(57)【要約】第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子、並びに組成物及びその作製及び使用方法が本明細書に記載されている。粒子は、本明細書に記載の疾病、障害、又は状態の処置に有用な治療薬を発現することが可能な細胞を含み得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）第１の区画と；
ｂ）第２の区画と；
ｃ）式（Ｉ−ａ）：
【化１】
2021520374.tif 000101
（式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ２〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である）
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と
を含む粒子。
【請求項２】
前記第１の区画が、前記第２の構成要素で取り囲まれている、請求項１に記載の粒子。
【請求項３】
前記第２の区画が、前記第１の区画の周りにバリアを形成する、請求項１又は２に記載の粒子。
【請求項４】
前記第２の区画の差分体積が、前記第１の区画の体積より例えば１．５倍、２倍、３倍、又は５倍小さい、請求項１〜３のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項５】
前記第２の区画の差分体積が、前記第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％小さい、請求項１〜４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項６】
以下から選択される特性を含む：
ａ）前記第１の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；
ｂ）前記第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；
ｃ）式（Ｉ−ａ）の化合物が、前記粒子の外面に配置され；及び／又は
ｄ）前記粒子が、前記第１及び第２の区画の間の境界面を含み、式（Ｉ−ａ）の化合物が、前記境界面に配置される、請求項１に記載の粒子。
【請求項７】
前記第１の区画又は前記第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まない、請求項１に記載の粒子。
【請求項８】
以下から選択される特性を含む：
ａ）前記第１の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；
ｂ）前記第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；
ｃ）前記粒子の外面が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；又は
ｄ）前記粒子が、前記第１及び第２の区画の間の境界面を含み、前記境界面が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まない、請求項１に記載の粒子。
【請求項９】
前記粒子が、１ミリメートル〜５ミリメートル、例えば、１ミリメートル〜４ミリメートル、１ミリメートル〜３ミリメートル、１ミリメートル〜２ミリメートル、又は１．５ミリメートル〜２ミリメートルの最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１０】
前記第１の区画の外側境界と前記第２の区画の内側境界との間の平均距離が、５００ナノメートル〜５００マイクロメートルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１１】
前記粒子が細胞を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１２】
前記第１の区画が細胞を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１３】
前記第１の区画が細胞を含み、前記第２の区画が細胞を含まない、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１４】
前記粒子が、少なくとも５×１０６、１０×１０６、１５×１０６又は２０×１０６個の細胞／ｍＬを含む、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１５】
前記１つ又は複数の細胞が、単一細胞、１つ以上のスフェロイドとして存在するか、又は１つ以上のマイクロキャリアに結合される、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１６】
ａ）１つ又は複数の細胞が、前記第１の区画内に配置され；
ｂ）１つ又は複数の細胞が、前記第２の区画内に配置され；
ｃ）前記第２の区画中の細胞の数又は密度が、前記第１の区画中の細胞の数又は密度より少なくとも２、５、１０、１０２、１０３、又は１０４倍小さく；
ｄ）前記第１の区画（例えば、前記第１の区画の外側境界）が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；及び／又は
ｅ）前記第２の区画（例えば、前記第２の区画の外側境界）が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含む、請求項１に記載の粒子。
【請求項１７】
前記細胞が、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、間葉系幹細胞、又はケラチン生成細胞である、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１８】
前記細胞が、ＲＰＥ（例えば、ＡＲＰＥ−１９）細胞又はＭＳＣである、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項１９】
前記細胞が膵島細胞である、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２０】
前記細胞が、治療薬（例えば、ポリペプチド）を発現する、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、第ＶＩＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体（例えば、配列番号１）又は第ＩＸ因子タンパク質若しくはその変異体（例えば、配列番号２）である、請求項２０に記載の粒子。
【請求項２２】
前記ポリペプチドが、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である、請求項２０に記載の粒子。
【請求項２３】
前記粒子がポリマーを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２４】
前記ポリマーが、アルギン酸塩、キトサン、ヒアルロン酸塩、ゼラチン、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、又はポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）から選択される、請求項２３に記載の粒子。
【請求項２５】
前記第１の区画が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、請求項２３〜２４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２６】
前記第２の区画が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２７】
前記第１の区画及び前記第２の区画の両方の前記ポリマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２８】
式（Ｉ−ａ）の前記化合物が、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｃ）、（Ｉ−ｄ）、（Ｉ−ｅ）、（Ｉ−ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、若しくは（ＩＩＩ−ｄ）のいずれか１つの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項２９】
式（Ｉ−ａ）の前記化合物が、表２に示される化合物１００、化合物１０１、化合物１１２、化合物１１３又は化合物１１４である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項３０】
前記粒子が、ヒドロゲルカプセルであり、
ａ）前記第１の区画が、ポリペプチドを発現するように組み換えられた複数の細胞を含み；
ｂ）前記第１の区画が、前記第２の区画で取り囲まれ；
ｃ）前記第２の区画が、細胞を実質的に含まず；
ｄ）ここで、前記粒子の前記第２の区画及び外面が、式（Ｉ−ａ）の前記化合物で化学修飾されたアルギン酸塩を含む、請求項１に記載の粒子。
【請求項３１】
前記化学修飾アルギン酸塩が、抗線維特性及び所望の機械的強度の両方を有する前記粒子を提供する量で、式（Ｉ−ａ）の前記化合物を含む、請求項３０に記載の粒子。
【請求項３２】
式（Ｉ−ａ）の前記化合物が、構造：
【化２】
2021520374.tif 000102
を有する化合物１０１である、請求項３０又は３１に記載の粒子。
【請求項３３】
化合物１０１が、窒素パーセントの燃焼分析によって決定した際に、少なくとも２．０％且つ９．０％未満の窒素（Ｎ）の密度（好ましくは、３．０％〜８．０％、４．０％〜７．０％、５．０％〜７．０％、又は６．０％〜７．０％）で、前記化学修飾アルギン酸塩中に存在する、請求項３２に記載の粒子。
【請求項３４】
前記第１の区画が、抗線維性化合物（例えば、式（Ｉ−ａ）の化合物）を含まないアルギン酸塩溶液から形成される、請求項３０又は３１に記載の粒子。
【請求項３５】
約１ｍｍ〜約２ｍｍの平均直径又は約０．７５〜約１．０ｍｍの平均直径を有する、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項３６】
前記第１の区画が、約１０００万〜約５０００万個の細胞／ｍｌ、５０００万〜約５億個の細胞／ｍｌ、約７５００万〜約４億５０００万個の細胞／ｍｌ、約１億〜約４億５０００万個の細胞／ｍｌ、約１億〜約４億個の細胞／ｍｌ、又は約１億〜約３億個の細胞／ｍｌを含むアルギン酸塩溶液から形成される、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項３７】
前記細胞が、ＡＲＰＥ１９細胞に由来し、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、及び配列番号２８を含む外因性のヌクレオチド配列を含む、請求項３０〜３６のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項３８】
前記外因性のヌクレオチド配列が、配列番号２３を含む、請求項３７に記載の粒子。
【請求項３９】
前記外因性のヌクレオチド配列が、配列番号１５又は配列番号２７を含む、請求項３７又は３８に記載の粒子。
【請求項４０】
前記外因性のヌクレオチド配列が、配列番号１９又は配列番号２８を含む、請求項３７又は３８に記載の粒子。
【請求項４１】
ポリマー溶液の複数の液滴を、粒子を生成するのに十分な期間にわたって水性架橋溶液と接触させることを含む方法によって作製され、ここで、前記架橋溶液が、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の粒子。
【請求項４２】
請求項１〜４１のいずれか一項に記載の粒子を含む複数の粒子の調製物。
【請求項４３】
薬学的に許容可能な調製物である、請求項４２に記載の調製物。
【請求項４４】
本明細書に記載の粒子、例えば、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の粒子を作製する方法。
【請求項４５】
患者への、物質、例えばポリペプチドを必要とする患者を処置するのに使用するための粒子の組成物であって、前記処置が、
前記物質を含むか又は前記物質を生成する能力を有する、例えば、実施形態１〜４１のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
前記粒子を前記患者の身体に配置すること
を含む、粒子の組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［優先権の主張］
本出願は、２０１８年４月４日に出願された米国仮特許出願第６２／６５２，８８０号；２０１８年９月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／７３７，８３８号；及び２０１９年３月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８１２，５６８号に対する優先権を主張するものである。上記の仮出願のそれぞれの開示内容は、全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
［配列表］
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、全体が参照により本明細書に援用される配列表を含む。２０１８年９月２６日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｓ２２２５−７０２２ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは２０５，１４５バイトである。
【０００３】
［背景］
組み換え細胞を含む移植された粒子の機能は、生成物を提供する能力及びレシピエントの生物学的免疫応答経路を含む多くの要因に依存している（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００８）２０：８６−１００；Ｌａｎｇｅｒ，Ａｄｖ  Ｍａｔｅｒ（２００９）２１：３２３５−３２３６）。移植後のこのような粒子の性能は、それらが抗線維性（ａｆｉｂｒｏｔｉｃ）である程度、例えば、異物反応を回避又は軽減することができる程度を含むそれらの生体適合性に大きく依存する。いくつかの刊行物が、げっ歯類及び非ヒト霊長類中の移植されたヒドロゲルカプセルに対する異物反応（ＦＢＲ）が、直径少なくとも１ｍｍのサイズを有する球状カプセル、例えば、ミリカプセル（ｍｉｌｌｉｃａｐｓｕｌｅ）を用いることによって著しく減少され得ること（Ｖｅｉｓｅｈ，Ｏ．，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  １４：６４３−６５２（２０１５）；国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット；国際公開第２０１６／１８７２２５号パンフレット）及び／又はＦＢＲを軽減する特定の化合物で化学修飾されるヒドロゲル形成ポリマーを用いて調製されることを報告している（Ｖｅｇａｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２２（３）：３０６−３１１（２０１６）、Ｖｅｇａｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３４（３）：３４５−３５２（２０１６）；国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット；国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレット）。
【０００４】
［概要］
第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子（例えば、本明細書に記載される）、並びに組成物及びその作製及び使用方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、粒子は、細胞（例えば、本明細書に記載の細胞）を含む。いくつかの実施形態において、細胞は、例えば、患者における疾病、障害又は状態、例えば、血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な治療薬を生成する。いくつかの実施形態において、粒子は、患者における免疫応答（例えば、ＦＢＲ）又は免疫応答（例えば、ＦＢＲ）の影響を調節することが可能である。
【０００５】
一態様において、本開示は、ａ）第１の区画；ｂ）第２の区画；及びｃ）式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2021520374.tif 000002
又はその薬学的に許容可能な塩を含む粒子を特徴とし、式中、変数Ａ、Ｌ１、Ｍ、Ｌ２、Ｐ、Ｌ３、及びＺ、並びに関連するサブ変数が、本明細書に定義される。いくつかの実施形態において、第１の区画は、第２の区画で取り囲まれている。いくつかの実施形態において、第２の区画は、第１の区画の周りにバリアを形成する。いくつかの実施形態において、第１の区画は、式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、第２の区画は、式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、第１及び第２の区画のそれぞれが、独立して、式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、粒子の外面に配置される。
【０００６】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｃ）、（Ｉ−ｄ）、（Ｉ−ｅ）、（Ｉ−ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、若しくは（ＩＩＩ−ｄ））は、本明細書に記載の化合物である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、本明細書の表２に示される化合物のうちの１つである。
【０００７】
いくつかの実施形態において、粒子中の区画の少なくとも１つが、ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び第２の区画の両方が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び第２の区画は、同じポリマーを含む。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び第２の区画は、異なるポリマーを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、多糖又は他のヒドロゲル形成ポリマー（例えば、アルギン酸塩、ヒアルロン酸塩又はコンドロイチン）である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、アルギン酸塩である。いくつかの実施形態において、粒子は、式（Ｉ）の化合物で化学修飾されるアルギン酸塩を含む。いくつかの実施形態において、化学修飾アルギン酸塩は、低分子量（例えば、７５ｋＤ未満のおよその分子量）を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の混合物を含む。いくつかの実施形態において、粒子は、ヒドロゲルカプセルである。いくつかの実施形態において、粒子は、ミリカプセル又はマイクロカプセル（例えば、ヒドロゲルミリカプセル又はヒドロゲルマイクロカプセル）である。
【０００９】
いくつかの実施形態において、粒子は球状である。いくつかの実施形態において、第２の区画の総体積（本明細書に定義される）は、第１の区画の体積より大きい（例えば、１．５倍、２倍、３倍、又は５倍超）。いくつかの実施形態において、第２の区画の差分体積（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｖｏｌｕｍｅ）（本明細書に定義される）は、第１の区画の体積より小さい（例えば、１．５倍、２倍、３倍、又は５倍未満）。いくつかの実施形態において、第２の区画の総体積は、第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％大きい。いくつかの実施形態において、第１の区画の差分体積は、第２の区画の体積より大きい（例えば、１．５倍、２倍、３倍、又は５倍超）。いくつかの実施形態において、第１の区画の総体積は、第２の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％大きい。
【００１０】
いくつかの実施形態において、粒子は、約２０ナノメートル〜約１０ミリメートルの最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子の最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径は、約５００ナノメートル〜約１０ミリメートル、約１ミリメートル〜１０ミリメートル、約１ミリメートル〜５ミリメートル、約１ミリメートル〜４ミリメートル、約１ミリメートル〜３ミリメートル、約１ミリメートル〜２ミリメートル、又は約１．５ミリメートル〜２ミリメートル又は約１．５ミリメートルである。
【００１１】
いくつかの実施形態において、第２の（外側）区画の外側境界と境界面との間の平均距離は、約１ナノメートル〜１ミリメートル、例えば、約１００ナノメートル〜１ミリメートル、約５００ナノメートル〜約１ミリメートル、又は約５００ナノメートル〜５００マイクロメートルである。
【００１２】
いくつかの実施形態において、粒子は細胞を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画が細胞を含み、及び／又は第２の区画が細胞を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画及び第２の区画の両方が、同じタイプの細胞又は異なるタイプの細胞を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画が細胞を含み、第２の区画が、細胞を含まない。本明細書に記載の粒子は、複数の細胞を含み得る。１つ又は複数の細胞が、単一細胞、細胞クラスター（例えば、スフェロイドとして）として粒子中に存在するか、又はマイクロキャリアに付着され得る。いくつかの実施形態において、粒子は、ポリマー溶液から形成され、ポリマー溶液のｍｌ当たり５００万、１０００万、１５００万、２０００万、３０００万、４０００万、５０００万、７５００万、１億、１億５０００万、２億、２億５０００万若しくは４億個の細胞又はこれらの値の間の任意の数の少なくともいずれかを含む。いくつかの実施形態において、粒子は、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、間葉系幹細胞、ケラチン生成細胞又は膵島細胞又は上記の細胞型のいずれかに由来する細胞を含む。いくつかの実施形態において、粒子は、網膜色素上皮（ＲＰＥ細胞）又は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）を含む。いくつかの実施形態において、粒子は、組み換え細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞又は組み換えＭＳＣ）を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、粒子は、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子などの治療薬を発現する細胞を含む。いくつかの実施形態において、治療薬は、例えば、患者における血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、治療薬は、ポリペプチド、例えば、第ＶＩＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体又は第ＩＸ因子タンパク質又は若しくはその変異体である。
【００１４】
別の態様において、本開示は、複数の粒子の調製物を特徴とし、複数の粒子の１つ以上が、本明細書に記載される、ａ）第１の区画；ｂ）第２の区画；及びｃ）式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、複数の粒子中の各粒子が、第１及び第２の区画及び式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、複数の粒子の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上が、球状粒子である。いくつかの実施形態において、調製物は、薬学的に許容可能な調製物である。
【００１５】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載の粒子を作製する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画が、粒子の第２の区画と同時に形成される。いくつかの実施形態において、方法は、ヒドロゲル形成ポリマー又はヒドロゲル形成ポリマーの混合物を含む第１及び第２のポリマー溶液から多数の液滴を生成するために、同心針を装着した静電液滴生成装置の使用を含む。いくつかの実施形態において、ポリマー又はポリマーの混合物は、式（Ｉ）の化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、ポリマーは、アルギン酸塩である。いくつかの実施形態において、方法は、液滴を、多価カチオンを含む架橋溶液と接触させて、各液滴を架橋させて粒子（例えば、内側区画及び外側区画を有するヒドロゲルカプセル）にすることをさらに含む。いくつかの実施形態において、架橋溶液は、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む。いくつかの実施形態において、架橋溶液は、界面活性剤をさらに含む。
【００１６】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載の粒子を患者に移植する方法を特徴とする。別の態様において、本開示は、物質（例えば、治療薬、例えば、ポリペプチド）を患者に提供する方法であって、本明細書に記載の粒子を患者に投与することを含み、ここで、粒子が、物質を含むか、又は物質を生成する能力を有する方法を特徴とする。別の態様において、本開示は、物質（例えば、治療薬、例えば、ポリペプチド）を必要とする患者を処置する方法であって、本明細書に記載の粒子を患者に投与することを含み、ここで、粒子が、物質を含むか、又は物質を生成する能力を有する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、投与工程は、複数の粒子を含む薬学的に許容可能な調製物を患者に移植することを含み、粒子のそれぞれが、物質を含むか、又は物質を生成する能力を有する。いくつかの実施形態において、患者は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。
【００１７】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載の粒子を評価する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載の粒子を提供し、粒子の構造又は機能パラメータを評価することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、ａ）構造的完全性；ｂ）細胞生存率；ｃ）治療薬（例えば、ポリペプチド）の生成；ｄ）栄養分若しくは又は酸素の取り込み；ｅ）老廃物の生成；及びｆ）線維化のうちの１つ以上について本明細書に記載の１つ又は複数の粒子を評価することを含む。いくつかの実施形態において、評価は、粒子の形成又は患者への粒子の投与の少なくとも１、５、１０、２０、３０、６０、９０又は１２０日後に行われる。いくつかの実施形態において、患者は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。
【００１８】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細が本明細書において記載されている。本開示の他の特徴、対象及び利点は、発明を実施するための形態、図面、実施例及び特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】第１の内側区画及びその中にカプセル化された細胞；外側境界を有する第２の外側区画；及び第１及び第２の区画の間の境界面を示す線を有する、本開示の例示的な球状粒子を示す。
【図２Ａ】例示的な組み換え細胞によってコードされる例示的なアミノ酸配列を示し、図２Ａは、例示的な組み換え細胞によってコードされる第ＶＩＩＩ〜ＢＤＤ因子タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【図２Ｂ】例示的な組み換え細胞によってコードされる例示的なアミノ酸配列を示し、図２Ｂは、ヒト野生型第ＩＸ因子タンパク質のアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図３】細胞充填当量（１００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩）の関数としての単一区画及び２区画ヒドロゲルカプセルの品質を比較するグラフであり、ここで、ｍｌアルギン酸塩は、２区画カプセルの第１の（内側）区画及び第２の（外側）区画を作製するのに使用されるアルギン酸塩の和である。
【図４Ａ】本開示の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画の厚さに対する、押し出されるアルギン酸塩の流量を変化させることの影響を示す。図４Ａは、第１の（内側）区画及び第２の（外側）区画を形成するのに使用されるポリマー溶液の流量を変化させることによって生成される粒子（約１．５ミリメートル（ｍｍ）直径）の平均の第２の（外側）区画厚さを示すグラフである。
【図４Ｂ】本開示の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画の厚さに対する、押し出されるアルギン酸塩の流量を変化させることの影響を示す。図４Ｂは、第１の（内側）区画及び第２の（外側）区画体積パーセンテージ及び実現される得られる区画厚さの表である。
【図５】内側：外側流量（ｍｌ／ｈ）の可変の比率を有する本開示の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の初期破壊を示すグラフである。第１の区画（内側）中のポリマーは、非修飾高分子量アルギン酸塩であり、第２の区画（外側）中のポリマーは、化学修飾アルギン酸塩対非修飾アルギン酸塩の７０：３０の比率における、化学修飾低分子量アルギン酸塩及び非修飾高分子量アルギン酸塩の混合物である。
【図６Ａ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の明視野像である。第２の（外側）区画は、低、中程度又は高コンジュゲーションアルギン酸塩又は対照（非修飾）、アルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【図６Ｂ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の明視野像である。第２の（外側）区画は、低、中程度又は高コンジュゲーションアルギン酸塩又は対照（非修飾）、アルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【図６Ｃ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の明視野像である。第２の（外側）区画は、低、中程度又は高コンジュゲーションアルギン酸塩又は対照（非修飾）、アルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【図６Ｄ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の明視野像である。第２の（外側）区画は、低、中程度又は高コンジュゲーションアルギン酸塩又は対照（非修飾）、アルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【図７Ａ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ａは、移植の１週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収された粒子の明視野像である。第１の（内側）区画内に組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子は、（ｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた低、中程度又は高レベルの式（Ｉ）の化合物、（ｉｉ）非修飾アルギン酸塩、又は（ｉｉｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた中程度のレベルの式（Ｉ）の化合物から構成される空のカプセルから構成される第２の（外側）区画を有していた。
【図７Ｂ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ｂは、移植の１週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収された粒子の明視野像である。第１の（内側）区画内に組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子は、（ｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた低、中程度又は高レベルの式（Ｉ）の化合物、（ｉｉ）非修飾アルギン酸塩、又は（ｉｉｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた中程度のレベルの式（Ｉ）の化合物から構成される空のカプセルから構成される第２の（外側）区画を有していた。
【図７Ｃ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ｃは、移植の１週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収された粒子の明視野像である。第１の（内側）区画内に組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子は、（ｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた低、中程度又は高レベルの式（Ｉ）の化合物、（ｉｉ）非修飾アルギン酸塩、又は（ｉｉｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた中程度のレベルの式（Ｉ）の化合物から構成される空のカプセルから構成される第２の（外側）区画を有していた。
【図７Ｄ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ｄは、移植の１週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収された粒子の明視野像である。第１の（内側）区画内に組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子は、（ｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた低、中程度又は高レベルの式（Ｉ）の化合物、（ｉｉ）非修飾アルギン酸塩、又は（ｉｉｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた中程度のレベルの式（Ｉ）の化合物から構成される空のカプセルから構成される第２の（外側）区画を有していた。
【図７Ｅ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ｅは、移植の１週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収された粒子の明視野像である。第１の（内側）区画内に組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子は、（ｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた低、中程度又は高レベルの式（Ｉ）の化合物、（ｉｉ）非修飾アルギン酸塩、又は（ｉｉｉ）アルギン酸塩にコンジュゲートされた中程度のレベルの式（Ｉ）の化合物から構成される空のカプセルから構成される第２の（外側）区画を有していた。
【図７Ｆ】例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）の第２の（外側）区画を含むアルギン酸塩における化学修飾のレベルを変化させることの、インビボでの線維化に対する影響を示す。図７Ｆは、マウスモデルにおける移植前（初期、黒色のバー）及びＣ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の７日後の回収後（回収、灰色のバー）の粒子の平均初期破壊を比較するグラフである。
【図８Ａ】様々なヒドロゲルミリカプセル及び線維化反応に対するそれらの影響を比較する画像である。移植の２週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収されたミリカプセルの概略図が示される。図８Ａ：細胞を含まない空のカプセル。
【図８Ｂ】様々なヒドロゲルミリカプセル及び線維化反応に対するそれらの影響を比較する画像である。移植の２週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収されたミリカプセルの概略図が示される。図８Ｂ：５０００個の細胞／カプセルを含む１区画カプセル。
【図８Ｃ】様々なヒドロゲルミリカプセル及び線維化反応に対するそれらの影響を比較する画像である。移植の２週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収されたミリカプセルの概略図が示される。図８Ｃ：５０００個の細胞／粒子を含む２区画カプセル。
【図８Ｄ】様々なヒドロゲルミリカプセル及び線維化反応に対するそれらの影響を比較する画像である。移植の２週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収されたミリカプセルの概略図が示される。図８Ｄ：２５００個の細胞／カプセルを含む２区画カプセル。
【図８Ｅ】様々なヒドロゲルミリカプセル及び線維化反応に対するそれらの影響を比較する画像である。移植の２週間後にＣ５７／ＢＬ６マウスから回収されたミリカプセルの概略図が示される。図８Ｅ：２５００個の細胞／カプセル及びより高密度の第２の（外側）区画を含む２区画カプセル。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｋは、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の１、２、及び４週間後の第２の（外側）区画中に可変（低、中程度、又は高）量の化学修飾アルギン酸塩を含む例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）におけるインビボでのマクロファージ付着のレベルを比較する免疫蛍光染色画像である。陽性対照（ＳＬＧ２０：非修飾中程度ＭＷアルギン酸塩）及び陰性対照（空のカプセル）が、これらの実験に含まれていた。
【図１０Ａ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）における線維化反応のレベルを示す明視野像である。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含んでいた。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルも含まれていた。
【図１０Ｂ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）における線維化反応のレベルを示す明視野像である。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含んでいた。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルも含まれていた。
【図１０Ｃ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）における線維化反応のレベルを示す明視野像である。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含んでいた。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルも含まれていた。
【図１０Ｄ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）における線維化反応のレベルを示す明視野像である。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含んでいた。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルも含まれていた。
【図１０Ｅ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）における線維化反応のレベルを示す明視野像である。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含んでいた。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルも含まれていた。
【図１１】マウスモデルにおける移植前（初期、黒色のバー）及びＣ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の回収後（回収、灰色のバー）の粒子の平均初期破壊を比較するグラフである。粒子は、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、高、又は２倍の高さ）量の化学修飾アルギン酸塩を含む。第２の（外側）区画中に中程度の量の化学修飾アルギン酸塩を含む陰性対照（空）カプセルが含まれていた。
【図１２Ａ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の、第２の（外側）区画中に可変（中程度又は高）量の化学修飾アルギン酸塩、又は第２の（外側）区画（「アミンを加え戻した」カプセル）中に非コンジュゲート抗線維性小分子（例えば、式（Ｉ）の化合物）のいずれかを含む例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）におけるインビボでの線維化反応のレベルを示す明視野像である。
【図１２Ｂ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の、第２の（外側）区画中に可変（中程度又は高）量の化学修飾アルギン酸塩、又は第２の（外側）区画（「アミンを加え戻した」カプセル）中に非コンジュゲート抗線維性小分子（例えば、式（Ｉ）の化合物）のいずれかを含む例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）におけるインビボでの線維化反応のレベルを示す明視野像である。
【図１２Ｃ】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける移植の２週間後の、第２の（外側）区画中に可変（中程度又は高）量の化学修飾アルギン酸塩、又は第２の（外側）区画（「アミンを加え戻した」カプセル）中に非コンジュゲート抗線維性小分子（例えば、式（Ｉ）の化合物）のいずれかを含む例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）におけるインビボでの線維化反応のレベルを示す明視野像である。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｆは、異なる第２の（外側）区画を有する例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルミリカプセル）におけるインビボでのマクロファージ付着のレベルを比較する免疫蛍光染色画像である。第２の（外側）区画は、化学修飾低分子量（ＣＭ−ＬＭＷ）アルギン酸塩対非修飾高分子量（Ｕ−ＨＭＷ）アルギン酸塩の７０：３０又は６０：４０のいずれかの比率のブレンドから調製され、第２の（外側）区画中に可変（中程度、中程度−高、又は高）量の化学修飾アルギン酸塩も含む。
【図１４】図１２Ａ〜１４Ｄは、カプセル化後１週間にわたって培養された、１区画又は２区画ヒドロゲルミリカプセル中のカプセル化ＨＥＫ２９３Ｆ細胞の明視野像である。図１４Ａは、１区画又は２区画カプセルの画像に対応する。
【図１５Ａ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベルと、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度との間の相関関係を示す。図１５Ａは、マウスの腹腔に移植される前（初期）及び移植の５日後に回収した際（回収）の、異なる細胞充填濃度で調製されたカプセル中の細胞数を示す。
【図１５Ｂ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベルと、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度との間の相関関係を示す。図１５Ｂは、それぞれ、移植されたカプセルによって生成される血漿及び腹腔液中のＦＩＸレベルを示す。
【図１５Ｃ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベルと、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度との間の相関関係を示す。図１５Ｃは、それぞれ、移植されたカプセルによって生成される血漿及び腹腔液中のＦＩＸレベルを示す。
【図１６Ａ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベル、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度及びカプセル完全性の間の相関関係を示す。図１６Ａは、カプセルが移植されたマウスの腹腔液中のＦＩＸレベルを示す。
【図１６Ｂ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベル、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度及びカプセル完全性の間の相関関係を示す。図１６Ｂは、移植前（初期）及び回収された時点の、６４６Ｍ／ｍｌの細胞を用いて調製されたカプセルの明視野像である。
【図１６Ｃ】２区画ヒドロゲルミリカプセルによるＦＩＸのインビボでの発現レベル、カプセルの内側区画中のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞の濃度及びカプセル完全性の間の相関関係を示す。
【図１７】表４〜８中に、例示的なアミノ酸配列及び治療用ポリペプチドのコード配列、及びＲＰＥ細胞を組み換えるのに有用な例示的な発現ベクター内のヌクレオチド配列を示す。
【図１８Ａ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する、直径約０．７５ｍｍ（図１８Ａ）の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルカプセルの明視野像である。第１の（内側）及び第２の（外側）区画のそれぞれが、中程度コンジュゲーションアルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【図１８Ｂ】内側：外側区画の５０：５０の体積比を有する、直径約１．０ｍｍ（図１８Ｂ）の例示的な粒子（すなわち、２区画ヒドロゲルカプセルの明視野像である。第１の（内側）及び第２の（外側）区画のそれぞれが、中程度コンジュゲーションアルギン酸塩を含む。外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を、２区画構造の視覚化のために第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【００２０】
［詳細な説明］
本開示は、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子（例えば、本明細書に記載される）、並びに組成物及びその作製及び使用方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、粒子及びその組成物は、疾病、障害、又は状態の予防又は処置に有用である。いくつかの実施形態において、第１のヒドロゲル区画及び第２のヒドロゲル区画及び式（Ｉ）の化合物を含むヒドロゲルミリカプセルとして構成される粒子は、有利な特性を示し、例えば、それらは、式（Ｉ）の化合物を含まないが、同じタイプのポリマーから構成され、実質的に同じサイズである類似のミリカプセルより抗線維性であり、単一の区画を含むミリカプセルと比較して、カプセル品質に対して最小限の悪影響で、より多くの細胞を保持することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子は、患者における疾病、障害、又は状態を処置するのに好適な治療薬（例えば、ポリペプチド）を生成する細胞（例えば、組み換え細胞）を含む。
【００２１】
［略語及び定義］
本開示の詳細な説明及び実施例を通して、以下の略語が使用される。
ＣＭ−Ａｌｇ：化学修飾アルギン酸塩
ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ：化学修飾された、低分子量アルギン酸塩
ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１：表２に示される化合物１０１で化学修飾された、低分子量アルギン酸塩
ＣＭ−ＨＭＷ−Ａｌｇ：化学修飾された、高分子量アルギン酸塩
ＣＭ−ＨＭＷ−Ａｌｇ−１０１：表２に示される化合物１０１で化学修飾された、高分子量アルギン酸塩
ＣＭ−ＭＭＷ−Ａｌｇ：化学修飾された、中間分子量アルギン酸塩
ＣＭ−ＭＭＷ−Ａｌｇ−１０１：表２に示される化合物１０１で化学修飾された、中間分子量アルギン酸塩
ＨＭＷ−Ａｌｇ：高分子量アルギン酸塩
ＭＭＷ−Ａｌｇ：中間分子量アルギン酸塩
Ｕ−Ａｌｇ：非修飾アルギン酸塩
Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇ：非修飾高分子量アルギン酸塩
Ｕ−ＬＭＷ−Ａｌｇ：非修飾低分子量アルギン酸塩
Ｕ−ＭＭＷ−Ａｌｇ：非修飾中間分子量アルギン酸塩
７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ：化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の７０：３０混合物（Ｖ：Ｖ）
【００２２】
本開示が、より容易に理解され得るように、本明細書において使用されるいくつかの専門用語及び科学用語が、以下に具体的に定義される。本明細書において他の箇所に特に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての他の専門用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。
【００２３】
添付の特許請求の範囲を含め、本明細書において用いられるところ、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの単数形の用語は、文脈上特に明記されない限り、それらの対応する複数の指示対象を含む。
【００２４】
「約」は、数値により規定されたパラメータ（例えば、直径、球形度、粒子中の細胞の数、調製物中の粒子の数などの、ヒドロゲルカプセルの物理的性質）を修飾するために本明細書において用いられる場合、パラメータが、そのパラメータについて記載される数値を１５％上回る又は下回る程度に変動し得ることを意味する。例えば、約１．５ミリメートル（ｍｍ）の直径を有し、約５００万（Ｍ）個の細胞をカプセル化するものと定義されるヒドロゲルカプセルは、１．２７５〜１．７２５ｍｍの直径を有し得、約４２５万〜５７５万個の細胞をカプセル化し得る。いくつかの実施形態において、約は、パラメータが、そのパラメータについて記載される数値を１０％上回る又は下回る程度に変動し得ることを意味する。
【００２５】
本明細書において用いられるところ、「取得する（Ａｃｑｕｉｒｅ）」又は「取得している（ａｃｑｕｉｒｉｎｇ）」は、値又は物理的エンティティを「直接的に取得する」又は「間接的に取得する」ことによる、値（例えば数値若しくはイメージ）、又は、物理的エンティティ（例えばサンプル）の入手を達成することを指す。「直接的に取得する」とは、プロセスを実施（例えば分析方法又はプロトコルの実施）して、値又は物理的エンティティを得ることを意味する。「間接的に取得する」とは、他の団体又は提供者（例えば、物理的エンティティ又は値を直接的に取得した第三者の実験室）から値又は物理的エンティティを受け取ることを指す。値又は物理的エンティティを直接的に取得するステップは、物理的な物質における物理的な変更、又は、機器若しくはデバイスの使用を含むプロセスの実施を含む。値を直接的に取得するステップの例としては、ヒト患者からのサンプルの入手が挙げられる。値を直接的に取得するステップは、例えば、蛍光顕微鏡データを取得する蛍光顕微鏡といった、機器又はデバイスを使用するプロセスの実施を含む。
【００２６】
本明細書において用いられるところ、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与している（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、本明細書に記載のエンティティ（例えば、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子（粒子封入細胞、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含む）、又は前記粒子を含む組成物）を、移植、吸収、経口摂取、注射、若しくは他の形で導入すること、又は患者にこれを提供することを指す。
【００２７】
本明細書において用いられるところ、「抗線維性」は、異物反応（ＦＢＲ）を軽減する化合物又は材料を指す。例えば、抗線維性化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、例えば、表２に列挙される化合物）を含む粒子（例えば、ヒドロゲルカプセル）のその組織への移植によって誘導される生体組織中のＦＢＲの量は、抗線維性なしの参照粒子、すなわち、抗線維性化合物又は材料を含まないが、実質的に同じ組成を有する粒子（例えば、同じ細胞型）及び構造（例えば、区画のサイズ、形状、数、同じ封入ポリマーなど）の移植によって誘導されるＦＢＲより少ない。実施形態において、ＦＢＲの程度は、例えば、国際公開第２０１７／０７５６３０号パンフレットに記載される当該技術分野において公知のアッセイを用いて、又はＶｅｇａｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（上掲）に記載されるアッセイ／方法（例えば、移植されたカプセルの皮下カテプシン測定、組織切片のマッソンのトリクローム（ＭＴ）、ヘマトキシリン又はエオジン染色、コラーゲン密度の定量化、マクロファージ（ＣＤ６８又はＦ４／８０）細胞染色及び共焦点顕微鏡検査、筋線維芽細胞（α平滑筋アクチン（ａｌｐｈａ−ｍｕｓｃｌｅ  ａｃｔｉｎ）、ＳＭＡ）又は一般的な細胞付着、公知の炎症因子及び免疫細胞マーカーの７９ＲＮＡ配列の定量化、又は好適な被験体、例えば、免疫応答性マウスの腹腔内で一定期間（例えば、１４日）後に回収された粒子（例えば、カプセル）におけるマクロファージ及び好中球についてのＦＡＣＳ分析のうちの１つ以上を用いて、例えば、タンパク質吸着、マクロファージ、多核異物巨細胞、線維芽細胞、及び血管新生を含み得る移植された粒子（例えば、ヒドロゲルカプセル）を含む組織における免疫応答によって評価される。実施形態において、ＦＢＲは、免疫応答の１つ以上のバイオマーカー、例えば、カテプシン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＣＣＬ２、又はＣＣＬ４の移植を含む組織におけるレベルを測定することによって評価される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子（例えば、外側区画の表面中及び／又は外側区画の表面上に配置された抗線維性化合物を含む２区画ヒドロゲルカプセル）によって誘導されるＦＢＲは、ＦＢＲなしの参照粒子、例えば、抗線維性化合物又は材料を含まないことを除き、その他の点では、権利請求される粒子と実質的に同一である、権利請求される粒子に実質的に同一の粒子によって誘導されるＦＢＲより少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は約１００％少ない。いくつかの実施形態において、移植された粒子によって誘導されるＦＢＲ（例えば、ＦＢＲバイオマーカーレベル）は、約３０分、約１時間、約６時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約１週間、約２週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約６ヶ月、又はそれ以上の後に測定される。
【００２８】
本明細書において用いられるところ、「細胞」は、組み換え細胞又は組み換えが行われていない細胞を指す。実施形態において、細胞は、不死化細胞である。
【００２９】
本明細書において用いられるところ、「保存的に修飾された変異体」又は保存的置換」は、そのアミノ酸配列中に１つ以上の保存的アミノ酸置換を有することを除いて、参照分子と同一である参照ペプチド又はポリペプチドの変異体を指す。実施形態において、保存的に修飾された変異体は、参照アミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列からなる。保存的アミノ酸置換は、同様の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造及び剛性など）を有し、且つ得られる置換ペプチド又はポリペプチドの生物活性に最小限の影響を与えるアミノ酸による、アミノ酸の置換を指す。機能的に類似したアミノ酸の保存的置換の表は、当該技術分野において周知であり、機能的特徴によって分類された例示的な置換が、以下の表１に記載されている。
【００３０】
【表１】
2021520374.tif 000003
【００３１】
本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられるところの「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの変化形は、任意の記載される要素又は要素の群の包含、及び規定の分子、組成物、粒子、又は方法の基本的又は新規な性質を実質的に変化させない、記載される要素と類似の又は異なる性質の他の要素の任意選択の包含を示す。非限定的な例として、記載されるアミノ酸配列から本質的になる治療用タンパク質は、それぞれ、治療用タンパク質の関連する生物学的活性に実質的に影響を与えない、１つ以上のアミノ酸残基の、記載されるアミノ酸配列内における置換を含む１つ以上のアミノ酸も含み得る。別の非限定的な例として、記載されるアミノ酸配列から本質的になるポリペプチドは、ポリペプチドの関連する生物学的活性を実質的に変化させない１つ以上の共有結合された部分（例えば、放射性又は蛍光標識）を含有し得る。
【００３２】
本明細書において用いられるところ、１つ又は複数の細胞に関する「に由来する」は、組織、細胞株、又は他の細胞から得られる１つ又は複数の細胞を指し、これらは、任意選択により、その後、培養、継代、不死化、分化及び／又は誘導されて、由来細胞を産生する。
【００３３】
本明細書において用いられるところ、「差分体積」は、別の区画に占有される空間を除く、粒子内の１つの区画の体積を指す。例えば、２区画粒子中の第２の区画の差分体積は、第１の区画に占有される空間を除く、第２の（例えば、外側）区画内の体積を指す。
【００３４】
本明細書において用いられるところ、「有効量」は、例えば、疾病、障害、又は状態を処置するための生物学的応答を誘発するために十分な、粒子の組成物（例えば、粒子組成物）又は粒子成分、例えば、細胞、例えば、組み換え細胞、又は細胞、例えば、組み換え細胞によって生成される薬剤、例えば、治療薬の量を指す。いくつかの実施形態において、「有効量」という用語は、粒子成分の量、例えば、粒子中の細胞の数、粒子表面上及び／又は外側区画中に配置される抗線維性化合物の濃度又は密度を指す。当業者に認識されるであろうとおり、有効量は、所望される生物学的エンドポイント、治療薬、組成物又は粒子の薬物動態、処置される状態、投与形態、並びに患者の年齢及び健康状態などの要因に応じて様々であり得る。有効量は、治療的及び予防的処置を包含する。例えば、粒子によって誘導されるＦＢＲを軽減するために、式（Ｉ）の化合物の抗線維性有効量は、線維化を低減するか、又は移植された粒子上又はその近くの線維化組織の増殖若しくは転移を停止させ得る。粒子、その組成物又は成分（例えば、抗線維性化合物、例えば、抗線維性ポリマー）の抗線維性有効量は、当該技術分野において公知であるか又は本明細書に記載される任意の技術によって決定され得る。
【００３５】
本明細書において用いられるところ、「内因性の核酸」とは、患者の細胞内で自然に生じる核酸である。
【００３６】
本明細書において用いられるところ、「内因性のポリペプチド」とは、患者の細胞内で自然に生じるポリペプチドである。
【００３７】
本明細書において用いられるところ、「組み換え細胞」とは、天然のものではない改変を有する細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）であり、典型的には、同様の条件下で組み換えがなされていない他の同様の細胞中に存在していない（又は、異なるレベルで存在する）核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）又はポリペプチドを含む（外因性の核酸配列）。実施形態において、組み換え細胞は外因性の核酸を含む（例えば、ベクター又は改変染色体配列）。実施形態において、組み換え細胞は、外因性のポリペプチドを含む。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞に存在しない外因性の核酸配列、例えば配列、例えばＤＮＡ又はＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は染色体性であり、例えば、外因性の核酸配列は、内因性の染色体配列中に配置された外因性の配列である。実施形態において、外因性の核酸配列は、染色体性又は染色体外性である、例えば非組み込み型ベクターである。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡ配列、例えば、ｍＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡとして発現される配列、例えばｍＲＮＡ又は調節ＲＮＡを含む染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ポリペプチドをコードする配列、又は、ポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、第２の核酸配列の立体構造又は発現を調節する第１の染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含み、ここで、第２のアミノ酸配列は外因性又は内因性であることが可能である。例えば、組み換え細胞は、内因性の配列の発現を制御する外因性の核酸を含んでいることが可能である。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞において見出されるレベルとは異なるレベル又は分布で存在するポリペプチドを含み得る。実施形態において、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、ポリペプチドをコードする配列、又はポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む外因性の核酸配列を含む。実施形態において、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、内因性の配列の配置又は発現を調節する外因性の核酸配列を含む。
【００３８】
本明細書において用いられるところ、「外因性の核酸」は、患者細胞内で天然に存在しない核酸である。
【００３９】
本明細書において用いられるところ、「外因性のポリペプチド」は、患者細胞内で天然に存在しないポリペプチドである。
【００４０】
本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩ生物活性、例えば、血液凝固の促進を有する、天然の第ＶＩＩ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。天然のＦＶＩＩは、一本鎖酵素前駆体、酵素前駆体様の二本鎖ポリペプチド及び完全に活性化された二本鎖形態（ＦＶＩＩａ）として存在する。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩへの言及は、酵素前駆体様及びＦＶＩＩａを含む、その一本鎖及び二本鎖形態を含む。本明細書に記載の粒子（例えば、２組み換えＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセル）によって生成され得るＦＶＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。いくつかの実施形態において、変異体ＦＶＩＩタンパク質は、野生型第ＶＩＩａ因子の活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する完全に活性化された二本鎖形態（第ＶＩＩａ因子）へと活性化されることが可能である。ＦＶＩＩ及びＦＶＩＩａの変異体は公知であり、例えば、マルゼプタコグアルファ（ｍａｒｚｅｐｔａｃｏｇ  ａｌｆａ）（活性化）（ＭａｒｚＡＡ）並びに欧州特許第１３７３４９３号明細書、米国特許第７７７１９９６号明細書、米国特許第９４７６０３７号明細書及び米国特許出願公開第２００８００５８２５５号明細書に記載されている変異体である。
【００４１】
ＦＶＩＩ生物活性は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって定量化され得る。例えば、生体液、例えば、血漿のサンプルのＦＶＩＩ生物活性は、（ｉ）脂質膜及び第Ｘ因子に埋め込まれたＴＦを含むシステムにおいて生成された第Ｘａ因子の量を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１９９１９−１９９２４，１９９７）；（ｉｉ）水性系における第Ｘ因子加水分解を測定すること；（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴に基づいて機器を用いて組織因子（ＴＦ）へのその物理的結合を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｓ．４１３：３５９−３６３，１９９７）；又は（ｉｖ）合成基質の加水分解を測定すること；及び／又は（ｖ）ＴＦ非依存性インビトロ系におけるトロンビンの生成を測定することによって定量化され得る。実施形態において、ＦＶＩＩ活性は、市販の発色アッセイ（ＢＩＯＰＨＥＮ  ＦＶＩＩ，ＨＹＰＨＥＮ  ＢｉｏＭｅｄ  Ｎｅｕｖｉｌｌｅ  ｓｕｒ  Ｏｉｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ）によって評価され、ここで、ＦＶＩＩを含有する生体サンプルが、トロンボプラスチンカルシウム、第Ｘ及びＳＸａ−１１因子（第Ｘａ因子に特異的な発色性基質と混合される。
【００４２】
本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩＩ生物活性、例えば、凝固活性を有する、天然の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の粒子、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルによって発現され得るＦＶＩＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失、Ｂドメイン欠失（ＢＤＤ）変異体、一本鎖変異体及び半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体のいずれかの融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、細胞は、Ｂドメインの完全又は部分的な欠失を有する前駆体第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）をコードするように組み換えられる。実施形態において、細胞は、一本鎖第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドをコードするように組み換えられる。変異体ＦＶＩＩＩタンパク質は、好ましくは、対応する野生型第ＶＩＩＩ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＶＩＩＩタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイは、一段階又は二段階凝固アッセイ（Ｒｉｚｚａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ  ｏｆ  ＦＶＩＩＩ：Ｃ  ａｎｄ  ＦＩＸａ  ｉｎ  Ｂｌｏｏｍ  ｅｄ．Ｔｈｅ  Ｈｅｍｏｐｈｅｌｉａｓ．ＮＹ  Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ  １９９２）又は発色性基質ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ（Ｒｏｓｅｎ，Ｓ．１９８４．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ３３：１３９−１４５、補遺）を含む。
【００４３】
いくつかのＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ変異体が公知であり、例えば、以下の米国特許第４，８６８，１１２号明細書（例えば、第２欄、２行から第１９欄、２１行及び表２）；同第５，１１２，９５０号明細書（例えば、第２欄、５５〜６８行、図２、及び実施例１）；同第５，１７１，８４４号明細書（例えば、第４欄、１２２行から第５欄、３６行）；同第５，５４３，５０２号明細書（例えば、第２欄、１７〜４６行）；同第５，５９５，８８６号明細書；同第５，６１０，２７８号明細書；同第５，７８９，２０３号明細書（例えば、第２欄、２６〜５１行及び実施例５〜８）；同第５，９７２，８８５号明細書（例えば、第１欄、２５行から第２欄、４０行）；同第６，０４８，７２０号明細書（例えば、第６欄、１〜２２行及び実施例１）；同第６，０６０，４４７号明細書；同第６，２２８，６２０号明細書；同第６，３１６，２２６号明細書（例えば、第４欄、４行から第５欄、２８行及び実施例１〜５）；同第６，３４６，５１３号明細書；同第６，４５８，５６３号明細書（例えば、第４欄、２５〜５３行）及び同第７，０４１，６３５号明細書（例えば、第２欄、１行から第３欄、１９行、第３欄、４０行から第４欄、６７行、第７欄、４３行から第８欄、２６行、及び第１１欄、５行から第１３欄、３９行）のいずれかに開示されている完全又は部分的なＢドメイン欠失を有する変異体が挙げられる。
【００４４】
いくつかの実施形態において、（例えば、粒子に含まれる組み換え細胞によって発現される）本明細書に記載の粒子より生成されるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、Ｂドメインにおけるアミノ酸の以下の欠失の１つ以上を有する：（ｉ）２つのポリペプチド鎖への一次翻訳産物の細胞内プロセシングに不可欠なアミノ末端Ｂドメイン配列を除くＢドメインの大部分（国際公開第９１／０９１２２号パンフレット）；（ｉｉ）アミノ酸７４７〜１６３８（Ｈｏｅｂｅｎ  Ｒ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（１３）：７３１８−７３２３（１９９０））；アミノ酸７７１〜１６６６又はアミノ酸８６８〜１５６２（Ｍｅｕｌｉｅｎ  Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．２（４）：３０１−６（１９８８）；アミノ酸９８２〜１５６２又は７６０〜１６３９（Ｔｏｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：５９３９−５９４２（１９８６））；アミノ酸７９７〜１５６２（Ｅａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：８３４３−８３４７（１９８６））；７４１〜１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ、国際公開第８７／０４１８７号パンフレット））、７４７〜１５６０（Ｓａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  ６：５５３−５６４（１９８７））；アミノ酸７４１〜１６４８（Ｐａｓｅｋ、国際公開第８８／００８３１号パンフレット））、アミノ酸８１６〜１５９８又は７４１〜１６８９（Ｌａｇｎｅｒ（Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．（１９８８）Ｎｏ  ８２：１６−２５、ＥＰ２９５５９７号明細書）の欠失；フーリンプロテアーゼ認識配列における１つ以上の残基を含む欠失、例えば、米国特許第９，９５６，２６９号明細書、第１０欄、６５行から第１１欄、３６行に記載されている特定の欠失のいずれかを含む、アミノ酸１６４３〜１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ。
【００４５】
他の実施形態において、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、以下のＢドメインアミノ酸又はアミノ酸配列のいずれかを保持する：（ｉ）Ｂドメインにおける１つ以上のＮ−連結されたグリコシル化部位、例えば、残基７５７、７８４、８２８、９００、９６３、又は任意選択により９４３、最初の２２６アミノ酸又は最初の１６３アミノ酸（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０３（ａ）：３４１２−３４１９（２００４）、Ｋａｓｕｄａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６：１３５２−１３５９（２００８）、及びＰｉｐｅ，Ｓ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９：２２３５−２２４２（２０１１）。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質は、米国特許第１０，０２３，６２８号明細書、同第９，３９４，３５３号明細書及び同第９，６７０，２６７号明細書に記載されているＲ１６４５及び／又はＲ１６４８位置における置換のいずれかを含む、この部位におけるタンパク質分解による切断を防ぐフーリンプロテアーゼ認識配列における１つ以上のアミノ酸の置換（アミノ酸１６４３〜１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ）によって生成される一本鎖変異体である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、上記のＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質のいずれかは、以下の変位の１つ以上をさらに含み得る：ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤタンパク質の発現を改善するためのＦ３０９Ｓ置換（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０３（ａ）：３４１２−３４１９（２００４）；アルブミン融合（国際公開第２０１１／０２０８６６号パンフレット）；及びＦｃ融合（国際公開第０４／１０１７４０号パンフレット）。
【００４８】
別段の定めがある場合を除き、本明細書において言及されるすべてのＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸位置は、完全長ヒトＦＶＩＩＩにおける位置を指す。
【００４９】
本明細書において用いられるところ、「第ＩＸ因子タンパク質」又は「ＦＩＸタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＩＸ生物活性、例えば、凝固活性を有する天然の第ＩＸ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。ＦＩＸは、不活性な酵素前駆体として生成され、これは、活性化ペプチドの第ＸＩａ因子除去によって活性な形態に転化されて、１つ以上のジスルフィド結合によって一緒に保持された重鎖及び軽鎖が生成される。（例えば、粒子に含まれる組み換えＲＰＥ細胞により発現される）本明細書に記載の粒子によって生成され得るＦＩＸタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体タンパク質のいずれかの１つ以上のアミノ酸置換及び／又は欠失及び融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、細胞は、完全長野生型ヒト第ＩＸ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）又はその機能的変異体をコードするように組み換えられる。変異体ＦＩＸタンパク質は、好ましくは、野生型第ＶＩＸ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＩＸタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイとしては、Ｂｉｏｐｈｅｎ第ＩＸ因子アッセイ（Ｈｙｐｈｅｎ  ＢｉｏＭｅｄ）及び一段階凝固アッセイ（活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）（例えば、欧州特許第２０３２  ６０７  Ｂ２号明細書に記載される）、トロンビン生成時間アッセイ（ＴＧＡ）及び回転式トロンボエラストメトリー（例えば、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載される）が挙げられる。
【００５０】
いくつかの機能的ＦＩＸ変異体が公知であり、以下の国際特許公報：国際公開第０２／０４０５４４  Ａ３号パンフレット、４頁、９〜３０行及び１５頁、６〜３１行；国際公開第０３／０２０７６４  Ａ２号パンフレット、１４〜２４頁の表２及び３、及び１２頁、１〜２７行；国際公開第２００７／１４９４０６  Ａ２号パンフレット、４頁、１行から１９頁、１１行；国際公開第２００７／１４９４０６  Ａ２号パンフレット、１９頁、１２行から２０頁、９行；国際公開第０８／１１８５０７  Ａ２号パンフレット、５頁、１４行から６頁、５行；国際公開第０９／０５１７１７  Ａ２号パンフレット、９頁、１１行から２０頁、２行；国際公開第０９／１３７２５４  Ａ２号パンフレット、２頁、段落［００６］から５頁、段落［０１１］及び１６頁、段落［０４４］から２４頁、段落［０５７］；国際公開第０９／１３０１９８  Ａ２号パンフレット、４頁、２６行から１２頁、６行；国際公開第０９／１４００１５  Ａ２号パンフレット、１１頁、段落［００４３］から１３頁、段落［００５３］；国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレット；国際公開第２０１５／０８６４０６号パンフレットに記載されている機能的ＦＩＸ変異体のいずれかを含む本発明に記載の粒子に封入される組み換え細胞によって発現され得る。
【００５１】
一定の実施形態において、ＦＩＸポリペプチドは、ＦＩＸタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された野生型又は変異体配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ−グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。例示的なＦＩＸポリペプチドは、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載されているｒＦＩＸＦｃタンパク質であり、これは、Ｆｃのヒンジ領域における２つのジスルフィド結合を介して一緒に結合されたＦＩＸＦｃ一本鎖（ＦＩＸＦ  ｃ−ｓｃ）及びＦｃ一本鎖（Ｆｃ−ｓｃ）である。
【００５２】
ＦＩＸ変異体は、機能獲得及び機能喪失変異体も含む。機能獲得変異体の例は、ヒトＦＩＸの「Ｐａｄｕａ」変異体であり、これは、Ｒ（アルギニン）（配列番号２のアミノ酸位置３８４に対応する）の代わりに成熟タンパク質の位置３３８におけるＬ（ロイシン）を有し、野生型ヒトＦＩＸと比較してより高い触媒及び凝固活性を有する（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１２０８９−９４（１９９８））。機能喪失変異体の例は、成熟タンパク質の開始から５番目のアミノ酸位置におけるリジンと置換されるアラニンであり、これは、コラーゲンＩＶへの結合の低下（例えば、機能喪失）を有するタンパク質をもたらす。
【００５３】
本明細書において用いられるところ、「インターロイキン２タンパク質」又は「ＩＬ−２タンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＩＬ−２生物活性を有する、例えば、Ｔｒｅｇ細胞におけるＩＬ−２受容体シグナル伝達を活性化する、天然のＩＬ−２タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載の粒子、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子によって生成され得るＩＬ−２タンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。変異体ＩＬ−２タンパク質は、好ましくは、対応する野生型ＩＬ−２の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＩＬ−２タンパク質のための生物活性アッセイが、米国特許第１０，０３５，８３６号明細書に記載されており、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５−／低Ｔ細胞又はＮＫ細胞と比較して、Ｔｒｅｇ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質のレベルを測定することを含む。本開示の粒子（例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含む粒子）によって生成され得る変異体ＩＬ−２タンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、及びＣ１２５Ｓ又はＣ１２５Ａの１つ以上を有するタンパク質を含む。
【００５４】
本明細書において用いられるところ、「膵島細胞」は、任意の天然の又は任意の合成的に生成された、又は修飾された細胞であって、膵臓ランゲルハンス島の細胞の部分的若しくは全体的な機能を部分的若しくは全体的に再現する、模倣する又は他の形で発現することを意図された細胞を含む細胞を意味する。「膵島細胞」という用語は、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞に由来するグルコース応答的なインスリン産生細胞を含む。
【００５５】
本明細書において用いられるところ、「マンニトール」は、特に明記されない限り、Ｄ−マンニトールを指す。
【００５６】
「間葉系幹機能細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｅｍ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｃｅｌｌ）」又は「ＭＳＦＣ」は、それらの用語が本明細書において用いられるところ、中胚葉系統に由来するか、又は中胚葉系統の細胞に特有の少なくとも１つの特徴を有する細胞を指し、ここで、ＭＳＦＣは、ｉ）分化の末期状態でなく、ｉｉ）１つ以上の細胞型へと最終的に分化し得る。ＭＳＦＣは、内胚葉由来の細胞、例えば、腸細胞、又は外胚葉由来の細胞、例えば、皮膚に由来する細胞、ＣＮＳ、又は神経細胞を含まない。実施形態において、ＭＳＦＣは、多能性である。実施形態において、ＭＳＦＣは、分化全能性でない。実施形態において、ＭＳＦＣは、以下の特徴の１つ以上を含む：
ａ）それは、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）又はそれに由来する細胞を含み、このような細胞としては、ＭＳＣの一次細胞培養物に由来する細胞、天然のＭＳＣ（例えばヒト又は他の哺乳動物由来）から直接単離された細胞（長期の培養を伴わない、例えば、細胞分裂が単離から５又は１０継代又は回未満）、形質転換、多能性、不死化、又は長期（例えば、細胞分裂から５又は１０継代又は回超）ＭＳＣ培養物に由来する細胞が挙げられる。実施形態において、ＭＳＦＣは、ヒト供給源、例えば、血液（例えば、末梢血）、骨髄（例えば、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊椎、肋骨、又は膝）、滑膜組織、脂肪組織、皮膚、胎児組織、臍帯、又は胎盤に由来し；
ｂ）それは、低分化細胞から得られた細胞、例えば、ＭＳＣに発生、プログラム、若しくは再プログラム（例えばインビトロで）された細胞、又はいずれかの遺伝子組み換えを除き、１種以上の天然ＭＳＣと実質的に同様である細胞又はＭＳＣの一次若しくは長期培養物由来の細胞、又は上のａ）に記載される細胞を含む。ＭＳＦＣが由来し得る低分化細胞の例としては、ＩＰＳ細胞、胚性幹細胞、又は他の分化全能性又は多能性細胞が挙げられ；例えば、Ｃｈｅｎ，Ｙ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  １（８３−９５）；Ｆｒｏｂｅｌ，Ｊ  ｅｔ  ａｌ（２０１４）Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ３（３）：４１４−４２２；Ｚｏｕ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ３：２２４３を参照されたい；
ｃ）例えば、細胞の多能性についての情報を提供することが可能な任意のアッセイ、例えば、顕微鏡検査によって測定した際に、それは多能性であり；
ｄ）それは、円形ないし楕円形の核と共に、特徴的な単核の卵形、星形又は紡錘形を示す。楕円形の細長い核は、隆起した核小体及びヘテロクロマチンとユークロマチンとの混合物を有し得る。ＭＳＦＣ（例えば、ＭＳＣ）は、細胞質をほとんど含まないが、核から伸びているように見える多くの薄い突起（ｐｒｏｃｅｓｓ）を有し得る；
ｅ）例えば、細胞分裂についての情報を提供することが可能な任意のアッセイ、例えば、顕微鏡検査によって測定した際に、それは細胞分裂が可能である。実施形態において、ＭＳＦＣは、（例えば、本明細書に記載の粒子内にカプセル化されるか又は組み込まれる前に）培養物中で細胞分裂が可能である。実施形態において、それは、粒子（例えば、本明細書に記載の２区画カプセル）内にカプセル化された、例えば、本明細書に記載されるようにカプセル化されたか、又は組み込まれた後、細胞分裂が可能である。実施形態において、それは、コンフルエンスに達した後、細胞分裂することができない；
ｆ）それは、間葉細胞系統、例えば、骨芽細胞、軟骨芽細胞、脂肪細胞、又は線維芽細胞へと分化することが可能である；
ｇ）それは、間葉細胞マーカー、例えば、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ７３、ＣＤ９０、Ｓｔｒｏ−１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１６６、ＴＮＡＰ＋、ＴＨＹ−１＋、Ｓｔｒｏ−２、Ｓｔｒｏ−４、及びアルカリホスファターゼのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はすべてを発現する；
ｈ）それは、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＶＥ−カドヘリン、ＣＤ４５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１１ｂ及びグリコホリン又は白血球分化抗原、例えば、ＣＤ１４、ＣＤ３３、ＣＤ３及びＣＤ１９のうちの１つ、２つ、３つ、又はいずれかの有意なレベルを発現しない；
ｉ）それは、ＣＤ７５、ＣＤ９０、及びＣＤ１０５のうちの１つ、２つ、又はすべてを発現し、ＣＤ４５、ＣＤ３４、及びＣＤ１４のうちの１つ、２つ、又はいずれかを発現しない；
ｊ）例えば、炎症に関連する情報を提供することが可能な任意の方法、例えば、Ｔ細胞増殖のインビボ阻害によって測定した際に、それは、抗炎症性又は免疫減衰性（ｉｍｍｕｎｅ−ｄａｍｐｅｎｉｎｇ）である；
ｋ）例えば、目視検査などによって決定した際に、それは、付着性、例えば、プラスチック付着性であることが可能である；又は
ｌ）例えば、目視検査などによって決定した際に、３次元で成長し得る。
【００５７】
本明細書において用いられるところ、「副甲状腺ホルモン」又は「ＰＴＨ」は、例えば、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＰＴＨ生物活性を有する、天然の副甲状腺ホルモンポリペプチド又はペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はペプチドを意味する。本明細書に記載の封入細胞によって発現され得るＰＴＨポリペプチド及びペプチドは、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。このようなＰＴＨポリペプチド及びペプチドは、プレプロ−ＰＴＨポリペプチド（１１５アミノ酸）、プロ−ＰＴＨポリペプチド（９０アミノ酸）、成熟８４−アミノ酸ペプチド（ＰＴＨ（１−８４））、及び生物学的に活性なその変異体、例えば、切断型変異体ペプチドＰＴＨ（１−３４）のための野生型ヒト配列から本質的になり得る。ヒト野生型配列における１つ以上のアミノ酸置換を有するＰＴＨペプチド変異体が、例えば、米国特許第７４１０９４８号明細書及び８５６３５１３号明細書並びに米国特許出願公開第２０１３０２１７６３０号明細書に記載されている。ＰＴＨ変異体は、好ましくは、対応する野生型ＰＴＨの生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。タンデム質量分析法による特定のＰＴＨ変異体を検出するためのアッセイが、米国特許第８３８３４１７号明細書に記載されている。ＰＴＨペプチド変異体のための生物活性アッセイ、ｃＡＭＰレベルを測定することによって決定される際、アデニル酸シクラーゼの刺激が、米国特許第７４１０９４８号明細書に記載されている。
【００５８】
本明細書において用いられるところ、「ポロキサマー」は、２つのポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））部分が横に配置されたポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中心の疎水性鎖から構成される非イオン性トリブロック直鎖コポリマーの種類に対する標準的な総称を指す。
【００５９】
本明細書において用いられるところ、「ポロキサマー１８８」又は「Ｐ  １８８」は、ポリオキシプロピレンコアについて１８００ｇ／モルのおよその分子量及び約８０％重量パーセント、例えば、７９．０〜８３．７パーセントのオキシエチレン含量を有するポロキサマーを指す。実施形態において、ポロキサマー１８８は、８３５０ｇ／モルの平均分子量を有する。実施形態において、ポロキサマー１８８は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィによって決定した際に、７６８０ｇ／モル〜９５１０ｇ／モルの平均分子量、及び８１．８±１．９％重量パーセントのオキシエチレン含量を有する。実施形態において、ポロキサマー１８８中の各ポリオキシエチレン鎖は、７５〜８５（例えば、８０）のエチレンオキシドモノマーを有し、ポリオキシプロピレンコアは、２５〜３０（例えば、２７）のプロピレンオキシドモノマーを有する。実施形態において、本明細書に記載の方法において使用されるポロキサマー１８８は、この方法が行われる時点で公式である、米国薬局方−国民医薬品集（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）（ＵＳＰ−ＮＦ）又は欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）によって公表されるポロキサマーの研究論文に記載される規格を実質的に満たす。
【００６０】
本明細書において用いられるところ、「ポロキサマー４０７」又は「Ｐ  ４０７」は、ポリプロピレンコアについて４０００ｇ／モルのおよその分子量及び約７０重量％のオキシエチレン含量を有するポロキサマーを意味する。実施形態において、ポロキサマー４０７は、９，８４０ｇ／モル〜１４，６００ｇ／モルの平均分子量及び７３．２±１．７重量％のオキシエチレン含量を有する。実施形態において、ポロキサマー４０７中の各ポリオキシエチレン鎖は、９５〜１０５（例えば、１０１）のエチレンオキシドモノマー（例えばを有し、ポリオキシプロピレンコアは、５４〜６０（例えば、５６）のプロピレンオキシドモノマーを有する。
【００６１】
本明細書において用いられるところ、「ポリペプチド」は、ペプチド結合を介して結合されたアミノ酸残基を含み、少なくとも２、実施形態において、少なくとも１０、５０、７５、１００、１５０又は２００のアミノ酸残基を有するポリマーを指す。
【００６２】
本明細書において用いられるところ、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、及び「予防している（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、投与又は治療の適用を含む処置であって、例えば、封入細胞の組成物（例えば、本明細書に記載の）を、疾病、障害、又は状態の発症の前に、前記疾病、障害、又は状態に係る物理的徴候を妨げるために投与するステップを含む処置を指す。いくつかの実施形態において、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が未だ発生していないか、又は、実測されていないことが必要とされる。いくつかの実施形態において、処置は、予防を含み、他の実施形態においては含まない。
【００６３】
「置換治療」又は「置換タンパク質」は、タンパク質の減少、変性又は欠乏に関連する疾病又は状態にある患者において減少している、不十分な量で存在している、変性した（例えば、変異した）、又は、欠乏しているタンパク質を置換又は増大させる治療用タンパク質又はその機能性画分である。例は、一定の血液凝固障害における一定の血液凝固因子、又は、一定のライソゾーム蓄積症における一定のライソゾーム酵素である。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、内因性のタンパク質の機能が提供される。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、置換されるタンパク質の、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子といった天然の変異体と同一のアミノ酸配列を有する。実施形態において、又は置換治療若しくは置換タンパク質は、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子であって、例えば患者が有する対立遺伝子といった天然変異体とは、アミノ酸残基の約１、２、３、４、５、１０、１５又は２０％以下でアミノ酸配列が異なる。
【００６４】
本明細書において用いられるところ、「ＲＰＥ細胞」は、以下の特徴の１つ以上を有する細胞を指す：ａ）それは、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２３０２（商標））を用いて培養される）又はこれに由来する細胞を含み、このような細胞としては、ＲＰＥ細胞の一次細胞培養物に由来する細胞、天然のＲＰＥ細胞（例えばヒト又は他の哺乳動物由来）から直接単離された細胞（長期の培養を伴わない、例えば、細胞分裂が単離から５又は１０継代又は回未満）、形質転換、不死化、又は長期（例えば、細胞分裂から５又は１０継代又は回超）ＲＰＥ細胞培養物に由来する細胞が挙げられ；ｂ）低分化細胞から得られた細胞、例えば、ＲＰＥ細胞に発生、プログラム、若しくは再プログラム（例えばインビトロで）された細胞、又はいずれかの遺伝子組み換えを除き、１種以上の天然ＲＰＥ細胞と実質的に同様である細胞又はＲＰＥ細胞の一次若しくは長期培養物由来の細胞（例えば、このような細胞は、ＩＰＳ細胞から誘導可能である）；又はｃ）以下の特性の１つ以上を有する細胞：ｉ）それは、バイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンの１つ以上を発現する；ｉｉ）それは、バイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ−６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、又はαＢ−クリスタリンの１つ以上を発現しない；ｉｉｉ）それは、網膜中に天然に見られ、ブルッフ膜中の脈絡膜血管上に単一層を形成する；ｉｖ）それは、網膜における上皮輸送、光吸収、分泌、及び免疫調節を担う；又はｖ）それは、合成的に生成されているか、又は不死化ＲＰＥ細胞株（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２３０２（商標）））と同じ若しくは実質的に同じ遺伝的内容、及び任意選択により、同じ若しくは実質的に同じ後成的内容を有するように、天然細胞から修飾されている。実施形態において、本明細書に記載のＲＰＥ細胞は、例えば、新たな特性を有するように操作され、例えば、細胞は、治療用タンパク質を発現するように操作される。他の実施形態において、ＲＰＥ細胞は、操作されていない。
【００６５】
「配列同一性」又は「パーセント同一」は、本明細書において、２つのヌクレオチド配列又は２つのアミノ酸配列を指すために用いられる場合、２つの配列が比較され、比較ウィンドウ（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｎｄｏｗ）又は指定される領域にわたって最大の一致のために整列される場合、２つの配列が規定の領域内で同じであるか、又は規定の領域内のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージの同じヌクレオチド又はアミノ酸を有することを意味する。配列同一性は、限定されないが、米国特許出願公開第２０１７／０２３３４４５５号明細書に記載されているアルゴリズムのいずれかを含む、当該技術分野において公知の標準的な技術を用いて決定され得る。実施形態において、同一のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージは、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上である。
【００６６】
本明細書において用いられるところ、「球状」は、球体（例えば、完全に円形の球）又は球体様の形状を形成する曲面を有する粒子を指す。球体及び球体様の物体は、３つの垂直軸、ａ、ｂ、及びｃのそれぞれの周りの円、楕円、又は組み合わせの回転によって数学的に定義され得る。球体については、３つの軸ａ、ｂ、及びｃが同じ長さである。一般に、球体様の形状は、互いに１０％、又は５％、又は２．５％以内である半主軸（ｓｅｍｉ−ｐｒｉｎｃｉｐａｌ  ａｘｅｓ）ａ、ｂ、及びｃを有する楕円体（その平均面について）である。球体又は球体様の形状の直径は、半主軸の平均などの平均直径である。
【００６７】
本明細書において用いられるところ、「患者」は、ヒト又は非ヒト動物を指す。実施形態において、患者は、例えば任意の年齢群のヒト（すなわち、男性又は女性）、小児科の患者（例えば乳児、小児、青年）又は成人患者（例えば、若年成人、中年成人、又は老人）である。実施形態において、患者は、非ヒト動物、例えば哺乳動物（例えば、霊長類（例えばカニクイザル又はアカゲザル）である。実施形態において、患者は、（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、又はイヌ）の商業的に関連する哺乳動物）又は鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、又はシチメンチョウなどの商業的に関連する鳥類）である。一定の実施形態において、動物は哺乳動物である。動物は、オス又はメスであり得、任意の成長段階であり得る。非ヒト動物は遺伝子組み換え動物であり得る。
【００６８】
本明細書において用いられるところ、「総体積」は、別の区画に占有される空間を含む粒子の１つの区画内の体積を指す。例えば、２区画粒子の第２の（例えば、外側）区画の総体積は、第１の区画に占有される空間を含む第２の区画内の体積を指す。
【００６９】
本明細書において用いられるところ、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害、若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延の１つ以上、又は疾病、障害、若しくは状態の症状、兆候、若しくは基礎原因の１つ以上の進行の阻害を指す。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の症状の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の兆候の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害又は状態の基礎原因の発症の低減、逆転、緩和、低減又は遅延を含む。いくつかの実施形態において、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が発生しているか、又は、実測されていることを必要とする。他の実施形態において、処置は、疾病又は状態の兆候又は症状が不在でも、例えば予防的処置で投与されてもよい。例えば、処置は、症状の発症（例えば、症状の履歴を鑑みて、及び／又は、遺伝的又は他の感受性要因を鑑みて）の前に感受性の個体に投与され得る。処置はまた、例えば再発を遅延又は予防するために、症状が回復した後も継続してもよい。いくつかの実施形態において、処置は予防を含み、他の実施形態においては含まない。
【００７０】
本明細書において用いられるところ、「フォン・ヴィレブランド因子タンパク質」又は「ＶＷＦタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＶＷＦ生物活性、例えば、ＦＶＩＩＩ結合活性を有する天然のＶＷＦポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。（例えば、粒子に含まれる組み換え細胞によって発現される）本明細書に記載の粒子によって生成され得るＶＷＦタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。封入細胞は、以下のＶＷＦポリペプチドのいずれかをコードするように組み換えられ得る：２８１３アミノ酸の前駆体ＶＷＦ、２２アミノ酸のシグナルペプチドを欠くＶＷＦ、及び任意選択により、７４１アミノ酸のプレプロペプチド、２０５０アミノ酸の成熟ＶＷＦタンパク質、及びその切断型変異体、例えば、ＶＷＦ欠損マウスにおける内因性のＦＶＩＩＩレベルを安定させるのに十分なＶＷＦ断片、例えば、Ｄ’Ｄ３領域（アミノ酸７６４〜１２４７）又はＤ１Ｄ２Ｄ’Ｄ３領域を含有する切断型変異体；及び例えば、米国特許第９４５８２２３号明細書に記載されているように、Ｄ’領域における１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＷＦ変異体。変異体ＶＷＦタンパク質は、好ましくは、対応する野生型ＶＷＦタンパク質の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＶＷＦの生物活性を決定するための当該技術分野において認識されているアッセイは、リストセチン補因子活性（Ｆｅｄｅｒｉｃｉ  Ａ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ８９：７７−８５）、血小板糖タンパク質複合体Ｉｂ−Ｖ−ＩＸのＧＰ  ＩｂαへのＶＷＦの結合（Ｓｕｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００６．Ｃｌｉｎ  Ａｐｐｌ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ．１２：３０５−３１０）、及びコラーゲン結合（Ｋａｌｌａｓ  ＆  Ｔａｌｐｓｅｐ．２００１．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ８０：４６６−４７１）を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本開示の粒子によって産生されるＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された天然又は変異体ＶＷＦアミノ酸配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ−グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【００７２】
［選択される化学的定義］
特定の官能基及び化学用語の定義を以下により詳細に記載する。化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．の内表紙のＰｅｒｉｏｄｏｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎに従って識別し、特定の官能基は、ここに記載されているとおり通常どおり定義している。また、有機化学の一般原則、並びに特定の官能基部分及び反応性は、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ、１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。
【００７３】
本明細書で用いている略語は、化学及び生物学の技術分野におけるその従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造及び式は、化学技術分野において既知である化学原子価に係る標準的な規則に従って構成されている。
【００７４】
値の範囲が列挙されている場合、範囲中の各値及び部分範囲が包含されることが意図されている。例えば「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ６、Ｃ１〜Ｃ５、Ｃ１〜Ｃ４、Ｃ１〜Ｃ３、Ｃ１〜Ｃ２、Ｃ２〜Ｃ６、Ｃ２〜Ｃ５、Ｃ２〜Ｃ４、Ｃ２〜Ｃ３、Ｃ３〜Ｃ６、Ｃ３〜Ｃ５、Ｃ３〜Ｃ４、Ｃ４〜Ｃ６、Ｃ４〜Ｃ５、及びＣ５〜Ｃ６アルキルを包含することが意図されている。
【００７５】
本明細書において用いられるところ、「アルキル」は、１〜２４個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ２４アルキル」）を有する直鎖又は分岐飽和炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１〜１２個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ１２アルキル」）、１〜１０個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ１２アルキル」）、１〜８個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」）、１〜６個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」）、１〜５個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」）、１〜４個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」）、１〜３個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ３アルキル」）、１〜２個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ２アルキル」）、又は１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ６アルキル」）。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ−プロピル（Ｃ３）、イソプロピル（Ｃ３）、ｎ−ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ４）、イソ−ブチル（Ｃ４）、ｎ−ペンチル（Ｃ５）、３−ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ５）、第三級アミル（Ｃ５）、及びｎ−ヘキシル（Ｃ６）が挙げられる。アルキル基の追加の例としては、ｎ−ヘプチル（Ｃ７）、ｎ−オクチル（Ｃ８）などが挙げられる。アルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキル」）。
【００７６】
本明細書において用いられるところ、「アルケニル」は、２〜２４個の炭素原子、１つ以上の炭素−炭素二重結合を有し、及び三重結合を有さない直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２〜１２個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル」）、２〜１０個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル」）、２〜８個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ８アルケニル」）、２〜６個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」）、２〜５個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ５アルケニル」）、２〜４個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ４アルケニル」）、２〜３個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ３アルケニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。１つ以上の炭素−炭素二重結合は、中間（２−ブテニルにおけるものなど）又は末端（１−ブテニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２〜Ｃ４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１−プロペニル（Ｃ３）、２−プロペニル（Ｃ３）、１−ブテニル（Ｃ４）、２−ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基の例としては、前述のＣ２〜４アルケニル基並びにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルケニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルケニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルケニル」）。
【００７７】
本明細書において用いられるところ、「アルキニル」という用語は、２〜２４個の炭素原子、１つ以上の炭素−炭素三重結合を有する直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２〜１２個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル」）、２〜１０個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル」）、２〜８個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」）、２〜６個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」）、２〜５個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ５アルキニル」）、２〜４個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ４アルキニル」）、２〜３個の炭素原子（「Ｃ２〜Ｃ３アルキニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。１つ以上の炭素−炭素三重結合は、中間（２−ブチニルにおけるものなど）又は末端（１−ブチニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２〜Ｃ４アルキニル基の例としては、エチニル（Ｃ２）、１−プロピニル（Ｃ３）、２−プロピニル（Ｃ３）、１−ブチニル（Ｃ４）、２−ブチニル（Ｃ４）などが挙げられる。アルキニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキニル」）。
【００７８】
本明細書において用いられるところ、「ヘテロアルキル」という用語は、非環式の安定な直鎖若しくは分岐鎖、又はこれらの組み合わせであって、少なくとも１個の炭素原子と、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子とを含むものを指し、ここで、窒素原子及び硫黄原子は任意選択により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択により四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の位置に配置されていてもよい。例示的なヘテロアルキル基としては、これらに限定されないが：−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ３、及び−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ３が挙げられる。２個又は３個以下のヘテロ原子が連続していてもよい（例えば−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３及び−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３など）。「ヘテロアルキル」が引用され、続いて、特定のヘテロアルキル基が引用されている場合（−ＣＨ２Ｏ、−ＮＲＣＲＤなど）、用語ヘテロアルキル及び−ＣＨ２Ｏ又は−ＮＲＣＲＤは、重複していないか、又は相互に排他的ではないことが理解されるであろう。むしろ、特定のヘテロアルキル基が追加的な明確さのために引用されている。それ故、「ヘテロアルキル」という用語は、−ＣＨ２Ｏ、−ＮＲＣＲＤなどの特定のヘテロアルキル基を排除していると本明細書において解釈されるべきではない。ヘテロアルキル基の各実例は、独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロアルキル」）又は例えば１個以上の置換基、例えば１〜５個の置換基、１〜３個の置換基、若しくは１個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアルキル」）。
【００７９】
「アルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、又は「ヘテロアルキレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、それぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はヘテロアルキレン基は、例えば、Ｃ１〜Ｃ６員アルキレン、Ｃ２〜Ｃ６員アルケニレン、Ｃ２〜Ｃ６員アルキニレン、又はＣ１〜Ｃ６員ヘテロアルキレンと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素原子を指す。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子は、鎖終端の一方又は両方を占有することも可能である（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基について、連結基の式が書かれている方向によって連結基の向きは示唆されていない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表し得る。
【００８０】
本明細書において用いられるところ、「アリール」は、６〜１４個の環炭素原子及びゼロ個のヘテロ原子を芳香族環系中に有する（「Ｃ６〜Ｃ１４アリール」）、単環式又は多環式（例えば、二環式又は三環式）４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６、１０、又は１４個のπ電子を有する）のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アリール基は６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」；例えば、１−ナフチル及び２−ナフチルなどのナフチル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）。アリール基は、例えば、Ｃ６〜Ｃ１０員アリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。アリール基としては、フェニル、ナフチル、インデニル、及びテトラヒドロナフチルが挙げられる。アリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換アリール」）。
【００８１】
本明細書において用いられるところ、「ヘテロアリール」は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜１０員単環式又は二環式４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６又は１０個のπ電子を有する）のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロアリール基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロアリール二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロアリール」はまた、上記に定義されているヘテロアリール環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がアリール又はヘテロアリール環のいずれかにある環系を含み、このような実例において、環員の数は、縮合（アリール／ヘテロアリール）環系中の環員の数を示す。一方の環がヘテロ原子を含有しない二環式ヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）において、結合点は、いずれかの環にあることが可能であり、すなわち、結合点は、ヘテロ原子を有する環（例えば、２−インドリル）又はヘテロ原子を含有しない環（例えば、５−インドリル）のいずれかにあることが可能である。ヘテロアリール基は、例えば６〜１０員ヘテロアリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。
【００８２】
いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜１０員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜８員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜８員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５〜６員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜６員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロアリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。
【００８３】
１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピロリル、フラニル及びチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、及びイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、トリアゾリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリダジニル、ピリミジニル、及びピラジニルが挙げられる。３又は４個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、それぞれトリアジニル及びテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロアリール基としては、限定されないが、アゼピニル、オキセピニル、及びチエピニルが挙げられる。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニル、及びプリニルが挙げられる。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、及びキナゾリニルが挙げられる。他の例示的なヘテロアリール基としては、ヘム及びヘム誘導体が挙げられる。
【００８４】
本明細書において用いられるところ、「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、それぞれ、アリール及びヘテロアリールから誘導される二価ラジカルを意味する。
【００８５】
本明細書において用いられるところ、「シクロアルキル」は、３〜１０個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル」）及びゼロ個のヘテロ原子を非芳香族環系中に有する非芳香族環状炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」）、３〜６個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」）、又は５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５〜Ｃ１０シクロアルキル」）。シクロアルキル基は、例えば、Ｃ４〜Ｃ７員シクロアルキルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。例示的なＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基としては、限定されないが、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ６）などが挙げられる。例示的なＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基並びにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、クバニル（Ｃ８）、ビシクロ［１．１．１］ペンタニル（Ｃ５）、ビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）、ビシクロ［２．１．１］ヘキサニル（Ｃ６）、ビシクロ［３．１．１］ヘプタニル（Ｃ７）などが挙げられる。例示的なＣ３〜Ｃ１０シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３〜Ｃ８シクロアルキル基並びにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）などが挙げられる。前述の例に例示されているとおり、一定の実施形態において、シクロアルキル基は、単環式（「単環式シクロアルキル」）であるか、又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系を含有し（「二環式シクロアルキル」）、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。「シクロアルキル」はまた、上記に定義されているシクロアルキル環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がシクロアルキル環にある環系を含み、このような実例において、炭素の数は引き続きシクロアルキル環系中の炭素の数を示す。シクロアルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換シクロアルキル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。
【００８６】
本明細書において用いられるところ、「ヘテロシクリル」は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する３〜１０員非芳香族環系のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「３〜１０員ヘテロシクリル」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロシクリル基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系（「二環式ヘテロシクリル」）であることが可能であり、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。ヘテロシクリル二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロシクリル」はまた、上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のシクロアルキル基と縮合しており、結合点がシクロアルキル又はヘテロシクリル環のいずれかにある環系、又は上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のアリール又はヘテロアリール基と縮合しており、結合点がヘテロシクリル環にある環系を含み、このような実例において、環員の数は引き続きヘテロシクリル環系中の環員の数を示す。ヘテロシクリル基は、例えば、３〜７員ヘテロシクリルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中における、非水素環原子、すなわち、炭素、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素を指す。ヘテロシクリルの各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロシクリル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は非置換３〜１０員ヘテロシクリルである。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は置換３〜１０員ヘテロシクリルである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「５〜１０員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜８員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５〜６員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５〜６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。
【００８８】
１個のヘテロ原子を含有する例示的な３員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アジルジニル（ａｚｉｒｄｉｎｙｌ）、オキシラニル、チオレニル（ｔｈｉｏｒｅｎｙｌ）が挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な４員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル及びチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル及びピロリル−２，５−ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニル、及びオキサゾリジン−２−オンが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル、及びチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、及びチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、ジオキサニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアジナニル又はチオモルホリニル−１，１−ジオキシドが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼパニル、オキセパニル及びチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な８員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゾカニル、オキセカニル及びチオカニルが挙げられる。Ｃ６アリール環に縮合した例示的な５員ヘテロシクリル基（本明細書において、５，６−二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニルなどが挙げられる。アリール環に縮合した例示的な６員ヘテロシクリル基（本明細書において、６，６−二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが挙げられる。
【００８９】
本明細書において用いられるところ、「アミノ」は、ラジカル−ＮＲ７０Ｒ７１を指し、ここで、Ｒ７０及びＲ７１は各々独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ４〜Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、及びＣ５〜Ｃ１０ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、アミノはＮＨ２を指す。
【００９０】
本明細書において用いられるところ、「シアノ」はラジカル−ＣＮを指す。
【００９１】
本明細書において用いられるところ、「ハロ」又は「ハロゲン」は、独立して、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、又はヨウ素（Ｉ）原子を意味する。
【００９２】
本明細書において用いられるところ、「ヒドロキシ」はラジカル−ＯＨを指す。
【００９３】
本明細書において定義されるところ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、任意選択により置換されている（例えば、「置換」若しくは「非置換」アルキル、「置換」若しくは「非置換」アルケニル、「置換」若しくは「非置換」アルキニル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロアルキル、「置換」若しくは「非置換」シクロアルキル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」若しくは「非置換」アリール又は「置換」若しくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、「置換されている」という用語は、用語「任意選択により」が先行しているか否かに関わらず、ある基（例えば炭素又は窒素原子）に存在する少なくとも１個の水素が許容される置換基で置き換えられることを意味し、この置換基は、例えば、置換により安定な化合物（例えば、再配列、環化、脱離、又は他の反応などによって自発的な変換を起こさない化合物）をもたらすものである。別段の定めがある場合を除き、「置換されている」基は、その基の１つ以上の置換可能な位置に置換基を有し、また、いずれかの所与の構造における２つ以上の位置が置換されている場合、この置換基は各位置において同一であるか又は異なる。「置換されている」という用語は、安定な化合物が形成される本明細書に記載の置換基のいずれかなどの、有機化合物のすべての許容可能な置換基による置換を含むことが想定される。本開示は、安定な化合物を得るためのあらゆるこのような組み合わせを想定する。本開示の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たすと共に、安定な部分の形成をもたらす、水素置換基及び／又は本明細書に記載のいずれかの好適な置換基を有し得る。
【００９４】
２個以上の置換基は、任意選択により結合されて、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリル基を形成し得る。このようないわゆる環形成置換基は、典型的には、必須ではないが、環基礎構造に結合して見出される。一実施形態において、環形成置換基は基礎構造の隣接する構成員に結合している。例えば、環基礎構造の隣接する構成員に結合する２個の環形成置換基が、縮合環構造を形成する。他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の単一の構成員に結合している。例えば、環基礎構造の単一の構成員に結合する２個の環形成置換基が、スピロ環式構造を形成する。さらに他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の隣接していない構成員に結合している。
【００９５】
本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物は１つ以上の不斉中心を含んでいることが可能であり、それ故、例えば、鏡像異性体及び／又はジアステレオマーといった種々の異性形態で存在することが可能である。例えば、本明細書に記載の化合物は個々の鏡像異性体、ジアステレオマー若しくは幾何異性体の形態であることが可能であり、又はラセミ混合物及び１種以上の立体異性体が富化された混合物を含む立体異性体の混合物の形態であることが可能である。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、並びにキラル塩の形成及び結晶化を含む当業者に公知の方法によって混合物から単離可能であり；又は好ましい異性体は、不斉合成により調製可能である。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；及びＷｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照のこと。本開示はさらに、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、及び代わりに、種々の異性体の混合物として、本明細書に記載の化合物を含む。
【００９６】
本明細書において用いられるところ、純粋な鏡像異性化合物は、化合物の他の鏡像異性体又は立体異性体を実質的に含まない（すなわち鏡像体過剰量である）。換言すると、「Ｓ」形態の化合物は「Ｒ」形態の化合物を実質的に含まず、それ故、「Ｒ」形態が鏡像体過剰量である。「鏡像異性体的に純粋な」又は「純粋な鏡像異性体」という用語は、化合物が、７５重量％超、８０重量％超、８５重量％超、９０重量％超、９１重量％超、９２重量％超、９３重量％超、９４重量％超、９５重量％超、９６重量％超、９７重量％超、９８重量％超、９９重量％超、９９．５重量％超、又は９９．９重量％超の鏡像異性体を含むことを示す。一定の実施形態において、重量は、化合物のすべての鏡像異性体又は立体異性体の総重量に基づく。
【００９７】
本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物はまた、１つ以上の同位体置換を含んでいてもよい。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ又は重水素）、及び３Ｈ（Ｔ又は三重水素）を含むいずれかの同位体形態であり得；Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含むいずれかの同位体形態であり得；Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏなどを含むいずれかの同位体形態であり得る。
【００９８】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書に記載の化合物に見出される特定の置換基に応じて、比較的無毒の酸又は塩基を伴って調製される有効な化合物の塩を含むことを意味する。本開示において使用される化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合、塩基付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の塩基と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、若しくはマグネシウム塩、又は同様の塩が挙げられる。本開示において使用される化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合、酸付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の酸と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸などのような無機酸から誘導されるものが挙げられ、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような有機酸から誘導される塩が挙げられる。また、アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などのような有機酸の塩が含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６６：１−１９（１９７７）を参照のこと）。一定の特定の本開示において使用される化合物は、塩基又は酸付加塩への化合物の転換を可能とする塩基性及び酸性官能基の両方を含有する。これらの塩は、当業者に公知の方法によって調製され得る。当業者に公知である他の薬学的に許容可能なキャリアが本開示において使用するのに好適である。
【００９９】
本開示は、プロドラッグ形態の式（Ｉ）の化合物を提供し得る。プロドラッグは、生理学的状態で化学変化を容易に生起して本開示において使用される化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、エキソビボ環境における化学的又は生化学的方法によって式（Ｉ）の有用な化合物に転換されることが可能である。
【０１００】
一定の式（Ｉ）の化合物は、非溶媒和形態、並びに水和物形態を含む溶媒和形態で存在することが可能である。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と同等であり、本開示の範囲内に包含される。一定の式（Ｉ）の化合物は、多数の結晶性又はアモルファス形態で存在し得る。一般に、すべての物理的形態が本開示によって想定される使用について同等であり、本開示の範囲内であることが意図されている。
【０１０１】
「溶媒和物」という用語は、通常は加溶剤分解反応による、溶剤に付随する化合物の形態を指す。この物理的な付随は水素結合を含み得る。従来の溶剤としては、水、メタノール、エタノール、酢酸、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジエチルエーテルなどが挙げられる。本明細書に記載の化合物は、例えば結晶形態で調製され得、溶媒和され得る。好適な溶媒和物としては、薬学的に許容可能な溶媒和物が挙げられ、さらに、化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方が挙げられる。
【０１０２】
「水和物」という用語は、水に付随している化合物を指す。典型的には、化合物の水和物に含有される水分子の数は、水和物中の化合物分子の数に対する確定された割合である。従って、化合物の水和物は、例えば一般式Ｒ・ｘ  Ｈ２Ｏ（式中、Ｒは化合物であり、ｘは０超の数字である）によって表され得る。
【０１０３】
「互変異性体」という用語は、本明細書において用いられるところ、化合物構造の相互変換可能な形態であって、水素原子及び電子の変位が様々である化合物を指す。それ故、２つの構造が、π電子及び原子（通常はＨ）の移動を介して平衡状態にあり得る。例えば、酸又は塩基のいずれかを伴う処理によって急速に相互変換されるため、エノール及びケトンは互変異性体である。互変異性体は、対象となる化合物の最適な化学反応性及び生物活性の獲得と関連性があり得る。
【０１０４】
本明細書において用いられるところ、記号
【化２】
2021520374.tif 000004
は、エンティティ、例えば、ポリマー（例えば、アルギン酸塩などのヒドロゲル形成ポリマー）又は移植可能な要素（例えば、粒子、デバイス若しくは材料）への結合を指す。
【化３】
2021520374.tif 000005
によって表される結合は、エンティティ、例えば、ポリマー又は移植可能な要素への直接結合を指してもよく、又は結合基を介したエンティティへの連結を指し得る。本明細書において用いられるところ、「結合基」は、エンティティ（例えば、本明細書に記載のポリマー又は移植可能な要素）への式（Ｉ）の化合物の連結のための部分を指し、当該技術分野において公知であるいずれかの結合化学を含み得る。例示的な結合基の列挙は、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（３ｒｄ  ｅｄ，Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｉｎｃ，２０１３）に概説されている。いくつかの実施形態において、結合基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属を含み、ここで、ＲＡ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＦ、ＲＧ、ｘ及びｙの各々は、独立して本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は、アミン、ケトン、エステル、アミド、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はチオールを含む。いくつかの実施形態において、結合基は架橋剤である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換され、Ｒ１は本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンは、１〜２個のアルキル基（例えば、１〜２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２−である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）（メチレン）−であり、ここで、アルキレンは、１〜２個のアルキル基（例えば、１〜２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−である。いくつかの実施形態において、結合基は−Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）−である。
【０１０５】
［粒子の特徴］
本開示は、例えば、本明細書に記載される、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子を特徴とする。粒子は、球状（例えば、ヒドロゲルカプセル）又は任意の他の形状であり得る。粒子は、金属、金属合金、セラミック、ポリマー、繊維、不活性材料、及びこれらの組み合わせなどの材料を含み得る。粒子は、１つのタイプの材料で完全に作製されてもよく、又は第２の区画及びいずれかの第１の区画内に多くの他の材料を含み得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、第１の区画は、式（Ｉ）の化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、第２の区画は、式（Ｉ）の化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、第１の区画及び第２の区画の両方は、独立して、式（Ｉ）の化合物で修飾される。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、粒子は、１ミリメートル（ｍｍ）超、好ましくは、１．５ｍｍ以上の最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、平均直径、又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、粒子は、直径又はサイズが１０ｍｍ程度であり得る。例えば、本明細書に記載の粒子は、０．５ｍｍ〜１０ｍｍ、１ｍｍ〜１０ｍｍ、１ｍｍ〜８ｍｍ、１ｍｍ〜６ｍｍ、１ｍｍ〜５ｍｍ、１ｍｍ〜４ｍｍ、１ｍｍ〜３ｍｍ、１ｍｍ〜２ｍｍ、１ｍｍ〜１．５ｍｍ、１．５ｍｍ〜８ｍｍ、１．５ｍｍ〜６ｍｍ、１．５ｍｍ〜５ｍｍ、１．５ｍｍ〜４ｍｍ、１．５ｍｍ〜３ｍｍ、１．５ｍｍ〜２ｍｍ、２ｍｍ〜８ｍｍ、２ｍｍ〜７ｍｍ、２ｍｍ〜６ｍｍ、２ｍｍ〜５ｍｍ、２ｍｍ〜４ｍｍ、２ｍｍ〜３ｍｍ、２．５ｍｍ〜８ｍｍ、２．５ｍｍ〜７ｍｍ、２．５ｍｍ〜６ｍｍ、２．５ｍｍ〜５ｍｍ、２．５ｍｍ〜４ｍｍ、２．５ｍｍ〜３ｍｍ、３ｍｍ〜８ｍｍ、３ｍｍ〜７ｍｍ、３ｍｍ〜６ｍｍ、３ｍｍ〜５ｍｍ、３ｍｍ〜４ｍｍ、３．５ｍｍ〜８ｍｍ、３．５ｍｍ〜７ｍｍ、３．５ｍｍ〜６ｍｍ、３．５ｍｍ〜５ｍｍ、３．５ｍｍ〜４ｍｍ、４ｍｍ〜８ｍｍ、４ｍｍ〜７ｍｍ、４ｍｍ〜６ｍｍ、４ｍｍ〜５ｍｍ、４．５ｍｍ〜８ｍｍ、４．５ｍｍ〜７ｍｍ、４．５ｍｍ〜６ｍｍ、４．５ｍｍ〜５ｍｍ、５ｍｍ〜８ｍｍ、５ｍｍ〜７ｍｍ、５ｍｍ〜６ｍｍ、５．５ｍｍ〜８ｍｍ、５．５ｍｍ〜７ｍｍ、５．５ｍｍ〜６ｍｍ、６ｍｍ〜８ｍｍ、６ｍｍ〜７ｍｍ、６．５ｍｍ〜８ｍｍ、６．５ｍｍ〜７ｍｍ、７ｍｍ〜８ｍｍ、又は７．５ｍｍ〜８ｍｍのサイズ範囲内である。いくつかの実施形態において、粒子は、１ｍｍ〜８ｍｍの平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１ｍｍ〜４ｍｍの平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１ｍｍ〜２ｍｍの平均直径又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１．５ｍｍ〜２ｍｍの平均直径又はサイズを有する。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、粒子は、１ミリメートル（ｍｍ）以下の最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、平均直径、又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、粒子は、０．３ｍｍ〜１ｍｍ、０．４ｍｍ〜１ｍｍ、０．５ｍｍ〜１ｍｍ、０．６ｍｍ〜１ｍｍ、０．７ｍｍ〜１ｍｍ、０．８ｍｍ〜１ｍｍ又は０．９ｍｍ〜１ｍｍのサイズ範囲である。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、例えば、図１に示されるように、第２の（外側）区画は、第１の（内側）区画を完全に取り囲み、第２の区画の内側境界が、第１の区画の外側境界との境界面を形成する。このような実施形態において、第２の（外側）区画の厚さは、第２の区画の外側境界と、２つの区画間の境界面との間の平均距離を意味する。いくつかの実施形態において、外側区画の厚さは、約１０ナノメートル（ｎｍ）超、好ましくは、１００ｎｍ以上であり、１ｍｍ程度であり得る。例えば、本明細書に記載の粒子における外側区画の厚さは、１０ナノメートル〜１ミリメートル、１００ナノメートル〜１ミリメートル、５００ナノメートル〜１ミリメートル、１マイクロメートル（μｍ）〜１ミリメートル、１μｍ〜１ｍｍ、１μｍ〜５００μｍ、１μｍ〜２５０μｍ、１μｍ〜１ｍｍ、５μｍ〜５００μｍ、５μｍ〜２５０μｍ、１０μｍ〜１ｍｍ、１０μｍ〜５００μｍ、又は１０μｍ〜２５０μｍであり得る。いくつかの実施形態において、外側区画の厚さは、１００ナノメートル〜１ミリメートル、１μｍ〜１ｍｍ、１μｍ〜５００μｍ又は５μｍ〜１ｍｍである。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、粒子は、例えば、材料の自由な流動を可能にするために、少なくとも１つの孔又は開口を含む。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜約１０μｍである。例えば、平均孔径は、０．１μｍ〜１０μｍ、０．１μｍ〜５μｍ、０．１μｍ〜２μｍ、０．１５μｍ〜１０μｍ、０．１５μｍ〜５μｍ、０．１５μｍ〜２μｍ、０．２μｍ〜１０μｍ、０．２μｍ〜５μｍ、０．２５μｍ〜１０μｍ、０．２５μｍ〜５μｍ、０．５μｍ〜１０μｍ、０．７５μｍ〜１０μｍ、１μｍ〜１０μｍ、１μｍ〜５μｍ、１μｍ〜２μｍ、２μｍ〜１０μｍ、２μｍ〜５μｍ、又は５μｍ〜１０μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜１０μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜５μｍである。いくつかの実施形態において、移植可能な要素の平均孔径は、約０．１μｍ〜１μｍである。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び第２の区画の平均孔径は、実質的に同じである。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び第２の区画の平均孔径は、約１．５％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又はそれ以上異なる。いくつかの実施形態において、粒子の平均孔径（例えば、第１の区画の平均孔径及び／又は第２の区画の平均孔径）は、各区画内の材料並びに式（Ｉ）の化合物の存在及び密度などのいくつかの要因に依存する。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、粒子は、金属又は金属合金を含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、金属又は金属合金を含み得る。例示的な金属又は金属合金としては、チタン及びチタン族合金（例えば、ニチノール、ニッケルチタン合金、熱記憶合金材料）、白金、白金族合金、ステンレス鋼、タンタル、パラジウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、ニッケル−クロム、クロムモリブデン合金、又は特定のコバルト合金（例えば、コバルト−クロム及びコバルト−クロム−ニッケル合金、例えば、ＥＬＧＩＬＯＹ（登録商標）及びＰＨＹＮＯＸ（登録商標））が挙げられる。例えば、金属材料は、ステンレス鋼グレード３１６（ＳＳ  ３１６Ｌ）（Ｆｅ、＜０．３％のＣ、１６〜１８．５％のＣｒ、１０〜１４％のＮｉ、２〜３％のＭｏ、＜２％のＭｎ、＜１％のＳｉ、＜０．４５％のＰ、及び＜０．０３％のＳから構成される）であり得る。金属含有粒子において、金属の量（例えば、重量％、実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、粒子は、セラミックを含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、セラミックを含み得る。例示的なセラミック材料としては、酸化チタン、酸化ハフニウム、酸化イリジウム、酸化クロム、酸化アルミニウム、及び酸化ジルコニウムなどの、遷移元素の酸化物、炭化物、又は窒化物が挙げられる。シリカなどのケイ素系材料も使用され得る。セラミック含有粒子において、セラミックの量（例えば、重量％、実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、粒子は、ポリマーを含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、ポリマーを含み得る。ポリマーは、直鎖、分岐、若しくは架橋ポリマー、又は選択された分子量範囲、重合度、粘度若しくはメルトフローレートのポリマーであり得る。分岐ポリマーは、以下のタイプ：星型ポリマー、櫛型ポリマー、ブラシ型ポリマー、デンドロン化ポリマー、ラダー、及びデンドリマーの１つ以上を含み得る。ポリマーは、熱応答性ポリマー、例えば、ゲル（例えば、熱若しくは特定の温度への曝露により固体若しくは液体になる）又は光架橋性ポリマーであり得る。例示的なポリマーとしては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアセチレン、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリオレフィンコポリマー、ポリ（ウレタン）、ポリアクリレート及びポリメタクリレート、ポリアクリルアミド及びポリメタクリルアミド、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリエステル、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエーテル、ポリ（オルトエステル）、ポリ（カーボネート）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、ポリフルオロカーボン、ＰＥＥＫ（登録商標）、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）（ポリテトラフルオロエチレン、ＰＴＦＥ）、ＰＥＥＫ、シリコーン、エポキシ樹脂、Ｋｅｖｌａｒ（登録商標）、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）（エチレングリコール及びテレフタル酸から得られる縮合ポリマー）、ポリエチレングリコール、ナイロン、ポリアルケン、フェノール樹脂、天然及び合成エラストマー、接着剤及びシーラント、ポリオレフィン、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル、多糖類及び天然ラテックスなどのバイオポリマー、コラーゲン、セルロースポリマー（例えば、アルキルセルロースなど）、ポリエチレングリコール及び２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、多糖類、ポリ（グリコール酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリジオキサノン（ＰＤＡ）、又はラセミポリ（乳酸）、ポリカーボネート、（例えば、ポリアミド（例えば、ナイロン））、フッ素樹脂、炭素繊維、アガロース、アルギン酸塩、キトサン、並びにこれらのブレンド又はコポリマーが挙げられる。ポリマー含有粒子において、ポリマーの量（例えば、粒子における重量％、ポリマーの実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリエチレンを含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、ポリエチレンを含み得る。例示的なポリエチレンとしては、超低密度ポリエチレン（ＵＬＤＰＥ）（例えば、コモノマーを含む、０．８９０〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；超低密度ポリエチレン（ＶＬＤＰＥ）（例えば、コモノマーを含む、０．９０５〜０．９１５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；直鎖低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ）（例えば、０．９１５〜０．９３５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含む）；低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）（例えば、約０．９１５〜０．９３５ｇ／ｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；中密度ポリエチレン（ＭＤＰＥ）（例えば、０．９２６〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含んでいても又は含まなくてもよい）；高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）（例えば、０．９４０〜０．９７０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含んでいても又は含まなくてもよい）が挙げられる。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、粒子は、ポリプロピレンを含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、ポリプロピレンを含み得る。例示的なポリプロピレンとしては、例えば、本明細書において参照によりその全体が援用される、ＭｃＫｅｅｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，３−Ｐｌａｓｔｉｃｓ  Ｕｓｅｄ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，（２０１４）：２１−５３に記載されるように、ホモポリマー、ランダムコポリマー（ホモ相コポリマー）、及びインパクトコポリマー（ヘテロ相コポリマー）が挙げられる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、粒子は、ポリスチレンを含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、ポリスチレンを含み得る。例示的なポリスチレンとしては、汎用性又は結晶（ＰＳ又はＧＰＰＳ）、ハイインパクト（ＨＩＰＳ）、及びシンジオタクチック（ＳＰＳ）ポリスチレンが挙げられる。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、粒子は、熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）を含む。第１の区画、第２の区画、又は両方の区画は、ＴＰＥを含み得る。例示的なＴＰＥとしては、（ｉ）ＴＰＡ−ポリアミドＴＰＥであって、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーを含み、ハードブロック中にアミド化学結合並びにソフトブロック中にエーテル及び／又はエステル結合を有するもの；（ｉｉ）ＴＰＣ−コ−ポリエステルＴＰＥであって、交互するハードセグメント及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、主鎖中の化学結合はエステル及び／又はエーテルであるもの；（ｉｉｉ）ＴＰＯ−オレフィン系ＴＰＥであって、ポリオレフィン及び従来のゴムのブレンドからなり、ブレンド中のゴム相は架橋をほとんど又は全く有さないもの；（ｉｖ）ＴＰＳ−スチレン系ＴＰＥであって、少なくとも、スチレン及び特定のジエンのトリブロックコポリマーからなり、ここで、２つの末端ブロック（ハードブロック）はポリスチレンであり、内部ブロック（１つ又は複数のソフトブロック）はポリジエン又は水素化ポリジエンであるもの；（ｖ）ＴＰＵ−ウレタンＴＰＥであって、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、ハードブロック中にウレタン化学結合、及びソフトブロック中にエーテル、エステル又は炭酸結合又はこれらの混合物を有するもの；（ｖｉ）ＴＰＶ−熱可塑性ゴム加硫物であって、熱可塑性材料及び従来のゴムのブレンドからなり、ここで、ゴムは、ブレンド及び混合ステップ中の動的加硫プロセスにより架橋されているもの；並びに（ｖｉｉ）ＴＰＡ、ＴＰＣ、ＴＰＯ、ＴＰＳ、ＴＰＵ、及びＴＰＶに分類されるもの以外のいずれかの組成物又は構造を含むＴＰＺ−未分類ＴＰＥが挙げられる。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、粒子は多糖を含み、多糖はアルギン酸塩である。アルギン酸塩は、β−Ｄ−マンヌロン酸（Ｍ）及びα−Ｌ−グルロン酸（Ｇ）から構成される多糖である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高グルロン酸（Ｇ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のグルロン酸（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高マンヌロン酸（Ｍ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のマンヌロン酸（Ｍ）を含む。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は約１である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１未満である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１超である。アルギン酸塩含有粒子において、アルギン酸塩の量（例えば、粒子における重量％、アルギン酸塩の実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、第１の区画及び第２の区画の両方は、同じポリマーを含む。いくつかの実施形態において、第１の区画及び第２の区画は、異なるポリマーを含む。いくつかの実施形態において、第１の区画は、アルギン酸塩を含む。いくつかの実施形態において、第２の区画は、アルギン酸塩を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画及び第２の区画の両方は、アルギン酸塩を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画中のアルギン酸塩は、第２の区画中のアルギン酸塩と異なる。いくつかの実施形態において、第１の区画は、アルギン酸塩を含み、第２の区画は、異なるポリマー（例えば、多糖、例えば、ヒアルロン酸塩又はキトサン）を含む。いくつかの実施形態において、第２の区画は、アルギン酸塩を含み、第１の区画は、異なるポリマー（例えば、多糖、例えば、ヒアルロン酸塩又はキトサン）を含む。
【０１２０】
第１の区画及び第２の区画の両方は、単一の成分（例えば、１つのポリマー）又は２つ以上の成分（例えば、ポリマーのブレンド）を含み得る。いくつかの実施形態において、第１の区画は、アルギン酸塩のみ（例えば、化学修飾アルギン酸塩、又は非修飾アルギン酸塩及び化学修飾アルギン酸塩のブレンド）を含む。いくつかの実施形態において、第２の区画は、アルギン酸塩のみ（例えば、化学修飾アルギン酸塩又は非修飾アルギン酸塩及び化学修飾アルギン酸塩のブレンド）を含む。いくつかの実施形態において、第１及び第２の区画の両方は、独立して、アルギン酸塩のみ（例えば、化学修飾アルギン酸塩又は非修飾アルギン酸塩及び化学修飾アルギン酸塩のブレンド）を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、第１及び第２の区画の一方又は両方におけるポリマーは、（ｉ）低分子量アルギン酸塩（例えば、およそのＭＷ＜７５ｋＤａ及びＧ：Ｍ比≧１．５を有する）、（ｉｉ）中間分子量アルギン酸塩（例えば、７５〜１５０ｋＤａのおよその分子量及びＧ：Ｍ比≧１．５を有する）、（ｉｉｉ）高分子量アルギン酸塩（例えば、１５０ｋＤａ〜２５０ｋＤａのおよそのＭＷ及びＧ：Ｍ比≧１．５を有する）、（ｉｖ）又はこれらのアルギン酸塩の２つ以上のブレンドである。実施形態において、第１の（内側）区画中のポリマーは、非修飾高分子量アルギン酸塩又は非修飾中間分子量アルギン酸塩であり、第２の（外側）区画中のポリマーは、化学修飾アルギン酸塩（例えば、表２に示される化合物１０１で修飾されたアルギン酸塩）及び非修飾アルギン酸塩のブレンド、例えば、ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１：Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇの７０：３０ブレンド又は６０：４０ブレンドであり、これは、以下の実施例に記載されるように調製され得る。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、粒子はアルギン酸塩を含み、式（Ｉ）の化合物は、アルギン酸塩中のいくらか又はすべてのモノマーに共有結合される。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩中のいくらか又はすべてのモノマーは、式（Ｉ）の同じ化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩中のいくらか又はすべてのモノマーは、式（Ｉ）の異なる化合物で修飾される。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画のポリマーは、式（Ｉ）の１つの化合物で修飾され、粒子の第２の区画のポリマーは、式（Ｉ）の異なる化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、粒子は、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー及び非修飾ポリマー（例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されていないポリマー）の混合物を含む。いくつかの実施形態において、第１の区画は、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー及び非修飾ポリマー（例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されていないポリマー）の混合物を含む。いくつかの実施形態において、第２の区画は、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー及び非修飾ポリマー（例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されていないポリマー）の混合物を含む。
【０１２４】
本明細書に記載の粒子のポリマーは、ポリマーの１つ以上のモノマー上で、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩で修飾され得る。粒子の修飾ポリマーは、粒子の第１の（内側）区画、粒子の第２の（外側）区画、又は粒子の第１の（内側）及び第２の（外側）区画の両方に存在し得る。いくつかの実施形態において、修飾ポリマーは、第２の区画（外部粒子表面を含む）のみに存在する。いくつかの実施形態において、ポリマーの少なくとも０．５％のモノマーが、式（Ｉ）の化合物で修飾される（例えば、ポリマーの少なくとも１％、２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上のモノマーが、式（Ｉ）の化合物で修飾される）。いくつかの実施形態において、ポリマーの０．５％〜５０％、１０％〜９０％、１０％〜５０％、又は２５〜７５％のモノマーが、式（Ｉ）の化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、ポリマーの１％〜２０％のモノマーが、式（Ｉ）の化合物で修飾される。いくつかの実施形態において、ポリマーの１％〜１０％のモノマーが、式（Ｉ）の化合物で修飾される。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、ポリマー（例えば、アルギン酸塩）（式（Ｉ）の化合物、例えば、表２の化合物１０１で修飾される場合）は、以下の値のいずれか：（ｉ）重量基準で少なくとも０．１％、０．２％、０．５％、１．０％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、又は１０％のＮ；（ｉｉ）０．１重量％〜１０重量％、（ｉｉｉ）０．１重量％〜２重量％のＮ；（ｉｖ）２重量％〜４重量％のＮ；（ｖ）４重量％〜８重量％のＮ；（ｖｉ）５重量％〜９重量％のＮ；（ｖｉｉ）６重量％〜９重量％のＮ、（ｖｉｉｉ）６重量％〜８重量％のＮ；（ｉｘ）７重量％〜９重量％のＮ；及び（ｘ）８重量％〜９重量％のＮの、（非修飾ポリマー、例えば、アルギン酸塩と比した）％  Ｎの増加を含み、ここで、それぞれ、％  Ｎは、燃焼分析（例えば、本明細書の実施例２に記載される）によって決定され、修飾ポリマー中の式（Ｉ）の化合物の量に相当する。
【０１２６】
粒子（例えば、その中の第１の区画又は第２の区画）は、粒子に特定の特徴を与える量で式（Ｉ）の化合物を含み得る。例えば、粒子表面（例えば、外側区画の外部）は、粒子が患者において抗線維性である（すなわち、異物反応を軽減する）ような式（Ｉ）の化合物の濃度又は密度を含み得る。実施形態において、粒子表面は、抗線維性−有効量の化合物１０１で化学修飾されたアルギン酸塩を含む。実施形態において、化合物１０１の抗線維性−有効量は、約０．５％〜２％、２％〜４％のＮ、約４％〜６％のＮ、約６％〜８％、又は約８％〜１０％のＮ）の、（非修飾アルギン酸塩と比した）％  Ｎの増加をもたらし、ここで、％  Ｎは、燃焼分析（例えば、本明細書の実施例２に記載される）によって決定され、修飾アルギン酸塩中の化合物１０１の量に相当する。
【０１２７】
以下の実施例に記載されるように、２区画アルギン酸塩ヒドロゲルカプセルの外側区画中の式（Ｉ）の化合物の特定のより高い濃度は、おそらく、架橋に利用可能な、アルギン酸塩分子における部位の減少のため、カプセルの機械的強度を損なった。従って、実施形態において、粒子表面（例えば、外側区画の外部）は、粒子を抗線維性にするのに十分高いが、所望の機械的強度が達成されない閾値より低い、式（Ｉ）化合物の濃度又は密度を含み得る。実施形態において、所望の機械的強度は、以下のストレス因子のいずれか１つ以上に曝されたときに、その形状を維持し、及び／又は無傷に保つ粒子の能力を指す：（ｉ）圧縮（例えば、一定の割合で）；（ｉｉ）患者への投与（例えば、移植）中；及び（ｉｉｉ）所望の移植期間後。粒子の機械的強度は、患者における粒子の移植の前、及び／又は移植された粒子の回収後（例えば、移植の１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１２週間、又はより長い期間の後）に測定され得る。実施形態において、製造後であるが移植前に決定される粒子（例えば、ヒドロゲルカプセル）の所望の機械的強度は、テクスチャーアナライザを用いた破壊試験を行うことによって決定される。
【０１２８】
実施形態において、ヒドロゲルカプセルの機械的試験は、５ｋｇのロードセルに取り付けられた５ｍｍのプローブを用いてＴＡ．ＸＴ  ｐｌｕｓ  Ｔｅｘｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｔａｂｌｅ  Ｍｉｃｒｏ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｕｒｒｅｙ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）において行われる。個々のカプセルを、台の上に設置し、０．５ｍｍ／秒の一定速度で、プローブによって上から圧縮する。１ｇの反発力が測定されるとき、プローブとカプセルとの接触が検出される。プローブは、プローブ及び台の接触高さの間の距離の９０％を移動し続けて、カプセルを破裂点まで圧縮する。プローブの圧縮力に対する抵抗性が測定され、プローブの移動の関数としてプロットされ得る（力対変位曲線）。典型的には、カプセルが完全に破裂する前に、それはわずかに破砕し、プローブに及ぼされる力がわずかに減少する。解析マクロが、０．２５〜０．５ｇの減少が力対変位曲線において最初に起こったときを検出するようにプログラムされ得る。これが起こるときにプローブによってかけられる力は、初期破壊力と呼ばれる。実施形態において、本明細書に記載の粒子（例えば、２区画ヒドロゲルカプセル）の所望の機械的強度は、１、１．５、２、２．５又は３グラム超又は少なくとも２グラムの初期破壊力を有する。
【０１２９】
実施形態において、粒子の所望の機械的強度は、患者における移植後の所望の時点で無傷に保つ能力であり、例えば、患者から取り出されたヒドロゲルカプセルの外側及び内側区画の両方が、光学顕微鏡法によって、例えば、本明細書の実施例に記載されるような明視野イメージングによって、正常免疫能マウスからの回収後に、明らかに無傷である。
【０１３０】
実施形態において、粒子表面は、抗線維特性及び所望の機械的強度の両方を粒子に提供する量、例えば、以下の値のいずれか：（ｉ）１重量％〜３重量％、（ｉｉ）２重量％〜４重量％のＮ；（ｉｉｉ）４重量％〜８重量％のＮ；（ｉｖ）５重量％〜９重量％のＮ；（ｖ）６重量％〜９重量％のＮ、（ｖｉ）６重量％〜８重量％のＮ；（ｖｉｉ）７重量％〜９重量％のＮ；及び（ｉｘ）８重量％〜９重量％のＮの、（非修飾アルギン酸塩と比した）％  Ｎの増加をもたらす修飾アルギン酸塩中の化合物１０１の濃度又は密度の化合物１０１で化学修飾されたアルギン酸塩を含み；ここで、それぞれ、％  Ｎは、燃焼分析（例えば、本明細書の実施例２に記載される）によって決定され、修飾アルギン酸塩中の式（Ｉ）の化合物の量に相当する。
【０１３１】
粒子（例えば、その中の第１の区画又は第２の区画）が、アルギン酸塩を含む場合、アルギン酸塩は、当該技術分野において公知の任意の好適な方法を用いて、式（Ｉ）の化合物で化学修飾され得る。例えば、アルギン酸塩カルボン酸部分は、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩を得るために、１つ以上のアミン官能化化合物への結合のために活性化され得る。アルギン酸塩ポリマーは、水（ポリマーのグラム当たり３０ｍＬ）に溶解され、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（０．５当量）及びＮ−メチルモルホリン（１当量）で処理され得る。この混合物に、緩衝液又は溶媒、例えばアセトニトリル（０．３Ｍ）に溶解された式（Ｉ）の化合物の溶液が加えられ得る。反応物が、例えば、１６時間にわたって５５℃に温められ、次に、室温に冷却され、回転蒸発によって濃縮され得る。次に、残渣が、緩衝液又は溶媒、例えば水に溶解され得る。次に、混合物は、例えば、シアノ修飾シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）の床に通してろ過され得、ろ過ケーキが水で洗浄され得る。次に、得られた溶液が、２４時間にわたって緩衝液又は水に対して透析され得（１０，０００  ＭＷＣＯ膜）、例えば、緩衝液又は水を少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、又はそれ以上交換する。得られた溶液が、例えば、凍結乾燥によって濃縮されて、所望の化学修飾アルギン酸塩が得られる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子は、細胞を含む。いくつかの実施形態において、細胞は、治療薬（例えば、タンパク質又はポリペプチド、例えば、抗体、タンパク質、酵素、又は増殖因子）を生成するように組み換えられる。いくつかの実施形態において、細胞は、第１の区画と共に配置される。いくつかの実施形態において、細胞は、第２の区画内に配置される。いくつかの実施形態において、細胞は、第１の区画内に配置され、第２の区画は、細胞を含まない。粒子は、グルコースオキシダーゼ（例えば、グルコースセンサ用）、キナーゼ、ホスファターゼ、オキシゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、レダクターゼなどの、タンパク質又はポリペプチドの活性又は不活性画分を含み得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、粒子は、特定のサイズを超える材料が孔又は開口を通過するのを防ぐことが可能である。いくつかの実施形態において、粒子は、５０ｋＤ、７５ｋＤ、１００ｋＤ、１２５ｋＤ、１５０ｋＤ、１７５ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、３００ｋＤ、４００ｋＤ、５００ｋＤ、７５０ｋＤ、又は１，０００ｋＤ超の材料が通過するのを防ぐことが可能である。
【０１３４】
本明細書に記載の粒子は、治療薬、例えば、外因性の物質、例えば、本明細書に記載の治療薬を放出するように構成され得る。いくつかの実施形態において、治療薬は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。いくつかの実施形態において、治療薬は生体材料である。いくつかの実施形態において、治療薬は、核酸（例えば、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ）、タンパク質（例えば、ホルモン、酵素、抗体、抗体画分、抗原、又はエピトープ）、小分子、脂質、薬物、ワクチン、又はそのいずれかの誘導体である。
【０１３５】
粒子（例えば、本明細書に記載される）は、患者への移植又は投与のための調製物又は組成物として提供され得る。いくつかの実施形態において、調製物又は組成物中の粒子の少なくとも２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％が、例えば平均直径又は平均孔径といった本明細書に記載の特徴を有する。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、粒子は、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）又は中枢神経系（ＣＮＳ））、脈管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系、又は胃腸管といった身体の特定の系を標的にするか又はそのような身体の特定の系に向けて設計される。いくつかの実施形態において、粒子は、ＣＮＳに標的化される。いくつかの実施形態において、粒子は、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣、又はペニスといった身体の特定の部分を標的にするか又はそのような身体の特定の部分に向けて設計される。
【０１３７】
粒子は、身体の任意の部位内又は部位上へのインプラント、又は移植又は配置のために構成され得る。いくつかの実施形態において、粒子は、患者の網、患者の皮下脂肪、又は患者の筋肉組織内へのインプラント、移植、又は配置のために構成される。粒子は、皮膚上又は中；粘膜表面、体腔、腹膜腔（例えば、網嚢）；中枢神経系、例えば、腸又は脊髄；臓器、例えば、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺、リンパ系、血管系、口腔、鼻腔、歯、歯茎、胃腸管；骨；股関節；脂肪組織；筋肉組織；循環血液；眼（例えば、眼内）；乳房、膣；子宮、関節、例えば、膝関節若しくは股関節、又は脊椎へのインプラント、又は移植、又は配置のために構成され得る。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、粒子は、腹膜腔（例えば、網）内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。いくつかの実施形態において、粒子は、網嚢（ｌｅｓｓｅｒ  ｓａｃ）（網嚢（ｏｍｅｎｔａｌ  ｂｕｒｓａ）又は網嚢（ｂｕｒｓａｌｉｓ  ｏｍｅｎｔｕｍ）としても知られている）内又は上へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。網嚢は、網によって形成される、腹部に位置する空間を指し、例えば、大網、小網、胃、小腸、大腸、肝臓、脾臓、胃脾間膜、副腎、及び膵臓にごく近接している。典型的には、網嚢は、網嚢孔（すなわち、ウィンズロー孔）を介して大嚢に結合されている。いくつかの実施形態において、網嚢は、高濃度の脂肪組織を含む。粒子は、腹膜腔（例えば、網、例えば、網嚢）内に移植されるか、又は注入若しくはカテーテルによって腹膜腔（例えば、網、例えば、網嚢）内の表面に配置され得る。網（例えば、網嚢）内への粒子のインプラント又は配置についてのさらなる検討が、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｍ．Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）ＣｅｌｌＲ４  ５（３）：ｅ２４１０に示されている。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、粒子は、中枢神経系（ＣＮＳ）、例えば、脳又は脊髄及びそれらの対応する組織及び体腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。脊椎動物において、ＣＮＳは、頭蓋腔及び脊柱管を含む背測腔内に含まれる。いくつかの実施形態において、粒子は、脳内腔、例えば、実質内腔、脳室内腔、又は硬膜下腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。粒子は、ＣＮＳ内に移植されるか、又は頭蓋骨内に形成された孔を通してＣＮＳ内の表面に配置され、注入若しくはカテーテルによって送達され得る。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、粒子は、眼内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。粒子のインプラント又は配置に好適な例示的な領域としては、網膜、角膜、上皮、房水、又は硝子体腔（ｖｉｔｒｅａｌ  ｓｐａｃｅ）などの、眼内の任意の表面又は空間が挙げられる。いくつかの実施形態において、粒子は、硝子体腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。粒子は、眼内に移植されるか、又は切開及び／又は注入によって、眼内の表面に配置され得る。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、粒子は、例えば、患者の損傷を生じずに、又は周囲組織の崩壊をあまり生じずに、患者から容易に取り外し可能である。実施形態において、粒子は、例えば、低侵襲手術によるアプローチ、摘出、又は切除によって、周囲組織からの粒子の最小限の分離を伴って又は手術による分離を伴わずに取り外し可能である。
【０１４２】
粒子は、限定的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、２日間、１日間、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、１時間未満又はそれ以下）。粒子は、持続的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１月間、２月間、３月間、４月間、５月間、６月間、７月間、８月間、９月間、１０月間、１１月間、１２月間、１３月間、１４月間、１５月間、１６月間、１７月間、１８月間、１９月間、２０月間、２１月間、２２月間、２３月間、２４月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、３．５年間、４年間又はそれ以上）粒子は、永続的に露出されるよう構成されていることが可能である（例えば、少なくとも６月間、７月間、８月間、９月間、１０月間、１１月間、１２月間、１３月間、１４月間、１５月間、１６月間、１７月間、１８月間、１９月間、２０月間、２１月間、２２月間、２３月間、２４月間、１年間、１．５年間、２年間、２．５年間、３年間、３．５年間、４年間又はそれ以上）。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、粒子は、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット、国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット、国際公開第２０１６／０１９３９１号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２−０２１３７０８号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００３０３５９号明細書、及び米国特許出願公開第２０１６−００３０３６０号明細書のいずれかに開示されている粒子でない。
【０１４４】
［化合物］
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子は、式（Ｉ）の化合物を含む。いくつかの実施形態において、粒子の第１の区画及び／又は第２の区画は、式（Ｉ）の化合物：
【化４】
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又はその薬学的に許容可能な塩を含み、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ２〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、不在であるか、各々が１個以上のＲ４で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり；
Ｚは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）：
【化５】
2021520374.tif 000007
の化合物又はその塩であり、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ２〜Ｃ６−アルケニレン）−、−ＮＣＮ−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ−、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）、又は−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、又は−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルケニレン）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）−であり、ＲＣ及びＲＤは独立して、水素又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨ−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換されている。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２−である。いくつかの実施形態において、Ａは−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（メチレン）−であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）−である。いくつかの実施形態において、Ａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）−である。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｌ１は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ１はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１はＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、又は−ＣＨ２ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−である。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｌ３は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３はＣ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３はＣ１〜Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は−ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、１個以上のＲ２（例えば、オキソ）で任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、１個以上のＲ２（例えば、オキソ）で任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−、−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２−、−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）３−、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、又は−ＣＨ２Ｏ−である。いくつかの実施形態において、Ｌ３は−ＣＨ２Ｏ−である。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｍは、不在、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍは不在である。いくつかの実施形態において、Ｍはアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは−ＣＨ２−である。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）ｚであり、ここで、ｚは、１〜１０から選択される整数である。いくつかの実施形態において、ｚは、１〜５から選択される整数である。いくつかの実施形態において、Ｍは、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）２、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）４、又は（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）５である。いくつかの実施形態において、Ｍは、−ＯＣＨ２ＣＨ２−、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）２、（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３、又は（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）４である。いくつかの実施形態において、Ｍは（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）３である。いくつかの実施形態において、Ｍはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは非置換フェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは
【化６】
2021520374.tif 000008
である。いくつかの実施形態において、Ｍは、Ｒ７（例えば、１個のＲ７）で置換されているフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは
【化７】
2021520374.tif 000009
である。いくつかの実施形態において、Ｒ７はＣＦ３である。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｐは、不在、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは不在である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ−ａ）について、Ｐは、三環式、二環式、又は単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、単環式、窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、ピロリル、オキサゾリル、又はチアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、又はピロリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
【化８】
2021520374.tif 000010
である。いくつかの実施形態において、Ｐはトリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは１，２，３−トリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
【化９】
2021520374.tif 000011
である。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、５員ヘテロシクリル又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリジノニル（ｉｍｉｄａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｐは
【化１０】
2021520374.tif 000012
である。いくつかの実施形態において、Ｐはチオモルホリニル−１，１−ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｐは
【化１１】
2021520374.tif 000013
である。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｚは、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、単環式又は二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員ヘテロシクリル、５員ヘテロシクリル、又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはテトラヒドロピラニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１２】
2021520374.tif 000014
である。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１３】
2021520374.tif 000015
である。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、Ｚは、二環式酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは無水フタル酸（ｐｈｔｈａｌｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、窒素原子及び硫黄原子を含有する６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはチオモルホリニル−１，１−ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１４】
2021520374.tif 000016
である。いくつかの実施形態において、Ｚは窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１５】
2021520374.tif 000017
である。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、Ｚは二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されている二環式窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１６】
2021520374.tif 000018
である。いくつかの実施形態において、Ｚは１−オキサ−３，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−オンである。いくつかの実施形態において、Ｚは
【化１７】
2021520374.tif 000019
である。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｚはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚは単環式アリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニル（例えば、１個のＲ５により）である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は窒素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＮＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はオルト位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はメタ位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はパラ位にある。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１〜５個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、又は−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、−ＯＲＡ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、−ＯＲＡ１又は−Ｃ（Ｏ）ＯＨである。いくつかの実施形態において、Ｚは−ＣＨ３である。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ−ａ）について、Ｚはヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１２ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ１０ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ８ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換された窒素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１〜５個のＲ５で置換された窒素及び硫黄含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミニルである。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、Ｚは、−ＯＲＡ又は−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡである。いくつかの実施形態において、Ｚは、−ＯＲＡ（例えば、−ＯＨ又は−ＯＣＨ３）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、ＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ）である。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、Ｚは水素である。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ）：
【化１８】
2021520374.tif 000020
の化合物又はその塩であり、式中、環Ｍ１は、各々が１〜５個のＲ３で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；環Ｚ１は、１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ、又はＳであり；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ１０及びＲ１１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、及びＲＥ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１〜６個のＲ７で任意選択により置換されており；各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；各ｍ及びｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化１９】
2021520374.tif 000021
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。いくつかの実施形態において、各Ｒ３及びＲ５について、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、ハロゲン、オキソ、シアノ、シクロアルキル、又はヘテロシクリルで任意選択により及び独立して置換されている。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−ｉ）：
【化２０】
2021520374.tif 000022
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｍ２は、１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アリール又はヘテロアリールであり；環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；又は２個のＲ５は一緒になって、環Ｚ２に縮合した５〜６員環を形成し；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化２１】
2021520374.tif 000023
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ−ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ−ｉｉ）：
【化２２】
2021520374.tif 000024
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化２３】
2021520374.tif 000025
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｃ）：
【化２４】
2021520374.tif 000026
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍは、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化２５】
2021520374.tif 000027
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｄ）：
【化２６】
2021520374.tif 000028
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化２７】
2021520374.tif 000029
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｅ）：
【化２８】
2021520374.tif 000030
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化２９】
2021520374.tif 000031
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｆ）：
【化３０】
2021520374.tif 000032
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｍは、１個以上のＲ３で任意選択により置換されているアルキルであり；環Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；Ｌ３は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化３１】
2021520374.tif 000033
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：
【化３２】
2021520374.tif 000034
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｍは、結合、アルキル又はアリールであり、ここで、アルキル及びアリールは、１個以上のＲ３で任意選択により置換されており；Ｌ３は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール又は−ＯＲＡであり、ここで、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；ＲＡは水素であり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化３３】
2021520374.tif 000035
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ−ａ）：
【化３４】
2021520374.tif 000036
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｌ３は、各々が１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又は−ＯＲＡであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；ＲＡは水素であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；
【化３５】
2021520374.tif 000037
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化３６】
2021520374.tif 000038
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｚ１は、各々が１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルの各々は、１〜６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｑは、０〜２５の整数であり；
【化３７】
2021520374.tif 000039
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）：
【化３８】
2021520374.tif 000040
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、各々が１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；
【化３９】
2021520374.tif 000041
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）：
【化４０】
2021520374.tif 000042
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、各々が１〜５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；
【化４１】
2021520374.tif 000043
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ａ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｃ）：
【化４２】
2021520374.tif 000044
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｘは、Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”）、Ｎ（Ｒ’）、又はＳ（Ｏ）ｘであり；Ｒ’及びＲ”の各々は独立して、水素、アルキル、ハロゲン、又はシクロアルキルであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；ｘは、０、１、又は２であり；
【化４３】
2021520374.tif 000045
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ｃ）の化合物は、式（ＩＩＩ−ｄ）：
【化４４】
2021520374.tif 000046
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｘは、Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”）、Ｎ（Ｒ’）、又はＳ（Ｏ）ｘであり；Ｒ’及びＲ”の各々は独立して、水素、アルキル、ハロゲン、又はシクロアルキルであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０〜２５の整数であり；ｘは、０、１、又は２であり；
【化４５】
2021520374.tif 000047
は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ）の化合物である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ａ）の化合物である。式（ＩＩ−ａ）のいくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ）の化合物である。いくつかの実施形態において、Ｐは不在であり、Ｌ１は−ＮＨＣＨ２であり、Ｌ２は結合であり、Ｍはアリール（例えば、フェニル）であり、Ｌ３は−ＣＨ２Ｏであり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、チオモルホリニル−１，１−ジオキシド）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、化合物１１６である。
【０１７８】
式（Ｉ−ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｐは不在であり、Ｌ１は−ＮＨＣＨ２であり、Ｌ２は結合であり、Ｍは不在であり、Ｌ３は結合であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ）の化合物は、化合物１０５である。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ−ｉ）の化合物である。式（Ｉ−ｂ−ｉ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素又はＣＨ３であり、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１又は２であり、ｎは１であり、ＸはＯであり、ｐは０であり、Ｍ２は、１個以上のＲ３で任意選択により置換されているフェニルであり、Ｒ３は−ＣＦ３であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ−ｉ）の化合物は、化合物１００、化合物１０６、化合物１０７、化合物１０８、化合物１０９、又は化合物１１１である。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ−ｉｉ）の化合物である。式（Ｉ−ｂ−ｉｉ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｑは０であり、ｐは０であり、ｍは１であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｂ−ｉｉ）の化合物は、化合物１００である。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｃ）の化合物である。式（Ｉ−ｃ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｒ５は−ＣＨ３であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、ピペラジニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、化合物１１３である。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｄ）の化合物である。式（Ｉ−ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは３であり、ＸはＯであり、ｐは０であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｄ）の化合物は、化合物１１０又は化合物１１４である。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｆ）の化合物である。式（Ｉ−ｆ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、Ｍは−ＣＨ２−であり、Ｐは、窒素含有ヘテロアリール（例えば、イミダゾリル）であり、Ｌ３は−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２−であり、ＺはＣＨ３である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ−ｆ）の化合物は、化合物１１５である。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ−ａ）の化合物である。式（ＩＩ−ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、ｑは０であり、Ｌ３は−ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２であり、Ｚは−ＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、化合物１１２である。
【０１８５】
式（ＩＩ−ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、Ｌ３は結合又は−ＣＨ２であり、Ｚは水素又は−ＯＨである。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ−ａ）の化合物は、化合物１０３又は化合物１０４である。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物である。式（ＩＩＩ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、ＲＣは水素であり、Ｚ１は、Ｒ５（例えば、−Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３）で任意選択により置換されているヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、化合物１２０である。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）の化合物である。式（ＩＩＩ−ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは０であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、Ｚ２は、１個のＲ５（例えば、−ＮＨ２）で置換されたアリール（例えば、フェニル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ｂ）の化合物は、化合物１０２である。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）の化合物である。式（ＩＩＩ−ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、ＲＣは水素であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、窒素含有スピロヘテロシクリル、例えば、２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナニル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ｂ）の化合物は、化合物１２１である。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ−ｄ）の化合物である。式（ＩＩＩ−ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは、１、２、３、又は４であり、ｐは０であり、ＸはＳ（Ｏ）２である。式（ＩＩＩ−ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは、１、２、３、又は４であり、ｐは０であり、ＸはＳ（Ｏ）２である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ−ｄ）の化合物は、化合物１０１、化合物１１７、化合物１１８、又は化合物１１９である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｄ）、又は（Ｉ−ｅ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｄ）、又は（ＩＩ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｄ）、又は（Ｉ−ｆ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｄ）、又は（ＩＩＩ）の化合物である。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット、国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット、国際公開第２０１６／０１９３９１号パンフレット、国際公開第２０１７／０７５６３０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２−０２１３７０８号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００３０３５９号明細書又は米国特許出願公開第２０１６−００３０３６０号明細書に開示されている化合物でない。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、表２に示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子は、表２に示される化合物、又はその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０１９３】
【表２】
2021520374.tif 000048
【０１９４】
【表３】
2021520374.tif 000049
【０１９５】
【表４】
2021520374.tif 000050
【０１９６】
いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｃ）、（Ｉ−ｄ）、（Ｉ−ｅ）、（Ｉ−ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、若しくは（ＩＩＩ−ｄ））、又はその薬学的に許容可能な塩であり、
【化４６】
2021520374.tif 000051
、又はその薬学的に許容可能な塩から選択される。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子は、
【化４７】
2021520374.tif 000052
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０１９８】
実施形態において、本明細書に記載の粒子は、アルギン酸塩ポリマーに共有結合される式（Ｉ）の化合物（例えば、表２に示される化合物）を含む。実施形態において、本明細書に記載の粒子は、例えば、アミド結合によって、アルギン酸塩ポリマー中の１つ以上のグルロン酸及び／又はマンヌロン酸モノマーに共有結合される式（Ｉ）の化合物（例えば、表２に示される化合物、例えば、化合物１０１）を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物（例えば、表２中の化合物１０１）は、以下の実施例に記載される窒素パーセントの燃焼分析によって決定した際に、少なくとも２．０％且つ９．０％未満の窒素、又は２．０％〜５％の窒素、３．０％〜８．０％の窒素、５％〜８．０％の窒素、４．０％〜７．０％の窒素、５．０％〜７．０％の窒素、又は６．０％〜７．０％の窒素又は約６．８％の窒素の結合密度で、アルギン酸塩（例えば、およそのＭＷ＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５を有するアルギン酸塩）に共有結合される。
【０２００】
［細胞］
本開示の粒子は、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、間葉系幹細胞、ケラチン生成細胞、膵島細胞、及び上記の細胞型のいずれかに由来する細胞を含む、多種多様な様々な細胞型（例えば、ヒト細胞）を含み得る。細胞は、幹細胞又は人工多能性幹細胞に由来し得る。例示的な細胞型としては、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットに記載されている細胞型が挙げられる。いくつかの実施形態において、細胞は、以下の表３に示される細胞株に由来する。
【０２０１】
【表５】
2021520374.tif 000053
【０２０２】
いくつかの実施形態において、粒子は、本明細書において定義されるような膵島細胞を含まない。実施形態において、本開示の粒子に含まれる細胞、例えば、ＲＰＥ細胞、ＭＳＦＣ（組み換えＲＰＥ細胞及びＭＳＦＣを含む）は、以下の特徴の１つ以上を有する：（ｉ）糖尿病又はインスリンで処置され得る別の疾病若しくは状態を処置するのに有効な量で、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）を産生することが可能でない；（ｉｉ）グルコース応答的にインスリンを産生することが可能でない；又は（ｉｉｉ）分化したインスリン産生膵β細胞へと操作される誘導多能性細胞でない。
【０２０３】
実施形態において、本明細書に記載の粒子は、複数の細胞を含む。実施形態において、複数の細胞は、本明細書に記載の粒子内にカプセル化される前に、細胞懸濁液の形態である。懸濁液中の細胞は、（例えば、単層細胞培養物からの）単一細胞の形態を取り得、又は例えば、マイクロキャリア（例えば、ビーズ若しくはマトリックス）上に配置された、又は細胞の３次元凝集体（例えば、細胞クラスター又はスフェロイド）としての別の形態で提供され得る。細胞懸濁液は、複数の細胞クラスター（例えば、スフェロイドとして）又はマイクロキャリアを含み得る。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、細胞は、例えば、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットに記載される疾病、障害、又は状態の予防又は処置のための治療薬を産生するように組み換えられている。治療薬は、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子などの任意の生物学的物質であり得る。例示的な治療薬としては、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットに列挙されている薬剤が挙げられる。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、治療薬は、ペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）、例えば、ホルモン、酵素、サイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン又は抗炎症性サイトカイン）、増殖因子、凝固因子、又はリポタンパク質である。組み換え細胞によって産生される、ペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質、例えば、ホルモン、増殖因子、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）、抗体分子、酵素、サイトカイン、サイトカイン受容体、又はサイトカイン若しくはサイトカイン受容体を含むキメラタンパク質）は、天然のアミノ酸配列を有することができ、又は天然の配列の変異体を含み得る。変異体は、基準の天然の配列に対する、天然又は非天然のアミノ酸置換、突然変異、欠失又は付加であり得る。天然のアミノ酸配列は、多型変異体であり得る。天然のアミノ酸配列は、ヒト又は非ヒトアミノ酸配列であり得る。いくつかの実施形態において、天然のアミノ酸配列又はその天然の変異体は、ヒト配列である。さらに、本開示と共に使用するためのペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）は、何らかの方法で、例えば、化学又は酵素修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化）によって修飾され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態において、タンパク質は、５ｋＤ、１０ｋＤ、２５ｋＤ、５０ｋＤ、１００ｋＤ、１５０ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、５００ｋＤ、又はそれ以上の平均分子量を有する。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、タンパク質はホルモンである。例示的なホルモンとしては、抗利尿剤ホルモン（ＡＤＨ）、オキシトシン、成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、アルドステロン、コルチゾール、エピネフリン、グルカゴン、インスリン、エストロゲン、プロゲステロン、及びテストステロンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、メチオニン−ヒト成長ホルモン、ｄｅｓ−フェニルアラニンヒト成長ホルモン、及びブタ成長ホルモンである。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、タンパク質は、増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、及びインスリン様増殖因子−Ｉ及び−ＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）、例えば、血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ  ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）又は血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固、すなわち、血液が液体から固体又はゲルへと変換される過程に関与するタンパク質である。例示的な凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）及び凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）としては、第Ｉ因子（例えば、フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（例えば、プロトロンビン）、第ＩＩＩ因子（例えば、組織因子）、第Ｖ因子（例えば、プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子（例えば、安定因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（例えば、抗血友病因子Ａ）、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子（例えば、抗血友病因子Ｂ）、第Ｘ因子（例えば、スチュアート・プロワー因子）、第ＸＩ因子（例えば、血漿トロンボプラスチン前駆物質）、第ＸＩＩ因子（例えば、ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（例えば、フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、ヘパリン補因子ＩＩ、高分子量キニノーゲン（例えば、フィッツジェラルド因子）、抗トロンビンＩＩＩ、及びフィブロネクチンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、プロテインＣなどの抗凝固因子である。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、タンパク質は抗体分子である。本明細書において用いられるところ、「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。「抗体分子」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖の抗原結合若しくは機能的断片を含む。実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合し、例えば、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する単一特異性抗体分子である。実施形態において、抗体分子は、多特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。実施形態において、多特異性抗体分子は、第３、第４又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。実施形態において、多特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
【０２１０】
任意のクラスの全免疫グロブリン、その断片、及び抗体の抗原結合可変ドメインを少なくとも含む合成タンパク質を含む様々なタイプの抗体分子が、カプセル化組み換え細胞によって産生され得る。抗体分子は、抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４などのＩｇＧ抗体であり得る。抗体分子は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖可変領域などを含む抗原結合断片の形態であり得る。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル（ｍＡｂ）であり得る。モノクローナル抗体は、それらが標的抗原に特異的に結合し、及び／又は所望の生物学的活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である「キメラ」抗体、並びにこのような抗体の断片を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体分子は、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）である。記載される抗体はまた、所望の機能を仲介する際の抗体の有効性を高めるために、組み換え手段、例えばアミノ酸の欠失、付加又は置換によって修飾され得る。例示的な抗体としては、抗β−ガラクトシダーゼ、抗コラーゲン、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ４０、抗ＨＥＲ２、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ６、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ１７、抗ＩＬ１８、抗ＩＬ−２３、抗ＩＬ−２８、抗ＩＬ−２９、抗ＩＬ−３３、抗ＥＧＦＲ、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤＦ、抗フラジェリン、抗ＩＦＮ−α、抗ＩＦＮ−β、抗ＩＦＮ−γ、抗マンノース受容体、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＬＲ１、抗ＴＬＲ２、抗ＴＬＲ３、抗ＴＬＲ４、抗ＴＬＲ５、抗ＴＬＲ６、抗ＴＬＲ９、抗ＰＤＦ、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ−１、又は抗神経増殖因子抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体は、抗神経増殖因子抗体（例えば、フルラヌマブ、ファシヌマブ、タネズマブ）である。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、タンパク質は、例えば腫瘍壊死因子α及びβ、それらの受容体及びそれらの誘導体、レニンを含む、サイトカイン若しくはサイトカイン受容体、又はサイトカイン若しくはそれらの受容体を含むキメラタンパク質；リポタンパク質；コルヒチン；コルチコトロピン；バソプレシン；ソマトスタチン；リプレシン；パンクレオザイミン；ロイプロリド；α−１−アンチトリプシン；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性剤；組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）以外のプラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキナーゼ；ボンベシン；トロンビン；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化正常Ｔ細胞における発現及び分泌調節性（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ））；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ−１−α）；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミュラー管抑制因子；レラキシンＡ鎖；レラキシンＢ鎖；プロリラキシン（ｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；絨毛性ゴナドトロピン；β−ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮａｓｅ；インヒビン；アクチビン；ホルモン又は増殖因子の受容体；インテグリン；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、又はＴＧＦ−β５を含むＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉ及び−ＩＩ（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）；ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質；ＣＤ−３、ＣＤ−４、ＣＤ−８、及びＣＤ−１９などのＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；インターフェロン−α（例えば、インターフェロン．α．２Ａ）、−β、−γ、−λ及びコンセンサスインターフェロンなどのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；プロスタグランジンなどの生殖阻害剤；生殖促進剤；調節タンパク質；イムノアドヘシンなどの、抗体（その断片を含む）及びキメラタンパク質；これらの化合物の前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体、並びにこれらの化合物、又はそれらの前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体の薬学的に許容可能な塩である。好適なタンパク質又はペプチドは、天然又は組み換えであってもよく、例えば、融合タンパク質が挙げられる。
【０２１２】
本明細書に記載の粒子によって産生されるポリペプチド（例えば、タンパク質）の例としては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９（ＣＣＬ１０）、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１（ＫＣ）、ＣＸＣＬ２（ＳＤＦ１ａ）、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８（ＩＬ８）、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＴＮＦＡ、ＴＮＦＢ（ＬＴＡ）、ＴＮＦＣ（ＬＴＢ）、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０ＬＧ）、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ７、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＥＤＡ、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ２１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ２７、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＯＳＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＣＴＦ１、ＩＬ１２ａ、ＩＬ１２ｂ、ＩＬ２３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ１４、ＩＬ１６、ＩＬ３２、ＩＬ３４、ＩＬ１０、ＩＬ２２、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２９、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＬ２８、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＷ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ａ（ＩＬ１Ｆ１）、ＩＬ１Ｂ（ＩＬ１Ｆ２）、ＩＬ１Ｒａ（ＩＬ１Ｆ３）、ＩＬ１Ｆ５（ＩＬ３６ＲＮ）、ＩＬ１Ｆ６（ＩＬ３６Ａ）、ＩＬ１Ｆ７（ＩＬ３７）、ＩＬ１Ｆ８（ＩＬ３６Ｂ）、ＩＬ１Ｆ９（ＩＬ３６Ｇ）、ＩＬ１Ｆ１０（ＩＬ３８）、ＩＬ３３（ＩＬ１Ｆ１１）、ＩＬ１８（ＩＬ１Ｇ）、ＩＬ１７、ＫＩＴＬＧ、ＩＬ２５（ＩＬ１７Ｅ）、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＳＰＰ１、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ２、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＡＩＭＰ１（ＳＣＹＥ１）、ＭＩＦ、Ａｒｅｇ、ＢＣ０９６４４１、Ｂｍｐ１、Ｂｍｐ１０、Ｂｍｐ１５、Ｂｍｐ２、Ｂｍｐ３、Ｂｍｐ４、Ｂｍｐ５、Ｂｍｐ６、Ｂｍｐ７、Ｂｍｐ８ａ、Ｂｍｐ８ｂ、Ｃ１ｑｔｎｆ４、Ｃｃｌ２１ａ、Ｃｃｌ２７ａ、Ｃｄ７０、Ｃｅｒ１、Ｃｋｌｆ、Ｃｌｃｆ１、Ｃｍｔｍ２ａ、Ｃｍｔｍ２ｂ、Ｃｍｔｍ３、Ｃｍｔｍ４、Ｃｍｔｍ５、Ｃｍｔｍ６、Ｃｍｔｍ７、Ｃｍｔｍ８、Ｃｒｌｆ１、Ｃｔｆ２、Ｅｂｉ３、Ｅｄｎ１、Ｆａｍ３ｂ、Ｆａｓｌ、Ｆｇｆ２、Ｆｌｔ３ｌ、Ｇｄｆ１０、Ｇｄｆ１１、Ｇｄｆ１５、Ｇｄｆ２、Ｇｄｆ３、Ｇｄｆ５、Ｇｄｆ６、Ｇｄｆ７、Ｇｄｆ９、Ｇｍ１２５９７、Ｇｍ１３２７１、Ｇｍ１３２７５、Ｇｍ１３２７６、Ｇｍ１３２��０、Ｇｍ１３２８３、Ｇｍ２５６４、Ｇｐｉ１、Ｇｒｅｍ１、Ｇｒｅｍ２、Ｇｒｎ、Ｈｍｇｂ１、Ｉｆｎａ１１、Ｉｆｎａ１２、Ｉｆｎａ９、Ｉｆｎａｂ、Ｉｆｎｅ、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ２３ａ、Ｉｌ２５、Ｉｌ３１、Ｉｌｔｉｆｂ、Ｉｎｈｂａ、Ｌｅｆｔｙ１、Ｌｅｆｔｙ２、Ｍｓｔｎ、Ｎａｍｐｔ、Ｎｄｐ、Ｎｏｄａｌ、Ｐｆ４、Ｐｇｌｙｒｐ１、Ｐｒｌ７ｄ１、Ｓｃｇ２、Ｓｃｇｂ３ａ１、Ｓｌｕｒｐ１、Ｓｐｐ１、Ｔｈｐｏ、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｔｎｆｓｆ１１、Ｔｎｆｓｆ１２、Ｔｎｆｓｆ１３、Ｔｎｆｓｆ１３ｂ、Ｔｎｆｓｆ１４、Ｔｎｆｓｆ１５、Ｔｎｆｓｆ１８、Ｔｎｆｓｆ４、Ｔｎｆｓｆ８、Ｔｎｆｓｆ９、Ｔｓｌｐ、Ｖｅｇｆａ、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ７ａ、Ｘｃｌ１、エピネフリン、メラトニン、トリヨードチロニン、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、膵島アミロイドポリペプチド、ミュラー管抑制因子又はホルモン、アディポネクチン、コルチコトロピン、アンジオテンシン、バソプレシン、アルギニンバソプレシン、アトリオペプチン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン、コレシストキニン、コルチスタチン、エンケファリン、エンドセリン、エリスロポエチン、卵胞刺激ホルモン、ガラニン、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１、ゴナドトロピン放出ホルモン、ヘプシジン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトーゲン、インヒビン、ソマトメジン、レプチン、リポトロピン、メラノサイト刺激ホルモン、モチリン、オレキシン、オキシトシン、膵臓ポリペプチド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、レラキシン、レニン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、サイロトロピン、サイロトロピン放出ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、アンドロゲン、α−グルコシダーゼ（酸性マルターゼとしても知られている）、グリコーゲンホスホリラーゼ、グリコーゲン脱分枝酵素、ホスホフルクトキナーゼ、ホスホグリセリン酸キナーゼ、ホスホグリセリン酸ムターゼ、乳酸脱水素酵素、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ、カルニチン、及びミオアデニル酸デアミナーゼも挙げられる。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、タンパク質は、補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）、例えば、第ＶＩＩＩ因子（例えば、天然のヒト第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）又は第ＩＸ因子（例えば、天然のヒト第ＩＸ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）である。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、細胞は、ヒト第ＶＩＩＩ因子タンパク質、例えば、組み換え第ＶＩＩＩ因子を発現するように組み換えられる。いくつかの実施形態において、組み換え第ＶＩＩＩ因子は、Ｂドメイン欠失組み換え第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤ）である。いくつかの実施形態において、細胞は、ヒトＲＰＥ細胞株に由来し、図２Ａに示されるＦＶＩＩＩ−ＢＤＤアミノ酸配列（配列番号１）をコードする外因性の核酸配列を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、細胞は、ＦＩＸ、例えば、野生型ヒトＦＩＸ、例えば、図２Ｂに示されるもの（配列番号２）又はその多型変異体（例えば、配列番号２のアミノ酸位置１４８においてトレオニンと置換されるアラニン）を発現するように組み換えられる。いくつかの実施形態において、細胞は、野生型ＦＩＸタンパク質（ＦＩＸ−ＧＩＦ）の機能獲得（ＧＩＦ）変異体を発現するように組み換えられ、ここで、ＧＩＦ変異体は、対応する野生型ＦＩＸより高い比活性度を有する。いくつかの実施形態において、細胞は、ヒトＲＰＥ細胞株に由来し、配列番号２のアミノ酸位置３３８に対応する位置においてアルギニンと置換されるアミノ酸を有することを除いて、配列番号２をコードする外因性の核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、配列番号２のアミノ酸位置３３８に対応する位置における置換アミノ酸は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、ロイシン、リジン、又はチロシンである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子に含まれる細胞によってコードされるＦＩＸタンパク質は、ＦＩＸ−ｐａｄｕａタンパク質であり、配列番号３６（図１７）を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなる。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、カプセル化細胞は、ヒトＲＰＥ細胞株に由来し、ポリペプチドのためのコード配列に動作可能に連結されるプロモータ配列（例えば、配列番号２６のヌクレオチド３３７〜２０６９）を含む外因性の核酸配列を含む。実施形態において、コード配列は、図１７に示されるコドン最適化ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤコード配列（配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６若しくは１７）又は図１７に示されるコドン最適化ＦＩＸ−ｐａｄｕａコード配列（配列番号１９、２０若しくは２１）である。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、カプセル化細胞は、ヒトＲＰＥ細胞株に由来し、配列番号１、２、３、４、５、６、７、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５及び３６からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されるプロモータ配列（例えば、配列番号２３、又は配列番号２３と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一であるヌクレオチド配列）を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、粒子は、２区画ヒドロゲルカプセルであり、内側区画が、約２０００万個の細胞／ｍｌ〜約４０００万個の細胞／ｍｌを含むポリマー溶液から形成され、ここで、細胞は、ＡＲＰＥ−１９細胞株に由来し、図１７に示されるコドン最適化ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤコード配列に動作可能に連結される配列番号２６のヌクレオチド３３７〜２０６９を含む。実施形態において、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤコード配列は、配列番号１５である。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、酵素、例えば、α−ガラクトシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、又はＮ−スルホグルコサミンスルホヒドロラーゼ（ＳＧＳＨ）である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、酵素、例えば、α−ガラクトシダーゼＡ（例えば、天然のヒトα−ガラクトシダーゼＡアミノ酸配列又はその変異体を含む）である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、サイトカイン又は抗体である。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、治療薬は、糖、例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖である。いくつかの実施形態において、糖は、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、又はヘプトース部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、直鎖単糖又は環化単糖を含む。いくつかの実施形態において、糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、マンノース、アラビノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、マンノサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、又はグルロン酸部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、タンパク質に結合される（例えば、Ｎ−結合型グリカン又はＯ−結合型グリカン）。例示的な糖としては、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ラムノース、スクロース、リボース、キシロース、シアル酸、マルトース、アミロース、イヌリン、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナン、レクチン、ペクチン、デンプン、セルロース、ヘパリン、ヒアルロン酸、キチン、アミロペクチン、又はグリコーゲンが挙げられる。いくつかの実施形態において、治療薬は、糖アルコールである。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、治療薬は脂質である。脂質は、疎水性又は両親媒性であってもよく、リポソーム、小胞、若しくは膜などの三次構造を形成するか又はリポソーム、小胞、若しくは膜に挿入され得る。脂質は、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、ステロール脂質、プレノール脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、ポリケチド、又はスフィンゴ脂質を含み得る。カプセル化細胞によって産生される脂質の例としては、アナンダミド、ドコサヘキサエン酸、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、エイコサノイド、トリグリセリド、カンナビノイド、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、エストロゲン、アンドロステロン、テストステロン、コレステロール、カロテノイド、キノン、ヒドロキノン、又はユビキノンが挙げられる。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、治療薬は小分子である。小分子は、細胞によって産生される天然産物を含み得る。いくつかの実施形態において、小分子は、利用可能性が不十分であり、又はリピンスキーのルールオブファイブと適合しない（小分子がヒトにおける経口で有効な薬物である見込みがあるかどうかを推定するのに使用される一連の指針；例えば、Ｌｉｐｉｎｓｋｉ，Ｃ．Ａ．ｅｔ  ａｌ（２００１）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  ４６：２−３６を参照）。例示的な小分子天然産物としては、抗菌薬（例えば、カルモナム、ダプトマイシン、フィダキソマイシン、ホスホマイシン、イセパマイシン、ミクロノマイシン硫酸塩、ミオカマイシン、ムピロシン、ネチルマイシン硫酸塩、テイコプラニン、チエナマイシン、リファマイシン、エリスロマイシン、バンコマイシン）、抗寄生虫薬（例えば、アルテミシニン、イベルメクチン）、抗癌剤（例えば、ドキソルビシン、アクラルビシン、アミノレブリン酸、アルグラビン、オマセタキシンメペスクシナート、パクリタキセル、ペントスタチン、ペプロマイシン、ロミデプシン、トラベクテジン、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、クロモマイシンＡ、ダウノルビシン、ロイコボリン、ネオカルジノスタチン、ストレプトゾシン、トラベクテジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、抗糖尿病薬（例えば、ボグリボース）、中枢神経系薬剤（例えば、Ｌ−ドパ、ガランタミン、ジコノチド）、スタチン（例えば、メバスタチン）、抗真菌薬（例えば、フマギリン、シクロスポリン）、１−デオキシノジリマイシン、及びテオフィリン、ステロール（コレステロール、エストロゲン、テストステロン）が挙げられる。さらなる小分子天然産物が、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｎｅｗｍａｎ，Ｄ．Ｊ．ａｎｄ  Ｃｒａｇｇ，Ｍ．（２０１６）Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  ７９：６２９−６６１及びＢｕｔｌｅｒ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ（２０１４）Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  Ｒｅｐ  ３１：１６１２−１６６１に記載されている。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、細胞は、非タンパク質又は非ペプチド小分子を合成するように組み換えられる。例えば、実施形態において、組み換え細胞は、スタチン（例えば、タウロスタチン（ｔａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン、フルバスタチン、又はアトルバスタチン）を産生し得る。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、治療薬は、抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、植物抗原、環境抗原、又は腫瘍抗原）である。抗原は、免疫賦活性である、すなわち、免疫応答を刺激するか又はそれが由来する生物又は分子に対して有効な免疫を提供することが可能であると当業者によって認識される。抗原は、核酸、ペプチド、タンパク質、糖、脂質、又はこれらの組み合わせであり得る。
【０２２５】
細胞を含む粒子は、単一の治療薬又は複数の治療薬を産生し得る。複数の治療薬は、関連し得るか又は複合体を形成し得る。いくつかの実施形態において、細胞を含む粒子から分泌又は放出される治療薬は、活性形態である。いくつかの実施形態において、治療薬は、不活性形態で、例えば、プロドラッグとして、細胞を含む粒子から分泌又は放出される。後者の場合、治療薬は、酵素などの下流の薬剤によって活性化され得る。
【０２２６】
［処置方法］
第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子（例えば、本明細書に記載される）、又はそれを含む組成物の投与又は移植によって、患者における疾病、障害、又は状態を予防又は処置するための方法が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の少なくとも１つの症状を直接又は間接的に低減又は軽減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の発症を予防するか又は遅らせる。いくつかの実施形態において、患者はヒトである。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）又は中枢神経系（ＣＮＳ））、脈管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系又は胃腸管といった身体の系に影響を及ぼす。いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣又はペニスといった身体の一部に影響を及ぼす。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、神経変性疾患、糖尿病、心臓病、自己免疫疾患、癌、肝疾患、ライソゾーム蓄積症、血液凝固障害又は凝固障害、整形外科状態、アミノ酸代謝障害である。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は神経変性疾患である。例示的な神経変性疾患としては、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病（ＰＤ）筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び脳性麻痺（ＣＰ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、神経核内封入体病（ＮＩＨＩＤ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、ハラーフォルデン・シュパッツ症候群、プリオン病、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、パンチドランカー、びまん性神経原線維変化病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、ニーマン・ピック病３型、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、脊髄小脳失調症、ピック病及び歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症が挙げられる。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、強皮症、多発性硬化症、狼瘡又は過敏症といった自己免疫疾患である。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、疾病は、例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、ＮＡＳＨといった肝臓病である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は癌である。例示的な癌としては、白血病、リンパ腫、メラノーマ、肺癌、脳癌（例えば、グリア芽細胞腫）、肉腫、膵癌、腎臓癌、肝臓癌、精巣癌、前立腺癌又は子宮癌が挙げられる。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は整形外科状態である。例示的な整形外科状態としては、骨粗鬆症、骨壊死、パジェット病又は骨折が挙げられる。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態はライソゾーム蓄積症である。例示的なライソゾーム蓄積症としては、ゴーシェ病（例えば、タイプＩ、タイプＩＩ、タイプＩＩＩ）、テイザックス病、ファブリー病、ファーバー病、ハーラー症候群（ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ  Ｉ）としても知られる）、ハンター症候群、ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症、ニーマン・ピック病、サラ病、サンフィリポ症候群（ムコ多糖症ＩＩＩＡ型（ＭＰＳ３Ａ）としても知られる）、多発性スルファターゼ欠損症、マロトー・ラミー症候群、異染性白質萎縮症、クラッベ病、シャイエ症候群、ハーラー・シャイエ症候群、スライ症候群、ヒアルロニダーゼ欠損症、ポンペ病、ダノン病、ガングリオシド蓄積症又はモルキオ症候群が挙げられる。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、血液凝固障害又は凝固障害である。例示的な血液凝固障害又は凝固障害としては、血友病（例えば、血友病Ａ又は血友病Ｂ）、ヴォン・ヴィレブランド病、血小板減少症、尿毒症、ベルナール・スーリエ症候群、第ＸＩＩ因子欠乏症、ビタミンＫ欠乏症又は先天性無フィブリノゲン血症が挙げられる。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、フェニルケトン尿症、チロシン血症（例えば、タイプ１又はタイプ２）、アルカプトン尿症、ホモシスチン尿症、高ホモシステイン血症、カエデ糖症といったアミノ酸代謝障害である。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、高脂血症、高コレステロール血症、ガラクトース血症といった脂肪酸代謝疾患である。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、疾病、障害、又は状態は、プリン又はピリミジン代謝障害、例えば、レッシュ・ナイハン症候群である。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、疾病、障害、又は状態は、糖尿病（例えば、１型又は２型糖尿病）である。
【０２４０】
本開示は、本明細書に記載の疾病、障害、又は状態に罹患しているか又は罹患している疑いのある患者を同定するための方法をさらに含み、このような同定の後、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子（例えば、本明細書に記載される）、又はこのような粒子を含む組成物を患者に投与する。実施形態において、患者はヒトである。
【０２４１】
［医薬組成物、キット、及び投与］
本開示は、本明細書に記載の粒子を含む医薬組成物、並びにそのキットをさらに含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子、並びに薬学的に許容可能な賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物中の粒子は、細胞（例えば、ヒト細胞、例えば、組み換えヒト細胞）及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、粒子は、医薬組成物中において有効量で提供される。いくつかの実施形態において、有効量は治療的有効量である。いくつかの実施形態において、有効量は予防的有効量である。
【０２４３】
本明細書に記載の医薬組成物は、薬理学の技術分野において公知であるいずれかの方法によって調製可能である。一般に、このような調製方法は、粒子（例えば、粒子、すなわち、「有効成分」をカプセル化するヒドロゲルカプセル）と、キャリア、及び／又は１種以上の他の補助成分とを付随させるステップ、並びに次いで、必要である及び／又は所望される場合、生成物を所望の単一投与又は多投与量単位に成型及び／又はパッケージングするステップを含む。
【０２４４】
薬学組成物は、単一の単位投与量及び／又は複数の単一単位投与量として、調製、パッケージ化、及び／又は、原体で販売されることが可能である。本明細書において用いられるところ、「単位投与量」は、所定の量の活性成分を含む薬学組成物の個別の量である。活性成分の量（すなわち、粒子の数）は一般に、患者に投与されることとなる活性成分の投与量、及び／又は、このような投与量の簡便な画分（例えばこのような投与量の半分若しくは三分の一など）と等しい。
【０２４５】
本開示の薬学組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は、いずれかの追加の成分の相対量は、処置される患者のアイデンティティ、サイズ及び／又は状態に応じて、並びに、さらに、組成物が投与される経路に応じて様々であろう。一例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０２４６】
「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、一緒に配合される化合物の薬理学的活性を破壊しない無毒性のキャリア、助剤、希釈剤、又はビヒクルを指す。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬製剤の技術分野において周知であるもののいずれかであり、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、平滑剤、及び／又は油が挙げられる。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。
【０２４７】
本明細書に記載の粒子は、経口的、非経口的（皮下、筋肉内、及び皮内を含む）、局所的、直腸的、経鼻的、腫瘍内、髄腔内、口腔内、腟内に、又は移植されたレザバーを介して、投与され得る。いくつかの実施形態において、提供される粒子又は組成物は、皮下に又はインプラントによって投与可能である。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子及び関連する組成物は、粘膜表面又は体腔などの、身体の特定の領域内又は領域上に投与又は移植され得る。投与又は移植の例示的な部位としては、腹膜腔（例えば、小腹膜嚢）、脂肪組織、心臓、眼、筋肉、脾臓、リンパ節、食道、鼻、副鼻腔、歯、歯茎、舌、口、のど、小腸、大腸、甲状腺、骨（例えば、股関節又は関節）、乳房、軟骨、膣、子宮、卵管、卵巣、陰茎、精巣、血管、肝臓、腎臓、中枢神経系（例えば、脳、脊髄、神経）、又は耳（例えば、蝸牛）が挙げられる。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子及び関連する組成物は、中枢神経系、例えば、脳、脊髄、神経以外の部位において投与又は移植される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の粒子及び関連する組成物は、眼（例えば、網膜）以外の部位において投与又は移植される。
【０２５０】
本開示の組成物の無菌注射液形態は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、技術分野において公知である技術に従い、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて配合され得る。無菌注射調製物はまた、無毒性で許容可能な非経口希釈剤又は溶剤中の無菌注射溶液又は懸濁液（例えば１，３−ブタンジオール中の溶液として）であり得る。ビヒクル及び溶剤のうち、利用され得る許容可能なものは、水、リンゲル溶液及び等張性の塩化ナトリウム溶液である。加えて、無菌の不揮発性油が、溶剤又は懸濁媒として簡便に利用される。
【０２５１】
眼科用途のためには、提供される薬学的に許容可能な組成物は、微粉化懸濁液として配合され得るか、又はワセリンなどの軟膏剤中に配合され得る。
【０２５２】
本明細書において提供される薬学組成物の説明は主にヒトへの投与に好適である薬学組成物に関するものであるが、このような組成物は一般に、すべての種類の動物に対する投与に好適であることは当業者によって理解されるであろう。組成物を種々の動物への投与に好適なものとするためのヒトへの投与に好適な薬学組成物の変更は十分に理解されており、通常の知識を有する獣医学薬理学者は、通常の実験によってこのような変更を設計及び／又は実施することが可能である。
【０２５３】
本明細書に記載の粒子及び関連する組成物は、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与量単位形態（例えば、単一単位剤形）で配合され得る。しかしながら、本開示の組成物の合計投与量及び使用レジメンは、担当医師によって適切な医学的良識の範囲内で決定されることとなることが理解されるであろう。いずれかの特定の患者又は生体に係る特定の治療的に有効な投与量レベルは、処置される疾病及び障害の重症度；利用される特定の活性成分の活性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康状態、性別及び規定食；利用される特定の活性成分の投与時間、投与経路及び排泄速度；処置期間；利用される特定の活性成分と組み合わされて、又は、同時に用いられる薬物；並びに、医学的技術分野において周知である同様の要因を含む多様な要因に応じることとなる。
【０２５４】
有効量を達成するために必要とされる治療の正確な量は、例えば患者の種、年齢及び全体的な状態、副作用又は疾患の重症度、特定の粒子のアイデンティティ、投与形態等に応じて、患者毎に様々となる。所望される投与量は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回、送達可能である。一定の実施形態において、所望される投与量は、多投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回又はそれ以上の投与）を用いて送達可能である。
【０２５５】
本明細書に記載の粒子及び関連する組成物が、１種以上の追加の薬学的薬剤と併用して投与され得ることが理解されるであろう。粒子又は組成物は、それらのバイオアベイラビリティを向上させ、それらの代謝を低下させ、及び／又は調節し、それらの排出を抑制し、及び／又は身体内におけるそれらの分布を調節する追加の薬学的薬剤と併用して投与され得る。用いられる療法が、同じ障害に対して所望の効果を達成し得、及び／又はそれが、異なる効果を達成し得ることも理解されるであろう。
【０２５６】
キット（例えば、医薬品包装）も本開示によって包含される。本発明に係るキットは、本明細書に記載の疾病、障害又は状態のいずれかを予防及び／又は処置するのに有用であり得る。提供されるキットは、本発明に記載の医薬組成物又は粒子及び容器（例えば、バイアル、アンプル、瓶、シリンジ、及び／又はディスペンサーパッケージ、又は他の好適な容器）を含み得る。いくつかの実施形態において、提供されるキットは、本発明に係る医薬組成物又は本発明に記載の粒子の希釈又は懸濁のための医薬品用賦形剤を含む第２の容器を任意選択によりさらに含み得る。いくつかの実施形態において、容器及び第２の容器中で提供される本発明に係る医薬組成物又は本発明に記載の粒子は、組み合わされて、１つの単位剤形が形成される。
【０２５７】
［粒子を作製する方法］
本開示は、本明細書に記載の粒子、例えば、第１の区画、第２の区画、及び式（Ｉ）の化合物を含む粒子を作製するための方法をさらに含む。粒子がヒドロゲルカプセルであるいくつかの実施形態において、粒子を作製する方法は、第１及び第２のポリマー溶液（例えば、それぞれヒドロゲル形成ポリマーを含む）を含む複数の液滴を、水性架橋溶液と接触させることを含む。液滴は、当該技術分野において公知の任意の技術を用いて形成され得る。
【０２５８】
本明細書に記載の粒子の各区画は、非修飾ポリマー、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー、又はそのブレンドを含み得る。簡潔に述べると、２区画ヒドロゲルカプセルとして構成される粒子を調製する方法を実施する際、ある体積の第１のポリマー溶液（例えば、非修飾ポリマー、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー、又はそのブレンドを含み、任意選択により細胞を含む）が、同心針の内腔に連結された第１のシリンジに充填される。次に、第１のシリンジは、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む水性架橋溶液を含む容器の上に垂直に配向されたシリンジポンプに連結され得る。ある体積の第２のポリマー溶液（例えば、非修飾ポリマー、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー、又はそのブレンドを含み、任意選択により細胞を含む）が、同心針の外腔に連結される第２のシリンジに充填される。次に、第２のシリンジは、架橋溶液を含む容器に対して水平に配向されたシリンジポンプに連結され得る。次に、高電圧発電機が、針の上部及び下部に連結され得る。次に、シリンジポンプ及び発電機を用いて、ポリマー溶液の所望の滴下速度を達成するように決定された設定で、シリンジを通して第１及び第２のポリマー溶液を架橋溶液中に押し出すことができる。当業者は、カプセルの大部分（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％又はそれ以上）が目標サイズの１０％以内であり、球体様の形状を有する２区画ヒドロゲルカプセル組成物を生成するための、針内腔サイズ、電圧範囲、流量、滴下速度及び落下距離の様々な組み合わせを容易に決定し得る。第１及び第２の体積のポリマー溶液を使い果たした後、液滴は、一定の時間、例えば、約５分間にわたって、架橋溶液中で架橋させられ得る。
【０２５９】
ミリカプセル（例えば、直径１．５ｍｍのミリカプセル）の組成物を調製するための例示的なプロセスパラメータとしては、以下が挙げられる。同心針は、針先端から溶液表面までの落下距離を提供するのに十分な距離で、架橋溶液の表面の上に配置される。実施形態において、針先端と溶液表面との間の距離は、１〜５ｃｍである。実施形態において、第１及び第２のポリマー溶液は、０．０５ｍＬ／分〜５ｍＬ／分、又は０．０５ｍＬ／分〜２．５ｍＬ／分、又は０．０５ｍＬ／分〜約１ｍＬ／分、又は０．０５ｍＬ／分〜０．５ｍＬ／分、又は０．１ｍＬ／分〜０．５ｍＬ／分の総流量で、針を通して押し出される。実施形態において、第１及び第２のポリマー溶液は、約０．０５ｍＬ／分、０．１ｍＬ／分、０．１５ｍＬ／分、０．２ｍＬ／分、０．２５ｍＬ／分、０．３ｍＬ／分、０．３５ｍＬ／分、０．４ｍＬ／分、０．４５ｍＬ／分、又は０．５ｍＬ／分の総流量で、針を通して押し出される。実施形態において、針を通る第１及び第２のポリマー溶液の流量は、実質的に同じである。実施形態において、針を通る第１及び第２のポリマー溶液の流量は、異なる。
【０２６０】
実施形態において、機器の電圧は、１ｋＶ〜２０ｋＶ、又は１〜１５ｋＶ、又は１ｋＶ〜１０ｋＶ、又は５ｋＶ〜１０ｋＶである。電圧は、所望の滴下速度に達するまで調整され得る。実施形態において、機器の滴下速度は、１滴／１０秒〜５０滴／１０秒、又は１滴／１０秒〜２５滴／１０秒である。
【０２６１】
実施形態において、架橋溶液の表面上の非粒子破片の数が決定される。次に、例えば、元の架橋容器の溶液表面上に非粒子破片を残して、粒子を含む架橋溶液を別の容器に移すことによって、架橋容器の底に落下した粒子が収集され得る。次に、取り出された粒子が、沈降され得、架橋溶液が除去され得、次に、粒子は、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ緩衝液）で１回以上洗浄され得る。実施形態において、得られた粒子組成物（例えば、粒子の調製物）の１つ以上のアリコートが、組成物の品質、例えば、粒子欠陥及びサテライト粒子の数を評価するために、顕微鏡検査によって調べられる。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、架橋溶液は、プロセス添加剤（例えば、親水性、非イオン性界面活性剤）をさらに含む。プロセス添加剤は、架橋溶液の表面張力を低下させ得る。本開示におけるプロセス添加剤として有用な薬剤としては、ポリソルベート系界面活性剤、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）及びポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）のコポリマー、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）トリブロックコポリマー、及び非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、ＩＧＥＰＡ（登録商標）ＣＡ−６３０、ポロキサマー１８８、若しくはポロキサマー４０７、又は直後の例示的な界面活性剤の表に列挙される実質的に同じ化学的及び物理的特性を有する界面活性剤が挙げられる。
【０２６３】
【表６】
2021520374.tif 000054
【０２６４】
いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、非イオン性界面活性剤である。実施形態において、プロセス添加剤は、２つ以上の界面活性剤、例えば、２つ以上の親水性界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（ポリソルベート２０）又はＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００を含まない。実施形態において、プロセス添加剤は、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ−６３０（ポリエチレングリコールソルビタンモノオレエート）である。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、ポロキサマー１８８である。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、プロセス添加剤（例えば、界面活性剤）は、少なくとも０．０００１％以上の濃度で架橋溶液中に存在する。いくつかの実施形態において、架橋溶液は、少なくとも０．００１％、０．０１％、又は０．１％のプロセス添加剤を含む。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、約０．００１％〜約０．１％、約０．００５％〜約０．０５％、約０．００５％〜約０．０１％、及び約０．０１％〜約０．５％から選択される濃度で存在する。実施形態において、プロセス添加剤は、界面活性剤であり、この界面活性剤の臨界ミセル濃度未満の濃度で存在する。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、架橋剤は、単一のタイプ又は異なるタイプの混合の二価カチオン、例えば、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋、Ｓｒ２＋の１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、１ｍＭ〜１００ｍＭ又は７．５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度のＢａＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、５０ｍＭ〜１００ｍＭの濃度のＣａＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、３７．５ｍＭ〜１００ｍＭの濃度のＳｒＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、ＢａＣｌ２（例えば、５ｍＭ〜２０ｍＭ）及びＣａＣｌ２（例えば、３７．５ｍＭ〜１２．５ｍＭ）の混合物、又はＢａＣｌ２（例えば、５ｍＭ〜２０ｍＭ）及びＳｒＣｌ２（例えば、３７．５ｍＭ〜１２．５ｍＭ）の混合物である。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、架橋剤は、ＳｒＣｌ２であり、プロセス添加剤は、０．１％未満、例えば、約０．００５％〜０．０５％、約０．００５％〜約０．０１％の濃度のＴｗｅｅｎ（登録商標）８０（又は例示的な界面活性剤の表に列挙される実質的に同じ化学的及び物理的特性を有する界面活性剤）である。いくつかの実施形態において、ＳｒＣｌ２の濃度は約５０ｍＭである。いくつかの実施形態において、架橋剤は、ＳｒＣｌ２であり、プロセス添加剤は、１％の濃度のポロキサマー１８８である。
【０２６８】
水性架橋溶液中の緩衝液のタイプ及び濃度は、溶液ｐＨをほぼ中性、例えば、約６．５〜約７．５、約７．０〜約７．５、又は約７．０に維持するように選択される。実施形態において、緩衝液は、粒子、例えば、細胞内にカプセル化される生体材料と適合する。いくつかの実施形態において、水性架橋溶液中の緩衝液は、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）を含む。
【０２６９】
水性架橋溶液中の浸透圧調整剤は、ポリマー溶液（いくつかの実施形態において、細胞の懸濁液を含む）の浸透圧、例えば、最大で２０％、１０％又は５％の上変動又は下変動を有する浸透圧と同様の値に溶液浸透圧を維持するように選択される。いくつかの実施形態において、浸透圧剤は、０．１Ｍ〜０．３Ｍの濃度のマンニトールである。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、架橋溶液は、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、２０ｍＭのＢａＣｌ２、０．２Ｍのマンニトール及び０．０１％のポロキサマー１８８を含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、架橋溶液は、５０ｍＭの塩化ストロンチウム六水和物、０．１６５Ｍのマンニトール、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、及び０．０１％の、Ｔｗｅｅｎ  ８０の代わりに例示的な界面活性剤の表に列挙される実質的に同じ化学的及び物理的特性を有する界面活性剤を含む。
【０２７２】
実施形態において、プロセス添加剤は、ポロキサマー１８８であり、これは、洗浄ステップ後に検出可能な量で粒子組成物（例えば、粒子の調製物）中に存在する。ポロキサマー１８８は、当該技術分野において公知の任意の技術によって、例えば、硫酸ナトリウム沈殿によって組成物のアリコートに粒子を部分的若しくは完全に溶解させ、上清をＬＣ／ＭＳによって分析することによって検出され得る。
【０２７３】
架橋溶液の表面張力の低下は、当該技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、接触角ゴニオメータ又は張力計の使用、例えば、デュノイリング法によって評価され得る（例えば、Ｄａｖａｒｃｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１７）Ｆｏｏｄ  Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ  ６２：１１９−１２７を参照）。
【０２７４】
［列挙される例示的な実施形態］
１．
ａ）第１の区画と；
ｂ）第２の区画と；
ｃ）式（Ｉ−ａ）：
【化４８】
2021520374.tif 000055
（式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）−、−ＮＣＮ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６−アルキレン）−、−Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ２〜Ｃ６−アルケニレン）−、−Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｘ−、−ＯＳ（Ｏ）ｘ−、−Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ−、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）−、−Ｐ（ＲＦ）ｙ−、−Ｓｉ（ＯＲＡ）２−、−Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）−、−Ｂ（ＯＲＡ）−、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５〜７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、−ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、−Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、−Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、−Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である）
の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と
を含む粒子。
【０２７５】
２．第１の区画が、第２の区画で取り囲まれている、実施形態１に記載の粒子。
【０２７６】
３．第１の区画が、第２の区画内に配置される、実施形態１〜２のいずれか１つに記載の粒子。
【０２７７】
４．第２の区画が、第１の区画の周りにバリアを形成する、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の粒子。
【０２７８】
５．第２の区画の総体積が、第１の区画の体積より例えば１．５倍、２倍、３倍、又は５倍大きい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２７９】
６．第２の区画の差分体積が、第１の区画の体積より例えば１．５倍、２倍、３倍、又は５倍大きい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８０】
７．第２の区画の総体積が、第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％大きい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８１】
８．第２の区画の差分体積が、第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％大きい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８２】
９．第２の区画の差分体積が、第１の区画の体積より例えば１．５倍、２倍、３倍、又は５倍小さい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８３】
１０．第２の区画の総体積が、第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％小さい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８４】
１１．第２の区画の差分体積が、第１の区画の体積より約１％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、又は７５％小さい、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８５】
１２．以下から選択される特性を含む：
ａ）第１の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；
ｂ）第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；
ｃ）式（Ｉ−ａ）の化合物が、粒子の外面に配置され；及び／又は
ｄ）粒子が、第１及び第２の区画の間の境界面を含み、式（Ｉ−ａ）の化合物が、境界面に配置される、実施形態１に記載の粒子。
【０２８６】
１３．特性ａを含む、実施形態１２に記載の粒子。
【０２８７】
１４．特性ｂを含む、実施形態１２〜１３のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８８】
１５．特性ｃを含む、実施形態１２〜１４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２８９】
１６．特性ｄを含む、実施形態１２〜１５のいずれか１つに記載の粒子。
【０２９０】
１７．第１の区画又は第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まない、実施形態１に記載の粒子。
【０２９１】
１８．粒子の外面が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まない、実施形態１に記載の粒子。
【０２９２】
１９．以下から選択される特性を含む：
ａ）第１の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；
ｂ）第２の区画が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；
ｃ）粒子の外面が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まず；又は
ｄ）粒子が、第１及び第２の区画の間の境界面を含み、境界面が、式（Ｉ−ａ）の化合物を実質的に含まない、実施形態１に記載の粒子。
【０２９３】
２０．特性ａを含む、実施形態１９に記載の粒子。
【０２９４】
２１．特性ｂを含む、実施形態１９〜２０のいずれか１つに記載の粒子。
【０２９５】
２２．特性ｃを含む、実施形態１９〜２１のいずれか１つに記載の粒子。
【０２９６】
２３．特性ｄを含む、実施形態１９〜２２のいずれか１つに記載の粒子。
【０２９７】
２４．特性ａ及びｂを含む、実施形態１９に記載の粒子。
【０２９８】
２５．粒子が、２０ナノメートル〜１０ミリメートルの最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径を有する、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の粒子。
【０２９９】
２６．粒子が、５００ナノメートル〜１０ミリメートルの最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径を有する、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の粒子。
【０３００】
２７．粒子が、１ミリメートル〜５ミリメートル、例えば、１ミリメートル〜４ミリメートル、１ミリメートル〜３ミリメートル、１ミリメートル〜２ミリメートル、約１．５ミリメートル〜２ミリメートル、又は約１．５ミリメートルの最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、直径を有する、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０１】
２８．粒子が、第２の区画によって取り囲まれた第１の区画を有するヒドロゲルカプセルとして構成される、実施形態１〜２７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０２】
２９．第２の区画の厚さが、
（ａ）１ナノメートル及び１ミリメートル；
（ｂ）１００ナノメートル及び１ミリメートル；及び
（ｃ）５００ナノメートル及び５００マイクロメートル
からなる群から選択される、実施形態２８に記載の粒子。
【０３０３】
３０．第２の区画の厚さが、粒子の直径の少なくとも約２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、又は８０％である、実施形態２９に記載の粒子。
【０３０４】
３１．粒子が細胞を含む、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０５】
３２．第１の区画が細胞を含む、実施形態１〜３１のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０６】
３３．第２の区画が細胞を含む、実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０７】
３４．第１の区画が細胞を含み、第２の区画が細胞を含まない、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０８】
３５．第１の区画が細胞を含み、第２の区画が細胞を含む、実施形態１〜３４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３０９】
３６．第１の区画及び第２の区画が、同じタイプの細胞を含む、実施形態３５に記載の粒子。
【０３１０】
３７．第１の区画中の細胞が、第２の区画の細胞と異なるタイプの細胞である、実施形態３５に記載の粒子。
【０３１１】
３８．粒子が、第１の区画と第２の区画との間の境界面を含み、細胞が、境界面に配置され、例えば、細胞が、第１及び第２の区画の両方に接触する、実施形態３１〜３６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１２】
３９．第２の区画中の細胞の数又は密度が、第１の区画中の細胞の数又は密度より小さい、実施形態３１〜３７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１３】
４０．第１の区画が、少なくとも０．５×１０６、１×１０６、５×１０６、１０×１０６、１５×１０６又は２０×１０６個の細胞／ｍＬを含むポリマー溶液から形成される、実施形態３１〜３９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１４】
４１．第１の区画が、少なくとも０．５×１０６、１×１０６、５×１０６、１０×１０６、１５×１０６、２０×１０６又は２５×１０６個の細胞／ｍＬを含むポリマー溶液から、又は１億〜３億個の細胞／ｍＬを含むポリマー溶液から形成される、実施形態３１〜４０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１５】
４２．粒子が、少なくとも１００；２５０；５００；７５０；１，０００；２，５００；５，０００；１０，０００；２５，０００；又は５０，０００個の細胞を含む、実施形態３１〜４１のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１６】
４３．第１の区画が、少なくとも１００；２５０；５００；７５０；１，０００；２，５００；５，０００；１０，０００；２５，０００；又は５０，０００個の細胞を含む、実施形態３１〜４２のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１７】
４４．細胞が、単一細胞、１つ以上のスフェロイドとして存在するか、又は１つ以上のマイクロキャリアに結合される、実施形態３１〜４３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１８】
４５．粒子の外面が、細胞を実質的に含まない、実施形態３１〜４４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３１９】
４６．
ａ）１つ又は複数の細胞が、第１の区画内に配置され；
ｂ）第２の区画中の細胞の数又は密度が、第１の区画中の細胞の数又は密度より少なくとも２、５、１０、１０２、１０３、又は１０４倍小さく；
ｃ）第１の区画（例えば、第１の区画の外側境界）が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含み；又は
ｄ）第２の区画（例えば、第２の区画の外側境界）が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含む、実施形態３１〜４５のいずれか１つに記載の粒子。
【０３２０】
４７．特性ａを含む、実施形態４６に記載の粒子。
【０３２１】
４８．特性ｂを含む、実施形態４６〜４７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３２２】
４９．特性ｃを含む、実施形態４６〜４８のいずれか１つに記載の粒子。
【０３２３】
５０．特性ｄを含む、実施形態４６〜４９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３２４】
５１．特性ａ及びｂを含む、実施形態５０に記載の粒子。
【０３２５】
５２．特性ａ、ｂ、及びｃを含む、実施形態５０に記載の粒子。
【０３２６】
５３．特性ａ、ｂ、及びｄを含む、実施形態５０に記載の粒子。
【０３２７】
５４．特性ａ、ｂ、ｃ、及びｄを含む、実施形態５０に記載の粒子。
【０３２８】
５５．第２の区画が、細胞を実質的に含まない、実施形態３１〜５４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３２９】
５６．細胞が、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、間葉系幹細胞、又はケラチン生成細胞である、実施形態３１〜５５のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３０】
５７．細胞が、ＲＰＥ（例えば、ＡＲＰＥ−１９）細胞又はＭＳＣである、実施形態３１〜５６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３１】
５８．細胞が膵島細胞である、実施形態３１〜５６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３２】
５９．細胞が、治療薬（例えば、ポリペプチド）を発現する、実施形態３１〜５８のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３３】
６０．ポリペプチドが、第ＶＩＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体又は第ＩＸ因子タンパク質若しくはその変異体である、実施形態５９に記載の粒子。
【０３３４】
６１．ポリペプチドが、配列番号１又はその変異体を含む、実施形態５９〜６０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３５】
６２．ポリペプチドが、配列番号２又はその変異体、例えば、配列番号２のアミノ酸位置１４８においてトレオニンと置換されるアラニン又は配列番号２のアミノ酸位置３３８においてアルギニンと置換されるロイシンを含む、実施形態５９〜６０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３６】
６３．ポリペプチドが、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である、実施形態５９に記載の粒子。
【０３３７】
６４．粒子がポリマーを含む、実施形態１〜６３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３３８】
６５．ポリマーが多糖である、実施形態６４に記載の粒子。
【０３３９】
６６．ポリマーが、アルギン酸塩、キトサン、ヒアルロン酸塩、ゼラチン、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、又はポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）から選択される、実施形態６４〜６５のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４０】
６７．第１の区画が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、実施形態６４〜６６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４１】
６８．第２の区画が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、実施形態６４〜６７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４２】
６９．第１の区画及び第２の区画の両方が、ポリマー（例えば、多糖、例えば、アルギン酸塩）を含む、実施形態６４〜６８のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４３】
７０．第１の区画及び第２の区画が、同じポリマーを含む、実施形態６４〜６９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４４】
７１．第１の区画及び第２の区画が、異なるポリマーを含む、実施形態６４〜７０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４５】
７２．第１の区画がアルギン酸塩を含まず、第２の区画がアルギン酸塩を含む、実施形態６４〜７１のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４６】
７３．第１の区画がアルギン酸塩を含み、第２の区画が、アルギン酸塩以外のポリマーを含む、実施形態６４〜７２のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４７】
７４．第２の区画がアルギン酸塩を含み、第１の区画が、アルギン酸塩以外のポリマーを含む、実施形態６４〜７３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３４８】
７５．第１の区画が、ヒアルロン酸塩又はコンドロイチンを含み、第２の区画がアルギン酸塩を含む、実施形態７４に記載の粒子。
【０３４９】
７６．第１の区画のポリマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される、実施形態７３〜７５のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５０】
７７．第２の区画のポリマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される、実施形態７３〜７６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５１】
７８．粒子の外面及び第２の区画の内部が、式（Ｉ−ａ）の化合物を含む、実施形態１〜７７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５２】
７９．第１の区画及び第２の区画の両方のポリマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される、実施形態６４〜７８のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５３】
８０．式（Ｉ−ａ）の化合物が、式（Ｉ−ｂ）、（Ｉ−ｃ）、（Ｉ−ｄ）、（Ｉ−ｅ）、（Ｉ−ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、若しくは（ＩＩＩ−ｄ）のいずれか１つの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である、実施形態１〜７９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５４】
８１．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３又は化合物１１４から選択される、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５５】
８２．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１１２である、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５６】
８３．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１１３である、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５７】
８４．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１１４である、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５８】
８５．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１００でない、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３５９】
８６．式（Ｉ−ａ）の化合物が、表２に示される化合物１０１である、実施形態７６〜８０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６０】
８７．ポリマーの少なくとも０．５％のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される（例えば、ポリマーの少なくとも１％、２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される）、実施形態７６〜８６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６１】
８８．粒子の第１の（内側）区画中のポリマーの少なくとも０．５％のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される（例えば、粒子の第１の（内側）区画中のポリマーの少なくとも１％、２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される）、実施形態７６〜８６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６２】
８９．粒子の第２の（外側）区画中のポリマーの少なくとも０．５％のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される（例えば、粒子の第２の（外側）区画中のポリマーの少なくとも１％、２．５％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上のモノマーが、式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される）、実施形態７６〜８６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６３】
９０．ポリマー（式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される場合）が、０．１重量％〜１０重量％のＮ（例えば、０．１重量％〜２重量％のＮ、２重量％〜４重量％、又は４重量％〜８重量％のＮ）の、（非修飾ポリマーと比した）％  Ｎの増加を含み、ここで、％  Ｎが、燃焼分析によって決定され、修飾ポリマー中の式（Ｉ−ａ）の化合物の量に相当する、実施形態７６〜８６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６４】
９１．粒子の第１の（内側）区画が、０．１重量％〜１０重量％のＮ（例えば、０．１重量％〜２重量％のＮ、２重量％〜４重量％、又は４重量％〜８重量％のＮ）の、（非修飾ポリマーと比した）％  Ｎの増加を含むポリマー（式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される場合）を含み、ここで、％  Ｎが、燃焼分析によって決定され、修飾ポリマー中の式（Ｉ−ａ）の化合物の量に相当する、実施形態７６〜８６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６５】
９２．粒子の第２の（外側）区画が、０．１重量％〜１０重量％のＮ（例えば、０．１重量％〜２重量％のＮ、２重量％〜４重量％、又は４重量％〜８重量％のＮ）の、（非修飾ポリマーと比した）％  Ｎの増加を含むポリマー（式（Ｉ−ａ）の化合物で修飾される場合）を含み、ここで、％  Ｎが、燃焼分析によって決定され、修飾ポリマー中の式（Ｉ−ａ）の化合物の量に相当する、実施形態７６〜８４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６６】
９３．粒子が、ヒドロゲルカプセルであり、カプセルの第２の（外側）区画が、非修飾アルギン酸塩と、以下の実施例に記載される窒素パーセントの燃焼分析によって決定した際に、少なくとも２．０％且つ９．０％未満の窒素（Ｎ）の結合密度、又は３．０％〜８．０％、４．０％〜７．０％、５．０％〜７．０％、又は６．０％〜７．０％又は約６．８％で、式（Ｉ−ａ）の化合物（例えば、化合物１０１）で修飾されたアルギン酸塩との混合物を用いて形成される、実施形態７６〜８４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６７】
９４．粒子が、球状粒子である、実施形態１〜９３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６８】
９５．粒子が、第２の区画が第１の区画の周りに形成される方法によって作製される、実施形態１〜９４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３６９】
９６．ポリマー溶液の複数の液滴を、粒子を生成するのに十分な期間にわたって水性架橋溶液と接触させることを含む方法によって作製され、ここで、架橋溶液が、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む、実施形態１〜９５のいずれかに記載の粒子。
【０３７０】
９７．架橋溶液がプロセス添加剤をさらに含む、実施形態９６に記載の粒子。
【０３７１】
９８．プロセス添加剤が界面活性剤である、実施形態９７に記載の粒子。
【０３７２】
９９．界面活性剤が、ポリソルベート系界面活性剤、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）及びポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）のコポリマー、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）−ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）トリブロックコポリマー、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェニル−ポリエチレングリコール、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７から選択される、実施形態９８に記載の粒子。
【０３７３】
１００．界面活性剤が、少なくとも１８又は少なくとも２４の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有し、任意選択により、界面活性剤がポロキサマー１８８である、実施形態９８〜９９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７４】
１０１．プロセス添加剤が、少なくとも約０．００１％〜約０．１％、約０．００５％〜約０．０５％、約０．００５％〜約０．０１％、又は約０．０１％〜約０．０５％の濃度で、架橋溶液中に存在する、実施形態９７〜９９のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７５】
１０２．架橋剤が、単一のタイプ又は異なるタイプの混合の二価カチオンを含み、任意選択により、架橋剤が、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋及びＳｒ２＋の１つ以上を含む、実施形態９６〜１０１のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７６】
１０３．架橋剤が、
ａ．１ｍＭ〜１００ｍＭ又は７．５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度のＢａＣｌ２；
ｂ．５０ｍＭ〜１００ｍＭの濃度のＣａＣｌ２；
ｃ．３７．５ｍＭ〜１００ｍＭの濃度のＳｒＣｌ２；
ｄ．５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度のＢａＣｌ２と、３７．５ｍＭ〜１２．５ｍＭの濃度のＣａＣｌ２との混合物；及び
ｅ．５ｍＭ〜２０ｍＭの濃度のＢａＣｌ２と、３７．５ｍＭ〜１２．５ｍＭの濃度のＳｒＣｌ２との混合物
からなる群から選択される、実施形態９６〜１０２のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７７】
１０４．緩衝液が、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）を含む、実施形態９６〜１０３のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７８】
１０５．浸透圧調整剤が、０．１Ｍ〜０．３Ｍの濃度のマンニトールを含む、実施形態９６〜１０４のいずれか１つに記載の粒子。
【０３７９】
１０６．架橋剤がＳｒＣｌ２でない、実施形態９６〜１０５のいずれかに記載の粒子。
【０３８０】
１０７．架橋剤がＢａＣｌ２である、実施形態９６〜１０６のいずれか１つに記載の粒子。
【０３８１】
１０８．架橋溶液が、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、２０ｍＭのＢａＣｌ２、０．２Ｍのマンニトール及び０．０１％のポロキサマー１８８を含む、実施形態９６〜１０７のいずれか１つに記載の粒子。
【０３８２】
１０９．架橋剤がＳｒＣｌ２であり、プロセス添加剤が、約０．０１％の濃度の界面活性剤であり、界面活性剤がポリソルベート８０である、実施形態９６〜１０８のいずれか１つに記載の粒子。
【０３８３】
１１０．架橋溶液が、５０ｍＭの塩化ストロンチウム六水和物、０．１６５Ｍのマンニトール、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ及び０．０１％のポリソルベート８０を含む、実施形態１０９に記載の粒子。
【０３８４】
１１１．粒子が、第１及び第２の区画のそれぞれにヒドロゲル形成ポリマーを含むヒドロゲルミリカプセルである、実施形態１〜１１０のいずれか１つに記載の粒子。
【０３８５】
１１２．第１の区画中のヒドロゲル形成ポリマーのみが、高分子量アルギン酸塩であり、第２の区画中のヒドロゲル形成ポリマーが、化学修飾低分子量アルギン酸塩及び非修飾高分子量アルギン酸塩の混合物である、実施形態１１１に記載の粒子。
【０３８６】
１１３．実施形態１〜１１２のいずれか１つに記載の粒子を含む複数の粒子の調製物。
【０３８７】
１１４．複数の粒子の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上が、球状粒子であり、任意選択により、調製物が、検出可能な量のプロセス添加剤を含む、実施形態１１３に記載の調製物。
【０３８８】
１１５．薬学的に許容可能な調製物である、実施形態１１３〜１１４に記載の調製物。
【０３８９】
１１６．本明細書に記載の粒子、例えば、実施形態１〜１１５のいずれかに記載の粒子を作製する方法。
【０３９０】
１１７．第２の区画の形成の前に、第１の区画を形成することを含む、実施形態１１６に記載の方法。
【０３９１】
１１８．第２の区画の形成と同時に、第１の区画を形成することを含む、実施形態１１７に記載の方法。
【０３９２】
１１９．第１及び第２のポリマー溶液の複数の液滴を、第１及び第２の区画を有するヒドロゲルカプセルを生成するのに十分な期間にわたって水性架橋溶液と接触させることを含み、ここで、架橋溶液が、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む、実施形態１１６〜１１８のいずれか１つに記載の方法。
【０３９３】
１２０．同心針の使用を含む、実施形態１１６〜１１９のいずれか１つに記載の方法。
【０３９４】
１２１．第１のポリマー溶液が細胞を含む、実施形態１１６〜１２０のいずれか１つに記載の方法。
【０３９５】
１２２．粒子を患者に移植する方法であって、
例えば、実施形態１〜１１２のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
粒子を患者の身体に配置することを含む、方法。
【０３９６】
１２３．物質、例えば治療用物質、例えばポリペプチドを患者に提供する方法であって、
物質を含むか又は物質を生成する能力を有する、例えば、実施形態１〜１１２のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
粒子を患者の身体に配置することを含む、方法。
【０３９７】
１２４．例えば患者における粒子を評価する方法であって、
例えば、実施形態１〜１１２のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
粒子を患者の身体に配置することを含む、方法。
【０３９８】
１２５．患者への、物質、例えばポリペプチドを必要とする患者を処置する方法であって、
物質を含むか又は物質を生成する能力を有する、例えば、実施形態１〜１１２のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
粒子を患者の身体に配置することを含む、方法。
【０３９９】
１２６．患者への、物質、例えばポリペプチドを必要とする患者を処置するのに使用するための粒子の組成物であって、処置が、
物質を含むか又は物質を生成する能力を有する、例えば、実施形態１〜１１２のいずれかに記載の、本明細書に記載の粒子を提供すること；及び
粒子を患者の身体に配置することを含む、粒子の組成物。
【０４００】
［実施例］
本明細書に記載の本開示がより完全に理解され得るよう、以下の実施例が記載されている。本出願に記載されている実施例は、本明細書において提供されている粒子、化学修飾、組成物及び方法を例示するために提供されており、如何様にもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【０４０１】
［実施例１：化学修飾された移植可能な要素の調製のための例示的な化合物の合成］
［一般的なプロトコル］
以下の手順は、化学修飾された移植可能な要素の調製のための例示的な化合物を調製する方法を説明するものである。本明細書において提供されている化合物は、容易に入手可能である出発材料から、当業者に周知であろう以下に記載の特定の合成プロトコルに対する修正をしながら調製可能である。典型的又は好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応体のモル比、溶剤、圧力等）が提示されている場合、別段の定めがある場合を除き、他のプロセス条件もまた用いることが可能であることが認識されるであろう。最適な反応条件は用いられる特定の反応体又は溶剤によって様々であり得るが、このような条件は、ルーチン的な最適化手法で当業者によって判定可能である。
【０４０２】
さらに、当業者には明らかであろうとおり、一定の官能基が望ましくない反応に供されることを防止するために従来の保護基が必要であり得る。保護及び脱保護に関する、特定の官能基に係る好適な保護基の選択、並びに、好適な条件は、技術分野において周知である。例えば、数多くの保護基、並びに、その導入及び除去が、Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、及び、その中で引用されている文献において記載されている。
【０４０３】
［１，４−置換トリアゾールを得るためのヒュスゲン環化付加］
銅触媒ヒュスゲン［３＋２］環化付加を用いて、トリアゾール系化合物、並びに、その組成物、デバイス及び材料を調製した。範囲及び典型的なプロトコルは多くのレビューの主題となっている（例えば、Ｍｅｌｄａｌ，Ｍ．ａｎｄ  Ｔｏｒｎｏｅ，Ｃ．Ｗ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００８）１０８：２９５２−３０１５；Ｈｅｉｎ，Ｊ．Ｅ．ａｎｄ  Ｆｏｋｉｎ，Ｖ．Ｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．（２０１０）３９（４）：１３０２−１３１５；この両方は、本明細書において参照により援用されている）。
【化４９】
2021520374.tif 000056
【０４０４】
上記の実施例において、アジドは、結合要素Ａを含有する画分における反応性部分であるが、一方で、アルキンは、側基Ｚの反応性構成要素である。以下に示されているとおり、これらの官能性のハンドルを交換して、構造的に関連しているトリアゾール生成物を生成することが可能である。これらの代替物の調製は同様であり、特別な考察を必要とはしない。
【化５０】
2021520374.tif 000057
【０４０５】
ヨウ化物から開始される典型的なヒュスゲン環化付加手法の概要を以下に記載する。いくつかの事例において、ヨウ化物は、安全性のために反応の経過中にアジドに変換される。
【化５１】
2021520374.tif 000058
【０４０６】
アジ化ナトリウム（１．１当量）、アスコルビン酸ナトリウム、（０．１当量）ｔ−Ｎ，Ｎ’−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．２５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）のメタノール（１．０Ｍ、制限試薬）中の溶液を窒素を通気させて脱気し、アセチレン（１当量）及びヨウ化アリール（１．２当量）で処理した。この混合物を室温で５分間撹拌し、次いで、５５℃で１６時間温めた。次いで、反応を室温に冷却し、漏斗を通してろ過し、フィルタケーキをメタノールで洗浄した。組み合わせたろ液を濃縮し、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィ（１２０ｇシリカ、ジクロロメタン中に０〜４０％の勾配（３％水性水酸化アンモニウム、２２％メタノール、残量ジクロロメタン）を介して精製して、所望の目標材料を得た。
【０４０７】
アジドから開始される典型的なヒュスゲン環化付加手法の概要を以下に記載する。
【化５２】
2021520374.tif 000059
【０４０８】
トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（０．２当量）、トリエチルアミン（０．５当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．０６当量）のメタノール（０．４Ｍ、制限試薬）中の溶液を、アセチレン（１．０当量）で処理し、０℃に冷却した。反応を３０分間かけて室温に温め、次いで、５５℃で１６時間加熱した。反応を室温に冷却し、濃縮し、ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ジクロロメタン中に０〜１００％の勾配（３％水性水酸化アンモニウム、２２％メタノール、残量ジクロロメタン）で精製して、所望の目標材料を得た。
【０４０９】
［１，５−置換トリアゾールを得るためのヒュスゲン環化付加］
ヒュスゲン［３＋２］環化付加をまた、ルテニウム触媒を伴って行い、選択的に１，５−二置換生成物を得た（例えば、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００５，１２７，１５９９８−１５９９９；Ｂｏｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０，８９２３−８９３０に記載されているとおり。これらの各々は、本明細書において参照によりその全体が援用される）。
【化５３】
2021520374.tif 000060
【０４１０】
既述のとおり、以下に示されているとおり、アジド及びアルキン基を交換して、同様のトリアゾールを形成し得る。
【化５４】
2021520374.tif 000061
【０４１１】
典型的な手法を以下に記載する：アルキン（１当量）及びアジド（１当量）のジオキサン（０．８Ｍ）中の溶液を、ペンタメチルシクロ−ペンタジエニルビス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム（ＩＩ）クロリド（０．０２当量）のジオキサン（０．１６Ｍ）中の溶液に滴下した。バイアルを窒素でパージし、シールし、混合物を６０℃で１２時間加熱した。得られた混合物を濃縮し、シリカゲルにおけるフラッシュクロマトグラフィを介して精製して、必要とされた化合物を得た。
【０４１２】
［（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３）のための実験手順］
【化５５】
2021520374.tif 000062
メタノール（９ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（１、８４３ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（７４μＬ、０．４７ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（７２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（６９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（４７０ｍｇ、７．２４ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び１−メチル−４−（プロパ−２−イン−１−イル）ピペラジン（２、０．５ｇ、３．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、褐色がかったスラリーをジクロロメタンで抽出した。セライトを、組み合わせたジクロロメタン相に添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（８０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から７．５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３、０．４５ｇ、４３％）を得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ２２Ｎ６についての計算値２８７．２；実測値２８７．１。
【０４１３】
［Ｎ−（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（４）のための実験手順］
【化５６】
2021520374.tif 000063
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３、１．２ｇ、４．１９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７０ｍＬ、５．０３ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．４３ｍＬ、４．４０ｍｍｏｌ、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１．０５当量）を添加した。反応を、氷浴で冷却しながら１日撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から７．５％へと徐々に増加させた。溶剤を減圧下で除去し、得られた固体をジエチルエーテルで研和し、ろ過し、ジエチルエーテルで複数回洗浄して、Ｎ−（４−（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（４、０．４１ｇ、２８％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ２６Ｎ６Ｏについての計算値３５５．２；実測値３５５．２。
【０４１４】
［（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６）のための実験手順］
【化５７】
2021520374.tif 000064
メタノール（４０ｍＬ）及び水（４ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（１、２．９５ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（２５９μＬ、１．６４ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（２５０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２４１ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（１．６４ｇ、２５．２９ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び３−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）プロパ−１−イン（５、２．０ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、次に５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解させ、ろ過し、セライト（登録商標）（１０ｇ）を用いて濃縮した。粗生成物を、溶離剤としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）に精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から６．２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６、１．３７ｇ、３５％）を得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ３についての計算値３０７．２；実測値３０７．０。
【０４１５】
［Ｎ−（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（７）のための実験手順］
【化５８】
2021520374.tif 000065
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（６、１．６９ｇ、５．５２ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．９２ｍＬ、６．６２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．５７ｍＬ、５．７９ｍｍｏｌ、１．０５当量）を滴下して添加した。反応を室温で４時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（８０ｇ）クロマトグラフィによって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（７、１．７６ｇ、８５％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ２６Ｎ４Ｏ４についての計算値３７５．２；実測値３７５．０。
【０４１６】
［３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９）のための実験手順］
【化５９】
2021520374.tif 000066
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２７．０ｇ、６７５ｍｍｏｌ、６０％の純度）の懸濁液を氷浴で冷却した。オキセタン−３−オール（８、２５ｇ、３３７ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、０℃で３０分間撹拌した。次いで、３−ブロモプロパ１−イン（９、４１．２ｍＬ、３７１ｍｍｏｌ、８０％の純度）を滴下して添加した。混合物を、室温に温めながら一晩撹拌した。混合物をセライトでろ過し、ＴＨＦで洗浄し、減圧下でセライトを用いて濃縮した。粗生成物を、シリカゲル（２２０ｇ）で精製し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離した。移動相中のＥｔＯＡｃの濃度を０から２５％へと増加させて、（９、１８．２５ｇ  ４８％）の黄色の油を得た。
【０４１７】
［３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１）のための実験手順］
【化６０】
2021520374.tif 000067
メタノール（８０ｍＬ）中の３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９、７．９６ｇ、７１ｍｍｏｌ、１．０当量）、３−アジドプロパン−１−アミン（１０、７．８２ｇ、７８ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（８．２９ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（１．３５ｇ、７．１ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（２．４７ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（２０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１５％へと徐々に増加させて、３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１、１１．８５ｇ、７９％）を黄色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ９Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２１３．１；実測値２１３．０。
【０４１８】
［Ｎ−（３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（１２）のための実験手順］
【化６１】
2021520374.tif 000068
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（１１、３．９４ｇ、１８．５６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（３．１ｍＬ、２２．２８ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．９９ｍＬ、２０．４２ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。反応を、室温に温めながら一晩撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（３−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（１２、３．２２ｇ、６２％の収率）を固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についての計算値２８１．２；実測値２８１．０。
【０４１９】
［Ｎ−（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１４）のための実験手順］
【化６２】
2021520374.tif 000069
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１３、ＷｕＸｉから入手される、１．２ｇ、５．７０ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１５ｍＬ、１０７．５５ｍｍｏｌ、１８．９当量）の溶液に、塩化メタクリロイル（８９３ｍｇ、８．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと滴下して添加した。反応を一晩撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィによって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１４、１．３８ｇ、４０％の収率）を得た。
【０４２０】
［（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５）のための実験手順］
【化６３】
2021520374.tif 000070
メタノール（５０ｍＬ）及び水（１２ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン塩酸塩（５．０ｇ、１８．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．５９ｍＬ  ３．７１ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（３６８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（５３０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（２．４１ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（３．１１ｍＬ、２２．２６ｍｍｏｌ、１．２当量）及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（２．６ｇ、１８．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、４１３ろ紙に通してろ過した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から６．２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５、３．５４ｇ、６６％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ２０Ｎ４Ｏ２についての計算値２８９．２；実測値２８９．２。
【０４２１】
［Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６）のための実験手順］
【化６４】
2021520374.tif 000071
ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（１５、３．４６ｇ、１２．００ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（２．０１ｍＬ、１４．４０ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．２３ｍＬ、１２．６０ｍｍｏｌ、１．０５当量、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。２０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から３．７５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６、２．７４ｇ、６４％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についての計算値３５７．２；実測値３５７．３。
【０４２２】
［Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１７）のための実験手順］
【化６５】
2021520374.tif 000072
Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１６、１．２ｇ、３．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、室温で一晩、メタノール（６ｍＬ）及びＨＣｌ（１Ｎ、水溶液、９ｍＬ）に溶解させた。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２４ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（１７、０．８５ｇ、９２％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１４Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２７３．１；実測値２７３．１。
【０４２３】
［（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）カルバメート（１９）のための実験手順］
【化６６】
2021520374.tif 000073
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のベンジル（４−（ヒドロキシメチル）ベンジル）カルバメート（２．７１ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．８１ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、２当量）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２８５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、０．１５当量）を室温で一晩撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲル（２４ｇ）で粗生成物を精製して、ベンジル（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）−カルバメート（１９、２．４ｇ、６８％）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋  Ｃ２１Ｈ２５ＮＯ４についての計算値３７８．１７、実測値３７８．１７。
【０４２４】
［（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−フェニル）メタンアミン（２０）のための実験手順］
【化６７】
2021520374.tif 000074
ＥｔＯＨ中の（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）カルバメート（１９、１．５ｇ、４．２ｍｍｏｌ、１当量）、パラジウム炭素（１６０ｍｇ、１０重量％）を、短時間の間排気し、次いで、水素を、バルーンを介して添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）フェニル）メタンアミン（２０、８９０ｍｇ、９５％）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ２についての計算値２２２．１５、実測値２２２．１４。
【０４２５】
［Ｎ−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）−メタクリルアミド（２１）のための実験手順］
【化６８】
2021520374.tif 000075
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）フェニル）メタンアミン（２０、０．５ｇ、２．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４７ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．３３ｍＬ、３．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始して、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２ｇ）によって、残渣を精製して、Ｎ−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）ベンジル）メタクリルアミド（２１、０．４７ｇ、７２％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋  Ｃ１７Ｈ２３ＮＯ３についての計算値３１２．１６；実測値３１２．１７。
【０４２６】
［実験手順（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２）］
【化６９】
2021520374.tif 000076
メタノール（２０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン（５．０ｇ、２１．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．４４ｍＬ  ２．７９ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（４２５ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（４０９ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（２．７９ｇ、４２．９１ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び２−（ブタ−３−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３．３６ｍＬ、２１．４５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、４１３ろ紙に通してろ過した。セライト（１０ｇ）を添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２、３．１５ｇ、４９％）を固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．１８；実測値３０３．１８。
【０４２７】
［Ｎ−（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２３）のための実験手順］
【化７０】
2021520374.tif 000077
ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）中の（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（２２、３．１０ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．７１ｍＬ、１２．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（１．０５ｍＬ、１２．３０ｍｍｏｌ、１．２当量、５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。８グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（４−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２３、２．０６ｇ、５４％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０８５。
【０４２８】
［実験手順（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４）］
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−エチニルフェニル）メタンアミン（２．３６ｇ、１８．００ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．５６ｍＬ、３．６０ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（３５７ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（５１４ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ、０．１５当量）、及び２−（２−アジドエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（３．０８、１８．００ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトでろ過し、ＭｅＯＨ（３×５０ｍＬ）ですすいだ。溶剤を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタンに再溶解させ、セライト（２０ｇ）を添加し、溶剤を減圧下で除去し、残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４、３．５１ｇ、６４％）を黄色がかった油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．１８１６；実測値３０３．１８１４。
【０４２９】
［Ｎ−（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２５）のための実験手順］
【化７１】
2021520374.tif 000078
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）フェニル）メタンアミン（２４、１．５ｇ、４．９６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．０４ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．７２ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（１−（２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）ベンジル）メタクリルアミド（２５、０．９ｇ、４９％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｎａ］＋  Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０７６。
【０４３０】
［１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６）のための実験手順］
【化７２】
2021520374.tif 000079
メタノール（９ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の１−（４−ヨードフェニル）エタン−１−アミン塩酸塩（１．０ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．０８ｍＬ  ０．５３ｍｍｏｌ、０．１３当量）、アスコルビン酸ナトリウム（８０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（７７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、０．１当量）、アジ化ナトリウム（５２６ｇ、８．０９ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（０．５７ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶剤を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタンに再溶解させ、セライトのプラグでろ過した。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（４０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６、０．６２ｇ、５１％）を黄色がかった固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ２についての計算値３０３．２；実測値３０３．２。
【０４３１】
［Ｎ−（１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エチル）メタクリルアミド（２７）のための実験手順］
【化７３】
2021520374.tif 000080
ＣＨ２Ｃｌ２（１１ｍＬ）中の１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エタン−１−アミン（２６、０．５２ｇ、１．７ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．２９ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、氷浴で０℃に冷却し、塩化メタクリロイル（０．１８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ、１．０５当量、１１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈される）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応を４時間撹拌した。５グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（１−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）エチル）メタクリルアミド（２７、０．４９ｇ、７６％の収率）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２０Ｈ２６Ｎ４Ｏ３についての計算値３７１．２０７８；実測値３７１．２０８７。
【０４３２】
［（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８）のための実験手順］
【化７４】
2021520374.tif 000081
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−ヨード−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（３．０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．３１ｍＬ  １．９９ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（１９７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２８５ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（１．３０ｇ、１９．９３ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（１．６７ｍＬ、１１．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）及び２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．４０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグに通してろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８、２．５３ｇ、７１％）を緑色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１６Ｈ１９Ｎ４Ｏ２Ｆ３についての計算値３５７．２；実測値３５７．１。
【０４３３】
［Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２（トリフルオロメチル）ベンジル）メタクリルアミド（２９）のための実験手順］
【化７５】
2021520374.tif 000082
ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）中の（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）メタンアミン（２８、１．０ｇ、２．８１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．５９ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．４１ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−２（トリフルオロメチル）ベンジル）メタクリルアミド（２９、０．６５ｇ、５５％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２０Ｈ２３Ｎ４Ｏ３Ｆ３についての計算値４２５．２；実測値４２５．１。
【０４３４】
［３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０）のための実験手順］
【化７６】
2021520374.tif 000083
メタノール（５０ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の３−アジドプロパン−１−アミン塩酸塩（１．５ｇ、１４．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（１．９９ｇ、３．７５ｍｍｏｌ、０．２５当量）、ヨウ化銅（０．２９ｇ、１．５０ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．５２ｍＬ、３．７５ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を窒素で５分間パージし、０Ｃに冷却した。２−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（２．１０ｇ、１４．９８ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、反応混合物を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグでろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライト（２０ｇ）をろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２０％へと徐々に増加させて、３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０、２．３６ｇ、６６％）を得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１１Ｈ２０Ｎ４Ｏ２についての計算値２４１．２；実測値２４１．２。
【０４３５】
［Ｎ−（３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（３１）のための実験手順］
【化７７】
2021520374.tif 000084
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパン−１−アミン（３０、１．０ｇ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．５８ｍＬ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．４０ｍＬ、４．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２０％へと徐々に増加させて、Ｎ−（３−（４−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロピル）メタクリルアミド（３１、０．９６ｇ、７５％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ２４Ｎ４Ｏ３についての計算値３０９．２；実測値３０９．４。
【０４３６】
［（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２）のための実験手順］
【化７８】
2021520374.tif 000085
メタノール（２４ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中の（４−ヨードフェニル）メタンアミン塩酸塩（２．６４ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１．０当量）、（１Ｓ，２Ｓ）−Ｎ１，Ｎ２−ジメチルシクロヘキサン−１，２−ジアミン（０．３１ｍＬ  １．９６ｍｍｏｌ、０．２当量）、アスコルビン酸ナトリウム（１９８ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ、０．１当量）、ヨウ化銅（２７９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、０．１５当量）、アジ化ナトリウム（１．２７ｇ、１９．５９ｍｍｏｌ、２．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（１．６４ｍＬ、１１．７５ｍｍｏｌ、１．２当量）及び３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）オキセタン（９、１．１０ｇ、９．８０ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を窒素で５分間パージし、５５℃に一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグに通してろ過し、メタノール（３×５０ｍＬ）ですすいだ。セライトをろ液に添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（１２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２、１．４３ｇ、５６％）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ１６Ｎ４Ｏ２についての計算値２６１．１３４６；実測値２６１．１３４２。
【０４３７】
［Ｎ−（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（３３）のための実験手順］
【化７９】
2021520374.tif 000086
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）フェニル）メタンアミン（３２、０．５８ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４７ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（０．３２ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。１００％のヘキサンから開始し、ＥｔＯＡｃの濃度を徐々に１００％へと増加させる溶離剤としてヘキサン／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２４ｇ）によって残渣を精製して、Ｎ−（４−（４−（（オキセタン−３−イルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ベンジル）メタクリルアミド（３３、０．４８ｇ、６６％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１７Ｈ２０Ｎ４Ｏ３についての計算値３２９．１６０８；実測値３２９．１６１１。
【０４３８】
［エチル１−（２−メタクリルアミドエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３５）のための実験手順］
【化８０】
2021520374.tif 000087
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中のエチル１−（２−アミノエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３４、２．０ｇ、１０．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（３．８０ｍＬ、２７．２９ｍｍｏｌ、２．５当量）の溶液を、短時間の間排気し、窒素でフラッシュした。塩化メタクリロイル（１．６０ｍＬ、１６．３７ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下して添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。十１５グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、エチル１−（２−メタクリルアミドエチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシレート（３５、１．２８ｇ、４７％の収率）を無色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１２Ｈ１７Ｎ３Ｏ３についての計算値２５２．１；実測値２５２．１。
【０４３９】
［Ｎ−（４−（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）ベンジル）メタクリルアミド（３７）のための実験手順］
【化８１】
2021520374.tif 000088
ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中の４−（４−（アミノメチル）フェニル）チオモルホリン１，１−ジオキシド塩酸塩（３６、１．１５ｇ、４．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．３９ｍＬ、９．９７ｍｍｏｌ、２．４当量）の溶液に、塩化メタクリロイルの溶液（０．４３ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ、１．０５当量、ＣＨ２Ｃｌ２中、５ｍＬ）を滴下して添加した。反応混合物を室温で２２時間撹拌した。８グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から３．７５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（４−（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）ベンジル）メタクリルアミド（３７、０．３２ｇ、２５％の収率）を固体として得た。
【０４４０】
［Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８）のための実験手順］
【化８２】
2021520374.tif 000089
１−メチルスルホニルエチレン（４．９９ｇ、４７．０３ｍｍｏｌ、４．１３ｍＬ）及びＡｍｂｅｒｌｙｓｔ−１５（（３０％  ｗ／ｗ））の混合物に、Ｎ−メチルプロパ−２−イン−１−アミン（２．６ｇ、３７．６２ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。混合物を室温で１２時間撹拌した。触媒をろ過によって除去し、ろ液を減圧下で濃縮して、Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８、６．４３ｇ、９８％）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ７Ｈ１３ＮＳＯ２についての計算値１７６．１１；実測値１７６．１。
【０４４１】
［Ｎ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０）のための実験手順］
【化８３】
2021520374.tif 000090
メタノール（５０ｍＬ）及び水（６ｍＬ）中のＮ−メチル−Ｎ−（２−（メチルスルホニル）エチル）プロパ−２−イン−１−アミン（３８、５．０２ｇ、２８．６４ｍｍｏｌ、１．２５当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．０４ｇ、５．７３ｍｍｏｌ、０．２５当量）、ヨウ化銅（４３６ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．８ｍＬ、５．７ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を排気し、窒素で（３回）フラッシュし、氷浴で冷却した。２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（３９、５．０２ｇ、２２．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（２０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０、４．９８ｇ、５５％）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ３１Ｎ５Ｏ５Ｓについての計算値３９４．２；実測値３９４．２。
【０４４２】
［実験手順Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４１）］
【化８４】
2021520374.tif 000091
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中のＮ−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−メチル−２−（メチルスルホニル）エタン−１−アミン（４０、１．０ｇ、２．５４ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．４３ｍＬ、３．０５ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、塩化メタクリロイル（０．３０ｍＬ、３．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を滴下して添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（４０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１２．５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（メチル（２−（メチルスルホニル）エチル）アミノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４１、０．８６ｇ、７３％の収率）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ３５Ｎ５Ｏ６Ｓについての計算値４６２．２；実測値４６２．２。
【０４４３】
［７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２）のための実験手順］
【化８５】
2021520374.tif 000092
３−ブロモプロパ−１−イン（４．４ｍＬ、３９．３２ｍｍｏｌ  １．０当量）を、メタノール（２００ｍＬ）中の２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（８．５４ｇ、３９．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）、炭酸カリウム（１７．９ｇ、１２９．７ｍｍｏｌ、３．３当量）の混合物に添加し、室温で一晩撹拌した。混合物をろ過し、セライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（２２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２、４．４４ｇ、６８％）を油として得た。
［２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３）のための実験手順］
【化８６】
2021520374.tif 000093
メタノール（５０ｍＬ）中の７−（プロパ−２−イン−１−イル）−２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン（４２、２．５ｇ、１５．１３ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（１．７７ｇ、３．３３ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（２８８ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（３９、３．８６ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３、４．７６ｇ、８２％）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１８Ｈ３３Ｎ５Ｏ４についての計算値３８４．３；実測値３８４．２。
【０４４４】
［Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４４）のための実験手順］
【化８７】
2021520374.tif 000094
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（４３、２．６５ｇ、６．９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（１．１６ｍＬ、８．２９ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．７４ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノナン−７−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４４、１．５０ｇ、４８％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２２Ｈ３７Ｎ５Ｏ５についての計算値４５２．２９；実測値４５２．２５。
【０４４５】
［４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５）のための実験手順］
【化８８】
2021520374.tif 000095
メタノール（２０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（１．１４ｇ、６．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（７６８ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（１２５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．２３ｍＬ、１．６５ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−アジドエトキシ）エタン−１−アミン（１．００ｇ、７．７０ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１０ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（４０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から９．５％へと徐々に増加させて、４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５、１．８６ｇ、９３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１１Ｈ２１Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３０４．１４３８；実測値３０４．１４４５。
【０４４６】
［Ｎ−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４６）のための実験手順］
【化８９】
2021520374.tif 000096
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の４−（（１−（２−（２−アミノエトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４５、１．３２ｇ、４．３５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７３ｍＬ、５．２２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．４７ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（１２０ｇ）によって精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１．２５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エチル）−メタクリルアミド（４６、０．９０ｇ、５６％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１５Ｈ２５Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３７２．１７；実測値３７２．１５。
【０４４７】
［４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７）のための実験手順］
【化９０】
2021520374.tif 000097
メタノール（８０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４．６ｇ、２６．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．１ｇ、５．８４ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（５０６ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（０．９３ｍＬ、６．６４ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を氷浴で冷却した。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（５．００ｇ、２８．６８ｍｍｏｌ、１．０８当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライトを添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７、５．２６ｇ、５７％）を黄色がかった油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ２５Ｎ５Ｏ４Ｓについての計算値３４８．１７００；実測値３４８．１７００。
【０４４８】
［実験手順Ｎ−（２−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）メタクリルアミド（４８）］
【化９１】
2021520374.tif 000098
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（（１−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４７、１．４９ｇ、４．２９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．７２ｍＬ、５．１５ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．４６ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（２−（２−（２−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−メタクリルアミド（４８、０．６７ｇ、３８％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１７Ｈ２９Ｎ５Ｏ５Ｓについての計算値４１６．２０；実測値４１６．２０。
【０４４９】
［４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９）のための実験手順］
【化９２】
2021520374.tif 000099
メタノール（９０ｍＬ）中の４−（プロパ−２−イン−１−イル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（５．０ｇ、２８．８６ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−アミン（３．３７ｇ、６．３５ｍｍｏｌ、０．２２当量）、ヨウ化銅（５５０ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ、０．１当量）、及びトリエチルアミン（１．０１ｍＬ、７．２２ｍｍｏｌ、０．２５当量）の混合物を、氷浴で冷却した。１４−アジド−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１−アミン（８．８６ｇ、３３．７７ｍｍｏｌ、１．１７当量）を滴下して添加し、冷却浴を外し、混合物を５分間撹拌した。反応を５５℃に温め、窒素雰囲気下で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、セライト（１５ｇ）を添加し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、移動相としてジクロロメタン／（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）を用いて、シリカゲル（２２０ｇ）で精製した。（１２％（ｖ／ｖ）の水性水酸化アンモニウムを含有するメタノール）の濃度を、０％から１０％へと徐々に増加させて、４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９、７．５６ｇ、６０％）を油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１７Ｈ３３Ｎ５Ｏ６Ｓについての計算値４３６．２２２４；実測値４３６．２２２８。
【０４５０】
［実験手順Ｎ−（１４−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）メタクリルアミド（５０）］
【化９３】
2021520374.tif 000100
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の４−（（１−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）チオモルホリン１，１−ジオキシド（４９、１．９５ｇ、４．７９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びトリエチルアミン（０．８０ｍＬ、５．７４ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液を、窒素雰囲気下で、氷浴で冷却した。塩化メタクリロイル（０．５１ｍＬ、５．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）を滴下して添加した。冷却浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。１０グラムのセライトを添加し、溶剤を減圧下で除去した。残渣を、移動相としてジクロロメタン／メタノールを用いて、シリカゲルクロマトグラフィ（８０ｇ）によって精製した。メタノールの濃度を、０％から５％へと徐々に増加させて、Ｎ−（１４−（４−（（１，１−ジオキシドチオモルホリノ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）メタクリルアミド（５０、０．７６ｇ、３２％の収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２１Ｈ３７Ｎ５Ｏ７Ｓについての計算値５０４．２５；実測値５０４．２０。
【０４５１】
［実施例２：例示的なポリマーの化学修飾］
ポリマー材料が、粒子（例えば、本明細書に記載のヒドロゲルカプセル）の調製の前に、式（Ｉ）の化合物（又はその薬学的に許容可能な塩）で化学修飾され得る。ポリマー材料の修飾のための例示的な化合物の合成プロトコルが、実施例１において上に概説される。これらの化合物、又はその他が、任意のポリマー材料を化学修飾するのに使用され得る。
【０４５２】
例えば、アルギン酸塩の場合、アルギン酸塩カルボン酸が、抗線維化化合物（ａｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩を得るために１つ以上のアミン官能化化合物に対するカップリングのために活性化される。アルギン酸塩ポリマーを、水（３０ｍＬ／グラムポリマー）に溶解させ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（０．５当量）Ｎ−メチルモルホリン（１当量）で処理する。この混合物に、アセトニトリル（０．３Ｍ）中の対象とする化合物（例えば、表２に示される化合物１０１）の溶液を添加する。
【０４５３】
添加される化合物及びカップリング試薬の量は、アルギン酸塩に結合される化合物の所望の濃度、例えば、結合密度に応じて決まる。化合物１０１の中程度結合密度は、典型的には、２％〜５％のＮの範囲である一方、化合物１０１の高結合密度は、典型的には、５．１％〜８％のＮの範囲である。ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｍｅｄｉｕｍポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（５．１ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ−メチルモルホリン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（５．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１−Ｈｉｇｈポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ−メチルモルホリン（２０．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（１０．８ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。
【０４５４】
反応を５５℃に１６時間温め、次いで室温に冷却し、ロータリー蒸発で穏やかに濃縮し、次いで、残渣を水に溶解させる。混合物をシアノ修飾シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）ベッドを通してろ過し、ろ過ケーキを水で洗浄する。次いで、得られる溶液を、十分に透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、アルギン酸塩溶液を、凍結乾燥によって濃縮して、所望の化学修飾アルギン酸塩を固体として得るか、又は２５ｃＰ〜３５ｃＰの粘度を有する化学修飾アルギン酸塩溶液を生成するのに好適な任意の技術を用いて濃縮する。
【０４５５】
化学修飾アルギン酸塩の結合密度を、窒素パーセントの燃焼分析によって測定する。化学修飾アルギン酸塩の溶液を、水に対して２４時間透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、水を２回交換した後、一定重量になるまで凍結乾燥することによって、サンプルを調製する。
【０４５６】
［実施例３：例示的なアルギン酸塩溶液の調製］
化学修飾及び非修飾アルギン酸塩の７０：３０混合物。低分子量アルギン酸塩（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＶＬＶＧアルギン酸塩、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ、Ｓａｎｄｖｉｋａ、Ｎｏｒｗａｙ、ｃａｔ．＃４２００５０６、およその分子量＜７５ｋＤａ；Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、表２中の化合物１０１で化学修飾して、２５ｃｐ〜３５ｃＰの粘度を有する化学修飾低分子量アルギン酸塩（ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ−１０１）溶液を生成した。高分子量非修飾アルギン酸塩（Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇ）の溶液を、０．９％の生理食塩水に重量体積比３％で非修飾アルギン酸塩（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＳＬＧ１００，ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ，Ｓａｎｄｖｉｋａ，Ｎｏｒｗａｙ，ｃａｔ．＃４２０２１０６、１５０ｋＤａ〜２５０ｋＤａのおよその分子量）を溶解させることによって調製した。ＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ溶液を、７０％のＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ対３０％のＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇの体積比のＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇ溶液（本明細書において７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：ＵＭ−Ａｌｇ溶液と呼ばれる）と混合した。
【０４５７】
非修飾アルギン酸塩対照溶液。非修飾中間分子量アルギン酸塩（ＳＬＧ２０，ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ，Ｓａｎｄｖｉｋａ，Ｎｏｒｗａｙ，ｃａｔ．＃４２０２００６、７５〜１５０ｋＤａのおよその分子量）を、０．９％の生理食塩水に重量体積比１．４％で溶解させて、Ｕ−ＭＭＷ−Ａｌｇ溶液を調製した。
【０４５８】
［実施例４：単一細胞としてのカプセル化のための例示的な細胞の培養］
４Ａ．ＡＲＰＥ−１９細胞。これらのＲＰＥ細胞を培養し、続いて、１区画又は２区画ヒドロゲルミリカプセル中にカプセル化した。ＡＲＰＥ−１９細胞が、当該技術分野において公知の任意の方法に従って、例えば以下のプロトコルに従って培養され得る。７５ｃｍ２の培養フラスコ中のＡＲＰＥ−１９細胞を吸引して、培養培地を除去し、細胞層を、０．０５％（ｗ／ｖ）のトリプシン／０．５３ｍＭのＥＤＴＡ溶液（「ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡ」）で短時間すすいで、トリプシン阻害剤を含有する血清をすべて除去した。２〜３ｍＬのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を、フラスコに添加し、細胞を、細胞層が分散されるまで、通常、５〜１５分間、倒立顕微鏡で観察した。凝集を避けるために、細胞を慎重に取り扱い、分散期間中フラスコをぶつけたり又は振ったりするのを最小限に抑えた。細胞が脱離しなかった場合、フラスコを３７℃に置いて、分散を促進した。細胞が分散したら、６〜８ｍＬの完全成長培地を添加し、細胞を、穏やかなピペッティングによって吸引した。細胞懸濁液を遠心分離管に移し、５〜１０分間にわたって約１２５×ｇで遠沈して、ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡを除去した。上清を廃棄し、細胞を新鮮な成長培地に再懸濁させた。適切な分量の細胞懸濁液を新たな培養容器に添加し、これを３７℃でインキュベートした。培地を週に２〜３回取り替えた。
【０４５９】
４Ｂ．ＨＥＫ２９３Ｆ細胞。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３  Ｆ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）として販売されているこれらの細胞を、２５ｍｌのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍの作業体積を有する１２５ｍｌのエルレンマイヤーフラスコを用いて、懸濁液中で成長させた。フラスコを、１２５ＲＰＭに設定されたシェーカープレート上で、３７℃でインキュベートした。細胞を、２〜３×１０６個の細胞／ｍｌの密度になるまで成長させ、その時点で、細胞を、２〜３×１０５個の細胞／ｍｌの密度になるまで、典型的には３〜４日ごとに再度播種した。凝集を避けるために、細胞を慎重に取り扱い、５０ｍｌのファルコンチューブに入れ、５〜１０秒間にわたってボルテックスして、細胞均質性を最大にした。細胞密度を計数した後、適切な分量の細胞懸濁液を新たな培養容器に添加した。
【０４６０】
［実施例５：カプセル化のための細胞クラスターの調製］
例示的な細胞（例えば、ＡＲＰＥ−１９細胞）のスフェロイドクラスターを、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）スフェロイドプレート（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び本明細書に概説されるプロトコルを用いて調製した。１日目に、すすぎ液（４ｍＬ）を各プレートに添加し、プレートを大型の遠心分離機において３，０００ＲＰＭで５分間にわたって遠沈した。すすぎ液をピペットによって除去し、４ｍＬの完全成長培地を添加した。ＡＲＰＥ−１９細胞を所望の細胞密度でプレートに播種し、ウェル当たり３９０万個の細胞が直径１５０μｍのクラスターを生じるという一般的な経験則を踏まえて、凝集を防ぐために直ぐにピペッティングした。プレートを８００ＲＰＭで３分間にわたって遠沈し、プレートを、一晩、培養器に入れた。
【０４６１】
２日目に、プレートをインキュベーションから取り外す。広径ピペットチップを用いて、細胞を穏やかにピペッティングして、スフェロイドクラスターを取り除く。クラスターを、４０μｍ又は８０μｍのセルストレーナーに通してろ過して、外部の脱離した単一細胞を除去し、次に、２×１分間にわたって遠心分離機中で遠沈する。クラスターを、広径ピペットチップを用いて穏やかに再懸濁させ、穏やかに撹拌して、培地又は別の材料（例えば、アルギン酸塩）全体にわたってそれらを分配する。
【０４６２】
或いは、ＡＲＰＥ−１９スフェロイドは、以下のプロトコルを用いて調製される。１日目に、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）プレートを、滅菌した組織培養フード中の包装から取り出す。２ｍＬのＡｇｇｒｅｗｅｌｌ（商標）すすぎ液を各ウェルに添加する。プレートを、５分間にわたって２，０００ｇで遠心分離して、気泡を除去し、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）すすぎ液をウェルから除去する。各ウェルを２ｍＬの完全成長培地ですすぎ、２００万個のＡＲＰＥ−１９細胞を３．９ｍＬの完全成長培地中に、各ウェルに添加する。プレートを、３分間にわたって１００ｇで遠心分離し、次に、細胞を、３７℃で４８時間インキュベートする。３日目に、上記と同じプロトコルを用いて、スフェロイドクラスターを取り除く。
【０４６３】
［実施例６：１区画及び２区画ヒドロゲルカプセルの形成］
単一細胞（実施例４に記載されるＡＲＰＥ−１９細胞又はＨＥＫ２９３Ｆ細胞）の懸濁液を、以下に記載されるプロトコルに従って、１区画又は２区画ヒドロゲルカプセル中にカプセル化した。
【０４６４】
カプセル化の直前に、単一細胞を、１分間にわたって１，４００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離し、カルシウムフリーＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）緩衝液（４．７ｍＭのＫＣｌ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．２ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、１３５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ≒７．４、約２９０ｍＯｓｍ）で洗浄した。洗浄した後、細胞を再度遠心分離し、上清のすべてを吸引した。いくつかの実験では、次に、細胞ペレットを、アルギン酸塩溶液のｍｌ当たりの懸濁単一細胞のある範囲の密度で、実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：ＵＭ−Ａｌｇ溶液中で再懸濁させた。いくつかの実験では、細胞を、アルギン酸塩溶液中での懸濁（例えば、希釈）なしで直接使用した（「非希釈細胞」）。
【０４６５】
１区画及び２区画ヒドロゲルカプセルの作製の前に、緩衝液及びアルギン酸塩溶液を、無菌プロセスを用いて０．２μｍフィルタに通したろ過によって滅菌した。
【０４６６】
直径約１．５ｍｍの２区画ヒドロゲルミリカプセルとして構成される粒子を調製するために、静電液滴生成装置を以下のように設定した：ＥＳシリーズ０〜１００ｋＶ、２０ワット高電圧発電機（ＥＱ  ｓｅｒｉｅｓ，Ｍａｔｓｕｓａｄａ，ＮＣ，ＵＳＡ）を、同心針（２２Ｇの内腔、１８Ｇの外腔、Ｒａｍｅ−Ｈａｒｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｓｕｃｃａｓｕｎｎａ，ＮＪ，ＵＳＡ）の上部及び下部に連結した。内腔を、まず、５ｍｌのルアーロックシリンジ（ＢＤ，ＮＪ，ＵＳＡ）に取り付け、それを、垂直に配向されたシリンジポンプ（Ｐｕｍｐ  １１  Ｐｉｃｏ  Ｐｌｕｓ，Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に連結した。外腔を、ルアーカップリングによって第２の５ｍｌのルアーロックシリンジに連結し、それを、水平に配向された第２のシリンジポンプ（Ｐｕｍｐ  １１  Ｐｉｃｏ  Ｐｌｕｓ）に連結した。内側区画のみに細胞をカプセル化する２区画カプセルを調製する場合、細胞を含む第１のアルギン酸塩溶液（単一の細胞懸濁液として）を、第１のシリンジに入れ、細胞を含まない第２のアルギン酸塩溶液を、第２のシリンジに入れた。２つのシリンジポンプは、第１及び第２のアルギン酸塩溶液を、同心針の両方の内腔を通してシリンジから移動させ、両方のアルギン酸塩溶液を含む単一の液滴が、針から、架橋溶液を含むガラス皿中へと押し出される。各Ｐｉｃｏ  Ｐｌｕｓシリンジポンプの設定は、直径１２．０６ｍｍであり、各ポンプの流量は、１０ｍｌ／時に設定された総流量を保持しながら、以下の実施例の様々な試験流量を達成するように調整した。
【０４６７】
直径約１．５ｍｍの１区画ヒドロゲルカプセルの作製のために、実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：ＵＭ−Ａｌｇ溶液（単一細胞の懸濁液を含むか又は含まない）を、シリンジに充填し、１８ゲージの平滑先端針（ＳＡＩ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で蓋をした。シリンジを、架橋緩衝液を含む皿の上に垂直に配向されたシリンジポンプに入れた。高電圧発電機を針に連結し、安全キャビネットに接地した。シリンジポンプ及び発電機をオンにして、０．１６ｍＬ／分又は１０ｍＬ／時の流量で、１０秒に１２滴の滴下速度になるまで電圧を５〜９ｋＶの範囲内で調整しながら、アルギン酸塩溶液を、針を通して押し出した。
【０４６８】
２区画及び１区画ミリカプセルの両方の作製のために、アルギン酸塩溶液の所望の体積の押し出しの後、アルギン酸塩液滴を、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液、２０ｍＭのＢａＣｌ２、及び０．２Ｍのマンニトールを含有する架橋溶液中で５分間にわたって架橋させた。いくつかの実験では、架橋溶液は、０．０１％のポロキサマー１８８も含有していた。架橋容器の底に落下したカプセルを、コニカルチューブ中にピペッティングすることによって収集した。カプセルがチューブ中で沈降した後、架橋緩衝液を除去し、カプセルを洗浄した。細胞を含まないカプセルを、ＨＥＰＥＳ緩衝液（ＮａＣｌ  １５．４２８ｇ、ＫＣｌ  ０．７０ｇ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ  ０．４８８ｇ、２リットルの脱イオン水中の０ｍｌのＨＥＰＥＳ（１Ｍ）緩衝液（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ））で４回洗浄し、使用するまで４℃で貯蔵した。細胞をカプセル化するカプセルを、ＨＥＰＥＳ緩衝液で４回、０．９％の生理食塩水で２回、及び培養培地で２回洗浄し、３７℃で培養器中に貯蔵した。
【０４６９】
いくつかの実験では、２区画又は１区画カプセルの組成物中のカプセルの品質を調べた。少なくとも２００個のカプセルを含有するアリコートを組成物から取り、ウェルプレートに移し、アリコート全体を、全体当たりの球状カプセルの数を計数することによって、品質について光学顕微鏡法によって調べた。
【０４７０】
いくつかの実験では、２区画カプセルの組成物中のカプセルの機械的強度を、上述されるように、初期破壊力を決定するためのテクスチャーアナライザを用いて調べた。
【０４７１】
［実施例７．カプセル品質に対する細胞充填の影響の評価］
カプセル組成物（２区画カプセル又は１区画カプセルを含む）を、実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：ＵＭ−Ａｌｇ溶液、及び第１の（内側）区画を形成するのに使用されるアルギン酸塩溶液中の様々な充填量の細胞を用いて、実施例６に記載されるように調製した。架橋溶液は、０．０１％のポロキサマー１８８を含んでいた。７０：３０アルギン酸塩溶液から形成された等体積の第１及び第２の区画を有する２区画カプセル（直径１．５ｍｍ）を、第１及び第２のシリンジのそれぞれにおけるアルギン酸塩溶液について５ｍｌ／時の流量を用いて調製した。さらに、内側区画を、第１のシリンジ（例えば、アルギン酸塩溶液なし）中で非希釈細胞（５億個の細胞／ｍｌに相当する濃度）を用いて形成したことを除いて、実質的に同じ方法で、２区画、１．５ｍｍのカプセルの組成物を調製した。第ＶＩＩＩ因子を発現する組み換えＡＲＰＥ１９細胞を、１区画カプセル中に１０００万〜５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液で、又は２区画カプセル中に１０００万〜５億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液（１区画カプセルに相当する濃度）でカプセル化した。異なるカプセル組成物を、品質について調べ、結果が図３に示される。
【０４７２】
１区画ミリカプセルについては、細胞充填が増加するにつれてカプセル品質（すなわち、球状の形状）が低下したことが一般に観察された。１区画ミリカプセルを含む組成物の品質は、２０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩を超える細胞充填で調べられるアリコート中の９５％の球状粒子の許容可能な閾値を下回っていた。２区画ミリカプセルを含む組成物は、最大で、５億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液に相当する非希釈細胞の充填細胞量の非常に高い球状品質を有しており、この充填細胞量は、１区画粒子についての許容可能な最高細胞充填容量より約２５倍高い細胞充填容量である。７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：ＵＭ−Ａｌｇ及びカプセルサイズのこの特定の構成については、５億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液に相当する細胞充填が、第１の（内側）区画についての充填の上限であるようである。従って、２区画ミリカプセルは、カプセルの球状形態に影響を与えずに、大幅に多い数の細胞のカプセル化を可能にした。
【０４７３】
［実施例８：第２の区画の厚さに対する流量比の影響の変化］
２区画ヒドロゲルミリカプセル（直径約１．５ｍｍ）を含む組成物を、両方の区画においてＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇの７０：３０混合物を用いて調製した。外腔及び内腔を通るアルギン酸塩溶液の合わせた流量を、１０ｍｌ／時で一定に保った一方、これらの流量の比率を変化させて、様々な区画厚さを有するカプセルを調製した。得られたカプセル中の区画を視覚化するために、ＡＲＰＥ１９−ＦＶＩＩＩ細胞を、第１の（内側）区画中に２０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液でカプセル化した。区画厚さを、画像解析によって測定した。
【０４７４】
外腔：内腔流量の比率を変化させることによって、１．５ｍｍの２区画カプセルの第２の（外側）区画の平均厚さを、図４Ａ〜４Ｂに示されるように、１１〜２６７μｍで変化させた。すべての場合において、約１．５ｍｍの球状カプセルが形成された。形成される最小の第２の（外側）区画は、直径約１１μｍであり、外腔：内腔流量の比率を増加させると、第２の（外側）区画厚さが、約１１μｍから最大２６７μｍに増加した。従って、ヒドロゲルカプセルの第２の（外側）区画厚さが、均一な球状のミリカプセルの組成物を生成するように、内側及び外側流量を変更することによって変化され得る。
【０４７５】
［実施例９：粒子の機械的特性に対する、第１の区画の組成物及びサイズの変更の影響］
実施例６に記載されるように、第１及び第２のアルギン酸塩溶液を、同心針を通して押し出すことによって、２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を調製した。第２の（外側）区画を、実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ溶液を用いて調製し、第１の（内側）区画を、実施例３に記載されるＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇ溶液を用いて調製した。全体（例えば、合わせた）流量を１０ｍｌ／時に保持しながら、内側：外側流量比（Ｉ：Ｏ）を、１ｍｌ〜９ｍｌ／時間から９ｍｌ〜１ｍｌ／時間で変化させて、異なる内側及び外側区画厚さを有するミリカプセルを生成した。対照カプセル組成物も調製した。１つの対照は、同じ７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ溶液から作製された１区画カプセルを含んでいた。第２の対照組成物は、同じＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇ溶液から作製された１区画カプセルを含んでいた。機械的試験を、個々のカプセルの初期破壊を測定するためのテクスチャーアナライザを用いて、組成物のそれぞれからのアリコートにおいて行った。
【０４７６】
直径約１．５ｍｍの２区画カプセルが、すべての条件において生成された。７０：３０混合物から調製された１区画カプセルは、２区画カプセル構成のすべてと比較して、最も低い初期破壊を有していた。Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇの内側区画を有する２区画カプセルの機械的強度は、カプセル全体に対する内側区画の体積分率の増加と共に増加した（図５を参照）。第２の対照組成物中のカプセル（１区画Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇカプセル）は、それぞれＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇ及び７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇから構成される内側及び外側区画を有するすべての２区画粒子より高い初期破壊を有していた。内側区画（Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇ）の体積分率が増加するにつれて、平均初期破壊が増加した。従って、２区画ミリカプセルの内側区画の構成（アルギン酸塩の属性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）及び／又は厚さ）を変化させることにより、その機械的特性を変化させることができる。従って、２区画ヒドロゲルミリカプセルは、化学修飾（例えば、ＦＢＲを軽減するため）に関して同じカプセル表面を示し得るが、第１の（内側）区画におけるアルギン酸塩組成物を変化させることによって、より強い機械的強度を有し得る。
【０４７７】
［実施例１０：第２の（外側）区画における可変量の化学修飾を有する２区画ヒドロゲルカプセルの調製］
化学修飾アルギン酸塩溶液を、化合物１０１の可変量のコンジュゲーションを用いて調製した。ポリマーを、低（２．０３％のＮ）、中程度（４．４２％のＮ）、又は高（６．７２％のＮ）レベルの化合物１０１コンジュゲーションを用いて調製し、ここで、％窒素が、燃焼分析によって決定され、ポリマーにコンジュゲートされた小分子の量に相当する。２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を以下のように調製した。外側区画を、（ｉ）ＣＭ−Ａｌｇ−１０１対Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇの７０：３０の比率でＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇと混合されたこれらのコンジュゲートポリマーのうちの１つを含む溶液又は（ｉｉ）対照として実施例３に記載されるＵ−ＭＭＷ−Ａｌｇ溶液を用いて形成した。内側区画を、Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇと混合された中程度のＣＭ−Ａｌｇ−１０１コンジュゲーションを含む溶液を用いて形成した。内側及び外側流量は両方とも５ｍｌ／時であった。第１の（内側）区画を視覚化するために、２０００万個のＡＲＰＥ１９−ＦＶＩＩＩ細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液を、カプセルの第１の（内側）区画中にカプセル化した。
【０４７８】
図６Ａ〜６Ｄは、第２の（外側）区画中の低、中程度、高コンジュゲーションＣＭ−Ａｌｇポリマー又は対照（非修飾）ポリマーを用いて生成されたカプセルを示す。直径約１．５ｍｍの球状の均一なミリカプセルの組成物が、外側区画を形成するのにどのＣＭ−ポリマー溶液を使用したかにかかわらず形成され、これは、高品質のカプセルが、第１の（内側）区画に使用される同じポリマー及び第２の（外側）区画における可変量の化学修飾を用いて調製され得ることを実証している。
【０４７９】
［実施例１１：生体適合性に対する、第２の区画における化学修飾のレベルの変更の影響］
実施例１０において調製されたヒドロゲルカプセルを、カプセルをＣ５７／ＢＬ６マウスの腹腔内に１週間にわたって移植することによって、インビボでの線維化について調べた。このマウスモデルにおいて、ヒトＲＰＥ細胞などのカプセル化異種細胞株は、一般に、線維化反応を誘発する。回収時に、粒子を、線維化の存在について撮像し、初期破壊を、テクスチャーアナライザを用いて測定した。結果が、図７Ａ〜７Ｆに示される。
【０４８０】
回収時に、空のカプセル（細胞なし）は、目に見える線維化を有していなかった（図７Ｄ）。対照カプセル（Ｕ−ＭＭＷ−Ａｌｇ外側区画）は、粒子を取り囲む線維化蓄積物（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｂｕｉｌｄｕｐ）を有していた（図７Ｅ）。外側区画にＣＭ−Ａｌｇ−１０１を含むカプセルでは、線維化反応が、低コンジュゲーションＣＭ−Ａｌｇカプセルのみで観察され（図７Ａ）、最小の線維化が、中程度及び高コンジュゲーションＣＭ−Ａｌｇカプセルにおいて観察された（図７Ｂ〜７Ｃ）。初期破壊を、移植前及び回収時に測定し、すべての２区画カプセルは、各時点で同様の初期破壊を有していた（図７Ｆ）。従って、カプセルの第２の（外側）区画のみにおける化学修飾プロファイルを変更することを用いて、抗線維特性を調節することができ、すなわち、外側区画における式Ｉの化合物の濃度を増加させることにより、機械的強度に影響を与えずに線維化を大幅に軽減することができる。
【０４８１】
［実施例１２：経時的なマクロファージ付着に対する、第２の区画における化学修飾のレベルの変更の影響］
第２の（外側）区画における可変量（低、中程度、又は高）の化学修飾を有するヒドロゲルカプセルにおける１〜４週間にわたるインビボでのマウスマクロファージ付着の程度を、以下のように調べた。カプセルを、実施例１０に記載されるように調製し、実施例１１と同様にＣ５７／ＢＬ６マウスに移植し、次に、移植の１、２、及び４週間後の時点で回収した。回収時に、粒子を、免疫蛍光染色（抗Ｆ４／８０）を用いてマウスマクロファージの存在について撮像した。結果が、図９Ａ〜９Ｋに示される。
【０４８２】
１週間の移植の後、マクロファージ付着が、陽性対照カプセル（非修飾中間分子量アルギン酸塩）及び低コンジュゲーションカプセルにおいて観察された（図９Ａ〜９Ｂ）。いくらかのマクロファージ付着が、中程度コンジュゲーションカプセルにおいて観察され（図９Ｃ）、高コンジュゲーション（図９Ｄ）、又は空のカプセル（図９Ｅ）において最小のマクロファージ付着があった。移植の２及び４週間後の時点で、空のカプセルにおいてマクロファージ付着は存在せず（図９Ｈ及び９Ｋ）、マクロファージ付着は、高コンジュゲーションカプセル（図９Ｇ及び９Ｊ）と比較して、中程度コンジュゲーションカプセルにおいてより高く（図９Ｆ及び９Ｉ）、これは、カプセルの第２の（外側）区画における化学修飾のレベルとインビボでのマクロファージ付着（線維化）との間の用量反応を実証している。
【０４８３】
［実施例１３：線維化に対する、第２の区画における化学修飾のレベルの変更の影響］
例示的な粒子の第２の（外側）区画における化学修飾のレベルを、以下に記載される方法を用いて、線維化に対するその影響について調べた。実施例１０において調製された低、中程度、及び高コンジュゲーションカプセルを使用した。さらに、中程度−高（４．７９％のＮ）及び２倍の高さ（９．００％のＮ）のコンジュゲーションカプセルを、実施例１０に記載される方法を用いて調製し、ここで、％窒素が、燃焼分析によって決定され、ポリマーにコンジュゲートされた小分子の量に相当する。次に、カプセルを、実施例１１に記載されるようにＣ５７／ＢＬ６マウスに移植し、移植の２週間後の時点で回収した。回収されたカプセルの線維化を、明視野イメージングを用いて分析し、ここで、カプセルの周りの不透明な層が、線維化を示す。結果が、図１０Ａ〜１０Ｅに示される。
【０４８４】
中程度コンジュゲーションを有する空のカプセルを、対照として使用し、これは、線維化を示さなかった（図１０Ａ）。中程度コンジュゲーション又は中程度−高コンジュゲーションを有するカプセルは、高コンジュゲーションカプセル（図１０Ｄ）と比較して、より高いレベルの線維化を示した（図１０Ｂ〜１０Ｃ）。２倍の高さのコンジュゲーションカプセルの多くが、回収後に無傷の球体でなく、一部は線維化しているように見え、又はサイズが減少し、顕著なカプセル破片があった（図１０Ｅ）。これは、高レベルの式（Ｉ）の化合物を含有する第２の（外側）区画が無傷でなかったことを示唆し、これは、線維化に有効に抵抗し得る式（Ｉ）の化合物の量に上限があることを実証している。
【０４８５】
［実施例１４：機械的強度に対する、第２の区画における化学修飾のレベルの変更の影響］
実施例１３に使用されるカプセルの機械的強度を、テクスチャーアナライザを用いて、初期破壊によって測定した。対照、中程度、中程度−高、高、及び２倍の高さのコンジュゲーションカプセルのそれぞれを、移植前及び移植後段階の両方で機械的強度について試験した。結果が、図１１に示される。
【０４８６】
初期機械的強度は、細胞を充填したカプセルと比較して、対照（空の）カプセルにおいてより高かった。中程度、中程度−高、及び高コンジュゲーションカプセルは、移植前及び移植後の両方において同様の強度を有し、移植後の強度の低下が観察された。実施例１３に示されるように、最も高いレベルのコンジュゲーション（２倍の高さ）を有するカプセルが、最も弱いカプセルであり、これらのカプセルの大部分が、回収時に無傷でなかった（図１１）。これは、有効である抗線維性小分子コンジュゲーションの量に上限があり、非常に高いレベルのコンジュゲーションは機械的強度を損なうことをさらに実証している。
【０４８７】
［実施例１５：線維化に対する、第２の（外側）区画の共有結合的及び非共有結合的な化学修飾の影響］
線維化に対する抵抗性を与えるための手段としてのヒドロゲルカプセルの第２の（外側）区画における式（Ｉ）のコンジュゲート又は非コンジュゲート化合物の間の相違を、以下の実験を用いて決定した。
【０４８８】
中程度及び高い量の式（Ｉ）の化合物を含むカプセルを、実施例１０と同様に調製した。さらに、非コンジュゲート抗線維性小分子を特徴とする第３のタイプのカプセル（「アミンを加え戻した」と示される）を、実施例１０の方法と同様の方法で調製し、ここで、カプセルの第２の（外側）区画を、式（Ｉ）の非コンジュゲート化合物を含有するアルギン酸塩溶液から作製した。この溶液は、高コンジュゲーションアルギン酸塩溶液に相当する式（Ｉ）の化合物の全体量を達成するのに必要な非コンジュゲート小分子の量を用いて、非コンジュゲート小分子を中程度コンジュゲーションアルギン酸塩溶液に添加することによって調製した。７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇを、「アミンを加え戻した」カプセルの第１の（内側）区画に使用した。次に、すべてのカプセルを、実施例１１と同様にＣ５７／ＢＬ６マウスを用いてインビボで移植し、移植の２週間後の時点で回収した。回収されたカプセルを、線維化の開始を示す付着した細胞の不透明な外層の存在を検出するために明視野顕微鏡検査を用いて撮像した。結果が、図１２Ａ〜１２Ｃに示される。
【０４８９】
中程度コンジュゲーションカプセルにおいて付着した細胞の層が観察された一方（図１２Ａ）、高コンジュゲーションカプセルへの最小な付着のみが観察された（図１２Ｂ）。「アミンを加え戻した」カプセルも不透明に見え、これは、カプセルにおける線維化細胞付着の層を示す（図１２Ｃ）。従って、このデータは、コンジュゲート小分子のみが、カプセルの抗線維特性に寄与することを実証している。
【０４９０】
［実施例１６：マクロファージ付着に対する、第２の区画における小分子コンジュゲーション及びポリマーブレンド比率のレベルの変更の影響］
２つのポリマーブレンドのアルギン酸塩溶液（様々な比率の低分子量アルギン酸塩（ＣＭ−ＬＭＷ）対非修飾高分子量アルギン酸塩（Ｕ−ＨＭＷ）を含有する）、及び可変量（中程度、中程度−高、又は高）の式（Ｉ）の化合物から調製されたカプセルを、以下の実験を用いて、インビボでのそれらの線維化抵抗性について比較した。
【０４９１】
３つのポリマーブレンドを、中程度、中程度−高、又は高レベルの式（Ｉ）の化合物を用いて、実施例３に記載されるように７０％のＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ対３０％のＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇの比率（７０：３０）で調製した。また、さらなる３つのポリマーブレンドを、中程度、中程度−高、又は高レベルの式（Ｉ）の化合物を同様に用いて、６０％のＣＭ−ＬＭＷ−Ａｌｇ対４０％のＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇの比率（６０：４０）で調製した。次に、各ポリマーブレンドを用いて、実施例１０に記載される方法を用いて、カプセルの第２の（外側）区画を形成し、これは、７０：３０又は６０：４０の比率のポリマーブレンドのいずれかからの中程度、中程度−高、又は高レベルのコンジュゲーションを特徴とする一連の６つのヒドロゲルカプセルを提供する。すべてのカプセルの内側区画は、７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ溶液を含んでいた。次に、カプセルを、実施例１１に記載されるようにインビボで移植し、移植の１週間後の時点で回収し、免疫蛍光染色によって、カプセルにおけるマウスマクロファージ付着（線維化）について分析した。結果が、図１３Ａ〜１３Ｆに示される。
【０４９２】
付着マクロファージのレベルを低下させる傾向が、７０：３０（図１３Ａ〜１３Ｃ）及び６０：４０の比率のブレンド（図１３Ｄ〜１３Ｆ）の両方にわたって、中程度ないし高コンジュゲートカプセルから観察された。また、７０：３０の比率のブレンドからのカプセルにおける比較的低い量のマクロファージ付着と比較して、より多い量の付着マクロファージが、６０：４０の比率のブレンドカプセルにおいて観察された。比率の変化が、カプセルにおける小分子の総用量に影響を与えるため、結果は、ポリマーにコンジュゲートされた小分子の量及びカプセルを調製するのに使用される化学修飾ポリマーの量が、独立して、マクロファージ付着及び線維化を変化させ得ることを示唆している。
【０４９３】
［実施例１７：線維化反応についてのカプセル構造の比較］
ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤを発現する単一のＡＲＰＥ−１９細胞をカプセル化する１区画又は２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、様々な細胞充填濃度を有する実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ溶液の液滴を架橋溶液中に押し出すことによって調製した。細胞を含まないか又はカプセル全体にわたって分散された５０００個の細胞を含む１区画カプセルを、対照として調製した。２区画カプセルは、細胞を含まない第２の（外側）区画及びカプセル当たり５０００又は２５００個の細胞を含む第１の（内側）区画を有していた。２５００及び５０００個の細胞を含むカプセルを、５０％：５０％の外側：内側体積比を用いて調製した。２５００個の細胞を含むカプセル及びより高密度の第２の（外側）区画を、７５％：２５％の外側：内側体積比を用いて調製した。カプセルを、０．５ｍｌのカプセル／マウスで、Ｃ５７／ＢＬ６マウスの腹腔内に移植した。カプセルを、１４日後に回収し、線維化の存在又は非存在を観察するために撮像した。このマウスモデルにおいて、カプセル中の異種ＡＲＰＥ−１９細胞が、ＦＢＲを誘発すると予想された。
【０４９４】
この実験の結果は、１つ又は２つの区画のいずれかを有して作製された、ＡＲＰＥ−１９細胞をカプセル化するすべてのカプセルが、Ｃ５７／ＢＬ６マウスモデルにおいて線維化されたことを示した（データは図示せず）。空の１区画対照カプセルにおいて線維化は観察されなかった。従って、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおいて、１区画又は２区画としてのカプセルの構成は、異種ＲＰＥ細胞によって誘発されるＦＢＲに対する明らかな影響を与えなかった。
【０４９５】
［実施例１８：２区画ヒドロゲルカプセルとして構成される例示的な粒子における細胞増殖の評価］
懸濁液中で成長するＨＥＫ２９３Ｆ細胞を、直径約１．５ｍｍの２区画ヒドロゲルミリカプセルの内側区画中にカプセル化した。カプセルを、内側及び外側区画の両方を形成するために、実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−ＭＷ−Ａｌｇ溶液を用いて調製した。内側区画中の細胞充填濃度は、２０００万個のＨＥＫ２９３Ｆ細胞／ｍｌであった（１．５ｍｍの１区画カプセル中の１０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液に相当する）。２区画カプセルを、５ｍｌ／時の内側及び外側流量を用いて作製した。対照として、直径約１．５ｍｍの１区画カプセルを、１０００万個のＨＥＫ２９３Ｆ細胞／ｍｌを含む同じ７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−ＭＷ−Ａｌｇアルギン酸塩溶液を用いて調製した。カプセルを、７日間にわたって３７℃、５％のＣＯ２でインキュベートし、次に、顕微鏡検査によって観察した。
【０４９６】
カプセル縁部の観察により、１週間の培養後に、１区画カプセルの縁部から突出する細胞の存在が示されたが、２区画カプセルでは示されなかった（図１４Ａ〜９Ｂ）。遊離浮遊細胞及び付着細胞が、１区画カプセルを含む組織培養プレートの表面において観察され、これは、不完全なカプセル化及び／又は細胞の流出を示す（図１４Ｃ）。対照的に、１週間の培養後に、培養プレート中の２区画カプセルの外部で細胞は観察されなかった（図１４Ｄ）。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞の代わりにＡＲＰＥ１９細胞を用いて１区画及び２区画カプセルを調製したときに、同様の結果が得られた（データは図示せず）。従って、２区画カプセルは、例えば、細胞の漏出又はカプセル表面を通した突出を伴わず、細胞を含む１区画カプセルより有効である。
【０４９７】
［実施例１９：１区画及び２区画カプセルからのタンパク質放出の評価］
カプセル化細胞によって発現されるタンパク分子が２区画ヒドロゲルカプセルから放出され得るかどうかを決定するために、ＦＶＩＩＩ−ＢＤＤを発現する組み換えＡＲＰＥ１９細胞を、２区画カプセル中にカプセル化し、タンパク質分泌を、２４時間後に測定した。
【０４９８】
カプセルを、第１及び第２のシリンジのそれぞれにおける実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−ａｌｇ：Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇ溶液、並びに５ｍｌ／時の内側及び外側流量を用いて調製した。内側区画を調製するためのアルギン酸塩溶液は、２０００万、５０００万又は１億個の細胞／ｍｌでＡＲＰＥ１９−ＦＶＩＩＩを含有していた。カプセルを、公知の体積の培地中で、３７℃で２４時間インキュベートし、培地上清を収集し、ＦＶＩＩＩを、ＦＶＩＩＩ  ＥＬＩＳＡによって検出した。
【０４９９】
２４時間後、ＦＶＩＩＩが、各細胞充填濃度について培地上清試料中で検出された。細胞充填濃度と２区画粒子から検出されたＦＶＩＩＩの量との間の増加傾向が観察された（データは図示せず）。これらの結果は、２区画カプセルの内側区画中にカプセル化された細胞によって発現されるＦＶＩＩＩが、第２の区画を通って拡散し、次に、カプセルを出ることを示唆している。
【０５００】
［実施例２０．カプセル中の細胞濃度が、ヌードマウスの血漿及び腹腔液中のＦＩＸレベルを増加するために増加され得る］
単一のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセル（１．５ｍｍ）の組成物を、様々な細胞充填濃度を有する実施例３に記載される７０：３０のＣＭ−Ａｌｇ：Ｕ−Ａｌｇ溶液の液滴を架橋溶液中に押し出すことによって調製した。細胞を、内側区画中に２００万、２０００万、１億、３億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩でカプセル化した（１．５ｍｍの１区画カプセル中の１００万、１０００万、５０００万、１億５０００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液に相当する）。カプセルを、ヌードマウスの腹腔内に移植し（０．５ｍｌ／マウス）、５日後に回収した。血漿及び腹腔液中のＦＩＸのレベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０５０１】
カプセル化細胞濃度を変更することによって、カプセル化細胞の総数を、図１５Ａに示されるように、５００〜３９，０００個の細胞／カプセルで変化させた。すべての細胞濃度で、球状形態を有するカプセルが生成された（データは図示せず）。細胞のいくらかの増殖が、移植中に観察された（図１５Ａ）。ＥＬＩＳＡアッセイの検出の下限である２００万個の細胞／ｍｌを除いて、血漿及び腹腔液中のＦＩＸのレベルが、細胞濃度の増加と共に観察された（図１５．Ｂ、Ｃ、及びデータは図示せず）。腹腔液中のＦＩＸレベルの約１０倍の増加があり、ここで、カプセルは、血漿と比較して、局所環境にある。すべての細胞濃度のカプセルが無傷で回収された（データは図示せず）。従って、腹腔及び血漿の両方におけるＦＩＸ発現についての用量反応が、内側区画を形成するのに使用される２００万〜３億個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液で観察された。さらに、３９，０００個の細胞／カプセルの上首尾のカプセル化が、科学文献において報告されているものより大幅に多い。
【０５０２】
［実施例２１：最適な細胞濃度が、ＦＩＸレベルを最大にし、カプセル完全性を維持した］
単一のＡＲＰＥ−１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、前の実施例と同様に調製したが、細胞を、内側区画を形成するのに使用される１億、２億、３億及び６億４６００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液でカプセル化した（１．５ｍｍの１区画カプセル中の５０００万、１億、１億５０００万、３億２３００万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩溶液に相当する）。カプセルを、ヌードマウスの腹腔内に移植し（０．５ｍｌ／マウス）、４週間後に回収した。腹腔液中のＦＩＸのレベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０５０３】
カプセル化細胞濃度を変更することによって、カプセル化細胞の総数を、２４，０００〜５４，０００個の細胞／カプセルで変化させた（データは図示せず）。すべての細胞濃度で、球状形態を有するカプセルが生成された（データは図示せず）。腹腔液中のＦＩＸのレベルが、１億５０００万個の細胞／ｍｌへの細胞濃度の増加と共に増加した（図１６Ａ）。最も高い充填細胞濃度（６億４６００万個の細胞／ｍｌ）で、ＦＩＸレベルは低く、回収されたカプセルはもはや無傷ではなかった（図１６Ｂ）。１億個の細胞／ｍｌを用いて調製されたカプセルの大部分は、無傷で回収されたカプセルを最も多く有していた（データは図示せず）。これは、タンパク質レベルを最大にし、カプセルがその完全性を維持する最適な細胞濃度があることを実証している。
【０５０４】
［実施例２２：直径０．７５ｍｍ又は直径１．０ｍｍの目標サイズを有する２区画カプセルの調製］
１．０ｍｍ又は０．７５ｍｍのカプセル目標サイズを有する２区画カプセル組成物を、以下の調整を伴い、前の実施例に記載されるように調製した。第２の（外側）区画を形成するのに使用されるアルギン酸塩溶液は、ＣＭ−Ａｌｇ−１０１対Ｕ−ＨＭＷ−Ａｌｇの７０：３０の比率でＵ−ＨＭＷ−Ａｌｇと混合された中程度コンジュゲーションレベルの化合物１０１（例えば、実施例１０に記載されるように調製される）と共にＣＭ−Ａｌｇ−１０１を含有していた。ヒトＦＶＩＩＩを発現するように組み換えられたＡＲＰＥ１９細胞（５０００万個の細胞／ｍｌ）の懸濁液を含む同じ混合されたアルギン酸塩溶液を用いて、第１の（内側）区画を形成した。１．０ｍｍのカプセルのカプセル目標サイズを有するカプセル組成物を、同心針（２０Ｇ  ＯＤ／２６Ｇ  ＩＤ）、７．３ｋＶの電圧、それぞれ５ｍＬ／時の第１及び第２の区画流量、及び３０〜３５液／１０秒のカプセル滴下速度を用いて生成した。０．７５ｍｍの目標サイズを有するカプセル組成物を、同心針（２０Ｇ  ＯＤ／２６Ｇ  ＩＤ）、約７．５ｋＶの電圧、それぞれ５ｍＬ／時の第１及び第２の区画流量、及び３５〜４０滴／１０秒のカプセル滴下速度を用いて調製した。
【０５０５】
図１８Ａ〜１８Ｂに示されるように、内側区画に細胞を含む球状の０．７５ｍｍ及び１．０ｍｍの２区画カプセルを生成した。これらのカプセルは、内側区画中に細胞を完全にカプセル化した外側区画を有していた。従って、２区画カプセルは、０．７５及び１．０ｍｍの平均直径で調製され得る。
【０５０６】
［均等物及び範囲］
本出願は、それらの全体が参照により本明細書において援用されている、種々の発行された特許、公開された特許出願、学術記事、書籍、マニュアル及び他の刊行物を参照する。援用された文献のいずれかと、本明細書との間に齟齬が存在する場合、本明細書が優先されるべきである。加えて、従来技術に属する本開示の特定の実施形態のいずれかは、いずれかの１つ以上の請求項からは明示的に除外され得る。このような実施形態は技術分野における当業者に公知であるとみなされるため、これらは、本明細書において明示的に除外されていない場合においても除外され得る。本開示の特定の実施形態のいずれかは、従来技術の存在に関連しているかに関係なく、いかなる理由によってもいずれかの請求項から除外可能である。
【０５０７】
当業者は、多くのルーチン的な実験を行うことなく、本明細書に記載の特定の実施形態の均等物を認識又は確認可能である。本明細書に記載の本実施形態の範囲が上記の明細書、図面又は実施例に限定されることは意図されておらず、添付の特許請求の範囲に記載されているとおりであることが意図されている。当業者は、以下の特許請求の範囲において定義されているとおり、本開示の趣旨又は範囲を逸脱することなく、本記載に対する種々の変更及び修正が可能であり得ることを認めるであろう。
【図１】
2021520374.tif 000103
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１７−４】
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【図１７−５】
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【図１７−６】
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【図１７−７】
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【図１７−８】
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【図１７−９】
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【図１７−１０】
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【図１７−１１】
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【図１７−１２】
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【図１７−１３】
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【図１７−１４】
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【図１７−１５】
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【図１７−１６】
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【図１７−１７】
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【図１７−１８】
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【図１７−１９】
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【図１７−２０】
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【図１７−２１】
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【図１７−２２】
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【図１７−２３】
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【図１７−２４】
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【図１７−２５】
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【図１７−２６】
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【図１７−２７】
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【図１７−２８】
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【図１７−２９】
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【図１７−３０】
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【図１７−３１】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2021520374.tif 000176
2021520374.tif 000177
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