(57)【要約】  本発明は、微細藻類抽出物に含まれるフコキサンチンを含む組成物に関する。さらに、細胞内の脂質蓄積を減少させるための組成物および方法を提供する。また、脂肪性肝疾患または脂肪性腎疾患を含むがこれらに限定されないメタボリックシンドロームの予防または治療のための方法も提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内の脂質含量を減少させるための方法であって、前記細胞を微細藻類抽出物および担体を含む組成物と接触させ、それにより前記細胞内の脂質蓄積を減少させ、それにより前記細胞内の前記脂質含量を減少させるステップを含む方法。
【請求項２】
前記細胞が異所性脂肪蓄積細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記異所性脂肪蓄積細胞が、肝臓細胞、腎細胞、膵臓細胞、および筋細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
メタボリックシンドロームの予防または治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、微細藻類抽出物および担体を含む治療有効量の組成物を前記対象に投与し、それによって前記対象におけるメタボリックシンドロームを予防または治療することを含む方法。
【請求項５】
前記メタボリックシンドロームが、脂肪性肝疾患、および脂肪性腎疾患からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記微細藻類抽出物がＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物が、乾燥重量で少なくとも０．５％（重量／重量）のフコキサンチンを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍがＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ  ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍである、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記担体が植物由来の油である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記植物由来の油が、少なくとも８５％の、最大１６個の炭素原子を含む脂肪酸鎖を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記植物由来の油が、少なくとも８５％の飽和脂肪酸鎖を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記植物由来の油が、ココナッツ油または中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記微細藻類抽出物が微細藻類抽出物の画分である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記画分が少なくとも０．０３μｇ／ｍＬのフコキサンチンを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記画分が、パルミチン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群から選択される１つ以上の化合物を含む、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
脂肪誘発性の肝毒性、腎毒性、またはそれらの両方を予防または治療するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月４日に出願された「フコキサンチンを含む組成物および脂肪性肝疾患の予防および治療におけるその使用」と題する米国仮特許出願第６２／６５２，４０１号の優先権の利益を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、とりわけ、フコキサンチンまたはその代謝物を含む組成物、ならびにその、細胞内の脂肪蓄積の減少または代謝性疾患の予防および治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
脂肪性肝疾患（ＦＬＤ）は、肝臓細胞内に脂質が蓄積した場合に生じる、一般的な肝疾患である。脂質の蓄積は細胞傷害を引き起こし、肝臓をさらなる傷害に感作させる。蓄積した脂質により、肝微小血管循環が損なわれる場合もある。
【０００４】
ＦＬＤは、過度のアルコール摂取ならびにインスリン抵抗性、肥満、および高血圧に関連する障害などの代謝障害を含む、数多くの原因から生じ得る。非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、例えば、ガラクトース血症、糖原病、ホモシスチン尿症、チロシン血症などの代謝障害、ならびに栄養失調、完全非経口栄養、飢餓、および栄養過剰などの食事状態からも生じ得る。場合によっては、ＮＡＦＬＤは空腸バイパス手術に関連している。他の原因には、例えば炭化水素溶剤など特定の化学物質への曝露、ならびに、例えば、アミオダロン、コルチコステロイド、エストロゲン（例えば合成エストロゲン）、タモキシフェン、マレイン酸塩、メトトレキサート、およびヌクレオシド類似体など特定の治療薬への曝露が含まれる。妊娠中には急性脂肪肝の状態も生じ得る。
【０００５】
ＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ；代謝性脂肪性肝炎）という、肝臓の炎症と損傷を特徴とする、肝臓の線維化または硬変を伴うことが多い状態など、より高度な肝疾患へと進行する可能性がある。ＮＡＳＨは、さらなる肝損傷へと進行して、最終的に慢性肝不全、場合によっては肝細胞癌をもたらす場合がある。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、フコキサンチンおよび／またはその代謝物を含む組成物、ならびにそれらを、細胞、例えば、肝細胞および腎細胞の脂質含量減少のために使用する方法を提供する。さらに、脂肪性肝疾患または脂肪性腎疾患などの代謝性疾患の予防または治療のための方法を提供する。
【０００７】
一態様によれば、細胞内の脂質含量を減少させるための方法が提供され、かかる方法は、細胞を、微細藻類抽出物および担体を含む組成物と接触させ、それにより、細胞内の脂質の蓄積を減少させ、それにより、細胞内の脂質含量を減少させるというステップを含む。
【０００８】
別の態様によれば、メタボリックシンドロームの予防または治療を必要とする対象においてそれを行う方法が提供され、かかる方法は、微細藻類抽出物および担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与し、それによって対象におけるメタボリックシンドロームを予防または治療することを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、細胞は異所性脂肪蓄積細胞である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、異所性脂肪蓄積細胞は、肝臓細胞、腎細胞、膵臓細胞、および筋細胞からなる群から選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、脂肪性肝疾患、および脂肪性腎疾患からなる群から選択される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物である。
【００１３】
いくつかの実施形態では、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物は、乾燥重量で少なくとも０．５％（重量／重量）のフコキサンチンを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍは、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ  ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、担体は植物由来の油である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、植物由来の油は、少なくとも８５％の、最大１６個の炭素原子を含む脂肪酸鎖を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、植物由来の油は、少なくとも８５％の飽和脂肪酸鎖を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、植物由来の油は、ココナッツ油または中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、微細藻類抽出物は、微細藻類抽出物の画分である。
【００２０】
いくつかの実施形態では、画分は、少なくとも０．０３μｇ／ｍＬのフコキサンチンを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態では、画分は、パルミチン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群から選択される１つ以上の化合物を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、脂肪誘発性の肝毒性、腎毒性、またはそれらの両方を予防または治療するためである場合方法。
【００２３】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および／または科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等の方法および材料を本発明の実施形態の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法および／または材料を以下に説明する。矛盾する場合は、定義を含む特許明細書が優先される。さらに、材料、方法、および例は、単なる例示であり、必ずしも限定することを意図するものではない。
【００２４】
本発明のさらなる実施形態および適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の趣旨および範囲内の様々な変更および修正が、この詳細な説明から当業者に明らかになるので、詳細な説明および特定の例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方で、例示としてのみ与えられると理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、様々な濃度（μｇ／ｍＬ）の本発明のフコキサンチン組成物の脂質蓄積阻害に対する効果を対照（「Ｖｅｈ」）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；＄ｐ＜０．００９９  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＾ｐ＜０．０００９  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図２】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）および様々な濃度（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；および＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図３】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）および様々な濃度（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；および＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図４】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）および様々な濃度（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）の市販のフコキサンチンと比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００３  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＄ｐ＜０．０００４  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図５】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）、および単体または各種ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）（２０μＭ、１０μＭ、および５μＭ）と組み合わせた１０μＭの市販のフコキサンチンと比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＄ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図６】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）、および単体または各種エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）（２０μＭ、１０μＭ、５μＭ、および２．５μＭ）と組み合わせた１０μＭの市販のフコキサンチンと比較して示す棒グラフである。ＥＰＡ単体も調べた（２０μＭ）。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；および＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図７】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）ならびに各種ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）と組み合わせた（いずれも２０μＭ、１０μＭまたは５μＭ）１０μＭの市販のフコキサンチンと比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＄ｐ＜０．０００９  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図８】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）および様々な濃度（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）のルテインと比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＄ｐ＜０．０００３  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図９】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、本発明のフコキサンチン組成物（４４０μｇ／ｍＬ）の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）および様々な濃度（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）のシリマリンと比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；および＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比；および＄ｐ＜０．０００３  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【図１０】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油に可溶化された、段階的に濃度を低下させた本発明のフコキサンチン組成物の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１１】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、ココナッツ油に可溶化された、段階的に濃度を低下させた本発明のフコキサンチン組成物の脂質蓄積阻害に対する効果を、対照（「Ｖｅｈ」）（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１２】は、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、脂質蓄積阻害に対する中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油の「担体効果」を、本発明のフコキサンチン組成物（２２０μｇ／ｍＬ）および対照（「Ｖｅｈ」）（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１３】は、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、脂質蓄積阻害に対するココナッツ油の「担体効果」を、本発明のフコキサンチン組成物（２２０μｇ／ｍＬ）および対照（「Ｖｅｈ」）（μＭおよびμｇ／ｍＬとして表される）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１４】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、脂質蓄積阻害に対するシーバックソーン油の「担体効果」を、本発明のフコキサンチン組成物の３つのバッチ（すなわち、バッチ１−２２０μｇ／ｍＬ；バッチ３−２２０μｇ／ｍＬ；ならびにバッチ５；１１０μｇ／ｍＬ、２２０μｇ／ｍＬ、および４４０μｇ／ｍＬ）、ならびに対照の、「Ｖｅｈ」、および本発明のフコキサンチンおよびシーバックソーン油（それぞれ４４０μｇ／ｍＬ）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１５】ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）のオレイン酸：パルミチン酸（Ｏ：Ｐ；０．３ｍＭ）の脂肪肝モデル下、シーバックソーン油と混合した本発明のフコキサンチン組成物の脂質蓄積阻害に対する効果を示す棒グラフである。本発明のフコキサンチン組成物のバッチ５（図１４）を、１５％または５％のシーバックソーンと混合した（それぞれ、Ｆｏｒ．１５％およびＦｏｒ．５％）。＊ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ不使用のＶｅｈ処置群との対比；＃ｐ＜０．０５  Ｏ：Ｐ使用のＶｅｈ処置群との対比。
【図１６】ヒト腎細胞（ＨＫ−２）における脂肪蓄積モデル下、様々な濃度（μｇ／ｍＬ）の本発明のフコキサンチン組成物の脂質蓄積阻害に対する効果を対照（「Ｖｅｈ」）と比較して示す棒グラフである。＊ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ不使用のビヒクル対照との対比；および＃ｐ＜０．０００１  Ｏ：Ｐ使用のビヒクル対照との対比。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
いくつかの実施形態では、本発明は、メタボリックシンドロームの予防または治療に使用するための、微細藻類抽出物に由来するフコキサンチンを含む組成物に関する。
【００２７】
本発明は、部分的には、ヒトの肝細胞および腎細胞それぞれの脂肪肝モデルおよび脂肪腎モデルの下、微細藻類抽出物に含まれるフコキサンチンが脂質蓄積を阻害したという知見に基づいている。意外にも、微細藻類抽出物に含まれるフコキサンチンは、異なる供給源または他の比較可能な抗酸化物質および既知の脂肪酸に由来するフコキサンチンよりも驚くほど優れていた。
【００２８】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、細胞内の脂質蓄積を減少させる方法を対象とし、かかる方法は、細胞を、治療有効量の本発明の組成物と接触させることを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、脂肪を蓄積している細胞は、脂肪蓄積、すなわち脂肪細胞と呼ばれる。いくつかの実施形態では、細胞は異所性脂肪蓄積細胞である。本明細書で使用する場合、「異所性脂肪蓄積細胞」という用語は、それ自体は脂肪を蓄積していない、すなわち脂肪細胞（白色脂肪組織または褐色脂肪組織）ではない任意の細胞を指す。いくつかの実施形態では、異所性脂肪蓄積細胞は、脂肪滴（ｆａｔ  ｄｒｏｐｌｅｔ）、脂肪滴（ｌｉｐｉｄ  ｄｒｏｐｌｅｔ）、またはそれらの両方を含む。いくつかの実施形態では、異所性脂肪蓄積細胞は、異所性脂肪滴（ｅｃｔｏｐｉｃ  ｆａｔ  ｄｒｏｐｌｅｔ）、異所性脂肪滴（ｅｃｔｏｐｉｃ  ｌｉｐｉｄ  ｄｒｏｐｌｅｔ）、またはそれらの両方を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、異所性脂肪蓄積細胞は、肝臓細胞、腎細胞、膵臓細胞、および筋細胞のうちのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、筋細胞は、骨格筋細胞または心筋細胞である。いくつかの実施形態では、膵臓細胞は、β細胞、α細胞、γ細胞、およびδ細胞のうちのいずれか１つである。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００３１】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、メタボリックシンドロームの治療を必要とする対象においてそれを行う方法に関し、かかる方法は、有効量の本発明の組成物を対象に投与することを含む。一実施形態では、メタボリックシンドロームは脂肪性肝疾患である。
【００３２】
別の実施形態によれば、方法は、微細藻類に由来するフコキサンチンおよび担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与し、それによって対象におけるメタボリックシンドロームを予防または治療することを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、フコキサンチン（５％から最高９９％まで）およびココナッツ油（１％から最高９５％まで）を含む組成物に関する。いくつかの実施形態によれば、組成物は、フコキサンチンおよびココナッツ油をそれぞれ、フコキサンチン対ココナッツ油が１００：１、９０：１、８０：１、７０：１、６０：１、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：６０、１：７０、１：８０、もしくは１：９０から、１：１００までの範囲の比、またはそれらの間の任意の値および範囲の比で含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００３４】
メタボリックシンドロームの治療
「治療」という用語およびその同語源語は、疾患および関連する状態もしくは症状について、進行の遅延（ｓｌｏｗ）、または重症度の軽減など、疾患の症状を改善するかまたは有益に変化させることができるあらゆる行為を指す。治療という用語は、疾患の完全治癒である必要はない。
【００３５】
「予防」という用語およびその同語源語は、疾患の発病もしくは発症を抑制または遅延させる（ｄｅｌａｙ）ことができるあらゆる行為を指す。
【００３６】
本明細書で使用する「メタボリックシンドローム」という用語は、以下の、過剰な腹部脂肪、高血圧症、空腹時血糖値異常またはインスリン抵抗性、トリグリセリド高値、および高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール低値のうちのいずれか１つを特徴とする、任意の疾患、障害、または状態を指す。本発明に従って治療可能なメタボリックシンドロームには、脂肪肝、肥満、前糖尿病、糖尿病、高血糖症、糖尿病性脂質異常症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高インスリン血症、インスリン抵抗性またはインスリン抵抗性関連が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
一実施形態では、メタボリックシンドロームは脂肪性肝疾患である。「脂肪性肝疾患」（ＦＬＤ）という用語は、少なくとも部分的には、異常な肝脂質沈着によって引き起こされる疾患または病的状態を指す。脂肪性肝疾患には、例えば、アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患、および妊娠中の急性脂肪肝が含まれる。脂肪性肝疾患は、例えば、大滴性脂肪変性または小滴性脂肪変性であり得る。一実施形態では、メタボリックシンドロームは非アルコール性脂肪性肝炎（すなわち、脂肪肝）である。一実施形態では、本発明の組成物および方法は、肝毒性、腎毒性、またはそれらの両方が脂肪により誘発された、肝毒性、腎毒性、またはそれらの両方を治療および予防するのに有用である。本明細書で使用する場合、脂肪誘発性肝毒性、および脂肪誘発性腎毒性とは、脂肪、トリグリセリド、遊離脂肪酸、脂肪滴（ｌｉｐｉｄ  ｄｒｏｐｌｅｔ）、もしくはその同等物の蓄積に起因する、肝臓、腎臓、もしくはそれらの両方の細胞に対する毒性増加を包含する、中毒細胞に悪影響を及ぼす任意の疾患または状態を指す。例えば、中毒細胞は、壊死を起こし、膜の完全性を失い、細胞溶解を起こし、増殖または細胞分裂を停止し、能動的にアポトーシスを誘導する。
【００３８】
一実施形態では、メタボリックシンドロームは脂肪性腎疾患（ＦＫＤ）である。「脂肪性腎疾患」という用語には、腎臓における異所性脂質沈着を含む任意の疾患または病的状態が包含される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは糖尿病である。いくつかの実施形態では、糖尿病は２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）である。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、インスリン抵抗性関連疾患である。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、インスリン抵抗性関連のＴ２ＤＭである。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、インスリン抵抗性依存型Ｔ２ＤＭである。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、筋疾患である。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、代謝性筋疾患である。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、心筋代謝性疾患（すなわち、心血管代謝性疾患）である。いくつかの実施形態では、メタボリックシンドロームは、骨格筋代謝性疾患である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物による治療を必要とする対象は、ＦＬＤ、ＦＫＤ、またはそれらの両方を発症するリスクが高い対象であり得る。例えば、脂肪代謝異常、アルコール依存症、高齢（例えば、４０歳、５０歳、６０歳、または７０歳を超えている）、セリアック病、真性糖尿病（例えば、ＩＩ型真性糖尿病）、脂質異常症、工業用溶剤への曝露、ガラクトース血症、糖原病、ホモシスチン尿症、高フェリチン血症、高インスリン血症、高脂血症、高血圧症、高トリグリセリド血症、高尿酸血症、低酸素症、空腹時高血糖、先天性代謝障害（例、ガラクトース、グリコーゲン、ホモシステイン、またはチロシンの代謝に関連する）、インスリン抵抗性、鉄過剰症、空腸バイパス手術、高比重リポタンパク低値、Ｍａｄｅｌｕｎｇ脂肪腫症、栄養失調、モーリアック症候群、メタボリックシンドローム、ミトコンドリア機能不全、ミトコンドリア傷害、ミトコンドリアロパシー、ナイアシン欠乏症、ニーマン・ピック病、肥満（特に、内臓脂肪症、中心性肥満）、栄養過剰、パントテン酸欠乏症、ペルオキシソーム病、多嚢胞性卵巣症候群、妊娠、急激な体重減少、リボフラビン欠乏症、睡眠時無呼吸、飢餓、チロシン血症、ウェーバー・クリスチャン病、またはウィルソン病を有する対象は、肝脂質沈着に関連する障害を有するか、または発症するリスクが高い場合がある。ＮＡＦＬＤは、急激な体重減少にも関連している。さらに、特定の薬剤、例えば、アミオダロン、コルチコステロイド、エストロゲン（例えば、合成エストロゲン）、マレイン酸塩、メトトレキサート、ペルヘキシリン、サリチル酸塩、タモキシフェン、テトラサイクリン、およびバルプロ酸などで治療されている患者は、肝脂質沈着に関連する障害を有するか、または発症するリスクが高い場合がある。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＦＬＤの治療を必要とする対象は、複数の方法によって診断され得る。当業者には明らかであるように、そのような方法には、身体検査、肝酵素の血液検査、画像検査法および組織生検が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、対象における脂肪肝を検出するための身体検査には、肝腫大の探索が含まれる。別の実施形態では、対象における脂肪肝を検出するための身体検査には、アルコール、薬剤、またはサプリメント使用についての対象の病歴検査が含まれる。一実施形態では、対象における脂肪肝を検出するための血液検査には、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）などであるがこれらに限定されない肝酵素の濃度を測定することが含まれる。別の実施形態では、肝酵素の濃度は、当業者に明らかなように、ＡＳＴとＡＬＴとの計算された比によって表され得る。一実施形態では、対象における脂肪肝を検出するための画像検査法には、超音波、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）などが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、対象における脂肪肝の検出には、組織生検の収集が含まれる。別の実施形態では、対象の組織生検における脂肪肝の検出には、切片化および染色が含まれる。別の実施形態では、当業者は、特異的に発現される遺伝子の検出のために、一般的な化学染色の代わりに特定のマーカーが使用され得ることを理解するであろう。
【００４２】
医薬組成物
一態様によれば、本発明の組成物は、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍの含油樹脂を含む。本発明の方法で使用するための医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、微細藻類抽出物由来などのフコキサンチン、および薬学的に許容される担体（賦形剤）を含む。適切な医薬担体の例は、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，１９９０，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．に記載されている。（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）。適切な賦形剤には、ココナッツ油デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が含まれ得る。本発明の組成物はまた、ｐＨ緩衝試薬および湿潤剤または乳化剤を含み得る。組成物は、補足的機能、追加的機能、または増強された治療機能を提供する他の活性化合物をさらに含有し得る。医薬組成物はまた、容器、パック、またはディスペンサー内に投与指示書とともに含まれ得る。
【００４３】
本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩もまた、医薬組成物に含まれ得る。塩の例には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、および硫酸など）の塩、および有機酸（例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸、および酒石酸など）の塩が含まれる。他の適切な薬学的に許容される塩基性塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩など）およびアルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩およびカルシウム塩など）が含まれる。さらに、本発明の化合物は、（化合物またはその塩の）水和物または半水和物として存在し得る。
【００４４】
組成物は、固形（例えば、粉末、錠剤）、液体（例えば、水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液）または他の形態に製剤化することができる。
【００４５】
適切な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水（例えば、パイロジェンフリー水）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適切な混合物、植物油（オリーブ油、綿実油、ヤシ油など）、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合は必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。これらの組成物はまた、アジュバント、抗菌剤および抗真菌剤、香味剤、生分解性ポリマーなどを含有し得る。植物由来の油の非限定的な例には、植物油が含まれる。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、例えば、経口、非経口、槽内、腹腔内、局所などを含む任意の適切な方法で哺乳動物（例えば、ヒト、げっ歯類など）に投与することができる。非経口投与には、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射／注入が含まれる。
【００４７】
用量は、対象および使用される特定の投与経路に応じて異なる。市販のアッセイを使用して、投与の最適な用量範囲および／またはスケジュールを決定してよい。有効量は、動物モデルから得られた用量反応曲線から外挿され得る。一般に、適切な動物モデルには、（１）例えば、ｏｂ／ｏｂマウス、ｆａ／ｆａ（Ｚｕｃｋｅｒ）ラット、またはｄｂ／ｄｂマウスなどの遺伝モデル、（２）動物に、例えば、高ショ糖／果糖食または高脂肪食を給餌する、栄養過剰モデル、（３）脂肪変性を発症し、一部の系統では線維症を発症する、メチオニン−コリン食餌性欠乏モデル、（４）脂質合成を支配する転写因子ＳＲＥＢＰ−１を過剰発現するマウスなどのトランスジェニックモデル、が含まれる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は毎日摂取される。一実施形態では、組成物の１日用量は、少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．２ｍｇ、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも０．７ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、少なくとも３ｍｇ、少なくとも４ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも６ｍｇ、少なくとも７ｍｇ、少なくとも８ｍｇ、少なくとも９ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１１ｍｇ、少なくとも１２ｍｇ、少なくとも１３ｍｇ、少なくとも１４ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも１６ｍｇ、少なくとも１７ｍｇ、少なくとも１８ｍｇ、少なくとも１９ｍｇ、または少なくとも２０ｍｇのフコキサンチン（例えば、微細藻類抽出物内）、またはそれらの間の任意の値および範囲のフコキサンチンを含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。一実施形態では、組成物の１日用量は、０．１〜０．２ｍｇ、０．１５〜０．５ｍｇ、０．３５〜０．７ｍｇ、０．６〜１ｍｇ、０．８〜２ｍｇ、１．５〜３ｍｇ、２〜４ｍｇ、２．５〜５ｍｇ、４〜６ｍｇ、５〜７ｍｇ、５．５〜８ｍｇ、６〜９ｍｇ、７．５〜１０ｍｇ、８〜１１ｍｇ、９〜１２ｍｇ、１０〜１３ｍｇ、１１〜１４ｍｇ、１２〜１５ｍｇ、１２．５〜１６ｍｇ、１４〜１７ｍｇ、１３〜１８ｍｇ、１６．５〜１９ｍｇ、または１７〜２０ｍｇのフコキサンチンを含む。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００４９】
微細藻類抽出物
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、微細藻類の内容物、例えば、フコキサンチンを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明のフコキサンチンは、微細藻類に由来するかまたはそれから抽出される。
【００５０】
本明細書で使用する場合、「微細藻類」という用語は、野生型微細藻類であるかまたは遺伝子改変微細藻類であるかにかかわらず、任意の単細胞の光合成微生物を意味する。一実施形態では、微細藻類抽出物は、珪藻微細藻類から抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ  ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｎａｖｉｃｕｌａ  ｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ａｍｐｈｏｒａから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ  ａｆｆ．Ｇａｌｂａｎａから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｏｄｏｎｔｅｌｌａ  ａｕｒｉｔａから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｎｉｔｚｓｃｉａ  ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｃｙｌｉｎｄｒｏｔｈｅｃａ  ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍから抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｃｈａｅｔｏｓｅｒｏｓ  ｓｐ．から抽出される。一実施形態では、微細藻類抽出物は、Ｅｍｉｌｉａｎｉａ  ｈｕｘｌｅｙｉから抽出される。
【００５１】
一実施形態では、ココナッツ油などの担体を含む組成物は、大型藻類から抽出されるかまたはそれに由来するフコキサンチンを含み得る。本明細書で使用する場合、「大型藻類」という用語は、肉眼的または多細胞性の任意の藻類を指す。一実施形態では、大型藻類は、野生型大型藻類、または遺伝子改変大型藻類である。
【００５２】
組成物がココナッツ油などの担体を含む実施形態によれば、フコキサンチンは合成により生成され得る。本明細書で定義されるように、「合成により生成された」とは、その物質の天然の供給源から抽出されたかまたは得られたものではない物質を指す。非限定的な例には、化学合成または遺伝子改変供給源からの回収（ｒｅｃｏｖｅｒｙ）が含まれ得る。
【００５３】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、乾燥重量で少なくとも０．００１％、少なくとも０．１％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％のフコキサンチンを含む。一実施形態では、微細藻類抽出物は、乾燥重量で１〜１５％の量のフコキサンチンを含む。一実施形態では、微細藻類抽出物は、１５〜９０％の量のフコキサンチンを含む。
【００５４】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンのほか、ビオラキサンチン、ジアジノキサンチン、アンテラキサンチン、ジアトキサンチン、ゼアキサンチン、β，β−カロテン、およびβ，ε−カロテンからなる群から選択される１つ以上のカロテノイドを含む。
【００５５】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、脂肪酸をさらに含む。一実施形態では、脂肪酸は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で４０％超、もしくは別法として４５％超、もしくは別法として５０％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。一実施形態では、脂肪酸は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で３５〜４５％、または別法として４０〜５５％、または別法として５０〜９５％を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。一実施形態では、脂肪酸は、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、トランス脂肪酸、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００５６】
一実施形態では、脂肪酸は、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、トランス脂肪酸、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００５７】
一実施形態では、脂肪酸は、飽和脂肪酸、一価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、トランス脂肪酸、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、飽和脂肪酸は、アラキジン酸、アラキドン酸、酪酸、カプロン酸、カプリン酸、カプリル酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸（ＰＡ）、パルミトレイン酸、ヘプタデセン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはそれらの異性体からなる群から選択される１つ以上の脂肪酸である。一実施形態では、一価不飽和脂肪酸は、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、ペンタデカン酸、オレイン酸、ヘプタデカン酸、バクセン酸、ドコセン酸、またはそれらの異性体からなる群から選択される１つ以上の脂肪酸である。一実施形態では、多価不飽和脂肪酸は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、リノール酸、アルファリノレン酸、ガンマリノレン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、またはそれらの異性体からなる群から選択される１つ以上の脂肪酸である。一実施形態では、トランス脂肪酸は、トランスオレイン酸、トランスバクセン酸、およびトランスＯＩ／Ｖａｃを含まないトランス異性体からなる群から選択される１つ以上の脂肪酸である。
【００５８】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、パルミトレイン酸またはその異性体をさらに含み、ここで、パルミトレイン酸は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．１％超、もしくは別法として０．５％超、もしくは別法として１％超、もしくは別法として２％超、もしくは別法として３％超、もしくは別法として４％超、もしくは別法として５％超、もしくは別法として６％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として８％超、もしくは別法として９％超、もしくは別法として１０％超、もしくは別法として１１％超、もしくは別法として１２％超、もしくは別法として１３％超、もしくは別法として１４％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００５９】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、アラキドン酸（ＡＡ）またはその異性体をさらに含み、ここで、ＡＡは、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．１％超、もしくは別法として０．２％超、もしくは別法として０．５％超、もしくは別法として０．６％超、もしくは別法として０．７％超、もしくは別法として０．９％超、もしくは別法として１％超、もしくは別法として１．５％超、もしくは別法として２％超、もしくは別法として２．５％超、もしくは別法として３％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６０】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）またはその異性体をさらに含み、ここで、ＤＨＡは、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．０１％超、もしくは別法として０．０５％超、もしくは別法として０．１％超、もしくは別法として０．２％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６１】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、パルミチン酸（ＰＡ）またはその異性体をさらに含み、ここで、ＰＡは、微細藻類抽出物の、乾燥重量で５％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として９％超、もしくは別法として１１％超、もしくは別法として１５％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６２】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンおよび脂肪酸を含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンと脂肪酸との重量対重量比は、１：１０〜１：３０の範囲である。いくつかの実施形態では、フコキサンチンと脂肪酸との重量対重量比は、１：１０〜１：２０の範囲である。
【００６３】
いくつかの実施形態では、抽出物は、フコキサンチンおよび不飽和脂肪酸を含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンと不飽和脂肪酸との重量対重量比は、１：２〜１：３、１：３〜１：５、１：５〜１：１０または１：３〜１：１５の範囲である。いくつかの実施形態では、不飽和脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンと、一価および多価の不飽和脂肪酸との重量対重量比は、１：１〜１：３、１：２〜１：４、１：３〜１：５または１：４〜１：１０の範囲である。いくつかの実施形態では、抽出物のフコキサンチンと多価不飽和脂肪酸との重量対重量比は、１：１〜１：３０、１：２〜１：２０、１：３〜１：１５、１：３〜１：１０、１：４〜１：３０、１：４〜１：２０、１：４〜１：１５、１：４〜１：１０、１：５〜１：３０、１：５〜１：２０、１：５〜１：１５、または１：５〜１：１０の範囲である。いくつかの実施形態では、抽出物のフコキサンチンと一価不飽和脂肪酸との重量対重量比は、１：１〜１：１０、１：２〜１：２０、１：３〜１：１５、１：３〜１：１０、１：４〜１：３０、１：４〜１：２０、１：４〜１：１５、１：４〜１：１０、１：５〜１：３０、１：５〜１：２０、１：５〜１：１５、または１：５〜１：１０の範囲である。
【００６５】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチン、パルミトレイン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、ガンマリノレン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびパルミチン酸（ＰＡ）またはそれらの異性体を含む。
【００６６】
一実施形態では、パルミトレイン酸および／またはその異性体は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．１％超、もしくは別法として０．５％超、もしくは別法として１％超、もしくは別法として２％超、もしくは別法として３％超、もしくは別法として４％超、もしくは別法として５％超、もしくは別法として６％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として８％超、もしくは別法として９％超、もしくは別法として１０％超、もしくは別法として１１％超、もしくは別法として１２％超、もしくは別法として１３％超、もしくは別法として１４％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６７】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンおよびパルミトレイン酸またはそれらの異性体を含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとパルミトレイン酸との重量対重量比は、３０：１〜１：１０、２０：１〜１：８、２：１〜１：２、１：１〜１：１０、３：１〜１：５、１：１〜１：２、１：２〜１：１０、または１：２〜１：５の範囲である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６８】
一実施形態では、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）またはその異性体は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．０７５％超、もしくは別法として１．５％超、もしくは別法として２％超、もしくは別法として３％超、もしくは別法として４％超、もしくは別法として５％超、もしくは別法として６％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として８％超、もしくは別法として１０％超、もしくは別法として１１％超、もしくは別法として１２％超、もしくは別法として１３％超、もしくは別法として１４％超、もしくは別法として１５％超、もしくは別法として１６％超、もしくは別法として１７％超、もしくは別法として１８％超、もしくは別法として１９％超、もしくは別法として２０％超、もしくは別法として２１％超、もしくは別法として２２％超、もしくは別法として２３％超、もしくは別法として２４％超、もしくは別法として２５％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００６９】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンおよびＥＰＡを含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＥＰＡとの重量対重量比は、２５：１〜１：２５、２０：１〜１：２０、１０：１〜１：１０、１：１と１：１０、５：１〜１：５、１：１〜１：２、１：２〜１：１０、１：２〜１：８、１：２〜１：７、または１：２〜１：６の範囲である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＥＰＡとの重量対重量比は、４：１〜１：８の範囲である。
【００７０】
いくつかの実施形態では、抽出物は、フコキサンチンおよびアラキドン酸（ＡＡ）またはそれらの異性体を含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＡＡとの重量対重量比は、１０：１〜１：２、１５：１〜１：２、２０：１〜１：２、１：１〜１：２、１．５：１〜１：１．５、４：１〜１：１、３：１〜１：１、２：１〜１：１、または１．５：１〜１：１の範囲である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＡＡとの重量対重量比は、１５：１〜１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＡＡとの重量対重量比は、１０：１〜１：１の範囲である。
【００７１】
一実施形態では、ＤＨＡまたはその異性体は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で０．０５％超、もしくは別法として０．０７５％超、もしくは別法として０．１％超、もしくは別法として０．１５％超、もしくは別法として０．２％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００７２】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンおよびＤＨＡを含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＤＨＡとの重量対重量比は、３０：１〜１：１、２０：１〜１：１、１０：１〜１：１、７：１〜１：１、６：１〜１：１、４：１〜１：１、１０：１〜２：１、８：１〜２：１、７：１〜２：１、６：１〜２：１、５：１〜２：１、４：１〜２：１、１０：１〜３：１、８：１〜３：１、７：１〜３：１、６：１〜３：１、５：１〜３：１、または４：１〜３：１の範囲である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＤＨＡとの重量対重量比は、６：１〜２：１の範囲である。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＤＨＡとの重量対重量比は、５：１〜３：１の範囲である。
【００７３】
一実施形態では、ＰＡまたはその異性体は、微細藻類抽出物の、乾燥重量で５％超、もしくは別法として６％超、もしくは別法として７％超、もしくは別法として８％超、もしくは別法として８．５％超、またはそれらの間の任意の値および範囲を構成する。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００７４】
一実施形態では、微細藻類抽出物は、フコキサンチンおよびＰＡを含む。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＰＡとの重量対重量比は、２：１〜１：１０、２：１〜１：８、２：１〜１：７、２：１〜１：６、２：１〜１：５、２：１〜１：４、１：１〜１：１０、１：１〜１：８、１：１〜１：７、１：１〜１：６、１：１と１：５、１：１〜１：４、１：２〜１：１０、１：２〜１：８、１：２〜１：７、１：２〜１：６、１：２〜１：５、１：２〜１：４、１：３〜１：１０、１：３〜１：８、１：３〜１：７、１：３〜１：６、または１：３〜１：５の範囲である。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
【００７５】
いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＰＡとの重量対重量比は、１：３〜１：５の範囲である。いくつかの実施形態では、抽出物中のフコキサンチンとＰＡとの重量対重量比は、１：２〜１：６の範囲である。
【００７６】
微細藻類は、当業者に既知の培地で増殖され得る。適切な培地は、微細藻類の生存および増殖を支持する当技術分野で既知の任意の培地である。
【００７７】
本明細書で使用する場合、微細藻類抽出物は、微細藻類から抽出される材料を指す。一実施形態では、微細藻類は、抽出の前に、濾過、空気浮上および遠心分離を含むがこれらに限定されない任意の従来手段によって回収する（ｈａｒｖｅｓｔ）ことができる。
【００７８】
フコキサンチンおよびさらなる成分の抽出は、当技術分野で既知の任意の手段によって実施することができる。一実施形態では、抽出は機械的抽出である。別の実施形態では、抽出は、有機溶媒を使用することによって実施される。一実施形態では、有機溶媒は、少なくとも部分的に水に混和性である。水に混和性のある溶媒の非限定的な例には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、４個以下の炭素を含有する他のアルコール、アセトン、４個以下の炭素を含有するケトン、ジオキサンおよびテトラヒドロフランなどの環状エーテル、ジエチルエーテルなどの水混和性エーテル、炭素原子と酸素原子の比が約４：１以下のである他の酸素含有有機分子、ならびにアセトニトリル、またはそれらの組み合わせが含まれる。別の実施形態では、有機溶媒は水と混和しない。水と混和しない有機溶媒の非限定的な例には、アルカン（ヘキサン、ペンタン、ヘプタン、オクタンなど）、エステル（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、ケトン（メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）など）、芳香族化合物（トルエン、ベンゼンなど）、シクロヘキサン、テトラヒドロフラン、ハロアルカン（クロロホルムなど）、トリクロロエチレン、およびエーテル（ジエチルエーテルなど）、またはそれらの組み合わせが含まれる。
【００７９】
本明細書で使用する「極性溶媒」という用語は、酸塩基相互作用、水素結合、双極子−双極子相互作用を介して、または双極子−誘導双極子相互作用によって、他の化合物またはそれ自体と相互作用する傾向がある溶媒を意味する。極性溶媒の非限定的な例には、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、グリセロール、プロパノール、ブタノール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキシレングリコール、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ギ酸、酢酸、アセトンが含まれる。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。よりさらなる実施形態によれば、抽出は、少なくとも２つの溶媒の組み合わせを用いて行われる。
【００８０】
別の実施形態では、抽出は、当技術分野で既知の超臨界流体−ＣＯ２（ＳＣＦ−ＣＯ２）を使用することによって実施される。本明細書で使用する場合、超臨界流体ＣＯ２は、その臨界点以上の温度（例えば、４０〜６０℃）および圧力におけるＣＯ２を指し、その場合、明確な液相および気相が存在しない。一実施形態では、超臨界流体−ＣＯ２は、気体のように固体を通って流出し、液体のように材料を溶解することができる。別の実施形態では、抽出は、ＳＣＦ−ＣＯ２および共溶媒を使用することによって実行される。一実施形態では、共溶媒は、エタノール、アセトン、メタノール、およびそれらの任意の組み合わせから選択される。
【００８１】
一実施形態では、溶媒による抽出は、ＳＣＦ−ＣＯ２抽出に続いて実施される。一実施形態では、溶媒による抽出は液液抽出である。一実施形態では、溶媒は極性溶媒である。一実施形態では、溶媒は、エタノール、メタノール、アセトン、ヘキサン、およびヘプタンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、溶媒による抽出の後に、第２の溶媒による第２の抽出が続く。いくつかの実施形態では、第２の溶媒は極性溶媒である。
【００８２】
「液液抽出」という用語は、溶媒抽出および分配としても知られ、ある液体から別の液相への物質の抽出を指す。液液抽出では、物質は、非限定的な例の水と有機溶媒など、２つの異なる非混和性液体（溶媒）への相対的な溶解度に基づいて分離される。
【００８３】
非限定的な例として、抽出を、超臨界流体−ＣＯ２（ＳＣＦ−ＣＯ２）を使用して実施し、続いてエタノールなどの極性溶媒による抽出を行ってエタノールで抽出された物質を濃縮し、続いて第２の極性溶媒（エタノール、ケトン、エステルなど）で２回目の抽出を行う。
【００８４】
いくつかの実施形態では、微細藻類抽出物をさらに分画する。本明細書で定義されるように、「分画」とは、混合物の複数の物質が分割され、その後、特定の特性を共有するいくつかの成分でそれぞれが構成される、多数の小さな分量（すなわち、画分）に収集される任意のプロセスを指す。分画の方法は当業者には明らかであり、非限定的な例には、吸着、毛細管電気泳動、遠心分離、サイクロン分離、クロマトグラフィー、結晶化、デカンテーション、デミスター、蒸留、乾燥、電気泳動、静電分離、水簸、蒸発、抽出、フィールドフロー分画、浮遊、凝集沈殿、濾過、分別濾過、分別凍結、油水分離、磁気分離、沈殿、再結晶、スクラビング、沈降、ふるい分け、ストリッピング、昇華、気液分離、吹き分けおよびゾーン精製などが含まれる。
【００８５】
考察において、特に明記しない限り、本発明の実施形態の特徴（複数可）の条件または関係特性を修飾する「実質的に」および「約」などの形容詞は、かかる条件または特性が、意図される適用のための実施形態の実施について許容される許容範囲内へ定義されることを意味すると理解される。特に指示しない限り、明細書および特許請求の範囲における「または」という語は、排他的な「または」ではなく、むしろ包括的な「または」であると見なされ、それが接続する項目のうちの少なくとも１つ、または任意の組み合わせを示す。
【００８６】
本出願の説明および特許請求の範囲において、動詞「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「有する」ならびにそれらの活用形の各々は、動詞の目的語（複数可）が必ずしも動詞の主語（複数可）の構成要素、要素または部分を完全に列挙したものではないことを示すために使用される
【００８７】
本明細書で使用する他の用語は、当技術分野におけるそれらの周知の意味によって定義されることを意味する。
【００８８】
本発明の追加の目的、利点、および新規の特徴は、限定することを意図しない、以下の実施例を検討すると、当業者には明らかになるであろう。追加的に、上記で説明されおよび以下の特許請求の範囲のセクションで特許請求される、本発明の様々な実施形態および態様の各々は、以下の実施例において実験的裏付けが認められる。
【００８９】
明確にするために別個の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできる、ことが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の様々な特徴は、別個に、もしくは任意の好適な部分的組み合わせで、または本発明の任意の他に説明された実施形態で好適として提供することもできる。様々な実施形態の文脈で説明されている特定の特徴は、実施形態がそれらの要素なしでは機能しない場合を除いて、それらの実施形態の本質的な特徴と見なされるべきではない。
【実施例】
【００９０】
一般に、本明細書で使用される術語、および本発明で利用される実験手順には、分子、生化学、微生物学および組換えＤＮＡの技術が含まれる。このような技術は、文献で詳しく説明されている。例えば、いずれも参照により組み込まれる、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．，ｅｄ．（１９９４）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）、Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ）”Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）、米国特許第４，６６６，８２８号、第４，６８３，２０２号、第４，８０１，５３１号、第５，１９２，６５９号および第５，２７２，０５７号に記載の方法論、”Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）、”Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”ｂｙ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、”Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．，ｅｄ．（１９９４）、Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）、Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ（ｅｄｓ．），“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ”ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照のこと。他の一般的な参考文献は、本書全体で提供されている。
【００９１】
材料および方法
微細藻類の増殖と培養
Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ微細藻類を、２％ＣＯ２を補充した一定の通気下、人工海水培地（ＪＯＮＥＳ，Ｒ．Ｆ．，Ｈ．Ｌ．ＳＰＥＥＲ，ＡＮＤ  Ｗ．ＫＵＲＹ．１９６３）でｐＨ７．５±０．５、２０℃にて培養した。培養物を、最小生物量である３．５ｇｒ／Ｌに達した時点で回収した。
【表１】
2021520343.tif 000003
【００９２】
ヒト肝細胞のインビトロ脂肪肝モデル（Ｈｅｐ  Ｇ２）
Ｈｅｐ  Ｇ２細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地（ＲＰＭＩ）を含む９６ウェルプレート（４×１０４細胞／ウェル）で一晩インキュベートした。次に、細胞を、ビヒクル（「Ｖｅｈ」）または被験化合物の存在下、脂肪酸の混合物（０．３ｍＭのオレイン酸：パルミチン酸、２：１）にさらに２４時間曝露した。インキュベーション期間後、細胞を洗浄し、Ｎｉｌｅ−Ｒｅｄ／Ｈｏｅｃｈｓｔ溶液の１μｇ／ｍＬ混合物とともに３７℃で１５分間、遮光してインキュベートした。Ｃｙｔａｔｉｏｎ３プレートリーダーによって蛍光を測定し、Ｎｉｌｅ−Ｒｅｄには５３０ｎｍで励起して６３５ｎｍでの発光を記録し、Ｈｏｅｃｈｓｔには３５０ｎｍで励起して４６１ｎｍでの発光を記録した。結果を、各ウェルの総タンパク質レベルに合わせて正規化し、ビヒクル処置群と比較した脂質の蓄積の変化として提示した。データは、群あたり８回の繰り返しによる平均±ＳＥＭを表している。
【００９３】
ヒト腎細胞（ＨＫ−２）のインビトロ脂肪腎モデル
ヒト腎ＨＫ−２細胞を、１０％ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭ培地中で、５％ＣＯ２、３７℃で維持した。遊離脂肪酸（オレイン酸とパルミチン酸のモル比２：１）をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と混合した。細胞を、脂肪酸−ＢＳＡ複合体とともに、脂肪酸および１％のＢＳＡの最終濃度１ｍｍｏｌ／ＬにてＦＣＳ不含培地でインキュベートした。対照細胞培養物を、ビヒクル含有培地とともにインキュベートした。化合物を、脂肪酸の存在下／非存在下、様々な濃度で試験した。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、Ｎｉｌｅ−Ｒｅｄ／Ｈｏｅｃｈｓｔ溶液の１μｇ／ｍＬ混合物とともに３７℃で１５分間、遮光してインキュベートした。蛍光を、Ｎｉｌｅ−ＲｅｄおよびＨｏｅｃｈｓｔについて、それぞれ、励起：５３０ｎｍ／発光：６３５ｎｍおよび励起：３５０ｎｍ／発光：４６１ｎｍにてＣｙｔａｔｉｏｎ−３プレートリーダーで測定した。結果は、各ウェルのＨｏｅｃｈｓｔ読み取り値に合わせて正規化し、ビヒクル処置群と比較した脂質の蓄積の変化として提示した。
【００９４】
実施例１
ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２細胞）内の脂質蓄積に対するＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物由来フコキサンチンの効果
最初に、本発明者らは、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物が細胞内脂質蓄積を減少させる能力を調べた。用量依存的な負の相関が観察され（図１）、１３．２μｇ／ｍＬのフコキサンチンを含む４４０μｇ／ｍＬのＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物濃度を、実験を進めるための「設定値」として決定された。
【００９５】
次に、本発明者らは、ＤＨＡおよびＥＰＡと比較した、上記Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値の効力を調べた。どちらの場合も（例えば、ＤＨＡおよびＥＰＡ）、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値は、脂質の蓄積を減少させることにおいてはるかに顕著に強力であることがわかった（それぞれ、図２および図３）。さらに、本発明者らは、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞に、同量の、精製した海藻のフコキサンチンおよびＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物のフコキサンチンを添加した場合であっても、脂質の蓄積阻害に関して、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値は、海藻由来の精製フコキサンチンよりも効率的であることを実証した（図４）。
【００９６】
続いて、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値を、ＤＨＡ（図５）、ＥＰＡ（図６）、およびＤＨＡとＥＰＡ（図７）のいずれかと組み合わせた海藻の精製フコキサンチンと比較して調べた。Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値は、３つの組み合わせのいずれよりも細胞内脂質蓄積を減少させることにおいて顕著に効果的であることがわかった。
【００９７】
Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の有効性をさらに試験するために、現在のＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の組成物を、肝臓保護作用を有する可能性のある市販の抗酸化剤と比較した。したがって、本発明者らは、インビトロでのヒト肝細胞の脂肪肝モデルにおいて、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値をルテインおよびシリマリンと比較した（それぞれ、図８および図９）。どちらの場合も、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物は、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞内の脂質蓄積を減少させることにおいて顕著に強力であることが示された。
【００９８】
脂質蓄積減少という有益な効果が、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物のみに起因するものなのか、部分的にでも担体（例えば、ココナッツ油中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、またはシーバックソーン油）は寄与しないのかをさらに試験するために、抽出物の肝臓保護作用を担体のそれと比較した。したがって、本発明者らは、インビトロでのヒト肝細胞の脂肪肝モデルにおいて、担体の存在下（用量依存的）でのＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の設定値を担体のみと比較し（それぞれ、図１０および図１１、ならびに図１２および図１３）、または担体の存在下でのＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の様々なバッチを比較した（用量依存的；図１４および図１５）。すべての場合において、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物は、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞内の脂質蓄積の減少に対する唯一の寄与因子であることが示された。ココナッツ油またはＭＣＴのいずれかで可溶化されたＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物の有効性に関して有意差は観察されなかった。それでもなお、シーバックソーン油単独では、一部の用量で脂肪の蓄積を誘発さえした可能性がある。
【００９９】
全体として、前述の例においてフコキサンチンを含む微細藻類培養物の様々なバッチを使用し、それらのすべてが、ヒト肝細胞内の脂質蓄積を減少させること関しては、対照よりも有利であることが証明された（図１〜１５）。
【０１００】
実施例２
ヒト腎細胞（ＨＫ−２細胞）内の脂質蓄積に対するＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物由来フコキサンチンの効果
Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ抽出物は、用量依存的に、ＨＫ−２腎細胞内の脂質蓄積を減少させることにおいて非常に効果的であることが示された（図１６）。
【０１０１】
本発明は具体的に記載されているが、当業者は、多くの変形および修正を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、具体的に記載された実施形態に限定されると解釈されるべきではなく、本発明の範囲および概念は、以下の特許請求の範囲を参照することによってより容易に理解されるであろう。
【図１】
2021520343.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
2021520343.tif 000007
【図５】
2021520343.tif 000008
【図６】
2021520343.tif 000009
【図７】
2021520343.tif 000010
【図８】
2021520343.tif 000011
【図９】
2021520343.tif 000012
【図１０】
2021520343.tif 000013
【図１１】
2021520343.tif 000014
【図１２】
2021520343.tif 000015
【図１３】
2021520343.tif 000016
【図１４】
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【図１５】
2021520343.tif 000018
【図１６】
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【国際調査報告】
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