(57)【要約】  抗ＦｃＲｎ抗体を含有する安定な薬学的組成物が記載され、特徴付けされる。
2021531346.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＨ６．５で緩衝された、最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、および最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体、２０〜３０ｍＭリン酸ナトリウム、２０〜３０ｍＭ塩化ナトリウム、８０〜１００ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．１０〜０．００５％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む、薬学的組成物。
【請求項２】
２５ｍＭリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
２５ｍＭ塩化ナトリウムを含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
９０〜９１ｍｇ／ｍｌトレハロースを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロースを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
０．０１％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．０１％ポリソルベート８０を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
いかなる追加の賦形剤も含まない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記抗体は、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記抗体は、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
ｐＨ６．５で緩衝された、最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、および最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体、２０〜３０ｍＭコハク酸ナトリウム、２０〜３０ｍＭ塩化ナトリウム、８９〜９２ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．１〜０．００５％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
２５ｍＭコハク酸ナトリウムを含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
２５ｍＭ塩化ナトリウムを含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
９０〜９１ｍｇ／ｍｌトレハロースを含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロースを含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
０．０１％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
２５ｍＭコハク酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．０１％ポリソルベート８０を含む、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
いかなる追加の賦形剤も含まない、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記抗体は、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記抗体は、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記抗体は、配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖を含み、配列番号１のアミノ酸配列からなる軽鎖を有する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
ポリソルベート８０以外のいかなるポリソルベートも含まない、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
ポリソルベート以外のいかなるポリマーも含まない、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
ポリソルベート８０以外のいかなるポリマーも含まない、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［背景技術］
数多くの自己免疫および同種免疫疾患は、病原性抗体によって媒介される。病原性抗体の安定性、活性、およびトランスポートは、ＩｇＧ結合性および血清アルブミン結合性細胞内小胞輸送タンパク質として機能するＩ型膜貫通タンパク質であるＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）に依存する。例えば、多くの胎児および新生児免疫疾患は、妊娠した対象、とりわけ免疫学的疾患を有する妊娠した対象から胎児への、胎盤におけるヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介した母体抗体の移行により生じる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本開示は、抗ＦｃＲｎ抗体を含む組成物（Ｍ２８１組成物）、および自己免疫疾患の治療においてそのような組成物を使用する方法に関する。
【０００３】
ｐＨ６．５で緩衝された、最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、および最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体、２０〜３０ｍＭリン酸ナトリウム、２０〜３０ｍＭ塩化ナトリウム、８０〜１００（例えば、９０〜９１）ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．１〜０．００５％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む薬学的組成物が本明細書において記載される。
【０００４】
様々な場合において、組成物は、２５ｍＭリン酸ナトリウムを含み；２５ｍＭ塩化ナトリウムを含み；９０〜９１ｍｇ／ｍｌトレハロースを含み；９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロースを含み；０．０１％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含み；２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．０１％ポリソルベート８０を含み；組成物は、いかなる追加の賦形剤も含まず；組成物は、ポリソルベート８０以外のいかなるポリソルベートも含まず；組成物は、ポリソルベート以外のいかなるポリマーも含まず；組成物は、ポリソルベート８０以外のいかなるポリマーも含まず；抗体は、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；抗体は、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０００５】
ｐＨ６．５で緩衝された、最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖、および最高５個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体、２０〜３０ｍＭコハク酸ナトリウム、２０〜３０ｍＭ塩化ナトリウム、８９〜９２ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．０２〜０．００５％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含む薬学的組成物も記載される。
【０００６】
様々な場合において、組成物は、２５ｍＭコハク酸ナトリウムを含み；２５ｍＭ塩化ナトリウムを含み；９０〜９１ｍｇ／ｍｌトレハロースを含み；９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロースを含み；０．０１％  ｗ／ｖポリソルベート８０を含み；２５ｍＭコハク酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ／ｍｌトレハロース、および０．０１％ポリソルベート８０を含み；組成物は、いかなる追加の賦形剤も含まず；抗体は、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸挿入、置換、または欠失を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；抗体は、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、最高２個までの単一アミノ酸置換を有する配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
【０００７】
別段の定義がない限り、本明細書において使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって共通に理解されるものと同じ意味を有する。本発明における使用のための方法および材料が本明細書において記載され、当技術分野において公知の他の適切な方法および材料も使用され得る。材料、方法、および実施例は単なる例示であり、限定的であることを意図されるわけではない。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、配列、データベース登録、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体として組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が制御するであろう。
【０００８】
本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な説明および図から、ならびに特許請求の範囲から明白であろう。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】表１における製剤に関する、ＤＳＣによって測定される温度遷移についてのデータを示したグラフである。
【図２】表１における製剤に関する、加速条件での、ＳＥＣによって測定されるサイズ純度についてのデータを示したグラフである。
【図３】表１における製剤に関する、加速条件での、ｃＩＥＦによって測定される電荷不均一性についてのデータを示したグラフである。
【図４】表１における製剤に関する、加速条件での、ＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒ（非還元）によって測定される純度についてのデータを示したグラフである。
【図５】表１における製剤に関する、加速条件での、ＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒ（還元）によって測定される純度についてのデータを示したグラフである。
【図６】表２における製剤に関する、加速条件での、ＳＥＣによって測定されるサイズ純度についてのデータを示したグラフである。
【図７】表２における製剤に関する、加速条件での、ｃＩＥＦによって測定される電荷不均一性についてのデータを示したグラフである。
【図８】表２における製剤に関する、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定されるサイズ分布についてのデータを示したグラフである。
【図９】表２における製剤に関する、加速条件での、ＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒ（非還元）によって測定される純度についてのデータを示したグラフである。
【図１０】表２における製剤に関する、加速条件での、ＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒ（還元）によって測定される純度についてのデータを示したグラフである。
【図１１】表２における製剤に関する、様々なバッファーｐＨに対してＤＳＣによって測定される温度遷移についてのデータを示したグラフである。より高いＴｍ開始ほど、特定のｐＨにおいてタンパク質のより良好な熱安定性を示す。ｐＨスクリーニング調査において、３つの遷移、Ｔｍ１、Ｔｍ２、およびＴｍ３が同定された。
【図１２】温度ストレス下での、ｃＩＥＦによる抗体メイン種レベル％の比較を示したグラフである。２〜８℃の長期保管条件での抗体安定性結果が実線として、および２５℃／６０％ＲＨの加速保管条件が点線として示されている。ロットＤに関する３０ｍｇ／ｍＬの抗体が赤で示されている。ロットＥに関する１０ｍｇ／ｍＬの抗体が黒で示され、ロットＦに関して紫で示され、およびロットＢに関して青で示されている。注記：緑の仕様線は、２〜８℃でのリアルタイム条件のみに適用される。
【図１３】温度ストレス下での、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる抗体メイン種レベル％の比較を示したグラフである。２〜８℃の長期保管条件での抗体安定性結果が実線として、および２５℃／６０％ＲＨの加速保管条件が点線として示されている。ロットＤに関する３０ｍｇ／ｍＬの抗体が赤で示されている。ロットＥに関する１０ｍｇ／ｍＬの抗体が黒で示され、ロットＦに関して紫で示され、およびロットＢに関して青で示されている。緑の仕様線は、２〜８℃でのリアルタイム条件のみに適用される。
【図１４Ａ−１４Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したＧＭＰロットＢのタンパク質濃度についてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、３０ｍｇ／ｍＬの１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣの濃度（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界；ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図１４Ｃ−１４Ｄ】上記と同様。
【図１５Ａ−１５Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢのｐＨ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣのｐＨ（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界；ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図１５Ｃ−１５Ｄ】上記と同様。
【図１６Ａ−１６Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢのサイズ純度についてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣのＳＥＣによるサイズ純度（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図１６Ｃ−１６Ｄ】上記と同様。
【図１７Ａ−１７Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢの還元ＣＥ−ＳＤＳによる純度についてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣの還元ＣＥ−ＳＤＳによるＨＣ＋ＬＣ純度（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図１７Ｃ−１７Ｄ】上記と同様。
【図１８Ａ−１８Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢの非還元ＣＥ−ＳＤＳによるサイズ純度についてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣの非還元ＣＥ−ＳＤＳによるサイズ純度（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図１８Ｃ−１８Ｄ】上記と同様。
【図１９Ａ−１９Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢの非還元ＣＥ−ＳＤＳによるピークＡレベルについてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣの非還元ＣＥ−ＳＤＳによるピークＡレベル（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界。
【図１９Ｃ−１９Ｄ】上記と同様。
【図２０Ａ−２０Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢのｃＩＥＦからのメインピークについてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣのｃＩＥＦからのメインピーク（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図２０Ｃ−２０Ｄ】上記と同様。
【図２１Ａ−２１Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢのｃＩＥＦからの酸性ピークについてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣのｃＩＥＦからの酸性ピーク（Ｃ）、ならびにＤＰロットＤについての回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界。
【図２１Ｃ−２１Ｄ】上記と同様。
【図２２Ａ−２２Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの３０カ月を通したＤＰ開発ロットＥ、２４カ月を通したロットＦ、２４カ月を通したＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢのｃＩＥＦからの塩基性ピークについてのデータ（Ａ）、ならびにすべての１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣのｃＩＥＦからの塩基性ピーク（Ｃ）、ならびに回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界。
【図２２Ｃ−２２Ｄ】上記と同様。
【図２３Ａ−２３Ｂ】安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１０ｍｇ／ｍＬの２４カ月を通したＤＰ  ＧＭＰロットＡ、１８カ月を通したロットＢの効力についてのデータ（Ａ）、ならびに両方の１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＰロットについての回帰調査プロット（Ｂ）；安定性調査における長期保管条件２〜８℃での、１２カ月を通した開発ＤＰロットＤおよび３カ月を通したＧＭＰロットＣの効力（Ｃ）、ならびに回帰調査プロット（Ｄ）を示したグラフである。ＵＳＬ：上側仕様限界；ＬＳＬ：下側仕様限界。
【図２３Ｃ−２３Ｄ】上記と同様。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
詳細な説明
本開示は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する抗体を含む組成物を特色とする。これらの組成物は、例えば、対象における自己抗体のクリアランスを促進するのに、対象における抗原提示を抑制するのに、免疫応答を遮断する、例えば対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を遮断するのに、または対象における免疫学的疾患（例えば、自己免疫疾患）を治療するのに有用である。
【００１１】
初期調査の後、選択製剤を、種々の濃度の塩化ナトリウム、トレハロース、および界面活性剤ポリソルベート（ＰＳ）８０、緩衝剤を用いて調製し、種々のｐＨ（ｐＨ５〜８）で緩衝した。ゆえに、組成物は、イオン性オスモライト安定剤（塩化ナトリウム）および非イオン性オスモライト安定剤（トレハロース）の両方を含む。前述の製剤の安定性を、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、サイズ純度、電荷分布、および熱安定性によって経時的に査定した。これらの安定性パラメーターを、ｐＨ、ＵＶ−Ｖｉｓ、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ＣＥ−ＳＤＳ、および示差走査熱量測定を含めた分析技法によって測定した。
【００１２】
２つの製剤が、前述の測定基準にわたって査定される増強した安定性を呈し、安定性は経時的に継続した：（１）ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ  ｍｌ−１トレハロース、０．０１％ポリソルベート（ＰＳ）８０、および１０または３０ｍｇ  ｍｌ−１の抗体（配列番号２の配列を含む重鎖および配列番号１を含む軽鎖を有する）；ならびに（２）ｐＨ６．６で緩衝された、２５ｍＭコハク酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ  ｍｌ−１トレハロース、０．０１％ポリソルベート（ＰＳ）８０、および１０または３０ｍｇ  ｍｌ−１の抗体（配列番号２の配列を含む重鎖および配列番号１を含む軽鎖を有する）。前述の２つの製剤の安定性を、選択した機械的、熱的、および化学的ストレスの存在下でさらに検査した。両製剤とも、複数の前述の測定基準にわたって経時的に査定される安定性の有意な悪化を呈しなかった。顕著には、安定性は、製剤（１）ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ  ｍｌ−１トレハロース、０．０１％ポリソルベート（ＰＳ）８０、および１０または３０ｍｇ  ｍｌ−１の抗体に関して３０カ月を上回る期間維持された。種々の量のポリソルベート８０とともに、ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、９０．５ｍｇ  ｍｌ−１トレハロース、および抗体（配列番号２の配列を含む重鎖および配列番号１を含む軽鎖を有する）という製剤も検査した。
【００１３】
抗ＦｃＲｎ抗体
本明細書において記載されるように製剤化され得る抗体には、配列番号１の軽鎖配列および配列番号２の重鎖配列を有する抗体（Ｍ２８１とも称される；この抗体を含有する組成物は、Ｍ２８１組成物と称されることもある）が含まれる。この抗体のバリアントも、本明細書において記載されるように製剤化され得る。そのようなバリアントには、１〜５個の単一アミノ酸置換または欠失を有する（および好ましくは、配列番号３〜５のＣＤＲ配列を含む）配列番号１のバリアントの軽鎖配列、および１〜５個の単一アミノ酸置換または欠失を有する（および好ましくは、配列番号６〜８のＣＤＲ配列を含む）配列番号２のバリアントの重鎖配列を有する抗体が含まれる。配列番号１のバリアントおよび配列番号２のバリアントから構成される抗体は、好ましくは、ＣＤＲ配列：ＴＧＴＧＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３）；ＧＤＳＥＲＰＳ（軽鎖ＣＤＲ２；配列番号４）；ＳＳＹＡＧＳＧＩＹＶ（軽鎖ＣＤＲ３；配列番号５）；ＴＹＡＭＧ（重鎖ＣＤＲ１；配列番号６）；ＳＩＧＡＳＧＳＱＴＲＹＡＤＳ（重鎖ＣＤＲ２；配列番号７）；およびＬＡＩＧＤＳＹ（重鎖ＣＤＲ３；配列番号８）を保持する。
【００１４】
一部の場合には、軽鎖は、
【００１５】
【化１】
2021531346.tif 000003
と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有する配列を有する。
【００１６】
一部の場合には、重鎖は、
【００１７】
【化２】
2021531346.tif 000004
と少なくとも９０％、９５％、または９８％の同一性を有する配列を有する。
【００１８】
ベクター、宿主細胞、および抗体産生
抗ＦｃＲｎ抗体は、宿主細胞から産生され得る。宿主細胞とは、本明細書において記載されるポリペプチドおよび構築物をそれらの対応する核酸から発現させるために必要とされる必須の細胞構成要素、例えば細胞小器官を含むビヒクルを指す。核酸は、当技術分野において公知の従来技法（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染等）によって宿主細胞に導入され得る核酸ベクターに含まれ得る。核酸ベクターの選定は、一部には、使用される対象となる宿主細胞に依存する。一般的に、好ましい宿主細胞は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物（例えば、哺乳類）起源のものである。
【００１９】
核酸ベクター構築および宿主細胞
抗ＦｃＲｎ抗体のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、当技術分野において公知の多様な方法によって調製され得る。これらの方法には、オリゴヌクレオチド媒介性（または部位指向性）変異導入およびＰＣＲ変異導入が含まれるが、それらに限定されるわけではない。抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸分子は、標準的技法、例えば遺伝子合成を使用して獲得され得る。あるいは、野生型抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸分子は、当技術分野における標準的技法、例えばＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）変異導入を使用して、特異的アミノ酸置換を含有するように変異し得る。核酸分子は、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を使用して合成され得る。
【００２０】
抗ＦｃＲｎ抗体をコードする核酸配列を、原核または真核宿主細胞において核酸分子を複製し得および発現させ得るベクターに挿入し得る。多くのベクターが当技術分野において入手可能であり、使用され得る。各ベクターは、特定の宿主細胞との適合性のために調整され得および最適化され得る様々な構成要素を含有し得る。例えば、ベクター構成要素には、複製の起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、関心対象のタンパク質をコードする核酸配列、および転写終結配列が含まれ得るが、それらに限定されるわけではない。
【００２１】
哺乳類細胞が宿主細胞として使用され得る。哺乳類細胞タイプの例には、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｆ）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＰＣ３、Ｖｅｒｏ、ＭＣ３Ｔ３、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、それらに限定されるわけではない。他では、大腸菌（E. coli）細胞が宿主細胞として使用され得る。大腸菌（E. coli）系統の例には、大腸菌（E. coli）２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、大腸菌（E. coli）λ１７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７、大腸菌（E. coli）ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ−１０２５）、および大腸菌（E. coli)ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。種々の宿主細胞は、翻訳後プロセシングおよびタンパク質産物の修飾のための特徴的でかつ特異的なメカニズムを有する。適当な細胞株または宿主システムを選定して、発現する抗ＦｃＲｎ抗体の正しい修飾およびプロセシングを確実にし得る。上記の発現ベクターを、当技術分野における従来技法、例えば形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、および直接マイクロインジェクションを使用して、適当な宿主細胞に導入し得る。ベクターが、タンパク質産生のための宿主細胞に導入され次第、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて改変された従来の栄養培地中で宿主細胞を培養する。治療用タンパク質の発現のための方法は、当技術分野において公知であり、例えばPaulina Balbas, Argelia Lorence (eds.) Recombinant Gene Expression: Reviews and Protocols (Methods in Molecular Biology), Humana Press; 2nd ed. 2004 (July 20, 2004)およびVladimir Voynov and Justin A. Caravella (eds.) Therapeutic Proteins: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology) Humana Press; 2nd ed. 2012 (June 28, 2012)を参照されたい。
【００２２】
タンパク質の産生、回収、および精製
抗ＦｃＲｎ抗体を産生するために使用される宿主細胞を、当技術分野において公知でかつ選択された宿主細胞の培養に適した培地中で成長させ得る。哺乳類宿主細胞のための適切な培地の例には、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補給されたＤＭＥＭ、およびＲＰＭＩ−１６４０が含まれる。細菌宿主細胞のための適切な培地の例には、選択剤、例えばアンピシリン等の必要な補給剤を加えたルリアブロス（ＬＢ）が含まれる。宿主細胞を、約２０℃〜約３９℃、例えば２５℃〜約３７℃、好ましくは３７℃等の適切な温度、および５〜１０％（好ましくは８％）等のＣＯ２レベルで培養する。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、一般的に約６．８〜７．４、例えば７．０である。発現ベクターにおいて誘導性プロモーターが使用される場合、タンパク質発現は、プロモーターの活性化に適した条件下で誘導される。
【００２３】
タンパク質回収は、一般的に浸透圧ショック、超音波処理、または溶解等の手段によって、宿主細胞を破壊するステップを典型的に伴う。細胞が破壊され次第、細胞残屑は、遠心分離または濾過によって除去され得る。タンパク質はさらに精製され得る。抗ＦｃＲｎ抗体は、タンパク質精製についての当技術分野において公知の任意の方法によって、例えばプロテインＡ親和性、他のクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための他の任意の標準的技法によって精製され得る。（Process Scale Purification of Antibodies, Uwe Gottschalk (ed.) John Wiley & Sons, Inc., 2009を参照されたい。）一部の場合には、抗ＦｃＲｎ抗体は、精製を容易にするペプチド等のマーカー配列にコンジュゲートされ得る。マーカーアミノ酸配列の例は６−ヒスチジンペプチド（Ｈｉｓタグ）であり、それはマイクロモル親和性でニッケル官能化アガロース親和性カラムに結合する。精製に有用な他のペプチドタグには、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン「ＨＡ」タグが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２４】
治療の方法および適応症
本明細書において記載される抗ＦｃＲｎ抗体を含有する薬学的組成物によるヒトＦｃＲｎの遮断は、ＩｇＧ自己抗体によって推進される疾患において治療上有益であり得る。全体的なＩｇＧ異化、および複数の種の自己抗体、小型循環代謝産物、またはリポタンパク質の除去を誘導するＦｃＲｎ遮断の能力は、自己抗体により推進される自己免疫疾患病理を有する患者まで、自己抗体除去ストラテジーの実用性および利用可能性を拡大する方法を与える。いかなる理論によっても拘束されることなく、抗ＦｃＲｎ抗体の作用の支配的メカニズムは、循環における病原性自己抗体の異化を増加させ、ならびに影響を受けた組織における自己抗体および免疫複合体蓄積を減少させることであり得る。
【００２５】
薬学的組成物は、対象における病原性抗体、例えばＩｇＧおよびＩｇＧ自己抗体の異化およびクリアランスを促進するのに、免疫応答を低下させる、例えば対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を遮断するのに、および対象における免疫学的病状または疾患を治療するのに有用である。特に、薬学的組成物は、急性または慢性免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を低下させるまたは治療するのに有用である。急性免疫応答は、尋常性天疱瘡、ループス腎炎、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、抗体媒介性拒絶反応、劇症型抗リン脂質抗体症候群、免疫複合体媒介性血管炎、糸球体炎、チャネロパチー、視神経脊髄炎、自己免疫性難聴、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、免疫性好中球減少症、拡張型心筋症、および血清病からなる群より選択される医学的病状によって活性化され得る。慢性免疫応答は、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、全身性ループス、急性治療に適応される障害の慢性形態、反応性関節障害、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性結腸炎、および抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎からなる群より選択される医学的病状によって活性化され得る。
【００２６】
一部の場合には、薬学的組成物は、自己免疫疾患によって活性化された免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。自己免疫疾患は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、アジソン病、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症（ＣＲＥＳＴ症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、ループス、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性結腸炎、ブドウ膜炎、白斑、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、重症筋無力症、視神経脊髄炎、またはウェゲナー肉芽腫症からなる群より選択され得る。
【００２７】
一部の場合には、薬学的組成物は、胎児における貧血の危険性を減少させるまたは貧血を発症する危険性を減少させるのに有用である。一部の場合には、薬学的組成物は、ＩＵＴ（子宮内輸血）の必要性を減少させるまたは取り除くのに有用である。一部の場合には、薬学的組成物および方法は、出生前ＰＰ＋ＩＶＩｇ、出生後輸血、ＩＶＩｇ、および／または光線療法の必要性を減少させるまたは取り除くのに有用である。
【００２８】
一部の場合には、薬学的組成物は、胎児または新生児における免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。一部の場合には、薬学的組成物および方法は、妊娠した母親における自己免疫疾患によって活性化された、胎児または新生児における免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。
【００２９】
特に、薬学的組成物は、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、尋常性天疱瘡／水疱性類天疱瘡、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、重症筋無力症、または視神経脊髄炎によって活性化された免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。一部の場合には、薬学的組成物は、胎児または新生児における免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。一部の場合には、薬学的組成物および方法は、妊娠した母親における全身性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、尋常性天疱瘡／水疱性類天疱瘡、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、重症筋無力症、または視神経脊髄炎によって活性化された免疫応答を低下させるまたは治療するのに有用である。
【００３０】
薬学的組成物は、ヒトＦｃＲｎに結合する単離された抗体を妊娠した対象に投与することによる、妊娠した対象の胎盤を越えた病原性抗体トランスポート（例えば、病原性母体ＩｇＧ抗体トランスポート）を減少させる、妊娠した対象における病原性抗体異化を増加させる、および胎児または新生児におけるウイルス性疾患の抗体媒介性増強を治療する方法において有用である。本明細書において記載される薬学的組成物によるＦｃＲｎ阻害から恩恵を受け得る疾患および障害には、妊娠した対象から胎児および／または新生児への胎盤を越えた母体病原性抗体（例えば、母体病原性ＩｇＧ抗体）の移行によって引き起こされる、胎児および／または新生児における疾患および障害が含まれる。
【００３１】
一部の場合には、本明細書において記載される薬学的組成物を用いた治療から恩恵を受け得る疾患および障害は、胎児および新生児同種免疫および／または自己免疫障害である。胎児および新生児同種免疫障害は、妊娠した対象における病原性抗体によって引き起こされる、胎児および／または新生児における障害である。妊娠した対象における病原性抗体は、胎児の抗原（例えば、胎児が胎児の父親から受け継いだ抗原）を攻撃し得、胎児または新生児に胎児および新生児同種免疫および／または自己免疫障害を持たせる。
【００３２】
治療され得る胎児および新生児同種免疫および／または自己免疫障害の例には、胎児および新生児同種免疫性血小板減少症（ＦＮＡＩＴ）、胎児および生まれたばかりの子どもの溶血性疾患（ＨＤＦＮ）、同種免疫性汎血小板減少症、先天性心ブロック、胎児関節拘縮、新生児重症筋無力症、新生児自己免疫性溶血性貧血、新生児抗リン脂質症候群、新生児多発性筋炎、皮膚筋炎、新生児ループス、新生児強皮症、ベーチェット病、新生児グレーブス病、新生児川崎病、新生児自己免疫性甲状腺疾患、および新生児Ｉ型糖尿病が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３３】
一部の場合には、本明細書において記載される薬学的組成物を用いた治療から恩恵を受け得る疾患および障害は、抗体が宿主細胞へのウイルス侵入を促し、細胞における感染力の増加または増強、例えばウイルス性疾患の抗体媒介性増強につながる、ウイルス性疾患である。一部の場合には、抗体は、ウイルス表面タンパク質に結合し得、抗体／ウイルス複合体は、抗体と受容体との間の相互作用を介して細胞表面のＦｃＲｎに結合し得る。その後、抗体／ウイルス複合体は、細胞に内在化され得る。例えば、ウイルスは、母体ＩｇＧ抗体と複合体を形成することにより、胎児の細胞および／または組織に侵入し得る。母体ＩｇＧ抗体は、ウイルス表面タンパク質に結合し得、ＩｇＧ／ウイルス複合体は、胎盤の栄養膜合胞体層においてＦｃＲｎに結合し得、次いでそれは複合体を胎児に移行させる。
【００３４】
一部の場合には、本明細書において記載される薬学的組成物を使用して、ウイルス性疾患の抗体媒介性増強を治療し得る。一部の場合には、病原性抗体（例えば、病原性ＩｇＧ抗体）によって増強されるウイルス性疾患には、アルファウイルス感染、フラビウイルス感染、ジカウイルス感染、チクングニアウイルス感染、ロスリバーウイルス感染、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス感染、中東呼吸器症候群、鳥インフルエンザ感染、インフルエンザウイルス感染、ヒト呼吸器合胞体ウイルス感染、エボラウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、デングウイルス感染、ヒト免疫不全ウイルス感染、呼吸器合胞体ウイルス感染、ハンタウイルス感染、ゲタウイルス感染、シンドビスウイルス感染、ブニヤムウェラウイルス感染、西ナイルウイルス感染、日本脳炎ウイルスＢ感染、ウサギ痘ウイルス感染、乳酸デヒドロゲナーゼ上昇ウイルス感染、レオウイルス感染、狂犬病ウイルス感染、口蹄疫ウイルス感染、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス感染、サル出血熱ウイルス感染、ウマ伝染性貧血ウイルス感染、ヤギ関節炎ウイルス感染、アフリカ豚熱ウイルス感染、レンチウイルス感染、ＢＫパポーバウイルス感染、マレーバレー脳炎ウイルス感染、エンテロウイルス感染、サイトメガロウイルス感染、ニューモウイルス感染、モルビリウイルス感染、および麻疹ウイルス感染によって引き起こされるウイルス性疾患が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３５】
抗ＦｃＲｎ抗体によるヒトＦｃＲｎの遮断は、病原性抗体（例えば、病原性ＩｇＧ抗体）によって推進される疾患において治療上有益であり得る。全体的な病原性抗体異化、および血清アルブミンをかき乱すことのない複数の種の病原性抗体、小型循環代謝産物、またはリポタンパク質の除去を誘導するＦｃＲｎ遮断の能力は、病原性抗体により推進される自己免疫疾患病理を有する患者まで、病原性抗体除去ストラテジーの実用性および利用可能性を拡大する方法を与える。理論によって拘束されないものの、抗ＦｃＲｎ抗体の作用の支配的メカニズムは、循環における病原性抗体の異化を増加させ、および影響を受けた組織における病原性抗体および免疫複合体蓄積を減少させることであり得る。
【００３６】
本明細書において記載される薬学的組成物は、妊娠した対象において免疫応答を活性化する医学的病状を有するまたは有する危険性がある妊娠した対象に投与され得る。一部の場合には、妊娠した対象は、妊娠した対象において免疫応答を活性化する医学的病状を過去に有していた可能性がある。一部の場合には、妊娠した対象は、胎児および新生児同種免疫および／または自己免疫障害を有する以前の胎児または新生児を有していた病歴を有する。一部の場合には、免疫疾患と関連した病原性抗体が、妊娠した対象から獲得された生物学的サンプル（例えば、血液または尿サンプル）において検出された場合、本明細書において記載される抗ＦｃＲｎ抗体は、妊娠した対象に投与され得る。一部の場合には、妊娠した対象の生物学的サンプルにおいて検出された病原性抗体は、妊娠した対象内の胎児由来の抗原（例えば、胎児が胎児の父親から受け継いだ抗原）に結合することが既知である。
【００３７】
一部の場合には、薬学的組成物は、妊娠する計画を立てている、妊娠した対象において免疫応答を活性化する医学的病状を有するもしくは有する危険性がある、および／または妊娠した対象において免疫応答を活性化する医学的病状を過去に有していた対象に投与され得る。一部の場合には、対象は、妊娠する計画を立てており、胎児および新生児同種免疫および／または自己免疫障害を有する以前の胎児または新生児を有していた病歴を有する。一部の場合には、本明細書において記載される抗ＦｃＲｎ抗体は、妊娠する計画を立てている、および生物学的サンプルが、免疫疾患と関連した病原性抗体を含有する対象に投与され得る。
【００３８】
一部の場合には、本明細書において記載される薬学的組成物を対象（例えば、妊娠した対象）に投与して、対象における急性または慢性免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を低下させ得るまたは治療し得る。急性免疫応答は、医学的病状（例えば、尋常性天疱瘡、ループス腎炎、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、抗体媒介性拒絶反応、劇症型抗リン脂質抗体症候群、免疫複合体媒介性血管炎、糸球体炎、チャネロパチー、視神経脊髄炎、自己免疫性難聴、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、免疫性好中球減少症、拡張型心筋症、血清病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、全身性ループス、反応性関節障害、原発性胆汁性肝硬変、潰瘍性結腸炎、または抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎）によって活性化され得る。
【００３９】
一部の場合には、本明細書において記載される製剤を対象（例えば、妊娠した対象）に投与して、自己免疫疾患によって活性化された免疫応答を低下させ得るまたは治療し得る。自己免疫疾患は、例えば円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、アジソン病、溶血性貧血、温式自己免疫性溶血性貧血（ｗＡＩＨＡ）、抗因子抗体、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＣＴ）、感作移植、自己免疫性肝炎、肝炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、限局性強皮症（ＣＲＥＳＴ症候群）、寒冷凝集素症、クローン病、皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、甲状腺機能低下症、炎症性腸疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、扁平苔癬、ループス、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、潰瘍性結腸炎、ブドウ膜炎、白斑、またはウェゲナー肉芽腫症であり得る。
【実施例】
【００４０】
以下の材料および方法を、本明細書において示される実施例において使用した。
【００４１】
材料
商業的供給業者から購入した材料には、リン酸二水素ナトリウム一水和物（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）、無水リン酸水素二ナトリウム（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）、コハク酸（ＴＧＩ）、コハク酸ナトリウム（Ｍａｃｒｏｎ）、塩化ナトリウム（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）、クエン酸一水和物（ＡｐｐｌｉＣｈｅｍ）、塩酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）、水酸化ナトリウム（Ｍａｃｒｏｎ）、高純度（低内毒素）α−α−トレハロース脱水物（Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ）、超精製ポリソルベート８０−ＬＱ（ＭＨ）（Ｃｒｏｄａ）が含まれた。
【００４２】
本明細書において使用される抗体（配列番号２の重鎖および配列番号１の軽鎖を含む）は、ＩｇＧ１  Ｇ１ｍ１７アロタイプ重鎖、末端Ｌｙｓ（Ｋ４４６：ＥＵ番号付け）を欠く十分なラムダ軽鎖として、およびＡｓｎ２９７でのグリコシル化を無効にするＡｓｎ２９７Ａｌａ（ＥＵ番号付け）変異を有してフォーマットされている。
【００４３】
外観分析
透明度、色、および目に見える粒子を含めた、すべてのサンプルの外観を、ライトボックス（Ｔｉａｎｄａ  Ｔｉａｎｆａ、ＹＢ−２型）を使用して白黒背景に対して調べた。
【００４４】
ｐＨの測定
Ｉｎｌａｂ（登録商標）Ｍｉｃｒｏ電極を有するｐＨメーター（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ、Ｓｅｖｅｎ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓ４０型）を使用して、サンプルｐＨを測定した。使用ごとの前に、市販の較正溶液を用いてｐＨメーターを較正した。
【００４５】
タンパク質濃度の測定
ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用したＵＶ２８０ｎｍ読み取りにより、タンパク質濃度を判定した。すべての調査において使用された消散係数は１．４４７ＡＵ  ｍｌ  ｍｇ−１  ｃｍ−１であった。
【００４６】
オスモル濃度測定のための方法
サンプルの希釈なしで、浸透圧計（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓａｍｐｌｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ；型番２０２０）を使用してオスモル濃度を測定した。検査の前および後に、臨床的に制御された２９０ｍＯｓｍ／ｋｇの参照溶液を用いて、浸透圧計の検査精度を確認した。
【００４７】
示差走査熱量測定
温度の関数としてサンプルおよび参照の温度を増加させるために要される熱の量の差を検出することによって、キャピラリーセル示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を利用してタンパク質の熱安定性を測定した。具体的には、ＤＥＣは、溶液中のタンパク質の相対的安定性の指標である温度遷移中点（Ｔｍ）を測定する。簡潔には、市販の参照バッファーを用いて、サンプルを約１ｍｇ  ｍｌ−１に希釈した。４００μｌの参照バッファーのアリコートを９６ウェルプレートの各奇数ウェルに添加し、一方で４００μｌの各サンプルのアリコートを対応する偶数ウェルに添加した。走査温度は、時間あたり２００℃の走査速度を有して１０℃〜１００℃に及ぶ。ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣ自動データ分析ソフトウェア２．０を使用して、データ分析を実施した。
【００４８】
サイズ排除クロマトグラフィー
ＴＳＫＧｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬサイズ排除クロマトグラフィーカラム（３００×７．８ｍｍ、５μＭ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙシステムを２５℃で使用して、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施した。ＳＥＣ分析の前にサンプルを移動相で１０ｍｇ  ｍｌ−１に希釈し、１００μｇのタンパク質を含有するサンプルを注入した。イソクラティック勾配を１ｍｌ  分−１の流速で２０分間適用した。移動相は、ｐＨ７．０±０．２の、５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー、３００ｍＭ  ＮａＣｌからなった。２８０ｎｍに設定された検出波長を有するＵＶ検出器によってデータを収集し、Ｗａｔｅｒｓ  Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウェアを使用してデータを分析した。
【００４９】
キャピラリー等電点電気泳動
ＦＣでコートされたｃＩＥＦカートリッジを有するＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ  ｉＣＥ３装置を使用して、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を実施して、ｐＨ勾配の電荷差に基づいてタンパク質を分離した。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）サンプルに関しては、２０μｇの各サンプルを、等電点（ｐＩ）マーカー７．５５／９．４６、セルバライト６〜９、セルバライト９〜１１、メチルセルロース溶液を含む１００μＬのマスターミックスと混合した。混合した後、サンプルを、１５００Ｖで１分間および３０００Ｖで８分間電気泳動した。検出波長を２８０ｎｍに設定し、電荷バリアント分布を種々のｐＩ域において評価した。
【００５０】
キャピラリー電気泳動
フォトダイオードアレイ検出器を備えたＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰＡ８００  ＥｎｈａｎｃｅｄまたはＰＡ８００  Ｐｌｕｓ機器を使用して、キャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒ）を実施して、ふるいポリマーを通したサイズに基づいて、ドデシル硫酸でコートされたタンパク質を分離した。還元条件で測定されるＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒに関しては、サンプルを希釈溶液（ＰＢ−ＣＡ）によって４ｍｇ  ｍｌ−１に希釈し、次いで７５μｌ  ＳＤＳサンプルバッファーおよび５μｌ  ２−メルカプトエタノールの存在下で７０℃で１０分間加熱した。非還元条件で測定されるＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒに関しては、サンプルを希釈溶液（ＰＢ−ＣＡ）によって４ｍｇ  ｍｌ−１に希釈し、次いで７５μｌ  ＳＤＳサンプルバッファーおよび５μｌ  １００ｍＭ  ＮＥＭの存在下で７０℃で１０分間加熱した。還元または非還元条件のいずれかで調製されたサンプルを、２０秒間の−５ｋＶを使用して逆極性を有する陰極に注入し、その後に−１５ｋＶでの分離が続き、検出波長を２２０ｎｍに設定した。
【００５１】
動的光散乱（ＤＬＳ）
ＤＬＳは、光が所定の温度で溶液によって散乱する程度を測定する技法である。散乱の程度は、溶液中の粒子のサイズ（六乗数まで）および濃度（線形）に比例する。この技法を使用して、光散乱に対する粒子サイズの重大な影響に起因したサブミクロン粒子をモニターする。最も低いｐＨ（５．０）および最も高いｐＨ（８．０）は、サイズ分布の増加を示した。他のすべてのｐＨは、明らかな差を示さなかった。
【００５２】
[実施例１]
抗体を含む液体製剤の安定性に影響を与える、製剤構成要素のバッファー種、ｐＨ、および賦形剤をどのように選択するかを判定するための液体製剤開発調査
種々の濃度のリン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ＮａＣｌ、トレハロース、およびＰＳ−８０とともに、３０ｍｇ／ｍｌで存在する本明細書における抗体（配列番号２の重鎖および配列番号１の軽鎖を含む）の選択製剤を調製し、製剤特性、例えば外観、ｐＨ、タンパク質濃度、オスモル濃度、熱安定性、サイズ純度、電荷不均一性を経時的に測定し、比較した。
【００５３】
表１に詳述される選択製剤を調製した。
【００５４】
【表１】
2021531346.tif 000005
【００５５】
製剤を、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、オスモル濃度、熱安定性、サイズ純度、および電荷不均一性に基づいて経時的にモニターした。検査したすべての製剤は、調査の継続期間の間、ｐＨ、タンパク質濃度、またはオスモル濃度の有意な変化を呈しなかった。対照的に、製剤の部分集合は、外観、熱安定性、サイズ純度、および電荷不均一性による差を呈した。具体的には、トレハロースを有しないすべての製剤が、加速条件（５０℃）での１４日後に、不透明性がほとんどない高度に分散したシステムに見られる外観である乳白光を示した。他のすべての製剤は、２〜８℃での４週間後および加速条件（５０℃）での１４日後に、無色、透明、かつ目に見える粒子がないままであった。これらの結果は、トレハロース構成要素が、Ｍ２８１を含む液体製剤に安定性を付与することを示している。種々の製剤の熱安定性を、示差走査熱量測定によって判定した（図１）。結果は、より低い塩化ナトリウム濃度を含有するまたはトレハロースを含有する製剤に、安定性の増加が付与されることを示している。種々の製剤のサイズ純度を、サイズ排除クロマトグラフィーによって判定した（図２）。結果は、ｐＨ６．５で低い塩化ナトリウム濃度およびトレハロースを含有する製剤が、最も高いサイズ純度安定性を経時的に呈することを示している。種々の製剤の電荷不均一性を、加速条件（５０℃）でのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によって判定した（図３）。種々の安定剤、例えば塩化ナトリウム、トレハロース、ＰＳ８０の濃度を変えることは、経時的な製剤の電荷不均一性に有意に影響を及ぼさなかった。対照的に、製剤のｐＨは有意な影響を有し、具体的には、ｐＨ６．５の製剤は、ｐＨ７またはｐＨ７．５の製剤と比較して、１および２週間後に電荷不均一性のより良好な維持を呈した。種々の製剤の純度を、非還元加速条件（図４）でおよび還元加速条件（５０℃）（図５）でＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒによって測定した。結果は、トレハロースを含有しかつｐＨ７またはｐＨ７．５と比較してｐＨ６．５で緩衝された製剤に、経時的な安定性の増加が付与されることを示している。
【００５６】
全体として、トレハロースを有する製剤は、トレハロースを有しないものよりも安定であった。２５ｍＭ  ＮａＣｌを有する製剤は、１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するものよりも安定であった。結論として、この製剤スクリーニングの結果は、検査した製剤の中で、２５ｍＭ  ＮａＣｌおよび９０．５ｍｇ／ｍＬトレハロースを有する製剤が最も高い安定性を呈し、安定性は１および２週間にわたって十分に維持されることを示した。
【００５７】
製剤ｐＨが製剤安定性にどのように影響を及ぼすかを判定するために、２５ｍＭクエン酸および二塩基性リン酸バッファー中の抗体（１０ｍｇ／ｍｌ）の選択製剤を種々のｐＨで調製し、製剤特性（例えば、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、オスモル濃度、熱安定性、サイズ純度、および電荷不均一性等）を測定し、比較した。表２に詳述される選択製剤を調製した。
【００５８】
【表２】
2021531346.tif 000006
【００５９】
製剤を、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、オスモル濃度、熱安定性、サイズ純度、および電荷不均一性に基づいて経時的にモニターした。すべての製剤は、調査の継続期間の間、外観、ｐＨ、タンパク質濃度、またはオスモル濃度の有意な変化を呈しなかった。対照的に、製剤の部分集合は、サイズ純度、電荷不均一性、および熱安定性による差を呈した。種々の製剤のサイズ純度を、サイズ排除クロマトグラフィーによって判定した（図６）。ｐＨ５、ｐＨ７、ｐＨ７．５、およびｐＨ８の製剤は、ｐＨ６または６．５の製剤と比較して、標的サイズの分子（メインまたは標的ピークと称される）の量の減少を呈した。これらの結果は、ｐＨ６および６．５の製剤がより高いサイズ純度を呈することを示している。種々の製剤の電荷不均一性を、加速条件（５０℃）でのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によって判定した（図７）。ｐＨ５．５、６．０、および６．５の製剤は、検査したより高いｐＨで緩衝された製剤と比較して、電荷不均一性のより良好な維持を呈した。種々の製剤のサイズ分布を、動的光散乱によって判定した（図８）。ｐＨ５．５〜７．５の製剤は、サイズ分布の有意な変化を示さなかった。対照的に、ｐＨ５およびｐＨ８の製剤はサイズ分布の変化を示し、ｐＨ５または８の製剤が安定ではなく、経時的に分解産物を形成し得ることを示した。種々の製剤の純度を、非還元加速条件（５０℃）（図９）でおよび還元加速条件（５０℃）（図１０）でＣＥ−ＳＤＳ  Ｃａｌｉｐｅｒによって測定した。結果は、ｐＨ５、５．５、６、または６．５で緩衝された製剤に安定性の増加が付与され、この安定性は、還元（β−メルカプトエタノールの存在下）または非還元（Ｎ−エチルマレイミドの存在下）加速条件の存在下で保たれることを示している。種々の製剤の熱安定性を、示差走査熱量測定によって判定した（図１１）。ｐＨ５．５、ｐＨ６、およびｐＨ６．５で緩衝された製剤は、ｐＨ７、ｐＨ７．５、またはｐＨ８で緩衝されたものと比較して、より高い熱安定性を呈した。製剤２２が、最も高いＴｍ開始およびＴｍ１値を有したことを考慮すると、ｐＨ６．５で緩衝された製剤に最も高い熱安定性が付与された。
【００６０】
結論として、この液体製剤開発調査の結果は、２５ｍＭ  ＮａＣｌおよび９０．５ｍｇ／ｍＬトレハロースを用いて調製されかつｐＨ６．５で緩衝された抗体の液体製剤に製剤安定性が付与されたことを示している。
【００６１】
[実施例２]
機械的、化学的、および熱的ストレスに曝露された場合の選択製剤の安定性を判定するための安定性分析調査
ストレスの存在下での選択製剤の安定性を調べおよび比較するために、選択製剤を調製し、機械的撹拌、可視光、ＵＶ光、高温、複数回の凍結融解、および酸化剤を含めた種々のストレスに曝露した。
【００６２】
結果
表３に詳述される選択製剤を調製した。
【００６３】
【表３】
2021531346.tif 000007
【００６４】
撹拌ストレス
製剤を、２５℃で５または１０日間、２５０ｒｐｍにおける機械的撹拌に曝露した。製剤は、外観、タンパク質濃度、ｐＩ、サイズ純度、または電荷純度の有意な変化を呈しなかった。顕著には、製剤は、互いにおよび経時的に比較して、同程度の割合の、ｃＩＥＦアッセイにおけるメインピーク、酸性ピーク、および塩基性ピーク、非還元および還元Ｃａｌｉｐｅｒアッセイによって測定されるサイズ純度、ならびにＤＬＳアッセイの平均粒子サイズおよびＰｄＩを呈した（表４）。ＳＥＣアッセイにおいて、撹拌は、凝集体の総含有量および増加した含有量に対して、メインピークパーセンテージのわずかな減退につながった。
【００６５】
【表４】
2021531346.tif 000008
【００６６】
熱ストレス
製剤を、４０℃で５または１０日間、熱ストレスに曝露した。製剤は、外観、タンパク質濃度、ｐＩ、ＳＥＣもしくはＤＬＳによって査定されるサイズ純度、または電荷純度の有意な変化を呈しなかった（表５）。製剤は、ｃＩＥＦアッセイのメインピークの減退、および酸性特異的ピークのパーセンテージの増加を呈したが、検査したすべての製剤（表３）は、同程度の大きさの変化を呈した。
【００６７】
【表５】
2021531346.tif 000009
【００６８】
可視光ストレス
製剤を、２５℃で５または１０日間、５０００ルクスの可視光ストレスに曝露した。製剤は、有意に異なる外観、タンパク質濃度、ｐＨ、ｐＩ、非還元Ｃａｌｉｐｅｒ純度、ＤＬＳアッセイによる平均粒子サイズまたはＰｄＩを呈しなかった（表６）。ＳＥＣ、ｃＩＥＦ、および還元Ｃａｌｉｐｅｒによるタンパク質純度のわずかな減少が観察された。
【００６９】
【表６】
2021531346.tif 000010
【００７０】
ＵＶ光ストレス
製剤を、２５℃で１０時間、２００ｗ／ｍ２のＵＶ光ストレスに曝露した。製剤は、有意に異なる外観、タンパク質濃度、ｐＨ、ｐＩ、非還元Ｃａｌｉｐｅｒ純度、およびＤＬＳアッセイによる平均粒子サイズまたはＰｄＩを呈しなかった（表７）。ＳＥＣ、ｃＩＥＦ、および還元Ｃａｌｉｐｅｒによるタンパク質純度の減少が観察された。
【００７１】
【表７】
2021531346.tif 000011
【００７２】
酸化ストレス
製剤を、２〜８℃で６時間、１％Ｈ２Ｏ２への曝露を用いた酸化ストレスに曝露した。製剤は、有意に異なる外観、タンパク質濃度、ｐＨ、ｐＩ、ＳＥＣ純度、還元および非還元Ｃａｌｉｐｅｒ純度、またはＤＬＳアッセイによる平均粒子サイズおよびＰｄＩを呈しなかった（表８）。ｃＩＥＦに関して、わずかな減少が観察された。
【００７３】
【表８】
2021531346.tif 000012
【００７４】
凍結融解ストレス
製剤を、−８０℃から室温（ＲＴ）への凍結融解に最高で１０サイクル曝露した。製剤は、有意に異なる外観、タンパク質濃度、ＳＥＣ純度、ｐＩ、ｃＩＥＦアッセイのメインピーク、酸性ピーク、および塩基性ピークの割合、非還元および還元Ｃａｌｉｐｅｒアッセイの純度、またはＤＬＳアッセイの平均粒子サイズおよびＰｄＩを呈しなかった（表９）。
【００７５】
【表９−１】
2021531346.tif 000013
【００７６】
【表９−２】
2021531346.tif 000014
【００７７】
検査した選択製剤は、機械的、熱的、および化学的ストレスに曝露された場合に安定性を維持した。リン酸ナトリウムまたはコハク酸ナトリウムで緩衝された製剤は、検査したすべてのストレス条件において同程度の安定性を呈し、どちらかの緩衝システムが適当であろう。
【００７８】
[実施例３]
ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％トレハロース、０．０１％ＰＳ８０を含有する製剤が、１０ｍｇ／ｍｌおよび３０ｍｇ／ｍｌのＭ２８１注入液にとって適切な安定性を提供するかどうかを判定する
ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％トレハロース、０．０１％  ｗ／ｖ  ＰＳ８０を含有する製剤が、１０ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬの両方のＭ２８１注入液にとって適切な安定性を提供するかどうかを判定するために、製剤の特性を、熱およびせん断ストレスへの曝露後に分析アッセイによって査定した。
【００７９】
ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％トレハロース、０．０１％  ｗ／ｖ  ＰＳ８０、および１０ｍｇ／ｍｌまたは３０ｍｇ／ｍｌのいずれかのＭ２８１を含有する製剤を調製した。様々な分析アッセイを使用して、これらの調査の一部として産物品質を査定した。評価した特質のうち、ｃＩＥＦによって測定される電荷バリアント、およびＳＥＣによって測定される凝集レベルにおいて、調査の過程にわたる最も実質的な変化が観察された。それゆえ、ｃＩＥＦおよびＳＥＣを、安定性指標アッセイとして選択した。１０ｍｇ／ｍＬ（ロットＥ、ロットＦ、およびロットＢ）および３０ｍｇ／ｍＬ（ロットＤ）の薬物産物に関する、ｃＩＥＦによる電荷バリアント（図１２）およびＳＥＣによる可溶性凝集体（図１３）を、長期のおよび加速した安定性調査において比較した。１０ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬでのｃＩＥＦおよびＳＥＣによるＭ２８１薬物産物に関するメイン種分解の速度は、長期保管条件（２〜８℃）および加速保管条件（２５℃）の両方で同等である。
【００８０】
撹拌、酸化、熱、およびせん断ストレス等の強制的な分解調査からのデータが、表１０〜表１３に示されている。データは、ｃＩＥＦおよびＳＥＣアッセイによって測定されるように、１０ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬの両方の製剤で同程度の分解を示す。
【００８１】
【表１０】
2021531346.tif 000015
【００８２】
【表１１】
2021531346.tif 000016
【００８３】
【表１２】
2021531346.tif 000017
【００８４】
【表１３】
2021531346.tif 000018
【００８５】
強制的分解から観察された分解速度の結果および生み出された安定性データ（図１４〜２３）は、ｐＨ６．５で緩衝された、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％トレハロース、０．０１％ポリソルベート８０、および１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体のいずれかを含有する製剤に関して、同程度の分解速度を示している。データは、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％  ｗ／ｖトレハロース、０．０１％  ｗ／ｖポリソルベート８０、ｐＨ６．５の製剤が、１０ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬの両方において、それぞれ最高で３０カ月および１８カ月の安定性を提供することを示している。
【００８６】
静止したおよび撹拌したサンプルの両方における目に見えない粒子に対するより高いレベルのポリソルベート８０の影響を、ｐＨ６．５で緩衝された、抗体、２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭ塩化ナトリウム、８．７％トレハロース、０．０１％ＰＳ８０、および１０または３０ｍｇ／ｍｌの抗体のいずれかを含有する製剤において調べた。製剤サンプルにおける目に見えない粒子を、ＦｌｏｗＣＡＭ粒子イメージングシステムを使用してそれらのサイズおよび形態について分析した。簡潔には、製剤のアリコートを７５トールで３０分間脱気し、５００μＬの各サンプルを分析器に注入した。流体中の粒子のリアルタイム画像を、それらがフローセルを通過するときに取り込んだ。サンプル中の全粒子を数えた粒子総数が収集され、表１４に提示されている。非タンパク性の反復するおよび円形の粒子（例えば、考え得る気泡）に起因した寄与を除外するために、生データへのデジタルフィルターの適用により、製剤に関する差し引かれた粒子数が生み出され、表１５に提示されている。この分析において、５μｍ未満である粒子は、粒子イメージング分析における正確なフィルタリングまたは差し引きには小さすぎると思われる。
【００８７】
【表１４】
2021531346.tif 000019
【００８８】
【表１５】
2021531346.tif 000020
【図１】
2021531346.tif 000021
【図２】
2021531346.tif 000022
【図３】
2021531346.tif 000023
【図４】
2021531346.tif 000024
【図５】
2021531346.tif 000025
【図６】
2021531346.tif 000026
【図７】
2021531346.tif 000027
【図８】
2021531346.tif 000028
【図９】
2021531346.tif 000029
【図１０】
2021531346.tif 000030
【図１１】
2021531346.tif 000031
【図１２】
2021531346.tif 000032
【図１３】
2021531346.tif 000033
【図１４Ａ−１４Ｂ】
2021531346.tif 000034
【図１４Ｃ−１４Ｄ】
2021531346.tif 000035
【図１５Ａ−１５Ｂ】
2021531346.tif 000036
【図１５Ｃ−１５Ｄ】
2021531346.tif 000037
【図１６Ａ−１６Ｂ】
2021531346.tif 000038
【図１６Ｃ−１６Ｄ】
2021531346.tif 000039
【図１７Ａ−１７Ｂ】
2021531346.tif 000040
【図１７Ｃ−１７Ｄ】
2021531346.tif 000041
【図１８Ａ−１８Ｂ】
2021531346.tif 000042
【図１８Ｃ−１８Ｄ】
2021531346.tif 000043
【図１９Ａ−１９Ｂ】
2021531346.tif 000044
【図１９Ｃ−１９Ｄ】
2021531346.tif 000045
【図２０Ａ−２０Ｂ】
2021531346.tif 000046
【図２０Ｃ−２０Ｄ】
2021531346.tif 000047
【図２１Ａ−２１Ｂ】
2021531346.tif 000048
【図２１Ｃ−２１Ｄ】
2021531346.tif 000049
【図２２Ａ−２２Ｂ】
2021531346.tif 000050
【図２２Ｃ−２２Ｄ】
2021531346.tif 000051
【図２３Ａ−２３Ｂ】
2021531346.tif 000052
【図２３Ｃ−２３Ｄ】
2021531346.tif 000053
【配列表】
2021531346000001.app
【国際調査報告】
2021531346.tif 000054
2021531346.tif 000055
2021531346.tif 000056