(57)【要約】  本開示は、一般に免疫調節剤として有用な化合物に関連するものである。本明細書では、化合物、その化合物を含む組成物、およびそれらの使用方法を提供する。本発明はさらに、がんおよび感染症を含む様々な疾患の治療に有効な、本開示に記載の少なくとも1つの化合物を含む医薬組成物に関連するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2021516232.tif 000055
［式中、
mは、0、1、または2であり；
n'は、1、2、または3であり；
Zは、水素、-CH3、-O(CH2)nXおよび-O(CH2)nArから選択され；ここで
nは、1、2、3、または4であり；
Xは、水素、-CH3、-CF3、CN、-CO2R1、-C(O)NH2、OR1、およびピロリドニルから選択され；
R1は、HまたはC1-C3アルキルであるが；但し、nが1のとき、R1は、C1-C3アルキルであり；
Arは、ベンゾジオキサニル、インダゾリル、イソキノリニル、イソオキサゾリル、ナフチル、オキサジアゾリル、フェニル、ピリジニル、ピリミジニル、およびキノリニルから選択されるが；但し、各環は、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルアミノ、C1-C4アルキル、(C1-C4アルキル)カルボニル、(C1-C4アルキル)スルホニル、アミド、アミノカルボニル、アミノカルボニル(C1-C3アルキル)、-(CH2)qCO2C1-C4アルキル、-(CH2)qOH、カルボキシ、シアノ、ホルミル、ハロゲン、ハロC1-C4アルキル、ハロC1-C4アルコキシ、ニトロ、1個のシアノ基で適宜置換されていてもよいフェニル、1個のハロゲンで適宜置換されていてもよいフェニルオキシ、フェニルカルボニル、ピロール、およびテトラヒドロピランから独立して選択される、1、2、3、または4個の置換基で適宜置換されていてもよく；ここで
qは、0、1、2、3、または4であり；
R2は、水素、C1-C3アルキル、シアノ、ハロゲン、およびハロC1-C3アルキルから選択され；
R3は、
【化２】
2021516232.tif 000056
から選択され；ここで
vは、1または2であり；
環Aは、1個の窒素原子を有する5または6員環であり、環中の炭素原子を介して親分子に接続し；および
Rvは、C1-C3アルキル、C1-C3アルキルカルボニルアミノ、およびヒドロキシから選択され；
但し、R3が
【化３】
2021516232.tif 000057
のとき、n'は、2または3であり；
各R4は、C2-C4アルケニル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シアノ、ハロゲン、およびハロC1-C4アルキルから独立して選択され；および
R5は、-(CH2)pCHO、-(CH2)pCO2H、-(CH2)wOH、-C(O)NR100R101、-CH(CH3)NRqR8、および-(CH2)wNRqR8から選択され；ここで
R100およびR101は、水素、C1-C6アルキル、および別のヒドロキシ基で適宜置換されていてもよいヒドロキシ(C1-C6アルキル)から選択されるか；または
R100およびR101は、接続する窒素原子と一体になって、カルボキシ基で適宜置換されていてもよい6員環を形成し；
pは、0、1、2、または3であり；
wは、1、2、3、または4であり；
Rqは、水素、C1-C4アルキル、ベンジル、(C3-C6シクロアルキル)C1-C3アルキル、ハロC1-C4アルキル、別のヒドロキシ基で適宜置換されていてもよいヒドロキシC1-C6アルキル、およびシアノ基で適宜置換されていてもよいピリジニル(C1-C3アルキル)から選択され；および
R8は、水素、C1-C4アルキル、-(CH2)nN(CH3)2、カルボキシC2-C6アルケニル、カルボキシC1-C6アルキル、およびヒドロキシC1-C6アルキルから選択され；ここでカルボキシC1-C6アルキルおよびヒドロキシC1-C6アルキルのアルキル部分は、下記で適宜置換されてもよく：1個のヒドロキシ基またはフェニル基、そのフェニル基はさらに以下で適宜置換されてもよく、ヒドロキシ基；
【化４】
2021516232.tif 000058
；および
Rwは-CONH2であり；
R9は、水素、ベンジル、およびメチルから選択され；
各R9'は、水素およびC1-C3アルキルから独立して選択され；
R10は、水素、C1-C3アルキル、およびベンジルから選択され；
R11は、C2-C4アルケニルおよびC1-C4アルキルから選択され；および
R60は、水素、C1-C6アルキル、およびC1-C6アルコキシカルボニルから選択されるか；または
R8およびRqは、接続する窒素原子と一体になって、
【化５】
2021516232.tif 000059
から選択される環を形成し；ここで
sは、0、1、または2であり；
zは、0、1、または2であり；
Q'は、CHR13''、S、O、NH、NC(O)OC1-C6アルキル、N(CH2)2OH、およびNCH3から選択され；
R12およびR12'は、水素、-CO2H、ヒドロキシC1-C4アルキル、オキソ、および-C(O)NHSO2R16から独立して選択され；
R13およびR13'は、水素、ヒドロキシC1-C4アルキル、オキソ、および-CO2Hから独立して選択され；
R13''は、ヒドロキシC1-C3アルキル、および-CO2Hから選択され；
各R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C6アルキル、カルボキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキル、-NRc'Rd'、およびフェニルオキシカルボニル(ここでフェニルは、ニトロ基で適宜置換されていてもよく、Rc'およびRd'は、水素、C1-C4アルコキシカルボニルおよびC1-C4アルキルカルボニルから独立して選択される)から独立して選択され；および
R16は、トリフルオロメチル、シクロプロピル、C1-C4アルキル、ジメチルアミノ、およびメチル基で置換されたイミダゾリルから選択される］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
R3が、
【化６】
2021516232.tif 000060
から選択される請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
R3が、
【化７】
2021516232.tif 000061
である請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
R2が、ハロゲンである請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
Zが、-O(CH2)nArであり；但し、nが、1であり、およびArが、1個のシアノ基で置換されたピリジニルである請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
mが、1であり、およびR4が、ハロゲンである請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
R5が、
【化８】
2021516232.tif 000062
である請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
R5が、
【化９】
2021516232.tif 000063
である請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
R5が、-CH2OHである請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
R5が、
【化１０】
2021516232.tif 000064
である請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
式中、
Zは、-O(CH2)nArであるが；但し、nは、1であり、およびArは、1個のシアノ基で置換されたピリジニルであり；
R2は、ハロゲンであり；
R3は、
【化１１】
2021516232.tif 000065
から選択され；
mは、1であり；
R4は、ハロゲンであり；および
R5は、
【化１２】
2021516232.tif 000066
および-CH2OHから選択される、請求項1の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
(2S)-1-(5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(2R)-2-((5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル；
((R)-2-((5-クロロ-4-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-2-((5-クロロ-4-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-2-((5-クロロ-4-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル;
(R)-2-((5-クロロ-4-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(2R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-2-(ヒドロキシメチル)-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(2S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-ピペリジン-2-カルボン酸；
(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-L-ホモセリン；
(2R)-2-((4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(2S)-1-(4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-L-ホモセリン；
(2R)-2-((5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；および
(5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-L-ホモセリン；
から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれの化合物、またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１４】
免疫応答を強化、刺激、調節、および/または増大するための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の請求項1〜12のいずれの化合物またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、方法。
【請求項１５】
がん細胞の成長、増殖、または転移を阻害するための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の請求項1〜12のいずれの化合物または医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、一般にPD-1/PD-L1(タンパク質/タンパク質)、およびCD80/PD-L1(タンパク質/タンパク質)相互作用の阻害剤として有用な化合物に関連するものを開示する。本明細書では、化合物、その化合物を含む組成物、およびそれらの使用方法を提供する。本開示はさらに、癌および感染症を含む様々な疾患の治療に有用な、本開示に記載の少なくとも1つの化合物を含む医薬組成物に関連するものである。
【０００２】
Programmed death-1(CD279)は、T細胞上の受容体であり、そのリガンド、Programmed death-リガンド1(PD-L1、CD274、B7-H1)またはPD-L2(CD273、B7-DC)のいずれかが結合したときに、T細胞受容体からの活性化シグナルを抑制することが知られている(非特許文献1)。T細胞上に発現しているPD-1が、PD-1のリガンドを発現している細胞に接触すると、増殖、サイトカイン分泌、および細胞溶解活性を含む、抗原刺激に応答する機能的活性が抑えられる。PD-1/PD-リガンド相互作用は、感染症または腫瘍の治癒、または自己免疫寛容を構築する間に免疫応答を下方調整する(非特許文献2)。例えば腫瘍疾患または慢性感染症の間に起こる慢性抗原刺激は、T細胞が高いPD-1レベルを発現し、慢性抗原に対する活性が機能不全となる(非特許文献3のレビュー)。これは「T細胞疲弊」と呼ばれる。B細胞もまたPD-1/PD-リガンド抑制および「疲弊」を示す。
【０００３】
PD-L1はCD80と相互作用することも知られている(非特許文献4)。発現している免疫細胞に対するPD-L1/CD80の相互作用は、阻害性相互作用であることが知られている。この相互作用を遮断することにより、この阻害性相互作用は撤回されることが知られている(非特許文献5、非特許文献6)。
【０００４】
PD-L1に対する抗体を利用してPD-1/PD-L1相互作用を遮断することは、多くのシステムにおけるT細胞活性化を修復、強化することが知られている。進行がん患者にとって、PD-L1に対するモノクローナル抗体を用いた治療は有用である(非特許文献7)。腫瘍の前臨床動物モデルでは、モノクローナル抗体によるPD-1/PD-L1経路の遮断は、免疫応答を高め、組織学的に明らかな数多くの腫瘍に対する免疫応答を行い得ることが分かった(非特許文献8、非特許文献9)。
【０００５】
PD-1/PD-L1相互作用を阻害することは、慢性感染症システムにおけるT細胞の活性を高めることも分かった。マウスの慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス感染症は、PD-L1遮断により、ウイルスの除去の促進や、免疫修復も表す(非特許文献10)。HIV-1に感染したヒト化マウスはウイルス血症に対する防御力を強化し、CD4+T細胞のウイルス性消耗を低下させることを示す(非特許文献11)。PD-L1に対するモノクローナル抗体を用いたPD-1/PD-L1遮断により、HIV患者(非特許文献12〜非特許文献19)、HCV患者(非特許文献20〜非特許文献24)またはHBV患者(非特許文献25〜非特許文献32)から得るT細胞に対する抗原特異的機能性を、インビトロで修復し得る。
【０００６】
PD-L1/CD80の相互作用の遮断は、免疫を刺激することも知られている(非特許文献33)。PD-L1/CD80の相互作用の遮断により起こる免疫刺激は、さらにPD-1/PD-L1またはPD-1/PD-L2相互作用の遮断を組み合わせることにより高められることが知られている。
【０００７】
免疫細胞表現型の変形は、敗血症性ショックにおける重要な因子であると仮定されている(非特許文献34)。これらにはPD-1およびPD-L1レベル、およびT細胞アポトーシスの増加が含まれる(非特許文献35)。PD-L1を対象にした抗体は、免疫細胞アポトーシスのレベルを減少し得る(非特許文献36)。さらに、PD-1欠損型マウスは野生型マウスより敗血症性ショック症状に対してより耐性がある(非特許文献37)。研究により、抗体を用いてPD-L1の相互作用を遮断することは、不適当な免疫応答を抑制し、疾患症状を改善し得ることが明らかになった。
【０００８】
慢性抗原に対する免疫応答を高めることに加え、PD-1/PD-L1経路の遮断は、慢性感染症の状態における治療型ワクチン接種を含む、ワクチン接種に対する応答を高めることも知られている(非特許文献38、非特許文献39、非特許文献40)。
【０００９】
PD-1経路は、慢性感染症および腫瘍疾患の期間の慢性抗原刺激に起因する、T細胞疲弊において鍵となる阻害性分子である。PD-L1タンパク質を標的とすることによるPD-1/PD-L1相互作用の遮断は、腫瘍または慢性感染症の状態でのワクチン接種に対する応答を高めることを含めて、インビトロおよびインビボで抗原特異的T細胞免疫機能を修復することが知られている。従って、PD-L1とPD-1またはCD80のいずれかとの相互作用を阻止する薬剤が望まれている。
【００１０】
出願人は、PD-L1とPD-1およびCD80との相互作用の阻害剤としての活性を有し、それ故癌または感染症において、免疫を高めるための治癒的投与(治療型ワクチンを含む)に有用であってもよい、強力な化合物を発見した。これらの化合物は、望ましい安定性、バイオアベイラビリティ、治療指数、および化合物のドラッグアビリティにとって重要な毒性値も持ち、有用な薬剤として提供される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Sharpe et al., Nat. Imm. 2007
【非特許文献２】Keir Me, Butte MJ, Freeman GJ, et al. Annu. Rev. Immunol.  2008; 26: Epub
【非特許文献３】Kim and Ahmed, Curr Opin Imm, 2010
【非特許文献４】Butte MJ et al., Immunity 27:111-122 (2007)
【非特許文献５】Paterson AM, et al., J Immunol., 187:1097-1105 (2011)
【非特許文献６】Yang J, et al.  J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)
【非特許文献７】Brahmer et al., New Engl J Med 2012
【非特許文献８】Dong H, Chen L. J Mol Med. 2003; 81(5):281 287
【非特許文献９】Dong H, Strome SE, Salamoa DR, et al. Nat Med. 2002; 8(8):793-800
【非特許文献１０】Barber DL, Wherry EJ, Masopust D, et al. Nature 2006; 439(7077):682-687
【非特許文献１１】Palmer et al., J. Immunol 2013
【非特許文献１２】Day, Nature 2006
【非特許文献１３】Petrovas, J. Exp. Med. 2006
【非特許文献１４】Trautman, Nature Med. 2006
【非特許文献１５】D'Souza, J.Immunol. 2007
【非特許文献１６】Zhang, Blood 2007
【非特許文献１７】Kaufmann, Nature Imm. 2007
【非特許文献１８】Kasu, J. Immunol. 2010
【非特許文献１９】Porichis, Blood 2011
【非特許文献２０】Golden-Mason, J. Virol. 2007
【非特許文献２１】Jeung, J. Leuk. Biol. 2007
【非特許文献２２】Urbani, J. Hepatol. 2008
【非特許文献２３】Nakamoto, PLoS Path. 2009
【非特許文献２４】Nakamoto, Gastroenterology 2008
【非特許文献２５】Boni, ,J. Virol. 2007
【非特許文献２６】Fisicaro, Gastro. 2010
【非特許文献２７】Fisicaro et al., Gastroenterology, 2012
【非特許文献２８】Boni et al., Gastro., 2012
【非特許文献２９】Penna et al., J Hep, 2012
【非特許文献３０】Raziorrough, Hepatology 2009
【非特許文献３１】Liang, World J Gastro. 2010
【非特許文献３２】Zhang, Gastro. 2008
【非特許文献３３】Yang J., et al., J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)
【非特許文献３４】Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol (2013)
【非特許文献３５】Guignant, et al, Crit. Care (2011)
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【非特許文献３７】Yang J., et al., J Immunol. Aug 1;187(3):1113-9 (2011)
【非特許文献３８】S. J. Ha, S. N. Mueller, E. J. Wherry et al., The Journal of Experimental Medicine, vol. 205, no. 3, pp. 543-555, 2008
【非特許文献３９】A. C. Finnefrock, A. Tang, F. Li et al., The Journal of Immunology, vol. 182, no. 2, pp. 980-987, 2009
【非特許文献４０】M. -Y. Song, S. -H. Park, H. J. Nam, D. -H. Choi, and Y.-C. Sung, The Journal of Immunotherapy, vol. 34, no. 3, pp. 297-306, 2011
【発明を実施するための形態】
【００１２】
第1態様において、本開示は式(I)
【化１】
2021516232.tif 000002
［式中、
mは、0、1、または2であり；
n'は、1、2、または3であり；
Zは、水素、-CH3、-O(CH2)nXおよび-O(CH2)nArから選択されるが；ここで
nは、1、2、3、または4であり；
Xは、水素、-CH3、-CF3、CN、-CO2R1、-C(O)NH2、OR1、およびピロリドニルから選択され；
R1は、HまたはC1-C3アルキルであるが；但し、nが1のとき、R1は、C1-C3アルキルであり；
Arは、ベンゾジオキサニル、インダゾリル、イソキノリニル、イソオキサゾリル、ナフチル、オキサジアゾリル、フェニル、ピリジニル、ピリミジニル、およびキノリニルから選択されるが；但し、各環は、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルアミノ、C1-C4アルキル、(C1-C4アルキル)カルボニル、(C1-C4アルキル)スルホニル、アミド、アミノカルボニル、アミノカルボニル(C1-C3アルキル)、-(CH2)qCO2C1-C4アルキル、-(CH2)qOH、カルボキシ、シアノ、ホルミル、ハロゲン、ハロC1-C4アルキル、ハロC1-C4アルコキシ、ニトロ、1個のシアノ基で適宜置換されていてもよいフェニル、1個のハロゲンで適宜置換されていてもよいフェニルオキシ、フェニルカルボニル、ピロール、およびテトラヒドロピランから独立して選択される、1、2、3、または4個の置換基で適宜置換されていてもよく；ここで
qは、0、1、2、3、または4であり；
R2は、水素、C1-C3アルキル、シアノ、ハロゲン、およびハロC1-C3アルキルから選択され；
R3は、
【化２】
2021516232.tif 000003
から選択され；ここで
vは、1または2であり；
環Aは、1個の窒素原子を有する5または6員環であり、環中の炭素原子を介して親分子に接続し；および
Rvは、C1-C3アルキル、C1-C3アルキルカルボニルアミノ、およびヒドロキシから選択され；
但し、R3が
【化３】
2021516232.tif 000004
のとき、n'は、2または3であり；
各R4は、C2-C4アルケニル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シアノ、ハロゲン、およびハロC1-C4アルキルから独立して選択され；および
R5は、-(CH2)pCHO、-(CH2)pCO2H、-(CH2)wOH、-C(O)NR100R101、-CH(CH3)NRqR8、および-(CH2)wNRqR8から選択され；ここで
R100およびR101は、水素、C1-C6アルキル、および別のヒドロキシ基で適宜置換されていてもよいヒドロキシ(C1-C6アルキル)から選択されるか；または
R100およびR101は、接続する窒素原子と一体になって、カルボキシ基で適宜置換されていてもよい6員環を形成し；
pは、0、1、2、または3であり；
wは、1、2、3、または4であり；
Rqは、水素、C1-C4アルキル、ベンジル、(C3-C6シクロアルキル)C1-C3アルキル、ハロC1-C4アルキル、別のヒドロキシ基で適宜置換されていてもよいヒドロキシC1-C6アルキル、およびシアノ基で適宜置換されていてもよいピリジニル(C1-C3アルキル)から選択され；および
R8は、水素、C1-C4アルキル、-(CH2)nN(CH3)2、カルボキシC2-C6アルケニル、カルボキシC1-C6アルキル、およびヒドロキシC1-C6アルキルから選択され；ここでカルボキシC1-C6アルキルおよびヒドロキシC1-C6アルキルのアルキル部分は、下記で適宜置換されてもよく：1個のヒドロキシ基またはフェニル基、そのフェニル基はさらに以下で適宜置換されてもよく、ヒドロキシ基；
【化４】
2021516232.tif 000005
；および
Rwは-CONH2であり；
R9は、水素、ベンジル、およびメチルから選択され；
各R9'は、水素およびC1-C3アルキルから独立して選択され；
R10は、水素、C1-C3アルキル、およびベンジルから選択され；
R11は、C2-C4アルケニルおよびC1-C4アルキルから選択され；および
R60は、水素、C1-C6アルキル、およびC1-C6アルコキシカルボニルから選択されるか；または
R8およびRqは、接続する窒素原子と一体になって、
【化５】
2021516232.tif 000006
から選択される環を形成し；ここで
sは、0、1、または2であり；
zは、0、1、または2であり；
Q'は、CHR13''、S、O、NH、NC(O)OC1-C6アルキル、N(CH2)2OH、およびNCH3から選択され；
R12およびR12'は、水素、-CO2H、ヒドロキシC1-C4アルキル、オキソ、および-C(O)NHSO2R16から独立して選択され；
R13およびR13'は、水素、ヒドロキシC1-C4アルキル、オキソ、および-CO2Hから独立して選択され；
R13''は、ヒドロキシC1-C3アルキル、および-CO2Hから選択され；
各R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C6アルキル、カルボキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキル、-NRc'Rd'、およびフェニルオキシカルボニル(ここでフェニルは、ニトロ基で適宜置換されていてもよく、Rc'およびRd'は、水素、C1-C4アルコキシカルボニルおよびC1-C4アルキルカルボニルから独立して選択される)から独立して選択され；および
R16は、トリフルオロメチル、シクロプロピル、C1-C4アルキル、ジメチルアミノ、およびメチル基で置換されたイミダゾリルから選択される］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１３】
第1態様の第1の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR3は、
【化６】
2021516232.tif 000007
から選択される)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１４】
第1態様の第2の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR3は、
【化７】
2021516232.tif 000008
である)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
第1態様の第3の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR2は、ハロゲンである)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１６】
第1態様の第4の実施態様において、本開示は、式(I)［ここでZは、-O(CH2)nArであり；但し、nは、1であり、およびArは、1個のシアノ基で置換されたピリジニルである］の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１７】
第1態様の第5の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでmは、1であり、およびR4は、ハロゲンである)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１８】
第1態様の第6の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR5は、
【化８】
2021516232.tif 000009
である)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１９】
第1態様の第7の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR5は、
【化９】
2021516232.tif 000010
である)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００２０】
第1態様の第8の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR5は、-CH2OHである)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００２１】
第1態様の第9の実施態様において、本開示は、式(I)(ここでR5は、
【化１０】
2021516232.tif 000011
である)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００２２】
第1態様の第10の実施態様において、本開示は、式(I)[式中、
Zは、-O(CH2)nArであるが；但し、nは1であり、およびArは1個のシアノ基で置換されたピリジニルであり；
R2は、ハロゲンであり；
R3は、
【化１１】
2021516232.tif 000012
から選択され；
mは、1であり；
R4は、ハロゲンであり；および
R5は、
【化１２】
2021516232.tif 000013
および-CH2OHから選択される］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００２３】
第2態様において、本開示は、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２４】
第3態様において、本開示は、免疫応答を強化、刺激、調整および/または増加させるための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。第3態様の第1の実施態様において、さらに、式(I)の化合物、またはその医薬的に許容される塩を投与する前または後、または同時に、別の薬剤を投与する方法を提供する。第2の実施態様において、別の薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性薬、遺伝子発現モジュレーター剤、および/または免疫応答修飾因子である。
【００２５】
第4態様において、本開示は、癌細胞の成長、増殖、または転移を抑制するための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物または医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。第4態様の第1の実施態様において、がんは、黒色腫、腎細胞がん、扁平上皮非小細胞性肺がん(NSCLC)、非扁平上皮NSCLC、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺がん、卵巣癌、胃癌、肝細胞がん、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮細胞がん、食道、消化管および乳房の癌、および造血器腫瘍から選択される。
【００２６】
第5態様において、本開示は、感染性疾患を治療するための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。第5態様の第1の実施態様において、感染性疾患は、ウイルスによって引き起こされる。第5態様の第2の実施態様において、そのウイルスは、HIV、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、およびインフルエンザから選択される。
【００２７】
第6態様において、本開示は、敗血症性ショックを治療するための、それが必要な患者に対する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。
【００２８】
本明細書において特に断りが無い限り、単数形で表される参照は複数も含んでもよい。例えば、「a」および「an」は「1」、または「1以上」のどちらを参照してもよい。
【００２９】
本明細書で用いられる、フレーズ「化合物またはその医薬的に許容される塩」とは、少なくとも1つの化合物、少なくとも1つの化合物の塩、またはその組み合わせをいう。例えば、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩には、式(I)の化合物単体；2つの式(I)の化合物；式(I)の化合物の塩単体；式(I)の化合物および1つ以上の式(I)の化合物の塩；および2つ以上の式(I)の化合物の塩が含まれる。
【００３０】
特に断りが無い限り、原子価が満たされていないいずれの原子にも、原子価を満たすために十分な水素原子が含まれると見なされる。
【００３１】
本明細書を通して、その基および置換基は、安定した部分および化合物を提供するように当業者により選択され得る。
【００３２】
本開示を記載するのに使用される種々の用語の定義が以下に列挙される。これらの定義は、(特定の場合で限定されない限り)個々に、またはより大きな基の一部として、明細書を通して使用される用語に適用される。ここに記載の定義は、引用により本願明細書に組み込まれた、あらゆる特許、特許出願および/または特許出願公報に記載の定義にも優先する。
【００３３】
本明細書で用いられる、用語「C2-C4アルケニル」とは、1つまたは2つの二重結合を有する2〜4個の炭素原子の炭化水素をいう。
【００３４】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルコキシ」とは、酸素原子を介して親分子の一部に接続するC1-C4アルキル基をいう。
【００３５】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルコキシカルボニル」とは、カルボニル基を介して親分子の一部に接続するC1-C4アルコキシ基をいう。
【００３６】
本明細書で用いられる、用語「C1-C6アルコキシカルボニル」とは、カルボニル基を介して親分子の一部に接続するC1-C6アルコキシ基をいう。
【００３７】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルコキシカルボニルアミノ」とは、-NH基を介して親分子の一部に接続するC1-C4アルコキシカルボニル基をいう。
【００３８】
本明細書で用いられる、用語「C1-C3アルキル」とは、1〜3個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
【００３９】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルキル」とは、1〜4個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
【００４０】
本明細書で用いられる、用語「C1-C6アルキル」とは、1〜6個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
【００４１】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルキルカルボニル」とは、カルボニル基を介して親分子の一部に接続するC1-C4アルキル基をいう。
【００４２】
本明細書で用いられる、用語「C1-C3アルキルカルボニルアミノ」とは、RaC(O)NH-をいい、ここでRaは、C1-C3アルキル基である。
【００４３】
本明細書で用いられる、用語「C1-C4アルキルスルホニル」とは、スルホニル基を介して親分子の一部に接続するC1-C4アルキル基をいう。
【００４４】
本明細書で用いられる、用語「アミド」とは、-C(O)NH2をいう。
【００４５】
本明細書で用いられる、用語「アミノカルボニル」とは、-C(O)NH2をいう。
【００４６】
本明細書で用いられる、用語「アミノカルボニル(C1-C3アルキル)」とは、C1-C3アルキル基を介して親分子の一部に接続するアミノカルボニル基をいう。
【００４７】
本明細書で用いられる、用語「カルボニル」とは、-C(O)-をいう。
【００４８】
本明細書で用いられる、用語「カルボキシ」とは、-CO2Hをいう。
【００４９】
本明細書で用いられる、用語「カルボキシC2-C6アルケニル」とは、C2-C6アルケニル基を介して親分子の一部に接続するカルボキシ基をいう。
【００５０】
本明細書で用いられる、用語「カルボキシC1-C6アルキル」とは、C1-C6アルキル基を介して親分子の一部に接続するカルボキシ基をいう。
【００５１】
本明細書で用いられる、用語「シアノ」とは、-CNをいう。
【００５２】
本明細書で用いられる、用語「C3-C6シクロアルキル」とは、3〜6個の炭素原子および0個のヘテロ原子を有する飽和単環式炭化水素環システムをいう。シクロアルキル基の典型例として、以下に限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００５３】
本明細書で用いられる、用語「(C3-C6シクロアルキル)C1-C3アルキル」とは、C3-C6シクロアルキル基で置換されたC1-C3アルキル基をいう。
【００５４】
本明細書で用いられる、用語「ホルミル」とは、-C(O)Hをいう。
【００５５】
本明細書で用いられる、用語「ハロ」および「ハロゲン」とは、F、Cl、Br、またはIをいう。
【００５６】
本明細書で用いられる、用語「ハロC1-C4アルコキシ」とは、酸素原子を介して親分子の一部に接続するハロC1-C4アルキル基をいう。
【００５７】
本明細書で用いられる、用語「ハロC1-C3アルキル」とは、1、2、または3個のハロゲン原子で置換されたC1-C3アルキル基をいう。
【００５８】
本明細書で用いられる、用語「ハロC1-C4アルキル」とは、1、2、または3個のハロゲン原子で置換されたC1-C4アルキル基をいう。
【００５９】
本明細書で用いられる、用語「ヒドロキシC1-C3アルキル」とは、C1-C3アルキル基を介して親分子の一部に接続するヒドロキシ基をいう。
【００６０】
本明細書で用いられる、用語「ヒドロキシC1-C4アルキル」とは、C1-C4アルキル基を介して親分子の一部に接続するヒドロキシ基をいう。
【００６１】
本明細書で用いられる、用語「ヒドロキシC1-C6アルキル」とは、C1-C6アルキル基を介して親分子の一部に接続するヒドロキシ基をいう。
【００６２】
本明細書で用いられる、用語「ニトロ」とは、-NO2をいう。
【００６３】
本明細書で用いられる、用語「オキソ」とは、=Oをいう。
【００６４】
本明細書で用いられる、用語「フェニルカルボニル」とは、カルボニル基を介して親分子の一部に接続するフェニル基をいう。
【００６５】
本明細書で用いられる、用語「フェニルオキシ」とは、酸素原子を介して親分子の一部に接続するフェニル基をいう。
【００６６】
本明細書で用いられる、用語「フェニルオキシカルボニル」とは、カルボニル基を介して親分子の一部に接続するフェニルオキシ基をいう。
【００６７】
本明細書で用いられる、用語「ピリジニル(C1-C3)アルキル」とは、C1-C3アルキル基を介して親分子の一部に接続するピリジニル基をいう。
【００６８】
本明細書で使用されるフレーズ「医薬的に許容される」とは、通常の医学的判断の範囲内において、過度な毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題、もしくは厄介な問題がなく、合理的な利益/リスク比に見合っており、ヒトおよび動物の組織と接触する使用に適した、化合物、物質、組成物、および/または投与剤形のことを示す。
【００６９】
式(I)の化合物は塩を形成し得て、その塩もまた本開示の範囲である。特に断りが無い限り、発明に関する化合物への言及はその1つ以上の塩への言及を含むと理解される。用語「塩」とは、無機および/または有機の酸および塩基により形成される酸塩および/または塩基塩を表す。さらに、用語「塩」には、例えば式(I)の化合物が、塩基性部分(例えばアミンまたはピリジンまたはイミダゾール環)および酸性部分(例えばカルボン酸)の両方を有する場合には、双性イオン(分子内塩)が含まれ得る。医薬的に許容される(すなわち、無毒かつ生理学的に許容される)塩とは、例えば、カチオンが塩の毒性または生物活性に有意に寄与しないような許容される金属塩およびアミン塩が好ましい。しかしながら、その他の塩も、例えば、製造過程で使用され得る単離または精製のステップにおいて有用な場合もあり、それ故、その他の塩も本開示の範囲であると考えられる。式(I)の化合物の塩は、例えば、式(I)の化合物を幾らかの酸または塩基(例えば1当量)と反応させることで、溶媒中、例えば塩を沈殿させるか、または水溶液を次いで凍結乾燥させることにより形成してもよい。
【００７０】
酸付加塩の典型例として、酢酸塩(例えば、酢酸またはトリハロ酢酸(例えば、トリフルオロ酢酸)から調製される酢酸塩)、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、硫酸水素塩、ホウ酸塩、ブチレート、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタノエート、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩(塩酸から調製)、臭化水素酸塩(臭化水素から調製)、ヨウ化水素酸塩、マレイン酸塩(マレイン酸から調製)、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩(メタンスルホン酸から調製)、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩(例えば硫酸から調製)、スルホン酸塩(例えば本明細書に記載のもの)、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩(例えばトシレート)、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００７１】
塩基塩の典型例として、アンモニウム塩、アルカリ金属塩(例えばナトリウム、リチウム、およびカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウムおよびマグネシウム塩)、バリウム、亜鉛、およびアルミニウム塩、有機塩基塩、例えば、有機アミン(例えばトリアルキルアミン(例えばトリエチルアミン)、プロカイン、ジベンジルアミン、N-ベンジル-β-フェネチルアミン、1-エフェナミン、N,N'-ジベンジルエチレン-ジアミン、デヒドロアビエチルアミン、N-エチルピペリジン、ベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン)、または類似の医薬的に許容されるアミン、およびアミノ酸塩(例えばアルギニン、リシン)などが挙げられる。塩基性含窒素基は、試薬(例えば低級アルキルハライド(例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルクロライド、ブロマイドおよびアイオダイド)、ジアルキル硫酸塩(例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル硫酸塩)、長鎖ハライド(例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルクロライド、ブロマイドおよびアイオダイド)、アラルキルハライド(例えば、ベンジルおよびフェネチルブロマイド)、およびその他の基)により四級化されていてもよい。好ましい塩として、一塩酸塩、硫酸水素塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩または硝酸塩が挙げられる。
【００７２】
プロドラッグの様々な形態は当該分野にて公知であり：
a) The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., Ch 31, (Academic Press, 1996);
b) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson and H. Bundgaard, eds. Ch 5, pgs 113 - 191 (Harwood Academic Publishers, 1991);および
d) Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa and Joachim M. Mayer, (Wiley-VCH, 2003)
に記載されている。
【００７３】
本開示の化合物は、不斉中心またはキラル中心の存在する立体異性体を含み得る。特定の立体化学は、キラル炭素原子周りの置換基の配置によって、「R」または「S」の記号で命名され得る。本発明は、様々な立体異性体(すなわち、エナンチオマーおよびジアステレオマー)およびその混合物を想定し、PD-L1に結合する全ての立体異性体を包含することを意図するものである。本発明の化合物のそれぞれの立体異性は、商業的に入手可能な、不斉中心またはキラル中心を有する出発物質から合成により製造され得るか、または当業者に公知の、ラセミ混合物の製造に続く分割により製造され得る。
【００７４】
加えて、式(I)の化合物は、その調製の後で、単離かつ精製され、式(I)の化合物を99%以上の量で含有する(「実質的に純粋な」)組成物を得、次にそれをここに記載されるように使用または処方する。かかる「実質的に純粋な」式(I)の化合物もまた、ここで本開示の一部であると考えられる。
【００７５】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度にまで単離しても、効果的な治療剤に製剤化しても分解しない、十分に強固な化合物であることを意図とする。本開示は安定な化合物を具現化するものとする。
【００７６】
「治療上の有効量」とは、PD-1/PD-L1(タンパク質/タンパク質)および/またはCD80/PD-L1(タンパク質/タンパク質)相互作用を阻害するのに効果的、またはがんまたは感染性疾患(例えば敗血症性ショック、HIVまたはB型肝炎、C型肝炎、およびD型肝炎)の治療または予防に効果的な、本開示の化合物の単体の量または特許請求の範囲の化合物を組み合わせた量、あるいは本開示の化合物を他の活性成分と組み合わせた量が含まれることを意図する。
【００７７】
本明細書で用いる用語「治療する」または「治療」とは、哺乳類、特にヒトにおける病態の治療に及び、(a)特に、哺乳類が病態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合に、該哺乳類が病態に罹患することを妨げること；(b)病態を抑制すること、すなわち、病態の進行を阻むこと；および/または(c)病態を緩和すること、すなわち、病態の退行を生じさせることを包含する。
【００７８】
本開示の化合物は、本化合物に存在する原子のあらゆる同位体を含有することを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、以下に限らないが、水素の同位体にはジュウテリウム(D)およびトリチウム(T)が含まれる。炭素の同位体には、13Cおよび14Cが含まれる。同位体で標識された本開示の化合物は、一般に当業者に公知の従来の技法、またはそれらに記載の類似の方法により、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体−標識試薬を用いて製造することが出来る。例えば、メチル(-CH3)は重水素化されたメチル基(例えば-CD3)も含む。
【００７９】
式(I)に記載の化合物および/またはその医薬的に許容される塩は、治療する症状に対して適切ないずれかの手段により投与され得て、それは部位特異的治療の必要性または運搬されるべき式(I)の化合物の量に依存し得る。また、本発明には、式(I)の化合物および/またはその医薬的に許容される塩および、毒性がなく、医薬的に許容される1つ以上の担体および/または希釈剤および/またはアジュバント(本明細書で「担体」と総称される物質)および、所望により他の活性成分とを含む、医薬組成物の類が含まれる。式(I)の化合物は、いずれかの適切な経路により、好ましくはそのような経路に適応する医薬組成物の形態、および予定される治療に効果的な投薬量で投与されてもよい。本発明の化合物および組成物は、例えば、経口的、経粘膜的、直腸内的、または血管内的、静脈内的、腹腔内的、皮下的、筋肉内的、および胸骨内的を含む非経口的に、医薬的に許容される従来の担体、アジュバント、およびビークルを含有する投与単位製剤にて投与されてもよい。例えば、医薬担体には、マンニトールまたはラクトースおよび微結晶セルロースの混合物を包含してもよい。該混合物は、例えば滑沢剤(例えばステアリン酸マグネシウム)および崩壊剤(例えばクロスポビドン)などの添加成分を包含してもよい。担体混合物はゼラチンカプセルに充填されてもよいか、または錠剤として圧縮されてもよい。医薬組成物は、例えば経口剤形または点滴として投与されてもよい。
【００８０】
経口投与用として、医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、液体カプセル、懸濁液、または液体の形態であってもよい。医薬組成物は、好ましくは特定の活性成分量を有する投与単位剤形で製剤化される。例えば、医薬組成物は、約0.1から1000mg、好ましくは約0.25から250mg、より好ましくは約0.5から100mgの範囲の活性成分量を含む錠剤またはカプセルとして提供されてもよい。ヒトまたはその他の哺乳類に投与する適切な1日用量は、患者の病状およびその他の要因によって大幅に変更されてもよいが、慣用的方法を用いて決定され得る。
【００８１】
本明細書で検討される医薬組成物はいずれも、例えば、許容され、かつ適切ないずれかの経口製剤を介して経口的に運搬され得る。経口製剤の典型例として、以下に限らないが、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性および油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハードおよびソフトカプセル、液体カプセル、シロップ、およびエリキシルが挙げられる。経口投与用の医薬組成物は、経口投与用の医薬組成物を製造する分野で公知のいずれかの方法に従って製造され得る。医薬的に飲みやすい製剤を提供するために、本開示に記載の医薬組成物は、甘味剤、風味剤、着色剤、粘滑剤、抗酸化剤、および防腐剤から選択される少なくとも1つの物質を包含し得る。
【００８２】
錠剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩と、少なくとも1つの毒性がなく医薬的に許容される、錠剤の製造に適切な添加剤を混合することで製造され得る。添加剤の典型例として、以下に限らないが、例えば、不活性希釈剤(例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、およびリン酸ナトリウム)、造粒剤および崩壊剤(例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチ、およびアルギン酸)、結合剤(例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、およびアラビアガム)、および滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、およびタルク)が挙げられる。さらに、錠剤は被膜されていないか、または不快な薬物の嫌な味をマスキングするため、またはその消化管での活性成分の崩壊および吸収を遅延させ、より長期間にわたって活性成分の効果を持続させるために、公知の技術で被膜され得る。水可溶性味マスキング材料の典型例として、以下に限らないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。時間遅延材料の典型例として、以下に限らないが、エチルセルロースおよび酢酸酪酸セルロースが挙げられる。
【００８３】
ハードゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその塩を、少なくとも1つの不活性固体希釈剤(例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、およびカオリン)と混合することにより製造され得る。
【００８４】
ソフトゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、少なくとも1つの水可溶性担体(例えば、ポリエチレングリコール)、および少なくとも1つの油性媒体(例えば、ピーナツ油、液体パラフィン、およびオリーブ油)と混合することに製造され得る。
【００８５】
水性懸濁液は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物、および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、少なくとも1つの水性懸濁液の製造に適切な添加剤と混合することにより製造され得る。水性懸濁液の製造に適切な添加剤の典型例としては、以下に限らないが、例えば、懸濁化剤(例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアラビアガム)、分散剤または湿潤剤(例えば、天然に存在するフォスファチド(例えばレシチン)、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物(例えばポリオキシエチレンステアレート)、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物(例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール)、エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物(例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート)、およびエチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物(例えばポリエチレンソルビタンモノオレエート)が挙げられる。また、水性懸濁液は、少なくとも1つの防腐剤(例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチルおよびn-プロピルp-ヒドロキシ安息香酸)、少なくとも1つの着色剤、少なくとも1つの風味剤、および/または少なくとも1つの甘味剤(以下に限らないが、例えば、スクロース、サッカリン、およびアスパルテーム)を包含し得る。
【００８６】
油性懸濁液は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、植物油(例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油、およびココナッツ油)、または鉱油(例えば液体パラフィン)のいずれかに懸濁することにより製造され得る。また、油性懸濁液は、少なくとも1つの濃化剤(例えば、蜜蝋、固形パラフィン、およびセチルアルコール)を包含し得る。飲みやすい油性懸濁液を提供するために、少なくとも1つの既に上記に記載の甘味剤、および/または少なくとも1つの風味剤が油性懸濁液に添加され得る。油性懸濁液は、さらに少なくとも1つの防腐剤(以下に限らないが、例えば、抗酸化剤(例えば、ブチルヒドロキシアニソール、およびα-トコフェロール)を包含し得る。
【００８７】
分散性粉末および顆粒は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、少なくとも1つの分散剤および/または湿潤剤、少なくとも1つの懸濁化剤、および/または少なくとも1つの防腐剤を混合することにより製造され得る。適切な分散剤、湿潤剤、および懸濁化剤は既に上記に記載されている。防腐剤の典型例として以下に限らないが、例えば、抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸)が挙げられる。さらに、分散性粉末および顆粒は、また、少なくとも1つの賦形剤(以下に限らないが、例えば、甘味剤、風味剤、および着色剤)を包含し得る。
【００８８】
少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩のエマルジョンは、例えば、水中油型エマルジョンとして製造され得る。式(I)の化合物を含むエマルジョンの油相は、既知の方法で既知の成分から構成されてもよい。該油相は以下に限らないが、例えば、植物油(例えば、オリーブ油および落花生油)、鉱油(例えば液体パラフィン)、およびその混合物により提供され得る。油相は乳化剤のみを包含するものであってもよいが、少なくとも1つの乳化剤と脂肪または油、または脂肪および油の両方の混合物を包含してもよい。適切な乳化剤には、以下に限らないが、例えば、天然に存在するフォスファチド(例えば大豆レシチン)、脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル(例えばソルビタンモノオレエート)、および部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物(例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート)が挙げられる。好ましくは、親水性乳化剤が、安定化剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。また、油および脂肪の両方を包含することも好ましい。併せて、乳化剤は、安定化剤と共に、または無しで、いわゆる乳化ワックスを作り上げ、およびそのワックスは、油および脂肪と共にクリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を作り上げる。エマルジョンはまた、甘味剤、風味剤、防腐剤、および/または抗酸化剤を包含し得る。本開示の製剤中での使用に適切な乳化剤およびエマルジョン安定化剤には、単体またはワックスと一緒になったTween 60、Span 80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラウリル硫酸ナトリウム、ジステアリン酸グリセリル；または当該分野に公知の他の物質が挙げられる。
【００８９】
式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩は、例えば、いずれの医薬的に許容され、かつ適切な注射形態を介して静脈内、皮下内、および/または筋肉内に運搬され得る。注射形態の典型例として、以下に限らないが、例えば、許容されるビークルおよび溶媒(例えば、水、リンゲル液、および塩化ナトリウム等張液)を含む無菌水溶液、無菌水中油型マイクロエマルジョン、および水性または油性懸濁液が挙げられる。
【００９０】
非経口投与用製剤は、水性または非水性等張無菌注射液または懸濁液の形態であってもよい。これらの溶液および懸濁液は、経口投与用の製剤中での使用について記載される1つ以上の担体または希釈剤を用いるか、または他の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いることにより、無菌粉末または顆粒から調製されてもよい。該化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ピーナツ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガカントガム、および/または様々な緩衝液に溶解させてもよい。その他のアジュバントおよび投与方法は、医薬分野において公知であり、広く知られている。また、その活性成分は適切な担体(例えば、生理食塩水、デキストロース、または水)、またはシクロデキストリン(すなわちCaptisol)、可溶化共溶媒(すなわちプロピレングリコール)、または可溶化ミセル(すなわちTween 80)との組成物として、注射により投与されてもよい。
【００９１】
また、無菌注射製剤とは、毒性がなく、非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射溶液または懸濁液(例えば1,3-ブタンジオール中の溶液)であってもよい。許容されるビークルおよび溶媒のうち、使用されてもよいものは、水、リンゲル液、および塩化ナトリウム等張液である。さらに、無菌不揮発油は、溶媒または懸濁媒体として慣例的に用いられている。このために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、いずれの無菌不揮発油が用いられてもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注射製剤として使用される。
【００９２】
無菌注射水中油型マイクロエマルジョンは、例えば以下によって製造され得る。1)少なくとも1つの式(I)の化合物を油相(例えば、ダイズ油およびレシチンの混合物)に溶解し、2)油相を含有する式(I)を、水およびグリセロールの混合物と組み合わせ、3)その組み合わせを処理してマイクロエマルジョンを形成する。
【００９３】
無菌水性懸濁液または無菌油性懸濁液は、当業者に公知の方法に従って製造され得る。例えば、無菌水溶液または無菌水性懸濁液は、毒性がなく、非経口的に許容される希釈剤または溶媒(例えば1,3-ブタンジオール)を用いて調製され得、無菌油性懸濁液は、無菌の毒性のない許容される溶媒または懸濁媒体(例えば、無菌不揮発油(例えば、合成モノグリセリドまたはジグリセリド)、および脂肪酸(例えばオレイン酸)を用いて製造され得る。
【００９４】
本開示の医薬組成物に使用され得る医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビークルには、以下に限らないが、イオン交換体、アルミナ、アルミニウムステアレート、レシチン、自己乳化ドラッグデリバリーシステム(SEDDS)(例えばd-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネート)、医薬剤形に用いられる界面活性剤(例えば、Tween、ポリエトキシ化ヒマシ油(例えばCREMOPHOR界面活性剤(BASF)、またはその他の類似するポリマーデリバリーマトリックス)、血清タンパク質(例えばヒト血清アルブミン)、緩衝液物質(例えば、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質(例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム)、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂)が挙げられる。また、シクロデキストリン(例えば、α-、β-、およびγ-シクロデキストリン、または化学的に修飾された誘導体(例えば、2-および3-ヒドロキシプロピルシクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン、またはその他の可溶化誘導体)も、本明細書に記載の式の化合物の運搬を増進するために有利に使用されてもよい。
【００９５】
本開示の医薬的に活性な化合物は、患者(例えば、ヒトおよびその他の哺乳類)に投与する薬剤を調製するために、従来の薬学の方法に従って処理され得る。医薬組成物は、従来の製薬操作(例えば滅菌処理)に供されてもよく、および/または従来のアジュバント(例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液など)を包含してもよい。錠剤および丸剤は、加えて腸溶性被覆剤を用いて調製され得る。また、そのような組成物は、アジュバント(例えば湿潤剤、甘味剤、風味剤、および芳香剤)も包含し得る。
【００９６】
本開示の化合物および/または組成物を用いて病状を治療するために投与される化合物の量、および投与計画は、様々な要因(例えば、年齢、体重、性別、患者の病状、疾患のタイプ、疾患の危篤度、投与経路および投与頻度、および利用される特定の化合物)に依存する。それ故、投与計画は大幅に変更されてもよいが、標準的方法を用いて規定通りに決定され得る。1日用量は、約0.001から100mg/体重kg、好ましくは約0.0025から約50mg/体重kgの間、および最も好ましくは約0.005から10mg/体重kgの間が適切であり得る。1日用量は1日に1から4回投与され得る。その他の投与計画として、週に1回および2日に1回のサイクルが挙げられる。
【００９７】
治療目的のために、本開示の活性化合物は、通常意図された投与経路に適切な1つ以上のアジュバントと組み合わせられる。経口的に投与される場合、該化合物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、マグネシウムオキシド、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および/またはポリビニルアルコールと混合されてもよく、次いで簡便な投与用に錠剤化またはカプセル化されてもよい。そのようなカプセルまたは錠剤は放出制御製剤を包含してもよく、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中に活性化合物を分散して提供されてもよい。
【００９８】
本開示の医薬組成物は、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩、およびいずれの医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビークルから選択される添加剤を適宜包含する。本開示の別の組成物には、本明細書に記載の式(I)の化合物、またはそのプロドラッグ、および医薬的に許容される担体、アジュバント、またはビークルを包含する。
【００９９】
本開示の化合物は、PD-1/PD-L1(タンパク質/タンパク質)を阻害し、PD-L1遮断につながる。PD-L1遮断は、ヒトを含む哺乳類における、がん細胞および感染症に対する免疫応答を高め得る。
【０１００】
ある態様において、本開示は、がん腫瘍の成長を抑制するような式(I)の化合物またはその塩を用いて、インビボでの患者の治療に関連するものである。式(I)の化合物またはその塩は、がん腫瘍の成長を抑制するために単体で使用してもよい。あるいは、式(I)の化合物またはその塩は、下記に示すその他の免疫原または標準的ながん治療と併用して使用してもよい。
【０１０１】
ある実施態様において、本開示は、患者の腫瘍細胞の成長を抑制する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物またはその塩を患者に投与すること特徴とする方法を提供する。
【０１０２】
ある実施態様において、がんを治療するための方法であり、それが必要な患者に、治療上の有効量の式(I)の化合物またはその塩を投与することを特徴とする方法が提供される。本開示の化合物を用いてその成長が抑制され得るがんの例には、一般的に免疫療法に反応するがんが挙げられる。治療に好ましいがんの例として、以下に限らないが、黒色腫(例えば転移悪性黒色腫)、腎がん(例えば明細胞がん)、前立腺癌(例えばホルモン不応性前立腺癌)、乳癌、結腸癌および肺がん(例えば非小細胞性肺がん)が挙げられる。さらに、本開示は、本開示の化合物を用いて成長が抑制される不応性または再発性悪性腫瘍を含む。
【０１０３】
本開示の方法を用いて治療されてもよいその他のがんの例には、骨がん、膵臓癌、皮膚がん、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣癌、直腸癌、肛門部がん、胃癌、精巣がん、子宮がん、卵管癌、子宮内膜がん、頸がん、腟がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病を含む、慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿道がん、腎盂がん、中枢神経系(CNS)新生物、中枢神経原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞がん、T細胞リンパ腫、石綿に誘発されるものを含む環境誘発がん、およびこれらのがんの組み合わせが挙げられる。本開示は転移がん(特にPD-L1を発現する転移がん)の治療にも有用である(Iwai et al.  (2005) Int.  Immunol.  17:133-144)。
【０１０４】
別に、式(I)の化合物またはその塩は、その他の免疫原、例えばがん細胞、精製腫瘍抗原(例えば、組み換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子)、細胞、およびサイトカインを刺激する免疫をコードする遺伝子を導入したトランスフェクト細胞(He et al (2004) J.  Immunol.  173:4919-28)と適宜組み合わせられ得る。以下の例に限らないが、使用され得る腫瘍ワクチンには、黒色腫抗原のペプチド、例えばgp100のペプチド、MAGE抗原、Trp-2、MART1および/またはチロシナーゼ、またはサイトカインGM-CSFを発現するトランスフェクト腫瘍細胞が挙げられる。
【０１０５】
ヒトにおいて、いくつかの腫瘍(例えば黒色腫)は、免疫原性があることが知られている。PD-L1遮断によりT細胞活性化の基準値が上昇することで、宿主における腫瘍応答活性化が期待されると予想される。
【０１０６】
PD-L1遮断は、ワクチン接種のプロトコルと組み合わせられ得る。腫瘍に対するワクチン接種の実験的戦略が多く考案されている(Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D.  2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K.  2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738; see also Restifo, N.  and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch.  61, pp.  3023-3043 in DeVita, V.  et al.  (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology.  Fifth Editionを参照)。これらの戦略の1つでは、ワクチンは自己または同種の腫瘍細胞を用いて調製される。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がGM-CSFを発現するように形質導入されたときに最も効果的であることが知られている。GM-CSFは、腫瘍ワクチン接種に対する抗原提示の強力なアクティベーターであることが知られている(Dranoff et al.  (1993) Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.  90: 3539-43)。
【０１０７】
様々な腫瘍における、遺伝子発現および広範囲の遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異抗原の定義に繋がった(Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7)。多くの場合、これらの腫瘍特異抗原は、腫瘍および腫瘍が生じた細胞(例えばメラニン細胞抗原gp100、MAGE抗原、およびTrp-2)に発現する分化抗原である。さらに重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主において見られる腫瘍特異T細胞の標的であることが示され得る。PD-L1遮断は、腫瘍に発現する組み換えタンパク質および/またはペプチドの集合と併用して、これらのタンパク質に対する免疫応答を生み出してもよい。これらのタンパク質は、通常自己抗原として免疫系で見られ、従ってそれらに寛容である。腫瘍抗原には、そのタンパク質のテロメラーゼも含んでよい。テロメラーゼは、染色体のテロメアの合成に必要であり、ヒトのがんの85%以上で発現するが、体細胞組織ではほんの限定的な数しか発現しない(Kim, N et al.  (1994) Science 266: 2011-2013)。(これらの体細胞組織は、免疫攻撃から様々な方法で保護されてもよい)。腫瘍抗原は、タンパク質配列を変化させる、または2つの無関係な配列間の融合タンパク質(すなわち、フィラデルフィア染色体のbcr-abl)を生み出す体細胞の突然変異によってがん細胞に発現する「ネオアンチゲン」、またはB細胞腫瘍のイディオタイプであってもよい。
【０１０８】
その他の腫瘍ワクチンには、ヒトのがんに関与するウイルス(例えば、ヒトパピローマウイルス(HPV)、肝炎ウイルス(HBV、HDVおよびHCV)およびカポジ肉腫ヘルペスウイルス(KHSV))からのタンパク質が挙げられ得る。PD-L1遮断と併用され得る腫瘍特異抗原の別の形態は、腫瘍組織自体から単離される、精製熱ショックタンパク質(HSP)である。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞のタンパク質のフラグメントを含み、これらのHSPは腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞に運搬する際に非常に効率的である(Suot, R & Srivastava, P (1995) Science 269:1585-1588; Tamura, Y.  et al.  (1997) Science 278:117-120)。
【０１０９】
樹状細胞(DC)は、抗原特異的応を誘導するために用いられ得る、強力な抗原提示細胞である。DCはエクスビボで生産され、様々なタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物が多く含まれ得る(Nestle, F.  et al.  (1998) Nature Medicine 4: 328-332)。またDCは、遺伝子学的方法により、これらの腫瘍抗原も発現するように形質導入されてもよい。DCは、免疫を行うために直接腫瘍細胞にも融合されている(Kugler, A.  et al.  (2000) Nature Medicine 6:332-336)。ワクチン接種の方法として、DC免疫は、より強力な抗腫瘍応答を活性化するために、効果的にPD-L1遮断と組み合わせられてもよい。
【０１１０】
またPD-L1遮断は、標準的ながん治療と組み合わされてもよい。PD-L1遮断は、効果的に化学療法と組み合わされてもよい。これらの例において、投与される化学療法剤の用量を減らすことが可能になってもよい((Mokyr, M.  et al.  (1998) Cancer Research 58: 5301-5304)。そのような組み合わせの例として、ここで開示の化合物と黒色腫の治療に用いるダカルバジンとの組み合わせがある。そのような組み合わせの別例として、ここで開示の化合物と黒色腫の治療に用いるインターロイキン-2(IL-2)との組み合わせがある。PD-L1遮断および化学療法を組み合わせて用いる背後の科学的根拠は、ほとんどの化学療法化合物の細胞毒性作用の結果である細胞死が、抗原提示経路の腫瘍抗原レベルの増加をもたらすはずであるということである。細胞死を介したPD-L1遮断との相乗効果をもたらし得る別の組み合わせ治療には、放射線治療、外科手術、およびホルモン除去療法がある。これらの各プロトコルは、宿主の腫瘍抗原源を生み出す。また、血管形成阻害剤もPD-L1遮断と組み合わせられてもよい。血管形成の阻害は、宿主の抗原提示経路に腫瘍抗原を送り込んで腫瘍細胞死に繋がる。
【０１１１】
また、ここで開示の化合物は、FcアルファまたはFcガンマ受容体発現エフェクター細胞のターゲットを腫瘍細胞に絞る二重特異性化合物と組み合わせて用いられてもよい(例えば、U.S.  Pat.  Nos.  5,922,845 and 5,837,243を参照)。二重特異性化合物は、2つの別個の抗原を標的にし得る。例えば、抗Fc受容体/抗腫瘍抗原(例えばHer-2/neu)の二重特異性化合物は、マクロファージのターゲットを腫瘍の部位に絞るために用いられている。このターゲティングは、腫瘍特異応答をより効果的に活性化し得る。これらの応答のT細胞は、PD-L1遮断により増大される。あるいは、抗原は、腫瘍抗原および樹状細胞に特異的な細胞表面マーカーに結合する二重特異性化合物の使用により、DCに直接運搬されてもよい。
【０１１２】
腫瘍は、多種多様なメカニズムにより宿主の免疫監視を逃れる。これらのメカニズムの多くは、腫瘍により発現したタンパク質および免疫抑制性タンパク質の不活性化により克服され得る。それらのタンパク質には、特にTGF-β(Kehrl, J.  et al.  (1986) J.  Exp.  Med.  163: 1037-1050)、IL-10(Howard, M.  & O'Garra, A.  (1992) Immunology Today 13: 198-200)、およびFasリガンド(Hahne, M.  et al.  (1996) Science 274: 1363-1365)が挙げられる。これらの各タンパク質に結合し、阻止する阻害剤は、免疫抑制剤の効果を弱め、宿主による腫瘍免疫応答を優位に働かせるために、ここで開示の化合物と組み合わせて用いられてもよい。
【０１１３】
宿主の免疫応答性を活性化する化合物は、PD-L1の遮断と組み合わせて用いられ得る。 それらの化合物には、DC機能および抗原提示を活性化する樹状細胞表面の分子が挙げられる。抗CD40化合物は、効果的にヘルパーT細胞活性の代わりに機能し(Ridge, J.  et al.  (1998) Nature 393: 474-478)、PD-L1の遮断と併用して用いられ得る(Ito, N.  et al.  (2000) Immunobiology 201 (5) 527-40)。また、T細胞共刺激分子(例えば、CTLA-4(例えばU.S.  Pat.  No.  5,811,097)、OX-40(Weinberg, A.  et al.  (2000) Immunol 164: 2160-2169)、4-1BB(Melero, I.  et al.  (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997))、およびICOS(Hutloff, A.  et al.  (1999) Nature 397: 262-266))に対する化合物を活性化することで、高レベルなT細胞活性化を提供し得る。
【０１１４】
骨髄移植は、現在様々な造血由来の腫瘍を治療するために用いられている。この治療の結果、移植片対宿主病が発症する一方、治療による利益が移植片対腫瘍応答から得られうる。PD-L1遮断は、ドナー移植腫瘍特異T細胞の有効性を高めるために用いられ得る。
【０１１５】
本開示の別の方法は、特定の毒素または病原体に曝されている患者を治療するために用いられる。従って、本開示の別の態様は、患者の感染性疾患を治療する方法であり、治療上の有効量の式(I)の化合物またはその塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。
【０１１６】
上記で述べた腫瘍に対する適用と類似して、式(I)の化合物またはその塩は、単体、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて、病原体、毒素、および自己抗原に対する免疫応答を刺激するために用いられ得る。この治療方法が特に有用になり得る病原体の例として、現在効果的なワクチンが無い病原体、または従来のワクチンでは効果が完全で無い病原体が挙げられる。それらには、以下に限定されないが、HIV、肝炎(A、B、CまたはD)、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、緑膿菌が挙げられる。PD-L1遮断は、例えばHIVのような、薬剤による確立した感染症(感染の過程で抗原の変化を示す)に対して特に有用である。これらの新規のエピトープは、投与時に異物と認識され、それ故PD-1を介したネガティブシグナルにより減衰されない、強いT細胞応答を引き起こす。
【０１１７】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例には、HIV、肝炎(A、B、C、またはD)、ヘルペスウイルス(例えば、VZV、HSV-1、HAV-6、HHV-7、HHV-8、HSV-2、CMV、およびエプスタイン・バールウイルス)、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、RSウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、HTLVウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、JCウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスが挙げられる。
【０１１８】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性細菌のいくつかの例には、クラミジア、リケッチア、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ菌、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネア、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス、炭疽菌、ペスト、レプトスピラ、およびライム病細菌が挙げられる。
【０１１９】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性真菌のいくつかの例には、カンジダ菌(アルビカンス、クルーセイ、グラブラータ、トロピカリスなど)、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス(フミガーツス、黒麹菌など)、ケカビ属(ケカビ、ユミケカビ、クモノスカビ)、スポロトリックス・シェンキィ、ブラストミセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラズマ・カプスラーツムが挙げられる。
【０１２０】
本開示の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性寄生虫のいくつかの例には、赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、フォーラーネグレリア、アカントアメーバ属、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム属、ニューモシスティニ・カリニ、三日熱マラリア原虫、バベシア・ミクロチ、トリパノソーマ・ブルーセイ、トリパノソーマ・クルージ、ドノバン・リーシュマニア、トキソプラズマ・ゴンディ、およびブラジル鉤虫が挙げられる。
【０１２１】
上記の全ての方法において、PD-L1遮断は、他の形態の免疫療法(例えばサイトカイン治療(例えばインターフェロン、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、または腫瘍抗原を強く発現する二重特異性抗体治療(例えば、Holliger (1993) Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123を参照)、ワクチン、または遺伝子発現を調整する薬剤)と組み合わせられ得る。
【０１２２】
ここで開示の化合物は自己免疫性応答を引き起こし、それを増強し得る。実際に、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを用いた抗腫瘍応答の誘導は、多くの抗腫瘍応答が抗自己反応性(抗CTLA-4+GM-CSF修飾B16黒色腫にて観察される脱色素(van Elsasらの上記文献参照); Trp-2ワクチン接種マウスにおける脱色素(Overwijk, W.  et al.  (1999) Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.  96: 2982-2987); TRAMP腫瘍細胞ワクチンによって惹起される自己免疫性前立腺炎(Hurwitz, A.  (2000) supra)、黒色腫ペプチド抗原ワクチン接種およびヒト臨床試験にて観察される白斑(Rosenberg, S A and White, D E (1996) J.  Immunother Emphasis Tumor Immunol 19 (1): 81-4))に関与することが明らかにされている。
【０１２３】
従って、疾患治療に向けて、これらの自己タンパク質に対する免疫応答を効率的に引き起こすワクチン接種プロトコルを考案するために、様々な自己タンパク質と併用して抗PD-L1遮断を用いることを検討することは可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳のアミロイド堆積におけるアミロイドベータ(A.β.)ペプチドの不適当な蓄積に関係する;アミロイドに対する抗体反応は、これらのアミロイドの堆積を除去し得る(Schenk et al., (1999) Nature 400: 173-177)。
【０１２４】
また、その他の自己タンパク質は、ターゲットとして用いられ得る(例えばアレルギーおよび喘息治療のためのIgE、および関節リウマチ治療のためのTNFα)。最終的に、様々なホルモンに対する抗体反応は、式(I)の化合物またはその塩の使用により誘発され得る。生殖ホルモンに対する中和抗体反応は避妊に用いられ得る。特定の腫瘍の成長に必要なホルモンおよびその他の可溶性因子に対する中和抗体反応もまた、考えられるワクチン接種のターゲットとして考慮され得る。
【０１２５】
抗PD-L1抗体を使用する上記に記載の類似の方法は、治療的自己免疫性応答の誘導をし、その他の自己抗原の不適当な蓄積(例えば、アルツハイマー病におけるA.β.を含むアミロイド堆積、サイトカイン(例えばTNFα、およびIgE))を保持する患者を治療するために用いられ得る。
【０１２６】
ここで開示の化合物は、式(I)の化合物またはその塩と関心のある抗原(例えばワクチン)の同時投与による抗原特異的免疫応答を刺激するために用いられ得る。従って、別の態様においてここで開示は、患者の抗原に対する免疫応答を高める方法であり、(i)抗原;および(ii)患者の抗原に対する免疫応答が高められるような式(I)の化合物またはその塩を患者に投与することを特徴とする方法を提供する。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または病原体由来の抗原であり得る。以下の例に限らないが、そのような抗原には、上記の項で検討された抗原、例えば上記で検討された腫瘍抗原(または腫瘍ワクチン)、または上記で検討されたウイルス、細菌またはその他の病原体由来の抗原が挙げられる。
【０１２７】
上記の通り、本開示の化合物は、1つ以上のその他の治療剤(例えば、細胞毒性剤、放射性毒性剤または免疫抑制性剤)と同時に投与され得る。本開示の化合物その他の治療剤の前または後、または同時に投与され得るか、またはその他の既知の治療(例えば、抗がん治療(例えば放射線))と同時に投与され得る。そのような治療剤には、特に、単体では、患者にとって毒性または準毒性なレベルの投与でしか効果的でない抗腫瘍剤(例えばドキソルビシン(アドリアマイシン)、シスプラチンブレオマイシン硫酸塩、カルムスチン、クロラムブシル、ダカルバジンおよびシクロホスファミドヒドロキシ尿素)が挙げられる。シスプラチンは4週間に1度、静脈内に100mg/用量で投与され、およびアドリアマイシンは21日毎に1度、静脈内に60-75mg/mL用量で投与される。式(I)の化合物またはその塩と、化学療法剤の同時投与は、異なるメカニズムを介して作用し、ヒト腫瘍細胞に細胞毒性効果をもたらす2つの抗がん剤を提供する。そのような同時投与は、薬剤抵抗性進行による問題または抗体で非反応性になる腫瘍細胞の抗原性の変化による問題を解決し得る。
【０１２８】
また、式(I)の化合物またはその塩、および使用説明書を含むキットも本開示の範囲である。キットは、さらに少なくとも1つの別の試薬を含み得る。キットには一般に、キットの内容の使用目的を示すラベルが含まれる。用語「ラベル」とは、あらゆる文字、またはキット上またはキットと共に提供される記録物質、またはそうでなければキットに添付される記録物質を含む。
【０１２９】
上記のその他の治療剤は、本開示の化合物と組み合わせて用いる場合、例えば、米医薬品便覧(PDR)に記載の量、またはそうでなければ当業者によって特に定められた量で使用されてもよい。本開示の方法において、その他の治療剤は、本発明の化合物の投与の前、同時、または後に投与されてもよい。
【実施例】
【０１３０】
本発明は、次の実施例においてさらに定義される。該実施例は説明によってのみ与えられると理解されるべきである。上記の検討および実施例から、当業者は本発明に本質的な特徴を解明することが出来、発明の精神および範囲から離れることなく、本発明を幅広い条件および用途に適応させるために変更および修正を行うことが出来る。その結果、本発明は以下で説明する該実施例によって制限されず、むしろ本明細書に添付の請求項により定義される。
【０１３１】
本明細書で用いられる、次に示す用語は以下の意味を持つ：THFはテトラヒドロフラン、hまたはhrは時間、minは分、rtまたはRTまたはRtは、室温または保持時間(文脈により決まる)、tRは保持時間、DMSOはジメチルスルホキシド、DMFはN,N-ジメチルホルムアミド、およびMeOHはメタノールを表す。
【０１３２】
中間体: 4-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化１３】
2021516232.tif 000014
ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(0.76mL、3.87mmol)を、4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オール(750.0mg、3.52mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(607.0mg、3.52mmol)およびトリフェニルホスフィン(1.02g、3.87mmol)の乾燥THF(15mL)溶液に0℃で滴下して加えた。得られた黄色溶液を室温に加温し、16時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、得られた残渣を少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(80g))にチャージし、これを最初にヘキサン(200mL)で溶出後、続いて0-50%B(溶媒B=酢酸エチル; 溶媒A=ヘキサン)で1500mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、所望の生成物、4-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド(742.6mg、38.9%)を薄黄色固体として得た。それを直接次のステップに用いた。 LCMS: tR(保持時間)=1.50分; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U(=μm); オーブン温度=40℃; 1H NMR (500 MHz、DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.47 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.26 (t, J=7.7 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.07 (dd, J=6.6, 3.7 Hz, 1H), 3.12 - 3.01 (m, 1H), 2.98 - 2.87 (m, 1H), 2.75 - 2.61 (m, 1H), 2.16 - 2.07 (m, 1H)
【０１３３】
中間体: 5-((5-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル
【化１４】
2021516232.tif 000015
4-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド(500mg、1.36mmol)、5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(270mg、1.77mmol)および炭酸セシウム(665mg、2.04mmol)/乾燥DMF(8mL)の懸濁液を室温で16時間撹拌した。溶媒を減圧除去し、得られた残渣を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した。抽出した有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、残渣を得た。これをジクロロメタンおよびヘキサンでトリチュレートし、所望の生成物、5-((5-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノ-ニトリル(201.2mg、28.9%)を吸引濾過後、薄黄色固体として得た。濾液を濃縮し、少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(40g))にチャージし、これを最初にヘキサン(60mL)で溶出し、続いて0-50%B(溶媒B=酢酸エチル; 溶媒A=ヘキサン)で600mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、さらに生成物を黄褐色固体として得た(101.3mg、10.4%)。両フラクションを後に合わせて、次のステップに直接用いた。 LCMS: tR=1.43分; LCMS (ESI) m/z=485.05 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃; 1H NMR (500 MHz、DMSO-d6) δ 10.26 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.58 - 8.55 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.61 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.31 - 7.13 (m, 2H), 6.31 (dd, J=6.6, 4.0 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.13 - 3.04 (m, 1H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.13 - 2.05 (m, 1H)
【０１３４】
中間体: 3-((3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジン
【化１５】
2021516232.tif 000016
3-ブロモ-2-クロロフェノール(0.50g、2.41mmol)および3-(ブロモメチル)-1-メチルピペリジンヒドロブロマイド(0.66g、2.41mmol)/乾燥DMF(10mL)の撹拌溶液に、炭酸カリウム(0.80g、5.78mmol)を1度に加えた。この懸濁液を60℃で16時間撹拌した。室温に冷却後、この混合物を次いで酢酸エチルおよび水で希釈した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した。抽出した有機層を合わせて食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮し、油状物を得た。それを少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(24g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(100mL)で溶出し、続いて0-10%B(溶媒B=メタノール; 溶媒A=ジクロロメタン)で650mL溶出した。溶離液を濃縮後、所望の生成物、3-((3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジン(585.5mg、76% 収率)を無色の油状物として単離した。LCMS: tR=0.97分; LCMS (ESI) m/z=317.85および319.90 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃; 1H NMR (500 MHz、CDCl3) δ 7.21 (dd, J=8.1, 1.0 Hz, 1H), 7.05 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.06 - 3.64 (m, 2H), 2.96 (br d, J=10.2 Hz, 1H), 2.74 (br d, J=10.4 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 1.99 (br t, J=10.4 Hz, 1H), 1.91 (br t, J=10.2 Hz, 1H), 1.84 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.59 (m, 1H), 1.26 - 1.10 (m, 1H)
【０１３５】
中間体: 3-((2-クロロ-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジン
【化１６】
2021516232.tif 000017
撹拌子を入れた、壁の厚い、スクリュートップ耐圧チューブ中で、3-((3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジン(1.0g、3.14mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(1.20g、4.71mmol)、および酢酸カリウム(0.92g、9.42mmol)/乾燥ジオキサン(20mL)のアルゴンで脱気した懸濁液に、1,1-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン-パラジウム(II)ジクロライド(0.12g、0.16mmol)を室温で1度に加えた。この混合物を95℃で4.5時間撹拌した後、室温に冷却し、無機物を除去するためにセライトを介して吸引濾過した。濾液を次いで濃縮し、粗製生成物を褐色の油状物として得た。これを少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(80g))にチャージした。これを最初にジクロロメタン(300mL)で溶出し、続いて0-20%B(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)1500mLで溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。所望の生成物を褐色の油状物として単離し(763.1mg、66%)、使用する際はそのまま用いた。また、使用しない場合は冷蔵保管した。LCMS: tR=1.18分; LCMS (ESI) m/z 観測質量:365.90 [M+H]＋ (ホウ素酸エステル); tR=0.86分; LCMS (ESI) m/z 観測質量:283.75 [M+H]＋ (LCMSではボロン酸が観測された); LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃; 1H NMR (500 MHz、クロロホルム-d) δ 7.23 - 7.20 (m, 1H), 7.19 - 7.14 (m, 1H), 6.95 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1H), 3.93 - 3.88 (m, 1H), 3.88 - 3.82 (m, 1H), 2.99 (br d, J=10.4 Hz, 1H), 2.74 (br d, J=10.7 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.25 - 2.15 (m, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.91 - 1.84 (m, 1H), 1.84 - 1.77 (m, 1H), 1.75 - 1.69 (m, 1H), 1.68 - 1.60 (m, 1H), 1.37 (s, 12H), 1.20 - 1.08 (m, 1H)
【０１３６】
中間体: 5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１７】
2021516232.tif 000018
1ドラムバイアル中で、3-((2-クロロ-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-フェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジン(126mg、0.21mmol)、5-((5-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(100mg、0.21mmol)およびリン酸カリウム(110mg、0.52mmol)/THF(1.5mL)および水(0.5mL)のアルゴンで脱気した混合物に、第2世代XPhos触媒(16.3mg、0.021mmol)を加えた。このバイアルを密封し、混合物を室温で16時間撹拌した後、酢酸エチルおよび水の間に分配した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した後、抽出した有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮し、粗製生成物を黄色の油状物として得た。得られた粗製生成物を少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(24g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(80mL)で溶出し、続いて0-20%B(溶媒B=メタノール; 溶媒A=ジクロロメタン)で800mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、生成物、5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(124.1mg、93%)を薄黄色の油状物として得た。使用しない場合はこれを冷蔵保管した。LCMS: tR=1.34分; LCMS (ESI) m/z=642.10および644.05 [M+H]＋; LCMS条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
【０１３７】
実施例1001: (2S)-1-(5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１８】
2021516232.tif 000019
ボラン2-ピコリンコンプレックス(4.1mg、0.039mmol)を、5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)-フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(25.0mg、0.039mmol)、(S)-ピペリジン-2-カルボン酸(10.1mg、0.078mmol)および酢酸(50μL)の乾燥DMF(0.5mL)撹拌溶液に室温で1度に加えた。この混合物を16時間撹拌した後、混合物を窒素気流を用いてほとんど乾燥するまで濃縮した。その後、メタノールを加え、得られた懸濁液をシリンジを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル: 水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル: 水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 12-52%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製した。フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は9.7mgであり、LCMS分析による推定純度は95%であった。2回の分析LCMSインジェクションは、最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters Acquity UPLC BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1.0mL/分; 検出: UV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 755.2; 保持時間: 1.71分
インジェクション2条件: カラム: Waters Acquity UPLC BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1.0mL/分; 検出: UV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 94.7%; 観測質量: 755.2; 保持時間: 1.50分
【０１３８】
実施例1002: (2R)-2-((5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１９】
2021516232.tif 000020
5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミル-フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(25.0mg、0.039mmol)、(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(9.3mg、0.078mmol)、酢酸(50μL)、4Åモレキュラー・シーブ(25mg)および乾燥トリエチルアミン(2滴)/乾燥エタノール(0.5mL)、ジクロロエタン(0.2mL)、DMF(0.2mL)およびTHF(0.2mL) の溶液を3時間撹拌した後、1Mナトリウムシアノボロハイドライド/THF(78μL、0.078mmol)の溶液を室温で少しずつ加えた。この混合物を16時間撹拌した後、窒素気流を用いて濃縮した。その後、メタノールを加え、得られた懸濁液をシリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル: 水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル: 水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 10-50%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで4分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は5.9mgであり、LCMS分析による推定純度は99%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 745.15; 保持時間: 1.46分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 99.2%; 観測質量: 745.15; 保持時間: 1.67分
【０１３９】
実施例1003: 5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-((1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル
【化２０】
2021516232.tif 000021
実施例1003を、上記実施例1002から得られた反応混合物および精製操作から単離した。生成物(三酢酸塩)の収量は13.7mgであり、LCMS分析による推定純度は100%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 mm x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 644.11; 保持時間: 1.76分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 mm x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 644.11; 保持時間: 2.01分
1H NMR (500 MHz、メタノール-d4) δ 8.95 (br s, 1H), 8.90 (br s, 1H), 8.35 (br s, 1H), 7.41 (br s, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.30 - 7.25 (m, 1H), 7.17 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 7.11 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 6.99 - 6.87 (m, 2H), 5.92 (br s, 1H), 5.30 (br s, 2H), 4.64 (br s, 2H), 4.14 - 4.08 (m, 1H), 4.00 (br t, J=7.3 Hz, 1H), 3.43 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 3.38 - 3.35 (m, 1H), 3.20 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 3.05 - 2.70 (series of m, 3H), 2.63 (br s, 3H), 2.58 - 2.44 (m, 3H), 2.34 (br s, 1H), 2.16 (br s, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 1H), 1.46 - 1.35 (m, 1H)
【０１４０】
中間体: (S)-4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オールおよび(R)-4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オール
【化２１】
2021516232.tif 000022
2つのエナンチオマーを市販品として入手可能な4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オール(〜5.0g)のキラル分割(条件: カラム: Chiralcel OD-H、30 x 250mm、5U; 移動相: 10%アセトニトリル:エタノール(1:1)/90%CO2; 圧力: 150 bar; 温度: 30℃; 流速: 120mL/分; UV: 220nm; 注入量: 0.25mL(アセトニトリル:エタノール(9:1)中、〜160mg/mL) stack: 4.00分; フラクションの回収: Slope and Level: Peak 1 Window: 4.50-5.80分; Peak 2 Window: 5.50-7.50分)から得た。絶対立体配置をX線結晶構造解析で決定した。
(S)-4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オール(ピーク1、2.58g、灰白色固体): LCMS: tR=1.20分; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (400 MHz、クロロホルム-d) δ 7.43 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.17 - 7.10 (m, 1H), 5.32 (q, J=5.5 Hz, 1H), 3.08 (ddd, J=16.7, 8.8, 4.6 Hz, 1H), 2.89 - 2.78 (m, 1H), 2.53 (dddd, J=13.4, 8.5, 7.0, 4.5 Hz, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 1H), 1.84 (br d, J=6.0 Hz, 1H)
(R)-4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オール(ピーク2、2.53g、灰白色固体): LCMS: tR=1.205分; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (400 MHz、クロロホルム-d) δ 7.43 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.17 - 7.10 (m, 1H), 5.31 (br t, J=6.0 Hz, 1H), 3.08 (ddd, J=16.6, 8.7, 4.5 Hz, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.53 (dddd, J=13.4, 8.5, 7.0, 4.5 Hz, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 1H), 1.85 (br s, 1H)
【０１４１】
実施例1004から実施例1011を4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-オールおよび3-((3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)メチル)-1-メチルピペリジンのキラル物質を用いて実施例1002および実施例1003と同様の方法で調製した。
【０１４２】
実施例1004: ((R)-2-((5-クロロ-4-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２２】
2021516232.tif 000023
5-((4-クロロ-5-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミル-フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(55.0mg、0.086mmol)、(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(20.4mg、0.17mmol)、酢酸(0.024mL、0.428mmol)、4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)および乾燥トリエチルアミン(2滴)/乾燥エタノール(0.6mL)、ジクロロエタン(0.2mL)、DMF(0.1mL)およびTHF(0.1mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.17mL、0.17mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 10-50%Bで22分かけて溶出後、次いで100%Bで6分かけて溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製した。フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は39.3mg(60.9%)であり、LCMS分析による推定純度は99%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 99.2%; 観測質量: 745.15; 保持時間: 1.48分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 98.9%; 観測質量: 745.16; 保持時間: 1.45分
【０１４３】
実施例1005: 5-((4-クロロ-5-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２３】
2021516232.tif 000024
実施例1005を上記実施例1004で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は3.6mg(6.1mg)であり、LCMS分析による推定純度は93%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 94.5%; 観測質量: 644.08; 保持時間: 1.82分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 93.3%; 観測質量: 644.08; 保持時間: 1.79分
【０１４４】
実施例1006: (R)-2-((5-クロロ-4-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２４】
2021516232.tif 000025
得られた粗製物質を分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 10-50%Bで22分かけて溶出後、次いで100%Bで6分かけて溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は51.9mg(55.0%)であり、LCMS分析による推定純度は98%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.4%; 観測質量: 745.13; 保持時間: 1.6分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 99.5%; 観測質量: 745.16; 保持時間: 1.54分
【０１４５】
実施例1007: 5-((4-クロロ-5-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((R)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２５】
2021516232.tif 000026
実施例1007を上記実施例1006で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は14.5mg(17.7%)であり、LCMS分析による推定純度は98%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.2%; 観測質量: 644.11; 保持時間: 1.76分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 98.7%; 観測質量: 644.12; 保持時間: 1.9分
【０１４６】
実施例1008: (R)-2-((5-クロロ-4-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２６】
2021516232.tif 000027
得られた粗製物質を分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 12-52%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製した。フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は29.4mg(56.0%)であり、LCMS分析による推定純度は99%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 745.13; 保持時間: 1.56分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 99.4%; 観測質量: 745.14; 保持時間: 1.46分
【０１４７】
実施例1009: 5-((4-クロロ-5-(((S)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２７】
2021516232.tif 000028
実施例1009を上記実施例1008で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は6.5mg(13.4%)であり、LCMS分析による推定純度は93%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.1%; 観測質量: 644.11; 保持時間: 1.92分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 93.3%; 観測質量: 644.08; 保持時間: 1.77分
【０１４８】
実施例1010: (R)-2-((5-クロロ-4-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２８】
2021516232.tif 000029
得られた粗製物質を分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 8-48%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで6分かけて溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は46.2mg(80.0%)であり、LCMS分析による推定純度は100%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 745.17; 保持時間: 1.55分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 745.13; 保持時間: 1.42分
【０１４９】
実施例1011: 5-((4-クロロ-5-(((R)-4-(2-クロロ-3-(((S)-1-メチルピペリジン-3-イル)メトキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２９】
2021516232.tif 000030
実施例1011を上記実施例1010で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は5.5mg(10.2%)であり、LCMS分析による推定純度は93%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 93.2%; 観測質量: 644.12; 保持時間: 1.89分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 93.2%; 観測質量: 644.11; 保持時間: 1.72分
【０１５０】
中間体: 1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-クロロベンゼン
【化３０】
2021516232.tif 000031
炭酸カリウム(8.3g、60.3mmol)を、3-ブロモ-2-クロロフェノール(10.0g、48.2mmol)および1,3-ジブロモプロパン(48.9mL、482mmol)/乾燥アセトン(400mL)の撹拌溶液に1度に加えた。この懸濁液を室温で5日間撹拌した後、塩を除去するために吸引濾過した。得られた濾液を次いで薄黄色の油状物になるまで減圧濃縮した。これを丸底フラスコ(250mL)に移し、過剰の1,3-ジブロモプロパンを全て除去するために高真空下で短いト字管を用いて蒸留し、それを38〜40℃(湯浴温度=70℃)の間で無色の液体として得られた。その後、蒸留後の容器中に、単離された所望の粗製生成物を粘性のある、蜂蜜色の油状物として得た。この油状物はかなり純度が高かったため、そのまま用いた。使用しない場合は冷蔵保管した。
LCMS: tR=1.46分; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、CDCl3) δ 7.26 (dd, J=8.0, 1.1 Hz, 1H), 7.09 (t, J=8.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.18 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.67 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.38 (quin, J=6.0 Hz, 2H)
【０１５１】
中間体: 1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルベンゼン
【０１５２】
2021516232.tif 000032
炭酸カリウム(9.2g、66.8mmol)を、3-ブロモ-2-メチルフェノール(10.0g、53.5mmol)および1,3-ジブロモプロパン(54.3mL、535mmol)/乾燥アセトン(400mL)の撹拌溶液に1度に加えた。この懸濁液を室温で6日間撹拌した後、塩を除去するために吸引濾過した。濾液を次いで薄黄色の油状物になるまで減圧濃縮した。これを丸底フラスコ(250mL)に移し、過剰の1,3-ジブロモプロパンの全てを除去するために高真空下で短いト字管を用いて蒸留し、28〜32℃(湯浴温度=70℃)の間に無色の液体として得られた。その後、蒸留後の容器中に、単離された所望の粗製生成物を薄黄色の油状物として得て、これをそのまま用いた。また、使用しない場合は冷蔵保管した。
LCMS: tR=1.76分; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、CDCl3) δ 7.18 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.02 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.81 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.11 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.63 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.39 - 2.34 (m, 2H), 2.33 (s, 3H)
【０１５３】
中間体: N-(1-(3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド
【化３１】
2021516232.tif 000033
炭酸カリウム(2.43g、17.58mmol)を、1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-クロロベンゼン(2.31g、7.03mmol)およびN-(ピペリジン-4-イル)アセトアミド(1.00g、7.03mmol)/乾燥アセトニトリル(20mL)およびDMF(10mL)の撹拌溶液に1度に加えた。この混合物を60℃で16時間加熱した後、室温に冷却し、酢酸エチルおよび水で希釈した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、1/4の体積になるまで濃縮し、生成物、N-(1-(3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)-プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(1.13g、41.2%)を吸引濾過後、白色固体として得た。得られた濾液を濃縮し、最小限のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(40g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(150mL)で溶出後、続いて0-20%B(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)で1300mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、別の生成物、N-(1-(3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)プロピル)-ピペリジン-4-イル)アセトアミド(0.62g、22.4%)を白色固体として得た。
LCMS: tR=0.86分; LCMS (ESI) m/z=388.90および390.90 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、CDCl3) δ 7.23 (dd, J=8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.07 (t, J=8.2 Hz, 1H), 6.88 (dd, J=8.2, 0.9 Hz, 1H), 5.38 - 5.10 (m, 1H), 4.08 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.94 - 3.64 (m, 1H), 2.86 (br d, J=11.7 Hz, 2H), 2.55 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.13 (br t, J=11.0 Hz, 2H), 2.05 - 1.99 (m, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.94 (br d, J=12.1 Hz, 2H), 1.43 (qd, J=11.6, 3.7 Hz, 2H)
【０１５４】
中間体: N-(1-(3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド
【化３２】
2021516232.tif 000034
炭酸カリウム(607mg、4.40mmol)を、1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルベンゼン(542mg、1.76mmol)およびN-(ピペリジン-4-イル)アセトアミド(250mg、1.76mmol)/乾燥DMF(7mL)の撹拌溶液に1度に加えた。この混合物を60℃で16時間加熱した後、溶媒を窒素気流で、室温で一夜かけて除去した。得られた残渣をジクロロメタンに溶解し、この懸濁液を5分間ソニケーションし、過剰の炭酸カリウムを除去するために吸引濾過した。濾液を次いで濃縮し、最小限のジクロロメタンでRediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(24g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(150mL)で溶出し、続いて0-20%B(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)で600mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。所望の生成物、N-(1-(3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(0.42g、64.4%)を白色固体として単離した。
LCMS: tR=1.07分; LCMS (ESI) m/z=368.95および370.90 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、クロロホルム-d) δ 7.15 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.99 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.77 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.00 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.90 - 3.68 (m, 1H), 2.87 (br d, J=11.5 Hz, 2H), 2.53 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.12 (br t, J=10.6 Hz, 2H), 2.01 - 1.88 (m, 4H), 1.98 (s, 3H), 1.44 (qd, J=11.7, 3.6 Hz, 2H)
【０１５５】
中間体: (S)-3-((3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)プロピル)アミノ)プロパン-1,2-ジオール
【化３３】
2021516232.tif 000035
ヒューニッヒ塩基(1.6mL、9.13mmol)を、1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-クロロベンゼン(1.0g、3.04mmol)および(S)-3-アミノ-プロパン-1,2-ジオール(1.4g、15.22mmol)/乾燥DMF(30mL)の撹拌溶液に1度に加えた。この混合物を次いで60℃で16時間加熱した後、室温に冷却し、窒素気流で濃縮した。得られた残渣をメタノール(10mLまで)で希釈し、PVDFシリンジフィルター(Whatman、13mm、45μM)を介して濾過し、5つのpHPLCバイアル(2mL)に分け、分取HPLC(10-100%Bで12分のグラジエントをかけて溶出; 流速:40mL/分; SunFire C18カラム(30 x 100mm、5U); 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有))で数回に分けて精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、精製された生成物、(S)-3-((3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)プロピル)アミノ)-プロパン-1,2-ジオール(971.0mg、94%)を薄黄色の粘性のある油状物として単離した。これを一夜冷凍庫に静置して薄黄色固体になるまで凝固させた。
LCMS: tR=1.04分; LCMS (ESI) m/z=338.00および340.00 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、メタノール-d4) δ 7.30 (dd, J=8.0, 0.9 Hz, 1H), 7.19 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 1H), 4.21 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.91 (br dd, J=8.7, 3.6 Hz, 1H), 3.63 - 3.50 (m, 2H), 3.35 (s, 1H), 3.29 - 3.24 (m, 2H), 3.18 (dd, J=12.5, 3.1 Hz, 1H), 3.02 (dd, J=12.5, 9.3 Hz, 1H), 2.32 - 2.16 (m, 2H)
【０１５６】
中間体: (S)-3-((3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)アミノ)プロパン-1,2-ジオール
【化３４】
2021516232.tif 000036
ヒューニッヒ塩基(1.70mL、9.74mmol)を、1-ブロモ-3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルベンゼン(1.00g、3.25mmol)および(S)-3-アミノプロパン-1,2-ジオール(1.48g、16.23mmol)/乾燥DMF(30mL)の撹拌溶液に1度に加えた。混合物を次いで60℃で16時間加熱した後、室温に冷却し、窒素気流で濃縮した。得られた残渣をメタノール(10mLまで)で希釈し、PVDFシリンジフィルター(Whatman、13mm、45μM)を介して希釈し、5つのpHPLCバイアル(2mL)に分け、分取HPLC(10-100%Bで12分のグラジエントをかけて溶出; 流速:40mL/分; SunFire C18カラム(30 x 100mm、5U); 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有))で数回に分けて精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、精製された生成物、(S)-3-((3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)アミノ)-プロパン-1,2-ジオール(944.3mg、91%)を無色の油状物として単離した。これを冷凍庫に静置して白色固体になるまで凝固させた。
LCMS: tR=1.07分; LCMS (ESI) m/z=318.07、観測質量: 318.05および320.05 [M+H]＋
LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (500 MHz、メタノール-d4) δ 7.16 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.05 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.92 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.12 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.90 (br dd, J=8.5, 3.6 Hz, 1H), 3.63 - 3.47 (m, 2H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 3.16 (dd, J=12.5, 3.1 Hz, 1H), 3.00 (dd, J=12.5, 9.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.25 - 2.14 (m, 2H)
【０１５７】
中間体: (R)-1-(3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール
【化３５】
2021516232.tif 000037
1-ブロモ-3-(3-クロロプロポキシ)-2-メチルベンゼン(5.15g、19.54mmol)、(R)-ピロリジン-3-オールヒドロクロライド(3.62g、29.30mmol)、粉末炭酸カリウム(4.05g、29.3mmol)およびヨウ化ナトリウム(2.93g、19.54mmol)/無水DMF(100mL)の撹拌した懸濁液を80℃で16時間加熱した。この混合物を次いで室温に冷却し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣を酢酸エチルおよび水の間に分配した後、水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した。抽出した有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、残渣を得た。これを少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(80g))にチャージし、最初にジクロロメタン(200mL)で溶出し、続いて0-100%(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)で1500mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、生成物、(R)-1-(3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール(5.10g、83%)をキャラメル色の油状物として単離した。生成物は冷凍保管し、使用する際はそのまま用いた。この生成物の一部(〜33mg)を解析するために、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 12-52%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分)でさらに精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。純粋な生成物の収量は25.1mgであり、LCMS分析による推定純度は98%であった。2回の分析LCMSインジェクションは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters Acquity UPLC BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1.0mL/分; 検出: UV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.2%; 観測質量: 314.0; 保持時間: 1.37分
インジェクション2条件: カラム: Waters Acquity UPLC BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.75分間溶出; 流速: 1.0mL/分; 検出: UV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 98.5%; 観測質量: 314.0; 保持時間: 1.38分
【０１５８】
中間体: 5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化３６】
2021516232.tif 000038
1,1-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン-パラジウム(II)ジクロライド(193mg、2.64μmol)を、壁の厚い耐圧チューブ中の5-((5-((4-ブロモ-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(1.70g、3.51mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(0.98g、3.87 mmol)、および酢酸カリウム(1.04g、10.54mmol)/乾燥ジオキサン(35mL)のアルゴンで脱気した懸濁液に、室温で1度に加えた。この混合物を80℃で10時間加熱撹拌した後、室温に冷却し、酢酸エチルおよび水で希釈した。(この反応に先立ちパイロットスケール(50mg)の反応を行い、その混合物を抽出処理の前にここへ加えた。)水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、粗製生成物を暗褐色の油状物として得た。得られた粗製生成物を次いで少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(80g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(300mL)で溶出し、続いて0-40%B(溶媒A=ヘキサン; 溶媒B=酢酸エチル)で2700mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル(1.36g、72.7%)を灰白色固体として単離し、これを直接次のステップにそのまま用いた。
LCMS: tR=1.72分; LCMS (ESI) m/z=531.10 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=1μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
1H NMR (400 MHz、DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.57 (t, J=2.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.68 (dd, J=7.3, 1.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.20 (br d, J=3.0 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.27 - 3.16 (m, 1H), 3.13 - 3.03 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.31 (s, 12H)
【０１５９】
中間体: 5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化３７】
2021516232.tif 000039
アルゴンで脱気した(R)-1-(3-(3-ブロモ-2-メチルフェノキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール(134mg、0.43mmol)、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル(250mg、0.47mmol)およびリン酸カリウム(227mg、1.07mmol)/THF(4mL)および水(1mL)の混合物に、第2世代XPhos触媒前駆体(34mg、0.043mmol)を室温で1度に加えた。このバイアルを密封し、得られた懸濁液を16時間撹拌した後、酢酸エチルおよび水で希釈した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した。抽出した有機層を合わせて、次いで食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた粗製生成物を少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(25g))にチャージし、最初にジクロロメタン(60mL)で溶出し、続いて0-10%B(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)で600mL溶出した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。所望の生成物、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル(171.4mg、62.7%)をわら色の油状物として単離し、解析目的用に中心部分を切り取った追加の生成物、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(25.2mg、9.2%)を薄橙色固体として単離した。
LCMS: tR=1.86分; LCMS (ESI) m/z=638.50 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=1μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
【０１６０】
実施例1012: (2R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化３８】
2021516232.tif 000040
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル(30.0mg、0.047mmol)、(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(11.2mg、0.094mmol)、酢酸(13μL、0.235mmol)、および4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)/乾燥DMF(0.50mL)およびMeOH(0.42mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.10mL、0.094mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 11-51%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで4分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は17.7mg(50.3%)であり、LCMS分析による推定純度は99%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 741.19; 保持時間: 1.51分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 99.1%; 観測質量: 741.19; 保持時間: 1.5分
【０１６１】
実施例1013: 5-((4-クロロ-2-(ヒドロキシメチル)-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化３９】
2021516232.tif 000041
実施例1013を上記実施例1012で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は10.7mg(33.3%)であり、LCMS分析による推定純度は94%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 93.6%; 観測質量: 640.24; 保持時間: 1.81分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 95.1%; 観測質量: 640.25; 保持時間: 1.92分
【０１６２】
実施例1014: (2S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-ピペリジン-2-カルボン酸
【化４０】
2021516232.tif 000042
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル(30.0mg、0.047mmol)、(S)-ピペリジン-2-カルボン酸(12.1mg、0.094mmol)、酢酸(13μL、0.235mmol)、および4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)/乾燥DMF(0.50mL)およびMeOH(0.42mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.10mL、0.094mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 10-50%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションをMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は25.6mg(67.5%)であり、LCMS分析による推定純度は93%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 95.7%; 観測質量: 751.23; 保持時間: 1.61分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 93.1%; 観測質量: 751.21; 保持時間: 1.52分
【０１６３】
実施例1015: (5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)ベンジル)-L-ホモセリン
【化４１】
2021516232.tif 000043
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシ-ピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル(30.0mg、0.047mmol)、L-ホモセリン(11.2mg、0.094mmol)、酢酸(13μL、0.24mmol)、および4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)/乾燥DMF(0.50mL)およびMeOH(0.42mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.10mL、0.094mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 9-49%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は25.9mg(71.8%)であり、LCMS分析による推定純度は97%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.7%; 観測質量: 741.19; 保持時間: 1.55分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 メタノール:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 メタノール:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3.5分かけて溶出後、次いで100%Bで0.5分間溶出; 流速: 0.5mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 96.6%; 観測質量: 741.19; 保持時間: 2.87分
【０１６４】
中間体: N-(1-(3-(2-クロロ-3-(1-(2-クロロ-5-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-ホルミルフェノキシ)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル)フェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド
【化４２】
2021516232.tif 000044
第2世代XPhos触媒前駆体(34mg、0.043mmol)を、アルゴンで脱気したN-(1-(3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)プロピル)-ピペリジン-4-イル)アセトアミド(167mg、0.43mmol)、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル(250mg、0.47mmol)およびリン酸カリウム(227mg、1.07mmol)/THF(4mL)および水(1mL)の混合物に室温で1度に加えた。このバイアルを次いで密封し、得られた懸濁液を16時間撹拌した後、酢酸エチルおよび水で希釈した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した後、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、褐色の油状物を得た。これをDMF、THFおよびメタノール(2:1:1mL)で希釈し、PVDFシリンジフィルター(Whatman Puradisc、13mm、45μM)を介して濾過し、2つのpHPLCバイアル(2mL)に分け、分取HPLC(10-100%Bで10分のグラジエントをかけて溶出; 流速:40mL/分; Waters-XBridge C18 OBD カラム(30 x 100mm、5 U); 移動相A: 10:90 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 90:10 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); UV波長: 220nm)で4回に分けて精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、生成物、N-(1-(3-(2-クロロ-3-(1-(2-クロロ-5-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-ホルミルフェノキシ)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル)フェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(186.5mg、61.0%)を無色の油状物として得た。
LCMS: tR =1.29分; LCMS (ESI) m/z=713.15および715.10 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=3μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
【０１６５】
実施例1016: (2R)-2-((4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化４３】
2021516232.tif 000045
(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(8.4mg、0.070mmol)、N-(1-(3-(2-クロロ-3-(1-(2-クロロ-5-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-ホルミルフェノキシ)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル)フェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(25.0mg、0.035mmol)、酢酸(10μL、0.175mmol)、4Åモレキュラー・シーブ(25mg)および乾燥TEA(2滴)/乾燥DMF(0.3mL)、メタノール(0.2mL)、エタノール(0.1mL)およびTHF(0.1mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(70μL、0.070mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、シリンジフィルターを介して濾過し、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 6 - 46%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 25mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は3.7mg(12.3%)であり、LCMS分析による推定純度は95%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 95.4%; 観測質量: 816.17; 保持時間: 1.78分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 99.0%; 観測質量: 816.18; 保持時間: 1.49分
【０１６６】
実施例1017: (2S)-1-(4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化４４】
2021516232.tif 000046
N-(1-(3-(2-クロロ-3-(1-(2-クロロ-5-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-ホルミルフェノキシ)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル)フェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(25.0mg、0.035mmol)、(S)-ピペリジン-2-カルボン酸(9.1mg、0.070mmol)、酢酸(10μL、0.175mmol)、4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)および乾燥TEA(2滴)/乾燥DMF(0.75mL)およびTHF(0.5mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(70μL、0.070mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 8-48%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 25mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は5.2mg(16.4%)であり、LCMS分析による推定純度は91%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 826.19; 保持時間: 1.59分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 91.1%; 観測質量: 826.19; 保持時間: 1.53分
【０１６７】
実施例1018: (4-((4-(3-(3-(4-アセトアミドピペリジン-1-イル)プロポキシ)-2-クロロフェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-L-ホモセリン
【化４５】
2021516232.tif 000047
L-ホモセリン(9.7mg、0.081mmol)、N-(1-(3-(2-クロロ-3-(1-(2-クロロ-5-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-ホルミルフェノキシ)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-4-イル)フェノキシ)プロピル)ピペリジン-4-イル)アセトアミド(29.0mg、0.041mmol)、酢酸(12μL、0.20mmol)、4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)および乾燥TEA(2滴)/乾燥DMF(0.1mL)、エタノール(0.2mL)、ジクロロエタン(0.1mL)およびTHF(0.1mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(80μL、0.080mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 7-47%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は1.8mg(5.3%)であり、LCMS分析による推定純度は97%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.4%; 観測質量: 816.2; 保持時間: 1.52分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 97.2%; 観測質量: 816.15; 保持時間: 1.38分
【０１６８】
中間体: 5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化４６】
2021516232.tif 000048
第2世代XPhos触媒前駆体(30mg、0.038mmol)を、アルゴンで脱気した(S)-3-((3-(3-ブロモ-2-クロロフェノキシ)-プロピル)アミノ)プロパン-1,2-ジオール(128mg、0.38mmol)、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)フェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル(220mg、0.41mmol)およびリン酸カリウム(200mg、0.94mmol)/THF(4mL)および水(1mL)の混合物に室温で1度に加えた。バイアルを密封し、得られた懸濁液を16時間撹拌した後、酢酸エチルおよび水で希釈した。水層を分離し、酢酸エチルでもう1度抽出した後、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた粗製生成物を少量のジクロロメタンに溶解し、RediSepRf順相シリカゲル(Teledyne ISCO使い捨てカラム(12g))にチャージし、これを最初にジクロロメタン(30mL)で溶出し、続いて0-20%Bで240mL、および最後に20-100%Bで200mL溶出した(溶媒A=ジクロロメタン; 溶媒B=メタノール)。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥し、生成物、5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(117.7mg、47.1%)を橙色固体として得た。この物質を次のステップにそのまま直接用いた。
LCMS: tR=1.26分; LCMS (ESI) m/z=662.10および664.05 [M+H]＋; LCMS 条件: 注入量=1μL; グラジエント=2-98%B; グラジエント時間=1.5分; 流速=0.8mL/分; 波長=220nm; 移動相A=0:100 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B=100:0 アセトニトリル:水(0.05%トリフルオロ酢酸含有); カラム=Waters Aquity BEH C18、2.1 x 50mm、1.7U; オーブン温度=40℃
【０１６９】
実施例1019: (2R)-2-((5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化４７】
2021516232.tif 000049
5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシ-プロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)-メチル)ニコチノニトリル(30.0mg、0.045mmol)、(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(10.8mg、0.091mmol)、酢酸(13μL、0.23mmol)、および4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)/乾燥DMF(0.50mL)およびMeOH(0.42mL)の溶液を3時間撹拌した後、1Mシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.90μL、0.090mmol)を室温で少しずつ加えた。この混合物を室温で16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 7-47%Bで20分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は10.4mg(30.0%)であり、LCMS分析による推定純度は100%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 765.16; 保持時間: 1.64分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 100.0%; 観測質量: 765.17; 保持時間: 1.61分
【０１７０】
実施例1020: 5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-(ヒドロキシメチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化４８】
2021516232.tif 000050
実施例1020を上記実施例1019で得られた反応混合物の精製操作から単離した。生成物の収量は4.7mg(14.0%)であり、LCMS分析による推定純度は90%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 92.4%; 観測質量: 664.09; 保持時間: 1.9分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 89.8%; 観測質量: 664.07; 保持時間: 1.87分
【０１７１】
実施例1021: (5-クロロ-4-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-L-ホモセリン
【化４９】
2021516232.tif 000051
5-((4-クロロ-5-((4-(2-クロロ-3-(3-(((S)-2,3-ジヒドロキシプロピル)-アミノ)プロポキシ)フェニル)-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)-ニコチノニトリル(30.0mg、0.045mmol)、L-ホモセリン(53.9mg、0.453mmol)、酢酸(26μL、0.45mmol)、および4Å粉末モレキュラー・シーブ(25mg)/乾燥DMF(0.50mL)の溶液を3時間撹拌した後、ボラン2-ピコリンコンプレックス(9.7mg、0.091mmol)を室温で1度に加えた。この混合物を16時間撹拌した後、DMFおよびMeOH(1:2、総体積2mLまで)で希釈し、シリンジフィルターを介して濾過し、分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 3-43%Bで23分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)で精製し、フラクションはUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。この物質を分取LCMS(条件: カラム: XBridge C18、19 x 200mm、5U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); グラジエント: 9 - 49%Bで25分かけて溶出後、次いで100%Bで5分間溶出; 流速: 20mL/分; カラム温度: 25℃)でさらに精製し、フラクションはMSおよびUVシグナルで判定して回収した。所望の生成物を含むフラクションを合わせて、遠心エバポレーターで乾燥した。生成物の収量は2.1mg(5.9%)であり、LCMS分析による推定純度は97%であった。分析LCMSは最終的な純度を決定するために用いた。
インジェクション1条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(10mM酢酸アンモニウム含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション1結果: 純度: 98.5%; 観測質量: 765.18; 保持時間: 1.5分
インジェクション2条件: カラム: Waters XBridge C18、2.1 x 50mm、1.7U; 移動相A: 5:95 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 移動相B: 95:5 アセトニトリル:水(0.1%トリフルオロ酢酸含有); 温度: 50℃; グラジエント: 0-100%Bで3分かけて溶出後、次いで100%Bで0.50分間溶出; 流速: 1mL/分; 検出: MSおよびUV(220nm)
インジェクション2結果: 純度: 97.1%; 観測質量: 765.2; 保持時間: 1.41分
【０１７２】
(生物学的アッセイ)
式(I)の化合物のPD-L1に対する結合能を、PD-1/PD-L1ホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)バインディングアッセイを用いて調査した。
【０１７３】
(ホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)バインディングアッセイ)
PD-1およびPD-L1の相互作用は、可溶性かつ精製された、その2つのタンパク質の細胞外ドメインの標品を用いることで評価され得る。PD-1およびPD-L1のタンパク質細胞外ドメインは、検出タグにより融合タンパク質として発現され、PD-1におけるタグは、免疫グロブリン(PD-1-Ig)のFc部分であり、PD-L1におけるタグは、6ヒスチジンモチーフ(PD-L1-His)であった。全てのバインディングの研究は、0.1%ウシ血清アルブミンおよび0.05%(v/v)Tween-20が添加されたdPBSを含む、HTRFアッセイ緩衝液中で行われた。h/PD-L1-Hisバインディングアッセイには、阻害剤をPD-L1-His(最終濃度10nM)と共に15分間アッセイ緩衝液(4μL)中、予めインキュベートし、次いでPD-1-Ig(最終濃度20nM)/アッセイ緩衝液(1μL)を加え、さらに15分間インキュベートした。HTRFの検出は、ユウロピウムクリプテート標識抗Ig(最終濃度1nM)およびアロフィコシアニン(APC)標識抗His(最終濃度20nM)を用いて行った。抗体をHTRF検出緩衝液に希釈し、その5μLを結合反応液の上部に分注した。反応混合物を30分間平衡化し、生じたシグナル(665nm/620nmの比)を、蛍光光度計(EnVision)を用いて得た。別のバインディングアッセイを、ヒトタンパク質のPD-1-Ig/PD-L2-His(それぞれ20nM/5nM)間およびCD80-His/PD-L1-Ig(それぞれ100nM/10nM)間で行った。
【０１７４】
組み換えタンパク質:免疫グロブリンG(Ig)エピトープ標識[hPD-1(25-167)-3S-IG]のC末端ヒトFcドメインを持つヒトPD-1(25-167)、およびC末端Hisエピトープ標識[hPD-L1(18-239)-TVMV-His]を持つヒトPD-L1(18-239)は、HEK293T細胞に発現し、プロテインAアフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーにより連続して精製した。ヒトPD-L2-HisおよびCD80-Hisは市販品として得た。
【０１７５】
組み換えヒトPD-1-Igの配列
【表１】
2021516232.tif 000052
(配列番号1)
組み換えヒトPD-L1-Hisの配列
【表２】
2021516232.tif 000053
(配列番号2)
【０１７６】
下記の表は、ここで開示の代表的な実施例を用いた、PD-1/PD-L1のホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)バインディングアッセイで測定したIC50の値を記載した。
【表３】
2021516232.tif 000054
【０１７７】
式(I)の化合物は、PD-1/PD-L1相互作用の阻害剤としての活性を有する。そのため、PD-1/PD-L1相互作用に関連する疾患または欠乏症の治療に使用されてもよい。PD-1/PD-L1相互作用の阻害により、本開示の化合物は感染症(例えばHIV、敗血症性ショック、A型、B型、C型、またはD型肝炎、およびがん)を治療するために用いられてもよい。
【０１７８】
前述の具体的な実施態様の説明により、本発明の一般的性質が完全に明らかになるため、発明者以外が当業者の知識を適用することで、過度の実験をせず、本発明の基本概念から離れることなく、上記の特定の実施態様を容易に様々な応用に改良および/または適応され得る。それ故、そのような応用および改良は、本明細書に提示された内容および指針に基づいて、本開示の実施態様と同等の意義の範囲内であることを意図する。本明細書の表現または専門用語は、説明のための使用であり、内容および指針を踏まえて当業者に解釈される本明細書の表現または専門用語に限定されることはないと理解されるべきである。
【０１７９】
本発明のその他の実施態様は、本開示の発明の明細書および実施態様を考慮することで当業者に明らかである。明細書および実施例は、次の請求項で示される本発明の真の範囲及び精神で、例示的なものとしてのみ見なされることを意図する。
【０１８０】
本明細書で開示のあらゆる出版物、特許、および特許出願は、個々の出版物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが明確かつ個別に示されている場合と同様の範囲で参照により組み込まれる。
【配列表】
2021516232000001.app
【国際調査報告】
2021516232.tif 000067
2021516232.tif 000068
2021516232.tif 000069