(57)【要約】  本開示は、概して、肝線維症、ならびに脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および硬変症などの関連する状態、または肺線維症および肺線維症に関連する状態を含む線維症の治療のための、ホスファチジルコリンと、ホスファチジルコリン誘導体、例えば、ＤＬＰＣ（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）またはＤＰＰＣとを含む組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
線維症を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、線維症を治療するためのリポソームまたはナノ粒子中の有効量のホスファチジルコリン（ＰＣ）を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ホスファチジルコリンが、ポリエンホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）または１６個の炭素のリン脂質テールを有するコリンヘッドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホスファチジルコリンが、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）またはコリンヘッドおよび１２個の炭素のリン脂質テールである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記リポソームまたはナノ粒子が、抗酸化剤をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗酸化剤が、脂溶性抗酸化剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記リポソームまたはナノ粒子が、ビタミンＥをさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記リポソームまたはナノ粒子が、新しい細胞成長を刺激し得る因子をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記リポソームまたはナノ粒子が、新しい細胞成長を刺激し得るタンパク質またはペプチドをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ペプチドが、新しい細胞成長を刺激し得るＧＨＫペプチドである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ホスファチジルコリンが、ＬＨＲ−１およびまたはＰＰＡＲアルファに結合する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記リポソームが、新しい細胞成長を刺激し得る因子および抗酸化剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記新しい細胞成長を刺激する因子がＧＨＫペプチドであり、前記抗酸化剤がビタミンＥである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記リポソームまたはナノ粒子が、コレステロールをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記リポソームが、注射により、経皮的に、経口的に、デポー剤を介して、または吸入により投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記リポソームが、静脈内投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、線維性疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝炎、肝硬変、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または間質性肺線維症に罹患している、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記投与が、肝線維症、肝臓の脂肪含量、硬変症の発生または進行、肝細胞癌の発生、肝アミノトランスフェラーゼレベルの増加、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロール、およびトリグリセリドのレベルの上昇からなる群から選択される線維性疾患の１つ以上の症状を寛解する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨに罹患している、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リポソームまたはナノ粒子が、毎週、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月、または２ヶ月ごとに１回投与される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象が、ヒトである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記リポソームが、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
リポソームまたはナノ粒子を含む組成物であって、前記リポソーム中に１〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で総ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含む。
【請求項２３】
前記ホスファチジルコリンが、ポリエンホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）または１６個の炭素のリン脂質テールを有するコリンヘッドである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ホスファチジルコリンが、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）またはコリンヘッドおよび１２個の炭素のリン脂質テールである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記リポソームまたはナノ粒子が、抗酸化剤をさらに含む、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記抗酸化剤が、脂溶性抗酸化剤である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記リポソームまたはナノ粒子が、ビタミンＥをさらに含む、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記リポソームまたはナノ粒子が、新しい細胞成長を刺激し得る因子をさらに含む、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記リポソームまたはナノ粒子が、新しい細胞成長を刺激し得るタンパク質またはペプチドをさらに含む、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記新しい細胞成長を刺激し得るペプチドが、ＧＨＫペプチドである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記新しい細胞成長を刺激する因子がＧＨＫペプチドであり、前記抗酸化剤がビタミンＥである、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記リポソームまたはナノ粒子が、コレステロールをさらに含む、請求項２２〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ＤＬＰＣが、１０重量％〜５０重量％組成で前記リポソーム中にある、請求項２２〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ＤＰＰＣが、１０重量％〜５０重量％組成で前記リポソーム中にある、請求項２２〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年１０月１１日に申請された米国仮特許出願第６２／５７０，８４７号の優先的利益を主張する。
【０００２】
本開示は、概して、肝線維症、ならびに脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および硬変症などの関連する状態を含む線維症の治療のための、ホスファチジルコリン誘導体、例えば、ＤＬＰＣ（１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）またはＤＰＰＣを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
脂肪性肝疾患（ＦＬＤ）は、アルコール性（ＡＦＬＤ）および非アルコール性（ＮＡＦＬＤ）の両方で、無秩序な脂質代謝をもたらす。ＦＬＤを促進する多くの経路があるが、疾患の進行にとって重要な経路のうちの３つは、反応性酸素種（ＲＯＳ）、ステロール調節要素結合タンパク質１（ＳＲＥＢＰ−１）、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）である。これらの経路の各々の調整は、ＦＬＤの抑止にいくつかの利益を示す。ビタミンＥを使用したＲＯＳの遮断は、動物モデルで肯定的な効果を実証しており、ヒトでの試験ではいくつかの肯定的なデータがある。非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療のためにＰＰＡＲガンマを遮断するいくつかの候補薬が開発中である。
【０００４】
肝臓受容体ホモログ１（ＬＲＨ−１）のアゴニストは、インビボでＳＲＥＢＰ−１を積極的に調節する。これらには、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）と呼ばれるホスホコリンに結合した１２個の炭素遊離脂肪酸、および／または１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）と呼ばれるホスホコリンに結合した１６個の炭素遊離脂肪酸が含まれる。細胞および組織、例えば、線維性組織においてＰＰＡＲアルファおよびＬＲＨ−１に結合するより長い鎖のホスファチジルコリンは、より短い鎖のＤＬＰＣおよびＤＰＰＣ種で置き換えることができる。動物モデルでは、固形飼料中にＤＬＰＣを給餌すると、肝線維症が遅延することが示されている（米国特許第５，２８４，８３５号）。ＤＰＰＣは、ＰＰＡＲアルファにも結合することができ、これが次にＰＰＡＲガンマを遮断し、疾患の進行も防ぎ得る。
【０００５】
線維症は、修復または反応プロセスとしての臓器または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発達に起因し、このプロセスが再上皮化不全により無秩序になると、様々な多様な組織で発生する（Ｔｏｍａｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３，３４９−３６３（２００２）、Ｔｈａｎｎｉｃｋａｌ  ｅｔ  ａｌ  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  ５５，３９５−４１７（２００４）、Ｈｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １７０，１８０７−１８１６（２００７））。米国特許公開第２０１２／０１４１４６１号も参照されたい。
【発明の概要】
【０００６】
本開示は、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、ならびに／またはＬＲＨ−１およびＰＰＡＲアルファを活性化して、肝臓および他の組織の線維症を調節するであろう任意のバージョンの遊離脂肪酸の組み合わせなどのホスホチジルコリンを送達する方法を提供する。脂質部分としてのＤＬＰＣおよび／またはＤＰＰＣは、組織への標的化送達を容易にするリポソーム、ミセル、または乳濁液のいずれかに可溶化できると企図される。
【０００７】
様々な実施形態では、本開示は、線維症を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に、線維症を治療するためのリポソームまたはナノ粒子中の有効量のホスファチジルコリン（ＰＣ）を投与することを含む。
【０００８】
本開示はまた、線維症を治療するのに有効な量のホスファチジルコリンを含む、本明細書に記載されるリポソームまたはナノ粒子を含む組成物を提供する。様々な実施形態では、本開示は、線維症の治療に使用するための、本明細書に記載されるリポソームを含む組成物を提供する。
【０００９】
様々な実施形態では、ホスファチジルコリンは、ポリエンホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）または１６個の炭素のリン脂質テールを有するコリンヘッドである。様々な実施形態では、ホスファチジルコリンは、ジリノレオイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）またはコリンヘッドおよび１２個の炭素のリン脂質テールである。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、ＤＰＰＣおよび／もしくはＤＰＬＣなどのホスファチジルコリンの混合物、ならびに／または１６個の炭素もしくは１２個の炭素のリン脂質テールを含むコリンヘッドを有するホスファチジルコリンを含む。
【００１０】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、抗酸化剤をさらに含む。様々な実施形態では、抗酸化剤は、脂溶性抗酸化剤である。様々な実施形態では、抗酸化剤はビタミンＥである。様々な実施形態では、ビタミンＥは、約１〜２０ｍｇ／ｍｌ、約２〜１０ｍｇ／ｍｌ、約４〜１０ｍｇ／ｍｌ、または約４〜８ｍｇ／ｍｌの濃度でリポソーム中にある。
【００１１】
追加の抗酸化剤は、発明を実施するための形態でさらに記載される。
【００１２】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、新しい細胞成長を刺激し得る因子をさらに含む。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、新しい細胞成長を刺激し得るタンパク質またはペプチドをさらに含む。様々な実施形態では、ペプチドは、新しい細胞成長を刺激し得るＧＨＫペプチドである。
【００１３】
様々な実施形態では、リポソームは、新しい細胞成長を刺激し得る因子および抗酸化剤をさらに含む。様々な実施形態では、新しい細胞増殖を刺激する因子はＧＨＫペプチドであり、抗酸化剤はビタミンＥである。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、ＤＬＰＣおよび／もしくはＤＰＰＣのみと組み合わせて、またはビタミンＥと組み合わせてＧＨＫを含む。
【００１４】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をさらに含む。様々な実施形態では、ＰＥＧは、約２〜２０ｍｇ／ｍｌ、約５〜１５ｍｇ／ｍｌ、または約４〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度でリポソーム中にある。
【００１５】
ホスファチジルコリンは、それらが用量あたり約２〜５０ｍｇ／ｋｇ、５〜４０ｍｇ／ｋｇ、１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または５〜２０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与されるようにリポソーム中に存在することが企図される。ＤＬＰＣ、ＤＰＰＣ、および／または１６個もしくは１２個の炭素の炭素テールを有する他のホスファチジルコリンは、約２ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇの濃度で投与されると企図される。様々な実施形態では、ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、約０．１〜１００ｍｇ／ｍｌ、約１〜８０ｍｇ／ｍｌ、約５〜７０ｍｇ／ｍｌ、約１０〜６０ｍｇ／ｍｌ、約１５〜１００ｍｇ／ｍｌ、約１５〜５０ｍｇ／ｍｌ、約２０−〜８０ｍｇ／ｍｌ、約２０〜７０ｍｇ／ｍｌ、約３０〜６０ｍｇ／ｍｌ、または約４０〜５０ｍｇ／ｍｌの総ＰＣ濃度でリポソームまたはナノ粒子中にある。様々な実施形態では、総ＰＣ濃度は、約１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌである。様々な実施形態では、ＩＶで送達される単回用量あたりに送達され得るより総ＰＣは、約２０，０００ｍｇ、１５，０００ｍｇ、１０，０００ｍｇ、８０００ｍｇ、６０００ｍｇ、４０００ｍｇ、３０００ｍｇ、２０００ｍｇ、１０００ｍｇ、７５０ｍｇ、５００ｍｇ、４００ｍｇ、２００ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇである。
【００１６】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、コレステロールをさらに含む。コレステロールは、約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２〜１５ｍｇ／ｋｇ、または約５〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲でリポソームまたはナノ粒子中に存在し得る。様々な実施形態では、コレステロールは、約１〜２０ｍｇ／ｍｌ、または約２〜１５ｍｇ／ｍｌ、または約５〜１０ｍｇ／ｍｌ、または約１〜５ｍｇ／ｍｌ、または約１〜３ｍｇ／ｍｌ、または約０．５〜５ｍｇ／ｍｌの範囲でリポソームまたはナノ粒子中にある。様々な実施形態では、コレステロール濃度は、約１．０ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、３．５ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６．０ｍｇ／ｍｌ、７．０ｍｇ／ｍｌ、７．５ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ、８．５ｍｇ／ｍｌ、９．０ｍｇ／ｍｌ、９．５ｍｇ／ｍｌ、１０．０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、または２０ｍｇ／ｍｌである。
【００１７】
様々な実施形態では、リポソームは、重量％組成に基づいて、以下の１０〜５０％のＤＬＰＣ、１０〜５０％のＤＰＰＣ、０〜５％のコレステロール、５〜２０％のビタミンＥ、および任意に０〜１５％のＰＥＧの組成を有し得る。これらの範囲内の構成成分の組み合わせは、本明細書中のリポソームを作製するのに有用であり、本開示により具体的に提供されることが企図される。リポソーム含有量は、組成物の化学含有量を決定するために使用されるＨＰＬＣまたは他の分析技法により測定され得る。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、リポソーム中に２０〜８０重量％組成の濃度で総ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含む。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、リポソーム中に１〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で総ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含む。
【００１８】
様々な実施形態では、リポソームは、注射（例えば、静脈内、皮下）により、局所的に、経口的に、デポー剤により、または吸入により投与される。様々な実施形態では、局所投与は、経皮投与である。様々な実施形態では、リポソームは、静脈内投与される。
【００１９】
様々な実施形態では、対象は、線維症、または関連線維症の前駆体であるか、もしくはそれに直接つながる疾患もしくは状態に罹患している。様々な実施形態では、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎、または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）もしくは間質性肺線維症などの肺線維性疾患を含むが、これらに限定されない任意の線維性疾患である。
【００２０】
様々な実施形態では、投与は、肝線維症、肝臓の脂肪含量、硬変症の発生または進行、肝細胞癌の発生、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）などの肝アミノトランスフェラーゼレベルの増加、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロール、およびトリグリセリドのレベルの上昇を含むが、これらに限定されない線維症の１つ以上の症状を寛解する。
【００２１】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、毎週、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月、または２ヶ月ごとに１回投与される。様々な実施形態では、療法剤は、少なくとも１年間投与され、対象または患者の生涯にわたって投与され得る。
【００２２】
様々な実施形態では、対象は、哺乳動物である。様々な実施形態では、対象は、ヒトである。様々な実施形態では、対象は、成人または青年である。
【００２３】
様々な実施形態では、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む。
【００２４】
本明細書に記載される各特徴もしくは実施形態、または組み合わせは、本発明の態様のいずれかの非限定的で例示的な例であり、そのため、本明細書に記載される任意の他の特徴もしくは実施形態、または組み合わせと組み合わせ可能であることが意図される。例えば、「一実施形態」、「いくつかの実施形態」、「ある特定の実施形態」、「さらなる実施形態」、「特定の例示的な実施形態」、および／または「別の実施形態」などの表現で特徴が記載される場合、これらの実施形態の種類は、考えられるあらゆる組み合わせを列挙することを必要とすることなく、本明細書に記載される任意の他の特徴または特徴の組み合わせと組み合わされることが意図されている特徴の非限定的な例である。かかる特徴または特徴の組み合わせは、本発明の態様のいずれにも適用される。範囲内にある値の例が開示される場合、これらの例はいずれも、範囲の考えられる終点として企図され、かかる終点の間のあらゆる数値が企図され、上限および下限の終点のあらゆる組み合わせが想定される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ホスファチジルコリンを含むリポソームで処置されたマウスにおける線維症の病理の低減を示す。
【図２】対照群およびリポソーム処置群の代表的な肝組織像を提供する。
【図３】対照群と処置群との間で肝酵素レベル（ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびビリルビン）に有意な変化がないことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本開示は、硬変症、肝炎、および非アルコール性脂肪症肝炎（ＮＡＳＨ）を含むが、これらに限定されない肝線維症および肝疾患を含む線維症の治療のためのリポソームを提供する。本明細書に開示されるリポソームは、肝臓により取り込まれ、酸化種および肝細胞の死に起因する線維症および炎症を低減する。
【００２７】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。以下の参考文献は、本発明で使用される多くの用語の一般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（２ｄ  ｅｄ．１９９４）、ＴＨＥ  ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）、ＴＨＥ  ＧＬＯＳＳＡＲＹ  ＯＦ  ＧＥＮＥＴＩＣＳ，５ＴＨ  ＥＤ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）、およびＨａｌｅ  ＆  Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ  ＨＡＲＰＥＲ  ＣＯＬＬＩＮＳ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＢＩＯＬＯＧＹ（１９９１）。
【００２８】
本明細書に引用される各刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、本開示と矛盾しない範囲で、その全体が参照により組み込まれる。
【００２９】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段に明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「誘導体」への言及は、複数のそのような誘導体を含み、「対象」への言及は、１つ以上の対象への言及などを含む。
【００３０】
様々な実施形態の説明が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用する場合、当業者は、いくつかの特定の例では、実施形態が「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という言語を使用して代替的に記載され得ると理解されるであろうことをさらに理解されたい。
【００３１】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料が、開示された方法および組成物の実施において使用され得るが、例示的な方法、デバイス、および材料が本明細書に記載される。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「リポソーム」は、内部の水性空間を取り囲む外側の脂質の二層または多層の膜を備える閉鎖構造を指す。リポソームは、多層または単層であり得る。リポソームは、直径が５〜１０μＭのサイズ〜ナノ粒子サイズの範囲であると企図される。ある特定の実施形態では、リポソームナノ粒子は、直径約５０〜１０００ｎｍ、約１００ｎｍ〜６００ｎｍ、約２００〜６００ｎｍ、約２００〜５００ｎｍ、または約１００〜３００ｎｍ、または直径１００〜２００ｎｍである。様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、直径約２００ｎｍである。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「ミセル」は、水溶液中のほぼ球状の脂質ベースの粒子を指し、ここで、これは、周囲の溶媒と接触する脂質の親水性「ヘッド」領域と凝集体を形成し、ミセルの中央の疎水性シングルテール領域を隔離する。ミセルは、脂質二重層であるリポソームと比較して、単一の脂質層を備える。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「乳濁液」は、通常、それらの天然の状態では非混和性または非混合性である２つ以上の液体の混合物を指す。ある特定の実施形態では、乳濁液は、油および水乳濁液である。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」または「有効量」は、症状の寛解、例えば、関連する病状の治療、治癒、予防、もしくは寛解、またはそのような状態の治療、治癒、予防、もしくは寛解の速度の増加をもたらし、典型的には、治療された患者集団において統計的に有意な改善を提供するのに十分な化合物の量を指す。単独で投与される個々の活性成分を言及する場合、治療有効用量は、その成分のみを指す。組み合わせを指す場合、治療有効用量は、連続してまたは同時を含めて、組み合わせて投与されるかどうかにかかわらず、療法効果をもたらす有効成分の合計量を指す。様々な実施形態では、治療有効量のＤＬＰＣまたはＤＰＰＣリポソームまたは粒子は、肝線維症、肝臓の脂肪含量、硬変症の発生または進行、肝細胞癌の発生、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）などの肝アミノトランスフェラーゼレベルの増加、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロール、およびトリグリセリドのレベルの上昇を含むが、これらに限定されない線維症の１つ以上の症状を寛解する。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「１つ以上の症状（複数可）」は、患者が特定の状態または疾患に罹患しているという一般的な兆候または示徴を指す。例えば、本明細書で企図されるＮＡＦＬＤ関連症状には、肝線維症、肝臓の脂肪含有量、ＡＬＴおよびＡＳＴなどの肝アミノトランスフェラーゼレベルの増加、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロール、およびトリグリセリドのレベルの上昇が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で企図される肺線維症関連症状には、衰弱および倦怠感、原因不明の空咳、息切れ、ならびに運動耐性の低下が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で企図される肝線維症関連症状には、皮膚の黄変（黄疸）、疲労、衰弱、食欲不振、かゆみ、およびあざが含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「対象」は、本明細書に記載されるリポソームまたはナノ粒子が投与される、哺乳動物または霊長類を含む、ヒトまたは非ヒト動物を指す。対象には、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ならびにヒトおよび他の霊長類などの動物が含まれ得る。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、健全な医学的判断の範囲において、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症のない、妥当な利益／リスク比に見合った、ヒトおよび動物の組織と接触させるのに好適である化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。「薬学的に適合性のある成分」という用語は、抗体−薬物コンジュゲートとともに投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
【００３９】
リポソーム
リポソームは、１０年以上にわたって医薬品開発に使用されてきた。リポソームの調製は、米国特許第６，２１７，８９９号、米国特許公開第２０１０００２１５３１号、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ａｎａｌ．３３：３３７−４６２，１９８８、およびＧ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ：”Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，”２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．Ｉ−ＩＩＩ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。医薬用途のためのリポソームは、Ｍｏｚａｆａｒｉ，Ｍ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｖｏｌ．１，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２，Ｖ．Ｗｅｓｓｉｎｇ  Ｅｄ．２０１０，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）に開示されている。
【００４０】
リポソームは、多層または単層であり得る。リポソームは、直径が５〜１０μＭのサイズ〜ナノ粒子サイズの範囲であると企図される。ある特定の実施形態では、リポソームナノ粒子は、直径約５０〜１０００ｎｍ、約１００ｎｍ〜６００ｎｍ、約２００〜６００ｎｍ、約２００〜５００ｎｍ、または約１００〜２００ｎｍである。リポソームサイズは、動的光散乱法により粒子全体の平均直径値として粒子サイズを測定するゼータサイザー（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）の使用を含む、当技術分野で既知の方法を使用して測定され得る。
【００４１】
様々な実施形態では、リポソームは、脂質、および任意にステロールを含む。様々な実施形態では、リポソームは、ＤＬＰＣおよびＤＰＰＣなどのホスファチジルコリン誘導体、ならびに任意にコレステロールを含む。
【００４２】
ホスファチジルコリンは、それらが用量あたり約２〜５０ｍｇ／ｋｇ、５〜４０ｍｇ／ｋｇ、１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または５〜２０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与されるようにリポソーム中に存在することが企図される。ＤＬＰＣ、ＤＰＰＣ、および／または１６個もしくは１２個の炭素の炭素テールを有する他のホスファチジルコリンは、約２ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇの濃度で投与されると企図される。様々な実施形態では、ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、約０．１〜１００ｍｇ／ｍｌ、約１〜８０ｍｇ／ｍｌ、約５〜７０ｍｇ／ｍｌ、約１０〜６０ｍｇ／ｍｌ、約１５〜１００ｍｇ／ｍｌ、約１５〜５０ｍｇ／ｍｌ、約２０〜８０ｍｇ／ｍｌ、約２０〜７０ｍｇ／ｍｌ、約３０〜６０ｍｇ／ｍｌ、または約４０〜５０ｍｇ／ｍｌの総ＰＣ濃度でリポソームまたはナノ粒子中にある。様々な実施形態では、総ＰＣ濃度は、約１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌである。様々な実施形態では、ＩＶで送達される単回用量あたりに送達され得るよりは総ＰＣは、約２０，０００ｍｇ、１５，０００ｍｇ、１０，０００ｍｇ、８０００ｍｇ、６０００ｍｇ、４０００ｍｇ、３０００ｍｇ、２０００ｍｇ、１０００ｍｇ、７５０ｍｇ、５００ｍｇ、４００ｍｇ、２００ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇである。
【００４３】
様々な実施形態では、リポソームまたはナノ粒子は、コレステロールをさらに含む。コレステロールは、約１〜２０ｍｇ／ｋｇ、約２〜１５ｍｇ／ｋｇ、または約５〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲でリポソームまたはナノ粒子中に存在し得る。様々な実施形態では、コレステロールは、約１〜２０ｍｇ／ｍｌ、または約２〜１５ｍｇ／ｍｌ、または約５〜１０ｍｇ／ｍｌ、または約１〜５ｍｇ／ｍｌ、または約１〜３ｍｇ／ｍｌ、または０．５〜５ｍｇ／ｍｌの範囲でリポソームまたはナノ粒子中にある。様々な実施形態では、コレステロール濃度は、約１．０ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、３．５ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６．０ｍｇ／ｍｌ、７．０ｍｇ／ｍｌ、７．５ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ、８．５ｍｇ／ｍｌ、９．０ｍｇ／ｍｌ、９．５ｍｇ／ｍｌ、１０．０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、または２０ｍｇ／ｍｌである。
【００４４】
ビタミンＥは脂溶性部分であり、抗酸化剤としていくらかの有効性を示すが、文献の理論では、ビタミンＥは別の手法と組み合わせるとより良好に機能すると仮定されている。様々な実施形態では、リポソームは、ビタミンＥまたは任意の他の抗酸化剤との脂質可溶化混合物としてＤＬＰＣおよびまたはＤＰＰＣを含む。
【００４５】
抗酸化剤の例には、トコフェロール、トコトリエノール、アルファ−トコフェロール、ベータ−トコフェロール、ガンマ−トコフェロール、デルタ−トコフェロール、アルファ−トコトリエノール、ベータ−トコトリエノール、アルファ−トコフェロールキノン、トロロックス（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、フラボノイド、イソフラボン、リコピン、ベータ−カロテン、セレン、ユビキノン、ルエチン、Ｓ−アデノシルメチオニン、グルタチオン、タウリン、Ｎ−アセチルシステイン、クエン酸、Ｌ−カルニチン、ＢＨＴ、モノチオグリセロール、アスコルビン酸、没食子酸プロピル、メチオニン、システイン、ホモシステイン、グルタチオン、シスタミンおよびシスタチオニン、ならびにグリシン−グリシン−ヒスチジン（トリペプチド）が含まれるが、これらに限定されない。様々な実施形態では、抗酸化剤は、脂溶性抗酸化剤である。
【００４６】
様々な実施形態では、リポソーム中のビタミンＥの濃度は、約１〜２０ｍｇ／ｍｌ、約５〜２５ｍｇ／ｍｌ、約１０〜１５ｍｇ／ｍｌ、または約２〜１０ｍｇ／ｍｌ、約４〜１０ｍｇ／ｍｌ、または約４〜８ｍｇ／ｍｌである。
【００４７】
肝機能を回復させる別の手法は、新しい細胞成長を刺激することであり得る。脂質粒子またはリポソームは、水溶液の担体であり得る。肝成長ペプチドと呼ばれる１つの成長ホルモンであるＧＨＫは、肝幹細胞成長を刺激することができ、強力な抗酸化剤でもある。様々な実施形態では、リポソームは、幹細胞成長因子を肝臓などの組織に送達するのに有用である。様々な実施形態では、成長因子は、肝成長因子である。様々な実施形態では、幹細胞成長因子は、タンパク質またはペプチドである。様々な実施形態では、ペプチドは、ＧＨＫペプチドである。様々な実施形態では、幹細胞成長因子は、リポソーム、ミセル、または乳濁液内に封入される。
【００４８】
様々な実施形態では、リポソームは抗線維症性であり、かつ／または抗線維症剤を含むことが企図される。様々な実施形態では、抗線維症剤は、脂溶性である。本明細書での使用が企図される抗線維症剤は、以下により詳細に記載される。
【００４９】
さらに、リポソームは、ポリエチレングリコール、ＰＬＧＡ、界面活性剤、および／または界面活性剤を含むが、これらに限定されない、安定剤または他の不活性成分を含み得る。様々な実施形態では、ＰＥＧは、約２〜２０ｍｇ／ｍｌ、約５〜１５ｍｇ／ｍｌ、または約４〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度でリポソーム中にある。
【００５０】
様々な実施形態では、リポソームは、重量％組成に基づいて、以下の１０〜５０％のＤＬＰＣ、１０〜５０％のＤＰＰＣ、０〜５％のコレステロール、５〜２０％のビタミンＥまたは他の抗酸化剤、および任意に０〜１５％のＰＥＧの組成を有し得る。これらの範囲内の構成成分の組み合わせは、本明細書中のリポソームを作製するのに有用であり、本開示により具体的に提供されることが企図される。リポソーム含有量は、組成物の化学含有量を決定するために使用されるＨＰＬＣまたは他の分析技法により測定され得る。
使用方法
【００５１】
本明細書に開示されるリポソームは、線維症、および関連線維症を有する状態または線維症前状態、例えば、脂肪性肝疾患、ＮＡＳＨまたは他の関連疾患を治療するために有用であると企図される。以前の研究は、主にポリエニルホスファチジルコリン（ＰＰＣ）の種を含有する大豆レシチン抽出物が、ヒヒのアルコール誘発性硬変症を防ぐと記載している（Ｌｅｉｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０６：１５２−１５９，１９９４）。ヒヒには、レシチン抽出物を直接彼らの食事とともに供給した。本明細書のＤＬＰＣリポソームは、ＤＬＰＣまたはＤＰＰＣがＬＲＨ−１および／またはＰＰＡＲアルファに結合することにより、肝臓または他の組織を標的とすると仮定されている。
【００５２】
ＤＬＰＣ、ＤＰＰＣ、およびビタミンＥは、ＮＡＳＨにおける療法に適用可能である薬剤として以前から特定されている。ＮＡＳＨにおけるビタミンＥの経口補給を評価する臨床試験は完了している（Ｇａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０１７；１０２：１６−３６）。ＤＬＰＣおよびＤＰＰＣの両方が、単独で、および他のリン脂質と組み合わせて、肝線維症の前臨床動物モデル（霊長類および齧歯類およびヒヒ）で評価されている。例えば、Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍ  １９９８；２４８：１７４−１７９、Ｎａｖｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍ  ２００２；２９１：１１０９−１１１２、Ｌｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９９０；１２：１３９０−９８、Ｌｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｃｏｈｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｅｓ  １９９７：２１：３７５−３７９、Ｍｕｓｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、１９：５３２−Ｓ２、およびＣｈａｋｒａｖａｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２００９；１３８：４７６−４８８を参照されたい。
【００５３】
ＤＬＰＣの動研究は、ＤＬＰＣが線維症で極めて重要な役割を果たすことが既知の細胞内受容体である肝臓受容体ホモログ−１（ＬＲＨ−１）（上記のＭｕｓｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，）に結合し、その作用を調整することにより、肝線維症につながる炎症過程を緩和する能力を有することを実証している。これらの前臨床研究では、ＤＬＰＣは、固形飼料とともに経口投与されている。ＤＬＰＣは以前に、経口投与経路を使用したヒトの臨床試験でも研究された。この研究では、ＤＬＰＣはおそらく経口バイオアベイラビリティが低いため、有意な臨床効果がないことが判明した。
【００５４】
アルファートコフェロール（ビタミンＥ）は、フリーラジカルに依存する過酸化反応を停止させる連鎖破壊酸化防止剤である脂溶性ビタミンである。具体的には、ビタミンＥは、肝細胞膜における多価不飽和脂質の過酸化反応を防ぐことが示されている。ビタミンＥは、肝線維症のモデルで細胞保護作用があることが示され、最近では、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）およびＮＡＳＨを有する患者を対象としたいくつかのランダム化試験で研究されている。これらの試験では、生検でＮＡＳＨが証明された患者は、経口ビタミンＥ補給の利益を受け得ることが示され、ビタミンＥ試験においてそのような患者は、脂肪肝および小葉炎症における改善を実証しているが、門脈炎症または線維症における改善を実証していない。米国肝疾患研究協会の現在のガイドラインでは、生検でＮＡＳＨが証明された患者の治療の第１の選択療法として、ビタミンＥの補給が推奨されている（上記のＧａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，）。
【００５５】
様々な実施形態では、対象は、線維症、または関連線維症につながるか、もしくは関連線維症である疾患もしくは状態に罹患している。様々な実施形態では、疾患または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎、肝炎、肝硬変、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または間質性肺線維症である。
【００５６】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、アルコール乱用がない場合に発生する一連の疾患を表す。それは、脂肪症（肝臓の脂肪）の存在を特徴とし、メタボリックシンドローム（肥満、糖尿病、および高トリグリセリド血症を含む）の肝症状を表し得る。ＮＡＦＬＤはインスリン抵抗性に関連しており、それにより、成人および子供において肝疾患が引き起こされ、最終的に硬変症につながり得る（Ｓｋｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２００１；３５：１９５−９、Ｃｈｉｔｔｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００２；３５（２）：３７３−９）。ＮＡＦＬＤの重症度は、比較的良性の孤立した主に大滴性脂肪症（すなわち、非アルコール性脂肪性肝疾患またはＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（Ａｎｇｕｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２００２；１７  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１８６−９０）までの範囲である。ＮＡＳＨは、脂肪症、細胞学的バルーニング、散在性炎症、および細胞周囲線維症の組織学的存在を特徴とする（Ｃｏｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ａｎａｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００２；９：３７−５１）。ＮＡＳＨに起因する肝線維症は、肝硬変または肝不全に進行する可能性があり、場合によっては、肝細胞癌につながり得る。
【００５７】
ＮＡＦＬＤがＮＡＳＨに進展するメカニズムは不明なままである。インスリン抵抗性はＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨの両方に関連しているため、ＮＡＳＨが発生するには他の追加の要因も必要であると想定される。これは「２ヒット」仮説（Ｄａｙ  Ｃ  Ｐ．，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２００２；１６（５）：６６３−７８）と呼ばれ、肝臓内の脂肪の蓄積および酸化ストレスが増加した大量のフリーラジカルの存在を伴う。大滴性脂肪症は、トリグリセリドの肝蓄積を表し、これは、肝臓への遊離脂肪酸の送達と利用との間の不均衡が原因である。カロリー摂取量が増加している期間中、トリグリセリドは蓄積され、予備のエネルギー源として作用する。食事のカロリーが不十分な場合、（脂肪に含まれる）貯蔵トリグリセリドは脂肪分解を受け、脂肪酸が循環に放出され、肝臓に取り込まれる。脂肪酸の酸化は、利用のためのエネルギーを生み出す。
【００５８】
ＮＡＳＨの治療は現在、肝臓内の脂肪蓄積および酸化ストレスを引き起こすフリーラジカルの過剰蓄積という２つの主要な病原因子の低減を中心に展開している。一部の研究では、抗酸化剤を用いた治療による酸化ストレスの低減が効果的であることが示されている。例えば、脂肪症を有した肥満の子供は、ビタミンＥ（４００〜１０００ＩＵ／日）で４〜１０ヶ月間治療された（Ｌａｖｉｎｅ  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  ２０００；１３６（６）：７３４−８）。ＢＭＩの任意の有意な変化にもかかわらず、平均ＡＬＴレベルは、１７５．＋−．１０６ＩＵ／Ｌから４０．＋−．２６ＩＵ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）に減少し、平均ＡＳＴレベルは１０４．＋−．６１ＩＵ／Ｌから３３．＋−．１１ＩＵ／Ｌ（Ｐ＜０．００２）に減少した。ビタミンＥ療法の中止を選択した患者では、肝トランスアミナーゼが増加した。ビタミンＥを１年間使用した成人の研究では、肝トランスアミナーゼ、ならびに線維症マーカーＴＧＦβレベルの類似の低減が実証された（Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２００１；１５（１０）：１６６７−７２）。しかし、ＲＯＳスカベンジャーを用いたすべての治療が効果的であったわけではない。
【００５９】
脂肪症はまた、活性酸素種（ＲＯＳ）および抗酸化防御の減少による酸化ストレスにより脂肪性肝炎に進展し得る（Ｓａｎｙａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００１；１２０（５）：１１８３−９２）。ＲＯＳは、ミトコンドリアの酸化、ペルオキシソーム、チトクロームＰ４５０、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、およびリポオキシゲナーゼを伴ういくつかの経路を通じて肝臓で生成され得る（Ｓａｎｙａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２００５；２（１）：４６−５３）。インスリン抵抗性および高インスリン症は、肝臓のＣＹＰ２ＥＩ活性の増加により、肝臓の酸化ストレスおよび脂質過酸化を増加させると示されている（Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００１；２８１（５）：Ｇ１１３５−９、Ｌｅｃｌｅｒｃｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０００；１０５（８）：１０６７−７５）。
【００６０】
ＮＡＦＬＤは、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）、脂肪症のための肝生検の組織病理学スコアの和（０〜３）、小葉炎症（０〜２）、および肝細胞バルーニング（０〜２）によりＮＡＳＨと区別され得る。＜３のＮＡＳはＮＡＦＬＤに相当し、３〜４のＮＡＳはＮＡＳＨの境界に相当し、≧５のＮＡＳはＮＡＳＨに相当する。生検で、線維症もスコア付けされる（０〜４）。
【００６１】
線維症は、磁気共鳴エラストグラフィ（ＭＲＥ）およびＦＩＢＲＯＳＣＡＮ（登録商標）超音波／一過性エラストグラフィを使用した非侵襲的方法でも測定され得る。
【００６２】
様々な実施形態では、投与は、ＮＡＳＨを有する対象における脂肪症、小葉炎症、門脈炎症、および／または肝細胞バルーニングの進行を遅延させるか、またはそれらの発生率を低減させる。
【００６３】
線維症は、身体の自然治癒プロセスがうまくいかない場合に発生する病理学的プロセスであり、組織の損傷に応答して細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の過剰産生および瘢痕形成につながる。線維症の形成には、多くの細胞型とサイトカインとの間の相互作用が伴われ、均衡が線維化促進になると、線維症の形成がある。いくつかの実施形態では、線維症は、肺、心臓、血管、肝臓、胆嚢、腎臓、皮膚、肺、筋肉、膵臓、眼、副腎、甲状腺、または体の他の器官の線維症である。一部の線維症の原因は現在不明であるか、よく理解されていない。線維症は、典型的には、不可逆的なプロセスであると考えられている。
【００６４】
慢性肺線維症は、慢性炎症プロセス（サルコイドーシス、ウェゲナー肉芽腫症）、感染症、環境因子（アスベスト、シリカ、ある特定のガスへの暴露）、電離放射線（胸部の腫瘍を治療するための放射線療法など）への暴露、持病（ループス、関節リウマチ）、およびさらにある特定の薬物療法を含む多くの状態により引き起こされ得る肺全体の瘢痕に起因する。過敏性肺炎として既知の状態では、吸入された有機性粉塵または職業性化学物質に対する免疫反応が高まると、肺の線維症が発症し得る。この状態はほとんどの場合、細菌、真菌、または動物性製品で汚染された粉塵を吸い込むことに起因する。現在、線維化疾患のための治療選択肢は限られている。患者にプレドニゾンおよびアザチオプリンを与えることは標準的な臨床診療であるが、これらの薬物が任意の療法的利益を提供することを示すデータはない。
【００６５】
追加の線維性障害には、慢性閉塞性肺疾患、肝線維症、関節リウマチ、うっ血性心不全、慢性腎疾患、過敏性肺炎、呼吸性気管支炎／間質性肺疾患、マンソン住血吸虫感染、原発性肺高血圧症（網状病変の形成の防止）、ヘルペスウイルス関連疾患（肺および皮膚症状を含む）、ケロイド瘢痕、ループス、腎性線維化性皮膚症、日本住血吸虫感染症に関連する線維化病変、自己免疫疾患、病原性線維症、ライム病、膵炎および間質性線維症における間質性リモデリング、子宮筋腫、卵巣線維症、角膜線維症、うっ血性心不全および他の虚血後状態、腹部癒着、広角緑内障線維柱帯切開後、およびそれらの任意の組み合わせを含む手術後の瘢痕、または薬物療法もしくは放射線療法に起因する瘢痕が含まれる。
【００６６】
様々な実施形態では、投与は、肝線維症、肝臓の脂肪含有量、ＡＬＴおよびＡＳＴなどの肝アミノトランスフェラーゼレベルの増加、血清フェリチンの増加、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ガンマ−ＧＴ）のレベルの上昇、ならびに血漿インスリン、コレステロール、およびトリグリセリドのレベルの上昇、原因不明の空咳、息切れ、運動耐性の低下、皮膚の黄変（黄疸）、疲労、衰弱、食欲不振、かゆみ、ならびにあざを含むが、これらに限定されない、本明細書に記載の線維性疾患の１つ以上の症状を改善する。
【００６７】
脂質粒子組成物は、ＮＡＳＨまたは線維症の他の局面を治療するために有用な第２の薬剤とともに投与されることがさらに企図される。第２の薬剤は、抗糖尿病剤、サイトカイン、成長因子、他の抗炎症剤、抗凝固剤、血圧を低下または低減させる薬剤、コレステロール、トリグリセリド、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、もしくはリポタンパク質（ａ）を低減させるかまたはＨＤＬを増加させる薬剤、コレステロール調節タンパク質のレベルを増加または減少させる薬剤、抗腫瘍薬または分子などの他の療法剤であり得る。
【００６８】
例示的な第２の薬剤には、ＮＡＳＨまたは糖尿病を治療するために使用される薬剤、単独またはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）かプレドニゾロン、もしくは他のコルチコステロイドと組み合わせたシクロホスファミド、抗炎症剤、アザチオプリン、あるいは抗線維症剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
例示的な抗糖尿病薬には、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリセンチド、スルホニル尿素、ＡＹ３１６３７）、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール）、チアゾールイジンジオン（例えば、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、グリピジド、バラグリタゾン、リボグリタゾン、ネトグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、ＡＤ５０７５、Ｔ１７４、ＹＭ２６８、Ｒ１０２３８０、ＮＣ２１００、ＮＩＰ２２３、ＮＩＰ２２１、ＭＫ０７６７、シグリタゾン、アダグリタゾン、ＣＬＸ０９２１、ダルグリタゾン、ＣＰ９２７６８、ＢＭ１５２０５４）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）およびＧＬＰ類似体もしくはＧＬＰ−１受容体のアゴニスト（例えば、エキセンディン）またはそれらの安定剤（例えば、シタグリプチンなどのＤＰＰ４阻害剤）、インスリンまたはその類似体もしくは模倣体（例えば、ＬＡＮＴＵＳ）、あるいは甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニスト（ソベチロム、エプロチロム、ＭＢ０７８１１（２Ｒ、４Ｓ）−４−（３−クロロフェニル）−２−［（３，５−ジメチル−４−（４’−ヒドロキシ−３’−イソプロピルベンジル）フェノキシ）メチル］−２−オキシド−［１−３］−ジオキサホスホナン、ＭＧＬ３１９６  ２−［３，５−ジクロロ−４−（５−イソプロピル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−３−イルオキシ）フェニル］−３，５−ジオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ［１、２、４］トリアジン−６−カルボニトリル（Ｊａｋｏｂｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ２０１７；７７（１５）：１６１３−１６２１を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７０】
本開示の方法での使用が企図される抗線維症剤は、線維症に影響を与える任意の薬剤であり得る。企図される薬剤には、１つ以上のＴＧＦ−βアイソフォームを標的とする抗体、ＴＧＦ−β受容体キナーゼＴＧＦＢＲ１（ＡＬＫ５）およびＴＧＦＢＲ２の阻害剤、ならびに受容体後シグナル伝達経路のモジュレーターを含む形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−β）の活性を低減させるもの（ＧＣ−１００８（Ｇｅｎｚｙｍｅ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、レルデリムマブ（ＣＡＴ−１５２；Ｔｒａｂｉｏ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）、メテリムマブ（ＣＡＴ−１９２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ＬＹ−２１５７２９９（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＡＣＵ−ＨＴＲ−０２８（Ｏｐｋｏ  Ｈｅａｌｔｈ）を含むが、これらに限定されない）；ケモカイン受容体シグナル伝達；エンドセリン受容体ＡおよびＢの両方を標的とする阻害剤、ならびにエンドセリン受容体Ａを選択的に標的とする阻害剤を含むエンドセリン受容体拮抗薬（アンブリセンタン、アボセンタン、ボセンタン、クラゾセンタン、ダルセンタン、ＢＱ−１５３、ＦＲ−１３９３１７、Ｌ−７４４４５３、マシテンタン、ＰＤ−１４５０６５、ＰＤ−１５６２５２、ＰＤ１６３６１０、ＰＳ−４３３５４０、Ｓ−０１３９、シタキセンタンナトリウム、ＴＢＣ−３７１１、ジボテンタンを含むが、これらに限定されない）；結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）の活性を低減させる薬剤（ＦＧ−３０１９，ＦｉｂｒｏＧｅｎを含むが、これに限定されない）（および他のＣＴＧＦ中和抗体も含まれる）；マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤（ＭＭＰＩ−１２、ＰＵＰ−１、およびチガポチド三フッ化物を含むが、これらに限定されない）；エルロチニブ、ゲフィチニブ、ＢＭＳ−６９０５１４、セツキシマブ、ＥＧＦ受容体を標的とする抗体、ＥＧＦ受容体キナーゼの阻害剤、および受容体後シグナル伝達経路のモジュレーターを含むが、これらに限定されない上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の活性を低減させる薬剤；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）の活性を低減させる薬剤（メシル酸イマチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を含むが、これに限定されない）（ならびにＰＤＧＦ中和抗体、ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）を標的とする抗体、ＰＤＧＦＲキナーゼ活性の阻害剤、および受容体後シグナル伝達経路も含まれる）；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を低減させる薬剤（アキシチニブ、ベバシズマブ、ＢＩＢＦ−１１２０、ＣＤＰ−７９１、ＣＴ−３２２、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＰＴＣ−２９９、およびラムシルマブを含むが、これらに限定されない）（かつＶＥＧＦ中和抗体、ＶＥＧＦ受容体１（ＶＥＧＦＲ１、Ｆｌｔ−１）およびＶＥＧＦ受容体２（ＶＥＧＦＲ２、ＫＤＲ）、ＶＥＧＦＲ１の可溶型（ｓＦｌｔ）、ならびにＶＥＧＦを中和するそれらの誘導体を標的とする抗体、さらにＶＥＧＦ受容体キナーゼ活性の阻害剤も含まれる）；血管内皮成長因子、線維芽細胞成長因子、および血小板由来成長因子の受容体キナーゼを阻害するＢＩＢＦ−１１２０などの複数の受容体キナーゼの阻害剤；インテグリン機能を妨害する薬剤（ＳＴＸ−１００およびＩＭＧＮ−３８８を含むが、これらに限定されない）（およびインテグ���ン標的抗体も含まれる）；ＩＬ−４（ＡＥＲ−００１、ＡＭＧ−３１７、ＡＰＧ−２０１、およびｓＩＬ−４Ｒαを含むが、これらに限定されない）およびＩＬ−１３（ＡＥＲ−００１、ＡＭＧ−３１７、アンルキンズマブ、ＣＡＴ−３５４、シントレデキンベスドトックス、ＭＫ−６１０５、ＱＡＸ−５７６、ＳＢ−３１３、ＳＬ−１０２、およびＴＮＸ−６５０を含むが、これらに限定されない）の線維化促進活性を妨害する薬剤（ならびにサイトカイン、ＩＬ−４受容体もしくはＩＬ−１３受容体を標的とする抗体、ＩＬ−４受容体の可溶型、またはＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方を結合させ、中和すると報告されているそれらの誘導体のいずれかに対する中和抗体、ＩＬ−１３の全部または一部および毒素、特にシュードモナスエンドトキシンを含むキメラタンパク質、ＪＡＫ−ＳＴＡＴキナーゼ経路を通るシグナル伝達も含まれる）；ｍＴｏｒの阻害剤を含む上皮間葉移行を妨害する薬剤（ＡＰ−２３５７３を含むが、これに限定されない）；テトラチオモリブデートなどの銅のレベルを低減させる薬剤；Ｎ−アセチルシステインおよびテトラチオモリブデートを含む酸化ストレスを低減する薬剤；さらにインターフェロンガンマが含まれるが、これらに限定されない。また、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）の阻害剤（ロフルミラストを含むが、これらに限定されない）、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）の阻害剤（ミロデナフィル、ＰＦ−４４８０６８２、クエン酸シルデナフィル、ＳＬｘ−２１０１、タダラフィル、ウデナフィル、ＵＫ−３６９００３、バルデナフィル、およびザプリナストを含むが、これらに限定されない）、またはシクロオキシゲナーゼおよび５−リポキセゲナーゼ阻害剤を含むアラキドン酸経路の修飾因子（ジロイトンを含むが、これに限定されない）である薬剤も企図される。プロリルヒドロラーゼ阻害剤（１０１６５４８、ＣＧ−００８９、ＦＧ−２２１６、ＦＧ−４４９７、ＦＧ−５６１５、ＦＧ−６５１３、フィブロスタチンＡ（Ｔａｋｅｄａ）、ルフィロニル、Ｐ−１８９４Ｂ、およびサフィロニル）、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマアゴニスト（ピオグリタゾンおよびロシグリタゾンを含むが、これらに限定されない）を含む組織リモデリングまたは線維症を低減する化合物がさらに企図される。
【００７１】
企図される他の特定の抗線維症剤には、リラキシン、ピルフェニドン、ウフィロニル、スリフォニル、ＴＧＦ−β抗体、ＣＡＴ−１９２、ＣＡＴ−１５８；アンブレセンタン、セリン；ＣＴＧＦ抗体であるＦＧ−３０１９；抗ＥＧＦＲ抗体；ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤；タルセバ；ゲフィチニブ；ＰＤＧＦ抗体、ＰＤＧＦＲキナーゼ阻害剤；グリーベック；ＢＩＢＦ−１１２０、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦ受容体阻害剤；抗インテグリン抗体；ＩＬ−４抗体；銅キレート剤であるテトラチオモリブデート；インターフェロン−ガンマ；システインプロドラッグであるＮＡＣ；肝細胞成長因子（ＨＧＦ）；ＫＧＦ；アンジオテンシン受容体遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、レンニン阻害剤；ＣＯＸおよびＬＯ阻害剤；ジロイトン；モンテルカスト；アバスチン；スタチン；シルデナフィル、ウデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、またはザプリナストなどのＰＤＥ５阻害剤；ロフルミラスト；エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）；凝固促進剤；ＰＧＥ２、ＰＲＸ−０８０６６、５ＨＴ２Ｂ受容体拮抗薬などのプロスタグランジン；遺伝子操作されたシュードモナス外毒素にコンジュゲートしたキメラヒトＩＬ１３であるシントレデキンベスドトックス；ＰＤＥ４阻害剤であるロフルミラスト；抗結合組織成長因子ヒトモノクローナル抗体であるＦＧ−３０１９；ＴＧＦ−βヒトモノクローナル抗体であるＧＣ−１００８；プロスタサイクリン類似体であるトレプロスチニル；インターフェロン−α；ＩＬ１３モジュレーターであるＱＡＸ−５７６；ＰＡＦ受容体拮抗薬であるＷＥＢ２０８６；メシル酸イマチニブ；ＦＧ−１０１９；スラミン；ボセンタン；ＩＦＮ−１ｂ；抗ＩＬ−４；抗ＩＬ−１３；タウリン、ナイアシン、ＮＦ−κＢアンチセンスオリゴヌクレオチド；ならびに一酸化窒素シンターゼ阻害剤が含まれる。
【００７２】
本明細書で企図される脂質粒子、例えば、リポソーム、ミセル、または乳濁液は、非経口、局所、鼻腔内、吸入、または経口投与などのいくつかの経路により投与され得る。一実施形態では、本組成物は、非経口、例えば、静脈内投与に好適である。一実施形態では、本組成物は、例えば、経皮パッチによる局所投与に好適である。脂質粒子は、薬物デポー剤を介しても投与され得る。
【００７３】
製造
本明細書に記載されるリポソームまたはナノ粒子を作製する方法も提供される。
【００７４】
様々な実施形態では、リポソームは、ホスファチジルコリンの天然混合物から、または精製された合成ホスファチジルコリンから製造される。リポソームは、商業実験室により製造され得る。ある特定の方法では、リポソームは、マイクロ流体エタノール注入のバージョンにより製造され、リポソーム製造の最適な制御を可能にする。例えば、プロセスは、単一ステップの無菌プロセスであり得る。リポソームのサイズは、小胞形成中にプロセスパラメーターを調整することにより調節される。生産にはクローズドシステムが使用される。すべての構成成分は、除菌ろ過で添加され得る。クロスフローろ過によるその後の濃縮も可能である。
【００７５】
この方法は、均質均一な小胞で、バッチ間の良好な一貫性を提供する。
【００７６】
製造プロセスで使用されるすべての構成成分は、純度を決定するために試験され、エンドトキシン、ｐＨ、目視検査などの分析試験が品質管理を確認するために実行される。これらには、ＨＰＬＣを使用してリポソーム壁内の各リン脂質の量を決定することが含まれる。
【００７７】
製剤
本開示のリポソームまたはナノ粒子を投与するために、様々な送達システムが使用され得る。本開示の様々な実施形態では、リポソーム組成物の投与は、静脈内点滴による。いくつかの実施形態では、投与は、３０分、１時間、または２時間の静脈内点滴による。
【００７８】
リポソーム組成物は、１つ以上の薬学的に適合性のある成分を含む医薬組成物として投与され得る。例えば、医薬組成物は、典型的には、１つ以上の薬学的に許容される担体、例えば、水ベースの担体（例えば、除菌液体）を含む。
【００７９】
本組成物は、必要に応じて、例えば、生理食塩水、緩衝液、塩、非イオン性界面活性剤、および／または糖も含有し得る。好適な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”に記載されている。
【００８０】
本開示は、例えば、治療有効量のリポソームまたはナノ粒子、緩衝剤、任意に凍結保護剤、任意に増量剤、任意に塩、および任意に界面活性剤を含む医薬組成物を提供する。追加の薬剤が本組成物に添加され得る。単一の薬剤が複数の機能を提供し得る。例えば、トレハロースなどの糖は、凍結保護剤および増量剤の両方として作用し得る。本開示に従って、任意の好適な薬学的に許容される緩衝剤、界面活性剤、サイロ保護剤、および増量剤が使用され得る。
【００８１】
本開示の製剤は、本明細書に記載の方法または疾患を治療するための他の方法とともに使用され得る。
【００８２】
キット
さらなる態様として、本開示は、本開示の方法を実践するためにそれらの使用を容易にする様式でパッケージ化された１つ以上のリポソームまたはナノ粒子化合物または組成物を含むキットを含む。一実施形態では、かかるキットは、密封ボトルまたは器などの容器の中にパッケージ化された、本明細書に記載される化合物または組成物（例えば、リポソームまたはナノ粒子を単独で、または抗線維症剤と組み合わせて含む組成物）を含み、本方法の実践における化合物または組成物の使用を記載するラベルが容器に貼付されているかまたはパッケージに含まれる。好ましくは、本化合物または本組成物は、単位剤形でパッケージ化されている。キットは、特定の投与経路に従う組成物の投与のため、またはスクリーニングアッセイの実践のために好適なデバイスをさらに含んでもよい。好ましくは、キットは、リポソームまたはナノ粒子組成物の使用を記載するラベルを含む。
【００８３】
本開示の血清代替物の追加の態様および詳細は、限定的ではなく例示的であることが意図される以下の実施例から明白になるであろう。
【実施例】
【００８４】
実施例１−ホスファチジルコリンを含むリポソームは、マウスの肝線維症を低減する。
肝疾患のマウスモデルはいくつかあるが、ヒトの肝疾患を完全に模倣するモデルは一つもない。摂食動物モデルは、例えば、高脂肪食またはアルコールを給餌することにより、対象の動物の食餌を変更し、これは、長期にわたると硬変肝につながる。四塩化炭素（ＣＣｌ４）などの肝臓毒性動物モデルは、投与した薬剤の毒性作用により肝障害を引き起こし、結果として線維症になる（Ｔｒａｕｔｗｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ６２：Ｓ１５−Ｓ２４，２０１５、Ｐｏｐｏｖ  ａｎｄ  Ｓｃｈｕｐｐａｎ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ５０：１２９４−１３０５，２００９）。食餌と組み合わせるとＮＡＳＨをシミュレートする遺伝的動物モデルもある。マウスモデルのいずれにおいても、線維症およびまたは脂質の無秩序の測定は、疾患の指標である。現在の療法の使用は、線維症を低減し、肝酵素を減少させる。
【００８５】
ＮＡＳＨのラットモデルおよびウサギモデルも存在する。これらの動物モデルの両方は、給餌方法を利用して、肝疾患を誘発する。摂食モデルでは、動物は高脂肪食により体重が増加し、線維症および肝酵素の上昇を示す。本発明のリポソーム療法は、これらの動物の線維症を減少させ、肝酵素を減少させる。
【００８６】
材料および方法
【００８７】
動物情報：ＢＡＬＢ／Ｃ雄マウスを、水および１８％のタンパク質、５％の脂肪、および５％の繊維からなる標準的な齧歯類の餌（Ｈａｒｌａｎ照射２９１８）を自由に摂食できるように飼育した。換気、温度、および湿度などのミクロおよびマクロ環境の要素は、飼育室のスタッフが毎日記録し、書類で追跡する。動物にビヒクル対照またはリポソームを投与し、これは、ＣＣｌ４処置の２週間後に開始された。投与２８日後の２４時間以内に実験を終了した。
【００８８】
ＣＣｌ４損傷：トウモロコシまたはオリーブオイル配合の四塩化炭素（ＣＣｌ４）に０．５μｌ／ｇの２０％溶液を週に２〜３回６週間投与して、肝線維症を誘発させた。
【００８９】
リポソーム：当技術分野で一般的に使用されるエタノール滴下法を使用して、リポソームを作製した。手短に言えば、ＤＰＰＣとＤＬＰＣとの混合物をエタノールと滴下混合して、リポソーム形成を誘発した。リポソームは、ホフスチジルコリンとビタミンＥとから構成されていた。任意に、リポソームは、５／ｍｇ／ｋｇのコレステロールを含み得る。
【００９０】
療法的投与：線維症を誘発するための２週間のＣＣｌ４投与後、マウスを、治療を受けない対照群、ＣＣｌ４＋生理食塩水、２回／週の腹腔内投与（ｉｐ）でリポソーム療法を受ける治療群Ｉ、および３回／週のｉｐでリポソーム療法を受ける治療群ＩＩのｎ＝８／群である治療群に分ける。マウスは、用量あたり１０ｍｇ／ｋｇのリポソーム（５ｍｇ／ｋｇのＤＰＰＣおよび５ｍｇ／ｋｇのＤＬＰＣを有する）を受け、合計で２０ｍｇ／ｋｇ／週または３０ｍｇ／ｋｇ／週を受けた。
【００９１】
研究の終了：４週間の投薬が完了すると、ＣＯ２吸入法を使用してマウスを安楽死させた。肝臓を分離し、重さを量り、４つの２００〜３００ｍｇの大きな切片および２つの５０〜１００ｍｇの小さな切片に各々切り分けた。大きな葉をホルマリン固定し、小さな切片を分析のために瞬間凍結した。
【００９２】
採血：研究開始時に、伏在静脈または顎下静脈穿刺技法によりｎ＝４／２４（試験ベースライン）の血液を採取した。（予想血清量３０〜５０μｌ）。心臓穿刺により採取された終末血
【００９３】
バイオマーカーアッセイおよび組織スコアリング：動物の血清中のＡＬＴおよびＡＳＴ酵素のレベルを測定した。肝臓試料（ホルマリン固定組織ブロック）を、Ｈ＆Ｅ、ピクロシリウスレッド染色のために処置し、次いで、線維症の病理についてスコア付けした。
【００９４】
結果
【００９５】
処置および未処置のＣＣｌ４動物の病理学スコアの分析は、ＤＬＰＣを含むリポソーム（Ｂａｓｔｅｔ１０１）の投与が処置された動物における線維症の重症度を治療的に低減することを示した（図１）。リポソームで処置した動物は、約１．５の平均病理学スコアを有するのに対し、未処置の動物は、約２の平均組織学的スコアを示し、これは、処置群と未処置群との間の統計的に有意な差（ｐ値≦０．０００９）を示す。図２は、対照または処置された肝組織におけるシリウスレッド（線維症のコラーゲン沈着に特異的な染色）の代表的な組織学的スライドを示す。本発明のリポソームを用いた処置は、対照および処置された動物において、ＡＬＴ、ＡＳＴ、および総ビリルビンのレベルからわかるように肝毒性を一切引き起こさず、ＣＣＬ４誘発性肝線維症を予防することが示された（図３）。
【００９６】
実施例２−ＮＡＦＬＤまたは肝線維症を有するヒト対象における療法的使用
本発明のリポソーム療法は、人間の使用のために設計されている。この療法は、ＮＡＳＨおよびアルコール性硬変症を含むが、これらに限定されない肝疾患を有するヒトに有用である。疾患マーカーは、線維症の増加、Ｆｉｂｒｏｓｃａｎにより測定した場合の肝臓の硬化の両方で類似している。肝生検は、肝疾患の診断にも使用される。
【００９７】
リポソームの安全性および忍容性を評価するために、療法を受けている対象は、１８歳を超え、生検で非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が証明され、組織病理学的ＮＡＳＨステージが≧１だが＜３の線維症スコアであることが証明されている。対象は、次のように群に分けられる：１）対象は、４週間ごとに１３０ｍＬの５％デキストロースのプラセボ点滴を受け、２）対象は、研究期間中、４週間に１回、１回分の用量で１３０ｍＬのリポソームのＩＶ点滴を受け、３）対象は、研究期間中、４週間に１回、２回分の用量で１３０ＭＬのリポソームを受ける。６週間ごとに、各対象は、履歴、身体検査、およびベースラインで行われる血液検査の繰り返しを行う。４ヶ月ごとに、肝臓の磁気共鳴エラストグラフィ（ＭＲＥ）試験および肝臓のＦＩＢＲＯＳＣＡＮ（登録商標）を繰り返す。
【００９８】
標的療法は、ＭＲＥ、ＦＩＢＲＯＳＣＡＮ（登録商標）、または肝生検により直接測定され得る、ヒト対象における線維症および関連する炎症を低減すると仮定されている。例えば、本発明のリポソームを用いた治療は、ＮＡＳＨを有する対象における脂肪症、小葉炎症、門脈炎症、および／または肝細胞バルーニングの進行を遅延させるか、またはそれらの発生率を低減させ得ると予想される。療法はまた、肝酵素（ＡＬＴ／ＡＳＴ、ビリルビン）を減少させ、血清アルブミンを増加させる可能性もある。いくつかの重症例では、療法により関連する腹水も低減される。
【００９９】
実施例３−リポソーム調合物
追加のリポソーム組成物を療法的投与のために開発した。リポソーム調合物は、２つのリン脂質、コレステロールおよびアルファ−トコフェロール（ビタミンＥ、ＶＩＴＥ）、ならびに任意にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。リン脂質は、１，２ジラウリル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）である。一実施例では、リポソームの水性内部は、０．９％の正常生理食塩水を含有する。リポソームは、以下の比率の構成成分を含有し得る：
【０１００】
【表１】
2021502404.tif 000002
【０１０１】
本発明のリポソームと、薬物送達に現在使用されている他のリポソームとの含有量の比較は以下の通りであり、これは、本発明のリポソームが、以前から既知のリポソームである、アンフォテリシンＢの送達に使用されるＡＭＢＩＳＯＭＥ（登録商標）およびドキソルビシンの送達に使用されるＤＯＸＩＬ（登録商標）とは異なる組成を含むことを示す。
【０１０２】
【表２】
2021502404.tif 000003
【０１０３】
上記の例示的な実施例に記載される本発明の多数の修正および変形が当業者には想起されると予想される。したがって、添付の特許請求の範囲に見られる限定のみが本発明に課せられるべきである。
【図１】
2021502404.tif 000004
【図２】
2021502404.tif 000005
【図３】
2021502404.tif 000006
【国際調査報告】
2021502404.tif 000007
2021502404.tif 000008