(57)【要約】Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が下方調節され、修飾Ｔ細胞が、工学操作されたＴＣＲ（例えば、キメラＴＣＲ）、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの機能的外因性受容体をさらに発現する方法、本方法によって得られる修飾Ｔ細胞、及び修飾Ｔ細胞を含む医薬組成物が提供される。また、１つ以上の変異を含む天然に存在しないＮｅｆタンパク質も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞を生成する方法であって、前記Ｎｅｆタンパク質が発現すると、前記修飾Ｔ細胞の内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が下方調節される前記方法。
【請求項２】
前記下方調節が、前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現を少なくとも約５０％下方制御することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｎｅｆを発現する前記修飾Ｔ細胞が、修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｎｅｆタンパク質が、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びＮｅｆ相同タンパク質からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｎｅｆタンパク質が、野生型Ｎｅｆである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｎｅｆタンパク質が、変異体Ｎｅｆである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記変異体Ｎｅｆが、
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記前駆体Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、前記前駆体Ｔ細胞に導入することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、別々のベクター上にある、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じベクター上にある、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の上流にある、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、連結配列を介して結合している、請求項８〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記連結配列が、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、エピソームベクター発現ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ベクターが、非ウイルスベクターである、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記非ウイルスベクターが、ＰｉｇｇｙｂａｃベクターまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙベクターである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｎｅｆを発現する前記修飾Ｔ細胞が、組織不適合性の個体において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）応答を誘発しないか、または前記前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の核酸及び／または前記第２の核酸を含むＴ細胞を単離または濃縮することをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｎｅｆを発現する前記修飾Ｔ細胞から、ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｎｅｆを発現する前記修飾Ｔ細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と配合することをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、請求項８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが全てＣＤ３εである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、
前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、請求項８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が同じである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第２のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｆ）第３のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第４のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であり、
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、請求項８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが同じである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗原結合性断片が、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、一本鎖Ｆｖ抗体、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗原結合性断片が、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、一価である、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多価である、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多重特異性である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記腫瘍抗原が、メソテリン、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、インターロイキン−１１受容体ａ（ＩＬ−１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲベータ）、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、及びＩＧＬＬ１からなる群から選択される、請求項２４〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記膜貫通ドメインが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する、請求項３０〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項３０〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＤＡＰ１２、またはＣＤ３γに由来する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項３０〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞質ドメインを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項２４〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ヒンジドメインが、ＣＤ８αに由来する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、請求項２４〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記シグナルペプチドが、ＣＤ８αに由来する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法によって得られる修飾Ｔ細胞。
【請求項４９】
請求項４８に記載の修飾Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項５０】
有効量の請求項４９に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、前記個体の疾患を処置する方法。
【請求項５１】
前記疾患が、がんである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５３】
変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質である、請求項５２に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５４】
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、請求項５２または５３に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５５】
内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御する、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５６】
内在性ＴＣＲの細胞表面発現を、前記野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下の差で下方制御する、請求項５２〜５５のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５７】
ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５８】
ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する、請求項５２〜５６のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項５９】
ＣＤ４の細胞表面発現を、前記野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下の差で下方制御する、請求項５８に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６０】
ＣＤ４の細胞表面発現を、前記野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％小さく下方制御する、請求項５８に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６１】
ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６２】
ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６３】
ＣＤ２８の細胞表面発現を、前記野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下の差で下方制御する、請求項６２に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６４】
ＣＤ２８の細胞表面発現を、前記野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％小さく下方制御する、請求項６２に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
【請求項６５】
請求項５２〜６４のいずれか１項に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質をコードする核酸を含む修飾Ｔ細胞。
【請求項６６】
機能的外因性受容体をさらに含む、請求項６５に記載の修飾Ｔ細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年７月２６日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９７２３５号に基づく優先権の利益を主張するものであり、その内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルによる配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルによる次の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７６１４２２００１７４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年７月２５日、サイズ：１２６ＫＢ）。
【０００３】
本願の技術分野
本願は、下方調節された内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を有する修飾Ｔ細胞を生成する方法に関する。本願はまた、下方調節された内在性ＴＣＲを有し、工学操作されたＴＣＲまたはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの外因性受容体をさらに発現する、修飾Ｔ細胞を生成する方法にも関する。さらに、本明細書に記載される方法によって生成される修飾Ｔ細胞、その医薬組成物、キット、及び処置方法が提供される。
【背景技術】
【０００４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）−Ｔ細胞療法は、標的腫瘍抗原を特異的に認識してＴ細胞を腫瘍部位に誘導する工学操作された受容体を有する、遺伝子修飾されたＴ細胞を利用する。これは、血液癌及び多発性骨髄腫（ＭＭ）の処置において有望な結果を示している。とはいえ、個体差があるため、自家ＣＡＲ−Ｔ療法または自家ＴＣＲ−Ｔ療法（患者自身のＴ細胞を使用するもの）は、製造及び標準化における大きな課題を提示し、製造及び処置のコストは極めて高い。さらに、がん患者は通常、低い免疫機能を有し、リンパ球の数が少なく、免疫活性が低く、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増大させるのが難しい。
【０００５】
汎用性のある同種ＣＡＲ−Ｔ療法またはＴＣＲ−Ｔ療法は、健康なドナーに由来するＴ細胞を用いる理想的なモデルであると考えられている。しかしながら、重要な課題は、組織不適合性に起因する処置中の移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）をいかに効果的になくすかである。ＴＣＲは、抗原提示に応じるＴ細胞活性化に関与する細胞表面受容体である。ヒトのＴ細胞の９５％は、アルファ（α）鎖及びベータ（β）鎖からなるＴＣＲを有する。ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖が組み合わさってヘテロ二量体を形成し、ＣＤ３サブユニットと会合して、細胞表面上に存在するＴＣＲ複合体を形成する。ＧｖＨＤは、ドナーのＴ細胞が非自己の主要組織適合抗原（ＭＨＣ）分子をＴＣＲによって認識し、宿主（移植レシピエント）の組織を抗原的に異質と判断して攻撃すると生じる。内在性ＴＣＲをドナーＴ細胞からなくし、それによりＧｖＨＤを防止するために、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びクリスパー（ＣＲＩＳＰＲ）−ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）などの遺伝子編集技術を使用して、内在性ＴＣＲαまたはＴＣＲβ遺伝子ノックアウト（ＫＯ）を行い、次いでＴＣＲ陰性Ｔ細胞を濃縮することにより、同種のＣＡＲ−ＴまたはＴＣＲ−Ｔの産生が行われてきた。しかしながら、ＴＣＲの欠失はＣＤ３下流シグナル伝達経路の障害をもたらし、Ｔ細胞の増大に影響を及ぼす場合がある。
【０００６】
本明細書において参照される全ての公開物、特許、特許出願、及び公開された特許出願の開示内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【発明の概要】
【０００７】
本願は、内在性ＴＣＲを下方調節するＮｅｆタンパク質（例えば、野生型（ｗｔ）Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞を生成する方法を提供する。本願はまた、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）、及び外因性受容体、例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）を発現する、修飾Ｔ細胞を生成する方法も提供する。本明細書に記載される方法によって生成される修飾Ｔ細胞、その医薬組成物、キット、及び処置方法も提供される。
【０００８】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、下方調節は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を少なくとも約５０％下方制御することを含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む。
【０００９】
本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質は、いくつかの実施形態では、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びＮｅｆ相同タンパク質からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む変異体Ｎｅｆのような、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む。例えば、前駆体Ｔ細胞は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現させることによってさらに修飾される、工学操作されたＴＣＲ−Ｔ細胞（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ細胞）、ＴＡＣ−Ｔ細胞、ＴＡＣ様Ｔ細胞、またはＣＡＲ−Ｔ細胞であってもよい。
【００１１】
いくつかの実施形態では、例えば、前駆体Ｔ細胞が工学操作されていない場合、本方法は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入するステップをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある、例えば、同じプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列を介して結合しており、この連結配列は例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される第１の核酸及び／または第２の核酸を有するベクターは、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、エピソームベクター発現ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択されるウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される第１の核酸及び／または第２の核酸を有するベクターは、ＰｉｇｇｙｂａｃベクターまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙベクターなどの非ウイルスベクターである。
【００１３】
本明細書に記載される方法のいずれかに従ういくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、組織不適合性の個体において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）応答を誘発しないか、または前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する。
【００１４】
本明細書に記載される方法のいずれかに従ういくつかの実施形態では、本方法は、第１の核酸及び／または第２の核酸を含むＴ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞から、ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と配合することをさらに含む。
【００１５】
機能的外因性受容体を含む前駆体Ｔ細胞を使用する、または機能的外因性受容体を前駆体Ｔ細胞に導入するステップを含む、本明細書に記載される方法のいずれか１つに従ういくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、ｃＴＣＲのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。
【００１６】
機能的外因性受容体を含む前駆体Ｔ細胞を使用する、または機能的外因性受容体を前駆体Ｔ細胞に導入するステップを含む、本明細書に記載される方法のいずれか１つに従ういくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ＴＡＣのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端にある。
【００１７】
機能的外因性受容体を含む前駆体Ｔ細胞を使用する、または機能的外因性受容体を前駆体Ｔ細胞に導入するステップを含む、本明細書に記載される方法のいずれか１つに従ういくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＴＡＣ様キメラ受容体であり、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ＴＡＣ様キメラ受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。
【００１８】
機能的外因性受容体を含む前駆体Ｔ細胞を使用する、または機能的外因性受容体を前駆体Ｔ細胞に導入するステップを含む、本明細書に記載される方法のいずれか１つに従ういくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えば、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む、ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、抗原結合性断片は、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、一本鎖Ｆｖ抗体、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）の群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合性断片は、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価である。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多重特異性またはマルチエピトープなど、多価である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、メソテリン、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、インターロイキン−１１受容体ａ（ＩＬ−１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲベータ）、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、及びＩＧＬＬ１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、またはＤＡＰ１２に由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって得られる修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、個体（例えばヒト）の疾患（例えばがん）を処置する方法が提供される。
【００２０】
別の態様では、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含み得る、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（変異体Ｎｅｆタンパク質または天然に存在しない変異体Ｎｅｆタンパク質ともいう）が提供される。別の態様では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質は、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質は、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少���くとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。
【００２１】
本明細書に記載される天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、本明細書に記載される方法のうちの任意のものにおいて使用され得る。
【００２２】
本発明は、本明細書に記載される方法で有用なキット及び製品をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ａ及びＢは、ＳＩＶ  Ｎｅｆ発現がＴ細胞活性化を著しく阻害し得ることを示す。Ａは、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＬＮＧＦＲ（Ｍ０７１）をコードするレンチウイルスをＪｕｒｋａｔ細胞株に形質導入した後、ＬＮＧＦＲ＋細胞率が６６．１％であったことと、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）により、ＬＮＧＦＲ＋細胞が９４．３％にさらに濃縮されたことを示す。Ｂは、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９が、ＰＨＡで刺激したＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞では著しく低減したが、ＰＭＡ／ＩＯＮで刺激したＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞では影響を受けなかったことを示す。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「ＴＣＲα  ＫＯ」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ法によるＴＣＲαノックアウトＪｕｒｋａｔ細胞株を示す。「ベクター」は、空ベクターを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「Ｍ０７１」は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現し、ＭＡＣＳによって濃縮されたＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞集団を表す。
【図２】ＳＩＶ  Ｎｅｆの発現が、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の細胞表面発現を阻害することにより、ＴＣＲ介在性シグナル伝達経路に影響を及ぼすことを示す。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「ＴＣＲα  ＫＯ」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ法によるＴＣＲαノックアウトＪｕｒｋａｔ細胞株を示す。「ベクター」は、空ベクターを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「Ｍ０７１」は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現し、ＭＡＣＳによって濃縮されたＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞集団を表す。
【図３】ＨＩＶ１  Ｎｅｆ及びＨＩＶ２  Ｎｅｆの発現が、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の細胞表面発現を阻害することにより、ＴＣＲ介在性シグナル伝達経路に影響を及ぼすことを示す。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「ＴＣＲα  ＫＯ」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ法によるＴＣＲαノックアウトＪｕｒｋａｔ細胞株を示す。「ベクター」は、空ベクターを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を示す。「Ｍ０７１」は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現し、ＭＡＣＳによって濃縮されたＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞集団を表す。「ＨＩＶ１  Ｎｅｆ」は、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を表す。「ＨＩＶ２  Ｎｅｆ」は、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を表す。
【図４Ａ】ＳＩＶ  Ｎｅｆを発現するＴＣＲ陰性Ｔ細胞の細胞選別戦略、及び標的細胞の細胞溶解作用を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＢＣＭＡ  ＣＡＲレンチウイルスをコトランスフェクトした３日後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＬＮＧＦＲの発現のＦＡＣＳ結果を示す。
【図４Ｂ】ＳＩＶ  Ｎｅｆを発現するＴＣＲ陰性Ｔ細胞の細胞選別戦略、及び標的細胞の細胞溶解作用を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲレンチウイルスをコトランスフェクトし、ＭＡＣＳｅｌｅｃｔ  ＬＮＧＦＲ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓで選別したＬＮＧＦＲ＋Ｔ細胞における、ＴＣＲαβの陽性率及び陰性率を示す。
【図４Ｃ】ＳＩＶ  Ｎｅｆを発現するＴＣＲ陰性Ｔ細胞の細胞選別戦略、及び標的細胞の細胞溶解作用を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＢＣＭＡ  ＣＡＲレンチウイルスをコトランスフェクトした、ＭＡＣＳ濃縮後のＣＤ３ε陰性Ｔ細胞における、ＴＣＲαβ、ＣＤ３ε、及びＬＮＧＦＲの発現率を示す。
【図４Ｄ】ＳＩＶ  Ｎｅｆを発現するＴＣＲ陰性Ｔ細胞の細胞選別戦略、及び標的細胞の細胞溶解作用を示す。ＲＰＭＩ−８２２６（ＢＣＭＡ＋）及びＫ５６２（ＢＣＭＡ−）の各細胞株に対する、ＣＡＲ＋／ＣＤ３ε−Ｔ細胞の特異的及び非特異的な細胞溶解作用を示す。「ＵｎＴ」は、形質導入していない初代Ｔ細胞を示す。「ＮＣ」は、初代Ｔ細胞と共にインキュベートしていない陰性対照としてのＬｕｃ標識細胞を表す。「ＰＣ」は、全てのＬｕｃ標識細胞を溶解するための陽性対照としてのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を表す。「ＭＡＣＳ  ＣＤ３ε  ｎｅｇ」は、ＭＡＣＳ濃縮後のＣＤ３ε陰性Ｔ細胞集団を表す。「ＴＣＲαβ−」は、ＣＤ３ε選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞を表す。「ＴＣＲαβ＋」は、ＣＤ３ε選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞を表す。
【図５Ａ】ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンレンチウイルスベクター、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７２）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０８６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０９０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ０９１）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１２６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１５９）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１６０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１６１）をトランスフェクトしたＴ細胞における、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＣＡＲ  ｐｏｓ）、ＴＣＲαβ（ＴＣＲαβ  ｎｅｇ）及びＣＤ３ε（ＣＤ３ε  ｎｅｇ）の発現率を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ（Ｍ０７１）は非ＣＡＲコード対照として使用した。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を表す。「ＣＡＲ  ｐｏｓ」は、ＣＡＲ陽性Ｔ細胞を表す。「ＴＣＲαβ  ｎｅｇ」は、ＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞を表す。「ＣＤ３ε  ｎｅｇ」は、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を表す。
【図５Ｂ】ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンレンチウイルスベクター、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７２）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０８６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０９０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ０９１）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１２６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１５９）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１６０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１６１）をトランスフェクトしたＴ細胞における、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＣＡＲ  ｐｏｓ）、ＴＣＲαβ（ＴＣＲαβ  ｎｅｇ）及びＣＤ３ε（ＣＤ３ε  ｎｅｇ）の発現率を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ（Ｍ０７１）は非ＣＡＲコード対照として使用した。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を表す。「ＣＡＲ  ｐｏｓ」は、ＣＡＲ陽性Ｔ細胞を表す。「ＴＣＲαβ  ｎｅｇ」は、ＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞を表す。「ＣＤ３ε  ｎｅｇ」は、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を表す。
【図５Ｃ】ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンレンチウイルスベクター、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７２）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０８６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０９０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ０９１）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１２６）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１５９）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１６０）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（Ｍ１６１）をトランスフェクトしたＴ細胞における、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＣＡＲ  ｐｏｓ）、ＴＣＲαβ（ＴＣＲαβ  ｎｅｇ）及びＣＤ３ε（ＣＤ３ε  ｎｅｇ）の発現率を示す。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ（Ｍ０７１）は非ＣＡＲコード対照として使用した。「ＵｎＴ」は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を表す。「ＣＡＲ  ｐｏｓ」は、ＣＡＲ陽性Ｔ細胞を表す。「ＴＣＲαβ  ｎｅｇ」は、ＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞を表す。「ＣＤ３ε  ｎｅｇ」は、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を表す。
【図６Ａ】Ｎｅｆサブタイプ及び変異体が、Ｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤε、ＣＤ２８、及びＣＤ４の発現に及ぼす作用を示す。
【図６Ｂ】Ｎｅｆサブタイプ及び変異体が、Ｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤε、ＣＤ２８、及びＣＤ４の発現に及ぼす作用を示す。
【図６Ｃ】Ｎｅｆサブタイプ及び変異体が、Ｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤε、ＣＤ２８、及びＣＤ４の発現に及ぼす作用を示す。
【図６Ｄ】Ｎｅｆサブタイプ及び変異体が、Ｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤε、ＣＤ２８、及びＣＤ４の発現に及ぼす作用を示す。
【図７】ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ（Ｍ１６７）Ｔ細胞（８９．７％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ（Ｍ１６８）Ｔ細胞（９３．３％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（Ｍ１６９）Ｔ細胞（９２．１％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（Ｍ１７０）Ｔ細胞（９３．６％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１（Ｍ１７１）Ｔ細胞（９３．５％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２（Ｍ１７２）Ｔ細胞（８７．９％）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ（Ｍ１７３）Ｔ細胞（９４．０％）についての、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率を示す。形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした。
【図８Ａ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲ  オールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞、及び形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした、様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＣＡＲによる特異的腫瘍細胞傷害を示す。Ｍ１６７：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６８：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６９：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７０：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７１：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１  Ｔ細胞。Ｍ１７２：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２  Ｔ細胞。Ｍ１７３：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。
【図８Ｂ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲ  オールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞、及び形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした、様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＣＡＲによる特異的腫瘍細胞傷害を示す。Ｍ１６７：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６８：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６９：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７０：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７１：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１  Ｔ細胞。Ｍ１７２：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２  Ｔ細胞。Ｍ１７３：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。
【図９Ａ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＴＣＲによる非特異的細胞傷害を示す。ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞には、ＴＣＲによる非特異的腫瘍細胞殺傷性がほとんどまたは全くなかった。Ｍ１６７：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６８：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６９：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７０：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７１：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１  Ｔ細胞。Ｍ１７２：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２  Ｔ細胞。Ｍ１７３：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。
【図９Ｂ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＴＣＲによる非特異的細胞傷害を示す。ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞には、ＴＣＲによる非特異的腫瘍細胞殺傷性がほとんどまたは全くなかった。Ｍ１６７：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６８：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１６９：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７０：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。Ｍ１７１：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１  Ｔ細胞。Ｍ１７２：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２  Ｔ細胞。Ｍ１７３：ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ  Ｔ細胞。
【図１０】Ａは、ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６トランスファープラスミド（ＰＬＬＶ−Ｍ１３３プラスミド）を形質導入したＴ細胞についての、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率を示す。Ｂは、ＰＬＬＶ−Ｍ１３３プラスミドを形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞の、ＣＡＲによる特異的腫瘍細胞傷害（左パネル）及びＴＣＲによる非特異的細胞傷害（右パネル）を示す。形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした。
【図１１】Ａは、Ｍ５７２という、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０キメラＴＣＲ（抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）−（ＧＧＧＧＳ）３−ＣＤ３ε）を形質導入したＴ細胞についての、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率を示す。Ｂは、ＰＬＬＶ−Ｍ５７２プラスミドを形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞の、ＣＤ２０キメラＴＣＲによる特異的腫瘍細胞傷害（左パネル）及び内在性ＴＣＲによる非特異的細胞傷害（右パネル）を示す。形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした。
【図１２】Ａは、ＰＬＬＶ−Ｍ５７４という、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ＴＡＣ（抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）−（ＧＧＧＧＳ）３−ｈｕＵＣＨＴ１．Ｙ１７７Ｔ−ＧＧＧＧＳ−ＣＤ４配列）を形質導入したＴ細胞についての、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率を示す。Ｂは、Ｍ５７４プラスミドを形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞の、抗ＣＤ２０  ＴＡＣによる特異的腫瘍細胞傷害（左パネル）及び内在性ＴＣＲによる非特異的細胞傷害（右パネル）を示す。形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした。
【図１３Ａ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆアミノ酸残基変異がＴＣＲαβの発現に及ぼす制御作用を、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較して示す。形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）を陰性対照とした。Ｍ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６、実施例６参照）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を陽性対照とした。
【図１３Ｂ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆアミノ酸残基変異がＣＤ４の発現に及ぼす制御作用を、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較して示す。形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）を陰性対照とした。Ｍ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６、実施例６参照）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を陽性対照とした。
【図１３Ｃ】様々なＳＩＶ  Ｎｅｆアミノ酸残基変異がＣＤ２８に及ぼす制御作用を、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較して示す。形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）を陰性対照とした。Ｍ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６、実施例６参照）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を陽性対照とした。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本願は、がん免疫療法などの処置中の組織不適合性の個体において低減したＧｖＨＤ応答を誘発し得る修飾Ｔ細胞（例えばＴＣＲ−Ｔ細胞（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ細胞）、ＴＡＣ−Ｔ細胞、ＴＡＣ様Ｔ細胞、またはＣＡＲ−Ｔ細胞）を生成する方法を提供する。簡単に説明すると、前駆体Ｔ細胞（すなわち、修飾しようとする最初のＴ細胞）を修飾して、Ｎｅｆ（Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）タンパク質を発現させ、内在性ＴＣＲを下方制御すること、例えば内在性ＴＣＲαまたはＴＣＲβの細胞表面発現を下方制御することにより、内在性ＴＣＲによるシグナル伝達を阻害することができるようにする（以下、「ＴＣＲ欠損Ｔ細胞」または「ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞」という）。次いで、これらのＮｅｆ含有ＴＣＲ欠損Ｔ細胞をさらに工学操作して、外因性受容体、例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）を発現するようにしてもよい。本願はまた、Ｎｅｆをコードするベクターと、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードするベクターとを前駆体Ｔ細胞に同時形質導入すること、あるいは、Ｎｅｆと外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））との両方をコードする「オールインワン」ベクターを前駆体Ｔ細胞に形質導入することにより、ＧｖＨＤ最小化修飾Ｔ細胞（例えばＴＣＲ−Ｔ細胞（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ細胞）、ＴＡＣ−Ｔ細胞、ＴＡＣ様Ｔ細胞、またはＣＡＲ−Ｔ細胞）を生成する１ステップの方法も提供する。本明細書に記載される方法から得られる修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲの細胞表面発現を効果的に下方制御すると共に、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の発現及び機能を維持することができる。本発明は、同種移植におけるＧｖＨＤの発生を効果的に最小限に抑えるか、またはなくし、汎用性のある同種ＣＡＲ−Ｔ、ＴＣＲ−Ｔ（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ）、ＴＡＣ−Ｔ、またはＴＡＣ様Ｔ療法のための簡便、効果的、かつ低コストの戦略を提供する。
【００２５】
したがって、本願の一態様は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞を生成する方法、及びかかる方法によって得られる修飾Ｔ細胞を提供する。別の態様では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、任意選択で、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞が提供される。別の態様では、本明細書に記載される修飾Ｔ細胞を作製するのに有用な、天然に存在しないＮｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）が提供される。また、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸と、任意選択で、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）をコードする核酸とを含む、ベクター（例えばウイルスベクター）が提供される。
【００２６】
Ｉ．  定義
「抗体」という用語には、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する、完全長４本鎖抗体または完全長重鎖のみ抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び一本鎖分子）、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ）が含まれる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書では「抗体」と同義に使用される。本明細書において企図される抗体には、重鎖のみ抗体などの単一ドメイン抗体が含まれる。
【００２７】
「重鎖のみ抗体」または「ＨＣＡｂ」という用語は、重鎖を含むが、４本鎖抗体に通常見出される軽鎖を欠いている機能的抗体を意味する。ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ラマ、またはアルパカ）はＨＣＡｂを産生することが知られている。
【００２８】
「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一の抗原結合ポリペプチドを意味する。ｓｄＡｂは単独で、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドとペアリングすることなく抗原に結合することができる。場合により、単一ドメイン抗体は、ラクダ科ＨＣＡｂから工学操作され、それらの重鎖可変ドメインは、本明細書では「ＶＨＨ」といわれる。いくつかのＶＨＨは、ナノボディとして知られる場合もある。ラクダ科ｓｄＡｂは、最小の公知の抗原結合抗体断片のうちの１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−８（１９９３）、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：１６８−７３（１９９５）、Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ−Ｇｈａｓｓａｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３−２６（２０１３）を参照されたい）。基本的なＶＨＨは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の構造を有し、ここで、ＦＲ１〜ＦＲ４は、それぞれフレームワーク領域１〜４を意味し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、相補性決定領域１〜３を意味する。
【００２９】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを意味する。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」といわれる場合がある。これらのドメインは、一般的に、抗体の可変性が（同じクラスの他の抗体と比較して）最も高いドメインであり、抗原結合部位を含む。ラクダ科種由来の重鎖のみ抗体は、単一の重鎖可変領域を有し、これは、「ＶＨＨ」といわれる。
【００３０】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントの配列が、抗体によって大きく異なるという事実に関するものである。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を決める。しかしながら、可変性は、可変ドメインの全範囲にわたって均一に分布しているわけではない。そうではなく、可変性は、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインにある超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインの中でより高度に保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲ領域を含み、これらは大部分がβシート立体構造をとり、３つのＨＶＲによって結合しており、この３つのＨＶＲはループを形成し、このループがβシート構造を結合し、場合によってはその一部を形成する。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって互いに近接して結び付いており、他方の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
【００３１】
「完全長抗体」、「インタクト抗体」、または「全抗体」という用語は、同義に使用され、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体を意味する。具体的には、完全長４本鎖抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有する抗体が含まれる。完全長重鎖のみ抗体は、重鎖（例えばＶＨＨ）及びＦｃ領域を含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）であっても、そのアミノ酸配列バリアントであってもよい。場合により、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【００３２】
「抗体断片」または「抗原結合性断片」は、インタクト抗体の一部分、好ましくはインタクト抗体の抗原結合領域及び／または可変領域を含む。抗体断片（または抗原結合性断片）の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］を参照されたい）；一本鎖抗体分子；単一ドメイン抗体（例えばＶＨＨ）、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一な抗原結合性断片と、残りの「Ｆｃ」断片とが得られた。「Ｆｃ」断片とは、容易に結晶化する能力を反映する呼称である。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体と併せて、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片が得られ、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのＦａｂ断片がジスルフィド結合したものにほぼ相当し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に抗体ヒンジ領域のシステインを１つ以上含む数個の追加の残基を有することが、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして生成された。抗体断片の他の化学的結合も知られている。
【００３３】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって互いに結び付けられたＨ鎖両方のカルボキシ末端を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域内の配列によって決定され、この領域はまた、特定の細胞型に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。
【００３４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが非共有結合で密接に会合した二量体からなる。これら２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基を寄与し、抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖から各３ループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）ですら、結合部位全体よりも低い親和性であるにせよ、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００３５】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、結合して単一のポリペプチド鎖となったＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これによりｓＦｖは、抗原結合に望ましい構造を形成することができる。
【００３６】
本明細書に記載される抗体の「機能的断片」は、インタクト抗体の一部分を含み、これは概して、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するかもしくは修飾されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例としては、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００３７】
本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、または「に特異的な」という用語は、生体分子を含む不均一な分子集団の存在下における標的の存在を決定付ける、標的と抗原結合タンパク質（例えば抗原結合ドメイン、リガンド、工学操作されたＴＣＲ、ＣＡＲ、またはキメラ受容体）との間の結合のような、測定可能かつ再現可能な相互作用に関するものである。例えば、ある標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、この標的に、他の標的に結合する場合と比べて高い親和性、高いアビディティ、高い容易さ、及び／または長い期間で結合する抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、無関係な標的への抗原結合タンパク質の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される抗原結合タンパク質の標的への結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、異なる種のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は排他的結合を含み得るが、しかし必須ではない。
【００３８】
「特異性」という用語は、抗原結合タンパク質（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）が抗原の特定のエピトープを選択的に認識することを意味する。例えば、自然抗体は、単一特異性である。本明細書で使用する「多重特異性」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば本明細書に記載される外因性受容体またはｓｄＡｂのいずれか）が２つ以上の抗原結合部位を有し、これらの少なくとも２つが異なる抗原に結合することを示す。本明細書で使用する「二重特異性」とは、抗原結合タンパク質（例えば本明細書に記載される外因性受容体のいずれか）が２つの異なる抗原結合特異性を有することを示す。本明細書で使用する「単一特異性」ＣＡＲという用語は、１つ以上の結合部位を有し、その各々が同じ抗原に結合する、抗原結合タンパク質（例えば本明細書に記載される外因性受容体またはｓｄＡｂ、ｓｃＦｖのいずれか）を示す。
【００３９】
本明細書で使用する「価」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば本明細書に記載される外因性受容体またはｓｄＡｂ、ｓｃＦｖのいずれか）に特定の数の結合部位が存在することを示す。例えば自然抗体、または完全長抗体は、２つの結合部位を有し、二価である。したがって、「三価」、「四価」、「五価」、及び「六価」という用語は、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、４つの結合部位、５つの結合部位、及び６つの結合部位が抗原結合タンパク質（例えば本明細書に記載される外因性受容体またはｓｄＡｂ、ｓｃＦｖのいずれか）に存在することを示す。
【００４０】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端に及ぶと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムによると残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え工学操作することによって除去され得る。したがって、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書に記載される抗体における使用に好適な天然配列のＦｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。
【００４１】
「結合親和性」とは、一般的に、分子（例えば、抗体、ＣＡＲなどの本明細書に記載される外因性受容体のいずれか）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の合計の強度を意味する。特記なき限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば、抗体と抗原、または本明細書に記載される外因性受容体のいずれかと抗原、例えばＣＡＲと抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を意味する。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当技術分野において公知である一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、概して、抗原に結合するのが遅く、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、概して、抗原に結合するのがより速く、より長く結合した状態を保つ傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で公知であり、そのいずれも本願の目的に使用することができる。結合親和性を測定するための特定の具体的かつ例示的な実施形態を以下に記載する。
【００４２】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物活性を阻害または低減するものである。いくつかの実施形態では、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的または完全に阻害する。
【００４３】
ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して最大の配列同一性パーセントを達成した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合に、候補配列において特定のペプチドまたはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、アミノ酸残基の百分率と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術範囲内にある様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【００４４】
本明細書で使用する「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞に１つ以上の抗原特異性をグラフトするために使用され得る、遺伝子工学操作された受容体を意味する。いくつかのＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」、または「キメラ免疫受容体」としても知られている。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の抗原（例えば腫瘍抗原）に特異的な細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＴ細胞及び／または他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「ＣＡＲ−Ｔ」は、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）を発現するＴ細胞を意味する。「ＢＣＭＡ  ＣＡＲ」は、ＢＣＭＡに特異的な細胞外結合ドメインを有するＣＡＲを意味する。「バイエピトープＣＡＲ」は、２つの異なるエピトープに特異的な細胞外結合ドメインを有するＣＡＲを意味する。
【００４５】
本明細書に記載される「単離された」核酸分子（例えば、Ｎｅｆタンパク質、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）をコードするもの）は、それが産生された環境において通常付随する少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、産生環境に付随するあらゆる成分との関連がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【００４６】
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物において作動可能に連結したコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。例えば、原核生物に好適な制御配列には、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。
【００４７】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれているとき、「作動可能に連結」している。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、そのポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結しており、プロモーターもしくはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結しており、またはリボソーム結合部位は、翻訳を容易にするように位置付けられている場合に、コード配列に作動可能に連結している。一般的に、「作動可能に連結した」とは、連結されるＤＮＡ配列が近接していること、及び分泌リーダーの場合には、近接しており、かつ読み取り相（ｒｅａｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは近接している必要はない。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の慣例に従って使用される。
【００４８】
特記なき限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という表現は、イントロンを含む場合もあるが、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が、いくつかのバージョンでイントロン（複数可）を含み得る場合に限る。
【００４９】
本明細書で使用する「ベクター」という用語は、それが結合した別の核酸を増殖させることができる核酸分子を意味する。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。特定のベクターは、それらが動作可能に連結した核酸の発現を指向することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」といわれる。
【００５０】
本明細書で使用する「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスに関するものである。「トランスフェクト」細胞または「形質転換」細胞または「形質導入」細胞とは、外因性核酸がトランスフェクトされた、それで形質転換された、またはそれが形質導入された細胞である。この細胞は、初代対象細胞及びその子孫を含む。
【００５１】
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置すること」とは、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的において、有益なまたは所望の臨床結果は、疾患に起因する１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の低減、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の防止もしくは遅延）、疾患の広がり（例えば、転移）の防止もしくは遅延、疾患の再発の防止もしくは遅延、疾患の進行の遅延もしくは緩徐化、病状の改善、疾患の寛解（部分寛解もしくは完全寛解）の提供、疾患の処置に必要な１つ以上の他の薬剤の用量の減少、疾患の進行の遅延、生活の質の向上、及び／または生存期間の延長のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない。また、がんの病理学的帰結の低減も「処置」に包含される。本願の方法は、これらの処置態様のいずれか１つ以上を企図する。
【００５２】
本明細書で使用する場合、「個体」または「対象」とは、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯類、または霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００５３】
本明細書で使用する「有効量」という用語は、特定の障害、状態、または疾患を治療するために、例えばその症状（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）のうちの１つ以上を改善、緩和、軽減、及び／または遅延するために十分な、本明細書に記載される修飾Ｔ細胞などの薬剤またはその医薬組成物の量を意味する。がんの場合、有効量は、腫瘍を縮小させる及び／または腫瘍の成長速度を低下させる（例えば、腫瘍成長を抑制する）、または他の望まれない細胞増殖を防止もしくは遅延するのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、発症を遅延するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、再発を防止または遅延するのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬剤（例えば修飾Ｔ細胞）または組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を低減させること、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させること、（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を、ある程度阻止する、遅らせる、緩徐化する、好ましくは停止すること、（ｉｖ）腫瘍転移を阻止する（すなわち、ある程度緩徐化する、好ましくは停止する）こと、（ｖ）腫瘍成長を阻止すること、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を防止もしくは遅延すること、及び／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減することができる。ウイルス感染などの感染性疾患の場合、本明細書に記載される修飾Ｔ細胞またはその組成物の治療有効量は、病原体に感染した細胞の数を低減させること、病原体由来抗原の生成もしくは放出を低減させること、未感染細胞への病原体の拡散を阻止する（すなわち、ある程度緩徐化する、好ましくは停止する）こと、及び／または感染に関連する１つ以上の症状をある程度軽減することができる。いくつかの実施形態では、治療有効量とは、患者の生存期間を延長する量である。
【００５４】
本明細書で使用する場合、疾患の発症を「遅延させること」とは、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）の発症を先送りにする、妨げる、緩徐化する、遅らせる、安定化する、及び／または延期することを意味する。この遅延は、病歴及び／または処置される個体に応じて、様々な長さの時間のものであり得る。当業者には明白であるように、十分なまたは著しい遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、実質的に防止を包含し得る。がんの発症を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患発症の可能性を低減させる、及び／または所与の時間枠内で疾患の程度を低減させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な数の個体を使用した臨床研究に基づく。がんの発症は、コンピュータ断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固検査、動脈造影法、または生検などを含むがこれらに限定されない、標準的な方法を使用して検出できる場合がある。発症（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）はまた、初期には検出できない場合があるがんの進行も意味し、発生、再発、及び発症（ｏｎｓｅｔ）を含む。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「自家」という用語は、個体に由来する材料で、後に同じ個体に再導入される任意の材料に関することが意図される。
【００５６】
「同種」とは、同じ種の異なる個体に由来するグラフトに関するものである。「同種Ｔ細胞」とは、レシピエントにマッチする組織ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）型を有するドナー由来のＴ細胞を意味する。典型的に、マッチングは、ＨＬＡ遺伝子の３つ以上の座位における可変性に基づいて行われ、これらの座位が完全にマッチすることが好ましい。いくつかの事例において、同種移植ドナーは、血縁（通常はＨＬＡが良好にマッチする兄弟姉妹）、同系（患者が一卵性「双生児」の一方である場合、もう一方）、または無関係（血縁関係はないがＨＬＡマッチング度が非常に良好であることが見出されるドナー）であり得る。ＨＬＡ遺伝子は、２つのカテゴリー（Ｉ型及びＩＩ型）に分類される。一般に、Ｉ型遺伝子（すなわち、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ）のミスマッチは、グラフト拒絶のリスクを高める。ＨＬＡ  ＩＩ型遺伝子（すなわち、ＨＬＡ−ＤＲ、またはＨＬＡ−ＤＱＢ１）のミスマッチは、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスクを高める。
【００５７】
本明細書で使用する「患者」は、疾患（例えば、がん、ウイルス感染、ＧｖＨＤ）に罹患したあらゆるヒトを含む。「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書では同義に使用される。「ドナー対象」または「ドナー」という用語は、本明細書では、さらなるｉｎ  ｖｉｔｒｏ工学操作のための細胞が得られる対象を意味する。ドナー対象は、本明細書に記載される方法によって生成される細胞集団で処置される患者（すなわち、自家ドナー）である場合もあれば、または、本明細書に記載される方法によって生成される細胞集団の生成後に、異なる個体もしくは患者を処置するために使用されることになる血液サンプル（例えば、リンパ球サンプル）を提供する個体（すなわち、同種ドナー）である場合もある。本発明の方法によって調製された細胞を受ける対象は、「レシピエント」または「レシピエント対象」といわれることがある。
【００５８】
「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、Ｔ細胞の表面上でペアリングするαβ鎖またはγδ鎖からなるヘテロ二量体受容体を意味する。α、β、γ、及びδの各鎖は、２つのＩｇ様ドメイン、すなわち相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識をもたらす可変ドメイン（Ｖ）と、これに続く、ペプチド及び膜貫通（ＴＭ）領域を結合させることによって細胞膜に固定されている定常ドメイン（Ｃ）とからなる。ＴＭ領域は、ＣＤ３シグナル伝達装置の不変サブユニットと会合する。各Ｖドメインは、３つのＣＤＲを有する。これらのＣＤＲは、主要組織適合抗原によってコードされるタンパク質と抗原ペプチドが結合した複合体（ｐＭＨＣ）と相互作用する（Ｄａｖｉｓ  ａｎｄ  Ｂｊｏｒｋｍａｎ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ，３３４，３９５−４０２、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６，５２３−５４４、Ｍｕｒｐｈｙ（２０１２），ｘｉｘ，８６８  ｐ．）。
【００５９】
「ＴＣＲ関連シグナル伝達分子」という用語は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体の一部である細胞質免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する分子を意味する。ＴＣＲ関連シグナル伝達分子には、ＣＤ３γε、ＣＤ３δε、及びζζ（別名ＣＤ３ζまたはＣＤ３ζζ）が含まれる。
【００６０】
「刺激」という用語は、本明細書で使用する場合、細胞表面部分のライゲーションによって誘導される一次応答を意味する。例えば、受容体の文脈において、このような刺激には、受容体のライゲーションと、後続のシグナル伝達事象とが含まれる。Ｔ細胞の刺激に関しては、このような刺激は、Ｔ細胞表面部分のライゲーションを意味し、これは一実施形態では、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合のように、後にシグナル伝達事象を誘導する。さらに、刺激事象は、細胞を活性化し、ＴＧＦ−βの下方制御のように、分子の発現または分泌を上方制御または下方制御し得る。したがって、細胞表面部分のライゲーションは、直接的なシグナル伝達事象がない場合であっても、細胞骨格構造の再構築、または細胞表面部分の合体をもたらすことがあり、これらは各々、後の細胞応答を向上、修飾、または変化させる機能を果たし得る。
【００６１】
「活性化」という用語は、本明細書で使用する場合、はっきりとした生化学的または形態学的な変化を誘導するのに十分な細胞表面部分のライゲーション後の細胞の状態を意味する。Ｔ細胞の文脈において、このような活性化は、細胞増殖を誘導するように十分に刺激されているＴ細胞の状態を意味する。Ｔ細胞の活性化は、サイトカイン産生、及び制御性または細胞溶解性のエフェクター機能の実行を誘導する場合もある。他の細胞の文脈において、この用語は、特定の物理化学的プロセスの上方制御または下方制御のいずれかを示す。「活性化Ｔ細胞」という用語は、細胞分裂、サイトカイン産生、制御性もしくは細胞溶解性のエフェクター機能の実行が進行中である、及び／または「活性化」のプロセスを経たばかりのＴ細胞を示す。
【００６２】
Ｔ細胞における分子（例えば、内在性ＴＣＲまたはＣＤ４）の「下方調節」という用語は、分子の細胞表面発現を下方制御すること、及び／またはそのシグナル伝達（例えば、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ２８によるシグナル伝達）、Ｔ細胞活性化、及びＴ細胞増殖に干渉することを意味する。標的受容体の下方調節、すなわち、内部移行、ストリッピング、キャッピング、または細胞表面上の他の形態の受容体転位の変化を介するものも包含され得る。
【００６３】
本明細書で使用する「機能的外因性受容体」という用語は、Ｔ細胞または本明細書に記載されるＮｅｆ発現Ｔ細胞に導入された後に生物活性を保持する外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）、またはＴＡＣ様キメラ受容体など）を意味する。生物活性は、分子（例えば、がん抗原、またはＡＣＴＲに対する抗体）に特異的に結合すること、下流シグナルを適切に伝達すること、例えば、細胞増殖、サイトカイン産生及び／または制御性もしくは細胞溶解性のエフェクター機能の実行を誘導することにおける、外因性受容体の能力を含むが、これらに限定されない。
【００６４】
本明細書に記載される本願の実施形態は、実施形態「からなる」及び／または実施形態「から本質的になる」を含むことが理解される。
【００６５】
本明細書における「約」のついた値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変形を含む（及び記述する）。例えば、「約Ｘ」について言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【００６６】
本明細書で使用する場合、ある値またはパラメータ「ではない（ｎｏｔ）」という言及は、概して、ある値またはパラメータ「以外」を意味し、記述する。例えば、本方法はタイプＸのがんを処置するために使用されない、とは、その方法がＸ以外のタイプのがんを処置するために使用されることを意味する。
【００６７】
本明細書で使用する「約Ｘ〜Ｙ」という用語は、「約Ｘ〜約Ｙ」と同じ意味を有する。
【００６８】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に明記されていない限り、複数の指示対象を含む。
【００６９】
ＩＩ．  Ｎｅｆタンパク質を発現する修飾Ｔ細胞
本発明は、Ｎｅｆを含む修飾Ｔ細胞、及びかかる修飾Ｔ細胞を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をさらに発現する。したがって本願は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの天然に存在しないＮｅｆタンパク質）のいずれか１つと、任意選択で、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））のいずれか１つとを同時発現する、修飾Ｔ細胞を提供する。本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される変異体Ｎｅｆタンパク質のいずれか、例えば変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆのような変異体Ｎｅｆである。
【００７０】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）が下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、下方調節は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲの細胞表面発現は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。いくつかの実施形態では、内在性ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δの細胞表面発現は、Ｎｅｆタンパク質により、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＣＤ３ζを下方調節する（例えば、発現を下方制御する）ことはないか、または、ＣＤ３ζを最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、もしくは約５％下方調節する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、または���ＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００７１】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβなどの修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、ｓｈＲＮＡ、及びＺＦＮから選択される遺伝子編集システムによって修飾される。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、配列番号２３の核酸配列を含むｇＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムによって修飾される。
【００７２】
いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸とは、異なるベクター上にある。
【００７３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１��７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、修飾Ｔ細胞における内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８に対する下方調節作用（例えば、細胞表面発現の下方制御）を、野生型Ｎｅｆタンパク質と比較して低減させる。いくつかの実施形態では、内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を含む修飾Ｔ細胞は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）の発現は、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約���０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約��０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御するが、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて最大で約３％（例えば最大で約２％または約１％）の差で、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）少なく、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）またはＴＡＣ様キメラ受容体である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、ま��は約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００７５】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、そのＴＣＲサブユニットの細胞外ドメイン（またはその一部分）を（またはいかなるＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインも）含まない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、ｃＴＣＲのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制��しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ｃＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ｃＴＣＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００７６】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、そのＴＣＲ共受容体の細胞外ドメイン（またはその一部分）を（またはいかなるＴＣＲ共受容体の細胞外ドメインも）含まない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに���来する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ＴＡＣのＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００７７】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、そのＴＣＲサブユニットの細胞外ドメイン（またはその一部分）を（またはいかなるＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインも）含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ＴＡＣ様キメラ受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチド、例えばＣＤ８αに由来するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣ様キメラ受容体を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００７８】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｄＡｂ（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、細���外リガンド結合ドメインは、２つ以上のｓｄＡｂがひとつに結合したものを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、またはＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含み、このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドまたは受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＤＮＡＭ−１、及びＮＫｐ８０からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）である。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、メソテリン、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、インターロイキン−１１受容体ａ（ＩＬ−１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲベータ）、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１８．２、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、及びＩＧＬＬ１、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、下方調節は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００８０】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖに直接的または間接的に（例えば、リンカーを介して）融合した抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、下方調節は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００８１】
いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲの細胞表面発現は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。いくつかの実施形態では、内在性ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δの細胞表面発現は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ３ζを下方調節する（例えば、発現を下方制御する）ことはないか、または、ＣＤ３ζを最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、もしくは約５％下方調節する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）の発現は、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）は、Ｎｅｆタンパク質により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００８２】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβなどの修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、及びＺＦＮから選択される遺伝子編集システムによって修飾される。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、配列番号２３の核酸配列を含むｇＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムによって修飾される。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸とは、異なるベクター上にある。
【００８３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の変異は、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質は、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質である。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、修飾Ｔ細胞における内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８に対する下方調節作用（例えば、細胞表面発現の下方制御）を、野生型Ｎｅｆタンパク質と比較して低減させる。いくつかの実施形態では、内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少��くとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御するが、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて最大で約３％（例えば最大で約２％または約１％）の差で、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）少なく、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。
【００８４】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、アミノ酸変異（例えば、アミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）を、表１１に記載されるアミノ酸変異部位のいずれかに含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）を、表１１に記載される同じ群に属する、最大２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸変異部位に含む。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、表１１に記載されるアミノ酸変異部位の１つのみにある。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、表１１に記載される同じ群に属する、２つ以上のアミノ酸変異部位にある。いくつかの実施形態では、変異は、連続した２つ以上のアミノ酸変異部位にあり、ここで、２つ以上のアミノ酸変異部位は、表１１に記載される同じ群に属する（例えば、群３のａａ１８５〜１８７及びａａ１８８〜１９０における変異）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸変異部位における全てのアミノ酸残基の変異（例えば、全てのＡｌａへの変異）であり、ここで、アミノ酸変異部位は、表１１に記載される同じ群に属する（例えば、群３のａａ１８５〜１８７及びａａ１８８〜１９０における全ての残基のＡｌａへの変異）。いくつかの実施形態では、変異は、第１のアミノ酸変異部位における１つのアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）、及び第２のアミノ酸変異部位における別のアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）であり、ここで、２つのアミノ酸変異部位は、表１１に記載される同じ群に属する。いくつかの実施形態では、変異は近接している。すなわち、少なくとも２つの変異部位が互いの近くにある（例えば、変異した残基がａａ８〜１０及びａａ１１〜１３にある）。いくつかの実施形態では、変異は近接していない。すなわち、変異部位は互いの近くにない（例えば、変異した残基がａａ８〜１０及びａａ４４〜４６にある）。
【００８５】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のいずれかの数、または最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上のいずれかの数）のアミノ酸変異（例えば、Ａｌａへの変異のようなアミノ酸置換）を、ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３（例えば、ａａ８〜１３）、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７（例えば、ａａ４４〜６７）、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２（例えば、ａａ１０７〜１１２）、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６（例えば、ａａ１６４〜１９６）、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８（例えば、ａａ２０３〜２０８）、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３（例えば、ａａ２１２〜２２３）のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、最大２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸変異部位にある（例えば、変異した残基がａａ８〜１０及びａａ４４〜４６にある）。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、１つのアミノ酸変異部位のみ（例えば、ａａ８〜１０のみ）にある。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、２つ��上のアミノ酸変異部位にある。いくつかの実施形態では、変異は近接している。すなわち、少なくとも２つのアミノ酸変異部位が互いの隣りにある（例えば、変異した残基がａａ８〜１０及びａａ１１〜１３にある）。いくつかの実施形態では、変異は近接していない。すなわち、アミノ酸変異部位は互いの近くにない（例えば、変異した残基がａａ８〜１０及びａａ４４〜４６にある）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸変異部位における全てのアミノ酸残基の変異（例えば、全てのＡｌａへの変異）である。いくつかの実施形態では、変異は、第１のアミノ酸変異部位における１つのアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）、及び第２のアミノ酸変異部位における別のアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆであり、ここで、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）異なり（小さく、または大きく）、ＣＤ４細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さい。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、ＴＣＲαβ細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４細胞表面発現を下方制御することはない。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のいずれかの数、または最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上のいずれかの数）のアミノ酸変異（例えば、Ａｌａへの変異のようなアミノ酸置換）を、ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７（例えば、ａａ４４〜６７）、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９（例えば、ａａ１６４〜１６９）、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１（例えば、ａａ１７６〜１８１）、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０（例えば、ａａ１８５〜１９０）、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、最大２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸変異部位にある（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ４４〜４６にある）。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、��、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、１つのアミノ酸変異部位のみ（例えば、ａａ２〜４のみ）にある。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、２つ以上のアミノ酸変異部位にある。いくつかの実施形態では、変異は近接している。すなわち、少なくとも２つのアミノ酸変異部位が互いの隣りにある（例えば、変異した残基がａａ６２〜６４及びａａ６５〜６７にある）。いくつかの実施形態では、変異は近接していない。すなわち、アミノ酸変異部位は互いの近くにない（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ４４〜４６にある）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸変異部位における全てのアミノ酸残基の変異（例えば、全てのＡｌａへの変異）である。いくつかの実施形態では、変異は、第１のアミノ酸変異部位における１つのアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）、及び第２のアミノ酸変異部位における別のアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆであり、ここで、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）異なり（小さく、または大きく）、ＣＤ２８細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さい。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、ＴＣＲαβ細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８細胞表面発現を下方制御することはない。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のいずれかの数、または最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上のいずれかの数）のアミノ酸変異（例えば、Ａｌａへの変異のようなアミノ酸置換）を、ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７（例えば、ａａ５６〜６７）、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０（例えば、ａａ１６４〜１９０）、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、最大２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸変異部位にある（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ５６〜５８にある）。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数��アミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、１つのアミノ酸変異部位のみ（例えば、ａａ２〜４のみ）にある。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、２つ以上のアミノ酸変異部位にある。いくつかの実施形態では、変異は近接している。すなわち、少なくとも２つのアミノ酸変異部位が互いの隣りにある（例えば、変異した残基がａａ６２〜６４及びａａ６５〜６７にある）。いくつかの実施形態では、変異は近接していない。すなわち、アミノ酸変異部位は互いの近くにない（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ６２〜６４にある）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸変異部位における全てのアミノ酸残基の変異（例えば、全てのＡｌａへの変異）である。いくつかの実施形態では、変異は、第１のアミノ酸変異部位における１つのアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）、及び第２のアミノ酸変異部位における別のアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）である。
【００８８】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆであり、ここで、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）異なり（小さく、または大きく）、ＣＤ４及びＣＤ２８細胞表面発現の変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さい。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し、ＣＤ４及びＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０のいずれかの数、または最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上のいずれかの数）のアミノ酸変異（例えば、Ａｌａへの変異のようなアミノ酸置換）を、ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７（例えば、ａａ５６〜６７）、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９（例えば、ａａ１６４〜１６９）、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１（例えば、ａａ１７６〜１８１）、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０（例えば、ａａ１８５〜１９０）、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、最大２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸変異部位にある（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ５６〜５８にある）。いくつかの実施形態では、変��（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、１つのアミノ酸変異部位のみ（例えば、ａａ２〜４のみ）にある。いくつかの実施形態では、変異（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０のいずれかの数のアミノ酸残基のＡｌａへの変異のような、１つ以上のＡｌａへの変異）は、２つ以上のアミノ酸変異部位にある。いくつかの実施形態では、変異は近接している。すなわち、少なくとも２つのアミノ酸変異部位が互いの隣りにある（例えば、変異した残基がａａ６２〜６４及びａａ６５〜６７にある）。いくつかの実施形態では、変異は近接していない。すなわち、アミノ酸変異部位は互いの近くにない（例えば、変異した残基がａａ２〜４及びａａ６５〜６７にある）。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸変異部位における全てのアミノ酸残基の変異（例えば、全てのＡｌａへの変異）である。いくつかの実施形態では、変異は、第１のアミノ酸変異部位における１つのアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）、及び第２のアミノ酸変異部位における別のアミノ酸残基の変異（例えば、Ａｌａへの変異）である。
【００８９】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＴＣＲαβ細胞表面発現を、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比べて大きく（例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％大きく）下方制御するが、ＣＤ４及びＣＤ２８細胞表面発現の下方制御は野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して小さい（例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％小さい）、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ２つのアミノ酸変異（例えば、一方または両方のアミノ酸のＡｌａへの変異のようなアミノ酸置換）を、アミノ酸残基１７８〜１７９ａａ（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。
【００９０】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ  ＩＥ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１−α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ）プロモーター、ユビキチンＣ（ＵＢＱ−Ｃ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＭＣ１）プロモーター、ベータアクチン（β−ＡＣＴ）プロモーター、「骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）」プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、及びＮＦκＢプロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１−αまたはＰＧＫである。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列を介して結合している。いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかを含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクター、改良エピソームベクター（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｅｐｉｓｏｍａｌ  Ｖｅｃｔｏｒ）（ＥＥＶ）、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼベクター、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステムなどの非ウイルスベクターである。
【００９２】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、組織不適合性の個体において、ＧｖＨＤ応答を誘発しないか、または修飾Ｔ細胞の起源となる前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する。
【００９３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ＴＡＣまたはＴＡＣ様キメラ受容体である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ＣＡＲ（例えば、抗抗原ＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、一価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、多価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、多価かつ多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的キメラＴＣＲが、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的キメラＴＣＲが、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ���）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第���のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）上にあり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβなどの修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆで
ある。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的キメ���ＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを��異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含
み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９���ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、野生型Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００９５】
したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上の��ピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む���貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメイ���またはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と
を含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターとは同じである。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターと第２のプロモーターとは異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜���７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００９６】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーター下で転写される。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳ、またはＰ２ＡもしくはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断
性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第���の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎ
ｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選
択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原���合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態��は、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を含む修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、修飾Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎ
ｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【００９８】
いくつかの実施形態では、プロモーターは、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ  ＩＥ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１−α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ）プロモーター、ユビキチンＣ（ＵＢＱ−Ｃ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＭＣ１）プロモーター、ベータアクチン（β−ＡＣＴ）プロモーター、「骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）」プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、及びＮＦκＢプロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１−αまたはＰＧＫである。
【００９９】
いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、連結配列は、ＩＲＥＳである。いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａをコードする核酸配列である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクター、改良エピソームベクター（ＥＥＶ）、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼベクター、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステムなどの非ウイルスベクターである。さらに、本明細書に記載されるベクター（例えば、ウイルスベクター）のいずれかを導入することによって得られるＴ細胞が提供される。さらに、本明細書に記載される方法のいずれかによって得られるＴ細胞が提供される。
【０１０１】
ベクター
本願は、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））のいずれか１つのクローニング及び発現のためのベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、哺乳動物細胞などの真核細胞における複製及び組み込みに好適である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスベクター技術は当技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載されている。
【０１０２】
いくつかのウイルスベースのシステムが、哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムのための簡便なプラットフォームを提供する。異種核酸は、当技術分野で公知の技術を使用し、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次いでこの組換えウイルスを単離し、工学操作された哺乳動物細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで送達することができる。いくつかのレトロウイルスシステムが当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターが当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。いくつかの実施形態では、自己不活性化レンチウイルスベクターが使用される。例えば、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする配列を有する自己不活性化レンチウイルスベクター、及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を有する自己不活性化レンチウイルスベクターを、当技術分野で公知のプロトコールによってパッケージングしてもよい。結果として得られるレンチウイルスベクターは、当技術分野で公知の方法を使用して哺乳動物細胞（例えば初代ヒトＴ細胞）に形質導入するために使用され得る。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期間の安定な組み込み、及び子孫細胞におけるその増殖を可能にするため、長期間の遺伝子移入を達成するのに好適なツールである。レンチウイルスベクターは、低い免疫原性も有し、非増殖細胞に形質導入することができる。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、トランスポゾン、例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステム、またはＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンシステムである。いくつかの実施形態では、ベクターは、例えば、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）及びポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）、及びデンドリマーを含む、ポリマーに基づく非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、カチオン性脂質に基づく非ウイルスベクター、例えば、カチオン性リポソーム、脂質ナノエマルション、及び固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ペプチドに基づく遺伝子非ウイルスベクター、例えば、ポリ−Ｌ−リジンである。ゲノム編集に好適な公知の非ウイルスベクターのいずれも、Ｎｅｆをコードする核酸及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする核酸を、工学操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入するために使用され得る。例えば、Ｙｉｎ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２０１４）１５：５２１−５５５、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ＥＬ  ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ  ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ａ  ｎｏｎ−ｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．”Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．（２０１１）Ｒ１：Ｒ１４−２０、及びＺｈａｏ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．“ＰｉｇｇｙＢａｃ  ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ  ｖｅｃｔｏｒｓ：ｔｈｅ  ｔｏｏｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ．”Ｔｒａｎｓｌ．Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１６）５（１）：１２０−１２５を参照されたい。これらは、参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆ及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸のいずれか１つ以上が、工学操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に、電気穿孔、ソノポレーション、フォトポレーション、マグネトフェクション、ハイドロポレーションを含むがこれらに限定されない物理的方法によって導入される。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）は、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸のいずれか１つを含む。核酸は、当技術分野で公知の任意の分子クローニング法の使用、例えば、制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーの使用により、ベクターにクローニングされ得る。いくつかの実施形態では、核酸は、プロモーターに作動可能に連結している。様々なプロモーターが哺乳動物細胞での遺伝子発現について調査されており、当技術分野で公知のプロモーターのうちのいずれを本発明に使用してもよい。プロモーターは、構成的プロモーター、または誘導性プロモーターなどの制御プロモーターに大まかに分類され得る。
【０１０５】
プロモーター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸は、構成的プロモーターに作動可能に連結している。構成的プロモーターは、異種遺伝子（導入遺伝子ともいう）を宿主細胞で構成的に発現させる。本明細書で企図される例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ）、ヒト伸長因子１アルファ（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、サルウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）、ＣＭＶ初期エンハンサーに結合したニワトリβアクチンプロモーター（ＣＡＧＧ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＭＣ１）プロモーター、ベータアクチン（β−ＡＣＴ）プロモーター、「骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）」プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。かかる構成的プロモーターが導入遺伝子発現を推進する効率については、多数の研究において広く比較されている。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｃ．Ｍｉｌｏｎｅらは、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現を推進するＣＭＶ、ｈＥＦ１α、ＵｂｉＣ、及びＰＧＫの効率を比較し、ｈＥＦ１αプロモーターが、最も高いレベルの導入遺伝子発現を誘導しただけでなく、ＣＤ４及びＣＤ８ヒトＴ細胞で最適に維持されたと結論した（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１７（８）：１４５３−１４６４（２００９））。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸は、ｈＥＦ１αプロモーターまたはＰＧＫプロモーターに作動可能に連結している。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−ｌａプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１−α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ１プロモーター（ＰＧＫ）、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＱ−Ｃ）、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＡＧ）、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（ＭＣ１）、ベータアクチンプロモーター（β−ＡＣＴ）、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、及び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、及びＮＦκＢプロモーターからなる群から選択される。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸は、誘導性プロモーターに作動可能に連結している。誘導性プロモーターは、制御プロモーターのカテゴリーに属する。誘導性プロモーターは、物理的条件、工学操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の微小環境、もしくは工学操作された免疫エフェクター細胞の生理学的状態、誘導因子（すなわち、誘導剤）、またはそれらの組み合わせなどの１つ以上の条件によって誘導され得る。いくつかの実施形態では、誘導条件は、工学操作された哺乳動物細胞及び／または医薬組成物を受ける対象における内在性遺伝子の発現を誘導しない。いくつかの実施形態では、誘導条件は、工学操作された哺乳動物細胞の誘導因子、照射（電離放射線、光など）、温度（熱など）、レドックス状態、腫瘍環境、及び活性化状態からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、またはＮＦκＢプロモーターであり得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ベクターはまた、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を発現する細胞を、ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）によりトランスフェクトされた宿主細胞集団から選択するために、選択可能マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子を含む。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれにも、宿主細胞における発現が可能になるように、適切な制御配列がフランキングしていてよい。例えば、ベクターは、転写ターミネーター及び翻訳ターミネーター、開始配列、ならびに核酸配列の発現の制御に有用なプロモーターを含み得る。
【０１０９】
連結配列
いくつかの実施形態では、ベクターは、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする核酸を２つ以上含む。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含み、第１の核酸は、連結配列を介して第２の核酸に作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、連結配列は、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）である。ＩＲＥＳは、キャップ非依存性様式での翻訳開始を可能にするＲＮＡエレメントである。いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列を含む（例えば、この核酸配列である）。いくつかの実施形態では、連結配列は、配列番号３４の核酸配列を含むＩＲＥＳである。いくつかの実施形態では、連結配列は、配列番号３５の核酸配列を含むＰＧＫである。いくつかの実施形態では、連結配列は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＰ２Ａペプチドをコードする核酸配列である。いくつかの実施形態では、連結配列は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＴ２Ａペプチドをコードする核酸配列である。いくつかの実施形態では、連結配列は、下記「Ｖ．機能的外因性受容体」における「ペプチドリンカー」のセクションに記載する、可動性リンカーのようなペプチドリンカーをコードする核酸配列である。いくつかの実施形態では、可動性連結配列は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）をコードする核酸配列からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、連結配列は、ＬＮＧＦＲなどの選択可能マーカーをコードする。いくつかの実施形態では、連結配列は、本明細書に記載される１つ以上のタイプの連結配列、例えば、自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ）に続くＧｌｙ−Ｓｅｒ可動性リンカー（例えば、（ＧＧＧＳ）３）、または自己切断性２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ）に続く選択可能マーカー（例えば、ＬＮＧＦＲ）をコードする核酸配列を含む。
【０１１０】
したがって、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を含むベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、Ｔ細胞において発現した場合、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を下方調節する（例えば、発現を下方制御する）ことはないか、あるいは、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆな��の変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸をさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含む、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結している、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で例えば細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ���受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を
下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａ���６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、��１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容���は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜
１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含む、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結している、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどのリンカーをコードする可動性核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗
ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、Ｃ��３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１の��ンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク���（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結���部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、機能的ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクター���提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、機能的キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫
通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、機能的Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリ��カー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）であって、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を含む、ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ��５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発��を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１１８】
ＩＩＩ．  修飾Ｔ細胞を生成する方法
本発明の一態様は、上述の修飾Ｔ細胞のいずれか１つを生成する方法を提供する。本方法は、概して、Ｎｅｆ（例えば変異体Ｎｅｆ）をコードする第２の核酸、及び任意選択で機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸を、天然の、または工学操作されたＴ細胞（本明細書では「前駆体Ｔ細胞」という）に導入することを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ器官に由来し、免疫系の細胞、例えば自然免疫または適応免疫の細胞である。いくつかの態様において、細胞は、ヒト細胞である。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、細胞株、例えばＴ細胞株に由来する。いくつかの実施形態における細胞は、異種源から、例えばマウス、ラット、非ヒト霊長類、及びブタから得られる。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８−、ＣＤ４−／ＣＤ８＋、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋、ＣＤ４−／ＣＤ８−、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞である。いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、工学操作されたＴ細胞、例えば、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））のいずれかである。いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を発現し、ＢＣＭＡ＋腫瘍細胞などの標的細胞に結合すると、ＩＬ−２、ＴＦＮ、及び／またはＴＮＦを産生する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現し、標的細胞に結合すると、抗原特異的標的細胞を溶解する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、造血幹細胞、多能性幹細胞、ｉＰＳ、または胚幹細胞などの幹細胞から分化される。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、本明細書に記載される核酸のいずれか１つまたはベクター（例えば、非ウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）のいずれか１つをトランスフェクトすることにより、Ｔ細胞に導入される。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、ＣＥＬＬ  ＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標）（例えば、米国特許出願公開第２０１４０２８７５０９号を参照されたい）などのマイクロ流体システムに細胞を通しながら、細胞膜にタンパク質を挿入することにより、Ｔ細胞に導入される。
【０１２４】
ベクター（例えば、ウイルスベクター）または単離された核酸を哺乳動物細胞に導入する方法は、当技術分野で公知である。本明細書に記載されるベクターは、物理的、化学的、または生物学的な方法により、Ｔ細胞に移入され得る。
【０１２５】
ベクター（例えば、ウイルスベクター）をＴ細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝突、微量注入、電気穿孔などが挙げられる。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞を生成する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、ウイルスベクター）は、電気穿孔によって細胞に導入される。
【０１２６】
ベクターをＴ細胞に導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物細胞、例えばヒト細胞に挿入するために最も広く使用されている方法となっている。
【０１２７】
ベクター（例えば、ウイルスベクター）をＴ細胞に導入するための化学的手段には、コロイド分散システム、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質に基づくシステムが含まれる。送達ビヒクルとしてｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用される例示的なコロイドシステムは、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））のいずれかをコードするＲＮＡ分子を、従来の方法（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写）によって調製し、次いでｍＲＮＡ電気穿孔などの公知の方法によってＴ細胞に導入してもよい。例えば、Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７：１０２７−１０３５を参照されたい。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされたＴ細胞を、ベクターまたは単離された核酸の導入後にｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させる。いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされたＴ細胞を培養して、少なくとも約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約１０日間、約１２日間、または約１４日間のうちのいずれかにわたって増殖させる。いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされたＴ細胞を、さらに評価またはスクリーニングして、工学操作された哺乳動物細胞を選択する。
【０１３０】
レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用され得る。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物もしくは組織に存在せず、またはそれによって発現されず、発現が何らかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性により明らかになるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時点でアッセイされる。好適なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２（２０００））。好適な発現システムは周知であり、公知の技術を使用して調製されるか、または商業的に入手され得る。
【０１３１】
工学操作されたＴ細胞における、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）のいずれかをコードする核酸の存在を確認するための他の方法としては、例えば、サザンブロッティング及びノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の分子生物学的アッセイや、特定のペプチドの存在または非存在の、例えば免疫学的方法（ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロットなど）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、または磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）による検出といった生化学的アッセイが挙げられる（実施例のセクションも参照されたい）。
【０１３２】
したがって、いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、前駆体Ｔ細胞は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に連続的に導入される。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、細胞外リガンド���合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）にお��る１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸と、第���のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）を介して結合している。
【０１３５】
したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば���従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  
Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、発現すると、修飾Ｔ細胞における内在性ＴＣＲ、ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δを下方調節する。例えば、内在性ＴＣＲ、ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δの細胞表面発現を、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆを発現する修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβなどの修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、及びＺＦＮから選択される遺伝子編集システムによって修飾される。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲ座位は、配列番号２３の核酸配列を含むｇＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムによって修飾される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体（例えば、ＨＩＶ  Ｆ２  Ｎｅｆ、ＨＩＶＣ２  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ  Ｈ２Ｎ２  Ｎｅｆ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異を含むか、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、���ａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、修飾Ｔ細胞において発現した場合、内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８に対する下方調節作用（例えば、細胞表面発現の下方制御）を、野生型Ｎｅｆタンパク質と比較して低減させる。例えば、下方調節作用を、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減させる。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡ��（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、発現すると、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を下方調節する（例えば、発現を下方制御する）ことはないか、あるいは、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体を最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節する（例えば、発現を下方制御する）。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、プロモーターは、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ  ＩＥ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１−α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ）プロモーター、ユビキチンＣ（ＵＢＱ−Ｃ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＭＣ１）プロモーター、ベータアクチン（β−ＡＣＴ）プロモーター、「骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）」プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、及びＮＦκＢプロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１−αまたはＰＧＫである。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、連結配列は、ＩＲＥＳである。いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａをコードする核酸配列である。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクター、改良エピソームベクター（ＥＥＶ）、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼベクター、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステムなどの非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）などの非ＴＣＲ受容体である。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｄＡｂ（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）またはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、２つ以上のｓｄＡｂがひとつに結合したものを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、２つ以上のｓｃＦｖがひとつに結合したものを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含み、このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドまたは受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＤＮＡＭ−１、及びＮＫｐ８０からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）である。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、一価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二重特異性）かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二価）かつ多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＤＡＰ１２、またはＣＤ３γに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、細胞外リガンド結合ドメイン（例えば、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ／ＢＡＦＦリガンド、またはＦｃ受容体の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＴＡＣ様キメラ受容体であり、第１、第２、第３、及��第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、組織不適合性の個体において、ＧｖＨＤ応答を誘発しないか、または修飾Ｔ細胞の起源となる前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する。いくつかの実施形態では、本方法は、第１の核酸及び／または第２の核酸を含むＴ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞から、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞から、内在性ＴＣＲα陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と配合することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する有効量の修飾Ｔ細胞、または、Ｎｅｆタンパク質を発現する修飾Ｔ細胞と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、有効量の医薬製剤を、個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、個体は、がんを有する。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲである。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、ＣＡＲをコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、導入することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、ＣＡＲをコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１��９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、導入することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、ｃＴＣＲをコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態��は、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形���では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ｃＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ｃＴＣＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、導入することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、ＴＡＣをコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含��、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じ（例えば、全てＣＤ４）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ���ものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４の��ＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣ様キメラ受容体を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含み、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば���ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含み、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列、例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列を介して結合している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ
細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、��ｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲである。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、導入することと、次いで、ＣＡＲをコードする第２の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することであり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、導入することとを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆ陽性及び／または内在性ＴＣＲ／ＣＤ３ε陰性の修飾Ｔ細胞を単離または濃縮し、次いで、ＣＡＲをコードする第２の核酸を、濃縮された修飾Ｔ細胞に導入する。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、Ｔ細胞に同時に導入される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、１つのベクター上にある、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、別のベクター上にある、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを、前駆体Ｔ細胞に同時に導入することを含み、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ��〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣ��の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含み、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含み、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）を介して結合している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥＳと、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上��例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、第１の連結配列ＩＲＥ���と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＣＡＲをコードする第２の核酸であり、ＣＡＲが、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第２の核酸と、Ｐ２Ａをコードする第１の連結配列と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、２つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂがひとつに結合したものを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、一価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二重特異性）かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二価）かつ多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３
９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含み、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター��を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含み、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列、例えば、ＩＲＥＳや���Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列を介して結合している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーな���の可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６
〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ｃＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ｃＴＣＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含み、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含み、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列、例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列を介して結合している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞���例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１
７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含み、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、異なるプロモーター（例えば、ＥＦ１−α及びＰＧＫ）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第１のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第２のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、第２のプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１のプロモーター（例えば、ＰＧＫ）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含み、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通��メイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１の核酸と第２の核酸とが、同じプロモーター（例えば、ＥＦ１−α）に作動可能に連結しており、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列、例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列を介して結合している。したがって、いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）を生成する方法であって、ベクターが、上流から下流に向かって、プロモーター（例えば、ＥＦ１−α）と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸であり、ＴＡ��様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、第２の核酸と、第１の連結配列（例えば、ＩＲＥＳや、Ｐ２ＡまたはＴ２Ａなどの自己切断性２Ａペプチドをコードする核酸配列）と、任意選択の第２の連結配列（例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーなどの可動性リンカーをコードする核酸配列）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸とを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４
、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  ��ｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣ様キメラ受容体を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と配合することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する有効量の修飾Ｔ細胞、または、Ｎｅｆタンパク質を発現する修飾Ｔ細胞と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、有効量の医薬製剤を、個体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、個体は、がんを有する。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【０１５６】
Ｔ細胞源、細胞の調製及び培養
Ｔ細胞（例えば、前駆体Ｔ細胞）の増大及び遺伝子修飾の前に、Ｔ細胞源が個体から得られる。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含むいくつかの源から得ることができる。いくつかの実施形態では、当技術分野で入手可能な任意の数のＴ細胞株が使用され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、当業者に公知の任意の数の技術、例えばＦＩＣＯＬＬ（商標）分離を使用して対象から収集される血液単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液由来の細胞が、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞を含むリンパ球、他の有核白血球細胞、赤血球細胞、及び血小板を含む。いくつかの実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、細胞をその後の処理ステップのために適切なバッファーまたは培地中に置いてもよい。いくつかの実施形態では、細胞は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、洗浄液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠いてもよく、または全てではなくとも多くの二価カチオンを欠いてもよい。この場合もやはり、驚くべきことに、カルシウムの非存在下での初期活性化ステップが、活性化の拡大をもたらす。当業者であれば容易に理解するであろうが、洗浄ステップは、当業者に公知の方法により、例えば、半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）をメーカーの説明に従って使用することにより、達成され得る。洗浄後、細胞を、様々な生体適合性バッファー、例えば、Ｃａ２＋不含、Ｍｇ２＋不含ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または他の食塩水溶液（バッファーの有無にかかわらない）などに再懸濁してもよい。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁してもよい。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、臍帯血バンク、末梢血バンクから提供されるか、または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、多分化性幹細胞及び多能性幹細胞、もしくはヒト胚性幹細胞に由来する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞株に由来する。いくつかの実施形態におけるＴ細胞は、異種源から、例えばマウス、ラット、非ヒト霊長類、及びブタから得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ヒト細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、初代細胞、例えば、対象から直接単離されたもの及び／または対象から単離され凍結されたものである。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞の１つ以上のサブセット、例えば全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びそれらの亜集団、例えば機能、活性化状態、成熟度、分化能、増大、再循環、局在化、及び／または持続の能力、抗原特異性、抗原受容体のタイプ、特定の器官もしくは区画における存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、及び／または分化度によって定義されるものを含む。処置される対象に関して、細胞は、同種及び／または自家であり得る。場合により、Ｔ細胞は、１体以上の意図されるレシピエントに関して同種である。場合により、Ｔ細胞は移植に好適であり、例えば、レシピエントにおいてＧｖＨＤを誘導することがない。
【０１５８】
Ｔ細胞及び／またはＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプ及び亜集団には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞及びそれらのサブタイプ、例えば幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または高分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する及び適応型の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えばＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、及びデルタ／ガンマＴ細胞がある。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球細胞を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または向流遠心溶出によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞など、Ｔ細胞の特定の亜集団は、正の選択または負の選択の技術によってさらに単離され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の正の選択に十分な時間にわたる、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔとのインキュベーションによって単離される。いくつかの実施形態では、この時間は、約３０分間である。さらなる一実施形態では、この時間は、３０分間〜３６時間以上の範囲及びこの間の全ての整数値である。さらなる一実施形態では、この時間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。いくつかの実施形態では、この時間は、１０〜２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、２４時間である。白血病患者からＴ細胞を単離する場合、２４時間などのより長いインキュベーション時間により、細胞収率が高まり得る。より長いインキュベーション時間は、他の細胞型と比較してわずかなＴ細胞しか存在しない任意の状況下で、例えば、腫瘍組織または免疫低下個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する際に、Ｔ細胞を単離するために使用され得る。さらに、より長いインキュベーション時間の使用により、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率が高まり得る。したがって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単に短縮もしくは延長すること、及び／またはビーズのＴ細胞に対する比を（本明細書にさらに記載されるように）増加もしくは減少させることにより、培養開始時またはプロセス中の他の時点で、Ｔ細胞の亜集団についての、またはこれに対しての、優先的な選択を行うことができる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることにより、培養開始時または他の所望の時点で、Ｔ細胞の亜集団についての、またはこれに対しての、優先的な選択を行うことができる。当業者であれば、複数ラウンドの選択を使用してもよいことを認識するであろう。いくつかの実施形態では、選択手順を行い、「選択されていない」細胞を活性化及び増大プロセスで使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞は、さらなるラウンドの選択に供してもよい。
【０１６０】
負の選択によるＴ細胞集団の濃縮は、負の選択を受ける細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて達成され得る。１つの方法は、負の選択を受ける細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する負磁気免疫接着（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ）またはフローサイトメトリーによる細胞選別及び／または選択である。例えば、負の選択によりＣＤ４＋細胞を濃縮するためには、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態では、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を濃縮するか、または正の選択をすることが望ましい場合がある。あるいは、特定の実施形態では、制御性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の同様の選択方法によって枯渇される。
【０１６１】
正の選択または負の選択によって所望の細胞集団を単離するには、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変化させてもよい。特定の実施形態では、細胞とビーズの接触が最大になることを確実にするために、ビーズ及び細胞を一緒に混合する体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、細胞２０億個／ｍＬの濃度が使用される。一実施形態では、細胞１０億個／ｍＬの濃度が使用される。さらなる一実施形態では、細胞１億個超／ｍＬが使用される。さらなる一実施形態では、細胞１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万個／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、細胞１億２５００万または１億５０００万個／ｍＬの濃度が使用される。高濃度の使用により、細胞収率の増加、細胞活性化、及び細胞増大がもたらされ得る。さらに、高い細胞濃度の使用により、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの捕捉が、より効率的になる。かかる細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、取得することが望ましいであろう。例えば、高濃度の細胞の使用により、通常はＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞の選択がより効率的になる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、より低い濃度の細胞を使用することが望ましい場合がある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を著しく希釈することにより、粒子と細胞との間の相互作用が最小限に抑えられる。これにより、粒子に結合する所望の抗原を多量に発現する細胞が選択される。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、希釈濃度で、ＣＤ８＋Ｔ細胞よりも高いレベルのＣＤ２８を発現し、より効率的に捕捉される。いくつかの実施形態では、使用される細胞濃度は５×１０６／ｍＬである。いくつかの実施形態では、使用される濃度は、約１×１０５／ｍＬ〜１×１０６／ｍＬ、及びこの間の任意の整数値であり得る。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、細胞は、回転子上で、２〜１０℃または室温のいずれかで、様々な速度で様々な長さの時間にわたってインキュベートされ得る。
【０１６４】
刺激用のＴ細胞は、洗浄ステップ後に凍結することもできる。理論に束縛されることを望むものではないが、凍結ステップ及びその後の解凍ステップは、細胞集団における顆粒球、及びある程度の単球を除去することによって、より均一な生成物をもたらす。血漿及び血小板を除去する洗浄ステップ後、細胞を凍結溶液中に懸濁してもよい。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で公知であり、この状況において有用であるが、１つの方法は、２０％  ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または１０％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％  ＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％  Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％  ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン、及び７．５％  ＤＭＳＯを含む培養培地、または例えば、Ｈｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の好適な細胞凍結培地の使用を伴い、その後、細胞は、１℃／分の速度で−８０℃になるまで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵される。他の制御凍結方法、ならびに−２０℃でまたは液体窒素中での即時の非制御凍結が使用され得る。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、凍結保存細胞を本明細書に記載されるように解凍及び洗浄し、室温で１時間静置した後、活性化させる。
【０１６６】
本願では、本明細書に記載される細胞の増大が必要とされ得る前の時点での対象からの血液サンプルまたはアフェレーシス産物の収集も企図される。したがって、増大させる細胞の源が必要な任意の時点で収集され、Ｔ細胞などの所望の細胞が単離され、本明細書に記載される疾患または状態のようなＴ細胞療法が有効となる任意の数の疾患または状態のためのＴ細胞療法において後に使用するために凍結され得る。一実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシスは、概して健康な対象から採取される。特定の実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシスは、疾患を発症するリスクがあるが疾患をまだ発症していない概して健康な対象から採取され、目的の細胞が単離され、後に使用するために凍結される。特定の実施形態では、Ｔ細胞を増大させ、凍結し、後に使用してもよい。特定の実施形態では、サンプルは、本明細書に記載される特定の疾患の診断直後、しかし任意の処置の前に、患者から収集される。さらなる一実施形態では、細胞は、任意の数の関連する処置様式の前に、対象由来の血液サンプルまたはアフェレーシスから単離され、この処置様式は、薬剤、例えば、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート、及びＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤（ｉｍｍｕｎｏａｂｌａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、及び照射法での処置を含むが、これらに限定されない。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファターゼのカルシニューリンを阻害するか（シクロスポリン及びＦＫ５０６）、または成長因子によって誘導されるシグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する（ラパマイシン）（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：８０７−８１５，１９９１、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ  ７３：３１６−３２１，１９９１、Ｂｉｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３−７７３，１９９３）。さらなる一実施形態では、細胞は、患者のために単離され、骨髄または幹細胞移植や、フルダラビン、外部ビーム照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドなどの化学療法剤、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体のいずれかを使用したＴ細胞除去療法と併せて（例えば、その前に、それと同時に、またはその後に）、後に使用するために凍結される。別の実施形態では、細胞は、先に単離され、Ｂ細胞除去療法、例えばＣＤ２０と反応する薬剤、例えばＲｉｔｕｘａｎなどに続いて、後に処置で使用するために凍結され得る。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、処置後に患者から直接得られる。この点について、特定のがん治療、特に免疫系を損傷する薬物での治療の後には、治療直後、患者が通常治療から回復する期間中、得られたＴ細胞の質が最適であるか、またはｅｘ  ｖｉｖｏで増大するそれらの能力が向上している場合があることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を使用したｅｘ  ｖｉｖｏ操作後、これらの細胞は、向上した生着及びｉｎ  ｖｉｖｏでの増大に好ましい状態にあり得る。したがって、本発明においては、Ｔ細胞、樹状細胞、または他の造血系細胞を含む血液細胞を、この回復期中に収集することが企図される。さらに、特定の実施形態では、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの動員）及びコンディショニングレジメンを使用して、特に治療後の規定された期間中に、対象において特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／または増大が優先される状態を作り出すことができる。具体的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び他の免疫系細胞が挙げられる。
【０１６８】
Ｔ細胞の活性化及び増大
いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子工学操作の前に、またはそれに関連して、インキュベート及び／または培養される。インキュベーションステップは、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）、刺激、活性化、及び／または増殖を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下でインキュベートされる。そのような条件としては、集団内の細胞の増殖、増大、活性化、及び／または生存を誘導する、抗原曝露を模倣する、及び／または遺伝子工学操作された抗原受容体の導入のような遺伝子工学操作のために細胞をプライミングするように設計されたものが挙げられる。この条件は、特定の培地、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、薬剤、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、及び／または刺激因子、例えばサイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、及び細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの１つ以上を含み得る。
【０１６９】
本明細書に記載されるＮｅｆ（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）によるＴ細胞の遺伝子修飾の前か後かを問わず、Ｔ細胞は、概して、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載されている方法を使用して、活性化及び増大させることができる。
【０１７０】
一般に、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが結合した表面との接触によって増大され得る。特に、Ｔ細胞集団は、本明細書に記載されるように、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合性断片、または表面上に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によって、またはカルシウムイオノフォアと併せたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させてよい。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、当技術分野で一般に知られる他の方法として使用され得る（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８、Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９、Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物に、非分裂性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などのフィーダー細胞を（例えば、結果として生じる細胞集団が、増大させようとする初期集団内の各Ｔリンパ球に対して少なくとも約５、１０、２０、または４０以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含むように）添加し、培養物を（例えば、Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な時間にわたって）インキュベートすることにより、増大される。いくつかの態様において、非分裂性フィーダー細胞は、ガンマ線を照射したＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を防止するために、約３０００〜３６００ラドの範囲のガンマ線を照射される。いくつかの態様において、フィーダー細胞は、Ｔ細胞集団の添加前に培養培地に添加される。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコールによって提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中に存在するか、または表面に結合していてもよい。表面に結合している場合、薬剤は、同じ表面に結合しているか（すなわち、「シス」構成）、または別々の表面に結合していてもよい（すなわち、「トランス」構成）。あるいは、一方の薬剤が表面に結合し、他方の薬剤が溶液中に存在してもよい。一実施形態では、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中に存在するか、または表面に結合している。特定の実施形態では、両方の薬剤が溶液中に存在し得る。別の実施形態では、薬剤は、可溶性形態であり得、表面、例えば、Ｆｃ受容体もしくは抗体を発現する細胞、または薬剤に結合する他の結合剤に架橋してもよい。この点について、例えば、本発明におけるＴ細胞の活性化及び増大での使用に企図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関する米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号及び同第２００６００３４８１０号を参照されたい。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、薬剤でコーティングされたビーズと合わせられ、その後、ビーズと細胞が分離され、次いで、細胞が培養される。代替的な一実施形態では、培養前に、薬剤でコーティングされたビーズと細胞は分離されず、一緒に培養される。さらなる一実施形態では、ビーズ及び細胞は、まず、磁力などの力を加えることによって濃縮され、これが細胞表面マーカーのライゲーションの増加をもたらし、それにより細胞刺激を誘導する。
【０１７４】
一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３×２８ビーズ）をＴ細胞と接触させることによってライゲーションされ得る。一実施形態では、細胞（例えば、１０４〜１０９個のＴ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズ１：１の比率）が、バッファー、好ましくはＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせられる。この場合もやはり、当業者であれば、任意の細胞濃度が使用され得ることを容易に理解することができる。例えば、標的細胞がサンプル中で非常に稀であり、サンプルの０．０１％のみを構成する場合もあれば、またはサンプル全体（すなわち、１００％）が目的の標的細胞を含む場合もある。したがって、任意の細胞数は、本発明の文脈内である。特定の実施形態では、細胞と粒子の接触が最大になることを確実にするために、粒子及び細胞を一緒に混合する体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、細胞約２０億個／ｍＬの濃度が使用される。別の実施形態では、細胞１億個超／ｍＬが使用される。さらなる一実施形態では、細胞１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万個／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、細胞７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、細胞１億２５００万または１億５０００万個／ｍＬの濃度が使用される。高濃度の使用により、細胞収率の増加、細胞活性化、及び細胞増大がもたらされ得る。さらに、高い細胞濃度の使用により、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の捕捉が、より効率的になる。特定の実施形態では、かかる細胞集団は、治療的価値を有する可能性があり、取得することが望ましいであろう。例えば、高濃度の細胞の使用により、通常はＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞の選択がより効率的になる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、混合物は、数時間（約３時間）〜約１４日間またはこの間の任意の整数値の時間にわたって培養され得る。別の実施形態では、混合物は、２１日間にわたって培養され得る。本発明の一実施形態では、ビーズ及びＴ細胞は、約８日間にわたって一緒に培養される。別の実施形態では、ビーズ及びＴ細胞は、２〜３日間にわたって一緒に培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日間以上になり得るように、いくつかの刺激サイクルが所望される場合もある。Ｔ細胞培養に適切な条件は、血清（例えば、ウシまたはヒトの胎児血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ、及びＴＮＦ−α、または当業者に公知の細胞成長のための任意の他の添加物を含む、増殖及び生存に必要な因子を含み得る適切な培地（例えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０またはＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞成長のための他の添加物としては、界面活性剤、プラスマネート、ならびにＮ−アセチル−システイン及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられるが、これらに限定されない。培地には、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びビタミンが添加され、無血清であるか、あるいは適切な量の血清（もしくは血漿）または規定された一組のホルモン、及び／またはＴ細胞の成長及び増大に十分な量のサイトカイン（複数可）が補われた、ＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５、及びＸ−Ｖｉｖｏ  ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒが含まれ得る。抗生物質、例えば、ペニシリン及びストレプトマイシンは、実験培養物にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長を支えるのに必要な条件、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）の下で維持される。異なる刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を呈し得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーシス末梢血単核細胞産物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８）を超えるヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体の刺激によるＴ細胞のＥｘ  ｖｉｖｏ増大を行うと、約８〜９日目前には、主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団が産生されるが、約８〜９日目以降、Ｔ細胞集団は、次第により多くのＴＣ細胞集団を含む。したがって、処置の目的に応じて、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが有利であり得る。同様に、抗原特異的なＴＣ細胞サブセットが単離された場合、このサブセットをより大きな程度に増大させることが有益であり得る。
【０１７６】
さらに、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーが、細胞増大プロセスの過程中に著しく変化するが、主に、再現可能に変化する。したがって、かかる再現性により、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物を調整する能力が有効になる。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、修飾された細胞、または工学操作される細胞の表面における、１つ以上のマーカーの発現を評価することを含む。一実施形態では、本発明の方法は、ＴＣＲまたはＣＤ３εの表面発現を、例えば、フローサイトメトリーなどの親和性に基づく検出方法により、評価することを含む。いくつかの態様において、本方法が抗原または他のマーカーの表面発現を明らかにする場合、抗原または他のマーカーをコードする遺伝子は、例えば、本明細書に記載される方法を使用して、破壊されるか、または発現が別様に抑圧される。
【０１７８】
内在性座位の遺伝子編集
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内在性座位、例えば内在性ＴＣＲ座位（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ）は、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現するようにＴ細胞を修飾する前に、またはそれと同時に、遺伝子編集方法によって修飾される。いくつかの実施形態では、内在性座位の修飾は、遺伝子の破壊、例えば、ノックアウト、挿入、ミスセンス、もしくは両アレルフレームシフト変異などのフレームシフト変異、遺伝子の全部もしくは一部、例えば、１つ以上のエクソンもしくはその一部分の欠失、及び／またはノックインをもたらすことによって行われる。いくつかの実施形態では、かかる座位修飾は、ＤＮＡ結合タンパク質もしくはＤＮＡ結合核酸などのＤＮＡ標的化分子、またはそれを含む複合体、化合物、もしくは組成物で、遺伝子に特異的に結合またはハイブリダイズするものを使用して行われる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化分子は、ＤＮＡ結合ドメイン、例えば、ジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）ＤＮＡ結合ドメイン、転写活性化因子様タンパク質（ＴＡＬ）もしくはＴＡＬエフェクター（ＴＡＬＥ）ＤＮＡ結合ドメイン、クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ）ＤＮＡ結合ドメイン、またはメガヌクレアーゼのＤＮＡ結合ドメインを含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、内在性座位（例えば、ＴＣＲ）の修飾は、ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）による破壊、または別のＲＮＡガイドエフェクター分子による他の形態の抑圧など、１つ以上のＤＮＡ結合核酸を使用して行われる。例えば、いくつかの実施形態では、抑圧は、クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ）及びＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）タンパク質を使用して行われる。Ｓａｎｄｅｒ  ａｎｄ  Ｊｏｕｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２（４）：３４７−３５５を参照されたい。
【０１８０】
一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステム」とは、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現またはその活性の指向に関与する転写物及び他のエレメントを集合的に意味し、Ｃａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えばｔｒａｃｒＲＮＡもしくは活性のある部分的なｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内在性ＣＲＩＳＰＲシステムとの関連における「ダイレクトリピート」及びｔｒａｃｒＲＮＡによりプロセシングされた部分的なダイレクトリピートを包含する）、ガイド配列（内在性ＣＲＩＳＰＲシステムとの関連において「スペーサー」ともいわれる）、及び／またはＣＲＩＳＰＲ座位の他の配列及び転写物を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムは、ＤＮＡに配列特異的に結合する非コードＲＮＡ分子（ガイド）ＲＮＡ、及びヌクレアーゼ機能性（例えば、２つのヌクレアーゼドメイン）を有するＣａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９）を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムの１つ以上のエレメントは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型のＣＲＩＳＰＲシステムに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムの１つ以上のエレメントは、内在性ＣＲＩＳＰＲシステムを含む特定の生物、例えばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来する。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、Ｃａｓヌクレアーゼ及びｇＲＮＡ（標的配列に特異的なｃｒＲＮＡと固定されたｔｒａｃｒＲＮＡとの融合物を含む）が、細胞に導入される。一般に、ｇＲＮＡの５’末端の標的部位は、相補的塩基ペアリングを使用して、Ｃａｓヌクレアーゼの標的を、標的部位、例えば遺伝子とする。いくつかの実施形態では、標的部位は、典型的にはＮＧＧまたはＮＡＧなどのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列のすぐ５’側のその位置に基づいて選択される。この点について、ｇＲＮＡは、ガイドＲＮＡの最初の２０ヌクレオチドを標的ＤＮＡ配列に対応するように修飾することにより、所望の配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは、配列番号２３の核酸配列を含む。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムは、標的部位のＤＳＢを誘導する。他の実施形態では、「ニッカーゼ」とみなされるＣａｓ９バリアントが、一本鎖を標的部位でニッキングするために使用される。いくつかの態様において、ニックが同時に導入されると５’オーバーハングが導入されるように、配列を標的とする異なるｇＲＮＡのペアによって各々が指向される、ペアリングしたニッカーゼが、例えば、特異性を向上させるために使用される。他の実施形態では、触媒的に不活性なＣａｓ９を、転写リプレッサーまたは活性化因子などの異種エフェクタードメインに融合させ、遺伝子発現をもたらす。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内在性座位（例えば、内在性ＴＣＲ）は、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現するようにＴ細胞を修飾する前に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムによって修飾される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内在性座位（例えば、内在性ＴＣＲ）は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現するようにＴ細胞を修飾するのと同時に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムによって修飾される。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする核酸（複数可）とは、同じベクター上にある。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムをコードする核酸（複数可）と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする核酸（複数可）とは、異なるベクター上にある。
【０１８６】
修飾Ｔ細胞の単離及び濃縮
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、第１の核酸及び／または第２の核酸を含むＴ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞から、ＣＤ３ε／γ／δ陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞から、内在性ＴＣＲα／β陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞から、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ２８＋Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の単離または濃縮は、本明細書に記載される方法の任意の組み合わせを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、単離方法は、細胞における、表面マーカー、例えば表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸などの１つ以上の特異的分子の非存在または存在に基づく、異なる細胞型の分離を含む。いくつかの実施形態では、選択マーカーは、Ｎｅｆ（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ６９、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはＭＨＣである。いくつかの実施形態では、かかるマーカーに基づく任意の公知の分離方法が使用され得る。いくつかの実施形態では、分離は、親和性または免疫親和性に基づく分離である。例えば、いくつかの態様における分離には、１つ以上のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの、細胞による発現または発現レベルに基づく、細胞及び細胞集団の分離が含まれ、これは例えば、かかるマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーションと、一般的にその後に洗浄ステップを行い、抗体または結合パートナーに結合した細胞を、抗体または結合パートナーに結合していない細胞から分離することによるものである。
【０１８８】
かかる分離ステップは、試薬に結合した細胞がさらなる使用のために保持される正の選択、及び／または抗体もしくは結合パートナーに結合していない細胞が保持される負の選択に基づいてもよい。いくつかの例においては、両画分が、さらなる使用のために保持される。いくつかの態様において、負の選択は、所望の集団以外の細胞によって発現されるマーカーに基づいて分離が最も良好に行われるように、不均一集団において細胞型を特異的に同定する抗体が利用できない場合に特に有用であり得る。
【０１８９】
分離は、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現する細胞の１００％の濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、特定のタイプの細胞、例えばマーカーを発現する細胞の、正の選択または濃縮は、かかる細胞の数または百分率の増加を意味するが、マーカーを発現しない細胞の完全な非存在をもたらす必要はない。同様に、特定のタイプの細胞、例えばマーカーを発現する細胞の、負の選択、除去、または枯渇は、かかる細胞の数または百分率の減少を意味するが、かかる細胞全ての完全な除去をもたらす必要はない。
【０１９０】
いくつかの例においては、１つのステップで正の選択または負の選択を受けた画分が、別の分離ステップ、例えば後続の正の選択または負の選択に供されるような、複数ラウンドの分離ステップが行われる。いくつかの例においては、単一の分離ステップにより、例えば、各々が負の選択の標的になるマーカーに特異的な複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることにより、同時に複数のマーカーを発現する細胞を枯渇させることができる。同様に、様々な細胞型で発現される複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることにより、複数の細胞型に同時に正の選択を行うことができる。
【０１９１】
例えば、いくつかの態様において、Ｔ細胞の特定の亜集団、例えば、１つ以上の表面マーカーが陽性であるか、またはそれらを高レベルで発現する細胞、例えば、ＣＤ２８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及び／またはＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞が、正の選択または負の選択の技術によって単離される。
【０１９２】
例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋Ｔ細胞には、ＣＤ３／ＣＤ２８コンジュゲート磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｘｐａｎｄｅｒ）を使用して正の選択を行うことができる。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、単離は、正の選択による特定の細胞集団の濃縮、または負の選択による特定の細胞集団の枯渇によって行われる。いくつかの実施形態では、正の選択または負の選択は、それぞれ、正の選択または負の選択を受ける細胞において発現される１つ以上の表面マーカー（マーカー＋）または比較的高いレベルで発現される表面マーカー（マーカーｈｉｇｈ）に特異的に結合する、１つ以上の抗体または他の結合剤と、細胞をインキュベートすることによって達成される。
【０１９４】
いくつかの態様において、分離しようとする細胞のサンプルまたは組成物は、小さく帯磁性または磁気応答性のある材料、例えば磁気応答性粒子または微粒子、例えば常磁性ビーズ（例えば、ＤｙｎａｌｂｅａｄｓまたはＭＡＣＳビーズなど）と共にインキュベートされる。磁気応答性材料、例えば粒子は、一般に、分離することが所望される、例えば、負の選択または正の選択を行うことが所望される細胞、複数の細胞、または細胞集団に存在する分子、例えば表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー、例えば抗体に、直接的または間接的に結合する。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、磁性粒子またはビーズは、抗体または他の結合パートナーなどの特定の結合メンバーに結合した磁気応答性材料を含む。磁気分離法で使用される磁気応答性材料は、多くのものが周知である。好適な磁性粒子としては、参照により本明細書に援用される、Ｍｏｌｄａｙの米国特許第４，４５２，７７３号、及び欧州特許明細書ＥＰ４５２３４２Ｂに記載されているものが挙げられる。Ｏｗｅｎの米国特許第４，７９５，６９８号、及びＬｉｂｅｒｔｉらの米国特許第５，２００，０８４号に記載されているようなコロイドサイズの粒子は、他の例である。
【０１９６】
インキュベーションは一般に、磁性粒子またはビーズに結合した、抗体もしくは結合パートナー、またはかかる抗体もしくは結合パートナーに特異的に結合する分子、例えば二次抗体または他の試薬が、サンプル中の細胞に存在する場合、細胞表面分子に特異的に結合する条件下で行われる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、サンプルが磁場に置かれ、磁気応答性または帯磁性のある粒子が結合した細胞が磁石に引きつけられ、未標識の細胞から分離される。正の選択の場合、磁石に引き付けられた細胞が保持され、負の選択の場合、引きつけられない細胞（未標識の細胞）が保持される。いくつかの態様において、正の選択と負の選択との組み合わせが同じ選択ステップ中に行われ、このステップでは、陽性及び陰性の画分が保持され、さらに処理されるか、またはさらなる分離ステップに供される。
【０１９８】
特定の実施形態では、磁気応答性粒子は、一次抗体もしくは他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンでコーティングされる。特定の実施形態では、磁性粒子は、１つ以上のマーカーに特異的な一次抗体のコーティングを介して、細胞に結合する。特定の実施形態では、ビーズではなく細胞が一次抗体または結合パートナーで標識され、次いで、細胞型特異的な二次抗体または他の結合パートナー（例えば、ストレプトアビジン）でコーティングされた磁性粒子が添加される。特定の実施形態では、ストレプトアビジンでコーティングされた磁性粒子は、ビオチン化された一次抗体または二次抗体と併せて使用される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、磁気応答性粒子は、後にインキュベート、培養及び／または工学操作される細胞に結合したままにされる。いくつかの態様において、粒子は、患者に投与される細胞に結合したままにされる。いくつかの実施形態では、帯磁性または磁気応答性のある粒子は、細胞から除去される。帯磁性粒子を細胞から除去する方法は公知であり、例えば、競合する非標識抗体、帯磁性粒子、または切断可能リンカーにコンジュゲートした抗体などの使用を含む。いくつかの実施形態では、帯磁性粒子には生分解性がある。
【０２００】
いくつかの実施形態では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆ．）による。磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）システムでは、磁化粒子が結合した細胞の高純度選択が可能である。特定の実施形態では、ＭＡＣＳは、外部磁場の印加後に非標的と標的種とが連続的に溶出されるモードで動作する。すなわち、磁化粒子に結合した細胞は固定されるが、未結合種は溶出される。次いで、この第１の溶出ステップが完了した後、磁場に捕捉されて溶出が阻止された種を、何らかの様式で遊離させて、それらを溶出させ回収できるようにする。特定の実施形態では、非標的細胞は、標識され、不均一な細胞集団から枯渇される。
【０２０１】
特定の実施形態では、単離または分離は、本発明の方法の単離、細胞調製、分離、処理、インキュベーション、培養、及び／または配合の各ステップのうちの１つ以上を行うシステム、デバイス、または装置を使用して行われる。いくつかの態様において、本システムは、例えば、エラー、使用者による取り扱い、及び／または汚染を最小限に抑えるために、閉鎖環境または無菌環境においてこれらのステップの各々を行うために使用される。一例において、本システムは、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０７２００３号、またはＵＳ２０１１０００３３８０Ａ１に記載されるようなシステムである。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、本システムまたは装置は、単離、処理、工学操作、及び配合の各ステップのうちの１つ以上、例えば全てを、統合型もしくは自己完結型のシステム、及び／または自動もしくはプログラム可能な様式で行う。いくつかの態様において、本システムまたは装置は、本システムまたは装置と通信するコンピュータ及び／またはコンピュータプログラムを含み、これにより、使用者は、処理、単離、工学操作、及び配合の各ステップをプログラムし、制御し、その結果を評価し、及び／またはその様々な態様を調節することができる。
【０２０３】
いくつかの態様において、分離及び／または他のステップは、例えば、閉鎖型かつ無菌のシステムにおける臨床規模レベルでの細胞の自動分離のために、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行われる。構成要素には、統合型マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプ、及び様々なピンチ弁が含まれ得る。統合型コンピュータは、いくつかの態様において、機器の全ての構成要素を制御し、反復する手順を標準化された順序で行うようシステムに指示する。磁気分離ユニットは、いくつかの態様において、可動永久磁石及び選択カラムのホルダーを含む。蠕動ポンプは、チューブセット全体にわたる流速を制御し、ピンチ弁と共に、システムを通るバッファーの流量の制御、及び細胞の継続的な懸濁を確実にする。
【０２０４】
ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステムは、いくつかの態様において、無菌で非発熱性の溶液において供給される、抗体に結合した帯磁性粒子を使用する。いくつかの実施形態では、細胞を磁性粒子で標識した後、細胞を洗浄して、余剰の粒子を除去する。次いで、細胞調製バッグをチューブセットに接続し、これを次に、バッファーを含むバッグ、及び細胞収集バッグに接続する。チューブセットは、プレカラム及び分離カラムを含む予め組み立てられた無菌チューブからなり、これらは使い捨て専用である。分離プログラムの開始後、本システムは、細胞サンプルを分離カラム上に自動的に加える。標識された細胞はカラム内に保持されるが、未標識の細胞は一連の洗浄ステップによって除去される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で使用する細胞集団は、標識されず、カラム内に保持されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で使用する細胞集団は、標識され、カラム内に保持される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で使用する細胞集団は、磁場の除去後にカラムから溶出し、細胞収集バッグ内に収集される。
【０２０５】
特定の実施形態では、分離及び／または他のステップは、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行われる。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムは、いくつかの態様において、細胞の自動洗浄及び遠心分離による分画を可能にする細胞処理ユニットを備える。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムはまた、ソース細胞産物の肉眼的な層を識別することによって最適な細胞分画エンドポイントを決定する、内蔵カメラ及び画像認識ソフトウェアを含んでもよい。例えば、末梢血は、赤血球、白血球細胞、及び血漿層に自動的に分離される。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムはまた、例えば、細胞の分化及び増大、抗原負荷、ならびに長期細胞培養などの細胞培養プロトコールを遂行する、統合された細胞培養チャンバを含んでもよい。注入ポートにより、培地の滅菌除去及び補充を行うことができ、一体型顕微鏡を使用することで、細胞をモニタリングすることができる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、フローサイトメトリーによって収集及び濃縮（または枯渇）される。フローサイトメトリーでは、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞が、流体の流れの中を運ばれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、分取スケール（ＦＡＣＳ）選別によって収集及び濃縮（または枯渇）される。特定の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップをＦＡＣＳベースの検出システムと組み合わせて使用することにより（例えば、ＷＯ２０１０／０３３１４０、Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ１０，１５６７−１５７３、及びＧｏｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ  Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．１（５）：３５５−３７６を参照されたい）、収集及び濃縮（または枯渇）される。いずれの場合にも、細胞を複数のマーカーで標識して、明確に定義されたＴ細胞サブセットを高純度で単離できるようにしてもよい。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、抗体または結合パートナーは、正の選択及び／または負の選択のための分離を容易にするために、１つ以上の検出可能なマーカーで標識される。例えば、分離は、蛍光標識抗体への結合に基づき得る。いくつかの例においては、１つ以上の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、例えば、分取スケール（ＦＡＣＳ）を含む蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、及び／または例えばフローサイトメトリー検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップにより、流体の流れの中で行われる。かかる方法により、複数のマーカーに基づく正の選択及び負の選択を同時に行うことができる。
【０２０８】
単離及び濃縮の方法については、「実施例」セクションも参照されたい。
【０２０９】
ＩＶ．  Ｎｅｆタンパク質
本明細書に記載される方法は、Ｎｅｆタンパク質の発現を伴う。また、本明細書に記載される修飾Ｔ細胞を作製するために特に有用な、天然に存在しない変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）も提供される。
【０２１０】
野生型Ｎｅｆ（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ）は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２）ならびにサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含む霊長類レンチウイルスによってコードされる、小さな２７〜３５ｋＤａのミリストイル化タンパク質である。Ｎｅｆは、主に細胞質に局在化するが、形質膜（ＰＭ）にも部分的に動員される。Ｎｅｆは、宿主の細胞機構を操作し、したがって病原体の感染、生存、または複製を可能にし得る病原性因子として機能する。
【０２１１】
Ｎｅｆは、全ての霊長類レンチウイルスにおいて高度に保存されている。ＨＩＶ−２及びＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質は、ＨＩＶ−１  Ｎｅｆよりも１０〜６０アミノ酸長い。Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｎｅｆタンパク質は、次のドメインを含む：ミリストイル化部位（ＣＤ４下方制御、ＭＨＣ  Ｉ下方制御、及びシグナル伝達分子との会合に関与し、Ｎｅｆの内部形質膜標的化及びビリオンの組み込み、ひいては感染力に必要とされる）、Ｎ末端αヘリックス（ＭＨＣ  Ｉ下方制御及びタンパク質キナーゼ動員に関与する）、チロシンベースのＡＰ動員（ＨＩＶ−２／ＳＩＶ  Ｎｅｆ）、ＣＤ４結合部位（ＷＬ残基、ＣＤ４下方制御に関与する、ＨＩＶ−１  Ｎｅｆに特徴的）、酸性クラスター（ＭＨＣ  Ｉ下方制御、宿主ＰＡＣＳ１及びＰＡＣＳ２との相互作用に関与する）、プロリンベースのリピート（ＭＨＣ  Ｉ下方制御及びＳＨ３結合に関与する）、ＰＡＫ（ｐ２１活性化キナーゼ）結合ドメイン（シグナル伝達分子との会合及びＣＤ４下方制御に関与する）、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン（ＣＤ４下方制御に関与する）、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン（ＣＤ４下方制御に関与する、ＨＩＶ−１  Ｎｅｆ）、ならびにＶ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン（ＣＤ４下方制御及びシグナル伝達分子との会合に関与する）。
【０２１２】
ＣＤ４は、５５ｋＤａでＩ型の内在性細胞表面糖タンパク質である。これは、ＭＨＣクラスＩＩ制限細胞、例えばヘルパー／インデューサーＴリンパ球及びマクロファージ／単球系列の細胞におけるＴ細胞受容体の成分である。これは、ＨＩＶ及びＳＩＶの主要な細胞受容体として機能する。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、主要なＨＩＶ−１サブタイプＣインド分離株から得られるか、またはそれに由来する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、完全長タンパク質をコードするインド分離株のＦ２アレルから発現される（ＨＩＶ  Ｆ２−Ｎｅｆ）。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、及びＰＡＫ結合ドメインのインフレーム欠失を有するインド分離株のＣ２アレルから発現される（ＨＩＶ  Ｃ２−Ｎｅｆ）。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＣＤ４結合部位のインフレーム欠失を有するインド分離株のＤ２アレルから発現される（ＨＩＶ  Ｄ２−Ｎｅｆ）。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位のうちの１つ以上を含むＮｅｆタンパク質などの変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、本願は、天然に存在しない変異体Ｎｅｆタンパク質、例えば、Ｔ細胞で発現した場合、外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、または工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体））を下方制御しない、天然に存在しない変異体Ｎｅｆタンパク質を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、野生型Ｎｅｆと比較して１つ以上の変異を含む天然に存在しない変異体Ｎｅｆタンパク質が提供され、この天然に存在しない変異体Ｎｅｆは、Ｔ細胞で発現した場合、外因性受容体の下方制御をもたらさないか、または野生型Ｎｅｆと比較して小さい下方制御をもたらす。Ｎｅｆタンパク質は、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のドメインまたはモチーフに、１つ以上の変異（例えば、天然に存在しない変異）を含み得る。
【０２１６】
例えば、いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメインに、１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン及びＰＡＫ結合ドメインに変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ならびにＶ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメインに変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ならびにＶ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメインに、１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメインならびにＶ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメインに、１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、ドメインの一部または全体を欠失させるトランケーションを含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上の変異（例えば、天然に存在しない変異）を、前述のドメイン／モチーフのいずれにも含まない。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、１つ以上の変異（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれかの数のアミノ酸残基の変異、例えばＡｌａへの変異）を、表１１に記載されるアミノ酸残基のいずれかに含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、１つ以上の変異（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のいずれかの数のアミノ酸残基の変異、例えばＡｌａへの変異）を、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａ���２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）に含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）における、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（野生型、または変異体、例えば、天然に存在しない変異体）の発現は、内在性ＴＣＲを下方調節する。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲの下方調節は、内在性ＴＣＲ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、及び／またはＣＤ３γの細胞表面発現を下方制御すること、及び／またはＴ細胞活性化もしくはＴ細胞増殖などのＴＣＲによるシグナル伝達に干渉すること（例えば、Ｌｃｋ及びＬＡＴなどの重要なＴＣＲ近位の機構の形質膜への輸送を統御する小胞輸送経路を調節することによる、及び／またはＴＣＲ近位のシグナル伝達機構の時空間協調に不可欠なＴＣＲ誘導性アクチンリモデリング事象を妨げることによる）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現するＴ細胞における内在性ＴＣＲ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、及び／またはＣＤ３γの細胞表面発現は、同じドナー源由来のＴ細胞のものと比較して、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。いくつかの実施形態では、内在性ＴＣＲを下方調節する（例えば、発現を下方制御する）変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆは、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａ��５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１４及び１８〜２２のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆ（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ４の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、ＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態���は、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御するが、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて最大で約３％（例えば最大で約２％または約１％）の差で、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）少なく、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を下方制御し、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞表面発現を下方制御する。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）における、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（野生型、または変異体、例えば、天然に存在しない変異体）の発現は、内在性ＣＤ３ζ発現もしくはＣＤ３ζによるシグナル伝達を変化させることはないか、あるいは、同じドナー源由来のＴ細胞のものと比較して、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、約５％もしくはそれ未満、内在性ＣＤ３ζ発現を下方制御し、及び／またはＣＤ３ζによるシグナル伝達を下方調節する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１４及び１８〜２２のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型Ｓ���Ｖ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。ＮｅｆがＣＤ３ζによるシグナル伝達に影響しない、または影響を最小限に抑えられることは、本発明において重要である。なぜなら、Ｎｅｆ発現は、内在性ＴＣＲを下方調節するが、同じ細胞に導入された外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体）、または例えばリガンド結合ドメインを含むキメラ受容体）のシグナル伝達に対する作用はほとんどまたは全く誘発しないように意図されるからである。Ｎｅｆ発現はまた、同じ細胞に導入された外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体）、またはリガンド結合ドメインを含むキメラ受容体）の発現に対する作用をほとんどまたは全く誘発しないことが所望される。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）における、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（野生型、または変異体、例えば、天然に存在しない変異体）の発現は、同じＴ細胞における外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体）、またはリガンド結合ドメインを含むキメラ受容体）を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質を発現する修飾Ｔ細胞における外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体）、またはリガンド結合ドメインを含むキメラ受容体）は、同じドナー源由来でＮｅｆを発現しないＴ細胞において外因性受容体が発現する場合と比較して、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。いくつかの実施形態では、外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体）、またはリガンド結合ドメインを含むキメラ受容体）の細胞表面発現及び／またはシグナル伝達は、修飾Ｔ細胞が本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質を発現するとき、影響を受けないか、または最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、もしくは約５％下方制御される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜１４及び１８〜２２のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）における、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（野生型、または変異体、例えば、天然に存在しない変異体）の発現は、内在性ＭＨＣ  Ｉ、ＣＤ４、及び／またはＣＤ２８を下方調節する。例えば、内在性ＭＨＣ  Ｉ、ＣＤ４、及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を（例えば、エンドサイトーシス及び分解により）下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質を発現するＴ細胞における内在性ＭＨＣ  Ｉ、ＣＤ４、及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現は、同じドナー源由来のＴ細胞のものと比較して、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御される。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）における、本明細書に記載される（例えば、ＣＤ４またはＣＤ２８の下方制御に関与する変異したドメイン／モチーフを有する）変異体（例えば、天然に存在しない変異体）Ｎｅｆタンパク質の発現は、内在性ＴＣＲ（及び／またはＭＨＣ  Ｉ）を下方調節すると共に、同じドナー源由来のＴ細胞において野生型Ｎｅｆタンパク質が発現する場合と比較して、内在性ＣＤ４またはＣＤ２８に対する下方調節作用が低減している（少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さい下方調節）。いくつかの実施形態では、内在性ＣＤ４／ＣＤ２８に対する下方調節作用は、ＣＤ４／ＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御を含む。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、内在性ＣＤ４を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、内在性ＣＤ２８を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、内在性ＣＤ４（及び／またはＣＤ２８）の細胞表面発現の下方制御は、変異体ＮｅｆがＴ細胞で発現した場合、同じドナー源由来のＴ細胞において野生型Ｎｅｆタンパク質が発現する場合と比較して、少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞における変異体Ｎｅｆの発現は、内在性ＴＣＲ（及び／またはＭＨＣ  Ｉ）の細胞表面発現を、同じドナー源由来のＴ細胞のものと比較して、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％下方制御するが、内在性ＣＤ４（及び／またはＣＤ２８）の細胞表面発現の下方制御は、同じドナー源由来のＴ細胞において野生型Ｎｅｆタンパク質が発現する場合と比較して、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％低減する。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて約３％以下（例えば約２％以下または約１％以下）の差で下方制御し（または、内在性ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（３％を含む、例えば少なくとも約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）大きく下方制御し）、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を、野生型Ｎｅｆによる下方制御と比べて少なくとも約３％（例えば少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％）小さく下方制御する。いくつかの���施形態では、変異体Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、小さいＣＤ４及び／またはＣＤ２８下方制御作用を有する変異体Ｎｅｆは、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異を含む、または前述のドメイン／モチーフのいずれにも１つ以上の変異を含まない、天然に存在しないＮｅｆタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれか（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、天然に存在しないＮｅｆタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、天然に存在しないＮｅｆタンパク質が提供される。
【０２２４】
また、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）のいずれかをコードする核酸（例えば、単離された核酸）も提供される。さらに、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）のいずれかをコードする核酸を含む、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター、細菌発現ベクター）が提供される。これらのベクターは、本明細書に記載されるベクターのいずれに配置してもよい。
【０２２５】
Ｖ．  機能的外因性受容体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をさらに発現する。機能的外因性受容体をコードする核酸は、前駆体Ｔ細胞に予め存在する場合があるか、または、Ｎｅｆタンパク質をコードする核酸と併せて（例えば、それと同時に）前駆体Ｔ細胞に導入される。機能的外因性受容体は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、工学操作されたＴＣＲ、例えば、共に抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ）を特異的に認識する、野生型ＴＣＲに由来するＶα及びＶβを含む、細胞外リガンド結合ドメインを含む、従来の工学操作されたＴＣＲ（例えば、「抗ＢＣＭＡ  ＴＣＲ」という、ＢＣＭＡまたはＢＣＭＡ／ＭＨＣ複合体を特異的に認識する工学操作されたＴＣＲ）であり、Ｖα、Ｖβ、またはその両方が、野生型ＴＣＲと比べて、１つ以上のＣＤＲに１つ以上の変異を含む。従来の工学操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞を、本明細書では「従来のＴＣＲ−Ｔ」という。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、ＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。キメラＴＣＲを発現するＴ細胞を、本明細書では「ｃＴＣＲ−Ｔ」という。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）に由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、ま��はＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の膜貫通部を含む膜貫通部、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じ（例えば、全てＣＤ４）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、またはＣＤ２８）を含む。ＴＡＣを発現するＴ細胞を、本明細書では「ＴＡＣ−Ｔ」という。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であり、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、ＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、ＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている（例えば、ＣＤ３ε）。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、ＣＤ３ε）であるが、第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）とは異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及��（ｅ）完全長の第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）を含み、第１及び第２のＴＣＲサブユニットはいずれも、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、いずれもＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１（例えば、ＴＣＲα）及び第２（例えば、ＣＤ３ε）のＴＣＲサブユニットは異なっている。ＴＡＣ様キメラ受容体を発現するＴ細胞を、本明細書では「ＴＡＣ様Ｔ」という。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、非ＴＣＲ受容体である。いくつかの実施形態では、非ＴＣＲ受容体は、（ａ）抗原（例えば、本明細書に記載される抗原のいずれか、例えばＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、受容体ドメインまたは抗体ベースの結合ドメイン、例えばｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、抗原結合性断片（以下、「抗抗原ＣＡＲ」、または「抗体ベースのＣＡＲ」、例えば、「抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ」という）、例えばｓｄＡｂ（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）またはｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ）を含む、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含む１つ以上の結合部分を含み（以下、「リガンド／受容体ベースのＣＡＲ」ともいう）、このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦ（ＢＣＭＡのリガンド）に由来する。ＣＡＲを発現するＴ細胞を、本明細書では「ＣＡＲ−Ｔ」という。ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦを含む１つ以上の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメインを含むＣＡＲは、以下、「ＢＣＭＡ−リガンドＣＡＲ」という。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。Ｆｃ結合ドメイン（例えば、ＦｃγＲ）を含む１つ以上の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメインを含むＣＡＲは、以下、「抗体結合Ｔ細胞受容体（ＡＣＴＲ）」ともいう。ＡＣＴＲを発現するＴ細胞を、本明細書では「ＡＣＴＲ−Ｔ」という。いくつかの実施形態では、Ｆｃ含有タンパク質をＡＣＴＲ−Ｔ細胞に投与するか、またはＡＣＴＲ−Ｔ細胞において同時発現させると、Ｆｃ含有タンパク質は、本明細書に記載される抗原に対するＡＣＴＲ発現Ｔ細胞の結合特異性をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｆｃ含有タンパク質は、Ｆｃ含有抗体（例えば、抗ＢＣＭＡ完全長抗体などの完全長抗体）、またはＦｃ融合タンパク質、例えば抗原結合性断片−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ−Ｆｃ融合タンパク質、または抗ＢＣＭＡ  ＨＣＡｂ）、Ｆｃ受容体／リガンド融合タンパク質（例えば、ＡＰＲＩＬ−Ｆｃ融合タンパク質）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ領域に融合したＴＣＲの可変領域を含むＦｃ融合タンパク質（「ＴＣＲ−Ｆｃ融合タンパク質」、例えば抗ＢＣＭＡ  ＴＣＲ−Ｆｃ融合タンパク質）である。ＡＣＴＲ／Ｆｃ含有タンパク質システムは、以下、「抗抗原ＡＣＴＲ」、例えば「抗ＢＣＭＡ  ＡＣＴＲ」という。
【０２２６】
また、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）のいずれかをコードする核酸（例えば、単離された核酸）が提供される。さらに、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））のいずれかをコードする核酸を含む、ベクター（例えば、レンチウイルスベクターなどのウイルスベクター）が提供される。
【０２２７】
抗原
本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞外リガンド結合ドメインは、標的細胞上の任意の抗原を特異的に認識し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、細胞表面分子である。いくつかの実施形態では、抗原は、特殊な病状に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして機能する。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単一の腫瘍抗原を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単一の腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、２つ以上の腫瘍抗原を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫（ＭＭ）などのＢ細胞悪性腫瘍に関連する。腫瘍は、免疫応答、特にＴ細胞性免疫応答の標的抗原として機能し得るいくつかのタンパク質を発現する。細胞外リガンド結合ドメインによって特異的に認識される抗原は、単一の疾患細胞上の抗原、または各々が疾患の一因となる異なる細胞で発現する抗原であってもよい。細胞外リガンド結合ドメインによって特異的に認識される抗原は、疾患に直接的または間接的に関与していてもよい。
【０２２８】
腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞性免疫応答を誘発できる腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。本発明の標的の抗原の選択は、処置されるがんの特定のタイプに依存する。例示的な腫瘍抗原としては、例えば、神経膠腫関連抗原、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ−１、ＭＮ−ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、Ｍ−ＣＳＦ、プロスターゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−ｌａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ならびにメソテリンが挙げられる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する１つ以上の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃の標的抗原として機能し得るいくつかのタンパク質を発現する。これらの分子は、黒色腫におけるＭＡＲＴ−１、チロシナーゼ、及びｇｐ１００、ならびに前立腺癌における前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）などの組織特異的抗原を含むが、これらに限定されない。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ−２などの形質転換関連分子の群に属する。さらに別の群の標的抗原は、癌胎児抗原（ＣＥＡ）などの癌胎児性抗原である。Ｂ細胞リンパ腫では、腫瘍特異的イディオタイプ免疫グロブリンは、個々の腫瘍に特有の真に腫瘍特異的な免疫グロブリン抗原を構成する。ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ３７などのＢ細胞分化抗原は、Ｂ細胞リンパ腫における標的抗原の他の候補である。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に特有であり、体内の他の細胞に生じない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に特有ではなく、むしろ、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導することができない条件下で正常細胞でも発現する。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することを可能にする条件下で生じ得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟で応答できない胎児の発達中に正常細胞で発現する抗原である場合もあれば、通常はきわめて低いレベルで正常細胞に存在するが、腫瘍細胞では大幅に高いレベルで発現する抗原である場合もある。
【０２３１】
ＴＳＡまたはＴＡＡ抗原の非限定的な例としては、分化抗原、例えばＭＡＲＴ−１／メランＡ（ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｇｐ  １００（Ｐｍｅｌ  １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２及び腫瘍特異的多系列抗原、例えばＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐｌ５；ＣＥＡなどの過剰発現する胚抗原；ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕなどの過剰発現するがん遺伝子及び変異した腫瘍抑制遺伝子；染色体転座に起因する特有の腫瘍抗原、例えばＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ；ならびに、エプスタイン・バーウイルス抗原ＥＢＶＡならびにヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７などのウイルス抗原が挙げられる。他の大きなタンパク質ベースの抗原としては、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ベータカテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１５、ｐ１６、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、アルファフェトプロテイン、ベータＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３＼ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０＼Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、及びＴＰＳが挙げられる。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｂ細胞上で発現する。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、抗原は、真菌抗原、ウイルス抗原、または細菌抗原などの病原体抗原である。いくつかの実施形態では、真菌抗原は、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＣａｎｄｉｄａに由来する。いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、メタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ライノウイルス、パラインフルエンザ（ＰＩＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＪＣウイルス（Ｊｏｈｎ  Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍウイルス）、ＢＫウイルス、ＨＩＶ、ジカウイルス、ヒトコロナウイルス、ノロウイルス、脳炎ウイルス、またはエボラに由来する。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、リガンドまたは受容体である。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含む１つ以上の結合部分を含み、このリガンドまたは受容体は、本明細書に記載される細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドまたは受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＤＮＡＭ−１、及びＮＫｐ８０からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＢＣＭＡに結合することができる、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）である。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。
【０２３５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、（ａ）抗原（例えば、本明細書に記載される抗原のいずれか、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲをさらに発現する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、４本鎖抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダ科抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ヒト抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｄＡｂ（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、２つ以上のｓｄＡｂがひとつに結合したものを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、またはＣＤ１９×ＣＤ２０二重特異性ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、非抗体結合タンパク質、例えば、抗原に結合するポリペプチドリガンドまたは工学操作されたタンパク質である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含み、このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドまたは受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＤＮＡＭ−１、及びＮＫｐ８０からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＢＣＭＡに結合することができる、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）である。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、一価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二重特異性）かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価（例えば、二価）かつ多重特異性（例えば、二重特異性）である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＤＡＰ１２、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３γに由来する。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７の細胞質ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、細胞外リガンド結合ドメイン（例えば、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ／ＢＡＦＦリガンド、またはＦｃ受容体の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、「抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ」である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂと第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂとは同じである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂと第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂとは異なっている。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂと第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂとは、同じＢＣＭＡエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂと第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂとは、異なるＢＣＭＡエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、配列番号５９〜６１から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、抗ＣＤ１９  ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９  ＣＡＲは、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、抗ＣＤ２０  ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖは、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））、またはＬｅｕ−１６に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ＣＡＲは、配列番号５５または５６のアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、抗ＣＤ１９／抗ＣＤ２０二重特異性ＣＡＲである（本明細書ではＣＤ１９×ＣＤ２０  ＣＡＲともいう）。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９×ＣＤ２０  ＣＡＲの細胞外リガンド結合ドメインは、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ及び／または抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９×ＣＤ２０  ＣＡＲは、配列番号５７のアミノ酸配列を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、「ＢＣＭＡ−リガンドＣＡＲ」である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する少なくとも１つのドメインを含む１つ以上の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、ＡＰＲＩＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、ＢＡＦＦドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、ＡＰＲＩＬドメイン及びＢＡＦＦドメインを含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲは、抗体結合ＴＣＲ（ＡＣＴＲ）である。ＡＣＴＲを有する工学操作されたＴ細胞は、Ｆｃ含有タンパク質（例えば、モノクローナル抗体、例えば、抗ＢＣＭＡ抗体）に結合することができ、これは次いで、腫瘍細胞への架橋として機能する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αシグナルペプチド、Ｆｃ結合ドメイン（例えば、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲ）を含む１つ以上の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。
【０２４２】
ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８及びＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０９４４０８（これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されているＣＡＲを含め、当技術分野で公知であるか、または本発明者らによって開発された任意のＣＡＲを使用して、本明細書に記載されるＣＡＲを構築することができる。ＣＡＲの例示的な構造は、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８の図１５Ａ〜１５Ｄに示されている。
【０２４３】
多価及び／または多重特異性ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、本明細書に記載される抗原のいずれか）を特異的に認識する２つ以上（例えば２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、多価ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、単一ドメイン抗体（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ、ＢＣＭＡ  ＶＨＨ）を含む。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、ラクダ科抗体に由来する。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、４本鎖抗体に由来する。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、ヒト抗体に由来する。いくつかの実施形態では、結合部分のうちの１つ以上は、抗原に特異的に結合するポリペプチドリガンドまたは他の非抗体ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、多価ＣＡＲは、単一特異性である。すなわち、多価ＣＡＲは、単一の抗原を標的とし、単一の抗原に対する２つ以上の結合部位を含む。いくつかの実施形態では、多価ＣＡＲは、多重特異性である。すなわち、多価ＣＡＲは、２つ以上の抗原を標的とし、多価ＣＡＲは、少なくとも１つの抗原に対する２つ以上の結合部位を含む。同じ抗原に特異的な結合部分は、抗原の同じエピトープに結合する場合もあれば（すなわち、「モノエピトープＣＡＲ」）、または抗原の異なるエピトープに結合する場合もある（すなわち、バイエピトープＣＡＲまたはトリエピトープＣＡＲなどの「マルチエピトープＣＡＲ」）。同じ抗原に特異的な結合部位は、同じまたは異なるｓｄＡｂを含み得る。いくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）に特異的に結合する複数（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、多価（例えば二価、三価、またはより高い価数）のＣＡＲである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）に特異的に結合する複数（例えば、少なくとも約２、３、４、５、６、またはそれ以上のいずれかの数）のｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、多価（例えば二価、三価、またはより高い価数）のＣＡＲである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の第１のエピトープに特異的に結合する第１の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）、及び抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の第２のエピトープに特異的に結合する第２の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む、細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、多価（例えば二価、三価、またはより高い価数）のＣＡＲである。いくつかの実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは異なっている。いくつかの実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは同じである。いくつかの実施形態では、第１の結合部分は、ｓｄＡｂであり、第２の結合部分は、ヒト抗体（例えば、ｓｃＦｖ）に由来する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の結合部分はいずれも、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第１の結合部分は、ｓｄＡｂであり、第２の結合部分は、ポリペプチドリガンドまたは受容体（例えば、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、Ｆｃ受容体）である。いくつかの実施形態では、多価ＣＡＲは、抗原上の２つの異なるエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、多価ＣＡＲは、抗原上の３つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ）の第１のエピトープに特異的に結合する第１のｓｄＡｂ、及び抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ）の第２のエピトープに特異的に結合する第２のｓｄＡｂを含む、細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、二価ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の第１のエピトープに特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、及び抗原（例えば、腫瘍抗原、例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の第２のエピトープに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含む、細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、二価ＣＡＲである（本明細書では、ＣＤ１９×ＣＤ２０  ＣＡＲともいう）。いくつかの実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは異なっている。いくつかの実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは同じである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する第１のｓｃＦｖ、及びＣＤ２０に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含む、細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、二価かつ二重特異性のＣＡＲである。例えばいくつかの実施形態では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、（ａ）ＢＣＭＡの第１のエピトープに特異的に結合する第１のｓｄＡｂ（「抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ１」または「抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ１」）、及びＢＣＭＡの第２のエピトープに特異的に結合する第２のｓｄＡｂ（「抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ２」または「抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ２」）を含む、細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、二価ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ１と抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ２とは同じである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ１と抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ２とは異なっている。
【０２４６】
細胞外リガンド結合ドメイン
本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の細胞外リガンド結合ドメインは、１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分、例えばｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、４本鎖抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダ科抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ヒト抗体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｄＡｂ（例えば、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、またはＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、非抗体結合タンパク質、例えば、抗原に結合するポリペプチドリガンドまたは工学操作されたタンパク質である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合部分は、リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含み、このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、リガンドまたは受容体は、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＤＮＡＭ−１、及びＮＫｐ８０からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、リガンドは、ＢＣＭＡに結合することができる、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する。いくつかの実施形態では、受容体は、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインなどのＦｃ結合ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）である。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）、ＣＤ１６Ｂ（ＦｃγＲＩＩＩｂ）、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ３２Ｂからなる群から選択される。結合部分は、ペプチド結合またはペプチドリンカーを介して互いに直接融合していてもよい。
【０２４７】
単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、１つ以上のｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む。ｓｄＡｂは、同じまたは異なる起源のものであり得、同じまたは異なるサイズのものであり得る。例示的なｓｄＡｂとしては、重鎖のみ抗体の重鎖可変ドメイン（例えば、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ）、軽鎖を天然に欠いている結合分子、従来の４本鎖抗体に由来する単一ドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、ヒト化重鎖のみ抗体、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットによって産生されるヒトｓｄＡｂ、ならびに抗体に由来するもの以外の工学操作されたドメイン及び単一ドメインスキャホールドが挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８及びＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０９４４０８（これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されているｓｄＡｂを含め、当技術分野で公知であるか、または本発明者らによって開発された任意のｓｄＡｂを使用して、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を構築することができる。ＣＡＲの例示的な構造は、ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８の図１５Ａ〜１５Ｄに示されている。ｓｄＡｂは、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来するものであってもよい。本明細書で企図される単一ドメイン抗体は、ラクダ科及びサメ以外の種に由来する天然に存在するｓｄＡｂ分子も含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軽鎖を欠いている重鎖抗体として知られる（本明細書では「重鎖のみ抗体」ともいう）天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子に由来する。かかる単一ドメイン分子は、例えば、ＷＯ９４／０４６７８及びＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８に開示されている。明確にするために、軽鎖を天然に欠いている重鎖分子に由来する可変ドメインは、４本鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、本明細書ではＶＨＨとして知られる。かかるＶＨＨ分子は、ラクダ科種、例えば、ラクダ、ラマ、ビクーナ、ヒトコブラクダ、アルパカ、及びグアナコで産生される抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種が、軽鎖を天然に欠いている重鎖分子を産生する場合もあり、そのようなＶＨＨは本願の範囲内である。
【０２４９】
ラクダ科由来のＶＨＨ分子は、ＩｇＧ分子よりも約１０倍小さい。それらは単一ポリペプチドであり、非常に安定しており、極端なｐＨ及び温度条件に耐えることができる。さらに、それらは、プロテアーゼ作用に耐性を示すことができ、これは従来の４本鎖抗体にはないものである。さらに、ＶＨＨのｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現は、高収率の適切に折り畳まれた機能的ＶＨＨをもたらす。さらに、ラクダ科動物で生成された抗体は、抗体ライブラリの使用またはラクダ科以外の哺乳動物の免疫化により、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された抗体によって認識されるエピトープ以外のエピトープを認識することができる（例えば、ＷＯ９７４９８０５を参照されたい）。したがって、１つ以上のＶＨＨドメインを含む多重特異性または多価のＣＡＲは、従来の４本鎖抗体に由来する抗原結合性断片を含む多重特異性または多価のＣＡＲよりも効率的に標的と相互作用することができる。ＶＨＨは空洞または溝などの「異常な」エピトープに結合することが知られているため、かかるＶＨＨを含むＣＡＲの親和性は、従来の多重特異性ポリペプチドよりも治療的処置に好適であり得る。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軟骨魚に見出される免疫グロブリンの可変領域に由来する。例えば、ｓｄＡｂは、サメの血清に見出される新規抗原受容体（ＮＡＲ）として公知の免疫グロブリンアイソタイプに由来し得る。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン分子（「ＩｇＮＡＲ」）を生成する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、組換え、ＣＤＲグラフト、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化、及び／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成された（例えば、ファージディスプレイによって選択された）ものである。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域のアミノ酸配列は、フレームワーク領域内の特定のアミノ酸残基の「ラクダ化」によって変更してもよい。ラクダ化とは、従来の４本鎖抗体の（天然に存在する）ＶＨドメインのアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメイン内の対応する位置（複数可）に存在するアミノ酸残基のうちの１つ以上に置き換える、すなわち置換することを意味する。これは、本質的に公知の様式で行うことができ、その様式は、例えば本明細書のさらなる記述に基づいて、当業者には明らかとなろう。かかる「ラクダ化」置換は、好ましくは、ＶＨ−ＶＬ界面を形成し、及び／またはその界面に存在するアミノ酸位置に、及び／または本明細書に定義されるいわゆるラクダ科特徴残基に挿入される（例えば、ＷＯ９４／０４６７８、Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３３９：２８５−２９０，１９９４、Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９（６）：５３１−５３７，１９９６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５９：９５７−９６９，１９９６、及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５−３８，１９９９を参照されたい）。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットによって産生されるヒトｓｄＡｂである。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、及びＷＯ２００４０４９７９４を参照されたい。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、親和性成熟したものである。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、特定の抗原または標的に対する天然に存在するＶＨＨドメインは、ラクダ科ＶＨＨ配列の（ナイーブまたは免疫）ライブラリから得ることができる。そのような方法は、前記抗原もしくは標的、またはそれらの少なくとも１つの部分、断片、抗原決定基もしくはエピトープを使用し、本質的に公知である１つ以上のスクリーニング技術を使用して、かかるライブラリをスクリーニングすることを含んでも含まなくてもよい。そのようなライブラリ及び技術は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０、及びＷＯ０３／０３５６９４に記載されている。あるいは、例えばＷＯ００／４３５０７に記載されているように、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨライブラリからランダム変異誘発及び／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術によって得られたＶＨＨライブラリのような、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨライブラリに由来する改善された合成または半合成のライブラリを使用してもよい。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、従来の４本鎖抗体から生成される。例えば、ＥＰ０３６８６８４、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  １９８９  Ｏｃｔ．１２；３４１（６２４２）：５４４−６）、Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００３，２１（１１）：４８４−４９０、ＷＯ０６／０３０２２０、及びＷＯ０６／００３３８８を参照されたい。
【０２５５】
ペプチドリンカー
本明細書に記載される多重特異性または多価の機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））における様々な結合部分（例えばｓｄＡｂ、リガンド／受容体ドメイン）は、ペプチドリンカーを介して互いに融合していてもよい。いくつかの実施形態では、結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、リガンド／受容体ドメイン）は、いかなるペプチドリンカーも用いずに互いに直接融合している。異なる結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、リガンド／受容体ドメイン）を連結するペプチドリンカーは、同じであっても異なっていてもよい。機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の異なるドメインが、ペプチドリンカーを介して互いに融合していてもよい。
【０２５６】
機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））における各ペプチドリンカーは、ｓｄＡｂ及び／または様々なドメイン（例えば、リガンド／受容体ドメイン）の構造的及び／または機能的特長に応じて、同じまたは異なる長さ及び／または配列を有してもよい。各ペプチドリンカーは、独立して選択及び最適化され得る。機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））に使用されるペプチドリンカー（複数可）の長さ、可動性の程度、及び／または他の特性は、１つ以上の特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性またはアビディティを含むがこれらに限定されない特性に、何らかの影響を及ぼし得る。例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないように、より長いペプチドリンカーを選択してもよい。例えば、多量体抗原に対して指向されたｓｄＡｂを含む、本明細書に記載される多価または多重特異性の機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））において、ペプチドリンカーの長さ及び可動性は、多価機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の各ｓｄＡｂが、多量体のサブユニットの各々の抗原決定基に結合することを可能にするようなものであることが好ましい。いくつかの実施形態では、短いペプチドリンカーが、機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に配されていてもよい。ある実施形態では、ペプチドリンカーは、隣接するドメインが互いに対して自由に移動することができるように、可動性残基（例えば、グリシン及びセリン）を含む。例えば、グリシン−セリンのダブレットは、好適なペプチドリンカーであり得る。
【０２５７】
ペプチドリンカーは、任意の好適な長さのものであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００、またはそれ以上のうちのいずれかのアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５以下、またはそれ未満のうちのいずれかのアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸〜約１０アミノ酸、約１アミノ酸〜約２０アミノ酸、約１アミノ酸〜約３０アミノ酸、約５アミノ酸〜約１５アミノ酸、約１０アミノ酸〜約２５アミノ酸、約５アミノ酸〜約３０アミノ酸、約１０アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸、約５０アミノ酸〜約１００アミノ酸、または約１アミノ酸〜約１００アミノ酸のうちのいずれかである。
【０２５８】
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列、または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみ抗体のヒンジ領域に由来する配列をリンカーとして使用してもよい。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、可動性リンカーである。例示的な可動性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）を含む）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及び当技術分野で公知の他の可動性リンカーが挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ（配列番号４０）、（ＧＧＧＧＳ）２（配列番号４１）、（ＧＧＧＳ）３（配列番号４２）、（ＧＧＧＳ）４（配列番号４３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４５）、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号４６）、または（ＧＧＧＧＳ）４（配列番号４７）を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される様々なペプチドリンカー及びそれらの特性は、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）と、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または天然に存在しない変異体Ｎｅｆ、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）との間に用いられる連結配列によってコードされるペプチドにも適用される。例えば、機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））をコードする核酸と、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸とが同じベクター上にあれば、それらの間に、可動性残基（例えば、グリシン及びセリン）を含むペプチドリンカーを付加して、機能的外因性受容体とＮｅｆタンパク質の両方の適切な折り畳みに十分な空間を設けること、及び／またはそれらの間の連結配列（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ）の切断を容易にすることができる。例えば、（ＧＧＧＳ）３リンカーは、本明細書に記載されるＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ構築物に使用される。
【０２６０】
膜貫通ドメイン
本願の機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、細胞外リガンド結合ドメインに直接的または間接的に融合していてよい膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来し得る。本明細書で使用する場合、「膜貫通ドメイン」とは、細胞膜、好ましくは真核細胞膜内で熱力学的に安定している任意のタンパク質構造を意味する。本明細書に記載されるＣＡＲでの使用に適合する膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得ることができる。あるいは、それは、合成の天然に存在しないタンパク質セグメント、例えば、細胞膜内で熱力学的に安定している疎水性タンパク質セグメントであってもよい。
【０２６１】
膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインの三次元構造に基づいて分類される。例えば、膜貫通ドメインは、アルファヘリックス、２つ以上のアルファヘリックスの複合体、ベータバレル、または細胞のリン脂質二重層を貫通することができる任意の他の安定した構造を形成し得る。さらに、膜貫通ドメインは、加えて、または代替的に、膜貫通ドメインが膜を通過する回数及びタンパク質の配向を含む膜貫通ドメイントポロジーに基づいて分類され得る。例えば、シングルパス膜タンパク質は、細胞膜を１回横断し、マルチパス膜タンパク質は、細胞膜を少なくとも２回（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、またはそれ以上の回数）横断する。膜タンパク質は、細胞の内外に対するそれらの末端及び膜通過セグメント（複数可）のトポロジーに応じて、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型と定義され得る。Ｉ型膜タンパク質は、単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＣ末端が細胞質側に存在するように配向される。ＩＩ型膜タンパク質も単一の膜貫通領域を有するが、タンパク質のＣ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＮ末端が細胞質側に存在するように配向される。ＩＩＩ型膜タンパク質は、複数の膜貫通セグメントを有し、膜貫通セグメントの数ならびにＮ末端及びＣ末端の位置に基づいてさらに下位分類され得る。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｉ型シングルパス膜タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、マルチパス膜タンパク質由来の膜貫通ドメインも、本明細書に記載されるＣＡＲでの使用に適合し得る。マルチパス膜タンパク質は、複合（少なくとも２、３、４、５、６、７、またはそれ以上の）アルファヘリックスまたはベータシート構造を含み得る。好ましくは、マルチパス膜タンパク質のＮ末端及びＣ末端は、脂質二重層の反対側に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は、脂質二重層の細胞質側に存在し、タンパク質のＣ末端は、細胞外側に存在する。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、もしくはゼータ鎖の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤＩＩａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤＩＩａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及び／またはＮＫＧ２Ｃから選択される膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来する。
【０２６４】
本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））で使用する膜貫通ドメインは、合成の天然に存在しないタンパク質セグメントの少なくとも一部分を含んでもよい。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成の天然に存在しないアルファヘリックスまたはベータシートである。いくつかの実施形態では、タンパク質セグメントは、少なくともおよそ２０アミノ酸、例えば、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれ以上のアミノ酸である。合成膜貫通ドメインの例は、当技術分野で、例えば米国特許第７，０５２，９０６号Ｂ１及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０００／０３２７７６号Ａ２において公知であり、これらの関連する開示内容は、参照により本明細書に援用される。
【０２６５】
膜貫通ドメインは、膜貫通領域、及び膜貫通ドメインのＣ末端側に位置する細胞質領域を含み得る。膜貫通ドメインの細胞質領域は、３つ以上のアミノ酸を含む場合があり、いくつかの実施形態では、脂質二重層内で膜貫通ドメインを配向させる助けとなる。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が、膜貫通ドメインの膜貫通領域に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が、膜貫通ドメインの細胞質領域に存在する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、正電荷を帯びたアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、アミノ酸、アルギニン、セリン、及びリジンを含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの膜貫通領域は、疎水性アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））の膜貫通ドメインは、人工疎水性配列を含む。例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットが、膜貫通ドメインのＣ末端に存在し得る。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、主に疎水性のアミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはバリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、疎水性である。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ポリ−ロイシン−アラニン配列を含む。タンパク質またはタンパク質セグメントのハイドロパシー、または疎水性もしくは親水性の特徴は、当技術分野で公知の任意の方法、例えばＫｙｔｅ及びＤｏｏｌｉｔｔｌｅのハイドロパシー分析によって評価され得る。
【０２６７】
細胞内シグナル伝達ドメイン
本願の機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の正常なエフェクター機能のうちの少なくとも１つの活性化の原因である。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊化機能を意味する。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。したがって、「細胞質シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特殊化機能を行うように指示するタンパク質の一部分を意味する。通常、細胞質シグナル伝達ドメイン全体を用いてもよいが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞質シグナル伝達ドメインのトランケート部分が使用される場合、かかるトランケート部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用され得る。したがって、細胞質シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞質シグナル伝達ドメインの任意のトランケート部分を含むよう意図される。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインから本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、刺激性の様式で作用して免疫エフェクター機能を誘導する細胞質シグナル伝達配列を意味する。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ、またはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含む。本明細書で使用する「ＩＴＡＭ」とは、多くの免疫細胞で発現するシグナル伝達分子の尾部分に通常存在する保存されたタンパク質モチーフである。このモチーフは、６〜８個のアミノ酸によって分離されたアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉ（式中、各ｘは独立して、任意のアミノ酸である）の２つの繰り返しを含み、保存されたモチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６−８）ＹｘｘＬ／Ｉを作ってもよい。シグナル伝達分子内のＩＴＡＭは、細胞内でのシグナル伝達に重要であり、これは、シグナル伝達分子の活性化後のＩＴＡＭにおけるチロシン残基のリン酸化によって少なくとも部分的に媒介される。ＩＴＡＭは、シグナル伝達経路に関与する他のタンパク質のドッキング部位としての機能も果たし得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列は、ＣＤ３γ、ＤＡＰ１２、またはＣＤ３ζに由来する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインからなる。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、野生型ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインである。
【０２７０】
共刺激シグナル伝達ドメイン
多くの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、細胞の増殖、分化、及び生存を促進すると共に、細胞のエフェクター機能を活性化するために、抗原特異的シグナルの刺激に加えて共刺激を必要とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用する「共刺激シグナル伝達ドメイン」という用語は、細胞内のシグナル伝達を媒介してエフェクター機能などの免疫応答を誘導するタンパク質の少なくとも一部分を意味する。本明細書に記載されるキメラ受容体の共刺激シグナル伝達ドメインは、シグナルを伝達し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球などの免疫細胞により媒介される応答を調節する、共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、共刺激分子の細胞質部分であり得る。「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それにより、限定されるものではないが増殖及び生存といった、免疫細胞による共刺激応答を媒介する、免疫細胞（例えばＴ細胞）上の同族結合パートナーを意味する。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上（例えば約２、３、４、またはそれ以上のいずれかの数）の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ共刺激シグナル伝達ドメインを２つ以上、例えば、ＣＤ２８またはＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の共刺激シグナル伝達ドメインを２コピー含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載されるいずれか２つ以上の共刺激タンパク質などの異なる共刺激タンパク質に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを２つ以上含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）及び１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４−１ＢＢ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと、一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）とは、任意選択のペプチドリンカーを介して互いに融合している。一次細胞内シグナル伝達ドメインと、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインとは、任意の好適な順番で配置されていてよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）との間に位置する。複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、相加的または相乗的な刺激作用をもたらし得る。
【０２７２】
宿主細胞（例えば、免疫細胞）における共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、細胞を誘導して、サイトカインの産生及び分泌、食作用特性、増殖、分化、生存、及び／または細胞傷害を増加または減少させ得る。いずれの共刺激分子の共刺激シグナル伝達ドメインも、本明細書に記載されるＣＡＲでの使用に適合し得る。共刺激シグナル伝達ドメインのタイプ（複数可）は、エフェクター分子を発現させる免疫エフェクター細胞のタイプ（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球）、及び所望の免疫エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ作用）などの因子に基づいて選択される。ＣＡＲで使用する共刺激シグナル伝達ドメインの例は、限定されるものではないが、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、及びＰＤＣＤ６）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦＲ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシンアルファ／ＴＮＦベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦアルファ、及びＴＮＦＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；ＳＬＡＭファミリーのメンバー（例えば、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、及びＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ならびに任意の他の共刺激分子、例えばＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰＲ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、及びＮＫＧ２Ｃを含む、共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される共刺激分子に由来する。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、本願のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン及びＣＤ１３７の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ１３７の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。
【０２７７】
また、本開示の範囲には、共刺激シグナル伝達ドメインが免疫細胞の免疫応答を調節することができるような、本明細書に記載される共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかのバリアントも含まれる。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、野生型の対応物と比較して、アミノ酸残基変化を最大１０個（例えば、１、２、３、４、５、または８個）含む。１つ以上のアミノ酸変化を含む、かかる共刺激シグナル伝達ドメインは、バリアントといわれる場合がある。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比べて、シグナル伝達を増加させ、免疫応答の刺激を増強させる場合がある。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比べて、シグナル伝達を減少させ、免疫応答の刺激を低減させる場合がある。
【０２７８】
ヒンジ
本願の機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを含み得る。ヒンジドメインは、タンパク質の２つのドメイン同士の間に通常見出されるアミノ酸セグメントであり、タンパク質に柔軟性を与え、これらのドメインの一方または両方が互いに対して移動できるようにすることができる。このような柔軟性を与え、エフェクター分子の膜貫通ドメインに対して細胞外抗原結合ドメインが移動できるようにする、任意のアミノ酸配列が使用され得る。
【０２７９】
ヒンジドメインは、約１０〜１００アミノ酸、例えば、約１５〜７５アミノ酸、約２０〜５０アミノ酸、または約３０〜６０アミノ酸のうちのいずれか１つを含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、または７５のうちのいずれか１つのアミノ酸長であり得る。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインである。ヒンジドメインを含むことが当技術分野で公知である任意のタンパク質のヒンジドメインが、本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、ＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））での使用に適合する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインの少なくとも一部分であり、キメラ受容体に柔軟性を与える。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジドメインの一部分、例えば、ＣＤ８αのヒンジドメインの少なくとも１５個（例えば、２０、２５、３０、３５、または４０個）の連続したアミノ酸を含む断片である。
【０２８１】
ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体などの抗体のヒンジドメインは、本明細書に記載されるｐＨ依存性キメラ受容体システムでの使用にも適合する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体の定常ドメインＣＨ１及びＣＨ２を連結するヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のものであり、抗体のヒンジドメイン及び抗体の１つ以上の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のヒンジドメイン及び抗体のＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のヒンジドメインならびに抗体のＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域及びＣＨ３定常領域を含む。
【０２８２】
天然に存在しないペプチドを、本明細書に記載されるキメラ受容体のヒンジドメインとして使用してもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間のヒンジドメインは、（ＧＸＳ）ｎリンカー（式中、ｘ及びｎは独立して、３〜１２、例えば３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上の整数であり得る）などのペプチドリンカーである。
【０２８３】
シグナルペプチド
本願の機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、ポリペプチドのＮ末端にシグナルペプチド（別名シグナル配列）を含み得る。一般に、シグナルペプチドは、ポリペプチドの標的を細胞内の所望の部位に定めるペプチド配列である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、エフェクター分子の標的を細胞の分泌経路に定め、エフェクター分子を脂質二重層に組み込み、固定することを可能にする。本明細書に記載される機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））での使用に適合する、天然に存在するタンパク質のシグナル配列または合成の天然に存在しないシグナル配列を含むシグナルペプチドは、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８α、ＧＭ−ＣＳＦ受容体α、及びＩｇＧ１重鎖からなる群から選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。
【０２８４】
ＡＣＴＲは、Ｆｃ受容体（ＣＤ１６）をシグナル伝達ドメイン（４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ）と組み合わせたキメラタンパク質である。ＡＣＴＲを有する工学操作されたＴ細胞は、モノクローナル抗体に結合することができ、これは次いで、腫瘍細胞への架橋として機能する。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体は、（ａ）リガンドに由来する少なくとも１つのドメインまたは受容体の細胞外ドメインを含む細胞外リガンド結合ドメイン（このリガンドまたは受容体は、細胞表面抗原（例えば、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＩＬ−３、ＩＬ−１３）である）、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ受容体である。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、ＢＣＭＡのリガンド、例えば、ＡＰＲＩＬまたはＢＡＦＦに由来する少なくとも１つのドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ）を含む。
【０２８７】
Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）
いくつかの実施形態では、本願の機能的外因性受容体は、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択の第１のリンカー、ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）、ｄ）任意選択の第２のリンカー、ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及びｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ共受容体はいずれも、ＣＤ４、ＣＤ２８、及びＣＤ８（例えばＣＤ８α）から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲ共受容体は異なっている。例えば、第１のＴＣＲ共受容体がＣＤ４であり、第２のＴＣＲ共受容体がＣＤ８（例えば、ＣＤ８）であるか、または第２のＴＣＲ共受容体がＣＤ４であり、第１のＴＣＲ共受容体がＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択の第１のリンカー、ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、ｄ）任意選択の第２のリンカー、及びｅ）ＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）に由来する任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は全て、ＣＤ４、ＣＤ２８、及びＣＤ８（例えばＣＤ８α）から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである（例えば、全てＣＤ４である）。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）などのＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣの膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）などのＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、ＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８（例えば、ＣＤ８α））の細胞外ドメイン（またはその一部分）を含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、いかなるＴＣＲ共受容体の細胞外ドメインまたはその一部分も含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂ）のＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを（例えば、ＴＣＲ共受容体の細胞外ドメインがなく、細胞外ＴＣＲ結合ドメインが細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端にある場合に）さらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを（例えば、ＴＣＲ共受容体の細胞外ドメインがなく、細胞外ＴＣＲ結合ドメインが細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にある場合に）さらに含む。上記「ヒンジ」及び「ペプチドリンカー」のサブセクションに記載されるヒンジドメイン及びリンカーのいずれも、本明細書におけるＴＡＣに使用することができる。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞内共刺激ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、細胞外標的結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端側にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端側にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端側にある。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原���合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ＣＤ３ε）によって認識されるＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の異なる細胞外ドメインを特異的に認識する第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）をさらに含み、第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインと細胞外リガンド結合ドメインとの間に位置付けられる。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、内容全体が参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０９４４０８及びＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８に開示されている抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれかのような、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂ（すなわち、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である抗原結合性断片を含む。
【０２８８】
したがって、いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４に由来する任意選択の細胞外ドメイン（完全または部分的なドメイン）、（ｆ）ＣＤ４に由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ４に由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）に由来する任意選択の細胞外ドメイン（完全または部分的なドメイン）、（ｆ）ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）に由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）に由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ２８に由来する任意選択の細胞外ドメイン（完全または部分的なドメイン）、（ｆ）ＣＤ２８に由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ２８に由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ４（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α；シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ���Ｃは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ２８（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ＣＤ３ε）によって認識されるＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の異なる細胞外ドメインを特異的に認識する第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）をさらに含み、第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインと細胞外リガンド結合ドメインとの間に位置付けられる。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、次の構造（Ｎ末端からＣ末端に向かって）：抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ−（ＧＧＧＧＳ）３−抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ−（  ＧＧＧＧＳ）−ＣＤ４配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖは、Ｌｅｕ−１６抗体に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＵＣＨＴ１（例えば、ｈｕＵＣＨＴ１）、Ｆ６Ａ、Ｌ２Ｋ、またはＯＫＴ３に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４配列は、ＣＤ４の部分的な細胞外ドメイン、完全な膜貫通ドメイン、及び完全な細胞内ドメイン、例えば完全長ＣＤ４のａａ３７５〜４５８を含む（ａａ１は、ＣＤ４のシグナルペプチドを始点としての番号である）。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。
【０２９０】
Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体
いくつかの実施形態では、本願の機能的外因性受容体は、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択の第１のリンカー、ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）、ｄ）任意選択の第２のリンカー、ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及びｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内ドメインを含む細胞内ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、及びＴＣＲδからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２及び第３のＴＣＲサブユニットは同じであり、例えば、いずれもＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じであり、例えば、全てＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットと、第２及び第３のＴＣＲサブユニットとは異なっており、例えば、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり、第２及び第３のＴＣＲサブユニットはＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択の第１のリンカー、ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）、ｄ）任意選択の第２のリンカー、及びｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含み、第１及び第２のＴＣＲサブユニットはいずれも、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、及びＴＣＲδからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲサブユニットは同じであり、例えば、いずれもＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＴＣＲサブユニットは異なっており、例えば、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり、第２のＴＣＲサブユニットはＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（���）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットと、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットとは異なっており、例えば、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットはＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、あるＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、このＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、及びＴＣＲδからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体の膜貫通ドメインは、あるＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含み、このＴＣＲサブユニットは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、及びＴＣＲδからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、そのＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインまたはその一部分を含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、いかなるＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインも含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを（例えば、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインまたはその一部分がなく、細胞外ＴＣＲ結合ドメインが細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端にある場合に）さらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを（例えば、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインまたはその一部分がなく、細胞外ＴＣＲ結合ドメインが細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にある場合に）さらに含む。上記「ヒンジ」及び「ペプチドリンカー」のサブセクションに記載されるヒンジドメイン及びリンカーのいずれも、本明細書におけるＴＡＣ様キメラ受容体に使用することができる。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞内共刺激ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端側にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端側にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ＣＤ３ε）によって認識されるＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の異なる細胞外ドメインを特異的に認識する第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）をさらに含み、第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインと細胞外リガンド結合ドメインとの間に位置付けられる。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、内容全体が参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０９４４０８及びＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８に開示されている抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれかのような、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂ（すなわち、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である抗原結合性断片を含む。
【０２９１】
したがって、いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ３εに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＣＤ３εに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ３εに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ３γに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＣＤ３γに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ３γに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ３δに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＣＤ３δに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＣＤ３δに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＴＣＲαに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＴＣＲαに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＴＣＲαに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、Ｔ���Ｒα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＴＣＲβに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＴＣＲβに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＴＣＲβに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＴＣＲγに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＴＣＲγに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＴＣＲγに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＴＣＲδに由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）ＴＣＲδに由来する膜貫通部、及び（ｇ）ＴＣＲδに由来する任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３γを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リ��ンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３δを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＴＣＲαを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＴＣＲβを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＴＣＲγを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δのいずれか）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＴＣＲδを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）任意選択のヒンジ、（ｆ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）に由来する膜貫通部、及び（ｇ）第２のＴＣ��サブユニット（例えば、ＣＤ３ε）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１及び第２のＴＣＲサブユニットはいずれも、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ＣＤ３ε）によって認識されるＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の異なる細胞外ドメインを特異的に認識する第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）をさらに含み、第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインと細胞外リガンド結合ドメインとの間に位置付けられる。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択の第１のリンカー、ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、ｄ）任意選択の第２のリンカー、ｅ）第１のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及びｆ）第２のＴＣＲサブユニットの細胞内ドメインを含む細胞内ドメインを含み、第１のＴＣＲサブユニット及び第２のＴＣＲサブユニットはいずれも、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、及びＴＣＲδからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＣＤ３εであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＣＤ３εである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＣＤ３γであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＣＤ３γである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＣＤ３δであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＣＤ３δである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲαである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲβである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲγである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδであり、及び／または、第２のＴＣＲサブユニットはＴＣＲδである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットと第２のＴＣＲサブユニットとは同じである。いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲサブユニットと第２のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、第１及び／または第２のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、いかなるＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインも含まない。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体ポリペプチドは、細胞内共刺激ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＮ末端側にある。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインのＣ末端側にある。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ＣＤ３ε）によって認識されるＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の異なる細胞外ドメインを特異的に認識する第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）をさらに含み、第２の細胞外ＴＣＲ結合ドメインは、細胞外ＴＣＲ結合ドメインと細胞外リガンド結合ドメインとの間に位置付けられる。
【０２９３】
工学操作されたＴＣＲ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体Ｎｅｆ、例えば、天然に存在しないＮｅｆタンパク質、例えば変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、共に抗原（例えば、本明細書に記載される抗原のいずれか、例えば、腫瘍抗原、ＢＣＭＡ）を特異的に認識する、野生型ＴＣＲに由来するＶα及びＶβを含む、細胞外リガンド結合ドメインを含む、工学操作されたＴＣＲ（例えば、ＢＣＭＡまたはＢＣＭＡ／ＭＨＣ複合体を特異的に認識する工学操作されたＴＣＲ）であって、Ｖα、Ｖβ、またはその両方が、野生型ＴＣＲと比べて、１つ以上のＣＤＲに１つ以上の変異を含む、工学操作されたＴＣＲ（以下、「従来の工学操作されたＴＣＲ」ともいう）をさらに発現する。いくつかの実施形態では、変異は、保存的アミノ酸置換などのアミノ酸置換をもたらす。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、野生型ＴＣＲが結合するものと同じ同族ペプチド−ＭＨＣに結合する。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、野生型ＴＣＲが結合するものと比較して高い親和性で、同じ同族ペプチド−ＭＨＣに結合する。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、野生型ＴＣＲが結合するものと比較して低い親和性で、同じ同族ペプチド−ＭＨＣに結合する。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、野生型ＴＣＲが結合しない非同族ペプチド−ＭＨＣに結合する。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、野生型ＴＣＲは、ＨＬＡ−Ａ２に結合する。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、ＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体Ｎｅｆ、例えば、天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、共にＢＣＭＡまたはＢＣＭＡ−ＭＨＣ複合体を特異的に認識する、野生型ＴＣＲに由来するＶα及びＶβを含む、細胞外リガンド結合ドメインを含む、工学操作されたＴＣＲであって、Ｖα、Ｖβ、またはその両方が、野生型ＴＣＲと比べて、１つ以上のＣＤＲに１つ以上の変異を含む、工学操作されたＴＣＲをさらに発現する。いくつかの実施形態では、工学操作された抗ＢＣＭＡ  ＴＣＲは、ＢＣＭＡへの結合親和性が、野生型抗ＢＣＭＡ  ＴＣＲよりも高い。いくつかの実施形態では、工学操作されたＴＣＲは、ＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインなどの細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、本願の工学操作されたＴＣＲは、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、ＴＣＲサブユニットの完全長または一部分に（直接的または間接的に）融合した、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、抗体ベースの抗原結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、及びＣＤ３δからなる群から選択される。融合ポリペプチドは、他の内在性ＴＣＲサブユニットと共に機能的ＴＣＲ複合体に組み込まれ、抗原特異性をＴＣＲ複合体に与えることができる。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲ細胞外リガンド結合ドメインは、ＣＤ３εサブユニットの完全長または一部分に融合している。ｃＴＣＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３εの細胞内シグナル伝達ドメインに由来し得る。ｃＴＣＲの膜貫通ドメインは、ＴＣＲサブユニットに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲ細胞内シグナル伝達ドメイン及びｃＴＣＲ膜貫通ドメインは、同じＴＣＲサブユニットに由来し、例えば、いずれもＣＤ３ε由来である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲ細胞外リガンド結合ドメイン及びＴＣＲサブユニット（全体またはその一部分）は、リンカー（例えばＧＳリンカー）を介して融合していてもよい。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、ｃＴＣＲ細胞内シグナル伝達ドメイン及び／またはｃＴＣＲ膜貫通ドメインの起源となるＴＣＲサブユニットと同じであっても異なっていてもよいＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインまたはその一部分をさらに含む。したがって、いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、ＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを（例えば、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインまたはその一部分がない場合に）さらに含む。上記「ヒンジ」及び「ペプチドリンカー」のサブセクションに記載されるヒンジドメイン及びリンカーのいずれも、ここでのｃＴＣＲに使用することができる。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、一価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、単量体である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）のエピトープを特異的に認識する単一の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ単一特異性である。すなわち、腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の同じエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、多価かつ多重特異性である。すなわち、同じ腫瘍抗原または異なる腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の２つ以上のエピトープを特異的に認識する２つ以上の抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞外リガンド結合ドメインは、内容全体が参照により本明細書に援用されるＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０９４４０８及びＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９６９３８に開示されている抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれかのような、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂ（すなわち、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ）である抗原結合性断片を含む。
【０２９６】
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体Ｎｅｆ、例えば、天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、抗ＣＤ２０キメラＴＣＲをさらに発現し、抗ＣＤ２０キメラＴＣＲは、ａ）ＣＤ２０を特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択のリンカー（例えばＧＳライナー、例えば、（ＧＧＧＧＳ）３）、ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分（例えば、ＣＤ３ε）、ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及びｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲは、ａ）抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、ｂ）リンカー（例えば、ＧＳライナー、例えば、（ＧＧＧＧＳ）３）、及びｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体Ｎｅｆ、例えば、天然に存在しないＮｅｆタンパク質、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ）を発現する修飾Ｔ細胞は、抗ＢＣＭＡキメラＴＣＲをさらに発現し、抗ＢＣＭＡキメラＴＣＲは、ａ）ＢＣＭＡを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、ｂ）任意選択のリンカー（例えばＧＳライナー、例えば、（ＧＧＧＧＳ）３）、ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分（例えば、ＣＤ３ε）、ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及びｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｃＴＣＲは、ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ、ｂ）リンカー（例えば、ＧＳライナー、例えば、（ＧＧＧＧＳ）３）、及びｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットのｃＴＣＲ膜貫通ドメイン、ｃＴＣＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意選択の細胞外ドメイン、またはそれらの一部分は、同じＴＣＲサ���ユニットに由来する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲサブユニットのｃＴＣＲ膜貫通ドメイン、ｃＴＣＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、及び任意選択の細胞外ドメイン、またはそれらの一部分は、ＣＤ３εに由来する。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）のＮ末端に融合した細胞外リガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲは、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ−（ＧＧＧＧＳ）３−ＣＤ３εの構造、例えば配列番号６４を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｃＴＣＲは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ−（ＧＧＧＧＳ）３−ＣＤ３εの構造を有する。
【０２９７】
ＶＩ．  医薬組成物
さらに、本願により、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）のいずれか１つと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。医薬組成物は、所望の純度を有するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製することができる。
【０２９８】
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、バッファー、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウム；防腐剤、等張化剤、安定剤、金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；ＥＤＴＡなどのキレート剤、及び／または非イオン性界面活性剤を含む。
【０２９９】
バッファーは、特に安定性がｐＨ依存性である場合、治療有効性を最適化する範囲内でｐＨを制御するために使用される。バッファーは、好ましくは、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本発明で使用するのに好適な緩衝剤には、有機酸及び無機酸の両方ならびにそれらの塩が含まれる。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。さらに、バッファーは、ヒスチジン及びトリスなどのトリメチルアミン塩を含み得る。
【０３００】
防腐剤は、微生物の増殖を遅らせるために添加され、典型的には、０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本発明で使用するのに好適な防腐剤としては、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールが挙げられる。
【０３０１】
等張剤は、「安定剤」として知られることもあり、組成物中の液体の浸透圧を調整または維持するために存在する。タンパク質及び抗体などの大きい荷電した生体分子と共に使用される場合、これらは「安定剤」と呼ばれることが多い。なぜなら、これらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それにより、分子間及び分子内の相互作用の可能性を低くし得るからである。等張剤は、他の成分の相対量を考慮して、０．１重量％〜２５重量％、好ましくは１〜５％の任意の量で存在してよい。好ましい等張剤としては、多価糖アルコール、好ましくはグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールなどの三価以上の糖アルコールが挙げられる。
【０３０２】
さらなる賦形剤としては、（１）増量剤、（２）溶解度向上剤、（３）安定剤、及び（４）変性または容器の壁への付着を防止する薬剤のうちの１つ以上として機能し得る薬剤が挙げられる。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸；スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノースなどの三糖類；ならびにデキストリンまたはデキストランなどの多糖類が挙げられる。
【０３０３】
非イオン性界面活性剤または界面活性物質（別名「湿潤剤」）は、治療剤の可溶化を助けるために、かつ撹拌によって誘導される凝集から治療用タンパク質を保護するために存在し、それにより、活性のある治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく製剤をせん断表面応力に曝露することも可能になる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約０．０７ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在する。
【０３０４】
好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、及び６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用され得るアニオン性界面活性物質としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性物質としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
【０３０５】
医薬組成物をｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するためには、それらは無菌でなければならない。医薬組成物は、滅菌濾過膜を通した濾過によって無菌にすることができる。本明細書の医薬組成物は、概して、無菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静注液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０３０６】
投与経路は、好適な様式での、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、もしくは関節内の経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または徐放もしくは持続放出手段による、長期間にわたる単回もしくは複数回ボーラスまたは注入などの公知の認められている方法に従う。
【０３０７】
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例としては、アンタゴニストを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とＬ−グルタミン酸エチルのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０３０８】
本明細書に記載される医薬組成物は、処置される特定の適応症に必要な２つ以上の活性化合物または薬剤、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含んでもよい。あるいは、またはさらに、組成物は、細胞傷害剤、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、または成長阻害剤を含んでもよい。かかる分子は、好適には、意図される目的に有効な量で組み合わさって存在する。
【０３０９】
活性成分はまた、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）、またはマイクロエマルションにおいて、例えば、コアセルベーション技術により、または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに封入してもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎに開示されている。
【０３１０】
ＶＩＩ．  処置方法
本願は、本明細書に記載される、医薬組成物、あるいはＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、または工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ、ＴＡＣ様キメラ受容体））を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）のいずれか１つを有効量で個体に投与することを含む、個体の疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法をさらに提供する。
【０３１１】
本明細書に記載される方法は、固形がんと液性がんの両方を含む様々ながんを処置するのに好適である。これらの方法は、早期がん、進行期がん、及び転移がんを含む全ての病期のがんに適用される。本明細書に記載される方法は、アジュバント設定またはネオアジュバント設定において、第１の療法、第２の療法、第３の療法、または当技術分野で公知の他のタイプのがん療法、例えば化学療法、手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、標的化療法、凍結療法、超音波療法、光線力学療法、高周波アブレーションなどとの併用療法として使用され得る。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼球内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、腟癌、外陰部癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期の固形腫瘍、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸の腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌、前記がんの組み合わせ、及び前記がんの転移巣からなる群から選択される固形がんを処置するのに好適である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ様白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ様白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ様白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞性前リンパ性白血病、芽細胞性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型もしくは大細胞型の濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、または前白血病のうちの１つ以上から選択される血液癌を処置するのに好適である。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ病期分類システムに基づいた、ステージＩ、ステージＩＩ、もしくはステージＩＩＩ、及び／またはステージＡもしくはステージＢの多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ（ＩＭＷＧ）の発表する国際病期分類システムに基づいた、ステージＩ、ステージＩＩ、またはステージＩＩＩの多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）である。いくつかの実施形態では、がんは、無症候性（くすぶり型／遅発性）骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、症候性または活動性の骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、難治性多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、個体は、多発性骨髄腫に対する既往の処置に応答しなかった。いくつかの実施形態では、個体は、多発性骨髄腫の既往の処置後に進行性疾患を有する。いくつかの実施形態では、個体は、多発性骨髄腫に対して少なくとも約２、３、４、またはそれ以上のいずれかの回数の処置をそれまでに受けたことがある。いくつかの実施形態では、がんは、再発性多発性骨髄腫である。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、個体は、活動性多発性骨髄腫を有する。いくつかの実施形態では、個体は、少なくとも１０％のクローン骨髄形質細胞を有する。いくつかの実施形態では、個体は、生検により確定診断された骨性または髄外性の形質細胞腫を有する。いくつかの実施形態では、個体は、基礎にある形質細胞増殖疾患に起因し得る末端器官障害の証拠を有する。いくつかの実施形態では、個体は、高カルシウム血症を有する。例えば、血清カルシウムが正常上限より＞０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ（＞１ｍｇ／ｄＬ）高い、または＞２．７５ｍｍｏｌ／Ｌ（＞１１ｍｇ／ｄＬ）である。いくつかの実施形態では、個体は、腎不全を有する。例えば、クレアチニンクリアランス＜４０ｍＬ／分または血清クレアチニン＞１７７ｍｏｌ／Ｌ（＞２ｍｇ／ｄＬ）である。いくつかの実施形態では、個体は、貧血である。例えば、ヘモグロビン値が正常下限を＞２０ｇ／Ｌ下回る、またはヘモグロビン値＜１００ｇ／Ｌである。いくつかの実施形態では、個体は、１つ以上の骨病変を有する。例えば、１つ以上の溶骨性病変が骨格のＸ線検査、ＣＴ、またはＰＥＴ／ＣＴにみられる。いくつかの実施形態では、個体は、次の悪性腫瘍のバイオマーカー（ＭＤＥ）のうちの１つ以上を有する：（１）骨髄検査でクローン形質細胞が６０％以上であること、（２）血清中の病変部／非病変部の遊離軽鎖比が１００以上であること（但し、病変部軽鎖の絶対レベルが少なくとも１００ｍｇ／Ｌであるものとする）、及び（３）少なくとも５ｍｍ以上のサイズの限局性病変が２つ以上ＭＲＩで認められること。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、自己免疫疾患を処置するのに好適である。自己免疫疾患、または自己免疫とは、生物が自身の構成要素を（分子下レベルまで）「自己」として認識することができず、その結果、自身の細胞及び組織に対する免疫応答を生じることである。そのような異常な免疫応答に起因するあらゆる疾患が、自己免疫疾患と呼ばれる。顕著な例としては、セリアック病、真性糖尿病１型（ＩＤＤＭ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、橋本甲状腺炎、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病、及び関節リウマチ（ＲＡ）が挙げられる。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、Ｂ細胞障害に関連する疾患のクラスでもある自己免疫疾患を含む炎症性疾患を処置するのに好適である。自己免疫疾患の例としては、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、真性糖尿病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後腎炎（ｐｏｓｔ−ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、慢性活動性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ウェゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、及び線維性肺胞炎が挙げられるが、これらに限定されない。最も一般的な処置はコルチコステロイド及び細胞傷害性薬であるが、これらは毒性が非常に高い場合がある。これらの薬物はまた、免疫系全体を抑制するものであり、重篤な感染をもたらし、骨髄、肝臓、及び腎臓に悪影響を及ぼす場合がある。これまで、クラスＩＩＩ自己免疫疾患を処置するために使用されてきた他の治療薬は、Ｔ細胞及びマクロファージに対して指向されたものである。自己免疫疾患、特にクラスＩＩＩ自己免疫疾患を処置する、より有効な方法が必要とされている。
【０３１８】
医薬組成物の投与は、注射、摂取、輸注、植え込み、または移植を含む、任意の簡便な様式で行ってよい。組成物は、患者の経動脈、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内、または腹腔内に投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、全身投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内注入などの注入によって個体に投与される。免疫療法のための注入技術は、当技術分野で公知である（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６（１９８８）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮内または皮下注射によって個体に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍またはリンパ節に直接注射される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍部位に、例えば腫瘍細胞に直接、または腫瘍細胞を有する組織に、局所投与される。
【０３１９】
本発明の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて異なり得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験により、ヒトの治療に有効な用量を決定するための信頼できる指針が得られる。有効量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６によって策定された原則に従って行うことができる。異なる製剤が異なる処置及び異なる障害に有効であること、ならびに特定の器官または組織の処置を目的とする投与が、別の器官または組織への投与とは異なる様式での送達を必要とし得ることは、本願の範囲内である。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、医薬組成物が、本明細書に記載されるＮｅｆ（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現する修飾Ｔ細胞のいずれか１つを含む場合、医薬組成物は、少なくとも約１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９細胞／ｋｇ（個体の体重）のいずれかの投与量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０４〜約１０５、約１０５〜約１０６、約１０６〜約１０７、約１０７〜約１０８、約１０８〜約１０９、約１０４〜約１０９、約１０４〜約１０６、約１０６〜約１０８、または約１０５〜約１０７細胞／ｋｇ（個体の体重）のいずれかの投与量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１×１０５、２×１０５、３×１０５、４×１０５、５×１０５、６×１０５、７×１０５、８×１０５、９×１０５、１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７細胞／ｋｇまたはそれ以上のいずれかの用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３×１０５〜約７×１０６細胞／ｋｇ、または約３×１０６細胞／ｋｇの用量で投与される。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、単回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、複数回（例えば２、３、４、５、６、またはそれ以上のいずれかの回数）投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１か月に１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、または１年に１回投与される。いくつかの実施形態では、投与間の間隔は、約１週間〜２週間、２週間〜１か月、２週間〜２か月、１か月〜２か月、１か月〜３か月、３か月〜６か月、または６か月〜１年のうちのいずれか１つである。特定の患者に最適な投与量及び処置体制は、疾患の徴候について患者をモニタリングし、それに応じて処置を調整することにより、医学分野の当業者が容易に決定することができる。
【０３２２】
さらに、投与量は、１回以上の別々の投与によって、または持続注入によって投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、分割用量、例えば約２、３、４、５、またはそれ以上のいずれかの回数の用量で投与される。いくつかの実施形態では、分割用量は、約１週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、用量は、等しく分割される。いくつかの実施形態では、分割用量は、総用量の約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％である。いくつかの実施形態では、連続した分割用量間の間隔は、約１日、２日、３日、またはそれ以上である。状態に応じて数日間以上にわたる反復投与の場合、処置は、疾患症状の所望される抑制が生じるまで継続される。しかしながら、他の投与レジメンも有用であり得る。この療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びＣＡＲを含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びキメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びキメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、多価である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａ��１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ��びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ｃＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ｃＴＣＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びＴ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多価である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣ��２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びＴＡＣ様キメラ受容体を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、有効量の医薬組成物を個体に投与することを含む、疾患（例えば、がん、感染性疾患、ＧｖＨＤ、移植片拒絶、自己免疫障害、または放射線宿酔）を有する個体を処置する方法であって、医薬組成物が、（１）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及びＴＡＣ様キメラ受容体を含む、修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）であり、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、修飾Ｔ細胞と、（２）薬学的に許容される担体とを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多価である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及��／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣ様キメラ受容体を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、修飾Ｔ細胞における内在性ＴＣＲ、ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δを下方調節する。例えば、内在性ＴＣＲ、ＭＨＣ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及び／またはＣＤ３δの細胞表面発現を、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、発現を下方制御する）ことはないか、あるいは、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及び／または外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）を最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節する。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ、及びそれらの相同体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、野生型Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、変異体Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、変異体Ｎｅｆは、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、１つ以上の変異（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のアミノ酸残基の変異、例えばＡｌａへの変異）を、表１１に記載されるアミノ酸残基のいずれかに含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、再発性または難治性の多発性骨髄腫などの多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体において客観的臨床応答を引き起こすことを含む。いくつかの実施形態では、厳格な臨床応答（ｓＣＲ）が個体において得られる。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体において疾患の寛解（部分または完全）を引き起こすことを含む。場合により、臨床的寛解は、個体が医薬組成物を受けてから約６か月、５か月、４か月、３か月、２か月、１か月以下、またはそれ未満のいずれかの期間の後に得られる。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体においてがんの再発または疾患進行を防止することを含む。いくつかの実施形態では、再発または疾患進行は、少なくとも約６か月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、またはそれ以上にわたって防止される。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体の生存期間（例えば無病生存期間）を延長することを含む。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体の生活の質を向上させることを含む。いくつかの実施形態では、処置効果は、固形腫瘍もしくはリンパ系腫瘍の成長を阻害すること、またはそのサイズを低減させることを含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、固形腫瘍またはリンパ系腫瘍のサイズは、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれかを含む）低減する。いくつかの実施形態では、個体における固形腫瘍もしくはリンパ系腫瘍の成長を阻害するか、またはそのサイズを低減させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、処置効果は、個体において腫瘍転移を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約１０％の（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれかを含む）転移が阻害される。いくつかの実施形態では、リンパ節への転移を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、肺への転移を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、肝臓への転移を阻害する方法が提供される。転移は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば血液検査、骨スキャン、Ｘ線スキャン、ＣＴスキャン、ＰＥＴスキャン、及び生検によって評価され得る。
【０３３１】
本発明は、本明細書に記載されるＮｅｆ（またはＮｅｆ＋機能的外因性受容体）を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）、その単離集団、またはそれを含む医薬組成物を使用して、疾患及び障害を低減もしくは改善する、または防止もしくは処置する方法にも関する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＮｅｆ（またはＮｅｆ＋機能的外因性受容体）を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）、その単離集団、またはそれを含む医薬組成物は、がん、感染、１つ以上の自己免疫障害、放射線宿酔を低減もしくは改善する、または防止もしくは処置するために、あるいは移植手術を受けた対象の移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）もしくは移植片拒絶を防止または処置するために使用される。
【０３３２】
Ｎｅｆ（またはＮｅｆ＋機能的外因性受容体）を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）、その単離集団、またはそれを含む医薬組成物は、自己免疫拒絶または移植片拒絶を変化させるのに有用である。なぜなら、これらのＴ細胞は、発生中にＴＧＦ−βで成長させることができ、分化して誘導性制御性Ｔ細胞になるからである。一実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ）など）を使用して、これらの誘導性制御性Ｔ細胞が疾患の組織部位でその阻害機能を行うために必要な機能的特異性を、誘導性制御性Ｔ細胞に与える。したがって、患者に使用するための、多数の抗原特異的制御性Ｔ細胞が成長する。制御性Ｔ細胞の分化に必須であるＦｏｘＰ３の発現は、フローサイトメトリーによって分析することができ、これらの制御性Ｔ細胞によるＴ細胞増殖の機能的阻害は、共培養時の抗ＣＤ３刺激後のＴ細胞増殖における減少を検査することによって分析することができる。
【０３３３】
本発明の別の実施形態は、Ｎｅｆ（またはＮｅｆ＋機能的外因性受容体）を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞）、その単離集団、またはそれを含む医薬組成物の、放射線宿酔の防止または処置のための使用に関する。放射線治療もしくは放射線曝露（例えば、汚染爆弾曝露、放射性物質漏れ）、または骨髄細胞を除去する他の条件（特定の薬物療法）後の１つの課題は、造血系を再構成することである。骨髄移植を受けた患者では、移植後１５日目のリンパ球絶対数が、良好な結果に相関する。リンパ球数が多い患者では再構成が良好であるため、良好なリンパ球の再構成があることが重要である。この作用の理由は不明だが、感染からのリンパ球の保護及び／または造血再構成に有利に働く成長因子の産生に起因する可能性がある。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、本発明は、個体におけるドナーＴ細胞の持続性及び／または生着を高める方法であって、１）同種Ｔ細胞を用意すること、及び２）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、同種Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、同種Ｔ細胞は、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞、工学操作されたＴＣＲ−Ｔ細胞（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ細胞）、ＴＡＣ−Ｔ細胞、ＴＡＣ様Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、同種Ｔ細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ＣＡＲをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つの抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖと１つの抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖとが直接的または間接的に（例えばリンカーを介して）ひとつに融合したものを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、従来の工学操作されたＴＣＲをコードする。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ＡＣＴＲをコードする。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ｃＴＣＲをコードする。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガン���結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ＴＡＣをコードする。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）に由来する任意選択の細胞外ドメイン、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の膜貫通部を含む膜貫通部、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４、ＣＤ２８、またはＣＤ８、例えば、ＣＤ８α）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、ｃＴＣＲ）、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体）は、一価かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、ｃＴＣＲ）、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体）は、多価かつ単一特異性である。くつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、ｃＴＣＲ）、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体）は、多重特異性（かつ多価）である。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、個体におけるドナーＴ細胞の持続性及び／または生着を高める方法であって、１）同種Ｔ細胞を用意すること、及び２）Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、本明細書に記載される例えば機能的外因性受容体（例えばＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、ＡＣＴＲ）、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、ｃＴＣＲ）、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体）をコードする第２の核酸とを含むベクター（例えば、ウイルスベクター、レンチウイルスベクター）を、同種Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９
、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、異なるプロモーターに作動可能に連結している。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ  ＩＥ）、伸長因子１アルファプロモーター（ＥＦ１−α）、ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ）プロモーター、ユビキチンＣ（ＵＢＱ−Ｃ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター、ポリオーマエンハンサー／単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ＭＣ１）プロモーター、ベータアクチン（β−ＡＣＴ）プロモーター、「骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）」プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、ＴＥＴＯＮ（登録商標）プロモーター、及びＮＦκＢプロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１−αまたはＰＧＫである。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の上流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸は、第２の核酸の下流にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、連結配列を介して結合している。いくつかの実施形態では、連結配列は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかである。いくつかの実施形態では、連結配列は、ＩＲＥＳまたはＰ２Ａをコードする核酸である。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクター、改良エピソームベクター（ＥＥＶ）、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼベクター、またはＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステムなどの非ウイルスベクターである。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、本発明は、同種Ｔ細胞移植を受ける個体において、ＧｖＨＤまたは移植片拒絶を誘導することなく疾患（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸を、同種Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、同種Ｔ細胞は、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞、ＴＣＲ−Ｔ細胞（例えば、ｃＴＣＲ−Ｔ細胞）、ＴＡＣ−Ｔ細胞、またはＴＡＣ様Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、同種Ｔ細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、ＣＡＲをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ｃＴＣＲをコードし、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリ��カー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードし、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードし、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードし、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、第２の核酸は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードし、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、多価である。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、多重特異性である。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、別々のベクター上にある。いくつかの実施形態では、第１の核酸と第２の核酸とは、同じベクター上にある。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、同種Ｔ細胞移植を受ける個体において、ＧｖＨＤまたは移植片拒絶を誘導することなく疾患（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＣＡＲをコードする第２の核酸とを含むベクターを、同種Ｔ細胞に導入することを含み、ＣＡＲが、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、同種Ｔ細胞移植を受ける個体において、ＧｖＨＤまたは移植片拒絶を誘導することなく疾患（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコー���する第１の核酸と、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）をコードする第２の核酸とを含むベクターを、同種Ｔ細胞に導入することを含み、キメラＴＣＲが、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、同種Ｔ細胞移植を受ける個体において、ＧｖＨＤまたは移植片拒絶を誘導することなく疾患（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）をコードする第２の核酸とを含むベクターを、同種Ｔ細胞に導入することを含み、Ｔ細胞抗原結合体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣ
Ｄ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体が全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、同種Ｔ細胞移植を受ける個体において、ＧｖＨＤまたは移植片拒絶を誘導することなく疾患（例えば、がん、感染性疾患、自己免疫障害、または放射線宿酔）を処置する方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする第１の核酸と、ＴＡＣ様キメラ受容体をコードする第２の核酸とを含むベクターを、同種Ｔ細胞に導入することを含み、ＴＡＣ様キメラ受容体が、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａ��１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来��工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、本発明は、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞のＧｖＨＤまたは移植片拒絶を低減させる方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸を、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種ＣＡＲ−Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９）を特異的に認識する１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の結合部分（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）１つ以上（例えば１、２、３、４、５、６またはそれ以上のいずれかの数）の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多価である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＡＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＣＡＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、本発明は、同種ｃＴＣＲ−Ｔ細胞のＧｖＨＤまたは移植片拒絶を低減させる方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸を、同種ｃＴＣＲ−Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種ｃＴＣＲ−Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｄ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｅ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは同じ（例えば、全てＣＤ３ε）である。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択のリンカー、及び（ｃ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含む。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、多価である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、ｃＴＣＲは、配列番号６４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ｃＴＣＲを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ｃＴＣＲは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、���たは変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、本発明は、同種ＴＡＣ−Ｔ細胞のＧｖＨＤまたは移植片拒絶を低減させる方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸を、同種ＴＡＣ−Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種ＴＡＣ−Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体（例えば、ＣＤ４）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は全て、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、及び第３のＴＣＲ共受容体は異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）ＣＤ４の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）ＣＤ４の膜貫通ドメイン、及び（ｇ）ＣＤ４の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０  ＴＡＣである。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多価である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣは、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３���１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態���は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣを下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣは、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本発明は、同種ＴＡＣ様Ｔ細胞のＧｖＨＤまたは移植片拒絶を低減させる方法であって、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）をコードする核酸を、同種ＴＡＣ様Ｔ細胞に導入することを含み、Ｎｅｆタンパク質が発現すると、同種ＴＡＣ様Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）第１のＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、（ｅ）第２のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、（ｆ）第３のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び（ｇ）第４のＴＣＲサブユニット（例えば、ＣＤ３ε）の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは異なっている。いくつかの実施形態では、第２、第３、及び第４のＴＣＲサブユニットは同じであるが、第１のＴＣＲサブユニットとは異なっている。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、（ａ）腫瘍抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０）の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ）を含む細胞外リガンド結合ドメイン、（ｂ）任意選択の第１のリンカー、（ｃ）ＴＣＲサブユニット（例えば、ＴＣＲα）の細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、（ｄ）任意選択の第２のリンカー、及び（ｅ）完全長ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く）を含み、ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、単一特異性である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、多価である。いくつかの実施形態では、ＴＡＣ様キメラ受容体は、多重特異性である。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、配列番号１２〜２２のいずれかのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質は、（ｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ���５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３、（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０、（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０、または（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異を含む、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆである。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御しない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ４の細胞表面発���を下方制御するが、ＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、ＴＣＲ及びＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御するが、ＣＤ４の細胞表面発現を下方制御することはない。いくつかの実施形態では、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）は、内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御するが、ＴＡＣ様キメラ受容体を下方調節する（例えば、細胞表面発現を下方制御する）ことはない。いくつかの実施形態では、機能的ＴＡＣ様キメラ受容体は、Ｎｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）により、最大で約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％下方調節される（例えば、細胞表面発現が下方制御される）。
【０３４２】
ＶＩＩＩ．  キット及び製品
さらに、本明細書に記載されるＮｅｆタンパク質（例えば、ｗｔ  Ｎｅｆ、または変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆなどの変異体Ｎｅｆ）及び／または機能的外因性受容体（例えば、工学操作されたＴＣＲ（例えば、従来の工学操作されたＴＣＲ、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ））、ＴＡＣ、ＴＡＣ様キメラ受容体、またはＣＡＲ（例えば、抗体ベースのＣＡＲ、リガンド／受容体ベースのＣＡＲ、またはＡＣＴＲ））を発現する修飾Ｔ細胞（例えば、同種Ｔ細胞、内在性ＴＣＲ欠損Ｔ細胞、ＧｖＨＤ最小化Ｔ細胞）のいずれか１つを含む、キット、単位剤形、及び製品が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物のいずれか１つを含み、好ましくはその使用に関する説明を提供する、キットが提供される。
【０３４３】
本願のキットは、好適なパッケージングに入っている。好適なパッケージングとしては、バイアル、ボトル、瓶、可撓性パッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、任意選択で、バッファー及び解説情報などの追加の構成要素を提供してもよい。したがって、本願は、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、瓶、可撓性パッケージングなどを含む製品も提供する。
【０３４４】
製品は、容器、及び容器に貼付または関連したラベルまたは添付文書を含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成されていてもよい。概して、容器は、本明細書に記載される疾患もしくは障害（例えば、がん、自己免疫疾患、または感染性疾患）の処置、または疾患もしくは障害の処置におけるＧｖＨＤもしくは移植片拒絶の低減／防止に有効な組成物を保持し、かつ、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静注液バッグまたはバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体の特定の状態を処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、組成物の個体への投与に関する説明をさらに含む。ラベルは、再構成及び／または使用に関する指示を示し得る。医薬組成物を保持する容器は、再構成した製剤の反復投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にする複数回使用バイアルであってもよい。添付文書とは、治療薬の商業用パッケージに通常含まれる説明書を意味し、かかる治療薬の適応症、使用法、投与量、投与、禁忌に関する情報及び／またはその使用に関する警告を含む。さらに、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容されるバッファーを含む第２の容器をさらに含んでもよい。さらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジなど、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料を含んでもよい。キットまたは製品は、薬局、例えば病院薬局及び調剤薬局での保管及び使用に十分な量でパッケージングされた、医薬組成物の複数の単位用量、及び使用説明書を含んでもよい。
例示的な実施形態
実施形態１。
Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸を、前駆体Ｔ細胞に導入することを含む、修飾Ｔ細胞を生成する方法であって、前記Ｎｅｆタンパク質が発現すると、前記修飾Ｔ細胞の内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が下方調節される前記方法。
実施形態２。
前記下方調節が、前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態３。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約５０％下方制御される、実施形態２に記載の方法。
実施形態４。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約６０％下方制御される、実施形態２または３に記載の方法。
実施形態５。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約７０％下方制御される、実施形態２〜４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約８０％下方制御される、実施形態２〜５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９０％下方制御される、実施形態２〜６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９５％下方制御される、実施形態２〜７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９。
前記修飾Ｔ細胞が、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０。
前記修飾Ｔ細胞が、修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１。
前記修飾Ｔ細胞が、修飾された内在性ＴＣＲα座位を含む、実施形態１０に記載の方法。
実施形態１２。
前記内在性ＴＣＲ座位が、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ（クリスパー（ＣＲＩＳＰＲ）−ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ））システムによって修飾される、実施形態１０または１１に記載の方法。
実施形態１３。
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムが、配列番号２３の核酸配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を含む、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１４。
前記Ｎｅｆタンパク質が、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆからなる群から選択される、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５。
前記Ｎｅｆタンパク質が、野生型Ｎｅｆである、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６。
前記野生型Ｎｅｆが、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７。
前記Ｎｅｆタンパク質が、変異体Ｎｅｆである、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８。
前記変異体Ｎｅｆが、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、実施形態１７に記載の方法。
実施形態１９。
前記変異が、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む、実施形態１７または１８に記載の方法。
実施形態２０。
前記変異体Ｎｅｆが、
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、実施形態１７〜１９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１。
前記前駆体Ｔ細胞が、細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２２。
細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を、前記前駆体Ｔ細胞に導入することをさらに含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、前記Ｔ細胞に連続的に導入される、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２４。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、前記Ｔ細胞に同時に導入される、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２５。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、別々のベクター上にある、実施形態２４に記載の方法。
実施形態２６。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じベクター上にある、実施形態２４に記載の方法。
実施形態２７。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結している、実施形態２６に記載の方法。
実施形態２８。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の上流にある、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の下流にある、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３０。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、連結配列を介して結合している、実施形態２６〜２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３１。
前記連結配列が、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかである、実施形態３０に記載の方法。
実施形態３２。
前記ベクターが、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである、実施形態２５〜３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３３。
前記修飾Ｔ細胞が、組織不適合性の個体において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）応答を誘発しないか、または前記前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する、実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３４。
前記第１の核酸及び／または前記第２の核酸を含むＴ細胞を単離または濃縮することをさらに含む、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３５。
前記Ｎｅｆタンパク質を発現する前記修飾Ｔ細胞から、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む、実施形態１〜３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３６。
前記Ｎｅｆタンパク質を発現する前記修飾Ｔ細胞から、内在性ＴＣＲα陰性Ｔ細胞を単離または濃縮することをさらに含む、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７。
前記Ｎｅｆタンパク質を発現する前記修飾Ｔ細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と配合することをさらに含む、実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３８。
前記Ｎｅｆタンパク質を発現する有効量の前記修飾Ｔ細胞を個体に投与することをさらに含む、実施形態１〜３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３９。
前記個体が、がんを有する、実施形態３８に記載の方法。
実施形態４０。
前記個体が、ヒトである、実施形態３８または３９に記載の方法。
実施形態４１。
前記機能的外因性受容体が、工学操作されたＴＣＲである、実施形態２１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２。
前記工学操作されたＴＣＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態４１に記載の方法。
実施形態４３。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４５。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、
前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、実施形態２１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が同じである、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４７。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が異なっている、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４８。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第２のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメイン、またはその一部分、
（ｆ）第３のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第４のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であり、
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態２１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４９。
少なくとも前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０。
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５１。
前記機能的外因性受容体が、非ＴＣＲ受容体である、実施形態２１〜４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５２。
前記非ＴＣＲ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３。
前記ＣＡＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むポリペプチドを含む、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４。
前記ＣＡＲが、
（ａ）Ｆｃ受容体である抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、抗体結合ＴＣＲ（ＡＣＴＲ）である、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５５。
前記抗原結合性断片が、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、実施形態４２〜５３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６。
前記抗原結合性断片が、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、一価である、実施形態４２〜５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多価である、実施形態４２〜５７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５９。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多重特異性である、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂを含む、実施形態４２〜５３、５５、５６、５８、及び５９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６１。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含む、実施形態４２〜５３、５５、５６、５８、及び５９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６２。
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態４２〜５３及び５５〜６１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６３。
前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６４。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂまたはｓｃＦｖを含む、実施形態６３に記載の方法。
実施形態６５。
前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する、実施形態５３〜６４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６６。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態６５に記載の方法。
実施形態６７。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４２〜６６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６８。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、またはＤＡＰ１２に由来する、実施形態６８に記載の方法。
実施形態７０。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、実施形態５３〜６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７１。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７２。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞質ドメインを含む、実施形態７１に記載の方法。
実施形態７３。
前記細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、実施形態４２〜７２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７４。
前記ヒンジドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態７３に記載の方法。
実施形態７５。
前記機能的外因性受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、実施形態４２〜７４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７６。
前記シグナルペプチドが、ＣＤ８αに由来する、実施形態７５に記載の方法。
実施形態７７。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチド、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂ、ＣＤ８αに由来するヒンジドメイン、ＣＤ８αに由来する膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む、実施形態５３及び５５〜７６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７８。
実施形態１〜７７のいずれか１つに記載の方法によって得られる修飾Ｔ細胞。
実施形態７９。
Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸を含む修飾Ｔ細胞であって、前記Ｎｅｆタンパク質が発現すると、前記修飾Ｔ細胞の内在性ＴＣＲが下方調節される、前記修飾Ｔ細胞。
実施形態８０。
前記下方調節が、前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む、実施形態７９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８１。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約５０％下方制御される、実施形態８０に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８２。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約６０％下方制御される、実施形態８０または８１に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８３。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約７０％下方制御される、実施形態８０〜８２のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８４。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約８０％下方制御される、実施形態８０〜８３のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８５。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９０％下方制御される、実施形態８０〜８４のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８６。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９５％下方制御される、実施形態８０〜８５のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８７。
前記修飾Ｔ細胞が、未修飾の内在性ＴＣＲ座位を含む、実施形態７９〜８６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８８。
前記修飾Ｔ細胞が、修飾された内在性ＴＣＲ座位を含む、実施形態７９〜８６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態８９。
前記修飾Ｔ細胞が、修飾された内在性ＴＣＲα座位を含む、実施形態８８に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９０。
前記内在性ＴＣＲ座位が、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムによって修飾される、実施形態８８または８９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９１。
前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムが、配列番号２３の核酸配列を含むｇＲＮＡを含む、実施形態９０に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９２。
前記Ｎｅｆタンパク質が、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆからなる群から選択される、実施形態７９〜９１のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９３。
前記Ｎｅｆタンパク質が、野生型Ｎｅｆである、実施形態７９〜９２のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９４。
前記野生型Ｎｅｆが、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態９３に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９５。
前記Ｎｅｆタンパク質が、変異体Ｎｅｆである、実施形態７９〜９２のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９６。
前記変異体Ｎｅｆが、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、実施形態９５に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９７。
前記変異が、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む、実施形態９５または９６に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９８。
前記変異体Ｎｅｆが、
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、実施形態９５〜９７のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態９９。
細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸をさらに含む、実施形態７９〜９８のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１００。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、別々のベクター上にある、実施形態９９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０１。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じベクター上にある、実施形態９９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０２。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結している、実施形態１０１に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０３。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の上流にある、実施形態１０２に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０４。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の下流にある、実施形態１０２に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０５。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、連結配列を介して結合している、実施形態１０１〜１０４のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０６。
前記連結配列が、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかである、実施形態１０５に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０７。
前記ベクターが、ウイルスベクターである、実施形態１００〜１０６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０８。
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターからなる群から選択される、実施形態１０７に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１０９。
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１０８に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１１０。
前記修飾Ｔ細胞が、組織不適合性の個体において、ＧｖＨＤ応答を誘発しないか、または前記修飾Ｔ細胞の起源となる前記前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する、実施形態７９〜１０９のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１１１。
前記機能的外因性受容体が、工学操作されたＴＣＲである、実施形態９９〜１１０のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１１２。
前記工学操作されたＴＣＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態１１１に記載の方法。
実施形態１１３。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１４。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１５。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、
前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、実施形態９９〜１１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１６。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が同じである、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１１７。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が異なっている、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１１８。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第２のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメイン、またはその一部分、
（ｆ）第３のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第４のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であり、
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態９９〜１１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１９。
少なくとも前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態１１８に記載の方法。
実施形態１２０。
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態１１８に記載の方法。
実施形態１２１。
前記機能的外因性受容体が、非ＴＣＲ受容体である、実施形態９９〜１１０のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２２。
前記非ＴＣＲ受容体が、ＣＡＲである、実施形態１２１に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２３。
前記ＣＡＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むポリペプチドを含む、実施形態１２２に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２４。
前記ＣＡＲが、
（ａ）Ｆｃ受容体である抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、抗体結合ＴＣＲ（ＡＣＴＲ）である、実施形態１２２に記載の方法。
実施形態１２５。
前記抗原結合性断片が、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、実施形態１１２〜１２４のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２６。
前記抗原結合性断片が、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである、実施形態１２５に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２７。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、一価である、実施形態１１２〜１２６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２８。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多価である、実施形態１１２〜１２６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１２９。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多重特異性である、実施形態１２８に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３０。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂを含む、実施形態１２８または１２９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３１。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含む、実施形態１２８または１２９に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３２。
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態１１２〜１２３及び１２５〜１３１のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３３。
前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である、実施形態１３２に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３４。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂを含む、実施形態１３３に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３５。
前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する、実施形態１２３〜１３４のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３６。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態１３５に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３７。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１１２〜１３６のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３８。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する、実施形態１３７に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１３９。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、またはＤＡＰ１２に由来する、実施形態１３８に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４０。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１２３〜１３９のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４１。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＣＤ３５３（ＢＬＡＭＥ、ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する、実施形態１４０に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４２。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞質ドメインを含む、実施形態１４１に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４３。
前記細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、実施形態１１２〜１４２のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４４。
前記ヒンジドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態１４３に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４４。
前記機能的外因性受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、実施形態１１２〜１４４のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４５。
前記シグナルペプチドが、ＣＤ８αに由来する、実施形態１４４に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４６。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチド、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂ、ＣＤ８αに由来するヒンジドメイン、ＣＤ８αに由来する膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む、実施形態１２３及び１２５〜１４５のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態１４７。
実施形態７８〜１４７のいずれか１つに記載の修飾Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
実施形態１４８。
有効量の実施形態１４７に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、前記個体の疾患を処置する方法。
実施形態１４９。
前記疾患が、がんである、実施形態１４８に記載の方法。
実施形態１５０。
前記個体が、前記修飾Ｔ細胞の起源となる前記前駆体Ｔ細胞のドナーと組織不適合性である、実施形態１４８または１４９に記載の方法。
実施形態１５１。
前記個体が、ヒトである、実施形態１４８〜１５０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５２。
ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５３。
前記変異が、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位から選択される、実施形態１５２に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５４。
前記天然に存在しないＮｅｆタンパク質が、Ｔ細胞において発現した場合、前記Ｔ細胞における内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８に対し、野生型Ｎｅｆタンパク質と比較して低減した下方調節作用を有する、実施形態１５２または１５３に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５５。
前記下方調節が、前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現を下方制御することを含む、実施形態１５４に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５６。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約５０％低減する、実施形態１５５に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５７。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約６０％低減する、実施形態１５５または１５６に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５８。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約７０％低減する、実施形態１５５〜１５７のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１５９。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約８０％低減する、実施形態１５５〜１５８のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６０。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約９０％低減する、実施形態１５５〜１５９のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６１。
前記内在性ＣＤ４及び／またはＣＤ２８の細胞表面発現の下方制御が、少なくとも約９５％低減する、実施形態１５５〜１６０のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６２。
単離された前記Ｎｅｆタンパク質がＴ細胞において発現すると、前記Ｔ細胞の前記内在性ＴＣＲが下方調節される、実施形態１５２〜１６１のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６３。
前記下方調節が、前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現を下方制御することを含む、実施形態１６２に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６４。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約５０％下方制御される、実施形態１６３に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６５。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約６０％下方制御される、実施形態１６３または１６４に記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６６。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約７０％下方制御される、実施形態１６３〜１６５のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６７。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約８０％下方制御される、実施形態１６３〜１６６のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６８。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９０％下方制御される、実施形態１６３〜１６７のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１６９。
前記内在性ＴＣＲの細胞表面発現が、少なくとも約９５％下方制御される、実施形態１６３〜１６８のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１７０。
前記Ｎｅｆタンパク質が、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆからなる群から選択される、実施形態１５２〜１６９のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１７１。
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、実施形態１５２〜１７０のいずれか１つに記載の天然に存在しないＮｅｆタンパク質。
実施形態１７２。
Ｎｅｆタンパク質をコードする第１の核酸を含むウイルスベクター。
実施形態１７３。
前記Ｎｅｆタンパク質が、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆからなる群から選択される、実施形態１７２に記載のウイルスベクター。
実施形態１７４。
前記Ｎｅｆタンパク質が、野生型Ｎｅｆである、実施形態１７２または１７３に記載のウイルスベクター。
実施形態１７５。
前記野生型Ｎｅｆが、配列番号１２〜１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１７４に記載のウイルスベクター。
実施形態１７６。
前記Ｎｅｆタンパク質が、変異体Ｎｅｆである、実施形態１７２または１７３に記載のウイルスベクター。
実施形態１７７。
前記変異体Ｎｅｆが、ミリストイル化部位、Ｎ末端αヘリックス、チロシンベースのＡＰ動員、ＣＤ４結合部位、酸性クラスター、プロリンベースのリピート、ＰＡＫ結合ドメイン、ＣＯＰ  Ｉ動員ドメイン、ジロイシンベースのＡＰ動員ドメイン、Ｖ−ＡＴＰａｓｅ及びＲａｆ−１結合ドメイン、もしくはそれらの任意の組み合わせにおける１つ以上の変異、または表１１に示されるアミノ酸残基のいずれかにおける１つ以上の変異を含む、実施形態１７６に記載のウイルスベクター。
実施形態１７８。
前記変異が、挿入、欠失、点変異（複数可）、及び／または転位を含む、実施形態１７６または１７７に記載のウイルスベクター。
実施形態１７９。
前記変異体Ｎｅｆが、
（ｉ）配列番号１８〜２２のいずれか１つのアミノ酸配列、
（ｉｉ）ａａ２〜４、ａａ８〜１０、ａａ１１〜１３、ａａ３８〜４０、ａａ４４〜４６、ａａ４７〜４９、ａａ５０〜５２、ａａ５３〜５５、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１１０〜１１２、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、１７９〜１８１ａａ、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９１〜１９３、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ２０６〜２０８、ａａ２１２〜２１４、ａａ２１５〜２１７、ａａ２１８〜２２０、ａａ２２１〜２２３、ａａ８〜１３、ａａ４４〜６７、ａａ１０７〜１１２、ａａ１６４〜１９６、ａａ２０３〜２０８、もしくはａａ２１２〜２２３のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｉｉ）ａａ２〜４、ａａ４４〜４６、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ９８〜１００、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ４４〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、ａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、
（ｉｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７０〜１７２、ａａ１７３〜１７５、ａａ１７６〜１７８、１７８〜１７９ａａ、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８２〜１８４、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、もしくはａａ１６４〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異、または
（ｖ）ａａ２〜４、ａａ５６〜５８、ａａ５９〜６１、ａａ６２〜６４、ａａ６５〜６７、ａａ１０７〜１０９、ａａ１３７〜１３９、ａａ１５２〜１５４、ａａ１６４〜１６６、ａａ１６７〜１６９、ａａ１７６〜１７８、ａａ１７８〜１７９、ａａ１７９〜１８１、ａａ１８５〜１８７、ａａ１８８〜１９０、ａａ１９４〜１９６、ａａ２０３〜２０５、ａａ５６〜６７、ａａ１６４〜１６９、ａａ１７６〜１８１、もしくはａａ１８５〜１９０のいずれかのアミノ酸残基（ここで、前記アミノ酸残基の位置は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに対応する）における１つ以上の変異
を含む、実施形態１７６〜１７８のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態１８０。
細胞外リガンド結合ドメイン及び任意選択で細胞内シグナル伝達ドメインを含む機能的外因性受容体をコードする第２の核酸をさらに含む、実施形態１７２〜１７９のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態１８１。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結している、実施形態１８０に記載のウイルスベクター。
実施形態１８２。
前記プロモーターが、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−ｌａプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、及びホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターからなる群から選択される、実施形態１８１に記載のウイルスベクター。
実施形態１８３。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の上流にある、実施形態１８１または１８２に記載のウイルスベクター。
実施形態１８４。
前記第１の核酸が、前記第２の核酸の下流にある、実施形態１８１または１８２に記載のウイルスベクター。
実施形態１８５。
前記第１の核酸と前記第２の核酸とが、連結配列を介して結合している、実施形態１８０〜１８４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態１８６。
前記連結配列が、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、ＢｍＣＰＶ  ２Ａ、ＢｍＩＦＶ  ２Ａ、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎをコードする核酸配列、またはＩＲＥＳ、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＵＢＣ、ＥＦ１α、ＰＧＫ、ＣＡＧＧの核酸配列、またはそれらの任意の組み合わせ（式中、ｎは、少なくとも１の整数である）のいずれかである、実施形態１８５に記載のウイルスベクター。
実施形態１８７。
前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターからなる群から選択される、実施形態１７２〜１８６のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態１８８。
前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、実施形態１８７に記載のウイルスベクター。
実施形態１８９。
前記機能的外因性受容体が、工学操作されたＴＣＲである、実施形態１８０〜１８８のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態１９０。
前記工学操作されたＴＣＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｄ）第２のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｅ）第３のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）であり、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態１８９に記載の方法。
実施形態１９１。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態１９０に記載の方法。
実施形態１９２。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態１９０に記載の方法。
実施形態１９３。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第１のＴＣＲ共受容体の任意選択の細胞外ドメインまたはその一部分、
（ｆ）第２のＴＣＲ共受容体の膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第３のＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）であり、
前記ＴＣＲサブユニットが、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択され、
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ２８からなる群から選択される、実施形態１８０〜１８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９４。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が同じである、実施形態１９３に記載の方法。
実施形態１９５。
前記第１、前記第２、及び前記第３のＴＣＲ共受容体が異なっている、実施形態１９３に記載の方法。
実施形態１９６。
前記機能的外因性受容体が、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）任意選択の第１のリンカー、
（ｃ）第１のＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを特異的に認識する細胞外ＴＣＲ結合ドメイン、
（ｄ）任意選択の第２のリンカー、
（ｅ）第２のＴＣＲサブユニットの任意選択の細胞外ドメイン、またはその一部分、
（ｆ）第３のＴＣＲサブユニットの膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメイン、及び
（ｇ）第４のＴＣＲサブユニットの細胞内シグナル伝達ドメインを含む任意選択の細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、Ｔ細胞抗原結合体（ＴＡＣ）様キメラ受容体であり、
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが全て、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、及びＣＤ３δからなる群から選択される、実施形態１８０〜１８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９７。
少なくとも前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが同じである、実施形態１９６に記載の方法。
実施形態１９８。
前記第１、前記第２、前記第３、及び前記第４のＴＣＲサブユニットが異なっている、実施形態１９６に記載の方法。
実施形態１９９。
前記機能的外因性受容体が、非ＴＣＲ受容体である、実施形態１８０〜１８８のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２００。
前記非ＴＣＲ受容体が、ＣＡＲである、実施形態１９９に記載のウイルスベクター。
実施形態２０１。
前記ＣＡＲが、
（ａ）腫瘍抗原の１つ以上のエピトープを特異的に認識する抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むポリペプチドを含む、実施形態２００に記載のウイルスベクター。
実施形態２０２。
前記ＣＡＲが、
（ａ）Ｆｃ受容体である抗原結合性断片を含む細胞外リガンド結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む、抗体結合ＴＣＲ（ＡＣＴＲ）である、実施形態２００に記載の方法。
実施形態２０３。
前記抗原結合性断片が、ラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、実施形態１９０〜２０１のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２０４。
前記抗原結合性断片が、ｓｄＡｂまたはｓｃＦｖである、実施形態２０３に記載のウイルスベクター。
実施形態２０５。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、一価である、実施形態１９０〜２０４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２０６。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多価である、実施形態１９０〜２０４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２０７。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、多重特異性である、実施形態２０６に記載のウイルスベクター。
実施形態２０８。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂを含む、実施形態２０６または２０７に記載のウイルスベクター。
実施形態２０９。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含む、実施形態２０６または２０７に記載のウイルスベクター。
実施形態２１０。
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３／ＩＬ３Ｒα、ｃ−Ｍｅｔ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＧＰＣ３、糖脂質Ｆ７７、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態１９０〜２０１及び２０３〜２０９のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２１１。
前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、またはＣＤ２０である、実施形態２１０に記載のウイルスベクター。
実施形態２１２。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂを含む、実施形態２１１に記載のウイルスベクター。
実施形態２１３。
前記細胞外リガンド結合ドメインが、ＣＤ１９またはＣＤ２０の１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｃＦｖを含む、実施形態２１１に記載のウイルスベクター。
実施形態２１４。
前記膜貫通ドメインが、Ｔ細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、及びＰＤ−１からなる群から選択される分子に由来する、実施形態２０１〜２１３のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１９４。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態１９３に記載のウイルスベクター。
実施形態２１５。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１９０〜２１４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２１６。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃイプシロンＲＩｂ）、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来する、実施形態２１５に記載のウイルスベクター。
実施形態２１７。
前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、またはＤＡＰ１２に由来する、実施形態２１６に記載のウイルスベクター。
実施形態２１８。
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、実施形態２０１〜２１７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２１９。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ−１）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＬＦＡ−１（リンパ球機能関連抗原１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤＳ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＰＯ−３、ＣＤ３５３（ＢＬＡＭＥ、ＳＬＡＭＦ８）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８３、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７３（ＰＤ−Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される共刺激分子に由来する、実施形態２１８に記載のウイルスベクター。
実施形態２２０。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の細胞質ドメインを含む、実施形態２１９に記載のウイルスベクター。
実施形態２２１。
前記細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、実施形態１９０〜２２０のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２２２。
前記ヒンジドメインが、ＣＤ８αに由来する、実施形態２２１に記載のウイルスベクター。
実施形態２２３。
前記機能的外因性受容体のＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、実施形態１９０〜２２２のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２２４。
前記シグナルペプチドが、ＣＤ８αに由来する、実施形態２３に記載のウイルスベクター。
実施形態２２５。
前記ＣＡＲが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αに由来するシグナルペプチド、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂ、ＣＤ８αに由来するヒンジドメイン、ＣＤ８αに由来する膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む、実施形態２０１及び２０３〜２２４のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２２６。
上流から下流に向かって、前記Ｎｅｆタンパク質をコードする前記第１の核酸と、Ｐ２Ａ、ＩＲＥＳ、またはＰＧＫをコードする第３の核酸と、（ＧＧＧＳ）３リンカーをコードする任意選択の第４の核酸と、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む前記ＣＡＲをコードする前記第２の核酸とを含む、実施形態２０１及び２０３〜２２５のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２２７。
上流から下流に向かって、ＢＣＭＡの１つ以上のエピトープを特異的に認識する１つ以上のｓｄＡｂを含む細胞外リガンド結合ドメインを含む前記ＣＡＲをコードする前記第２の核酸と、Ｐ２Ａ、ＩＲＥＳ、またはＰＧＫをコードする第３の核酸と、（ＧＧＧＳ）３リンカーをコードする任意選択の第４の核酸と、前記Ｎｅｆタンパク質をコードする前記第１の核酸とを含む、実施形態２０１及び２０３〜２２５のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
実施形態２２８。
実施形態１７２〜２２７のいずれか１つに記載のウイルスベクターを前駆体Ｔ細胞に導入することによって得られる修飾Ｔ細胞。
実施形態２２９。
前記修飾Ｔ細胞が、組織不適合性の個体において、ＧｖＨＤ応答を誘発しないか、または前記修飾Ｔ細胞の起源となる前記前駆体Ｔ細胞のドナーから単離された初代Ｔ細胞によって誘発されるＧｖＨＤ応答と比較して低減したＧｖＨＤ応答を誘発する、実施形態２２８に記載の修飾Ｔ細胞。
実施形態２３０。
実施形態２２８または２２９に記載の修飾Ｔ細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
実施形態２３１。
有効量の実施形態２３０に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、前記個体の疾患を処置する方法。
実施形態２３２。
前記疾患が、がんである、実施形態２３１に記載の方法。
実施形態２３３。
前記個体が、前記修飾Ｔ細胞の起源となる前記前駆体Ｔ細胞のドナーと組織不適合性である、実施形態２３１または２３２に記載の方法。
実施形態２３４。
前記個体が、ヒトである、実施形態２３１〜２３３のいずれか１つに記載の方法。
【実施例】
【０３４５】
以下の実施例及び例示的な実施形態は、単に本発明の例示となるよう意図されており、したがって、いかなる点でも本発明を限定するものとみなされるべきではない。以下の実施例及び詳細な説明は、例示として提供するものであり、制限するものではない。
【０３４６】
実施例１。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、ＴＣＲによるシグナル伝達を阻害する
本実施例では、ＳＩＶ  Ｎｅｆを発現する例示的なＴ細胞の設計及び調製、ならびにＳＩＶ  ＮｅｆがＴＣＲによるシグナル伝達に及ぼす作用を説明する。
【０３４７】
１。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミド、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞株の構築
ｐＬＶＸ−Ｐｕｒｏは、ＨＩＶ−１に基づくレンチウイルス発現ベクターである。ｐＬＶＸ−ｈＥＦ１αベクターを構築するために、ＣｌａＩ及びＥｃｏＲＩを使用してｐＬＶＸ−Ｐｕｒｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）ベクターを酵素的に消化して、多重クローニング部位（ＭＣＳ）のすぐ上流に位置する構成的活性型ヒトサイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＰＣＭＶ  ＩＥ）を除去し、次いで、消化されたベクターにヒトＥＦ１αプロモーター（ＧｅｎＢａｎｋ：Ｊ０４６１７．１）をクローニングした。次に、ＳＩＶ  Ｎｅｆ、Ｐ２Ａ、及びＬＮＧＦＲ（低親和性神経成長因子受容体）をコードする融合遺伝子を連続的に構築した。次いで、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ融合遺伝子（配列番号２４）をｐＬＶＸ−ｈＥＦ１αプラスミドにクローニングし、その結果、組換えＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミド（以下、「ＰＬＬＶ−Ｍ０７１」といい、「Ｍ０７１」と略す）を得た。Ｍ０７１組換えトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得て、これを−８０℃で保管した。
【０３４８】
Ｊｕｒｋａｔ細胞（クローンＥ６−１、ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））を、９０％  ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃２２４００−０８９）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃１００９９−１４１）、及び１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃１５１４０−１２２）で培養した。ＳＩＶ  ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ融合遺伝子を有するレンチウイルスを、Ｊｕｒｋａｔ細胞培養物の上清に添加して形質導入した。ＬＮＧＦＲを、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋細胞の選択マーカーとして使用した。形質導入の６０時間後、５×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞を、下記のようにＬｉｆｅ  Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴ  ＦＡＣＳ（ＦＡＣＳ）を使用したフローサイトメトリー分析に供し、ＬＮＧＦＲ＋細胞の百分率は６６．１％であった。他の１×１０７細胞をＤＰＢＳで再懸濁し、次いで２０μＬのＭＡＣＳｅｌｅｃｔ  ＬＮＧＦＲ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−３３０）を補い、磁気標識のために氷上で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＥバッファー（リン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）を添加して、体積を５００μＬに調整した。次いで、細胞懸濁液を、ＭＡＣＳキットプロトコール（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃキット、＃１３０−０９１−３３０）に従う磁気分離及び濃縮に供し、その結果、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現する９４．３％のＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞株を得た（図１Ａ）。
【０３４９】
ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別機）
簡単に説明すると、細胞懸濁液を室温１０００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄した。細胞をＤＰＢＳで再懸濁し、次いで抗体を添加し、４℃で３０分間インキュベートした。本実施例において、使用した抗体は、１μＬのＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ２７１  ＮＧＦＲ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３４５１１１）であった。インキュベーション後、細胞懸濁液を室温１０００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄し、次いで細胞を１ｍＬのＤＰＢＳで再懸濁した。遠心分離及びＤＰＢＳでの再懸濁のステップを１回繰り返した。次いで、細胞を０．４ｍＬのＤＰＢＳで再懸濁し、ＦＡＣＳを行った。
【０３５０】
ＭＡＣＳ（磁気活性化細胞選別）
簡単に説明すると、細胞懸濁液を室温１０００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄した。細胞をＤＰＢＳで再懸濁し、次いで２０μＬのＭＡＣＳｅｌｅｃｔ  ＬＮＧＦＲ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−３３０）を補い、磁気標識のために氷上で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＥバッファー（リン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）を添加して、体積を５００μＬに調整した。次いで、細胞懸濁液を、ＭＡＣＳキットプロトコールに従う磁気分離及び濃縮に供した。
【０３５１】
２。ＴＣＲαノックアウト（ＫＯ）構築物及びＴＣＲα欠損Ｊｕｒｋａｔ細胞株の構築
ヒトＴＲＡＣ（Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  Ｃｏｎｓｔａｎｔ、ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＣ＿０１８９２５．２）を標的とするｇＲＮＡ配列を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術のために設計し（配列番号２３）、ｌｅｎｔｉＣＲＩＳＰＲ  ｖ２ベクター（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド、＃５２９６１、ピューロマイシン選択可能マーカーを含む）にサブクローニングして、ＴＣＲαＫＯ組換えプラスミドを構築した。ＴＣＲαＫＯ組換えプラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得て、これを−８０℃で保管した。
【０３５２】
Ｊｕｒｋａｔ細胞（クローンＥ６−１、ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））を上記のように培養した。ＴＣＲαＫＯ配列を有するレンチウイルスを、Ｊｕｒｋａｔ細胞培養物の上清に添加して形質導入した。形質導入の７２時間後、最終濃度１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを添加した。培養培地を３日毎に変え、同濃度のピューロマイシンを補って、単細胞クローンについてさらにスクリーニングした。
【０３５３】
３。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、ＴＣＲ／ＣＤ３によるシグナル伝達を阻害する
ＳＩＶ  Ｎｅｆ過剰発現がＴＣＲ／ＣＤ３によるシグナル伝達に影響を及ぼすかどうかを試験するために、ＬＮＧＦＲ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、及び空ベクターを形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を、上述のようにＭＡＣＳで単離し、次いで、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ、２μｇ／ｍＬ）でＴ細胞活性化を誘導した。ＰＨＡは、ＴＣＲを含むグリコシル化表面タンパク質上の糖に結合し、それによってそれらを架橋する。これにより、カルシウム依存性シグナル伝達経路が作動し、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核内因子）の活性化が起こる。ＰＨＡ刺激の３日後、各Ｊｕｒｋａｔ細胞型の５×１０５細胞を、ＣＤ６９＋率について、ＦＡＣＳを使用して試験した。ＦＡＣＳは上記のように行い、１μＬのＰＥ抗ヒトＣＤ６９抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３１０９０６）を使用した。
【０３５４】
図１Ｂ（パネル中左の２つの縦列）に示すように、ＰＨＡ刺激後、ＣＤ６９陽性率は、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞で４１．１％、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞で１．０９％、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞で６０．１％、Ｍ０７１（ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ）ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞で７．０５％であった。これらの結果は、ＴＣＲによるＴ細胞活性化が、ＳＩＶ  Ｎｅｆの過剰発現時に有意に阻害される（Ｐ＜０．０５）ことを示した。
【０３５５】
４。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体下流のシグナル伝達を阻害しない
ＳＩＶ  Ｎｅｆ過剰発現がＴＣＲ／ＣＤ３下流のシグナル伝達に影響を及ぼすかどうかを試験するために、Ｊｕｒｋａｔ細胞株を、ＰＭＡ（ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート、１０ｎｇ／ｍＬ）とＩＯＮ（イオノマイシン、２５０ｎｇ／ｍＬ）との混合物で誘導し、次いで、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９の発現を、ＦＡＣＳで試験した（上記方法を参照されたい）。ＰＭＡは、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）の、ひいてはＮＦ−κＢの特異的活性化因子である。ＩＯＮは、細胞内外へのＣａ２＋の移動を容易にする膜透過性カルシウムイオノフォアであり、細胞内カルシウムレベルを上昇させるために使用され得る。ＰＭＡとＩＯＮとの組み合わせにより、シグナル伝達装置が迂回され、転写因子のＮＦ−κＢ及びＮＦＡＴが活性化し、Ｔ細胞活性化が起こる。図１Ｂ（パネル中右の２つの縦列を参照のこと）に示すように、ＰＭＡ／ＩＯＮ刺激後、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＭ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞のＣＤ６９＋率は、それぞれ９６．７％、９７．１％、９８．５％、及び８７．４％であった。これらの結果は、下流核内シグナル伝達が、ＳＩＶ  Ｎｅｆの過剰発現時に著しく影響されないことを示した。
【０３５６】
まとめると、上記の結果は、Ｎｅｆが、ＴＣＲによる上流Ｔ細胞活性化を著しく阻害するが、ＴＣＲ下流の核内シグナル伝達には影響しないことを示した。
【０３５７】
実施例２。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、Ｔ細胞表面上のＴＣＲ／ＣＤ３複合体の発現を下方制御する
実施例１に記載したような、５×１０５個の形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＭ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞を得て、ＣＤ３ε及びＴＣＲαβの陽性率検査のためにＦＡＣＳに供した。ＦＡＣＳを実施例１のように行った。１μＬのＰＥ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３００３１６）または１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）をＦＡＣＳに使用した。
【０３５８】
別個の実験として、実施例１に記載したような、１×１０６個の形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＭ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞を収集し、室温１０００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄した。細胞をＤＰＢＳで再懸濁し、１００μＬのＩｍｍｕｎｏｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  Ｆｉｘ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、＃Ｐ００９８）を固定のために２０分、室温で添加した。次いで、細胞懸濁液を室温１５００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄した。細胞を、室温で２０分間、２００μＬのＤＰＢＳ＋Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（０．１％）で再懸濁した。次いで、１μＬのＦＩＴＣコンジュゲートＣＤ３ζ／ＣＤ２４７抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ａ１５７５４）を添加し、細胞懸濁液を１５分間室温でインキュベートした。インキュベーション後、細胞懸濁液を室温１５００ｒｐｍ／分で遠心分離し、上清を廃棄し、次いで細胞を１ｍＬのＤＰＢＳで再懸濁した。遠心分離及びＤＰＢＳでの再懸濁のステップを１回繰り返した。次いで、細胞を０．４ｍＬのＤＰＢＳで再懸濁し、ＣＤ３ζ陽性率検査のためにＦＡＣＳを行った。
【０３５９】
図２に示すように、ＣＤ３ε発現の高いＪｕｒｋａｔ細胞、及びＴＣＲαβを発現する細胞は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ発現時に著しく低減した。Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞に関するＣＤ３ε＋率１５．６％及びＴＣＲαβ＋率１５．３％を、形質導入していない（ＵｎＴ）Ｊｕｒｋａｔ細胞のもの（それぞれ８５．９％及び９０．０％）と比較されたい。ＣＤ３ζ＋率は、Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞については９３．２％であり、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞のもの（９５．６％）との有意差はなかった。対照として、空ベクターの発現は、形質導入していない（ＵｎＴ）Ｊｕｒｋａｔ細胞での場合と比較して、ＣＤ３ε、ＴＣＲαβ、及びＣＤ３ζのＪｕｒｋａｔ細胞発現に影響を及ぼさない。
【０３６０】
これらの結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆの過剰発現がＴＣＲ／ＣＤ３複合体のＴ細胞表面発現を著しく下方制御し（一方、ＣＤ３ζ発現は影響を受けない）、それにより、ＴＣＲによるＴ細胞活性化が影響を受けることを示した。
【０３６１】
実施例３。ＳＩＶ  Ｎｅｆ相同体のＨＩＶ１  Ｎｅｆ及びＨＩＶ２  Ｎｅｆは、ＴＣＲ／ＣＤ３によるシグナル伝達を阻害する
１。ＨＩＶ１  Ｎｅｆ／ＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏトランスファープラスミド及び細胞株の構築
ＵｎｉＰｒｏｔデータベースの分析に基づき、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ及びＨＩＶ２  ＮｅｆをＳＩＶ  Ｎｅｆ相同体として回収した。融合遺伝子ＨＩＶ１  ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ（配列番号２５）及びＨＩＶ２  ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ（配列番号２６）を構築し、ｐＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現ベクター（実施例１において構築）にクローニングして、組換えトランスファープラスミドのＨＩＶ１  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ（以下、「ＨＩＶ１」トランスファープラスミドという）及びＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ（以下、「ＨＩＶ２」トランスファープラスミドという）をそれぞれ形成した。ＨＩＶ１トランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。ＨＩＶ２トランスファープラスミドを精製し、同様にｐｓＰＡＸ２及びｐＭＤ２．Ｇプラスミドと共にＨＥＫ２９３Ｔ細胞に形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得て、これを−８０℃で保管した。
【０３６２】
Ｊｕｒｋａｔ細胞（クローンＥ６−１、ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））を実施例１のように培養した。ＨＩＶ１  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−ＰｕｒｏまたはＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ融合配列を有するレンチウイルスを、Ｊｕｒｋａｔ細胞培養物の上清に添加して形質導入した。ピューロマイシンをＨＩＶ１／ＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋細胞の選択可能マーカーとして使用した。形質導入の７２時間後、最終濃度１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを添加した。培養培地を３日毎に変え、同濃度のピューロマイシンを補って、単細胞クローンについてさらにスクリーニングした。
【０３６３】
２。ＨＩＶ１  Ｎｅｆ／ＨＩＶ２  Ｎｅｆは、Ｔ細胞表面上のＴＣＲ／ＣＤ３複合体の発現を下方制御する
実施例１に記載したような、５×１０５個のＨＩＶ１  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（ＵｎＴ）、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＣＤ３ε及びＴＣＲαβの陽性率検査のためにＦＡＣＳに供した。ＦＡＣＳを実施例１のように行い、１μＬのＰＥ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３００３１６）または１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）をＦＡＣＳに使用した。別個の実験として、実施例１に記載したような、１×１０６個のＨＩＶ１  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、形質導入していない（ＵｎＴ）Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、及びＭ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞を、実施例２のように収集し、固定し、ＣＤ３ζ陽性率検査のためにＦＡＣＳに供した。１μＬのＦＩＴＣコンジュゲートＣＤ３ζ／ＣＤ２４７抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ａ１５７５４）をＦＡＣＳに使用した。
【０３６４】
図３に示すように、ＴＣＲαβ＋率は、Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞でそれぞれ１６．１％、１５．１％、及び２６．２％であり、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞のもの（９６．５％、Ｐ＜０．０５）より有意に低かった。ＣＤ３ε＋率は、Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞でそれぞれ１９．４％、１８．１％、及び３０．６％であり、空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞のもの（９８．２％、Ｐ＜０．０５）より有意に低かった。ＴＣＲαＫＯ  Ｊｕｒｋａｔ細胞は陽性対照であり、著しく低減したＴＣＲα＋率及びＣＤ３ε＋率を示した。一方、ＣＤ３ζ＋率は、Ｍ０７１  ＬＮＧＦＲ＋濃縮Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨＩＶ１  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞、及びＨＩＶ２  Ｎｅｆ＋Ｊｕｒｋａｔ細胞でそれぞれ９９．０％、９４．３％、及び９５．０％であり、形質導入していない（ＵｎＴ）Ｊｕｒｋａｔ細胞または空ベクターを発現するＪｕｒｋａｔ細胞のもの（それぞれ９８．０％及び９９．７％、Ｐ＞０．０５）との有意差はなかった。
【０３６５】
これらの結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ相同体ＨＩＶ１  Ｎｅｆ及びＨＩＶ２  Ｎｅｆの過剰発現が、ＴＣＲ／ＣＤ３の細胞表面発現を効果的に下方制御することができ（一方、ＣＤ３ζ発現は影響を受けない）、それにより、ＴＣＲ／ＣＤ３によるＴ細胞活性化が阻害されることを示す。ＨＩＶ１  Ｎｅｆ及びＨＩＶ２  Ｎｅｆの阻害効率は、ＳＩＶ  Ｎｅｆのものに匹敵する。
【０３６６】
実施例４。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、標的細胞のＴＣＲによる細胞溶解を阻害する
１。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ及び抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミドの構築
抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（以下、「ＢＣＭＡ  ＣＡＲ」という）を、ＷＯ２０１７０２５０３８及びＷＯ２０１８０２８６４７の実施例に記載されているように構築した。ＷＯ２０１８０２８６４７の内容全体は、記載されている全てのＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の配列を含め、参照により本明細書に具体的に援用される。
【０３６７】
簡単に説明すると、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ８αヒンジドメイン（「ＣＤ８αヒンジ」）、ＣＤ８膜貫通ドメイン（「ＣＤ８  ＴＭ」）、ＣＤ２８細胞質ドメイン（「ＣＤ２８  ｃｙｔｏ」）、及び／または４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）細胞質ドメイン（「４−１ＢＢ  ｃｙｔｏ」）、及びＣＤ３ζ細胞質ドメイン（「ＣＤ３ζ」）を含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードする核酸配列を化学合成し、これを、構成的ｈＥＦ１αプロモーター（実施例１のように構築したｐＬＶＸ−ｈＥＦ１α）の下流でそれに作動可能に連結した事前修飾レンチウイルスベクターにクローニングした。
【０３６８】
融合配列ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを有するＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミドを構築するために、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ遺伝子をＧｅｎｓｃｒｉｐｔによって直接構築した。
【０３６９】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得て、これを−８０℃で保管した。
【０３７０】
２。ＳＩＶ  Ｎｅｆ及び抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの同時発現試験
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲプラスミドを、通常のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）形質導入プロトコールの使用によりＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。トランスフェクションの３日後、５×１０５細胞をＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋及びＬＮＧＦＲ＋発現についてＦＡＣＳにより検査した。ＦＡＣＳは、実施例１に記載したように行った。１μＬのＦＩＴＣ標識ヒトＢＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７タンパク質、Ｆｃタグ（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＢＣＡ−ＨＦ２５４）、及び１μＬのＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ２７１  ＮＧＦＲ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３４５１１１）を混合し、ＦＡＣＳに使用した。
【０３７１】
図４Ａに示すように、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトしたＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲプラスミドにより、１７．３％のＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋／ＬＮＧＦＲ＋二重陽性細胞が生成された。このことは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲが、ＳＩＶ  Ｎｅｆの過剰発現時にも細胞表面上で効果的に発現し得ることを示した。
【０３７２】
３。ＳＩＶ  Ｎｅｆは、初代Ｔリンパ球においてＴＣＲ細胞表面発現を著しく阻害する
５０ｍＬの末梢血をボランティアから採血した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離によって単離した。汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９６−５３５）を使用して、ＰＢＭＣを磁気標識し、Ｔリンパ球を単離及び精製した。ヒトＴ細胞活性化／増大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−４４１）を使用して、精製後のＴリンパ球の活性化及び増大を行った。活性化Ｔリンパ球を収集し、ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ、＃２２４００−０８９）に再懸濁した。活性化の３日後、５×１０６個の活性化Ｔリンパ球に、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスと、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスとを同時形質導入した。Ｔ細胞懸濁液を６ウェルプレートに加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータで一晩インキュベートした。形質導入の５日後、１×１０７個のＴ細胞を採取し、ＭＡＣＳ（実施例１に記載の通り、ＭＡＣＳｅｌｅｃｔ  ＬＮＧＦＲ  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９１−３３０）を使用）を使用して分離して、ＬＮＧＦＲ＋Ｔ細胞を得た。選別後のＬＮＧＦＲ＋Ｔ細胞を２日間にわたって増大及び濃縮させ、次いで、５×１０５個のＬＮＧＦＲ＋Ｔ細胞を、ＦＡＣＳにより、ＴＣＲαβ陽性率について試験した。ＦＡＣＳは実施例１のように行い、１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）を使用した。
【０３７３】
図４Ｂに示すように、Ｔ細胞に、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスと、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスとを同時形質導入したところ、ＬＮＧＦＲ＋Ｔ細胞集団中、３５．８％のＴＣＲαβ−細胞がもたらされた。このことは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲの同時形質導入により、ＴＣＲαβ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞が効果的に生成されることを示した。
【０３７４】
４。ＴＣＲ／ＣＤ３枯渇Ｔリンパ球の選別及び濃縮
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルス、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスを、５×１０７個の初代Ｔリンパ球への同時形質導入に使用した。形質導入の５日後、汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９６−５３５）を使用して、キットプロトコールに従い、細胞を磁気標識し、ＣＤ３ε陰性Ｔリンパ球を分離及び精製した。選別後のＣＤ３ε陰性Ｔ細胞を２日間にわたって増大及び濃縮させ、次いで、５×１０５個の細胞を（各ＦＡＣＳ実験につき）収集し、ＦＡＣＳにより、ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞集団中のＴＣＲαβ、ＣＤ３ε、及びＬＮＧＦＲの陽性率を検査した。ＦＡＣＳは実施例１のように行い、１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）をＴＣＲαβ＋試験に使用し、１μＬのＰＥ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３００３１６）をＣＤ３ε＋試験に使用し、１μＬのＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５抗ヒトＣＤ２７１  ＮＧＦＲ抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３４５１１１）をＬＮＧＦＲ＋試験に使用した。
【０３７５】
図４Ｃに示すように、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスと、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスとを同時形質導入した、ＭＡＣＳ選別後のＣＤ３ε陰性Ｔ細胞集団のうち、ＴＣＲαβ＋率は５．３５％であり、ＣＤ３ε＋率は２．２７％であり、ＬＮＧＦＲ＋率は８８．５％であった（「ＭＡＣＳ  ＣＤ３  ｎｅｇパネル」を参照されたい）。一方、ＭＡＣＳ選別後の形質導入していない（ＵｎＴ）Ｔ細胞では、ＴＣＲαβ＋率は８０．９％であり、ＣＤ３ε＋率は９１．９％であり、ＬＮＧＦＲ＋率は１．２５％しかなかった。このことは、ＭＡＣＳによるＣＤ３ε陰性細胞選別によって、ＴＣＲ陰性初代Ｔリンパ球がさらに単離及び濃縮され得ることを示した。
【０３７６】
５。標的細胞に対するＴＣＲによる細胞溶解活性は、ＴＣＲ／ＣＤ３枯渇Ｔリンパ球において著しく低減した
上記ステップから得られた、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスと、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲをコードするレンチウイルスとを同時形質導入した、選別後のＣＤ３ε陰性Ｔ細胞の異なる群を、２０：１または１０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）細胞比で、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株ＲＰＭＩ−８２２６（ＢＣＭＡ＋、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）マーカーあり）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞株Ｋ５６２（ＢＣＭＡ−、Ｌｕｃマーカーあり）と混合し、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３８４ウェルソリッドプレート白で１２時間インキュベートした。ＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｅ６１２０）を使用して、ルシフェラーゼ産生を測定した。２５μＬのＯＮＥ−Ｇｌｏ（商標）試薬を３８４ウェルプレートの各ウェルに加え、インキュベートしてから、標的細胞に対する異なるＴリンパ球の細胞溶解作用を計算するために、Ｓｐａｒｋ（商標）１０Ｍマルチモードマイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）上に置き、ルシフェラーゼ測定を行った。
【０３７７】
ＲＰＭＩ−８２２６及びＫ５６２細胞株に対するＣＡＲ＋／ＣＤ３ε−Ｔ細胞の特異的及び非特異的な細胞溶解作用を、さらに試験した。図４Ｄに示すように、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現する濃縮ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞は、ＴＣＲ発現レベル（ＣＤ３ε＋／ＴＣＲαβ＋、「ＴＣＲ  ｐｏｓ」、またはＣＤ３ε−／ＴＣＲαβ−、「ＴＣＲ  ｎｅｇ」）にかかわらず、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）に対する抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ特異的腫瘍細胞殺傷を効果的に媒介し、溶解率は９０％超であり、これは、形質導入していないＴ細胞（「ＵｎＴ」、Ｐ＜０．０５）の場合と比べて有意に高かった。一方、ＴＣＲαβを発現する細胞（ＣＤ３ε＋／ＴＣＲαβ＋）が、ＴＣＲαβを発現しない細胞（ＣＤ３ε−／ＴＣＲαβ−）と比べて高い細胞溶解性を有し、そのような細胞溶解作用が、形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ、Ｐ＞０．０５）の場合に匹敵したことから、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲを発現する濃縮ＣＤ３ε陰性Ｔ細胞は、Ｋ５６２細胞株（ＢＣＭＡ−）において、ＴＣＲによる非特異的腫瘍細胞殺傷を誘導した。初代Ｔ細胞と共にインキュベートしていないＬｕｃ標識細胞を陰性対照（ＮＣ）とした。０．２５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００化学溶解群を陽性対照（ＰＣ）とした。ＲＰＭＩ−８２２６とＫ５６２の両細胞株において、Ｅ：Ｔ率が高いほど細胞殺傷性が高かった。これは、レンチウイルスによる腫瘍細胞殺傷に起因すると考えられる。これらの結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆの発現が、ＴＣＲαβによるＴ細胞活性化を効果的に阻害し、その結果、標的細胞に対するＴＣＲによる細胞溶解作用が低減することを示した。
【０３７８】
実施例５。ＴＣＲ／ＣＤ３枯渇ＣＡＲ−Ｔ細胞の１ステップでの取得
１。ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクター及びＪｕｒｋａｔ細胞株の構築
融合遺伝子配列ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＡＲ、ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＣＡＲを化学合成し、ｐＬＶＸ−ｈＥＦ１αベクター（実施例１参照）にクローニングし、組換えトランスファープラスミドＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（「ＰＬＬＶ−Ｍ０７２」または「Ｍ０７２」）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（「ＰＬＬＶ−Ｍ０８６」または「Ｍ０８６」）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（「ＰＬＬＶ−Ｍ０９０」または「Ｍ０９０」）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（「ＰＬＬＶ−Ｍ０９１」または「Ｍ０９１」）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（「ＰＬＬＶ−Ｍ１２６」または「Ｍ１２６」）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（「ＰＬＬＶ−Ｍ１５９」または「Ｍ１５９」）、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（「ＰＬＬＶ−Ｍ１６０」または「Ｍ１６０」）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（「ＰＬＬＶ−Ｍ１６１」または「Ｍ１６１」）を構築した。トランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得て、これを−８０℃で保管した。
【０３７９】
２。ＴＣＲ／ＣＤ３枯渇ＣＡＲ−Ｔ細胞の１ステップでの取得
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＢＣＭＡ  ＣＡＲの各配列を有するレンチウイルスを、培養後のＪｕｒｋａｔ細胞懸濁液に添加して形質導入した。レンチウイルスＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ（Ｍ０７１）を非ＣＡＲコード対照として使用した。形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞（「ＵｎＴ」）を陰性対照として使用した。形質導入の７２時間後、５×１０５細胞を含む懸濁液を収集及び調製し、実施例１に記載したようにＦＡＣＳを行って、ＣＤ３ε、ＴＣＲαβ、及びＢＣＭＡ  ＣＡＲの陽性率を検査した。１μＬのＰＥ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３００３１６）、１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）、または１μＬのＦＩＴＣ標識ヒトＢＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７タンパク質、Ｆｃタグ（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃ＢＣＡ−ＨＦ２５４）をＦＡＣＳに使用した。
【０３８０】
図５Ａ〜５Ｃから分かるように、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＣＡＲ（Ｍ０９１）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＡＲ（Ｍ１２６）、ＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１５９）、ＣＡＲ−ＰＧＫ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ１６０）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＰＧＫ−ＣＡＲ（Ｍ１６１）のＴＣＲαβ−率はそれぞれ、５９．１％、８２．７％、５０．４％、４３．５％、９５．０％であり、ＴＣＲαβは、ＵｎＴ群（１２．６％）と比較して著しく下方制御された。一方、ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７２）、ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０８６）、ＣＡＲ−Ｐ２Ａ−（ＧＧＧＳ）３−ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０９０）のＴＣＲαβ−率はそれぞれ、７．９４％、１６．３％、１５．４％であり、形質導入していない（ＵｎＴ）群（１２．６％）と比較して有意差はなかった。これらの上記結果は、ＳＩＶ  ＮｅｆのＣ’末端に構築されたＣＡＲが、自己切断性ペプチドＰ２Ａ（Ｍ０９１）を介して、ＴＣＲ／ＣＤ３の細胞表面発現を下方制御すると共に、十分なＣＡＲ発現を維持し得ることを示した。しかしその一方で、ＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質のＮ末端の空間的構造がＴＣＲ／ＣＤ３複合体の細胞表面発現を下方制御するうえで重要であり、Ｎｅｆタンパク質のＮ’末端に残留するＭ０７２、Ｍ０８６、及びＭ０９０ベクターの切断されたＰ２Ａアミノ酸が、その機能に著しく影響したという可能性がある。下記の表５に、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  ＣＡＲオールインワンプラスミドがＣＤ３ε、ＴＣＲαβ、及びＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現に及ぼす作用をまとめる。
【表５】
2021532742.tif 000002
【０３８１】
実施例６。Ｔ細胞ＣＤ４及びＣＤ２８発現に対する負の効果が低減しているＮｅｆ変異体及びサブタイプ
Ｎｅｆタンパク質の特定のアミノ酸は、ＣＤ４及びＣＤ２８に結合することで、Ｔ細胞におけるＣＤ４、ＣＤ２８発現を下方制御し得る（表６参照）。ＮｅｆがＣＤ４及びＣＤ２８の発現及び機能に及ぼす負の効果を低減させるために、本発明者らは、サブタイプＮｅｆ（ＨＩＶ  Ｆ２−Ｎｅｆ、ＨＩＶ  Ｃ２−Ｎｅｆ、ＨＩＶ  ＨＶ２ＮＺ−Ｎｅｆ）及び変異体Ｎｅｆ（「ｍｕｔＮｅｆ」という）をさらに設計し、構築した。
【表６】
2021532742.tif 000003
【０３８２】
１。サブタイプまたは変異体Ｎｅｆプラスミド及び様々なＮｅｆ発現細胞株の構築
本発明者らは、ＣＤ４及びＣＤ２８結合に重要な変異型アミノ酸を有するＳＩＶ  Ｎｅｆ  配列を設計した。また、他のＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体及びＨＩＶ  Ｎｅｆ相同体もいくつか設計した。サブタイプＮｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲまたはｍｕｔＮｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ融合配列を化学合成し、次いで、実施例１に記載したようなｐＬＶＸ−ｈＥＦ１αプラスミドにクローニングし、その結果、サブタイプＮｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ及びｍｕｔＮｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲトランスファープラスミドを得た（サブタイプまたは変異型Ｎｅｆの構造については表７を、変異体の配列については「配列表」のセクションを参照されたい）。Ｍ０１６（スクランブル配列）を陰性対照とした。実施例１で構築したようなＭ０７１（野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ）を陽性対照として使用した。
【表７】
2021532742.tif 000004
【０３８３】
表７のトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得てから、これを−８０℃で保管した。
【０３８４】
Ｊｕｒｋａｔ細胞（クローンＥ６−１、ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ−１５２（商標））を実施例１のように培養した。表６に記載の融合配列を有するレンチウイルスを、Ｊｕｒｋａｔ細胞培養物の上清に添加して形質導入した。ピューロマイシンをＮｅｆ＋細胞の選択可能マーカーとして使用した。形質導入の７２時間後、最終濃度１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを添加した。培養培地を３日毎に変え、同濃度のピューロマイシンを補って、単細胞クローンについてさらにスクリーニングした。
【０３８５】
２。サブタイプまたは変異体ＮｅｆがＴ細胞におけるＣＤ４及びＣＤ２８の発現に及ぼす作用の試験
形質導入の７２時間後、５×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞を含む懸濁液を収集及び調製し、実施例１に記載したようにＦＡＣＳを行って、ＣＤ３ε、ＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の陽性率を検査した。１μＬのＰＥ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３００３１６）、１μＬのＰＥ／Ｃｙ５抗ヒトＴＣＲα／β抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、＃３０６７１０）、１μＬのＰＥ−ＣＤ４またはＡＰＣ抗ヒトＣＤ２８抗体をＦＡＣＳに使用した。
【０３８６】
図６Ａ〜６Ｄから分かるように、Ｍ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１またはＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞は、８８．５％のＴＣＲαβ陰性率、８６．６％のＣＤ３ε陰性率を呈し、７３．３％のＴＣＲαβ陰性率、８７．３％のＣＤ３ε陰性率を呈したＭ０７１形質導入細胞（ｗｔ  ＳＩＶ  Ｎｅｆ、Ｐ＞０．０５）との有意差はなかった。一方、Ｍ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１またはＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞は、７．４４％のＣＤ４陰性率及び１．６７％のＣＤ２８陰性率しか呈さず、これは、Ｍ０７１形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞（ｗｔ  ＳＩＶ  Ｎｅｆ、Ｐ＜０．０５）における５３．３％のＣＤ４陰性率及び７２．９％のＣＤ２８陰性率と比べて有意に低かった。この結果は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆタンパク質と比較して、Ｍ１１６プラスミド中のＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１が、Ｔ細胞表面上のＴＣＲ／ＣＤ３複合体の発現を効果的に下方制御し得るが、ＣＤ４及びＣＤ２８の発現には下方制御作用をほとんど及ぼさないことを示した。Ｍ１１７（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体２）、Ｍ１１８（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体３）、Ｍ１４２（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体４）、及びＭ１４３（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体５）は、Ｔ細胞表面において、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の発現を効果的に下方制御すると共に、ＣＤ４及びＣＤ２８の発現を維持する（すなわち、ＣＤ４下方制御作用及び／またはＣＤ２８下方制御作用が大幅に低い）という同様の作用を有した。ＨＩＶサブタイプＮｅｆタンパク質（Ｍ１１９、Ｍ１２０、及びＭ１２１）もまた、ＣＤ４発現に対する下方制御作用をほとんど有しなかったが、Ｔ細胞表面上のＴＣＲ／ＣＤ３複合体に対する下方制御作用は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体（Ｍ１１６、Ｍ１１７、Ｍ１１８、Ｍ１４２、及びＭ１４３）ほど良好ではなかった。表８に、異なるＮｅｆサブタイプ及び変異体が、Ｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、及びＣＤ２８の発現に及ぼす作用をまとめる。
【表８】
2021532742.tif 000005
【０３８７】
実施例７。ＣＡＲ−Ｔ細胞免疫療法におけるＳＩＶ  Ｎｅｆの使用
１。ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクターの構築
融合遺伝子配列ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ（配列番号４８）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ（配列番号４９）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（配列番号５０）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（配列番号５１）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１（配列番号５２）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２（配列番号５３）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ（配列番号５４）を化学合成し、次いで、ｐＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現ベクター（実施例１参照）にクローニングし、組換えトランスファープラスミドＰＬＬＶ−Ｍ１６７、ＰＬＬＶ−Ｍ１６８、ＰＬＬＶ−Ｍ１６９、ＰＬＬＶ−Ｍ１７０、ＰＬＬＶ−Ｍ１７１、ＰＬＬＶ−Ｍ１７２、及びＰＬＬＶ−Ｍ１７３を、それぞれ構築した（表９参照）。
【０３８８】
トランスファープラスミドを精製し、同様にｐｓＰＡＸ２及びｐＭＤ２．Ｇプラスミドと共にＨＥＫ２９３Ｔ細胞に形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得てから、これを−８０℃で保管した。
【表９】
2021532742.tif 000006
【０３８９】
２。ＴＣＲ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞の１ステップでの取得
解凍されたＰＢＭＣから、汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９６−５３５）を使用し、Ｔ細胞を得た。単離されたＴ細胞を１０ｃｍの細胞培養皿に播種し、次いでＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−１１１−１６０）をメーカーの説明に従って補い、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータで７２時間インキュベートした。
【０３９０】
ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２、またはＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲの各配列を有するレンチウイルスを、それぞれ、培養後の初代Ｔ細胞懸濁液に添加して形質導入した。形質導入後、ＴＣＲαβ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９２−６１４）を使用したＭＡＣＳにより、ＴＣＲ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞を単離し、濃縮した。
【０３９１】
ＭＡＣＳの１日後、濃縮された５×１０５個のＴＣＲαβ陰性細胞を含む懸濁液を収集及び調製し、ＦＡＣＳを行ってＴＣＲαβの発現を検査した。
【０３９２】
図７から分かるように、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＴ細胞の場合はかなり高かったが、形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）は、ＭＡＣＳ後、１．１４％のＴＣＲαβ陰性率しかもたらさなかった。ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ（Ｍ１６７）Ｔ細胞（８９．７％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ（Ｍ１６８）Ｔ細胞（９３．３％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（Ｍ１６９）Ｔ細胞（９２．１％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ（Ｍ１７０）Ｔ細胞（９３．６％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１（Ｍ１７１）Ｔ細胞（９３．５％）、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２（Ｍ１７２）Ｔ細胞（８７．９％）、及びＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ（Ｍ１７３）Ｔ細胞（９４．０％）について、ＭＡＣＳ後のＴＣＲαβ陰性率を参照されたい。
【０３９３】
上記ステップで得た、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞、及び形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を、異なるエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）細胞比で、標的細胞または腫瘍細胞とそれぞれ混合し、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）３８４ウェルソリッドプレート白で１２時間インキュベートした。Ｋ５６２−ＣＤ２０は、ＣＤ２０を形質導入した骨髄性白血病細胞株である。Ｒａｊｉは、Ｂ細胞リンパ腫細胞株（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋、ＢＣＭＡ−）である。Ｋ５６２−ＣＤ１９は、ＣＤ１９を形質導入した骨髄性白血病細胞株である。ＲＰＭＩ−８２２６は、ＢＣＭＡを発現する多発性骨髄腫細胞株である。Ｏｎｅ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（ＴＡＫＡＲＡ、＃Ｂ６１２０）を使用して、ルシフェラーゼ活性を測定した。２５μＬのＯｎｅ−Ｇｌｏ（商標）試薬を３８４ウェルプレートの各ウェルに加えた。インキュベーション後、標的細胞に対する異なるＴリンパ球の細胞傷害率を計算するために、Ｓｐａｒｋ（商標）１０Ｍマルチモードマイクロプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）を使用して蛍光を測定した。シナリオは、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞では、ＴＣＲがＳＩＶ  Ｎｅｆによって枯渇されないため、ＴＣＲによる非特異的殺傷活性が示されるであろうが、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞ではＴＣＲがほぼ枯渇しているため、主にＣＡＲによる特異的殺傷活性が示されるであろう、というものであった。
【０３９４】
図８Ａ〜８Ｂは、様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞、及び形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）を対照とした、様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＣＡＲによる特異的腫瘍細胞傷害を示す。図８Ａ〜８Ｂから分かるように、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞は、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及び形質導入していないＴ細胞と比較して著しく高い腫瘍細胞殺傷活性を示し、腫瘍細胞殺傷活性は、Ｅ：Ｔ比との正の相関を示す（Ｅ：Ｔが高いほど、ＣＡＲによる殺傷力が高い）。
【０３９５】
図９Ａ〜９Ｂは、様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワン構築物を形質導入したＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞及びＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞のＴＣＲによる非特異的殺傷効率を示す。Ｈ９２９は、ヒト多発性骨髄腫細胞株（ＣＤ１９−、ＣＤ２０−）である。ＫＧ１は、ヒト急性骨髄性白血病細胞株（ＣＤ１９−）である。Ｒａｊｉは、バーキットリンパ腫細胞株（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋、ＢＣＭＡ−）である。Ｋ５６２は、骨髄性白血病細胞株（ＣＤ２０−、ＣＤ１９−、ＢＣＭＡ−）である。図９Ａ〜９Ｂから分かるように、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞（ＣＡＲを発現し、ＴＣＲをほとんどまたは全く発現しないもの）は、対応するＣＡＲ抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＭＡ）が対応する試験標的細胞で発現しないことから、予想された通り、標的細胞に対して殺傷活性がほとんどまたは全くなかった。一方、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞（ＴＣＲのみを発現するもの）は、ＴＣＲによる非特異的腫瘍細胞殺傷を大幅に強く引き起こした。
【０３９６】
これらの結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクターが、ＴＣＲαβ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成するのに効果的かつ容易であり、その結果、ＣＡＲによる特異的腫瘍細胞殺傷を効果的に引き起こすことができ（Ｐ＜０．０５）、ＴＣＲによる非特異的細胞傷害を伴わないことを示す。したがって、本明細書に例示するＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクターは、初代Ｔ細胞におけるＴＣＲαβの発現及び機能を効果的に低減させると共に、ＣＡＲ発現、及び標的細胞に対するＣＡＲによる特異的細胞傷害を維持することができる。
【０３９７】
実施例８。ＣＡＲ−Ｔ細胞免疫療法におけるＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体の使用
この実験では、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６配列（実施例６のＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１を参照されたい）を使用して、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクターを構築した。融合遺伝子配列ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６（配列番号６２）を化学合成し、ＰＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現プラスミド（実施例１参照）にクローニングし、その結果、組換えＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６トランスファープラスミド（以下、「ＰＬＬＶ−Ｍ１３３」という）を得た。ＰＬＬＶ−Ｍ１３３組換えトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得てから、これを−８０℃で保管した。
【０３９８】
初代Ｔ細胞を、実施例７に記載したように得てから、ＰＬＬＶ−Ｍ１３３を有するレンチウイルスを形質導入した。形質導入後、ＴＣＲαβ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、＃１３０−０９２−６１４）を使用したＭＡＣＳにより、ＴＣＲ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞を単離し、濃縮した。ＭＡＣＳの１日後、濃縮された５×１０５個のＴＣＲαβ陰性細胞を含む懸濁液を収集及び調製し、ＦＡＣＳを行ってＴＣＲαβの発現を検査した。
【０３９９】
図１０Ａに示すように、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｍ１３３  ＣＡＲ−Ｔ細胞の割合は９９．７％であった。形質導入していないＴ細胞は対照であり、１．３８％のＴＣＲαβ陰性率しか示さなかった。
【０４００】
細胞傷害アッセイを、実施例７に記載したように実施した。Ｋ５６２は、骨髄性白血病細胞株（ＢＣＭＡ−）である。ＲＰＭＩ−８２２６は、ＢＣＭＡを発現する多発性骨髄腫細胞株である。図１０Ｂ左パネルから分かるように、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｍ１３３  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＲＰＭＩ−８２２６細胞（ＢＣＭＡ＋）に対して、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｍ１３３  Ｔ細胞及び形質導入していないＴ細胞と比較して有意に高い細胞傷害（３４．９９±６．２０％）をもたらした。これは、ＣＡＲ−Ｔによる特異的腫瘍細胞殺傷を反映するものである。ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性Ｍ１３３  Ｔ細胞は、Ｋ５６２細胞（ＢＣＭＡ−）に対して、ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷性がほとんどなく（０．９０±３．４５％）、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｔ細胞は、ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷を大幅に強く引き起こした（図１０Ｂ右パネル）。
【０４０１】
これらの結果は、変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆ配列を有するＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＡＲオールインワンベクターもまた、ＴＣＲαβ陰性ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成するのに効果的かつ容易であり、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＡＲ及びＣＡＲ−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆの構成がいずれも効果的に機能することを示す（実施例７及び８を比較されたい）。両方の配列構成が、初代Ｔ細胞におけるＴＣＲαβの発現及び機能を効果的に低減させると共に、ＣＡＲ発現、及び標的細胞に対するＣＡＲによる特異的細胞傷害を維持することができる。
【０４０２】
実施例９。キメラＴＣＲ−Ｔ（ｃＴＣＲ−Ｔ）細胞免疫療法におけるＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体の使用
この実験では、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６配列（実施例６のＭ１１６、ＳＩＶ  ＮＥＦ変異体１を参照されたい）及び抗ＣＤ２０キメラＴＣＲ（ｃＴＣＲ）配列を使用して、ＳＩＶ−Ｎｅｆ＋キメラＴＣＲオールインワンベクターを構築した。抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲは、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）−（ＧＧＧＧＳ）３−ＣＤ３ε（シグナルペプチドを除く完全長）の構造と、配列番号６４のアミノ酸配列を有する。抗ＣＤ２０  ｃＴＣＲ融合ポリペプチドを天然ＴＣＲ複合体に組み込むことにより、修飾されたＴＣＲ複合体は、ＨＬＡの必要なしに、ＣＤ２０を発現する腫瘍細胞を認識し、完全なＴＣＲ機構を利用して、強力で調節され、かつ持続的な腫瘍殺傷に必要とされる、完全なＴ細胞機能を推進することができる。融合遺伝子配列ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｃＴＣＲ（配列番号６３）を化学合成し、ＰＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現プラスミド（実施例１参照）にクローニングし、その結果、組換えＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｃＴＣＲトランスファープラスミド（以下、「ＰＬＬＶ−Ｍ５７２」という）を得た。ＰＬＬＶ−Ｍ５７２組換えトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得てから、これを−８０℃で保管した。実施例７に記載したように、初代Ｔ細胞にＰＬＬＶ−Ｍ５７２を有するレンチウイルスを形質導入し、次いでＭＡＣＳ濃縮を行うことにより、ＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０−ｃＴＣＲ陽性Ｔ細胞を調製した。ＴＣＲαβの発現は、上述のものと同様の方法に従って検査した。図１１Ａに示すように、ＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性Ｔ細胞率は、ＰＬＬＶ−Ｍ５７２を形質導入したＴ細胞では９４．９％であったが、形質導入していないＴ細胞は、０．５９９％のＴＣＲαβ陰性率しか有しなかった。
【０４０３】
細胞傷害アッセイを、実施例７に記載したように実施した。Ｋ５６２は、骨髄性白血病細胞株（ＣＤ２０−、ＣＤ１９−、ＢＣＭＡ−）である。Ｒａｊｉは、バーキットリンパ腫細胞株（ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋、ＢＣＭＡ−）である。図１１Ｂ左パネルから分かるように、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ｃＴＣＲ−Ｔ細胞は、Ｒａｊｉ細胞（ＣＤ２０＋）に対して、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｍ５７２  Ｔ細胞及び形質導入していないＴ細胞と比較して有意に高い細胞傷害（４９．２１±２２．９６％）をもたらした。これは、ＣＤ２０  ｃＴＣＲによる特異的腫瘍細胞殺傷を反映するものである。さらに、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ｃＴＣＲ−Ｔ細胞の殺傷力は、Ｅ：Ｔ比が高いほど高かった。ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ｃＴＣＲ−Ｔ細胞は、Ｋ５６２細胞（ＣＤ２０−）に対して、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷性がほとんどなく（３．７６±４．３１％）、一方、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｍ５７２  Ｔ細胞は、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷を大幅に強く引き起こした（図１１Ｂ右パネル）。
【０４０４】
これらの驚くべき結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ｃＴＣＲオールインワンベクターが、外因性ｃＴＣＲと統合されたＴＣＲ複合体の機能に影響を及ぼすことなく、初代Ｔ細胞における内在性ＴＣＲαβの発現及び機能を効果的に下方制御し得ることを示す。さらに、ＴＣＲαβ陰性ｃＴＣＲ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞に対するｃＴＣＲ特異的細胞傷害を効果的に媒介し（Ｐ＜０．０５）、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞傷害はほとんどまたは全くなかった。
【０４０５】
実施例１０。ＴＡＣ−Ｔ細胞免疫療法におけるＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体の使用
この実験では、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６（実施例６のＭ１１６、ＳＩＶ  ＮＥＦ変異体１を参照されたい）を使用して、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＣＤ２０  ＴＡＣオールインワンベクターを構築した。抗ＣＤ２０  ＴＡＣは、抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）−（ＧＧＧＧＳ）３−ｈｕＵＣＨＴ１．Ｙ１７７Ｔ−ＧＧＧＧＳ−ＣＤ４（部分的細胞外ドメイン＋膜貫通ドメイン＋細胞内ドメイン）の構造と、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。ｈｕＵＣＨＴ１は、ＣＤ３εを標的にする。融合遺伝子配列ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ＴＡＣ（配列番号６５）を化学合成し、ＰＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現プラスミド（実施例１参照）にクローニングし、その結果、組換えＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ＴＡＣトランスファープラスミド（以下、「ＰＬＬＶ−Ｍ５７４」という）を得た。ＰＬＬＶ−Ｍ５７４組換えトランスファープラスミドを精製し、パッケージングプラスミドｐｓＰＡＸ２及びエンベローププラスミドｐＭＤ２．Ｇと同じ比率で混合し、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時形質導入した。形質導入の６０時間後、ウイルス上清を収集し、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を０．４５μｍフィルターの使用により濾過し、次いで、５００ＫＤの中空繊維膜による接線流濾過を使用してさらに濃縮し、濃縮されたレンチウイルスを得てから、これを−８０℃で保管した。実施例７に記載したように、初代Ｔ細胞にＰＬＬＶ−Ｍ５７４を有するレンチウイルスを形質導入し、次いでＭＡＣＳ濃縮を行うことにより、ＴＣＲαβ陰性ＴＡＣ−Ｔ細胞を調製した。ＴＣＲαβの発現は、上述のものと同様の方法に従って検査した。図１２Ａに示すように、ＰＬＬＶ−Ｍ５７４を形質導入したＴ細胞のＭＡＣＳ濃縮後のＴＣＲαβ陰性率は９５．５％であったが、形質導入していないＴ細胞（ＵｎＴ）は、０．９７１％のＴＣＲαβ陰性率しか有しなかった。
【０４０６】
細胞傷害アッセイを、実施例７に記載したように実施した。Ｒａｊｉは、バーキットリンパ腫細胞株（ＣＤ２０＋）である。Ｈ９２９は、ヒト多発性骨髄腫細胞株（ＣＤ２０−）である。図１２Ｂ左パネルから分かるように、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ＴＡＣ−Ｔ細胞は、Ｒａｊｉ細胞（ＣＤ２０＋）に対して、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｍ５７４  Ｔ細胞及び形質導入していないＴ細胞と比較して有意に高い細胞傷害（５４．５８±２０．０３％）を引き起こした。これは、抗ＣＤ２０  ＴＡＣによる特異的腫瘍細胞殺傷を反映するものである。さらに、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ＴＡＣ−Ｔ細胞の殺傷力は、Ｅ：Ｔ比が高いほど高かった。ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陰性ＣＤ２０  ＴＡＣ−Ｔ細胞は、Ｈ９２９細胞（ＣＤ２０−）に対して、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷性がほとんどなく（３．３３±２．８０％）、一方、ＭＡＣＳ選別後のＴＣＲαβ陽性Ｍ５７４  Ｔ細胞は、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞殺傷を大幅に強く引き起こした（図１２Ｂ右パネル）。
【０４０７】
これらの驚くべき結果は、ＳＩＶ  Ｎｅｆ＋ＴＡＣオールインワンベクターが、ＴＡＣの発現及び機能に影響を及ぼすことなく、初代Ｔ細胞における内在性ＴＣＲαβの発現及び機能を効果的に下方制御し得ることを示す。さらに、ＴＣＲαβ陰性ＴＡＣ−Ｔ細胞は、腫瘍細胞に対するＴＡＣ特異的細胞傷害を効果的に媒介し（Ｐ＜０．０５）、内在性ＴＣＲによる非特異的細胞傷害はほとんどまたは全くない。
【０４０８】
実施例１１。ＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の制御に関するＳＩＶ  Ｎｅｆドメインエレメントの試験
完全長ＳＩＶ  Ｎｅｆは、２２３個のアミノ酸を有する。Ｎｅｆタンパク質の特定のアミノ酸は、ＣＤ４及びＣＤ２８に結合することで、Ｔ細胞におけるＣＤ４、ＣＤ２８を下方制御し得る（実施例６、表６参照）。様々なＮｅｆドメインエレメントがＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の発現及び機能に及ぼす作用を試験するために、最初のメチオニンを除いて完全長配列にわたり、３つずつ連続したアミノ酸をアラニン−アラニン−アラニン（ＡＡＡ）に変異させることにより、７４個の変異体を設計した。これらの変異体核酸配列を化学合成し、ＰＬＶＸ−ｈＥＦ１α発現プラスミド（実施例１参照）にクローニングし、その結果、７４個の組換えＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体トランスファープラスミドを得た。各組換えトランスファープラスミドを有するレンチウイルスを、上述のように調製した。例えば、実施例７を参照されたい。Ｊｕｒｋａｔ細胞に７４個のレンチウイルスをそれぞれ感染させ、２週間にわたり、１μｇ／ｍＬのピューロマイシンを使用し、陽性細胞クローンを選択した。Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の発現を、上述のようにＦＡＣＳによって検査した。例えば、実施例１を参照されたい。形質導入していないＪｕｒｋａｔ細胞を陰性対照とした。Ｍ０７１（野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ）またはＭ１１６（ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６、実施例６参照）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞を陽性対照とした。少なくとも３％の制御を、ＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８発現の制御に対するＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体の影響をさらに評価するためのカットオフとみなした。例えば、変異体ＳＩＶ  ＮｅｆによるＴＣＲαβの下方制御レベルと、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御との差が０％（０％を含む）〜３％未満であった場合、または変異体ＳＩＶ  ＮｅｆによるＴＣＲαβの下方制御が、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比較して３％超である（またはそれに等しい）場合、その変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、「野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して同様の（またはより大きい）ＴＣＲαβ下方制御」をもたらすとみなした。変異体ＳＩＶ  ＮｅｆによるＣＤ４（及び／またはＣＤ２８）の下方制御が、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆによる下方制御と比較して３％未満である場合、かかる変異体ＳＩＶ  Ｎｅｆは、「野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して小さいＣＤ４下方制御」（及び／または「野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して小さいＣＤ２８下方制御」）をもたらすとみなした。
【０４０９】
図１３Ａ〜１３Ｃに示すように、７４個のＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体がＴＣＲαβ、ＣＤ４、及びＣＤ２８の発現を制御する能力について、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）との比較における並列スクリーニングを行った。変異の位置及びそれらの対応する機能を表１０に記載する。このスクリーニング実験の結果、異なる制御機能を有する様々なＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体セットが得られた。３４個のＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較して、ＴＣＲαβ発現に対する下方制御作用を維持した。そのうち１８個の変異体は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して小さいＣＤ４の下方制御をさらに示し、１９個の変異体は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆと比較して小さいＣＤ２８の下方制御をさらに示し、１６個の変異体は、野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）のＴＣＲαβ下方制御作用を維持するだけでなく、ＣＤ４及びＣＤ２８の下方制御作用が野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較して小さいことも見出された。詳細な概要については表１１を参照されたい。
表１０。野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ（Ｍ０７１）と比較したＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体の制御作用
【表１０−１】
2021532742.tif 000007
【表１０−２】
2021532742.tif 000008
【表１１】
2021532742.tif 000009
配列表
配列番号１（野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆ核酸配列）
【化１】
2021532742.tif 000010
配列番号２（ＨＩＶ１  Ｎｅｆ核酸配列）
【化２】
2021532742.tif 000011
配列番号３（ＨＩＶ２  Ｎｅｆ核酸配列）
【化３】
2021532742.tif 000012
配列番号４（ＨＩＶ  Ｆ２−Ｎｅｆ核酸配列）
【化４】
2021532742.tif 000013
【化５】
2021532742.tif 000014
配列番号５（ＨＩＶ  Ｃ２−Ｎｅｆ核酸配列）
【化６】
2021532742.tif 000015
配列番号６（ＨＩＶ  ＨＶ２ＮＺ−Ｎｅｆ核酸配列）
【化７】
2021532742.tif 000016
配列番号７（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１／ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６核酸配列）
【化８】
2021532742.tif 000017
配列番号８（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体２核酸配列）
【化９】
2021532742.tif 000018
【化１０】
2021532742.tif 000019
配列番号９（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体３核酸配列）
【化１１】
2021532742.tif 000020
配列番号１０（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体４核酸配列）
【化１２】
2021532742.tif 000021
配列番号１１（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体５核酸配列）
【化１３】
2021532742.tif 000022
配列番号１２（野生型ＳＩＶ  Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１４】
2021532742.tif 000023
配列番号１３（ＨＩＶ１  Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１５】
2021532742.tif 000024
配列番号１４（ＨＩＶ２  Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１６】
2021532742.tif 000025
配列番号１５（ＨＩＶ  Ｆ２−Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１７】
2021532742.tif 000026
配列番号１６（ＨＩＶ  Ｃ２−Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１８】
2021532742.tif 000027
配列番号１７（ＨＩＶ  ＨＶ２ＮＺ−Ｎｅｆアミノ酸配列）
【化１９】
2021532742.tif 000028
配列番号１８（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体１／ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６アミノ酸配列）
【化２０】
2021532742.tif 000029
配列番号１９（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体２アミノ酸配列）
【化２１】
2021532742.tif 000030
配列番号２０（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体３アミノ酸配列）
【化２２】
2021532742.tif 000031
配列番号２１（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体４アミノ酸配列）
【化２３】
2021532742.tif 000032
配列番号２２（ＳＩＶ  Ｎｅｆ変異体５アミノ酸配列）
【化２４】
2021532742.tif 000033
配列番号２３（ｇＲＮＡ核酸配列）
【化２５】
2021532742.tif 000034
配列番号２４（ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲ核酸配列；ＳＩＶ  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｐ２Ａ配列には下線が引かれており、ＬＮＧＦＲ配列はイタリック体であり、制限部位は小文字である）
【化２６】
2021532742.tif 000035
配列番号２５（ＨＩＶ１  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ核酸配列；ＨＩＶ１  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｔ２Ａ配列には下線が引かれており、Ｐｕｒｏ配列はイタリック体であり、制限部位は小文字である）
【化２７】
2021532742.tif 000036
【化２８】
2021532742.tif 000037
配列番号２６（ＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏ核酸配列；ＨＩＶ１  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｔ２Ａ配列には下線が引かれており、Ｐｕｒｏ配列はイタリック体であり、制限部位は小文字である）
【化２９】
2021532742.tif 000038
配列番号２７（ＳＩＶ  Ｎｅｆ−Ｐ２Ａ−ＬＮＧＦＲアミノ酸配列；ＳＩＶ  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｐ２Ａ配列には下線が引かれており、ＬＮＧＦＲ配列はイタリック体であり、制限部位は灰色である）
【化３０】
2021532742.tif 000039
【化３１】
2021532742.tif 000040
配列番号２８（ＨＩＶ１  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏアミノ酸配列；ＨＩＶ１  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｔ２Ａ配列には下線が引かれており、Ｐｕｒｏ配列はイタリック体であり、制限部位は灰色である）
【化３２】
2021532742.tif 000041
配列番号２９（ＨＩＶ２  Ｎｅｆ−Ｔ２Ａ−Ｐｕｒｏアミノ酸配列；ＨＩＶ２  Ｎｅｆ配列は太字であり、Ｔ２Ａ配列には下線が引かれており、Ｐｕｒｏ配列はイタリック体であり、制限部位は灰色である）
【化３３】
2021532742.tif 000042
配列番号３０（Ｐ２Ａ核酸配列）
【化３４】
2021532742.tif 000043
配列番号３１（Ｔ２Ａ核酸配列）
【化３５】
2021532742.tif 000044
配列番号３２（Ｅ２Ａ核酸配列）
【化３６】
2021532742.tif 000045
配列番号３３（Ｆ２Ａ核酸配列）
【化３７】
2021532742.tif 000046
配列番号３４（ＩＲＥＳ核酸配列）
【化３８】
2021532742.tif 000047
【化３９】
2021532742.tif 000048
配列番号３５（ＰＧＫ核酸配列）
【化４０】
2021532742.tif 000049
配列番号３６（Ｐ２Ａアミノ酸配列）
ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ
配列番号３７（Ｔ２Ａアミノ酸配列）
ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ
配列番号３８（Ｅ２Ａアミノ酸配列）
ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ
配列番号３９（Ｆ２Ａアミノ酸配列）
ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ
配列番号４０（リンカーアミノ酸配列）
ＧＧＧＧＳ
配列番号４１（リンカーアミノ酸配列）
（ＧＧＧＧＳ）２
配列番号４２（リンカーアミノ酸配列）
（ＧＧＧＳ）３
配列番号４３（リンカーアミノ酸配列）
（ＧＧＧＳ）４
配列番号４４（リンカーアミノ酸配列）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号４５（リンカーアミノ酸配列）
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＧＳＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号４６（リンカーアミノ酸配列）
（ＧＧＧＧＳ）３
配列番号４７（リンカーアミノ酸配列）
（ＧＧＧＧＳ）４
配列番号４８（Ｍ１６７、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲ核酸配列）
【化４１】
2021532742.tif 000050
配列番号４９（Ｍ１６８、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲ核酸配列）
【化４２】
2021532742.tif 000051
【化４３】
2021532742.tif 000052
配列番号５０（Ｍ１６９、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ核酸配列）
【化４４】
2021532742.tif 000053
【化４５】
2021532742.tif 000054
配列番号５１（Ｍ１７０、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲ核酸配列）
【化４６】
2021532742.tif 000055
【化４７】
2021532742.tif 000056
配列番号５２（Ｍ１７１、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１核酸配列）
【化４８】
2021532742.tif 000057
【化４９】
2021532742.tif 000058
配列番号５３（Ｍ１７２、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２核酸配列）
【化５０】
2021532742.tif 000059
【化５１】
2021532742.tif 000060
配列番号５４（Ｍ１７３、ＳＩＶ  Ｎｅｆ−ＩＲＥＳ−ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲ核酸配列）
【化５２】
2021532742.tif 000061
配列番号５５（抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ（リツキシマブ）ＣＡＲアミノ酸配列）
【化５３】
2021532742.tif 000062
【化５４】
2021532742.tif 000063
配列番号５６（抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  （Ｌｅｕ−１６）ＣＡＲアミノ酸配列）
【化５５】
2021532742.tif 000064
配列番号５７（ＣＤ１９×ＣＤ２０  ｓｃＦｖ  ＣＡＲアミノ酸配列）
【化５６】
2021532742.tif 000065
配列番号５８（抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ  ＣＡＲアミノ酸配列）
【化５７】
2021532742.tif 000066
配列番号５９（抗ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１アミノ酸配列）
【化５８】
2021532742.tif 000067
配列番号６０（抗ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ２アミノ酸配列）
【化５９】
2021532742.tif 000068
配列番号６１（抗ＢＣＭＡ  ｍｏｎｏ−ＶＨＨ  ＣＡＲアミノ酸配列）
【化６０】
2021532742.tif 000069
配列番号６２（Ｍ１３３、ＢＣＭＡ  ＢｉＶＨＨ  ＣＡＲ１−ＩＲＥＳ−ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６核酸配列）
【化６１】
2021532742.tif 000070
【化６２】
2021532742.tif 000071
配列番号６３（Ｍ５７２、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０キメラＴＣＲ核酸配列）
【化６３】
2021532742.tif 000072
配列番号６４（抗ＣＤ２０キメラＴＣＲアミノ酸配列；ＣＤ３ε（［シグナルペプチドなし］細胞外−ヘリックス−細胞質）アミノ酸配列には下線が引かれている）
【化６４】
2021532742.tif 000073
【化６５】
2021532742.tif 000074
配列番号６５（Ｍ５７４、ＳＩＶ  Ｎｅｆ  Ｍ１１６−ＩＲＥＳ−ＣＤ２０  ＴＡＣ核酸配列）
【化６６】
2021532742.tif 000075
【化６７】
2021532742.tif 000076
配列番号６６（抗ＣＤ２０  ＴＡＣアミノ酸配列；ＣＤ４（部分的細胞外−ヘリックス−細胞質）アミノ酸配列には下線が引かれている）
【化６８】
2021532742.tif 000077
【図１】
2021532742.tif 000078
【図２】
2021532742.tif 000079
【図３】
2021532742.tif 000080
【図４Ａ】
2021532742.tif 000081
【図４Ｂ】
2021532742.tif 000082
【図４Ｃ】
2021532742.tif 000083
【図４Ｄ】
2021532742.tif 000084
【図５Ａ】
2021532742.tif 000085
【図５Ｂ】
2021532742.tif 000086
【図５Ｃ】
2021532742.tif 000087
【図６Ａ】
2021532742.tif 000088
【図６Ｂ】
2021532742.tif 000089
【図６Ｃ】
2021532742.tif 000090
【図６Ｄ】
2021532742.tif 000091
【図７】
2021532742.tif 000092
【図８Ａ】
2021532742.tif 000093
【図８Ｂ】
2021532742.tif 000094
【図９Ａ】
2021532742.tif 000095
【図９Ｂ】
2021532742.tif 000096
【図１０】
2021532742.tif 000097
【図１１】
2021532742.tif 000098
【図１２】
2021532742.tif 000099
【図１３Ａ】
2021532742.tif 000100
【図１３Ｂ】
2021532742.tif 000101
【図１３Ｃ】
2021532742.tif 000102
【配列表】
2021532742000001.app
【国際調査報告】
2021532742.tif 000103
2021532742.tif 000104
2021532742.tif 000105
2021532742.tif 000106
2021532742.tif 000107