(57)【要約】  本出願では、バイオリアクターが提供される。上記バイオリアクターは：流体を受け入れるための内部区画を少なくとも部分的に画定する壁を有する容器；少なくとも１つのポート；及び上記少なくとも１つのポートと着脱可能に係合するよう構成された少なくとも１つのキャップであって、上記少なくとも１つのキャップは濾材を備える、少なくとも１つのキャップを含む。また、本出願では細胞培養方法も提供され、上記細胞培養方法は：バイオリアクターの容器に細胞及び細胞増殖培地を添加するステップ；並びにマイクロキャリアを上記容器に添加して、上記マイクロキャリア上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップを含む。上記細胞培養方法は更に：上記コンフルエントな細胞を洗浄するステップ；上記コンフルエントな細胞を回収して、上記細胞を含有する溶液を形成するステップ；及び上記バイオリアクターの少なくとも１つのポートと着脱可能に係合したキャップの中の濾材を通して上記溶液を流し出すことにより、上記容器から上記細胞を含有する上記溶液を取り出すステップを含む。
2021503913.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイオリアクターであって：
流体を受け入れるための内部区画を少なくとも部分的に画定する壁を有する容器；
少なくとも１つのポート；及び
前記少なくとも１つのポートと着脱可能に係合するよう構成された少なくとも１つのキャップであって、前記少なくとも１つのキャップは濾材を備える、少なくとも１つのキャップ
を備える、バイオリアクター。
【請求項２】
前記容器の前記内部区画の中に配置された撹拌機を更に備える、請求項１に記載のバイオリアクター。
【請求項３】
前記少なくとも１つのポートは雄ネジを備え、前記少なくとも１つのキャップは雌ネジを備え、前記少なくとも１つのキャップの前記雌ネジは、前記少なくとも１つのポートの前記雄ネジと協働するよう構成される、請求項１又は２に記載のバイオリアクター。
【請求項４】
射出成形ポリマーを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のバイオリアクター。
【請求項５】
前記少なくとも１つのキャップは、前記少なくとも１つのキャップの上部に開口部を備え、前記開口部は前記濾材を前記容器の外部の環境に曝露する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のバイオリアクター。
【請求項６】
前記少なくとも１つのキャップは、前記濾材の上方に配置された上部支持板、及び前記濾材の下方に配置された下部支持板を備える、請求項１〜５のいずれか１項に記載のバイオリアクター。
【請求項７】
細胞培養方法であって：
バイオリアクターの容器に細胞及び細胞増殖培地を添加するステップ；
マイクロキャリアを前記容器に添加して、前記マイクロキャリア上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップ；
前記コンフルエントな細胞を洗浄するステップ；
前記コンフルエントな細胞を回収して、前記細胞を含有する溶液を形成するステップ；並びに
前記バイオリアクターの少なくとも１つのポートと着脱可能に係合したキャップの中の濾材を通して前記溶液を流し出すことにより、前記容器から前記細胞を含有する前記溶液を取り出すステップ
を含む、細胞培養方法。
【請求項８】
前記容器から前記細胞を含有する前記溶液を取り出す前記ステップは、前記マイクロキャリアを懸濁状態に維持するステップを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記コンフルエントな細胞を洗浄する前記ステップは、前記容器にリン酸緩衝液を含む洗浄溶液を添加するステップを含む、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記コンフルエントな細胞を回収する前記ステップは、剥離剤を含む回収溶液を添加するステップを含む、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１７年１１月２９日出願の米国仮特許出願番号６２／５９２，０１１の優先権の利益を主張する。上記特許出願の内容は依拠され、その全体が、以下に完全に記載されているかのように、参照により本出願に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本開示は概して細胞培養システムに関し、より詳細には、マイクロキャリアから細胞を分離するためのフィルターを備えたキャップ（ｆｉｌｔｅｒｅｄ  ｃａｐ）を含む細胞培養システムに関する。
【背景技術】
【０００３】
マイクロキャリア細胞培養は典型的には、バイオリアクターの中で行われる。培養の間に、細胞はマイクロキャリアの表面上で増殖する。細胞培養処理が完了すると、培養された細胞がマイクロキャリアから切り離され、次に、細胞を含有する培養液が、使用又は更なる処理のためにマイクロキャリアから分離される。
【０００４】
マイクロキャリアから細胞を切り離す従来の処理は、マイクロキャリアをバイオリアクターの中に沈殿させるステップを含む。マイクロキャリアを沈殿させるステップは、通常、バイオリアクター内での撹拌を停止するステップを含む。その後、バイオリアクター中の細胞培養培地を除去してよい。その後、少なくとも１回の洗浄ステップを行ってよい。ここでは、例えばダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ：ＤＰＢＳ）を含む洗浄溶液をバイオリアクターに添加し、その後、バイオリアクターの内容物を短時間撹拌する。短時間の撹拌の後、マイクロキャリアを再度沈殿させ、洗浄溶液をバイオリアクターから除去する。その後、トリプシン等の細胞剥離剤（ｃｅｌｌ  ｄｅｔａｃｈｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含有する回収溶液（ｈａｒｖｅｓｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）をバイオリアクターに添加し、撹拌を再開する。回収溶液を撹拌と組み合わせることで、相当数の細胞がマイクロキャリアから切り離される。
【０００５】
従来の分離プロセスの間にマイクロキャリアを沈殿させるステップは時間がかかる場合があり、例えば、従来の分離プロセスを完了する時間を略５０％延長させてしまう場合がある。加えて、細胞及びマイクロキャリアをバイオリアクターの中で沈殿させるステップにより、細胞及びマイクロキャリアが圧縮された凝集物がバイオリアクターの底に生じ得る。圧縮されることにより、細胞は、栄養素及び酸素の枯渇、高濃度の細胞老廃物、並びに極限ｐＨ（ｐＨ  ｅｘｔｒｅｍｅｓ）を特徴とする環境に曝露され得る。このような環境は、細胞増殖、細胞の健康、及び／又は細胞機能に対して直接的な負の影響を及ぼす可能性がある。
【０００６】
従来技術では、マイクロキャリアからの細胞の切り離しの後、マイクロキャリアは、切り離された細胞を含む培養液から分離される。この分離を実施するための１つの従来の技法としては、溶液を容器の中の固定されたメッシュスクリーンに通過させることが挙げられる。このスクリーンは、培養した流体は通過させるが、マイクロキャリアの通過を阻止する。しかしながら、マイクロキャリアがスクリーン上に蓄積するため、これらのマイクロキャリアがスクリーンに詰まり、流体がスクリーンを通過するのを阻害し始める。詰まったマイクロキャリアは、細胞を捕捉して、細胞がメッシュスクリーンを通過するのを阻害する可能性もある。一旦スクリーンが詰まると、スクリーンの詰まりが除去されるまでプロセスが停止する。これらのプロセスステップには費用及び時間がかかる可能性があり、また、マイクロキャリア細胞培養における細胞収率の低下の一因となると考えられる。更に、メッシュスクリーンが分離システムの構成要素であるため、培養液は、細胞培養プロセスが実施される容器からメッシュスクリーンを通して移動させられなければならない。この移動の結果として、このようなメッシュスクリーンは、細胞又は細胞培養液を汚染するリスクを高める場合がある。
【０００７】
切り離された細胞を含む培養液からマイクロキャリアを分離するためのいくつかの他の技法としては、例えば、分画勾配遠心分離（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）、音響共振、接線流濾過、スピンフィルター及び円錐形の板又は傾斜平板を使用する沈降が挙げられる。これらの技法の大半は、高価な資本設備を必要とするか、又は操作が複雑である。
【発明の概要】
【０００８】
本開示の実施形態によると、バイオリアクターが提供される。バイオリアクターは：流体を受け入れるための内部区画を少なくとも部分的に画定する壁を有する容器；少なくとも１つのポート；及び少なくとも１つのポートと着脱可能に係合するよう構成された少なくとも１つのキャップであって上記少なくとも１つのキャップは濾材を備える、少なくとも１つのキャップを備える。
【０００９】
本開示の実施形態によると、細胞培養方法が提供される。細胞培養方法は、バイオリアクターの容器に細胞及び細胞増殖培地を添加するステップ、並びにマイクロキャリアを容器に添加して、マイクロキャリア上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップを含む。細胞培養方法は更に、コンフルエントな細胞を洗浄するステップ、コンフルエントな細胞を回収して、細胞を含有する溶液を形成するステップ、及びバイオリアクターの少なくとも１つのポートと着脱可能に係合したキャップの中の濾材を通して溶液を流し出すことにより、容器から細胞を含有する溶液を取り出すステップを含む。
【００１０】
更なる特徴及び利点は以下の「発明を実施するための形態」に示され、一部はその説明から当業者に容易に明らかになるか、又は以下の詳細な説明、特許請求の範囲、及び添付の図面を含む本明細書に記載された実施形態を実践することにより認識されるであろう。
【００１１】
以上の「発明の概要」及び以下の「発明を実施するための形態」はいずれも単なる例示にすぎず、特許請求の範囲の性質及び特性を理解するための概要又は枠組みを提供することを意図したものであることを理解されたい。添付の図面は、更なる理解をもたらすために含められ、本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する。図面は１つ以上の実施形態を例示するものであり、本記載とあわせて様々な実施形態の原理及び操作を説明するために役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本開示は以下の説明により、そして単に非限定的な例として提供される添付の図面により更に明白に理解されるであろう。
【図１】本開示の実施形態による例示的なバイオリアクター
【図２Ａ】本開示の実施形態によるフィルターを有するキャップの部分断面斜視図
【図２Ｂ】本開示の実施形態によるフィルターを有するキャップの斜視図
【図３】本開示の実施形態によるフィルターを有するキャップの上面図
【図４】本開示の実施形態によるバイオリアクターの部分断面斜視図
【図５】本開示の実施形態によるバイオリアクターの分解立体図
【図６】本開示の実施形態による細胞培養方法
【発明の詳細な説明】
【００１３】
これより、添付の図面において例示されている本発明の１つ以上の実施形態、１つ以上の実施例について詳細に言及する。可能な限り、図面全体を通して、同一の参照番号を使用して、同一の部材又は同様の部材を指す。
【００１４】
単数形「ある（ａ、ａｎ）」、及び「その、上記（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかにそうではないことを示している場合を除き、複数の指示物を含む。同一の特性を列挙する全ての範囲の終点は独立して組み合わせ可能であり、列挙される終点は包括的である。全ての参考文献は、参照により本明細書に援用される。
【００１５】
本明細書中で使用される場合、「有する（ｈａｖｅ、ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ、ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、「備える、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等は、それらの非限定的な意味で使用され、概ね「含むが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味する。
【００１６】
本明細書中で使用される全ての学術用語及び技術用語は、特に指定がない限り、当該分野で一般的に使用されている意味を有する。本明細書中で提供される定義は、本明細書中で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするためのものであり、本開示の範囲を限定することを意味するものではない。
【００１７】
本発明の開示は以下に、最初は一般的に、その後、いくつかの例示的な実施形態に基づいて詳細に記載される。個々の例示的な実施形態において互いに組み合わせて示される特徴は、必ずしも全てが実現されない。特に、個々の特徴が省略される場合もあり、又は同一の例示的な実施形態の図示されている他の特徴、若しくは他の例示的な実施形態の他の特徴と、他の何らかの方法で組み合わせられる場合もある。
【００１８】
本開示の実施形態は、キャップの中にフィルターを有する密閉用キャップを含む、バイオリアクターに関する。本明細書に記載されているキャップは、バイオリアクターの中にマイクロキャリアを沈殿させる時間を必要とすることなく、マイクロキャリアから細胞を分離することを可能とし、これにより、マイクロキャリアから細胞を分離するプロセスを完了するために必要な時間が短縮され、このようなプロセスの実施に伴うコストも削減される。また、バイオリアクターの中にマイクロキャリアを沈殿させる時間を必要とすることなく、細胞をマイクロキャリアから分離することにより、バイオリアクターの中でマイクロキャリアが圧縮された状態を防ぎ、これにより、マイクロキャリアが圧縮されることに付随する、細胞増殖、細胞の健康、及び／又は細胞機能に対する負の影響が低減されるか、又は排除されさえする。
【００１９】
本開示の実施形態により、マイクロキャリアからの細胞の分離のプロセスを単一の容器の中で実施することも可能となる。単一の容器の中での分離プロセスの実施を容易にすることにより、本明細書に記載されているキャップはまた、最初のシステム又は容器からの細胞の取り出し及び後続のシステム又は容器への細胞の移動に付随する、汚染リスク及び細胞収率の低下を軽減する。汚染リスクの低下の例としては、汚染物（例えば、様々なシステム若しくは容器の材料由来の抽出可能な物質及び溶出性の物質、並びに／又は様々なシステム若しくは容器の材料を起源とし得る、若しくはあるシステム若しくは容器から別のシステム若しくは容器への細胞若しくは細胞生産物の移動の際の環境を起源とし得る微粒子等）への細胞の曝露の可能性が挙げられる。このような汚染物への曝露は、汚染の結果として最終的に廃棄が必要となり得る、費用がかかる下流の生成物の汚染につながり得る。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、用語「流体（ｆｌｕｉｄ）」は、流動できるいずれの物質、例えば限定するものではないが、液体、液状懸濁物、ガス、ガス状懸濁物等を指す。用語「流体及び／又は他の成分（ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」は、本開示全体を通して、細胞増殖のための栄養素を有する細胞培養培地、細胞、細胞培養プロセスの副生成物、及びバイオプロセスシステムにおいて従来から添加又は形成されることがあるいずれの他の生物学的材料又は成分を含み得る流体を指すために使用される。本明細書に記載されている容器は、１つ以上の細胞又は試薬を含んでよい。容器は、緩衝液も含んでよい。加えて、容器は細胞培養培地を含んでよい。細胞培養培地は、例えば糖類、塩類、アミノ酸、血清（例えばウシ胎児血清）、抗生物質、増殖因子、分化因子、着色剤、又は他の所望の要素であってよいが、これらに限定されない。容器の中に提供してよい一般的な培養培地としては、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ  ：ＤＭＥＭ）、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２栄養混合物（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ）、最小必須培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ：ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉｕｍ）等が挙げられる。不死化細胞、初代培養細胞、癌細胞、幹細胞（例えば、胚幹細胞又は誘導多能性幹細胞）等を含むがこれらに限定されないいずれのタイプの培養細胞を、容器に含めてよい。細胞は、哺乳動物細胞、鳥類細胞、魚類細胞等であってよい。細胞は、腎臓、線維芽細胞、乳房、皮膚、脳、卵巣、肺、骨、神経、筋肉、心臓、結腸直腸、すい臓、免疫（例えば、Ｂ細胞）、血液等を含むがこれらに限定されないいずれの組織型の細胞であってよい。容器中の細胞は、分散細胞（例えば新たに播種された細胞）、コンフルエントな細胞、二次元細胞、三次元細胞、スフェロイド等を含むいずれの培養された形態であってよい。いくつかの実施形態では、細胞は培地を伴わずに（例えば凍結乾燥させられた状態、保存された状態、凍った状態等で）存在する。
【００２１】
図１を参照すると、本開示の実施形態によるバイオリアクターが示されている。バイオリアクター１０は、上部１４及び下部１６を備えた容器本体１２を有する容器１１を含む。容器１１はまた、ネック付きアクセスポート（ｎｅｃｋｅｄ  ａｃｃｅｓｓ  ｐｏｒｔ）１８、及び容器１１の内部区画１３の中に配置された撹拌機２０を含む。図面には２つのアクセスポート１８が示されているが、本開示の実施形態による容器はいずれの数のアクセスポート１８を含んでよいことが理解されるであろう。各ネック付きアクセスポート１８は、密閉用キャップ４４ａ、４４ｂによって閉鎖できる。キャップ４４ａ、４４ｂは、容器１１のネック付きアクセスポート１８の雄ネジと協働するよう構成された雌ネジツイストキャップであってよい。加えて、キャップ４４ａ、４４ｂのうち少なくとも一方は、フィルター２１０を含んでよい。
【００２２】
上部１４は、容器１１の内部区画１３と連通する開口部を画定する環状側壁を含んでよい。環状側壁は、ツイストキャップの雌ネジと係合するよう構成された雄ネジを有してよく、又は環状側壁は、スナップキャップ（ｓｎａｐ  ｃａｐ）と協働するよう構成された、環状に突出するスナップキャップ係合特徴部分を有してよい。あるいは、上部１４は、下部１６と一体として形成してよく、又は図４及び５に示すように、上部１４及び下部１６の両方の外周を囲む相互接続リップの接合の結果である溶接線に沿って、下部１６に対して周方向に密閉されてよい。
【００２３】
本開示の実施形態によるバイオリアクターとしては、射出成形ポリマー、例えばポリスチレン、ポリカーボネート、高密度ポリプロピレン（ＨＤＰＥ）、超高分子量（ＵＨＭＷ）ポリエチレン、ポリプロピレン、ＥＶＡ、ＬＤＰＥ、及びＬＬＤＰＥ、又は当業者によって識別されるいずれの他のポリマーから形成された容器１０が挙げられる。任意に、容器１１はガラス、金属、又は別の剛性材料から形成されてもよい。
【００２４】
容器１１は、容器１１の内部区画１３の中に撹拌機２０を含んでよい。撹拌機２０は、容器１１の上部１４から延在するシャフトを含んでよく、このシャフトは、シャフトの長さに沿って少なくとも１つの羽根車を有し、また容器１１の内部区画１３の内部で上記少なくとも１つの羽根車を回転させるよう構成されたオーバヘッドモーターに接続される。あるいは、撹拌機２０は、容器１１の上部から延在するシャフトを含んでよく、このシャフトは、シャフトの末端にパドルを有する。シャフトはオーバヘッドモーターに連結され、オーバヘッドモーターは、容器１１の中央の垂直軸に対してゼロでない角度で略円形の経路全体にパドルを回転させるよう構成される。このようなパドル型撹拌機の一例が米国登録特許第９，１６８，４９７号明細書に示されている。別の例として、図４及び５に示すように、撹拌機２０は、容器１１の上部から延在するシャフトを含んでよく、このシャフトは、シャフトから延在しかつシャフトと連続している、４枚のパドルブレードを有する。シャフトには、各パドルブレードが互いに対して９０度で配置されている。この４パドルブレード型撹拌機は更に、４パドルブレード型撹拌機を磁気誘導により回転させる磁気撹拌棒を収納するよう構成された受けを含む。このような４パドルブレード型撹拌機の一例が米国登録特許第８，０５７，０９２号明細書に示されている。更に別の代替例として、撹拌機２０は、内部区画１３の下部に配置された回転可能な羽根車を含んでよい。回転可能な羽根車は、少なくとも部分的に磁性又は強磁性であり、外部原動デバイスに磁気結合されていてもよい。外部原動装置は、流体撹拌要素との電磁結合を形成するための回転駆動磁石構造、流体撹拌要素を回転させて浮揚させるための電磁気構造、又は流体要素を浮揚及び回転させるための超伝導要素を含む。このような回転可能な羽根車の一例が米国登録特許第７，４８１，５７２号明細書に示されている。
【００２５】
ここで図２Ａ、２Ｂ及び３を参照すると、フィルター２１０を有するキャップ４４ａが示されている。図２Ａはキャップ４４ａの部分断面図を示し、図３はキャップ４４ａの上面図を示す。フィルター２１０は、他の物質を容器１１の中に留めたまま、特定の物質を容器１１の外に流し出すことができる、多孔質材料を含む。一般に、フィルター２１０を通過できる程度に十分小さい物質は、細胞又は細胞生産物とみなされる物質であり得、これらは、下流での処理又は使用のために、容器１１の外側に配置された容器に回収できる。フィルター２１０の平均孔径は、細胞、細胞培養培地、及び細胞生産物（例えば組み換えタンパク質、抗体、ウイルス粒子、ＤＮＡ、ＲＮＡ、糖類、脂質、バイオディーゼル、無機物粒子、ブタノール、代謝による副生成物）がフィルター２１０を通過できるよう十分に大きいが、マイクロキャリアが膜を通過するのを防ぎ、マイクロキャリアを容器１１の内部区画１３の中に留めるのに十分小さい。一般に、キャップ４４ａは、約１マイクロメートル〜約１００マイクロメートルの平均孔径を有するフィルター２１０を含んでよい。
【００２６】
図２Ａに示すように、キャップ４４ａは、上部２１４及び下部２１６を含み、概ね円筒状の側壁２１８が上部２１４と下部２１６との間に延在する。概ね円筒状の側壁２１８は、キャップ４４ａに確実な把持面を設けるために様々な表面特徴部分が形成され得る外表面を有する。表面特徴部分は例えば、側壁２１８の外表面から突出する少なくとも１つの隆起であってよい。あるいは、表面特徴部分は、側壁２１８の外表面に沿って形成された一連の凹みの形態をとってよい。
【００２７】
図２Ａの部分的に切り取った箇所に示すように、側壁２１８の内表面は、フィルター２１０を固定する下部支持板２２２を更に含む。下部支持板２２２は、側壁２１８の内表面の周囲の一部又は全体にわたって、連続的に、又は不連続なセクションとして、延在してよい。下部支持板２２２は、フィルター２１０がキャップ４４ａの内部に滑り落ちることを防ぐ。キャップ４４ａの上部２１４において、フィルター２１０は上部支持板２２０により固定され、上部支持板２２０は下部支持板２２２と共にフィルター２１０のための支持構造を形成する。図２及び３は更に、キャップ４４ａの上部２１４に形成された開口部２１２を示し、開口部２１２によりフィルター２１０を外部環境に曝露できる。動作中、容器１１の内部区画１３の中の流体をフィルター２１０の内部側と接触させ、フィルター２１０を通過させ、キャップ４４ａの開口部２１２を通してフィルターの外に流し出すことができる。
【００２８】
ここで図２Ｂを参照すると、注ぎ口２４４を更に含む、図２Ａのようなフィルター２１０を有するキャップ４４ａが示されている。注ぎ口２４４は、キャップ４４ａの上部２１４に対して固定されてよく、又はキャップ４４ａと一体として形成されてよい。注ぎ口２４４は、キャップ４４ａからフィルター２１０を通して流し出されるいずれの流体及び／又は他の成分を導く漏斗様の形状を有する。
【００２９】
ここで図４〜５を参照すると、細胞培養のための容器１１が示されている。図１のバイオリアクター１０と同様に、容器１１は、上部１４及び下部１６を有する容器本体１２、ネック付きアクセスポート１８、並びに撹拌機２０を含む。上部１４及び下部１６は、上部１４及び下部１６の両方を囲む相互接続リップ２４、２６の接合の結果である溶接線２２に沿って、周方向に密閉される。容器１１は、略円筒形状を有し、上面５８、側壁５５、及び中心に隆起した瘤５４を有する底面５１を有する。
【００３０】
図５に示すように、容器本体１２は、容器本体１２の内壁に沿って、中心軸に平行な垂直方向に延在する、バッフル５０を含む。各バッフル５０は、おおよそ半円筒又は二等辺三角形の断面形状を有する。各バッフル５０は、底面５１から始まり、垂直方向上向きに延在して、楕円形の形状で終端する。バッフル５０は、容器１１の内部区画へと突出し、撹拌機２０との組み合わせによって容器１１の内部区画の中に乱流を生成し、また乱流を可能とする。図４及び５に示す容器１１は、内壁に沿って中心軸に関して対称に配置された３つのバッフル５０を含むが、バッフル５０の数及び密度は様々であってよい。
【００３１】
撹拌機２０は、容器１１の中心軸に沿って延在する可撓性シャフト２８を含む。可撓性シャフト２８は、シャフト２８の自由な回転を可能にする単一の設置点を、上部１４の上に有する。４枚のパドルブレード３０、３２がシャフト２８から、シャフト２８と連続して延在し、これらはそれぞれ、互いに対して約９０度で配置される。４枚のパドルブレード３０、３２のうち、２枚は大きなブレード３０であり、２枚は小さなブレード３２である。大きなブレード３０は互いに対して約１８０度で配置され、同様に、２枚の小さなブレード３２は互いに対して約１８０度で配置される。中心シャフトの周囲のブレードの配置は、小さなブレードと大きなブレードの配向が交互になるという効果を生成する。４枚より少ない又は４枚より多いブレードを用いるものを含む他のブレードの構成、形状、及び配置が可能であることを理解されたい。撹拌機２０は、大きなブレード３０が容器１１のほとんど全直径に達するような大きさであってよい。あるいは、大きなブレード３０のうちの少なくとも一方が、中心軸から側壁まで測定した場合に、容器１１の半径の約５０％〜約９５％、又は約７５％〜約９５％に達してよい。
【００３２】
２枚の大きなブレード３０は、磁気撹拌棒４０を受承するための磁石受け３８を含む。小さなブレード３２及びシャフト領域にある１つの孔が磁石受け３８を完成させる。円筒プラグ又は磁気撹拌棒４０が、２枚の大きなブレード３０の下端に沿って、小さなブレード３２に直交するように磁石受け３８に取り付けられる。あるいは、磁石自体を撹拌機２０の中に成形してよい。これを達成するために、磁石は鋳型に挿入され、撹拌機が磁石自体の周りにオーバーモールドされる。
【００３３】
アクセスポート１８は、容器１１の上部１４から外向きに延在する。アクセスポート１８は、撹拌機２０に制限されることなく容器１１に機器を挿入できるように、水平からある角度をなして容器本体１２から延在するよう構成されていてよい。アクセスポート１８の寸法、及びアクセスポート１８が容器本体１２から延在する角度は、容器１１内の様々な領域への機器の近づきやすさを最適化するよう選択してよい。
【００３４】
雌ネジ密閉用キャップ４４ａ、４４ｂは、アクセスポート１８の雄ネジと着脱可能に係合でき、また容器１１中へのピペット等の機器の挿入を可能にするために取り外すことができる。図２及び３に示すキャップ４４ａ等の、キャップ４４ａのうちの少なくとも１つは、フィルター２１０を含んでよい。キャップ４４ｂのうちの別のキャップは、容器内部にガスを送り込むことができるが、液体が容器から漏れること及び他の汚染物質が容器に入ることを防ぐ材料から作製された、疎水性膜インサート（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｓｅｒｔ）４６を含んでよい。このような膜材料の例としては、ポリテトラフルオロエチレン及びポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）が挙げられる。任意に、本明細書に記載されている膜を含むキャップ４４は更に、容器１１の内部と外部環境との間での気体連通を可能とする通気孔４８を含んでよい。
【００３５】
本開示の実施形態は更に、細胞培養方法に関する。図６は、本開示の実施形態による例示的な細胞培養方法を示す。このような細胞培養方法は、本明細書に記載され、図１〜５に例示されているバイオリアクターの中で実施してよい。図６は本明細書に記載されている方法の実施形態の例示にすぎず、図示した全てのステップを実施する必要はないこと、及び本明細書に記載されている方法の実施形態の複数のステップは、順序が指定されている場合を除いて、いずれの特定の順序で実施する必要はないことを理解されたい。
【００３６】
本明細書に記載されている細胞培養方法６００は、細胞及び細胞増殖培地をバイオリアクター１０の容器１１に添加するステップ６０２を含んでよい。本明細書に記載されている細胞培養方法６００は更に、マイクロキャリアを容器１１に添加して、マイクロキャリアの表面上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップ６０４を含んでよい。本明細書に記載されているマイクロキャリアは、いずれの材料から形成してよく、通常は、ガラス材料、可塑性材料、又はヒドロゲル材料から形成される。本明細書に記載されているマイクロキャリアは、約１００マイクロメートル〜約５００マイクロメートルの平均直径を有してよい。一般的に、マイクロキャリアは、約２００マイクロメートル〜約３００マイクロメートルの平均直径を有する。バイオリアクター１０の中での実質的なコンフルエンスを促すために十分なマイクロキャリアが添加される限り、いずれの数のマイクロキャリアを容器１１に添加してよい。本明細書中で使用される場合、用語「コンフルエント（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）」及び「コンフルエンス（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ）」は、細胞が細胞培養基材の表面（即ちマイクロキャリアの表面）上に粘着性の単細胞層を形成し、その結果事実上全ての利用可能な表面が使用されている状態を指すために使用される。例えば「コンフルエント」は、全ての細胞が、その全周にわたり他の細胞と接触し、被覆されていない利用可能な基材がない状況として定義される。本開示の目的のために、用語「実質的にコンフルエント（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）」は、隙間が残る場合があるものの、細胞がマイクロキャリアの表面と概ね接触し、その結果、約７０％超、又は約８０％超、又は更に約９０％超の利用可能な表面が使用される状態を指すために使用される。用語「利用可能な表面（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｓｕｒｆａｃｅ）」は、細胞を収容するために十分な表面領域を示すために使用される。従って、更なる細胞を収容できない、隣接する細胞間の小さな隙間は、「利用可能な表面」を構成しない。
【００３７】
細胞、培地、及びマイクロキャリアをバイオリアクター１０に添加した後、容器１１の中で細胞の増殖が起こり、細胞がマイクロキャリアの表面を占有するまで（即ち細胞がマイクロキャリア上で実質的にコンフルエントになるまで）、又は細胞が更なる増殖をサポートする培地の容量を上回るまで続く。培地の容量の超過は、細胞が培地中の栄養素を消費して、細胞増殖、細胞の健康、及び／又は細胞機能に直接的な負の影響を及ぼし得る老廃物を生成した結果である。細胞の増殖の期間中、その期間の少なくとも一部に、バイオリアクター１０の中の流体及び／又は他の成分を撹拌機２０で混合する又は撹拌するステップが含まれる。これにより、マイクロキャリアは、バイオリアクター１０の内部区画１３の中で懸濁される。
【００３８】
本開示の実施形態によると、本明細書に記載されている細胞培養方法６００は更に、キャップ４４ａのフィルター２１０を通して容器１１から培地を流し出すことにより、容器１１から使用済み培地を除去するステップ６０６を含んでよい。フィルター２１０は、細胞老廃物を含む細胞生産物と共に使用済み培地は通過させるが、マイクロキャリア及びコンフルエントな細胞は容器１１の中に留める。従来の方法とは異なり、フィルター２１０は、容器１１の底面５１にマイクロキャリアを沈殿させる時間を必要とすることなく、使用済み培地を除去できる。言い換えると、使用済み培地の除去を、マイクロキャリアを懸濁状態に維持したまま達成できる。疑義が生じるのを避けるために、句「マイクロキャリアを懸濁状態に維持する（ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）」は、マイクロキャリアがバイオリアクター１０の中で凝集物として沈殿していない状態を指すために使用される。撹拌機２０による撹拌又は混合は、マイクロキャリアを懸濁状態に維持するために用いてよいが、撹拌機２０による撹拌又は混合を停止してよく、撹拌又は混合が停止された後の一定の期間、マイクロキャリアは懸濁状態のままであることを理解されたい。従って、マイクロキャリアを懸濁状態に維持するために、撹拌機２０による撹拌又は混合は不要である。使用済み培地を容器１１から除去するステップ６０６に続いて、本明細書に記載されている細胞培養方法６００は更に、容器１１に新鮮な培地を添加するステップ６０８を含んでよい。新鮮な培地は、キャップ４４ａ、４４ｂをそれぞれネック付きアクセスポート１８から取り外し、アクセスポート１８の開口部を通して新鮮な培地を流し込むことにより添加してよい。容器１１に添加される新鮮な培地の体積は、フィルター２１０を通して取り出された使用済み培地の体積と略等しい体積であってよい。
【００３９】
使用済み培地を容器１１から除去するステップ６０６と、それに続く、新鮮な培地を容器１１に添加するステップ６０８とは、細胞がマイクロキャリアから分離されて回収されるまで、何度でも実施してよい。本明細書に記載されている細胞培養方法６００は、コンフルエントな細胞を洗浄するステップ６１０を含む場合がある。コンフルエントな細胞を洗浄するステップ６１０の前に、上記方法は、後続の新鮮な培地を容器１１に添加するステップ６０８を含むことなく、使用済み培地を容器１１から除去するステップ６０６を含む。コンフルエントな細胞を洗浄するステップ６１０は、例えば、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）等のリン酸緩衝液を含有する洗浄溶液を添加するステップを含んでよい。洗浄溶液は、キャップ４４ａ、４４ｂを各ネック付きアクセスポート１８から取り外し、アクセスポート１８の開口部を通して洗浄溶液を流し込むことにより添加してよい。容器１１の内部区画１３において、洗浄溶液と共に、バイオリアクター１０の中の流体及び／又は他の成分を、撹拌機１８で混合又は撹拌してよい。コンフルエントな細胞を洗浄するステップ６１０は、容器１１から洗浄溶液を除去するステップ、及びそれに続く洗浄溶液を添加するステップを更に含んでよい。容器１１から洗浄溶液を除去するステップは、キャップ４４ａのフィルター２１０を通して容器１１から洗浄溶液を注ぐステップを含む。フィルター２１０は、洗浄溶液は通過させるが、マイクロキャリア及びコンフルエントな細胞は容器１１の中に留める。従来の方法とは異なり、フィルター２１０は、容器１１の底面５１にマイクロキャリアを沈殿させる時間を必要とすることなく、洗浄溶液を除去できる。言い換えると、洗浄溶液の除去を、マイクロキャリアを懸濁状態に維持したまま達成できる。
【００４０】
容器１１から洗浄溶液を除去するステップと、容器１１に次の洗浄溶液を添加するステップとは、細胞がマイクロキャリアから分離されるまで、何度でも実施してよい。本明細書に記載されている細胞培養方法６００は更に、コンフルエントな細胞を回収して、細胞を含有する溶液を形成するステップ６１２を含んでよい。細胞を回収するステップ６１２の前に、コンフルエントな細胞を洗浄するステップ６１０は、後続の容器１１に洗浄溶液を添加するステップを行わずに、容器１１から洗浄溶液を除去するステップを含む。細胞を回収するステップ６１２は、細胞をマイクロキャリアから切り離すための、例えばトリプシン等の剥離剤を含んでよい回収溶液を添加するステップを含む。容器１１の内部区画１３において、回収溶液と共に、バイオリアクター１０の中の流体及び／又は他の成分を、撹拌機１８で混合又は撹拌してよい。
【００４１】
マイクロキャリアから細胞が外されると、細胞を含有する溶液がバイオリアクター１０の容器１１の中に形成される。任意に、細胞を回収するステップ６１２は更に、容器１１内に細胞を含有する溶液を形成するステップを含んでよい。例えば、細胞を含有する溶液を形成するステップは、濾過、捕捉、及びクロマトグラフィー操作を含む下流の処理ステップのために細胞を生存可能なままとするための環境（例えばｐＨ条件）を維持する、回収緩衝液等の緩衝液を添加するステップを含んでよい。別の例として、緩衝液は、製剤化用緩衝液、即ち、細胞を容器１１から取り出した後に治療用途に使用できるようにする組成物であってよい。細胞を含有する溶液を形成するステップはまた、凍結保護物質、即ち、凍結による損傷から細胞又は細胞生産物を保護するために使用される組成物を、容器１１に添加するステップを含んでよく、これにより、細胞を容器１１から取り出した後に凍結保存できる。
【００４２】
細胞を回収するステップ６１２に続いて、本明細書に記載されている細胞培養方法６００は更に、容器１１から細胞を含有する溶液を取り出すステップ６１４を含んでよい。細胞を含有する溶液を取り出すステップ６１４は、容器１１からキャップ４４ａのフィルター２１０を通して溶液を流し出すステップを含む。フィルター２１０は、細胞を含有する溶液は通過させるが、マイクロキャリアは容器１１の中に留める。使用済み培地の除去及び洗浄溶液の除去に関して上述したように、容器１１から細胞を含有する溶液を取り出すステップ６１４は、マイクロキャリアを懸濁状態に維持したまま達成できる。
【００４３】
本開示の態様（１）によると、バイオリアクターが提供される。上記バイオリアクターは：流体を受け入れるための内部区画を少なくとも部分的に画定する壁を有する容器；少なくとも１つのポート；及び上記少なくとも１つのポートと着脱可能に係合するよう構成された少なくとも１つのキャップであって、上記少なくとも１つのキャップは濾材を備える、少なくとも１つのキャップを備える。
【００４４】
本開示の態様（２）によると、上記容器の上記内部区画の中に配置された撹拌機を更に備える、態様（１）に記載のバイオリアクターが提供される。
【００４５】
本開示の別の態様（３）によると、上記少なくとも１つのポートは雄ネジを備え、上記少なくとも１つのキャップは雌ネジを備え、上記少なくとも１つのキャップの上記雌ネジは、上記少なくとも１つのポートの上記雄ネジと協働するよう構成される、態様（１）又は（２）に記載のバイオリアクターが提供される。
【００４６】
本開示の別の態様（４）によると、射出成形ポリマーを含む、態様（１）〜（３）のいずれか１つに記載のバイオリアクターが提供される。
【００４７】
本開示の別の態様（５）によると、上記濾材は、約１マイクロメートル〜約１００マイクロメートルの平均孔径を有する多孔質材料を含む、態様（１）〜（４）のいずれか１つに記載のバイオリアクターが提供される。
【００４８】
本開示の別の態様（６）によると、上記少なくとも１つのキャップは、上記少なくとも１つのキャップの上部に開口部を備え、上記開口部は上記濾材を上記容器の外部の環境に曝露する、態様（１）〜（５）のいずれか１つに記載のバイオリアクターが提供される。
【００４９】
本開示の別の態様（７）によると、上記少なくとも１つのキャップは、上記濾材の上方に配置された上部支持板、及び上記濾材の下方に配置された下部支持板を備える、態様（１）〜（６）のいずれか１つに記載のバイオリアクターが提供される。
【００５０】
本開示の別の態様（８）によると、少なくとも第１のポート及び第２のポートを備える、態様（１）〜（７）のいずれか１つに記載のバイオリアクターが提供される。
【００５１】
本開示の別の態様（９）によると、少なくとも第１のキャップ及び第２のキャップを更に備え、上記第１のキャップは上記第１のポートと着脱可能に係合するよう構成され、上記第２のキャップは上記第２のポートと着脱可能に係合するよう構成される、態様（８）に記載のバイオリアクターが提供される。
【００５２】
本開示の別の態様（１０）によると、上記第１のキャップは濾材を備え、上記第２のキャップは濾材を備えない、態様（９）に記載のバイオリアクターが提供される。
【００５３】
本開示の別の態様（１１）によると、上記第２のキャップは通気孔を備える、態様（８）又は（９）に記載のバイオリアクターが提供される。
【００５４】
本開示の態様（１２）によると、細胞培養方法が提供される。上記細胞培養方法は：バイオリアクターの容器に細胞及び細胞増殖培地を添加するステップ；マイクロキャリアを上記容器に添加して、上記マイクロキャリア上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップ；上記コンフルエントな細胞を洗浄するステップ；上記コンフルエントな細胞を回収して、上記細胞を含有する溶液を形成するステップ；並びに上記バイオリアクターの少なくとも１つのポートと着脱可能に係合したキャップの中の濾材を通して上記溶液を流し出すことにより、上記容器から上記細胞を含有する上記溶液を取り出すステップを含む。
【００５５】
本開示の別の態様（１３）によると、上記容器から上記細胞を含有する上記溶液を取り出す上記ステップは、上記マイクロキャリアを懸濁状態に維持するステップを含む、態様（１２）に記載の細胞培養方法が提供される。
【００５６】
本開示の別の態様（１４）によると、上記キャップの上記濾材を通して上記容器から培地を流し出すことにより、上記容器から使用済み培地を除去するステップを更に含む、態様（１２）又は（１３）に記載の細胞培養方法が提供される。
【００５７】
本開示の別の態様（１５）によると、上記容器に新鮮な培地を添加するステップを更に含む、態様（１４）に記載の細胞培養方法が提供される。
【００５８】
本開示の別の態様（１６）によると、上記コンフルエントな細胞を洗浄する上記ステップは、上記容器にリン酸緩衝液を含む洗浄溶液を添加するステップを含む、態様（１２）〜（１５）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００５９】
本開示の別の態様（１７）によると、上記コンフルエントな細胞を洗浄する上記ステップは、上記容器の内容物を撹拌するステップを含む、態様（１２）〜（１６）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６０】
本開示の別の態様（１８）によると、上記コンフルエントな細胞を回収する上記ステップは、剥離剤を含む回収溶液を添加するステップを含む、態様（１２）〜（１７）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６１】
本開示の別の態様（１９）によると、上記剥離剤はトリプシンを含む、態様（１８）に記載の細胞培養方法が提供される。
【００６２】
本開示の別の態様（２０）によると、上記コンフルエントな細胞を回収する上記ステップは、上記容器の内容物を撹拌するステップを含む、態様（１２）〜（１９）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６３】
本開示の別の態様（２１）によると、上記マイクロキャリアは、ガラス、プラスチック、及びヒドロゲルからなる群から選択される材料を含む、態様（１２）〜（２０）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６４】
本開示の別の態様（２２）によると、上記マイクロキャリアは、約１００マイクロメートル〜約５００マイクロメートルの平均直径を有する、態様（１２）〜（２１）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６５】
本開示の別の態様（２３）によると、上記濾材は、約１マイクロメートル〜約１００マイクロメートルの平均孔径を有する多孔質材料を含む、態様（１２）〜（２２）のいずれか１つに記載の細胞培養方法が提供される。
【００６６】
本開示は限られた数の実施形態を含むが、本開示の利益を有する当業者は、本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を考案できることを理解するであろう。
【００６７】
以下、本発明の好ましい実施形態を項分け記載する。
【００６８】
実施形態１
バイオリアクターであって：
流体を受け入れるための内部区画を少なくとも部分的に画定する壁を有する容器；
少なくとも１つのポート；及び
上記少なくとも１つのポートと着脱可能に係合するよう構成された少なくとも１つのキャップであって、上記少なくとも１つのキャップは濾材を備える、少なくとも１つのキャップ
を備える、バイオリアクター。
【００６９】
実施形態２
上記容器の上記内部区画の中に配置された撹拌機を更に備える、実施形態１に記載のバイオリアクター。
【００７０】
実施形態３
上記少なくとも１つのポートは雄ネジを備え、上記少なくとも１つのキャップは雌ネジを備え、上記少なくとも１つのキャップの上記雌ネジは、上記少なくとも１つのポートの上記雄ネジと協働するよう構成される、実施形態１又は２に記載のバイオリアクター。
【００７１】
実施形態４
射出成形ポリマーを含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載のバイオリアクター。
【００７２】
実施形態５
上記濾材は、約１マイクロメートル〜約１００マイクロメートルの平均孔径を有する多孔質材料を含む、実施形態１〜４のいずれか１つに記載のバイオリアクター。
【００７３】
実施形態６
上記少なくとも１つのキャップは、上記少なくとも１つのキャップの上部に開口部を備え、上記開口部は上記濾材を上記容器の外部の環境に曝露する、実施形態１〜５のいずれか１つに記載のバイオリアクター。
【００７４】
実施形態７
上記少なくとも１つのキャップは、上記濾材の上方に配置された上部支持板、及び上記濾材の下方に配置された下部支持板を備える、実施形態１〜６のいずれか１つに記載のバイオリアクター。
【００７５】
実施形態８
少なくとも第１のポート及び第２のポートを備える、実施形態１〜７のいずれか１つに記載のバイオリアクター。
【００７６】
実施形態９
少なくとも第１のキャップ及び第２のキャップを更に備え、上記第１のキャップは上記第１のポートと着脱可能に係合するよう構成され、上記第２のキャップは上記第２のポートと着脱可能に係合するよう構成される、実施形態８に記載のバイオリアクター。
【００７７】
実施形態１０
上記第１のキャップは濾材を備え、上記第２のキャップは濾材を備えない、実施形態９に記載のバイオリアクター。
【００７８】
実施形態１１
上記第２のキャップは通気孔を備える、実施形態８又は９に記載のバイオリアクター。
【００７９】
実施形態１２
細胞培養方法であって：
バイオリアクターの容器に細胞及び細胞増殖培地を添加するステップ；
マイクロキャリアを上記容器に添加して、上記マイクロキャリア上に実質的にコンフルエントな細胞を形成するステップ；
上記コンフルエントな細胞を洗浄するステップ；
上記コンフルエントな細胞を回収して、上記細胞を含有する溶液を形成するステップ；並びに
上記バイオリアクターの少なくとも１つのポートと着脱可能に係合したキャップの中の濾材を通して上記溶液を流し出すことにより、上記容器から上記細胞を含有する上記溶液を取り出すステップ
を含む、細胞培養方法。
【００８０】
実施形態１３
上記容器から上記細胞を含有する上記溶液を取り出す上記ステップは、上記マイクロキャリアを懸濁状態に維持するステップを含む、実施形態１２に記載の方法。
【００８１】
実施形態１４
上記キャップの上記濾材を通して上記容器から培地を流し出すことにより、上記容器から使用済み培地を除去するステップを更に含む、実施形態１２又は１３に記載の方法。
【００８２】
実施形態１５
上記容器に新鮮な培地を添加するステップを更に含む、実施形態１４に記載の方法。
【００８３】
実施形態１６
上記コンフルエントな細胞を洗浄する上記ステップは、上記容器にリン酸緩衝液を含む洗浄溶液を添加するステップを含む、実施形態１２〜１５のいずれか１つに記載の方法。
【００８４】
実施形態１７
上記コンフルエントな細胞を洗浄する上記ステップは、上記容器の内容物を撹拌するステップを含む、実施形態１２〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【００８５】
実施形態１８
上記コンフルエントな細胞を回収する上記ステップは、剥離剤を含む回収溶液を添加するステップを含む、実施形態１２〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【００８６】
実施形態１９
上記剥離剤はトリプシンを含む、実施形態１８に記載の方法。
【００８７】
実施形態２０
上記コンフルエントな細胞を回収する上記ステップは、上記容器の内容物を撹拌するステップを含む、実施形態１２〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【００８８】
実施形態２１
上記マイクロキャリアは、ガラス、プラスチック、及びヒドロゲルからなる群から選択される材料を含む、実施形態１２〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【００８９】
実施形態２２
上記マイクロキャリアは、約１００マイクロメートル〜約５００マイクロメートルの平均直径を有する、実施形態１２〜２１のいずれか１つに記載の方法。
【００９０】
実施形態２３
上記濾材は、約１マイクロメートル〜約１００マイクロメートルの平均孔径を有する多孔質材料を含む、実施形態１２〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【符号の説明】
【００９１】
１０  バイオリアクター
１１  容器
１２  容器本体
１３  内部区画
１４、２１４  上部
１６、２１６  下部
１８  ネック付きアクセスポート
２０  撹拌機
２２  溶接線
２４、２６  相互接続リップ
２８  可撓性シャフト
３０  パドルブレード、大きなブレード
３２  パドルブレード、小さなブレード
３８  磁石受け
４０  磁気撹拌棒
４４  キャップ
４４ａ、４４ｂ  密閉用キャップ
４６  疎水性膜インサート
４８  通気孔
５０  バッフル
５１  底面
５４  瘤
５５  側壁
５８  上面
２１０  フィルター
２１２  開口部
２１８  側壁
２２０  上部支持板
２２２  下部支持板
２４４  注ぎ口
【図１】
2021503913.tif 000003
【図２Ａ】
2021503913.tif 000004
【図２Ｂ】
2021503913.tif 000005
【図３】
2021503913.tif 000006
【図４】
2021503913.tif 000007
【図５】
2021503913.tif 000008
【図６】
2021503913.tif 000009
【国際調査報告】
2021503913.tif 000010
2021503913.tif 000011
2021503913.tif 000012