(57)【要約】  対象において悪性固形腫瘍を治療する本開示の方法には、悪性固形腫瘍組織内で差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）保持される免疫調節用量の放射性リン脂質エーテル金属キレート、放射性ハロゲン化リン脂質エーテル、またはその他の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤を対象に投与するステップと、免疫賦活剤、例えば免疫チェックポイント阻害剤などを対象に全身投与することによって対象において免疫療法を行うステップが含まれる。限定されない例では、放射性リン脂質金属キレート化合物は、式（Ｉ）を有し、式中、Ｒ１は、金属原子にキレート化されたキレート剤を含み、該金属原子は、６時間よりも長く３０日未満の半減期をもつアルファ、ベータまたはオージェ放出金属同位体であるか、あるいは、Ｒ１は、放射性ハロゲン同位体を含む。【化１】2021502368.tif 000062  そのような一実施形態では、ａは１であり、ｎは１８であり、ｍは０であり、ｂは１であり、Ｒ２は−Ｎ＋（ＣＨ３）３である。【選択図】図５７
2021502368.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療する方法であって、対象に、
（ａ）悪性固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持される、免疫調節用量の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤、および
（ｂ）１以上の免疫賦活剤、
を全身投与することを含み、
それによって対象において癌を治療する、方法。
【請求項２】
１以上の免疫賦活剤が、１以上のチェックポイント分子を標的化する能力のある免疫チェックポイント阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
チェックポイント阻害剤が標的化可能な１以上のチェックポイント分子が、Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）、ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ）、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）、ＰＤ−１（プログラム細胞死受容体１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＣＤ４０（分化抗原群４０）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ１３７（分化抗原群１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４；分化抗原群１３４）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド；分化抗原群２５２）、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質リガンド）、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激性（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ））、ＩＣＯＳＬ（誘導性Ｔ細胞共刺激リガンド）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；分化抗原群２７６）、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１；Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１）、ＩＤＯ（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）、ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）、Ｇａｌ−９（ガレクチン−９）、およびＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー）からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１以上の免疫チェックポイント阻害剤が、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体、または１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、および抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＩＴＲＬ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＩＣＯＳＬ抗体、Ｂ７Ｈ３抗体、Ｂ７Ｈ４抗体、ＩＤＯ抗体、ＴＩＭ−３抗体、Ｇａｌ−９抗体、およびＶＩＳＴＡ抗体からなる群から選択されるか、または、１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤が、小分子ＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＴＲＴ剤が、
（１）ＭＩＢＧ中のヨウ素原子が放射性ヨウ素同位体であるメタヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、
（２）放射標識された腫瘍標的化抗体、
（３）放射性ラジウム同位体；あるいは
（４）次式：
【化１】
2021502368.tif 000028
〔式中、
Ｒ１は、（ａ）金属原子にキレート化されたキレート剤であって、金属原子が、６時間よりも長く３０日未満の半減期をもつアルファ、ベータまたはオージェ放出金属同位体；または（ｂ）放射性ハロゲン同位体を含み、
ａは、０または１であり、
ｎは、１２〜３０の整数であり、
ｍは、０または１であり、
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＸ、−ＯＣＯＸ、および−ＯＸからなる群から選択され、Ｘは、アルキルまたはアリールアルキルであり、
Ｒ２は、−Ｎ＋Ｈ３、−Ｎ＋Ｈ２Ｚ、−Ｎ＋ＨＺ２、および−Ｎ＋Ｚ３からなる群から選択され、各Ｚは、独立にアルキルまたはアリールであり、かつ
ｂは、１または２である、ただし、Ｒ１が放射性ハロゲン同位体を含む場合、ｂは１である〕
を有するリン脂質エーテル金属キレートまたは放射性ハロゲン化リン脂質エーテルまたはその塩である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
（１）金属同位体が、Ｓｃ−４７、Ｌｕ−１７７、Ｙ−９０、Ｈｏ−１６６、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ａｕ−１９９、Ｒｈ−１０５、Ｒａ−２２３、Ａｃ−２２５、Ｐｂ−２１２、およびＴｈ−２２７からなる群から選択されるか、
（２）放射性ハロゲン同位体が、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、７７Ｂｒ、および７６Ｂｒからなる群から選択されるか、または
（３）放射性ラジウム同位体がＲａ−２２３である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４−二酢酸（ＮＯＤＡ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）およびその誘導体、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン，１−グルタル酸−４，７−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）およびその誘導体、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン，１−グルタル酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）およびその誘導体、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）およびその誘導体、１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン−４，１１−二酢酸（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）およびその誘導体、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、そのジエステル、およびその誘導体、２−シクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸（ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡ）およびその誘導体、デフェロキサミン（ＤＦＯ）およびその誘導体、１，２−［［６−カルボキシピリジン−２−イル］メチルアミノ］エタン（Ｈ２ｄｅｄｐａ）およびその誘導体、ならびにＤＡＤＡおよびその誘導体からなる群から選択され、ＤＡＤＡが次の構造：
【化２】
2021502368.tif 000029
を含む、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）ｍが０であるか、または
（ｂ）ｂが１であるか、または
（ｃ）ｎが１８であるか、または
（ｄ）Ｒ２が−Ｎ＋Ｚ３であるか、または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）の任意の２またはそれ以上の組合せである、
請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
各Ｚが、独立に−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
各Ｚが−ＣＨ３である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
金属原子にキレート化されたキレート剤が、
【化３】
2021502368.tif 000030
2021502368.tif 000031
2021502368.tif 000032
2021502368.tif 000033
2021502368.tif 000034
からなる群から選択される、請求項６〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、
【化４】
2021502368.tif 000035
2021502368.tif 000036
2021502368.tif 000037
2021502368.tif 000038
2021502368.tif 000039
からなる群から選択される式を有し、
選択された化合物が、金属原子にキレート化されている、
請求項６〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ａが１であり、ｂが１であり、ｍが０であり、ｎが１８であり、Ｒ２が−Ｎ＋（ＣＨ３）３である、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、金属原子をキレート化したＮＭ６００であるか、または放射性ハロゲン化リン脂質エーテルがＮＭ４０４である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、９０Ｙ−ＮＭ６００または１７７Ｌｕ−ＮＭ６００である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
放射性ハロゲン化リン脂質エーテルが、［１２３Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２４Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２５Ｉ］−ＮＭ４０４、［１３１Ｉ］−ＮＭ４０４、［２１１Ａｔ］−ＮＭ４０４、［７７Ｂｒ］−ＮＭ４０４、または［７６Ｂｒ］−ＮＭ４０４である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
ＴＲＴ剤、免疫チェックポイント阻害剤、またはその両方、が静脈内投与される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
対象がヒトである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
治療される癌が、黒色腫、神経芽腫、肺癌、副腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、皮膚または頭頸部の扁平上皮癌、腸癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、神経膠腫、乳癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、ウィルムス腫瘍、および小児脳腫瘍からなる群から選択される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
癌が、チェックポイント分子ではない腫瘍抗原に対する抗体を対象に投与することなく治療される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
癌が、対象に抗ＧＤ２抗体を投与することなく治療される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療するための（ａ）免疫調節用量の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤および（ｂ）１以上の免疫賦活剤の使用であって、ＴＲＴ剤が、悪性固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持されることができ、ＴＲＴ剤と１以上の免疫賦活剤が両方とも対象に全身投与され、
それによって対象において癌を治療する、使用。
【請求項２４】
１以上の免疫賦活剤が、１以上のチェックポイント分子を標的化する能力のある免疫チェックポイント阻害剤である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
チェックポイント阻害剤が標的化可能な１以上のチェックポイント分子が、Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）、ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ）、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）、ＰＤ−１（プログラム細胞死受容体１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＣＤ４０（分化抗原群４０）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ１３７（分化抗原群１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４；分化抗原群１３４）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド；分化抗原群２５２）、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質リガンド）、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激性（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ））、ＩＣＯＳＬ（誘導性Ｔ細胞共刺激リガンド）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；分化抗原群２７６）、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１；Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１）、ＩＤＯ（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）、ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）、Ｇａｌ−９（ガレクチン−９）、およびＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー）からなる群から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
１以上の免疫チェックポイント阻害剤が、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体または１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項２４または請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、および抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＩＴＲＬ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＩＣＯＳＬ抗体、Ｂ７Ｈ３抗体、Ｂ７Ｈ４抗体、ＩＤＯ抗体、ＴＩＭ−３抗体、Ｇａｌ−９抗体、およびＶＩＳＴＡ抗体からなる群から選択されるか、または、１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤が、小分子ＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
ＴＲＴ剤が、
（１）ＭＩＢＧ中のヨウ素原子が放射性ヨウ素同位体であるメタヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、
（２）放射標識された腫瘍標的化抗体、
（３）放射性ラジウム同位体、あるいは
（４）次式：
【化５】
2021502368.tif 000040
〔式中、
Ｒ１は、（ａ）金属原子にキレート化されたキレート剤であって、金属原子が、６時間よりも長く３０日未満の半減期をもつアルファ、ベータまたはオージェ放出金属同位体であるか、または（ｂ）放射性ハロゲン同位体を含み、
ａは、０または１であり、
ｎは、１２〜３０の整数であり、
ｍは、０または１であり、
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＸ、−ＯＣＯＸ、および−ＯＸからなる群から選択され、Ｘは、アルキルまたはアリールアルキルであり、
Ｒ２は、−Ｎ＋Ｈ３、−Ｎ＋Ｈ２Ｚ、−Ｎ＋ＨＺ２、および−Ｎ＋Ｚ３からなる群から選択され、各Ｚは、独立にアルキルまたはアリールであり、かつ
ｂは、１または２である、
ただし、Ｒ１が放射性ハロゲン同位体を含む場合、ｂは１である〕
を有するリン脂質エーテル金属キレートまたは放射性ハロゲン化リン脂質エーテルまたはその塩である、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
（１）金属同位体が、Ｓｃ−４７、Ｌｕ−１７７、Ｙ−９０、Ｈｏ−１６６、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ａｕ−１９９、Ｒｈ−１０５、Ｒａ−２２３、Ａｃ−２２５、Ｐｂ−２１２、およびＴｈ−２２７からなる群から選択されるか、
（２）放射性ハロゲン同位体が、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、７７Ｂｒ、および７６Ｂｒからなる群から選択されるか、または
（３）放射性ラジウム同位体がＲａ−２２３である、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４−二酢酸（ＮＯＤＡ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）およびその誘導体、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）およびその誘導体、１，４，７−トリアザシクロノナン，１−グルタル酸−４，７−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）およびその誘導体、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン，１−グルタル酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）およびその誘導体、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）およびその誘導体、１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン−４，１１−二酢酸（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）およびその誘導体、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、そのジエステル、およびその誘導体、２−シクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸（ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡ）およびその誘導体、デフェロキサミン（ＤＦＯ）およびその誘導体、１，２−［［６−カルボキシピリジン−２−イル］メチルアミノ］エタン（Ｈ２ｄｅｄｐａ）およびその誘導体、ならびにＤＡＤＡおよびその誘導体からなる群から選択され、ＤＡＤＡが次の構造：
【化６】
2021502368.tif 000041
を含む、請求項２８または請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
（ａ）ｍが０であるか、または
（ｂ）ｂが１であるか、または
（ｃ）ｎが１８であるか、または
（ｄ）Ｒ２が−Ｎ＋Ｚ３であるか、または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）の任意の２またはそれ以上の組合せである、
請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
各Ｚが、独立に−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
各Ｚが−ＣＨ３である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
金属原子にキレート化されたキレート剤が、
【化７】
2021502368.tif 000042
2021502368.tif 000043
2021502368.tif 000044
2021502368.tif 000045
からなる群から選択される、請求項２８〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、
【化８】
2021502368.tif 000046
2021502368.tif 000047
2021502368.tif 000048
2021502368.tif 000049
2021502368.tif 000050
からなる群から選択される式を有し、
選択された化合物が、金属原子にキレート化されている、
請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
ａが１であり、ｂが１であり、ｍが０であり、ｎが１８であり、Ｒ２が−Ｎ＋（ＣＨ３）３である、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、金属原子をキレート化したＮＭ６００であるか、または放射性ハロゲン化リン脂質エーテルがＮＭ４０４である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、９０Ｙ−ＮＭ６００または１７７Ｌｕ−ＮＭ６００である、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
放射性ハロゲン化リン脂質エーテルが、［１２３Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２４Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２５Ｉ］−ＮＭ４０４、［１３１Ｉ］−ＮＭ４０４、［２１１Ａｔ］−ＮＭ４０４、［７７Ｂｒ］−ＮＭ４０４、または［７６Ｂｒ］−ＮＭ４０４である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
ＴＲＴ剤、免疫チェックポイント阻害剤、またはその両方、が静脈内投与される、請求項２３〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
対象がヒトである、請求項２３〜４０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４２】
治療される癌が、黒色腫、神経芽腫、肺癌、副腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、皮膚または頭頸部の扁平上皮癌、腸癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、神経膠腫、乳癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、ウィルムス腫瘍、および小児脳腫瘍からなる群から選択される、請求項２３〜４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
癌が、チェックポイント分子ではない腫瘍抗原に対する抗体を対象に投与することなく治療される、請求項２３〜４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４４】
癌が、対象に抗ＧＤ２抗体を投与することなく治療される、請求項２３〜４３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４５】
対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療するための薬物の製造における（ａ）免疫調節用量の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤または（ｂ）１以上の免疫賦活剤の使用であって、
ＴＲＴ剤が、悪性固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持されることができ、薬物が対象に全身投与される、使用。
【請求項４６】
１以上の免疫賦活剤が、１以上のチェックポイント分子を標的化する能力のある免疫チェックポイント阻害剤である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
チェックポイント阻害剤が標的化可能な１以上のチェックポイント分子が、Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）、ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ）、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）、ＰＤ−１（プログラム細胞死受容体１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＣＤ４０（分化抗原群４０）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ１３７（分化抗原群１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４；分化抗原群１３４）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド；分化抗原群２５２）、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質リガンド）、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激性（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ））、ＩＣＯＳＬ（誘導性Ｔ細胞共刺激リガンド）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；分化抗原群２７６）、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１；Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１）、ＩＤＯ（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）、ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）、Ｇａｌ−９（ガレクチン−９）、およびＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー）からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
１以上の免疫チェックポイント阻害剤が、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体または１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項４６または請求項４７に記載の使用。
【請求項４９】
１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体が、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、および抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、ＧＩＴＲ抗体、ＧＩＴＲＬ抗体、ＩＣＯＳ抗体、ＩＣＯＳＬ抗体、Ｂ７Ｈ３抗体、Ｂ７Ｈ４抗体、ＩＤＯ抗体、ＴＩＭ−３抗体、Ｇａｌ−９抗体、およびＶＩＳＴＡ抗体からなる群から選択されるか、または、１以上の免疫チェックポイント分子を遮断するように作用する１以上の小分子免疫チェックポイント阻害剤が、小分子ＰＤ−Ｌ１阻害剤を含む、請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
ＴＲＴ剤が、
（１）ＭＩＢＧ中のヨウ素原子が放射性ヨウ素同位体であるメタヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）、
（２）放射標識された腫瘍標的化抗体、
（３）放射性ラジウム同位体、あるいは
（４）次式：
【化９】
2021502368.tif 000051
〔式中、
Ｒ１は、（ａ）金属原子にキレート化されたキレート剤であって、金属原子が、６時間よりも長く３０日未満の半減期をもつアルファ、ベータまたはオージェ放出金属同位体であるか、または（ｂ）放射性ハロゲン同位体を含み、
ａは、０または１であり、
ｎは、１２〜３０の整数であり、
ｍは、０または１であり、
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＸ、−ＯＣＯＸ、および−ＯＸからなる群から選択され、Ｘは、アルキルまたはアリールアルキルであり、
Ｒ２は、−Ｎ＋Ｈ３、−Ｎ＋Ｈ２Ｚ、−Ｎ＋ＨＺ２、および−Ｎ＋Ｚ３からなる群から選択され、各Ｚは、独立にアルキルまたはアリールであり、かつ
ｂは、１または２である、
ただし、Ｒ１が放射性ハロゲン同位体を含む場合、ｂは１である〕
を有するリン脂質エーテル金属キレートまたは放射性ハロゲン化リン脂質エーテルまたはその塩である、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５１】
（１）金属同位体が、Ｓｃ−４７、Ｌｕ−１７７、Ｙ−９０、Ｈｏ−１６６、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ａｕ−１９９、Ｒｈ−１０５、Ｒａ−２２３、Ａｃ−２２５、Ｐｂ−２１２、およびＴｈ−２２７からなる群から選択されるか、
（２）放射性ハロゲン同位体が、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、７７Ｂｒ、および７６Ｂｒからなる群から選択されるか、または
（３）放射性ラジウム同位体がＲａ−２２３である、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
キレート剤が、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）およびその誘導体；１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４−二酢酸（ＮＯＤＡ）およびその誘導体；１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）およびその誘導体；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）およびその誘導体；１，４，７−トリアザシクロノナン，１−グルタル酸−４，７−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）およびその誘導体；１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン，１−グルタル酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）およびその誘導体；１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）およびその誘導体；１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン−４，１１−二酢酸（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）およびその誘導体；ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、そのジエステル、およびその誘導体；２−シクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸（ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡ）およびその誘導体；デフェロキサミン（ＤＦＯ）およびその誘導体；１，２−［［６−カルボキシピリジン−２−イル］メチルアミノ］エタン（Ｈ２ｄｅｄｐａ）およびその誘導体；ならびにＤＡＤＡおよびその誘導体からなる群から選択され、ＤＡＤＡが次の構造：
【化１０】
2021502368.tif 000052
を含む、請求項５０または請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
（ａ）ｍが０であるか；または
（ｂ）ｂが１であるか；または
（ｃ）ｎが１８であるか；または
（ｄ）Ｒ２が−Ｎ＋Ｚ３であるか；または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）の任意の２またはそれ以上の組合せである、
請求項５０〜５２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５４】
各Ｚが、独立に−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
各Ｚが−ＣＨ３である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
金属原子にキレート化されたキレート剤が、
【化１１】
2021502368.tif 000053
2021502368.tif 000054
2021502368.tif 000055
2021502368.tif 000056
からなる群から選択される、請求項５０〜５５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５７】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、
【化１２】
2021502368.tif 000057
2021502368.tif 000058
2021502368.tif 000059
2021502368.tif 000060
2021502368.tif 000061
からなる群から選択される式を有し、
選択された化合物が金属原子にキレート化されている、請求項５０〜５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
ａが１であり、ｂが１であり、ｍが０であり、ｎが１８であり、Ｒ２が−Ｎ＋（ＣＨ３）３である、請求項５０〜５７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５９】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、金属原子をキレート化したＮＭ６００であるか、または放射性ハロゲン化リン脂質エーテルがＮＭ４０４である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
放射性リン脂質エーテル金属キレートが、９０Ｙ−ＮＭ６００または１７７Ｌｕ−ＮＭ６００である、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
放射性ハロゲン化リン脂質エーテルが、［１２３Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２４Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２５Ｉ］−ＮＭ４０４、［１３１Ｉ］−ＮＭ４０４、［２１１Ａｔ］−ＮＭ４０４、［７７Ｂｒ］−ＮＭ４０４、または［７６Ｂｒ］−ＮＭ４０４である、請求項５９に記載の使用。
【請求項６２】
ＴＲＴ剤；免疫チェックポイント阻害剤；またはその両方；が静脈内投与される、請求項４５〜６１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６３】
対象がヒトである、請求項４５〜６２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６４】
治療される癌が、黒色腫、神経芽腫、肺癌、副腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、皮膚または頭頸部の扁平上皮癌、腸癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、神経膠腫、乳癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、ウィルムス腫瘍、および小児脳腫瘍からなる群から選択される、請求項４５〜６３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６５】
癌が、チェックポイント分子ではない腫瘍抗原に対する抗体を対象に投与することなく治療される、請求項４５〜６４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６６】
癌が、対象に抗ＧＤ２抗体を投与することなく治療される、請求項４５〜６５のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、２０１７年１１月１０日出願の米国特許出願公開第１５／８０９４２７号の利益を主張する。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究または開発に関する記載
本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられたＯＤ０２４５７６およびＣＡ１９７０７８の下で政府支援によってなされた。合衆国政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本開示は、一般に癌を治療する方法に関する。特に、本開示は、対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を、（１）免疫調節用量の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤、例えば放射性金属キレート化合物、放射性ハロゲン化化合物、放射標識抗体、または固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持される放射性同位体（ｒａｄｉｏｓｉｏｔｏｐｅ）を対象に全身投与し、（２）１以上の免疫賦活剤、例えば１以上の免疫チェックポイント阻害剤を対象に全身投与することにより治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
現在の癌治療は、一般に全身化学療法を伴い、それにより、非標的小分子または抗体指向性の細胞毒性薬剤が、多様な機構によって優先的に癌細胞に侵入するかまたは癌細胞と結合（抗体指向性薬剤の場合）して癌細胞を死滅させる。しばしば化学療法と併用される外照射療法（ｘＲＴ）は、核ＤＮＡ二重鎖の切断を誘発し、その結果、細胞周期死をもたらすことによって癌細胞を死滅させる。全身化学療法とは異なり、ｘＲＴは、腫瘍の解剖学的部位を正確に決定する能力に依存する。また、腫瘍の外科的切除は、残存腫瘍細胞が手術後に腫瘍を急速に再建するため、腫瘍を調べる能力と完全な除去にも依存する。手術およびｘＲＴは、通常、悪性腫瘍の局所治療に限定されているので、播種性または転移性疾患の治療には限界がある。これが、化学療法がしばしばこれらの治療様式と併せて使用される理由である。全身化学療法は、脳転移は例外かもしれないが、多くの遠隔転移部位に到達することができるが、あまりにも多くの患者にとって、応答は一般に短期間（数カ月から数年）であり、最終的に腫瘍再発をもたらす。
【０００５】
身体の自然免疫系は、癌細胞を認識後に破壊することもできるので、免疫学的手法は癌治療のパラダイムにおいて急速に普及しつつある。しかし、一部の癌細胞、そしてさらに多くの範囲で、癌幹細胞は、最初は免疫監視を回避しようとし、比較的免疫的に見えないままでいることによって進化し、最終的に生き延びる能力を実際に獲得する［Ｇａｉｐｉら，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ６：５９７−６１０，２０１４］。
【０００６】
ますます調査されている１つの特定の免疫学的手法は、「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種」、つまり、腫瘍免疫原性を増強し、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を生成し、「ワクチン接種していない」播種性腫瘍に対する全身性抗腫瘍免疫応答を引き起こそうとする戦略である。ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種では、腫瘍の免疫を寛容化する微小環境を逆転させる炎症促進性シグナルを同時に提供しながら、悪性固形腫瘍に、腫瘍抗原の放出を促進する１以上の薬剤を注射する（またはそれで治療する）［Ｐｉｅｒｃｅら，Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｏｅｕｔｉｃｓ  １１（８）：１９０１−１９０９，２０１５；Ｍａｒａｂｅｌｌｅら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０（７）：１７４７−５６，２０１４；Ｍｏｒｒｉｓら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；７６（１３）；３９２９−４１，２０１６］。
【０００７】
もう一つの全く異なるアプローチは全身投与性免疫療法である。全身投与性免疫療法では、免疫チェックポイント阻害剤などの免疫賦活剤は、腫瘍に局所的に注入されるのではなく、全身を循環するように（例、静脈内に）投与される。そのような薬剤は、抗腫瘍免疫応答は存在するが、「使い尽くされた」かまたは効果がなくなっている腫瘍を治療するために使用することができる。チェックポイント阻害剤の場合、腫瘍細胞は既存の抗腫瘍免疫細胞の「チェックポイント受容体」と相互作用する「チェックポイントリガンド」または他のチェックポイント分子を発現し、これらの細胞の不活性化を引き起こす。この相互作用を遮断することにより、全身投与されたチェックポイント阻害剤は、癌患者の疲弊した既存の免疫応答をオンにし、患者自身の免疫系による癌細胞へのより効果的な攻撃を促進する。
【０００８】
臨床試験および前臨床モデルから得た最近のデータはこれらの手法の可能性を示しているが、当技術分野では全身の有効性の改善を示す全身投与性免疫療法の方法が非常に必要とされている。
【０００９】
放射線ホルミシスは、低線量の電離ＲＴは、電離ＲＴがないと活性化されない天然の保護修復機構の活性化を刺激することによって有益であり得るという数十年前の仮説である［Ｃａｍｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｍｏｕｌｄｅｒ，Ｍｅｄ．Ｐｈｙｓ．２５：１４０７，１９９８］。予備修復機構は、電離ＲＴの有害作用を取り消すだけでなく、ＲＴ曝露に関連しない疾患を抑制するように刺激された場合に十分に有効であると仮定される。おそらく関連している、アブスコパル効果は、１つの腫瘍のｘＲＴ治療が、ＲＴ治療領域外の別の腫瘍の縮小を実際に引き起こす、１９５０年代に報告された現象である。稀ではあるが、この現象は免疫系の活性化に依存すると考えられる。総合すると、ホルミシスとアブスコパル効果は、低投与量（免疫刺激性であるが非細胞毒性）ＲＴによる免疫系の相互作用および刺激作用の可能性を裏付ける。これは次に全身投与性免疫療法などのその他の免疫学的手法と組み合わせることができる。
【００１０】
本発明者らは、腫瘍が１つ存在する場合には、局所ｘＲＴ＋ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種および／または全身性チェックポイント阻害剤免疫療法の組合せが、マウスの大きな確立された腫瘍を治療する際に強力に相乗的であることを以前に発表した［Ｍｏｒｒｉｓら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；７６（１３）；３９２９−４１，２０１６］。しかし、驚いたことに、本発明者らはｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種とｘＲＴの組合せが、第２の非照射腫瘍の存在下で腫瘍増殖を抑制しないことを見出した。明らかに、非照射腫瘍は照射腫瘍に対するｘＲＴおよびｉｎ  ｓｉｔｕワクチンの免疫調節効果に対する抑制効果（本発明者らは「付随する免疫寛容」と呼ぶ）を示す。
【００１１】
ｘＲＴが腫瘍の全領域に投与される場合、この付随する免疫寛容は克服されることができ、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の有効性を可能にする。しかし、ｘＲＴは、複数の腫瘍が存在する場合、特に腫瘍の数が少なくない場合、または１以上の腫瘍の部位が正確に分かっていない場合、またはｘＲＴを腫瘍のすべての部位に送達することができない場合には、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種法と組み合わせて効果的に使用することができない。さらに、転移性疾患をもつ患者のすべての腫瘍部位にｘＲＴを投与すると、全身の免疫抑制が起こる可能性が高く、全身投与性免疫療法の主な目的にそぐわない。
【００１２】
したがって、腫瘍の数および解剖学的部位にかかわらず、全身投与性免疫療法と組み合わせて、免疫調節用量のＲＴを対象内のすべての腫瘍に送達する改善された方法が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明者らは、特定のアルキルホスホコリン類似体が悪性固形腫瘍細胞によって優先的に取り込まれ保持されることを以前に示した。参照によりその全文が本明細書に組み込まれる米国特許公報第２０１４／００３０１８７号において、Ｗｅｉｃｈｅｒｔらは、多様な悪性固形腫瘍の検出および位置特定ならびに治療のための主剤１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン（ＮＭ４０４；図１参照）の類似体の使用を開示している。ヨード部分が、イメージングに最適化された放射性核種、例えばヨウ素−１２４（［１２４Ｉ］−ＮＭ４０４）である場合、この類似体は、固形腫瘍の陽電子放出断層撮影−コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）または単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）画像法で使用することができる。あるいは、ヨード部分が、ヨウ素−１２５またはヨウ素−１３１（［１２５Ｉ］−ＮＭ４０４または［１３１Ｉ］−ＮＭ４０４）などの、類似体が取り込まれる固形腫瘍細胞に治療線量のＲＴを送達するために最適化された放射性核種である場合、この類似体を用いて固形腫瘍を治療することができる。
【００１４】
そのような類似体は、インビボで幅広い種類の固形腫瘍型を標的とするだけでなく、腫瘍細胞において長期間の選択的な保持を受け、したがってＲＴ剤として高い可能性をもたらす。さらに、腫瘍取り込みは悪性癌に限定され、前悪性または良性の病変ではなされない。
【００１５】
しかし、以前に開示されたアルキルホスホコリン類似体で使用される放射性ヨウ素同位体よりも最適化されたイメージングおよび／またはＲＴに良好な特性を有する金属同位体がある。例えば、イメージング同位体として、Ｉ−１２４は陽電子放出が不十分であり（放射の約２４％しか陽電子でない）、さらにガンマ放射（６００ＫｅＶ）と混同される。これは実際に通常の５１１ＫｅＶのＰＥＴ検出を妨害する。ある特定の陽電子放出金属は良好なイメージング特性を有する。別の例として、ＲＴ同位体として、Ｉ−１３１は他のエネルギーで他の非治療的放出を生じ、それは骨髄をはじめとする隣接する正常組織に、望まない放射線線量測定を追加する。Ｉ−１３１のベータ粒子範囲も非常に長く、オフターゲット毒性の原因となる。いくつかの金属放射線治療同位体は、よりクリーンな放出プロファイルと、より短い経路長、したがってより少ない潜在毒性を提供する。
【００１６】
本発明者らは、放射性ヨウ素同位体（例えば、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる米国特許公報第２０１８／００２２７６８号参照）の代わりにキレート化された放射性金属同位体を含む改善されたアルキルホスホコリン類似体を開発した。この類似体は、以前に開示された放射性ヨウ素化化合物と同じ骨格を含むので、これらは依然として腫瘍細胞に選択的に取り込まれ保持される。しかし、キレート化された放射性金属同位体は、イメージングおよび／または放射線治療用途のために放出が改善されている。そのような薬剤は、腫瘍の数および解剖学的部位が分かっていようといまいと、対象内に存在するすべての悪性腫瘍に細胞毒性未満であるが免疫調節用量の電離ＲＴを送達するのに非常に適している。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
したがって、第１の態様では、本開示は、対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療する方法を包含する。この方法は、対象に（ａ）悪性固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持される、免疫調節用量の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤と（ｂ）１以上の免疫賦活剤を全身投与するステップを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、１以上の免疫賦活剤は、１以上のチェックポイント分子を標的化する能力のある免疫チェックポイント阻害剤である。
【００１９】
１以上の免疫チェックポイント阻害剤の限定されない例としては、以下のチェックポイント分子：Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）、ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ）、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）、ＰＤ−１（プログラム細胞死受容体１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＣＤ４０（分化抗原群４０）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ１３７（分化抗原群１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４；分化抗原群１３４）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド；分化抗原群２５２）、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質リガンド）、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激性（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ））、ＩＣＯＳＬ（誘導性Ｔ細胞共刺激リガンド）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；分化抗原群２７６）、Ｂ７Ｈ４（ＶＴＣＮ１；Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１）、ＩＤＯ（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）、ＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）、Ｇａｌ−９（ガレクチン−９）、またはＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー）の１以上を標的化する能力のある薬剤が挙げられる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、１以上の免疫チェックポイント阻害剤には、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体が含まれる。一部のそのような実施形態では、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体には、少なくとも１つのモノクローナル抗体が含まれる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、１以上の免疫チェックポイント阻害剤には、１以上の免疫チェックポイント分子を抑制または遮断する能力のある１以上の小分子が含まれる。そのような小分子チェックポイント阻害剤の限定されない例としては、ＣＡ−１７０およびＣＡ−３２７が挙げられ、これらは両方ともＰＤ−Ｌ１を標的化する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、１以上の抗免疫チェックポイント分子抗体には、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、および抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０Ｌ抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＧＩＴＲＬ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＩＣＯＳＬ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗Ｂ７Ｈ４抗体、抗ＩＤＯ抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗Ｇａｌ−９抗体、または抗ＶＩＳＴＡ抗体が含まれる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤は、ＭＩＢＧ中のヨウ素原子が放射性ヨウ素同位体であるメタヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤は、放射標識された腫瘍標的化抗体である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤は、ラジウムの放射性同位体、例えばＲａ−２２３などである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤は、式：
【化１】
2021502368.tif 000003
を有する放射性リン脂質エーテル金属キレートまたはその塩である。Ｒ１には、金属原子にキレート化されたキレート剤が含まれ、金属原子は、６時間よりも長く３０日未満の半減期をもつアルファ、ベータまたはオージェ放出金属同位体であり、ａは０または１であり、ｎは１２〜３０の整数であり、ｍは０または１であり、Ｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＸ、−ＯＣＯＸ、または−ＯＸであり、Ｘはアルキルまたはアリールであり、Ｒ２は−Ｎ＋Ｈ３、−Ｎ＋Ｈ２Ｚ、−Ｎ＋ＨＺ２、または−Ｎ＋Ｚ３であり、各Ｚは独立にアルキルまたはアロアルキルであり、ｂは、１または２である。使用され得る金属同位体の限定されない例としては、Ｓｃ−４７、Ｌｕ−１７７、Ｙ−９０、Ｈｏ−１６６、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ａｕ−１９９、Ｒｈ−１０５、Ｒａ−２２３、Ａｃ−２２５、Ｐｂ−２１２、またはＴｈ−２２７が挙げられる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）またはその誘導体の１つ、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４−二酢酸（ＮＯＤＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸（ＮＯＴＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，７−トリアザシクロノナン，１−グルタル酸−４，７−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン，１−グルタル酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）またはその誘導体の１つ、１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン−４，１１−二酢酸（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）またはその誘導体の１つ、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、そのジエステル、またはその誘導体の１つ、２−シクロヘキシルジエチレントリアミン五酢酸（ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡ）またはその誘導体の１つ、デフェロキサミン（ＤＦＯ）またはその誘導体の１つ、１，２−［［６−カルボキシピリジン−２−イル］メチルアミノ］エタン（Ｈ２ｄｅｄｐａ）またはその誘導体の１つ、およびＤＡＤＡまたはその誘導体の１つからなる群から選択され、ＤＡＤＡは次の構造：
【化２】
2021502368.tif 000004
を有する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ａは１である（脂肪族アリール−アルキル鎖）。他の実施形態では、ａは０である（脂肪族アルキル鎖）。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ｍは１である（アシルリン脂質シリーズ）。いくつかのそのような実施形態では、ｎは１２〜２０の間の整数である。いくつかの実施形態では、Ｙは−ＯＣＯＸ、−ＣＯＯＸまたは−ＯＸである。
【００３０】
いくつかの実施形態では、Ｘは−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ｍは０である（アルキルリン脂質シリーズ）。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ｂは１である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、ｎは１８である。
【００３４】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は−Ｎ＋Ｚ３である。いくつかのそのような実施形態では、各Ｚは、独立に−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ３である。いくつかのそのような実施形態では、各Ｚは、−ＣＨ３である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、金属原子にキレート化されたキレート剤は：
【化３】
2021502368.tif 000005
2021502368.tif 000006
2021502368.tif 000007
2021502368.tif 000008
2021502368.tif 000009
【００３６】
いくつかの実施形態では、放射性リン脂質エーテル金属キレートは、選択された化合物が金属原子にキレート化されている以下の化合物の１つである：
【化４】
2021502368.tif 000010
2021502368.tif 000011
2021502368.tif 000012
2021502368.tif 000013
2021502368.tif 000014
【００３７】
いくつかの実施形態では、リン脂質エーテル金属キレート構造中、ａは１であり、ｂは１であり、ｍは０であり、ｎは１８であり、Ｒ２は−Ｎ＋（ＣＨ３）３である。いくつかのそのような実施形態では、リン脂質エーテル金属キレートは、金属原子にキレート化されたＮＭ６００、例えば（限定されるものではないが）９０Ｙ−ＮＭ６００などである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤は、式：
【化５】
2021502368.tif 000015
を有する放射性ハロゲン化リン脂質エーテルまたはその塩である。Ｒ１は、放射性ハロゲン同位体を含み、ａは０または１であり、ｎは１２〜３０の整数であり；ｍは０または１であり、Ｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＸ、−ＯＸ、および−ＯＣＯＸからなる群から選択され、上式中のＸはアルキルまたはアリールアルキルであり、Ｒ２は−Ｎ＋Ｈ３、−Ｎ＋Ｈ２Ｚ、−Ｎ＋ＨＺ２、および−Ｎ＋Ｚ３からなる群から選択され、上式中の各Ｚは独立にアルキルまたはアリールである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、放射性ハロゲン同位体は、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、７６Ｂｒ、または７７Ｂｒである。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｍは０である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ｎは１８である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、Ｒ２は−Ｎ＋（ＣＨ３）３である。いくつかの実施形態では、ａは１であり、ｍは０であり、ｎは１８である。いくつかのそのような実施形態では、放射性ハロゲン同位体は、放射性ハロゲン同位体は、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、または１３１Ｉである（放射性ハロゲン化リン脂質エーテルは［１２３Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２４Ｉ］−ＮＭ４０４、［１２５Ｉ］−ＮＭ４０４、［１３１Ｉ］−ＮＭ４０４、［２１１Ａｔ］−ＮＭ４０４、［７６Ｂｒ］−ＮＭ４０４、または［７７Ｂｒ］−ＮＭ４０４である）。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＴＲＴ剤、免疫賦活剤、またはその両方が静脈内投与される。
【００４４】
いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【００４５】
本方法を用いて治療され得る悪性固形腫瘍として示される癌の限定されない例としては、黒色腫、神経芽細胞腫、肺癌、副腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、皮下癌、皮膚または頭頸部の扁平上皮癌、腸癌、網膜芽細胞腫、子宮頸癌、神経膠腫、乳癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、ウィルムス腫瘍、および小児脳腫瘍が挙げられる。
【００４６】
いくつかの実施形態では、癌は、チェックポイント分子ではない腫瘍抗原に対する抗体を対象に投与することなく治療される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、抗ＧＤ２抗体は対象に投与されない。
【００４８】
第２の態様では、本開示は、上にさらに記載されるように、対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療するためのＴＲＴ剤および１以上の免疫賦活剤の使用を包含する。
【００４９】
第３の態様では、本開示は、上にさらに記載されるように、対象において１以上の悪性固形腫瘍を含む癌を治療するための薬物の製造のためのＴＲＴ剤および／または１以上の免疫賦活剤の使用を包含する。
【００５０】
本発明のその他の目的、特徴および利点は、明細書、特許請求の範囲および図面を検討した後に明らかになるであろう。
【００５１】
本特許または出願書類は、少なくとも１枚の着色された図面を含む。この１枚または複数枚のカラー図面を含む特許または出願公開のコピーは、特許局に依頼して必要な料金を支払うと得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】主剤１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン（ＮＭ４０４）の化学構造を示す図である。
【図２Ａ】ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣがｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種を誘発することを示すグラフを示す図である。より具体的には、図２Ａは、ｘＲＴとＩＴ−ｈｕ１４．１８−ＩＬ２との間の相乗効果を示す腫瘍増殖曲線を示す。ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣで処置したマウスの７１％（２２／３１）が、無病になっている。
【図２Ｂ】ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣがｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種を誘発することを示すもう一つのグラフを示す図である。より具体的には、図２Ｂは、ｘＲＴとＩＴ−ｈｕ１４．１８−ＩＬ２との間の相乗効果を示すカプラン・マイヤー生存曲線を示す。ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣで処置したマウスの７１％（２２／３１）が、無病になっている。
【図２Ｃ】ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣがｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種を誘発することを示すもう一つのグラフを示す図である。より具体的には、図２Ｃは、処置されたマウスの９０％がＢ７８黒色腫によるその後の生着を拒絶することを示す。
【図３】付随する免疫寛容を示すグラフを示す図である。原発性腫瘍の応答が示される。未処置の遠隔腫瘍は、２腫瘍Ｂ７８黒色腫モデルにおいてｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する応答を抑制する。この抑制は、第２の腫瘍を照射することによって克服することができる（ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｂｅ  ｒａｄｉａｔｉｎｇ）。
【図４】付随する免疫寛容がＴｒｅｇに起因することを示すグラフを示す図である。原発性腫瘍の応答が示される。未処置の遠隔腫瘍は、２腫瘍Ｂ７８黒色腫モデルにおいてｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する応答を抑制し、この抑制は、Ｔｒｅｇを枯渇させる（ジフテリア毒素受容体をＴｒｅｇに発現するトランスジェニックＤＥＲＥＧマウスを使用し、ジフテリア毒素を投与することによってＴｒｅｇを枯渇させる）ことによって克服することができる。
【図５】Ｂ７８黒色腫による１２４Ｉ−ＮＭ４０４の選択的取り込みを示す画像を示す図である。約２００ｍｍ３のＢ７８腫瘍を有するマウスにＩＶ  １２４Ｉ−ＮＭ４０４を静脈内投与し、連続ＰＥＴ／ＣＴスキャンを行った。７１時間でのこの画像は、腫瘍による選択的取り込みと、心臓および肝臓によるいくらかの残留バックグラウンド取り込みを示す。
【図６】ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種が、残留レベルの分子標的化放射線療法（ＴＲＴ）の存在下で誘発され得ることを示すグラフを示す図である。ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣとの併用処置は、３μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４の有無にかかわらず等しく効果的である。これは、実施例４に記載されるように、本発明者らがｘＲＴ（０日目）に続いてＩＴ−ＩＣ（６〜１０日目）を送達する時に存在するであろうＴＲＴの残留放射能とほぼ同じである。
【図７】腫瘍を有するマウスのＧｄ−ＮＭ６００の注射後２４時間までの腫瘍（Ｔ）の増大を示す経時的ＭＲＩ画像の推移を示す図である。
【図８Ａ】マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制を示す図である。同系のジシアロガングリオシドを発現する（ＧＤ２＋）原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２免疫サイトカイン（ＩＣ）、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２（抗ＧＤ２  ｍＡｂとＩＬ２の融合体）の腫瘍内（ＩＴ）注射によって処置した。原発性腫瘍の平均体積が図８Ａに示される。より具体的には、図８Ａは、原発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスにおいて、未処置の続発性Ｂ７８腫瘍の存在が、ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性腫瘍応答に拮抗したことを示す。本発明者らは、この作用を「付随する免疫寛容」、つまりｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する処置腫瘍の局所応答に対する、未処置遠隔腫瘍の拮抗作用として説明する。
【図８Ｂ】マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制を示すもう一つの図である。同系のジシアロガングリオシドを発現する（ＧＤ２＋）原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２免疫サイトカイン（ＩＣ）、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２（抗ＧＤ２  ｍＡｂとＩＬ２の融合体）の腫瘍内（ＩＴ）注射によって処置した。より具体的には、図８Ｂは、マウスと反復実験についてのカプラン・マイヤー生存曲線を示す。ほぼすべてのマウスが原発性腫瘍の進行のために安楽死した。
【図８Ｃ】マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制を示すもう一つの図である。同系のジシアロガングリオシドを発現する（ＧＤ２＋）原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２免疫サイトカイン（ＩＣ）、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２（抗ＧＤ２  ｍＡｂとＩＬ２の融合体）の腫瘍内（ＩＴ）注射によって処置した。より具体的には、図８Ｃは、原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋膵腫瘍を有するマウスにおいて、反対側腹部の続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２−腫瘍の有無にかかわらず、未処置のＰａｎｃ０２続発性腫瘍の存在が、ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋腫瘍の応答を抑制したことを示す。
【図８Ｄ】マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制を示すもう一つの図である。同系のジシアロガングリオシドを発現する（ＧＤ２＋）原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２免疫サイトカイン（ＩＣ）、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２（抗ＧＤ２  ｍＡｂとＩＬ２の融合体）の腫瘍内（ＩＴ）注射によって処置した。より具体的には、図８Ｄは、原発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスにおいて、続発性Ｂ７８腫瘍がＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性腫瘍応答を抑制したが、続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋膵腫瘍はこの作用を発揮しなかったことを示す。
【図８Ｅ】マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制を示すもう一つの図である。同系のジシアロガングリオシドを発現する（ＧＤ２＋）原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２免疫サイトカイン（ＩＣ）、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２（抗ＧＤ２  ｍＡｂとＩＬ２の融合体）の腫瘍内（ＩＴ）注射によって処置した。より具体的には、図８Ｅは、原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋腫瘍を有するマウスでは、続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２−腫瘍がｘＲＴおよびＩＴ−ｈｕ１４．１８−ＩＬ２の併用に対する原発性腫瘍応答を抑制したが、Ｂ７８続発性腫瘍は抑制しなかったことを示す。ｎ＝１群当たりのマウスの数。ＮＳ＝有意でない、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図９Ａ−１】付随する免疫寛容が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特異的枯渇によって回避されることを示す免疫組織化学画像（左および中央）およびグラフ（右）を示す図である。より具体的には、図９Ａは、腫瘍を１つ（図９Ａ、一番左のパネルＡ１およびＡ２）または２つ（図９Ａ、中央のパネルＡ３およびＡ４）有するマウスにおいてｘＲＴ後６日目に評価された腫瘍のＴｒｅｇマーカー、ＦｏｘＰ３の免疫組織化学（代表的な４００倍画像が示される）を示す。マウスはｘＲＴを受けなかったか、または原発性腫瘍に対してのみｘＲＴを受けた。原発性腫瘍を図９ＡのパネルＡ１〜Ａ３に示し、続発性腫瘍を図９ＡのパネルＡ４に示す。小さな矢印は、ＦｏｘＰ３＋細胞の一部を指摘する（褐色の核＝ＦｏｘＰ３＋、青色＝ヘマトキシリン対比染色）。右側のグラフは、図９ＡのパネルＡ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４にそれぞれ示される条件に対応する、２００倍視野あたりのＦｏｘＰ３＋細胞数の盲検定量化を示す。
【図９Ａ−２】付随する免疫寛容が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特異的枯渇によって回避されることを示す免疫組織化学画像（左および中央）およびグラフ（右）を示す図である。より具体的には、図９Ａは、腫瘍を１つ（図９Ａ、一番左のパネルＡ１およびＡ２）または２つ（図９Ａ、中央のパネルＡ３およびＡ４）有するマウスにおいてｘＲＴ後６日目に評価された腫瘍のＴｒｅｇマーカー、ＦｏｘＰ３の免疫組織化学（代表的な４００倍画像が示される）を示す。マウスはｘＲＴを受けなかったか、または原発性腫瘍に対してのみｘＲＴを受けた。原発性腫瘍を図９ＡのパネルＡ１〜Ａ３に示し、続発性腫瘍を図９ＡのパネルＡ４に示す。小さな矢印は、ＦｏｘＰ３＋細胞の一部を指摘する（褐色の核＝ＦｏｘＰ３＋、青色＝ヘマトキシリン対比染色）。右側のグラフは、図９ＡのパネルＡ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４にそれぞれ示される条件に対応する、２００倍視野あたりのＦｏｘＰ３＋細胞数の盲検定量化を示す。
【図９Ｂ】付随する免疫寛容が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特異的枯渇によって回避されることを示すもう一つのグラフである。より具体的には、図９Ｂは、ＤＥＲＥＧマウスがＴｒｅｇ特異的ＦｏｘＰ３プロモーターの制御下でジフテリア毒素受容体を発現し、ジフテリア毒素のＩＰ注射時にＴｒｅｇの特異的枯渇を可能にすることを示す。原発性および続発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するＤＥＲＥＧマウスを、原発性腫瘍へのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣと、ジフテリア毒素またはＰＢＳのいずれかのＩＰ注射で処置した（最初の反復実験が示される）。付随する免疫寛容は、これらのマウスにおいてＴｒｅｇの枯渇の後に排除され、原発性腫瘍の応答が改善される（図９Ｂ）。ｎ＝１群当たりのマウスの数。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図９Ｃ】付随する免疫寛容が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特異的枯渇によって回避されることを示すもう一つのグラフである。より具体的には、図９Ｃは、ＤＥＲＥＧマウスがＴｒｅｇ特異的ＦｏｘＰ３プロモーターの制御下でジフテリア毒素受容体を発現し、ジフテリア毒素のＩＰ注射時にＴｒｅｇの特異的枯渇を可能にすることを示す。原発性および続発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するＤＥＲＥＧマウスを、原発性腫瘍へのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣと、ジフテリア毒素またはＰＢＳのいずれかのＩＰ注射で処置した（最初の反復実験が示される）。付随する免疫寛容は、これらのマウスにおいてＴｒｅｇの枯渇の後に排除され、続発性腫瘍の応答が改善される（図９Ｃ）。ｎ＝１群当たりのマウスの数。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１０Ａ】付随する免疫寛容がｘＲＴを両方の腫瘍部位に送達することによって克服されることを示すグラフを示す図である。原発性および続発性Ｂ７８腫瘍を有するマウスでは、続発性腫瘍は、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣによる原発性腫瘍処置に対する原発性腫瘍応答を抑制する。これは、１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍と続発性腫瘍の両方に、そしてＩＴ−ＩＣを原発性腫瘍に送達することによって克服され、その結果、反復実験から原発性腫瘍応答（第１の反復実験が示されている）が改善された（図１０Ａ）。ｎ＝１群当たりのマウスの数。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１０Ｂ】付随する免疫寛容がｘＲＴを両方の腫瘍部位に送達することによって克服されることを示すもう一つのグラフを示す図である。原発性および続発性Ｂ７８腫瘍を有するマウスでは、続発性腫瘍は、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣによる原発性腫瘍処置に対する原発性腫瘍応答を抑制する。これは、１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍と続発性腫瘍の両方に、そしてＩＴ−ＩＣを原発性腫瘍に送達することによって克服され、その結果、反復実験から総動物生存率（ａｇｇｒｅｇａｔｅ  ａｎｉｍａｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）が向上した（図１０Ｂ）。ｎ＝１群当たりのマウスの数。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図１１Ａ】低線量のｘＲＴが、単独ではｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発しないが、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位の１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣ処置とともに遠隔腫瘍部位に送達した場合に、付随する免疫寛容を実際に克服することを示すグラフを示す図である。より具体的には、図１１Ａは、原発性Ｂ７８腫瘍のみを有するマウスでは、１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣは、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発し（すでに示した通り）、大部分のマウスにおける完全な腫瘍退縮（本実験では４／６）および記憶性免疫応答をもたらすことを示す（Ｍｏｒｒｉｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１６）。一方、ＩＴ−ＩＣ単独または低線量（２Ｇｙ）ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの後に完全な腫瘍退縮を示す動物はない（両方の群で０／６）ｐ＜０．０５。
【図１１Ｂ】低線量のｘＲＴが、単独ではｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発しないが、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位の１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣ処置とともに遠隔腫瘍部位に送達した場合に、付随する免疫寛容を実際に克服することを示すもう一つのグラフを示す図である。より具体的には、図１１Ｂは、原発性および続発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスでは、続発性腫瘍に送達された低線量ｘＲＴ（２Ｇｙまたは５Ｇｙ）は、原発性腫瘍で付随する免疫寛容を克服するその能力では１２Ｇｙに匹敵することを示す。
【図１１Ｃ】低線量のｘＲＴが、単独ではｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発しないが、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位の１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣ処置とともに遠隔腫瘍部位に送達した場合に、付随する免疫寛容を実際に克服することを示すもう一つのグラフを示す図である。より具体的には、図１１Ｃは、これらの同じ動物において、低線量ｘＲＴを続発性腫瘍に送達することによって付随する免疫寛容を克服することが、ＩＴ−ＩＣ免疫療法に対する全身応答を救済することは明らかであることを示す。これに関連して、ｘＲＴがすべての腫瘍部位に送達されると、原発性腫瘍のＩＴ−ＩＣ注射は、全身性抗腫瘍効果を引き起こし、２Ｇｙまたは５Ｇｙに対する続発性腫瘍応答を、原発性腫瘍のＩＴ−ＩＣ注射を行わない場合の１２ＧｙのｘＲＴに対する応答よりも大きくする。
【図１２Ａ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、全身性白血球減少症を伴わずにまたは腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を枯渇させずに、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを効果的に枯渇させることを示すＰＥＴ画像を示す図である。大部分の臨床シナリオでは、免疫抑制をもたらすことになる顕著な骨髄枯渇および白血球減少を引き起こさずに、すべての腫瘍部位に外照射を送達することは、たとえ低線量であっても実現不可能である。ここで、本発明者らは、ＴＲＴを全身投与して、全身の免疫細胞の枯渇および白血球減少症を引き起こすことなく、腫瘍浸潤抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ）を特異的に枯渇させることができるかどうかを試験した。より具体的には、図１２Ａは、陽電子放出１２４Ｉ−ＮＭ４０４を用いるこのＢ７８黒色腫腫瘍モデルにおける線量測定研究により、ＮＭ４０４の腫瘍選択的取り込みが確認されることを示す。Ｂ７８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、６０μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置した。この放射能は、約２ＧｙのＴＲＴをＢ７８腫瘍に送達するのに必要な１３１Ｉ−ＮＭ４０４の量とほぼ同じである。末梢血および腫瘍試料を未処置の対照マウス（Ｃと名付けた）で収集し、その後８日間隔（Ｔ１＝ｄ８、Ｔ２＝ｄ１６、Ｔ３＝ｄ２４、Ｔ４＝ｄ３２）で収集した。
【図１２Ｂ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、全身性白血球減少症を伴わずにまたは腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を枯渇させずに、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを効果的に枯渇させることを示す棒グラフを示す図である。大部分の臨床シナリオでは、免疫抑制をもたらすことになる顕著な骨髄枯渇および白血球減少を引き起こさずに、すべての腫瘍部位に外照射を送達することは、たとえ低線量であっても実現不可能である。ここで、本発明者らは、ＴＲＴを全身投与して、全身の免疫細胞の枯渇および白血球減少症を引き起こすことなく、腫瘍浸潤抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ）を特異的に枯渇させることができるかどうかを試験した。より具体的には、図１２Ｂは、この線量のＴＲＴが有意な全身性白血球減少症を引き起こさなかったことを示す。
【図１２Ｃ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、全身性白血球減少症を伴わずにまたは腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を枯渇させずに、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを効果的に枯渇させることを示すもう一つの棒グラフを示す図である。大部分の臨床シナリオでは、免疫抑制をもたらすことになる顕著な骨髄枯渇および白血球減少を引き起こさずに、すべての腫瘍部位に外照射を送達することは、たとえ低線量であっても実現不可能である。ここで、本発明者らは、ＴＲＴを全身投与して、全身の免疫細胞の枯渇および白血球減少症を引き起こすことなく、腫瘍浸潤抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ）を特異的に枯渇させることができるかどうかを試験した。より具体的には、図１２Ｃは、この線量のＴＲＴが腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞のレベルに有意な影響を及ぼさなかったことを示す（ＡＮＯＶＡ  ｐ＝０．２５）。
【図１２Ｄ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、全身性白血球減少症を伴わずにまたは腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を枯渇させずに、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを効果的に枯渇させることを示すもう一つの棒グラフを示す図である。大部分の臨床シナリオでは、免疫抑制をもたらすことになる顕著な骨髄枯渇および白血球減少を引き起こさずに、すべての腫瘍部位に外照射を送達することは、たとえ低線量であっても実現不可能である。ここで、本発明者らは、ＴＲＴを全身投与して、全身の免疫細胞の枯渇および白血球減少症を引き起こすことなく、腫瘍浸潤抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ）を特異的に枯渇させることができるかどうかを試験した。より具体的には、図１２Ｄは、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇが、この線量のＴＲＴによって有意に枯渇したことを示す（ＡＮＯＶＡ  ｐ＝０．０３；＊ｐ＜０．０５）。
【図１３Ａ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済することを示すグラフを示す図である。低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴが、マウスを白血球減少症にすることなく腫瘍浸潤Ｔｒｅｇを枯渇させる能力を考慮に入れて、本発明者らは低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４が付随する免疫寛容を効果的に克服するかどうかについて試験した。２つのＢ７８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように、１日目に６０ｍｃＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置した（ＮＭ４０４）。１半減期（８日）後、動物に１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与したか、またはｘＲＴを投与しなかった。１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与しなかった対照マウスに、示されるような（０、２、または１２Ｇｙ）処置を続発性腫瘍に対して行った。１３〜１７日目に、マウスに毎日ＩＣのＩＴ注射を示されるように原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与した。より具体的には、図１３Ａは、原発性腫瘍応答を示し、低線量ＴＲＴの投与が付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済することを実証する。
【図１３Ｂ】低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４が、付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済することを示すもう一つのグラフを示す図である。低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴが、マウスを白血球減少症にすることなく腫瘍浸潤Ｔｒｅｇを枯渇させる能力を考慮に入れて、本発明者らは低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４が付随する免疫寛容を効果的に克服するかどうかについて試験した。２つのＢ７８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように、１日目に６０ｍｃＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置した（ＮＭ４０４）。１半減期（８日）後、動物に１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与したか、またはｘＲＴを投与しなかった。１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与しなかった対照マウスに、示されるような（０、２、または１２Ｇｙ）処置を続発性腫瘍に対して行った。１３〜１７日目に、マウスに毎日ＩＣのＩＴ注射を示されるように原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与した。より具体的には、図１３Ｂは、続発性腫瘍応答を示し、低線量ＴＲＴの投与が付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済することを実証する。
【図１４】例となるアルキルホスホコリン金属キレート（６４Ｃｕ−ＮＭ６００）の化学構造を示す図である。他の金属を６４Ｃｕの代わりに使用してもよい。
【図１５】２匹の１腫瘍Ｂ７８マウスの８６Ｙ−ＮＭ６００での注射後４８時間に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。
【図１６】２匹の２腫瘍Ｂ７８マウスの８６Ｙ−ＮＭ６００での注射後４８時間に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。
【図１７】Ｕ８７ＭＧマウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図１８】４Ｔ１マウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図１９】ＨＣＴ−１１６マウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２０】Ａ５４９マウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２１】ＰＣ−３マウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２２】ＨＴ−２９マウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２３】ＭｉａＰａｃａマウスの６４Ｃｕ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２４】４Ｔ１マウスの８６Ｙ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２５】４Ｔ１マウスの８９Ｚｒ−ＮＭ６００での注射後３時間（左パネル）、２４時間（中央パネル）および４８時間（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２６】ＨＴ−２９マウスの５２Ｍｎ−ＮＭ６００での注射後４時間（左パネル）および１日（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは右端に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２７】ＰＣ−３マウスの５２Ｍｎ−ＮＭ６００での注射後４時間（左パネル）および１日（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは各画像の右に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２８】ＨＴ−２９マウスの５２Ｍｎ−ＮＭ６００での注射後２日（左パネル）、３日（左から２番目のパネル）、５日（右から２番目のパネル）および７日（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは画像の右に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図２９】ＰＣ−３マウスの５２Ｍｎ−ＮＭ６００での注射後２日（左パネル）、３日（左から２番目のパネル）、５日（右から２番目のパネル）および７日（右パネル）に行われたスキャンからのＰＥＴ／ＣＴ画像を示す図である。これらの画像は、注入量／ｇ組織の百分率（％ＩＤ／ｇ、スケールは画像の右に表示）として計算される組織放射能を示す。
【図３０】８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００および８９Ｚｒ−ＮＭ−６００を注射した４Ｔ１マウスの４Ｔ１腫瘍組織についての目的データ（時間の関数としてのキレート取り込み）のＰＥＴ定量範囲を示すグラフを示す図である。
【図３１】８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００および８９Ｚｒ−ＮＭ−６００を注射した４Ｔ１マウスの心臓組織についての目的データ（時間の関数としてのキレート取り込み）のＰＥＴ定量範囲を示すグラフを示す図である。
【図３２】８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００および８９Ｚｒ−ＮＭ−６００を注射した４Ｔ１マウスの肝臓組織についての目的データ（時間の関数としてのキレート取り込み）のＰＥＴ定量範囲を示すグラフを示す図である。
【図３３】８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００および８９Ｚｒ−ＮＭ−６００を注射した４Ｔ１マウスの全身についての目的データ（時間の関数としてのキレート取り込み）のＰＥＴ定量範囲を示すグラフを示す図である。
【図３４】金属キレートの注射後４８時間（８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００、８９Ｚｒ−ＮＭ−６００および１７７Ｌｕ−ＮＭ６００）および９６時間（１７７Ｌｕ−ＮＭ６００）の４Ｔ１マウスの健常組織および腫瘍組織のエクスビボでのキレート体内分布を示す棒グラフを示す図である。
【図３５】例となるアルキルホスホコリン金属キレート（１７７Ｌｕ−ＮＭ６００）の化学構造を示す図である。他の金属を１７７Ｌｕの代わりに使用してもよい。
【図３６】９０Ｙ−ＮＭ６００の注射の４８時間後に撮影した３匹のＢ７８マウスのオーディオラジオグラフィー画像（ａｕｄｉｏｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ｉｍａｇｅ）を示す図である。異種移植Ｂ７８腫瘍は、各マウス画像の右下の大きな黒い点として見える。
【図３７】９０Ｙ−ＮＭ６００の注射の９６時間後に撮影した３匹のＢ７８マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植Ｂ７８腫瘍は、各マウス画像の右下の大きな黒い点として見える。
【図３８】１７７Ｌｕ−ＮＭ６００による注射後５日目に撮影したＢ７８マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植Ｂ７８腫瘍は、マウスの下部の２つの黒い点として見える。
【図３９】１７７Ｌｕ−ＮＭ６００による注射後１３日目に撮影したＢ７８マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植Ｂ７８腫瘍は、マウスの下部の２つの黒い点として見える。
【図４０】１７７Ｌｕ−ＮＭ６００による注射の１０日後に撮影したＭｉａＰａｃａマウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植ＭｉａＰａｃａ腫瘍の位置は、矢印および破線円で示される。
【図４１】１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の注射の４８時間後に撮影した３匹の４Ｔ１マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植４Ｔ１腫瘍の位置は、矢印および破線円で示される。
【図４２】１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の注射の９６時間後に撮影した３匹の４Ｔ１マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植４Ｔ１腫瘍の位置は、破線円で示される。
【図４３】９０Ｙ−ＮＭ６００の注射の４時間後に撮影した３匹の４Ｔ１マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植４Ｔ１腫瘍の位置は、矢印および破線円で示される。
【図４４】９０Ｙ−ＮＭ６００の注射の４８時間後に撮影した３匹の４Ｔ１マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植４Ｔ１腫瘍は、各マウス画像の右下の大きな黒い点として見える。
【図４５】９０Ｙ−ＮＭ６００の注射の９６時間後に撮影した３匹の４Ｔ１マウスのオーディオラジオグラフィー画像を示す図である。異種移植４Ｔ１腫瘍は、各マウス画像の右下の大きな黒い点として見える。
【図４６】対照（賦形剤のみ）と比較した、Ｂ７８異種移植マウスモデルにおける２つの異なる線量（１５０μＣｉおよび３００μＣｉ）の９０Ｙ−ＮＭ６００の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。
【図４７】対照（賦形剤のみ）と比較した、Ｂ７８異種移植マウスモデルにおける１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の５００μＣｉ単回投与の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。
【図４８】対照（賦形剤のみ）と比較した、ＭｉａＰａｃａ異種移植マウスモデルにおける１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の４００μＣｉ単回投与の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。
【図４９】対照（賦形剤のみ）と比較した、４Ｔ１異種移植マウスモデルにおける１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の５００μＣｉ単回投与の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図５０】対照（賦形剤のみ）と比較した、４Ｔ１異種移植マウスモデルにおける１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の２回の連続投与（５００μＣｉおよび２５０μＣｉ）の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。
【図５１】対照（賦形剤のみ）と比較した、４Ｔ１異種移植マウスモデルにおける２つの異なる線量（５００μＣｉおよび２５０μＣｉ）の１７７Ｌｕ−ＮＭ６００の放射線治療の効果を説明するグラフを示す図である。データは、測定された腫瘍体積（ｍｍ３）として、注射後の日数で表される時間の関数として示される。
【図５２】従来のＴＲＴにおける９０Ｙ−ＮＭ６００および１３１Ｉ−ＮＭ４０４の治療効果の比較への腫瘍量の影響を示すグラフを示す図である。
【図５３】アミン類似体とともに、ＮＭ４０４の３つの異なる金属キレート類似体の平均アルブミン結合エネルギーを比較する棒グラフを示す図である。比較のために、Ｉ−ＮＭ４０４結合エネルギーを点線として示す。
【図５４】抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）および／または様々な線量（２５μＣｉ、５０μＣｉ、または１００μＣｉ）の標的化放射線療法（ＴＲＴ）剤Ｙ９０−ＮＭ６００で処置したＢ７８黒色腫側腹部腫瘍マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。対照マウスには、抗ＣＴＬＡ４またはＴＲＴ剤を含まないビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。１８日後、５０または１００μＣｉのＹ９０−ＮＭ６００と抗ＣＴＬＡ４を用いる併用処置は、ＰＢＳ、Ｙ９０−ＮＭ６００単独、または抗ＣＴＬＡ４単独と比較して、腫瘍増殖を有意に（ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５）低下させた。抗ＣＴＬＡ−４を用いる２５μＣｉ  Ｙ９０−ＮＭ６００併用処置群は、線量反応の傾向を示す中程度の増殖遅延応答を示した。
【図５５】ＴＲＴのみ、チェックポイント遮断のみ（抗ＣＴＬＡ４）、またはＰＢＳビヒクルを投与したマウスと比較した、ＴＲＴ（５０μＣｉのＹ９０−ＮＭ６００）とチェックポイント遮断（抗ＣＴＬＡ４）の組合せを投与したマウスの総動物生存率を示すグラフを示す図である。
【図５６】チェックポイント遮断（抗ＣＴＬＡ４）とＴＲＴ（２５μＣｉ、５０μＣｉ、および１００μＣｉのＹ９０−ＮＭ６００）の３つの異なる組合せを投与したマウスの総動物生存率を示すグラフを示す図である。
【図５７】抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）および／または様々な線量（２５μＣｉ、５０μＣｉ、または１００μＣｉ）の分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００で処置したＢ７８黒色腫側腹部腫瘍マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。対照マウスには、抗ＣＴＬＡ４またはＭＴＲＴ剤を含まないビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。５０または１００μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００と抗ＣＴＬＡ４を用いる併用処置は、ＰＢＳ、９０Ｙ−ＮＭ６００のみ、または抗ＣＴＬＡ４のみと比較して、腫瘍増殖を有意に（ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５）低下させた。
【図５８】抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）および／または様々な線量（２５μＣｉ、５０μＣｉ、または１００μＣｉ）の分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００で処置したＢ７８黒色腫側腹部腫瘍マウスの総動物生存率を示すグラフを示す図である。ＭＴＲＴ（５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００または１００μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００）とチェックポイント遮断（抗ＣＴＬＡ４）の組合せを投与したマウスは、他の群と比較して著しく増加した生存率を示した。
【図５９】抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）および／または５０μＣｉの分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００で処置したＮＸＳ２神経芽細胞腫腫瘍マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。対照マウスには、抗ＣＴＬＡ４またはＴＲＴ剤を含まないビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。９０Ｙ−ＮＭ６００  ＭＴＲＴと抗ＣＴＬＡ４を用いる併用処置は、ＰＢＳ、９０Ｙ−ＮＭ６００のみ、または抗ＣＴＬＡ４のみと比較して、腫瘍増殖を有意に低下させた。
【図６０】抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）および／または５０μＣｉの分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００で処置した４Ｔ１乳癌腫瘍マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。対照マウスには、抗ＣＴＬＡ４またはＴＲＴ剤を含まないビヒクル（ＰＢＳ）を投与した。９０Ｙ−ＮＭ６００  ＭＴＲＴと抗ＣＴＬＡ４を用いる併用処置は、ＰＢＳ、９０Ｙ−ＮＭ６００のみ、または抗ＣＴＬＡ４のみと比較して、腫瘍増殖を有意に低下させた。
【図６１】原発性腫瘍と続発性（遠隔）腫瘍の両方を有するＢ７８黒色腫側腹部腫瘍マウスの照射された原発性Ｂ７８腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。マウスを、原発性腫瘍のみのＥＢＲＴ（１２Ｇｙ、続発性腫瘍は遮蔽した）、抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）、および／または５０μＣｉの分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００の様々な組合せで処置した。１２Ｇｙ  ＥＢＲＴ、９０Ｙ−ＮＭ６００  ＭＴＲＴ、および抗ＣＴＬＡ４の併用処置は、他の群と比較して原発性腫瘍増殖を著しく低下させた。
【図６２】原発性腫瘍と続発性腫瘍の両方を有するＢ７８黒色腫側腹部腫瘍マウスの遮蔽した続発性（遠隔）Ｂ７８腫瘍の腫瘍体積（ｍｍ３）を時間（日）の関数として示すグラフを示す図である。マウスを、原発性腫瘍のみのＥＢＲＴ（１２Ｇｙ、続発性腫瘍は遮蔽した）、抗ＣＴＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４）、および／または５０μＣｉの分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）剤９０Ｙ−ＮＭ６００の様々な組合せで処置した。原発性腫瘍に対するＥＢＲＴ、９０Ｙ−ＮＭ６００  ＭＴＲＴ、および抗ＣＴＬＡ４の併用処置は、他の群と比較して続発性腫瘍増殖を著しく低下させた。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
Ｉ．概要
記載されている特定の方法論、プロトコル、材料、および試薬は、変化する可能性があるため、本開示はこれらに限定されないことは理解される。本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、後に出願された非仮出願によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００５４】
本明細書および添付される特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、文脈上明らかに指示されている場合を除いて複数形への言及が含まれる。同様に、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書において同義的に使用され得る。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」およびその変化形は、これらの用語が本明細書および特許請求の範囲に現れる場合には限定的な意味を有さない。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「有する」は、同義的に使用され得る。
【００５５】
別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等のどんな方法および材料も本発明の実践または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここに記載する。本明細書に具体的に言及されたすべての刊行物および特許は、本発明に関連して使用され得る刊行物に報告されている化学物質、機器、統計解析および方法論を記載および開示することを含むあらゆる目的のために参照により組み込まれる。本明細書中で引用されたすべての参考文献は、当業者の技術水準を示すものとして解釈される。
【００５６】
本明細書に記載の専門用語は、実施形態の説明のためのだけのものであり、全体として本発明を限定するものと解釈されるべきではない。特に断りのない限り、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「少なくとも１つ」は同義的に使用され、１つまたは複数を意味する。
【００５７】
本開示は、本明細書に記載される化合物（中間体を含む）をその薬剤的に許容される形態のいずれかで含み、その形態には異性体（例えば、ジアステレオマーおよびエナンチオマー）、互変異性体、塩、溶媒和物、多形体、プロドラッグなどが含まれる。特に、化合物が光学活性である場合、本発明は、化合物のエナンチオマーの各々、ならびにエナンチオマーのラセミ混合物を具体的に含む。用語「化合物」は、（時折、「塩」が明示的に述べられているが）明示的に述べられているかいないかにかかわらず、そのような形態のいずれかまたはすべてを含むことを理解されたい。
【００５８】
本明細書において使用される「薬剤的に許容される」とは、その化合物または組成物または担体が、治療の必要性を考慮して過度に有害な副作用なく本明細書に記載の治療を達成するための対象への投与に適していることを意味する。
【００５９】
用語「有効量」とは、本明細書において、研究者、獣医師、医師またはその他の臨床医が求める対象、組織または細胞の生物学的または医学的応答を引き出す化合物の量または投与量をさす。
【００６０】
本明細書において、「薬剤的に許容される担体」には、ありとあらゆる乾燥粉末、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などが含まれる。薬剤的に許容される担体は、本発明の方法において化合物を投与するために有用な物質である。この物質は好ましくは無毒であり、固体、液体または気体の物質であってよく、その他の点では不活性であって薬剤的に許容され、本発明の化合物と相溶性である。そのような担体の例としては、限定されるものではないが、様々なラクトース、マンニトール、トウモロコシ油などの油、ＰＢＳなどの緩衝液、生理食塩水、ポリエチレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドなどのアミド、アルブミンなどのタンパク質、およびＴｗｅｅｎ８０などの界面活性剤、グルコース、ラクトース、シクロデキストリンおよびデンプンなどの単糖類およびオリゴ多糖類が挙げられる。
【００６１】
用語「投与すること」または「投与」とは、本明細書において、治療または予防されるべき疾患または状態に罹患しているかまたはその危険性がある対象に本発明の化合物または医薬組成物を提供することをさす。
【００６２】
薬理学において投与経路は、薬物が体内に取り込まれる経路である。投与経路は、通常、物質が適用される部位によって分類される。一般的な例としては、経口投与および静脈内投与が挙げられる。また、経路は作用標的がどこにあるかに基づいて分類されることもできる。作用は、局所的、経腸的（全身に及ぶ作用、ただし消化管を通じて送達される）、または吸入によって肺を経由する非経口的（全身作用、ただし消化管以外の経路によって送達される）であってよい。
【００６３】
経腸投与では、望ましい作用は全身的（非局所的）であり、物質は消化管を介して投与される。非経口投与では、望ましい作用は全身的であり、物質は消化管以外の経路によって投与される。
【００６４】
経腸投与は、消化管のいずれかの部分を伴い、全身性の作用を有する投与であってよい。例としては、口からの（経口）、錠剤、カプセル剤、または滴剤としての多くの薬物の投与、胃栄養チューブ、十二指腸栄養チューブ、または胃瘻造設による、多くの薬物および経腸栄養の投与、ならびに直腸内への坐剤中の様々な薬物の投与を挙げることができる。
【００６５】
非経口投与の例としては、静脈内（静脈の中への）投与、例えば多くの薬物、中心動脈栄養法の動脈内（動脈の中への）投与、例えば、血管攣縮の治療における血管拡張薬および塞栓症の治療のための血栓溶解薬、骨内注入（骨髄内への）投与、筋肉内投与、大脳内（脳実質内への）投与、脳室内（脳室系内への）投与、髄腔内投与（脊柱管への注射）、ならびに皮下（皮膚の下への）投与を挙げることができる。これらの中で、骨内注入は、骨髄が静脈系に直接排出されるので、実質的に、間接的静脈内アクセスである。骨内注入は、静脈内へのアクセスが困難な場合に、救急医療や小児科において薬物や輸液に時折使用されることがある。
【００６６】
本開示では以下の略語を使用する：ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性；抗ＣＴＬ４、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に見られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）を標的とする抗体；Ｂ１６、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系の黒色腫；Ｂ７８、ＧＤ２シンターゼによるトランスフェクションにより、ＧＤ２を発現するＢ１６の変異体；Ｄ、日；Ｈｕ１４．１８−ＩＬ２、実施例に開示される調査で使用される一次免疫サイトカイン（ＧＤ２に対して反応する）；ＩＣ、免疫サイトカイン（ＩＬ２に結合した腫瘍反応性ｍＡｂの融合タンパク質）；ＩＣＩ、免疫チェックポイント阻害剤；ＩＬ２、インターロイキン２；ＩＴ、腫瘍内；ＩＶ、静脈内；ｍＡｂ、モノクローナル抗体；ＭＡＨＡ、マウス抗ヒト抗体；ＮＭ４０４、図１に示されるリン脂質エーテルをさすために使用され、大部分の腫瘍によって選択的に取り込まれ、実施例に開示される調査においてＴＲＴに使用される；ＮＭ６００、図１４に示されるリン脂質エーテルをさすために使用され、どんな金属ともキレート化されることができ、これも大部分の腫瘍によって選択的に取り込まれ、実施例に開示される調査においてＴＲＴに使用される；ＮＸＳ２、ＡＪマウスと同系の神経芽細胞腫；Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２、ＧＤ２シンターゼによるトランスフェクションのためにＧＤ２を発現するＣ５７Ｂｌ／６マウスと同系の膵臓癌；ＰＬＥ、リン脂質エーテル；ＲＴ、放射線療法；ＴＲＴ、標的化放射線療法；Ｗ、週；９４６４Ｄ−ＧＤ２、ＧＤ２シンターゼによるトランスフェクションのためにＧＤ２を発現するＣ５７Ｂｌ／６マウスと同系の神経芽細胞腫。
【００６７】
ＩＩ．本発明
本開示は、１以上の悪性固形腫瘍として存在するあらゆる癌を治療する方法に関する。開示される方法は、２つの治療ステップを組み合わせ、予期せぬ相乗効果によって、悪性固形腫瘍に対してはるかに改善された効果をもたらす。具体的には、悪性固形腫瘍組織によって差別的に（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ）取り込まれ保持される、免疫調節用量の放射性リン脂質金属キレート化合物または放射性ハロゲン化リン脂質化合物が患者に投与されると、免疫刺激剤で処置されている悪性固形腫瘍の少なくとも１つに対する追加のｘＲＴの有無にかかわらず、特定の免疫細胞を刺激する能力のある１以上の薬剤を含む組成物を（例えば静脈内注射によって）全身投与することによって、さらなる免疫調節が行われる。
【００６８】
免疫調節用量の放射性リン脂質金属キレートまたは放射性ハロゲン化化合物は、Ｔｒｅｇレベル（およびその他の免疫抑制要素）を低下させる可能性が高く、ｘＲＴを１つの腫瘍に対して使用し、１以上の追加の腫瘍が照射されない場合に生じる免疫系の低下（付随する免疫寛容）を防ぐが、機序の理解は本発明の実践に必要ではなく、本発明は特定の作用機序に限定されない。
【００６９】
Ａ．全身投与性免疫療法：例となる免疫賦活剤としての免疫チェックポイント阻害剤
免疫調節剤を腫瘍に直接投与することによる免疫活性化の方法（例えば下の例の一部に示されているｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種による腫瘍内免疫など）とは対照的に、全身投与性免疫療法は、免疫賦活剤を全身投与することにより行われる。免疫賦活剤は対象の全身を循環し、身体の自然な免疫応答を刺激する。
【００７０】
免疫チェックポイント阻害剤は、そのような免疫賦活剤の限定されない例である。活性化Ｔ細胞は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）などの複数の免疫共抑制受容体を発現する。これらおよび他の免疫チェックポイント分子は、特有の非重複経路を介して、腫瘍微小環境で腫瘍抗原に対するＴ細胞応答を調節することが示されている。
【００７１】
より具体的には、癌の増殖は、癌に誘発される免疫抑制によって部分的に媒介される。腫瘍は、腫瘍に対する一般的な免疫応答を低下させるために、免疫抑制チェックポイント経路を活性化することができる。したがって、主要な免疫チェックポイント経路の遮断は、患者自身の免疫系によって促進される抗腫瘍免疫を誘発することができる。
【００７２】
ＣＴＬＡ４は、ＣＴＬＡ４を標的化する（抗ＣＬＡ４）ｍＡｂを投与することにより、臨床的に標的化される最初の免疫チェックポイント分子であった。これまでのところ、癌の治療のための最も有望な免疫チェックポイント阻害剤戦略は、ＣＴＬＡ−４および／またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１を標的化するｍＡｂの投与を伴う。他の免疫チェックポイント阻害剤戦略は現在開発中であり、本開示の併用方法は特定の免疫チェックポイント経路を標的化することに限定されない。
【００７３】
チェックポイント阻害剤および癌免疫療法を網羅する一連のレビューが、最近、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓの第２７６巻で公開された。入門的な概要である、Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２７６（２０１７年３月４日）：５−８を含むこれらのレビューは、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
【００７４】
Ｂ．免疫調節用量の放射性リン脂質金属キレート化合物
使用される放射性リン脂質金属キレート化合物は、金属キレート化合物にキレート化された金属同位体によって放出されたＲＴが、放出されたＲＴに他の組織型を実質的にさらすことなく悪性固形腫瘍組織に向けられるように、広範囲の固形腫瘍細胞型を選択的に標的とするべきである。放射性リン脂質金属キレート化合物に含められる放射性金属同位体は、化合物を取り込む細胞の免疫活性化をもたらす形で電離ＲＴを放出することが公知のどんな放射性金属同位体であってもよい。使用され得る放射性金属同位体の限定されない例としては、Ｌｕ−１７７、Ｙ−９０、Ｈｏ−１６６、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｃｕ−６７、Ａｕ−１９９、Ｒｈ−１０５、Ｒａ−２２３、Ａｃ−２２５、Ｐｂ−２１２、またはＴｈ−２２７が挙げられる。
【００７５】
放射性リン脂質金属キレート化合物の免疫調節ＲＴ線量は（注入量とは対照的に）、悪性固形腫瘍に対して従来ＲＴに使用される線量よりもはるかに少ない。具体的には、線量は、免疫賦活効果を担う望ましい免疫細胞を除去しない一方で、（おそらく免疫抑制Ｔｒｅｇレベルおよびその他の免疫抑制細胞または分子を減少させることによって）腫瘍微小環境内の免疫細胞において応答を刺激するのに十分であるべきである。
【００７６】
適切な免疫調節用量は、「検出促進」用量の放射性金属キレート化合物を投与した後に得られる画像データから計算することができる。検出促進用量は、免疫調節用量とは全く異なっていることがあり、放射性金属キレート化合物に組み込まれる放射性金属同位体は異なっていることがある（しかし化合物構造の残部は同じであるべきである）。検出ステップおよび線量測定計算で用いられる放射性金属同位体は、従来のイメージング手段によってすぐに検出可能な形態でＲＴを放出することが公知の、どんな放射性金属同位体であってもよい。「従来のイメージング手段」の限定されない例としては、ガンマ線検出、ＰＥＴ走査、およびＳＰＥＣＴ走査が挙げられる。使用され得る放射性金属同位体の限定されない例としては、Ｇａ−６６、Ｃｕ−６４、Ｙ−８６、Ｃｏ−５５、Ｚｒ−８９、Ｓｒ−８３、Ｍｎ−５２、Ａｓ−７２、Ｓｃ−４４、Ｇａ−６７、Ｉｎ−１１１、またはＴｃ−９９ｍが挙げられる。
【００７７】
Ｃ．ＰＬＥ類似体の金属キレート
開示される構造は、アルキルホスホコリン（ＡＰＣ）担体骨格を利用する。合成されれば、薬剤は、関連する放射性ハロゲン化化合物で以前に実証したように腫瘍選択性を保持すると同時にそれらを注射に適したものにする製剤特性を有するべきである。開示される構造には、放射性金属同位体とキレート化して最終的なイメージングまたは治療薬を生成するキレート部分が含まれる。
【００７８】
Ｄ．例となるＭ−ＰＬＥ類似体を合成する方法
化合物１の提案される合成を以下に示す。合成の最初のステップは、Ｏｒｇ  Ｓｙｎｔｈ，２００８，８５，１０−１４に記載されるものに類似している。合成はサイクレンから出発し、これをＤＯ３Ａトリス−Ｂｎエステルに変換する。次に、この中間体を塩基およびＰｄ触媒の存在下でＮＭ４０４と結合体化させる。最後に、ベンジル保護基を接触水素化によって除去する。
【化６】
2021502368.tif 000016
【００７９】
化合物２の合成を以下に示す。合成はＤＯ３Ａトリス−Ｂｎエステルから開始し、これを３−（ブロモ−プロパ−１−イニル）−トリメチルシランでアルキル化する。アルキル化後、トリメチルシリル基を除去し、中間体アセチレンを薗頭反応によってＮＭ４０４とカップリングさせる。ベンジル基を除去し、合成の最後のステップで三重結合を同時に水素化する。
【化７】
2021502368.tif 000017
【００８０】
化合物５および６は、以下のスキームに示すように、同じ前駆体、ＤＴＰＡ二無水物および１８−ｐ−（３−ヒドロキシエチル−フェニル）−オクタデシルホスホコリンから合成することができる。
【化８】
2021502368.tif 000018
【００８１】
ＮＯＴＡ−ＮＭ４０４結合体は類似の方法で合成することができる。一例は、以下のＮＯＴＡ−ＮＭ４０４結合体７である。
【化９】
2021502368.tif 000019
【００８２】
Ｅ．剤形および投与方法
相乗的標的化ＲＴには、どんな投与経路も適するであろう。一実施形態では、開示されるアルキルホスホコリン類似体は、静脈内注射を介して対象に投与されてよい。もう一つの実施形態では、開示されるアルキルホスホコリン類似体は、任意のその他の適した全身送達、例えば非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与、直腸投与、または経皮投与を介して対象に投与されてよい。
【００８３】
もう一つの実施形態では、開示されるアルキルホスホコリン類似体は、鼻腔系または口を介して、例えば、吸入によって対象に投与されてよい。
【００８４】
もう一つの実施形態では、開示されるアルキルホスホコリン類似体は、腹腔内注射またはＩＰ注射を介して対象に投与されてよい。
【００８５】
ある種の実施形態では、開示されるアルキルホスホコリン類似体は、薬剤的に許容される塩として提供されてよい。しかし、その他の塩は、アルキルホスホコリン類似体またはその薬剤的に許容される塩の調製に有用であることがある。適した薬剤的に許容される塩としては、限定されるものではないが、例えば、アルキルホスホコリン類似体の溶液を、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬剤的に許容される酸の溶液と混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。
【００８６】
開示されるアルキルホスホコリン類似体が少なくとも１つの不斉中心を有する場合、それらはそれに応じてエナンチオマーとして存在してよい。開示されるアルキルホスホコリン類似体が２以上の不斉中心を有する場合、それらはそれに応じてジアステレオ異性体として存在してよい。そのような異性体およびその任意の割合の混合物がすべて本開示の範囲内に包含されることは理解される。
【００８７】
本開示は、１以上の開示されるアルキルホスホコリン類似体を薬剤的に許容される担体とともに含む医薬組成物を使用する方法も含む。好ましくは、これらの組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、滅菌非経口液剤または懸濁剤、定量エアゾール剤または液体スプレー剤、滴剤、アンプル剤、自動注射装置または坐剤などの、非経口投与、鼻腔内投与、舌下投与もしくは直腸投与、または吸入もしくは吹送による投与用の、単位剤形の形である。
【００８８】
錠剤などの固体組成物を調製するには、主要な有効成分を、薬学的に許容される担体、例えば従来の錠剤化成分、例えばトウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはゴム、およびその他の薬学的希釈剤、例えば水などと混合して、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩のための均質な混合物を含有する、固体の予備製剤組成物を形成する。これらの予備製剤組成物を均質と呼ぶ場合、それは、有効成分が組成物全体にわたって均一に分散されているので、組成物が錠剤、丸剤およびカプセル剤などの等しく有効な単位剤形に容易に細分され得ることを意味する。この固体の予備製剤組成物は、次に、０．１〜約５００ｍｇの本発明の有効成分を含有する上記の種類の単位剤形に細分される。典型的な単位剤形は、１〜１００ｍｇ、例えば、１、２、５、１０、２５、５０または１００ｍｇの有効成分を含有する。新規組成物の錠剤または丸剤は、長期作用の利点を与える投与量を提供するためにコーティングされるか、または別の方法で配合され得る。例えば、錠剤または丸薬は、内側投薬成分および外側投薬成分を含むことができ、後者は、前者の上の外被の形態である。２つの成分は、胃での分解に抵抗するのに役立ち、内側の成分が損傷を受けずに十二指腸に入るかまたは放出が遅延されるのに役立つ、腸溶層によって隔てられ得る。多様な材料がそのような腸溶層または腸溶コーティングに使用され得、そのような材料には、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸と、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースとしてのそのような材料との混合物が含まれる。
【００８９】
アルキルホスホコリン類似体を経口または注射による投与のために組み込んでよい液体形態としては、水溶液、適切に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、および、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油またはピーナッツ油などの食用油を含む風味付き乳濁液、ならびにエリキシル剤および同様の薬学的賦形剤が挙げられる。水性懸濁液に適した分散剤または沈殿防止剤としては、トラガカントゴム、アラビアゴム、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどの合成および天然ゴムが挙げられる。
【００９０】
開示されるアルキルホスホコリン類似体は、注射可能な担体系との組合せを含む、薬学的に注射可能な投薬形態に処方される場合に特に有用である。本明細書において、注射可能な剤形および注入剤形（すなわち非経口剤形）としては、限定されるものではないが、リポソーム注射剤または活性のある原薬を封入するリン脂質を有する脂質二重層小胞が挙げられる。注射剤には、非経口使用を意図した無菌調製物が含まれる。
【００９１】
ＵＳＰによって定義されるように５つの異なるクラスの注射剤：乳濁液、脂質、粉末、溶液および懸濁液が存在する。乳濁液注射には、非経口投与が意図される無菌の発熱物質を含まない調製物を含む乳濁液が含まれる。溶液注射用の脂質複合体および粉末は、非経口使用のための溶液を形成するための再構成を意図した無菌調製物である。懸濁液注射用粉末は、非経口使用のための懸濁液を形成するための再構成を意図した無菌調製物である。リポソーム懸濁液注射用の凍結乾燥粉末は、再構成時に製剤が形成される、非経口使用のための再構成を目的とする無菌のフリーズドライ調製物であり、これは、脂質二重層内または水性空間に活性のある原薬を封入するために使用されるリン脂質を有する、脂質二重層小胞などのリポソームの組み込みを可能にする形で処方される。溶液注射用の凍結乾燥粉末は、その製法が極低圧で凍結状態の生成物から水分を除去することを含み、その後の液体の添加により注射の必要条件にあらゆる点で適合する溶液を生成する、凍結乾燥（「フリーズドライ」）によって調製される溶液用の剤形である。懸濁液注射用の凍結乾燥粉末は、適した液状媒体中に懸濁された固体を含む、非経口使用を目的とする液体調製物であり、そしてそれは、懸濁液を意図する薬剤が凍結乾燥によって調製される、滅菌懸濁液の必要条件にあらゆる点で適合する。溶液注射は、注射に適している、適した溶媒または相互に混和性の溶媒の混合物に溶解した１以上の原薬を含有する液体調製物を含む。
【００９２】
溶液濃縮物注射は、適した溶媒を添加すると、注射の必要条件にあらゆる点で適合する溶液を生じる非経口使用用の無菌調製物を含む。懸濁液注射は、粒子が不溶性であり、油相が水相全体に分散しているかまたは逆も同じである、液相全体にわたって分散した固体粒子を含有する（注射に適した）液体調製物を含む。懸濁リポソーム注射剤は、リポソーム（脂質二重層内かまたは水性空間のいずれかに活性のある原薬を封入するために使用されるリン脂質を通常含有する脂質二重層小胞）が形成されるように、油相が水相全体に分散した（注射に適した）液体調製物である。懸濁液超音波処理注射液は、粒子が不溶性である、液相全体に分散した固体粒子を含有する（注射に適した）液体調製物である。その上、生成物は、ガスを懸濁液に吹き込む際に超音波処理されてもよく、その結果、固体粒子によるミクロスフェアが形成される。
【００９３】
非経口担体系には、１以上の薬学的に適した賦形剤、例えば溶媒および共溶媒、可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤、増粘剤、乳化剤、キレート剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、還元剤、抗菌性保存剤、充填剤、保護剤、等張化剤、および特殊添加剤などが含まれる。
【００９４】
以下の実施例は説明目的のためだけに提供され、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。実際に、本明細書中に示され記載されたものに加えて、本発明の様々な変更は、前述の説明および以下の実施例から当業者に明らかとなり、添付される特許請求の範囲に入る。
【実施例】
【００９５】
ＩＩＩ．実施例
実施例の序論
これらの実施例は、予想外の非常に強力な相乗効果を利用する、癌治療研究における２つの非常に異なる最先端の学問分野を１つにする可能性を示す。これらの学問分野は、１）全身投与されるＴＲＴ、および２）局所への抗体媒介性癌免疫療法または全身投与される癌免疫療法である。本明細書に提示されるデータは、強力な相乗効果がこれらの手法を組み合わせることによって生じることを示唆している。総合すると、これらの２つの戦略は、破壊された癌細胞が、どんな部位のどんな種類の固形腫瘍に対しても持続性残存転移性疾患を根絶できる腫瘍特異的Ｔ細胞免疫を生成する強力な免疫賦活剤として機能することを可能にする方法で、目に見える肉眼的腫瘍を破壊するために使用することができる。
【００９６】
本発明者らの進行中の前臨床研究は、腫瘍特異的ｍＡｂとＩＬ２（自然免疫細胞を活性化するため）の組合せにより、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）が増強することを示した［１、２］。これは神経芽細胞腫の小児に対する臨床的利益にすでに変換されているプロセス［３］である。最近の前臨床データは、ｍＡｂ−ＩＬ２融合タンパク質が腫瘍内注射（ＩＴ）された場合に、より強力な抗腫瘍効率を示す［４、５］。注目すべきことに、これらのｍＡｂ／ＩＬ２注射に応答せず、局所ｘＲＴのみで治療した場合には増殖し続ける大きな腫瘍は、ｘＲＴをｍＡｂ／ＩＬ２治療と組み合わせると完全に根絶することができる。大部分のマウスが治癒し、同様の腫瘍細胞による再攻撃を拒絶するＴ細胞記憶を発達させており［６］；併用されたｘＲＴ＋ｍＡｂ／ＩＬ２が強力な「ｉｎ  ｓｉｔｕ」抗癌ワクチンとして作用していることを示している。
【００９７】
重要な制限は、これらの動物が原発性（第１の）腫瘍に対してｘＲＴ＋ｍＡｂ／ＩＬ２治療を受けた場合に別の肉眼的腫瘍が存在するならば、第２の腫瘍は増殖し続け、驚くことに、免疫反応を抑制して、１回目の治療を受けた腫瘍の縮小を防ぐことである。この「付随する免疫寛容」は、一部分、第２の腫瘍の抑制性制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に起因する。ＲＴだけを両方の腫瘍に送達すると最小の抗腫瘍効果があるが、これらのＴｒｅｇを枯渇させる。このように、第１の腫瘍をｘＲＴ＋ｍＡｂ／ＩＬ２で治療する場合、第２の腫瘍にＲＴを加えることによってこの免疫寛容が回避され、両方の腫瘍の根絶が可能になる［７］。これらの知見は、転移性の状況におけるｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種の制限を示しているが、ＲＴがこの制限を克服する強い能力も示唆する。
【００９８】
ｘＲＴは、一般に、禁止されている正常組織への毒性および免疫抑制を伴わずに、すべての転移部位に送達することはできない。しかし、肉眼的疾患のすべての部位にｘＲＴを送達しないと、抑制性免疫系統を無傷のままにすることができ、そのことは本発明者らの局所ｘＲＴ＋ｍＡｂ／ＩＬ２免疫療法に対する免疫学的応答を抑制することができる。そのため、必要とされているのは、標的化された方法で癌患者のすべての腫瘍部位にＲＴを送達する手段である。
【００９９】
本発明者らは、全身投与されたＲＴを原発性癌と転移性癌の両方に標的化することができるＴＲＴ賦形剤を開発した。そのようなＴＲＴ試薬の１つである、１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、静脈内（ＩＶ）投与されるリン脂質エーテル（ＰＬＥ）類似体で、６０を超えるインビボ癌および癌幹細胞モデルにおいてほぼ万能の腫瘍標的化特性を示した。この試薬は現在、複数のイメージングおよび臨床試験で臨床的に評価されている［８、９］。１３１Ｉ−ＮＭ４０４の全身注射は、解剖学的部位にかかわらず、すべての腫瘍に集中して、効果的な腫瘍根絶性免疫応答の生成を防ぐことのできる、腫瘍内免疫抑制経路を切断するのに十分なＲＴを内部的に提供する。この手法の独特の特質は、ＮＭ４０４のほぼ万能の腫瘍標的化能力、ならびに致死量以下の免疫調節用量のＲＴをすべての腫瘍部位に送達する能力であり、これは一般にｘＲＴでは実現不可能である。これについての新しい点は、本発明者らのＴＲＴ剤が、解剖学的部位にかかわらず、すべての腫瘍を免疫調節し、付随する寛容性を克服することができ、それにより局所ｘＲＴとそれに続く腫瘍特異的ｍＡｂ＋ＩＬ２の注射の後に長期間のｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種効果がもたらされることである。ますます多くの腫瘍特異的ｍＡｂが臨床使用のために承認されるようになっているので、この併用戦略は、腫瘍反応性ｍＡｂによって標的化され得るどんな腫瘍型に対しても手法の拡張を提供する。さらに、この手法は、すべてのｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種戦略に容易に一般化することができる。
【０１００】
近年、本発明者らは、１３１Ｉ−ＮＭ４０４中のヨウ素を、幅広い種類の金属イメージング（ＭＲＩおよびＰＥＴ）およびＴＲＴ放射線治療部分を有することのできるキレート剤で置換できることを見出した。これらの実施例では、１３１Ｉ−ＮＭ４０４（および関連する金属キレート類似体）の、ｘＲＴ＋免疫療法の併用処置が癌性固形腫瘍（ｔｉｍｕｏｒｓ）に対する強力な放射免疫促進応答を誘発することを可能にするために必要な全身免疫調節応答を開始する能力を評価する方法を本発明者らは説明する。同様の手法は、ＰＬＥ類似体に送達されるＴＲＴと、癌性固形腫瘍に対して用いられる他の免疫療法との併用に用いることができる。例えば、併用法では局所ｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン接種とはかなり異なる免疫調節（ｉｍｍｕｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ）ステップ、すなわち免疫チェックポイント阻害剤などの免疫賦活剤（ｉｍｍｕｎｏｓｔｕｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）の全身投与が使用され得ることを本発明者らは以下に示している。
【０１０１】
要するに、本発明者らは、一見したところ切り離された癌治療の学問分野に由来する２つの異なる方法を１つの統合された治療に組み合わせる治療および研究プロセスを本明細書において開示する。これらの実施例に提示されるデータは、これら２つの方法を相乗的に組み合わせて、悪性固形腫瘍を効果的に排除し、腫瘍再発を防ぐことができることを示す。
【０１０２】
実施例１では、本発明者らは、本方法の裏付けとしてＢ７８  ＧＤ２＋モデルから得たバックグラウンドデータを提示する。
【０１０３】
実施例２では、本発明者らは、原発性腫瘍に対する最適なｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果に必要なｘＲＴの線量、および付随する免疫寛容を防ぐために必要な遠隔腫瘍に対するｘＲＴの最小線量を決定するためのガイダンスを提供する。
【０１０４】
実施例３では、本発明者らは、実施例２で決定されるように、転移に対するｘＲＴの必要な投与量に近い１３１Ｉ−ＮＭ４０４の投与量を決定し、その後、１３１Ｉ−ＮＭ４０４の線量のインビボ免疫機能への効果を評価するためのガイダンスを提供する。そのようなガイダンスは、開示される放射性リン脂質金属キレート化合物をＴＲＴ剤として使用する場合に同様に適用され得る。
【０１０５】
実施例４では、本発明者らは、実施例２および３から得たデータを使用して、２以上の腫瘍を有するマウスにおいて、局所的に処置された腫瘍を破壊し、すべての遠隔腫瘍のＴ細胞媒介性根絶を誘導するための、１３１Ｉ−ＮＭ４０４＋局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ｍＡｂ／ＩＬ２の投与計画を設計／試験／開発するためのガイダンスを提供する。ＴＲＴおよびｘＲＴの線量および時間の重大な問題は、抗腫瘍効率のために最適化されている。この場合もやはり、そのようなガイダンスは、開示される放射性リン脂質金属キレート化合物をＴＲＴ剤として使用する場合に同様に適用され得る。
【０１０６】
実施例５では、本発明者らは、放射性金属同位体をキレート化している類似化合物の合成にも用途を見出す、例となる合成を提供する。
【０１０７】
実施例６では、本発明者らは、ＮＭ４０４（Ｇｄ−ＮＭ６００）のヨウ素部分の代わりに用いられるキレート剤およびキレート化された金属を有する類似体が、固形腫瘍組織に取り込まれ（そして固形腫瘍内で画像化され得）、したがって開示される金属キレートをＴＲＴ剤として使用するための概念実証を提供することを示す。
【０１０８】
実施例７、８、９および１０では、本発明者らは、実施例１〜４のガイダンスに従って実施された実証研究から得た情報および具体的なデータを提供する。
【０１０９】
実施例１１および１２では、本発明者らは、キレート剤およびキレート化された金属がＮＭ４０４のヨウ素部分に置き換えられているさらなる類似体が、インビボモデルにおいて様々な固形腫瘍に取り込まれ、様々な固形腫瘍の中で画像化され得、様々な固形腫瘍でのＴＲＴに治療的に使用され得ること、したがって開示される方法において開示される金属キレートをＴＲＴ剤として使用するためのさらなる概念実証を提供することを示す。
【０１１０】
実施例１３では、どのように線量測定を既知の放射線感受性と組み合わせて使用すれば、当業者が任意の固形腫瘍の処置投与量を最適化することができるかを本発明者らは考察する。
【０１１１】
実施例１４では、本発明者らは、実施例１〜４および７〜１０に例示されるヨウ素化化合物ではなく、開示される方法においてアルキルホスホコリン金属キレートを使用することの違いおよび利点を考察する。
【０１１２】
実施例１５および１６では、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種よりも、全身投与性免疫療法と組み合わせたＴＲＴが固形腫瘍の治療にも有効であることを示している。全身投与される免疫賦活剤は、免疫チェックポイント遮断薬または阻害剤（この場合、抗ＣＴＬＡ４）であってよい。
【０１１３】
実施例１：バックグラウンドを裏付けるデータ
Ｓｏｎｄｅｌ研究室は、腫瘍特異的ｍＡｂ＋ＩＬ２が自然免疫細胞を活性化させてマウスにおいてＡＤＣＣを媒介し［２］、神経芽腫をもつ小児にとって臨床的に有益である［３］ことを示した。マウスにおいて、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２のＩＶ投与は、抗ＧＤ２  ｍＡｂ＋ＩＬ２のＩＶ投与よりも強力であった［２、１０］。これは、ごく小さい、最近確立されたＧＤ２＋腫瘍またはごく小さい顕微鏡レベルの転移に対して劇的な抗腫瘍効果を提供することができ、寛解状態であるが再発の危険性が高い患者におけるこの手法の臨床使用を潜在的に説明する［３］。測定可能な肉眼的腫瘍［すなわち、約５０ｍｍ３のＧＤ２＋腫瘍］に対するより強力な抗腫瘍効率は、ＩＣがＩＶよりもむしろ腫瘍内注射された（ＩＴ−ＩＣ）場合に実現され得る［４、５］。
【０１１４】
本発明者らは現在、はるかに大きい肉眼的腫瘍の状況で利益をもたらす方法に注目している。５週間前に確立された、中程度の大きさ（２００ｍｍ３）のＢ７８黒色腫腫瘍を有するマウスは、ＩＶ−ＩＣに対して応答を示さず、ＩＴ−ＩＣによってその増殖が遅くされているが、腫瘍は増殖を続ける。これらの同じ２００ｍｍ３腫瘍も、１２ＧｙのｘＲＴの後に増殖する。対照的に、ＩＴ−ＩＣおよびｘＲＴを併用すると、７３％の動物の腫瘍がなくなり、その疾患が治癒したように見える（図２Ａおよび２Ｂ）。次に、これらのマウスは、同じ腫瘍による再負荷のＴ細胞媒介性拒絶を示す（図２Ｃ）。したがってＩＴ−ＩＣ＋ｘＲＴは相乗作用を示し、腫瘍が「ｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍ワクチン」になることを誘導する［６］。
【０１１５】
臨床転移をシミュレートするために、本発明者らはＢ７８を１日目にマウスの側腹部に、そして２週間目に他方の側腹部に接種する。５週目に、第１の腫瘍は２００ｍｍ３であり、第２の腫瘍は５０ｍｍ３である。本発明者らは、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣが第１の腫瘍を破壊し、得られるＴ細胞応答が次に第２の腫瘍を破壊するであろうと予測した。しかし、ＩＴ−ＩＣをｘＲＴに加えても、５０ｍｍ３腫瘍にも２００ｍｍ３腫瘍にも実質的に効果がなかった（図３）。これは本発明者らが提供した治療法への重要な制限を示した；つまり、これらのマウスがｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣを第１の腫瘍に受けた時に別の腫瘍が存在する場合、第２の腫瘍は全身性の腫瘍特異的な付随する免疫寛容作用を引き起こし、どちらの腫瘍の縮小も防ぐことになることである。重要なことに、本発明者らは、第１および第２の腫瘍に対する局所ｘＲＴ（１２Ｇｙ）が同時にこの寛容作用を抑止し、大部分のマウスで両方の腫瘍を根絶する免疫応答を第１の腫瘍に対するＩＴ−ＩＣに誘導させることを見出した（図４）［７］。Ｔｒｅｇ枯渇ｍＡｂ（図示せず）または選択的Ｔｒｅｇ枯渇を可能にするトランスジェニックマウス（図４）［７］を用いる最近のデータは、この免疫寛容が、一部分、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって媒介されることを示す。第１および第２の腫瘍へのＲＴは、これらのＴｒｅｇを部分的に枯渇させ、両方の腫瘍への照射が寛容作用を回避する方法を潜在的に説明する［７］。
【０１１６】
第１および第２の腫瘍の両方に対する局所ｘＲＴは寛容性を回避するが、臨床転移性疾患は多くの場合、数個の部位に存在する。すべての肉眼的転移性疾患は、免疫寛容を阻止し、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣがすべての腫瘍部位を効果的に根絶することを可能にするためにＲＴを受けなければならない。しかし、１２ＧｙのｘＲＴをすべての疾患部位に送達することは、主な線量依存的（潜在的致死）毒性および深刻な全身性免疫抑制を伴う「全身ＲＴ」に近い可能性がある。
【０１１７】
以前に、Ｗｅｉｃｈｅｒｔ研究室は、すべての全身性腫瘍部位にＲＴを送達し、同時に正常組織（特に骨髄および免疫組織）に対する「オフターゲット」ＲＴを最小限に抑えるために、ＴＲＴを先駆的に開発した。
【０１１８】
腫瘍細胞が過剰なリン脂質エーテル（ＰＬＥ）を含むという知見に基づいて［１１］、本発明者らは、腫瘍を選択的に標的化する類似体を同定することを狙って３０を超える放射性ヨウ素化ＰＬＥ類似体を合成した［１２］。これらのうちの１つである、ＮＭ４０４は、脳転移および癌幹細胞を含む解剖学的部位にかかわらず、調査した７０を超えるインビボモデルの３つを除くすべてにおいてほぼ万能の腫瘍取り込みを示しただけでなく、腫瘍細胞に侵入すると、長期間選択的に保持された［８］。これらの診断兼治療用（ｄｉａｐｅｕｔｉｃ）ＰＬＥ類似体は、それらが前悪性病変および炎症性病変を回避するという点で独特である。正常細胞と比較して癌細胞で過剰発現する表面膜脂質ラフトは、ＮＭ４０４を含むＰＬＥの癌および癌幹細胞への侵入の入り口として役立つ［８］。放射性ヨウ素化ＮＭ４０４（Ｉ−１２４およびＩ−１３１）は、今回５回の第１相および第２相ＰＥＴイメージング試験および３回の第１相ＴＲＴ放射線療法試験においてそれぞれ評価され、１ダースを超えるヒト癌型において同様の腫瘍取り込みおよび保持特性を示す［８］。これらの例に関連する癌モデル（Ｂ７８  ＧＤ２＋マウス黒色腫）での優れた腫瘍取り込みは、１２４Ｉ−ＮＭ４０４  ＰＥＴイメージングで確認された（図５）。
【０１１９】
実施例２：ｘＲＴの投与量の決定
本発明者らのデータはこれらの４つの仮説を示唆する：（１）１つの腫瘍を治療するために使用したｘＲＴの線量は、適度の直接インビボ腫瘍死を引き起こし、免疫に媒介される死（ＡＤＣＣとＴ細胞の両方による）に対する感受性を増大させる；（２）ＩＴ  ｍＡｂでなくＩＴ−ＩＣの添加によってもたらされる強いＴ細胞応答は、ＩＬ２の存在下で照射を受けた腫瘍細胞と結合するｍＡｂが、抗原提示および適応免疫の誘導の増強を促進することを示唆する；（３）第２の腫瘍が存在すると、第２の腫瘍に存在する免疫抑制細胞［例えばＴｒｅｇおよびおそらく骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）など］の全身作用によって主に引き起こされる寛容性のために、第１の腫瘍へのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣが実質的にどんな抗腫瘍効果も引き起こさない；この寛容性は、Ｔｒｅｇの枯渇（図４）または第２の腫瘍への照射（図３）によって回避することができる；（４）寛容性を回避するために第２の腫瘍で必要なＲＴの線量は、第１の腫瘍が「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」となるために必要なｘＲＴ線量よりもはるかに低い可能性がある［１４］。
【０１２０】
原発性（「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」）腫瘍部位のｘＲＴ線量の最適化
【０１２１】
本発明者らのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣのインビボ研究は、第１の腫瘍に対する１２Ｇｙの１回の投与量に注目してきた。これは、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣのｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果が、機能的Ｆａｓ−Ｌを有するマウスを必要とすることを実証する本発明者らのインビボデータと連結させた、インビトロＲＴがＢ７８腫瘍細胞でＦａｓの線量依存性の機能アップレギュレーションを誘導する（＞１２Ｇｙのピーク付近）ことを示す本発明者らのデータに基づく（６）。本発明者らは１２Ｇｙの線量を選択する前にインビボパイロット研究を実施した。それは高線量（１６Ｇｙ）または分割側腹部ＲＴの増加が毒性（皮膚炎、潰瘍、および後肢浮腫）を有することを示し、腫瘍応答の改善は示さなかった。本発明者らはインビボ研究に１２Ｇｙの１回照射（ｓｉｎｇｌｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）のｘＲＴを選択したが、本発明者らが臨床解釈へと進む際にｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を安全かつ効果的に誘導するために、局所ｘＲＴ効果の機構およびその線量条件をより良く理解することが有益であろう。
【０１２２】
本発明者らのマウスデータ（図２Ａ、２Ｂおよび２Ｃ）は、たとえ１２ＧｙのｘＲＴだけでは腫瘍の縮小が引き起こされないとしても、１２ＧｙのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣで強力なワクチン効果を誘導することができることを示す；それは進行性の成長を遅らせるだけである。本発明者らは、より低い線量のＲＴを使用した場合と同じくらい強力なｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果が見られると考えた。これを試験するために、本発明者らは、約２００ｍｍ３のＢ７８腫瘍を有するマウスにおいて１回照射として一連のｘＲＴ線量（４〜１６Ｇｙ）とそれに続く本発明者らの標準的なＩＴ−ＩＣ投与計画（６〜１０日目に５０ｍｃｇ／日）を評価する。本発明者らは、ＩＴ−ＩＣと併用した場合に、どのｘＲＴ線量が最適な腫瘍根絶およびＴ細胞記憶をもたらすかを決定する。１２Ｇｙ未満の線量のほうが毒性が少なく、匹敵する有効性を示す場合、そのような低線量は、実施例３および４の「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」部位への本発明者らのｘＲＴ線量のより良い標的となるであろう。同様の手法を用いて特定の標的または対象に対する投薬を最適化してもよい。
【０１２３】
寛容性が「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種」を阻止することを防ぐための遠隔腫瘍でのｘＲＴ線量の最適化。
【０１２４】
第１の腫瘍と第２の腫瘍の両方を１２Ｇｙで処置することにより（図３）、第１の腫瘍に対するＩＴ−ＩＣが、両方の腫瘍を根絶する強力な応答を誘導することが可能になる。本発明者らの目的は、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣを１つの腫瘍に提供すると同時に、寛容性を回避するために転移部位で必要最小ＲＴ線量を使用することによって、この同じｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果の達成を可能にすることである。本発明者らは、ｘＲＴ自体が、特に広い範囲に及ぶ場合には、骨髄／免疫抑制性であり得ることを認識している。そのため、本発明者らは実施例３および４でＴＲＴを追跡している。たとえ標的化されているとしても、ＴＲＴはＲＴのいくらかの全身送達を行っている。ＴＲＴによる全身性免疫抑制を最小にするために、本発明者らは、全身性ＲＴ誘発性の全体的な免疫抑制を引き起こさずに、腫瘍誘発性の免疫寛容を効果的に抑制するのに必要なだけの低線量のＴＲＴを投与することを望んでいる。そのため、第１の腫瘍へのＩＴ−ＩＣと併用した場合に、第１の腫瘍へのより高いｘＲＴ線量が、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチンとして機能することを可能にするために、遠隔腫瘍に送達するために必要な最小の線量のｘＲＴを選択することが最善である。
【０１２５】
例となる最適化実験として、２００ｍｍ３の第１のＢ７８腫瘍および約５０ｍｍ３の第２のＢ７８腫瘍を有するマウスに、０日目（第１のＢ７８腫瘍の移植の約５週間後）に１２ＧｙのｘＲＴを第１の腫瘍に投与する。これに続いて、６〜１０日目に本発明者らの標準的なＩＴ−ＩＣの投与計画を行う。別々の群のマウスに、様々な線量のｘＲＴを第２の腫瘍に投与する。３Ｇｙの全身ｘＲＴが骨髄腫モデルにおいて免疫抑制作用を防ぐことができることを示すＢ．Ｊｏｈｎｓｏｎの研究室のデータに基づいて（１５）、本発明者らは、０、１、５および８Ｇｙの線量を（現在効果的であると分かっている１２Ｇｙ量に加えて）評価する。本発明者らは、第２の腫瘍に対して実質的に１２Ｇｙ未満の線量が、免疫寛容を排除する上で１２Ｇｙの総線量と同じくらい効果的であるかどうかを確かめていく。
【０１２６】
本発明者らが、有益な効果を失うｘＲＴの限界線量を選択したら、限界線量をより良好に最適化するために次の分析を実行する。例えば、５Ｇｙは１２Ｇｙと同じくらい効果的であるが、１Ｇｙは０Ｇｙとあまり変わらない場合は、本発明者らは、１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣを第１の腫瘍に投与するこの２つの腫瘍モデルで、２、３、および４Ｇｙを比較して、寛容性を排除し、効力を得るために必要な限界最低有効ＲＴ線量を特定する。
【０１２７】
次に、反復研究を行って、第１の腫瘍に対する線量が１２Ｇｙ線量でなく１腫瘍モデルでの最小実行線量（上の実施例２で試験済み）である場合に、第２の腫瘍へのこの最小実行線量がｉｎ  ｓｉｔｕワクチンをなおに可能にするかを確かめる。要するに、実施例２の研究は、第１および第２の腫瘍に対するｘＲＴの最小線量を、両方に対して１２Ｇｙで本発明者らが実証した有効性を失うことなく最適化する。
【０１２８】
Ｂ７８以外の腫瘍を有するマウスにおける第１および第２の腫瘍に必要なｘＲＴ線量の研究の開始。
【０１２９】
本発明者らのマウス研究によって、より多くの臨床一般化可能性を示すことができるように、ＧＤ２＋腫瘍の追加のモデルでＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの分析を開始する。本発明者らは、ＧＤ２＋ＮＸＳ２神経芽細胞腫を有するＡＪマウスにおけるｈｕ１４．１８−ＩＬ２  ＩＣを伴うＩＴ−ＩＣについて発表した［５］。また、本発明者らは、ＧＤ２＋９４６４Ｄ−ＧＤ２神経芽細胞腫、および、ＧＤ２シンターゼの遺伝子の挿入によってＧＤ２を発現するＰａｎｃ０２−ＧＤ２膵臓癌を有するＣ５７ＢＬ／６マウスにおいてこの同じＩＣでのＩＴ−ＩＣを評価している。実施例２に関して、各モデルについて本発明者らは、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を保持するために原発性腫瘍および続発性腫瘍に必要な最小有効ｘＲＴ線量を決定する。
【０１３０】
実施例３：１３１Ｉ−ＮＭ４０４の投与量の決定ならびにＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＴＲＴによる免疫機能線量測定およびＴＲＴからの免疫抑制への効果の評価
１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、＞９５％の腫瘍株（ヒトおよびマウス）においてインビトロで選択的な取り込みを示し、非悪性細胞による取り込みは少なく、インビボでも同様の腫瘍特異性が見られた。これには、Ｂ７８腫瘍によるインビボでの選択的取り込みが含まれる（図５）。予備的線量測定研究では、本発明者らは１２４Ｉ−ＮＭ４０４をＣ５７ＢＬ／６マウスに投与し、連続ＰＥＴ／ＣＴイメージングによって（図５のように）ＴＲＴ曝露の経時的推移を特徴付けた。この研究に基づくモンテカルロ線量測定計算［１６−１８］により、４週間の崩壊期間にわたって確立されたＢ７８腫瘍に約３Ｇｙを送達するために、約６０μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４が必要であることが示された。これらの４週間後、Ｂ７８腫瘍への残りのＴＲＴ線量は、０．２５Ｇｙ未満となる。本発明者らは、ｘＲＴを用いて２腫瘍モデルで得たデータを複製する（図３）が、遠隔疾患のすべての部位の腫瘍に誘発される寛容性を効果的に排除することを可能にするために、標的化された１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴの可能な最小線量を使用する。しかし、数分ですべての線量を送達した後に行われるｘＲＴとは違って、ＴＲＴは、標的同位体の生物学的半減期と物理的半減期の両方（１３１Ｉについて８日ｔ１／２）に応じて、経時的に線量を蓄積させる。本発明者らは、免疫寛容を根絶するために遠隔腫瘍部位で初期ＴＲＴ効果を求めている。しかし、本発明者らは、ＩＴ−ＩＣを投与してＡＤＣＣおよびｉｎ  ｓｉｔｕワクチン抗腫瘍効果を誘発させる場合にはＴＲＴの免疫抑制効果を最小に抑えたい。これはすべての部位で完全に腫瘍を破壊するために必要不可欠である。
【０１３１】
本発明者らの予備データからから得た線量測定計算を用いて、３μＣｉの線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、約０．２Ｇｙに相当する量を腫瘍部位に送達するはずであると本発明者らは推定した。本発明者らが仮定した線量は免疫抑制性であってはならず、リンパ球に媒介される腫瘍破壊を妨げるべきでない。上記のように、これは最初の１３１Ｉ−ＮＭ４０４線量６０μＣｉの２８日後になってもまだ送達されないと本発明者らが推定した線量である。このようにして、本発明者らは単一の２００ｍｍ３のＢ７８腫瘍を有するマウスの群を評価した。０日目に、すべてのマウスに１２ＧｙのｘＲＴをその腫瘍に投与し、６〜１０日目に、すべてのマウスに５０ｍｃｇ／日のＩＴ−ＩＣを投与した。１つの群には０日目に３μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４も投与した（約０．２Ｇｙ）。図６は、１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与された群が、１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与されていない群と同程度の腫瘍根絶を示したことを示し、腫瘍のこの低線量の「残留」ＴＲＴが、ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣ  ｉｎ  ｓｉｔｕワクチンによる免疫媒介性破壊を阻止しないことを実証する。したがって、本発明者らは、２２日目に６０μＣｉの初期線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴを使用すると、それは遠隔腫瘍の免疫寛容原性作用を効果的に阻止し、さらに第１の腫瘍に対する０日目のｘＲＴ、および６〜１０日目（ＴＲＴの２８日後）のＩＴ−ＩＣをｉｎ  ｓｉｔｕワクチンとして機能させ、その後すべての腫瘍を根絶する適応応答を誘導すると仮定する。
【０１３２】
この実施例に概説した実験は、図６で試験された線量相関を最適化する。本発明者らの１腫瘍Ｂ７８モデルにおいて、本発明者らは、１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴの線量範囲を試験して、望ましいｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を妨げる（そしてそれによって第１の腫瘍の根絶を遅らせるかまたは防ぐ）のに十分な望ましくない全身性免疫抑制をもたらす、最良のＴＲＴ線量を選択する。これは、実施例４にとって重要である。それは遠隔疾患を有するマウスにおいて第１の腫瘍へのＩＴ−ＩＣを開始した時点で、ＴＲＴの残留放射能がこの値よりも小さく減衰したことを確認することができるためである。本発明者らはまた、様々なＴＲＴ線量後のＴＲＴ応答の速度を評価して、「寛容性を妨げるＴＲＴ線量」を複数の腫瘍を有する動物に投与した後に、第１の腫瘍のＲＴ＋ＩＴ−ＩＣ処置がそれでもｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を誘導し、原発性腫瘍ならびに遠隔腫瘍を根絶できるようにするために、待つべき最適な期間を選択する。
【０１３３】
関連する研究は、単剤処置として投与されるＴＲＴのどの線量が、単一のＢ７８腫瘍の緩徐化、縮小、根絶に対して最も有益であるかについても注目する。腫瘍誘発性免疫寛容を排除するために最も有益なＴＲＴの線量は、（ＴＲＴ単独から）完全な腫瘍破壊を実際に誘導するために必要なＴＲＴ線量よりも実質的に少ないであろう。
【０１３４】
最後に、ＴＲＴの様々な最適化線量の効果が１腫瘍モデルで決定されれば、本発明者らはこれらの対象の血清をＩＣのヒトＩｇＧ成分に対する免疫応答について評価することによって、ＴＲＴのわずかな免疫抑制効果を評価する。本発明者らは、免疫適格マウスがこれらのヒト化ＩＣでの処置の後に容易に定量されるレベルのマウス抗ヒト抗体（ＭＡＨＡ）を生成することを示した（１９）。本発明者らは、これを、ＴＲＴがマウスの免疫応答の強度の検出可能な線量依存的な低下を引き起こすと見ている線量を決定する手段として使用して、これらのマウスがこのＴＲＴから受けるＲＴの全身投与による全体的な免疫抑制効果を測定する。本発明者らが腫瘍誘発性免疫寛容を阻止するために必要となる低いＴＲＴ線量は、最小の全身性免疫抑制を引き起こすであろう。
【０１３５】
実施例４：２以上の腫瘍を有するマウスにおける１３１Ｉ−ＮＭ４０４＋局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ｍＡｂ／ＩＬ２の最適な投与計画の開発
２腫瘍Ｂ７８モデルにおけるＴＲＴ＋ＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの有効性の試験。
【０１３６】
実施例２および３で概説した研究から得られた線量およびタイミングの情報は、本発明者らの２腫瘍モデルでの有効性に必要なＴＲＴの投薬およびタイミングを最適化するために必要な情報をもたらす。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、Ｂ７８を左（Ｌ）および右（Ｒ）側腹部に同時に接種する。各腫瘍は、２週間後に約５０ｍｍ３、５週間後に約２００ｍｍ３であるはずである。実施例３の線量測定計算で、３ＧｙのＲＴに近づけるために６０μＣｉのＴＲＴを第２の腫瘍に送達する必要があると本発明者らが考える場合（免疫寛容を阻止するため）、本発明者らの外部照射ｘＲＴ研究は、この線量が腫瘍増殖に最小限の減速効果を有するはずであると予測している。本発明者らは、２週間の時点で、異なる群のマウスを３０、６０または９０μＣｉで処置することを計画するであろう（腫瘍が約５０ｍｍ３である場合）。３週間後、腫瘍は約２００ｍｍ３になっているはずである；その時点で本発明者らは、ｘＲＴ（実施例２に概説した通り決定した線量）を投与し、続いて６日後（ＴＲＴの約２８日後）にＬ側腹部の腫瘍にＩＴ−ＩＣの注射を毎日５回投与して、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を誘導する。対照マウスには、遠隔腫瘍からの寛容性のためにｉｎ  ｓｉｔｕワクチンがないことを予測して、ＴＲＴを投与せず、ｘＲＴおよびＩＴ−ＩＣのみをＬ側腹部に投与する。別の群には、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果による両方の腫瘍の根絶を予測して、局所ｘＲＴを両方の腫瘍に、そしてＩＴ−ＩＣをＬ側腹部に投与する。別の群には、不完全なワクチン効果を予測して、ＴＲＴ＋ＩＴ−ＩＣを投与するが局所ｘＲＴは投与しない。
【０１３７】
追跡実験は、様々な線量のＴＲＴおよびＴＲＴと原発性腫瘍（Ｌ側腹部）への局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣとの間のタイミングの変動をさらに評価する。読み取り情報は、（Ａ）原発性腫瘍の根絶；（Ｂ）続発性腫瘍の根絶；および（Ｃ）ＭＡＨＡ応答のＥＬＩＳＡ分析による全身性免疫抑制、となる。本発明者らの目的は、（ＭＡＨＡ応答によって測定される）全身免疫抑制を最小限に抑えながら、大部分の対象において両方の腫瘍を根絶させることのできる局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣ投与計画を加えるために、特定の対象および疾患モデルによって最適なＴＲＴ線量およびタイミングを特定することである。
【０１３８】
３つ以上のＢ７８腫瘍を有するマウスにおけるＴＲＴ＋ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの最適化。
【０１３９】
実施例４のこの項は、関連する臨床状況、つまり、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位として使用され得る注射可能な腫瘍を有するが、各々が腫瘍誘発性免疫寛容を引き起こしていることのあり得る複数の遠隔転移を有する患者に最も類似している。これらの研究は、実施例４（上記）の最初の部分で最も効果的であることが見出された条件を再現することになる。重要な違いは、これらの対象の各々がＬおよびＲの側腹部とＬおよびＲの肩甲側部に４つの別々の腫瘍を有することである。ＴＲＴは、実施例４の最初の項で概説した研究で最も効果的であると認められた線量およびタイミングで投与され、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣがその後Ｌ側腹部病変にのみ投与される。ＴＲＴは、ｘＲＴを投与されていない３つの部位によって引き起こされる腫瘍誘発性免疫寛容を効果的に排除するので、ここでの目的は、最も効果的なｉｎ  ｓｉｔｕワクチンを可能にするＴＲＴ線量およびタイミングの問題を選択することである。有効性の尺度は、大部分の対象における４つすべての腫瘍の除去である。ＴＲＴ線量およびタイミングの修正を試験して、最も効果的な最適化された投与計画を作成する。そのような投与計画は、複数の遠隔転移を有する患者のために診療所において用途が見出される。その複数の遠隔転移は、すべて外部ビームによって照射することはできないが、「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」部位への局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣと併用すると、ＴＲＴによって照射することができる。
【０１４０】
実施例５：金属キレート化ＮＭ６００の合成
この実施例では、本発明者らは、１つの例となるリン脂質キレート、Ｇｄ−ＮＭ６００を合成するために使用される合成スキームを示す。様々な放射性同位体を組み込んでいる類似体を同様の方法で合成することもでき、問題の放射性同位体は、Ｇｄの代わりに用いられる。
【０１４１】
Ｇｄ−ＮＭ６００を合成するためのスキーム（開示される放射性金属同位体はＧｄの代わりに使用され得る）：
【化１０】
2021502368.tif 000020
【０１４２】
実施例６：インビボイメージングによる概念実証
この実施例では、本発明者らは、Ｇｄ−ＮＭ６００をＭＲＩ造影剤として使用し、成功した腫瘍のインビボＭＲＩイメージングを示す。データは、骨格リン脂質およびキレート剤が固形腫瘍によって取り込まれ保持されることを実証し、本明細書に開示される、様々な放射性金属を組み込んでいるそのようなキレートが同様の特性を示すことを実証する。
【０１４３】
Ｇｄ−ＮＭ４０４剤の腫瘍取り込みの概念実証インビボイメージングのために、側腹部Ａ５４９腫瘍（非小細胞肺癌）異種移植片を有する胸腺欠損ヌードマウスをスキャンした。Ｇｄ−ＮＭ６００剤（２．７ｍｇ）を尾静脈注射によって送達した。マウスを麻酔し、造影剤投与の前と、造影剤送達後１、４、２４、４８、および７２時間にスキャンを実施した。イメージングは、直角位相体積コイルを備えた４．７Ｔ  Ｖａｒｉａｎ前臨床ＭＲＩスキャナで行った。以下のパルスシーケンスパラメータ：反復時間（ＴＲ）＝２０６ミリ秒、エコー間隔＝９ミリ秒、エコートレイン長＝２、実効エコー時間（ＴＥ）＝９ミリ秒、平均数１０で、視野４０×４０ｍｍ２、１９２×１９２マトリックス、厚さ各１ｍｍの１０切片を用いる高速スピンエコースキャンを使用して、すべての撮像時点でＴ１強調画像を取得した。
【０１４４】
図７に見られるように、腫瘍のＭＲＩイメージングは、注射後２４時間までに大幅に増強された。
【０１４５】
これらの結果は、アルキルホスホコリン類似体の差別的な（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）取り込みおよび保持が、本明細書に開示される金属キレート化された類似体に関して維持されることを実証する。したがって、開示される金属キレートは、臨床治療および画像化用途に容易に適用させることができる。
【０１４６】
実施例７：原発性腫瘍に対する最適なｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果に必要なｘＲＴの線量、および付随する免疫寛容を防ぐために必要な遠隔腫瘍に対するｘＲＴの最小線量を決定する実験
実施例１〜４に対する追跡調査として、１または２の腫瘍を有するマウスに対する様々なｘＲＴ線量を評価する線量滴定実験が実施された。第１の目的は、１つの腫瘍を有するマウスにおいて、相乗作用、およびＩＴ−ＩＣ、ＩＬ２と結合した腫瘍反応性ｍＡｂを含む「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」を促進するために必要なｘＲＴの線量を試験することであった。初期実験により、１２ＧｙのＲＴ単独は確立されたＢ７８黒色腫腫瘍を根絶することもその増殖後退させることもなく（完全な退縮は０％）、一方、１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣは１つの腫瘍を有するマウスにおいて大部分のＢ７８腫瘍の完全な退縮をもたらす（６６％）という、本発明者らの以前の知見が確認された。一方、２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣは、ＩＴ−ＩＣ単独と比較して腫瘍の進行を遅らせる（３２日目の平均腫瘍サイズは、それぞれ、４７２ｍｍ３と１２１４ｍｍ３）が、どのマウスも無病にならなかった（完全な退縮０％）。
【０１４７】
本発明者らの「２腫瘍モデル」において、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣによる１つの「原発性」腫瘍の治療は、治療された原発性腫瘍または未治療の「続発性」腫瘍のいずれの治療にも効果がないことを本発明者らは以前に示している。実際に、この２腫瘍モデルにおいて、第２の腫瘍の存在が、ｘＲＴの後のＩＴ−ＩＣ注射の効力を除去することを本発明者らは観察した。本発明者らはこの現象を「付随する免疫寛容」（ＣＩＴ）と命名し、これが少なくとも一部分、遠隔（非照射）続発性腫瘍の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）から生じ、それが全身を循環し、ｘＲＴ処置／ＩＴ−ＩＣ注射された原発性腫瘍に再び集合することを実証した。原発性腫瘍に戻るこれらのＴｒｅｇは、望ましい「ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン」効果を妨害すると思われる。
【０１４８】
本発明者らは、これで、１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍と続発性腫瘍の両方に送達することによってＣＩＴが克服され得るという本発明者らの以前の知見を確認した。重要なことに、ＴｒｅｇはＲＴに対する感受性がかなり高いと考えて、ＣＩＴを克服し、原発性腫瘍（１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣで処置した原発性腫瘍）でのｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種に対する応答を救済するために、より低線量のＲＴを続発性腫瘍に送達することができるのではないかと本発明者らは仮定した。そこで本発明者らはこれを試験し、続発性腫瘍への２Ｇｙまたは５ＧｙのｘＲＴ線量が、ＣＩＴを鈍らせ、１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣによる原発性腫瘍処置に対する応答を救済する能力において１２Ｇｙに匹敵することを観察した。これらの重要な実験は２回繰り返され、（仮定したように）ＣＩＴを防ぐために遠隔腫瘍に投与されなければならないｘＲＴの線量は、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を生じる目的でＩＴ−ＩＣを注射した原発性腫瘍部位で必要な線量よりもはるかに低いことを示唆している。
【０１４９】
これは、本開示中の本発明者らの包括的な仮説を裏付け、複数の腫瘍を有する動物では、本発明者らは標的放射線治療薬（ＴＲＴ）ＮＭ６００を使用して疾患のすべての部位に比較的低線量のＲＴを送達することができるので、これを局所ｘＲＴおよび１つの腫瘍部位（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）のＩＴ−ＩＣ注射と併用すると、ＣＩＴを克服できることを示唆する。
【０１５０】
実施例８：上記で決定されたように、転移に対するｘＲＴの必要な投与量に近い１３１Ｉ−ＮＭ４０４投与量を決定し、次に、その１３１Ｉ−ＮＭ４０４線量がインビボ免疫機能に及ぼす効果を評価する実験
実施例１〜４の上記の予備データに基づいて、これらの概念をＴＲＴを用いるインビボ試験に移すための研究が行われてきた。線量測定研究は、１または２つのＢ７８腫瘍を有するマウス（本発明者らの最良のｉｎ  ｓｉｔｕワクチン手法およびＣＩＴのハードルを実証するために本発明者らが使用している腫瘍モデル）で実施した。これは、約２ＧｙのｘＲＴに近づけるために必要となる１３１Ｉ−ＮＭ４０４の量を推定するために行われた。
【０１５１】
次に、約２Ｇｙの同等の線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４が腫瘍内リンパ球系細胞（特にＴｒｅｇ）に対して望ましい効果を有するかどうかを決定するために、２つの別々の手法が追求されてきた。最初に、本発明者らは、Ｂ７８腫瘍に匹敵するＮＭ４０４取り込みを示す放射線感受性リンパ腫腫瘍を有するマウスにこの線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与した。これに続いて、本発明者らは、Ｂ７８腫瘍の実質的な縮小／減速も循環リンパ球系細胞の明白な枯渇も引き起こさない条件下で、強力なリンパ系腫瘍の縮小／線量依存性の抑制を記述した（末梢全血球数によって計測）。これらのデータは、リンパ球系細胞が典型的な固形腫瘍細胞よりも低線量のＲＴに対してはるかに敏感であるという事実と一致しており、腫瘍におけるＴＲＴの選択的取り込みが、全身性リンパ球減少症を伴わない腫瘍内リンパ球系細胞枯渇を可能にすることがあることを示唆する。これらの研究はまた、そのようなリンパ系腫瘍が、腫瘍内リンパ球系細胞へのＴＲＴの効果を同定しモニターするためのインビボの生物学的「線量計」として役立ち得ることを示唆する。
【０１５２】
第２の手法は、Ｂ７８腫瘍を有するマウスをこれらの同じ線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置することを伴った。次に、これらの動物を半減期（８日）の間隔で犠牲にし、放射性崩壊のための十分に遅らせた後に、免疫組織化学によってエフェクターＴ細胞およびＴｒｅｇの存在について腫瘍を染色した。興味深いことに、この初期実験で１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与された動物は、どの時点でも全身性リンパ球減少症を示さず（末梢の全血球数による）、ＴＲＴ投与に続く２半減期で腫瘍内ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの減少を示した。この２半減期の時点で、本発明者らは腫瘍内エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞の減少も観察した。しかし、重要なことに、その後の３および４半減期の時点で、本発明者らは、どちらも未治療のベースラインおよび第２の半減期レベルと比較して、腫瘍内ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増加を観察したが、腫瘍内Ｔｒｅｇレベルのさらなる低下を観察した。この知見もやはり、複数の腫瘍を有する動物においてｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を救済するために、ＴＲＴを使用してＴｒｅｇに媒介されるＣＩＴを克服することが実現可能であろうという本発明者らの仮説を裏付ける。
【０１５３】
最後に、腫瘍内の免疫細胞へのＴＲＴの免疫学的効果を特徴付けるために、本発明者らはＢ７８を有するマウスを１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置し、前処置およびその後の半減期（８日）の間隔で腫瘍組織を収集した。次に、これらの組織を、免疫シグネチャのパネルの遺伝子発現についてＲＴ−ＰＣＲによって分析した。結果は、ＴＲＴ処置が単独で、免疫感受性の腫瘍細胞マーカーの発現と免疫細胞によってのみ通常発現する遺伝子の顕著な変化を引き起こすことを示し、遺伝子は発現の減少とそれに続くリバウンドの過剰発現の明白な経時変化を示す。
【０１５４】
実施例９：実施例５および６から得たデータを使用して、２以上の腫瘍を有するマウスにおける１３１Ｉ−ＮＭ４０４＋局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ｍＡｂ／ＩＬ２の投与計画を開発し、すべての遠隔腫瘍のＴ細胞媒介性根絶を誘導する実験
この実施例は、少なくとも２つの部位に腫瘍を有する動物を治療することを説明する。本発明者らの戦略は、すべての腫瘍部位で抗腫瘍免疫活性を増強させるために、ＣＩＴを抑制するための全身性ＴＲＴと組み合わせた、ｘＲＴおよびｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位での局所ＩＴ−ＩＣの使用を含む。ＴＲＴおよびｘＲＴの線量およびタイミングの重大な問題は、抗腫瘍効率のために最適化される。
【０１５５】
実施例７および８でまとめたデータを用いて、２つの別個のＢ７８腫瘍を有するマウスで研究を行った。マウスに、推定される必要な全身への１３１Ｉ−ＮＭ４０４線量を投与し、それに続いてｘＲＴおよびｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位への局所免疫療法を投与した。適切な制御によって、この線量の１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、腫瘍を２つ有するマウスにおいて求められるように、ＣＩＴを弱めると思われた。その上、１つの腫瘍を有するマウスでは、このＴＲＴ線量は、局所ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を（仮定され、望まれるように）妨害するように見えなかった。ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン効果を抑制することなくＣＩＴを遮断するという望ましい効果を最大化するために、さらなる試験、および実験変数の一部の修正が進行中である。これらの実験に関するさらなる詳細は、下の実施例１０に開示される。
【０１５６】
実施例１０：２以上の腫瘍を有するマウスから得られるデータ
マウス黒色腫および膵腫瘍モデルにおける遠隔未処置腫瘍による、局所ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの組合せに対する原発性腫瘍応答の腫瘍特異的抑制。
【０１５７】
同系のＧＤ２＋原発性側腹部腫瘍＋／−対側腹部の続発性腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されるように原発性腫瘍だけに、「１」日目にｘＲＴによって、そして６〜１０日目に５０ｍｃｇの抗ＧＤ２  ＩＣ、ｈｕ１４．１８−ＩＬ２のＩＴ注射によって処置した。
【０１５８】
原発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスでは、未処置の続発性Ｂ７８腫瘍の存在は、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性腫瘍応答に拮抗した（図８Ａ）。本発明者らは、この作用を「付随する免疫寛容」、つまりｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する処置腫瘍の局所応答に対する、未処置遠隔腫瘍の拮抗作用として説明する。カプラン・マイヤー生存曲線を。これらのマウスと反復実験について得た（図８Ｂ）。ほぼすべてのマウスが原発性腫瘍の進行のために安楽死した。
【０１５９】
原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋膵腫瘍を有するマウスでは、反対側腹部の続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２−腫瘍の有無にかかわらず、未処置のＰａｎｃ０２続発性腫瘍の存在が、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋腫瘍の応答を抑制した（図８Ｃ）。原発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスでは、続発性Ｂ７８腫瘍がｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣに対する原発性腫瘍応答を抑制したが、続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋膵腫瘍はこの作用を発揮しなかった（図８Ｄ）。原発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２＋腫瘍を有するマウスでは、続発性Ｐａｎｃ０２−ＧＤ２−腫瘍がｘＲＴおよびＩＴ−ｈｕ１４．１８−ＩＬ２の併用に対する原発性腫瘍応答を抑制したが、Ｂ７８続発性腫瘍は抑制しなかった（図８Ｅ）。
【０１６０】
付随する免疫寛容は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特異的枯渇によって回避される。
【０１６１】
腫瘍を１または２個有するマウスにおいてｘＲＴ後６日目に調べた腫瘍の、Ｔｒｅｇマーカー、ＦｏｘＰ３についての免疫組織化学画像を得た（図９Ａ）。マウスはｘＲＴを受けなかったか、または原発性腫瘍に対してのみｘＲＴを受けた。ＤＥＲＥＧマウスは、Ｔｒｅｇ特異的ＦｏｘＰ３プロモーターの制御下でジフテリア毒素受容体を発現し、ジフテリア毒素のＩＰ注射と同時にＴｒｅｇの特異的枯渇を可能にする（図９Ｂおよび９Ｃ）。原発性および続発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するＤＥＲＥＧマウスを、原発性腫瘍へのｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣと、ジフテリア毒素またはＰＢＳのいずれかのＩＰ注射で処置した。付随する免疫寛容は、これらのマウスにおいてＴｒｅｇの枯渇の後に排除され、原発性（図９Ｂ）および続発性（図９Ｃ）腫瘍応答の改善をもたらす。
【０１６２】
付随する免疫寛容は、ｘＲＴを両方の腫瘍部位に送達することによって克服される。
【０１６３】
原発性および続発性Ｂ７８腫瘍を有するマウスでは、続発性腫瘍は、ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣによる原発性腫瘍処置に対する原発性腫瘍応答を抑制する。これは、１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍と続発性腫瘍の両方に、そしてＩＴ−ＩＣを原発性腫瘍に送達することによって克服され、その結果、反復実験から原発性腫瘍応答が改善され（図１０Ａ）、総動物生存率（ａｇｇｒｅｇａｔｅ  ａｎｉｍａｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）が向上した（図１０Ｂ）。
【０１６４】
低線量のｘＲＴは、単独ではｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発しないが、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位の１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣ処置とともに遠隔腫瘍部位に送達した場合に、付随する免疫寛容を実際に克服する。
【０１６５】
原発性Ｂ７８腫瘍のみを有するマウスでは、１２Ｇｙ＋ＩＴ−ＩＣは、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種を誘発し（すでに示した通り）、大部分のマウスにおける完全な腫瘍退縮（図１１Ａ）および記憶性免疫応答をもたらす（Ｍｏｒｒｉｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１６）。一方、ＩＴ−ＩＣ単独または低線量（２Ｇｙ）ｘＲＴ＋ＩＴ−ＩＣの後に完全な腫瘍退縮を示す動物はない（両方の群で０／６）ｐ＜０．０５。
【０１６６】
原発性および続発性Ｂ７８黒色腫腫瘍を有するマウスでは、続発性腫瘍に送達された低線量ｘＲＴ（２Ｇｙまたは５Ｇｙ）は、原発性腫瘍で付随する免疫寛容を克服するその能力では１２Ｇｙに匹敵する（図１１Ｂ）。これらの同じ動物において、低線量ｘＲＴを続発性腫瘍に送達することによって付随する免疫寛容を克服することが、ＩＴ−ＩＣ免疫療法に対する全身応答を救済することは明らかである（図１１Ｃ）。これに関連して、ＲＴがすべての腫瘍部位に送達されると、原発性腫瘍のＩＴ−ＩＣ注射は、全身性抗腫瘍効果を引き起こし、２Ｇｙまたは５Ｇｙに対する続発性腫瘍応答を、原発性腫瘍のＩＴ−ＩＣ注射を行わない場合の１２ＧｙのＲＴに対する応答よりも大きくする。
【０１６７】
低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、全身性白血球減少症を伴わずにまたは腫瘍浸潤ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を枯渇させずに、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇを効果的に枯渇させる。
【０１６８】
大部分の臨床シナリオでは、免疫抑制をもたらすことになる顕著な骨髄枯渇および白血球減少を引き起こさずに、すべての腫瘍部位に外照射を送達することは、たとえ低線量であっても実現不可能である。ここで、本発明者らは、ＴＲＴを全身投与して、全身の免疫細胞の枯渇および白血球減少症を引き起こすことなく、腫瘍浸潤抑制性免疫細胞（Ｔｒｅｇ）を特異的に枯渇させることができるかどうかを試験した。このＢ７８黒色腫腫瘍モデルにおける線量測定研究は、陽電子放出１２４Ｉ−ＮＭ４０４を用いて実施して、ＮＭ４０４の腫瘍選択的取り込みを確認した（図１２Ａ）。Ｂ７８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、６０μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置した。この放射能は、約２ＧｙのＴＲＴをＢ７８腫瘍に送達するのに必要な１３１Ｉ−ＮＭ４０４の量とほぼ同じである。末梢血および腫瘍試料を未処置の対照マウス（Ｃ）で収集し、その後８日間隔（Ｔ１＝ｄ８、Ｔ２＝ｄ１６、Ｔ３＝ｄ２４、Ｔ４＝ｄ３２）で収集した。この線量のＴＲＴは有意な全身性白血球減少症をもたらさず（図１２Ｂ）、腫瘍浸潤ＣＤ８エフェクターＴ細胞のレベルに有意な影響を及ぼさなかった（図１２Ｃ）。しかし、腫瘍浸潤ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇは、この線量のＴＲＴによって有意に枯渇した（図１２Ｄ）。
【０１６９】
低線量ＴＲＴと１３１Ｉ−ＮＭ４０４は、付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済する。
【０１７０】
低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４  ＴＲＴが、マウスを白血球減少症にすることなく腫瘍浸潤Ｔｒｅｇを枯渇させる能力を考慮に入れて、本発明者らは低線量１３１Ｉ−ＮＭ４０４が付随する免疫寛容を効果的に克服するかどうかについて試験した。２つのＢ７８腫瘍を有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示したように１日目に６０μＣｉの１３１Ｉ−ＮＭ４０４で処置した（ＮＭ４０４）。１半減期（８日）後、動物に１２ＧｙのｘＲＴを原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与したか、またはｘＲＴを投与しなかった。１３１Ｉ−ＮＭ４０４を投与しなかった対照マウスに、示されるような（０、２、または１２Ｇｙ）処置を続発性腫瘍に対して行った。１３〜１７日目に、マウスに毎日ＩＣのＩＴ注射を示されるように原発性腫瘍（ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン部位）に投与した。原発性腫瘍（図１３Ａ）および続発性腫瘍（図１３Ｂ）応答は、低線量ＴＲＴの投与が付随する免疫寛容を効果的に克服し、ｉｎ  ｓｉｔｕワクチン接種の全身性抗腫瘍効果を救済することを実証する。
【０１７１】
実施例１〜４および７〜１０で引用された参考文献：
［１］  Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＲＲ，Ｓｕｒｆｕｓ  Ｊ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＢＭ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｃｈｅｕｎｇ  Ｎ−−Ｋ  ａｎｄ  Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：５２３４−９．１９９０．
［２］  Ｎｅａｌ  ＺＣ，Ｙａｎｇ  ＪＣ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｂｕｈｔｏｉａｒｏｖ  Ｉ，Ｌｕｍ  ＨＥ，Ｉｍｂｏｄｅｎ  Ｍ，Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｌｏｄｅ  ＨＮ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕ１４．１８‐ＩＬ２  ＩＣ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ＮＸＳ２  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｗｈｅｎ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ＩＬ２  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４  Ｊｕｌ  １５；１０（１４）：４８３９‐４７．
［３］  Ｙｕ  ＡＬ，Ｇｉｌｍａｎ  ＡＬ，Ｏｚｋａｙｎａｋ  ＭＦ，Ｌｏｎｄｏｎ  ＷＢ，Ｋｒｅｉｓｓｍａｎ  Ｓ，Ｃｈｅｎ  Ｈ，Ｓｍｉｔｈ  Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｂ，Ｖｉｌｌａｂｌａｎｃａ  Ｊ，Ｍａｔｔｈａｙ  ＫＫ，Ｓｈｉｍａｄａ  Ｈ，Ｇｒｕｐｐ  ＳＡ，Ｓｅｅｇｅｒ  Ｒ，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ＣＰ，Ｂｕｘｔｏｎ  Ａ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｃｏｈｎ  ＳＬ，Ｍａｒｉｓ  ＪＭ，Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ａｎｔｉ‐ＧＤ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ＧＭ‐ＣＳＦ，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ‐２，ａｎｄ  ｉｓｏｔｒｅｔｉｎｏｉｎ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．２０１０  Ｓｅｐ  ３０；３６３（１４）：１３２４‐３４．
［４］  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＥＥ，Ｙａｍａｎｅ  ＢＨ，Ｌｕｍ  ＨＤ，Ｂｕｈｔｏｉａｒｏｖ  ＩＮ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｍａｈｖｉ  ＤＭ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｓｏｎｄｅｌ，ＰＭ．Ｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  Ａｂｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ＫＳ‐ＩＬ２  ＩＣ（ＥＭＤ  ２７３０６６）Ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｃｏｌｏｎ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００９  Ａｕｇ  １；１５（１５）：４８７５−８４．
［５］  Ｙａｎｇ  ＲＫ，Ｋａｌｏｇｒｉｏｐｏｕｌｏｓ  ＮＡ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｒａｎｈｅｉｍ  ＥＡ，Ｓｅｏ  Ｓ，Ｋｉｍ  ＫＭ，Ａｌｄｅｒｓｏｎ  ＫＬ，Ｇａｎ  Ｊ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  ｈｕ１４．１８‐ＩＬ２（ＩＣ）Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｌｏｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｔｈａｔ  Ｉｎｖｏｌｖｅ  Ｂｏｔｈ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ‐  ａｎｄ  ＮＫ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ＩＣ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２  Ｓｅｐ  １；１８９（５）：２６５６‐６４．
［６］  Ｍｏｒｒｉｓ  ＺＳ，Ｅｍｉｌｙ  Ｉ．Ｇｕｙ  ＥＩ，Ｆｒａｎｃｉｓ  ＤＭ，Ｇｒｅｓｓｅｔｔ  ＭＭ，Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ  ＬＬ，Ｙａｎｇ  ＲＫ，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＥＡ，Ｈｕａｎｇ  Ｓ，Ｎａｖｉｄ  Ｆ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｋｏｒｍａｎ  Ａ，Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｈａｒａｒｉ  ＰＭ，Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  Ｌｏｃａｌ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ‐ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｒ  ＩＣ  ｔｏ  ｅｌｉｃｉｔ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｔｕｍｏｒ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｅ−ｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ，２０１６．
［７］  Ｍｏｒｒｉｓ  ＺＳ，Ｇ．Ｅ．，Ｆｒａｎｃｉｓ  ＤＭ，Ｇｒｅｓｓｅｔｔ  ＭＭ，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＥＡ，Ｈｕａｎ  Ｓ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｋｏｒｍａｎ  ＡＪ，Ｈａｎｋ  ＪＡ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｈａｒａｒｉ  ＰＭ，ａｎｄ  Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．，ＩＣ  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ｌｏｃａｌ  ａｎｄ  ａｂｓｃｏｐａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＣＴＬＡ‐４  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｏｄｅｌ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ａｂｓｔｒａｃｔ  ａｃｃｅｐｔｅｄ  Ｏｃｔ．２０１５（ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ａｓ  ｔｈｅ  ｍｅｅｔｉｎｇ’ｓ  ｗｉｎｎｉｎｇ  ａｂｓｔｒａｃｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂａｓｉｃ−−‐ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｃａｔｅｇｏｒｙ）．
［８］  Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｃｌａｒｋ  ＰＡ，Ｋａｎｄｅｌａ  ＩＫ，Ｖａｃｃａｒｏ  ＡＭ，Ｃｌａｒｋｅ  Ｗ，Ｌｏｎｇｉｎｏ  ＭＡ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｆａｒｈｏｕｄ  Ｍ，Ｓｗａｎｓｏｎ  ＫＩ，Ｆｌｏｂｅｒｇ  ＪＭ，Ｇｒｕｄｚｉｎｓｋｉ  Ｊ，Ｔｉｔｚ  Ｂ，Ｔｒａｙｎｏｒ  ＡＭ，Ｃｈｅｎ  ＨＥ，Ｈａｌｌ  ＬＴ，Ｐａｚｏｌｅｓ  ＣＪ，Ｐｉｃｋｈａｒｄｔ  ＰＪ，Ｋｕｏ  ＪＳ．Ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｓ  ｆｏｒ  Ｂｒｏａｄ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６，２４０ｒａ７５，１‐１０．２０１４．
［９］  Ｍｏｒｒｉｓ  ＺＳ，ＪＰ  Ｗｅｉｃｈｅｒｔ，Ｊ  Ｓａｋｅｒａ，ＥＡ  Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ａ  Ｂｅｓｅｍｅｒ，Ｂ  Ｂｅｄｎａｒｚ，Ｒ  Ｋｉｍｐｌｅ，ＰＭ  Ｈａｒａｒｉ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  ＮＭ４０４  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｂｅａｍ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ＤＯＩ：１０．１０１６．２０１５．
［１０］  Ｌｏｄｅ  ＨＮ，Ｘｉａｎｇ  Ｒ，Ｄｒｅｉｅｒ  Ｔ，Ｖａｒｋｉ  ＮＭ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ．Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｔｏ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ‐２  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｌｏｏｄ  ９１（５），１７０６‐１７１５．１９９８．
［１１］  Ｓｎｙｄｅｒ  Ｆ，Ｗｏｏｄ  Ｒ．Ａｌｋｙｌ  ａｎｄ  ａｌｋ‐１‐ｅｎｙｌ  ｅｔｈｅｒｓ  ｏｆ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２９，２５１‐２５７．１９６９．
［１２］  Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｒａｍｐｙ  ＭＡ，Ｌｏｎｇｉｎｏ  ＭＡ，Ｓｋｉｎｎｅｒ  ＲＷ，Ｇｒｏｓｓ  ＭＤ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｃｏｕｎｓｅｌｌ  ＲＥ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ‐ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ａｖｉｄｉｔｙ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｅｔｈｅｒ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４９，２１５５‐  ２１６５．２００６．
［１３］  Ｓｗａｎｓｏｎ  ＫＩ，Ｃｌａｒｋ  ＰＡ，Ｐｉｎｃｈｕｋ  ＡＮ，Ｌｏｎｇｉｎｏ  ＭＡ，Ｆａｒｈｏｕｄ  Ｍ，Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  ＪＰ，Ｋｕｏ  ＪＳ．Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃａｎｃｅｒ‐Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｓ  ＣＬＲ１５０１  ａｎｄ  ＣＬＲ１５０２  ｆｏｒ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ‐ｇｕｉｄｅｄ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ．７６（２）：１１５‐１２３．２０１５．
［１４］  Ｆｉｌａｔｅｎｋｏｖ  Ａ，Ｂａｋｅｒ  Ｊ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ＡＭ，Ｋｅｎｋｅｌ  Ｊ，Ａｈｎ  ＧＯ，Ｄｕｔｔ  Ｓ，Ｚｈａｎｇ  Ｎ，Ｋｏｈｒｔ  Ｈ，Ｊｅｎｓｅｎ  Ｋ，Ｄｅｊｂａｋｈｓｈ‐Ｊｏｎｅｓ  Ｓ，Ｓｈｉｚｕｒｕ  ＪＡ，Ｎｅｇｒｉｎ  ＲＮ，Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ＥＧ，Ｓｔｒｏｂｅｒ  Ｓ．Ａｂｌａｔｉｖｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｃａｎ  Ｃｈａｎｇｅ  ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｔｏ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ｄｕｒａｂｌｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１：３７２７‐３９．２０１５．
［１５］  Ｊｉｎｇ  Ｗ，Ｇｅｒｓｈａｎ  ＪＡ，Ｗｅｂｅｒ  Ｊ，Ｔｌｏｍａｋ  Ｄ，ＭｃＯｌａｓｈ  Ｌ，Ｓａｂａｔｏｓ‐Ｐｅｙｔｏｎ  Ｃ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＢＤ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ａｎｄ  ｌｏｗ  ｄｏｓｅ  ｗｈｏｌｅ  ｂｏｄｙ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｓ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ．３：２．
２０１５．
［１６］  Ｂｅｄｎａｒｚ  Ｂ．，Ｂｅｓｅｍｅｒ  Ａ．，Ｙａｎｇ  Ｙ．Ａ  Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ‐Ｂａｓｅｄ  Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  Ｐｒｅ‐Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ：Ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  Ｃｏｎｃｅｐｔ．Ｍｅｄ．Ｐｈｙｓ．３９，３８９９．２０１２．
［１７］  Ｂｅｓｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｏｗａｒｄｓ  Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｄｉａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｍｅｄ．Ｐｈｙｓ．４０，３８２．２０１３．
［１８］  Ｂｅｓｅｍｅｒ  Ａ．ａｎｄ  Ｂｅｄｎａｒｚ  Ｂ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ‐ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ．Ｍｅｄ．Ｐｈｙｓ．４１，３０３．２０１４．
［１９］  Ｉｍｂｏｄｅｎ  Ｍ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＫＲ，Ｒａｋｈｍｉｌｅｖｉｃｈ  ＡＬ，Ｎｅａｌ  ＺＣ，Ｘｉａｎｇ  Ｒ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ＲＡ，Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ａｎｄ  Ｓｏｎｄｅｌ  ＰＭ．Ｔｈｅ  ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃａｎ  ｃｈａｎｇｅ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：１５００‐７．２００１．
【０１７２】
実施例１１：ＰＥＴイメージングによって実証される、８つの異なる固形腫瘍型を異種移植したマウスにおける複数のＮＭ６００金属キレートのインビボ取り込み
この実施例では、本発明者らは、このような腫瘍のＰＥＴ／ＣＴイメージングで示されるように、インビボの様々な固形腫瘍での、４つの異なる金属でキレート化されたＮＭ６００の異なる取り込みを示す。これらのデータは、本明細書に開示されるように、腫瘍誘発性免疫寛容を排除するためのＴＲＴ剤として金属キレート化されたアルキルホスホコリン類似体を使用するためのさらなる裏付けを提供する。ＮＭ６００の構造は、６４Ｃｕでキレート化された例示的な種（６４Ｃｕ−ＮＭ６００）として図１４に示される；しかし、どんな金属もＮＭ６００に容易にキレート化することができる。
【０１７３】
具体的には、８つの異なる固形腫瘍細胞株（Ｂ７８（黒色腫）、Ｕ８７ＭＧ（神経膠芽腫）、４Ｔ１（乳癌）、ＨＣＴ−１１６（結腸直腸癌）、Ａ５４９（肺癌）、ＰＣ−３（前立腺癌）、ＨＴ−２９（結腸直腸腺癌）、またはＭｉａＰａｃａ（膵癌））の１つをマウスにそれぞれ異種移植した。異種移植したマウスのそれぞれに対して、腫瘍細胞を含有する細胞懸濁液を、マウスの片方または両方の側腹部の皮下組織に接種した。異種移植腫瘍が最大サイズに達したら、それぞれのマウスに、１５０〜３００μＣｉの間の、６４Ｃｕ、８９Ｚｒ、８６Ｙ、または５２Ｍｎで放射標識されたＮＭ６００を外側尾静脈注射によって注射した。取り込み期間の後、ＰＥＴイメージングをＩｎｖｅｏｎ  ｍｉｃｒｏ  ＰＥＴ／ＣＴで実施した。それぞれのスキャンの直前に、マウスをイソフルラン（２％）で麻酔し、腹臥位でスキャナに置いた。経時的な４０００〜８０００万の一致イベントの静的ＰＥＴスキャンを放射性トレーサの注射後３、１２、２４、および４８時間に取得し、ＯＳＥＭ３Ｄ／ＭＡＰ再構築アルゴリズムを用いて画像を再構築した。
【０１７４】
図１５は、８６Ｙ−ＮＭ６００を注射した１腫瘍Ｂ７８マウスの注射後４８時間に得られた画像を示す；図１６は、８６Ｙ−ＮＭ６００を注射した２腫瘍Ｂ７８マウスの注射後４８時間に得られた画像を示す；図１７は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＵ８７ＭＧマウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図１８は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射した４Ｔ１マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図１９は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＨＣＴ−１１６マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２０は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＡ５４９マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２１は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＰＣ−３マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２２は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＨＴ−２９マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２３は、６４Ｃｕ−ＮＭ６００を注射したＭｉａＰａｃａマウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２４は、８６Ｙ−ＮＭ６００を注射した４Ｔ１マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す；図２５は、８９Ｚｒ−ＮＭ６００を注射した４Ｔ１マウスの注射後３、２４および４８時間に得られた画像を示す。
【０１７５】
５２Ｍｎ−ＮＭ６００を注射したＨＴ−２９およびＰＣ３マウスについて、ＰＥＴ画像は注射後４時間、および１日目（ＨＴ−２９に関して図２６；ＰＣ３に関して図２７）、ならびに注射後２、３、５および７日目に取得した（ＨＴ−２９に関して図２８；ＰＣ−３に関して図２９）。
【０１７６】
図１５〜２９に見られるように、スキャンされたマウスは、異種移植した腫瘍に集中した累積吸収線量分布を示す、ＰＥＴ／ＣＴ三次元ボリュームレンダリングを生成した。これらの結果により、金属キレート化されたＮＭ６００の異種移植した固形腫瘍組織への差別的（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）取り込みが確認され、開示される治療方法において放射性金属同位体を組み込んでいるＮＭ６００類似体の使用可能性が実証される。
【０１７７】
画像の定量的関心領域分析を、目的の腫瘍およびその他の器官の輪郭を手で描くことによって実施した。定量的データは、組織１ｇ当たりの注入量の百分率（％ＩＤ／ｇ）として表した。例示的なデータは、４Ｔ１腫瘍組織が、時間とともにその取り込みを増加させ、試験した３つすべてのＮＭ６００キレートを効果的に保持したが（８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００および８９Ｚｒ−ＮＭ６００、図３０参照）、健常な心臓（図３１）、肝臓（図３２）および全身組織（図３３）はすべて時間とともに取り込み／保持の大幅な低下を示したことを示す。
【０１７８】
エクスビボでの体内分布分析を、最後の経時的ＰＥＴスキャンの後に実施した。マウスを麻酔し、組織を回収し、湿重量を測定し、自動ガンマカウンターで計数した（Ｗｉｚａｒｄ  ２４８０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）。例示的体内分布データは、腫瘍組織（４Ｔ１）における有意な取り込みおよび保持を異なるＮＭ−６００キレートについて示す（８６Ｙ−ＮＭ６００、６４Ｃｕ−ＮＭ６００、８９Ｚｒ−ＮＭ６００および１７７Ｌｕ−ＮＭ６００、図３４参照）。
【０１７９】
総合すると、これらの結果は、本開示の金属キレートが、本開示の治療方法のＴＲＴステップに容易に使用され得ることを実証する。
【０１８０】
実施例１２：異種移植マウスの複数の固形腫瘍型に対する２つの異なるＮＭ６００金属キレートによる抗腫瘍活性および腫瘍オートラジオグラフィーの実証
この実施例では、３つの異なる固形腫瘍モデルを使用し、アルキルホスホコリン金属キレート類似体が従来のＴＲＴを促進するために効果的に使用され得ることを本発明者らは示す。これらの結果は、ここに開示される治療方法のＴＲＴステップで金属キレートを使用する可能性をさらに実証する。
【０１８１】
Ｂ７８、ＭｉａＰａｃａおよび４Ｔ１の皮下側腹部異種移植片を、前述のようにマウスに導入した。その後に、マウスに治療線量（２５０〜５００μＣｉ）の９０Ｙ−ＮＭ６００、１７７Ｌｕ−ＮＭ６００、または対照溶液を外側尾静脈注射によって投与した。
【０１８２】
薬剤の体内分布の平面２Ｄ蛍光体画像を、サイクロンホスホイメージャー（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて撮像した。マウスを麻酔し、蛍光体プレートに仰臥位で直接接触させて置き、そこでマウスを１５〜３０分の間そのままにし；その後、プレートをホスホイメージャーで読み取った。放射線量の注射後４〜９６時間の間に様々な画像を記録した。得られるオートラジオグラフィー画像は、試験した固形腫瘍組織型のすべてにおいてキレートの迅速かつ選択的な取り込みおよび長期保持を実証する（図４０、４１、４２、４３、４４および４５参照）。
【０１８３】
腫瘍応答を、処置マウスと対照マウスの腫瘍増殖を比較することにより評価した。腫瘍体積は、ノギスで腫瘍の長さおよび幅を測定し、楕円体の体積を求める式を用いて体積を計算することによって決定した。マウス体重も記録した。人道的エンドポイントを：腫瘍体積＞２５００ｍ３または１３ｇ未満の有意な体重減少、と定義した。
【０１８４】
図４６、４７、４８、４９、５０および５１に見られるように、これらの結果は、２つの試験したＮＭ６００キレートが、対照と比較した場合に統計学的に有意なインビボ治療効果を有しており、その結果、４Ｔ１異種移植片において２倍の線量の１７７Ｌｕ−ＮＭ６００について平均腫瘍体積が減少し（図５０参照）、単一線量の１７７Ｌｕ−ＮＭ６００を投与したＭｉａＰａｃａ、４Ｔ１またはＢ７８異種移植片（図４７、４８、および４９参照）あるいは単一線量の９０Ｙ−ＮＭ６００を投与したＢ７８または４Ｔ１異種移植片（図４６および５１参照）の増殖をゼロ近くまで低下させるかまたはその増殖速度を遅くすることを実証する。
【０１８５】
これらの結果は、開示されるアルキルホスホコリン金属キレートを使用してＴＲＴを送達し、様々な型の固形腫瘍を効率的に治療する有効性をさらに実証する。
【０１８６】
実施例１３：広範囲の固形腫瘍型におけるＴＲＴ応答を予測するための放射線線量測定と放射線感受性指数の結合
この実施例では、本発明者らは様々な固形腫瘍型において開示される方法のＴＲＴステップに適切なキレート投与量を決定するための要因を考察する。
【０１８７】
腫瘍吸収線量の推定
投与される１７７Ｌｕ／９０Ｙ−ＮＭ６００の量が免疫刺激性であるかまたは細胞毒性であるかは、腫瘍吸収線量によって決まる。６４Ｃｕ／８６Ｙ−ＮＭ６００を治療用金属１７７Ｌｕ／９０Ｙ−ＮＭ６００のイメージングの代用としてそれぞれ使用することができる、ＮＭ６００の診断兼治療（ｄｉａｐｅｕｔｉｃ）特性を活用して腫瘍線量測定を推定した。最後に、６４Ｃｕ／８６Ｙ−ＮＭ６００のＰＥＴ／ＣＴを用いてインビボでの体内分布を定量的に測定し、線量を制限する器官および１７７Ｌｕ／９０Ｙ−ＮＭ６００  ＴＲＴの潜在的腫瘍有効性を特定するのに役立ち得る放射線線量測定を推定した。
【０１８８】
一般的な概念は次の通りである：（１）腫瘍内の６４Ｃｕ／８６Ｙ−ＮＭ６００の濃度を、長期ＰＥＴ／ＣＴイメージングを用いて経時的に定量化する、（２）６４Ｃｕ／８６Ｙ−ＮＭ６００の濃度を減衰補正して６４Ｃｕ／８６Ｙ−ＮＭ６００と１７７Ｌｕ／９０Ｙ−ＮＭ６００の間の減衰率の違いを説明する、（３）腫瘍内の１７７Ｌｕ／９０Ｙ−ＮＭ６００の濃度を時間積分して累積放射能か、または減衰の総数を算出する、（４）放射性核種崩壊の堆積を腫瘍内でモデル化し、定量化する。
【０１８９】
ステップ（１）から（３）は、医用画像処理ソフトウェアパッケージで実施することができるが、ステップ（４）には高性能な放射線線量測定ソフトウェアが必要である。ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ（Ｓｔａｂｉｎ，Ｓｐａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｅ  ２００５）は、米国核医学会の医療内部被曝線量（ＭＩＲＤ）委員会によって開発された形式を使用する、５１０（ｋ）が承認された線量測定推定ソフトウェアである（Ｂｏｌｃｈら，２００９）。ＭＩＲＤの手法は、器官自体の内部からまたは別のソース器官から放出される放射線に起因する、組織または器官が受け取った平均吸収線量を推定する。ＭＩＲＤの式の最も簡単な形である、
【数１】
2021502368.tif 000021
は、ソース領域内の放射性核種放射能ｓから標的領域ｔへの吸収線量、Ｄ［ｍＧｙ］を与える。ｓの放射性核種放射能は、累積放射能
【数２】
2021502368.tif 000022
として表され、これはＭＢｑ−ｓの単位で表される放射性核種崩壊の総数である。Ｓ因子、Ｓ（ｔ←ｓ）［ｍＧｙ／ＭＢｑ−ｓ］は、標的領域ｔの質量ｍｔによって正規化された、標的領域ｔ内に堆積する、ソース領域ｓ内の１つの放射性核種の崩壊によって放出されるエネルギーの割合である。Ｓ因子は、一組の標準的なファントムおよび器官においてモンテカルロを用いて計算された、表形式の値である。一般に、本発明者らは注射された放射能の単位当たりの線量、
【数３】
2021502368.tif 000023
［ｍＧｙ／ＭＢｑ］に関心がある。この式は、滞留時間、τｈ、［ＭＢｑ−ｓ／ＭＢｑｉｎｊ］に関して、
【数４】
2021502368.tif 000024
と書かれ、上式は、累積放射能および注射放射能、Ａｉｎｊ［ＭＢｑ］の比であり、
【数５】
2021502368.tif 000025
として表される。
【０１９０】
腫瘍線量測定を計算する場合、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭは、ステップ（１）の一部として生成された関心の腫瘍領域（ＲＯＩ）からその体積が推定された、単離された単位密度球として腫瘍をモデル化する。腫瘍内のＮＭ６００の濃度（％ＩＤ／ｇ）を各々の時点で求め、減衰補正した。次に、台形の区分積分を用いてすべての時間にわたって濃度を積分することによって累積放射能を計算した。
【０１９１】
多くの細胞株についての放射線線量測定の結果を表１に示す。この情報を用いて、腫瘍の根絶かまたは免疫系の刺激のいずれかを目的とする放射線治療研究のための吸収線量を推定することができる。
【表１】
2021502368.tif 000026
【０１９２】
線量応答を予測するための放射線感受性指数
【０１９３】
固有の放射線感受性は、放射線治療応答の根底にある重要な要因であり、それを癌型について事前に知っていることは、ＴＲＴからの放射線にそれがどのように応答するかを予測することの助けになり得る。しかし、腫瘍でのその日常的評価の方法はないので、放射線感受性は、クローン原性検定によって２Ｇｙ（ＳＦ２）で照射した後の生存率（０〜１の間）として測定される。癌細胞表現型の相対的な放射線感受性は、放射線感受性が非常に低いもの（膵臓、結腸直腸、神経膠腫および乳房）から放射線感受性が高いもの（リンパ腫）に及ぶ。癌は、その放射線感受性指数によって分類するかまたはランク付けすることができる（表２）。
【０１９４】
本発明者らが、リンパ腫のような放射線感受性の高い腫瘍、および神経膠腫、乳房、膵臓または結腸直腸のような放射線抵抗性の高い腫瘍において、ＡＰＣ金属キレートを用いて良好な腫瘍取り込みおよび増殖抑制を示すことができる場合、これらの薬剤がインビボで腫瘍を標的にすることができるならば、これらの薬剤がリンパ腫と神経膠腫の間のＳＦ２値（０．３〜０．８２）を有するどんな腫瘍に対しても有効であることを意味することができる。その場合には、神経膠腫腫瘍細胞を根絶するために必要とされる放射線量は、より放射線感受性の高いリンパ腫細胞を治療するために必要とされる放射線量よりも高くなるとも予想される。
【０１９５】
本発明者らは現在、表２に列挙されるすべての腫瘍細胞株での腫瘍選択性および治療応答（腫瘍増殖抑制）データを確認するためのインビボイメージングを有している。場合によっては、十分な癌細胞の死滅を誘発するためにＡＰＣキレートを複数回投与する必要があり得る。定量的イメージングを放射線線量測定計算と結び付けて使用することにより、本発明者らは、本明細書に開示されるように、癌細胞を死滅させる（高線量）かまたは免疫系を刺激する（低線量）ために必要な腫瘍吸収線量を推定することができる。
【０１９６】
多様な癌細胞株（表１）の線量測定推定値と、それらのそれぞれの放射線感受性指数（表２）を組み合わせることにより、ＮＭ６００の線量応答ランドスケープの確立が裏付けられる。一連の細胞株内のＮＭ６００の腫瘍標的化特性および有効性を知ることによって、同様の放射線感受性指数をもつ細胞株の吸収された腫瘍線量および潜在的有効性を推定することが可能である。さらに、治療線量は、腫瘍根絶または免疫刺激という望ましい結果（本明細書に開示される通り）に応じて、表１に従って直線的に増減され得る。
【表２】
2021502368.tif 000027
１Ｔａｇｈｉａｎ，Ａｌｐｈｏｎｓｅら，「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ．」Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ＊Ｂｉｏｌｏｇｙ＊Ｐｈｙｓｉｃｓ  ３２．１（１９９５）：９９−１０４。
２Ｒａｍｓａｙ，Ｊ．，Ｒ．Ｗａｒｄ，およびＮ．Ｍ．Ｂｌｅｅｈｅｎ．「Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａｓ．」Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ＊Ｂｉｏｌｏｇｙ＊Ｐｈｙｓｉｃｓ  ２４．４（１９９２）：６７５−６８０。
３Ｆｅｒｔｉｌ，Ｂ．，およびＥ．Ｐ．Ｍａｌａｉｓｅ．「Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒａｄｉｏｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １０１  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｃｕｒｖｅｓ．」Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ＊  Ｂｉｏｌｏｇｙ＊  Ｐｈｙｓｉｃｓ  １１．９（１９８５）：１６９９−１７０７．
４Ｗｏｌｌｉｎ，Ｍｉｃｈａｅｌら，「Ｒａｄｉｏ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．」Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １５．３（１９８９）：２８５−２９３．
５Ｋｏｄｙｍ、Ｅｌｉｓａｂｅｔｈら，「Ｔｈｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＣＤＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＳＮＳ−０３２，ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ａｎｄ  ｈｙｐｏｘｉｃ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．」Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ６６．１（２００９）：３７−４７．
６Ｕｎｋｅｌ，Ｓｔｅｆｆｅｎ，Ｃｌａｕｓ  Ｂｅｌｋａ，およびＫｉｒｓｔｅｎ  Ｌａｕｂｅｒ．「Ｏｎ  ｔｈｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｄａｔａ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｌｉｎｅａｒ−ｑｕａｄｒａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌ．」Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １１．１（２０１６）：１１．
７ＥＰ  Ｍａｌａｉｓｅ，Ｐａｔｒｉｃｋ  Ｊ．Ｄｅｓｃｈａｖａｎｎｅ，ａｎｄ  Ｂｅｒｎａｒｄ  Ｆｅｒｔｉｌ．「Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．」Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ  １５（２０１６）：３７−７０．
８Ｓｉｌｅｓ，Ｅ．ら，「Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐ５３  ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｕｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．」Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ７３．５（１９９６）：５８１−５８８．
【０１９７】
実施例１３で引用された参考文献：
Ｂｏｌｃｈ，Ｗ．Ｅ．，Ｋ．Ｆ．Ｅｃｋｅｒｍａｎ，Ｇ．Ｓｇｏｕｒｏｓ，ａｎｄ  Ｓ．Ｒ．Ｔｈｏｍａｓ．２００９．“ＭＩＲＤ  Ｐａｍｐｈｌｅｔ  Ｎｏ．２１：Ａ  Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  Ｓｃｈｅｍａ  ｆｏｒ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ−−Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ．”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５０（３）：４７７−８４．ｄｏｉ：１０．２９６７／ｊｎｕｍｅｄ．１０８．０５６０３６．
【０１９８】
Ｓｔａｂｉｎ，Ｍ  Ｇ，Ｒ  Ｂ  Ｓｐａｒｋｓ，ａｎｄ  Ｅ  Ｃｒｏｗｅ．２００５．“ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ：Ｔｈｅ  Ｓｅｃｏｎｄ−Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｄｏｓｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．”  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ４６（６）：１０２３−２７．
【０１９９】
実施例１４：放射性ヨウ素化化合物、例えば実施例１〜４および７〜１０に例示されるものの代わりにアルキルホスホコリン金属キレートを使用する場合の利点および相違
この実施例では、本発明者らは放射性ヨウ素化化合物（実施例１〜４および７〜１０に例示される化合物）の代わりにＡＰＣ金属キレートを使用することの利点を考察する。本発明者らはまた、開示される方法のＴＲＴステップで使用される予定の金属キレートの投与量を最適化する際に当業者が考察するべき要因も考察する。
【０２００】
キレートは、画像化および治療のための幅広い種類の安定なまたは放射性の金属イオンの使用を可能にする。それらは幅広い種類の任意のアルファ、ベータ、オージェ、ガンマおよび陽電子放射体と結合体化され得るが、ヨウ素は１つの陽電子（Ｉ−１２４）、１つのベータ（Ｉ−１３１）、１つのガンマ（Ｉ−１２３）および１つのオージェ（Ｉ−１２５）同位体に制限される。
【０２０１】
金属同位体は、Ｉ−１３１およびＩ−１２４よりも診断兼治療的に（ｄｉａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ）有効である。
【０２０２】
Ｌｕ−１７７は高エネルギーのガンマが少ないため、ＳＰＥＣＴイメージングおよび線量測定に好ましい。しかし、そのベータエネルギーはＩ−１３１よりもわずかに小さいため、小さい腫瘍の治療には理想的である。
【０２０３】
Ｉ−１３１およびＬｕ−１７７は、治療効果の「馬力」において同等であるが、Ｌｕ−１７７のガンマ放出からの全体的な線量への寄与は著しく少ない。Ｙ−９０の場合、ガンマ放出からの放射線量の寄与はごくわずかである。
【０２０４】
Ｉ−１３１と比較して、図５２に見られ下でさらに考察されるように、Ｙ−９０は、従来のＴＲＴによる癌細胞の死滅についてＩ−１３１よりも有効である。
【０２０５】
医療内部被曝線量（ＭＩＲＤ）委員会は、投与された放射性医薬品からの内部放射線量を評価するための標準法、モデル、仮定および数学的スキーマを開発している。このＭＩＲＤの手法は、多くの異なる放射性核種について放射線量を評価する問題を単純化したものであり、広く使用されている５１０（ｋ）承認ソフトウェア、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ１に実装されている。その多くの標準的な擬人化ファントムとともに、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭは、腫瘍線量を概算するために使用することのできるＳｐｈｅｒｅｓ  Ｍｏｄｅｌを有する。Ｓｐｈｅｒｅｓ  Ｍｏｄｅｌは、様々な腫瘍量（０．０１〜６，０００ｇ）の単位密度球内に放射性医薬品が均一に分布していることを前提とする。
【０２０６】
この標準モデルを使用して、本発明者らは投与された放射能で正規化した放射線量に関して、Ｙ−９０とＩ−１３１を比較した。この比較の結果を、１〜１００ｇの間の腫瘍量について、図５２に示す。Ｙ−９０とＩ−１３１の比は、腫瘍４ｇで４に達し、腫瘍１００ｇまで４．０〜４．２の間に留まり、ｍＣｉ／ｍＣｉベースで、Ｙ−９０は、１０ｇまでの大きさの腫瘍でＩ−１３１の３．６〜４．１倍の細胞毒性であり、１０ｇを超える大きさの腫瘍では約４．１倍効果的であることを強く示唆することに注意されたい。
【０２０７】
異なる薬物動態特性
ヨウ素化類似体とは違って、ＡＰＣキレートは大きすぎて血漿の既知のアルブミン結合ポケットに収まらないため、異なるインビボ薬物動態および体内分布プロファイルを示す（図５３参照）。結合エネルギーが低いと、血漿中の遊離分子の割合が大きくなり、それによってより急速な腫瘍の取り込みが可能になる。一部のＡＰＣキレートは腎臓系を介して除去されるが、ヨウ素化類似体は肝胆道系によって除去される。ＡＰＣキレートは、腫瘍にも蓄積し、ヨウ素化類似体よりも素早く血液から除去される。より迅速な血液浄化は、骨髄の減少および治療用放射性医薬品のオフターゲット毒性と直接関連している。
【０２０８】
ＰＫおよび体内分布プロファイルにおけるこれらの相違が、様々な用量制限臓器毒性および最終的な有用性をもたらす。血液学的毒性から用量制限毒性のために腎臓または肝臓に移動すると、ＴＲＴ用の放射性金属キレートの有用性が高まるであろう。
【０２０９】
さらに、ＡＰＣキレートの薬物動態プロファイルは、キレートの構造（例えばキレート電荷）のわずかな変化によって容易に操作することができる。キレート剤の選択範囲は膨大である。正常組織からのクリアランスが速いほど、画像コントラストおよび治療ウィンドウが改善され、その結果、最大許容線量が高くなる。
【０２１０】
ＡＰＣキレートは、ヨウ素化類似体とは異なる物理化学的特性を有する。ＡＰＣキレートは水溶性がはるかに高いので、それらを静脈内注射に適したものにするために界面活性剤を必要としない。ＡＰＣキレートは金属のキレートへのイオン結合に基づいているのに対して、ヨウ素化化合物はそれらの担体分子と共有結合を形成する。インビボでの脱ヨウ素化はヨウ化アルキルでは非常に一般的であるが、キレートはインビボでは極めて安定している傾向がある。
【０２１１】
脱ヨウ素化が起こると、遊離ヨウ化物は甲状腺に急速に蓄積し、その後の排出半減期が非常に長いのに対して、遊離放射性金属は通常、はるかに迅速に身体から排出されるかまたは解毒される。
【０２１２】
ＡＰＣキレートのインビボでの体内分布は、金属イオンに応じてかなり異なる可能性があるので、金属およびキレートの両方もＡＰＣの腫瘍標的化特性の原因となる。すべてのキレートが腫瘍を標的化するのではない。腫瘍標的化は、ＡＰＣ担体の累積特性、キレートの種類（直鎖キレートは急速な腎臓除去を受けるが、大環状キレートは肝胆汁排泄を受ける）、および金属イオンに依存する。キレート構造のわずかな変化でさえもインビボ特性に有意な変動をもたらす。同位体の単純な変化は、腫瘍標的化を５０％を超えて変化させ得る。
【０２１３】
放射性ＡＰＣ−金属キレートは手軽な条件下でほぼ定量的（＞９８％）収率で容易に放射性標識されるのに対し、ヨウ素化類似体の放射性ヨウ素化収率ははるかに低い（一般にＩ−１３１について約５０％、Ｉ−１２４では６０％）。さらに、高い比活性がキレートを用いて達成され得る。合成は、精巧な換気装置または訓練を必要とせずに、あらゆる核薬学で放射標識キットを用いて行うことができる。放射ヨウ素化は、標識反応中の放射性ヨウ素の揮発性のため、排水監視装置を備えたドラフト内で行わなければならない。
【０２１４】
造影剤は、必ずしも良い治療薬を作るわけではなく、逆もまた同じである。
【０２１５】
造影剤を用いて良好に腫瘍取り込みが行われるからといって、そのことにより治療が明白であることを意味すると仮定することはできない。良好な腫瘍取り込みを有することに加えて、治療薬は、正常組織と比較して長期の腫瘍保持を有する必要があり、骨髄曝露および関連する毒性を低下させるために血液から迅速に除去されなければならない。ヨウ素化類似体は長期間血液に滞留し、用量制限骨髄毒性をもたらす。対照的に、本発明者らのＡＰＣキレートは、上に述べたように、血漿中のアルブミン結合が低いために、はるかに速い血液クリアランス動態を示す可能性が最も高い。
【０２１６】
最後に、ヨウ素−１３１と比較して金属ベータおよびアルファ放射体の短い経路長および物理的性質により、注射の後に医療従事者または家族に対する曝露の懸念はない。Ｉ−１３１治療を受けている患者は、しばしば退院する前に病院から解放される前に鉛で遮蔽された部屋にしばらくの間（最長１週間）収容されなければならない。放射性アルファおよびベータ放出ＡＰＣキレートを注射された患者は、入院を続ける必要はなくなるであろう。
【０２１７】
実施例１５：Ｙ９０−ＮＭ６００によって抗ＣＬＡ４免疫チェックポイント阻害剤の投与と組み合わせて送達されるＴＲＴは、インビボ黒色腫モデルで癌を相乗的に阻害する
この実施例では、本発明者らは開示された併用方法の有効性を実証する。ここで、インビボ免疫化は、免疫チェックポイント阻害剤（抗ＣＴＬＡ４抗体）を全身投与することによって行われ、ＴＲＴは、前の実施例で使用された９０Ｙ−ＮＭ６００  キレートを全身投与することによって行われる。
【０２１８】
Ｂ７８黒色腫の皮下側腹部異種移植片を、前述のように雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに移植した。その後、マウスは無作為化されて様々な線量（２５μＣｉ、５０μＣｉ、または１００μＣｉ）の９０Ｙ−ＮＭ６００で処置され（１日目）、抗ＣＴＬＡ４抗体（免疫チェックポイント阻害剤）を伴う場合と伴わない場合があった（４、７、および１１日目に２００μｇ）（各実験群についてｎ＝６）。両方の薬剤は、外側尾静脈注射を介して（すなわち、静脈内に）投与された。ＰＢＳ処置のみ、および抗ＣＴＬＡ４のみの対照群も含めた。腫瘍をキャリパーで週２回測定し、動物の生存を６０日間監視した。
【０２１９】
図５４に示されるように、３つの併用療法（３つの異なる投与量の抗ＣＴＬＡ４＋９０Ｙ−ＮＭ６００）は、単一の療法（３つの異なる投与量の抗ＣＴＬＡ４または９０Ｙ−ＮＭ６００のみ）またはＰＢＳ対照と比較して、実質的な腫瘍増殖抑制を示した。１８日後、５０または１００μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００と抗ＣＴＬＡ４を用いる併用処置は、ＰＢＳ、９０Ｙ−ＮＭ６００のみ、または抗ＣＴＬＡ４のみと比較して、腫瘍増殖を有意に（ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５）低下させた。抗ＣＴＬＡ−４を用いる２５μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００併用処置群は、線量反応の傾向を示す中程度の増殖遅延応答を示した。
【０２２０】
図５５に見られるように、抗ＣＴＬＡ４と組み合わせた５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００で処理されたマウスは、ＴＲＴ単独またはＰＢＳビヒクルで処理したマウスよりも有意に高い総生存率を示した（ｐ＜０．０５）。抗ＣＴＬＡ４単独と比較して、併用処置（ｔｒｅａｔｍｎｅｎｔ）のログランクはｐ＝０．０６であった。
【０２２１】
図５６に見られるように、３つすべての併用処置は生存を大幅に改善した。意義深いことに、非併用対照アーム（ＰＢＳ、５０μＣｉのＴＲＴのみ、１００μＣｉのＴＲＴのみ、および抗ＣＴＬＡ４のみ）の完全レスポンダーが０／２４であるのと比較して、５０および１００μＣｉの治療線量の９０Ｙ−ＮＭ６００でＴＲＴ＋ＣＴＬＡ４の併用アームでは、完全レスポンダーは６／１２（５０％）であった。
【０２２２】
これらの結果は、分子標的放射線治療薬と、免疫チェックポイント阻害（ＩＣＩ）を引き起こす任意の薬剤の併用による治療可能性を示している。結果は、分子的に標的化されたＴＲＴとＩＣＩの組合せが、各薬剤単独での処置と比較して相乗効果をもたらすことを示す。有意な腫瘍退縮を示すことに加えて、この併用法は、免疫記憶を生成し、腫瘍の再発を防ぐ強力なｉｎ  ｓｉｔｕ癌ワクチン効果を最終的に提供する可能性もある。
【０２２３】
実施例１６：転移性癌モデルにおける全身性チェックポイント阻害の有効性を高めるための分子標的化放射線療法の利用
実施例１５に対する追跡調査では、前の実施例で使用された９０Ｙ−ＮＭ６００キレートを全身投与することにより行われる免疫チェックポイント阻害剤とＴＲＴの全身投与を組み合わせる本開示の方法の有効性を示す、大幅に拡大された裏付けデータを本発明者らは提供する。有効性は、マウス黒色腫、神経芽細胞腫、および乳癌モデル、ならびに播種性の「冷たい（ｃｏｌｄ）」腫瘍を有する複数の腫瘍黒色腫モデルで実証されている。
【０２２４】
臨床試験は、免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）で処置された患者のサブセットが、すべての疾患部位で耐久性のある完全寛解（ＣＲ）を経験することを示している。しかし、ＩＣＩは、低レベルのＴ細胞浸潤および／または少数の突然変異によって生成されたネオアンチゲンを特徴とする免疫学的に「冷たい」腫瘍を有する患者には一般に効果的ではない。この実施例では、本開示の併用方法を使用して、そのような腫瘍の免疫応答を刺激し、「熱い」腫瘍において応答を増強することを本発明者らは実証する。より具体的には、本発明者らは、抗腫瘍免疫療法応答の生成において逆効果となる全身性リンパ球枯渇を結果的に引き起こさずに、免疫賦活性の低線量の放射線を疾患のすべての部位に送達することができる全身性分子標的化放射線療法（ＭＴＲＴ）と全身性ＩＣＩを組み合わせることによって、全身性ＩＣＩの有効性を強化した。
【０２２５】
方法：
ＭＴＲＴの腫瘍取り込み研究のために、側腹部腫瘍（Ｂ７８黒色腫およびＰａｎｃ０２の各々についてｎ＝３）を、１００μＬＰＢＳ中１−２ｘ１０６細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに承認されたＩＡＣＵＣプロトコルで注入することによって確立した。Ｂ７８腫瘍とＰａｎｃ０２腫瘍はどちらも免疫原性が低から中程度であり、増殖が遅く、放射線抵抗性の腫瘍株であるので、このプロフィールをＭＴＲＴの研究に生かすことができる。増殖が遅いことによりＭＴＲＴの減衰に時間がかかり、放射線抵抗性と低い免疫原性は併用したＭＴＲＴ＋ＩＣＩによる有効性の協同的改善を試験することを可能にする。
【０２２６】
腫瘍が十分に確立された後、注射の約５週間後に、動物をＩＶ  ８６Ｙ−ＮＭ６００の線量で処置し、連続ＰＥＴ／ＣＴ画像をＭＴＲＴ注射の１、２、および３日後に収集した。ＰＥＴ取り込み値を、心臓および肝臓をはじめとするバックグラウンド放射能の領域と比較した。対応のあるｔ検定を実施して、バックグラウンド臓器と腫瘍部位の間の８６Ｙ−ＮＭ６００取り込みの有意差を試験した。
【０２２７】
９０Ｙ−ＮＭ６００および／またはＩＣＩがＢ７８黒色腫側腹部腫瘍内の免疫抑制性Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる能力を示すために、本発明者らはＢ７８黒色腫の側腹部腫瘍モデル（各群についてｎ＝４）を生成した。ＭＴＲＴ（５０μＣｉ）、抗ＣＴＬＡ４（４日目、７日目、１０日目、２００μｇ）、ＭＴＲＴおよびＣＴＬＡ４、そしてＰＢＳプラセボ対照が本発明者らの処置群であった。腫瘍免疫細胞集団への処置の効果を、照射または生理食塩水プラセボ送達後１、７、および１４日目に、腫瘍組織を採取し、組織学用に一部を凍結し、定量的ＰＣＲ用に別の部分を保存することによって調べた。残りの腫瘍試料はｍＲＮＡおよびＲＴ−ＰＣＲ分析用に調製した。定量的ＲＴ−ＰＣＲは、免疫感受性マーカー（例えば、Ｆａｓ、ＭＨＣ−Ｉ、およびＰＤ−Ｌ１）の腫瘍細胞発現の変化を評価するために使用した。
【０２２８】
有効性研究用に、Ｂ７８黒色腫の２つの両側腹部腫瘍モデルをＣ５７ＢＬ／６マウスで生成した。腫瘍が８０〜１２０ｍｍ３に増殖したら、腫瘍を次の処置群に無作為化した：４、７、１０日目の２００μｇ  ＩＰの抗ＣＴＬＡ−４のみ、１日目の９０Ｙ−ＮＭ６００  ＩＶ（５０μＣｉ）、および抗ＣＴＬＡ４、１２Ｇｙの全身照射（ＥＢＲＴ）および抗ＣＴＬＡ４、１２ＧｙのＥＢＲＴ＋５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００、１２ＧｙのＥＢＲＴ＋５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００および抗ＣＴＬＡ４。腫瘍の測定は週２回３０日間行われ、生存率は６０日まで追跡され、安楽死のエンドポイントは直径１５ｍｍの腫瘍負荷であった。
【０２２９】
治療に完全寛解したマウスに、ＭＴＲＴの９０日後に２ｘ１０６  Ｂ７８または１ｘ１０６  Ｐａｎｃ０２細胞を反対側の側腹部に再負荷し、その後再び１２０日目にＰａｎｃ０２（Ｂ７８に対してのみ）およびＢ１６黒色腫を再負荷して、腫瘍特異的免疫記憶応答を試験した。
【０２３０】
結果：
本発明者らのＭＴＲＴ剤、９０Ｙ−ＮＭ６００の選択的取り込みは、Ｂ７８およびＰａｎｃ０２腫瘍モデルの両方で確認された。Ｂ７８黒色腫では、９０Ｙ−ＮＭ６００の腫瘍取り込みにより、最初の注射後、大部分の薬剤は予想どおり血液プールにあったが、注射後４８時間のうちに大部分の薬剤は腫瘍または排出器官（肝臓、腎臓）に保持されていたことが実証された。４８日目に採取された組織切片のガンマカウントは、ＰＥＴイメージングの取り込み値を確認する。腫瘍組織では放射能カウントが高く、時間とともに増加し、骨髄腔では値が低く、時間とともに減少する。共同研究的な試みとして行われたモンテカルロ線量測定は、本発明者らの実験線量の５０μＣｉが送達された場合、約２〜３ＧｙがＭＴＲＴ剤の寿命にわたって送達されることを示す。Ｐａｎｃ０２膵臓癌でのＰＥＴ取り込みと組織の生体内分布の研究でも、７２時間の骨髄組織と比較して、腫瘍組織での９０Ｙ−ＮＭ６００の取り込みおよび保持の増加が実証された。
【０２３１】
腫瘍免疫細胞集団への治療効果を研究するために、放射線照射後の様々な時点で腫瘍組織試料を収集した。ＭＴＲＴ処置（５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００）後の１４日目に、ＭＴＲＴと抗ＣＴＬＡ４の組合せにより、腫瘍組織のＣＤ４／ＦｏｘＰ３およびＣＤ８／ＦｏｘＰ３浸潤物によって決定される、エフェクターＴ細胞／免疫抑制性Ｔ細胞の比が大幅に増加することを本発明者らは見出した。遺伝子発現の定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）研究も、インターフェロン遺伝子経路（ＳＴＩＮＧ）の刺激因子の一部である遺伝子をはじめとする炎症性遺伝子発現の増加を示した。すべてＳＴＩＮＧ活性化の下流にあるＭｘ１、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、およびＰＤＬ１のレベルは、ＰＢＳ対照と比較して上方制御された。
【０２３２】
次に、本発明者らはマウスに単一のＢ７８  Ｒ側腹部腫瘍を確立し、それらが約８０ｍｍ３に達したら、それらを無作為に、１日目に２５、５０、および１００ｕＣｉのＭＴＲＴ線量処置を投与されて４、７、および１０日目に抗ＣＴＬＡ４を投与された各群と投与されなかった各群、ならびに対照としてＰＢＳおよび抗ＣＴＬＡ４のみを投与された各群に分けた。５０および１００ｕＣｉの線量レベルのＭＴＲＴと抗ＣＴＬＡ４の併用は、他群と比較して腫瘍増殖の遅延（図５７）および生存率（図５８）が大幅に改善されたことが実証されたことを本発明者らは見出した。２５ｕＣｉのＭＴＲＴでは、中間の応答があった。さらに、処置に対して完全寛解を示したマウスは、併用処置群にしか入っておらず、５０ｕＣｉ、１００、および２５ｕＣｉのＭＴＲＴ線量群の動物の６６％、３３、および１６％であった。ＭＴＲＴ注射後６０日目に完全寛解していたすべてのマウスの対側腹部にＢ７８細胞を負荷すると、ナイーブ対照と比較して１００％の拒絶率があり、本発明者らの処置免疫記憶応答を生成できたことを実証している。
【０２３３】
それ以来、この研究は再現されて同様の傾向を示し、両方の研究の生存率は、ログランクテストにより、ＭＴＲＴ（５０、１００ｕＣｉ）と抗ＣＴＬＡ４で併用処置されたマウスの全体的な生存率が他群と比較して大幅に向上したことを示した。
【０２３４】
次に、本発明者らはこの研究を神経芽細胞腫（ＮＸＳ２）および乳癌（４Ｔ１）の同様のマウスモデルに拡張した。図５９（ＮＸＳ２）と図６０（４Ｔ１）に見られるように、ＣＴＬＡ４とＭＴＲＴの併用は、この場合も腫瘍増殖の大幅な低下（実際、腫瘍体積の縮小）を示す唯一の群であった。
【０２３５】
次に、本発明者らはこの研究を拡張して、複数の巨大腫瘍を有するマウスで奏効率が改善されることを実証した。本発明者らは２腫瘍マウスモデルでのＭＴＲＴ治療の研究を設計した。目標は、複数の巨大腫瘍を有するマウスを治療することであり、これは複数の部位に巨大な転移性疾患がある患者に相当する。この実験では、ＥＢＲＴを免疫チェックポイント遮断と組み合わせて１つの部位に送達するという現在の臨床パラダイムよりもＭＴＲＴが奏効率を改善できるかどうかを調べた。
【０２３６】
Ｐａｎｃ０２およびＢ７８黒色腫の２腫瘍モデルを確立した。最初にＢ７８黒色腫で、従来の免疫感作ＥＢＲＴ（１２Ｇｙ）を疾患の原発部位へ（続発部位を遮蔽）の投与を抗ＣＴＬＡ４と併用し、放射線照射のみ、ＭＴＲＴおよび抗ＣＴＬＡ４、または原発部位へのＥＢＲＴとの併用処置とすべての部位へのＭＴＲＴおよび抗ＣＴＬＡ４の併用処置と比較した。腫瘍増殖曲線は、３剤併用処置が、他群と比較して原発性腫瘍（図６１）および続発性腫瘍（図６２）の両方の腫瘍退縮の改善をもたらすことを示す。さらに、生存率は、２剤併用処置群と比較して、３剤併用処置（ｐ＜０．０１）で大幅に改善された。３剤併用処置は、４０％の完全寛解率（ＭＴＲＴ＋抗ＣＴＬＡ４では１６％の完全寛解、他の群は０％）をもたらし、応答したすべての動物がＢ７８または関連Ｂ１６黒色腫に対して腫瘍特異的免疫記憶を有していた。
【０２３７】
最後に、２つの肉眼で見える遠隔腫瘍と播種性の顕微鏡的転移を有するマウスモデルを使用して、進行した多部位の「冷たい」癌（すなわち、強い免疫系の応答を引き起こさないため、チェックポイント阻害に大きく抵抗する多部位腫瘍）をシミュレートした。
【０２３８】
大きな原発性腫瘍を形成するために、マウスの一方の側腹部に２×１０６個のＢ７８黒色腫腫瘍細胞を注入した。１２日後、小さな続発性腫瘍を形成するために、マウスの反対の側腹部に５×１０５個のＢ７８黒色腫腫瘍細胞を注射した。これから１７日後（１日目）に、播種性転移を作成するために、マウスに２×１０５個のＢ１６黒色腫細胞を静脈内注射した。
【０２３９】
マウスを様々な単一または併用処置にさらした：ＰＢＳ対照注射；１日目のＭＴＲＴ、５０μＣｉ  ＩＶ；４、７、および１０日目のＩＣＩ、抗ＣＴＬＡ４／ＰＤ１；１日目のＩｎ  Ｓｉｔｕワクチン（ＩＳ）、１２Ｇｙの局所ＲＴ＋６〜１０日目の抗ＧＤ２  ｍＡｂおよびＩＬ２の腫瘍内注射。試験した単一処置および併用処置は、ＰＢＳ、ＭＴＲＴ、ＩＣＩ、ＩＳ、ＭＴＲＴ＋ＩＣＩ、ＭＴＲＴ＋ＩＳ、ＩＣＩ＋ＩＳ、およびＭＴＲＴ＋ＩＳ＋ＩＣＩであった。６０日目から、マウスの腫瘍増殖および動物の生存をモニターし、９０日目に腫瘍のないマウスにＢ７８を再負荷した。
【０２４０】
９０日目に、ＩＣＩマウスの２０％未満が生存していたが、ＭＴＲＴ＋ＩＳおよびＩＣＩ＋ＩＳマウスの約半分が生存していた（ＭＴＲＴ＋ＩＳのほうが生存率はやや高かった）。驚いたことに、ＭＴＲＴ＋ＩＳマウスは１００％生存していた（他のすべての群の生存率はゼロであった）。特に、これらのマウスの８３％は腫瘍がないことが見出され、免疫細胞記憶を伴う完全寛解（ＣＲ）（すなわち、治癒）を示したが、残りは制御不能な続発性腫瘍を維持していた。
【０２４１】
また、本発明者らは神経芽細胞腫（ＮＸＳ２、９４６４Ｄ）、横紋筋肉腫（Ｍ３−９−Ｍ）、高悪性度神経膠腫、ルイス肺癌、および頭頸部癌（ＭＯＣ−２）をはじめとする、他の様々な癌での取り込みおよび線量送達も確認した。腫瘍取り込みおよび線量測定に加えて、毒性分析が実施され、放射線誘発性骨髄毒性（血清白血球またはリンパ球で測定）は、本発明者らの治療放射線量の５０μＣｉ（腫瘍線量２〜３Ｇｙ）では観察されなかった。また、本発明者らは外部ビームと様々な線量の９０Ｙ−ＮＭ６００の両方をマウスに照射し、ＰＣＲによるｍＲＮＡ分析のためにＩＨＣならびに組織で染色した組織像を収集した。これらの研究から得たデータは、５０μＣｉの９０Ｙ−ＮＭ６００によるインターフェロンシグナル伝達経路のアップレギュレーションならびにＰＤＬ１発現の増加を示す。さらに、腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞が分子標的化放射線療法によって減少することを本発明者らは発見した。
【０２４２】
要するに、この研究からの本発明者らの発見は、低線量のＮＭ６００  ＭＴＲＴは、チェックポイント遮断と組み合わせると、腫瘍のアブスコパル反応を増強することができることを示唆する。特に、ＮＭ６００  ＭＴＲＴ放射線療法用送達剤は、通常は免疫チェックポイント遮断にのみ反応しない「冷たい」腫瘍の反応を改善する能力を示す。さらに、比較的低いＭＴＲＴ線量である５０μＣｉ（２．５Ｇｙの腫瘍線量）は、全身性リンパ球が枯渇せずにＩＣＩの有効性を高める免疫賦活効果を達成するのに十分である。ＭＴＲＴを単一部位のＥＢＲＴおよびチェックポイント遮断に追加して、局所と遠隔の両方の腫瘍部位でより優れた腫瘍反応と治癒率を達成することができる。本発明者らの結果は、ＭＴＲＴが患者における免疫療法処置の治療効果を向上させる大きな可能性を有していることを示している。
【０２４３】
実施例の結論
これらの実施例は、放射線療法の標的全身送達と、免疫チェックポイント阻害剤などの免疫賦活剤の全身送達との、相乗的で広く適用可能な組合せに基づく抗癌戦略を示している。開示された金属キレート化および放射性ハロゲン化アルキルホスホコリン類似体は、事実上あらゆる組織の癌を標的とできるため、免疫チェックポイントを標的とするｍＡｂもしくは小分子（免疫チェックポイント阻害剤）の全身投与は、実質的にどんな癌型にも有用であることが分かっている（腫瘍反応性ｍＡｂは承認されているか、またはほぼすべての癌組織型の臨床試験に使用されている）。したがって、２つの異なる併用戦略を臨床に移行させると、事実上すべての高リスク癌に対して広い用途がある。
【０２４４】
本発明のその他の実施形態および使用は、本明細書に開示される本発明の明細書および実践を考慮すれば当業者に明白である。すべての学術誌の引用および米国／外国特許および特許出願を含む、何らかの理由で本明細書に引用されるすべての参考文献は、参照により具体的にかつ完全に本明細書に組み込まれる。本発明は、本明細書に例示され説明される特定の試薬、製剤、反応条件等に限定されず、以下の特許請求の範囲内に入るそのようなそれらの変更形態を包含することが理解される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2021502368.tif 000069
【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９Ａ−１】
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【図９Ａ−２】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【国際調査報告】
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