(57)【要約】  本発明は、抗ＰＤ−１抗体および抗原結合性断片、ならびにがんまたは感染症の処置におけるこれらの抗体および抗原結合性断片の使用に関する。【選択図】図１
2021511806.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９、７９または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
ａ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４、１５、１８、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｃ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号７または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１、３４または７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号６に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１３、１６、１９、２３、２７、３０または３３に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
配列番号９２に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
配列番号８５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
配列番号８４に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１０の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１２】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９、７９、８６または９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１または１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
配列番号７５、７８、８１または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１５】
配列番号７４、７７、８０、８２または８９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１６】
配列番号９５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１７】
配列番号８３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１６の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１８】
ａ．  配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
ａ．  配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２０】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲが、
ａ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｃ．  配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｄ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２１】
配列番号４０と少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９と少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
ａ．  配列番号３７または１１９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｂ．  配列番号４４または１２１に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｃ．  配列番号５０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに
ｄ．  配列番号５７または１２３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
よりなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて５０ｐＭ未満のＫＤを有してヒトＰＤ−１に結合する、請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２４】
２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である、請求項１〜２３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２５】
Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、請求項１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２６】
ＩｇＧ１サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、請求項１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２７】
哺乳動物細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、請求項１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２８】
ＣＨＯ細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、請求項１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２９】
請求項１〜２６の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つをコードする単離された核酸。
【請求項３０】
請求項２９の単離された核酸を含む発現ベクター。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、ポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３２】
細菌細胞、ヒト細胞、哺乳動物細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、組成物。
【請求項３４】
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；および
ｚ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ａａ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｂｂ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される剤をさらに含む、請求項３３の組成物。
【請求項３５】
ａ．  請求項１〜２８の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、ポリヌクレオチドの発現に好都合な条件下で培養すること；ならびに
ｂ．  宿主細胞および／または培養培地から抗体または抗原結合性断片を回収すること
を含む、抗体または抗原結合性断片を生産する方法。
【請求項３６】
ａ．  がんの処置；または
ｂ．  感染もしくは感染症の処置
における使用のための、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３７】
免疫細胞の活性化を増大させる；がんを処置する；または感染もしくは感染症を処置するための薬剤の製造のための、請求項１〜２８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片の使用。
【請求項３８】
請求項１〜２８のいずれか一項の抗体もしくは抗原結合性断片または請求項３０に記載の発現ベクターまたは請求項３３に記載の組成物の有効量を、任意選択でさらなる治療剤または治療手法を伴って対象に投与することを含む、ヒト対象においてがんを処置する方法。
【請求項３９】
請求項１〜２８のいずれか一項の抗体もしくは抗原結合性断片または請求項３０に記載の発現ベクターまたは請求項３３に記載の組成物の有効量を、任意選択でさらなる治療剤または治療手法を伴って対象に投与することを含む、ヒト対象において感染または感染症を処置する方法。
【請求項４０】
さらなる治療剤が、
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；
ｚ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ａａ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｂｂ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される、請求項３８または３９の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月１日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０７４９１６への優先権の利益を主張するものであり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、腫瘍を介した免疫抑制に対抗することによって改善される症状の処置に関する。より詳細には、本発明は、抗ＰＤ−１抗体に関し、同様に疾患、例えばがんおよび感染症などの処置におけるこれらの抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＰＤ−１は、免疫制御および末梢性寛容の維持において重要な分子として認識されている。ＰＤ−１は、ナイーブＴ細胞、Ｂ細胞およびＮＫＴ細胞上に中程度に発現しており、リンパ球、単球および骨髄系細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナル伝達によりアップレギュレートされる（１）。
【０００４】
ＰＤ−１に対する２つの公知のリガンド、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）は、様々な組織中に生じるヒトのがんにおいて発現している。例として卵巣がん、腎臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、肝臓がんおよびメラノーマの大規模サンプルセットにおいて、ＰＤ−Ｌ１発現は、その後の処置にかかわらず、予後不良および全生存期間の低減と相関することが示された（２−１３）。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上でのＰＤ−１発現は、乳がんおよびメラノーマ中の機能障害Ｔ細胞を特徴付けること（１４−１５）、ならびに腎臓がんにおける予後不良と相関すること（１６）が見出された。それゆえに、ＰＤ−Ｌ１を発現する腫瘍細胞は、ＰＤ−１を発現するＴ細胞と相互作用することでＴ細胞活性化を減弱して免疫サーベイランスを回避し、それによって腫瘍に対する免疫応答障害に寄与することが提唱されている。
【０００５】
当該技術分野において、腫瘍に対して頑強な免疫応答を生じさせるために用いることができる、ＰＤ−１活性をアンタゴナイズする高い有効性の治療抗体へのニーズがある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓｈａｒｐｅ，  Ａ．Ｈ，  Ｗｈｅｒｒｙ，  Ｅ．Ｊ．，  Ａｈｍｅｄ  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｇ．Ｊ．  Ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （２００７）；８：２３９−２４５．
【非特許文献２】Ｄｏｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｂ７−Ｈ１  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｖａｓｉｏｎ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２００２  Ａｕｇ；８（８）：７９３−８００．
【非特許文献３】Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−１  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｕｖｅａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００８  Ｊｕｎ；４９（６  （２００８）：  ４９：  ２５１８−２５２５．
【非特許文献４】Ｇｈｅｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  （２００６）  ８：  １９０−１９８．
【非特許文献５】Ｈａｍａｎｉｓｈｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ｌｉｇａｎｄ  １  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （２００７）：  １０４：  ３３６０−３３６５．
【非特許文献６】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＲＨ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  （２００６）：  ５：  ２０６−２１１．
【非特許文献７】Ｎｏｍｉ，  Ｔ．  Ｓｈｏ，  Ｍ．，  Ａｋａｈｏｒｉ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−  １  ｌｉｇａｎｄ／ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００７）；１３：２１５１−２１５７．
【非特許文献８】Ｏｈｉｇａｓｈｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ−１  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００５）：  １１：  ２９４７−２９５３．
【非特許文献９】Ｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−Ｌ１  （Ｂ７−Ｈ１）  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ａｎｄ  ＢＣＧ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔａ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｓｔａｇｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２００７）：  １０９：  １４９９−１５０５．
【非特許文献１０】Ｓｈｉｍａｕｃｈｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｎｅｏｐｌａｓｍａｔｉｃ  ａｎｄ  ｎｏｎｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ／  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２００７）：  １２１：２５８５−２５９０．
【非特許文献１１】Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００９）  １５：  ９７１−９７９．
【非特許文献１２】Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｊ．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒａｄｅ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  （２００７）  ５６：  １１７３−  １１８２．
【非特許文献１３】Ｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ−１  ｉｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２０１０）：  ００：  １−９．１４．
【非特許文献１４】Ｇｈｅｂｅｈ  Ｈ．  Ｆｏｘｐ３＋  ｔｒｅｇｓ  ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ１＋／ＰＤ−１＋  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｃｏ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．  ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２００８  Ｆｅｂ  ２３；８：５７．
【非特許文献１５】Ａｈｍａｄｚａｄｅｈ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ａｒｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｉｍｐａｉｒｅｄ．  Ｂｌｏｏｄ  （２００９）  １１４：  １５３７−１５４４．
【非特許文献１６】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＲＨ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−１  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００７）  １５：  １７５７−１７６１．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有するまたは有しない、ヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３または１０４の重鎖ＣＤＲ領域および／または軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する（連続的ナンバリング）。本発明はまた、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有するまたは有しない、ヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３または１０４の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有する、ヒト化０８Ａの重鎖ＣＤＲ領域および／または軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の態様において、本発明は、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有する、ヒト化０８Ａの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０００９】
さらなる態様において、本発明はまた、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有するまたは有しない、ヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１２８、１３３、１３８または１３９の重鎖ＣＤＲ領域および／または軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。さらなる態様において、本発明はまた、ＣＤＲＨ２領域中にＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド化部位補正を有するまたは有しない、ヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１２８、１３３、１３８または１３９の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１０】
本発明はまた、本発明の抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つをコードする単離された核酸を提供する。本発明はまた、かかる核酸を含む発現ベクターを提供する（ここで、前記ポリペプチドはリーダー配列を含んでもよい）。これらの単離された核酸およびそれらを含む発現ベクターは、組換え宿主細胞において本発明の抗体またはその抗原結合性断片を発現させるために用いられ得る。それゆえに、本発明はまた、かかる単離された核酸を含む宿主細胞を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】遺伝子操作Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ＋ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１アッセイにおける本発明のＦａｂおよび二重特異性抗体の試験。二重特異性抗体およびＦａｂは、ＰＤ１−ＰＤＬ１相互作用によって生み出される免疫抑制を元に戻すことができた。これは、抗体／ＦａｂをＪｕｒｋａｔ細胞（ＰＤ１＋ｖｅ）およびＴＨＰ１ＰＤＬ１細胞（＋ＬＰＳ、ＩＦＮｇ、ａＣＤ３）とインキュベートしたときのＩＬ２介在性のルシフェラーゼレベルの増加として測定された。
【図２】混合リンパ球反応において二重特異性抗体によって誘導されたＩＬ−２産生（下のパネル）およびＩＦＮ−γ産生（上のパネル）。
【図３】ＰＤ−Ｌ１をトランスフェクトしたＪＹ細胞で再刺激されたＣＤ４＋  Ｔ細胞クローン４−４９の二重特異性抗体によるＩＦＮ−γ産生。
【図４】Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（登録商標）変異（スティック）の導入時に９０ＡＳＵまたは１８ＡＳＳ二重特異性抗体の抗ＰＤ１アーム中に形成されるＣＨ１（灰色）およびＣＬ（白色）界面の３Ｄ表示。正しくペアリングされた界面の選択的形成に至らせて重鎖−軽鎖のミスペアリングを回避するため、抗ＬＡＧ３の２つ目のアーム中に異なる変異セットが導入される。
【図５】Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（登録商標）変異（スティック）の導入時に９０ＡＳＵまたは１８ＡＳＳ二重特異性抗体の抗ＬＡＧ３の２つ目のアーム中に形成されるＣＨ１（灰色）およびＣＬ（白色）界面の３Ｄ表示。正しくペアリングされた界面の選択的形成に至らせて重鎖−軽鎖のミスペアリングを回避するため、抗ＰＤ−１の１つ目のアーム中に異なる変異セットが導入される。
【図６】Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（登録商標）変異（スティック）の導入時に二重特異性抗体（１８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵ）中で重鎖１（灰色）および重鎖２（白色）によって形成されるＣＨ３ヘテロダイマー界面の３Ｄ表示。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
略語
本発明の詳細な説明および例の全体にわたって、次の略語が用いられる：
ＡＤＣＣ    抗体依存性細胞傷害
ＣＤＣ    補体依存性細胞傷害
ＣＤＲ    Ｋａｂａｔナンバリングシステムを用いて規定される、免疫グロブリン可変領域内の相補性決定領域
ＣＨＯ    チャイニーズハムスター卵巣
ＥＬＩＳＡ    酵素結合免疫吸着アッセイ
ＦＲ  抗体フレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域
ＩＦＮ    インターフェロン
ＩＣ５０    ５０％阻害をもたらす濃度
ＩｇＧ    免疫グロブリンＧ
Ｋａｂａｔ    Ｅｌｖｉｎ  Ａ．Ｋａｂａｔが先駆けとなった免疫グロブリンアラインメントおよびナンバリングシステム（（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）
ｍＡｂまたはＭａｂまたはＭＡｂ    モノクローナル抗体
Ｖ領域    異なる抗体間で配列が可変であるＩｇ鎖のセグメント。軽鎖においてＫａｂａｔ残基１０９まで、重鎖においてＫａｂａｔ残基１１３まで広がっている。
【００１３】
ＶＨ    免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＫ    免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
定義
本発明がより容易に理解され得るように、ある種の技術用語および科学用語が下に具体的に定義される。本書類中のどこかで具体的に定義されないかぎり、本明細書中で用いられる全ての他の技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通例的に理解される意味を持つ。
【００１４】
添付の特許請求の範囲を包含する本明細書中で用いられるとき、言葉の単数形、例えば「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などは、その内容が明らかに他を指示しないかぎり、それらの対応する複数形の言及を包含する。
【００１５】
「投与」および「処置」とは、動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または生物学的液体に適用されるとき、その動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または生物学的液体への外来性の医薬、治療剤、診断剤または組成物の接触を指す。細胞の処置は、細胞への試薬の接触、同様に、細胞に液体が接触している場合には液体への試薬の接触を包含する。「投与」および「処置」はまた、例として細胞の、試薬、診断薬、結合性化合物による、または別の細胞による、インビトロおよびエクスビボでの処置を意味する。
【００１６】
「処置する」または「処置すること」は、治療剤、例えば本発明の抗体または抗原結合性断片のいずれかを含有する組成物などを、その治療剤が治療活性を有する１もしくは複数の疾患の症候を持つ、または疾患を持つ疑いのある対象または患者に、内的または外的に投与することを意味する。典型的に、治療剤は、何かしら臨床的に測定可能な程度、かかる症候（１または複数）の退縮を誘導することまたは進行を阻害することによって、処置される対象または集団において１または複数の疾患の症候を緩和するために有効な量で投与される。任意の特定の疾患の症候を緩和するために有効である治療剤の量は、例えば疾患の状態、患者の年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を引き起こす薬剤の能力などの要因に応じて変わり得る。疾患の症候が緩和されたかどうかは、その症候の重症度または進行状態を判定するために医師または他の専門の医療提供者により典型的に用いられる任意の臨床的測定により判定することができる。
【００１７】
抗体、多重特異性抗体および抗原結合性断片
本発明は、抗ＰＤ−１抗体およびその使用方法を包含する。本明細書中で用いられるとき、用語「抗体」とは、所望の生物学的活性を呈する任意の形態の抗体を指す。それゆえに、これは最も広い意味で用いられ、具体的には、限定されるものではないが、モノクローナル抗体（２つの軽鎖および２つの重鎖を含む完全長のモノクローナル抗体を包含する）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例として二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体に及ぶ。
【００１８】
一般的に、基本的な抗体構造単位はテトラマーを含む。各テトラマーは２つの同一のポリペプチド鎖ペアを包含し、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を持つ。各鎖のアミノ末端部は、主として抗原認識に関与する約１００から１１０個以上のアミノ酸からなる可変領域を包含する。重鎖のカルボキシ末端部は、主としてエフェクター機能に関与する定常領域を規定し得る。
【００１９】
抗体に関して用いられる場合の用語「軽鎖」とは、アミノ末端部が約１００から約１１０個以上のアミノ酸からなる可変領域を包含し、カルボキシ末端部が定常領域を包含する、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。軽鎖のおおよその長さは、２１１から２１７アミノ酸である。典型的に、ヒトの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）軽鎖およびラムダ（λ）軽鎖に分類される。軽鎖のアミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。軽鎖は、ヒトの軽鎖であることができる。
【００２０】
抗体に関して用いられる場合の用語「重鎖」とは、アミノ末端部が約１２０から約１３０個以上のアミノ酸からなる可変領域を包含し、カルボキシ末端部が定常領域を包含する、約５０〜７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびｍｕ（μ）という５つの別個のタイプ（例としてアイソタイプ）のうちの１つであることができる。別個の重鎖はサイズが異なり、α、δおよびγは約５０個のアミノ酸を含有するが、μおよびεは約５５０個のアミノ酸を含有する。軽鎖と組み合わされたとき、これらの別個のタイプの重鎖は、免疫グロブリン（Ｉｇ）の５つの周知の分類（例としてアイソタイプ）、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを生じさせ、この分類はＩｇＧの４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を包含する。重鎖は、ヒトの重鎖であることができる。
【００２１】
軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域により連結され、重鎖はさらに約１０個のアミノ酸からなる「Ｄ」領域も包含する。全般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）を参照されたい。
【００２２】
各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は、抗体結合部位を形成する。それゆえに、一般的に、インタクトな抗体は２つの結合部位を持つ。二機能性抗体または二重特異性抗体におけるものを除いて、２つの結合部位は、一般的に同じである。
【００２３】
用語「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」または「Ｖドメイン」は、一般に軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置しており、重鎖内で約１２０から１３０個のアミノ酸長を、軽鎖内で約１００から１１０個のアミノ酸長を持つ抗体の軽鎖または重鎖の部分を指し、各々の特定の抗体の、その特定の抗原に対する結合および特異性において用いられる。そのＩｇ鎖のセグメントは、異なる抗体間で配列が可変である。いくつかの例において、これは、軽鎖においてはＫａｂａｔ残基１０９まで、重鎖においては１１３まで広がっている。重鎖の可変領域は「ＶＨ」といわれることもある。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」といわれることもある。用語「可変」とは、可変領域のある種のセグメントは抗体間で配列が広範囲にわたって異なる事を指す。Ｖ領域は抗原の結合を仲介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変領域の１１０アミノ酸のスパンの至るところで等しく分布しているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、約１５〜３０個のアミノ酸からなる、より可変でない（例として、比較的不変である）フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる一続きが、各々約９〜１２アミノ酸長である「高頻度可変領域」と呼ばれるより高可変性の（例として極度に可変である）より短い領域により隔てられてなる。重鎖および軽鎖各々の可変領域は、大部分はβシート配置を採用し、３つの高頻度可変領域に連結される４つのＦＲを含み、この高頻度可変領域はβシート構造をつなぐループを形成し、いくつかの場合においてはβシート構造の一部を形成する。各鎖中の高頻度可変領域はＦＲに極めて近接して一緒に保持され、他の鎖からの高頻度可変領域と共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例としてＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ  ｅｄ．  １９９１）を参照されたい）。定常領域は、抗体の抗原への結合には直接関わらないが、様々なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与などを呈する。可変領域は、異なる抗体間で配列が広範囲にわたって異なる。具体的実施形態において、可変領域は、ヒトの可変領域である。
【００２４】
用語「Ｋａｂａｔのような可変領域残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置ナンバリング」およびそれらのバリエーションは、上のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．中で抗体コンパイルの重鎖可変領域または軽鎖可変領域について用いられたナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを用いて、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはこれへの挿入に対応する、より少ないアミノ酸または付加的なアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後ろに１つのアミノ酸の挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）を、および残基８２の後ろに３つの挿入残基（例としてＫａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を包含し得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、所与の抗体について、抗体の配列の相同領域での「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列とのアラインメントによって決定され得る。Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメイン（おおよそ軽鎖の残基１〜１０７および重鎖の残基１〜１１３）中の残基を指すときに用いられる（例として上のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．）。「ＥＵナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基を指すときに用いられる（例として上のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．中に報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ  １  ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。他のナンバリングシステムは、例えばＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴおよびＡＨｏｎにより記載されている。
【００２５】
典型的に、重鎖および軽鎖両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる３つの高頻度可変領域を含む。ＣＤＲは通常フレームワーク領域と並んでおり、特異的なエピトープへの結合を可能にする。一般的に、Ｎ末端からＣ末端までに、軽鎖および重鎖両方の可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）  Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．  ３２：１−７５；Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に従い、ＥＵナンバリングについてはＥｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５（１９６９）を参照されたい。
【００２６】
高頻度可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメイン中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３、ならびに重鎖可変ドメイン中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。「ＣＤＲ」とは、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨ  β−シートフレームワークの非フレームワーク領域内にある３つの高頻度可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬ  β−シートフレームワークの非フレームワーク領域内にある３つの高頻度可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）のうちの１つを指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者に周知であり、例えばＫａｂａｔによって抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最高頻度可変領域として規定されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２５２：６６０９−１６；Ｋａｂａｔ，１９７８，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．  ３２：１−７５；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（抗体のＣＤＲ領域を配列により規定））。ＣＤＲ領域配列はまた、Ｃｈｏｔｈｉａによって、保存されたβ−シートフレームワークの一部ではない、それゆえに異なる配置を採用することができる残基として構造的に規定されている（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７（抗体のＣＤＲ領域を構造により規定））。両用語は、当該技術分野においてよく認識されている。ＣＤＲ領域配列はまた、ＡｂＭ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによって規定されている。基準的な抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ２７３：９２７−４８；Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９）。高頻度可変領域内の残基数は異なる抗体において変わるため、基準位置に対する付加的な残基は、可変領域ナンバリングスキームにおいて慣用的にａ、ｂ、ｃとナンバリングされ、残基数の隣に付けられる（上のＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．）。かかる命名法は、当業者に同様に周知である。
【００２７】
本明細書中で用いられる場合の用語「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」とは、配列が高頻度可変であって、および／または構造的に規定されたループを形成する、抗体可変領域のうちの領域を指す。一般に、抗体は６つの高頻度可変領域を含み、３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）中に、３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）中にある。いくつもの高頻度可変領域の描写が使用されていて、本明細書中に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づいており、最も通例的に用いられる（例として上のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａは代わりに構造的ループの位置を参照する（例としてＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−１７を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングの慣習を用いてナンバリングされた場合のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２からＨ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームが挿入をＨ３５ＡとＨ３５Ｂに配置するためである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終わり；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終わり；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ高頻度可変領域はＫａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の折衷物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられる（例としてＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．２０１０）を参照されたい）。「接触」高頻度可変領域は、利用可能な複合体結晶構造解析に基づく。これらの高頻度可変領域またはＣＤＲの各々からの残基は、下に記される。
【００２８】
近年、普遍的なナンバリングシステムであるＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）が開発され、広く採用されている（Ｌａｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２７（１）：５５−７７）。ＩＭＧＴは、ヒトおよび他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。ここでは、ＣＤＲは、アミノ酸配列および軽鎖または重鎖内の位置の両方の観点から参照される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内にあるＣＤＲの「位置」は種間で保存されており、ループと呼ばれる構造中に存在することから、可変ドメインの配列を構造的特徴に応じて整列させるナンバリングシステムを用いることにより、ＣＤＲおよびフレームワーク残基は容易に同定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体からのアクセプターフレームワークに移植および置換する際に用いることができる。付加的なナンバリングシステム（ＡＨｏｎ）が、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ３０９：６５７−７０により開発されている。ナンバリングシステム間の、例えばＫａｂａｔナンバリングシステムとＩＭＧＴユニークナンバリングシステムとの間の対応は、当業者に周知である（例として上のＫａｂａｔ；上のＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ；上のＭａｒｔｉｎ；上のＬｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムによって規定されるとおりである。他の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによって規定されるとおりである。ある種の実施形態において、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングシステムによって規定されるとおりである。他の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａシステムによって規定されるとおりである。なお他の実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングシステムによって規定されるとおりである。
【表１】
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【００２９】
高頻度可変領域は、次のような「拡張高頻度可変領域」：ＶＬ中の２４−３６または２４−３４（Ｌ１）、４６−５６または５０−５６（Ｌ２）および８９−９７または８９−９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中の２６−３５または２６−３５Ａ（Ｈ１）、５０−６５または４９−６５（Ｈ２）および９３−１０２、９４−１０２または９５−１０２（Ｈ３）を含み得る。本明細書中で用いられるとき、用語「ＨＶＲ」および「ＣＤＲ」は交換可能に用いられる。
【００３０】
本明細書中で用いられるとき、用語「フレームワーク」または「ＦＲ」とは、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を指す。ＦＲ残基は、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、リニア抗体および二重特異性抗体中に存在する。ＦＲ残基は、本明細書中でＣＤＲ残基として規定される高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。
【００３１】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ３ドメインおよびＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖断片を含有する。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合によって、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用を包含する他の相互作用によって、一緒に保持される。Ｆｃ領域は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域として規定され、例えばネイティブ配列のＦｃ領域、組換えＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域を包含する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、しばしば、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びるように規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の生産もしくは精製の際に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え的に操作することによって、除去され得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基を有する抗体およびＫ４４７残基を有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。
【００３２】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」とは、抗体の抗原への結合には直接関わらないが、様々なエフェクター機能、例えばＦｃ受容体との相互作用などを発揮する軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部を指す。この用語は、免疫グロブリンの他の部分である、抗原結合部位を含有する可変領域と比べてより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域ならびに軽鎖のＣＬ領域を含有し得る。「ＩｇＧ１定常ドメイン」は、Ｃ末端リジン（Ｋ）を有するまたは有さない重鎖ＩｇＧ１タンパク質の全てのアロタイプを包含し、これらとしては限定されるものではないが、Ｇ１ｍ３、Ｇ１ｍ１７，１、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１７，１，２、Ｇ１ｍ（ｆ）、Ｇ１ｍ（ｚ，ａ）およびＧ１ｍ（ｚ，ａ，ｘ）が挙げられる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  １：４，１−７；２００９の表１およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｇ  ａｎｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、ＩＭＧＴ（登録商標）、国際的ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）情報システム（ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂ：ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ａｌｌｏｔｙｐｅｓ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｏｔｙｐｅｓ１．ｈｔｍｌ）を参照されたい。一実施形態において、Ｃ末端リジンを有さないＩｇＧ１定常ドメインは、配列番号１２４である。
【００３３】
「カッパ定常領域」は、軽鎖カッパタンパク質のすべてのアロタイプを包含し、これらとしては、限定されるものではないが、Ｋｍ１、Ｋｍ２およびＫｍ３が挙げられる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ  １：４，１−７；２００９を参照されたい。一実施形態において、カッパ定常ドメインは、配列番号１２５である。
【００３４】
用語「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体断片を指し、ここでこれらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、さらに、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間に含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。また、国際公開Ｎｏ．ＷＯ８８／０１６４９および米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号を参照されたい。一実施形態において、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＨ領域、ペプチドリンカーおよびＶＬ領域を含む。別の実施形態において、ｓｃＦｖは、ＮからＣ末端に向かってＶＬ領域、ペプチドリンカーおよびＶＨ領域を含む。
【００３５】
本明細書中で用いられるとき、用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、これらのドメインは別の鎖の相補的ドメインと強制的にペアリングされ、２つの抗原結合部位を生じさせる。ダイアボディは、例としてＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８中により十分に記載されている。一般的な人工抗体バリアントの総説については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００３６】
「Ｆａｂ」は、重鎖のＶＨ領域およびＣＨ１領域ならびに軽鎖のＶＬ領域およびＣＬ領域から構成され、これらは典型的にはジスルフィド結合によってつなぎ合わされて、単一の抗原結合部位を持つ。Ｆａｂ中のＶＨ領域、ＣＨ１領域、ＶＬ領域およびＣＬ領域は、本開示に従って抗原結合能を付与するために様々な方法で配置することができる。例えば、ＶＨ領域およびＣＨ１領域は１つのポリペプチド上にあることができ、ＶＬ領域およびＣＬ領域は別のポリペプチド上にあることができる。あるいは、ＶＨ領域、ＣＨ１領域、ＶＬ領域およびＣＬ領域は全て同じペプチド上にあることができ、異なる順番で配置されてもよい。
【００３７】
本発明はまた、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖ断片およびその使用方法を包含する。用語「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む抗体断片を指し、ここでこれらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、さらに、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間に含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ  ＯＦ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。また、国際特許出願公開Ｎｏ．ＷＯ８８／０１６４９および米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号を参照されたい。一実施形態において、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かってＶＨ領域、ペプチドリンカーおよびＶＬ領域を含む。別の実施形態において、ｓｃＦｖは、ＮからＣ末端に向かってＶＬ領域、ペプチドリンカーおよびＶＨ領域を含む。
【００３８】
本発明は、抗ＰＤ−１ダイアボディおよびその使用方法を包含する。本明細書中で用いられるとき、用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、これらのドメインは別の鎖の相補的ドメインと強制的にペアリングされ、２つの抗原結合部位を生じさせる。ダイアボディは、例としてＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８中により十分に記載されている。一般的な人工抗体バリアントの総説については、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００３９】
本発明の「二重特異性抗体」は、特許請求の範囲に記載の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片のうちのいずれかの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性アームと、異なる抗原を認識する別の抗原結合性アームとを含む。好ましい実施形態において、二重特異性抗体は、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１抗原結合性アームと重鎖および軽鎖を含む異なる抗原に結合する別の抗原結合性アームとを有するヘテロダイマーである。２つの抗原結合性アームが会合することで、ＣＨ３領域中に変異を持つ２つの重鎖定常領域を介してヘテロダイマーを形成する（例えば図６を参照されたい）。「多重特異性抗体」は、抗ＰＤ−１二重特異性抗体を含み、少なくとも別の抗原を標的とする重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む付加的な抗原結合性アームをさらに含む。
【００４０】
本発明はまた、抗ＰＤ−１抗原結合性断片およびその使用方法を包含する。本明細書中で用いられるとき、特に指示がない限り、「抗体断片」または「抗原結合性断片」とは、抗体または二重特異性抗体の抗原結合性断片を指し、すなわち完全長抗体によって結合される抗原に特異的に結合する能力を保持した抗体断片、例として１または複数のＣＤＲ領域を保持した断片を指す。抗原結合性断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；リニア抗体；一本鎖抗体分子、例としてｓｃ−Ｆｖ；１つの抗原結合性アームの重鎖および軽鎖を含むハーフの二重特異性分子が挙げられる。
【００４１】
典型的に、何らかの方法で修飾された本発明の抗体、二重特異性抗体または抗原結合性断片は、その結合活性をモルベースで発現させた場合、その結合活性の少なくとも１０％（親抗体と比較した場合）を保持する。好ましくは、本発明の抗体、二重特異性抗体または抗原結合性断片は、親抗体としてのＰＤ−１結合アフィニティの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％以上を保持する。本発明の抗体、二重特異性抗体または抗原結合性断片は、その生物学的活性を実質的に変えない保存的または非保存的なアミノ酸置換（抗体の「保存的バリアント」または「機能保存的バリアント」と呼ばれる）を包含することができることも意図される。
【００４２】
本発明は、単離された抗ＰＤ−１抗体およびその抗原結合性断片ならびにそれらの使用方法を包含する。「単離された」抗体もしくは二重特異性抗体またはその抗原結合性断片は、それらが産生される細胞または細胞培養物からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含まない。かかる生物学的分子としては、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質、例えば細胞デブリおよび増殖培地などが挙げられる。単離された抗体または抗原結合性断片は、さらに、発現系の構成成分、例えば宿主細胞からの生物学的分子またはその増殖培地の生物学的分子などを少なくとも部分的に含まないものであり得る。一般に、用語「単離された」は、かかる生物学的分子が完全に存在しないこと、または水、バッファーもしくは塩が存在しないこと、または抗体もしくは断片を包含する医薬製剤の構成成分を指すことを意図していない。
【００４３】
「単離された核酸分子」または「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノムのＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくは合成起源のもの、またはそれらのいくつかの組み合わせであって、単離されたポリヌクレオチドが天然で見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部と会合していない、または天然では連結していないポリヌクレオチドに連結されているものを意味する。本開示の目的のために、特定のヌクレオチド配列「を含む核酸分子」は、インタクトな染色体を包含しないことが理解されるものである。指定の核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、指定の配列に加えて、１０個まで、もしくはさらには２０個まで、もしくはより多くの他のタンパク質もしくは部分もしくはそれらの断片のコーディング配列を包含してもよく、または、挙げられた核酸配列のコーディング領域の発現を制御する作動可能に連結された制御性配列を包含してもよく、および／または、ベクター配列を包含してもよい。
【００４４】
句「制御配列」とは、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコーディング配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を包含する。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが知られている。
【００４５】
核酸またはポリヌクレオチドは、それが別の核酸配列と機能的な関係に置かれているときに「作動可能に連結」されている。例えば、プレ配列もしくは分泌リーダーについてのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合にポリペプチドについてのＤＮＡと作動可能に連結されており；プロモーターもしくはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合にコーディング配列と作動可能に連結されており；またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を容易にするように配置される場合にコーディング配列と作動可能に連結されている。一般に、しかし常にではないが、「作動可能に連結されている」とは、連結されているＤＮＡ配列が隣接していることを意味し、分泌リーダーの場合には、隣接していて、かつ読み取り相（ｒｅａｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、隣接している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが慣行的実務に従って用いられる。
【００４６】
本明細書中で用いられるとき、表現「細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」は、交換可能に用いられ、全てのかかる名称は後代を包含する。それゆえに、言葉「形質転換体」および「形質転換細胞」は、初代の対象細胞、および継代回数に関係なくそれに由来する培養物を包含する。計画的なまたは偶然の変異のために全ての後代が正確に同一のＤＮＡの中身を持つわけではないことも理解される。元の形質転換細胞の中からスクリーニングされた同じ機能または生物学的活性を持つ変異後代が包含される。別個の名称が意図される場合は、文脈から明らかであろう。
【００４７】
本明細書中で用いられるとき、「生殖系列配列」とは、再構成されていない免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を指す。再構成されていない免疫グロブリン配列の任意の好適な供給源が用いられ得る。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上のＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ生殖系列データベースから入手し得る。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３３：Ｄ２５６−Ｄ２６１中に記載されるとおりに入手し得る。
【００４８】
抗ＰＤ−１抗体および抗原結合性断片
本発明は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４９】
別の態様において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５０】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５１】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５２】
なお別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５３】
なお別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５４】
さらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５５】
なおさらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５６】
なおさらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００５７】
別の態様において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９、７９または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
ａ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４、１５、１８、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｃ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。
【００５８】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む。
【００５９】
さらなる態様において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む。
【００６０】
なおさらなる態様において、抗体または抗原結合性断片は、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む。
【００６１】
別の態様において、本発明は、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１と少なくとも約５７％、７１％または８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号２２と少なくとも約６７％、７８％または８９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６２】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１、３４または７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１、３４に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００６３】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号６に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１３、１６、１９、２３、２７、３０または３３に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂである。さらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号９２に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００６４】
なおさらなる実施形態において、本発明は、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号８５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８４または９０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂである。
【００６５】
別の態様において、本発明は、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９、７９、８６または９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１または１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００６６】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００６７】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００６８】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００６９】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００７０】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７５、７８、８１または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７４、７７、８０、８２、８９または９４に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である。さらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号９５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。なおさらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である。なおさらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である。なおさらなる実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号９０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である。
【００７１】
さらなる態様において、本発明は、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ．  配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００７２】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む。
【００７３】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲは、
ａ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｃ．  配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｄ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される。
【００７４】
さらなる態様において、本発明は、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
配列番号４０と少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９と少なくとも約７０％、７６％、８２％、８８％または９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０と少なくとも約５７％、７１％または８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５と少なくとも約６７％、７８％または８９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖および軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００７５】
別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、
ａ．  配列番号３７または１１９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｂ．  配列番号４４または１２１に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｃ．  配列番号５０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに
ｄ．  配列番号５７または１２３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
よりなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【００７６】
前述の実施形態の１つの態様において、抗体またはその断片は、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて５０ｐＭ未満のＫＤを有してヒトＰＤ−１に結合する。前述の実施形態の別の態様において、抗体または抗原結合性断片は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である。別の実施形態において、ＩｇＧ１サブタイプの重鎖領域を含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；Ｇ２３７Ａの変異（ＥＵナンバリング）のうちの１または複数をさらに含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。さらなる実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ａの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。なおさらなる実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、変異Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｄ（ＥＵナンバリング）をさらに含む。さらなる実施形態において、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＧ４サブタイプの重鎖定常領域を含み、これは、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵナンバリング）を有してもよい。一実施形態において、ＩｇＧ４定常ドメインは、変異Ｆ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａのうちの１または複数をさらに含む。一実施形態において、ＩｇＧ４定常ドメインは、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓの変異をさらに含む。一実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、哺乳動物細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む。
【００７７】
なおさらなる態様において、本発明は、前述の抗体または抗原結合性断片および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を提供する。一実施形態において、組成物は、
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片  ；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；
ａａ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ｂｂ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｃｃ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される剤をさらに含む。
【００７８】
一実施形態において、剤は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一実施形態において、剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。一実施形態において、剤は、ＰＡＲＰ阻害剤である。
【００７９】
本開示は、下の表８中に記載される任意の抗体または抗原結合性断片を包含する。いくつかの実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片は、表８中に収載されるＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片は、表８中に収載されるＶＨ配列に規定されるＣＤＲおよび表８中に収載されるＶＬ配列に規定されるＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片は、表８中に収載されるＶＨ配列および表８中に収載されるＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片は、表８中に収載される重鎖配列および表８中に収載される軽鎖配列を含む。
【００８０】
例示的抗体の物理的および機能的性質
「保存的改変バリアント」または「保存的置換」は、タンパク質の生物学的活性を変えることなくしばしば変化させることができるような、タンパク質中のアミノ酸の、類似した特性（例として電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造および剛性など）を持つ他のアミノ酸との置換を指す。当業者は、一般的に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換は生物学的活性を実質的に変えないことを認識する（例としてＷａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。加えて、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換は、表１中に記述されている。
【００８１】
表１．例示的な保存的アミノ酸置換
【表２】
2021511806.tif 000004
【００８２】
本発明の抗体の機能保存的バリアントもまた、本発明により考えられる。本明細書中で用いられるとき、「機能保存的バリアント」とは、所望の性質、例えば抗原アフィニティおよび／または特異性などを変えることなく１または複数のアミノ酸残基が変化している抗体または断片を指す。かかるバリアントとしては、限定されるものではないが、類似した性質を持つアミノ酸でのアミノ酸の置き換え、例えば表１の保存的アミノ酸置換などが挙げられる。また、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上のアミノ酸置換を好ましくはフレームワーク領域中に有する、本発明の単離された抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片も提供される。
【００８３】
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
本発明は、本発明の抗ＰＤ−１抗体およびその抗原結合性断片のポリペプチドまたは免疫グロブリン鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。例えば、本発明は、配列番号１〜９５および１１８〜１２３のいずれか１つに記載されるアミノ酸をコードするポリヌクレオチドを包含する。さらなる態様において、本発明は、抗体もしくは抗原結合性断片のうちのいずれか１つをコードする単離された核酸、および前記核酸を含む発現ベクター、および前記抗体もしくは抗原結合性断片を含む宿主細胞、および／または発現ベクターを提供する。宿主細胞は、細菌細胞、ヒト細胞、哺乳動物細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞であることができる。
【００８４】
一実施形態において、本明細書中に規定される単離された抗体または抗原結合性断片のポリペプチド鎖をコードする単離されたポリヌクレオチド、例えばＤＮＡが提供される。一実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、本発明による１つの成熟した免疫グロブリン軽鎖および本発明による１つの成熟した免疫グロブリン重鎖を含む、その抗ＰＤ−１抗原結合性断片をコードする。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは単一のポリヌクレオチド分子上に軽鎖および重鎖の両方をコードし、他の実施形態において、軽鎖および重鎖は別々のポリヌクレオチド分子上にコードされる。別の実施形態において、ポリヌクレオチドはシグナル配列をさらにコードする。別の実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、少なくとも１つの成熟した一本鎖Ｆｖを含むその抗ＰＤ−１抗原結合性断片をコードする。
【００８５】
本発明はまた、本発明の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター、例として発現ベクター、例えばプラスミドなどを提供し、ここでポリヌクレオチドは、宿主細胞に前記ベクターをトランスフェクトした場合に宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結される。また、本発明のベクターを含む宿主細胞、ならびに本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片またはポリペプチドを生産するための方法であって、抗体またはその抗原結合性断片の免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターまたは核酸を保有する宿主細胞を培養培地中で培養すること、ならびに前記宿主細胞または培養培地から抗体またはその抗原結合性断片を単離することを含む前記方法が提供される。
【００８６】
別の実施形態において、本発明は、
ａ．  前述の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、ポリヌクレオチドの発現に好都合な条件下で培養すること；ならびに
ｂ．  任意選択で、宿主細胞および／または培養培地から抗体または抗原結合性断片を回収すること
を含む、抗体または抗原結合性断片を生産する方法を提供する。
【００８７】
抗体およびその抗原結合性断片を作製する方法
本明細書中に開示される抗体はまた、組換え的に生産され得る（例としてＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７発現系、哺乳動物細胞発現系または下等真核生物発現系において）。一実施形態において、本発明の抗体分子（例としてｓｃＦｖ、ＶＨまたはＶＬ）をコードする核酸は、ｐＥＴベースのプラスミド中に挿入されてＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７系において発現させ得る。例えば、本発明は、宿主細胞（例として細菌宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ、例えばＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３など）中で抗体またはその抗原結合性断片またはその免疫グロブリン鎖を発現させるための方法であって、Ｔ７プロモーターに作動可能に連結された免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドをも包含する細胞中で、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現させることを含む前記方法を包含する。例えば、本発明のある実施形態において、細菌宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉなどは、ｌａｃプロモーターに作動可能に連結されたＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを包含し、ポリメラーゼおよび鎖の発現は、ＩＰＴＧ（イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）との宿主細胞のインキュベーションによって誘導される。
【００８８】
組換え抗体を生産するためのいくつかの方法が当該技術分野で知られている。抗体の組換え生産のための方法の１つの例は、米国特許第４，８１６，５６７号中に開示されている。
【００８９】
形質転換は、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための任意の公知の方法によって行うことができる。哺乳動物細胞への異種ポリペプチド導入のための方法は当該技術分野で周知であり、これらとしては、デキストラン介在性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン介在性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム中へのポリヌクレオチド（１または複数）の封入、微粒子銃インジェクションおよび核へのＤＮＡのダイレクトマイクロインジェクションが挙げられる。加えて、核酸分子は、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞に導入され得る。細胞を形質転換する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；第４，９１２，０４０号；第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照されたい。
【００９０】
それゆえに、本発明は、本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片、またはその免疫グロブリン鎖を作製するための組換え方法であって、抗体または断片の１または複数の免疫グロブリン鎖（例として重鎖および／または軽鎖の免疫グロブリン鎖、ｓｃＦｖ）をコードするポリヌクレオチドを導入すること；宿主細胞（例としてＣＨＯまたはピキアまたはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））をかかる発現に好都合な条件下で培養すること、ならびに任意選択で宿主細胞および／または宿主細胞が増殖した培地から抗体または断片または免疫グロブリン鎖を単離することを含む方法を包含する。
【００９１】
本明細書中に開示される抗体または断片または免疫グロブリン鎖の発現のための宿主としての哺乳動物細胞を包含する真核生物および原核生物の宿主細胞は、当該技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を包含する。これらとしては、なかでも、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、Ｈｅｌａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例としてＨｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞およびいくつもの他の細胞株が挙げられる。哺乳動物宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスターの細胞が挙げられる。とりわけ好ましい細胞株は、どの細胞株の発現レベルが高いかを決定することを通じて選択される。用いられ得る他の細胞株は、昆虫細胞株、例えばＳｆ９細胞など、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。真菌細胞は酵母および糸状真菌細胞を包含し、これらとしては、例えばピキア・パストリス、ピキア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラナエファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・ミヌータ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌータ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピキア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピキア・オプンティアエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スティプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クリベロマイセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クリベロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓ��ｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）が挙げられる。ピキア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、任意のサッカロマイセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクリベロマイセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）。重鎖もしくはその抗原結合性部分もしくは断片、軽鎖および／もしくはその抗原結合性断片、またはｓｃＦｖをコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入されたとき、宿主細胞中で抗体または断片または鎖を発現させるのに、または宿主細胞が増殖する培養培地中に分泌させるのに十分な時間、宿主細胞を培養することによって、抗体が生産される。
【００９２】
抗体およびその抗原結合性断片および免疫グロブリン鎖は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培養培地から回収することができる。さらに、産生細胞株からの本発明の抗体およびその抗原結合性断片および免疫グロブリン鎖（またはそれらに由来する他の部分）の発現は、いくつもの公知の技術を用いて増大させることができる。例えば、グルタミン合成酵素遺伝子発現系（ＧＳ系）は、ある種の条件下で発現を増大させるための通例のアプローチである。ＧＳ系は、欧州特許第０２１６８４６号、第０２５６０５５号および第０３２３９９７号、ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号との関係で全体的にまたは一部が論じられている。それゆえに、本発明のある実施形態において、哺乳動物宿主細胞（例としてＣＨＯ）はグルタミン合成酵素遺伝子を欠損しているが、ここで免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドが宿主細胞中の遺伝子欠損を補うグルタミン合成酵素遺伝子を含んでいると培地中でグルタミン酸の非存在下で増殖する。
【００９３】
一般的に、特定の細胞株または遺伝子導入動物中で生産される糖タンパク質は、その細胞株または遺伝子導入動物中で生産される糖タンパク質に特徴的な一連のグリコシル化パターンを持つ。それゆえ、抗体の特定のグリコシル化パターンは、抗体の生産のために用いられる特定の細胞株または遺伝子導入動物に依存する。しかしながら、本明細書中で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、抗体が持ち得るグリコシル化パターンと関係なく、本発明を構成する。同様に、特定の実施形態において、非フコシル化Ｎ−グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体は、典型的に、そのフコシル化された対応物よりもインビトロおよびインビボの両方で強力な有効性を呈することが示されていることから、有利であり得る（例えばＳｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７８：３４６６−３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらの抗体は、それらの炭化水素構造がヒト血清ＩｇＧ中に存在するポピュレーションの正常な構成成分であることから、免疫原性である可能性は低い。
【００９４】
免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てられ得る。いくつかの実施形態において、異なる定常ドメインは、ＶＬ領域、ＶＨ領域またはＶＨ−ＶＬ領域に付加され得る。免疫グロブリンには少なくとも５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかはさらにサブクラス（サブタイプ）、例としてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けられ得る。
【００９５】
一実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、重鎖定常領域、例としてヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３もしくはγ４ヒト重鎖定常領域またはそれらのバリアントなどを含む。別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、軽鎖定常領域、例としてヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらのバリアントなどを含む。
【００９６】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＧ１サブタイプの重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；Ｇ２３７Ａの変異（ＥＵナンバリング）のうちの１または複数をさらに含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。さらなる実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ａの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。なおさらなる実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａの変異（ＥＵナンバリング）をさらに含む。別の実施形態において、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、変異Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｄ（ＥＵナンバリング）をさらに含む。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＧ４サブタイプの重鎖定常領域を含み、これは、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵナンバリング）を有してもよい。一実施形態において、ＩｇＧ４定常ドメインは、変異Ｆ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａのうちの１または複数をさらに含む。一実施形態において、ＩｇＧ４定常ドメインは、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓの変異をさらに含む。前述の実施形態の別の態様において、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅの変異をさらに含む。
【００９７】
抗体エンジニアリング
例として抗体または断片の性質を改良するために、抗体およびその抗原結合性断片が、本明細書中で提供される配列の可変ドメイン内のフレームワーク残基への改変を包含するように設計された抗体である実施形態がさらに包含される。典型的に、かかるフレームワークの改変は、抗体または断片の免疫原性を減少させるために行われる。これは通常、親（例えば齧歯類）抗体または断片の可変ドメイン中の非ＣＤＲ残基（すなわちフレームワーク残基）を、抗体が用いられることになる種の免疫レパトワからの類似残基、例えばヒト治療薬の場合にはヒト残基で置き換えることによって達成される。かかる抗体または断片は、「ヒト化」抗体または断片と呼ばれる。１つのアプローチは、１または複数のフレームワーク残基を、対応する生殖系列配列に変異させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体または断片は、抗体が由来する生殖系列配列と異なるフレームワーク残基を含有することができる。かかる残基は、抗体または断片のフレームワーク配列を、抗体または断片が由来する生殖系列配列と比較することによって同定することができる。別のアプローチは、例としてフレームワーク残基を置き換えるプロセスにおいて失われた可能性のある結合アフィニティを回復させるために、人工（例としてヒト化）抗体の１または複数の位置において、元の親（例として齧歯類）残基に戻すことである（例として米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，５８５，０８９号および米国特許第５，５３０，１０１号を参照されたい）。
【００９８】
ある種の実施形態において、抗体およびその抗原結合性断片は、それらの性質を改良するために、フレームワークおよび／またはＣＤＲ中に改変を包含するように設計される（例としてヒト化される）。かかる人工的変更は、分子モデルに基づくことができる。親（非ヒト）抗体配列の可変領域についての分子モデルは、抗体の構造的特徴を理解するために構築することができ、抗原と相互作用することができる抗体上の潜在的な領域を同定するために用いることができる。慣用的なＣＤＲは、免疫グロブリン配列のアラインメントおよび可変領域の同定に基づいている。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２；Ｋａｂａｔ（１９７８）  Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．  ３２：１−７５；Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２５２：６６０９−６６１６。Ｃｈｏｔｈｉａらは、抗体の結晶構造におけるループの立体構造を注意深く調べ、高頻度可変ループを提案した。Ｃｈｏｔｈｉａ，  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３。「ＣＤＲ」および「高頻度可変ループ」に分類される領域の間にはバリエーションがある。後の研究（Ｒａｇｈｕｎａｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１２）  Ｊ．Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇ．  ２５，３，１０３−１１３）は、いくつかの抗体−抗原結晶複合体を分析し、抗体中の抗原結合性領域が必ずしも「ＣＤＲ」残基または「高頻度可変」ループに厳密に適合しないことを観察した。非ヒト抗体の可変領域についての分子モデルは、抗原に潜在的に結合することができる領域の選択を導くために用いることができる。実際には、モデルに基づく潜在的な抗原結合性領域は、慣用的な「ＣＤＲ」または「高頻度可変」ループと異なる。市販の科学ソフトウェア、例えばＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）などを分子モデリングのために用いることができる。ヒトフレームワークは、フレームワーク中およびＣＤＲ中の両方の非ヒト配列とのベストマッチに基づいて選択することができる。ＶＨ中のＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖系列のＶＪ領域は、対応する非ヒト領域と比較される。ＶＬ中のＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖系列配列のＪ−カッパおよびＪ−ラムダ領域は、対応する非ヒト領域と比較される。好適なヒトフレームワークが同定されると、ＣＤＲは、選択されたヒトフレームワーク中に移植される。いくつかの場合において、ＶＬ−ＶＨ界面中のある種の残基は、非ヒト（親）配列中と同様に保持することができる。分子モデルはまた、ＣＤＲの立体構造を潜在的に変化させ、それ故に抗原への結合を変化させることができる残基を同定するために用いることができる。いくつかの場合において、これらの残基は、非ヒト（親）配列中と同様に保持される。分子モデルはまた、望まれ���い効果、例えばグリコシル化、脱アミド化、酸化などをもたらす可能性のある溶媒に曝露されたアミノ酸を同定するために用いることができる。開発可能性フィルターを設計ステージで早期に導入することで、これらの潜在的な問題を除去／最小化することができる。
【００９９】
別のタイプのフレームワーク改変は、フレームワーク領域内の１もしくは複数の残基、または１もしくは複数のＣＤＲ領域内の１もしくは複数の残基でさえも変異させることでＴ細胞エピトープを除去し、それによって抗体の潜在的な免疫原性を低減させることを伴う。このアプローチは「脱免疫化」とも呼ばれ、米国特許第７，１２５，６８９号中にさらに詳細に記載されている。
【０１００】
特定の実施形態において、脱アミド化または異性化を回避するように最終抗体のより高い化学的安定性を提供するために、露出した側鎖を含有するある種のアミノ酸を別のアミノ酸残基に変更することが望ましい。アスパラギンおよびグルタミンの脱アミド化および／または異性化は、ＤＧ、ＮＧ、ＮＳ、ＮＡ、ＮＴ、ＱＧまたはＱＳ配列上で生じ得て、ポリペプチド鎖にねじれを導入してその安定性を減少させるイソアスパラギン酸残基の生成をもたらし得る（イソアスパラギン酸効果）。異性化は、ＤＧ、ＤＳ、ＤＡまたはＤＴ配列において生じることができる。ある種の実施形態において、本開示の抗体は、脱アミド化部位またはアスパラギン異性化部位を含有しない。一実施形態において、抗ＰＤ−１重鎖ＣＤＲＨ２は、脱アミド化部位を除去するためのＧ５６Ａ補正を含む。
【０１０１】
例えば、アスパラギン（Ａｓｎ）残基をＧｌｎまたはＡｌａに変更することで、とりわけＣＤＲ内の任意のＡｓｎ−Ｇｌｙ配列におけるイソアスパルテートの形成の可能性を低減させ得る。同様の問題は、Ａｓｐ−Ｇｌｙ配列において発生し得る。Ｒｅｉｓｓｎｅｒ  ａｎｄ  Ａｓｗａｄ（２００３）  Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ６０：１２８１。イソアスパルテートの形成は、抗体のその標的抗原への結合を弱め得て、または完全に抑止し得る。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１６：７３１  ａｔ  ７３４を参照されたい。一実施形態において、アスパラギンはグルタミン（Ｇｌｎ）に変更される。アスパラギン（Ａｓｎ）またはグルタミン（Ｇｌｎ）残基に隣接するアミノ酸を変化させることもまた、低分子量のアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンに隣接して存在するときにより高い割合で生じる脱アミド化の可能性を低減させるために望ましいものであり得る。Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ＆  Ｋｏｌｂｅ（１９９４）  Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．  ６６２：２６１を参照されたい。加えて、ＣＤＲ中の任意のメチオニン残基（典型的には溶媒に曝露されたＭｅｔ）は、抗原結合アフィニティを低減させることができて最終抗体調製物における分子の不均質性にも寄与し得るメチオニン硫黄が酸化する可能性を低減させるために、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、ＡｌａもしくはＰｈｅまたは他のアミノ酸に変更され得る。Ｉｄ。加えて、潜在的な解離しやすいＡｓｎ−Ｐｒｏペプチド結合を防ぐまたは最小化するために、ＣＤＲ中に見出される任意のＡｓｎ−Ｐｒｏの組み合わせを、Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ａｌａ−ＰｒｏまたはＡｓｎ−Ａｌａに変えることが望ましいものであり得る。かかる置換を有する抗体を、その後にスクリーニングすることで、置換がＰＤ−１に対する抗体のアフィニティもしくは特異性または他の所望の生物学的活性を許容できないレベルまで減少させないことを確実にする。
【０１０２】
表２．例示的な安定化ＣＤＲバリアント
【表３】
2021511806.tif 000005
【０１０３】
Ｆｃ領域の抗体エンジニアリング
本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片はまた、典型的には抗体の１または複数の性質、例えば血清半減期、補体結合性、Ｆｃ受容体結合性および／またはエフェクター機能（例として抗体依存性細胞傷害）などを変えるために、Ｆｃ領域内に改変を包含するように設計することができる。さらには、本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片は、やはり抗体または断片の１または複数の性質を変えるため、化学的に改変することができ（例として１または複数の化学的部分を抗体に付着させることができ）、またはそのグリコシル化を変えるように改変することができる。これらの実施形態の各々は、下にさらに詳細に記載される。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのそれである。
【０１０４】
本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片はまた、変化したエフェクター機能を提供するように改変された（またはブロックされた）Ｆｃ領域を有する抗体および断片を包含する。例として米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２を参照されたい。かかる改変は、診断および治療における潜在的な有益な効果を有して、免疫系の様々な反応を増強または抑制するために用いることができる。Ｆｃ領域の変化は、アミノ酸の変更（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化、および複数のＦｃ領域の付加を包含する。Ｆｃへの変化はまた、治療抗体の抗体半減期を変化させることができ、これはより少ない頻度での投薬を可能にし、それゆえに利便性の向上および材料の使用量の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）  Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１６：７３１  ａｔ  ７３４−３５を参照されたい。
【０１０５】
一実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、重鎖定常領域のヒンジ領域中の２２８位に相当する位置でのセリンからプロリンへの変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体または断片である。この変異は、ヒンジ領域中の重鎖間ジスルフィド架橋の不均質性を消失させることが報告されている（上のＡｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．；２４１位はＫａｂａｔナンバリングシステムに基づく）。
【０１０６】
本発明の一実施形態において、ヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が増加または減少するように改変される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号中にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを容易にするため、または抗体の安定性を増加または減少させるために変えられる。
【０１０７】
別の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片のＦｃヒンジ領域は、抗体または断片の生物学的半減期を減少させるために変異が加えられる。より具体的には、抗体または断片のブドウ球菌プロテインＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ、ＳｐＡ）結合性が、ネイティブのＦｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合性と比べて損なわれるように、１または複数のアミノ酸変異がＦｃ−ヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に導入される。このアプローチは、米国特許第６，１６５，７４５号中にさらに詳細に記載されている。
【０１０８】
別の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、その生物学的半減期を増加させるように改変される。様々なアプローチが可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号中に記載されるように、次の変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆのうちの１または複数を導入することができる。あるいは、生物学的半減期を増加させるため、抗体は、米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号中に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するように、ＣＨ１またはＣＬ領域内で変化させることができる。
【０１０９】
なお他の実施形態において、Ｆｃ領域は、抗体または抗原結合性断片のエフェクター機能（１または複数）を変化させるため、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって変えられる。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１または複数のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対するアフィニティを変化させ、親抗体の抗原結合能を保持するように、異なるアミノ酸で置き換えることができる。アフィニティが変化させられるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１構成成分であることができる。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号中にさらに詳細に記載されている。
【０１１０】
別の例において、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１または複数のアミノ酸は、抗体がＣ１ｑ結合を変化させ、および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低減もしくは消失するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号中にさらに詳細に記載されている。
【０１１１】
別の例において、アミノ酸２３１位および２３９位内の１または複数のアミノ酸残基は、それによって抗体が補体を固定する能力を変化させるように変えられる。このアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１中にさらに詳細に記載されている。
【０１１２】
なお別の例において、Ｆｃ領域は、次の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９における１または複数のアミノ酸を改変することによって、本発明の抗体もしくは抗原結合性断片の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を仲介する能力を減少させるように、および／またはＦｃγ受容体に対する抗体もしくは断片のアフィニティを減少させるように改変される。このアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ００／４２０７２中にさらに詳細に記載されている。そのうえ、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされ、結合が改良されたバリアントが記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１−６６０４を参照されたい）。
【０１１３】
本発明の一実施形態において、Ｆｃ領域は、残基２４３および２６４を改変することによって、本発明の抗体のエフェクター機能を仲介する能力を減少させるように、および／または抗炎症性を増加させるように改変される。一実施形態において、抗体または断片のＦｃ領域は、２４３位および２６４位の残基をアラニンに変更することによって改変される。一実施形態において、Ｆｃ領域は、残基２４３、２６４、２６７および３２８を改変することによって、抗体もしくは断片のエフェクター機能を仲介する能力を減少させるように、および／または抗炎症性を増加させるように改変される。
【０１１４】
エフェクター機能の制御
本明細書中で用いられるとき、用語「エフェクター機能」とは、抗体依存性細胞介在性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）介在性応答、Ｆｃ介在性ファゴサイトーシスまたは抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクリングのうちの１または複数を指すことを意味する。
【０１１５】
抗原結合性タンパク質の定常領域と、ＦｃガンマＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃガンマＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃガンマＲＩＩＩ（ＣＤ１６）といった様々なＦｃ受容体（ＦｃＲ）との相互作用は、抗原結合性タンパク質のエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよびＣＤＣなどを仲介すると考えられている。Ｆｃ受容体はまた抗体架橋のためにも重要であり、これは抗腫瘍免疫のために重要なことがある。
【０１１６】
エフェクター機能は、例えば、ＡＤＣＣエフェクター機能を測定するためのナチュラルキラー細胞へのＦｃガンマＲＩＩＩの結合を介した方法、または単球／マクロファージへのＦｃガンマＲＩを介した方法といったいくつもの方法で測定することができる。例えば本発明の抗原結合性タンパク質は、ナチュラルキラー細胞アッセイにおいてＡＤＣＣエフェクター機能について判定することができる。かかるアッセイの例は、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，２００１  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ  ６５９１−６６０４；Ｃｈａｐｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ２６８，ｐ２５１２４−２５１３１；Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ，２００６  ＰＮＡＳ，１０３；４００５−４０１０中に見出すことができる。
【０１１７】
本発明の抗体のＡＤＣＣもしくはＣＤＣの性質、またはそれらの架橋性は、いくつもの方法で低減され得る。残基Ａｓｎ２９７上の特定の変異または変化したグルコシル化を含有するヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を低減させることが示されている。他の場合において、これらの変異はまた、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することが示されている（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ２００６，１０３；４００５−４０１０；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００１，２７６；６５９１−６６０４；Ｎｅｃｈａｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００７，４４；１８１５−１８１７）。加えて、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、Ｇ２３７Ａの変異はＦｃγＲＩＩ認識の低減をもたらす。Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４７，２６５７−２６６３（１９９１）。
【０１１８】
本発明の一実施形態において、かかる変異は、２３９、３３２および３３０から選択される位置のうちの１もしくは複数にあり（ＩｇＧ１）、または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等の位置にある。好適な変異の例は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌである。一実施形態において、本明細書中に記載される本発明の抗原結合性タンパク質は、２３９位および３３２位に変異が加えられ、例えばＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅであり、またはさらなる実施形態において、２３９および３３２および３３０から選択される３つ以上の位置において変異が加えられ、例えばＳ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌである（ＥＵインデックスナンバリング）。
【０１１９】
改変されたグリコシル化を有する抗体の生産
なお別の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合性断片は、特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、フコシル化されていないまたはグリコシル化されていない抗体または断片を作製することができる（すなわち、それぞれフコースまたはグリコシル化を欠く抗体）。抗体または断片のグリコシル化パターンは、例えば、ＰＤ−１抗原に対する抗体または断片のアフィニティまたはアビデティを増加させるように変化させ得る。かかる改変は、例えば、抗体または断片配列内のグリコシル化部位のうちの１または複数を変化させることによって達成することができる。例えば、可変領域フレームワークのグリコシル化部位のうちの１または複数の除去をもたらす１または複数のアミノ酸置換を作製し、それによってその部位でのグリコシル化を排除することができる。かかる非グリコシル化は、抗原に対する抗体または断片のアフィニティまたはアビデティを増加させ得る。例として米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。一実施形態において、抗ＰＤ−１  ＣＤＲＨ２領域は、Ｓ６１Ｎグリコシル化補正を持つ。
【０１２０】
本明細書中に開示される抗体および抗原結合性断片は、哺乳動物様またはヒト様のグリコシル化パターンを持つ糖タンパク質を産生するように遺伝子改変された下等真核生物宿主細胞、とりわけ真菌宿主細胞、例えば酵母および糸状菌などにおいて産生されるものをさらに包含し得る（例えばＣｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ，（２００３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  １００：５０２２−５０２７；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１：１２４４−１２４６；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１３：１４４１−１４４３；Ｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｓｔ  ２８（３）：２３７−５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｏｃｔ；１８（５）：３８７−９２（２００７）を参照されたい）。現在用いられている哺乳動物細胞株に対するこれらの遺伝子改変宿主細胞のとりわけ有利な点は、特定のＮ−グリカン構造が優勢である糖タンパク質の組成物を産生することができるよう、細胞中で産生される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルを制御する能力である（例として米国特許第７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝子改変宿主細胞は、特定のＮ−グリカン構造を優勢に持つ抗体を生産するために用いられてきた（例えばＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２４：２１０−２１５を参照されたい）。
【０１２１】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片は、下等真核生物宿主細胞中で産生され、フコシル化されているおよびフコシル化されていないハイブリッド型および複合型のＮ−グリカンを含むものをさらに包含し、Ｎ−グリカンはバイセクト種およびマルチアンテナ種を包含し、限定されるものではないが、例えばＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２などのＮ−グリカンが挙げられる。
【０１２２】
特定の実施形態において、本明細書中で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２よりなる群から選択される少なくとも１つのハイブリッド型Ｎ−グリカンを持つ抗体または断片を含み得る。特定の態様において、ハイブリッド型Ｎ−グリカンは、組成物中で優勢なＮ−グリカン種である。
【０１２３】
特定の実施形態において、本明細書中で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２よりなる群から選択される少なくとも１つの複合型Ｎ−グリカンを持つ抗体および断片を含む。特定の態様において、複合型Ｎ−グリカンは、組成物中で優勢なＮ−グリカン種である。さらなる態様において、複合型Ｎ−グリカンは、組成物中の複合型Ｎ−グリカンの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％を構成する特定のＮ−グリカン種である。一実施形態において、本明細書中で提供される二重特異性抗体およびその抗原結合性断片は複合型Ｎ−グリカンを含み、ここで少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の複合型Ｎ−グリカンが構造ＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２を含み、かかる構造がフコシル化されていない。かかる構造は、例として遺伝子操作されたピキア・パストリス宿主細胞中で生産することができる。
【０１２４】
特定の実施形態において、Ｎ−グリカンはフコシル化されている。一般的に、フコースは、Ｎ−グリカンの還元末端にＧｌｃＮａｃを有するα１，３−結合、Ｎ−グリカンの還元末端にＧｌｃＮａｃを有するα１，６−結合、Ｎ−グリカンの非還元末端にＧａｌを有するα１，２−結合、Ｎ−グリカンの非還元末端にＧｌｃＮａｃを有するα１，３−結合、またはＮ−グリカンの非還元末端にＧｌｃＮａｃを有するα１，４−結合の状態にある。
【０１２５】
それゆえ、上の糖タンパク質組成物の特定の態様において、グリコフォームは、α１，３−結合もしくはα１，６−結合フコースの状態にあることでＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）よりなる群から選択されるグリコフォームを生成し；α１，３−結合もしくはα１，４−結合フコースの状態にあることでＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２よりなる群から選択されるグリコフォームを生成し；またはα１，２−結合フコースの状態にあることでＧａｌ（Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２よりなる群から選択されるグリコフォームを生成する。
【０１２６】
さらなる態様において、抗体またはその抗原結合性断片は、高マンノース型Ｎ−グリカンを含み、これらとしては限定されるものではないが、Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ４ＧｌｃＮＡｃ２、またはＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカン構造からなるＮ−グリカンが挙げられる。
【０１２７】
上記のさらなる態様において、複合型Ｎ−グリカンは、フコシル化されているおよびフコシル化されていないバイセクト種およびマルチアンテナ種をさらに包含する。
【０１２８】
本明細書中で用いられるとき、用語「Ｎ−グリカン」および「グリコフォーム」は交換可能に用いられ、Ｎ−結合型オリゴ糖、例えば、アスパラギン−Ｎ−アセチルグルコサミン結合によってポリペプチドのアスパラギン残基に付着したものを指す。Ｎ−結合型糖タンパク質は、タンパク質中のアスパラギン残基のアミド窒素に連結したＮ−アセチルグルコサミン残基を含有する。糖タンパク質上で見出される優勢な糖は、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびシアル酸（例としてＮ−アセチル−ノイラミン酸（ＮＡＮＡ））である。糖基のプロセシングは、Ｎ−結合糖タンパク質の場合、翻訳と同時にＥＲの内腔の中で起こって翻訳後にゴルジ体の中で継続する。
【０１２９】
Ｎ−グリカンは、共通の５糖コアであるＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（「Ｍａｎ」はマンノースを指し；「Ｇｌｃ」はグルコースを指し；および「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを指し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを指す）を持つ。通常、Ｎ−グリカン構造は、非還元末端を左側に、還元末端を右側にして表される。Ｎ−グリカンの還元末端は、タンパク質上のグリコシル化部位を含むＡｓｎ残基に付着する末端である。Ｎ−グリカンは、「トリマンノースコア」、「５糖コア」または「パウチマンノースコア」とも呼ばれるＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（「Ｍａｎ３」）コア構造に付加される周辺の糖（例としてＧｌｃＮＡｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含む分岐（アンテナ）の数に関して異なっている。Ｎ−グリカンは、その分岐した構成成分に従って分類される（例として高マンノース型、複合型またはハイブリッド型）。「高マンノース」型のＮ−グリカンは、５個以上のマンノース残基を持つ。「複合」型のＮ−グリカンは、典型的に、「トリマンノース」コアの１，３マンノースアームに付着した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃおよび１，６マンノースアームに付着した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃを持つ。複合型Ｎ−グリカンはまた、シアル酸または誘導体（例として「ＮＡＮＡ」または「ＮｅｕＡｃ」、ここで「Ｎｅｕ」はノイラミン酸を指し、「Ａｃ」はアセチルを指す）で修飾されていてもよいガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ−アセチルガラクトサミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基を持ち得る。複合型Ｎ−グリカンはまた、「バイセクティング」ＧｌｃＮＡｃおよびコアフコース（「Ｆｕｃ」）を含む鎖内置換を持ち得る。複合型Ｎ−グリカンはまた、「トリマンノースコア」上に複数のアンテナを持ち得て、これはしばしば「マルチアンテナ型グリカン」と呼ばれる。「ハイブリッド型」のＮ−グリカンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端上に少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃを、およびトリマンノースコアの１，６マンノースアーム上に０個以上のマンノースを持つ。これら様々なＮ−グリカンは「グリコフォーム」とも呼ばれる。
【０１３０】
複合型Ｎ−グリカンに関して、用語「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」は次のことを意味する。「Ｇ−２」はＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；用語「Ｇ−１」はＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；用語「Ｇ０」はＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；用語「Ｇ１」はＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；用語「Ｇ２」はＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；用語「Ａ１」はＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指し；および用語「Ａ２」はＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けることができるＮ−グリカン構造を指す。特に指示がない限り、用語「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」は、Ｎ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に付着したフコースを欠くＮ−グリカン種を指し示す。用語が「Ｆ」を包含するとき、「Ｆ」は、Ｎ−グリカン種がＮ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基上にフコース残基を含有することを指し示す。例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、Ａ１ＦおよびＡ２Ｆは全て、Ｎ−グリカンが、Ｎ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に付着したフコース残基をさらに包含することを指し示す。下等真核生物、例えば酵母および糸状菌などは、通常、フコースを生成するＮ−グリカンを産生しない。
【０１３１】
マルチアンテナ型Ｎ−グリカンに関して、用語「マルチアンテナ型Ｎ−グリカン」とは、Ｎ−グリカンの１，６アームもしくは１，３アームの非還元末端を構成するマンノース残基上にＧｌｃＮＡｃ残基を、またはＮ−グリカンの１，６アームおよび１，３アームの非還元末端を構成する各々のマンノース残基上にＧｌｃＮＡｃ残基をさらに含むＮ−グリカンを指す。それゆえに、マルチアンテナ型Ｎ−グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＮＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２により特徴付けることができる。用語「１−４」は、１、２、３または４個の残基を指す。
【０１３２】
バイセクト型Ｎ−グリカンに関して、用語「バイセクト型Ｎ−グリカン」とは、ＧｌｃＮＡｃ残基がＮ−グリカンの還元末端においてマンノース残基と連結したＮ−グリカンを指す。バイセクト型Ｎ−グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２により特徴付けることができ、ここで各マンノース残基はその非還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基と連結している。対照的に、マルチアンテナ型Ｎ−グリカンがＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けられるとき、この式は、多アンテナＮ−グリカンがＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２場合、この式は、２つのＧｌｃＮＡｃ残基がＮ−グリカンの２つのアームのうちの一方の非還元末端においてマンノース残基と連結しており、１つのＧｌｃＮＡｃ残基がＮ−グリカンの他方のアームの非還元末端においてマンノース残基と連結していることを指し示す。
【０１３３】
抗体の物理的性質
本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片は、軽鎖免疫グロブリン可変領域または重鎖免疫グロブリン可変領域のいずれかに１または複数のグリコシル化部位をさらに含有し得る。かかるグリコシル化部位は、抗原結合性の変化のため、抗体もしくは断片の免疫原性増加または抗体のｐＫの変化をもたらし得る（Ｍａｒｓｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４１：６７３−７０２；Ｇａｌａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２：５４８９−９４；Ｗａｌｌｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６８：１０９９−１０９；Ｓｐｉｒｏ（２００２）  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １２：４３Ｒ−５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１６：４５２−７；Ｍｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：６９７−７０６）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフにおいて起こることが知られている。
【０１３４】
各抗体または抗原結合性断片は固有の等電点（ｐＩ）を持ち、これは一般に６から９．５の間のｐＨ範囲にある。ＩｇＧ１抗体のｐＩは、典型的に７〜９．５のｐＨ範囲内にあり、ＩｇＧ４抗体のｐＩは、典型的に６〜８のｐＨ範囲内にある。
【０１３５】
各抗体または抗原結合性断片は特徴的な融解温度を持ち、融解温度が高いほどインビボでの全体的な安定性が高いことを指し示す（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｒ  ａｎｄ  Ｍａｎｎｉｎｇ  ＭＣ（２００２）  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：３６１−７１）。一般的に、ＴＭ１  （初期アンフォールディング温度）は６０℃より高い、６５℃より高いまたは７０℃より高いものであり得る。抗体または断片の融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２０：１９５２−６０；Ｇｈｉｒｌａｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ６８：４７−５２）または円二色法（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｓｃｉ  ４０：３４３−９）を用いて測定することができる。
【０１３６】
さらなる実施形態において、抗体およびその抗原結合性断片は、急速に分解しないものが選択される。抗体または断片の分解は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ−ＭＳを用いて測定することができる（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＡＪ  ａｎｄ  Ｈｕｇｈｅｓ  ＤＥ（１９９５）  Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ６７：３６２６−３２）。
【０１３７】
さらなる実施形態において、抗体およびその抗原結合性断片は、望まれない免疫応答の引き金につながることがある凝集作用および／または変化したもしくは好ましくない薬物動態学的性質が最小限であるものが選択される。一般に、抗体および断片は、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下の凝集を許容可能である。凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および光散乱といったいくつかの技術によって測定することができる。
【０１３８】
抗体コンジュゲート
本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片はまた、化学的部分にコンジュゲートされ得る。化学的部分は、なかでも、ポリマー、放射性核種、または免疫調節物質に結合する低分子であり得る。特定の実施形態において、化学的部分は、対象の体内で抗体または断片の半減期を増加させるポリマーである。好適なポリマーとしては、限定されるものではないが親水性ポリマーが挙げられ、親水性ポリマーとしては、限定されるものではないがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例として２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）が挙げられる。Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．  １０：９７３−９８１）は、ＰＥＧがコンジュゲートした一本鎖抗体を開示している。Ｗｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．  １２：５４５−５５３）は、抗体を放射性金属キレート剤（ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ））に付着したＰＥＧでコンジュゲートすることを開示している。
【０１３９】
本明細書中に開示される抗体およびその抗原結合性断片はまた、標識、例えば９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈおよび４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒおよび５６Ｆｅなどとコンジュゲートされ得る。
【０１４０】
本明細書中に開示される抗体および抗原結合性断片はまた、例えばその生物学的（例として血清）半減期を増加させるために、ＰＥＧ化され得る。抗体または断片をＰＥＧ化するため、抗体または断片は、典型的には、反応性形態のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などと、１または複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着するようになる条件下で、反応させる。特定の実施形態において、ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似した反応性の水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書中で用いられるとき、用語「ポリエチレングリコール」は、他のタンパク質を誘導体化するために用いられてきた任意の形態のＰＥＧ、例えばモノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドなどを包含することが意図される。ある種の実施形態において、ＰＥＧ化される抗体または断片は、グリコシル化されていない抗体または断片である。タンパク質をＰＥＧ化するための方法は当該技術分野で知られており、本発明の抗体に適用することができる。例としてＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０１４１】
本明細書中に開示される抗体および抗原結合性断片はまた、蛍光標識または化学発光標識とコンジュゲートされ得て、これらの標識としては、蛍光団、例えば希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアネート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアデハイド（ｐｈｔｈａｌａｄｅｈｙｄｅ）、フルオレサミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナル標識（ｌｕｍｉｎａｌ  ｌａｂｅｌ）、イソルミナル標識（ｉｓｏｌｕｍｉｎａｌ  ｌａｂｅｌ）、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム（ａｃｒｉｄｉｍｉｕｍ）塩標識、オキサレートエステル標識、エクオリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識および安定なフリーラジカルなどが挙げられる。
【０１４２】
本発明の抗体およびその抗原結合性断片を様々な部分にコンジュゲートするための当該技術分野で知られている任意の方法が使用され得て、この方法としては、Ｈｕｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６２）  Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５；Ｄａｖｉｄ，ｅｔ  ａｌ．，（１９７４）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４；Ｐａｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．  ４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，（１９８２）  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．  ３０：４０７により記載されている方法が挙げられる。抗体および断片をコンジュゲートするための方法は慣用的であり、当該技術分野で非常によく知られている。
【０１４３】
抗体の治療的使用
さらに、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片での処置の必要がある、ヒト対象を包含する対象を処置するための方法が提供される。一実施形態において、かかる対象は、がんまたは感染症を患っている。
【０１４４】
「対象」は、哺乳類、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル（例としてカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）、例としてマカク・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））またはウサギなどであることができる。ある種の実施形態において、対象は、ヒト対象である。
【０１４５】
用語「を伴う（ｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」とは、本明細書中で提供される方法において投与される構成成分を、同時送達のための単一の組成物へと製剤化することができること、または２つ以上の組成物（例としてキット）へと別々に製剤化することができることを指し示す。各構成成分は、他の構成成分が投与される時と異なる時に対象に投与することができる。ある種の実施形態において、各投与は、所与の期間にわたって、いくらかの間隔をおいて、非同時的に（例として別々にまたは逐次的に）与えられる。そのうえ、別々の構成成分は、同じ経路によってまたは異なる経路によって対象に投与することができる。
【０１４６】
さらに、本明細書中に開示される単離された抗体またはその抗原結合性断片での処置の必要がある、ヒト対象を包含する対象を処置するための方法が提供される。一実施形態において、かかる対象は、感染または感染症を患っている。いくつかの実施形態において、本明細書中では、がんの処置における使用のための抗体または抗原結合性断片が提供される。他の実施形態において、本明細書中では、感染または感染症の処置における使用のための抗体または抗原結合性断片が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書中では、がんを処置するための薬剤の製造のための抗体または抗原結合性断片の使用が提供される。他の実施形態において、本明細書中では、感染または感染症を処置するための薬剤の製造のための抗体または抗原結合性断片の使用が提供される。一実施形態において、本明細書中では、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。一実施形態において、本明細書中では、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片をコードする核酸を含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む。ある種の実施形態において、本明細書中で提供される方法は、さらなる治療剤または治療手法をさらに含むか、さもなければこれらを伴う。
【０１４７】
一実施形態において、さらなる治療剤は、（ｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；（ｘ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｉｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｉｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｖ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｉｘ）抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘｉｉｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘｉｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；（ｘｘｖ）ＳＴＩＮＧアゴニスト；（ｘｘｖｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および（ｘｘｖｉｉ）ＰＡＲＰ阻害剤よりなる群から選択される。
【０１４８】
一実施形態において、剤は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態において、剤は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一実施形態において、剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。一実施形態において、剤は、ＰＡＲＰ阻害剤である。
【０１４９】
別の実施形態において、対象はがんを患っている。一実施形態において、がんは、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎臓移行上皮がん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺がん（例として非小細胞肺がん）、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎臓細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳がん、神経膠芽腫、髄膜腫、脳下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｍｙｅｌｆｉｂｒｏｓｉｓ）、軟組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、乳がんまたは胃がんである。ある実施形態において、がんは、転移性がん、例として上記の種類の転位性がんである。
【０１５０】
本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片、組成物および方法により処置することができるがんとしては、限定されるものではないが、心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、筋腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫様過誤腫、中皮腫；消化器：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（腺管癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カルポジ肉腫（Ｋａｒｐｏｓｉ'ｓ  ｓａｒｃｏｍａ）、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）  結腸直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（精上皮腫、奇形腫、胚性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管細胞癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、オステオクロンフローマ（ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｆｒｏｍａ）（骨軟骨性外骨症）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、コンドロミクソフィブローマ（ｃｈｏｎｄｒｏｍｙｘｏｆｉｂｒｏｍａ）、類骨骨腫および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形神経膠芽腫、乏突起膠細胞腫、シュワン腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍性子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌］、卵胞顆粒膜細胞腫瘍（ｇｒａｎｕｌｏｓａ  ｔｈｅｃａｌ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒ）、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状横紋筋肉腫（胚性横紋筋肉腫）、ファロピウス管（癌腫）、乳房；血液学：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カルポジ肉腫、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、アンギオーマ、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽細胞腫が挙げられる。それゆえに、用語「がん性細胞」は、本明細書中で提供されるとき、上で特定される症状のうちのいずれか１つに罹患した細胞を包含する。
【０１５１】
一実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片、組成物および方法により処置することができるがんとしては、限定されるものではないが、肺がん、膵臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、甲状腺がん、骨髄異形成症候群、膀胱癌、表皮癌、黒色腫、乳がん、前立腺がん、頭頸部がん、卵巣がん、脳がん、間葉系起源のがん、肉腫、テトラカルシノーマ（ｔｅｔｒａｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）、神経芽細胞腫、腎臓癌、肝がん、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫および甲状腺未分化癌が挙げられる。
【０１５２】
ある実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片を用いて対象を処置するための方法であって、対象がウイルス感染を患っている前記方法が提供される。一実施形態において、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例としてＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス類、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス脳炎ウイルスよりなる群から選択されるウイルスの感染である。
【０１５３】
ある実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片を用いて対象を処置するための方法であって、対象が細菌感染を患っている前記方法が提供される。一実施形態において、細菌感染は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌（ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉ）および淋菌（ｇｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、桿菌、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、バチルス・アントリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、エルシニア・ペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）およびボリエラ（Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ）よりなる群から選択される細菌の感染である。
【０１５４】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片を用いて対象を処置するための方法であって、対象が真菌感染を患っている前記方法が、本明細書中で提供される。一実施形態において、真菌感染は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ目（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）の属（ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ））、スポロトリクス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラズマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）よりなる群から選択される真菌の感染である。
【０１５５】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体または抗原結合性断片を用いて対象を処置するための方法であって、対象が寄生生物感染を患っている前記方法が、本明細書中で提供される。一実施形態において、寄生生物感染は、エントアメーバ・ヒストリチカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスティス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、ニッポストロンギルス・ブラジリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）よりなる群から選択される寄生生物の感染である。
【０１５６】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または他のさらなる治療剤および／もしくは治療手法を伴って、任意の疾患、例えばがんなど、例として本明細書中で論じられるものを処置または予防するために、かかる処置または予防の必要がある対象において用いることができる。薬学的に許容される担体を含み、かかる抗体および断片をさらなる治療剤を伴って含む組成物、例として医薬組成物も考えられる。
【０１５７】
それゆえ、本明細書中では、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。ある種の実施形態において、投与は、さらなる治療剤または治療手法を伴う。
【０１５８】
また本明細書中では、ヒト対象において感染または感染症を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。ある種の実施形態において、投与は、さらなる治療剤または治療手法を伴う。
【０１５９】
別の実施形態において、さらなる治療剤と組み合わされた、がんの処置または感染もしくは感染症の処置における使用のための本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片が提供される。一実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、がんの処置における使用のためのものである。一実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、感染の処置における使用のためのものである。一実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、感染症の処置における使用のためのものである。ある種の実施形態において、処置は、さらなる治療剤を含む。
【０１６０】
さらなる実施形態において、さらなる治療剤と組み合わされた、がんの処置または感染もしくは感染症の処置のための薬剤の製造のための本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の使用が提供される。別の実施形態において、がんの処置または感染もしくは感染症の処置のための、本発明の抗体または抗原結合性断片とさらなる治療剤との組み合わせが提供される。一実施形態において、がんを処置するための薬剤の製造のための抗体またはその抗原結合性断片が提供される。一実施形態において、感染を処置するための薬剤の製造のための抗体またはその抗原結合性断片が提供される。一実施形態において、感染症を処置するための薬剤の製造のための抗体またはその抗原結合性断片が提供される。ある種の実施形態において、薬剤は、さらなる治療剤と共に製剤化される。
【０１６１】
他の実施形態において、ヒト対象においてがんを処置するまたは感染もしくは感染症を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体もしくは抗原結合性断片または本明細書中に開示される発現ベクターもしくは宿主細胞の有効量を、任意選択でさらなる治療剤または治療手法を伴って、対象に投与することを含む。一実施形態において、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。別の実施形態において、ヒト対象において感染を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。なお別の実施形態において、ヒト対象において感染性疾患を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片の有効量を対象に投与することを含む。一実施形態において、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む。別の実施形態において、ヒト対象において感染を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む。なお別の実施形態において、ヒト対象において感染性疾患を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む。一実施形態において、ヒト対象においてがんを処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む。別の実施形態において、ヒト対象において感染を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む。なお別の実施形態において、ヒト対象において感染性疾患を処置する方法が提供され、この方法は、本明細書中に開示される抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む。ある種の実施形態において、方法は、付加的な治療剤の投与をさらに含む。他の実施形態において、方法は、付加的な治療手法をさらに含む。
【０１６２】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または腫瘍ワクチンを伴って用いることができる。腫瘍ワクチンの例としては、限定されるものではないが、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染が引き起こすがんに対するワクチン、例えばＧａｒｄａｓｉｌ（登録商標）、Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）およびＣｅｒｖａｒｉｘ（登録商標）など；Ｂ型肝炎ウイルスが引き起こす肝臓がんを予防するワクチン、例えばＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（登録商標）およびＲｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ（登録商標）など；免疫応答を誘発する腫瘍溶解性ウイルス治療、例えばＩｍｌｙｇｉｃ（登録商標）など；ＤＮＡワクチン、例えばＳｙｎｃｈｏｔｒｏｐｅ  ＭＡ２ＭプラスミドＤＮＡワクチンおよびＺＹＣ１０１；マンマグロビン−ａ  ＤＮＡワクチンなど（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１４  ２０（２３）：５９６４−７５を参照されたい）；ベクターをベースにしたワクチン、例えばＰＳＡ−ＴＲＩＣＯＭ（ｐｒｏｓｔｖａｃ）、ＰＡＮＶＡＣ−ＶＦ、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）をベースにしたＰＳＡワクチン（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０１４，２（５）  １３７−１４８を参照されたい）、リステリア−メソテリン  Ａｄｅｎｏ−ＣＥＡ；アロジェニックワクチン、例えばＧＶＡＸ、ＢＬＰ−２５（抗Ａｎｋａｒａ−ムチン１）、ベラゲンプマツセル−Ｌ、ＴＧ４０１０、ＣＩＭＡｖａｘ上皮増殖因子ワクチン、ＮＹ−ＥＳＯ、ＧＭ．ＣＤ４０Ｌ−ＣＣＬ２１など；自家ワクチン、例えばＡｄｅｎｏ−ＣＤ４０Ｌ、ＢＣＧ、ＩＮＧＮ−２２５、樹状細胞ワクチン、例えばＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（シプロイセル−Ｔ）、ｒＦ−ＣＥＡ−ＭＵＣ１−ＴＲＩＣＯＭ（ｐａｎｖａｃ−ＤＣ）など；抗原ワクチン、例えばＭＵＣ−１（ｓｔｉｍｕｖａｘ）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰ−１００、ＭＡＧＥ−Ａ３（黒色腫抗原コーディング遺伝子Ａ３）、ＩＮＧＮ−２２５など（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １５３（２０１５）  １−９）が挙げられる。
【０１６３】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または化学療法剤を伴って用いることができる。
【０１６４】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または放射線治療を伴って用いることができる。
【０１６５】
特定の実施形態において、本明細書中に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または標的治療を伴って用いることができる。標的治療の例としては、ホルモン治療、シグナル伝達阻害剤（例としてＥＧＦＲ阻害剤、例えばセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））など）；ＨＥＲ２阻害剤（例としてトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））およびペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）））；ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤（例えばイマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））およびダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））など）；ＡＬＫ阻害剤（例えばクリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標））およびセリチニブ（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標））など）；ＢＲＡＦ阻害剤（例えばベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））およびダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標））など）、遺伝子発現調節物質、アポトーシス誘導物質（例としてボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））およびカルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）））、血管新生阻害剤（例としてベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））およびラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、毒素に付着させたモノクローナル抗体（例として、ブレンツキシマブ  ベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））およびアド−トラスツズマブ  エムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）））が挙げられる。
【０１６６】
特定の実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗がん治療剤と組み合わせて用いられる。他の実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、免疫調節性薬剤と組み合わせて用いられる。いくつかの実施形態において、免疫調節性薬剤は、免疫調節性受容体阻害剤である。ある種の実施形態において、免疫調節性薬剤は、受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。
【０１６７】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＣＳ１抗体（例としてエロツズマブ）、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体（例としてリリルマブ）、抗ＣＤ１３７抗体（例としてウレルマブ）、抗ＧＩＴＲ抗体（例としてＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ１抗体（例としてペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１））、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例としてＢＭＳ−９３６５５９、デュルバルマブ、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＩＬＴ１抗体、抗ＩＬＴ２抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＩＬＴ５抗体、抗ＩＬＴ６抗体、抗ＩＬＴ７抗体、抗ＩＬＴ８抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体、抗４−１ＢＢ抗体（例としてＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＩＬ−１０抗体、ＩＬ−１０もしくはＰＥＧ化ＩＬ−１０、またはかかる標的の任意の有機低分子阻害剤のうちの１または複数を伴って用いられる。
【０１６８】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＰＤＬ１抗体（例としてＢＭＳ−９３６５５９、デュルバルマブ、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）を伴って用いられる。
【０１６９】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＣＴＬＡ４抗体を伴って用いられる。
【０１７０】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＣＳ１抗体を伴って用いられる。
【０１７１】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体を伴って用いられる。
【０１７２】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＣＤ１３７（例としてウレルマブ）抗体を伴って用いられる。
【０１７３】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＧＩＴＲ（例としてＴＲＸ５１８）抗体を伴って用いられる。
【０１７４】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＰＤ−Ｌ２抗体を伴って用いられる。
【０１７５】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ１抗体を伴って用いられる。
【０１７６】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ２抗体を伴って用いられる。
【０１７７】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ３抗体を伴って用いられる。
【０１７８】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ４抗体を伴って用いられる。
【０１７９】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ５抗体を伴って用いられる。
【０１８０】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ６抗体を伴って用いられる。
【０１８１】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ７抗体を伴って用いられる。
【０１８２】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＴＬ８抗体を伴って用いられる。
【０１８３】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＣＤ４０抗体を伴って用いられる。
【０１８４】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＯＸ４０抗体を伴って用いられる。
【０１８５】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体を伴って用いられる。
【０１８６】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体を伴って用いられる。
【０１８７】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体を伴って用いられる。
【０１８８】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体を伴って用いられる。
【０１８９】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体を伴って用いられる。
【０１９０】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体を伴って用いられる。
【０１９１】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を伴って用いられる。
【０１９２】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体を伴って用いられる。
【０１９３】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を伴って用いられる。
【０１９４】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体を伴って用いられる。
【０１９５】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＣＯＳ抗体を伴って用いられる。
【０１９６】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＳＩＲＰα抗体を伴って用いられる。
【０１９７】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗４−１ＢＢ抗体を伴って用いられる。
【０１９８】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＩＬ−１０抗体を伴って用いられる。
【０１９９】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＴＳＬＰ抗体を伴って用いられる。
【０２００】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＬ−１０またはＰＥＧ化ＩＬ−１０を伴って用いられる。
【０２０１】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、阻害剤（例として有機低分子または抗体もしくはその抗原結合性断片）、例えばＭＴＯＲ（哺乳類ラパマイシン標的タンパク質）阻害剤、細胞傷害剤、白金剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、微小管安定剤、タキサン、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ５２阻害剤、ＣＤ３０阻害剤、ＲＡＮＫ（核内因子カッパ−Ｂ受容体活性化因子）阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＲＡＮＫＬ（核内因子カッパ−Ｂ受容体活性化因子リガンド）阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＥＲ１阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＨＥＲ４阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＣＤ２２阻害剤、ＣＤ７９ｂ阻害剤、ＥｒｂＢ２阻害剤またはファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤などのうちの１または複数を伴って用いられる。
【０２０２】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、４−ヒドロキシタモキシフェン、５−デオオキシウリジン（ｄｅｏｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、５'−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、６−メカプトプリン（ｍｅｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、７−ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ−４４３６５４、酢酸アビラテロン、アブラキサン、ＡＢＴ−５７８、アコルビフェン、ＡＤＳ−１００３８０、ＡＬＴ−１１０、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンジオスタチン、ＡＰ−２３５７３、ＡＲＱ−１９７、アルゾキシフェン、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴ−９２６３、アトラセンタン、アキシチニブ、ＡＺＤ１１５２、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン、ＢＣ−２１０、ベソデュトクス（ｂｅｓｏｄｕｔｏｘ）、ベバシズマブ、ビカルタミド、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ブレオマイシン、ＢＭＳ−２１４６６２、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−２７５２９１、ＢＭＳ−３１０７０５、ボルテジミブ（ｂｏｒｔｅｚｉｍｉｂ）、ブセレリン、ブスルファン、カルシトリオール、カンプトテシン、カネルチニブ、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ＣＣ８４９０、セジラニブ、ＣＧ−１５２１、ＣＧ−７８１、クラミドシン、クロラムブシル、クロロトキシン、シレンジタイド、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、ＣＯＬ−３、ＣＰ−７２４７１４、シクロホスファミド、シプロテロン、酢酸シプロテロン、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダカルバジン、ダシノスタット、ダクチノマイシン、ダロツズマブ、ダヌセルチブ、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ダウノルビシン、デカタニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、デグエリン、デニロイキン、デオキシコホルマイシン、デプシペプチド、ジアリルプロピオニトリル、ジエチルスチルベストロール、ジフチトクス、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、エドテカリン、イットリウム−９０標識エドトレオチド、エドトレオチド、ＥＫＢ−５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン、エンザルタミド、エンザスタウリン、エピルビシン、エピチロンＢ（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ  Ｂ）、ＥＲＡ−９２３、アービタックス、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、フィクラツズマブ、フィナステリド、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベストラント、ガレテロン、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ジャイマテカン、ゴセレリン、酢酸ゴセレリン、ゴシポール、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ−３３３９、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシウレア、ＩＣ８７１１４、イダルビシン、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、イホスファミド、ＩＭ８６２、イマチニブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン−１２、イピリムマブ、イリノテカン、ＪＮＪ−１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ−０４０２、ラパチニブ、ラソフォキシフェン、レトロゾール、ロイコボリン、リュープロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、リポソーム内包パクリタキセル、ロムスチン、ロナファルニブ、ルカントン、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、マリマスタット、メクロレタミン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、トザセルチブ、ＭＬＮ８０５４、ネオバスタット、ネラチニブ、ノイラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ、ニルチミド（ｎｉｌｕｔｉｍｉｄｅ）、ノラトレキセド、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、オブリメルセン、オクトレオチド、オファツムマブ、オラパリブ、オレゴボマブ、オルテロネル、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パミドロネート、パニツムマブ、パゾパニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ−インターフェロン、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペリホシン、フェニルアラニンマスタード、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＩＫ−７５、ピペンドキシフェン、ＰＫＩ−１６６、プリカマイシン、ポルフィマー、プレドニゾン、プロカルバジン、プロゲスチン類、ＰＸ−８６６、Ｒ−７６３、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、リダフォロリムス、リツキシマブ、ロミデプシン、ＲＴＡ７４４、ルビテカン、スクリプタイド、Ｓｄｘ１０２、セリシクリブ、セルメチニブ、セマクサニブ、ＳＦ１１２６、シロリムス、ＳＮ３６０９３、ソラフェニブ、スピロノラクトン、スクワラミン、ＳＲ１３６６８、ストレプトゾシン、ＳＵ６６６８、スベロイルアナリドヒドロキサム酸（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎａｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、スニチニブ、合成エストロゲン、タランパネル、タリモジーン  ラハーパレプベック、タモキシフェン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テスミリフェン、テストステロン、テトランドリン、ＴＧＸ−２２１、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ、チピファルニブ、チボザニブ、ＴＫＩ−２５８、ＴＬＫ２８６、トポテカン、クエン酸トレミフェン、トラベクテジン、トラスツズマブ、トレチノイン、トリコスタチンＡ、トリシリビンホスフェート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）一水和物、パモ酸トリプトレリン、ＴＳＥ−４２４、ウラシルマスタード、バルプロ酸、バルルビシン、バンデタニブ、バタラニブ、ＶＥＧＦトラップ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビタキシン、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、ボリノスタット、ＶＸ−７４５、ワートマニン、Ｘｒ３１１、ザノリムマブ、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ−３０４７０９、ＺＭ３３６３７２、ＺＳＴＫ４７４のうちの任意の１または複数を伴って用いられる。
【０２０３】
本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて用いられる好適な抗がん剤の限定されない例としては、細胞増殖抑制剤、細胞傷害剤、がんおよび新生物性疾患に対する標的治療剤（低分子、生物製剤、ｓｉＲＮＡおよびマイクロＲＮＡ）が挙げられる。一実施形態において、剤は、代謝拮抗剤（例えばメトクストレキセート（ｍｅｔｈｏｘｔｒｅｘａｔｅ）、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、フルダラビン、カペシタビンなど）である。一実施形態において、剤は、アルキル化剤、例えばテモゾロミドまたはシクロホスファミドなどである。一実施形態において、剤は、ＤＮＡ相互作用剤またはＤＮＡ損傷剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチンまたはドキソルビシンなどである。一実施形態において、剤は、電離放射線照射、例えば放射線治療などである。一実施形態において、剤は、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばエトポシドまたはドキソルビシンなどである／一実施形態において、剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカンまたはトポテカンなど  一実施形態において、剤は、チューブリン相互作用剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、Ａｂｒａｘａｎｅｒまたはエポチロンなどである。一実施形態において、剤は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤である。一実施形態において、剤は、紡錘体チェックポイント阻害剤である。一実施形態において、剤は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、例えばオラパリブ、ニラパリブまたはベリパリブなどである。一実施形態において、剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤である。一実施形態において、剤は、ロテアーゼ（ｒｏｔｅａｓｅ）阻害剤、例えばカテプシンＤまたはカテプシンＫ阻害剤などである。一実施形態において、剤は、プロテオソームまたはユビキチン化阻害剤、例えばボルテゾミブなどである。一実施形態において、剤は、その野生型ｐ５３活性を回復させる変異ｐ５３の活性化物質（ｃｔｉｖａｔｏｒ）である。一実施形態において、剤は、アデノウイルス−ｐ５３である。一実施形態において、剤は、ａＢｃｌ−２阻害剤、例えばＡＢＴ−２６３などである。一実施形態において、剤は、ヒートショックプロテイン（ＨＳＰ）調節物質、例えばゲルダナマイシンおよび１７−ＡＡＧなどである。一実施形態において、剤は、ヒストンデアセチラーゼ（ｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ）（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えばボリノスタット（ＳＡＨＡ）などである。一実施形態において、剤は、性ホルモン調節剤である。一実施形態において、剤は、抗エストロゲン、例えばタモキシフェンまたはフルベストラントなどである。一実施形態において、剤は、選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）、例えばラロキシフェンなどである。一実施形態において、剤は、抗アンドロゲン、例えばビカルタミドまたはフルタミドなどである。一実施形態において、剤は、ＬＨＲＨアゴニスト、例えばリュープロリドなどである。一実施形態において、剤は、５α−レダクターゼ阻害剤、例えばフィナステリドなどである。一実施形態において、剤は、チトクロムＰ４５０  Ｃ１７リアーゼ（ＣＹＰ４５０ｃ１７、１７αＣとも呼ばれる）である。一実��形態において、剤は、アロマターゼ阻害剤、例えばレトロゾール、アナストロゾールまたはエキセメスタンなどである。一実施形態において、剤は、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、例えばゲフチニブ（ｇｅｆｔｉｎｉｂ）、エルロチニブまたはラプチニブ（ｌａｐｔｉｎｉｂ）などである。一実施形態において、剤は、ｅｒｂＢ１およびｅｒｂＢ２のデュアル阻害剤、例えばラパチニブなどである。一実施形態において、剤は、多標的キナーゼ（セリン／スレオニンおよび／またはチロシンキナーゼ）阻害剤である。一実施形態において、剤は、ＡＢＬキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブおよびニロチニブまたはダサチニブなどである。一実施形態において、剤は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、ＦＬＴ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｔｉｅ２、Ｒａｆ、ＭＥＫまたはＥＲＫの阻害剤、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＰＬＸ−４０３２、アキシチニブ、ＰＴＫ７８７またはＧＳＫ−１１２０２１２などである。一実施形態において、剤は、ポロ様キナーゼ阻害剤である。一実施形態において、剤は、オーロラキナーゼ阻害剤である。一実施形態において、剤は、ＪＡＫ阻害剤である。一実施形態において、剤は、ｃ−ＭＥＴキナーゼ阻害剤である。一実施形態において、剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤またはｍＴＯＲ阻害剤、例えばＧＤＣ−０９４１、ＢＥＺ−２３５、ＢＫＭ−１２０またはＡＺＤ−８０５５などである。一実施形態において、剤は、ラパマイシンまたはラパマイシンアナログ、例えばテムシロリムス、エベロリムスまたはデフォロリムスなどである。一実施形態において、剤は、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）アゴニストである。一実施形態において、剤は、ＣＸＣＲ（ＣＸＣケモカイン受容体）阻害剤、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。
【０２０４】
他の抗がん剤（抗新生物剤としても知られる）としては、限定されるものではないが、ａｒａ−Ｃ、アドリアマイシン、シトキサン、カルボプラチン、ウラシルマスタード、クロルメチン（Ｃｌｏｒｍｅｔｈｉｎｅ）、イフォスフスミド（Ｉｆｏｓｆｓｍｉｄｅ）、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスフォルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン（Ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎｅ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、テニポシド、シタラビン、ペメトレキセド、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、フルタミド  酢酸メドロキシプロゲステロン、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミソール、Ｄｒｏｌｌｏｘａｆｉｎｅ、ヘキサメチルメラミン、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、Ｐｒｏｆｉｍｅｒ、チオテパ、アルトレタミン、Ｄｏｘｉｌ、Ｏｎｔａｋ、Ｄｅｐｏｃｙｔ、Ａｒａｎｅｓｐ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）、Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標）が挙げられる。一実施形態において、剤は、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、例えばＳＡＲＡＳＡＲ（商標）（４−［２−［４−［（１１Ｒ）−３，１０−ジブロモ−８−クロロ−６、１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［５，６］シクロヘプタ［１，２−ｂ］ピリジン−１１−イル−］−１−ピペリジニル］−２−オキソエチル］−ピペリジンカルボキサミド、チピファルニブなどである。一実施形態において、剤は、インターフェロン、例えばイントロンＡまたはＰｅｇ−イントロンなどである。一実施形態において、剤は、抗ｅｒｂＢ１抗体、例えばセツキシマブまたはパニツムマブなどである。一実施形態において、剤は、抗ｅｒｂＢ２抗体、例えばトラスツズマブなどである。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ５２抗体、例えばアレムツズマブなどである。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブなどである。一実施形態において、剤は、抗ＣＤ３３抗体、例えばゲムツズマブ  オゾガマイシンなどである。一実施形態において、剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、例えばＡＶＡＳＴＩＮなどである。一実施形態において、剤は、ＴＲＩＡＬリガンド、例えばレクサツムマブ、マパツムマブまたはＡＭＧ−６５５などである��一実施形態において、剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブなどである。一実施形態において、剤は、ＣＴＡ１、ＣＥＡ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、ＭＨＣＩＩ、ＨＧＦ、ＩＬ−６、ＭＵＣ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＬ６、ＴＡＧ−７２、ＴＲＡＩＬＲ、ＶＥＧＦＲ、ＩＧＦ−２またはＦＧＦのいずれかに対する抗体である。一実施形態において、剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、例えばダロツズマブ（ＭＫ−０６４６）またはロバツムマブ（ＳＣＨ  ７１７４５４）などである。
【０２０５】
「エストロゲン受容体調節物質」とは、メカニズムにかかわらず、エストロゲンの受容体への結合を妨げるまたは阻害する化合物を指す。エストロゲン受容体調節物質の例としては、限定されるものではないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４'−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が挙げられる。
【０２０６】
「アンドロゲン受容体調節物質」とは、メカニズムにかかわらず、アンドロゲンの受容体への結合を妨げるまたは阻害する化合物を指す。アンドロゲン受容体調節物質の例としては、フィナステリドおよび他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾールおよび酢酸アビラテロンが挙げられる。
【０２０７】
「レチノイド受容体調節物質」とは、メカニズムにかかわらず、レチノイドの受容体への結合を妨げるまたは阻害する化合物を指す。かかるレチノイド受容体調節物質の例としては、ベキサロテン、トレチノイン、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、９−ｃｉｓ−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、ｔｒａｎｓ−Ｎ−（４'−ヒドロキシフェニル）  レチンアミド、およびＮ−４−カルボキシフェニル  レチンアミドが挙げられる。
【０２０８】
「細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤」とは、主として細胞の機能を直接的に妨げることによって、または細胞の縮瞳（ｍｙｏｓｉｓ）を阻害もしくは妨げることによって、細胞死を引き起こすまたは細胞増殖を阻害する化合物を指し、これらとしては、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化性化合物、微小管阻害剤／微小管安定剤、有糸分裂キネシンの阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、有糸分裂の進行に関与するキナーゼの阻害剤、増殖因子およびサイトカインのシグナル伝達経路に関与するキナーゼの阻害剤、代謝拮抗剤、生物学的応答調節物質、ホルモン治療剤／抗ホルモン治療剤、造血性増殖因子、モノクローナル抗体標的治療剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤およびオーロラキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【０２０９】
細胞傷害剤／細胞増殖抑制剤の例としては、限定されるものではないが、白金配位化合物、セルテネフ（ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸イムプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、ｃｉｓ−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド、ＧＰＸ１００、（ｔｒａｎｓ、ｔｒａｎｓ、ｔｒａｎｓ）−ビス−ｍｕ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ｍｕ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３'−デアミノ−３'−モルフォリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ００／５００３２を参照されたい）が挙げられる。
【０２１０】
低酸素活性化性化合物の例は、チラパザミンである。
【０２１１】
プロテオソーム阻害剤の例としては、限定されるものではないがラクタシスチンおよびＭＬＮ−３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ）が挙げられる。
【０２１２】
微小管阻害剤／微小管安定剤の例としては、タキサン類全般が挙げられる。具体的化合物としては、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、硫酸ビンデシン、３'，４'−ジデヒドロ−４'−デオキシ−８'−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、オーリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）  ベンゼンスルホンアミド、無水ビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、（配列番号１２８として開示される「Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン」）、ＴＤＸ２５８、エポチロン類（例えば米国特許第６，２８４，７８１号および第６，２８８，２３７号を参照されたい）およびＢＭＳ１８８７９７が挙げられる
トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ハイカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３'，４'−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャルトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）  プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［デ］ピラノ［３'，４'：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ラルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２'−ジメチルアミノ−２'−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ、５ａＢ、８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロオキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３'，４'：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソグイノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−デ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンチン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］  キノリン−７−オンおよびジメスナである。
【０２１３】
有糸分裂キネシン、とりわけヒト有糸分裂キネシンＫＳＰの阻害剤の例は、刊行物ＷＯ０３／０３９４６０、ＷＯ０３／０５００６４、ＷＯ０３／０５０１２２、ＷＯ０３／０４９５２７、ＷＯ０３／０４９６７９、ＷＯ０３／０４９６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、ＷＯ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７、ＷＯ０５／０１７１９０、ＵＳ２００５／０１７６７７６中に記載されている。ある実施形態において、有糸分裂キネシンの阻害剤としては、限定されるものではないが、ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰ１の阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、ＭＣＡＫの阻害剤およびＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤が挙げられる。
【０２１４】
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」の例としては、限定されるものではないが、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８およびスクリプタイドが挙げられる。他のヒストンデアセチラーゼ阻害剤へのさらなる言及は、次のマニュスクリプト；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ４６（２４）：５０９７−５１１６（２００３）中に見出すことができる。
【０２１５】
「有糸分裂の進行に関与するキナーゼの阻害剤」としては、限定されるものではないが、オーロラキナーゼの阻害剤、ポロ様キナーゼの阻害剤（ＰＬＫ；とりわけＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤およびｂｕｂ−Ｒ１の阻害剤が挙げられる。「オーロラキナーゼ阻害剤」の例は、ＶＸ−６８０である。
【０２１６】
「抗増殖剤」としては、アンチセンスのＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１など、ならびに代謝拮抗剤、例えばエノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキセート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビン  オクホスフェート、フォステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２'−デオキシ−２'−メチリデンシチジン、２'−フルオロメチレン−２'−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ'−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナシジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル  酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２'−シアノ−２'−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノ  フラノシル  シトシン、３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒド  チオセミカルバゾンおよびトラスツズマブが挙げられる。
【０２１７】
モノクローナル抗体標的治療剤の例としては、がん細胞特異的または標的細胞特異的なモノクローナル抗体に細胞傷害剤または放射性同位体が付着した治療剤が挙げられる。例としては、Ｂｅｘｘａｒが挙げられる。
【０２１８】
「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤」とは、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）、Ｉ型ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）およびＩＩ型ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ、Ｒａｂ  ＧＧＰＴａｓｅとも呼ばれる）といったプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素のいずれか１つまたは任意の組み合わせを阻害する化合物を指す。
【０２１９】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の例は、次の刊行物および特許中に見出すことができる：ＷＯ９６／３０３４３、ＷＯ９７／１８８１３、ＷＯ９７／２１７０１、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／３８６６５、ＷＯ９８／２８９８０、ＷＯ９８／２９１１９、ＷＯ９５／３２９８７、米国特許第５，４２０，２４５号、米国特許第５，５２３，４３０号、米国特許第５，５３２，３５９号、米国特許第５，５１０，５１０号、米国特許第５，５８９，４８５号、米国特許第５，６０２，０９８号、欧州特許公開０６１８２２１、欧州特許公開０６７５１１２、欧州特許公開０６０４１８１、欧州特許公開０６９６５９３、ＷＯ９４／１９３５７、ＷＯ９５／０８５４２、ＷＯ９５／１１９１７、ＷＯ９５／１２６１２、ＷＯ９５／１２５７２、ＷＯ９５／１０５１４、米国特許第５，６６１，１５２号、ＷＯ９５／１０５１５、ＷＯ９５／１０５１６、ＷＯ９５／２４６１２、ＷＯ９５／３４５３５、ＷＯ９５／２５０８６、ＷＯ９６／０５５２９、ＷＯ９６／０６１３８、ＷＯ９６／０６１９３、ＷＯ９６／１６４４３、ＷＯ９６／２１７０１、ＷＯ９６／２１４５６、ＷＯ９６／２２２７８、ＷＯ９６／２４６１１、ＷＯ９６／２４６１２、ＷＯ９６／０５１６８、ＷＯ９６／０５１６９、ＷＯ９６／００７３６、米国特許第５，５７１，７９２号、ＷＯ９６／１７８６１、ＷＯ９６／３３１５９、ＷＯ９６／３４８５０、ＷＯ９６／３４８５１、ＷＯ９６／３００１７、ＷＯ９６／３００１８、ＷＯ９６／３０３６２、ＷＯ９６／３０３６３、ＷＯ９６／３１１１１、ＷＯ９６／３１４７７、ＷＯ９６／３１４７８、ＷＯ９６／３１５０１、ＷＯ９７／００２５２、ＷＯ９７／０３０４７、ＷＯ９７／０３０５０、ＷＯ９７／０４７８５、ＷＯ９７／０２９２０、ＷＯ９７／１７０７０、ＷＯ９７／２３４７８、ＷＯ９７／２６２４６、ＷＯ９７／３００５３、ＷＯ９７／４４３５０、ＷＯ９８／０２４３６および米国特許第５，５３２，３５９号。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の役割の例については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）を参照されたい。
【０２２０】
「血管新生阻害剤」とは、メカニズムにかかわらず、新たな血管の形成を阻害する化合物を指す。血管新生阻害剤の例としては、限定されるものではないが、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害剤、表皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来増殖因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリンブロッカー、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ポリ硫酸ペントサン、アスピリンおよびイブプロフェンのような非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）や同様にセレコキシブおよびロフェコキシブのような選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤といったシクロオキシゲナーゼ阻害剤（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）；Ａｎａｔ；Ｒｅｃ．，Ｖｏｌ；２３８，ｐ；６８（１９９４）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ；３７２，ｐ；８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．  Ｖｏｌ；３１３，ｐ；７６（１９９５）；Ｊ；Ｍｏｌ；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ；１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ；Ｊ；Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ；７５，ｐ；１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ；５７，ｐ；１６２５（１９９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ；９３，ｐ；７０５（１９９８）；Ｉｎｔｌ；Ｊ；Ｍｏｌ；Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ；２，ｐ；７１５（１９９８）；Ｊ；Ｂｉｏｌ；Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ；２７４，ｐ；９１１６（１９９９））、ステロイド性抗炎症剤（例えばコルチコステロイド、ミネラルコルチコイド、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレド、ベタメタゾンなど）、カルボキサミドトリアゾール、コンブレタスタチン  Ａ−４、スクワラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンジオスタチン、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．  １０５：１４１−１４５（１９８５）を参照されたい）、ならびにＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９９）；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）；ＷＯ００／４４７７７；およびＷＯ００／６１１８６を参照されたい）が挙げられる。
【０２２１】
血管新生阻害剤の他の例としては、限定されるものではないが、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］ｏｃｔ−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド，ＣＭ１０１、スクワラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペンタオースリン酸塩（ｓｕｌｆａｔｅｄ  ｍａｎｎｏｐｅｎｔａｏｓｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレン  ジスルホネート）および３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）が挙げられる。
【０２２２】
血管新生を調節または阻害し、かつ本明細書中で提供される化合物と組み合わせて用いることもできる他の治療剤としては、凝固系および線溶系を調節または阻害する剤が挙げられる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．  ３８：６７９−６９２（２０００）中の総説を参照されたい）。凝固経路および線溶経路を調節または阻害するかかる剤の例としては、限定されるものではないが、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．  ８０：１０−２３（１９９８）を参照されたい）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵ阻害剤（活性トロンビン活性化線溶抑制因子［ＴＡＦＩａ］の阻害剤としても知られる）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．  １０１：３２９−３５４（２００１）を参照されたい）が挙げられる。ＴＡＦＩａ阻害剤は、米国シリアルＮｏ．６０／３１０，９２７（２００１年８月８日出願）およびＮｏ．６０／３４９，９２５（２００２年１月１８日出願）中に記載されている。
【０２２３】
「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨げる剤」とは、ＲＴＫを阻害し、それゆえ発がんおよび腫瘍の進行に関与するメカニズムを阻害する化合物を指す。かかる剤としては、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびｃ−Ｍｅｔの阻害剤が挙げられる。さらなる剤としては、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１により記載されているＲＴＫの阻害剤が挙げられる。
【０２２４】
「細胞増殖および生存シグナル伝達経路の阻害剤」とは、細胞表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する化合物を指す。かかる剤としては、セリン／スレオニンキナーゼの阻害剤（限定されるものではないが、Ａｋｔの阻害剤、例えばＷＯ０２／０８３０６４、ＷＯ０２／０８３１３９、ＷＯ０２／０８３１４０、ＵＳ２００４−０１１６４３２、ＷＯ０２／０８３１３８、ＵＳ２００４−０１０２３６０、ＷＯ０３／０８６４０４、ＷＯ０３／０８６２７９、ＷＯ０３／０８６３９４、ＷＯ０３／０８４４７３、ＷＯ０３／０８６４０３、ＷＯ２００４／０４１１６２、ＷＯ２００４／０９６１３１、ＷＯ２００４／０９６１２９、ＷＯ２００４／０９６１３５、ＷＯ２００４／０９６１３０、ＷＯ２００５／１００３５６、ＷＯ２００５／１００３４４、ＵＳ２００５／０２９９４１、ＵＳ２００５／４４２９４、ＵＳ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９中に記載されているものなどが挙げられる）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えばＰＬＸ−４０３２）、ＭＥＫの阻害剤（例えばＡｒｒｙ−１６２、ＲＯ−４９８７６５５およびＧＳＫ−１１２０２１２）、ｍＴＯＲの阻害剤（例えばＡＺＤ−８０５５、ＢＥＺ−２３５およびエベロリムス）、ならびにＰＩ３Ｋの阻害剤（例えばＧＤＣ−０９４１、ＢＫＭ−１２０）が挙げられる。
【０２２５】
上で用いられるように、「インテグリンブロッカー」とは、αｖβ３インテグリンへの生理的リガンドの結合を選択的にアンタゴナイズする、阻害するまたはこれに対抗する化合物、αｖβ５インテグリンへの生理的リガンドの結合を選択的にアンタゴナイズする、阻害するまたはこれに対抗する化合物、αｖβ３インテグリンおよびαｖβ５インテグリンの両方への生理的リガンドの結合をアンタゴナイズする、阻害するまたはこれに対抗する化合物、ならびに毛細血管内皮細胞上に発現した特定のインテグリン（１または複数）の活性をアンタゴナイズする、阻害するまたはこれに対抗する化合物を指す。この用語はまた、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンのアンタゴニストを指す。この用語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンのうちの任意の組み合わせのアンタゴニストを指す。
【０２２６】
チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかの具体例としては、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデンイル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルフォリニル）プロポキシ］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３'，２'，１'−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタン  スルホネート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４'−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミンおよびＥＭＤ１２１９７４が挙げられる。
【０２２７】
本出願で特許請求している抗体または抗原結合性断片とＰＰＡＲ−γ（すなわちＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわちＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組み合わせは、ある種の悪性腫瘍の処置において有用であり得る。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは、核内ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞上でのＰＰＡＲ−γの発現および血管新生へのその関与は、文献中に報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９８；３１：９０９−９１３；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  １９９９；２７４：９１１６−９１２１；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．  ２０００；４１：２３０９−２３１７を参照されたい）。より近年、ＰＰＡＲ−γアゴニストは、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生応答を阻害することが示されており；トログリタゾンおよびマレイン酸ロシグリタゾンの両方が、マウスにおいて網膜新生血管形成の発生を阻害する。（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．  ２００１；１１９：７０９−７１７）。ＰＰＡＲ−γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例としては、限定されるものではないが、Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ（登録商標）、Ｔａｌａｚｏｐａｒｉｂ（登録商標）、ニラパリブ、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ（登録商標）、チアゾリジンジオン（例えばＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンなど）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンズイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸および２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）  フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸が挙げられる。
【０２２８】
本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片はまた、アロマターゼ阻害剤と組み合わせて乳がんを処置または予防するために有用であり得る。アロマターゼ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、アナストロゾール、レトロゾールおよびエキセメスタンが挙げられる。
【０２２９】
本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片はまた、次の化学療法剤と組み合わせてがんを処置または予防するために有用であり得る：アバレリックス（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ（登録商標））；アルデスロイキン（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））；アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラギナーゼ（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））；アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；ベンダムスチン塩酸塩（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン・カプセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン・ゲル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；ブレフェルジンＡ；静注ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルステロン（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））；ポリフェプロサン２０インプラントを伴うカルムスチン（Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））；セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））；シタラビンリポソーム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパリンナトリウム注射液（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダルベポエチン  アルファ（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））；ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイキン  ジフチトクス（Ｏｎｔａｋ（登録商標））；デクスラゾキサン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））；デクスラゾキサン塩酸塩（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニンＢ；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；エクリズマブ注射液（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；Ｅｌｌｉｏｔｔ'ｓ  Ｂ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ'ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））；エルトロムボパグ（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチン  アルファ（ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））；エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））；エトポシド、ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベロリムス錠剤（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェルモキシトール（Ｆｅｒａｈｅｍｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル、５−ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；ゲムツズマブ  オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリン（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ  チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））；イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；インターフェロン  アルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ（登録商標））；インターフェロン  アルファ−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標））；ヨーベングアン  Ｉ  １２３注射液（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））；イキサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；ラパチニブ錠剤（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）、Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸リュープロリド（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；レバミソール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン、ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン、ナイトロジェンマスタ��ド（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン、６−ＭＰ（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ  ｔａｂｓ（登録商標））；メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；メトキサレン（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））；８−メトキシプソラレン；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン；ナンドロロンフェンプロピオネート（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０（登録商標））；ネララビン（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））；ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレルベキン（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；パクリタキセル（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））；パクリタキセル  タンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））；パリフェルミン（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ錠剤（Ｖｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペグアスパルガーゼ（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピポブロマン（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標））；プリカマイシン、ミトラマイシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフィマーナトリウム（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキセート注射液（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キナクリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン；ラスブリカーゼ（Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））；ラロキシフェン塩酸塩（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミプロスチム（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））；テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））；テニポシド、ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；テストラクトン（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグアニン、６−ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；��オプリン；チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））；トレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））；トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ−１３１  トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；ｔｒａｎｓ−レチノイン酸；トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；トレチノイン、ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリエチレンメラミン；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））；バルルビシン（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））；ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ワートマニン；およびゾレドロネート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））。
【０２３０】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１または複数の制吐薬を伴って用いられ、制吐薬としては、限定されるものではないが、カソピタント（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）および他のＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ＭＧＩ  ＰｈａｒｍａによってＡｌｏｘｉとして販売されている）、アプレピタント（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによってＥｍｅｎｄとして販売されている）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによってＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売されている）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによってＡｔａｒａｘ（登録商標）として販売されている）、メトクロプラミド（ＡＨ  Ｒｏｂｉｎｓ  Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡによってＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売されている）、ロラゼパム（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪによってＡｔｉｖａｎ（登録商標）として販売されている）、アルプラゾラム（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによってＸａｎａｘ（登録商標）として販売されている）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪによってＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販売されている）、ドロペリドール（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，ＧＡによってＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売されている）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによってＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによってＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売されている）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによってＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売されている）、グラニセトロン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪによってＫｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売されている）、オンダンセトロン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによってＺｏｆｒａｎ（登録商標）として販売されている）、ドラセトロン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによってＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売されている）、トロピセトロン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪ）によってＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売されている）が挙げられる。
【０２３１】
がん処置の他の副作用としては、赤血球および白血球の欠乏が挙げられる。したがって、ある実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片は、かかる欠乏を処置または予防する剤、例としてフィルグラスチム、ＰＥＧ−フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチン  アルファまたはダルベポエチン  アルファなどを伴う。
【０２３２】
ある実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、抗がん放射線治療を伴って投与される。例えば、ある実施形態において、放射線治療は、外部照射治療（ＥＢＴ）：高エネルギーＸ線のビームを腫瘍の位置に送達するための方法である。このビームは、患者の外部で（例として直線加速器によって）生成され、腫瘍部位を標的とする。これらのＸ線は、がん細胞を破壊することができ、慎重な治療計画により周囲の正常組織を温存することが可能になる。放射線源は、患者の体内に設置されない。ある実施形態において、放射線治療は、陽子線治療：Ｘ線の代わりに陽子線を患部組織にあてるタイプの原体療法である。ある実施形態において、放射線治療は、原体外部照射放射線治療：先進的技術を用いることで放射線治療を個体の身体の構造に合わせて調整する手法である。ある実施形態において、放射線治療はブラキセラピー：体内への放射性物質の一時的設置であり、通常、ある領域に追加線量照射またはブースト照射を与えるために使用される。
【０２３３】
ある実施形態において、抗体またはその抗原結合性断片に伴って投与される外科的手法は、外科的な腫瘍摘出である。
【０２３４】
医薬組成物および投与
本明細書中で提供される抗体および抗原結合性断片の医薬組成物または滅菌組成物を調製するため、抗体またはその抗原結合性断片は薬学的に許容される担体または賦形剤と混合することができる。例としてＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。
【０２３５】
治療剤および診断剤の製剤は、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することによって、例として凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態に調製することができる（例としてＨａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ'ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０２３６】
単独でまたは別の治療剤と組み合わせて投与される本明細書中で提供される抗体の毒性および治療的有効性は、例としてＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定するための細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法によって決定することができる。毒性効果と治療効果の間の用量比は治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。これらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータは、ヒトにおける使用のための投薬量の範囲の策定に用いることができる。かかる化合物の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を包含する循環濃度の範囲内にある。投薬量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変えることができる。
【０２３７】
さらなる実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片に伴って対象に投与されるさらなる治療剤は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ'  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １，２００２））に従う。
【０２３８】
投与様式は変えることができる。投与経路としては、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接的脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼球内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が挙げられる。
【０２３９】
特定の実施形態において、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、侵襲的経路、例えば注射などにより投与することができる。さらなる実施形態において、抗体もしくはその抗原結合性断片、またはそれらの医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内に、または吸入、エアロゾル送達により投与される。非侵襲的経路（例として経口；例えば、丸剤、カプセルまたは錠剤中）による投与も考えられる。
【０２４０】
また、本明細書中で提供される抗体もしくは抗原結合性断片またはそれらの医薬組成物のいずれかを含む容器（例としてプラスチック製またはガラス製のバイアルであって、例としてキャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空針またはシリンジシリンダーを有するもの）が提供される。また、本明細書中で提供される抗体もしくは抗原結合性断片またはそれらの医薬組成物のいずれかを含む注射装置が提供される。注射装置は、非経口の経路、例として筋肉内、皮下または静脈内を介して患者の体内に物質を導入する装置である。例えば、注射装置は、シリンジ（例として医薬組成物を予め充填したもの、例えば自動注入器など）であることができ、これは例えば注入される液体（例として抗体もしくは断片またはそれらの医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたは注射外筒、液体の注射のために皮膚および／または血管を貫くための針；ならびに液体をシリンダーから押し出して針穴を通すためのプランジャーを包含する。ある実施形態において、本明細書中で提供される二重特異性抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれらの医薬組成物を含む注射装置は、静脈内（ＩＶ）注射装置である。かかる装置は、抗体もしくは断片またはそれらの医薬組成物をカニューレまたはトロカール／針の中に包含し、これは、そのカニューレまたはトロカール／針を通じて患者の体内に導入される液体（例として生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、グルコースを包含してもよい乳酸リンゲル溶液）を保持するためのバッグまたはリザーバーに取り付けることができるチューブに取り付けることができる。いくつかの実施形態において、トロカールおよびカニューレが対象の静脈内に挿入されてトロカールが挿入されたカニューレから取り外されると、抗体もしくは断片またはそれらの医薬組成物が装置内に導入される。ＩＶ装置は、例えば末梢静脈内（例として手または腕の中）に；上大静脈もしくは下大静脈内に、もしくは右心房内（例として中心ＩＶ）に；または例えば上大静脈もしくは右心房に達するまで心臓に向かって進む鎖骨下、内頚もしくは大腿静脈内（例として中心静脈ライン）に挿入され得る。ある実施形態において、注射装置は自動注射器；ジェット式注射器または外部注入ポンプである。ジェット式注射器は、表皮に浸透する液体の高圧で細い噴射を用いることで、抗体もしくは断片またはそれらの医薬組成物を患者の体に導入する。外部注入ポンプは、抗体もしくは断片またはそれらの医薬組成物を制御された量で患者の体内に送達させる医療機器である。外部注入ポンプは、電気的に動いても機械的に動いてもよい。異なるポンプは異なる方法で作動し、例えばシリンジポンプは液体をシリンジのリザーバー中に保持して可動ピストンが液体の運搬を制御し、エラストマーポンプは液体を伸縮性バルーンリザーバー中に保持してバルーンの弾性壁からの圧力が液体の運搬を駆動する。ペリスタルティックポンプにおいては、ローラーのセットが１本のフレキシブルチューブを挟んで下り、液体を前に押す。マルチチャネルポンプにおいては、複数のリザーバーから複数の速度で液体を運搬することができる。
【０２４１】
本明細書中に開示される医薬組成物はまた、無針の皮下注射装置；例えば米国特許第６，６２０，１３５号；第６，０９６，００２号；第５，３９９，１６３号；第５，３８３，８５１号；第５，３１２，３３５号；第５，０６４，４１３号；第４，９４１，８８０号；第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号中に開示される装置などを使用して投与することもできる。医薬組成物を含むかかる無針装置もまた考えられる。本明細書中に開示される医薬組成物はまた、注入によって投与することもできる。医薬組成物を投与するための周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で薬物を投薬するための移植可能なマイクロインフュージョンポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号；精密な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号；連続的薬剤送達のための可変流量の移植可能な注入機器を開示している米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバー区画を持つ浸透ドラッグデリバリーシステムを開示している米国特許第４，４３９，１９６号中に開示されるものが挙げられる。多くの他のかかるインプラント、送達システムおよびモジュールが当業者に周知であり、本明細書中で提供される医薬組成物を含むものもまた考えられる。
【０２４２】
投与レジメンは、治療抗体または抗原結合性断片の血清または組織での代謝回転速度、症候のレベル、治療抗体の免疫原性および生物学的マトリックス中での標的細胞のアクセス性といったいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、標的の疾患状態に改良をもたらし、同時に望まれない副作用を最小化するのに十分な治療抗体または断片を送達する。したがって、送達される生物製剤の量は、具体的な治療抗体および処置される症状の重症度に部分的に依存する。治療抗体または断片の適切な用量選択におけるガイダンスが利用可能である（例としてＷａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  ３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０２４３】
適切な用量の決定は、臨床家により、例として当該技術分野において処置に影響することが知られているまたはその可能性があるパラメーターまたは因子を用いてなされる。一般に、用量は最適用量よりもいくらか少ない量で始めて、その後、何らかのネガティブな副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、少量ずつ増加させる。重要な診断的測定値としては、症候の、例として炎症の症候の測定値、または生産される炎症性サイトカインのレベルが挙げられる。一般的に、用いられる生物製剤は処置の標的となる動物と同じ種に由来することが望ましく、それによって試薬に対する何らかの免疫応答を最小化することができる。ヒト対象の場合、例えば、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましいものであり得る。
【０２４４】
本明細書中で用いられるとき、用語「有効量」とは、単独でまたは付加的な治療剤と組み合わせて細胞、組織または対象に投与されたときに、１または複数の疾患の症候に測定可能な改良を引き起こすのに有効である、本明細書中で提供される二重特異性抗体またはその抗原結合性断片の量を指す。単独で投与される個々の活性成分に適用されるとき、有効用量とは、その成分単独を指す。組み合わせに適用されるとき、有効用量とは、組み合わせ、逐次的または同時のいずれで投与されたものであっても、治療効果をもたらす活性成分の合わせた量を指す。有効量の治療薬は、診断的測定値またはパラメーターの、少なくとも１０％；通常は少なくとも２０％；好ましくは少なくとも約３０％；より好ましくは少なくとも４０％、および最も好ましくは少なくとも５０％の改良をもたらす。有効量はまた、主観的測定値が疾患の重症度を判定するために用いられる場合、主観的測定値の改良をもたらすこともできる。
【０２４５】
キット
さらに、本明細書中で論じられる、限定されるものではないが抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性断片を包含する１または複数の構成成分を含み、限定されるものではないが薬学的に許容される担体および／または治療剤を包含する１または複数の付加的な構成成分を伴うキットが提供される。抗体もしくは断片および／または治療剤は、純粋な組成物として、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物中に製剤化することができる。
【０２４６】
一実施形態において、キットは、本明細書中で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片またはそれらの医薬組成物を１つの容器中に（例として滅菌されたガラス製またはプラスチック製バイアル中に）包含し、それらの医薬組成物および／または治療剤を別の容器中に（例として滅菌されたガラス製またはプラスチック製バイアル中に）包含する。
【０２４７】
別の実施形態において、キットは、本明細書中で提供される抗体またはその抗原結合性断片を薬学的に許容される担体と一緒に包含する組み合わせであって、任意選択で共に製剤化される１または複数の治療剤と組み合わせて、任意選択で医薬組成物中の、単一の普通の容器の中にある前記組み合わせを含む。
【０２４８】
キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を包含する場合、キットは、かかる投与を実施するためのデバイスを包含することができる。例えば、キットは、上で論じられる１もしくは複数の皮下注射針または他の注射デバイスを包含することができる。
【０２４９】
キットは、キット中の医薬組成物および剤形に関する情報を包含する添付文書を包含することができる。一般に、かかる情報は、患者および医師が同封された医薬組成物および剤形を効果的かつ安全に用いることを助ける。例えば、本明細書中で提供される剤の組み合わせについての次の情報を添付文書中に供給することができる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメーター、適応症および使用法、禁忌、警告、注意事項、副作用、過量投与、適した用法および用量、供給法、適した保存条件、参考文献、製造者／販売業者情報および特許情報。
【０２５０】
便宜上、抗体またはその抗原結合性断片は、キット、すなわち予め決められた量の試薬と診断または検出のアッセイを実施するための説明書とのパッケージ化された組み合わせで提供することができる。抗体または断片が酵素で標識されている場合、キットは、酵素によって必要とされる基質および補因子（例として検出可能な発色団または蛍光団を提供する基質前駆体）を包含することができる。加えて、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例としてブロックバッファーまたは溶解バッファー）などを包含することができる。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するために広範に変えることができる。とりわけ、試薬は、溶解すると適切な濃度を有する試薬溶液を提供する、賦形剤を包含し、通常は凍結乾燥された乾燥粉末として提供することができる。
【０２５１】
また、例えばイムノアッセイ、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（サンドイッチ型または競合形式）などといった種々の検出アッセイにおける使用のための、診断用または検出用試薬および１または複数のかかる試薬を含むキットも提供される。キットの構成成分は、固体支持体に予め付着させることができ、またはキットの使用時に固体支持体の表面に適用することができる。いくつかの実施形態において、シグナル発生手段は、本明細書中で提供される抗体もしくは断片と予め結合した状態になっていることができ、または使用の前に、１または複数の構成成分、例としてバッファー、抗体−酵素コンジュゲート、酵素基質などと組み合わせることを必要とすることができる。キットはまた、付加的な試薬、例として固相表面への非特異的結合を低減させるためのブロッキング試薬、洗浄試薬、酵素基質などを包含することができる。固相表面は、チューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、マイクロスフィア、またはタンパク質、ペプチドもしくはポリペプチドを固定化するのに適した他の材料の形態であることができる。特定の態様において、化学発光性もしくは発色性生成物の形成または化学発光性もしくは発色性基質の還元を触媒する酵素は、シグナル発生手段の構成成分である。かかる酵素は当該技術分野で周知である。キットは、本明細書中に記載される捕捉剤および検出試薬のいずれかを含むことができる。任意選択で、キットはまた、本明細書中で提供される方法を行うための説明書を含むことができる。
【０２５２】
また、容器、例えばバイアルまたはボトルなどの中に包装された抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性断片を含み、さらに容器に添付されたまたは容器に包装されたラベルを含むキットが提供され、ここでラベルは容器の内容物を記述し、本明細書中に記載される１または複数の疾患状態を処置するための容器の内容物の使用についての指示および／または指図を提供する。
【０２５３】
組み合わせ治療のセクションにおいて上で論じたように、２つの治療剤の同時的投与は、剤がその治療効果を発揮している期間に重複がある限り、剤が同じ時にまたは同じ経路で投与されることを必要としない。同時または逐次投与が考えられ、異なる日または週での投与も同様である。
【０２５４】
本明細書中に開示される治療用および検出用キットはまた、本明細書中に開示される抗体、ペプチド、抗原結合性断片またはポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つと、検出試薬または治療剤として組成物を用いるための説明書とを含むものに調製することができる。かかるキットにおける使用のための容器は、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の好適な容器を含むことができ、これらの中には検出および／または治療用組成物（１または複数）のうちの１または複数を入れること、好ましくは好適に分注することができる。第二の治療剤も提供される場合、キットはまた、この第二の検出および／または治療用組成物を入れることができる第二の別個の容器を含有することができる。あるいは、複数の化合物を単一の医薬組成物中に調製することができ、単一の容器手段、例えばバイアル、フラスコ、シリンジ、ボトルまたは他の好適な単一の容器などの中に包装することができる。本明細書中に開示されるキットはまた、典型的には、商業的販売のためにバイアル（１または複数）を密に封じ込めて収容するための手段、例えば、例として所望のバイアル（１または複数）が保持される射出成形またはブロー成形されたプラスチック容器などを包含する。放射性標識、発色、蛍光または他のタイプの検出可能な標識または検出手段がキット内に包含される場合、標識剤は、検出または治療用組成物自体と同じ容器中に提供することができ、あるいは、その中にこの第二の組成物を入れ、好適に分注することができる第二の別個の容器手段中に入れることができる。あるいは、検出試薬および標識は、単一の容器手段の中で調製することができ、大半の場合、キットはまた、典型的には、商業的販売ならびに／または好都合な包装および輸送のために、バイアル（１または複数）を密に封じ込めて収容するための手段を包含する。
【０２５５】
本明細書中に記載される検出またはモニタリング方法を行うための装置または機器もまた提供される。かかる機器は、その中に試料を投入することができるチャンバまたはチューブ、装置を通じて試料の流れを指示するためのバルブまたはポンプを任意選択で包含する流体処理システム、血液から血漿または血清を分離するための任意選択のフィルター、捕捉剤または検出試薬の添加のための混合チャンバ、および捕捉剤免疫複合体に結合した検出可能な標識の量を検出するための任意選択の検出装置を包含することができる。試料の流れは、受動的（例として毛細管力、静水力、または試料がアプライされたら装置のさらなる操作を必要としない他の力による）または能動的（例として機械的ポンプ、電気浸透ポンプ、遠心力または増加した空気圧を介して生成される力の適用による）、または能動的な力と受動的な力との組み合わせによるものであることができる。
【０２５６】
さらなる実施形態において、プロセッサ、コンピュータ読み取り可能メモリ、およびコンピュータ読み取り可能メモリ上に記憶され、本明細書中に記載される方法のいずれかを実施するためにプロセッサ上で実行されるように適合させたルーチンも提供される。好適なコンピューティングシステム、環境および／または構成の例としては、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハンドヘルドもしくはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサベースのシステム、セットトップボックス、プログラム可能な家電製品、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、上のシステムもしくはデバイスのいずれかを包含する分散コンピューティング環境、または当該技術分野で知られている任意の他のシステムが挙げられる。
【０２５７】
一般的方法
分子生物学における標準的方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８２＆１９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されている。標準的な方法はまた、Ａｕｓｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ中にも出ており、これは細菌細胞およびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質の発現（Ｖｏｌ．３）およびバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０２５８】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を包含するタンパク質精製方法は、記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾および融合タンパク質の生産、タンパク質のグリコシル化は、記載されている（例としてＣｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）  ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の生産、精製および断片化は、記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；上のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ）。リガンド／受容体相互作用の性質決定のための標準的技術は、利用可能である（例としてＣｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０２５９】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は、調製することができる（例としてＳｈｅｐｅｒｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ（ｅｄｓ．）  （２０００）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ（ｅｄｓ．）  （２００１）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：６２０５；Ｈｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：１０２９；Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  ２２４：４８７−４９９；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，３２９，５１１を参照されたい）。
【０２６０】
一本鎖抗体およびダイアボディは、記載されている（例としてＭａｌｅｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７６：２６２８５−２６２９０；Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｒｔｔ（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１７７−１８９；および米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。二機能性抗体は、提供されている（例としてＭａｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：７０２１−７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５；Ｖｏｌｋｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １４：８１５−８２３；Ｓｅｇａｌ，  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１−６；Ｂｒｅｎｎａｎ，  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３；Ｒａｓｏ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：３６５５−３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、第５，５３２，２１０号および第６，１２９，９１４号を参照されたい）。
【０２６１】
二重特異性抗体もまた提供されている（例としてＡｚｚｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１：３４９３；Ｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７：８７５を参照されたい）。
【０２６２】
抗原の精製は、抗体作製に必要ではない。動物に目的抗原を有する細胞を免疫することができる。脾臓細胞を次いで免疫動物から単離し、脾臓細胞をミエローマ細胞株と融合することでハイブリドーマを生産することができる（例としてＭｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；上のＰｒｅｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；Ｋａｉｔｈａｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：５１５７−５１６４を参照されたい）。
【０２６３】
抗体は、例として低分子量の薬剤分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とコンジュゲートさせることができる。抗体は、治療薬、診断薬、キットまたは他の目的のために有用であり、例として色素、放射性同位体、酵素、または金属、例として金コロイドと結合した抗体を包含する（例としてＬｅ  Ｄｏｕｓｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：３８９１−３８９８；Ｈｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｂｉｓｈｏｐ（１９９９）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８：８８３−８８９を参照されたい）。
【０２６４】
蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を包含するフローサイトメトリー法は、利用可能である（例としてＯｗｅｎｓ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ  （２００１）  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例として診断用試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを包含する核酸、ポリペプチドならびに抗体の修飾に適した蛍光試薬は、利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０２６５】
免疫系の組織学の標準的方法は、記載されている（例としてＭｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（ｅｄ．）  （１９８６）  Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０２６６】
例として抗原性断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースは、利用可能である（例としてＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）  Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．  ６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
【実施例】
【０２６７】
１．  実施例
このセクション中の例は、説明として提示されるものであり、限定として提示されるものではない。
【０２６８】
１．１  実施例１：ヒト化０８Ａ抗体のアフィニティ成熟および結合アフィニティ試験
１．１．１  単一ＣＤＲコドンベースでの突然変異誘発ライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
ヒト化０８Ａ（Ｓ６１Ｎグリコシル化部位補正を有する、配列番号に従った連続的ナンバリング）Ｆａｂ００１（配列番号１および２）のＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ３を、コドンベースでの突然変異誘発のために標的化した。Ｈ３、Ｌ１およびＬ３のライブラリーを、それぞれＨ９５−Ｈ１００Ｂ位、Ｌ２７Ｂ−Ｌ３２位およびＬ９０−Ｌ９７位でランダム化した。各ライブラリーからの代表的な個別コロニーの配列決定は、標的残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を確認した。各ライブラリーは１０８超の個別コロニーを産出し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内のアミノ酸のあらゆる可能な組み合わせを考慮するのに十分であったことを示唆する。
【０２６９】
ライブラリーは、各ラウンドで抗原の濃度を減少させながら、４ラウンドの、アフィニティに基づく溶液相ファージディスプレイ選択に供した。比較的高い抗原濃度（２０ｎＭ）を最初のラウンドのために用いた。高アフィニティのバリアントを選ぶため、その後の３回のラウンドの各々で抗原濃度を１０倍減少させた。４回目のラウンドからの個々のバリアントを、ＥＬＩＳＡスクリーニングによって抗原へのポジティブな結合について検査した。
【０２７０】
ｗｔより低いＫＤを有するバリアントｓｃＦｖを同定するため、細菌ＰＰＥ中の未精製ネイティブｓｃＦｖに対するＯＣＴＥＴ  ＲＥＤ９６（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＵＳＡ）によって見かけのＫｏｆｆを決定した。４回目の選択ラウンドからの合計１５６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆでランク付けした。ｋｏｆｆが改良された２０クローンをＦａｂ変換のために選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥによって決定し、ＫＤをＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ２００評価ソフトウェアを用いて計算した。１つのＦａｂ、Ｆａｂ００４または３Ｇ９だけが、０８Ａに比して２倍のＫＤの改良を示した。
【０２７１】
１．１．２  ランダム突然変異誘発ライブラリーおよびＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
ＫＤの改良を達成するため、Ｈ３、Ｌ１およびＬ３に焦点をあてる代わりに、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを構築するため、０８ＡからのＣＤＲ３の６つ全てのＶＨおよびＶＬ領域をランダム化突然変異誘発の標的にした。これらの配列は、野生型配列と比較してより大きな多様性を有するであろうが、低減された濃度の抗原を用いたパニングは、結合を保持するアフィニティがより高いクローンの濃縮をもたらすはずである。パニングのための３つのＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリー：（１）０８Ａ  ＶＨ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを用いた軽鎖シャッフリング、（２）Ｆａｂ００４  ＶＨ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを用いた軽鎖シャッフリング、および（３）ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアルライブラリーを作成した。
【０２７２】
ＶＨおよびＶＬ中の６つ全てのＣＤＲにわたる多様性を向上させるために、ランダム突然変異誘発ストラテジーを利用した。具体的には、６つのＣＤＲを２０個のアミノ酸のいずれか１つに変更するため、ＮＮＫコドンランダム化を用いて突然変異誘発を行った。ＣＤＲループ内の全ての残基にランダム変異を有する配列ライブラリーを得るために、合計１２個のライブラリーを構築した。６つのＶＨライブラリーは、それぞれＨ３１−Ｈ３５位（Ｈ１ライブラリー）、Ｈ５１−Ｈ５４位（Ｈ２Ａライブラリー）、Ｈ５５−Ｈ５９位（Ｈ２Ｂライブラリー）、Ｈ６０−Ｈ６４位（Ｈ２Ｃライブラリー）、Ｈ９６−Ｈ１００位（Ｈ３Ａライブラリー）およびＨ９６Ａ−Ｈ１０２位（Ｈ３Ｂライブラリー）でランダム化された。６つのＶＬライブラリーは、それぞれＬ２１−Ｌ２７Ａ位（Ｌ１Ａライブラリー）、Ｌ２７Ｂ−Ｌ２９位（Ｌ１Ｂライブラリー）、Ｌ３０−Ｌ３４位（Ｌ１Ｃライブラリー）、Ｌ５１−Ｌ５５位（Ｌ２ライブラリー）、Ｌ８９−Ｌ９３位（Ｌ３Ａライブラリー）およびＬ９３−Ｌ９７位（Ｌ３Ｂライブラリー）でランダム化された。各ライブラリーからの代表的な個別コロニーの配列決定は、標的残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を確認した。各ライブラリーは１０８超の個別コロニーを産出し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内のアミノ酸のあらゆる可能な組み合わせを考慮するのに十分であったことを示唆する。
【０２７３】
１２個全てのライブラリーを３ラウンドのパニングに供した。３回目のラウンドのアウトプットであるプラスミドＤＮＡを調製し、これを鋳型として用いることで変異ＣＤＲ断片を増幅した。２ステップのオーバーラップＰＣＲによってコンビナトリアルＶＨ突然変異誘発ｓｃＦｖを作成し、３つのＣＤＲを一緒にした。コンビナトリアルＶＬ突然変異誘発ｓｃＦｖも同様にして作成した。重鎖および軽鎖コンビナトリアルライブラリーは、上記のようにｓｃＦｖをファージミドベクターにクローニングすることによって作成した。
【０２７４】
１２個全てのライブラリーを別々に、各ラウンドで抗原の濃度を減少させながら、３ラウンドのｏｆｆ−ｒａｔｅファージディスプレイ選択に供した。比較的高い抗原濃度（１０ｎＭ）を最初のラウンドのために用いた。その後の２回のラウンドの各々で抗原濃度を１０倍減少させた。コンビナトリアルＶＨまたはＶＬ突然変異誘発ライブラリーは、３回目のラウンドのアウトプットからのＶＨまたはＶＬのプールされたレパトワを用いて、３つのＣＤＲを一緒にする２ステップのオーバーラップＰＣＲによって作成した。また、オーバーラップＰＣＲを用いてクローンＦａｂ００４の重鎖とコンビナトリアル軽鎖を組み合わせることによって、鎖シャッフリングライブラリーを作成した。これらのコンビナトリアルライブラリーを、減少する抗原濃度（１００ｐＭおよび１０ａｍ）の存在下で、さらに２ラウンドのｏｆｆ−ｒａｔｅ選択に供した。
【０２７５】
Ｆａｂ００４から始めることによってアフィニティがより大きく増強される可能性があるため、０８Ａ  ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーよりもＦａｂ００４  ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーからのパニングおよびスクリーニングを優先した。Ｆａｂ００４  ＶＨ軽鎖シャッフリングコンビナトリアルライブラリーのラウンド２のアウトプットからの個々のバリアントを、ＥＬＩＳＡスクリーニングによって抗原へのポジティブな結合について検査した。合計１０８個のｓｃＦｖをｋｏｆｆでランク付けした。ｋｏｆｆが改良された７クローンをＦａｂ変換のために選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥによって決定し、ＫＤを計算した。７つ全てのＦａｂが、０８Ａに比して５から１０倍のＫＤの改良を示し、これは単一突然変異誘発ライブラリーを用いた先の方法によって観察されたものよりも大きな改良であった（表４）。Ｆａｂ０９８、Ｆａｂ０９９、Ｆａｂ１００、Ｆａｂ１０１、Ｆａｂ１０２、Ｆａｂ１０３およびＦａｂ１０４を、コンビナトリアル軽鎖ライブラリーと組み合わせた３Ｇ９重鎖の２回目のラウンド選択から単離した。
【０２７６】
ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを作成するため、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーの最初のラウンドのアウトプットからのＶＨおよびＶＬのプールされたレパトワを、オーバーラップＰＣＲによって再度組み合わせることで、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の両方に変異を有する再結合バリアントの単一ライブラリーを作成した。ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーを、１０ｐＭの抗原でのさらに２ラウンドのｏｆｆ−ｒａｔｅ選択に供した。コンビナトリアルライブラリーのラウンド２のアウトプットからの個々のバリアントを、ＥＬＩＳＡによって抗原へのポジティブな結合について検査した。合計で２１６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆでランク付けした。ｋｏｆｆが改良された４クローンをＦａｂ変換のために選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥによって決定し、ＫＤを計算した。４つのＦａｂ（Ｆａｂ１２８、Ｆａｂ１３３、Ｆａｂ１３８およびＦａｂ１３９）が、０８Ａに比して５から１８倍のＫＤの改良を示した（表４）。
【０２７７】
１．１．３  選択されたクローンの配列
ｏｆｆ−ｒａｔｅが改良されたクローンの可変領域（ＶＨおよびＶＬ）をＰＣＲで増幅した（プライマーはＧｅｎｅｗｉｚ，Ｓｕｚｈｏｕによって合成）。ＰＣＲ反応は、９５℃で２分、９５℃で３０秒、５２℃で１分、７２℃で１分を１５サイクル、７２℃で１０分の後に４℃で実行した。最終ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル中でチェックし、Ｑｉａｇｅｎ  ＱＩＡＱＵＩＣＫ精製キットを用いて精製した。
【０２７８】
精製されたＶＬおよびＶＨ  ＰＣＲ産物をそれぞれｐＣＰ−ｈＣｋ（ＶＬ）またはｐＣＰ−ｈＣｇ４（Ｆａｂベクター）にクローニングした。ポジティブクローンを次いで配列決定のためにＢｉｏＳｕｎｅ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）に送った。プラスミドＤＮＡはＭＮ  ｍｉｄｉ−ｐｒｅｐキットを用いて調製した（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ，ＵＳＡ）。
【０２７９】
１．１．４  ２９３細胞における一過性トランスフェクション
トランスフェクションの約２４時間前、２９３−Ｆ細胞をＯＰＭ−２９３  ＣＤ０３培地（ＯＰＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ）中に２．２×１０６細胞／ｍｌで植え継ぎ、シェーカー上で１２０ｒｐｍ／分、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。トランスフェクション当日、細胞密度は約４×１０６細胞／ｍｌであった。最適なトランスフェクションを確実にするため、細胞の生存率は＞９５％でなければならない。
【０２８０】
１００ｍｌの細胞培養物（Ｆｄ：ＬＣ＝２：３）あたり１５０μｇのプラスミドＤＮＡを調製した。ＤＮＡは、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ発現培地（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）中でトランスフェクトされる培養物の２０分の１に相当する量に希釈し、１ｍｇ  ＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）は、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地中でＤＮＡ溶液の量と等しい量に希釈した。ＰＥＩ溶液を希釈ＤＮＡ溶液に加え；ＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を穏やかに混合し、トランスフェクションの前に室温で１５分間インキュベートした。フラスコの細胞をゆっくりと旋回させながら細胞培養にＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を加え、ＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を細胞と４時間インキュベートした。培養培地の量の２０分の１のペプトン（Ｆｌｕｋａ，ＵＳＡ）をフラスコに加えた。細胞を次いで１２５ｒｐｍ／分、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０２８１】
１．１．５  Ｆａｂの精製
６日目の上記コンディション培地を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０で平衡化した０．６ｍｌ  ＫＡＰＰＡＳＥＬＥＣＴレジン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＳＡ）カラムにロードした。カラムを次いで、平衡化バッファーを使用して、試料ローディング後のベースラインまで洗浄した。洗浄後、カラムを５０ｍＭクエン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ３．０で溶出し、その後に１Ｍアルギニン、４００ｍＭコハク酸、ｐＨ９．０を直ちに添加してｐＨ値を５．５に調整した。最終生成物をＰＢＳ溶液に対して透析した。タンパク質の純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、その濃度をＢｒａｄｆｏｒｄ法によって測定した。
【０２８２】
１．１．６  精製されたＦａｂのサイズ排除クロマトグラフィー分析
精製された抗体を分析するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、ＳＥＣ  ＳＩＺＥＳＥＰ−ＳＩＨカラム（Ｗａｔｅｒｓ、内径７．８ｍｍ、長さ３０ｃｍ）を使用して、ＨＰＬＣシステム（Ｅ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ）を用いて、外界温度で行った。移動相として、５倍量のＰＢＳバッファーを流速１ｍＬ／分で用いた。注入量は２０μｌであって、２８０ｎｍで検出した。
【０２８３】
１．１．７  精製されたＦａｂのＢｉａｃｏｒｅアッセイ
組換えヒトまたはイヌＰＤ−１のＣＭ５チップ上への固定化：ＣＭ５センサーチップを、ＦＣ２中で７分間、新たに調製した１：１  ５０ｍＭ  ＮＨＳ：２００ｍＭ  ＥＤＣを注入すること（１０μｌ／分）によって活性化した。１０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー  ｐＨ５．０中の濃度０．２μｇ／ｍｌのＰＤ−１を、活性化されたチップ上に５μｌ／分（ＨＢＳ−ＥＰランニングバッファー：１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）で１２０秒間注入した。残った活性カップリング部位は、１Ｍエタノールアミンを１０μｌ／分で７分間注入してブロックした。
【０２８４】
結合動態測定：結合相の間、様々な濃度のＦａｂを流速３０μｌ／分で１８０秒間注入した（１または複数回）。結合抗体の解離は、チップ表面上にＨＢＳ−ＥＰバッファーを６００秒間流すことによってモニターした。各サイクルの終わりに、再生バッファー（ｐＨ１．７の１０ｍＭグリシンバッファー）を１８０秒間注入することによって、センサー表面を再生した。センソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を参照フローからのシグナルに対して補正した後、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ  ２００評価ソフトウェアｖｅｒ．１．０（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ，ＵＳＡ）を使用してキネティクスを計算した。
【０２８５】
表３．  Ｆａｂ９８−１０４アフィニティ成熟変異のアラインメント
【表４】
2021511806.tif 000006
2021511806.tif 000007
2021511806.tif 000008
【０２８６】
表４．  コンビナトリアルＣＤＲ突然変異誘発ライブラリーから単離されたＦａｂのアフィニティ
【表５】
2021511806.tif 000009
【０２８７】
１．２  実施例２：マウスおよびヒト化抗ＰＤ−１  ｍＡｂのヒトＰＤ１に対するアフィニティ
１．２．１  ＢＩＡｃｏｒｅによる表面キネティクス
捕捉モードを利用した表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）ベースのアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付加ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ、９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ−１抗体の結合キネティクスおよびアフィニティを決定した。製造説明書に従って、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）をアミン−カップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を用いて活性化した。供給されたｐＨ５．０、１０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー中で希釈したヒト捕捉キット（抗ヒトＦｃ、２５μｇ／ｍＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３９）またはマウス捕捉キット（抗マウスＦｃ、３０μｇ／ｍＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３８）のいずれかの抗体を、活性化した表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍエタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルは、４つのフローセルの各々の中で、マウス捕捉の場合は約８，０００共鳴単位（ＲＵ）、またはヒト捕捉の場合は約１２，０００ＲＵに達した。
【０２８８】
結合キネティクスは、ビアコアＴ２００上で、ＨＢＳ−ＥＰ＋（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）ランニングバッファー中、２５℃で測定した。抗体は、１０μＬ／分の流速で、マウスまたはヒトＦｃ捕捉表面のいずれかの上に捕捉した。抗体は、フローセル２、３および４上に捕捉した。フローセル１は、抗体が捕捉されていない参照として用いた。２０ｎＭで始まる分析物９８ＡＦＫ（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ）の６点の２倍段階希釈物を、ランニングバッファー（ＨＢＳ−ＥＰ＋）中で調製した。２つのバッファーブランクは、二重参照のために包含された。用量設定系列を５０μｌ／分で３分間注入し、その後に６００秒間解離させた。各サイクルの後、表面を、抗ヒトＦｃチップ上で３Ｍ  ＭｇＣｌ２を１０μＬ／ｍＬで３０秒注入すること、または抗マウスＦｃチップ上で１０ｍＭグリシン  ｐＨ１．７を１０μｌ／分で１８０秒注入することで再生した。
【０２８９】
センサーグラムの処理およびデータ解析は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０．４（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して実施した。抗体結合を示すセンサーグラムは、参照フローセル１のシグナルとブランク注入からのシグナルを差し引くことによる二重参照の後に得られた。処理された曲線を１：１結合モデルにグローバルフィットさせ、結合速度定数ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１、ここで「Ｍ」はモルに等しく、「ｓ」は秒に等しい）および解離速度定数ｋｏｆｆ（ｓ−１）を決定した。これらの速度定数を用いて、平衡解離定数ＫＤ（Ｍ）＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎを計算した。
【０２９０】
１．２．２  ＢＩＡｃｏｒｅによる溶液アフィニティ
溶液モードを利用したＳＰＲベースのアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付加ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ、９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ−１ヒト化抗体の溶液アフィニティを決定した。製造説明書に従って、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）をアミン−カップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を用いて活性化した。ヒトＰＤ１−Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ、４０μｇ／ｍＬ、ｐＨ５．０  １０ｍＭ酢酸ナトリウムバッファー中で希釈）を、活性化した表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍエタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルは、フローセル中で約６，０００共鳴単位（ＲＵ）に達した。
【０２９１】
溶液アフィニティは、一連の用量設定において抗体パラトープの未結合画分を測定することによって決定され、この用量設定においては、抗体濃度が一定（５００ｐＭまたは１００ｐＭのいずれか）に維持され、抗原であるｈＰＤ１−Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ）の濃縮物が１：２で１００ｎＭから３ｐＭまでの１６点の用量設定系列に希釈された。用量設定系列を１６〜２４時間インキュベートして、室温で平衡に到達させた。未結合部位は、抗原が固定化されたＢＩＡｃｏｒｅチップを用いて競合モードで測定され、ここで検出されるＳＰＲシグナルは未結合抗体に相当した。
【０２９２】
溶液アフィニティは、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ２００上で、ＨＢＳ−ＥＰ＋（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）ランニングバッファー中、２５℃で測定した。＞１６時間のインキュベーション後の用量設定系列を、ｈＰＤ１−Ｈｉｓが固定化されたセンサーチップ（上記）に対して注入した。遊離の未結合抗体の濃度を、１０μＬ／分で１２０秒（５００ｐＭ  ｍＡｂ系列の場合）または４００秒（１００ｐＭ  ｍＡｂ系列の場合）の注入後にＲＵの比率として測定した。各サイクルの後、表面を、３Ｍ  ＭｇＣｌ２とｐＨ２．０  １０ｍＭグリシンとの１：１混合物を３０μＬ／分で３０秒注入することで再生した。
【０２９３】
データ解析は、ＫＩＮＥＸＡ  Ｐｒｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０２（Ｓａｐｙｄｙｎｅ）を用いて実施し、ここではＲＵを正規化して濃度に対してプロットした。２つの用量設定（１００ｐＭおよび５００ｐＭの固定化抗体濃度を用いたもの）からの正規化データを、ｎ−Ｃｕｒｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０２（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）を用いてフィッティングし、各相互作用についてのＫＤ（Ｍ）値を得た。
【０２９４】
標準的な表面ベースのアフィニティ測定において、親のマウス０８Ａ抗体は、０．２４ｎＭのアフィニティを示した。対照的に、親マウス０８Ａ抗体のＶＨ  ＣＤＲ２中のバリアントＮ５９Ｑ、Ｎ５９ＥおよびＮ５９Ａは、親マウス０８Ａ抗体と比べてアフィニティの減少を示した。ヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体バリアントは全て、親のマウス０８Ａ抗体と比べてより強いアフィニティを示した。ＣＤＨＲ２中にＧ５６Ａ、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ／Ｓ６１Ｎ補正を有する後続のヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体バリアントはアフィニティ改良の傾向を示したが、Ｎ５５Ｅは示さなかった。Ｇ５６Ａ補正を有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟バージョンのＦａｂ０９８  ＩｇＧ４抗体では、アフィニティは約３倍改良された。Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟バージョンのＦａｂ１００  ＩｇＧ４抗体では、アフィニティは約６倍改良された（表５を参照されたい）。
【０２９５】
表５．  ヒトＰＤ１−Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ）に対する標準的な表面ベースのアフィニティ
【表６】
2021511806.tif 000010
【０２９６】
溶液モードのアフィニティ決定において、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するアフィニティ成熟ヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４  Ｆａｂ１００抗体は、Ｓ６１Ｎ補正を有するヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体に比して顕著なアフィニティの改良を示した（表６を参照されたい）。
【０２９７】
表６．  ヒトＰＤ−１−Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ）に対するＳＰＲ溶液アフィニティ
【表７】
2021511806.tif 000011
【０２９８】
１．３  実施例３：抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体の生産
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）１８ＡＳＳは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するアフィニティ成熟Ｆａｂ１００の重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＬ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０２）；アフィニティ成熟Ｆａｂ１００の軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域とを有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１０３）；ＷＯ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＳ１８１Ｋ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号９６）；ＷＯ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域とを有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を持つ。
【０２９９】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体９０ＡＳＵは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するヒト化０８Ａ重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＬ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０１）；ヒト化０８Ａの軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域とを有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１００）；ＷＯ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＳ１８１Ｋ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号９６）；ＷＯ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域とを有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を持つ。
【０３００】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体３３ＡＲＫは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正ならびにＦＲ変異であるＱ３９Ｅを有するヒト化０８Ａ重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＬ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０８）；ＦＲ変異であるＱ３８Ｒを有するヒト化０８Ａの軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｒ、Ｑ１６０ＫおよびＴ１７８Ｒを有するカッパ定常領域とを有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１１０）；ＦＲ変異であるＱ３９Ｒを有するＷＯ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１変異であるＨ１６８ＲおよびＱ１７５Ｋ、ＣＨ２変異であるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３変異であるＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域とを有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号１０４）；Ｑ３８Ｅ  ＦＲ変異を有するＷＯ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ変異であるＱ１２４Ｅ、Ｑ１６０ＥおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域とを有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号１０６）を持つ。
【０３０１】
抗ＰＤ−１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖の各々におけるＣＨ３変異（ＥＵナンバリング）は、抗ＰＤ−１アームおよび抗ＬＡＧ３アームのヘテロダイマー形成を促進する。抗ＰＤ−１重鎖および軽鎖、同様に抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖におけるＣＨ１変異およびＣκ変異（ＥＵナンバリング）は、正しい重鎖と軽鎖のペアリングを促進する。３３ＡＲＫにおいて、ＦＲ変異もまた、正しい重鎖と軽鎖のペアリングを促進する。ＣＨ２変異（ＥＵナンバリング）はエフェクター機能を低減させる。Ｓ６１Ｎ補正はグリコシル化部位を除去し、Ｇ５６Ａ補正は脱アミド化部位を除去する（配列番号における連続的ナンバリング）。
【０３０２】
１．３．１  １８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵのトランスフェクション、発現および精製
１８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵを、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において、ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥトランスフェクション試薬を用いた一過性トランスフェクションを介して、組換え的に発現させた。抗体重鎖および抗体軽鎖の２つのペアをコードする遺伝子（９０ＡＳＵ：抗ＰＤ−１：配列番号１００および１０１；抗ＬＡＧ３：配列番号９６および９８）（１８ＡＳＳ：抗ＰＤ−１：配列番号１０２および１０３；抗ＬＡＧ３：配列番号９６および９８）を、哺乳動物での発現に最適化されたコドンを用いた遺伝子合成を介して構築した。４つの鎖をコードする発現カセットをｐＴＴ５哺乳動物発現ベクター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ｃａｎａｄａより）にクローニングした。異なるタンパク質鎖（２つの重鎖および２つの軽鎖）をコードする４つのプラスミドＤＮＡを、１：１：１：１のプラスミドＤＮＡ比でトランスフェクトし、７日間発現させた後、９３％の細胞生存率で回収した。プロテインＡクロマトグラフィー樹脂（ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ  ＬＸ；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）との一晩のインキュベーションによってアセンブルされた分泌抗体を培養上清から捕捉し、慣用的なタンパク質精製法を介してさらに精製した。最終的な二重特異性抗体の純度は、キャピラリーゲル電気泳動、分析的サイズ排除クロマトグラフィーおよび質量分析（インタクトな質量）による測定で＞９８％であった。
【０３０３】
１．３．２  ３３ＡＲＫのクローニング、トランスフェクション、発現および精製
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体３３ＡＲＫの遺伝子産物を哺乳動物発現ベクターｐＴＴ５にクローニングし、ＣＨＯ細胞中で一過性に発現させた（Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ５５（１）：４４−−５１（２０１１））。ＣＨＯ−３Ｅ７細胞を、４ｍＭグルタミンおよび０．１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｃａｔ＃  ２４０４０−−０３２）を補充したＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＴＭ  Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｃａｔ＃  Ａ−−１３８３５０１）中で３７℃で培養した。２つの重鎖および２つの軽鎖をコードする４つのプラスミドＤＮＡ（抗ＰＤ−１：配列番号１０８および１１０）および（抗ＬＡＧ３：配列番号１０４および１０６）を、１５：１５：２０：５０のＤＮＡ比（抗ＬＡＧ３  ＨＣ：抗ＰＤ−１  ＨＣ：抗ＬＡＧ３  ＬＣ：抗ＰＤ−１  ＬＣ）で、３Ｌスケールでトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後に温度を３２℃まで下げ、１０日後に細胞上清を回収した。
【０３０４】
上清中の抗体の定量は、プロテインＡカートリッジ（ＰＯＲＯＳＡ２０カラム、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，Ｐａｒｔ＃  ２−１００１−００，２．１ｍｍＤ×３０ｍｍＨ，１０４μＬ）を備えた６００／７１７／９９６  ＨＰＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を用いて実施した。試料を、ＮＡＮＯＳＥＰ  ＭＦ  ＧＨＰ  ０．４５μｍ遠心デバイス（Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐａｒｔ＃  ＯＤＧＨＰＣ３５）を用いた８０００〜１１０００ｇで３分間の遠心分離によってろ過した後、ＰＢＳを用いて流速２ｍＬ／分でカラム上に注入した。溶出は、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ２．０で実施した。ＥＭＰＯＷＥＲソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を用いてデータを処理し、曲線を線形回帰によってフィットさせた。
【０３０５】
２Ｌおよび３Ｌの細胞培養液を遠心分離してろ過した後、１０ｍＬのＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）プロテインＡカラム上に１０ｍｌ／分でロードした。３３ＡＲＫ二重特異性抗体をｐＨ３．０の１００ｍＭクエン酸バッファーで溶出し、ｐＨ１１のＴＲＩＳバッファーでｐＨ６〜７に中和した。試料を試料変性溶液（還元条件の場合）またはタンパク質発現試料バッファー（非還元条件の場合）のいずれかと混合し、ＢｉｏＲａｄハードシェル９６ウェルプレート上にロードした。試料を次いで７０℃で１５分間加熱し、遠心分離し、水およびゲル染色液と混合した後、ＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ上で泳動した。プロテインＡ溶出液を、ｐＨ７．４のＰＢＳバッファー中、流速１ｍＬ／分でのＡＫＴＡ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＦＰＬＣを介したＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １６／６０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で、１回の注入で精製した。ＣＥ−ＳＤＳによる純度が９０％を超える画分をプールして最終試料を形成し、２ｍｇ／ｍＬを超える濃度になるまで２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、７％スクロース中でバッファーを交換した。
【０３０６】
１．４  実施例４：遺伝子操作Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ＋ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１アッセイ
クローンＤＴ９９９Ａ１は、ＩＬ−２介在性のルシフェラーゼレポーターを有するＰＤ−１導入遺伝子を発現するＪｕｒｋａＴ細胞クローン（Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ）である。Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃを、ＲＰＭＩ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ  １０−０４０−ＣＶ）＋熱不活化１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＳＨ３０９１０．０３）＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｃｅｌｌｇｒｏ  ２５−００５−ＣＩ）＋２μｇ／ｍｌ  ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ｐ９６２０）＋０．５ｍｇ／ｍｌ  ジェネテシン（Ｇｉｂｃｏ  １０１３１−０２７）中で増殖させた。２×１０５細胞／ｍｌで細胞を播種した後、細胞を週に２回分割し、密度が１×１０６細胞／ｍｌを超えたら分割した。ＰＤ−Ｌ１導入遺伝子を発現するＴＨＰ−１細胞（ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１）をＲＰＭＩ培地＋熱不活化１０％ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン＋０．５ｕｇ／ｍｌ  ピューロマイシン中で増殖させた。３×１０５細胞／ｍｌで細胞を播種した後、細胞を週に２回分割し、１×１０６細胞／ｍｌに達したら分割した。
【０３０７】
バイオアッセイは、アッセイ培地［フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ  １１８３５−０３０）＋１０％透析ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３００７９．０３）］を用いて準備した。初発濃度が３０μｇ／ｍｌの抗体の４倍段階希釈物５０マイクロリットルを白色壁で仕切られた組織培養処理プレートに加えた。抗体用量設定のため、４ｘ１０６細胞／ｍｌ  ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１＋１ｘ１０６細胞／ｍｌ  Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ細胞ならびに２ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｌ４３９１）および１００ｎｇ／ｍｌ  ＩＦＮ−ｇ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ２８５−ＩＦ／ＣＦ）の２×刺激条件を含有する５０μｌの細胞懸濁液を加えた。２２時間のインキュベーション（インキュベーター中で３７℃）の終了後、１０μｌの５５ｎｇ／ｍｌ  抗ＰＤ−１抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ５５５３３６；１１×作業溶液）を、さらに２時間かけて加えた。１００マイクロリットルのＯＮＥ−ＧＬＯ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｅ６１２０）を加え、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥＮＶＩＳＩＯＮ上で０．１秒の積分時間でプレートを読み取った。相対的光単位（ＲＬＵ）での生データをＧＲＡＰＨＰＡＤソフトウェアを用いてプロットし、ＥＣ５０値を計算した。図１も参照されたい。
【０３０８】
表７．  試験試料についてのＥＣ５０値
【表８】
2021511806.tif 000012
【０３０９】
アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有する）を有する二重特異性抗体１８ＡＳＳは、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有する）を有する二重特異性抗体９０ＡＳＵよりも５から６倍強力である。同じく、アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１Ｎ補正を有する）を有するＦａｂ３１ＡＲＬは、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１Ｎ補正を有する）を有するＦａｂ００ＡＰＥよりも５から６倍強力である。アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有する）を有する二重特異性抗体１８ＡＳＳはまた、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１Ｎ補正を有する）ならびに正しい重鎖と軽鎖のペアリングを促進するための異なるＣＨ１−Ｃк変異およびＦＲ変異を有する二重特異性抗体３３ＡＲＫよりも５から６倍強力である。
【０３１０】
１．５  実施例５：混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）から精製し、液体窒素フリーザー内で凍らせた。冷凍ヒトＰＢＭＣを解凍し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ：２００１２０２７）中で希釈し、４５０×ｇで５分間遠心分離し、細胞ペレットを細胞分離バッファー；ＰＢＳ、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１０４３８０２６）およびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩溶液（ＥＤＴＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｅ７８８９−１００ＭＬ）中に再懸濁した。単球を、Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔキット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；１９０５９）を用いて濃縮した。細胞を、１００ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２１５−ＧＭ−１１０）および５０ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２０４−ＩＬ−０１０／ＣＦ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１１８７５−１１９）、ＦＢＳおよびペニシリン−ストレプトマイシン（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１５１４０１２２）中１×１０６細胞／ｍｌ（５ｍｌ／ウェル）で、６ウェルプレートに移した。単球を３７℃で５日間インキュベートして、樹状細胞（ＤＣ）に分化させた。単球由来樹状細胞（Ｍｏ−ＤＣ）を６日目に回収し、カウントし、ＲＰＭＩ  １６４０培地、ヒト血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｈ４５２２−１００ＭＬ）およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中に再懸濁し、ＭＬＲアッセイ中で刺激物質として用いた。
【０３１１】
実験開始日に冷凍ヒトＰＢＭＣを解凍し、細胞分離バッファー中で希釈した。各ドナーからのＣＤ４  Ｔ細胞をＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  ＣＤ４  Ｔ細胞分離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；１７９５２）を用いて濃縮した。分離されたＣＤ４  Ｔ細胞を、ＲＰＭＩ  １６４０培地、ヒト血清およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中に１×１０６細胞／ｍＬで懸濁した。Ｍｏ−ＤＣを１：１０の比（１×１０４細胞／ｍＬ）でＣＤ４＋  Ｔ細胞（１×１０５細胞／ｍＬ）と混合し、細胞混合物を２００μＬ／ウェルで平底９６ウェルプレート中に播いた。二重特異性抗体を６倍希釈系列を用いて段階希釈し、５×作業ストックを調製した。５０μＬの各希釈物を２００μＬの培養液に加え、１×終濃度の二重特異性抗体を与えた。対照ウェルは、アイソタイプコントロール抗体で処理するか、未処理のままにした。実験開始後２日目に、Ｖ−ＰＬＥＸ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−２キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃａｔ＃  Ｋ１５１ＱＱＤ−４）を用いたＩＬ−２定量のために培養上清を回収した。
【０３１２】
この実施例は、抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体３３ＡＲＫ、９０ＡＳＵおよび１８ＡＳＳが、アロジェニック単球由来樹状細胞で刺激された初代ＣＤ４  Ｔ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の産生を誘導することを実証した（図２を参照されたい）。アイソタイプコントロール抗体で処理したＭＬＲ試料（３７ＡＳＫ）および未処理のＭＬＲ試料（Ａｂなし）は、対照として示される。
【０３１３】
１．６  実施例６：ヒトＴ細胞クローン＋ＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１アッセイ
１．６．１  ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞クローンの作製および培養
ＭＨＣクラスＩＩアロ抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞クローンＢＣ４−４９を、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株ＪＹとの２ラウンドの混合白血球反応により作製し、限界希釈によりクローニングした。クローンを２週間間隔でアロ特異的抗原を使用して再刺激し、Ｙｓｓｅｌ培地（ＩＭＤＭ、Ｇｉｂｃｏ  １２４４０−０５３；ヒト血清ＡＢ、Ｇｅｍｉｍｉ  １００５１２；ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ３０−００２−ＣＩ；ヒトアルブミン、Ｓｉｇｍａ  Ａ９０８０；ＩＴＳ−Ｘ、Ｇｉｂｃｏ  ５１５０００５６；トランスフェリン、Ｒｏｃｈｅ  １０６５２２０２００１；ＰＡ  Ｂｉｏｘｔｒａ  Ｓｉｇｍａ  ｐ５５８５；ＬＡ−ＯＡ−アルブミン、Ｓｉｇｍａ  Ｌ９６５５）中で培養した。Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒにより提供された２つのヒトバフィーコートから新たなＰＢＭＣを分離し、１：１の細胞比でプールした。ＰＢＭＣは、使用前にガンマ線照射器内で線量４０００ｒａｄで放射線照射した。野生型ＪＹ細胞を調製し、線量５０００ｒａｄで放射線照射した。Ｔ細胞クローンをフィーダーと共に、２４ウェルプレート内で、１ｍＬ／ウェルで、ＣＤ４＋  Ｔ細胞  ０．２×１０６／ｍＬ、照射ＰＢＭＣ  １×１０６／ｍＬ、照射ＪＹ  ０．１×１０６／ｍＬ、および１００ｎｇ／ｍＬ  ＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｌ９０１７）の終濃度で培養した。組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２０２−ＩＬ／ＣＦ）を再刺激後３日目に終濃度１００ｎｇ／ｍＬで加え、増殖全体を通して３〜４日毎に補充した。細胞を、０．５〜１．０×１０６／ｍＬの間の最適濃度に継代した。再刺激後７日目に、豊富なレベルのＬＡＧ−３および中程度のレベルのＰＤ−１がＴ細胞表面上に発現した。
【０３１４】
１．６．２  ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞機能アッセイ
アロ抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞を、抗原再刺激後７日目に２４ウェル培養プレートから回収し、次いで遠心分離により２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１５５７５−３８）を含有する２０ｍＬ  ＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３００２８０２）で２回洗浄した。ペレットをＹｓｓｅｌ培地中に再懸濁し、単一細胞懸濁液にした。二重特異性抗体９０ＡＳＵ、１８ＡＳＳを、最も高い最終濃度で１３３ｎＭから開始してＹｓｓｅｌ培地中で５倍段階希釈し、９６ウェルＵ底培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ、３５３０７７）中で１００μＬの容量で合計７回希釈することにより用量設定した。二重特異性抗体は、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ  Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ変異を持っていた。アイソタイプコントロール３７ＡＳＫ（配列番号１２６および１２７）は、同じ変異を有する抗ＲＳＶであった。密度４×１０５細胞／ｍＬの５０マイクロリットルのＴ細胞懸濁液を、用量設定抗体を含有するウェルに加えた。抗体／Ｔ細胞混合物を、５％ＣＯ２を有する３７℃のインキュベーター内で１時間プレインキュベートした。ヒトＰＤ−Ｌ１導入遺伝子を発現するＪＹ細胞（ＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１）を、共培養中で用いて、アロ特異的抗原を提供した。Ｔ−７５フラスコ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，１５６４９９）中で、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ，１０−０４０−ＣＶ）中で培養したＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１細胞を回収し、ガンマ線照射装置内で５０００ｒａｄの線量で放射線照射し、次いで遠心分離により２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで２回洗浄した。ペレットをＹｓｓｅｌ培地中に再懸濁し、４０μｍ細胞ストレーナーでろ過した後に播いた。５０μＬ／ウェルの、濃度２×１０５細胞／ｍＬのＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１懸濁液を、プレインキュベートした抗体−Ｔ細胞混合物に、２：１のＴ細胞対ＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１細胞比で分注した。全ての条件は二重に行った。約３日間の培養後、１ウェルあたり１００μＬの上清をヒトＩＦＮγ定量のために回収した。ヒトＩＦＮγ  ＥＬＩＳＡを実施し、ｈＩＦＮγ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳＩＦ５０）を用いることにより、２連からプール上清のＩＦＮγレベルを判定した。アッセイは、製造業者により提供された標準的プロトコールに従って行った。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて計算した。これらの実験からのデータは、図３に示される。
【０３１５】
この実施例は、二重特異性抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３抗体９０ＡＳＵ（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａを有する抗ＰＤ−１  ｈｕ−０８Ａ／抗ＬＡＧ３  ｈｕ−２２Ｄ２  Ａｂ６）および１８ＡＳＳ（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａを有する抗ＰＤ−１  Ｆａｂ１００アフィニティ成熟／抗ＬＡＧ３  ｈｕ−２２Ｄ２  Ａｂ６）は、Ｔ細胞クローンにより発現されたヒトＰＤ−１およびヒトＬＡＧ−３の両方に結合し、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１との相互作用をブロックし、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩとの相互作用をブロックし；それによって、ＰＤ−Ｌ１介在性およびＭＨＣクラスＩＩ介在性の二重の抑制の阻害に基づいて、Ｔ細胞がアロジェニック刺激に対してＩＦＮγを産生するように応答することを可能にすることを実証した。加えて、この実施例は、二重特異性抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３  ９０ＡＳＵおよび１８ＡＳＳが、Ｔ細胞のＩＦＮγ産生の促進において同等の効力を持つことを示した。アイソタイプコントロール抗体３７ＡＳＫは、活性化されたＴ細胞クローンによるＩＦＮγ産生を増強しなかった。
【０３１６】
１．  Ｓｈａｒｐｅ，  Ａ．Ｈ，  Ｗｈｅｒｒｙ，  Ｅ．Ｊ．，  Ａｈｍｅｄ  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｇ．Ｊ．  Ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （２００７）；８：２３９−２４５．
２．  Ｄｏｎｇ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｂ７−Ｈ１  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｖａｓｉｏｎ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ２００２  Ａｕｇ；８（８）：７９３−８００．
３．  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−１  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｕｖｅａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００８  Ｊｕｎ；４９（６  （２００８）：  ４９：  ２５１８−２５２５．
４．  Ｇｈｅｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｄｕｃｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  （２００６）  ８：  １９０−１９８．
５．  Ｈａｍａｎｉｓｈｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ｌｉｇａｎｄ  １  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｒｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （２００７）：  １０４：  ３３６０−３３６５．
６．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＲＨ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｅｎｉｔｏｕｒｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  （２００６）：  ５：  ２０６−２１１．
７．  Ｎｏｍｉ，  Ｔ．  Ｓｈｏ，  Ｍ．，  Ａｋａｈｏｒｉ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−  １  ｌｉｇａｎｄ／ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００７）；１３：２１５１−２１５７．
８．  Ｏｈｉｇａｓｈｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ−１  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００５）：  １１：  ２９４７−２９５３．
９．  Ｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−Ｌ１  （Ｂ７−Ｈ１）  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ａｎｄ  ＢＣＧ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔａ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｓｔａｇｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２００７）：  １０９：  １４９９−１５０５．
１０．  Ｓｈｉｍａｕｃｈｉ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｉｎ  ｂｏｔｈ  ｎｅｏｐｌａｓｍａｔｉｃ  ａｎｄ  ｎｏｎｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ／  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２００７）：  １２１：２５８５−２５９０．
１１．  Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００９）  １５：  ９７１−９７９．
１２．  Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｊ．  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  （ＰＤ−Ｌ１）  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒａｄｅ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  （２００７）  ５６：  １１７３−  １１８２．
１３．  Ｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ−１  ｉｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  （２０１０）：  ００：  １−９．
１４．
１４．  Ｇｈｅｂｅｈ  Ｈ．  Ｆｏｘｐ３＋  ｔｒｅｇｓ  ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ１＋／ＰＤ−１＋  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｃｏ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．  ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２００８  Ｆｅｂ  ２３；８：５７．
１５．  Ａｈｍａｄｚａｄｅｈ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ａｒｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｉｍｐａｉｒｅｄ．  Ｂｌｏｏｄ  （２００９）  １１４：  １５３７−１５４４．
１６．  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＲＨ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＤ−１  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００７）  １５：  １７５７−１７６１．
本明細書中で引用される全ての参考文献は、各々の個別の刊行物、データベースエントリー（例としてＧｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に指し示されていた場合と同程度に、参照により組み込まれる。参照による組み込みについてのこの記述は、出願人により、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．  §１．５７（ｂ）（１）に従って、かかる引用が参照による組み込みについての専用の記述に直接隣接していなくとも、その各々が３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．  §１．５７（ｂ）（２）に従って明確に同定されているあらゆる個別の刊行物、データベースエントリー（例としてＧｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許と関連付けることが意図されたものである。明細書の中に参照による組み込みについての専用の記述を含めることは、もしあったとしても、参照による組み込みについてのこの一般的な記述を何ら弱めるものではない。本明細書中の参考文献の引用は、参考文献が関連する従来技術であるという自認とは意図されず、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何らの自認を構成するものではない。
【０３１７】
本発明は、本明細書中に記載されている具体的な実施形態により範囲を限定されるものではない。実際に、本明細書中に記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の記載および添付の図から当業者に明らかになる。かかる改変は添付の特許請求の範囲の中に入ることが意図される。
【０３１８】
前述の書面の明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするために十分であると考えられる。本明細書中に示されて記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の記載から当業者に明らかになり、これらは添付の特許請求の範囲の中に入る。
【０３１９】
表８．配列情報
【表９】
2021511806.tif 000013
2021511806.tif 000014
2021511806.tif 000015
2021511806.tif 000016
2021511806.tif 000017
2021511806.tif 000018
2021511806.tif 000019
2021511806.tif 000020
2021511806.tif 000021
2021511806.tif 000022
2021511806.tif 000023
2021511806.tif 000024
2021511806.tif 000025
2021511806.tif 000026
2021511806.tif 000027
2021511806.tif 000028
2021511806.tif 000029
2021511806.tif 000030
2021511806.tif 000031
2021511806.tif 000032
【０３２０】
変異は太字で示し（可変領域中の変異は連続的ナンバリングを使用、定常領域中の変異はＥＵナンバリングを使用）、下線はＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ）の強調である。
【図１】
2021511806.tif 000033
【図２】
2021511806.tif 000034
【図３】
2021511806.tif 000035
【図４】
2021511806.tif 000036
【図５】
2021511806.tif 000037
【図６】
2021511806.tif 000038
【配列表】
2021511806000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年10月8日(2020.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
（ｉ）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９、７９または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）
ａ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４、１５、１８、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｃ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
（ｉ）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
（ｉ）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
（ｉ）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号７または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１、３４または７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号６に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１３、１６、１９、２３、２７、３０または３３に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
配列番号９２に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
配列番号８５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
配列番号８４に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１０の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１２】
（ｉ）
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９、７９、８６または９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｃ．  配列番号４１または１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
配列番号７５、７８、８１または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１５】
配列番号７４、７７、８０、８２または８９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１６】
配列番号９５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１７】
配列番号８３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、請求項１６の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１８】
（ｉ）
ａ．  配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域、ならびに
（ｉｉ）
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
ａ．  配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２０】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲが、
ａ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｃ．  配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｄ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２１】
配列番号４０と少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９と少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
ａ．  配列番号３７または１１９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｂ．  配列番号４４または１２１に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｃ．  配列番号５０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに
ｄ．  配列番号５７または１２３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
よりなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１８の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて５０ｐＭ未満のＫＤを有してヒトＰＤ−１に結合する、請求項１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２４】
２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である、請求項１〜２３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２５】
Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、請求項１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２６】
ＩｇＧ１サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、請求項１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２７】
哺乳動物細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、請求項１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２８】
ＣＨＯ細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、請求項１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２９】
請求項１〜２６の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つをコードする単離された核酸。
【請求項３０】
請求項２９の単離された核酸を含む発現ベクター。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、核酸または発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３２】
細菌細胞、ヒト細胞、哺乳動物細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、組成物。
【請求項３４】
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；および
ｚ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ａａ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｂｂ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される剤をさらに含む、請求項３３の組成物。
【請求項３５】
ａ．  請求項１〜２８の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、ポリヌクレオチドの発現に好都合な条件下で培養すること；ならびに
ｂ．  宿主細胞および／または培養培地から抗体または抗原結合性断片を回収すること
を含む、抗体または抗原結合性断片を生産する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２０】
変異は太字で示し（可変領域中の変異は連続的ナンバリングを使用、定常領域中の変異はＥＵナンバリングを使用）、下線はＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ）の強調である。
本発明は一態様において、以下を提供する。
[項目１]
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目２]
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目３]
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９、７９または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
ａ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４、１５、１８、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｃ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域
を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目４]
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目５]
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目６]
１）
配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域；ならびに
２）
配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２１と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号２２と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目７]
配列番号７または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１、３４または７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目８]
配列番号６に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１３、１６、１９、２３、２７、３０または３３に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。
[項目９]
配列番号９２に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１の抗体または抗原結合性断片。[項目１０]
配列番号８５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目１１]
配列番号８４に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、項目１０の抗体または抗原結合性断片。
[項目１２]
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９、７９、８６または９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、ｃ．  配列番号４１または１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目１３]
ａ．  配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１２の抗体または抗原結合性断片。
[項目１４]
配列番号７５、７８、８１または８８に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１２の抗体または抗原結合性断片。
[項目１５]
配列番号７４、７７、８０、８２または８９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、項目１２の抗体または抗原結合性断片。
[項目１６]
配列番号９５に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、項目１２の抗体または抗原結合性断片。
[項目１７]
配列番号８３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体である、項目１６の抗体または抗原結合性断片。
[項目１８]
ａ．  配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号６３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目１９]
ａ．  配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．  配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．  配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．  配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．  配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．  配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、項目１８の抗体または抗原結合性断片。
[項目２０]
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲが、
ａ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｂ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
ｃ．  配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
ｄ．  配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
よりなる群から選択される、項目１８の抗体または抗原結合性断片。
[項目２１]
配列番号４０と少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９と少なくとも約７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０と少なくとも約５７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２および配列番号５と少なくとも約６７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合性断片。
[項目２２]
ａ．  配列番号３７または１１９に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｂ．  配列番号４４または１２１に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４６に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
ｃ．  配列番号５０に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５２に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに
ｄ．  配列番号５７または１２３に規定されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号５９に規定されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
よりなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、項目１８の抗体または抗原結合性断片。
[項目２３]
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおいて５０ｐＭ未満のＫＤを有してヒトＰＤ−１に結合する、項目１〜２２のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２４]
２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗体である、項目１〜２３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２５]
Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、項目１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２６]
ＩｇＧ１サブタイプの重鎖領域を含む抗体である、項目１〜２４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２７]
哺乳動物細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、項目１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２８]
ＣＨＯ細胞による発現のグリコシル化パターン特性を含む、項目１〜２６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
[項目２９]
項目１〜２６の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つをコードする単離された核酸。
[項目３０]
項目２９の単離された核酸を含む発現ベクター。
[項目３１]
項目１〜３０のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、ポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞。
[項目３２]
細菌細胞、ヒト細胞、哺乳動物細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、項目３１の宿主細胞。
[項目３３]
項目１〜２８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、組成物。
[項目３４]
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；および
ｚ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ａａ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｂｂ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される剤をさらに含む、項目３３の組成物。
[項目３５]
ａ．  項目１〜２８の抗体または抗原結合性断片のうちのいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、ポリヌクレオチドの発現に好都合な条件下で培養すること；ならびに
ｂ．  宿主細胞および／または培養培地から抗体または抗原結合性断片を回収すること
を含む、抗体または抗原結合性断片を生産する方法。
[項目３６]
ａ．  がんの処置；または
ｂ．  感染もしくは感染症の処置
における使用のための、項目１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
[項目３７]
免疫細胞の活性化を増大させる；がんを処置する；または感染もしくは感染症を処置するための薬剤の製造のための、項目１〜２８のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片の使用。
[項目３８]
項目１〜２８のいずれか一項の抗体もしくは抗原結合性断片または項目３０に記載の発現ベクターまたは項目３３に記載の組成物の有効量を、任意選択でさらなる治療剤または治療手法を伴って対象に投与することを含む、ヒト対象においてがんを処置する方法。
[項目３９]
項目１〜２８のいずれか一項の抗体もしくは抗原結合性断片または項目３０に記載の発現ベクターまたは項目３３に記載の組成物の有効量を、任意選択でさらなる治療剤または治療手法を伴って対象に投与することを含む、ヒト対象において感染または感染症を処置する方法。
[項目４０]
さらなる治療剤が、
ａ．  抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｂ．  抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性断片；
ｃ．  抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｄ．  抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｅ．  抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｆ．  抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｇ．  抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性断片；
ｈ．  抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性断片；
ｉ．  抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性断片；
ｊ．  抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性断片；
ｋ．  抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性断片；
ｌ．  抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｍ．  抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性断片；
ｎ．  抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性断片；
ｏ．  抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片；
ｐ．  抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性断片；
ｑ．  抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性断片；
ｒ．  抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性断片；
ｓ．  抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性断片；
ｔ．  抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性断片；
ｕ．  抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性断片；
ｖ．  抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性断片；
ｗ．  抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性断片；
ｘ．  抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性断片；
ｙ．  抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性断片；
ｚ．  ＳＴＩＮＧアゴニスト；
ａａ．  ＣＸＣＲ２アンタゴニスト；および
ｂｂ．  ＰＡＲＰ阻害剤
よりなる群から選択される、項目３８または３９の方法。
【国際調査報告】
2021511806.tif 000039
2021511806.tif 000040
2021511806.tif 000041