(57)【要約】  本発明は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体および抗体フラグメント、この抗体または抗体フラグメントを含んでなる組成物、この抗体またはその抗体フラグメントをコードする核酸、対応する宿主細胞およびその使用に関する。さらに、本発明はまた、この抗体および抗体フラグメントと他の療法との組合せを使用するある種の療法も提供する。
2021508436.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体が
（ｉ）配列番号２６もしくは３０で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３２もしくは３６で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ、または
（ｉｉ）配列番号２７で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３３で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ、または
（ｉｉｉ）配列番号２８で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３４で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ、または
（ｉｖ）配列番号２９または３１で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３５または３７で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ
を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体が重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲｓ）と軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲｓ）とを含んでなり、ここで、
ＨＣＤＲ１は、配列番号１、２、３、または４に示されるアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は、配列番号５、６、７、８、または９に示されるアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ３は、配列番号１０、１１、１２、または１３に示されるアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４、１５、または１６に示されるアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は、配列番号１７、１８、１９、または２０に示されるアミノ酸配列を含んでなり、かつ、ＬＣＤＲ３は、配列番号２１、２２、２３、２４、または２５に示されるアミノ酸配列を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体が重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含んでなり、ここで、
前記重鎖可変領域が、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれか１つのＶＨに含まれる３つの相補性決定領域（ＨＣＤＲｓ）；または
（ｉｉ）表Ａに示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の組合せ
を含んでなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域が、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれか１つのＶＬに含まれる３つの相補性決定領域（ＬＣＤＲｓ）；または
（ｉｉ）表Ａに示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の組合せ
を含んでなる、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体が軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含んでなり、
（ｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２６もしくは３０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３２もしくは３６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；
（ｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくからなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；
（ｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；
（ｉｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号２９もしくは３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３５もしくは３７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなる、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記抗体が軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含んでなり、ここで、
（ｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２６もしくは３０のアミノ酸配列を含んでなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３２もしくは３６のアミノ酸配列を含んでなり；
（ｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２７のアミノ酸配列を含んでなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３３のアミノ酸配列を含んでなり；
（ｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号２８のアミノ酸配列を含んでなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３４のアミノ酸配列を含んでなり；
（ｉｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号２９もしくは３１のアミノ酸配列を含んでなり；かつ／または
前記軽鎖可変領域は、配列番号３５もしくは３７のアミノ酸配列を含んでなる、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記抗体が
（ａ）以下を含んでなるもしくはからなる重鎖：
（ｉ）配列番号３８、４２、４３、もしくは４４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号３８、４２、４３、もしくは４４から選択されるアミノ酸配列；および／または
（ｂ）以下を含んでなるもしくはからなる軽鎖：
（ｉ）配列番号４６もしくは５０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号４６もしくは５０から選択されるアミノ酸配列；あるいは
（ａ）以下を含んでなるもしくはからなる重鎖：
（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列；および／または
（ｂ）以下を含んでなるもしくはからなる軽鎖：
（ｉ）配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号４７のアミノ酸配列；あるいは
（ａ）以下を含んでなるもしくはからなる重鎖：
（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；もしくは
（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列；および／または
（ｂ）以下を含んでなるもしくはからなる軽鎖：
（ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号４８のアミノ酸配列；あるいは
（ａ）以下を含んでなるもしくはからなる重鎖：
（ｉ）配列番号４１もしくは４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号４１もしくは４５から選択されるアミノ酸配列；および／または
（ｂ）以下を含んでなるもしくはからなる軽鎖：
（ｉ）配列番号４９もしくは５１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｉ）配列番号４９もしくは５１から選択されるアミノ酸配列
を含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
下記の特徴：
（１）ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）と高い親和性で結合する、例えば、ＰＤ−Ｌ１と約２ｎＭ未満の平衡解離定数（ＫＤ）で結合する；
（２）抗体またはそのフラグメントが、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞と、例えば約２ｎＭ以下のＥＣ５０で結合する；
（３）抗体またはそのフラグメントが、ＰＤ−Ｌ１に関連した活性を、例えば約０．７ｎＭ以下のＥＣ５０で遮断する；
（４）抗体またはそのフラグメントが、例えば、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばテセントリクよりも良好にＴ細胞機能を増強する；
（５）抗体またはそのフラグメントが、例えば、ＭＬＲにおいて、例えば、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばテセントリクよりも良好にＴ細胞増殖を増強する；
（６）抗体またはそのフラグメントが、、例えば、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばテセントリクよりも良好にＩＦＮ−γ分泌を増強する；
（７）抗体またはそのフラグメントが、例えば、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばテセントリクよりも良好にＩＬ−２分泌を増強する；
（８）Ｚｅｎｉｘカラムアッセイにおいて、保持時間（ＲＴ）が約１０分未満；
（９）ＰＤ−Ｌ１の１以上の活性を阻害する、例えば、下記のうち１以上をもたらす：腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介増殖の増加、または癌細胞の免疫回避の減少；
（１０）抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する；
（１１）ＰＤ−Ｌ１に対して、表３に挙げられている抗体のいずれか１つと同じまたは類似の結合親和性および／または特異性を示す；
（１２）表３に挙げられている抗体のいずれか１つのＰＤ−Ｌ１への結合を阻害する（例えば、競合的に阻害する）；
（１３）表３に挙げられている抗体のいずれか１つと同じまたは重複するエピトープに結合する；
（１４）ＰＤ−Ｌ１との結合をめぐって表３に挙げられている抗体のいずれか１つと競合する；
（１５）表３に挙げられている抗体のいずれか１つの１以上の生物学的特徴を有する
のうちの１以上を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記抗体がＩｇＧ１またはＩｇＧ４の形態の抗体または抗原結合フラグメントであり、場合により、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントがκ軽鎖定常領域、例えば、ヒトκ軽鎖定常領域を含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項９】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
前記抗体がヒト化抗体またはヒト抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの一本鎖抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、シングルドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、または直鎖抗体からなる群から選択される抗体フラグメントである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記抗体が、二重特異性または多重特異性抗体、好ましくはＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３に結合する二重特異性抗体である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、単離された核酸。
【請求項１４】
好ましくはｐＴＴ５ベクターなどの発現ベクターである、請求項１３に記載の核酸を含んでなる、ベクター。
【請求項１５】
請求項１３に記載の核酸または請求項１４に記載のベクターを含んでなる宿主細胞であって、好ましくは原核生物または真核生物であり、より好ましくは大腸菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、または抗体またはその抗原結合フラグメントの生産に好適な他の細胞からなる群から選択され、最も好ましくは２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、宿主細胞。
【請求項１６】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを製造する方法であって、請求項１５に記載の宿主細胞を請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸の発現に好適な条件でインキュベートすること、および場合により、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを単離することを含んでなり；場合により、前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを前記宿主細胞から回収することをさらに含んでなる、方法。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと細胞傷害性薬剤などの付加的物質とを含んでなる、免疫複合体。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項１７に記載の免疫複合体と、場合により医薬補助材料とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項１７に記載の免疫複合体、付加的治療薬、および場合により、医薬補助材料を含んでなり；好ましくは、前記付加的治療薬が、化学療法薬、他の抗体（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体、例えば、ヒト抗原に結合する抗ＬＡＧ−３抗体、好ましくは、抗ＬＡＧ−３抗体はヒト化されている）、細胞傷害性薬剤、ワクチン、抗感染活性薬、または免疫調節薬（例えば、共刺激分子の活性化剤または免疫チェックポイント分子の阻害剤）からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項２０】
前記抗ＬＡＧ−３抗体が、
（ｉ）配列番号７５で示される重鎖可変領域の３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲｓ）、および／または
（ｉｉ）配列番号７６で示される軽鎖可変領域の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲｓ）
を含んでなる、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗ＬＡＧ−３抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、
（ｉ）前記ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含んでなり、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７０から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；および／または
（ｉｉ）前記ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号７２のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号７４から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなる、
請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
被験体または個体において腫瘍または感染性疾患を予防または治療するための薬物の調製における、有効量の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または請求項１７に記載の免疫複合体の使用。
【請求項２３】
被験体または個体において腫瘍または感染性疾患を予防または治療するための薬物の調製における、有効量の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、請求項１７に記載の免疫複合体、または請求項１８もしくは１９に記載の医薬組成物、および抗ＬＡＧ−３抗体（例えば、ヒト抗原に結合する抗ＬＡＧ−３抗体、好ましくは、抗ＬＡＧ−３抗体はヒト化されている）の使用。
【請求項２４】
前記腫瘍が癌、例えば、消化管腫瘍、例えば、消化管癌、例えば、結腸癌であるか；または前記感染性疾患が慢性感染症である、請求項２２または２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記薬物が他の療法の１以上と組み合わせて投与されてよく、前記療法は、例えば、治療法および／または他の治療薬を含み、好ましくは、前記治療法は、外科療法および／もしくは放射線療法を含み、または前記治療薬は、化学療法薬、細胞傷害性薬剤、ワクチン、抗感染活性薬、他の抗体（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体、例えば、ヒト抗原に結合する抗ＬＡＧ−３抗体、好ましくは、抗ＬＡＧ−３抗体はヒト化されている）、または免疫調節薬（例えば、共刺激分子の活性化剤または免疫チェックポイント分子の阻害剤）からなる群から選択される、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２６】
前記抗ＬＡＧ−３抗体が、
（ｉ）配列番号７５で示される重鎖可変領域の３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲｓ）、および／または
（ｉｉ）配列番号７６で示される軽鎖可変領域の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲｓ）
を含んでなる、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２７】
前記抗ＬＡＧ−３抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、
（ｉ）前記ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含んでなり、前記ＨＣＤＲ１は、配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７０から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなり；前記ＨＣＤＲ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；かつ／または
（ｉｉ）前記ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり、ここで、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号７２のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＬＣＤＲ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；前記ＬＣＤＲ３は、配列番号７４から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなる、
請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
サンプルにおいてＰＤ−Ｌ１を検出するための方法であって、
（ａ）前記サンプルを請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させること；および
（ｂ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出すること、場合により、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が検出可能に標識される
を含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する新規な抗体およびその抗体フラグメントならびにこの抗体または抗体フラグメントを含んでなる組成物に関する。加えて、本発明は、この抗体またはその抗体フラグメントをコードする核酸、この核酸を含んでなる宿主細胞、および関連の使用に関する。さらに、本発明は、これらの抗体および抗体フラグメントの治療的および診断的使用に関する。特に、本発明は、これらの抗体および抗体フラグメントと他の療法、例えば、治療法または薬剤の併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プログラム細胞死−リガンド１(Programmed death-ligand 1)（ＰＤ−Ｌ１）は、慢性感染症、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患、および癌の際に免疫系の応答の抑制に関与するタンパク質である。ＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞および単球の表面で発現されるプログラム細胞死１（ＰＤ−１）と呼ばれる阻害性の受容体と結合することにより免疫応答を調節する。ＰＤ−Ｌ１はまた、他の受容体Ｂ７．１（Ｂ７−１またはＣＤ８０としても知られる）との相互作用を介してＴ細胞機能に負の調節を行う。ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１／Ｂ７．１複合体の形成は、Ｔ細胞受容体シグナル伝達に負の調節を行い、続いてＴ細胞の活性化の下方調節および抗腫瘍免疫活性の阻害をもたらす。ＰＤ−Ｌ１は、膀胱腫瘍、乳房腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、黒色腫、卵巣腫瘍、唾液腺腫瘍(salivary tumors)、胃腫瘍、および甲状腺腫瘍などの様々な固形腫瘍を含む多くの癌で過剰発現される。腫瘍細胞におけるＰＤ−Ｌ１の過剰発現は、腫瘍浸潤を促進する可能性があり、不良な予後と関連している場合が多い。
【０００３】
よって、当技術分野では、ＰＤ−Ｌ１により良好に結合し、かつ、良好なドラッガビリティーを有する新規な抗ＰＤ−Ｌ１抗体の需要がなおある。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書では、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体分子が開示される。抗体またはその抗体フラグメントをコードする核酸、ならびにその抗体分子を生産するための発現ベクター、宿主細胞、および方法も提供される。また、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子、多重特異性または二重特異性抗体分子を含んでなる免疫複合体、および医薬組成物も提供される。本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、腫瘍性疾患および感染性疾患を治療、予防および／または診断するために単独で使用することもできるし、または他の療法、例えば、治療薬または治療法と併用することもできる。加えて、本明細書では、ＰＤ−Ｌ１を検出するための組成物および方法、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子を用いて腫瘍および／または感染性疾患を含む様々な疾患を予防または治療するための方法も開示される。
【０００５】
よって、いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１に（特異的に）結合する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ヒトＰＤ−Ｌ１に（特異的に）結合する。
【０００６】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）に高い親和性で結合し、例えば、ＰＤ−Ｌ１に約５０ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ以下、より好ましくは約１５ｎＭ以下、より好ましくは約１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、または２ｎＭ以下、最も好ましくは約１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、または０．８ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１に０．１〜１０ｎＭ、好ましくは０．５〜１０ｎＭ、より好ましくは０．６〜１０ｎＭ、０．７〜８ｎＭ、および０．７〜５ｎＭ、最も好ましくは０．５〜１．５ｎＭ、０．７〜１．５ｎＭ、および０．７〜１ｎＭのＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、ヒトＰＤ−Ｌ１である。いくつかの実施態様では、抗体の結合親和性は、生物学的光干渉法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性測定）を用いて決定される。
【０００７】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞に、例えば、約４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．９ｎＭ、２．８ｎＭ、２．７ｎＭ、２．６ｎＭ、２．５ｎＭ、２．４ｎＭ、２．３ｎＭ、２．２ｎＭ、２．１ｎＭ、２ｎＭ、１．９ｎＭ、１．８ｎＭ、１．７ｎＭ、または１．６ｎＭ以下のＥＣ５０で結合する。いくつかの実施態様では、結合は、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて決定される。いくつかの実施態様では、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞は、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ細胞である。
【０００８】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１の関連活性を、例えば、約１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、または０．７ｎＭ以下、好ましくは０．１〜１ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、０．６〜１ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、または１ｎＭのＥＣ５０で遮断する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１の関連活性は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合である。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＭＯＡアッセイにおいて、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を、約１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、または０．７ｎＭ以下、好ましくは０．１〜１ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、０．６〜１ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、または１ｎＭのＥＣ５０で阻害する。いくつかの実施態様では、この細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【０００９】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｔ細胞機能を増強する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｔ細胞増殖を増強する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＩＦＮ−γ分泌を増強する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２分泌を増強する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＩＦＮ−γ分泌とＩＬ−２分泌の両方を増強する。いくつかの実施態様では、この増強は混合リンパ球反応（ＭＬＲ）により決定される。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントのＴ細胞を活性化させる能力は、テセントリクなどの既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも良好である。
【００１０】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばテセントリク）よりも粘稠度が低く、従って、より良好なドラッガビリティーを有する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｚｅｎｉｘカラムクロマトグラフィーにおいて、約１０分、約９分、または約８分未満、好ましくは約７〜９分、好ましくは約７〜８．５分、約７．５〜８．５分、約７〜８分、または約７．５〜８分、例えば、約７．５分、７．６分、７．７分、７．８分、７．９分、８分、８．１分、８．２分、８．３分、８．４分、８．５分の保持時間（ＲＴ）を有する。
【００１１】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１の１以上の活性を阻害する、例えば、下記：腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介増殖の増加、または癌細胞の免疫回避の減少のうち１以上を引き起こす。
【００１２】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導し得る。
【００１３】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、単独で、または他の療法（例えば、治療法および／もしくは薬剤）と組み合わせて、腫瘍（例えば、癌）または感染（例えば、慢性感染症）の治療に有効である。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。いくつかの実施態様では、腫瘍は癌である。いくつかの実施態様では、腫瘍は消化管腫瘍である。いくつかの実施態様では、癌は結腸癌である。
【００１４】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントの重鎖および／または軽鎖は、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号６８）などのシグナルペプチド配列をさらに含んでなる。
【００１５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体はまた、抗ＰＤ−Ｌ１抗体のアミノ酸配列の変異体、ならびに上記の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントのいずれかと同じエピトープに結合する抗体も包含する。
【００１６】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒトまたはマウス定常領域をさらに含んでなる。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、またはＩｇＥの形態の抗体である。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域からなる群から選択される；特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の重鎖定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域、より詳しくは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含んでなる。一つの実施態様では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域である。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体に含まれるマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、およびＩｇＧ３からなる群から選択される。
【００１７】
別の実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、例えば、κまたはλ軽鎖定常領域、好ましくはκ（例えば、ヒトκ）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。
【００１８】
別の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ４）の重鎖定常領域を含んでなる。一つの実施態様では、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵナンバリングに従って２２８番の置換（例えば、ＳｅｒからＰｒｏへの置換）を含んでなる。別の実施態様では、ヒトＩｇＧ４は、１１４〜１１５番（ＥＵナンバリング）のＡＡに突然変異を含む(Armour KL1, Clark MR, Hadley AG, Williamson LM, Eur J Immunol., Aug., 1999; 29(8):2613-24, Recombinant human IgG molecules lacking Fcgamma receptor I binding and monocyte triggering activities)。別の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）の重鎖定常領域を含んでなる。一つの実施態様では、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングに従って２９７番の置換（例えば、ＡｓｎからＡｌａへの置換）を含んでなる。一つの実施態様では、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングに従って２６５番の置換、ＥＵナンバリングに従って３２９番の置換、またはその両方（例えば、ＥＵナンバリングに従って２６５番のＡｓｐからＡｌａへの置換および／またはＥＵナンバリングに従って３２９番のＰｒｏからＡｌａへの置換）を含んでなる。一つの実施態様では、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングに従って２３４番の置換、ＥＵナンバリングに従って２３５番の置換、またはその両方（例えば、ＥＵナンバリングに従って２３４番のＬｅｕからＡｌａへの置換および／またはＥＵナンバリングに従って２３５番のＬｅｕからＡｌａへの置換）を含んでなる。一つの実施態様では、重鎖定常領域は、配列番号６４、６５、もしくは６６に示されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。
【００１９】
別の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、κ軽鎖定常領域、例えば、ヒトκ軽鎖定常領域を含んでなる。一つの実施態様では、軽鎖定常領域は、配列番号６７に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。
【００２０】
一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＩｇＧ１の重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域）およびκ軽鎖定常領域（例えば、ヒトκ軽鎖定常領域）を含んでなる。一つの実施態様では、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングに従って２９７番の置換（例えば、ＡｓｎからＡｌａへの置換）を含んでなる。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、配列番号６４もしくは６５に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。一つの実施態様では、ヒトκ軽鎖定常領域は、配列番号６７に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。
【００２１】
別の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＩｇＧ４の重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域）およびκ軽鎖定常領域（例えば、ヒトκ軽鎖定常領域）を含んでなる。一つの実施態様では、定常領域は、変異型ＩｇＧ４定常領域、例えば、変異型ヒトＩｇＧ４定常領域（例えば、ＥＵナンバリングに従って２２８番の突然変異、例えば、Ｓ２２８Ｐ突然変異を有し、かつ／または１１４〜１１５番（ＥＵナンバリング）のＡＡに突然変異を有する）である。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、配列番号６６に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。一つの実施態様では、ヒトκ軽鎖定常領域は、配列番号６７に示されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する配列を含んでなるか、または該配列からなる。
【００２２】
一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、単離されているか、または組換え体である。
【００２３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体または単一特異性の抗体である。抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子はまた、ヒト化、キメラ、またはヒト抗体分子であってもよい。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体のフレームワーク配列の少なくとも一部は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である。一つの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体はまた、その抗体フラグメント、好ましくは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）または（Ｆａｂ’）２、シングルドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、または直鎖抗体からなる群から選択される抗体フラグメントも含んでなる。
【００２４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、二重特異性または多重特異性抗体分子の形態である。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−Ｌ１に対して第１の結合特異性を有し、ＬＡＧ−３に対して第２の結合特異性を有する。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３に結合する。多重特異性抗体分子は、ＰＤ−Ｌ１および他の標的に対する結合特異性のいずれの組合せも持ち得る。
【００２５】
一つの態様において、本発明は、上記の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントのいずれかをコードする核酸を提供する。一つの実施態様では、核酸を含んでなるベクターが提供される。一つの実施態様では、ベクターは、発現ベクターである。一つの実施態様では、核酸またはベクターを含んでなる宿主細胞が提供される。一つの実施態様では、宿主細胞は、真核生物である。別の実施態様では、宿主細胞は、酵母細胞、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞もしくは２９３細胞）、または抗体またはその抗原結合フラグメントの調製に好適な他の細胞から選択される。別の実施態様では、宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌(E. coli)細胞である。
【００２６】
一つの実施態様では、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）を調製するための方法を提供し、その方法は、宿主細胞を抗体またはそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）をコードする核酸の発現に好適な条件下でインキュベートすること、および場合により、その抗体またはそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）を単離することを含んでなる。ある特定の実施態様では、この方法は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）を宿主細胞から回収することをさらに含んでなる。
【００２７】
いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書で提供される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかと細胞傷害性薬剤またはマーカーなどの他の物質とを含んでなる免疫複合体を提供する。いくつかの実施態様では、免疫複合体は、腫瘍（例えば、癌）または感染性疾患を予防または治療するために使用される。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。好ましくは、腫瘍は、消化管腫瘍（例えば、癌）、例えば、結腸癌である。好ましくは、感染性疾患は、慢性感染症である。
【００２８】
いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそのフラグメント（好ましくは、抗原結合フラグメント）、またはその免疫複合体を含んでなる組成物を提供し、好ましくは、この組成物は医薬組成物である。一つの実施態様では、この組成物は、医薬補助材料をさらに含んでなる。一つの実施態様では、この組成物、例えば、医薬組成物は、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそのフラグメントまたはその免疫複合体と、１種類以上の他の治療薬（例えば、化学療法薬、他の抗体、細胞傷害性薬剤、ワクチン、有効抗感染薬、または免疫調節剤、例えば、共刺激分子の活性化剤もしくは免疫チェックポイント分子の阻害剤）の組合せとを含んでなる
【００２９】
いくつかの実施態様では、医薬組成物は、腫瘍（例えば、癌）または感染を予防または治療するために使用される。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。好ましくは、腫瘍は、消化管腫瘍（例えば、癌）、例えば、結腸癌である。好ましくは、感染性疾患は、慢性感染症である。他の態様では、本発明は、被験体または個体における腫瘍（例えば、癌）または感染性疾患を予防または治療するための方法に関し、その方法は、被験体に有効量の本明細書に記載のいずれかの抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそのフラグメント、医薬組成物、または免疫複合体を投与することを含んでなる。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。一つの実施態様では、腫瘍は、消化管腫瘍（例えば、癌）、例えば、結腸癌である。一つの実施態様では、感染性疾患は、慢性感染症である。他の態様では、本発明はまた、被験体において腫瘍（例えば、癌）または感染を治療するための薬剤の調製のための、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントのいずれかの使用に関する。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。一つの実施態様では、腫瘍は、消化管腫瘍（例えば、癌）、例えば、結腸癌である。一つの実施態様では、感染性疾患は、慢性感染症である。
【００３０】
いくつかのさらなる実施態様では、本明細書に記載の予防または治療の方法は、１以上の療法（例えば、治療法および／または他の治療薬）を被験体または個体に投与することをさらに含んでなる。いくつかの実施態様では、治療法は、外科療法および／または放射線療法を含む。いくつかの実施態様では、他の治療薬は、化学療法薬、細胞傷害性薬剤、ワクチン、有効抗感染薬、他の抗体、および免疫調節剤（例えば、共刺激分子活性化剤または免疫チェックポイント分子阻害剤）からなる群から選択される。
【００３１】
いくつかの実施態様では、被験体または個体は、非ヒト動物、例えば、哺乳動物、好ましくは、ヒトである。
【００３２】
一つの態様において、本発明は、サンプルにおいてＰＤ−Ｌ１を検出するための方法であって、（ａ）サンプルを本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントのいずれかと接触させること；および（ｂ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントとＰＤ−Ｌ１の複合体の形成を検出することを含んでなる方法に関する。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、検出可能に標識される。
【００３３】
いくつかの実施態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントを含んでなるキットまたは加工品に関する。いくつかの実施態様では、キットまたは加工品は、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントと任意選択の医薬補助材料とを含んでなる。いくつかの実施態様では、キットまたは加工品は、腫瘍または感染を治療するための薬剤の投与に関する説明書をさらに含んでなる。
【００３４】
本発明はまた、本明細書に記載の実施態様のいずれかのいずれの組合せも包含する。本明細書に記載の実施態様のいずれもまたはそのいずれの組合せも本明細書に記載の本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメント、方法、および使用のいずれにも適用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、ＦＡＣＳにより決定された本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体のＣＨＯ−ＰＤＬ１細胞への結合を示す。
【図２】図２は、ＦＡＣＳにより決定された本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体のＣＨＯ−ＰＤＬ１細胞への結合を示す。
【図３】図３は、ＭＯＡアッセイにより決定されたＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用に対する本発明の抗体の遮断活性を示す。
【図４Ａ】図４Ａおよび４Ｂは、ＭＬＲアッセイにより決定された本発明の抗体によるＴ細胞の活性化（のＩＬ−２相対的発現）を示す。
【図４Ｂ】図４Ａおよび４Ｂは、ＭＬＲアッセイにより決定された本発明の抗体によるＴ細胞の活性化（のＩＬ−２相対的発現）を示す。
【図５Ａ】図５Ａおよび５Ｂは、ＭＬＲアッセイにより決定された本発明の抗体によるＴ細胞の活性化（ＩＦＮ−γの相対的発現）を示す。
【図５Ｂ】図５Ａおよび５Ｂは、ＭＬＲアッセイにより決定された本発明の抗体によるＴ細胞の活性化（ＩＦＮ−γの相対的発現）を示す。
【図６】図６は、腫瘍に対する本発明の抗体の阻害効果を示す。
【図７】図７は、抗ＬＡＧ−３抗体との組合せにおける本発明の抗体の阻害効果を示す。
【発明の具体的説明】
【００３６】
略号
特に断りのない限り、本明細書の略号は下記の意味を有する。
下記の略号を使用する。
ＡＤＣＣ      抗体依存性細胞媒介細胞傷害
ＣＤＣ        補体依存性細胞傷害
ＣＤＲ        免疫グロブリンの可変領域の相補性決定領域
ＣＨＯ        チャイニーズハムスター卵巣
ＥＣ５０        ５０％効力または結合をもたらす濃度
ＫＤ            平衡解離定数
ＥＬＩＳＡ    酵素結合免疫吸着アッセイ
ＦＡＣＳ      蛍光活性化細胞選別
ＭＯＡ        作用機序
ＭＬＲ        混合リンパ球反応
ＦＲ          抗体フレームワーク領域
ＩＣ５０        ５０％阻害を生じる濃度
Ｉｇ          免疫グロブリン
Ｋａｂａｔ    Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)により確立された免疫グロブリンアラインメントおよびナンバリングシステム
ｍＡｂ／Ｍａｂ／ＭＡｂ    モノクローナル抗体
ＰＣＲ        ポリメラーゼ連鎖反応
ＩＦＮ        インターフェロン
ＶＬ          軽鎖可変領域
ＶＨ          重鎖可変領域
ＬＣ          軽鎖
ＨＣ          重鎖
ＨＣＤＲ      重鎖相補性決定領域
ＬＣＤＲ      軽鎖相補性決定領域
【００３７】
定義
本発明を以下に詳細に記載する前に、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコール、および試薬は変更可能であるので、本発明はこれらに限定されないと理解されるべきである。本明細書に使用される用語は、特定の実施態様を記載するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されるべきである。特に断りのない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属す技術分野の熟練者に共通に理解されているものと同じ意味を有する。
【００３８】
本明細書を説明する目的で、下記の定義が使用され、該当する場合、単数形で使用される用語は複数形も含み得、この逆もそうである。本明細書で使用される用語は、特定の実施態様を説明するためのものに過ぎず、限定することを意図するものではないと理解される。
【００３９】
数値と組み合わせて使用される用語「約」は、明示された数値の５％小さい下限から明示された数値の５％大きい上限までの範囲の数値を包含することを意図する。
【００４０】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合相手（例えば、抗原）の間の総ての非共有結合的相互作用の総和の強度を意味する。特に断りのない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１の相互作用を表す固有の結合親和性を指す。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性は一般に、平衡解離定数（ＫＤ）により表すことができる。親和性は、従来技術において既知であり、本明細書に記載のものを含む、当技術分野で公知の一般的な方法により測定することができる。
【００４１】
用語「プログラム細胞死１リガンド１」、「ＰＤ−Ｌ１」、「プログラム細胞死リガンド１」、「分化抗原群２７４」、「ＣＤ２７４」、または「Ｂ７ホモログ１」は、本明細書で使用する場合、霊長類（例えば、ヒト）および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含むいずれの脊椎動物源に由来するいずれの天然ＰＤ−Ｌ１も指す。この用語は、「全長」、非プロセシングＰＤ−Ｌ１、および細胞内でのプロセシングにより生じるいずれの形態のＰＤ−Ｌ１も包含する。ＰＤ−Ｌ１は、膜貫通タンパク質または可溶型タンパク質として存在し得る。この用語はまた、スプライシング変異体または対立遺伝子変異体などの天然に存在するＰＤ−Ｌ１の変異体も包含する。ＰＤ−Ｌ１の基本構造は、４つのドメイン：細胞外Ｉｇ様Ｖ型ドメインおよびＩｇ様Ｃ２型ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。ゲノムＤＮＡ配列を含め、ヒトＰＤ−Ｌ１遺伝子に関するさらなる情報は、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ．２９１２６として見出すことができる。ゲノムＤＮＡ配列を含め、ヒトＰＤ−Ｌ１遺伝子に関するさらなる情報は、ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ．６０５３３として見出すことができる。例示的全長ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のアミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００１２５４６５３またはＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９ＮＺＱ７として見出すことができ、例示的全長マウスＰＤ−Ｌ１タンパク質の配列は、例えば、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿０６８６９３またはＵｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９ＥＰ７３として見出すことができる。
【００４２】
用語「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」、「抗ＰＤ−Ｌ１」、「ＰＤ−Ｌ１抗体」または「ＰＤ−Ｌ１結合抗体」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ−Ｌ１タンパク質と十分な親和性で結合し得る抗体、またはそのフラグメントを指す。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が非ＰＤ−Ｌ１タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または生物光干渉アッセイまたはＭＳＤアッセイにより測定した場合に、その抗体がＰＤ−Ｌ１タンパク質に結合する程度の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、もしくは約９０％未満またはそれを超える程度である。
【００４３】
本明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」または「Ｍａｂ」は、例えば、真核生物、原核生物、またはファージクローンに由来する単一コピーまたはクローンの抗体を指し、それらが生産される方法を指すのではない。モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレー技術、ＣＤＲグラフティングなどの合成技術、またはこのような技術もしくは当技術分野で公知の他の技術の組合せによって生産することができる。
【００４４】
「天然抗体」とは、種々の構造の天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合で結合された２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、次に、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、次に、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２タイプのうち１つに割り当てることができる。「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列のヒトＦｃ領域には、天然配列（非ＡアロタイプおよびＡアロタイプ）のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、および天然配列のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、および以上のものの天然に存在する変異体が含まれる。
【００４５】
「抗体フラグメント」は、無傷抗体の一部を含んでなり、かつ、無傷抗体が結合する抗原に結合する、無傷抗体とは異なる分子を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）；シングルドメイン抗体；二価または二重特異性抗体またはそのフラグメント；ラクダ科動物抗体；および前記抗体フラグメントから形成された二重特異性抗体または多重特異性抗体が含まれる。
【００４６】
本明細書で使用する場合、用語「エピトープ」は、抗体分子と特異的に相互作用する、抗原（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）の部分を指す。このような部分（本明細書では抗原決定基と呼ばれる）は一般に、アミノ酸側鎖または糖側鎖などの要素を含んでなるか、またはその一部である。抗原決定基は、当技術分野で公知のまたは本明細書で開示される方法を用いて（例えば、結晶学または水素−重水素交換により）定義することができる。抗原決定基と特異的に相互作用する抗体分子の少なくとも１つまたはいくつかの部分は一般に、ＣＤＲ内に位置する。一般に、エピトープは、特定の三次元構造の特徴を有する。一般に、エピトープは、特定の荷電特徴を有する。いくつかのエピトープは線状エピトープであり、他は立体配座エピトープである。
【００４７】
参照抗体と「同じまたは重複するエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を遮断する抗体を指し、または逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を遮断する。
【００４８】
その抗原への結合をめぐって参照抗体と競合する抗体とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を遮断する抗体を指す。逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を遮断する。直接的または間接的固相ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、直接的または間接的固相酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253参照）など、多くのタイプの競合的結合アッセイが、ある抗体が別の抗体と競合するかどうかを決定するために使用可能である。
【００４９】
参照抗体のその抗原への結合を阻害する（例えば、競合的に阻害する）抗体は、参照抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を阻害する抗体を指す。逆に、参照抗体は、抗体のその抗原への結合の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を阻害する。抗体のその抗原への結合は、親和性（例えば、平衡解離定数）により測定することができる。親和性を決定するための方法は、当技術分野で公知である。
【００５０】
参照抗体と同じまたは類似の結合親和性および／または特異性を示す抗体とは、参照抗体の結合親和性および／または特異性の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％またはそれを超える割合を有し得る抗体を指す。これは、結合親和性および／または特異性を決定するための当技術分野で公知のいずれかの方法により決定することができる。
【００５１】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ領域」または「ＣＤＲ」は、配列の変動が極めて大きく、構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、かつ／または抗原接触残基（「抗原接触点」）を含んでなる、抗体可変ドメインの領域である。ＣＤＲは、エピトープとの結合を主として担う。重鎖および軽鎖のＣＤＲは一般に、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から順次符番される。抗体重鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と呼ばれ、抗体軽鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３と呼ばれる。あるアミノ酸配列の軽鎖可変領域または重鎖可変領域において、各ＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、例えば、抗体の三次元構造とＣＤＲループのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ(Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273:927-948 (1997))、抗体配列変動に基づくＫａｂａｔ(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, US Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987))、ＡｂＭ（バース大学）、Ｃｏｎｔａｃｔ（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）(imgt.cines.fr/ on the World Wide Web)、および多数の結晶構造を用いた親和性伝搬クラスタリングに基づくＮｏｒｔｈ  ＣＤＲ定義を含む、多くの周知の抗体ＣＤＲ割り当てシステムのいずれか１つまたは組合せを用いて決定することができる。
【００５２】
例えば、種々のＣＤＲ決定スキームによる、各ＣＤＲの残基は次の通りである。
【００５３】
【表１】
2021508436.tif 000003
【００５４】
ＣＤＲは、また、参照ＣＤＲ配列（例えば、本発明の例示的ＣＤＲのいずれか）と同じＫａｂａｔナンバリング位置を有することに基づいて決定することもできる。
【００５５】
特に断りのない限り、本発明では、用語「ＣＤＲ」または「ＣＤＲ配列」は、上記の方法のいずれかによって決定されたＣＤＲ配列も包含する。
【００５６】
特に断りのない限り、本発明では、抗体可変領域の残基（重鎖可変領域残基および軽鎖可変領域残基を含む）の位置を参照する場合、それはＫａｂａｔナンバリングシステム(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))に従うナンバリング位置を指す。
【００５７】
一つの実施態様では、本発明の抗体のＣＤＲの境界は、例えば、表１で示される配列の抗体など、Ｃｈｏｔｈｉａ規則またはＫａｂａｔ規則によって決定される。
【００５８】
異なる割り当てシステムによって得られた抗体の可変領域のＣＤＲの境界は異なる場合があることに留意すべきである。すなわち、異なる割り当てシステムによって定義された抗体の可変領域のＣＤＲ配列は異なる。従って、本発明で定義される特定のＣＤＲ配列を有する抗体を定義するということになると、その抗体の範囲はまた、可変領域配列がその特定のＣＤＲ配列を含んでなるが、異なるプロトコール（例えば、異なる割り当てシステム規則またはそれらの組合せ）が適用される場合に、本発明により定義されるような特定のＣＤＲ境界とは異なるＣＤＲ境界が特許請求されるような抗体を包含する。
【００５９】
異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲ（同じ割り当てシステム下）を有する。しかしながら、ＣＤＲは抗体ごとに異なるものの、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位のみが抗原結合に直接関与する。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、およびＮｏｒｔｈ法の少なくとも２つを用いて最小の重複領域を決定することができ、抗原結合の「最小結合単位」が得られる。この最小結合単位は、ＣＤＲの下位部分であり得る。当業者には自明であるように、残りのＣＤＲ配列の残基は、抗体構造およびタンパク質の折り畳みによって決定することができる。従って、本発明では、本明細書に示されるＣＤＲのいずれの変異体も考慮される。例えば、あるＣＤＲ変異体では、最小結合単位内のアミノ酸残基は不変のままであり得るが、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａにより定義される他のＣＤＲ残基は、保存的アミノ酸残基により置換されてもよい。
【００６０】
抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭは当技術分野で公知であり、これらのクラスのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【００６１】
「ＩｇＧ形態の抗体」とは、抗体の重鎖定常領域が属すＩｇＧ形態を指す。同じタイプの総ての抗体の重鎖定常領域は同一であり、異なるタイプの抗体の重鎖定常領域は異なる。例えば、ＩｇＧ１形態の抗体は、その重鎖定常領域のＩｇドメインがＩｇＧ１のＩｇドメインであることを指す。
【００６２】
「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する分泌免疫グロブリンが、細胞傷害性エフェクター細胞を抗原保持標的細胞に特異的に結合し、続いてそれらの標的細胞を細胞毒素で死滅させることを可能とする、細胞傷害の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃｙＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球は、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、およびＦｃｙＲＩＩＩを発現する。Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)の第４６４頁の表３に、造血系細胞におけるＦｃＲ発現がまとめられている。対象とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号、または同第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されているものなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が含まれる。場合により／あるいは、対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、例えば、Clynes et al., PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されているものなど動物モデルにおいて評価することができる。
【００６３】
本発明で使用される用語「細胞傷害性薬剤」または「細胞傷害性因子」は、細胞機能を阻害もしくは抑制し、かつ／または細胞死または破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤の例としては、ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１５／１３８９２０、およびＷＯ２０１６／００７２３５に開示されているものがある。
【００６４】
用語「治療薬」は、本明細書に記載される場合、化学療法薬、細胞傷害性薬剤、ワクチン、他の抗体、有効抗感染薬、免疫調節剤、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と併用可能なＷＯ２０１６／００７２３５またはＷＯ２０１０／０７７６３４またはＵＳ６０／６９６４２６に開示されている物質のいずれをも含め、腫瘍（例えば、癌）および感染症（例えば、慢性感染症）の予防または治療に有効ないずれの物質も包含する。
【００６５】
「化学療法薬」は、癌の治療に有用な化学化合物を含む。化学療法薬の例としては、ＷＯ２０１６／００７２３５、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＵＳ６０／６９６４２６もしくはＷＯ２０１６／０６１１４２、ＵＳ６１／２６４０６１、またはＷＯ２０１６／００７２３５に開示されているものがある。
【００６６】
用語「サイトカイン」は、ある細胞集団により放出され、他の細胞に対して細胞間メディエーターとして働くタンパク質に対する一般用語である。このようなサイトカインの例としては、リンホカインおよびモノカイン；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、およびＩＬ−１５；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；およびＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）およびγ−インターフェロンを含む他のポリペプチド因子がある。本明細書で使用する場合、サイトカインという用語には、天然源または組換え細胞培養物に由来するタンパク質、ならびに人工合成により生産された小分子実体、および薬理学的に許容可能なそれらの誘導体および塩を含む、天然配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。
【００６７】
用語「共刺激分子」は、Ｔ細胞上の共刺激リガンドに特異的に結合し、従って、Ｔ細胞媒介共刺激応答（例えば、限定されるものではないが、増殖）を可能とする、関連のある結合相手を指す。共刺激分子は、高効率の免疫応答に必要とされる抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、限定されるものではないが：ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＮＫ細胞活性化受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。
【００６８】
用語「活性化剤」または「作動剤」には、ある分子（例えば、共刺激分子）の特定のパラメーター（例えば、活性）を増大させる物質が含まれる。例えば、この用語には、ある分子の活性（例えば、共刺激活性）を少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％、またはそれを超えて増大させる物質が含まれる。
【００６９】
用語「免疫チェックポイント分子」は、ＣＤ４  Ｔ細胞およびＣＤ８  Ｔ細胞の細胞表面の分子群を指す。これらの分子は、抗腫瘍免疫応答を下方調節または抑制する「ブレーキ」として効果的に働き得る。免疫チェックポイント分子としては、限定されるものではないが、プログラム細胞死受容体１（ＰＤ−１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、およびＬＡＧ−３が含まれ、これらは免疫細胞を直接阻害する。
【００７０】
用語「阻害剤」または「拮抗剤」には、ある分子（例えば、免疫チェックポイント阻害タンパク質）の特定のパラメーター（例えば、活性）を低下させる物質が含まれる。例えば、この用語には、ある分子の活性（例えば、ＬＡＧ−３活性）を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％またはそれを超えて阻害する物質が含まれる。よって、阻害効果は、１００％である必要はない。
【００７１】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントを意味し、そのフラグメントは、１つのポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）に、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が連結されたものを含んでなる。各鎖においてこれら２つのドメインの間で対合するには短いリンカーを用いることによって、これらのドメインは、他鎖の相補的ドメインと対合して２つの抗原結合部位を形成することを余儀なくされる。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)にさらに詳細に記載されている。トリボディおよびテトラボディもまた、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【００７２】
「機能的Ｆｃ領域」とは、天然配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、またはＢＣＲ）下方調節などが含まれる。このようなエフェクター機能には一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と会合している必要があり、本明細書に開示されているものなどの様々なアッセイを用いて評価することができる。
【００７３】
「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域に帰すことができ、抗体のアイソタイプによって異なる生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）下方調節、およびＢ細胞の活性化が含まれる。
【００７４】
「ヒトエフェクター細胞」とは、１以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を果たす白血球を指す。特定の実施態様では、これらの細胞は、少なくともＦｃｙＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣのエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、および好中球が含まれる。エフェクター細胞は、血液などのそれらの天然源から単離することができる。
【００７５】
用語「有効量」は、治療または予防を必要とする患者において、その患者に単回または複数用量で投与した後に期待される効果を生じる本発明の抗体もしくはフラグメントまたは複合体もしくは組成物の量または用量を指す。有効量は、次のような様々な因子を考慮することにより当業者としての主治医によって容易に決定され得る：哺乳動物などの種；そのサイズ、年齢、および健康状態；関与する特定の疾患；その疾患の程度または重症度；個体患者の応答；投与される特定の抗体；投与経路；投与される処方物のバイオアベイラビリティ特性；選択される投与計画；および並行療法の使用。
【００７６】
「治療上有効な量」とは、必要な用量で所望の期間、所望の治療結果を達成するために有効な量を指す。抗体もしくは抗体フラグメント、またはその複合体もしくは組成物の治療上有効な量は、個体の病状、年齢、性、および体重、ならびにその個体において所望の応答を惹起する抗体または抗体部分の能力などの様々な因子によって異なり得る。治療上有効な量は、抗体もしくは抗体フラグメント、またはその複合体もしくは組成物の有毒なまたは望まれない影響が、治療上有益な効果よりも少ない量でもある。「治療上有効な量」は、好ましくは、非処置被験体に比べて、測定可能なパラメーター（例えば、腫瘍成長速度）を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、いっそうより好ましくは少なくとも約５０％、６０％、または７０％、およびなおより好ましくは少なくとも約８０％または９０％阻害する。測定可能なパラメーター（例えば、癌）を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍において有効性を予測する動物モデル系で評価することができる。場合により、組成物のこのような特性は、熟練者に知られたアッセイによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定可能な化合物の阻害能を調べることによって評価することもできる。
【００７７】
「予防上有効な量」とは、必要な用量で所望の期間、所望の予防結果を達成するために有効な量を指す。一般に、予防用量は疾患の初期段階以前に被験体に投与されるので、予防上有効な量は、治療上有効な量より少ない。
【００７８】
本発明に好適な「抗体およびその抗原結合フラグメント」には、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロコンジュゲート、多重特異性、組換え、異種、ヘテロハイブリッド、キメラ、ヒト化（特に、ＣＤＲグラフトされたもの）、脱免疫化、またはヒト抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーから生成したフラグメントＦｄ、Ｆｖ、ジスルフィド安定化Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、ダイアボディまたはテトラボディ(Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (14), 6444-6448)、ナノボディ（シングルドメイン抗体とも呼ばれる）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントが含まれる。
【００７９】
「Ｆａｂ」フラグメントには、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインが含まれ、また、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）も含まれる。Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に数残基（抗体ヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む）が付加されていることでＦａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’を指す。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元は、Ｆａｂ’フラグメント間にヒンジシステインを有する対合Ｆａｂ’フラグメントとして作製されたものである。抗体フラグメントの他の化学カップリングも知られている。
【００８０】
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書において、定常領域の少なくとも一部を含んでなる免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語には、Ｆｃ領域および天然配列の変異体Ｆｃ領域が含まれる。特定の実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボニル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）は存在しても存在しなくてもよい。特に断りのない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されているようなＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに基づく。
【００８１】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体と抗原との結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、多くの場合、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する（例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 第6版, W.H. Freeman and Co. p91 (2007)参照）。単一のＶＨまたはＶＬドメインで、抗原結合特異性を提供するために十分である。加えて、特定の抗原に結合する抗体に由来するＶＨまたはＶＬドメインは、それぞれ相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に結合する抗体を単離するために使用することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol., 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature, 352:624-628 (1991)参照。
【００８２】
「フレームワーク」または「ＦＲ」とは、相補性決定領域ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。従って、ＣＤＲおよびＦＲ配列は一般に、下記の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ））で見られる：
ＦＲ１−ＨＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）−ＦＲ２−ＨＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）−ＦＲ３−ＨＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）−ＦＲ４。
【００８３】
特に断りのない限り、抗体の様々なドメインの残基のナンバリングは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Science Health, Bethesda, MD, 1991に記載されているようなＥＵインデックスと呼ばれるＥＵナンバリングシステムに基づく。
【００８４】
用語「全長抗体」、「完全抗体」および「無傷抗体」は、本明細書では、天然抗体構造と実質的に類似の構造を有する抗体または本明細書に定義されるようなＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指して互換的に使用される。
【００８５】
「Ｆｖ」は、無傷の抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。一つの実施態様では、二本鎖Ｆｖ型は、強固に非共有結合された二量体としての１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインからなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）型では、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインは、その軽鎖と重鎖が二本鎖型の「二量体」構造に類似の構造で会合され得るように、フレキシブルペプチドリンカーを介して共有結合させることができる。この構成では、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面の抗原結合部位を規定するのは、各可変ドメインの３つのＣＤＲである。要するに、６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながらやはり、単一可変ドメイン（すなわち、抗原に特異的な３つのＣＤＲのＦｖを半分しか持たない）であっても、親和性は無傷の結合部位よりも低いものの、抗原を認識して結合する能力を有する。ｓｃＦｖの総説として、例えば、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113巻, Rosenburg and Moore編, (Springer-Verlag, New York, 1994), 269-315頁を参照。
【００８６】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入される細胞を、そのような細胞の世代を含めて指す。宿主細胞には、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、これらには初代形質転換細胞およびそれらに由来する世代が継代数に関係なく含まれる。世代は、親細胞と核酸内容が完全に同一でなくてもよく、突然変異を含んでよい。本明細書には、最初に形質転換された細胞からスクリーニングまたは選択された同じ機能または生物活性を有する突然変異世代が含まれる。
【００８７】
「ヒト抗体」とは、ヒトまたはヒト細胞により生成されるか、またはヒト抗体ライブラリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含有するヒト化抗体を明確に除外する。
【００８８】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も高頻度に見られるアミノ酸残基を表すフレームワークを指す。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブタイプからの選択である。一般に、配列のサブタイプは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, NIH Public Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 第1〜3巻に開示されているサブタイプである。一つの実施態様では、ＶＬに関して、サブタイプは、Ｋａｂａｔら（上記参照）と同様にサブタイプκＩである。一つの実施態様では、ＶＨに関して、サブタイプは、Ｋａｂａｔら（上記参照）と同様にサブタイプＩＩＩである。
【００８９】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基とヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含んでなるキメラ抗体を指す。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、総てまたは実質的に総てのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ）が非ヒト抗体のＣＤＲに相当し、かつ、総てまたは実質的に総てのＦＲがヒト抗体のＦＲに相当する、少なくとも１つの、一般には２つの可変ドメインの実質的に総てを含んでなる。ヒト化抗体は、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部も場合により含んでなり得る。抗体（例えば、非ヒト抗体）の「ヒト化形態」とは、ヒト化されている抗体を指す。
【００９０】
用語「癌」および「癌性」は、一般に制御を欠いた細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的疾患を指す、または言う。癌の例としては、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ系悪性腫瘍が含まれる。このような癌のより具体的な例としては、限定されるものではないが、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（消化管癌および消化管間質癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在性びまん性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒色腫、結節性黒色腫、多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症を伴う異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、およびメイグス症候群、脳腫瘍および脳癌、および頭頸部癌、ならびに関連の転移が含まれる。特定の実施態様では、本発明の抗体による治療に好適な癌としては、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓  癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、白血病、および頭頸部癌が含まれ、それらの癌の転移形態も含む。
【００９１】
用語「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」は、特定の程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一つの実施態様では、細胞増殖性疾患は癌を指す。
【００９２】
用語「腫瘍」は、悪性または良性に関わらず、総ての新生細胞成長および増殖、ならびに総ての前癌および癌細胞および組織を指す。用語「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、および「腫瘍」は、本明細書に言及される場合、相互に排他しない。
【００９３】
用語「感染性疾患」は、例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染などの原虫を含む、病原体により引き起こされる疾患を指す。
【００９４】
用語「腫瘍免疫回避」は、腫瘍が免疫認識およびクリアランスを逃れることを指す。よって、治療の概念として、腫瘍免疫は「治療」され、回避が弱まると、腫瘍は免疫系によって認識および攻撃される。腫瘍認識の例としては、腫瘍結合、腫瘍退縮、および腫瘍クリアランスが含まれる。
【００９５】
用語「慢性感染症」は、感染因子（例えば、病原体、例えば、ウイルス、細菌、寄生虫などの原虫、真菌など）が感染した宿主で免疫応答を誘導したが、急性感染症のように宿主からクリアランスまたは排除されなかった感染症を指す。慢性感染症は、持続性、潜伏性または遅発性であり得る。急性感染症は一般に数日または数週間のうちに免疫系によって消散されるが（例えば、インフルエンザ）、持続的感染症は数ヶ月、数年、数十年、または生涯、比較的低レベルで続き得る（例えば、Ｂ型肝炎）。これに対して、潜伏感染は、時として急速に増大する過剰感染および病原体レベルの上昇により中断される長期の無症候性の活動を特徴とする（例えば、単純ヘルペス）。最後に、遅発性感染症は、長い潜伏期などの疾病症状の緩徐的および継続的進行と、その後の臨床症状の発症後の長期的かつ進行性の臨床過程を特徴とする。潜伏感染症および持続的感染症とは異なり、慢性感染症は、ウイルス増殖の急性期には始まり得ない（例えば、ピコルナウイルス感染症、ビスナウイルス、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ病）。慢性感染症を誘発し得る例示的感染因子としては、ウイルス（例えば、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｉ型およびＩＩ型単純ヘルペスウイルス、１型および２型ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、１型および２型ヒトＴリンパ球ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルスなど）、細菌（例えば、結核菌(Mycobacterium tuberculosis)、リステリア(Listeria)種、肺炎桿菌(Klebsiella pneumonia)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、ボレリア(Borrelia)種、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)など）、寄生虫（例えば、リーシュマニア(Leishmania)種、熱帯熱マラリア原虫(Plasmodium falciparum)、住血吸虫(Schistosoma)種、トキソプラズマ(Toxoplasma)種、トリパノソーマ(Trypanosoma)種、テニア・クラシセプス(Taenia carssiceps)など）の原虫、および真菌（例えば、アスペルギルス(Aspergillus)種、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、コクシジオイデス・イミチス(Coccidioides immitis)、ヒストプラズマ・カプスラーツム(Histoplasma capsulatum)、ニューモシスチス・カリニ(Pneumocystis carinii)など）が含まれる。さらなる感染因子としては、脳またはニューロン組織でタンパク質のミスフォールディングをさらに増やすことによって脳またはニューロン構造に影響を及ぼし、アミロイド斑（これは細胞死、組織損傷、およびついには死をもたらす）の形成に至るプリオンまたはミスフォールドタンパク質が含まれる。プリオン感染により引き起こされる疾患の例としては、クロイツフェルト・ヤコブ病およびその変種、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ｓＦＩ）、クールー病、スクレイピー、ウシ海綿脳症（ＢＳＥ）（別名「狂牛」病）、および様々な動物型の様々な他の脳症［例えば、伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、オジロジカ、ヘラジカおよびニュールジカの慢性消耗病（ＣＷＤ）、ネコ海綿脳症、ニアラ、オリックスおよびクーズーの外来有蹄類脳症(exoticungulate encephalopathy)（ＥＵＥ）、ダチョウの海綿脳症］が含まれる。
【００９６】
「免疫複合体」は、限定されるものではないが、細胞傷害性薬剤または標識を含む１以上の他の物質にコンジュゲートされた抗体である。
【００９７】
本明細書で使用する用語「標識」は、ポリヌクレオチドプローブまたは抗体などの薬剤に直接的または間接的にコンジュゲートまたは融合され、それがコンジュゲートまたは融合された薬剤の検出を容易にする化合物または組成物を指す。標識はそれ自体検出可能である（例えば、放射性同位元素標識もしくは蛍光標識）か、または酵素標識の場合には、検出可能な基質化合物または組成物の化学変化を触媒することができる。この用語は、検出可能な物質とプローブまたは抗体をカップリング（すなわち、物理的結合）することによるプローブまたは抗体の直接的標識と、直接的に標識された他の試薬と反応させることによるプローブまたは抗体の間接的標識を包含することを意図する。間接的標識の例としては、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出することができるようなビオチン化ＤＮＡプローブの末端標識が含まれる。
【００９８】
「個体」または「被験体」としては、哺乳動物が含まれる。哺乳動物としては、限定されるものではないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヤギ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えばサル）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれる。いくつかの実施態様では、個体または被験体はヒトである。
【００９９】
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から分離されたものである。いくつかの実施態様では、抗体は、例えば、電気泳動［例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動］またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）で決定した場合に９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度を評価するための方法の総説としては、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr., B848:79-87 (2007)を参照。
【０１００】
「単離された」核酸とは、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸としては、通常核酸分子を含有する細胞に含有されるが、染色体外にまたはその本来の染色体の場所とは異なる染色体の場所に存在する核酸分子を含む。
【０１０１】
「抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖または軽鎖（またはそのフラグメント）をコードする１以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別のベクター内のこのような核酸分子、および宿主細胞内の１以上の場所に存在するこのような核酸分子を含む。
【０１０２】
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」または「ポリヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は互換的に使用される。それらは、ポリマー形態またはその類似形態にある、任意の長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド）を指す。ポリヌクレオチドは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、一本鎖の場合、コード鎖であっても非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分が挿入されていてもよい。ポリヌクレオチドは、標識成分とのコンジュゲーションによるなど、重合後にさらに修飾されてもよい。核酸は、組換えポリヌクレオチド、あるいは天然に存在しない、またはゲノム源、ｃＤＮＡ源、半合成源、もしくは合成源に由来する他のポリヌクレオチドと天然にはないレイアウトで連結されているポリヌクレオチドであり得る。
【０１０３】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（一本鎖の場合）は本明細書で互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸ポリマーを指す。このポリマーは直鎖であっても分岐鎖であってもよく、修飾アミノ酸を含んでなってもよく、かつ、非アミノ酸が挿入されていてもよい。この用語にはまた、修飾された（例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの他のいずれかの操作）アミノ酸ポリマーも含まれる。ポリペプチドは、天然源から単離されてもよく、組換え技術によって真核生物または原核生物宿主から生産することができ、また、合成法の生成物であり得る。
【０１０４】
配列間の配列同一性の計算は、次のように行われる。
【０１０５】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、これらの配列を最適な比較のためにアラインする（例えば、最適なアラインメントのために、ギャップを第１および第２のアミノ酸配列に、または一方もしくは両方の核酸配列に導入することができ、あるいは比較のために非相同配列を切り捨てることができる）。好ましい一つの実施態様では、比較のために、アラインされた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、およびいっそうより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められていれば、それらの分子はこの位置で同一である。
【０１０６】
２つの配列間の配列比較と同一性パーセントの計算を達成するために数学的アルゴリズムを使用することができる。好ましい一つの実施態様では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウエアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedlema and Wunsch [(1970) J. Mol. Biol., 48:444-453]で、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスおよびギャップウエイト１６、１４、１２、１０、８、６、または４およびレングスウエイト１、２、３、４、５、または６を用いて決定される。さらに別の好ましい実施態様では、２つのヌクレオチド配列(nucleotide acid sequences)間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウエアパッケージのＧＡＰプログラム（http://www.gcg.comで利用可能）で、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよびギャップウエイト４０、５０、６０、７０、または８０およびレングスウエイト１、２、３、４、５または６を用いて決定される。特に好ましいパラメーターセット（および特に断りのない限り使用されるべきもの）は、ギャップペナルティー１２、ギャップエクステンションペナルティー４、およびフレームシフトギャップペナルティー５で、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２スコアリングマトリックである。
【０１０７】
２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントはまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．  ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．  Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム((1989) CABIOS, 4:11-17)を用い、ＰＡＭ１２０加重剰余表、ギャップレングスペナルティー１２およびギャップペナルティー４で決定することもできる。
【０１０８】
加えてまたは代わりに、本明細書に記載の核酸配列およびタンパク質配列はさらに、公開データベースに対して、例えば、他のファミリーメンバー配列または関連の配列を特定するための検索を実行するために「クエリー配列」として使用することもできる。例えば、このような検索は、Altschul et al., (1990) J. Mol. Biol., 215:403-10のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムを用いて実行することができる。本発明の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワードレングス＝１２を用いて実行することができる。本発明のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワードレングス＝３を用いて実行することができる。比較のためにギャップ付きアラインメント結果を得るために、ギャップ付きＢＬＡＳＴをAltschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載の通りに使用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付きＢＬＡＳＴプログラム、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターが使用可能である。http://www.ncbi.nlm.nih.gov参照。
【０１０９】
本明細書で使用する場合、用語「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または極端ストリンジェンシー条件下でのハイブリダイゼーション」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件を表す。ハイブリダイゼーション反応を実施するための説明は、参照により組み込まれるCurrent Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出すことができる。これらの参照文献には水性法および非水性法が記載され、いずれかの方法が使用できる。本明細書に述べられる特異的ハイブリダイゼーション条件は次の通りである：１）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中で約４５℃、次いで、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、少なくとも５０℃（低ストリンジェンシー条件では、洗浄の温度は５５℃に引き上げることができる）で２回の洗浄であり；２）中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、６×ＳＳＣ中で約４５℃、次いで、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、約６０℃で１回以上の洗浄であり；３）高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は６×ＳＳＣ中で約４５℃、次いで、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃で１回以上の洗浄であり；および好ましくは、４）極端ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中で６５℃、次いで、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃で１回以上の洗浄である。極端ストリンジェンシー条件（４）が好ましい条件であり、特に断りのない限り使用されるべきものである。
【０１１０】
用語「医薬組成物」は、含有される有効成分の生物活性を有効とさせ、かつ、組成物が投与される被験体に許容されない毒性を有する付加的成分を含有しない形態で存在するこのような組成物を指す。
【０１１１】
用語「医薬補助材料」は、有効物質とともに投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントのアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、担体または安定剤などを指す。
【０１１２】
本明細書で使用する場合、「治療("treatment" (or "treat" or "treating"))」は、既存の症状、障害、病態、または疾患の進行または重症度の緩徐化、中断、休止、緩和、停止、軽減、または逆転を指す。
【０１１３】
本明細書で使用する場合、「予防("prevention" (or "prevent" or "preventing"))」は、疾患もしくは障害または特定の疾患もしくは障害の症状の発症または進行の阻害を含む。いくつかの実施態様では、癌の家族歴を有する被験体は、予防計画の候補である。一般に、癌に関して、用語「予防」は、特に癌のリスクのある被験体において癌の徴候または症状が発症する前の薬物の投与を指す。
【０１１４】
用語「抗感染薬」には、ウイルス、細菌、真菌、または原虫、例えば、寄生虫などの微生物の成長を特異的に阻害または排除し、かつ、その投与濃度および投与間隔では宿主に致死的でないいずれの分子も含まれる。本明細書で使用する場合、抗感染薬という用語には、抗生剤、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬、および抗原虫薬が含まれる。一つの特定の態様では、抗感染薬は、その投与濃度および投与間隔では宿主に非毒性である。
【０１１５】
抗菌抗感染薬または抗菌薬は、殺菌薬（すなわち、直接的に死滅させる）または静菌薬（すなわち、分裂を妨げる）に大きく分類することができる。抗菌抗感染薬は、狭域抗菌薬（すなわち、グラム陰性などの限定された細菌サブタイプにのみ作用する）または広域抗菌薬（すなわち、広範囲の種に作用する）にさらに分類することができる。例としては、アミカシン、ゲンタマイシン、ゲルダナマイシン、ヘルビマイシン、ムピロシン、フラントイン、ピラジンアミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピシン／リファンピン、イソニアジドおよびピラジンアミド錠、またはチニダゾールが挙げられる。
【０１１６】
用語「抗ウイルス薬」には、ウイルスの成長、病原性、および／または生存を阻害または排除するいずれの物質も含まれる。これには、例えば、アシクロビル、シドフォビル、ジドブジン、ジダノシン（ｄｄＩ、ＶＩＤＥＸ）、ザルシタビン（ｄｄＣ、ＨＩＶＩＤ）、スタブジン（ｄ４Ｔ、ＺＥＲＩＴ）、ラミブジン（３ＴＣ、エピビル）、アバカビル（ＺＩＡＧＥＮ）、エムトリシタビン（エムトリバ）などが含まれる。
【０１１７】
用語「抗真菌薬」には、真菌の成長、病原性、および／または生存を阻害または排除するいずれの物質も含まれる。これには、例えば、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アムホテリシンＢ、カンジシン、パチョリ、ニームシードオイル、ココナッツオイルなどが含まれる。
【０１１８】
用語「抗原虫薬」には、原虫生物（例えば、寄生虫）の成長、病原性、および／または生存を阻害または排除するいずれの物質も含まれる。抗原虫薬の例としては、キニーネ、キニジンなどの抗マラリア薬が含まれる。
【０１１９】
例示的抗菌薬、抗ウイルス薬、抗真菌薬、および抗原虫薬については、例えばＷＯ２０１０／０７７６３４などを参照。
【０１２０】
抗感染薬については、例えば、ＷＯ２０１４／００８２１８、ＷＯ２０１６／０２８６７２、ＷＯ２０１５／１３８９２０またはＷＯ２０１６／０６１１４２も参照。
【０１２１】
用語「ベクター」は、本明細書で使用する場合、それに連結された他の核酸を増幅させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造として働くベクターならびに導入された宿主細胞のゲノムに結合するベクターが含まれる。いくつかのベクターは、機能的に連結された核酸の発現を命令することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現」ベクターと呼ばれる。
【０１２２】
「被験体／患者サンプル」は、患者または被験体から得られた細胞または体液の採取物を指す。組織または細胞サンプルの供給源は、固体組織、例えば、新鮮、凍結および／もしくは保存器官もしくは組織サンプルまたは生検サンプルもしくは穿刺サンプル；血液または血液成分；脳脊髄液、羊水、腹腔液、または間質液などの体液；妊娠または発生中の任意の時点で被験体から得られる細胞であり得る。組織サンプルは、保存剤、抗凝固剤、バッファー、固定剤、栄養剤、抗生剤などの本来組織とは混合されていない化合物を含んでなり得る。腫瘍サンプルの例としては、限定されるものではないが、腫瘍生検、穿刺吸引物、気管支洗浄液、胸膜液、唾液、尿、手術検体、循環腫瘍細胞、血清、血漿、循環血漿タンパク質、腹水、腫瘍由来のまたは腫瘍様特性を呈する初代細胞培養物または細胞株、およびホルマリン固定、パラフィン包埋腫瘍サンプルまたは凍結腫瘍サンプルなどの保存腫瘍サンプルが含まれる。
【０１２３】
用語「添付文書」は、治療薬の市販パッケージに一般に包含される説明書を指すために使用され、これには、適応症、用法、用量、投与、併用療法、禁忌および／またはそのような治療薬の適用に関する警告についての情報が含まれている。
【０１２４】
本発明の抗体
よって、いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、哺乳動物ＰＤ−Ｌ１、例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。例えば、この抗体分子は、ＰＤ−Ｌ１のエピトープ（例えば、線状または立体配座エピトープ）に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、この抗体分子は、ＰＤ−Ｌ１の１以上の細胞外ドメインに結合する。
【０１２５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、下記の特性のうち１以上を有する：
（１）本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）に高い親和性で結合する、例えば、ＰＤ−Ｌ１に、約５０ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ以下、より好ましくは約１５ｎＭ以下、より好ましくは約１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、または２ｎＭ以下、最も好ましくは約１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、または０．８ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１に、０．１〜１０ｎＭ、好ましくは０．５〜１０ｎＭ、より好ましくは０．６〜１０ｎＭ、０．７〜８ｎＭ、および０．７〜５ｎＭ、最も好ましくは０．５〜１．５ｎＭ、０．７〜１．５ｎＭ、および０．７〜１ｎＭのＫＤで結合する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、ヒトＰＤ−Ｌ１である。いくつかの実施態様では、抗体の結合親和性は、生物学的光干渉法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性測定）を用いて決定される。
【０１２６】
（２）本発明の抗体またはそのフラグメントは、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞に、例えば、約４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．９ｎＭ、２．８ｎＭ、２．７ｎＭ、２．６ｎＭ、２．５ｎＭ、２．４ｎＭ、２．３ｎＭ、２．２ｎＭ、２．１ｎＭ、２ｎＭ、１．９ｎＭ、１．８ｎＭ、１．７ｎＭ、または１．６ｎＭ以下のＥＣ５０で結合する。いくつかの実施態様では、この結合は、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて決定される。いくつかの実施態様では、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する細胞は、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ細胞である。
【０１２７】
（３）本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１の関連活性を、例えば、約１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、または０．７ｎＭ以下、好ましくは０．１〜１ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、０．６〜１ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、または１ｎＭのＥＣ５０で遮断する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１の関連活性は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合である。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＭＯＡアッセイにおいて、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を、約１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、または０．７ｎＭ以下、好ましくは０．１〜１ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、０．６〜１ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、または１ｎＭのＥＣ５０で阻害する。いくつかの実施態様では、細胞はＣＨＯ細胞である。
【０１２８】
（４）Ｔ細胞機能を向上させる本発明の抗体またはそのフラグメントの能力が、例えば、テセントリクなどの既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも良好である。
【０１２９】
（５）例えばＭＬＲにおける、Ｔ細胞を活性化する本発明の抗体またはそのフラグメントの能力が、例えば、テセントリクなどの既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも良好である。
【０１３０】
（６）例えばＭＬＲにおける、ＩＦＮ−γ分泌を増強する本発明の抗体またはそのフラグメントの能力が、例えば、テセントリクなどの既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも良好である。
【０１３１】
（７）例えばＭＬＲにおける、ＩＬ−２分泌を増強する本発明の抗体またはそのフラグメントの能力が、例えば、テセントリクなどの既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも良好である。
【０１３２】
（８）本発明の抗体またはそのフラグメントは、既知の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えばテセントリク）よりも粘稠度が低く、従って、より良好なドラッガビリティーを有する。いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、Ｚｅｎｉｘカラムクロマトグラフィーにおいて、約１０分、約９分、または約８分未満、好ましくは約７〜９分、好ましくは約７〜８．５分、約７．５〜８．５分、約７〜８分、または約７．５〜８分、例えば、約７．５分、７．６分、７．７分、７．８分、７．９分、８分、８．１分、８．２分、８．３分、８．４分、８．５分の保持時間（ＲＴ）を有する。
【０１３３】
（９）本発明の抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ−Ｌ１の１以上の活性を阻害して、例えば、下記：腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介増殖の増加、または癌細胞の免疫回避の減少のうち１以上を引き起こす。
【０１３４】
（１０）本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。
【０１３５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、下記の特徴のうち１以上を有する：
（ｉ）ＰＤ−Ｌ１に対して、本発明の抗体（例えば、表３に挙げられている抗体のいずれか）と同じまたは類似の結合親和性および／または特異性を示す；
（ｉｉ）本発明の抗体（例えば、表３に挙げられている抗体のいずれか）のＰＤ−Ｌ１への結合を阻害する（例えば、競合的に阻害する）；
（ｉｉｉ）本発明の抗体（例えば、表３に挙げられている抗体のいずれか）と同じまたは重複するエピトープに結合する；
（ｉｖ）ＰＤ−Ｌ１との結合をめぐって、本発明の抗体（例えば、表３に挙げられている抗体のいずれか）と競合する；
（ｖ）本発明の抗体（例えば、表３に挙げられている抗体のいずれか）の１以上の生物学的特徴を有する。
【０１３６】
例示的抗体
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでなり、ここで、ＶＨは、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれかのＶＨに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、または
（ｉｉ）（ｉ）の配列に比べ、３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる配列
を含んでなる。
【０１３７】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、ＶＬは、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれかのＶＬに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、または
（ｉｉ）（ｉ）の配列に比べ、３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる配列
を含んでなる。
【０１３８】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域ＶＨと軽鎖可変領域ＶＬを含んでなり、ここで、
（ａ）ＶＨは、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれかのＶＨに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、または
（ｉｉ）（ｉ）の配列に比べ、３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる配列
を含んでなり；かつ／または
（ｂ）ＶＬは、
（ｉ）表Ｂに挙げられている抗体のいずれかのＶＬに含まれる３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、または
（ｉｉ）（ｉ）の配列に比べ、３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる配列
を含んでなる。
【０１３９】
好ましい実施態様では、ＶＨは、配列番号２６、２７、２８、２９、３０、または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるまたはからなる。
【０１４０】
好ましい実施態様では、ＶＬは、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、または３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるまたはからなる。
【０１４１】
好ましい実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号２６もしくは３０で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３２もしくは３６で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ、または
（ｉｉ）配列番号２７で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３３で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ、または
（ｉｉｉ）配列番号２８で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３４で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲ、または
（ｉｖ）配列番号２９もしくは３１で示される重鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＨＣＤＲｓと、配列番号３５もしくは３７で示される軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域ＬＣＤＲｓ
を含んでなる。
【０１４２】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、
（ｉ）ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号１、２、３、もしくは４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＨＣＤＲ１は、配列番号１、２、３、もしくは４からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり；ＨＣＤＲ２は、配列番号５、６、７、８、もしくは９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＨＣＤＲ２は、配列番号５、６、７、８、もしくは９からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり；ＨＣＤＲ３は、配列番号１０、１１、１２、もしくは１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＨＣＤＲ３は、配列番号１０、１１、１２、もしくは１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり；かつ／あるいは
（ｉｉ）ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号１４、１５、もしくは１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＬＣＤＲ１は、配列番号１４、１５、もしくは１６からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり；ＬＣＤＲ２は、配列番号１７、１８、１９、もしくは２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＬＣＤＲ２は、配列番号１７、１８、１９、もしくは２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり；ＬＣＤＲ３は、配列番号２１、２２、２３、２４、もしくは２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、またはＬＣＤＲ３は、配列番号２１、２２、２３、２４、または２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に比べて、１つ、２つ、または３つの変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなる。
【０１４３】
好ましい実施態様では、本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、
（ａ）ＶＨは、
（ｉ）表Ａで示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３の組合せ；または
（ｉｉ）３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２、または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる、（ｉ）のＨＣＤＲ組合せの変異体
を含んでなり；かつ／または
（ｂ）ＶＬは、
（ｉ）表Ａで示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の組合せ；または
（ｉｉ）３つのＣＤＲ領域に合計少なくとも１個、多くとも５、４、３、２または１個のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換）を含んでなる、（ｉ）のＬＣＤＲ組合せの変異体
を含んでなる、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【０１４４】
好ましい実施態様では、本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり、かつ、ＶＬは、ＣＤＲであるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり、抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の組合せは、下記の表（表Ａ）で示される、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【０１４５】
【表２】
2021508436.tif 000004
【０１４６】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域ＶＨおよび／または軽鎖可変領域ＶＬを含んでなり、ここで、
（ａ）重鎖可変領域ＶＨは、
（ｉ）配列番号２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；
（ｉｉ）配列番号２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；または
（ｉｉｉ）配列番号２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１から選択されるアミノ酸配列に比べて、１個以上（好ましくは多くとも１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２もしくは１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、ＣＤＲ内には存在しない；
かつ／または
（ｂ）軽鎖可変領域ＶＬは、
（ｉ）配列番号３２、３３、３４、３５、３６、もしくは３７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；
（ｉｉ）配列番号３２、３３、３４、３５、３６、もしくは３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；または
（ｉｉｉ）配列番号３２、３３、３４、３５、３６、もしくは３７から選択されるアミノ酸配列に比べて、１個以上（好ましくは、多くとも１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２または１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、保存的アミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、ＣＤＲ内には存在しない。
【０１４７】
好ましい実施態様では、本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、その抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれる重鎖可変領域ＶＨと軽鎖可変領域ＶＬの組合せは、下記の表（表Ｂ）で示される。
【０１４８】
【表３】
2021508436.tif 000005
【０１４９】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖および／または軽鎖を含んでなり、ここで、
（ａ）重鎖は、
（ｉ）配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、もしくは４５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；
（ｉｉ）配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、もしくは４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；または
（ｉｉｉ）配列番号３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４もしくは４５から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも２０または１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２または１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、重鎖のＣＤＲ内には存在せず、より好ましくは、これらのアミノ酸変異は、重鎖可変領域内には存在せず；かつ／または
（ｂ）軽鎖は、
（ｉ）配列番号４６、４７、４８、４９、５０、もしくは５１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；
（ｉｉ）配列番号４６、４７、４８、４９、５０、もしくは５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか；または
（ｉｉｉ）配列番号４６、４７、４８、４９、５０もしくは５１から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも２０または１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２または１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、軽鎖のＣＤＲ内には存在せず、より好ましくは、これらのアミノ酸変異は、軽鎖可変領域内には存在しない。
【０１５０】
好ましい実施態様では、本発明は、重鎖と軽鎖を含んでなる抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、その抗体またはその抗原結合フラグメントに含まれる重鎖と軽鎖の組合せは、下記の表（表Ｃ）で示される。
【０１５１】
【表４】
2021508436.tif 000006
【０１５２】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントの重鎖および／または軽鎖は、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号６８）などのシグナルペプチド配列をさらに含んでなる。
【０１５３】
本発明の一つの実施態様では、本明細書に記載のアミノ酸変異には、アミノ酸置換、挿入、または欠失が含まれる。好ましくは、本明細書に記載のアミノ酸変異は、アミノ酸置換、好ましくは、保存的置換である。
【０１５４】
好ましい実施態様では、本明細書に記載のアミノ酸変異は、ＣＤＲ外の領域（例えば、ＦＲ内）に存在する。より好ましくは、本明細書に記載のアミノ酸変異は、重鎖可変領域外および／または軽鎖可変領域外の領域に存在する。
【０１５５】
場合により、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、軽鎖可変領域、重鎖可変領域、軽鎖、または重鎖に対する翻訳後修飾を含んでなる。例示的翻訳後修飾としては、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの他のいずれかの操作が含まれる。
【０１５６】
いくつかの実施態様では、置換は保存的置換である。保存的置換とは、あるアミノ酸の、同じクラスの他のアミノ酸による置き換え、例えば、ある酸性アミノ酸の他の酸性アミノ酸による置き換え、ある塩基性アミノ酸の他の塩基性アミノ酸による置き換え、またはある中性アミノ酸の他の中性アミノ酸による置き換えを指す。例示的置換は、以下の表Ｄで示される。
【０１５７】
【表５】
2021508436.tif 000007
【０１５８】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大または低減するように変更される。抗体のグリコシル化部位の付加または欠失は、１以上のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって有利に達成することができる。
【０１５９】
例えば、１以上のアミノ酸置換は、１以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位を除去し、それによりその部位のグリコシル化を除去するために行うことができる。このようなグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増すことができる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号参照。フコシル残基の量が低減された低フコシル化抗体または二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体など、グリコシル化のクラスが変更された抗体が作製可能である。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣを増強する能力を示した。このような糖鎖修飾は、例えばグリコシル化システムが変更された宿主細胞において抗体を発現させることによって達成することができる。グリコシル化システムが変更された細胞は当技術分野で記載があり、本発明の抗体を発現させる宿主細胞として使用することができ、それにより、グリコシル化が変更された抗体が生産される。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）−フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、従って、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９で発現された抗体がそれらの糖鎖にフコースを欠く。細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９ＦＵＴ８−／−は、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞においてＦＵＴ８遺伝子を破壊の標的とする２つの選択的ベクターを用いて作出される（米国特許出願公開第２００４０１１０７０４号およびYamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22参照）。ＥＰ１，１７６，１９５には、細胞株で発現された抗体が、α−１，６結合関連酵素を低減または排除することによって低いフコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊されている細胞株が記載されている。ＥＰ１，１７６，１９５にはまた、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）などの抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加する酵素活性が低いまたは無い細胞株も記載されている。ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５には、Ａｓｎ（２９７）結合糖鎖にフコースを付加する能力が低減され、それにより、宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらす変異型ＣＨＯ細胞株Ｌｅｃ１３細胞が記載されている（Shields et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照）。グリコシル化プロファイルが改変された抗体はまた、ＰＣＴ公開ＷＯ０６／０８９２３１に記載されているように、卵でも生産することができる。あるいは、グリコシル化プロファイルが改変された抗体は、アオウキクサなどの植物細胞でも生産することができる。植物系で抗体を生産するための方法は、Ａｌｓｔｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｒｄ  ＬＬＰ弁理士事件番号０４０９８９／３１４９１１に相当する２００６年８月１１日出願の米国特許出願に開示されている。ＰＣＴ国際ＷＯ９９／５４３４２には、糖タンパク質を修飾するグリコシルトランスフェラーゼ［例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）］を発現するように操作された細胞株が記載され、それにより、操作細胞株で発現された抗体は、二分ＧｌｃＮａｃ構造の増大を示し、その結果、その抗体のＡＤＣＣ活性が上昇する［Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180も参照］。あるいは、抗体のフコシル残基を切除するためにフコシダーゼを使用することもでき、例えば、α−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する[Tarentino et al. (1975) Biochem. 14:5516-23]。
【０１６０】
本発明の一つの実施態様では、本発明の抗体またはフラグメントは、操作された酵母Ｎ結合グリカンまたはＣＨＯ  Ｎ結合グリカンでグリコシル化される。
【０１６１】
本発明により包含される、本明細書に記載の抗体またはそのフラグメントに対するもう１つの修飾がペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生体（例えば、血清）半減期を延長するためにペグ化することができる。抗体をペグ化するためには、抗体またはそのフラグメントを一般に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）と、１以上のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメントと結合する条件で反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）を用い、アシル化反応またはアルキル化反応により行われる。本明細書で使用する場合、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているいずれの形態のＰＥＧも包含することを意図する。特定の実施態様では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質のペグ化のための方法は当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用可能である、例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４参照。
【０１６２】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に１以上のアミノ酸修飾を導入し、それにより、例えば、癌または細胞増殖性疾患の治療において抗体の有効性が高められるようなＦｃ領域変異体を生産することができる。本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、ヒト化またはキメラ抗体）およびその抗原結合フラグメントにはまた、エフェクター機能の変更を提供するために修飾された（または閉じた）Ｆｃ領域を有する抗体およびフラグメントも含まれる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、ＷＯ２００３／０８６３１０、ＷＯ２００５／１２０５７１、ＷＯ２００６／００５７７０２参照。このような修飾は免疫系の様々な応答を増強または抑制するために使用することができ、診断および治療において有益な効果を持ち得る。Ｆｃ領域の修飾には、アミノ酸変異（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化、および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する修飾はまた、治療抗体において抗体の半減期を変化させることができ、それにより、低頻度投与、および従って利便性の増大および材料使用の低減を可能とし得る。Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731, 第734-735頁参照。
【０１６３】
一つの実施態様では、抗体特性を改変するために抗体のシステイン残基の数を変更することができる。例えば、ＣＨ１のヒンジ領域を、そのヒンジ領域のシステイン残基の数を変化させる（例えば、増加または減少させる）ように改変する。この方法は、米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。例えば、軽鎖および重鎖の組み立てを助長するため、または抗体の安定性を高めるもしくは低下させるために、ＣＨ１のヒンジ領域のシステイン残基の数を変更することができる。
【０１６４】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な他の非タンパク質部分を含むようにさらに修飾することができる。抗体誘導体化の好適な部分としては、限定されるものではないが、水溶性ポリマーが含まれる。水溶性ポリマーの限定されない例としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキサン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−エチレンメチルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が含まれる。このポリマーは、いずれの分子量であってもよく、分岐型でも非分岐型でもよい。抗体に結合しているポリマーの数は可変であり、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、限定されるものではないが、改良される抗体の特定の特徴または機能、その抗体誘導体が定義された条件で療法に使用されるかなどを含む考慮事項に基づいて決定することができる。
【０１６５】
いくつかの実施態様では、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体のフラグメントを包含する。抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体、および抗体フラグメントから形成される二重特異性抗体が含まれる。
【０１６６】
例えば、この抗体分子は、重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列と軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列を含んでなり得る。一つの実施態様では、抗体分子（本明細書では不完全抗体と呼ばれる）は、重鎖と軽鎖を含んでなるまたはからなる。別の例では、抗体分子は、２つの重鎖可変ドメイン配列と２つの軽鎖可変ドメイン配列を含み、それにより、２つの抗原結合部位を形成する。このようなＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特異性）およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体は、無傷抗体を修飾することにより生産することができ、または組換えＤＮＡ技術を用いてｄｅ  ｎｏｖｏ合成することができる。これらの機能的抗体フラグメントは、それらの対応する抗原または受容体に選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体フラグメントは、限定されるものではないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含むいずれの抗体クラスに、また、いずれの抗体サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）に由来してもよい。抗体分子の調製法はモノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生産された抗体であり得る。この抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有し得る。抗体はまた、例えば、κまたはλから選択される軽鎖も有し得る。
【０１６７】
本発明の抗体はまた、シングルドメイン抗体であり得る。シングルドメイン抗体としては、相補性決定領域がシングルドメインポリペプチドの部分である抗体を含み得る。例としては、限定されるものではないが、重鎖抗体、天然に軽鎖を欠く抗体、シングルドメイン抗体または従来の４鎖抗体に由来する操作抗体が含まれる。シングルドメイン抗体は、従来技術のいずれの抗体であってもよく、または今後出てくるいずれのシングルドメイン抗体であってもよい。シングルドメイン抗体は、限定されるものではないが、マウス、ヒト、ラクダ、アルパカ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含むいずれの種に由来するものであってもよい。本発明の別の態様によれば、シングルドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体と呼ばれる、天然に存在するシングルドメイン抗体である。このようなシングルドメイン抗体は、例えば、ＷＯ９４／０４６７８に開示されている。シングルドメイン抗体またはナノボディは、ラクダ、アルパカ、ヒトコブラクダ、ラマ、およびグアナコなどのラクダ科動物種から生産される抗体であり得る。ラクダ以外の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体を生産することができ、このようなシングルドメイン抗体は本発明の範囲内にある。
【０１６８】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒト化抗体である。抗体をヒト化するための種々の方法は、その内容が参照によりそのまま本明細書の一部とされるＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ[Almagro J.C. and Fransson J (2008) Frontiers in Bioscience 13:1619-1633]に概要が示されるように、当業者に既知である。ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎは、合理的アプローチと経験的アプローチを区別している。合理的アプローチは、少数の操作抗体変異体を作出し、それらの結合または対象とする他のいずれかの特徴を評価することを特徴とする。設計の変異体が期待する結果をもたらさない場合、設計および統合評価の新たなラウンドを始める。合理的アプローチとしては、ＣＤＲグラフティング、リサーフェイシング、超ヒト化、およびヒトストリングコンテントオプティマイゼーション(human string content optimization)が含まれる。これに対して、経験的方法は、大きなヒト化変異体ライブラリーの作出に基づき、濃縮技術またはハイスループットスクリーニングを用いて最良のクローンを選択する。よって、経験的アプローチは、多数の抗体変異体を検索することができる信頼性のある選択および／またはスクリーニング系に依存する。ファージディスプレーおよびリボソームディスプレーなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレー技術はこれらの要件を満たし、当業者に周知である。経験的アプローチには、ＦＲライブラリーの構築、ガイドセレクション、フレームワークシャッフリング、およびヒューマニアリングが含まれる。
【０１６９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術によって作製することができる。ヒト抗体は一般に、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol 5:368-74(2001)およびLonberg, Curr. Opin. Immunol 20:450-459(2008)に記載されている。ヒトモノクローナル抗体を生産するために使用するためには、マウス系よりも、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスを使用することができる（例えば、Ｗｏｏｄら、国際出願ＷＯ９１／００９０６；  Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、国際出願ＷＯ９２／０３９１８；Ｋａｙら、国際出願９２／０３９１７；Lonberg, N. et al., 1994 Nature 368:856-859; Green, L.L. et al., 1994 Nature Genet. 7:13-21; Morrison, S.L. et al., 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855; Bruggeman et al., 1993 Yeast Immunol 7:33-40; Tuaillon et al., 1993 PNAS 90:3720-3724;およびBruggeman et al., 1991 Eur J Immunol 21:1323-1326参照）。
【０１７０】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、齧歯類（マウスまたはラット）抗体、ヤギ抗体、霊長類（例えば、サル）抗体およびラクダ科動物抗体などの非ヒト抗体である。好ましくは、非ヒト抗体は、齧歯類（マウスまたはラット）抗体である。齧歯類抗体を生産するための方法は当技術分野で公知である。
【０１７１】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体はキメラ抗体である。いくつかのキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 81:6851-6855, 1984に記載されている。一つの実施態様では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギまたはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）およびヒト定常領域を含んでなる。別の実施態様では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスに比べて変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合フラグメントが含まれる。
【０１７２】
特定の実施態様では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。一般に、非ヒト抗体は、その親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しつつ、ヒトにおけるその免疫原性を低減するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、１以上の可変ドメインを含んでなる。場合により、ヒト化抗体は、ヒト定常領域の少なくとも一部をさらに含んでなる。いくつかの実施態様では、例えば抗体の特異性または親和性を回復または向上させるために、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基が非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）の対応する残基により置き換えられる。
【０１７３】
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリーを所望の活性を有する抗体に関してスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、ファージディスプレーライブラリーを作製し、それらのライブラリーを所望の結合特徴を有する抗体に関してスクリーニングするための種々の方法が当技術分野では公知である。これらの方法は、例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O' Brien et al.編, Human Press, Totowa, NJ, 2001)に記載され、さらに、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackso et al., Nature 352:624-628 (1991); Marks et al., J.Mol.Biol. 222:581-597(1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編, Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J.Mol.Biol. 338(2):299-310(2004); Lee et al., J.Mol.Biol340(5):1073-1093(2004); Fellouse, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101 (34):12467-12472(2004);および Lee et al., J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)に記載される。
【０１７４】
一つの実施態様では、抗体分子は単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合する。例えば、単一特異性抗体分子には、それぞれ同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列が含まれる。
【０１７５】
一つの実施態様では、抗体分子は多重特異性抗体分子であり、例えば、抗体分子は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含んでなり、これら複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対して結合特異性を有し、これら複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列の第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対して結合特異性を有する。一つの実施態様では、第１および第２のエピトープは、同じ抗原（例えば、同じタンパク質または多量体タンパク質の同じサブユニット）に存在する。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複する。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複しない。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは、異なる抗原（例えば、異なるタンパク質または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上に存在する。一つの実施態様では、多重特異性抗体分子は、第３、第４または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含んでなる。一つの実施態様では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子または三重特異的性抗体分子または四重特異性抗体分子である。
【０１７６】
一つの実施態様では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、多くとも２つの抗原に特異的である。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列を特徴とする。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは、同じ抗原（例えば、同じタンパク質または多量体タンパク質の同じサブユニット）上に存在する。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複する。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは重複しない。一つの実施態様では、第１のエピトープと第２のエピトープは、異なる抗原（例えば、異なるタンパク質または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上に存在する。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖および軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖および軽鎖可変ドメイン配列とを含んでなる。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する不完全抗体と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する不完全抗体とを含んでなる。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する不完全抗体またはそのフラグメントと、第２のエピトープに対して結合特異性を有する不完全抗体またはそのフラグメントとを含んでなる。一つの実施態様では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはそのフラグメントと、第２のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはそのフラグメントとを含んでなる。一つの実施態様では、第１のエピトープはＰＤ−Ｌ１上にあり、第２のエピトープはＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、またはＰＤ−Ｌ２上にある。
【０１７７】
いくつかの実施態様では、本発明はさらに、他の物質、例えば、治療用成分またはマーカー、例えば、細胞傷害性薬剤または免疫調節剤にコンジュゲートされた抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（「免疫複合体」）を提供する。細胞傷害性薬剤には、細胞に有害であるいずれの薬剤も含まれる。免疫複合体を形成するために好適な細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法薬）の例は当技術分野で公知である、例えば、ＷＯ２０１５／１５３５１３またはＷＯ２０１５／１３８９２０などを参照。例えば、細胞傷害性薬剤としては、限定されるものではないが、放射性同位元素、例えば、ヨウ素（１３１Ｉまたは１２５Ｉ）、イットリウム（９０Ｙ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５Ａｃ）、プラセオジム、アスタチン（２１１Ａｔ）、レニウム（１８６Ｒｅ）、ビスマス（２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）、リン（３２Ｐ）、ロジウム（１８８Ｒｈ）、硫黄（３５Ｓ）、炭素（１４Ｃ）、トリチウム（３Ｈ）、クロム（５１Ｃｒ）、塩素（３６Ｃｌ）、コバルト（５７Ｃｏまたは５８Ｃｏ）、鉄（５９Ｆｅ）、セレン（７５Ｓｅ）、またはガリウム（６７Ｇａ）が含まれる。細胞傷害性薬剤の例としては、さらに、化学療法薬または他の治療物質、例えば、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、ジヒドロキシアントラキンジケトン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンおよび類似体または上記総ての治療薬の同族体が含まれる。細胞傷害性薬剤としてはさらに、例えば、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル、およびダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエファロラムシル(thioephaloramucil)、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアンミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラマイシン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシンとして知られた）およびドキソルビシン）、抗生剤（例えば、アクチノマイシンＤ（以前はアクチノマイシンとして知られた）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が含まれる。
【０１７８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体とコンジュゲート／カップリング可能な物質は、例えば、ＷＯ２０１０／０７７６３４またはＵＳ６０／６９６４２６またはＷＯ２０１６／００７２３５またはＷＯ２０１６／０６１１４２などに見られる。
【０１７９】
本発明の核酸およびそれを含んでなる宿主細胞
一つの態様において、本発明は、上記の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を提供する。この核酸は、抗体の軽鎖可変領域および／もしくは重鎖可変領域を含んでなるアミノ酸配列、または抗体の軽鎖および／もしくは重鎖を含んでなるアミノ酸配列をコードすることができる。
【０１８０】
例えば、本発明の例示的核酸は、配列番号２６〜５１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列をコードする核酸、または配列番号２６〜５１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。
【０１８１】
本発明はさらに、下記核酸、または１以上の置換（例えば、保存的置換）、欠失もしくは挿入を有する下記核酸の変種とストリンジェント条件下でハイブリダイズされる核酸を提供する：配列番号２６〜５１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列をコードする核酸；または配列番号２６〜５１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸。
【０１８２】
一つの実施態様では、この核酸を含有する１以上のベクターが提供される。一つの実施態様では、ベクターは、真核生物の発現ベクターなどの発現ベクターである。ベクターとしては、限定されるものではないが、ウイルス、プラスミド、コスミド、λファージまたは酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれる。多くのベクター系が使用可能である。例えば、あるクラスのベクターは、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルスまたはＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）およびＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を使用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルスおよびフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡ要素を使用する。好ましい実施態様では、本発明の発現ベクターは、ｐＴＴ５発現ベクターである。
【０１８３】
加えて、ＤＮＡがその染色体に安定に組み込まれた細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能とする１以上のマーカーを導入することにより選択され得る。これらのマーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対しては、原栄養性、殺生物剤（例えば、抗生剤）耐性、または重金属（例えば、銅）耐性などを提供し得る。選択マーカー遺伝子は、同じ細胞への同時形質転換により発現または導入されるように、ＤＮＡ配列に直接連結させることができる。ｍＲＮＡの最適な合成のために付加的要素も必要とされる場合がある。これらの要素としては、スプライシングシグナル、転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルを含み得る。
【０１８４】
発現のために発現ベクターまたはＤＮＡ配列が作出されれば、その発現ベクターを好適な宿主細胞にトランスフェクトまたは導入することができる。この目的で様々な技術、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿法、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、微粒子銃、脂質に基づくトランスフェクション、または他の従来技術が使用できる。プロトプラスト融合の場合、細胞を培養培地でインキュベートし、適当な活性に関してスクリーニングする。得られたトランスフェクト細胞をインキュベートするため、および得られた抗体分子を回収するための方法および条件は当業者に公知であり、本明細書および当技術分野で公知の方法に基づいて使用される特定の発現ベクターおよび特定の哺乳動物宿主細胞に従って変更または最適化することができる。
【０１８５】
一つの実施態様では、本明細書に記載の抗体分子をコードする核酸または本明細書に記載のベクターを含有する宿主細胞が提供される。抗体をコードする核酸またはベクターをクローニングまたは発現するために好適な宿主細胞には、本明細書に記載されるような原核細胞または真核細胞が含まれる。抗体は、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、例えば細菌で生産可能である。細菌における抗体フラグメントおよびポリペプチドの発現は、例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号および同第５８４０５２３号に記載され、大腸菌での抗体フラグメントの発現を記載するCharlton, Methods in Molecular Biology, 第248巻 (B. K. C. Lo, 編, Humana Press, Totowa, NJ, 2003), 第245-254頁にも記載されている。発現の後、抗体は可溶性画分中の細菌ペーストから単離することができ、さらに精製することができる。一つの実施態様では、宿主細胞は大腸菌である。
【０１８６】
一つの実施態様では、宿主細胞は、真核生物である。別の実施態様では、宿主細胞は、酵母、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）、昆虫細胞、植物細胞、または抗体またはその抗原結合フラグメントの作製に好適な他の細胞からなる群から選択される。例えば、糸状真菌または酵母などの真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」されて部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の生産をもたらす真菌および酵母を含め(Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414(2004)、およびNat. Biotech. 24:210-215 (2006)参照)、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来する。
【０１８７】
また、脊椎動物細胞が宿主として使用されてもよい。例えば、懸濁増殖に好適となるように操作された哺乳動物細胞株が使用可能である。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例として、ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胎児腎臓株（例えば、Graham et al.、J. Gen Virol. 36: 59 (1977)に記載されるような２９３ＨＥＫまたは２９３細胞）などがある。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ−  ＣＨＯ細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 216 (1980))を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。
【０１８８】
抗体生産に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の総説は、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, 第248巻 (B. K. C. Lo, 編, Humana Press, Totowa, NJ), 第255-268頁 (2003)から見出すことができる。他の有用な宿主細胞としては、限定されるものではないが、Ｖｅｒｏ細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫＩＩ細胞、ＰｅｒＣ６細胞株由来の卵母細胞（例えば、Ｃｒｕｃｅｌｌ社のＰＥＲＣ６細胞）、および乳房上皮細胞などのトランスジェニック動物由来細胞が含まれる。好適な昆虫細胞としては、限定されるものではないが、Ｓｆ９細胞が含まれる。
【０１８９】
抗体およびその抗原結合フラグメントを製造するための方法
本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、組換え生産することができる。組換え抗体の生産のためには当技術分野で公知のいくつかの方法がある。抗体の組換え生産のための方法の一例は、米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。
【０１９０】
一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を製造するための方法が提供され、その方法は、上記に示されるように、抗体をコードする核酸を含有する宿主細胞を、抗体を発現させるために好適な条件下でインキュベートする工程、および場合により、その抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養物）から回収する工程を含んでなる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組換え生産については、抗体（例えば、上記の抗体）をコードする核酸を単離し、宿主細胞でのさらなるクローニングおよび／または発現のために１以上のベクターに挿入する。この核酸は容易に単離され、従来の手順を使用することにより（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）配列決定される。
【０１９１】
一つの実施態様では、宿主細胞は、抗体のＶＬのアミノ酸配列をコードする核酸と抗体のＶＨのアミノ酸配列をコードする核酸とを含んだベクターを含む。一つの実施態様では、宿主細胞は、抗体のＶＬのアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる第１のベクターと抗体のＶＨのアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる第２のベクターとを含む。
【０１９２】
アッセイ
本明細書で提供される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、当技術分野で公知の様々なアッセイによりその物理的／化学的特性および／または生物活性に関して同定、スクリーニング、または特性決定を行うことができる。一つの態様において、本発明の抗体の抗原結合活性は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法、フローサイトメトリー、および抗体分子でコーティングされた磁性ビーズなどの既知の方法によって試験される。ＰＤ−Ｌ１結合は、当技術分野で公知の方法によって決定することができ、例示的方法が本明細書に開示される。いくつかの実施態様では、生物学的光干渉法（例えば、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ親和性測定）またはＭＳＤアッセイまたはフローサイトメトリーが使用される。
【０１９３】
他の態様では、競合的結合アッセイは、Ｄ−Ｌ１との結合をめぐって本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体と競合する抗体を同定するために使用することができる。いくつかの実施態様では、このような競合的抗体は、本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかと同じエピトープ（例えば、線状エピトープまたは立体配座エピトープ）に結合する。抗体結合エピトープの位置決定を行うための詳細な例示的方法は、Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology 第66巻 (Humana Press, Totowa, NJ)に記載されている。
【０１９４】
本発明はさらに、上記の特性の１以上を有する抗ＰＤ−Ｌ１抗体を同定するためのアッセイを提供する。さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでこのような生物活性を有する抗体が提供される。
【０１９５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体が、上記の特性の１以上に関して試験される。
【０１９６】
前記ｉｎ−ｖｉｔｒｏアッセイのいずれかで使用するための細胞には、ＰＤ−Ｌ１を天然に発現するか、またはＰＤ−Ｌ１を発現するように操作された細胞または細胞株が含まれる。
【０１９７】
前記アッセイはいずれも、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の代わりにまたはそれに加えて本発明の免疫複合体を使用することによって実施され得ることが認識されるであろう。
【０１９８】
前記アッセイはいずれも、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および他の治療薬を使用することによって実施され得ることが認識されるであろう。
【０１９９】
医薬組成物および医薬製剤
本発明はさらに、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗体のフラグメントまたはその免疫複合体を含んでなる組成物（医薬組成物または医薬製剤を含む）、ならびに抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を含んでなる組成物を提供する。特定の実施態様では、組成物は、ＰＤ−Ｌ１もしくはその抗体のフラグメントもしくはその免疫複合体に結合する１以上の抗体、またはＰＤ−Ｌ１またはそのフラグメントと結合する１以上の抗体をコードする１以上の核酸を含んでなる。このような組成物は、バッファーを含め、当技術分野で公知の医薬担体、賦形剤などの好適な医薬補助材料をさらに含有し得る。
【０２００】
本発明での使用に好適な医薬担体は、水、および石油、または動物起源、植物起源、もしくは合成起源の油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む油などの無菌の液体であり得る。水は、医薬組成物が静脈内に投与される場合に好ましい担体である。生理食塩水およびデキストロースおよびグリセロール水溶液も、液体担体として、特に注射溶液に使用するために使用可能である。
【０２０１】
好適な賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。賦形剤の使用に関しては、"Handbook of Pharmaceutical Excipients", 第5版, R. C. Rowe, P. J. Seskey and S. C. Owen, Pharmaceutical Press, London, Chicago参照。
【０２０２】
組成物は、所望により、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨバッファーをさらに含有してもよい。
【０２０３】
これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態を採り得る。経口製剤は、医薬級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウムおよびサッカリンなどの標準的な担体および／または賦形剤を含有し得る。
【０２０４】
本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含んでなる、好ましくは、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の医薬製剤は、所望の純度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を１種類以上の任意選択の医薬補助材料と混合することによって作製することができる[Remington's Pharmaceutical Sciences, 第16版, Osol, A.編 (1980)]。
【０２０５】
例示的凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６１７１５８６号およびＷＯ２００６／０４４９０８に記載されているものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸バッファーを含んでなる。
【０２０６】
本発明の医薬組成物または製剤はまた、治療される特定の適応症により必要とされる２種類以上の有効成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する有効成分も含有し得る。例えば、化学療法薬および／または細胞傷害性薬剤などの他の抗癌有効成分をさらに提供することが望ましい。有効成分は、意図される目的に有効な量で適宜組み合わせられる。有効成分は、化学療法薬、他の抗体、および他の治療薬を含め、当技術分野で公知であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせることができるいずれの物質であってもよい。有効成分の例は、例えば、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１６／０６１１４２、ＵＳ６１／２６４０６１、ＵＳ６０／６９６４２６、ＷＯ２０１６／００７２３５などに見出すことができる。
【０２０７】
いくつかの実施態様では、有効成分は、抗ＬＡＧ−３抗体、例えば、ヒト抗原に結合する抗ＬＡＧ−３抗体であり、好ましくは、抗ＬＡＧ−３抗体はヒト化されている。
【０２０８】
徐放性製剤を作製することができる。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０２０９】
抗体の使用
一つの態様において、本発明は、被験体において免疫応答を調節するための方法に関する。この方法は、被験体に有効量の本明細書に開示される抗体分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）または医薬組成物または免疫複合体を投与し、それにより、その被験体において免疫応答を調節することを含んでなる。一つの実施態様では、本明細書に開示される抗体分子（例えば、治療上有効な量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）または医薬組成物または免疫複合体は、被験体において免疫応答を回復させる、増強する、刺激するまたは増大させる。
【０２１０】
他の態様では、本発明は、被験体において腫瘍（例えば、癌）を予防または治療するための方法に関し、その方法は、被験体に有効量の本明細書に開示される抗体分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）または医薬組成物または免疫複合体を投与することを含んでなる。いくつかの実施態様では、腫瘍は、免疫回避腫瘍(tumor immune escape)である。好ましくは、腫瘍は、消化管腫瘍（例えば、癌）、例えば、結腸癌である。
【０２１１】
他の態様では、本発明は、被験体において感染性疾患を予防または治療するための方法に関し、その方法は、被験体に有効量の本明細書に開示される抗体分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）または医薬組成物または免疫複合体を投与することを含んでなる。一つの実施態様では、感染性疾患は慢性感染症である。
【０２１２】
他の態様では、本発明は、被験体において抗体依存性細胞媒介細胞傷害を誘導するための方法に関し、その方法は、被験体に有効量の本明細書に開示される抗体分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）または医薬組成物または免疫複合体を投与することを含んでなる。
【０２１３】
被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、好ましくは、高等霊長類、例えば、ヒト（例えば、本明細書に記載の疾患を有するまたは有するリスクのある患者）であり得る。一つの実施態様では、被験体は、免疫応答の増強を必要とする。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、Ｔ細胞増殖を促進する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、被験体において抗原特異的Ｔ細胞応答を、例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答におけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の生産を回復させる、促進する、または刺激する。いくつかの実施態様では、免疫応答は、抗腫瘍応答である。一つの実施態様では、被験体は、本明細書に記載の疾患（例えば、本明細書に記載の腫瘍または感染性疾患）を有するか、または有するリスクがある。特定の実施態様では、被験体は免疫不全であるか、または免疫不全のリスクがある。例えば、被験体は、化学療法および／または放射線療法を受けているか、または受けていた。あるいは、または組み合わせて、被験体は、感染による免疫不全であるか、または感染による免疫不全であるリスクがある。
【０２１４】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の腫瘍、例えば、癌としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液性癌、軟組織腫瘍、および転移病巣が含まれる。
【０２１５】
固形腫瘍の例としては、種々の器官系の悪性腫瘍、例えば、肉腫および癌腫（腺癌および扁平上皮癌を含む）、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、消化管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎臓および膀胱上皮細胞）、前立腺、および咽頭を侵す癌腫が含まれる。腺癌としては、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌の非小細胞癌、小腸癌、および食道癌などの悪性腫瘍が含まれる。扁平上皮癌としては、肺、食道、皮膚、頭頸部領域、口腔、肛門、および子宮頸の癌腫などの悪性腫瘍が含まれる。一つの実施態様では、癌は、黒色腫、例えば、進行性黒色腫である。一つの実施態様では、癌は、結腸癌などの消化管癌である。上記の癌腫の転移病巣もまた、本発明の方法および組成物を使用することによって治療または予防することができる。
【０２１６】
治療される好ましい癌の限定されない例としては、リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、乳癌（例えば、転移性乳癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例えば、ステージＩＶもしくは再発性非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ腺癌、またはＮＳＣＬＣ扁平上皮癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、ステージＩＩＩもしくはＩＶ黒色腫）またはメルケル細胞癌腫）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、骨髄異形成症候群、膀胱癌（例えば、移行上皮癌）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌、例えば、明細胞腎細胞癌、例えば、進行性または転移性明細胞腎細胞癌）、および結腸癌が含まれる。加えて、難治性または再発性悪性腫瘍は、本明細書に記載の抗体分子を使用することによって治療することができる。
【０２１７】
治療可能な他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部または頸部癌、皮膚または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃食道癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、メルケル細胞癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、および慢性リンパ球性白血病を含む）、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、腎臓または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、軸椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、および環境誘発癌（アスベストにより誘発される癌、例えば、中皮腫を含む）、ならびにそれらの組合せが含まれる。
【０２１８】
転移性癌、例えば、ＰＤ−Ｌ１を発現する転移性癌の治療(Iwai et al., (2005) Int. Immunol. 17:133-144)は、本明細書に記載の抗体分子を使用することによって実施され得る。
【０２１９】
免疫回避腫瘍(tumor immune escape)もまた、本明細書に記載の抗体分子を使用することによって治療可能である。
【０２２０】
一つの実施態様では、腫瘍は、高レベルのＰＤ−Ｌ１を発現する癌である。
【０２２１】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の癌は、結腸癌およびその転移性癌である。
【０２２２】
いくつかの実施態様では、感染は、急性または慢性である。いくつかの実施態様では、慢性感染は、持続的感染、潜在感染または遅発性感染である。いくつかの実施態様では、慢性感染は、細菌、ウイルス、真菌、および原虫からなる群から選択される病原体により引き起こされる。
【０２２３】
いくつかの実施態様では、病原体は細菌である。一つの実施態様では、細菌は、マイコバクテリア種(Mycobacterium spp.)、サルモネラ種(Salmonella spp.)、リステリア種(Listeria spp.)、連鎖球菌種(Streptococcus spp.)、ヘモフィルス種(Haemophilus spp.)、ナイセリア種(Neisseria spp.)、クレブシエラ種(Klebsiella spp.)、ボレリア種(Borrelia spp.)、バクテロイデス・フラジリス(Bacterioides fragilis)、トレポネーマ種(Treponema spp.)、およびヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter pylori)からなる群から選択される。
【０２２４】
いくつかの実施態様では、病原体はウイルスである。一つの実施態様では、ウイルスは、感染性ウイルス、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルス（ＨＢＶまたはＨＣＶ）、単純ヘルペスウイルスＩまたはＩＩ、ヒト免疫不全ウイルスＩまたはＩＩ、サイトメガウイルス(cytomegavirus)、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒトＴリンパ球向性白血病ウイルスＩまたはＩＩ、および水痘帯状疱疹ウイルスからなる群から選択される。
【０２２５】
いくつかの実施態様では、病原体は真菌である。一つの実施態様では、真菌誘発障害は、アスペルギルス症(aspergilosis)、ブラストミセス症、カンジダ症(candidiasis albicans)、コクシジオイデス症(coccidioiodmycosis immitis)、ヒストプラスマ症、パラコクシジオイデス症、および微胞子虫類症からなる群から選択される。
【０２２６】
いくつかの実施態様では、病原体は、寄生虫などの原虫である。一つの実施態様では、原生生物により引き起こされる障害は、リーシュマニア症、プラスモディウム症（すなわち、マラリア）、クリプトスポリジウム症、トキソプラスマ症、トリパノソーマ症、および蠕虫感染（吸虫（例えば、住血吸虫症）、条虫（例えば、エキノコックス症）および線虫（例えば、旋毛虫症）により引き起こされる疾患、回虫症、フィラリア症ならびに糞線虫症を含む）からなる群から選択される。
【０２２７】
別の実施態様では、感染は、肝炎感染、例えば、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎感染である。抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、治療上有利なようにＢ型肝炎感染またはＣ型肝炎感染に対する従来の治療と組み合わせてもよい。特定の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、Ｂ型肝炎抗原（例えば、Ｅｎｇｅｒｉｘ  Ｂ）またはワクチンと組み合わせて、また場合によりアルミニウム含有アジュバントと組み合わせて投与される。
【０２２８】
別の実施態様では、感染性疾患はインフルエンザである。特定の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、インフルエンザ抗原またはワクチンと組み合わせて投与される。
【０２２９】
本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントを用いた予防または治療に好適な疾患は、さらにＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１６／０６１１４２、ＵＳ６０／６９６４２６、ＷＯ２０１６／００７２３５またはＵＳ６１／２６４０６１に見出すことができる。
【０２３０】
他の態様において、本発明は、上記の関連疾患または病態の予防または治療のための薬物の製造または調製における抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントまたはその免疫複合体の使用を提供する。
【０２３１】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体または抗体フラグメントまたは免疫複合体は、病態および／またはそれらの病態に関連する症状の発症を遅延させる。
【０２３２】
併用療法
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の予防または治療方法は、被験体または個体に、本明細書に開示される抗体分子（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくはそのフラグメント）または医薬組成物もしくは免疫複合体を１以上の他の療法、例えば、治療法および／または他の治療薬と組み合わせて投与することをさらに含んでなる。
【０２３３】
いくつかの実施態様では、治療法としては、手術（例えば、腫瘍切除）、放射線療法（例えば、照射領域が設計される三次元原体放射線療法を含む体外照射療法）、部分照射（例えば、予め選択された標的または器官に向けられる照射）、集束照射などが含まれる。集束照射は、定位放射線手術、定位分割放射線手術、および強度変調放射線療法からなる群から選択され得る。集束照射は、例えば、ＷＯ２０１２／１７７６２４に記載されるように、粒子ビーム（陽子）、コバルト−６０（光子）、および線形加速器（Ｘ線）からなる群から選択される放射線源を備え得る。
【０２３４】
放射線療法は、限定されるものではないが、体外照射療法、体内放射線療法、組織内照射、定位放射線手術、全身放射線療法、放射線療法および永久または一過性組織内小線源療法を含む方法の１つまたは組合せによって行うことができる。用語「小線源療法」は、腫瘍または他の増殖性組織疾患の部位またはその付近の身体に挿入された空間的に閉じ込められた放射性物質により送達される放射線療法を指す。この用語は、限定されるものではないが、放射性同位元素（例えば、Ａｔ−２１１、Ｉ−１３１、Ｉ−１２５、Ｙ−９０、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｓｍ−１５３、Ｂｉ−２１２、Ｐ−３２、およびＬｕの放射性同位元素）への曝露を含むことを意図する。好適な線源には、固体および液体が含まれる。限定されない例として、線源は、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｙｂ−１６９および固体源としてのＩｒ−１９２、固体源としてのＩ−１２５などの放射性核種、または光子、β粒子、γ線もしくは他の治療用光線を発する他の放射性核種であり得る。放射性物質はまた任意の放射性核種溶液、例えば、Ｉ−１２５もしくはＩ−１３１溶液から作製された流体であってもよく、または放射性流体は、固体放射性核種（例えば、Ａｕ−１９８およびＹ−９０）の小粒子を含有する好適な流体のスラリーを使用することにより生産することもできる。加えて、放射性核種は、ゲルまたは放射性ミクロスフェア内に封入されていてもよい。
【０２３５】
いくつかの実施態様では、治療薬は、化学療法薬、細胞傷害性薬剤、ワクチン、他の抗体、抗感染活性薬、および免疫調節剤（例えば、共刺激分子活性化剤または免疫チェックポイント分子阻害剤）からなる群から選択される。
【０２３６】
例示的細胞傷害性薬剤としては、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、インターカレート剤、シグナル伝達経路に干渉し得る活性薬、有効アポトーシス剤、プロテアソーム阻害剤、および照射（例えば、部分的または全身照射（例えば、γ線））が含まれる。
【０２３７】
他の例示的抗体としては、限定されるものではないが、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＴＩＭ−３、抗ＣＥＡＣＡＭまたは抗ＬＡＧ−３）、免疫細胞を刺激する抗体（例えば、作動性ＧＩＴＲ抗体またはＣＤ１３７抗体）、抗癌抗体（例えば、リツキシマブ（リツキサン（登録商標）またはマブセラ（登録商標））、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、トシツモマブ（ベキサール（登録商標））、イブリツモマブ（ゼヴァリン（登録商標））、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標））、エピラツズマブ（リンホシド（登録商標））、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））などが含まれる。
【０２３８】
例示的化学療法薬としては、限定されるものではないが、アナストロゾール（アリミテックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（ベレノキサン（登録商標））、ブスルファン（ミレラン（登録商標））、ブスルファン注射剤（ブスルフェックス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４−ペンチルオキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（パラパラチン(Parapalatin)（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（プラチノール（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）またはネオサール（登録商標））、シトシンアラビノシド、シトシンアラビノシド（シトサール−Ｕ（登録商標））、デポシト（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤおよびコスメガン）、塩酸ダウノマイシン（セルビジン（登録商標））、クエン酸ダウノマイシンリポソーム注射剤（ダウノキソム（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）およびルベックス（登録商標））、エトポシド（ベペシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５−フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）およびエフデックス（登録商標））、フルタミド（エウレキシン（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ヒドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（カンプトサール（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ホリナートカルシウム、メルファラン（アルクラン（登録商標））、６−メルカプトプリン（プリントール（登録商標））、メトトレキサート（フォレックス（登録商標））、ミトキサントロン、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（マイロターグ）、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０とカルムスチンインプラント（グリアデル（登録商標））の組合せ、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（ブモン（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（チラゾリン（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（ベルバン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、ビノレルビン、イブルチニブ、ザイデリグ（イデラリシブ）およびブレンツキシマブベドチンが含まれる。
【０２３９】
例示的ワクチンとしては、限定されるものではないが、癌ワクチンである。ワクチンは、ＤＮＡに基づくワクチン、ＲＮＡに基づくワクチンまたはウイルス形質導入に基づくワクチンであり得る。癌ワクチンは、予防的であっても治療的であってもよい。いくつかの実施態様では、癌ワクチンは、ペプチド癌ワクチンであり、いくつかの実施態様では、これは個別化ペプチドワクチンである。いくつかの実施態様では、ペプチド癌ワクチンは、多価長鎖ペプチド、多重ペプチド、ペプチド混合物、ハイブリッドペプチド、またはペプチドパルス樹状細胞ワクチンである（例えば、Yamada et al., Cancer Sci, 104:14-21, 2013参照）。
【０２４０】
例示的活性抗感染薬としては、限定されるものではないが、上記のように、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬および抗菌薬、例えば、ヌクレオシド類似体（ジドブジン（ＡＳＴ）、ガンシクロビル、ホスカルネット、またはシドビル）が含まれる。
【０２４１】
免疫調節剤としては、免疫チェックポイント分子阻害剤および共刺激分子活性化剤が含まれる。
【０２４２】
いくつかの実施態様では、免疫チェックポイント分子阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、−３、および／または−５）、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４および／またはＴＧＦＲβの阻害剤である。この分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質レベルで起こり得る。いくつかの実施態様では、免疫チェックポイント分子の発現を阻害するために阻害核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）を使用することができる。他の実施態様では、免疫チェックポイント分子阻害剤は、可溶性リガンド（例えば、ＰＤ−１−ＩｇもしくはＣＴＬＡ−４Ｉｇ）、または抗体もしくはその抗原結合フラグメント、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、−３、および／もしくは−５）、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／もしくはＴＧＦＲβまたはそれらの組合せに結合する抗体またはそのフラグメントなどの、免疫チェックポイント分子と結合するポリペプチドである。他の実施態様では、免疫調節剤は、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、−３および／または−５）（例えば、ヒトＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、−３および／または−５））の阻害剤である。他の実施態様では、免疫調節剤は、ＬＡＧ−３（例えば、ヒトＬＡＧ−３）の阻害剤である。一つの実施態様では、ＬＡＧ−３の阻害剤は、ＬＡＧ−３に対する抗体分子、例えば、ヒトに結合する抗ＬＡＧ−３抗体であり、好ましくは、抗ＬＡＧ−３抗体はヒト化されている。他の実施態様では、免疫調節剤は、ＴＩＭ−３（例えば、ヒトＴＩＭ−３）の阻害剤である。一つの実施態様では、ＴＩＭ−３の阻害剤は、ＴＩＭ−３に対する抗体分子である。
【０２４３】
いくつかの実施態様では、免疫調節剤は、共刺激分子活性化剤または作動剤である。一つの実施態様では、共刺激分子作動剤は、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、またはＣＤ８３リガンドからなる群から選択される分子の作動剤（例えば、作動抗体またはその抗原結合フラグメント、または可溶性融合物）である。他の実施態様では、免疫調節剤は、ＧＩＴＲ作動剤である。一つの実施態様では、ＧＩＴＲ作動剤は、ＧＩＴＲに対する抗体分子である。他の実施態様では、免疫調節剤は、ＯＸ４０作動剤である。一つの実施態様では、ＯＸ４０作動剤は、ＯＸ４０に対する抗体分子である。
【０２４４】
いくつかのさらなる実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントはまた、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と組み合わせて使用することができる。例示的チロシンキナーゼ阻害剤としては、限定されるものではないが、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤、例えば、ＶＥＧＦＲ−１阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２阻害剤、およびＶＥＧＦＲ−３阻害剤）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤、例えば、ＰＤＧＦＲ−β阻害剤）、ＲＡＦ−１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤、およびＲＥＴ阻害剤が含まれる。
【０２４５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントはまた、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、および／またはＪＡＫ２阻害剤などと組み合わせて使用することができる。
【０２４６】
本発明の方法のいずれかのいくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントの投与が、抗原の投与と組み合わせられる。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または病原体由来の抗原であり得る。いくつかの実施態様では、腫瘍抗原は、タンパク質を含んでなる。いくつかの実施態様では、腫瘍抗原は、核酸を含んでなる。いくつかの実施態様では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞である。
【０２４７】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球またはＣＴＬ）の養子免疫細胞移入を含んでなる療法と組み合わせて投与することができる。
【０２４８】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、抗腫瘍薬剤と組み合わせて投与することができる。
【０２４９】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞で選択的に増幅し、癌細胞死を誘発するか、または癌細胞の成長を遅延させることができる。いくつかの場合では、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞には影響がないか、もしくは影響が最小である。腫瘍溶解性ウイルスとしては、限定されるものではないが、腫瘍退縮アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、または腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、または腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））が含まれる。いくつかの実施態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、ＵＳ２０１０／０１７８６８４Ａ１に記載のウイルス、例えば、組換え腫瘍溶解性ウイルスである。
【０２５０】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはそのフラグメントは、サイトカインと組み合わせて投与することができる。
【０２５１】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、限定されるものではないが、（ｉ）癌細胞を死滅させ、腫瘍を減らすための放射線療法（例えば、放射線療法、Ｘ線療法および照射）または電磁放射線（ここでは、放射線療法は、外部照射療法（ＥＢＲＴ）または内部小線源療法によって行うことができる）；（ｉｉ）一般に急速に分裂している細胞に影響を及ぼす化学療法、または細胞傷害性薬剤の適用；（ｉｉｉ）癌細胞のタンパク質の脱調節に特異的に影響を及ぼす標的化療法、または薬剤（例えば、イマチニブおよびゲフィチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤；モノクローナル抗体；光線力学療法）；（ｉｖ）免疫療法、または宿主の免疫応答の増強（例えば、ワクチン）；（ｖ）ホルモン療法、またはホルモンの遮断（例えば、腫瘍がホルモン感受性である場合）；（ｖｉ）血管新生阻害剤、または血管新生および成長を遮断する療法；および（ｖｉｉ）緩和医療、または疼痛、悪心、嘔吐、下痢、および出血を管理するための健康管理の質の向上に関連する療法（ここでは、より積極的な治療計画を可能とするためにモルヒネおよびオキシコドンなどの鎮痛薬ならびにオンダンセトロンおよびアプレピタントなどの抗催吐薬が投与される）を含む、当技術分野の慣例の癌療法と組み合わせることができる。
【０２５２】
いくつかの実施態様では、本発明の抗体またはそのフラグメントは、宿主の免疫機能を増強する常法と組み合わせることができる。その常法としては、限定されるものではないが、（ｉ）例えば、（ａ）異種のＭＨＣ同種抗原をコードするＤＮＡを腫瘍に注射すること、または（ｂ）生検腫瘍細胞を免疫抗原認識（例えば、免疫刺激性サイトカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、共刺激分子Ｂ７．１、および共刺激分子Ｂ７．２）の可能性を高める遺伝子でトランスフェクトすることによるＡＰＣの増強、（ｉｉ）養子細胞免疫療法、または活性化腫瘍特異的Ｔ細胞療法が含まれる。養子細胞免疫療法は、腫瘍浸潤宿主Ｔリンパ球を単離すること、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、ＩＬ−２または腫瘍またはその両方を介してその集団の拡大増殖を刺激することを含み；加えて、単離された機能不全Ｔ細胞を本発明の抗体のｉｎ−ｖｉｔｒｏ適用によって活性化し、次いで、活性化されたＴ細胞を宿主に再投与することができる。
【０２５３】
上記の様々な併用療法を治療のためにさらに組み合わせることができる。
【０２５４】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体と他の治療法または治療薬の組合せのさらなる例は、ＷＯ２０１６／０６１１４２、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＵＳ６０／６９６４２６、ＵＳ６１／２６４０６１、ＷＯ２０１６／００７２３５などに見出せる。
【０２５５】
このような併用療法は、併用投与（２種類以上の治療薬が同じ処方物または別の処方物に含有される）と個別投与（本発明の抗体の投与は、他の療法、例えば、治療法または治療薬の投与の前、投与と同時、および／または投与の後に行うことができる）の両方を包含する。抗体分子および／または他の療法、例えば、治療薬または治療法は、活動性疾患期または寛解もしくは低活動性疾患期に投与することができる。抗体分子は、他の療法の前に、他の療法と同時に、他の療法の後に、または疾患の寛解期に投与してよい。
【０２５６】
一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与と他の療法（治療法または治療薬）の投与は、互いに約１か月以内、または約１週間、２週間、もしくは３週間以内、または約１日、２日、３日、４日、５日または６日以内に行う。
【０２５７】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体の組合せは、個別に（例えば、別の抗体として）または連結して（例えば、二重特異性または三重特異性抗体分子として）投与することができる。
【０２５８】
いずれの療法も抗ＰＤ−Ｌ１抗体の代わりにまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体に加えて本発明の免疫複合体を使用することによって実施可能なことが認識されるであろう。
【０２５９】
抗ＬＡＧ−３抗体との併用療法
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、抗ＬＡＧ−３抗体と組み合わせて治療に使用され得る。
【０２６０】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体は、抗ヒトＬＡＧ−３抗体である。いくつかの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ２抗体またはＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＬＡＧ−３抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＬＡＧ−３抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施態様では、抗ＬＡＧ−３抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＬＡＧ−３抗体のフレームワーク配列の少なくとも一部が、ヒトコンセンサスフレームワーク配列である。一つの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体はまた、その抗体フラグメント、好ましくは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、一本鎖可変フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）または（Ｆａｂ’）２、シングルドメイン抗体、ダイアボディ（ｄＡｂ）、または直鎖抗体からなる群から選択される抗体フラグメントも含んでなる。
【０２６１】
いくつかの特定の実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号７５で示される重鎖可変領域の３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲｓ）、および／または
（ｉｉ）配列番号７６で示される軽鎖可変領域の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲｓ）
を含んでなる。
【０２６２】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなり、ここで、
（ｉ）ＶＨは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含んでなり、ＨＣＤＲ１は、配列番号６９のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；ＨＣＤＲ２は、配列番号７０から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなり；ＨＣＤＲ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；かつ／または
（ｉｉ）ＶＬは、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり、ＬＣＤＲ１は、配列番号７２のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；ＬＣＤＲ２は、配列番号７３のアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなり；ＬＣＤＲ３は、配列番号７４から選択されるアミノ酸配列を含んでなるか、もしくはそのアミノ酸配列からなる。
【０２６３】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域ＶＨおよび／または軽鎖可変領域ＶＬを含んでなり、ここで、
（ａ）重鎖可変領域ＶＨは、
（ｉ）配列番号７５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなりもしくはからなるか、
（ｉｉ）配列番号７５から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、または
（ｉｉｉ）配列番号７５から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２もしくは１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、ＣＤＲ内には存在せず；かつ／あるいは
（ｂ）軽鎖可変領域ＶＬは、
（ｉ）配列番号７６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、
（ｉｉ）配列番号７６から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、または
（ｉｉｉ）配列番号７６から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２もしくは１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、ＣＤＲ内には存在しない。
【０２６４】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖および／または軽鎖を含んでなり、ここで、
（ａ）重鎖は、
（ｉ）配列番号７７から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、
（ｉｉ）配列番号７７から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、または
（ｉｉｉ）配列番号７７から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも２０もしくは１０個、より好ましくは多くとも５、４、３、２または１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、重鎖のＣＤＲ内には存在せず、より好ましくは、これらのアミノ酸変異は、重鎖可変領域には存在せず；かつ／あるいは
（ｂ）軽鎖は、
（ｉ）配列番号７８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、
（ｉｉ）配列番号７８から選択されるアミノ酸配列を含んでなるもしくはからなるか、または
（ｉｉｉ）配列番号７８から選択されるアミノ酸配列に比べ、１個以上（好ましくは多くとも２０または１０、より好ましくは多くとも５、４、３、２もしくは１個）のアミノ酸変異（好ましくは、アミノ酸置換、より好ましくは、アミノ酸保存的置換）を有するアミノ酸配列を含んでなり、好ましくは、これらのアミノ酸変異は、軽鎖のＣＤＲ内には存在せず、より好ましくは、これらのアミノ酸変異は、軽鎖可変領域には存在しない。
【０２６５】
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体の修飾はまた、抗ＬＡＧ−３抗体にも当てはまる。
【０２６６】
投与経路および用量
本発明の抗体（またはその抗体もしくは他のいずれかの治療薬を含有する医薬組成物または免疫複合体）は、局所治療に必要とされる場合、非経口投与、肺内投与、鼻腔内投与、および病巣内投与を含むいずれの好適な手段によって投与してもよい。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。薬物は、短期治療または長期治療に応じてある程度まで、注射、例えば、静脈内または皮下注射などのいずれの好適な手段によって投与してもよい。本明細書では様々な投与計画が企図され、限定されるものではないが、単回投与または複数時点での複数回投与、ボーラス注射、およびパルス注入が含まれる。
【０２６７】
疾患を予防または治療するために、本発明の抗体の適当な用量（単独でまたは１種類以上の他の治療薬と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、抗体のタイプ、疾患の重症度および進行、抗体が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、過去の治療、患者の臨床歴および抗体に対する応答、ならびに主治医の判断によって異なる。抗体は、単回用量または一連の処置で患者に適宜投与される。
【０２６８】
いくつかの実施態様では、投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラス注射を施してもよいし、数回の個別用量を経時的に投与してもよいし、または用量は、治療病態の重症度により示されるように比例的に増減することができる。用量投与の容易さおよび均一性のために非経口組成物は単位剤形に処方することが特に有利である。単位剤形は、本明細書で使用する場合、治療される被験体に単位用量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせて所望の治療効果を生じるように計算された所定量の有効化合物を含有する。本発明の単位剤形の詳細は、（ａ）有効化合物に特有の特徴および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における高感度療法(sensitive therapy)のために有効化合物を組み合わせる分野に特有の制限に直接的に依存する。
【０２６９】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子の用量および計画は、当業者により決定可能である。特定の実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で注射により（例えば、皮下または静脈内に）投与される。投与計画は、例えば、週１回〜２、３、または４週間毎に１回の範囲であり得る。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週に投与される。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、隔週、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約４ｍｇ／ｋｇ以下、約３ｍｇ／ｋｇ以下、約２ｍｇ／ｋｇ以下、または約１ｍｇ／ｋｇ以下の用量で、単独または組み合わせて（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体分子と組み合わせて）投与される。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、隔週約１〜５ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週約１〜４ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週約１〜３ｍｇ／ｋｇの用量で、または隔週約１〜２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、単独でまたは組み合わせて（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体分子と組み合わせて）、隔週約１〜５ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週約１〜４ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週約１〜３ｍｇ／ｋｇの用量で、または隔週１〜２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０２７０】
診断および検出のための方法および組成物
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントはいずれも、生体サンプルにおいてＰＤ−Ｌ１の存在の検出のために使用され得る。用語「検出」には、本明細書で使用する場合、定量的または定性的検出が含まれ、例示的検出は、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）、抗体分子と複合体を形成した磁性ビーズ、ＥＬＩＳＡ、およびＰＣＲ技術（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）を含み得る。いくつかの実施態様では、生体サンプルは、血液、血清、または生物起源の他の流体サンプルである。特定の実施態様では、生体サンプルは、細胞または組織を含む。いくつかの実施態様では、生体サンプルは、増殖病巣または癌性病巣に由来する。
【０２７１】
一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、診断法または検出法で使用するために提供される。他の態様では、生体サンプルにおけるＰＤ−Ｌ１の存在を検出するための方法が提供される。特定の実施態様では、この方法は、生体サンプルにおいてＰＤ−Ｌ１タンパク質の存在を検出することを含んでなる。特定の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、ヒトＰＤ−Ｌ１である。特定の実施態様では、この方法は、生体サンプルを本明細書に記載されるような抗ＰＤ−Ｌ１抗体と、抗ＰＤ−Ｌ１抗体がＰＤ−Ｌ１に結合することを可能とする条件で接触させること、および抗ＰＤ−Ｌ１抗体とＰＤ−Ｌ１により複合体が形成されるかどうかを検出することを含んでなる。複合体の形成は、ＰＤ−Ｌ１の存在を示す。この方法は、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ法またはｉｎ−ｖｉｖｏ法であり得る。一つの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体による治療に好適な被験体を選択するために使用され、例えば、ＰＤ−Ｌ１は、被験体を選択するためのバイオマーカーである。
【０２７２】
一つの実施態様では、本発明の抗体は、被験体において、癌または腫瘍を診断するため、例えば、本明細書に記載の疾患（例えば、増殖性疾患または癌性疾患）の治療もしくは進行、診断および／または病期分類を評価（例えば、監視）するために使用することができる。特定の実施態様では、標識された抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供される。この標識としては、限定されるものではないが、直接検出される標識または部分（例えば、蛍光標識、発色団標識、電子密度標識、化学発光標識、および放射性標識）ならびに例えば酵素反応または分子相互作用により、酵素またはリガンドなどの、間接的に検出される部分が含まれる。例示的標識としては、限定されるものではないが、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉの放射性同位元素、蛍光団（例えば、レアアースキレートまたはルシフェリンおよびその誘導体）、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ(luceriferaze)［例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）］、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲ）、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、ライセース(lysase)、糖質オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環式オキシダーゼ（例えば、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ）、過酸化水素を利用して色素前駆体を酸化する酵素（例えば、ＨＲ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼ）、ビオチン／アビジン、スピン標識、ファージ標識、安定フリーラジカルなどが含まれる。
【０２７３】
本明細書で提供される本発明のいくつかの実施態様では、サンプルは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体による処置の前に取得される。いくつかの実施態様では、サンプルは、抗癌薬による処置の前に取得される。いくつかの実施態様では、サンプルは、癌が転移した後に取得される。いくつかの実施態様では、サンプルは、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）サンプルである。いくつかの実施態様では、サンプルは、生検（例えば、コア生検）検体、手術検体（例えば、外科的切除からの検体）、または穿刺吸引液である。
【０２７４】
いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、処置の前、例えば、初回処置の前または特定の処置から一定期間後の処置の前に検出される。
【０２７５】
いくつかの実施態様では、腫瘍または感染症を治療するための方法が提供され、その方法は、被験体においてＰＤ−Ｌ１の存在を検出し（例えば、サンプル、例えば、被験体の癌細胞を含有するサンプルを使用）、それにより、ＰＤ−Ｌ１値を決定すること；そのＰＤ−Ｌ１値を対照値と比較すること；およびＰＤ−Ｌ１値が対照値より大きければ、その被験体に、治療上有効な量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体）を、場合により、１以上の他の療法と組み合わせて投与し、それにより、腫瘍または感染症を治療することを含んでなる。
【０２７６】
本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例示的配列
【０２７７】
【表６】
2021508436.tif 000008
2021508436.tif 000009
【表７】
2021508436.tif 000010
2021508436.tif 000011
【表８】
2021508436.tif 000012
2021508436.tif 000013
2021508436.tif 000014
2021508436.tif 000015
2021508436.tif 000016
【表９】
2021508436.tif 000017
【０２７８】
本発明のこれらおよび他の態様および実施態様を図面（図面の簡単な説明の後に続く）および下記の発明の詳細な説明に記載し、下記の実施例で説明する。上記および本願を通じて論じられた特徴のいずれかまたは総ては、本発明の様々な実施態様において組み合わせることができる。下記の実施例により、本発明をさらに説明する。しかしながら、これらの実施例は限定ではなく例示として記載され、様々な改変が当業者によりなされ得ると理解されるべきである。
【実施例】
【０２７９】
実施例１  ハイブリドーマ細胞の作製
ハイブリドーマ技術は、２つの細胞を、両方の主な特徴を維持しつつ融合させる方法である。これらの２つの細胞は、抗原で免疫したマウス脾細胞とマウス骨髄腫細胞を指す。特定の抗原で免疫したマウス脾細胞（Ｂリンパ球）は抗体分泌機能の特徴を持つが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで継代培養することができない。マウス骨髄腫細胞は、培養条件で無限に分裂および増殖することができ、すなわち、いわゆる不死化されている。選択培地の作用において、骨髄腫細胞とＢ細胞を融合させることによって形成されたハイブリッド細胞のみが継代培養能を持ち得、抗体分泌機能と不死化の両方を有する細胞クローンが形成される。ある実験では、マウスをｈＰＤ−Ｌ１タンパク質で免疫し、マウスの脾細胞および骨髄腫細胞を取得し、融合させ、これにより、陽性抗体発現能を有するハイブリドーマ細胞が得られた。
【０２８０】
ハイブリドーマの融合
【０２８１】
【表１０】
2021508436.tif 000018
【０２８２】
エレクトロポレーションの準備：  ディッシュを７０％エタノールに十分に浸し、使用のためにウルトラクリーンベンチ内で乾燥させた。
【０２８３】
脾細胞の単離：  マウスを頚椎脱臼により犠牲にし、７５％アルコールで５分間殺菌し、すぐに、ウルトラクリーンベンチ内マウス解剖プレートに左側臥位で置き、マウスの四肢を７番針で固定し；脾臓は、無菌的に腹腔を開口した後に摘出し、次いで、基本培地（下表に従って作製）で洗浄した。周囲の結合組織を注意深く除去した。次に、脾臓を、基本培地を含有する別のディッシュに移し；脾臓をエルボーニードルで押さえつけ、小ニードルで穿孔した後、鉗子で圧力をかけ、脾細胞を完全に放出させて脾細胞懸濁液を得；１００μＭセルストレーナーで濾過した後に、細胞懸濁液を３０ｍＬの基本培地で１回洗浄し、１２００ｒｐｍで６分間遠心分離した。
【０２８４】
【表１１】
2021508436.tif 000019
【０２８５】
赤血球の溶解：  上清を廃棄し、細胞を１０ｍＬのＲＢＣ溶解バッファー（ＧＩＢＣＯ）に再懸濁させた。次に、２０ｍＬのＲＢＣ溶解バッファーを加え；懸濁液を５分間静置し、１１００ｒｐｍで６分間遠心分離した。上清を除去した後、細胞を１０ｍＬの基本培地に再懸濁させた。次に、３０ｍＬの基本培地を加え、細胞を１１００ｒｐｍで６分間遠心分離し；上清を除去した後、細胞を２０ｍＬの基本培地に再懸濁させ、計数した。
【０２８６】
エレクトロポレーション：  ＳＰ２／０細胞（マウス骨髄腫細胞）（ＡＴＣＣ）を２０ｍＬの基本培地に再懸濁させ、計数し；ＳＰ２／０細胞と脾細胞を１：２〜１：１の比で混合し、１００ｒｐｍで６分間遠心分離し；上清を除去した後、混合した細胞を１０ｍＬの融合バッファー（ＢＴＸｐｒｅｓｓ）に再懸濁させ；次いで、１５ｍＬの融合バッファーを加え、この混合物を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を廃棄し；上記の工程を繰り返した後、細胞を適当な量の融合バッファー溶液に再懸濁させ、混合細胞密度を１×１０７細胞／ｍＬに調整した。エレクトロポレーション装置の設定は下記の通りとした。エレクトロポレーションのために、２ｍＬの細胞懸濁液を各ディッシュに加えた。
【０２８７】
【表１２】
2021508436.tif 000020
【０２８８】
融合後の播種：  細胞をディッシュ内で室温にて５分置き；細胞を遠沈管に移し、選択培地（下表に従って作製）で希釈して１〜２×１０４細胞／ｍＬとした。１００μＬの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。融合７日後に選択培地を交換した。細胞をインキュベーション１０日目（または細胞の増殖状態によってそれ以降）にスクリーニングした。特異的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体を発現するハイブリドーマ細胞を、ＦＡＣＳ［ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）］により選択した。
【０２８９】
【表１３】
2021508436.tif 000021
【０２９０】
陽性ハイブリドーマ細胞のサブクローニング
サブクローニング：  ２００μＬの上記基本培地を９６ウェルプレートの第２列〜第８列の各ウェルに加え；選択された陽性ウェルからの細胞を用いて懸濁液を作製し、第１列に加え；第１列の１００μＬの細胞懸濁液を第２列に移し、ウェルを混合した後に１００μＬの混合物を次の列に移した。上記の工程を最終列に３００μＬの混合物が得られるまで繰り返した。１５分間静置した後、細胞を顕微鏡下で計数した。２００μＬの各ウェルに混合および播種するために、約１００細胞を含有する相当容量を２０ｍＬの上記基本培地に加えた。１週間後、細胞を顕微鏡下で観察した。モノクローナルウェルをマークし、陽性ウェルを検出した。
【０２９１】
細胞の凍結保存：  細胞の状態を監視した。９０％を超える生存率を有する増殖ウェルを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を廃棄し；細胞を、凍結保存剤（４５．５％のＦＢＳ、４４．５％のＲＰＭＩ−１６４０および１０％のＤＭＳＯ）を用い、１×１０７細胞／ｍＬとなるように再懸濁させ、凍結保存管に分注し、プログラム冷却容器に入れ、−８０℃で低温保存した。
【０２９２】
実施例２  キメラ抗体の作製および精製
分子バイオテクロノジーを用い、本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１陽性ハイブリドーマ細胞内に抗体配列を作出し、その抗体配列を用いてヒト−マウスキメラ抗体を構築する。
【０２９３】
ハイブリドーマの配列決定
ＲＮＡ抽出：  新鮮な細胞を３００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。５００μＬのＬＹバッファー（Ｂｉｏｍｉｇａ）（使用前１ｍＬ当たり２０μＬのβメルカプトエタノール）を沈降物に加え、透明になるまで振盪した。この混合物を遠沈管に移し、１３０００ｒｐｍで２分間遠心分離した。フロースルーを回収した。１００％エタノールをこのフロースルーに１／２比で加え、この流体を透明な溶液が得られるまで５分間混合した。この透明な溶液をＲＮＡコレクションチューブに加え、１３０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、液体部分を廃棄した。５００μＬの再生バッファー（Ｔａｋａｒａ）を加え、この混合物を１３０００ｒｐｍで３０秒間遠心分離し、５００μＬのＲＮＡ洗浄バッファー（Ｂｉｏｍｉｇａ）（エタノールは使用前に添加）を加えた後にさらに３０秒間遠心分離した。上記の工程を繰り返した後に遠心分離し、エタノールを完全に除去するために蒸発させた。コレクションカラムは３０μＬのＤＥＰＣ処理水で予め処理し、この混合物を１２０００ｇで２分間遠心分離し、溶出液を回収した。ＲＮＡ濃度を測定した。
【０２９４】
逆転写によるｃＤＮＡの作製：
反応システムＩは次のように構成した。
【０２９５】
【表１４】
2021508436.tif 000022
【０２９６】
６５℃で５分間のインキュベーション後に、その系を氷上で急速冷却し；反応系Ｉに下記の逆転写系を総量２０μＬで加えた。
【０２９７】
【表１５】
2021508436.tif 000023
【０２９８】
緩慢混合した後、４２℃で６０分→９５℃で５分という条件で逆転写を誘発した。次に、この混合物を氷上で冷却した後にｃＤＮＡを回収した。
【０２９９】
ｃＤＮＡとＴベクターの接続：
重鎖可変領域および軽鎖可変領域をＰＣＲによりそれぞれ増幅した。ＰＣＲ反応系は下記の成分を含んでなった。
【０３００】
【表１６】
2021508436.tif 000024
【０３０１】
ＰＣＲ反応条件は次の通りとした。
【表１７】
2021508436.tif 000025
【０３０２】
０．５μＬのｐＭＤ２０−Ｔベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）および５μＬのＬｉｇａｔｉｏｐｎ  Ｍｉｇｈｔｙ  Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ）をＰＣＲ反応からのＰＣＲ産物４．５μＬに加えた。この混合物を穏やかに混合し、３７℃で２時間インキュベートして連結産物を得た。
【０３０３】
細胞の形質転換：
ＴＯＰ１０コンピテント細胞［Ｔｉａｎｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  （Ｂｅｉｊｉｎｇ）  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．］を−８０℃から取り出し、氷上で解凍した。得られた連結産物５μＬを解凍したＴＯＰ１０コンピテント細胞に加えた。この混合物を振盪し、氷上で３０分間インキュベートした。４２℃で９０秒の熱ショックの後に、得られた混合物を氷上で２分急速冷却した。９００μＬのＬＢ培養培地［Ｓａｎｇｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  （Ｓｈａｎｇｈａｉ）  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．］をＥＰ管に加え、この混合物を３７℃にて、２２０ｒｐｍのシェーカー上で１時間インキュベートした。細菌を３０００ｇで２分間遠心分離した。８００μＬの上清を除去し、アンピシリンプレートでのインキュベーションのために細菌を残った培地に再懸濁させた。細菌を一晩３７℃でインキュベートした。配列決定のためにクローンを分離した。
【０３０４】
キメラ抗体の構築
実施例１のハイブリドーマから作製されたマウス抗ＰＤ−Ｌ１抗体の、配列決定済みのＶＨおよびＶＬ領域をＰＣＲにより増幅した：上流および下流プライマーの配列を表５および６に示す。
【０３０５】
【表１８】
2021508436.tif 000026
【０３０６】
成分を比に応じて混合した後、得られたプライマーミックス１を続いてのＶＨ  ＰＣＲ増幅に使用した。
【０３０７】
【表１９】
2021508436.tif 000027
2021508436.tif 000028
【０３０８】
成分を比に応じて混合した後、得られたプライマーミックス２を続いてのＶＬ  ＰＣＲ増幅に使用した。
【０３０９】
ＰＣＲ系は次の通りとした。
【０３１０】
【表２０】
2021508436.tif 000029
【０３１１】
ＰＣＲ増幅産物を回収するためにゲルを切り出した。
【０３１２】
相同組換え：
相同組換え系は次のように構成した。
【０３１３】
【表２１】
2021508436.tif 000030
【０３１４】
３７℃で３０分間のインキュベーションの後、組換え産物を得た。ＴＯＰ１０コンピテント細胞をこの組換え産物により形質転換させ、配列決定のためにモノクローンを分離した。正しい挿入方向でプラスミドを含有するクローンを陽性クローンとして選択し、保有した。
【０３１５】
キメラ抗体の発現および精製
上記で得られた陽性クローンから抗ＰＤ−Ｌ１抗体配列を含有するプラスミドを抽出した。
【０３１６】
２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を所望のトランスフェクション容量に応じて継代培養し、トランスフェクション前日に細胞密度１．５×１０６細胞／ｍＬに調整した。トランスフェクション当日の細胞密度はおよそ３×１０６細胞／ｍＬであった。適当な量のプラスミドをＦ１７培養培地（Ｇｉｂｃｏ、Ａ１３８３５−０１）にトランスフェクションとしての最終容量の１／１０で加え、混合した。適当な量のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、２３９６６）をこの混合物に加え（２９３Ｆ細胞ではプラスミド：ＰＥＩ＝１：３比）、混合し、室温で１０分間インキュベートし、ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物を得た。ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物に再懸濁させた後、３６．５℃、８％ＣＯ２で細胞を導入した。２４時間後、これらの細胞にＦＥＥＤ（Ｓｉｇｍａ）をトランスフェクション容量の２％で添加し、３６．５℃、８％ＣＯ２、１２０ｒｐｍでインキュベートした。継代培養６日目または生存率が６０％を下回るまで継代培養し、細胞を遠心分離し、上清を回収し、精製した。
【０３１７】
精製用の重力カラムを０．５ＭのＮａＯＨで一晩処理した後に１８０℃で４時間乾燥させ、精製カラムとした。ガラス容器は蒸留水で洗浄し、乾燥させた。精製前に、回収した培養物を４５００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、これらの細胞を廃棄した。上清を０．２２μＬのフィルターで濾過した。各チューブに１ｍＬのプロテインＡを充填し、１０ｍＬの結合バッファー（リン酸ナトリウム２０ｍＭ、ＮａＣｌ  １５０ｍＭ、ｐＨ７．０）で平衡化した。濾過した上清を精製カラムに載せ、次いで、１５ｍＬの結合バッファーで再び平衡化した。５ｍＬの溶出バッファー（クエン酸＋クエン酸ナトリウム０．１Ｍ、ｐＨ３．５）を加えた。溶出液を回収し、溶出液１ｍＬ当たり８０μＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌを加えた。回収された抗体のバッファーを限外濾過／ダイアフィルトレーションによりＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、７００１１−０４４）に交換し、濃度を測定した。
【０３１８】
得られた４つの本発明のキメラ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変領域、ならびに軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、ならびにそれらの配列番号は、上記表１〜３に示す。
【０３１９】
本発明で使用した参照抗体はＲｏｃｈｅのＰＤ−Ｌ１抗体アテゾリズマブ（以下、ＡＴＥもしくはＡｔｅと呼称、または商標：テセントリク）であり、そのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変領域、ならびに軽鎖および重鎖のアミノ酸配列も上記表１〜３に示す。
【０３２０】
実施例３  生物学的光干渉法で決定された抗原に対するキメラ抗体の結合動態
本発明の抗体のヒトＰＤ−Ｌ１への結合の平衡解離定数（ＫＤ）を、生物学的光干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で決定した。従来技術のＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性アッセイを行った(Estep, P., et al, High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013.5(2):270-8)。
【０３２１】
実験の３０分前に、サンプルの数に応じて適当な数のＡＭＱ（Ｐａｌｌ、１５０６０９１）センサー（サンプル検出用）またはＡＨＱ（Ｐａｌｌ、１５０２０５１）センサー（陽性対照検出用）をＳＤバッファー（ＰＢＳ  １×、ＢＳＡ  ０．１％、Ｔｗｅｅｎ−２０  ０．０５％）に浸漬した。
【０３２２】
ＳＤバッファー、抗体、および抗原（ヒトＰＤ−Ｌ１、マウスＰＤ−Ｌ１およびカニクイザル(macaca fascicularis)ＰＤ−Ｌ１を含み、総てＡｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入）各１００μＬを９６ウェルブラックポリスチレンハーフエリアマイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、６７５０７６）に加えた。センサーはサンプルの位置に従って配置した。装置の設定は次の通りとした：操作手順は、ベースライン、ローディング約１ｎｍ、ベースライン、会合、および解離とした。各手順の実施時間は、会合および解離の速度に依存した。回転速度は４００ｒｐｍとし、温度は３０℃とした。ＫＤ値はＦｏｒｔｅＢｉｏ分析ソフトウエアにより分析した。
【０３２３】
上記のアッセイで、抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６、および４−４８．５の親和性を表７に示す。
【０３２４】
【表２２】
2021508436.tif 000031
【０３２５】
上記のアッセイで、キメラ抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６、および４−４８．５のＫＤ値はそれぞれ９．８０Ｅ−１０Ｍ、７．５６Ｅ−０９Ｍ、３．８５Ｅ−０９Ｍ、および１．２３Ｅ−０９Ｍであった。本試験の抗体は、参照に比べて同等または優れたＫＤ値を有していた。
【０３２６】
実施例４  キメラ抗体とＰＤ−Ｌ１を過剰発現する細胞の結合アッセイ
この試験では、勾配希釈を行った本発明のキメラ抗体の、細胞表面にヒトＰＤ−Ｌ１を過剰発現した安定なＣＨＯ細胞株への結合を、フローサイトメトリーにより測定した。
【０３２７】
ヒトＰＤ−Ｌ１を過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ＰＤＬ１）は、ＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｋｉｔ、カタログ番号Ａ２９１３３）を、多重クローニング部位（ＭＣＳ）にクローニングされたヒトＰＤ−Ｌ１  ｃＤＮＡ（Ｓｉｎｏ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を保持するｐＣＨＯ１．０ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でトランスフェクトすることによって作製した。
【０３２８】
ＣＨＯ−ＰＤＬ１細胞を計数し、１×１０６細胞／ｍＬに希釈し、Ｕ底９６ウェルプレートの各ウェルに１００μＬ／ウェルで加えた。この懸濁液を４００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。これらのサンプル（キメラ抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６および４−４８．５のそれぞれと陽性対照Ａｔｅ）（これらの抗体は、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳ中５００ｎＭの濃度から８分の１濃度まで、連続的に３倍希釈した）をＵ型プレートに加えた。これらの細胞を１００μＬ／ウェルの容量となるように再懸濁させ、次いで、氷上に３０分間置いた。この懸濁液を４００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。これらの細胞をＰＢＳで１回洗浄した。この混合物を４００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。抗マウス−Ｆａｂに対するＦＩＴＣ標識二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＢＳで１：５００希釈）１００μＬを各ウェルに加え、抗ヒト−Ｆａｂに対するＦＩＴＣ標識二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）１００μＬを、陽性対照抗体を加えた細胞に加えた。細胞を暗所、氷上で３０分間インキュベートした。これらの細胞を４００ｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄し、ＰＢＳで１回洗浄した。これらの細胞を１００μＬの１×ＰＢＳに再懸濁させ、ＦＡＣＳにより検出した。
【０３２９】
上記のアッセイで、抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６および４−４８．５のＣＨＯ−ＰＤＬ１細胞への結合を図１に示す。
【０３３０】
上記のアッセイで、抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６、および４−４８．５は総て、ＣＨＯ細胞上で過剰発現されたヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、ＥＣ５０はそれぞれ２．１３９ｎＭ、２．５９８ｎＭ、１．９８５ｎＭ、および１．９９５ｎＭであった。参照抗体ＡＴＥに比べ、抗体３−２６６．１、４−７９．２、４−２６．６、および４−４８．５は優れた親和性を有し、結合能が参照抗体の２倍を超える抗体もあった。
【０３３１】
実施例５  キメラ抗体のヒト化
実施例１で得られたキメラ抗体をヒト化した。抗体のヒト化は、ＭａｃｒｏｍｏｌｔｅｋからのＳｍｒｔＭｏｌＨｕｍａｎｉｚｅプロプライエタリーソフトウエアプログラムを使用することにより実施した。これらの配列をソフトウエアに入力したところ、システムはこれらの配列の三次元モデルを作成した。次に、これらの配列は下記の工程によりヒト化された：
１）ＣＤＲループの構造を決定する；
２）ヒト生殖細胞系配列データベースで、重鎖および軽鎖の各Ｖ／Ｊ領域に関して最も近い相同配列を検索する；
３）ヒト生殖細胞系を、重鎖および軽鎖と最も類似性が高く、かつ、復帰突然変異が最小量であるものに関してスクリーニングする；
４）ヒト抗体の骨格にキメラ抗体のＣＤＲ領域を構築する；
５）配列および構造的特徴に基づいてその骨格でＣＤＲ機能を維持しているアミノ酸の位置を決定する；
６）その配列の重要な位置に復帰突然変異（入力したアミノ酸に戻る）を付加する；
７）ヒト化配列の三次元モデルを作成する；
８）配列および構造を手動で調べ、ミスフォールディングまたは安定性の低下を生じ得るリスク部位を特定する；
９）リスク部位のアミノ酸を最適化する。
【０３３２】
得られた４つの本発明のキメラ抗体（ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ４ＰＡＫ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変領域、ならびに軽鎖および重鎖のアミノ酸配列は、上記の表１〜３に示す。
【０３３３】
実施例６  ＦｏｒｔｅＢｉｏで決定された抗原に対するヒト化抗体の結合動態
本発明の種々のＦｃサブタイプのヒト化抗体の、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合の平衡解離定数（ＫＤ）を、ＦｏｒｔｅＢｉｏで決定した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性アッセイは、実施例２に示した。上記のアッセイで、抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ４ＰＡＫ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａの親和性を表８に示す。
【０３３４】
【表２３】
2021508436.tif 000032
【０３３５】
上記のアッセイで、本明細書に記載のヒト化抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−Ｇ４ＰＡＡＫおよびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａはそれぞれ７．２４Ｅ−１０Ｍ、９．３５Ｅ−１０Ｍ、１．３２Ｅ−０９Ｍ、および３．１７Ｅ−０９ＭのＫＤ値を有し、この試験でのヒト化抗体は、参照に比べて、同等または優れたＫＤ値を有した。
【０３３６】
実施例７  ヒト化抗体とＰＤ−Ｌ１を過剰発現する細胞の結合アッセイ
この試験では、勾配希釈を行った本発明のヒト化抗体の、細胞表面にヒトＰＤ−Ｌ１を過剰発現した安定なＣＨＯ細胞株（ＣＨＯ−ＰＤＬ１）への結合を、フローサイトメトリーにより測定した。このアッセイは、使用した抗体がヒト化抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−Ｇ４ＰＡＡＫ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａであったこと以外は、実施例３に示した。これらの抗体を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳで５００ｎＭの濃度から８分の１の濃度まで連続的に３倍希釈した。ヒト化抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−Ｇ４ＰＡＡＫ、ＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、およびＣＨＯ−ＰＤＬ１の結合条件を図２に示す。
【０３３７】
このアッセイで、ヒト化抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＨＺ３２６６−Ｇ４ＰＡＡＫ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａが、ＣＨＯ細胞上で過剰発現したヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、ＥＣ５０はそれぞれ１．８１３ｎＭ、１．７８４ｎＭ、１．８６２ｎＭ、および１．５６１ｎＭであった。参照抗体ＡＴＥに比べ、これらの抗体は優れた結合能を有した。
【０３３８】
実施例８  ＭＯＡによる抗体の生物活性の検出
抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合を遮断することにより、下流ＮＦＡＴシグナル経路への阻害効果を軽減することができる。この試験では、Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能なＭＯＡ検出システム（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  Ｂｉｏａｓｓａｙ、Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｅｌ、カタログＪ１２５２）を使用した。製品マニュアルに示される方法に従い、蛍光リポーター遺伝子の発現を検出し、それにより、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対する抗体の阻害効果を検出することにより、ＮＦＡＴシグナルの活性化を表した。
【０３３９】
ＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１細胞（上記のＭＯＡ検出システムから）を活性アッセイの１日前に播種した。細胞を播種１〜２日前に継代培養した。培養上清を廃棄し、細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄した。消化のために適当な量のトリプシン（Ｇｉｂｃｏ）を３７℃、５％ＣＯ２で３〜５分間加え；トリプシンの４倍の容量の培養培地を加え、これらの細胞を５０ｍＬの遠沈管に移し、計数した。所望の容量の細胞を２３０ｇで１０分間遠心分離した。細胞を１６４０培養培地（Ｇｉｂｃｏ）に加え、４×１０５細胞／ｍＬとなるように再懸濁させた。これらの細胞を９６ウェル白色培養プレート（Ｎｕｎｃｌｏｎ）に１００μＬ／ウェルで移した。ＰＢＳを２００μＬ／ウェルで端のウェルに加えた。細胞をインキュベーターにて、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。
【０３４０】
Ｊｕｒｋａｔ−ＰＤ１細胞（上記のＭＯＡ検出システムから）の処理：  細胞を活性アッセイの２日前に継代培養した。計数後、所望の容量の細胞を１７０ｇで５分間遠心分離した。細胞をアッセイバッファー［１６４０培養培地（Ｇｉｂｃｏ）＋１％ＦＢＳ］に１．２５×１０６細胞／ｍＬとなるように再懸濁させた。
【０３４１】
サンプルおよびＪｕｒｋａｔ−ＰＤ１細胞のアッセイプレート（上記のＭＯＡ検出システムから）への添加：  ９５μＬ／ウェルのＣＨＯＫ１−ＰＤＬ１細胞上清を廃棄した。４０μＬのサンプル［本発明で作製したヒト化抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７ＡおよびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、陽性対照（Ａｔｅ）および陰性対照（ＩｇＧ１）］を加えた［これらの抗体は、アッセイバッファー中１００ｎＭの濃度から８分の１の濃度まで連続的に３倍希釈した］。４０μＬのＪｕｒｋａｔ−ＰＤ１細胞を加えた。細胞をインキュベーターにて、３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした。
【０３４２】
検出：  Ｂｉｏ−ＧｌｏＴＭバッファー（上記のＭＯＡ検出システムから）を予め解凍し、Ｂｉｏ−ＧｌｏＴＭ基質（上記のＭＯＡ検出システムから）を加え、よく混合した。６時間後、Ｂｉｏ−ＧｌｏＴＭ試薬（上記のＭＯＡ検出システムから）を８０μＬ／ウェルで加えた。得られた混合物を読み取りまで室温で５〜１０分置いた。
【０３４３】
このアッセイで、図３に示されるように、抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａは、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を効果的に遮断し得る。
【０３４４】
実施例９  混合リンパ球反応
この試験では、本抗体と異なるドナーに由来する成熟ＤＣ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞を共インキュベートした。Ｔ細胞に対する種々の抗体の活性化効果が反映されるように、この系におけるＩＬ２およびＩＦＮ−γの相対発現量を検出した。
【０３４５】
ＰＢＭＣの単離：  ドナー由来の新鮮な血液５０ｍＬに２．５倍のＰＢＳを加えた。この混合物をフィコール（Ｔｈｅｒｍｏ）に穏やかに加え、４本のチューブに１２．５ｍＬずつ分注した。これらのサンプルを４００ｇで３０分間遠心分離した後、減速度０で停止させた。中間の白色ストリップをピペットでＰＢＳに取り、ＰＢＳで２回洗浄した。
【０３４６】
ＤＣ細胞の単離：  上記で単離されたＰＢＭＣ細胞を、５ｍＬのＴ細胞培養培地（下表に従って調製）を加えた後に、３７℃、６％ＣＯ２で２時間、接着させてインキュベートした。この細胞懸濁液をＣＤ４＋細胞の単離のためにピペットで取った。２日間のインキュベーションのために残りの細胞に３ｍＬのＤＣ培養培地（下表に従って調製）を加え、さらに３ｍＬのＤＣ培養培地を加えた。培養５日目に、さらに２日のインキュベーションのためにｒＴＮＦａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（１０００Ｕ／ｍＬ）、ＩＬ−１ｂ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（５ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（１０ｎｇ／ｍＬ）および１μＭ  ＰＧＥ２（Ｔｏｃｒｉｓ）を加え、リンパ球混合反応（ＭＬＲ）用のＤＣ細胞を得た。
【０３４７】
【表２４】
2021508436.tif 000033
【０３４８】
ＣＤ４＋Ｔ細胞の単離：  これは「非接触(Untouched)ＣＤ４＋Ｔ細胞単離」キットの説明書（１１３４６Ｄ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って行った。ＰＢＭＣを２時間放置した後、細胞懸濁液をピペットで１５ｍＬの遠沈管に移した。細胞を２００ｇで１０分間遠心分離し、沈降物を５００μＬの分離培地、１００μＬのＡＢ型血清および１００μＬの精製抗体に再懸濁させた。この混合物を４℃で２０分間インキュベートし、分離培地で１回洗浄した。１５分のインキュベーションのために５００μＬのビーズバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、次に、これらのビーズを磁場により除去した。この混合物をＴ細胞培養培地で１回洗浄し、８ｍＬの培養培地に再懸濁させた。次に、得られた混合物を３７℃、６％ＣＯ２でインキュベートした。
【０３４９】
ＭＬＲ：  上記で得た成熟ＤＣ細胞とＣＤ４＋細胞を、１００００個のＤＣ細胞と１０００００個のＣＤ４＋細胞として２００μＬ／ウェルで混合した。本発明の抗体（濃度：１００ｎＭ、２０ｎＭ、４ｎＭ、０．８ｎＭ、０．１６ｎＭおよび０．０３２ｎＭ）を加えた。上記で調製したＤＣ細胞の混合物（下表にＤＣと表す）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（下表にＣＤ４と表す）、ＤＣ細胞とＣＤ４＋細胞の混合物（下表に細胞と表す）、ならびにここで陰性対照として用いる表３に開示されているＩｇＧ１、および陽性対照として用いるＤＣ  ＋  ＣＤ４＋Ｔ細胞  ＋  抗ＣＤ３／ＣＤ２８磁性ビーズ（ＱＩＡＧＥＮ）（下表でビーズと表す）。これらのサンプルを５日間インキュベートし、ＩＬ２およびＩＦＮ−γの濃度（相対発現ΔＦ％）をｃｉｓｂｉｏキット（ヒトＩＬ２キット１０００テスト、ヒトＩＦＮγ１０００テスト）により検出した。
【０３５０】
結果を表９、１０、１１、および１２、ならびに図４および５に示す。表のデータはΔＦ％である。
【０３５１】
【表２５】
2021508436.tif 000034
【０３５２】
【表２６】
2021508436.tif 000035
【０３５３】
【表２７】
2021508436.tif 000036
【０３５４】
【表２８】
2021508436.tif 000037
【０３５５】
よって、本発明の抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞を効果的に活性化することができ、活性化効果の部分は陽性対照抗体の場合よりも良好である。
【０３５６】
実施例１０  Ｚｅｎｉｘカラムによる抗体のドラッガビリティーのアッセイ
このアッセイでは、抗体のドラッガビリティーを、Ｚｅｎｉｘカラム（Ｓｅｐａｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ）で本発明の例示的ヒト化抗体の保持時間を分析することにより検知した。保持時間が短いほど抗体の粘度は低く、より良好なドラッガビリティーであった。
【０３５７】
クロマトグラフィー条件：  波長：２１４ｎｍ、カラム温度：２５℃、流速：０．３５ｍＬ／分、注入容量：１０μＬ。
【０３５８】
サンプルの調製：  １００μＬのサンプル（抗体ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ４ＰＡＡＫ、ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、およびＨＺ４４８５−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ；陽性対照としてのＡＴＥ  濃度１ｍｇ／ｍＬ）を１３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。８０μＬの上清を液相インサートに移し、注入のために液相サンプルトレーに置いた。
【０３５９】
表１３に示されるように、カラムにおける種々のＨＺ３２６６アイソタイプおよびＨＺ４４８５の保持時間は参照抗体よりも短く、抗体ＨＺ３２６６およびＨＺ４４８５の良好なドラッガビリティーを示す。
【０３６０】
【表２９】
2021508436.tif 000038
【０３６１】
実施例１１  抗腫瘍有効性アッセイ
このアッセイでは、本発明のＰＤ−Ｌ１抗体の抗腫瘍効果を、ｈＰＤ−Ｌ１トランスジェニックマウスでヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＭＣ３８細胞（ＭＣ３８−ｈＰＤＬ１）（Ｎａｎｊｉｎｇ  Ｙｉｎｈｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）において試験した。
【０３６２】
ｈＰＤ−Ｌ１トランスジェニックマウス：
Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｍｏｄｅｌ  Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｉｎｃ．から購入したＣ５７Ｂｌ／６バックグラウンドを有する雌ｈＰＤ−Ｌ１トランスジェニックマウス（約８週齢）。試験前に、マウスを到着後７日間適応させた。
【０３６３】
細胞：
ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＭＣ３８細胞（ＭＣ３８−ｈＰＤＬ１）をＮａｎｊｉｎｇ  Ｙｉｎｈｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入し、さらなるｉｎ−ｖｉｖｏアッセイのために説明書に厳格に従って継代培養した。細胞を遠心分離により回収し、無菌ＰＢＳに再懸濁させ、細胞密度を５×１０６細胞／ｍＬに調整した。０日目に、０．２ｍＬの細胞懸濁液をｈＰＤ−Ｌ１トランスジェニックマウスの腹部領域の皮下に移植し、ＭＣ３８−ｈＰＤＬ１担癌マウスモデルを確立した。
【０３６４】
投与：
マウスの腫瘍体積を移植６日後に測定し、８７．４ｍｍ３〜２２８．４ｍｍ３の範囲の腫瘍体積を有するマウスを選択し、腫瘍体積により均一に群に分けた（各群８個体のマウス、１個体はＩｇＧ１を受容し、他の個体は本発明のＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａを受容）。マウスを、移植後６、１０、１４、１７、２１、２４、２８、３１および３５日目に、週に２回処置した。用量および投与経路を表１２に示す。処置期間中、５週間、２回／週、マウスの腫瘍体積および体重の変化を監視した。体重および腫瘍体積は各投与前に測定した。腫瘍体積の測定：  腫瘍の長軸の最大長（Ｌ）および短軸の最大長（Ｗ）をノギスで測定し、腫瘍体積を、下式：Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２を用いて計算した。マウスの体重を、電子天秤を用いて週に２回測定した。
【０３６５】
【表３０】
2021508436.tif 000039
【０３６６】
本発明の抗体は、投与後１週目に有意な抗腫瘍有効性を示し（図６）、３５日目までに、本発明の抗体を受容した１個体のマウスの腫瘍は完全に退縮した。これらの結果は、種々の抗体の投与が担癌マウスの体重に影響を及ぼさなかったことを示した。
【０３６７】
よって、本発明の抗体は、腫瘍に対して明らかな阻害効果を有する。
【０３６８】
実施例１２  本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と抗ヒト−ＬＡＧ−３抗体の組合せ
この試験では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）と抗ヒト−ＬＡＧ−３抗体（ＡＤＩ−３１８５３）の併用の抗腫瘍活性をヒト化マウスモデルで試験した。
【０３６９】
この試験では、Ａ３７５（ＡＴＣＣ）ヒト皮膚癌細胞を保有するＮＣＧマウスにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の抗腫瘍有効性を試験した。ヒトＰＢＭＣ（全細胞）（２×１０６細胞／マウス）を予め静脈内に注射し、次いで、皮下移植によりＡ３７５担癌マウスモデルを確立した。腫瘍形成後にマウスを群に分け、異なる抗体による処置を施した。処置期間中、腫瘍サイズおよびマウスの体重の変化を監視した。処置は２週間、週に２回、合計５用量で施した。マウスを４週間、週に２回監視した。用量および投与経路は次の通りである。処置の終了後に腫瘍成長阻害（ＴＧＩ％）を計算した。
【０３７０】
抗ヒト−ＬＡＧ−３抗体ＡＤＩ−３１８５３
抗ＬＡＧ−３抗体ＡＤＩ−３１８５３の軽鎖および重鎖アミノ酸配列（表３）をコードするｃＤＮＡを、当技術分野の常法に従い、発現ベクターｐＴＴ５にクローニングした。
【０３７１】
標的抗体遺伝子を含有する発現ベクターおよびトランスフェクション試薬ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、製造者により提供されたスキームに従い、インキュベートしたヒト胎児腎臓細胞２９３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクション後、上清を廃棄し、細胞を新鮮なＥＸＰＩ２９３培地（Ｇｉｂｃｏ）で４×１０６／ｍＬに希釈した。４８時間ごとに新鮮培地を供給しつつ、これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７日間インキュベートした。７日後、これらの細胞を１３００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清をプロテインＡで精製し、９５％を超える純度で抗体が生産された。
【０３７２】
ＡＤＩ３１８５３のヒトＬＡＧ−３（ｈＬＡＧ−３）への結合に関する平衡解離定数（ＫＤ）を生物学的光干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）により測定した。従来技術のＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性アッセイを実施した(Estep, P., et al, High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013.5(2):270-8)。簡単に述べれば、センサーをアッセイバッファーで３０分間、オフラインで平衡化し、次いで、オンライン検出を６０秒間行ってベースラインを確立した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性アッセイのために、上記のように得られた精製抗体をオンラインでＡＨＱセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）にロードした。次に、抗体をロードしたセンサーを１００ｎＭのヒトＬＡＧ−３抗原（ＡｒｃｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に５分間曝した後、解離速度の測定のために、このセンサーを５分間、解離用アッセイバッファーに移した。１：１結合モデルを用いて動態分析を行った。
【０３７３】
上記のアッセイで、ＡＤＩ−３１８５３親和性は次の通りであった。
【０３７４】
【表３１】
2021508436.tif 000040
【０３７５】
マウス：
Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した体重１７．６〜２４．２ｇの雌、７〜８週齢（腫瘍細胞移植時の齢）のＮＯＧマウス。試験前、到着後７日間マウスを適応させた。
【０３７６】
細胞：
ヒト皮膚癌細胞Ａ３７５（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６１９）をＡＴＣＣから購入し、さらなるｉｎ−ｖｉｖｏアッセイのために、ＡＴＣＣにより提供された要件に厳格に従って継代培養した。細胞を遠心分離により回収し、無菌ＰＢＳに再懸濁させ、細胞密度を３０×１０６細胞／ｍＬに調整した。ＮＯＧマウスにヒトＰＢＭＣ（全細胞）を静脈内注射した後、右背部を剃毛し、Ａ３７５細胞を０．２ｍＬ／マウスで皮下注射した。マウスの腫瘍体積を移植７日後に測定し、７０〜７１ｍｍ３の範囲の腫瘍体積を有するマウスを選択し、腫瘍体積によって無作為に群に分けた。
【０３７７】
処置：
下記の抗体を種々の群に皮下注射した：
（１）ヒトＩｇＧ（ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ）、２０ｍｇ／ｋｇ；
（２）ＬＡＧ−３（ＡＤＩ−３１８５３）、１０ｍｇ／ｋｇ；
（３）ＰＤ−Ｌ１（ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）、１０ｍｇ／ｋｇ；
（４）ＬＡＧ−３（ＡＤＩ−３１８５３）、１０ｍｇ／ｋｇ＋ＰＤ−Ｌ１（ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）、１０ｍｇ／ｋｇ。
【０３７８】
移植７日後に、要件を満たす平均腫瘍サイズを有するマウスを無作為に各群８個体のマウスの群に分けた。各群のマウスに７、１０、１４および１７日目にそれぞれ上記の用量の４つの投与計画で投与を行った。
【０３７９】
分析：  試験中、週に２回、腫瘍体積および体重を測定し、腫瘍がエンドポイントに達した場合またはマウスに２０％を超える体重減少があった場合に、マウスを安楽死させた。腫瘍の長軸（Ｌ）の最大長および短軸（Ｗ）の最大長をノギスで測定し、腫瘍体積を、下式：Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２を用いて計算した。種々の群のマウスの経時的腫瘍体積をプロットした。統計的有意性を、分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて決定した。総ての分析で、０．０５未満のＰ値を統計的に有意とみなした。
【０３８０】
図７に示されるように、抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体ＡＤＩ−３１８５３（３１８５３）と抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体（ＨＺ３２６６−ＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ）（ＨＺ３２６６）の併用は、ヒトＩｇＧ対照（ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ）（ｈＩｇＧ）の使用およびこれら２つの抗体の個別使用に比べて腫瘍成長を有意に阻害したことが見て取れる。
【図１】
2021508436.tif 000041
【図２】
2021508436.tif 000042
【図３】
2021508436.tif 000043
【図４Ａ】
2021508436.tif 000044
【図４Ｂ】
2021508436.tif 000045
【図５Ａ】
2021508436.tif 000046
【図５Ｂ】
2021508436.tif 000047
【図６】
2021508436.tif 000048
【図７】
2021508436.tif 000049
【配列表】
2021508436000001.app
【国際調査報告】
2021508436.tif 000050
2021508436.tif 000051
2021508436.tif 000052
2021508436.tif 000053
2021508436.tif 000054
2021508436.tif 000055