(57)【要約】本発明は、ＤＮＡ−ＰＫの阻害剤として有用な化合物に関する。本発明はまた、前記化合物を含む薬学的に許容される組成物、および様々な疾患、状態または障害の処置において組成物を使用する方法を提供する。本発明により提供される化合物および組成物はまた、生物学的および病理学的現象におけるＤＮＡ−ＰＫの研究；このようなキナーゼにより媒介される細胞内シグナル形質導入経路の研究；および新規キナーゼ阻害剤の比較による評価に対しても有用である。
2021511314.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式によって表される化合物
【化２７０】
2021511314.tif 000297
または薬学的に許容されるその塩［式中、
環Ａは、
【化２７１】
2021511314.tif 000298
から選択される芳香族環系であり、
環Ｂは、
【化２７２】
2021511314.tif 000299
から選択される環系であり、環Ｂは、−Ｆ、−ＯＨ、ならびに−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて置換されており、
環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキル、５〜６員のヘテロアリール、またはフェニル基であり、環Ｃは、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じてさらに置換されており、
Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＯＣ１〜４アルキル−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−であり、
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ１およびＲ２は、同時に水素であってはならず、
各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜１０員のヘテロシクリルであり、前記Ｒ４基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、ＣＨ２ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｎ（Ｒ５）２、５〜６員のヘテロシクリル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）ＯＲ５、−ＯＲ５およびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−ＯＣ１〜４アルキル、−ＳＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、
各Ｒ５は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、５〜６員のヘテロアリールもしくは４〜７員のヘテロシクリルであり、各Ｒ５は、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣ１〜２アルキル、５〜６員のヘテロアリール、および４〜７員のヘテロシクリルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、または２個のＲ５基は、介在する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成し、
Ｒ６は、水素であるか、または−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ７は、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、そのそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、および−ＯＲからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、
ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素もしくはＣ１〜４アルキルであり、またはＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成する］。
【請求項２】
Ｒ４の前記アリール基が、必要に応じて置換されており、フェニルまたはナフタレンから選択され、Ｒ４の前記ヘテロアリール基が、必要に応じて置換されており、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、またはベンゾオキサゾールから選択され、Ｒ４の前記ヘテロシクリル基が、必要に応じて置換されており、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ４の置換基の前記複素環式基が、必要に応じて置換されており、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、フラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、オキサジアゾールまたはテトラゾールから選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５の前記ヘテロアリール基が、必要に応じて置換されており、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、ピリジン、またはピリミジンから選択され、Ｒ５の前記ヘテロシクリル基が、必要に応じて置換されており、オキセタン、テトラヒドロフラン、またはテトラヒドロピランから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
環Ｃが、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、−Ｏ−または−ＮＨ−である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
【化２７３】
2021511314.tif 000300
が、必要に応じて置換されており、
【化２７４】
2021511314.tif 000301
から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
各Ｒ３が、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれが、独立して、必要に応じて置換されている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
各Ｒ４が、独立して、水素であるか、またはＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜５シクロアルキルもしくはフェニルから選択される、必要に応じて置換されている基である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
各Ｒ４が、独立して、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、必要に応じて置換されている基である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
各Ｒ４が、独立して、イミダゾール、ピラゾール、ピリミジン、フロピリミジン、オキセタンまたはジヒドロフロピリミジンから選択される、必要に応じて置換されている基である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
各Ｒ４が、独立して、水素であるか、あるいはＣ１〜４アルキル、
【化２７５】
2021511314.tif 000302
またはＣ３〜５シクロアルキル、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾールもしくはフェニルから選択される環基から選択される、必要に応じて置換されている基であり、
Ｘ１が、ＮまたはＣＲ４ｄであり、
Ｘ２が、ＮまたはＣＲ４ｃであり、Ｘ１およびＸ２は、同時にＮであってはならず、
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、およびＲ４ｃのそれぞれが、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジンもしくはピペラジンから選択される複素環式基、またはフラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾールもしくはテトラゾールから選択されるヘテロアリール基であり、あるいはＲ４ｃおよびＲ４ａ、またはＲ４ｃおよびＲ４ｂが、介在する原子と一緒になって、必要に応じてジヒドロフラン、ジヒドロピラン、またはテトラヒドロピペリジン複素環式環基を形成し、
Ｒ４ｄが、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、
前記Ｒ４の環基のそれぞれが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジンまたはピペラジンから選択される複素環式基、およびフラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾールまたはテトラゾールから選択されるヘテロアリール基からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて独立して置換されており、
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の前記置換基の前記複素環式およびヘテロアリール基のそれぞれが、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の前記置換基の前記アルキルおよびシクロアルキル基のそれぞれが、−Ｆおよび−ＯＨからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
各Ｒ４が、独立して、Ｃ１〜４アルキルであるか、またはＣ３〜５シクロアルキル、ピラゾール、イミダゾール、オキセタン、
【化２７６】
2021511314.tif 000303
から選択される環基であり、
前記Ｒ４のＣ１〜４アルキルが、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、および−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記Ｒ４の環基のそれぞれが、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＣＮ、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれが、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ｒ４のＣ１〜４アルキルが、−Ｆおよび−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記Ｒ４の環基のそれぞれが、Ｃ１〜４アルキル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれが、１つまたは複数のＣ１〜４アルキルで必要に応じて置換されている、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１およびＲ２のそれぞれが、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ７が、必要に応じて置換されており、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ７が、必要に応じて置換されており、ピリミジン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、オキセタン、ジヒドロフロピリミジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ７が、必要に応じて置換されており、ピリミジン、ピラゾール、フロピリミジン、チアゾール、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｘが、−Ｏ−である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
環Ｃが、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
環Ｃが、必要に応じて置換されているシクロヘキサンである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
以下の式によって表される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物
【化２７７】
2021511314.tif 000304
または薬学的に許容されるその塩［式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、
Ｒ２は、水素である］。
【請求項２３】
以下の式によって表される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物
【化２７８】
2021511314.tif 000305
または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２４】
各Ｒ１が、独立して、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ１が、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ１が、−ＮＨＲ４である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１が、−ＯＲ４である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
以下の式によって表される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物
【化２７９】
2021511314.tif 000306
または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２９】
各Ｒ１が、独立して、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ１が、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４または−ＯＲ４である、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１が、−ＮＨＲ４である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１が、−ＯＲ４である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３３】
各Ｒ３が、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ６が、水素またはメチルである、
請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
環Ｃが、必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
【化２８０】
2021511314.tif 000307
が、必要に応じて置換されている（ｓｕｂｓｔｉｔｅｄ）
【化２８１】
2021511314.tif 000308
である、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
環Ｃが、必要に応じて置換されているフェニルである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｘが、−ＯＣ１〜４アルキル−である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
以下の式によって表される、請求項３７に記載の化合物
【化２８２】
2021511314.tif 000309
または薬学的に許容されるその塩［式中、
Ｒ１は、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である］。
【請求項３９】
【化２８３】
2021511314.tif 000310
が、必要に応じて置換されている
【化２８４】
2021511314.tif 000311
である、請求項３６〜３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
以下の式によって表される、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の化合物
【化２８５】
2021511314.tif 000312
または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４１】
Ｒ３が、水素、メチル、シクロプロピル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＮＲＲ’、または−ＣＮであり、前記Ｒ３のアルキルのそれぞれが、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
各Ｒ４が、独立して、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている、必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、
ＲおよびＲ’が、それぞれ独立して、水素またはＣ１〜２アルキルである、
請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
各Ｒ３が、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ６が、水素またはメチルである、
請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
表１および２の化合物の一覧から選択される化合物、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項４５】
細胞を、ＤＮＡ傷害を誘発する治療剤または疾患状態に対して感受性化させる方法であって、前記細胞を、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物、または前記化合物を含む医薬組成物と接触させるステップを含む、方法。
【請求項４６】
患者のがんを処置するための治療レジメンを増強する方法であって、前記患者に、有効量の請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物、または前記化合物を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４７】
患者におけるがんを処置する、またはがん細胞成長を阻害する方法であって、前記患者に、有効量の請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物、または前記化合物を含む医薬組成物を単独で、または１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項４８】
式（Ｉ）によって表される化合物
【化２８６】
2021511314.tif 000313
または薬学的に許容されるその塩［式中、式（Ｉ）の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］を調製する方法であって、
化合物（Ｘ−１）を化合物（Ｙ−１）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化２８７】
2021511314.tif 000314
［式中、
化合物（Ｘ−１）のＬ１は、ハロゲン、トルエンスルホネート、メタンスルホネートまたはトリフルオロメタンスルホネートであり、化合物（Ｘ−１）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］
を形成することを含み、
化合物（Ｙ−１）が、
【化２８８】
2021511314.tif 000315
［式中、Ｒａは、−Ｈであり、または２個のＲａは、それらが結合する酸素原子と一緒になって、１つもしくは複数のＣ１〜２アルキルで必要に応じて置換されているジオキサン環を形成する］である、
方法。
【請求項４９】
以下の式によって表される化合物
【化２８９】
2021511314.tif 000316
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｒ１は、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］を調製する方法であって、
化合物（Ｘ−２）を化合物（Ｙ−２）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化２９０】
2021511314.tif 000317
［式中、
化合物（Ｘ−２）のＱ１は、−ＮＨ２または−ＯＨであり、化合物（Ｘ−２）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りであり、
化合物（Ｙ−２）は、Ｒ４−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、Ｒ４−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、ＮＨＲ４−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、Ｒ４Ｓ（Ｏ）２−Ｌ２、Ｒ４−Ｌ２、Ｒ４Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、またはＲ４−Ｎ＝Ｃ＝Ｏであり、各Ｒ４は、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りであり、Ｌ２は、ハロゲン、トルエンスルホネート、メタンスルホネートまたはトリフルオロメタンスルホネートであり、Ｒｂは、Ｃ１〜４アルキルである］
を形成することを含む、方法。
【請求項５０】
以下の式によって表される化合物
【化２９１】
2021511314.tif 000318
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｘは、−ＮＨ−または−Ｏ−であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］を調製する方法であって、
（ｉ）化合物（Ｘ−３）を化合物（Ｙ−３）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物もしくは薬学的に許容されるその塩を形成すること、
【化２９２】
2021511314.tif 000319
または
（ｉｉ）化合物（Ｘ−４）を化合物（Ｙ−４）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物もしくは薬学的に許容されるその塩
【化２９３】
2021511314.tif 000320
［式中、Ｌ３は、ハロゲンであり、Ｌ４は、ハロゲン、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートであり、化合物（Ｘ−３）、（Ｘ−４）、（Ｙ−３）、および（Ｙ−４）のそれぞれの可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］
を形成することを含む、方法。
【請求項５１】
以下の式によって表される化合物
【化２９４】
2021511314.tif 000321
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ２は、水素であり、Ｒ４のそれぞれは、独立して、−ＯＲ５で置換されている５〜１０員のヘテロアリールであり、Ｒ７は、独立して、−ＯＲで置換されている５〜１０員のヘテロアリールであり、Ｒ、Ｒ５、および式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りであり、ただしＲおよびＲ５は、共に水素であることはないことを条件とする］
を調製する方法であって、
化合物（Ｘ−５）をＲ５ＯＨまたはＲＯＨと反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化２９５】
2021511314.tif 000322
［式中、
Ｑ２は、結合、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨ−、または−Ｏ−であり、
環Ｄは、５〜１０員のヘテロアリールであり、
Ｌ５は、ハロゲンであり、
ＲＯＨのＲ、Ｒ５ＯＨのＲ５、および化合物（Ｘ−５）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りであり、ただしＲおよびＲ５は、共に水素であることはないことを条件とする］
を形成することを含む、方法。
【請求項５２】
以下の式によって表される化合物
【化２９６】
2021511314.tif 000323
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｘは、−Ｏ−であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］
を調製する方法であって、
化合物（Ｘ−６）を（Ｙ−６）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化２９７】
2021511314.tif 000324
［式中、Ｌ６は、−ＯＨであり、Ｌ７は、−ＯＨであり、化合物（Ｘ−６）および（Ｙ−６）のそれぞれの残りの可変要素は、それぞれ独立して、請求項１〜４３のいずれか一項に記載される通りである］
を形成することを含む、方法。
【請求項５３】
１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、
１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含み、
前記１つまたは複数の標的ゲノム領域が編集される、方法。
【請求項５４】
相同組換え修復（ＨＤＲ）経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域のＤＮＡ切断を修復する方法であって、
１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含み、
前記ゲノム編集システムが、前記標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、前記ＤＮＡ切断が、ＨＤＲ経路を介して少なくとも部分的に修復される、
方法。
【請求項５５】
非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路を介した１つまたは複数の標的ゲノム領域のＤＮＡ切断の修復を阻害または抑制する方法であって、
１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含み、
前記ゲノム編集システムが、前記１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、ＮＨＥＪ経路を介した前記ＤＮＡ切断の修復が、阻害または抑制される、
方法。
【請求項５６】
１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質の発現を改変する方法であって、
１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含み、
前記ゲノム編集システムが、標的遺伝子（複数可）の前記１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、前記１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集をもたらし、前記編集が、前記標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現を改変する、
方法。
【請求項５７】
前記ＤＮＡ切断が、ＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）を含む、請求項５４または５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記化合物が、式（Ｉ）の構造を有する化合物、およびアジピン酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸または安息香酸から選択される共結晶形成剤を含む共結晶である、請求項５３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記１つまたは複数の細胞において前記標的ゲノム領域を編集する効率が、前記化合物が存在しないこと以外の点では同一である１つまたは複数の細胞と比較して増加する、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
ＨＤＲ経路を介した前記１つまたは複数の細胞の前記標的ゲノム領域における前記ＤＮＡ切断の修復の効率が、前記化合物が存在しないこと以外の点では同一である１つまたは複数の細胞と比較して増加する、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
ＮＨＥＪ経路を介した前記１つまたは複数の細胞の前記標的ゲノム領域における前記ＤＮＡ切断の修復を阻害または抑制する効率が、前記化合物が存在しないこと以外の点では同一である１つまたは複数の細胞と比較して増加する、請求項５５に記載の方法。
【請求項６２】
前記効率が、前記化合物が存在しないこと以外の点では同一である１つまたは複数の細胞と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍増加する、請求項５９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記効率が、標的化されたポリヌクレオチド組込みの頻度により測定される、請求項５９〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記効率が、標的化された突然変異導入の頻度により測定される、請求項５９〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記標的化された突然変異導入が、点突然変異、欠失、および／または挿入を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現が、前記投与前の前記１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して増加する、請求項５６に記載の方法。
【請求項６７】
前記発現が、前記投与前の前記１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、または１０倍増加する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現が、前記投与前の前記１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して低減する、請求項５６に記載の方法。
【請求項６９】
前記遺伝子発現が、前記投与前の前記１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低減する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現が、前記１つまたは複数の細胞において実質的に消失する、請求項５６に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞が、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズにおいて同期化される、請求項５３〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記化合物を投与されたまたは接触させられた前記１つまたは複数の細胞が、前記化合物を投与されても、接触させられてもいない１つまたは複数の細胞と比較して生存期間の増加を有する、請求項５３〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記ゲノム編集システムおよび前記化合物が、前記１つまたは複数の細胞に同時に投与される、請求項５３〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記ゲノム編集システムおよび前記化合物が、前記１つまたは複数の細胞に逐次的に投与される、請求項５３〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記ゲノム編集システムが、前記化合物の前に、前記１つまたは複数の細胞に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記化合物が、前記ゲノム編集システムの前に、前記１つまたは複数の細胞に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記１つまたは複数の細胞が、培養細胞である、請求項５３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記１つまたは複数の細胞が、生物内のｉｎ  ｖｉｖｏ細胞である、請求項５３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記１つまたは複数の細胞が、生物由来のｅｘ  ｖｉｖｏ細胞である、請求項５３〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記生物が哺乳動物である、請求項７８または７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記生物がヒトである、請求項７８または７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記ゲノム編集システムおよび前記化合物が、同じ経路を介して投与される、請求項５３〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ゲノム編集システムおよび前記化合物が、異なる経路を介して投与される、請求項５３〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ゲノム編集システムが、静脈内投与され、前記化合物が、経口投与される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記ゲノム編集システムが、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムから選択される、請求項５３〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
ゲノム編集システムが、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムまたはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムであり、前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムが、（ａ）以下を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメント：（ｉ）前記１つもしくは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、または前記ターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸、（ｉｉ）および前記ターゲッターＲＮＡとのハイブリッド形成が可能なヌクレオチド配列を含むアクチベーターＲＮＡ、または前記アクチベーターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸、ならびに（ｂ）Ｃａｓタンパク質を含むＣａｓタンパク質エレメントまたは前記Ｃａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ターゲッターＲＮＡおよびアクチベーターＲＮＡが、単一分子として融合される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記Ｃａｓタンパク質が、ＩＩ型Ｃａｓ９タンパク質である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｃａｓ９タンパク質が、ＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、またはＤ１０Ａニッカーゼ、またはこれらの任意の組合せである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムであり、前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムが、（ａ）少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメントまたは前記ガイドＲＮＡエレメントをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸であって、前記ガイドＲＮＡが前記１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡを含む、ガイドＲＮＡエレメントまたは核酸、および（ｂ）Ｃｐｆタンパク質を含むＣｐｆタンパク質エレメントまたは前記Ｃｐｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記ゲノム編集システムが、１つまたは複数のベクターにより送達される、請求項５３〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記１つまたは複数のベクターが、ウイルスベクター、プラスミド、またはｓｓＤＮＡから選択される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスおよび単純ヘルペスウイルスのベクターからなる群から選択される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ゲノム編集システムが、合成ＲＮＡにより送達される、請求項５３〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記ゲノム編集システムが、ナノ製剤により送達される、請求項５３〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記化合物が、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集するためのキットまたは組成物であって、
ゲノム編集システム、および
請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩
を含む、キットまたは組成物。
【請求項１００】
前記ゲノム編集システムが、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムである、請求項９９に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０１】
ゲノム編集システムが、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムである、請求項１００に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０２】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムまたはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである、請求項１０１に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０３】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムであり、前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムが、（ａ）以下を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメント：（ｉ）前記１つもしくは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、または前記ターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸、（ｉｉ）および前記ターゲッターＲＮＡとのハイブリッド形成が可能なヌクレオチド配列を含むアクチベーターＲＮＡ、または前記アクチベーターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸、ならびに（ｂ）Ｃａｓタンパク質を含むＣａｓタンパク質エレメントまたは前記Ｃａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む、請求項１０２に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０４】
前記Ｃａｓタンパク質が、ＩＩ型Ｃａｓ９タンパク質である、請求項１０２に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０５】
前記Ｃａｓ９タンパク質が、ＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、またはＤ１０Ａニッカーゼ、またはこれらの任意の組合せである、請求項１０２に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０６】
前記ＣＲＩＳＰＲベースのシステムが、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムであり、前記ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムが、（ａ）前記１つもしくは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、または前記ターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸、および（ｂ）Ｃｐｆタンパク質を含むＣｐｆタンパク質エレメントまたは前記Ｃｐｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む、請求項１０２に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０７】
前記ゲノム編集システムが、１つまたは複数のベクターに含まれるまたはパッケージされる、請求項９９〜１０６のいずれか一項に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０８】
前記１つまたは複数のベクターが、ウイルスベクター、プラスミド、またはｓｓＤＮＡから選択される、請求項１０７に記載のキットまたは組成物。
【請求項１０９】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスおよび単純ヘルペスウイルスのベクターからなる群から選択される、請求項１０８に記載のキットまたは組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１月１７日出願の米国仮特許出願第６２／６１８，３３９号の利益を主張するものであり、その内容全体は、これにより参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１９年１月１６日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、１４３９０−６８８配列表＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、サイズが５ＫＢである。
【０００３】
本発明は、ＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ−ＰＫ）の阻害剤として有用な化合物に関する。本発明はまた、本発明の化合物を含む薬学的に許容される組成物、ならびにがんの処置において、ならびにＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを細胞（複数可）に投与することによりゲノム編集効率を増加させるために組成物を使用する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
電離放射線（ＩＲ）は様々なＤＮＡ損傷を誘発するが、中でも二本鎖切断（ＤＳＢ）が最も細胞傷害性がある。これらＤＳＢは、急速および完全に修復されない限り、アポトーシスおよび／または分裂期崩壊を介して細胞死につながる可能性がある。ＩＲに加えて、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ブレオマイシン、およびドキソルビシンを含むある特定の化学療法剤もまたＤＳＢを引き起こす。これらのＤＮＡ傷害は、損傷を受けたＤＮＡを修復し、細胞生存およびゲノム安定性を維持するように機能する一連の複雑なシグナルを、ＤＮＡ損傷応答ネットワークを介して誘発する。哺乳動物細胞において、ＤＳＢに対する主要な修復経路は非相同末端結合経路（ＮＨＥＪ）である。この経路は、細胞周期フェーズに関わらず機能し、切断されたＤＮＡ末端を再ライゲーションするのに鋳型を必要としない。ＮＨＥＪは、多くのタンパク質およびシグナル伝達経路の協調を必要とする。コアＮＨＥＪ機構は、Ｋｕ７０／８０ヘテロ二量体およびＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＤＮＡ−ＰＫｃｓまたはＤＮＡ−ＰＫ）からなり、これらは一緒になって活性のあるＤＮＡ−ＰＫ酵素複合体を構成する。ＤＮＡ−ＰＫｃｓは、セリン／スレオニンタンパク質キナーゼのホスファチジルイノシトール３−キナーゼ関連キナーゼ（ＰＩＫＫ）ファミリーのメンバーであり、このファミリーはまた、細血管拡張運動失調突然変異（ＡＴＭ）、細血管拡張運動失調およびＲａｄ３関連（ＡＴＲ）、ｍＴＯＲ、ならびに４種のＰＩ３Ｋアイソフォームを含む。しかし、ＤＮＡ−ＰＫｃｓがＡＴＭおよびＡＴＲと同じタンパク質キナーゼファミリーの場合、これら後者のキナーゼは、相同組換え（ＨＲ）経路を介してＤＮＡ損傷を修復するよう機能し、細胞周期のＳおよびＧ２フェーズに限定される。ＡＴＭはまたＤＳＢの部位に動員されるが、ＡＴＲは一本鎖ＤＮＡ切断部位に動員される。
【０００５】
ＮＨＥＪは、３つの主要ステップ：ＤＳＢの認識、ライゲーション不可能な末端または末端における他の形態の損傷を除去するためのＤＮＡプロセシング、最後にＤＮＡ末端のライゲーションを介して進行すると考えられる。ＤＳＢの認識は、ちぎれたＤＮＡ末端へのＫｕヘテロ二量体の結合、これに続く、ＤＳＢの、隣接する側へのＤＮＡ−ＰＫｃｓの２個の分子の動員により行われる。これは、追加のプロセシング酵素が動員されるまで切断された末端を保護する働きをする。最近のデータは、ＤＮＡ−ＰＫｃｓがプロセシング酵素、Ａｒｔｅｍｉｓ、ならびにそれ自体をリン酸化して、追加のプロセシングのためにＤＮＡ末端の準備を整えるという仮説を支持している。場合によってはライゲーションステップ前に新規末端を合成するためのＤＮＡポリメラーゼが必要とされ得る。ＤＮＡ−ＰＫｃｓの自己リン酸化は、中央のＤＮＡ結合空洞を開き、ＤＮＡからＤＮＡ−ＰＫｃｓを放出し、ＤＮＡ末端の最終的な再ライゲーションを促進する立体配座変化を誘発すると考えられている。
【０００６】
ＤＮＡ−ＰＫ−／−マウスがＩＲの作用に過感受性であること、およびＤＮＡ−ＰＫｃｓの一部の非選択的小分子阻害剤が一連の広範な遺伝的背景の全域で様々な腫瘍細胞型を放射線感受性化し得ることは、しばらく前から公知であった。ＤＮＡ−ＰＫの阻害は正常細胞をある程度放射線感受性化すると予想されるが、その程度は、腫瘍細胞よりも低いと見られている。理由は、恐らく、腫瘍細胞が内因性複製ストレスのより高い基本的レベルを保有すること、ならびにＤＮＡ損傷（がん遺伝子誘発性複製ストレス）およびＤＮＡ修復機序の効率が腫瘍細胞においてより低いという事実からである。最も重要なことには、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤と、画像誘導ＲＴ（ＩＧＲＴ）および強度モジュレートされたＲＴ（ＩＭＲＴ）を含む、集束ＩＲの正確な送達における最近の進歩とを組み合わせることによって、より多くの正常な組織を温存した改善された治療域が得られる。
【０００７】
ＤＮＡ−ＰＫ活性の阻害は、周期および非周期細胞の両方において作用を誘発する。これは、固形腫瘍の細胞の大部分が任意の所与の時点で活発に複製されておらず、これによって、細胞周期を標的とする多くの薬剤の有効性が制限されるので極めて重要である。同じく興味深いのは、ＮＨＥＪ経路の阻害と、従来は放射線抵抗性であったがん幹細胞（ＣＳＣ）を死滅させる能力との間の強い関係を示唆する最近の報告である。一部の腫瘍細胞において、休眠ＣＳＣにおけるＤＳＢは、ＮＨＥＪ経路を介したＤＮＡ修復を圧倒的に活性化することが示されている。ＣＳＣは普通、細胞周期の静止期にあると考えられている。これは、現在の戦略が効果的にＣＳＣを標的にすることができないので、処置したにもかかわらずがん患者の半分が局所的または離れた腫瘍の再発を経験し得る理由を説明し得る。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、これら潜在的転移性前駆細胞をＩＲおよび特定のＤＳＢ誘発化学療法剤の作用に対して感受性化させる能力を有し得る。
【０００８】
ＤＮＡ修復プロセスにおけるＤＮＡ−ＰＫの関与を考慮すると、特定のＤＮＡ−ＰＫ阻害性薬物の適用は、がん化学療法と放射線療法の両方の有効性を増強する薬剤として作用する。したがって、ＤＮＡ−ＰＫの阻害剤として有用な化合物を開発することが望ましい。
【０００９】
加えて、遺伝的変異の体系的操作を可能にするために正確なゲノム標的化技術が必要とされる。ゲノム編集システム、具体的には、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ））−エンドヌクレアーゼベースのゲノム編集技術の使用は、この数年で指数関数的に成長した。ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９細菌性先天免疫系は、ヒトゲノムの標的化された改変のための有効なゲノム編集ツールとして出現した（Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ，  Ｂ．２０１２；Ｈｓｕ，  Ｐ．Ｄ．ｅｔａ．  ２０１４）。近年になって、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆゲノム編集システムが記載されている。ＣＲＩＳＰＲ−エンドヌクレアーゼベースのゲノム編集は、ＤＮＡ二本鎖切断を修復するのに、部分的に、非相同末端結合経路（ＮＨＥＪ）、および相同組換え修復（ＨＤＲ）経路に依存する。細胞の修復機序は、ＨＤＲよりもＮＨＥＪを好む。
【００１０】
ＮＨＥＪからの挿入または欠失（インデル）の達成は一部の報告では７０％まで有効であるが、ＨＤＲの効率は、１％未満の割合で困難なままである。
【００１１】
したがって、ゲノム編集効率、特に、ＨＤＲ効率を増加させる必要性がある。特定のＤＮＡ−ＰＫ阻害性薬物の別の適用は、ゲノム編集システムの有効性を増強する薬剤として作用することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の化合物、および薬学的に許容されるその組成物は、ＤＮＡ−ＰＫの阻害剤として有効であることが判明した。したがって一態様では、本発明は、式（Ｉ）によって表される化合物
【化１】
2021511314.tif 000003
または薬学的に許容されるその塩を特徴とする［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、環Ａ、環Ｂおよび環Ｃのそれぞれは、独立して、本明細書の他所に定義される通りである］。
【００１３】
一実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩［式中、
環Ａは、
【化２】
2021511314.tif 000004
から選択される芳香族環系であり、
環Ｂは、
【化３】
2021511314.tif 000005
から選択される環系であり、環Ｂは、−Ｆ、−ＯＨ、ならびに−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて置換されており、
環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキル、５〜６員のヘテロアリール、またはフェニル基であり、環Ｃは、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じてさらに置換されており、
Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＯＣ１〜４アルキル−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−であり、
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ１およびＲ２は、同時に水素であってはならず、
各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜１０員のヘテロシクリルであり、前記Ｒ４基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、ＣＨ２ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｎ（Ｒ５）２、５〜６員のヘテロシクリル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）ＯＲ５、−ＯＲ５およびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−ＯＣ１〜４アルキル、−ＳＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、
各Ｒ５は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、５〜６員のヘテロアリールもしくは４〜７員のヘテロシクリルであり、各Ｒ５は、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣ１〜２アルキル、５〜６員のヘテロアリール、および４〜７員のヘテロシクリルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されており、または２個のＲ５基は、介在する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成し、
Ｒ６は、水素であるか、または−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ７は、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、そのそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、および−ＯＲからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素もしくはＣ１〜４アルキルであり、またはＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成する］
または薬学的に許容されるその塩であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、環Ａ、環Ｂおよび環Ｃのそれぞれは、本明細書で他所に定義される通りである。
【００１４】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含む医薬組成物を提供する。これらの化合物および医薬組成物は、がんを処置するまたはがんの重症度を低めるのに有用である。
【００１５】
本発明により提供される化合物および組成物はまた、生物学的および病理学的現象におけるＤＮＡ−ＰＫの研究；このようなキナーゼにより媒介される細胞内シグナル形質導入経路の研究；および新規キナーゼ阻害剤の比較による評価に対しても有用である。
【００１６】
本発明はまた、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を使用してＤＮＡ−ＰＫなどのＮＨＥＪ酵素を抑制することによりＨＤＲ効率を改善することができる。
【００１７】
一部の実施形態では、本開示は、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）で表される化合物：
【化４】
2021511314.tif 000006
またはその薬学的に許容される塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、環Ａ、環Ｂおよび環Ｃのそれぞれは、独立して、本明細書の他の箇所で定義されている通りである）を投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
環Ａは、
【００１９】
【化５】
2021511314.tif 000007
から選択される芳香族環系であり、
【００２０】
環Ｂは、
【００２１】
【化６】
2021511314.tif 000008
から選択される環系であり、環Ｂは、−Ｆ、−ＯＨ、ならびに−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて置換されており、
【００２２】
環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキル、５〜６員のヘテロアリール、またはフェニル基であり、環Ｃは、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じてさらに置換されており、
【００２３】
Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＯＣ１〜４アルキル−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−であり、
【００２４】
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ１およびＲ２は、同時に水素であってはならず、
【００２５】
各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
【００２６】
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜１０員のヘテロシクリルであり、前記Ｒ４基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、ＣＨ２ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｎ（Ｒ５）２、５〜６員のヘテロシクリル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）ＯＲ５、−ＯＲ５およびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−ＯＣ１〜４アルキル、−ＳＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、
【００２７】
各Ｒ５は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、５〜６員のヘテロアリールもしくは４〜７員のヘテロシクリルであり、各Ｒ５は、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣ１〜２アルキル、５〜６員のヘテロアリール、および４〜７員のヘテロシクリルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されており、または２個のＲ５基は、介在する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成し、
【００２８】
Ｒ６は、水素であるか、または−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、
【００２９】
Ｒ７は、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、そのそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、および−ＯＲからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
【００３０】
ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素もしくはＣ１〜４アルキルであり、またはＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成する。
【００３１】
一部の実施形態では、本開示はまた、相同組換え修復（ＨＤＲ）経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断を修復する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法も提供する。
【００３２】
ゲノム編集システムは、標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、このＤＮＡ切断はＨＤＲ経路を介して少なくとも部分的に修復される。
【００３３】
一部の実施形態では、本開示はまた、ＮＨＥＪ経路を介した１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断の修復を阻害または抑制する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００３４】
ゲノム編集システムは、１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、ＮＨＥＪ経路を介したＤＮＡ切断の修復が阻害または抑制される。
【００３５】
一部の実施形態では、本開示はまた、１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質の発現を改変する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００３６】
ゲノム編集システムは、標的遺伝子（複数可）の１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集をもたらし、この編集は、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現を改変する。
【００３７】
一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集するためのキットまたは組成物が提供される。一部の実施形態では、キットまたは組成物は、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００３８】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下に続く詳細な説明で明らかとなる。しかし、詳細な説明は、本発明の実施形態および態様を示すものではあるが、制限としてではなく、単に例示により付与されることを理解されたい。本発明の範囲内の様々な変化および改変が詳細な説明から当業者に明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｃは、ＨＤＲ効率をモニタリングするために使用したトラフィックライトレポーターアッセイの使用に関する一連の概略図および配列である。
【００４０】
図１Ａは、ヒトＡＡＶＳ１遺伝子座（ＳＢＩ）を標的化するバイシストロニック構築物の設計の図である。
【００４１】
【図１−２】図１Ｂは、ＨＤＲ効率をモニタリングするためにトラフィックライトレポーターアッセイで使用した細胞系、および標的化ポリヌクレオチド領域の図である。
【００４２】
【図１−３】図１Ｃは、ＨＤＲ効率をモニタリングするためにトラフィックライトレポーターアッセイで使用した実験ワークフローの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
別段定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者に一般に理解される意味を有するものとする。一般的に、本明細書に記載されている細胞および組織培養物、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴ−またはポリヌクレオチド化学およびハイブリッド形成に関連して利用される命名法、およびこれらの技術は周知であり、当技術分野で共通して使用されている。標準的技術が組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および変換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）に対して使用される。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従いもしくは当技術分野で共通して達成されているようにまたは本明細書に記載されているように実施される。前述の技術および手順は一般的に、当技術分野で周知の従来の方法に従い、ならびに本開示全体にわたり引用および論じられている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、ならびに医化学および薬品化学と関連して利用される命名法、ならびにそれらの実験手順および技術は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準技術は、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、および送達、および患者の処置のために使用される。一般に、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，  ７５ｔｈ  Ｅｄ．  １９９４に従って特定される。さらに、有機化学の一般原則は、”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”  Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：  １９９９および”Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”  ５ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．Ｂ．  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，  Ｊ．，  ｅｄｓ．  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  ２００１に記載されており、それらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。本開示に従って利用される通り、本開示で定義される用語は、別段指定されない限り、本明細書で定義される意味を有すると理解されるべきである。
【００４４】
本発明の化合物
【００４５】
一実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）によって表されるか、
【化７】
2021511314.tif 000009
または薬学的に許容されるその塩であり、式中、式（Ｉ）の可変要素は、それぞれ独立して、下記の通りである。式（Ｉ）の可変要素の第１の組は、以下の通りである。
【００４６】
環Ａは、
【化８】
2021511314.tif 000010
から選択される芳香族環系である。
【００４７】
環Ｂは、必要に応じて置換されており、
【化９】
2021511314.tif 000011
から選択される環系であり、環Ｂは、−Ｆ、−ＯＨ、ならびに−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて置換されている。特定の一実施形態では、環Ｂは、必要に応じて置換されており、
【化１０】
2021511314.tif 000012
から選択される。別の特定の実施形態では、環Ｂは、必要に応じて置換されている
【化１１】
2021511314.tif 000013
である。環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキル、５〜６員のヘテロアリール、またはフェニルであり、環Ｃは、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じてさらに置換されている。特定の実施形態では、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールである。特定の実施形態では、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルである。特定の実施形態では、環Ｃは、必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールまたは必要に応じて置換されているフェニルである。
【００４８】
Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＯＣ１〜４アルキル−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−である。特定の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−ＣＨ２−である。別の特定の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−または−Ｏ−である。別の特定の実施形態では、Ｘは、−Ｏ−である。別の特定の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−である。別の特定の実施形態では、Ｘは、−ＯＣ１〜４アルキル−である。別の特定の実施形態では、Ｘは、−ＣＨ２−である。
【００４９】
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ１およびＲ２は、同時に水素であってはならない。特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、−ＮＨＲ４または−ＯＲ４である。別の特定の実施形態では、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である。別の特定の実施形態では、Ｒ２は、水素であり、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である。別の特定の実施形態では、Ｒ２は、水素であり、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である。別の特定の実施形態では、Ｒ２は、水素であり、Ｒ１は、−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である。別の特定の実施形態では、Ｒ２は、水素であり、Ｒ１は、−ＮＨＲ４または−ＯＲ４である。
【００５０】
各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている。特定の実施形態では、各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、必要に応じて置換されている。別の特定の実施形態では、各Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２である。
【００５１】
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜１０員のヘテロシクリルである。Ｒ４基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、ＣＨ２ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｎ（Ｒ５）２、５〜６員のヘテロシクリル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）ＯＲ５、−ＯＲ５、およびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている。必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−ＯＣ１〜４アルキル、−ＳＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている。Ｒ４のヘテロアリール基の具体例として、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン（例えば、
【化１２】
2021511314.tif 000014
）、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン（例えば、
【化１３】
2021511314.tif 000015
）、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、およびベンゾオキサゾールが挙げられる。特定の実施形態では、Ｒ４のＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、およびＣ２〜４アルキニルのそれぞれは、−Ｆおよび−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、Ｒ４のＣ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、および４〜１０員のヘテロシクリル基のそれぞれは、１つまたは複数のＣ１〜４アルキル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、またはピペラジンで必要に応じて独立して置換されており、必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、１つまたは複数のＣ１〜４アルキルで必要に応じて置換されている。
【００５２】
Ｒ４のヘテロシクリル基の具体例として、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン（例えば、
【化１４】
2021511314.tif 000016
）、ジヒドロピラノピリミジン（例えば、
【化１５】
2021511314.tif 000017
）、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン（例えば、
【化１６】
2021511314.tif 000018
）、ジヒドロフロピリジン（例えば、
【化１７】
2021511314.tif 000019
）、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、およびイソインドリン−１，３−ジオンが挙げられる。Ｒ４の置換基の複素環式基の具体例として、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、フラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、オキサジアゾールおよびテトラゾールが挙げられる。
【００５３】
特定の実施形態では、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、またはＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜５シクロアルキルもしくはフェニルから選択される、必要に応じて置換されている基である。別の特定の実施形態では、各Ｒ４は、独立して、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、必要に応じて置換されている基である。別の特定の実施形態では、各Ｒ４は、独立して、イミダゾール、ピラゾール、ピリミジン、フロピリミジン、オキセタンまたはジヒドロフロピリミジンから選択される、必要に応じて置換されている基である。
【００５４】
別の特定の実施形態では、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、あるいはＣ１〜４アルキル、
【化１８】
2021511314.tif 000020
またはＣ３〜５シクロアルキル（ｃｙｌｃｏａｌｋｙｌ）基、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾールもしくはフェニルから選択される環基から選択される、必要に応じて置換されている基であり、Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４ｄであり、Ｘ２は、ＮまたはＣＲ４ｃであり、Ｘ１およびＸ２は、同時にＮであってはならず、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、およびＲ４ｃのそれぞれは、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジンもしくはピペラジンから選択される複素環式基、またはフラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾールもしくはテトラゾールから選択されるヘテロアリール基であり、あるいはＲ４ｃおよびＲ４ａ、またはＲ４ｃおよびＲ４ｂは、介在する原子と一緒になって、必要に応じてジヒドロフラン、ジヒドロピラン、またはテトラヒドロピペリジン複素環式基を形成し、Ｒ４ｄは、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２である。Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の置換基の前記複素環式およびヘテロアリール基のそれぞれは、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の置換基のアルキルおよびシクロアルキル基のそれぞれは、−Ｆおよび−ＯＨからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている。特定の実施形態では、Ｒ４ｄは、水素、ＣＦ、ＣＣｌ、または１つもしくは複数の−Ｆで必要に応じて置換されているＣＣ１〜２アルキルである。
【００５５】
別の特定の実施形態では、各Ｒ４は、独立して、Ｃ１〜４アルキルであるか、またはＣ３〜５シクロアルキル、ピラゾール、イミダゾール、オキセタン、
【化１９】
2021511314.tif 000021
【化２０】
2021511314.tif 000022
から選択される環基であり、Ｒ４のＣ１〜４アルキルは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、および−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、Ｒ４の環基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＣＮ、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている。特定の実施形態では、Ｒ４のＣ１〜４アルキルは、−Ｆおよび−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、Ｒ４の環基のそれぞれは、Ｃ１〜４アルキル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、１つまたは複数のＣ１〜４アルキルで必要に応じて置換されている。
【００５６】
各Ｒ５は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、５〜６員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、各Ｒ５は、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣ１〜２アルキル、５〜６員のヘテロアリール、および４〜７員のヘテロシクリルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されており、または２個のＲ５基は、介在する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジンもしくはピペラジンを形成する。Ｒ５の必要に応じて置換されているヘテロアリール基の具体例として、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、ピリジン、およびピリミジンが挙げられる。Ｒ５の必要に応じて置換されているヘテロシクリル基の具体例として、オキセタン、テトラヒドロフラン、およびテトラヒドロピランが挙げられる。
【００５７】
Ｒ６は、水素であるか、または−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ６は、水素またはメチルである。
【００５８】
Ｒ７は、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、そのそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、および−ＯＲからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている。Ｒ７の具体例として、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、およびイソインドリン−１，３−ジオンが挙げられる。特定の実施形態では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピリミジン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、オキセタン、ジヒドロフロピリミジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される。別の特定の実施形態では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピリミジン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、フロピリミジン、オキセタン、ジヒドロフロピリミジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される。さらに別の特定の実施形態では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピリミジン、ピラゾール、フロピリミジン、チアゾール、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される。
【００５９】
ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素もしくはＣ１〜４アルキルであり、またはＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成する。特定の実施形態では、ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素またはＣ１〜４アルキルである。別の特定の実施形態では、ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素またはＣ１〜２アルキルである。
【００６０】
式（Ｉ）の可変要素の第２の組では、各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、フェニル、ナフタレン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、およびベンゾオキサゾールからなる群から選択される５〜１０員のヘテロアリール基、またはテトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、およびイソインドリン−１，３−ジオンからなる群から選択される４〜１０員のヘテロシクリル基である。Ｒ４のそれぞれは、必要に応じて独立して置換されている。特定の実施形態では、Ｒ４の置換基の複素環式基は、必要に応じて置換されており、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、フラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、オキサジアゾールまたはテトラゾールから選択される。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１の組に記載される通りである。
【００６１】
式（Ｉ）の可変要素の第３の組では、各Ｒ５は、独立して、水素であるか、あるいはＣ１〜４アルキル、フェニル、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、ピリジンもしくはピリミジンから選択される５〜６員の（ｍｅｍｅｒｅｄ）ヘテロアリール基、またはオキセタン、テトラヒドロフランもしくはテトラヒドロピランから選択される４〜６員のヘテロシクリル基から選択される、必要に応じて置換されている基である。各Ｒ４は、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第２の組に記載される通りである。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１または第２の組に記載される通りである。
【００６２】
式（Ｉ）の可変要素の第４の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第３の組に記載される通りであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３の組のいずれかに記載される通りである。
【００６３】
式（Ｉ）の可変要素の第５の組では、Ｘは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜４の組のいずれかに記載される通りである。
【００６４】
式（Ｉ）の可変要素の第６の組では、Ｘは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第３の組に記載される通りであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜５の組のいずれかに記載される通りである。
【００６５】
式（Ｉ）の可変要素の第７の組では、環Ｂ
【化２１】
2021511314.tif 000023
は、必要に応じて置換されており、
【化２２】
2021511314.tif 000024
から選択され、Ｘは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜６の組のいずれか１つに記載される通りである。
【００６６】
式（Ｉ）の可変要素の第８の組では、環Ｂ
【化２３】
2021511314.tif 000025
は、必要に応じて置換されており、
【化２４】
2021511314.tif 000026
から選択され、Ｘは、−Ｏ−または−ＮＨ−であり、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルまたは必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールであり、Ｒ４およびＲ５のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第３の組に記載される通りであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜７の組のいずれかに記載される通りである。
【００６７】
式（Ｉ）の可変要素の第９の組では、各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、必要に応じて置換されており、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜８の組のいずれかに記載される通りである。
【００６８】
式（Ｉ）の可変要素の第１０の組では、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、またはＣ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜５シクロアルキルもしくはフェニルから選択される、必要に応じて置換されている基であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜９の組のいずれかに記載される通りである。
【００６９】
式（Ｉ）の可変要素の第１１の組では、各Ｒ４は、独立して、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される、必要に応じて置換されている基であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１０の組のいずれかに記載される通りである。
【００７０】
式（Ｉ）の可変要素の第１２の組では、各Ｒ４は、独立して、イミダゾール、ピラゾール、ピリミジン、フロピリミジン、オキセタンまたはジヒドロフロピリミジンから選択される、必要に応じて置換されている基であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１１の組のいずれかに記載される通りである。
【００７１】
式（Ｉ）の可変要素の第１３の組では、各Ｒ４は、独立して、水素であるか、あるいはＣ１〜４アルキル、
【化２５】
2021511314.tif 000027
またはＣ３〜５シクロアルキル、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾールもしくはフェニルから選択される環基から選択される、必要に応じて置換されている基であり、Ｘ１は、ＮまたはＣＲ４ｄであり、
Ｘ２は、ＮまたはＣＲ４ｃであり、Ｘ１およびＸ２は、同時にＮであってはならず、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、およびＲ４ｃのそれぞれは、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジンもしくはピペラジンから選択される複素環式基、またはフラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾールもしくはテトラゾールから選択されるヘテロアリール基であり、あるいはＲ４ｃおよびＲ４ａ、またはＲ４ｃおよびＲ４ｂは、介在する原子と一緒になって、必要に応じてジヒドロフラン、ジヒドロピラン、またはテトラヒドロピペリジン複素環式環基を形成し、Ｒ４ｄは、独立して、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、またはＣ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２であり、Ｒ４の環基のそれぞれは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、モルホリン、ピペリジンまたはピペラジンから選択される複素環式基、およびフラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピロール、ピラゾール、トリアゾールまたはテトラゾールから選択されるヘテロアリール基からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて独立して置換されており、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の置換基の前記複素環式およびヘテロアリール基のそれぞれは、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃ、ならびにＲ４の置換基の前記アルキルおよびシクロアルキル基のそれぞれは、−Ｆおよび−ＯＨからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１３の組のいずれかに記載される通りである。
【００７２】
式（Ｉ）の可変要素の第１４の組では、各Ｒ４は、独立して、Ｃ１〜４アルキルであるか、またはＣ３〜５シクロアルキル、ピラゾール、イミダゾール、オキセタン、
【化２６】
2021511314.tif 000028
から選択される環基であり、
前記Ｒ４のＣ１〜４アルキルは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、および−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記Ｒ４の環基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＣＮ、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されている。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１３の組のいずれかに記載される通りである。
【００７３】
式（Ｉ）の可変要素の第１５の組では、各Ｒ４は、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１４の組に記載される通りであり、Ｒ４のＣ１〜４アルキルは、−Ｆおよび−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、Ｒ４の環基のそれぞれは、Ｃ１〜４アルキル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、およびピペラジンからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、１つまたは複数のＣ１〜４アルキルで必要に応じて置換されている。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１４の組のいずれかに記載される通りである。
【００７４】
式（Ｉ）の可変要素の第１６の組では、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７である。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１５の組のいずれかに記載される通りである。
【００７５】
式（Ｉ）の可変要素の第１７の組では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、ピリジン、フロピリジン、ピリミジン、ピリミジノン、ピラジン、ピリダジン、キノロン、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、テトラヒドロフラン、オキセタン、テトラヒドロピラン、ジヒドロイソオキサゾール、ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、ジヒドロフロピリミジン、ジヒドロピラノピリミジン、ジヒドロピロロピリミジン、テトラヒドロピリドピリミジン、ジヒドロピリドピリミジン、ジヒドロフロピリジン、ジヒドロピリドピリジン、テトラヒドロプテリジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１６の組のいずれかに記載される通りである。
【００７６】
式（Ｉ）の可変要素の第１８の組では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピリミジン、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、フロピリミジン、ピロロピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、オキセタン、ジヒドロフロピリミジン、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択される。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１７の組のいずれかに記載される通りである。
【００７７】
式（Ｉ）の可変要素の第１９の組では、Ｒ７は、必要に応じて置換されており、ピリミジン、ピラゾール、フロピリミジン、チアゾール、またはイソインドリン−１，３−ジオンから選択され、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１８の組のいずれかに記載される通りである。
【００７８】
式（Ｉ）の可変要素の第２０の組では、Ｘは、−Ｏ−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１８の組のいずれかに記載される通りである。
【００７９】
式（Ｉ）の可変要素の第２１の組では、Ｘは、−ＮＨ−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１８の組のいずれかに記載される通りである。
【００８０】
式（Ｉ）の可変要素の第２２の組では、Ｘは、−ＣＨ２−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１８の組のいずれかに記載される通りである。
【００８１】
式（Ｉ）の可変要素の第２３の組では、Ｘは、−ＯＣ１〜４アルキル−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜１８の組のいずれかに記載される通りである。
【００８２】
式（Ｉ）の可変要素の第２４の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されているＣ４〜６シクロアルキルであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２３の組のいずれかに記載される通りである。
【００８３】
式（Ｉ）の可変要素の第２５の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されているシクロヘキサンであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２４の組のいずれかに記載される通りである。
【００８４】
式（Ｉ）の可変要素の第２６の組では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ２は、水素であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２５の組のいずれかに記載される通りである。
【００８５】
式（Ｉ）の可変要素の第２７の組では、各Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、水素またはメチルであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２６の組のいずれかに記載される通りである。
【００８６】
式（Ｉ）の可変要素の第２８の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されている５〜６員のヘテロアリールであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【００８７】
式（Ｉ）の可変要素の第２９の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されているフェニルであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【００８８】
式（Ｉ）の可変要素の第３０の組では、環Ｃは、必要に応じて置換されているフェニルであり、Ｘは、−ＯＣ１〜４アルキル−であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【００８９】
別の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＩ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩
【化２７】
2021511314.tif 000029
であり、式中、式（ＩＩ）の可変要素は、それぞれ独立して（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）、下記の通りである。
【００９０】
式（ＩＩ）の可変要素の第１の組では、式（ＩＩ）の可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかにおいて上記の通りである。
【００９１】
式（ＩＩ）の可変要素（ｖａｒａｉｂｌｅｓ）の第２の組では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ２は、水素である。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【００９２】
別の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）もしくは（ＩＩＩ−Ｂ−２）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩
【化２８】
2021511314.tif 000030
であり、式中、式（ＩＩ）の可変要素は、それぞれ独立して（ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌ）、下記の通りである。
【００９３】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１の組では、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかにおいて上記の通りである。
【００９４】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第２の組では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【００９５】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第３の組では、Ｒ１は、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１または第２の組のいずれかに記載される通りである。
【００９６】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第４の組では、Ｒ１は、−ＮＨＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜３の組のいずれかに記載される通りである。
【００９７】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第５の組では、Ｒ１は、−ＯＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜４の組のいずれかに記載される通りである。
【００９８】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第６の組では、Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、水素またはメチルであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜５の組のいずれかに記載される通りである。
【００９９】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＶ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩
【化２９】
2021511314.tif 000031
であり、式中、式（ＩＶ）の可変要素は、それぞれ独立して、下記の通りである。
【０１００】
式（ＩＶ）の可変要素の第１の組では、可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０１０１】
式（ＩＶ）の可変要素の第２の組では、Ｒ１は、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、式（ＩＶ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれかに記載される通りである。
【０１０２】
式（ＩＶ）の可変要素の第３の組では、環Ｂは、必要に応じて置換されている
【化３０】
2021511314.tif 000032
であり、式（ＩＶ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＶ）の可変要素の第１または第２の組に記載される通りである。
【０１０３】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｖ−Ａ）もしくは（Ｖ−Ｂ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩
【化３１】
2021511314.tif 000033
であり、式中、式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素のそれぞれは、独立して、下記の通りである。
【０１０４】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第１の組では、可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０１０５】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第２の組では、Ｒ３は、水素、メチル、シクロプロピル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＮＲＲ’、または−ＣＮであり、前記Ｒ３のアルキルのそれぞれは、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、各Ｒ４は、独立して、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている、必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、ＲおよびＲ’は、それぞれ独立して、水素またはＣ１〜２アルキルである。式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０１０６】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第３の組では、各Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、水素またはメチルである。式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第１または第２の組に記載される通りである。
【０１０７】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）のいずれか１つによって表されるか、または薬学的に許容されるその塩であり、これらの式の可変要素のそれぞれは、独立して、表１および２の構造式に図示される通りである。
【０１０８】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、表１および２に図示される通りであるか、または薬学的に許容されるその塩である。特定の一実施形態では、本発明は、表１に列挙される化合物の群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩を特徴とする。別の特定の実施形態では、本発明は、表２に列挙される化合物の群から選択される化合物または薬学的に許容されるその塩を特徴とする。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、他に指摘されていない限り以下の定義が適用されるものとする。本発明の目的のため、化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、およびｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，  ７５ｔｈ  Ｅｄ．  １９９４に従い特定される。さらに、有機化学の一般的原理は、その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、および”Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，  ５ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．Ｂ．  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，  Ｊ．  ｅｄｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１に記載されている。
【０１１０】
本明細書に記載されているように、本発明の化合物は、上記に一般的に例示されているような、または本発明の特定のクラス、サブクラス、および種で例示されているような１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されていてもよい。「必要に応じて置換されている」という句は、「置換または非置換」という句と交換可能なように使用されることを認識されたい。一般的に、「置換されている」という用語は、「必要に応じて」という用語が先行してもしなくても、所与の構造内の１個または複数の水素基を特定された置換基の基で置き換えることを指す。他に指摘されていない限り、必要に応じて置換されている基は、基の各置換可能な位置に置換基を有することができる。所与の構造内の１つより多くの位置が、特定された基から選択される１つより多くの置換基で置換され得る場合、置換基は各位置において同じでも、異なってもよい。
【０１１１】
本明細書に記載されているように、「必要に応じて置換されている」という用語がリストの前に先行する場合、前記用語は、そのリスト内のそれに続く置換可能な基のすべてを指す。例えば、Ｘがハロゲン、必要に応じて置換されているＣ１〜３アルキルまたはフェニルである場合、Ｘは、必要に応じて置換されているアルキルまたは必要に応じて置換されているフェニルのいずれかであってよい。同様に、「必要に応じて置換されている」という用語がリストの後に続く場合、前記用語はまた、他に指摘されていない限り、前のリスト内の置換可能な基のすべてを指す。例えば、Ｘがハロゲン、Ｃ１〜３アルキル、またはフェニルであり、ＸがＪＸで必要に応じて置換されている場合、Ｃ１〜３アルキルとフェニルは両方ともＪＸで必要に応じて置換されていてもよい。当業者には明らかであるように、Ｈ、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＯＨ、またはＯＣＦ３などの基は、置換可能な基ではないため、含まれない。同様に当業者に明らかなように、ＮＨ基を含有するヘテロアリールまたは複素環式環は、水素原子を置換基で置き換えることにより必要に応じて置換されていてもよい。置換基の基または構造が「必要に応じて置換されている」と特定または定義されていない場合、置換基の基または構造は非置換である。
【０１１２】
本発明で想定される置換基の組合せは、安定したまたは化学的に可能な化合物の形成をもたらすものが好ましい。「安定した」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示されている目的のうちの１つまたは複数のためのこれらの生成、検出、ならびに好ましくは、これらの回収、精製、および使用を可能にする条件下におかれた場合、実質的に変化しない化合物を指す。一部の実施形態では、安定した化合物または化学的に可能な化合物は、水分または他の化学反応性条件の非存在下で、４０℃またはそれ未満の温度で少なくとも１週間保持された場合、実質的に変化しないものである。
【０１１３】
「アルキル」または「アルキル基」という用語は、本明細書で使用される場合、完全飽和の直鎖（すなわち、非分枝）または分枝、置換または非置換の炭化水素鎖を意味する。特に明記しない限り、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を含有する。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を含有し、さらに他の実施形態では、アルキル基は１〜４個の炭素原子（「Ｃ１〜４アルキル」として表される）を含有する。他の実施形態では、アルキル基は、共有結合またはＣ１〜４アルキル鎖のいずれかを表す「Ｃ０〜４アルキル」として特徴付けられる。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。「アルキレン」という用語は、本明細書で使用される場合、飽和した二価直鎖または分枝鎖炭化水素基を表し、メチレン、エチレン、イソプロピレンなどにより例示される。「アルキリデン」という用語は、本明細書で使用される場合、二価の直鎖アルキル連結基を表す。「アルケニル」という用語は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の炭素−炭素二重結合を含有する一価の直鎖または分枝鎖炭化水素基を表す。「アルキニル」という用語は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を含有する一価の直鎖または分枝鎖炭化水素基を表す。
【０１１４】
「シクロアルキル」（または「炭素環」）という用語は、完全に飽和し、分子の残りに単一結合点を有する単環式Ｃ３〜Ｃ８炭化水素または二環式Ｃ８〜Ｃ１２炭化水素を指し、前記二環式環系中の任意の個々の環は３〜７員を有する。適切なシクロアルキル基として、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルが挙げられる。
【０１１５】
「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、または「複素環式」という用語は、本明細書で使用される場合、系内の少なくとも１つの環が、同じまたは異なる１個または複数のヘテロ原子を含有する単環式、二環式、または三環式環系を指し、これは、完全に飽和しているか、または１つもしくは複数の不飽和の単位を含有するが、芳香族ではなく、分子の残りへの単一結合点を有する。一部の実施形態では、「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、または「複素環式」基は、３〜１４の環員を有し、この中の１つまたは複数の環員は、酸素、硫黄、窒素、またはリンから独立して選択されるヘテロ原子であり、系内の各環は３〜８の環員を含有する。
【０１１６】
複素環式環の例として、これらに限定されないが、以下の単環が挙げられる：２−テトラヒドロフラニル、３−テトラヒドロフラニル、２−テトラヒドロチオフェニル、３−テトラヒドロチオフェニル、２−モルホリノ、３−モルホリノ、４−モルホリノ、２−チオモルホリノ、３−チオモルホリノ、４−チオモルホリノ、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル、３−ピロリジニル、１−テトラヒドロピペラジニル、２−テトラヒドロピペラジニル、３−テトラヒドロピペラジニル、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、１−ピラゾリニル、３−ピラゾリニル、４−ピラゾリニル、５−ピラゾリニル、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−ピペリジニル、２−チアゾリジニル、３−チアゾリジニル、４−チアゾリジニル、１−イミダゾリジニル、２−イミダゾリジニル、４−イミダゾリジニル、５−イミダゾリジニル；ならびに以下の二環：３−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（１−アルキル）−ベンゾイミダゾール−２−オン、インドリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、ベンゾチオラン、ベンゾジチアン、および１，３−ジヒドロ−イミダゾール−２−オン。
【０１１７】
「ヘテロ原子」という用語は、任意の酸化形態の窒素、硫黄、もしくはリンを含む、酸素、硫黄、窒素、もしくはリンのうちの１つもしくは複数；任意の塩基性窒素の四級化形態；または複素環式環の置換可能な窒素、例えばＮ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルの場合）、ＮＨ（ピロリジニルの場合）またはＮＲ＋（Ｎ−置換ピロリジニルの場合）を意味する。
【０１１８】
「不飽和」という用語は、本明細書で使用される場合、部分が１つまたは複数の不飽和の単位を有することを意味する。
【０１１９】
「アルコキシ」または「チオアルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、酸素（「アルコキシ」）または硫黄（「チオアルキル」）原子を介して主要な炭素鎖に結合している、以前に定義されたようなアルキル基を指す。
【０１２０】
「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」、および「ハロアルコキシ」という用語は、場合によっては、１個または複数のハロゲン原子で置換されているアルキル、アルケニル、またはアルコキシを意味する。「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
【０１２１】
単独でまたは「アラルキル」、「アラルコキシ」、もしくは「アリールオキシアルキル」のようなより大きな部分の一部として使用される「アリール」という用語は、合計６〜１４の環員を有する単環式、二環式、または三環式炭素環式環系を指し、前記環系は、分子の残りへの単一結合点を有し、系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、系内の各環は４〜７の環員を含有する。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と交換可能なように使用することができる。アリール環の例として、フェニル、ナフチル、およびアントラセンが挙げられる。
【０１２２】
単独でまたは「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアリールアルコキシ」のようなより大きな部分の一部として使用される「ヘテロアリール」という用語は、合計５〜１４の環員を有する単環式、二環式、および三環式環系を指し、前記環系は分子の残りへの単一結合点を有し、系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、系内の少なくとも１つの環は窒素、酸素、硫黄またはリンから独立して選択される１個または複数のヘテロ原子を含有し、系内の各環は４〜７環員を含有する。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」という用語または「ヘテロ芳香族」という用語と交換可能なように使用することができる。
【０１２３】
ヘテロアリール環のさらなる例として以下の単環が挙げられる：２−フラニル、３−フラニル、Ｎ−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、Ｎ−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、ピリダジニル（例えば、３−ピリダジニル）、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、テトラゾリル（例えば、５−テトラゾリル）、トリアゾリル（例えば、２−トリアゾリルおよび５−トリアゾリル）、２−チエニル、３−チエニル、ピラゾリル（例えば、２−ピラゾリル）、イソチアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、ピラジニル、１，３，５−トリアジニル、および以下の二環：ベンゾイミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、インドリル（例えば、２−インドリル）、プリニル、キノリニル（例えば、２−キノリニル、３−キノリニル、４−キノリニル）、およびイソキノリニル（例えば、１−イソキノリニル、３−イソキノリニル、または４−イソキノリニル）。
【０１２４】
本明細書に記載されているように、多環系内の置換基から１つの環の中心へと描かれている結合（以下に示されている通り）は、多環系内の環のいずれかにおける任意の置換可能な位置での置換基の置換を表す。例えば、構造ａは、構造ｂに示されている位置のいずれかにおける可能な置換を表す。
【化３２】
2021511314.tif 000034
【０１２５】
これはまた、必要に応じた環系に縮合した多環系（点線で表されることになる）にも適用される。例えば、構造ｃにおいて、Ｘは環Ａと環Ｂの両方に対する必要に応じた置換基である。
【化３３】
2021511314.tif 000035
【０１２６】
しかし、多環系内の２つの環が各環の中心から描かれている異なる置換基をそれぞれ有する場合、特に明記しない限り、各置換基は、それが結合している環上での置換のみを表す。例えば、構造ｄにおいて、Ｙは環Ａのみに対する必要に応じた置換基であり、Ｘは環Ｂのみに対する必要に応じた置換基である。
【化３４】
2021511314.tif 000036
【０１２７】
「保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、合成手順の間の有害反応から、例えば、アルコール、アミン、カルボキシル、カルボニルなどの官能基を保護することを意図するような基を表す。一般的に使用されている保護基は、参照により本明細書に組み込まれるＧｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９９）に開示されている。窒素保護基の例として、アシル、アロイル、またはカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルおよびキラル助剤、例えば、保護されたまたは非保護のＤ、ＬまたはＤ，Ｌ−アミノ酸、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニンなど；スルホニル基、例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；カルバメート基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど、アリールアルキル基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど、およびシリル基、例えば、トリメチルシリルなどが挙げられる。好ましいＮ保護基はホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。ヒドロキシル保護基の例として、エーテル、例えば、テトラヒドロピラニル、ｔｅｒｔブチル、ベンジル、アリルなど；シリルエーテル、例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルなど；エステル、例えば、アセチル、トリフルオロアセチルなど；およびカーボネートが挙げられる。またヒドロキシル保護基として、フェノールの保護に適当なものが挙げられる。
【０１２８】
他に示されても、述べられてもいない限り、本明細書で列挙された構造は、すべての異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体配座））形態の構造；例えば、各不斉中心に対するＲおよびＳ立体配置、（Ｚ）および（Ｅ）二重結合異性体、ならびに（Ｚ）および（Ｅ）立体配座異性体を含むことが意図されている。したがって、単一の立体化学異性体ならびに本発明の化合物のエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体配座）混合物は本発明の範囲内である。普通、ハッチング線（
【化３５】
2021511314.tif 000037
）またはボールド体（
【化３６】
2021511314.tif 000038
）の結合を使用して定義された立体化学的中心と共に描かれた化合物は、立体化学的に純粋であるが、絶対立体化学は依然として定義されていない。このような化合物はＲまたはＳ立体配置のいずれかを有することができる。絶対立体配置が決定されている場合、キラル中心（複数可）は、図の中で（Ｒ）または（Ｓ）と標識されている。
【０１２９】
特に述べられていない限り、本発明の化合物のすべての互変異性形態は本発明の範囲内にある。さらに、特に述べられていない限り、本明細書で示されている構造はまた、１個または複数の同位体を豊富に含む原子が存在することのみが異なる化合物を含むことを意図する。例えば、水素が重水素もしくはトリチウムで置き換えられている、または炭素が１３Ｃもしくは１４Ｃを豊富に含む炭素で置き換えられていることを除いて本発明の構造を有する化合物は本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析用ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、または改善された治療プロファイルを有するＤＮＡ−ＰＫ阻害剤として有用である。
本発明の化合物の組成物、製剤、および投与
【０１３０】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されている式のいずれかの化合物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、表１の化合物を含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、表２の化合物を含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、組成物は、追加の治療剤をさらに含む。
【０１３１】
別の実施形態に従い、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容される誘導体と、薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルとを含む組成物を提供する。一実施形態では、本発明の組成物中の化合物の量は、生体試料または患者においてＤＮＡ−ＰＫを適度に阻害するのに有効であるような量である。別の実施形態では、本発明の組成物中の化合物の量は、ＤＮＡ−ＰＫを適度に阻害するのに有効であるような量である。一実施形態では、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者への投与用に製剤化される。さらなる実施形態では、本発明の組成物は、患者への経口投与用に製剤化される。
【０１３２】
「患者」という用語は、本明細書で使用される場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１３３】
「薬剤」という用語は、化学化合物、小分子、化学化合物の混合物、生物学的巨大分子、または生物学的物質から生成された抽出物を表すように本明細書で使用されている。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、「処置」もしくは「処置する」または「和らげる」もしくは「回復させる」は交換可能なように使用される。これらの用語は、これらに限定されないが、治療利益および／または予防的利益を含む、有益なまたは所望の結果を得るための手法を指す。治療利益とは、処置中の１種または複数種の疾患、状態、または症状に対する任意の治療的関連のある改善または作用を意味する。予防的利益のため、組成物は、疾患、状態、または症状が未だ現れていなくとも特定の疾患、状態、もしくは症状を発症するリスクがある対象、または疾患の生理学的症状のうちの１種もしくは複数種を報告している対象に投与され得る。これらの用語はまた、哺乳動物における、例えば、ヒトにおける疾患の処置を意味し、処置は以下を含む：（ａ）疾患を阻害する、すなわち、その発症を止めるもしくは予防する；（ｂ）疾患を軽減する、すなわち、疾患状態の退縮を引き起こす；または（ｃ）疾患を治癒する。
【０１３５】
「有効量」または「治療有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果を生じるのに十分な薬剤の量を指す。治療有効量は、処置を受けている対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与方式などのうちの１つまたは複数に応じて変動し得るが、当業者により容易に決定することができる。この用語はまた、本明細書に記載されているイメージング法のいずれか１つによる、検出用画像が得られるような用量にも適用される。具体的な用量は、選択された特定の薬剤、従うべき投薬レジメン、他の化合物と併用して投与されるかどうか、投与のタイミング、イメージングする組織、およびこれを運ぶ物理的送達システムのうちの１つまたは複数に応じて変動し得る。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「投与する」とは、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を対象に、ゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞または対象に接触させる、注射する、分配する、送達する、または適用することを指す。一部の実施形態では、投与は、ゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞（複数可）に接触させる。一部の実施形態では、投与は、ゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞（複数可）に送達する。一部の実施形態では、投与は、ゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞（複数可）に適用する。一部の実施形態では、投与は、ゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞（複数可）に注射する。投与することは、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生じ得る。ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を細胞（複数可）に投与することは同時にまたは逐次的に行うことができる。
【０１３７】
本明細書で使用される状態または疾患に関連して、「後天性」という用語は、出生時に存在する先天性障害とは対照的に、胎児期後に発症する障害または医学的状態を意味する。先天性障害は後天性障害に先行し得る。
【０１３８】
「先天性」または「遺伝性」の状態または疾患という用語は、出生時に対象に存在する対象のゲノムに発見された遺伝的障害である。「ゲノム」とは、本明細書で使用される場合、核および細胞形質内のすべての遺伝物質を含み、ミトコンドリアゲノムおよびリボソームゲノムをさらに含む。先天性または遺伝性は対象の生涯のいつでも、例えば、出生時または成人期に発現し得る。
【０１３９】
「遺伝的障害」または「遺伝的疾患」という用語は、疾患を引き起す、または引き起こし得る、対象のゲノムにおける遺伝性または後天性の突然変異を含む。
【０１４０】
「多型」または「遺伝的変異」という用語は、遺伝子座における遺伝子の異なる形態を意味する。
【０１４１】
ある特定の本発明の化合物は、処置のため遊離形態で、または適切な場合には、その薬学的に許容される誘導体で存在することができることもまた認識されたい。本発明によると、薬学的に許容される誘導体として、これらに限定されないが、薬学的に許容されるプロドラッグ、塩、エステル、このようなエステルの塩、または任意の他の付加体もしくは誘導体が挙げられ、これらは、必要性のある患者への投与の際、直接的または間接的に、本明細書で別途記載されているような化合物、またはその代謝物もしくは残基を提供することが可能である。本明細書で使用される場合、「阻害活性代謝物またはその残基」という用語は、代謝物またはその残基もまたＤＮＡ−ＰＫの阻害剤であることを意味する。
【０１４２】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などが生じることなく、ヒトおよび下等動物の組織に接触させて使用するのに適切な塩を指す。
【０１４３】
薬学的に許容される塩は当技術分野で周知である。例えば、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅらは、参照により本明細書に組み込まれるＪ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ６６，  １−１９，  １９７７において薬学的に許容される塩について詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、適切な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から誘導されるものを含む。薬学的に許容される、非毒性の酸付加塩の例は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸を用いて、または有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸を用いて、あるいは、当技術分野で使用されている他の方法、例えば、イオン交換などを使用することにより形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩として、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。適当な塩基から誘導される塩として、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。本発明はまた、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定している。このような四級化により、水溶性もしくは油溶性または分散性の生成物を得ることもできる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩として、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらに薬学的に許容される塩として、適当な場合、対イオン、例えば、ハロゲン化物イオン、水酸化物イオン、カルボン酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イオン、Ｃ１〜８スルホン酸イオンおよびアリールスルホン酸イオンなどが、非毒性アンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン、およびアミンカチオンと形成する塩が挙げられる。
【０１４４】
上に記載されているように、薬学的に許容される本発明の組成物は薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルをさらに含み、これらは、本明細書で使用される場合、所望の特定の剤形に適合した任意のおよびすべての溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散液もしくは懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む。それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれている、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ２００５，  ｅｄ．  Ｄ．Ｂ．  Ｔｒｏｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａおよびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ｅｄｓ，  Ｊ．  Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｃ．  Ｂｏｙｌａｎ，  １９８８−１９９９，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて、薬学的に許容される組成物の製剤化に使用されている様々な担体およびその調製のための公知の技術が開示されている。例えば、任意の有害生物学的な作用を生成すること、またはさもなければ薬学的に許容される組成物の任意の他の構成成分（複数可）と有害な方式で相互作用することにより、任意の従来の担体媒体が本発明の化合物と不適合性である場合を除いて、その使用は本発明の範囲内であると考えられる。
【０１４５】
薬学的に許容される担体として機能することができる物質の一部の例として、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、またはソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂、糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末状トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、ココアバターおよび坐剤ワックス；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油；ベニバナ油；ゴマ油；オリーブ油；トウモロコシ油およびダイズ油；グリコール、例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンを含まない水；等張生理食塩水；リンガー液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝液、ならびに他の非毒性相容性滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤および抗酸化剤が挙げられ、これらもまた処方者の判断に従い、組成物中に存在することができる。
【０１４６】
本発明の組成物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所的、直腸、経鼻的、口腔内頬側、経膣または埋め込みリザーバーを介して投与することができる。「非経口」という用語は、本明細書で使用される場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、眼内、肝内、病巣内、硬膜外、脊髄内、および脳内の注射または点滴技術を含む。好ましくは、組成物は経口的に、腹腔内にまたは静脈内に投与される。本発明の組成物の滅菌注射用形態は水性または油性懸濁液であってよい。これらの懸濁液は、当技術分野で公知の技術に従い適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して製剤化することができる。滅菌注射用調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中溶液としての非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の注射可能な滅菌溶液または懸濁液であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中でも利用することができるのは、水、リンガー液および等張性塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌の不揮発性油は溶媒または懸濁媒として慣例的に利用されている。
【０１４７】
この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激の不揮発性油を利用することができる。脂肪酸、例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、天然の薬学的に許容される油、例えば、オリーブ油またはヒマシ油、特にこれらのポリオキシエチル化バージョンで注射剤の調製に有用である。これら油の溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えば、カルボキシメチルセルロースまたは乳剤および懸濁剤を含む薬学的に許容される剤形の製剤に一般的に使用されている類似の分散剤を含有することができる。他の一般的に使用されている界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓ、および薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造に一般的に使用されている他の乳化剤またはバイオアベイラビリティー促進剤もまた製剤目的のため使用することができる。
【０１４８】
薬学的に許容される本発明の組成物は、これらに限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含む任意の経口的に許容される剤形で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用されている担体はラクトースおよびトウモロコシデンプンを含む。滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムも通常加える。カプセル剤形態での経口投与に対しては、有用な希釈剤はラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンを含む。水性懸濁剤が経口使用のために必要とされる場合、活性成分は乳化剤および懸濁剤と合わせる。所望する場合、ある特定の甘味剤、香味剤または着色剤を加えてもよい。
【０１４９】
代わりに、薬学的に許容される本発明の組成物は直腸投与用に坐剤の形態で投与することもできる。これらは、薬剤を、室温では固体であるが、直腸の温度では液体であり、したがって直腸内で溶融して薬物を放出する適切な無刺激性賦形剤と混合することにより調製することができる。このような物質として、ココアバター、蜜ろうおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１５０】
薬学的に許容される本発明の組成物はまた、特に処置の標的が、眼、皮膚、または下部腸管の疾患を含めて、局所的塗布により容易に到達可能な領域または臓器を含む場合、局所的に投与することもできる。適切な局所的製剤は、これらの領域または臓器のそれぞれに対して容易に調製される。
【０１５１】
下部腸管に対する局所的塗布は、直腸の坐剤製剤（上記を参照されたい）または適切な浣腸製剤で実行することができる。局所的経皮パッチもまた使用することができる。
【０１５２】
局所的塗布のため、薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の担体に懸濁または溶解した活性構成成分を含有する適切な軟膏剤に製剤化することができる。本発明の化合物の局所的投与のための担体として、これらに限定されないが、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水が挙げられる。代わりに、薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解した活性構成成分を含有する適切なローション剤またはクリーム剤に製剤化することもできる。適切な担体として、これらに限定されないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。
【０１５３】
眼用使用のため、薬学的に許容される組成物は、例えば、等張の、ｐＨ調整された滅菌生理食塩水または他の水溶液中の微粉化した懸濁剤として、または、好ましくは、等張の、ｐＨ調整された滅菌生理食塩水または他の水溶液中の液剤として、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤と一緒に、またはこれら無しで製剤化することができる。代わりに、眼用使用のため、薬学的に許容される組成物は、ワセリンなどの軟膏剤に製剤化することができる。薬学的に許容される本発明の組成物はまた、経鼻エアゾール剤または吸入により投与することもできる。このような組成物は医薬製剤の当技術分野で周知の技術に従い調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティーを増強する吸収プロモーター、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を利用して、生理食塩水中の液剤として調製することもできる。
【０１５４】
最も好ましくは、薬学的に許容される本発明の組成物は経口投与用に製剤化される。
【０１５５】
経口投与用の液体剤形として、これらに限定されないが、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用されている不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実、ラッカセイ、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールならびにソルビタンの脂肪酸エステルおよびこれらの混合物などを含有し得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤、ならびに芳香剤を含むこともできる。
【０１５６】
注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性または油性の懸濁剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して公知の技術に従い製剤化することができる。滅菌注射用調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中溶液としての、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の注射可能な滅菌溶液、懸濁剤または乳剤であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中でも、水、リンガー液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液を利用することができる。加えて、滅菌の、不揮発性油が溶媒または懸濁媒として慣例的に利用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激の不揮発性油を利用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用される。
【０１５７】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通してろ過することにより、または使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより滅菌することができる。
【０１５８】
本発明の化合物の作用を長引かせるために、多くの場合皮下または筋肉注射からの化合物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、難水溶性の結晶性または非晶質物質の液体懸濁剤の使用により達成することができる。よって、化合物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、ひいては、結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。代わりに、化合物を油ビヒクル中に溶解または懸濁化させることは、非経口的に投与される化合物形態の遅延吸収を遂行する。注射用デポー剤形態は、ポリ乳酸−ポリグリコライドなどの生分解性ポリマーの中に化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより生成される。化合物のポリマーに対する比および特定の利用するポリマーの性質に応じて、化合物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としてポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポー剤注射用製剤はまた、化合物を体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルジョンに封入することにより調製することもできる。
【０１５９】
直腸または経膣投与用の組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、周辺温度では固体であるが、体温では液体であり、したがって直腸または膣腔内で溶融して活性化合物を放出する、適切な無刺激性賦形剤または担体、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤ワックスと混合することにより調製できる坐剤である。
【０１６０】
経口投与用の固体剤形として、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および粒剤が挙げられる。このような固体剤形において、活性化合物は、少なくとも１種の不活性な、薬学的に許容される賦形剤もしくは担体、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムならびに／またはａ）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア、ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、ｈ）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイト粘土、ならびにｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形はまた緩衝剤を含んでもよい。
【０１６１】
類似のタイプの固体組成物もまた、賦形剤、例えば、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用する軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として利用することができる。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および粒剤の固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶コーティングおよび製剤処方技術で周知の他のコーティングを用いて調製することができる。これらは、不透明化剤を必要に応じて含有することができ、これらが活性成分（複数可）のみを、または活性成分（複数可）を優先的に、腸管のある特定の部分に、必要に応じて、遅延した方式で放出する組成物を有することもできる。使用することができる包埋組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。類似のタイプの固体組成物もまた、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレン（ｐｏｌｅｔｈｙｌｅｎｅ）グリコールなどの賦形剤を使用する軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤において充填剤として利用することもできる。
【０１６２】
活性化合物はまた、上述のような１つまたは複数の賦形剤を用いたマイクロカプセル化形態であってもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および粒剤の固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび製剤処方技術で周知の他のコーティングを用いて調製することができる。このような固体剤形において、活性化合物は、少なくとも１種の不活性希釈剤、例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプンと混和してもよい。このような剤形はまた、通常の慣行通り、不活性希釈剤以外の追加物質、例えば、錠剤化滑沢剤および他の錠剤化助剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースを含んでもよい。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形はまた緩衝剤を含んでもよい。これらは、不透明化剤を必要に応じて含有してもよく、またこれらが活性成分（複数可）のみを、または活性成分（複数可）を優先的に、腸管のある特定の部分に、必要に応じて、遅延した方式で放出する組成物を有することもできる。使用することができる包埋組成物の例として、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。
【０１６３】
本発明の化合物の局所的または経皮的投与用剤形として、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤またはパッチが挙げられる。活性構成成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体および必要に応じて任意の必要とされる保存剤または緩衝剤と混和する。眼用製剤、点耳剤、および点眼剤もまた本発明の範囲内であると想定されている。さらに、本発明は経皮パッチの使用を想定しているが、これにより化合物の身体へのコントロール送達を提供するという利点が加わる。このような剤形は、適正な媒体中で化合物を溶解または分配することにより作製することができる。吸収促進剤はまた、皮膚全域での化合物の流動を増加させるために使用することができる。速度は、速度制御膜を提供するか、またはポリマーマトリックスまたはゲル内で化合物を分散させるかのいずれかにより制御することができる。
【０１６４】
本発明の化合物は、投与を簡単にし、用量を均一にするために単位剤形で製剤化されることが好ましい。「単位剤形」という表現は、本明細書で使用される場合、処置すべき患者に対して適当な、物理的に別個の単位の薬剤を指す。しかし、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で担当医師により決定されることになることを理解されたい。任意の特定の患者または生物に対する具体的な有効用量レベルは、処置を受けている障害および障害の重症度；利用される特定の化合物の活性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食生活；利用される特定の化合物の投与の時間、投与経路、および排出速度；処置期間；利用される特定の化合物と併用してまたは同時に使用される薬物、および医術で周知の類似した要因を含む様々な要因に依存することになる。
【０１６５】
担体物質と合わせて単一剤形で組成物を生成し得る本発明の化合物の量は、処置される宿主、特定の投与モードに応じて変動することになる。好ましくは、組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間の用量の阻害剤がこれら組成物を受ける患者に投与され得るように製剤化されるべきである。
【０１６６】
処置すべき特定の増殖状態またはがんに応じて、その状態を処置するまたは予防するために通常投与される追加の治療剤もまた本発明の組成物内に存在し得る。本明細書で使用される場合、特定の増殖状態またはがんを処置または予防するために通常投与される追加の治療剤は、「処置を受けている疾患、または状態に対して適当である」として公知である。追加の治療剤の例は以下に提供されている。
【０１６７】
本発明の組成物中に存在する追加の治療剤の量は、治療剤を唯一の活性剤として含む組成物中で通常投与される量以下となる。好ましくは、本発明で開示された組成物中の追加の治療剤の量は、薬剤を唯一の治療活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲となる。
本発明の化合物および組成物の使用
【０１６８】
一実施形態では、本発明は、細胞を、ＤＮＡ傷害を誘発する治療剤または疾患状態に対して感受性化させる方法であって、細胞を、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）、または薬学的に許容されるその塩の１つまたは複数のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤と接触させるステップを含む、方法を提供する。特定の一実施形態では、本発明の方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、および（ＩＩＩ−Ｂ−２）、または薬学的に許容されるその塩の１つまたは複数のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を用いる。
【０１６９】
本発明はさらに、がんを処置するための治療レジメンを増強する方法であって、それを必要とする個体に、有効量の（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）、または薬学的に許容されるその塩のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与するステップを含む、方法を提供する。特定の一実施形態では、本発明の方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、および（ＩＩＩ−Ｂ−２）、または薬学的に許容されるその塩の１つまたは複数のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を用いる。一態様では、がんを処置するための治療レジメンは、放射線療法を含む。
【０１７０】
本発明の化合物は、放射線療法がこのような処置の治療利益を増強するために適応される場合において有用である。加えて、放射線療法は頻繁にがんの処置において、手術に対するアジュバントとして適応されている。アジュバント設定において、放射線療法のゴールは、原発性腫瘍が制御される場合、再発の危険性を減少させ、無病生存を増強することである。アジュバント放射線療法は、以下に記載されている結腸、直腸、肺、胃食道、および乳房がんを含むいくつかの疾患に適応されている。
【０１７１】
本発明はまた、がんの処置のための治療レジメンに本発明の化合物と共に別の抗がん化学療法剤を含むことによって、放射線療法を伴ってまたは伴わずに実施することができる。本発明のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤化合物と、このような他の薬剤との組合せは化学療法のプロトコールを増強することができる。例えば、本発明の阻害剤化合物は、ＤＮＡ鎖の破損を引き起こすことが公知の薬剤であるエトポシドまたはブレオマイシンと共に投与することができる。
【０１７２】
本発明はさらに、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、および（ＩＩＩ−Ｂ−２）、または薬学的に許容されるその塩のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤などの本発明の化合物を利用する、腫瘍細胞の放射線感受性化に関する。好ましい化合物は、本発明の医薬組成物について記載される通りの化合物である。細胞を「放射線感受性化する」ことができる化合物は、本明細書で使用される場合、治療有効量で動物に投与されて、電磁放射線に対する細胞の感受性を増加させる、および／または電磁放射線（例えば、Ｘ線）で処置可能な疾患の処置を促進する分子、好ましくは低分子量分子と定義される。電磁放射線で処置可能な疾患としては、新生物疾患、良性および悪性腫瘍、ならびにがん性細胞が挙げられる。
【０１７３】
本発明はまた、動物に有効量のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤、例えば本発明の化合物などを投与することを含む、動物においてがんを処置する方法を提供する。本発明はさらに、生物システムにおいて細胞増殖、侵襲、および転移のプロセスを含む、がん細胞成長を阻害する方法を対象とする。その方法は、本発明の化合物の、がん細胞成長の阻害剤としての使用を含む。好ましくは、その方法を利用して、哺乳動物などの生きている動物において、がんの細胞成長、侵襲、転移、または腫瘍発症率を阻害するまたは減少させる。本発明の化合物は、がんの処置またはがん細胞成長の阻害において、単独で、あるいはＩＲまたは１種もしくは複数種の化学療法剤の使用と併用して使用することができる。本発明の方法はまた、アッセイシステム、例えば、がん細胞成長およびその特性をアッセイすること、ならびにがん細胞成長に影響を与える化合物を同定することにおける使用に容易に適応可能である。
【０１７４】
腫瘍または新生物は組織細胞の成長を含み、細胞の増殖は無制御であり、進行性である。一部のこのような成長は良性であるが、他は「悪性」と呼ばれ、生物の死亡をもたらし得る。悪性新生物または「がん」は、侵攻性細胞の増殖を示すことに加えて、これらは周辺組織に侵入し、転移することができるという点で良性の成長から区別される。さらに、悪性新生物は、相互に対しておよびこれらの周辺組織と比べて、これらがより多くの分化およびこれらの組織の損失（より多くの「脱分化」）を示すことにより特徴付けられる。この特性はまた「退生」とも呼ばれる。
【０１７５】
本発明で処置可能な新生物はまた、固形腫瘍、すなわち、癌腫および肉腫を含む。癌腫は、周辺組織に浸潤し（侵入する）、転移を生じる上皮細胞から誘導される悪性新生物を含む。腺癌は、腺組織から、または認識可能な腺状構造を形成する組織から誘導される癌腫である。別の広範なカテゴリーのがんとして肉腫が挙げられる、肉腫は、その細胞が原線維または胚性結合組織などの均一な物質内に埋め込まれる腫瘍である。本発明はまた、白血病、リンパ腫、および通常腫瘤として存在しないが、血管系またはリンパ網内系組織系内で分配される他のがんを含めた、骨髄系またはリンパ系のがんの処置も可能にすることができる。
【０１７６】
ＤＮＡ−ＰＫ活性は、例えば、成人および小児オンコロジー、固形腫瘍／悪性腫瘍の成長、粘液性および円形細胞癌、局所的に進行した腫瘍、転移性がん、ユーイング肉腫を含むヒト軟部組織肉腫、リンパ性転移を含むがん転移、扁平上皮癌、特に頭頸部のもの、食道扁平上皮癌、口腔癌、多発性骨髄腫を含む血液細胞の悪性腫瘍、急性リンパ球性白血病、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、および有毛細胞白血病を含む白血病、滲出性リンパ腫（体腔ベースのリンパ腫）、小細胞肺癌を含む胸腺リンパ腫肺がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎皮質のがん、ＡＣＴＨ産生腫瘍、非小細胞がん、小細胞癌および腺管癌を含む乳がん、胃がん、結腸がん、結腸直腸がんを含む、消化管がん、結腸直腸新生物に関連するポリープ、膵臓がん、肝臓がん、原発性表在性膀胱腫瘍、侵襲性膀胱移行上皮癌、および筋層侵襲性膀胱がん、前立腺がんを含む膀胱がんを含む泌尿器がん、卵巣癌、原発性腹膜上皮新生物、子宮頸癌、子宮内膜がん、膣がん、外陰部のがん、子宮がんおよび卵胞内の固形腫瘍を含む女性生殖器官の悪性腫瘍、精巣がんおよび陰茎がんを含む男性生殖器官の悪性腫瘍、腎臓細胞癌を含む腎臓がん、内因性脳腫瘍、神経芽細胞腫、星状膠細胞の脳腫瘍を含む脳がん、神経膠腫、中枢神経系における転移性腫瘍細胞の侵入、骨腫および骨肉腫を含む骨がん、悪性黒色腫、ヒト皮膚ケラチノサイトの腫瘍進行を含む皮膚がん、扁平上皮細胞がん、甲状腺がん、網膜芽腫、神経芽細胞腫、腹水、悪性胸膜滲出、中皮腫、ウィルムス腫瘍、胆嚢がん、絨毛性腫瘍、血管外皮細胞腫、およびカポジ肉腫における様々な形態のがんに関連し得る。これらおよび他の形態のがんの処置を増強する方法もまた本発明に包含される。
【０１７７】
本発明は、生体試料を本発明の化合物または組成物と接触させることを含む、生体試料においてＤＮＡ−ＰＫ活性を阻害するための方法を提供する。「生体試料」という用語は、本明細書で使用される場合、生命体の外の試料を意味し、制限なしで、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得た、生検が行われる物質またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞、精液、涙、または他の体液またはその抽出物を含む。生体試料におけるキナーゼ活性、特にＤＮＡ−ＰＫ活性の阻害は、当業者に公知の様々な目的に対して有用である。このような目的の例として、これらに限定されないが、生物学的検体の貯蔵および生物学的アッセイが挙げられる。一実施形態では、生体試料においてＤＮＡ−ＰＫ活性を阻害する方法は、非治療的方法に限定される。
【０１７８】
一部の実施形態では、本開示は、例えば、突然変異を補正することにより標的ゲノムを編集するための方法、組成物およびキットを提供する。このような方法、組成物およびキットは、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の使用によりゲノム編集効率を増加させることができる。
【０１７９】
ゲノム編集システムは、例えば、ゲノム内の所望の遺伝子座（または標的ゲノム領域）のＤＳＢ（複数可）においてＤＮＡ切断（複数可）を刺激または誘発することができる。ＤＮＡ切断の生成は、細胞酵素が、エラーが生じやすいＮＨＥＪ経路またはエラーのないＨＤＲ経路のいずれかを介して、切断部位を修復することを促す。ＮＨＥＪでは、ＤＮＡ傷害は、Ｋｕ７０／８０ヘテロ二量体およびＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＤＮＡ−ＰＫ）酵素が関与する一連の酵素的プロセスにおいてＤＮＡ切断の２つの末端を融合することにより修復される。修復機序は、２つのＤＮＡ末端のテザリングおよびアライメント、切除、伸長およびライゲーションを含み（Ｒｏｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ；  Ｄｅｘｈｅｉｍｅｒ  Ｔ．  ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．  Ｉｎ：  Ｍａｔｈｅｗｓ  Ｌ，  Ｃａｂａｒｃａｓ  Ｓ，  Ｈｕｒｔ  Ｅ，  ｅｄｉｔｏｒｓ．  ＤＮＡ  ｒｅｐａｉｒ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．  Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ：  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；  ２０１３．  ｐ．１９−３２．）、これは、切断部位に小さな挿入または欠失突然変異（インデル）を形成する。遺伝子のコード配列に導入されたインデルは、未成熟停止コドンまたはフレーム−シフト突然変異のいずれかを引き起こす可能性があり、これが非機能性の、末端切断型タンパク質の産生をもたらす。ＨＤＲ経路の機序はあまり理解されておらず、これには、塩基挿入または遺伝子置換えのためのドナー修復鋳型による鎖侵入を刺激するＲａｄ５１などの異なるセットの修復タンパク質が関与している。したがって、ＨＤＲは、外来性ＤＮＡ鋳型を導入し、ゲノム内で所望のＤＮＡ編集結果を得ることを可能にし、翻訳疾患モデリングおよび遺伝子機能を回復するための治療的ゲノム編集のための強力な戦略であり得る。
【０１８０】
２つのＤＮＡ修復経路のうち、ＮＨＥＪははるかに高い頻度で生じ、ニューロンにおいてさえ、７０％より高い効率を達成することができることが報告されている（Ｓｗｉｅｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｂｒａｉｎ  ｕｓｉｎｇ  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９”，  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１５  Ｊａｎ；  ３３（１）：１０２−６２０１４）。しかし、ＨＤＲによる遺伝子補正は、ＤＮＡ複製が完了し、姉妹染色分体が修復鋳型として機能するために利用可能である場合、非常に低い頻度で、ＳおよびＧ２フェーズの間に生じる（Ｈｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ．  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４４：１１３−１３９，  ２０１０）。ＮＨＥＪは細胞周期を通して起き、ＳおよびＧ２フェーズの間にはＨＤＲと競合しＨＤＲよりも好かれるため、ＨＤＲ経路を介した標的化された挿入には難題が依然として残されており、継続した研究の焦点となっている。
【０１８１】
ＤＮＡタンパク質−キナーゼ（ＤＮＡ−ＰＫ）は、様々なＤＮＡ修復プロセスにおいて役割を果たす。ＤＮＡ−ＰＫは、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路の活性化を介してＤＮＡ二本鎖切断修復に関与する。ＮＨＥＪは、３つのステップ：ＤＳＢの認識、ライゲーション不可能な末端または末端における他の形態の損傷を除去するためのＤＮＡプロセシング、最後にＤＮＡ末端のライゲーションを介して進行すると考えられる。ＤＳＢの認識は、ちぎれたＤＮＡ末端へのＫｕヘテロ二量体の結合、これに続く、ＤＳＢの、隣接する側へのＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＤＮＡ−ＰＫｃｓ）の２個の分子の動員により行われる；これは、追加のプロセシング酵素が動員されるまで切断された末端を保護する働きをする。最近のデータは、ＤＮＡ−ＰＫｃｓがプロセシング酵素、Ａｒｔｅｍｉｓ、ならびにそれ自体をリン酸化して、追加のプロセシングのためにＤＮＡ末端の準備を整えるという仮説を支持している。場合によってはライゲーションステップ前に新規末端を合成するためにＤＮＡポリメラーゼが必要とされ得る。ＤＮＡ−ＰＫｃｓの自己リン酸化は、中央のＤＮＡ結合空洞を開き、ＤＮＡからＤＮＡ−ＰＫｃｓを放出し、ＤＮＡ末端の最終的な再ライゲーションを促進する立体配座変化を誘発すると考えられている。
【０１８２】
一部の実施形態では、本開示は、細胞内のＣＲＩＳＰＲベースのＨＤＲによる修復を含む、ゲノム編集システムにおける、遺伝子編集を増強するための、特にＨＤＲ経路を介したＤＮＡ切断（複数可）の修復効率、またはＮＨＥＪ経路を介したＤＮＡ切断（複数可）の修復の阻害もしくは抑制の効率を増加させるための方法、組成物、およびキットを提供する。特定の理論に拘束されるわけではないが、細胞（複数可）に投与されるゲノム編集システムは、標的遺伝子の核酸（複数可）と相互作用し、ＤＮＡ切断をもたらすまたは引き起こす；このようなＤＮＡ切断は、いくつかの修復経路、例えば、ＨＤＲにより修復され、細胞（複数可）に投与されたＤＮＡ−ＰＫ阻害剤はＮＨＥＪ修復経路を阻害、遮断、または抑制し、ＨＤＲによるＤＮＡ修復経路の頻度または効率を増加または促進することができると考えられている。
【０１８３】
ゲノム編集システムと標的遺伝子の核酸（複数可）との間の相互作用は、ゲノム編集システムの少なくとも一部の、標的遺伝子の核酸（複数可）とのハイブリッド形成、またはゲノム編集システムによる標的遺伝子の核酸（複数可）の他の任意の認識であり得る。一部の実施形態では、このような相互作用は、タンパク質−ＤＮＡ相互作用または塩基対間のハイブリッド形成である。
【０１８４】
一部の実施形態では、本開示は、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することによる、細胞（複数可）内に１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法を提供する。編集は同時にまたは逐次的に行うことができる。１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、任意の種類の遺伝子操作または細胞ゲノムの操作を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、細胞（複数可）内でのゲノム領域の挿入、欠失、または置換えを含むことができる。ゲノム領域は、細胞（複数可）内の遺伝物質、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドを含む。細胞（複数可）内のゲノム領域はまた、細胞（複数可）内に含有されるミトコンドリアまたは葉緑体のゲノムも含む。
【０１８５】
一部の実施形態では、挿入、欠失または置換えは、コーディングまたは非コーディングゲノム領域内、イントロンもしくはエクソン領域内、またはこれらの重複もしくは非重複セグメントを含むこれらの任意の組合せのいずれかに存在し得る。本明細書で使用される場合、「非コーディング領域」とは、アミノ酸配列をコードしないゲノム領域を指す。例えば、非コーディング領域はイントロンを含む。コーディング領域とはアミノ酸配列をコードするゲノム領域を指す。例えば、コーディング領域はエクソンを含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、細胞（複数可）のゲノム内の任意の１つまたは複数の標的領域の中で生じ得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、例えば、エクソン、イントロン、転写開始部位、プロモーター領域、エンハンサー領域、サイレンサー領域、インスレーター領域、抗リプレッサー、翻訳後調節エレメント、ポリアデニル化シグナル（例えば最小のポリＡ）、保存領域、転写因子結合部位、またはこれらの任意の組合せにおいて生じ得る。
【０１８７】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを細胞（複数可）に投与すると、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、標的化されたゲノム編集効率の増加が結果として生じる。一部の実施形態では、編集効率の増加は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または細胞（複数可）にゲノム編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍である。ゲノム編集効率は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、標的化されたポリヌクレオチド組込みの頻度を確定する任意の方法により、または標的化された突然変異導入の頻度を測定することにより測定することができる。標的化されたポリヌクレオチド組込みはまた、ゲノム、染色体または細胞クロマチン中の目的の領域内で配列の変更または置換えをもたらすこともできる。標的化されたポリヌクレオチド組込みは、これらに限定されないが、点突然変異（すなわち、単一の塩基対の異なる塩基対への変換）、置換（すなわち、複数の塩基対の、同一の長さの異なる配列への変換）、１つもしくは複数の塩基対の挿入、１つもしくは複数の塩基対の欠失および上述の配列変更の任意の組合せを含む標的化された突然変異をもたらすことができる。
【０１８８】
一部の実施形態では、細胞（複数可）内の１つもしくは複数の標的ゲノム領域を編集する方法は、細胞（複数可）に、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することを含む。一部の実施形態では、細胞（複数可）は、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズに同期化される。ＳまたはＧ２細胞周期フェーズにおける細胞（複数可）の同期化は、当技術分野で公知の任意の方法により達成することができる。非限定的例として、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズに細胞（複数可）を同期化させるために使用することができる薬剤として、アフィジコリン、ヒドロキシ尿素（ｄｙｒｏｘｙｕｒｅａ）、ロバスタチン、ミモシン、ノコダゾール、チミジン、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  ”Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｉｍｉｎｇ  ｏｆ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｅｌｉｆｅ．  ２０１４  Ｄｅｃ  １５；３を参照されたい）。一部の実施形態では、細胞の同期化のための薬剤は、遺伝子編集プロセス中の任意の時点で投与することができる。一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよび／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与する前に、投与している間、または投与した後に、細胞（複数可）を細胞周期のＳまたはＧ２フェーズに同期化させることができる。
【０１８９】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することにより、細胞（複数可）内で１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法は、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞（複数可）に投与されなかった条件と比較して、または遺伝子編集システムのみが細胞（複数可）に接触させられるもしくは投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が接触させられても、投与されてもいない条件と比較して、細胞生存期間の増加を結果として生じる。
【０１９０】
一部の実施形態では、ＨＤＲ経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断を修復する方法が本明細書に提供されている。細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与すると、ゲノムの標的化された領域のＤＮＡ切断が結果として生じ、続いてＤＮＡ切断が少なくとも部分的に、ＨＤＲ経路により修復される。これらの方法は、１つまたは複数の標的ゲノム領域内で、ＨＤＲ媒介性修復（例えばＨＤＲ経路）の量の増加をもたらし、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、より高い効率でのＨＤＲ媒介性修復が結果として生じる。一部の実施形態では、ＤＮＡ切断のＨＤＲ経路媒介性修復の効率は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または細胞（複数可）にゲノム編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍である。ＨＤＲ経路媒介性修復の効率は、当技術分野で公知の任意の方法により、例えば、標的化されたポリヌクレオチド組込みの頻度を確定することにより、または標的化された突然変異導入の頻度を測定することにより、測定することができる。
【０１９１】
一部の実施形態では、本明細書の方法は、ＨＤＲ経路の効率を増加させることによるＤＮＡ切断の修復を提供する。
【０１９２】
ＨＤＲ経路は、「標準的」または「代替」であり得る。「ＨＤＲ」（相同組換え修復）とは、例えば、細胞（複数可）内の二本鎖切断またはＤＮＡニックの修復中に起きるＤＮＡ修復の特化した形態を指す。二本鎖切断のＨＤＲは一般的にはヌクレオチド配列相同性に基づき、「標的」分子（例えば、二本鎖切断を受けたもの）の鋳型修復に「ドナー」分子を使用し、ドナーから標的への遺伝子情報の転移をもたらし得る。二本鎖切断の標準的ＨＤＲは、ＢＲＣＡ２およびＲＡＤ５１に一般的に基づき、通常ｄｓＤＮＡドナー分子を利用する。非標準的、または「代替」のＨＤＲは、ＢＲＣＡ２、ＲＡＤ５１、および／または機能的関連遺伝子により抑制されるＨＤＲ機序である。代替のＨＤＲは、ｓｓＤＮＡまたはニックの入ったｄｓＤＮＡドナー分子を使用することもできる。例えば、ＷＯ２０１４１７２４５８を参照されたい。
【０１９３】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することによる、ＨＤＲ経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断を修復する方法は、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または遺伝子編集システムのみが細胞（複数可）に投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、細胞生存期間の増加をもたらす。
【０１９４】
一部の実施形態では、細胞（複数可）内の１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復を阻害または抑制する方法が本明細書に提供されている。一部の実施形態では、ＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復の阻害または抑制は、ＮＨＥＪ経路を阻害または抑制することにより実施される。ＮＨＥＪ経路は、古典的（「標準的」）または代替のＮＨＥＪ経路（ａｌｔ−ＮＨＥＪ、またはミクロ相同媒介末端結合（ＭＭＥＪ））のいずれかであり得る。ＮＨＥＪ経路またはａｌｔ−ＮＨＥＪ経路は、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することにより、細胞（複数可）内で抑制される。
【０１９５】
古典的なＮＨＥＪ修復経路は、二本鎖切断の末端が大規模な相同性なしにライゲーションされているＤＮＡ二本鎖切断の修復経路である。古典的ＮＨＥＪ修復は、ＫＵ７０／８０ヘテロ二量体（ＫＵ）、ＸＲＣＣ４、リガーゼＩＶ、およびＤＮＡタンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＤＮＡ−ＰＫｃｓ）を含むいくつかの因子を使用する。ａｌｔ−ＮＨＥＪは、二本鎖切断を修復するための別の経路である。ａｌｔ−ＮＨＥＪは、切断末端を結合する前の切断末端のアライメント中に５〜２５塩基対のミクロ相同配列を使用する。Ａｌｔ−ＮＨＥＪは、ＫＵ７０／８０ヘテロ二量体（ＫＵ）、ＸＲＣＣ４、リガーゼＩＶ、ＤＮＡタンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＤＮＡ−ＰＫｃｓ）、ＲＡＤ５２、およびＥＲＣＣ１とは主として無関係である。Ｂｅｎｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ−ＮＨＥＪ  ｉｓ  ａ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃａｌｌｙ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  Ｂｒｅａｋ  Ｒｅｐａｉｒ”，  ＰＬＯＳ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  Ｊｕｎｅ  ２７，  ２００８を参照されたい。
【０１９６】
一部の実施形態では、細胞（複数可）へのゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与を介してＮＨＥＪ経路を阻害または抑制することにより、細胞（複数可）内の１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＮＨＥＪ経路を介したＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復を阻害または抑制する方法は、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を受けていない細胞（複数可）と比較して、または細胞（複数可）がゲノム編集システムを受け、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を受けていない条件と比較して、ＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復の阻害または抑制の効率の増加をもたらす。一部の実施形態では、細胞（複数可）をＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムに接触させることによる、ＤＮＡ切断のＮＨＥＪ経路を介した修復の阻害または抑制の効率の増加は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、またはゲノム編集システムのみが細胞（複数可）に投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍である。ＤＮＡ切断のＮＨＥＪ経路を介した修復の阻害または抑制の効率は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、標的化されたポリヌクレオチド組込みの頻度を確定することにより、または標的化された突然変異導入の頻度を測定することにより、測定することができる。
【０１９７】
一部の実施形態では、細胞（複数可）へのゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与を介してＮＨＥＪ経路を阻害または抑制することにより、細胞（複数可）内の１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復を阻害または抑制する方法は、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞（複数可）に接触させられても、投与されてもいなかった条件と比較して、または遺伝子編集システムのみが細胞（複数可）に接触させられ、または投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が接触させられても、投与されてもいない条件と比較して、細胞生存期間の増加をもたらす。
【０１９８】
ＤＮＡ切断は、二本鎖切断（ＤＳＢ）または２つの一本鎖切断（例えば、２つのＤＮＡニック）であり得る。ＤＳＢは、平滑末端であってもよいし、または５’もしくは３’のいずれかがオーバーハングしていてもよく、鎖がそれぞれ大きく間をあけて切断された場合、このオーバーハングは継続して互いにアニーリングし、１つのＤＳＢではなく２つのニックとして存在する。
【０１９９】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することにより、１つまたは複数の遺伝子（標的遺伝子（複数可））、および／または対応するもしくは下流タンパク質の発現を改変する方法が本明細書に提供されている。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、細胞（複数可）の標的遺伝子（複数可）の標的ゲノム領域（複数可）において、例えば、挿入、欠失、置換え、改変または破壊を作り出し、結果として、標的遺伝子（複数可）の改変された発現が生じ得る。一部の実施形態では、挿入、欠失、置換え、改変または破壊は、特定のタンパク質、またはタンパク質の群、または下流タンパク質の標的化された発現をもたらし得る。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、非コーディング領域またはコーディング領域内で挿入、欠失または置換えを作り出すことができる。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、プロモーター領域、エンハンサー領域、および／または、エクソン、イントロン、転写開始部位、サイレンサー領域、インスレーター領域、抗リプレッサー、翻訳後調節エレメント、ポリアデニル化シグナル（例えば最小ポリＡ）、保存領域、転写因子結合部位、またはこれらの任意の組合せを含む任意の他の遺伝子調節エレメントにおいて、挿入、欠失、置換え、改変または破壊を作り出すことができる。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、１つより多くの標的領域内で、挿入、欠失、置換え、改変または破壊を同時にまたは逐次的に作り出すことができる。一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することにより、細胞（複数可）において標的化された遺伝子発現の改変が可能になり得る。このような標的化された遺伝子発現の改変は、特定のタンパク質およびその下流タンパク質の発現をもたらすことができる。
【０２００】
一部の実施形態では、下流遺伝子および／またはタンパク質の発現は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または細胞（複数可）にゲノム編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、または１０倍増加する。
【０２０１】
一部の実施形態では、下流遺伝子および／またはタンパク質の遺伝子発現は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または細胞（複数可）にゲノム編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低減する。
【０２０２】
本明細書の方法の細胞は、任意の細胞であり得る。一部の実施形態では、細胞は脊椎動物細胞である。一部の実施形態では、脊椎動物細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、脊椎動物細胞はヒト細胞である。
【０２０３】
細胞は、任意の発育段階における任意の種類の細胞であり得る。一部の実施形態では、細胞は、分化細胞、全能性幹細胞、多能性幹細胞、胚性幹細胞、胚性胚細胞、成体幹細胞、前駆細胞、人工多能性幹細胞、またはこれらの任意の組合せであり得る。分化細胞は、組織内で特定の機能を実施する特化した細胞である。全能性幹細胞は胚、胎児または成体由来の未分化細胞であり、これらの細胞は長期間にわたり分裂することができ、生物の三胚葉のいずれかの任意の細胞型へと分化する能力を有する。多能性幹細胞は、胚、胎児または成体由来の未分化細胞であり、これらの細胞は、長期間にわたり分裂することができ、胚外組織または胎盤を除く生物の任意の細胞型に分化する能力を有する。胚性幹細胞は、胚の内部細胞集団において発見される未分化幹細胞であり、三胚葉のいずれかの任意の細胞型へと分化する能力を有する。胚性胚細胞は、精子細胞または卵細胞などの生殖細胞を生じることができる胚性細胞である。成体幹細胞は分化した組織に見出される未分化細胞であり、自己再生可能であり、それが宿る組織の細胞のいずれかへと分化することができる。前駆体または前駆細胞は、通常１種類の細胞（例えば単能性細胞）へと分化することしかできない部分的に分化した細胞である。人工多能性幹細胞は、成体の分化細胞または部分的に分化した細胞から生成される多能性幹細胞の一種である。例えば、ＷＯ／２０１０／０１７５６２を参照されたい。
【０２０４】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないと指示していない限り、複数への言及を含む。例えば、「細胞」という用語は、これらの混合物を含めた、複数の細胞を含む。例えば「１つまたは複数の細胞」および「細胞（複数可）」は本明細書で交換可能なように使用されている。同様に、「１つまたは複数の標的ゲノム領域」および「標的ゲノム領域（複数可）」は本明細書で交換可能なように使用されている。
【０２０５】
「およそ」および「約」という用語は、本明細書で交換可能なように使用される。「およそ」または「約」という用語は、目的の１つまたは複数の値に適用される場合、述べられた基準値と同様の値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、特に述べられていない限りまたは特に文脈から明らかではない限り（このような数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、述べられた基準値のいずれかの方向において（それより大きいまたはそれ未満）、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満に入る値の範囲を指す。
【０２０６】
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、交換可能なように使用される。これらの用語は、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）もしくはリボヌクレオチド（ＲＮＡ）のいずれか、またはこれらのアナログの任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、公知のまたは未知の任意の機能を実施することができる。以下はポリヌクレオチドの非限定的例である：遺伝子または遺伝子断片のコーディングまたは非コーディング領域、連結分析から定義される遺伝子座（複数可）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは、１つまたは複数の改変ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造の改変は、ポリマー組立の前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分により分断されていてもよい。ポリヌクレオチドは、標識構成成分とのコンジュゲーションなどにより、重合後にさらに改変することもできる。「ｓｓＤＮＡ」という用語は、一本鎖ＤＮＡ分子を意味する。「ｓｓＯＤＮ」という用語は、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドを意味する。
【０２０７】
本明細書で言及されている「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で言及された「改変ヌクレオチド」という用語は、改変または置換された糖類などを有するヌクレオチドを含む。本明細書で言及された「オリゴヌクレオチド連結」という用語は、オリゴヌクレオチド連結、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデートなどを含む。所望する場合、オリゴヌクレオチドは検出用標識を含むことができる。
【０２０８】
「合成ＲＮＡ」という用語は、操作されたまたは天然に存在しないＲＮＡを指す。
【０２０９】
本明細書で使用される場合、「野生型」という用語は、当業者に理解されている技術用語であり、突然変異体またはバリアント形態とは区別される、自然界において存在する生物、株、遺伝子または特徴の典型的な形態を意味する。
【０２１０】
「天然に存在しない」または「操作された」という用語は、交換可能なように使用され、人の手の関与を示す。核酸分子またはポリペプチドについて言及する場合、この用語は、その核酸分子またはポリペプチドが本来、自然界において付随し、自然界に見出される少なくとも１種の他の構成成分を少なくとも実質的に含まないことを意味する。
【０２１１】
「相補性」とは、従来のワトソンクリック型または他の非従来型のいずれかにより、核酸が別の核酸と水素結合（複数可）を形成する能力を指す。相補性のパーセントは、第２の核酸配列と、水素結合（例えば、ワトソンクリック型塩基対形成）を形成することができる核酸分子中の残基のパーセンテージを示す（例えば、１０個中５、６、７、８、９、１０個は５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、および１００％の相補性がある）。「完全に相補的」とは、核酸配列のすべての隣接する残基が第２の核酸配列中の同数の隣接する残基と水素結合することを意味する。「実質的に相補的」とは、本明細書で使用される場合、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれよりも多くのヌクレオチド領域にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の相補性の程度を指すか、または厳格な条件下でハイブリッド形成する２つの核酸を指す。
【０２１２】
本明細書で使用される場合、「発現」とは、ＤＮＡ鋳型からポリヌクレオチドが（例えば、ｍＲＮＡまたは他のＲＮＡ転写物などに）転写されるプロセスおよび／または転写されたｍＲＮＡが続いてペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質へと翻訳されるプロセスを指す。転写物およびコードされたポリペプチドは、総合的に「遺伝子産物」と呼ぶことができる。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡから誘導された場合、発現は真核細胞におけるｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。
【０２１３】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書で交換可能なように使用されて、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖または分枝であってよく、ポリマーは修飾アミノ酸を含んでもよく、ポリマーは非アミノ酸で分断されていてもよい。この用語はまた、改変されたアミノ酸ポリマー；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識構成成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作を包含する。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシンおよびＤまたはＬの両方の光学異性体、ならびにアミノ酸アナログおよびペプチド模倣体を含む、天然および／もしくは非天然または合成アミノ酸を含む。
【０２１４】
「ウイルスベクター」は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかで、宿主細胞に送達されるポリヌクレオチドを含む、組換えで生成されたウイルスまたはウイルス粒子と定義される。ウイルスベクターの例として、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびキメラウイルスベクターなどが挙げられる。遺伝子移入がレトロウイルスベクターで媒介される一部の実施形態では、ベクター構築物とは、レトロウイルスのゲノムまたはその一部分を含むポリヌクレオチドを指す。
【０２１５】
本開示の一部の実施形態は、１つもしくは複数のベクターを含むベクター系、またはベクターそれ自体に関する。ベクターは、原核細胞または真核細胞におけるＣＲＩＳＰＲ転写物（例えば、核酸転写物、タンパク質、または酵素）の発現用に設計することができる。例えば、ＣＲＩＳＰＲ転写物は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用）、酵母細胞、または哺乳動物細胞において発現させることができる。
【０２１６】
細胞は、初代細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）、成体幹細胞、前駆細胞または細胞系であってよい。「初代細胞」は生体組織から直接採取し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏに配置して成長させる細胞である。初代細胞は、ほとんど集団で倍化せず、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの集団倍化に対する寿命は有限である。「幹細胞」、「胚性幹細胞」および「人工多能性幹細胞」は、自己再生可能であり、特化した機能を有する異なる型の細胞へと分化する可能性を有する非特化、未分化の細胞である。「細胞系」は、無制限に増殖できる１つの細胞型または同じ型の一連の細胞から誘導される細胞培養物を含む。哺乳動物細胞系の非限定的例として、ＣＤ３４細胞、２９３細胞、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＶ−１細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＨｅＬａ細胞、またはこれらの任意のバリアントを挙げることができる。
【０２１７】
一部の実施形態では、ベクターは、哺乳動物発現ベクターを使用して哺乳動物細胞内の１つまたは複数の配列の発現を推進することが可能である。哺乳動物発現ベクターの例として、ｐＣＤＭ８およびｐＭＴ２ＰＣが挙げられる。哺乳動物細胞において使用される場合、発現ベクターの制御機能は通常、１つまたは複数の調節エレメントにより提供される。例えば、一般的に使用されているプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、サルウイルス４０、および本明細書で開示されているおよび当技術分野で公知のその他のものから誘導される。他のプロモーターとして、例えば、ＥＦ１プロモーター、またはＥＦ１アルファプロモーターを挙げることができる。原核細胞と真核細胞の両方に対する他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８９の第１６章および第１７章を参照されたい。
【０２１８】
本明細書で使用される場合、「標識」または「標識された」という用語は、例えば、ラジオ標識されたアミノ酸の組込み、またはマーク付きアビジンにより検出可能なビオチニル部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組込みを指す（例えば、蛍光マーカーを含有するストレプトアビジンまたは光学的もしくは熱量測定法により検出できる酵素活性）。ある特定の状況では、標識またはマーカーは治療用であり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野で公知であり、使用することができる。ポリペプチドに対する標識の例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次リポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体への結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。一部の実施形態では、標識を様々な長さのスペーサーアームにより結合させ、潜在的立体障害を減少させる。「薬剤または薬物」という用語は、本明細書で使用される場合、患者に適切に投与された場合、所望の治療効果を誘発することが可能な化学化合物または組成物を指す。
【０２１９】
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」とは、対象種が存在する主要な種である（すなわち、モルベースで、組成物中の任意の他の個々の種よりも豊富である）ことを意味する。一部の実施形態では、実質的な精製画分は、対象種が存在するすべての巨大分子種の少なくとも約５０パーセント（モルベースで）を構成する組成物である。
【０２２０】
一般的に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての巨大分子種のうちの約８０パーセントより多くを含む。一部の実施形態では、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての巨大分子種のうちの約８５％、９０％、９５％、および９９％より多くを含む。一部の実施形態では、対象種は、本質的に均一となるように精製し（汚染種は従来の検出方法により組成物中に検出されない）、組成物は本質的に単一の巨大分子種からなる。
ゲノム編集システム
【０２２１】
様々な種類のゲノム操作システムを使用することができる。「ゲノム編集システム」、「遺伝子編集システム」などの用語は、本明細書で交換可能なように使用され、標的遺伝子またはその機能もしくは発現を編集するシステムまたは技術を指す。ゲノム編集システムは以下を含む：標的ゲノム領域（複数可）（または標的配列（複数可））の切断を可能にする少なくとも１つのエンドヌクレアーゼコンポーネント；およびエンドヌクレアーゼコンポーネントを標的ゲノム領域（複数可）に届ける、または標的ゲノム領域（複数可）をエンドヌクレアーゼコンポーネントの標的にする少なくとも１つのゲノム標的化エレメント。ゲノム標的化エレメントの例として、ＤＮＡ結合ドメイン（例えば、ジンクフィンガーＤＮＡ結合タンパク質またはＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメイン）、ガイドＲＮＡエレメント（例えば、ＣＲＩＳＰＲガイドＲＮＡ）、およびガイドＤＮＡエレメント（例えば、ＮｇＡｇｏガイドＤＮＡ）が挙げられる。プログラミング可能なゲノム標的化およびエンドヌクレアーゼエレメントは、特定のゲノムの遺伝子座に、二本鎖切断（ＤＳＢ）などのＤＮＡ切断を導入することにより正確なゲノム編集を可能にする。ＤＳＢは、続いて、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同組換え修復（ＨＤＲ）のいずれかのための内因性修復機構をＤＳＢ部位に動員し、ゲノム編集を媒介する。「エンドヌクレアーゼコンポーネント」は、このようなエンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含むエンドヌクレアーゼまたは核酸を含む。
【０２２２】
「エンドヌクレアーゼ」という用語は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子内の核酸間の結合の加水分解（切断）を触媒することが可能な任意の野生型、突然変異型、バリアント、または操作した酵素を指す。エンドヌクレアーゼは、その標的ゲノム領域においてＤＮＡまたはＲＮＡ分子を認識し、切断することができる。エンドヌクレアーゼの例として、ホーミングエンドヌクレアーゼ；制限酵素、例えば、ＦｏｋＩなど；操作されたジンクフィンガードメインの、ＦｏｋＩなどの制限酵素の触媒ドメインとの融合から生成されるキメラジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）；Ｃａｓ酵素、およびＣｐｆ酵素が挙げられる。化学的またはペプチド切断物質が、特異的標的配列を認識する核酸のポリマー、または別のＤＮＡのいずれかにコンジュゲートされ、これにより切断活性を特異的配列に標的化する化学的エンドヌクレアーゼは、「エンドヌクレアーゼ」という用語に含まれる。化学的エンドヌクレアーゼの例として、オルトフェナントロリン、ＤＮＡ切断分子、および三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）のコンジュゲートのような合成ヌクレアーゼが挙げられる。
【０２２３】
「バリアント」とは、親タンパク質のアミノ酸配列の中の少なくとも１個の残基を、異なるアミノ酸で置き換えることにより得られる組換えタンパク質を意図する。
【０２２４】
一部の実施形態では、エンドヌクレアーゼ、例えば、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮおよび／またはメガヌクレアーゼは、切断ドメインおよび／または切断ハーフドメインを含む。切断ドメインは、ＤＮＡ結合ドメインに対して同種であっても、異種であってもよい。例えば、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインおよびヌクレアーゼ由来の切断ドメイン、またはメガヌクレアーゼＤＮＡ結合ドメインおよび異なるヌクレアーゼ由来の切断ドメインを使用することができる。異種切断ドメインは、任意のエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼから得ることができる。切断ドメインが誘導され得る例示的エンドヌクレアーゼとして、これらに限定されないが、制限エンドヌクレアーゼおよびホーミングエンドヌクレアーゼが挙げられる。例えば、ＷＯ２０１３／１３０８２４を参照されたい。ＤＮＡを切断する追加の酵素は公知である（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ；ヤエナリヌクレアーゼ；膵臓ＤＮａｓｅＩ；小球菌ヌクレアーゼ；酵母ＨＯエンドヌクレアーゼ；Ｌｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ）  Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９３も参照されたい）。これらの酵素のうちの１つまたは複数（またはその機能的断片）は、切断ドメインおよび切断ハーフドメインの供給源として使用することができる。
【０２２５】
切断ハーフドメインは、切断活性のために二量体化を必要とする、上に記載されたような任意のヌクレアーゼまたはその部分から誘導することができる。一部の実施形態では、融合タンパク質が切断ハーフドメインを含む場合、２つの融合タンパク質が切断のために必要とされる。一部の実施形態では、２つの切断ハーフドメインを含む単一のタンパク質を使用することができる。一部の実施形態では、２つの切断ハーフドメインは、同じエンドヌクレアーゼ（またはその機能的断片）から誘導することができる。一部の実施形態では、各切断ハーフドメインは、異なるエンドヌクレアーゼ（またはその機能的断片）から誘導することができる。加えて、２つの融合タンパク質に対する標的部位は互いに対して好ましく配置され、この結果、２つの融合タンパク質のこれらのそれぞれの標的部位への結合が、例えば二量体化により切断ハーフドメインの機能的切断ドメインの形成を可能にする互いの空間的方向性で切断ハーフドメインを配置させる。よって、ある特定の実施形態では、標的部位の近端は、５〜５０ヌクレオチド、５〜８ヌクレオチドまたは１５〜１８ヌクレオチド離れている。任意の整数のヌクレオチドまたはヌクレオチド対が、２つの標的部位の間に介入できる（例えば、２から５０のヌクレオチド対またはそれより多く）ことが指摘されている。一部の実施形態では、切断部位は標的部位の間に位置する。
【０２２６】
制限エンドヌクレアーゼ（制限酵素）は多くの種に存在し、ＤＮＡへ配列特異結合（認識部位において）すること、および結合部位において、またはその付近でＤＮＡを切断することが可能である。ある特定の制限酵素（例えば、ＩＩＳ型）は、認識部位から除外された部位でＤＮＡを切断し、分離可能結合ドメインおよび切断ドメインを有する。例えば、ＩＩＳ型酵素ＦｏｋＩは、ＤＮＡの二本鎖切断を触媒する。例えば、米国特許第５，３５６，８０２号；第５，４３６，１５０号および第５，４８７，９９４号；ならびにＬｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：４２７５−４２７９；  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：２７６４−２７６８；  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４ａ）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：８８３−８８７；  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４ｂ）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：３１，  ９７８−３１，  ９８２を参照されたい。
【０２２７】
一部の実施形態では、エンドヌクレアーゼコンポーネントは、少なくとも１つのＩＩＳ型制限酵素由来の切断ドメイン（または切断ハーフドメイン）および１つまたは複数のジンクフィンガー結合ドメイン（操作されていても、操作されていなくてもよい）を含む融合タンパク質（複数可）を含む。その切断ドメインが結合ドメインから分離可能な例示的ＩＩＳ型制限酵素はＦｏｋＩである。この特定の酵素は二量体として活性がある。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ  （１９９８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：１０，５７０−１０，５７５。このような融合タンパク質に使用されているＦｏｋＩ酵素の部分は切断ハーフドメインと考えられる。よって、ジンクフィンガー融合またはＴＡＬＥ−ＦｏｋＩ融合を使用した、細胞配列の標的化された二本鎖切断および／または標的化された置換えのため、それぞれがＦｏｋＩ切断ハーフドメインを含む２つの融合タンパク質を使用して、触媒活性のある切断ドメインを再構成することができる。代わりに、ジンクフィンガー結合ドメインおよび２つのＦｏｋＩ切断ハーフドメインを含有する単一のポリペプチド分子を使用することもできる。
【０２２８】
例示的ＩＩＳ型制限酵素は、その全体が本明細書に組み込まれている国際公開ＷＯ０７／０１４２７５に記載されている。追加の制限酵素もまた分離可能な結合および切断ドメインを含有し、これらは本開示で想定されている。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３１：４１８−４２０を参照されたい。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、切断ドメインは、例えば、米国特許公開第２００５００６４４７４号および第２００６０１８８９８７号およびＷＯ２０１３／１３０８２４に記載されているようなホモ二量体化を最小化するまたは阻止する１つまたは複数の操作された切断ハーフドメイン（二量体化ドメイン突然変異体とも呼ばれる）を含む。必須ヘテロ二量体を形成するＦｏｋＩの例示的な操作された切断ハーフドメインは、第１の切断ハーフドメインがＦｏｋＩの４９０および５３８の位置でアミノ酸残基の突然変異を含み、第２の切断ハーフドメインがアミノ酸残基４８６および４９９において突然変異を含む、対を含む。例えば、米国特許出願公開第２００８／０１３１９６２号および第２０１１／０２０１０５５号を参照されたい。本明細書に記載されている操作された切断ハーフドメインは、任意の適切な方法を使用して、例えば、米国特許公開第２００５００６４４７４号および第２００８０１３１９６２号に記載されているような野生型切断ハーフドメインの部位特異的突然変異導入（ＦｏｋＩ）により調製することができる。
【０２３０】
「編集する（ｅｄｉｔ）」、「編集する（ｅｄｉｔｓ）」、「編集している（ｅｄｉｔｉｎｇ）」などの用語は、任意の種類の操作、変更、改変またはモジュレートを指す（いずれの場合も、これらに限定されないが、遺伝子ノックアウト、遺伝子タグ化、遺伝子破壊、遺伝子突然変異、遺伝子挿入、遺伝子欠失、遺伝子活性化、遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックインの手段によるものを含む）。
【０２３１】
本明細書で使用される場合、「遺伝子改変」、「ゲノム編集」、「ゲノム改変」、「遺伝子の改変」および「遺伝子編集」は、細胞のヌクレオチドに対する、任意の遺伝子の付加、欠失、ノックアウト、ノックイン、タグ化、突然変異、活性化、サイレンシング、改変、および／または破壊を指す。この文脈において、細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏであり得る。
【０２３２】
「標的ゲノム領域」、「標的遺伝子」、「ＤＮＡ標的」、「ＤＮＡ標的配列」、「標的配列」、「標的ヌクレオチド配列」、「標的部位」、「標的」、「目的の部位」、「認識部位」、「ポリヌクレオチド認識部位」、「認識配列」、「切断部位」とは、ゲノム編集システムにより認識および切断されるポリヌクレオチド配列を意図する。これらの用語は、明確なＤＮＡの位置、好ましくは、ＤＮＡ切断（ｂｒｅａｋ）（切断（ｃｌｅａｖａｇｅ））がゲノム編集システムにより誘発されることになるゲノムの位置を指す。
【０２３３】
操作、変更、改変およびモジュレートを含む前述の編集は、同時にまたは逐次的に生じ得る。当技術分野で公知の任意のゲノム編集システムを使用することができる。一部の実施形態では、ゲノム編集システムはメガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）ベースのシステム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムである。
【０２３４】
メガヌクレアーゼベース、ＺＦＮベースおよびＴＡＬＥＮベースはそれぞれ、少なくとも１つのＤＮＡ結合ドメインまたはこのＤＮＡ結合ドメインをコードする核酸配列（複数可）を含む核酸を含み、タンパク質−ＤＮＡ相互作用を介して標的ゲノム領域（複数可）の特異的標的化または認識を達成する。ＣＲＩＳＰＲベースのシステムは、少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメントまたはこのガイドＲＮＡエレメントをコードする核酸配列（複数可）を含む核酸を含み、標的ゲノム領域（複数可）のＤＮＡとの直接的な塩基対を介して、標的ゲノム領域（複数可）の特異的な標的化または認識を達成する。ＮｇＡｇｏベースのシステムは少なくとも１つのガイドＤＮＡエレメントまたはこのガイドＤＮＡエレメントをコードする核酸配列（複数可）を含む核酸を含み、標的ゲノム領域（複数可）のＤＮＡとの直接的な塩基対を介して、標的ゲノム領域（複数可）の特異的な標的化または認識を達成する。
【０２３５】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはメガヌクレアーゼベースのシステムである。メガヌクレアーゼベースのシステムは、大きな（＞１４ｂｐ）認識部位を有するエンドヌクレアーゼであるメガヌクレアーゼを利用し、そのＤＮＡ結合ドメインもまた標的配列の切断に関与している。メガヌクレアーゼのＤＮＡ結合ドメインは１２〜４５ｂｐの二本鎖ＤＮＡ標的配列を有し得る。一部の実施形態では、メガヌクレアーゼは、各メガヌクレアーゼドメインが単量体上にある二量体酵素であるか、または単一のポリペプチド上の２つのドメインを含む単量体酵素のいずれかである。野生型メガヌクレアーゼだけではなく、様々なメガヌクレアーゼバリアントも、無数の独特な配列の組合せを網羅するようタンパク質操作により生成されてきた。一部の実施形態では、メガヌクレアーゼＡの半分の部位およびプロテインＢの半分の部位で構成される認識部位を有するキメラメガヌクレアーゼもまた使用することができる。このようなキメラメガヌクレアーゼの具体例はＩ−ＤｍｏＩおよびＩ−ＣｒｅＩのタンパク質ドメインを含む。メガヌクレアーゼの例として、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧファミリー由来のホーミングエンドヌクレアーゼが挙げられる。
【０２３６】
ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、Ｉ−ＳｃｅＩ、Ｉ−ＣｈｕＩ、Ｉ−ＣｒｅＩ、Ｉ−ＣｓｍＩ、ＰＩ−ＳｃｅＩ、ＰＩ−ＴｌｉＩ、ＰＩ−ＭｔｕＩ、Ｉ−ＣｅｕＩ、Ｉ−ＳｃｅＩＩ、Ｉ−ＳｃｅＩＩＩ、ＨＯ、ＰＩ−ＣｉｖＩ、ＰＩ−ＣｔｒＩ、ＰＩ−ＡａｅＩ、ＰＩ−ＢｓｕＩ、ＰＩ−ＤｈａＩ、ＰＩ−ＤｒａＩ、ＰＩ−ＭａｖＩ、ＰＩ−ＭｃｈＩ、ＰＩ−ＭｆｕＩ、ＰＩ−ＭｆｌＩ、ＰＩ−ＭｇａＩ、ＰＩ−ＭｇｏＩ、ＰＩ−ＭｉｎＩ、ＰＩ−ＭｋａＩ、ＰＩ−ＭｌｅＩ、ＰＩ−ＭｍａＩ、ＰＩ−ＭｓｈＩ、ＰＩ−ＭｓｍＩ、ＰＩ−ＭｔｈＩ、ＰＩ−ＭｔｕＩ、ＰＩ−ＭｘｅＩ、ＰＩ−ＮｐｕＩ、ＰＩ−ＰｆｕＩ、ＰＩ−ＲｍａＩ、ＰＩ−ＳｐｂＩ、ＰＩ−ＳｓｐＩ、ＰＩ−ＦａｃＩ、ＰＩ−ＭｊａＩ、ＰＩ−ＰｈｏＩ、ＰＩ−ＴａｇＩ、ＰＩ−ＴｈｙＩ、ＰＩ−ＴｋｏＩ、ＰＩ−ＴｓｐＩ、もしくはＩ−ＭｓｏＩであってよく、またはホモ二量体、ヘテロ二量体もしくは単量体であるかどうかに関わらずそれらの機能的な突然変異体もしくはバリアントであってもよい。一部の実施形態では、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼはＩ−ＣｒｅＩ誘導体である。一部の実施形態では、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、天然のＩ−ＣｒｅＩ  ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼと少なくとも８０％の類似性を共有する。一部の実施形態では、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、天然のＩ−ＣｒｅＩ  ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼの残基１〜１５２と少なくとも８０％の類似性を共有する。一部の実施形態では、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、天然のＩ−ＣｒｅＩ  ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼの残基１〜１５２と少なくとも８０％類似性を共有し、リンカーペプチドと共に、またはリンカーペプチドなしで、一緒に連結している２つの単量体からなってもよい。
【０２３７】
【０２３８】
「ＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼ」は、Ｓｔｏｄｄａｒｄ  ｅｔ  ａｌ  （Ｓｔｏｄｄａｒｄ，  ２００５）において定義されているような、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧファミリー由来のホーミングエンドヌクレアーゼ、または前記天然ホーミングエンドヌクレアーゼと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９９％もしくはそれよりも多くの同一性または類似性を共有するポリペプチドを含む操作されたバリアントを指す。このような操作されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、単量体または二量体メガヌクレアーゼから誘導することができる。二量体メガヌクレアーゼから誘導される場合、このような操作されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧメガヌクレアーゼは、一本鎖または二量体エンドヌクレアーゼであり得る。
【０２３９】
「Ｉ−ＣｒｅＩ」とは、ｐｄｂ受託コード１ｇ９ｙの配列を有する天然の野生型Ｉ−ＣｒｅＩメガヌクレアーゼを意味する。
【０２４０】
メガヌクレアーゼのＤＮＡ認識および切断機能は一般的に単一ドメイン内で縒り合わされている。メガヌクレアーゼとは異なり、ＺＦＮベースおよびＴＡＬＥＮベースのシステムのＤＮＡ結合ドメインは、切断機能に対してエンドヌクレアーゼとははっきりと異なる。ＺＦＮベースのシステムは以下を含む：少なくとも１つのジンクフィンガータンパク質もしくはそのバリアント、またはジンクフィンガータンパク質もしくはそのバリアントをそのＤＮＡ結合ドメインとしてコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；およびエンドヌクレアーゼエレメント、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）またはＦｏｋ１切断ドメインなど。ジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）は、これが選択した標的部位と結合するよう操作されているという点で天然に存在しない。例えば、Ｂｅｅｒｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０：１３５−１４１；  Ｐａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ７０：３１３−３４０；  Ｉｓａｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １９：６５６−６６０；  Ｓｅｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １２：６３２−６３７；  Ｃｈｏｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ．  １０：４１１−４１６；米国特許第６，４５３，２４２号；第６，５３４，２６１号；第６，５９９，６９２号；第６，５０３，７１７号；第６，６８９，５５８号；第７，０３０，２１５号；第６，７９４，１３６号；第７，０６７，３１７号；第７，２６２，０５４号；第７，０７０，９３４号；第７，３６１，６３５号；第７，２５３，２７３号；および米国特許公開第２００５／００６４４７４号；第２００７／０２１８５２８号；第２００５／０２６７０６１号を参照されたい。
【０２４１】
操作されたジンクフィンガー結合ドメインは、天然に生じるジンクフィンガータンパク質と比較して新規の結合特異性を有することができる。操作方法として、これらに限定されないが、合理的設計および様々な種類の選択が挙げられる。合理的設計には、例えば、トリプレット（またはクアドラプレット）ヌクレオチド配列および個々のジンクフィンガーアミノ酸配列を含むデータベースの使用が含まれるが、各トリプレットまたはクアドラプレットヌクレオチド配列は、特定のトリプレットまたはクアドラプレット配列に結合するジンクフィンガーの１つまたは複数のアミノ酸配列と関連する。これら全体が参照により本明細書に組み込まれている、例えば、共所有の米国特許第６，４５３，２４２号および第６，５３４，２６１号を参照されたい。
【０２４２】
様々な種類の選択方法を本明細書の方法と共に使用することができる。ファージディスプレイおよびツーハイブリッドシステムを含む例示的な選択方法は、米国特許第５，７８９，５３８号；第５，９２５，５２３号；第６，００７，９８８号；第６，０１３，４５３号；第６，４１０，２４８号；第６，１４０，４６６号；第６，２００，７５９号；および第６，２４２，５６８号；ならびにＷＯ９８／３７１８６；ＷＯ９８／５３０５７；ＷＯ００／２７８７８；ＷＯ０１／８８１９７およびＧＢ２，３３８，２３７で開示されている。加えて、ジンクフィンガー結合ドメインに対する結合特異性の増強は、例えば、ＷＯ０２／０７７２２７に記載されている。加えて、これらおよび他の参考文献において開示されているように、ジンクフィンガードメインおよび／またはマルチフィンガージンクフィンガータンパク質を、例えば、長さ５またはそれよりも長いアミノ酸のリンカーを含む、任意の適切なリンカー配列を使用して一緒に連結してもよい。また、長さ６またはそれよりも長いアミノ酸の例示的なリンカー配列については米国特許第６，４７９，６２６号；第６，９０３，１８５号；および第７，１５３，９４９号を参照されたい。本明細書に記載されているタンパク質は、タンパク質の個々のジンクフィンガー間の適切なリンカーの任意の組合せを含み得る。標的部位の選択、ＺＦＰ、ならびに融合タンパク質（およびそれをコードするポリヌクレオチド）の設計および構築の方法は、当業者には公知であり、米国特許第６，１４０，０８１５号；第７８９，５３８号；第６，４５３，２４２号；第６，５３４，２６１号；第５，９２５，５２３号；第６，００７，９８８号；第６，０１３，４５３号；第６，２００，７５９号；ＷＯ９５／１９４３１；ＷＯ９６／０６１６６；ＷＯ９８／５３０５７；ＷＯ９８／５４３１１；ＷＯ００／２７８７８；ＷＯ０１／６０９７０ＷＯ０１／８８１９７；ＷＯ０２／０９９０８４；ＷＯ９８／５３０５８；ＷＯ９８／５３０５９；ＷＯ９８／５３０６０；ＷＯ０２／０１６５３６およびＷＯ０３／０１６４９６に詳細に記載されている。
【０２４３】
加えて、これらおよび他の参考文献に開示されているように、ジンクフィンガードメインおよび／またはマルチフィンガージンクフィンガータンパク質は、例えば、長さ５またはそれよりも長いアミノ酸のリンカーを含む、任意の適切なリンカー配列を使用して一緒に連結してもよい。また、長さ６またはそれよりも長いアミノ酸の例示的なリンカー配列については、米国特許第６，４７９，６２６号；第６，９０３，１８５号；および第７，１５３，９４９号も参照されたい。本明細書に記載されているタンパク質は、タンパク質の個々のジンクフィンガー間の適切なリンカーの任意の組合せを含み得る。
【０２４４】
転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システムとは、１つまたは複数の転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）−ＤＮＡ結合ドメインおよびエンドヌクレアーゼエレメント、例えば、Ｆｏｋ１切断ドメインを利用するゲノム編集システムを指す。ＴＡＬＥ−ＤＮＡ結合ドメインは、それぞれ長さ３０〜３８（例えば、３１、３２、３３、３４、３５、または３６）のアミノ酸を有する１つまたは複数のＴＡＬＥ繰り返し単位を含む。ＴＡＬＥ−ＤＮＡ結合ドメインは、全長ＴＡＬＥタンパク質もしくはその断片、またはそのバリアントを利用し得る。ＴＡＬＥ−ＤＮＡ結合ドメインは、リンカーによりエンドヌクレアーゼドメインに融合または連結することができる。
【０２４５】
「ＣＲＩＳＰＲベースのシステム」、「ＣＲＩＳＰＲベースの遺伝子編集システム」、「ＣＲＩＳＰＲゲノム編集」、「ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集」、「ＣＲＩＳＰＲエンドヌクレアーゼベースのゲノム編集」などの用語は本明細書で交換可能なように使用され、１つまたは複数のガイドＲＮＡエレメントおよび１つまたは複数のＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼエレメントを含むゲノム編集システムを総合的に指す。ガイドＲＮＡエレメントは、１つまたは複数の標的ゲノム領域でのヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、またはターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む。ＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼエレメントは、ガイドＲＮＡエレメントにより標的ゲノム領域（複数可）へガイドされるもしくはもたらされるエンドヌクレアーゼ；またはこのようなエンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む。ＣＲＩＳＰＲベースのシステムを含む、このようなＣＲＩＳＰＲベースの遺伝子編集システムの例は、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムまたはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである。
【０２４６】
本明細書で使用される場合、「ガイドＲＮＡエレメント」、「ガイドＲＮＡ」、「ｇＲＮＡ」、「ｇＲＮＡ分子」、および「合成ガイドＲＮＡ」という用語は、交換可能なように使用され、標的核酸配列とハイブリッド形成するターゲッターＲＮＡまたはこのターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含むポリヌクレオチド配列を指す。ｇＲＮＡのターゲッターＲＮＡは、標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含む標的化ドメインを含む。「実質的に相補的」という句は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれよりも多くのヌクレオチドの領域にわたり、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％である相補性の程度を意味するか、または厳格な条件下でハイブリッド形成する２つの核酸を指す。
【０２４７】
ガイドＲＮＡエレメントは、ターゲッターＲＮＡとハイブリッド形成することが可能なアクチベーターＲＮＡ、またはこのアクチベーターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸をさらに含むことができる。アクチベーターＲＮＡおよびターゲッターＲＮＡは、別個であるか、またはリンカーループ配列を介して単一の核酸として融合して、単一のｇＲＮＡ分子を形成することができる。ｇＲＮＡ分子はいくつかのドメインを含んでもよい。例えば、このようなｇＲＮＡは、例えば、５’から３’に以下を含む：標的化ドメイン（標的核酸に相補的）；第１の相補性ドメイン；連結ドメイン；第２の相補性ドメイン（第１の相補性ドメインに相補的）；近位ドメイン；および必要に応じて、テールドメイン。ＷＯ２０１５０４８５５７を参照されたい。
【０２４８】
「第１の相補性ドメイン」は、第２の相補性ドメインとの実質的な相補性を有し、少なくともいくつかの生理学的条件下で二重鎖領域を形成することができる。
【０２４９】
「連結ドメイン」は、第１の相補性ドメインを、単分子ｇＲＮＡの第２の相補性ドメインに連結する働きをする。連結ドメインは、第１および第２の相補性ドメインを共有結合または非共有結合により連結することができる。
【０２５０】
「近位ドメイン」は、３〜２５ヌクレオチドの長さ、または５〜２０ヌクレオチドの長さであってよい。近位ドメインは、天然に存在する近位ドメインと相同性を共有でき、または天然に存在する近位ドメインから誘導することができる。
【０２５１】
「テールドメイン」は、存在しなくてもよいし、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドの長さであってもよい。テールドメインは、互いに相補的であり、少なくともいくつかの生理学的な条件下で二重鎖領域を形成する配列を含み得る。
【０２５２】
ガイドＲＮＡエレメントは、ＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼエレメントのエンドヌクレアーゼとの複合体、例えば、Ｃａｓエンドヌクレアーゼ（「ｇＲＮＡ／ヌクレアーゼ複合体」）などを形成し得る。ｇＲＮＡ／ヌクレアーゼ複合体の例は、ＣＲＩＳＲベースのシステムに関して以下に記載されているようなＣＲＩＳＰＲ複合体である。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ複合体は、ターゲッターＲＮＡと複合体を形成するＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼシステムのエンドヌクレアーゼを含む。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ複合体は、ターゲッターＲＮＡおよびアクチベーターＲＮＡと複合体を形成するＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼシステムのエンドヌクレアーゼを含む。
【０２５３】
ターゲッターＲＮＡの標的化ドメインは、標的ヌクレオチド配列へのｇＲＮＡ／ヌクレアーゼ複合体の特異的標的化またはホーミングを促進する。一部の実施形態では、標的化ドメインは、１０〜３０ｂｐ、例えば、１５〜２５ｂｐ、１８〜２２ｂｐ、または２０ｂｐであり得る。
【０２５４】
標的ドメインを選択、設計、および検証するための方法を含む、ｇＲＮＡを設計する方法は、当技術分野で公知である。例えば、ＷＯ２０１５０４８５７７、Ｍａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３  ＳＣＩＥＮＣＥ，  ３３９（６１２１）：  ８２３−８２６；  Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３  ＮＡＴＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ，  ３１（９）：８２７−３２；  Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ，，  ２０１４  ＮＡＴＢＴＯＴＥＣＨＮＯＬ，  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｎｂｔ．２８０８．    ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２４４６３５７４；  Ｈｅｉｇｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４，  ＮＡＴ  ＭＥＴＨＯＤＳ  １１（２）：１２２−３．  ｄｏｉ：  ｌ  ０．１０３８／ｎｍｅｔｈ．２８１２．    ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２４４８１２１６；  Ｂａｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４  ＢＩＯＴＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２４４６３１８１；  Ｘｉａｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４  ＢＩＯＩＮＦＯＲＭＡＴＩＣＳ  Ｐｕｂ  Ｍｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２４３８９６６２を参照されたい。
【０２５５】
一部の実施形態では、ＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼ、例えば、Ｃａｓ酵素もしくはタンパク質（例えば、ＩＩ型Ｃａｓ９タンパク質）またはＣｐｆ酵素もしくはタンパク質（例えば、Ｃｐｆ１タンパク質）を使用することができる。一部の実施形態では、このようなＣａｓまたはＣｐｆ酵素またはタンパク質の改変バージョンもまた使用することができる。
【０２５６】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムである。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムは、（ａ）少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメントまたはこのガイドＲＮＡエレメントをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸であって、このガイドＲＮＡエレメントが１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、およびターゲッターＲＮＡとのハイブリッド形成が可能なヌクレオチド配列を含むアクチベーターＲＮＡを含む、ガイドＲＮＡエレメントまたは核酸；ならびに（ｂ）Ｃａｓタンパク質を含むＣａｓタンパク質エレメントまたはこのＣａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む。ターゲッターＲＮＡおよびアクチベーターＲＮＡは、別個であってもよいし、または単一のＲＮＡ内に一緒に融合されていてもよい。
【０２５７】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムは、クラス１ＣＲＩＳＰＲおよび／またはクラス２ＣＲＩＳＰＲシステムを含む。クラス１システムは、ターゲッターＲＮＡとしてＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）と一緒にいくつかのＣａｓタンパク質を利用して、機能的エンドヌクレアーゼを構築する。クラス２ＣＲＩＳＰＲシステムは、単一のＣａｓタンパク質、およびターゲッターＲＮＡとしてｃｒＲＮＡを利用する。ＩＩ型Ｃａｓ９ベースのシステムを含むクラス２ＣＲＩＳＰＲシステムは、クラス１システムにより利用されるマルチ−サブユニット複合体ではなく、切断を媒介するための単一のＣａｓタンパク質を含む。ＣＲＩＳＰＲベースのシステムはまた、Ｃｐｆ１タンパク質およびターゲッターＲＮＡとしてｃｒＲＮＡを利用するクラスＩＩ、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲシステムを含む。
【０２５８】
Ｃａｓタンパク質は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）二本鎖のヌクレアーゼである。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムはＣａｓ９タンパク質を含む。一部の実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質はＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、またはＤ１０Ａニッカーゼである。「Ｃａｓタンパク質」という用語、例えば、Ｃａｓ９タンパク質は、野生型Ｃａｓタンパク質またはその機能的誘導体（例えば、ヌクレアーゼ活性を有する野生型Ｃａｓタンパク質の末端切断型バージョンまたはバリアント）を含む。
【０２５９】
一部の実施形態では、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓおよびＳ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ以外の種由来のＣａｓ９タンパク質を使用することができる。以下を含む追加のＣａｓ９タンパク質種を入手し、本明細書で使用することができる：Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｉｓ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．、ｃｙｃｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ａｍｉｎｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｖｏｒａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ；  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｍｉｔｈｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．、Ｂｌａｓｔｏｐｉｒｅｌｌｕｌａ  ｍａｒｉｎａ、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｌａｒｉ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｐｕｎｉｃｅｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｉｎｇｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｃｏｌｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｏｌｉｃｈｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｔｒｕｃｈｏｔｉｉ、Ｄｉｎｏｒｏｓｅｏｂａｃｔｅｒ  ｓｈｉｂａｅ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｏｌｉｃｈｕｍ、ｇａｍｍａ  ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｌｚｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｃｉｎａｅｄｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｍｕｓｔｅｌａｅ、ｌｌｙｏｂａｃｔｅｒ  ｐｏｌｙｔｒｏｐｕｓ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ、ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｉｖａｎｏｖｉｉ、ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、ｌｉｓｔｅｒｉａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．、Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ  ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ  ｍｕｌｉｅｒｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ、Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｐａｒｖｉｂａｃｕｌｕｍ  ｌａｖａｍｅｎｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｕｃｃｉｎａｔｕｔｅｌｌｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｙｚｙｇｉｉ、Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｌｕｓｔｒｉｓ、Ｒｈｏｄｏｖｕｌｕｍ  ｓｐ．、Ｓｉｍｏｎｓｉｅｌｌａ  ｍｕｅｌｌｅｒｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖｉｎｅａｅ、Ｓｔａｐｈｙ���ｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ  ｓｐ．、Ｔｉｓｔｒｅｌｌａ  ｍｏｂｉｌｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐ．、またはＶｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ。
【０２６０】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムの１つまたは複数のエレメントは、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムから誘導される。
【０２６１】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムの１つまたは複数のエレメントは、内因性ＣＲＩＳＰＲシステムを含む特定の生物、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｓｐ．、Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、およびＬａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ  ｓｐ．から誘導される。一般的に、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムは、標的ゲノム領域または標的配列の部位でのＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するエレメント（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムとの関連でプロトスペーサーとも呼ばれる）により特徴付けられる。ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成との関連で、「標的配列」とは、実質的な相補性を有するようにガイド配列が設計された配列を指し、この場合、標的配列とガイド配列との間のハイブリッド形成がＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する。完全な相補性は必ずしも必要とされないが、ただし、ハイブリッド形成を引き起こし、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するのに十分な相補性は存在するものとする。標的配列は、任意のポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、標的配列は、細胞（複数可）の核または細胞形質に位置する。一部の実施形態では、標的配列は、真核細胞（複数可）の細胞器官、例えば、ミトコンドリアまたは葉緑体内にあってもよい。
【０２６２】
標的配列を含む標的化された遺伝子座への組換えのために使用することができる配列または鋳型は、「編集鋳型」または「編集ポリヌクレオチド」または「編集配列」と呼ばれる。外来性鋳型ポリヌクレオチドは、編集鋳型またはドナー鋳型と呼ぶことができる。一部の実施形態では、合成または生物的起源の一本鎖ＤＮＡおよび二本鎖ＤＮＡを使用することができる。非限定的例として、適切な編集鋳型として、ｓｓＯＤＮ、ｄｓＯＤＮ、ＰＣＲ生成物、プラスミド、およびＡＡＶ、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルスなどを含むウイルスが挙げられる。追加の編集鋳型もまた可能である。一部の実施形態では、組換えは相同組換えである。
【０２６３】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムである。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムのターゲッターＲＮＡはＣＲＩＳＰＲ標的化ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）を含み、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムのアクチベーターＲＮＡは、ｔｒａｎｓ−活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃＲＮＡ）を含む。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムのＣａｓタンパク質エレメントはＣａｓ９タンパク質を利用する。ｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡは、別個にすることも、またはリンカーループ配列を介して単一のＲＮＡ構築物に合わせることもできる。この合わせたＲＮＡ構築物は単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ；またはガイドＲＮＡ）と呼ばれる。
【０２６４】
方法、材料、送達ビヒクル、ベクター、粒子、ＡＡＶ、ならびに量および製剤化に関するものを含めたこれを作製および使用することを含めた、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステム、その構成成分、およびこのような構成成分の送達に関する一般的な情報については、以下に見出される：米国特許第８，９９９，６４１号、第８，９９３，２３３号、第８，９４５，８３９号、第８，９３２，８１４号、第８，９０６，６１６号、第８，８９５，３０８号、第８，８８９，４１８号、第８，８８９，３５６号、第８，８７１，４４５号、第８，８６５，４０６号、第８，７９５，９６５号、第８，７７１，９４５号および第８，６９７，３５９号；米国特許公開ＵＳ２０１４−０３１０８３０、ＵＳ２０１４−０２８７９３８Ａ１、ＵＳ２０１４−０２７３２３４Ａ１、ＵＳ２０１４−０２７３２３２Ａ１、ＵＳ２０１４−０２７３２３１、ＵＳ２０１４−０２５６０４６Ａ１、ＵＳ２０１４−０２４８７０２Ａ１、ＵＳ２０１４−０２４２７００Ａ１、ＵＳ２０１４−０２４２６９９Ａ１、ＵＳ２０１４−０２４２６６４Ａ１、ＵＳ２０１４−０２３４９７２Ａ１、ＵＳ２０１４−０２２７７８７Ａ１、ＵＳ２０１４−０１８９８９６Ａ１、ＵＳ２０１４−０１８６９５８、ＵＳ２０１４−０１８６９１９Ａ１、ＵＳ２０１４−０１８６８４３Ａ１、ＵＳ２０１４−０１７９７７０Ａ１およびＵＳ２０１４−０１７９００６Ａ１、ＵＳ２０１４−０１７０７５３；欧州特許ＥＰ２７８４１６２Ｂ１およびＥＰ２７７１４６８Ｂ１；欧州特許出願ＥＰ２７７１４６８（ＥＰ１３８１８５７０．７）、ＥＰ２７６４１０３（ＥＰ１３８２４２３２．６）、およびＥＰ２７８４１６２（ＥＰ１４１７０３８３．５）；ならびにＰＣＴ特許出願公開ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１４／０９３６６１、ＷＯ２０１４／０９３６９４、ＷＯ２０１４／０９３５９５、ＷＯ２０１４／０９３７１８、ＷＯ２０１４／０９３７０９、ＷＯ２０１４／０９３６２２、ＷＯ２０１４／０９３６３５、ＷＯ２０１４／０９３６５５、ＷＯ２０１４／０９３７１２、ＷＯ２０１４／０９３７０１、ＷＯ２０１４／０１８４２３、ＷＯ２０１４／２０４７２３、ＷＯ２０１４／２０４７２４、ＷＯ２０１４／２０４７２５、ＷＯ２０１４／２０４７２６、ＷＯ２０１４／２０４７２７、ＷＯ２０１４／２０４７２８、ＷＯ２０１４／２０４７２９、およびＷＯ２０１６／０２８６８２。
【０２６５】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである。「ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステム」は、（ａ）少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメントまたはこのガイドＲＮＡエレメントをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸であって、このガイドＲＮＡが、標的核酸の遺伝子座においてヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有するターゲッターＲＮＡを含む、ガイドＲＮＡエレメントまたは核酸；ならびに（ｂ）Ｃｐｆタンパク質エレメントまたはこのＣｐｆタンパク質エレメントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
【０２６６】
Ｃｐｆタンパク質エレメントの例として、Ｃｐｆ１ヌクレアーゼ、例えば、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  Ｃｐｆ１（ＦｎＣｐｆ１）およびその任意のバリアントが挙げられる。例えば、Ｚｅｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｃｐｆ１  ｉｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ  ｏｆ  ａ  ｃｌａｓｓ  ２  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ  ｓｙｓｔｅｍ”，  Ｃｅｌｌ，  １６３（３）：  ｐａｇｅｓ  ７５９−７１；およびＦｏｎｆａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｔｈｅ  ＣＲＩＳＰＲ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＤＮＡ−ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  Ｃｐｆ１  ａｌｓｏ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ”  Ｎａｔｕｒｅ，  ５３２（７６００）：  ｐａｇｅ，  ５１７−２１を参照されたい。Ｃｐｆ１の好ましいＰＡＭは５’−ＴＴＮであり、ゲノムの位置とＧＣ含量の両方において、Ｃａｓ９（３’−ＮＧＧ）とは異なる。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムは、アクチベーターＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を利用しなくてもよい。Ｃｐｆ１もガイドＲＮＡも一般的にこれらのＳｐＣａｓ９同等物より小さい。Ｃｐｆ１遺伝子座は、混合アルファ／ベータドメイン、ＲｕｖＣ−Ｉ、これに続くヘリックス領域、ＲｕｖＣ−ＩＩおよびジンクフィンガー様ドメインを含有する。Ｃｐｆ１タンパク質は、Ｃａｓ９のＲｕｖＣドメインと同様であるＲｕｖＣ様エンドヌクレアーゼドメインを有する。さらに、Ｃｐｆ１はＨＮＨエンドヌクレアーゼドメインを有さず、Ｃｐｆ１のＮ末端はＣａｓ９のアルファヘリックスの認識ローブを有さない。Ｃｐｆ１遺伝子座は、ＩＩ型システムよりも、ＩおよびＩＩＩ型により類似したＣａｓ１、Ｃａｓ２およびＣａｓ４タンパク質をコードする。Ｃｐｆ１−ファミリータンパク質は多くの細菌種に見出すことができる。
【０２６７】
特定の理論に拘束されることなく、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムは、Ｃａｓ９で標的化されたＧ豊富なＰＡＭとは対照的に、プロトスペーサー隣接モチーフ５’−ＹＴＮ−３’（式中、「Ｙ」はピリミジンであり、「Ｎ」は任意の核酸塩基である）または５’−ＴＴＮ−３を識別することにより、標的ＤＮＡまたはＲＮＡを切断するＣｐｆ１−ｃｒＲＮＡ複合体を利用する。ＰＡＭの識別後、Ｃｐｆ１は４または５のヌクレオチドオーバーハングの粘着性末端様ＤＮＡ二本鎖切断を導入する。
【０２６８】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはＮｇＡｇｏベースのシステムである。ＮｇＡｇｏベースのシステムは、少なくとも１つのガイドＤＮＡエレメントまたはこのガイドＤＮＡエレメントをコードする核酸配列（複数可）を含む核酸；およびＤＮＡガイド型エンドヌクレアーゼを含む。ＮｇＡｇｏベースのシステムは、ガイドエレメントとしてＤＮＡを利用する。その作動原理はＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９技術のものとは類似しているが、そのガイドエレメントはＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９技術のｇＲＮＡではなく、ガイドＤＮＡ（ｄＤＮＡ）のセグメントである。ＤＮＡガイド型エンドヌクレアーゼの例は、Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉ由来のアルゴノートエンドヌクレアーゼ（ＮｇＡｇｏ）である。例えば、Ｆｅｎｇ  Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ”ＤＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉ  Ａｒｇｏｎａｕｔｅ”，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  （２０１６）：ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．３５４７を参照されたい。
【０２６９】
「リンカー」、「ペプチドリンカー」、「ペプチド性リンカー」または「ペプチドスペーサー」とは、融合タンパク質中の異なる単量体の接続、および前記融合タンパク質活性のための正しい立体配座の採用を可能にし、単量体のいずれの活性も変化させないペプチド配列を意味することを意図する。ペプチドリンカーは、非限定的な指標範囲として、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０〜５０アミノ酸またはこの範囲内の任意の中間値の様々なサイズであってもよい。
【０２７０】
ゲノム編集効率を増加させるためのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤
【０２７１】
標的化されたゲノム編集効率は、細胞（複数可）に、本明細書に記載されている１つまたは複数の化合物（例えば、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤）およびゲノム編集システムを投与することにより増加することができる。使用に適したゲノム編集システムとして、例えば、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムまたはＮｇＡｇｏベースのシステムが挙げられる。本開示の方法、組成物、およびキットは、ゲノム編集効率を増加するためのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および／またはゲノム編集システムを提供する。一部の実施形態では、ＨＤＲゲノム編集効率は、細胞（複数可）にＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与した後に増加する。
【０２７２】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムである。ＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムまたはそのバリアントであり得る。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムは、任意のＣａｓエンドヌクレアーゼ、例えば、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼおよびそのバリアントを使用することができる。Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼの例として、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼまたはそのバリアント、例えば、ＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、またはＣａｓＤ１０Ａニッカーゼが挙げられる。Ｃａｓエンドヌクレアーゼは、野生型、操作された、またはニッカーゼ突然変異体、またはその任意の変化形であり得る。
【０２７３】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ配列、ｔｒａｎｓ−活性化ｃｒ（ｔｒａｃｒ）配列、ガイド配列およびＣａｓエンドヌクレアーゼまたはこれらの任意の組合せを含む。
【０２７４】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ配列を含むＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｎｓ−活性化ｃｒ（ｔｒａｃｒ）配列を含むＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）およびＣａｓエンドヌクレアーゼまたはこれらの任意の組合せを含む。
【０２７５】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムは、ＣＲＩＳＰＲ配列、ガイド配列、およびＣａｓエンドヌクレアーゼまたはＣｐｆエンドヌクレアーゼ、またはこれらの任意の組合せを含む。
【０２７６】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのゲノム編集システムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである。Ｃｐｆヌクレアーゼはクラス２ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムエンドヌクレアーゼである。Ｃｐｆは単一ＲＮＡガイド型エンドヌクレアーゼである。Ｃｐｆヌクレアーゼは、野生型、操作された、またはニッカーゼ突然変異体、またはその任意の変化形であり得る。例えば、Ｚｅｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ，，  ”ＣＰＦ１  ｉｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ  ｏｆ  ａ  Ｃｌａｓｓ  ２  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ  Ｓｙｓｔｅｍ”，  Ｃｅｌｌ，  １６３（３）：７５９−７１を参照されたい。一部の実施形態では、ＣｐｆヌクレアーゼはＣｐｆ１エンドヌクレアーゼである。
【０２７７】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはメガヌクレアーゼベースのシステムである。メガヌクレアーゼベースのゲノム編集は、大きなＤＮＡ標的部位を認識する（例えば通常約＞１２ｂｐ）配列特異的なエンドヌクレアーゼを使用する。例えば、Ｕ．Ｓ．９，３６５，９６４を参照されたい。メガヌクレアーゼは、全体的なゲノムの完全性に影響を与えることなく、独特な染色体配列を切断することができる。一部の実施形態では、メガヌクレアーゼはホーミングエンドヌクレアーゼであり得る。一部の実施形態では、メガヌクレアーゼは、イントロンエンドヌクレアーゼまたはインテインエンドヌクレアーゼであり得る。ホーミングエンドヌクレアーゼはＬＡＧＬＩＤＡＤＧファミリーに属することができる。メガヌクレアーゼは、野生型、操作された、またはニッカーゼ突然変異体であり得る。
【０２７８】
一部の実施形態では、遺伝子編集システムはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステムである。ＺＦＮは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ切断ドメインとの間の融合に基づき操作された人工制限酵素である。例えば、Ｕ．Ｓ．９，１４５，５６５を参照されたい。
【０２７９】
一部の実施形態では、遺伝子編集システムは、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である。ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインのＤＮＡ切断ドメインへの融合により生成された、操作された制限酵素である。例えば、Ｕ．Ｓ．９，１８１，５３５を参照されたい。
【０２８０】
一部の実施形態では、遺伝子編集システムはアルゴノートベースのシステムである。アルゴノートベースの遺伝子編集システムは、アルゴノートから誘導されるエンドヌクレアーゼおよび５’リン酸化ｓｓＤＮＡを含む。一部の実施形態では、リン酸化ｓｓＤＮＡは、１０〜４０ヌクレオチド、１５〜３０ヌクレオチドまたは１８〜３０ヌクレオチド（例えば、約２４ヌクレオチド）の長さであり得る。一部の実施形態では、アルゴノートエンドヌクレアーゼは任意のエンドヌクレアーゼであり得る。一部の実施形態では、アルゴノートエンドヌクレアーゼは、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ（ＴｔＡｇｏ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｕｒｉｏｓｕｓ（ＰｆＡｇｏ）、またはＮａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉ（ＮｇＡｇｏ）から誘導される。一部の実施形態では、Ｎａｔｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉ（ＮｇＡｇｏ）は株２（すなわちＮ．ｇｒｅｇｏｒｙｉ  ＳＰ２）である。一部の実施形態では、アルゴノートエンドヌクレアーゼはＮｇＡｇｏである。例えば、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ”ＤＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉ  Ａｒｇｏｎａｕｔｅ”，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｍａｙ  ２０１６を参照されたい。
【０２８１】
ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、任意のＤＮＡ−ＰＫ阻害剤であり得る。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、ＤＮＡ−ＰＫの阻害を引き起こす任意の化合物または物質であり得る。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は化合物、小分子、抗体、またはヌクレオチド配列であり得る。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）で表される化合物である。
【０２８２】
一部の実施形態では、本開示は、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）によって表される化合物
【化３７】
2021511314.tif 000039
または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、環Ａ、環Ｂおよび環Ｃのそれぞれは、独立して、本明細書の他所に定義される通りである］を投与することを含む、方法を提供する。
【０２８３】
環Ａは、
【０２８４】
【化３８】
2021511314.tif 000040
から選択される芳香族環系であり、
【０２８５】
環Ｂは、
【０２８６】
【化３９】
2021511314.tif 000041
から選択される環系であり、環Ｂは、−Ｆ、−ＯＨ、ならびに−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で、必要に応じて置換されており、
【０２８７】
環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキル、５〜６員のヘテロアリール、またはフェニル基であり、環Ｃは、ハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、−ＯＨ、および−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じてさらに置換されており、
【０２８８】
Ｘは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＯＣ１〜４アルキル−、−Ｓ−、または−ＣＨ２−であり、
【０２８９】
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、独立して、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ１およびＲ２は、同時に水素であってはならず、
【０２９０】
各Ｒ３は、独立して、水素、−Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、−ＯＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜２アルキル、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜２アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ３〜４シクロアルキル、または−ＮＲＲ’であり、前記Ｒ３のアルキルおよびシクロアルキルのそれぞれは、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
【０２９１】
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜１０シクロアルキル、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜１０員のヘテロシクリルであり、前記Ｒ４基のそれぞれは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、Ｃ１〜４アルキル、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ２〜４アルケニル、Ｃ２〜４アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ１〜４アルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｏ−Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ１〜４アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキル）、ＣＨ２ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、Ｃ０〜４アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５、Ｃ０〜４アルキル−Ｎ（Ｒ５）２、５〜６員のヘテロシクリル、−Ｏ（Ｃ１〜４アルキル）ＯＲ５、−ＯＲ５およびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、前記必要に応じたＲ４の置換基のそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜４アルキル、−ＯＨ、−ＯＣ１〜４アルキル、−ＳＣ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜４アルキル、および−Ｃ（Ｏ）ＯＣ０〜４アルキル−Ｃ３〜５シクロアルキルからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて独立して置換されており、
【０２９２】
各Ｒ５は、独立して、水素、Ｃ１〜４アルキル、フェニル、５〜６員のヘテロアリールもしくは４〜７員のヘテロシクリルであり、各Ｒ５は、独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣ１〜２アルキル、５〜６員のヘテロアリール、および４〜７員のヘテロシクリルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されており、または２個のＲ５基は、介在する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成し、
【０２９３】
Ｒ６は、水素であるか、または−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨおよび−ＯＣ１〜２アルキルからなる群から選択される１つもしくは複数の置換基で必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、
【０２９４】
Ｒ７は、６〜１０員のアリール、５〜１０員のヘテロアリール、または４〜７員のヘテロシクリルであり、そのそれぞれは、−Ｆ、−Ｃｌ、Ｃ１〜２アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＮ、および−ＯＲからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、
【０２９５】
ＲおよびＲ’のそれぞれは、独立して、水素もしくはＣ１〜４アルキルであり、またはＲおよびＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、必要に応じてモルホリン環、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環もしくはピペラジン環を形成する。
【０２９６】
一部の実施形態では、本開示は、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（ＩＩ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化４０】
2021511314.tif 000042
［式中、式（ＩＩ）の可変要素は、それぞれ独立して、下記の通りである］を投与することを含む、方法を提供する。
【０２９７】
式（ＩＩ）の可変要素の第１の組では、式（ＩＩ）の可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかにおいて上記の通りである。
【０２９８】
式（ＩＩ）の可変要素の第２の組では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ２は、水素である。式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【０２９９】
一部の実施形態では、本開示は、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）もしくは（ＩＩＩ−Ｂ−２）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【化４１】
2021511314.tif 000043
［式中、式（ＩＩ）の可変要素は、それぞれ独立して、下記の通りである］
【０３００】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１の組では、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかにおいて上記の通りである。
【０３０１】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第２の組では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜２７の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０２】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第３の組では、Ｒ１は、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１または第２の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０３】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第４の組では、Ｒ１は、−ＮＨＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜３の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０４】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第５の組では、Ｒ１は、−ＯＲ４であり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜４の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０５】
式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第６の組では、Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、水素またはメチルであり、式（Ｉ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、または（ＩＩＩ−Ｂ−２）の可変要素の第１〜５の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０６】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、式（ＩＶ）によって表されるか、または薬学的に許容されるその塩
【化４２】
2021511314.tif 000044
であり、式中、式（ＩＶ）の可変要素は、それぞれ独立して、下記の通りである。
【０３０７】
式（ＩＶ）の可変要素の第１の組では、可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０３０８】
式（ＩＶ）の可変要素の第２の組では、Ｒ１は、水素、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ０〜４アルキル−ＮＨＲ４、−ＯＲ４、またはＲ７であり、式（ＩＶ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれかに記載される通りである。
【０３０９】
式（ＩＶ）の可変要素の第３の組では、環Ｂは、必要に応じて置換されている
【化４３】
2021511314.tif 000045
であり、式（ＩＶ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（ＩＶ）の可変要素の第１または第２の組に記載される通りである。
【０３１０】
一部の実施形態では、本開示は、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｖ−Ａ）もしくは（Ｖ−Ｂ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩
【化４４】
2021511314.tif 000046
［式中、式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素のそれぞれは、独立して、下記の通りである］を投与することを含む、方法を提供する。
【０３１１】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第１の組では、可変要素のそれぞれは、独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０３１２】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第２の組では、Ｒ３は、水素、メチル、シクロプロピル、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＣ１〜２アルキル、−ＮＲＲ’、または−ＣＮであり、前記Ｒ３のアルキルのそれぞれは、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されており、各Ｒ４は、独立して、−Ｆ、−ＯＨ、および−Ｏ（Ｃ１〜２アルキル）からなる群から選択される１つまたは複数の置換基で必要に応じて置換されている、必要に応じて置換されているＣ１〜４アルキルであり、ＲおよびＲ’は、それぞれ独立して、水素またはＣ１〜２アルキルである。式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）の可変要素の第１〜３０の組のいずれか１つに記載される通りである。
【０３１３】
式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第３の組では、各Ｒ３は、独立して、水素、メチル、−Ｃｌ、−ＯＣＨ３、−ＣＮ、シクロプロピル、−ＮＨＣＨ３、または−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、水素またはメチルである。式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｖ−Ａ）または（Ｖ−Ｂ）の可変要素の第１または第２の組に記載される通りである。
【０３１４】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）のいずれか１つによって表されるか、または薬学的に許容されるその塩であり、これらの式の可変要素のそれぞれは、独立して、表１および２の構造式に図示される通りである。
【０３１５】
一部の実施形態では、本開示はまた、相同組換え修復（ＨＤＲ）経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断を修復する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【０３１６】
ゲノム編集システムは、標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、ＤＮＡ切断はＨＤＲ経路を介して少なくとも部分的に修復される。
【０３１７】
一部の実施形態では、本開示はまた、ＮＨＥＪ経路を介した１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断の修復を阻害または抑制する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を有する１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【０３１８】
ゲノム編集システムは、１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、ＤＮＡ切断をもたらし、ＮＨＥＪ経路を介したＤＮＡ切断の修復は阻害または抑制される。
【０３１９】
一部の実施形態では、本開示はまた、１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質の発現を改変する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、ゲノム編集システムおよび式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【０３２０】
ゲノム編集システムは、標的遺伝子（複数可）の１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集をもたらし、この編集は、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現を改変する。
【０３２１】
一部の実施形態では、ＤＮＡ切断はＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）を含む。
【０３２２】
一部の実施形態では、化合物は、式（Ｉ）の構造を有する化合物、およびアジピン酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸または安息香酸から選択される共結晶形成剤を含む、共結晶である。
【０３２３】
一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞において標的ゲノム領域を編集する効率は、化合物が存在しないこと以外の点では同一である１つまたは複数の細胞と比較して増加する。
【０３２４】
一部の実施形態では、ＨＤＲ経路を介した１つまたは複数の細胞の標的ゲノム領域におけるＤＮＡ切断の修復の効率が、化合物が存在しないこと以外の点では同一である細胞（複数可）と比較して増加する。
【０３２５】
一部の実施形態では、ＮＨＥＪ経路を介した１つまたは複数の細胞の標的ゲノム領域におけるＤＮＡ切断の修復を阻害または抑制する効率が、化合物が存在しないこと以外の点では同一である細胞（複数可）と比較して増加する。
【０３２６】
一部の実施形態では、効率が、化合物が存在しないこと以外の点では同一である細胞（複数可）と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍増加する。
【０３２７】
一部の実施形態では、効率は、標的化されたポリヌクレオチド組込みの頻度により測定される。一部の実施形態では、効率は標的化された突然変異導入の頻度により測定される。一部の実施形態では、標的化された突然変異導入は、点突然変異、欠失、および／または挿入を含む。
【０３２８】
一部の実施形態では、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現は、投与前の１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して増加する。例えば、前記発現は、投与前の１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、または１０倍増加する。
【０３２９】
一部の実施形態では、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現は、投与前の１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して低減する。例えば、遺伝子発現は、投与前の１つまたは複数の細胞におけるベースライン発現レベルと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低減する。
【０３３０】
一部の実施形態では、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現は、１つまたは複数の細胞において実質的に消失する。
【０３３１】
一部の実施形態では、細胞は、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズに同期化される。
【０３３２】
一部の実施形態では、前記化合物が投与されたまたは接触させられた１つまたは複数の細胞は、前記化合物を投与されても、接触させられてもいない１つまたは複数の細胞と比較して生存期間の増加を有する。
【０３３３】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムおよび化合物は、１つまたは複数の細胞に同時に投与される。一部の実施形態では、ゲノム編集システムおよび化合物は、１つまたは複数の細胞に逐次的に投与される。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、化合物の前に１つまたは複数の細胞に投与される。一部の実施形態では、化合物は、ゲノム編集システムの前に１つまたは複数の細胞に投与される。
【０３３４】
一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞は培養細胞である。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞は生物内のｉｎ  ｖｉｖｏ細胞である。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞は生物由来のｅｘ  ｖｉｖｏ細胞である。
【０３３５】
一部の実施形態では、生物は哺乳動物である。一部の実施形態では、生物はヒトである。
【０３３６】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムおよび化合物は同じ経路を介して投与される。一部の実施形態では、ゲノム編集システムおよび化合物は異なる経路を介して投与される。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは静脈内投与され、化合物は経口投与される。
【０３３７】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムから選択される。
【０３３８】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはＣＲＩＳＰＲベースのシステムである。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムまたはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである。
【０３３９】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムは、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムであり、このＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムは、（ａ）以下を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメント：（ｉ）１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡまたはこのターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；（ｉｉ）およびターゲッターＲＮＡとのハイブリッド形成が可能なヌクレオチド配列を含むアクチベーターＲＮＡまたはこのアクチベーターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；ならびに（ｂ）Ｃａｓタンパク質を含むＣａｓタンパク質エレメントまたはこのＣａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む。
【０３４０】
一部の実施形態では、ターゲッターＲＮＡおよびアクチベーターＲＮＡは、単一分子として融合される。
【０３４１】
一部の実施形態では、Ｃａｓタンパク質はＩＩ型Ｃａｓ９タンパク質である。一部の実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、またはＤ１０Ａニッカーゼ、またはこれらの任意の組合せである。
【０３４２】
一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲベースのシステムは、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムであり、このＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムは、（ａ）少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメントまたはこのガイドＲＮＡエレメントをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸であって、このガイドＲＮＡが１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡを含む、ガイドＲＮＡエレメントまたは核酸；および（ｂ）Ｃｐｆタンパク質を含むＣｐｆタンパク質エレメントまたはこのＣｐｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
【０３４３】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムは１つまたは複数のベクターにより送達される。
【０３４４】
一部の実施形態では、１つまたは複数のベクターはウイルスベクター、プラスミド、またはｓｓＤＮＡから選択される。
【０３４５】
一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴および単純ヘルペスのウイルスベクターから選択される。
【０３４６】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムは合成ＲＮＡにより送達される。
【０３４７】
一部の実施形態では、ゲノム編集システムはナノ製剤により送達される。
【０３４８】
一部の実施形態では、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集するためのキットまたは組成物が提供される。一部の実施形態では、キットまたは組成物は、ゲノム編集システム、ならびに
【０３４９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。
【０３５０】
一部の実施形態では、キットまたは組成物のゲノム編集システムは、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムである。一部の実施形態では、キットまたは組成物のゲノム編集システムはＣＲＩＳＰＲベースのシステムである。一部の実施形態では、キットまたは組成物のＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムまたはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムである。
【０３５１】
一部の実施形態では、キットまたは組成物のＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムであり、このＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムは、（ａ）以下を含む少なくとも１つのガイドＲＮＡエレメント：（ｉ）１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡまたはこのターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；（ｉｉ）およびターゲッターＲＮＡとのハイブリッド形成が可能なヌクレオチド配列を含むアクチベーターＲＮＡ、またはこのアクチベーターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；ならびに（ｂ）Ｃａｓタンパク質を含むＣａｓタンパク質エレメントまたはこのＣａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む。
【０３５２】
一部の実施形態では、キットまたは組成物のＣａｓタンパク質はＩＩ型Ｃａｓ９タンパク質である。一部の実施形態では、キットまたは組成物のＣａｓ９タンパク質は、ＳａＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９ｎ、Ｃａｓ９−ＨＦ、Ｃａｓ９−Ｈ８４０Ａ、ＦｏｋＩ−ｄＣａｓ９、もしくはＤ１０Ａニッカーゼ、またはこれらの任意の組合せである。
【０３５３】
一部の実施形態では、キットまたは組成物のＣＲＩＳＰＲベースのシステムはＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムであり、このＣＲＩＳＰＲ−Ｃｐｆシステムは、（ａ）１つまたは複数の標的ゲノム領域におけるヌクレオチド配列に実質的に相補的なヌクレオチド配列を含むターゲッターＲＮＡ、またはこのターゲッターＲＮＡをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸；および（ｂ）Ｃｐｆタンパク質を含むＣｐｆタンパク質エレメント、またはこのＣｐｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む核酸を含む。
【０３５４】
一部の実施形態では、キットまたは組成物のゲノム編集システムは、１つまたは複数のベクターに含まれるまたはパッケージされる。一部の実施形態では、１つまたは複数のベクターは、ウイルスベクター、プラスミド、またはｓｓＤＮＡから選択される。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴および単純ヘルペスのウイルスベクターからなる群から選択される。
【０３５５】
一部の実施形態では、ゲノム編集効率の増加は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムが細胞（複数可）に投与されない条件と比較して、または細胞（複数可）にゲノム編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されない条件と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍である。
【０３５６】
ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システム、キット、およびその組成物の使用
【０３５７】
特定のゲノム領域が正確に変化するゲノム編集は、多大な治療的可能性を保持する。
【０３５８】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することを介して、ＨＤＲ経路を介して１つまたは複数の標的ゲノム領域内のＤＮＡ切断を修復するため、１つまたは複数の標的ゲノムのＤＮＡ切断のＮＨＥＪ媒介性修復を阻害または抑制するため、および１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質の発現を改変するために、１つまたは複数の標的ゲノム領域を編集するための方法が本明細書に提供されている。
【０３５９】
一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質の発現を改変する方法であって、１つまたは複数の標的ゲノム領域を含む１つまたは複数の細胞に、本明細書に記載されているゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することを含み、ゲノム編集システムが、標的遺伝子（複数可）の１つまたは複数の標的ゲノム領域の核酸（複数可）と相互作用して、１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集をもたらし、この編集が、標的遺伝子（複数可）に関連する下流遺伝子（複数可）および／またはタンパク質（複数可）の発現を改変する方法が本明細書に提供されている。
【０３６０】
ゲノム編集システムは、細胞（複数可）内の標的ゲノム領域を編集することができる任意のゲノム編集システムであり得る。例示的ゲノム編集システムは上記に詳細に記載されており、例えば、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムを含むことができる。
【０３６１】
１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、任意の種類の遺伝子操作または細胞のゲノムの操作を含む。１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集は、１つまたは複数のエンドヌクレアーゼにより実施される細胞（複数可）内のゲノム領域の挿入、欠失、または置換えを含むことができる。ゲノム領域は、細胞（複数可）内の遺伝物質、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドを含む。細胞（複数可）内のゲノム領域はまた、細胞（複数可）内に含有されるミトコンドリアまたは葉緑体のゲノムも含む。
【０３６２】
一部の実施形態では、対象の細胞（複数可）内の１つまたは複数の標的ゲノム領域の編集を必要とする疾患または状態を有する対象を処置する方法であって、１つまたは複数の細胞にゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を投与することを含む方法が本明細書に提供されている。
【０３６３】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている方法は、経路における、遺伝子、ＲＮＡ分子、タンパク質、タンパク質の群、または下流タンパク質の発現を改変するために使用される。このような改変は、疾患、機能障害、異常な生命体ホメオスタシスを処置するために使用することができ、これらは、後天性もしくは遺伝性のいずれか、または高齢化過程によるものである。本明細書で使用される場合、「改変する」または「改変している」という用語は、モジュレートする、促進する、低減する、増加する、挿入する、欠失する、ノックアウトする、ノックインすることなどを含む。
【０３６４】
当業者は、その疾患は、後天性であっても遺伝性であっても、または別の方法で得たものであっても、遺伝子またはタンパク質機能の関与を含むホメオスタシス機序の異常調節が関与していることを理解する。この目的を達成するために、当業者であれば、本明細書に提供されている方法を使用して、対象において、遺伝子機能をモジュレートする、改変する、増強する、低減する、または別の方法を提供することができる。
【０３６５】
遺伝子の発現の改変および結果として起こる細胞（複数可）内のタンパク質発現は、本明細書に提供されている方法、例えば、エクソン、イントロン、転写開始部位、プロモーター領域、エンハンサー領域、サイレンサー領域、インスレーター領域、抗リプレッサー、翻訳後調節エレメント、ポリアデニル化シグナル（例えば最小ポリＡ）、保存領域、転写因子結合部位のうちのいずれか、またはこれらの任意の組合せにおける核酸配列を特異的に編集すること（例えば、置換え、挿入または欠失、これらの任意の組合せ）により達成することができる。
【０３６６】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている方法、キットおよび組成物は、がんを有する対象を処置するために使用される。がんまたはがんに関連した状態を有する対象を処置する方法は、対象の細胞（複数可）に、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することを含む。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムの投与は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏであり得る。
【０３６７】
がんは任意の種類のがんであり得る。がんは、固形腫瘍、例えば、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、および他の組織臓器の腫瘍ならびに血液細胞のがん、例えば、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、Ｔ細胞リンパ球性白血病、およびＢ細胞リンパ腫を含めたリンパ腫および白血病を含む。がんは、黒色腫、白血病、星状細胞腫（ａｓｔｏｃｙｔｏｍａ）、神経膠芽腫、リンパ腫、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球白血病ならびに膵臓、乳房、甲状腺、卵巣、子宮、精巣、下垂体、腎臓、胃、食道および直腸のがんを含むことができる。
【０３６８】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている方法、キットおよび組成物は、以下のがんのうちのいずれか１種または複数種を有する対象を処置するために使用される：急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、小児小脳または脳の星状細胞腫、基底細胞癌、肝外胆管がん（胆管癌を参照）、膀胱がん、骨腫瘍、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳がん、脳腫瘍（小脳星状細胞腫）、脳腫瘍（脳星状細胞腫／悪性神経膠種）、脳腫瘍（上衣細胞腫）、脳腫瘍（髄芽腫）、脳腫瘍（テント上原始神経外胚葉性腫瘍）、脳腫瘍（視覚経路および視床下部神経膠腫）、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、小児カルチノイド腫瘍、消化管カルチノイド腫瘍、原発不明癌腫、原発性中枢神経系リンパ腫、小児の小脳星状細胞腫、小児の脳星状細胞腫／悪性神経膠種、子宮頚部がん、小児がん、軟骨肉腫、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣細胞腫、類上皮血管内皮腫（Ｅｐｉｔｈｅｌｉｏｄ  Ｈｅｍａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｍａ）（ＥＨＥ）、食道がん、ユーイングファミリーの腫瘍のユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼がん（眼球内黒色腫）、眼がん（網膜芽腫）、胆嚢がん、胃のがん（胃がん）、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外、性腺外、または卵巣の胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、脳幹の神経膠腫、神経膠腫（小児の脳星状細胞腫）、小児視覚経路および視床下部の神経膠腫、胃カルチノイド、有毛細胞白血病、頭頸部がん、心臓がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、小児の視床下部および視覚経路神経膠腫、眼球内黒色腫、島細胞癌（膵臓内分泌部）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎臓細胞がん）、喉頭部がん、白血病類、急性リンパ性白血病（急性リンパ球性白血病とも呼ばれる）、急性骨髄性白血病（Ｌｅｕｋａｅｍｉａ，  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ）（急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）とも呼ばれる）、慢性リンパ球性白血病（Ｌｅｕｋａｅｍｉａ，  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ）（慢性リンパ球性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）とも呼ばれる）、慢性骨髄性白血病（Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）（慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）とも呼ばれる）、有毛細胞白血病、唇および口腔がん、脂肪肉腫、肝臓がん（原発性）、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキン（ホジキンを除くすべてのリンパ腫の古い分類）リンパ腫、原発性中枢神経系ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、男性の乳がん、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、小児の黒色腫、眼球内（眼）黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、成人期悪性中皮腫、原発不明の、小児の転移性扁平頸部がん、がん���多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、成人の急性骨髄性白血病、小児の急性骨髄腫、多発性（骨髄がん）、骨髄増殖性障害、慢性粘液腫、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、乏突起膠腫、口のがん、口腔咽頭がん、骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮間質性腫瘍）、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、島細胞膵臓がん、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎臓細胞癌（腎臓がん）、腎孟尿管がん（ｃａｎｅｒ）、移行性細胞がん、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、ユーイングファミリーの腫瘍、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、皮膚癌（メルケル細胞）、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮癌−皮膚がん（非黒色腫）を参照、原発不明、転移性の頸部扁平上皮がん、胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉腫およびセザリー症候群）、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、甲状腺がん、腎孟尿管の移行性細胞がん、妊娠性絨毛腫瘍、成人期の原発部位不明癌、小児の原発部位不明のがん、尿管および腎盂移行性細胞がん、尿道がん、子宮がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、膣がん、視覚経路および視床下部神経膠腫、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍（腎臓がん）。
【０３６９】
一部の実施形態では、がんに関連する例示的標的遺伝子として、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＣＳＬ３、ＡＦ１５Ｑ１４、ＡＦ１Ｑ、ＡＦ３ｐ２１、ＡＦ５ｑ３１、ＡＫＡＰ９、ＡＴ１、ＡＫＴ２、ＡＬＤＨ２、ＡＬ、ＡＬ０１７、ＡＰＣ、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＡＲＨＨ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲＩＤ２、ＡＲＮＴ、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＳＸＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＩＣ、ＡＴＭ、ＡＴＲＸ、ＡＸＩＮ１、ＢＡＰ１、ＢＣＬ１０、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ５、ＢＣＬ６、ＢＣＬ７Ａ、ＢＣＬ９、ＢＣＯＲ、ＢＣＲ、ＢＨＤ、ＢＩＲＣ３、ＢＬＭ、ＢＭＰＲＩＡ、ＢＲＡＦ、ＢＲＣＡｌ、ＢＲＣＡ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＩＰＩ、ＢＴＧ１、ＢＵＢ１Ｂ、Ｃ１２ｏｒｆ９、Ｃ１５ｏｒｆ２１、Ｃ１５ｏｒｆ５５、Ｃ１６ｏｒｆ７５、Ｃ２ｏｒｆ４４、ＣＡＭＴＡ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＲＳ、ＣＢＦＡ２Ｔ１、ＣＢＦＡ２Ｔ３、Ｃ．ＢＦＢ、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１ＩＰ１、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＣＮＥ１、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１１、ＣＤＫ１２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＮ２Ａ、ＣＤＮ２ａ（ｐｌ４）、ＣＤＮ２Ｃ、ＣＤＸ２、ＣＥＢＰＡ、ＣＥＰｌ、ＣＨＣＨＤ７、ＣＨＥＫ２、ＣＨＩＣ２、ＣＨＮｌ、ＣＩＣ、Ｃｉｎ  Ａ、ＣＬＴＣ、ＣＬＴＣＬ１、ＣＭＫＯＲ１、ＣＮＯＴ３、ＣＯＬ１Ａｌ、ＣＯＰＥＢ、ＣＯＸ６Ｃ、ＣＲＥＢ１、ＣＲＥＢ３Ｌ１、ＣＲＥＢ３Ｌ２、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＴＣ３、ＣＴＮＮＢ１、ＣＹＬＤ、Ｄ１０Ｓ１７０、ＤＡＸＸ、ＤＤＢ２、ＤＤＩＴ３、ＤＤＸ１０、ＤＤＸ５、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、Ｄ１ＣＥＲ１、ＤＮＭ２、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＵＸ４、ＥＢＦＩ、ＥＣＴ２Ｌ、ＥＧＦＲ、Ｅ１Ｆ４Ａ２、ＥＬＦ４、ＥＬＫ４、ＥＬＫＳ、ＥＬＬ、ＥＬＮ、ＥＭＬ４、ＥＰ３００、ＥＰＳ１５、ＥＲＢＢ２、ＥＲＣＣ２、ＥＲＣＣ３、ＥＲＣＣ４、ＥＲＣＣ５、ＥＲＧ、ＥＴＶｌ、ＥＴＶ４、ＥＴＶ５、ＥＴＶ６、ＥＶＩｌ、ＥＷＳＲ１、ＥＸＴｌ、ＥＸＴ２、ＥＺＨ２、ＥＺＲ、ＦＡＣＬ６、ＦＡＭ２２Ａ、ＦＡＭ２２Ｂ、ＦＡＭ４６Ｃ、１ＡＮＣＡ、ＥＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＢＸＯｌ１、ＦＢＸＷ７、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＥＶ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲＩＯＰ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＴＩ、ＦＩＩＩＴ、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＬＵ、ＦＬＪ２７３５２、ＦＬＴ３、ＦＮＢＰ１、ＦＯＸＬ２、ＦＯＸＯＩＡ、ＦＯＸ０３Ａ、ＦＯＸＰ１、ＦＳＴＬ３、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＦＶＴ１、ＧＡＳ７、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ２、ＧＡＴＡ３、ＧＭＰＳ、ＧＮＡ１１、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＧＡ５、ＧＯＰＣ、ＧＰＣ３、ＧＰＨＮ、ＧＲＡＦ、Ｈ３Ｆ３Ａ、ＩＩＣＭＯＧＴ−１、ＩＩＥＡＢ、ＨＥＲＰＵＤ１、ＩＩＥＹ１、ＩＩＩＰｌ、ＨＩＳＴ１ＩＴ３Ｂ、ＩＩＩＳＴ１ＩＩ４Ｉ、ＩＩＬＦ、ＨＬＸＢ９、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＮＲＮＰＡ２ＢＩ、ＨＯＯＫ３、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１３、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＣ１１、ＨＯＸＣ１３、ＨＯＸＤ１１、ＨＯＸＤ１３、ＨＲＡＳ、ＩＩＲＰＴ２、ＨＳＰＣＡ、ＨＳＰＣＢ、ＩＤＨｌ、ＩＤＨ２、ＩＧＨ、ＩＧＫ、ＩＧＬ、ＩＫＺＦｌ���ＩＬ２、ＴＬ２１Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７Ｒ、ＩＲＦ４、ＩＲＴＡ１、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＪＡＺＦ１、ＪＵＮ、ＫＣＮＪ５、ＫＤＭ５Ａ、ＫＤＭ５Ｃ、ＫＤＭ６Ａ、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ１５４９、ＫＩＦ５Ｂ、ＫＩＴ、ＫＬＦ４、ＫＬＫ２、ＫＲＡＳ、ＫＴＮ１、ＬＡＦ４、ＬＡＳＰｌ、ＬＣＫ、ＬＣＰ１、ＬＣＸ、ＬＨＦＰ、ＬＩＦＲ、ＬＭＯｌ、ＬＭ０２、ＬＰＰ、ＬＲＩＧ３、ＬＹＬ１、ＭＡＤＨ４、ＭＡＦ、ＭＡＦＢ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ２ＫＬ  ＭＡＰ２Ｋ２、ΜλΡ２Κ４、ＭＡＸ、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＤＳ１、ＭＤＳ２、ＭＥＣＴｌ、ＭＥＤ１２、ＭＥＮ１、ＭＥＴ、ＭＩＴＦ、ＭＫＬ１、ＭＬＦ１、ＭＬＩＩｌ、ＭＬＬ、ＭＬＬ２、ＭＬＬ３、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１０、ＭＬＬＴ２、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＬＬＴ６、ＭＬＬＴ７、ＭＮ１、ＭＰＬ、ＭＳＦ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＳＩ２、ＭＳＮ、ＭＴＣＰ１、ＭＵＣ１、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ１、ＭＹＣＮ、ＭＹＤ８８、ＭＹＨ１１、ＭＹＨ９、ＭＹＳＴ４、ＮＡＣＡ、ＮＢＳ１、ＮＣＯＡ１、ＮＣＯＡ２、ＮＣＯＡ４、ＮＤＲＧ１、ＮＦ１、ＮＦ２、ＮＦＥ２Ｌ２、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＩＮ、ＮＫＸ２−１、ＮＯＮＯ、ＮＯＴＣＨＩ、ＮＯＴＣＨ２、ＮＰＭｌ、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＡＳ、ＮＳＤｌ、ＮＴ５Ｃ２、ＮＴＲＫｌ、ＮＴＲＫ３、ＮＵＭＡｌ、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＯＬＩＧ２、ＯＭＤ、Ｐ２ＲＹ８、ＰＡＦＡＨ１Ｂ２、ＰＡＬＢ２、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＡＸ７、ＰＡＸ８、ＰＢＲＭ１、ＰＢＸ１、ＰＣＭ１、ＰＣＳＫ７、ＰＤＥ４ＤＩＰ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＲＩ、ＰＩＩＦ６、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＬＡＧ１、ＰＭＬ、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＰＭＸ１、ＰＮＵＴＬ１、ＰＯＴ１、ＰＯＵ２ＡＦ１、ＰＯＵ５Ｆ１、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＣＣ、ＰＲＤＭ１、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＦ１、ＰＲＫＡＲ１Ａ、ＰＲＯ１０７３、ＰＳＩＰ２、ＰＴＣＨ、ＰＴＥＮ、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＢ５ＥＰ、ＲＡＣｌ、ＲＡＤ５１Ｌ１、ＲＡＦｌ、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＮＢＰ１７、ＲＡＰＩＧＤＳＩ、ＲＡＲＡ、ＲＢＩ、ＲＢＭ１５、ＲＥＣＱＬ４、ＲＥＬ、ＲＥＴ、ＲＮＦ４３、ＲＯＳ１、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ５、ＲＰＮ１、ＲＵＮＤＣ２Ａ、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸＢＰ２、ＳＢＤＳ、ＳＤＣ４、ＳＤＨ５、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＣ、ＳＤＨＤ、ＳＥＰＴ６、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤ２、ＳＦ３Ｂ１、ＳＦＰＱ、ＳＦＲＳ３、ＳＨ２Ｂ３、ＳＨ３ＧＬ１、ＳＩＬ、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＭＡＲＣＢ１、ＳＭＡＲＣＥ１、ＳＭＯ、ＳＯＣＳ１、ＳＯＸ２、ＳＲＧＡＰ３、ＳＲＳＦ２、ＳＳＩ８、ＳＳ１８Ｌ１、ＳＳＨ３ＢＰ１、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ４、ＳＴＡＴ３、ＳＴＫ１１、ＳＴＬ、ＳＵＦＵ、ＳＩＪＺ１２、ＳＹＫ、ＴＡＦ１５、ＴＡＬＩ、ＴＡＬ２、ＴＣＥＡ１、ＴＣＦ１、ＴＣＦ１２、ＴＣＦ３、ＴＣＦ７Ｌ２、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ６、ＴＥＲＴ、ＴＥＴ２、ＴＦＥ３、ＴＦＥＢ、ＴＦＧ、ＴＦＰＴ、ＴＦＲＣ、ＴＨＲＡＰ３、ＴＩＦ１、ＴＬＸ１、ＴＬＸ３、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＯＰＩ、ＴＰ５３、ＴＰＭ３、ＴＰＭ４、ＴＰＲ、ＴＲＡ、ＴＲＡＦ７、ＴＲＢ、ＴＲＤ、ＴＲＩＭ２７、ＴＲＩＭ３３、ＴＲＩＰ１１、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＴＳＨＲ、ＴＴＬ、Ｕ２ＡＦ１、ＵＳＰ６、ＶＨＬ、ＶＴＵＡ、ＷＡＳ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＦ１、ＷＲＮ、ＷＴ１、ＷＴＸ、ＷＷＴＲ１、ＸＰＡ、ＸＰＣ、ＸＰＯｌ、ＹＷＨＡＥ、ＺＮＦ１４５、ＺＮＦ１９８、ＺＮＦ２７８、ＺＮＦ３３１、ＺＮＦ３８４、ＺＮＦ５２１、ＺＮＦ９、ＺＲＳＲ２またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３７０】
一部の実施形態では、本明細書に提供されている方法は、遺伝性障害を有する対象を処置するために使用される。遺伝的疾患もしくは遺伝的状態または遺伝性障害を有する対象を処置する方法は、対象の細胞（複数可）にＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することを含む。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムの投与は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏであり得る。
【０３７１】
遺伝性障害は、染色体領域内での突然変異または重複から（例えば、点突然変異、欠失、挿入、フレームシフト、染色体の重複または欠失から）生じ得る。遺伝性障害は任意の遺伝性障害であり得る。
【０３７２】
一部の実施形態では、遺伝性障害は、２２ｑ１１．２欠失症候群、アンジェルマン症候群、カナバン病、シャルコーマリートゥース疾患、色盲、ネコ鳴き症候群、ダウン症候群、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ヘモクロマトーシス、血友病、クラインフェルター症候群、神経線維腫症、フェニルケトン尿症、多嚢胞腎臓疾患、プラダー・ウィリ症候群、鎌状赤血球症、脊髄性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、テイ−サックス病、ターナー症候群、異常ヘモグロビン症、またはこれらの任意の組合せである。
【０３７３】
一部の実施形態では、遺伝性障害は、１ｐ３６欠失症候群、１８ｐ欠失症候群、２１−ヒドロキシラーゼ欠損症、４７ＸＸＸ（トリプルＸ症候群）、４７ＸＸＹ（クラインフェルター症候群）、５−ＡＬＡ脱水酵素欠損性ポルフィリン症（ＡＬＡ脱水酵素欠損症）、５−アミノレブリン酸脱水酵素欠損症ポルフィリン症、５ｐ欠失症候群（ネコ鳴き症候群）（別名５ｐ−症候群）、細血管拡張運動失調（別名Ａ−Ｔ）、アルファ１−アンチトリプシン欠損症（ＡＡＴ）、セルロプラスミン欠損症、軟骨無発生症ＩＩ型（ＡＣＧ２）、軟骨無形成症（ＡＣＨ）、酸性ベータ−グルコシダーゼ欠損症、ゴーシェ病（任意の型、例えば１型、２型、３型）、短頭合指症（アペール）（アペール症候群）、短頭合指症（任意の型、例えば、１型、２型、３型、５型）、ファイファー症候群、尖頭症、急性脳ゴーシェ病、急性間欠性ポルフィリン症、（ＡＩＰ）ＡＣＹ２欠損症、アルツハイマー病（ＡＤ）、アデレイド型頭蓋骨癒合症、ミュエンク症候群、大腸腺腫症、家族性大腸腺腫症、結腸の腺腫様ポリープ、家族性大腸腺腫症（ＡＤＰ）、アデニロコハク酸リアーゼ欠損症、副腎障害、副腎性器症候群、副腎脳白質ジストロフィー、アンドロゲン不感性症候群（ＡＩＳ）、アルカプトン尿症（ＡＫＵ）、ＡＬＡ脱水酵素欠損性ポルフィリン症、ＡＬＡ−Ｄポルフィリン症、ＡＬＡ脱水酵素欠損症、アラジール症候群、白子症、アルカプトン尿症、アルカプトン尿症、アレキサンダー病、アルカプトン尿症、アルカプトン尿性組織黒変症、アルカプトン尿症（アルファ−１プロテアーゼインヒビター疾患）、アルファ−１関連肺気腫、アルファ−ガラクトシダーゼＡ欠損症、ファブリー病、アルストレム症候群、アレキサンダー病（ＡＬＸ）、遺伝性エナメル質形成不全症、アミノレブリン酸脱水酵素欠損症、アミノアシラーゼ２欠損症、カナバン病、アンダーソン−ファブリー病、アンドロゲン不感性症候群、遺伝性鉄芽球性貧血、Ｘ連鎖の鉄芽球性脾性貧血および／または家族性貧血、広汎性体幹角化血管腫、びまん性体部被角血管腫、網膜血管腫症、フォンヒッペル−リンドウ疾患、ＡＰＣ抵抗性、ライデン型、第Ｖ因子ライデン栓友病、アペール症候群、ＡＲ欠損症、アンドロゲン不感性症候群、シャルコーマリートゥース病（任意の型、例えば、ＣＭＴ１、ＣＭＴＸ、ＣＭＴ２、ＣＭＴ４、重度早期開始ＣＭＴ）、クモ指症、マルファン症候群、ＡＲＮＳＨＬ、非症候性難聴（常染色体劣性、常染色体優性、ｘ連鎖、またはミトコンドリア）、遺伝性進行性関節眼疾患、スティックラー症候群（例えばＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ９Ａ１）、先天性多発性関節弛緩症、エーラース−ダンロス症候群（例えば過剰運動型、多発性関節弛緩型、古典型、血管型、後側弯型、皮膚脆弱型）Ａｓｐ欠損症、Ａｓｐａ欠損症、アスパルトアシラーゼ欠損症、細血管拡張運動失調、自閉症−認知症−運動失調−目的のない手の動き症候群、レット症候群、常染色体優性若年型ＡＬＳ、常染色体優性ｏｐｉｔｚ  Ｇ／ＢＢＢ症候群、常染色体劣性形態の若年型ＡＬＳ３型、筋萎縮性側索硬化症（任意の型；例えば、ＡＬＳ１、ＡＬＳ２、ＡＬＳ３、ＡＬＳ４、ＡＬＳ５、ＡＬＳ５、ＡＬＳ６、ＡＬＳ７、ＡＬＳ８、Ａ���Ｓ９、ＡＬＳ１０、ＡＬＳ１１、ＡＬＳ１２、ＡＬＳ１３、ＡＬＳ１４、ＡＬＳ１５、ＡＬＳ１６、ＡＬＳ１７、ＡＬＳ１８、ＡＬＳ１９、ＡＬＳ２０、ＡＬＳ２１、ＡＬＳ２２、ＦＴＤＡＬＳ１、ＦＴＤＡＬＳ２、ＦＴＤＡＬＳ３、ＦＴＤＡＬＳ４、ＦＴＤＡＬＳ４、ＩＢＭＰＦＤ２）、常染色体劣性非症候性難聴、常染色体劣性感覚神経的な聴力機能障害および甲状腺腫、ペンドレッド症候群、アレキサンダー疾患（ＡｘＤ）、アイエルザ症候群、家族性（ｆａｍｉｌｉｌａｌ）肺動脈性肺高血圧症、ヘキソサミニダーゼＧＭ２ガングリオシドーシスのＢバリアント、サンドホフ病、ＢＡＮＦ関連障害、神経線維腫症（任意の型、例えば、ＮＦ１、ＮＦ２、神経鞘腫症）、ベーレ−スティーブンソン脳回状頭皮症候群、良性発作性腹膜炎、ベンジャミン症候群、ベータ−サラセミア、ＢＨ４欠損症、テトラヒドロビオプテリン欠損症、両側性聴神経線維腫症、ビオチニダーゼ欠損症、膀胱がん、出血性障害、第Ｖ因子ライデン栓友病、ブロッホズルツベルガー症候群、色素失調症、ブルーム症候群、骨疾患、ブルタヴィーユ病、結節性硬化症、脳疾患、プリオン病、乳がん、バート−ホッグ−デュベ症候群、骨粗鬆症、骨形成不全症、広幅指−母趾症候群、ルビンシュタイン−テイビ症候群、青銅糖尿病、血色症、青銅硬変、球脊髄性筋萎縮症、Ｘ連鎖脊髄性延髄性筋萎縮症、ビュルガー−グリュッツ症候群、リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、ＣＧＤ慢性肉芽腫性障害、屈曲肢異形成症、家族性がん症候群、遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん、乳がん、膀胱がん、カルボキシラーゼ欠損症、多発性遅発性ビオチニダーゼ欠損症、ネコ鳴き症候群、ケーラー心顔症候群、セラミドトリヘキソシダーゼ欠損症、小脳網膜血管腫症、家族性フォンヒッペル−リンドウ病、脳動脈症、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、脳常染色体優性動脈症（ａｔｅｒｉｏｐａｔｈｙ）、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、大脳萎縮性高アンモニア血症、レット症候群、セレブロシドリピドーシス症候群、シャルコー病、ＣＨＡＲＧＥ症候群、軟骨形成異常症、軟骨形成異常症症候群、感音性難聴を伴う軟骨形成異常症、耳脊椎巨大骨端異形成、軟骨形成不全症、舞踏病アテトーゼ（自傷行為）、高尿酸血症症候群（レッシュナイハン症候群）、古典的ガラクトース血症、ガラクトース血症、口唇裂および口蓋裂、スティックラー症候群、致死性小人症を伴うクローバ形頭蓋、致死性骨異形成症（例えば１型または２型）、コフィン−ローリー症候群（ＣＬＳ）、コケイン症候群、コフィン−ローリー症候群、コラーゲン異常症ＩＩ型およびＸＩ型、家族性の非ポリポーシス、遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん、家族性の結腸がん、家族性大腸腺腫症、直腸結腸がん、完全ＨＰＲＴ欠損症（レッシュナイハン症候群）、完全ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症、圧迫性ニューロパシー、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー、結合組織疾患、円錐動脈幹異常顔貌症候群、クーリー貧血、ベータ−サラセミア、銅蓄積症、ウィルソン病、銅輸送病、メンケス病、コプロポルフィリン症、遺伝性コプロポルフィリン症、コプロポルフィリノーゲン酸化酵素欠損症、カウデン症候群、ＣＰＸ欠損症、頭蓋顔面関節異常、���ルーゾン症候群、頭蓋顔面異骨症、クルーゾン症候群、クローン病、線維性狭窄、クルーゾン症候群、黒色表皮腫を伴うクルーゾン症候群、クルーゾン皮膚骨格症候群、クルーゾン皮膚骨格症候群、コケイン症候群（ＣＳ）、カウデン症候群、クルシュマン−バッテン−シュタイナート症候群、ベーレ−スティーブンソンの脳回状頭皮症候群、ベーレ−スティーブンソン脳回状頭皮症候群、Ｄ−グリセリン酸脱水素酵素欠損症、高シュウ酸塩尿、原発性まだらの骨幹端症候群、ストラドウィック型脊椎骨端骨幹端異形成、アルツハイマー型認知症（ＤＡＴ）、遺伝性高カルシウム尿症、デント病、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型およびベッカー型）、甲状腺腫を伴う難聴、ペンドレッド症候群、難聴網膜色素変性症症候群、アッシャー症候群、フェニルアラニン水酸化酵素欠損症疾患、神経変性疾患、ｄｅ  Ｇｒｏｕｃｈｙ症候群１、Ｄｅ  Ｇｒｏｕｃｈｙ症候群、デジェリン−ソッタス症候群、デルタ−アミノレブリン酸脱水酵素欠損性ポルフィリン症、認知症（ＣＡＤＡＳＩＬ症候群）、脱髄型大脳白質萎縮症、アレキサンダー病、皮膚脆弱型エーラース−ダンロス症候群（皮膚脆弱）、遺伝性発達障害、遠位遺伝性運動ニューロパシー（ｄＨＭＮ）、遠位遺伝性運動ニューロパシー（例えば、ＤＨＭＮ−Ｖ）、ＤＨＴＲ欠損症、アンドロゲン不感性症候群、びまん性のグロボイド体硬化症、クラッベ病、ディジョージ症候群、ジヒドロテストステロン受容体欠損症、アンドロゲン不感性症候群、遠位遺伝性運動ニューロパシー、筋直性ジストロフィー（１型または２型）、遠位型脊髄性筋萎縮症（任意の型、例えば、１型、２型、３型、４型、５型、６型を含む）、デュシェンヌ型／ベッカー型筋ジストロフィー、小人症（任意の種類、例えば、軟骨形成不全型、軟骨無形成症、致死性骨異形成型）、小人症−網膜萎縮−難聴症候群、コケイン症候群、脱髄性白質ジストロフィー（アレキサンダー病）、筋強直性ジストロフィー、異栄養網膜色素性骨形成不全症候群（アッシャー症候群）、早期発症型家族性アルツハイマー病（ＥＯＦＡＤ）、アルツハイマー病（例えば１型、２型、３型、または４型を含む）、エクマンロブシュタイン病、骨形成不全症、絞扼性ニューロパシー、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー、赤芽球型プロトポルフィリン症（ＥＰＰ）、赤芽球性貧血、ベータ−サラセミア、赤芽肝性プロトポルフィリン症、赤血球５−アミノレブリン酸合成酵素欠損症、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、眼のがん、網膜芽腫ＦＡ−フリードライヒ運動失調症、フリードライヒ運動失調症、ＦＡ、ファンコニ貧血、顔面傷害および障害、第Ｖ因子ライデン栓友病、ＦＡＬＳ、筋萎縮性側索硬化症、家族性聴神経腫瘍、家族性腺腫性ポリポーシス、家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）、家族性筋萎縮性側索硬化症、筋萎縮性側索硬化症、家族性自律神経異常症、家族性脂肪誘発性高トリグリセリド血症（家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症）、家族性血色症、血色症、家族性ＬＰＬ欠損症（家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症）、家族性非ポリポーシス結腸がん、遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん、家族性発作性多発性漿膜炎、家族性ＰＣＴ、晩発性皮膚ポルフィリン症、家族性圧力感受性のニューロパシー、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー、家族性原発性肺高血圧（ＦＰＰＨ）、家族性血管系白質脳症、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、ＦＡＰ（家族性腺腫性ポリポーシス）、ＦＤ（家族性自律神経異常症）、フェロケラターゼ欠損症、フェロポーチン疾患、ヘモクロマトーシス（任意の型、例えば、１型、２Ａ型、２Ｂ型、３型、４型、新生児ヘモクロマトーシス、セルロプラスミン欠損症（ａｃａｅｒｕｌｏｐｌａｓｍｉｎａｅｍｉａ）、先天性無トランスフェリン血症、ｇｒａｃｉｌｅ症候群）周期熱症候群（ｓｙｎｄｏｍｅ）、家族性地中海熱（ＦＭＦ）、ＦＧ症候群、ＦＧＦＲ３−関連冠状縫合骨癒合症、星状細胞のフィブリノイド変性（アレキサンダー病）、膵臓の線維嚢胞性疾患、フォリング病、ｆｒａ（Ｘ）症候群、脆弱Ｘ症候群、骨脆弱症、骨形成不全症、ＦＲＡＸＡ症候群、フリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）、Ｇ６ＰＤ欠損症、ガラクトキナーゼ欠損症疾患（ガラクトース血症）、ガラクトース−１−リン酸ウリジル−トランスフェラーゼ欠損症疾患（ガラクトース血症）、ガラクトシルセラミダーゼ欠損症疾患（クラッベ病）、ガラクトシルセラミドリピドーシス（クラッベ病）、ガラクトシルセレブロシダーゼ欠損症、ガラクトシルスフィンゴシンリピドーシス、ＧＡＬＣ欠損症、ＧＡＬＴ欠損症（ガラクトース血症）、ゴーシェ病様疾患、擬似ゴーシェ病疾患、ＧＢＡ欠損症、遺伝性脳障害、遺伝性肺気腫、遺伝性血色症、血色症、巨細胞性肝炎（新生児）、新生児血色症、ＧＬＡ欠損症、網膜神経膠芽細胞腫（網膜芽腫）、網膜神経膠腫（網膜芽腫）、グロボイド細胞白質ジストロフィー（ＧＣＬ、ＧＬＤ）、（クラッベ病）、グロボイド細胞白質脳症、グルコセレブロシダーゼ欠損症、グルコセレブロシドーシス、グルコシルセレブロシドリピドーシス、グルコシルセラミダーゼ欠損症、グルコシルセラミドベータ−グルコシダーゼ欠損症、グルコシルセラミドリピドーシス、グリセリン酸尿症、原発性高シュウ酸塩尿症、グリシン脳症、非ケトン性高グリシン血症、グリコール酸尿症、原発性高シュウ酸塩尿症、ＧＭ２ガングリオシドーシス、テイ−サックス病、甲状腺腫−難聴症候群（ペンドレッド症候群）、グレーフ−アッシャー症候群（アッシャー症候群）、グレンブラッド−ストランドベリー症候群、弾性線維性仮性黄色腫、ヘモクロマトーシス（血色症）、ハルグレン症候群、アッシャー症候群、ハーレクイン型魚鱗癬、Ｈｂ  Ｓ病、軟骨低形成
症（ＨＣＨ）、遺伝性コプロポルフィリン症（ＨＣＰ）、頭部および脳の奇形、聴覚障害および難聴、小児における聴覚問題、ＨＥＦ２Ａ、ＨＥＦ２Ｂ、ヘマトポルフィリン症（ポルフィリン症）、ヘム合成酵素欠損症、ヘモクロマトーシス、ヘモグロビンＭ病、ベータ−グロビン型メトヘモグロビン血症、ヘモグロビンＳ病、血友病、骨髄肝性ポルフィリン症（ＨＥＰ）、肝性ＡＧＴ欠損症、原発性高シュウ酸塩尿症、肝レンズ核変性症候群、ウィルソン病、遺伝性関節眼疾患、スティックラー症候群、遺伝性異所性リピドーシス、遺伝性血色症（ＨＨＣ）（血色症）、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）、遺伝性封入体筋炎、骨格筋再生、遺伝性鉄付加性貧血、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、遺伝性運動性および感覚性ニューロパシー、遺伝性運動ニューロノパシー、Ｖ型、遠位性遺伝性運動ニューロパシー、遺伝性多発性外骨腫、遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん、遺伝性周期熱症候群、遺伝性大腸ポリポーシス、家族性腺腫性ポリポーシス、遺伝性肺気腫、活性化プロテインＣに対する遺伝性抵抗性、第Ｖ因子ライデン栓友病、遺伝性感覚性および自律神経ニューロパシーＩＩＩ型、家族性自律神経異常症、遺伝性痙性対麻痺、乳児期開始上行性遺伝性痙性運動麻痺、遺伝性脊髄性運動失調、フリードライヒ運動失調症、遺伝性脊髄硬化症（フリードライヒ運動失調症）、ヘリック貧血症、ヘテロ接合性ＯＳＭＥＤ（ヴァイセンバッヒャー−ツヴァイミュラー症候群）、ヘテロ接合性耳脊椎巨大骨端異形成（ヴァイセンバッヒャー−ツヴァイミュラー症候群）、ＨｅｘＡ欠損症（テイ−サックス病）、ヘキソサミニダーゼＡ欠損症（テイ−サックス病）、ヘキソサミニダーゼアルファ−サブユニット欠損症（任意のバリアント、例えばバリアントＡ、バリアントＢ）（テイ−サックス病）、ＨＦＥ−関連血色症（血色症）、ＨＧＰＳ（早老症）、ヒッペル−リンドウ病（フォンヒッペル−リンドウ病）、血色症（ＨＬＡＨ）、遠位遺伝性運動ニューロパシー（ＨＭＮ  Ｖ）、遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん（ＨＮＰＣＣ）、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー（ＨＮＰＰ）、ホモシスチン尿症、ホモゲンチジン酸酸化酵素欠損症、（アルカプトン尿症）、ホモゲンチジン酸尿症（アルカプトン尿症）、ホモ接合性晩発性皮膚ポルフィリン症（骨髄肝性ポルフィリン症）、原発性高シュウ酸塩尿症（ＨＰ１）、高シュウ酸塩尿症（ＨＰ２）、高フェニルアラニン血症（ＨＰＡ）、ＨＰＲＴ−ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症（レッシュ−ナイハン症候群）、ＨＳＡＮ  ＩＩＩ型、家族性自律神経異常症、家族性自律神経異常症（ＨＳＡＮ３）、遺伝性感覚性ニューロパシー（任意の型、例えば、ＨＳＮ−１、ＨＳＮ−ＩＩ、ＨＳＮ−ＩＩＩ）、家族性自律神経異常症、ヒト皮膚脆弱、ハンチントン病、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（早老）、２１水酸化酵素欠損症による非古典型アンドロゲン過剰症、高カイロミクロン血症、家族性リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性、ケトアシドーシスおよび白血球減少症を伴う高グリシン血症（プロピオン酸血症）、高リポタンパク質血症Ｉ型、リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性高シュウ酸塩尿症、原発性高フェニルアラニン血症（ｈ��ｐｅｒｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎａｅｍｉａ）（高フェニルアラニン血症）、高フェニルアラニン血症、軟骨異形性軟骨低形成症、軟骨低発生症、軟骨低形成症、低色素性貧血、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）欠損症、レッシュ−ナイハン症候群、乳児期開始上行性遺伝性痙性運動麻痺（ＩＡＨＳＰ）、ＩＣＦ症候群、免疫不全、動原体不安定性および顔面奇形症候群、特発性血色症、血色症３型、特発性の新生児の血色症（血色症）、新生児特発性肺高血圧、免疫系障害、Ｘ連鎖重症複合免疫不全、色素失調症、乳児脳性ゴーシェ病、乳児ゴーシェ病、乳児期開始上行性遺伝性痙性運動麻痺、不妊症、遺伝性肺気腫、圧迫性麻痺への遺伝性傾向、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー、Ｉｎｓｌｅｙ−Ａｓｔｌｅｙ症候群（耳脊椎巨大骨端異形成）、間欠性急性ポルフィリン症症候群（急性間欠性ポルフィリン症）、腸ポリポーシス−皮膚色素沈着症候群（ポイツ−ジェガース症候群）、色素失調症（ＩＰ）、鉄蓄積障害（血色症）、イソジセントリック１５、イソジセントリック１５、非症候性難聴（Ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｄｅａｆｎｅｓｓ）、非症候性難聴（ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ  ｄｅａｆｎｅｓｓ）、ジャクソン−ワイス症候群、ジュベール症候群、若年性原発性側索硬化症（ＪＰＬＳ）、若年性筋萎縮性側索硬化症、若年性痛風、舞踏病アテトーゼ、精神遅滞症候群、レッシュ−ナイハン症候群、若年性高尿酸血症症候群、レッシュ−ナイハン症候群、ジャクソン−ワイス症候群（ＪＷＳ）、球脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、球脊髄性筋萎縮症、ケネディ球脊髄性筋萎縮症、球脊髄性筋萎縮症、ケラシン組織球症、ケラシンリポイドーシス、ケラシン蓄積症、ケトーシス型グリシン血症（プロピオン酸血症）、ケトーシス型高グリシン血症（プロピオン酸血症）、腎臓病、原発性高シュウ酸塩尿症、Ｋｎｉｅｓｔ異形成、クラッベ病、クーゲルベルク−ヴェランダー病、脊髄性筋萎縮症、ラクナ認知症、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、Ｌａｎｇｅｒ−Ｓａｌｄｉｎｏ型軟骨無発生症、Ｌａｎｇｅｒ−Ｓａｌｄｉｎｏ型異形成、遅発性アルツハイマー病、遅発性クラッベ病（ＬＯＫＤ）（クラッベ病）、学習障害、学習能力障害、口周囲黒子症、ポイツ−ジェガース症候群、レッシュ−ナイハン症候群、白質ジストロフィー、ローゼンタール線維を伴う白質ジストロフィー（アレキサンダー病）、海綿状白質ジストロフィー、リー−フラウメニ症候群（ＬＦＳ）、リー−フラウメニ症候群リパーゼＤ欠損症、リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性ＬＩＰＤ欠損症、リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性セレブロシドリピドーシス、乳児期ガングリオシドリピドーシス、テイ−サックス病、リポイド組織球症（ケラシン型）、リポタンパク質リパーゼ欠損症、家族性肝疾患（ガラクトース血症）、ルーゲーリック病、ルイバー症候群、細血管拡張運動失調、リンチ症候群（遺伝性非ポリポーシス直腸結腸がん）、リシル水酸化酵素欠損症、マシャドジョセフ病、脊髄小脳変性症（任意の型、例えばＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ１８、ＳＣＡ２０、ＳＣＡ２１、ＳＣＡ２３、ＳＣＡ２６、ＳＣＡ２８、ＳＣＡ２９）、男性乳がん（乳がん）、男性生殖器障害、乳房の悪���新生物（乳がん）、乳房の悪性腫瘍（乳がん）、膀胱の悪性腫瘍（膀胱がん）、乳房のがん（乳がん）、マルファン症候群、マーカーＸ症候群、脆弱Ｘ症候群、マーティン−ベル症候群、脆弱Ｘ症候群、マキューン−オルブライト症候群、マクラウド症候群、ＭＥＤＮＩＫ症候群、地中海性貧血、ベータ−サラセミア、巨大骨端性小人症、耳脊椎巨大骨端異形成、メンケア病（メンケス病）、メンケス病、骨軟骨異常を伴う精神遅滞、コフィン−ローリー症候群、代謝障害、変容性小人症ＩＩ型、Ｋｎｉｅｓｔ異形成、変容性異形成ＩＩ型、Ｋｎｉｅｓｔ異形成、メトヘモグロビン血症（任意の型、例えば先天性、ベータ−グロビン型、先天性メトヘモグロビン血症ＩＩ型）、メチルマロン酸血症、マルファン症候群（ＭＦＳ）、ＭＨＡＭ、カウデン症候群、ミクロ症候群、小頭症、ＭＭＡ、メチルマロン酸血症、メンケス病（別名ＭＫまたはＭＮＫ）、モノソミー１ｐ３６症候群、運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索硬化症、筋萎縮性側索硬化症、運動障害、モワット−ウィルソン症候群、ムコ多糖症（ＭＰＳ  Ｉ）、膵臓線維症、多発硬化性認知症、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、多発性カルボキシラーゼ欠損症、遅発性ビオチニダーゼ欠損症、多発性過誤腫症候群（カウデン症候群）、多発性神経線維腫症、筋ジストロフィー（任意の型、例えば、デュシェンヌ型およびベッカー型を含む）、萎縮性ミオトニー、筋直性ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、Ｎａｎｃｅ−Ｉｎｓｌｅｙ症候群（耳脊椎巨大骨端異形成）、Ｎａｎｃｅ−Ｓｗｅｅｎｅｙ軟骨異形成（耳脊椎巨大骨端異形成）、ＮＢＩＡ１、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、ニール−ディングウォール症候群、コケイン症候群、網膜神経芽細胞腫、網膜芽腫、脳内鉄蓄積１型を伴う神経変性、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、神経疾患、神経筋障害、遠位性遺伝性運動ニューロノパシー、ニーマンピック（ニーマンピック病）、ノアク症候群、非ケトン性高グリシン血症、グリシン脳症、非神経障害性ゴーシェ病、非フェニルケトン尿症型高フェニルアラニン血症、テトラヒドロビオプテリン欠損症、非症候性難聴、ヌーナン症候群、ノルボットン型ゴーシェ病、組織黒変症、アルカプトン尿症、アルカプトン尿性関節炎、オグデン症候群、骨形成不全症（ＯＩ）、オスラー−ウェーバー−ランデュ病、遺伝性出血性末梢血管拡張症、ＯＳＭＥＤ（耳脊椎巨大骨端異形成）、骨形成不全症、骨脆弱症（骨形成不全症）、先天性骨硬化症（耳脊椎巨大骨端異形成）、耳脊椎巨大骨端異形成（耳脊椎巨大骨端異形成）、シュウ酸症、原発性高シュウ酸塩尿症、原発性シュウ酸塩尿症、原発性高シュウ酸塩尿症、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、パトー症候群（トリソミー１３）、ＰＢＧＤ欠損症（急性間欠性ポルフィリン症）、ＰＣＣ欠損症、プロピオン酸血症、晩発性皮膚ポルフィリン症（ＰＣＴ）、ＰＤＭ病、ペンドレッド症候群、周期性疾患（地中海性発熱、家族性周期性腹膜炎）、口周囲多発性黒子症症候群（ポイツ−ジェガース症候群）、末梢神経障害（家族性自律神経異常症）、末梢性神経線維腫症、腓骨筋萎縮、ペルオキシソームアラニン：グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ欠損症、高シュウ酸塩尿症、原発性ポイツ−ジェガース症��群、フェニルアラニン水酸化酵素欠損症疾患、褐色細胞腫、フォンヒッペル−リンドウ疾患、胎児性軟骨異形成を伴うピエール−ロビン症候群、ヴァイセンバッヒャー−ツヴァイミュラー症候群、色素性肝硬変症（血色症）、ポイツ−ジェガース症候群（ＰＪＳ）、パントテン酸キナーゼ関連神経変性（ＰＫＡＮ）、ＰＫＵ、フェニルケトン尿症、プルモボポルフィリン症、ＡＬＡ欠損症ポルフィリン症、ＰＭＡ、多発性嚢胞腎、多骨性線維性異形成（マキューン−オルブライト症候群）、家族性腺腫性ポリポーシス、過誤腫性大腸ポリポーシス、ポリープおよび色素斑症候群（ポイツ−ジェガース症候群）、ポルフォビリノーゲン合成酵素欠損症、ＡＬＡ欠損症ポルフィリン症、ポルフィリン障害、ＰＰＯＸ欠損症、異型ポルフィリン症、プラダー−ラープハルト−ウィリー症候群、プラダー・ウィリ症候群、初老および老人性認知症、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、原発性血色症（血色症）、原発性高尿酸血症症候群、レッシュ−ナイハン症候群、原発性老年性変性認知症、プロコラーゲン型ＥＤＳ  ＶＩＩ、突然変異型早老型ハッチンソンギルフォード早老症候群、早老様症候群（コケイン症候群）、早老症性小体症（コケイン症候群）、進行性舞踏病、慢性遺伝性（ハンチントン）、ハンチントン病、正常な強膜を伴う進行性変形性骨形成不全症、骨形成不全症（任意の型、例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、Ｖ型、ＶＩ型、ＶＩＩ型、ＶＩＩＩ型）、近位筋直性ジストロフィー（ＰＲＯＭＭ）、プロピオン酸血症、プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ欠損症、プロテインＣ欠損症、プロテインＳ欠損症、プロトポルフィリン症、プロトポルフィリノーゲン酸化酵素欠損症、異型ポルフィリン症、近位筋直性ジストロフィー、筋直性ジストロフィー２型、近位筋強直性ミオパシー、擬似ゴーシェ病、弾性線維性仮性黄色腫、サイコシンリピドーシス（クラッベ病）、肺動脈性肺高血圧症、肺高血圧、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、弾性線維性仮性黄色腫、網膜芽腫（Ｒｂ）、レックリングハウゼン病、再発性多発性漿膜炎、網膜障害、網膜色素変性症−難聴症候群、アッシャー症候群、網膜芽腫、レット症候群、３型ＲＦＡＬＳ、リッカー症候群、ライリー−デイ症候群、家族性自律神経異常症、ルシー−レヴィ症候群、ルビンシュタイン−テイビ症候群（ＲＳＴＳ）、レット症候群（ＲＴＳ）、ルビンシュタイン−テイビ症候群、ルビンシュタイ
ン−テイビ症候群、サック−バラバス症候群、ＳＡＤＤＡＮ疾患、リーおよびフラウメニの家族性肉腫症候群（リー−フラウメニ症候群）、ＳＢＬＡ症候群（肉腫、乳房、白血病、および副腎症候群）（リー−フラウメニ症候群）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、シュワン細胞腫、両側性、聴覚神経線維腫症ＩＩ型、シュワルツヤンペル症候群、Ｘ連鎖重症複合免疫不全（ＳＣＩＤＸ１）、先天性ＳＥＤ、先天性脊椎骨端異形成、ストラドウィック型ＳＥＤ、ストラドウィック型脊椎骨端骨幹端異形成、先天性脊椎骨端異形成（ＳＥＤｃ）、脊椎骨端骨幹端異形成（ＳＥＭＤ）、ストラドウィック型ＳＥＭＤ、老人性認知症、発育遅延および黒色表皮腫を伴う重度の軟骨無形成症、ＳＡＤＤＡＮ疾患、シュプリンツェン症候群、ＰＨＦ８遺伝子の突然変異によって引き起こされるＳｉｄｅｒｉｕｓ  Ｘ連鎖精神遅滞症候群、軟骨無形成症、皮膚色素沈着障害、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、脊椎骨幹端骨端異形成症（ＳＭＥＤ）（任意の型、例えばＳｔｕｄｗｉｃｋ型、１型）、スミス−レムリ−オピッツ症候群、スミス−マゲニス症候群、南アフリカ遺伝性ポルフィリン症、乳児期開始上行性痙性運動麻痺、乳児期開始上行性遺伝性痙性運動麻痺、発話能力およびコミュニケーション障害、スフィンゴリピドーシス、テイ−サックス（テイ−サックス病）、球脊髄性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症、脊髄性筋萎縮症（遠位性Ｖ型）、遠位性遺伝性運動ニューロパシー、上肢優位を伴う遠位性脊髄性筋萎縮症、遠位性遺伝性運動ニューロパシー、脊髄小脳変性症、先天性脊椎骨端異形成、脊椎骨端異形成、コラーゲン異常症（任意の型、例えばＩＩ型およびＸＩ型）、脊椎骨端骨幹端異形成、脊椎骨幹端異形成（ＳＭＤ）（脊椎骨端骨幹端異形成）、中枢神経系の海綿状変性、脳の海綿状変性、乳児期の白質の海綿状変性、散発性原発性肺高血圧、ＳＳＢ症候群、剛毛症候群（メンケス病）、スタイナート病（筋直性ジストロフィー）、スタイナート筋直性ジストロフィー症候群（筋直性ジストロフィー）、スティックラー症候群、脳卒中、ＣＡＤＡＳＩＬ症候群、ストラドウィック症候群、亜急性神経障害性ゴーシェ病、スウェーデン遺伝性ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、急性間欠性ポルフィリン症、スイスチーズ軟骨異形成、Ｋｎｉｅｓｔ異形成、テイ−サックス病、ＴＤ−致死性小人症、致死性骨異形成症、まっすぐな大腿およびクローバ形頭蓋を伴うＴＤ、致死性骨異形成症２型、末梢血管拡張症、小脳眼皮膚細血管拡張運動失調、精巣性女性化症候群（アンドロゲン不感性症候群）、テトラヒドロビオプテリン欠損症、精巣性女性化症候群（ＴＦＭ）（アンドロゲン不感性症候群）、中間型サラセミア（ベータ−サラセミア）、重症型サラセミア（ベータ−サラセミア）、致死性骨異形成症、活性化プロテインＣコファクター欠損による、ライデン型栓友病（第Ｖ因子ライデン栓友病）、甲状腺疾患、ソーセージ様ニューロパシー、遺伝性圧脆弱性ニューロパシー、全ＨＰＲＴ欠損症、レッシュ−ナイハン症候群、全ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症、レッシュ−ナイハン症候群、トレハーコリンズ症候群、三徴候骨脆弱症、トリプルＸ症候群、ＴｒｉｐｌｏＸ症候群、トリソ���ー２１、トリソミーＸ、トロアジュ−ハノット−シャウファード症候群（血色症）、テイ−サックス病（ＴＳＤ）、結節性硬化症症候群（ＴＳＣ）、結節性硬化症、ターナー様症候群、ヌーナン症候群、ＵＤＰ−ガラクトース−４−エピメラーゼ欠損症疾患、ガラクトース血症、ＵＤＰグルコース４−エピメラーゼ欠損症疾患、ガラクトース血症、ＵＤＰグルコースヘキソース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ欠損症、ガラクトース血症、未分化難聴、非症候性難聴、ＵＰＳ欠損症、急性間欠性ポルフィリン症、膀胱のがん、膀胱がん、ＵＲＯＤ欠損症、ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ欠損症、ウロポルフィリノーゲン合成酵素欠損症、急性間欠性ポルフィリン症、アッシャー症候群、ＵＴＰヘキソース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ欠損症（ガラクトース血症）、Ｖａｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ−Ｂｅｒｔｒａｎｄ症候群、ファンデルヘーヴェ症候群、口蓋心臓顔面症候群、ＶＨＬ症候群、フォンヒッペル−リンドウ疾患、視覚機能障害および失明、アルストレム症候群、Ｖｏｎ  Ｂｏｇａｅｒｔ−Ｂｅｒｔｒａｎｄ疾患、フォンヒッペル−リンドウ疾患、Ｖｏｎ  Ｒｅｃｋｌｅｎｈａｕｓｅｎ−Ａｐｐｌｅｂａｕｍ疾患（血色症）、フォンレックリングハウゼン病、神経線維腫症Ｉ型、フロリク病、骨形成不全症、ワールデンブルグ症候群、Ｗａｒｂｕｒｇ  Ｓｊｏ  Ｆｌｅｄｅｌｉｕｓ症候群、マイクロ症候群、ウィルソン病（ＷＤ）、ヴァイセンバッハー−ツヴェイミューラー症候群、ウェルドニッヒ−ホフマン病、脊髄性筋萎縮症、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウィルソン病、ウィルソン病、ウォルフ−ヒルシュホーン症候群、ウォルフ周期病、ヴァイセンバッヒャー−ツヴァイミュラー症候群（ＷＺＳ）、色素性乾皮症、Ｘ連鎖精神遅滞および巨精巣症、脆弱Ｘ症候群、Ｘ連鎖原発性高尿酸血症（レッシュ−ナイハン症候群）、Ｘ連鎖重症複合免疫不全、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、Ｘ連鎖脊髄性−延髄性筋萎縮、球脊髄性筋萎縮症、Ｘ連鎖尿酸尿酵素欠損症、（レッシュ−ナイハン症候群）、Ｘ−ＳＣＩＤ、Ｘ連鎖重症複合免疫不全、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血（ＸＬＳＡ）、Ｘ−ＳＣＩＤ、Ｘ連鎖重症複合免疫不全、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血（ＸＬＳＡ）、ＸＳＣＩＤ、Ｘ連鎖重症複合免疫不全、ＸＸＸ症候群、トリプルＸ症候群、ＸＸＸＸ症候群、ＸＸＸＸＸ症候群、ＸＸＸＸＸ、ＸＸＹ症候群、ＸＸＹトリソミー、クラインフェルター症候群、ＸＹＹ症候群、トリプレットリピート障害、またはこれらの任意の組合せである。
【０３７４】
ある実施形態では、特定の転写後制御モジュレーターは、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することにより、活性のモジュレーション、改変、増強または低減に対して標的化される。例えば、転写後制御モジュレーターとして、ＰＡＲＮ、ＰＡＮ、ＣＰＳＦ、ＣｓｔＦ、ＰＡＰ、ＰＡＢＰ、ＰＡＢ２、ＣＦＩ、ＣＦＩＩ、ＲＮＡトリホスファターゼ、ＲＮＡグルタミルトランスフェラーゼ（ｇｌｕａｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）、ＲＮＡメチルトランスフェラーゼ、ＳＡＭシンターゼ、ユビキチン複合体化酵素Ｅ２Ｒ、ＳＲタンパク質ＳＦＲＳ１〜ＳＦＲ１１、ｈｎＲＮＰタンパク質（例えば、ＨＮＲＮＰＡ０、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＮＲＮＰＡ１Ｌ１、ＨＮＲＮＰＡ１Ｌ２、ＨＮＲＮＰＡ２、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＨＮＲＮＰＡＢ、ＨＮＲＮＰＢ１、ＨＮＲＮＰＣ、ＨＮＲＮＰＣＬ１、ＨＮＲＮＰＤ、ＨＮＲＰＤＬ、ＨＮＲＮＰＦ、ＨＮＲＮＨＰ１、ＨＮＲＮＰＨ２、ＨＮＲＮＰＨ３、ＨＮＲＮＰＫ、ＨＮＲＮＰＬ、ＨＮＲＮＰＬＬ、ＨＮＲＮＰＭ、ＨＮＲＮＰＲ、ＨＮＲＮＰＵ、ＨＮＲＮＰＵＬ１、ＨＮＲＮＰＵＬ２、ＨＮＲＮＰＵＬ３、ＡＤＡＲ、Ｍｅｘ６７、Ｍｔｒ２、Ｎａｂ２、Ｄｅａｄ−ｂｏｘｈｅｌｉｃａｓｅ、ｅｌＦ４Ａ、ｅｌＦ４Ｂ、ｅｌＦ４Ｅ、ｅｌＦ４Ｇ、ＧＥＦ、ＧＣＮ２、ＰＫＲ、ＨＲＩ、ＰＥＲＫ、ｅＥＦ１、ｅＥＦ２、ＧＣＮ、ｅＲＦ３、ＡＲＥ特異結合タンパク質、ＥＸＲＮ１、ＤＣＰ１、ＤＣＰ２、ＲＣＫ／ｐ５４、ＣＰＥＢ、ｅＩＦ４Ｅ、ミクロＲＮＡＳおよびｓｉＲＮＡ、ＤＩＣＥＲ、Ａｇｏタンパク質、ナンセンス−媒介ｍＲＮＡ分解タンパク質、ＵＰＦ３Ａ、ＵＰＦ３ＢｅＩＦ４Ａ３、ＭＬＮ５１、Ｙ１４／ＭＡＧＯＨ、ＭＧ−１、ＳＭＧ−５、ＳＭＧ−６、ＳＭＧ−７、またはこれらの任意の組合せを挙げることができる。
【０３７５】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することによって細胞周期に関連する遺伝子経路の活性を、モジュレート、増強または低減する。細胞周期に関連する例示的経路および遺伝子として、ＡＴＭ、ＰＭＳ２、ＦＡＳ−Ｌ、ＭＲＥ１１、ＭＬＨ１、ＦａｓＲ、ＮＢＳ１、ＭＳＨ６、Ｔｒａｉｌ−Ｌ、ＲＡＤ５０、ＭＳＨ２、Ｔｒａｉｌ−Ｒ、５３ＢＰ１、ＲＦＣ、ＴＮＦ−Ｃｔ、Ｐ５３、ＰＣＮＡ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＣＨＫＥ、ＭＳＨ３、ＦＡＤＤ、Ｅ２Ｆ１、ＭｕｔＳホモログ、ＴＲＡＤＤ、ＰＭＬ、ＭｕｔＬホモログ、Ｒ１Ｐ１、ＦＡＮＣＤ２、エキソヌクレアーゼ、ＭｙＤ８８、ＳＭＣ１、ＤＮＡ、ポリメラーゼデルタ、ＩＲＡＫ、ＢＬＭ１、（ＰＯＬＤ１、ＰＯＬＤ２、ＰＯＬＤ３、ＮＩＬ、ＢＲＣＡ１、および、ＰＯＬＤ４、−遺伝子、ＩＫＫ、Ｈ２ＡＸ、コード、サブユニット）、ＮＦΚβ、ＡＴＲ、トポイソメラーゼ１、ΙκΒα、ＲＰＡ、トポイソメラーゼ２、ＩＡＰ、ＡＴＲＩＰ、ＲＮＡｓｅＨｌ、カスパーゼ３、ＲＡＤ９、リガーゼ、１、カスパーゼ、６、ＲＡＤ１、ＤＮＡ、ポリメラーゼ１、カスパーゼ７、ＨＵＳ、ＤＮＡ、ポリメラーゼ３、カスパーゼ８、ＲＡＤ１７、プライマーゼ、カスパーゼ１０、ＲＦＣ、ヘリカーゼ、ＨＤＡＣ１、ＣＨＫ１、一本鎖、結合、ＨＤＡＣ２、ＴＬＫ１タンパク質、シトクロムＣ、ＣＤＣ２５、Ｂｘｌ−ｘＬ、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、ＤＦＦ４５、Ｖｃｌ−２、ＥＮＤＯ−Ｇ、ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、カルパイン、Ｂａｄ、Ｂａｘ、ユビキチン媒介タンパク質分解、低酸素、細胞増殖、ＨＩＦ−ｌｏｃ、ＭＡＰＫ、Ｅｌ、ＨＥＲＣ１、ＴＲＡＦ６、ＨＩＦ−Ιβ、ＭＡＰＫＫ、Ｅ２、ＵＢＥ２Ｑ、ＭＥＫＫ１、Ｒｅｆｌ、ＭＡＰＫＫＫ、Ｅ３、ＵＢＥ２Ｒ、ＣＯＰ！、ＨＳＰ９０、ｃ−Ｍｅｔ、ＵＢＬＥ１Ａ、ＵＢＥ２Ｓ、ＰＩＦＨ２、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＵＢＬＥ１Ｂ、ＵＢＥ２Ｕ、ｃＩＡＰ、ＰＡＳ、ＥＲ、Ｓ１／２、ＵＢＬＥＩＣ、ＵＢＥ２Ｗ、ＰＩＡＳ、ＡＲＮＴ、ＡＴＫ、ＵＢＥ２Ａ、ＵＢＥ２Ｚ、ＳＹＶＮ、ＶＨＬ、ＰＫＣ、ＵＢＥ２Ｂ、ＡＦＣ、ＬＬＣ、Ｎ、ＮＨＬＲＣ１、ＨＬＦ、パキシリン、ＵＢＥ２Ｃ、ＵＢＥ１、ＡＩＲＥ、ＥＰＦ、ＦＡＫ、ＵＢＥ２Ａ、Ｅ６ＡＰ、ＭＧＲＮ１、ＶＤＵ２、アデュシン、ＵＢＥ２Ｅ、ＵＢＥ３Ｂ、ＢＲＣＡ１、ＳＵＭＯＲＥＳＵＭＥ、ＰＹＫ１、ＵＢＥ２Ｆ、Ｓｍｕｒｆ、ＦＡＮＣＬ、ＳＥＮＰ１、ＲＢ、ＵＢＥ２Ｇ１、Ｉｔｃｈ、ＭＩＤＩ、カルシニューリンＡ、ＲＢＩ、ＵＢＥ２Ｇ２、ＨＥＲＣ２、Ｃｄｃ２０、ＲＡＣＫ１、Ｒａｆ−１、ＵＢＥ２Ｉ、ＨＥＲＣ３、Ｃｄｈｌ、ＰＴＢ、Ａ−Ｒａｆ、ＵＢＥ２Ｊ１、ＨＥＲＣ４、Ａｐｃｌ、Ｈｕｒ、Ｂ−ｒａｆ、ＵＢＥ２Ｊ２、ＵＢＥ４Ａ、Ａｐｃ２、ＰＨＤ２、ＭＥＫ１／２、ＵＢＥ２Ｌ３、ＵＢＥ４Ｂ、Ａｐｃ３、ＳＳＡＴ２、ＥＲＫ１／２、ＵＢＥ２Ｌ６、ＣＨＩＰ、Ａｐｃ４、ＳＳＡＴ１、Ｅｔｓ、ＵＢＥ２Ｍ、ＣＹＣ４、Ａｐｃ５、ＧＳＫ３、Ｅｌｋｌ、ＵＢＥ２Ｎ、ＰＰＲ１９、Ａｐｃ６、ＣＢＰ、ＳＡＰ１、ＵＢＥ２０、ＵＩＰ５、Ａｐｃ７、ＦＯＸ０４、ｃＰＬＡ２、ＷＷＰＩ、Ｍｄｍ２、Ａｐｃ８、ＦｌＨ−１、ＷＷＰ２、Ｐａｒｋｉｎ、Ａｐｃ９、ＴＲＩＰ、１２、Ｔｒｉｍ３２、Ａｐｅ１０、ＮＥＥＤ４、Ｔ��ｉｍ３７、Ａｐｅ１１、ＡＲＦ−ＢＰ１、ＳＩＡＨ−１、Ａｐｅ１２、ＥＤＤ１、ＰＭＬ、細胞生存期間、細胞周期停止、ＳＭＡＤＩ、Ｐ２１、ＳＭＡＤ５、ＢＡＸ、ＳＡＭＤ８、ＭＤＲ、ＬＥＦ１、ＤＲＡＩＬ、ＩＧＦＢＰ３、ＴＣＦ３、ＧＡＤＤ４５、ＴＣＦ４、Ｐ３００、ＨＡＴ１、ＰＩ３、Ａｋｔ、ＧＦ１、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３７６】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することによって、血管新生に関連する遺伝子の活性を、モジュレート、増強または低減する。血管新生、および血管新生に関連する状態に関連する例示的な遺伝子および遺伝子経路として、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ２、ＳＨＣ、Ｅ２Ｆ７、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＲ３、ＰＩ３、ＶＥＧＦＣ、Ｎｒｐ１、ＰＩＰ３、ＥＧＦＤＩＰ３、ＤＡＧ、ＧＲＢ２、ＳＯＳ、Ａｋｔ、ＰＢ、ＰＫＣ、Ｒａｓ、ＲＡＦ１、ＤＡＧ、ｅＮＯＳ、ＮＯ、ＥＲＫ１、ＥＲ２、ｃＰＬＡ２、ＭＥ１、ＭＥＫ２、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３７７】
一部の実施形態では、細胞（複数可）にＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムを投与することによって、ミトコンドリア機能に関連する遺伝子経路および／または遺伝子の活性を、モジュレート、増強または低減する。ミトコンドリア機能に関連する例示的な遺伝子および遺伝子経路として、リンゴ酸デヒドロゲナーゼアミノトランスフェラーゼ、ヒドラターゼ、デアシラーゼ、デヒドロゲナーゼ、カルボキシラーゼ、ムターゼ、脂肪酸酸化ロイシン酸化イソロイシン障害（酵素経路酸化経路不全）アミノトランスフェラーゼアミノトランスフェラーゼ、ＯＣＴＮ２分枝鎖分枝鎖、ＦＡＴＰ１−６アミノトランスフェラーゼ２、アミノトランスフェラーゼ２、ＣＰＴ−１ミトコンドリアミトコンドリア、ＣＡＣＴイソブチル（Ｉｓｏｂｕｔｙｔｙｌ）−ＣｏＡ２−メチルブチル（ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｔｙｌ）−ＣｏＡ、ＣＰＴ−ＩＩデヒドロゲナーゼデヒドロゲナーゼ、ＳＣＡＤ（分枝鎖（分枝鎖、ＭＣＡＤケト酸ケト酸、ＶＬＣＡＤデヒドロゲナーゼ（Ｄｅｈｙｄｒｏｇａｓｅ）デヒドロゲナーゼ、ＥＴＦ−ＤＨ複合体）複合体）、アルファ−ＥＴＦヒドラターゼヒドラターゼ、ベータ−ＥＴＦ  ＨＭＧ−ＣｏＡリアーゼ２−メチル−３−ＯＨ−ＳＣＨＡＤブチリル−ＣｏＡ、ＬＣＨＡＤデヒドロゲナーゼ、ＭＴＰ３−オキソチオラーゼ、ＬＫＡＴ、ＤＥＣＲ１、ＨＭＧＣＳ２、ＨＭＧＣＬ、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３７８】
一部の実施形態では、ＤＮＡ損傷またはゲノム不安定性に関連する遺伝子経路および／または遺伝子の活性を、モジュレート、増強または低減する。ＤＮＡ損傷およびゲノム不安定性に関する経路および／または遺伝子に関連する例示的遺伝子および遺伝子経路として、５３ＢＰ１、ＢＬＭ、ＭＢＤ２、ＤＮＡ、リガーゼ４、ＭＤＣ１、Ｈ２ＡＸ、ＸＬＦ、ＳＭＣ１、５３ＢＰ１、Ｒａｄ５０、Ｐ５３、Ｐ５３、Ａｒｔｅｍｉｓ、Ｒａｄ２７、ＴｄＴ、ＡＰＥ１、ＰＭＳ２、ＡＰＥ２、ＵｖｒＡ、ＲｅｃＡ、ＭＬＨ１、ＮＥＩＬ１、ＵｖｒＢ、ＳＳＢ、ＭＳＨ６、ＮＥＩＬ２、ＵｖｒＣ、Ｍｒｅｌｌ、ＭＳＨ２、ＮＥＩＬ３、ＸＰＣ、Ｒａｄ５０、ＲＦＣ、ＸＲＣＣ１、Ｒａｄ２３Ｂ、Ｎｂｓｌ、ＰＣＮＡ、ＰＮＫＰ、ＣＥＮ２、ＣｔＩＰ、ＭＳＨ３、Ｔｄｐｌ、ＤＤＢ１、ＲＰＡ、ＭｕｔＳ、ＡＰＴＸ、ＸＰＥ、Ｒａｄ５１、ＭｕｔＬ、ＤＮＡポリメラーゼβＣＳＡ、Ｒａｄ５２、ＤＮＡポリメラーゼδ、ＣＳＢ、Ｒａｄ５４、トポイソメラーゼ１、ＤＮＡ、ＴＦＴ１Ｈ、ＢＲＣＡ１、トポイソメラーゼ２、ＰＣＮＡ、ＸＰＢ、ＢＲＣＡ２、ＲＮＡｓｅＨｌ、ＦＥＮ１、ＸＰＤ、Ｅｘｏｌ、リガーゼ１、ＲＦＣ、ＸＰＡ、ＢＬＭ、ＤＮＡ、ポリメラーゼ１、ＰＡＲ、１、ＲＰＡ、Ｔｏｐｌｌｌａ、ＤＮＡ、Ｌｉｇｌ、ＸＰＧ、ＧＥＮ１、プライマーゼ、Ｌｉｇ３、ＥＲＣＣ１Ｙｅｎｌヘリカーゼ、ＵＮＧ、ＸＰＦ、Ｓｌｘｌ、ＳＳＢ、ＭＵＴＹ  ＤＮＡポリメラーゼδ、Ｓｌｘ４、ＳＭＵＧ  ＤＮＡポリメラーゼε、Ｍｕｓ８、ＭＢＤ４、Ｅｍｅｌ、Ｄｓｓｌ、ＡＳＨ１Ｌ、ＳＥＴＤ４、ＤＱＴ１Ｌ、ＳＥＴＤ５、ＥＨＭＴ１、ＳＥＴＤ６、ＥＨＭＴ２、ＳＥＴＤ７、ＥＺＨ１、ＳＥＴＤ８、ＥＺＨ２、ＳＥＴＤ９、ＭＬＬ、ＳＥＴＤＢ１、ＭＬＬ２、ＳＥＴＤＢ２、ＭＬＬ３、ＳＥＴＭＡＲ、ＭＬＬ４、ＳＭＹＤ、１、ＭＬＬ５、ＳＭＹＤ２、ＮＳＤ、１、ＳＭＹＤ３、ＰＲＤＭ２、ＳＭＹＤ４、ＳＥＴ、ＳＭＹＤ５、ＳＥＴＢＰ１、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＳＥＴＤ１Ａ、ＳＵＶ３９Ｈ２、ＳＥＴＤ１Ｂ、ＳＵＶ４２０Ｈ１、ＳＥＴＤ２、ＳＵＶ４２０Ｈ２、ＳＥＴＤ３、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３７９】
一部の実施形態では、哺乳動物転写因子をコードする遺伝子がモジュレート、増強、低減されるか、または細胞に提供される。例示的ヒト転写因子として、ＡＦＦ４、ＡＦＦ３、ＡＦＦ２、ＡＦＦ１、ＡＲ、ＴＦＡＰ２Ｂ、ＴＦＡＰ２Ｄ、ＴＦＡＰ２Ｃ、ＴＦＡＰ２Ｅ、ＴＦＡＰ２Ａ、ＪＡＲＩＤ２、ＫＤＭ５Ｄ、ＡＲＩＤ４Ａ、ＡＲＩＤ４Ｂ、ＫＤＭ５Ａ、ＡＲＩＤ３Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＤＭ５Ｃ、ＡＲＩＤ５Ｂ、ＡＲＩＤ３Ｂ、ＡＲＩＤ２、ＡＲＩＤ５Ａ、ＡＲＩＤ３Ｃ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲＩＤ１Ｂ、ＨＩＦ１Ａ、ＮＰＡＳ１、ＮＰＡＳ３、ＮＰＡＳ４、ＭＬＸＩＰＬ、ＡＲＮＴＬ２、ＭＸＤ１、ＡＨＲＲ、ＴＦＥ３、ＨＥＳ２、ＭＮＴ、ＴＣＦ３、ＳＲＥＢＦ１、ＴＦＡＰ４、ＴＣＦＬ５、ＬＹＬ１、ＵＳＦ２、ＴＦＥＣ、ＡＨＲ、ＭＬＸ、ＭＹＦ６、ＭＹＦ５、ＳＩＭ１、ＴＦＥＢ、ＨＡＮＤ１、ＨＥＳ１、ＩＤ２、ＭＹＣＬ１、ＩＤ３、ＴＣＦ２１、ＭＸＩ１、ＳＯＨＬＨ２、ＭＹＯＧ、ＴＷＩＳＴ１、ＮＥＵＲＯＧ３、ＢＨＬＨＥ４１、ＮＥＵＲＯＤ４、ＭＸＤ４、ＢＨＬＨＥ２３、ＴＣＦ１５、ＭＡＸ、ＩＤ１、ＭＹＯＤ１、ＡＲＮＴＬ、ＢＨＬＨＥ４０、ＭＹＣＮ、ＣＬＯＣＫ、ＨＥＹ２、ＭＹＣ、ＡＳＣＬ１、ＴＣＦ１２、ＡＲＮＴ、ＨＥＳ６、ＦＥＲＤ３Ｌ、ＭＳＧＮ１、ＵＳＦ１、ＴＡＬ１、ＮＥＵＲＯＤ１、ＴＣＦ２３、ＨＥＹＬ、ＨＡＮＤ２、ＮＥＵＲＯＤ６、ＨＥＹ１、ＳＯＨＬＨ１、ＭＥＳＰ１、ＰＴＦ１Ａ、ＡＴＯＨ８、ＮＰＡＳ２、ＮＥＵＲＯＤ２、ＮＨＬＨ１、ＩＤ４、ＡＴＯＨ１、ＡＲＮＴ２、ＨＥＳ３、ＭＬＸＩＰ、ＡＳＣＬ３、ＫＩＡＡ２０１８、ＯＬＩＧ３、ＮＨＬＨ２、ＮＥＵＲＯＧ２、ＭＳＣ、ＨＥＳ７、ＡＴＯＨ７、ＢＨＬＨＡ１５、ＢＨＬＨＥ２２、ＮＥＵＲＯＧ１、ＦＩＧＬＡ、ＡＳＣＬ２、ＯＬＩＧ１、ＴＡＬ２、ＭＩＴＦ、ＳＣＸＢ、ＨＥＬＴ、ＡＳＣＬ４、ＭＥＳＰ２、ＨＥＳ４、ＳＣＸＡ、ＴＣＦ４、ＨＥＳ５、ＳＲＥＢＦ２、ＢＨＬＨＡ９、ＯＬＩＧ２、ＭＸＤ３、ＴＷＩＳＴ２、ＬＯＣ３８８５５３、Ｃ１３ｏｒｆ３８−ＳＯＨＬＨ２、ＣＥＢＰＥ、ＸＢＰ１、ＢＡＴＦ３、ＣＲＥＢ５、ＣＥＢＰＧ、ＡＴＦ３、ＡＴＦ７、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＢＰＤ、ＣＥＢＰＡ、ＣＢＦＢ、ＣＡＭＴＡ２、ＣＡＭＴＡ１、ＥＢＦ４、ＥＢＦ３、ＥＢＦ１、ＥＢＦ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＧＲＨＬ２、ＴＦＣＰ２Ｌ１、ＧＲＨＬ１、ＴＦＣＰ２、ＵＢＰ１、ＧＲＨＬ３、ＹＢＸ２、ＣＳＤＥ１、ＣＳＤＡ、ＹＢＸ１、ＬＩＮ２８Ａ、ＣＡＲＨＳＰ１、ＣＳＤＣ２、ＬＩＮ２８Ｂ、ＮＦＩＸ、ＮＦＩＣ、ＮＦＩＢ、ＮＦＩＡ、ＣＵＸ２、ＯＮＥＣＵＴ２、ＣＵＸ１、ＯＮＥＣＵＴ１、ＳＡＴＢ１、ＯＮＥＣＵＴ３、ＳＡＴＢ２、ＤＭＲＴ３、ＤＭＲＴ１、ＤＭＲＴＣ２、ＤＭＲＴＡ２、ＤＭＲＴＢ１、ＤＭＲＴ２、ＤＭＲＴＡ１、Ｅ２Ｆ２、Ｅ２Ｆ１、Ｅ２Ｆ３、ＴＦＤＰ２、Ｅ２Ｆ８、Ｅ２Ｆ５、Ｅ２Ｆ７、Ｅ２Ｆ６、ＴＦＤＰ３、ＴＦＤＰ１、Ｅ２Ｆ４、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ２、ＥＴＶ１、ＥＴＶ７、ＳＰＩ１、ＥＬＦ４、ＥＴＶ２、ＥＲＦ、ＥＬＦ２、ＥＬＫ３、ＥＴＶ３、ＥＬＦ１、ＳＰＤＥＦ、ＥＬＫ１、ＥＴＳ１、ＥＨＦ、ＥＬＦ５、ＥＴＶ６、ＳＰＩＢ、ＦＬＩ１、ＧＡＢＰＡ、ＥＲＧ、ＥＴＳ２、ＥＬＫ４、ＥＬＦ３、ＦＥＶ、ＳＰＩＣ、ＥＴＶ４、ＥＴＶ５、ＦＯＸＮ３、ＦＯＸＣ１、ＦＯＸＪ２、ＦＯＸＦ１、ＦＯＸＮ１、ＦＯＸＭ１、ＦＯＸＰ１、ＦＯＸＯ３、ＦＯＸＡ２、ＦＯＸＰ２、ＦＯＸＪ１、ＦＯＸＰ４、ＦＯＸＦ２、ＦＯＸＮ４、ＦＯＸＫ２、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＨ１、ＦＯＸＱ１、ＦＯＸＫ１、ＦＯＸＩ１、ＦＯＸＤ４、ＦＯＸＡ３、ＦＯＸＮ２、ＦＯＸＢ１、ＦＯＸＧ１、ＦＯＸＲ１、ＦＯＸＬ１、ＦＯＸＣ２、ＦＯＸＥ１、ＦＯＸＳ１、ＦＯＸＬ２、ＦＯＸＯ４、ＦＯＸＤ４Ｌ１、ＦＯＸＤ４Ｌ４、ＦＯＸＤ２、ＦＯＸＩ２、ＦＯＸＥ３、ＦＯＸＤ３、ＦＯＸＤ４Ｌ３、ＦＯＸＲ２、ＦＯＸＪ３、ＦＯＸＯ６、ＦＯＸＢ２、ＦＯＸＤ４Ｌ５、ＦＯＸＤ４Ｌ６、ＦＯＸＤ４Ｌ２、ＫＩＡＡ０４１５、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＰ３、ＧＣＭ２、ＧＣＭ１、ＮＲ３Ｃ１、ＧＴＦ２ＩＲＤ１、ＧＴＦ２Ｉ、ＧＴＦ２ＩＲＤ２Ｂ、ＧＴＦ２ＩＲＤ２、ＳＯＸ８、ＳＯＸ３０、ＰＭＳ１、ＣＩＣ、ＴＣＦ７、ＴＯＸ４、ＳＯＸ１０、ＨＭＧＸＢ４、ＨＢＰ１、ＴＦＡＭ、ＵＢＴＦ、ＷＨＳＣ１、ＳＯＸ６、ＨＭＧＸＢ３、ＢＢＸ、ＴＯＸ２、ＳＯＸ４、ＳＯＸ２１、ＳＯＸ９、ＳＯＸ１５、ＳＯＸ５、ＳＯＸ３、ＬＥＦ１、ＨＭＧ２０Ａ、ＳＯＸ１３、ＴＣＦ７Ｌ２、ＳＳＲＰ１、ＴＣＦ７Ｌ１、ＳＯＸ１７、ＳＯＸ１４、ＰＩＮＸ１、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１１、ＳＯＸ１２、ＳＯＸ２、ＳＯＸ１、ＳＲＹ、ＳＯＸ１８、ＵＢＴＦＬ１、ＵＢＴＦＬ２、ＴＯＸ、ＨＭＧＢ１、ＨＭＧＢ２、ＰＢＲＭ１、ＴＯＸ３、ＳＭＡＲＣＥ１、ＨＭＧ２０Ｂ、ＨＭＧＢ３、ＨＭＧＡ２、ＨＭＧＡ１、ＡＲＸ、ＨＯＸＡ１１、ＭＥＯＸ１、ＤＬＸ６、ＩＳＬ１、ＨＯＸＣ８、ＢＡＲＸ２、ＡＬＸ４、ＧＳＣ２、ＤＬＸ３、ＰＩＴＸ１、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＡ１０、ＬＨＸ５、ＬＡＳＳ４、ＺＦＨＸ４、ＳＩＸ４、ＶＳＸ１、ＡＤＮＰ、ＲＨＯＸＦ１、ＭＥＩＳ３、ＰＢＸ４、ＤＬＸ５、ＨＯＸＡ１、ＨＯＸＡ２、ＨＯＸＡ３、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ６、ＨＯＸＡ１３、ＥＶＸ１、ＮＯＢＯＸ、ＭＥＯＸ２、ＬＨＸ２、ＬＨＸ６、ＬＨＸ３、ＴＬＸ１、ＰＩＴＸ３、ＨＯＸＢ６、ＨＮＦ１Ｂ、ＤＬＸ４、ＳＥＢＯＸ、ＶＴＮ、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＮＫＸ３−２、ＤＢＸ１、ＮＡＮＯＧ、ＩＲＸ４、ＣＤＸ１、ＴＬＸ２、ＤＬＸ２、ＶＡＸ２、ＰＲＲＸ１、ＴＧＩＦ２、ＶＳＸ２、ＮＫＸ２−３、ＨＯＸＢ８、ＨＯＸＢ５、ＨＯＸＢ７、ＨＯＸＢ３、ＨＯＸＢ１、ＭＳＸ２、ＬＨＸ４、ＨＯＸＡ７、ＨＯＸＣ１３、ＨＯＸＣ１１、ＨＯＸＣ１２、ＥＳＸ１、ＢＡＲＨＬ１、ＮＫＸ２−４、ＮＫＸ２−２、ＳＩＸ１、ＨＯＸＤ１、ＨＯＸＤ３、ＨＯＸＤ９、ＨＯＸＤ１０、ＨＯＸＤ１１、ＨＯＸＤ１３、ＭＮＸ１、ＣＤＸ４、ＢＡＲＸ１、ＲＨＯＸＦ２、ＬＨＸ１、ＧＳＣ、ＭＥＩＳ２、ＲＡＸ、ＥＭＸ１、ＮＫＸ２−８、ＮＫＸ２−１、ＨＬＸ、ＬＭＸ１Ｂ、ＳＩＸ３、ＬＢＸ１、ＰＤＸ１、ＬＡＳＳ５、ＺＦＨＸ３、ＢＡＲＨＬ２、ＬＨＸ９、ＬＡＳＳ２、ＭＥＩＳ１、ＤＬＸ１、ＨＭＢＯＸ１、ＺＥＢ１、ＶＡＸ１、ＮＫＸ６−２、ＶＥＮＴＸ、ＨＨＥＸ、ＴＧＩＦ２ＬＸ、ＬＡＳＳ３、ＡＬＸ３、ＨＯＸＢ１３、ＩＲＸ６、ＩＳＬ２、ＰＫＮＯＸ１、ＬＨＸ８、ＬＭＸ１Ａ、ＥＮ１、ＭＳＸ１、ＮＫＸ６−１、ＨＥＳＸ１、ＰＩＴＸ２、ＴＬＸ３、ＥＮ２、ＵＮＣＸ、ＧＢＸ１、ＮＫＸ６−３、ＺＨＸ１、ＨＤＸ、ＰＨＯＸ２Ａ、ＰＫＮＯＸ２、ＣＤＸ２、ＤＲＧＸ、ＮＫＸ３−１、ＰＢＸ３、ＰＲＲＸ２、ＧＢＸ２、ＳＨＯＸ２、ＧＳＸ１、ＨＯＸＤ４、ＨＯＸＤ１２、ＥＭＸ２、ＩＲＸ１、ＩＲＸ２、ＳＩＸ２、ＨＯＸＢ９、ＨＯＰＸ、ＯＴＰ、ＬＡＳＳ６、ＨＯＸＣ５、ＨＯＸＢ２、ＲＡＸ２、ＥＶＸ２、ＺＨＸ３、ＰＲＯＰ１、ＩＳＸ、ＨＯＸＤ８、ＴＧＩＦ２ＬＹ、ＩＲＸ５、ＳＩＸ５、ＴＧＩＦ１、ＩＲＸ３、ＺＨＸ２、ＬＢＸ２、ＮＫＸ２−６、ＡＬＸ１、ＧＳＸ２、ＨＯＸＣ９、ＨＯＸＣ１０、ＨＯＸＢ４、ＮＫＸ２−５、ＳＩＸ６、ＭＩＸＬ１、ＤＢＸ２、ＰＢＸ１、ＳＨＯＸ、ＡＲＧＦＸ、ＨＭＸ３、ＨＭＸ２、ＢＳＸ、ＨＯＸＡ４、ＤＭＢＸ１、ＨＯＸＣ６、ＨＯＸＣ４、ＲＨＯＸＦ２Ｂ、ＰＢＸ２、ＤＵＸＡ、ＤＰＲＸ、ＬＥＵＴＸ、ＮＯＴＯ、ＨＯＭＥＺ、ＨＭＸ１、ＤＵＸ４Ｌ５、ＤＵＸ４Ｌ２、ＤＵＸ４Ｌ３、ＤＵＸ４Ｌ６、ＮＫＸ１−１、ＨＮＦ１Ａ、ＨＳＦ４、ＨＳＦＹ２、ＨＳＦＸ１、ＨＳＦＸ２、ＨＳＦＹ１、ＨＳＦ１、ＬＣＯＲＬ、ＬＣＯＲ、ＩＲＦ６、ＩＲＦ１、ＩＲＦ３、ＩＲＦ５、ＩＲＦ４、ＩＲＦ８、ＩＲＦ２、ＩＲＦ７、ＩＲＦ９、ＭＢＤ３、ＢＡＺ２Ｂ、ＭＢＤ４、ＳＥＴＤＢ２、ＭＢＤ１、ＭＥＣＰ２、ＳＥＴＤＢ１、ＭＢＤ２、ＢＡＺ２Ａ、ＳＭＡＤ７、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ９、ＳＭＡＤ６、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＺＺＺ３、ＲＣＯＲ１、ＣＤＣ５Ｌ、ＭＹＢＬ２、ＤＮＡＪＣ２、ＴＡＤＡ２Ａ、ＲＣＯＲ３、ＭＹＢ、ＴＥＲＦ２、ＤＭＴＦ１、ＤＮＡＪＣ１、ＮＣＯＲ１、ＴＥＲＦ１、ＭＩＥＲ３、ＭＹＳＭ１、ＳＮＡＰＣ４、ＲＣＯＲ２、ＴＡＤＡ２Ｂ、ＭＹＢＬ１、ＴＥＲＦ１Ｐ２、ＮＣＯＲ２、ＣＣＤＣ７９、ＳＭＡＲＣＣ１、ＳＭＡＲＣＣ２、ＴＴＦ１、Ｃ１１ｏｒｆ９、ＮＦＹＡ、ＮＦＹＣ、ＮＦＹＢ、ＮＲＦ１、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＥＳＲ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ０Ｂ１、ＰＲＥＢ、ＥＡＦ２、ＳＰＺ１、ＴＰ６３、ＴＰ７３、ＴＰ５３、ＰＡＸ６、ＰＡＸ７、ＰＡＸ２、ＰＡＸ４、ＰＡＸ８、ＰＡＸ１、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＡＸ９、ＳＵＢ１、ＰＯＵ２Ｆ２、ＰＯＵ１Ｆ１、ＰＯＵ４Ｆ３、ＰＯＵ６Ｆ２、ＰＯＵ２Ｆ３、ＰＯＵ２Ｆ１、ＰＯＵ４Ｆ２、ＰＯＵ４Ｆ１、ＰＯＵ６Ｆ１、ＰＯＵ３Ｆ２、ＰＯＵ３Ｆ１、ＰＯＵ３Ｆ４、ＰＯＵ３Ｆ３、ＰＯＵ５Ｆ１、ＰＯＵ５Ｆ１Ｂ、ＰＰＡＲＤ、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＡＲＡ、ＰＧＲ、ＰＲＯＸ１、ＰＲＯＸ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ６Ａ１、ＥＳＲＲＡ、ＮＲ２Ｃ２、ＲＦＸ３、ＲＦＸ２、ＲＦＸ４、ＲＦＸ１、ＲＦＸ５、ＲＦＸ７、ＲＦＸ６、ＲＦＸ８、ＮＦＡＴＣ３、ＮＦＫＢ２、ＮＦＡＴＣ４、ＮＦＡＴＣ２、ＮＦＡＴ５、ＲＥＬＢ、ＮＦＫＢ１、ＮＦＡＴＣ１、ＲＥＬ、ＲＥＬＡ、ＲＯＲＡ、ＲＯＲＣ、ＮＲ１Ｄ２、ＲＯＲＢ、ＲＵＮＸ３、ＲＵＮＸ１、ＳＰ１００、ＳＰ１４０、ＧＭＥＢ２、ＳＰ１１０、ＡＩＲＥ、ＧＭＥＢ１、ＤＥＡＦ１、ＳＰ１４０Ｌ、ＬＯＣ７２９９９１−ＭＥＦ２Ｂ、ＭＥＦ２Ａ、ＳＲＦ、ＭＥＦ２Ｄ、ＭＥＦ２Ｂ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ６、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＴＢＸ２１、ＴＢＸ５、ＴＢＸ１５、ＴＢＸ１８、ＴＢＸ２、ＴＢＸ４、ＴＢＸ２２、ＴＢＸ３、ＴＢＲ１、ＴＢＸ１９、ＴＢＸ６、ＥＯＭＥＳ、Ｔ、ＴＢＸ２０、ＴＢＸ１０、ＭＧＡ、ＴＢＸ１、ＴＥＡＤ３、ＴＥＡＤ２、ＴＥＡＤ１、ＴＥＡＤ４、ＣＲＥＢＬ２、ＮＦＥ２Ｌ３、ＣＲＥＢ３Ｌ３、ＦＯＳＬ２、ＮＦＥ２Ｌ１、ＣＲＥＭ、ＤＢＰ、ＣＲＥＢ３、ＨＬＦ、ＢＡＣＨ２、ＡＴＦ２、ＮＦＥ２Ｌ２、ＡＴＦ６、ＣＲＥＢ１、ＡＴＦ１、ＮＦＥ２、ＦＯＳＢ、ＡＴＦ４、ＮＲＬ、ＪＵＮＤ、ＪＤＰ２、ＣＲＥＢ３Ｌ４、ＢＡＴＦ、ＢＡＣＨ１、ＣＲＥＢ３Ｌ１、ＮＦＩＬ３、ＴＥＦ、ＢＡＴＦ２、ＡＴＦ５、ＦＯＳ、ＪＵＮＢ、ＤＤＩＴ３、ＦＯＳＬ１、ＪＵＮ、ＭＡＦ、ＣＲＥＢ３Ｌ２、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＦ、ＭＡＦＧ、ＭＡＦＫ、ＭＡＦＢ、ＡＴＦ６Ｂ、ＣＲＸ、ＯＴＸ１、ＯＴＸ２、ＴＨＡＰ３、ＴＨＡＰ１０、ＴＨＡＰ１、ＰＲＫＲＩＲ、ＴＨＡＰ８、ＴＨＡＰ９、ＴＨＡＰ１１、ＴＨＡＰ２、ＴＨＡＰ６、ＴＨＡＰ４、ＴＨＡＰ５、ＴＨＡＰ７、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ２Ｅ３、ＲＡＲＢ、ＨＮＦ４Ａ、ＶＤＲ、ＥＳＲＲＢ、ＴＨＲＡ、ＮＲ１Ｄ１、ＲＡＲＡ、ＥＳＲ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ１Ｉ２、ＴＨＲＢ、ＮＲ３Ｃ２、ＨＮＦ４Ｇ、ＲＡＲＧ、ＲＸＲＡ、ＥＳＲＲＧ、ＲＸＲＢ、ＴＳＣ２２Ｄ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＣ２２Ｄ４、ＴＳＣ２２Ｄ２、ＴＵＬＰ３、ＴＵＬＰ２、ＴＵＬＰ１、ＴＵＬＰ４、ＴＵＢ、ＺＢＴＢ３３、ＺＢＴＢ３２、ＺＢＴＢ１１、ＭＹＮＮ、ＺＢＴＢ２５、ＰＡＴＺ１、ＺＢＴＢ１６、ＺＢＴＢ２４、ＢＣＬ６、ＺＢＴＢ４７、ＺＢＴＢ１７、ＺＢＴＢ４５、ＧＺＦ１、ＺＢＴＢ１、ＺＢＴＢ４６、ＺＢＴＢ８Ａ、ＺＢＴＢ７Ｂ、ＢＣＬ６Ｂ、ＺＢＴＢ４９、ＺＢＴＢ４３、ＨＩＣ２、ＺＢＴＢ２６、ＺＮＦ１３１、ＺＮＦ２９５、ＺＢＴＢ４、ＺＢＴＢ３４、ＺＢＴＢ３８、ＨＩＣ１、ＺＢＴＢ４１、ＺＢＴＢ７Ａ、ＺＮＦ２３８、ＺＢＴＢ４２、ＺＢＴＢ２、ＺＢＴＢ２０、ＺＢＴＢ４０、ＺＢＴＢ７Ｃ、ＺＢＴＢ３７、ＺＢＴＢ３、ＺＢＴＢ６、ＺＢＴＢ４４、ＺＦＰ１６１、ＺＢＴＢ１２、ＺＢＴＢ４８、ＺＢＴＢ１０、ＺＢＥＤ４、ＺＢＥＤ３、ＺＢＥＤ２、Ｃ１１ｏｒｆ９５、ＺＢＥＤ１、ＩＫＺＦ５、ＺＮＦ８２１、ＺＮＦ４５１、ＺＮＦ１９５、ＺＦＸ、ＺＮＦ２６３、ＺＮＦ２００、ＨＩＶＥＰ２、ＷＩＺ、ＺＮＦ５８２、ＳＮＡＩ２、ＺＦＰ６４、ＩＫＺＦ２、ＺＩＣ２、ＺＮＦ８００、ＰＲＤＭ１、ＰＲＤＭ６、ＺＦＰ１１２、ＺＮＦ２７５、ＺＮＦ７６、
ＺＦＡＴ、ＫＬＦ６、ＺＦＹ、ＺＸＤＣ、ＧＬＩ２、ＺＮＦ５３２、ＺＮＦ３７Ａ、ＺＮＦ５１０、ＺＮＦ５０６、ＺＮＦ３２４、ＺＮＦ６７１、ＺＮＦ４１６、ＺＮＦ５８６、ＺＮＦ４４６、ＺＮＦ８、ＺＮＦ２６４、ＲＥＳＴ、ＭＥＣＯＭ、ＺＮＦ２１３、ＺＮＦ３４３、ＺＮＦ３０２、ＺＮＦ２６８、ＺＮＦ１０、ＨＩＶＥＰ１、ＺＮＦ１８４、ＭＺＦ１、ＳＡＬＬ４、ＺＮＦ５１６、ＫＬＦ８、ＫＬＦ５、ＺＮＦ６２９、ＺＮＦ４２３、ＣＴＣＦ、ＺＮＦ５００、ＺＮＦ１７４、ＳＡＬＬ１、ＭＡＺ、ＺＮＦ４１９、ＯＶＯＬ３、ＺＮＦ１７５、ＺＮＦ１４、ＺＮＦ５７４、ＺＮＦ８５、ＳＰ４、ＺＫＳＣＡＮ１、ＧＬＩ３、ＧＬＩＳ３、ＫＬＦ３、ＰＲＤＭ４、ＧＬＩ１、ＰＲＤＭ１３、ＺＮＦ１４２、ＰＲＤＭ２、ＺＮＦ６８４、ＺＮＦ５４１、ＫＬＦ７、ＰＬＡＧＬ１、ＺＮＦ４３０、ＫＬＦ１２、ＫＬＦ９、ＺＮＦ４１０、ＢＣＬ１１Ａ、ＥＧＲ１、ＺＦＰ３０、ＴＳＨＺ３、ＺＮＦ５４９、ＺＳＣＡＮ１８、ＺＮＦ２１１、ＺＮＦ６３９、ＺＳＣＡＮ２０、ＧＴＦ３Ａ、ＺＮＦ２０５、ＺＮＦ６４４、ＥＧＲ２、ＩＫＺＦ４、ＣＴＣＦＬ、ＺＮＦ８３１、ＳＮＡＩ１、ＺＮＦ５７６、ＺＮＦ４５、ＴＲＥＲＦ１、ＺＮＦ３９１、ＲＲＥＢ１、ＺＮＦ１３３、ＯＶＯＬ２、ＺＮＦ４３６、ＰＬＡＧＬ２、ＧＬＩＳ２、ＺＮＦ３８４、ＺＮＦ４８４、ＨＩＶＥＰ３、ＢＣＬ１１Ｂ、ＫＬＦ２、ＺＮＦ７８０Ｂ、ＦＥＺＦ１、ＫＬＦ１６、ＺＳＣＡＮ１０、ＺＮＦ５５７、ＺＮＦ３３７、ＰＲＤＭ１２、ＺＮＦ３１７、ＺＮＦ４２６、ＺＮＦ３３１、ＺＮＦ２３６、ＺＮＦ３４１、ＺＮＦ２２７、ＺＮＦ１４１、ＺＮＦ３０４、ＺＳＣＡＮ５Ａ、ＺＮＦ１３２、ＺＮＦ２０、ＥＧＲ４、ＺＮＦ６７０、ＶＥＺＦ１、ＫＬＦ４、ＺＦＰ３７、ＺＮＦ１８９、ＺＮＦ１９３、ＺＮＦ２８０Ｄ、ＰＲＤＭ５、ＺＮＦ７４０、ＺＩＣ５、ＺＳＣＡＮ２９、ＺＮＦ７１０、ＺＮＦ４３４、ＺＮＦ２８７、ＺＩＭ３、ＰＲＤＭ１５、ＺＦＰ１４、ＺＮＦ７８７、ＺＮＦ４７３、ＺＮＦ６１４、ＰＲＤＭ１６、ＺＮＦ６９７、ＺＮＦ６８７、ＯＳＲ１、ＺＮＦ５１４、ＺＮＦ６６０、ＺＮＦ３００、ＲＢＡＫ、ＺＮＦ９２、ＺＮＦ１５７、ＺＮＦ１８２、ＺＮＦ４１、ＺＮＦ７１１、ＰＲＤＭ１４、ＺＮＦ７、ＺＮＦ２１４、ＺＮＦ２１５、ＳＡＬＬ３、ＺＮＦ８２７、ＺＮＦ５４７、ＺＮＦ７７３、ＺＮＦ７７６、ＺＮＦ２５６、ＺＳＣＡＮ１、ＺＮＦ８３７、ＰＲＤＭ８、ＺＮＦ１１７、ＺＩＣ１、ＦＥＺＦ２、ＺＮＦ５９９、ＺＮＦ１８、ＫＬＦ１０、ＺＫＳＣＡＮ２、ＺＮＦ６８９、ＺＩＣ３、ＺＮＦ１９、ＺＳＣＡＮ１２、ＺＮＦ２７６、ＺＮＦ２８３、ＺＮＦ２２１、ＺＮＦ２２５、ＺＮＦ２３０、ＺＮＦ２２２、ＺＮＦ２３４、ＺＮＦ２３３、ＺＮＦ２３５、ＺＮＦ３６２、ＺＮＦ２０８、ＺＮＦ７１４、ＺＮＦ３９４、ＺＮＦ３３３、ＺＮＦ３８２、ＩＫＺＦ３、ＺＮＦ５７７、ＺＮＦ６５３、ＺＮＦ７５Ａ、ＧＦＩ１、ＺＮＦ２８１、ＺＮＦ４９６、ＺＮＦ２、ＺＮＦ５１３、ＺＮＦ１４８、ＫＬＦ１５、ＺＮＦ６９１、ＺＮＦ５８９、ＰＲＤＭ９、ＺＮＦ１２、ＳＰ８、ＯＳＲ２、ＺＮＦ３６７、ＺＮＦ２２、ＧＦＩ１Ｂ、ＺＮＦ２１９、ＳＡＬＬ２、ＺＮＦ３１９、ＺＮＦ２０２、ＺＮＦ１４３、ＺＮＦ３、ＺＳＣＡＮ２１、ＺＮＦ６０６、ＳＰ２、ＺＮＦ９１、ＺＮＦ２３、ＺＮＦ２２６、ＺＮＦ２２９、ＺＮＦ１８０、ＺＮＦ６６８、ＺＮＦ６４６、ＺＮＦ６４１、ＺＮＦ６１０、ＺＮＦ５２８、ＺＮＦ７０１、ＺＮＦ５２６、ＺＮＦ１４６、ＺＮＦ４４４、ＺＮＦ８３、ＺＮＦ５５８、ＺＮＦ２３２、Ｅ４Ｆ１、ＺＮＦ５９７、ＩＮＳＭ２、ＺＮＦ３０、ＺＮＦ５０７、ＺＮＦ３５４Ａ、ＺＥＢ２、ＺＮＦ３２、ＫＬＦ１３、ＺＦＰＭ２、ＺＮＦ７６４、ＺＮＦ７６８、ＺＮＦ３５、ＺＮＦ７７８、ＺＮＦ２１２、ＺＮＦ２８２、ＰＲＤＭ１０、ＳＰ７、ＳＣＲＴ１、ＺＮＦ１６、ＺＮＦ２９６、ＺＮＦ１６０、ＺＮＦ４１５、ＺＮＦ６７２、ＺＮＦ６９２、ＺＮＦ４３９、ＺＮＦ４４０、ＺＮＦ５８１、ＺＮＦ５２４、ＺＮＦ５６２、ＺＮＦ５６１、ＺＮＦ５８４、ＺＮＦ２７４、ＺＩＫ１、ＺＮＦ５４０、ＺＮＦ５７０、ＫＬＦ１７、ＺＮＦ２１７、ＺＮＦ５７、ＺＮＦ５５６、ＺＮＦ５５４、ＫＬＦ１１、ＨＩＮＦＰ、ＺＮＦ２４、ＺＮＦ５９６、ＯＶＯＬ１、ＳＰ３、ＺＮＦ６２１、ＺＮＦ６８０、ＢＮＣ２、ＺＮＦ４８３、ＺＮＦ４４９、ＩＮＳＭ１、ＺＮＦ４１７、ＺＮＦ７９１、ＺＮＦ８０、ＧＬＩＳ１、ＺＮＦ４９７、ＫＬＦ１４、ＺＮＦ２６６、ＺＩＣ４、ＺＮＦ４０８、ＺＮＦ５１９、ＺＮＦ２５、ＺＮＦ７７、ＺＮＦ１６９、ＺＮＦ６１３、ＺＮＦ６８３、ＺＮＦ１３５、ＺＳＣＡＮ２、ＺＮＦ５７５、ＺＮＦ４９１、ＺＮＦ６２０、ＺＮＦ６１９、ＺＮＦ３５４Ｃ、ＺＮＦ１１４、ＺＮＦ３６６、ＺＮＦ４５４、ＺＮＦ５４３、ＺＮＦ３５４Ｂ、ＺＮＦ２２３、ＺＮＦ７１３、ＺＮＦ８５２、ＺＮＦ５５２、ＺＦＰ４２、ＺＮＦ６６４、ＥＧＲ３、ＺＦＰＭ１、ＺＮＦ７８４、ＺＮＦ６４８、ＦＩＺ１、ＺＮＦ７７１、ＴＳＨＺ１、ＺＮＦ４８、ＺＮＦ８１６、ＺＮＦ５７１、ＺＳＣＡＮ４、ＺＮＦ５９４、ＺＦＰ３、ＺＮＦ４４３、ＺＮＦ７９２、ＺＮＦ５７２、ＺＮＦ７０７、ＺＮＦ７４６、ＺＮＦ３２２Ａ、ＺＮＦ４６７、ＺＮＦ６７８、ＺＦＰ４１、ＨＫＲ１、ＰＬＡＧ１、ＺＮＦ３２９、ＺＮＦ１０１、ＺＮＦ７１６、ＺＮＦ７０８、ＺＳＣＡＮ２２、ＺＮＦ６６２、ＺＮＦ３２０、ＺＮＦ６２３、ＺＮＦ５３０、ＺＮＦ２８５、ＺＦＰ１、ＷＴ１、ＺＦＰ９０、ＺＮＦ４７９、ＺＮＦ４４５、ＺＮＦ７４、ＳＰ１、ＳＮＡＩ３、ＺＮＦ６９６、ＩＫＺＦ１、ＺＮＦ２６７、ＺＮＦ５６６、ＺＮＦ２２４、ＺＮＦ５２９、ＺＮＦ２８４、ＺＮＦ７４９、ＺＮＦ１７、ＺＮＦ５５５、ＺＮＦ７５Ｄ、ＺＮＦ５０１、ＺＮＦ１９７、ＺＮＦ３９６、ＺＦＰ９１、ＺＮＦ７３２、ＺＮＦ３９７、ＺＳＣＡＮ３０、ＺＮＦ５４６、ＺＮＦ２８６Ａ、ＺＫＳＣＡＮ４、ＺＮＦ７０、ＺＮＦ６４３、ＺＮＦ６４２、ＺＳＣＡＮ２３、ＺＮＦ４９０、ＺＮＦ６２６、ＺＮＦ７９３、ＺＮＦ３８３、ＺＮＦ６６９、ＺＮＦ５５９、ＺＮＦ１７７、ＺＮＦ５４８、ＭＴＦ１、ＺＮＦ３２２Ｂ、ＺＮＦ５６３、ＺＮＦ２９２、ＺＮＦ５６７、ＳＰ６、ＺＮＦ５７３、ＺＮＦ５２７、ＺＮＦ３３Ａ、ＺＮＦ６００、ＺＫＳＣＡＮ３、ＺＮＦ６７６、ＺＮＦ６９９、ＺＮＦ２５０、ＺＮＦ７９、ＺＮＦ６８１、ＺＮＦ７６６、ＺＮＦ１０７、ＺＮＦ４７１、ＺＮＦ８３６、ＺＮＦ４９３、ＺＮＦ１６７、ＺＮＦ５６５、ＺＮＦ３４、ＺＮＦ７８１、ＺＮＦ１４０、ＺＮＦ７７４、ＺＮＦ６５８、ＺＮＦ７６５、ＺＮＦ１２４、ＺＮＦ５６９、ＺＮＦ７７７、ＺＮＦ７７５、ＺＮＦ７９９、ＺＮＦ７８２、ＺＮＦ８４６、ＺＮＦ１３６、ＺＫＳＣＡＮ５、ＺＮＦ５０２、ＺＦＰ６２、ＺＮＦ３３Ｂ、ＺＮＦ５１２Ｂ、ＺＮＦ４３１、ＺＮＦ４１８、ＺＮＦ７００、ＺＮＦ２３９、ＺＳＣＡＮ１６、ＺＦＰ２８、ＺＮＦ７０５Ａ、ＺＮＦ５８５Ａ、ＺＮＦ１３８、ＺＮＦ４２９、ＺＮＦ４７０、ＺＮＦ１００、ＺＮＦ３９８、ＺＮＦ４９８、ＺＮＦ４４１、ＺＮＦ４２０、ＺＮＦ７６３、ＺＮＦ６７９、ＺＮＦ６８２、ＺＮＦ７７２、ＺＮＦ２５７、ＺＮＦ７８５、ＺＳＣＡＮ５Ｂ、ＺＮＦ１６５、ＺＮＦ６５５、ＺＮＦ９８、ＺＮＦ７８６、ＺＮＦ５１７、ＺＮＦ６７５、ＺＮＦ８６０、ＺＮＦ６２８、ＺＮＦ６６５、ＺＮＦ６２４、ＺＮＦ８４１、ＺＮＦ６１５、ＺＮＦ３５０、ＺＮＦ４３２、ＺＮＦ４３３、ＺＮＦ４６０、ＺＮＦ８１、ＺＮＦ７８０Ａ、ＺＮＦ４６１、ＺＮＦ１８１、ＬＯＣ１００２８７８４１、ＺＮＦ４４、ＺＮＦ７９０、ＺＮＦ６７７、ＺＮＦ８２３、ＺＮＦ３１１、ＺＮＦ３４７、ＺＮＦ７１、ＺＮＦ１２１、ＺＮＦ３３５、ＺＮＦ５６０、ＺＮＦ２７３、ＺＮＦ８４、ＺＮＦ６６７、ＺＮＦ６４９、ＺＮＦ２４８、ＺＮＦ５４４、ＺＮＦ７７０、ＺＮＦ７３７、ＺＮＦ２５１、ＺＮＦ６０７、ＺＮＦ３３４、ＺＸＤＡ、ＺＮＦ４８５、ＺＩＭ２、ＰＥＧ３、ＺＮＦ１９２、ＺＮＦ４４２、ＺＮＦ８１３、ＺＮＦ２６、ＺＮＦ６９、ＺＮＦ５８３、ＺＮＦ５６８、ＺＸＤＢ、ＺＮＦ４８０、ＺＮＦ５８７、ＺＮＦ８０８、ＺＮＦ４３、ＺＮＦ２８、ＺＮＦ６２７、ＺＮＦ７８９、ＺＮＦ５３６、ＺＮＦ５３４、ＺＮＦ６５２、ＺＮＦ５２１、ＺＮＦ３５８、ＺＦＰ２、ＳＰ５、ＺＮＦ８１４、ＺＮＦ５５１、ＺＮＦ８０５、ＺＳＣＡＮ５Ｃ、ＺＮＦ４６８、ＺＮＦ６１６、ＺＦＰ５７、ＺＮＦ１５５、ＺＮＦ７８３、ＺＮＦ４２５、ＺＮＦ５８０、ＺＮＦ６１１、ＺＮＦ２５４、ＺＮＦ６２５、ＺＮＦ１３４、ＺＮＦ８４５、ＺＮＦ９９、ＺＮＦ２５３、ＺＮＦ９０、ＺＮＦ９３、ＺＮＦ４８６、ＲＥＰＩＮ１、ＬＯＣ１００１３１５３９、ＺＮＦ７０５Ｄ、ＬＯＣ１００１３２３９６、ＺＮＦ７０５Ｇ、ＳＣＲＴ２、ＺＮＦ４０７、ＳＰ９、ＺＮＦ５７９、ＺＮＦ８８０、ＺＮＦ６３０、ＺＮＦ８４４、ＺＮＦ４６９、ＺＮＦ７１７、ＺＮＦ８６５、ＺＮＦ４９２、ＺＮＦ６８８、ＹＹ２、ＺＮＦ８７８、ＺＮＦ８７９、ＺＮＦ７３６、ＺＮＦ３２３、ＺＮＦ７０９、ＺＮＦ５１２、ＺＮＦ５８５Ｂ、ＺＮＦ１５４、ＺＮＦ３２４Ｂ、ＺＮＦ５６４、ＺＦＰ８２、ＧＬＩ４、ＺＮＦ６７４、ＺＮＦ３４５、ＺＮＦ５５０、ＫＬＦ１、ＹＹ１、ＭＹＳＴ２、ＳＴ１８、Ｌ３ＭＢＴＬ４、ＭＹＴ１Ｌ、ＭＹＴ１、Ｌ３ＭＢＴＬ１、ＭＴＡ３、ＧＡＴＡ１、ＴＲＰＳ１、ＧＡＴＡ３、ＧＡＴＡ５、ＧＡＴＡ４、ＧＡＴＡ６、ＧＡＴＡＤ２Ｂ、ＧＡＴＡＤ１、ＧＡＴＡ２、ＭＴＡ１、ＺＧＬＰ１、ＭＴＡ２、ＲＥＲＥ、Ｃ１６ｏｒｆ５、ＬＩＴＡＦ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ４、ＺＭＩＺ１、ＺＭＩＺ２、ＰＩＡＳ３、ＲＮＦ１３８、ＮＦＸ１、ＮＦＸＬ１、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。
【０３８０】
一部の実施形態では、細胞は１つの細胞型から別の細胞型へと操作される（例えば、変換または分化される）。一部の実施形態では、膵臓細胞を操作してベータ膵島細胞にする。一部の実施形態では、線維芽細胞を操作してｉＰＳ細胞にする。一部の実施形態では、前脂肪細胞を操作して褐色脂肪細胞にする。他の例示的細胞として、例えば、筋肉細胞、神経細胞、白血球、およびリンパ球が挙げられる。
【０３８１】
一部の実施形態では、細胞は、疾患細胞または突然変異体保有細胞である。このような細胞は、疾患を処置する、例えば、突然変異を補正する、または細胞の表現型を変化させて、例えば、がん細胞の成長を阻害するよう操作することができる。例えば、細胞は、本明細書に記載されている１種または複数種の疾患または状態に関連する。
【０３８２】
一部の実施形態では、操作される細胞は正常細胞である。
【０３８３】
一部の実施形態では、操作される細胞は幹細胞または前駆細胞（例えば、ｉＰＳ、胚、造血、脂肪、生殖系、肺、または神経の幹細胞または前駆細胞）である。一部の実施形態では、操作される細胞は、三胚葉のうちのいずれか由来の細胞（すなわち中胚葉、内胚葉または外胚葉）であり得る。一部の実施形態では、操作される細胞は、例えば、胎盤由来の胚体外組織由来であり得る。
【０３８４】
一部の実施形態では、操作される細胞は、線維芽細胞、単球前駆体、Ｂ細胞、外分泌細胞、膵臓前駆体、内分泌前駆体、肝芽細胞、筋原細胞、または前脂肪細胞から選択される。一部の実施形態では、細胞を操作して（例えば、変換または分化する）、筋肉細胞、赤血球系−巨核球細胞、好酸球、ｉＰＳ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、膵島ベータ−細胞、ニューロン、心筋細胞、血液細胞、内分泌前駆体、外分泌前駆体、乳管細胞、腺房細胞、アルファ細胞、ベータ細胞、デルタ細胞、ＰＰ細胞、肝細胞、胆管細胞、血管芽細胞、中胚葉性血管芽細胞または褐色脂肪細胞にする。
【０３８５】
一部の実施形態では、細胞は筋肉細胞、赤血球系−巨核球細胞、
【０３８６】
好酸球、ｉＰＳ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、膵島ベータ−細胞、ニューロン、心筋細胞、血液細胞、内分泌前駆体、外分泌前駆体、乳管細胞、腺房細胞、アルファ細胞、ベータ細胞、デルタ細胞、ＰＰ細胞、肝細胞、胆管細胞、または白色もしくは褐色脂肪細胞である。
【０３８７】
一部の実施形態では、細胞は、前駆細胞、多能性細胞、全能性細胞、成体幹細胞、内部細胞塊細胞、胚性幹細胞、またはｉＰＳ細胞である。
【０３８８】
一部の実施形態では、操作される細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、がん細胞は、肺がん細胞、乳がん細胞、皮膚がん細胞、脳がん細胞、膵臓がん細胞、造血系がん細胞、肝臓がん細胞、腎臓がん細胞、卵巣がん細胞、前立腺がん細胞、皮膚がん細胞であり得る。
【０３８９】
一部の実施形態では、細胞は、筋肉細胞、赤血球系−巨核球細胞、好酸球、ｉＰＳ細胞、マクロファージ、Ｔ細胞、膵島ベータ−細胞、ニューロン、心筋細胞、血液細胞、内分泌前駆体、外分泌前駆体、乳管細胞、腺房細胞、アルファ細胞、ベータ細胞、デルタ細胞、ＰＰ細胞、肝細胞、胆管細胞、または白色もしくは褐色脂肪細胞である。
【０３９０】
細胞（複数可）へのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および遺伝子−編集システムの投与
【０３９１】
細胞（複数可）への、ゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与は、当技術分野で公知の任意の方法により実施することができる。投与は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏであり得る。細胞（複数可）へのゲノム編集システムおよびＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与は同時または逐次的に行うことができる。一部の実施形態では、投与は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システム構成成分の細胞膜への進入を結果として生じる。一部の実施形態では、投与は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システム構成成分の細胞核への進入を結果として生じる。一部の実施形態では、投与は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤およびゲノム編集システムの存在下で細胞をインキュベートすることを含む。
【０３９２】
遺伝子編集システムは、当技術分野で公知の任意の方法により細胞（複数可）に投与することができる。例えば、当技術分野で公知の任意の核酸またはタンパク質送達方法を使用することができる。遺伝子編集システムは、遺伝子編集システムの構成成分をコードする核酸として細胞に投与される（例えば、送達される）。遺伝子編集システムは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターのいずれによっても細胞に投与することができる。一部の実施形態では、ウイルスベクターが使用される。ウイルスベクターは、レトロウイルス（例えば、マウス白血病、ＨＩＶ、またはレンチウイルス）またはＤＮＡウイルス（例えばアデノウイルス、単純ヘルペス、およびアデノ随伴）であり得る。一部の実施形態では、トランスフェクション方法（例えば非ウイルス送達方法）を使用して、ゲノム編集システムを細胞に導入する。トランスフェクション方法は、細胞をＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム、リポソームと接触させること、またはプラスミドを細胞に電気穿孔することを含む。非ウイルス送達の追加の方法は、電気穿孔、リポフェクション、顕微注射、微粒子銃、ビロソーム、リポソーム、免疫リポゾーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、裸のＲＮＡ、人工ビリオン、および薬剤によるＤＮＡ取込みの増強を含む。例えば、Ｓｏｎｉｔｒｏｎ２０００システム（Ｒｉｃｈ−Ｍａｒ）を使用したソノポレーション法もまた核酸の送達に使用することができる。一部の実施形態では、１種または複数種の核酸がｍＲＮＡとして送達される。一部の実施形態では、キャップしたｍＲＮＡを使用して、翻訳効率および／またはｍＲＮＡ安定性を増加させる。一部の実施形態では、ＡＲＣＡ（アンチリバースキャップアナログ（ａｎｔｉ−ｒｅｖｅｒｓｅ  ｃａｐ  ａｎａｌｏｇ））キャップまたはそのバリアントが使用される。米国特許ＵＳ７０７４５９６およびＵＳ８１５３７７３を参照されたい。
【０３９３】
ある実施形態では、エンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ、Ｃｐｆ１など）およびｇＲＮＡはＤＮＡから転写される。
【０３９４】
ある実施形態では、エンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ、Ｃｐｆ１など）はＤＮＡから転写され、ｇＲＮＡはＲＮＡとして提供される。
【０３９５】
ある実施形態では、エンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ、Ｃｐｆ１など）およびｇＲＮＡはＲＮＡとして提供される。
【０３９６】
ある実施形態では、エンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ、Ｃｐｆ１など）はタンパク質として提供されｇＲＮＡはＤＮＡとして提供される。
【０３９７】
ある実施形態では、エンドヌクレアーゼ（例えばＣａｓ、Ｃｐｆ１など）はタンパク質として提供され、ｇＲＮＡはＲＮＡとして提供される。
【０３９８】
追加の核酸送達システムとして、Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｃｏｌｏｇｎｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｍａｘｃｙｔｅ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）、ＢＴＸＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ）およびＣｏｐｅｒｎｉｃｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ（例えば、ＵＳ６００８３３６を参照されたい）から提供されるものが挙げられる。リポフェクションは、例えば、米国特許第５，０４９，３８６号；第４，９４６，７８７号；および第４，８９７，３５５号に記載されており、リポフェクション試薬は市販されている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）ＲＮＡｉＭＡＸ）。ポリヌクレオチドの効率的な受容体認識リポフェクションに適したカチオン性および中性脂質として、Ｆｅｉｇｎｅｒ、ＷＯ９１／１７４２４、ＷＯ９１／１６０２４のものが挙げられる。送達は、細胞（ｅｘ  ｖｉｖｏ投与）または標的組織（ｉｎ  ｖｉｖｏ投与）に対して行うことができる。
【０３９９】
免疫脂質複合体などの標的化されたリポソームを含む脂質：核酸複合体の調製は、当業者に周知である（例えば、Ｃｒｙｓｔａｌ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：４０４−４１０（１９９５）；  Ｂｌａｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２：２９１−２９７（１９９５）；Ｂｅｈｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５：３８２−３８９（１９９４）；Ｒｅｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５：６４７−６５４（１９９４）；Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ２：７１０−７２２（１９９５）を参照されたい）。
【０４００】
追加の送達方法として、送達される核酸の、ＥｎＧｅｎｅＩＣ送達ビヒクル（ＥＤＶ）へのパッケージングの使用が挙げられる。これらＥＤＶは、二重特異性抗体を使用して標的組織に特異的に送達され、この抗体の一方のアームは標的組織に対する特異性を有し、他方はＥＤＶに対する特異性を有する。抗体は、ＥＤＶを標的細胞表面に届け、次いでＥＤＶをエンドサイトーシスにより細胞に届ける。細胞内に入ると、内容物が放出される（ＭａｃＤｉａｒｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２７（７）：６４３；  Ａｈｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５２：４８１７−４８２０（１９９２）；米国特許第４，１８６，１８３号、第４，２１７，３４４号、第４，２３５，８７１号、第４，２６１，９７５号、第４，４８５，０５４号、第４，５０１，７２８号、第４，７７４，０８５号、第４，８３７，０２８号、および第４，９４６，７８７号を参照されたい）。
【０４０１】
一部の実施形態では、トランスフェクションは一過性であり得、この場合、プラスミドを含有する、トランスフェクトしたゲノム編集システムは核に進入するが、複製中に細胞のゲノムに組み込まれることはない。トランスフェクションは安定させることができ、この場合、トランスフェクトしたプラスミドは細胞のゲノム領域に組み込まれる。
【０４０２】
一過性発現が使用される一部の実施形態では、アデノウイルスベースのシステムを使用することができる。アデノウイルスベースのベクターは、多くの細胞型において非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を必要としない。このようなベクターを用いて、高い力価および高いレベルの発現が得られてきた。このベクターは、比較的単純なシステムで大量生産することができる。アデノ随伴ウイルス（「ＡＡＶ」）ベクターもまた、例えば、核酸およびペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成において標的核酸で細胞を形質導入するため、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏおよびｅｘ  ｖｉｖｏでの遺伝子療法手順のために使用されている（例えば、Ｗｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  １６０：３８−４７（１９８７）；米国特許第４，７９７，３６８号；ＷＯ９３／２４６４１；Ｋｏｔｉｎ，  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：７９３−８０１（１９９４）；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９４：１３５１（１９９４）を参照されたい）。組換えＡＡＶベクターの構築は、米国特許第５，１７３，４１４号；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ５：３２５１−３２６０（１９８５）；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４：２０７２−２０８１（１９８４）；Ｈｅｒｍｏｎａｔ  ＆  Ｍｕｚｙｃｚｋａ，  ＰＮＡＳ  ８１：６４６６−６４７０（１９８４）；および  Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ  ６３：０３８２２−３８２８（１９８９）を含むいくつかの刊行物に記載されている。
【０４０３】
一部の実施形態では、細胞（複数可）へのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤ならびにＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の細胞膜および／または細胞核への侵入を可能にする任意の適切な媒体の存在下で単離細胞（複数可）を培養することによって実施する。
【０４０４】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、細胞（複数可）にｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで投与される。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、細胞（複数可）に約５時間、１０時間、１５時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、３０時間、３５時間、４０時間、４５時間、５０時間、５５時間、６０時間、６５時間、７０時間、８５時間、９０時間、１００時間、１２５時間、１５０時間、２００時間、またはその間の任意の期間にわたり接触させる。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、細胞（複数可）に、約１．５週間、２．０週間、２．５週間、３．０週間、３．５週間、４週間、またはその間の任意の期間にわたり接触させる。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は細胞培養培地の交換と共に再投与してもよい。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、ゲノム編集システム構成成分の導入前、導入中または導入後のいずれかに細胞と接触させることができる。
【０４０５】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、約０．１μＭ、０．２５μＭ、０．５μＭ、０．７５μＭ、１．０μＭ、１．２５μＭ、１．５０μＭ、１．７５μＭ、２．０μＭ、２．５μＭ、３．０μＭ、３．５μＭ、４．０μＭ、４．５μＭ、５．０μＭ、５．５μＭ、６．０μＭ、６．５μＭ、７．０μＭ、７．５μＭ、８．０μＭ、８．５μＭ、９．０μＭ、９．５μＭ、１０μＭ、１０．５μＭ、１１．０μＭ、１１．５μＭ、１２μＭの濃度、またはその間の任意の濃度で細胞（複数可）に投与される。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、濃度は、投与の過程において改変することができる。
【０４０６】
一部の実施形態では、遺伝子編集構成成分は、１種または複数種のベクターにより、またはＲＮＡ、ｍＲＮＡの形態で、またはエンドヌクレアーゼコンポーネントの場合、精製タンパク質またはｍＲＮＡ（例えばＣａｓ９タンパク質）として細胞（複数可）に送達される。１種または複数種のベクターは、ウイルスベクター、プラスミドまたはｓｓＤＮＡを含むことができる。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ベクター、および単純ヘルペスウイルスベクター、またはこれらの任意の組合せを含むことができる。一部の実施形態では、遺伝子編集構成成分はＲＮＡまたは合成ＲＮＡを介して送達される。
【０４０７】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を、遺伝子編集システムと共に細胞に投与することによって、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞に投与されないベースライン条件と比較して、相同組換え修復による遺伝子編集結果の量が増加する。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、オンターゲットでもオフターゲットでもインデル（ＮＨＥＪ由来）の抑制をもたらす。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、目的の遺伝子の発現の増加または低減をもたらす。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、細胞にとって内因性ではない遺伝子の発現をもたらすことができる。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、細胞（複数可）からの遺伝子の完全もしくは部分的な除去、または改変をもたらす。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、細胞（複数可）内のイントロンおよび／またはエクソンの完全もしくは部分的な除去、または改変をもたらす。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、細胞（複数可）内の非コーディング領域の完全もしくは部分的な除去、または改変をもたらす。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞に投与することは、細胞（複数可）内のコーディングおよび／または非コーディング遺伝子領域の同時もしくは逐次的な、完全もしくは部分的な除去、または改変をもたらす。一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤を遺伝子編集システムと共に細胞（複数可）に投与することは、染色体外ＤＮＡまたはＲＮＡを含めた、細胞（複数可）内のコーディングおよび／または非コーディング遺伝子領域の同時もしくは逐次的な、完全もしくは部分的な除去、または改変をもたらす。染色体外ＤＮＡは、ミトコンドリアＤＮＡ、葉緑体ＤＮＡ、染色体外環状ＤＮＡ、またはウイルス染色体外ＤＮＡであってもよい。
【０４０８】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤をゲノム編集システムと共に細胞に投与することは、目的の遺伝子の発現増加または発現低減をもたらす。一部の実施形態では、目的の遺伝子の発現の増加または低減は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞に投与されないベースライン条件と比較して、約２．５％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％であるか、またはこれらの間であり得る。一部の実施形態では、目的の遺伝子の増加または低減は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞に投与されないベースライン発現レベルと比較して、約０．５倍、１．０倍、１．５倍、２．０倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍または１０倍であるか、またはこれらの間であり得る。
【０４０９】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤をゲノム編集システムと共に細胞に投与することは、ゲノム編集の増加をもたらす。一部の実施形態では、ゲノム編集の増加は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞に投与されないベースライン条件と比較して、約２．５％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％であるか、またはこれらの間であり得る。一部の実施形態では、ゲノム編集の増加は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が細胞に投与されないベースライン発現レベルと比較して、約０．５倍、１．０倍、１．５倍、２．０倍、２．５倍、３．０倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍または１０倍であるか、またはこれらの間であり得る。
【０４１０】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および遺伝子編集システムの細胞集団への投与は、細胞集団に遺伝子編集システムのみが投与され、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤が投与されないベースライン条件と比較して、より大きな細胞生存期間をもたらす。一部の実施形態では、より大きな細胞生存期間をもたらすＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ−Ａ−１）、（ＩＩＩ−Ａ−２）、（ＩＩＩ−Ｂ−１）、（ＩＩＩ−Ｂ−２）、（ＩＶ）、（Ｖ−Ａ）および（Ｖ−Ｂ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【０４１１】
一部の実施形態では、細胞は、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の投与前、投与後または投与中のいずれかにおいて、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズに同期化させる。一部の実施形態では、細胞は、遺伝子編集構成成分の導入前、導入後または導入中のいずれかにおいて、ＳまたはＧ２細胞周期フェーズに同期化させる。ＳまたはＧ２細胞周期フェーズでの細胞の同期化は、当技術分野で公知の任意の方法により達成することができる。非限定的例として、細胞をＳまたはＧ２細胞周期フェーズに同期化するために使用することができる薬剤として、アフィジコリン、ヒドロキシ尿素、ロバスタチン、ミモシン、ノコダゾール、チミジン、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｌｉｆｅ．  ２０１４  Ｄｅｃ  １５；３２０１４を参照されたい）。一部の実施形態では、細胞同期化のための薬剤は、遺伝子編集プロセスの間の任意の時点で投与することができる。
【０４１２】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および／またはゲノム編集システムは、使用説明書と一緒に容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。一部の実施形態では、使用説明書と一緒に容器、パックまたはディスペンサーに含まれるＤＮＡ−ＰＫ阻害剤薬剤および／またはゲノム編集システムはキットである。
【０４１３】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および／またはゲノム編集システムは使用説明書と共にキットに含まれる。キットは任意のゲノム編集システム、ならびに／またはＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および使用説明書を含有することができる。一部の実施形態ではＤＮＡ−ＰＫ阻害剤は、構造式（Ｉ）で表される化合物のいずれかである。一部の実施形態では、ゲノム編集システムは、メガヌクレアーゼベースのシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ベースのシステム、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、ＣＲＩＳＰＲベースのシステム、またはＮｇＡｇｏベースのシステムから選択される。ゲノム編集システムは、キット内に、任意の形態で、例えば、プラスミド、ベクター、ＤＮＡ、またはＲＮＡ構築物として提供することができる。
【０４１４】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および／またはゲノム編集システムはｉｎ  ｖｉｖｏで投与される。ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤および遺伝子編集システムは、その意図した投与経路と適合するように製剤化される。投与経路の例は上記に記載されている。
【０４１５】
一部の実施形態では、製剤はまた、処置を受けている特定の適応症に対する必要に応じて、１つより多くの活性化合物、例えば、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有することもできる。代わりに、またはこれに加えて、組成物は、その機能を増強する薬剤、例えば、細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤、または成長阻害剤を含むことができる。このような分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
【０４１６】
一部の実施形態では、ＤＮＡ−ＰＫ阻害剤薬剤および／またはゲノム編集システムは、併用療法、すなわち、病理学的状態または障害、例えば、様々な形態のがんおよび炎症性疾患を処置するのに有用な他の薬剤、例えば、治療剤と併用して投与される。「併用して」という用語は、この文脈において、薬剤を、実質的に同時期に、同時にまたは逐次的に付与することを意味する。逐次的に付与される場合、第２の化合物の投与の開始時に、２つの化合物のうちの第１の化合物は、処置部位において依然として有効濃度で検出可能なことが好ましい。
ゲノム編集スクリーニング法
【０４１７】
当技術分野で公知の任意の方法を使用して、ＮＨＥＪおよび／またはＨＤＲの効率を含むゲノム編集効率について細胞をスクリーニングすることができる。例えば、スクリーニング法として、ゲノム編集を確認するための標的化領域のＰＣＲベースの増幅、これに続く、増幅領域のシークエンシングまたはディープシークエンシングを挙げることができる。ＰＣＲの遺伝子型判定により、ＨＤＲ刺激における化合物の定量化およびランキングが可能となる。他方のスクリーニング法として、次世代シークエンシングを挙げることができる。例えばＢｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ａ  ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ｎｅｘｔ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，”  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，  １５：１００２（２０１４）を参照されたい。
【０４１８】
ＰＣＲプライマーは、未改変遺伝子領域と改変遺伝子領域の両方を選択的に増幅し、遺伝子改変状態に応じて異なる長さのアンプリコンをもたらすように操作することができる。次いで、アンプリコンをゲル上で分割し、Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｅｒを使用してデンシトメトリーによりＨＤＲ効率を予測することができる。あるいは、新規ＰＣＲ技術である、高速デジタルドロップレットＰＣＲ（ＤＤＰＣＲ）を使用して、ゲノム編集試料においてＨＤＲおよびＮＨＥＪ事象を同時に測定することができる。例えば、Ｍｉｙａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＤＲ  ａｎｄ  ＮＨＥＪ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｅｆｆｅｃｔｒｓ  ｏｆ  ｌｏｃｕｓ，  ｎｕｃｌｅａｓｅ，  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ  ｏｎ  ｇｅｎｏｍｅ−ｅｄｉｔｉｎ，”  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，  ６，  ２０１６を参照されたい。ゲノム改変のための細胞スクリーニングには、Ｓａｎｇｅｒシークエンシング、ディープシークエンシング、およびＲＴ−ＰＣＲを含む他の方法を使用することができる。
【０４１９】
一部の実施形態では、細胞をスクリーニングするために、トラフィックライトレポーター（ＴＬＲ）構築物が使用される。ＴＬＲスクリーニングは、標的化ゲノム編集時に蛍光性マーカーを発現するように操作されているレポーター細胞を含む。適切な標的化の後、細胞によって蛍光性マーカーが発現される。適切に標的化された細胞の定量化は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、フローサイトメトリー分析によって実施することができる。例えば、Ｃｅｒｔｏ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１１，  ”Ｔｒａｃｋｉｎｇ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ａｔ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ＤＮＡ  ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔｓ，”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ８，  ｐａｇｅｓ  ６７１−６７６  （２０１１）を参照。
本発明の化合物の調製
【０４２０】
本明細書で使用される場合、すべての略語、記号および慣例は、現代の科学文献に使用されているものと一致する。例えば、Ｊａｎｅｔ  Ｓ．  Ｄｏｄｄ，  ｅｄ．，  Ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｔｙｌｅ  Ｇｕｉｄｅ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ａｕｔｈｏｒｓ  ａｎｄ  Ｅｄｉｔｏｒｓ，  ２ｎｄ  Ｅｄ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．：  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  １９９７を参照されたい。以下の定義は、本明細書で使用されている用語および略語について記載している：
ＢＰｉｎ  ピナコールボロン酸エステル
Ｂｒｉｎｅ  ＮａＣｌ飽和水溶液
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＩＡＤ  アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ  ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＤＴＴ  ジチオトレイトール
ＥＳＭＳ  エレクトロスプレー質量分析法
Ｅｔ２Ｏ  エチルエーテル
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エチルアルコール
ＨＥＰＥＳ  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡ  イソプロパノール
ＬＡＨ  水素化リチウムアルミニウム
ＬＣ−ＭＳ  液体クロマトグラフィー−質量分析法
ＬＤＡ  リチウムジイソプロピルエチルアミド（ｄｉｉｓｏｐｒｏｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｄｅ）
Ｍｅ  メチル
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭｓＣｌ  塩化メタンスルホニル
ＭＴＢＥ  メチルｔ−ブチルエーテル
ＮＭＰ  Ｎ−メチルピロリジン
Ｐｄ２（ｄｂａ）３  トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２  １，１’ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセンジクロロ−パラジウム
ＰＧ  保護基
Ｐｈ  フェニル
（ｒａｃ）−ＢＩＮＡＰ  ラセミ２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル
ＲｏｃｋＰｈｏｓ  ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２’，４’，６’−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）ホスフィン
ＲＴまたはｒｔ  室温
ＳＦＣ  超臨界流体クロマトグラフィー
ＳＰｈｏｓ  ２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル
ＴＢＡＩ  テトラブチルアンモニウムヨージド
ｔＢｕ  第三級ブチル
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＴＥＡ  トリエチルアミン
ＴＭＥＤＡ  テトラメチルエチレンジアミン
ＶＰｈｏｓ  ［３−（２−ジシクロヘキシルホスファニルフェニル）−２，４−ジメトキシ−フェニル］スルホニルオキシナトリウム
一般的合成手順
【０４２１】
一般に、本発明の化合物は、本明細書に記載される方法によって、または当業者に公知の他の方法、例えばＵＳ２０１３／０２８１４３１および２０１４年３月１２日出願のＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２４７６７によって調製することができる。本発明の化合物の例示的な具体的調製を、以下の実施例の節に記載する。
【０４２２】
一実施形態では、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩を調製する方法は、化合物（Ｘ−１）を化合物（Ｙ−１）と適切な条件下で反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩を形成するステップを用いる。
【化４５】
2021511314.tif 000047
式（Ｉ）の可変要素は、それぞれ独立して、本発明の化合物について上記の通りである。化合物（Ｘ−１）のＬ１は、脱離基、例えばハロゲン（例えば、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）、トルエンスルホネート、メタンスルホネートまたはトリフルオロメタンスルホネートであり、化合物（Ｘ−１）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りである。特定の実施形態では、Ｌ１は、−Ｂｒ、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートである。化合物（Ｙ−１）は、
【化４６】
2021511314.tif 000048
［式中、Ｒａは、−Ｈであり、または２個のＲａは、それらが結合する酸素原子と一緒になって、１つもしくは複数のＣ１〜２アルキルで必要に応じて置換されているジオキソラン環を形成する］である。特定の実施形態では、２個のＲａは、それらが結合する酸素原子およびホウ素原子と一緒になって、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランを形成する。当技術分野で公知のクロスカップリング、例えばＣｓｐ２−Ｃｓｐ２カップリングを行うための任意の適切な条件を使用することができる。例示的な具体的条件は、以下の実施例に記載される。
【０４２３】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｒ１は、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、上記の通りである］は、化合物（Ｘ−２）を化合物（Ｙ−２）と適切な条件下で反応させるステップを用いることによって調製される。
【化４７】
2021511314.tif 000049
化合物（Ｘ−２）のＱ１は、−ＮＨ２または−ＯＨであり、化合物（Ｘ−２）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りである。化合物（Ｙ−２）は、Ｒ４−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、Ｒ４−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、ＮＨＲ４−Ｃ（Ｏ）−Ｌ２、Ｒ４Ｓ（Ｏ）２−Ｌ２、Ｒ４−Ｌ２、Ｒ４Ｃ（Ｏ）ＯＲｂ、またはＲ４−Ｎ＝Ｃ＝Ｏであり、各Ｒ４は、独立して、式（Ｉ）について記載される通りであり、Ｌ２は、ハロゲン（例えば、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉ）、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートであり、Ｒｂは、Ｃ１〜４アルキル、例えばメチルまたはエチルである。特定の実施形態では、Ｌ２は、−Ｂｒ、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートである。当技術分野で公知の反応を行うための任意の適切な条件を使用することができる。例示的な具体的条件は、以下の実施例に記載される。
【０４２４】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｘは、−ＮＨ−または−Ｏ−であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、上記の通りである］は、
（ｉ）化合物（Ｘ−３）を化合物（Ｙ−３）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物もしくは薬学的に許容されるその塩を形成すること、
【化４８】
2021511314.tif 000050
または
（ｉｉ）化合物（Ｘ−４）を化合物（Ｙ−４）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物もしくは薬学的に許容されるその塩
【化４９】
2021511314.tif 000051
を形成することを用いる方法によって調製される。
化合物（Ｘ−３）のＬ３は、ハロゲン（例えば、−Ｂｒ、−Ｃｌ、または−Ｉ）である。化合物（Ｙ−４）のＬ４は、ハロゲン（例えば、−Ｂｒ、−Ｃｌ、または−Ｉ）、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートである。化合物（Ｙ−３）および（Ｘ−４）の各Ｘは、独立して、−ＮＨ−または−Ｏ−である。化合物（Ｘ−３）、（Ｘ−４）、（Ｙ−３）、および（Ｙ−４）のそれぞれの残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りである。特定の実施形態では、化合物（Ｘ−３）のＬ３は、−Ｂｒである。別の特定の実施形態では、化合物（Ｙ−４）のＬ４は、−Ｂｒ、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートである。当技術分野で公知の求核置換のための任意の適切な条件を使用することができる。例示的な具体的条件は、以下の実施例に記載される。
【０４２５】
別の実施形態では、本発明の方法は、化合物（Ｘ−５）をＲ５ＯＨまたはＲＯＨと反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ４、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＲ４、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨＲ４、または−ＯＲ４、またはＲ７であり、Ｒ４は、少なくとも１つの−ＯＲ５で置換されている５〜１０員のヘテロアリールであり、Ｒ７は、少なくとも１つの−ＯＲで置換されている５〜１０員のヘテロアリールであり、Ｒ、Ｒ５、および式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りであり、ただしＲおよびＲ５は、共に水素であることはないことを条件とする］を形成するステップを用いる。
【化５０】
2021511314.tif 000052
化合物（Ａ−５）のＱ２は、結合、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ１〜４アルキル−ＮＨ−、または−Ｏ−である。化合物（Ａ−５）の環Ｄは、５〜１０員のヘテロアリールである。Ｌ５は、ハロゲン（例えば、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、または−Ｉ）である。ＲＯＨのＲ、Ｒ５ＯＨのＲ５、および化合物（Ｘ−５）の残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りである。特定の実施形態では、Ｌ５は、−Ｂｒである。当技術分野で公知の求核性芳香族置換のための任意の適切な条件を使用することができる。例示的な具体的条件は、以下の実施例に記載される。
【０４２６】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩［式中、Ｘは、−Ｏ−であり、式（Ｉ）のその他の可変要素は、それぞれ独立して、上記の通りである］は、化合物（Ｘ−６）を化合物（Ｙ−６）と反応させて、式（Ｉ）によって表される化合物または薬学的に許容されるその塩を形成することを用いる方法によって調製される。
【化５１】
2021511314.tif 000053
【０４２７】
化合物（Ｘ−６）のＬ６は、−ＯＨである。化合物（Ｙ−６）のＬ７は、−ＯＨである。化合物（Ｘ−６）および（Ｙ−６）のそれぞれの残りの可変要素は、それぞれ独立して、式（Ｉ）について上記の通りである。当技術分野で公知の求核置換、例えば光延反応のための任意の適切な条件を使用することができる。例示的な具体的条件は、以下の実施例に記載される。
【０４２８】
具体的な一例では、式（Ｉ）の化合物［式中、Ｘは、−ＮＨ−である］は、スキーム１で以下に概説される通り調製することができる。したがって、スキーム１のステップ１−ｉにおいて示される通り、式Ａのヘテロアリール化合物を、極性非プロトン性溶媒中で混合物を加熱することによって、モルホリンまたはモルホリンアナログと反応させて、式Ｂの化合物を生成することができる。スキーム１のステップ１−ｉｉに示される通り、パラジウム触媒された（例えば、Ｐｄ２（ｄｂａ）３）ホスフィンリガンド支援Ｂｕｃｈｗａｌｄ／Ｈａｒｔｗｉｇ型カップリングを利用して、式Ｂの化合物を、式Ｃのアミノシクロヘキサンと反応させて、式Ｄの化合物を生成することができる［式中、Ｒ１およびＲ２は、本明細書の他所に記載される通りである］。一例では、式Ｅの単一保護されたメソシクロヘキサン−１，４−ジアミンが調製される場合、スキーム１のステップ１−ｉｉｉに示される通り、保護基の除去により、式Ｆの化合物が形成される。次に、得られた遊離アミンを、スキーム１のステップ１−ｉｖに示される通り、アミンに対して反応性の基を有する様々な部分（例えば、Ｒ１ａ−Ｌ、ここでＬは、脱離基、例えばクロロ、ブロモ、ヨード、トルエンスルホネート、メタンスルホネートもしくはトリフルオロメタンスルホネートであり、またはＬは、反応性カルボニル含有部分、例えば活性のあるエステルもしくはイソシアナト基である）と反応させて、式Ｇの化合物を生成することができる。式（Ｉ）の化合物［式中、Ｘは、−Ｓ−である］を、化合物（Ｃ）のチオール対応物を適切な条件下で用いて、スキーム１に概説されるものと同様に調製することができる。
例１：式Ｇの化合物の一般的調製
【化５２】
2021511314.tif 000054
別の例では、式（Ｉ）の化合物［式中、Ｘは、−Ｏ−である］は、スキーム２ａおよび２ｂにおいて以下に概説される通り調製することができる。したがって、スキーム２ａのステップ２−ｉに示される通り、式Ｈのヘテロアリール化合物のヒドロキシ基を保護して、式Ｊの化合物を生成することができ、次にそれを、スキーム２ａのステップ２−ｉｉおよび２−ｉｉｉに示される通り、混合物を極性非プロトン性溶媒中で加熱することによって、モルホリンまたはモルホリンアナログと反応させて、保護基を除去した後に式Ｋの化合物を生成することができる。その後、スキーム２ａのステップ２−ｉｖに示される通り、式Ｋの化合物を、その脱離基（例えば、式中、Ｌは、脱離基、例えばクロロ、ブロモ、ヨード、トルエンスルホネート、メタンスルホネート、またはトリフルオロメタンスルホネートである）のＳＮ２置換に影響を与えるのに十分な条件下で、式Ｌの化合物と反応させて、Ｒ１またはＲ２が水素であるかどうかに応じて、式Ｍまたは式Ｍの化合物を生成することができる。Ｒ１またはＲ２が保護された窒素または酸素部分であるような場合、本発明の化合物は、保護基の除去、およびその後得られた遊離アミン／アルコールの合成操作によって生成することができる。
例２：式Ｍ、Ｎ、Ｒ、およびＳの化合物の一般的調製
【化５３】
2021511314.tif 000055
【０４２９】
あるいはスキーム２ｂに示される通り、式Ｏの化合物のヒドロキシル基を、式Ｌの化合物と反応させて、式Ｐの縮合ビシクロヘテロアリールブロミドを生成することができ、それをその後、モルホリンまたはモルホリンアナログと反応させて、式Ｍまたは式Ｎの化合物を生成することができる。
【化５４】
2021511314.tif 000056
【０４３０】
あるいはスキーム２ｃに示される通り、本発明の化合物［式中、環Ｂは、ジヒドロピラン環である］は、式Ｑの化合物をジアルキル（３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ボロネートと反応させて、式Ｒの化合物を生成することによって調製することができる。反応は、Ｐｄ触媒、例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）の下、塩基条件（例えば、金属炭酸塩、例えばＮａ２ＣＯ３）中で行うことができる。スキーム２ｃのＲａは、−Ｈであり、または２個のＲａは、それらが結合する酸素原子と一緒になって、１つもしくは複数のＣ１〜２アルキルで必要に応じて置換されているジオキソラン環を形成する。特定の実施形態では、２個のＲａは、それらが結合する酸素原子およびホウ素原子と一緒になって、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランを形成する。
【化５５】
2021511314.tif 000057
【０４３１】
別の例では、式（Ｉ）の化合物［式中、Ｘは、−ＣＨ２−である］は、スキーム３Ａおよび３Ｂにおいて以下に概説される通り調製することができる。例えば、化合物（３Ａ−１０）［式中、環Ｃは、Ｃ４〜６シクロアルキルであり、Ｘは、−ＣＨ２−である］は、スキーム３Ａに示される通り調製することができる。ステップ（ｉ）では、化合物（３Ａ−１）のＦ基を化合物（３Ａ−２）のシアニド基での求核性芳香族置換することにより、化合物（３Ａ−２）を作製する。化合物（３Ａ−２）をメタノールＨＣｌで処理して、エステル化合物（３Ａ−３）を形成し、それをステップ（ｉｉｉ）においてＢｕｃｈｗａｌｄ条件下でモルホリンと反応させて、化合物（３Ａ−４）を形成する。エステル化合物（３Ａ−４）を、水素化リチウムアルミニウムなどの適切な還元剤で還元することにより、第一級アルコール化合物（３Ａ−５）を得る。アルコール化合物（３Ａ−５）を、適切な塩素化剤、例えばＰＯＣｌ３で塩素化した後、トリフェニルホスフィンと反応させることにより、ウィティッヒ塩である化合物（３Ａ−７）を形成する。化合物（３Ａ−７）を、塩基、例えばＫＯｔＢｕで脱プロトン化することにより、化合物（３Ａ−８）を作製する。化合物（３Ａ−８）を、適切に置換されたシクロヘキサノンと反応させることにより、アルケン化合物（３Ａ−９）が得られる。次に、アルケン化合物（３Ａ−９）を、適切な水素化条件、例えばＨ２ガスを伴うＰｄ／Ｃ下で還元する。
【化５６】
2021511314.tif 000058
【０４３２】
別の例では、化合物（３Ｂ−４）［式中、環Ｃは、芳香族環系（フェニルまたはヘテロアリールのいずれか）であり、Ｘは、−ＣＨ２−である］は、スキーム３Ｂに示される通り調製することができる。スキーム３Ｂの具体的な条件は、従来技術において、例えばＪ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１４，  ７９，  ４２８５−４２９２に見出すことができる。
【化５７】
2021511314.tif 000059
【０４３３】
あるいは、式（Ｉ）の他の化合物を調製するために、実施例において以下に示される通り、表２の化合物を使用することもできる。
【実施例】
【０４３４】
分析的特徴付け
本明細書で使用される場合、用語「Ｒｔ（分）」は、化合物に関連するＨＰＬＣ保持時間（分）を指す。別段指定されない限り、記録保持時間を得るために利用されるＨＰＬＣ方法は、下記の通りである。
ＨＰＬＣ方法Ａ
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ  ３１００質量分析器
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＣＳＨ  Ｃ１８  １．７ｕｍ  ２．１×５０ｍｍ
温度：２５℃
溶媒Ａ：水＋０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
検出：ＤＡＤ２２０〜４００ｎｍ
勾配：
０分      ９５％Ａ、５％Ｂ
０．６分  ５％Ａ、９５％Ｂ
０．７分  ５％Ａ、９５％Ｂ
１．４分  ９５％Ａ、５％Ｂ
流量：０．６００ｍＬ／分
ＨＰＬＣ方法Ｂ
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｕｔｏｐｕｒｅ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１００ｍｍ
温度：周辺温度
溶媒Ａ：水＋０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
検出：質量分析器−Ｗａｔｅｒｓ  ３１００、ＤＡＤ（２２０〜４００ｎｍ）
勾配：
０分−９８％Ａ、２％Ｂ
３．８分−２％Ａ、９８％Ｂ
４．９分−２％Ａ、９８％Ｂ
５．０分−９８％Ａ、２％Ｂ
流量：１．５０ｍＬ／分
ＨＰＬＣ方法Ｃ
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ  ３１００質量分析器
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＣＳＨ  Ｃ１８  １．７ｕｍ  ２．１×５０ｍｍ
温度：２５℃
溶媒Ａ：水＋０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
検出：ＤＡＤ２２０〜４００ｎｍ
勾配：
０分      ９０％Ａ、１０％Ｂ
０．６分  ４０％Ａ、６０％Ｂ
０．７分  ９０％Ａ、１０％Ｂ
１．４分  ９０％Ａ、１０％Ｂ
流量：０．６００ｍＬ／分
ＨＰＬＣ方法Ｄ
機器：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ  ３１００質量分析器
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ８  １．７ｕｍ  ２．１×５０ｍｍ
温度：２５℃
溶媒Ａ：９５／５水（５０ｍＭギ酸アンモニウム、ｐＨ９）／アセトニトリル
溶媒Ｂ：アセトニトリル
検出：ＤＡＤ２２０〜４００ｎｍ
勾配：
０分      ９５％Ａ、５％Ｂ
０．６分  ５％Ａ、９５％Ｂ
０．７分  ５％Ａ、９５％Ｂ
１．４分  ９５％Ａ、５％Ｂ
流量：０．６００ｍＬ／分。
（実施例１）
化合物の調製
【０４３５】
化合物１：２−メチル−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンの調製
４−［（２−クロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（１−Ａ）
【化５８】
2021511314.tif 000060
冷却器を装着した丸底フラスコ中、４−アミノシクロヘキサン−１−オール（１．２１９ｇ、１０．５８ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン（２．０００ｇ、１０．５８ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（２．７３５ｇ、３．６８６ｍＬ、２１．１６ｍｍｏｌ）、およびｉＰｒＯＨ（２６．３８ｍＬ）の混合物を、１００℃に１６時間加熱した。溶媒を除去し、粗残渣を、ＥｔＯＡｃと飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に分配した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×）でさらに抽出した。合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、オレンジ色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）は、残留ＥｔＯＡｃとともに、清浄な、所望の４−［（２−クロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（２．６５９  ｇ、９．９３２  ｍｍｏｌ、９３．８９％）を示す。真空下で終夜乾燥させ、そのまま持ち越した。
【化５９】
2021511314.tif 000061
【化６０】
2021511314.tif 000062
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値２６７．０７７４５、実測値２６８．１５（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５６分間。
４−［（２−メチルフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（１−Ｂ）
【化６１】
2021511314.tif 000063
オーブンで乾燥させたマイクロ波管中、Ｎ２下で、化合物（１−Ａ）を無水ＴＨＦ（８．０ｍＬ）に溶解させた。溶液をＮ２で５分間バブリングすることによって反応物を脱気した。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２１５．９ｍｇ、０．１８６８ｍｍｏｌ）を添加し、さらに２分間脱気した。トリメチルアルミニウム（２．１０７ｇ、２Ｍで２．８０２ｍＬ、５．６０３ｍｍｏｌ）を注意深く添加し、反応混合物を１２５℃のアルミニウムビーズ浴中、１６時間加熱した。反応混合物を、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注意深く注いだ。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×）およびＣＨ２Ｃｌ２（２×）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、オレンジ色の半固体を得た。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（１２ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、所望の生成物を提供した（１８０．７５ｍｇ、０．７３０９ｍｍｏｌ、７８．２７％）。
【化６２】
2021511314.tif 000064
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２４７．１３２０８，  ｆｏｕｎｄ  ２４８．２５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．４６分
４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（１−Ｃ）
【化６３】
2021511314.tif 000065
Ｐｄ（ＯＨ）２（３．４２４ｇ、４．８７７ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、ＥｔＯＨ（２７０．９ｍＬ）およびＨＣｌ（２Ｍで１１ｍＬ、２２．００ｍｍｏｌ）中、化合物（１−Ｂ）（２．６８ｇ、９．７５４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を、Ｐａｒｒ振盪機で５０ｐｓｉのＨ２の下で２時間１０分振盪した。反応混合物を、セライトを介して濾過し、濃縮した。材料をセライト上に乾燥負荷し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（８０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％ヘキサン→３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。関連する画分を合わせ、濃縮して、４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（２．１５ｇ、８．６２４ｍｍｏｌ、８８．４０％）を提供した。
【化６４】
2021511314.tif 000066
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２４９．１４７７２，  ｆｏｕｎｄ  ２５０．１９  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．４６分
［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１−Ｄ）
【化６５】
2021511314.tif 000067
ＣＨ２Ｃｌ２（２２３．６ｍＬ）中４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサノール（２．１５ｇ、８．６２４ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２．７９３ｇ、３．８４７ｍＬ、２７．６０ｍｍｏｌ）の室温の懸濁液に、ＭｓＣｌ（１．０８７ｇ、７３４．５μＬ、９．４８６ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を室温で３０分間継続した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３に注いだ。層を分離し、水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１５０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（１２０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）。［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（２．３２６９ｇ、７．１０７ｍｍｏｌ、８２．４３％）を得た。
【化６６】
2021511314.tif 000068
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３２７．１２５２７，  ｆｏｕｎｄ  ３２８．１６  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５２分
２−メチル−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化６７】
2021511314.tif 000069
無水ジオキサン（１．０ｍＬ）中７−モルホリノキナゾリン−５−オール（１７．４ｍｇ、０．０７５２４ｍｍｏｌ、化合物（１−Ｆ）、以下の化合物７の調製を参照されたい）、［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（４９．３ｍｇ、０．１５０６ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（７３．６ｍｇ、０．２２５９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１１０℃に７２時間加熱した。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（１２ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、所望の生成物を提供したが、残留不純物を含有していた。材料を、逆相Ｉｓｃｏによってさらに精製した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＳＰＥカートリッジを通過させて、２−メチル−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１２．２ｍｇ、０．０２３７４ｍｍｏｌ、３１．５５％）を提供した。
【化６８】
2021511314.tif 000070
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４６２．２３７９５，  ｆｏｕｎｄ  ４６３．２６  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５分．
【０４３６】
化合物２：５−［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリルの調製
【化６９】
2021511314.tif 000071
無水ジオキサン（１．５ｍＬ）中５−ヒドロキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（３１ｍｇ、０．１２１０ｍｍｏｌ、化合物（２−Ａ）、以下の化合物１１の調製を参照）、［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（８０ｍｇ、０．２４４４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１６０ｍｇ、０．４９１１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１１５℃に７２時間加熱した。反応混合物を、セライトを介して濾過し、濾液を濃縮した。粗残渣を、最少量のＤＭＳＯに溶解させ、逆相Ｉｓｃｏによって精製した［１５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＳＰＥカートリッジを通過させて、生成物を提供したが、純度はわずか約７５％である。順相Ｉｓｃｏによって再精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、５−［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（３．１ｍｇ、０．００５８８１ｍｍｏｌ、４．８６１％）を重量により純度９２．５％で得た。
【化７０】
2021511314.tif 000072
【化７１】
2021511314.tif 000073
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４８７．２３３２，  ｆｏｕｎｄ  ４８８．３４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６３分
【０４３７】
化合物３：２−メチル−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミンの調製
【化７２】
2021511314.tif 000074
無水ジオキサン（３．３ｍＬ）中７−モルホリノキナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸（１））（６８．７８ｍｇ、０．１９９２ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１４２．１ｍｇ、０．４９８０ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（３２４．５ｍｇ、０．９９６０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１１０℃に２４時間加熱した。反応混合物をＨ２Ｏに注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、生成物（１１．５ｍｇ、０．０２６５３ｍｍｏｌ、１３．３２％）を提供した。
【化７３】
2021511314.tif 000075
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４２０．２２７４，  ｆｏｕｎｄ  ４２１．４２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５５分
化合物４：５−［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリルの調製
【化７４】
2021511314.tif 000076
無水ＤＭＦ（２．６ｍＬ）中５−ヒドロキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（トリフルオロ酢酸塩）（９５．４２ｍｇ、０．２５７７ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（２２０．６ｍｇ、０．７７３１ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（４２０ｍｇ、１．２８９ｍｍｏｌ）懸濁液を、８０℃に１１２時間加熱した。反応混合物を、ガラスフリットを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、生成物（４１．８ｍｇ、０．０９１０１ｍｍｏｌ、３５．３２％）を提供した。
【化７５】
2021511314.tif 000077
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４４５．２２２６３，  ｆｏｕｎｄ  ４４６．３５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６１分
【０４３８】
化合物５：Ｎ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンの調製
【化７６】
2021511314.tif 000078
無水ＤＭＦ（１．３ｍＬ）中４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸（１））（７３．７８ｍｇ、０．１９６６ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチル−６，７−ジヒドロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１６１ｍｇ、０．４９１８ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（３２１ｍｇ、０．９８５２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に２４時間加熱した。反応混合物を、コットンプラグを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、生成物（３９．９ｍｇ、０．０７９３８ｍｍｏｌ、４０．３８％）を提供した。
【化７７】
2021511314.tif 000079
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４９２．２４８５，  ｆｏｕｎｄ  ４９３．３４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５８分
【０４３９】
化合物６：Ｎ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−ピリミジン−４−アミンの調製
【化７８】
2021511314.tif 000080
無水ＤＭＦ（１．３ｍＬ）中４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸（１））（７３．７８ｍｇ、０．１９６６ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１４０ｍｇ、０．４９０６ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（３３０ｍｇ、１．０１３ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に２４時間加熱した。反応混合物を、コットンプラグを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、生成物（２０．３ｍｇ、０．０４４１６ｍｍｏｌ、２２．４６％）を提供した。
【化７９】
2021511314.tif 000081
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４５０．２３７９５，  ｆｏｕｎｄ  ４５１．３５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５７分
【０４４０】
化合物７：４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
化合物（１−Ｆ）：７−モルホリノキナゾリン−５−オールの調製
【化８０】
2021511314.tif 000082
４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１．３８ｇ、３．９２７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１２．３６ｇ、８．３５１ｍＬ、１０８．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた濃い赤色からオレンジ色の混合物を、５０℃で４時間撹拌し、次に室温で終夜撹拌した。溶媒を穏やかな加熱／Ｎ２ストリーム下で蒸発させた。粗残渣を、次のステップに直接持ち越した。Ｍ＋１：２３２．３２。保持時間：０．５
［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキシル］メタンスルホネートの調製
【化８１】
2021511314.tif 000083
Ｅｔ３Ｎ（１．２３８ｇ、１．７０５ｍＬ、１２．２３ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（６．６８３ｍＬ）中２−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）イソインドリン−１，３−ジオン（１．０ｇ、４．０７７ｍｍｏｌ）の０℃の懸濁液を、ＭｓＣｌ（６０７．１ｍｇ、４１０．２μＬ、５．３００ｍｍｏｌ）で処理した（発熱性の反応物が温まったら、ＲＴの水浴に入れた）。撹拌を継続しながら、ＲＴに終夜加温した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏに注いだ。層を分離し、水相を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、ふわふわした白色の固体を得た。１Ｈ  ＮＭＲは、混じりけのない所望の生成物を示し、精製は必要なかった。生成物の重量は１．２７７ｇである。
化合物７：２−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオンの調製
【化８２】
2021511314.tif 000084
無水ＤＭＦ（５．７０５ｍＬ）中７−モルホリノキナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸（１））（３２４．７ｍｇ、０．９４０５ｍｍｏｌ）、［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキシル］メタンスルホネート（７６０．２ｍｇ、２．３５１ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（１．５３５ｇ、４．７１２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に２４時間加熱した。反応混合物を、セライトプラグを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、セライト上に乾燥負荷し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、生成物（２０６．５ｍｇ、０．４４１４ｍｍｏｌ、４６．９３％）を黄褐色の固体として提供した。
【化８３】
2021511314.tif 000085
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４５８．１９５４，  ｆｏｕｎｄ  ４５９．３１  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６６分
【０４４１】
化合物８：Ｎ−メチル−２−［［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン：化合物（８−Ａ）の調製
【化８４】
2021511314.tif 000086
撹拌した２−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（１．４７７ｇ、３．２２１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１１０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン（２．０ｍＬ、６３．７２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応物を密閉し、室温で２０時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。粗残渣に、ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、懸濁液を、中程度の多孔性のガラスフリットを介して濾過した（固体を、ＣＨ２Ｃｌ２で数回すすぎ、同じフラスコに収集した）。濾液を濃縮して、４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（１．０１３３ｇ、３．０８５ｍｍｏｌ、９５．７８％）を提供した。バッチ全体を、真空下で５０℃において４日間乾燥させた。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（１．０１３３ｇ、３．０８５ｍｍｏｌ、９５．７８％）を得た。
【化８５】
2021511314.tif 000087
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３２８．１８９９，  ｆｏｕｎｄ  ０．５２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ３２９．３９分
Ｎ−メチル−２−［［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（化合物８）の調製
【化８６】
2021511314.tif 000088
水（１５６μＬ）中４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（３３．２ｍｇ、０．０９５０３ｍｍｏｌ）、２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（１８．８ｍｇ、０．１０９６ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍで１９０μＬ、０．３８００ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉マイクロ波管中、加熱還流させた（１００℃）。得られた混合物を終夜撹拌した。粗懸濁液を冷却し、凍結させ、凍結乾燥器で乾燥させた。残渣を、セライト上に乾燥負荷し、逆相Ｉｓｃｏによって精製した［１５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮した。試料を、最少量のＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジに通過させた。濾液を濃縮し、減圧下で乾燥させて、Ｎ−メチル−２−［［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（３２．４ｍｇ、０．０６９２０ｍｍｏｌ、７２．８２％）を提供した。
【化８７】
2021511314.tif 000089
【化８８】
2021511314.tif 000090
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４６３．２３３２，  ｆｏｕｎｄ  ４６４．３５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５８分
【０４４２】
化合物（９）：２−［［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール：化合物（９−Ａ）の調製
【化８９】
2021511314.tif 000091
４−［４−メトキシ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１００ｍｇ、０．２６２２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２．６６７ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．７９４ｇ、１．２１２ｍＬ、１５．７３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を密閉し、熱的に５０℃に１６時間加熱した。溶媒を、Ｎ２ストリーム／穏やかな加熱下で除去した。粗残渣を、次の反応に直接持ち越した。質量＋１：２６２．３４。保持時間：０．５５
［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシル］メタンスルホネート：化合物（９−Ｂ）の調製
【化９０】
2021511314.tif 000092
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）カルバメート（８．２ｇ、３８．０９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（１４ｍＬ、８０．３８ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（３．２ｍＬ、４１．３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０．５時間撹拌し、ＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲルパッド層を介して濾過し、濃縮した。オフホワイト色の固体を回収した。
【化９１】
2021511314.tif 000093
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメート：化合物（９−Ｃ）の調製
【化９２】
2021511314.tif 000094
無水ＤＭＦ（１．７５ｍＬ）中４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸（１））（９８．４ｍｇ、０．２６２２ｍｍｏｌ）、［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシル］メタンスルホネート（１５４ｍｇ、０．５２４９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（４２７ｍｇ、１．３１１ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に２４時間加熱した。反応混合物を、コットンプラグを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメートを提供した。粗材料を、そのままＢｏｃ脱保護に持ち越した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値４５８．２５２９３、実測値４５９．４５（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．６７分間。
４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン：化合物（９−Ｆ）の調製
【化９３】
2021511314.tif 000095
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメート（１２０．２ｍｇ、０．２６２２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２．６２２ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（８９６．９ｍｇ、６０６．０μＬ、７．８６６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、粗残渣を逆相Ｉｓｃｏによって精製した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→４０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮し、トルエン共沸混合物（２×）および真空によって乾燥させて、４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（トリフルオロ酢酸（１））（５０ｍｇ、０．１０５８ｍｍｏｌ、４０．３６％）（３ステップにわたる収率）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値３５８．２００５、実測値３５９．３６（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５３分間。
２−［［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド：化合物（９）の調製
【化９４】
2021511314.tif 000096
【０４４３】
化合物（１０）：ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメートの調製
【化９５】
2021511314.tif 000097
試薬および条件：（ａ）モルホリン、ＤＩＥＡ、ｉＰｒＯＨ、（ｂ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、（ｃ）［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシル］メタンスルホネート、ＣｓＣＯ３、ＤＭＦ
ステップａ
１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−キナゾリン（８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、モルホリン（２３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４５ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５．０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）およびｒａｃ−ＢＩＮＡＰ（２８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２でバブリングし、９０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、蒸発させた。粗製物を、０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。これにより、４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（５０ｍｇ、６１％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値３６５．１、実測値３６６．１４（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５８分間。
ステップｂ
４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（１８０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応物を、室温で１時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。粗製物を、０〜４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出する１２ｇのシリカゲルカートリッジによって精製し、２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（８５ｍｇ、７０％）を得た。
【化９６】
2021511314.tif 000098
ステップｃ
ＤＭＦ（１ｍＬ）中２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）の混合物に、７０℃で［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシル］メタンスルホネート（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を７０℃で１時間撹拌した。その混合物に、別の部分の［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニルアミノ）−シクロヘキシル］メタンスルホネート（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を７０℃で１８時間継続した。混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物を、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメート（２．０ｍｇ、３．６％）（化合物１０）を回収した。
【化９７】
2021511314.tif 000099
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４４２．２６，  ｆｏｕｎｄ  ４４３．２  （Ｍ＋１）  ＋；保持時間：  ０．６分
【０４４４】
化合物１１：Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
５−ヒドロキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（化合物（２−Ａ））の調製（Ｐｒｐａｒａｔｉｏｎ）
【化９８】
2021511314.tif 000100
５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（１６０ｍｇ、０．４２５１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４．２５ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．８００ｇ、１．２１６ｍＬ、１５．７９ｍｍｏｌ）を添加した（溶液は黄色から赤色に変色した）。反応混合物を室温で終夜撹拌した後、ＬＣＭＳは、所望の生成物の［Ｍ＋１］に対応する主なピークだけを示す。溶媒を穏やかな加熱／Ｎ２ストリーム下で除去し、粗残渣を、さらに操作することなく次のステップに直接持ち越した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値２５６．０９６０４、実測値２５７．３（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．６２分間。
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（４−シアノ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメート（化合物（１１−Ａ））の調製
【化９９】
2021511314.tif 000101
無水ＤＭＦ（２．７５ｍＬ）中５−ヒドロキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（トリフルオロ酢酸（１））（１５７．４ｍｇ、０．４２５１ｍｍｏｌ）、［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシル］メタンスルホネート（３１２ｍｇ、１．０６３ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（６９４ｍｇ、２．１３０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に２４時間加熱した。反応混合物を、セライトプラグを介して真空濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、Ｃ２４Ｈ３１Ｎ５Ｏ４（１９２．８ｍｇ、０．４２５１ｍｍｏｌ、１００．０％）を提供した。この粗材料を、次のステップに持ち越した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値４５３．２３７６、実測値４５４．４１（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．８３分間。
５−（４−アミノシクロヘキサオキシ）−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（化合物（１１−Ｂ））の調製
【化１００】
2021511314.tif 000102
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［４−（４−シアノ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］カルバメート（１９２．８ｍｇ、０．４２５１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．４５４ｇ、９８２．４μＬ、１２．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、粗残渣を逆相Ｉｓｃｏによって精製した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→４０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮し、トルエン共沸混合物（２×）および真空によって乾燥させて、５−（４−アミノシクロヘキサオキシ）−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（トリフルオロ酢酸（１））（４７．８ｍｇ、０．１０２３ｍｍｏｌ、２４．０６％）（３ステップにわたる収率）を提供した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値３５３．１８５１８、実測値３５４．４１（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５７分間。
Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（化合物（１１））の調製
【化１０１】
2021511314.tif 000103
水（５０６．７μＬ）中５−（４−アミノシクロヘキサオキシ）−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（トリフルオロ酢酸（１））（４７．８ｍｇ、０．１０２３ｍｍｏｌ）、２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（２３ｍｇ、０．１３４０ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍで２５６．２μＬ、０．５１２４ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉マイクロ波管中１１０℃に加熱し、１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは、主なピークへの変換を示すが、それは［Ｍ＋１］４８０．４２に対応している。Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（またはその互変異性体）は、反応中に形成されたと思われた。粗懸濁液を室温に冷却した。溶解を助けるために、１：１ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（約１ｍＬ）および約６〜８滴のＴＦＡを添加した。得られた溶液を、逆相Ｉｓｃｏ上に直接負荷した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。［Ｍ＋１］４８０．４２の生成物に対応する画分を収集し、減圧下で濃縮した。試料を、最少量の１：１ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨに溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジを通過させた。濾液を濃縮すると、白色の固体フィルム状物が残った。材料の１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）は、Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（またはその互変異性体）と一致した。
【化１０２】
2021511314.tif 000104
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４７９．２２８１，  ｆｏｕｎｄ  ４８０．３３  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５７分
【０４４５】
化合物１２：２−メチル−Ｎ−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−ピリミジン−４−アミンの調製
【化１０３】
2021511314.tif 000105
試薬および条件：（ａ）アセトアミジン（ＨＣｌ）、Ｋ２ＣＯ３およびＭＳ４Ａ、ブチロニトリル、１３０℃、２２ｈ、（ｂ）ＮａＨ、ＰＭＢ−ＯＨ、ＤＭＦ、（ｃ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、（ｄ）２−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）イソインドリン−１，３−ジオン、ＰＰｈ３、ＤＩＡＤ、ＴＨＦ、（ｅ）モルホリン、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ、ＣｓＣＯ３、ジオキサン、（ｆ）ＮＨ２ＮＨ２、ＭｅＯＨ、（ｇ）４−クロロ−２−メチル−ピリミジン、ｔ−ブチルｘＰｈｏｓパラダサイクル（ｂｕｔｙｌｘＰｈｏｓｐａｌｌａｄｃｙｃｌｅ）、ＮａＯｔＢｕ、ｔＢｕＯＨ。
ステップａ：
ブチロニトリル（２０．００ｍＬ）中４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンズアルデヒド（４ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）、アセトアミジン（塩酸（１））（２．４ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．５ｇ、２５ｍｍｏｌ）およびＭＳ４Ａ（２．８ｇ、粉末）の混合物を、１３０℃で２０時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、セライト層を介して濾過し、真空下で濃縮した。粗製物を、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出する１２０ｇのシリカゲルカートリッジから精製した。これにより、７−ブロモ−５−フルオロ−２−メチル−キナゾリン（１．３５ｇ、３１％）を得た。
【化１０４】
2021511314.tif 000106
ステップｂ：
（４−メトキシフェニル）メタノール（８８６ｍｇ、０．８ｍＬ、６．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０．００ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（２６０ｍｇ、６．４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた（ｒｅｓｕｌｔａｎ）混合物を３０分間撹拌した。その混合物に、７−ブロモ−５−フルオロ−２−メチル−キナゾリン（８００ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１時間継続した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗製物を、０〜６０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出する４０ｇのシリカゲルカートリッジから精製した。これにより、７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−キナゾリン（９００ｍｇ、７５．５％）を得た。
【化１０５】
2021511314.tif 000107
ステップｃ：
７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−キナゾリン（１．２ｇ、３．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２．０ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出する４０ｇのシリカゲルカートリッジから精製して、７−ブロモ−２−メチル−キナゾリン−５−オール（４５０ｍｇ、５６％）を得た。
【化１０６】
2021511314.tif 000108
ステップｄ：
７−ブロモ−２−メチル−キナゾリン−５−オール（２００ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、２−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）イソインドリン−１，３−ジオン（２１０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）およびＰＰｈ３（３３０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＤＩＡＤ（２５３ｍｇ、２５０μＬ、１．２５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。得られた反応混合物を１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、０〜７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出する１２ｇのシリカゲルカートリッジから精製して、２−［４−（７−ブロモ−２−メチル−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（２８０ｍｇ、７１％）を得た。
【化１０７】
2021511314.tif 000109
ステップｅ：
ジオキサン（５ｍＬ）中２−［４−（７−ブロモ−２−メチル−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（２８０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、モルホリン（１００μＬ、１．１ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ（４０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＰｄＯＡｃ２（７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２で５分間バブリングした。反応混合物を密閉し、１００℃で終夜撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、濃縮した。粗製物を、シリカゲルクロマトグラフィーから、０〜３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で精製して、２−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（１２５ｍｇ、４４％）を得た。
【化１０８】
2021511314.tif 000110
ステップｆ：
２−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（１２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ヒドラジン（水（１））（２５０ｍｇ、２８０μＬ、５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を７０℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、０〜１０％（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ中７ＭのＮＨ３）の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇのカートリッジ）から精製した。これにより、４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（６６ｍｇ、７６％）を得る。
【化１０９】
2021511314.tif 000111
ステップｇ：
ｔ−ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（６６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、４−クロロ−２−メチル−ピリミジン（４２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチルｘＰｈｏｓパラダサイクル（ｐａｌｌａｄｙｃｙｃｌｅ）（１３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の混合物に、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中２Ｍ溶液２００μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で終夜撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、濃縮した。粗製物を、０〜６％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（４ｇのカートリッジ）から精製し、２−メチル−Ｎ−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−ピリミジン−４−アミン（２０．９ｍｇ、２３．７％）を得た。
【化１１０】
2021511314.tif 000112
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４３４．２４，  ｆｏｕｎｄ  ４３５．２８  （Ｍ＋１）  ＋；保持時間：  ０．５０分
【０４４６】
化合物１３：Ｎ−メチル−２−［［４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
【化１１１】
2021511314.tif 000113
４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−４−メチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（化合物（１３−Ａ））の調製
４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１００ｍｇ、０．２５９２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でＴＨＦ（１．３ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２（１０．６ｍｇ、０．０１２９８ｍｍｏｌ）を添加した後、ＭｅＭｇＢｒ（ジエチルエーテル中３Ｍ溶液１１０μＬ、０．３３００ｍｍｏｌ）を滴下添加した。氷浴を除去し、得られた反応混合物を、Ｎ２下で室温において終夜撹拌した。このステップを、今回は２〜２．５当量のＭｅＭｇＢｒを使用して大規模で反復した。２つのバッチからの生成物を合わせ、Ｈ２Ｏに注いだ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、明るいオレンジ色から黄色の固体を得た。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−４−メチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（２４５．０ｍｇ、０．６７０５ｍｍｏｌ、４３．１２％）を提供した。
【化１１２】
2021511314.tif 000114
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３６５．１７３９５，  ｆｏｕｎｄ  ３６６．３９  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６４分
４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（化合物（１３−Ｂ））の調製
【化１１３】
2021511314.tif 000115
４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−４−メチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（２４５．０ｍｇ、０．６７０５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６．５３４ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２．０ｍＬ、２５．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を、Ｎ２ストリーム／穏やかな加熱下で除去した。粗残渣を、次の反応に直接持ち越した。質量＋１：２４６．４１。保持時間：０．５４
２−［４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（化合物（１３−Ｃ））の調製
【化１１４】
2021511314.tif 000116
無水ＤＭＦ（４．２ｍＬ）中４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸塩）（２４０．９ｍｇ、０．６７０５ｍｍｏｌ）、［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキシル］メタンスルホネート（５４２ｍｇ、１．６７６ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（１．１０ｇ、３．３７６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、９０℃に５時間加熱した。ＬＣＭＳは、部分的な進行を示す。別の１．５当量のメシレートを添加し、１１０℃に１６時間加熱した。反応混合物を、セライトプラグを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２ですすいだ。濾液を蒸発させ、粗残渣を、セライト上に乾燥負荷し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、２−［４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（１２７．９ｍｇ、０．２７０７ｍｍｏｌ、４０．３７％）を提供した。
【化１１５】
2021511314.tif 000117
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４７２．２１１０６，  ｆｏｕｎｄ  ４７３．４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６６分
４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（化合物（１３−Ｄ））の調製
【化１１６】
2021511314.tif 000118
撹拌した２−［４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］イソインドリン−１，３−ジオン（１２７．９ｍｇ、０．２７０７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン（１７２μＬ、５．４８０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応物を密閉し、室温で２０時間撹拌した（ＬＣＭＳは完了を示す）。反応混合物を濃縮した。粗残渣に、ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。懸濁液を、中程度の多孔性のガラスフリットを介して濾過した（固体を、ＣＨ２Ｃｌ２で数回すすぎ、同じフラスコに収集した）。濾液を濃縮し、粗残渣を逆相Ｉｓｃｏによって精製した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、減圧下で濃縮して、生成物（トリフルオロ酢酸（１））（２１．９ｍｇ、０．０４７９８ｍｍｏｌ、１７．７２％）を提供した。ＴＦＡ塩を、次の反応に直接持ち越した。質量＋１：３４３．３９。保持時間：０．５２
Ｎ−メチル−２−［［４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（化合物（１３））の調製
【化１１７】
2021511314.tif 000119
水（２５０μＬ）中４−（４−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（トリフルオロ酢酸（１））（２１．９ｍｇ、０．０４７９８ｍｍｏｌ）、２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（１２．３５ｍｇ、０．０７１９７ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍで１２０μＬ、０．２４００ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉マイクロ波管中、加熱還流させた（１００℃）。得られた混合物を７２時間撹拌した。粗懸濁液を、ＭｅＯＨおよび数滴のＴＦＡで処理し、得られた溶液を逆相Ｉｓｃｏによって精製した［５０ｇのＣ１８  Ａｑカラム、０→５０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ＴＦＡ改変剤）］。関連する画分を合わせ、濃縮した。試料を、最少量の１：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジを通過させた。濾液を濃縮して、生成物（５．８ｍｇ、０．０１１５４ｍｍｏｌ、２４．０５％）を薄黄色の固体として提供した。
【化１１８】
2021511314.tif 000120
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４７７．２４８８４，  ｆｏｕｎｄ  ４７８．４４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５９分
【０４４７】
化合物１４：６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミンの調製
４−クロロ−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン（化合物（１４−Ａ））の調製
【化１１９】
2021511314.tif 000121
０℃の４，６−ジクロロピリミジン（２．０ｇ、１３．４２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．４９４ｇ、２．０５８ｍＬ、１４．７６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（４０ｍＬ）溶液に、１−メチルピペラジン（１．３４４ｇ、１．４９０ｍＬ、１３．４２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温に加温し、次に５時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃと１ＮのＮａＯＨに分配した。層を分離し、水相を、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃに溶解させ、５日間静置し、その間にオフホワイト色の材料が沈殿した（生成物ではない）。固体を濾別し、濾液を濃縮して、生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）は、混じりけのない望ましい４−クロロ−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン（２．１２６ｇ、９．８９６ｍｍｏｌ、７３．７５％）を示す。
【化１２０】
2021511314.tif 000122
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２１２．０８２８７，  ｆｏｕｎｄ  ２１３．１４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．３９分
６−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミン（化合物（１４））の調製
【化１２１】
2021511314.tif 000123
ｔＢｕＯＨ（８００μＬ）中４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（４０ｍｇ、０．１２１８ｍｍｏｌ）、４−クロロ−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン（２８．５ｍｇ、０．１３４０ｍｍｏｌ）、４−クロロ−６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン（２８．５ｍｇ、０．１３４０ｍｍｏｌ）およびＮａＯｔＢｕ（３５ｍｇ、０．３６４２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、ｔ−ＢｕＸＰｈｏｓパラダサイクル（８ｍｇ、０．０１１６５ｍｍｏｌ）で処理した。反応物を密閉し、アルミニウムビーズ浴中、１００℃に２時間加熱した。溶媒をＮ２ストリーム下で除去し、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２［＋０．１％Ｅｔ３Ｎ］）。関連する画分を合わせ、濃縮して、生成物（４２．１ｍｇ、０．０７５０９ｍｍｏｌ、６１．６５％）を得た。
【化１２２】
2021511314.tif 000124
【化１２３】
2021511314.tif 000125
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ５０４．２９６１，  ｆｏｕｎｄ  ５０５．４４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５３分
【０４４８】
化合物１５：Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
【化１２４】
2021511314.tif 000126
１，４−ジオキサン（１．２ｍＬ）中４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（４０ｍｇ、０．１２１８ｍｍｏｌ）、ピリミジン−４−カルボン酸（２３ｍｇ、０．１８５３ｍｍｏｌ）、およびＥｔ３Ｎ（１０２μＬ、０．７３１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％ｗ／ｖ溶液２３５μＬ、０．３６９３ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られた（ｒｅｓｕｌａｎｔ）溶液を、５０℃に２０時間加熱した。溶媒をＮ２ストリーム下で除去し、粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製したが［１２ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（＋０．５％Ｅｔ３Ｎ）］、材料はまだ不純物を含有していた。材料を、ＤＭＳＯ２ｍＬに溶解／懸濁させ、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによって精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を１：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジを通過させた。濾液を濃縮して、Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−カルボキサミド（２０．９ｍｇ、０．０４７１４ｍｍｏｌ、３８．７０％）を提供した。
【化１２５】
2021511314.tif 000127
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４３４．２０６６３，  ｆｏｕｎｄ  ４３５．３５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ２．４８分
【０４４９】
化合物１６：Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］シクロプロパンカルボキサミドの調製
【化１２６】
2021511314.tif 000128
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（４０ｍｇ、０．１２１８ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１．０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２０．２１ｍｇ、０．１４６２ｍｍｏｌ）を添加した後、シクロプロパンカルボニルクロリド（１２．７３ｍｇ、１１．０５μＬ、０．１２１８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。得られた赤色からオレンジ色の反応混合物を、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。粗残渣を、１：１ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏに溶解／懸濁させ、セライトを介して濾過し、Ｃ１８分取ＨＰＬＣに供した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を１：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジを通過させた。濾液を濃縮して、Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］シクロプロパンカルボキサミド（７．２ｍｇ、０．０１７８０ｍｍｏｌ、１４．６１％）を提供した。
【化１２７】
2021511314.tif 000129
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９６．２１６１６，  ｆｏｕｎｄ  ３９７．４４  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５８分
【０４５０】
化合物１７：Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンの調製
【化１２８】
2021511314.tif 000130
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（４０ｍｇ、０．１２１８ｍｍｏｌ）、４−クロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジン（２１ｍｇ、０．１３５９ｍｍｏｌ）、およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３５ｍｇ、０．３６４２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、混合物をＮ２で１０分間バブリングすることによって脱気した。ｔ−ＢｕＸＰｈｏｓパラダサイクル（８ｍｇ、０．０１１６５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１００℃に１６時間加熱した。反応混合物を濃縮し、ＤＭＳＯ２ｍＬに溶解／懸濁させ、セライトを介して濾過し、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによって精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を、１：１ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓ  ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ樹脂カートリッジを通過させた。濾液を濃縮して、Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１０．５ｍｇ、０．０２１１６ｍｍｏｌ、１７．３８％）を提供した。
【化１２９】
2021511314.tif 000131
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４４６．２０６６３，  ｆｏｕｎｄ  ４４７．１２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５５分
化合物１８：２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミンの調製
２−クロロ−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミンの調製
【化１３０】
2021511314.tif 000132
水（４５０μＬ）中４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（１１０ｍｇ、０．３３４９ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロピリミジン（５５ｍｇ、０．３６９２ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍで６７０μＬ、１．３４０ｍｍｏｌ）の混合物を、密閉マイクロ波管中、１６時間加熱還流させ、その時点で、材料は大きなボール状物にクラスター化していた（冷却時に固化する）。上清を、ピペットを介して除去し、固体をヘラで崩壊させ、水で数回に分けて洗浄した。固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、溶液を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、褐色がかったオレンジ色の泡状物質を得た。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、２−クロロ−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミン（４１．２ｍｇ、０．０９３４４ｍｍｏｌ、２７．８９％）を提供した。
【化１３１】
2021511314.tif 000133
２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミンの調製
【化１３２】
2021511314.tif 000134
ｉＰｒＯＨ（７００μＬ）中２−クロロ−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミン（４１．２ｍｇ、０．０９３４４ｍｍｏｌ）、１−メチルピペラジン（２５μＬ、０．２２５４ｍｍｏｌ）、およびヒューニッヒ塩基（４０μＬ、０．２２９６ｍｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波中１７０℃に１時間加熱した。ｉ−ＰｒＯＨを減圧下で除去した。粗残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注いだ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２でさらに抽出した。合わせた有機物を、１ＮのＮａＯＨおよびブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、Ｉｓｃｏによって精製して（４０ｇのゴールドカラム、０→６０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−［４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］ピリミジン−４−アミン（２１．６ｍｇ、０．０４１５２ｍｍｏｌ、４４．４４％）を提供した。得られた生成物をＣＨ３ＣＮに溶解させ、還流させ、数回再濃縮して、残留（ｒｅｓｉｄｕｅａｌ）溶媒を除去した。
【化１３３】
2021511314.tif 000135
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ５０４．２９６１，  ｆｏｕｎｄ  ５０５．４９  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５３分
【０４５１】
化合物１９：Ｎ−メチル−２−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−ピリミジン−４−カルボキシルアミド（ｃａｒｂｏｘｙｌａｍｉｄｅａｓ）の調製
化合物１９を、ステップｇについて以下の手順を用いること以外は、化合物１２の合成スキームで先に示される通り調製した。
【化１３４】
2021511314.tif 000136
ｇ）２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド、ナトリウムｔ−ブトキシド、ｔ−ＢｕＸＰｈｏｓパラダサイクル、ｔ−ＢｕＯＨ
ｔ−ＢｕＯＨ（２ｍＬ）中４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（６８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、およびｔ−ブチルｘＰｈｏｓパラダサイクル（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の混合物に、ナトリウムｔ−ブトキシド（２Ｍで２５０μＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で終夜撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、蒸発させた。粗製物を、シリカゲルクロマトグラフィーによって、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配を用いて精製して、所望の生成物を得た。生成物を、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによって精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を、ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ＳＰＥに通過させて、Ｎ−メチル−２−［４−（２−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−ピリミジン−４−カルボキシルアミド（１３．３ｍｇ、１１．３％）を得た。
【化１３５】
2021511314.tif 000137
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４７７．２５，  ｆｏｕｎｄ  ４７８．３  （Ｍ＋１）  ＋；保持時間：  ０．５３分
【０４５２】
化合物２０：２−メトキシ−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）アセトアミドの調製
【化１３６】
2021511314.tif 000138
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１６ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、３−（エチルイミノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパン−１−アミン（塩酸（１））（３５ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）、および２−メトキシ酢酸（８．８μＬ、０．１１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．２ｍＬ）中、窒素中で室温において合わせた。得られた混合物を４０分間撹拌した。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２５ｍｇ、０．０７６１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を３０分間継続した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を、水（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、クロマトグラフィーによって、４ｇのシリカゲル上で０〜１０％メタノール／ＤＣＭ勾配を使用して精製した。２−メトキシ−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）アセトアミド（１０ｍｇ）を得た（収率３３％）。
【化１３７】
2021511314.tif 000139
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４０１．３２  （Ｍ＋１）＋．
【０４５３】
３−メチル−５−［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン：化合物２１の調製
【化１３８】
2021511314.tif 000140
７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン：化合物（２１−Ｂ）の調製
（４−メトキシフェニル）メタノール（１０．６９ｇ、７７．３９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、０℃でＮａＨ（６．８９ｇ、１７２．３ｍｍｏｌ）を少しずつ５分間にわたって添加し、次に室温に３０分間にわたって加温した。反応物を０℃に冷却し、５，７−ジフルオロ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（２３．７８ｇ、１１４．９ｍｍｏｌ）を、少しずつ５分間にわたって添加した。反応物を、この温度で３０分間撹拌し、次に室温に終夜加温した。反応は不完全であるとみなされたので、アルコール０．９６ｍＬおよびＮａＨ６８０ｍｇを添加し、反応物を室温で３０分間撹拌した。反応はまだ不完全であるとみなされたので、さらなるアルコール０．９６ｍＬおよびＮａＨ６８０ｍｇを添加し、反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を水で希釈し、ｐＨを酢酸で５に調整した。得られた固体を濾過し、水およびＥｔ２Ｏで洗浄し、次に真空下で乾燥させて、７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（２３．４５ｇ、収率１００％）を得た。
【化１３９】
2021511314.tif 000141
７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−キナゾリン−４−オン：化合物（２１−Ｃ）の調製
磁気撹拌棒を備えたＢｉｏｔａｇｅ製の１０ｍＬのマイクロ波バイアルに、アセトン（１０ｍＬ）中７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（４０６ｍｇ、１．３５２ｍｍｏｌ）、ＭｅＩ（１９３．９ｍｇ、８５．０４μＬ、１．３６６ｍｍｏｌ）、ＮａＩ（２０．００ｍｇ、０．１３３４ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（９３５．９ｍｇ、６．７７２ｍｍｏｌ）を投入した。バイアルを、Ｔｅｆｌｏｎ製セプタムキャップで密閉し、マイクロ波中１００℃に１５分間加熱した。反応物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、逆相Ｃ１８−誘導体化シリカゲルカラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用することによって精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）を添加することによって中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−キナゾリン−４−オン（２２７ｍｇ、収率５３．４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値３１４．１０６６６、実測値３１５．０９（Ｍ＋１）＋。
５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン：化合物（２１−Ｄ）の調製
７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−キナゾリン−４−オン（８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）およびモルホリン（４３０μＬ、４．９ｍｍｏｌ）の無水ＮＭＰ（１ｍＬ）溶液を、１２０℃で１８時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈した。沈殿物を濾過し、水で洗浄し、次に真空下で乾燥させて、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン（６０ｍｇ、収率６４％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値３８１．１６８８５、実測値３８２．２１（Ｍ＋１）＋。
３−メチル−５−［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン：化合物（２１−Ｅ）の調製
５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（０．５ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を、室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、５−ヒドロキシ−３−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オンを得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値２６１．１１１３３、実測値２６２．０７（Ｍ＋１）＋。
３−メチル−５−［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン：化合物（２１）の調製
磁気撹拌棒を備えたマイクロ波バイアルに、ＤＭＦ（３ｍＬ）中５−ヒドロキシ−３−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン（６０．９ｍｇ、０．２３３１ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（２００ｍｇ、０．７００９ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（３８０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を投入した。バイアルを、使い捨てのＴｅｆｌｏｎ製セプタムキャップで密閉し、マイクロ波中１２０℃で１０分間加熱した。［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート５０ｍｇを添加し、マイクロ波中１２０℃で１０分間加熱した。反応物をマイクロ波中１２０℃でさらに５分間加熱した。反応物を濾過し、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中１０〜５０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、３−メチル−５−［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−オン（３２．６ｍｇ、収率３０．８％）を得た。
【化１４０】
2021511314.tif 000142
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４５０．２３７９５，  ｆｏｕｎｄ  ４５１．３３  （Ｍ＋１）＋．
【０４５４】
化合物２２：エチル（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）カルバメートの調製。
【化１４１】
2021511314.tif 000143
氷冷した４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３２μＬ、０．２３０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８００μＬ）溶液に、エチルクロロホルメート（１０．９μＬ、０．１１４ｍｍｏｌ）を添加した。３０分間撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム（水溶液）を添加した。混合物を相分離機に通し、有機物を減圧下で濃縮した。４ｇのシリカゲルカラム上で、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶出液として使用してクロマトグラフ処理し、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによってさらに精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を、ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ＳＰＥに通過させて、エチル（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）カルバメート（２．３ｍｇ、収率７％）を得た。
【化１４２】
2021511314.tif 000144
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４０１．３２  （Ｍ＋１）＋．
【０４５５】
化合物２３：１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）シクロプロパン−１−カルボキサミドの調製
【化１４３】
2021511314.tif 000145
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１６ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、３−（エチルイミノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパン−１−アミン（塩酸（１））（３５ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）、および１−メチルシクロプロパン−１−カルボン酸（１２ｍｇ、０．１１９９ｍｍｏｌ）を、窒素中で室温においてＤＭＦ（０．２ｍＬ）中で合わせ、４０分間撹拌した。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２５ｍｇ、０．０７６１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌をさらに３０分間継続した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を、水（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、クロマトグラフィーによって、４ｇのシリカゲル上で０〜１０％メタノール／ＤＣＭ勾配を使用することによって精製した。１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）シクロプロパン−１−カルボキサミド（１３ｍｇ、収率４０％）を得た。
【化１４４】
2021511314.tif 000146
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４１１．３１  （Ｍ＋１）＋．
【０４５６】
化合物２４：１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）シクロプロパン−１−カルボキサミドの調製
【化１４５】
2021511314.tif 000147
２ｍＬのマイクロ波管中、ｔＢｕＯＨ（４００μＬ）中４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２７ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）、３−ブロモ−１−メチル−ピラゾール（９．５μＬ、０．０９９９ｍｍｏｌ）、アリル（クロロ）パラジウム（０．８ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２’，４’，６’−トリイソプロピル−３，６−ジメトキシ−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）ホスファン（４ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）、およびナトリウム２−メチルプロパン−２−オレート（テトラヒドロフラン中２Ｍで８３μＬ、０．１６６ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、セライトを介して濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、１２ｇのシリカゲル上で、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶出液として使用してクロマトグラフ処理して、１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（１２．５ｍｇ、３６％）を得た。
【化１４６】
2021511314.tif 000148
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４０９．３３  （Ｍ＋１）＋．
【０４５７】
化合物２５：Ｎ−メチル−２−［［４−（３−メチル−７−モルホリノ−４−オキソ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
【化１４７】
2021511314.tif 000149
ステップａ
（４−メトキシフェニル）メタノール（５ｍＬ、４０．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（３ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。その混合物に、７−ブロモ−５−フルオロ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（５ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で２時間継続した。混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸でｐＨ５に中和した。得られた沈殿物を、真空濾過によって収集し、Ｈ２Ｏ、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、真空下で終夜乾燥させた。これにより、［７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３−Ｈ−キナゾリン−４−オン（７ｇ、９５％）を得た。
【化１４８】
2021511314.tif 000150
ステップｂ
７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（７ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１５ｍＬ、１９４．７ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を３０分間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＮａＨＣＯ３溶液で中和し、濾過して、固体を収集した。固体を、減圧下で終夜乾燥させて、７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（４．５ｇ、９８％）を提供した。
【化１４９】
2021511314.tif 000151
ステップｃ
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中ＮａＨ（１．９ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃で７−ブロモ−５−ヒドロキシ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（５ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、得られた混合物を、室温で２０分間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、次にＰＯＭＣｌ（９．４ｇ、９ｍＬ、６２．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０分間撹拌した。反応混合物を、酢酸（１０ｍＬ）のＨ２Ｏ（１００ｍｌ）溶液に注いだ。沈殿物を濾過し、ＤＣＭに溶解させ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、蒸発させた。粗製物を、０〜２５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶出する１２０ｇのシリカゲルカートリッジによって精製し、（７−ブロモ−５−ヒドロキシ−４−オキソ−キナゾリン−３−イル）メチル２，２−ジメチルプロパノエート（４．５ｇ、６１％）を得た。
【化１５０】
2021511314.tif 000152
ステップｄ
ＴＨＦ（３５ｍＬ）中（７−ブロモ−５−ヒドロキシ−４−オキソ−キナゾリン−３−イル）メチル２，２−ジメチルプロパノエート（３．５ｇ、９．８５ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（４．１ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）および２−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）イソインドリン−１，３−ジオン（２．８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＡＤを滴下添加した（３．２ｇ、３．１ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）。混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーカラムによって精製した。これにより、［７−ブロモ−５−［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキサオキシ］−４−オキソ−キナゾリン−３−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート（４．２ｇ、７３％）を得た。
【化１５１】
2021511314.tif 000153
ステップｅ
１，４−ジオキサン（５．０ｍＬ）中［７−ブロモ−５−［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキサオキシ］−４−オキソ−キナゾリン−３−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート（５００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、モルホリン（８３ｍｇ、８５μＬ、１．０ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（５６６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ（１０７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２で５分間バブリングした。混合物を、マイクロ波中１５０℃で１５分間加熱した。混合物を室温に冷却し、ＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、濃縮した。粗残渣を、０〜２０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、［５−［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−４−オキソ−キナゾリン−３−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート（５６ｍｇ、１１％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値５８８．２６、実測値５８９．３（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．７８分間。
ステップｆ
［５−［４−（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）シクロヘキサオキシ］−７−モルホリノ−４−オキソ−キナゾリン−３−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート（５６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に、ＮＨ２ＮＨ２（１００μＬ、３．２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応溶液を７０℃で９０分間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を濃縮し、０〜１０％（７ＮのＮＨ３／ＭｅＯＨ）／ＤＣＭで溶出する４ｇのシリカゲルカートリッジによって精製して、所望の５−（４−アミノ−シクロヘキサオキシ）−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（３０ｍｇ、９１％）を得た。
【化１５２】
2021511314.tif 000154
ステップｇ
Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）中５−（４−アミノシクロヘキサオキシ）−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（３０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１８時間撹拌した。混合物をＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。これにより、Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄ）（１５ｍｇ、３５．９％）を得た。
【化１５３】
2021511314.tif 000155
ステップｈ
ＤＭＦ（１ｍＬ）中Ｎ−メチル−２−［［４−［（７−モルホリノ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリン−５−イル）オキシ］シクロヘキシル］アミノ］−ピリミジン−４−カルボキサミド（１５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（８０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の混合物に、ＭｅＩ（５０μＬ、０．８０ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗製物を、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出する４ｇのシリカゲルカートリッジによって精製した。回収した生成物は不純であった。生成物をＳＦＣ分離に供して、Ｎ−メチル−２−［［４−（３−メチル−７−モルホリノ−４−オキソ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］ピリミジン−４−カルボキサミド（２ｍｇ、１６．３％）を得た。
【化１５４】
2021511314.tif 000156
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４９３．２４３７４，  ｆｏｕｎｄ  ４９４．３７  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６分
【０４５８】
化合物２６：１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドの調製
【化１５５】
2021511314.tif 000157
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１６ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、３−（エチルイミノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパン−１−アミン（塩酸（１））（３５ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）、および１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（１５ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）を、窒素中で室温においてＤＭＦ（０．２ｍＬ）中で合わせ、４０分間撹拌した。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２５ｍｇ、０．０７６１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌をさらに３０分間継続した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を、水（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、クロマトグラフィーによって、４ｇのシリカゲル上で０〜１０％メタノール／ＤＣＭ勾配を使用して精製して、１−メチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミド（６ｍｇ、１７％）を得た。
【化１５６】
2021511314.tif 000158
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４３３．０５  （Ｍ＋１）＋．
【０４５９】
化合物２７の調製：
２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イルオキシ）ピリミジン：化合物（２７−Ａ）の調製
【化１５７】
2021511314.tif 000159
氷浴で冷却したＤＭＡ（２ｍｌ）中ＮａＨ（３７０．１ｍｇ、９．２５４ｍｍｏｌ）（鉱油中６０％）の懸濁液に、１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オール（１ｇ、６．３２１ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１０ｍＬ）溶液およびイミダゾール（４３ｍｇ）を添加した。ｒｔで３０分間撹拌した後、２−クロロピリミジン（８６８．７ｍｇ、７．５８５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、ｒｔで２時間撹拌し、次に６０℃で１時間撹拌した。次に、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのシリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜５０％）、２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イルオキシ）ピリミジン（３．２０ｇ、６．２３０ｍｍｏｌ、９８．５９％）を得、それを次の反応にそのまま持ち越した。
【化１５８】
2021511314.tif 000160
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２３６．１１６０９，  ｆｏｕｎｄ  ２３７．２２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７２分
４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノン：化合物（２７−Ｂ）の調製
【化１５９】
2021511314.tif 000161
２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イルオキシ）ピリミジン（１．１０ｇ、４．６５６ｍｍｏｌ）のジオキサン（６ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ（６Ｍで７．８８３ｍＬ、４７．３０ｍｍｏｌ）を添加した。２日間撹拌した後、反応混合物を蒸発させ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＤＣＭ（３×）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（１２ｇのシリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜１００％）、４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノン（８００ｍｇ、４．１６２ｍｍｏｌ、８９．３９％）を得た。
【化１６０】
2021511314.tif 000162
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  １９２．０８９８７，  ｆｏｕｎｄ  １９３．０７  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６分
化合物（２７−Ｃ）、（２７−Ｄ）、および（２７−Ｅ）の調製
【化１６１】
2021511314.tif 000163
化合物（２７−Ｂ）（３８３ｍｇ、１．９９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（１５１ｍｇ、３．９９１ｍｍｏｌ）を添加した。温度を少し上昇させると、中程度のガス発生が観察された。反応物を１時間撹拌し、次にそれをＨＣｌ（６Ｎで０．７０ｍＬ）でクエンチし、ガス発生が停止するまで撹拌した。混合物を、１ＮのＮａＯＨでｐＨ約８の塩基性にし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機物を、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノール２４８ｍｇを得た。試料１２ｍｇを、ＨＰＬＣ分取クロマトグラフィー（１０〜９０％ＣＨ３ＣＮ／水勾配）を介して精製して、ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ異性体を分離した。ｔｒａｎｓ−４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノール：
【化１６２】
2021511314.tif 000164
ｃｉｓ−４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノール：
【化１６３】
2021511314.tif 000165
７−モルホリノキナゾリン−５−オール：化合物（１−Ｆ）の調製
【化１６４】
2021511314.tif 000166
２０ｍｌのマイクロ波バイアル中、１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン（３００ｍｇ、０．８６９１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１８ｍｇ、０．０８０１７ｍｍｏｌ）、およびＲｕＰｈｏｓ（８１．１０ｍｇ、０．１７３８ｍｍｏｌ）の懸濁液を、Ｎ２でバブリングした。モルホリン（１１３．６ｍｇ、１１３．７μＬ、１．３０４ｍｍｏｌ）を添加した後、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２５０．５ｍｇ、２．６０７ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを密閉し、１００℃で１９時間加熱した。ＮＨ４Ｃｌ水溶液（Ａｕｅｏｕｓ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（６×）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーによってさらに２回精製して（４ｇ＋１２ｇのシリカゲル、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ０〜１０％）、７−モルホリノキナゾリン−５−オール（１４７ｍｇ、０．６３５７ｍｍｏｌ、７３．１４％）を得た。
【化１６５】
2021511314.tif 000167
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２３１．１００７８，  ｆｏｕｎｄ  ２３２．２２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．４９
ｔｒａｎｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート：化合物（２７−Ｆ）の調製
【化１６６】
2021511314.tif 000168
ｔｒａｎｓ−４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノール（８０ｍｇ、０．４１１９ｍｍｏｌ）（ＦＣ１由来）、ＴＥＡ（１２５．１ｍｇ、１７２．３μＬ、１．２３６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を、塩化メタンスルホニル（７０．７７ｍｇ、４７．８２μＬ、０．６１７８ｍｍｏｌ）で１時間処理した。反応混合物を蒸発させ、残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して（４ｇのシリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ０〜３０％）、ｔｒａｎｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート（７４ｍｇ、０．２７１７ｍｍｏｌ、６５．９５％）を得た。
【化１６７】
2021511314.tif 000169
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２７２．０８３０７，  ｆｏｕｎｄ  ２７３．１２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７６分
４−［５−ｃｉｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリン：化合物（２７）の調製
【化１６８】
2021511314.tif 000170
ジオキサン（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍｌ）中ｔｒａｎｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート（５８．７ｍｇ、０．２１５６ｍｍｏｌ）、７−モルホリノキナゾリン−５−オール（４０ｍｇ、０．１７３０ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（６７．６４ｍｇ、０．２０７６ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波管に入れて密閉し、１１０℃に１５時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨ９：１に溶解させ、セライトを介して濾過した。濾液を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（２×４ｇのシリカゲル、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ０〜５％）、４−［５−ｃｉｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリン（４５ｍｇ、０．０９９４ｍｍｏｌ、５７．４５％）を得た。
【化１６９】
2021511314.tif 000171
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４０７．１９５７４，  ｆｏｕｎｄ  ４０８．３５  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６３分
【０４６０】
化合物２８：４−［５−ｔｒａｎｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
ｃｉｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート：化合物（２７−Ｆ）の調製
【化１７０】
2021511314.tif 000172
ｃｉｓ−４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサノール（１６０ｍｇ、０．８２３８ｍｍｏｌ）（ＦＣ２）およびＴＥＡ（２５０．０ｍｇ、３４４．４μＬ、２．４７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０７８ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（１４０．７ｍｇ、９５．０７μＬ、１．２２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をｒｔで１時間撹拌し、濃縮し、１２ｇのシリカゲル上で、０→７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを溶出液として使用してクロマトグラフ処理して、ｃｉｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート（１４２ｍｇ、０．５２１４ｍｍｏｌ、６３．３１％）を得た。
【化１７１】
2021511314.tif 000173
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２７２．０８３０７，  ｆｏｕｎｄ  ２７３．１６  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７４分
４−［５−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリン：化合物（２７）の調製
【化１７２】
2021511314.tif 000174
ジオキサン（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍｌ）中ｃｉｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキシル）メタンスルホネート（４３ｍｇ、０．１５７９ｍｍｏｌ）、７−モルホリノキナゾリン−５−オール（４０ｍｇ、０．１７３０ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（６７．６４ｍｇ、０．２０７６ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波管に入れて密閉し、１１０℃に１５時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ／ＭｅＯＨ９：１に溶解させ、セライトを介して濾過した。濾液を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（２×４ｇのシリカゲル、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ０〜５％）、４−［５−ｔｒａｎｓ−（４−ピリミジン−２−イルオキシシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリン（１４．５ｍｇ、０．０３２０３ｍｍｏｌ、１８．５１％）を得た。
【化１７３】
2021511314.tif 000175
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４０７．１９５７４，  ｆｏｕｎｄ  ４０８．３９  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６２分
【０４６１】
化合物２９および３５の調製
【化１７４】
2021511314.tif 000176
２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）チアゾール：化合物（２９−Ｂ）の調製
ジオキサン（４０ｍＬ）中２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（２．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、２−ブロモチアゾール（１．２７ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４３６ｍｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ溶液を７．６０ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、窒素を再充填し（２回反復した）、次に９０℃に６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを使用して精製して、２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）チアゾール（８８９ｍｇ、収率５３．０％）を得た。
【化１７５】
2021511314.tif 000177
２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イル）チアゾール：化合物（２９−Ｃ）の調製
ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−７−エン−８−イル）チアゾール（８８９ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）および１０％パラジウム活性炭（４２５ｍｇ、０．３９９ｍｍｏｌ）の混合物を、１気圧の水素下で室温において終夜撹拌した。反応物を、セライトを介して濾過し、減圧下で濃縮して、２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イル）チアゾール（８６０ｍｇ、収率９３．９％）を得た。
【化１７６】
2021511314.tif 000178
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ２２５．０８２３５，  ｆｏｕｎｄ  ２２６．０５  （Ｍ＋１）＋．
４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノン：化合物（２９−Ｄ）の調製
２−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イル）チアゾール（８６０ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）およびピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（１．９３ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）のアセトン（１９ｍＬ）および水（１９ｍＬ）溶液を、終夜加熱還流させた。アセトンを減圧下で除去した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノン（６４１．５ｍｇ、収率９０％）を得た。
【化１７７】
2021511314.tif 000179
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  １８１．０５６１４，  ｆｏｕｎｄ  １８２．０２  （Ｍ＋１）＋．
化合物（２９−Ｅ）および（２９−Ｆ）の調製
４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノン（５６４ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、０℃でＮａＢＨ４（２４４ｍｇ、６．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、１時間にわたって室温に加温した。溶媒を減圧下で除去した。反応物を水で希釈し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（４９２ｍｇ、収率８２．４％）を得た。
【化１７８】
2021511314.tif 000180
【化１７９】
2021511314.tif 000181
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  １８３．０７１７８，  ｆｏｕｎｄ  １８４．０  （Ｍ＋１）＋．
ｔｒａｎｓ−およびｃｉｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（４９２ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）の混合物を、ＳＦＣによって、ＣＯ２およびＥｔＯＨ（０．２％Ｅｔ２ＮＨ）を使用して精製して、ｔｒａｎｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（３８１ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を得た。
【化１８０】
2021511314.tif 000182
およびｃｉｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（６５．７  ｍｇ，  ０．３５９  ｍｍｏｌ）  
【化１８１】
2021511314.tif 000183
化合物（２９）の調製
【化１８２】
2021511314.tif 000184
７−モルホリノキナゾリン−５−オール（２５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ｃｉｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（３０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（５２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（４５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜５０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−［５−（ｔｒａｎｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサオキシ）キナゾリン−７−イル］モルホリン（１７．２ｍｇ、３８．５％）を得た。
【化１８３】
2021511314.tif 000185
【化１８４】
2021511314.tif 000186
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９６．１６２，  ｆｏｕｎｄ  ３９７．３２  （Ｍ＋１）＋．
化合物（３５）の調製
【化１８５】
2021511314.tif 000187
７−モルホリノキナゾリン−５−オール（２５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ｔｒａｎｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（２５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（４６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（４０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応は不完全であるとみなされたので、ｔｒａｎｓ−４−チアゾール−２−イルシクロヘキサノール（５ｍｇ）、ＰＰｈ３（１１ｍｇ）、およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（１０ｍｇ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜４０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−（５−（（ｃｉｓ−４−（チアゾール−２−イル）シクロヘキシル）オキシ）キナゾリン−７−イル）モルホリン（１４．８ｍｇ、収率３３．２％）を得た。
【化１８６】
2021511314.tif 000188
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９６．１６２，  ｆｏｕｎｄ  ３９７．２６  （Ｍ＋１）＋．
【０４６２】
化合物３０および３８の調製
化合物（３０−Ａ）および（３０−Ｂ）の調製
化合物（３０−Ａ）および（３０−Ｂ）を、化合物（２９−Ｅ）および（２９−Ｆ）と同様にして調製した。ｔｒａｎｓ−およびｃｉｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサノール（４６５ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）の混合物を、ＳＦＣによって、ＣＯ２およびＥｔＯＨ（０．２％Ｅｔ２ＮＨ）を使用して精製して、ｔｒａｎｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサノール（３３１ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を得た。
【化１８７】
2021511314.tif 000189
およびｃｉｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサノール（７１  ｍｇ，  ０．３５  ｍｍｏｌ）  
【化１８８】
2021511314.tif 000190
化合物３０：４−［５−［ｃｉｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサオキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
【化１８９】
2021511314.tif 000191
７−モルホリノキナゾリン−５−オール（２７．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ｔｒａｎｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサノール（３５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（５６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（４９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜４０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−［５−［ｃｉｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサオキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１８．５ｍｇ、収率３６．５％）を得た。
【化１９０】
2021511314.tif 000192
【化１９１】
2021511314.tif 000193
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４０５．２１６４６，  ｆｏｕｎｄ  ４０６．３６  （Ｍ＋１）＋．
化合物３８：４−［５−［ｔｒａｎｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサオキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
【化１９２】
2021511314.tif 000194
７−モルホリノキナゾリン−５−オール（２５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ｃｉｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサノール（３３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（５２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（４５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２日間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃを使用して精製して、４−［５−［ｔｒａｎｓ−４−（２−メチルピリミジン−４−イル）シクロヘキサオキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、収率３７％）を得た。
【化１９３】
2021511314.tif 000195
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４０５．２１６４６，  ｆｏｕｎｄ  ４０６．２９  （Ｍ＋１）＋．
【０４６３】
化合物３１：エチル４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレートの調製
【化１９４】
2021511314.tif 000196
化合物（３１−Ｃ）の調製
７−ブロモキナゾリン−５−オール（５００ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）、エチル４−ヒドロキシシクロヘキサンカルボキシレート（５１６ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）、およびＰＰｈ３（９３７ｍｇ、３．５７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート（８１９ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２日間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを使用して精製して、ｃｉｓ−エチル４−（７−ブロモキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレート（５８５ｍｇ、収率６９．４％）を得た。
【化１９５】
2021511314.tif 000197
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３７８．０５７９，  ｆｏｕｎｄ  ３７９．  １  （Ｍ＋１）＋．
化合物（３１）の調製
磁気撹拌棒を備えたＢｉｏｔａｇｅ製の０．５〜２ｍＬのマイクロ波バイアルに、ジオキサン（１．６ｍＬ）中エチル４−（７−ブロモキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレート（１００ｍｇ、０．２６４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、およびＲｕＰｈｏｓ（２５ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を投入し、反応物を窒素で１０分間バブリングした。モルホリン（３６μＬ、０．４１ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２５８ｍｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）を添加し、バイアルを、使い捨てのＴｅｆｌｏｎ製セプタムキャップで密閉した。バイアルを１００℃に４．５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃを使用して精製して、エチル４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレート（９０ｍｇ、収率８５％）を得た。
【化１９６】
2021511314.tif 000198
【化１９７】
2021511314.tif 000199
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３８５．２００１６，  ｆｏｕｎｄ  ３８６．２８  （Ｍ＋１）＋．
【０４６４】
化合物３２：ｃｉｓ−Ｎ−シクロプロピル−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキサンカルボキサミドの調製
【化１９８】
2021511314.tif 000200
化合物（３２−Ａ）の調製
エチル４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレート（２１０ｍｇ、０．５４５ｍｍｏｌ、化合物（３１））およびＬｉＯＨ（２０ｍｇ、０．８３５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）および水（５００μＬ）溶液を、６５℃で１．５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、ｐＨを６ＭのＨＣｌで１に調整した。溶媒を除去して、４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボン酸塩酸塩を得た。
化合物（３２）の調製
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボン酸塩酸塩（４６．４ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、シクロプロパンアミン（１０μＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（４９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（８２μＬ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で４０分間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで、Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜３０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、ｃｉｓ−Ｎ−シクロプロピル−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキサンカルボキサミド（２７ｍｇ、収率５６％）を得た。
【化１９９】
2021511314.tif 000201
【化２００】
2021511314.tif 000202
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９６．２１６１６，  ｆｏｕｎｄ  ３９７．３１  （Ｍ＋１）＋．
【０４６５】
化合物３３：２，２−ジメチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）シクロプロパン−１−カルボキサミドの調製
【化２０１】
2021511314.tif 000203
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（２３ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）、３−（エチルイミノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパン−１−アミン（塩酸（１）（４９ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）、および２，２−ジメチルシクロプロパンカルボン酸（１８ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）を、窒素中で室温においてＤＭＦ（２８０μＬ）中で合わせ、４０分間撹拌した。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（３５ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）を添加し、終夜撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を、水（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残渣を、４ｇのシリカゲルカラムで、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶出液として使用してクロマトグラフ処理し、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによってさらに精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を、ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ＳＰＥに通過させて、２，２−ジメチル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）シクロプロパン−１−カルボキサミド（１１．５ｍｇ、収率２５％）を得た。
【化２０２】
2021511314.tif 000204
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４２５．３３  （Ｍ＋１）＋．
【０４６６】
化合物３４：Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）オキセタン−３−カルボキサミドの調製
【化２０３】
2021511314.tif 000205
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（１８ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）、３−（エチルイミノメチレンアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロパン−１−アミン（塩酸（１）（３８ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）、およびオキセタン−３−カルボン酸（１３ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５μＬ、０．１０７６ｍｍｏｌ）を、窒素中で室温においてＤＭＦ（１ｍＬ）中で合わせ、４０分間撹拌した。４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンアミン（２７ｍｇ、０．０８２２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を終夜撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムを添加し、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を、水（２×）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、クロマトグラフィーによって、４ｇのシリカゲル上で０〜１０％メタノール／ＤＣＭ勾配を使用して精製して、Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ）シクロヘキシル）オキセタン−３−カルボキサミド（４ｍｇ、収率１１％）を得た。
【化２０４】
2021511314.tif 000206
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ＝  ４１３．４６  （Ｍ＋１）＋．
【０４６７】
化合物３６：Ｎ−［４−（２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−ピリミジン−４−アミンの調製
【化２０５】
2021511314.tif 000207
試薬および条件：（ａ）ＮＨ３、９０℃、２２ｈ、（ｂ）ＡｃＣｌ、ＤＩＥＡ、ＤＣＭ、（ｃ）ＮＨ３、ＥｔＯＨ、（ｄ）ＮａＨ、ＰＭＢ−ＯＨ、ＤＭＦ、（ｅ）モルホリン、ＤＩＥＡ、ｉＰｒＯＨ、（ｆ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、（ｇ）［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート、ＣｓＣＯ３、ＤＭＦ
ステップａ
１−（２，４，６−トリフルオロフェニル）エタノン（７ｇ、４０．２ｍｍｏｌ）およびアンモニウム（４０ｇ、６６５ｍｍｏｌ、３０％ｗ／ｗ）の混合物を、密閉加圧ボトル中、９０℃で２２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンで溶出する１２０ｇのシリカゲルカートリッジによって精製した。これにより、１−（２−アミノ−４，６−ジフルオロ−フェニル）エタノン（５．１ｇ、７４％）を得た。
【化２０６】
2021511314.tif 000208
ステップｂ
１−（２−アミノ−４，６−ジフルオロ−フェニル）エタノン（３．１ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（３．８ｍＬ、２１．８ｍｍｏｌ）およびＡｃＣｌ（２ｍＬ、２８．１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を１時間撹拌し、濃縮した。残渣をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、減圧下で濃縮した。白色の残渣を、次のステップに持ち越した。これにより、Ｎ−（２−アセチル−３，５−ジフルオロ−フェニル）アセトアミド（３．８ｇ、１７．８ｍｍｏｌ、９８．４％）を得た。
【化２０７】
2021511314.tif 000209
ステップｃ
ＥｔＯＨ（２Ｍで８０ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）中Ｎ−（２−アセチル−３，５−ジフルオロ−フェニル）アセトアミド（１．７ｇ、８ｍｍｏｌ）および２ＭのＮＨ３の混合物を、９０℃で１８時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、４０ｇのシリカゲルカートリッジによって、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘで精製した。これにより、５，７−ジフルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン（１．２ｇ、７７％）を得た。
【化２０８】
2021511314.tif 000210
ステップｄ
（４−メトキシフェニル）メタノール（２７０μＬ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（１１０ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を１０分間撹拌した。混合物に、５，７−ジフルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン（３５０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を添加し、撹拌をさらに３０分間継続した。混合物をＨ２Ｏによってクエンチし、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗製物を、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出する４０ｇのシリカゲルカートリッジによって精製し、７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２，４−ジメチル−キナゾリン（３００ｍｇ、３７％）を得た。
【化２０９】
2021511314.tif 000211
ステップｅ
ｉＰｒＯＨ（３ｍＬ）中７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２，４−ジメチル−キナゾリン（３００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、モルホリン（３００μＬ、３．４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３００μＬ、１．７ｍｍｏｌ）の混合物を、１６０℃で２０分間、マイクロ波処理した。混合物を、１８０℃で３０分間マイクロ波処理し、次に１９０℃で６０分間マイクロ波処理した。混合物を濃縮し、０〜７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２，４−ジメチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（６０ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ、１６．５％）を得た。
【化２１０】
2021511314.tif 000212
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３７９．１８９６，  ｆｏｕｎｄ  ３８０．１  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６分
ステップｆ
４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２，４−ジメチル−キナゾリン−７−イル］モルホリン（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液を１時間撹拌した。混合物を濃縮し、０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出する４ｇのシリカゲルカートリッジによって精製して、２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（３７ｍｇ、９０％）を得た。
【化２１１】
2021511314.tif 000213
ステップｇ
ＤＭＦ（１ｍＬ）中２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（３４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（５５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（７０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃で２０時間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、濃縮した。粗製物を、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、Ｎ−［４−（２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−ピリミジン−４−アミン（６．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、９．９％）を得た。
【化２１２】
2021511314.tif 000214
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４４８．２５８６７，  ｆｏｕｎｄ  ４４９．３２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５  ｍｉｎｕｔｅｓ
【０４６８】
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−Ｎ−（２−ピリジル）シクロヘキサンカルボキサミド：化合物３７の調製
【化２１３】
2021511314.tif 000215
エチル４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボキシレート（３０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ、化合物（３０））およびピリジン−２−アミン（１５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のトルエン（０．５ｍＬ）溶液に、窒素中でＡｌＭｅ２Ｃｌ（１．０Ｍで１５５μＬ、０．１５５ｍｍｏｌ）を滴下添加した。添加が完了した後、反応物を８０℃に３０分間加熱した。反応物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を、ＭＰＬＣによって、Ｃ１８逆相ＳｉＯ２カラムでＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜４０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−Ｎ−（２−ピリジル）シクロヘキサンカルボキサミド（２１．８ｍｇ、収率６３．３％）を得た。
【化２１４】
2021511314.tif 000216
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４３３．２１１４，  ｆｏｕｎｄ  ４３４．３３  （Ｍ＋１）＋．
【０４６９】
化合物３９：Ｎ−［４−（７−ブロモキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−ピリミジン−４−アミンの調製
【化２１５】
2021511314.tif 000217
磁気撹拌棒を備えたマイクロ波バイアルに、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中７−ブロモキナゾリン−５−オール（３１．３ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）、［４−［（２−メチルピリミジン−４−イル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１２０ｍｇ、０．４２１ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（１３６ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）を投入した。バイアルを密閉し、マイクロ波中１２０℃で１０分間加熱した。反応は不完全であるとみなされたので、反応物を、マイクロ波中１２０℃で１０分間加熱し、次に１４０℃で１０分間加熱した。反応物を濾過し、逆相Ｃ１８−誘導体化ＳｉＯ２カラムで精製した。生成物を、酢酸エチルに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄することによって中和した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、Ｎ−［４−（７−ブロモキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］−２−メチル−ピリミジン−４−アミン（１９．３ｍｇ、収率３２．４％）を得た。
【化２１６】
2021511314.tif 000218
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４１３．０８５１，  ｆｏｕｎｄ  ４１４．１７  （Ｍ＋１）＋．
【０４７０】
化合物４０：Ｎ−メチル−４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−シクロヘキサンカルボキサミドの調製
【化２１７】
2021511314.tif 000219
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボン酸塩酸塩（４６．４ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、メチルアミン（２Ｍで１００μＬ、０．２００ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（９５μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣をＣ１８分取ＨＰＬＣによって精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、Ｎ−メチル−４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−シクロヘキサンカルボキサミド（３０ｍｇ、収率６３％）を得た。
【化２１８】
2021511314.tif 000220
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３７０．２００５，  ｆｏｕｎｄ  ３７１．３８  （Ｍ＋１）＋．
【０４７１】
化合物４１：Ｎ−（３−メトキシプロピル）−４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−シクロヘキサンカルボキサミドの調製
【化２１９】
2021511314.tif 000221
４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキサンカルボン酸塩酸塩（４６ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、３−メトキシプロパン−１−アミン（１３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（９５μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣を、ＭＰＬＣによって、Ｃ１８逆相ＳｉＯ２カラムでＨ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）中５〜５０％ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）を使用して精製した。生成物の画分を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和）で中和し、次にＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、Ｎ−（３−メトキシプロピル）−４−（７−モルホリノキナゾリン−５−イル）オキシ−シクロヘキサンカルボキサミド（３９．４ｍｇ、収率６９．３％）を得た。
【化２２０】
2021511314.tif 000222
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４２８．２４２３７．
【０４７２】
化合物４２：２−［［４−（２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミドの調製：
【化２２１】
2021511314.tif 000223
試薬および条件：（ａ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、（ｂ）［４−［［４−（メチルカルバモイル）−ピリミジン−２−イル］アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート、ＣｓＣＯ３、ＤＭＦ、（ｃ）モルホリン、ＤＩＥＡ、ｉＰｒＯＨ
ステップａ
７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２，４−ジメチル−キナゾリン（１３０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を室温で１時間継続した。混合物を濃縮し、０〜４％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出する１２ｇのシリカゲルカートリッジで精製して、７−フルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン−５−オール（７０ｍｇ、８７％）を得た。
【化２２２】
2021511314.tif 000224
ステップｂ
ＤＭＦ（１ｍＬ）中７−フルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン−５−オール（４５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、［４−［［４−（メチルカルバモイル）−ピリミジン−２−イル］アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１２０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃で２０時間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、セライト層を介して濾過し、濃縮し、４ｇのシリカゲルカートリッジによって、０〜５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用して精製して、２−［［４−（７−フルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（１０ｍｇ、１０％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値４２４．２、実測値４２５．３（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５５分間。
ステップｃ
ｉＰｒＯＨ（０．５ｍＬ）中２−［［４−（７−フルオロ−２，４−ジメチル−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（１０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）、モルホリン（２００μＬ、２．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（４００μＬ、２．３ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃で３日間撹拌した。混合物を濃縮し、Ｃ１８分取ＨＰＬＣによって精製した（水／アセトニトリルとＴＦＡ改変剤）。関連する画分を乾燥させ、残渣を、ＰＬ−ＨＣＯ３  ＭＰ  ＳＰＥに通過させて、２−［［４−（２，４−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（３．２ｍｇ、２５％）を得た。
【化２２３】
2021511314.tif 000225
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ４９１．２６４５，  ｆｏｕｎｄ  ４９２．３  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．５４分
【０４７３】
化合物４３：２−メトキシ−Ｎ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アセトアミドの調製
化合物（４３−Ａ）の調製
【化２２４】
2021511314.tif 000226
０℃の４−アミノシクロヘキサン−１−オール（５．０１ｇ、４２．１９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（１４．７ｍＬ、８４．３９ｍｍｏｌ）を添加した後、２−メトキシアセチルクロリド（４．４ｍＬ、４７．３１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応物を５分間撹拌し、次に氷浴を除去し、反応物をＲＴで終夜撹拌した。次に、反応混合物を分液（ｓｅｐａｒｔｏｒｙ）漏斗に移し、有機層を１ＮのＨＣｌで洗浄し、水（ａｑｅｕｏｕｓ）層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、褐色がかった固体に濃縮して、粗生成物２．４ｇを得た。この粗生成物を、ＤＣＭに溶解させ、８０ｇのＩＳＣＯカラム、ＥＬＳＤ検出器、０〜７％のＭｅＯＨ／ＤＣＭに注入した。所望の画分を合わせ、真空下で濃縮して、Ｎ−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−２−メトキシ−アセトアミド（８００ｍｇ）を得た。
【化２２５】
2021511314.tif 000227
【化２２６】
2021511314.tif 000228
化合物（４３−Ｂ）の調製
【化２２７】
2021511314.tif 000229
Ｎ−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−２−メトキシ−アセトアミド（８００ｍｇ、４．１４４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９．４６７ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（１．１３０ｇ、１．５２３ｍＬ、８．７４４ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（５１５．０ｍｇ、３４８．０μＬ、４．４９６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０．５時間撹拌し、ＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲルの薄パッドを介して濾過し、シリカパッドをＤＣＭで洗浄し、濃縮した。［４−［（２−メトキシアセチル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネートを、オフホワイト色の固体として得た（１．０９ｇ、収率９９．１％）。
【化２２８】
2021511314.tif 000230
化合物（４３）の調製
【化２２９】
2021511314.tif 000231
ＤＭＦ中［４−［（２−メトキシアセチル）アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（７５ｍｇ、０．２８２７ｍｍｏｌ）、４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（トリフルオロ酢酸塩、化合物（９−Ａ））（５４ｍｇ、純度５０％、０．０７１９４ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２５１ｍｇ、０．７７０４ｍｍｏｌ）の混合物を、５ｍＬのマイクロ波管に入れて密閉し、１００℃に加熱した。熱を除去し、ＲＴで終夜撹拌し、反応混合物を濾過し、濃縮し、ＤＣＭに溶解させ、４ｇのＩＳＣＯカラム上に注入し、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出した。所望の画分を収集し、合わせ、濃縮して、不純物生成物２２ｍｇを得た。この材料をＭｅＯＨに溶解させ、Ｃ１８カラムで精製して、黄色の油状物質２４ｍｇを得た。この材料をＤＣＭに溶解させ、Ｓｔｒａｔｏｓｐｈｅｒｅｓカーボネートカートリッジを通過させて、混じりけのない溶液を得、それを真空下で濃縮し、高真空下で終夜乾燥させて、２−メトキシ−Ｎ−［４−（４−メトキシ−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル）オキシシクロヘキシル］アセトアミド（１４ｍｇ、収率４３．８％）を得た。
【化２３０】
2021511314.tif 000232
【０４７４】
化合物４４：２−［［４−［４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル］オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミドの調製
２−［（４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド：化合物（４４−Ａ）の調製
【化２３１】
2021511314.tif 000233
ｉＰｒＯＨ（２５．００ｍＬ）中２−クロロ−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（４．５ｇ、２６．２３ｍｍｏｌ）、４−アミノシクロヘキサン−１−オール（３ｇ、２６．０５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＥＡ（６ｍＬ、３４．４５ｍｍｏｌ）を添加し、終夜還流させ、次に濃縮して、２−［（４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド４．２ｇ（９６％）を得た。
【化２３２】
2021511314.tif 000234
４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール：化合物（４４−Ｂ）の調製
【化２３３】
2021511314.tif 000235
５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミン（３７０ｍｇ、０．８９１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４．４５６ｍＬ）およびＴＦＡ（５ｍＬ、６４．９０ｍｍｏｌ）溶液を、５０℃で３時間撹拌した。次に、反応物を濃縮乾固させ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で処理し、３×ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機物を濃縮乾固させ、最少量のＥｔＯＡｃに溶解させ、ヘプタンに滴下した。得られた黄褐色の沈殿物を濾過し、乾燥させて、４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オールを黄褐色の固体として得（２４０ｍｇ、０．８７４９ｍｍｏｌ、９８．２０％）、それをさらに精製することなく使用した。ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚの計算値２７４．１４２９７、実測値２７５．０（Ｍ＋１）＋；保持時間：０．５５分間。
［４−［［４−（メチルカルバモイル）ピリミジン−２−イル］アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート：化合物（４４−Ｃ）の調製
【化２３４】
2021511314.tif 000236
２−［（４−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（４．３ｇ、１７．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（１５ｍＬ、８６．１２ｍｍｏｌ）およびＭｓＣｌ（２．８ｍＬ、３６．１８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３時間撹拌し、次に濃縮し、８０ｇのシリカゲルカートリッジから、０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘで精製して、［４−［［４−（メチルカルバモイル）ピリミジン−２−イル］アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（５．２ｇ、１５．８３ｍｍｏｌ、９２．１７％）を提供した。
【化２３５】
2021511314.tif 000237
【化２３６】
2021511314.tif 000238
２−［［４−［４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル］オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド：化合物（４４）の調製
【化２３７】
2021511314.tif 000239
ＤＭＦ（１．３６７ｍＬ）中４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−オール（７５ｍｇ、０．２７３４ｍｍｏｌ）、［４−［［４−（メチルカルバモイル）ピリミジン−２−イル］アミノ］シクロヘキシル］メタンスルホネート（１２５．７ｍｇ、０．３８２８ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（２６７．２ｍｇ、０．８２０２ｍｍｏｌ）を、密閉管中１００℃で終夜撹拌した。別の０．７当量のメシレートを添加し、１００℃でさらに３時間撹拌した。次に、反応物を水で希釈し、３×ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機物を濃縮乾固させ、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅＯＨで溶出するフラッシュクロマトグラフィーを介して精製した。純粋な画分を合わせ、濃縮し、凍結乾燥させて、２−［［４−［４−（ジメチルアミノ）−７−モルホリノ−キナゾリン−５−イル］オキシシクロヘキシル］アミノ］−Ｎ−メチル−ピリミジン−４−カルボキサミド（１９．７ｍｇ、０．０３６９４ｍｍｏｌ、１３．５１％）を得た。
【化２３８】
2021511314.tif 000240
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ５０６．２７５４，  ｆｏｕｎｄ  ５０７．０  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６４分
【０４７５】
化合物５１：５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オンの調製
【化２３９】
2021511314.tif 000241
７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（１．３８ｇ、３．８２１ｍｍｏｌ）、ｔブトキシド（ナトリウムイオン（１））（１．１１ｇ、１１．５５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４３ｍｇ、０．１９１５ｍｍｏｌ）、およびＲｕＰｈｏｓ（１７６ｍｇ、０．３７７２ｍｍｏｌ）の混合物に、モルホリン（４６７μＬ、５．３５５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１６．８ｍＬ）溶液を添加した（混合物が十分に撹拌されなかったので、最初に１４ｍＬを添加し、次にさらなる２．８ｍＬを添加した）。得られた混合物を１００℃で終夜加熱した。混合物を室温に冷却し、ＤＣＭと飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に分配した。層を分離し、水および浮遊固体をＤＣＭで洗浄した。有機層を合わせ、水層を濾過した。すべての有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、生成物１．３ｇを得た。この材料を、ＤＣＭおよびＭｅＯＨに溶解させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｒｇｒａｐｈｙ）によって精製して（ＤＣＭで平衡化した４０グラムのカラム、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ０〜１０％で２０分間にわたって溶出）、白色の固体２４０ｍｇを得た。フィルターから得た固体材料および水層を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭに溶解させ、合わせ、濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物に再溶解させ、セライト１４ｇを添加した。この混合物をほぼ濃縮乾固させ、４０ｇのＩＳＣＯカラムに乾燥負荷し、上記の通り溶出して、生成物を白色の固体として得た（３７０ｍｇ）。このカラムから得た第１の画分を濃縮して、さらなる生成物（４８０ｍｇ）をオフホワイト色の固体として得た。純粋な材料を合わせて、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン１．１グラムを得た。
【化２４０】
2021511314.tif 000242
【０４７６】
化合物５２：４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
【化２４１】
2021511314.tif 000243
４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（８．０ｇ、２０．７３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４７０ｍＬ）溶液に、ＮａＣｌ（３６０ｍＬ）を添加した。得られた二相性混合物を、加熱還流させ（５５℃のアルミニウムビーズ浴）、ＮＨ４ＯＨ（３０％ｗ／ｖで１００ｍＬ、８５６．０ｍｍｏｌ）および亜鉛（４５．０ｇ、６８８．０ｍｍｏｌ）を添加した。加熱を２．５時間継続した。混合物を、セライトを介して濾過し、フィルターパッドをＣＨ２Ｃｌ２およびＨ２Ｏで洗浄した。濾液を、水層と有機層に分離した。水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（２×）でさらに抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、セライト上に乾燥負荷し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（２２０ｇのＩｓｃｏカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、純度約９０〜９５％の４−［５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（３．９６ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ、４８．９２％）を提供した。
【化２４２】
2021511314.tif 000244
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３５１．１５８３，  ｆｏｕｎｄ  ３５２．３９  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６３分
【０４７７】
４−［４−メトキシ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン：化合物５３の調製
【化２４３】
2021511314.tif 000245
４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（４５０ｍｇ、１．１６６ｍｍｏｌ）、メタノール（０．２３６ｍＬ、５．８２６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３２２ｍｇ、２．３３０ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（５．０ｍＬ）を、マイクロ波容器内で合わせ、マイクロ波中１５０℃に３０分間加熱して、ＬＣＭＳによって部分的に変換したとみなされた。マイクロ波中１７５℃に１時間、再び加熱した。反応混合物を、ガラスフリットを介して濾過し、溶媒を蒸発させた。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（１２ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、４−［４−メトキシ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（２０６ｍｇ、０．５３４７ｍｍｏｌ、４５．８６％）を提供した。
【化２４４】
2021511314.tif 000246
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３８１．１６８８５，  ｆｏｕｎｄ  ３８２．３２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．６５分
【０４７８】
化合物５４：４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
【化２４５】
2021511314.tif 000247
トルエン（２５０ｍＬ）中５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（化合物（５１）：１８．６０ｇ、４７．０８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４１．００ｍＬ、２３５．４ｍｍｏｌ）を添加した後、ＰＯＣｌ３（１７．５５ｍＬ、１８８．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃で３時間加熱した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２でさらに抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、オレンジ色の非晶質固体に濃縮した。粗残渣を、セライト上に乾燥負荷し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（４０ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１１．９７７ｇ、３１．０４ｍｍｏｌ、６５．９２％）を提供した。
【化２４６】
2021511314.tif 000248
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３８５．１１９３２，  ｆｏｕｎｄ  ３８６．３２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７７分
【０４７９】
化合物５５：５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリルの調製
【化２４７】
2021511314.tif 000249
４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（４００ｍｇ、１．０３７ｍｍｏｌ）、ＫＣＮ（２０４ｍｇ、３．１３３ｍｍｏｌ）、ナトリウムｐ−トルエンスルホネート（１３２ｍｇ、０．６７９８ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（７．２ｍＬ）の混合物を密閉し、８０℃に１６時間加熱した。反応混合物を、Ｈ２ＯとＣＨ２Ｃｌ２に分配した。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機物を水で２回洗浄し、ブラインで１回洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（１２ｇのＩｓｃｏゴールドカラム、直線勾配０％→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−キナゾリン−４−カルボニトリル（２６３．５ｍｇ、０．７０００ｍｍｏｌ、６７．５１％）を提供した。加熱／真空下で乾燥させて、残留ＤＭＦを除去した。
【化２４８】
2021511314.tif 000250
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３７６．１５３５３，  ｆｏｕｎｄ  ３７７．３２  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．８１分
【０４８０】
化合物５６：４−［４−シクロプロピル−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリンの調製
【化２４９】
2021511314.tif 000251
化合物（５６−Ｂ）の調製
７−フルオロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（５．６３ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）およびモルホリン（３３ｍＬ、３８０ｍｍｏｌ）の無水ＮＭＰ（６０ｍＬ）溶液を、１２０℃に終夜加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈した。沈殿物を濾過し、真空下で５５℃において乾燥させて、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（３．２６ｇ、収率４７．３％）を得た。
【化２５０】
2021511314.tif 000252
化合物（５６−Ｃ）の調製
トルエン（２５ｍＬ）中５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−７−モルホリノ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（２．０ｇ、５．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＩＰＥＡ（５．６９ｍＬ、３２．７ｍｍｏｌ）を添加した後、ＰＯＣｌ３（２．５４ｍＬ、２７．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を８０℃に３．５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを使用して精製して、４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１．４６ｇ、収率６９．５％）を得た。
【化２５１】
2021511314.tif 000253
化合物（５６）の調製
ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＮＭＰ（０．２５ｍＬ）中４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（２００ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）およびＦｅ（ａｃａｃ）３（５５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の混合物に、窒素中で（シクロプロピル）マグネシウムブロミド（０．５Ｍで１．２０ｍＬ、０．６０００ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応は不完全であるとみなされ、（シクロプロピル）マグネシウムブロミド１ｍＬを滴下添加し、室温で５．５時間撹拌し続けた。反応物を、氷冷したＮＨ４Ｃｌを含有する分液（ｓｅｐｅｒａｔｏｒｙ）漏斗に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィーによって、ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを使用して精製して、４−［４−シクロプロピル−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（１７６ｍｇ、収率８４．８％）を得た。
【化２５２】
2021511314.tif 000254
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９１．１８９６，  ｆｏｕｎｄ  ３９２．２５  （Ｍ＋１）＋．
【０４８１】
化合物５７：５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミンの調製
【化２５３】
2021511314.tif 000255
４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（５００ｍｇ、１．２９６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（６．４８０ｍＬ）溶液に、ＴＨＦ中メチルアミン（２Ｍで３．２４０ｍＬ、６．４８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で１５分間加熱した。反応物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、濃縮乾固させ、最少量のＥｔＯＡｃに溶解させ、冷却したヘプタンに激しく撹拌しながら滴下した。得られた薄いオレンジ色のｐｐｔを濾過し、真空下で５０℃において終夜乾燥させて、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ−メチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミン（３７８ｍｇ、０．９６３８ｍｍｏｌ、７４．３６％）を得た。
【化２５４】
2021511314.tif 000256
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３８０．１８４８４，  ｆｏｕｎｄ  ３８１．０  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７３分
【０４８２】
化合物５８：５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミンの調製
【化２５５】
2021511314.tif 000257
１，４−ジオキサン（６．４８０ｍＬ）中４−［４−クロロ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］キナゾリン−７−イル］モルホリン（５００ｍｇ、１．２９６ｍｍｏｌ）、ジメチルアミン（塩酸（１））（５２８．４ｍｇ、５６３．３μＬ、６．４８０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．３１１ｇ、１．８０６ｍＬ、１２．９６ｍｍｏｌ）を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、３×ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機物を濃縮乾固させ、最少量のＥｔＯＡｃに溶解させ、冷却したヘプタンに激しく撹拌しながら滴下した。得られた黄褐色のｐｐｔを濾過し、真空下で５０℃において終夜乾燥させて、５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミン３８４ｍｇ（７１．４％）を得、それを次の反応にそのまま持ち越した。５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−７−モルホリノ−キナゾリン−４−アミン（３８４ｍｇ、０．９２４８ｍｍｏｌ、７１．３６％）
【化２５６】
2021511314.tif 000258
ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ｃａｌｃ．  ３９４．２００５，  ｆｏｕｎｄ  ３９５．０  （Ｍ＋１）＋；保持時間：  ０．７４分
【０４８３】
７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン：化合物５９の調製
【化２５７】
2021511314.tif 000259
（４−メトキシフェニル）メタノール（３１．１ｇ、２２５．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２７９．９ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（９．３１ｇ、２３２．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。７−ブロモ−５−フルオロ−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（２７．３３ｇ、１１２．５ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌をさらに２時間継続した。水（６００ｍＬ）を添加することによってクエンチし、次にＡｃＯＨを添加して、固体を沈殿させた。固体を、真空濾過によって収集し、水で洗浄し、次にＥｔ２Ｏで洗浄した。固体を高真空で終夜乾燥させて、７−ブロモ−５−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−３Ｈ−キナゾリン−４−オン（３４．３２ｇ、８０．２％）を得た。
【化２５８】
2021511314.tif 000260
実施例２：本発明の化合物の生物学的アッセイ
Ａ  ＤＮＡ−ＰＫ阻害アッセイ
【０４８４】
化合物を、標準的な放射分析アッセイを使用して、ＤＮＡ−ＰＫキナーゼを阻害するこれらの能力についてスクリーニングした。簡単に説明すると、このキナーゼアッセイにおいて、３３Ｐ−ＡＴＰの末端３３Ｐ−リン酸塩の、ペプチド基質への転移を調べる。およそ６ｎＭ  ＤＮＡ−ＰＫ、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０μｇ／ｍＬの剪断二本鎖ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａから入手）、０．８ｍｇ／ｍＬ  ＤＮＡ−ＰＫペプチド（Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅから入手）、および１００μＭ  ＡＴＰを含有する、１ウェル当たり５０μＬまでの最終容量の３８４−ウェルプレートでアッセイを行った。したがって、本発明の化合物をＤＭＳＯに溶解して、１０ｍＭの最初のストック溶液を生成した。次いで、ＤＭＳＯ中段階希釈を作製して、アッセイ用最終溶液を得た。ＤＭＳＯ中の０．７５μＬアリコートのＤＭＳＯまたは阻害剤を各ウェルに加え、これに続いて３３Ｐ−ＡＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから入手）を含有するＡＴＰ基質溶液を加えた。ＤＮＡ−ＰＫ、ペプチドおよびｄｓ−ＤＮＡの添加により反応を開始した。４５分後、２５μＬの５％リン酸で反応をクエンチした。反応混合物をＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ＨＴＳ３８４−ウェルＰＨプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手）に移し、１時間結合させ、１％リン酸で３回洗浄した。５０μＬのＵｌｔｉｍａ  Ｇｏｌｄ（商標）高性能シンチラント（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから入手）の添加後、試料をＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）でカウントした。競合的で厳しい結合阻害について、データをキネティックモデルにフィットさせるＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  Ｓｏｌｖｅｒマクロを使用して、Ｋｉ値を計算した。以下の表１および２においては、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．００１マイクロモル未満のＫｉは、「Ａ」と示され、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．００１マイクロモルまたはそれを超え、０．０１マイクロモル未満のＫｉは、「Ｂ」と示され、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．０１マイクロモルまたはそれを超え、０．１マイクロモル未満のＫｉは、「Ｃ」と示され、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．１マイクロモルまたはそれを超え、１マイクロモル未満のＫｉは、「Ｄ」と示され、１マイクロモルまたはそれを超えるＫｉは、「Ｅ」と示される。
Ｂ．ＤＮＡ−ＰＫ細胞アッセイ
【０４８５】
ＤＮＡ−ＰＫは、ＤＮＡの二本鎖切断（ＤＳＢ）によって動員され、活性化され、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）修復機序において非常に重要な役割を演じている。ＤＮＡ−ＰＫは、活性化すると、Ｓｅｒ２０５６において急速な自己リン酸化を受ける。ＤＮＡのＤＳＢに応答するｐＤＮＡ−ＰＫ（Ｓｅｒ２０５６）の測定は、潜在的なＤＮＡ−ＰＫキナーゼ阻害剤を評価するための細胞シグナル伝達アッセイを提供する。
【０４８６】
ネオカルチノスタチン（ＮＣＳ）を、ＤＮＡのＤＳＢを誘発するための放射線類似物として使用した。サンドイッチＥＬＩＳＡでは、典型的に従来のＥＬＩＳＡ型式よりも高い感度を提供するＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ電気化学発光技術プラットフォームを使用した。内部検証では、このアッセイにより、ｐＤＮＡ−ＰＫ（Ｓｅｒ２０５６）の高度に特異的かつ定量的な測定が可能になることが実証された。
【０４８７】
Ａ５４９（ヒトＮＳＣＬＣ）細胞を、黒色クリアボトム９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３９０４）上の、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１５０７０−０６３）および１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３００７１．０３ＨＩ）を補充したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１１９９５−０４０）１００ｕＬに、２５，０００個の細胞／ウェルで播種し、５％ＣＯ２中３７℃で終夜接着させる。翌日、化合物およびＮＣＳ溶液を、ＣｏｒｎｉｎｇポリプロピレンＶボトムディープウェルプレート（カタログ番号３３５７）中、１ウェル当たりＤＭＥＭ増殖培地１００ｕｌを添加することによって調製する。ＨＰ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｄ３００機器を使用して、化合物を、対数的な１６点滴定による一重項の設定を使用して適切なウェルに添加した。
【０４８８】
ＤＭＥＭ  ＮＣＳ溶液を、ＮＣＳをＤＭＥＭ培地に２００ｎｇ／ｍｌ（最終アッセイ濃度、５０ｎｇ／ｍｌ）で添加することによって調製した。ＤＭＥＭ／ＮＣＳ溶液１００ｕｌを、化合物を含むウェルに添加する。次に、この溶液１００ｕｌを、Ａ５４９細胞にすぐに添加する。次に、細胞を３７℃で１５分間インキュベートする。
【０４８９】
完全溶解緩衝剤を、１％ホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ２８５０）および１％プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ８３４０）をＬａｎｔｈａｓｃｒｅｅｎ細胞アッセイ溶解緩衝剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号ＰＶ５５９８）に添加することによって調製する。プレートから、軽くはじき軽くたたいて乾燥させることによって培地を除去した。６０ｕＬ／ウェルの完全溶解緩衝剤を、各ウェルに添加する。次に、これらのプレートを、溶解緩衝剤中で室温において少なくとも５分間インキュベートして、完全に溶解させる。この時点で、溶菌液を、調製したＥＬＩＳＡプレートに移すことができる。
【０４９０】
調製したＥＬＩＳＡプレートを、室温で１時間振盪しながら、１５０ｕＬ／ウェルの３％ブロッカーＡ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅカタログ番号Ｒ９３−ＢＡ）を含むＭｅｓｏｓｃａｌｅ製ヤギ−抗マウス（ＧＡＭ）プレートをブロックすることで調製した。捕捉抗体を、マウスモノクローナル抗全ＤＮＡ−ＰＫ（ＡｂＣＡＭカタログ番号ａｂ１８３２）を１％ブロッカーＡ中３ｕｇ／ｍＬに希釈することによって調製する。ブロックしたプレートを、Ｄ−ＰＢＳ２００ｕＬで１回すすいだ。捕捉抗体（２５ｕｌ／ウェル）を各ウェルに添加し、振盪しながら室温で１時間インキュベートした。これをＤ−ＰＢＳ２００ｕｌで１回すすいだ後、調製した細胞溶菌液２５ｕＬを、細胞プレートからＭｅｓｏｓｃａｌｅ製ＧＡＭ  ＥＬＩＳＡプレートに添加した。次に溶菌液を、プレート上で、振盪しながら室温で１時間インキュベートする。検出抗体（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ製ウサギ抗ｐＳ２０５６−ＤＮＡ−ＰＫ）を、１％ブロッカーＡ中１／１０００倍希釈（最終濃度４５０ｎｇ／ｍＬまで）で調製する。ＧＡＭプレートを、Ｄ−ＰＢＳ２００ｕＬで１回洗浄し、次に２５ｕＬ／ウェルの検出抗体をプレートに添加する。これを振盪しながら室温で１時間インキュベートする。Ｓｕｌｆｏｔａｇを、Ｓｕｌｆｏ−Ｔａｇヤギ−抗ウサギ抗体（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅカタログ番号Ｒ３２ＡＢ−１）を１／５００倍希釈（１ｕｇ／ｍＬ）で１％ブロッカーＡに添加することによって調製する。ＧＡＭプレートをＤ−ＰＢＳ２００ｕＬで洗浄し、次に、Ｓｕｌｆｏｔａｇ調製物２５ｕＬを各ウェルに添加する。プレートを、最終溶液、Ｓｕｌｆｏｔａｇと共に１時間インキュベートしたら、それらをＤ−ＰＢＳ２００ｕＬで１回洗浄する。１倍の読取り用緩衝剤（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅカタログ番号Ｒ３２−ＴＣ）を、緩衝剤をｄｄＨ２０で４倍希釈することによって作製する。１倍緩衝剤１５０ｕＬを、ＧＡＭプレートの各ウェルに添加し、次にプレートをＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００で読み取る。読み出し（電気化学発光）を、各化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウエア（Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ用のＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０ｅ）を使用してＩＣ５０を生成した。
【０４９１】
以下の表１および２において、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．１０マイクロモル未満のＩＣ５０は、「Ａ」と示され、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について０．１０マイクロモルまたはそれを超え、１．０マイクロモル未満のＩＣ５０は、「Ｂ」と示され、ＤＮＡ−ＰＫの阻害について１．０マイクロモルまたはそれを超えるＩＣ５０は、「Ｃ」と示される。
表１：本発明のある特定の化合物の特徴付けデータならびにＫｉおよび  ＩＣ５０値
【表１−１】
2021511314.tif 000261
【表１−２】
2021511314.tif 000262
【表１−３】
2021511314.tif 000263
【表１−４】
2021511314.tif 000264
【表１−５】
2021511314.tif 000265
【表１−６】
2021511314.tif 000266
【表１−７】
2021511314.tif 000267
【表１−８】
2021511314.tif 000268
【表１−９】
2021511314.tif 000269
【表１−１０】
2021511314.tif 000270
【表１−１１】
2021511314.tif 000271
【表１−１２】
2021511314.tif 000272
【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
2021511314.tif 000275
【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
2021511314.tif 000280
【表１−２１】
2021511314.tif 000281
表２：本発明のある特定の化合物の特徴付けデータならびにＫｉおよびＩＣ５０値
【表２−１】
2021511314.tif 000282
【表２−２】
2021511314.tif 000283
【表２−３】
2021511314.tif 000284
【表２−４】
2021511314.tif 000285
遺伝子編集の実施例
【０４９２】
実施した実験および達成された結果を含めた以下の実施例は、単に例示目的で提供され、本開示を制限すると解釈されるべきではない。
【０４９３】
（実施例３）
材料および方法
【０４９４】
トラフィックライトレポーター（ＴＬＲ）アッセイ：ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ（増強緑色蛍光阻害タンパク質）安定細胞系を、Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＳＢＩ）から購入した。ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞系は、停止コドンおよびＡＡＶＳ１遺伝子座に由来する５３ｂｐのゲノム断片を有する、破壊されたＧＦＰコード配列を保持している。細胞を、１０％熱不活化ＦＢＳ（ウシ胎児血清、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）、Ｇｌｕｔａｍａｘおよびペニシリン＋ストレプトマイシンを補充した高グルコース（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１０３１３−０３９）を含むＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１０３１３−０３９）中で維持し、３７℃および５％ＣＯ２で培養した。
【０４９５】
細胞トランスフェクションおよびＮＨＥＪ阻害剤処理：ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ安定細胞に、２つが一体化したｇＲＮＡ／ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９二重プラスミドベクター、プラスミド修復ドナー（両方のプラスミドをＳｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得た）をトランスフェクトする。トランスフェクションは、Ａｍａｘａヌクレオフェクターシステム（Ｌｏｎｚａ）を使用し、製造業者のプロトコールに従って行う。１６時間後、細胞を、１μＭ、２．５μＭ、５μＭおよび１０μＭの化合物を含む様々な濃度の式（Ｉ）によって表される化合物で処理する。Ｓｃｒ７の構造は、以下の通り示され、
【化２５９】
2021511314.tif 000286
対照として使用することができる。培地を、さらに２４時間インキュベートした後に交換する。トランスフェクションの５日後にＦＡＣＳ解析を実施し、次に、ゲノムＤＮＡ単離およびＰＣＲ遺伝子型判定のために細胞を収集する。
【０４９６】
細胞選別およびフローサイトメトリー：フローサイトメトリー分析のために、ＨＥＫ２９３細胞をトリプシン処理し、ＰＢＳ／１％ＢＳＡ  ＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁させ、Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析する。細胞の一部を遠心分離し、ゲノムＤＮＡの単離のために使用する。
【０４９７】
化合物処理時の細胞生存率アッセイ：ＮＨＥＪ阻害剤処理の潜在的な毒性をアセスメントするために、細胞生存率を、異なる濃度の化合物に曝露した後にアセスメントする。ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰの細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）キットによって決定する。プラスミドドナーをトランスフェクトした細胞を、化合物（１ｕＭ、２．５ｕＭ、５ｕＭおよび１０ｕＭ）の存在下で２４、４８または７２時間成長させ、それをＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイにかける。各実験を、独立して３回、三連で反復する。ＨＤＲに必要なＳ／Ｇ２に入ることができる健康な細胞を維持するために、細胞を、２．５μＭの濃度の化合物で処理する。
【０４９８】
ゲノムＤＮＡ単離、ＰＣＲ遺伝子型判定、およびゲル定量化：特別に設計したＰＣＲプライマー対により、ＨＤＲ媒介性ゲノム編集をアセスメントするための別の手段を提供して、機能的ｅＧＦＰ陽性細胞を得る。遺伝子型判定用のＰＣＲプライマー対は、以下に示されており、配列番号６および７に対応する。２１９ｂｐのＰＣＲ生成物は、未改変細胞に対応し、１６３ｂｐのヌクレオチドは、ＨＤＲによる改変に対応する。＞２．５％のゲル上のこれらのバンド強度により、Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｅｒを使用するデンシトメトリーによってＨＤＲを推定することが可能になる。この技術により、阻害剤によるＨＤＲの改善を相対的にランク付けすることが可能になる。レーンごとに測定した強度を、「挿入」を「全体」（挿入および未改変）で割ったものに対応するＰＣＲバンドの比を計算することによって正規化する。変化倍率を、化合物を伴う挿入の化合物なしの挿入に対する比を比較することによって計算する。
【０４９９】
（実施例４）
ＨＤＲ効率をモニタリングするためのアッセイ
【０５００】
ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞におけるＨＤＲ効率を確認するためのアッセイを実施する。この目的を達成するために、ヒトＡＡＶＳ１遺伝子座を標的化するバイシストロニック構築物を使用する（図１Ａ）。バイシストロニックベクターシステムは、ＥＦ１プロモーターによって駆動されるヒトコドン最適化Ｃａｓ９、ならびにＨ１プロモーターによって駆動されるキメラｃｒＲＮＡ−ｔｒａｃｒＲＮＡ転写物からなるカスタムガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を同時発現する。ｈｓｐＣａｓ９は、ｈｓｐＣａｓ９タンパク質を核に効率的に移入するために、Ｎ末端およびＣ末端に２つの核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含有している。ｈｓｐＣａｓ９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の後に、ＷＰＲＥ（ウッドチャックウイルス転写後調節エレメント）と呼ばれる調節エレメントが続いて、遺伝子発現を強化し、ｍＲＮＡ転写物を安定化する。
【０５０１】
操作されたヒト細胞系であるＥＧＩＰ  ＨＥＫ２９３を使用し、先および図１Ａに記載されるバイシストロニック構築物を使用してＨＤＲ効率をモニタリングする。ＥＧＩＰ  ＨＥＫ２９３レポーター細胞系は、ＳＢＩから購入した。ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞系は、停止コドンおよびＡＡＶＳ１遺伝子座に由来する５３ｂｐのゲノム断片を有する、破壊されたＧＦＰコード配列を保持している。安定系は、ｅＧＦＰの発現を駆動するためのＥＦ１アルファプロモーターを有する２９３Ｔ細胞にレンチウイルスを感染させた後、ピューロマイシンで選択することによって作製した。ｅＧＦＰ配列を、ヒトＡＡＶＳ１セーフハーバー部位由来の５６ヌクレオチド挿入断片（大文字）を挿入するように改変した。この配列は、ｅＧＦＰ翻訳配列中のアミノ酸Ｔ１０９の後に停止コドン（赤色のＴＡＡ）を含有する。標的化されたガイド配列は、ボールド体字である。ガイドおよびドナーのトランスフェクション時に、破壊されたｅＧＦＰ内のＡＡＶＳ１部位が切断され、ドナー構築物が、停止コドンおよびＡＡＶＳ１挿入断片を除去することによって相同配列を提供して、ｅＧＦＰを修復した。このシステムを使用すると、ＨＤＲドナー修復を受ける編集細胞は、ＧＦＰ陽性細胞を生成する。したがって、Ｃａｓ９、ｇＲＮＡ標的化ＡＡＶＳ１およびＡＡＶＳ１／ＥＧＦＰレスキュードナーの同時トランスフェクトにより、ＨＤＲによって配列が回復されて、ＧＦＰ＋細胞が得られた。
【０５０２】
ＧＦＰ陽性細胞の個体数は、相同組換え修復の効率と正比例する。
【０５０３】
これらのアッセイのために、２つが一体化したＣａｓ９−ｓｇＲＮＡおよびｅＧＦＰドナー鋳型ベクターを、Ａｍａｘａヌクレオフェクター（Ｌｏｎｚａ）を使用する電気穿孔によってＨＥＫ２９３  ＥＧＩＰ細胞に導入して、Ｃａｓ９−ｓｇＲＮＡおよびｅＧＦＰドナー鋳型の合成を駆動する。化合物を、トランスフェクションの１６時間後に添加し、その４８時間後に培地を交換する。次に、細胞をさらに７２時間増殖させた後、ＦＡＣＳ解析を行う。
【０５０４】
ＨＤＲドナー鋳型配列は、２６６ヌクレオチドの５’相同性アーム（ボールド体、黒色および下線付き）および３７８ヌクレオチドの３’相同性アーム（イタリック体および下線付き）を含有していた（以下の配列番号１を参照）。ガイドＲＮＡおよびドナー鋳型のトランスフェクション時に、破壊されたｅＧＦＰ内のＡＡＶＳ１部位が切断され、ドナー構築物が、停止コドンおよびＡＡＶＳ１挿入断片を除去して相同配列を提供して、ｅＧＦＰを修復する。
【０５０５】
トラフィックライトレポーターアッセイで使用されるＨＤＲ鋳型配列を、以下に示す（配列番号１）：
【化２６０】
2021511314.tif 000287
【化２６１】
2021511314.tif 000288
【０５０６】
本明細書に記載されるアッセイのために使用されるプライマー部位を、以下に示す。これらのプライマー部位は、ドナー配列内に位置している。ゲノム鋳型上のＰＣＲ反応により、７００ヌクレオチドの生成物が作製され、ＮＨＥＪが長さ約３００ヌクレオチドおよび４００ヌクレオチドの断片を生成すると予測される。ＨＤＲ事象後、供給されたドナー鋳型を使用して予測されるＰＣＲ生成物は、６４４ヌクレオチドである。アッセイのために使用されるプライマー部位は、以下の配列を含む。
【０５０７】
ガイドＲＮＡ＿１：
【化２６２】
2021511314.tif 000289
【０５０８】
ガイドＲＮＡ＿２：
【化２６３】
2021511314.tif 000290
【０５０９】
Ｓｕｒｖｅｙｏｒフォワードプライマー：
【化２６４】
2021511314.tif 000291
【０５１０】
Ｓｕｒｖｅｙｏｒリバースプライマー：
【化２６５】
2021511314.tif 000292
【０５１１】
ＨＤＲプライマー＿１：
【化２６６】
2021511314.tif 000293
【０５１２】
ＨＤＲプライマー＿２：
【化２６７】
2021511314.tif 000294
【０５１３】
（実施例３）
ＣＲＩＳＰＲ−ゲノム編集ＨＤＲの有効性を増大させるＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の評価
【０５１４】
ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞に、以下の構築物をヌクレオフェクトし、記載される通り培養する。二重発現ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９だけ、二重発現ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９とドナー修復鋳型、二重発現ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９とドナー鋳型および２．５μＭの化合物１を伴う細胞培養物、ならびに二重発現ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９とドナー修復鋳型および２．５μＭの推定リガーゼＩＶ阻害剤Ｓｃｒ７を伴う細胞培養物。細胞を、式（Ｉ）の化合物またはＳｃｒ７と２４時間接触させる。
【０５１５】
ＣＲＩＳＰＲ−ゲノム編集ＨＥＫ−ＥＧＩＰ細胞の量の増加を、ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９およびドナー鋳型条件だけと比較して評価する。ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９およびドナー鋳型をヌクレオフェクトしたＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞の培地への式（Ｉ）の化合物の添加を、ＣＲＩＳＰＲ−ゲノム編集ＨＥＫ−ＥＧＩＰ細胞の量の増加について、ｇＲＮＡ−Ｃａｓ９およびドナー鋳型条件だけと比較して評価する。
【０５１６】
一部の実施形態では、ドナー修復鋳型の存在下でＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムを使用するＤＮＡ修復プロセスの増強の増加倍率を、蛍光活性化細胞選別機（ＦＡＣＳ）によって定量する。トランスフェクションの１０日後にフローサイトメトリー分析を実施する。フローサイトメトリー実験は、三連で行う。
【０５１７】
一部の実施形態では、ロバストな「トラフィックライトレポーター」（ＴＬＲ）アッセイを使用して（図１Ｂ）、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムにおけるＨＤＲ媒介性ＤＮＡ修復プロセスの増強の増加倍率を定量する。ＴＬＲシステムでは、「破壊された」緑色蛍光タンパク質ｅＧＦＰを発現するＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ安定細胞系は、ＤＮＡドナー鋳型の存在下でＨＤＲ媒介性修復に依存して機能的ｅＧＦＰを作製する（図１Ｂおよび１Ｃを参照）。図１Ｃの実験ワークフローに示される通り、機能的ＧＦＰ陽性細胞は、ＨＤＲ経路を介して出現し、そこで５６ｎｔの挿入が正しいＤＮＡ配列で置き換えられる。電気穿孔によるトランスフェクションの４８時間後に、通常、ＧＦＰ陽性細胞が出現する。フローサイトメトリー分析は、三連で実施する。
【０５１８】
（実施例５）
ＨＤＲによるゲノム編集を増加するための小分子ＮＨＥＪ阻害剤の比較
【０５１９】
本明細書に記載される化合物のいずれかのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤と接触した後のＨＤＲ効率を確認するために、ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞系を利用してさらなる実験を実施する。
【０５２０】
これらの実験のために、ＨＥＫ２９３−ＥＧＩＰ細胞に、ドナー鋳型だけ、またはドナー鋳型およびＣａｓ９−ｓｇＲＮＡをヌクレオフェクトする。本明細書に記載される化合物がＨＤＲ編集を増強する能力を試験するために、ドナー鋳型単独、またはドナー鋳型およびＣａｓ９−ｓｇＲＮＡのいずれかをヌクレオフェクトされる細胞に、Ｓｃｒ７、または本明細書に記載されるＤＮＡ−ＰＫ阻害剤のいずれかを投与する。
【０５２１】
ＨＤＲによる組換え状況を、従来の「エンドポイント」ＰＣＲプライマー遺伝子型判定およびアガロースバンド強度に基づく定量化によって確認する。プライマーは、未改変細胞に対応する２１９ｂｐのヌクレオチドバンドおよびＨＤＲ事象に関する１６３ｂｐのヌクレオチド生成物の、別個のアンプリコンを生成した。＞２．５％のゲル上のこれらのバンド強度により、Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｅｒを使用するデンシトメトリーによってＨＤＲを推定することが可能になる。この技術により、ＮＨＥＪ阻害剤によってＨＤＲを改善するための条件を相対的にランク付けすることが可能になる。これらのアッセイのための遺伝子型判定用のＰＣＲプライマー対を、以下に示す。
【０５２２】
ＨＤＲプライマー＿１  
【化２６８】
2021511314.tif 000295
【０５２３】
ＨＤＲプライマー＿２  
【化２６９】
2021511314.tif 000296
【０５２４】
Ｃａｓ９タンパク質およびｓｇＲＮＡは、ＳＢＩから購入したベクターシステムの代わりに、合成ＲＮＡの形態で送達することができる。本発明者らの内部でのゲノム編集実験では、ＨＤＲ効率の強化に加えて、リボ核タンパク質タンパク質（ＲＮＰ）トランスフェクション後の細胞生存率が、ＤＮＡトランスフェクションと比較して高いことが示された。さらに、Ｓ／Ｇ２フェーズの細胞同期化も、ＨＤＲを刺激することができる（Ｌｉｎ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｌｉｆｅ．  ２０１４  Ｄｅｃ  １５；３，  ２０１４）。これらの新しい戦略、ならびにデジタルドロップレットＰＣＲおよび次世代シークエンシングなどのゲノム編集のロバストな検出は、治療目的および研究目的の両方に合わせてゲノム編集を合理化するために使用される。
【０５２５】
（実施例６）
遺伝子編集を増加するためのＤＮＡ−ＰＫ阻害剤化合物の投与の評価
【０５２６】
標的遺伝子の編集を可能にするＤＮＡ−ＰＫ阻害剤の能力を確認するためのアッセイを実施する。これらのアッセイのために、Ｓｅｒｐｉｎ  Ａ１遺伝子のＭ型からＺ型への編集をアセスメントする。この目的を達成するために、Ｈｕｈ７肝細胞の癌細胞に、ＫｐｎＩ部位を導入されたドナー修復鋳型を伴ってまたは伴わずに、ｇＲＮＡおよびＣａｓ９タンパク質をヌクレオフェクトする。次に、ヌクレオフェクトした細胞を、ＤＭＳＯまたは２．５μＭの本明細書に記載されるＤＮＡ−ＰＫ阻害剤化合物の存在下で３日間培養し、その後、ゲノムＤＮＡを増幅し、Ｋｐｎ部位の導入についてアセスメントする。
【０５２７】
アッセイは、以下の通り作用する。ＳｅｒｐｉｎＡ１遺伝子が編集される場合、Ｋｐｎエンドヌクレアーゼは遺伝子断片を消化することができ、その結果、ＳｅｒｐｉｎＡ１遺伝子が編集される場合だけ、ゲル上に消化されたバンドが出現する。それとは逆に、ＳｅｒｐｉｎＡ１が編集されない場合、Ｋｐｎエンドヌクレアーゼは遺伝子断片を切断することができず、したがって、消化された新しいバンドはゲル上に出現しない。
【０５２８】
前述の発明は、明瞭な理解という目的のため、例示および実施例としていくらか詳細に記載されているが、本発明の教示を考慮して、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、ある特定の変更および改変が本発明になされ得ることは当業者には容易に明らかとなろう。
【０５２９】
本明細書に提供されるすべての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、すべての略語、記号および慣習は、現代の科学文献で使用されるものと合致する。例えば、Ｊａｎｅｔ  Ｓ．  Ｄｏｄｄ，  ｅｄ．，  Ｔｈｅ  ＡＣＳ  Ｓｔｙｌｅ  Ｇｕｉｄｅ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ａｕｔｈｏｒｓ  ａｎｄ  Ｅｄｉｔｏｒｓ，  ２ｎｄ  Ｅｄ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．：  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  １９９７を参照のこと。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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