(57)【要約】  本開示は、リンカーを介して、パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端にあるＩｇ様抗ＨＥＲ２抗体のパラトープに連結されている、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む組換え融合タンパク質を提供する。本開示はまた、組換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含む発現ベクター、組換えタンパク質を産生するための方法、ならびにＣＤ４７および／またはＨＥＲ２の過剰発現によって引き起こされる疾患を治療するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンカーを介して、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体のパラトープに、前記パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端において連結されている、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む組換え融合タンパク質であって、癌細胞上のＣＤ４７のマクロファージ表面上のＳＩＲＰへの結合、制御されていない癌細胞の成長を阻害するための癌細胞上のＨＥＲ２への結合、およびＮＫ細胞またはマクロファージ上のＦｃＲへの結合を遮断することができる、組換え融合タンパク質。
【請求項２】
前記Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープが、前記パラトープを構成する前記重鎖の前記Ｎ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている、請求項１に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項３】
前記Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープが、前記パラトープを構成する前記軽鎖の前記Ｎ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている、請求項１または２に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項４】
前記Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の一方のパラトープが、前記パラトープを構成する前記重鎖の前記Ｎ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結され、前記Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の他方のパラトープは、前記パラトープを構成する前記軽鎖の前記Ｎ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている、請求項１から３のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項５】
前記シグナル調節タンパク質がＳＩＲＰαである、請求項１から４のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項６】
前記シグナル調節タンパク質の前記細胞外Ｉｇ様ドメインが、シグナル調節タンパク質の最初の細胞外Ｉｇ様ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）である、請求項５に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項７】
前記リンカーが１０〜３０のアミノ酸残基のペプチドである、請求項１から６のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項８】
前記リンカーが−（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）３−である、請求項７に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項９】
前記Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体が、それぞれが配列番号６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する２つの重鎖、およびそれぞれが配列番号８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する２つの軽鎖を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項１０】
各重鎖が配列番号６のアミノ酸配列を有する、請求項９に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項１１】
各軽鎖が配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項９または１０に記載の組換え融合タンパク質。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１４】
請求項１３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質、および少なくとも１つの医薬担体を含む医薬組成物。
【請求項１６】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵癌、腎細胞癌、クローン病、アレルギー性喘息、および関節リウマチからなる群から選択される疾患を治療するための医薬品の調製における請求項１から１１のいずれか一項に記載の組換え融合タンパク質の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＤ４７およびＨＥＲ２を標的とする組換え融合タンパク質、ならびにその調製および使用、特に腫瘍治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体療法は、様々な法域で承認されており、幅広い範囲の癌を治療し、患者の転帰を大幅に改善している（Ｋｏｍｅｅｖ  ＫＶ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１７）ＴＬＲ−ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ｄｒｉｖｅｒｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ８９：１２７−１３５）。癌抗原に結合すると、抗体は、抗体依存性細胞傷害を誘発する、補体系を活性化する、受容体がそのリガンドと相互作用するのを妨ぐ可能性があり、これらはすべて細胞死につながり得る。米国ＦＤＡ承認の抗体医薬品としては、アレムツズマブ、ニボルマブ、リツキシマブ、及びデュルバルマブが挙げられる。
【０００３】
腫瘍の免疫監視の回避
【０００４】
癌細胞は、宿主の免疫監視を回避するためのいくつかのメカニズムを開発している。例えば、多くの腫瘍細胞または癌細胞は、マクロファージの細胞表面上のＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ；ＳＨＰＳ１およびＢＩＴとしても公知である）に結合することにより、高レベルのＣＤ４７をその表面上に発現させ、マクロファージによる癌細胞の食作用を阻害する。
【０００５】
ＣＤ４７過剰発現癌細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、および膵癌を有する患者に見られる。ＣＤ４７−ＳＩＲＰαの相互作用を遮断するＣＤ−４７特異的抗体を注射することにより、担癌マウスの腫瘍成長を有意に阻害することができ、同じ抗体をヒト白血病細胞担持マウスに注射したときに、腫瘍または癌細胞が完全に消失した（Ｔｈｅｏｃｈａｒｉｄｅｓ  ＡＰＡ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｊ．Ｃ．Ｙ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０９：１８８３−１８９９）。
【０００６】
ＨＥＲ２関連腫瘍および治療
【０００７】
ＥｒｂＢ２としても公知であるＨＥＲ２は、ヒト上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーであり、赤芽球性癌遺伝子Ｂ（ＥＲＢＢ２）によってコードされている。この癌遺伝子の過剰発現は、乳癌の約１５〜３０％で発生し、疾患の再発の増加および予後不良と強く関連している（Ｍｉｔｒｉ  Ｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ．Ｖｏｌｕｍｅ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ７４３１９３，７  ｐａｇｅｓ；Ｂｕｒｓｔｅｉｎ  ＨＪ，（２００５）Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３５３（１６）：１６５２−４；Ｔａｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．６０８：１１９−２９）。そのような過剰発現は、卵巣癌、胃癌、肺腺癌、および攻撃的形態の子宮癌にも見られる。
【０００８】
モノクローナル抗体は、ＨＥＲ２を標的とするために開発されているか、開発されているところである。そのような抗体の１つであるトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））は、１９９８年に米国で医療使用のために承認され、ＨＥＲ２陽性乳癌の臨床治療における使用において奏功している。
【０００９】
治療上の二重特異性または多重特異性融合タンパク質／抗体
【００１０】
抗体は、癌を治療する能力を大幅に進歩させているが、それでも臨床研究では、多くの患者が単一特異性療法に適切に応答しないことが示されている。例えば、乳癌治療では、ＦｃｇＲＩＩＩＡ遺伝子の１５８Ｆ多型などの複数のメカニズムにより、かなりの割合のＨＥＲ２陽性患者がトラスツズマブ治療に応答しない。さらに、後天的な抗体耐性が、いくつかの治療サイクル後に頻繁に生じる。
【００１１】
したがって、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、２つ以上の別個の固有の抗原、または同じ抗原の異なるエピトープに対して開発される。例えば、いくつかの二重特異性抗体は、細胞傷害性細胞および腫瘍細胞に同時に結合するように設計されている。そのような抗体は、複数の腫瘍細胞の成長および生存経路を遮断することができ、かつ／または腫瘍細胞死滅経路を活性化することができ、したがって、癌成長をより十分に阻害する可能性を有する。
【００１２】
しかし、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、分子の適合性、結果として生じる抗体の親和性、安定性、および医薬特性など、複数の問題を考慮する必要があるため、設計上の大きな課題を提示する。抗体またはタンパク質を単に連結するのみでは、必ずしも相乗効果／有利な効果が得られるとは限らないことは十分に認識されている。リンカーによってアービタックス（セツキシマブ）に連結されたＳＩＲＰαＤ１を含む本開示に開示された組換え抗体は、ＨＴ−２９またはＮＣｌ−Ｈ１９７５腫瘍モデル（実施例８を参照）においてアービタックスまたはＳＩＲＰαＤ１−Ｆｃ単独と比較して、劣っている抗腫瘍活性を有することが証明されている。
【００１３】
しかし、本発明者らは、勤勉な努力を通じて、ＣＤ４７およびＨＥＲ２の両方を正確に標的とし、通常の単一抗原標的抗体よりも優れた抗腫瘍活性を示す組換え二重特異性タンパク質を設計することに成功している。
【発明の概要】
【００１４】
本開示では、リンカーを介して、パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてＩｇ様抗ＨＥＲ２抗体のパラトープに連結されている、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む組換え融合タンパク質であって、ＣＤ４７、ＨＥＲ２およびＦｃＲに同時に結合する組換え融合タンパク質を開示している。癌細胞上のＣＤ４７に結合することにより、マクロファージ上でのＣＤ４７とＳＩＲＰとの相互作用が遮断され、ＳＩＲＰ媒介阻害シグナルによりマクロファージ上でチェックが放出され、その一方で、癌細胞上のＨＥＲ２に結合することにより、制御されていない腫瘍細胞の成長が阻害され、それと同時に、ＮＫ細胞上またはマクロファージ上のＦｃＲに結合することにより、ＮＫ細胞またはマクロファージによる標的癌細胞の死滅が刺激される。
【００１５】
一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体のいずれかのパラトープは、パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープは、そのパラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープは、そのパラトープを構成する重鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープは、そのパラトープを構成する軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の一方のパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されており、他方のパラトープは、そのパラトープを構成する軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体の１つのパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖および軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインの２つのコピーに連結され得る。
【００１６】
一実施形態では、組換え融合タンパク質中のシグナル調節タンパク質はＳＩＲＰαであり得、シグナル調節タンパク質の細胞外Ｉｇ様ドメインは、ＳＩＲＰαの最初の細胞外Ｉｇ様ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）であり得る。ＳＩＲＰαＤ１などのシグナル調節タンパク質の細胞外Ｉｇ様ドメインは、癌細胞／腫瘍細胞の細胞表面上のＣＤ４７に結合して、マクロファージの細胞表面上のＳＩＲＰとＣＤ４７との相互作用を遮断することができる。
【００１７】
一実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１は、それぞれ配列番号１および２に示される核酸配列およびアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１は、配列番号２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ここで、ＳＩＲＰαＤ１は、癌細胞／腫瘍細胞の細胞表面上のＣＤ４７に結合することができ、またマクロファージの細胞表面上のＳＩＲＰとＣＤ４７との相互作用を遮断できる。
【００１８】
組換え融合タンパク質中のリンカーは、約５〜３０のアミノ酸残基のペプチドであり得る。一実施形態では、リンカーは、１０〜３０のアミノ酸残基のペプチドである。別の実施形態では、リンカーは、１５〜３０アミノ酸残基のペプチドである。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）３−（配列番号４）であり、これは、配列番号３によってコードされ得る。
【００１９】
抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、マルゲツキシマブなどの単離されたモノクローナル抗体、およびトラスツズマブまたはマルゲツキシマブに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のアミノ酸同一性を有する一方で、結合親和性はそのままである抗体であり得る。
【００２０】
抗ＨＥＲ２抗体は、それぞれが配列番号６のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、およびそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖を含む、単離されたモノクローナル抗体であり得、それぞれ配列番号５および７の核酸配列によってコードされ得る。抗ＨＥＲ２抗体の抗原結合（Ｆａｂ）またはパラトープ部分は、癌細胞／腫瘍細胞の細胞表面上のＨＥＲ２に結合できるため、制御されていない腫瘍細胞／癌細胞の成長が生じるのを防ぐ一方で、抗ＨＥＲ２抗体のＦｃ部分は、ＮＫ細胞またはマクロファージの細胞表面上のＦｃＲに結合して、ＮＫ細胞またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激することができる。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２に結合し、癌細胞／腫瘍細胞の制御されていない成長を防ぐことができ、また、ＮＫ細胞またはマクロファージの細胞表面上のＦｃＲに結合し、これによりＮＫ細胞またはマクロファージを活性化して癌細胞を死滅させることができる。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２に結合し、癌細胞／腫瘍細胞の制御されていない成長が生じるのを防ぐ。
【００２１】
ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２重鎖融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み得、これは、配列番号９のヌクレオチドによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２重鎖は、配列番号１０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２重鎖は、抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖と共に、ＣＤ４７、ＨＥＲ２、およびＦｃＲに結合でき、ｉ）癌細胞上のＣＤ４７とマクロファージ上のＳＩＲＰとの相互作用を遮断する、ｉｉ）制御されていない癌細胞／腫瘍細胞の成長を阻害する、およびｉｉｉ）ＮＫ細胞またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激する。
【００２２】
一実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２軽鎖融合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、これは配列番号１１のヌクレオチドによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２軽鎖は、配列番号１０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＳＩＲＰαＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２軽鎖は、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖と共に、ＣＤ４７、ＨＥＲ２、およびＦｃＲに結合でき、ｉ）癌細胞上のＣＤ４７とマクロファージ上のＳＩＲＰとの相互作用を遮断する、ｉｉ）制御されていない癌細胞／腫瘍細胞の成長を阻害する、およびｉｉｉ）ＮＫ細胞またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激する。
【００２３】
本開示の組換え融合タンパク質をコードする核酸分子、ならびに核酸を含む発現ベクターおよび発現ベクターを含む宿主細胞も提供される。
【００２４】
発現ベクターを含む宿主細胞を使用して組換え融合タンパク質を調製するための方法も提供され、本方法は、（ｉ）宿主細胞において組換え融合タンパク質を発現させるステップと、（ｉｉ）宿主細胞から組換え融合タンパク質を単離するステップと、を含む。
【００２５】
別の態様では、本開示は、本開示の組換え融合タンパク質、および少なくとも１つの医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、少なくとも１つのアジュバントをさらに含み得る。
【００２６】
別の態様では、本開示は、ＣＤ４７および／またはＨＥＲ２の過剰発現によって引き起こされる疾患を治療するための方法を提供し、それを必要とする患者または対象に、治療有効量の本開示の医薬組成物を投与することを含む。
【００２７】
一実施形態では、本開示は、ＣＤ４７および／またはＨＥＲ２の過剰発現によって引き起こされる疾患の治療のための医薬組成物の製造における組換え融合タンパク質の使用を提供する。
【００２８】
一実施形態では、本開示の方法は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵癌、および腎細胞癌からなる群から選択される疾患を治療するためのものである。一実施形態では、本開示は、クローン病、アレルギー性喘息または関節リウマチを治療するための方法を提供する。
【００２９】
本開示の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および実施例から明らかになるであろうが、限定的であると解釈されるべきではない。この出願を通して引用されたすべての参考文献、Ｇｅｎｂａｎｋエントリー、特許、および公開された特許出願の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本開示の組換え融合タンパク質の構造を示す概略図である。
【００３１】
【図２】ＩＭＭ２９０１およびＩＭＭ２９０２のＣＤ４７への結合活性を示す図である。
【００３２】
【図３】ＩＭＭ２９０１およびＩＭＭ２９０２のＨＥＲ２への結合活性を示す図である。
【００３３】
【図４】ＩＭＭ２９０２が誘発するＨＬ−６０細胞の食作用を示す図である。
【００３４】
【図５】ＩＭＭ２９０２のＡＤＣＣ活性を示す図である。
【００３５】
【図６】ＩＭＭ２９０２が誘発するＨＥＲ２の内在化を示す図である。
【００３６】
【図７】ＢＴ−４７４異種移植モデルにおけるＩＭＭ２９０２のｉｎ  ｖｉｖｏ治療効果を示す図である。
【００３７】
【図８】ＨＴ−２９異種移植モデルにおけるＩＭＭ０４０４のｉｎ  ｖｉｖｏ治療効果を示す図である。
【００３８】
【図９】ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植モデルにおけるＩＭＭ０４０４のｉｎ  ｖｉｖｏ治療効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
腫瘍成長の２つ以上の薬理学を標的とするには、主に３つの異なるアプローチが存在する。最も一般的には、患者は、２つ以上の異なる薬物のカクテルが与えられ得る。この選択肢により、可能な薬物の組み合わせおよび異なる投与量に関して最大限の柔軟性が可能になるが、（ａ）錠剤数の負担（ｐｉｌｌ  ｂｕｒｄｅｎ）が増加し、個々の薬物の投与スケジュールが異なるために、患者による治療への順守が不十分になり得ること、（ｂ）薬物間相互作用のために、不適合性が生じ得ること、および（ｃ）薬物の副作用のリスクが増加することが問題となる。これらの問題は、特に癌などの慢性疾患の管理において、治療法の有効性を低下させ、治療目標の達成を妨げ得る。
【００４０】
２番目のアプローチは、単一の剤形での薬物の固定用量の組み合わせの使用に依存する。このアプローチにより、錠剤数の負担が軽減され、結果的に患者のコンプライアンスの改善となる。固定用量を組み合わせることの欠点は、主に、有効成分間の可能な用量比の選択肢に制限があることであり、これにより、個々の患者を最小限の副作用で最大の効果まで適切に滴定することがより困難になる。さらに、この組み合わせ中の構成成分の異なる薬物動態特性により、個々の標的での薬力学的効果の複雑な時間的不一致がもたらされ得、それによって全体的な有効性が損なわれ得る。
【００４１】
３番目のアプローチは、２つ以上の薬理学を１つのエンティティに組み合わせる多機能薬物の使用である。そのような多機能エンティティの設計および検証はより複雑であり、標的活性の最適な比率を十分に調査する必要がある。多機能分子はまた、他の薬物との固定用量の組み合わせを受け入れることができ、それにより、単一の錠剤に３つの薬理学またはさらには４つの薬理学を組み合わせることにより、効力がさらに増分することとなる。
【００４２】
２つ以上の標的に対する組換え二重特異性または多重特異性タンパク質は多機能薬物であり、通常の単一抗原標的抗体と比較して必ずしも優れた抗腫瘍活性を示すものではない。例えば、以下の実施例８に示されるように、リンカーによって抗ＥＧＦＲ抗体であるアービタックス（セツキシマブ）に連結されたＳＩＲＰαＤ１を含む組換え抗体は、ＨＴ−２９またはＮＣｌ−Ｈ１９７５腫瘍モデルにおいてアービタックスまたはＳＩＲＰαＤ１−Ｆｃよりも低い抗腫瘍活性を有した。組換えタンパク質が相乗効果をもたらすには、洗練された設計が必要とされる。
【００４３】
絶えず実験を行うことにより、本発明者らは、３つの作用メカニズムを介して腫瘍を攻撃することができる新規の組換え融合タンパク質を発明した。１つはＳＩＲＰ媒介阻害シグナルによりマクロファージ上でチェックを放出することであり、もう１つはＨＥＲ２シグナル伝達媒介腫瘍細胞／癌細胞の増殖を制御することであり、３つ目は、ＮＫ細胞および／またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激することである。
【００４４】
本開示の組換え融合タンパク質は、リンカーを介して、パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてＩｇ様抗ＨＥＲ２抗体のパラトープに連結されている、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインを含み、組換え融合タンパク質は、ＣＤ４７、ＨＥＲ２、ＦｃＲに同時に結合し、ｉ）癌細胞上のＣＤ４７に結合して、マクロファージ上のＳＩＲＰとＣＤ４７との相互作用を遮断し、これによりＳＩＲＰ媒介阻害シグナルによりマクロファージ上でチェックを放出し、ｉｉ）癌細胞上のＨＥＲ２に結合し、これにより制御されていない腫瘍／癌細胞の成長を阻害し、ｉｉｉ）ＮＫ細胞またはマクロファージ上のＦｃＲに結合して、ＮＫ細胞またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激する。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体のいずれかのパラトープは、パラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体のいずれかの各パラトープは、そのパラトープを構成する重鎖または軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープは、そのパラトープを構成する重鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の各パラトープは、そのパラトープを構成する軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。一実施形態では、Ｉｇ様抗ＨＥＲ２抗体の一方のパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されており、他方のパラトープは、そのパラトープを構成する軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインに連結されている。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体の１つのパラトープは、そのパラトープを構成する重鎖および軽鎖のＮ末端においてシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメインの２つのコピーに連結され得る。
【００４５】
本開示の融合タンパク質に含まれる３つの主要な構成要素は、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）の細胞外Ｉｇ様ドメイン、リンカー、および抗ＨＥＲ２抗体である。当業者は、上記の３つの構成要素を選択するための多くの設計上の選択肢があることを認識するであろう。好ましくは、ヒト由来の配列は、非ヒト動物からのタンパク質またはペプチドの強力な免疫原性がアレルギーおよび他の有害作用をもたらし得るため、ヒトの癌治療に使用される。しかし、適切な場合にヒト化された他の動物タンパク質またはペプチドもまた、異なる適用目的に基づいて本開示において使用され得る。
【００４６】
ＣＤ４７と結合することができる任意のＳＩＰＲ（ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ、およびＳＩＲＰγ）の任意の細胞外Ｉｇ様ドメインが、融合タンパク質を構築するために選択され得る。一実施形態では、組換え融合タンパク質中のシグナル調節タンパク質はＳＩＲＰαであり、シグナル調節タンパク質の細胞外Ｉｇ様ドメインは、ＳＩＲＰαの最初の細胞外Ｉｇ様ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）である。
【００４７】
一実施形態では、組換え融合タンパク質は、それぞれ配列番号１および２に示される核酸配列およびアミノ酸配列を有するＳＩＲＰαＤ１を含む。別の実施形態では、ＳＩＲＰαＤ１は、配列番号２に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ＳＩＲＰαＤ１は、癌細胞／腫瘍細胞の細胞表面上のＣＤ４７に結合し、マクロファージの細胞表面のＳＩＲＰとＣＤ４７の相互作用を遮断することができる。
【００４８】
リンカーは主に、ＳＩＲＰの細胞外Ｉｇ様ドメインと抗ＨＥＲ２抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端との間のスペーサーとして作用する。リンカーは、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸、好ましくはペプチド結合によって連結された５〜３０のアミノ酸から構成され得、アミノ酸は、２０の天然に存在するアミノ酸から選択される。ＳＩＲＰ細胞外Ｉｇ様ドメインの２つのコピーが、そのパラトープを構成する重鎖および軽鎖のＮ末端において抗ＨＥＲ２抗体の１つのパラトープに連結している場合、比較的長いリンカー（おそらく１０以上の長さまたはさらには１５以上の長さのアミノ酸残基であり得る）が、立体障害の可能性を回避するために必要となり得る。当業者によって理解されるように、これらのアミノ酸のうちの１または複数は、グリコシル化され得る。一実施形態では、５〜３０のアミノ酸は、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、セリン、およびリシンから選択され得る。一実施形態では、リンカーは、大部分がグリシンおよびアラニンなどの立体障害のないアミノ酸で構成されている。例示的なリンカーは、ポリグリシン（特に、Ｇｌｙ、（Ｇｌｙ）８、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ））、およびポリアラニンである。以下の実施例に示されるような１つの例示的な好適なリンカーは、ポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）、例えば、−（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）３−である。
【００４９】
リンカーはまた、非ペプチドリンカーであり得る。例えば、−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｓ−Ｃ（Ｏ）−などのアルキルリンカー（式中、ｓ＝２〜２０である）を使用することができる。これらのアルキルリンカーはさらに、低級アルキル（例えば、Ｃ１〜４）、低級アシル、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ２、フェニルなどの任意の非立体障害基によって置換され得る。
【００５０】
任意の抗ＨＥＲ２抗体、特に任意のＩｇ様抗ＨＥＲ２抗体が、本開示の融合タンパク質の形成に使用され得る。抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブおよびマルゲツキシマブなどの単離されたモノクローナル抗体であり得る。
【００５１】
いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、それぞれが配列番号６のアミノ酸配列を有する２つの重鎖、およびそれぞれが配列番号８のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖を含む単離されたモノクローナル抗体であり、これら２つは、それぞれ、配列番号５および７の核酸配列によってコードされ得る。抗ＨＥＲ２抗体のＦａｂまたはパラトープ部分は、癌細胞／腫瘍細胞の細胞表面上のＨＥＲ２に結合し、これにより癌細胞／腫瘍細胞の制御されていない成長が生じるのを防ぐことができ、一方、抗ＨＥＲ２抗体のＦｃ部分は、ＮＫ細胞またはマクロファージの細胞表面上のＦｃＲに結合して、ＮＫ細胞またはマクロファージによる癌細胞の死滅を刺激することができる。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号６に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２に結合し、癌細胞／腫瘍細胞の制御されていない成長が生じるのを防ぐことができ、また、ＮＫ細胞またはマクロファージの細胞表面上のＦｃＲに結合し、これによりＮＫ細胞またはマクロファージを活性化して癌細胞を死滅させることができる。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得、抗ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２に結合し、癌細胞／腫瘍細胞の制御されていない成長が生じるのを防ぐ。
【００５２】
上記のとおり、ＳＩＲＰ細胞外Ｉｇ様ドメイン、特にＳＩＲＰαＤ１の１つまたは２つのコピーを、特定のパラトープを構成する重鎖および／または軽鎖のＮ末端において抗ＨＥＲ２のいずれかのパラトープまたは各パラトープに連結することができる。
【００５３】
また、本開示は、組換え融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子および組換え二機能性融合タンパク質を発現する発現ベクターを提供する。ベクターの例としては、これらに限定されないが、プラスミド、ウイルスベクター、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、形質転換能力のある人工染色体（ＴＡＣ）、哺乳類人工染色体（ＭＡＣ）、およびヒト人工エピソーム染色体（ＨＡＥＣ）が挙げられる。
【００５４】
本開示は、上記の発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞は、発現ベクターで形質転換され得るかまたはトランスフェクトされ得る。好適な宿主細胞としては、大腸菌、酵母および他の真核生物が挙げられる。好ましくは、大腸菌、酵母または哺乳動物細胞株（ＣＯＳまたはＣＨＯなど）が使用される。
【００５５】
別の態様では、本開示は、医薬上許容されるアジュバントと共に配合された本開示の融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。本組成物は、任意により、別の抗体または薬物などの１または複数の追加の医薬的活性成分を含み得る。本開示の医薬組成物はまた、例えば、別の免疫刺激剤、抗癌剤、またはワクチンとの併用療法で投与することができる。
【００５６】
医薬組成物は、任意の数の賦形剤を含むことができる。使用できる賦形剤としては、担体、界面活性剤、増粘剤または乳化剤、固体結合剤、分散剤または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、コーティング、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、防腐剤、等張剤、およびそれらの組み合わせが挙げられる。好適な賦形剤の選択および使用は、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ２００３）に教示されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５７】
医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、本質的に水性であるかまたは非水性であるかのいずれかであり得る。例えば、好適なビヒクルまたは担体は、注射用水、生理食塩水、または人工脳脊髄液であり得、注射において一般的である他の材料が補充されている可能性がある。例えば、ビヒクルまたは担体は、中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水であり得る。他の例示的な医薬組成物は、トリス緩衝液、または酢酸緩衝液を含み、これは、ソルビトールまたはその好適な代替物をさらに含み得る。本開示の一実施形態では、組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態の任意の製剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（前出））と混合することによって貯蔵用に調製され得る。さらに、治療用組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として配合され得る。
【００５８】
好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性分子は、任意の材料でコーティングして、酸の作用および不活性化させ得る他の自然条件から保護することができる。本明細書で使用される「非経口投与」という句は、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射および注入が挙げられる。あるいは、本開示の抗体は、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下または局所などの非経口経路を介して投与され得る。
【００５９】
医薬組成物は、無菌の水溶液または分散液の形態であり得る。それらの組成物はまた、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に好適である他の秩序だった構造で配合され得る。
【００６０】
担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる有効成分の量は、治療される対象および特定の投与様式に応じて異なり、一般に、治療効果を生み出す組成物の量となる。一般に、この量は、医薬上許容される担体と組み合わせて、１００％のうち、約０．０１％〜約９９％の有効成分、好ましくは約０．１％〜約７０％、最も好ましくは約１％〜約３０％の有効成分の範囲となる。
【００６１】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）をもたらすように調整される。例えば、いくつかの細分化された用量を経時的に投与することができるか、または治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例して減少または増加させることができる。投与の容易性および投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を配合することは特に有利である。本明細書で使用される投薬単位形態は、治療される対象の単一投薬量として好適である物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。あるいは、融合タンパク質は徐放性配合物として投与され得、その場合、より少ない頻度の投与が必要とされる。
【００６２】
融合タンパク質を投与する場合、投薬量は、宿主体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投薬量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、または１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンは、週に２回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月に１回、または３〜６ヶ月に１回の投与を伴う。本開示の融合タンパク質の好ましい投与レジメンには、腹腔内投与による３ｍｇ／ｋｇ体重または６ｍｇ／ｋｇ体重が含まれ、抗体は、以下の投与スケジュールのうちの１つを使用して与えられる：（ｉ）６回の投与について４週間ごと、その後３か月ごと、（ｉｉ）３週間ごと、（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、その後３週間ごとに１ｍｇ／ｋｇ体重、（ｖｉ）６ｍｇ／ｋｇ体重、１週間に１回の投薬。いくつかの方法では、投薬量は、約１〜１０００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整され、いくつかの方法では、約２５〜３００μｇ／ｍｌに調整される。
【００６３】
本開示の融合タンパク質の「治療上有効な投薬量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、無疾患症状期間の頻度の増加およびその期間の増長、または疾患の苦痛による機能障害または身体障害の予防をもたらす。例えば、担癌対象の治療の場合、「治療上有効な投薬量」は、未治療の対象と比較して、好ましくは腫瘍成長を少なくとも約４０％、より好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％阻害する。本開示の融合タンパク質の治療有効量は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ、典型的にはヒトであるかまたは別の哺乳動物であり得る対象の症状を改善することができる。
【００６４】
医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムなどの制御放出配合物であり得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【００６５】
治療用組成物は、（１）無針皮下注射デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；および同第４，５９６，５５６号）；（２）マイクロ輸液ポンプ（米国特許第４，４８７，６０３号）；（３）経皮デバイス（米国特許第４，４８６，１９４号）；（４）注入装置（米国特許第第４，４４７，２３３号および第４，４４７，２２４号）；および（５）浸透圧装置（米国特許第４，４３９，１９６号および同第４，４７５，１９６号）などの医療デバイスを介して投与され得る。これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６６】
特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて確実に適切な分布となるように配合され得る。例えば、本開示の治療用融合タンパク質が血液脳関門を確実に通過するために、特定の細胞または器官への選択的輸送を増強するための標的化部分をさらに含み得るリポソーム内に配合され得る。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；同第５，４１６，０１６号；および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。
【００６７】
本開示の組換え融合タンパク質をコードする核酸分子またはその誘導体が対象に直接導入される、ｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子治療も想定される。例えば、本開示の組換え融合タンパク質をコードする核酸配列は、アデノ随伴ウイルスベクターなどの適切な送達ベクターを伴うまたは伴わない核酸構築物の局所注射を介して標的細胞に導入される。代替のウイルスベクターとしては、これらに限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスおよび乳頭腫ウイルスベクターが挙げられる。ウイルスベクターの物理的移動は、所望の核酸構築物または所望の核酸配列を含む他の適切な送達ベクターの局所注射、リポソーム媒介移動、直接注射（裸のＤＮＡ）、または微粒子銃（遺伝子銃）によってｉｎ  ｖｉｖｏで達成され得る。
【００６８】
本開示の組成物は、単独で、または他の治療剤と組み合わせて使用して、それらの治療効果を増強させ得るか、または潜在的な副作用を減少させ得る。
【００６９】
本開示の別の目的は、上記の組換え融合タンパク質および上記の組換え融合タンパク質を含む医薬組成物を調製するための方法を提供することである。一実施形態では、本方法は、（１）タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子を提供することと、（２）（１）のポリヌクレオチド分子を含む発現ベクターを構築することと、（３）好適な宿主細胞を（２）の発現ベクターでトランスフェクトまたは形質転換し、タンパク質を発現するように宿主細胞を培養することと、（４）タンパク質を精製することと、を含む。調製は、当業者により、周知の技術を用いて実施され得る。
【００７０】
本開示の別の目的は、有効量の前述の医薬組成物を、それを必要とする患者または対象に投与することを含む、本開示の医薬組成物を使用して癌を治療する方法を提供することである。一実施形態では、医薬組成物は、これらに限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、乳癌、膵癌、および腎癌など、ＣＤ４７および／またはＨＥＲ２過剰発現腫瘍または癌を治療するために使用される。
【００７１】
一実施形態では、ＣＤ４７および／またはＨＥＲ２の過剰発現に関連する疾患には、これらに限定されないが、クローン病、アレルギー性喘息、および関節リウマチが含まれる。
【００７２】
次に、本開示は、以下の非限定的な例でさらに説明される。
【００７３】
実施例
【００７４】
以下の実施例では、ＩＭＭ２９は、ＨＥＲ２特異的抗体を指す。この抗体は、それぞれが配列番号６のアミノ酸配列を有する２つの重鎖と、それぞれが配列番号８のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖とを有し、これら２つは、それぞれ配列番号５および配列番号７の核酸配列によってコードされ得る。
【００７５】
ＩＭＭ２９０１は、ＣＤ４７およびＨＥＲ２に結合できる組換え融合タンパク質であり、それぞれＧＳリンカーを介して各重鎖のＮ末端においてＩＭＭ２９に連結された２つのＳＩＲＰαＤ１を含み、ＳＩＲＰαＤ１は、それぞれ、配列番号１および配列番号２の核酸配列およびアミノ酸配列を有し、リンカーは、配列番号３の核酸配列によってコードされ得る、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【００７６】
ＩＭＭ２９０２も、ＣＤ４７およびＨＥＲ２に結合できる組換え融合タンパク質であり、各ＳＩＲＰαＤ１がＧＳリンカーを介して各軽鎖のＮ末端においてＩＭＭ２９に連結しているという点でＩＭＭ２９０１とは異なる。
【００７７】
ＩＭＭ０１は、ＣＤ４７に結合できる融合タンパク質であり、国際公開第２０１６１６９２６１号に記載されているＦｃ断片に連結したＳＩＲＰαＤ１で構成されている。この融合タンパク質の核酸配列およびアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１３および配列番号１４に示されている。
【００７８】
ＩＭＭ０４０４は、組換え融合タンパク質であり、それぞれがＧＳリンカーを介して各重鎖のＮ末端において抗ＥＧＦＲ抗体に連結されている２つのＳＩＲＰαＤ１を含む。ＳＩＲＰαＤ１−ＧＳ−リンカー−抗ＥＧＦＲ重鎖は、それぞれ、配列番号１５および配列番号１６の核酸配列およびアミノ酸配列を有する。抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖は、配列番号１８のアミノ酸配列を有し、これは、配列番号１７の核酸配列によってコードされ得る。
【００７９】
これらのタンパク質の構造を図１に見出され得る。
【００８０】
実施例１  ＩＭＭ２９、ＩＭＭ２９０１、ＩＭＭ２９０２、ＩＭＭ０１およびＩＭＭ０４０４を発現するベクターの構築
【００８１】
１．１  ＩＭＭ２９
【００８２】
ＩＭＭ２９の全長コード配列は、人工的に設計された。具体的には、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方のコード配列は、ハーセプチン（トラスツズマブ）に由来していた。マウスＩｇＧ１重鎖（配列番号１９）のシグナルペプチドをコードする５７のヌクレオチドを、重鎖コード配列（配列番号５）または軽鎖コード配列（配列番号７）の５'末端に付加し、コザック配列（配列番号２０）をシグナルペプチド配列の５'末端に付加した。次に、得られた重鎖配列の５'および３'末端にＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＮｈｅＩ制限部位を付加し、得られた軽鎖配列の５'および３'末端にＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＸｂａＩ制限部位を付加した。得られた２つの配列を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＩＤ＃：Ｔ８４３００（重鎖）；Ｔ８５５５５（軽鎖））によって合成し、それぞれｐＭａｃ−ＨベクターおよびｐＭａｃ−Ｌベクターにサブクローニングした。
【００８３】
１．２  ＩＭＭ２９０１
【００８４】
ＩＭＭ２９０１の軽鎖の発現ベクターは、ＩＭＭ２９の発現ベクターと同じである。重鎖ベクター構築のために、ＳＩＲＰαの最初の細胞外ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）（配列番号１）のコード配列を、ＧＳリンカー（配列番号３）を介して、ＩＭＭ２９の重鎖コード配列（配列番号５）のＮ末端に連結した（全体で配列番号９）。マウスＩｇＧ１重鎖（配列番号１９）のシグナルペプチドをコードする５７ヌクレオチドをＳＩＲＰαＤ１コード配列の５'末端に付加し、コザック配列（配列番号２０）をシグナルペプチド配列の５'末端に付加した。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＮｈｅＩ制限部位を、得られた配列の５'および３'末端にそれぞれ付加した。得られた配列を、Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＤ＃：Ｙ００００５０６−１−Ａ１０８６３）によって合成し、ｐＭａｃ−Ｈベクターにサブクローニングした。
【００８５】
１．３  ＩＭＭ２９０２
【００８６】
ＩＭＭ２９０２の重鎖の発現ベクターは、ＩＭＭ２９の発現ベクターと同じある。軽鎖ベクター構築のために、ＳＩＲＰαの最初の細胞外ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）（配列番号１）のコード配列を、ＧＳリンカー（配列番号３）を介してＩＭＭ２９の軽鎖コード配列（配列番号７）のＮ末端に連結した（全体で配列番号１１）。マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチド（配列番号１９）をコードする５７ヌクレオチドをＳＩＲＰαＤ１コード配列の５'末端に付加し、コザック配列（配列番号２０）をシグナルペプチド配列の５'末端に付加した。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＸｂａＩ制限部位を、得られた配列の５'および３'末端にそれぞれ付加した。得られた配列を、Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＤ＃：Ｙ００００５０６−２−Ａ１０８６８）によって合成し、ｐＭａｃ−Ｌベクターにサブクローニングした。
【００８７】
１．４  ＩＭＭ０１
【００８８】
ＳＩＲＰαＤ１−Ｆｃの発現カセットは、コザック配列（配列番号２０）をシグナルペプチド（配列番号１９）およびＳＩＲＰαＤ１−Ｆｃ（配列番号１３）のコード配列と順次接続することにより設計した。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＥｃｏＲＩ制限部位は、得られた配列の５'および３'末端にそれぞれ付加し、これはＣｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＤ＃：ＣＮ１４１８−Ｆ９０４３）によって合成し、ｐＭａｃ−Ｆｃベクターにサブクローニングした。
【００８９】
１．５  ＩＭＭ０４０４
【００９０】
ＩＭＭ０４０４の軽鎖の発現カセットは、コザック配列（配列番号２０）をシグナルペプチド（配列番号１９）のコード配列および抗ＥＧＦＲ抗体（アービタックス（セツキシマブ））（配列番号１７）の軽鎖と順次接続することにより設計された。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＸｂａＩ制限部位は、それぞれ、得られた配列の５'および３'末端に付加し、これはＣｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＩＤ＃：ＮＪ０７１９０２８Ｊ＿Ａ６３１５）によって合成し、ｐＭａｃ−Ｌベクターにサブクローニングした。重鎖ベクター構築のために、ＳＩＲＰαの最初の細胞外ドメイン（ＳＩＲＰαＤ１）のコード配列は、ＧＳリンカーを介して、ＥＧＦＲ特異的抗体の重鎖コード配列のＮ末端に連結され、ＳＩＲＰαＤ１−ＧＳリンカー重鎖は、配列番号１５によってコードされていた。マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチド（配列番号１９）をコードする５７のヌクレオチドをＳＩＲＰαＤ１−ＧＳリンカー重鎖（配列番号１５）の５'末端に付加し、コザック配列（配列番号２０）を、シグナルペプチド配列の５'末端に付加した。最後に、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位およびＮｈｅＩ制限部位は、得られた配列の５'および３'末端に付加し、これはＧｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＩＤ＃：Ｍ１７０２５）によって合成し、ｐＭａｃ−Ｈベクターにサブクローニングした。
【００９１】
実施例２  タンパク質の発現および精製
【００９２】
所望のタンパク質を製造するために、実施例１の発現ベクターをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＣＬ−６１）にエレクトロポレートし、ネオマイシンの圧力選択を数ラウンド行った。選択した安定細胞を無血清Ｂａｌａｎ  ＣＤ  ＣＨＯ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａ培地（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号９４１２０）に適合させた。タンパク質の発現のために、細胞を３Ｌバイオリアクターに播種し、流加培養で培養した。細胞生存率が約８０％まで低下したときに、バイオリアクター内での反応を停止し、細胞培養上清を採取し、アフィニティークロマトグラフィーによるタンパク質精製を行った。組換えタンパク質の純度は９５％を超え、エンドトキシンの含有量は０．５Ｕ／ｇ未満であった。
【００９３】
実施例３  ＣＤ４７またはＨＥＲ２に結合したＩＭＭ２９０１およびＩＭＭ２９０２
【００９４】
組換えタンパク質のＣＤ４７またはＨＥＲ２結合能は、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。組換えヒトＣＤ４７（ロット番号ＬＣ１０ＤＥ２００４、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）およびＥｒｂＢ２（ロット番号ＬＣ１１ＭＣ０２０１、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）をそれぞれコーティングバッファ（製品コード：１００１３２９２８８  Ｃ３０４１−１００ＣＡＰ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．）で調製し、５０ｎｇ／ウェルでＥＬＩＳＡプレートに転写した（カタログ番号４４２４０４、ＮｕｎｃＴＭ）。プレートを４℃の冷蔵庫に一晩置いた。アッセイを行うとき、滴定タンパク質を添加する前に、プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で３回洗浄し、そのプレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した後、ＨＲＰ−ウサギ抗−ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（カタログ番号：３０９−０３６−００８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂ）をプレートに加え、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−Ｔで５回洗浄した後、基質をプレートに加え、１ＮのＨ２ＳＯ４により色の変化を止めた後にプレートリーダーで読み取った。
【００９５】
ＩＭＭ２９０１およびＩＭＭ２９０２は、それぞれＥＣ５０値０．１９０３ｎＭおよび０．３８９４でＣＤ４７に結合し（図２）、それぞれＥＣ５０値０．７４３５ｎＭおよび０．５９３１ｎＭでＨＥＲ２に結合し（図３）、従来の単一抗原標的化抗体に対してわずかに劣っている。
【００９６】
実施例４  ＩＭＭ２９０２は、ＨＬ−６０の食作用を活性化した。
【００９７】
マウスマクロファージ細胞株Ａｎａ−１を９６ウェル細胞培養プレートに１×１０５細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１６〜１８時間培養した。標的細胞（ＨＬ−６０）をＣＦＳＥで標識し、段階希釈したＩＭＭ２９０２または対照タンパク質と４５分間インキュベートした。試験タンパク質を含む標的細胞溶液を、Ａｎａ−１細胞を含むプレートに移し、Ａｎａ−１細胞対ＨＬ−６０細胞の数の比は１：３であった。混合物を細胞培養インキュベーターで２時間培養し、次にＡｎａ−１細胞中のＣＦＳＥの密度についてＦＡＣＳ分析を行った。
【００９８】
図４に示すとおり、ＩＭＭ２９０２は、腫瘍細胞の高レベルの食作用を活性化した。
【００９９】
実施例５  ＩＭＭ２９０２は、高い抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有していた。
【０１００】
ＣＦＳＥ標識ＢＴ−４７４細胞（標的細胞として使用）を、ＦｃγＲＩＩＩａを１：２の比率で安定して発現するＮＫ９２ＭＩ細胞（エフェクター細胞）と混合し、この混合細胞を段階希釈ＩＭＭ２９０２または対照タンパク質の存在下で３７℃、５％ＣＯ２下で４時間培養した。次に、５ｇ／ｍｌヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４１７０）を５μｇ／ｍｌの濃度で細胞培養に添加し、細胞培養をＰＩシグナルのＦＡＣＳ分析に供した。ＡＤＣＣによって媒介される細胞溶解の割合（パーセンテージ）は、次式に基づいて算出した：
【０１０１】
溶解％＝（ＩＭＭ２９０２または対照タンパク質を含むＰＩ陽性細胞％−陰性対照タンパク質を含むＰＩ陽性細胞％）／（１００−陰性対照タンパク質を含むＰＩ陽性細胞％）＊１００
【０１０２】
図５に示すとおり、ＩＭＭ２９０２は、ＩＭＭ２９およびハーセプチンと比較して同等以上のＡＤＣＣ活性を有していた。
【０１０３】
実施例６  ＩＭＭ２９０２は、ＨＥＲ２の内在化を誘導した。
【０１０４】
１×１０６個のＢＴ−４７４細胞を含む、５％ＦＢＳを含む２００ＬのＤＭＥＭ培地を９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、プレートをインキュベーターから取り出し、培地を滴定タンパク質を含む新鮮培地と交換した。プレートを細胞培養インキュベーター内でさらに４時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、ヒトＩｇＧのＦｃ部分に特異的なＦＩＴＣコンジュゲート抗体で染色した。内在化したＨＥＲ２受容体の割合は、次式に基づいて算出した：
【０１０５】
内在化率＝（１−ＭＦＩ／ＭＦＩｔ＝０）＊１００％
【０１０６】
ＭＦＩ：平均蛍光強度
【０１０７】
図６によると、ＩＭＭ２９０２は、ＩＭＭ２９またはハーセプチンと同等のレベルでＨＥＲ２の内在化を誘導することができた。
【０１０８】
実施例７  ＩＭＭ２９０２は、優れた抗腫瘍効果を有していた。
【０１０９】
ＢＴ−４７４ヒト乳癌細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）番号：ＨＴＢ−２０；ロット番号：６３０８７０４３）は、３７℃、５％ＣＯ２で１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地で培養した。
【０１１０】
細胞を収集し、無血清ＤＭＥＭ培地、１×１０８／ｍＬに再懸濁した。培地にマトリゲルを体積比１：１で添加および混合し、使用するために氷上に置いた。
【０１１１】
５５匹のヌードマウスにＢＴ−４７４細胞（１×１０７細胞／マウス）を右脇腹に皮下注射した。これらのマウスは、エストロゲン依存性腫瘍の成長を維持するために、腫瘍細胞注射の１週間前から試験終了まで、３回／週（毎週月曜日、水曜日、金曜日）、エストロゲンの筋肉内注射を受けた。
【０１１２】
腫瘍体積が１００〜１５０ｍｍ３に達したとき、３６匹のマウスを無作為に６つの群に割り当て、各群６匹のマウスとした。マウスは、ＰＢＳ、ＩＭＭ０１（３．０ｍｇ／ｋｇ）、ハーセプチン（５．０ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ２９（５．０ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ２９０９（６．０ｍｇ／ｋｇ）、およびＩＭＭ０１＋ＩＭＭ２９（３．０ｍｇ／ｋｇ＋５．０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によってそれぞれ週２回、３週間治療した。合計６回の治療を行った。最初に投与した日を０日目と定義した。腫瘍体積および体重を週に２回測定した。
【０１１３】
治療中、マウスの体重が１５％以上減少した場合、体重減少が１０％以下になるまで薬物投与を停止した。いずれかの群の平均腫瘍体積が２０００ｍｍ３を超えたとき、または実験が完了したときに、動物を屠殺した。
【０１１４】
腫瘍体積（Ｖ）は、（長さｘ幅２）／２として算出した。腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）は、次式により算出した：腫瘍成長阻害率＝（１−投与群における腫瘍体積変化／対照群における腫瘍体積変化）ｘ１００％。ダネットの多重比較検定を使用して、群差を算出した。
［表１］ＩＭＭ２９０２および他の抗体の抗腫瘍効果
【表１】
2021532807.tif 000002
【０１１５】
上記の表１および図７に示すとおり、群５は、１１５．２８％の腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）を有し、他の群よりも高く、単一抗原標的抗体と比較してＩＭＭ２９０２の有効性が高いことを示唆している。特に、群５のＴＧＩは、ＩＭＭ０１およびＩＭＭ２９を組み合わせて使用した群よりもさらに高かった。
【０１１６】
実施例８  ＨＴ−２９またはＮＣｌ−Ｈ１９７５異種移植モデルにおけるＩＭＭ０４０４の抗腫瘍活性
【０１１７】
８．１  ＨＴ−２９異種移植モデル
【０１１８】
ＨＴ−２９ヒト大腸癌細胞は、３７℃、５％ＣＯ２で１０％ＦＢＳを含むマッコイ５Ａ培地で培養した。
【０１１９】
対数期の細胞を回収し、１×ＰＢＳに再懸濁した。懸濁液にマトリゲルを体積比１：１で添加および混合し、混合物には３×１０７細胞／ｍＬを含めた。
【０１２０】
４０匹のマウスに、マウス１匹あたり３×１０６細胞のＨＴ−２９細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が１００〜２００ｍｍ３に達したとき、これらの動物をランダムに５つの群に割り当て、各群８匹のマウスとした。マウスは、ＰＢＳ、ＩＭＭ０１（１．２ｍｇ／ｋｇ）、アービタックス（２．０ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ０４０４（２．７ｍｇ／ｋｇ）、およびＩＭＭ０１＋アービタックス（１．２ｍｇ／ｋｇ＋２．０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射により、それぞれ週に１回、４週間治療した。合計４回の治療を行った。最初に投与した日を０日目と定義した。腫瘍体積および体重を週に２回測定した。
【０１２１】
腫瘍体積（Ｖ）は、（長さ×幅２）／２として算出した。腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）は、次式により算出した：腫瘍成長阻害率＝（１−投与群における腫瘍体積変化／対照群における腫瘍体積変化）ｘ１００％。スチューデント検定を使用して、群差を算出した。
［表２］ＩＭＭ０４０４および他の抗体の抗腫瘍効果
【表２】
2021532807.tif 000003
【０１２２】
表２および図８から、ＩＭＭ０４０４はこの異種移植モデルの他のタンパク質よりも優れた抗腫瘍活性を示さなかったことが見られ得る。
【０１２３】
８．２  ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植モデル
【０１２４】
ＮＣＩ−Ｈ１９７５非小細胞肺癌細胞は、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ、ＵＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０１２５】
対数期の細胞を回収し、１×ＰＢＳに再懸濁した（１×１０７細胞／ｍＬ）。
【０１２６】
４０匹のＳＣＩＤマウスにマウス１匹あたり１×１０６細胞のＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍体積が１００〜２００ｍｍ３に達したとき、これらの動物をランダムに５つの群に割り当て、各群８匹のマウスとした。マウスは、ＰＢＳ、ＩＭＭ０１（２．７ｍｇ／ｋｇ）、アービタックス（５．０ｍｇ／ｋｇ）、ＩＭＭ０４０４（６．０ｍｇ／ｋｇ）、およびＩＭＭ０１＋アービタックス（２．７ｍｇ／ｋｇ＋５．０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射により、それぞれ週に１回、３週間治療した。合計３回の治療を行った。最初に投与した日を０日目と定義した。腫瘍体積および体重を週に２回測定した。
【０１２７】
腫瘍体積（Ｖ）は、（長さ×幅２）／２として算出した。腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）は、次式により算出した：腫瘍成長阻害率＝（１−投与群における腫瘍体積変化／対照群における腫瘍体積変化）ｘ１００％。スチューデント検定を使用して、群差を算出した。
［表３］ＩＭＭ０４０４および他の抗体の抗腫瘍効果
【表３】
2021532807.tif 000004
【０１２８】
表３および図９から、ＩＭＭ０４０４の抗腫瘍活性は、ＩＭＭ０１よりも優れていたが、アービタックスおよびＩＭＭ０１＋アービタックスよりも劣っていることが見られ得る。
【０１２９】
この実施例のデータは、二重特異性抗体が、単一抗原標的化抗体と比較して必ずしも優れた効力を示すものではないことを示唆した。
【０１３０】
本発明は、１または複数の実施形態に関連して上記で説明してきたが、本開示はそれらの実施形態に限定されるものではなく、説明は、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれ得るとおり、以下に含まれ得るすべての代替、変形、および同等物を網羅することを意図していることを理解されたい。本明細書で引用されているすべての参照は、その全体が参照によりさらに組み込まれる。
【０１３１】
本出願における配列は、以下に要約される。
配列番号１  ＳＩＲＰアルファの最初の細胞外Ｉｇ様ドメイン
ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣ  ＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴ  ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧ  ＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧ  ＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧ  ＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡ  ＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣ  ＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡ  ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣ  ＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧ  ＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴ  ＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴ  ＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣ  ＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴ  ＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧ  ＣＡＴＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧ  ＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴ  ＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡ  ＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＧＴＧＣＣＡＡＡＣＣ  ＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣ  ＧＴＧＧＴＡＴＣＧＧ  ＧＣＣＣＴ        ３７５
配列番号２  ＳＩＲＰアルファの最初の細胞外Ｉｇ様ドメイン
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ  ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ  ＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬ  ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ  ＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹ  ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ  ＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥ  ＮＭＤＦＳＩＳＩＳＡ  ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ  ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ  ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥ  ＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰ  ＶＶＳＧＰ    １２５
配列番号３  リンカー
ＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＴＧＧＧＡＧＣ  ＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧ  ＧＧＡＧＣＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＧＧＧＣＴＣＧ  ４５
配列番号４  リンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  １５
配列番号５  抗ＨＥＲ２抗体の重鎖
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＣＧＡＧＡＧ  ＣＧＧＣＧＧＧＧＧＣ  ＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＧＧＧＣＧＧＧＴＣ  ＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧ  ＡＧＣＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＧＡＧＣＧＧＧＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＣＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧ  ＡＴＣＴＡＣＣＣＣＡ  ＣＧＡＡＣＧＧＧＴＡ  ＣＡＣＣＣＧＣＴＡＣ  ＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧ  ＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧ  ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＡＧＣＧＣＧＧＡＣＡ  ＣＣＴＣＧＡＡＧＡＡ  ＣＡＣＧＧＣＣＴＡＣ  ＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡ  ＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧ  ＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣ  ＧＧＣＧＡＣＧＧＧＴ  ＴＣＴＡＣＧＣＣＡＴ  ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣ  ＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ  ＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡ  ＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣ  ＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣ  ＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴ  ＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧ  ＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧ  ＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣ  ＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴ  ＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧ  ＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧ  ＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧ  ＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣ  ＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴ  ＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡ  ＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴ  ＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣ  ＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡ  ＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧ  ＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣ  ＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡ  ＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣ  ＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧ  ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ  ＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣ  ＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧ  ＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡ  ＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡ  ＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧ  ＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴ  ＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡ  ＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴ  ＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣ  ＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣ  ＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣ  ＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣ  ＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴ  ＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴ  ＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴ  ＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣ  ＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣ  ＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡ  ＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧ  ＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴ  ＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣ  ＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣ  ＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡ  ＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣ  ＧＣＣＡＣＧＴＡＣＣ  ＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧ  ＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣ  ＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣ  ＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴ  ＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧ  ＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴ  ＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣ  ＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣ  ＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣ  ＣＣＡＴＣＧＣＣＧＣ  ＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣ  ＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧ  ＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧ  ＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣ  ＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣ  ＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡ  ＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧ  ＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣ  ＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧ  ＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣ  ＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣ  ＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴ  ＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡ  ＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧ  ＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴ  ＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣ  ＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧ  ＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧ  ＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴ  ＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴ  ＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡ  ＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡ  ＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧ  ＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡ  ＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣ  ＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧ  ＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧ  ＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡ  ＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣ  ＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣ  ＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ  ＴＧＡ    １３５３
配列番号６  抗ＨＥＲ２抗体の重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫ  ＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲ  ＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧ  ＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＡＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＡＡＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥ  ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ  ４５０
配列番号７  抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡ  ＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧ  ＣＣＣＧＴＣＧＡＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡ  ＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡ  ＣＣＧＧＧＴＣＡＣＧ  ＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣ  ＧＣＧＣＧＡＧＣＣＡ  ＧＧＡＣＧＴＧＡＡＣ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＧ  ＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡ  ＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣ  ＧＧＧＡＡＧＧＣＣＣ  ＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴ  ＧＡＴＣＴＡＣＴＣＧ  ＧＣＧＡＧＣＴＴＣＣ  ＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＧＴＣＣＣＣＡＧＣ  ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ  ＧＧＴＣＧＣＧＣＡＧ  ＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣ  ＴＴＣＡＣＧＣＴＣＡ  ＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧ  ＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧ  ＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡ  ＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧ  ＣＡＣＴＡＣＡＣＣＡ  ＣＧＣＣＣＣＣＣＡＣ  ＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧ  ＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧ  ＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡ  ＧＣＧＡＡＣＴＧＴＧ  ＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴ  ＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴ  ＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡ  ＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣ  ＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣ  ＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣ  ＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴ  ＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡ  ＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴ  ＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧ  ＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡ  ＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ  ＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣ  ＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧ  ＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣ  ＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡ  ＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧ  ＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧ  ＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡ  ＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡ  ＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴ  ＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣ  ＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣ  ＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡ  ＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣ  ＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴ  ＧＴＴＡＧ    ６４５
配列番号８  抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮ  ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳ  ＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳ    ＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱ  ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ  ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ    ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ  ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ  ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ  ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ  ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ  ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ    ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ  ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ  ＲＧＥＣ    ２１４
配列番号９  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２重鎖
ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣ  ＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴ  ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧ  ＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴ  ＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧ  ＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧ  ＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡ  ＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣ  ＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡ  ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣ  ＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧ  ＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴ  ＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴ  ＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣ  ＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴ  ＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧ  ＣＡＴＣＡＧＴＧＣＣ  ＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧ  ＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴ  ＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡ  ＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＧＴＧＣＣＡＡＡＣＣ  ＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣ  ＧＴＧＧＴＡＴＣＧＧ  ＧＣＣＣＴＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＴＧＧＧＡＧＣ  ＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧ  ＧＧＡＧＣＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＧＧＧＣＴＣＧ  ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＣＧＡＧＡＧ  ＣＧＧＣＧＧＧＧＧＣ  ＣＴＣＧＴＧＣＡＧＣ  ＣＧＧＧＣＧＧＧＴＣ  ＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＣＧＣＣＧ  ＣＧＡＧＣＧＧＧＴＴ  ＣＡＡＣＡＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＡＣＣＴＡＣＡ  ＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴ  ＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣ  ＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧ  ＧＣＣＴＣＧＡＧＴＧ  ＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧ  ＡＴＣＴＡＣＣＣＣＡ  ＣＧＡＡＣＧＧＧＴＡ  ＣＡＣＣＣＧＣＴＡＣ  ＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧ  ＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧ  ＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣ  ＡＧＣＧＣＧＧＡＣＡ  ＣＣＴＣＧＡＡＧＡＡ  ＣＡＣＧＧＣＣＴＡＣ  ＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡ  ＡＣＡＧＣＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴ  ＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧ  ＣＣＧＧＴＧＧＧＧＣ  ＧＧＣＧＡＣＧＧＧＴ  ＴＣＴＡＣＧＣＣＡＴ  ＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧ  ＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡ  ＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣ  ＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ  ＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡ  ＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣ  ＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣ  ＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴ  ＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧ  ＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧ  ＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧ  ＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧ  ＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣ  ＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴ  ＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧ  ＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧ  ＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧ  ＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣ  ＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴ  ＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴ  ＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣ  ＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡ  ＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧ  ＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣ  ＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡ  ＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣ  ＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧ  ＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧ  ＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣ  ＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧ  ＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡ  ＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡ  ＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧ  ＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴ  ＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡ  ＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴ  ＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣ  ＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣ  ＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣ  ＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣ  ＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴ  ＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴ  ＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣ  ＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣ  ＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡ  ＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧ  ＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴ  Ｇ��ＡＴＡＡＴＧＣＣ  ＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣ  ＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡ  ＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣ  ＧＣＣＡＣＧＴＡＣＣ  ＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧ  ＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣ  ＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣ  ＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴ  ＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧ  ＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴ  ＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣ  ＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣ  ＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣ  ＣＣＡＴＣＧＣＣＧＣ  ＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣ  ＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧ  ＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧ  ＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣ  ＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣ  ＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡ  ＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧ  ＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣ  ＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧ  ＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣ  ＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣ  ＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴ  ＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡ  ＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧ  ＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴ  ＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣ  ＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧ  ＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧ  ＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴ  ＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴ  ＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡ  ＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡ  ＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡ  ＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣ  ＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧ  ＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧ  ＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡ  ＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣ  ＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣ  ＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ  ＴＧＡ    １７７３
配列番号１０  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２重鎖
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ  ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ  ＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬ  ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ  ＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹ  ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ  ＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥ  ＮＭＤＦＳＩＳＩＳＡ  ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ  ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ  ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥ  ＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰ  ＶＶＳＧＰＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ  ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ  ＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫ  ＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡ  ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲ  ＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹ  ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ  ＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹ  ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ  ＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷ  ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ  ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ    ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ  ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰ  ＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰ  ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＡＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＡＡＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  ＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥ  ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹ  ＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ  ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶ  ＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ  ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ    ５９０
配列番号１１  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗−ＨＥＲ２軽鎖
ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣ  ＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴ  ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧ  ＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴ  ＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧ  ＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧ  ＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡ  ＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣ  ＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡ  ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣ  ＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧ  ＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴ  ＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴ  ＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣ  ＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴ  ＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧ  ＣＡＴＣＡＧＴＧＣＣ  ＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧ  ＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴ  ＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡ  ＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＧＴＧＣＣＡＡＡＣＣ  ＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣ  ＧＴＧＧＴＡＴＣＧＧ  ＧＣＣＣＴＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＴＧＧＧＡＧＣ  ＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧ  ＧＧＡＧＣＧＧＣＧＧ  ＣＧＧＧＧＧＣＴＣＧ  ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡ  ＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧ  ＣＣＣＧＴＣＧＡＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡ  ＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡ  ＣＣＧＧＧＴＣＡＣＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣ  ＧＣＧＣＧＡＧＣＣＡ  ＧＧＡＣＧＴＧＡＡＣ  ＡＣＣＧＣＣＧＴＧＧ  ＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡ  ＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣ  ＧＧＧＡＡＧＧＣＣＣ  ＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴ  ＧＡＴＣＴＡＣＴＣＧ  ＧＣＧＡＧＣＴＴＣＣ  ＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧ  ＣＧＴＣＣＣＣＡＧＣ  ＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧ  ＧＧＴＣＧＣＧＣＡＧ  ＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣ  ＴＴＣＡＣＧＣＴＣＡ  ＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧ  ＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧ  ＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡ  ＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧ  ＣＡＣＴＡＣＡＣＣＡ  ＣＧＣＣＣＣＣＣＡＣ  ＣＴＴＣＧＧＧＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧ  ＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡ  ＧＣＧＡＡＣＴＧＴＧ  ＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴ  ＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴ  ＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡ  ＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣ  ＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣ  ＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣ  ＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴ  ＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡ  ＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴ  ＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧ  ＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡ  ＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ  ＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣ  ＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧ  ＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣ  ＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡ  ＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧ  ＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡ  ＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡ  ＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴ  ＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣ  ＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣ  ＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡ  ＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣ  ＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴ  ＧＴＴＡＧ  １０６５
配列番号１２  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗ＨＥＲ２軽鎖
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ  ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ  ＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬ  ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ  ＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹ  ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ  ＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥ  ＮＭＤＦＳＩＳＩＳＡ  ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ  ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ  ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥ  ＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰ  ＶＶＳＧＰＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ  ＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮ  ＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰ  ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳ  ＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳ  ＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤ  ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ  ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ  ＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ  ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ  ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ  ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ  ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ  ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ  ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ  ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ  ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ  ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ  ＲＧＥＣ    ３５４
配列番号１３  ＳＩＲＰアルファＤ１−Ｆｃ
ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣ  ＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴ  ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧ  ＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴ  ＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧ  ＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧ  ＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡ  ＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣ  ＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡ  ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣ  ＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧ  ＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴ  ＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴ  ＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣ  ＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴ  ＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧ  ＣＡＴＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧ  ＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴ  ＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡ  ＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＧＴＧＣＣＡＡＡＣＣ  ＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣ  ＧＴＧＧＴＡＴＣＧＧ  ＧＣＣＣＴＧＣＧＧＣ  ＧＡＧＧＧＣＣＡＣＡ  ＣＣＴＣＡＧＣＡＣＧ  ＡＡＴＴＣＧＡＧＣＣ  ＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴ  ＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣ  ＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣ  ＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡ  ＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣ  ＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧ  ＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣ  ＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣ  ＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣ  ＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣ  ＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴ  ＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣ  ＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡ  ＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧ  ＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧ  ＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣ  ＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡ  ＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧ  ＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣ  ＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧ  ＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣ  ＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧ  ＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧ  ＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡ  ＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣ  ＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡ  ＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣ  ＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣ  ＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣ  ＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡ  ＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧ  ＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴ  ＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣ  ＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣ  ＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡ  ＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣ  ＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡ  ＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣ  ＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡ  ＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣ  ＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴ  ＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡ  ＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧ  ＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡ  ＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧ  ＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡ  ＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣ  ＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴ  ＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧ  ＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡ  ＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣ  ＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣ  ＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡ  ＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴ  ＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴ  ＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡ  ＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣ  ＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡ  ＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧ  ＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧ  ＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴ  ＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴ  ＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧ  ＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡ  ＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣ  ＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣ  ＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴ  ＣＴＣＣＧＧＧＴＴＧ  Ａ    １１０１
配列番号１４  ＳＩＲＰアルファＤ１−Ｆｃ
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ  ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ  ＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬ  ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ  ＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹ  ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ    ＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥ  ＮＭＤＦＳＩＳＩＳＡ  ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ  ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ  ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥ  ＬＳＶＲＡＫＰＳＡＰ  ＶＶＳＧＰＡＡＲＡＴ  ＰＱＨＥＦＥＰＫＳＣ  ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴ  ＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  ＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬ  ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧ    ３６６
配列番号１５  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗ＥＧＦＲ軽鎖
ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴ  ＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣ  ＡＡＧＴＣＣＧＴＡＴ  ＣＡＧＴＴＧＣＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＡＧＴＣＧ  ＧＣＣＡＴＴＣＴＧＣ  ＡＣＴＧＣＡＣＴＧＴ  ＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧ  ＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧ  ＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡ  ＧＴＧＧＴＴＣＡＧＡ  ＧＧＡＧＣＴＧＧＡＣ  ＣＡＧＣＣＣＧＧＧＡ  ＡＴＴＡＡＴＣＴＡＣ  ＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧ  ＡＡＧＧＣＣＡＣＴＴ  ＣＣＣＣＣＧＧＧＴＡ  ＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴ  ＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣ  ＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡ  ＡＡＣＡＴＧＧＡＣＴ  ＴＴＴＣＣＡＴＣＡＧ  ＣＡＴＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧ  ＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧ  ＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣ  ＴＧＴＧＴＧＡＡＧＴ  ＴＣＣＧＧＡＡＡＧＧ  ＧＡＧＣＣＣＴＧＡＣ  ＡＣＧＧＡＧＴＴＴＡ  ＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＣＡＣＴＧＡＧ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＣ  ＧＴＧＣＣＡＡＡＣＣ  ＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣ  ＧＧＴＧＧＧＡＧＣＧ  ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧ  ＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣ  ＧＧＧＧＧＣＴＣＧＣ  ＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴ  ＧＡＡＧＣＡＧＴＣＡ  ＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣ  ＴＡＧＴＧＣＡＧＣＣ  ＣＴＣＡＣＡＧＡＧＣ  ＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡ  ＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴ  ＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＣＡＴＴＡＡＣＴＡ  ＡＣＴＡＴＧＧＴＧＴ  ＡＣＡＣＴＧＧＧＴＴ  ＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣ  ＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧ  ＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧ  ＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡ  ＴＡＴＧＧＡＧＴＧＧ  ＴＧＧＡＡＡＣＡＣＡ  ＧＡＣＴＡＴＡＡＴＡ  ＣＡＣＣＴＴＴＣＡＣ  ＡＴＣＣＡＧＡＣＴＧ  ＡＧＣＡＴＣＡＡＣＡ  ＡＧＧＡＣＡＡＴＴＣ  ＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡ  ＧＴＴＴＴＣＴＴＴＡ  ＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧ  ＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴ  ＣＡＧＧＡＣＡＣＡＧ  ＣＣＡＴＡＴＡＴＴＡ  ＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡ  ＧＣＣＣＴＣＡＣＣＴ  ＡＣＴＡＴＧＡＴＴＡ  ＣＧＡＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣ  ＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴ  ＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣ  ＴＣＴＧＣＡＧＣＴＡ  ＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧ  ＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣ  ＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧ  ＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣ  ＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣ  ＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡ  ＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴ  ＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧ  ＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴ  ＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡ  ＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧ  ＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡ  ＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣ  ＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣ  ＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡ  ＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣ  ＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧ  ＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣ  ＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴ  ＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣ  ＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧ  ＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣ  ＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡ  ＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴ  ＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧ  ＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡ  ＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡ  ＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴ  ＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴ  ＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡ  ＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡ  ＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴ  ＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣ  ＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧ  ＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴ  ＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴ  ＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡ  ＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧ  ＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴ  ＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧ  ＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧ  ＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴ  ＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧ  ＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡ  ＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣ  ＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧ  ＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴ  ＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴ  ＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡ  ＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧ  ＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧ  ＴＡＣＡＡＣＧＣＣＡ  ＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴ  ＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣ  ＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣ  ＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡ  ＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴ  ＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴ  ＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡ  ＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣ  ＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣ  ＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴ  ＣＧＣＣＧＣＡＡＣＣ  ＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧ  ＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡ  ＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴ  ＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣ  ＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧ  ＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡ  ＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡ  ＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧ  ＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧ  ＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴ  ＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣ  ＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧ  ＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡ  ＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧ  ＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡ  ＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡ  ＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴ  ＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧ  ＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧ  ＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣ  ＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡ  ＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴ  ＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣ  ＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣ  ＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴ  ＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣ  ＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴ  ＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣ  ＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡ  ＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣ  ＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧ  ＧＧＣＡＡＡＴＧＡ  １７４９
配列番号１６  ＳＩＲＰアルファＤ１−リンカー−抗ＥＧＦＲ軽鎖
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ  ＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳ  ＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬ  ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ  ＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹ  ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ    ＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥ  ＮＭＤＦＳＩＳＩＳＡ  ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ  ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ  ＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥ  ＬＳＶＲＡＫＰＳＧＧ  ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ  ＧＧＳＱＶＱＬＫＱＳ  ＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳ  ＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦ  ＳＬＴＮＹＧＶＨＷＶ  ＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷ  ＬＧＶＩＷＳＧＧＮＴ  ＤＹＮＴＰＦＴＳＲＬ  ＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱ  ＶＦＦＫＭＮＳＬＱＳ  ＱＤＴＡＩＹＹＣＡＲ  ＡＬＴＹＹＤＹＥＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶ  ＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶ  ＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴ  ＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬ  ＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴ  ＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳ  ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱ  ＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶ  ＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴ  ＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫ  ＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ  ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ  ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬ  ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰ  ＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ  ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ  ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ  ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ  ＹＮＡＴＹＲＶＶＳＶ  ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ  ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ  ＫＡＬＰＡＰＩＡＡＴ  ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲ  ＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬ  ＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳ  ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ  ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ  ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ  ＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳ  ＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ  ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨ  ＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ  ＧＫ    ５８２
配列番号１７  抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖
ＧＡＣＡＴＣＴＴＧＣ  ＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣ  ＴＣＣＡＧＴＣＡＴＣ  ＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡ  ＧＴＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴ  ＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡ  ＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡ  ＧＡＧＴＡＴＴＧＧＣ  ＡＣＡＡＡＣＡＴＡＣ  ＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡ  ＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡ  ＡＡＴＧＧＴＴＣＴＣ  ＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴ  ＣＡＴＡＡＡＧＴＡＴ  ＧＣＴＴＣＴＧＡＧＴ  ＣＴＡＴＣＴＣＴＧＧ  ＧＡＴＣＣＣＴＴＣＣ  ＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧ  ＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣ  ＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴ  ＴＴＴＡＣＴＣＴＴＡ  ＧＣＡＴＣＡＡＣＡＧ  ＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧ  ＣＡＧＡＴＴＡＴＴＡ  ＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡ  ＡＡＴＡＡＴＡＡＣＴ  ＧＧＣＣＡＡＣＣＡＣ  ＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴ  ＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣ  ＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡ  ＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧ  ＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴ  ＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴ  ＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡ  ＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣ  ＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣ  ＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣ  ＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴ  ＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡ  ＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴ  ＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧ  ＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡ  ＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ  ＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣ  ＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧ  ＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣ  ＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡ  ＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧ  ＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧ  ＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧ  ＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡ  ＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡ  ＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴ  ＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣ  ＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣ  ＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡ  ＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣ  ＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴ  ＧＴＴＡＧ    ６４５
配列番号１８  抗ＥＧＦＲ抗体の軽鎖
ＤＩＬＬＴＱＳＰＶＩ  ＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳ  ＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧ  ＴＮＩＨＷＹＱＱＲＴ  ＮＧＳＰＲＬＬＩＫＹ  ＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳ    ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ  ＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳ  ＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱ  ＮＮＮＷＰＴＴＦＧＡ  ＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶ  ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ  ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ  ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ  ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ  ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ  ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ  ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ  ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ  ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ  ＲＧＥＣ    ２１４
配列番号１９  マウスＩｇＧ１重鎖のシグナルペプチド
ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴ  ＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴ  ＣＣＴＴＴＴＴＣＴＧ  ＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧ  ＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴ  ＡＣＡＴＴＣＡ  ５７
配列番号２０  コザック
ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ  ９
【０１３２】
【図１】
2021532807.tif 000005
【図２】
2021532807.tif 000006
【図３】
2021532807.tif 000007
【図４】
2021532807.tif 000008
【図５】
2021532807.tif 000009
【図６】
2021532807.tif 000010
【図７】
2021532807.tif 000011
【図８】
2021532807.tif 000012
【図９】
2021532807.tif 000013
【配列表】
2021532807000001.app
【国際調査報告】
2021532807.tif 000014
2021532807.tif 000015
2021532807.tif 000016
2021532807.tif 000017
2021532807.tif 000018