(57)【要約】  本発明は、高親和性でＣＤ２７と特異的に結合する単離抗体を提供する。本発明は、癌を有する対象を処置する方法であって、対象に治療有効量の抗ＣＤ２７抗体を単剤療法としてまたは抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＣＴＬＡ−４抗体などのチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはフローサイトメトリーにより測定して、ヒトＣＤ２７に特異的に結合し、そのＣＤ７０リガンドの結合を遮断せず、ここで、
(ａ) ヒトＣＤ２７に約１００nM以下、約９０nM以下、約８０nM以下、約７０nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nMまたは約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合するおよび／または
(ｂ) 抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体で刺激されたナイーブヒトＴ細胞で約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nMまたは約０.０２nM〜約０.２５nMのＥＣ５０でＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導する、
モノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
水素−重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)および／またはタンパク質の高速光化学酸化(ＦＰＯＰ)エピトープマッピングにより決定して、凡そアミノ酸残基２１〜４１および５２〜５７(その配列は配列番号１)に跨る不連続領域に位置するエピトープに特異的に結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
ヒトＣＤ２７に特異的に結合し、
(ａ) 配列番号２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号４に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域(ＶＨ)を含む；
(ｂ) 配列番号５に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号６に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号７に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む；
(ｃ) 配列番号８に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＶＨを含む；
(ｄ) 配列番号９に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＶＬを含む；
(ｅ) 配列番号１２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む重鎖を含む；
(ｆ) 配列番号１３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む軽鎖を含む；および／または
(ｇ) ＢＭＳ−９８６２１５と命名されたモノクローナル抗体である、
モノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
請求項３に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分と同じヒトＣＤ２７のエピトープに特異的に結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
(ａ) 表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはフローサイトメトリーにより測定して、ＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害しない；
(ｂ) ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定してラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない；
(ｃ) ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの１以上に特異的に結合しない；
(ｄ) １０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上に特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される；
(ｅ) 抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導できる；
(ｆ) ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を誘導できる；
(ｇ) ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を誘導できる；
(ｈ) ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)刺激ヒト末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)からのＩＬ−２放出増加を誘導できる；
(ｉ) 抗計画死１(抗ＰＤ−１)抗体と組み合わせたときＩＬ−２放出を少なくとも２倍増加させる；
(ｊ) 単球由来樹状細胞(ＭＤＤＣ)および可溶性ＯＫＴ３存在下共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を反転させる；および
(ｋ) ヒトＴ細胞増殖および可溶性ＣＤ７０によるＩＦＮ−γ分泌の誘導の増強ができる
から選択される１以上の特徴を有する、請求項１〜４の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
モノクローナル抗体またはその抗原結合部分ヒトＣＤ２７に約１００nM以下、約９０nM以下、約８０nM以下、約７０nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nMまたは約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合する、請求項２〜５の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
モノクローナル抗体またはその抗原結合部分が：
(ａ) ヒトＴ細胞に約０.１nM以下、約０.０９nM以下、約０.０８nM以下、約０.０７nM以下、約０.０６nM以下、約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０１nM〜約０.１nM、約０.０２５nM〜約０.０７５nMまたは約０.０３nM〜約０.０６nMのＥＣ５０で結合する；
(ｂ) カニクイザルＴ細胞に約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.２nM以下、約０.１nM以下、約０.０１nM〜約０.５nM、約０.０２５nM〜約０.４nM、約０.０４〜約０.３nMまたは約０.０６〜約０.２nMのＥＣ５０で結合する；および／または
(ｃ) ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む、
請求項１〜６の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
(ａ) ヒト抗体またはそのフラグメントである；
(ｂ) ヒト化抗体またはそのフラグメントである；
(ｃ) キメラ抗体またはそのフラグメントである；
(ｄ) ヒトＣＤ２７アゴニストである；
(ｅ) ＳＰＲまたはフローサイトメトリーで測定してＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害しない；
(ｆ) ＳＰＲまたはフローサイトメトリーで測定してラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない；
(ｇ) ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの１以上に特異的に結合しない；
(ｈ) １０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上に特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される；
(ｉ) 抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を、所望により約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nMまたは約０.０２〜約０.２５nMのＥＣ５０で、誘導する；
(ｊ) ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を、所望により約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３nM以下、約０.０００５nM〜約０.０５nM、約０.０００５nM〜約０.０４nM、約０.０００５nM〜約０.０３nM、約０.００１nM〜約０.０５nM、約０.００１nM〜約０.０４nMまたは約０.００１nM〜約０.０３nMのＥＣ５０で、誘導する；
(ｋ) ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を、所望により約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nM、約０.００３nM〜約０.００７nMまたは約０.００４nM〜約０.００６nMのＥＣ５０で、誘導する；
(ｌ) ＳＥＢ刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−２放出を、所望によりクロスリンカーの存在下で約５０％または所望により抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたとき少なくとも約２倍、刺激する；
(ｍ) ＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下、共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を、所望により少なくとも約７０％、反転させる；または
(ｎ) 可溶性ＣＤ７０によるヒトＴ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ分泌の誘導を、所望により約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nMまたは約０.００３nM〜約０.００５nMのＥＣ５０で増強するおよび所望によりＩＦＮ−γ分泌の誘導を約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nMまたは約０.００５nM〜約０.００７nMのＥＣ５０で増強する、
請求項１〜７の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項１０】
さらなる抗体またはその抗原結合部分をさらに含み、該さらなる抗体またはその抗原結合部分が抗ＰＤ−１抗体、抗計画死リガンド−１(ＰＤ−Ｌ１)抗体、抗細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４(ＣＴＬＡ−４)抗体、抗リンパ球活性化遺伝子−３(ＬＡＧ−３)抗体、抗ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター(ＢＴＬＡ)抗体、抗Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３(ＴＩＭ−３)抗体、抗キラー免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)抗体、抗キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１(ＫＬＲＧ−１)抗体、抗アデノシンＡ２ａ受容体(Ａ２ａＲ)抗体、抗ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４(ＣＤ２４４)抗体、抗ＣＤ１６０抗体、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体(ＴＩＧＩＴ)抗体、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサー(ＶＩＳＴＡ)抗体、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９と命名された抗体、抗誘導性Ｔ細胞共刺激分子(ＩＣＯＳ)抗体、抗ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)抗体、抗ＣＤ１３４(ＯＸ４０)抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)抗体、抗ヘルペスウイルス侵入メディエーター(ＨＶＥＭ)抗体およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分をコードする、単離核酸。
【請求項１２】
癌を有する対象を処置する方法であって、対象が処置されるように、対象に治療有効量の請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
対象における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、対象における腫瘍細胞増殖が阻害されるように、対象に治療有効量の請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
さらに対象に治療有効量の癌処置のためのさらなる治療剤を投与することを含み、所望により、さらなる治療剤が免疫系の阻害を低減するまたは刺激を増加する化合物である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
癌が固形腫瘍であるまたは腫瘍細胞が固形腫瘍の細胞である、請求項１２〜１４の何れかに記載の方法。
【請求項１６】
固形腫瘍が結腸癌、線維肉腫、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、乳癌、食道癌、胃癌、消化器癌、小腸癌、肝臓癌、肝細胞癌(ＨＣＣ)、膵臓癌(ＰＡＣ)、腎臓癌、腎細胞癌(ＲＣＣ)、膀胱癌、尿道癌、輸尿管癌、結腸直腸癌(ＣＲＣ)、結腸癌、肛門部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、神経芽腫、神経膠腫、神経膠芽腫、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、皮膚癌、骨癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮内膜癌腫、卵管癌腫、卵巣癌、子宮頸癌腫、膣癌腫、外陰癌腫、精巣癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、陰茎癌、腎盂癌腫、中枢神経系(ＣＮＳ)新生物、原発ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、小児固形腫瘍、環境誘発癌、ウイルス関連癌、ウイルス起源の癌、進行型癌、切除不能癌、転移癌、難治性癌、再発性癌およびこれらの何れかの組み合わせから選択される癌である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
癌が造血器腫瘍であるまたは腫瘍細胞が造血器腫瘍の細胞である、請求項１２〜１４の何れかに記載の方法。
【請求項１８】
造血器腫瘍が急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症(ＭＧＵＳ)、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液系腫瘍および該血液系腫瘍の何れかの組み合わせから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
癌を有する対象を処置するためのキットであって、
(ａ)約０.１〜約２０mg／kg体重の範囲の請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物の１以上の投与量；および
(ｂ)請求項１２〜１８の何れかに記載の方法において該１以上の投与量を使用するための指示
を含む、キット。
【請求項２０】
癌を有する対象を処置するためのキットであって、
(ａ) 約０.１〜約２０mg／kg体重の範囲の請求項１〜８の何れかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分または請求項９もしくは１０に記載の医薬組成物の１以上の投与量；
(ｂ) さらなる治療剤の１以上の投与量；および
(ｃ) 請求項１２〜１８の何れかに記載の方法において該投与量を使用するための指示
を含む、
キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願をとおして、種々の刊行物を、括弧内に著者名および日付を示すことにより、または特許または特許公開番号により引用している。これらの刊行物の完全な引用は本明細書の最後、特許請求の範囲の直前にまとめられている。これらの刊行物の開示を、ここに本発明が記載され、請求された当時の当業者の技術常識をより完全に示すために、全体を引用して本明細書に包含させる。しかしながら、これらの開示は、取り込まれた情報と、本明細書における明白な開示により提供される情報の間に矛盾が存在しないことを限度として、本出願に引用により取り込まれる。さらに、ここでの引用文献の言及は、このような引用文献が本発明の先行技術であることを認めるものと解釈されてはならない。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月４日出願の米国仮出願６２／６５２,７９０の利益を主張し、その内容を全体として引用により本明細書に包含させる。
【０００３】
ＥＦＳ−ＷＥＢにより電子的に提供した配列表の記載
本明細書に関連して、電子的に提供した配列表(名称：13107-WO-PCT_ST25.txt、サイズ：２３,８８５バイト；および作成日：２０１９年４月１日)は、引用により全体として本明細書に包含される。
【０００４】
発明の分野
本発明は、ＣＤ２７に特異的に結合するモノクローナル抗体(ｍＡｂ)ならびに対象における癌を処置する方法であって、該対象に該抗ＣＤ２７抗体(Ａｂ)を単剤療法としてまたは免疫チェックポイント阻害剤などの抗癌剤および／またはある化学療法および放射線療法と組み合わせて投与することを含む、方法に関する。
【背景技術】
【０００５】
発明の背景
ヒト癌は、多数の遺伝的および後成的改変を担持し、免疫系により潜在的に認識可能であるネオアンチゲンを産生する(Chakravarthi et al., 2016)。Ｔリンパ球およびＢリンパ球からなる適応免疫系は強力な抗癌能を有し、広い能力で、多様な腫瘍抗原に応答する特異性を獲得する。さらに、免疫系は、相当な柔軟性および記憶要素を含む。適応免疫系のこれら属性全てをうまく利用することは、免疫療法を、全ての癌処置モダリティ中で独特のものとする。
【０００６】
過去十年、癌処置のための特異的免疫チェックポイント経路阻害剤の開発が明らかにされており(Chen and Mellman, 2013; Lesokhin et al., 2015)、これは進行型黒色腫を有する患者の処置のための細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４(ＣＴＬＡ−４)に結合し、阻害するイピリムマブ(ヤーボイ(登録商標))であるＡｂおよびＰＤ−１受容体に特異的に結合し、阻害性ＰＤ−１／ＰＤ−１リガンド(ＰＤ−Ｌ１)シグナル伝達経路を遮断するニボルマブ(オプジーボ(登録商標))、ペンブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標))およびセミプリマブ−ｒｗｌｃ(LIBTAYO(登録商標))などのＡｂを含む(Iwai et al., 2017)。この経路はまたＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアテゾリズマブ(テセントリク(登録商標))、デュルバルマブ(イミフィンジ(登録商標))およびアベルマブ(バベンシオ(登録商標))を含むＡｂによっても阻止される。
【０００７】
ニボルマブは、ＰＤ−１リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を選択的に阻止する完全ヒト免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｇ４(Ｓ２２８Ｐ)ｍＡｂであり(米国特許８,００８,４４９; Wang et al., 2014)、それにより外来(腫瘍を含む)および自己抗原両者に対する抗原特異的Ｔ細胞応答の下方制御を遮断し、これらの抗原に対する免疫応答を増強する。ニボルマブは、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、頭頸部癌、尿路上皮癌、ＭＳＩ−ＨまたはｄＭＭＲ転移結腸直腸癌および肝細胞癌を含む数種の癌に対して最近承認を受けており、現在さらなる腫瘍タイプに対して単剤療法または他の抗癌剤と組み合わせて臨床評価されている。しかしながら、患者のごく一部、一般に約２５％未満しか、チェックポイント阻害剤での処置から利益を受けず、チェックポイント阻害剤および他の抗癌剤または治療と組み合わせて使用する免疫療法の有効性に、現在相当な努力が向けられている。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤で広範囲の癌の処置が成功することが証明されているため、免疫腫瘍学における種々の将来的薬物組み合わせの中堅となる可能性が認知され、最も有効な組み合わせの開発競争が始まっている(例えば、Mahoney et al., 2015; Ott et al., 2017参照)。
【０００８】
腫瘍壊死因子受容体(ＴＮＦＲ)ファミリーの５５kDaのＩ型膜貫通タンパク質であるＣＤ２７は、そのリガンドＣＤ７０への結合後、Ｔ細胞活性化を共刺激する。ヒトにおいて、ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞で構成的におよび排他的に発現され、活性化Ｔ細胞およびＢ細胞で上方制御されるが、II型膜貫通タンパク質であるＣＤ７０の発現は極めて制御されており、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞および樹状細胞(ＤＣ)で一過性に生じるのみである(Wajant, 2016)。ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞増大、エフェクター機能増大ならびにＴ細胞免疫およびレスポンダーＴ細胞プールの産生および長期維持に重要な役割を有する(Hendricks et al., 2000)。ＣＤ２７欠損マウスはＴ細胞免疫、インフルエンザウイルスへの記憶および活性化ＮＫ細胞の細胞溶解活性の低減を示し(Hendricks et al., 2000; De Colvenaer et al., 2011)、一方ＣＤ７０欠損は、エフェクターＣＤ８＋  Ｔ細胞産生およびウイルスクリアランスを障害させる(Munitic et al., 2013)。ＣＤ２７はヒト腫瘍より高レベルでヒト末梢血で発現され、ＴｒｅｇはＣＤ４＋  Ｔ細胞より高レベルのＣＤ２７を発現する。ＣＤ２７駆動共刺激はＣＤ８＋  Ｔ細胞のＴ細胞受容体活性化閾値を下げ、低親和性抗原に対する応答を可能とし、機能的Ｔ細胞レパートリーを広げると考えられる(van Gisbergen et al., 2011)。ＣＤ２７−ＣＤ７０相互作用遮断は、一次ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答を低減させ(Taraban et al., 2004; Sanchez et al., 2007)、ＣＤ８＋  Ｔ細胞記憶の減少をもたらす(Dolfi et al., 2008)。重要なことに、ＣＤ２７共刺激遮断は、マウスリンパ腫モデルにおける抗ＣＤ４０治療応答を完全に排除する(French et al., 2007)。
【０００９】
ＣＤ２７は、一次免疫応答の早期産生に役割を有し、Ｔ細胞免疫の産生および長期維持に必要である。ＣＤ２７−ＣＤ７０結合は、ＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫ８／ＪＮＫ経路の活性化に至る。アダプタータンパク質ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ５は、ＣＤ２７結合に起因するシグナル伝達に介在することが示されている。適正な免疫機能の維持における活性ＣＤ２７の臨床的関連についての証拠は、機能的ＣＤ２７を欠く患者における、致命的ＥＢＶ関連リンパ増殖性障害または永続的ＥＢＶウイルス血症により示される(Salzer et al., 2013; van Montfrans et al., 2012)。
【００１０】
ＣＤ２７アゴニズムによるＴ細胞刺激増強は、増殖およびＩＦＮ−γの分泌の増加により顕在化する(Ramakrishna et al., 2015)。黒色腫患者からの末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)を使用するエクスビボ試験において、ＣＤ２７アゴニスト処置は、黒色腫抗原に対するＣＤ８＋  Ｔ細胞の応答を、ＩＦＮ−γ産生と共に増加させる(Bullock et al., 2014)。ＣＤ２７アゴニスト介在共刺激は、非腫瘍担持マウス試験で、疲弊ＣＤ８＋  Ｔ細胞を静止から抜け出させることにより、共阻害性チェックポイントＰＤ−Ｌ１遮断と協力することが示されている(Buchan et al., 2015)。前臨床試験において、抗ＣＤ２７アゴニスト処置が実験的肺転移を阻害し(Roberts et al., 2010)、同系腫瘍の増殖を阻害する(French et al., 2007; Roberts et al., 2010; He et al., 2013; Sakanishi and Yagita, 2010)ことが示されている。ＰＤ−１遮断を伴うＣＤ２７アゴニズムが、ＴＣ−１腫瘍根絶に有効である抗原特異的ＣＴＬ応答を増加させ(Ahrends et al., 2016)、抗ヒトＣＤ２７アゴニストモノクローナル抗体(ｍＡｂ)であるバルリルマブは、ヒト−ＣＤ２７トランスジェニックマウスにおけるリンパ腫に対する保護のためにＰＤ−Ｌ１遮断と協力する(Buchan et al., 2018)こともまた示されている。バルリルマブは多くの癌患者で抗ＰＤ−１  ｍＡｂ、ニボルマブと組み合わせた臨床治験中であり、現在まで忍容性が良好であり、ＰＤ−１阻害剤単剤療法に一般に抵抗性である腫瘍タイプの患者サブセットでの臨床活性の初期証拠がある(Sanborn et al., 2017)。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、抗腫瘍免疫誘導ならびにＣＤ７０介在共刺激およびアゴニズムの維持における非リガンド遮断ＣＤ２７アゴニスト抗体(Ａｂ)の評価に関する。本発明はまた抗腫瘍活性に対する非リガンド遮断ＣＤ２７アゴニストＡｂとチェックポイント遮断治療の組み合わせの評価にも関する。抗腫瘍免疫応答を増強する、強力なアゴニスト活性を示す高親和性、非リガンド遮断抗ＣＤ２７  Ａｂに対する要請が存在し続けている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の要約
本発明は、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはフローサイトメトリーにより測定して、ヒトＣＤ２７(ｈＣＤ２７)に特異的に結合し、そのＣＤ７０リガンドとの結合を遮断しないｍＡｂまたはその抗原結合部分であって、ここで、Ａｂまたはそのフラグメントが(ａ)ｈＣＤ２７に約１００nM以下、約９０nM以下、約８０nM以下、約７０nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nM、または約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合するおよび／または(ｂ)抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブヒトＴ細胞において約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nM、または約０.０２nM〜約０.２５nMのＥＣ５０でＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導するｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。
【００１３】
本発明は、水素−重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)および／またはタンパク質の高速光化学酸化(ＦＰＯＰ)エピトープマッピングにより決定して、ｈＣＤ２７の凡そアミノ酸残基２１〜４１および５２〜５７(その配列は配列番号１)に跨る不連続領域内に位置するエピトープに特異的に結合するｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。
【００１４】
本発明は、(ａ)配列番号２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号４に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域(ＶＨ)；および(ｂ)配列番号５に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号６に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号７に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域(ＶＬ)を含む、ｈＣＤ２７に特異的に結合するｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。ある実施態様において、ＶＨは、配列番号８に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む。ある実施態様において、ＶＬは、配列番号９に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む。ある実施態様において、ｍＡｂは、配列番号１２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む重鎖および配列番号１３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む軽鎖を含む。ある実施態様において、ｍＡｂは、ＢＭＳ−９８６２１５と命名されるｍＡｂである。
【００１５】
本発明は、上記ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかのｍＡｂまたはそれらと実質的に同じｈＣＤ２７のエピトープに特異的に結合するｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。本発明は、さらに、ｈＣＤ２７への結合について対照Ａｂまたはその対照抗原結合部分と交差競合するｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。
【００１６】
上記ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れも下記実施態様で抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分と称する。
【００１７】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかは、(ａ)表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはフローサイトメトリーにより測定して、ＣＤ２７へのＣＤ７０結合を阻害しない；(ｂ)ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定してラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない；(ｃ)ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上のＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーに特異的に結合しない；(ｄ)１０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上と特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される；(ｅ)抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導できる；(ｆ)ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイで増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を誘導できる；(ｇ)ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を誘導できる；(ｈ)ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)刺激ヒトＰＢＭＣからＩＬ−２放出増加の誘導ができる；(ｉ)抗計画死１(抗ＰＤ−１)Ａｂと組み合わせたとき、ＩＬ−２放出を少なくとも２倍増加できる；(ｊ)単球由来樹状細胞(ＭＤＤＣ)および可溶性ＯＫＴ３存在下共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を反転させる；および(ｋ)ヒトＴ細胞増殖および可溶性ＣＤ７０によるＩＦＮ−γ分泌の誘導の増強ができる
からなる群から選択される、１以上の特徴を有する。
【００１８】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはｈＣＤ２７に約１００nM以下、約９０nM以下、約８０nM以下、約７０nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nM、または約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合する。
【００１９】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはヒトＴ細胞に約０.１nM以下、約０.０９nM以下、約０.０８nM以下、約０.０７nM以下、約０.０６nM以下、約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０１nM〜約０.１nM、約０.０２５nM〜約０.０７５nM、または約０.０３nM〜約０.０６nMのＥＣ５０で結合する。
【００２０】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはカニクイザルＴ細胞に約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.２nM以下、約０.１nM以下、約０.０１nM〜約０.５nM、約０.０２５nM〜約０.４nM、約０.０４〜約０.３nM、または約０.０６nM〜約０.２nMのＥＣ５０で結合する。
【００２１】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。ある好ましい実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。他の実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。
【００２２】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂの何れかはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプの完全長Ａｂである。
【００２３】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７抗原結合部分の何れかはＡｂフラグメントまたは一本鎖Ａｂである。ある実施態様において、Ａｂフラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、ＦｄおよびＦｖフラグメント、単一ドメインＡｂ、一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)、二価ｓｃＦｖ(ｄｉ−ｓｃＦｖ)およびビバレントｓｃＦｖ(ｂｉ−ｓｃＦｖ)、二重特異性抗体、ミニボディ、ＣＤＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【００２４】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはヒトＡｂまたはそのフラグメントである。
【００２５】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはヒト化Ａｂまたはそのフラグメントである。
【００２６】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはキメラＡｂまたはそのフラグメントである。
【００２７】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはｈＣＤ２７アゴニストである。
【００２８】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＳＰＲまたはフローサイトメトリーで測定して、ＣＤ２７へのＣＤ７０結合を阻害しない。
【００２９】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定してラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない。
【００３０】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはもＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上のＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーに特異的に結合しない。
【００３１】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかは１０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上と特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【００３２】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかは抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導できる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nM、または約０.０２nM〜約０.２５nMのＥＣ５０でＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導できる。
【００３３】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイで増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を誘導できる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３nM以下、約０.０００５nM〜約０.０５nM、約０.０００５nM〜約０.０４nM、約０.０００５nM〜約０.０３nM、約０.００１nM〜約０.０５nM、約０.００１nM〜約０.０４nM、または約０.００１nM〜約０.０３nMのＥＣ５０で増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を誘導できる。
【００３４】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を誘導できる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nM、約０.００３nM〜約０.００７nM、または約０.００４nM〜約０.００６nMのＥＣ５０で増殖を誘導できる。
【００３５】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＳＥＢ刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−２放出を増加できる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、例えば、陰性対照ＩｇＧ１  ｍＡｂと比較して、クロスリンカーの存在下、ＩＬ−２放出を約５０％より多く増加できる。
【００３６】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかは、抗ＰＤ−１  Ａｂと組み合わせたとき、ＩＬ−２放出を少なくとも約２倍増加できる。
【００３７】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下、共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を反転させ得る。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、例えば、陰性対照ＩｇＧ１  ｍＡｂと比較して、Ｔｒｅｇ介在抑制を少なくとも約７０％反転できる。
【００３８】
ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかはヒトＴ細胞増殖および可溶性ＣＤ７０によるＩＦＮ−γ分泌の誘導の増強ができる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nM、または約０.００３nM〜約０.００５nMのＥＣ５０で、増殖を増強できる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nM、または約０.００５nM〜約０.００７nMのＥＣ５０で、ＩＦＮ−γ分泌の誘導を増強できる。
【００３９】
本発明は、治療剤と結合した抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかを含む、イムノコンジュゲートに関する。ある実施態様において、治療剤は細胞毒である。ある他の実施態様において、治療剤は放射性同位体である。
【００４０】
本発明は、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分と異なる結合特異性を有する結合ドメインに結合した抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかを含む、二特異的分子に関する。
【００４１】
本発明は、(ａ)抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れか；(ｂ)イムノコンジュゲートの何れか；または(ｃ)二特異的分子の何れか；および薬学的に許容される担体を含む組成物に関する。ある実施態様において、組成物は、さらにさらなるＡｂまたはその抗原結合部分を含む。ある実施態様において、さらなるＡｂまたはその抗原結合部分は、抗ＰＤ−１  Ａｂ、抗計画死リガンド−１(ＰＤ−Ｌ１)Ａｂ、抗細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４(ＣＴＬＡ−４)Ａｂ、抗リンパ球活性化遺伝子−３(ＬＡＧ−３)Ａｂ、抗ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター(ＢＴＬＡ)Ａｂ、抗Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン−３(ＴＩＭ−３)Ａｂ、抗キラー免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)Ａｂ、抗キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１(ＫＬＲＧ−１)Ａｂ、抗アデノシンＡ２ａ受容体(Ａ２ａＲ)Ａｂ、抗ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４(ＣＤ２４４)Ａｂ、抗ＣＤ１６０  Ａｂ、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体(ＴＩＧＩＴ)Ａｂ、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサー(ＶＩＳＴＡ)Ａｂ、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。ある実施態様において、さらなるＡｂまたはその抗原結合部分は、抗誘導性Ｔ細胞共刺激分子(ＩＣＯＳ)Ａｂ、抗ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)Ａｂ、抗ＣＤ１３４(ＯＸ４０)Ａｂ、抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)Ａｂ、抗ヘルペスウイルス侵入メディエーター(ＨＶＥＭ)Ａｂおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【００４２】
本発明は、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れかをコードする単離核酸に関する。
【００４３】
本発明は、単離核酸の何れかを含む発現ベクターに関する。
【００４４】
本発明は、発現ベクターの何れかを含む宿主細胞に関する。
【００４５】
本発明は、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖導入遺伝子を含むトランスジェニックマウスに関し、ここで、マウスは抗ＣＤ２７  ｍＡｂの何れかを発現する。
【００４６】
本発明は、トランスジェニックマウスの何れかから調製されたハイブリドーマに関し、ここで、ハイブリドーマは抗ＣＤ２７  ｍＡｂを産生する。
【００４７】
本発明は、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れを製造する方法であって、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分を宿主細胞の何れかから発現させ、該抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分を該宿主細胞から単離することを含む、方法に関する。
【００４８】
本発明は、癌を有する対象を処置する方法であって、対象に治療有効量の抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れか、イムノコンジュゲートの何れか、二特異的分子の何れかまたは医薬組成物の何れかを、対象が処置されるように投与することを含む、方法に関する。
【００４９】
本発明は、対象における腫瘍細胞増殖を阻害する方法、対象に治療有効量の抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れか、イムノコンジュゲートの何れか、二特異的分子の何れかまたは医薬組成物の何れかを、腫瘍細胞の増殖が阻害されるように投与することを含む、方法に関する。
【００５０】
ある実施態様において、癌を処置するまたは腫瘍増殖を阻害する方法の何れもさらに、対象に癌を処置するための治療有効量のさらなる治療剤を投与することを含む。ある実施態様において、さらなる治療剤は免疫系の阻害を低減するまたは刺激を増加する化合物である。ある実施態様において、さらなる治療剤は小分子化合物、大環状ペプチド、融合タンパク質またはＡｂである。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ−３、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ−１、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴまたはＶＩＳＴＡに特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＣＤ１３４(ＯＸ４０)、ＣＤ２７、ＧＩＴＲまたはＨＶＥＭに特異的に結合するアゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を妨害し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分であり、キメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−１への結合についてニボルマブと交差競合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分であり、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはセミプリマブである。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合についてＢＭＳ−９３６５５９と命名されたＡｂ(ＷＯ２０１３／１７３２２３)と交差競合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分であり、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＢＭＳ−９３６５５９と命名されたＡｂ(ＷＯ２０１３／１７３２２３)である。
【００５１】
ある実施態様において、癌処置または腫瘍増殖阻害についてここに記載する方法の何れかにおける癌は固形腫瘍であるかまたは腫瘍細胞は固形腫瘍の細胞である。ある実施態様において、固形腫瘍は、結腸癌または線維肉腫である。さらなる実施態様において、固形腫瘍は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＳＣＣＨＮ)、乳癌、トリプルネガティブ乳癌(ＴＮＢＣ)、男性乳癌、食道癌、胃癌、消化器癌、小腸癌、肝臓癌、肝細胞癌(ＨＣＣ)、膵臓癌(ＰＡＣ)、膵管腺癌(ＰＤＡＣ)、腎臓癌、腎細胞癌(ＲＣＣ)、膀胱癌、尿道癌、輸尿管癌、結腸直腸癌(ＣＲＣ)、直腸癌、結腸癌腫、肛門部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、転移去勢抵抗性前立腺癌(ｍＣＲＰＣ)、神経芽腫、神経膠腫、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、皮膚癌、骨癌、子宮頸癌、子宮(子宮内膜)癌、子宮内膜癌腫、子宮肉腫、卵管癌腫、卵巣癌、子宮頸癌腫、膣癌腫、外陰癌腫、精巣癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、陰茎癌、腎盂癌腫、中枢神経系(ＣＮＳ)新生物、原発ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、小児固形腫瘍、環境誘発癌、ウイルス関連癌、ウイルス起源癌、進行型癌、切除不能癌、転移癌、難治性癌、再発癌およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される癌である。
【００５２】
ある実施態様において、癌処置または腫瘍増殖阻害について開示する方法の何れかにおける癌は造血器腫瘍であるかまたは腫瘍細胞は造血器腫瘍の細胞である。ある実施態様において、造血器腫瘍は、Ｔ細胞リンパ腫である。ある実施態様において、造血器腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症(ＭＧＵＳ)、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液系腫瘍および該血液系腫瘍の何れかの組み合わせから選択される。
【００５３】
ある実施態様において、処置または阻害の方法の何れかにおける対象はヒトである。
【００５４】
本発明は、癌を有する対象を処置するためのキットであって、(ａ)約０.１〜約２０mg／kg体重の範囲の抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れか、イムノコンジュゲートの何れか、二特異的分子の何れかまたは医薬組成物の何れかの１以上の投与量；および(ｂ)癌を処置するまたは腫瘍増殖を阻害する方法の何れかに該１以上の投与量を使用するための指示を含む、キットに関する。
【００５５】
本発明は、癌を有する対象を処置するためのキットであって、(ａ)約０.１〜約２０mg／kg体重の範囲の抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分の何れか、イムノコンジュゲートの何れか、二特異的分子の何れかまたは医薬組成物の何れかの１以上の投与量；(ｂ)ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分の何れかの約２００〜約１６００mgの範囲の１以上の投与量；および(ｃ)処置または阻害の方法の何れかにおいて該１以上の投与量を投与するための指示を含み、さらなる治療剤を含み、ここで、さらなる治療剤ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分に関するものである、キット。
【００５６】
本発明の他の特性および利点は、次の詳細な記載および実施例から明らかであり、これらは限定的と解釈してはならない。本明細書をとおして引用する科学論文、ＧｅｎＢａｎｋエントリー、特許および特許出願を含むすべての引用する参考文献の内容を、ここに引用により明示的に包含させる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１(Ａ)〜(Ｂ)は、フローサイトメトリー分析におけるヒト(Ａ)およびカニクイザル(Ｂ)Ｔ細胞に対するＡｂの結合親和性を示す。グラフは、ナノモル(nM)濃度のＢＭＳ−９８６２１５および１Ｆ５ヒト抗ＣＤ２７  ｍＡｂに関連する平均蛍光強度(ＭＦＩ)を、(Ａ)のヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１)対照Ａｂと共に示す。(Ａ)の「ＦＬ２」は、蛍光チャネル２(ＦＬ２)での測定を示す。グラフは、ＢＭＳ−９８６２１５が、ヒトおよびカニクイザルＣＤ２７に１Ｆ５より高い親和性を有することを示す。
【００５８】
【図２】図２(Ａ)〜(Ｂ)は、ＢＭＳ−９８６２１５が非リガンド遮断抗ＣＤ２７  ｍＡｂであることを示す。(Ａ)は、ＣＤ２７のリガンドである１０μg／ml  ヒトＣＤ７０(ｈＣＤ７０)で前処理され、続くリガンド遮断(Ｂ)または非遮断(ＮＢ)抗ＣＤ２７  Ａｂ(ａＣＤ２７)で処置されたヒトＴ細胞のフローサイトメトリーアッセイの説明を示す。本アッセイにおけるＡｂの結合は、標識抗ヒトＩｇＧ  Ａｂ(＊、ａｈＩｇＧ)により検出した。(Ｂ)は、(Ａ)のアッセイがＢＭＳ−９８６２１５、リガンド遮断１Ｆ５およびヒトＩｇＧ１(対照)Ａｂで実施されたグラフを示す。ＢＭＳ−９８６２１５の結合が検出され、ＣＤ２７へのＣＤ７０結合がＢＭＳ−９８６２１５の結合を遮断しないことが示された。リガンド遮断１Ｆ５Ａｂの結合は検出されなかった。(Ｃ)は、ヒトＴ細胞が(Ａ)について記載したＡｂに１０μg／ml  可溶性ヒトＣＤ７０存在下で曝されたフローサイトメトリーアッセイの説明を示す。ＣＤ７０は標識抗ＣＤ７０  Ａｂ(＊、ａＣＤ７０)。(Ｄ)(Ｃ)のアッセイをＢＭＳ−９８６２１５、リガンド遮断１Ｆ５およびヒトＩｇＧ１(対照)Ａｂで行ったグラフを示す。ＣＤ７０はＢＭＳ−９８６２１５の濃度を上げても検出可能なままであり、ＣＤ７０結合がＢＭＳ−９８６２１５により遮断されなかったことを示す。ＣＤ７０の結合は、リガンド遮断１Ｆ５Ａｂの濃度を上げると減少した。「ＭＦＩ」、「ｈＩｇＧ１」および「ＦＬ２」は図１について記載するとおりである。(Ｂ)の「ＦＬ１」は、蛍光チャネル１(ＦＬ１)での測定を示す。
【００５９】
【図３】図３(Ａ)〜(Ｃ)は、ＢＭＳ−９８６２１５エピトープマッピングを示す。(Ａ)は、水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)およびタンパク質の高速光化学酸化(ＦＰＯＰ)エピトープマッピング方法で得たＣＤ２７の配列包括度を示す。示す配列は、配列番号１の２０アミノ酸シグナルペプチド配列がない成熟ＣＤ２７タンパク質である。(Ａ)のアミノ酸１〜１７２は、配列番号１のアミノ酸２１〜１９２に対応する。(Ｂ)は、ＣＤ２７のＮ末端領域(配列番号１のアミノ酸２１〜４１に対応)がＢＭＳ−９８６２１５結合により有意な保護を示したことを示す、ＨＤＸ−ＭＳデータ分析を示す。(Ｃ)は、ＣＤ２７の４ペプチドのＦＰＯＰ相対的保護パーセンテージを示し、成熟タンパク質のアミノ酸３２〜３７(配列番号１のアミノ酸５２〜５７に対応)が最高ＦＰＯＰ保護パーセンテージ(７５％)を有し、Ｆａｂとの相互作用によるＣＤ２７の結合エピトープが示される。
【００６０】
【図４】図４(Ａ)〜(Ｂ)は、リガンド遮断抗ＣＤ２７  Ａｂ(Ａ)およびリガンド非遮断Ａｂ、ＢＭＳ−９８６２１５(Ｂ)の、Ｆｃガンマ受容体(ＦｃγＲ)との相互作用およびＴ細胞のＣＤ２７刺激の観点での効果の説明を示す。Ｔ細胞のそのリガンドＣＤ７０への結合によるＣＤ２７共刺激はＢＭＳ−９８６２１５存在下で生じるが(Ｂ)、リガンド遮断Ａｂ存在下ではなかった(Ａ)。
【００６１】
【図５】図５(Ａ)〜(Ｃ)は、ＢＭＳ−９８６２１５が、初代Ｔ細胞シグナル伝達アッセイで１Ｆ５と比較してＮＦ−κＢシグナル伝達の大きな誘導をもたらすことを示す。グラフは、示す量(μg／ml)のＢＭＳ−９８６２１５(Ａ)、１Ｆ５(Ｂ)およびＩｇＧ１対照(Ｃ)Ａｂでの０分、１５分、３０分および６０分の処理時間に基づくＮＦ−κＢシグナル強度を示す。
【００６２】
【図６】図６(Ａ)〜(Ｂ)は、ＢＭＳ−９８６２１５が、１Ｆ５と比較して、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＨＯ−ｓｃＣＤ３−ＣＤ３２ａ細胞(抗ＣＤ３  ＯＫＴ３  ｍＡｂおよびｈＣＤ３２ａ−１３１Ｈｉｓ(ＦｃγＲIIａ)由来の一本鎖抗ＣＤ３  ｓｃＦｖＡｂを発現するＣＨＯ細胞)の共培養でＴ細胞増殖およびＩＦＮ−ｇ分泌の大きな誘導をもたらすことを示す。共培養物を、グラフに示す濃度(nM)のＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)で処理した。(Ａ)は、カウント毎分(ＣＰＭ)でＴ細胞増殖を示し、(Ｂ)は、処理後のＴ細胞から分泌されるＩＦＮ−γの量をミリリットルあたりのピコグラム(pg／ml)で示す。
【００６３】
【図７】図７(Ａ)〜(Ｄ)は、ＢＭＳ−９８６２１５は、１Ｆ５と比較して、ＣＨＯ−ｓｃＣＤ３−ＣＤ３２ａ細胞とＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞((Ａ)〜(Ｂ))またはＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ナイーブＴ細胞((Ｃ)〜(Ｄ))の共培養でＴ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌の誘導が大きいことを示し、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−γの量およびＡｂは図６に記載のとおりである。
【００６４】
【図８】図８は、ＢＭＳ−９８６２１５が、Ｂ細胞と共培養され、種々の量(ng／ml)のブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)により刺激されている、種々のドナー(ドナー１およびドナー２)からのＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞からのＩＦＮ−γ分泌(pg／ml)の２.５を超える平均誘導倍率をもたらすことを示す。刺激された共培養物を、ＢＭＳ−９８６２１５または抗キーホールリンペットヘモシアニンＡｂ、ｇ１Ｆ糖型(ＫＬＨ−ｇ１ｆ)で刺激した。
【００６５】
【図９】図９(Ａ)〜(Ｅ)は、インターロイキン−２(ＩＬ−２)放出が、ＢＭＳ−９８６２１５がない対照と比較して、可溶性架橋ＢＭＳ−９８６２１５存在下でＳＥＢ刺激ヒトＰＢＭＣから増加したことを示す。ＳＥＢで刺激した３ドナー(ドナーＡ、ＢおよびＣ)からのＰＢＭＣを、可溶性抗ヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１、対照)、抗ヒトＯＸ４０(ＯＸ４０.２１)、１Ｆ５またはＢＭＳ−９８６２１５Ａｂで、示す濃度(nM)で、クロスリンカー(抗ヒトＦｃγ  Ａｂ)に存在下(図９(Ａ)および(Ｃ))または存在下(図９(Ｂ)、(Ｄ)および(Ｅ))処理した。ＳＥＢまたはＡｂ処理をしないＰＢＭＣ(細胞のみ)およびＳＥＢで処理するがＡｂではないないＰＢＭＣ(ＳＥＢのみ)は対照であった。
【００６６】
【図１０】図１０(Ａ)〜(Ｆ)は、ＢＭＳ−９８６２１５は、ＳＥＢでのＴ細胞刺激におけるＩＬ−２産生改善のためにニボルマブおよびイピリムマブと相乗的に作用することを示す。ＳＥＢで処理した２ドナー(ドナーＡおよびＢ)からのＰＢＭＣを、可溶性抗ヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１、対照)、１Ｆ５またはＢＭＳ−９８６２１５Ａｂで、示す濃度(nM)で、単独(ＣＤ２７)またはニボルマブ(Nivo combo)またはイピリムマブ(Ipi combo)と共に処理した。
【００６７】
【図１１】図１１(Ａ)〜(Ｃ)は、ＢＭＳ−９８６２１５が制御性Ｔ細胞(Ｔｒｅｇ)介在抑制を反転させ、レスポンダーＴ細胞(Ｔｒｅｓｐ)の増大を誘導することを示す。(Ａ)は、ＭＤＤＣおよび可溶性抗ヒトＣＤ３  ｍＡｂ、ＯＫＴ３存在下、共培養ＣＤ４＋  ＴｒｅｓｐのＴｒｅｇ介在抑制に対するＢＭＳ−９８６２１５およびＩｇＧ１(対照)Ａｂのｐ効果を示す。Ｔｒｅｇ：Ｔｒｅｓｐ比をｘ軸に示し、ＣＤ４＋  Ｔｒｅｓｐのパーセンテージ増殖をｙ軸に示す。ＢＭＳ−９８６２１５は、抑制を７０％を超えて反転させた。(Ｂ)および(Ｃ)は、Ｔｒｅｓｐ細胞を、可溶性抗ＣＤ２８存在下、ＯＫＴ３およびＢＭＳ−９８６２１５(.８)、１Ｆ５または抗ＫＬＨ(ＫＬＨ)Ａｂで被覆したウェル中、７日間培養した後の、Ｔｒｅｓｐ細胞数((Ｂ)におけるＦｏｘｐ３−事象)およびＦｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇ細胞数((Ｃ)におけるＦｏｘｐ３＋事象)を示す。(Ｃ)は、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔｒｅｇ集団の細胞数を示す。
【００６８】
【図１２】図１２ｂは、ＢＭＳ−９８６２１５によるＡＤＣＣ活性の中程度の誘導を示す。(Ａ)および(Ｂ)は、ＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはＩｇＧ１アイソタイプ(対照)Ａｂを、エフェクター対標的１０：１比でエフェクター細胞としての初代ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞および標的細胞としての活性化Ｔ細胞の共培養に加える実験を示した(ｎ＝８)。
【００６９】
【図１３】図１３(Ａ)〜(Ｄ)は、ＦｃγＲ非存在下のＴ細胞活性化および可溶性ヒトＣＤ７０(ｓｈＣＤ７０)による増強におけるＢＭＳ−９８６２１５によるアゴニスト活性を示す。(Ａ)は、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞をＣＨＯ−ＯＫＴ３細胞(抗ＣＤ３  ＯＫＴ３  ｍＡｂ由来一本鎖抗ＣＤ３  ｓｃＦｖＡｂを発現するＣＨＯ細胞)と共培養したアッセイにおける、リガンド遮断抗ＣＤ２７  Ａｂ(１Ｆ５)および非リガンド遮断Ａｂ(ＢＭＳ−９８６２１５)の効果の説明を示す。(Ｂ)〜(Ｅ)は、(Ａ)のアッセイを、共培養物を、ｓｈＣＤ７０非添加((Ｂ)および(Ｃ))または１０μg／ml  ｓｈＣＤ７０添加((Ｄ)および(Ｅ))で、ＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)Ａｂでの処理により実施し、Ｔ細胞増殖((Ｂ)および(Ｄ))またはＩＦＮ−γ分泌((Ｃ)および(Ｅ))についてアッセイしたグラフを示す。図１３(Ｂ)および(Ｃ)は、１Ｆ５ではなく、ＢＭＳ−９８６２１５が、ＦｃγＲ非存在下およびｓｈＣＤ７０なしで、Ｔ細胞増殖(Ｂ)およびＩＦＮ−γ分泌を増強することにより、弱アゴニスト活性を示すことを示す。図１３(Ｄ)および(Ｅ)は、１Ｆ５ではなく、ＢＭＳ−９８６２１５が、可溶性ＣＤ７０タンパク質によるヒトＴ細胞活性化(増殖およびＩＦＮ−γ分泌)を増強することを示す。
【００７０】
【図１４】図１４(Ａ)〜(Ｆ)は、ＢＭＳ−９８６２１５のサロゲートである抗マウスＣＤ２７  ｍＡｂ、クローン８Ｈ５が、マウス腫瘍モデルで抗ＰＤ−１  ｍＡｂ活性を増強することを示す。マウス結腸癌モデルとして１×１０６  ＣＴ２６細胞を皮下移植されたＢＡＬＢ／ｃマウスを、１０mg／kgの対照マウスＩｇＧ２ａおよび対照マウスＩｇＧ１−Ｄ２６５ＡアイソタイプｍＡｂの組み合わせ(Ａ：対照ｍＩｇＧ２ａ＋対照ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａ)；マウスＩｇＧ１アイソタイプとして形作られたｍＡｂ  ８Ｈ５と命名されたＢＭＳ−９８６２１５の抗マウスＣＤ２７(抗ｍＣＤ２７)サロゲート(Ｂ：抗ｍＣＤ２７、８Ｈ５、ｍＩｇＧ１)；マウスＩｇＧ２ａアイソタイプとして形作られた８Ｈ５(Ｃ：抗ｍＣＤ２７、８Ｈ５、ｍＩｇＧ２ａ)；Ｆｃ−不活性マウスＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａアイソタイプとして形作られた抗マウスＰＤ−１  ｍＡｂ(Ｄ：抗ｍＰＤ−１、ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａ)；抗ｍＰＤ−１、ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａおよび抗ｍＣＤ２７、８Ｈ５、ｍＩｇＧ１の組み合わせ(Ｅ)；および抗ｍＰＤ−１、ｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａおよび抗ｍＣＤ２７、８Ｈ５、ｍＩｇＧ２ａの組み合わせ(Ｆ)の腹腔内注射で、移植後６日目、９日目および１３日目に処置した。ＰＤ−１遮断と組み合わせた抗ｍＣＤ２７  ｍＡｂによるＣＤ２７アゴニズムは、腫瘍増殖阻害(ＴＧＩ)を改善させ、無腫瘍(ＴＦ)マウスが単剤治療(図１４(Ｂ)、抗ｍＣＤ２７：２２％ＴＧＩ、０／１０  ＴＦ；図１４(Ｄ)、抗ｍＰＤ−１：２７％ＴＧＩ、２／１０  ＴＦ)より多かった(図１４(Ｅ)：それぞれ７０％ＴＧＩ、３／１０  ＴＦ)。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
発明の詳細な記載
本発明は、ＣＤ２７に特異的に結合するｍＡｂおよび患者における癌を処置する方法であって、該患者に抗ＣＤ２７  Ａｂを単独でまたは免疫チェックポイント阻害剤などの抗癌剤との組み合わせで投与することを含む、方法に関する。
【００７２】
用語
本開示がより容易に理解され得るように、一部用語をまず定義する。本明細書で使用されている場合、ここで特に明示する場合を除き、次の用語の各々は、以下に示す意味を有する。さらなる定義が、本明細書中で示される。
【００７３】
ここで、態様が「含む」なる用語を用いて記載されているとき、「からなる」および／または「本質的にからなる」なる用語で示される他の類似する態様も提供される。
【００７４】
特に断らない限り、ここで使用する全ての技術的および科学的用語は、本開示が関連する分野の当業者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本明細書で使用する多くの用語の一般的辞書を当業者に提供する。
【００７５】
単位、接頭辞および記号は、その国際単位系(ＳＩ)が認めた形態である。数値範囲は、該範囲を定義する数値を含む。ここに提供する表題は、本明細書を全体として引用して得られる種々の態様の開示を制限しない。従って、すぐ下に定義する用語は、本明細書をその全体として引用して、より完全に定義される。
【００７６】
「投与する」は、治療剤または治療剤を含む組成物の、当業者に知られる種々の方法および送達系の何れかを使用する対象への物理的導入をいう。抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１  Ａｂなどの治療Ａｂの好ましい投与経路は静脈内投与である。他の投与経路は、例えば、注射または点滴による、筋肉内、皮下、腹腔内または他の非経腸投与経路を含む。ここで使用する用語「非経腸投与」は、経腸および局所投与以外の投与方式を意味する。投与はまた、例えば、１回、複数回および／または１以上の期間にわたり実施される。
【００７７】
「抗体」(Ａｂ)は、抗原に特異的に結合し、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重(Ｈ)鎖および２つの軽(Ｌ)鎖を含む糖タンパク質免疫グロブリン(Ｉｇ)またはその抗原結合部分をいう。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域(ここではＶＨと略す)および重鎖定常領域を含む。ＩｇＧ  Ａｂの重鎖定常領域は、３定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域(ここではＶＬと略す)および軽鎖定常領域を含む。ＩｇＧ  Ａｂの軽鎖定常領域は、１定常ドメイン、ＣＬを含む。ＶＨおよびＶＬ領域を、フレームワーク領域(ＦＲ)と称される、より保存された領域が散在する相補性決定領域(ＣＤＲ)と称される、超可変性の領域にさらに細分し得る。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含み、アミノ末端からカルボキシ末端で、次の順に配置される：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。種々の方法が、Ａｂ内のＣＤＲドメインの線引きに使用されており、Kabat、Chothia、ＡｂＭ、接触およびＩＭＧＴ定義を含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の種々の細胞(例えば、エフェクター細胞)および古典的補体系の第一成分(Ｃ１ｑ)を含む、宿主組織または因子へのＩｇの結合に介在し得る。
【００７８】
Ｉｇは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含むが、これらに限定されない一般に知られるアイソタイプの何れかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスも当業者に周知であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むが、これらに限定されない。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされるＡｂクラスまたはサブクラス(例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４)をいう。用語「抗体」は、例として、天然に存在するおよび天然に存在しないＡｂ、モノクローナルおよびポリクローナルＡｂ、キメラおよびヒト化Ａｂ、ヒトまたは非ヒトＡｂ、完全合成Ａｂおよび一本鎖Ａｂの両者を含む。非ヒトＡｂは、ヒトにおける免疫原性を低減するために、組み換え方法により一部または完全にヒト化され得る。明示されず、文脈に反しない限り、用語「抗体」はまた、前記Ｉｇの何れかの抗原結合フラグメントまたは抗原結合部分も含み、一価および二価フラグメントまたは一部および一本鎖Ａｂを含む。
【００７９】
「単離」Ａｂは、異なる抗原特異性を有する他のＡｂを実質的に含まないＡｂをいう(例えば、ＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂは、ＣＤ２７以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない)。しかしながら、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂは、カニクイザルなどの異なる種からのＣＤ２７ポリペプチドなどの他の抗原と交差反応性を有し得る。さらに、単離Ａｂを、他の細胞物質および／または化学物質が実質的に含まないように精製し得る。
【００８０】
用語「モノクローナル」Ａｂ(ｍＡｂ)は、単一分子組成のＡｂ分子、すなわち、一次配列が本質的に同一であり、特定のエピトープに単一結合特異性および親和性を示すＡｂ分子の天然に存在しない調製物をいう。ｍＡｂは単離Ａｂの一例である。ｍＡｂはハイブリドーマ、組み換え、トランスジェニックまたは当業者に知られる他の技術により産生され得る。
【００８１】
「キメラ」Ａｂは、可変領域がマウスＡｂ由来であり、定常領域がヒトＡｂ由来であるＡｂなどの、可変領域がある一つの種由来であり、定常領域が他の種由来であるＡｂをいう。
【００８２】
「ヒト」ｍＡｂ(ＨｕＭＡｂ)は、フレームワークおよびＣＤＲ領域両者がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する、ｍＡｂをいう。さらに、Ａｂが定常領域を含むならば、定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来である。本発明のヒトＡｂは、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得る(例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的変異誘発により導入したまたはインビボで体細胞変異による変異)。しかしながら、ここで使用する用語「ヒト」Ａｂは、マウスなどの他の哺乳動物種の生殖細胞系由来のＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されているＡｂを含むことを意図しない。用語「ヒト」Ａｂおよび「完全ヒト」Ａｂは、同義に使用される。
【００８３】
「ヒト化」ｍＡｂは、非ヒトｍＡｂのＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分または全てがヒト免疫グロブリン由来の対応するアミノ酸で置換されているｍＡｂをいう。Ａｂのヒト化形態のある実施態様において、ＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分または全ては、ヒト免疫グロブリンからのアミノ酸で置換されており、一方１以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分または全ては不変である。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾は、Ａｂが特定の抗原に結合する能力を消失させない限り、許容される。「ヒト化」Ａｂは、元のＡｂに類似する抗原特異性を保持する。
【００８４】
「抗抗原」Ａｂは、該抗原に特異的に結合するＡｂをいう。例えば、抗ＣＤ２７  ＡｂはＣＤ２７に特異的に結合するＡｂであり、一方、抗ＰＤ−１  Ａｂは、ＰＤ−１に特異的に結合するＡｂである。ここで使用する「抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１」Ａｂは、抗ＰＤ−１  Ａｂまたは抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂであり得る、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路の妨害に使用するＡｂをいう。
【００８５】
Ａｂの「抗原結合部分」(「抗原結合フラグメント」とも称する)は、Ａｂ全体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保持する、Ａｂの１以上のフラグメントをいう。
【００８６】
「癌」は、体内での異常細胞の制御されない増殖を特徴とする、種々の疾患の広い一群をいう。制御されない細胞分裂および増殖は、近隣組織に侵襲し、リンパ系または血流を介して体内の遠隔部位に転移もし得る悪性腫瘍の形成をもたらす。
【００８７】
「ＣＤ２７」は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである受容体をいう。ＣＤ２７はＴ細胞免疫の産生および長期維持に必要であり、ＣＤ７０に結合する。ＣＤ２７は、大部分の成熟Ｔ細胞、記憶Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞の一部で構成的に発現される。ＣＤ２７とそのリガンドＣＤ７０の相互作用は、次の過程で重要な役割を有する：１)Ｔ細胞のＣＤ２７を介する共刺激は、エフェクター能および記憶の活性化、増殖、生存および成熟をもたらす；２)ヒトＢ細胞のＣＤ２７を介する共刺激は、形質細胞の産生、増殖および免疫グロブリン産生を活性化および促進するおよび３)ナチュラルキラー細胞のＣＤ２７を介する共刺激は細胞溶解活性を誘導する。ここで使用する用語「ＣＤ２７」は、ｈＣＤ２７、バリアント、アイソフォームおよびｈＣＤ２７の種ホモログおよびｈＣＤ２７と少なくとも一つの共通エピトープを有するアナログを含む。完全ｈＣＤ２７配列は、GenBank Accession No. AAH12160下に見ることができる。慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫などの種々のタイプのリンパ腫および白血病におけるＣＤ２７発現は、十分に文書で証明されている。
【００８８】
「細胞毒性Ｔリンパ球抗原−４」(ＣＴＬＡ−４)は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫阻害性受容体をいう。ＣＴＬＡ−４はインビボでＴ細胞に排他的に発現され、２つのリガンド、ＣＤ８０およびＣＤ８６(それぞれＢ７−１およびＢ７−２とも称される)に結合する。ここで使用する用語「ＣＴＬＡ−４」は、ヒトＣＴＬＡ−４(ｈＣＴＬＡ−４)、バリアント、アイソフォームおよびｈＣＴＬＡ−４の種ホモログおよびｈＣＴＬＡ−４と少なくとも一つの共通エピトープを有するアナログを含む。完全ｈＣＴＬＡ−４配列は、GenBank Accession No. AAB59385下に見ることができる。
【００８９】
用語「免疫療法」は、免疫応答の誘導、増強、抑制または他の修飾を含む方法により、疾患を有するまたはそれを有するもしくは再発するリスクのある対象を処置することをいう。
【００９０】
対象の「処置」または「治療」は、疾患と関連する症状、合併症、状態または生化学的徴候の発症、進行、進展、重症度または再発の反転、軽減、改善、阻止、減速または予防を目的として、対象に行う活性剤の投与を含むあらゆるタイプの介入または過程をいう。
【００９１】
「計画死−１」(ＰＤ−１)は、インビボで予め活性化されたＴ細胞に優勢に発現し、２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に結合する、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫阻害性受容体をいう。ここで使用する用語「ＰＤ−１」は、ヒトＰＤ−１(ｈＰＤ−１)、バリアント、アイソフォームおよびｈＰＤ−１の種ホモログおよびｈＰＤ−１と少なくとも一つの共通エピトープを有するアナログを含む。完全ｈＰＤ−１アミノ酸配列は、GENBANK(登録商標)Accession No. U64863下に見ることができる。
【００９２】
「計画死リガンド−１」(ＰＤ−Ｌ１)は、ＰＤ−１の二つの細胞表面糖タンパク質リガンドの一方(他方はＰＤ−Ｌ２)であり、それはＰＤ−１への結合により、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン分泌を下方制御する。ここで使用する用語「ＰＤ−Ｌ１」は、ヒトＰＤ−Ｌ１(ｈＰＤ−Ｌ１)、バリアント、アイソフォームおよびｈＰＤ−Ｌ１の種ホモログおよびｈＰＤ−Ｌ１と少なくとも一つの共通エピトープを有するアナログを含む。完全ｈＰＤ−Ｌ１配列は、GENBANK(登録商標)Accession No. Q9NZQ7に見ることができる。
【００９３】
「対象」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は、脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌおよびマウス、ラットおよびモルモットなどの齧歯類を含むが、これらに限定されない。好ましい実施態様において、対象はヒトである。用語「対象」および「患者」は、ここでは相互交換可能に使用される。
【００９４】
薬物または治療剤の「治療有効量」または「治療有効投与量」は、単独でまたは他の治療剤と組み合わせて使用したとき、疾患症状の重症度低減、無疾患症状期間の頻度および期間の増大または疾患罹患による機能障害または能力障害予防またはの低減により証明される、対象を疾患発症から保護するまたは疾患退縮を促進する薬物または薬剤のあらゆる量である。さらに、処置に関連する用語「有効な」および「有効性」は、薬理学的有効性および生理学的安全性両者を含む。薬理学的有効性は、薬物が患者で疾患退縮、例えば、癌退縮を促進する能力をいう。生理学的安全性は、薬物投与に起因する、細胞、臓器および／または生物レベルでの許容されるレベルの毒性または他の有害生理作用(有害作用)をいう。治療剤の有効性を、臨床治験中のヒトにおいて、ヒトでの有効性を予測する動物モデルでまたはインビトロアッセイで薬剤の活性のアッセイによるなど、通常の技術の実施者に知られる多様な方法を使用して、評価し得る。
【００９５】
腫瘍処置の例として、治療有効量の抗癌剤は、好ましくは細胞増殖または腫瘍増殖を、未処置対象に対して少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約４０％、より好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％およびなおより好ましくは約１００％阻害する。本発明の好ましい実施態様において、腫瘍退縮は、少なくとも約３０日、より好ましくは少なくとも約６０日またはさらにより好ましくは少なくとも約６か月の期間観察され、継続され得る。治療有効性のこれらの最終的測定にかかわらず、免疫治療薬物の評価は、「免疫関連」応答パターンを差し引かなければならない。
【００９６】
「免疫関連」応答パターンは、癌特異的免疫応答誘発または自然免疫過程修飾により抗腫瘍効果を生じる免疫治療剤で処置された癌患者でしばしば観察される臨床的応答パターンをいう。この応答パターンは、伝統的化学療法剤では疾患進行と分類され、薬物失敗と同義である、腫瘍負荷の最初の増加または新規病変出現後の有利な治療効果により特徴づけられる。従って、免疫治療剤の適切な評価は、標的疾患に対するこれら薬剤の効果の長期モニタリングを必要とし得る。
【００９７】
薬物の治療有効量は、疾患を発症する(例えば、癌を発症するリスクのある前悪性状態を有する対象)または疾患の再発のリスクのある対象に単独でまたは他の治療剤と組み合わせて投与したとき、疾患(例えば、癌)発症または再発を阻止する、薬物のあらゆる量である「予防有効量」を含む。好ましい実施態様において、予防有効量は、疾患発症または再発を完全に阻止する。疾患発症または再発「阻止」は、疾患発症または再発の可能性の低減または疾患発症または再発の完全な阻止を意味する。
【００９８】
選択肢(例えば、「または」)の使用は、選択肢の一方、両方またはこれらの何れかの組み合わせを意味すると理解されるべきである。ここで使用する単数表現は、あらゆる記載されたまたは列記された要素の「１以上」をいうと理解される。
【００９９】
用語「「および／または」は、ここで使用されているとき、２つの特定した特性または要素の各々の、他方を伴うまたは伴わない具体的開示と解釈される。故に、ここで「Ａおよび／またはＢ」などの言い回しで使用される用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」(単独)および「Ｂ」(単独)を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの言い回しで使用される用語「および／または」は、次の態様の各々を含むことを意図する：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ(単独)；Ｂ(単独)；およびＣ(単独)。
【０１００】
用語「約」は、当業者により決定される、特定の値、組成または特徴の許容される誤差範囲内の数値、組成または特徴であり、これは、一部、どのように値、組成または特徴が測定または決定されたか、すなわち、測定系の限界に依存する。例えば、「約」は、当分野の慣例に従い、１内または１を超える標準偏差内を意味し得る。あるいは、±２０％の範囲、より一般には±１０％の範囲を意味し得る。特定の値、組成または特徴が明細書および特許請求の範囲に提供されるとき、特に断らない限り、「約」の意味を、その特定の値、組成または特徴の許容される誤差範囲内であるとして仮定すべきである。薬物投与レジメンの投与頻度について、ここで使用する用語「ほぼ週１回」、「ほぼ２週に１回」、または任意の他の類似投与間隔用語は、おおよその数値を意味する。例えば、「ほぼ週１回」は７日毎±１日、すなわち、６日毎〜８日毎を含み得る。「ほぼ２週に１回」は１４日毎±３日、すなわち、１１日毎〜１７日毎を含む。類似の近似が、例えば、ほぼ３週に１回、ほぼ４週に１回、ほぼ月１回またはほぼ３〜６か月毎に１回またはそれ以上に適用される。
【０１０１】
用語「実質的に同じ」または「本質的に同じ」は、当業者がこれらの値、組成または特徴の間の差異が、測定される性質の状況の範囲内で、生物学的および／または統計学的意義がほとんどまたは全くないと考える２以上の数値、組成または特徴の間の十分に高い程度の類似性をいう。測定される数値間の差異は、例えば、約３０％未満、好ましくは約２０％未満およびより好ましくは約１０％未満であり得る。
【０１０２】
ここに記載する、あらゆる濃度範囲、パーセンテージ範囲、比範囲または整数範囲は、特に断らない限り、記載する範囲内のあらゆる整数値および、適切なとき、その分数(例えば整数の１／１０および１／１００)を含むと理解されるべきである。
【０１０３】
本発明の種々の態様を、次のサブセクションでさらに詳述する。
【０１０４】
抗ＣＤ２７  ｍＡｂ
ある態様において、本発明は、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂ、特にｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。ある実施態様において、ｈＣＤ２７の配列は、配列番号１に示す。
【０１０５】
抗ＣＤ２７  ＡｂのＣＤ２７への特異的結合
本発明のｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む抗ＣＤ２７  ＡｂはＣＤ２７に特異的に結合する。Ａｂは、一般に１μM〜１０pM以下の解離定数(ＫＤ)により反映される高親和性で、同族抗原に特異的に結合する。約１００μMより大きいあらゆるＫＤは、非特異的結合と一般に考えられる。ここで使用する、抗原に「特異的に結合する」ＩｇＧ  Ａｂは、約１００nM以下のＫＤを有することを意味する、高親和性である抗原および実質的に同一抗原に結合するが、無関係抗原に高親和性で結合しないＡｂをいう。抗原は、ある抗原と高度の配列同一性を示すならば、例えば、ある抗原の配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７％またはさらにより好ましくは少なくとも９９％配列同一性を示すならば、該ある抗原と「実質的に同一」である。ある実施態様において、ｈＣＤ２７と特異的に結合するＡｂは、ある霊長類種、例えば、カニクイザルからのＣＤ２７抗原と交差反応性も有する。ある実施態様において、ｈＣＤ２７に特異的に結合するＡｂは、齧歯類種、例えばマウスおよび／またはラットからのＣＤ２７抗原またはＣＤ２７以外の抗原、例えば、ＡｘｌまたはＰＤ−１抗原と交差反応しない。
【０１０６】
ここで使用する用語「ＫＤ」は、ｋｏｆｆ対ｋｏｎ比(すなわち、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ)から導かれ、モル濃度(例えば、nM)で表される、特定のＡｂ−抗原相互作用の解離定数をいう。用語「ｋｏｎ」は、Ａｂとその抗原相互作用の結合の結合速度または「オン速度」をいい、一方、用語「ｋｏｆｆ」は、Ａｂ−抗原複合体の解離速度をいう。ＡｂのＫＤ値は、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはバイオレイヤー干渉法(ＢＬＩ; ForteBio, Fremont, CA)などの、当分野で十分に確立されている方法を使用して決定され得る。一つのＡｂについて異なる方法で決定したＫＤ値は、相当、例えば、１,０００倍まで変わり得る。それ故に、異なるＡｂでＫＤ値を比較するために、これらのＫＤ値を同じ方法を使用して決定することが重要である。明示されず、文脈から他の解釈が示されない限り、ここに開示するＡｂ結合のＫＤ値は、BIACORE(登録商標)バイオセンサー系(GE Healthcare, Chicago, IL)を使用するＳＰＲにより決定した。
【０１０７】
ここに開示する発明のある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約１００nM以下、約９５nM以下、約９０nM以下、約８５nM以下、約８０nM以下、約７５nM以下、約７０nM以下、約６５nM以下、約６０nM以下、約５５nM以下、約５０nM以下、約４５nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１nM〜約７０nM、約１nM〜約５０nM、約１nM〜約４５nM、約５nM〜約１００nM、約５nM〜約７０nM、約５nM〜約５０nM、約５nM〜約４５nM、約１０nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nM、約１０nM〜約４５nMまたは約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約１００nM以下、約９０nM以下、約８０nM以下、約７０nM以下、約６０nM以下、約５０nM以下、約４０nM以下、約１nM〜約１００nM、約１０nM〜約７０nM、約１０nM〜約５０nMまたは約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合する。ある実施態様において、ＫＤは約３７℃および／または約２５℃である。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約３７℃および約２５℃で約１０nM〜約１００nM、約１０nM〜約７５nM、約１０nM〜約５０nMまたは約１０nM〜約４５nMのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約３７℃で約１５nM〜約１００nM、約１５nM〜約７５nM、約１５nM〜約５０nM、約１５nM〜約４５nM、約２０nM〜約１００nM、約２０nM〜約７５nM、約２０nM〜約５０nM、約２０nM〜約４５nM、約３０nM〜約１００nM、約３０nM〜約７５nM、約３０nM〜約５０nM、約３０nM〜約４５nMまたは約４０nM〜約４５nMのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約２５℃で約４５nM以下、約４０nM以下、約３５nM以下、約３０nM以下、約２５nM以下、約２０nM以下、約１nM〜約４５nM、約１nM〜約４０nM、約１nM〜約３０nM、約１nM〜約２０nM、約５nM〜約４５nM、約５nM〜約４０nM、約５nM〜約３０nM、約５nM〜約２０nM、約１０nM〜約４５nM、約１０nM〜約４０nM、約１０nM〜約３０nMまたは約１０nM〜約２０nMのＫＤで結合する。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ｈＣＤ２７と、約３７℃で約４１nM〜約４４nMおよび／または約２５℃で約１３nM〜約１６nMのＫＤで結合する。
【０１０８】
抗ＣＤ２７  Ａｂの特異的エピトープへの結合
水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)およびタンパク質の高速光化学酸化(ＦＰＯＰ)を含む種々の方法を利用して、Ａｂの結合エピトープを精査できる。
【０１０９】
ＨＤＸ−ＭＳは、溶液のタンパク質三次元構造および三次元動力学を、主鎖アミド水素原子の重水素交換の速度および程度をモニタリングすることにより精査する(Huang and Chen, 2015; Wei et al., 2014)。ＨＤＸのレベルは、主鎖アミド水素原子およびタンパク質水素結合への溶媒親和性による。ＨＤＸによるタンパク質質量増加は、ＭＳにより厳密に測定され得る。この技術を酵素消化と合わせたとき、ペプチドレベルでの構造特性が解析でき、折り畳まれた内側から表面露出ペプチドの差別化を可能とする。一般に、重水素標識および続く消光実験、続いて酵素消化、ペプチド分離およびＭＳ分析が実施される。
【０１１０】
ＦＰＯＰは、一般に、ヒドロキシル(ＯＨ)ラジカルにより誘導されるアミノ酸側鎖の酸化レベルの決定によるタンパク質三次元構造の特徴づけのための相補的タンパク質フットプリント技術である(Yan et al., 2014; Jones et al., 2011)。側鎖酸化の程度は、アミノ酸側鎖の溶媒親和性および暴露アミノ酸の化学的性質による。ＦＰＯＰは、フローシステムでの光化学標識のためのＨ２Ｏ２のレーザー照射を使用し、過度の標識を避けるため、ラジカルスカベンジャーの導入によりラジカル寿命を約１μsに制御する。酸化タンパク質を続いて酵素で消化し、ＭＳで分析する。種々の条件下でのペプチド酸化レベルの変化が、局所三次元構造の変化を取得し、タンパク質インターフェイスの特徴づけをするために使用される。
【０１１１】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＨＤＸ−ＭＳおよび／またはＦＰＯＰエピトープマッピングにより決定される、ｈＣＤ２７のアミノ酸残基の凡そ２１〜４１および５２〜５７(その配列は配列番号１)に跨る不連続領域内に位置するエピトープに特異的に結合する。
【０１１２】
構造的に定義された抗ＣＤ２７  Ａｂ
本発明はまたｈＣＤ２７に特異的に結合し、配列番号８に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＶＨおよび配列番号９に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＶＬの各々にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分も提供する。
【０１１３】
Ａｂ内のＣＤＲドメインを線引きするために、種々の方法が開発されている。広く使用されているKabat定義に加えて、Kabat定義の欠点に取り組むことを探索するChothia、ＡｂＮｕｍ、ＡｂＭ、接触およびＩＭＧＴ定義を含むその他が用いられている。
【０１１４】
Kabatおよび同僚ら(Wu and Kabat, 1970; Kabat et al., 1983)の試みは、ＣＤＲがＡｂで最も可変の位置を含み、よって当時入手可能であったかなり限られた数のＡｂ配列のアラインにより同定できるであろうとの仮定に基づいた。このアラインメントに基づき、Kabatらは、超可変領域の残基のためのナンバリングスキームを導入し、どの位置が各ＣＤＲの始まりおよび終わりであるかを決定した(http://bioinf.org.uk/abs/simkab.html)。
【０１１５】
Chothia定義は、Ａｂ配列とそのＣＤＲの構造ループ領域の間の相関を決定するための、少数のＡｂ構造の分析に基づく(Chothia et al., 1987; 1989; Al-Lazikani et al., 1997; http://bioinf.org.uk/abs/Chothia.html)。ＦＲとＣＤＲの境界を決定し、後者は、ＣＤＲおよびフランキングＦＲの重要な位置でのある残基の存在に基づき、制限された三次元構造のセットを採用することが示された。得られたChothiaナンバリングスキームはKabatスキームとほぼ同一であるが、構造考慮により、ＶＬ  ＣＤＲ１およびＶＨ  ＣＤＲ１における挿入を異なる位置に配置している。利用可能な実験的データが増えたため、ＣＤＲの境界の再分析および再定義が行われている。AbhinandanおよびMartin(2008)は、構造の状況でＡｂ配列アラインメントを分析し、手動で割り当てたKabatデータベースの配列の約１０％が誤差または矛盾を含むことが判明した。彼らはＣＤＲおよびフレームワークをとおして構造的に補正したChothiaスキームの修正版を提案し、自動かつ確実な方法でKabat、Chothiaおよび修飾Chothiaナンバリングに適用される、ソフトウェアツールを開発した(AbNum; http://www.bioinf.org.uk/abs/abnum/で入手可能)。その他の方法であるＡｂＭ定義は、KabatとChothia定義の妥協点を表し、Oxford Molecular Group’s AbM Abモデリングソフトウェア(http://www.bioinf.org.uk/abs; Martin et al., 1989)により使用される。
【０１１６】
接触定義は、タンパク質データバンク(http://bioinf.org.uk/abs/; MacCallum et al., 1996)で入手可能な複合体結晶構造におけるＡｂと抗原の接触の分析に基づく。
【０１１７】
ＣＤＲを定義する、より最近の試みは、Ｉｇ、Ｔ細胞受容体(ＴｃＲ)および主要組織適合遺伝子複合体(ＭＨＣ)分子のヌクレオチド配列情報を整理するＩＭＧＴデータベース(Lefranc et al. (2003; http://www.imgt.org)のものである。５０００を超えるＩｇおよびＴｃＲ可変領域配列のアラインに基づき、ＩｇおよびＴｃＲ配列の均一ナンバリング系を提案する。
【０１１８】
Kabat定義は、Ａｂの構造情報が入手不可能であった時代に開発されたにも関わらず、ＣＤＲドメインの予測に、最も一般に使用される方法である。明示されず、文脈から他の解釈が示されない限り、ここに開示するＣＤＲは、Kabat定義を使用して同定されている(表２参照)。従って、本発明は、６ＣＤＲのセットを含み、その少なくとも一つは表２に示すＣＤＲ配列に対応する、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を提供する。ある実施態様において、本発明は、表２に示す全３つの重鎖可変領域(ＶＨ)ＣＤＲ配列を含む、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を提供する。ある実施態様において、本発明は、表２に示す全３つの軽鎖可変領域(ＶＬ)ＣＤＲ配列を含む、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を提供する。
【０１１９】
ある実施態様において、本発明は、
(ａ) 配列番号２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号４に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含むＶＨ；および
(ｂ) 配列番号５に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ１、配列番号６に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ２および配列番号７に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含むＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、ｈＣＤ２７に特異的に結合する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を提供する。
【０１２０】
ある実施態様において、ＶＨは、配列番号８に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む。
【０１２１】
ある実施態様において、ＶＬは、配列番号９に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む。
【０１２２】
ある実施態様において、Ａｂ、好ましくはｍＡｂは、配列番号１２に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む重鎖および配列番号１３に示す配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む軽鎖を含む。
【０１２３】
ある実施態様において、Ａｂは、ＢＭＳ−９８６２１５と命名されるｍＡｂである。
【０１２４】
上記抗ＣＤ２７  Ａｂの何れかのアミノ酸配列と高度に類似または相同であるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬ領域を含み、これらのＡｂの機能的性質を保持する抗ＣＤ２７  Ａｂも、本方法での使用に適する。例えば、適当なＡｂは、各々それぞれ配列番号８および／または９に示すアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である配列を有する連続的に結合したアミノ酸を含む、ＶＨおよびＶＬ領域を含むｍＡｂを含む。さらなる実施態様において、例えば、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、それぞれ配列番号８および／または９に示す配列と、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％または９９％同一性を示す。ここで使用する、２アミノ酸配列間のパーセント配列同一性は、２配列間の配列同一性の程度を最大化するために導入した何らかのギャップ数およびそのような各ギャップの長さを考慮して、比較した配列長に対するこれら配列により共有される同一位置数の関数である(すなわち、％同一性＝同一位置数／比較した位置の総数×１００)。配列比較および２配列間のパーセント同一性決定は、当業者に周知の数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。
【０１２５】
ある実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。ある好ましい実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである。ある実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの完全長Ａｂである。ある好ましい実施態様において、完全長ＡｂはＩｇＧ１アイソタイプのものである。さらなる実施態様において、完全長ＡｂはＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１２６】
ＣＤ２７への結合について対照Ａｂと交差競合する抗ＣＤ２７  ｍＡｂ
本発明の範囲内にまた包含されるのは、ＣＤ２７、例えば、ｈＣＤ２７および／またはカニクイザルＣＤ２７(ｃＣＤ２７)に特異的に結合し、ｈＣＤ２７への結合について対照Ａｂまたはその対照抗原結合部分と交差競合する、単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分である。Ａｂ対が、抗原、例えば、ＣＤ２７への結合について「交差競合する」能力は、第一Ａｂが、第二Ａｂと抗原の実質的に同じエピトープ領域に結合し、その特定のエピトープ領域で第二Ａｂの結合を立体的に妨害し、逆に、第二Ａｂが第一Ａｂと抗原の実質的に同じエピトープ領域に結合し、その特定のエピトープ領域で第一Ａｂの結合を立体的に妨害することを示す。それ故に、試験Ａｂが、例えば、ｍＡｂ  ＢＭＳ−９８６２１５のｈＣＤ２７への結合を競合的に阻害する能力は、該試験Ａｂが、ｍＡｂ  ＢＭＳ−９８６２１５とｈＣＤ２７の実質的に同じエピトープ領域に結合することを示す。
【０１２７】
第一Ａｂは、第一Ａｂが第二Ａｂの抗原への結合を少なくとも約４０％減少させたならば、第二Ａｂと「実質的に同じエピトープ」に結合すると考えられる。好ましくは、第一Ａｂは、第二Ａｂの抗原への結合を約５０％超(例えば、少なくとも約６０％または少なくとも約７０％)減少させる。より好ましい実施態様において、第一Ａｂは、第二Ａｂの抗原への結合を、約７０％超(例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または約１００％)減少させる。第一Ａｂと第二Ａｂの順番は逆でよく、すなわち「第二」Ａｂを、表面に最初に結合させ、「第一」をその後に「第二」Ａｂ存在下で該表面と接触させてよい。これらＡｂは、抗原への結合の競合的減少が、Ａｂを固定化抗原に加える順番と無関係に観察されるならば、「交差競合する」と考えられる。
【０１２８】
交差競合Ａｂは、ＣＤ２７受容体などの抗原の実質的に同じエピトープ領域に結合するため、対照Ａｂの性質に極めて類似する機能的性質を有することが予測される。交差競合の程度が高いほど、機能的性質はより類似する。例えば、２つの交差競合Ａｂは、各々が他方のエピトープへの結合を少なくとも約８０％阻害するならば、本質的に同じ機能的性質を有すると予測される。この機能の類似性は、交差競合Ａｂが解離定数(ＫＤ)により測定して、エピトープへの結合の親和性が類似するならば、より近いと予測される。
【０１２９】
交差競合抗抗原Ａｂは、組み換え抗原分子または細胞表面発現抗原分子を使用する、BIACORE(登録商標)分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーを含む、標準抗原結合アッセイで検出可能に競合する能力に基づき、容易に同定され得る。例として、ｈＣＤ２７への結合について試験ＡｂがＢＭＳ−９８６２１５と競合するか否かを同定する単純競合アッセイは、(１)ｈＣＤ２７が固定化されたBIACORE(登録商標)チップ(または他の適当なＳＰＲ分析用媒体)に飽和濃度で適用されたＢＭＳ−９８６２１５の結合の測定および(２)試験Ａｂが予め結合されたｈＣＤ２７被覆BIACORE(登録商標)チップ(または他の適当な媒体)へのＢＭＳ−９８６２１５の結合の測定を含み得る。試験Ａｂ存在下および非存在下のＣＤ２７被覆表面へのＢＭＳ−９８６２１５の結合を比較する。試験Ａｂ存在下でのＢＭＳ−９８６２１５の結合の顕著な(例えば、約４０％を超える)減少は、両Ａｂが、ＣＤ２７標的への結合を競合するように、実質的に同じエピトープを認識することを示す。第二Ａｂにより阻害された第一Ａｂの抗原への結合のパーセンテージを、[１−(第二Ａｂ存在下の第一Ａｂの結合検出値)／(第二Ａｂ非存在下の第一Ａｂの結合検出値)]×１００。複数Ａｂが交差競合をするか否かを決定するために、競合的結合アッセイを、ＢＭＳ−９８６２１５存在下の試験ＡｂのＣＤ２７被覆チップへの結合以外、繰り返す。
【０１３０】
ある態様において、本発明は、ここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂの何れかと同じｈＣＤ２７のエピトープに特異的に結合する単離Ａｂ、特にｍＡｂまたはその抗原結合部分に関する。
【０１３１】
抗ＣＤ２７  ｍＡｂの特徴
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ここに記載する１以上の特徴を有する。
【０１３２】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離ＡｂはｈＣＤ２７アゴニストである。
【０１３３】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)またはフローサイトメトリーにより測定して、ＣＤ２７、例えば、ｈＣＤ２７に特異的に結合し、そのＣＤ７０リガンドへの結合を遮断しない(すなわち、ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定してＣＤ２７へのＣＤ７０結合を阻害しない)。このようなｍＡｂまたはその抗原結合部分は、ここでは相互交換可能に非リガンド遮断ｍＡｂまたはその抗原結合部分、リガンド非遮断ｍＡｂまたはその抗原結合部分またはリガンド非ブロッカーと称し得る。
【０１３４】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定して、ラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない。
【０１３５】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択されるＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの１以上に特異的に結合しない。
【０１３６】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、１０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上に特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３７】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよび／またはＭＡＰＫシグナル伝達を約０.５nM以下、約０.４５nM以下、約０.４nM以下、約０.３５nM以下、約０.３nM以下、約０.２５nM以下、約０.２nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.００５nM〜約０.４nM、約０.００５nM〜約０.３nM、約０.００５nM〜約０.２５nM、約０.００５nM〜約０.２nM、約０.０１nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nM、約０.０１nM〜約０.３nM、約０.０１nM〜約０.２５nM、約０.０１nM〜約０.２nM、約０.０１５nM〜約０.５nM、約０.０１５nM〜約０.４nM、約０.０１５nM〜約０.３nM、約０.０１５nM〜約０.２５nM、約０.０１５nM〜約０.２nM、約０.０２nM〜約０.５nM、約０.０２nM〜約０.４nM、約０.０２nM〜約０.３nM、約０.０２nM〜約０.２５nMまたは約０.０２nM〜約０.２３nMのＥＣ５０で誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.００５nM〜約０.５nM、約０.０１nM〜約０.４nMまたは約０.０１５〜約０.３nMのＥＣ５０で誘導する。
【０１３８】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を約０.０５nM以下、約０.０４５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３５nM以下、約０.０３nM以下、約０.０２５nM以下、約０.０２nM以下、約０.０１５nM以下、約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.０００５nM〜約０.０５nM、約０.０００５nM〜約０.０４nM、約０.０００５nM〜約０.０３nM、約０.０００５nM〜約０.０２nM、約０.０００５nM〜約０.０１nM、約０.０００５nM〜約０.００９nM、約０.０００５nM〜約０.００８nM、約０.００１nM〜約０.０５nM、約０.００１nM〜約０.０４nM、約０.００１nM〜約０.０３nM、約０.００１nM〜約０.０２nM、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００１nM〜約０.００９nMまたは約０.００１nM〜約０.００８nMのＥＣ５０で誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌を約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３nM以下、約０.０２５nM以下、約０.０００５nM〜約０.０５nM、約０.０００５nM〜約０.０４nM、約０.０００５nM〜約０.０３nM、約０.００１nM〜約０.０５nM、約０.００１nM〜約０.０４nMまたは約０.００１nM〜約０.０３nMのＥＣ５０で誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおける増殖を、約０.００９nMの平均ＥＣ５０で誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２ＡアッセイにおけるＩＦＮ−γ分泌を、約０.００８nMの平均ＥＣ５０で誘導する。
【０１３９】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖を約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nM、約０.００３nM〜約０.００７nMまたは約０.００４nM〜約０.００６nMのＥＣ５０で誘導する。
【０１４０】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γ分泌を誘導する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γ分泌を約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０３nM以下、約０.０２nM以下、約０.００５nM〜約０.０５nM、約０.００５nM〜約０.０４nM、約０.００５nM〜約０.０３nM、約０.００５nM〜約０.０２nM、約０.０１nM〜約０.０５nM、約０.０１nM〜約０.０４nM、約０.０１nM〜約０.０３nMまたは約０.０１nM〜約０.０２nMのＥＣ５０で誘導する。
【０１４１】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−２放出を増加させる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＳＥＢ刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−２放出をクロスリンカーの存在下で約５０％を超えて増加させる。ある実施態様において、ＩＬ−２放出が増加するパーセンテージは、陰性対照ＩｇＧ１  ｍＡｂ(例えば、陰性対照ｈＩｇＧ１  ｍＡｂ)との比較である。ある実施態様において、倍数増加は、約１nM〜約１０nMのＡｂ濃度でである。
【０１４２】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、抗ＰＤ−１  Ａｂと組み合わせたときＩＬ−２放出を少なくとも約２倍増加させる。ある実施態様において、増加倍数は、抗ＰＤ−１  Ａｂ非存在下の該ｍＡｂまたはその抗原結合部分との比較である。
【０１４３】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を反転させる。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制を少なくとも約７０％反転させる。ある実施態様において、Ｔｒｅｇ介在抑制を反転させるパーセンテージは、陰性対照ＩｇＧ１  ｍＡｂ(例えば、陰性対照ｈＩｇＧ１  ｍＡｂ)との比較である。
【０１４４】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、可溶性ＣＤ７０によるヒトＴ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ分泌の誘導を増強する。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、可溶性ＣＤ７０によるヒトＴ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ分泌の誘導を、約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００６nM以下、約０.００５nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nMまたは約０.００３nM〜約０.００５nMのＥＣ５０で増強するおよび／またはＩＦＮ−γ分泌の誘導を約０.０１nM以下、約０.００９nM以下、約０.００８nM以下、約０.００７nM以下、約０.００１nM〜約０.０１nM、約０.００２nM〜約０.００８nMまたは約０.００５nM〜約０.００７nMのＥＣ５０で増強する。
【０１４５】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、陰性対照Ａｂおよび／または異なる抗ＣＤ２７  Ａｂと比較して、異なる特徴を有する。ある実施態様において、陰性対照ＡｂはｈＩｇＧ１  Ａｂである。ある実施態様において、異なる抗ＣＤ２７  Ａｂは、表５に示すそれぞれ配列番号２０および２１により示される重鎖および軽鎖配列を有する抗ｈＣＤ２７である１Ｆ５である。ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、既知抗ＣＤ２７  Ａｂと比較して、著しくすぐれたおよび／または治療上有利な１以上の特徴を示す。例えば、ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、陰性対照Ａｂおよび／または異なる抗ＣＤ２７  Ａｂと比較して：例えば、ＫＤまたはＥＣ５０値により示して、ｈＣＤ２７および／またはｃＣＤ２７に高い親和性を有する；ｈＣＤ２７および／またはｃＣＤ２７アゴニストである；リガンド非ブロッカーである；ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより測定してラットＣＤ２７および／またはマウスＣＤ２７に特異的に結合しない；ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＲ５、４−１ＢＢ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲおよびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上のＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーに特異的に結合しない；１０μg／mLまでの濃度でヒト組織の１以上と特異的に結合せず、ここで、ヒト組織は甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤、精巣、大脳、小脳、心臓、末梢神経およびこれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される；抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞においてＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達の高い誘導をもたらす；ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２Ａアッセイにおいて増殖および／またはＩＦＮ−γ分泌の高い誘導をもたらす；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖の高い誘導をもたらす；ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γ分泌の高い誘導をもたらす；ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)刺激ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−２放出の高い増加をもたらす；ＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下で共培養ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞のＴｒｅｇ介在抑制の高い反転をもたらす；可溶性ＣＤ７０によるヒトＴ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ分泌の誘導を増強するまたは高レベルで増強する；インビトロおよび／またはインビボで腫瘍細胞および／または腫瘍の増殖阻害の高い有効性を有する；およびこれらの何れかの組み合わせ。
【０１４６】
Ｔ細胞への抗ＣＤ２７  Ａｂの結合
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、ヒトＴ細胞と約０.１nM以下、約０.０９nM以下、約０.０８nM以下、約０.０７nM以下、約０.０６nM以下、約０.０５nM以下、約０.０４nM以下、約０.０１nM〜約０.１nM、約０.０１５nM〜約０.０９nMまたは約０.０２nM〜約０.０８nMのＥＣ５０で結合する。
【０１４７】
ある実施態様において、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む本発明の単離Ａｂは、カニクイザルＴ細胞と約０.５nM以下、約０.４nM以下、約０.３nM以下、約０.２nM以下、約０.１nM以下、約０.０１nM〜約０.５nM、約０.０２nM〜約０.４nMまたは約０.０３〜約０.３nMのＥＣ５０で結合する。
【０１４８】
抗ＣＤ２７  Ａｂの機能的抗原結合部分
本発明により提供される抗ＣＤ２７  Ａｂは、完全長Ａｂに加えて抗原結合フラグメントも含む。Ａｂの抗原結合機能が完全長Ａｂのフラグメントにより実施され得ることは十分に示されている。Ａｂの「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合フラグメントの例は、(ｉ)ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；(ii)ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂフラグメントからなるビバレントフラグメントであるＦ(ａｂ’)２フラグメント；(iii)ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；(iv)Ａｂの単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；および(ｖ)Ａｂの単一モノマー可変ドメインからなる単一ドメインＡｂ(ｓｄＡｂ)またはナノボディを含む。慣用のＡｂ、ラクダ、アルパカおよびラマなどのラクダ類およびサメおよびエイなどの軟骨魚類は、３つのＣＤＲを含む重鎖ホモ二量体からなる重鎖Ａｂ(ｈｃＡｂ)のサブセットを含み、軽鎖を欠く。最初のｓｄＡｂは、もともとラクダ類(ＶＨＨフラグメントから称される)または軟骨魚類(ＶＮＡＲフラグメント)で見られるｈｃＡｂから操作(engineering)されたが、慣用のＡｂからの二量体可変ドメインを分けることによっても産生され得る。重鎖可変ドメイン由来ｓｄＡｂに加えて、軽鎖由来のナノボディも特定抗原に選択的に結合することが示されている。
【０１４９】
パパインおよびペプシンなどの酵素でのタンパク質分解により最初に得られたＡｂフラグメントは、その後一価および多価抗原結合フラグメントにエンジニアリングされている。例えば、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別の遺伝子によりコードされてよいが、組み換え方法を使用して合成リンカーペプチドにより合わせてよく、それは、一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)として知られる一価分子を形成するために、ＶＬおよびＶＨ領域が対合する単一タンパク質鎖としてそれらを形成することを可能とする。二価またはビバレントｃＦｖ(ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ)を、２つのＶＨ領域および２つのＶＬ領域を含むタンデムｓｃＦｖとして知られる、単一ペプチド鎖内に二つのｓｃＦｖを結合することにより操作され得る。ＳｃＦｖ二量体および高次多量体は、２つの可変領域を一緒に折り畳むには短すぎる１０未満のアミノ酸のリンカーペプチドを使用して製造でき、これは、ｓｃＦｖを二量体化させ、二重特異性抗体を産生させるかまたは他の多量体を形成させる。二重特異性抗体は、対応するｓｃＦｖより高い親和性でその同族抗原に結合することが示されており、ｓｃＦｖへのＫＤ値より最大４０倍低い解離定数を有する。超短リンカー(≦３アミノ酸)は、二重特異性抗体よりさらに高い抗原への親和性を示す、三価トリアボディまたは四価テトラボディの形成をもたらす。他のバリアントは、ｓｃＦｖ−ＣＨ３二量体であるミニボディおよび大型ｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント(ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３二量体)を含み、単離ＣＤＲは抗原結合機能を示し得る。これらのＡｂフラグメントは、当業者に知られる慣用の組み換え技術を使用してエンジニアリングされ、フラグメントは、インタクトＡｂと同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。Ａｂの上記タンパク質分解および操作されたフラグメントおよび関連バリアント全て(さらなる詳細についてHollinger and Hudson, 2005; Olafsen and Wu, 2010参照)は、Ａｂの「抗原結合部分」なる用語の範囲内に含まれることが意図される。
【０１５０】
本発明のある態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂの抗原結合部分は、Ａｂフラグメントまたは一本鎖Ａｂである。ある実施態様において、ＡｂフラグメントはＦａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、ＦｄおよびＦｖフラグメント、ｓｄＡｂ、一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)、二価ｓｃＦｖ(ｄｉ−ｓｃＦｖ)およびビバレントｃＦｖ(ｂｉ−ｓｃＦｖ)、二重特異性抗体、ミニボディおよびＣＤＲから選択される。ある好ましい実施態様において、ＡｂフラグメントはＦａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、ＦｄおよびＦｖフラグメントおよび一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)から選択される。
【０１５１】
ある実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分はヒトＡｂまたはそのフラグメントである。他の実施態様において、ヒト化Ａｂまたはそのフラグメントである。さらなる実施態様において、キメラＡｂまたはそのフラグメントである。他の実施態様において、単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分はマウスＡｂまたはそのフラグメントである。ヒト対象への投与のために、Ａｂは好ましくはキメラＡｂまたは、より好ましくは、ヒト化またはヒトＡｂである。このようなキメラ、ヒト化、ヒトまたはマウスｍＡｂは、当分野で周知の方法により製造および単離され得る。
【０１５２】
抗ＣＤ２７イムノコンジュゲート
他の態様において、本発明は、細胞毒素または放射性同位体などの治療剤に連結した、ここに開示する単離抗ＣＤ２７  Ａｂの何れかまたはその抗原結合部分に関する。このようなコンジュゲートを、ここでは「イムノコンジュゲート」と称する。細胞毒素を、当分野で利用可能なリンカーテクノロジーを使用して、本発明のＡｂとコンジュゲートさせ得る。放射性イムノコンジュゲートの製造法も当分野で確立されている。
【０１５３】
二特異的分子
他の態様において、本発明は、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分と異なる結合特異性を有する結合ドメインに結合した、ここに開示する単離抗ＣＤ２７  Ａｂの何れかまたはその抗原結合部分を含む二特異的分子に関する。結合ドメインは、産生された二特異的分子が少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合するように、機能的分子、例えば、他のＡｂ、Ａｂの抗原結合部分または受容体のリガンドであり得る。
【０１５４】
抗ＣＤ２７  Ａｂをコードする核酸およびＡｂ発現のための使用
本発明の他の態様は、本発明の単離抗ＣＤ２７  Ａｂをコードする核酸に関する。本発明は、ここに記載するＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分の何れかをコードする単離核酸を提供する。「単離」核酸は、天然に存在する核酸と著しく異なる、すなわち、特有の化学的同一性、性質および有用性を有する、核酸組成物をいう。例えば、単離ＤＮＡは、天然ＤＮＡと異なり、天然ＤＮＡの独立した(free-standing)部分であり、天然にみられる大型の構造複合体、染色体の必須部分ではない。さらに、単離ＤＮＡは、天然ＤＮＡと異なり、とりわけ、遺伝子発現を測定し、疾患診断または治療有効性予測のための、バイオマーカー遺伝子または変異を測定および検出するための、ＰＣＲプライマーまたはハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。単離核酸はまた、当分野で周知の標準技術を使用して他の細胞要素または他の混入物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質を実質的に含まないように精製することもできる。
【０１５５】
本発明の核酸を、標準分子生物学技術を使用して、得ることができる。ハイブリドーマ(例えば、実施例１に記載のヒトＩｇ遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから調製したハイブリドーマ)によるＡｂ発現のために、ハイブリドーマより製造されたＡｂの軽鎖および重鎖または可変領域をコードするｃＤＮＡを標準ＰＣＲ増幅技術により得ることができる。ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたらこれらのＤＮＡフラグメントを標準組み換えＤＮＡ技術を使用してさらに操作して、例えば、可変領域ＤＮＡを完全長Ａｂ鎖遺伝子に、Ｆａｂフラグメント遺伝子にまたはｓｃＦｖ遺伝子に変換し得る。Ｉｇ遺伝子ライブラリー(例えば、ファージディスプレイ技術を使用)から得たＡｂについて、Ａｂをコードする核酸をライブラリーから回収し得る。
【０１５６】
本発明の核酸は、例えば、ＲＮＡまたはｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡなどのＤＮＡであり得る。好ましい実施態様において、核酸はｃＤＮＡである。
【０１５７】
本発明はまた抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分をコードする単離核酸を含む発現ベクターも提供する。本発明は、さらに該発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。真核生物細胞および最も好ましくは哺乳動物宿主細胞が、このような真核生物細胞および特に哺乳動物細胞で発現されたＡｂが、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性なＡｂを組み立ておよび分泌させる可能性が原核生物細胞より高いため、発現用宿主細胞として好ましい。本発明の組み換えＡｂの発現のための好ましい哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞(Kaufman and Sharp, 1982)、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞を含む。
【０１５８】
宿主細胞を、抗ＣＤ２７  ｍＡｂまたはその抗原結合部分を製造する方法に使用でき、その方法は、ｍＡｂまたはその抗原結合部分を宿主細胞で発現させ、該ｍＡｂまたはその抗原結合部分を宿主細胞から単離することを含む。宿主細胞をエクスビボまたはインビボで使用し得る。Ａｂ重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡを別の発現ベクターに導入してもよく、より一般には、両者を同じベクターに導入する。ＡｂのＶＨおよびＶＬセグメントを、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントと操作可能に結合され、Ｖκセグメントがベクター内のＣＬセグメントと操作可能に結合されるように、所望のアイソタイプの重鎖および軽鎖定常領域を既にコードする発現ベクターにこれら可変領域をコードするＤＮＡを挿入することにより、任意のアイソタイプの完全長Ａｂを製造するのに使用できる。
【０１５９】
本発明の他の態様は、ヒトＩｇ重鎖および軽鎖導入遺伝子を含むトランスジェニックマウスに関し、ここで、マウスは、ここに記載する抗ＣＤ２７  ＨｕＭＡｂの何れかを発現する。本発明はまた該マウスから調製されたハイブリドーマも包含し、ここで、ハイブリドーマはＨｕＭＡｂを産生する。
【０１６０】
本発明治療方法での使用に適する抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ
ここに開示する癌処置法、組成物またはキットでの使用に適する抗ＰＤ−１  Ａｂは、高特異性および親和性でＰＤ−１に結合し、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を遮断し、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制性効果を阻害する、単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む。同様に、これらの方法での使用に適する抗ＰＤ−Ｌ１は、高特異性および親和性でＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０(Ｂ７−１)への結合を遮断し、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制性効果を阻害する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を含む。ここに開示する治療方法の何れにおいても、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、それぞれＰＤ−１受容体またはＰＤ−Ｌ１リガンドに結合し、受容体−リガンド結合についてＡｂ全体に類似する機能的性質を示し、Ｔ細胞活性阻害を反転させ、それにより免疫応答を上方制御する、抗原結合部分またはフラグメントを含む。
【０１６１】
抗ＰＤ−１  Ａｂ
ＰＤ−１と高親和性で特異的に結合するｍＡｂは、米国特許８,００８,４４９に開示されている。他の抗ＰＤ−１  ｍＡｂは、例えば、米国特許７,４８８,８０２、８,１６８,７５７、８,３５４,５０９および９,２０５,１４８に開示されている。米国特許８,００８,４４９に開示の抗ＰＤ−１  ｍＡｂは、次の特徴のいくつかまたは全てを有することが示されている。(ａ)ＳＰＲ(BIACORE(登録商標))バイオセンサー系により決定して、約５０nM以下のＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；(ｂ)ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；(ｃ)混合リンパ球反応(ＭＬＲ)アッセイでＴ細胞増殖、インターフェロン−γ産生およびＩＬ−２分泌を増加させる；(ｄ)ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に結合する；(ｅ)ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；(ｆ)ＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞の増殖およびインターフェロン−γ産生に対するＴｒｅｇ細胞による阻害から解放する；(ｇ)抗原特異的記憶応答を刺激する；(ｈ)Ａｂ応答を刺激する；および(ｉ)インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。本発明の処置方法、組成物またはキットに有用な抗ＰＤ−１  Ａｂは、ヒトＰＤ−１と高親和性で特異的に結合し、前記特徴の少なくとも５つ、好ましくは全てを示すｍＡｂを含む。例えば、ここに開示する治療法での使用に適する抗ＰＤ−１  Ａｂは、(ａ)ＳＰＲ(BIACORE(登録商標))により決定して、約１０nM〜０.１nMのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；(ｂ)ＭＬＲアッセイでＴ細胞増殖、インターフェロン−γ産生およびＩＬ−２分泌を増加させる；(ｃ)ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；(ｄ)ＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞の増殖およびインターフェロン−γ産生に対するＴｒｅｇによる阻害を反転させる；(ｅ)抗原特異的記憶応答を刺激する；および(ｆ)インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。
【０１６２】
他の抗ＰＤ−１  ｍＡｂは、例えば、米国特許６,８０８,７１０、７,４８８,８０２、８,１６８,７５７、８,３５４,５０９および９,９８７,５００、米国公開２０１６／０２７２７０８およびＰＣＴ公開ＷＯ２００８／１５６７１２、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１４／１９４３０２、ＷＯ２０１４／２０６１０７、ＷＯ２０１５／０３５６０６、ＷＯ２０１５／０８５８４７、ＷＯ２０１５／１１２９００、ＷＯ２０１６／１０６１５９、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２４５１５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／０２５０５１、ＷＯ２０１７／０４０７９０、ＷＯ２０１７／１０６０６１、ＷＯ２０１７／１２３５５７、ＷＯ２０１７／１３２８２７、ＷＯ２０１７／１３３５４０に開示されており、これら各々を引用により全体として本明細書に包含させる。
【０１６３】
ある実施態様において、抗ＰＤ−１  ｍＡｂは、ニボルマブ(オプジーボ(登録商標)；以前の名称５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６またはＯＮＯ−４５３８)、ペンブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標)；以前の名称ランブロリズマブおよびＭＫ−３４７５；ＷＯ２００８／１５６７１２Ａ１参照)、セミプリマブ(LIBTAYO(登録商標)；以前はＲＥＧＮ−２８１０として知られる；ＷＯ２０１５／１１２８００参照)、ＰＤＲ００１(ＷＯ２０１５／１１２９００参照)、ＭＥＤＩ−０６８０(以前の名称ＡＭＰ−５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３参照)、ＪＳ００１(Liu and Wu, 2017参照)、ＢＧＢ−Ａ３１７(ＷＯ２０１５／０３５６０６およびＵＳ２０１５／００７９１０９参照)、ＩＮＣＳＨＲ１２１０(ＳＨＲ−１２１０；ＷＯ２０１５／０８５８４７；Liu and Wu, 2017参照)、ＴＳＲ−０４２(ＡＮＢ０１１；ＷＯ２０１４／１７９６６４参照)、ＧＬＳ−０１０(ＷＢＰ３０５５；Liu and Wu, 2017参照)、ＡＭ−０００１(ＷＯ２０１７／１２３５５７参照)、ＳＴＩ−１１１０(ＷＯ２０１４／１９４３０２参照)、ＡＧＥＮ２０３４(ＷＯ２０１７／０４０７９０参照)およびＭＧＤ０１３(ＷＯ２０１７／１０６０６１参照)からなる群から選択される。
【０１６４】
抗ＰＤ−１  Ａｂの投与を含むここに記載する治療法の何れかのある好ましい実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂは、複数の種々の癌の処置について、米国食品医薬品局(ＦＤＡ)により既に承認されているニボルマブ(オプジーボ(登録商標))である。ニボルマブは、ＰＤ−１リガンド(ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２)との相互作用を選択的に阻止し、それにより抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する、完全ヒトＩｇＧ４(Ｓ２２８Ｐ)ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤Ａｂである(米国特許８,００８,４４９にｍＡｂ  Ｃ５として記載; Wang et al., 2014)。他の好ましい実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂは、ペンブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標)；ＰＤ−１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４  Ａｂであり、米国特許８,３５４,５０９にｈ４０９Ａ１１として記載)であり、これもまた複数の癌適応症に承認されている。
【０１６５】
本発明方法、組成物またはキットで有用な抗ＰＤ−１  Ａｂは、ヒトＰＤ−１(ｈＰＤ−１)に特異的に結合し、ここに記載する抗ＰＤ−１  Ａｂの何れか、例えば：ニボルマブ(５Ｃ４；例えば、米国特許８,００８,４４９；ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)およびペンブロリズマブとヒトＰＤ−１への結合について交差競合する単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂも含む。対照Ａｂ、例えば、ニボルマブまたはペンブロリズマブと、抗原、この場合ヒトＰＤ−１への結合について交差競合するＡｂは、BIACORE(登録商標)分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準ＰＤ−１結合アッセイにより容易に同定され得る(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。ある実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂは、ここに記載する抗ＰＤ−１  Ａｂの何れか、例えば、ニボルマブまたはペンブロリズマブと同じエピトープに結合する。
【０１６６】
本発明方法で有用な抗ＰＤ−１  Ａｂは、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、ＦｄまたはＦｖフラグメント、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、ミニボディまたは単離ＣＤＲを含む抗原結合部分も含む(さらなる詳細についてHollinger and Hudson, 2005; Olafsen and Wu, 2010参照)。
【０１６７】
ある実施態様において、単離抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。ある好ましい実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。他の実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。ある他の実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域は、ヒンジ領域におけるセリン残基をＩｇＧ１アイソタイプＡｂの対応する位置で通常みられるプロリン残基に置き換える、Ｓ２２８Ｐ変異(ＥＵナンバリング系により番号付け、Kabat et al., 1991；あるいは、Ｓ２４１Ｐ、Kabatシステムにより番号付け、Kabat et al., 1987)を含む。ニボルマブに存在するこの変異は、野生型ＩｇＧ４  Ａｂと関連する活性化Ｆｃ受容体への低親和性を維持しながら、内因性ＩｇＧ４  ＡｂとのＦａｂアーム交換を阻止する(Wang et al., 2014)。さらに他の実施態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【０１６８】
本方法の他の実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分はｍＡｂまたはその抗原結合部分である。ヒト対象への投与のために、抗ＰＤ−１  Ａｂは好ましくはキメラＡｂまたは、より好ましくは、ヒト化またはヒトＡｂである。このようなキメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂは、例えば、米国特許８,００８,４４９に記載の当分野で周知の方法により製造および単離できる。
【０１６９】
抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ
抗ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１が同じシグナル伝達経路を標的とし、臨床治験で種々の癌に同等レベルの有効性を示すことが示されているため(例えば、Brahmer et al., 2012；ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)、抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ここに開示する治療方法における組み合わせで、抗ＰＤ−１  Ａｂと置き換え得る。
【０１７０】
本発明方法、組成物またはキットでの使用に適する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、高特異性および親和性でＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０への結合を遮断し、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制性効果を阻害する単離Ａｂである。ＰＤ−Ｌ１と高親和性で特異的に結合するｍＡｂは、米国特許７,９４３,７４３に開示されている。他の抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂは、例えば、米国特許８,２１７,１４９、８,７７９,１０８、９,１７５,０８２、９,６２４,２９８および９,９３８,３４５およびＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／１４５４９３に開示されている。ＰＤ−１  ＨｕＭＡｂに記載の抗ＰＤ−１  ＨｕＭＡｂは、次の特徴の１以上を示すことが示されている。(ａ)ＳＰＲ(BIACORE(登録商標))により決定して、約５０mM以下のＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；(ｂ)ＭＬＲアッセイでＴ細胞増殖、インターフェロン−γ産生およびＩＬ−２分泌を増加させる；(ｃ)Ａｂ応答を刺激する；(ｄ)ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を阻害する；および(ｅ)Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞に対するＴｒｅｇの抑制効果を反転させる。ここに開示する治療方法に使用する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ヒトＰＤ−Ｌ１と高親和性で特異的に結合し、前記特徴の少なくとも１つ、ある実施態様において少なくとも３つ、好ましくは全てを示す単離Ａｂ、好ましくはｍＡｂを含む。例えば、これらの方法で使用するのに適する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、(ａ)ＳＰＲ(BIACORE(登録商標))により決定して、約５０mM〜０.１mMのＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；(ｂ)ＭＬＲアッセイでＴ細胞増殖、インターフェロン−γ産生およびＩＬ−２分泌を増加させる；(ｃ)ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１およびＣＤ８０への結合を阻害する；および(ｄ)Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞に対するＴｒｅｇの抑制効果を反転させる。
【０１７１】
本方法において使用するのに適当な抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ＢＭＳ−９３６５５９(以前はＭＤＸ−１１０５；米国特許７,９４３,７４３で１２Ａ４と命名)である。他の適当な抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、アテゾリズマブ(テセントリク(登録商標)；以前はＲＧ７４４６およびＭＰＤＬ３２８０Ａとして知られた；米国特許８,２１７,１４９でＹＷ２４３.５５Ｓ７０と命名；Herbst et al., 2014もまた参照)、デュルバルマブ(イミフィンジ(登録商標)；以前はＭＥＤＩ−４７３６として知られた；米国特許８,７７９,１０８で２.１４Ｈ９ＯＰＴと命名)、アベルマブ(バベンシオ(登録商標)；以前はＭＳＢ−００１０７１８Ｃとして知られた；米国特許９,６２４,２９８でＡ０９−２４６−２と命名)、ＳＴＩ−Ａ１０１４(米国特許９,１７５,０８２でＨ６と命名)、ＣＸ−０７２(ＷＯ２０１６／１４９２０１参照)、ＫＮ０３５(Zhang et al., 2017参照)、ＬＹ３３０００５４(例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６参照)およびＣＫ−３０１(Gorelik et al., 2017参照)を含む。
【０１７２】
本発明方法、組成物またはキットでの使用に適する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ヒトＰＤ−Ｌ１と特異的に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合について、ここに開示する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの何れかの何れか、例えば、ＢＭＳ−９３６５５９(１２Ａ４；例えば、米国特許７,９４３,７４３；ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＳＴＩ−Ａ１０１４であり得る対照Ａｂと交差競合する、単離Ａｂも含む。ＡｂがヒトＰＤ−Ｌ１への結合について対照Ａｂと交差競合する能力は、このようなＡｂが対照ＡｂとＰＤ−Ｌ１の同じエピトープ領域に結合し、ＰＤ−Ｌ１の実質的に同じエピトープ領域へのその結合により、対照Ａｂに極めて類似する機能的性質を有することが予測される。ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、ここに記載する抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの何れか、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＳＴＩ−Ａ１０１４と同じエピトープに結合する。交差競合Ａｂは、当業者に周知のBIACORE(登録商標)分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準ＰＤ−Ｌ１結合アッセイにおいて、アテゾリズマブまたはアベルマブなどの対照Ａｂと交差競合する能力により、容易に同定され得る(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)。
【０１７３】
ある好ましい実施態様において、本方法で使用する単離抗ＰＤ−Ｌ１  ＡｂはｍＡｂである。他の実施態様において、特にヒト対象への投与のために、これらのＡｂは好ましくはキメラＡｂまたはより好ましくはヒト化またはヒトＡｂである。キメラ、ヒト化およびヒトＡｂは、例えば、米国特許７,９４３,７４３に記載のとおり、当分野で周知の方法により製造および単離できる。
【０１７４】
ある実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。ある他の実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。さらなる実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分のＩｇＧ４重鎖定常領域の配列は、Ｓ２２８Ｐ変異を含む。他の実施態様において、Ａｂは、ヒトカッパまたはラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。
【０１７５】
本発明の抗ＰＤ−Ｌ１  ＡｂはまたＰＤ−Ｌ１に結合し、受容体結合阻害および免疫系上方制御に、Ａｂ全体と類似する機能的性質を示す、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｄ、ＦｖおよびｓｃＦｖ、ｄｉ−ｓｃＦｖまたはｂｉ−ｓｃＦｖおよびｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメント、ナノボディ、二重特異性抗体、トリアボディ、テトラボディおよび単離ＣＤＲを含む上記Ａｂの抗原結合部分も含む。
【０１７６】
治療方法
単剤療法としての抗ＣＤ２７  Ａｂでの癌処置
実施例８に記載のとおり、抗ｍＣＤ２７  ｍＡｂ、８Ｈ５は、ＣＴ２６  結腸癌および線維肉腫腫瘍モデルで腫瘍増殖を阻害した(図１４および表７参照)。従って、本発明は、癌を有する対象を処置する方法であって、対象が処置されるように、対象に治療有効量のここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７７】
本発明は、対象における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、対象における腫瘍細胞増殖が阻害されるように、対象に治療有効量のここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物を投与することを含む、方法も提供する。
【０１７８】
他の抗癌剤と組み合わせた抗ＣＤ２７  Ａｂでの癌処置
実施例８に記載のとおり、抗ｍＣＤ２７  ｍＡｂ、８Ｈ５は、ＣＴ２６結腸癌、ＳＡ１Ｎ線維肉腫およびＥＧ７リンパ腫マウスモデルを含む、種々の癌タイプにおける、抗ｍＰＤ−１  ｍＡｂ活性を増強する(図１４および表７参照)。それ故に、抗ＣＤ２７  Ａｂは、抗ＰＤ−１  Ａｂなどのチェックポイント阻害剤と合わせたとき、腫瘍増殖阻害にはるかに有効である。従って、本発明は、癌を有する対象を処置する方法であって、対象が処置されるように、対象に治療有効量の：(ａ)ここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物；および(ｂ)癌処置のためのさらなる治療剤を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７９】
本発明は、対象における腫瘍細胞増殖を阻害する方法、対象における腫瘍細胞増殖が阻害されるように、対象に治療有効量の：(ａ)ここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂ、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物；および(ｂ)癌処置のためのさらなる治療剤を投与することを含む、方法も提供する。
【０１８０】
本方法の何れかのある好ましい実施態様において、対象はヒト患者である。
【０１８１】
ある実施態様において、さらなる治療剤は免疫系の阻害を低減するまたは刺激を増加する化合物である。例えば、さらなる治療剤は、小分子化合物、大環状ペプチド、融合タンパク質またはＡｂであり得る。さらなる実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ−３、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ−１、Ａ２ａＲ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ受容体、ＣＤ２４４またはＣＤ１６０に特異的に結合するアンタゴニストＡｂである。他の実施態様において、さらなる治療剤は、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＣＤ２７、ＧＩＴＲまたはＨＶＥＭに特異的に結合するアゴニストＡｂである。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を妨害し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分は、キメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−１への結合についてニボルマブと交差競合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分であり、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合についてＢＭＳ−９３６５５９と命名されたＡｂ(ＷＯ２０１３／１７３２２３)と交差競合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアンタゴニストＡｂまたはその抗原結合部分であり、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブまたはＢＭＳ−９３６５５９と命名されたＡｂ(ＷＯ２０１３／１７３２２３)である。
【０１８２】
本発明方法による処置に適する癌
癌細胞攻撃および破壊のために事実上無限の柔軟性を有する免疫系の利用に基づく腫瘍免疫療法は、極めて広範な癌の処置に適用可能である(例えば、Yao et al., 2013; Callahan et al., 2016; Pianko et al., 2017; Farkona et al., 2016; Kamta et al., 2017参照)。
【０１８３】
ある実施態様において、開示する治療方法を、固形腫瘍である癌の処置に使用し得る。
【０１８４】
ある実施態様において、固形腫瘍は、結腸癌または線維肉腫である。ある実施態様において、固形腫瘍は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、乳癌、食道癌、胃癌、消化器癌、小腸癌、肝臓癌、肝細胞癌(ＨＣＣ)、肝細胞癌、胆嚢および胆管癌、膵臓癌(ＰＡＣ)、膵管腺癌(ＰＤＡＣ)、腎臓癌、腎細胞癌(ＲＣＣ)、膀胱癌、尿道癌、輸尿管癌、結腸直腸癌(ＣＲＣ)、結腸癌、肛門部癌、子宮内膜癌、前立腺癌、神経芽腫、神経膠腫、神経膠芽腫、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、皮膚癌、メルケル細胞癌、基底細胞癌、骨癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮内膜癌腫、卵管癌腫、卵巣癌、子宮頸癌腫、膣癌腫、外陰癌腫、精巣癌、内分泌系癌、胸腺腫瘍、胸腺腫、甲状腺癌、口腔癌、口内癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、陰茎癌、腎盂癌腫、中枢神経系(ＣＮＳ)新生物、原発ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、神経芽腫、下垂体腺腫、類表皮癌、小児固形腫瘍、小児肉腫、横紋筋肉腫、原発不明癌、環境誘発癌、ウイルス関連癌、ＡＩＤＳ関連癌、ウイルス起源の癌、進行型癌、切除不能癌、転移癌、難治性癌、再発性癌および前記固形腫瘍の何れかの組み合わせからなる群から選択される癌である。
【０１８５】
ある実施態様において、固形腫瘍は、小細胞肺癌(ＳＣＬＣ)、扁平上皮非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、非扁平上皮ＮＳＣＬＣおよびトリプルネガティブ乳癌(ＴＮＢＣ)から選択される癌である。
【０１８６】
本発明の抗ＣＤ２７  Ａｂは、化学療法および／または放射線療法が重要な処置モダリティである疾患の早期相においても有効であり得るが、さらに持続可能な抗腫瘍免疫を助長する必要がある。ある実施態様において、固形腫瘍は、食道癌、胃癌、直腸癌、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)および頭頸部扁平上皮細胞癌(ＳＣＣＨＮ)から選択される癌である。
【０１８７】
ある他の実施態様において、固形腫瘍は、黒色腫、腎臓癌、ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、胃癌、膀胱癌および神経膠芽腫から選択される。
【０１８８】
ある実施態様において、本発明の治療方法は、血液系悪性腫瘍である癌または腫瘍細胞が血液系悪性腫瘍の細胞である癌の処置に使用し得る。血液系腫瘍は、全てのタイプの白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む、２つの主要な血液細胞系譜、すなわち、骨髄細胞株(顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび肥満細胞を産生する)またはリンパ系細胞株(Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する)の何れか由来の液性腫瘍を含む。本治療方法を使用して処置し得る血液系腫瘍は、例えば、急性リンパ芽球性白血病(ＡＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症(ＭＧＵＳ)、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液系腫瘍および該血液系腫瘍の何れかの組み合わせから選択される癌を含む。
【０１８９】
他の実施態様において、血液系悪性腫瘍は、急性、慢性、リンパ芽球性および／または骨髄性白血病、例えばＡＬＬ、ＡＭＬ、ＣＬＬおよびＣＭＬ；リンパ腫、例えばＨＬ、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫(ＤＬＢＣＬ)、濾胞性リンパ腫(ＦＬ)、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)／小リンパ球性リンパ腫(ＳＬＬ)、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫(粘膜関連リンパ系組織(ＭＡＬＴ)リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫および脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫)、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫(ＬＰＬ；ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症(ＷＭ)としても知られる)、ヘアリー細胞リンパ腫および一次中枢神経系(ＣＮＳ)リンパ腫を含む約８５％がＢ細胞リンパ腫であるＮＨＬ、  前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病を含むＴ細胞リンパ腫であるＮＨＬ、Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病(Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ)、末梢Ｔ細胞リンパ腫、例えば皮膚Ｔ細胞リンパ腫(ＣＴＬＣ、すなわち、菌状息肉症、セザリー症候群およびその他)、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫鼻腔タイプ、腸疾患関連腸Ｔ細胞リンパ腫(ＥＡＴＬ)、未分化大細胞リンパ腫(ＡＬＣＬ)および不特定末梢Ｔ細胞リンパ腫、急性骨髄リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸Ｔ細胞リンパ腫、原発縦隔Ｂ細胞リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真正組織球性リンパ腫、原発浸出リンパ腫、汎発性組織球性リンパ腫(ＤＨＬ)、免疫芽球性大細胞リンパ腫および前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫；骨髄腫、例えば多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫(低悪性度骨髄腫とも称する)、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症(ＭＧＵＳ)、孤立性形質細胞腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌型骨髄腫およびアミロイド症；および該血液系腫瘍の何れかの組み合わせから選択される癌である。本方法は、進行性、転移性、難治性および／または再発性血液系腫瘍の処置にも適用可能である。
【０１９０】
組み合わせ治療に関して、抗ＰＤ−１  Ａｂ、ニボルマブが多くのタイプの癌の処置に有効であることが示されており(例えば、Brahmer et al., 2015; Guo et al., 2017; Pianko et al., 2017；ＷＯ２０１３／１７３２２３参照)、現在複数の固形および血液癌で臨床治験が行われている。ニボルマブは、進行型黒色腫、進行型非小細胞肺癌、転移腎細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、頭頸部進行型扁平上皮細胞癌、尿路上皮癌、ＭＳＩ−ＨまたはｄＭＭＲ転移結腸直腸癌および肝細胞癌および小細胞肺癌(Drugs.com - Opdivo Approval History: https://www.drugs.com/history/opdivo.html)の処置に承認されており、多くの他の癌で臨床治験中である。同様に、ペンブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標))およびセミプリマブ(LIBTAYO(登録商標))などの他の抗ＰＤ−１薬物ならびにアテゾリズマブ(テセントリク(登録商標))、デュルバルマブ(イミフィンジ(登録商標))およびアベルマブ(バベンシオ(登録商標))などの抗ＰＤ−Ｌ１薬物は、種々の適応症で承認を獲得している。従って、多種多様な癌が、ここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの組み合わせを使用して、処置可能である。この治療剤組み合わせについて示されている高度の有効性は、充足されていない重要な医療ニーズに悩まされている癌に焦点を当てることを可能とする。
【０１９１】
抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの医学的用途
上記のとおり、本発明は、癌を有する対象を処置する方法において使用するための、単離抗ＣＤ２７  Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分を提供する。本発明は、さらに癌を有する対象を処置する方法において組み合わせて使用するための、単離抗ＣＤ２７  Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分および単離抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ、好ましくはｍＡｂまたはその抗原結合部分などのチェックポイント阻害剤を提供する。抗ＣＤ２７  Ａｂを、単剤療法としてまたは抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂなどのチェックポイント阻害剤と組み合わせで、ここに開示する全範囲の癌の処置に使用し得る。
【０１９２】
本発明のある態様は、癌を有する対象の処置用医薬の製造のための、本発明の単離抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分を含む。抗ＣＤ２７  Ａｂは、癌患者の処置用医薬の製造のために、単独でまたは単離抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分などのチェックポイント阻害剤との組み合わせで使用し得る。医薬の製造のための抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂのすべての使用は、ここに開示する全範囲の癌に、広く適用可能である。
【０１９３】
本発明はまた、ここに記載するこの治療剤組み合わせを用いる処置方法の実施態様全てに対応する癌の処置方法に使用するための、単離抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分などのチェックポイント阻害剤と組み合わせた抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分も提供する。
【０１９４】
医薬組成物および投与レジメン
ここに開示する治療方法の何れかに使用するＡｂは、組成物、例えば、Ａｂおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に含まれ得る。ここで使用する「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、Ａｂを含む組成物の担体は、静脈内(IV)、筋肉内、皮下(ＳＣ)、非経腸、脊髄または上皮投与(例えば、注射または点滴による)に適する。
【０１９５】
ＳＣ注射のための選択肢は、皮下送達できる生物学的製剤および薬物の体積に関するこれまでの制約を細胞外マトリクスによって取りを除く、Ａｂと組み換えヒトヒアルロニダーゼ酵素(ｒＨｕＰＨ２０)の共製剤を含むHalozyme TherapeuticsのENHANZE(登録商標)薬物送達技術を含む(米国特許７,７６７,４２９)。組み合わせ治療で使用する２種のＡｂを、ＳＣ投与用の一組成物に共製剤することは可能であり得る。
【０１９６】
本発明の医薬組成物は、１以上の薬学的に許容される塩、抗酸化剤、水性および非水性担体および／またはアジュバント、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含み得る。
【０１９７】
投与レジメンは、最適な所望の応答、例えば、最大治療応答および／または最小有害作用を提供するように調整される。組み合わせ使用に含まれる抗ＣＤ２７、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分の投与のために、投与量は、約０.０１〜約２０mg／kg、好ましくは約０.１〜約１０mg／kg対象体重の範囲であり得る。例えば、投与量は、約０.１mg／kg、０.２mg／kg、０.３mg／kg、０.４mg／kg、０.５mg／kg、０.６mg／kg、０.７mg／kg、０.８mg／kg、０.９mg／kg、１mg／kg、２mg／kg、３mg／kg、５mg／kgまたは１０mg／kg体重であり得る。あるいは、体重に基づく用量の代わりに、固定または一定用量、例えば、約５０〜約２０００mgのＡｂまたはその抗原結合部分が投与され得る。例えば、約５０mg、１００mg、２００mg、４００mg、５００mg、８００mg、１０００mg、１２００mg、１５００mg、１６００mgまたは２０００mgの固定用量の抗体が投与され得る。投与スケジュールは、一般にＡｂの典型的薬物動態性質に基づき、持続受容体占拠(ＲＯ)をもたらす暴露を達成するよう設計される。処置レジメの例は、ほぼ週１回、ほぼ２週に１回、ほぼ３週に１回、ほぼ４週に１回、ほぼ月１回、ほぼ３〜６か月毎に１回またはそれより長い間隔での投与を含む。ある好ましい実施態様において、抗ＣＤ２７、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはそれらの抗原結合部分は、対象にほぼ２週に１回投与される。他の好ましい実施態様において、Ａｂまたはその抗原結合部分は、ほぼ３週に１回投与される。他の好ましい実施態様において、Ａｂまたはその抗原結合部分は、ほぼ４週に１回投与される。投与量およびスケジューリングは、処置経過中に変わり得る。ある好ましい実施態様において、約２４０mgの固定または一定用量の抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、対象にほぼ２週に１回投与される。他の好ましい実施態様において、約４８０mgの固定または一定用量の抗ＰＤ−１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、対象にほぼ４週に１回投与される。ある実施態様において、抗ＰＤ−１  Ａｂはニボルマブである。
【０１９８】
組み合わせで使用するとき、Ａｂの一方または両方の治療量以下の投与量、例えば、典型的なまたは承認された単剤療法用量より低い抗ＣＤ２７、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分の投与量が使用され得る。例えば、承認投与量の一つである２週毎に３mg／kgより低いニボルマブの投与量、例えば、２週、３週または４週毎に１.０mg／kg以下は治療量以下の投与量と見られる。ニボルマブの０.３mg／kg〜１０mg／kg投与を受けた１５対象からのＲＯデータは、この用量範囲でＰＤ−１占拠が用量非依存的であると見られることを示す。全用量にわたり、平均占拠率は８５％(範囲、７０％〜９７％)であり、平均プラトー占拠は７２％(範囲、５９％〜８１％)であった(Brahmer et al., 2010)。それ故に、０.３mg／kg投与は、顕著な生物活性に至るに十分な暴露を可能とし得る。
【０１９９】
マウス腫瘍モデルで見られる相乗的相互作用(実施例８)は、癌患者に治療量以下の投与量で抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分の何れかを投与することを可能とし得る。本発明組み合わせ治療法のある実施態様において、抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分は、治療量以下の用量で癌患者に投与される。他の実施態様において、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は、治療量以下の用量で患者に投与される。さらなる実施態様において、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分は、各々の治療量以下の用量で患者に投与される。
【０２００】
Ａｂの一方または両方の治療量以下の用量での投与は、単剤療法における個々のＡｂの高用量の使用と比較して、有害事象を低減し得る。それ故に、本発明の組み合わせ治療法の成功は、これらＡｂの単剤療法と比較した、これらＡｂの組み合わせの有効性改善だけでなく、単剤療法用量に比して組み合わせで低投与量で薬物を使用することによる安全性向上、すなわち、有害事象発生低減によっても示され得る。
【０２０１】
ここに開示する方法の何れかの実施態様において、抗ＣＤ２７、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂは、静脈内(IV)投与または皮下(ＳＣ)注射用に製剤される。ある実施態様において、抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分および抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその抗原結合部分は対象に逐次的に投与される。「逐次」投与は、抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの一方が他方の前に投与されることを意味する。何れのＡｂを先に投与してもよい；すなわち、ある実施態様において、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂが抗ＣＤ２７  Ａｂの前に投与される、一方他の実施態様において、抗ＣＤ２７  Ａｂが抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの前に投与される。ある実施態様において、各ＡｂはIV点滴、例えば、約３０分間または約６０分間にわたる点滴で投与される。他の実施態様において、少なくとも一つのＡｂはＳＣ注射により投与される。
【０２０２】
逐次的IV投与のある実施態様において、患者に好都合であるように、抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその部分を、それぞれ３０分以内に投与する。一般に、抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂ両者がIV投与で同日に投与されるとき、各点滴のために別々の点滴バッグおよびフィルターが使用される。最初のＡｂの点滴の直ぐ後にＡｂをラインから浄化するために食塩水でフラッシュし、その後二番目のＡｂの点滴が開始される。他の実施態様において、２種のＡｂが互いに１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間または４８時間以内に投与される。
【０２０３】
少なくとも一つのＡｂのＳＣによる投与は、医療従事者の投与に必要な時間を減らし、薬物投与の時間を短縮する。例えば、ＳＣ注射の使用は、一般に約３０〜６０分であるIV投与に必要な時間を、約５分まで短縮する。逐次的ＳＣ投与のある実施態様において、抗ＣＤ２７  Ａｂおよび抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂまたはその部分を、互いに１０分以内に投与する。
【０２０４】
チェックポイント阻害剤Ａｂが、一部免疫系の記憶要素により極めて持続性の応答を生じることが示されているため(例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３; Lipson et al., 2013; Wolchok et al., 2013参照)、投与抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの活性は、数週間、数か月または数年すら継続し得る。ある実施態様において、逐次投与を含む本組み合わせ治療方法は、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂで先に処置されている患者への抗ＣＤ２７  Ａｂ投与を含む。さらなる実施態様において、抗ＣＤ２７  Ａｂは、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂで先に処置され、進行している患者に投与される。他の実施態様において、逐次投与を含む本組み合わせ治療方法は、抗ＣＤ２７  Ａｂで先に処置されている患者、所望により抗ＣＤ２７  Ａｂでの処置後癌が進行している患者への抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂの投与を含む。
【０２０５】
ある他の実施態様において、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  Ａｂおよび抗ＣＤ２７  Ａｂは、同時投与用の薬学的に許容される製剤における一組成物として混合されてまたは各Ａｂが薬学的に許容される組成物と製剤されている別々の組成物として同時に、同時投与される。
【０２０６】
キット
また本発明の範囲内にあるのは、治療用途のための抗ＣＤ２７  Ａｂを含むキットである。キットは、一般にキットの内容物の意図する使用および使用の指示を含むラベルを含む。用語ラベルは、キット上にまたはキットと共に提供されるまたは他の方法でキットに付随する、あらゆる文書または記録媒体を含む。従って、本発明は、癌を有する対象を処置するためのキットであって、(ａ)約０.１〜約２０mg／kg体重の投与量の範囲のここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物の１回以上；および(ｂ)ここに開示する治療方法の何れかにおける該ｍＡｂの使用指示を含む、キットを提供する。本発明は、さらに癌を有する対象を処置するためのキットであって、(ａ)約０.１〜約２０mg／kg体重の投与量の範囲のここに開示する抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかまたは該抗ＣＤ２７  Ａｂまたはその抗原結合部分、イムノコンジュゲートまたは二特異的分子の何れかを含む医薬組成物の１以上；(ｂ)約５０〜約２０００mgの投与量の範囲のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するＡｂまたはその抗原結合部分の何れかの１回以上；および(ｃ)ここに開示する組み合わせ治療方法の何れかにおける抗ＣＤ２７  ｍＡｂおよびチェックポイント阻害剤、例えば、抗ＰＤ−１／抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの使用指示を含む、キットを提供する。
【０２０７】
ある実施態様において、これらＡｂは、単位投与量形態で共包装される。ヒト患者処置のためのある好ましい実施態様において、キットは、ここに開示する抗ヒトＰＤ−１  Ａｂ、例えば、ニボルマブまたはペンブロリズマブを含む。
【０２０８】
本発明を、さらなる限定と解釈してはならない次の実施例により、さらに説明する。本明細書をとおして引用する全ての引用文献の内容を、明示的に引用により本明細書に包含させる。
【実施例】
【０２０９】
実施例１
ＣＤ２７に対するｍＡｂ産生
ヒト抗ＣＤ２７  ｍＡｂを、ヒトＡｂ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスをヒトＣＤ２７(ｈＣＤ２７)抗原で免疫化することにより産生し、マウスでＣＤ２７に特異的なヒトＩｇのレパートリーを形成させた。ラット抗マウスＣＤ２７  ｍＡｂを、ラットをマウスＣＤ２７(ｍＣＤ２７)抗原で免疫化して、産生した。
【０２１０】
ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスの免疫化
ｈＣＤ２７に対するＨｕＭＡｂを、ヒトＩｇトランスジェニックマウス(ＫＭマウス、系統番号３２５４３２)を、ｈＦｃおよびヒスチジンタグタンパク質含有組み換えｈＣＤ２７(ｒｈＣＤ２７−ｈＦｃ−ｈｉｓ)ならびにｈＣＤ２７で安定的にトランスフェクトしたＣＨＯ細胞で交互に免疫化して産生した。
【０２１１】
ＣＤ２７に対するｍＡｂを産生するハイブリドーマの産生
マウス脾細胞を、免疫化後陽性抗ＣＤ２７  ＩｇＧ力価を示した上記免疫化マウスから単離した。ハイブリドーマを、脾細胞とマウス骨髄腫ＳＰ２／０融合パートナーの融合により産生した。
【０２１２】
ラットの免疫化
ｍＣＤ２７に対するサロゲートｍＡｂを、ラットをＦｃタグタンパク質を含む組み換えマウスＣＤ２７(ｒｍＣＤ２７−Ｆｃ)で免疫化することにより産生した。
【０２１３】
実施例２
ヒト抗ヒトＣＤ２７  ｍＡｂのスクリーニングおよび選択
ヒトＣＤ２７に選択的に結合するｍＡｂのスクリーニング
ｈＣＤ２７に結合するＨｕＭＡｂを産生するために、ヒトＩｇトランスジェニックマウスを、実施例１に記載のとおりｈＣＤ２７抗原で免疫化した。
ハイブリドーマ上清を、酵素結合免疫吸着アッセイ(ＥＬＩＳＡ)でまずｈＣＤ２７への結合についてスクリーニングした。次いで、抗原特異性をｈＣＤ２７＋  Ｔ細胞への結合により確認した。続いて、Ａｂをフローサイトメトリーおよび表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)でＣＤ２７とＣＤ７０の相互作用を遮断する能力について試験した。
【０２１４】
アゴニスト抗ＣＤ２７ｍＡｂの機能的スクリーニング
抗ＣＤ２７  Ａｂのアゴニスト活性を、インビトロでＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２ａアッセイを使用して決定した。このアッセイにおいて、抗ＣＤ２７アゴニストＡｂは、ＣＤ３２ａへの結合により架橋し、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞のｓｖＣＤ３介在活性化を増強させた。
リードｍＡｂ、非リガンドブロッカークローン１６Ｄ９を、ｈ−およびｃＣＤ２７へのその優れた結合親和性および活性化Ｔ細胞のその優れたアゴニズムにより選択した。リードｍＡｂは、ヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞と共培養したＩＬ−２−活性化ヒトＮＫ細胞を使用して、比較的中程度のレベルのＡＤＣＣ活性を有することが決定された。
【０２１５】
抗ｈＣＤ２７  ＨｕＭＡｂの最適化
クローン１６Ｄ９を、その後、軽鎖ＣＤＲにおけるＶＨ−Ａ２８ＴおよびＶＫ−Ｉ２０Ｔ−Ｉ２２Ｔ−Ｄ４３Ａフレームワーク復帰とＳ９３Ｎ変異に付した。修飾クローンは、ヒトＩｇＧ１として操作され、ＢＭＳ−９８６２１５と名付けられた。ＢＭＳ−９８６２１５は、ＣＤ２７アゴニズムに必要なＦｃ架橋をさせるために、ｈＩｇＧ１として操作された。
【０２１６】
完全ｈＣＤ２７アミノ酸配列を表１に示し、これはGENBANK(登録商標)Accession No. AAH12160に見られ得る。表１で下線を引いたアミノ酸１〜２０は予測シグナルペプチドを表す。例えば、CBS Prediction SignalP 4.1 (http://www.cbs.dtu.dk)参照。
【表１】
2021520201.tif 000002
【０２１７】
Kabat方法を使用して定義したＨｕＭＡｂ  ＢＭＳ−９８６２１５の６つのＣＤＲドメインのアミノ酸配列を表２に示す。
ＨｕＭＡｂ  ＢＭＳ−９８６２１５のＶＨ、ＶＬ、ＣＨ、ＣＬ、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を表３に示す。
【表２】
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【０２１８】
【表３】
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【０２１９】
ＡｂをＣＨＯ細胞で組み換え方法により産生し、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーで精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｎ末端シーケンシングおよびマススペクトロメトリー分析によりＡｂの特性を確認した。Ａｂの純度は、サイズ排除クロマトグラフィー(ＳＥＣ)で試験して＞９８％であった。ＢＭＳ−９８６２１５のＣＤＲ領域で実施した特異的凝集傾向(ＳＡＰ)モデリング試験は、極めて低凝集傾向を示す、低ＳＡＰスコアを示した。単一Ｎ−グリコシル化部位は重鎖のＮ２９７で確認され(表３で下線)、ＣＨＯ細胞でのヒトＩｇＧ１分子発現について予測されるとおり、Ｇ０Ｆ、Ｇ１ＦおよびＧ２Ｆ構造を含むグリカンプロファイルを示した。ＢＭＳ−９８６２１５は、高い熱および化学安定性を示した。７８℃でのこの分子の熱的可逆性は、典型的ヒトＩｇＧ１分子で一般にみられるより高い４１％である。ＢＭＳ−９８６２１５の生物物理学的特徴は表４に要約される。
【０２２０】
実施例３
ＢＭＳ−９８６２１５の結合動態、結合親和性、交差反応性、組織特異性および安定性による特徴づけ
ＢＭＳ−９８６２１５はヒトおよびカニクイザルＣＤ２７に特異的に結合する
表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ)分析は、ＢＭＳ−９８６２１５のｈＣＤ２７への特異的結合を確認した。ＢＭＳ−９８６２１５のＦａｂフラグメントおよびｈＣＤ２７−マウスＦｃまたはｈＣＤ２７−Ｈｉｓタグタンパク質を使用して測定した、ＡｂのｈＣＤ２７への見かけの親和性(ＫＤ)は、ＳＰＲで約４０nMと決定された。測定値は３７℃で４１〜４４nMおよび２５℃で１３〜１６nMであった。２５℃から３７℃での親和性の３倍喪失は、結合速度が不変のままであるのに対し、解離速度増加によるものであった。動態分析は、１：１フィット結合モデルを使用した。ＫＤは、スキャッチャード分析で０.０４５nMと決定された。
ＢＭＳ−９８６２１５のヒトＴ細胞への結合のＥＣ５０値は、フローサイトメトリーにより０.０４４nMと決定された(範囲０.０２２〜０.０７６nM、０.０４４±０.０１１nM、ｎ＝５)。ＢＭＳ−９８６２１５のカニクイザルＴ細胞への結合のＥＣ５０値はフローサイトメトリーで０.１３１nMと決定され(範囲０.０３５６９〜０.２６５７、０.１３１±０.０６９nM、ｎ＝３)、ＢＭＳ−９８６２１５がｃＣＤ２７と交差反応することが示された。
【０２２１】
【表４】
2021520201.tif 000005
【０２２２】
フローサイトメトリー分析も、１Ｆ５、ヒト抗ｈＣＤ２７対照ｍＡｂと比較して、ＢＭＳ−９８６２１５がｈ−およびｃＣＤ２７に高い親和性を有することを示した。それぞれ図１Ａおよび１Ｂ参照。ＨｕＭＡｂ  １Ｆ５の重鎖および軽鎖アミノ酸配列を表５に示す。図１ＡにおけるＢＭＳ−９８６２１５および１Ｆ５のヒトＴ細胞への結合ＥＣ５０値は、それぞれ０.０２２１０nMおよび１.０８８nMであった。図１ＢにおけるＢＭＳ−９８６２１５および１Ｆ５のカニクイザルＴ細胞への結合により決定したＥＣ５０値は、それぞれ０.０９２nMおよび１.８００nMであった。
【表５】
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【０２２３】
ＢＭＳ−９８６２１５は非リガンド遮断ｍＡｂである
ＢＭＳ−９８６２１５によるＣＤ２７へのＣＤ７０結合阻害またはその逆は、ＳＰＲまたはフローサイトメトリーにより検出されず、リガンド非遮断ＡｂであるこのｍＡｂと一致した。図２Ｂおよび２Ｄ参照。例えば、フローサイトメトリー分析を、１０μg／ml  可溶性ヒトＣＤ７０、ＣＤ２７のリガンドで前処理し、続いてＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５およびヒトＩｇＧ１(対照)Ａｂで処理したヒトＴ細胞を使用して実施した。Ａｂの結合の存在または非存在を、標識抗ヒトＩｇＧ  Ａｂを使用して検出した。ＢＭＳ−９８６２１５の結合が検出され、ＣＤ２７へのＣＤ７０結合がＢＭＳ−９８６２１５の結合を遮断しないことが示された。本アッセイを模式的に示す図２Ａおよび結果のグラフを示す図２Ｂ参照。リガンド遮断１Ｆ５Ａｂの結合は検出されなかった。同上。他のフローサイトメトリー分析を実施し、そこで、ヒトＴ細胞を１０μg／ml  可溶性ヒトＣＤ７０存在下ＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５およびヒトＩｇＧ１(対照)Ａｂに曝した。ＣＤ７０を標識抗ＣＤ７０  Ａｂにより検出した。ＣＤ７０はＢＭＳ−９８６２１５の濃度を上げても検出可能なままであり、ＣＤ７０結合がＢＭＳ−９８６２１５により遮断されなかったことを示す。本アッセイを模式的に示す図２Ｃおよび結果のグラフを示す図２Ｄ参照。ＣＤ７０の結合は、リガンド遮断Ａｂ  １Ｆ５の濃度が増加するにつれ、減少した。Ｉｄ。
【０２２４】
組織特異性
予備的組織交差反応性評価において、フルオレセインイソチオシアネート(ＦＩＴＣ)コンジュゲートＢＭＳ−９８６２１５(研究グレード)を、２２の正常ヒト組織(各１または２ドナー)の凍結切片に適用した。予想通り、特異的染色が胸腺、扁桃および脾臓の単核細胞(ＭＮＣ)サブセット、リンパ系富組織(結腸、小腸および胃)および稀に他の組織(甲状腺、肺、皮膚、子宮、前立腺、肝臓、腎臓、膵臓、副腎、下垂体、胎盤および精巣)で観察された(データは示していない)。一般に、陽性細胞は背景炎症性病変と相関する。扁桃、胸腺および小腸に最大数の陽性染色細胞があった。陽性染色リンパ球は、胸腺髄質および扁桃におけるＴ細胞富領域(毛包間領域)および脾臓(毛包周囲様／辺縁帯およびＰＡＬＳ)で高濃度であった。小腸で、陽性細胞は主に基底粘膜固有層および限局性リンパ系集合体／濾胞に分布した。大脳、小脳、心臓および末梢神経は陰性であった。
【０２２５】
実施例４
ＢＭＳ−９８６２１５エピトープマッピング
水素／重水素交換マススペクトロメトリー(ＨＤＸ−ＭＳ)およびタンパク質の高速光化学酸化(ＦＰＯＰ)方法を、ＢＭＳ−９８６２１５が結合するＣＤ２７の領域のプローブに利用した。ＣＤ２７／ＢＭＳ−９８６２１５のＨＤＸ−ＭＳ実験は６２％配列包括度を提供し、ＣＤ２７のＮ末端およびＣ末端領域を含んだ。ＦＰＯＰ測定は、ＣＤ２７の８１％配列包括度をもたらし、ＣＤ２７の中間領域を含んだ。ＣＤ２７の総配列包括度は、複合ＨＤＸ−ＭＳおよびＦＰＯＰデータセットで９８％であった。図３(Ａ)参照。図３(Ａ)に示す配列は、配列番号１のアミノ酸１〜２０のシグナルペプチド配列がない成熟ＣＤ２７タンパク質である。図３(Ａ)のアミノ酸１〜１７２は、配列番号１のアミノ酸２１〜１９２に対応する。
【０２２６】
ＨＤＸ−ＭＳ
エピトープマッピング実験前に、非重水素化実験を実施して、組み換え完全長ｈＣＤ２７−Ｈｉｓタグ(１０μM)およびＣＤ２７とＢＭＳ−９８６２１５のタンパク質複合体(１：１モル比)の共通ペプチドのリストを作成した。ＨＤＸ−ＭＳ実験で、５μLの各サンプル(ＣＤ２７またはＣＤ２７とＢＭＳ−９８６２１５)を２０μLのＤ２Ｏ緩衝液(１０mM  リン酸緩衝液、Ｄ２Ｏ、ｐＤ７.０)で希釈して、標識反応を開始させた。２０秒、１分、１０分および２４０分の種々の時間、反応させた。各標識反応時間の最後に、クエンチング緩衝液(１００mM  リン酸緩衝液と４Ｍ  ＧｄｎＣｌおよび０.４Ｍ  ＴＣＥＰ、ｐＨ２.５、１：１、ｖ／ｖ)を加えて反応停止させた。１μLのペプシン／プロテアーゼXIII(１mg／mLで１：１、ｖ／ｖ)を加え、タンパク質を氷上で３分間消化させた。消化溶液を、分析のためにWaters HDX-MS系(Waters Corporation, Milford, MA)に注入した。共通消化性ペプチドの重水素取り込みレベルを、ＢＭＳ−９８６２１５非存在下または存在下、モニターした。
ＣＤ２７におけるＢＭＳ−９８６２１５のＨＤＸ−ＭＳデータ分析は、ＢＭＳ−９８６２１５がＣＤ２７のＮ末端のTPAPKSCPERHYWAQGKLCCQ(配列番号１５、成熟タンパク質のアミノ酸１〜２１または配列番号１のアミノ酸２１〜４１に対応する)領域を含むエピトープに結合することを示す。
【０２２７】
ＦＰＯＰ
ＦＰＯＰ実験を、ＣＤ２７およびＣＤ２７／ＢＭＳ−９８６２１５のＦａｂ複合体(１：１モル比、７.５μM最終濃度)で実施した。ＫｒＦエキシマレーザーを使用して、Ｈ２Ｏ２光分解によりヒドロキシル基を作製し、励起波長を２４８nmに設定した。標識直前、各５μLのヒスチジンおよびＨ２Ｏ２を一定量のタンパク質に加えた。タンパク質溶液の最終体積は５０μLであり、ヒスチジンおよびＨ２Ｏ２の最終濃度はそれぞれ５００μMおよび１５mMであった。レーザーエネルギーを２８mJ／パルス(７.４Hz)に調節した。ＦＰＯＰおよび無レーザー対照実験両者をデュプリケートで実施した。各繰り返しを、１１μLのクエンチング溶液(８００nMのカタラーゼ四量体および２００mMのメチオニン)を含むマイクロ遠心チューブに集めた。サンプルを変性させ、還元し、アルキル化し、トリプシン消化させた。データ取得を、Thermo Q Exactive Plusマススペクトロメーター(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)と、Waters Acquity UPLC系(Waters Corporation)で実施した。ByonicTMサーチエンジン(Proten Metrics, San Carlos, CA)を使用して、シーケンシングカバレッジを得て、酸化部位を同定した。トリプシン性ペプチドの相対的酸化レベルを、各繰り返しで手動計算した。遊離および結合状態で相対的酸化に統計的有意差があるペプチドのみ(スチューデントのＴ検定に基づく、ｐ値＜０.０５)を、さらなる分析について考慮した。
ＦＰＯＰ実験において、４つのＣＤ２７ペプチドが酸化レベルで有意な差を示した：HYWAQGK(配列番号１６、成熟タンパク質のアミノ酸１１〜１７または配列番号１のアミノ酸３１〜３７に対応する)、LCCQMCEPGTFLVK(配列番号１７、成熟タンパク質のアミノ酸１８〜３１または配列番号１のアミノ酸３８〜５１に対応する)、DCDQHR(配列番号１８、成熟タンパク質のアミノ酸３２〜３７または配列番号１のアミノ酸５２〜５７に対応する)およびDCDQHR(配列番号１９、成熟タンパク質のアミノ酸８８〜９３または配列番号１のアミノ酸１０８〜１１３に対応する)。Ｆａｂへの結合によるＦＰＯＰ保護パーセンテージを(ＣＤ２７における相対的％ＦＰＯＰ差−Ｆａｂにおける相対的％ＦＰＯＰ差)／(ＣＤ２７における相対的％ＦＰＯＰ差)×１００として計算した。図３(Ｃ)は、これら４つのペプチドのＦＰＯＰ保護パーセンテージを示す。DCDQHRペプチドは最高ＦＰＯＰ保護パーセンテージ(７５％)を有することが示され、ＢＭＳ−９８６２１５Ｆａｂとの相互作用でＣＤ２７の結合エピトープを示す。
上記ＨＤＸ−ＭＳおよびＦＰＯＰ実験に基づき、ＢＭＳ−９８６２１５が結合するＣＤ２７エピトープは、配列番号１のアミノ酸２１〜４１および５２〜５７に対応する、２つの不連続結合領域、TPAPKSCPERHYWAQGKLCCQ(配列番号１５)およびDCDQHR(配列番号１８)を含むと考えられる。
【０２２８】
実施例５
ＢＭＳ−９８６２１５によるＣＤ２７アゴニズムは、Ｔ細胞活性化を増加させる
抗ＣＤ２７  ｍＡｂアゴニストは、活性のためにＦｃγＲ相互作用(すなわち、架橋)を必要とする。リガンド遮断ｍＡｂ(例えば１Ｆ５)存在下、ＦｃγＲ＋細胞なしでは、Ｔ細胞のＣＤ２７共刺激はない。図４(Ａ)参照。しかしながら、ＢＭＳ−９８６２１５ｍＡｂは非リガンド遮断ｍＡｂであり、生物学的アッセイを、その活性決定のために実施した。１Ｆ５などのリガンド遮断ｍＡｂと異なり、データは、ＢＭＳ−９８６２１５は、ＣＤ７０存在下、ＦｃγＲ結合なしでＴ細胞を共刺激可能であったことを示す。図４(Ｂ)参照。
【０２２９】
ＢＭＳ−９８６２１５はＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を増強する
初代Ｔ細胞シグナル伝達アッセイを、抗ＣＤ３  Ａｂおよび抗ＣＤ２８  Ａｂで刺激したナイーブで活性化前ヒトＴ細胞におけるＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達誘導に対するＢＭＳ−９８６２１５の効果を観察するために実施した。簡潔には、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８  Ａｂで２４時間刺激した。細胞を、１０,０００細胞／ウェルで３８４ウェルプレートに播種し、Ａｂ添加前２時間飢餓状態とした。次いで、細胞を、用量／タイムコースでクロスリンカーと組み合わせたＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)Ａｂで処理し、ＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を分析した。
ＢＭＳ−９８６２１５は、０.０２nM〜０.２３nMのＥＣ５０でＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫシグナル伝達を誘導することが観察された。例えば、図５(Ａ)〜(Ｃ)は、Ａｂ処理に由来するＮＦ−κＢシグナル強度を示し、１Ｆ５と比較して、ＢＭＳ−９８６２１５によりＮＦ−κＢが多く誘導された。
【０２３０】
ＢＭＳ−９８６２１５はＴ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌を増強する
ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２ａ細胞の共培養物を使用して、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌に対するＢＭＳ−９８６２１５の効果をアッセイした。簡潔には、健常ドナー血液サンプルからのヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞を、ＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２ａ細胞(抗ＣＤ３  ＯＫＴ３  ｍＡｂおよびｈＣＤ３２ａ−１３１Ｈｉｓ(ＦｃγＲIIａ)由来の一本鎖抗ＣＤ３  ｓｃＦｖＡｂを発現するＣＨＯ細胞)と共培養した。共培養物をＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)Ａｂで処理し、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌を分析した。
ＢＭＳ−９８６２１５はＴ細胞を共刺激することが観察され、０.００１nM〜０.０２８nMのＥＣ５０で増殖およびＩＦＮ−γ分泌増強をもたらした。ＢＭＳ−９８６２１５の平均ＥＣ５０値は、増殖およびＩＦＮ−γ分泌それぞれ０.００９nMおよび０.００７８nMであった。例えば、図６(Ａ)〜(Ｂ)は、一般に１Ｆ５と比較して、ＢＭＳ−９８６２１５による増殖およびＩＦＮ−γ分泌のはるかに大きな誘導を示す。図６(Ａ)でＴ細胞増殖と関連するＥＣ５０値は、ＢＭＳ−９８６２１５および１Ｆ５でそれぞれ０.００４５０３nMおよび０.０３５６６nMであった。図６(Ｂ)でＩＦＮ−γ分泌と関連するＥＣ５０値は、ＢＭＳ−９８６２１５および１Ｆ５でそれぞれ０.００６２３５nMおよび０.０４０１７nMであった。
ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ナイーブＴ細胞とＣＨＯ−ｓｖＣＤ３−ＣＤ３２ａ細胞の共培養物を使用したアッセイも実施した。共培養物をＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)Ａｂで処理し、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌を分析した。結果を図７に示し、ＢＭＳ−９８６２１５は、１Ｆ５よりはるかに高いレベルのＴ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌をもたらした。例えば、ＢＭＳ−９８６２１５は、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞の増殖およびＩＦＮ−γ産生を、それぞれ０.００５nMおよび０.０１５nMのＥＣ５０値でもたらし、１Ｆ５の対比するＥＣ５０値は、それぞれ０.０７３nMおよび０.０８９nMであった。
２ドナーからのＣＤ４＋ＣＤ２５−  Ｔ細胞を別々にＢ細胞と共培養し、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ(ＳＥＢ)で刺激し、ＢＭＳ−９８６２１５または抗キーホールリンペットヘモシアニンＡｂ、ｇ１Ｆ糖型(ＫＬＨ−ｇ１ｆ)で処理(各Ａｂ１０μg／mlで使用)したさらなるアッセイを実施した。結果を図８に示し、ＢＭＳ−９８６２１５は、１００ng／mlのＳＥＢを使用したときより２.５倍大きな平均ＩＦＮ−γ分泌の誘導をもたらした。
【０２３１】
ＢＭＳ−９８６２１５はＩＬ−２分泌を増強する
ＳＥＢで刺激したＴ細胞を、クロスリンカー存在下または非存在下、可溶性ＢＭＳ−９８６２１５の存在下にインターロイキン−２(ＩＬ−２)産生をアッセイした。３ドナー(ドナーＡ〜Ｃ)のバフィーコートから単離した新鮮ＰＢＭＣを、１００,０００細胞／ウェルで組織培養プレートに播種した。ＳＥＢを８０ng／mLで加えた。細胞を可溶性抗ヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１)、抗ヒトＯＸ４０(ＯＸ４０.２１)、対照抗ｈＣＤ２７(１Ｆ５−ＩｇＧ１)またはＢＭＳ−９８６２１５Ａｂで処理した。Ａｂを、クロスリンカーとして２.５μg／mL  抗ヒトＦｃγ  Ａｂ(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA)の存在下または非存在下、３倍でタイトレーションした。ＳＥＢまたはＡｂ処理をしないＰＢＭＣ(細胞のみ)およびＳＥＢで処理するがＡｂではないないＰＢＭＣ(ＳＥＢのみ)を対照として使用した。
結果を図９に示す。ドナーＡおよびＢからのＰＭＢＣを、可溶性Ａｂ架橋無し(図９(Ａ)および(Ｃ))または有り(図９(Ｂ)および(Ｄ))で処理した。ドナーＣからのＰＭＢＣ(図９(Ｅ))は、可溶性Ａｂの架橋でのみ処理した。結果は、ＩＬ−２分泌が、可溶性架橋ＢＭＳ−９８６２１５存在下、ＳＥＢ刺激ヒトＰＢＭＣから、ｈＩｇＧ１と比較して、約５０％を超えて増加されることを示す。
ＰＤ−１遮断と組み合わせたときのＩＬ−２産生に対するＢＭＳ−９８６２１５の効果を決定するためのさらなるアッセイを実施した。簡潔には、２ドナー(ドナーＡおよびＢ)のバフィーコートから単離した新鮮ＰＢＭＣを、１００,０００細胞／ウェルで組織培養プレートに播種した。ＳＥＢを８０ng／mLで加えた。細胞を５μg／mlの可溶性抗ヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１)、１Ｆ５またはＢＭＳ−９８６２１５Ａｂ単独で処理するかまたはＰＤ−１遮断のための０.１μg／mlのニボルマブまたはＣＴＬＡ−４遮断のためのイピリムマブとタンデムでタイトレーションした。ＳＥＢまたはＡｂ処理をしないＰＢＭＣ(細胞のみ)を対照として使用した。
結果を図１０に示す。ＢＭＳ−９８６２１５によるＩＬ−２放出は、ＰＤ−１遮断と併用したとき、ＰＤ−１遮断をしない場合と比較して、２倍増加した。
【０２３２】
ＢＭＳ−９８６２１５は、制御性Ｔ細胞によるレスポンダーＴ細胞の抑制を低減する
制御性Ｔ細胞またはＴｒｅｇとして知られるフォークヘッドボックスＰ３(Ｆｏｘｐ３)＋  ＣＤ４＋  Ｔ細胞は免疫応答を抑制し、腫瘍が免疫監視を回避することを可能とする。一般に、ＴｒｅｇはＣＤ４５ＲＡまたはＣＤ４５ＲＯで発現される。ＴｒｅｇはレスポンダーＴ細胞(Ｔｒｅｓｐ)を抑制し得る。
Ｔｒｅｇ介在抑制に対するＢＭＳ−９８６２１５の効果を調べた。
最初のアッセイにおいて、ＣＤ４５ＲＡ＋  Ｔｒｅｇを、５０,０００細胞／ウェルで組織培養プレートに播種し、５０,０００標識Ｔｒｅｓｐ／ウェルを加えて１：２希釈した。次に、ウェルあたり樹状細胞(ＭＤＤＣ)由来の５,０００の単球を０.３μg／mL  可溶性ムロモナブ−ＣＤ３(ＯＫＴ３)、抗ヒトＣＤ３  ｍＡｂと共に加えた。次いで、可溶性ＢＭＳ−９８６２１５または対照ＩｇＧ１  Ａｂを１０μg／mLで加えた。細胞を９６時間、３７℃でインキュベートし、Ｔｒｅｇ：Ｔｒｅｓｐ比およびＣＤ４＋  Ｔｒｅｓｐのパーセンテージ増殖を、蛍光活性化セルソーティング(ＦＡＣＳ)により決定した。結果を図１１(Ａ)に示す。ＭＤＤＣおよび可溶性ＯＫＴ３存在下の共培養ＣＤ４＋  ＴｒｅｓｐのＴｒｅｇ介在抑制は、対照ＩｇＧ１  Ａｂと比較して、２つの実験でＢＭＳ−９８６２１５により７０％を超えて大きく反転した。
第二のアッセイにおいて、９６ウェルＵ底プレートを３μg／mL  ＯＫＴ３および１０μg／mLのＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５または抗ＫＬＨ  Ａｂで被覆した。次に、ウェルあたり２０,０００  Ｔｒｅｓｐを加えた。さらなるＩＬ−２は加えなかった。次いで、１μg／mLの可溶性抗ＣＤ２８  Ａｂを加えた。細胞を７日間培養し、ＴｒｅｓｐおよびＦｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇ細胞数を決定した。結果を図１１(Ｂ)および(Ｃ)に示す。ＢＭＳ−９８６２１５は、Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇより大きなＴｒｅｓｐ拡大をもたらした。
【０２３３】
ＢＭＳ−９８６２１５は、中程度のＡＤＣＣ活性と低レベルのＦｃエフェクター機能を誘導する
ＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはＩｇＧ１(対照)Ａｂを、１０：１比のエフェクター対標的(ｎ＝８)でのエフェクター細胞としての初代ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞および標的細胞としての活性化Ｔ細胞またはＲａｍｏｓ細胞の共培養に加えた。結果をＴ細胞にについて図１２示す。ＢＭＳ−９８６２１５は、ＡＤＣＣ活性の中程度の誘導を示す、Ｔ細胞またはＲａｍｏｓ細胞の２０〜４４％溶解を誘導した。
Ｆｃエフェクター機能分析は、低レベルのＡＤＣＰ、ＣＤＣおよびＣ１ｑ結合活性を示した(データは示していない)。
抗ＰＤ−１  ｍＡｂと併用したまたは併用しないＢＭＳ−９８６２１５は、８健常ヒトドナーからの新鮮全血サンプルの自発的サイトカイン分泌に介在しなかった(データは示していない)。
【０２３４】
ヒトＴ細胞に対するＢＭＳ−９８６２１５のアゴニスト活性はＣＤ７０により増強される
ＣＤ４＋  Ｔ細胞とＣＨＯ−ＯＫＴ３細胞の共培養物を使用して、ＦｃγＲ非存在下、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌に対するＢＭＳ−９８６２１５の効果をアッセイした。簡潔には、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞をＣＨＯ−ＯＫＴ３細胞(抗ＣＤ３  ＯＫＴ３  ｍＡｂ由来一本鎖抗ＣＤ３  ｓｃＦｖＡｂを発現するＣＨＯ細胞)と共培養した。共培養物をＢＭＳ−９８６２１５、１Ｆ５またはｈＩｇＧ１(対照)Ａｂで、１０μg／ml  可溶性ヒトＣＤ７０(ｓｈＣＤ７０)と併用してまたは併用せずに処理して、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮ−γ分泌を分析した。図１３(Ａ)においてアッセイを模式的に示す。
結果を図１３に記載し、これは、１Ｆ５ではなく、ＢＭＳ−９８６２１５が、ＦｃγＲ非存在下かつｓｈＣＤ７０と併用せずに、Ｔ細胞増殖(Ｂ)およびＩＦＮ−γ分泌(Ｃ)の増強により、弱アゴニスト活性を示したことを示す。１Ｆ５ではなく、ＢＭＳ−９８６２１５が、可溶性ＣＤ７０タンパク質によるＴ細胞増殖(Ｄ)およびＩＦＮ−γ分泌(Ｅ)の誘導により測定して、ヒトＴ細胞活性化を増強した。
【０２３５】
実施例６
前臨床薬物動態、受容体占拠予測および毒性検討
カニクイザルサルにおけるＢＭＳ−９８６２１５の薬物動態および毒性
表６は、カニクイザルサルに０.２mg／kgおよび４mg／kgを単回静脈内投与後のＢＭＳ−９８６２１５の薬物動態(ＰＫ)パラメータを要約する。０.２mg／kg用量では約６時間後および４mg／kg用量では約２４時間後にＣｍａｘに達した。試験した用量が２０倍増加すると、全身クリアランス(ＣＬＴ)は、２.２mL／時間／kgから０.３９mL／時間／kgに減少した。その結果、半減期(ｔ１／２)は２.２日から１４日に伸びた。さらに、抗薬物Ａｂ(ＡＤＡ)が、０.２mg／kgの血清サンプルで検出された。これは、標的介在薬物沈着(ＴＭＤＤ)を示唆し、ＡＤＡはサルにおいてＢＭＳ−９８６２１５で観察された非線形ＰＫをもたらした可能性がある。カニクイザルＴ細胞への結合についてのＢＭＳ−９８６２１５のＥＣ５０は、約５ng／mLである。
各用量レベルで、ＢＭＳ−９８６２１５を、３匹のサルに１.６mL／kgで静脈内投与した；薬力学比較のため、２匹のサルに媒体を投与した。評価基準は臨床観察、血液試験、ＰＫ、ＣＤ２７受容体占拠(ＲＯ)、循環ＣＤ２７レベル、リンパ球サブセット分析、サイトカインレベルおよびＡＤＡ決定を含んだ。血液サンプルを、投与前および投与後４２日まで種々の間隔で得た。全体として、有害臨床的観察がなく、血液試験パラメータの変化がないことを含み、有害所見はなかった。循環ＣＤ２７レベルに時間および用量依存性的増加があった。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に対する９０％を超える高いＢＭＳ−９８６２１５ＣＤ２７  ＲＯが、０.２mg／kgで約７日および４mg／kgで実験期間中(４２日)検出された。ＣＤ４＋、Ｔｒｅｇ(Ｆｏｘｐ３＋／ＣＤ４＋)、ＣＤ８＋  Ｔ、ＣＤ２０＋  ＢおよびＮＫ細胞を含む循環リンパ球サブセットまたは循環サイトカインレベルに有意な変化はなかった。
【表６】
2021520201.tif 000007
ＰＫパラメータは非コンパートメント方法で計算した。値は平均±ＳＤである。(Ｎ＝３)
【０２３６】
サルにおけるＢＭＳ−９８６２１５の全血ＣＤ２７受容体占拠の薬物動態／薬力学モデリング
ＣＤ２７  ＲＯを、サルＰＫ／ＲＯ試験の全血から決定し、下記Ｅｍａｘモデルを使用して、血清ＢＭＳ−９８６２１５濃度とリンクさせた。
【数１】
2021520201.tif 000008
〔式中、Ｅｍａｘは最大ＲＯ(ＢＭＳ−９８６２１５では１００％に固定)であり；ＥＣ５０はＥｍａｘの５０％に対応する血清濃度である。〕サル全血におけるＣＤ２７  ＲＯの５０％に対応する概算インビボ血清ＥＣ５０は０.０８±０.０３nMであり、インビトロ結合親和性ＥＣ５０(０.１３±０.０７nM、ｎ＝３)と一致した。
【０２３７】
ヒト薬物動態および受容体占拠予測
ＢＭＳ−９８６２１５のヒトＰＫパラメータを、サルデータから推定した。非線形ＰＫであるため、ヒトクリアランスを、下記のとおり、非標的および標的介在排出過程両者を考慮に入れて、予測する。
【数２】
2021520201.tif 000009
標的介在クリアランスは、下式を使用して、説明され得る。
【数３】
2021520201.tif 000010
〔式中、Ｖｍａｘは最大標的介在排出速度であり、ＫｍはＶｍａｘの５０％に対応する血清薬物濃度であり、Ｃｐは血漿薬物濃度である。〕非標的介在クリアランスに関して、アロメトリーを用いて、０.８５のべき指数を使用して、サルからヒトを試算した。標的介在クリアランスについて、ＶｍａｘおよびＫｍ両者を、サルとヒトで同じであると仮定した。分布のヒト定常状態量も、べき指数を１としてアロメトリーにより予測した。その結果、Ｑ３Ｗレジメンで０.１mg／kgおよび１mg／kg用量でヒトｔ１／２は、それぞれ２日および１１日であると予測された。予測ｔ１／２は、ＡＤＡがヒトにおいて最小限の寄与しかしないならば、長いかもしれない。
纏めると、ＢＭＳ−９８６２１５は、カニクイザルサルで非線形ＰＫを示し、２.
２〜１４日範囲の終末ｔ１／２であった。非線形ＰＫは標的介在薬物沈着(ＴＭＤＤ)およびおそらくＡＤＡ形成によるものである可能性がある。
現在、末梢血受容体占拠(ＲＯ)は、血漿濃度を使用して、ヒトにおいて容易に予測され得る。サルで観察されたＢＭＳ−９８６２１５のＣＤ２７  ＲＯについての良好なインビトロ−インビボ相関に基づき、ＢＭＳ−９８６２１５について、０.７mg／kgを３週毎投与のヒト用量が、トラフで９０％を超えるＲＯを達成すると予測される。
【０２３８】
実施例７
ヒト癌におけるＣＤ２７およびＣＤ７０発現
複数のヒト癌におけるＣＤ２７発現の免疫組織化学分析
可能性のある疾患適応症を特定するため、複数の癌タイプにおけるＣＤ２７の発現プロファイルおよび分布を、市販抗ＣＤ２７  ｍＡｂ、クローン１３７Ｂ４を使用して、通常の完全サイズホルマリン固定パラフィン包埋(ＦＦＰＥ)切片で、免疫組織化学(ＩＨＣ)により検討した。６種の腫瘍タイプおよび各腫瘍タイプで２２〜５５のサンプル、すなわち、乳腺癌(ＢｒＣ、ｎ＝３５)、子宮頸癌(ＣＣ、ｎ＝２３)、結腸直腸腺癌(ＣＲＣ、ｎ＝２２)、頭頸部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ、ｎ＝４６)、肝細胞癌(ＨＣＣ、ｎ＝５５)および卵巣腺癌(ＯｖＣ、ｎ＝２７)をＩＨＣ染色に付した。さらに、多くの例で(ｎ＝１３〜３７サンプル)、隣接切片で市販抗ＣＤ７０  ｍＡｂを使用して、ＣＤ７０発現を評価した。
ＣＤ２７＋染色が試験した全腫瘍タイプの腫瘍浸潤リンパ球(ＴＩＬ)のサブセットで観察された。一般に、ＣＤ２７＋  ＴＩＬは、ＣＤ３＋  ＴＩＬに極めて類似したパターンを示した。稀な例として、ＣＤ２７＋  ＴＩＬはＣＤ３＋  ＴＩＬより顕著に豊富であり、Ｔ細胞に加えて、Ｂ細胞におけるＣＤ２７の発現が示唆された。６腫瘍タイプのうち、ＨＮＳＣＣおよびＣＣでＣＤ２７＋  ＴＩＬが最高レベルであり、続いてＣＲＣ、ＢｒＣおよびＨＣＣであり、ＯｖＣは最低レベルを示した。
ＣＤ７０＋染色は、ＴＩＬの小分画で観察され、ＣＤ２７＋染色より頻度が著しく低かった。６腫瘍タイプのうち、ＣＣ、ＨＣＣおよびＣＲＣは、ＨＮＳＣＣ、ＢｒＣおよびＯｖＣより高レベルのＣＤ７０＋  ＴＩＬを示した。ＴＩＬでのＣＤ７０発現検出に加えて、ＣＤ７０＋標識は、腫瘍細胞で、約３０％のＣＣおよび１５％のＯｖＣ例を確認した。しかしながら、これらＣＤ７０＋腫瘍細胞例で、大部分は極めて低い発現体であった。カットオフとして１０％腫瘍細胞＋を使用して、約１５％のＣＣ例が陽性と考えられた。
【０２３９】
ＣＤ２７およびＣＤ７０発現のＴＣＧＡ分析
他の共刺激およびチェックポイント受容体で観察されるとおり、癌ゲノムアトラス(ＴＣＧＡ)データベースは、ＣＤ２７が他のＴ細胞シグネチャーと相関する様式で、大部分の腫瘍においてＲＮＡレベルで発現されることを示す。リンパ腫は例外であり、ＣＤ２７は悪性Ｂ細胞により発現される。ＣＤ２７発現それ自体は生存とは有意に相関しないが、子宮頸癌および頭頸部癌は例外であり、その高発現が生存改善と相関した(それぞれｐ＝０.００００１および０.０１)。Ｂリンパ腫後、最高にＣＤ２７を発現する腫瘍は、甲状腺、腎臓細胞、肺および頭頸部であった。
子宮頸癌ＴＣＧＡデータセットにおいて、高ＣＤ２７発現集団中、高ＣＤ７０発現体は低ＣＤ７０発現体より生存が良好であり、ＢＭＳ−９８６２１５によるＣＤ２７アゴニズム増加が、利益をもたらしたことが示唆される。
【０２４０】
可溶性ＣＤ２７
可溶性ＣＤ２７(ｓＣＤ２７)は、臨床治験における薬力学(ＰＤ)マーカーとして追跡し得る、免疫細胞活性化のマーカーであり得ることが示唆される(Huang et al., 2013)。すなわち、ステージＩ〜IV黒色腫、ＣＲＣ、ＲＣＣおよび肺癌の患者からの血清でｓＣＤ２７レベルについて試験し、正常健常ボランティア(ＮＨＶ)血清サンプルからの非癌対照と比較した。癌患者の一部個体は、ＮＨＶ(２０００〜７０００pg／mL)と比較して、血清ｓＣＤ２７レベルが２〜３倍高かった(２０００〜１５,０００pg／mL)。これは、ｓＣＤ７０がＮＨＶ(５００pg／mL)に対して癌患者(１５０pg／mL)で低いとして報告された文献のものと異なり、かつ高い。
抗ＣＤ２７  ｍＡｂ処置カニクイザルサルにおいて、末梢Ｔ細胞活性化検出のためのアッセイで活性化または増殖増加が示されなくても、ｓＣＤ２７レベルが増加することが判明した。それ故に、抗ＣＤ２７処置後にみられるｓＣＤ２７上昇は、ＦｃＲｎ介在循環ｔ１／２円超の結果である可能性がある。
【０２４１】
実施例８
マウス腫瘍試験
非リガンド遮断ＣＤ２７  ｍＡｂがマウス腫瘍モデルで抗腫瘍活性を有することを示すために、ラット抗マウスＣＤ２７  ｍＡｂを実施例１に記載のとおり産生し、クローン８Ｈ５をＢＭＳ−９８６２１５のサロゲートとして役立つリガンド非遮断アゴニストＡｂとして選択した。このサロゲート抗ＣＤ２７  Ａｂは、０.２５nM親和性でｍＣＤ２７に結合し、マウスＣＤ７０結合を遮断せず、マウス脾臓Ｔ細胞でアゴニスト活性を示し、ｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２ａ  Ｆｃバリアントを用いてエンジニアリングされた。そのようなものとして、８Ｈ５はＢＭＳ−９８６２１５の適当なサロゲートである。
クローン８Ｈ５は、特に、ＰＤ−１チェックポイント遮断と組み合わせて、固形および血液マウス腫瘍モデルの両者で抗腫瘍活性を示した。例えば、ＣＴ２６マウス結腸癌モデルの結果を示す図１４およびＳＡ１Ｎ線維肉腫、ＣＴ２６およびＥＧＴ  Ｔ細胞リンパ腫マウスモデルで得られた結果を要約する表７参照。８Ｈ５のｍＩｇＧ１アイソタイプは、ｍＩｇＧ２ａおよびｍＩｇＧ１、Ｄ２６５Ａ対照(図１４(Ａ))と比較して、ＣＴ２６モデルで２１％腫瘍増殖阻害のわずかな抗腫瘍活性しか示さなかった(ＴＧＩ；図１４(Ｂ)))。８Ｈ５のｍＩｇＧ２ａアイソタイプはわずかに高いが、なお中程度の抗腫瘍活性を示し(図１４(Ｃ))、ｍＩｇＧ１もＩｇＧ２ａアイソタイプも、処置した１０匹のマウスで、無腫瘍(ＴＦ)マウスを全くもたらさなかった。
ｍＩｇＧ１−Ｄ２６５Ａアイソタイプを有する抗ｍＰＤ−１  Ａｂ、４Ｈ２の抗腫瘍活性も試験した。４Ｈ２は、Ｆｃ部分が異なるマウスＩｇＧアイソタイプのＦｃ部分で置き換えられた、ラットＩｇＧ２ａ抗マウスＰＤ−１  Ａｂから構築されたキメララット−マウス抗ｍＰＤ−１  Ａｂである(ＷＯ２００６／１２１１６８)。ＣＴ２６腫瘍モデルで、４Ｈ２は中程度の抗腫瘍活性を示し、２７％ＴＧＩおよび処置した１０匹中２匹のＴＦマウスをもたらした(図１４(Ｄ))。この抗ＰＤ−１活性は８Ｈ５により増強され、８Ｈ５、ｍＩｇＧ１との組み合わせが７０％ＴＧＩおよび３／１０  ＴＦマウスをもたらす(図１４(Ｅ)；表７)および８Ｈ５、ｍＩｇＧ２ａとの組み合わせが７６％ＴＧＩおよび４／１０  ＴＦマウス(図１４(Ｆ)；表７)をもたらすことにより示される。これは、抗ＣＤ２７がインビボで癌細胞増殖減少に、抗ＰＤ−１などのチェックポイント阻害剤と相乗的に相互作用することを示す。これらＡｂの組み合わせは、組み合わせの抗腫瘍効果が各個々のＡｂにより示される阻害レベルの和より大きいならば、相乗的である。
Ｔ細胞表面受容体(共刺激性および共阻害性両者)に特異的なＡｂのアイソタイプの変動は、これらＡｂの抗腫瘍活性能を変える可能性があり得る。腫瘍担持マウスをｍＩｇＧ１およびｍＩｇＧ２ａ(活性化ＦｃγＲ結合体)ｍＡｂとして発現される単剤８Ｈ５で処置したとき、強力な抗腫瘍活性がＳＡ１Ｎ線維肉腫モデルで観察された。８Ｈ５のｍＩｇＧ１アイソタイプは強力な抗腫瘍活性を示し、５２％ＴＧＩおよび処置した１２匹中８匹のＴＦマウスをもたらした(表７)。８Ｈ５のｍＩｇＧ２ａアイソタイプはさらに強力であり、９８％ＴＧＩおよび処置した１２匹中１１匹のＴＦマウスをもたらした(表７)。単剤療法活性は、腫瘍部位でのＣＤ８＋  Ｔ細胞拡大およびＴｒｅｇ枯渇と相関した。最近の前臨床試験は、アゴニストＣＤ２７  Ａｂは、ＰＤ−１遮断と組み合わせたとき抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性を増加させることを示し、これは腫瘍根絶に有効である(Ahrends et al., 2016)。抗マウスＰＤ−１と組み合わせた抗マウスＣＤ２７アイソタイプは、２５日目のＴＧＩで測定して、ＣＴ２６モデルにおけると同等レベルの抗腫瘍活性(それぞれ７０％および７６％ＴＧＩ)および総無腫瘍(ＴＦ)マウス数(それぞれ３／１０および４／１０  ＴＦ)を示した。表７参照。
部分的Ｔｒｅｇ枯渇に加えて、８Ｈ５  ｍＩｇＧ１または８Ｈ５  ｍＩｇＧ２ａで処置したマウスのＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞数は、腫瘍部位と比較して、末梢(例えば、血液および脾臓)で減少した。腫瘍内でｍＩｇＧ２ａアイソタイプより大きなＣＤ８＋  Ｔ細胞がｍＩｇＧ１で観察されたが、ｍＩｇＧ２ａは、Ｔｒｅｇ枯渇により強力であるように見えた。これらのデータは、抗ＣＤ２７アイソタイプバリアントが、主としてＴｒｅｇ枯渇(ｍＩｇＧ２ａ)および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞拡大(ｍＩｇＧ１)により抗腫瘍活性をもたらすことを示唆する。これらの試験は、ＣＤ２７アゴニズムおよびＰＤ−１遮断が同系腫瘍モデルで腫瘍負荷低減および生存増加をもたらすことを示している。表７参照。
【０２４２】
抗ｍＣＤ２７  ｍＡｂ、８Ｈ５のｍＩｇＧ１アイソタイプも、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプも、マウスＥＧ７  Ｔ細胞リンパ腫細胞に抗腫瘍活性を示さなかったが、抗ＰＤ１  ｍＡｂ  ４Ｈ２は極めてわずかな活性を示した(表７)。それにも関わらず、８Ｈ５  ｍＩｇＧ１は、４Ｈ２と組み合わせて、このリンパ腫モデルで相乗的に４４％ＴＧＩおよび１／１０  ＴＦマウスをもたらした(表７)。
【表７】
2021520201.tif 000011
ａＡＪマウスでのデータ
ｂＢＡＬＢ／ｃマウスでのデータ
ｃＣ５７ＢＬ／６マウスでのデータ
略語：ＴＧＩ＝接種後２１〜２８日目の腫瘍増殖阻害；ＴＦ＝試験終了時の無腫瘍
【０２４３】
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１２−１】
2021520201.tif 000030
【図１２−２】
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【図１３】
2021520201.tif 000032
【図１４−１】
2021520201.tif 000033
【図１４−２】
2021520201.tif 000034
【図１５−１】
2021520201.tif 000035
【図１５−２】
2021520201.tif 000036
【図１５−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2021520201.tif 000038
2021520201.tif 000039
2021520201.tif 000040