(57)【要約】  本発明は、広域スペクトル、高効率、抗腫瘍性の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体−毒素−複合体（ＡＤＣ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１（ａ、ｂ、ｃ、ｄ）、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ）と命名された）を提供する。本発明は、ジスルフィド結合架橋または従来のカップリング技術および化学リンカー（Ｌｉｎｋｅｒ）を使用して、細胞毒性作用を有する毒素を抗ＴＲＡＩＬＲ２ヒト化モノクローナル抗体と共有結合させて、抗ＴＲＡＩＬＲ２ヒト化抗体−毒素−複合体を形成した。本発明のＡＤＣはＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍の特異性を有し、ＴＲＡＩＬＲ２に結合した後、エンドサイトーシスされ、腫瘍細胞のリソソーム（ｌｙｓｏｓｏｍｅ）に進入し、リソソーム中のプロテアーゼにより分解されて、遊離小分子毒素を放出し、それにより様々なＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍細胞を特異的に殺し、腫瘍の成長を阻害し、腫瘍細胞を完全に排除して腫瘍を治癒する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物であって、
前記抗体薬物複合体は、
（ａ）抗体部分と、
（ｂ）前記抗体部分にカップリングされた、検出可能なラベル、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはその組み合わせの群から選択されるカップリング部分とを含み、
前記抗体の重鎖可変領域は、
（Ｈ１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：１に示されるＣＤＲＨ１と、
（Ｈ２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：２に示されるＣＤＲＨ２と、および
（Ｈ３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：３に示されるＣＤＲＨ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
前記重鎖可変領域アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を保持できる誘導体配列をさらに含み、および／または
前記抗体の軽鎖可変領域は、
（Ｌ１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：４に示されるＣＤＲＬ１と、
（Ｌ２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：５に示されるＣＤＲＬ２と、および
（Ｌ３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：６に示されるＣＤＲＬ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
前記軽鎖可変領域アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸誘導体配列に付加、削除、修飾および／または置換されることを特徴とする、前記抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項２】
前記抗体薬物複合体ＡＤＣは、以下の分子式に示され、
【化１】
2021516670.tif 000027
Ａｂは、ＴＲＡＩＬＲ２に対する抗体であり、
ＬＵは、無しまたは前記抗体と前記薬物をリンクするリンカーであり、
Ｄは、薬物であり、
ｐは、前記抗体にカプリングされた前記薬物の数であり、ｐは、１−１０、好ましくは、１−８、より好ましくは、２−４から選択され、
「−」は、結合またはリンカーであることを特徴とする
請求項１に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項３】
前記ＬＵの構造は、以下式（Ｉ）に示され、
−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−        （Ｉ）
Ｌ１は、無しまたはＰｙ、Ｍｃであり、
Ｌ２は、無しまたはＶｃ、ＭＡＡ、Ｍｃであり、
Ｌ３は、無しまたはＰＡＢ、ＭＡＡ、Ｍｃであり、
「−」は、それぞれ独立して結合であり、
Ｐｙは、１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジン−１，３，５−トリイル）トリス（プロパ−２−エン−１−オン）であり、
Ｖｃは、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブチリルアミノ）−５−ウレイドペンタンアミドであり、
Ｍｃは、  ６−（２，５−ジオキソシクロペンタ−３−エン−１−イル）ヘキサン酸であり、
ＰＡＢ−ＯＨは、（４−アミノフェニル）メタノールであり、
ＭＡＡは、２−メルカプト酢酸であり、
その分子構造式は、次のとおりであり、
【化２】
2021516670.tif 000028
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３の少なくとも１つは無しではないことを特徴とする
請求項２に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項４】
前記Ｄは、化学療法剤、放射性物質、毒素、プロドラッグをその活性型の抗癌プロドラッグに変換できる活性化酵素、またはその組み合わせの群から選択されることを特徴とする
請求項２に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項５】
前記薬物Ｄは、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）系誘導体、またはその組み合わせの群から選択されることを特徴とする
請求項２に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【表１】
2021516670.tif 000029
【請求項６】
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの構造は、次のとおりであり、
【化３】
2021516670.tif 000030
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂの構造は、次のとおりであり、
【化４】
2021516670.tif 000031
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの構造は、次のとおりであり、
【化５】
2021516670.tif 000032
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄの構造は、次のとおりであり、
【化６】
2021516670.tif 000033
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化７】
2021516670.tif 000034
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂの構造は、次のとおりであり、
【化８】
2021516670.tif 000035
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃの構造は、次のとおりであり、
【化９】
2021516670.tif 000036
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりであり、
【化１０】
2021516670.tif 000037
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの構造は、次のとおりであることを特徴とする。
【化１１】
2021516670.tif 000038
請求項１に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項７】
前記抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されたとおりであり、および／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されたとおりであり、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含むことを特徴とする
請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項８】
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化１２】
2021516670.tif 000039
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりであることを特徴とする
【化１３】
2021516670.tif 000040
請求項７に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項９】
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａであり、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化１４】
2021516670.tif 000041
前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂであることを特徴とする
請求項８に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物の使用であって、
前記抗体−薬物複合体は、（ｉ）診断試薬を調製するために使用され、および／または（ｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患の予防および／または治療のための薬物を調製するために使用されること特徴とする、前記使用。
【請求項１１】
前記ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患は、腫瘍の発生、成長および／または転移の群から選択されることを特徴とする
請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記腫瘍は、ＴＲＡＩＬＲ２陽性癌であり、前記癌は、Ｔリンパ性白血病、Ｂリンパ性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病、非小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、子宮頸部の扁平上皮癌、膵扁平上皮癌、結腸扁平上皮癌、胃扁平上皮癌、前立腺癌、骨肉腫または軟部組織肉腫の群から選択されることを特徴とする
請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
薬学的組成物であって、
（ｉ）請求項１に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物またはその組み合わせである活性成分と、および
（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記薬学的組成物。
【請求項１４】
前記活性成分は、請求項７または８または９に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物またはその組み合わせであることを特徴とする
請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法であって、
前記腫瘍細胞を請求項１または７または８または９に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物を接触させるステップを含むことを特徴とする、前記腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法。
【請求項１６】
腫瘍の予防および／または治療方法であって、
請求項１または７または８または９に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または請求項１３または１４に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含むことを特徴とする、前記腫瘍の予防および／または治療方法。
【請求項１７】
腫瘍の予防および／または治療の薬物の調製における請求項１または７または８または９に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または請求項１３または１４に記載の薬学的組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物化学、免疫化学、有機化学および薬物化学技術分野に関し、具体的に、本発明は、抗体−毒素−複合体（ＡＤＣ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３と命名された）およびその腫瘍の治療のための薬物の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＷＨＯが発表した「Ｇｌｏｂａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２０１４」によると、全世界のがんの症例は、２０１２年の１４００万人から２０２５年の１９００万人、２０３５年の２４００万人と急速に増加し、全世界のがん患者数と死亡数は驚くほど増加し、新しい癌の症例のほぼ半分はアジアにあり、そのほとんどは中国にあり、中国は新しい癌の症例で第１位にランクされている。２０１２年の全世界で最も一般的な３つの癌は、肺癌（１８０万人）、乳癌（１７０万人）、および結腸直腸癌（１４０万人）で、死亡率の上位３癌は肺癌、肝臓癌、胃癌である。白血病は中国の上位１０の悪性腫瘍の１つであり、死亡率はさまざまな腫瘍の中で６番目にランクされている。２００８年から２０１５年にかけて、中国の抗腫瘍薬の市場規模は、２８９.８６万元から９７０.０１億元へと着実に増加した。２０１８年までに、このカテゴリーの医薬品の市場売上高は、１４４７.４２億元に達すると推定されている。
【０００３】
最初の治療用抗体（ＯＫＴ３）が１９８６年に発売されて以来、多くの治療用抗体とその誘導体が臨床治療に使用されており、１０００以上の抗体とその誘導体が開発段階にある。全世界の治療用抗体は、当初はごくわずかな市場シェアから、癌、自己免疫疾患、移植拒絶反応、心血管疾患、さまざまな感染症などの主要な疾患に対する安全で特異的かつ効果的な治療に成長した。２０１６年に、米国ＦＤＡが販売を承認した１６の新薬のうち、６が抗体薬であった。現在、いくつかの臨床試験がフェーズＩＩとフェーズＩＩＩにあり、２０１７年には米国ＦＤＡが８−１０種類の抗体医薬品を市場に承認すると推定されている。市販後の各抗体医薬品の平均年間売上高は約１０億ドルであった。現在、年間売上高が１０億ドルを超える、いわゆる「ブロックバスター」はすべて抗体医薬品である。したがって、治療用抗体は全世界のバイオ医薬品研究開発の主な方向性であり、その先駆けであり、多くの学者は治療用抗体医薬品が「未来の薬」であると信じている。しかし、中国は依然として治療用抗体の開発と工業化に遅れており、これまでいくつかの一般的な治療用抗体医薬品を除けば、独立した知的財産権を持つ革新的な治療用抗体医薬品はほとんない。
【０００４】
腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）は細胞アポトーシスを誘発することができ、その中のＦａｓＬ／Ｆａｓ（ＣＤ９５Ｌ／ＣＤ９５）、ＴＮＦ／ＴＮＦＲ、ＴＲＡＩＬ／ＴＲＡＩＬＲなどの３つのリガンドとその受容体は、腫瘍細胞アポトーシスの誘導に重要な役割を果たす。ＴＲＡＩＬはII型膜貫通タンパク質で、前の２つとは異なり、ＴＲＡＩＬは、対応する死受容体に結合した後、正常細胞に損傷を与えることなく、腫瘍細胞のアポトーシスを特異的に誘導できる。ＴＲＡＩＬとその死受容体のこの特性は、これに基づいた新しい治療法を見つけることを期待して、研究者から大きな注目を集めている。  ＴＲＡＩＬ受容体には、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧの５種類がある。ＴＲＡＩＬＲ１とＴＲＡＩＬＲ２は死受容体（ＤＲ）であり、死受容体の細胞内ドメインには完全な死ドメイン（ＤＤ）があり、標的細胞のアポトーシスを誘導でき、ＴＲＡＩＬＲ３とＴＲＡＩＬＲ４はデコイ受容体（ＤｃＲ１、ＤｃＲ２）であり、デコイ受容体の細胞内領域は完全な死の構造ドメインがなく、アポトーシス信号を伝達することができず、これは正常細胞をアポトーシスから保護するメカニズムの１つである。ＴＲＡＩＬがその死受容体に結合すると、細胞内で一連のアスパラギン酸プロテアーゼカスケード反応を引き起こし、最終的にＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２陽性の腫瘍細胞を死滅させることができる。
【０００５】
組換え可溶性ＴＲＡＩＬ、抗ＴＲＡＩＬＲ１または抗ＴＲＡＩＬＲ２アゴニスト性モノクローナルの治療の適用を含む、ＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２を標的とする腫瘍の治療は、さまざまな腫瘍患者の治療のためのヒト臨床試験段階（フェーズＩ／ＩＩ）に移行した。臨床試験の結果は、その安全性は良いことを示しているが、薬剤単独の有効性は満足のいくものではなかった。  その理由は、インビボでの組換え型可溶性ＴＲＡＩＬの半減期が短いこと、使用した治療用抗体の親和性が低いこと、ＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２が仲介する複雑なシグナル経路、および効果的な分子マーカーを使用して患者を選択できないことに関連している可能性がある。したがって、ＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２を標的とする腫瘍治療薬物の現在の研究開発は、化学薬、標的薬、抗体薬、および小分子阻害剤との併用薬を含む、ＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２アゴニストの安定性と生物活性を改善し、そしてナノキャリア技術などの応用することを目的とし、そして一定の進歩を遂げてきた。
【０００６】
したがって、いくつかの国際的な薬物研究開発会社や研究所は、さまざまな腫瘍治療の臨床試験を実施するために薬物の組み合わせを採用しており、良好な結果を達成した。しかし、併用薬のコストが高く、特に化学薬品と組み合わせた場合、化学薬品の高い毒性、不十分な患者コンプライアンス、そして依然として患者に対する大きな毒性副作用の問題を根本的に解決できなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の欠点に対して、本発明は創造的に抗体−毒素−複合体（ＡＤＣ）を調製する戦略を採用するため、ＡＤＣは抗体の高い腫瘍特異性を保持するだけでなく、リンカーを使用して抗体と小分子毒素をカップリングして、カップリング複合体を形成し、ＡＤＣが腫瘍細胞の表面の特定の抗原に特異的に結合すると、小分子毒素を腫瘍細胞のリソソームに運び、リソソームのプロテアーゼ加水分解によって毒素を放出し、それによって特異的に腫瘍細胞を殺すことができ、治療効果を大幅に向上させると同時に、低分子毒素の副作用を軽減し、安全性を大幅に向上させるため、非常に人気がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の態様では、抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物であって、
前記抗体薬物複合体は、
（ａ）抗体部分と、および
（ｂ）前記抗体部分にカップリングされた、検出可能なラベル、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはその組み合わせの群から選択されるカップリング部分とを含み、
前記抗体の重鎖可変領域は、
（Ｈ１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：１に示されるＣＤＲＨ１と、
（Ｈ２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：２に示されるＣＤＲＨ２と、および
（Ｈ３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：３に示されるＣＤＲＨ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
前記重鎖可変領域アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を保持できる誘導体配列をさらに含み、および／または
前記抗体の軽鎖可変領域は、
（Ｌ１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：４に示されるＣＤＲＬ１と、
（Ｌ２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：５に示されるＣＤＲＬ２と、および
（Ｌ３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：６に示されるＣＤＲＬ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
前記軽鎖可変領域アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸誘導体配列に付加、削除、修飾および／または置換される、前記抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物を提供する。
【０００９】
別の好ましい例では、前記抗体は、完全抗体またはその活性断片を含む。
【００１０】
別の好ましい例では、前記活性断片は、ＴＲＡＩＬＲ２に結合する結合活性を保持する。
【００１１】
別の好ましい例では、前記抗体薬物複合体ＡＤＣは、以下の分子式に示され、
【化１】
2021516670.tif 000002
Ａｂは、ＴＲＡＩＬＲ２に対する抗体であり、
ＬＵは、無しまたは前記抗体と前記薬物をリンクするリンカーであり、
Ｄは、薬物であり、
ｐは、前記抗体にカプリングされた前記薬物の数であり、ｐは、１−１０、好ましくは、１−８、より好ましくは、２−４から選択され、
「−」は、結合またはリンカーである。
【００１２】
別の好ましい例では、前記薬物Ｄは、毒素である。
【００１３】
別の好ましい例では、前記毒素は、小分子毒素である。
【００１４】
別の好ましい例では、前記ＬＵは、化学リンカーである。
【００１５】
別の好ましい例では、前記リンカーは、カテプシンによって切断され得るリンカーである。
【００１６】
別の好ましい例では、前記リンカーは、カテプシンによって切断され得ないリンカーである。
【００１７】
別の好ましい例では、前記ＬＵの構造は、以下式（Ｉ）に示され、
−Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−        （Ｉ）
Ｌ１は、無しまたはＰｙ、Ｍｃであり、
Ｌ２は、無しまたはＶｃ、ＭＡＡ、Ｍｃであり、
Ｌ３は、無しまたはＰＡＢ、ＭＡＡ、Ｍｃであり、
「−」は、それぞれ独立して結合であり、
Ｐｙは、１，１’，１’’−（１，３，５−トリアジン−１，３，５−トリイル）トリス（プロパ−２−エン−１−オン）（１，１’，１’’−（１，３，５−ｔｒｉａｚｉｎａｎｅ−１，３，５−ｔｒｉｙｌ）ｔｒｉｓ（ｐｒｏｐ−２−ｅｎ−１−ｏｎｅ））であり、
Ｖｃは、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブチリルアミノ）−５−ウレイドペンタンアミド（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−３−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔａｎａｍｉｄｏ）−５−ｕｒｅｉｄｏｐｅｎｔａｎａｍｉｄｅ）であり、
Ｍｃは、  ６−（２，５−ジオキソシクロペンタ−３−エン−１−イル）ヘキサン酸（６−（２，５−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｐｅｎｔ−３−ｅｎ−１−ｙｌ）ｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）であり、
ＰＡＢ−ＯＨは、（４−アミノフェニル）メタノール（（４−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｙｌ）ｍｅｔｈａｎｏｌ）であり、
ＭＡＡは、２−メルカプト酢酸（２−ｍｅｒｃａｐｔｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）であり、
その分子構造式は、次のとおりであり、
【化２】
2021516670.tif 000003
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３の少なくとも１つは無しではない。
【００１８】
別の好ましい例では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３の少なくとも２つは無しではない。
【００１９】
別の好ましい例では、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３の３つとも無しではない。
【００２０】
別の好ましい例では、前記ＬＵは、Ｐｙ−Ｖｃ−ＰＡＢ（Ｐｙ−Ｖｃ−ＰＡＢ−ＯＨ）、Ｍｃ−Ｖｃ−ＰＡＢ（Ｍｃ−Ｖｃ−ＰＡＢ−ＯＨ）、Ｐｙ−ＭＡＡ（Ｐｙ−ＭＡＡ−ＯＨ）、Ｍｃ（Ｍｃ−ＯＨ）の群から選択され、その分子構造式は以下のとおりである
【化３】
2021516670.tif 000004
【００２１】
別の好ましい例では、前記リンカーＬＵ中のＬ１は、Ｐｙである。
【００２２】
別の好ましい例では、前記ＬＵは、Ｐｙ−Ｖｃ−ＰＡＢ（Ｐｙ−Ｖｃ−ＰＡＢ−ＯＨ）、Ｍｃ（Ｍｃ−ＯＨ）、Ｐｙ−ＭＡＡ（Ｐｙ−ＭＡＡ−ＯＨ）の群から選択される。
【００２３】
別の好ましい例では、前記薬物Ｄ（例えば、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦまたはＭＭＡＤ）は、リンカーＬＵを介して抗体（例えば、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂ）に接続し、その接続方法は、架橋カップリング、従来のカップリングから選択される。
【００２４】
別の好ましい例では、前記架橋カップリングは、スルフヒドリル架橋カップリング（例えば、ジスルフィド結合架橋）である。
【００２５】
別の好ましい例では、前記従来のカップリングは、スルフヒドリル基の従来のカップリングである。
【００２６】
別の好ましい例では、前記リンカーＬＵは、プロテアーゼによって切断され得る方法で薬物Ｄに接続される。
【００２７】
別の好ましい例では、前記リンカーＬＵは、切断不可能な方法で薬物Ｄに接続される。
【００２８】
別の好ましい例では、前記Ｄは、化学療法剤、放射性物質、毒素、プロドラッグをその活性型の抗癌プロドラッグに変換できる活性化酵素、またはその組み合わせの群から選択される。
【００２９】
別の好ましい例では、前記薬物Ｄは、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチン−Ｄ（ＭＭＡＤ）系誘導体、またはその組み合わせの群から選択される。
【表１】
2021516670.tif 000005
【００３０】
別の好ましい例では、前記Ｄに接続されたアミノ酸残基は、もともと抗体（親抗体）に存在するか、または外因的に導入される。
【００３１】
別の好ましい実施形態では、前記Ｄに接続されたアミノ酸残基はシステインアミノ酸である。
【００３２】
別の好ましい例では、前記システインアミノ酸は、親抗体において、Ｋａｂａｔ番号付け規則に従って軽鎖の１つまたは複数の位置、および／またはＫａｂａｔ番号付け規則に従って重鎖の１つまたは複数の位置に、およびＥＵ番号付け規則に従って重鎖の１つまたは複数の位置に導入された１つ以上の遊離システインアミノ酸である。
【００３３】
別の好ましい例では、前記Ｄに接続されたアミノ酸残基は、リジンである。
【００３４】
別の好ましい例では、前記活性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片の群から選択される。
【００３５】
別の好ましい例では、前記抗体は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。
【００３６】
別の好ましい例では、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００３７】
別の好ましい例では、前記抗体は、抗ＴＲＡＩＬＲ２ヒト化モノクローナル抗体である。
【００３８】
別の好ましい例では、前記抗体は、二本鎖抗体、一本鎖抗体を含む。
【００３９】
別の好ましい例では、前記抗体は、組換え型である。
【００４０】
別の好ましい例では、前記抗体は、細菌（例えば、大腸菌）で産生される。
【００４１】
別の好ましい例では、前記抗体は、真核細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）で産生される。
【００４２】
別の好ましい例では、前記抗体は、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはその組み合わせから選択される。
【００４３】
別の好ましい例では、前記抗体は、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である。
【００４４】
別の好ましい例では、前記抗体は、抗腫瘍特異的抗体である。
【００４５】
別の好ましい例では、前記抗体は、腫瘍細胞で特異的に発現される受容体ＴＲＡＩＬＲ１またはＴＲＡＩＬＲ２の抗体である。
【００４６】
別の好ましい例では、前記抗体は、抗ヒト腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）の受容体１（ＴＲＡＩＬＲ１）、または抗ヒト腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）の受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）の抗体、またはその組み合わせから選択される。
【００４７】
別の好ましい例では、前記抗体は、抗ヒト腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）の受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）のヒト化モノクローナル抗体である。
【００４８】
別の好ましい例では、前記抗ヒト腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）の受容体２（ＴＲＡＩＬＲ２）のヒト化モノクローナル抗体は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００４９】
別の好ましい例では、ヒトＴＲＡＩＬＲ２タンパク質に対する前記抗体の親和性のＥＣ５０は、０.１−１０ｎＭ、好ましくは、０.１−１.０ｎＭ、より好ましくは、０.１−０.５ｎＭである。
【００５０】
別の好ましい例では、前記抗体は、野生型マウスのＴＲＡＩＬＲ２タンパク質に結合しない。
【００５１】
別の好ましい例では、前記抗体は、以下の群から選択される１つ以上の特性を有する：
（ａ）ＴＲＡＩＬＲ２特定のエピトープに結合すること、
（ｂ）細胞表面ＴＲＡＩＬＲ２に結合して形成された抗原抗体複合体は、リソソームにエンドサイトーシスされること、
（ｃ）腫瘍の形成と成長を阻害すること、
（ｄ）腫瘍細胞の移動または転移を阻害すること。
【００５２】
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの構造は、次のとおりであり、
【化４】
2021516670.tif 000006
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂの構造は、次のとおりであり、
【化５】
2021516670.tif 000007
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの構造は、次のとおりであり、
【化６】
2021516670.tif 000008
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄの構造は、次のとおりであり、
【化７】
2021516670.tif 000009
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化８】
2021516670.tif 000010
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂの構造は、次のとおりであり、
【化９】
2021516670.tif 000011
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃの構造は、次のとおりであり、
【化１０】
2021516670.tif 000012
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりであり、
【化１１】
2021516670.tif 000013
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの構造は、次のとおりである。
【化１２】
2021516670.tif 000014
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの構造は、次のとおりであり、
【化１３】
2021516670.tif 000015
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの構造は、次のとおりである。
【化１４】
2021516670.tif 000016
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化１５】
2021516670.tif 000017
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりである。
【化１６】
2021516670.tif 000018
別の好ましい例では、前記抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されたとおりであり、および／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されたとおりであり、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含む。
別の好ましい例では、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されたとおりであり、および／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されたとおりであり、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの群から選択される。
【００５３】
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの群から選択され、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００５４】
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００５５】
別の好ましい例では、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されたとおりであり、および／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されたとおりであり、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの群から選択される。
【００５６】
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの群から選択され、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
別の好ましい例では、前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００５７】
本発明の第２の態様では、本発明の第１の態様に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物の応用であって、前記抗体−薬物複合体は、（ｉ）診断試薬を調製するために使用され、および／または（ｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患の予防および／または治療のための薬物を調製するために使用される、前記応用を提供する。
【００５８】
別の好ましい例では、前記ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患は、腫瘍（例えば、ＴＲＡＩＬＲ２陽性発現する腫瘍）の発生、成長および／または転移の群から選択される。
【００５９】
別の好ましい例では、前記ＴＲＡＩＬＲ２陽性発現する腫瘍は、ＴＲＡＩＬＲ２陽性発現する癌である。
【００６０】
別の好ましい例では、前記癌は、Ｔリンパ性白血病、Ｂリンパ性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病、非小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、子宮頸部の扁平上皮癌、膵扁平上皮癌、結腸扁平上皮癌、胃扁平上皮癌、前立腺癌、骨肉腫または軟部組織肉腫から選択される。
【００６１】
別の好ましい例では、前記腫瘍は、ＴＲＡＩＬＲ２陽性発現する癌であり、前記癌は、Ｔリンパ性白血病、Ｂリンパ性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病、非小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、子宮頸部の扁平上皮癌、膵扁平上皮癌、結腸扁平上皮癌、胃扁平上皮癌、前立腺癌、骨肉腫または軟部組織肉腫から選択される。
【００６２】
別の好ましい例では、前記ＴＲＡＩＬＲ２陽性発現は、腫瘍組織および／または細胞におけるＴＲＡＩＬＲ２転写物および／またはタンパク質のレベルＬ１と正常組織および／または細胞における転写物および／またはタンパク質のレベルＬ０の比率であり、Ｌ１／Ｌ０≧２、好ましくは≧３である。
【００６３】
本発明の第３の態様では、薬学的組成物であって、
（ｉ）本発明の第１の態様に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物またはその組み合わせである活性成分と、および
（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む、前記薬学的組成物を提供する。
【００６４】
別の好ましい例では、前記活性成分は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄまたはその組み合わせであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００６５】
別の好ましい例では、前記活性成分は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００６６】
別の好ましい例では、前記活性成分は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃまたはその組み合わせであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００６７】
別の好ましい例では、前記活性成分は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａであり、前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【００６８】
別の好ましい例では、前記薬学的組成物は、ヒト用の単位剤形態である。
【００６９】
別の好ましい例では、前記薬学的組成物は、液体製剤である。
【００７０】
別の好ましい例では、前記薬学的組成物において、前記抗体薬物複合体の含有量は、０.００５−５０ｗｔ％であり、好ましくは０.０５−１０ｗｔ％である。
【００７１】
別の好ましい例では、前記薬物は、（ｉｉｉ）追加の治療剤をさらに含む。
【００７２】
別の好ましい例では、前記追加の治療剤は、化学療法剤を含む。
【００７３】
本発明の第４の態様では、腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法であって、前記腫瘍細胞を本発明の第１の態様に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物を接触させるステップを含む、前記腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法を提供する。
【００７４】
別の好ましい例では、前記接触は、インビトロ培養系で行われる。
【００７５】
本発明の第５の態様では、腫瘍の予防および／または治療方法であって、
本発明の第１の態様に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または本発明の第３の態様に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、前記腫瘍の予防および／または治療方法を提供する。
【００７６】
別の好ましい例では、前記対象は、ヒトを含む哺乳動物である。
【００７７】
本発明の第６の態様では、治療対象の腫瘍の成長を遅らせる方法であって、有効量の本発明の第１の態様に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物と、放射線療法、化学療法剤療法、生物学的療法、またはその組み合わせの群から選択される１つまたは複数の治療とを併用するステップを含む、前記治療対象の腫瘍の成長を遅らせる方法を提供する。
【００７８】
本発明の第７の態様では、腫瘍の予防および／または治療の薬物の調製における本発明の第１の態様に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または本発明の第３の態様に記載の薬学的組成物の用途を提供する。
【発明の効果】
【００７９】
本発明の範囲内で、本発明の上記の技術的特徴および以下（例えば、実施例）に具体的に説明する各技術的特徴を互いに組み合わせて、新規または好ましい技術的解決手段を形成することができることを理解されたい。スペースの制限のため、ここでは繰り返しない。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】本発明の化学リンカーの分子構造式である。
【図２】本発明の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体−毒素−複合体の分子構造式である。
【図３】本発明の化学毒素の分子構造式である。
【図４】本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａとＴＲＡＩＬＲ２組換えタンパク質（抗原）の親和性を示す。
【図５】ヌードマウスにおけるリンパ性白血病Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１の皮下移植腫瘍の増殖に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図６】ヌードマウスにおける大細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ４６０移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図７】ヌードマウスにおけるヒト非小細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ１９７５移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図８】ヌードマウスにおける肝癌細胞ＳＭＭＣ−７７２１ヌードマウス移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図９】ヌードマウスにおける卵巣癌細胞Ａ２７８０移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図１０】ヌードマウスにおける膵臓癌細胞Ｍｉａ  ＰａＣａ−２移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果を示す。
【図１１】正常なマウスへの単回投与における本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの最大耐量を示す。
【図１２】本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａとＴＲＡＩＬＲ２組換えタンパク質（抗原）の親和性を示す。
【図１３】ヌードマウスにおけるヒト非小細胞肺癌ＭＳＴＯ−２１１Ｈ移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果を示す。
【図１４】ヌードマウスにおける膵臓癌細胞Ｍｉａ  ＰａＣａ−２移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果を示す。
【図１５】ヌードマウスにおけるＴリンパ性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果を示す。
【図１６】ヌードマウスにおける非Ｔ非Ｂリンパ性白血病細胞Ｒｅｈ移植腫瘍の生長に対する本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果を示す。
【図１７】正常なマウスへの単回投与における本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの最大耐量を示す。
【図１８】正常なカニクイザルへの単回投与における本発明のＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの最大耐量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
広範囲にわたる詳細な研究を通じて、発明者らはＴＲＡＩＬＲ２を標的とする抗体薬物複合体を設計し、前記抗体薬物複合体は著しい抗腫瘍効果を持っている。本発明はまた、前記抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体−薬物複合体の薬学的用途および腫瘍の阻害または予防における役割を提供する。
【００８２】
本発明のＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲＡＩＬＲ２またはＣＤ２６２）に対するヒト化モノクローナル抗体は、中国国内および国外でヒトの臨床試験に入り、ＴＲＡＩＬＲ２標的とする他の抗体と比較して、独特の遺伝子配列、エピトープ、および強力な抗原親和性を有し、生体内外で様々なＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍細胞を特異的に殺し、腫瘍細胞の増殖を阻害することができるが、正常な細胞や組織に対する毒性はほとんどなく、安全性も良好である。
【００８３】
本発明の一好ましい実施形態では、抗ＴＲＡＩＬＲ２ヒト化モノクローナル抗体（Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂ）が使用され、ジスルフィド結合架橋カップリング技術を使用して、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂを異なる化学リンカーを介して小分子毒素にカップリングして、さまざまな化学構造が異なるＡＤＣを取得し、インビボおよびインビトロで抗腫瘍活性のスクリーニングを繰り返して、優れた薬効性を持つＡＤＣ候補薬（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３と命名された）を取得し、ＴＲＡＩＬＲ２陽性に使用され複数の腫瘍の治療に使用され得る。
【００８４】
用語
本発明の核となる用語の解釈
【表２−１】
2021516670.tif 000019
【表２−２】
2021516670.tif 000020
本明細書で使用されるように、用語「抗体薬物複合体」、「抗体複合物」、「抗体薬物複合物」、「抗体−薬物複合物」「免疫複合物」は、互換的に使用でき、（ａ）抗体またはその活性断片と（ｂ）薬物によって形成される複合体を指す。
【００８５】
本明細書で使用されるように、用語「本発明の抗体薬物複合体」、「本発明の抗体と薬物複合物」または「本発明のＡＤＣ」は、互換的に使用でき、ＴＲＡＩＬＲ２に対する本発明の抗体またはその活性断片と薬物によって形成される複合体を有することを指す。
【００８６】
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書で使用されるように、具体的に列挙された値に関して使用される場合、用語「約」は、値が列挙された値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、「約１００」という表現は、９９と１０１の間のすべての値を含む（例えば、９９.１、９９.２、９９.３、９９.４など）。
【００８７】
抗体
本明細書で使用されるように、用語「抗体」または「免疫グロブリン」は、２つの同一の軽鎖（Ｌ）と２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる、同じ構造特性を持つ約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に接続され、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間のジスルフィド結合の数は異なる。各重鎖および軽鎖には、規則的に間隔を置いた鎖内ジスルフィド結合もある。  
【００８８】
各重鎖には、一端に可変領域（ＶＨ）があり、その後に複数の定常領域が続く。各軽鎖には、一端に可変領域（ＶＬ）があり、他端に定常領域があり：軽鎖の定常領域は重鎖の最初の定常領域に対向し、軽鎖の可変領域は重鎖の可変領域に対向する。特別なアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖の可変領域間で界面を形成する。
【００８９】
本明細書で使用されるように、用語「可変」は、抗体の可変領域の特定の部分が配列が異なり、それらが特定の抗原に対する様々な特定の抗体の結合および特異性を形成することを意味する。しかし、可変性は抗体の可変領域全体に均一に分布していない。それは、軽鎖および重鎖の可変領域における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つの断片に集中している。可変領域のより保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖と軽鎖の可変領域には、それぞれ４つのＦＲ領域が含まれ、これらの領域はおおよそβ−折りたたまれた構成で、接続環を形成する３つのＣＤＲで接続され、場合によっては部分的なβ折りたたみ構造を形成できる。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって密接に結合され、他の鎖のＣＤＲと一緒に抗体の抗原結合部位を形成する（Ｋａｂａｔら、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ.  Ｎｏ.  ９１−３２４２，  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ，６４７−６６９ページ（１９９１）を参照）。定常領域は抗体と抗原の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性に関与するなど、異なるエフェクター機能を発揮する。
【００９０】
脊椎動物の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、異なる２つの種類（κおよびλと呼ばれる）のいずれかに分類できる。その重鎖定常領域のアミノ酸配列にしたがって、免疫グロブリンは、異なる種類に分類できる。主にＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ  の５種類の免疫グロブリンがあり、それらのいくつかはさらにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２などのサブクラス（アイソタイプ）に分類できる。異なる種類の免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なる種類の免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元配置は、当業者によく知られている。
【００９１】
一般に、抗体の抗原結合特性は、重鎖および軽鎖の可変領域にある３つの特定の領域によって記述でき、可変領域（ＣＤＲ）と呼ばれ、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に分割され、４つのＦＲのアミノ酸配列は比較的保守的であり、結合反応に直接関与しない。これらのＣＤＲは環状構造を形成し、その間のＦＲによって形成されるβ折りたたみは空間構造において互いに近接しており、重鎖のＣＤＲと対応する軽鎖のＣＤＲは抗体の抗原結合部位を構成する。同じタイプの抗体のアミノ酸配列を比較して、ＦＲまたはＣＤＲ領域を構成するアミノ酸を決定できる。
本発明は、完全な抗体だけでなく、免疫学的活性を有する抗体の断片（抗原結合断片など）、または抗体および他の配列によって形成される融合タンパク質も含む。したがって、本発明はまた、抗体の断片、誘導体およびアナログを含む。
【００９２】
本発明において、抗体は、当業者に周知の技術により調製されたマウス、キメラ、ヒト化、または完全ヒト抗体を含む。ヒトおよび非ヒト部分を含む、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗体は、標準的なＤＮＡ組換え技術によって得ることができ、それらはすべて有用な抗体である。キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域とヒト免疫グロブリン由来の定常領域を有するキメラ抗体などの異なる部分が異なる動物種に由来する分子である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７および米国特許第４，８１６，３９７を参照、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する抗体分子を指し、非ヒト種に由来する１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を含む（米国特許第５，５８５，０８９を参照、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。これらのキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で周知のＤＮＡ組換え技術を使用して調製することができる。
【００９３】
本発明において、抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはより多重特異性であり得る。
【００９４】
本発明において、本発明の抗体はまた、その保存的変異体を含み、これは、本発明の抗体のアミノ酸配列と比較して、多くとも１０、好ましくは多くとも８、より好ましくは多くとも５、最も好ましくは多くとも３つのアミノ酸が類似または近い特性を持つアミノ酸に置き換えられて、ポリペプチドを形成する。これらの保存的変異ポリペプチドは、表１に従ってアミノ酸置換を通じて生成される。
【表３】
2021516670.tif 000021
【００９５】
本発明のＴＲＡＩＬＲ２に対する抗体
本発明は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖が重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を含み、軽鎖が軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を含む、ＴＲＡＩＬＲ２に対する高特異性および高親和性抗体を提供する。
【００９６】
好ましくは、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列のそれぞれのＣＤＲは、以下の群から選択される：
ａ１）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.１：ＣＤＲＨ１、ＤＦＳＭＮ；
ａ２）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.２：ＣＤＲＨ２、ＷＩＮＴＥＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ；
ａ３）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.３：ＣＤＲＨ３、ＩＤＹ；
ａ４）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.４：ＣＤＲＬ１、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ；
ａ５）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.５：ＣＤＲＬ２、ＫＶＳＮＲＦＳ；
ａ６）ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.６：ＣＤＲＬ３、ＦＱＳＴＨＶＰＨＴ；
ａ７）前記アミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換され、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する配列。
【００９７】
別の好ましい例では、前記少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換して形成される配列は、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、さらに好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列である。
【００９８】
好ましくは、前記抗体は、ＴＲＡＩＬＲ２関連シグナル経路を活性化する活性；細胞アポトーシスを促進する活性；細胞増殖を阻害する活性；オートファジーを促進する活性、またはそれらの組み合わせを有する。
【００９９】
典型的に、本発明は、ＴＲＡＩＬＲ２に対する抗体を提供し、前記抗体は、本発明の重鎖可変領域と、および／または本発明の軽鎖可変領域とを有し、
【０１００】
ここで、前記抗体の重鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：１に示されるＣＤＲＨ１と、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：２に示されるＣＤＲＨ２と、および
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：３に示されるＣＤＲＨ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
【０１０１】
ここで、前記アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を保持できる誘導体配列をさらに含み、および／または
【０１０２】
前記抗体の軽鎖可変領域は、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：４に示されるＣＤＲＬ１と、
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：５に示されるＣＤＲＬ２と、および
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：６に示されるＣＤＲＬ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含み、
【０１０３】
前記軽鎖可変領域アミノ酸配列中のいずれか１つのアミノ酸配列は、ＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸誘導体配列に付加、削除、修飾および／または置換される。
【０１０４】
好ましくは、前記抗体の重鎖可変領域配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：７であり、および／または前記抗体の軽鎖可変領域配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：８である。
【０１０５】
本発明において、前記抗体は、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体またはその組み合わせから選択される。
【０１０６】
別の好ましい例では、前記付加、削除、修飾および／または置換されるアミノ酸の数は、最初のアミノ酸配列のアミノ酸の総数の４０％を超えない。
【０１０７】
別の好ましい例では、前記付加、削除、修飾および／または置換されるアミノ酸の数は、１−７である。
【０１０８】
別の好ましい例では、前記付加、削除、修飾および／または置換される少なくとも１つのアミノ酸配列は、相同性が少なくとも８０％のアミノ酸配列である。
【０１０９】
別の好ましい例では、前記付加、削除、修飾および／または置換される少なくとも１つのアミノ酸は、ＴＲＡＩＬＲ２関連シグナル経路を活性化する活性を有し、アポトーシスを促進し、細胞増殖を阻害し、オートファジーを促進する活性中のいずれかの１つまたは複数を有する。
【０１１０】
本発明の抗体は、二本鎖または一本鎖抗体であることができ、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体から選択されることができ、より好ましくは、ヒト化抗体、ヒト−動物キメラ抗体（ヒト−マウスキメラ抗体など）であり、さらに好ましくは、完全ヒト抗体である。
【０１１１】
本発明の抗体誘導体は、一本鎖抗体、および／または抗体断片であることができ、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２または当該分野で公知の他の抗体誘導体など、ならびにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体、または抗体の他のサブタイプの抗体の１つまたは複数であり得る。
【０１１２】
ここで、前記動物はマウスなどの哺乳動物であることが好ましい。
【０１１３】
本発明の抗体は、ヒトＴＲＡＩＬＲ２を標的とするキメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植および／または修飾の抗体であることができる。
【０１１４】
本発明の一好ましい実施例において、前記ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：１−ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：３中のいずれか１つまたは複数の配列、またはそれらのＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換された配列は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ領域に位置する。
【０１１５】
本発明の一好ましい実施例において、前記ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：４−ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：６中のいずれか１つまたは複数の配列、またはそれらのＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換された配列は、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ領域に位置する。
【０１１６】
本発明の一より好ましい実施例中において、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３はそれぞれ独立して、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：１−ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：３中のいずれか１つまたは複数の配列、またはそれらのＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換された配列から選択され、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３はそれぞれ独立して、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：４−ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.：６中のいずれか１つまたは複数の配列、またはそれらのＴＲＡＩＬＲ２結合親和性を有する少なくとも１つのアミノ酸に付加、削除、修飾および／または置換された配列から選択される。
【０１１７】
本発明の上記の内容において、前記付加、削除、修飾および／または置換されるアミノ酸の数は、好ましくは最初のアミノ酸配列のアミノ酸の総数の４０％を超えず、より好ましくは３５％を超えず、より好ましくは１−３３％であり、より好ましくは５−３０％であり、より好ましくは１０−２５％であり、より好ましくは１５−２０％である。
本発明の上記の内容において、より好ましくは、前記付加、削除、修飾および／または置換されるアミノ酸の数は、１−７であることができ、より好ましくは１−５であり、より好ましくは１−３であり、より好ましくは１−２である。
【０１１８】
別の好ましい例では、前記ＴＲＡＩＬＲ２を標的とする抗体は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂである。
【０１１９】
別の好ましい例では、前記抗体Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂの重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：７に示されるアミノ酸配列である。
【０１２０】
別の好ましい例では、前記抗体Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂの軽鎖可変領域（Ｖ−Ｋａｐｐａ）アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ.：  ８に示されるアミノ酸配列である。
【０１２１】
別の好ましい例では、前記抗体重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含む。
【０１２２】
別の好ましい例では、前記抗体軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含む。
【０１２３】
具体的な実施形態では、前記相同性または配列同一性は８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％−９８％、最も好ましくは９９％以上であることができる。
【０１２４】
当業者に周知の配列相同性または同一性を測定する方法は、限定されないが、以下を含む：計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｌｅｓｋ、Ａ.Ｍ.編集、オックスフォード大学出版、ニューヨーク、１９８８；バイオコンピューティング：インフォマティクスおよびゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ.Ｗ.編集、アカデミックプレス、ニューヨーク、１９９３；配列データのコンピューター分析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ）、パート１、Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ａ.Ｍ.およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ.Ｇ.編集、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー、１９９４；分子生物学におけるシーケンス分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ.  、アカデミックプレス、１９８７およびシーケンス分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ.とＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ.編集、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク、１９９１およびＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ.とＬｉｐｍａｎ，Ｄ.，ＳＩＡＭ  Ｊ.  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ.  、４８：１０７３（１９８８）。同一性を測定する好ましい方法は、試験された配列間の最大の一致を得ることである。同一性を測定する方法は、一般に入手可能なコンピュータープログラムにコンパイルされている。２つの配列間の同一性を測定するための好ましいコンピュータープログラム方法は、ＧＣＧパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊ.ら、１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ。Ｆ.ら、１９９０）を含むが、これらに限定されない。公衆は、ＮＣＢＩおよびその他のソースからＢＬＡＳＴＸプログラムを入手できる（ＢＬＡＳＴハンドブック、Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ.ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ  ２０８９４；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ.ら、１９９０）。よく知られているＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を測定することに使用できる。
【０１２５】
抗体の調製
本発明の抗体またはその断片のＤＮＡ分子の配列は、ＰＣＲ増幅またはゲノムライブラリースクリーニングなどの従来の技術によって得ることができる。さらに、軽鎖および重鎖のコード配列を互いに融合させて、一本鎖抗体を形成することができる。
【０１２６】
一旦関連する配列が得られたら、組換え法を使用して、関連する配列を大量に取得できる。これは通常、それをベクターにクローニングし、それを細胞に再導入し、増殖した宿主細胞から関連する配列を従来の方法で単離することによって行われる。
【０１２７】
さらに、特にフラグメント長が短い場合は、人工的な合成方法を使用して関連シーケンスを合成することもできる。通常、最初に複数の小さな断片を合成し、それらを接続して非常に長い配列を持つ断片を取得できる。
【０１２８】
現在、完全に化学合成により本発明の抗体（またはその断片、またはその誘導体）をコードするＤＮＡ配列を得ることができる。次いで、ＤＮＡ配列を、当該分野で公知の様々な既存のＤＮＡ分子（またはベクターなど）および細胞に導入し得る。さらに、化学合成により、変異を本発明のタンパク質配列に導入することもできる。
【０１２９】
本発明はまた、上記の適切なＤＮＡ配列および適切なプロモーターまたは制御配列を含むベクターに関する。これらのベクターは、適切な宿主細胞を形質転換し、タンパク質を発現させることに使用できる。
【０１３０】
宿主細胞は、細菌細胞などの原核細胞；または酵母細胞などの下等真核細胞；または哺乳動物細胞などの高等真核細胞であり得る。好ましい動物細胞は、ＣＨＯ−Ｓ、ＨＥＫ−２９３細胞を含む（しかし、これらに限定されない）。
【０１３１】
通常、本発明の抗体の発現に適した条件下で、形質転換された宿主細胞を培養する。次に、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製ステップで、当業者に周知の従来の分離および精製手段によって精製して、本発明の抗体を得た。
【０１３２】
得られたモノクローナル抗体は、従来の手段により同定することができる。例えば、モノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法、またはインビトロ結合アッセイ（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）など）によって測定することができる。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ.  Ｂｉｏｃｈｅｍ.，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により測定することができる。
【０１３３】
本発明の抗体は、細胞内で、細胞膜上で発現され、または細胞から分泌され得る。必要に応じて、組換えタンパク質は、その物理的、化学的およびその他の特性を使用して、さまざまな分離方法によって分離および精製することができる。これらの方法は当業者によく知られている。これらの方法の例は、従来の再生処理、タンパク質沈殿剤による処理（塩析法）、遠心分離、浸透圧滅菌、超音波処理、超遠心分離、分子ふるいクロマトグラフィー（ゲルろ過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびその他のさまざまな液体クロマトグラフィー技術、およびこれらの方法の組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０１３４】
細胞毒剤
本発明のＡＤＣを形成するために使用することができる薬物は、細胞毒性剤を含むが、これに限定されない。
【０１３５】
用語「細胞毒剤」は、細胞発現活性、細胞機能を阻害または防止し、および／または細胞破壊を引き起こす物質を指す。前記用語は、放射性同位元素、化学療法剤、および毒素を含み、例えば、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素、または酵素活性毒素、その断片および／または変異体を含む。細胞毒性剤の例は、オーリスタチン系（例えば、オーリスタチンＥ、オーリスタチンＦ、ＭＭＡＥとＭＭＡＦ）、オーレオマイシン、メイタンシノール類似体(maytansino analogs)、リシン毒素、リシン毒素Ａ−鎖、コンブレタスタチン、ズオカルマイシン、ドラスタチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、パクリタキセル、シスプラチン、ｃｃ１０６５、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、α−八連球菌、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｔｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン、エノマイシン、クルシン（ｃｕｒｉｃｉｎ）、クロチン、カリケアマイシン、サパオナリアオフィシナリス（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤及び糖質コルチコイドと他の化学療法薬、およびＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２または２１３、Ｐ３２とＬｕ１７７を含むＬｕの放射性同位体などの放射性同位体を含むが、これらに限定されない。抗体は、プロドラッグをその活性型に変換することができる抗癌プロドラッグ活性化酵素に複合体させることもできる。
【０１３６】
好ましい小分子薬物は、高い細胞毒性を有する化合物であり、好ましくは、モノメチルオーリスタチン（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、カリケアマイシン、メイタンシノイド、またはそれらの組み合わせであり、より好ましくは、モノメチルオーリスタチン−Ｅ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチン−Ｄ（ＭＭＡＤ）、モノメチルオーリスタチン−Ｆ（ＭＭＡＦ）、またはそれらの組み合わせである。
【０１３７】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）
本発明はまた、本発明の抗体に基づく抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を提供する。
【０１３８】
典型的に、前記抗体薬物複合体は、前記抗体、およびエフェクター分子を含み、前記抗体は、前記エフェクター分子にカップリングされ、好ましくは化学カップリングである。ここで、前記エフェクター分子は、治療活性を有する薬物であることが好ましい。さらに、前記エフェクター分子は、毒性タンパク質、化学療法薬物、小分子薬物または放射性核種のうちの１つまたは複数であり得る。
【０１３９】
本発明の抗体および前記エフェクター分子は、カップリング剤を介してカップリングされ得る。前記カップリング剤の例は、非選択的カップリング剤、カルボキシル基を使用するカップリング剤、ペプチド鎖、およびジスルフィド結合を使用するカップリング剤のいずれか１つまたは複数であり得る。前記非選択的カップリング剤は、グルタルアルデヒドなどのエフェクター分子と抗体が共有結合を形成することを可能にする化合物を指す。前記カルボキシル基を使用するカップリング剤は、シス−アコニット酸無水物カップリング剤（シス−アコニット酸無水物など）およびアシルヒドラゾンカップリング剤（カップリング部位はアシルヒドラゾンである）のいずれか１つまたは複数であり得る。
【０１４０】
抗体の特定の残基（ＣｙｓまたはＬｙｓなど）は、イメージング試薬（発色団や蛍光基など）、診断試薬（ＭＲＩ造影剤や放射性同位元素など）、安定剤（グリコールポリマーなど）および治療薬などのさまざまな官能基に接続するために使用される。抗体は、機能剤にカップリングして、抗体機能剤複合体を形成することができる。機能剤（例えば、薬物、検出試薬、安定剤）は抗体にカップリング（共有結合）される。機能剤は、リンカーを介して直接的または間接的に抗体に連結され得る。
【０１４１】
本発明に適した典型的なカップリング方法は、Ｋ−ＬｏｃｋおよびＣ−Ｌｏｃｋの２つのカップリング方法を含む。Ｋ−Ｌｏｃｋカップリング方法では、薬物分子は抗体配列のリジン（Ｋ）残基にカップリングされ、Ｃ−Ｌｏｃｋカップリング方法では、薬物分子は抗体配列のシステイン（Ｃ）残基にカップリングされる。
【０１４２】
抗体を薬物にカップリングさせて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成できる。典型的に、ＡＤＣは薬物と抗体の間に位置するリンカーを含む。リンカーは、分解性リンカーまたは非分解性リンカーであり得る。分解性リンカーは、典型的には細胞内環境で容易に分解され、例えば、リンカーは標的部位で分解され、その結果、薬物が抗体から放出される。適切な分解性リンカーは、例えば、細胞内プロテアーゼ（リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼなど）によって分解され得るペプチジル含有リンカーを含む酵素分解リンカー、またはグルクロニダーゼによって分解され得るグルクロニド含有リンカーなどの糖リンカーを含む。ペプチジルリンカーは、例えば、バリン−シトルリン、フェニルアラニン−リジンまたはバリン−アラニンなどのジペプチドを含み得る。他の適切な分解性リンカーは、例えば、ｐＨ感受性リンカー（例えば、ヒドラゾンリンカーなどの５.５未満のｐＨで加水分解されるリンカー）および還元条件下で分解するリンカー（例えば、ジスルフィド結合リンカー）を含む。非分解性リンカーは、典型的には、抗体がプロテアーゼにより加水分解される条件下で薬物を放出する。
【０１４３】
リンカーは、抗体に接続する前に、特定のアミノ酸残基と反応できる反応基を持ち、活性反応基を介して接続される。スルフヒドリル特異的反応性反応基が好ましく、例えば、マレイミド化合物、ハロゲン化アミド（例えば、ヨウ素、臭素、または塩素化）；ハロゲン化エステル（例えば、ヨウ素、臭素、または塩素化）；ハロゲン化メチルケトン（例えば、ヨウ素、臭素、塩素化）；ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ素、臭素、塩素化）；ビニルスルホン、ピリジルジスルフィド；３、６−３，６−ビス−（水銀メチル）ジオキサンなどの水銀誘導体、および対イオンは酢酸塩、塩化物または硝酸塩；およびポリメチレンジメチルスルフィドチオスルホネートを含む。リンカーは、例えば、チオスクシンイミドを介して抗体に連結されたマレイミドを含み得る。
【０１４４】
薬物は、任意の細胞毒性、細胞増殖阻害または免疫抑制薬物であり得る。  実施形態では、リンカーは抗体と薬物を接続し、薬物はリンカーと結合を形成することができる官能基を有する。例えば、薬物は、リンカーとの結合を形成することができるアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、またはケトン基を有し得る。薬物がリンカーに直接結合している場合、薬物は抗体に結合する前に反応性活性基を持っている。
薬物の特に有用なクラスは、例えば、抗チューブリン薬物、ＤＮＡ小溝結合試薬、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤、抗生物質、葉酸拮抗薬、代謝拮抗薬、化学療法増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどを含む。特に有用な細胞毒性薬物系の例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合試薬、ＤＮＡアルキル化試薬、およびチューブリン阻害剤を含み、典型的な細胞毒性薬物は、例えば、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎｓ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅｓ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅｓ）及びメイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）（例えば、ＤＭ１及びＤＭ４）、タキサン（ｔａｘａｎｅｓ）、ベンゾジアゼピン（ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｓ）またはベンゾジアゼピンを含有する薬物（ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｒｕｇｓ）（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤｓ）、インドリノベンゾジアゼピン（ｉｎｄｏｌｉｎｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｓ）及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン（ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｓ））、ビンカアルカロイド（ｖｉｎｃａ  ａｌｋａｌｏｉｄｓ）を含む。
【０１４５】
本発明において、薬物−リンカーを使用して、１つの簡単なステップでＡＤＣを形成することができる。他の実施形態では、二官能性リンカー化合物を使用して、２ステップまたは複数のステップ方法でＡＤＣを形成することができる。例えば、システイン残基は第１のステップでリンカーの反応活性部分と反応し、その後のステップでリンカーの官能基が薬物と反応してＡＤＣを形成する。
【０１４６】
通常、リンカー上の官能基は、薬物部分上の適切な反応性基との特定の反応を促進するように選択される。非限定的な例として、アジドベースの部分に基づいて、薬物部分の反応性アルキニル基と特異的に反応させることができる。薬物は、アジド基とアルキニル基の間の１，３−双極子環状付加を介してリンカーに共有結合する。他の有用な官能基は、例えば、ケトンおよびアルデヒド（ヒドラジドおよびアルコキシアミンとの反応に適する）、ホスフィン（アジドとの反応に適する）；イソシアネートおよびイソチオシアネート（アミンとの反応に適する）；およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどの活性化エステル（アミンやアルコールとの反応に適する）を含む。「バイオコンジュゲーション技術」、第２版（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）に記載されているようなこれらおよび他のライゲーション戦略は、当業者によく知られている。当業者は、薬物部分とリンカーの選択的反応について、反応性官能基の相補的対が選択される場合、相補的対の各メンバーをリンカーおよび薬物の両方に使用できることを理解できる。
【０１４７】
本発明はまた、ＡＤＣを調製するための方法を提供し、抗体複合体（ＡＤＣ）を形成するのに十分な条件下で抗体を薬物−リンカー化合物と組み合わせることをさらに含み得る。
【０１４８】
特定の実施形態では、本発明の方法は、抗体−リンカー複合体を形成するのに十分な条件下で、抗体を二官能性リンカー化合物と接続することを含む。これらの実施形態では、本発明の方法はさらに、リンカーを介して薬物部分を抗体に共有結合させるのに十分な条件下で抗体リンカー複合体を薬物部分に結合することを含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体ＡＤＣは、以下の分子式に示され、
【化１７】
2021516670.tif 000022
ここで、
Ａｂは、ＴＲＡＩＬＲ２に対する抗体であり、
ＬＵは、無しまたは前記抗体と前記薬物をリンクするリンカーであり、
Ｄは、薬物であり、
ｐは、前記抗体にカプリングされた前記薬物の数であり、ｐは、１−１０、好ましくは、１−８、より好ましくは、２−４から選択され、
「−」は、結合またはリンカーである。
【０１５０】
典型的に、本発明の４つのＡＤＣの薬物部分（毒素など）、リンカー、接続方法及び溶解方法は、表２に示したとおりである。
【表４】
2021516670.tif 000023
【０１５１】
典型的に、本発明の５つのＡＤＣの薬物部分（毒素など）、リンカー、接続方法および溶解方法は、表３に示したとおりである。
【表５】
2021516670.tif 000024
【０１５２】
典型的に、本発明ＡＤＣにおけるリンカー構造は、図１に示したとおりである。
【０１５３】
典型的に、本発明の９つのＡＤＣ構造式は、図２に示したとおりである。
【０１５４】
典型的に、本発明の薬物の構造式は、図３に示したとおりである。
【０１５５】
応用
本発明は、診断製剤を調製するため、またはＴＲＡＩＬＲ２関連疾患を予防および／または治療するための薬物を調製するための、本発明の抗体の用途をさらに提供する。前記ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患は、腫瘍の発生、成長および／または転移血栓関連疾患、炎症、代謝関連疾患などを含む。
【０１５６】
本発明の抗体、ＡＤＣまたはＣＡＲ−Ｔなどの用途は、以下を含む（しかし、これらに限定されない）：
（ｉ）腫瘍の発生、成長および／または転移、特にＴＲＡＩＬＲ２陽性発現する固形腫瘍の診断、予防および／または治療。
前記腫瘍は、非小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、子宮頸部の扁平上皮癌、膵扁平上皮癌、結腸扁平上皮癌、胃扁平上皮癌、前立腺癌、骨肉腫または軟部組織肉腫、より好ましくは非小細胞肺癌、肝癌、卵巣癌および膵臓癌などを含む（しかし、これらに限定されない）。
（ｉｉ）血液系の腫瘍の診断、予防および／または治療。前記腫瘍は、包括（しかし、これらに限定されない）：リンパ性白血病、顆粒球性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキン病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫などを含む（しかし、これらに限定されない）。より好ましくは、急性Ｔリンパ性白血病、Ｂリンパ性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病である。
【０１５７】
典型的に、本発明は、一般式Ａｂ−（ＬＵ−Ｄ）ｐに示されるＺａｐａｄｃｉｎｅ−１（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ、またはその組み合わせ）またはＺａｐａｄｃｉｎｅ−３（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅ、またはその組み合わせ）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグおよびそれらの混合物が活性成分として癌の予防および／または治療のための薬物の調製におけるの応用に関する
【０１５８】
薬学的組成物
本発明は、組成物をさらに提供する。好ましい例では、前記組成物は、上記の抗体またはその活性断片またはそのは融合タンパク質またはそのＡＤＣ、および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物である。一般に、これらの物質は、非毒性で不活性で薬学的に許容される水性担体媒体に配合することができ、ｐＨは通常約５〜８、好ましくは約６〜８であるが、ｐＨは調製される物質の性質および治療される疾患によって変化される。調製された薬学的組成物は、腫瘍内、腹腔内、静脈内、または局所投与を含むがこれらに限定されない従来の経路によって投与することができる。
【０１５９】
本発明の薬学的組成物は、ＴＲＡＩＬＲ２タンパク質分子を結合するために直接使用することができ、したがって、腫瘍などの疾患を予防および治療するために使用することができる。さらに、他の治療薬も同時に使用でき、例えば、ＴＮＦ、ＩＦＮ、ＩＬ−２などのさまざまなサイトカイン、５−ＦＵ、メトトレキサートなどの核酸生合成に影響を与える薬物などのさまざまな腫瘍化学療法薬、ナイトロジェンマスタードやシクロホスファミドなどのアルキル化剤、ＲＮＡ合成を防ぐために転写プロセスを妨害するドキソルビシンやアクチノマイシンＤなどの薬物、ビンクリスチン、カンプトテシン。標的薬物、抗体薬物、阻害剤、例えば抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｆａｓ抗体、およびＢｃｌ−２阻害剤などである。
【０１６０】
本発明の薬学的組成物は、安全かつ有効な量（例えば、０.００１−９９ｗｔ％、好ましくは、  ０.０１−９０ｗｔ％、より好ましくは、０.１−８０ｗｔ％）の本発明のモノクローナル抗体（またはその複合体）および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。このような担体は、生理食塩水、バッファー、グルコース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせを含む（しかし、これらに限定されない）。医薬品は投与方法と一致している必要があります。医薬品は投与方法とマッチングする必要がある。本発明の薬学的組成物は、注射剤の形態で調製することができ、例えば、生理食塩水またはグルコースおよびその他のアジュバントを含む水溶液を用いて、常法により調製することができる。錠剤およびカプセルなどの薬学的組成物は、従来の方法によって調製することができる。注射剤、液剤薬学的組成物は、無菌条件下で製造する必要がある。本発明の薬学的組成物は、エアロゾル吸入用の粉末にすることもできる。活性成分の投与量は、治療的に有効な量であり、例えば、約１  μｇ／ｋｇ体重〜約５ ｍｇ／ｋｇ体重／日である。なお、本発明のポリペプチドは、他の治療薬と併用することができる。
【０１６１】
薬学的組成物を使用する場合、安全かつ有効な量の免疫複合体を哺乳動物に投与し、安全かつ有効な量は通常少なくとも約１０  μｇ／ｋｇ体重であり、ほとんどの場合、約５０ ｍｇ／ｋｇ体重を超えず、好ましくは、約１０  μｇ／ｋｇ体重から約２０ ｍｇ／ｋｇ体重である。もちろん、特定の投与量は、熟練した医師のスキルの範囲内である、投与経路、患者の健康状態などの要因も考慮する必要がある。
【０１６２】
典型的に、本発明は、治療有効量の一般式Ａｂ−（ＬＵ−Ｄ）ｐに示されるＺａｐａｄｃｉｎｅ−１（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ、またはその組み合わせ）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、一般式ｍＡｂ−（ＬＵ−Ｄ）ｐに示されるＺａｐａｄｃｉｎｅ−１（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃまたはＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ）またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグを活性成分として使用し、単独で、または組み合わせて使用し、または他の薬物、賦形剤などと錠剤、粉末、ピル、注射剤、カプセル剤、フィルム剤、坐剤、軟膏、顆粒剤などを含むがこれらに限定されない様々な剤形に調製される。
【０１６４】
典型的に、本発明は、治療有効量の一般式Ａｂ−（ＬＵ−Ｄ）ｐに示されるＺａｐａｄｃｉｎｅ−３（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅ、またはその組み合わせ）またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、本発明薬学的組成物は、一般式ｍＡｂ−（ＬＵ−Ｄ）ｐに示されるＺａｐａｄｃｉｎｅ−３（Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄまたはＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅ）またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグを活性成分として使用し、単独で、または組み合わせて使用し、または他の薬物、賦形剤などと錠剤、粉末、ピル、注射剤、カプセル剤、フィルム剤、坐剤、軟膏、顆粒剤などを含むがこれらに限定されない様々な剤形に調製される。
【０１６６】
本発明は以下の主な利点を含む：
（１）本発明のＡＤＣは、新しい、広域スペクトル、高効率、特異的に抗腫瘍性の抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体−毒素−複合体（ＡＤＣ）であり、ＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍の治療に使用され、腫瘍の治療、特にリンパ性白血病、肝臓癌、肺癌、膵臓癌、卵巣癌などの治療に使用される。
（２）本発明のＡＤＣの治療用量が低く、薬物の安全性を大幅に改善する。
【０１６７】
以下では具体的な実施例に結び合わせて、本発明をさらに説明する。  これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例における具体的な条件のない実験方法は、一般的に、米国のＳａｍｂｒｏｏｋ.  Ｊら、「分子クローニング実験室ガイド（黄培堂ら訳、北京、科学出版社、２００２年）に記載の条件、またはメーカーが推奨する条件（例えば、製品取扱説明書）に基づく。他に示されない限り、パーセンテージおよび部数は重量パーセントおよび重量部である。以下の実施例で使用される実験材料および試薬は、特に指定のない限り、商業チャネルから入手できる。
以下、添付の図面を参照し、例を挙げて本発明の実施例を参照して本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。以下の実施例に記載されている実験方法は、特に指定のない限り従来の方法であり、試薬および生物学的材料は、特に指定のない限り、商業チャネルから入手できる。
【０１６８】
一般的な方法
本発明によって解決される技術的問題は、以前の臨床試験から教訓を引き出し、腫瘍治療のための抗ＴＲＡＩＬＲ２モノクローナル抗体の治療効果の問題をどのように解決するかである。この目的のために、本発明者らは、ＡＤＣ複合体を調製する戦略を採用し、以下の一連の研究工程を経て、本発明のＡＤＣ薬物候補を得た。すなわち：
（１）Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂを発現するＣＨＯオリジナル細胞バンク、マスター細胞バンク、生産細胞バンクを構築し、小規模プロセス研究を完了し、５リットルのバイオリアクターで３.５ｇ／Ｌの発現レベルに達した。
（２）マウスの尾静脈から注射した１３１Ｉ標識Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂは、肺癌移植腫瘍などのＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍を特異的に標的とすることができる。
（３）免疫細胞化学技術を使用して、蛍光標識されたＺａｐｔｕｚｕｍａｂは、肺癌などの腫瘍細胞の表面のＴＲＡＩＬＲ２受容体に結合した後、迅速にエンドサイトーシスされ、リソソームに入り、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂが抗体−毒素−複合体を調製する２つの重要な機能を有することを証明した。すなわち、腫瘍特異的ターゲティングと、腫瘍細胞によってエンドサイトーシスによってリソソームに取り込まれ、小分子毒素を放出。
（４）ジスルフィド結合架橋カップリング技術を使用して、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂは異なる化学リンカーを介して毒素にカップリングされ、異なる化学構造を持つさまざまなＡＤＣを得た。インビボｏおよび／またはインビトロでの抗腫瘍活性のスクリーニングを繰り返した後、優れた薬効性を持つ２つのＡＤＣ候補（それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１およびＺａｐａｄｃｉｎｅ−３と命名）を得、ＴＲＡＩＬＲ２陽性のさまざまな腫瘍の治療に使用される。
【０１６９】
材料および方法
実験動物
ＢＡＬＢ／ｃ雌ラットは上海Ｘｉｐｕｅｒ−Ｂｉｋａｉ実験動物有限会社（中国、上海）から購入し、ＳＰＦ実験動物室で飼育し、ＮＯＤ−ＳＣＩＤ雌ラットは上海Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ生物化学有限会社（中国、上海）から購入し、ＳＰＦ実験動物室で飼育し、１２時間明暗サイクルを維持し、十分な食物と清潔な飲料水を提供し、８週齢で実験を開始した。すべての動物実験は承認され、上海市動物管理および使用委員会のガイダンスに従って実施した。
【０１７０】
細胞株および試薬
ヒトリンパ性白血病、肺癌細胞、肝臓癌細胞、卵巣癌細胞、膵臓癌細胞などの腫瘍細胞、正常細胞は、ＡＴＣＣまたは中国医学科学院基礎医学研究所のセルセンター、または中国科学院上海生命科学研究院の細胞資源センター、または  Ｓａｉｑｉ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｃｏ.、Ｌｔｄ.またはＣｙｂｅｒｋｏｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ.、Ｌｔｄ.またはＭｉａｏｔｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ.、Ｌｔｄ.から購入した。パクリタキセル、ビンクリスチンおよびエピルビシンはすべてＳｅｌｌｅｃｋから購入した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率検出キットは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入した。
【０１７１】
実施例１  Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１のインビトロ抗腫瘍活性
さまざまな種類ＴＲＡＩＬＲ２を高発現するリンパ性白血病細胞株（Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１）、肺癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ４６０およびＮＣＩ−Ｈ１９７５）、肝癌細胞株（ＳＭＭＣ−７２２１）、卵巣癌細胞株（Ａ２７８０）、および膵臓癌Ｍｉａ  ＰａＣａ−２およびヒト正常細胞株または末梢血細胞、例えばヒト正常末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ヒト正常結腸上皮細胞（ＮＣＭ−４６０）、ヒト正常結腸組織細胞（ＣＣＤ−１８Ｃｏ）およびヒト正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ−２Ｂ）を使用して、さまざまな腫瘍細胞および正常細胞に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１の細胞毒性効果を評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：トリプシン（０.２５％、Ｖ／Ｖ）を使用して、付着培養細胞（ＮＣＩ−Ｈ４６０やＳＭＭＣ−７２２１など）を消化し、細胞を剥がし、および／または浮遊培養で細胞を直接収集し（Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１）、１００μＬの完全培地に再懸濁した。５０００個の付着細胞または１６０００個の浮遊細胞を９６ウェルプレートに接種し、３７℃で一晩培養した。次に、異なる濃度の抗ＴＲＡＩＬＲ２裸抗体またはＺａｐａｄｃｉｎｅ−１を含む１００μＬの培地を追加し、７２時間インキュベーターに入れてから、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏルシフェラーゼ活性検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、ロット番号：００００２１７７３８）を使用して、インビトロで培養したさまざまな腫瘍細胞に対する試験薬物の細胞毒性を測定した。
【０１７２】
細胞生存率は、式：Ｖサンプル／Ｖ陰性対照×１００％で計算した。ここで、Ｖサンプルは、薬物処理群の読み取り値であり、Ｖ陰性対照は、溶媒対照群の平均値である。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５.０ソフトウェアを応用し、非線形回帰モデルを使用してＳタイプの用量−生存率曲線を描き、ＩＣ５０値を計算した。  ＩＣ５０値は、サンプル濃度に対する細胞生存率（％）の対数値Ｘであり、次の非線形フィッティングの式で計算した。
【表６】
2021516670.tif 000025
ここで、ＮＲは応答なし（ｎｏ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、ｅｆｆ.  はｅｆｆｉｃａｃｙ（％）、ＩＣ５０の単位はｎｇ／ｍｌである。
【０１７３】
具体的な結果は表４に示したとおりである。研究結果は、抗ＴＲＡＩＬＲ２裸抗と比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１がさまざまなＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１、ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＮＣＩ−Ｈ１９７５、ＳＭＭＣ−７７２１、Ａ２７８０、Ｍｉａ  ＰａＣａ−２など）の増殖を、効果的に阻害できることを示し、ＺａｐｔｕｚｕｍａｂとＺａｐａｄｃｉｎｅ−１は、ＴＲＡＩＬＲ２陰性細胞（例えば、ヒト正常ＰＢＭＣ、ＢＥＡＳ−２Ｂ、ＮＣ−４６０、ＣＣＤ−１８Ｃｏなど）に対して細胞毒性効果がないことを示す。
【０１７４】
実施例２  ＥＬＩＳＡ技術でＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａとＴＲＡＩＬＲ２の親和性状況を検出
ＥＬＩＳＡ法を使用して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａとヒト化組換えタンパク質ＴＲＡＩＬＲ２の結合状況を評価し、具体的なプロセスは次のとおりである：１×ＰＢＳバッファー（ｐＨ  ７.４）で１００μｌ／ウェルの容量で２μｇ／ｍｌのヒト化組換えタンパク質ＴＲＡＩＬＲ２を９６ウェルプレートにコーティングし、４℃で一晩放置した。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴ（０.０５％Ｔｗｅｅｅｎ２０を含むｐＨ  ７.４  ＰＢＳ）バッファーで３回、各回５分間洗浄し、２４０μｌ／ウェルごとに５％脱脂粉乳を含むＰＢＳを加え、ブロッキングのために３７℃で３時間インキュベートした。ブロッキング溶液を捨て、プレートを３００μｌ  ／ウェルのＰＢＳＴで３回、各回５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとに１％スキムミルク粉末またはＢＳＡを含むＰＢＳで希釈したテストする抗体（一次抗体）またはＡＤＣを添加し、濃度は  ４μｇ／ｍｌで２倍勾配希釈を開始し、合計１２の濃度、３つのウェルを複製し、室温で１時間インキュベートした。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴで３回、各５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとに１％スキムミルク粉末またはＢＳＡを含むＰＢＳで希釈した二次抗体を加え、濃度は１μｇ／ｍｌ  であり、３７℃で４０分間インキュベートした。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴで３回、各回５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとにＴＭＢカラー現像液を添加し、室温で５〜１０分間インキュベートした。発色効果に従い、５０μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加して反応を停止した。ＳＰＡＲＫ  １０Ｍ多機能マイクロプレート検出器で４５０ｎｍでＯＤ値を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５.０ソフトウェアを使用してデータ分析した。具体的な結果を図４に示したとおりである。
【０１７５】
結果は、ヒト化モノクローナル抗体Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂと比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａとＺａｐｔｕｚｕｍａｂの親和性は同じ桁に留まっていることを示し、これは、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａが効果的にＴＲＡＩＬＲ２に結合し、ヒト化モノクローナル抗体の抗原結合能力を保持できることを証明する。
【０１７６】
実施例３リンパ性白血病のマウスにおける皮下異種移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害およびクリアランス効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗リンパ性白血病効果は、ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスでのＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒトＪｕｒｋａｔ  Ｅ６−１白血病細胞に対するその成長阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＴリンパ性白血病Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０８／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１  ｍｌ（１×１０７細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫瘍マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびビンクリスチン陽性対照群（０.５ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ７Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの投与時間は群分け後０、４、７日であり、ビンクリスチンの投与時間は群分け後０、７、１４日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後３、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定した。実験は最初の投与から２８日後に終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１７７】
具体的な結果は図５に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後１４日目に、中用量群と高用量群（３ ｍｇ／ｋｇおよび９ ｍｇ／ｋｇ）は１００ ｍｍ３リンパ性白血病異種移植片を完全に除去し、腫瘍抑制率は１００％に達した。低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も移植腫瘍の増殖を有意に抑制でき、腫瘍抑制率は５４.８８％に達した。２８日目の実験の終わりに、陰性対照群の平均腫瘍重量は９０２.１±６０.４５  ｍｇであったが、陽性対照群の平均腫瘍重量は６４８.７±８３.６３  ｍｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は４３７.９±９６.７８  ｍｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）と高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０ ｍｇであった。
【０１７８】
実施例４  ヒト大細胞肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０のヌードマウス皮下移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗肺癌特性は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒト大細胞肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０の増殖阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＮＣＩ−Ｈ４６０肺癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０7／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、パクリタキセル、陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から２８日後に終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１７９】
具体的な結果は図６に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の肺癌移植腫瘍の増殖が抑制され始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後２８日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は９６％に達したが、中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は６６％に達した。低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も移植腫瘍の増殖を有意に抑制でき、腫瘍抑制率は２８％に達した。２８日目の実験の終わりに、陰性対照群の平均腫瘍重量は１.４７±０.４５ｇ、陽性対照群の平均腫瘍重量は１.１３±０.４２ｇ、そしてＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.９９±０.２６ｇ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.５５±０.２１ｇ、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.０８±０.０７ｇであった。
【０１８０】
実施例５  ヌードマウスにおけるヒト非小細胞肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ１９７５移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗ヒト非小細胞肺癌の特性は、ＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒト非小細胞肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ１９７５を移植されたヌードマウスに対する抑制効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＮＣＩ−Ｈ１９７５肺癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築した。ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０7／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫瘍マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ，Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、パクリタキセル陽性対照群および陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から２８日後に実験を終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
具体的な結果は図７に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の肺癌移植腫瘍の増殖を抑制し始めたことを示す。  
【０１８１】
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後２１日目に、中用量群と高用量群（６ ｍｇ／ｋｇおよび１２ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、低用量群（２ ｍｇ／ｋｇ）も有意に抑制でき、腫瘍抑制率は８４％に達した。２８日目の実験の終わりに、陰性対照群の平均腫瘍重量は２.０９  ±  ０.０８ｇであったが、陽性対照群の平均腫瘍重量は０.５８  ±  ０.１５ｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ低用量群（２ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.５８  ±  ０.１７ｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ中用量群（６ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.０１±０.０１ｇであり、高用量群（１２ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.０ｇであった。
【０１８２】
実施例６  ヌードマウスにおける肝癌細胞ＳＭＭＣ−７７２１の移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗肺癌特性は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２の陽性発現のヒトＳＭＭＣ−７７２１肝癌細胞の増殖阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＳＭＭＣ−７７２１肝癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、ＳＭＭＣ−７７２１細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびエピルビシン陽性対照群（５ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×９）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａおよび陰性対照群の投与時間はグループ化後０、４、７日であるが、エピルビシンの投与時間はグループ化後０、４、７、１０、１４、１７、２１日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定した。実験は最初の投与から２８日後に終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１８３】
具体的な結果は図８に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の肝癌移植腫瘍の増殖が抑制され始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後１１日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は８９％に達した。低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も移植腫瘍の増殖を有意に抑制でき、腫瘍抑制率は４８％に達した。２８日目の実験の終わりに、陰性対照群の平均腫瘍重量は１.３７  ±  ０.１７ｇ、陽性対照群の平均腫瘍重量は１.０２  ±  ０.０８ｇ、そしてＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.８８  ±  ０.１２ｇ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.２６  ±  ０.０７ｇ、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０ｇであった。
【０１８４】
実施例７  ヌードマウスにおける卵巣癌細胞Ａ２７８０移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗卵巣癌特性は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２発現の陽性のヒトＡ２７８０卵巣癌細胞の増殖阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＡ２７８０卵巣癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、Ａ２７８０卵巣癌細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、パクリタキセルおよび陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から２８日後に実験を終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１８５】
具体的な結果は図９に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の卵巣癌移植腫瘍の増殖を抑制し始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後１８日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は９２％に達し、低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も有意に抑制でき、腫瘍抑制率は５６％に達した。２８日目の実験の終わりに、陰性対照群の平均腫瘍重量は２.８８  ±  ０.３４ｇであったが、陽性対照群の平均腫瘍重量は２.４２  ±  ０.３５ｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は１.４０  ±  ０.１５ｇであり、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０.２７  ±  ０.１０ｇであり、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍重量は０ｇであった。
【０１８６】
実施例８  ヌードマウスにおける膵臓癌細胞Ｍｉａ  ＰａＣａ−２移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａのインビボ抗膵臓癌特性は、ヌードマウスインビボでの陽性のＴＲＡＩＬＲ２発現のヒトＭｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞の増殖阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＭｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、Ｍｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、パクリタキセルおよび陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から２８日後に実験を終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１８７】
具体的な結果は図１０に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の膵臓癌移植腫瘍の増殖を抑制し始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの３回投与後１２日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は９１％に達し、低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も有意に抑制でき、腫瘍抑制率は３９％に達した。
【０１８８】
実施例９  正常マウスに対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの急性毒性効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１の急性毒性効果は、投与後の正常マウスの体調と生化学的指標の変化を調査することによって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：２０匹の健康なＢＡＬＢ／ｃ雌マウス（上海Ｘｉｐｕｅｒ−Ｂｉｋａｉ実験動物有限会社から購入）を取り、マウスは６〜７週齢で、体重は１８〜２２  ｇである。５つのグループに分け、各グループ４匹である。定期的な給餌の１週間後、投与し始めた。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの用量は、２０ ｍｇ／ｋｇ、３０ ｍｇ／ｋｇ、４０ ｍｇ／ｋｇおよび５０ ｍｇ／ｋｇで、正常対照としてブランク溶媒を使用した。尾静脈からゆっくりと単回投与し、死亡、食事、運動を含めて毎日マウスを観察し、３日ごとにマウスの体重を記録し、５日目と１５日目に血液生化学検査のために血液サンプルを採取し、検査項目はＡＬＴとＵＲＥＡを含む。投与１５日目に、過量麻酔により安楽死させた。
具体的な結果は図１１に示したとおりである。その結果、対照群と比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ  ２０ ｍｇ／ｋｇ、３０ ｍｇ／ｋｇ、４０ ｍｇ／ｋｇの３つの用量群のマウスは正常に成長し、よく運動し、正常な体重変化を示し、正常な肝臓と腎臓の機能を示し、死ななかった。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ  ５０ ｍｇ／ｋｇ用量群では、マウスの死亡率は５０％に達し、マウスの体重は初期段階で減少し、マウスの成長は後期段階で正常に戻り、マウスの体重変化は正常であり、マウスの肝臓と腎臓の機能は正常であり、これは、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの単回投与に対するマウスの最大耐量が４０〜５０ ｍｇ／ｋｇであり、安全であることを示す。
【０１８９】
実施例１０  Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３のインビトロ抗腫瘍活性
さまざまな種類のＴＲＡＩＬＲ２高発見のリンパ性白血病細胞株（Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１、Ｒｅｈ）、肺癌細胞株（ＭＳＴＯ−２１１Ｈ）、神経膠腫細胞株（Ａ１７２）、膵臓癌Ｍｉａ  ＰａＣａ−２、およびヒト正常細胞株または末梢血細胞、例えばヒト正常末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ヒト正常結腸上皮細胞（ＮＣＭ−４６０）、ヒト正常結腸組織細胞（ＣＣＤ−１８Ｃｏ）、ヒト正常肺上皮細胞（ＢＥＡＳ−２Ｂ）を使用して、さまざまな腫瘍細胞および正常細胞に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３の細胞毒性効果を評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：トリプシン（０.２５％、Ｖ／Ｖ）を使用して、付着培養細胞（ＭＳＴＯ−２１１Ｈなど）を消化し、細胞を剥がし、および／または浮遊培養で細胞を直接収集し（Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１、Ｒｅｈ）、１００μＬの完全培地に再懸濁した。５０００個の付着細胞または１６０００個の浮遊細胞を９６ウェルプレートに接種し、３７℃で一晩培養した。次に、異なる濃度の抗ＴＲＡＩＬＲ２裸抗体またはＺａｐａｄｃｉｎｅ−３を含む１００μＬの培地を追加し、７２時間インキュベーターに入れてから、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏルシフェラーゼ活性検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ、ロット番号：００００２１７７３８）を使用して、インビトロで培養したさまざまな腫瘍細胞に対する試験薬物の細胞毒性を測定した。
【０１９０】
細胞生存率は、式：Ｖサンプル／Ｖ陰性対照×１００％  で計算した。ここで、Ｖサンプルは、薬物処理群の読み取り値であり、Ｖ陰性対照は、溶媒対照群の平均値である。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５.０ソフトウェアを応用し、非線形回帰モデルを使用してＳタイプの用量−生存率曲線を描き、ＩＣ５０値を計算した。  ＩＣ５０値は、サンプル濃度に対する細胞生存率（％）の対数値Ｘであり、次の非線形フィッティングの式で計算した。
【表７】
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【０１９１】
具体的な結果は表５に示したとおりである。研究結果は、抗ＴＲＡＩＬＲ２裸抗と比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３（例えば、特にＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａおよびＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ）がさまざまなＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１，Ｒｅｈ，ＭＳＴＯ−２１１Ｈ、Ａ１７２およびＭｉａ  ＰａＣａ−２など）の増殖を、効果的に阻害できることを示し、ＺａｐｔｕｚｕｍａｂとＺａｐａｄｃｉｎｅ−３は、ＴＲＡＩＬＲ２陰性細胞（例えば、ヒト正常ＰＢＭＣ、ＢＥＡＳ−２Ｂ、ＮＣＭ−４６０、ＣＣＤ−１８Ｃｏなど）に対して細胞毒性効果がないことを示す。
【０１９２】
実施例１１  ＥＬＩＳＡ技術でＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａとＴＲＡＩＬＲ２の親和性状況を検出
ＥＬＩＳＡ法を使用して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａとヒト化組換えタンパク質ＴＲＡＩＬＲ２の結合状況を評価し、具体的なプロセスは次のとおりである：１×ＰＢＳバッファー（ｐＨ  ７.４）で１００μｌ／ウェルの容量で２μｇ／ｍｌのヒト化組換えタンパク質ＴＲＡＩＬＲ２を９６ウェルプレートにコーティングし、４℃で一晩放置した。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴ（０.０５％Ｔｗｅｅｅｎ２０を含むｐＨ  ７.４  ＰＢＳ）バッファーで３回、各回５分間洗浄し、２４０μｌ／ウェルごとに５％脱脂粉乳を含むＰＢＳを加え、ブロッキングのために３７℃で３時間インキュベートした。ブロッキング溶液を捨て、プレートを３００μｌ／ウェルのＰＢＳＴで３回、各回５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとに１％スキムミルク粉末またはＢＳＡを含むＰＢＳで希釈したテストする抗体（一次抗体）またはＡＤＣを添加し、濃度は４μｇ／ｍｌで２倍勾配希釈を開始し、合計１２の濃度、３つのウェルを複製し、室温で１時間インキュベートした。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴで３回、各５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとに１％スキムミルク粉末またはＢＳＡを含むＰＢＳで希釈した二次抗体を加え、濃度は１μｇ／ｍｌであり、３７℃で４０分間インキュベートした。上清を捨て、プレートをＰＢＳＴで３回、各回５分間洗浄し、５０μｌ／ウェルごとにＴＭＢカラー現像液を添加し、室温で５〜１０分間インキュベートした。発色効果に従い、５０μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加して反応を停止した。ＳＰＡＲＫ  １０Ｍ多機能マイクロプレート検出器で４５０ｎｍでＯＤ値を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５.０ソフトウェアを使用してデータ分析した。具体的な結果を図１２に示したとおりである。
【０１９３】
結果は、ヒト化モノクローナル抗体Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂと比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａとＺａｐｔｕｚｕｍａｂの親和性は同じ桁に留まっていることを示し、これは、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａが効果的にＴＲＡＩＬＲ２に結合し、ヒト化モノクローナル抗体の抗原結合能力を保持できることを証明する。
【０１９４】
実施例１２  ヌードマウスにおけるヒト非小細胞肺癌細胞ＭＳＴＯ−２１１Ｈ移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａのインビボ抗ヒト非小細胞肺癌特性は、ＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒト非小細胞肺癌細胞ＭＳＴＯ−２１１Ｈを移植されたヌードマウスに対する抑制効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＭＳＴＯ−２１１Ｈ肺癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、ＭＳＴＯ−２１１Ｈ細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、パクリタキセル陽性対照群および陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から３２日後に実験を終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１９５】
具体的な結果は図１３に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの３回投与後７日目に、高、中、低用量群の肺癌移植腫瘍の増殖を抑制し始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの３回投与後１８日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、低用量群（１および３ ｍｇ／ｋｇ）も有意に抑制でき、腫瘍抑制率はそれぞれ６５％および９３％に達した。
【０１９６】
実施例１３  ヌードマウスにおける膵臓癌細胞Ｍｉａ  ＰａＣａ−２移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａのインビボ抗膵臓癌特性は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２の陽性発現のヒトＭｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞の増殖阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＭｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（４週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築し、Ｍｉａ  ＰａＣａ−２膵臓癌細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０７／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１５ｍｌ（１.５×１０６細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびパクリタキセル陽性対照群（１０ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ７Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、および陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、ビンクリスチンの投与時間は群分け後０、７、１４日であり上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定し、投与から２８日後に実験を終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。血液サンプルを採取して肝臓と腎臓の機能指数（ＡＬＴ、ＢＵＮ、ＣＥＲＡ）を検出した。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１９７】
具体的な結果は図１４に示したとおりである。その結果、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの２回投与後５日目に、高、中、低用量群の膵臓癌移植腫瘍の増殖を抑制し始めたことを示す。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの３回投与後９日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は１００％に達したが、中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は９１％に達し、低用量群（１ ｍｇ／ｋｇ）も有意に抑制でき、腫瘍抑制率は４５％に達した。
【０１９８】
実施例１４  ヌードマウスにおけるＴリンパ性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａのインビボ抗リンパ性白血病効果は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒトＴリンパ性白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１に対するその成長阻害効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｅ６−１の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（５−６週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０８／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１  ｍｌ（１×１０７細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫瘍マウスをランダムに４つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａおよび陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定した。実験は最初の投与から２８日後に終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０１９９】
具体的な結果は図１５に示したとおりである。その結果、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１マウス皮下異種移植腫瘍モデルでは、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの投与後１４日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）は１００ ｍｍ３リンパ性白血病異種移植片を完全に除去し、腫瘍抑制率は１００％に達した。中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）も移植腫瘍の増殖を有意に抑制でき、腫瘍抑制率は８４.８８％に達した。
【０２００】
実施例１５  ヌードマウスにおける非Ｔ非Ｂリンパ性白血病細胞Ｒｅｈ移植腫瘍に対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの阻害効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａのインビボ抗非Ｔ非Ｂ淋巴細胞白血病の特性は、ヌードマウスインビボでのＴＲＡＩＬＲ２の高発現のヒト非Ｔ非Ｂリンパ性白血病細胞Ｒｅｈの増殖抑制効果によって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：ヒトＲｅｈ細胞の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（５−６週齢）皮下異種移植腫瘍モデルを構築した。Ｒｅｈ細胞をインビトロで培養し、対数増殖期まで拡大し、細胞数を数えた後、ＰＢＳバッファーで１×１０８／ｍｌの細胞懸濁液に希釈して、超クリーンベンチで１  ｍｌのシリンジを使用して、０.１  ｍｌ（１×１０７細胞）を吸引し、マウスの右背中の皮膚の下に接種した。接種部位の皮膚を７０％アルコールで消毒し、接種後、定期的に動物の生存状態を観察し、移植された腫瘍の成長を測定して記録した。平均腫瘍サイズが８０−１００ ｍｍ３に達したとき、担腫瘍マウスをランダムに５つのグループに分け、それぞれ８匹のマウス、それぞれＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ投与群（低用量群１ ｍｇ／ｋｇ、中用量群３ ｍｇ／ｋｇ、高用量群９ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ３Ｄ×３）、陰性対照群（ＰＢＳ、Ｑ３Ｄ×３）およびビンクリスチン陽性対照群（０.５ ｍｇ／ｋｇ、Ｑ７Ｄ×３）である。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａおよび陰性対照群の投与時間は群分け後０、４、７日であり、ビンクリスチンの投与時間は群分け後０、７、１４日であり、上記投与方法は全て尾静脈注射である。投与後４、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８日目に腫瘍サイズ（最長径、最短径）を測定した。実験は最初の投与から２８日後に終了し、動物は過剰摂取麻酔によって直ちに安楽死させ、マウスの体重を量った。腫瘍を取り出して重量を測定し、写真を撮った。腫瘍と主要組織および臓器（心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺）を分離し、液体窒素で凍結保存するか、４％パラホルムアルデヒドで固定し、後で使用するためにパラフィン切片を準備した。
【０２０１】
具体的な結果は図１６に示したとおりである。その結果、Ｒｅｈマウス皮下異種移植腫瘍モデルでは、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの投与後２１日目に、高用量群（９ ｍｇ／ｋｇ）は１００ ｍｍ３リンパ性白血病異種移植片を完全に除去し、腫瘍抑制率は１００％に達した。中用量群（３ ｍｇ／ｋｇ）も移植腫瘍の増殖を有意に抑制でき、腫瘍抑制率は９３.２８％に達した。
【０２０２】
実施例１６  正常マウスに対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの急性毒性効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの急性毒性効果は、投与後の正常マウスの体調と生化学的指標の変化を調査することによって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：２０匹の健康なＳＤラット（上海Ｘｉｐｕｅｒ−Ｂｉｋａｉ実験動物有限会社から購入）を取り、マウスは５〜６週齢で、体重は１６０〜１８０ｇである。４つのグループに分け、各グループ５匹である。定期的な給餌の１週間後、投与し始めた。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの用量は、１５ ｍｇ／ｋｇ、２０ ｍｇ／ｋｇおよび２５ ｍｇ／ｋｇで、正常対照としてブランク溶媒を使用した。尾静脈からゆっくりと単回投与し、死亡、食事、運動を含めて毎日ラットを観察し、３日ごとにラットの体重を記録し、５日目と１５日目に血液生化学検査のために血液サンプルを採取し、検査項目はＡＬＴとＵＲＥＡを含む。投与２１日目に、過量麻酔により安楽死させた。
【０２０３】
具体的な結果は図１７に示したとおりである。その結果、対照群と比較して、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ  １５ ｍｇ／ｋｇおよび２０ ｍｇ／ｋｇの２つの用量群のラットは正常に成長し、よく運動し、正常な体重変化を示し、正常な肝臓と腎臓の機能を示し、死ななかった。Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ  ２５ ｍｇ／ｋｇ用量群のラットは正常に成長し、すべてが生存したが、ラットの体重変化は鈍化し、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの単回投与に対するラットの最大耐量は２５ ｍｇ／ｋｇ以上であり、安全性が良いことを示す。
【０２０４】
実施例１７  正常なカニクイザルに対するＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの急性毒性効果
Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの急性毒性効果は、投与後の正常なカニクイザルの体調と生化学的指標の変化を調査することによって評価した。具体的な研究プロセスは次のとおりである：体重３.１９〜３.６３  ｋｇの３匹の雌Ｎｏｎ−Ｎａiｖｅカニクイザルを選択した。静脈内注入によって投与し、投与量は２、３、４ ｍｇ／ｋｇであり、投与容量は２  ｍＬ／ｋｇである。投与当日１回投与し、投与後２１日間観察を継続した。Ｄ−１、Ｄ１、投与前、Ｄ８、Ｄ１５、およびＤ２２（解剖前）で動物の体重を測定し、Ｄ２、Ｄ８、Ｄ１５、およびＤ２１で動物の２４時間以内（２４時間±１時間）の摂餌量を測定し、投与前、投与後２２日目に血液学、凝固、血液生化学検査および尿検査分析を行った。投与前、投与終了後２０分、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１６８時間、２４０時間、３３６時間、５０４時間に、血漿薬物濃度検出のためにＥＤＴＡ−Ｋ２抗凝固血漿サンプルを採取した。動物をＤ２２に安楽死させ、肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺などの組織を収集して保存し、肝臓、脾臓、腎臓、および心臓の重量を量った。
【０２０５】
具体的な結果は図１８に示したとおりである。その結果、化合物Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａを雌カニクイザルに１回の静脈内注入で投与した場合、用量は２、３、４ ｍｇ／ｋｇであり、動物は２１日間継続して観察し、動物の体重と摂餌量に明らかな異常はなかった。投与後のＤ２２の血液学データにおける網状赤血球数および網状赤血球の割合は、薬物投与前よりも有意に高く、これは薬物投与の効果に関連している可能性がある思われる。投与群動物のＣＫ（クレアチンキナーゼ）値は、投与前の値と比較して、減少傾向があった。各群の動物の血液凝固指数、尿指数および臓器重量データに明らかな異常はなかった。この実験の条件下で、雌のカニクイザルに２、３、４ ｍｇ／ｋｇのＺａｐａｄｃｉｎｅ−３ａを１回静脈内注入した場合、動物の最大耐量は４ ｍｇ／ｋｇであった。
【０２０６】
討論
ＡＤＣ薬物では、小分子部分は主に化学毒素と化学リンカーで構成される。一般的に使用される化学毒素は、モノメチルアリスタチンＤ、Ｅ、Ｆ（ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦと略称）などのチューブリンポリメラーゼ阻害剤、メイタンシン、およびカリケアマイシンやデュオカルマイシンなどのＤＮＡ二重らせん構造を破壊する毒素を含む。現在研究または臨床応用されているＡＤＣ薬物は、ほとんどがＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、チューブリン脱重合剤メイタンシンＤＭ１およびＤＭ４を使用する。国内外で認識されている化学結合は、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合などの分解性化学結合、チオエーテル結合などの非分解性化学結合である。第１世代ＡＤＣ薬物マイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）では、ジスルフィド結合およびヒドラゾン結合の２つの分解性のジスルフィド結合を使用して、抗体とカリケアマイシンを接続したが、その不安定な化学結合と制限された治療効果により、それは２０１０年にファイザー社によってリコールされた。第２世代のＡＤＣ薬物Ｋａｄｃｙｌａでは、非分解性のチオエーテル結合を利用して、良好な活性と低い生物学的毒性を備える。しかし、チオエーテル結合のインビボ酸化により、化学結合は依然として血液循環で切断される可能性があり、したがって強い肝臓毒性を持っている可能性がある。ＡｄｃｅｔｒｉｓとＫａｄｃｙｌａが発売されて以来、世界中で１００を超えるＡＤＣ医薬品候補がヒトの臨床試験に参加している。しかし、中国では２つのＡＤＣのみが人間の臨床試験への参加が承認されており、そのほとんどは前臨床研究段階にあり、完全に革新的で、独立した知的財産権を持つ完全に革新的なＡＤＣ抗体薬は市場に出ていない。したがって、独立した知的財産権、優れた安全性、および優れた有効性を備えた抗ＴＲＡＩＬＲ２抗体−毒素−複合体の開発は、非常に魅力的な臨床応用の見通しを持っている。
ＡＤＣの調製に使用される抗体には、２つの基本的な特性、すなわち抗体の腫瘍特異性と、抗体が抗原に結合した後に形成される抗原−抗体複合体がリソソームにエンドサイトーシスされ、分解されてリソソームで小分子毒素を放出して、小分子毒素が腫瘍細胞を特異的に殺す。
【０２０７】
本発明に関する独立した知的財産権を有する抗ＴＲＡＩＬＲ２（ＴＲＡＩＬＲ２またはＣＤ２６２またはＤＲ５）のヒト化モノクローナル抗体は、中国国内および国外でヒトの臨床試験に入り、ＴＲＡＩＬＲ２標的とする他の抗体と比較して、独特の遺伝子配列、エピトープ、および強力な抗原親和性を有し、生体内外で様々なＴＲＡＩＬＲ２陽性腫瘍細胞を特異的に殺し、腫瘍細胞の増殖を阻害することができるが、正常な細胞や組織に対する毒性はほとんどなく、安全性も良好である。国際的には、ＴＲＡＩＬＲ２標的とする腫瘍治療について、臨床試験の結果はその安全性は良いことを示したが、薬剤単独の有効性は満足のいくものではなかった。
【０２０８】
本発明で言及されるすべての文書は、あたかも各文書が個々に参照により組み込まれたかのように、本出願に参照により組み込まれる。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も本出願の添付の特許請求の範囲によって定義される範囲内に入ることを理解されたい。
配列表
本発明の配列情報
Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂの重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列  ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７：
Ｇｌｎ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｌａ  
１                              ５                                      １０                                    １５            
Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  
２０                                    ２５                                    ３０                    
Ｓｅｒ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｔｒｐ  Ｖａｌ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｍｅｔ  
３５                                    ４０                                    ４５                            
Ｇｌｙ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｇｌｕ  Ｔｈｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ａｓｐ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  
５０                                    ５５                                    ６０                                    
Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  
６５                                    ７０                                    ７５                                    ８０    
Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  
８５                                    ９０                                    ９５            
Ａｌａ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ａｓｐ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  
１００                                  １０５                                  １１０          
前記抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８：
Ａｓｐ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  
１                              ５                                      １０                                    １５            
Ｇｌｕ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｓｅｒ  
２０                                    ２５                                    ３０                    
Ａｓｎ  Ｇｌｙ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｔｒｐ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  
３５                                    ４０                                    ４５                            
Ｐｒｏ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ  Ｔｙｒ  Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  
５０                                    ５５                                    ６０                                    
Ａｓｐ  Ａｒｇ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ａｓｐ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  
６５                                    ７０                                    ７５                                    ８０    
Ｓｅｒ  Ａｒｇ  Ｖａｌ  Ｇｌｕ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ａｓｐ  Ｖａｌ  Ｇｌｙ  Ｖａｌ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｃｙｓ  Ｐｈｅ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  
８５                                    ９０                                    ９５            
Ｔｈｒ  Ｈｉｓ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｈｉｓ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｌｙｓ  
１００                                  １０５                                  １１０                  
Ａｒｇ
【図１】
2021516670.tif 000042
【図２−１】
2021516670.tif 000043
【図２−２】
2021516670.tif 000044
【図３】
2021516670.tif 000045
【図４】
2021516670.tif 000046
【図５】
2021516670.tif 000047
【図６】
2021516670.tif 000048
【図７】
2021516670.tif 000049
【図８】
2021516670.tif 000050
【図９】
2021516670.tif 000051
【図１０】
2021516670.tif 000052
【図１１】
2021516670.tif 000053
【図１２】
2021516670.tif 000054
【図１３】
2021516670.tif 000055
【図１４】
2021516670.tif 000056
【図１５】
2021516670.tif 000057
【図１６】
2021516670.tif 000058
【図１７】
2021516670.tif 000059
【図１８】
2021516670.tif 000060
【配列表】
2021516670000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月13日(2019.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物であって、
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ａの構造は、次のとおりであり、
【化１】
2021516670.tif 000061
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｂの構造は、次のとおりであり、        
【化２】
2021516670.tif 000062
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｃの構造は、次のとおりであり、
【化３】
2021516670.tif 000063
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−１ｄの構造は、次のとおりであり、
【化４】
2021516670.tif 000064
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化５】
2021516670.tif 000065
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｂの構造は、次のとおりであり、
【化６】
2021516670.tif 000066
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｃの構造は、次のとおりであり、
【化７】
2021516670.tif 000067
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりであり、
【化８】
2021516670.tif 000068
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｅの構造は、次のとおりであることを特徴とする
【化９】
2021516670.tif 000069
前記抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項２】
前記抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されたとおりであり、および／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されたとおりであり、
前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含み、
前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、少なくとも１つのアミノ酸で任意に付加、削除、修飾および／または置換され、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ.８に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性または配列同一性を有する誘導体配列をさらに含むことを特徴とする
請求項１に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項３】
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａ、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの群から選択され、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化１０】
2021516670.tif 000070
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ｄの構造は、次のとおりであることを特徴とする
【化１１】
2021516670.tif 000071
請求項２に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項４】
前記抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａであり、
複合体Ｚａｐａｄｃｉｎｅ−３ａの構造は、次のとおりであり、
【化１２】
2021516670.tif 000072
前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｚａｐｔｕｚｕｍａｂであることを特徴とする
請求項３に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物の使用であって、
前記抗体−薬物複合体は、（ｉ）診断試薬を調製するために使用され、および／または（ｉｉ）ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患の予防および／または治療のための薬物を調製するために使用されること特徴とする、前記使用。
【請求項６】
前記ＴＲＡＩＬＲ２関連疾患は、腫瘍の発生、成長および／または転移の群から選択されることを特徴とする
請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記腫瘍は、ＴＲＡＩＬＲ２陽性癌であり、前記癌は、Ｔリンパ性白血病、Ｂリンパ性白血病、非Ｔ非Ｂリンパ性白血病、非小細胞肺癌、肝臓癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道扁平上皮癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、子宮頸部の扁平上皮癌、膵扁平上皮癌、結腸扁平上皮癌、胃扁平上皮癌、前立腺癌、骨肉腫または軟部組織肉腫の群から選択されることを特徴とする
請求項６に記載の使用。
【請求項８】
薬学的組成物であって、
（ｉ）請求項１に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物またはその組み合わせである活性成分と、および
（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含むことを特徴とする、前記薬学的組成物。
【請求項９】
前記活性成分は、請求項２〜４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物またはその組み合わせであることを特徴とする
請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法であって、
前記腫瘍細胞を請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物を接触させるステップを含むことを特徴とする、前記腫瘍細胞をインビトロで非治療的に阻害する方法。
【請求項１１】
腫瘍の予防および／または治療方法であって、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または請求項８または９に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含むことを特徴とする、前記腫瘍の予防および／または治療方法。
【請求項１２】
腫瘍の予防および／または治療の薬物の調製における請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒化合物または請求項８または９に記載の薬学的組成物の使用。
【国際調査報告】
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