(57)【要約】  Ｃ３ｂ結合領域を含むポリペプチド、ならびにこうしたポリペプチドをコードする核酸およびベクター、ならびにこうしたポリペプチドを含む細胞および組成物を開示する。やはり開示するのは、疾患および状態を治療し、そして防止するためのポリペプチドの使用およびこうしたポリペプチドを用いる方法である。【選択図】図１Ａ
2021511030.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドであって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチド。
【請求項２】
補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドをコードする核酸であって、前記ポリペプチドが、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記核酸。
【請求項３】
補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドの使用であって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドの前記使用。
【請求項４】
補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドをコードする核酸の使用であって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドをコードする前記核酸の前記使用。
【請求項５】
補体関連疾患または状態が眼の疾患または状態である、請求項１または請求項２記載のポリペプチド、あるいは請求項３または請求項４記載の使用。
【請求項６】
眼の疾患または状態の治療または防止が、被験体の少なくとも１つの眼の細胞が該ポリペプチドを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、請求項５記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項７】
眼の疾患または状態の治療または防止が、被験体の少なくとも１つの眼の細胞が該ポリペプチドをコードする核酸を発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、請求項５または請求項６記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項８】
眼の疾患または状態の治療または防止が、被験体の少なくとも１つの眼の細胞に、該ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを投与する工程を含む、請求項５〜７のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項９】
少なくとも１つの目の細胞が網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞である、請求項６〜８のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１０】
疾患または状態が、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理的に関与している疾患または状態である、請求項１〜９のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１１】
疾患または状態が黄斑変性症である、請求項１〜１０のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１２】
疾患または状態が：加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、初期ＡＭＤ、中間期ＡＭＤ、後期ＡＭＤ、地図状萎縮（「乾性」ＡＭＤ）、「湿性」（血管新生性）ＡＭＤ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、緑内障、自己免疫ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、および早発性黄斑変性症（ＥＯＭＤ）の１つまたはそれより多くより選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１３】
ポリペプチドが配列番号４に少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜１２のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１４】
Ｘ１がＡまたはＴであり、Ｘ２がＰまたはＬであり、そして／またはＸ３がＧまたはＲである、請求項１〜１３のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１５】
ポリペプチドが５０〜２５０アミノ酸の全長を有する、請求項１〜１４のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１６】
ポリペプチドが、配列番号２または配列番号３を含むかまたはこれらの配列からなる、請求項１〜１５のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１７】
ポリペプチドが配列番号１３を含むかまたは該配列からなる、請求項１〜１４のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１８】
ポリペプチドが補体因子Ｉに関する補因子として作用可能である、請求項１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項１９】
ポリペプチドが、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を超えて拡散可能である、請求項１〜１８のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２０】
ポリペプチドが、補体因子Ｉに関する補因子によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、請求項１〜１９のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２１】
ポリペプチドが、補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、請求項１〜２０のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２２】
ポリペプチドが分泌経路配列を含む、請求項１〜２１のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２３】
分泌経路配列が配列番号７を含むかまたは該配列からなる、請求項２２記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２４】
ポリペプチドが配列番号４７、４９または５１を含むかまたはこれらの配列からなる、請求項２２または請求項２３記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２５】
ポリペプチドが、分泌経路配列を除去するための切断部位を含む、請求項２２〜２４のいずれか一項記載のポリペプチドまたは使用。
【請求項２６】
配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチド。
【請求項２７】
配列番号４に少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６記載のポリペプチド。
【請求項２８】
Ｘ１がＡまたはＴであり、Ｘ２がＰまたはＬであり、そして／またはＸ３がＧまたはＲである、請求項２６または請求項２７のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項２９】
ポリペプチドが５０〜２５０アミノ酸の全長を有する、請求項２６〜２８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３０】
配列番号２または配列番号３を含むかまたはこれらの配列からなる、請求項２６〜２９のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３１】
配列番号１３を含むかまたは該配列からなる、請求項２６〜２８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３２】
ポリペプチドが補体因子Ｉに関する補因子として作用可能である、請求項２６〜３１のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３３】
ポリペプチドが、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を超えて拡散可能である、請求項２６〜３２のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３４】
補体因子Ｉに関する補因子によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、請求項２６〜３３のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３５】
補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、請求項２６〜３４のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３６】
ポリペプチドが分泌経路配列を含む、請求項２６〜３５のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項３７】
分泌経路配列が配列番号７を含むかまたは該配列からなる、請求項３６記載のポリペプチド。
【請求項３８】
ポリペプチドが配列番号４７、４９または５１を含むかまたはこれらの配列からなる、請求項３６または請求項３７記載のポリペプチド。
【請求項３９】
ポリペプチドが、分泌経路配列を除去するための切断部位を含む、請求項３６〜３８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項４０】
請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項４１】
請求項４０の核酸を含むベクター。
【請求項４２】
請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項４０記載の核酸、または請求項４１記載のベクターを含む、細胞。
【請求項４３】
請求項４０記載の核酸または請求項４１記載のベクターを細胞内に導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で細胞を培養する工程を含む、ポリペプチドを産生するための方法。
【請求項４４】
請求項４３記載の方法によって得られるかまたは得られうる、細胞。
【請求項４５】
請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項４０記載の核酸、請求項４１記載のベクター、あるいは請求項４２または４４記載の細胞を含み、随意に、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項４６】
疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項４０記載の核酸、請求項４１記載のベクター、請求項４２または４４記載の細胞、あるいは請求項４５記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項４０記載の核酸、請求項４１記載のベクター、請求項４２または４４記載の細胞、あるいは請求項４５記載の薬学的組成物の使用。
【請求項４８】
あらかじめ決定した量の、請求項２６〜３９のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項４０記載の核酸、請求項４１記載のベクター、請求項４２または請求項４４記載の細胞、あるいは請求項４５記載の薬学的組成物を含む、部分のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年１月１５日出願のＧＢ１８００６２０．５に優先権を請求し、該出願の内容および要素は、すべての目的のため、本明細書に援用される。
発明の分野
本発明は、分子生物学、免疫学、および医学の分野に関する。より具体的には、本発明は、Ｃ３ｂに結合するポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、先進国における失明の主因であり；ＡＭＤは現在、世界中で、すべての失明登録の８．７％に関与しており、そして２０２０年までに１億９６００万人の人々が罹患すると概算される（Ｗｏｎｇら  Ｌａｎｃｅｔ  Ｇｌｏｂ  Ｈｅａｌ  （２０１４）  ２：ｅ１０６−１６）。ＡＭＤは、目の裏側の網膜の中心部分である黄斑の進行性破壊として現れ、中心視力の喪失を導く。疾患初期段階では、黄斑の形態学的変化が見られ、これにはまず、脈絡膜（酸素および栄養を外部網膜に供給する非常に血管形成された層）に見られる有窓血管である、脈絡毛細管中の血管の喪失が含まれる（Ｗｈｉｔｍｏｒｅら，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  （２０１５）  ４５：１−２９）。
【０００３】
ＡＭＤは主に、遺伝病である。免疫系の一部である補体系の遺伝子における突然変異は、ＡＭＤのリスク増加に非常に関連する。実際、補体の過剰活性化が疾患病因形成の主な駆動因子であることが明らかになってきており、そして脈絡毛細管には補体過剰活性化の多くの例が見られうる。ＡＭＤにおける補体の役割は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｚｉｐｆｅｌら  第２章，  ＬａｍｂｒｉｓおよびＡｄａｍｉｓ（監修），  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７０３，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，  ＬＬＣ（２０１０）中に記載される。補体は、免疫系タンパク質Ｃ３の炎症促進性分解産物であるタンパク質Ｃ３ｂの表面上の沈着によって活性化される。Ｃ３ｂは他のタンパク質と会合して、補体反応を活性化し、そして増幅するためのコンバターゼ酵素複合体を形成し、そして補体カスケードの増幅ループを開始し、最終的に、細胞／組織破壊および局所炎症反応（すべてＡＭＤの特徴）を導く。
【０００４】
脈絡毛細管は、薄い（２〜４μｍ）無細胞５層細胞外マトリックスであるブルッフ膜（ＢｒＭ）によって、代謝的に活性である網膜色素上皮（ＲＰＥ）から分離される。ＢｒＭは、２つの主な機能を果たし：ＲＰＥの基層および血管壁として働く。ＢｒＭの構造および機能は、その全体が本明細書に援用される、ＣｕｒｃｉｏおよびＪｏｈｎｓｏｎ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ，  ：  Ｒｙａｎら  （２０１３），  Ｒｅｔｉｎａ，  Ｖｏｌ．  １，  Ｐａｒｔ  ２：  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  第５版  Ｌｏｎｄｏｎ：  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ中，  ｐｐ４６６−４８１に概説される。
【０００５】
無細胞構造、例えばＢｒＭおよび毛細血管間中隔（脈絡毛細管における毛細管の間の空間を埋める細胞外マトリックス）に対する補体のＣ３ｂ活性化は、タンパク質「補体因子Ｈ」（ＦＨ）および「補体因子Ｉ」（ＦＩ）によって制御される。ＦＩは、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂと称されるタンパク質分解的に不活性である型に切断することによって補体活性化を防止し、ｉＣ３ｂはコンバターゼの集合に参加することが不可能である。しかし、ｉＣ３ｂはオプソニンであり、そしてしたがって、白血球補充の仲介因子であり、これは続いて炎症反応を引き起こすが、一方、Ｃ３ｂのさらなる分解産物、ｉＣ３ｄｇおよびＣ３ｄは劣ったオプソニンである。Ｃ３ｂを切断するため、ＦＩは、補因子の存在を必要とし、その例には、血管由来ＦＨタンパク質および膜結合表面補因子「補体因子１」（ＣＲ１；ＣＤ３５）が含まれる。ＣＲ１は、広範囲の細胞上に発現される膜受容体であり、そして免疫複合体クリアランス、食作用、および補体制御に関与する。Ｃ３ｂのＦＩ仲介性切断における補因子として働くとともに、ＣＲ１は、Ｃ３およびＣ５コンバターゼの崩壊を加速させることにより、補体の制御因子として作用する。ＣＲ１構造および機能は、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、ＫｈｅｒａおよびＤａｓ，  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００９）  ４６（５）：７６１−７７２、ならびにＪａｃｑｕｅｔら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１３）  １９０（７）：３７２１−３７３１に概説される。
【０００６】
初期ＡＭＤのドルーゼンと呼ばれる特徴的な病変は、ＲＰＥ層に隣接するＢｒＭ内で発展する（Ｂｉｒｄら，  Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  （１９９５）  ３９（５）：３６７−３７４）。ドルーゼンは、脂質および細胞破片の集積から形成され、そしてこれには、一連の補体活性化産物が含まれる（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  （２００９）  ２９：９５−１１２；  Ｗｈｉｔｃｕｐら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｎｆｌａｍ  （２０１３）  １−１０）。ＢｒＭ内にドルーゼンが存在すると、細胞外マトリックスを超える脈絡膜からＲＰＥ細胞への栄養分の流動が妨げられ、細胞機能不全および最終的には死を導く。ＲＰＥ細胞の単層は、栄養分を提供し、そして廃棄物を除去することによって、神経感覚網膜の桿体細胞および錐体細胞を支持するため、これらの細胞が死ぬと、光受容細胞の機能不全が引き起こされ、そして続いて視力が失われる。
【０００７】
これは、ＡＭＤ症例のほぼ９０％に相当する「乾性」ＡＭＤとしておよびまた地図状萎縮としても知られる、ＡＭＤの後期段階の１つに相当する。後期段階ＡＭＤの症例の残りの割合においては、ドルーゼンの存在が脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を促進し、この場合、ＲＰＥ細胞による血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の合成増加が、脈絡膜／脈絡毛細管からの新規血管増殖を促進し、これがＢｒＭを通じて網膜まで破壊する。これらの新規血管が漏出し、そして最終的には瘢痕組織を形成し；これは「湿性」ＡＭＤと称される。
【０００８】
「湿性」ＡＭＤは症例の１０％にしか相当しないが、後期段階ＡＭＤの最も悪性の型であり、そして「乾性」ＡＭＤとは異なる疾患特性を有する。例えば、抗ＶＥＧＦ剤の目の硝子体内への注射が、これらの血管の増殖を遅延させるかまたは逆転させることが可能な、湿性ＡＭＤの治療があるが、これは、そもそもその形成を防止することはできない。地図状萎縮（「乾性」ＡＭＤ）は治療不能なままである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｗｏｎｇら  Ｌａｎｃｅｔ  Ｇｌｏｂ  Ｈｅａｌ  （２０１４）  ２：ｅ１０６−１６
【非特許文献２】Ｗｈｉｔｍｏｒｅら，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  （２０１５）  ４５：１−２９
【非特許文献３】Ｚｉｐｆｅｌら  第２章，  ＬａｍｂｒｉｓおよびＡｄａｍｉｓ（監修），  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７０３，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，  ＬＬＣ（２０１０）
【非特許文献４】ＣｕｒｃｉｏおよびＪｏｈｎｓｏｎ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｒｕｃｈ’ｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ，  ：  Ｒｙａｎら  （２０１３），  Ｒｅｔｉｎａ，  Ｖｏｌ．  １，  Ｐａｒｔ  ２：  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  第５版  Ｌｏｎｄｏｎ：  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ中，  ｐｐ４６６−４８１
【非特許文献５】ＫｈｅｒａおよびＤａｓ，  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００９）  ４６（５）：７６１−７７２
【非特許文献６】Ｊａｃｑｕｅｔら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１３）  １９０（７）：３７２１−３７３１
【非特許文献７】Ｂｉｒｄら，  Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  （１９９５）  ３９（５）：３６７−３７４
【非特許文献８】Ａｎｄｅｒｓｏｎら，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  （２００９）  ２９：９５−１１２
【非特許文献９】Ｗｈｉｔｃｕｐら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｎｆｌａｍ  （２０１３）  １−１０
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止するために有用である、Ｃ３ｂに結合するポリペプチドを提供する。
１つの側面において、本発明は、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドであって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドを提供する。
【００１１】
やはり提供するのは、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドをコードする核酸であって、前記ポリペプチドが、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記核酸である。
【００１２】
別の側面において、本発明は、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドの使用であって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドの前記使用を提供する。
【００１３】
やはり提供するのは、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドをコードする核酸の使用であって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドをコードする前記核酸の前記使用である。
【００１４】
別の側面において、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、被験体に、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドであって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドを投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００１５】
別の側面において、被験体において、補体関連疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、被験体の少なくとも１つの細胞が、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドであって、配列番号４に少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する、前記ポリペプチドを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、前記方法を提供する。
【００１６】
いくつかの態様において、補体関連疾患または状態は、眼の疾患または状態である。
いくつかの態様において、眼の疾患または状態の治療または防止は、被験体の少なくとも１つの眼の細胞がポリペプチドを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む。いくつかの態様において、眼の疾患または状態の治療または防止は、被験体の少なくとも１つの眼の細胞がポリペプチドをコードする核酸を発現するかまたは含むように修飾する工程を含む。いくつかの態様において、眼の疾患または状態の治療または防止は、ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを、被験体の少なくとも１つの眼の細胞に投与する工程を含む。いくつかの態様において、少なくとも１つの眼の細胞は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞である。
【００１７】
いくつかの態様において、疾患または状態は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理的に関与している疾患または状態である。
【００１８】
いくつかの態様において、疾患または状態は黄斑変性症である。いくつかの態様において、疾患または状態は：加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、初期ＡＭＤ、中間期ＡＭＤ、後期ＡＭＤ、地図状萎縮（「乾性」ＡＭＤ）、「湿性」（血管新生性）ＡＭＤ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、緑内障、自己免疫ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、および早発性黄斑変性症（ＥＯＭＤ）の１つまたはそれより多くより選択される。
【００１９】
いくつかの態様において、ポリペプチドは配列番号４に少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、配列番号４の、Ｘ１はＡまたはＴであり、Ｘ２はＰまたはＬであり、そして／またはＸ３はＧまたはＲである。
【００２０】
いくつかの態様において、ポリペプチドは５０〜２５０アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号２または配列番号３を含むかまたはこれらの配列からなる。
【００２１】
いくつかの態様において、ポリペプチドは配列番号１３を含むかまたは該配列からなる。
いくつかの態様において、ポリペプチドは補体因子Ｉに関する補因子として作用可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を超えて拡散可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体因子Ｉに関する補因子によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する。
【００２２】
いくつかの態様において、ポリペプチドは分泌経路配列を含む。いくつかの態様において、分泌経路配列は配列番号７を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは配列番号４７、４９または５１を含むかまたはこれらの配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、分泌経路配列を除去するための切断部位を含む。
【００２３】
１つの側面において、本発明は、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有し、７００アミノ酸またはそれ未満の長さを有するポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０〜７００アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｘ１がＡまたはＴであり、Ｘ２がＰまたはＬであり、そして／またはＸ３がＧまたはＲである、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有する。
【００２４】
やはり提供するのは、Ｃ３ｂに結合可能なポリペプチドであって、配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして４５０アミノ酸またはそれ未満の長さを有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【００２５】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、Ｘ１はＡまたはＴであり、Ｘ２はＰまたはＬであり、そして／またはＸ３はＧまたはＲである。
【００２６】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０〜２５０アミノ酸の全長を有する。
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号２記載のアミノ酸配列を含むかまたはこれらの配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号３記載のアミノ酸配列を含むかまたはこれらの配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは配列番号１３記載のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。
【００２７】
いくつかの態様において、ポリペプチドはＣ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体因子Ｉに関する補因子によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体因子Ｉに関する補因子として作用する。
【００２８】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を超えて拡散可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドはグリコシル化されていないかまたは部分的にグリコシル化されている。いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０９、５７８、９５９および／または１０２８位（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７（配列番号１）にしたがった番号付け）で、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば１つ、２つ、３つまたは４つの置換を含む。いくつかの態様において、少なくとも１つのアミノ酸置換は、Ｎ５０９Ｑ、Ｎ５７８Ｑ、Ｎ９５９Ｑおよび／またはＮ１０２８Ｑ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７（配列番号１）にしたがった番号付け）の１つまたはそれより多くである。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号５、配列番号６および／または配列番号１５を含むかまたはこれらの配列からなる。
【００２９】
いくつかの態様において、ポリペプチドはさらに分泌経路配列を含む。いくつかの態様において、分泌経路配列は配列番号７を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、分泌経路配列を除去するための切断部位をさらに含む。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４７、４９または５１を含むかまたはこれらの配列からなる。
【００３０】
別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明の核酸を含むベクターを提供する。
【００３１】
別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチド、核酸、またはベクターを含む、細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で該細胞を培養する工程を含む、ポリペプチドを産生するための方法を提供する。
【００３２】
別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチドを産生するための方法によって得られるかまたは得られることが可能である、細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは細胞を含む、薬学的組成物を提供する。いくつかの態様において、薬学的組成物は、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む。
【００３３】
別の側面において、本発明は、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法において使用するための、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物を提供する。
【００３４】
別の側面において、本発明は、疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の使用を提供する。
【００３５】
別の側面において、本発明は、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、被験体に、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００３６】
別の側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、被験体の少なくとも１つの細胞が、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたはポリペプチドを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、前記方法を提供する。
【００３７】
本発明の多様な側面にしたがったいくつかの態様において、疾患または状態は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理的に関与している疾患または状態である。いくつかの態様において、疾患または状態は、黄斑変性症である。いくつかの態様において、疾患または状態は加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）である。いくつかの態様において、疾患または状態を治療するかまたは防止するための方法は、被験体の少なくとも１つの網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が、本発明記載の核酸、ベクター、またはポリペプチドを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む。
【００３８】
別の側面において、本発明は、あらかじめ決定した量の、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物を含む、部分のキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
本発明の原理を例示する態様および実験は、ここで、付随する図を参照しながら論じられるであろう。
【図１】図１Ａおよび１Ｂ。ヒトＨＥＫ２９３細胞からのＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａタンパク質発現。（１Ａ）ＣＲ１ａは、２つの糖型として発現され、これらはＰＮＧアーゼでの脱グリコシル化処理後、１つのより低分子量のバンドに縮小される。（１Ｂ）ｎＣＲ１ａは、脱グリコシル化ＣＲ１ａと同じ分子量の単一の型として発現される。
【図２】ヒト細胞によって発現され、そして分泌されたＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａが、Ｃ３ｂの因子Ｉ仲介性分解に関する補因子として作用する能力。ＣＲ１ａ／ｎＣＲ１ａ＋ＦＩ＋Ｃ３ｂ反応は、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇを生じた（レーン７および１１）。
【図３−１】（３Ａ）ブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じて拡散する能力を示す、２４時間後のウッシングチャンバーの拡散チャンバーにおけるＣＲ１ａの存在。
【図３−２】（３Ｂ）（３Ｂ）ＣＲ１ａおよび（３Ｃ）ｎＣＲ１ａがブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じたポリペプチドの拡散後、Ｃ３ｂを破壊するため、因子Ｉに関する補因子として作用する能力。
【図３−３】（３Ｃ）（３Ｂ）ＣＲ１ａおよび（３Ｃ）ｎＣＲ１ａがブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じたポリペプチドの拡散後、Ｃ３ｂを破壊するため、因子Ｉに関する補因子として作用する能力。
【図４】（ａ）はヒト・ドナーの眼由来の濃縮されたブルッフ膜であって、５ｍｍの開口部を覆い、そして１つのチャンバーから別のチャンバーへの液体の唯一の通路に相当し；（ｂ）はサンプリングアクセスポイントであり；そして（ｃ）は磁気スターラーバーである、拡散実験に用いるウッシングチャンバーの模式図。
【図５−１】Ｂｉｏｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって測定した、Ｃ３ｂに対する、ＣＲ１ａ、ＦＨおよびＦＨＬ−１の結合動力学。
【図５−２】Ｂｉｏｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって測定した、Ｃ３ｂに対する、ＣＲ１ａ、ＦＨおよびＦＨＬ−１の結合動力学。
【図５−３】Ｂｉｏｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって測定した、Ｃ３ｂに対する、ＣＲ１ａ、ＦＨおよびＦＨＬ−１の結合動力学。
【図６】抗ＣＲ１ａ抗体を用いた、ＡＡＶ−ＣＲ１ａ形質導入ＡＲＰＥ−１９細胞の組織培地からの分泌ＣＲ１ａ（ＡＡＶ−ＣＲ１ａ培地）の検出。組換えＣＲ１ａタンパク質を陽性対照として用いた。培地のみおよびＡＡＶ−ＧＦＰ形質導入ＡＲＰＥ−１９細胞の培養由来の培地を陰性対照として用いた。
【図７−１】ヒトＡＲＰＥ−１９細胞から分泌されたＣＲ１ａが、Ｃ３ｂの因子Ｉ仲介性分解に関する補因子として作用する能力。（７Ａ）分泌されたＣＲ１ａは、ＦＩ補因子として作用して、ｉＣ３ｂ（産物ｅ）およびＣ３ｄｇ（産物ｆ）を産生する。ヒトＨＥＫ２９３細胞から分泌されたＣＲ１ａを対照として提供した。
【図７−２】ヒトＡＲＰＥ−１９細胞から分泌されたＣＲ１ａが、Ｃ３ｂの因子Ｉ仲介性分解に関する補因子として作用する能力。（７Ｂ）培養したＡＡＶ−ＣＲ１ａ形質導入ＲＰＥ細胞は、非形質導入細胞を含有する培地に比較して、Ｃ３ｂ（産物ａ）をｉＣ３ｂ（産物ｂ）に分解する能力の増加を示した。
【図８】光受容体、網膜色素上皮、ブルッフ膜、ならびに脈絡膜中の脈絡毛細管および毛細管間中隔を示す、眼の黄斑部の模式図。
【図９】Ｆｏｒｅｓｔら（２０１５）  Ｄｉｓ．  Ｍｏｄ．  Ｍｅｃｈ．  ８，  ４２１−４２７（図１）由来の網膜組織の代表的な蛍光顕微鏡画像。示すのは、破壊されたＲＰＥ細胞および補体活性化領域が根底にある、ドルーゼン沈着である。スケールバー２０μｍ。
【図１０】有効な補体療法の局所化発現の重要な段階を示す、眼の黄斑部の模式図。
【図１１−１】本発明記載のポリペプチド（例えばＣＲ１ａ）、プロモーター要素、複製要素および選択要素をコードする核酸を含む発現ベクターの例。
【図１１−２】本発明記載のポリペプチド（例えばＣＲ１ａ）、プロモーター要素、複製要素および選択要素をコードする核酸を含む発現ベクターの例。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
ＡＭＤのための補体に基づく療法は、これまで、眼内に補体制御性抗体を注射することに集中してきた。これらのタンパク質は、ターゲット領域、すなわちＢｒＭおよびその根底にある血管系、脈絡毛細管にまったく、または有効な濃度では到達不能であるため、こうした療法は、ほとんどまたはまったく療法的利益を提供してこなかった。
【００４１】
補体の補体因子Ｉ（ＦＩ）仲介性制御、すなわちＣ３ｂのｉＣ３ｂ（タンパク質分解的に不活性であるＣ３ｂ）への切断は、膜係留ＣＲ１のような補因子を必要とする。しかし、本発明者らは、補因子活性成功のために、全長膜結合ＣＲ１、またはさらに膜貫通ドメインのみを欠くＣＲ１の可溶性型を提供する必要はないことを発見してきた。その代わり、本発明者らは、効率的なＦＩ仲介性Ｃ３ｂ切断を可能にするには、ＣＲ１  Ｃ３ｂ結合ドメインを含む短いＣＲ１断片で十分であることを発見した。
【００４２】
したがって、本発明は、ＦＩ補因子ＣＲ１に由来する可溶性一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）ポリペプチドに関する。該ポリペプチドは、こうしたドメインが補体活性化の制御のための本質的なＦＩ補因子として作用しうるように、Ｃ３ｂに結合可能であるドメインを含む。可溶性一部切除ポリペプチドの重要な利点は、ＢｒＭを通過する能力であり、そしてしたがって、これらはＡＭＤに関連するすべての領域、すなわちＲＰＥ／ＢｒＭ界面、ＢｒＭ、および毛細管間中隔（脈絡毛細管の血管間の細胞外マトリックス）を含む脈絡膜に到達可能である。本発明はまた、ＢｒＭを通じたポリペプチド通過を補助しうる、ＣＲ１由来の非グリコシル化ポリペプチドも提供する。該ポリペプチドは、容易に発現され、そして分泌され、罹患した部位に局在する細胞によるｉｎ  ｓｉｔｕ発現、および補体過剰活性化によって影響を受けている領域へのポリペプチドのターゲティングを可能にする。ポリペプチドのｉｎ  ｓｉｔｕ発現を、遺伝子治療技術を用いて達成してもよい。ｉｎ  ｓｉｔｕ発現は、体内の別の場所で機能している補体制御を妨害することなく、必要な領域にターゲティング化された療法を提供する。
【００４３】
本発明は、現在行われている内因性補体制御を置き換えるか、または残りの補体カスケードに干渉することなく、悪化している補体制御系の補充を可能にする。
【００４４】
ポリペプチド
本発明記載のポリペプチドは、１つまたはそれより多いＣ３ｂ結合領域を含んでもよいし、または該領域からなってもよい。
【００４５】
本発明記載のポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有し、ここで、該ポリペプチドは７００アミノ酸またはそれ未満の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで、該ポリペプチドは７００アミノ酸またはそれ未満の長さを有する。
【００４６】
本発明記載のポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有する、７００アミノ酸またはそれ未満のアミノ酸配列を含んでもよいし、または該配列からなってもよい。
【００４７】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、または２００アミノ酸またはそれ未満のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１〜２００アミノ酸、１〜２５０アミノ酸、１〜３００アミノ酸、１〜３５０アミノ酸、１〜４００アミノ酸、１〜４５０アミノ酸、１〜５００アミノ酸、１〜５５０アミノ酸、１〜６００アミノ酸、１〜６５０アミノ酸、または１〜７００アミノ酸を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０〜７００アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１００〜６５０アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１００〜５５０アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１５０〜４５０アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、４００〜７００アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、７００〜１０００、または１０００を超えるアミノ酸の長さを有する。
【００４８】
「長さ」は、本明細書において、ポリペプチドの全長を指し；すなわち、「長さ」は、端から端、すなわちＮ末端からＣ末端の全ポリペプチドの測定値または度合いを指す。「長さ」は、本明細書において、ポリペプチド内のアミノ酸残基の数によって測定される。
【００４９】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、分離された／別々の／別個の／個別の分子である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、別のアミノ酸配列と未連結の、すなわち連結されていない、融合していないまたは付着していない、単一連続アミノ酸配列である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、アミノ酸リンカーまたは非アミノ酸リンカーによって、別のポリペプチドまたはアミノ酸配列に付着していない。いくつかの態様において、ポリペプチドは、より長いアミノ酸配列の部分、一部または領域ではなく、すなわち該ポリペプチドは、最大の明記されるポリペプチド長を超えるアミノ酸配列の一部ではない。いくつかの態様において、ポリペプチドは、融合タンパク質の一部ではなく、またはその部分を形成しない。いくつかの態様において、ポリペプチドは、ポリペプチドの最大長を超えない限り、本明細書に提供する配列および１つまたはそれより多いさらなるアミノ酸を含んでもよい。本明細書記載のポリペプチドが短い長さであるため、該ポリペプチドがＢｒＭを通過して、そして補体活性化の部位に到達することが可能になる。
【００５０】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、または２００アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、４００、３９０、３８０、３７０、３６０、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、または７０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１〜７０アミノ酸、１〜８０アミノ酸、１〜９０アミノ酸、１〜１００アミノ酸、１〜１１０アミノ酸、１〜１２０アミノ酸、１〜１３０アミノ酸、１〜１４０アミノ酸、１〜１５０アミノ酸、１〜１６０アミノ酸、１〜１７０アミノ酸、１〜１８０アミノ酸、１〜１９０アミノ酸、１〜２００アミノ酸、１〜２１０アミノ酸、１〜２２０アミノ酸、１〜２３０アミノ酸、１〜２４０アミノ酸、１〜２５０アミノ酸、１〜２６０アミノ酸、１〜２７０アミノ酸、１〜２８０アミノ酸、１〜２９０アミノ酸、１〜３００アミノ酸、１〜３１０アミノ酸、１〜３２０アミノ酸、１〜３３０アミノ酸、１〜３４０アミノ酸、１〜３５０アミノ酸、１〜３６０アミノ酸、１〜３７０アミノ酸、１〜３８０アミノ酸、１〜３９０アミノ酸、１〜４００アミノ酸、１〜４１０アミノ酸、１〜４２０アミノ酸、１〜４３０アミノ酸、１〜４４０アミノ酸、または１〜４５０アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０〜４５０アミノ酸、５０〜４００アミノ酸、５０〜３５０アミノ酸、５０〜３００アミノ酸、５０〜２５０アミノ酸、５０〜２００アミノ酸、１００〜２５０アミノ酸、１００〜２００アミノ酸、１５０〜２５０アミノ酸、または１５０〜２００アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、６１、７２、１９４、２１２、２３１、３８８、４０６、または６４４アミノ酸の１つの全長を有する。
【００５１】
いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、８０ｋＤａの最大分子量を有し、該ポリペプチドは、より大きい複合体に共有／非共有結合しているか、より大きい複合体の一部であるか、またはより大きい複合体の一部ではない。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、７５ｋＤａまたはそれ未満、７０ｋＤａまたはそれ未満、６５ｋＤａまたはそれ未満、６０ｋＤａまたはそれ未満、５５ｋＤａまたはそれ未満、５０ｋＤａまたはそれ未満、４５ｋＤａまたはそれ未満、４０ｋＤａまたはそれ未満、３５ｋＤａまたはそれ未満、３０ｋＤａまたはそれ未満、２９ｋＤａまたはそれ未満、２８ｋＤａまたはそれ未満、２７ｋＤａまたはそれ未満、２６ｋＤａまたはそれ未満、２５ｋＤａまたはそれ未満、２４ｋＤａまたはそれ未満、２３ｋＤａまたはそれ未満、２２ｋＤａまたはそれ未満、２１ｋＤａまたはそれ未満、２０ｋＤａまたはそれ未満、１９ｋＤａまたはそれ未満、１８ｋＤａまたはそれ未満、１７ｋＤａまたはそれ未満、１６ｋＤａまたはそれ未満、１５ｋＤａまたはそれ未満、１４ｋＤａまたはそれ未満、１３ｋＤａまたはそれ未満、１２ｋＤａまたはそれ未満、１１ｋＤａまたはそれ未満、あるいは１０ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、５０ｋＤａの最大分子量、すなわち５０ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、２６ｋＤａの最大分子量、すなわち２６ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、２４ｋＤａの最大分子量、すなわち２４ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、２２ｋＤａの最大分子量、すなわち２２ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、２０ｋＤａの最大分子量、すなわち２０ｋＤａまたはそれ未満の分子量を有する。
【００５２】
いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号４に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、Ｘ１はＡまたはＴであり、Ｘ２はＰまたはＬであり、そして／またはＸ３はＧまたはＲである。いくつかの態様において、Ｘ１はＡであり、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ１はＡであり、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＲである。いくつかの態様において、Ｘ１はＡであり、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＲである。いくつかの態様において、Ｘ１はＡであり、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＲである。いくつかの態様において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＲである。
【００５３】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは本明細書に提供する長さを有する。例えば、いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、４００、３９０、３８０、３７０、３６０、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、１８０、１７０、または１６０アミノ酸またはそれ未満の全長を有し；いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、４００、３９０、３８０、３７０、３６０、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、または１８０アミノ酸またはそれ未満の全長を有し；いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、４００、３９０、３８０、３７０、３６０、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、２００、１９０、または１８０アミノ酸またはそれ未満の全長を有し；いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、４００、３９０、３８０、３７０、３６０、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。
【００５４】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、５０〜４５０アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、２５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、５０〜２５０アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、４５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、５０〜４５０アミノ酸の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、２５０アミノ酸またはそれ未満の全長を有する。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここで該ポリペプチドは、５０〜２５０アミノ酸の全長を有する。
【００５５】
ヒトＣＲ１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７（エントリーバージョン１８１（２０１７年１０月２５日）、配列バージョン３（２０２０年３月２日））；配列番号１）は、２，０３９アミノ酸配列（Ｎ末端４１アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして３０の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメイン（ｓｕｓｈｉドメインまたは小分子コンセンサスリピート（ＳＣＲ）としてもまた知られる）を含み、Ｎ末端の２８のＣＣＰは、各々７つのＣＣＰを含む４つの長鎖相同リピート（ＬＨＲ）ドメイン：ＬＨＲ−Ａ、ＬＨＲ−Ｂ、ＬＨＲ−ＣおよびＬＨＲ−Ｄに編成される。ＣＲ１のＣ３ｂ結合領域は、ＬＨＲ−Ｂ中のＣＣＰ  ８〜１０（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７  ４９１〜６８４位；配列番号２）、およびＬＨＲ−Ｃ中のＣＣＰ  １５〜１７（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７  ９４１〜１１３４位；配列番号３）に見られる。ＣＣＰ  ８〜１０および１５〜１７は、コンセンサス配列、配列番号４に示すように、３つのアミノ酸残基で配列が異なる。
【００５６】
本発明記載のポリペプチドは、ＣＣＰ  ８〜１０（配列番号２）および／またはＣＣＰ  １５〜１７（配列番号３）に相当するアミノ酸配列を含んでもよいしまたは該配列からなってもよい。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号２および／または配列番号３に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００５７】
本発明記載のポリペプチドは、ＣＣＰ  ８〜１０および１５〜１７に相当するアミノ酸配列を含んでもよいしまたは該配列からなってもよい。ポリペプチドは、その天然ＣＲ１配列（配列番号３０）において、ＣＣＰ  ８〜１０および１５〜１７を含んでもよいしまたはこれらからなってもよい。ポリペプチドは、ＣＣＰ  １５〜１７に連結されたＣＣＰ  ８〜１０を含んでもよいしまたはこれらからなってもよい。これは連続配列であってもよいし（配列番号１３）、またはＣＣＰ  ８〜１０および１５〜１７の間のリンカーによって達成されてもよい（例えば配列番号１４）。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１４および／または配列番号３０に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００５８】
本発明記載のポリペプチドは、配列「Ａ」（配列番号８）、配列「Ｂ」（配列番号１６）および／または配列「Ｃ」（配列番号１７）の１つまたはそれより多くに対応するアミノ酸配列を含んでもよいしまたはこうした配列からなってもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列「Ａ」（配列番号８）、配列「Ｂ」（配列番号１６）および配列「Ｃ」（配列番号１７）より選択される配列からなる。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、配列「Ａ」（配列番号８）、配列「Ｂ」（配列番号１６）および／または配列「Ｃ」（配列番号１７）の１つまたはそれより多くに少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。
【００５９】
本発明記載のポリペプチドが、配列「Ｂ」（配列番号１６）、あるいは配列「Ｂ」（配列番号１６）に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこうした配列からなる、いくつかの態様において、Ｘ１はＡまたはＴである。いくつかの態様において、Ｘ１はＡである。いくつかの態様において、Ｘ１はＴである。
【００６０】
本発明記載のポリペプチドが、配列「Ｃ」（配列番号１７）、あるいは配列「Ｃ」（配列番号１７）に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこうした配列からなる、いくつかの態様において、Ｘ２はＰまたはＬであり、そして／またはＸ３はＧまたはＲである。いくつかの態様において、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ２はＰであり、そして／またはＸ３はＲである。いくつかの態様において、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＧである。いくつかの態様において、Ｘ２はＬであり、そして／またはＸ３はＲである。
【００６１】
いくつかの態様において、配列「Ｂ」は、配列番号９または配列番号１１に相当する。いくつかの態様において、配列「Ｃ」は、配列番号１０または配列番号１２に相当する。
本発明には、本明細書に記載するような、配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」、ならびにその組み合わせを含むポリペプチドが含まれ、少なくとも以下の組み合わせが含まれる（Ｎ末端からＣ末端に編成される）：
・Ａ＋Ｂ
・Ｂ＋Ｃ
・Ａ＋Ｃ
・Ｃ＋Ａ
・Ａ＋Ｂ＋Ｃ
・Ｂ＋Ｃ＋Ａ
・Ｃ＋Ａ＋Ｂ
・Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ａ
・Ｂ＋Ｃ＋Ａ＋Ｂ
・Ｃ＋Ａ＋Ｂ＋Ｃ
・Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ａ＋Ｂ
・Ｂ＋Ｃ＋Ａ＋Ｂ＋Ｃ
・Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ａ＋Ｂ＋Ｃ
・Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ａ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｙ（式中、Ｙ＝Ａ、Ｂおよび／またはＣの１つまたはそれより多く）。
【００６２】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、本明細書記載のＣＣＰドメインの任意の組み合わせ、あるいは配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」の任意の組み合わせに少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこうした配列からなる。
【００６３】
いくつかの態様において、ＣＣＰドメインの組み合わせは、天然ＣＲ１に見られる組み合わせである。いくつかの態様において、ＣＣＰドメインの組み合わせは、天然ＣＲ１に見られる組み合わせではない。
【００６４】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列「Ａ」の多数のコピー、配列「Ｂ」の多数のコピー、および／または配列「Ｃ」の多数のコピーを有するアミノ酸配列を含むかまたはこれらの配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」の１つまたはそれより多くの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つまたはそれより多いコピーを含む。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列「Ａ」の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つまたはそれより多いコピー；配列「Ｂ」の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つまたはそれより多いコピー；および／または配列「Ｃ」の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つまたはそれより多いコピーを含む。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」の１つまたはそれより多くの９つ、１０、またはそれより多いコピーを含む。
【００６５】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ヒトＣＲ１（配列番号１）のアミノ酸配列１〜４９０、６８５〜９４０および／または１１３５〜２０３９の１つまたはそれより多くに、実質的な配列同一性を欠く。本明細書に記載するような実質的な配列同一性を欠くポリペプチドは、ヒトＣＲ１（配列番号１）のアミノ酸配列１〜４９０、６８５〜９４０および／または１１３５〜２０３９の１つまたはそれより多くに、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の配列同一性を有してもよい。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ＣＲ１長鎖相同リピート（ＬＨＲ）ドメイン、ＬＨＲ−Ａおよび／またはＬＨＲ−Ｄに実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ＣＲ１  ＣＣＰドメイン１〜７、１１〜１４および／または１８〜３０に実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠く。配列番号１のアミノ酸残基は、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７；エントリーバージョン１８１（２０１７年１０月２５日）、配列バージョン３（２０１０年３月２日）にしたがって番号付けされる。
【００６６】
本発明にしたがった、そして／または本明細書記載のポリペプチドを単離してもよいし、そして／または実質的に精製してもよい。
【００６７】
ポリペプチドのさらなる特徴
本発明記載のポリペプチドは、修飾および／またはさらなるアミノ酸配列を含んでもよい。修飾および／またはさらなるアミノ酸配列は、ポリペプチドの長さの限界を超えないように、本明細書に提供するポリペプチドの長さの限界中に含まれてもよい。
【００６８】
いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、２５、５０、１００、１５０、または２００を超えないアミノ酸を含むかまたは該アミノ酸からなり、すなわちさらなるアミノ酸配列は、１〜２５、１〜５０、１〜１００、１〜１５０、または１〜２００アミノ酸を含むかまたは該アミノ酸からなる。いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、２００より多いアミノ酸を含む。いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、本発明記載のポリペプチドのＣ末端に１００を超えないアミノ酸、そして／または本発明記載のポリペプチドのＮ末端に１００を超えないアミノ酸を含む。
【００６９】
いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、７００アミノ酸より長いポリペプチドを生じる。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、７００またはそれより多いアミノ酸を含むかまたは該アミノ酸からなる。例えば、ポリペプチドは、７００〜７５０、７５０〜８００、８００〜８５０、８５０〜９００、９００〜９５０、９５０〜１００、または１０００を超えるアミノ酸を含んでもよいし、または該アミノ酸からなってもよい。
【００７０】
いくつかの態様において、本明細書に記載するさらなるアミノ酸配列は、ヒトＣＲ１（配列番号１；Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７；エントリーバージョン１８１（２０１７年１０月２５日）、配列バージョン３（２０２０年３月２日）にしたがって番号付け）のアミノ酸配列１〜４９０、６８５〜９４０および／または１１３５〜２０３９の１つまたはそれより多くに実質的な配列同一性を欠く。いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、ＣＲ１  ＣＣＰドメイン１〜７、１１〜１４および／または１８〜３０に実質的な配列同一性を欠く。いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、ヒトＣＲ１（配列番号１）のアミノ酸配列１〜４９０、６８５〜９４０および／または１１３５〜２０３９の１つまたはそれより多くに、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の配列同一性を有する。いくつかの態様において、さらなるアミノ酸配列は、ＣＲ１長鎖相同リピート（ＬＨＲ）ドメイン、ＬＨＲ−Ａおよび／またはＬＨＲ−Ｄに実質的な配列同一性を欠く。
【００７１】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域以外の補体因子Ｉ（例えばＣＲ１）に関する補因子の領域に、実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠いてもよい。例えば、ポリペプチドは、ＣＲ１  ＣＣＰドメイン８〜１０および／または１５〜１７（配列番号１の、それぞれ残基４９１〜６８４および／または９４１〜１１３４）以外のＣＲ１に実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠いてもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドは、ＣＲ１  ＣＣＰドメイン１〜７、１１〜１４および／または１８〜３０に実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠いてもよい。本明細書に記載するような実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠くポリペプチドは、ヒトＣＲ１（配列番号１）のアミノ酸配列１〜４９０、６８５〜９４０および／または１１３５〜２０３９の１つまたはそれより多くに、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満の配列同一性を有してもよい。
【００７２】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、分泌経路配列を含んでもよい。本明細書において、分泌経路配列は、ポリペプチドの分泌を指示するアミノ酸配列である。分泌経路配列は、粗面小胞体を超えるポリペプチド鎖の排出が開始されたら、成熟タンパク質から切断されてもよい。哺乳動物細胞によって分泌されるポリペプチドは、一般的に、該ポリペプチドのＮ末端に融合されたシグナルペプチドを有し、該ペプチドは、翻訳されたポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの「成熟」型を産生する。
【００７３】
いくつかの態様において、分泌経路配列は、リーダー配列（シグナルペプチドまたはシグナル配列としてもまた知られる）を含んでもよいしまたは該配列からなってもよい。リーダー配列は、通常、５〜３０の疎水性アミノ酸の配列からなり、該アミノ酸は単一のアルファらせんを形成する。分泌されたタンパク質および細胞表面で発現されるタンパク質は、しばしば、リーダー配列を含む。リーダー配列は、新規に翻訳されたポリペプチド（例えばリーダー配列を除去するプロセシングの前）中に存在してもよい。リーダー配列は、多くのタンパク質に関して知られ、そしてＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌｅ、およびＩｎｔｅｒＰｒｏのようなデータベース中に記録され、そして／または例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，  ２０１１  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：  ７８５−７８６）またはＳｉｇｎａｌ−ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ，  ２００８  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２４：  ２１７２−２１７６）のようなアミノ酸配列分析ツールを用いて、同定／予測されてもよい。
【００７４】
いくつかの態様において、分泌経路配列は、補体因子Ｈ（ＦＨ）由来である。いくつかの態様において、分泌経路配列は、配列番号７を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドの分泌経路配列は、配列番号７のアミノ酸配列に少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。
【００７５】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号４７、４９、および／または５１に相当するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４７、４９、および／または５１に少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００７６】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、さらに、ポリペプチドから分泌経路配列を除去するための切断部位を含んでもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドから分泌経路配列を除去するための切断部位は、エンドプロテアーゼに関する切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、ポリペプチドが発現される細胞によって発現されるエンドプロテアーゼに関するものである。いくつかの態様において、切断部位は、シグナルペプチダーゼ切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、プロテアーゼ切断部位、例えばポリペプチドを発現する細胞によって発現されるエンドプロテアーゼに関する切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、ＲＰＥ細胞によって発現されるエンドプロテアーゼに関する切断部位である。
【００７７】
本発明記載のポリペプチドは、アミノ酸配列間に１つまたはそれより多いリンカー配列を含んでもよい。リンカー配列は、配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」の任意の２つまたはそれより多くの間に提供されてもよい。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、アミノ酸配列Ａ＋Ｂ＋Ｃ−［リンカー］−Ａ＋Ｂ＋Ｃを含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号１４を含むかまたは該配列からなる。
【００７８】
リンカー配列は当業者に知られ、そして例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｃｈｅｎら，  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  （２０１３）  ６５（１０）：  １３５７−１３６９に記載される。いくつかの態様において、リンカー配列は、柔軟なリンカー配列であってもよい。柔軟なリンカー配列は、リンカー配列によって連結されるアミノ酸配列の相対的な運動を可能にする。柔軟なリンカー配列は、当業者に知られ、そしていくつかは、Ｃｈｅｎら，  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ  （２０１３）  ６５（１０）：  １３５７−１３６９に同定される。柔軟なリンカー配列は、しばしば、高比率のグリシンおよび／またはセリン残基を含む。
【００７９】
いくつかの態様において、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基および／または少なくとも１つのセリン残基を含む。いくつかの態様において、リンカー配列は、グリシンおよびセリン残基からなる。いくつかの態様において、リンカー配列は、１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、１〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０または１〜３５アミノ酸の長さを有する。
【００８０】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、非アミノ酸リンカーを含む。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、コンジュゲート化によって、例えば求核置換（例えばハロゲン化アシル、活性エステルとアミンおよびアルコールの反応）、求電子置換（例えばエナミン反応）ならびに炭素−炭素および炭素−ヘテロ原子多重結合への付加（例えばマイケル反応、ディールズ・アルダー反応）によって連結された、２つまたはそれより多いポリペプチドを含んでもよい。これらのおよび他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  第３版，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８５；  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  １９９６；およびＦｅｅｎｅｙら，  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ；  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ，  Ｖｏｌ．  １９８，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．，  １９８２に論じられる。
【００８１】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは切断可能リンカーを含む。
本発明記載のポリペプチドがＣＲ１の特定の特性を欠くことが望ましい可能性もある。例えば、ポリペプチドが、そうでなければブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じた拡散を阻害するであろう領域または天然補因子ファミリータンパク質の作用に干渉するであろう領域を欠くことが望ましい可能性もある。
【００８２】
本発明記載のポリペプチドは、ＣＲ１膜貫通ドメイン（配列番号３２）を欠く。本発明記載のポリペプチドは、ＣＲ１細胞質テール（配列番号３３）を欠いてもよい。好ましい態様において、本発明記載のポリペプチドは可溶性である。
【００８３】
本発明記載のポリペプチドは、そうでなければ、病原性細菌によって宿主免疫系を破壊するために利用されうる領域を欠いてもよい。細菌は、血液由来の可溶性補体因子Ｈに結合し、そしてこれを補充可能である分子を細菌表面上に発展させている。これによって、細菌は自身を補体制御因子で有効にコーティングして、そして宿主免疫反応を回避することが可能になる。本発明記載のポリペプチドは、侵入性病原体が免疫反応を回避するために使用できないように、細菌結合部位を欠いてもよい。
【００８４】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、１つまたはそれより多いグリコシル化部位を含む。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、グリコシル化される。
【００８５】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドはグリコシル化されない。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、１つまたはそれより多いグリコシル化部位を欠く。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、１つまたはそれより多いＮ連結グリコシル化部位を欠く。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、Ｎ連結グリカンを欠く。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ポリペプチドをグリコシル化できないかまたは完全にはグリコシル化できない細胞によって発現され、そして／または分泌される。例えば、細胞は、機能的グリコシルトランスフェラーゼ酵素を欠いてもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドは無グリコシルである（すなわちグリコシル化されていない）。いくつかの態様において、ポリペプチドは、例えばグリコシダーゼ（例えばペプチドＮ−グリコシダーゼ）での処理によって、脱グリコシル化されている。脱グリコシル化は、好ましくは非変性性である。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、部分的にグリコシル化されているか、非グリコシル化されているかまたは脱グリコシル化されている。
【００８６】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、Ｎグリコシル化のための部位を除去するように突然変異されている、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する、１つまたはそれより多い配列を含む。いくつかの態様において、配列番号２７記載の１つまたはそれより多いコンセンサス配列中のＡｓｎ（Ｎ）残基は、別のアミノ酸残基、例えば：Ａｌａ（Ａ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＴｙｒ（Ｙ）より選択される残基で置換される。いくつかの態様において、配列番号２７記載の１つまたはそれより多いコンセンサス配列中のＡｓｎ（Ｎ）残基は、Ｇｌｎ（Ｑ）残基で置換される。いくつかの態様において、配列番号２７の残基Ｘ２は、Ｓｅｒ（Ｓ）またはＴｈｒ（Ｔ）ではないアミノ酸であるか、またはこうしたアミノ酸に置換される。
【００８７】
いくつかの態様において、配列番号２または配列番号４に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるポリペプチドは、５０９位および／または５７８位（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７にしたがった番号付け）で１つまたはそれより多いアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、１つまたはそれより多いアミノ酸置換は、Ｎ５０９Ｑおよび／またはＮ５７８Ｑより選択される。いくつかの態様において、配列番号３に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるポリペプチドは、９５９位および／または１０２８位（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７にしたがった番号付け）で１つまたはそれより多いアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、１つまたはそれより多いアミノ酸置換は、Ｎ９５９Ｑおよび／またはＮ１０２８Ｑより選択される。いくつかの態様において、配列番号１３に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるポリペプチドは、５０９位、５７８位、９５９位および／または１０２８位（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ１７９２７にしたがった番号付け）で１つまたはそれより多いアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、１つまたはそれより多いアミノ酸置換は、Ｎ５０９Ｑ、Ｎ５７８Ｑ、Ｎ９５９Ｑおよび／またはＮ１０２８Ｑより選択される。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００８８】
いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号５、配列番号６、配列番号１５、および／または配列番号３１に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００８９】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、分泌経路配列、およびＮグリコシル化のための部位を除去するために突然変異されている配列番号２７のコンセンサス配列に一致する１つまたはそれより多い配列を有する。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号４８、５０、５２、５３、および／または５４に相当するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４８、５０、５２、５３、および／または５４に少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００９０】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ポリペプチドの発現、フォールディング、輸送、プロセシング、精製または検出を容易にするアミノ酸配列（単数または複数）を含んでもよい。例えば、ポリペプチドは、タンパク質タグ、例えばＨｉｓ（例えば６ＸＨｉｓ）、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグをコードする配列を、随意に：ポリペプチドのＮまたはＣ末端に；リンカー中に；あるいはリンカーのＮまたはＣ末端に含んでもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドは、検出可能部分、例えば、蛍光、発光、免疫検出可能、放射性、化学、核酸または酵素標識を含む。いくつかの態様において、検出可能部分は、例えば、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の被験体への投与後、被験体から得られた試料において、ポリペプチドの検出を容易にする。試料は、被験体から得られる任意の生物学的試料であってもよい。いくつかの態様において、試料は液体生検、例えば眼液（涙液、眼房水、または硝子体液）、血液、血漿等である。いくつかの態様において、試料は、例えば眼の細胞／組織の、細胞学的試料または組織試料、例えば外科試料である。
【００９１】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、ウェスタンブロッティング、質量分析および／または酵素消化によって、例えば特異的ペプチダーゼによる消化によって、検出され、そして／または内因性ＣＲ１から区別されてもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドは、酵素消化によって、内因性ＣＲ１由来の消化後ペプチドとは異なるペプチドを生成する、点突然変異を含んでもよい。
【００９２】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、タンパク質タグを除去するための切断部位をさらに含んでもよい。例えば、精製後、ポリペプチドの精製のために用いたタグを除去することが望ましい可能性もある。いくつかの態様において、切断部位は、例えば、例えば配列番号３４に示すような、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位であってもよい。
【００９３】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、および／または４６に相当するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４０、４２、４４、および／または４６に少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。こうしたポリペプチドは、本明細書に提供する任意の長さを有してもよい。
【００９４】
本明細書において、「ポリペプチド」には、（例えば共有的または非共有的に）複合体に会合していてもよい、１つより多いポリペプチド鎖を含む分子が含まれる。すなわち、本発明の意味内にある「ポリペプチド」は、１つまたはそれより多いポリペプチド鎖を含む分子を含む。本発明のポリペプチドは、多様な異なる態様で、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの異なる発現／産生段階で、例えばシグナルペプチド、タンパク質タグ、その除去のための切断部位等を含んでもよい。本発明のポリペプチドは、本明細書に記載する任意のＣＲ１  ＣＣＰ配列、あるいは本明細書に記載するＣＲ１  ＣＣＰドメイン８（配列番号８）、９（配列番号９）、１０（配列番号１０）、１５（配列番号８）、１６（配列番号１１）、および／または１７（配列番号１２）、または配列「Ａ」、「Ｂ」および／または「Ｃ」の任意の組み合わせを、随意に、本明細書に記載する本発明のポリペプチドのさらなる特徴（例えばシグナルペプチド、リンカー、検出配列、グリコシル化部位の欠如、置換アミノ酸残基、タンパク質タグ、タンパク質タグを除去するための切断部位、分泌経路配列、分泌経路配列を除去するための切断部位）のいずれかの１つまたはそれより多くと組み合わせて、含んでもよい。
【００９５】
配列同一性
本明細書において、参照アミノ酸配列に相当するアミノ酸配列は、参照配列に、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を含んでもよい。
【００９６】
２つまたはそれより多いアミノ酸または核酸配列の間のパーセント同一性を決定する目的のための対のおよび多数の配列整列を、例えばＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓоｅｄｉｎｇ，  Ｊ．  ２００５，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１，  ９５１−９６０）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら  ２０００，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  （２０００）  ３０２，  ２０５−２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ  ２００５，  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，  ６（２９８））およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ  ２０１３，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，  ３０（４）  ７７２−７８０）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当業者に知られる多様な方法で達成してもよい。こうしたソフトウェアを用いる際、好ましくは、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するデフォルトパラメータを用いる。
【００９７】
配列
【００９８】
【表１−１】
2021511030.tif 000003
【００９９】
【表１−２】
2021511030.tif 000004
【０１００】
【表１−３】
2021511030.tif 000005
【０１０１】
【表１−４】
2021511030.tif 000006
【０１０２】
【表１−５】
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【０１０３】
【表１−６】
2021511030.tif 000008
【０１０４】
【表１−７】
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【０１０５】
【表１−８】
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【０１０６】
【表１−９】
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【０１０７】
【表１−１０】
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【０１０８】
【表１−１１】
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【０１０９】
【表１−１２】
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【０１１０】
【表１−１３】
2021511030.tif 000015
【０１１１】
ポリペプチドの機能特性
本発明記載のポリペプチドを、１つまたはそれより多い機能特性を参照することによって特徴づけてもよい。
【０１１２】
特に、本発明記載のポリペプチドは、以下の特性（前記特性に関する適切なアッセイにおける分析によって決定されるようなもの）の１つまたはそれより多くを所持してもよい：
Ｃ３ｂに結合する；
補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合のアフィニティと類似の結合アフィニティでＣ３ｂに結合する；
補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合のアフィニティより高い結合アフィニティでＣ３ｂに結合する；
補体受容体１（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合のアフィニティと類似の結合アフィニティでＣ３ｂに結合する；
補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合する；
補体受容体１（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合する；
補体受容体１  ＣＣＰドメイン８〜１０および／または１５〜１７（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合する；
Ｃ３ｂの補体因子Ｉ仲介性不活性化を可能にする補因子として作用する；
機能性Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼの形成の補体因子Ｉ仲介性減少／防止を可能にする補因子として作用する；
機能性Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５コンバターゼの形成の補体因子Ｉ仲介性減少／防止を可能にする補因子として作用する；
機能性Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼの形成の補体因子Ｉ仲介性減少／防止を可能にする補因子として作用する；
Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼ活性の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５コンバターゼ活性の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼ活性の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼの量の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５コンバターゼの量の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼの量の補体因子Ｉ仲介性減少を可能にする補因子として作用する；
補体因子Ｉを通じてＣ３ｂの量を減少させる；
補体因子Ｉを通じてｉＣ３ｂの量を増加させる；
補体因子Ｉを通じてＣ３ｄｇの量を増加させる；
補体因子Ｉを通じてＣ３ｄの量を増加させる；
補体因子Ｉを通じてＣ３ｆの量を増加させる；
補体因子Ｉを通じてＣ５ｂの量を減少させる；
補体因子Ｉを通じてＣ５ａの量を減少させる；
補体因子Ｉを通じてＦＨおよび／またはＦＨＬ−１によって産生されるｉＣ３ｂの量に比較して、補体因子Ｉを通じてｉＣ３ｂの量を減少させる；
補体因子Ｉを通じてｉＣ３ｂに対するＣ３ｄｇの比を増加させる；
補体活性化を阻害可能である；
ブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じて拡散する
補体因子Ｉに比較して、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す；
補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す；
補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す；
補体因子Ｈに比較して、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す；
補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ−１に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す；
補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ−１に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す；
可溶性補体受容体１に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す；
可溶性補体受容体１に比較して、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。
【０１１３】
所定のポリペプチドが、先の段落に示す機能特性を所持するかどうかを、例えば本明細書に記載するように分析してもよい。
本発明記載のポリペプチドは、Ｃ３ｂに結合可能であってもよい。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域を含んでもよいしまたは該領域からなってもよい。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、ＣＲ１のＣ３ｂ結合領域、例えばＣＣＰドメイン８〜１０および／または１５〜１７を含むかまたは該領域からなる。
【０１１４】
本明細書において、「Ｃ３ｂ結合領域」は、Ｃ３ｂに結合可能な領域を指す。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂに特異的に結合可能である。Ｃ３ｂへの結合は、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂの間で形成される、ファンデルワールス力、静電相互作用、水素結合、および疎水性相互作用などの非共有相互作用によって仲介されてもよい。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂ以外の分子に結合するよりも、より高いアフィニティで、そして／またはより長い期間、Ｃ３ｂに結合する。
【０１１５】
ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１２）  ９０７：４１１−４４２；またはＲｉｃｈら，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００８  Ｆｅｂ  １；  ３７３（１）：１１２−２０を参照されたい）、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（例えば、Ｌａｄら，  （２０１５）  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：  ４９８−５０７；またはＣｏｎｃｅｐｃｉｏｎら，  Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．  ２００９  Ｓｅｐ；  １２（８）：７９１−８００を参照されたい）、ＭｉｃｒｏＳｃａｌｅ  Ｔｈｅｒｍｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＭＳＴ）分析（例えば、Ｊｅｒａｂｅｋ−Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら，  Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  Ａｕｇ；  ９（４）：  ３４２−３５３を参照されたい）を含む当業者に周知の技術を用いて、あるいは放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、本発明記載のポリペプチドまたは推定上のＣ３ｂ結合領域が、Ｃ３ｂに結合する能力を分析してもよい。こうした分析を通じて、所定のターゲットへの結合を決定し、そして定量化してもよい。いくつかの態様において、結合は、所定のアッセイで検出される反応であってもよい。
【０１１６】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、こうしたアッセイにおいて、Ｃ３ｂ結合領域が結合しない陰性対照分子に対して、こうしたアッセイにおいて検出される結合シグナルのレベルの１倍より大きい、例えば、＞１．０１、＞１．０２、＞１．０３、＞１．０４、＞１．０５、＞１．０６、＞１．０７、＞１．０８、＞１．０９、＞１．１、＞１．２、＞１．３、＞１．４、＞１．５、＞１．６、＞１．７、＞１．８、＞１．９、＞２、＞３、＞４、＞５、＞６、＞７、＞８、＞９、＞１０、＞１５、＞２０、＞２５、＞３０、＞３５、＞４０、＞４５、＞５０、＞６０、＞７０、＞８０、＞９０、または＞１００倍の１つの、Ｃ３ｂへの結合を示す。
【０１１７】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、所定のアッセイにおいて、ＣＲ１または補体因子Ｉに関する別の補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合のアフィニティと類似の結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。参照結合アフィニティと類似である結合アフィニティは、比較アッセイにおいて、参照ＣＲ１または補体因子Ｉに関する参照補因子によって示されるＣ３ｂへの結合レベルの、例えば±４０％、例えば結合レベルの±３５％、±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％または±５％の１つであってもよい。
【０１１８】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、所定のアッセイにおいて、補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合アフィニティより高い結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、所定のアッセイにおいて、補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合アフィニティの１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、７５倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、または１０００倍の結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、所定のアッセイにおいて、補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合アフィニティの１００００倍、１０００００倍、または１００００００倍の結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、所定のアッセイにおいて、補体因子Ｉに関する補因子（またはその断片）によって示されるＣ３ｂへの結合アフィニティの２、３、４、５、６、７、８、９または１０桁高い結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、補体因子Ｉに関する補因子は、補体因子Ｈまたは一部切除ＦＨアイソフォームＦＨＬ−１である。補体因子Ｉに関する補因子は、ＣＲ１であってもよい。
【０１１９】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体因子Ｉに関する補因子によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合可能である（すなわち同じ領域または重複する領域に結合する）。いくつかの態様において、ポリペプチドは、ＣＲ１（またはその断片）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、ＣＲ１  ＣＣＰドメイン８〜１０および／または１５〜１７によって結合される領域中でＣ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体因子Ｉ補因子、補体因子Ｈ、ＣＤ４６、ＣＤ５５、Ｃ４ＢＰ、ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ、またはＭＯＰＩＣＥ（またはその断片）の１つまたはそれより多くによって結合される領域中でＣ３ｂに結合可能である。
【０１２０】
本発明記載のポリペプチドが、補体因子Ｉに関する所定の補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合するかどうかを、ＥＬＩＳＡ、および表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を含む、当業者に知られる多様な方法によって決定してもよい。Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｉに関する所定の補因子（またはその断片）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合するかどうかを決定する適切なアッセイの例は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイである。
【０１２１】
例えば、本発明記載のポリペプチドが、補体因子Ｉに関する所定の補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合するかどうかは、本発明記載のポリペプチドの存在下での、あるいは補因子／断片およびＣ３ｂの一方または両方と本発明記載のポリペプチドのインキュベーション後の、Ｃ３ｂと補因子／断片の相互作用の分析によって決定されてもよい。所定の補因子／断片によって結合されるＣ３ｂの領域中でＣ３ｂに結合するＣ３ｂ結合領域は、本発明記載のポリペプチドの非存在下での（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下での）相互作用のレベルに比較した際、本発明記載のポリペプチドの存在下での、あるいは本発明記載のポリペプチドと、一方または両方の相互作用パートナーのインキュベーション後の、補因子／断片およびＣ３ｂの間の相互作用レベルの低下／減少の観察によって同定される。例えば組換え相互作用パートナーを用いて、適切な分析をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行ってもよい。こうしたアッセイの目的のため、相互作用レベルを検出し、そして／または測定する目的のために、相互作用パートナーおよび／または本発明記載のポリペプチドの一方または両方を標識するか、あるいは検出可能実体と組み合わせて用いてもよい。
【０１２２】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体因子Ｉに関する補因子として作用する。例えば、ポリペプチドは、補体因子ＩによるＣ３ｂの切断を強化してもよく、そして／または補体因子Ｉによるタンパク質分解的切断のために好ましい配向でＣ３ｂを提示してもよい。ポリペプチドは、好ましくは、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断を阻害しない。いくつかの態様において、補体因子Ｉは内因性である。いくつかの態様において、補体因子Ｉは外因性である。
【０１２３】
本明細書において、「内因性」タンパク質／ペプチドは、（本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物での処置前に）適切な細胞タイプ、組織、または被験体によってコードされる／発現されるタンパク質／ペプチドを指す。「非内因性」または「外因性」タンパク質／ペプチドは、（本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物での処置前に）適切な細胞タイプ、組織、または被験体によってコードされない／発現されないタンパク質／ペプチドを指す。
【０１２４】
例えば本発明記載のポリペプチドの非存在下での（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下での）、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度に比較した際の、本発明記載のポリペプチドの存在下での（または該ポリペプチドとのインキュベーション後の）適切なアッセイにおける、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度の分析によって、補体因子Ｉに関する補因子として作用する本発明記載のポリペプチドを決定してもよい。補体因子Ｉに関する補因子として作用するＣ３ｂ結合領域は、本発明記載のポリペプチドの非存在下での（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下での）、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度に比較した際の、本発明記載のポリペプチドの存在下での（または該ポリペプチドとのインキュベーション後の）補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度の増加の検出によって同定される。例えば、補体因子ＩによるＣ３ｂの切断の１つまたはそれより多い産物、例えばｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄまたはＣ３ｆの検出によって、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度を決定してもよい。例えば、Ｃ３ｂの存在の減少を検出することによって、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度を決定してもよい。いくつかの態様において、補体因子Ｉに関する補因子として作用する本発明記載のポリペプチドは、補体因子Ｉを通じてＦＨ／ＦＨＬ−１によって産生されるｉＣ３ｂの量に比較して、全体により少ない量のｉＣ３ｂを生じる。いくつかの態様において、補体因子Ｉに関する補因子として作用する本発明記載のポリペプチドは、補体因子Ｉを通じてＦＨ／ＦＨＬ−１によって産生されるｉＣ３ｂに対するＣ３ｄｇの比に比較して、補体因子Ｉを通じてｉＣ３ｂに対するＣ３ｄｇの比を増加させる。例えば、ポリペプチドは、ｉＣ３ｂの全体の量を増加させることは不可能であるが、その代わり、補体因子Ｉを通じて、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｆおよび／またはＣ３ｄの量を増加させうる。
【０１２５】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体活性化を阻害するかまたは減少させることが可能である。ポリペプチドは、補体の過剰活性化を阻害するかまたは減少させてもよい。本明細書記載のアッセイによって、例えば補体構成要素の異常なレベルによって、または、例えばその全体が本明細書に援用される、ＳｈｉｈおよびＭｕｒａｌｉ  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２０１５，  ９０：  １１８０−１１８６；  ＫｉｒｓｃｈｆｉｎｋおよびＭｏｌｌｎｅｓ，  Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２００３，  １０（６）：  ９８２−９８９；  ＮｉｌｓｓｏｎおよびＥｋｄａｈｌ，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ２０１２，  論文ＩＤ  ９６２７０２に記載されるような、当業者に知られる試験／アッセイによって、補体活性化／過剰活性化のレベルを決定してもよい。
【０１２６】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、こうした特性に関する適切なアッセイにおける分析によって決定されるように、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じて拡散する、すなわちブルッフ膜を通過する能力を所持する。
【０１２７】
所定のポリペプチドがＢｒＭを通じて拡散する能力を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで、例えばＣｌａｒｋら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  １９３，  ４９６２−４９７０に記載されるように、分析してもよい。簡潔には、ＭｃＨａｒｇら，  Ｊ  Ｖｉｓ  Ｅｘｐ  （２０１５）  １−７に記載されるように、ドナーの眼からＢｒＭを単離してもよく、そして黄斑部をウッシングチャンバーに載せてもよい。載せたら、５ｍｍ直径の黄斑部は、２つの同一の区画間の唯一の障壁である。ＢｒＭの両側をＰＢＳで洗浄してもよく、そしてヒト血清をＰＢＳで１：１に希釈して、そしてＢｒＭの一方の側のウッシング区画（試料チャンバー）に添加してもよい。分析しようとするポリペプチドを、ＰＢＳ中で試料チャンバーに添加してもよく、そしてＰＢＳのみを、ＢｒＭのもう一方の側の区画（拡散物チャンバー）に添加してもよく、そして試料および拡散物チャンバーの両方を穏やかに攪拌しながら、ウッシングチャンバーを室温で２４時間インキュベーションしてもよい。続いて、例えばＥＬＩＳＡ分析またはウェスタンブロットなどの抗体に基づく検出法を用いて、各チャンバー由来の試料を、ポリペプチドの存在に関して分析してもよい。拡散物チャンバー中でポリペプチドが検出された場合、ポリペプチドがＢｒＭを通じて拡散可能であることを示す。ＢｒＭを拡散可能である／拡散不能であることが知られる適切な陽性および陰性対照タンパク質をこうした実験に含めてもよい。
【０１２８】
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体因子ＩよりもＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体因子ＨよりもＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。２０のＣＣＰドメインからなるＦＨは巨大分子であり、そしてＢｒＭを通過しない。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、一部切除補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ−１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３−２；配列番号２８）に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ−１に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散するより優れた能力を示す。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、全長可溶性ＣＲ１（３０  ＣＣＰドメイン；配列番号３２および配列番号３３を欠く配列番号１）に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、全長可溶性ＣＲ１に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散するより優れた能力を示す。ＢｒＭを通じて拡散可能である本発明記載のポリペプチドは、ＢｒＭを通じて拡散した後、好ましくは機能的に活性であるままであり、すなわち補体因子Ｉに関する補因子として作用する。
【０１２９】
所定の参照ポリペプチドに比較した際、ＢｒＭを通じて拡散するより優れた能力を示す本発明のポリペプチドを、上述のように、ＢｒＭを通じた拡散を分析することによって同定してもよい。拡散物チャンバーへの拡散の速度を測定し、そして／または実験終了時に拡散物チャンバー中に存在するポリペプチドの比率を検出することによって、ＢｒＭを通じた拡散を検出してもよい。所定の参照ポリペプチドに比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示す本発明のポリペプチドを、上述のように、ＢｒＭを通じた拡散を分析することによって同定してもよい。参照ポリペプチドに関する拡散速度の３０％以内である、例えば２５％、２０％、１５％、または１０％の１つ以内である拡散物チャンバーへの拡散速度を検出することによって、そして／または拡散物チャンバー中に存在する参照ポリペプチドの比率の３０％以内である、例えば２５％、２０％、１５％、または１０％の１つ以内である、実験終了時に拡散物チャンバー中に存在する、本発明のポリペプチドの比率を検出することによって、ＢｒＭを通じて拡散する類似の能力を示してもよい。
【０１３０】
ポリペプチドがＢｒＭを通じて拡散する能力の結果として、本発明のポリペプチドはまた、もし／ひとたび、ＦＩとともに補因子の役割を実行したならば、Ｃ３ｂ不活性化の部位から拡散することも可能である。言い換えると、本発明のポリペプチドは、補体活性化の領域に、一過性に存在可能でありうる。これは、補体関連破片の集積は、特に、細胞破片集積がドルーゼンの形成を導きうる黄斑変性症の背景では望ましくないため、好適である。
【０１３１】
本発明のポリペプチドは、細胞、例えば本明細書に記載するような細胞において、発現されることが可能であってもよい。本発明のポリペプチドは、細胞、例えば本明細書に記載するような細胞によって分泌されることが可能であってもよい。いくつかの態様において、細胞は、本明細書に記載するような、眼の細胞、例えばＲＰＥ細胞である。
【０１３２】
核酸、細胞、組成物およびキット
本発明は、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、核酸は、例えば他の核酸、または天然存在生物学的材料から、精製されるかまたは単離される。いくつかの態様において、核酸（単数または複数）は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含むかまたはこれらからなる。
【０１３３】
本明細書に提供するのは、配列番号２、３、５、６、１３、１４、１５、３０、３１、４０、４２、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３または５４を含むかまたはこれらの配列からなるポリペプチドをコードする核酸配列である。コードされるポリペプチドは、リーダー配列、例えば分泌経路配列を含みまたは含まずに産生されてもよい。コードされるポリペプチドは、リーダー配列とともに産生されてもよく、次いで、リーダー配列は続いて、前記ポリペプチドから除去される。
【０１３４】
いくつかの態様において、本発明記載の核酸は、配列番号３５、３６、３７、３８、３９、４１、４３、および／または４５の１つまたはそれより多く、あるいはコドン縮重により、同じそれぞれのポリペプチドに翻訳されるであろうその同等の核酸配列を含むかまたはこれらの配列からなる。
【０１３５】
本発明はまた、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を含むベクターも提供する。
ヌクレオチド配列は、ベクター、例えば発現ベクター中に含有されてもよい。「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性核酸を輸送するためのビヒクルとして用いられる核酸分子である。ベクターは、細胞における核酸の発現のためのベクターであってもよい。こうしたベクターには、発現しようとする配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれてもよい。ベクターにはまた、終結コドンおよび発現エンハンサーも含まれてもよい。ベクターには、制御要素、例えばポリアデニル化部位が含まれてもよい。当該技術分野に知られる、任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターから、ペプチドまたはポリペプチドを発現してもよい。本明細書記載の核酸配列は、所望の細胞または生物における最適化発現のため、コドン最適化されていてもよい。
【０１３６】
用語「機能可能であるように連結された」には、選択した核酸配列および制御核酸配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、核酸配列の発現を制御配列の影響または調節下に置く（それによって発現カセットを形成する）ように、共有連結されている状況が含まれてもよい。したがって、制御配列は、核酸配列の転写を達成可能である場合、選択した核酸配列に機能可能であるように連結されている。次いで、生じた転写物（単数または複数）を所望のペプチド（単数または複数）／ポリペプチド（単数または複数）に翻訳してもよい。
【０１３７】
本発明記載の核酸および／またはベクターは、好ましくは、細胞、例えばヒト細胞内への導入のために提供される。適切なベクターには、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ，  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ２０１６  ４，  ９に記載されるように、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えばガンマレトロウイルスベクター（例えばネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター、例えば単純ヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターは、ｐＥＬＮＳであってもよいし、またはｐＥＬＮＳに由来してもよい。いくつかの態様において、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をコードするベクターであってもよい。いくつかの態様において、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、ＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１、あるいはそのハイブリッドおよび／または突然変異体より選択される。いくつかの態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ−２）ベクター、あるいはそのハイブリッドおよび／または突然変異体である。遺伝材料を細胞内に導入するためのウイルスおよび非ウイルス送達系は、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｎａｙｅｒｏｓｓａｄａｔら，  Ａｄｖ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ．  ２０１２；  １：  ２７；  ＭａｃＬａｒｅｎら  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２０１６，  １２３（１０  Ｓｕｐｐｌ）：  Ｓ９８−Ｓ１０６；  ＰｅｔｉｔおよびＰｕｎｚｏ，  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｍｅｄ．  ２０１６，  ２２（１２１）：  ２２１−２２９；  Ａｇｕｉｒｒｅ，  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０１７，  ５８（１２）：  ５３９９−５４１１；  Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．  ２０１８，  ６（２）：  ４２に概説される。任意の適切なヌクレオチドまたはベクター送達法を本発明の背景で用いてもよい。
【０１３８】
いくつかの態様において、本発明記載の核酸またはベクター中に含有される核酸の発現は、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｂｅｌｔｒａｎ  ＷＡら  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１０；  １７：１１６２−７４およびＢｏｙｅ  ＳＥら  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１２；  ２３：１１０１−１５に記載されるように、特定の網膜細胞タイプ、例えば桿体、錐体、ＲＰＥ、または神経節細胞における発現を駆動するプロモーターによって駆動される。
【０１３９】
いくつかの態様において、本発明記載の核酸またはベクター中に含有される核酸の発現は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞において、その核酸の発現を駆動するプロモーターによって駆動される。いくつかの態様において、プロモーターは、ＲＰＥ６５またはＶＭＤ２プロモーター、あるいはその修飾型である。いくつかの態様において、プロモーターはニワトリβアクチンプロモーターである。
【０１４０】
いくつかの態様において、ベクターは真核ベクター、例えば真核細胞において、ベクターからタンパク質を発現するために必要な要素を含むベクターであってもよい。いくつかの態様において、ベクターは、例えばタンパク質発現を駆動するサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０プロモーターを含む、哺乳動物ベクターであってもよい。
【０１４１】
いくつかの態様において、ベクターは誘導性プロモーターを含み、すなわち遺伝子発現は、特定の分子の存在下または非存在下でのみ、プロモーターによって活性化される。適切な誘導性プロモーターは、当業者に知られるであろう。誘導性プロモーターの例は、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｌｅら  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００８，  ４９（３）：  １２４８−１２５３およびＭｃＧｅｅ  Ｓａｎｆｔｎｅｒら  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００１．  ３（５）：６８８−６９６に記載される。
【０１４２】
いくつかの態様において、核酸は、配列番号２、３、４、５、６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、３０、３１、４０、４２、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、または５４、あるいは本明細書において上に記載するような配列Ａ、Ｂ、および／またはＣの任意の組み合わせに、少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含むかまたは該配列からなる。
【０１４３】
本発明はまた、本発明記載のポリペプチドを含むかまたは発現する細胞も提供する。やはり提供するのは、本発明記載の核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞である。本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞は、本発明記載のポリペプチドを分泌してもよい。すなわち、細胞によるポリペプチド、核酸またはベクターの発現は、細胞からの本発明記載のポリペプチドの可溶性産生を生じてもよい。
【０１４４】
細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、または非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯目の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。いくつかの態様において、細胞は、ヒト被験体由来であってもよいし、またはヒト被験体から得られていてもよい。
【０１４５】
いくつかの態様において、細胞は目の細胞である。いくつかの態様において、細胞は、神経感覚網膜、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、脈絡膜または黄斑の細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜色素上皮細胞である。いくつかの態様において、細胞は、ヒト網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）である。いくつかの態様において、細胞は光受容体細胞である。
【０１４６】
本発明はまた、本発明記載の核酸またはベクターを含む細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、本発明記載の単離核酸（単数または複数）またはベクター（単数または複数）を細胞内に導入する工程は、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションまたは形質導入（例えばレトロウイルス形質導入）を含む。核酸／ベクターを含む細胞の産生のため、当業者に知られる方法にしたがって、本発明記載の細胞を産生するための方法を実行してもよい。
【０１４７】
本発明はまた、本発明記載のポリペプチドを含むかまたは発現する細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む前記方法も提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に適した条件下で、細胞を培養する工程をさらに含む。いくつかの態様において、方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで実行される。いくつかの態様において、方法はｉｎ  ｖｉｖｏで実行される。
【０１４８】
本発明はまた、本発明記載の方法によって得られるかまたは得られうる細胞も提供する。
本発明はまた、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは細胞を含む組成物も提供する。
【０１４９】
本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞を、臨床使用のための薬学的組成物として配合してもよく、そしてこれらは、薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。
【０１５０】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物を産生するための方法もまた提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するようなポリペプチド、細胞、核酸またはベクターを単離し；そして／または本明細書に記載するようなポリペプチド、細胞、核酸またはベクターを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される、１つまたはそれより多い工程を含んでもよい。
【０１５１】
部分のキットもまた提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定した量の、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、および／または組成物を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。
【０１５２】
キットは、明記する疾患／状態を治療するため、被験体に投与するための使用説明書とともに、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を提供してもよい。注射または注入に適切であるように、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を配合してもよい。いくつかの態様において、静脈内、眼内、網膜下、脈絡膜上または結膜内注射、点眼剤としての投与（すなわち眼適用）または経口投与に適しているように、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を配合してもよい。
【０１５３】
いくつかの態様において、キットは、本発明記載の細胞を産生するための材料を含んでもよい。例えば、キットは、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように、細胞を修飾するための材料、あるいは本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入するための材料を含んでもよい。
【０１５４】
いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えばＡＭＤの治療のための療法剤）を有する少なくとも１つの容器をさらに含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態のための組み合わせた治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与してもよいように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。いくつかの態様において、第二の薬剤または薬学的組成物は、補体因子Ｉを含む。
【０１５５】
ポリペプチド産生
本発明はまた、本発明記載のポリペプチドを産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入し、そして該ポリペプチドの発現に適した条件下で該細胞を培養する工程を含む、前記方法も提供する。ポリペプチドは融合タンパク質であってもよい。ポリペプチドを続いて単離し、そして／または実質的に精製してもよい。
【０１５６】
当業者に知られるポリペプチドの産生のための方法にしたがって、本発明記載のポリペプチドを調製してもよい。
ポリペプチドを、化学合成、例えば液相または固相合成によって、調製してもよい。例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｃｈａｎｄｒｕｄｕら，  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  （２０１３），  １８：  ４３７３−４３８８に記載される方法を用いて、ペプチド／ポリペプチドを合成してもよい。
【０１５７】
あるいは、ポリペプチドを組換え発現によって産生してもよい。ポリペプチドの組換え産生に適した分子生物学技術は当該技術分野に周知であり、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （第４版），  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２に、そしてＮａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  （２００８）；  ５（２）：  １３５−１４６に示されるものがある。
【０１５８】
本発明記載の組換え産生のため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞を用いてもよい。細胞は原核細胞または真核細胞であってもよい。いくつかの態様において、細胞は原核細胞、例えば古細菌または細菌の細胞である。いくつかの態様において、細菌は、グラム陰性細菌、例えば腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）であってもよい。いくつかの態様において、細胞は、真核細胞、例えば、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ、ＨＥＫ（例えばＨＥＫ２９３）、ＨｅＬａまたはＣＯＳ細胞である。
【０１５９】
原核細胞は真核細胞と同じフォールディングまたは翻訳後修飾を可能にしないものがあるため、いくつかの場合、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞においては非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いて、真核細胞からタンパク質をより容易に精製してもよい。タンパク質の培地内への分泌を増進する、特定のプラスミドもまた利用してもよい。
【０１６０】
いくつかの態様において、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｚｅｍｅｌｌａら  Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ  （２０１５）  １６（１７）：  ２４２０−２４３１に記載される系を用いて、細胞不含タンパク質合成（ＣＦＰＳ）によって、ポリペプチドを調製してもよい。
【０１６１】
産生は、関心対象のポリペプチド（単数または複数）を発現するように修飾された真核細胞の培養または発酵を伴ってもよい。栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供して、培養または発酵をバイオリアクター中で行ってもよい。培地／発酵ブロスを細胞から分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして分泌されたポリペプチド（単数または複数）を単離するため、個々のタンパク質を分離することによって、分泌されたタンパク質を収集してもよい。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知であり、そして例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第４版；本明細書において、上記に援用される）に記載される。
【０１６２】
バイオリアクターには、１つまたはそれより多い容器が含まれ、その中で細胞を培養してもよい。バイオリアクター中の培養は、リアクター内への反応物の連続流入およびリアクターからの培養細胞の連続流出を伴って、連続的に行われてもよい。あるいは、培養はバッチで行われてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞にとって最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、流入および流出速度、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして制御する。
【０１６３】
抗原結合分子／ポリペプチド（単数または複数）を発現する細胞の培養後、関心対象のポリペプチド（単数または複数）を単離してもよい。当該技術分野に知られる細胞からタンパク質を分離するために適した任意の方法を用いてもよい。ポリペプチドを単離するため、栄養培地から、細胞を分離することが必要でありうる。ポリペプチド（単数または複数）が細胞から分泌される場合、関心対象の分泌されたポリペプチド（単数または複数）を含有する培地から、遠心分離によって、細胞を分離してもよい。関心対象のポリペプチド（単数または複数）が細胞内で集積する場合、タンパク質単離は、細胞培地から細胞を分離する遠心分離、溶解緩衝液での細胞ペレットの処理、および例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解による細胞破壊を含んでもよい。
【０１６４】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素を含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド（単数または複数）を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からタンパク質構成要素を分離する一般的なアプローチは、沈殿によるものである。異なる溶解度のタンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、沈殿剤が低濃度であると、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質を区別することも可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。
【０１６５】
異なるタンパク質を区別するための他の方法、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィが当該技術分野に知られる。また、ポリペプチド上の分子タグ（例えばＨｉｓ、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグ）に対する適切な結合パートナーを用いて、ポリペプチドをアフィニティ精製してもよい。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０１６６】
いくつかの場合、例えばアミノ酸配列、分子タグ、部分等を除去するため、ポリペプチドをプロセシングすることがさらに望ましい可能性もある。
いくつかの態様において、処理は、アミノ酸配列の切断および除去のための適切なエンドペプチダーゼでの処理である。
【０１６７】
いくつかの態様において、処理は、関心対象の部分を除去する酵素での処理である。いくつかの態様において、例えばペプチド：Ｎ−グリコシダーゼ（ＰＮＧアーゼ）のようなグリコシダーゼでの処理によって、ポリペプチドを処理してグリカンを除去する（すなわちポリペプチドを脱グリコシル化する）。
【０１６８】
関心対象のポリペプチド（単数または複数）が培養から単離されたら、ポリペプチド（単数または複数）を濃縮することが望ましいかまたは必要である可能性もある。限外濾過または凍結乾燥など、タンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られる。
【０１６９】
いくつかの態様において、ポリペプチドの産生は、例えば本発明のポリペプチドをコードする核酸またはベクターを含む細胞を宿主に導入した後、あるいは本発明のポリペプチドをコードする核酸またはベクターを宿主の細胞内に導入した後、ｉｎ  ｖｉｖｏで起こる。こうした態様において、ポリペプチドは転写され、翻訳され、そして成熟ポリペプチドへと翻訳後プロセシングされる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、宿主において所望の位置で、ｉｎ  ｓｉｔｕで産生される。いくつかの態様において、望ましい場所は、眼、例えば網膜、脈絡膜、網膜色素上皮（ＲＰＥ）または黄斑の細胞中である。いくつかの態様において、望ましい場所は、網膜細胞または網膜細胞中である。いくつかの態様において、望ましい場所は、ＲＰＥ細胞またはＲＰＥ細胞中である。
【０１７０】
療法適用
本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物のいずれも、療法および予防的方法において、使用を見出す。
【０１７１】
本発明は、医学的治療または予防の方法において使用するための、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物を提供する。本発明はまた、疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤製造における、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の使用も提供する。本発明はまた、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の療法的または予防的に有効な量を被験体に投与する工程を含む、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法も提供する。
【０１７２】
特に、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物は、補体機能不全、特に過剰活性補体反応に関連する疾患／状態を治療するかまたは防止するために使用を見出す。いくつかの態様において、過剰活性補体反応は、Ｃ３ｂの存在に関連する。いくつかの態様において、治療または防止されるべき疾患／状態は、補体関連疾患である。いくつかの態様において、治療または防止されるべき疾患／状態は、補体活性化と病理的に関連する。いくつかの態様において、治療または防止されるべき疾患／状態は、補体過剰活性化と病理的に関連する。いくつかの態様において、治療または防止されるべき疾患／状態は、補体活性化または過剰活性化によって駆動される。いくつかの態様において、疾患／状態は、補体活性化または過剰活性化である。
【０１７３】
ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物は：Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼ、Ｃ３ｂＢｂ３Ｂ型Ｃ５コンバターゼまたはＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼのレベルの減少；Ｃ３ｂ、Ｃ５ｂまたはＣ５ａのレベルの減少；ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加；あるいはｉＣ３ｂのレベルまたは活性の減少、およびＣ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加の１つまたはそれより多くから利益を得るであろう疾患／状態を治療するかまたは防止するために使用を見出す。
【０１７４】
「治療」は、例えば、疾患／状態の発展または進行の減少、疾患／状態の症状の軽減、あるいは疾患／状態の病理の減少であってもよい。疾患／状態の治療または軽減は、疾患／状態の進行の防止、例えば状態の悪化の防止または発展速度の遅延に有効であってもよい。いくつかの態様において、治療または軽減は、疾患／状態の改善、例えば疾患／状態の症状の減少または疾患／状態の重症度／活性の何らかの他の相関物の減少を導いてもよい。疾患／状態の防止／予防は、状態の悪化の防止または疾患／状態の発展の防止、例えば初期段階の疾患／状態がより後期の慢性段階に発展することの防止を指してもよい。
【０１７５】
いくつかの態様において、治療または防止しようとする疾患または状態は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する疾患／状態、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物であってもよい。すなわち、いくつかの態様において、治療または防止しようとする疾患または状態は、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいは前記活性／反応の産物が病理的に関連する疾患／状態である。いくつかの態様において、疾患／状態は、対照状態と比較した際の、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体のレベル増加、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応のレベル増加、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベル増加に関連してもよい。
【０１７６】
治療は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体のレベル、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。いくつかの態様において、治療は：Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼ、Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５コンバターゼまたはＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼのレベルまたは活性の減少；Ｃ３ｂ、Ｃ５ｂまたはＣ５ａのレベルの減少；ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加、あるいは、ｉＣ３ｂのレベルの減少およびＣ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加を目的とする。
【０１７７】
本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の投与は、Ｃ３ｂの切断を通じて、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベルの減少を引き起こしてもよい。
【０１７８】
いくつかの態様において、治療は、被験体における、例えば特定の位置での、特定の臓器、組織、構造または細胞タイプでの、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。いくつかの態様において、治療は、目における、例えば網膜、脈絡膜、ＲＰＥ、黄斑における、そして／またはＢｒＭ／ＲＰＥ界面での、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。
【０１７９】
いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように、細胞または細胞集団を修飾する工程を含んでもよい。いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチドのｉｎ  ｓｉｔｕ産生のため、ｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞／集団の修飾を含んでもよい。いくつかの態様において、細胞／細胞集団は、眼の単数の細胞／複数の細胞である。いくつかの態様において、細胞／細胞集団は、ＲＰＥ細胞および／またはＲＰＥ細胞集団である。いくつかの態様において、細胞／細胞集団は、光受容体細胞および／または光受容体細胞集団である。
【０１８０】
いくつかの態様において、本発明は、遺伝子治療に使用するための本発明の核酸またはベクターを提供する。いくつかの態様において、治療は、核酸および／またはベクターを被験体に投与する工程を含む。いくつかの態様において、治療は、本明細書に記載するかまたは当該技術分野に周知である技術を用いて、核酸および／またはベクターを被験体の細胞内に導入する工程を含む。例えば、その全体が本明細書に援用される、ＭａｃＬａｒｅｎら  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２０１６，  １２３（１０  Ｓｕｐｐｌ）：  Ｓ９８−Ｓ１０６；  Ａｇｕｉｒｒｅ，  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０１７，  ５８（１２）：  ５３９９−５４１１；  Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．  ２０１８，  ６（２）：  ４２を参照されたい。いくつかの態様において、細胞は、眼の単数または複数の細胞である。いくつかの態様において、細胞は単数または複数のＲＰＥ細胞である。いくつかの態様において、細胞は単数または複数の光受容体細胞である。
【０１８１】
いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように修飾された細胞または細胞集団を、被験体に投与する工程を含んでもよい。いくつかの態様において、治療は、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞／集団の修飾を含んでもよい。
【０１８２】
いくつかの態様において、治療は、例えば本発明記載の細胞を投与することによって、または本発明記載の細胞を生成することによって、本発明のポリペプチドを産生し、そして／または産生するであろう細胞または細胞集団を被験体に提供することを目的とする。
【０１８３】
いくつかの態様において、本明細書で言及する細胞は、目の細胞、すなわち眼細胞である。いくつかの態様において、細胞は、網膜、脈絡膜、網膜色素上皮（ＲＰＥ）または黄斑の細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜細胞である。いくつかの態様において、細胞はＲＰＥ細胞である。いくつかの態様において、細胞は光受容体細胞である。
【０１８４】
本発明は、被験体において疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、少なくとも１つの細胞が、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、前記方法を提供する。いくつかの態様において、少なくとも１つの細胞は眼細胞である。いくつかの態様において、少なくとも１つの細胞はＲＰＥ細胞である。
【０１８５】
本発明にしたがって修飾される少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法にしたがって修飾されてもよい。修飾は、トランスファーされた核酸の永続的または一過性の発現のための核酸トランスファーを含んでもよい。任意の適切な遺伝子操作プラットホームを用いて、本発明にしたがって細胞を修飾してもよい。細胞を修飾するために適した方法には、遺伝子操作プラットホーム、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションの使用が含まれ、例えば、本明細書の上記に援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５に記載される通りである。
【０１８６】
治療すべき被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は、治療が必要な疾患または状態を持つと診断されたか、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０１８７】
治療すべき被験体は、例えば、適切なアッセイを用いた、被験体、または被験体から得た試料（例えば細胞、組織、血液試料）の分析によって決定した際に、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物のレベル上昇を示してもよい。
【０１８８】
被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の陽性制御因子／エフェクターの発現または活性のレベルの増加を有してもよいし、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物の発現または活性のレベルの増加を有してもよい。被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって上方制御される活性のレベルの増加を有してもよい。
【０１８９】
被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の陰性制御因子の発現または活性のレベルの減少を有してもよいし、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって下方制御される因子の発現または活性のレベルの減少を有してもよい。被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって下方制御される活性のレベルの減少を有してもよい。
【０１９０】
増加／減少は、関連する疾患／状態の非存在下での発現／活性のレベル、例えば健康な対照被験体または健康な対照被験体から得た試料における発現／活性のレベルに対するものであってもよい。
【０１９１】
いくつかの態様において、被験体は、疾患または状態を発展させる／これらに罹患するリスクを有してもよい。いくつかの態様において、被験体は、疾患または状態を発展させる／これらに罹患するリスクを増加させる、１つまたはそれより多い素因要因を所持してもよい。
【０１９２】
いくつかの態様において、被験体は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）の１つまたはそれより多いリスク要因を所持してもよい。いくつかの態様において、被験体は、ＡＭＤ関連遺伝子変異体を１つまたはそれより多く所持してもよい。ＡＭＤ関連遺伝子変異体は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｃｌａｒｋら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  （２０１５）  ４（１）：１８−３１に記載される。いくつかの態様において、被験体は、以下のＡＭＤ関連遺伝子変異体（またはこうした変異体とＬＤ＝ｒ２≧０．８を有する変異体）の１つまたはそれより多くを所持してもよい：ＣＦＨにおけるＹ４０２Ｈ（すなわちｒｓ１０６１１７０Ｃ）、ｒｓ１４１０９９６Ｃ、ＣＦＨにおけるＩ６２Ｖ、ＣＦＨにおけるＲ５３Ｃ、ＣＦＨにおけるＤ９０Ｇ、ＣＦＨにおけるＲ１２１０Ｃ、またはＣＦＨＲ４におけるｒｓ６６８５９３１Ｔ。
【０１９３】
いくつかの態様において、被験体は、早発性黄斑変性症（ＥＯＭＤ）に関する１つまたはそれより多いリスク要因を所持してもよい。ＥＯＭＤは、ＣＦＨ遺伝子の稀な変異体の一遺伝子性遺伝によって引き起こされると考えられる（例えば、Ｂｏｏｎ  ＣＪら  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ２００８；  ８２（２）：５１６−２３；  ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｎ  ＪＰら  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０１２；１３０（８）：１０３８−４７；  Ｙｕ  Ｙら  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ２０１４；  ２３（１９）：５２８３−９３；  Ｄｕｖｖａｒｉ  ＭＲら  Ｍｏｌ  Ｖｉｓ  ２０１５；  ２１：２８５−９２；  Ｈｕｇｈｅｓ  ＡＥら  Ａｃｔａ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０１６；  ９４（３）：ｅ２４７−８；  Ｗａｇｎｅｒら  Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ２０１６；６：３１５３１を参照されたい）。いくつかの態様において、被験体は、ＥＯＭＤ関連遺伝子変異体の１つまたはそれより多くを所持してもよい。ＥＯＭＤ関連遺伝子変異体は、例えばＳｅｒｖａｉｓ  Ａら  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ，  ２０１２；  ８２（４）：４５４−６４およびＤｒａｇｏｎ−Ｄｕｒｅｙ  ＭＡら  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ２００４；  １５（３）：７８７−９５に記載され；該文献は、その全体が本明細書に援用される。いくつかの態様において、被験体は、以下のＥＯＭＤ関連遺伝子変異体の１つまたはそれより多くを所持してもよい：  ＣＦＨ  ｃ．１２４３ｄｅｌ、ｐ．（Ａｌａ４１５Ｐｒｏｆｓ＊３９）  ｈｅｔ；  ＣＦＨ  ｃ．３５０＋１Ｇ＞Ｔ  ｈｅｔ；  ＣＦＨ  ｃ．６１９＋１Ｇ＞Ａ  ｈｅｔ；  ＣＦＨ  ｃ．３８０Ｇ＞Ａ、ｐ．（Ａｒｇ１２７Ｈｉｓ）；  ＣＦＨ  ｃ．６９４Ｃ＞Ｔ、ｐ．（Ａｒｇ２３２Ｔｅｒ）；またはＣＦＨ  ｃ．１２９１Ｔ＞Ａ、ｐ．（Ｃｙｓ４３１Ｓｅｒ）。
【０１９４】
いくつかの態様において、被験体は、ＡＭＤおよび／またはＥＯＭＤに関する１つまたはそれより多いリスク要因、例えば１つまたはそれより多いＡＭＤ／ＥＯＭＤ関連遺伝子変異体を所持すると決定されたことに基づいて、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物での療法的または予防的治療に関して選択される。いくつかの態様において、被験体は、１つまたはそれより多いこうしたリスク要因を有すると決定されている。いくつかの態様において、本発明の方法は、被験体が、１つまたはそれより多いこうしたリスク要因を所持するかどうかを決定する工程を含む。
【０１９５】
いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、眼の疾患／状態であってもよい。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、補体関連眼疾患である。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、黄斑変性症である。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）である。ＡＭＤは、５０歳またはそれより高齢の被験体において失明を引き起こすと一般に定義される。
【０１９６】
いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、初期ＡＭＤ、中間期ＡＭＤ、後期ＡＭＤ、地図状萎縮（「乾性」（すなわち非滲出性）ＡＭＤ）、「湿性」（血管新生または滲出性）ＡＭＤ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、緑内障、自己免疫ブドウ膜炎、および糖尿病性網膜症より選択されてもよい。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、ＡＭＤである。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、地図状萎縮（「乾性」ＡＭＤ）である。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、「湿性」ＡＭＤである。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、上記の疾患／状態の組み合わせ、例えば「乾性」および「湿性」ＡＭＤである。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、「湿性」ＡＭＤまたは脈絡膜血管新生ではない。いくつかの態様において、治療すべき被験体は５０歳またはそれより高齢であり、すなわち少なくとも５０歳である。
【０１９７】
本明細書において、「初期ＡＭＤ」は、ＲＰＥ層に隣接するブルッフ膜内の、一般的には〜２００μｍまでの幅を有する中程度の大きさのドルーゼンの存在によって特徴づけられるＡＭＤの段階を指す。初期ＡＭＤを有する被験体は、典型的には、有意な視力喪失を示さない。本明細書において、「中間期ＡＭＤ」は、大きなドルーゼンおよび／または網膜中の色素変化によって特徴づけられるＡＭＤの段階を指す。中間期ＡＭＤは、ある程度の視力喪失を伴いうる。本明細書において、「後期ＡＭＤ」は、ドルーゼンの存在および黄斑への損傷による視力喪失によって特徴づけられるＡＭＤの段階を指す。ＡＭＤのすべての病期で、神経感覚網膜およびＲＰＥの間の網膜下空間における細胞外物質の集積を指す、「網状偽ドルーゼン（ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｐｓｅｕｄｏｄｒｕｓｅｎ）」（ＲＰＤ）または「網状ドルーゼン」が存在する可能性もある。「後期ＡＭＤ」は、「乾性」および「湿性」ＡＭＤを含む。「乾性」ＡＭＤ（地図状萎縮としてもまた知られる）において、視覚情報を脳に運ぶ黄斑中の光感受性細胞の、および黄斑下の支持組織の漸進的破壊がある。「湿性」ＡＭＤ（脈絡膜血管新生および滲出性ＡＭＤとしてもまた知られる）において、異常な血管が網膜の下で、そして網膜内に増殖する。これらの血管は、液体および血液を漏出させる可能性もあり、これが黄斑の膨張および損傷を導き、そして続いて瘢痕形成を導きうる。損傷は、迅速で、そして重度でありうる。
【０１９８】
いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、早発性黄斑変性症（ＥＯＭＤ）である。本明細書において、「ＥＯＭＤ」は、古典的ＡＭＤよりもはるかに若い年齢で生じ、そしてさらに何年も経って実質的な視力喪失を生じる、黄斑変性の表現型的に重度のサブタイプを指す。ＥＯＭＤサブセットは、例えば、Ｂｏｏｎ  ＣＪら  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ２００８；  ８２（２）：５１６−２３およびｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｎ  ＪＰら  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２０１２；１３０（８）：１０３８−４７に記載される。いくつかの態様において、治療すべき被験体は４９歳またはそれ未満である。いくつかの態様において、治療すべき被験体は、年齢１５〜４９歳の間であり、すなわち１５〜４９歳の間である。
【０１９９】
いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、補体過剰活性化によって駆動される疾患／状態である。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、非典型的溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ  ＩＩ）、敗血症、および発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）より選択されてもよい。
【０２００】
医学的治療法はまた、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を用いるものを含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、および養子免疫療法を伴ってもよい。
本明細書記載のポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に対して利益を示すために十分なものである。投与する実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量に関する決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療すべき状態、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因を考慮する。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０２０１】
本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞は、臨床的使用のための薬学的組成物または薬剤として配合されてもよく、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。組成物は、注射または注入、あるいは点眼剤としての投与（すなわち眼適用）を含んでもよい、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋内、クモ膜下腔内、眼内、結膜内、網膜下、脈絡膜上、皮下、皮内、クモ膜下腔内、経口または経皮投与経路のために配合されてもよい。適切な配合物は、無菌または等張媒体中に、ポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞を含んでもよい。薬剤および薬学的組成物は、ゲルを含む液体型で配合されてもよい。液体配合物は、ヒトまたは動物の体の選択した臓器または領域への注射または注入（例えばカテーテルを通じたもの）による投与のために配合されてもよい。いくつかの態様において、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物を、例えば硝子体内注射による、硝子体内投与経路のために配合する。いくつかの態様において、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物を、黄斑下送達、すなわちターゲット細胞層との直接接触下に療法分子を置くために配合する。
【０２０２】
投与の特定の様式および／または部位は、Ｃ３ｂ不活性化が望ましい位置にしたがって選択されてもよい。いくつかの態様において、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、または薬学的組成物を、目において、光受容体細胞および網膜色素上皮（ＲＰＥ）の間の網膜下空間内への投与のために配合し、そして／またはこうした空間内に投与する。いくつかの態様において、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、または薬学的組成物を網膜色素上皮（ＲＰＥ）内への投与のために配合し、そして／またはＲＰＥ内に投与する。
【０２０３】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のための方法もまた提供され、こうした産生法は：本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞の単離；および／または本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞と、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤との混合より選択される１つまたはそれより多い工程を含んでもよい。
【０２０４】
例えば、本発明のさらなる側面は、医学的治療の方法において使用するための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞と、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤を混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む、前記方法に関する。
【０２０５】
投与は、単独であってもよいし、あるいは治療すべき状態に応じて、同時または連続的のいずれかで、他の治療（例えば他の療法的または予防的介入）と組み合わされてもよい。本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、および療法剤を、同時にまたは連続して投与してもよい。
【０２０６】
同時投与は、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、および療法剤の、一緒の、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）としての、または互いの直後の、そして随意に、同じ投与経路を通じた、例えば同じ組織、動脈、静脈、または他の血管への投与を指す。連続投与は、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、あるいは療法剤の一方の投与に続く、所定の時間間隔後の、他方の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路によって投与される必要はないが、いくつかの態様においてはこれが当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。いくつかの態様において、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、および療法剤を、目に、別個に、同時に、または連続して投与する。
【０２０７】
いくつかの態様において、他の治療／療法剤は、補体因子Ｉの療法的に有効な量である。いくつかの態様において、補体因子Ｉを、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の投与と同時にまたは連続して、被験体に投与する。いくつかの態様において、治療は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、細胞または細胞集団が補体因子Ｉを発現し、そして／または分泌するように、細胞または細胞集団を修飾する工程を含んでもよい。細胞または細胞集団は、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように修飾された細胞または細胞集団と、同じ細胞または細胞集団であってもよく、例えば、治療は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、細胞または細胞集団が、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクター、および補体因子Ｉを発現し、そして／または分泌するように、細胞または細胞集団を修飾する工程を含んでもよい。いくつかの態様において、補体因子Ｉを被験体に投与し、ここで、被験体は、本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように修飾された細胞または細胞集団を含む。いくつかの態様において、補体因子Ｉを被験体に投与し、ここで、被験体は、ｉｎ  ｓｉｔｕで本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを発現していたか、またはｉｎ  ｓｉｔｕで発現中である。
【０２０８】
補体因子Ｉまたは補体因子Ｉを含む組成物は、注射または注入、あるいは点眼剤としての投与（すなわち眼適用）を含んでもよい、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、硝子体内、動脈内、筋内、クモ膜下腔内、眼内、結膜内、網膜下、脈絡膜上、皮下、皮内、クモ膜下腔内、経口または経皮投与経路のために配合されてもよい。適切な配合物は、無菌または等張媒体を含んでもよい。薬剤および薬学的組成物は、ゲルを含む液体型で配合されてもよい。液体配合物は、ヒトまたは動物の体の選択した臓器または領域への注射または注入（例えばカテーテルを通じたもの）による投与のために配合されてもよい。
【０２０９】
いくつかの態様において、他の治療／療法剤は、療法的に有効な量の抗ＶＥＧＦ療法（例えばラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ；  Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ベバシズマブ（認可外Ａｖａｓｔｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、アフィルベルセプト（Ｅｙｌｅａ／ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ−Ｅｙｅ；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ｂａｙｅｒ））、ペガプタニブ（Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標））、レーザー光凝集、または光力学療法（ＰＤＴ）、例えばＶｉｓｕｄｙｎｅＴＭ（ベルテポルフィン）を用いるものの療法的有効量である。
【０２１０】
ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の多数の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多く、あるいは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随してもよい。
【０２１１】
多数の用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分離されていてもよく、これらは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５、または６か月の１つより選択されてもよい。例えば、用量は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）ごとに１回投与されてもよい。
【０２１２】
本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは組成物を、あらかじめ決定した速度で、ポリペプチド、核酸、ベクターまたは組成物を放出するために、持続放出送達系に配合してもよい。持続放出送達系は、明記される期間、一定の薬剤／療法剤濃度を維持してもよい。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは組成物を、リポソーム、ゲル、移植物、デバイス、または薬剤−ポリマーコンジュゲート、例えばヒドロゲルに配合する。
【０２１３】
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）における遺伝的要因
補体因子Ｈ（ＣＦＨ遺伝子によってコードされる）は、補体因子Ｉに関する別の補因子である。補体因子Ｈ構造および機能は、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｗｕら，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００９）  １０（７）：  ７２８−７３３に概説される。ヒト補体因子Ｈ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３；配列番号２９）は、１，２３３アミノ酸配列（Ｎ末端の１８アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして２０の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインを含む。補体因子Ｈの最初の４つのＣＣＰドメイン（すなわちＣＣＰ１〜ＣＣＰ４）は、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂに切断するための補体因子Ｉ補因子活性に必要である。ＣＣＰ  １９〜２０もまた、Ｃ３ｂおよびＣ３ｄと会合することが示されてきている（Ｍｏｒｇａｎら，  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１１）  １８（４）：４６３−４７０）一方、ＣＣＰ７およびＣＣＰ  １９〜２０は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）およびシアル酸と結合し、そして自己および非自己の間の区別に関与する（Ｓｃｈｍｉｄｔら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００８）  １８１（４）：２６１０−２６１９；  Ｋａｊａｎｄｅｒら，  ＰＮＡＳ  （２０１１）  １０８（７）：２８９７−２９０２）。
【０２１４】
ＡＭＤを発展させる遺伝的リスクに関連する主なＳＮＰの１つは、ＣＦＨ遺伝子中に見られ、そして補体因子ＨにおけるＹ４０２Ｈ多型（例えば、Ｈａｉｎｅｓら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （２００５）  ３０８：４１９−２１を参照されたい）、およびその選択的スプライス変異体因子Ｈ様タンパク質１（ＦＨＬ−１）を導く。白人欧州遺伝形質の個体のおよそ３０％は、この多型を少なくとも１コピー有する一方、ヘテロ接合体であると、ＡＭＤのリスクは〜３倍増加する（Ｓｏｆａｔら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  （２０１２）  ４１：２５０−２６２）。第七の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインに現れるＹ４０２Ｈ多型は、ＢｒＭへのＦＨ／ＦＨＬ−１の結合を減少させて、これらの血液由来補体制御因子の結合の妨害、およびこの表面上での補体制御の減衰を導く（Ｃｌａｒｋら，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  （２０１０）  ２８５：３０１９２−２０２）。
【０２１５】
ＢｒＭへのＦＨ／ＦＨＬ−１の結合は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヘパラン硫酸（ＨＳ）およびデルマタン硫酸（ＤＳ）を含む、硫酸化糖によって仲介される。ＢｒＭに見られるＧＡＧ配列のファミリーは、そのＣＣＰ７ドメインを通じて、そしてＣＣＰ  １９〜２０に見られるＦＨの二次係留部位は通じずに、ＦＨ／ＦＨＬ−１を補充可能であるため、以前考えられていたよりも、高い組織特異性を有するようである（Ｃｌａｒｋら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１３）  １９０：２０４９−２０５７）。ＢｒＭ内の補体の主な制御因子は、一部切除ＦＨＬ−１タンパク質であり（Ｃｌａｒｋら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  １９３，  ４９６２−４９７０）、これはＣＣＰ７に１つの表面係留部位を持つのみであり、そしてＣＣＰ  １９〜２０を欠くことが発見されてきているため、これは進化のねじれである可能性がある。対照的に、Ｙ４０２Ｈ多型は、ＦＨのＣＣＰ  １９〜２０ドメインが主なＧＡＧ仲介性係留部位であることが知られる腎臓疾患とは関連しない（Ｃｌａｒｋら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１３）  １９０：２０４９−２０５７）。それ自体、正常な加齢プロセスの一部と見なされる、ＨＳおよびＤＳのＢｒＭ発現レベルにおける加齢性の変化もまた、ＡＭＤに関連付けられてきており、そして遺伝的に駆動されるＡＭＤの加齢性の性質をある程度説明することも可能である。
【０２１６】
ＢｒＭに結合しないＦＨのＣ末端ＣＣＰ  １９〜２０領域中の稀な突然変異（Ｒ１２１０Ｃ）は、ＡＭＤと非常に高レベルの関連を有し、そしてこの突然変異を所持するＦＨタンパク質は、アルブミンに共有結合し（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃｏｒｒａｌら，  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  （２００２）  ７１：１２８５−１２９５）、ＦＨタンパク質が循環を離れて、そして眼組織に入ることを防止することが見出されている。いくつかの研究によって、地図状萎縮およびＲＰＥにおける関連する色素変化に先立つ、大きな融合性のドルーゼンは、ＲＰＥの機能不全から、乾性ＡＭＤがまず生じ、脈絡膜内の二次的影響が伴うことを示すと示唆される（ＢｈｕｔｔｏおよびＬｕｔｔｙ  Ｍｏｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ  （２０１２）  ３３：２９５−３１７）。対照的に、Ｗｈｉｔｍｏｒｅらは、終末補体膜攻撃複合体（ＭＡＣ）の沈着を含む、後期段階ＡＭＤのすべての型に先行する脈絡毛細管の変化を報告し、そして脈絡毛細管における過剰補体活性化が一次事象であり、ＲＰＥ萎縮が二次事象であると論じる（Ｗｈｉｔｍｏｒｅら，  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  （２０１５）  ４５：１−２９）。これらのデータは、補体遺伝子の改変によって与えられる遺伝的素因が、ＢｒＭおよび根底にある脈絡毛細管両方の変化が表面化するまで、許容されることを暗示する。これらの変化が、酸化ストレスによって駆動される加齢性のものであるか、またはＲＰＥ細胞機能不全の結果であるかどうかは不明なままであるが、これらの構造における天然存在変化は、加齢性であることが知られている。
【０２１７】
Ｃ３およびＣ３ｂ
補体構成要素３（Ｃ３）は、自然免疫および補体系において、中心的な役割を有する免疫系タンパク質である。Ｃ３のプロセシングは、例えば、その全体が本明細書に援用されるＦｏｌｅｙら  Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  （２０１５）  １３：６１０−６１８に記載される。ヒトＣ３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１０２４；配列番号１８）は、１，６６３アミノ酸配列（Ｎ末端の２２アミノ酸シグナルペプチドを含む）を含む。アミノ酸２３〜６６７はＣ３  β鎖（配列番号１９）をコードし、そしてアミノ酸７４９〜１，６６３はＣ３  α’鎖（配列番号２０）をコードする。Ｃ３  β鎖およびＣ３  α’鎖は、鎖間ジスルフィド結合（Ｃ３  β鎖のシステイン５５９、およびＣ３  α’鎖のシステイン８１６の間に形成される）を通じて会合し、Ｃ３ｂを形成する。Ｃ３ａは、Ｃ３のアミノ酸６７２〜７４８位に対応する７７アミノ酸断片（配列番号２１）であり、古典的補体経路およびレクチン経路を通じた活性化後、Ｃ３のタンパク質分解的切断によって生成される。
【０２１８】
Ｃ３ｂは、食細胞およびＮＫ細胞による食作用のため、病原体を、抗体−抗原免疫複合体およびアポトーシス細胞にターゲティングする、強力なオプソニンである。Ｃ３ｂはまた、補体反応を活性化し、そして増幅するためのコンバターゼ酵素複合体の形成にも関与する。Ｃ３ｂは因子Ｂと会合して、Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３コンバターゼを形成し（代替補体経路）、そしてＣ４ｂおよびＣ２ａと会合してＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５コンバターゼを形成する（古典的経路）か、またはＣ３ｂＢｂと会合してＣ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５コンバターゼを形成する（代替経路）ことも可能である。
【０２１９】
タンパク質分解的に不活性であり、そしてそれ自体、さらなる補体増幅を促進不能であるｉＣ３ｂへのＣ３ｂのプロセシングは、α’鎖断片１（Ｃ３のアミノ酸６７２〜７４８位に対応する；配列番号２２）およびα’鎖断片２（Ｃ３のアミノ酸１３２１〜１，６６３位に対応する；配列番号２３）を形成する、アミノ酸１３０３および１３２０位でのＣ３ｂ  α’鎖のタンパク質分解的切断を伴う。したがって、ｉＣ３ｂは、Ｃ３  β鎖、Ｃ３  α’鎖断片１およびＣ３  α’鎖断片２（ジスルフィド結合を通じて会合する）を含む。α’鎖の切断はまた、Ｃ３ｆも遊離させ、これはＣ３のアミノ酸１３０４〜１３２０位に対応する（配列番号２４）。
【０２２０】
本明細書において、「Ｃ３」は、任意の種由来のＣ３を指し、そして任意の種由来のＣ３のアイソフォーム、断片、変異体または相同体を含む。いくつかの態様において、Ｃ３は、哺乳動物Ｃ３（例えばカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）Ｃ３）である。Ｃ３のアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種由来の未成熟または成熟Ｃ３、例えばヒトＣ３（配列番号１８）のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有すると特徴づけられてもよい。
【０２２１】
本明細書において、「Ｃ３ｂ」は、任意の種由来のＣ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体を指し、そしてこれらを含む。いくつかの態様において、Ｃ３ｂは、哺乳動物Ｃ３ｂ（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）Ｃ３ｂ）である。
【０２２２】
Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種、例えばヒト由来のそれぞれのポリペプチドのアミノ酸配列に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３  α’鎖断片１、Ｃ３  α’鎖断片２およびＣ３  βを含むと特徴づけられてもよい。すなわち、Ｃ３ｂは：配列番号２２に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３  α’鎖断片１；配列番号２３に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３  α’鎖断片２；および配列番号１９に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３  β鎖を含んでもよい。
【０２２３】
Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、例えば、機能的特性／活性に関する適切なアッセイによる分析によって決定した際、参照Ｃ３ｂの機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、変異体または相同体であってもよい。例えば、Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、オプソニンとして作用する能力、および／または機能的Ｃ３／Ｃ５コンバターゼを形成する能力によって特徴づけられてもよい。
【０２２４】
補体因子Ｉ
Ｃ３ｂからｉＣ３ｂへのプロセシングは、補体因子Ｉ（ヒトにおいては遺伝子ＣＦＩによってコードされる）によって行われる。ヒト補体因子Ｉ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０５１５６；配列番号２５）は、５８３アミノ酸配列（Ｎ末端の１８アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有する。前駆体ポリペプチドは、フューリンによって切断されて、鎖間ジスルフィド結合によって連結された重鎖（アミノ酸１９〜３３５）および軽鎖（アミノ酸３４０〜５８３）を含む、成熟補体因子Ｉを生じる。軽鎖のアミノ酸３４０〜５７４は、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメイン（配列番号２６）をコードし、該ドメインは、Ｃ３ｂを切断してｉＣ３ｂを産生する際に関与する、触媒三連構造を含有するセリンプロテアーゼである（Ｅｋｄａｈｌら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （１９９０）  １４４  （１１）：４２６９−７４）。
【０２２５】
本明細書において、「補体因子Ｉ（ＦＩ）」は、任意の種由来の補体因子Ｉを指し、そして任意の種由来の補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体を含む。いくつかの態様において、補体因子Ｉは、哺乳動物補体因子Ｉ（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）補体因子Ｉ）である。
【０２２６】
補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種由来の未成熟または成熟補体因子Ｉ、例えばヒト補体因子Ｉ（配列番号２５）のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有すると特徴づけられてもよい。補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、例えば、機能的特性／活性に関する適切なアッセイによる分析によって決定した際、参照補体因子Ｉ（例えば全長ヒト補体因子Ｉ）の機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、変異体または相同体であってもよい。例えば、補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、セリンプロテアーゼ活性を示してもよく、そして／またはＣ３ｂを不活性化することが可能であってもよい。
【０２２７】
ｉＣ３ｂを生じる、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断は、補体因子Ｉに関する補因子によって促進される。補体因子Ｉに関する補因子は、典型的にはＣ３ｂおよび／または補体因子Ｉに結合し、そして補体因子ＩによるＣ３ｂのｉＣ３ｂへのプロセシングを増強する。
【０２２８】
補体受容体１
補体受容体１（ＣＲ１）は、補体因子Ｉに関する補因子として作用し、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂおよび下流産物への切断を可能にする。
【０２２９】
ｉＣ３ｂは、補体系を増幅もまた活性化もしないが、なお、食作用のために病原体をターゲティングするオプソニンとして作用しうる。ｉＣ３ｂ産生は、したがって、局所免疫系活性化および炎症効果を生じる。これは、補体関連疾患罹患患者に負の結果を有する可能性もあり、そして存在する補体関連疾患／状態の発展または悪化に寄与しうる。
【０２３０】
因子Ｈ（ＦＨ）および一部切除ＦＨアイソフォームＦＨＬ−１は、ＦＩに関する補因子として作用してｉＣ３ｂを産生するが、これらは、ｉＣ３ｂのさらなる分解を促進することは不可能であり、望ましくないｉＣ３ｂ集積を導きうる。さらに、ｉＣ３ｂの集積は、罹患領域におけるさらなる破片に寄与する可能性もあり、例えば、黄斑変性症において、ドルーゼンの（さらなる）発展を導きうる。
【０２３１】
対照的に、ＣＲ１および本発明記載のポリペプチドは、例えば図２、３Ｂ、７Ａで見られるように、ＦＩと組み合わせて作用し、ｉＣ３ｂの好適な下流産物、例えばＣ３ｃ、Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｂへのさらなる分解を促進してもよい。これらの分子はオプソニンではなく、そしてしたがって、免疫系構成要素の補充を回避する。罹患領域におけるこれらの存在は、ｉＣ３ｂ集積に好ましい。
【０２３２】
本明細書において、「補体受容体１（ＣＲ１）」は、任意の種由来のＣＲ１を指し、そしてこれには任意の種由来のＣＲ１のアイソフォーム、断片、変異体または相同体が含まれる。いくつかの態様において、ＣＲ１は、哺乳動物ＣＲ１（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）ＣＲ１）である。
【０２３３】
本発明の側面および態様は、付随する図に言及しながら、例としてここで例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書は、本明細書に援用される。
【０２３４】
本発明には、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明白に回避される場合を除いて、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれる。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のためのみであり、そして記載する主題を限定するとは見なされないものとする。
【０２３５】
適切であるように、特定の型で、あるいは開示する機能を実行するための手段、または開示する結果を得るための方法もしくはプロセスに関して表現される、前述の説明、または以下の請求項、または付随する図に開示する特徴は、別個に、またはこうした特徴の任意の組み合わせで、その多様な型で、本発明を実現するために利用されてもよい。
【０２３６】
本発明は、上記の例示的な態様と組み合わせて記載されてきているが、当業者には、本開示が提供された際、多くの同等の修飾および変動が明らかであろう。したがって、上に示す本発明の例示的態様は、例示的であり、そして限定しないと見なされる。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、記載する態様に対する多様な改変を行ってもよい。
【０２３７】
いかなる疑義も回避するため、本明細書に提供するいかなる理論的説明も、読者の理解を改善する目的のために提供される。本発明者らは、これらの理論的説明のいずれにも束縛されることは望まない。
【０２３８】
以下に続く請求項を含めて、本明細書全体で、文脈が別に必要としない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程の群の包含を示すが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程の群の排除も示さないことが理解されるであろう。
【０２３９】
明細書および付随する請求項で用いた際、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈が明らかに別に示さない限り、複数の参照対象が含まれることに注目しなければならない。本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして範囲が示されうる。こうした範囲が示された場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／またはもう一方の特定の値までが含まれる。同様に、先行詞「約」の使用によって、値が近似値として示された際、特定の値は別の態様を形成することが理解されるであろう。
【０２４０】
核酸配列が開示される場合、その逆相補体もまた、明らかに意図される。
以下の番号付けされた段落は、本発明の特定の側面および態様を記載する：
１．  配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドであって、７００アミノ酸またはそれより短い長さを有する、前記ポリペプチド。
【０２４１】
２．  ５０〜７００アミノ酸の長さを有する、段落１記載のポリペプチド。
３．  Ｘ１がＡまたはＴであり、Ｘ２がＰまたはＬであり、そして／またはＸ３がＧまたはＲである、段落１または２記載のポリペプチド。
【０２４２】
４．  配列番号２、配列番号３または配列番号１３を含む、段落１〜３のいずれか一項記載のポリペプチド。
５．  配列番号２、配列番号３、または配列番号１３からなる、段落１〜４のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４３】
６．  Ｃ３ｂに結合可能である、段落１〜５のいずれか一項記載のポリペプチド。
７．  補体因子Ｉに関する補因子によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、段落１〜６のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４４】
８．  補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域中でＣ３ｂに結合する、段落１〜７のいずれか一項記載のポリペプチド。
９．  補体因子Ｉに関する補因子として作用する、段落１〜８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４５】
１０．  ブルッフ膜（ＢｒＭ）を超えて拡散可能である、段落１〜９のいずれか一項記載のポリペプチド。
１１．  グリコシル化されていないかまたは部分的にグリコシル化されている、段落１〜１０のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４６】
１２．  アミノ酸配列が、５０９、５７８、９５９および／または１０２８位（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７にしたがった番号付け）で、１つまたはそれより多いアミノ酸置換を含む、段落１〜１１のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４７】
１３．  １つまたはそれより多いアミノ酸置換が、Ｎ５０９Ｑ、Ｎ５７８Ｑ、Ｎ９５９Ｑおよび／またはＮ１０２８Ｑ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７にしたがった番号付け）より選択される、段落１２記載のポリペプチド。
【０２４８】
１４．  配列番号５、配列番号６、および／または配列番号１５を含むかまたは該配列からなる、段落１〜１３のいずれか一項記載のポリペプチド。
１５．  分泌経路配列をさらに含む、段落１〜１４のいずれか一項記載のポリペプチド。
【０２４９】
１６．  分泌経路配列が配列番号７を含む、段落１５記載のポリペプチド。
１７．  分泌経路配列を除去するための切断部位をさらに含む、段落１５または段落１６記載のポリペプチド。
【０２５０】
１８．  段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする、核酸。
１９．  段落１８の核酸を含む、ベクター。
２０．  段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、または段落１９記載のベクターを含む、細胞。
【０２５１】
２１．  段落１８記載の核酸または段落１９記載のベクターを細胞内に導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で細胞を培養する工程を含む、ポリペプチドを産生するための方法。
【０２５２】
２２．  段落２１記載の方法によって得られるかまたは得られうる、細胞。
２３．  段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、段落１９記載のベクター、あるいは段落２０または２２記載の細胞を含み、随意に、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【０２５３】
２４．  疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、段落１９記載のベクター、段落２０または２２記載の細胞、あるいは段落２３記載の薬学的組成物。
【０２５４】
２５．  疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬剤の製造における、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、段落１９記載のベクター、段落２０または２２記載の細胞、あるいは段落２３記載の薬学的組成物の使用。
【０２５５】
２６．  被験体に、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、段落１９記載のベクター、段落２０または２２記載の細胞、あるいは段落２３記載の薬学的組成物を投与する工程を含む、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法。
【０２５６】
２７．  被験体の少なくとも１つの細胞が、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、または段落１９記載のベクターを発現するか含むように修飾する工程を含む、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法。
【０２５７】
２８．  疾患または状態が、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理的に関与している疾患または状態である、段落２４記載の使用のためのポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物、段落２５記載の使用、あるいは段落２６または段落２７記載の方法。
【０２５８】
２９．  疾患または状態が、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）である、段落２４〜２８のいずれか一項記載の、使用のためのポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物、使用、あるいは方法。
【０２５９】
３０．  疾患または状態を治療するかまたは防止するための方法が、被験体の少なくとも１つの網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、または段落１９記載のベクターを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、段落２４〜２９のいずれか一項記載の、使用のためのポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物、使用、あるいは方法。
【０２６０】
３１．  あらかじめ決定された量の、段落１〜１７のいずれか一項記載のポリペプチド、段落１８記載の核酸、段落１９記載のベクター、段落２０または段落２２記載の細胞、あるいは段落２３記載の薬学的組成物を含む、部分のキット。
【実施例】
【０２６１】
以下の実施例（単数または複数）において、本発明者らは、補体受容体１のＣ３ｂ結合補因子領域を含む、組換えＣＲ１タンパク質の設計を記載する。やはり記載するのは、これらのタンパク質がヒト細胞によって発現され、ヒト・ドナーの眼から濃縮されたブルッフ膜を通じて拡散し、そして制御活性を与える、すなわちＣ３ｂからｉＣ３ｂおよびさらなる分解産物へのＦＩ仲介性分解を促進する能力である。
【０２６２】
実施例１
配列番号２および５に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ挿入物を、組換えＤＮＡ技術によって調製し、そしてベクター内にクローニングして、ＣＲ１ペプチドの組換え発現のために構築物を生成した。アミノ酸配列およびその特徴を以下に示す：
【０２６３】
【化１】
2021511030.tif 000016
【０２６４】
１８アミノ酸シグナルペプチドは、分泌に際して、ポリペプチドから切断されるように設計される。
いくつかの実験において、それぞれ、配列番号４０および２１に示すように、ＨＩＳタグ化ＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａを用いた。
【０２６５】
ヒト細胞からのタンパク質の発現
ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞（プレートあたり７ｘ１０６細胞）を、１５ｃｍ培養プレートにおいて、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｆ９６６５）を補充した、高グルコースを含む１７ｍｌのダルベッコの修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ４６９）中、５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で一晩増殖させた。細胞が６０％集密に到達したら、これらを、８６．４μｌの７．５ｍＭポリエチレンイミン（ＰＥＩ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２４７６５−２）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵＫ  Ｌｔｄ、カタログ番号１０７３５９２）を用い、シグナルペプチド（配列番号７）に連結されたＣＲ１ａ（配列番号２）またはｎＣＲ１ａ（配列番号５）のいずれかを発現する１４．４μｇプラスミドで一過性にトランスフェクションした。陰性対照のため、１４．４μｌのＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝剤をプラスミドＤＮＡの代わりに用いた。トランスフェクション５時間後、１０％ＦＢＳを含有するトランスフェクション培地を、２％ＦＢＳを補充した高グルコースを含む１７．５ｍｌの新鮮なＤＭＥＭ（本明細書において、以後、発現培地と称する）で置き換えた。発現培地をトランスフェクション２４、４８、７２および１４０時間後に収集した。８０μｌの０．５Ｍフェニルメタンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ、Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ７６２６）を、収集した１００ｍｌごとの発現培地に添加し、そして４℃で保存した。２４時間後に収集した発現培地を、以下に記載する拡散および機能研究に用いた。
【０２６６】
ヒト細胞から分泌されるタンパク質の特徴づけ
ヒト細胞からのタンパク質発現を図１Ａおよび１Ｂに示す。組換え発現され、そして精製されたＣＲ１ａタンパク質は、２つの糖型で細胞から分泌されることが見出された。グリコシル化を除去する酵素であるＰＮＧアーゼＦでの処理は、２つのバンドをより小さい見かけの分子量の１つのバンドに減少させた（１Ａ）。タンパク質の非グリコシル化型（ｎＣＲ１ａ）を発現させた。ウェスタンブロッティングによって、ｎＣＲ１ａが酵素的に脱グリコシル化されたタンパク質と同じ位置に移動する単一のバンドを生じることが立証された（１Ｂ）。
【０２６７】
Ｃ３ｂ分解活性
ヒトＨＥＫ２９３細胞から発現され、そして分泌されたＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａを、Ｃ３ｂの因子Ｉ仲介性分解に関する補因子として作用する能力に関して試験した。
【０２６８】
１μｇの組換えＣＲ１ａまたはｎＣＲ１ａタンパク質を、２μｇの純粋Ｃ３ｂタンパク質および０．０４μｇの純粋補体因子Ｉ（ＦＩ；ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号３４１２８０）と３７℃で１５分間混合した。ＦＨＬ−１を、ＦＩに関する補因子対照として提供した。ＣＲ１ａ／ｎＣＲ１ａ、ＣＲ１ａ／ｎＣＲ１ａ＋ＦＩ、ＣＲ１ａ／ｎＣＲ１ａ＋Ｃ３ｂおよびＣ３ｂ単独もまた、対照として提供した。４ｘＳＤＳ装填緩衝液の添加および１００℃で５分間の加熱で、反応を停止した。次いで、試料を４〜１２％ＮｕＰＡＧＥ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上で、２００Ｖで６０分間泳動した。トランスファー緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭグリシン、１０％（ｖ／ｖ）メタノール）中、セミドライトランスファー装置を用いて、試料を８０ｍＡで１．５時間ニトロセルロース膜上にトランスファーした。膜を、ＰＢＳ、１０％（ｗ／ｖ）ミルク、０．２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、４℃で１６時間ブロッキングした後、ＰＢＳ、０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ−Ｔ）中、１００μｇ／ｍｌの抗Ｃ３ｂ抗体（ＨｙｃｕｌｔＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号ＨＭ２２８７）を室温で１時間添加した。膜をＰＢＳ−Ｔ中、２ｘ３０分間洗浄した後、１：２５００希釈のＨＲＰコンジュゲート化ヤギ抗マウスを、遮光して室温で１時間添加した。膜をＰＢＳ−Ｔで２ｘ３０分間洗浄した後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０８０）を室温で３分間添加した。処理した膜に、Ｓｕｐｅｒ  ＲＸ−Ｎ  Ｘ線フィルム（ＦｕｊｉＦｉｌｍ、カタログ番号ＰＰＢ５０８０）を室温で２分間曝露し、そして自動Ｘ線フィルム現像装置上で現像することによって、反応バンドを検出した。
【０２６９】
結果を図２に示す。分泌されたタンパク質はどちらも、補体因子Ｉに関する補因子として作用して、まずＣ３ｂのｉＣ３ｂ（ａ１）への分解、そしてさらにＣ３ｄｇ（ａ１−１）への分解を導いた。ＣＲ１ａ／ｎＣＲ１ａを用いたＣ３ｂ分解は、ｉＣ３ｂ（ａ１）のみを生じる、ＦＩ＋ＦＨＬ−１を用いて観察されるＣ３ｂの通常の天然の分解（第二のレーン）よりもさらに続いた。
【０２７０】
ウッシングチャンバー拡散実験およびＣ３ｂ分解活性
ＭｃＨａｒｇら，  Ｊ  Ｖｉｓ  Ｅｘｐ  （２０１５）  １−７、上記に記載されるように、ドナーの眼から単離した濃縮ブルッフ膜の黄斑部を、ウッシングチャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ、米国ハムデン）に載せた。載せたら、５ｍｍ直径の黄斑部は、２つの同一の区画間の唯一のバリアであり、すなわち、液体はブルッフ膜を通過しなければならない（図４）。ブルッフ膜の両側を２ｍｌのＰＢＳで、室温で５分間洗浄した。実験の前に、次のチャンバーに漏出することなく、１つのチャンバー中に２ｍｌの液体を保持する能力によって、ブルッフ膜の構造的完全性を試験した。組換えタンパク質（ＣＲ１ａおよび／またはｎＣＲ１ａ、上記を参照されたい）を含有する２ｍｌの発現培地をチャンバー（以後、試料チャンバーと称する）に添加し、そして２ｍｌの新鮮なＰＢＳをもう一方のチャンバー（以後、拡散物／拡散チャンバーと称する）に添加した。拡散タンパク質の勾配が生じることを回避するため、磁気スターラーバーで各区画を穏やかに攪拌しながら、ウッシングチャンバーを室温で２４時間放置した。
【０２７１】
ＣＲ１ａを試料チャンバーに添加した。２４時間後、各チャンバー（元来の試料チャンバーおよび拡散チャンバー）由来の試料を、ＣＲ１ａの存在に関して試験した。
結果を図３Ａに示す。ＣＲ１ａは、２４時間後、拡散チャンバー中に存在することが見出された。
【０２７２】
ＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａを別個に試料チャンバーに添加し、そして両方のチャンバー由来の試料をＣ３ｂ分解活性に関して分析した。２４時間後、１８．６μｌの試料を各チャンバーから取り、そして１μｌ（１μｇ）の純粋Ｃ３ｂタンパク質および０．４μｌの純粋補体因子Ｉ（０．０４μｇ、ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カタログ番号３４１２８０）と、３７℃で１５、３０、または６０分間の１つで混合した。４ｘＳＤＳ装填緩衝剤を添加し、そして１００℃で５分間加熱して反応を停止した。次いで、試料を４〜１２％  ＮｕＰＡＧＥ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上で、２００Ｖで６０分間泳動した。
【０２７３】
結果を図３Ｂおよび３Ｃに示す。拡散チャンバーにおけるＣ３ｂの分解は、グリコシル化ＣＲ１ａ（３Ｂ）および非グリコシル化ｎＣＲ１ａ（３Ｃ）の両方が試料チャンバーからブルッフ膜を横断可能であり、そして機能的に活性のままであったことを立証する。両方のチャンバー由来のＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａは、ＦＩに関する補因子として成功裡に作用して、Ｃ３ｂ分解産物ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇに相当するバンドの存在によって立証されるように、Ｃ３ｂをタンパク質分解的に不活性であるＣ３ｂ（ｉＣ３ｂ）およびさらなる産物に分解することが見出された。したがって、ＣＲ１ａおよびｎＣＲ１ａは、ＢｒＭを通じて拡散し、そして因子Ｉの存在下で、Ｃ３ｂ分解を与える能力を保持することが可能である。
【０２７４】
実施例２
本発明記載のポリペプチドの発現レベルを比較して、最適な配合物があるかどうか、すなわちグリコシル化ポリペプチドが非グリコシル化ポリペプチドよりも高いレベルで発現するかどうかを評価する。ポリペプチドのグリコシル化状態は、発現レベルに最小限の影響を有するであろうと予期される。
【０２７５】
ＣＲ１ａは、ヒト細胞によってよく発現されることが見出された。ｎＣＲ１ａは、ＣＲ１ａより低いレベルで発現されることが見出されたが、どちらのポリペプチドも機能的に活性であることが見出された。例えば図２を参照されたい。
【０２７６】
実施例３
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用い、それによってＣ３ｂをＳＰＲチップ上に固定し、そしてポリペプチドを液相で用いて、本発明記載の精製ポリペプチドのＣ３ｂに対する結合動力学を試験する。会合および解離定数を直接測定し、そして相互作用に関するｋＤ値を推測する。
【０２７７】
ＣＲ１ａ（ＣＣＰ  ８〜１０）またはＣＲ１ｂ（ＣＣＰ  １５〜１７）種のＣ３ｂへの結合において相違は観察されないが、グリコシル化ポリペプチドは、非グリコシル化ポリペプチドよりもＣ３ｂにより強く結合する。
【０２７８】
Ｂｉｏ−ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって測定される結合動力学
ＣＲ１ａのＣ３ｂタンパク質に関するアフィニティを、ＯｃｔｅｔＲｅｄ９６系（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ、米国）を用いて測定した。ビオチン化Ｃ３ｂタンパク質を０．２％ＰＢＳＴで最終濃度０．４μｇ／ｍＬに希釈し、そしてあらかじめ同じ緩衝液で２０分間水和させておいた高精度ストレプトアビジン（ＳＡＸ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ、米国）上に、６００秒間装填した。次いで、Ｃ３ｂ装填センサーを０．２％ＰＢＳＴで１５０秒間洗浄し（ベースライン）、そして３０．０μｇ／ｍＬ〜２．６μｇ／ｍＬの範囲の異なる濃度のＣＲ１ａを含有するウェル内に６００秒間ディップし（会合）、その後、０．２％ＰＢＳＴで６００秒間洗浄した（解離）。会合および解離プロファイルを記録し、そしてＦｏｒｔｅＢｉｏデータ分析ｖ９（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ、米国）で分析した。陰性対照、すなわち０．２％ＰＢＳＴ含有ウェルを平行して用いて、センサーとの非特異的相互作用から生じる結合を減じた。動力学モードを用い、２５℃で実験を実行し、そして試料プレートをあらかじめ３分間攪拌した。結合プロファイルを全体的に１：１（表面上の１つの結合部位に対して溶液中の１つの分析物）に適合させた。定常状態分析によって、４つの最低の利用可能な分析物濃度から、会合（０秒〜６００秒）および解離（０秒〜１００秒）のデータを用いてＫＤを決定した。固定Ｃ３ｂに対する天然可溶性Ｃ３ｂ結合補体制御因子、因子Ｈ（ＦＨ）およびＦＨＬ−１に関する結合アフィニティもまた決定した。
【０２７９】
結果を図５に示す。Ｃ３ｂに関するＣＲ１ａの結合アフィニティは、２１ｎＭであることが見出された。比較のため、ＦＨのＣ３ｂに関する結合アフィニティは５８０ｎＭであり、そしてＦＨＬ−１は１．２ｍＭであった。したがって、ＣＲ１ａは、どちらの天然可溶性補体制御因子よりも、有意により強くＣ３ｂに結合する。Ｃ３ｂに関するＣＲ１ａの強い結合アフィニティは、ＣＲ１ａが、ＦＨまたはＦＨＬ−１に基づく剤よりも、Ｃ３ｂ分解を促進するより有効な剤であることを意味する。
【０２８０】
強い結合アフィニティはまた、ＣＲ１ａがｉＣ３ｂの望ましいさらなる下流産物、例えばＣ３ｄｇへの分解を促進することも可能にする（図２を参照されたい）。対照的に、ＦＨおよびＦＨＬ−１は、ｉＣ３ｂを超えてＣ３ｂの分解を引き起こすことは不可能である。ｉＣ３ｂは、補体活性化の部位に免疫細胞を補充するよう作用する炎症促進性分子であり、これは次に、負の炎症効果を引き起こす。したがって、ＣＲ１ａによるｉＣ３ｂのＣ３ｄｇへのさらなる分解は好適であり、そして免疫系によって引き起こされるさらなる損傷を回避する。
【０２８１】
実施例４
ウッシングチャンバー実験（上述）を用いて、本発明記載のポリペプチドの拡散速度を比較して、タンパク質の配合による何らかの相違が生じるかどうかを見た。
【０２８２】
実験には、ドルーゼンおよび基底裏打ち（ｌｉｎｅａｒ）沈着物を含む、ＡＭＤにおいてブルッフ膜中に沈着する物質が、ポリペプチドがブルッフ膜を横断する能力を損なうかどうかを決定するため、この状態にあるドナー由来のブルッフ膜の使用が含まれる。最適ポリペプチドは、ＡＭＤ変化の存在下であっても、ブルッフ膜を横断すると予期される。
【０２８３】
実施例５
随意に、好ましいシグナルペプチド、配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチド、および終結コドンをコードする、本発明記載の核酸を、ＡＡＶベクター内に挿入する。生じた発現ベクターを用いて、培養ＲＰＥ細胞をトランスフェクションする。コードされるポリペプチドの発現および分泌を評価する。配列番号４に少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドは、ＲＰＥ細胞によって分泌され、そしてシグナルペプチドは、分泌されたポリペプチドから切断されていると予期される。
【０２８４】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）形質導入。実施例１に記載するＣＲ１ａポリペプチドをコードする核酸を、網膜色素上皮由来のヒトＡＰＲＥ−１９細胞（ＡＴＣＣ、米国）にトランスフェクションした。
【０２８５】
ＡＡＶ２血清型ウイルス粒子を、ＣＲ１ａプラスミドでプレパッケージングした。ＡＲＰＥ−１９細胞を、ウェルあたり３００，０００細胞の密度で、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清（ＡＴＣＣ、米国）を補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２増殖培地（ＡＴＣＣ、米国）２ｍｌ中、６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に植え付けた。次いで、細胞を５％ＣＯ２の加湿大気中、３７℃で２４時間インキュベーションした。インキュベーション後、細胞を２ｍｌ血清不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２増殖培地で２回洗浄した。総体積１ｍｌ中、血清不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２増殖培地中、感染効率（ＭＯＩ）１００，０００のＡＡＶ２−ＣＲ１ａを添加した。ＡＡＶ２−ＣＲ１ａ含有培地を、細胞と２４時間（３７℃、５％ＣＯ２）インキュベーションした後、翌日、新鮮な血清不含ＤＭＥＭ／Ｆ１２増殖培地２ｍｌで置換した。ＡＡＶ−ＧＦＰで形質導入した対照細胞を、平行して増殖させた。形質導入効率を感染１４日後に評価した。ＡＲＰＥ−１９細胞によるＣＲ１ａの分泌を、ドットブロットによって検出し；ＣＲ１ａ形質導入ＲＰＥ細胞由来の順化培地を社内ポリクローナル抗ＣＲ１ａ抗体と接触させた。
【０２８６】
結果を図６に示す。陰性対照として用いたＡＡＶ−ＧＦＰで形質導入したＲＰＥ細胞由来の培地（対照培地）と比較して、試験した両方の試料（ＡＡＶ−ＣＲ１ａ培地）において、抗ＣＲ１ａ抗体との免疫反応性が見られた。精製組換えＣＲ１ａタンパク質を陽性対照として含めた。
【０２８７】
ヒトＡＰＲＥ−１９およびＨＥＫ２９３細胞から分泌された組換えＣＲ１ａポリペプチドを、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇに分解する能力に関して評価した。
結果を図７Ａに示す。ヒトＡＰＲＥ−１９細胞から分泌される機能性ＣＲ１ａポリペプチドは、因子Ｉに関する補因子として作用して、Ｃ３ｂのｉＣ３ｂ（産物ｅ）およびＣ３ｄｇ（産物ｆ）への分解を導くことが見出された。ＦＨＬ−１＋ＦＩ＋Ｃ３ｂを含有する反応は、Ｃ３ｂおよび産物ｉＣ３ｂのＭＷ対照を提供した。
【０２８８】
ＡＡＶ送達ＣＲ１ａで形質導入されたヒトＲＰＥ細胞（ＡＲＰＥ−１９）の組織培地において、Ｃ３ｂ分解を評価した。ＡＡＶ−ＧＦＰ形質導入ＲＰＥ細胞を陰性対照として用いた。形質導入１４日後、形質導入細胞に、精製Ｃ３ｂおよび因子Ｉを補充した。組織培地におけるＣ３ｂおよびｉＣ３ｂレベルを、ウェスタンブロットによって検出した。
【０２８９】
結果を図７Ｂに示す。ＲＰＥ細胞は、それ自体の補体構成要素を産生し、そしてＣ３ｂ（産物ａ）のｉＣ３ｂ（産物ｂ；レーン２）への低い天然代謝回転を有することが見出された。しかし、ＡＡＶ送達ＣＲ１ａを発現するＲＰＥ細胞は、天然代謝回転速度に比較して、増加したｉＣ３ｂ（産物ｂ；レーン３）へのＣ３ｂ分解能を有することが見出された。
【０２９０】
これは、ＣＲ１ａが、眼の細胞、例えば網膜色素上皮細胞から成功裡に分泌され、ＦＩ補因子として機能的に活性であり、下流産物へのＣ３ｂ分解を増進し、補体制御が可能であり、そして補体の過剰活性化、例えば過剰なＣ３ｂを伴う状態に対して、療法的利点を提供するであろう。
【０２９１】
実施例６
本発明のポリペプチドは、補体関連障害の治療または防止の方法において、使用を見出す。補体関連障害の一例は、眼の黄斑変性症、例えばＡＭＤである。
【０２９２】
図８は、眼の黄斑部の模式図を提供する。網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、神経感覚網膜および血管脈絡膜の間の立方体状／円柱状上皮細胞の連続単層である。細胞は、物理的、光学的、代謝的／生化学的および輸送機能を有し、そして正常な視覚プロセスにおいて必須の役割を果たす。ＲＰＥは、ブルッフ膜（ＢｒＭ）：薄い（２〜４μｍ）無細胞５層細胞外マトリックスによって、脈絡膜から分離される。ＢｒＭは２つの主な機能を果たし：ＲＰＥの基底層および血管壁として働く。ＢｒＭにすぐ隣接して、そして脈絡膜内には、脈絡毛細管と称される毛細管の層がある。補体活性化は、毛細管間中隔と称される、脈絡毛細管の細胞外マトリックスを中心とする。
【０２９３】
ＡＭＤの特徴的な病変、ドルーゼンは、多くの補体活性化産物を含む、脂質および細胞破片の集積から形成される。ドルーゼンは、ＲＰＥ層に隣接するＢｒＭ内で発展し、そして脈絡膜からＲＰＥへの栄養の流れを妨げ、細胞機能不全および細胞死を導く。ＲＰＥ細胞の死はまた、光受容体細胞の機能不全、そして続いて視力喪失を引き起こす。
【０２９４】
Ｆｏｒｅｓｔら（２０１５）  Ｄｉｓ．  Ｍｏｄ．  Ｍｅｃｈ．  ８，  ４２１−４２７（図１）から取ったドルーゼン沈着の代表的な蛍光顕微鏡画像を、図９に提供する。図９は、ＡＭＤを有する８２歳の女性由来の網膜組織を示す。細胞膜マーカーは、ドルーゼンに重層する分解されたＲＰＥ細胞を示す。ドルーゼン内および血管周囲の補体活性化領域を、最終補体複合体マーカーＣ５ｂ−９によって示す。核を染色する。スケールバー２０μｍ。
【０２９５】
補体制御分子の全身投与は、高い用量を必要とし、そして機能性補体系に対する有害なオフターゲット効果の実質的なリスクを所持する。局所投与、例えばＲＰＥ細胞からの発現は、安全でそしてより有効な送達法である。しかし、ＲＰＥ発現分子が、脈絡毛細管の毛細管間中隔における、すなわち補体過剰活性化の部位における、補体関連障害を治療／防止する際に有効であるため、分子はブルッフ膜を横断しなければならない（図１０を参照されたい）。すなわち、有効な補体阻害療法は、図１０の３つの段階すべての要件を満たさなければならない。
【０２９６】
本明細書に示すように、ＣＲ１ａは：
１．  ヒトＲＰＥ細胞から分泌され（例えば図６を参照されたい）；
２．  ヒトＢｒＭを超えて受動拡散することが可能であり（例えば図３を参照されたい）；そして
３．  補体因子Ｉの存在下で、Ｃ３ｂのｉＣ３ｂへの、そしてさらに望ましい分解産物への分解を仲介可能である（例えば図２、３、７を参照されたい）。
【０２９７】
したがって、ＣＲ１ａは、ＲＰＥ細胞によって発現されることが可能であり、Ｃ３ｂ制御が必要な場合、補体活性化の領域に到達可能であり、そして例えばＡＭＤの、眼における補体過剰活性化を治療する有効な療法剤として作用することも可能である。
【０２９８】
実施例７
レーザー誘導性脈絡膜血管新生モデル
このモデルは、マウスまたはラットの網膜にレーザー熱傷を適用し、例えばＳｃｈｎａｂｏｌｋら  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｖ．  ２０１８；  ９：  １−１１に記載されるように、脈絡膜血管新生を引き起こす。脈絡膜血管新生複合体のサイズを、フルオレセイン血管造影によって、または組織学によって測定してもよい。
【０２９９】
齧歯類に、ＡＡＶベクター、例えばＣＲ１ａ  ｃＤＮＡを含有するＡＡＶ２、または対照としての空のＡＡＶベクターの網膜下注射を行う。ＣＲ１ａ  ｃＤＮＡを含有するＡＡＶベクターを投与された齧歯類は、その網膜色素上皮細胞からＣＲ１ａタンパク質を分泌する。最大ＣＲ１ａタンパク質排出が達成されたら、レーザー熱傷を齧歯類網膜に適用し、そしてレーザー熱傷後のあらかじめ明記した時間で、脈絡膜血管新生複合体のサイズを測定する。ＣＲ１ａポリペプチドの補体阻害効果は、空のＡＡＶベクターを投与した齧歯類に比較して、脈絡膜血管新生複合体のサイズを減少させることで見られる。
【０３００】
ヨウ化ナトリウム誘導性網膜変性
例えば、Ｋａｔｓｃｈｋｅら，  Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．  ２０１８；  ８（１）：７３４８に記載されるように、補体活性化に部分的に依存する網膜色素上皮の変性を誘導するヨウ化ナトリウムを、マウスに静脈内注射する。組換えタンパク質としての硝子体内注射によって、またはＣＲ１ａ  ｃＤＮＡを含有するＡＡＶベクター、例えばＡＡＶ２を用いた網膜下送達によって、ＣＲ１ａを送達する。ＣＲ１ａ処置マウスは、ＣＲ１ａ処置を受けていない対照マウスよりも、より少ない網膜変性を有することが見出される。
【図１】
2021511030.tif 000017
【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５−１】
2021511030.tif 000023
【図５−２】
2021511030.tif 000024
【図５−３】
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【図６】
2021511030.tif 000026
【図７−１】
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【図７−２】
2021511030.tif 000028
【図８】
2021511030.tif 000029
【図９】
2021511030.tif 000030
【図１０】
2021511030.tif 000031
【図１１−１】
2021511030.tif 000032
【図１１−２】
2021511030.tif 000033
【配列表】
2021511030000001.app
【国際調査報告】
2021511030.tif 000034
2021511030.tif 000035
2021511030.tif 000036