ１２．３  Ｇ９１Ａの両方は、Ａｂ４７よりも高いＢ最大値を表示した（図１４及び表１９）。
表１９．ＥＬＩＳＡによるｒｈＣＤ４７への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１４）。
【表１９】
2021503927.tif 000028
【０３４８】
抗ＣＤ４７抗体のＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への飽和結合を、実行した。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の結合を、ＬＣＤＲ３においてＧ９１Ａ変異を有する変異型と比較した（図１５及び表２０）。
表２０．飽和結合によって得られたＳＷ７８０ヒト膀胱癌細胞への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１５）。
【表２０−１】
2021503927.tif 000029
【表２０−２】
2021503927.tif 000030
【０３４９】
抗ＣＤ４７抗体のヒト赤血球への飽和結合を実行した。Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３の結合を、ＬＣＤＲ３においてＧ９１Ａ変異を有する変異型と比較した（図１６及び表２１）。
表２１．飽和結合によって得られた赤血球への結合親和性（Ｋｄ）の決定（図１６）。
【表２１】
2021503927.tif 000031
【０３５０】
実施例４：インビボ実験
組織におけるマクロファージの浸潤の評価は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、またはＲＮＡ配列決定法を含む従来の方法によるＦ４／８０マウスマクロファージまたはＣＤ１６３、ＣＤ６８、またはＣＤ１１ｂを含む、マクロファージの表面マーカーを監視することによって行われ得る。
【０３５１】
組織におけるプロテアーゼの評価は、タンパク質分解活性を検出することができるものと同様に、プロテアーゼ活性を監視するものとの両方を含む、様々な技法を使用して監視され得る。プロテアーゼの不活性及び活性形態の両方を含むことができる、組織におけるプロテアーゼの存在を検出することができる従来の方法は、ＩＨＣ、ＲＮＡ配列決定、ウェスタンブロット、またはＥＬＩＳＡベースの方法を含む。追加的な技法は、組織におけるプロテアーゼ活性を検出するために使用され得、ザイモグラフィー、蛍光顕微鏡によるインサイツザイモグラフィー、または蛍光タンパク質分解基質の使用を含む。加えて、蛍光タンパク質分解基質の使用は、特定のプロテアーゼの免疫捕捉と組み合わされ得る。追加的に、プロテアーゼの活性部位に対して指向された抗体は、ＩＨＣ、蛍光顕微鏡、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、またはフローサイトメトリーを含む様々な技法によって使用され得る（Ｓｅｌａ−Ｐａｓｓｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１８：１４３−１４７．２０１２、ＬｅＢｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７５：１２２５−１２３５．２０１５、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４２：８９２−９００．２００３、Ｓｈｉｒｙａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．２：ｅ８０．２０１３を参照されたい。）
【０３５２】
ＮＳＧマウスにおけるＬ４２８リンパ腫異種移植腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を決定した。この異種移植モデルは、ＩＨＣによるマウスＦ４／８０の頑健な染色によって証明されるように、高いマクロファージ浸潤を有する。例えば、図１７Ｂを参照されたい。抗体を、１または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかでｑ４ｄ×４でｉ．ｐ．投与した。アンマスクされた抗体Ａｂ４７及びｈＢ６Ｈ１２．３と同様に、マスクされた抗体Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、全て１０ｍｇ／ｋｇの用量で研究期間にわたって腫瘍体積を効果的に低下させた。１ｍｇ／ｋｇの用量で、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３及びアンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３の両方は、腫瘍成長遅延をもたらす。マスクされた抗体、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、この用量でアンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３よりもわずかに低い活性であった。（図１７Ａ）。
【０３５３】
ＮＳＧマウスにおけるＤｅｔｒｏｉｔ  ５６２異種移植頭頸部癌モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性を決定した。この異種移植モデルは、ＩＨＣによるマウスＦ４／８０の頑健な染色によって証明されるように、高いマクロファージ浸潤を有する。図１８Ｂを参照されたい。５ｍｇ／ｋｇでｑ４ｄ×４。抗体Ａｂ４７、ｈＢ６Ｈ１２．３、及びＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、研究期間にわたって効果的に腫瘍体積を低下させた（図１８Ａ）。
【０３５４】
ＮＳＧマウスにおけるＨＴ１０８０異種移植線維肉腫腫瘍モデル（図１９Ａ及び１９Ｂ）及びＨＥＰＧ２異種移植肝細胞癌モデル（図１９Ｃ及び１９Ｄ）における抗ＣＤ４７抗体の活性を決定した。これらの異種移植モデルは、１０ｍｇ／ｋｇでのＩＨＣ．ｑ４ｄ×４によりマウスＦ４／８０の限定された染色によって証明されるように、低いマクロファージ浸潤を有する。抗体Ａｂ４７、ｈＢ６Ｈ１２．３、及びＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、研究期間にわたって効果的に腫瘍体積を低下及び／または遅延させた。
【０３５５】
抗腫瘍活性を評価することに加え、アンマスクする抗体の評価と同様に、マクロファージ浸潤、これらの腫瘍内のＭＭＰのレベルとのその相関は評価されている。異種移植及び同系腫瘍モデルからの腫瘍を、ＴＭＥ内のＲＮＡとタンパク質レベルとの間の相関の理解を得るのと同様に、これらの腫瘍内のＭＭＰのレベルを監視するために、収集し、タンパク質及びＲＮＡ配列評価に供した。Ｌｕｍｉｎｅｘ多重プラットフォームを使用するタンパク質分析は、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の抗腫瘍活性を調査するために使用される腫瘍が頑健なレベルのＭＭＰ２及び９の両方を全て含有することを明らかにした（表２２）。追加的に、細胞培養系内に存在するものと腫瘍ＭＭＰレベルを比較した際、単にインビトロ組織培養条件において見られるレベルを十分に超えた、腫瘍部位でのＭＭＰレベルの著しい増加を見出した（図３５Ａ及び３５Ｂ）。
表２２．選択腫瘍におけるＭＭＰ２及びＭＭＰ９レベル（ｐｇ／ｍｌ）。
【表２２】
2021503927.tif 000032
【０３５６】
固有のマクロファージ含有量が低い腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の活性は、マクロファージ浸潤を促進することが知られているＭＭＡＥアウリスタチンＡＤＣと組み合わされると増幅され得る。このことは、ＮＳＧマウスにおけるＨｅｐＧ２異種移植腫瘍モデルにおいて実証された。抗ＣＤ４７抗体を５ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．ｑ４ｄ×４投与した一方、ＭＭＡＥと共にＡＤＣを１ｍｇ／ｋｇで１回投与した。抗体の組み合わせは、いずれかの抗体単独よりも腫瘍体積の低下に、より有効であった（図２０）。他のＭＭＡＥ含有アウリスタチン（ＬＩＶ１Ａ及びＣＤ３０）を用いた追加的な実験は、Ｌｉｖ１Ａ  ＡＤＣについての乳癌異種移植モデルＭＣＳＦ７及びＣＤ３０  ＡＤＣについてのＬ４２８リンパ腫モデルにおける抗ＣＤ４７抗体との同様な組み合わせ可能性を実証している（図３６Ａ及び図３６Ｂ）。
【０３５７】
マウス反応性抗ＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３：８５５−８６１，２００１）は、ヒトｈＢ６Ｈ１２．３抗体に対して使用された同じＶＥＬ及びＩＰＶ配列を使用してマスクされることができた。これらの構築物を用いたマスキングは、マウスＣＤ４７陽性腫瘍へ結合する抗体を遮断し（図２１Ａ）、ＲＢＣ貪食によって測定されるような機能性を防止した（図２１Ｂ）。
【０３５８】
抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、１０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ用量で投与される際に、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける血小板の枯渇を促進する。対照的に、この枯渇は、マウスが１０ｍｇ／ｋｇの用量のＩＶでマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１及びＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１抗体を投与された際に、観察されなかった（図２２Ａ）。
【０３５９】
マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１抗体は、アンマスクされたｍＩＡＰ３０１と比べてＢＡＬＢ／ｃマウスの血漿における薬物動態を大幅に改善し、マスクされた抗体により、典型的な抗ＣＤ４７抗体が直面する標的媒介性薬物動態を避けることができることを実証した。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１及びｍＩＡＰ３０１抗体を、リジン複合体化を介して３Ｈ−プロピオナートで標識し、１ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量でＢＡＬＢ／ｃマウスに投与した。抗体濃度を、異なる時点で引き出された血漿のシンチレーション計数によって決定した（図２２Ｂ）。血漿におけるｍＩＡＰ３０１の濃度は１５分以内に検出可能な量未満であった一方、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１濃度は投薬後最大７日まで測定されることができた。
【０３６０】
マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１、Ｖｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１、及びアンマスクされたｍＩＡＰ３０１の生体内分布を、１及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で３Ｈ標識抗体を使用してＡ２０を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて試験した。腫瘍が２５０ｍｍ３に達すると、抗体を投与した。指定された時点でマウスを屠殺し、血漿、血液、腫瘍、脾臓、及び肝臓における抗体の濃度をシンチレーション計数によって決定した。図３７Ａ及び３７Ｂに示されるように、血漿におけるｍＩＡＰ３０１の濃度は、投与後１時間以内ではごくわずかである。一方、顕著に少ないマスクされた抗体は、アンマスクされたｍＩＡＰ３０１抗体と比較した際に、脾臓中に存在する（図３７Ｃ及び３７Ｄ）。同様の結果は、肝臓で見られた。（データは示されない）。対照的に、正常な組織におけるＣＤ４７の標的媒介性動態を避けることによって、マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１及びＶｅｌ−Ｍ２−ｍＩＡＰ３０１抗体は、ｍＩＡＰ３０１と比較して腫瘍におけるレベルが増加していたことが実証されている（図３７Ｅ及び３７Ｆ）。
【０３６１】
抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、Ａ２０リンパ腫モデルにおいて抗腫瘍活性を促進したが、同時ＲＢＣ枯渇の原因となった（図２３Ａ及び図２３Ｂ）。マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１抗体は、同様の活性を付与したが、ＲＢＣ枯渇への影響を抑止した。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１抗体は、ＲＢＣ抗原シンクを避けたが、同様に腫瘍結合も維持した（図２３Ｃ及び図２３Ｄ）Ａ２０リンパ腫モデルは、Ｄｏｎｎｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ７０１７０４，２０１２）及びＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２１：１２０９−１２１５，２０１５）にさらに詳細に記載される。
【０３６２】
抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１が免疫腫瘍学薬剤に応答性であることが知られているＭＣ３８結腸癌モデルにおける抗腫瘍活性を促進した。このモデルにおけるマスクされたｍＩＡＰ３０１抗体の活性は、完全な応答を呈する動物によって表されるような優れた有効性を示した（図２４）。この動物の再投与は、腫瘍の完全な拒絶を生じ、長期間生存するメモリーＴ細胞応答の誘導を実証した（データは示されない）。ＭＣ３８結腸癌モデルは、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（上記）にさらに詳細に記載される。
【０３６３】
Ｌｉｖ１ａまたはＣＤ３０に対するＡＤＣとのヒト抗ＣＤ４７抗体の組み合わせ活性を試験することに加えて、他の免疫調節薬剤との組み合わせ活性も評価した。これを達成するために、免疫完全なマウス系に移動し、マウス標的化抗ＣＤ４７代替抗体ｍＩＡＰを利用した。Ａ２０モデルを使用して、マスクされた抗ＣＤ４７抗体が抗ＳＥＡ−ＣＤ４０抗体、ＳＥＡ−１Ｃ１０と同様に抗ＰＤ−１代替抗体と協同することを実証した。これらのデータは、マスクされたＣＤ４７標的化薬剤と共に免疫システムの先得的及び適応的アームの両方の会合が頑健な抗腫瘍応答を促進するために組み合わさることができる証拠を提供する。
【０３６４】
親及びマスクされた抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、抗ＰＤ−１代替抗体と組み合わされて増加した抗腫瘍活性を促進し、その結果、４／６の動物がＣＲ応答を呈した（ＰＤ−１抗体、クローンＲＭＰ１〜１４への参照については、Ｄａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２８：２８５−２９５．２０１５を参照されたい）（図２５Ａ）。親抗マウスＣＤ４７抗体ｍＩＡＰ３０１は、ＳＥＡ増強代替抗体１Ｃ１０に標的化されたマクロファージ活性化ＣＤ４０と組み合わされて増加した抗腫瘍活性を促進した（１Ｃ１０抗体への参照についてはＷＯ２０１６／０６９９１９を参照、ｍＩＡＰ３０１抗体への参照についてはＬｉｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５６７−１５７０．１９９４を参照されたい）（図２５Ｂ）。
【０３６５】
抗ＰＤ−１または抗ＣＤ４０と組み合わされた抗ＣＤ４７を示すデータは、抗ＣＤ４７療法が、生得的な細胞活性を増強するそれらの薬剤（抗ＣＤ４０抗体または他のＣＤ４０阻害剤）と同様にチェックポイント阻害剤抗体（抗ＰＤ−１抗体）の文脈におけるように、Ｔ細胞活性を増強する薬剤の活性を増強できることを示す。このことは、抗ＣＤ４７抗体が抗腫瘍応答の適応的及び生得的アーム両方を支持する臨床において複数の免疫調節薬剤と対になり得るという考えを裏付ける。
【０３６６】
実施例５：コイルドコイルドメインマスクされた抗体
異なるコイルドコイルドメインを有するマスクされたヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体の安定性を、ＢＡＬＢ／ｃマウスへの静脈内投与を使用して評価した。抗体を、５ｍｇ／ｋｇで投与した。所与の時点（３日目）で、血漿を、投与されたマウスから採取した。ヒト抗体を、ＩｇＳｅｌｅｃｔ樹脂を使用して血漿から精製した。捕捉された抗体を、還元し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、次いで、ＨＲＰ複合体化抗ヒトＦｃ抗体を使用するウェスタンブロットによって探索した。切断された抗体パーセントは、約５ｋＤａだけサイズが異なるマスクされた及びアンマスクされた重鎖に対応する帯域の濃度測定によって評価した（図２６）。
【０３６７】
表２３は、重鎖（配列番号２）及び軽鎖（配列番号１０）を含むヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体に組み込まれ、異なる細胞株に対して試験された、異なるコイルドコイル形成ペプチド対を用いたマスキングの効果を示す。抗体は、実施例においてＡｂ４７とも呼ばれる。Ｋｄ（ｎＭ）は、各それぞれの細胞株上での飽和結合に由来した各抗体について示される。２０００ｎＭの高濃度を、各結合実験のために使用した。表２３に示されるように様々なコイルドコイルドメインは、２マイクロモル超の濃度で試験された際でさえ細胞表面上で発現されたＣＤ４７へのＡｂ４７の結合を阻害できた一方、アンマスクされたＡｂ４７抗体は３．３〜２１ｎＭのＩＣ５０を表示した。
【０３６８】
Ｖｅｌ−ＩＰＶコイルドコイル及び切断配列を有するマスクされたヒト化Ｂ６Ｈ１２の安定性及び活性化を、ヒトＨＴ１０８０線維肉腫異種移植を有するヌードマウスにおいて評価した。抗体を、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰで投与した。所与の時点（１、３、４日目）で、マウスを屠殺し、組織及び血漿を採取した。組織をホモジナイズし、ヒト抗体をＩｇＳｅｌｅｃｔ樹脂を使用して生物学的試料から精製した。捕捉された抗体を、還元し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、次いで、ＨＲＰ複合体化抗ヒトＦｃ抗体を使用するウェスタンブロットによって探索した。切断された抗体パーセントは、約５ｋＤａだけサイズが異なるマスクされた及びアンマスクされた重鎖に対応する帯域の濃度測定によって評価した（図３８Ａ及び３８Ｂ）。非常に少ないアンマスクされた抗体（＜５％）が、試験した任意の時点で血漿または肝臓において検出された。一方、２０〜３０％を超える切断が腫瘍において検出され、切断の最大量は投与後３〜４日で生じた。追加的に、Ａｂ４７またはＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７で４または７日間治療されたマウスから収集されたＨＴ１０８０腫瘍を、フローサイトメトリーに供し、腫瘍発現ＣＤ４７に結合し腫瘍発現ＣＤ４７を飽和させることができる抗体の程度を決定した（図３８Ｂ）。
表２３．異なる抗体マスキングドメインを有するヒト化Ｂ６Ｈ１２抗体（Ａｂ４７）の、飽和結合フローサイトメトリーにより誘導される、親和性（ｎＭ）。
【表２３−１】
2021503927.tif 000033
【表２３−２】
2021503927.tif 000034
【０３６９】
ヒト化抗ＣＤ４７抗体の活性及び薬物動態ならびにカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅｓ）におけるマスキングを通じた改善された忍容性の実証。
抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体変異型の薬物動態及び忍容性を改善するマスキングの能力を試験するために、一連のＩＶ単回投薬研究を、カニクイザルで行った。試験された抗ＣＤ４７  ＩｇＧ１抗体は、発現及び配列においてこれらの種にわたって高度に保存されているヒト及びカニクイザルＣＤ４７と交差反応性であった。カニクイザル及びヒト組織のパネルのインサイツゲルザイモグラフィーによるプロテアーゼ活性の評価は、プロテアーゼ活性レベルがこれらの種にわたって高度に保存されることを示した。さらに、カニクイザルは、ＩｇＧ１抗体と高度に類似したＦｃγＲ相互作用を有し、ヒトＩｇＧ１抗体のエフェクター機能関連作用を毒物学的に予測するとみなされており、それらをＩｇＧ１抗ＣＤ４７抗体の作用を評価するのに好適なモデルとしている（Ｗａｒｎｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８：４４０５−４４１１．２０１２）。まとめると、カニクイザルは、抗ＣＤ４７抗体単独の異なる活性を評価することについて、そしてさらにこの活性がどのようにマスキング及びエフェクター機能で改変されるかについて、適切な種を代表する。
【０３７０】
代替的ヒト化Ｂ６Ｈ１２であるＡｂ４７
代替的ヒト化ＩｇＧ１構築物に対するＢ６Ｈ１２の忍容性及びＰＫを決定し、忍容性及び薬物動態を改変するＶｅｌ−ＩＰＶマスク及び切断配列の能力の概念の証明をさらに実証するために、ナイーブなカニクイザルに、０．１、１、１０、及び３０ｍｇ／ｋｇの代替的ヒト化ＩｇＧ１  Ｂ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体であるＡｂ４７で静脈内投与した。ヒト化ＩｇＧ１ベースのＡｂ４７は、ヒト化ＩｇＧ４プラットフォームに対するｍＢ６Ｈ１２抗体の公開されたデータ（Ｌｉｕ，２０１５）と比較される場合、血液学分析による赤血球量減少として実証される、活性の増加を示した。ＣＤ４７との相互作用を遮断することに加えて高いＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣ活性を可能にするエフェクター機能を欠くＩｇＧ４  Ｂ６Ｈ１２がカニクイザルにおいて最大３０ｍｇ／ｋｇの用量の忍容性を実証した（Ｌｉｕ，２０１５）一方、Ａｂ４７は１ｍｇ／ｋｇ超の用量で忍容性を示さなかった（図２７Ａ）。
【０３７１】
Ａｂ４７対Ｖｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７
Ａｂ４７の活性を和らげるＶｅｌ−ＩＰＶマスクの能力を実証するために、カニクイザルに、０．１、１、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与した。特に、１．０ｍｇ／ｋｇのＡｂ４７及び１０ｍｇ／ｋｇのＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７で治療された動物における血液学分析のために採取された血液試料における同様のレベルの赤血球量減少として実証されるように、およそ１０倍高い用量はマスクされていないＡｂ４７よりも良い忍容性を示した（図２７Ｂ）。Ａｂ４７で治療された動物は、溶血及び忍容性の欠如に関連する一貫した臨床徴候を実証した（赤色泌尿生殖分泌物、溶血試料、嘔吐、活動性低下）一方、マスクされた抗体で治療された動物において観察された有害な臨床徴候の完全な欠如があった。マスクされたＡｂ４７に伴う忍容性の増加は、単球化学誘引物質タンパク質−１であるＭＣＰ−１のような循環血漿サイトカインの増加を減じるマスキングの能力においても実証された。試験された最高用量のＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７（１０ｍｇ／ｋｇ）は、対照及び試験されたＡｂ４７の最低用量の０．１ｍｇ／ｋｇと同様のレベルを実証した（図３９Ａ）。追加的に、マスキングは、分子のＰＫを劇的に改善した。Ａｂ４７の１ｍｇ／ｋｇ用量は研究３日目にＧｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ（総抗体）アッセイについての検出の限界値未満であったが、１ｍｇ／ｋｇのＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７は研究の全体経過の、研究１５日目を通して検出可能であった（図２８）。Ｇｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ  ＥＬＩＳＡは、Ａｂ４７及びＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７のヒト軽鎖カッパに結合する抗ヒト軽鎖カッパｍＡｂで被覆された９６ウェルマイクロタイタープレートを使用する。それは、カニクイザル軽鎖カッパと交差反応しない。試験試料を、ナイーブなプールしたカニクイザルＫ２ＥＤＴＡ血漿で、Ａｂ４７（１０（ＬＬＯＱ）から１２８０ｎｇ／ｍＬ（ＵＬＯＱ）まで）またはＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７（２０（ＬＬＯＱ）から２５６０ｎｇ／ｍＬ（ＵＬＯＱ）まで）のアッセイの動的範囲に希釈した。希釈した試料は、ＱＣ及びキャリブレーターと共に、遮断され洗浄されたプレートへの添加の前にアッセイ緩衝液を用いて１：２０のＭｉｎｉｍｕｍ  Ｒｅｑｕｉｒｅｄ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ（ＭＲＤ）に供した。室温で１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、ストレプトアビジンに複合体化したポリマーセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ポリ−ＨＲＰ−ＳＡ）の添加前に、ビオチン化抗ヒト軽鎖カッパｍＡｂ（捕捉試薬と同一のクローン）を用いて結合した分析物（Ａｂ４７またはＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７）を検出した。インキュベーション及び洗浄の後、ＨＲＰ基質３，３’，５，５’−テトラメチル−ベンジジン（ＴＭＢ）をプレートに添加し、色を１０分間展開させた。反応を１ＮのＨＣｌで停止させ、プレートを４５０ｎｍ〜６３０ｎｍでＳｐｅｃｔｒｏｍａｘ  Ｍ５プレートリーダー上で読み取った。純吸光度値をＷａｔｓｏｎ  ＬＩＭＳ  ｖ．７．４．２にインポートし、５−ＰＬ非線形回帰を吸光度から試料中に存在する総抗体ｎｇ／ｍＬへの変換のために実行した。
【０３７２】
Ａｂ４７対ｈＢ６Ｈ１２．３
示差的なＫｄ、増加したＢ最大値、及び減少した血球凝集を特徴とするヒト化Ｂ６Ｈ１２．３を、１ｍｇ／ｋｇの用量の単回ＩＶボーラスにおいてカニクイザルに投与し、インビボの示差的活性について試験した。ｈＢ６Ｈ１２．３及びＡｂ４７の両方が１ｍｇ／ｋｇで同様のレベルの赤血球枯渇を生じる（図２９）が、Ａｂ４７は１ｍｇ／ｋｇでの投薬前血小板レベルのおよそ４０％までの枯渇も実証した一方、ｈＢ６Ｈ１２．３は恐らくサンプリングバイアスによる対照レベルと同様の２０％の枯渇のみを有した（図３０）。試験７日目に始まる血小板の増加は、恐らく広く骨髄が刺激されたことにより、両抗体を用いた治療に続いて生じた。
【０３７３】
ｈＢ６Ｈ１２．３対Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２
ｈＢ６Ｈ１２．３の活性を軽減するＶｅｌ−ＩＰＶマスクの能力を実証するために、カニクイザルに、１０及び２０ｍｇ／ｋｇの用量の抗体を投与した。試験された最高用量である２０ｍｇ／ｋｇの血液試験は、１ｍｇ／ｋｇのｈＢ６Ｈ１２．３であるが、２０倍低い用量でマスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３よりも高い忍容性で観察されるように赤血球量減少の同様の低下を実証した（図３１）。同様に、ｈＢ６Ｈ１２．３のマスキングは、ＭＣＰ−１を含む循環サイトカインの減少も実証し、アンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３で達成される物と同様の応答を得るためにマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３の用量の２０倍を必要とした（図３９Ｂ）。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３を投与された動物は治療に関連する臨床症状を経験しなかった一方、溶血に関連する臨床症状はマスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３で１ｍｇ／ｋｇで観察された。Ｇｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ  ＥＬＩＳＡを使用する薬物動態分析は、マスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３と比較して改善された薬物動態プロファイルを実証した（図３９Ｃ）。
【０３７４】
Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３対ＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３
ＩｇＧ１マスクされた抗ＣＤ４７抗体であるＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の活性をさらに増強するために、抗体を、糖操作された抗体であるＳＥＡの、増強されたエフェクター機能を有するフコシル化されていない抗体を産生するＳｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓの商標技術（米国第８，１６３，５５１号）を利用して産生した。フコシル化されたＳＥＡ  ｈＢ６Ｈ１２．３及びフコシル化されていないＳＥＡ  ｈＢ６Ｈ１２．３と同様に、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３及びＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の異種移植モデルにおける相対的抗腫瘍活性を、高（Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２）及び低（ＨＴ１０８０）マクロファージモデルにおいて評価した。コアフコシル化ならびに得られたＳＥＡ−ｈＢ６Ｈ１２．３及びＳＥＡ−Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の除去は、いずれかのモデルにおける高腫瘍活性に対する効果の証拠が得られなかった（図４０Ａ及び４０Ｂ）。これらのモデルが、ＳＥＡ骨格を与えられた増強されたエフェクター機能を十分活用することができない免疫不完全のマウスにおいて実行される場合、マウス代替抗体ｍＩＡＰ３０１もフコシル化されておらず、またフコシル化された及びフコシル化されていないｖｅｌ−ＩＰＶ−ｍＩＡＰ３０１による抗腫瘍活性を、低活性ＣＴ２６同系モデルと同様に高活性Ａ２０同系リンパ腫モデルにおいて試験した。ＳＥＡ抗体を産生するためのコアフコースの除去は、追加的な抗腫瘍効果を付与するようには見えなかった。
【０３７５】
他の抗体を用いたＳＥＡ技術が、抗体がマスクされる際に増加した活性を生じているが、ＳＥＡ及び非ＳＥＡバージョンの両方は、試験された同一の最大用量レベルの２０ｍｇ／ｋｇと同様の赤血球量減少とともに十分な忍容性を示す（図３２）。有害な臨床徴候はいずれかの抗体を用いた治療中には観察されなかったが、循環ＭＣＰ−１サイトカインレベルはＳＥＡ抗体について増加した（図４１Ａ）。Ｇｅｎｅｒｉｃ  ＴＡｂ  ＥＬＩＳＡを使用する薬物動態分析は、ＳＥＡ及び非ＳＥＡ  Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３抗体の間で一般に同様の薬物動態プロファイルを実証し、ともにマスクされていないｈＢ６Ｈ１２．３と比較して改善した（図４１Ｂ）。
【０３７６】
実施例６：選択バイオマーカーを有する対象における腫瘍の治療
本開示は、該対象内の選択バイオマーカーに基づく本発明の抗ＣＤ４７抗体を用いた腫瘍を有する対象の治療をさらに構想する。本発明の抗ＣＤ４７抗体を用いた治療のための対象の選択は、１）周囲の非腫瘍組織に対して腫瘍組織内のより高いレベル及び活性のＭＭＰと、２）周囲の非腫瘍組織に対して腫瘍組織上のより高い発現レベルのＣＤ４７と、３）周囲の非腫瘍組織に対して腫瘍組織におけるより高いレベルのマクロファージ浸潤と、に基づくであろう。
【０３７７】
選択バイオマーカーのレベル及び活性を決定する方法は、免疫組織化学及び酵素学の分析を含む。例えば、マクロファージ浸潤のレベルは、マーカーとして抗ＣＤ１６３抗体を使用する免疫組織化学によって決定され得る。
【０３７８】
腫瘍対日腫瘍組織試料における腫瘍浸潤マクロファージを検出する能力を実証するために、乳癌コア試料及び正常乳房組織試料を使用した。免疫組織化学を、抗ＣＤ１６３抗体を使用して実行した。結果は、腫瘍浸潤マクロファージが非腫瘍試料よりも腫瘍試料において容易に検出され得ることを実証する（図３３）。
【０３７９】
実施例７：Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３によるＣＤ４７陽性細胞の貪食及び赤血球凝集
ＣＤ４７陽性ＲＢＣの貪食を、抗体機能性に対するマスキングの影響を評価するために監視した。ヒト赤血球を、蛍光赤色ＰＫＨ色素で標識し、１μｇ／ｍＬのアンマスクされたｈＢ６Ｈ１２．３、マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３、またはＭＭＰ活性化Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３と共に３０分間オプソニン化した。赤血球を洗浄し、次いで、単球マクロファージと共に１０：１比率で２時間インキュベートした。次いで、試料をＡＣＫ低張溶解緩衝液で３回洗浄した。貪食の程度を、フローサイトメトリーを介したヒトマクロファージによる蛍光標識されたヒトＲＢＣの取り込みを監視することによって評価した。
【０３８０】
図４２に示されるように、マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、未処理ＲＢＣのバッググラウンドレベル超の貪食の増加を呈しなかった一方、ｈＢ６Ｈ１２．３及びＭＭＰ活性化Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の両方は同様のレベルのＲＢＣ貪食を示した。
【０３８１】
マスクされたＡｂ４７抗体によるヒトＲＢＣの赤血球凝集の促進を、実施例２に記載されるように試験した。ヒトＲＢＣを、増加する濃度のマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７またはＭＭＰ切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−Ａｂ４７に３７で℃で３０分間曝露した。赤血球凝集を、各ウェル内の明らかな斑点の直径の光学的評価によって監視した。
【０３８２】
図４３に示されるように、Ａｂ４７がマスクされた際に赤血球凝集が阻害され、マスクがＭＭＰによって除去された際に赤血球凝集が復元された。
【０３８３】
実施例８：ｈＢ６Ｈ１２．３はアポトーシスを直接誘導する
細胞表面ＣＤ４７ライゲーションはアポトーシスを誘導することができる。抗ＣＤ４７  ｍＡｂクローンＢ６Ｈ１２が、表面に固定化された際のみアポトーシスを誘導することができることが報告されているが、ｈＢ６Ｈ１２．３は、表面に結合されることなくアポトーシス活性を実証した。８つの異なる細胞株（Ａ４３１、ＨＥＫ２９３、Ｈｅｌａ、ＨｅｐＧ２、ＨＰＡＦ１１、Ｉ５４０Ｃｙ、ＭＣＦ７、及びＴＨＰ１）を、２４時間、ウェルあたり５０，０００細胞で各々播種した。細胞を、５〜０．０５μｇ／ｍＬの濃度のｈＢ６Ｈ１２．３、５Ｆ９またはＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いて１８時間処理した。次いで、細胞を、採取し、２回洗浄し、アポトーシスマーカーアネキシンＶについて染色し、アポトーシスをフローサイトメトリーを使用して定量した。
【０３８４】
図４４に示されるように、８つの細胞型全てにおいて、相対的レベルのアネキシン染色によって決定されるように、ｈＢ６Ｈ１２．３で処理された細胞は、５Ｆ９またはＩｇＧ１アイソタイプ対照で処理された同じ型の細胞よりも大きなレベルのアポトーシスを呈した。
【０３８５】
実施例９：全血及び血漿におけるｈＢ６Ｈ１２．３安定性
様々な型のがんを有する１７名の患者（１０名の肉腫、３名のＮＳＣＬＣ、３名の結腸癌、及び１名の黒色腫）から新たに収集した全血試料（４％クエン酸ナトリウム）を、ＢｉｏＩＶＴから得た。ｈＢ６Ｈ１２．３及びマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３抗体を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で直接標識した。新鮮な全血の試料を、高濃度（最大濃度、２０μｇ／ｍｌ）のＦＩＴＣ標識されたｈＢ６Ｈ１２．３またはＦＩＴＣ標識されマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３と共に３７℃で２０時間インキュベートした。血液細胞に対する抗体の結合を、フローサイトメトリーによって特徴付けた。
【０３８６】
肉腫全血試料の各々の部分を血漿を抽出するために使用し、２０μｇ／ｍＬの組換えＣＤ４７を血漿試料に添加した。次いで、組換えＣＤ４７を含有する血漿の試料を、２０μｇ／ｍＬのｈＢ６Ｈ１２．３またはマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３と共に３７℃で４日間インキュベートした。Ｖｅｌ−ＩＰＶマスクの切断の程度を、実施例２に記載されるようにＣＤ４７結合ＥＬＩＳＡを使用して評価した。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、血漿中で急上昇した濃度で（２０μｇ／ｍＬ）組換えＣＤ４７に結合せず、したがって、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３と共にインキュベートされた血漿において検出された任意の抗体−ＣＤ４７結合は、切断されたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３のＣＤ４７との結合によるものである。
【０３８７】
試験された１７個の血液試料のうち、マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、最高濃度でただ１つの外れ値試料（肉腫、図４５Ｂを参照されたい）への１０％超の結合を示した。マスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３による結合は、他の１６個の試料のいずれにおいても検出されなかった（代表的データが図４５Ａに示される）。図４５Ｃに示されるように、２％以下のマスクされたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３は、肉腫を有する患者からの１０個の血漿試料のいずれにおいても切断された。
【０３８８】
実施例１０：ｈＢ６Ｈ１２．３に応答するサイトカイン産生
がん患者からの新鮮な全血の試料（１０名の肉腫、３名のＮＳＣＬＣ、３名の結腸癌、及び１名の黒色腫）を、高濃度（最大濃度、２０μｇ／ｍｌ）のＦＩＴＣ標識されたｈＢ６Ｈ１２．３もしくはＦＩＴＣ標識されたＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３と共に、または０．１μｇ／ｍＬのＬＰＳと共に３７℃で２０時間インキュベートした。サイトカインレベルを、３８プレックスサイトカイン及びケモカイン磁気ビーズパネルを使用して評価した。
【０３８９】
試験した患者試料の大半において、中程度のサイトカイン産生はｈＢ６Ｈ１２．３によって誘導されたが、最小限のサイトカイン産生はＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３によって誘導された。サイトカインＩＰ−１０、ＩＬ１−Ｒａ、ＭＩＰ−１α、及びＭＩＰ−１αは、最も一般的にｈＢ６Ｈ１２．３によって誘導された。ＩＬ１−Ｒａ（図４６Ｂ）、ＭＩＰ−１α、及びＭＩＰ−１βのレベルは試験されたｈＢ６Ｈ１２．３の最大濃度で２００ｐｇ／ｍＬ未満であった一方、ＩＰ−１０レベルは４０００〜５０００ｎｇ／ｍＬに達した（図４６Ａ）。Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３によって産生されるサイトカインレベルは、全ての場合においてｈＢ６Ｈ１２．３によって産生されるものよりも低かったが、典型的には、１００〜１０００倍低かった。
【０３９０】
実施例１１：ｈＢ６Ｈ１２．３はインビボでアポトーシスを誘導する
ヒトＨＴ１０８０線維肉腫異種移植を有するヌードマウスに、腫瘍が２００ｍｍ３に達した際に、５ｍｇ／ｋｇのＩＰ用量のｈＢ６Ｈ１２．３、Ｖｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照を投与した。所与の時点（２４及び９６時間）で、マウスを屠殺し、腫瘍を採取した。腫瘍をホモジナイズし、ヒトＨＴ１０８０異種移植線維肉腫腫瘍細胞を１倍のアネキシンＶ染色緩衝液において１００万細胞／ｍｌで再懸濁させた（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、７００ｍＭのＮａＣｌ、１２．５ｍＭのＣａＣｌ２を含有する１０倍染色緩衝液ｐＨ７．４を水に１：１０で希釈した）。細胞を、丸底９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェル）に移し、５μＬのＦＩＴＣアネキシンＶ染色試薬及び１μＬの１００μｇ／ｍｌ紫外線Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色緩衝液を各ウェルに添加した。細胞を、室温で３０分間染色した。試料を５分間１５５０ｇで回転し、上清を除去し、細胞を１倍の氷冷アネキシンＶ染色緩衝液で３回洗浄した。細胞を、１００μｌの１倍のアネキシンＶ染色緩衝液に再懸濁させた。アポトーシスを、表面ホスファチジルセリンへのアネキシンＶ結合に対する陽性の細胞のパーセントとしてＬＳＲＩＩサイトメーター上でのフローサイトメトリーによって評価した。Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色で陽性に染色された細胞を、分析から除外した。
【０３９１】
図４７に示されるように、ｈＢ６Ｈ１２．３及びＶｅｌ−ＩＰＶ−ｈＢ６Ｈ１２．３の両方で処理された腫瘍は、未処置及びアイソタイプ対照処理腫瘍試料と比較した際に、９６時間処置後に増加したアネキシンＶ＋アポトーシス細胞を呈した。
【０３９２】
ある特定の非限定的実施形態
実施形態１．ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変が、
配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されるＣＤＲと、
配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０３９３】
実施形態２．ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変が、
配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されるＣＤＲと、
配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０３９４】
実施形態３．ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変が、
配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されるＣＤＲと、
配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０３９５】
実施形態４．ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変が、
配列番号１６（ＧＹＧＭＳ）、１７（ＴＩＴＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）、及び１８（ＳＬＡＧＮＡＭＤＹ）として示されるＣＤＲと、
配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０３９６】
実施形態５．実施形態１〜４のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記軽鎖可変領域が、
配列番号３１（ＲＡＳＱＴＩＳＤＹＬＨ）、３２（ＦＡＳＱＳＩＳ）、及び３３（ＱＮＧＨＧＦＰＲＴ）として示されるＣＤＲと、
配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０３９７】
実施形態６．実施形態１〜４のいずれか一項に記載のヒト化抗体または抗原結合断片であって、前記軽鎖可変領域が、
配列番号３１（ＲＡＳＱＴＩＳＤＹＬＨ）、３２（ＦＡＳＱＳＩＳ）、及び３３（ＱＮＧＨＧＦＰＲＴ）として示されるＣＤＲと、
配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークと、を含み、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒト化抗体または抗原結合断片。
【０３９８】
実施形態７．Ｋａｂａｔ番付に従うＨ２９がＦによって占有され、Ｈ４４がＲまたはＧによって占有され、Ｈ４９がＡによって占有され、Ｈ８２がＭまたはＩによって占有され、Ｈ８９がＩまたはＶによって占有され、Ｈ９１がＦまたはＹによって占有され、Ｈ９４がＲによって占有される、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０３９９】
実施形態８．Ｋａｂａｔ番付に従うＬ４はＭによって占有され、Ｌ２１はＬによって占有され、Ｌ４９はＫによって占有され、Ｌ６９はＴまたはＳによって占有され、Ｌ８５はＶまたはＴによって占有される、実施形態５に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４００】
実施形態９．配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０１】
実施形態１０．Ｋａｂａｔ番付に従うＬＣＤＲ３においてＧ９１Ａ変異をさらに含む、実施形態５に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０２】
実施形態１１．抗体または抗原結合断片がＩｇＧ１アイソタイプのものである、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０３】
実施形態１２．抗体または抗原結合断片がその親抗体と比較して増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０４】
実施形態１３．抗体または抗原結合断片がその親抗体と比較して増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を有する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０５】
実施形態１４．その親抗体と比較して低下したコアフコシル化を有する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０６】
実施形態１５．抗体または抗原結合断片がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０７】
実施形態１６．抗体または抗原結合断片がその親抗体と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４０８】
実施形態１７．実施形態１〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片をコードする、核酸配列。
【０４０９】
実施形態１８．Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、実施形態１に記載の抗原結合断片。
【０４１０】
実施形態１９．マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を対象に投与することを含む、前記対象におけるＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、前記マスキング薬剤が、マスキング薬剤を有しない抗体またはその抗原結合断片と比較してヒトＣＤ４７への抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる１個以上のコイルドコイルペプチドを含む、前記方法。
【０４１１】
実施形態２０．プロテアーゼ切断可能リンカーが前記マスキング薬剤を前記抗体またはその抗原結合断片に結合させる、実施形態１９に記載の方法。
【０４１２】
実施形態２１．前記プロテアーゼ切断可能リンカーがＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含むアミノ酸配列を有する、実施形態２０に記載の方法。
【０４１３】
実施形態２２．前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、実施形態２０に記載の方法。
【０４１４】
実施形態２３．前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位からなる群から選択される、実施形態２２に記載の方法。
【０４１５】
実施形態２４．前記マスキング薬剤が、ＭＭＰによる腫瘍微小環境におけるＭＭＰ切断部位の切断の後、前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片から放出される、実施形態２２に記載の方法。
【０４１６】
実施形態２５．前記切断された抗ＣＤ４７抗体が、前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを有する、実施形態２４に記載の方法。
【０４１７】
実施形態２６．  前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体のＮ末端でＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【０４１８】
実施形態２７．１個以上のコイルドコイルペプチドが、配列番号４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５及び５６からなる群から選択される１個以上の配列を含む、実施形態１９に記載の方法。
【０４１９】
実施形態２８．ＣＤ４７に結合する抗体または抗原結合断片が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して少なくとも約１００倍低下する、実施形態１９に記載の方法。
【０４２０】
実施形態２９．ＣＤ４７に結合する抗体または抗原結合断片が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して約２００倍〜約１５００倍低下する、実施形態１９に記載の方法。
【０４２１】
実施形態３０．前記ＣＤ４７発現癌が固形癌の原因となる血液癌である、実施形態１９に記載の方法。
【０４２２】
実施形態３１．前記血液腫瘍が、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫からなる群から選択される、実施形態３０に記載の方法。
【０４２３】
実施形態３２．前記ＣＤ４７発現癌が固形腫瘍である、実施形態１９に記載の方法。
【０４２４】
実施形態３３．前記固形腫瘍が、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、皮膚癌、前立腺癌、下垂体癌、胃癌、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌からなる群から選択される、実施形態３２に記載の方法。
【０４２５】
実施形態３４．前記固形腫瘍が、肺癌、軟部組織肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、及び乳癌からなる群から選択される、実施形態３２に記載の方法。
【０４２６】
実施形態３５．前記対象が固形癌に罹患しているヒトである、実施形態１９に記載の方法。
【０４２７】
実施形態３６．前記抗ＣＤ４７抗体が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される、実施形態１９に記載の方法。
【０４２８】
実施形態３７．マスキング薬剤を含む前記ヒトＣＤ４７タンパク質に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記マスキング薬剤が配列番号９５（ＱＧＡＳＴＴＶＡＱＬＥＥＫＶＫＴＬＲＡＥＮＹＥＬＫＳＥＶＱＲＬＥＥＱＶＡＱＬＧＳ）及び／または配列番号９４（ＱＧＡＳＴＳＶＤＥＬＱＡＥＶＤＱＬＥＤＥＮＹＡＬＫＴＫＶＡＱＬＲＫＫＶＥＫＬＧＳ）を含む１個以上のコイルドコイルペプチドを含み、前記１個以上のコイルドコイルペプチドが、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較してヒトＣＤ４７タンパク質への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる、前記抗体またはその抗原結合断片。
【０４２９】
実施形態３８．配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、実施形態３７に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３０】
実施形態３９．前記マスキング薬剤がプロテアーゼ切断可能リンカーを介して前記抗体またはその抗原結合断片に結合される、実施形態３７に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３１】
実施形態４０．前記プロテアーゼ切断可能リンカーがＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含むアミノ酸配列を有する、実施形態３９に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３２】
実施形態４１．前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、実施形態３９に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３３】
実施形態４２．前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位からなる群から選択される、実施形態４１に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３４】
実施形態４３．前記マスキング薬剤が、ＭＭＰによるＭＭＰ切断部位の切断後、前記抗ＣＤ４７抗体から除去される、実施形態３７に記載の抗体。
【０４３５】
実施形態４４．前記抗ＣＤ４７抗体が、ＭＭＰによるＭＭＰ切断部位の切断後、前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを有する、実施形態４３に記載の抗体。
【０４３６】
実施形態４５．前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体のＮ末端で前記ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む、実施形態４４に記載の方法。
【０４３７】
実施形態４６．結合が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して少なくとも約１００倍低下する、実施形態３７に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３８】
実施形態４７．前記結合が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して約２００倍〜約１５００倍低下する、実施形態３７に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４３９】
実施形態４８．４８  配列番号４２の重鎖配列及び配列番号４３の軽鎖配列を含む、実施形態３７に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４４０】
実施形態４９．ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性から選択される増強されたエフェクター機能を付与する変異型Ｆｃ領域を含む、実施形態３７〜４８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０４４１】
実施形態５０．フコシル化されていない、実施形態４９記載の抗体または抗原結合断片。
【０４４２】
実施形態５１．前記抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０４４３】
実施形態５２．増強されたＡＤＣＣ、増強されたＡＤＣＰ、及び／または増強されたＣＤＣ活性を含む、実施形態５１に記載の抗体。
【０４４４】
実施形態５３．対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を前記対象に投与するステップであって、前記対象ががんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有する場合、前記マスキング薬剤が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させるコイルドコイルペプチドを含む、前記投与するステップと、を含む、前記方法。
【０４４５】
実施形態５４．前記ＭＭＰが、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１３からなる群から選択される、実施形態５３に記載の方法。
【０４４６】
実施形態５５．ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び前記非がん組織においてＭＭＰを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、実施形態５３に記載の方法。
【０４４７】
実施形態５６．対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）前記がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＣＤ４７を有するものとして前記対象を特定するステップと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を前記対象に投与するステップであって、前記対象が前記がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＣＤ４７を有する場合、前記マスキング薬剤が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させるコイルドコイルペプチドを含む、前記投与するステップと、を含む、前記方法。
【０４４８】
実施形態５７．ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び周囲の非がん組織においてＣＤ４７を検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織を染色するＣＤ４７に対して前記がん組織において染色するＣＤ４７の量を比較することと、を含む、実施形態５６に記載の方法。
【０４４９】
実施形態５８．対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして前記対象を特定することと、
ｂ）マスキング薬剤を含む抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を前記対象に投与するステップであって、前記対象が前記がんにおいて前記非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有する場合、前記マスキング薬剤が、前記マスキング薬剤を有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる１個以上のコイルドコイルペプチドを含む、前記投与するステップと、を含む、前記方法。
【０４５０】
実施形態５９．ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、実施形態５８に記載の方法。
【０４５１】
実施形態６０．前記マクロファージ染色が抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される、実施形態５８に記載の方法。
【０４５２】
実施形態６１．配列番号２、３、４、５、６、７及び８のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５のいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は前記ＨＣＶＲ及び／または前記ＬＣＶＲのＮ末端で前記配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲをさらに含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
【０４５３】
実施形態６２．実施形態３７に記載のマスクされたＣＤ４７抗体のアゴニストＣＤ４０抗体との組み合わせを投与することによってがんを治療する方法。
【０４５４】
実施形態６３．前記アゴニストＣＤ４０抗体が低いフコシル化レベル、例えば、ＳＥＡ−ＣＤ４０抗体を有する、実施形態６２に記載の方法。
【０４５５】
実施形態６４．実施形態３７に記載のマスクされたＣＤ４７抗体の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）との組み合わせを投与することによってがんを治療する方法であって、前記ＡＤＣの抗体はがん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、前記抗体は細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される、前記方法。
【０４５６】
実施形態６５．前記細胞傷害性薬剤がアウリスタチンである、実施形態６４に記載の方法。
【０４５７】
実施形態６６．前記ＡＤＣの抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、実施形態６４に記載の方法。
【図１−１】
2021503927.tif 000035
【図１−２】
2021503927.tif 000036
【図１−３】
2021503927.tif 000037
【図１−４】
2021503927.tif 000038
【図１−５】
2021503927.tif 000039
【図１−６】
2021503927.tif 000040
【図１−７】
2021503927.tif 000041
【図１−８】
2021503927.tif 000042
【図１−９】
2021503927.tif 000043
【図１−１０】
2021503927.tif 000044
【図２−１】
2021503927.tif 000045
【図２−２】
2021503927.tif 000046
【図２−３】
2021503927.tif 000047
【図３−１】
2021503927.tif 000048
【図３−２】
2021503927.tif 000049
【図４−１】
2021503927.tif 000050
【図４−２】
2021503927.tif 000051
【図５−１】
2021503927.tif 000052
【図５−２】
2021503927.tif 000053
【図６−１】
2021503927.tif 000054
【図６−２】
2021503927.tif 000055
【図７−１】
2021503927.tif 000056
【図７−２】
2021503927.tif 000057
【図７−３】
2021503927.tif 000058
【図７−４】
2021503927.tif 000059
【図８−１】
2021503927.tif 000060
【図８−２】
2021503927.tif 000061
【図８−３】
2021503927.tif 000062
【図８−４】
2021503927.tif 000063
【図９−１】
2021503927.tif 000064
【図９−２】
2021503927.tif 000065
【図１０】
2021503927.tif 000066
【図１１】
2021503927.tif 000067
【図１２】
2021503927.tif 000068
【図１３】
2021503927.tif 000069
【図１４】
2021503927.tif 000070
【図１５】
2021503927.tif 000071
【図１６】
2021503927.tif 000072
【図１７】
2021503927.tif 000073
【図１８−１】
2021503927.tif 000074
【図１８−２】
2021503927.tif 000075
【図１８−３】
2021503927.tif 000076
【図１８−４】
2021503927.tif 000077
【図１９−１】
2021503927.tif 000078
【図１９−２】
2021503927.tif 000079
【図１９−３】
2021503927.tif 000080
【図１９−４】
2021503927.tif 000081
【図２０】
2021503927.tif 000082
【図２１】
2021503927.tif 000083
【図２２】
2021503927.tif 000084
【図２３−１】
2021503927.tif 000085
【図２３−２】
2021503927.tif 000086
【図２３−３】
2021503927.tif 000087
【図２３−４】
2021503927.tif 000088
【図２４】
2021503927.tif 000089
【図２５−１】
2021503927.tif 000090
【図２５−２】
2021503927.tif 000091
【図２６】
2021503927.tif 000092
【図２７】
2021503927.tif 000093
【図２８】
2021503927.tif 000094
【図２９】
2021503927.tif 000095
【図３０】
2021503927.tif 000096
【図３１】
2021503927.tif 000097
【図３２】
2021503927.tif 000098
【図３３】
2021503927.tif 000099
【図３４】
2021503927.tif 000100
【図３５−１】
2021503927.tif 000101
【図３５−２】
2021503927.tif 000102
【図３６−１】
2021503927.tif 000103
【図３６−２】
2021503927.tif 000104
【図３７−１】
2021503927.tif 000105
【図３７−２】
2021503927.tif 000106
【図３７−３】
2021503927.tif 000107
【図３７−４】
2021503927.tif 000108
【図３７−５】
2021503927.tif 000109
【図３７−６】
2021503927.tif 000110
【図３８】
2021503927.tif 000111
【図３９−１】
2021503927.tif 000112
【図３９−２】
2021503927.tif 000113
【図３９−３】
2021503927.tif 000114
【図４０】
2021503927.tif 000115
【図４１】
2021503927.tif 000116
【図４２】
2021503927.tif 000117
【図４３】
2021503927.tif 000118
【図４４】
2021503927.tif 000119
【図４５−１】
2021503927.tif 000120
【図４５−２】
2021503927.tif 000121
【図４５−３】
2021503927.tif 000122
【図４６−１】
2021503927.tif 000123
【図４６−２】
2021503927.tif 000124
【図４７】
2021503927.tif 000125
【配列表】
2021503927000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月29日(2020.7.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０７】
本方法に従うと、典型的には、少量のフコースのみが、ヒト化またはキメラ抗体のＮ−グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、様々な実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満の抗体の分子は、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％の抗体の分子は、フコースによるコアフコシル化を有する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０８】
ある特定の実施形態では、少量のフコース類似体のみ（またはフコース類似体の代謝物または産物）が、Ｎ−グリコシド連結複合型糖鎖（複数可）に組み込まれる。例えば、様々な実施形態では、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約３％未満のヒト化またはキメラ抗体は、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、約２％のヒト化またはキメラ抗体は、フコース類似体、またはフコース類似体の代謝物もしくは産物によるコアフコシル化を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０９】
抗体産生細胞をフコース類似体と共にインキュベートすることによりフコシル化されていない抗体を作製する方法は、例えば、ＷＯ２００９／１３５１８１に記載される。簡潔に、ヒト化またはキメラ抗体を発現するように操作された細胞は、フコース類似体、またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物の存在下でインキュベートされる。細胞内代謝物は、例えば、ＧＤＰ修飾された類似体または完全にもしくは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。産物は、例えば、完全にまたは部分的に脱エステル化された類似体であり得る。いくつかの実施形態では、フコース類似体は、フコースサルベージ経路において酵素（複数可）を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコキナーゼまたはＧＤＰ−フコース−ピロホスホリラーゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコシルトランスフェラーゼ（好ましくは、１，６−フコシルトランスフェラーゼ、例えば、ＦＵＴ８タンパク質）を阻害する。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコースの新規合成経路において酵素の活性を阻害することができる。例えば、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼまたは／またはＧＤＰ−フコースシンセターゼの活性を阻害することができる。いくつかの実施形態では、フコース類似体（またはフコース類似体の細胞内代謝物もしくは産物）は、フコース輸送体（例えば、ＧＤＰ−フコース輸送体）を阻害することができる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１１】
コアフコシル化を低下させるために細胞系を操作するための方法は、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン、及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含んだ。遺伝子ノックアウトでは、ＦＵＴ８をコードする遺伝子（アルファ１，６−フコシルトランスフェラーゼ酵素）が不活性化される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ−フコースからＮ−グリカンのＡｓｎ連結（Ｎ連結）ＧｌｃＮａｃの６位へのフコシル残基の移動を触媒する。ＦＵＴ８は、フコースをＡｓｎ２９７でのＮ−連結二分岐炭水化物へ添加する役割を果たす唯一の酵素であると報告される。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩまたはゴルジアルファマンノシダーゼＩＩのような酵素をコードする遺伝子を添加する。細胞におけるかかる酵素のレベルの増加は、フコシル化経路からモノクローナル抗体を転用し（コアフコシル化の減少を引き起こす）、バイセクトＮ−アセチルグルコサミンの量を増加させる。ＲＮＡｉは、典型的には、ＦＵＴ８遺伝子発現も標的化し、減少したｍＲＮＡ転写レベルを引き起こすか、または遺伝子発現を完全にノックアウトする。これらの方法のいずれかは、フコシル化されていない抗体、例えば、ヒト化またはキメラ抗体を産生することができるであろう細胞系を生成するために使用され得る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４５７】
実施形態６６．前記ＡＤＣの抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、実施形態６４に記載の方法。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目２)
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６、１９、２１、及び２３から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号１７、２０、２２、及び２４から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１及び３４から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３２及び３５から選択されるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３及び３６から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ｃ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｄ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目３)
前記重鎖可変領域が配列番号１６、１７、及び１８、配列番号１９、２０、及び１８、配列番号２１、２２、及び１８、配列番号１６、２０、及び１８、ならびに配列番号２３、２４、及び１８から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、項目１または項目２に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目４)
前記軽鎖可変領域が配列番号３１、３２、及び３３、配列番号３１、３２、及び３６、ならびに配列番号３４、３５、及び３３から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目５)
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１９、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２１、２２、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３１、３２、及び３３、配列番号１６、２０、１８、３４、３５、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３３、配列番号２３、２４、１８、３４、３５、及び３３、配列番号１６、１７、１８、３１、３２、及び３６、配列番号１９、２０、１８、３１、３２、及び３６、配列番号２１、２２、１８、３１、３２、及び３６、１６、２０、１８、３１、３２、及び３６、ならびに配列番号２３、２４、１８、３１、３２、及び３６から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目６)
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７、及び８から選択されるアミノ酸配列への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４、及び１５から選択されるアミノ酸配列への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目７)
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２５、２８、及び２９から選択されるＨＣＤＲ１、配列番号２６及び３０から選択されるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号２７であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３７及び４０から選択されるＬＣＤＲ１、配列番号３８であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３９及び４１から選択されるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含み、
前記軽鎖可変領域が、
ｃ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｄ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目８)
前記重鎖可変領域が配列番号２５、２６、及び２７、配列番号２８、２６、及び２７、配列番号２９、３０、及び２７、ならびに配列番号２９、２６、及び２７から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、項目６または項目７に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目９)
前記軽鎖可変領域が配列番号３７、３８、及び３９、配列番号４０、３８、及び３９、ならびに配列番号３７、３８、及び４１から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、項目６〜８のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１０)
前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２５、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２８、２６、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、４０、３８、及び３９、配列番号２９、３０、２７、３７、３８、及び４１、配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び３９、配列番号２９、２６、２７、４０、３８、及び３９、ならびに配列番号２９、２６、２７、３７、３８、及び４１から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、項目６〜９のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１１)
前記重鎖可変領域が配列番号２、３、４、５、６、７及び８から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１〜１０のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１２)
前記軽鎖可変領域が配列番号１０、１１、１２、１３、１４及び１５から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１３)
前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が配列番号２及び１０、配列番号３及び１１、配列番号３及び１２、配列番号３及び１３、配列番号３及び１４、配列番号４及び１１、配列番号４及び１２、配列番号４及び１３、配列番号４及び１４、配列番号５及び１１、配列番号５及び１２、配列番号５及び１３、配列番号５及び１４、配列番号６及び１１、配列番号６及び１２、配列番号６及び１３、配列番号６及び１４、配列番号７及び１１、配列番号７及び１２、配列番号７及び１３、配列番号７及び１４、配列番号８及び１１、配列番号８及び１２、配列番号８及び１３、配列番号８及び１４、配列番号３及び１５を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１４)
ヒトＣＤ４７に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号１６であるＨＣＤＲ１、配列番号１７であるＨＣＤＲ２、ならびに配列番号１８であるＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３１であるＬＣＤＲ１、配列番号３２であるＬＣＤＲ２、ならびに配列番号３３であるＬＣＤＲ３を含み、前記重鎖可変領域が配列番号３への少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１３への少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記抗体がＡｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１５)
前記重鎖可変領域が配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含む、項目１４に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１６)
前記重鎖可変領域が、
ａ）配列番号８８に示されるヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４４、Ｈ４９、Ｈ８２、Ｈ８９、Ｈ９１、及びＨ９４がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−２３／ＨＪ４フレームワーク、または
ｂ）配列番号８９に示されるヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−４８／ＨＪ４フレームワーク、または
ｃ）配列番号９０に示されるヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ２９、Ｈ４９、及びＨ８２がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−６６／ＨＪ４フレームワーク、または
ｄ）配列番号９１に示されるヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｈ４９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＨＶ３−７４／ＨＪ４フレームワーク、を含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１７)
Ｋａｂａｔ番付に従うＨ２９がＦであり、Ｈ４４がＲまたはＧであり、Ｈ４９がＡであり、Ｈ８２がＭまたはＩであり、Ｈ８９がＩまたはＶであり、Ｈ９１がＦまたはＹであり、Ｈ９４がＲである、項目１６に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１８)
前記軽鎖可変領域が、
ａ）配列番号９２に示されるヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ４、Ｌ２１、Ｌ６９、及びＬ８５がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ６−２１／ＫＪ２フレームワーク、または
ｂ）配列番号９３に示されるヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワークであって、Ｋａｂａｔ番付に従うフレームワーク位置Ｌ２１、Ｌ４９、及びＬ６９がドナー残基である、前記ヒトＩＧＫＶ１−２７／ＫＪ２フレームワーク、を含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目１９)
Ｋａｂａｔ番付に従うＬ４がＭであり、Ｌ２１がＬであり、Ｌ４９がＫであり、Ｌ６９がＴまたはＳであり、Ｌ８５がＶまたはＴである、項目１８に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
(項目２０)
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩｇＧ１アイソタイプのものである、項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２１)
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する、項目１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２２)
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を有する、項目１〜２１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２３)
前記抗体またはその抗原結合断片が、その親抗体と比較して、増強された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有する、項目１〜２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２４)
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、１本鎖抗体、ｓｃＦｖ断片、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである、項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２５)
前記抗体またはその抗原結合断片がインビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、項目１〜２４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２６)
その親抗体と比較して、低下したコアフコシル化を有する、項目１〜２５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２７)
フコシル化されていない、項目１〜２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
(項目２８)
前記抗体または抗原結合断片がＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する、項目１〜２７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
(項目２９)
前記抗体または抗原結合断片がＡｂ４７と比較して低下した赤血球の赤血球凝集を有する、項目１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
(項目３０)
項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片をコードする、核酸配列。
(項目３１)
項目２９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
(項目３２)
項目３０に記載の核酸または項目２８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
(項目３３)
項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を発現する、宿主細胞。
(項目３４)
項目３２または項目３３に記載の宿主細胞を培養することを含む、項目１〜２３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を産生する方法。
(項目３５)
前記抗体またはその抗原結合断片を単離することをさらに含む、項目３４に記載の方法。
(項目３６)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、前記対象に項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体または抗原結合断片の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
(項目３７)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
(項目３８)
ステップａ）が、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む、項目３７に記載の方法。
(項目３９)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に項目１〜２６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
(項目４０)
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、項目３９に記載の方法。
(項目４１)
前記マクロファージ染色が抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される、項目４０に記載の方法。
(項目４２)
前記ＣＤ４７発現癌が血液癌または固形癌である、項目３６〜４１のいずれか一項に記載の方法。
(項目４３)
前記ＣＤ４７発現癌が、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される、項目３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
(項目４４)
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌、癌腫、頭頸部癌、皮膚癌、黒色腫、前立腺癌、下垂体癌、胃癌、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される、項目３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
(項目４５)
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び乳癌から選択される、項目３６〜４２のいずれか一項に記載の方法。
(項目４６)
前記ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される、項目３６〜４５のいずれか一項に記載の方法。
(項目４７)
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わされて投与される、項目３６〜４６のいずれか一項に記載の方法。
(項目４８)
前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体が低いフコシル化レベルを有するか、またはフコシル化されていない、項目４７に記載の方法。
(項目４９)
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされて投与され、前記ＡＤＣの前記抗体ががん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、前記抗体が細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される、項目３６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
(項目５０)
前記細胞傷害性薬剤がアウリスタチンである、項目４９に記載の方法。
(項目５１)
前記ＡＤＣの前記抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、項目５０に記載の方法。
(項目５２)
ＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、前記細胞を項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む、前記方法。
(項目５３)
前記細胞がインビトロにある、項目５２に記載の方法。
(項目５４)
前記細胞がインビボにある、項目５２に記載の方法。
(項目５５)
前記ヒトＣＤ４７タンパク質及び少なくとも１つのマスキングドメインに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むマスクされた抗体であって、少なくとも１つのマスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、前記マスクされた抗体。
(項目５６)
前記少なくとも１つのマスキングドメインが、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７タンパク質への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる、項目５５に記載のマスクされた抗体。
(項目５７)
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、少なくとも約１００倍低下する、項目５６に記載のマスクされた抗体。
(項目５８)
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、約２００倍〜約１５００倍低下する、項目５６に記載のマスクされた抗体。
(項目５９)
前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結されるか、または前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結されるか、または前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結され、前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結される、項目５５〜５８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目６０)
前記第１のマスキングドメインが配列番号４４、４６、４８、５０、５２、５４、７５、７７、７９、８１、８３、８５、及び９４から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２のマスキングドメインが配列番号４５、４７、４９、５１、５３、５５、７６、７８、８０、８２、８４、８６、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、項目５９に記載のマスクされた抗体。
(項目６１)
前記第１のマスキングドメイン及び前記第２のマスキングドメインが、配列番号４４及び４５、配列番号４６及び４７、配列番号４８及び４９、配列番号５０及び５１、配列番号５２及び５３、配列番号５４及び５５、配列番号７５及び７６、配列番号７７及び７８、配列番号７９及び８０、配列番号８１及び８２、配列番号８３及び８４、配列番号８５及び８６、ならびに配列番号９４及び９５から選択されるマスキングドメインの対である、項目６０に記載のマスクされた抗体。
(項目６２)
前記第１のマスキングドメインが前記重鎖のＮ末端に連結され、前記第２のマスキングドメインが前記軽鎖のＮ末端に連結される、項目５９〜６１のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目６３)
各マスキングドメインが、プロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーを介して前記重鎖または軽鎖に連結される、項目５９〜６２のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目６４)
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、項目６３に記載のマスクされた抗体。
(項目６５)
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、項目６４に記載のマスクされた抗体。
(項目６６)
ＭＭＰによる切断に続き、前記抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖及び／または軽鎖が前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを含む、項目６４または項目６５に記載のマスクされた抗体。
(項目６７)
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲを含む、項目６６に記載のマスクされた抗体。
(項目６８)
前記抗体またはその抗原結合断片が項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片である、項目５５〜６７のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目６９)
第１のマスキングドメインに連結された、配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖及び第２のマスキングドメインに連結された、配列番号４３のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、項目５５〜６８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目７０)
項目１〜２９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片及び少なくとも１つのマスキングドメインを含む、マスクされた抗体。
(項目７１)
少なくとも１つのマスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、項目７０に記載のマスクされた抗体。
(項目７２)
各マスキングドメインが配列番号４４〜５５、７５〜８６、９４、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、項目７０に記載のマスクされた抗体。
(項目７３)
前記少なくとも１つのマスキングドメインが、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、ヒトＣＤ４７タンパク質への前記抗体または抗原結合断片の結合親和性を低下させる、項目７０〜７２のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目７４)
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、少なくとも約１００倍低下する、項目７３に記載のマスクされた抗体。
(項目７５)
前記結合親和性が、前記少なくとも１つのマスキングドメインを有しない前記抗体またはその抗原結合断片と比較して、約２００倍〜約１５００倍低下する、項目７３に記載のマスクされた抗体。
(項目７６)
前記抗体またはその抗原結合断片が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結されるか、または前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結されるか、または前記重鎖が第１のマスキングドメインに連結され、前記軽鎖が第２のマスキングドメインに連結される、項目７０〜７５のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目７７)
前記第１のマスキングドメインが配列番号４４、４６、４８、５０、５２、５４、７５、７７、７９、８１、８３、８５、及び９４から選択されるアミノ酸配列を含み、前記第２のマスキングドメインが配列番号４５、４７、４９、５１、５３、５５、７６、７８、８０、８２、８４、８６、及び９５から選択されるアミノ酸配列を含む、項目７６に記載のマスクされた抗体。
(項目７８)
前記第１のマスキングドメイン及び前記第２のマスキングドメインが、配列番号４４及び４５、配列番号４６及び４７、配列番号４８及び４９、配列番号５０及び５１、配列番号５２及び５３、配列番号５４及び５５、配列番号７５及び７６、配列番号７７及び７８、配列番号７９及び８０、配列番号８１及び８２、配列番号８３及び８４、配列番号８５及び８６、ならびに配列番号９４及び９５から選択されるマスキングドメインの対である、項目７７に記載のマスクされた抗体。
(項目７９)
前記第１のマスキングドメインが前記重鎖のＮ末端に連結され、前記第２のマスキングドメインが前記軽鎖のＮ末端に連結される、項目７６〜７８のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目８０)
各マスキングドメインが、プロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーを介して前記重鎖または軽鎖に連結される、項目７６〜７９のいずれか一項に記載のマスクされた抗体。
(項目８１)
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含む、項目８０に記載のマスクされた抗体。
(項目８２)
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、項目８１に記載のマスクされた抗体。
(項目８３)
ＭＭＰによる切断に続き、前記抗体またはその抗原結合断片の前記重鎖及び／または軽鎖が前記ＭＭＰ切断部位のスタブアミノ酸レムナントを含む、項目８１または項目８２に記載のマスクされた抗体。
(項目８４)
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記配列ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲを含む、項目８３に記載のマスクされた抗体。
(項目８５)
項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体をコードする、核酸配列。
(項目８６)
項目８５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
(項目８７)
項目８６に記載の核酸または項目７８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
(項目８８)
項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体を発現する、宿主細胞。
(項目８９)
項目８７または項目８８に記載の宿主細胞を培養することを含む、項目４９〜７６のいずれか一項に記載のマスクされた抗体を産生する方法。
(項目９０)
前記マスクされた抗体を単離することをさらに含む、項目８９に記載の方法。
(項目９１)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、前記対象に項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
(項目９２)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）前記がんにおいて周囲の非がん組織に対して上昇したレベルのＭＭＰを有するものとして対象を特定するステップと、
ｂ）前記対象に項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与するステップであって、前記マスクされた抗体の各マスキングドメインがプロテアーゼ切断可能リンカーを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーがマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）切断部位を含むステップと、を含む、前記方法。
(項目９３)
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位から選択される、項目９２に記載の方法。
(項目９４)
前記ＭＭＰが、ＭＭＰ２、ＭＭＰ７、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１３からなる群から選択される、項目９２または項目９３に記載の方法。
(項目９５)
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織及び前記非がん組織においてＭＭＰを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、項目９２〜９４のいずれか一項に記載の方法。
(項目９６)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）ＣＤ４７発現癌を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
(項目９７)
ステップａ）が、
ｉ）がん組織を単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織においてＣＤ４７を検出することと、を含む、項目９６に記載の方法。
(項目９８)
対象においてＣＤ４７発現癌を治療するための方法であって、
ａ）がん組織において非がん組織に対して上昇したレベルのマクロファージ浸潤を有するものとして対象を特定することと、
ｂ）前記対象に項目５５〜８４のいずれか一項に記載のマスクされた抗体の治療有効量を投与することと、を含む、前記方法。
(項目９９)
ステップａ）が、
ｉ）がん組織及び周囲の非がん組織を前記対象から単離することと、
ｉｉ）前記単離されたがん組織において及び非がん組織においてマクロファージを検出することと、
ｉｉｉ）前記非がん組織に対して前記がん組織における染色の量を比較することと、を含む、項目９８に記載の方法。
(項目１００)
前記マクロファージ染色が抗ＣＤ１６３抗体を用いて実行される、項目９９に記載の方法。
(項目１０１)
前記ＣＤ４７発現癌が血液癌または固形癌である、項目９１〜１００のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０２)
前記ＣＤ４７発現癌が、非ホジキンリンパ腫、Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リヒター症候群、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性多血症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び未分化大細胞リンパ腫から選択される、項目９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０３)
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、腎臓癌、膀胱癌、脊髄癌、脳癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、結腸直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、食道癌、胆嚢癌、消化器癌、胃癌、肉腫、頭頸部癌、黒色腫、皮膚癌、前立腺癌、下垂体癌、胃癌、子宮癌、膣癌及び甲状腺癌から選択される、項目９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０４)
前記ＣＤ４７発現癌が、肺癌、肉腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、黒色腫、及び乳癌から選択される、項目９１〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０５)
前記抗ＣＤ４７抗体が、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−Ｌ２、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ−１）、ＣＥＡＣＡＭ−５、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＣＤ１６０、２Ｂ４またはＴＧＦＲのうちの１つ以上から選ばれる免疫チェックポイント分子の阻害剤と組み合わされて投与される、項目９１〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０６)
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と組み合わされて投与される、項目９１〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０７)
前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体が低いフコシル化レベルを有するか、またはフコシル化されていない、項目１０６に記載の方法。
(項目１０８)
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が抗体薬物複合体（ＡＤＣ）と組み合わされて投与され、前記ＡＤＣの前記抗体ががん細胞の細胞外表面上に発現されるタンパク質に特異的に結合し、前記抗体が細胞傷害性薬剤を含む薬物リンカーに複合体化される、項目９１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１０９)
前記細胞傷害性薬剤がアウリスタチンである、項目１０８に記載の方法。
(項目１１０)
前記ＡＤＣの前記抗体がｖｃＭＭＡＥ及びｍｃＭＭＡＦからなる群から選択される薬物リンカーに複合体化される、項目１０９に記載の方法。
(項目１１１)
前記マスクされた抗体がプロテアーゼ切断可能リンカーを含む少なくとも１つのマスキングドメインを含み、前記プロテアーゼ切断可能リンカーが腫瘍微小環境において切断される、項目９１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１２)
前記腫瘍微小環境における前記プロテアーゼ切断可能リンカーの切断に続いて、前記マスキングドメインが前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片から放出される、項目１１１に記載の方法。
(項目１１３)
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがアミノ酸配列ＩＰＶＳＬＲＳＧ（配列番号７３）またはＧＰＬＧＶＲ（配列番号５７）を含む、項目１１１または項目１１２に記載の方法。
(項目１１４)
前記プロテアーゼ切断可能リンカーがＭＭＰ切断部位を含む、項目１１１〜１１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１５)
前記ＭＭＰ切断部位が、ＭＭＰ２切断部位、ＭＭＰ７切断部位、ＭＭＰ９切断部位及びＭＭＰ１３切断部位からなる群から選択される、項目１１４に記載の方法。
(項目１１６)
前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片の放出に続いて、前記抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片が前記プロテアーゼ切断可能リンカーのスタブアミノ酸レムナントを有する、項目１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１７)
前記スタブアミノ酸レムナントが前記抗体の前記Ｎ末端で前記ＬＲＳＧ、ＳＧ、またはＶＲの配列を含む、項目１１６に記載の方法。
(項目１１８)
前記腫瘍微小環境における切断に続いて、前記放出された抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がＣＤ４７に対する前記マスクされた抗体の前記親和性よりも少なくとも約１００倍強力な親和性でＣＤ４７に結合する、項目１１１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１１９)
前記腫瘍微小環境における切断に続いて、前記放出された抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合断片がＣＤ４７に対する前記マスクされた抗体の前記親和性よりも２００〜１５００倍強力な親和性でＣＤ４７に結合する、項目１１１〜１１７のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２０)
前記抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片または前記マスクされた抗体の前記抗ＣＤ４７抗体もしくはその抗原結合断片がその親抗ＣＤ４７抗体と比較してインビトロで低下した赤血球凝集を呈する、項目３６〜５１及び９１〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２１)
前記親抗体がＡｂ４７である、項目１２０に記載の方法。
(項目１２２)
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体の投与が前記対象における赤血球凝集を誘導しない、項目３６〜５１及び９１〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２３)
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体がインビトロ及び／またはインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、項目３６〜５１及び９１〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
(項目１２４)
前記抗ＣＤ４７抗体またはマスクされた抗体がインビボでＣＤ４７発現細胞のアポトーシスを誘導する、項目１２３に記載の方法。
(項目１２５)
前記ＣＤ４７発現細胞ががん細胞である、項目１２４に記載の方法。
【国際調査報告】
2021503927.tif 000126
2021503927.tif 000127
2021503927.tif 000128
2021503927.tif 000129
2021503927.tif 000130
2021503927.tif 000131
2021503927.tif 000132
2021503927.tif 000133