(57)【要約】アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼと、界面活性剤系と、液体担体（すなわち、水）と、を含む液体洗剤組成物、好ましくは、食器手洗い用液体洗剤組成物。液体洗剤組成物を含む洗浄方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼである、１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素と、
ｂ）１種以上のアニオン性界面活性剤と、両性界面活性剤、双極性界面活性剤、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上の共界面活性剤とを含む界面活性剤系であって、前記アニオン性界面活性剤の前記共界面活性剤に対する重量比が、９：１未満、好ましくは５：１〜１：１、より好ましくは４：１〜２：１である界面活性剤系と、
ｃ）前記組成物の３０重量％〜９５重量％の液体担体であって、水である液体担体と、
を含み、
好ましくは、食器手洗い用液体組成物である、液体洗剤組成物。
【請求項２】
前記アラキドン酸リポキシゲナーゼが、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）、アラキドン酸８−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．４０）、アラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１３．１１．３１）、及びアラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）からなる群から選択され、好ましくは、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アラキドン酸リポキシゲナーゼが、ヒトアラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）（配列番号７）、プレキサウラ・ホモマラアラキドン酸８−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．４０）（配列番号８）、ヒトアラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３１）（配列番号９、１０、１１）、ヒメツリガネゴケアラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３１）（配列番号１２）、ヒトアラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）（配列番号１３）、緑膿菌アラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）（配列番号１４）、シアノセイス属の種アラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）（配列番号１５）、ノストック・パンクチフォルムアラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）（配列番号１６）、及びオオムギアラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）（配列番号１７）からなる群から選択され、好ましくはヒトアラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）（配列番号７）である少なくとも１つの参照配列の全長に対して整列された配列の全長にわたって計算したとき、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、又は好ましくは更に１００％の同一性を有する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アルファ−ジオキシゲナーゼが、アラビドプシス・タリアナアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号１）、アラビドプシス・タリアナアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号２）、フサリウム・グラミネアルムアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号３）、フサリウム・ベルチシリオイデスアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号４）、フサリウム・オキシスポラムアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号５）、及びオリザ・サティバアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号６）からなる群から選択され、好ましくは、アラビドプシス・タリアナアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号２）である少なくとも１つの参照配列の全長に対して整列された配列の全長にわたって計算したとき、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、又は好ましくは更に１００％の同一性を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
脂肪酸ペルオキシダーゼ（ＥＣ１．１１．１．３）、非特異的ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．１）、植物種子ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．３）、脂肪酸ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．４）、リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．４４）、５，８−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．６０及びＥＣ５．４．４．５）、７，８−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．６０及びＥＣ５．４．４．６）、９，１４−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．Ｂ１）、８，１１−リノール酸ジオール合成酵素、オレイン酸ジオール合成酵素、他のリノール酸ジオール合成酵素、非特異的モノオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１４．１）、アルカン−１−モノオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１５．３）、オレイン酸１２−ヒドロキシラーゼ（ＥＣ１．１４．１８．４）、脂肪酸アミドヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．９９）、オレイン酸ヒドラターゼ（ＥＣ４．２．１．５３）、リノール酸異性化酵素（ＥＣ５．２．１．５）、リノール酸（１０Ｅ，１２Ｚ）−異性化酵素（ＥＣ５．３．３．Ｂ２）、脂肪酸脱炭酸酵素（ＯｌｅＴ様）、鉄依存性脱炭酸酵素（ＵｎｄＡ様）、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、及びこれらの混合物、好ましくは、脂肪酸ペルオキシダーゼ（ＥＣ１．１１．１．３）、非特異的ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．１）、植物種子ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．３）、及び脂肪酸ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．４）、並びにこれらの混合物からなる群から選択される１種以上の補酵素を更に含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素が、活性タンパク質に基づいて、前記洗剤組成物の０．０００１重量％〜１重量％、好ましくは０．００１重量％〜０．２重量％の量で存在する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記界面活性剤系が、前記洗剤組成物の１重量％〜６０重量％、好ましくは５重量％〜５０重量％の量で存在する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記アニオン性界面活性剤が、アルキルサルフェート、アルキルアルコキシサルフェート、アルキルベンゼンスルホネート、パラフィンスルホネート、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記両性界面活性剤がアミンオキシド界面活性剤であり、前記双極性界面活性剤がベタイン界面活性剤である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アニオン性界面活性剤が、アルキルサルフェート及びアルキルアルコキシサルフェートの混合物であり、前記共界面活性剤が、アルキルジメチルアミンオキシドであり、前記アニオン性界面活性剤の前記共界面活性剤に対する重量比が４：１〜２：１である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
１種以上の非イオン性界面活性剤を更に含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
化学的安定剤及び物理的安定剤からなる群から選択される酵素安定剤を更に含み、好ましくは、前記物理的安定剤が、封入された酵素を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物がキレート剤を更に含み、好ましくはカルボキシレートキレート剤、アミノカルボキシレートキレート剤、アミノホスホネートキレート剤、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくは、前記キレート剤が、ＭＧＤＡ（メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸）、ＧＬＤＡ（グルタミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸）、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
汚れた物品、好ましくは食器類を手作業で洗う方法であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物を一定の体積の水に入れて洗浄溶液を形成する工程と、前記汚れた物品を前記洗浄溶液中に浸漬する工程と、を含み、好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素が、洗浄工程中の前記洗浄溶液中に、活性タンパク質に基づいて、０．００５ｐｐｍ〜１５ｐｐｍ、好ましくは０．０１ｐｐｍ〜５ｐｐｍ、より好ましくは０．０２ｐｐｍ〜０．５ｐｐｍの濃度で存在する、方法。
【請求項１５】
汚れ、好ましくは脂性汚れ、より好ましくは不飽和脂肪酸を含む脂性汚れを含む水性洗浄液中の泡寿命を延長するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の洗剤組成物における、アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼである１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（配列表の参照）
本明細書は、コンピュータ可読形態での配列表を含む。このコンピュータ可読形態は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、界面活性剤系と、アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼと、液体担体（すなわち、水）と、を含む液体洗剤組成物に関する。当該組成物は、良好な洗浄、特に良好な脂乳化、及び特に脂性汚れの存在下で長持ちする泡を含む、１つ以上の効果を提供する。
【背景技術】
【０００３】
液体洗剤組成物は、良好な汚れ及び／又は脂の洗浄を提供しながら、良好な泡プロファイル、具体的には、特に脂性汚れの存在下で長持ちする泡プロファイルを有していなければならない。ユーザは、通常、泡を液体洗剤組成物の性能の指標とみなしている。更に、液体洗剤組成物のユーザは、洗浄溶液がまだ有効な洗剤成分を含んでいることの指標として、泡プロファイル及び泡の外観（例えば、密度、白色度）を使用することもある。これは、特に本明細書で手洗い（hand-washing）とも称される手洗い（manual washing）の場合であり、ユーザは、通常、残存する泡に応じて液体洗剤組成物を投入し、泡が減ったとき又は泡の密度が十分に高くはみえないときに、洗浄溶液を新しくする。したがって、泡がほとんど発生しないか又は発生する泡の密度が低い液体洗剤組成物、特に手洗い用液体洗剤組成物は、ユーザによって必要以上に頻繁に交換される傾向がある。したがって、液体洗剤組成物が、液体洗剤と水との初期混合中及び／又は全洗浄作業中に、良好な泡高さ及び／又は密度、並びに良好な泡の持続性を含む、「良好な泡立ちプロファイル」を提供することが望ましい。
【０００４】
手洗いプロセスで使用されたとき、好ましくは、洗浄中に快適な洗浄体験、すなわち、ユーザの手における良好な感触も提供する、改善された液体洗剤組成物も必要とされている。好ましくは、液体洗剤組成物はすすぎも容易である。更に、改善された液体洗剤組成物が安定なものであり、相分離せず、その結果、製品の貯蔵寿命がより長くなることが望ましい。好ましくは更に、組成物は、洗い上がりの物品に良好な仕上がりを提供する。泡立ち又は脂洗浄及び乳化特性に悪い影響を与えることなく界面活性剤の量を低減する要望もある。したがって、手洗い条件における洗浄及び泡寿命を改善する新規組成物を見出す必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
いくつかのタイプの汚れ、具体的には、不飽和脂肪酸を含む脂性汚れが泡抑制剤として作用して、消費者が必要以上に頻繁に製品を交換する一因となることが判明している。したがって、特に脂性汚れの存在下、更には不飽和脂肪酸を含む脂性汚れの存在下において望ましい泡特性を有すると同時に、良好な汚れ及び脂の除去を提供する液体洗剤組成物を提供することが必要とされている。本出願人は、本明細書で以下に説明する改善された液体洗剤組成物を通して、上述の必要性のいくつか又は全てが少なくとも部分的に満たされ得ることを発見した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、１種以上の脂肪酸を１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸に変換することができる１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素と、界面活性剤系と、液体担体とを含む液体洗剤組成物を処方することによって、このような組成物が、特に脂性汚れの存在下で、良好な泡立ちプロファイル、具体的には望ましい泡体積及び／又は持続的な泡安定化を呈するという驚くべき発見に基づいて、これらの必要性のうちの１つ以上を満たす。当該組成物は、また、良好な脂洗浄及び乳化の効果も提供する。
【０００７】
本発明の一態様によれば、１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素と、界面活性剤系と、組成物の３０重量％〜９５重量％の液体担体（すなわち、水）と、を含む液体洗剤組成物が提供される。ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼである。界面活性剤系は、１種以上のアニオン性界面活性剤と、両性界面活性剤、双極性界面活性剤、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上の共界面活性剤とを含み、当該アニオン性界面活性剤の当該共界面活性剤に対する重量比は、９：１未満、好ましくは５：１〜１：１、より好ましくは４：１〜２：１である。
【０００８】
好ましくは、液体洗剤組成物は、手洗い用組成物である。好ましくは、液体洗剤組成物は、食器手洗い用である。本発明の組成物は、特に脂性汚れの存在下で、良好な洗浄及び良好な泡プロファイルを提供する。
【０００９】
別の態様によれば、本発明は、汚れた物品、好ましくは食器類を手作業で洗う方法であって、本発明の洗剤組成物を一定の体積の水に入れて洗浄溶液を形成する工程と、当該洗浄溶液中に当該汚れた物品を浸漬する工程と、を含む方法を目的とする。好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、洗浄工程中の洗浄溶液中に、活性タンパク質に基づいて、０．００５ｐｐｍ〜１５ｐｐｍ、好ましくは０．０１ｐｐｍ〜５ｐｐｍ、より好ましくは０．０２ｐｐｍ〜０．５ｐｐｍの濃度で存在する。好ましくは、手作業で洗うことは食器類を洗浄することであり、汚れた物品は汚れた食器類を含む。本明細書で使用するとき、「食器」は、調理器具及び食卓用食器を含む。
【００１０】
本発明の組成物がこの方法に従って使用されるとき、長持ち効果を有する良好な泡立ち特性が得られる。
【００１１】
更に別の態様では、本発明は、食器類を手作業で洗う方法であって、ｉ）本発明の組成物を食器類又は洗浄用具に入れる工程と、ｉｉ）水の存在下において当該組成物で当該食器類を洗浄する工程と、ｉｉｉ）任意に、当該食器類をすすぐ工程と、を含む方法を目的とする。汚れた表面又は当該汚れた表面を洗浄するために使用されるスポンジなどの洗浄用具に組成物を直接塗布する場合、脂洗浄の観点でより大きな効果が得られることから、好ましくは、本発明の組成物は、未希釈の形態（すなわち、直接塗布）で使用される。
【００１２】
別の態様によれば、本発明は、汚れ、特に脂性汚れ、特に不飽和脂肪酸を含む脂性汚れを含む水性洗浄液における泡寿命を延長するための、本発明の液体洗剤組成物における１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素の使用を目的とする。本発明の組成物は、特に脂性汚れの存在下で、良好な洗浄及び良好な泡プロファイルを提供する。
【００１３】
本発明の第１の態様に関連して説明される本発明の組成物の要素は、必要な変更を加えて、発明の他の態様にも適用される。
【００１４】
本発明のこれら及び他の特徴、態様、及び利点は、以下の詳細な説明から当業者に明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
定義
本明細書で使用する場合、「ａ」及び「ａｎ」なる冠詞は、特許請求の範囲において使用される場合、特許請求又は記載されるものの１つ以上を意味するものと理解される。
【００１６】
本明細書で使用するとき、「を実質的に含まない（substantially free of）」又は「を実質的に含まない（substantially free from）」という用語は、指定の材料が、組成物の約５重量％以下、好ましくは約２重量％以下、より好ましくは約１重量％以下の量で存在することを意味する。
【００１７】
本明細書で使用するとき、「を本質的に含まない（essentially free of）」又は「を本質的に含まない（essentially free from）」という用語は、指定の材料が、組成物の約０．１重量％以下の量で存在するか、又は好ましくは、このような組成物中に分析的に検出可能な濃度では存在しないことを意味する。示される物質がかかる組成物に意図的に添加された物質のうちの１種以上の不純物としてのみ存在するような組成物が含まれ得る。
【００１８】
本明細書で使用する場合、用語「洗剤組成物」は、汚れた表面を洗浄するために設計された組成物又は配合物を指す。そのような組成物は、食器洗い組成物、洗濯洗剤組成物、布地柔軟化組成物、布地強化組成物、布地消臭組成物、予洗い用洗剤（laundry pre-wash）、洗濯前処理剤、洗濯補助剤、スプレー製品、ドライクリーニング剤又は組成物、洗濯すすぎ添加剤、洗浄添加剤、すすぎ後布地処理剤、アイロン助剤、硬質面洗浄組成物、単位用量配合剤、遅延送達配合剤、多孔性基材又は不織布シート上又は中に含有される洗剤、及び本明細書の教示を考慮すると当業者に明らかであり得る他の好適な形態を含むが、これらに限定されない。このような組成物は、洗浄前処理剤、洗浄後処理剤として使用してもよいし、あるいは、洗浄工程のすすぎ又は洗浄サイクル中に加えてもよい。洗剤組成物は、液体形態である。好ましくは、組成物は手作業での洗浄用である。好ましくは、本発明の洗剤組成物は、食器洗い用洗剤である。
【００１９】
本明細書で使用する場合、用語「断片」は、参照配列の少なくとも３０、６０、１００、１５０個、又はそれらの間の任意の整数個の連続したアミノ酸のアミノ酸配列を意味する。
【００２０】
本明細書で使用する場合、用語「同一性」は、２つ以上の配列間の同一性を意味し、配列間の同一性又は類似性の点で表される。配列同一性は、百分率同一性の点で測定され得る。割合が高いほど、配列はより同一である。百分率同一性は、比較の長さにわたって計算される。例えば、同一性は、典型的には、参照配列の全長に対して整列された配列の全長にわたって計算される。比較のための配列の整列方法は当該技術分野で周知であり、同一性は多くの既知の方法によって計算され得る。様々なプログラム及び整列アルゴリズムが当該技術分野で説明される。用語「配列同一性」及び「配列類似性」は互換的に用いることができることを理解するべきである。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「泡寿命の延長」という用語は、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素及びヒドロペルオキシ脂肪酸変換酵素の非存在下において同じ組成物及びプロセスによって提供される泡寿命と比較して、１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素、好ましくは、１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸変換酵素を含む組成物を使用して汚れた物品を洗浄する洗浄工程において目視可能な泡の持続時間が延長されることを意味する。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「汚れた表面」という用語は、限定されないが、木綿、亜麻布、ウール、ポリエステル、ナイロン、絹、アクリル及びこれらに類するものなどの天然、人工、及び合成繊維を包含する天然又は人工繊維の網状構造、並びに様々なブレンド物及び組み合わせからなる任意のタイプの可撓性材料を、非特定的に指す。汚れた表面は、限定ではないが、タイル、花崗岩、しっくい、ガラス、複合材料、ビニル、堅木、金属、調理用表面、プラスチック、及びこれらに類するものなどの天然表面、人工表面、及び合成表面を含む任意のタイプの硬質表面、並びにブレンド及び組み合わせ、並びに食器類を更に指す場合がある。本出願により中心的に対象とされる汚れた表面は、汚れた食器類である。
【００２３】
本明細書で使用する場合、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素又はヒドロペルオキシ脂肪酸変換酵素の「変異体」という用語は、当該ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素又はヒドロペルオキシ脂肪酸変換酵素が、１種以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はそれ以上のアミノ酸修飾）によって又は当該アミノ酸において置換、挿入、欠失、及びこれらの組み合わせから選択される修飾を受けたときのアミノ酸配列を意味する。変異体は、置換アミノ酸がそれを置換したアミノ酸と同様の構造的又は化学的性質を有する、例えば、ロイシンとイソロイシンとの置換である「保存的な」置換を有していてもよい。変異体は「非保存的な」変化、例えばグリシンのトリプトファンとの置換を有することができる。変異体はまた、アミノ酸欠失若しくは挿入、又はその両方を有する配列を含むことができる。タンパク質の活性を消失することなく、どのアミノ酸残基が置換、挿入、又は欠失され得るかを判定する手引きが、当該技術分野で周知のコンピュータプログラムを用いて、見いだされ得る。また、変異体は、野生型ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素又はヒドロペルオキシ脂肪酸変換酵素に由来する切断型、例えば、Ｎ末端が切断されたタンパク質も含み得る。また、変異体は、例えば、Ｎ末端タグ、Ｃ末端タグ、又はタンパク質配列の中央における挿入などの、追加のアミノ酸配列を野生型タンパク質に付加することによって得られる形態も含み得る。
【００２４】
本明細書で使用するとき、「水硬度」又は「硬度」という用語は、アルカリ性条件下でアニオン性界面活性剤又は任意の他のアニオンに帯電した洗剤活性物質と共に沈殿し、それによって、界面活性剤の界面活性及び洗浄能力を減弱させる能力を有する非複合型カチオンイオン（すなわち、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋）が、水中に存在することを意味する。更に、「水硬度が高い（high water hardness）」及び「水硬度が高い（elevated water hardness）」という用語は、互換的に用いることができ、本発明の目的に関する相対語であり、限定されないが、水１ガロン当たり少なくとも１２グラムのカルシウムイオンを含有する硬度レベル（ｇｐｇ、「米国穀粒硬度」単位）を包含することを意図する。
【００２５】
洗剤組成物
本発明は、液体洗剤組成物、好ましくは食器手洗い用液体組成物を目的とする。当該組成物は、当該組成物の３０重量％〜９５重量％、好ましくは４０重量％〜９０重量％、より好ましくは５０重量％〜８５重量％の液体担体を含有し、当該担体には他の必須成分及び任意成分が溶解、分散又は懸濁している。液体担体は、水である。
【００２６】
好ましくは、２０℃の脱塩水中で１０％の生成物濃度として測定される本発明の液体洗剤組成物のｐＨは、３〜１４、より好ましくは４〜１３、より好ましくは６〜１２、最も好ましくは８〜１０に調整される。液体洗剤組成物のｐＨは、当該技術分野において既知のｐＨ調節成分を使用して調整することができる。
【００２７】
酵素
脂肪酸は、ジオキシゲナーゼ、例えば、アラキドン酸リポキシゲナーゼ及びアルファ−ジオキシゲナーゼによって分子酸素（Ｏ２）の存在下で酸化して、ヒドロペルオキシ脂肪酸を生成することができる。これらのヒドロペルオキシ化化合物は、他の酵素によって更に処理される場合もあり、又は様々な酸素化脂肪酸及び他の誘導体に自然に転換する場合もある。本出願に関連して、「ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素」は、少なくとも１つの脂肪酸を、中間体として又は最終生成物として少なくともヒドロペルオキシ脂肪酸を含む酸素化化合物の混合物に変換することができる酵素である。
【００２８】
予想外にも、本出願人らは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素の群が、油性及び／又は脂性汚れを含む洗剤洗浄溶液中で、より安定な、したがってより長く持続する泡立ちプロファイルを生じさせることができることを見出した。理論に束縛されるものではないが、出願人らは、泡立ち効果の増大が、硬水の存在下での、界面活性剤特性の強化、及び／又は沈殿する傾向の低下による、油性及び／若しくは脂性汚れ中に存在する脂肪酸の酸素化脂肪酸への変換によるものであると考えている。
【００２９】
したがって、本発明の液体洗剤組成物は、１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素を含む。ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、１種以上の脂肪酸を１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸に変換することができる。ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼである。
【００３０】
好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素によって変換される脂肪酸は、モノ不飽和脂肪酸、ジ不飽和脂肪酸、トリ不飽和脂肪酸、テトラ不飽和脂肪酸、ペンタ不飽和脂肪酸、ヘキサ不飽和脂肪酸、飽和脂肪酸、及びこれらの混合物、好ましくは、ミリストレイン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミトレイン酸、パルミチン酸、サピエン酸、マルガリン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、ステアリン酸、ガドレイン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、リシノール酸、エイコセン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサジエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコセン酸、及びこれらの混合物、好ましくは、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択され、より好ましくは、オレイン酸である。
【００３１】
好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素による脂肪酸の変換反応から形成される、得られたヒドロペルオキシ脂肪酸は、２−ヒドロペルオキシ脂肪酸、８Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、８Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、９Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、９Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１０Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１１Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１１Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１２Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１２Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１３Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１３Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１４Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１４Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、１５Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、これらの誘導体、及びこれらの混合物、好ましくは、２Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和５Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和８Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和９Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和１１Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和１２Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和１２Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和１３Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、不飽和１５Ｓ−ヒドロペルオキシ脂肪酸、これらの誘導体、及びこれらの混合物からなる群から選択される、より好ましくは、２Ｒ−ヒドロペルオキシ脂肪酸である。得られたヒドロペルオキシ脂肪酸は、ヒドロキシ脂肪酸、アルデヒド、短鎖脂肪酸、又は他の誘導体への自然転換又は酵素転換を受け得る。ヒドロキシ脂肪酸の非限定的な例は、２−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和５−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和８−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和９−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和１１−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和１２−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和１３−ヒドロキシ脂肪酸、不飽和１５−ヒドロキシ脂肪酸、これらの誘導体、及びこれらの混合物である。アルデヒドの非限定的な例は、１−アルカン、アルケン−１−アル、アルカジエン−１−アル、アルカトリエン−１−アル、アルカテトラエン−１アル、及びこれらの混合物である。
【００３２】
リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．−）は、分子酸素の不飽和脂肪酸への挿入を触媒して、対応するヒドロペルオキシ脂肪酸を産生する、（非ヘム）鉄含有ジオキシゲナーゼのファミリーである。本発明は、アラキドン酸リポキシゲナーゼを含む。アラキドン酸リポキシゲナーゼは、典型的には、好ましい基質としてアラキドン酸／アラキドン酸塩を認識するが、用語「アラキドン酸リポキシゲナーゼ」は、任意の基質特異性を示さない。すなわち、それぞれの酵素は、基質（例えば、リノール酸／リノール酸塩、リノレン酸／リノレン酸塩、アラキドン酸／アラキドン酸塩）のいずれにも作用し得る。好ましくは、アラキドン酸リポキシゲナーゼは、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）、アラキドン酸８−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．４０）、アラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１３．１１．３１）、及びアラキドン酸１５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３３）からなる群から選択され、好ましくは、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）である。
【００３３】
本発明の一部であるアラキドン酸リポキシゲナーゼの非限定的な例としては、表１に列挙される野生型及びアラキドン酸リポキシゲナーゼ活性を示すその変異体が挙げられる。好ましくは、アラキドン酸リポキシゲナーゼは、表１に列挙される野生型アラキドン酸リポキシゲナーゼからなる群から選択される少なくとも１つの参照配列の全長に対して整列された配列の全長にわたって計算したとき、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、又は好ましくは更に１００％の同一性を有する。
【００３４】
【表１】
2021502453.tif 000002
【００３５】
位置特異的リポキシゲナーゼは、不飽和脂肪酸の位置特異的ヒドロペルオキシ化を触媒する。例えば、アラキドン酸１２−及び１５−リポキシゲナーゼは、アラキドン酸を対応する１２−及び１５−ヒドロペルオキシ脂肪酸に変換し、同じ酵素のいくつかの変異体（例えば、配列番号１１、１２、１５、１６、及び１７）は、リノール酸を９−、１１−、又は１３−ヒドロペルオキシ誘導体に変換することができる。更に、いくつかのリポキシゲナーゼは、不飽和脂肪酸のいくつかの位置において分子酸素の取り込みを触媒することができる（配列番号１１）。
【００３６】
アルファ−ジオキシゲナーゼは、立体選択的二原子酸素添加を介して、飽和及び不飽和脂肪酸を対応する２−ヒドロペルオキシ脂肪酸に変換する。得られたヒドロペルオキシ脂肪酸は、自然な脱炭酸を受けてより短いアルデヒドになり得る。アルファ−ジオキシゲナーゼは、酸化中に不飽和炭素結合が必要ないという点で、リポキシゲナーゼとは異なる。これらは、一般に、植物及び真菌の様々な種によってコードされており、病原体の攻撃に対する宿主の防御応答中にアップレギュレートされるが、細菌にもホモログが見出されている。
【００３７】
本発明の一部であるアルファ−ジオキシゲナーゼの非限定的な例としては、表２に列挙される野生型及びアルファ−ジオキシゲナーゼ活性を示すその変異体が挙げられる。好ましいアルファ−ジオキシゲナーゼは、表２に列挙される野生型アルファ−ジオキシゲナーゼからなる群から選択される少なくとも１つの参照配列の全長に対して整列された配列の全長にわたって計算したとき、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、又は好ましくは更に１００％の同一性を有する。
【００３８】
【表２】
2021502453.tif 000003
【００３９】
好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、組成物中の活性タンパク質に基づいて、組成物の０．０００１重量％〜１重量％の量で存在する。より好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、組成物中の活性タンパク質に基づいて、組成物の０．００１重量％〜０．２重量％の量で存在する。
【００４０】
本発明は、酵素の変異体も含む。酵素の変異体は、本明細書で使用するとき、それぞれのタンパク質の野生型タンパク質が、１種以上のアミノ酸（例えば、１、２、５、又は１０個のアミノ酸）によって又は当該アミノ酸において修飾されたときに生じる配列を含む。また、本発明は、Ｎ末端の切断されたタンパク質又はＣ末端の切断されたタンパク質などの、野生型酵素由来の切断型の形態の変異体も含む。いくつかの酵素は、細胞による分泌時に除去される可能性が高いＮ末端シグナルペプチドを含んでいる場合がある。本発明は、Ｎ末端シグナルペプチドを有しない変異体も含む。ＳｉｇｎａｌＰバージョン４．１（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ  ＴＮ．，Ｂｒｕｎａｋ  Ｓ．，ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ  Ｇ．ａｎｄ  Ｎｉｅｌｓｅｎ  Ｈ．（２０１１），Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７８５−７８６）などのバイオインフォマティックツールを使用して、このようなシグナルペプチドの存在及び長さを予測することができる。また、本発明は、例えば、Ｎ末端タグ、Ｃ末端タグ、又はタンパク質配列の中央における挿入などの追加のアミノ酸配列を、野生型タンパク質に付加することによって得られる変異体も含む。タグの非限定的な例は、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、チオオレドキシン（Ｔｒｘ）タグ、Ｈｉｓ−タグ、及び当業者に既知の任意の他のタグである。タグは、発酵中の溶解度及び発現レベルを改善するために、又は酵素精製のためのハンドルとして使用することができる。
【００４１】
酵素の変異体は、不飽和脂肪酸の変換を触媒する野生型タンパク質の能力を保持し、好ましくは改善することが重要である。変異体の所与の特性における若干の性能低下は当然許容され得るが、変異体は、それが意図する関連用途に好適な特性を保持、好ましくは改善すべきである。野生型のうちの１つの変異体のスクリーニングを使用して、当該変異体が適切な特性を保持、好ましくは改善しているかどうかを特定することができる。
【００４２】
変異体は、「保存的」置換を有し得る。保存的置換の好適な例としては、酵素における１つの保存的置換、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、又は配列番号１７における保存的置換が挙げられる。他の好適な例としては、５個以下など、タンパク質中における１０個以下の保存的置換が挙げられる。したがって、本発明の酵素は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれ以上の保存的置換を含み得る。酵素は、例えば、部位特異的突然変異誘導又はＰＣＲなどの標準的な手順を使用して、その酵素をコードしているヌクレオチド配列を操作することによって、１種以上の保存的置換を含有するように生成され得る。
【００４３】
酵素における元のアミノ酸に置き換わり得、かつ保存的置換とみなされるアミノ酸の例としては、Ａｌａに対するＳｅｒ、Ａｒｇに対するＬｙｓ、Ａｓｎに対するＧｌｎ又はＨｉｓ、Ａｓｐに対するＧｌｕ、Ｇｌｎに対するＡｓｎ、Ｇｌｕに対するＡｓｐ、Ｇｌｙに対するＰｒｏ、Ｈｉｓに対するＡｓｎ又はＧｌｎ、Ｉｌｅに対するＬｅｕ又はＶａｌ、Ｌｅｕに対するＩｌｅ又はＶａｌ、Ｌｙｓに対するＡｒｇ又はＧｌｎ、Ｍｅｔに対するＬｅｕ又はＩｌｅ、Ｐｈｅに対するＭｅｔ、Ｌｅｕ、又はＴｙｒ、Ｓｅｒに対するＴｈｒ、Ｔｈｒに対するＳｅｒ、Ｔｒｐに対するＴｙｒ、Ｔｙｒに対するＴｒｐ又はＰｈｅ、及びＶａｌに対するＩｌｅ又はＬｅｕが挙げられる。
【００４４】
変異体は、アミノ酸の少なくとも１つの置換、挿入、及び／又は欠失を有するタンパク質を包含する「修飾酵素」又は「突然変異酵素」を含む。修飾酵素は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はそれ以上のアミノ酸修飾（置換、挿入、欠失、及びこれらの組み合わせから選択される）を有し得る。
【００４５】
酵素は、様々な化学的技術によって修飾されて、非修飾酵素と本質的に同じ又は好ましくは改善された活性を有し、任意で他の望ましい特性を有する誘導体を生成する。例えば、カルボキシル末端であろうと側鎖であろうと、タンパク質のカルボン酸基は、製薬上許容できるカチオンの塩の形態で提供されてもよく、又はエステル化されて、例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルエステルを形成してもよく、又は例えば、式ＣＯＮＲ１Ｒ２（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである）のアミドに変換されてもよく、又は組み合わされて、複素環、例えば、５又は６員環を形成してもよい。アミノ末端であろうと側鎖であろうと、酵素のアミノ基は、製薬上許容できる酸付加塩、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、酢酸塩、安息香酸塩、トルエンスルホン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、及び他の有機塩の形態であってもよく、又はＣ１〜Ｃ２０アルキル若しくはジアルキルアミノに修飾されてもよく、又はアミドに更に変換されてもよい。タンパク質側鎖のヒドロキシル基は、よく知られている技術を用いて、アルコキシ又はエステル基、例えば、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ又はＣ１〜Ｃ２０アルキルエステルに変換され得る。タンパク質側鎖のフェニル及びフェノール環は、１種以上のハロゲン原子、例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、若しくはＩで、又はＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、カルボン酸、及びこれらのエステル、又はこのようなカルボン酸のアミドで置換され得る。タンパク質側鎖のメチレン基は、同族のＣ２〜Ｃ４アルキレンまで伸ばすことができる。チオールは、アセトアミド基等のいくつかのよく知られた保護基のうち任意の１つで保護され得る。また、当業者は、増強された安定性をもたらす、構造に対する高次構造上の制約を選択し、提供するために、本開示のタンパク質に環状構造を導入する方法を認識するであろう。
【００４６】
本発明に関して本明細書に記載する同一性、又は相同性のパーセントは、ＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｌ，ＵＳＡ）から入手することができるＧＡＰプログラムを用いて計算され得るものである。あるいは、手作業での整列を行うことができる。
【００４７】
酵素の配列比較については、以下の設定を用いることができる：Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９７０，４８：４４３−４５３。アミノ酸類似性の比較マトリクスとしては、Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリクスが使用される（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｓ．ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｊ．Ｇ．，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ  １９９２，８９：１０９１５−１０９１９）。以下のギャップ採点パラメータが使用される。ギャップペナルティ：１２、ギャップ長ペナルティ：２、エンドギャップペナルティにはペナルティなし。
【００４８】
所与の配列は、典型的には、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、又は配列番号１７の完全長配列に対して比較され、スコアを得る。
【００４９】
ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、酵素顆粒などの添加剤粒子を介して又は封入物の形態で液体洗剤組成物に組み込まれてもよく、液体製剤の形態で添加されてもよい。好ましくは、酵素は、封入物を介して液体洗剤組成物に組み込まれる。酵素を封入することは、組成物中の酵素の安定性を促進し、組成物中に存在し効果を減弱させる漂白剤、プロテアーゼ、界面活性剤、キレート剤などといったあらゆる化合物による影響を防ぐ助けとなる。
【００５０】
添加剤粒子中に存在するヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、添加剤粒子における唯一の酵素として存在していてもよく、１種以上の追加の補酵素と組み合わせて添加剤粒子中に存在していてもよい。
【００５１】
好ましくは、本発明の組成物は、脂肪酸ペルオキシダーゼ（ＥＣ１．１１．１．３）、非特異的ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．１）、植物種子ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．３）、脂肪酸ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．４）、リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．４４）、５，８−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．６０及びＥＣ５．４．４．５）、７，８−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．６０及びＥＣ５．４．４．６）、９，１４−リノール酸ジオール合成酵素（ＥＣ１．１３．１１．Ｂ１）、８，１１−リノール酸ジオール合成酵素、オレイン酸ジオール合成酵素、他のリノール酸ジオール合成酵素、非特異的モノオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１４．１）、アルカン−１−モノオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１５．３）、オレイン酸１２−ヒドロキシラーゼ（ＥＣ１．１４．１８．４）、脂肪酸アミドヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．９９）、オレイン酸ヒドラターゼ（ＥＣ４．２．１．５３）、リノール酸異性化酵素（ＥＣ５．２．１．５）、リノール酸（１０Ｅ，１２Ｚ）−異性化酵素（ＥＣ５．３．３．Ｂ２）、脂肪酸脱炭酸酵素（ＯｌｅＴ様）、鉄依存性脱炭酸酵素（ＵｎｄＡ様）、他のＣＹＰ４５０モノオキシゲナーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上の補酵素を更に含み得る。好ましくは、補酵素は、脂肪酸ペルオキシダーゼ（ＥＣ１．１１．１．３）、非特異的ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．１）、植物種子ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．３）、脂肪酸ペルオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１１．２．４）、及びこれらの混合物である。
【００５２】
他の好適な追加の補酵素としては、プロテアーゼ、例えば、メタロプロテアーゼ又はアルカリ性セリンプロテアーゼ、例えば、サブチリシン、マンナナーゼ、ペクチナーゼ、ＤＮＡｓｅ、酸化還元酵素、ペルオキシダーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、セロビオヒドロラーゼ、セロビオースデヒドロゲナーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、アミラーゼ、及びこれらの混合物が挙げられる。
【００５３】
必要に応じて、組成物は、酵素の有効な機能に必要な任意の追加の基質を含むか、当該基質へのアクセスを提供するか、又は当該基質をその場で形成する。例えば、分子酸素は、アルファ−ジオキシゲナーゼ及びアラキドン酸リポキシゲナーゼの活性については追加の基質として提供され、オレイン酸ヒドラターゼについては水として提供され、ペルオキシダーゼ、ペルオキシゲナーゼ、及び／又は脂肪酸脱炭酸酵素（ＯｌｅＴ様）については過酸化水素が提供され得る。アルファ−ジオキシゲナーゼ及びアラキドン酸リポキシゲナーゼによって必要とされる酸素は、大気から、又は転換されてその場で酸素を生成することができる前駆体から得ることができる。多くの用途では、大気からの酸素は、十分な量で存在し得る。
【００５４】
界面活性剤系
好ましくは、液体洗剤組成物は、全組成物の１重量％〜６０重量％、好ましくは５重量％〜５０重量％、より好ましくは８重量％〜４０重量％の界面活性剤系を含む。
【００５５】
本発明の組成物の界面活性剤系は、１種以上のアニオン性界面活性剤を含む。好ましくは、本発明の液体洗剤組成物用の界面活性剤系は、全組成物の１重量％〜４０重量％、好ましくは６重量％〜３５重量％、より好ましくは８重量％〜３０重量％のアニオン性界面活性剤を含む。アニオン性界面活性剤は、任意のアニオン性洗浄界面活性剤であってもよく、好ましくは、サルフェート及び／又はスルホネートアニオン性界面活性剤から選択される。ＨＬＡＳ（直鎖アルキルベンゼンスルホネート）が、最も好ましいスルホネートアニオン性界面活性剤であろう。特に好ましいアニオン性界面活性剤は、アルキルサルフェート、アルキルアルコキシサルフェート、好ましくは、アルキルエトキシサルフェート、アルキルベンゼンスルホネート、パラフィンスルホネート、及びこれらの混合物からなる群から選択される。好ましいアニオン性界面活性剤は、５未満、好ましくは３未満、より好ましくは２未満、かつ０．５超の合計平均エトキシル化度、及び約５％〜約４０％、より好ましくは約１０％〜３５％、更により好ましくは約２０％〜３０％の平均分枝率を有するアルキルサルフェート及びアルキルエトキシサルフェートの組み合わせである。
【００５６】
平均アルコキシル化度は、アニオン性界面活性剤の混合物の全成分のモル平均アルコキシル化度（すなわち、モル平均アルコキシル化度）である。モル平均アルコキシル化度の計算には、アルコキシレート基を有しないサルフェートアニオン性界面活性剤成分の重量も含めるべきである。
【００５７】
モル平均アルコキシル化度＝（ｘ１＊界面活性剤１のアルコキシル化度＋ｘ２＊界面活性剤２のアルコキシル化度＋．．．．）／（ｘ１＋ｘ２＋．．．．）
式中、ｘ１、ｘ２、．．．は、混合物の各サルフェートアニオン性界面活性剤のモル数であり、アルコキシル化度は、各サルフェートアニオン性界面活性剤中のアルコキシ基の数である。
【００５８】
平均分枝度は、分枝の重量平均％であり、以下の式によって定義される。
分枝の重量平均（％）＝［（ｘ１＊アルコール１中の分枝状アルコール１の重量％＋ｘ２＊アルコール２中の分枝状アルコール２の重量％＋．．．．）／（ｘ１＋ｘ２＋．．．．）］×１００
式中、ｘ１、ｘ２、．．．は、本発明の組成物のアニオン性界面活性剤のための出発原料として使用したアルコールの全アルコール混合物中の各アルコールのグラム単位の重量である。重量平均分枝化度の計算には、分枝基を有しないアニオン性界面活性剤成分の重量も含めなければならない。
【００５９】
市販されているサルフェートの好適な例としては、Ｓｈｅｌｌ社製のＮｅｏｄｏｌアルコール、Ｓａｓｏｌ社製のＬｉａｌ−Ｉｓａｌｃｈｅｍ及びＳａｆｏｌ、Ｐｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製の天然アルコールをベースにしたものが挙げられる。本明細書に用いるのに適したスルホネート界面活性剤としては、Ｃ８〜Ｃ１８アルキル又はヒドロキシアルキルスルホネートの水溶性塩；Ｃ１１〜Ｃ１８アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、修飾されたアルキルベンゼンスルホネート（ＭＬＡＳ）；メチルエステルスルホネート（ＭＥＳ）；及びα−オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）が挙げられる。これらはまた、炭素原子１０〜２０個のパラフィンをスルホネート化することによって得られる、モノスルホネート及び／又はジスルホネートであり得るパラフィンスルホネートを含む。スルホネート界面活性剤としてはまた、アルキルグリセリルスルホネート界面活性剤が挙げられる。
【００６０】
本発明の組成物の界面活性剤系は、一次共界面活性剤系を更に含み、一次共界面活性剤系は、好ましくは両性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、及びそれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、両性界面活性剤は、アミンオキシド界面活性剤であり、双極性界面活性剤は、ベタイン界面活性剤である。好ましくは、本発明の液体洗剤組成物用の界面活性剤系は、全組成物の０．５重量％〜１５重量％、好ましくは１重量％〜１２重量％、より好ましくは２重量％〜１０重量％の一次共界面活性剤系を含む。
【００６１】
好ましくは、アニオン性界面活性剤の一次共界面活性剤に対する重量比は、９：１未満、より好ましくは５：１〜１：１、より好ましくは４：１〜２：１である。好ましくは、一次共界面活性剤系は、両性界面活性剤である。好ましくは、一次共界面活性剤系は、アミンオキシド系界面活性剤、好ましくは、アルキルジメチルアミンオキシドであり、当該アニオン性界面活性剤は、アルキルサルフェート及びアルキルアルコキシサルフェートの混合物であり、組成物は、９：１未満、より好ましくは５：１〜１：１、より好ましくは４：１〜２：１、好ましくは３：１〜２．５：１の重量比で、当該アニオン性界面活性剤及び当該アミンオキシド系界面活性剤を含む。好ましいアミンオキシドは、アルキルジメチルアミンオキシド又はアルキルアミドプロピルジメチルアミンオキシド、より好ましくはアルキルジメチルアミンオキシド、特にココジメチルアミンオキシドである。アミンオキシドは、直鎖又は分枝鎖アルキル基を有し得る。
【００６２】
所望により、アミンオキシド界面活性剤は、ローカットアミンオキシド及びミッドカットアミンオキシドを含む、アミンオキシドの混合物である。そこで、本発明の組成物のアミンオキシドは、
ａ）当該アミンオキシドの約１０重量％〜約４５重量％の式Ｒ１Ｒ２Ｒ３ＡＯ（式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、又はこれらの混合物から選択され、Ｒ３は、Ｃ１０アルキル又はその混合物から選択される）のローカットアミンオキシドと、
ｂ）当該アミンオキシドの５５重量％〜９０重量％の式Ｒ４Ｒ５Ｒ６ＡＯ（式中、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、又はこれらの混合物から選択され、Ｒ６は、Ｃ１２〜Ｃ１６アルキル又はその混合物から選択される）のミッドカットアミンオキシドと、を含む。
【００６３】
本明細書に用いるのに好ましいローカットアミンオキシドにおいて、Ｒ３は、ｎ−デシルである。本明細書に用いるのに好ましい別のローカットアミンオキシドにおいて、Ｒ１及びＲ２は、いずれもメチルである。本明細書に用いるのに特に好ましいローカットアミンオキシドにおいて、Ｒ１及びＲ２は、いずれもメチルであり、Ｒ３は、ｎ−デシルである。
【００６４】
好ましくはアミンオキシドは、アミンオキシドの約５重量％未満、より好ましくは３重量％未満の式Ｒ７Ｒ８Ｒ９ＡＯ（式中、Ｒ７及びＲ８は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、及びこれらの混合物から選択され、Ｒ９は、Ｃ８アルキル及びその混合物から選択される）のアミンオキシドを含む。Ｒ７Ｒ８Ｒ９ＡＯを含む組成物は、不安定になる傾向があり、強力な泡マイレージを提供しない。
【００６５】
好ましくは、一次共界面活性剤系は、両性イオン性界面活性剤である。双極性界面活性剤の好適な例としては、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミドアゾリニウムベタイン、スルホベタイン（ＩＮＣＩスルタイン）、並びにホスホベタインなどのベタインが挙げられ、好ましくは次の式（Ｉ）を満たす：
Ｒ１−［ＣＯ−Ｘ（ＣＨ２）ｎ］ｘ−Ｎ＋（Ｒ２）（Ｒ３）−（ＣＨ２）ｍ−［ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２］ｙ−Ｙ−
（Ｉ）
（式中、
Ｒ１は、飽和又は不飽和Ｃ６〜２２アルキル残基、好ましくはＣ８〜１８アルキル残基、特に飽和Ｃ１０〜１６アルキル残基、例えば、飽和Ｃ１２〜１４アルキル残基であり、
Ｘは、ＮＨ、ＮＲ４（Ｃ１〜４アルキル残基Ｒ４を有する）、Ｏ、又はＳであり、
ｎは、１〜１０、好ましくは２〜５、特に３の数であり、
ｘは、０又は１、好ましくは１であり、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、ヒドロキシエチル、好ましくはメチルなどの、ヒドロキシ置換される可能性のあるＣ１〜４アルキル残基であり、
ｍは、１〜４、特に１、２又は３の数であり、
ｙは、０又は１であり、
Ｙは、ＣＯＯ、ＳＯ３、ＯＰＯ（ＯＲ５）Ｏ、又はＰ（Ｏ）（ＯＲ５）Ｏ（式中、Ｒ５は、水素原子Ｈ又はＣ１〜４アルキル残基である）である）。
【００６６】
好ましいベタインは、式（Ｉａ）のアルキルベタイン、式（Ｉｂ）のアルキルアミドプロピルベタイン、式（Ｉｃ）のスルホベタイン、及び式（Ｉｄ）のアミドスルホベタインである；
Ｒ１−Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２ＣＯＯ−  （Ｉａ）
Ｒ１−ＣＯ−ＮＨ（ＣＨ２）３−Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２ＣＯＯ−  （Ｉｂ）
Ｒ１−Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＳＯ３−  （Ｉｃ）
Ｒ１−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＳＯ３−  （Ｉｄ）
（式中、Ｒ１は、式（Ｉ）と同じ意味を有する）。特に好ましいベタインは、カルボベタイン［式中、Ｙ−＝ＣＯＯ−］であり、特に式（Ｉａ）及び式（Ｉｂ）のカルボベタイン、より好ましくは式（Ｉｂ）のアルキルアミドベタインである。好ましいベタインは、例えば、ココアミドプロピルベタインである。
【００６７】
好ましくは、本発明の組成物の界面活性剤系は、全組成物の０．１重量％〜１０重量％の、好ましくは非イオン性界面活性剤を含む二次共界面活性剤系を更に含む。好適な非イオン性界面活性剤としては、脂肪族アルコールと１〜２５モルのエチレンオキシドとの縮合生成物が挙げられる。脂肪族アルコールのアルキル鎖は、直鎖又は分枝状のいずれかであってもよく、一級であっても二級であってもよく、一般的に８〜２２個の炭素原子を含有し得る。特に好ましいのは、１０〜１８個の炭素原子、好ましくは１０〜１５個の炭素原子を含有するアルキル基を有するアルコールと、アルコール１モル当たり２〜１８モル、好ましくは２〜１５モル、より好ましくは５〜１２モルのエチレンオキシドとの縮合生成物である。極めて好ましい非イオン性界面活性剤は、ゲルベアルコールと、アルコール１モル当たり２〜１８モル、好ましくは２〜１５モル、より好ましくは５〜１２モルのエチレンオキシドとの縮合生成物である。好ましくは、非イオン性界面活性剤は、好ましくはそのアルキル鎖に９〜１５個の炭素原子及びアルコール１モル当たり５〜１２単位のエチレンオキシドを含む、アルキルエトキシ化された活性剤である。本明細書に用いるのに好適な他の非イオン性界面活性剤としては、脂肪族アルコールポリグリコールエーテル、アルキルポリグルコシド、及び脂肪酸グルカミド、好ましくはアルキルポリグルコシドが挙げられる。好ましくは、アルキルポリグルコシド界面活性剤は、Ｃ８〜Ｃ１６アルキルポリグルコシド界面活性剤、好ましくはＣ８〜Ｃ１４アルキルポリグルコシド界面活性剤であり、好ましくは０．１〜３、より好ましくは０．５〜２．５、更により好ましくは１〜２の平均重合度を有するものである。最も好ましくは、アルキルポリグルコシド界面活性剤は、０．５〜２．５、好ましくは１〜２、最も好ましくは１．２〜１．６の平均重合度で、１０〜１６、好ましくは１０〜１４、最も好ましくは１２〜１４の平均アルキル炭素鎖長を有する。Ｃ８〜Ｃ１６アルキルポリグルコシドは、いくつかの供給元から市販されている（例えば、Ｓｅｐｐｉｃ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＳｉｍｕｓｏｌ（登録商標）界面活性剤；及びＢＡＳＦ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＧｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）６００  ＣＳＵＰ、Ｇｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）６５０  ＥＣ、Ｇｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）６００  ＣＳＵＰ／ＭＢ、並びにＧｌｕｃｏｐｏｎ（登録商標）６５０  ＥＣ／ＭＢ）。好ましくは、当該組成物は、アニオン性界面活性剤及び非イオン生界面活性剤を、２：１〜５０：１、好ましくは２：１〜１０：１の比で含む。
【００６８】
酵素安定剤
好ましくは、本発明の組成物は、化学的安定剤及び物理的安定剤からなる群から選択される酵素安定剤を含み、好ましくは、当該物理的安定剤は、封入された酵素を含む。好適な酵素安定剤は、（ａ）アルカリ土類金属、アルカリ金属、アルミニウム、鉄、銅、及び亜鉛、好ましくはアルカリ金属及びアルカリ土類金属の無機又は有機塩、好ましくはハロゲン化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、硝酸塩、亜硝酸、リン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、及びそれらの混合物を有するアルカリ金属及びアルカリ土類金属塩の群から好ましくは選択される一価、二価、及び／又は三価カチオンからなる群から選択されてもよい。好ましい実施形態では、塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カリウム、乳酸カルシウム、硝酸カルシウム、及びこれらの混合物からなる群から選択される。塩化カルシウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、ギ酸ナトリウム、ギ酸カリウム、乳酸カルシウム、硝酸カルシウム、及びそれらの混合物からなる群から選択される塩、特に、塩化カリウム、硫酸カリウム、酢酸カリウム、ギ酸カリウム、プロピオン酸カリウム、乳酸カリウム、及びそれらの混合物の群から選択されるカリウム塩が最も好ましい。酢酸カリウム及び塩化カリウムが最も好ましい。好ましいカルシウム塩は、ギ酸カルシウム、乳酸カルシウム、及び四水和物を含む硝酸カルシウムである。ギ酸カルシウム塩及びギ酸ナトリウム塩が好まれ得る。これらのカチオンは、全組成物の少なくとも０．０１重量％、好ましくは少なくとも０．０３重量％、より好ましくは少なくとも０．０５重量％、最も好ましくは少なくとも０．２５重量％、最大２重量％、又は更に最大１重量％で存在する。これらの塩は、組成物の総重量に対して０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．２重量％〜４重量％、より好ましくは０．３重量％〜３重量％、最も好ましくは０．５重量％〜２重量％で配合される。更に酵素安定剤は、（ｂ）オリゴ糖、多糖、及びそれらの混合物、例えばＷＯ２０１２１９８４４に記載されている単糖グリセラートからなる群から選択される炭水化物と、（ｃ）フェニルボロン酸及びそれらの誘導体、好ましくは４−ホルミルフェニルボロン酸からなる群から選択される重量効率的（mass-efficient）可逆性プロテアーゼ阻害剤と、（ｄ）１，２−プロパンジオール、プロピレングリコール等のアルコール類と、（ｅ）トリペプチドアルデヒド等、例えばＣｂｚ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｈ、又は二置換アラニンアミドのペプチドアルデヒド安定剤と、（ｆ）カルボン酸、例えばＷＯ２０１２／１９８４９に記載されているフェニルアルキルジカルボン酸、又は例えばＷＯ２０１２／１９８４８に記載されているベンジルラジカルの少なくとも２つの炭素原子上でカルボキシル基を含む多重置換ベンジルカルボン酸、フタロイルグルタミン酸、フタロイルアスパラギン酸、アミノフタル酸、及び／又はオリゴアミノ−ビフェニル−オリゴカルボン酸と、（ｇ）それらの混合物と、の群から選択され���る。
【００６９】
追加の酵素
本発明の好ましい組成物は、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、リポキシゲナーゼ、ジオール合成酵素、及びこれらの混合物からなる群から選択される１種以上の追加の酵素を含む。本発明の更により好ましい組成物は、リパーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１種以上の酵素を含む。最も好ましくは、本発明の組成物は、リパーゼ、プロテアーゼ、アミラーゼ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される１種以上の酵素を含む。
【００７０】
本発明の組成物は、プロテアーゼ酵素を更に含むことが特に好ましい場合がある。オレイン酸及び他の抑泡性不飽和脂肪酸は、体の汚れ又は更にヒトの皮膚にも存在するので、プロテアーゼ酵素がスキンケア剤として作用したとき又はタンパク質性汚れを分解したとき、放出された脂肪酸が分解され、泡の抑制が阻害される。
【００７１】
本発明の組成物は、アミラーゼ酵素を更に含むことが特に好ましい場合がある。油性汚れは一般的に澱粉質汚れに捕捉されているので、アミラーゼ及び不飽和脂肪酸転換酵素が相乗的に作用する：澱粉質汚れがアミラーゼで分解されることによって脂肪酸汚れが放出されるため、不飽和脂肪酸転換酵素は、洗浄液における泡立ちに対して悪影響を及ぼさないことを確実にする上で特に有効である。
【００７２】
各追加の酵素は、典型的には、活性タンパク質に基づいて、組成物の０．０００１重量％〜１重量％（活性タンパク質の重量で）、より好ましくは０．０００５重量％〜０．５重量％、最も好ましくは０．００５重量％〜０．１重量％の量で存在する。
【００７３】
塩
本発明の組成物は、任意に、総組成物の０．０１重量％〜３重量％、好ましくは０．０５重量％〜２重量％、より好ましくは０．２重量％〜１．５重量％、又は最も好ましくは０．５重量％〜１重量％の塩、好ましくは一価無機塩、二価無機塩、又はそれらの混合物、好ましくは塩化ナトリウムを含んでもよい。最も好ましくは、組成物は、あるいは更に、当該組成物の０．０１重量％〜２重量％、好ましくは０．１重量％〜１重量％、より好ましくは０．２重量％〜０．８重量％の量の多価金属カチオンを含み、好ましくは、当該多価金属カチオンは、マグネシウム、アルミニウム、銅、カルシウム、又は鉄、より好ましくはマグネシウムであり、最も好ましくは、当該多価の塩は、塩化マグネシウムである。理論に束縛されることを望むものではないが、多価カチオンの使用が、油水界面及び気液界面でタンパク質／タンパク質、界面活性剤／界面活性剤、又はハイブリッドタンパク質／界面活性剤網状構造の形成を助け、そのことが泡を強化していると考えられる。
【００７４】
炭水化物
好ましくは、本発明の組成物は、Ｏ−グリカン、Ｎ−グリカン、及びそれらの混合物を含む群から選択される１種以上の炭水化物を含む。好適な炭水化物は、１，３及び／又は１．４及び／又は１，６結合を有するα又はβグルカンを含む。グルカンは、特にカルボキシルサルフェート、アミノ基のグリコールエーテルで修飾することができる。グルカンは、デキストラン、デンプン、又はセルロースから抽出できる。特に、シゾフィラン、スクレログルカン、又はパラミロン等の天然グルカンに近い構造を有するグルカンが特に好ましい。
【００７５】
ヒドロトロープ
本発明の組成物は、任意に、全組成物の１重量％〜１０重量％、又は好ましくは０．５重量％〜１０重量％、より好ましくは１重量％〜６重量％、又は最も好ましくは０．１重量％〜３重量％、又はそれらの組み合わせのヒドロトロープ、好ましくはクメンスルホン酸ナトリウムを含んでもよい。本明細書に用いるのに好適な他のヒドロトロープとしては、米国特許第３，９１５，９０３号に開示されているような、アニオン型のヒドロトロープ、特にキシレンスルホン酸ナトリウム、キシレンスルホン酸カリウム、及びキシレンスルホン酸アンモニウム、トルエンスルホン酸ナトリウム、トルエンスルホン酸カリウム、及びトルエンスルホン酸アンモニウム、クメンスルホン酸ナトリウム、クメンスルホン酸カリウム、及びクメンスルホン酸アンモニウム、並びにこれらの混合物が挙げられる。好ましくは、本発明の組成物は、等方性である。等方性組成物は、水中油型エマルション及びラメラ相組成物とは区別される。偏光顕微鏡は、組成物が等方性であるかどうかを評価することができる。例えば、Ｔｈｅ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｐｈａｓｅ  Ｂｅｈａｖｉｏｕｒ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ，Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌａｕｇｈｌｉｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４，ｐｐ．５３８−５４２を参照のこと。好ましくは、等方性組成物が提供される。好ましくは、当該組成物は、全組成物の０．１重量％〜３重量％のヒドロトロープを含み、好ましくは、当該ヒドロトロープは、キシレンスルホン酸ナトリウム、キシレンスルホン酸カリウム、及びキシレンスルホン酸アンモニウム、トルエンスルホン酸ナトリウム、トルエンスルホン酸カリウム、及びトルエンスルホン酸アンモニウム、クメンスルホン酸ナトリウム、クメンスルホン酸カリウム、及びクメンスルホン酸アンモニウム、並びにこれらの混合物から選択される。
【００７６】
有機溶媒
本発明の組成物は、有機溶媒を任意に含み得る。好適な有機溶媒としては、Ｃ４〜１４エーテル及びジエーテル、ポリオール、グリコール、アルコキシル化グリコール、Ｃ６〜Ｃ１６グリコールエーテル、アルコキシル化芳香族アルコール、芳香族アルコール、脂肪族直鎖又は分岐鎖アルコール、アルコキシル化脂肪族直鎖又は分岐鎖アルコール、アルコキシル化Ｃ１〜Ｃ５アルコール、Ｃ８〜Ｃ１４アルキル及びシクロアルキル炭化水素及びハロ炭化水素、並びにこれらの混合物が挙げられる。好ましくは、有機溶媒としては、アルコール、グリコール、及びグリコールエーテル、あるいはアルコール及びグリコールが挙げられる。本組成物は、全組成物の０重量％〜５０重量％未満、好ましくは０．０１重量％〜２５重量％、より好ましくは０．１重量％〜１０重量％、又は最も好ましくは０．５重量％〜５重量％の有機溶媒、好ましくはアルコール、より好ましくはエタノール、ポリアルキレングリコール、より好ましくはポリプロピレングリコール、及びこれらの混合物を含む。
【００７７】
両親媒性ポリマー
本発明の組成物は、全組成物の約０．０１重量％〜約５重量％、好ましくは約０．０５重量％〜約２重量％、より好ましくは約０．０７重量％〜約１重量％の、両親媒性アルコキシル化ポリアルキレンイミン、及びそれらの混合物、好ましくは両親媒性アルコキシル化ポリアルキレンイミンからなる群から選択される両親媒性ポリマーを更に含み得る。
【００７８】
好ましくは、両親媒性アルコキシル化ポリアルキレンイミンは、１００〜５，０００、好ましくは４００〜２，０００、より好ましくは４００〜１，０００ダルトンの平均分子量範囲を有するポリエチレンイミン主鎖を含むアルコキシル化ポリエチレンイミンポリマーであり、当該アルコキシル化ポリエチレンイミンポリマーは、
（ｉ）修飾当たり平均約１〜約５０個のアルコキシ部分を有するポリアルコキシレン鎖による窒素原子当たり１個若しくは２個のアルコキシル化修飾であって、当該アルコキシル化修飾の末端アルコキシ部分が、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、若しくはこれらの混合物で末端保護されているアルコキシル化修飾；
（ｉｉ）１個のＣ１〜Ｃ４アルキル部分の付加、及び修飾当たり平均約１〜約５０個のアルコキシ部分を有するポリアルコキシレン鎖による窒素原子当たり１若しくは２個のアルコキシル化修飾であって、末端アルコキシ部分が、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、若しくはこれらの混合物で末端保護されているアルコキシル化修飾；又は
（ｉｉｉ）これらの組み合わせを更に含み、
当該アルコキシ部分は、エトキシ（ＥＯ）及び／又はプロポキシ（ＰＯ）及び／又はブトキシ（ＢＯ）を含み、当該アルコキシル化修飾がＥＯを含む場合、ＰＯ又はＢＯも含む。
【００７９】
好ましい両親媒性アルコキシル化ポリエチレンイミンポリマーは、アルコキシル化鎖内にＥＯ基及びＰＯ基を含み、ＰＯ基は、好ましくはアルコキシ鎖の末端位置に存在し、アルコキシル化鎖は、好ましくは水素で末端保護されている。所望により、本発明の範囲内で、アルコキシル化鎖内にエトキシ（ＥＯ）単位のみを含む親水性アルコキシル化ポリエチレンイミンポリマーも配合してよい。
【００８０】
例えば、ポリエチレンイミン主鎖の末端窒素原子に対する可能な修飾を以下に示すが、これらに限定されるものではない（ただし、Ｒは、エチレンスペーサーを表し、Ｅは、Ｃ１〜Ｃ４アルキル部分を表し、Ｘ−は、好適な水溶性対イオンを表す）。
【００８１】
【化１】
2021502453.tif 000004
【００８２】
また、例えば、ポリエチレンイミン主鎖の内部窒素原子に対する可能な修飾を以下に示すが、これらに限定されるものではない（ただし、Ｒは、エチレンスペーサーを表し、Ｅは、Ｃ１〜Ｃ４アルキル部分を表し、Ｘ−は、好適な水溶性対イオンを表す）。
【００８３】
【化２】
2021502453.tif 000005
【００８４】
ポリエチレンイミン主鎖のアルコキシル化修飾は、平均約１〜約５０個のアルコキシ部分、好ましくは約２０〜約４５個のアルコキシ部分、最も好ましくは約３０〜約４５個のアルコキシ部分を有するポリアルコキシレン鎖による水素原子の置換からなる。アルコキシ部分は、エトキシ（ＥＯ）、プロポキシ（ＰＯ）、ブトキシ（ＢＯ）、及びこれらの混合物から選択される。しかし、エトキシ単位のみを含むアルコキシ部分は、本発明の範囲外である。好ましくは、ポリアルコキシレン鎖は、エトキシ／プロポキシブロック部分から選択される。より好ましくは、ポリアルコキシレン鎖は、約３〜約３０の平均エトキシル化度及び約１〜約２０の平均プロポキシル化度を有するエトキシ／プロポキシブロック部分、より好ましくは、約２０〜約３０の平均エトキシル化度及び約１０〜約２０の平均プロポキシル化度を有するエトキシ／プロポキシブロック部分である。
【００８５】
より好ましくは、エトキシ／プロポキシブロック部分は、３：１〜１：１、好ましくは２：１〜１：１の、エトキシ単位のプロポキシ単位に対する相対比を有する。最も好ましくは、ポリアルコキシレン鎖は、プロポキシ部分ブロックが末端アルコキシ部分ブロックである、エトキシ／プロポキシブロック部分である。
【００８６】
この修飾の結果、ポリエチレンイミン主鎖の窒素原子が永久的に四級化されてもよい。永久的な四級化度は、ポリエチレンイミン主鎖の窒素原子の０％〜約３０％であってよい。ポリエチレンイミン主鎖の窒素原子の３０％未満が永久的に四級化されることが好ましい。最も好ましくは、四級化度は約０％である。
【００８７】
好ましいポリエチレンイミンは、式（ＩＩ）の一般構造を有し、
【００８８】
【化３】
2021502453.tif 000006
ポリエチレンイミン主鎖の重量平均分子量は約６００であり、式（ＩＩ）のｎの平均は約１０であり、式（ＩＩ）のｍの平均は約７であり、式（ＩＩ）のＲは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、及びこれらの混合物から選択され、好ましくは水素である。式（ＩＩ）の永久的な四級化の度合は、ポリエチレンイミン主鎖の窒素原子の０％〜約２２％であってもよい。このポリエチレンイミンの分子量は、好ましくは１０，０００〜１５，０００である。
【００８９】
別のポリエチレンイミンは式（ＩＩ）の一般構造を有するが、ポリエチレンイミン主鎖の重量平均分子量は約６００であり、式（ＩＩ）のｎの平均は約２４であり、式（ＩＩ）のｍの平均は約１６であり、式（ＩＩ）のＲは、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、及びこれらの混合物から選択され、好ましくは水素である。式（ＩＩ）の永久的な四級化の度合は、ポリエチレンイミン主鎖窒素原子の０％〜約２２％であってもよい。このポリエチレンイミンの分子量は、好ましくは２５，０００〜３０，０００である。
【００９０】
最も好ましいポリエチレンイミンは、式（ＩＩ）の一般構造を有し、ポリエチレンイミン主鎖の重量平均分子量は約６００であり、式（ＩＩ）のｎは平均約２４であり、式（ＩＩ）のｍは平均約１６であり、式（ＩＩ）のＲは水素である。式（ＩＩ）の永久的な四級化度は、ポリエチレンイミン主鎖の窒素原子の０％である。このポリエチレンイミンの分子量は、好ましくは大体約２５，０００〜３０，０００、最も好ましくは約２８，０００である。
【００９１】
これらのポリエチレンイミンは、国際公開第２００７／１３５６４５号により詳細に記載されているとおり、例えば、二酸化炭素、亜硫酸水素ナトリウム、硫酸、過酸化水素、塩酸、酢酸などの触媒の存在下でエチレンイミンを重合させることによって調製することができる。
【００９２】
キレート剤
本明細書における液体洗剤組成物は、全組成物の０．１重量％〜２０重量％、好ましくは０．２重量％〜５重量％、より好ましくは０．２重量％〜３重量％の濃度でキレート剤を含むことができる。
【００９３】
洗剤分野において一般的に理解されているように、キレート化は、本明細書において、二座配位子又は多座配位子の結合又は錯化を意味する。多くの場合有機化合物であるこれらの配位子は、キレート剤、キレーター、キレート化剤、及び／又は金属イオン封鎖剤と呼ばれる。キレート化剤は、単一金属イオンと多重結合を形成する。キレート剤は、特定の金属イオンと可溶性の錯体分子を形成する化学物質であり、これらのイオンが他の元素又はイオンと通常通りに反応して析出物又はスケールを生成すること、又は汚れ上に付着物を形成して、除去をより困難にすることができないように当該イオンを不活性化する。配位子は、基質とキレート錯体を形成する。この用語は、金属イオンがキレート剤の２つ以上の原子に結合する錯体のためのものである。
【００９４】
好ましくは、本発明の組成物は、好ましくはカルボキシレートキレート剤、アミノカルボキシレートキレート剤、アミノホスホネートキレート剤、及びこれらの混合物を含む群から選択される、１種以上のキレート剤を含む。好ましくは、キレート剤は、ＭＧＤＡ（メチルグリシン−Ｎ，Ｎ−二酢酸）、ＧＬＤＡ（グルタミン酸−Ｎ，Ｎ−二酢酸）、及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００９５】
好適なキレート剤は、アミノカルボキシレート、アミノホスホネート、ポリカルボキシレートキレート剤、及びこれらの混合物からなる群から選択することができる。
【００９６】
他のキレート剤としては、ポリカルボン酸、及びその部分又は完全中和塩、モノマーのポリカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸、並びにこれらの塩のホモポリマー及びコポリマーが挙げられる。好適なポリカルボン酸は、非環式、脂環式、複素環式及び芳香族のカルボン酸であり、この場合、これらは、いずれの場合も好ましくは２個以下の炭素原子によって互いに隔てられている少なくとも２つのカルボキシル基を含有する。好適なヒドロキシカルボン酸は、例えば、クエン酸である。別の好適なポリカルボン酸は、アクリル酸のホモポリマーである。スルホネートで末端保護されたポリカルボキシレートが好ましい。
【００９７】
補助成分
本明細書の洗剤組成物は、所望により、ビルダー（例えば、好ましくはシトレート）、洗浄溶剤、洗浄アミン、コンディショニングポリマー、洗浄ポリマー、表面改質ポリマー、汚れ凝集ポリマー、構造化剤、皮膚軟化剤、湿潤剤、皮膚若返り活性成分、酵素、カルボン酸、スクラブ粒子、漂白剤及び漂白活性剤、香料、悪臭抑制剤、顔料、染料、乳白剤、ビーズ、真珠光沢粒子、マイクロカプセル、Ｃａ／Ｍｇイオンなどのアルカリ土類金属などの無機カチオン、抗菌剤、防腐剤、粘度調整剤（例えば、ＮａＣｌ、並びに他の一価、二価、及び三価の塩）、並びにｐＨ調整剤及び緩衝手段（例えば、クエン酸などのカルボン酸、ＨＣｌ、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、アルカノールアミン、リン酸及びスルホン酸、炭酸ナトリウムなどの炭酸塩、重炭酸塩、セスキ炭酸塩、ホウ酸塩、ケイ酸塩、リン酸塩、イミダゾールなど）などの多くの他の補助成分を含んでいてよい。
【００９８】
洗浄方法
本発明の他の態様は、汚れた物品、特に食器類を本発明の組成物で洗浄する方法を目的とする。したがって、汚れた物品、好ましくは食器類を手作業で洗う方法であって、本発明の液体洗剤組成物を一定の体積の水に入れて洗浄溶液を形成する工程と、当該溶液中に当該汚れた物品を浸漬する工程と、を含む方法が提供される。好ましくは、ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、洗浄工程中の水性洗浄液中に、活性タンパク質に基づいて、０．００５ｐｐｍ〜１５ｐｐｍ、好ましくは０．０１ｐｐｍ〜５ｐｐｍ、より好ましくは０．０２ｐｐｍ〜０．５ｐｐｍの濃度で存在する。そのようにして、本明細書の組成物は、希釈形態にて食器類に適用できる。汚れた表面、例えば食器を、有効量、典型的には（処理される食器２５個当たり）０．５ｍＬ〜２０ｍＬ、好ましくは３ｍＬ〜１０ｍＬの、水で希釈された本発明の液体洗剤組成物と接触させる。使用される液体洗剤組成物の実際の量は、ユーザの判断に基づくものであり、典型的には、当該組成物中の活性成分の濃度を含む当該組成物の具体的な製品処方、洗浄される汚れた食器の数、食器上の汚れの程度などの要因によって異なる。一般に、０．０１ｍＬ〜１５０ｍＬ、好ましくは３ｍＬ〜４０ｍＬの本発明の液体洗剤組成物が、１，０００ｍＬ〜２０，０００ｍＬ、より典型的には５，０００ｍＬ〜１５，０００ｍＬの範囲の容積を有するシンクの中の、２，０００ｍＬ〜２０，０００ｍＬ、より典型的には５，０００ｍＬ〜１５，０００ｍＬの水と合わせられる。汚れた食器をこのように希釈した組成物を入れたシンク内に浸漬して、食器の汚れた表面を布、スポンジ又は類似の物品と接触させて洗浄する。布、スポンジ、又は類似の物品は、食器表面と接触させる前に、液体洗剤組成物と水との混合物中に浸漬させてもよく、典型的には、１〜１０秒間にわたって食器表面と接触させるが、実際の時間は、各用途及びユーザによって異なる。布、スポンジ、又は類似の物品を表面に接触させることは、好ましくは同時に表面をこすることにより達成される。
【００９９】
本発明の別の態様は、汚れを含む水性洗浄液における泡寿命を延長するための、本発明の液体洗剤組成物における１種以上のヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素の使用である。ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素は、アラキドン酸リポキシゲナーゼ、アルファ−ジオキシゲナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択され、好ましくはアルファ−ジオキシゲナーゼである。
【０１００】
試験方法
本明細書に記載され、特許請求される発明がより完全に理解され得るためには、以下に記載するアッセイを用いなければならない。
【０１０１】
試験法１−ガラスバイアル泡マイレージ法
ガラスバイアル泡マイレージ試験法の目的は、脂性汚れ、例えばオリーブ油の存在下で、特定の液体洗剤組成物の溶液によって生じた経時的な泡体積の変化を測定することである。当該方法の工程は、以下のとおりである。
１．ａ）指定の洗剤濃度及び水硬度の水性洗剤溶液１０ｇ、ｂ）指定の濃度及び水硬度のタンパク質水溶液１．０ｇ、及びｃ）オリーブ油（Ｂｅｒｔｏｌｌｉ（登録商標）、エキストラバージンオリーブ油）０．１１ｇの室温のアリコートを４０ｍＬガラスバイアル（寸法：９５ｍｍＨ×２７．５ｍｍ  Ｄ）に続けて添加することによって、試験溶液を調製する。参照サンプルについては、タンパク質溶液を１．０ｍＬの脱塩水で置き換える。
２．磁気撹拌プレート（ＩＫＡ、型番ＲＴＣ  Ｂ  Ｓ００１、ＶＷＲ磁気撹拌器、カタログ番号５８９４９−０１２、５００ＲＰＭ）上において室温で２分間撹拌し、続いて、上下運動（毎秒約２回上下サイクル、＋／−３０ｃｍ上及び３０ｃｍ下）させながら２０秒間手動で振盪することによって、試験溶液を密閉試験バイアル内で混合する。
３．振盪後、一定温度を維持するために４６℃の水浴内で、密閉バイアル内の試験溶液を磁気撹拌プレート（ＩＫＡ、型番ＲＴＣ  Ｂ  Ｓ００１、ＶＷＲ磁気撹拌器、カタログ番号５８９４９−０１２、５００ＲＰＭ）上において６０分間更に撹拌する。次いで、サンプルを上記のように更に２０秒間手動で振盪し、初期泡高さ（Ｈ１）を定規で記録する。
４．サンプルを、撹拌しながら（ＩＫＡ、型番ＲＴＣ  Ｂ  Ｓ００１、ＶＷＲ磁気撹拌器、カタログ番号５８９４９−０１２、５００ＲＰＭ）、４６℃の水浴内で更に３０分間インキュベートし、続いて、上記のように更に２０秒間手動で振盪する。最終泡高さ（Ｈ２）を記録する。
５．好ましくはＨ１とＨ２との間の泡高さの低下がより少ないことと合わせて、より高い泡高さ（Ｈ１及びＨ２）を生じさせるタンパク質溶液がより望ましい。
【０１０２】
試験法２−小型流し台泡マイレージ法
液体洗剤組成物の溶液によって生じる泡体積の変化は、以下のように汚れ負荷を定期的に加えながら求めることができる。液体洗剤組成物の１５ｄＨの硬水（最終濃度０．１２重量％、初期温度４６℃）溶液の５００ｍＬのアリコートを、円筒状容器（寸法：１５０ｍｍＤ×１５０ｍｍＨ）に添加する。溶液の温度を４６℃〜４０℃で維持するために、試験中に容器を水浴中でインキュベートする。容器の中央に配置されたパドル（寸法：５０ｍｍ×２５ｍｍ）を用いて、１３５ｒｐｍで１２０秒間機械的に撹拌することによって、容器内で初期泡体積が生じる。
【０１０３】
次いで、１３５ｒｐｍで１４秒間パドルで溶液を回転させながら、２０ｍＬのシリンジ及び自動ポンプ（ＫＤＳ  Ｌｅｇａｔｏ  １１０  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｓｙｒｉｎｇｅ  Ｉ／Ｗポンプ）を使用して、脂性汚れの０．５ｍＬのアリコート（組成：表３を参照、０．５ｍＬ）を溶液に投入する。混合後、次のサイクルの前に溶液を更に１６６秒間インキュベートする。汚れの注入、パドリング、及びインキュベーションの工程を、エンドポイントに到達するまで１８０秒間毎に繰り返し、必要な汚れ添加量を記録する。エンドポイントは、最後にインペラの周囲半分を取り囲む透明な泡を含まない環が２回以上連続して観察されたときに生じる。全プロセスを少なくとも３回繰り返し、各液体洗剤組成物について全ての反復試験の添加回数の平均を計算する。
【０１０４】
最後に、泡マイレージ指数を次のように計算する（試験液体洗剤組成物の平均汚れ添加数）／（参照液体洗剤組成物の平均汚れ添加数）×１００。試験目的に応じて（Pending on）、当業者は、別の水硬度、溶液温度、製品濃度、又は汚れの種類を選択するために選択を行うことができる。
【０１０５】
【表３】
2021502453.tif 000007
【０１０６】
試験法３−大型流し台泡マイレージ法
液体洗剤組成物の溶液によって生じる泡体積の変化は、以下のように汚れ負荷を定期的に加えながら求めることができる。４バールの一定圧力を印加しながら、流し台（円筒寸法：３００ｍｍ  Ｄ×２８８ｍｍ  Ｈ）に４Ｌになるまで硬水流（１５ｄＨ）を充填する。同時に、液体洗剤組成物のアリコート（最終濃度０．１２重量％）を、流し台の底面の上方３７ｃｍの高さに０．６７ｍＬ／秒の流速でピペットを通して分注する。水の圧力に起因して、流し台内で初期泡体積が生成される。試験中、溶液の温度を４６℃で維持する。
【０１０７】
初期泡体積（平均泡高さ×流し台表面積）を記録した後、パドル（寸法：１０ｃｍ×５ｃｍ、４５度の角度で、気液界面において流し台の中央に位置する）を８５ｒｐｍで溶液中において２０回回転させながら、一定量の脂性汚れ（組成：表３を参照、４ｍＬ）を流し台の中央に注入する。この工程の直後に、全泡体積を別に測定する。測定した泡体積が４００ｃｍ３に設定した最小レベルになるまで、汚れの注入、パドリング、及び測定の工程を繰り返す。そのレベルに達するのに必要な汚れ添加量を記録する。全プロセスを何回も繰り返し、各液体洗剤組成物について全ての反復試験の添加回数の平均を計算する。
【０１０８】
最後に、泡マイレージ指数を次のように計算する（試験液体洗剤組成物の平均汚れ添加数）／（参照液体洗剤組成物の平均汚れ添加数）×１００。
【０１０９】
試験目的に応じて（Pending on）、当業者は、別の水硬度、溶液温度、製品濃度、又は汚れの種類を選択するために選択を行うことができる。
【実施例】
【０１１０】
以下の実施例は、本発明を更に例証するために与えられるものであり、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく本発明の多くの変更が可能であることから、本発明を制限するものとして解釈すべきではない。
【０１１１】
実施例１ａ−アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ２（アルファＤＯＸ２）Ｑ９Ｃ９Ｕ３
Ｈｉｓタグ、ＭＢＰタグ、及びＴＥＶプロテアーゼ切断部位を含有するＮ末端アミノ酸配列を含む、アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ２（アルファＤＯＸ２）変異体（配列番号１９）をコードしているコドン最適化遺伝子（配列番号１８）を設計し、合成する。遺伝子合成後、タンパク質を発現させ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＰＩＳＣＡＴＡＷＡＹ，ＮＪ）によって精製する。簡潔に言えば、完全な合成遺伝子配列を、異種発現のためにｐＥＴ２８ａベクターにサブクローニングする。大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を組み換えプラスミドで形質転換し、３７℃のカナマイシン含有ＴＢ培地に単一コロニーを接種する。ＯＤ６００が約３．８に達したら、イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）（最終濃度０．１ｍＭ）及びδ−アミノレブリン酸（最終濃度０．２５ｍＭ）を添加することによってタンパク質発現を誘導する。培養物を１６℃で１６時間、２００ｒｐｍでインキュベートする。細胞を遠心分離によって回収し、ペレットを超音波処理によって溶解させる。遠心分離後、上清を回収し、ニッケル親和性カラム及び当該技術分野において既知の標準的なプロトコルを用いて、一段階精製によってタンパク質を精製する。１０％グリセロールを含有する１×ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中にタンパク質を保存する。最終的なタンパク質濃度は、標準としてＢＳＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２３２３６）を用いてＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイによって測定したときに０．５８ｍｇ／ｍＬであり、還元条件下でクマシーブルーで染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの濃度測定分析によって推定したときの純度は約６０％である。
【０１１２】
実施例１ｂ−アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ１（アルファＤＯＸ１）Ｑ９ＳＧＨ６
Ｈｉｓタグ、ＭＢＰタグ、及びＴＥＶプロテアーゼ切断部位を含有するＮ末端アミノ酸配列を含む、アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ１（アルファＤＯＸ１）変異体（配列番号２１）をコードしているコドン最適化遺伝子（配列番号２０）を設計し、合成する。遺伝子合成後、タンパク質を発現させ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＰＩＳＣＡＴＡＷＡＹ，ＮＪ）によって精製する。簡潔に言えば、完全な合成遺伝子配列を、異種発現のためにｐＥＴ２８ａベクターにサブクローニングする。大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を組み換えプラスミドで形質転換し、３７℃のカナマイシン含有ＴＢ培地に単一コロニーを接種する。ＯＤ６００が約４に達したら、イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）（最終濃度０．１ｍＭ）及びδ−アミノレブリン酸（最終濃度０．２５ｍＭ）を添加することによってタンパク質発現を誘導する。培養物を１６℃で１６時間、２００ｒｐｍでインキュベートする。細胞を遠心分離によって回収し、ペレットを超音波処理によって溶解させる。遠心分離後、上清を回収し、ニッケル親和性カラム及び当該技術分野において既知の標準的なプロトコルを用いて、一段階精製によってタンパク質を精製する。１０％グリセロールを含有する１×ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中にタンパク質を保存する。最終的なタンパク質濃度は、標準としてＢＳＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２３２３６）を用いてＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイによって測定したときに１．５８ｍｇ／ｍＬであり、還元条件下でクマシーブルーで染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの濃度測定分析によって推定したときの純度は約８０％である。
【０１１３】
実施例１ｃ−オリザ・サティバ脂肪酸アルファ−ジオキシゲナーゼＱ９Ｍ５Ｊ１
Ｎ末端Ｈｉｓタグ配列を含むオリザ・サティバ脂肪酸アルファ−ジオキシゲナーゼ変異体（配列番号２３）をコードしているコドン最適化遺伝子（配列番号２２）を設計し、合成する。遺伝子合成後、タンパク質を発現させ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（ＰＩＳＣＡＴＡＷＡＹ，ＮＪ）によって精製する。簡潔に言えば、完全な合成遺伝子配列を、異種発現のためにｐＥＴ３０ａベクターにサブクローニングする。大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を組み換えプラスミドで形質転換し、３７℃のカナマイシンを含有する２ｘＹＴ培地に単一コロニーを接種する。ＯＤ６００が約０．８５に達したら、イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）（最終濃度０．１ｍＭ）及びδ−アミノレブリン酸（最終濃度０．２５ｍＭ）を添加することによってタンパク質発現を誘導する。培養物を１６℃で１６時間、２００ｒｐｍでインキュベートする。細胞を遠心分離によって回収し、ペレットを超音波処理によって溶解させる。遠心分離後、上清を回収し、ニッケル親和性カラム及び当該技術分野において既知の標準的なプロトコルを用いて、一段階精製によってタンパク質を精製する。１０％グリセロールを含有する１×ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中にタンパク質を保存する。最終的なタンパク質濃度は、標準としてＢＳＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２３２３６）を用いてＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイによって測定したときに１．２９ｍｇ／ｍＬであり、還元条件下でクマシーブルーで染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの濃度測定分析によって推定したときの純度は約８５％である。
【０１１４】
実施例１ｄ−ヒドロペルオキシ脂肪酸産生酵素洗剤組成物
特定の条件下（例えば、水硬度、溶液温度、洗剤濃度など）で、汚れ、すなわち、脂性汚れの存在下で特定の液体洗剤組成物の溶液によって生じる泡体積の変化が生じる。以下の溶液を調製する。
Ａ．硬水（１５ｄＨ）：０．７５ｇのＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｍ９２７２）、２．１０ｇのＣａＣｌ２．６Ｈ２Ｏ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号２１１０８）、及び０．６８９ｇのＮａＨＣＯ３（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号３１４３７）を５Ｌの脱塩水に溶解させる。
Ｂ．標的洗剤濃度０．１２％で、上記のとおり調製した硬水（１５ｄＨ）で希釈された、２：１〜４：１の重量％比のＣ１２１３ＡＥ０．６Ｓアニオン性界面活性剤及びＣ１２１４−ジメチルアミンオキシド両性界面活性剤と、５０％〜８５％の水とを含む、２０１７年２月に英国で市販されているＦａｉｒｙ  Ｄａｒｋ  Ｇｒｅｅｎを使用して、対照参照洗剤組成物の洗剤溶液（「溶液ＤＧ−Ｒ」）を調製する。
Ｃ．脂性汚れ：表３に記載の組成に従って脂性汚れを調製する。
【０１１５】
実施例２−アルファ−ジオキシゲナーゼ及びアラキドン酸リポキシゲナーゼの泡マイレージ
本発明の組成物Ａは、ａ）洗剤溶液ＤＧ−Ｒ（実施例１ｄに記載のとおり調製）とｂ）精製アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ２（アルファＤＯＸ２）（実施例１ａに記載のとおり調製）の希釈サンプルとを用いて作製された、本発明にかかる液体洗剤組成物の例である。
【０１１６】
本発明の組成物Ｂは、ａ）洗剤溶液ＤＧ−Ｒ（実施例１ｄに記載のとおり調製）とｂ）精製アラビドプシス・タリアナアルファジオキシゲナーゼ１（アルファＤＯＸ１）（実施例１ｂに記載のとおり調製）の希釈サンプルとを用いて作製された、本発明にかかる液体洗剤組成物の例である。
【０１１７】
本発明の組成物Ｃは、ａ）洗剤溶液ＤＧ−Ｒ（実施例１ｄに記載のとおり調製）と、ｂ）精製オリザ・サティバ脂肪酸アルファジオキシゲナーゼ（実施例１ｃに記載のとおり調製）の希釈サンプルとを用いて作製された、本発明にかかる液体洗剤組成物の例である。
【０１１８】
本発明の組成物Ｄは、ａ）洗剤溶液ＤＧ−Ｒ（実施例１ｄに記載のとおり調製）とｂ）Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手した精製ヒトアラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（ＥＣ１．１３．１１．３４）（カタログ番号４３７９９６）の希釈サンプルとを用いて作製された、本発明にかかる液体洗剤組成物の例である。
【０１１９】
比較組成物Ｅは、酵素の非存在下で同じ洗剤溶液ＤＧ−Ｒを含有する。
【０１２０】
試験法の項に記載されているように、小型流し台泡マイレージ法（試験法２）を使用して当該組成物を試験した。結果を表４に示す。
【０１２１】
【表４】
2021502453.tif 000008
【０１２２】
表４の結果から、本発明にかかるアルファ−ジオキシゲナーゼ及びアラキドン酸リポキシゲナーゼを含む本発明の洗剤組成物Ａ〜Ｄが、酵素を含まない比較組成物Ｅと比較して、単一変数として洗浄工程全体にわたって優れた泡プロファイルを有することが確認される。
【０１２３】
実施例３：例示的な食器手洗い用液体洗剤組成物
本発明にかかるアラビドプシス・タリアナアルファ−ジオキシゲナーゼ（配列番号２）又はヒトアラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（配列番号７）を含む食器手洗い用液体洗剤組成物を表５に示す。
【０１２４】
【表５】
2021502453.tif 000009
【０１２５】
酵素に与えられる全ての百分率及び比率は、活性タンパク質に基づく。本明細書における全ての割合及び比率は、特に指示しない限り、重量で計算される。全ての百分率及び比率は、別途記載のない限り、全組成に基づいて計算される。
【０１２６】
本明細書の全体を通して与えられる全ての最大数値限定は、それよりも小さい全ての数値限定を、かかるより小さい数値限定があたかも本明細書に明確に記載されているかのように含むものと理解すべきである。本明細書の全体を通して与えられる全ての最小数値限定は、それよりも高い全ての数値限定を、かかるより高い数値限定があたかも本明細書に明確に記載されているかのように含む。本明細書の全体を通して与えられる全ての数値範囲は、かかるより広い数値範囲内に含まれるより狭い全ての数値範囲を、かかるより狭い数値範囲があたかも全て本明細書に明確に記載されているかのように含む。
【０１２７】
本明細書にて開示された寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。その代わりに、特に指示がない限り、このような寸法はそれぞれ、列挙された値とその値を囲む機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図されている。例えば、「４０ｍｍ」と開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。
【配列表】
2021502453000001.app
【国際調査報告】
2021502453.tif 000010
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