(57)【要約】  本明細書では、異種タンパク質を発現する樹状細胞を投与して免疫応答を誘発することによってがんを治療するための方法及び組成物が開示される。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ９３をコードする異種核酸分子をさらに含む。なおさらなる実施形態では、異種タンパク質を発現する樹状細胞を活性化させる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む樹状細胞。
【請求項２】
前記１つ以上の異種核酸分子は、ＣＤ９３をコードする、請求項１に記載の樹状細胞。
【請求項３】
異種ＣＤ４０Ｌタンパク質と異種ＣＸＣＬ１３タンパク質とを含む樹状細胞。
【請求項４】
異種ＣＤ９３タンパク質をさらに含む、請求項３に記載の樹状細胞。
【請求項５】
ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む、抗原活性化樹状細胞。
【請求項６】
前記１つ以上の異種核酸分子は、ＣＤ９３をコードする、請求項５に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項７】
前記細胞は、１つ以上の抗原への曝露によって活性化される、請求項５または６に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項８】
前記抗原は腫瘍抗原である、請求項７に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項９】
前記抗原はウイルス抗原である、請求項７に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１０】
前記抗原は細胞ライセートである、請求項７〜９のいずれか一項に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１１】
前記細胞ライセートは、前記抗原活性化樹状細胞にとって同種または自己である、請求項１０に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１２】
前記細胞ライセートは、同種メラノーマ細胞ライセートの１つまたは組み合わせを含むライセートである、請求項１０または１１に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１３】
前記同種メラノーマ細胞ライセートは、ＤＤＭ−１．７細胞ライセート、ＤＤＭ−１．１３細胞ライセート、またはそれらの組み合わせである、請求項１２に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１４】
前記細胞ライセートは全細胞ライセートである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１５】
前記細胞ライセートは腫瘍細胞ライセートである、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の抗原活性化樹状細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物であって、異種抗原を含まない、前記組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項１８】
対象における固形腫瘍、がん、または悪性疾患を治療する方法であって、請求項１〜４または１６〜１７に記載の樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかを前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１９】
対象における固形腫瘍、がん、または悪性疾患を治療する方法であって、請求項５〜１４または１５〜１７に記載の樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかを前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２０】
投与前に、前記対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行い、同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルとの交差適合検査を行うこと、及び
前記切除した腫瘍または前記生検標本の前記タンパク質発現プロファイルのうち少なくとも３つの断片が前記同種腫瘍ライセートの前記タンパク質発現プロファイルと交差適合する場合に、同種腫瘍ライセート活性化樹状細胞または活性化樹状細胞組成物を投与すること、をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記同種腫瘍ライセートは、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される同種メラノーマ細胞株に由来する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記樹状細胞は前記対象と同じＨＬＡ型を有していない、請求項１８〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌／大腸癌、リンパ性悪性疾患、膵癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、メラノーマ、ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹部神経膠腫及び混合膠腫等）、膠芽腫（多形膠芽腫としても知られる）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚腫、髄芽腫、シュワン細胞腫  頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移等）からなる群から選択される固形腫瘍である、請求項１８〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
投与経路は、腫瘍内、腫瘍周囲、皮内、皮下、筋肉内、または腹腔内への注射を介する、請求項１８〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記投与することは、皮下注射、腫瘍内注射または皮内注射を介する、請求項１８〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記樹状細胞または前記組成物は、凍結保存され、投与前に解凍される、請求項１８〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記樹状細胞には、投与前に抗原をパルスしない、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記樹状細胞または前記組成物は容器内に凍結もしくは凍結保存されており、かつ、任意選択で、別個の容器に凍結保存された同種腫瘍ライセートを含む、請求項１〜１７に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキット。
【請求項２９】
前記樹状細胞または前記組成物は容器内に凍結もしくは凍結保存されており、任意選択で、別個の容器に凍結もしくは凍結保存された自己腫瘍ライセートを含む、請求項１〜１７に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキット。
【請求項３０】
前記活性化された樹状細胞または前記組成物は容器に入れて凍結される、請求項１０〜１５または１７に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキット。
【請求項３１】
１つ以上の緩衝液を含み、任意選択で１つ以上の活性化剤を含む別個の容器をさらに含む、請求項２９または３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記樹状細胞もしくは前記組成物をインキュベート及び／または処理するための説明書をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
対象におけるがんを治療する方法であって、
投与前に、前記対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行い、同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルとの交差適合検査を行うこと、
切除した腫瘍もしくは生検標本の前記タンパク質発現プロファイルの少なくとも３つの断片が前記同種腫瘍ライセートの前記タンパク質発現プロファイルに適合する場合に、請求項１〜１５に記載の樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかを前記対象に投与すること、あるいは
切除した腫瘍もしくは生検標本の前記タンパク質発現プロファイルの前記少なくとも３つの断片が前記同種腫瘍ライセートタンパク質発現プロファイルに適合しない場合に、
（ａ）請求項１〜１０、１４、または１６に記載の樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかをパルスした自己腫瘍ライセートを含む組成物を前記対象に投与するか、または
（ｂ）抗原をパルスしていない、請求項１〜４または１６に記載の細胞もしくは組成物のうちのいずれかを前記対象に投与すること、を含む、前記方法。
【請求項３４】
請求項１〜４または１６に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、前記対象におけるがんを治療する方法であって、前記樹状細胞または前記組成物は腫瘍抗原をパルスされていない、前記方法。
【請求項３５】
請求項１〜１７に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、前記対象におけるがんを治療する方法であって、前記樹状細胞は腫瘍抗原またはライセートをパルスされている、前記方法。
【請求項３６】
免疫系を活性化する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項１〜１７に記載の樹状細胞または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、前記方法。
【請求項３７】
未熟樹状細胞を作製する方法であって、
ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋及び／またはＣＤ１ａ＋の単球を、未熟樹状細胞へとインビトロで培養することを含む、前記方法。
【請求項３８】
前記未熟樹状細胞と、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、及びｐＩＣのうち１つ以上を含む組成物とを接触させることをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現する前記ＣＤ１４＋単球を作製することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記作製することは、ＣＤ１４＋単球と、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３をコードする１つ以上のベクターとを接触させることを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ベクターは、組換えアデノウイルスベクター、組換えレトロウイルスベクター、もしくは組換えレンチウイルスベクター、またはそれらの組み合わせである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現する前記ＣＤ１４＋単球を前記作製することは、前記単球と、ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋単球を産生する１つ以上のＣＲＩＳＰＲコンストラクトとを接触させることを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＲＩＳＰＲコンストラクトはＣＡＳ９である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記接触させることは、トランスフェクション、形質導入、電気穿孔、感染、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記未熟樹状細胞を凍結することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４６】
前記未熟樹状細胞を、成熟前に自己腫瘍ライセートまたは同種腫瘍ライセートと接触させることをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
前記樹状細胞を成熟後に凍結することをさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＣＤ１４＋単球は、ＣＤ９３を異種発現するようにさらに改変される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４９】
前記同種腫瘍ライセートは、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される同種メラノーマ細胞株に由来する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記ライセートは全細胞ライセートである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記患者において移植片対腫瘍（ＧＶＴ）応答が増大する、請求項１８〜２７または３３〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
前記樹状細胞または前記組成物の投与後４〜１４日の時間枠で、前記患者はさらに、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによるニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋによるキイトルーダ）としても知られるペンブロリズマブ／ランブロリズマブ、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）を含む）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ−１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ−４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）を含む）等の、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）の阻害剤、ＣＴＬＡ−４の拮抗薬（抗ＣＴＬＡ４抗体ヤーボイ（商標）（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、チシリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ−２２４（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）を含む抗ＣＴＬＡ−４抗体等）が含まれる、２種のチェックポイント阻害剤のうちのいずれか１つもしくは組み合わせが含まれる、免疫チェックポイント阻害剤；あるいは腫瘍特異的抗体である、乳癌に対するトラスツズマブ（ハーセプチン）、リンパ腫に対するリツキシマブ（リツキサン）、もしくはセツキシマブ（アービタックス）を投与される、請求項１８〜２７または３３〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
がんを治療するために一般に使用される１つ以上の追加薬剤を投与することをさらに含む、請求項１８〜２７、３３〜３６、５１、または５２のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
前記追加薬剤は、放射線、化学療法、抗体薬物複合体、及び免疫調節抗体から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記化学療法は、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ビノレルビン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、もしくはペメトレキセド、またはそれらの組み合わせ、もしくはそれらの薬学的に許容される塩によるものである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記免疫調節抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、もしくは抗ＯＸ４０抗体、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体薬物複合体は、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ、ＬＲＲＣ１５、ＥＧＦＲ、もしくはＣＳ１、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記治療または前記免疫応答増大は、前記患者が疾患改善または疾患の安定／非進行を示す限り、維持療法として、５日に１回、１０日、１４日に１回、２１日に１回、月１回から、２か月に１回まで、３か月に１回まで、４か月に１回まで、５か月に１回まで、６か月に１回まで、または７か月に１回、または８か月に１回、または９か月に１回、または１０か月に１回、または１１か月に１回、または年１回という時間枠で定期的に繰り返される、請求項１８〜２７、３３〜３６、５１、または５２〜５４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１８年７月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／６９８，２５４号に対する優先権を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１９年７月３日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、１４６６１６＿００３０２＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、サイズは１４，０５１バイトである。
【背景技術】
【０００３】
がん治療は幅広い治療アプローチを包含し、外科療法、放射線療法、化学療法、ならびに細胞を用いる免疫療法が含まれる。これらの様々な治療アプローチにより治療の選択の幅は広がるが、既存の治療法は、正常細胞よりも標的細胞に対する選択性の欠如、毒性、及びがんによる治療抵抗性を含め、多くの欠点に悩まされている。正常細胞よりもがん細胞の主要な細胞プロセスを選択的に妨げる標的治療法を利用した比較的最近のアプローチにより、放射線治療等の非標的化治療と比較して副作用が少ない化学療法レジメンがもたらされた。
【０００４】
がん免疫療法もまた、既存の標準治療を強化及び補完する有望な治療アプローチとして出現してきている。例えば、非特許文献１を参照のこと。これらのアプローチには、免疫系を調節してがん細胞を死滅させるための抗体利用が含まれる。固形腫瘍の一部の患者における抗腫瘍免疫応答は抗ＰＤ１治療により増強された。しかしながら、そのような治療に応答性であるのはごく一部の患者に限られており、このことは、既存の治療法の標準治療を強化及び補完する、追加のアプローチ及びさらなるがん治療の必要性を強調している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ；２７：４３９−４４９（２０１５）
【発明の概要】
【０００６】
本明細書では、ＣＤ４０Ｌ及び／またはＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む樹状細胞が提供される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種核酸分子は、ＣＤ９３をコードする。
【０００８】
本明細書ではさらに、異種ＣＤ４０Ｌタンパク質と異種ＣＸＣＬ１３タンパク質とを含む樹状細胞が提供される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、細胞は、異種ＣＤ９３タンパク質をさらに含む。
【００１０】
本明細書ではさらに、抗原活性化樹状細胞が提供され、かかる樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び／またはＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の異種核酸分子は、ＣＤ９３をコードする。
【００１１】
いくつかの実施形態では、抗原活性化樹状細胞は、１つ以上の抗原への曝露によって活性化される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。
【００１３】
いくつかの実施形態では、抗原は、ウイルス抗原である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、抗原は、細胞ライセートである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、細胞ライセートは、抗原活性化樹状細胞にとって同種または自己である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、細胞ライセートは、同種メラノーマ細胞ライセートの１つまたは組み合わせを含むライセートである。
【００１７】
いくつかの実施形態では、同種メラノーマ細胞ライセートは、ＤＤＭ−１．７細胞ライセート、ＤＤＭ−１．１３細胞ライセート、またはそれらの組み合わせである。
【００１８】
いくつかの実施形態では、細胞ライセートは、全細胞ライセートである。
【００１９】
いくつかの実施形態では、細胞ライセートは、腫瘍細胞ライセートである。
【００２０】
本明細書ではさらに、本明細書に記載される細胞を含む組成物（組換え樹状細胞もしくは活性化細胞、または関連組成物）が提供され、かかる組成物は異種抗原を含まない。
【００２１】
本明細書ではさらに、本明細書で提供される細胞を含む医薬組成物が提供される。
【００２２】
本明細書ではさらに、本明細書で提供される細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、対象における固形腫瘍、がん、または悪性疾患を治療する方法が提供される。
【００２３】
本明細書ではさらに、本明細書で提供される細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、対象における固形腫瘍、がん、または悪性疾患を治療する方法が提供される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、方法は、
投与前に、対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行い、同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルとの交差適合検査を行うこと、及び
切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのうち少なくとも３つの断片が同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルと交差適合する場合に、同種腫瘍ライセート活性化樹状細胞または活性化樹状細胞組成物を投与すること、をさらに含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、同種腫瘍ライセートは、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される同種メラノーマ細胞株に由来する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は対象と同じＨＬＡ型を有していない。
【００２７】
いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌／大腸癌、リンパ性悪性疾患、膵癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、メラノーマ、ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹部神経膠腫及び混合膠腫等）、膠芽腫（多形膠芽腫としても知られる）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚腫、髄芽腫、シュワン細胞腫  頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移等からなる群から選択される固形腫瘍である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、投与経路は、腫瘍内、腫瘍周囲、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内への注射を介する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、投与することは、皮下注射、腫瘍内注射または皮内注射を介する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、樹状細胞または組成物を、凍結または凍結保存し、投与前に解凍する。
【００３１】
いくつかの実施形態では、樹状細胞には、投与前に抗原をパルスしない。
【００３２】
本明細書ではさらに、本明細書で提供される樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、樹状細胞または組成物は、容器内に凍結または凍結保存されており、任意選択で、別個の容器に凍結もしくは凍結保存された同種腫瘍ライセートを含む。
【００３３】
本明細書ではさらに、本明細書に記載される樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキットが提供され、かかる樹状細胞または組成物は容器内に凍結もしくは凍結保存されており、任意選択で、別個の容器に凍結もしくは凍結保存された自己腫瘍ライセートを含む。
【００３４】
本明細書ではさらに、本明細書に記載される樹状細胞または組成物のうちのいずれかを含むキットが提供され、かかる活性化された樹状細胞または組成物は容器内に凍結もしくは凍結保存されている。
【００３５】
いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の緩衝液を含み、任意選択で１つ以上の活性化剤を含む、別個の容器をさらに含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、キットは、樹状細胞もしくは組成物をインキュベート及び／または処理するための説明書をさらに含む。
【００３７】
本明細書ではさらに、対象におけるがんを治療する方法であって、
投与前に、対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行い、同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルとの交差適合検査を行うこと、
切除した腫瘍もしくは生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つの断片が同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルに適合する場合に、本明細書で提供される樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかを対象に投与すること、あるいは
切除した腫瘍もしくは生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つの断片が同種腫瘍ライセートタンパク質発現プロファイルに適合しない場合に、
（ａ）本明細書に記載される樹状細胞もしくは組成物のうちのいずれかをパルスした自己腫瘍ライセートを含む組成物を対象に投与するか、または
（ｂ）抗原をパルスしていない、本明細書に記載される細胞もしくは組成物のうちのいずれかを対象に投与すること、を含む方法が提供される。
【００３８】
本明細書ではさらに、本明細書で提供されるような樹状細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法が提供され、かかる樹状細胞または組成物は、腫瘍抗原をパルスされていない。
【００３９】
本明細書ではさらに、本明細書で提供されるような樹状細胞または組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法が提供され、かかる樹状細胞は、腫瘍抗原またはライセートをパルスされている。
【００４０】
本明細書ではさらに、免疫系を活性化させる方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載される樹状細胞または組成物のうちのいずれかを投与することを含む方法が提供される。
【００４１】
本明細書ではさらに、未熟樹状細胞を作製する方法であって、
ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋及び／またはＣＤ１ａ＋の単球を、未熟樹状細胞へとインビトロで培養することを含む方法が提供される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、方法は、未熟樹状細胞と、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、及びｐＩＣのうち１つ以上を含む組成物とを接触させることを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋単球を作製することをさらに含む。
【００４４】
いくつかの実施形態では、作製することは、ＣＤ１４＋単球と、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３をコードする１つ以上のベクターとを接触させることを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態では、ベクターは、組換えアデノウイルスベクター、組換えレトロウイルスベクター、もしくは組換えレンチウイルスベクター、またはそれらの組み合わせである。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋単球を作製することは、単球と、ＣＤ４０Ｌと、ＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを異種発現するＣＤ１４＋単球を産生する１つ以上のＣＲＩＳＰＲコンストラクトとを接触させることを含む。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲコンストラクトはＣＡＳ９である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、接触させることは、トランスフェクション、形質導入、電気穿孔、感染、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、方法は、未熟樹状細胞を凍結することをさらに含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、方法は、未熟樹状細胞を、成熟前に自己腫瘍ライセートまたは同種腫瘍ライセートと接触させることをさらに含む。
【００５１】
いくつかの実施形態では、方法は、樹状細胞を成熟後に凍結することをさらに含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１４＋単球は、ＣＤ９３を異種発現するようにさらに改変される。
【００５３】
いくつかの実施形態では、同種腫瘍ライセートは、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される同種メラノーマ細胞株に由来する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、ライセートは全細胞ライセートである。
【００５５】
いくつかの実施形態では、患者において移植片対腫瘍（ＧＶＴ）応答が増大する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、患者は、樹状細胞または組成物の投与後４〜１４日の時間枠で、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによるニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋによるキイトルーダ）としても知られるペンブロリズマブ／ランブロリズマブ、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）を含む）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ−１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ−４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）を含む）等の、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）の阻害剤、ＣＴＬＡ−４の拮抗薬（抗ＣＴＬＡ４抗体ヤーボイ（商標）（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、チシリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ−２２４（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）を含む抗ＣＴＬＡ−４抗体等）が含まれる、２種のチェックポイント阻害剤のうちのいずれか１つもしくは組み合わせが含まれる、免疫チェックポイント阻害剤；あるいは腫瘍特異的抗体である、乳癌に対するトラスツズマブ（ハーセプチン）、リンパ腫に対するリツキシマブ（リツキサン）、もしくはセツキシマブ（アービタックス）をさらに投与される。
【００５７】
いくつかの実施形態では、方法は、がんを治療するために一般に使用される１つ以上の追加薬剤を投与することをさらに含む。
【００５８】
いくつかの実施形態では、追加薬剤は、放射線、化学療法、抗体薬物複合体、及び免疫調節抗体から選択される。
【００５９】
いくつかの実施形態では、化学療法は、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ビノレルビン、ビンブラスチン、イリノテカン、エトポシド、もしくはペメトレキセド、またはそれらの組み合わせ、もしくはそれらの薬学的に許容される塩によるものである。
【００６０】
いくつかの実施形態では、免疫調節抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、もしくは抗ＯＸ４０抗体、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００６１】
いくつかの実施形態では、抗体薬物複合体は、ｃ−Ｍｅｔキナーゼ、ＬＲＲＣ１５、ＥＧＦＲ、もしくはＣＳ１、またはそれらの任意の組み合わせを標的とする。
【００６２】
いくつかの実施形態では、治療または免疫応答の増大は、患者が疾患改善または疾患の安定／非進行を示す限り、維持療法として、５日に１回、週１回、１０日に１回、１４日に１回、２１日に１回、月１回から、２か月に１回まで、３か月に１回まで、４か月に１回まで、５か月に１回まで、６か月に１回まで、または７か月に１回、または８か月に１回、または９か月に１回、または１０か月に１回、または１１か月に１回、または年１回という時間枠で定期的に繰り返される。
【００６３】
本明細書では、異種タンパク質を発現する樹状細胞を投与して免疫応答を誘発することによってがんを治療するための方法及び組成物が開示される。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ９３をコードする異種核酸分子をさらに含む。さらなる実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。さらなる実施形態では、樹状細胞は、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ＬとＣＸＣＬ１３と、任意選択でＣＤ９３とを過剰発現する樹状細胞は、抗原活性化樹状細胞であり得る。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原またはウイルス抗原であり得る。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、対象にとって同種または自己である。
【００６５】
さらなる実施形態では、対象におけるがんを治療する方法は、樹状細胞を含む組成物を対象に投与することを含み、ここで、樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３から選択される１つ以上のタンパク質を過剰発現する。いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルを取得すること、
（ｂ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルと、メラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルとを比較すること、及び
（ｃ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つのマーカーがメラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルに適合する場合には、樹状細胞とメラノーマ細胞ライセートとを共培養して樹状細胞を活性化させ、活性化された樹状細胞を含む組成物を対象に投与すること、
または
（ｄ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つのマーカーがメラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルに適合しない場合には、樹状細胞と自己腫瘍または生検ライセートとを共培養して樹状細胞を活性化させ、自己で活性化された樹状細胞を含む組成物を対象に投与すること、をさらに含む。
【００６６】
さらなる実施形態では、未熟樹状細胞を作製する方法は、
（ａ）対象からＣＤ１４＋単球を単離すること、
（ｂ）単離されたＣＤ１４＋単球でＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を過剰発現させること、及び
（ｃ）インビトロでＣＤ１４＋単球を未熟樹状細胞に分化させること、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１Ａ】図１は、特定の免疫細胞における様々な発現及び活性化のプロセスを示す図、概略図である。図１Ａは、ＣＤ４０Ｌ発現の作用機序を示す図である。
【図１Ｂ】図１は、特定の免疫細胞における様々な発現及び活性化のプロセスを示す図、概略図である。図１Ｂは、ＣＸＣＬ１３発現の免疫動員プロセスを示す図である。
【図１Ｃ】図１は、特定の免疫細胞における様々な発現及び活性化のプロセスを示す図、概略図である。図１Ｃは、がん免疫サイクルを示す概略図である。
【図１Ｄ】図１は、特定の免疫細胞における様々な発現及び活性化のプロセスを示す図、概略図である。図１Ｄは、樹状細胞成熟の様々な段階を示す概略図である。
【図２Ａ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図２Ｂ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図２Ｃ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図２Ｄ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図２Ｅ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図２Ｆ】表現型及び純度の評価のための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球のフローサイトメトリー画像である。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｂ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｃ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｄ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｅ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｆ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｇ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｈ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｉ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｊ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｋ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｌ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｍ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｎ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｏ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図３Ｐ】図３Ａ〜図３Ｐは、未熟同種樹状細胞（ａｌｌｏＤＣ）試料の表現型を示すフローサイトメトリー画像である。試料が以下のマーカーについて分析されたことを示している：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ：（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４−、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ２０９、ＣＤ４０Ｌ。
【図４】未熟組換えａｌｌｏＤＣが貪食能を示すことを示すフローサイトメトリー画像である。
【図５】カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）染色の希釈により示される、ａｌｌｏＤＣで刺激された同種Ｔ細胞の増殖についての蛍光指示薬の画像である。
【図６】患者の大腸腫瘍の、自己腫瘍搭載ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ワクチンによる治療の前（図６Ａ）及び６か月後（図６Ｂ）の画像である。
【図７】患者の大腸腫瘍からの多発性肝転移の、自己腫瘍搭載ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ワクチンによる治療の前（図７Ａ、図７Ｃ）及び６か月後（図７Ｂ及び図７Ｄ）の画像である。
【図８】患者の転移性浸潤性乳管腫瘍の、自己腫瘍搭載ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ワクチンによる治療の前（図８Ａ、図８Ｃ）及び６か月後（図８Ｂ及び図８Ｄ）の画像である。
【図９】本明細書に記載される組換えａｌｌｏＤＣワクチンを投与するための例示的概要を示す概略図である。
【図１０】ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３を発現するか、またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３の三重発現を発現する組換えＤＣの場合の共培養におけるＴ細胞増殖を示すグラフであり、三重発現が最も大量のＴ細胞増殖を示している。
【図１１】は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３を発現するか、またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３の三重発現を発現する組換えＤＣの場合の共培養におけるＮＫ細胞増殖を示すグラフであり、三重発現が最も大量のＮＫ細胞増殖を示している。
【図１２】４日目のＣＤ１９＋細胞でのＣＤ６９発現レベルをフローサイトメトリーで決定することによってＢ細胞活性化を決定するための細胞分類画像である。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
本実施形態は、部分的には、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３で形質導入された樹状細胞に関連する方法及び組成物を対象とする。ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３は、ヒトであり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３は、げっ歯類（マウスまたはラット）またはブタである。異種発現させたタンパク質を含む細胞は、組換え細胞と呼ばれ得る。組成物は、固形腫瘍を有する対象及び悪性疾患を有する対象に対するワクチン接種及び／または免疫アジュバントとしての、組換えＤＣ（樹状細胞）単独の組成物であり得るか、あるいは代替的実施形態では、組換えＤＣ細胞は、細胞と腫瘍ライセートとを接触させること（「搭載すること」とも呼ばれ得る）、または代替として、同種（「既製」）腫瘍ライセートを搭載することによって、抗原活性化され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍ライセートは、樹状細胞の供給源に関して同種である。いくつかの実施形態では、腫瘍ライセートは、樹状細胞の供給源に関して自己である。
【００６９】
樹状細胞（ＤＣ）は、プロフェッショナルな抗原処理細胞である。それらの細胞は、抗原の取り込みを高めるいくつかの受容体を有しており、またそれらは、これらの抗原を、リンパ球が認識することのできるＭＨＣ−ペプチド複合体に変換することに特化している。
【００７０】
理論に束縛されることは望まないが、本組成物及び本方法は、少なくとも部分的に、組換え（または遺伝子導入）樹状細胞が、注射部位で混合白血球反応（ＭＬＲ）を生じさせる能力に基づいている。周知の臨床アッセイであるＭＬＲで試験した際、本明細書に記載される組換えａｌｌｏＤＣは、主要な刺激因子であり、また異常に強力であった。いくつかの実施形態では、ＤＣは、対象にとって同種であり得る。そのような実施形態では、ＤＣは、ａｌｌｏＤＣと呼ばれ得る。ａｌｌｏＤＣは、それらが投与される対象と比較した場合に同種である細胞である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、患者のＴ細胞及びＢ細胞の誘引を最大限にして、抗腫瘍の細胞性及び液性免疫応答のカスケードを引き起こすために、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及び／またはＣＸＣＬ１３で形質導入される。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３で形質導入される。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３で形質導入される。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３で形質導入される。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３で形質導入される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ９３で形質導入されない。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【００７２】
任意選択のさらなる実施形態では、ＣＤ４０Ｌ＋及びＣＸＣＬ１３＋のａｌｌｏＤＣへのＣＤ９３形質導入により、同種ＤＣと宿主ＤＣ間のクロストークが促進され、安定かつ持続性の宿主抗腫瘍免疫原性が作り出される。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３（及び任意選択でＣＤ９３）または本明細書に記載のようなそれらの任意の組み合わせをコードする組換えベクターをヒトＣＤ１４＋単球にトランスフェクトし、ヒト単球で安定して発現されるようにする。陽性に形質導入された単球は選択することができ、その後、かかる単球は、インビトロで未熟ＤＣ及び／または成熟ＤＣに分化させることができる。切除及び生検を行った悪性患者の場合、自己腫瘍ライセートを生成することができ、腫瘍ライセートは、未熟組換えａｌｌｏＤＣ（組換えｉｍ  ａｌｌｏＤｃ）に提示されて、自己腫瘍ライセートが組換えｉｍ  ａｌｌｏＤｃによるプロセスを受けるようにすることができる。いくつかの実施形態では、切除した腫瘍標本及び生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行う。発現プロファイリングで、少なくとも３つの断片がＧＭＰ−ＭＣＶと共有されることが示される場合には、組換えｉｍＤＣは、ＤＣが成熟する前にインビトロでＧＭＰ−ＭＣＶを搭載される。切除不能及び生検不能である患者の場合はいずれも、組換えＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ａｌｌｏＤＣ（または任意選択でさらにＣＤ９３＋が含まれる）を免疫アジュバントとして、抗原は搭載せずに患者に投与することができる。このＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋（任意選択の）ＣＤ９３  ＡｌｌｏＤＣのアプローチを使用することにより、末期段階のがん患者は、腫瘍抗原に対して新たな抗腫瘍の細胞性及び液性免疫応答を開始して、いかなる特定の機序にも拘束されずに、免疫応答を高めることができる。
【００７４】
組換えＤＣを活性化させるために使用され得る別の腫瘍ライセートには、ＤＤＭ−１．７及び／またはＤＤＭ−１．１３が含まれる。ＤＤＭ−１．７及びＤＤＭ−１．１３の記載は、米国特許第７，７７１，９９８号及び同第７，７２３，１０７号（公的に入手可能なそれぞれの寄託情報：ＥＣＡＣＣ０１１１２３３９及びＥＣＡＣＣ０１１１２３３８を含む）に見ることができ、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７５】
本明細書で使用される場合、未熟である樹状細胞は、ＣＤ１ａ陽性、ＣＤ１４陰性、及びＣＤ８３陰性／低というマーカー特性を有するものである。
【００７６】
いくつかの実施形態では、樹状細胞の供給源は、ドナーの末梢血由来であり得、ＣＤ１４＋単球またはＣＤ３４＋細胞に由来する樹状細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、ドナーは、本明細書に記載される樹状細胞及び組成物で治療される対象と同じではない。
【００７７】
近年、Ｔ細胞、特にナイーブＴ細胞への抗原送達の効率的な方法は、樹状細胞を手段とするものであることが認識されている。樹状細胞（ＤＣ）は、最も効率的な抗原提示細胞であり、ＤＣを用いた免疫療法はすでにがん治療の様々な状況で使用されており（（Ｋｕｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，ｖ．６，ｐｐ．３３２−３３６、Ｎｅｓｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ（Ｍｅｄ．），ｖ．４，ｐｐ．３２８−３３２、Ｔｈｕｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，ｖ．１９０，ｐｐ．１６６９−１６７８））、この方法による免疫の効力の高さを示している。
【００７８】
ＤＣ特有の特性の１つは、それらがエンドサイトーシスにより外因性タンパク質を取り込む能力であり、取り込まれた外因性タンパク質は次に、プロセスを受け、ＭＨＣクラスＩ抗原と共にペプチドエピトープとしてＤＣ表面に提示される。抗原を提示している樹状細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞によって認識され得る。この特性は、腫瘍細胞抗原を、外因的に加えられる腫瘍ライセートまたはアポトーシス小体の形態で利用する場合に重要なことである。高い細胞内活性は、未熟ＤＣと成熟ＤＣの比較を基にすると、ＤＣの分化の未熟段階に関連すると考えられている、（Ｓａｌｌｕｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，ｖ．１８２，ｐｐ．３８９−４００）。
【００７９】
いくつかの実施形態では、組換え樹状細胞は、組換え樹状細胞に腫瘍細胞ライセート及び／または抗原を搭載する前もしくは搭載中、インターフェロン−アルファ（ＩＦＮ−α）及び／または５’−アザ−２’デオキシシチジン（Ａｚａ）で処理される。ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／５３１６１６を参照のこと。
【００８０】
いくつかの実施形態では、精製ヒトＣＤ１４＋単球は、ヒトのＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３のコンストラクト、及び任意選択でＣＤ９３のコンストラクトも含む、アデノウイルスまたはレンチウイルスのベクター等の組換えベクターで形質導入され、これにより、精製されたヒト単球上に組換え分子を発現させることができる。その後、陽性に形質導入された単球を選択し、次いで、これらをインビトロで未熟ＤＣ（ｉｍＤＣ）に分化させ、これらを組換え同種ＤＣ（組換えａｌｌｏＤＣ）とする。いくつかの実施形態では、発現は、安定発現である。いくつかの実施形態では、発現は、過剰発現である。「過剰発現」とは、天然発現レベルに対して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、または５００％超えているレベルを指す。天然発現レベルとは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３等、目的の異種タンパク質またはタンパク質を発現するようなベクターでの形質導入が行われていない細胞の発現レベルを指す。
【００８１】
樹状細胞の様々な段階及び成熟／活性化因子についての記載は図１Ｄに示されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＦｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：４３８を参照のこと）。
【００８２】
いくつかの実施形態では、組換えＤＣと成熟因子とを、腫瘍細胞ライセート及び／または抗原を搭載した後で接触させることによって細胞を成熟させる。そのような成熟因子には、少なくとも、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＰＧＥ２、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態では、組換えＤＣと成熟因子とを接触させてから、腫瘍細胞ライセート及び／または抗原と接触させることによって細胞を成熟させる。いくつかの実施形態では、ＤＣを成熟因子で成熟させ、腫瘍細胞ライセート及び／または抗原と接触させない。いくつかの実施形態では、組換え樹状細胞を、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、Ｆｌｔ−３１、ＳＣＦ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択されるサイトカインと共に培養またはインキュベートする。
【００８３】
略語
ＷＢＣ：白血球
ＩＰＡ：７０％イソプロピルアルコール
ＱＡ：品質保証
ＱＣ：品質管理
Ｖｏｌ．：体積
ＲＴ：室温
ＤＣ：樹状細胞
ｉｍＤＣ：未熟樹状細胞
ｍＤＣ：成熟樹状細胞
ＡｌｌｏＤＣ：同種樹状細胞
ＭＣＶ：ＭａｌＣａｎｃｅｒＶａｃ
ＧＭ−ＣＳＦ：顆粒球マクロファージコロニー刺激因子
ＩＬ−４：インターロイキン４
ＩＬ−１β：インターロイキン１β
ＩＬ−１５：インターロイキン１５
ＴＮＦα：腫瘍壊死因子α
ｐＩＣ：ポリイノシン：ポリシチジン酸
ＩＦＮ−α：インターフェロンα
ＩＦＮ−γ：インターフェロンγ
ＣＸＣＬ１３：Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカインリガンド１３
ＣＤ４０Ｌ：ＣＤ４０リガンド
ＭＡＧＥ：メラノーマ関連抗原
ＭＯＩ：感染多重度
【００８４】
本出願及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈で特に明確に指示されない限り、複数形が含まれる。さらに、用語「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」を意味する。
【００８５】
用語「患者」と「対象」は置き換え可能であり、本発明の化合物で治療され得るあらゆる生物を意味すると解釈されてよい。したがって、用語「患者」及び「対象」には、任意の非ヒト哺乳類、霊長類またはヒトが含まれ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、「患者」または「対象」は、マウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、霊長類、またはヒト等の哺乳類である。いくつかの実施形態では、患者または対象は、成人、小児または乳児である。いくつかの実施形態では、患者または対象はヒトである。
【００８６】
用語「約」とは、数値の直前に置かれる場合、その値のプラスマイナス１０％の範囲を意味し、例えば、「約５０」は４５〜５５を意味し、「約２５，０００」は２２，５００〜２７，５００を意味する等であるが、開示の文脈で他に指示されるか、またはそのような解釈と矛盾する場合はその限りではない。例えば、「約４９、約５０、約５５」等の数値の列挙では、「約５０」は、直前及び後続の値との間隔（複数可）の半分未満まで拡大した範囲、例えば、４９．５超から５２．５未満までを意味する。さらに、「約（値）未満」または「約（値）超」という語句は、本明細書で提供される用語「約」の定義を考慮して理解されるべきである。さらに、ある範囲が、「約Ｘ〜Ｙ」のように書かれている場合、文脈で他に指示されない限り、「約」はＸとＹの両方の値を修飾する。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」または「投与」という用語は、目的薬剤とも呼ばれ得る、化合物、細胞、組成物、または医薬組成物のいずれかを直接投与することを指す。いくつかの実施形態では、組成物は、ウイルスまたは細菌の粒子を除去するために滅菌または濾過されている。
【００８８】
「同時投与」等の用語は、単一患者に対する選択治療剤の投与を包含することを意味し、同一もしくは異なる投与経路、または同時もしくは異なる時間により薬剤が投与される治療レジメンが含まれることが意図される。
【００８９】
ある組成物の「治療的有効量」とは、所望の効果を達成するため、すなわち、患者の望ましくない状態、疾患もしくは症状を改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、予防する、または改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）ために十分な量である。本方法により意図される活動には、必要に応じて、治療的処置及び／または予防的処置のいずれも含まれ得る。具体的な用量は、例えば、投与される治療薬、投与経路、及び治療される状態を含め、その症例を取り巻く特定の状況によって決定することができる。投与される有効量は、治療される状態、投与されるべき治療薬の選択、及び選択投与経路を含め、関連する状況に鑑みて医師により決定され得る。
【００９０】
用語「阻害する」には、症状の発症を予防する、症状を軽減する、または疾患、状態もしくは障害を消失させるための、本明細書の実施形態の治療薬の投与が含まれる。
【００９１】
「薬学的に許容される」とは、担体、希釈剤または添加物は、治療薬の他の成分との適合性があり、そのレシピエントにとって有害であってはならないこと意味する。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療される」、または「治療すること」とは、治療的処置及び予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的な状態、障害もしくは疾患を、阻害するか、予防するか、もしくは減速させる（減少させる）こと、あるいは臨床結果を改善するか、阻害するか、または他の方法で有益もしくは所望の臨床結果を得ることである。有益または所望の臨床結果には、症状の改善または軽減；状態、障害または疾患の程度の減弱；状態、障害または疾患の状態の安定化（すなわち、悪化させない）；状態、障害もしくは疾患の、発症の遅延または進行の減速；状態、障害または疾患の状態の改善；及び状態、障害もしくは疾患の、検出可能か検出不能かを問わない寛解（部分寛解、完全寛解を問わない）、または増強もしくは改善が含まれるが、これらに限定されない。治療には、過剰なレベルの副作用を伴わずに、臨床上重要な応答を誘発することが含まれる。治療にはまた、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較した生存期間延長も含まれる。
【００９３】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」と同義である移行用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的または非限定的であり、追加の記述されていない要素または方法ステップを除外しない。対照的に、移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、特許請求の範囲で特定されていない、いかなる要素、ステップ、または成分も除外する。「本質的に〜からなる」という移行句は、特許請求の範囲を、特定された材料またはステップ及び請求項に係わる発明の「基本的かつ新規な特徴（複数可）に実質的に影響を及ぼさない材料またはステップ」に限定する。含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）という用語が移行句として使用されている実施形態または請求項では、そのような実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で置き換えることを想定することもできる。
【００９４】
本明細書では、異種タンパク質を発現する樹状細胞を投与して免疫応答を誘発することによってがんを治療するための方法及び組成物が開示される。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【００９５】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は、それらが投与される対象に関して同種であり、そのため、ＨＬＡ発現により制限されることがない。対象と比較して同種であるという細胞の性質は、改善された抗腫瘍効果を開始させるための追加利点である。
【００９６】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は、それらが投与される対象にとって自己であり得る。
【００９７】
したがって、理論に束縛されることは望まないが、本発明の態様は、患者において、がん（腫瘍）に対する改善された免疫応答を誘発するために、異種タンパク質を発現する樹状細胞（例えば、組換えａｌｌｏＤＣ）を患者に提供することに関する。本明細書に記載される方法及び組成物には、以前の組成物及び方法に対して多くの利点があり、これには、フィーダー細胞との共培養がないこと、ならびに組換えａｌｌｏＤＣのため、及び任意選択で自己抗原または「既製」抗原を搭載するためのインビトロでの培養／インキュベーション時間が短いことにより、細胞組成物の汚染リスクが最小限に抑えられること、及び細胞組成物の調製と患者への送達が容易かつ迅速であることが挙げられ、これらに、細胞組成物による副作用が極最小限であり、典型的にはわずかグレード１（またはそれより少ない副作用）であることが伴う。これらの組換えａｌｌｏ−ＤＣ細胞及び組成物により、細胞性と液性の両方の免疫応答が患者に誘発されるという追加利点が提供される。さらに、ＨＬＡ不適合のＤＣに対する宿主のアロ反応性により、腫瘍特異的な免疫応答が増幅される。これらの方法はまた、ワクチン同様にがん標的を認識して死滅させるよう、宿主の患者免疫細胞をトレーニングして、宿主の細胞性及び液性の応答を高める「ワクチン効果」を提供するのに役立つ。いくつかの実施形態では、細胞を受け取る対象は、細胞を異物と見なして、その細胞に対する免疫応答を開始し、これは、細胞を拒絶すると言われ得る。この「拒絶」は、対象の腫瘍特異的免疫応答を増幅させることができる。
【００９８】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」とは、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然供給源または組換え供給源に由来する無傷の免疫グロブリンであり得、また無傷の免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）２、ならびに一本鎖抗体及びヒト化抗体を含む、様々な形態で存在してよい。
【００９９】
用語「抗体断片」とは、無傷抗体の一部を指し、無傷抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖの各断片、線状抗体、ｓｃＦｖ抗体、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本明細書で使用される場合、用語「抗原」は、免疫応答を誘発する分子と定義される。この免疫応答は、抗体産生、もしくは特定の免疫学的コンピテントセルの活性化、またはその両方、のいずれを伴ってもよい。抗原はまた、ＤＣを活性化させるためにインビトロで使用することもでき、これは、免疫応答に匹敵する。当業者は、事実上すべてのタンパク質またはペプチドを含め、いかなる巨大分子も抗原として使用できることを理解できよう。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含むいかなるＤＮＡも、本明細書で「抗原」という用語が使用されるところの「抗原」をコードすることを理解できよう。さらに、当業者は、抗原が、ある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解できよう。実施形態には、２つ以上の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用が含まれるが、これらに限定されないこと、及びこれらのヌクレオチド配列は、所望の免疫応答を誘発するよう様々な組み合わせで配置されることは、すぐに明らかとなる。さらに、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要はまったくないことを理解できよう。抗原は、合成で作製することも、また生体試料に由来することも可能なことは、すぐに明らかとなる。そのような生体試料には、組織試料、腫瘍標本、細胞または生体液が含まれ得るが、これらに限定されない。本明細書に記載されるように、抗原は、腫瘍細胞ライセートであり得る。腫瘍細胞ライセートの例には、本明細書に記載されるもの、腫瘍生検または腫瘍切除から調製されたライセートが含まれるが、これらに限定されない。ライセートを調製する方法は知られており、いずれの方法も使用することができる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「がん」は、異常細胞の急速かつ制御されない増殖を特徴とする疾患と定義される。がん細胞は、局所的に、または血流及びリンパ系を介して体の他の部分へと広がり得る。様々ながんの例には、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、大腸癌、腎癌、肝癌、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、肺癌等が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０２】
治療され得るがんには、血管が新生していないか、または血管がまだ実質的に新生していない腫瘍、及び血管が新生している腫瘍が含まれる。本明細書に記載される組換え樹状細胞で治療されるがん種には、癌腫、芽細胞腫、及び肉腫、ならびに特定の白血病またはリンパ性悪性疾患、良性及び悪性の腫瘍、ならびに悪性疾患、例えば、肉腫、癌腫、及びメラノーマ等が含まれるが、これらに限定されない。成人の腫瘍／がん及び小児の腫瘍／がんもまた含まれる。
【０１０３】
固形腫瘍は、組織の異常な塊であり、通常は嚢胞または液体領域を含有しない。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。腫瘍を形成する細胞の種類にちなんで、様々な種類の固形腫瘍が命名されている（肉腫、癌腫、及びリンパ腫等）。肉腫及び癌腫等の固形腫瘍の例には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、メラノーマ、ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹部神経膠腫及び混合膠腫等）、膠芽腫（多形膠芽腫としても知られる）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚腫、髄芽腫、シュワン細胞腫  頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移等）が含まれる。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、用語「抗腫瘍効果」とは、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移の数の減少、余命の延長、またはがん状態に関連した様々な生理的症状の改善によって示され得る、生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、組換え細胞及び治療用組成物が、まず最初に腫瘍の発現を予防する能力によっても示され得る。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、用語「自己」とは、任意の材料であって、後でそれが再導入されるべき個体と同一の個体に由来するものを指すことが意図される。
【０１０６】
「同種」とは、試料（移植片、細胞、または細胞の集団）であって、後で試料が導入される動物と同じ種の異なる動物に由来するものを指す。いくつかの実施形態では、組換え樹状細胞は、組換え樹状細胞を受け取る対象と比べて完全にＨＬＡ不適合であり、ＨＬＡ−Ａ、−Ｂ、及び−ＤＲを適合させることが移植片生着にとって有益である腎移植及び骨髄移植での状況とは異なる。がんを治療する、及び／または免疫応答を高める、及び／または免疫応答を改善するための本方法では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３を発現する組換え樹状細胞は、Ｔ細胞を誘引して、例えば、液性免疫応答を生じさせることができ、これが、がん細胞を標的としてそれらに結合し、それらを死滅させる役割を果たし、腫瘍細胞抗原を放出する。このサイクルは、同種組換え樹状細胞では、これらの細胞が宿主細胞の免疫応答によって死滅させられるまで何度も繰り返される。これは、例えば、約４〜約７日以内（場合によっては、より長い範囲の約４〜約１５日の間）に起こり得る。したがって、同種組換えＤＣのそのように短い寿命では、ＧＶＨＤ（移植片対宿主病）のリスクは低下しているかまたはまったくない。しかしながら、その約４〜約７日という期間、腫瘍細胞を認識して死滅させ、抗原を放出する過程において、いくつかの実施形態では、同種細胞は、腫瘍細胞を認識して死滅させるよう宿主の樹状細胞及び他の免疫細胞にワクチン接種する役割を果たすことができる。参照により全体が本明細書に組み込まれる総説Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．２０１９  Ｊａｎ；１１０（１）：１６−２２をさらに参照のこと。抗腫瘍免疫の誘導は、自己増殖的であり得る循環過程である。これは、がん細胞に対するＴ細胞応答を増幅して拡張することができる。この循環過程はまた、それ自体、標的細胞（がん細胞）が根絶された場合にサイクルを停止させるためのいくつかの抑制因子を含んでいる。サイクルは、図１Ｃに示されるように、７つのステップに分けることができ、がん細胞からのがん抗原の放出に始まり、がん細胞の殺滅で終わる。ＡＰＣは抗原提示細胞、ＤＣは樹状細胞である。
【０１０７】
「疾患」は、対象が恒常性を維持できず、また疾患を改善させなければその動物の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象の「障害」は、対象が恒常性を維持することはできるが、対象の健康状態は、障害がない場合に考えられるものよりも好ましくない健康状態である。未治療で放置した場合、障害により、必ずしも対象の健康状態のさらなる悪化が引き起こされるわけではない。
【０１０８】
「コードすること」とは、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ等のポリヌクレオチド中の、特定の配列のヌクレオチドの固有特性を指し、これは、定義された配列のヌクレオチド（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）または定義された配列のアミノ酸のいずれか及びそれらから生じる生物学的特性を有する、生物学的プロセスでの他のポリマー及び巨大分子の合成用鋳型として機能する。したがって、ある遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳により細胞内または他の生物系でタンパク質が生成される場合、その遺伝子はそのタンパク質をコードする。ｍＲＮＡ配列と同一であり、通常、配列表に提供されるヌクレオチド配列であるコード鎖、及び遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される非コード鎖のいずれも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると言うことができる。本明細書で使用される場合、目的タンパク質をコードするベクターとは、そのタンパク質またはタンパク質（複数）をコードするヌクレオチド配列を含有するベクターを指す。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「外因性」とは、生物、細胞、組織もしくは系から導入されるかまたはその外部で産生される任意の材料を指す。異種タンパク質と呼ばれるタンパク質は、生物、細胞、組織または系内に導入されている外因性材料（ベクター、ヌクレオチド配列等）によって発現される。疑念を回避するため、異種タンパク質、異種ベクター、または異種ヌクレオチド分子は、生物、細胞、組織または系の天然の未修飾ゲノムに存在し得るものとは同じではない。生物、細胞、組織、もしくは系にすでに存在する配列と同じであるかまたは同様の配列を有し得る、異種タンパク質、ベクター、もしくはヌクレオチド配列は、その生物、細胞、組織、もしくは系のゲノムに見出される天然配列以外の位置もしくは配列から発現される。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、用語「発現」は、自身のプロモーターにより誘導される特定のヌクレオチド配列の転写及び／または翻訳と定義される。
【０１１１】
「発現ベクター」とは、発現されるべきヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現エレメントは、宿主細胞によって、またはインビトロでの発現系において供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込む、コスミド、プラスミド（例えば、裸で、またはリポソーム中に含有）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）等、当該技術分野で公知のものすべてが含まれる。
【０１１２】
「相同」または「相同性」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性もしくは配列同一性を指す。２つの比較配列の双方におけるある位置が、同じ塩基またはアミノ酸の単量体サブユニットにより占有されている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれにおけるある位置がアデニンにより占有されている場合は、その分子は、その位置において相同である。２配列間の相同性のパーセントは、２つの配列により共有されている一致または相同な位置の数を、比較される位置の数で割り、１００をかける関数である。例えば、２つの配列において１０箇所の位置のうち６箇所が一致または相同であれば、その２つの配列は６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列のＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣは５０％の相同性を共有している。一般に、最大の相同性を得られるように２つの配列が整列されている場合に比較が行われる。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」という用語は、抗体として機能する、タンパク質のクラスと定義される。Ｂ細胞により発現される抗体は、ＢＣＲ（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｂ細胞受容体）または抗原レセプターと呼ばれることがある。このクラスのタンパク質に含まれる５つのメンバーは、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥである。
【０１１４】
「単離されている」とは、天然の状態から変化または除去されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは「単離されて」いないが、同じ核酸またはペプチドが、その天然状態の共存物質から部分的または完全に分離されている場合、それは「単離されている」。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、または、例えば、宿主細胞等、非天然環境で存在することができる。「単離された」生物学的成分（核酸、タンパク質または細胞等）は、他の生物学的成分（細胞残屑、他のタンパク質、核酸または細胞型等）からは実質的に分離または精製されている。「単離され」ている生物学的成分には、標準の精製方法により精製された成分が含まれる。
【０１１５】
疾患を予防すること、治療することまたは改善させること：疾患を「予防すること」とは、疾患の完全な発症を阻害することを指す。「治療すること」とは、疾患または病的状態の徴候または症状が発症した後でそれを改善させる治療的介入を指す。「改善させること」とは、疾患の徴候または症状についての数または重症度の低下を指す。
【０１１６】
化学療法には、腫瘍、新生物、がん及び乾癬等、異常な細胞増殖を特徴とする疾患を治療するための治療的有用性を有する、化学薬品（細胞傷害性薬物等）による治療が含まれる。化学療法の例には、本明細書に記載されるものが含まれるが、それらに限定されない。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、組換えとは一般に、組換え核酸またはタンパク質が、天然に存在しない配列を有するか、または配列の、本来は別々である２つのセグメントの人工的組み合わせによって作製されている配列を有するものであることを指す。この人工的な組み合わせは、化学合成によるか、または核酸の単離されたセグメントの人工的操作によって、例えば、遺伝子工学技術によって達成されることが多い。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、一般に出現する核酸塩基の以下の略語が使用される。「Ａ」はアデノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジンを指し、「Ｕ」とはウリジンを指す。
【０１１９】
本明細書で使用する用語「白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）」または「白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）」とは、単球、好中球、好酸球、好塩基性細胞、及びリンパ球を含めた任意の免疫細胞を指す。本明細書で使用される場合、用語「リンパ球」とは、リンパに一般に見られる細胞を指し、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、Ｔ細胞、及びＢ細胞が含まれる。上掲の免疫細胞型は、さらなるサブセットに分類可能であることは当業者により認識されよう。
【０１２０】
本明細書で使用する用語「腫瘍浸潤白血球」とは、固形腫瘍内に存在する白血球を指す。
【０１２１】
本明細書で使用する用語「血液試料」とは、血液等から単離された、血漿、血液細胞等、血液から調製された任意の試料を指す。
【０１２２】
本明細書で使用する用語「精製試料」とは、１つ以上の細胞サブセットが濃縮されている任意の試料を指す。試料は、サイズ、タンパク質発現等の特徴等に基づいた細胞の除去または単離によって精製され得る。
【０１２３】
薬学的に許容されるビヒクル：本開示で有用な薬学的に許容される担体（ビヒクル）は従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７５）には、１つ以上の治療用組成物、及び追加の医薬品の医薬送達に好適な組成物及び製剤が記載されている。
【０１２４】
一般に、送達に適切な担体またはビヒクルの性質は、採用される特定の投与方法に応じて異なってくる。例えば、非経口製剤は通常水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロール等、ビヒクルとして薬学的及び生理学的に許容される液体が含まれる注射用液を含む。固体組成物（例えば、粉末、ピル、錠剤、またはカプセルの形態）の場合、従来の非毒性固体担体には、例えば、医薬品グレードのマンニトール、乳糖、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムが含まれ得る。生物学的に中性の担体に加え、投与されるべき医薬組成物は、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、及びｐＨ緩衝剤等のような少量の非毒性補助物質、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウラートを含有することができる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、組成物は、それらが溶液、懸濁液、または他の同様の形態であるかを問わず、以下の、ＤＭＳＯ、注射用水等の滅菌希釈剤、生理食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒として使用され得る合成モノグリセリドもしくはジグリセリド等の不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベン等の抗菌性物質；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩等の緩衝剤、及び塩化ナトリウムまたはデキストロース等の等張性調節用物質、のうち１つ以上が含まれてよい。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、免疫不全とは、免疫系の少なくとも１つの重要な機能が欠如していることを意味する。本明細書で使用される場合、「免疫不全」対象（ヒト等）は、免疫系の特定の構成要素が欠如しているか、または免疫系の特定の構成要素（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはマクロファージ等）の機能が欠如している対象である。場合によっては、免疫不全の対象は、機能的免疫細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞等）の発生を阻止または阻害する、１つ以上の遺伝子変化を含む。いくつかの例では、遺伝子変化は、ＩＬ１７またはＩＬ１７受容体にある。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、免疫抑制とは、免疫系の活性または機能の低下を指す。対象は、例えば、免疫抑制化合物による治療のため、または疾患もしくは障害の結果として、免疫抑制であり得る（例えば、ＨＩＶ感染に起因するかまたは遺伝的欠陥による免疫抑制）。場合によっては、免疫抑制は、Ｔ細胞等の機能的免疫細胞の発生を阻止または阻害する遺伝子変異の結果として生じる。
【０１２８】
本明細書に記載される、有効量の組換え樹状細胞組成物及び関連方法により治療することができるがん及び増殖性障害の種類の例には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、ユーイング腫瘍、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、異形成及び過形成が含まれるが、これらに限定されない。がんの治療及び／または予防には、がんに関連した１つ以上の症状を軽減すること、がんの進行の阻害もしくは抑制、がんの退縮の促進、及び／または免疫応答の促進が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２９】
他の特定の実施形態では、「治療的有効量」は、本発明の組成物または細胞を投与されていない患者（または動物）もしくは患者（または動物）群における腫瘍増殖もしくはがんの拡散と比べ、本明細書に記載される組成物または細胞を投与された患者もしくは動物において、少なくとも２．５％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２５％、少なくとも３５％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の腫瘍、がんの増殖もしくは拡散の低下がもたらされる、組換え樹状細胞組成物の量である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、組換え樹状細胞組成物は、抗菌剤、抗ウイルス剤及び他の治療剤と同時に投与することができる。別法として、組換え樹状細胞組成物は、抗菌剤、抗ウイルス剤及び他の治療剤が投与される時間より前の、選択した時間に投与することができる。
【０１３１】
抗体との組み合わせ
いくつかの実施形態では、組換え樹状細胞組成物は、選択されたがん種に特異的な抗体と同時に投与することができる。別法として、組換え樹状細胞組成物は、選択されたがん種に特異的な抗体が投与される時間より前の、選択した時間に投与することができる。選択されたがん種に特異的な抗体には、がんの治療用に承認された任意の抗体が含まれる。例としては、乳癌に対するトラスツズマブ（ハーセプチン）、リンパ腫に対するリツキシマブ（リツキサン）、及び頭頸部扁平上皮癌に対するセツキシマブ（アービタックス）が含まれる。
【０１３２】
そのような抗体薬剤の追加の例には、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによるニボルマブ）及びＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋによるキイトルーダ）としても知られるペンブロリズマブ／ランブロリズマブ、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）が含まれる抗ＰＤ−１抗体、ならびにＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ−１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ−４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）が含まれる抗ＰＤ−Ｌ１抗体等、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）の阻害剤が含まれる。他のチェックポイント阻害剤には、抗ＣＴＬＡ−４抗体等のＣＴＬＡ−４拮抗薬が含まれる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより市販されているヤーボイ（商標）（イピリムマブ）である。他の例示的ＣＴＬＡ−４抗体には、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、チシリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＡＭＧＰ−２２４（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）が含まれる。場合によっては、これらの抗体のうちの任意の２剤の組み合わせもまた適応となり得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は、末梢血単核細胞を含め、様々な供給源から単離される。
【０１３４】
「末梢血単核細胞」、「ＰＢＭＣ」または「単核球」とは、典型的には抗がん免疫療法に使用される、末梢血から分離された単核球を指す。末梢血単核細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配法等の公知の方法を使用して採取されたヒトの血液から取得することができる。
【０１３５】
例示的な一実施形態によれば、「末梢血単核細胞」は、任意の適切な人から得てよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるがん治療及び免疫刺激方法での使用のための樹状細胞の単離の場合、末梢血単核細胞等の供給源を含め、本明細書で使用されるドナー細胞の供給源は、レシピエント患者にとって同種であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、ドナーの抑制性リガンドは、患者（例えば、宿主）のＨＬＡとは不適合である。
【０１３６】
代替的実施形態では、本明細書に記載されるがん治療及び免疫刺激方法での使用のための樹状細胞の単離の場合、末梢血単核細胞等の供給源を含め、本明細書で使用されるドナー細胞供給源は、レシピエント患者にとって自己である。
【０１３７】
細胞供給源
ＰＢＭＣは、廃棄され、匿名化された白血球除去フィルター（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｅｄ  Ｃｒｏｓｓ）、またはインフォームドコンセントを得た健常志願者からの供血から得た試料のＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心によって単離することができる。所望の細胞型を選択または濃縮するための、細胞集団、供給源及び方法の記載は、例えば、米国特許第９，３４７，０４４号に見出すことができる。哺乳類を治療するための本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、ヒト細胞等、種が一致していなければならない。細胞は、動物、例えば、ヒト患者から得てよい。細胞が動物から得られる場合、最初に培養で、例えば、形質転換によって樹立させておいてよく、またはそれらが予備精製方法に供されていることがより好ましい。例えば、細胞集団には、細胞表面マーカーの発現に基づいて、陽性または陰性の選択によって操作すること；インビトロまたはインビボで１つ以上の抗原で刺激すること；インビトロまたはインビボで１つ以上の生物学的調節剤により処置すること；またはこれらのうちのいずれかもしくはすべての組み合わせが行われ得る。例示的な実施形態では、細胞集団は、非Ｔ細胞及び／または特定のＴ細胞サブセットの除去のための陰性選択に供される。陰性選択は、Ｂ細胞マーカーのＣＤ１９、及びＣＤ２０等、単球マーカーのＣＤ１４、ＮＫ細胞マーカーのＣＤ５６を含め、多種多様な分子の細胞表面発現に基づいて実施することができる。別法として、細胞集団は、非ＣＤ３４．ｓｕｐ．＋造血細胞及び／または特定の造血細胞サブセットの除去のための陰性選択に供され得る。陰性選択は、例えば、ＭＡＣＳまたはカラム分離を介した、他の細胞型の分離に使用され得る抗体カクテル（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａ）等、多種多様な分子の細胞表面発現に基づいて実施することができる。
【０１３８】
細胞の集団には、末梢血単核細胞、全血または混合集団を含有するその画分、脾臓細胞、骨髄細胞、腫瘍浸潤リンパ球、白血球アフェレーシスで得られる細胞、生検組織、リンパ節、例えば、腫瘍からの流入領域リンパ節が含まれる。適切なドナーとしては、免疫されたドナー、免疫されていない（ナイーブ）ドナー、処理されたドナーまたは未処理ドナーが含まれる。「処理された」ドナーは、１つ以上の生物学的調節剤に曝露されたことのあるドナーである。「未処理」ドナーは、１つ以上の生物学的調節剤に曝露されたことのないドナーである。
【０１３９】
単球（成熟してＤＣになるもの）または樹状細胞を含む細胞の集団を取得する方法は、当該技術分野において周知である。例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、当該技術分野で公知の方法に従って記載されているように取得することができる。そのような方法の例は、例えば、Ｎａｉｒ，Ｓｍｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．Ｃｈａｐｔｅｒ  ７（２０１２）：Ｕｎｉｔ７．３２．ｄｏｉ：１０．１００２／０４７１１４２７３５．ｉｍ０７３２ｓ９９に記載されている。
【０１４０】
対象から細胞試料を取得し、その後、それを所望の細胞型について濃縮することも可能である。例えば、ＰＢＭＣは、本明細書に記載されるように血液から単離することができる。向流遠心分離（エルトリエーション）を使用してＰＢＭＣからの単球または樹状細胞について濃縮することができる。細胞はまた、所望の細胞型の細胞表面のエピトープに結合する抗体を用いた単離及び／または活性化等、様々な技術を使用して他の細胞から単離することもでき、例えば、一部のＴ細胞単離キットでは、抗体を結合させたビーズを、細胞を活性化させるために使用しており、その後のカラム分離にも同ビーズを用いている。使用できる別の方法には、受容体会合によって細胞を活性化させることなく特定の細胞型について選択的に濃縮するための、細胞表面マーカーに対する抗体を使用する陰性選択が含まれる。
【０１４１】
骨髄細胞（ＢＭ細胞）は、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊椎、肋骨または他の髄腔から取得され得る。骨髄は、患者から採取され、様々な分離及び洗浄の手順を介して単離され得る。骨髄細胞の単離のための既知の手順では、以下のステップ、ａ）骨髄懸濁液を３つの分画に遠心分離し、中間分画、すなわちバフィーコートを採取するステップ、ｂ）ステップ（ａ）で得たバフィーコート分画を分離液、一般的にはＦｉｃｏｌｌ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＡＢの商標）に入れてもう一度遠心分離にかけ、骨髄細胞を含有する中間分画を採取するステップ、及びｃ）再輸注可能な骨髄細胞を回収するために、ステップ（ｂ）で採取した分画を洗浄するステップを含む。さらに、ＢＭ細胞は、動員、及びそれに続く白血球アフェレーシスによって採取することができる。
【０１４２】
樹状細胞（ＤＣ）は、免疫系の見張りの抗原提示細胞である。これらの細胞には、自身の環境から抗原物質を捕捉し、続いて、活発な免疫応答を開始する能力があり、がん免疫療法のワクチンを送達するための理想的候補である。樹状細胞は、形態が特徴的で組織分布が広範囲に及ぶ不均一な細胞集団を含む。ＤＣは、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ１４１＋、ＣＤ１６＋、またはＨＬＡ−ＤＲ＋等の細胞表面マーカーを示す。
【０１４３】
特に、樹状細胞は、外来性タンパク質のエンドサイトーシスの後、それらのタンパク質を処理して、ＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ抗原と併せてエピトープとして細胞表面に提示することによって、抗原提示細胞として機能する。抗原を提示している樹状細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞及びヘルパーＴ細胞によって認識され得る。樹状細胞の成熟状態は、それらの貪食活性／細胞内活性にとって重要である。未熟樹状細胞は典型的には、抗原搭載に最も効率的な細胞である。
【０１４４】
未熟樹状細胞とは、特定の細胞マーカーであるＣＤ１ａ、ＣＤ１４及びＣＤ８３の発現が、ＣＤ１ａ高発現（その集団内ＤＣの５０％超がＣＤ１ａ陽性である）、ＣＤ１４無または低発現（その集団内ＤＣの１５％未満がＣＤ１４陽性である）、及びＣＤ８３低発現（その集団内ＤＣの２５％未満がＣＤ８３陽性である）を特徴とする樹状細胞を指す。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ＤＣは、皮膚表皮（ランゲルハンス細胞）等の非リンパ組織、ならびに脾臓、骨髄、リンパ節及び胸腺等のリンパ組織、ならびに血液及び末梢血を含む循環系を含め、ＤＣが存在する任意の組織から取得される。ＤＣは、それらが存在しているどの組織でも少数しか発生しないため、ＤＣは、濃縮または単離して使用され得る。濃縮されたＤＣ集団を得るために、反復密度勾配分離、陽性選択、陰性選択、またはそれらの組み合わせを必要とするいくつかの手順のうちいずれを使用してもよい。ＤＣが得られたら、それらを適切な培地で培養して細胞集団を増殖させ、及び／またはＤＣを、抗原の取り込み、処理及び提示に最適な状態に維持してよい。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＤＣは、がんを患う対象にとって自己であり得る、すなわち、対象に投与されるＤＣは、同一対象から単離され得る。他の実施形態では、ＤＣは、がんを患う対象にとって同種であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＤＣは、骨髄系ＤＣ、形質細胞様ＤＣ、間質ＤＣ、リンパ組織常在ＤＣ、濾胞性ＤＣ、ＣＤ１４＋ＤＣ等のような任意のサブタイプであり得る。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、がん治療に使用され得る、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３を発現する、遺伝子操作された／組換え樹状細胞を作製する方法を提供する。
【０１４８】
ＣＤ４０Ｌは、３５ｋＤａのＩＩ型膜タンパク質であり、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）遺伝子ファミリーメンバーであり、抗原認識と同時にＴ細胞表面に発現する。ＣＤ４０Ｌは、腫瘍自己抗原に対する効果的な防御免疫を誘導するために必要なＴ細胞活性化に決定的に関与している。（参照により全体が本明細書に組み込まれるＦｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１；２：３１を参照のこと）。ヒトＣＤ４０Ｌの完全な配列の情報は、ＮＣＢＩ、Ｇｅｎｅ  ＩＤ：９５９に見出すことができる。
【０１４９】
ＣＸＣＬ１３は、リンパ器官の濾胞性間質細胞、腹膜腔及び胸腔のマクロファージ、及び骨髄樹状細胞に発現するケモカインである。主にＧタンパク質共役型受容体ＣＸＣＲ５に結合することが示されている。ＣＸＣＲ５は、Ｂ細胞、及びＴ細胞の特定のサブセット（濾胞性ヘルパーＴ細胞、循環メモリーＣＤ４  Ｔ細胞のサブセット、及びヘルパーＴ−１（Ｔｈ１）またはヘルパーＴ−２（Ｔｈ２）として完全には分化していない他のＴ細胞集団を含む）で発現する。ＣＸＣＬ１３は、自己反応性Ｂ１細胞のパイエル板へのホーミングと他の炎症部位に影響を与えることによって、及びＴ細胞依存性抗体産生のために二次リンパ器官へのＴｈ細胞動員における役割を果たすことによって、Ｂ細胞とＴ細胞の共局在における生理学的役割が実証されている。（参照により全体が本明細書に組み込まれるＦｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６；７：２２５を参照のこと）。ヒトＣＸＣＬ１３の完全な配列の情報はＮＣＢＩ、Ｇｅｎｅ  ＩＤ：１０５６３に見出すことができる。
【０１５０】
ヒトＣＤ９３（ｈＣＤ９３）は、２０番染色体、ｐ１１．２１に位置する１型膜貫通型糖タンパク質である。このタンパク質は、Ｂ細胞発生時及び食作用時の細胞間相互作用に関与している。ＣＤ９３は、骨髄系細胞、造血幹細胞、ＮＫ細胞、血小板、ミクログリア、及び内皮細胞に発現する。ヒトＣＤ９３の完全な配列の情報はＮＣＢＩ、Ｇｅｎｅ  ＩＤ：２２９１８に見出すことができる。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び／またはＣＸＣＬ１３をコードする１つ以上の異種核酸分子を含む。ＣＤ４０Ｌをコードする異種核酸分子は、ヒト、マウス、ラット、もしくはブタ、または他の任意の哺乳類等、どの供給源からのものでもよい。ヒトＣＤ４０Ｌの核酸配列は、配列番号１として開示される。同様に、ＣＸＣＬ１３をコードする異種核酸分子は、ヒト、マウス、ラット、もしくはブタ、または他の任意の哺乳類等、どの供給源からのものでもよい。ヒトＣＸＣＬ１３の核酸配列は、配列番号２として開示される。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、樹状細胞はさらに、ＣＤ９３をコードする異種核酸分子を含んでよい。ＣＤ９３をコードする異種核酸分子は、ヒト、マウス、ラット、もしくはブタ、または他の任意の哺乳類等、どの供給源からのものでもよい。ヒトＣＤ９３の核酸配列は、配列番号３として開示される。
【０１５３】
ただし、タンパク質をコードする核酸配列は、遺伝暗号の縮重性質のため他の配列であり得る。これらの核酸配列は非限定的な例であり、他の配列を使用することができる。
【０１５４】
対応するヒトアミノ酸配列は、以下のとおりである：ヒトＣＤ４０Ｌ：配列番号４；ヒトＣＸＣＬ１３：配列番号５；及びヒトＣＤ９３：配列番号６。いくつかの実施形態では、タンパク質は保存的置換を含む。
【０１５５】
以下の配列は、必要に応じて、本出願全体を通して参照として使用することができる。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０Ｌは、以下によってコードされる。
ＡＴＧＡＴＣＧＡＡＡＣＡＴＡＣＡＡＣＣＡＡＡＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＡＴＣＴＧＣＧＧＣＣＡＣＴＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＴＣＡＧＣＡＴＧＡＡＡＡＴＴＴＴＴＡＴＧＴＡＴＴＴＡＣＴＴＡＣＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＡＴＣＡＣＣＣＡＧＡＴＧＡＴＴＧＧＧＴＣＡＧＣＡＣＴＴＴＴＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＴＡＧＡＡＧＧＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＴＡＧＡＡＧＡＴＧＡＡＡＧＧＡＡＴＣＴＴＣＡＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＡＡＡＣＧＡＴＡＣＡＧＡＧＡＴＧＣＡＡＣＡＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＴＣＣＴＴＡＴＣＣＴＴＡＣＴＧＡＡＣＴＧＴＧＡＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＡＧＣＣＡＧＴＴＴＧＡＡＧＧＣＴＴＴＧＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＡＡＴＧＴＴＡＡＡＣＡＡＡＧＡＧＧＡＧＡＣＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＴＴＴＧＡＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＡＡＴＣＣＴＣＡＡＡＴＴＧＣＧＧＣＡＣＡＴＧＴＣＡＴＡＡＧＴＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＡＡＡＣＡＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＴＡＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＧＧＡＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡＧＣＡＡＣＡＡＣＴＴＧＧＴＡＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＴＡＡＡＡＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＣＴＡＴＴＡＴＡＴＣＴＡＴＧＣＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＴＴＣＴＧＴＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＡＡＧＣＴＴＣＧＡＧＴＣＡＡＧＣＴＣＣＡＴＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＣＣＴＡＡＡＧＴＣＣＣＣＣＧＧＴＡＧＡＴＴＣＧＡＧＡＧＡＡＴＣＴＴＡＣＴＣＡＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＣＣＣＡＣＡＧＴＴＣＣＧＣＣＡＡＡＣＣＴＴＧＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＴＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＴＴＣＧＧＴＧＴＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＣＴＧＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＴＧＡＧＣＣＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＧＴＣＣＴＴＴＧＧＣＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＣ（配列番号１）
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＸＣＬ１３は、以下によってコードされる。
ＡＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＣＧＡＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＴＣＴＣＣＡＧＴＣＣＡＡＧＧＴＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＡＣＡＡＧＣＴＴＧＡＧＧＴＧＴＡＧＡＴＧＴＧＴＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＴＣＡＧＴＣＴＴＴＡＴＣＣＣＴＡＧＡＣＧＣＴＴＣＡＴＴＧＡＴＣＧＡＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＴＧＣＣＣＣＧＴＧＧＧＡＡＴＧＧＴＴＧＴＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＴＣＡＴＡＧＴＣＴＧＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＡＧＴＣＡＡＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＣＴＧＡＡＴＧＧＡＴＡＣＡＡＡＧＡＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＴＴＣＴＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＣＡＧＴＴＣＣＡＧＴＧＴＴＴＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＴＴＣＣＣ（配列番号２）
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ９３は、以下によってコードされる。
ＡＴＧＧＣＣＡＣＣＴＣＣＡＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＣＣＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＡＣＧＧＧＡＧＣＴＧＡＣＡＣＧＧＡＧＧＣＧＧＴＧＧＴＣＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＣＣＧＣＣＴＧＣＴＡＣＡＣＧＧＣＣＣＡＣＴＣＧＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＣＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＡＣＣＡＣＴＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＣＧＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＣＴＧＴＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＣＡＧＣＡＣＧＴＣＣＡＧＣＧＡＧＴＡＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＧＧＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＣＡＡＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＧＧＧＣＴＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＡＧＴＣＴＧＣＣＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＧＡＣＡＣＧＣＣＴＴＡＣＴＣＴＡＡＣＴＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＴＣＧＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＣＧＣＴＧＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＴＣＣＣＡＧＣＣＧＣＴＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＣＡＡＧＴＧＧＴＣＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＧＧＡＧＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＣＧＧＡＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＧＧＣＴＴＣＧＴＧＴＧＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＴＧＴＧＣＣＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＴＣＡＧＧＴＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＴＴＣＣＡＧＡＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＣＴＣＣＴＴＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＣＴＴＴＧＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＴＧＴＧＧＧＧＡＡＧＧＴＧＡＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＡＣＴＣＡＧＡＧＴＣＡＴＴＡＴＴＴＣＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＣＣＧＡＴＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＧＧＧＧＣＡＧＣＴＣＧＧＧＣＣＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＴＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＣＴＴＣＡＡＣＡＡＴＧＧＧＧＧＣＴＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＣＴＴＴＧＡＡＧＧＧＧＧＧＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＴＧＣＣＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴＣＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＣＴＣＧＡＡＡＣＣＣＴＴＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＣＣＣＡＴＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＣＣＡＣＧＴＧＣＧＴＣＣＴＧＧＧＡＣＣＣＣＡＴＧＧＧＡＡＡＡＡＣＴＡＣＡＣＧＴＧＣＣＧＣＴＧＣＣＣＣＣＡＡＧＧＧＴＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＴＣＧＡＧＴＣＡＧＣＴＧＧＡＣＴＧＴＧＴＧＧＡＣＧＴＧＧＡＴＧＡＡＴＧＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＴＧＴＧＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＧＣＴＴＣＣＧＣＴＧＣＧＡＡＴＧＣＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＡＴＧＡＧＣＣＧＧＧＣＧＧＴＣＣＴＧＧＡＧＡＧＧＧＧＧＣＣＴＧＴＣＡＧＧＡＴＧＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＣＧＣＴＣＧＣＣＴＴＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＡＴＴＴＣＡＣＴＧＣＴＣＣＴＧＴＧＡＧＧＡＧＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＴＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＡＣＧＧＧＡＣＴＣＡＧＴＧＣＣＡＧＧＡＣＧＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＴＧＧＧＣＣＣＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣＴＣＴＧＣＧＡＣＡＧＣＴＴＧＴＧＣＴＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＧＧＧＴＣＣＴＴＣＣＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＡＡＴＧＧＧＧＴＣＴＣＴＴＧＣＡＣＣＡＴＧＧＧＧＣＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＣＣＡＣＣＡＴＣＴＧＧＧＣＣＣＣＣＣＧＡＴＧＡＧＧＡＧＧＡＣＡＡＡＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＡＡＧＧＧＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＣＡＣＡＡＧＧＧＧＣＣＣＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＣＡＡＧＴＡＧＡＣＣＴＴＣＧＣＴＧＴＣＡＴＣＴＧＡＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＡＣＡＴＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＴＧＧＧＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＴＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＣＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＴＣＡＣＧＣＣＡＣＡＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＣＡＧＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＡＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＣＣＡＣＡＣＡＡＡＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＴＧＡＣＧＧＧＣＡＡＡＡＧＣＴＧＣＴＴＴＴＡＴＴＣＴＡＣＡＴＣＣＴＡＧＧＣＡＣＣＧＴＧＧＴＧＧＣＣＡＴＣＣＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＧＧＣＴＡＣＴＧＧＴＣＴＡＴＣＧＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＣＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＧＡＡＴＧＣＧＧＣＡＧＡＣＡＧＴＴＡＣＴＣＣＴＧＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧＣＧＡＧＣＴＧＡＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＴＧＧＡＧＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＣＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＧＣ（配列番号３）
【０１５９】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０Ｌは、以下のアミノ酸配列を含む。
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ（配列番号４）
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＸＣＬ１３は、以下のアミノ酸配列を含む。
ＭＫＦＩＳＴＳＬＬＬＭＬＬＶＳＳＬＳＰＶＱＧＶＬＥＶＹＹＴＳＬＲＣＲＣＶＱＥＳＳＶＦＩＰＲＲＦＩＤＲＩＱＩＬＰＲ  ＧＮＧＣＰＲＫＥＩＩＶＷＫＫＮＫＳＩＶＣＶＤＰＱＡＥＷＩＱＲＭＭＥＶＬＲＫＲＳＳＳＴＬＰＶＰＶＦＫＲＫＩＰ（配列番号５）
【０１６１】
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ９３は、以下のアミノ酸配列を含む。
ＭＡＴＳＭＧＬＬＬＬＬＬＬＬＬＴＱＰＧＡＧＴＧＡＤＴＥＡＶＶＣＶＧＴＡＣＹＴＡＨＳＧＫＬＳＡＡＥＡＱＮＨＣＮＱＮＧＧＮＬＡＴＶＫＳＫＥＥＡＱＨＶＱＲＶＬＡＱＬＬＲＲＥＡＡＬＴＡＲＭＳＫＦＷＩＧＬＱＲＥＫＧＫＣＬＤＰＳＬＰＬＫＧＦＳＷＶＧＧＧＥＤＴＰＹＳＮＷＨＫＥＬＲＮＳＣＩＳＫＲＣＶＳＬＬＬＤＬＳＱＰＬＬＰＳＲＬＰＫＷＳＥＧＰＣＧＳＰＧＳＰＧＳＮＩＥＧＦＶＣＫＦＳＦＫＧＭＣＲＰＬＡＬＧＧＰＧＱＶＴＹＴＴＰＦＱＴＴＳＳＳＬＥＡＶＰＦＡＳＡＡＮＶＡＣＧＥＧＤＫＤＥＴＱＳＨＹＦＬＣＫＥＫＡＰＤＶＦＤＷＧＳＳＧＰＬＣＶＳＰＫＹＧＣＮＦＮＮＧＧＣＨＱＤＣＦＥＧＧＤＧＳＦＬＣＧＣＲＰＧＦＲＬＬＤＤＬＶＴＣＡＳＲＮＰＣＳＳＳＰＣＲＧＧＡＴＣＶＬＧＰＨＧＫＮＹＴＣＲＣＰＱＧＹＱＬＤＳＳＱＬＤＣＶＤＶＤＥＣＱＤＳＰＣＡＱＥＣＶＮＴＰＧＧＦＲＣＥＣＷＶＧＹＥＰＧＧＰＧＥＧＡＣＱＤＶＤＥＣＡＬＧＲＳＰＣＡＱＧＣＴＮＴＤＧＳＦＨＣＳＣＥＥＧＹＶＬＡＧＥＤＧＴＱＣＱＤＶＤＥＣＶＧＰＧＧＰＬＣＤＳＬＣＦＮＴＱＧＳＦＨＣＧＣＬＰＧＷＶＬＡＰＮＧＶＳＣＴＭＧＰＶＳＬＧＰＰＳＧＰＰＤＥＥＤＫＧＥＫＥＧＳＴＶＰＲＡＡＴＡＳＰＴＲＧＰＥＧＴＰＫＡＴＰＴＴＳＲＰＳＬＳＳＤＡＰＩＴＳＡＰＬＫＭＬＡＰＳＧＳＰＧＶＷＲＥＰＳＩＨＨＡＴＡＡＳＧＰＱＥＰＡＧＧＤＳＳＶＡＴＱＮＮＤＧＴＤＧＱＫＬＬＬＦＹＩＬＧＴＶＶＡＩＬＬＬＬＡＬＡＬＧＬＬＶＹＲＫＲＲＡＫＲＥＥＫＫＥＫＫＰＱＮＡＡＤＳＹＳＷＶＰＥＲＡＥＳＲＡＭＥＮＱＹＳＰＴＰＧＴＤＣ（配列番号６）。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、タンパク質は、本明細書で提供される配列と、少なくとも、または約９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％相同である。「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基が、類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を持つアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、電荷を持たない極性側鎖を持つアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を持つアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分岐側鎖を持つアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を持つアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
【０１６３】
異種核酸分子は、リポソームトランスフェクション、化学的トランスフェクション、遺伝子導入ＤＮＡ組換え、ウイルス感染、トランスポゾン挿入、ジャンピング遺伝子挿入、マイクロインジェクション、電気穿孔、遺伝子銃による貫通、及びそれらの組み合わせ等、当該技術分野で知られているいずれの既知の組換え技術によっても樹状細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、異種核酸分子を導入するために組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノ随伴ベクター、組換えレトロウイルスベクター、組換えレンチウイルスベクター、またはそれらの組み合わせが使用され得る。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、所望の遺伝子−ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を発現させる方法が使用され得る。そのような方法には、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、ＴＡＬＥＮ、及びジンクフィンガーヌクレアーゼを送達することが含まれる。例えば、ＴＡＬＥＮ及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、天然遺伝子の上流及び下流に特定の転写調節エレメントを挿入してよい。ＴＡＬＥＮ及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、特定の遺伝子座において一本鎖または二本鎖のＤＮＡ切断を発生させることができる。これにより、外因性鋳型からの相同組換え修復（ＨＤＲ）が刺激されて、転写調節エレメントの正確な挿入を可能にし、天然遺伝子を活性化させる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはそれらの組み合わせ等、どの遺伝子送達ベクターを使用して送達してもよい。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作されたＤＣは、温度、ｐＨ等、周囲条件下で従来の栄養培地で培養してよく、それらは当業者に明らかである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を過剰発現しているＤＣは、抗原によって活性化またはパルスされ得る。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原またはウイルス抗原であり得る。非限定的な腫瘍抗原の例には、大腸癌細胞、乳癌細胞、卵巣癌細胞、膵癌細胞、頭頸部癌細胞、膀胱癌細胞、肝癌細胞、腎癌細胞、メラノーマ細胞、消化管癌細胞、前立腺癌細胞、小細胞肺癌細胞、非小細胞肺癌細胞、肉腫細胞、膠芽腫細胞、Ｔ細胞及びＢ細胞のリンパ腫細胞、子宮内膜癌細胞、または子宮頸癌細胞によって発現される抗原が含まれる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗原は、がん（腫瘍）細胞ライセートであり得、がん細胞ライセートは、樹状細胞にとって同種または自己であり得る。いくつかの実施形態では、がん細胞ライセートは、ＤＤＭ−１．７細胞ライセート、ＤＤＭ−１．１３細胞ライセート、またはそれらの組み合わせ等、メラノーマのがん細胞ライセートであり得る。
【０１６８】
抗原を用いて樹状細胞をパルスまたは活性化する多数の方法が当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、細胞の生存能を促進する条件下で培養された樹状細胞に抗原を加えてよく、その後で、細胞に十分な時間、約２４時間（約１８〜約３０時間、好ましくは２４時間）という期間を与えて、抗原を取り込んで処理し、抗原ペプチドをクラスＩまたはクラスＩＩのいずれかのＭＨＣと会合した状態で細胞表面に発現させる。樹状細胞はまた、それらに抗原をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることによって抗原に曝露され得る。ＤＮＡが発現し、抗原は恐らく細胞質性／クラスＩ経路を介して処理される。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、単離されたペプチドはＤＣをパルスまたは活性化するために使用され得る。ペプチドは、樹状細胞とのペプチドのインキュベーション、ペプチドを含むタンパク質のＤＣとのインキュベーション、ＤＣ（または前駆細胞を増殖させた単球集団）へのペプチド（またはペプチドを含むタンパク質）をコードする遺伝子の形質導入等を含めた多種多様な方法のいずれかによりパルスされる。ペプチドとしての使用のための典型的な抗原は、形質転換細胞、がん細胞、細菌細胞、寄生虫による感染細胞またはウイルス感染細胞等のような標的細胞に発現するものに由来する。例としては、ムチン；腫瘍抗原；ＨＩＶ  Ｇａｇ、ＨＩＶ  Ｅｎｖ、ＨＥＲ−２、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ−１００、ＰＳＡ、ＨＢＶｃ、ＨＢＶｓ、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、チロシナーゼ、ＭＡＧＥ−１、ｔｒｐ−１、マイコバクテリア抗原、及びＣＥＡからなる群から選択されるタンパク質に由来するペプチド等の炭水化物；ならびにその他多数が含まれるが、これらに限定されない。提示に好適な腫瘍抗原には、ｃ−ｅｒｂ−β−２／ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＥＭ／ＭＵＣ−１、Ｉｎｔ−２、Ｈｓｔ、ＢＲＣＡ−１、ＢＲＣＡ−２、切断型ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＥＡ、ｐ５３、ｒａｓ、ＲＫ、Ｍｙｃ、Ｍｙｂ、ＯＢ−１、ＯＢ−２、ＢＣＲ／ＡＢＬ、ＧＩＰ、ＧＳＰ、ＲＥＴ、ＲＯＳ、ＦＩＳ、ＳＲＣ、ＴＲＣ、ＷＴＩ、ＤＣＣ、ＮＦ１、ＦＡＰ、ＭＥＮ−１、ＥＲＢ−Ｂ１、ＭＡＧＥの各抗原、及びイディオタイプ免疫グロブリン（例えば、非ホジキンリンパ腫患者のＢ細胞由来）が含まれるが、これらに限定されない。樹状細胞の抗原提示活性は、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１αもしくはＩＬ−１β等の特定のサイトカインとの共培養により増強され得る。
【０１７０】
本明細書に開示される活性化樹状細胞は、生理学的に許容される担体、添加物、アジュバント、または希釈剤を含む組成物中に存在し得る。中性の緩衝生理食塩水または血清アルブミン混合生理食塩水は、適切な例示的希釈剤である。適切な担体には、水性等張無菌注射液（抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を意図されるレシピエント血液と等張にする溶質を含有することができる）、ならびに水性及び非水性の無菌懸濁剤（懸濁剤、可溶化剤、濃稠化剤｜増粘剤、安定化剤、及び保存剤が含まれ得る）が含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍抗原またはウイルス抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、いかなる異種抗原も含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約１０５樹状細胞／ｍＬ、少なくとも約１０６細胞／ｍＬ、少なくとも約１０７細胞／ｍＬ、またはそれ以上の集団を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、活性化ＤＣは、対象への投与前に凍結（凍結保存）され得る。いくつかの実施形態では、活性化ＤＣは、少なくとも３０％のヒト由来の血清及び／または血漿を含有する培地に細胞を懸濁し、懸濁液の温度を少なくとも−８０℃まで下げ、それによりＤＣを凍結することによって凍結され得る。いくつかの実施形態では、凍結培地は、約３０％のヒト由来の血清及び／または血漿ならびに約１０％の、凍結時の氷結晶形成を防止する薬剤、例えばＤＭＳＯである。さらなる実施形態では、ＤＣ懸濁液を少なくとも２４時間−８０℃で維持し、その後、保存期間中は液体窒素に移す。さらなる実施形態では、ＤＣ懸濁液を、３４℃〜４１℃の範囲の温度で解凍する。
【０１７２】
本明細書にはまた、単球から未熟ＤＣを発達させ、未熟ＤＣを、同種または自己の腫瘍細胞ライセートで活性化させる方法も開示される。いくつかの実施形態では、方法には、（ａ）対象から単球を単離すること、（ｂ）単離された単球に、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３から選択される１つ以上の遺伝子を過剰発現させること、ならびに（ｃ）インビトロで、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３から選択される１つ以上の遺伝子を発現している単球を未熟樹状細胞に分化させること、が含まれる。いくつかの実施形態では、単球は、ＣＤ１４＋単球である。いくつかの実施形態では、方法は、インビトロで、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３を異種発現している単球を未熟樹状細胞に分化させることを含む。いくつかの実施形態では、単球は、ＣＤ１４＋単球である。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書で提供されるように形質導入して、単球に分化または増殖させてから成熟させたＣＤ３４＋細胞である。異なる組み合わせの異種発現タンパク質も本明細書に記載される。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、単球は、様々な供給源から得られ、例えば、患者からの末梢血単核細胞の白血球アフェレーシス、それに続く単離された末梢血のエルトリエーションにより単離された単球が得られる。単離された単球を、リポソームトランスフェクション、化学的トランスフェクション、遺伝子導入ＤＮＡ組換え、ウイルス感染、トランスポゾン挿入、ジャンピング遺伝子挿入、マイクロインジェクション、電気穿孔、遺伝子銃による貫通、及びそれらの組み合わせ等、本明細書に開示される技術によって遺伝子操作して、異種のＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３タンパク質のうちのいずれか１つまたは組み合わせを発現させてよい。いくつかの実施形態では、組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノ随伴ベクター、組換えレトロウイルスベクター、組換えレンチウイルスベクター、またはそれらの組み合わせを使用してよい。異種タンパク質ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３のうちのいずれか１つまたは組み合わせを過剰発現させるために、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、ＴＡＬＥＮ、及びジンクフィンガーヌクレアーゼを送達する等の方法を使用してもよい。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３を発現している組換え単球をＩＬ−３の存在下で増殖させ、単球を増殖させて、単球の増殖した集団を得る。単球の増殖した集団を未熟樹状細胞に分化させ、これは、例えば、細胞の増殖した集団を、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４（ベースラインまたはＩ型のＤＣを産生させるため）、ならびに任意選択で、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、及びＰＧＥ２と共に培養することによる。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、組換え同種未熟樹状細胞は、抗原で活性化またはパルスされ得る。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原またはウイルス抗原であり得る。いくつかの実施形態では、抗原は、がん細胞ライセートであり得、がん細胞ライセートは、未熟樹状細胞にとって同種または自己であり得る。いくつかの実施形態では、がん細胞ライセートは、ＤＤＭ−１．７細胞ライセート、ＤＤＭ−１．１３細胞ライセート、またはそれらの組み合わせ等、メラノーマのがん細胞ライセートであり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、抗原で活性化またはパルスされない。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される活性化未熟ＤＣは、生理学的に許容される担体、添加物、アジュバント、または希釈剤を含む組成物中に存在し得る。中性の緩衝生理食塩水または血清アルブミン混合生理食塩水は、適切な例示的希釈剤である。いくつかの実施形態では、活性化未熟ＤＣは、対象への投与前に凍結され得る。細胞は、対象に投与される前に解凍することができる。
【０１７７】
本明細書にはまた、対象におけるがんを治療する方法も開示される。いくつかの実施形態では、対象におけるがんを治療する方法は、組換え樹状細胞を含む組成物を対象に投与することを含み、かかる樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３から選択される１つ以上のタンパク質を異種発現する。本明細書に記載されるように、細胞は、対象にとって同種であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、対象にとって自己であり得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、がんを患う対象において免疫応答を誘発する方法は、樹状細胞を含む組成物を対象に投与することを含み、かかる樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３から選択される１つ以上のタンパク質を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、がんを患う対象にがんワクチンを提供する方法は、樹状細胞を含む組成物を対象に投与することを含み、かかる樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３から選択される１つ以上のタンパク質を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、投与される樹状細胞（ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３を異種発現している）は、対象にとって同種である。いくつかの実施形態では、投与される樹状細胞（異種のＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３）は、対象にとって自己である。いくつかの実施形態では、投与される樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３を異種発現している未熟樹状細胞である。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、対象は、結腸癌、乳癌、膵癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞癌、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性白血病、真性多血症、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるがんを患っている。
【０１８２】
さらなる実施形態では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ性悪性疾患、膵癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、メラノーマ、ならびにＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹部神経膠腫及び混合膠腫等）、膠芽腫（多形膠芽腫としても知られる）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚腫、髄芽腫、シュワン細胞腫  頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移等からなる群から選択される固形腫瘍である。
【０１８３】
さらなる実施形態では、方法は、組換え樹状細胞の投与後、４〜１４日の時間枠で、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによるニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（Ｍｅｒｃｋによるキイトルーダ）としても知られるペンブロリズマブ／ランブロリズマブ、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）を含む）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ−１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ−４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）を含む）等の、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）の阻害剤、ＣＴＬＡ−４の拮抗薬（抗ＣＴＬＡ４抗体ヤーボイ（商標）（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、チシリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ−２２４（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）を含む抗ＣＴＬＡ−４抗体等）が含まれる、２種のチェックポイント阻害剤のうちのいずれか１つもしくは組み合わせが含まれる、免疫チェックポイント阻害剤；あるいは腫瘍特異的抗体である、乳癌に対するトラスツズマブ（ハーセプチン）、リンパ腫に対するリツキシマブ（リツキサン）、もしくはセツキシマブ（アービタックス）を、患者に投与することをさらに含む。
【０１８４】
さらなる実施形態では、治療、投与、または免疫応答増大は、患者が疾患改善または疾患の安定／非進行を示す限り、実施例１〜３の場合のような時間枠で定期的に繰り返される。
【０１８５】
さらなる実施形態では、治療、投与、または免疫応答増大は、患者が疾患改善または疾患の安定／非進行を示す限り、維持療法として、５日に１回、週１回、１４日に１回、２１日に１回から、月１回まで、２か月に１回まで、３か月に１回まで、４か月に１回まで、５か月に１回まで、６か月に１回まで、または７か月に１回、または８か月に１回、または９か月に１回、または１０か月に１回、または１１か月に１回、または年１回という時間枠で定期的に繰り返される。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、対象に投与される組換え樹状細胞（異種のＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＤ９３）は、投与前に抗原で活性化またはパルスされない。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、免疫応答を誘発することを助け得るアジュバント、サイトカイン、及びインターロイキンを含む組成物にして投与され得る。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、方法は、以下をさらに含む：（ａ）対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルを取得すること、
（ｂ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルと、メラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルとを比較すること、ならびに
（ｃ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つのマーカーがメラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルに適合する場合には、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３を過剰発現する樹状細胞とメラノーマ細胞ライセートとを共培養して樹状細胞を活性化させ、活性化された樹状細胞を含む組成物を対象に投与すること、及び
（ｄ）切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルの少なくとも３つのマーカーがメラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルに適合しない場合には、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及び任意選択でＣＤ９３を過剰発現する樹状細胞と腫瘍もしくは生検標本とを共培養して樹状細胞を活性化させ、活性化された樹状細胞を含む組成物を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、投与前に、対象から切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行い、同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルとの交差適合検査を行うこと；及び切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルのうち少なくとも３つの断片が同種腫瘍ライセートのタンパク質発現プロファイルと交差適合する場合に、同種腫瘍ライセート活性化樹状細胞または活性化樹状細胞組成物を投与すること、をさらに含む。本明細書で使用される場合、用語「交差適合」とは、腫瘍ライセートと、生検標本または切除した腫瘍標本との比較等、ある試料のタンパク質発現プロファイルを別の試料のそれに照らして比較することを指す。あるタンパク質の断片がライセート及び試料の両方に見られる場合は、適合すると言われる。
【０１８８】
上記方法のいくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ４０Ｌ及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＸＣＬ１３及びＣＤ９３を異種発現する。いくつかの実施形態では、ＤＣは、ＣＤ９３を異種発現しない。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、タンパク質発現プロファイルは、タンパク質アレイ、プロテオミクス、質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）等のような当該技術分野で周知の技術によって測定または比較される。いくつかの実施形態では、比較のために、タンパク質発現プロファイルに代えて遺伝子発現プロファイルを使用してよい。遺伝子発現プロファイルは、遺伝子アレイ、マイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲ等のような当該技術分野で周知の技術を使用して取得することができる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、切除した腫瘍または生検標本のタンパク質発現プロファイルと、メラノーマ細胞ライセートのタンパク質発現プロファイルとの間で比較されるマーカーは、ＭＡＧＥの各抗原である。例えば、各々が参照によりその全体が組み込まれる、Ｓｃａｎｌａｎ，Ｍａｔｔｈｅｗ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｓ．２００２，１８８：２２−３２及びＷｅｏｎ  ＪＬ，Ｐｏｔｔｓ  ＰＲ．Ｔｈｅ  ＭＡＧＥ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２０１５；３７：１−８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｂ．２０１５．０８．００２を参照のこと。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、メラノーマ細胞ライセートは、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞株に由来する。いくつかの実施形態では、メラノーマ細胞ライセートは、ＭＣＶ腫瘍ライセートであるか、またはＭＣＶ腫瘍ライセート発現プロファイルの一部に適合するものである。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、投与経路は、腫瘍内、腫瘍周囲、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内への注射を介する。組成物は、免疫応答を刺激するために投与され、これは、ボーラス注射、持続注入、インプラントからの持続放出、または他の適切な技術により投与することができる。
【０１９３】
あくまでも例示のためであるが、注入前、その後の分析及び比較用に、対象から血液試料を取得して保存することによって方法を実施することができる。一般に、少なくとも約１０４〜１０６、典型的には１×１０８〜１×１０１０の細胞が、約６０〜１２０分かけて７０ｋｇの患者に静脈内または腹腔内注入される。
【０１９４】
いくつかの態様では、本明細書に記載される治療方法のいずれもさらに、１つ以上の追加の抗がん治療を個体に投与することを含むことができる。様々なクラスの抗がん剤を使用することができる。非限定的な例には、放射線療法、アルキル化薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチン）、代謝拮抗剤（例えば、アザチオプリンまたはメルカプトプリン）、アントラサイクリン、植物アルカロイド（例えば、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、またはビンデシン等）及びタキサン（パクリタキセル、タキソール、またはドセタキセル等）を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、またはテニポシド）、ポドフィロトキシン（及びその誘導体のエトポシド及びテニポシド等）、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標）））、ホルモン治療、可溶性受容体、及び他の抗悪性腫瘍薬（例えば、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、またはイホスファミド）が含まれる。
【０１９５】
さらに、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される細胞及び組成物は、抗がん特性を有する他の薬剤もしくは治療剤に補助的またはそれらと共に使用することができる（参照により全体が本明細書に組み込まれる米国特許第９，９１４，７８３号を参照のこと）。補助的に使用される場合、組換えＤＣ及び関連組成物ならびに他の薬剤（複数可）は、併せて単一の組み合わせ医薬製剤に製剤化されても、または別々に製剤化及び投与されてもよく、調整された単一投与レジメンでも異なる投与レジメンでもよい。組換えＤＣ及び関連組成物に補助的またはそれらと共に投与される薬剤は典型的に、細胞と他の薬剤とが互いに悪影響を及ぼさないよう、組換えＤＣ及び関連組成物に相補的な活性を有する。
【０１９６】
抗ＰＤ−１抗体に補助的に使用され得る薬剤には、アルキル化薬、血管新生阻害剤、抗体、代謝拮抗剤、抗有糸分裂薬、抗増殖薬、抗ウイルス薬、オーロラキナーゼ阻害剤、アポトーシスプロモーター（例えば、Ｂｃｌ−２ファミリー阻害剤）、デスレセプター経路の活性化薬、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導）抗体、抗体薬物複合体、生物学的応答調節剤、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、細胞周期阻害剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、ＤＶＤ、白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＥｒｂＢ２）受容体阻害剤、増殖因子阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）−９０阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤、ホルモン療法薬、免疫剤、アポトーシスタンパク質の阻害剤の阻害剤（ＩＡＰ）、挿入抗生物質、キナーゼ阻害剤、キネシン阻害剤、Ｊａｋ２阻害剤、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質阻害剤、マイクロＲＮＡ、分裂促進因子活性化細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤、多価結合タンパク質、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ポリＡＤＰ（アデノシン二リン酸）−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、プラチナ化学療法薬、ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）阻害剤、ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、プロテアソーム阻害剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤、レチノイド／デルトイド植物アルカロイド、低分子阻害リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、トポイソメラーゼ阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤等、ならびにこれらの薬剤のうち１つ以上の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９７】
ＢｉＴＥ抗体は、Ｔ細胞とがん細胞の２つの細胞を同時に結合することによって、がん細胞を攻撃するようＴ細胞を導く二重特異性抗体である。Ｔ細胞はその後標的がん細胞を攻撃する。ＢｉＴＥ抗体の例には、アデカツムマブ（Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ  ＭＴ２０１）、ブリナツモマブ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ  ＭＴ１０３）等が含まれる。理論により制限されることなく、Ｔ細胞が標的がん細胞のアポトーシスを誘発する機序の１つはパーフォリン及びグランザイムＢが含まれる細胞溶解性顆粒成分のエキソサイトーシスによるものである。
【０１９８】
ｓｉＲＮＡは、内在性ＲＮＡ塩基または化学的に修飾されたヌクレオチドを有する分子である。修飾により細胞活性が消失することはなく、むしろ増大した安定性及び／または増大した細胞能力を付与する。化学修飾の例には、ホスホロチオアート基、２’−デオキシヌクレオチド、２’−ＯＣＨ．ｓｕｂ．３含有リボヌクレオチド、２’−Ｆ−リボヌクレオチド、２’−メトキシエチルリボヌクレオチド、その組み合わせ等が含まれる。ｓｉＲＮＡは、異なる長さ（例えば、１０〜２００ｂｐ）及び構造（例えば、ヘアピン、一本鎖／二本鎖、バルジ、ニック／ギャップ、ミスマッチ）を持つことができ、細胞内で処理されて能動的遺伝子サイレンシングを提供する。二本鎖ｓｉＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、各鎖で同数のヌクレオチドを有する（平滑末端）か、または非対称末端（突出末端）を有し得る。１〜２ヌクレオチドの突出が、センス鎖及び／またはアンチセンス鎖に存在し得、また所与の鎖の５’末端及び／または３’末端に存在し得る。
【０１９９】
多価結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質である。多価結合タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作され、一般には、天然に存在しない抗体である。用語「多重特異性結合タンパク質」とは、２つ以上の関連するかまたは無関係の標的を結合することができる結合タンパク質を意味する。二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含むタンパク質と結合する、４価または多価の結合タンパク質である。そのようなＤＶＤは、単一特異性（すなわち、１つの抗原と結合することができる）または多重特異性（すなわち、２つ以上の抗原と結合することができる）のいずれでもあり得る。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチドと２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ  Ｉｇと呼ばれる。ＤＶＤ  Ｉｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチド、及び２つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位あたり、抗原結合に関与する合計６つのＣＤＲを有する。
【０２００】
アルキル化薬には、アルトレタミン、ＡＭＤ−４７３、ＡＰ−５２８０、アパジコン、ベンダムスチン、ブロスタリシン、ブスルファン、カルボコン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、クロラムブシル、ＣＬＯＲＥＴＡＺＩＮＥ（登録商標）（ラロムスチン、ＶＮＰ４０１０１Ｍ）、シクロホスファミド、ダカルバジン、エストラムスチン、ホテムスチン、グルフォスファミド、イホスファミド、ＫＷ−２１７０、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、マホスファミド、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、ラニムスチン、テモゾロミド、チオテパ、ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標）（ベンダムスチン）、トレオスルファン、及びトロホスファミドが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０１】
血管新生阻害剤には、内皮特異的受容体チロシンキナーゼ（Ｔｉｅ−２）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦ）阻害剤、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）阻害剤、インスリン増殖因子−２受容体（ＩＧＦＲ−２）阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）阻害剤、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤、トロンボスポンジン類似体、及び血管内皮細胞増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＶＥＧＦＲ）阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０２】
抗体薬物複合体には、ｃ−Ｍｅｔキナーゼを標的とするもの（例えば、米国特許第７，６１５，５２９号に記載のＡＤＣ）、ＬＲＲＣ１５を標的とするもの、ＣＤ３０を標的とするもの（例えば、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン））、ＣＳ１を標的とするもの（例えば、米国公開第２０１６０１２２４３０号に記載のＡＤＣ）、ＤＬＬ３を標的とするもの（例えば、ロバルピツズマブテシリン（ＲＯＶＡ−Ｔ））、ＨＥＲ２を標的とするもの（例えば、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシン））、ＥＧＦＲを標的とするもの（例えば、米国公開第２０１５０３３７０４２号に記載のＡＤＣ）、及びプロラクチン受容体を標的とするもの（例えば、米国公開第２０１４０２２７２９４号に記載のＡＤＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０３】
代謝拮抗剤には、ＡＬＩＭＴＡ（登録商標）（ペメトレキセドナトリウム、ＬＹ２３１５１４、ＭＴＡ）、５−アザシチジン、ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）（カペシタビン）、カルモフール、ＬＥＵＳＴＡＴ（登録商標）（クラドリビン）、クロファラビン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、シトシンアラビノシド、デシタビン、デフェロキサミン、ドキシフルリジン、エフロルニチン、ＥＩＣＡＲ（５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド）、エノシタビン、エトニルシチジン（ｅｔｈｎｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）、フルダラビン、５−フルオロウラシル単独またはロイコボリン併用、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、ヒドロキシ尿素、ＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標）（メルファラン）、メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド、メトトレキサート、ミコフェノール酸、ネララビン、ノラトレキセド、オクホスファート、ペリトレキソール、ペントスタチン、ラルチトレキセド、リバビリン、トリアピン、トリメトレキサート、Ｓ−１、チアゾフリン、テガフール、ＴＳ−１、ビダラビン、及びＵＦＴが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０４】
抗ウイルス薬には、リトナビル、アシクロビル、シドフォビル、ガンシクロビル、ホスカルネット、ジドブジン、リバビリン、及びヒドロキシクロロキンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０５】
オーロラキナーゼ阻害剤には、ＡＢＴ−３４８、ＡＺＤ−１１５２、ＭＬＮ−８０５４、ＶＸ−６８０、Ａｕｒｏｒａ  Ａ特異的キナーゼ阻害剤、Ａｕｒｏｒａ  Ｂ特異的キナーゼ阻害剤、及び汎オーロラキナーゼ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０６】
Ｂｃｌ−２タンパク質阻害剤には、ＡＢＴ−２６３（ナビトクラックス）、ＡＴ−１０１（（−）ゴシポール）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）（Ｇ３１３９またはオブリメルセン（Ｂｃｌ−２−指向性アンチセンスオリゴヌクレオチド））、ＩＰＩ−１９４、ＩＰＩ−５６５、Ｎ−（４−（４−（（４’−クロロ（１，１’−ビフェニル）−２−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）ベンゾイル）−４−−  （（（１Ｒ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）−３−ニトロベンゼンスルホンアミド）、Ｎ−（４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−５，５−ジメチル−１−シクロヘキサ−１−エン−１−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）ベンゾイル）−４−（（（１Ｒ）−３−（モルホリン−４−イル）−１−（（フェニルスルファニル）メチル−）プロピル）アミノ）−３−（（トリフルオロメチル）スルホニル）ベンゼンスルホンアミド、ベネトクラクス及びＧＸ−０７０（オバトクラックス）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０７】
Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤には、ＤＡＳＡＴＩＮＩＢ（登録商標）（ＢＭＳ−３５４８２５）及びＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（イマチニブ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０８】
ＢＴＫ阻害剤には、イブルチニブ及びアカラブルチニブが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０９】
ＣＤＫ阻害剤には、ＡＺＤ−５４３８、ＢＭＩ−１０４０、ＢＭＳ−０３２、ＢＭＳ−３８７、ＣＶＴ−２５８４、フラボピリドール、ＧＰＣ−２８６１９９、ＭＣＳ−５Ａ、ＰＤ０３３２９９１、ＰＨＡ−６９０５０９、セリシクリブ（ＣＹＣ−２０２、Ｒ−ロスコビチン）、アベマシクリブ、パルボシクリブ、及びＺＫ−３０４７０９が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１０】
ＣＯＸ−２阻害剤には、ＡＢＴ−９６３、ＡＲＣＯＸＩＡ（登録商標）（エトリコキシブ）、ＢＥＸＴＲＡ（登録商標）（バルデコキシブ）、ＢＭＳ３４７０７０、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、ＣＯＸ−１８９（ルミラコキシブ）、ＣＴ−３、ＤＥＲＡＭＡＸＸ（登録商標）（デラコキシブ）、ＪＴＥ−５２２、４−メチル−２−（３，４−ジメチルフェニル）−１−（４−スルファモイルフェニル−１Ｈ−ピロール）−、ＭＫ−６６３（エトリコキシブ）、ＮＳ−３９８、パレコキシブ、ＲＳ−５７０６７、ＳＣ−５８１２５、ＳＤ−８３８１、ＳＶＴ−２０１６、Ｓ−２４７４、Ｔ−６１４、及びＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１１】
ＥＧＦＲ阻害剤には、ＡＢＸ−ＥＧＦ、抗ＥＧＦＲイムノリポソーム、ＥＧＦワクチン、ＥＭＤ−７２００、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ）、ＨＲ３、ＩｇＡ抗体、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブまたはＯＳＩ−７７４）、ＴＡＧＲＩＳＳＯ（登録商標）（オシメルチニブ）、ＴＰ−３８、ＥＧＦＲ融合タンパク質、及びＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１２】
ＥｒｂＢ２受容体阻害剤には、ＣＰ−７２４−７１４、ＣＩ−１０３３（カネルチニブ）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）（２Ｃ４、ペルツズマブ）、ＴＡＫ−１６５、ＧＷ−５７２０１６（ヨナファルニブ（ｉｏｎａｆａｒｎｉｂ））、ＧＷ−２８２９７４、ＥＫＢ−５６９、ＰＩ−１６６、ｄＨＥＲ２（ＨＥＲ２ワクチン）、ＡＰＣ−８０２４（ＨＥＲ−２ワクチン）、抗ＨＥＲ／２ｎｅｕ二重特異性抗体、Ｂ７．ｈｅｒ２ＩｇＧ３、ＡＳ  ＨＥＲ２三官能性二重特異性抗体、ｍＡＢ  ＡＲ−２０９、及びｍＡＢ  ２Ｂ−１が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１３】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤には、デプシペプチド、ＬＡＱ−８２４、ＭＳ−２７５、トラポキシン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ＴＳＡ、及びバルプロ酸が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１４】
ＨＳＰ−９０阻害剤には、１７−ＡＡＧ−ｎａｂ、１７−ＡＡＧ、ＣＮＦ−１０１、ＣＮＦ−１０１０、ＣＮＦ−２０２４、１７−ＤＭＡＧ、ゲルダナマイシン、ＩＰＩ−５０４、ＫＯＳ−９５３、ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標）（ＨＳＰ−９０に対するヒト組換え抗体）、ＮＣＳ−６８３６６４、ＰＵ２４ＦＣｌ、ＰＵ−３、ラジシコール、ＳＮＸ−２１１２、ＳＴＡ−９０９０、及びＶＥＲ４９００９が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１５】
アポトーシスタンパク質の阻害剤には、ＨＧＳ１０２９、ＧＤＣ−０１４５、ＧＤＣ−０１５２、ＬＣＬ−１６１、及びＬＢＷ−２４２が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１６】
デスレセプター経路の活性化薬には、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬまたはデスレセプター（例えば、ＤＲ４及びＤＲ５）を標的とする抗体または他の薬剤、例えば、アポマブ、コナツムマブ、ＥＴＲ２−ＳＴ０１、ＧＤＣ０１４５（レクサツムマブ）、ＨＧＳ−１０２９、ＬＢＹ−１３５、ＰＲＯ−１７６２及びトラスツズマブ等が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１７】
キネシン阻害剤には、ＡＺＤ４８７７、ＡＲＲＹ−５２０等のＥｇ５阻害剤、及びＧＳＫ９２３２９５Ａ等のＣＥＮＰＥ阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１８】
ＪＡＫ−２阻害剤には、ＣＥＰ−７０１（レスタウルチニブ）、ＸＬ０１９及びＩＮＣＢ０１８４２４が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１９】
ＭＥＫ阻害剤には、ＡＲＲＹ−１４２８８６、ＡＲＲＹ−４３８１６２、ＰＤ−３２５９０１、及びＰＤ−９８０５９が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２０】
ｍＴＯＲ阻害剤には、ＡＰ−２３５７３、ＣＣＩ−７７９、エベロリムス、ＲＡＤ−００１、ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＴＰ競合的ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤（ＰＩ−１０３、ＰＰ２４２、ＰＰ３０、及びＴｏｒｉｎ  １を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２１】
非ステロイド性抗炎症薬には、ＡＭＩＧＥＳＩＣ（登録商標）（サルサラート）、ＤＯＬＯＢＩＤ（登録商標）（ジフルニサル）、ＭＯＴＲＩＮ（登録商標）（イブプロフェン）、ＯＲＵＤＩＳ（登録商標）（ケトプロフェン）、ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標）（ナブメトン）、ＦＥＬＤＥＮＥ（登録商標）（ピロキシカム）、イブプロフェンクリーム、ＡＬＥＶＥ（登録商標）（ナプロキセン）及びＮＡＰＲＯＳＹＮ（登録商標）（ナプロキセン）、ＶＯＬＴＡＲＥＮ（登録商標）（ジクロフェナク）、ＩＮＤＯＣＩＮ（登録商標）（インドメタシン）、ＣＬＩＮＯＲＩＬ（登録商標）（スリンダク）、ＴＯＬＥＣＴＩＮ（登録商標）（トルメチン）、ＬＯＤＩＮＥ（登録商標）（エトドラク）、ＴＯＲＡＤＯＬ（登録商標）（ケトロラク）、及びＤＡＹＰＲＯ（登録商標）（オキサプロジン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２２】
ＰＤＧＦＲ阻害剤には、Ｃ−４５１、ＣＰ−６７３及びＣＰ−８６８５９６が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２３】
プラチナ化学療法薬には、シスプラチン、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）（オキサリプラチン）エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標）（カルボプラチン）、サトラプラチン、及びピコプラチンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２２４】
ポロ様キナーゼ阻害剤には、ＢＩ−２５３６が含まれるが、これに限定されない。
【０２２５】
ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤には、ウォルトマンニン、ＬＹ２９４００２、ＸＬ−１４７、ＣＡＬ−１２０、ＯＮＣ−２１、ＡＥＺＳ−１２７、ＥＴＰ−４５６５８、ＰＸ−８６６、ＧＤＣ−０９４１、ＢＧＴ２２６、ＢＥＺ２３５、及びＸＬ７６５が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２６】
トロンボスポンジン類似体には、ＡＢＴ−５１０、ＡＢＴ−５６７、ＡＢＴ−８９８、及びＴＳＰ−１が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２７】
ＶＥＧＦＲ阻害剤には、ＡＢＴ−８６９、ＡＥＥ−７８８、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（商標）（血管新生を阻害するリボザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）及びＣｈｉｒｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆ．））、アキシチニブ（ＡＧ−１３７３６）、ＡＺＤ−２１７１、ＣＰ−５４７，６３２、ＣＹＲＡＭＺＡ（登録商標）（ラムシルマブ）、ＩＭ−８６２、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタミブ）、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）（ソラフェニブ、ＢＡＹ４３〜９００６）、パゾパニブ（ＧＷ−７８６０３４）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４）、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ、ＳＵ−１１２４８）、ＳＴＩＶＡＲＧＡ（登録商標）（レゴラフェニブ）、ＶＥＧＦトラップ、及びＺＡＣＴＩＭＡ（商標）（バンデタニブ、ＺＤ−６４７４）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２８】
抗生物質には、挿入抗生物質アクラルビシン、アクチノマイシンＤ、アムルビシン、アンナマイシン、アドリアマイシン、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標）（ブレオマイシン）、ダウノルビシン、ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）またはＭＹＯＣＥＴ（登録商標）（リポソームドキソルビシン）、エルサミトルシン、エピルビシン、グラルビシン（ｇｌａｒｂｕｉｃｉｎ）、ＺＡＶＥＤＯＳ（登録商標）（イダルビシン）、マイトマイシンＣ、ネモルビシン、ネオカルジノスタチン、ペプロマイシン、ピラルビシン、レベッカマイシン、スチマラマー、ストレプトゾシン、ＶＡＬＳＴＡＲ（登録商標）（バルルビシン）、及びジノスタチンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２２９】
トポイソメラーゼ阻害剤には、アクラルビシン、９−アミノカンプトテシン、アモナフィド、アムサクリン、ベカテカリン、ベロテカン、ＢＮ−８０９１５、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）（塩酸イリノテカン）、カンプトテシン、ＣＡＲＤＩＯＸＡＮＥ（登録商標）（デクスラゾキシン）、ジフロモテカン、エドテカリン、ＥＬＬＥＮＣＥ（登録商標）またはＰＨＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（登録商標）（エピルビシン）、エトポシド、エキサテカン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、ギマテカン、ルルトテカン、ミトキサントロン、Ｏｎｉｖｙｄｅ（商標）（リポソームイリノテカン）、オラテシン、ピラルブシン、ピキサントロン、ルビテカン、ソブゾキサン、ＳＮ−３８、タフルポシド（Ｔａｆｌｕｐｏｓｉｄｅ）、及びトポテカンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３０】
抗体には、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＤ４０特異的抗体、ｃｈＴＮＴ−１／Ｂ、デノスマブ、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ）、ＨＵＭＡＸ−ＣＤ４（登録商標）（ザノリムマブ）、ＩＧＦ１Ｒ特異的抗体、リンツズマブ（ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）、ＯＸ−４０特異的抗体、ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）（エドレコロマブ）、ＲＥＮＣＡＲＥＸ（登録商標）（ＷＸ  Ｇ２５０）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）、チシリムマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）（パニツムマブ）及びＣＤ２０抗体タイプＩとＩＩが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３１】
ホルモン療法薬には、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン）、アルゾキシフェン、ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標）（ビカルタミド）、ＣＥＴＲＯＴＩＤＥ（登録商標）（セトロレリクス）、デガレリクス、デスロレリン、ＤＥＳＯＰＡＮ（登録商標）（トリロスタン）、デキサメタゾン、ＤＲＯＧＥＮＩＬ（登録商標）（フルタミド）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）（ラロキシフェン）、ＡＦＥＭＡ（商標）（ファドロゾール）、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（トレミフェン）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）（フルベストラント）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール）、ホルメスタン、グルココルチコイド、ＨＥＣＴＯＲＯＬ（登録商標）（ドキセルカルシフェロール）、ＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）（炭酸セベラマー）、ラソホキシフェン、リュープロリド酢酸塩、ＭＥＧＡＣＥ（登録商標）（メゲステロール）、ＭＩＦＥＰＲＥＸ（登録商標）（ミフェプリストン）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮ（商標）（ニルタミド）、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）（タモキシフェンクエン酸塩）、ＰＬＥＮＡＸＩＳ（商標）（アバレリクス）、プレドニゾン、ＰＲＯＰＥＣＩＡ（登録商標）（フィナステリド）、リロスタン、ＳＵＰＲＥＦＡＣＴ（登録商標）（ブセレリン）、ＴＲＥＬＳＴＡＲ（登録商標）（黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ））、ＶＡＮＴＡＳ（登録商標）（ヒストレリン植込錠）、ＶＥＴＯＲＹＬ（登録商標）（トリロスタンまたはモドラスタン）、及びＺＯＬＡＤＥＸ（フォスレリン、ゴセレリン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３２】
デルトイド及びレチノイドには、セオカルシトール（ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３）、レキサカルシトール（ＫＨ１０６０）、フェンレチニド、ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標）（アリレチノイン（ａｌｉｒｅｔｉｎｏｉｎ））、ＡＴＲＡＧＥＮ（登録商標）（リポソームトレチノイン）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）（ベキサロテン）、及びＬＧＤ−１５５０が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３３】
ＰＡＲＰ阻害薬には、ＡＢＴ−８８８（ベリパリブ）、ＫＵ−５９４３６、ＡＺＤ−２２８１（オラパリブ）、ＡＧ−０１４６９９（ルカパリブ）、ＭＫ４８２７（ニラパリブ）、ＢＭＮ−６７３（タラゾパリブ）、イニパリブ、ＢＳＩ−２０１、ＢＧＰ−１５、ＩＮＯ−１００１、及びＯＮＯ−２２３１が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３４】
植物アルカロイドには、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３５】
プロテアソーム阻害剤には、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）（ボルテゾミブ）、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（登録商標）（カルフィルゾミブ）、ＭＧ１３２、ＮＰＩ−００５２、及びＰＲ−１７１が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３６】
免疫薬の例には、インターフェロン、免疫チェックポイント阻害剤、共刺激剤、及び他の免疫増強剤が含まれるが、これらに限定されない。インターフェロンには、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ−１ａ、ＡＣＴＩＭＭＵＮＥ（登録商標）（インターフェロンガンマ−１ｂ）またはインターフェロンガンマ−ｎ１、その組み合わせ等が含まれる。免疫チェックポイント阻害剤には、ＰＤ−Ｌ１を標的とする抗体（例えば、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、及びＣＴＬＡ４（細胞傷害性リンパ球抗原４；例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）が含まれる。共刺激剤には、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１３７（例えば、ウレルマブ）、Ｂ７Ｈ１、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ−Ｒ、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＮＫＧ２Ａ、ＫＩＲ（例えば、リリルマブ）、ＴＧＦ−β（例えば、フレゾリムマブ）及びそれらの組み合わせに対する抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３７】
他の薬剤には、ＡＬＦＡＦＥＲＯＮＥ（登録商標）（ＩＦＮ−α）、ＢＡＭ−００２（酸化型グルタチオン）、ＢＥＲＯＭＵＮ（登録商標）（タソネルミン）、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）（トシツモマブ）、ＣＡＭＰＡＴＨ（（登録商標）アレムツズマブ）、ダカルバジン、デニロイキン、エプラツズマブ、ＧＲＡＮＯＣＹＴＥ（登録商標）（レノグラスチム）、レンチナン、白血球アルファインターフェロン、イミキモド、メラノーマワクチン、ミツモマブ、モルグラモスチム、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標）（フィルグラスチム）、ＯｎｃｏＶＡＣ−ＣＬ、ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）（オレゴボマブ）、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、ＰＲＯＶＥＮＧＥ（登録商標）（シプロイセル−Ｔ）、サルガラモスチム（ｓａｒｇａｒａｍｏｓｔｉｍ）、シゾフィラン、テセロイキン、ＴＨＥＲＡＣＹＳ（登録商標）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）、ウベニメクス、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（登録商標）（免疫療法薬、Ｌｏｒｕｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｚ−１００（丸山ワクチン（ＳＳＭ））、ＷＦ−１０（テトラクロロデカオキシド（ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｅｃａｏｘｉｄｅ）（ＴＣＤＯ））、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）（アルデスロイキン）、ＺＡＤＡＸＩＮ（登録商標）（サイマルファシン）、ＺＩＮＢＲＹＴＡ（登録商標）（高収率合成ダクリズマブ）、及びＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３８】
生物学的応答調節剤は、生物の防御機構または生物学的応答、例えば、組織細胞の生存、増殖または分化を調節して、抗腫瘍活性を有するように誘導する薬剤であり、これには、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン、ピシバニルＰＦ−３５１２６７６（ＣｐＧ−８９５４）、及びウベニメクスが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３９】
ピリミジン類似体には、シタラビン（ａｒａ  ＣまたはアラビノシドＣ）、シトシンアラビノシド、ドキシフルリジン、ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標）（フルダラビン）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、フロキシウリジン、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、ＴＯＭＵＤＥＸ（登録商標）（ラチトレキセド（ｒａｔｉｔｒｅｘｅｄ））、及びＴＲＯＸＡＴＹＬ（商標）（トリアセチルウリジントロキサシタビン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４０】
プリン類似体には、ＬＡＮＶＩＳ（登録商標）（チオグアニン）及びＰＵＲＩＮＥＴＨＯＬ（登録商標）（メルカプトプリン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４１】
抗有糸分裂剤には、バタブリン、エポチロンＤ（ＫＯＳ−８６２）、Ｎ−（２−（（４−ヒドロキシフェニル）アミノ）ピリジン−３−イル）−４−メトキシベンゼンスルホンアミド、イキサベピロン（ＢＭＳ２４７５５０）、ＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル）、ＰＮＵ１００９４０（１０９８８１）、パツピロン、ＸＲＰ−９８８１（ラロタキセル）、ビンフルニン、及びＺＫ−ＥＰＯ（合成エポチロン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４２】
ユビキチンリガーゼ阻害剤には、ヌトリン等のＭＤＭ２阻害剤、及びＭＬＮ４９２４等のＮＥＤＤ８阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４３】
組換えＤＣ及び関連組成物はまた、放射線療法の有効性を高めるために使用され得る。放射線療法の例には、外部ビーム放射線療法、内部放射線療法（すなわち、近接照射療法）及び全身放射線療法が含まれる。
【０２４４】
組換えＤＣ及び関連組成物は、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（ＡＢＩ−００７）、ＡＢＴ−１００（ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬）、ＡＤＶＥＸＩＮ（登録商標）（Ａｄ５ＣＭＶ−ｐ５３  ワクチン）、ＡＬＴＯＣＯＲ（登録商標）またはＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン）、ＡＭＰＬＩＧＥＮ（登録商標）（ポリＩ：ポリＣ１２Ｕ、合成ＲＮＡ）、ＡＰＴＯＳＹＮ（登録商標）（エキシスリンド）、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）（パミドロン酸）、アルグラビン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アタメスタン（１−メチル−３，１７−ジオン−アンドロスタ−１，４−ジエン）、ＡＶＡＧＥ（登録商標）（タザロテン）、ＡＶＥ−８０６２（コンブレアスタチン（ｃｏｍｂｒｅａｓｔａｔｉｎ）誘導体）ＢＥＣ２（ミツモマブ）、カケクチンまたはカケキシン（ｃａｃｈｅｘｉｎ）（腫瘍壊死因子）、カンバキシン（ｃａｎｖａｘｉｎ）（ワクチン）、ＣＥＡＶＡＣ（登録商標）（がんワクチン）、ＣＥＬＥＵＫ（登録商標）（セルモロイキン）、ＣＥＰＬＥＮＥ（登録商標）（ヒスタミン二塩酸塩）、ＣＥＲＶＡＲＩＸ（登録商標）（ヒトパピローマウイルスワクチン）、ＣＨＯＰ（登録商標）（Ｃ：ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）（シクロホスファミド）；Ｈ：ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ヒドロキシドキソルビシン）；Ｏ：Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；Ｐ：プレドニゾン）、ＣＹＰＡＴ（商標）（酢酸シプロテロン）、コンブレスタチンＡ４Ｐ（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ  Ａ４Ｐ）、ＤＡＢ（３８９）ＥＧＦ（ヒト上皮増殖因子受容体にＨｉｓ−Ａｌａリンカーを介して融合されたジフテリア毒素の触媒及び転座ドメイン）またはＴｒａｎｓＭＩＤ−１０７Ｒ（商標）（ジフテリア毒素）、ダカルバジン、ダクチノマイシン、５，６−ジメチルキサンテノン−４−酢酸（ＤＭＸＡＡ）、エニルウラシル、ＥＶＩＺＯＮ（商標）（乳酸スクアラミン）、ＤＩＭＥＲＩＣＩＮＥ（登録商標）（Ｔ４Ｎ５  リポソームローション）、ディスコデルモライド、ＤＸ−８９５１ｆ（エキサテカンメシル酸塩）、エンザスタウリン、ＥＰＯ９０６（エポチロンＢ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標）（組換え４価ヒトパピローマウイルス（６型、１１型、１６型、１８型）ワクチン）、ＧＡＳＴＲＩＭＭＵＮＥ（登録商標）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、ＧＭＫ（ガングリオシド複合体ワクチン）、ＧＶＡＸ（登録商標）（前立腺癌ワクチン）、ハロフギノン、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、イバンドロン酸、ＩＧＮ−１０１、ＩＬ−１３−ＰＥ３８、ＩＬ−１３−ＰＥ３８ＱＱＲ（シントレデキンベスドトクス）、ＩＬ−１３−ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、インターフェロン−α、インターフェロン−γ、ＪＵＮＯＶＡＮ（商標）またはＭＥＰＡＣＴ（商標）（ミファムルチド）、ロナファルニブ、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、ミルテホシン（ヘキサデシルホスホコリン）、ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（登録商標）（ＡＥ−９４１）、ＮＥＵＴＲＥＸＩＮ（登録商標）（グルクロン酸トリメトレキサート）、ＮＩＰＥＮＴ（登録商標）（ペントスタチン）、ＯＮＣＯＮＡＳＥ（登録商標）（リボヌクレアーゼ酵素）、ＯＮＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）（メラノーマワ��チン治療）、ＯＮＣＯＶＡＸ（登録商標）（ＩＬ−２ワクチン）、ＯＲＡＴＨＥＣＩＮ（商標）（ルビテカン）、ＯＳＩＤＥＭ（登録商標）（抗体ベース細胞薬物）、ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）ＭＡｂ（マウスモノクローナル抗体）、パクリタキセル、ＰＡＮＤＩＭＥＸ（商標）（２０（Ｓ）プロトパナキサジオール（ａＰＰＤ）及び２０（Ｓ）プロトパナキサトリオール（ａＰＰＴ）を含むチョウセンニンジン由来アグリコンサポニン）、パニツムマブ、ＰＡＮＶＡＣ（登録商標）−ＶＦ（治験がんワクチン）、ペガスパルガーゼ、ＰＥＧインターフェロンＡ、フェノキソジオール、プロカルバジン、レビマスタット、ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標）（カツマキソマブ）、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）（レナリドミド）、ＲＳＲ１３（エファプロキシラール）、ＳＯＭＡＴＵＬＩＮＥ（登録商標）ＬＡ（ランレオチド）、ＳＯＲＩＡＴＡＮＥ（登録商標）（アシトレチン）、スタウロスポリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｓ）、タラボスタット（ＰＴ１００）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）（ベキサロテン）、ＴＡＸＯＰＲＥＸＩＮ（登録商標）（ＤＨＡ−パクリタキセル）、ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）（カンホスファミド、ＴＬＫ２８６）、テミリフェン、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）（テモゾロミド）、テスミリフェン、サリドマイド、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）（ＳＴｎ−ＫＬＨ）、チミタク（２−アミノ−３，４−ジヒドロ−６−メチル−４−オキソ−５−（４−ピリジルチオ）キナゾリンジヒドロクロリド）、ＴＮＦＥＲＡＤＥ（商標）（アデノベクター：腫瘍壊死因子−αの遺伝子を含有するＤＮＡ担体）、ＴＲＡＣＬＥＥＲ（登録商標）またはＺＡＶＥＳＣＡ（登録商標）（ボセンタン）、トレチノイン（レチン−Ａ）、テトランドリン、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（登録商標）（三酸化ヒ素）、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（登録商標）、ウクライン（ｕｋｒａｉｎ）（クサノオウ（ｇｒｅａｔｅｒ  ｃｅｌａｎｄｉｎｅ）植物由来アルカロイドの誘導体）、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）（抗アルファｖベータ３抗体）、ＸＣＹＴＲＩＮ（登録商標）（モテキサフィンガドリニウム）、ＸＩＮＬＡＹ（商標）（アトラセンタン）、ＸＹＯＴＡＸ（商標）（ポリグルタミン酸付加パクリタキセル）、ＹＯＮＤＥＬＩＳ（登録商標）（トラベクテジン）、ＺＤ−６１２６、ＺＩＮＥＣＡＲＤ（登録商標）（デキスラゾキサン）、ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）（ゾレンドロン酸（ｚｏｌｅｎｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ））、及びゾルビシン、ならびにこれらの薬剤のうちのいずれかの組み合わせ等、他の化学療法薬に補助的またはそれらと共に投与され得る。
【０２４５】
キット
さらに、これらの組換え樹状細胞組成物の特定の成分または実施形態は、キットにして提供することができる。例えば、組換え樹状細胞組成物のいずれか、ならびに自己または他の腫瘍細胞ライセート組成物は、単独、または、コンディショニング前もしくはコンディショニング後のステップからの他の薬剤のいずれかの別個の容器、及び任意選択の使用説明書と共にキットとして、凍結され、包装された状態で提供することができる。
【０２４６】
いくつかの実施形態はまた、キット内の前述の細胞組成物のいずれも対象とする。いくつかの実施形態では、キットは、アンプル、使い捨てシリンジ、カプセル、バイアル、チューブ等を含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書の実施形態の局所製剤を含む単回投与容器または頻回投与容器を含み得る。いくつかの実施形態では、各投与容器は１つ以上の単位用量を含有し得る。いくつかの実施形態では、キットには、アプリケーターが含まれ得る。いくつかの実施形態では、キットには、コンディショニング／治療の各段階に必要なすべての構成要素が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞組成物は、保存剤を有する場合と保存剤を含まない場合（例えば、単回使用容器）がある。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、またはＣＤ９３のうちのいずれか１つ以上を発現する組換え樹状細胞組成物は、病院または治療機関への輸送に好適な未熟段階に調製して凍結され得る。いくつかの実施形態では、自己、または、例えば、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３等の細胞株に由来するメラノーマ細胞ライセート、またはそれらの組み合わせ、のいずれかの搭載用抗原は、標準的方法を使用して、組換え樹状細胞組成物とは別に調製して凍結し、これらの組成物が病院または治療機関に輸送されてから以降の処理及び患者への投与が行われ得るようにすることができる。さらに他の実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、またはＣＤ９３のうちのいずれか１つ以上を発現する組換え樹状細胞組成物は、調製してから、所望の自己、または、例えば、ＤＤＭ−１．７、ＤＤＭ−１．１３等の細胞株に由来するメラノーマ細胞ライセートと混合して、組換え樹状細胞への腫瘍抗原の搭載を促進してよく、その後、この混合物は凍結され、これらの組成物が病院または治療機関に輸送されてから以降の処理及び患者への投与が行われ得るようにする。
【０２４７】
さらに、特定の患者では、腫瘍または感染因子（複数可）に対する免疫系応答を高めるために、方法または治療レジメンのうちのいずれかが定期的に繰り返されることが予想される。そのような定期的治療は、患者が必要とする限りは維持療法として、週１回、月１回から、２か月に１回まで、３か月に１回まで、４か月に１回まで、５か月に１回まで、６か月に１回まで、または７か月に１回、または８か月に１回、または９か月に１回、または１０か月に１回、または１１か月に１回、または年１回までと異なり得る。
【０２４８】
治療の概要
いくつかの実施形態では、患者のＴ細胞及びＢ細胞の誘引を最大限にし、抗腫瘍の細胞性及び液性の免疫応答カスケードを発生させるために、ａｌｌｏＤＣに、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を形質導入する。
【０２４９】
任意選択のさらなる実施形態では、ＣＤ４０Ｌ＋及びＣＸＣＬ１３＋のａｌｌｏＤＣへのＣＤ９３形質導入により、同種ＤＣと宿主ＤＣ間のクロストークがさらに促進され、安定かつ持続性の宿主抗腫瘍免疫原性が作り出される。
【０２５０】
腫瘍の生検または切除を行うことが可能な患者では、切除した腫瘍標本及び生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行う。発現プロファイリングで、少なくとも３つの断片がＧＭＰ−ＭＣＶと共有されることが示される場合には、組換えｉｍＤＣに、ＤＣが成熟する前にインビトロでＧＭＰ−ＭＣＶ（同種または「既製」の腫瘍ライセート）を搭載する。
【０２５１】
同種／既製のライセートと共有される腫瘍断片が試料にない患者の場合、自己腫瘍ライセートを生成し、その腫瘍ライセートが未熟組換えａｌｌｏＤＣに提示され、自己腫瘍ライセートは組換え未熟ａｌｌｏＤｃによって処理され、提示される。
【０２５２】
切除不能及び生検不能である患者の場合はいずれも、組換えＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ａｌｌｏＤＣ（または任意選択でさらにＣＤ９３＋を含む）細胞組成物を免疫アジュバントとして、抗原は搭載せずに患者に投与される。このＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋（任意選択の）ＣＤ９３  ＡｌｌｏＤＣアプローチを使用することにより、末期段階のがん患者は、腫瘍の新規抗原に対して新たな抗腫瘍の細胞性及び液性免疫応答を開始して、迅速、効率的かつ低費用の治療法で既存の免疫応答を強化することができる。
【０２５３】
これらの選択肢の概要を以下に記載する。
【０２５４】
選択肢１：ＭｅｌＣａｎｃｅｒＶａｃ（ＭＣＶ）腫瘍ライセートの発現プロファイルとの交差適合について、切除した腫瘍標本及び生検標本のタンパク質発現プロファイルのスクリーニングを行う。発現プロファイリングがＧＭＰ−ＭＣＶ腫瘍ライセートと同じ少なくとも３つの断片を示す場合、その患者には、既製の製品である、ＭＣＶ腫瘍ライセートのパルス、増強／活性化済み組換え同種ＤＣワクチン（ａｌｌｏＤＣ／ＭＣＶ腫瘍ライセート）を使用することができる。
【０２５５】
選択肢２：タンパク質発現プロファイルがＭＣＶライセートのプロファイルに適合しない場合、自己腫瘍ライセートを未熟組換えａｌｌｏＤＣに提示し、インビトロでパルスした後、成熟させる。
【０２５６】
選択肢３：切除不能及び非生検の患者の場合、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３（及び任意選択でＣＤ９３）組換えａｌｌｏＤＣは、抗原のパルスまたは活性化を用いずに免疫アジュバントとして投与することができる。
【０２５７】
組換えＤＣ細胞を作製するための選択肢は、精製ヒトＣＤ１４＋単球にＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を形質導入するために、レンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターではなく組換えアデノウイルスベクター／ＣＲＩＳＰＲ  Ｃａｓ９を使用することである。組換え／遺伝子導入単球が、機能的かつ免疫原性のＤＣへと確実に分化することができるよう、形質導入効率ならびに形質導入された単球の機能性を、遊走、分化、及びサイトカイン分泌を含めて評価する。
【０２５８】
アデノウイルス（ＡｄＶ）を使用することは、細胞の有糸分裂状態に関係なく、造血由来細胞を含めた多くの細胞型で形質導入効率が高いこと等、いくつかの理由から有益である。別の利点は、複製欠陥ＡｄＶで臨床上の安全性プロファイルが実証されていることである。さらに、ＡｄＶでは高レベルの導入遺伝子発現が得られるため、ＡｄＶで形質導入したＤＣは抗原タンパク質を効果的に提示することができる。組換えアデノウイルスベクターにより、未熟ＤＣに９５％の効率まで首尾よくトランスフェクトすることができる。（Ｌｅｉ  Ｚｈｏｎｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９．２９：９６４−９７２を参照のこと）。しかしながら、レンチウイルスベクターを含め、追加のウイルスベクター系を利用できることも予想される。（Ｖｅｃｔａｌｙｓ（Ｔｏｕｌｏｕｓｅ  Ｆｒａｎｃｅ）等の商業的供給源及び米国特許第１０，２７２，１１１号における関連方法を参照のこと）。
【０２５９】
ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１３（ＣＸＣＬ１３）は、Ｂリンパ球化学誘引物質（ＢＬＣ）またはＢ細胞誘引ケモカイン１（ＢＣＡ−１）としても知られる、ヒトでＣＸＣＬ１３遺伝子によってコードされるタンパク質リガンドである。ＣＸＣＲ５は、ＣＸＣＬ１３に対する受容体である。ケモカイン発現は、リンパ球の動員と刺激という正のループを開始させる。腸上皮細胞でＣＸＣＬ１３を過剰発現させると、粘膜固有層でのＢ細胞数の顕著な増加、及び小腸のリンパ濾胞のサイズと数の増加が促進された。（Ｆ．Ｍａｒｃｈｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９．２（６）：４８６−４９４を参照のこと）。
【０２６０】
これらの結果は、炎症状態にある間、腸でのＣＸＣＬ１３の過剰発現は、Ｂ細胞、ならびに免疫調節及び修復機能を有するＬＴｉ及びＮＫ細胞の動員に有利に働くことを示唆している。
【０２６１】
ＣＤ１５４とも呼ばれるＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、ＴＮＦスーパーファミリーの分子のメンバーであるタンパク質である。これは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ４０に結合し、これにより、標的細胞型に応じた多くの作用がもたらされる。ＣＤ４０Ｌには、ＣＤ４０、α５β１インテグリン及びαＩＩｂβ３の全部で３つの結合パートナーがある。ＣＤ１５４は、共刺激分子として働き、濾胞ヘルパーＴ細胞（ＴＦＨ細胞）と呼ばれるＴ細胞サブセットでは特に重要である。ＴＦＨ細胞では、ＣＤ４０Ｌは、Ｂ細胞表面のＣＤ４０と結合することによってＢ細胞の成熟と機能を促進し、そのため、細胞間コミュニケーションが促進される。ＣＤ４０Ｌの安定発現により、ＤＣは、ＩＬ−１２を産生して免疫抑制を克服し、メモリーＴ細胞の分化を誘発することができる。
【０２６２】
ＣＤ９３は、約１２０ｋＤａのＯ−シアロ糖タンパク質であり、造血系内で骨髄系の細胞に選択的に発現する。その一次構造と機能は最近まで不明であった。ＣＤ９３  ｃＤＮＡを単離するためにレトロウイルス発現クローニングが利用された。シークエンス解析により、ＣＤ９３は、Ｃ１ｑ受容体（Ｃ１ｑＲｐ）と呼ばれるヒト食細胞上のタンパク質と同一であることが明らかになった。Ｃ１ｑＲｐは、単球の食作用増強を媒介することが先に示されており、Ｃ１ｑ及び他の２つの構造的に関連する分子の受容体であることが示唆された。ＣＤ９３形質導入体と対照細胞を研究したところ、ＣＤ９３を発現する細胞はＣ１ｑと結合する能力が増強されていることがわかった。さらに、未熟樹状細胞（ＤＣ）はＣＤ９３／Ｃ１ｑＲｐを発現し、また抗原取り込み能が低下していることと、食作用が失われていることが知られている成熟ＤＣは、ＣＤ９３／Ｃ１ｑＲｐ発現が弱〜陰性を示すことが示された。本明細書で提供される異種タンパク質の形質導入用細胞の供給源として使用される細胞は、どのドナーのものでも可能である。いくつかの実施形態では、ドナーから単離された細胞が、それを投与される対象にとって同種であると見なされることが確立されるよう、ドナーのスクリーニングを行う。いくつかの実施形態では、ドナーのスクリーニング基準には、ドナーの年齢、ドナーの性別、ドナーの民族性、ドナーのＡＢＯ／Ｒｈ；ドナーのＢＭＩ（体重と身長）、ドナーのＨＬＡ高解像度タイピングを含めた、ドナーの人口統計が含まれ得る。
【０２６３】
さらに、いくつかの実施形態では、ドナー試料は、白血球アフェレーシス材料（またはそのような供給源材料でも）で、輸血についての完全なパネル検査（ＦＤＡ）を受けることができ、これには、ＣＭＶ検査；梅毒の血清学的検査及び抗体スクリーニング；以下の検査のうち１つ以上を含む感染症パネル：Ｂ型肝炎コア抗体（抗ＨＢｓ  ＥＩＡ）；Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ  ＥＩＡ）；Ｃ型肝炎ウイルス抗体（抗ＨＣＶ  ＥＩＡ）；ヒト免疫不全ウイルスＡｂ（ＨＩＶ１／２、及びグループＯ）；ヒトＴリンパ球向性ウイルス抗体（ＨＴＬＶ−Ｉ／ＩＩ）；ＨＩＶ−１／ＨＧＶ／ＨＢＶ核酸検査；ＷＮＶ核酸検査；Ｔｒｙｐａｎａｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ抗体；及びジカ、が含まれる。したがって、いくつかの実施形態では、ドナー細胞または患者に投与される細胞は、ＣＭＶ、梅毒、肝炎Ａ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ−Ｉ／ＩＩ、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、Ｔｒｙｐａｎａｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、及び／またはジカを含まないドナーに由来する。
【０２６４】
試料は、単球のパーセンテージと数について血球分析装置及びフローサイトメトリーによって評価され得る。
【０２６５】
試料は、アフェレーシスによるか、または全血採取によって採取され、標準的検査の対象となり得る。特定の場合には、採取は、Ｏｐｔｉａでの白血球アフェレーシス採取によるものである。試料は、生存率とＣＤ１４＋の割合（％）について分析し、ＣＤ１４＋単球を計数する。
【０２６６】
ＣｌｉｎｉＭＡＣＳを標準的手順に従って使用して、陰性単球の単離を実施することはもう一つの選択肢である。
【０２６７】
単離後の純度と細胞数
いくつかの実施形態では、精製された単球は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３（及び特定の実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３）を含むアデノウイルスベクターでトランスフェクトされる。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、精製された単球は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３（及び特定の実施形態では、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３）を含むレンチウイルスベクターでトランスフェクトされる。
【０２６９】
ウイルスベクターへの曝露後、陽性に形質導入された単球を選択することができる。例えば、細胞は、以下の陽性または陰性マーカーのうちの１つ以上で選択することができる：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＣＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、またはＣＤ２０９。
【０２７０】
特定の場合には、収率を計算できるよう、陽性選別の前に細胞の形質導入効率を評価する。形質導入効率はＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３＋の単球細胞の予想される収率を決定するのに必要／有用である。
【０２７１】
本明細書で提供されるように、細胞は単球であり得、インビトロで未熟樹状細胞に分化させることができる。いくつかの実施形態では、細胞（形質導入されたもの、または形質導入されていないもの）を遠心分離にかけて細胞を単離する。細胞は、例えば、４００×ｇで室温（ＲＴ）にて１０分間、低ブレーキで遠心分離にかけることができる。遠心分離された細胞は、その上清から分離することができる。遠心分離された細胞は、Ｘ−ＶＩＶＯ  １５、（１０００単位／ｍｌ）等の組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ、及びＩＬ−４（１０００単位／ｍｌ）と共に細胞培養フラスコに再懸濁させることができ、細胞を、少なくとも、または約１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、または１０日間、インキュベーターで単球に分化させることができる。いくつかの実施形態では、細胞を約４〜約８日間分化させる。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、分化させた細胞をその後、細胞培地から採取して遠心分離にかけることができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞培地を、培養フラスコから遠沈管に採取する。ＰＢＳを細胞培養フラスコ内に入れ、フラスコ表面を覆うことができる。細胞培養フラスコは、ＰＢＳと共に３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで約３０分間インキュベートすることができる。いくつかの実施形態では、インキュベーション後、フラスコを軽く叩いてフラスコの内容物を遠沈管に採取する。フラスコをすすぎ、遠沈管に採取することができる。いくつかの実施形態では、採取した細胞は、例えば、４００×ｇで室温にて１０分間、低ブレーキで遠心分離にかけることができる。遠心分離後、細胞をその上清から分離し、細胞を単離する。細胞を再懸濁させ、生存率について分析する。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、試料を細胞数について分析し、関連バイオマーカーをフローサイトメトリーで同定する。それらは、以下の陽性または陰性マーカーのうちの１つ以上によって分析することも、またはそれらで選択することもできる：Ｌｉｎａｇｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ（ＣＤ３−、ＣＤ５６−、ＣＤ１９−、ＣＤ６６ｂ−）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４＋、ＣＤ４０Ｌ＋、ＣＸＣＬ１３＋、ＣＤ１ｃ＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０ｌｏｗ、ＣＤ８３−、ＣＤ１６Ｌｏｗ、ＣＤ３３＋、ＣＤ１６３−、ＣＤ２０６＋、またはＣＤ２０９。
【０２７４】
本明細書で提供されるように、単球は、レンチウイルスまたはアデノウイルス等のウイルスベクターを用いて形質導入することができる。ウイルスによる形質導入のいずれのプロトコルも使用することができる。例えば、細胞は、培地カクテルで培養することができる。いくつかの実施形態では、培地は、１００ｎｇ／ｍＬのｍＦｌｔ３Ｌ／ｍＴＰＯ／ｍＳＣＦ、及び３０ｎｇ／ｍＬのｍＩＬ−３を含む。細胞を、例えば、この培地に入れて培養し、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、または活性化されるまでインキュベートすることができる。活性化後、細胞は、ＰＧＥ２で前処理することができる。次いで、細胞を適切なベクターで形質導入することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスを、１０、１００、または１００のＭＯＩ（感染多重度）で加える。形質導入後、細胞は、例えば、ベクターによってコードされる異種タンパク質のうち１つ以上に結合する、ビーズまたは精製用製品を使用して単離することができる。例えば、ＣＤ４０Ｌマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、細胞を形質導入工程後に採取し、ＣＤ４０Ｌを発現する細胞を精製することができる。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３４＋レンチウイルス＋形質導入細胞等の形質導入された単球を、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋単球に分化させるためには、精製ＣＤ３４＋Ｌｖ＋細胞は、３〜１０日間、Ｇ−Ｒｅｘ  １０Ｍに入れた増殖培地（Ｘ−ＶＩＶＯ  １０培地；ヒトＡＢ血清１０％；ｒｈＳＣＦ  ５０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ＴＰＯ  １５ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ＩＬ−３  ３０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；Ｆｌｔ−３Ｌ  ３０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））で、１×１０５ＣＤ３４＋細胞／ｍｌを培養することにより増殖させることができる。細胞の増殖後（１〜１０日）、細胞は、Ｇ−Ｒｅｘ  １００Ｍに入れた分化培地に移して１４日間おくことができる。分化培地の非限定的な例の１つとして、２０％のヒトＡＢ血清；ＳＣＦ  ２５ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；Ｍ−ＣＳＦ  ３０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ＩＬ−３  ３０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；及びＦｌｔ−３Ｌ  ３０ｎｇ／ｍｌ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加したＩＭＤＭが挙げられる。次いで、細胞は、分化カクテル内で約または少なくとも１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、もしくは１０日間インキュベートすることができる。分化カクテルの非限定的な例は、ＲＰＭＩ−１６４０；３％ヒトＡＢ血清；ＧＭ−ＣＳＦ  ９００ＩＵ／ｍｌ；ＩＬ−４  １０００ＩＵ／ｍｌ；ＴＮＦアルファ  ４００ＩＵ／ｍｌ；及びＴＧＦベータ１  ０．２ｎｇ／ｍｌである。分化カクテルは、単球の未熟樹状細胞への分化を増進することができる。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、未熟樹状細胞の成熟をさらに増進するために、細胞を成熟カクテルに入れてインキュベートすることができる。いくつかの実施形態では、成熟カクテルは、抗原、腫瘍ライセートまたは生きている腫瘍細胞を含む。これらの例を本明細書で提供する。成熟カクテルには、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ  ５００ＩＵ／ｍｌ；ＩＬ−１５  ４００ｎｇ／ｎｌ；ＩＦＮガンマ  １００ｎｇ／ｍｌ；ＴＮＦアルファ  ２ｎｇ／ｍｌ；及びＰｇＥ２  ２ｍｃｇ／ｍｌが含まれ得る。量は例示に過ぎず、そのような量に限定されない。したがって、いくつかの実施形態では、成熟組成物（カクテル）は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１５、ＩＦＮガンマ、ＴＮＦアルファ、及び／またはＰｇＥ２を含む。細胞は、この成熟組成物中で約１２〜約４８時間、約２０〜約４０時間、約３０〜約３８時間、約、または少なくとも、１２時間、１６時間、１８時間、２０時間、２４時間、２８時間、３２時間、３６時間、４０時間、４４時間、もしくは４８時間、インキュベートすることができる。成熟カクテルはまた、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、及び／またはｐＩＣも含むことができる。
【０２７７】
これらの実施形態のうち１つ以上を使用した実験の結果は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳで単離されたＣＤ１４＋単球を使用した代表的表現型及び純度評価を図２Ａ〜図２Ｆに示す。
【０２７８】
未熟組換えＤＣは、図４Ａ及び図４Ｂに示される貪食能を示すことが示された。図４Ａ及び図４Ｂの結果では、蛍光標識したＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）粒子の未熟ＤＣ生成物による食作用がフローサイトメトリーで観察された。図４Ａは陰性対照であり、一方の図４Ｂは、８６．１３％の生成物が蛍光標識Ｅ．ｃｏｌｉ粒子を貪食したことを示す。使用されるアッセイは、任意の食作用アッセイであり得る。
【０２７９】
さらに、図５Ａ〜図５Ｄは、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）の希釈によって示されるように、組換えＤＣが同種Ｔ細胞増殖を刺激したことを示す。図５Ａ〜図５Ｄに示されている結果では、同種Ｔ細胞はＣＦＳＥで標識され、組換えａｌｌｏＤＣと共に共培養された。Ｔ細胞の増殖は、ＣＦＳＥの希釈によって観察され得る。左の列（図５Ａ及び図５Ｃ）は４日目の増殖を示し、右の列は７日目の増殖を示した（図５Ｂ及び図５Ｄ）。これらの結果は、組換えａｌｌｏＤＣが同種Ｔ細胞増殖を刺激したことを示している。
【０２８０】
本組成物及び本方法の有用な態様には、患者の治療を容易にするため、現地の病院で使用するための既製ワクチンを提供するために組換えＤＣを保存しておけることが含まれる。そのような組換えＤＣは、その後、３つの異なる方法での処理が考えられる：１）それらに自己腫瘍ライセートを搭載することができる、または（２）他の場合には、それらにＭＣＶ腫瘍ライセート（Ｄａｎｄｒｉｔ  ＧＭＰ：患者の腫瘍の３つ以上のエピトープがＭＣＶ抗原プールに存在する場合）、もしくは別の市販の同種腫瘍ライセートを搭載することができる；または（３）切除不能の腫瘍の場合は抗原搭載が行われない可能性がある。
【０２８１】
組換えＤＣワクチン調製の次のステップでは、組換えａｌｌｏＤＣを組換えヒトサイトカインのカクテル、例えば、上記のもの等で成熟させる。
【０２８２】
その後、細胞は表現型であり、機能性を評価し（図４及び図５に示すとおり）、ならびに関連する導入遺伝子（例えば、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１３、及びＣＤ９３）の発現について評価する。最後に、組換えＤＣを凍結する、より具体的には凍結保存する、典型的には、制御された速度で凍結保存し、その後、解凍した後、臨床の場で利用する。そのような細胞は、がん、腫瘍、及び悪性疾患を治療するための組換えＤＣ生物学的ワクチン／免疫アジュバントの基礎となる。治療、細胞調製、及びワクチン接種工程の概略図を図９に示す。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、細胞を凍結し、これは、凍結保存と呼ばれ得る。細胞は、例えば、ＣｒｙｏＳｔｏｒ  ＣＳ５（凍結培地）を使用して凍結することができる。ただし、これは、培地を凍結することの非限定的な例であり、他の凍結培地を使用することができる。細胞は、最初、４℃に冷却することができる。その後、細胞を約−２０℃にさらに冷却することができる。細胞を遠心分離にかけるかまたは追加の凍結培地に再懸濁した後、−９０℃まで段階的に冷却することができる。その後、細胞は液体窒素に保存することができる。いくつかの実施形態では、細胞をクライオバッグに入れて凍結する。
【０２８４】
細胞は、３７℃の水浴で解凍することによって解凍することができる。いくつかの実施形態では、水浴中で細胞を動かさずに、すなわち、８の字を描くように動かすこと、または軽く叩くことはせずに細胞を解凍する。その後、細胞を血漿及び温めた解凍培地と接触させることができる。その後、細胞を、対象に投与される前に、生存率について分析することができる。マーカーの例は、本明細書及び上記に提供される。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、樹状細胞をサイトカインカクテルで成熟させる、及び／またはＤＣに自己腫瘍ライセート／ＭＣＶを搭載する。例えば、生存未熟ＤＣを腫瘍ライセートと共に、またはＭＣＶをＤＣ細胞と共に培養することができる。これは、上記のような成熟カクテルか、または、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、及びｐＩＣを含む組成物の存在下で行うことができる。細胞を、この組成物と共に、約１２〜約３６時間、例えば、または約、または少なくとも、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、もしくは３０時間、インキュベートすることができる。その後、成熟細胞を採取して分析することができる。成熟細胞はまた、本明細書に記載されるような凍結培地及び段階的凍結工程を使用して凍結することもできる。
【０２８６】
本明細書に記載されるように、細胞は、腫瘍ライセートと共にインキュベートするか、またはそれを搭載することができる。腫瘍ライセートは、どのような様態でも調製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、腫瘍材料を提供する（単離されたもの、取得されたもの、切除されたもの等）。試料は、液体窒素で瞬間凍結させることができる。いくつかの実施形態では、試料は、非悪性組織を含まない。これは、試料が非悪性組織を含まずに除去されたこと、または試料がそのような非悪性組織を除去するためにさらに処理されていること、を意味し得る。その後、試料を解凍し、１〜５回瞬間凍結して細胞の溶解を助けることができる。ライセートは、遠心分離し、濾過して腫瘍ライセートを調製することができる。ライセートは、例えば、−８０℃のフリーザーで凍結することができる。
【０２８７】
ここで、以下の実施例を参照にしながら実施形態を説明する。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されており、実施形態は、これらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるすべての変形を包含すると解釈されるべきである。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすために変更または修正が可能であると考えられる重要性の低い様々なパラメータを容易に認識するであろう。
【実施例】
【０２８８】
実施例１
転移性大腸癌の切除不能な患者
患者の男性は２９歳の時に大腸癌と診断され、６ｃｍの原発性大腸腫瘍は診断時に除去された。患者は補助化学療法を受けなかった。患者は、初回手術から１８か月後、原発腫瘍病変の再発を呈し、腸間膜及び肝臓に複数の転移を伴っていた。患者は、原発腫瘍再発（１６ｃｍ）により直腸結腸の通路が閉塞していたため、緊急人工肛門造設手術を受けた。人工肛門造設手術中に患者の原発腫瘍からコア生検を採取した。手術の３週間後、本明細書で上述されるような、ＣＤ４０Ｌを提示する自己腫瘍細胞でパルスし、成熟カクテルで成熟させた、同種ＤＣの投与が患者に開始された。患者は他の治療は受けなかった。ワクチン投与スケジュールは、１ｘ１０６のＡｌｌｏ−ＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋搭載細胞を１５日ごとに皮下注射するものであった。図６Ａ及び図６Ｂは、Ａｌｌｏ−ＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋搭載細胞の治療から６か月（注射１２回）後、腫瘍塊の大幅な縮小を示すＣＡＴ／ＰＥＴスキャン（ＣＴ）画像である。自己腫瘍細胞を搭載したａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ワクチンによる治療から６か月後、原発腫瘍は１２ｃｍから１７．３ｍｍ×３４．５ｍｍ（図６Ｂ）まで縮小した。これらの細胞は、ＣＤ４０Ｌを発現するよう形質導入されたものであったが、ＣＸＣＬ１３及び任意選択でＣＤ９３をさらに形質導入されたａｌｌｏＤＣ細胞は、ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋細胞のように、抗腫瘍効果（自己腫瘍を搭載）をさらに増強することが予想される。
【０２８９】
実施例２：切除不能な転移性大腸癌の６９歳の男性
患者の男性は６８歳の時に大腸癌と診断された。診断時、５センチメートル（５ｃｍ）の原発性大腸腫瘍を除去した。患者は６か月のＦＯＬＦＯＸレジメンを受けた。ＦＯＬＦＯＸ治療後の追跡評価時、患者は原発腫瘍病変の再発を呈し、肝臓及び肺に複数の転移を伴っていた。追跡の後、患者にＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸレジメンが開始された。ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ治療に入って６か月目、患者は、原発腫瘍再発により直腸結腸の通路が閉塞していたため、緊急人工肛門造設手術を受けた。本明細書に上述されるような、成熟カクテルで成熟させた、自己腫瘍パルスＣＤ４０Ｌ提示ａｌｌｏＤＣワクチンの投与が患者に開始された。
【０２９０】
ワクチン治療中は、患者はカペシタビンのみを投与された。ワクチン投与スケジュールは、２×１０６細胞を１５日ごとに皮下注射するものであった。図７Ａ〜図７ＤのＣＴ／ＰＥＴ画像は自己腫瘍細胞を搭載したａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ワクチン治療から６か月（注射１２回）後、肝臓及び肺の塊の大幅な縮小を示す。これらの細胞は、ＣＤ４０Ｌを発現するよう形質導入されたものであったが、ＣＸＣＬ１３及び任意選択でＣＤ９３をさらに形質導入されたａｌｌｏＤＣ細胞は、ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋細胞のように、抗腫瘍効果（自己腫瘍を搭載）をさらに増強することが予想される。
【０２９１】
実施例３：転移性浸潤性乳管癌の４５歳の女性
患者の女性は、ＨＥＲ２陽性、ＥＲ陰性、及びＰＲ陰性の乳癌と診断され、２００８年に乳房切除術を受けた（Ｔ１ｃＮ２Ｍ０）。患者はＴＡＣを６か月間受け、寛解した。２０１０年にＰＥＴにより転移の証拠が明らかになった。患者は、ゲムシタビン、カルボプラチン、トラスツズマブの投与を受けたが、進行した。その後、患者は、ボルテゾミブ及びラパチニブの投与を受けたが、疾患はなおも進行した。トラスツズマブエムタンシンによる３次治療が２０１３年に開始され、２０１５年まで行われた。肺の進行が続いた。
【０２９２】
次に、患者は、トラスツズマブ及びビノレルビンによる５次治療を受け、２０１５年８月に開始され、進行のため２０１６年４月に中止された。トラスツズマブ、ボルテゾミブ及びエリブリンによる６次治療が２０１６年４月に開始され、進行のため２０１６年７月に中止された。トラスツズマブエムタンシン及びパブロシクリブ（ｐａｂｌｏｃｉｃｌｉｂ）による７次治療が２０１７年７月に開始され、進行のため、２０１８年１月に中止された。フルベストラント、トラスツズマブ、及びパブロシクリブ（ｐａｂｌｏｃｉｃｌｉｂ）による８次治療が２０１７年１月から８月まで行われたが、進行のため中止された。
【０２９３】
２０１７年１０月、患者は脳転移と診断され、右開頭術が行われ、合計５箇所の脳病変は定位手術的照射により治療された。患者は、その時点では、それ以上の脳治療は受けていなかった。２０１８年２月、患者に、トラスツズマブ、イキサベピロン及びカペシタビンが開始されが、進行のため、２０１８年４月に治療は中止された。２０１８年８月、患者は、免疫療法の治療を受けるための移動に備えて身体的に健康になるために全脳照射を受けた。患者は、２０１８年９月の気管支鏡による腫瘍生検手技の前に、初回治療として養子細胞治療を受けた。
【０２９４】
２０１８年９月、本明細書に記載されるような、成熟カクテルで成熟させた、自己腫瘍細胞をパルスしたＣＤ４０ＬとＣＸＣＬ１３とを発現するａｌｌｏＤＣの投与が患者に開始された。ワクチン接種用量は、皮下（ｓｕｂ−Ｑ）注射による１０６細胞であった。ワクチンスケジュールは以下のとおりであった：注射の１回目〜４回目は７日ごと、５回目〜８回目は１０日ごと、９回目〜１２回目は１５日ごと（１３０日で合計１２回のｓｕｂ−Ｑ注射）。図８Ａ〜図８ＤのＣＴ及びＰＥＴ／ＣＴ画像は、自己腫瘍細胞をパルスしたａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋細胞による治療の１か月後の肺病変の大幅な縮小を示している。
【０２９５】
これらの細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１３を発現するよう形質導入されたものであったが、以下の図１０〜図１２に示されるインビトロでの相乗的結果を考慮すると、ＣＤ９３をさらに形質導入されたａｌｌｏＤＣ細胞は、ａｌｌｏＤＣ  ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋細胞のように、抗腫瘍効果（自己腫瘍を搭載）をさらに増強することが予想される。
【０２９６】
実施例４：インビトロ試験
Ｔ細胞増殖（図１０）
乳癌患者から得た腫瘍ライセートを使用して、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３、またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３、またはＣＤ４０Ｌのみを発現する遺伝子改変成熟ＤＣをレンチウイルスを使用して作製する。次いで、成熟ａｌｌｏ−ＤＣ（２ｘ１０４）と末梢血ＣＤ３＋Ｔ細胞（１ｘ１０６）とを、５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加したＴｅｘＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）培地で３連で共培養する。ａｌｌｏ−ＤＣの持続性を、播種４８時間後にフローサイトメトリーにより測定した（ＣＤ８６及びＣＤ１ａ）。いずれの条件においても、共培養の４８時間後には生存ａｌｌｏ−ＤＣは検出されなかった。
【０２９７】
ＮＫ細胞増殖（図１１）
乳癌患者から得た腫瘍ライセートを使用して、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３、またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３、またはＣＤ４０Ｌのみを発現する遺伝子改変成熟ＤＣをレンチウイルスを使用して作製する。次いで、成熟ａｌｌｏ−ＤＣ（１ｘ１０４）と末梢血ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（５ｘ１０５）とを、ＮＫ細胞培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中で５００ＩＵ／ｍｌのＩＬ２の存在下、３連で共培養する。ａｌｌｏ−ＤＣの持続性を、播種４８時間後にフローサイトメトリーにより測定した（ＣＤ８６及びＣＤ１ａ）。いずれの条件においても、共培養の４８時間後には生存ａｌｌｏ−ＤＣは検出されなかった。
【０２９８】
Ｂ細胞活性化（図１２）
乳癌患者から得た腫瘍ライセートを使用して、ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋ＣＤ９３、またはＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３、またはＣＤ４０Ｌのみを発現する遺伝子改変成熟ＤＣをレンチウイルスを使用して作製する。次いで、成熟ａｌｌｏ−ＤＣ（１ｘ１０４）と末梢血ＣＤ１９＋Ｂ細胞（２．５ｘ１０５）とを、５％のヒトＡＢ血清及び１ｍＭのｇｌｕｔａｍａｘを添加したＲＰＭＩ  １６４０培地で３連で共培養する。Ｂ細胞の活性化レベルは、４日目のＣＤ１９＋細胞でのＣＤ６９発現レベルを決定することによるフローサイトメトリーによるものであった。
【０２９９】
図１０〜図１２の結果は、組換えＤＣで３つの受容体すべてを共発現させることの相乗効果を示している。図１０では、組換えＤＣに対する細胞性免疫応答の増大を示すための代替としてＴ細胞増殖を使用した。Ｔ細胞増殖の最も大きな増大は、三重組換えＤＣ（ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋、及びＣＤ９３）で示された。同様に、図１１では、インビボでの細胞性免疫応答増大についての別の代替として、組換えＤＣとの共培養におけるＮＫ（ナチュラルキラー）細胞増殖を使用した。同様に、図１１では、ＮＫ細胞増殖の最も大きな増大は、三重コンストラクトとの共培養の場合に示された。最後に、図１２では、インビボでのＢ細胞活性化についての代替として、共培養におけるＢ細胞の活性化レベルを利用した。共培養した細胞を、４日目のＣＤ１９＋細胞でのＣＤ６９発現について分析して、Ｂ細胞活性化を決定した。これらの共培養において、三重組換えＤＣ（ＣＤ４０Ｌ＋ＣＸＣＬ１３＋、及びＣＤ９３）はまた、最も高いレベルのＣＤ６９＋発現を示し、体液性免疫系の活性化を類似的に示している。
【０３００】
標準的方法
分子生物学における標準的方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８２  ＆  １９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で記載されている。標準的方法はまた、Ａｕｓｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも現れ、これには、細菌細胞におけるクローニング及びＤＮＡ変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞及び酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質及びタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）が記載されている。
【０３０１】
免疫沈降法、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、及び晶出を含む、タンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学的分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の作製、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照のこと）。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の産生、精製、及び断片化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、上記参照）。リガンド／受容体の相互作用を特徴付けるための標準的技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【０３０２】
本明細書で引用されているすべての参考文献は、個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が各々参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかの如く同程度に、参照により組み込まれる。参照による組み込みに関するこの記述は、個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許のすべてに関し、かつ、その各々は、そのような引用が、参照による組み込みについての専用記述に直接隣接していない場合であっても、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従って明確に識別されることを、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従って、出願人が意図するものである。参照による組み込みについての専用記述がある場合にそれを明細書内に含めることは、参照による組み込みについてのこの一般記述を何ら弱めるものではない。本明細書での参考文献の引用は、その参考文献が関連先行技術であることの承認を意図しておらず、またこれらの刊行物または文書の内容または日付に関するいかなる承認も構成するものでもない。
【０３０３】
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態により範囲を限定されるものではない。実際に、上述の説明及び添付の図面から、本明細書に記載されている本発明の修正に加えて、本発明の様々な修正が当業者には明らかとなろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【図１Ａ】
2021531765.tif 000003
【図１Ｂ】
2021531765.tif 000004
【図１Ｃ】
2021531765.tif 000005
【図１Ｄ】
2021531765.tif 000006
【図２Ａ】
2021531765.tif 000007
【図２Ｂ】
2021531765.tif 000008
【図２Ｃ】
2021531765.tif 000009
【図２Ｄ】
2021531765.tif 000010
【図２Ｅ】
2021531765.tif 000011
【図２Ｆ】
2021531765.tif 000012
【図３Ａ】
2021531765.tif 000013
【図３Ｂ】
2021531765.tif 000014
【図３Ｃ】
2021531765.tif 000015
【図３Ｄ】
2021531765.tif 000016
【図３Ｅ】
2021531765.tif 000017
【図３Ｆ】
2021531765.tif 000018
【図３Ｇ】
2021531765.tif 000019
【図３Ｈ】
2021531765.tif 000020
【図３Ｉ】
2021531765.tif 000021
【図３Ｊ】
2021531765.tif 000022
【図３Ｋ】
2021531765.tif 000023
【図３Ｌ】
2021531765.tif 000024
【図３Ｍ】
2021531765.tif 000025
【図３Ｎ】
2021531765.tif 000026
【図３Ｏ】
2021531765.tif 000027
【図３Ｐ】
2021531765.tif 000028
【図４】
2021531765.tif 000029
【図５】
2021531765.tif 000030
【図６】
2021531765.tif 000031
【図７】
2021531765.tif 000032
【図８】
2021531765.tif 000033
【図９】
2021531765.tif 000034
【図１０】
2021531765.tif 000035
【図１１】
2021531765.tif 000036
【図１２】
2021531765.tif 000037
【配列表】
2021531765000001.app
【国際調査報告】
2021531765.tif 000038
2021531765.tif 000039
2021531765.tif 000040
2021531765.tif 000041