(57)【要約】  放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響を治療する方法は、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、対象に投与するステップを含む。放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響を治療するための組成物は、第１の抗ＡＧＥ抗体、第２の抗ＡＧＥ抗体、及び薬学的に許容される担体を含む。第１の抗ＡＧＥ抗体は、第２の抗ＡＧＥ抗体と異なる。放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法は、それを必要とする対象を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対して免疫化するステップを含む。
2021532114.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射線曝露の慢性影響を治療又は予防する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、対象に投与するステップを含む、前記方法。
【請求項２】
放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、第１の抗ＡＧＥ抗体と、第２の抗ＡＧＥ抗体とを含む組成物を、対象に投与するステップを含み；
前記第２の抗ＡＧＥ抗体が、前記第１の抗ＡＧＥ抗体と異なる、
前記方法。
【請求項３】
放射線曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、
抗ＡＧＥ抗体を、第一に投与するステップ；その後、
放射線曝露の前記慢性影響の治療における、前記第１の投与の有効性について、前記対象を調べるステップ；その後、
前記抗ＡＧＥ抗体を、第二に投与するステップ；
を含む、前記方法。
【請求項４】
放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、抗ＡＧＥ抗体の使用。
【請求項５】
放射線曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物。
【請求項６】
放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための組成物であって、
（ａ）第１の抗ＡＧＥ抗体、
（ｂ）第２の抗ＡＧＥ抗体、及び
（ｃ）薬学的に許容される担体
を含み、
前記第１の抗ＡＧＥ抗体が、前記第２の抗ＡＧＥ抗体と異なる、
前記組成物。
【請求項７】
放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、それを必要とする対象を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対して免疫化するステップを含む、前記方法。
【請求項８】
放射線曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、
第１のＡＧＥ抗原を含む第１のワクチンを投与するステップ；及び
任意で、第２のＡＧＥ抗原を含む第２のワクチンを投与するステップ；を含み、
前記第２のＡＧＥ抗原が、前記第１のＡＧＥ抗原と異なる、
前記方法。
【請求項９】
放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、ＡＧＥ抗原の使用。
【請求項１０】
放射線曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、ＡＧＥ抗原を含む組成物。
【請求項１１】
化学物質曝露の慢性影響を治療又は予防する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、対象に投与するステップを含む、前記方法。
【請求項１２】
化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、第１の抗ＡＧＥ抗体と、第２の抗ＡＧＥ抗体とを含む組成物を、対象に投与するステップを含み；
前記第２の抗ＡＧＥ抗体が、前記第１の抗ＡＧＥ抗体と異なる、
前記方法。
【請求項１３】
化学物質曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、
抗ＡＧＥ抗体を、第１に投与するステップ；その後、
化学物質曝露の前記慢性影響の治療における、前記第１の投与の有効性について、前記対象を調べるステップ；その後、
前記抗ＡＧＥ抗体を、第２に投与するステップ；
を含む、前記方法。
【請求項１４】
化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、抗ＡＧＥ抗体の使用。
【請求項１５】
化学物質曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物。
【請求項１６】
化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための組成物であって、
（ａ）第１の抗ＡＧＥ抗体、
（ｂ）第２の抗ＡＧＥ抗体、及び
（ｃ）薬学的に許容される担体
を含み、
前記第１の抗ＡＧＥ抗体が、前記第２の抗ＡＧＥ抗体と異なる、
前記組成物。
【請求項１７】
化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、それを必要とする対象を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対して免疫化するステップを含む、前記方法。
【請求項１８】
化学物質曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、
第１のＡＧＥ抗原を含む第１のワクチンを投与するステップ；及び
任意で、第２のＡＧＥ抗原を含む第２のワクチンを投与するステップ；を含み、
前記第２のＡＧＥ抗原が、前記第１のＡＧＥ抗原と異なる、
前記方法。
【請求項１９】
化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、ＡＧＥ抗原の使用。
【請求項２０】
化学物質曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、ＡＧＥ抗原を含む組成物。
【請求項２１】
組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２２】
対象が、ヒト、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ラクダ、アルパカ、イヌ、及びネコからなる群から選択される、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２３】
対象が、ヒトである、請求項１〜２２のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２４】
抗ＡＧＥ抗体が、ヒト、ネコ、イヌ、ウマ、ラクダ、アルパカ、ウシ、ヒツジ、ブタ、及びヤギからなる群から選択される種に対して非免疫原性である、請求項１〜２３のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２５】
抗ＡＧＥ抗体が、静脈内投与される、請求項１〜２４のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２６】
抗ＡＧＥ抗体が、局所投与される、請求項１〜２５のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２７】
抗ＡＧＥ抗体が、ＦＦＩ、ピラリン、ＡＦＧＰ、ＡＬＩ、カルボキシメチルリシン、カルボキシエチルリシン、及びペントシジンからなる群から選択されるＡＧＥ修飾を呈する少なくとも１つのタンパク質又はペプチドを含むＡＧＥ抗原に結合する、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２８】
抗ＡＧＥ抗体が、カルボキシメチルリシン修飾タンパク質又はカルボキシメチルリシン修飾ペプチドに結合する、請求項１〜２７のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項２９】
抗ＡＧＥ抗体が、カルボキシエチルリシン修飾タンパク質又はカルボキシエチルリシン修飾ペプチドに結合する、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３０】
第１の抗ＡＧＥ抗体及び第２の抗ＡＧＥ抗体が、ＦＦＩ、ピラリン、ＡＦＧＰ、ＡＬＩ、カルボキシメチルリシン、カルボキシエチルリシン、及びペントシジンからなる群から選択される異なるＡＧＥ修飾を呈する少なくとも１つのタンパク質又はペプチドを含むＡＧＥ抗原に結合する、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３１】
組成物が、単位投与量形態である、請求項１〜３０のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３２】
組成物が、複数回投与量形態である、請求項１〜３１のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３３】
組成物が、滅菌されている、請求項１〜３２のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３４】
免疫化するステップが、ＡＧＥ抗原を含むワクチンを投与するステップを含む、請求項１〜３３のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３５】
ワクチンが、
（ａ）ＡＧＥ抗原、
（ｂ）アジュバント、
（ｃ）任意で保存剤、及び
（ｄ）任意で賦形剤
を含む、請求項１〜３４のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３６】
ワクチンが、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドを有する細胞に対する抗体を産生する免疫系を引き起こすのに有効な量で投与される、請求項１〜３５のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３７】
ＡＧＥ抗原が、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−ヒトヘモグロビン、ＡＧＥ−アルブミン、ＡＧＥ−ＢＳＡ、ＡＧＥ−ヒト血清アルブミン、ＡＧＥ−オボアルブミン、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、ＡＧＥ−コラーゲンIV、ＡＧＥ−抗トロンビンIII、ＡＧＥ−カルモジュリン、ＡＧＥ−インスリン、ＡＧＥ−セルロプラスミン、ＡＧＥ−コラーゲン、ＡＧＥ−カテプシンＢ、ＡＧＥ−アルブミン、ＡＧＥ−クリスタリン、ＡＧＥ−プラスミノーゲン活性化因子、ＡＧＥ−内皮細胞膜タンパク質、ＡＧＥ−アルデヒドレダクターゼ、ＡＧＥ−トランスフェリン、ＡＧＥ−フィブリン、ＡＧＥ−銅／亜鉛ＳＯＤ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｂ、ＡＧＥ−フィブロネクチン、ＡＧＥ−膵リボース、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ａ−Ｉ及びII、ＡＧＥ−ヘモグロビン、ＡＧＥ−Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ、ＡＧＥ−プラスミノーゲン、ＡＧＥ−ミエリン、ＡＧＥ−リゾチーム、ＡＧＥ−免疫グロブリン、ＡＧＥ−赤血球Ｇｌｕ輸送タンパク質、ＡＧＥ−β−Ｎ−アセチルヘキソミナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｅ、ＡＧＥ−赤血球膜タンパク質、ＡＧＥ−アルドースレダクターゼ、ＡＧＥ−フェリチン、ＡＧＥ−赤血球スペクトリン、ＡＧＥ−アルコールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−ハプトグロビン、ＡＧＥ−チューブリン、ＡＧＥ−甲状腺ホルモン、ＡＧＥ−フィブリノーゲン、ＡＧＥ−β２−マイクログロブリン、ＡＧＥ−ソルビトールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−α１−抗トリプシン、ＡＧＥ−炭酸デヒドラターゼ、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、ＡＧＥ−ヘキソキナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｃ−Ｉ、ＡＧＥ−ＫＬＨ、及びこれらの混合物からなる群から選択される、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドである、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３８】
ＡＧＥ抗原が、カルボキシメチルリシン、カルボキシエチルリシン、ペントシジン、ピラリン、ＦＦＩ、ＡＦＧＰ、及びＡＬＩからなる群から選択されるＡＧＥ修飾を呈する少なくとも１つのタンパク質又はペプチドを含む、請求項１〜３７のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項３９】
ＡＧＥ抗原が、カルボキシメチルリシン修飾タンパク質又はカルボキシメチルリシン修飾ペプチドを含む、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４０】
ＡＧＥ抗原が、カルボキシエチルリシン修飾タンパク質又はカルボキシエチルリシン修飾ペプチドを含む、請求項１〜３９のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４１】
ワクチンが、滅菌されている、請求項１〜４０のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４２】
ワクチンが、単位投与量形態である、請求項１〜４１のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４３】
ワクチンが、複数回投与量形態である、請求項１〜４２のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４４】
医薬が、
（ａ）ＡＧＥ抗原、
（ｂ）アジュバント、
（ｃ）任意で保存剤、及び
（ｄ）任意で賦形剤
を含む、請求項１〜４３のいずれかに記載の使用。
【請求項４５】
組成物が、ワクチンを含む、請求項１〜４４のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４６】
ワクチンが、
（ａ）ＡＧＥ抗原、
（ｂ）アジュバント、
（ｃ）任意で保存剤、及び
（ｄ）任意で賦形剤
を含む、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４７】
治療するステップが、ワクチンを、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドを発現する細胞に対する抗体を産生する免疫系を引き起こすのに有効な量で、対象に投与するステップを含む、請求項１〜４６のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４８】
患者を調べて、慢性影響が改善されたかどうかを判定するステップ、及び
必要な場合に、免疫化を反復するステップ
をさらに含む、請求項１〜４７のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項４９】
抗ＡＧＥ抗体が、配列番号１、配列番号３、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドを含む、請求項１〜４８のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５０】
抗体が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、及び配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドを含む、請求項１〜４９のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５１】
抗体が、
重鎖、及び
軽鎖
を含み、
前記重鎖が、配列番号１、配列番号１７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、及び配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は
前記軽鎖が、配列番号３、配列番号１９、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項１〜５０のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５２】
抗体が、
重鎖、及び
軽鎖
を含み、
前記重鎖が、配列番号１、配列番号１７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、及び配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、
前記軽鎖が、配列番号３、配列番号１９、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項１〜５１のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５３】
抗体が、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、及び配列番号２８からなる群から選択されるアミノ酸配列と、少なくとも９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％の配列同一性を有する少なくとも１つのアミノ酸配列を含む相補性決定領域を含み、かつ、
抗体が、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ラクダ、アルパカ、イヌ、及びネコからなる群から選択される種に対して、実質的に非免疫原性である、
請求項１〜５２のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５４】
抗体が、ＡＧＥ修飾細胞の破壊を引き起こす薬剤にコンジュゲートされている、請求項１〜５３のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５５】
抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜５４のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５６】
抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜５５のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５７】
抗体が、ヒトに対して、実質的に非免疫原性である、請求項１〜５６のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５８】
抗体が、９×１０−３／秒以下の解離速度（ｋｄ）を有する、請求項１〜５７のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項５９】
薬剤が、毒素、細胞毒性剤、磁気ナノ粒子、及び磁気スピンボルテックスディスクからなる群から選択される、請求項１〜５８のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６０】
抗体が、対象の免疫系による、標的とする細胞の破壊を可能とする定常領域を含む、請求項１〜５９のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６１】
抗体が、二重特異性抗体である、請求項１〜６０のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６２】
放射線曝露の慢性影響が、白髪、しわ、フレイル、白内障、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、パーキンソン病、サルコペニア、脂肪組織の減少、前彎後彎症、がん、早発閉経、心血管疾患、認知症、II型糖尿病、内分泌障害、心機能障害、骨粗相症、骨関節炎、肺線維症、腎疾患及び肝疾患、代謝障害、リポジストロフィー、聴覚低下、視覚低下、並びに記憶障害からなる群から選択される、早期老化を模倣する少なくとも１つの症状を含む、請求項１〜６１のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６３】
化学物質曝露の慢性影響が、白髪、しわ、フレイル、白内障、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、パーキンソン病、サルコペニア、脂肪組織の減少、前彎後彎症、がん、早発閉経、心血管疾患、認知症、II型糖尿病、内分泌障害、心機能障害、骨粗相症、骨関節炎、肺線維症、腎疾患及び肝疾患、代謝障害、リポジストロフィー、聴覚低下、視覚低下、並びに記憶障害からなる群から選択される、早期老化を模倣する少なくとも１つの症状を含む、請求項１〜６２のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６４】
ＡＧＥ抗原が、ＣＭＬ−ＫＬＨ（carboxymethyllysine conjugated with keyhole limpet hemocyanin）を含む、請求項１〜６３のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６５】
放射線が、アルファ線、ベータ線、ガンマ線、Ｘ線、及び中性子線からなる群から選択される少なくとも１つの種類の放射線を含む、請求項１〜６４のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６６】
化学物質曝露が、化学兵器、化学療法剤、ＨＡＡＲＴ（高活性抗レトロウイルス療法）剤、毒物、又は酸化剤への曝露を含む、請求項１〜６５のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６７】
化学兵器が、塩素ガス、ホスゲンガス、マスタードガス、Ｇ剤、Ｖ剤、ノビチョク剤、カルバメート、及び殺虫剤からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む、請求項１〜６６のいずれかに記載の方法、使用、又は組成物。
【請求項６８】
早期老化を受ける対象を治療する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、前記対象に投与するステップを含み、
前記対象が、早老症候群に罹患していると診断されており、
前記早老症候群が、ハッチソン−ギルフォード早老症候群ではない、
前記方法。
【請求項６９】
早老症候群が、ウェルナー症候群、ブルーム症候群、ロスムンド−トムソン症候群、コケイン症候群、色素性乾皮症、硫黄欠乏性毛発育異常症、色素性乾皮症−コケイン症候群の組合せ、及び拘束性皮膚障害からなる群から選択される１又は２以上の早老症候群を含む、請求項１〜６８のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
早期老化又は老化の加速化は、生物が、実年齢が進んだ類似する生物において典型的に観察される生理学的変化を呈する場合に生じる。早期老化は、全生物に影響を及ぼす全身（whole-body又はsystemic）状態である。一部の変化は、白髪又はしわの進行（development）など、純粋に美容上の変化であり、健康に対して、負の影響を及ぼさない。他の変化は、白内障、動脈硬化症、又はアルツハイマー病の進行など、身体健康に重度の影響を与えうる。その最も重度の形態では、早期老化は、寿命の短縮を結果としてもたらしうる。
【０００２】
早期老化は、早老症候群として公知の遺伝障害のクラスの一般的症状である。大半の早老症候群は、ＤＮＡ修復機構の欠損、又はラミンＡ／Ｃタンパク質の欠損をもたらす、単一遺伝子の変異により引き起こされる（“Progeroid syndromes”, available online at en.wikipedia.org/wiki/Progeroid_syndromes (November 29, 2017)）。早老症候群の例は、ハッチソン−ギルフォード早老症候群（また、早老症としても公知である）、ウェルナー症候群、ブルーム症候群、ロスムンド−トムソン症候群、コケイン症候群、色素性乾皮症、硫黄欠乏性毛発育異常症、色素性乾皮症−コケイン症候群の組合せ、及び拘束性皮膚障害を含む。具体的機構は変動しうるが、これらの遺伝障害は、寿命の短縮を結果としてもたらすことが多い。例えば、ハッチソン−ギルフォード早老症候群は、血管老化の加速化を引き起こし、これは、典型的に、心血管疾患に起因する若齢死を結果としてもたらす（Ribas, J. et al., “Biomechanical strain exacerbates inflammation on a progeria-on-a-chip model”, Small, Vol. 13 (2017)）。
【０００３】
早期老化を模倣する症状は、ある特定の物質への曝露の慢性影響でありうる。これらの症状は、環境への曝露、とりわけ、放射線への曝露、及び多様な化学物質への曝露から生じうる。早期老化と異なり、早期老化を模倣する症状は、典型的に、曝露領域に局在化される。
【０００４】
放射線曝露、特に、イオン化放射線への曝露、及び紫外（ＵＶ：ultraviolet）線は、早期老化を模倣する症状の、公知の原因である。イオン化放射線曝露は、１９４０年代以来、早期老化を模倣する症状と関連しており、がん、心血管疾患、認知症、及びII型糖尿病の増大を引き起こすことが公知である（Richardson, R. B., “Ionizing radiation and aging: rejuvenating an old idea”, Aging, Vol. 1, No. 11, pp. 887-902 (2009)）。放射線療法（ＲＴ：radiotherapy）は、がん治療レジメンの一部として含まれることが多く、胸部領域腫瘍のための放射線療法を施される患者における肺線維症の進行など、健常組織に対して、憂慮すべき、長期的な損傷を引き起こすことが公知である（Haddadi, G. H. et al., “Hesperidin as radioprotector against radiation-induced lung damage in rat: a histopathological study”, Journal of Medical Physics, Vol. 42, No. 1, pp. 25-32 (2017)）。紫外線への曝露が、長期にわたり、保護されないと、皮膚において、弾力性の喪失、色素の喪失、及び皮膚組織の分解を含む、早期老化を模倣する症状が引き起こされる（Flament, F. et al., “Effect of the sun on visible clinical signs of aging in Caucasian skin”, Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology, Vol. 6, pp. 221-232 (2016)）。火傷、爆風損傷、創傷、爆傷、及び感染性合併症など、損傷の他の形態と組み合わさった放射線曝露、とりわけ、放射線と火傷との組合せは、身体的危害の増大を結果としてもたらす（Palmer, J. L. et al., “Combined radiation and burn injury results in exaggerated early pulmonary inflammation”, Radiation Research, Vol. 180, No. 3, pp. 276-283 (2013)）。
【０００５】
ある特定の疾患及び障害のための治療経過の一部としての、化学物質への曝露もまた、早期老化を模倣する症状を引き起こしうる。化学療法の公知の副作用は、早期老化を模倣する症状の進行である。がんの生存者は、一般集団と比較して、内分泌障害、心機能障害、骨粗相症、肺線維症、続発がん、及びフレイル（frailty）の早期発症（onset）及び高罹患率を示す（Cupit-Link, M. C. et al., “Biology of premature ageing in survivors of cancer”, ESMO Open, Vol. 2, No. e000250, pp. 1-9 (2017)）。ＨＡＡＲＴ（高活性抗レトロウイルス療法：highly active antiretroviral therapy）として公知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ：human immunodeficiency virus）治療レジメンは、ＨＩＶ感染患者の寿命を、非治療ＨＩＶ感染患者と比較して、著明に延長する。しかし、ＨＡＡＲＴ治療患者は、平均余命が、正常集団と比較して短縮されるほか、心血管疾患、糖尿病、骨粗相症、腎疾患及び肝疾患、代謝障害、リポジストロフィー、アルツハイマー病、並びにパーキンソン病の有病率も増大している（Smith, R. L. et al., “Premature and accelerated aging: HIV or HAART?”, Frontiers in Genetics, Vol. 3, Article 328, pp. 1-10 (2013)）。
【０００６】
早期老化を模倣する症状はまた、化学兵器（また、化学兵器物質又はＣＷＡ：chemical warfare agentとしても公知である）又は毒物など、危害を引き起こす化学物質への曝露の副作用でもある。化学兵器の例は、塩素ガス、ホスゲンガス、マスタードガス（また、硫黄マスタードと称されるか、又はＨ、ＨＤ、ＨＴ、ＨＬ、若しくはＨＱなど、その製剤名により言及される）、ＧＡ（タブン）、ＧＢ（サリン）、ＧＤ（ソマン）、及びＧＦ（シクロサリン）を含むＧ剤、ＶＥ、ＶＧ、ＶＭ、ＶＲ、及びＶＸを含むＶ剤、ノビチョク剤、カルバメート、並びに殺虫剤を含む。硫黄マスタード（マスタードガス）曝露の生存者は、神経障害性合併症、肺性合併症、心臓性合併症、発がん性合併症、及び血液合併症の増大を受けることが見出されている（Rohani, A. et al., “A case control study of cardiovascular health in chemical war disabled Iranian victims”, Indian Journal of Critical Care Medicine, Vol. 14, No. 3, pp. 109-112 (2010)）。ビクトル・ユシチェンコは、心血管疾患、がん、糖尿病、及び早期月経閉止を含む、早期老化を模倣する症状を引き起こす、ダイオキシン中毒の周知の症例であった（White, S. S. et al., “An overview of the effects of dioxins and dioxin-like compounds on vertebrates, as documented in human and ecological epidemiology”, Journal of Environmental Science and Health. Part C, Environmental Carcinogenesis & Ecotoxicology Reviews, Vol. 27, No. 4, pp. 197-211 (2009)）。鉛中毒及びカドミウム中毒は、心血管疾患、慢性腎疾患、及び他の老化関連疾患をもたらしうる（Zota, A. R. et al., “Associations of cadmium and lead exposure with leukocyte telomere length: findings from national health and nutrition examination survey, 1999-2002”, American Journal of Epidemiology, Vol. 181, No. 2, pp. 127-136 (2015)）。酸化物質への曝露もまた、早期老化を模倣する症状を結果としてもたらしうる。過酸化水素によるヒト軟骨細胞の治療は、インビトロにおいて、老化過程を加速化させる（Brandl, A. et al., “Oxidative stress induces senescence in chondrocytes”, Journal of Orthopaedic Research, Vol. 29, pp. 1114-1120 (2011)）。
【０００７】
細胞レベルでは、早期老化は、細胞の老化の早期発症として考えられうる。老化細胞は、部分的に機能的であるか、又は非機能的な細胞であり、増殖停止の状態にある。老化とは、細胞の独特な状態をいい、バイオマーカーｐ１６Ｉｎｋ４ａの活性化、及びβ−ガラクトシダーゼの発現などのバイオマーカーと関連する。複製老化は、ＤＮＡ損傷応答をもたらす、テロメアの短縮から生じる。老化はまた、細胞の損傷又はストレス（増殖因子による過剰刺激などのストレス）によっても引き起こされうる。
【０００８】
終末糖化反応最終産物（ＡＧＥ：advanced glycation end-product；また、ＡＧＥ修飾タンパク質又は糖化反応最終産物とも称される）は、糖とタンパク質側鎖との非酵素反応から生じる（Ando, K. et al., Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in the Circulation, Biochem Biophys Res Commun., Vol. 258, 123, 125 (1999)）。この過程は、還元糖とアミノ基との可逆反応で開始してシッフ塩基を形成し、これが進行して、共有結合性のアマドリ再配列産物を形成する。形成されると、アマドリ産物は、さらなる再配列を経て、ＡＧＥを産生する。糖尿病（ＤＭ：diabetes mellitus）及び酸化ストレスにより引き起こされる高血糖症は、膜タンパク質の、この翻訳後修飾を促進する（Lindsey JB, et al., “Receptor For Advanced Glycation End-Products (RAGE) and soluble RAGE (sRAGE): Cardiovascular Implications,” Diabetes Vascular Disease Research, Vol. 6(1), 7-14, (2009)）。ＡＧＥはまた、他の方法からも形成されうる。例えば、終末糖化反応最終産物である、Ｎε−（カルボキシメチル）リシンは、脂質の過酸化反応及び糖化反応の両方の産物である。ＡＧＥは、糖尿病性合併症、炎症、網膜症、腎症、アテローム性動脈硬化、脳卒中、内皮細胞機能障害、及び神経変性障害を含む、複数の病理学的状態と関連している（Bierhaus A, “AGEs and their interaction with AGE-receptors in vascular disease and diabetes mellitus. I. The AGE concept,” Cardiovasc Res, Vol. 37(3), 586-600 (1998)）。
【０００９】
ＡＧＥ修飾タンパク質はまた、老化細胞のマーカーでもある。当技術分野では、この糖化反応最終産物と老化との関連が周知である。例えば、Gruber, L. （国際公開第２００９／１４３４１１号パンフレット、２００９年１１月２６日）、Ando, K. et al. （Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in the Circulation, Biochem Biophys Res Commun., Vol. 258, 123, 125 (1999)）、Ahmed, E.K. et al. （“Protein Modification and Replicative Senescence of WI-38 Human Embryonic Fibroblasts” Aging Cells, vol. 9, 252, 260 (2010)）、Vlassara, H. et al. （Advanced Glycosylation Endproducts on Erythrocyte Cell Surface Induce Receptor-Mediated Phagocytosis by Macrophages, J. Exp. Med., Vol. 166, 539, 545 (1987)）；及びVlassara et al. （“High-affinity-receptor-mediated Uptake and Degradation of Glucose-modified Proteins: A Potential Mechanism for the Removal of Senescent Macromolecules” Proc. Natl. Acad. Sci. USAI, Vol. 82, 5588, 5591 (1985)）を参照されたい。さらに、Ahmed, E.K. et al.は、糖化反応最終産物が、「細胞内タンパク質及び細胞外タンパク質に対する自発的損傷の主要原因のうちの１つ」であることを指し示す（Ahmed, E.K. et al.、上記、３５３頁を参照されたい）。したがって、糖化反応最終産物の蓄積は、老化及び機能の欠如と関連する。
【００１０】
細胞の老化を引き起こす損傷又はストレスはまた、細胞内のミトコンドリアＤＮＡに負の影響も与えて、これらにフリーラジカルを産生させ、これが、細胞内の糖と反応して、メチルグリオキサール（ＭＧ：methyl glyoxal）を形成する。続いてＭＧは、タンパク質又は脂質と反応して、終末糖化反応最終産物を発生させる。タンパク質成分であるリシンの場合、ＭＧは、ＡＧＥであるカルボキシメチルリシンを形成するように反応する。
【００１１】
ミトコンドリアＤＮＡに対する損傷又はストレスはまた、細胞周期をブロックするタンパク質を産生するように細胞を誘導するＤＮＡ損傷応答も誘発する。これらのブロックするタンパク質は、細胞分裂を阻害する。損傷又はストレスの持続は、ｍＴＯＲの産生を引き起こし、今度はこれが、タンパク質の合成を活性化させ、タンパク質の分解を不活化させる。細胞のさらなる刺激は、プログラムされた細胞死（アポトーシス）をもたらす。
【００１２】
ｐ１６とは、Ｓ期（合成期）を阻害することにより、細胞周期の調節に関与するタンパク質である。ｐ１６は、老化時に活性化される場合もあり、又はＤＮＡ損傷、酸化ストレス、若しくは薬物への曝露など、多様なストレスに応答して活性化される場合もある。ｐ１６は、典型的に、細胞を、ＤＮＡ損傷に応答して老化させ、細胞が過剰増殖状態に入ることを不可逆的に防止する腫瘍抑制タンパク質であると考えられている。しかし、一部の腫瘍は、ｐ１６の過剰発現を示すが、他の腫瘍は、発現の下方調節を示すので、この点には、ある程度の両義性が存在している。一部の腫瘍におけるｐ１６の過剰発現が、不全性網膜芽細胞腫タンパク質（「Ｒｂ」：retinoblastoma protein）の結果生じることを示唆する証拠がある。ｐ１６は、Ｓ期を阻害するように、Ｒｂに作用し、Ｒｂは、ｐ１６を下方調節し、負のフィードバックを創出する。不全性Ｒｂは、Ｓ期の阻害及びｐ１６の下方調節のいずれにも失敗するので、過剰増殖細胞内の、ｐ１６の過剰発現を結果としてもたらす（Romagosa, C. et al., p16Ink4a overexpression in cancer: a tumor suppressor gene associated with senescence and high-grade tumors, Oncogene, Vol. 30, 2087-2097 (2011)）。
【００１３】
老化細胞は、炎症促進性因子を含む、細胞間シグナル伝達に関与する多くの因子の分泌と関連し；これらの因子の分泌は、老化関連分泌現象又はＳＡＳＰ（senescence-associated secretory phenotype）と称されている（Freund, A. “Inflammatory networks during cellular senescence: causes and consequences” Trends Mol Med. 2010 May;16(5):238-46）。クローン病及び関節リウマチなどの自己免疫疾患は、慢性炎症と関連する（Ferraccioli, G. et al. “Interleukin-1β and Interleukin-6 in Arthritis Animal Models: Roles in the Early Phase of Transition from Acute to Chronic Inflammation and Relevance for Human Rheumatoid Arthritis” Mol Med. 2010 Nov-Dec; 16(11-12): 552-557）。慢性炎症は、病理部位近傍における、ベースラインより高レベルであるが、急性炎症において見出されるレベルより低レベルの炎症促進性因子の存在により特徴づけられうる。これらの因子の例は、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｃ５補体タンパク質、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ、ＩｇＥ、α４β１インテグリン、及びα４β７インテグリンを含む。老化細胞はまた、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＣＡＭ１、ＴＮＦＡＰ３、ＥＳＭ１、及びＣＣＬ２を含む、炎症において役割を伴う遺伝子も上方調節する（Burton, D.G.A. et al., “Microarray analysis of senescent vascular smooth muscle cells: a link to atherosclerosis and vascular calcification”, Experimental Gerontology, Vol. 44, No. 10, pp. 659-665 (October 2009)）。
【００１４】
老化細胞は、ＳＡＳＰの一部として、反応性酸素分子種（「ＲＯＳ」：reactive oxygen species）を分泌する。ＲＯＳは、細胞の老化の維持において、重要な役割を果たすと考えられる。ＲＯＳの分泌は、老化細胞が、近隣細胞内の老化を誘導するバイスタンダー効果を創出する：ＲＯＳは、ｐ１６の発現を活性化させ、老化をもたらすことが公知である、細胞の損傷そのものを創出する（Nelson, G., A senescent cell bystander effect: senescence-induced senescence, Aging Cell, Vo. 11, 345-349 (2012)）。ｐ１６／Ｒｂ経路は、ＲＯＳの誘導をもたらし、これは、タンパク質キナーゼＣデルタを活性化させ、ＲＯＳをさらに増強する正のフィードバックループを創出し、細胞周期の不可逆的な停止の維持の一助となり；がん細胞を、ＲＯＳに曝露すれば、過剰増殖細胞内の細胞期の停止を誘導することにより、がんを治療するのに効果的でありうることが示唆されてさえいる（Rayess, H. et al., Cellular senescence and tumor suppressor gene p16, Int J Cancer, Vol. 130, 1715-1725 (2012)）。
【００１５】
近年の研究は、老化細胞を除去することの治療的利益を裏付けている。Mayo Clinic in Rochester、Minnesotaにおけるインビボ動物研究は、老化細胞の消失についてのバイオマーカーを保有するトランスジェニックマウスにおける老化細胞の消失は、細胞の老化と関連する老化関連障害を遅延させることを見出した。脂肪組織内及び筋肉組織内の老化細胞の消失は、サルコペニア及び白内障の発症を実質的に遅延させ、骨格筋及び眼における老化指標を低減した（Baker, D. J. et al., “Clearance of p16Ink4a-positive senescent cells delays ageing-associated disorders”, Nature, Vol. 479, pp. 232-236, (2011)）。老化細胞の消失を誘導するように治療されたマウスは、筋線維の直径が、非治療マウスと比較して大きいことが見出された。トレッドミル運動試験は、治療がまた、筋肉の機能も保存することも指し示した。老化細胞の除去のための、トランスジェニックマウスの持続的治療は、負の副作用を及ぼさず、細胞に依存する老化関連現象を、選択的に遅延させた。このデータは、老化細胞の除去が、有益な治療効果をもたらすことを裏付け、これらの利益が、有害作用を伴わずに達成されうることを示す。
【００１６】
マウスにおける、さらなるインビボ動物研究は、老化細胞溶解剤を使用する、老化細胞の除去が、老化関連障害、アテローム性動脈硬化、及び肺線維症を治療することを見出した。高齢マウス又は早老マウスにおける、老化細胞溶解薬による短期治療は、複数の老化関連現象を緩和した（Zhu, Y. et al., “The Achilles’ heel of senescent cells: from transcriptome to senolytic drugs”, Aging Cell, Vol. 14, pp. 644-658 (2015)）。老化細胞溶解薬による長期治療は、アテローム性動脈硬化が確立されたマウスにおいて、血管運動機能を改善し、血管内膜プラークの石灰化を低減した（Roos, C.M. et al., “Chronic senolytic treatment alleviates established vasomotor dysfunction in aged or atherosclerotic mice”, Aging Cell (2016)）。老化細胞溶解剤の投与による、老化細胞の除去は、マウスにおける放射線誘導性肺線維症を回復させた（Pan, J. et al., “Inhibition of Bcl-2/xl with ABT-263 selectively kills senescent type II pneumocytes and reverses pulmonary fibrosis induced by ionizing radiation in mice”, International Journal of Radiation Oncology Biology Physics, Vol. 99, No. 2, pp. 353-361 (2017)）。このデータは、老化細胞を除去することの利益を、さらに裏付けている。
【００１７】
ワクチンは、エドワード・ジェンナーによる、１７７０年代における、それらの導入以来、広範にわたる疾患及び罹病に対して免疫を付与するのに、広く使用されている。ワクチン調製物は、抗原に対して、免疫を刺激することが可能な、選択された免疫原性作用物質を含有する。典型的に、抗原は、例えば、死滅させるか、又は弱毒化させたウイルス、及び精製したウイルス構成要素など、ワクチン中の免疫原性作用物質として使用される。がんワクチンの作製において使用される抗原は、例えば、腫瘍関連炭水化物抗原（ＴＡＣＡ：tumor-associated carbohydrate antigen）、樹状細胞、全細胞、及びウイルスベクターを含む。所望される量及び種類の、求められる抗原を産生するのに、異なる技法が用いられる。例えば、病原性ウイルスを、卵内又は細胞内で増殖させる。ワクチンのための弱毒化ウイルスを作出するのに、組換えＤＮＡ技術が利用されることが多い。
【００１８】
したがって、体内の抗体の産生を刺激し、抗原に対する免疫をもたらすのに、ワクチンが使用されうる。抗原が、ワクチン接種され、この抗原に対する免疫が発達した対象に導入されると、免疫系は、抗原を発現する細胞を、破壊又は除去しうる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第２００９／１４３４１１号パンフレット
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】“Progeroid syndromes”, available online at en.wikipedia.org/wiki/Progeroid_syndromes (November 29, 2017)
【非特許文献２】Ribas, J. et al., “Biomechanical strain exacerbates inflammation on a progeria-on-a-chip model”, Small, Vol. 13 (2017)
【非特許文献３】Richardson, R. B., “Ionizing radiation and aging: rejuvenating an old idea”, Aging, Vol. 1, No. 11, pp. 887-902 (2009)
【非特許文献４】Haddadi, G. H. et al., “Hesperidin as radioprotector against radiation-induced lung damage in rat: a histopathological study”, Journal of Medical Physics, Vol. 42, No. 1, pp. 25-32 (2017)
【非特許文献５】Flament, F. et al., “Effect of the sun on visible clinical signs of aging in Caucasian skin”, Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology, Vol. 6, pp. 221-232 (2016)
【非特許文献６】Palmer, J. L. et al., “Combined radiation and burn injury results in exaggerated early pulmonary inflammation”, Radiation Research, Vol. 180, No. 3, pp. 276-283 (2013)
【非特許文献７】Cupit-Link, M. C. et al., “Biology of premature ageing in survivors of cancer”, ESMO Open, Vol. 2, No. e000250, pp. 1-9 (2017)
【非特許文献８】Smith, R. L. et al., “Premature and accelerated aging: HIV or HAART?”, Frontiers in Genetics, Vol. 3, Article 328, pp. 1-10 (2013)
【非特許文献９】Rohani, A. et al., “A case control study of cardiovascular health in chemical war disabled Iranian victims”, Indian Journal of Critical Care Medicine, Vol. 14, No. 3, pp. 109-112 (2010)
【非特許文献１０】White, S. S. et al., “An overview of the effects of dioxins and dioxin-like compounds on vertebrates, as documented in human and ecological epidemiology”, Journal of Environmental Science and Health. Part C, Environmental Carcinogenesis & Ecotoxicology Reviews, Vol. 27, No. 4, pp. 197-211 (2009)
【非特許文献１１】Zota, A. R. et al., “Associations of cadmium and lead exposure with leukocyte telomere length: findings from national health and nutrition examination survey, 1999-2002”, American Journal of Epidemiology, Vol. 181, No. 2, pp. 127-136 (2015)
【非特許文献１２】Brandl, A. et al., “Oxidative stress induces senescence in chondrocytes”, Journal of Orthopaedic Research, Vol. 29, pp. 1114-1120 (2011)
【非特許文献１３】Ando, K. et al., Membrane Proteins of Human Erythrocytes Are Modified by Advanced Glycation End Products during Aging in the Circulation, Biochem Biophys Res Commun., Vol. 258, 123, 125 (1999)
【非特許文献１４】Lindsey JB, et al., “Receptor For Advanced Glycation End-Products (RAGE) and soluble RAGE (sRAGE): Cardiovascular Implications,” Diabetes Vascular Disease Research, Vol. 6(1), 7-14, (2009)
【非特許文献１５】Bierhaus A, “AGEs and their interaction with AGE-receptors in vascular disease and diabetes mellitus. I. The AGE concept,” Cardiovasc Res, Vol. 37(3), 586-600 (1998)
【非特許文献１６】Ahmed, E.K. et al., “Protein Modification and Replicative Senescence of WI-38 Human Embryonic Fibroblasts” Aging Cells, vol. 9, 252, 260 (2010)
【非特許文献１７】Vlassara, H. et al., Advanced Glycosylation Endproducts on Erythrocyte Cell Surface Induce Receptor-Mediated Phagocytosis by Macrophages, J. Exp. Med., Vol. 166, 539, 545 (1987)
【非特許文献１８】Vlassara et al., “High-affinity-receptor-mediated Uptake and Degradation of Glucose-modified Proteins: A Potential Mechanism for the Removal of Senescent Macromolecules” Proc. Natl. Acad. Sci. USAI, Vol. 82, 5588, 5591 (1985)
【非特許文献１９】Romagosa, C. et al., p16Ink4a overexpression in cancer: a tumor suppressor gene associated with senescence and high-grade tumors, Oncogene, Vol. 30, 2087-2097 (2011)
【非特許文献２０】Freund, A. “Inflammatory networks during cellular senescence: causes and consequences” Trends Mol Med. 2010 May;16(5):238-46
【非特許文献２１】Ferraccioli, G. et al. “Interleukin-1β and Interleukin-6 in Arthritis Animal Models: Roles in the Early Phase of Transition from Acute to Chronic Inflammation and Relevance for Human Rheumatoid Arthritis” Mol Med. 2010 Nov-Dec; 16(11-12): 552-557
【非特許文献２２】Burton, D.G.A. et al., “Microarray analysis of senescent vascular smooth muscle cells: a link to atherosclerosis and vascular calcification”, Experimental Gerontology, Vol. 44, No. 10, pp. 659-665 (October 2009)
【非特許文献２３】Nelson, G., A senescent cell bystander effect: senescence-induced senescence, Aging Cell, Vo. 11, 345-349 (2012)
【非特許文献２４】Rayess, H. et al., Cellular senescence and tumor suppressor gene p16, Int J Cancer, Vol. 130, 1715-1725 (2012)
【非特許文献２５】Baker, D. J. et al., “Clearance of p16Ink4a-positive senescent cells delays ageing-associated disorders”, Nature, Vol. 479, pp. 232-236, (2011)
【非特許文献２６】Zhu, Y. et al., “The Achilles’ heel of senescent cells: from transcriptome to senolytic drugs”, Aging Cell, Vol. 14, pp. 644-658 (2015)
【非特許文献２７】Roos, C.M. et al., “Chronic senolytic treatment alleviates established vasomotor dysfunction in aged or atherosclerotic mice”, Aging Cell (2016)
【非特許文献２８】Pan, J. et al., “Inhibition of Bcl-2/xl with ABT-263 selectively kills senescent type II pneumocytes and reverses pulmonary fibrosis induced by ionizing radiation in mice”, International Journal of Radiation Oncology Biology Physics, Vol. 99, No. 2, pp. 353-361 (2017)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
第１の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響（chronic effect）の発症（onset）を治療又は予防する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、対象に投与するステップを含む方法である。
【００２２】
第２の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、第１の抗ＡＧＥ抗体と、第２の抗ＡＧＥ抗体とを含む組成物を、対象に投与するステップを含む方法である。第２の抗ＡＧＥ抗体は、第１の抗ＡＧＥ抗体と異なる。
【００２３】
第３の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を、第１に投与するステップ；これに続く、対象を、放射線曝露の慢性影響の治療における、第１の投与の有効性について調べるステップ；及びこれに続く、抗ＡＧＥ抗体を、第２に投与するステップを含む方法である。
【００２４】
第４の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、抗ＡＧＥ抗体の使用である。
【００２５】
第５の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物である。
【００２６】
第６の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための組成物であって、第１の抗ＡＧＥ抗体、第２の抗ＡＧＥ抗体、及び薬学的に許容される担体を含む組成物である。第１の抗ＡＧＥ抗体は、第２の抗ＡＧＥ抗体と異なる。
【００２７】
第７の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、それを必要とする対象を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対して免疫化するステップを含む方法である。
【００２８】
第８の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、第１のＡＧＥ抗原を含む第１のワクチンを投与するステップ、及び任意の、第２のＡＧＥ抗原を含む第２のワクチンを投与するステップを含む方法である。第２のＡＧＥ抗原は、第１のＡＧＥ抗原と異なる。
【００２９】
第９の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、ＡＧＥ抗原の使用である。
【００３０】
第１０の態様では、本発明は、放射線曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、ＡＧＥ抗原を含む組成物である。
【００３１】
第１１の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物を、対象に投与するステップを含む方法である。
【００３２】
第１２の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、第１の抗ＡＧＥ抗体と、第２の抗ＡＧＥ抗体とを含む組成物を、対象に投与するステップを含む方法である。第２の抗ＡＧＥ抗体は、第１の抗ＡＧＥ抗体と異なる。
【００３３】
第１３の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、抗ＡＧＥ抗体を、第１に投与するステップ；これに続く、対象を、化学物質曝露の慢性影響の治療における、第１の投与の有効性について調べるステップ；及びこれに続く、抗ＡＧＥ抗体を、第２に投与するステップを含む方法である。
【００３４】
第１４の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、抗ＡＧＥ抗体の使用である。
【００３５】
第１５の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、抗ＡＧＥ抗体を含む組成物である。
【００３６】
第１６の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための組成物であって、第１の抗ＡＧＥ抗体、第２の抗ＡＧＥ抗体、及び薬学的に許容される担体を含む組成物である。第１の抗ＡＧＥ抗体は、第２の抗ＡＧＥ抗体と異なる。
【００３７】
第１７の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防する方法であって、それを必要とする対象を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対して免疫化するステップを含む方法である。
【００３８】
第１８の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響を受ける対象を治療する方法であって、第１のＡＧＥ抗原を含む第１のワクチンを投与するステップ、及び任意の、第２のＡＧＥ抗原を含む第２のワクチンを投与するステップを含む方法である。第２のＡＧＥ抗原は、第１のＡＧＥ抗原と異なる。
【００３９】
第１９の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症を治療又は予防するための医薬の製造のための、ＡＧＥ抗原の使用である。
【００４０】
第２０の態様では、本発明は、化学物質曝露の慢性影響の発症の治療又は予防における使用のための、ＡＧＥ抗原を含む組成物である。
【００４１】
定義
「早期老化」という用語は、実年齢が進んだ、類似する生物において、典型的に観察される生理学的変化の進行又は発症を意味する。早期老化は、全生物に影響を及ぼす全身（whole-body又はsystemic）状態である。
【００４２】
「放射線」という用語は、アルファ線、ベータ線、ガンマ線、Ｘ線、及び中性子線を含む。
【００４３】
「慢性影響」という用語は、早期老化を模倣する症状により特徴づけられる影響を意味する。
【００４４】
「ペプチド」という用語は、２〜５０アミノ酸から構成される分子を意味する。
【００４５】
「タンパク質」という用語は、５１アミノ酸以上から構成される分子を意味する。
【００４６】
「終末糖化反応最終産物」、「ＡＧＥ」、「ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチド」、及び「糖化反応最終産物」という用語は、糖が、さらに再配列され、不可逆的架橋を形成するタンパク質側鎖と反応する結果として形成される、修飾タンパク質又は修飾ペプチドを指す。この過程は、還元糖とアミノ基との可逆反応であって、シッフ塩基を形成する可逆反応で始まり、これが進行して、共有結合性のアマドリ再配列産物を形成する。形成されると、アマドリ産物は、さらなる再配列を経て、ＡＧＥを産生する。ＡＧＥ修飾タンパク質、及びＡＧＥ修飾タンパク質に対する抗体については、Bucalaによる米国特許第５，７０２，７０４号明細書（「Bucala」）、及びAl-Abed et al.による米国特許第６，３８０，１６５号明細書（「Al-Abed」）において記載されている。糖化アルブミン上で見出されるＮ−デオキシフルクトシルリシンなど、ＡＧＥを形成するのに必要な再配列を経ない、糖化タンパク質又は糖化ペプチドは、ＡＧＥではない。ＡＧＥは、２−（２−フルオイル）−４（５）−（２−フラニル）−１Ｈ−イミダゾール（「ＦＦＩ」：2-(2-furoyl)-4(5)-(2-furanyl)-1H-imidazole）；５−ヒドロキシメチル−１−アルキルピロール−２−カルバルデヒド（「ピラリン」）；非蛍光性のモデルＡＧＥである、１−アルキル−２−ホルミル−３，４−ジグリコシルピロール（「ＡＦＧＰ」：1-alkyl-2-formyl-3,4-diglycosyl pyrrole）；カルボキシメチルリシン；カルボキシエチルリシン；及びペントシジンなどのＡＧＥ修飾（また、ＡＧＥエピトープ又はＡＧＥ部分とも称される）の存在により同定されうる。別のＡＧＥである、ＡＬＩについては、Al-Abedにおいて記載されている。
【００４７】
「ＡＧＥ抗原」という用語は、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対する免疫応答を誘発する物質を意味する。細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対する免疫応答は、ＡＧＥが修飾されていないタンパク質又はペプチドに対する抗体の産生を含む。
【００４８】
「細胞上のＡＧＥ修飾タンパク質に結合する抗体」、「抗ＡＧＥ抗体」、又は「ＡＧＥ抗体」とは、好ましくは、抗体の定常領域を含み、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドが、通常、細胞、好ましくは、哺乳動物細胞、より好ましくは、ヒト細胞、ネコ細胞、イヌ細胞、ウマ細胞、ラクダ科動物細胞（例えば、ラクダ細胞又はアルパカ細胞）、ウシ細胞、ヒツジ細胞、ブタ細胞、又はヤギ細胞の表面上に結合していることが見出される、タンパク質又はペプチドである、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに結合する、抗体、抗体断片、又は他のタンパク質若しくはペプチドを意味する。「細胞上のＡＧＥ修飾タンパク質に結合する抗体」、「抗ＡＧＥ抗体」、又は「ＡＧＥ抗体」は、ＡＧＥが修飾されたタンパク質又はペプチド、及びＡＧＥが修飾されていない、同じタンパク質又はペプチドの両方に、同じ特異性及び選択性で結合する（すなわち、ＡＧＥ修飾の存在は、結合を増大させない）、抗体又は他のタンパク質を含む。ＡＧＥ修飾アルブミンは、アルブミンは、通常、細胞の表面上に結合していることが見出されるタンパク質ではないため、細胞上のＡＧＥ修飾タンパク質ではない。「細胞上のＡＧＥ修飾タンパク質に結合する抗体」、「抗ＡＧＥ抗体」、又は「ＡＧＥ抗体」は、細胞の除去、破壊、又は死をもたらす抗体だけを含む。また、例えば、毒素、薬物、又は他の化学物質若しくは粒子にコンジュゲートした抗体も含まれる。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体であるが、ポリクローナル抗体もまた、可能である。
【００４９】
「老化細胞」という用語は、増殖停止の状態にあり、ｐ１６Ｉｎｋ４ａの活性化、又は老化と関連するβ−ガラクトシダーゼの発現など、１又は２以上の、老化のバイオマーカーを発現する細胞を意味する。また、ＡＬＳ患者の筋肉内で見出される、一部のサテライト細胞など、インビボでは増殖しないが、ある特定の条件下にあるインビトロでは増殖しうる、１又は２以上の、老化のバイオマーカーを発現する細胞も含まれる。
【００５０】
「老化細胞溶解剤」という用語は、老化細胞を破壊する、分子量９００ダルトン未満の低分子を意味する。「老化細胞溶解剤」という用語は、抗体、抗体コンジュゲート、タンパク質、ペプチド、又は生物療法を含む。
【００５１】
「バリアント」という用語は、特異的に同定された配列と異なり、１又は２以上のヌクレオチド、タンパク質又はアミノ酸の残基が、欠失するか、置換されるか、又は付加された、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、又はアミノ酸配列を意味する。バリアントは、天然に存在する対立遺伝子バリアントの場合もあり、天然に存在しないバリアントの場合もある。同定された配列のバリアントは、同定された配列の機能的特徴の、一部又は全部を保持しうる。
【００５２】
「配列同一性パーセント（％）」という用語は、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列をアライメントし、必要な場合に、ギャップを導入し、保存的置換を、配列同一性の一部と考えずにおいた後で、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一な、候補配列のアミノ酸残基の百分率として規定される。アミノ酸配列の同一性パーセントを決定することを目的とするアライメントは、BLASTソフトウェア、BLAST-2ソフトウェア、ALIGNソフトウェア、又はMegalign（DNASTAR社製）ソフトウェアなど、公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、多様な方式で達成されうる。好ましくは、配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムである、ALIGN-2を使用して生成される。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムは、Genentech, Inc.社（South San Francisco、CA）から公開されているか、又は米国著作権局において、ユーザー文書と共に保管され、米国著作権登録番号第TXU510087号の下に登録されている、ソースコードからコンパイルされうる。ALIGN-2プログラムは、デジタル式のUNIX V4.0Dを含む、UNIXオペレーティングシステム上の使用のためにコンパイルされるものとする。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムにより設定され、変動しない。
【００５３】
ALIGN-2が、アミノ酸配列比較のために用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに照らした、これとの、又はこれに対する配列同一性％（これは、代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに照らした、これとの、又はこれに対する、ある特定のアミノ酸配列の同一性％を有するか、又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとしても言及される）は、以下：100×比X/Y［式中、Xは、配列アライメントプログラムALIGN-2により、このプログラムのＡとＢとのアライメントにおいて、同一なマッチとして評定されたアミノ酸残基の数であり、Yは、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である］の通りに計算される。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ａの、Ｂに照らした、アミノ酸配列の同一性％は、Ｂの、Ａに照らした、アミノ酸配列の同一性％と等しくない。そうでないことが具体的に言明されない限りにおいて、本明細書で使用される、全てのアミノ酸配列の同一性％値は、ALIGN-2コンピュータプログラムを使用して得られる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】抗体結合時間の時間と対比した応答についてのグラフである。
【図２Ａ】β−ガラクトシダーゼ老化染色キットによる染色の後における、非治療細胞を例示する図である。
【図２Ｂ】ＧＦＰにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、非治療細胞を例示する図である。
【図２Ｃ】ＧＦＰ−ＤＡＰＩにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、非治療細胞を例示する図である。
【図２Ｄ】β−ガラクトシダーゼ老化染色キットによる染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する図である。
【図２Ｅ】ＧＦＰにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する図である。
【図２Ｆ】ＧＦＰ−ＤＡＰＩにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する図である。
【図３Ａ】細胞を、０μＭのドキソルビシンで、３日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｂ】細胞を、０．０１μＭのドキソルビシンで、３日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｃ】細胞を、０．１μＭのドキソルビシンで、３日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｄ】細胞を、１μＭのドキソルビシンで、３日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｅ】細胞を、０μＭのドキソルビシンで、６日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｆ】細胞を、０．１μＭのドキソルビシンで、６日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【図３Ｇ】細胞を、１μＭのドキソルビシンで、６日間にわたり治療する結果を例示する図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
近年の研究は、炎症と、早期老化を模倣する症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響との関連を明らかにしている。ダイオキシン中毒は、サイトカインであるＴＮＦα、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βの発現を含む炎症を誘導し、その産物が、酸化ストレスに関与する遺伝子の発現の増大を引き起こす（White, S. S. et al., “An overview of the effects of dioxins and dioxin-like compounds on vertebrates, as documented in human and ecological epidemiology”, Journal of Environmental Science and Health. Part C, Environmental Carcinogenesis & Ecotoxicology Reviews, Vol. 27, No. 4, pp. 197-211 (2009)）。紫外光は、サイトカインのカスケードを引き起こす皮膚の炎症を誘導し、スーパーオキシドアニオン、過酸化水素、及びヒドロキシルラジカルを含む反応性酸素分子種を発生させる（D’Orazio, J. et al., “UV radiation and the skin”, International Journal of Molecular Sciences, Vol. 14, pp. 12222-12248 (2013)）。イオン化放射線、ＨＡＡＲＴ療法に関与する抗レトロウイルス薬、カドミウム曝露、及び鉛曝露は、全て、酸化ストレス及び炎症の両方を促進することにより、早期老化を模倣する症状に寄与する（Zota, A. R. et al.；Smith, R. L. et al., “Premature and accelerated aging: HIV or HAART?”, Frontiers in Genetics, Vol. 3, Article 328, pp. 1-10 (2013)；Richardson, R. B., “Ionizing radiation and aging: rejuvenating an old idea”, Aging, Vol. 1, No. 11, pp. 887-902 (2009)；Haddadi, G. H. et al., “Hesperidin as radioprotector against radiation-induced lung damage in rat: a histopathological study”, Journal of Medical Physics, Vol. 42, No. 1, pp. 25-32 (2017)）。これは、炎症と、早老症候群から生じる早期老化との関連を見出した研究と符合する。例えば、早老症の生体機能チップモデルは、生体力学的歪みに応答して炎症マーカーのレベルが増大することを示した（Ribas, J. et al., “Biomechanical strain exacerbates inflammation on a progeria-on-a-chip model”, Small, Vol. 13 (2017)）。
【００５６】
放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響において炎症及び酸化ストレスが役割を担うことから、細胞の老化の関与が示唆される。老化細胞は、老化関連分泌現象（ＳＡＳＰ）の一部として、炎症因子及び反応性酸素分子種を分泌することが公知である。これらの特徴は、細胞の老化が、早期老化を模倣する症状の進行又は発症など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響における原因因子であることを示唆する。この関係を裏書きする証拠は、化学療法薬及びイオン化放射線が、細胞の老化の直接的な原因であることを示す複数の研究において見出されうる（Cupit-Link, M. C. et al., “Biology of premature ageing in survivors of cancer”, ESMO Open, Vol. 2, No. e000250, pp. 1-9 (2017)；Richardson, R. B., “Ionizing radiation and aging: rejuvenating an old idea”, Aging, Vol. 1, No. 11, pp. 887-902 (2009)；Roninson, I. B., “Tumor cell senescence in cancer treatment”, Cancer Research, Vol. 63, pp. 2705-2715 (2003)；Meng, A. et al., “Ionizing radiation and Bisulfan induce premature senescence in murine bone marrow hematopoietic cells”, Cancer Research, Vol. 63, pp. 5414-5419 (2003)）。
【００５７】
老化細胞溶解剤の投与による、老化細胞の除去は、イオン化放射線曝露から生じる、早期老化を模倣する症状を治療することが示されている（Zhu, Y. et al., “The Achilles’ heel of senescent cells: from transcriptome to senolytic drugs”, Aging Cell, Vol. 14, pp. 644-658 (2015)；Pan, J. et al., “Inhibition of Bcl-2/xl with ABT-263 selectively kills senescent type II pneumocytes and reverses pulmonary fibrosis induced by ionizing radiation in mice”, International Journal of Radiation Oncology Biology Physics, Vol. 99, No. 2, pp. 353-361 (2017)）。細胞の老化と、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響との間の、一般的連関の同定は、炎症及び酸化ストレスの発生源をターゲティングする、同様の治療可能性を可能とする。本発明は、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドを発現する細胞（ＡＧＥ修飾細胞）のクリアランスの増強を使用して、早期老化を模倣する症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響の発症を治療、改善、又は予防する。これは、抗ＡＧＥ抗体を、対象に投与することにより達成され得る。
【００５８】
細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチン接種もまた、対象における、ＡＧＥ修飾細胞の存在を制御するのに使用されうる。ワクチン接種に反応して、体内の免疫系によりなされる、持続的で、事実上ユビキタスな監視は、体内のＡＧＥ修飾細胞を低レベルに維持することを可能とする。細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチン接種は、老化細胞を除去するか、又は死滅させる。老化細胞の除去又は破壊の過程は、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチン接種を、早期老化を模倣する症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響の発症の治療又は予防に使用することを可能とする。
【００５９】
早期老化は、実年齢が進んだ生物において、典型的に呈される、生理学的変化、疾患、障害、及び／又は状態の発症により特徴づけられる。早期老化の徴候は、白髪、しわ、フレイル、白内障、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、パーキンソン病、サルコペニア、脂肪組織の減少、前彎後彎症、がん、早発閉経、心血管疾患、認知症、II型糖尿病、内分泌障害、心機能障害、骨粗相症、骨関節炎、肺線維症、腎疾患及び肝疾患、代謝障害、リポジストロフィー、聴覚低下、視覚低下、並びに記憶障害の進行を含む。早期老化は、１又は２以上の早老症候群から生じうる。早期老化を模倣する症状は、放射線への曝露、又は化学療法薬、ＨＡＡＲＴ薬、化学兵器、毒物、若しくは酸化剤などの化学物質への曝露など、環境への曝露の慢性影響でありうる。
【００６０】
当技術分野では、抗ＡＧＥ抗体が公知であり、市販されている。例は、米国特許第５，７０２，７０４号明細書（Bucala）、及び米国特許第６，３８０，１６５号明細書（Al-Abed et al.）において記載されている例を含む。抗体は、ＦＦＩ、ピラリン、ＡＦＧＰ、ＡＬＩ、カルボキシメチルリシン（ＣＭＬ：carboxymethyllysine）、カルボキシエチルリシン（ＣＥＬ：carboxyethyllysine）、及びペントシジンなど、ＡＧＥ修飾を有する、１又は２以上のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチド、及びこのような抗体の混合物に結合しうる。好ましくは、抗体は、ヒト；ネコ、イヌ、及びウマを含む愛玩動物；並びにラクダ（又はアルパカ）、ウシ（ウシ）、ヒツジ、ブタ、及びヤギなど、商業的に重要な動物に対して非免疫原性であるなど、それが使用される動物に対して非免疫原性である。より好ましくは、抗体は、ヒト化抗体（ヒトに対する）、ネコ化抗体（ネコに対する）、イヌ化抗体（イヌに対する）、ウマ化抗体（ウマに対する）、ラクダ科動物化抗体（ラクダ又はアルパカに対する）、ウシ化抗体（ウシに対する）、ヒツジ化抗体（ヒツジに対する）、ブタ化抗体（ブタに対する）、又はヤギ化抗体（ヤギに対する）など、抗体に対する免疫応答を低減するように、動物の抗体と同種の定常領域を有する。最も好ましくは、抗体は、ヒト抗体、ネコ抗体、イヌ抗体、ウマ抗体、ラクダ抗体、ウシ抗体、ヒツジ抗体、ブタ抗体、又はヤギ抗体など、それが使用される動物の抗体と同一（可変領域を除き）である。これらの動物に対する抗体の定常領域及び他の部分の詳細については、下記に記載される。抗体は、モノクローナル抗体の場合もあり、ポリクローナル抗体の場合もある。好ましくは、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００６１】
好ましい抗ＡＧＥ抗体は、カルボキシメチルリシンＡＧＥ修飾又はカルボキシエチルリシンＡＧＥ修飾を呈する、タンパク質又はペプチドに結合する抗ＡＧＥ抗体を含む。カルボキシメチルリシン（また、Ｎ（イプシロン）−（カルボキシメチル）リシン、Ｎ（６）−カルボキシメチルリシン、又は２−アミノ−６−（カルボキシメチルアミノ）ヘキサン酸としても公知である）、及びカルボキシエチルリシン（また、Ｎ−イプシロン−（カルボキシエチル）リシンとしても公知である）は、酸化ストレス及び化学物質の糖化反応の結果として、タンパク質又はペプチド及び脂質において見出される。ＣＭＬ改変タンパク質又はＣＭＬ改変ペプチド及びＣＥＬ改変タンパク質又はＣＥＬ改変ペプチドは、様々な細胞上で発現される受容体である、ＲＡＧＥにより認識される。ＣＭＬ及びＣＥＬについては、十分に研究されており、ＣＭＬ関連製品及びＣＥＬ関連製品は市販されている。例えば、Cell Biolabs, Inc.社は、ＣＭＬ−ＢＳＡ抗原、ＣＭＬポリクローナル抗体、ＣＭＬ免疫ブロットキット、及びＣＭＬ競合ＥＬＩＳＡキット（www.cellbiolabs.com/cml-assays）のほか、ＣＥＬ−ＢＳＡ抗原及びＣＥＬ競合ＥＬＩＳＡキット（www.cellbiolabs.com/cel-n-epsilon-carboxyethyl-lysine-assays-and-reagents）を販売している。好ましい抗体は、キーホールリンペットヘモシアニンをコンジュゲートしたカルボキシメチルリシンに対して惹起された、市販のマウス抗糖化反応最終産物抗体であって、R&D Systems, Inc.社から入手可能であり（Minneapolis、MN；型番：MAB3247）、ヒト定常領域（又はそれが投与される動物の定常領域）を有するように修飾された抗体であるカルボキシメチルリシンＭＡｂ（クローン：318003）の可変領域を含む。R&D Systems, Inc.社の型番：MAB3247に対応するカルボキシメチルリシン抗体など、市販の抗体は、診断目的で対象となる場合があり、動物又はヒトにおける使用に適さない材料を含有しうる。好ましくは、市販の抗体は、毒素又は他の潜在的に有害な材料を除去するように、動物又はヒトにおける使用の前に、精製及び／又は単離される。
【００６２】
抗ＡＧＥ抗体は、好ましくは、抗体−抗原複合体からの解離速度又はｋｄ（また、ｋｂａｃｋ又はオフ速度とも称される）が小さい、好ましくは、９×１０−３、８×１０−３、７×１０−３、６×１０−３（１／秒）以下である。抗ＡＧＥ抗体は、好ましくは、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質に対する高アフィニティーを有し、これは、低解離定数である、９×１０−６、８×１０−６、７×１０−６、６×１０−６、５×１０−６、４×１０−６、３×１０−６（Ｍ）以下のＫＤとして表されうる。好ましくは、抗ＡＧＥ抗体結合特性は、図１に例示される、R&D Systems, Inc.社（Minneapolis、MN；型番：MAB3247）から市販されているカルボキシメチルリシンＭＡｂ（クローン：318003）と、同等であるか、同じであるか、又はこれより優れている。
【００６３】
抗ＡＧＥ抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ：antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity）を介して、ＡＧＥ修飾細胞を破壊しうる。ＡＤＣＣとは、免疫系のエフェクター細胞が、膜表面抗原に特異的抗体が結合した標的細胞を、能動的に溶解する、細胞媒介性免疫防御のメカニズムである。ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ：natural killer）細胞、マクロファージ、好中球、又は好酸球により媒介されうる。エフェクター細胞は、結合した抗体のＦｃ部分に結合する。抗ＡＧＥ抗体はまた、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ：complement-dependent cytotoxicity）を介して、ＡＧＥ修飾細胞も破壊しうる。ＣＤＣでは、免疫系の補体カスケードは、標的抗原に結合した抗体により誘発される。
【００６４】
抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥ修飾細胞の破壊を引き起こす薬剤にコンジュゲートされうる。このような薬剤は、毒素、細胞毒性剤、磁気ナノ粒子、及び磁気スピンボルテックスディスクでありうる。
【００６５】
ＡＧＥ修飾細胞を、選択的にターゲティングし、除去するように、抗ＡＧＥ抗体にコンジュゲートした小孔形成毒素（ＰＦＴ：pore-forming toxin）（Aroian R. et al., “Pore-Forming Toxins and Cellular Non-Immune Defenses (CNIDs),” Current Opinion in Microbiology, 10:57-61 (2007)）などの毒素が、患者に注射されうる。抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥ修飾細胞を認識し、これらに結合する。次いで、毒素が、細胞表面にポア形成を引き起こし、浸透圧溶解によって、細胞を除去する。
【００６６】
抗ＡＧＥ抗体にコンジュゲートした磁気ナノ粒子を、患者に注射して、ＡＧＥ修飾細胞をターゲティングし、除去することができる。ＡＧＥ修飾細胞を、選択的に除去するために、磁場を印加することにより、磁気ナノ粒子は加熱されうる。
【００６７】
代替法として、血管を遮断しうる自己凝集を回避するために、磁場が印加されたときだけ磁化される磁気スピンボルテックスディスクは、磁場が印加されると、スピンし始め、標的細胞の膜破壊を引き起こす。抗ＡＧＥ抗体にコンジュゲートした磁気スピンボルテックスディスクは、他の細胞の除去を伴わずに、ＡＧＥ修飾細胞型を、特異的にターゲティングする。
【００６８】
抗体は、２つの重鎖と、２つの軽鎖とから構成されるＹ字形タンパク質である。Ｙ字形の２つアームが、抗体の抗原結合性断片（Ｆａｂ：fragment antigen-binding）領域を形成するのに対し、Ｙ字形の基部又はテール部は、抗体のＦｃ（結晶性断片：fragment crystallizable）領域を形成する。抗原への結合は、相補性決定領域（また、ＣＤＲ又は超可変領域としても公知である）のセットである、パラトープと称される場所にある、抗原結合性断片領域（Ｙ字形のアームの先端部分）の末端部分で生じる。相補性決定領域は、異なる抗体間で異なり、所与の抗体に、所与の抗原との結合のための特異性を与える。抗体のＦｃ（結晶性断片）領域は、抗原への結合の結果を決定し、補体カスケードを誘発するか、又は抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を誘起することなどにより、免疫系と相互作用しうる。抗体が、組換えにより調製される場合、２つの異なる抗原に結合する可変領域（又は相補性決定領域）を有する単一抗体を有することも可能であり、Ｙ字形の各先端部分が、いずれかの抗原に特異的である。これらは、二重特異性（bi-specific）抗体と呼ばれている。
【００６９】
本発明に従うヒト化抗ＡＧＥ抗体は、配列番号２２に示されるアミノ酸のヒト定常領域配列を有しうる。ヒト化抗ＡＧＥ抗体の重鎖相補性決定領域は、配列番号２３（ＣＤＲ１Ｈ）、配列番号２４（ＣＤＲ２Ｈ）、及び配列番号２５（ＣＤＲ３Ｈ）に示されるタンパク質配列のうちの１又は２以上を有しうる。ヒト化抗ＡＧＥ抗体の軽鎖相補性決定領域は、配列番号２６（ＣＤＲ１Ｌ）、配列番号２７（ＣＤＲ２Ｌ）、及び配列番号２８（ＣＤＲ３Ｌ）に示されるタンパク質配列のうちの１又は２以上を有しうる。
【００７０】
ヒト化抗ＡＧＥ抗体の重鎖は、配列番号１のタンパク質配列を有しうるか、又は含みうる。重鎖の可変ドメインは、配列番号２のタンパク質配列を有しうるか、又は含みうる。重鎖可変ドメインの相補性決定領域（配列番号２）は、配列番号４１、配列番号４２、及び配列番号４３に示される。ヒト化抗ＡＧＥ抗体のカッパ軽鎖は、配列番号３のタンパク質配列を有しうるか、又は含みうる。カッパ軽鎖の可変ドメインは、配列番号４のタンパク質配列を有しうるか、又は含みうる。配列番号４の１２８位におけるアルギニン（Ａｒｇ又はＲ）残基は、省かれてもよい。軽鎖可変ドメインの相補性決定領域（配列番号４）は、配列番号４４、配列番号４５、及び配列番号４６に示される。可変領域は、コドンが最適化され、合成され、ヒト免疫グロブリンＧ１定常領域を含有する発現ベクターにクローニングされうる。加えて、可変領域は、非ヒト抗ＡＧＥ抗体の調製において使用されうる。
【００７１】
抗体の重鎖は、マウス抗ＡＧＥ抗体免疫グロブリンＧ２ｂ重鎖のＤＮＡ配列である、配列番号１２によりコードされうる。配列番号１２によりコードされるマウス抗ＡＧＥ抗体免疫グロブリンＧ２ｂ重鎖のタンパク質配列は、配列番号１６に示される。マウス抗体の可変領域は、配列番号１６の２５〜１４２位に対応する、配列番号２０に示される。抗体の重鎖は、代替的に、キメラ抗ＡＧＥ抗体ヒト免疫グロブリンＧ１重鎖のＤＮＡ配列である、配列番号１３によりコードされうる。配列番号１３によりコードされる、キメラ抗ＡＧＥ抗体ヒト免疫グロブリンＧ１重鎖のタンパク質配列は、配列番号１７に示される。キメラ抗ＡＧＥ抗体ヒト免疫グロブリンは、配列番号２０の２５〜１４２位における、マウス可変領域を含む。抗体の軽鎖は、マウス抗ＡＧＥ抗体カッパ軽鎖である配列番号１４のＤＮＡ配列によりコードされうる。配列番号１４によりコードされるマウス抗ＡＧＥ抗体カッパ軽鎖のタンパク質配列は、配列番号１８に示される。マウス抗体の可変領域は、配列番号２１に示され、これは配列番号１８の２１〜１３２位に対応する。抗体の軽鎖は、代替的に、キメラ抗ＡＧＥ抗体ヒトカッパ軽鎖である配列番号１５のＤＮＡ配列によりコードされうる。配列番号１５によりコードされるキメラ抗ＡＧＥ抗体ヒトカッパ軽鎖のタンパク質配列を、配列番号１９に示される。キメラ抗ＡＧＥ抗体ヒト免疫グロブリンは、配列番号２１の２１〜１３２位におけるマウス可変領域を含む。
【００７２】
本発明に従うヒト化抗ＡＧＥ抗体は、１又は２以上のヒト化重鎖又はヒト化軽鎖を有しうるか、又は含みうる。ヒト化重鎖は、配列番号３０、３２、又は３４のＤＮＡ配列によりコードされうる。配列番号３０、配列番号３２、及び配列番号３４によりコードされるヒト化重鎖のタンパク質配列は、それぞれ、配列番号２９、配列番号３１、及び配列番号３３に示される。ヒト化軽鎖は、配列番号３６、配列番号３８、又は配列番号４０のＤＮＡ配列によりコードされうる。配列番号３６、配列番号３８、及び配列番号４０によりコードされるヒト化軽鎖のタンパク質配列は、それぞれ、配列番号３５、配列番号３７、及び配列番号３９に示される。好ましくは、ヒト化抗ＡＧＥ抗体は、元の抗体特異性を保持しながら、ヒト配列の量を最大化する。配列番号２９、配列番号３１、及び配列番号３３から選び出されるタンパク質配列を有する重鎖、並びに配列番号３５、配列番号３７、及び配列番号３９から選び出されるタンパク質配列を有する軽鎖を含有する、完全ヒト化抗体が構築されうる。
【００７３】
特に好ましい抗ＡＧＥ抗体は、マウス抗ＡＧＥ抗体モノクローナル抗体をヒト化することにより得られうる。マウス抗ＡＧＥ抗体モノクローナル抗体は、配列番号４７に示される重鎖タンパク質配列（可変ドメインのタンパク質配列は、配列番号５２に示される）と、配列番号５７に示される軽鎖タンパク質配列（可変ドメインのタンパク質配列は、配列番号６２に示される）とを有する。好ましいヒト化重鎖は、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、又は配列番号５１に示されるタンパク質配列（ヒト化重鎖の可変ドメインのタンパク質配列は、それぞれ、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６に示される）を有しうる。好ましいヒト化軽鎖は、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、又は配列番号６１に示されるタンパク質配列（ヒト化軽鎖の可変ドメインのタンパク質配列は、それぞれ、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、及び配列番号６６に示される）を有しうる。好ましくは、ヒト化抗ＡＧＥ抗体モノクローナル抗体は、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、及び配列番号５１からなる群から選択されるタンパク質配列を有する重鎖、並びに配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１からなる群から選択されるタンパク質配列を有する軽鎖から構成される。これらのタンパク質配列から構成されたヒト化抗ＡＧＥ抗体モノクローナル抗体は、良好な結合及び／又は免疫系の活性化の改善を有する結果として、効能の増大をもたらしうる。
【００７４】
非ヒト種に由来する抗体のタンパク質配列は、配列番号２に示される配列を有する重鎖、又は配列番号４に示される配列を有するカッパ軽鎖の可変ドメインを含むように修飾されうる。非ヒト種は、飼いネコ又は飼いイヌなどの愛玩動物の場合もあり、ウシ、ウマ、又はラクダなどの家畜の場合もある。好ましくは、非ヒト種は、マウスではない。ウマ（Equus caballus）抗体免疫グロブリンガンマ４の重鎖は、配列番号５のタンパク質配列（EMBL/GenBank受託番号：AY445518）を有しうるか、又は含みうる。ウマ（Equus caballus）抗体免疫グロブリンデルタの重鎖は、配列番号６のタンパク質配列（EMBL/GenBank受託番号：AY631942）を有しうるか、又は含みうる。イヌ（Canis familiaris）抗体免疫グロブリンＡの重鎖は、配列番号７のタンパク質配列（GenBank受託番号：L36871）を有しうるか、又は含みうる。イヌ（Canis familiaris）抗体免疫グロブリンＥの重鎖は、配列番号８のタンパク質配列（GenBank受託番号：L36872）を有しうるか、又は含みうる。ネコ（Felis catus）抗体免疫グロブリンＧ２の重鎖は、配列番号９のタンパク質配列（DDBJ/EMBL/GenBank受託番号：KF811175）を有しうるか、又は含みうる。
【００７５】
ラクダ（ヒトコブラクダ（Camelus dromedarius）及びフタコブラクダ（Camelus bactrianus））、ラマ（llama）（ラマ（Lama glama）、アルパカ（Lama pacos及びLama vicugna））、アルパカ（Vicugna pacos）、及びグアナコ（Lama guanicoe）などのラクダ科の動物は、他の哺乳動物では見出されない、固有の抗体を有する。従来の免疫グロブリンＧ抗体から構成される重鎖及び軽鎖の四量体に加えて、ラクダ科動物はまた、軽鎖を含有せず、重鎖二量体として存在する、重鎖免疫グロブリンＧ抗体も有する。これらの抗体は、重鎖抗体、ＨＣＡｂ、単一ドメイン抗体、又はｓｄＡｂとして公知であり、ラクダ科動物の重鎖抗体の可変ドメインは、ＶＨＨとして公知である。ラクダ科動物の重鎖抗体は、重鎖ＣＨ１ドメインを欠き、他の種では見出されないヒンジ領域を有する。アラビアラクダ（ヒトコブラクダ）単一ドメイン抗体の可変領域は、配列番号１０のタンパク質配列（GenBank 受託番号：AJ245148）を有しうるか、又は含みうる。アラビアラクダ（ヒトコブラクダ）の四量体免疫グロブリン重鎖の可変領域は、配列番号１１のタンパク質配列（GenBank受託番号：AJ245184）を有しうるか、又は含みうる。
【００７６】
ラクダ科動物に加えて、重鎖抗体はまた、サメ、ガンギエイ、及びエイなどの軟骨魚においても見出される。この種類の抗体は、免疫グロブリン新抗原受容体又はＩｇＮＡＲとして公知であり、ＩｇＮＡＲの可変ドメインは、ＶＮＡＲとして公知である。ＩｇＮＡＲは、各々１つずつの可変ドメイン及び５つずつの定常ドメインから構成される、２つの同一な重鎖二量体として存在する。ラクダ科動物と同様に、軽鎖は存在しない。
【００７７】
さらなる非ヒト種のタンパク質配列は、International ImMunoGeneTics Information System（www.imgt.org）、European Bioinformatics Institute（www.ebi.ac.uk）、DNA Databank of Japan（ddbj.nig.ac.jp／arsa）、又はNational Center for Biotechnology Information（www.ncbi.nlm.nih.gov）などのオンラインデータベース内で、たやすく見出されうる。
【００７８】
抗ＡＧＥ抗体又はこのバリアントは、配列番号１、配列番号１６、配列番号１７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、又は配列番号５１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖であって、それらの翻訳後修飾を含みうる。少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する重鎖は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有しうるが、この配列を含む抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥに結合する能力を保持する。
【００７９】
抗ＡＧＥ抗体又はこのバリアントは、配列番号２、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、又は配列番号５６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域であって、それらの翻訳後修飾を含みうる。少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する可変領域は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有しうるが、この配列を含む抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥに結合する能力を保持する。置換、挿入、又は欠失は、可変領域外の領域内で生じうる。
【００８０】
抗ＡＧＥ抗体又はこのバリアントは、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、又は配列番号６１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖であって、それらの翻訳後修飾を含みうる。少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する軽鎖は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有しうるが、この配列を含む抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥに結合する能力を保持する。置換、挿入、又は欠失は、可変領域外の領域内で生じうる。
【００８１】
抗ＡＧＥ抗体又はこのバリアントは、配列番号４、配列番号２１、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、又は配列番号６６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域であって、それらの翻訳後修飾を含みうる。少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有する可変領域は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有しうるが、この配列を含む抗ＡＧＥ抗体は、ＡＧＥに結合する能力を保持する。置換、挿入、又は欠失は、可変領域外の領域内で生じうる。
【００８２】
代替的に、抗体は、ＣＭＬ−ＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニンをコンジュゲートしたカルボキシメチルリシン：carboxymethyl lysine conjugated with keyhole limpet hemocyanin）に対して惹起された、市販のマウス抗糖化反応最終産物抗体であって、R&D Systems, Inc.社から入手可能な抗体（Minneapolis、MN；型番：MAB3247）である、カルボキシメチルリシンＭＡｂ（クローン：318003）の相補性決定領域を有しうる。
【００８３】
抗体は、対象の免疫系による、標的とする細胞の破壊を可能とする定常領域を有しうるか、又は含みうる。
【００８４】
ＡＧＥ型が２以上のＡＧＥ修飾タンパク質に結合する抗体の混合物もまた、使用されうる。
【００８５】
２つの異なるエピトープに向けられた抗ＡＧＥ抗体である二重特異性抗体もまた、使用されうる。このような抗体は、１つの抗ＡＧＥ抗体の可変領域に由来する可変領域（又は相補性決定領域）、及び異なる抗体に由来する可変領域（又は相補性決定領域）を有するであろう。
【００８６】
抗体断片は、全抗体の代わりに使用されうる。例えば、免疫グロブリンＧは、酵素による消化を介して、小型断片に分解されうる。パパイン消化は、重鎖間ジスルフィド架橋のＮ末端側を切断して、Ｆａｂ断片をもたらす。Ｆａｂ断片は、軽鎖と、重鎖の、２つのＮ末端ドメインのうちの１つとを含む（また、Ｆｄ断片としても公知である）。ペプシン消化は、重鎖間ジスルフィド架橋のＣ末端側を切断して、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、軽鎖、及びジスルフィド架橋により連結された、２つのＮ末端ドメインの両方を含む。ペプシン消化はまた、Ｆｖ（可変断片：fragment variable）及びＦｃ断片（結晶性断片）も形成しうる。Ｆｖ断片は、２つのＮ末端可変ドメインを含有する。Ｆｃ断片は、細胞上の免疫グロブリン受容体、及び補体カスケードの最初の要素と相互作用するドメインを含有する。ペプシンはまた、重鎖の第３定常ドメイン（ＣＨ３：third constant domain of the heavy chain）の前で、免疫グロブリンＧを切断して、大型断片であるＦ（ａｂｃ）と、小型断片であるｐＦｃ’とをもたらす場合もある。抗体断片は、代替的に、組換えによりもたらされる場合もある。好ましくは、このような抗体断片は、ＡＧＥ修飾細胞の破壊を引き起こす薬剤にコンジュゲートされうる。
【００８７】
さらなる抗体が所望される場合、これらは、周知の方法を使用して作製されうる。例えば、哺乳動物宿主において、ポリクローナル抗体（ｐＡｂ）は、免疫原と、所望の場合、アジュバントとの、１回又は２回以上の注射により惹起されうる。典型的に、免疫原（及びアジュバント）は、哺乳動物において、皮下注射又は腹腔内注射により注射されうる。免疫原は、ＡＧＥ−抗トロンビンIII、ＡＧＥ−カルモジュリン、ＡＧＥ−インスリン、ＡＧＥ−セルロプラスミン、ＡＧＥ−コラーゲン、ＡＧＥ−カテプシンＢ、ＡＧＥ−ウシ血清アルブミン（ＡＧＥ−ＢＳＡ）、ＡＧＥ−ヒト血清アルブミン、及びオボアルブミンなどのＡＧＥ−アルブミン、ＡＧＥ−クリスタリン、ＡＧＥ−プラスミノーゲン活性化因子、ＡＧＥ−内皮細胞膜タンパク質、ＡＧＥ−アルデヒドレダクターゼ、ＡＧＥ−トランスフェリン、ＡＧＥ−フィブリン、ＡＧＥ−銅／亜鉛ＳＯＤ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｂ、ＡＧＥ−フィブロネクチン、ＡＧＥ−膵リボース、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ａ−Ｉ及びII、ＡＧＥ−ヘモグロビン、ＡＧＥ−Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ、ＡＧＥ−プラスミノーゲン、ＡＧＥ−ミエリン、ＡＧＥ−リゾチーム、ＡＧＥ−免疫グロブリン、ＡＧＥ−赤血球Ｇｌｕ輸送タンパク質、ＡＧＥ−β−Ｎ−アセチルヘキソミナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｅ、ＡＧＥ−赤血球膜タンパク質、ＡＧＥ−アルドースレダクターゼ、ＡＧＥ−フェリチン、ＡＧＥ−赤血球スペクトリン、ＡＧＥ−アルコールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−ハプトグロビン、ＡＧＥ−チューブリン、ＡＧＥ−甲状腺ホルモン、ＡＧＥ−フィブリノーゲン、ＡＧＥ−β２−マイクログロブリン、ＡＧＥ−ソルビトールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−α１−抗トリプシン、ＡＧＥ−炭酸デヒドラターゼ、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、ＡＧＥ−ヘキソキナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｃ−Ｉ、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−ヒトヘモグロビンなどのＡＧＥ−ヘモグロビン、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質（ＡＧＥ−ＬＤＬ）、及びＡＧＥ−コラーゲンIVなど、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質でありうる。ＡＧＥ修飾全赤血球、ＡＧＥ修飾溶解赤血球、又はＡＧＥ修飾部分消化赤血球などのＡＧＥ修飾細胞もまた、ＡＧＥ抗原として使用されうる。アジュバントの例は、フロイント完全、モノホスホリルリピドＡ合成トレハロースジコリノミコレート、アルミニウム水酸化物（アラム）、熱ショックタンパク質ＨＳＰ７０又はＨＳＰ９６、モノホスホリルリピドＡを含有するスクアレンエマルジョン、α２−マクログロブリン、並びに油エマルジョン、プルロニック（pleuronic）ポリオール、ポリアニオン、及びジニトロフェノールを含む表面活性物質を含む。免疫応答を改善するために、免疫原は、ＫＬＨ（keyhole limpet hemocyanin）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、コレラ毒素、不安定性エンテロトキシン、シリカ粒子、又はダイズトリプシン阻害剤など、宿主において免疫原性のポリペプチドにコンジュゲートされうる。好ましい免疫原コンジュゲートは、ＡＧＥ−ＫＬＨである。代替的に、ｐＡｂは、ＩｇＹ分子を産生するニワトリにおいて作製されうる。
【００８８】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ：monoclonal antibody）はまた、宿主又は宿主に由来するリンパ球を免疫化し、ｍＡｂを分泌する（又はｍＡｂを潜在的に分泌する）リンパ球を採取し、これらのリンパ球を、不死化細胞（例えば、骨髄腫細胞）に融合させ、所望のｍＡｂを分泌する細胞を選択することによっても作製されうる。ＥＢＶハイブリドーマ法など、他の技法も使用されうる。非ヒト抗体は、抗体を、非ヒト抗体の構成要素と、ヒト抗体の構成要素との組合せを含有するように改変することにより、ヒトに対して免疫原性でなくされうる。キメラ抗体は、非ヒト抗体の可変領域を、ヒト定常領域と組み合わせることにより作製されうる。ヒト化抗体は、ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ：complementarity determining region）を、非ヒト抗体のＣＤＲで置きかえることにより作製されうる。同様に、抗体は、アミノ酸レベルで、実質的にネコ、イヌ、ウマ、ラクダ又はアルパカ、ウシ、ヒツジ、ブタ、又はヤギなど、所与の動物「化」されることにより、他の種に対しても免疫原性でなくされうる。所望の場合、ｍＡｂは、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、硫酸アンモニウム沈殿、又はアフィニティークロマトグラフィーなど、従来の手順により、培養培地又は腹水から精製されうる。加えて、ヒトモノクローナル抗体は、第３のコピーである、ヒトＩｇＧのトランス遺伝子座と、サイレンシングされた、内因性のマウスＩｇ遺伝子座とを含有する、トランスジェニックマウスの免疫化により作出される場合もあり、ヒトトランスジェニックマウスを使用することにより作出される場合もある。ヒト化モノクローナル抗体及びその断片の作製はまた、ファージディスプレイ法を介してもなされうる。
【００８９】
「薬学的に許容される担体」は、医薬の投与に適合性のものなど、任意の溶媒及び全ての溶媒、任意の分散媒及び全ての分散媒、任意のコーティング及び全てのコーティング、任意の抗菌剤及び抗真菌剤並びに全ての抗菌剤及び抗真菌剤、任意の等張剤及び全ての等張剤、並びに任意の吸収遅延剤及び全ての吸収遅延剤を含む。好ましい、このような担体又は希釈剤の例は、水、生理食塩液、リンゲル液、及びデキストロース溶液を含む。補足的な活性化合物もまた、組成物に組み込まれうる。非経口投与のために使用されうる溶液及び懸濁液は、注射用水、生理食塩液溶液、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなど、等張性を調整するための薬剤を含みうる。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整されうる。非経口調製物は、ガラス製又はプラスチック製の、アンプル、ディスポーザブルのシリンジ、又は複数回投与用のバイアルに封入されうる。
【００９０】
抗体は、静脈内注射などの注射により投与される場合もあり、関節への関節内注射など、局所投与される場合もある。注射に適切な医薬組成物は、滅菌注射用溶液又は滅菌注射用分散液の即席調製物のための、滅菌水溶液又は水性分散液を含む。注射に適切な抗体による医薬組成物中には、多様な賦形剤が含まれうる。適切な担体は、生理食塩液、静菌水、CREMOPHOR EL（登録商標）（BASF社製；Parsippany、NJ）、又はリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ：phosphate buffered saline）を含む。いずれの場合も、組成物は、滅菌でなければならず、シリンジを使用して投与されるように、流体であるものとする。このような組成物は、製造時及び保管時に、安定であるものとし、細菌及び真菌などの微生物による汚染に対して保護されなければならない。多様な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、及びチメロサールが、微生物汚染を封じ込めうる。組成物中には、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、及び塩化ナトリウムなどの等張剤が含まれうる。吸収を遅延させうる組成物は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの薬剤を含む。滅菌注射用溶液は、抗体と、他の任意の治療成分とを、適切な溶媒中に、要求される成分のうちの１つ又は組合せと共に、要求量で組み込むことに続き、滅菌を行うことにより調製されうる。滅菌注射用溶液を調製するために、滅菌固体を調製する方法は、固体をもたらす、真空乾燥及び凍結乾燥を含む。
【００９１】
吸入による投与のために、抗体は、噴霧器又は適切な高圧ガス、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する高圧容器からのエアゾールスプレーとして送達されうる。抗体はまた、例えば、iSPERSE（商標）吸入型薬物送達プラットフォーム（PULMATRIX社製、Lexington、Mass.）を使用する乾燥粉末として、吸入を介しても送達されうる。ニワトリ抗体（ＩｇＹ）である、抗ＡＧＥ抗体の使用は、吸入により投与された場合、ヒトを含む、様々な動物において、非免疫原性でありうる。
【００９２】
各種の抗体の適切な投与量レベルは、一般に、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１〜５００ｍｇであろう。好ましくは、投与量レベルは、約０．１〜約２５０ｍｇ／ｋｇ；より好ましくは、約０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇであろう。適切な投与量レベルは、約０．０１〜２５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇでありうる。この範囲内で、投与量は、０．０５〜０．５、０．５〜５又は５〜５０ｍｇ／ｋｇでありうる。各種の抗体は、毎日１回又は２回など、毎日１〜４回のレジメンで投与されうるが、抗体は、典型的に、長いインビボ半減期を有する。したがって、各種の抗体は、毎日１回、毎週１回、隔週１回、３週間ごとに１回、毎月１回、又は６０〜９０日間ごとに１回投与されうる。
【００９３】
抗ＡＧＥ抗体の投与を施される対象は、投与が、早期老化を伴う症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響を治療するのに効果的であったのかどうかを決定するために調べられうる。例えば、対象は、後続の測定の間において、又は時間経過にわたり、１又は２以上の、早期老化を模倣する症状の低減を裏付ける場合、効果的な抗体治療を施されたと考えられうる。代替的に、老化細胞の濃度及び／又は数が、時間経過にわたり測定される場合もある。抗体の投与、及び後続の検査は、所望の治療結果が達成されるまで反復されうる。
【００９４】
投与及び投与量の均一性を容易とするように、単位投与量形態（Unit dosage forms）が創出されうる。単位投与量形態とは、治療される対象のための、単回の投与量として適し、要求される医薬担体と会合させた、治療有効量の、１種又は２種以上の抗体を含有する、物理的に個別の単位を指す。好ましくは、単位投与量形態は、密封容器に入れられ、滅菌されている。
【００９５】
ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチンは、ＡＧＥ抗原、アジュバント、任意の保存剤、及び任意の賦形剤を含有する。ＡＧＥ抗原の例は、ＡＧＥ−抗トロンビンIII、ＡＧＥ−カルモジュリン、ＡＧＥ−インスリン、ＡＧＥ−セルロプラスミン、ＡＧＥ−コラーゲン、ＡＧＥ−カテプシンＢ、ＡＧＥ−ウシ血清アルブミン（ＡＧＥ−ＢＳＡ）、ＡＧＥ−ヒト血清アルブミン、及びオボアルブミンなどのＡＧＥ−アルブミン、ＡＧＥ−クリスタリン、ＡＧＥ−プラスミノーゲン活性化因子、ＡＧＥ−内皮細胞膜タンパク質、ＡＧＥ−アルデヒドレダクターゼ、ＡＧＥ−トランスフェリン、ＡＧＥ−フィブリン、ＡＧＥ−銅／亜鉛ＳＯＤ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｂ、ＡＧＥ−フィブロネクチン、ＡＧＥ−膵リボース、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ａ−Ｉ及びII、ＡＧＥ−ヘモグロビン、ＡＧＥ−Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰアーゼ、ＡＧＥ−プラスミノーゲン、ＡＧＥ−ミエリン、ＡＧＥ−リゾチーム、ＡＧＥ−免疫グロブリン、ＡＧＥ−赤血球Ｇｌｕ輸送タンパク質、ＡＧＥ−β−Ｎ−アセチルヘキソミナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｅ、ＡＧＥ−赤血球膜タンパク質、ＡＧＥ−アルドースレダクターゼ、ＡＧＥ−フェリチン、ＡＧＥ−赤血球スペクトリン、ＡＧＥ−アルコールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−ハプトグロビン、ＡＧＥ−チューブリン、ＡＧＥ−甲状腺ホルモン、ＡＧＥ−フィブリノーゲン、ＡＧＥ−β２−マイクログロブリン、ＡＧＥ−ソルビトールデヒドロゲナーゼ、ＡＧＥ−α１−抗トリプシン、ＡＧＥ−炭酸デヒドラターゼ、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質、ＡＧＥ−ヘキソキナーゼ、ＡＧＥ−ａｐｏ  Ｃ−Ｉ、ＡＧＥ−ＲＮアーゼ、ＡＧＥ−ヒトヘモグロビンなどのＡＧＥ−ヘモグロビン、ＡＧＥ−低密度リポタンパク質（ＡＧＥ−ＬＤＬ）、及びＡＧＥ−コラーゲンIVなどのＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドを含む。ＡＧＥ修飾全赤血球、ＡＧＥ修飾溶解赤血球、又はＡＧＥ修飾部分消化赤血球などのＡＧＥ修飾細胞もまた、ＡＧＥ抗原として使用されうる。適切なＡＧＥ抗原はまた、カルボキシメチルリシン（ＣＭＬ）、カルボキシエチルリシン（ＣＥＬ）、ペントシジン、ピラリン、ＦＦＩ、ＡＦＧＰ、及びＡＬＩなどのＡＧＥ修飾（また、ＡＧＥエピトープ又はＡＧＥ部分とも称される）を呈するタンパク質又はペプチドも含む。ＡＧＥ抗原は、ＡＧＥ−ＫＬＨ（AGE conjugated to keyhole limpet hemocyanin）などのＡＧＥ−タンパク質コンジュゲートでありうる。これらのＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチド、及びこれらの調製物の一部についてのさらなる詳細については、Bucalaにおいて記載されている。
【００９６】
特に好ましいＡＧＥ抗原は、カルボキシメチルリシンＡＧＥ修飾又はカルボキシエチルリシンＡＧＥ修飾を呈する、タンパク質又はペプチドを含む。カルボキシメチルリシン（また、Ｎ（イプシロン）−（カルボキシメチル）リシン、Ｎ（６）−カルボキシメチルリシン、又は２−アミノ−６−（カルボキシメチルアミノ）ヘキサン酸としても公知である）、及びカルボキシエチルリシン（また、Ｎ−イプシロン−（カルボキシエチル）リシンとしても公知である）は、酸化ストレス及び化学物質の糖化反応の結果として、タンパク質又はペプチド及び脂質において見出され、若年性遺伝障害と相関している。ＣＭＬ改変タンパク質又はＣＭＬ改変ペプチド及びＣＥＬ改変タンパク質又はＣＥＬ改変ペプチドは、様々な細胞上で発現される受容体である、ＲＡＧＥにより認識される。ＣＭＬ及びＣＥＬについては、十分に研究されており、ＣＭＬ関連製品及びＣＥＬ関連製品は市販されている。例えば、Cell Biolabs, Inc.社は、ＣＭＬ−ＢＳＡ抗原、ＣＭＬポリクローナル抗体、ＣＭＬ免疫ブロットキット、及びＣＭＬ競合ＥＬＩＳＡキット（www.cellbiolabs.com/cml-assays）のほか、ＣＥＬ−ＢＳＡ抗原及びＣＥＬ競合ＥＬＩＳＡキット（www.cellbiolabs.com/cel-n-epsilon-carboxyethyl-lysine-assays-and-reagents）を販売している。
【００９７】
ＡＧＥ抗原は、対象における抗体の産生を増強するように、担体タンパク質にコンジュゲートされうる。単独では、十分に免疫原性でない抗原は、免疫系からの応答を刺激するのに適する、担体タンパク質を要求する場合がある。適切な担体タンパク質の例は、ＫＬＨ（keyhole limpet hemocyanin）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、コレラ毒素、不安定性エンテロトキシン、シリカ粒子、及びダイズトリプシン阻害剤を含む。好ましくは、担体タンパク質は、ＫＬＨ（ＡＧＥ−ＫＬＨ）である。ＫＬＨは、集中的に研究され、被験がんワクチン中の、効果的な担体タンパク質として同定されている。好ましいＡＧＥ抗原-担体タンパク質コンジュゲートは、ＣＭＬ−ＫＬＨ及びＣＥＬ−ＫＬＨを含む。
【００９８】
ＡＧＥ抗原の投与は、免疫系が、抗原に対する免疫を発生させることを可能とする。免疫は、細胞性免疫応答又は体液性免疫応答である、長期的免疫応答である。細胞性免疫応答は、抗原が提示されたときに活性化され、好ましくは、Ｔ細胞を分化させ、サイトカインを産生させるＴ細胞の共刺激因子とともに、活性化される。細胞性免疫応答の発生に関与する細胞は、ヘルパーＴ（Ｔｈ：T-helper）細胞の、２つクラスである、Ｔｈ１及びＴｈ２である。Ｔｈ１細胞が、補体カスケードを活性化させ、マクロファージのＦｃ受容体に結合する、ＩｇＧ２Ａアイソタイプの抗体を、主に産生するように、Ｂ細胞を刺激するのに対し、Ｔｈ２細胞は、マウスにおけるＩｇＧ１アイソタイプ抗体、ヒトにおけるＩｇＧ４アイソタイプ抗体、及びＩｇＥアイソタイプ抗体を産生するように、Ｂ細胞を刺激する。ヒトの身体はまた、樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞など、「プロフェッショナル」の抗原提示細胞も含有する。
【００９９】
液性免疫応答（humoral immune response）は、Ｂ細胞が、抗原に、選択的に結合し、増殖し始め、この抗原を特異的に認識する抗体を産生し、形質細胞又はメモリーＢ細胞と称される、抗体分泌細胞に分化しうる細胞のクローン集団の産生をもたらす場合に誘発される。抗体とは、Ｂ細胞により産生される分子であって、特異的抗原に結合する分子である。抗原−抗体複合体は、複数の応答、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）若しくはマクロファージを介する細胞媒介性応答、又は、例えば、標的細胞の溶解を結果としてもたらすカスケードにおいて、逐次的に作用する、複数の血清タンパク質の複合体である、補体系を活性化させることを介する、血清媒介性応答を誘発する。
【０１００】
免疫アジュバント（単に、「アジュバント」ともまた称される）とは、免疫原性作用物質に対する免疫応答を強化する、ワクチンの成分（複数可）である。アジュバントは、マクロファージを、免疫原性作用物質に誘引し、次いで、この作用物質を、所属リンパ節に提示して、効果的な抗原応答を誘発することにより機能する。アジュバントはまた、それ自体、免疫原性作用物質のための担体としても作用しうる。アジュバントは、免疫応答の誘発において重要な役割を果たしうる炎症応答を誘導しうる。
【０１０１】
アジュバントは、アルミニウム塩などの無機化合物、油エマルジョン、細菌性産物、リポソーム、免疫刺激複合体、及びスクアレンを含む。アルミニウム化合物は、ヒトワクチン及び獣医科ワクチンにおいて、最も広く使用されるアジュバントである。これらのアルミニウム化合物は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）化合物及び水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）化合物などのアルミニウム塩を含み、典型的に、ゲルの形態にあり、ワクチン用免疫アジュバントの分野では、一般に、「アラム」と称される。水酸化アルミニウムは、鉱物である、ベーマイトの構造を有する、低結晶性の水酸化酸化アルミニウムである。リン酸アルミニウムは、非結晶性の、ヒドロキシリン酸アルミニウムである。負に帯電した分子種（例えば、負に帯電した抗原）が、中性ｐＨにおいて、水酸化アルミニウムゲルに吸収されるのに対し、正に帯電した分子種（例えば、正に帯電した抗原）は、中性ｐＨにおいて、リン酸アルミニウムゲルに吸収される。これらのアルミニウム化合物は、投与部位において、抗原の貯蔵庫をもたらし、これにより、抗体の産生を刺激するように、段階的で持続的な抗原の放出をもたらすと考えられる。アルミニウム化合物は、Ｔｈ１細胞ではなく、Ｔｈ２細胞により媒介される細胞応答を、より効果的に刺激する傾向がある。
【０１０２】
エマルジョンアジュバントは、油中水エマルジョン（例えば、油エマルジョン中の死滅抗酸菌などのフロイントアジュバント）及び水中油エマルジョン（例えば、MF-59）を含む。エマルジョンアジュバントは、体液性応答の上昇、Ｔ細胞増殖、細胞毒性リンパ球、及び細胞媒介性免疫の増大を誘導しうる、免疫原性成分、例えば、スクアレン（MF-59）、又はオレイン酸マンニド（不完全フロイントアジュバント）を含む。
【０１０３】
リポソームアジュバント又は小胞アジュバント（パウキラメラによる脂質小胞を含む）は、様々な材料、例えば、抗原を封入及び輸送するのに使用されうる、脂質二重層ドメインと、水性環境とを有する。パウキラメラ小胞（例えば、米国特許第６，３８７，３７３号明細書において記載されている、パウキラメラ小胞）は、非リン脂質材料（例えば、両親媒性界面活性剤；米国特許第４，２１７，３４４号明細書；同第４，９１７，９５１号明細書；及び同第４，９１１，９２８号明細書を参照されたい）、任意に、ステロール、及び小胞内に封入される、任意の水非混和性の油性材料（例えば、スクアレン油などの油、及び油溶性抗原又は油中懸濁性抗原）を含む脂質相と；水、生理食塩液、緩衝液又は脂質を水和させるのに使用される、他の任意の水溶液などの水性相とを、高圧条件又は高せん断条件下で混合することにより調製されうる。リポソームアジュバント又は小胞アジュバントは、例えば、小胞の、免疫細胞膜への融合により、抗原の、免疫細胞との接触を促進し、ヘルパーＴ細胞のＴｈ１亜集団を、優先的に刺激すると考えられる。
【０１０４】
他の種類のアジュバントは、ウシ型結核菌（Mycobacterium bovis）によるＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌：bacillus Calmette-Guerin）、キラヤサポニン、及び非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）を含む。さらなるアジュバントについては、米国特許出願公開第２０１０／０２２６９３２号（２０１０年９月９日）；及びJiang, Z-H. et al. “Synthetic vaccines: the role of adjuvants in immune targeting”, Current Medicinal Chemistry, Vol. 10(15), pp. 1423-39 (2003)において記載されている。好ましいアジュバントは、フロイント完全アジュバント及びフロイント不完全アジュバントを含む。
【０１０５】
ワクチンは、抗酸化剤、抗菌剤、及び抗微生物剤、並びにこれらの組合せなど、１又は２以上の保存剤を含んでもよい。例は、塩化ベンゼトニウム、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）、チメロサール、フェノール、２−フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、及びホルマリン；アンホテリシンＢ、クロルテトラサイクリン、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ポリミキシンＢ、及びストレプトマイシンなどの抗菌剤；ポリオキシエチレン−９、１０−ノニルフェノール（Triton N-101、オクトキシノール９）、デオキシコール酸ナトリウム、及びポリオキシエチル化オクチルフェノール（Triton X-l00）などの抗微生物界面活性剤を含む。ワクチンの作製及びパッケージングは、保存剤に対する必要を消失させうる。例えば、滅菌され、密封容器内で保管されたワクチンは、保存剤を要求しない場合がある。
【０１０６】
ワクチンの他の成分は、安定化剤、増粘剤、毒素解毒剤、希釈剤、ｐＨ調整剤、等張性調整剤、界面活性剤、消泡剤、タンパク質安定化剤、色素、及び溶媒など、薬学的に許容される賦形剤を含む。このような賦形剤の例は、塩酸、リン酸緩衝液、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ホウ砂、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、ポリジメチルシロゾン、ブリリアントグリーン、フェノールｒｅｄ（フェノールスルホンフタレイン）、グリシン、グリセリン、ソルビトール、ヒスチジン、グルタミン酸一ナトリウム、グルタミン酸カリウム、スクロース、尿素、ラクトース、ゼラチン、ソルビトール、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、及びグルタルアルデヒドを含む。ワクチン、並びにアジュバントの、これらの様々な成分については、www.cdc.gov/vaccines/pubs/pinkbook/downloads/appendices/B/excipient-table-2.pdf；及びVogel, F. R. et al., “A compendium of vaccine adjuvants and excipients”, Pharmaceutical Biotechnology, Vol. 6, pp. 141-228 (1995)において記載されている。
【０１０７】
ワクチンは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、４００、８００、１０００μｇ、又は２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０ｍｇを含む、１μｇ〜１００ｍｇの、少なくとも１つのＡＧＥ抗原を含有しうる。単回の注射のために使用される量は、単位投与量に対応する。
【０１０８】
ワクチンは、単位投与量形態、又は２〜１００、２〜１０回など、複数回投与量形態（multidosage form）で提供されうる。単位投与量は、中隔を伴うバイアルにより提供される場合もあり、注射針を伴うか、又は伴わないシリンジにより提供される場合もある。ワクチンは、静脈内投与、皮下投与、又は腹腔内投与されうる。好ましくは、ワクチンは、滅菌されている。
【０１０９】
ワクチンは、２、３、４、５、６、７、８、９回を含む、１〜１０回など、１又は２回以上投与される場合があり、１週間〜１年間、２〜１０週間、２〜１０カ月間の範囲の期間にわたり投与されうる。さらに、２、５、１０、及び１５年間を含む、１年間〜２０年間の経過にわたり、追加のワクチン接種が所望されうる。
【０１１０】
細胞のＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチンを施される対象は、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対する免疫を発生させたのかどうかを決定するために調べられる場合がある。適切な試験は、イムノアッセイなど、抗体の存在検出するための血液検査、又は抗体力価を検出するための血液検査を含みうる。ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対する免疫はまた、老化細胞の濃度及び／又は数を、時間経過にわたりモニタリングすることによっても決定されうる。ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対する免疫の進行についての検査に加えて、対象はまた、ワクチン接種が、早期老化を模倣する症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の慢性影響を治療するのに効果的であったのかどうかを決定するようにも調べられうる。例えば、対象は、後続の測定の間において、若しくは時間経過にわたり、１若しくは２以上の、早期老化を模倣する症状の低減を裏付ける場合、又は老化細胞の濃度及び／若しくは数を測定することにより、効果的なワクチン接種を施されたと考えられうる。ワクチン接種、及び後続の検査は、所望の治療結果が達成されるまで反復されうる。
【０１１１】
ワクチン接種法は、複数のＡＧＥ部分に対する免疫をもたらすようにデザインされうる。単一のＡＧＥ抗原は、複数のＡＧＥ部分に結合することが可能なＡＧＥ抗体の産生を誘導しうる。代替的に、ワクチンは、複数のＡＧＥ抗原を含有しうる。加えて、対象は、複数のワクチンを施される場合があり、この場合、各ワクチンは、異なるＡＧＥ抗原を含有する。
【０１１２】
本明細書に記載される方法により、任意の哺乳動物が治療されうる。ヒトは、治療に好ましい哺乳動物である。治療されうる、他の哺乳動物は、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、及びイヌ又はネコなどの愛玩動物を含みうる。代替的に、上記で同定された、哺乳動物又は対象のうちのいずれも、炎症と関連する疼痛治療を必要とする患者集団から除外されうる。
【０１１３】
対象は、早期老化を模倣する症状など、放射線曝露又は化学物質曝露の、１又は２以上の慢性影響の存在に基づき、治療を必要とする対象として同定されうる。早期老化を模倣する症状は、白髪、しわ、フレイル、白内障、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、パーキンソン病、サルコペニア、脂肪組織の減少、前彎後彎症、がん、早発閉経、心血管疾患、認知症、II型糖尿病、内分泌障害、心機能障害、骨粗相症、骨関節炎、肺線維症、腎疾患及び肝疾患、代謝障害、リポジストロフィー、聴覚低下、視覚低下、並びに記憶障害の進行を含む。対象はまた、ハッチソン−ギルフォード早老症候群（また、早老症としても公知である）、ウェルナー症候群、ブルーム症候群、ロスムンド−トムソン症候群、コケイン症候群、色素性乾皮症、硫黄欠乏性毛発育異常症、色素性乾皮症−コケイン症候群の組合せ、及び拘束性皮膚障害を含む、１又は２以上の早老症候群を伴う診断に基づいても、治療を必要とする対象として同定されうる。加えて、対象は、例えば、転移性がん、網膜症、腎症、脳卒中、内皮細胞機能障害、又は神経変性障害など、炎症又はＡＧＥと関連する病理学的状態の存在に基づき、治療を必要とする対象として同定されうる。
【０１１４】
対象はまた、放射線又は化学物質への、既知の曝露又は予期される曝露に基づいても、治療を必要とする対象として同定されうる。例えば、対象は、塩素ガス、ホスゲンガス、マスタードガス、Ｇ剤、Ｖ剤、ノビチョク剤、カルバメートなどの化学兵器、又は殺虫剤への曝露の後、又はダイオキシン、鉛、又はカドミウムなどの毒物への曝露の後に、治療を必要とする対象として同定されうる。同様に、化学療法又はＨＡＡＲＴを施された、又はこれらを施され始めようとする対象は、治療を必要とする対象として同定されうる。一般に使用される化学療法剤の例は、ビノレルビン（NAVELBINE（登録商標））、マイトマイシン（MITOSOL（登録商標））、カンプトテシン、シクロホスファミド（CYTOXAN（登録商標））、メトトレキサート（TREXALL（登録商標））、タモキシフェンクエン酸塩（NOLVADEX（登録商標）、SOLTAMOX（登録商標））、５−フルオロウラシル（ADRUCIL（登録商標））、イリノテカン（ONIVYDE（登録商標））、ドキソルビシン（DOXIL（登録商標））、フルタミド、パクリタキセル（TAXOL（登録商標）、ABRAXANE（登録商標））、ドセタキセル（DOCEFREZ（登録商標）、TAXOTERE（登録商標））、ビンブラスチン、イマチニブメシル酸塩（GLEEVEC（登録商標））、アントラサイクリン、レトロゾール（FEMARA（登録商標））、三酸化ヒ素（TRISENOX（登録商標））、アナストロゾール（ARIMIDEX（登録商標））、トリプトレリンパモ酸塩（TRELSTAR（登録商標））、オゾガマイシン、イリノテカン塩酸塩（CAMPTOSAR（登録商標））、ＢＣＧ生菌（THERACYS（登録商標））、ロイプロリド酢酸塩インプラント（VIADUR（登録商標））、ベキサロテン（TARGRETIN（登録商標））、エキセメスタン（AROMASIN（登録商標））、トポテカン塩酸塩（HYCAMTIN（登録商標））、ゲムシタビンHCL（GEMZAR（登録商標））、ダウノルビシン塩酸塩、トレミフェンクエン酸塩（FARESTON（登録商標））、カルボプラチン（PARAPLATIN（登録商標））、シスプラチン（PLATINOL（登録商標））、オキサリプラチン（ELOTAXIN（登録商標））及び他の任意の白金含有がん治療薬、トラスツズマブ（HERCEPTIN（登録商標））、ラパチニブ（TYKERB（登録商標））、ゲフィチニブ（IRESSA（登録商標））、セツキシマブ（ERBITUX（登録商標））、パニツムマブ（VECTIBIX（登録商標））、テムシロリムス（TORISEL（登録商標））、エベロリムス（AFINITOR（登録商標））、バンデタニブ（CAPRELSA（登録商標））、ベムラフェニブ（ZELBORAF（登録商標））、クリゾチニブ（XALKORI（登録商標））、ボリノスタット（ZOLINZA（登録商標））、ベバシズマブ（AVASTIN（登録商標））、放射線療法、温熱療法、遺伝子療法、及び光力学療法を含む。化学療法レジメン又はＨＡＡＲＴ療法レジメンは、化学療法剤又は抗レトロウイルス剤の投与を、抗ＡＧＥ抗体の投与と組み合わせる場合もあり、ＡＧＥ修飾タンパク質又はＡＧＥ修飾ペプチドに対するワクチン接種と組み合わせる場合もある。
【０１１５】
配列番号１に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
10        20         30        40         50
MNLLLILTFV AAAVAQVQLL QPGAELVKPG ASVKLACKAS GYLFTTYWMH
60        70         80        90
WLKQRPGQGL EWIGEISPTN GRAYYNARFK SEATLTVDKS
100      110        120        130
SNTAYMQLSS LTSEASAVYY CARAYGNYEF AYWGQGTLVT
140       150       160       170
VSVASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC LVKDYFPEPV
180      190        200       210        220
TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG TQTYICNVNH
230      240        250       260
KPSNTKVDKK VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP
270       280        290        300
PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV
310       320       330        340
HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS
350       360        370        380       390
NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS REEMTKNQVS LTCLVKGFYP
400       410        420        430
SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK
440       450        460
SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
【０１１６】
上記のアミノ酸配列の１６〜１３３位は、配列番号２に対応する。上記のアミノ酸配列の４６〜５０位は、配列番号４１に対応する。上記のアミノ酸配列の６５〜８１位は、配列番号４２に対応する。上記のアミノ酸配列の１１４〜１２２位は、配列番号４３に対応する。
【０１１７】
配列番号３に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
10         20         30        40         50
MNLLLILTFV AAAVADVVMT QTPLSLPVSL GDQASISCRS RQSLVNSNGN
60         70         80        90        100
TFLQWYLQKP GQSPKLLIYK VSLRFSGVPD RFSGSGSGTD FTLKISRVEA
110        120        130        140        150
EDLGLYFCSQ STHVPPTFGG GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA
160        170        180       190
SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD
200        210        220       230
STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
【０１１８】
上記のアミノ酸配列の１６〜１２８位は、配列番号４に対応する。配列番号４の１２８位におけるアルギニン（Ａｒｇ又はＲ）残基は、省かれてもよい。上記のアミノ酸配列の３９〜５４位は、配列番号４４に対応する。上記のアミノ酸配列の７０〜７６位は、配列番号４５に対応する。上記のアミノ酸配列の１０９〜１１７位は、配列番号４６に対応する。
【０１１９】
配列番号１２に対応するＤＮＡ配列を、下記に示す。
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGCTGCAGCCAGGTGCCGAGCTCGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGCTGGCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCAGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGAGATCTCCCCCACCAACGGCAGAGCCTACTACAACGCCCGGTTCAAGTCCGAGGCCACCCTGACCGTGGACAAGTCCTCCAACACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCCCTGACCTCTGAGGCCTCCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGCTTACGGCAACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCTGTGGCTAAGACCACCCCTCCCTCCGTGTACCCTCTGGCTCCTGGCTGTGGCGACACCACCGGATCCTCTGTGACCCTGGGCTGCCTCGTGAAGGGCTACTTCCCTGAGTCCGTGACCGTGACCTGGAACTCCGGCTCCCTGTCCTCCTCCGTGCACACCTTTCCAGCCCTGCTGCAGTCCGGCCTGTACACCATGTCCTCCAGCGTGACAGTGCCCTCCTCCACCTGGCCTTCCCAGACCGTGACATGCTCTGTGGCCCACCCTGCCTCTTCCACCACCGTGGACAAGAAGCTGGAACCCTCCGGCCCCATCTCCACCATCAACCCTTGCCCTCCCTGCAAAGAATGCCACAAGTGCCCTGCCCCCAACCTGGAAGGCGGCCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCCAACATCAAGGACGTGCTGATGATCTCCCTGACCCCCAAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCGAGGACGACCCTGACGTGCAGATCAGTTGGTTCGTGAACAACGTGGAAGTGCACACCGCCCAGACCCAGACACACAGAGAGGACTACAACAGCACCATCAGAGTGGTGTCTACCCTGCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGTCCGGCAAAGAATTCAAGTGCAAAGTGAACAACAAGGACCTGCCCAGCCCCATCGAGCGGACCATCTCCAAGATCAAGGGCCTCGTGCGGGCTCCCCAGGTGTACATTCTGCCTCCACCAGCCGAGCAGCTGTCCCGGAAGGATGTGTCTCTGACATGTCTGGTCGTGGGCTTCAACCCCGGCGACATCTCCGTGGAATGGACCTCCAACGGCCACACCGAGGAAAACTACAAGGACACCGCCCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTACTTCATCTACTCCAAGCTGAACATGAAGACCTCCAAGTGGGAAAAGACCGACTCCTTCTCCTGCAACGTGCGGCACGAGGGCCTGAAGAACTACTACCTGAAGAAAACCATCTCCCGGTCCCCCGGCTAG
【０１２０】
配列番号１３に対応するＤＮＡ配列を、下記に示す。
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGCTGCAGCCAGGTGCCGAGCTCGTGAAACCTGGCGCCTCTGTGAAGCTGGCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGCTGAAGCAGAGGCCAGGCCAGGGCCTGGAATGGATCGGCGAGATCTCCCCCACCAACGGCAGAGCCTACTACAACGCCCGGTTCAAGTCCGAGGCCACCCTGACCGTGGACAAGTCCTCCAACACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCCCTGACCTCTGAGGCCTCCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGCTTACGGCAACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCTGTGGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGATAG
【０１２１】
配列番号１４に対応するＤＮＡ配列を、下記に示す。
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGACCCCTCTGTCCCTGCCTGTGTCTCTGGGCGACCAGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGACAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCCTGTACTTCTGCAGCCAGTCCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCAGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTGA
【０１２２】
配列番号１５に対応するＤＮＡ配列を、下記に示す。
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGACCCCTCTGTCCCTGCCTGTGTCTCTGGGCGACCAGGCCTCCATCTCCTGCCGGTCTAGACAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCCCCCAAGCTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCCTGTACTTCTGCAGCCAGTCCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
【０１２３】
配列番号１６に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARAYGNYEFAYWGQGTLVTVSVAKTTPPSVYPLAPGCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPESVTVTWNSGSLSSSVHTFPALLQSGLYTMSSSVTVPSSTWPSQTVTCSVAHPASSTTVDKKLEPSGPISTINPCPPCKECHKCPAPNLEGGPSVFIFPPNIKDVLMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTIRVVSTLPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPSPIERTISKIKGLVRAPQVYILPPPAEQLSRKDVSLTCLVVGFNPGDISVEWTSNGHTEENYKDTAPVLDSDGSYFIYSKLNMKTSKWEKTDSFSCNVRHEGLKNYYLKKTISRSPG*
【０１２４】
上記のアミノ酸配列の１２３位におけるアラニン残基は、セリン残基で置きかえられてもよい。上記のアミノ酸配列の１２４位におけるチロシン残基は、フェニルアラニン残基で置きかえられてもよい。上記のアミノ酸配列の２５〜１４２位は、配列番号２０に対応する。配列番号２０は、１２３及び１２４位における置換を含んでもよい。配列番号２０は、末端のバリン残基の後に、１つのさらなるリシン残基を含有してよい。
【０１２５】
配列番号１７に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARAYGNYEFAYWGQGTLVTVSVASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG*
【０１２６】
配列番号１８に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC*
【０１２７】
上記のアミノ酸配列の２１〜１３２位は、配列番号２１に対応する。
【０１２８】
配列番号１９に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
【０１２９】
配列番号２２に対応する、１文字式アミノ酸配列を、下記に示す。
10         20         30        40         50
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
60         70         80        90        100
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER
110        120        130       140        150
KCCVECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP
160        170        180        190
EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTVVHQ
200        210        220        230        240
DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN
250       260        270        280        290
QVSLTCLVKG FYPSDISVEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT
300       310        320
VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK
【０１３０】
配列番号２３に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
SYTMGVS
である。
【０１３１】
配列番号２４に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
TISSGGGSTYYPDSVKG
である。
【０１３２】
配列番号２５に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QGGWLPPFAX
［配列中、Ｘは、任意の、天然に存在するアミノ酸でありうる］
である。
【０１３３】
配列番号２６に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
RASKSVSTSSRGYSYMH
である。
【０１３４】
配列番号２７に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
LVSNLES
である。
【０１３５】
配列番号２８に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QHIRELTRS
である。
【０１３６】
配列番号２９に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNQKFQGRVTMTVDKSTNTVYMELSSLRSEDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
である。
【０１３７】
配列番号３０に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCACCAACACCGTGTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA
である。
【０１３８】
配列番号３１に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNAKFQGRVTMTVDKSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
である。
【０１３９】
配列番号３２に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCACCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA
である。
【０１４０】
配列番号３３に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNAKFQGRVTMTVDKSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARAYGNYFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
である。
【０１４１】
配列番号３４に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGACCCCAAGGGCAGCCTGAGCTGGAGAATCCTGCTGTTCCTGAGCCTGGCCTTCGAGCTGAGCTACGGCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACCTGTTCACCACCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCGAGATCTCCCCTACCAACGGCAGAGCCTACTACAACCAAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCGTGGACAAGTCCATCAACACCGCTTACATGGAACTGTCCAGACTGCGGAGCGATGACACCGCCGTGTACTACTGCGCTAGAGCCTACGGCAACTACGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTGTCCTCTGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCTCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGAACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGCGCTCTGACCAGCGGAGTGCACACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCTAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCCGCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCTCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTCGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGCGACGAGCTGACAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCCGTGCTGGACAGCGACGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCGGATAGTAA
である。
【０１４２】
配列番号３５に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１４３】
配列番号３６に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
である。
【０１４４】
配列番号３７に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYQQRPGQSPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１４５】
配列番号３８に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCCTGCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCAGGCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCAGCAGCGGCCTGGCCAGAGCCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCGGAGGCACCAAGTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
である。
【０１４６】
配列番号３９に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
METDTLLLWVLLLWVPGSTGDVVMTQSPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVNSNGNTFLQWYHQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGKDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPTFGQGTLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１４７】
配列番号４０に対応する、ＤＮＡ配列は、
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTCTGGGTGCTGCTGCTCTGGGTGCCCGGCTCCACCGGAGACGTCGTGATGACCCAGTCCCCTCTGTCCAGTCCTGTGACCCTGGGACAGCCTGCCTCCATCTCCTCAGATCCTCCCAGTCCCTCGTGAACTCCAACGGCAACACCTTCCTGCAGTGGTATCACCAGCGGCCTGGCCAGCCTCCCAGACTGCTGATCTACAAGGTGTCCCTGCGGTTCTCCGGCGTGCCCGACGATTTTCCGGCTCTGGCGCTGGCAAGGACTTCACCCTGAAGATCTCCCGGGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGCTCCCAGAGCACCCACGTGCCCCCTACATTTGGCCAGGGCACCAACTGGAAATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCTCCCAGCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGGCAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGACAAGGTGTACGCCTGCGAGGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTAA
である。
【０１４８】
配列番号４７に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSVASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１４９】
配列番号４８に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSEVQLLESGAEAKKPGASVKLSCKASGYLFTTYWMHWVHQAPGQRLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１５０】
配列番号４９に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQRLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１５１】
配列番号５０に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１５２】
配列番号５１に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MGWTLVFLFLLSVTAGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１５３】
配列番号５２に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QVQLLQPGAELVKPGASVKLACKASGYLFTTYWMHWLKQRPGQGLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSEATLTVDKSSNTAYMQLSSLTSEASAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSV
である。
【０１５４】
配列番号５３に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
EVQLLESGAEAKKPGASVKLSCKASGYLFTTYWMHWVHQAPGQRLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS
である。
【０１５５】
配列番号５４に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQRLEWIGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS
である。
【０１５６】
配列番号５５に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS
である。
【０１５７】
配列番号５６に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYLFTTYWMHWVRQAPGQGLEWMGEISPTNGRAYYNARFKSRVTITRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSFGNYEFAYWGQGTLVTVSS
である。
【０１５８】
配列番号５７に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１５９】
配列番号５８に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLQQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLTISRVEAEDVGIYFCSQSTHVPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１６０】
配列番号５９に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPQLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEPEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１６１】
配列番号６０に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWFQQRPGQSPRRLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSDTDFTLRISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１６２】
配列番号６１に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
MVSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLLQKPGQPPQLLIYKVSLRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【０１６３】
配列番号６２に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPKLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYFCSQSTHVPPTFGGGTKLEIK
である。
【０１６４】
配列番号６３に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
DIVMTQTPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLQQRPGQPPRLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLTISRVEAEDVGIYFCSQSTHVPPTFGQGTKVEIK
である。
【０１６５】
配列番号６４に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWYLQKPGQSPQLLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEPEDVGVYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEVK
である。
【０１６６】
配列番号６５に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWFQQRPGQSPRRLIYKVSLRFSGVPDRFSGSGSDTDFTLRISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGQGTKLEIK
である。
【０１６７】
配列番号６６に対応する、１文字式アミノ酸配列は、
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSRQSLVNSNGNTFLQWLLQKPGQPPQLLIYKVSLRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCSQSTHVPPTFGGGTKVEIK
である。
［実施例］
【実施例１】
【０１６８】
抗糖化反応最終産物抗体の投与についてのインビボ研究
抗糖化反応最終産物抗体の効果について検討するために、抗体を、老齢ＣＤ１（ＩＣＲ）マウス（Charles River Laboratories社製）に、３週間にわたり、毎週１回（１、８、及び１５日目に）、１日に２回、静脈内注射により投与するのに続き、１０週間にわたる治療休止期間を設けた。被験抗体は、キーホールリンペットヘモシアニンをコンジュゲートしたカルボキシメチルリシンに対して惹起された、市販のマウス抗糖化反応最終産物抗体である、R&D Systems, Inc.社（Minneapolis、MN；型番：MAB3247）から入手可能なカルボキシメチルリシンＭＡｂ（クローン：318003）であった。生理食塩液による対照参照は、対照動物において使用した。
【０１６９】
「若齢」と称されるマウスが、８週齢であったのに対し、「老齢」と称されるマウスは、８８週（±２日）齢であった。抗体の投与に由来する有害事象は、認められなかった。研究で使用した異なる動物群を、表１に示す。
【０１７０】
【表１】
2021532114.tif 000003
【０１７１】
老化細胞についてのマーカーであるＰ１６ＩＮＫ４ａ  ｍＲＮＡを、群の脂肪組織内で、リアルタイムｑＰＣＲにより定量した。結果を、表２に示す。表中、ΔΔＣｔ＝対照群におけるΔＣｔ平均値（２）−被験群（１、３、５）におけるΔＣｔ平均値であり；発現倍数＝２−ΔΔＣｔである。
【０１７２】
【表２】
2021532114.tif 000004
【０１７３】
上記の表は、予測される通り、非治療老齢マウス（対照群２）が、非治療若齢マウス（対照群１）の２．５５倍のｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡを発現することを指し示す。これは、８５日目における回収の終了時に安楽死させられた、群２の非治療老齢マウスを、２２日目における治療の終了時に安楽死させられた、群１の非治療若齢マウスと比較する場合に観察された。群２の非治療老齢マウスからの結果を、８５日目に安楽死させられた、群３の治療老齢マウスからの結果と比較したところ、ｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡは、群２において、群３の１．２３倍であることが観察された。したがって、ｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡの発現レベルは、老齢マウスを、１週間毎、毎日２回、１グラム当たり２．５μｇの抗体で治療した場合に低下した。
【０１７４】
群２（対照）の非治療老齢マウスからの結果を、２２日目に安楽死させられた、群５（１グラム当たり５μｇ）の治療老齢マウスからの結果と比較したところ、ｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡは、群２（対照）において、群５（１グラム当たり５μｇ）の３．０３倍であることが観察された。この比較は、群５の動物のｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡ発現レベルが、１週間毎、毎日２回、１グラム当たり５．０μｇで治療した場合に低下することを指し示したことから、若齢非治療マウス（すなわち、群１）の発現レベルと同等な、ｐ１６Ｉｎｋ４ａ  ｍＲＮＡ発現レベルを提示する。８５日目における回収の終了時に安楽死させられた、群３（１グラム当たり２．５μｇ）のマウスと異なり、群５マウスは、２２日目における治療の終了時に安楽死させられた。
【０１７５】
これらの結果は、抗体の投与が、老化細胞の殺滅を結果としてもたらしたことを指し示す。
【０１７６】
また、抗体投与の、サルコペニアに対する効果を決定するように、腓腹筋量も測定した。結果を、表３に提示する。結果は、抗体の投与が、筋肉量を、対照と比較して増大させたが、これは、１週間毎、毎日２回、１グラム当たり５．０μｇの高投与量における投与に限られたことを指し示す。
【０１７７】
【表３】
2021532114.tif 000005
【０１７８】
これらの結果は、細胞のＡＧＥに結合する抗体の投与が、老化のバイオマーカーである、ｐ１６Ｉｎｋ４ａを発現する細胞の低減を結果としてもたらしたことを裏付ける。データは、老化細胞の低減が、老齢マウスにおける筋肉量の増大を、直接もたらすことを示す。これらの結果は、サルコペニアの古典的徴候である、筋肉量の減少が、細胞のＡＧＥに結合する抗体の投与により治療されうることを指し示す。結果は、抗体の投与が、老化細胞を除去することにより、早期老化を治療するのに効果的であることを示唆する。
【実施例２】
【０１７９】
被験抗体のアフィニティー及び反応速度
Ｎα，Ｎα−ビス（カルボキシメチル）−Ｌ−リシントリフルオロ酢酸塩（Sigma-Aldrich社、St. Louis、MO）を、細胞のＡＧＥ修飾タンパク質についてのモデル基質として使用して、実施例１で使用した被験抗体の、アフィニティー及び反応速度を解析した。ブランクとして設定されたＦｃ１、及び被験抗体（分子量を１５０，０００Ｄａとする）を固定化したＦｃ２を伴う、Series S sensor chip CM5（GE Healthcare社、Pittsburgh、PA）を、BIACORE（商標）T200（GE Healthcare社、Pittsburgh、PA）上で使用して、無標識相互作用解析を実行した。ランニング緩衝液は、温度を２５℃とする、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．０５％のP-20、ｐＨ７．４）であった。ソフトウェアは、BIACORE（商標）T200 evaluation software, version 2.0であった。解析では、二重参照（Ｆｃ２−１及び緩衝液だけの注射）を使用し、データは、ラングミュア１：１結合モデルに当てはめた。
【０１８０】
【表４】
2021532114.tif 000006
【０１８１】
時間に対する応答のグラフを、図１に例示する。以下の値：ｋａ（１／Ｍ秒）＝１．８５７×１０３；ｋｄ（１／秒）＝６．７８１×１０−３；ＫＤ（Ｍ）＝３．６５１×１０−６；Ｒｍａｘ（ＲＵ）＝１９．５２；及びχ２＝０．１１４は、解析から決定した。当てはめのχ２値が、Ｒｍａｘの１０％未満であるため、当てはめは信頼できる。
【実施例３】
【０１８２】
マウス抗ＡＧＥ抗体  ＩｇＧ２ｂ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体  ＩｇＧ１抗体の構築及び作製
マウス抗ＡＧＥ抗体及びキメラヒト抗ＡＧＥ抗体を調製した。マウス抗ＡＧＥ抗体ＩｇＧ２ｂ重鎖のＤＮＡ配列を、配列番号１２に示す。キメラヒト抗ＡＧＥ抗体ＩｇＧ１重鎖のＤＮＡ配列を、配列番号１３に示す。マウス抗ＡＧＥ抗体カッパ軽鎖のＤＮＡ配列を、配列番号１４に示す。キメラヒト抗ＡＧＥ抗体カッパ軽鎖のＤＮＡ配列を、配列番号１５に示す。遺伝子配列を合成し、高発現哺乳動物ベクターにクローニングした。配列は、コドン最適化した。完成したコンストラクトは、トランスフェクションに進む前に、配列を確認した。
【０１８３】
ＨＥＫ２９３細胞を、トランスフェクションの１日前に、シェークフラスコに播種し、無血清既知組成培地を使用して増殖させた。ＤＮＡ発現コンストラクトを、０．０３リットルの懸濁ＨＥＫ２９３細胞に、一過性にトランスフェクトした。２０時間後に、細胞を採取して、生存率及び生細胞数を求め、力価を測定した（OCTET（登録商標）QKe、ForteBio社製）。一過性トランスフェクション作製工程によって、さらなる読取りを行った。５日目に、培養物を採取し、各々について、さらなる試料を、細胞密度、生存率、及び力価について測定した。
【０１８４】
マウス抗ＡＧＥ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体のための馴化培地を、一過性トランスフェクション作製工程から採取し、遠心分離及び濾過により清澄化させた。上清を、プロテインＡカラム上に流過させ、低ｐＨ緩衝液で溶出させた。アリコート分割の前に、０．２μｍ膜フィルターを使用する濾過を実施した。精製及び濾過の後、タンパク質濃度を、ＯＤ２８０及び減衰係数から計算した。収率及びアリコートの概要を、表５に示す。
【０１８５】
【表５】
2021532114.tif 000007
【０１８６】
抗体純度は、LabChip（登録商標）GXII（PerkinElmer社）を使用するキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ：capillary electrophoresis sodium-dodecyl sulfate）解析により査定した。
【実施例４】
【０１８７】
マウス（親）抗ＡＧＥ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体の結合
実施例３で記載された、マウス（親）抗ＡＧＥ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体の結合を、直接結合ＥＬＩＳＡにより探索した。抗カルボキシメチルリシン（ＣＭＬ）抗体（R&D Systems社、MAB3247）を、対照として使用した。ＣＭＬを、ＫＬＨにコンジュゲートさせ（ＣＭＬ−ＫＬＨ）、ＥＬＩＳＡプレートを、ＣＭＬ及びＣＭＬ−ＫＬＨの両方で、一晩にわたりコーティングした。ＨＲＰ−ヤギ抗マウスＦｃを使用して、対照抗体及びマウス（親）抗ＡＧＥ抗体を検出した。ＨＲＰ−ヤギ抗ヒトＦｃを使用して、キメラ抗ＡＧＥ抗体を検出した。
【０１８８】
抗原を、ｐＨ６．５の、１倍濃度リン酸緩衝液中、１μｇ／ｍＬに希釈した。９６ウェルマイクロ滴定ＥＬＩＳＡプレートを、ウェル１つ当たり１００μＬの希釈抗原でコーティングし、４℃で、一晩にわたり静置した。プレートを、１倍濃度のＰＢＳ、２．５％のＢＳＡでブロッキングし、翌朝、室温で、１〜２時間にわたり静置した。抗体試料を、１倍濃度のＰＢＳ、１％のＢＳＡを伴い、出発濃度を５０μｇ／ｍＬとする系列希釈液中で調製した。二次抗体を、１：５，０００に希釈した。１００μＬの抗体希釈液を、各ウェルにアプライした。プレートを、マイクロプレートシェーカー上、室温で、０．５〜１時間にわたりインキュベートした。プレートを、１倍濃度のＰＢＳで、３回にわたり洗浄した。ウェル１つ当たり１００μＬの、希釈されたＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ二次抗体を、ウェルにアプライした。プレートを、マイクロプレートシェーカー上で、１時間にわたりインキュベートした。次いで、プレートを、１倍濃度のＰＢＳで、３回にわたり洗浄した。１００μＬのＨＲＰ基質であるＴＭＢを、各ウェルに添加して、プレートを発色させた。３〜５分間の経過後、１００μＬの１Ｎ  ＨＣｌを添加することにより、反応を停止させた。次に、直接結合ＥＬＩＳＡを、ＣＭＬコーティングだけを伴い実施した。マイクロプレートリーダーを使用して、ＯＤ４５０における吸光度を読み取った。
【０１８９】
ＣＭＬ  ＥＬＩＳＡ及びＣＭＬ−ＫＬＨ  ＥＬＩＳＡについてのＯＤ４５０吸光度の生データを、下記のプレートマップに示す。ウェルプレート内の９６ウェル中４８のウェルを使用した。プレートマップ内のブランクウェルは、非使用ウェルを指し示す。
【０１９０】
【表６】
2021532114.tif 000008
【０１９１】
ＣＭＬだけによるＥＬＩＳＡについてのＯＤ４５０吸光度の生データを、下記のプレートマップに示す。ウェルプレート内の９６ウェル中２４のウェルを使用した。プレートマップ内のブランクウェルは、非使用ウェルを指し示す。
【０１９２】
【表７】
2021532114.tif 000009
【０１９３】
対照抗ＡＧＥ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体は、ＣＭＬ及びＣＭＬ−ＫＬＨの両方への結合を示した。マウス（親）抗ＡＧＥ抗体はＣＭＬ又はＣＭＬ−ＫＬＨへの、極めて弱い結合を示し、乃至はＣＭＬ又はＣＭＬ−ＫＬＨへの結合を示さなかった。反復されたＥＬＩＳＡからのデータは、対照抗ＡＧＥ抗体及びキメラ抗ＡＧＥ抗体の、ＣＭＬへの結合を確認する。全ての緩衝液対照は、負のシグナルを示した。
【実施例５】
【０１９４】
ヒト化抗体
ヒト化抗体は、親（マウス）抗体配列の選択された部分を、ヒトフレームワーク配列と融合させる、複数のハイブリッド配列を創出することによりデザインした。アクセプターフレームワークは、フレームワークにわたる、全体的な配列同一性、インターフェース位置のマッチング、同様に分類された、カノニカルのＣＤＲ位置、及び除去されるＮ−グリコシル化部位の存在に基づき同定した。３つのヒト化軽鎖、及び３つのヒト化重鎖は、２つの異なる重鎖及び軽鎖の、ヒトアクセプターフレームワークに基づきデザインした。重鎖のアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号３０、配列番号３２、及び配列番号３４に示されるＤＮＡ配列によりコードされる、配列番号２９、配列番号３１、及び配列番号３３に示す。軽鎖のアミノ酸配列を、それぞれ、配列番号３６、配列番号３８、及び配列番号４０に示されるＤＮＡ配列によりコードされる、配列番号３５、配列番号３７、及び配列番号３９に示す。ヒト化配列を、目視及びコンピュータモデル化により、方法に基づいて解析して、抗原への結合を保持する可能性が高い配列を取り出した。目標は、元の抗体特異性を保持しながら、最終的なヒト化抗体内のヒト配列の量を最大化することであった。ヒト化軽鎖とヒト化重鎖とを組み合わせて、９つの完全ヒト化抗体バリアントを創出することができた。
【０１９５】
３つの重鎖及び３つの軽鎖を解析して、それらのヒト性を決定した。抗体のヒト性スコアは、Gao, S. H., et al., “Monoclonal antibody humanness score and its applications”, BMC Biotechnology, 13:55 (July 5, 2013)において記載されている方法に従い計算した。ヒト性スコアは、抗体の可変領域配列が、どのくらいヒト配列に似て見えるのかを表す。重鎖スコアについて、７９以上は、ヒト配列に似て見えることを指し示し；軽鎖スコアについて、８６以上は、ヒト配列に似て見えることを指し示す。３つの重鎖、３つの軽鎖、親（マウス）重鎖、及び親（マウス）軽鎖のヒト性を、下記の表６に示す。
【０１９６】
【表８】
2021532114.tif 000010
【０１９７】
まず、可変領域配列を合成することにより、全長抗体遺伝子を構築した。配列を、哺乳動物細胞内の発現について最適化した。次いで、これらの可変領域配列を、ヒトＦｃドメインを、既に含有する発現ベクターにクローニングし、重鎖には、ＩｇＧ１を使用した。
【０１９８】
小スケールのヒト化抗体の作製は、既知組成培地を、血清の非存在下で使用して、懸濁ＨＥＫ２９３細胞に、重鎖及び軽鎖のためのプラスミドをトランスフェクトすることにより実行した。MabSelect SuRe Protein A培地（GE Healthcare社製）を使用して、馴化培地中の全抗体を精製した。
【０１９９】
配列番号２９、配列番号３１、及び配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有する、３つの重鎖と、配列番号３５、配列番号３７、及び配列番号３９に示されるアミノ酸配列を有する、３つの軽鎖との各組合せから、９つのヒト化抗体を作製した。比較のためのキメラ親抗体もまた調製した。抗体及びそれらのそれぞれの力価を、下記の表７に示す。
【０２００】
【表９】
2021532114.tif 000011
【０２０１】
ヒト化抗体の結合は、例えば、用量依存的結合ＥＬＩＳＡアッセイ又は細胞ベースの結合アッセイにより査定することができる。
【実施例６】
【０２０２】
ヒト対象における、ＡＧＥ−ＲＮアーゼを含有するワクチン。
ＡＧＥ−ＲＮアーゼは、ＲＮアーゼを、０．１〜３Ｍのグルコース、グルコース−６−リン酸、果糖、又はリボースを含有するリン酸緩衝液中で、１０〜１００日間にわたりインキュベートすることにより調製する。ＡＧＥ−ＲＮアーゼ溶液を透析し、タンパク質含量を測定する。アジュバントとしての水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウムを、１００μｇのＡＧＥ−ＲＮアーゼに添加する。ホルムアルデヒド又はホルマリンを、保存剤として、調製物に添加する。アスコルビン酸を、抗酸化剤として添加する。ワクチンはまた、ｐＨを調整するためのリン酸緩衝液、及びタンパク質安定化剤としてのグリシンも含む。組成物は、早老症を伴う対象に、静脈内注射する。
【実施例７】
【０２０３】
ヒト対象における、ＡＧＥ−ＲＮアーゼを含有するワクチンのための注射レジメン。
実施例６で記載されたワクチンと同じワクチンを、早期発症アルツハイマー病の診断に基づき、早期老化を受ける対象として同定された対象に、静脈内注射することができる。ＡＧＥ−ＲＮアーゼに対する抗体の力価は、ＥＬＩＳＡにより、２週間後に決定される。さらなる注射を、それぞれ、３週間後及び６週間後に実施する。さらなる力価の決定を、各回の注射の２週間後に実施する。
【実施例８】
【０２０４】
ヒト対象における、ＡＧＥ−ヘモグロビンを含有するワクチン。
ＡＧＥ−ヘモグロビンは、ヒトヘモグロビンを、０．１〜３Ｍのグルコース、グルコース−６−リン酸、果糖、又はリボースを含有するリン酸緩衝液中で、１０〜１００日間にわたりインキュベートすることにより調製する。ＡＧＥ−ヘモグロビン溶液を透析し、タンパク質含量を測定する。全てのワクチン成分は、ＡＧＥ−ヘモグロビンで、ＡＧＥ−ＲＮアーゼを置きかえる点を除き、実施例６の場合と同じである。投与は、実施例６又は実施例７の場合と同様に実行する。
【実施例９】
【０２０５】
ヒト対象における、ＡＧＥ−ヒト血清アルブミンを含有するワクチン。
ＡＧＥ−ヒト血清アルブミンは、ヒト血清アルブミンを、０．１〜３Ｍのグルコース、グルコース−６−リン酸、果糖、又はリボースを含有するリン酸緩衝液中で、１０〜１００日間にわたりインキュベートすることにより調製する。ＡＧＥ−ヒト血清アルブミン溶液を透析し、タンパク質含量を測定する。全てのワクチン成分は、ＡＧＥ−ヒト血清アルブミンで、ＡＧＥ−ＲＮアーゼを置きかえる点を除き、実施例６の場合と同じである。投与は、実施例６又は実施例７の場合と同様に実行する。
【実施例１０】
【０２０６】
ヒト対象のためのカルボキシメチルリシン修飾タンパク質ワクチン
ワクチンは、カルボキシメチルリシン修飾タンパク質、ＡＧＥ抗原として、アジュバントとしての水酸化アルミニウム、保存剤としてのホルムアルデヒド、抗酸化剤としてのアスコルビン酸、ワクチンのｐＨを調整するリン酸緩衝液、及びタンパク質安定化剤としてのグリシンを組み合わせることにより調製する。ワクチンは、イオン化放射線療法を施された後、心血管疾患が進行した対象へ、皮下注射する。
【実施例１１】
【０２０７】
ヒト対象のためのカルボキシエチルリシン修飾ペプチドワクチン
ワクチンは、ＫＬＨにコンジュゲートしたカルボキシエチルリシン修飾ペプチド、ＡＧＥ抗原として、アジュバントとしての水酸化アルミニウム、保存剤としてのホルムアルデヒド、抗酸化剤としてのアスコルビン酸、ワクチンのｐＨを調整するリン酸緩衝液、及びタンパク質安定化剤としてのグリシンを組み合わせることにより調製する。ワクチンは、ダイオキシンに曝露されて慢性腎疾患を伴う対象に、皮下注射する。
【実施例１２】
【０２０８】
カルボキシメチルリシンモノクローナル抗体の投与についてのインビボ研究
カルボキシメチルリシン抗体の、腫瘍増殖、転移可能性、悪液質に対する効果を探索した。マウス乳がん腫瘍モデルを使用して、マウスにおいて、インビボ研究を実行した。雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（BALB/cAnNCrl、Charles River社）は、研究の１日目において、１１週齢であった。
【０２０９】
４Ｔ１マウス乳腺腫瘍細胞（ATCC CRL-2539）を、１０％のウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシン、１００単位／ｍＬのペニシリンＧ  Ｎａ、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン硫酸塩を含有するRPMI 1640培地中で培養した。腫瘍細胞を、５％のＣＯ２及び９５％の空気による雰囲気中、３７℃の加湿型インキュベーター内の、組織培養フラスコ中で維持した。
【０２１０】
次いで、培養された乳がん細胞を、マウスに植え込んだ。４Ｔ１細胞を、対数増殖期に採取し、インプラント日において、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）中に、１ｍＬ当たりの細胞１×１０６個の濃度で再懸濁させた。腫瘍は、４Ｔ１細胞１×１０５個（０．１ｍＬの懸濁液）を、各被験動物の、右脇腹に、皮下インプラントすることにより誘発した。それらの体積が、８０〜１２０ｍｍ３の目標範囲に近づくのに伴い、腫瘍をモニタリングした。腫瘍体積は、式：腫瘍体積=(腫瘍幅)2(腫瘍長さ)/2を使用して決定した。腫瘍重量は、１ｍｍ３の腫瘍体積が、１ｍｇの重量を有するという仮定を使用して近似した。研究の１日目と名付ける、移植の１３日後に、マウスを、個々の腫瘍体積の範囲を、１０８〜１２６ｍｍ３とし、腫瘍体積の群平均値を、１１２ｍｍ３とする、４つの群（群１つ当たりのｎ＝１５）に区分した。４つの治療群を、下記の表８に示す。
【０２１１】
【表１０】
2021532114.tif 000012
【０２１２】
抗カルボキシメチルリシンモノクローナル抗体を、治療剤として使用した。２５０ｍｇのカルボキシメチルリシンモノクローナル抗体を、R&D Systems社（Minneapolis、MN）から得た。カルボキシメチルリシンモノクローナル抗体の投与液を、媒体（ＰＢＳ）中に、１及び０．５ｍｇ／ｍＬで調製して、１０ｍＬ／ｋｇの投与容量中、それぞれ、１０及び５μｇ／ｇの活性投与量をもたらした。投与液は、光から保護して、４℃で保管した。
【０２１３】
全ての治療は、マウスに１回の投与を行った、研究の１日目を除き、毎日２回、２１日間静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。研究の１９日目に、尾静脈分解のために、ｉ．ｖ．投与できない動物には、ｉ．ｖ．投与を、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与に変更した。投与容量は、体重２０グラム当たり０．２００ｍＬの（１０ｍＬ／ｋｇ）であり、各個別の動物の体重に照らしてスケーリングした。
【０２１４】
研究は、２３日間にわたり続いた。腫瘍は、毎週２回、キャリパーを使用して測定した。動物は、１〜５日目に毎日秤量し、次いで毎週２回ずつ、研究が完了するまで秤量した。マウスはまた、任意の副作用についても観察した。許容可能な毒性は、研究中の体重減少の群平均値が２０％未満であり、治療関連死が１０％以下であることとして規定した。治療の有効性は、研究の最終日（２３日目）からのデータを使用して決定した。
【０２１５】
抗カルボキシメチルリシン抗体が、腫瘍の増殖を阻害する能力は、腫瘍体積中央値（ＭＴＶ）を、群１〜３について比較することにより決定した。腫瘍体積は、上記で記載した通りに測定した。腫瘍増殖の阻害パーセント（ＴＧＩ％）は、対照群（群１）のＭＴＶと、薬物治療群のＭＴＶとの差として規定し、対照群のＭＴＶに対する百分率として表す。ＴＧＩ％は、式：TGI%=(1-MTVtreated/MTVcontrol)×100に従い計算することができる。
【０２１６】
抗カルボキシメチルリシン抗体が、がんの転移を阻害する能力は、肺がん病巣を、群１〜３について比較することにより決定した。阻害パーセント（阻害％）は、対照群の転移性病巣の平均値カウントと、薬物治療群の転移性病巣の平均値カウントとの差として規定し、対照群の転移性病巣の平均値カウントに対する百分率として表す。阻害％は、以下の式：阻害%=(1-病巣treatedの平均値カウント/病巣controlの平均値カウント)×100に従い計算することができる。
【０２１７】
抗カルボキシメチルリシン抗体が、悪液質を阻害する能力は、肺及び腓腹筋の重量を、群１〜３について比較することにより決定した。組織重量はまた、体重１００ｇに照らしても正規化した。
【０２１８】
治療の有効性はまた、研究中に観察された退縮応答の発生率及び大きさによっても査定した。治療は、動物において、腫瘍の部分退縮（ＰＲ：partial regression）又は完全退縮（ＣＲ：complete regression）を引き起こすことができる。ＰＲ応答では、腫瘍体積は、研究の経過中に、３回の測定で、連続して、その１日目の体積の５０％以下であり、これらの３回の測定のうちの、１又は２回以上において、１３．５ｍｍ３以上であった。ＣＲ応答では、腫瘍体積は、研究の経過中に、３回の測定で、連続して、１３．５ｍｍ３未満であった。
【０２１９】
統計学的解析は、Windows 6.07用のPrism（GraphPad社製）を使用して実行した。２つの群の、２３日目における平均値腫瘍体積（ＭＴＶ）の間の差違についての統計学的解析は、マン−ホイットニーのＵ検定を使用して達した。転移性病巣の比較は、ＡＮＯＶＡ−ダネットにより評価した。正規化された組織重量は、ＡＮＯＶＡにより比較した。両側の統計学的解析は、Ｐ＝０．０５の有意水準で行った。結果は、統計学的に有意であるか、又は統計学的に有意でないとして分類した。
【０２２０】
研究の結果を、下記の表９に示す。
【０２２１】
【表１１】
2021532114.tif 000013
【０２２２】
治療関連死を伴わない場合、全ての治療レジメンは、許容可能に忍容された。唯一の動物死は、転移に起因する非治療関連死であった。ＴＧＩ％は、５μｇ／ｇ治療群（群２）及び１０μｇ／ｇ治療群（群３）について、有意性への傾向（マン−ホイットニーによるＰは、０．０５を超える）を示した。阻害％は、５μｇ／ｇ治療群について、有意性への傾向（ＡＮＯＶＡ−ダネットによるＰは、０．０５を超える）を示した。阻害％は、１０μｇ／ｇ治療群について、統計学的に有意（Ｐは０．０１以下、ＡＮＯＶＡ−ダネット）であった。カルボキシメチルリシン抗体が、悪液質を治療する能力は、肺及び腓腹筋の臓器重量の、治療群と、対照群との間における比較に基づき、有意性への傾向（ＡＮＯＶＡによるＰは、０．０５を超える）を示した。結果は、抗カルボキシメチルリシンモノクローナル抗体の投与が、がん転移を低減することが可能であることを指し示す。このデータは、抗ＡＧＥ抗体のインビボ投与が、治療利益を、安全かつ効果的に提供しうることの、さらなる証拠を提示する。
【実施例１３】
【０２２３】
イオン化放射線に起因する、早期老化の発生を模倣する症状の進行についての研究
マウスにおいて、インビボ研究を実行して、抗ＡＧＥ抗体による治療、及びＡＧＥ−ＫＬＨによるワクチン接種の、イオン化放射線曝露により誘導される、早期老化を模倣する症状に対する効果について研究する。骨関節炎の局在化した進行についてモニタリングする。雄Ｃ５７／ＢＬ６マウスは、研究の１日目において、８〜１０週齢とする。マウスを、５つの治療群：（１）対照；（２）静脈内投与される媒体だけ；（３）１０μｇ／ｇの用量で、静脈内投与される、抗ＡＧＥ抗体；（４）１０μｇ／ｇの用量で、関節内投与される、抗ＡＧＥ抗体；及び（５）ワクチンとして、腹腔内投与される、１０μｇのＡＧＥ−ＫＬＨに分ける。
【０２２４】
骨関節炎は、群２〜５において、右後脚内側を、イオン化放射線に曝露することにより誘導する。群１は、右後脚が照射されない対照である。
【０２２５】
投与は、手術の１週間後に始まる。群２〜５について、投与容量は、体重２０グラム当たり０．２００ｍＬの（１０ｍＬ／ｋｇ）であり、各個別の動物の体重に照らしてスケーリングする。群２は、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）を静脈内送達される。群３は、毎日２回、２１日間にわたり、１０μｇ／ｇの抗ＡＧＥ抗体を静脈内送達される。群４は、毎日２回、２１日間にわたり、右後膝に、１０μｇ／ｇの抗ＡＧＥ抗体を関節内送達される。群５には、イオン化放射線への曝露の１週間前に、フロイントの完全アジュバント中の、１０μｇのＡＧＥ−ＫＬＨを、腹腔内に投与するのに続き、照射の４週間後に、１０μｇ／ｇのワクチンの追加注射を施す。
【０２２６】
全ての群を、罹患率／死亡率について、毎日モニタリングし、運動及び歩行の変化に対する影響について、毎日査定する。骨関節炎を、全ての群において、動的体重負荷（ＤＭＢ：dynamic weight bearing）試験により測定する。
【０２２７】
群１及び５における動物を、１６週目に屠殺する。群５については、抗ＡＧＥ抗体に特異的なマウスにおける抗体の力価を決定する、THERMOFISHER（登録商標）EASY-TITER（登録商標）Mouse IgG Assayなどの抗体力価アッセイのために、血液を回収する。群２〜４における、同数の動物を、４、８、及び１６週目に屠殺する。各屠殺群内のマウスの半数を、組織学について解析し、半数を、ｐ１６ＩＮＫ４ａ  ｑＲＴ  ＰＣＲについて解析する。ｐ１６ＩＮＫ４ａを、屠殺された動物の関節軟骨（軟骨細胞）内で測定する。ｐ１６ＩＮＫ４ａ  ｑＲＴ  ＰＣＲを、ｑＲＴ  ＰＣＲ解析のために保存する。
【０２２８】
骨関節炎はまた、膝関節試料を査定することによっても測定する。全てのマウスに由来する、右及び左の全膝関節試料を回収し、１０％のＮＢＦ中で固定し、次いで、脱灰し、パラフィンワックス中に包埋する。各染色のために、３枚の非連続冠状断面を、右膝関節について採取し、別の３枚の非連続冠状断面を、左膝関節について採取し、各染色のために、動物１匹当たりのスライド６枚が得られ、動物１匹当たりの合計のスライド１２枚が得られる。断面は、半定量的分級システムを使用する、有資格の獣医科病理医により、疾患の重症度（骨棘及び滑膜を伴う軟骨／骨）について評定される。スコアは、統計学的解析と共に報告する。
【０２２９】
抗ＡＧＥ抗体は、老化細胞に特異的に結合し、免疫系が、これらの細胞を破壊することを可能とする。同様に、ＡＧＥ−ＫＬＨ抗原によるワクチン接種は、マウス免疫系が、老化細胞をターゲティングし、これらを除去することを可能とするであろう。老化細胞の殺滅及び除去は、イオン化放射線への曝露から生じる、骨関節炎及び他の早期老化を模倣する症状の進行を防止するであろう。
【実施例１４】
【０２３０】
イオン化放射線に起因する早期老化を模倣する症状の進行及び火傷についての研究
マウスにおいて、インビボ研究を実行して、抗ＡＧＥ抗体の投与、及びＡＧＥ抗原に対するワクチン接種の、イオン化放射線曝露により誘導される、早期老化を模倣する症状及び火傷に対する効果について研究する。肺炎の局在化した進行についてモニタリングする。
【０２３１】
４０匹のマウスを、群１つ当たりのマウス１０匹ずつの４つの群、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤに編成する。群Ａ内の各マウスを、損傷の直前に、フロイントの完全アジュバント（Sigma Aldrich社製）と、滅菌内毒素非含有ＰＢＳ中、１ミリリットル当たり４００μｇに希釈された、ＣＭＬを付加したキーホールリンペットヘモシアニン（Biosynthesis社製）のアリコート６００μＬとの、１：１のエマルジョン２００μＬで、皮下免疫化する。群Ｂのマウス１０匹には、創傷閉止後に、内毒素非含有ＰＢＳ溶液８００μＬの皮下注射を施す。群Ｃには、１グラム当たりの抗ＣＭＬ抗体１０μｇの注射を施す。群Ｄ内のマウスには、内毒素非含有ＰＢＳの皮内注射を施す。
【０２３２】
全てのマウスを、７４．３ｃＧｙの放出率における、１３７Ｃ線源への曝露により、５Ｇｙの総体内イオン化放射線に曝露する（さらなる詳細については、Palmer, J. L. et al., “Combined radiation and burn injury results in exaggerated early pulmonary inflammation”, Radiation Research, Vol. 180, No. 3, pp. 276-283 (2013)を参照されたい）。放射線損傷の１時間後、全てのマウスに、ケタミン（１ｋｇ当たり１００ｍｇ）とキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）との混合物により、腹腔内において麻酔をかける。マウスの背面を、動物用バリカンで剃毛する。次いで、各マウスを、それらの背部上の、全体表面積のうちの１５％の曝露を可能とする開口部を伴う、プラスチック製の鋳型に入れる。熱傷は、動物を、摂氏９５度の水浴中に、７秒間にわたり浸漬することにより達成する。マウスは、さらなる熱傷を防止するように、熱湯への曝露の直後に乾燥させる。全てのマウスに、火傷の直後に、体液の喪失を補償するように、０．９％の温熱生理食塩液１．０ｍｌを、腹腔内において投与し、マウスが、麻酔から回復する間、マウスのケージを、温熱パッド上に置くことにより、体内温度を維持する。損傷の４８時間後、全てのマウスを屠殺する。火傷部位及び非創傷皮膚に由来する皮膚の試料を採取し、１０％の緩衝ホルマリン中で固定し、パラフィン中で処理及び包埋する。パラフィン切片を、マッソントリクローム染色処理にかけ（さらなる詳細については、Wilgus, T. A. et al., “Regulation of scar formation by vascular endothelial growth factor”, Laboratory Investigation, Vol. 88, pp. 579-590 (2008)を参照されたい）、対物ミクロメーターを使用して、各瘢痕の幅を測定する。各マウスの肺に由来する切片を、ヘマトキシリン／エオシンで染色し、肺胞１つ当たりの好中球の存在及び計量について評定する。
【０２３３】
群Ａ及びＣにおけるマウスは、群Ｂ及びＤにおけるマウスより、５０％少ない瘢痕化及び５０％少ない好中球を呈するであろう。ＡＧＥ抗原（群Ａ）による免疫化は、マウス免疫系が、老化細胞をターゲティングし、除去することを可能とするであろう。同様に、抗ＡＧＥ抗体の投与（群Ｃ）は、老化細胞に特異的に結合し、免疫系が、これらの細胞を破壊することを可能とするであろう。老化細胞の殺滅及び除去は、イオン化放射線への曝露及び火傷から生じる、肺炎及び他の早期老化を模倣する症状の発生を防止するであろう。
【実施例１５】
【０２３４】
放射線誘導性老化、並びにダサチニブ及びケルセチンによる治療
被験群は、放射線誘導性老化、並びに老化細胞溶解剤ダサチニブ及びケルセチンを使用する、老化細胞の除去について探索した（Zhu, Y. et al., “The Achilles’ heel of senescent cells: from transcriptome to senolytic drugs”, Aging Cell, Vol. 14, pp. 644-658 (2015)）。結果を、下記にまとめる。
【０２３５】
インビトロ研究は、イオン化放射線への曝露が、老化細胞内の遺伝子発現を変化させることを裏付けた。前脂肪細胞（脂肪細胞の前駆細胞）を、ヒト対象から単離し、１０Ｇｙのイオン化放射線に曝露するか、又は偽照射する。遺伝子発現は、放射線曝露の２５日後に測定した。老化細胞は、非老化細胞と比較して、実質的に異なる遺伝子発現であって、アポトーシスの負の調節因子、及び抗アポトーシス性遺伝子セットの上方調節を含む遺伝子発現を呈した。
【０２３６】
マウスモデルにおけるインビボ研究は、老化細胞溶解剤が、老化細胞を消失させ、長期的な利益をもたらしうることを裏付けた。マウスの体内の残余を遮蔽しながら、一方の脚を、１０Ｇｙの放射線に曝露する一方、対照マウスには、偽照射した。放射線曝露の１２週間後、照射された後肢上の体毛は、グレーに変わり、動物は、トレッドミル運動能の低減を呈したが、これらは、放射線曝露により誘導される早期老化の徴候である。次いで、マウスに、ダサチニブ及びケルセチン（Ｄ＋Ｑ）の単回投与を行うか、又は媒体だけの対照を投与した。Ｄ＋Ｑの単回投与を施されたマウスは、投与の５日後に、トレッドミル上で、消耗までになされた、運動時間、距離、及び総仕事量の増大を呈した。治療されたマウスはまた、筋肉中及び鼠径部脂肪中の老化マーカーも低減された。Ｄ＋Ｑ投与の７カ月後、照射され、Ｄ＋Ｑの単回投与で治療されたマウスは、媒体治療対照と比較して、著明に良好なトレッドミル運動能を呈し、偽照射対照と本質的に同一な持久力を有した。偽照射対照への、Ｄ＋Ｑの単回投与は、投与の７カ月後において、媒体治療対照と比較して、持久力に対する効果を及ぼさなかった。
【０２３７】
これらの結果は、放射線曝露が、インビトロ及びインビボのいずれにおいても、老化をもたらすことを確認する。インビボ研究は、放射線曝露から生じる早期老化の症状が、Ｄ＋Ｑを使用する、老化細胞の除去により改善されうることを裏付ける。
【実施例１６】
【０２３８】
化学物質曝露誘導性老化、及び遺伝子改変機構又はABT-263を使用する、老化細胞の消失による治療
被験群は、トランスジェニックマウスモデル（Demaria, M., et al., “Cellular senescence promotes adverse effects of chemotherapy and cancer relapse”, Cancer Discovery, Vol. 7, No. 2, pp. 165-176 (2017)）における化学療法剤及び老化細胞の除去から生じる治療誘導性老化（ＴＩＳ：therapy-induced senescence）について探索した。全てのインビボ実験は、生物発光による老化細胞の検出、及び他の点では非毒性の抗ウイルス薬である、ガンシクロビル（ＧＣＶ：ganciclovir）の投与による老化細胞の消失を容易とするように、特異的に改変されたトランスジェニックマウスモデルである、p16-3MRを伴った。結果を、下記にまとめる。
【０２３９】
インビトロ研究及びインビボ研究は、化学療法剤への曝露が、細胞の老化を誘導することを裏付けた。インビトロ研究では、マウス胎仔性線維芽細胞、マウス皮膚線維芽細胞、及びヒト皮膚線維芽細胞を、ドキソルビシン又はパクリタキセルで治療した。細胞は、老化関連β−ガラクトシダーゼ（ＳＡ−β−ｇａｌ：senescence-associated β-galactosidase）活性の増大、ＤＮＡ合成の低減、ｐ１６ＩＮＫ４ａをコードするｍＲＮＡレベルの上昇、老化関連分泌現象（ＳＡＳＰ）成分レベルの上昇、ｐ２１レベルの上昇、及びＬａｍｉｎＢ１発現の低減を含む、細胞老化の症状を呈した。インビボ研究では、マウスに、ドキソルビシン、パクリタキセル、テモゾロミド、又はシスプラチンを投与した。化学療法剤の投与は、角化細胞、内皮細胞、線維芽細胞、及び平滑筋細胞を含む、多様な細胞型における老化を誘導した。パクリタキセル、テモゾロミド、及びシスプラチンは、皮膚内の、ｐ１６ＩＮＫ４ａ発現の上昇を結果としてもたらすことが見出された。
【０２４０】
複数のインビボ研究は、遺伝子改変マウスモデルにおける老化細胞の消失の誘導、又は老化細胞溶解剤であるABT-263の投与による老化細胞の消失が、化学療法剤への曝露から生じる症状を、効果的に治療することを裏付けた。１つのインビボ研究は、炎症、骨髄の回復、及び心機能について検討した。遺伝子改変マウスを、老化を誘導するドキソルビシンで治療するのに続き、ＧＣＶ（老化細胞の消失を誘導する）で治療した。ドキソルビシンの投与は、炎症、造血前駆細胞（ＨＰＣ：hematopoietic progenitor cell）機能の低減、及び心機能の低減と関連する、ＳＡＳＰ因子遺伝子発現の増大を結果としてもたらした。老化細胞の消失は、循環炎症性因子を低減し、ＨＰＣの機能的回収を促進し、心機能障害を予防した。
【０２４１】
第２のインビボ研究は、がんの拡大及び再発について検討した。遺伝子改変マウスを、乳がん細胞の注射の後（ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ）に、ドキソルビシンで治療した。ドキソルビシンに続き、ＧＣＶ（老化細胞の消失を誘導する）を施されたマウスは、ドキソルビシンに続き、媒体だけの投与を施されたマウスと比較して、生存の延長及びがん転移の低減を呈した。他の被験対象は、治療の前に、触知可能な腫瘍の、手術による除去を施された。ＧＣＶ（老化細胞の消失を誘導する）施された、手術治療マウスは、ドキソルビシンに続き、媒体だけの投与を施された手術治療マウスと比較して、腫瘍増殖が低下し、がん転移が低減され、転移性病巣が減少した。同様の結果は、老化細胞を、ABT-263の投与により消失させた場合にも得られた。
【０２４２】
第３のインビボ研究は、化学療法誘導性疲労（無力症）について検討した。遺伝子改変マウスを、老化を誘導するドキソルビシン又はパクリタキセルに続き、ＧＣＶ（老化細胞の消失を誘導する）又はABT-263の投与で治療した。ドキソルビシン又はパクリタキセルの投与は、走行活力及び筋力の減退により測定される、化学療法誘導性疲労を結果としてもたらした。老化細胞の消失は、走行活力の減退を、ほぼ回復させ、筋力の低下を改善した。
【０２４３】
これらの結果は、化学療法剤への曝露が、インビトロ及びインビボのいずれにおいても、老化をもたらすことを確認する。インビボ研究は、化学物質への曝露から生じる早期老化の症状が、老化細胞の消失により改善されうることを裏付ける。インビボ研究はまた、遺伝子改変機構を介して、老化細胞の消失を誘導することにより、又は老化細胞溶解剤であるABT-263の投与により、有益な結果を達成しうることも確立する。
【実施例１７】
【０２４４】
化学物質曝露誘導性老化についての、蛍光顕微鏡研究
膵臓がんＰＡＮＣ−１細胞株に由来する細胞を、化学療法剤である、１２．５μＭのエトポシドで、２４時間にわたり治療して、老化を誘導した。対照細胞を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ：dimethylsulfoxide）媒体で、２４時間にわたり治療した。次いで、細胞を、β−ガラクトシダーゼ老化染色キット、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ：green fluorescent protein）にコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体、又はＧＦＰ及び４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ：4’,6-diamidino-2-phenylindole）にコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体で染色した。蛍光顕微鏡下では、ＧＦＰで染色された細胞は緑色を呈し、ＤＡＰＩで染色された細胞は青色を呈する。
【０２４５】
図２Ａは、β−ガラクトシダーゼ老化染色キットによる染色の後における、非治療細胞を例示する。図２Ｂは、ＧＦＰにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、非治療細胞を例示する。図２Ｃは、ＧＦＰ−ＤＡＰＩにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、非治療細胞を例示する。図２Ｂ及び２Ｃは、輝度を増大させて、対比を増強している。非治療細胞は、比較的均一のサイズ及び形状を呈し、稠密に充填されている。
【０２４６】
図２Ｄは、β−ガラクトシダーゼ老化染色キットによる染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する。図２Ｅは、ＧＦＰにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する。図２Ｆは、ＧＦＰ−ＤＡＰＩにコンジュゲートした抗ＡＧＥ抗体による染色の後における、エトポシド治療細胞を例示する。図２Ｅ及び２Ｆは、輝度を増大させて、対比を増強している。エトポシド治療細胞は、不規則な外観を呈し、サイズが大きく、疎に充填されている。
【０２４７】
結果は、化学療法剤の投与が、ＰＡＮＣ−１細胞内の老化を誘導することを裏付ける。結果はまた、抗ＡＧＥ抗体が、化学療法剤への曝露後に老化した細胞に結合することも確認する。
【実施例１８】
【０２４８】
化学物質曝露誘導性老化についての蛍光顕微鏡研究
ヒト組織球性リンパ腫Ｕ９３７細胞株に由来する細胞を、化学療法剤であるドキソルビシンで治療して、老化を誘導した。細胞を、０μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、若しくは１μＭのドキソルビシンで、３日間にわたり治療するか、又は０μＭ、０．１μＭ、若しくは１μＭのドキソルビシンで、６日間にわたり治療した。老化は、蛍光顕微鏡イメージングを介して、老化関連β−ガラクトシダーゼアッセイにより測定した。
【０２４９】
図３Ａ〜３Ｄは、細胞を、０μＭ（図３Ａ）、０．０１μＭ（図３Ｂ）、０．１μＭ（図３Ｃ）、１μＭ（図３Ｄ）のドキソルビシンで、３日間にわたり治療した結果を例示する。０μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの１％未満が、弱く蛍光発光する。０．０１μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約８５％が、蛍光発光する。０．１μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約６５％が蛍光発光する。１μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約６０％が蛍光発光する。図３Ｅ〜３Ｇは、細胞を、０μＭ（図３Ｅ）、０．１μＭ（図３Ｆ）、１μＭ（図３Ｇ）のドキソルビシンで、６日間にわたり治療した結果を例示する。０μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約１％が、弱く蛍光発光する。０．１μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約８５％が蛍光発光する。１μＭのドキソルビシンでは、細胞のうちの約８５％が蛍光発光する。１μＭのドキソルビシンによる治療は、著明な細胞死を引き起こした。老化誘導のピークは、３〜６日間にわたる、０．１μＭのドキソルビシン治療であると考えられる。
【０２５０】
結果は、化学療法剤の投与が、Ｕ９３７細胞内の老化を誘導することを裏付ける。
【０２５１】
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【図１】
2021532114.tif 000014
【図２Ａ】
2021532114.tif 000015
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2021532114.tif 000022
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2021532114.tif 000024
【図３Ｅ】
2021532114.tif 000025
【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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