(57)【要約】  本開示は、ＰＳＧＬ−１およびＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡに結合する薬剤（例えば、抗体）の相互作用を調節する（例えば、妨げる、阻害する、遮断する）ための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてＶＩＳＴＡ介在腫瘍を診断するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に特異的に結合することができる試薬と接触させる工程；および
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量し、前記試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定する工程
を含んでなる、方法。
【請求項２】
前記試薬がＤＮＡプローブ、ＲＮＡプローブ、および抗ＰＳＧＬ−１抗体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍微小環境の免疫浸潤物におけるＰＳＧＬ−１の結合が定量される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程（Ｂ）のレベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づいて適当な尺度で比較することにより腫瘍をスコア化する工程をさらに含んでなる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
工程ｂ）の発現レベルを参照レベルと比較する工程をさらに含んでなり、工程（ｂ）におけるＰＳＧＬ−１のアッセイレベルが参照レベルに比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在腫瘍の指標である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記参照レベルが正常組織試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
工程ａ）が前記生体試料において前記免疫浸潤物によるＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを測定することをさらに含んでなり；かつ
工程ｂ）が工程ａ）の発現レベルを対照レベルと比較することを含んでなり、
それにより、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、もしくはＣＤ８のアッセイレベルがＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、もしくはＣＤ８の対照レベルに比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在癌の指標である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
ＶＩＳＴＡ介在腫瘍が血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫）、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結合組織癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉頭癌、腎臓癌、口腔癌、卵巣癌、もしくは前立腺癌、または肉腫、黒色腫、もしくは神経膠腫、またはこれらの癌のいずれかの転移からなる群から選択される、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
患者のＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬であって、前記使用は請求項１〜８に係る前記患者において前記ＶＩＳＴＡ介在癌を診断する前工程を含んでなる、抗ＶＩＳＴＡ治療薬。
【請求項１０】
抗ＶＩＳＴＡ抗体である、請求項９に記載の使用のための抗ＶＩＳＴＡ治療薬。
【請求項１１】
前記抗ＶＩＳＴＡ抗体が、
ａ）Ｋａｂａｔにより定義される配列番号１２９６、１３５４、および１３９３の配列の３つのＣＤＲを含んでなる重鎖と；Ｋａｂａｔにより定義される配列番号１４３２、１４７７、および１４９９の配列の３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖を含んでなる抗ＶＩＳＴＡ抗体；ならびに
ｂ）Ｋａｂａｔにより定義される配列番号１２９６、１５５９、および１３９３の配列の３つのＣＤＲを含んでなる重鎖と；Ｋａｂａｔにより定義される配列番号１４３２、１６３３、および１４９９の配列の３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖を含んでなる抗ＶＩＳＴＡ抗体
からなる群から選択される、請求項１０に記載の使用のための抗ＶＩＳＴＡ治療薬。
【請求項１２】
前記抗ＶＩＳＴＡ抗体がヒト化抗体である、請求項１０に記載の使用のための抗ＶＩＳＴＡ治療薬。
【請求項１３】
抗ＶＩＳＴＡ治療薬による治療を適合させる工程をさらに含んでなり、前記治療の適合が、
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に不応であると診断された場合には、前記抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の低減もしくは抑制、または
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に応答すると診断された場合には、前記抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の継続
である、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の使用のための抗ＶＩＳＴＡ治療薬。
【請求項１４】
ＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１の相互作用に作動させるまたは拮抗させる抗体。
【請求項１５】
作動性抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗体フラグメントである、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
拮抗性抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗体フラグメントである、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１７】
ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの細胞外ドメインとの結合を阻害または遮断し得る、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
ＶＩＳＴＡ発現細胞とＰＳＧＬ−１発現Ｔ細胞との結合を阻害または遮断し得る、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１９】
前記ＶＩＳＴＡ発現細胞が骨髄細胞、樹状細胞、マクロファージまたはＴ細胞である、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記ＶＩＳＴＡ発現細胞が腫瘍細胞である、請求項１８または１９に記載の抗体。
【請求項２１】
前記ＰＳＧＬ−１発現細胞がＴ細胞である、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
ＰＳＧＬ−１とＰ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンとの結合を遮断も阻害もしない、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の抗体と、生理学上許容可能な担体、賦形剤および／または安定剤と、を含んでなる医薬組成物。
【請求項２４】
共抑制分子に対する拮抗剤または共刺激分子に対する作動剤をさらに含んでなる、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記拮抗剤が共抑制分子に対する抗体である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記共抑制分子がＣＤ８６、ＣＤ８０、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＢＴＮＬ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ブチロフィリン、ＣＤ４８、ＣＤ２４４、ＴＩＭ−３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２００、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ガレクチン９、ＴＩＭ３、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３およびＴＩＧＩＴからなる群から選択される、請求項２４または２５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
緒論
免疫療法は癌療法の分野のゲームチェンジャーとなった。免疫チェックポイントに基づく療法の開発は、息を呑むような速度で進行している。しかしながら、免疫療法に応答するのは患者の一部にすぎない。癌免疫療法における特定の課題は、このような治療の候補を特定し疾病管理の決定を導くために使用し得る、機序に基づくバイオマーカーの同定となってきた(Topalian et al., N Engl J Med, 366(26): 2443-54 (2012))。従って、患者の選択は、利益を受ける見込みのない患者における治療関連の毒性およびコストを回避するので重要な問題である。
【０００２】
腫瘍抗原が応答を一度刺激しても免疫炎症性応答が活性化され続けないようにするために、複数の制御機構または「チェックポイント」が配備され、または活性化される。これらのチェックポイントは、主として、Ｔ細胞受容体が周囲の腫瘍微小環境中の細胞上のリガンドに結合し、免疫シナプスを形成し、次にこれがＴ細胞の機能を調節することによって呈される。
【０００３】
ＶＩＳＴＡ(V-Domain Ig Suppressor of T Cell Activation)は、Ｔ細胞の活性化および免疫応答を調節する負のチェックポイント制御タンパク質である。これはＢ７およびＣＤ２８の両ファミリーの類似ドメインと相同性を有する単一のＩｇ様Ｖ型ドメインと細胞内ドメインを含むＩ型膜貫通タンパク質である。ＶＩＳＴＡ細胞質テールドメインは、２つの潜在的タンパク質キナーゼＣ結合部位ならびに合体部位として働き得るプロリン残基を含み、ＶＩＳＴＡは受容体およびリガンドの両方として働く可能性があることが示唆される。
【０００４】
ＶＩＳＴＡは、ＰＤＬ−１と相同であるが、造血コンパートメントに限定される独特な発現パターンを示す。ＶＩＳＴＡは、骨髄細胞および顆粒球で最も発現が高く、Ｔ細胞ではより低レベルで発現されるが、Ｂ細胞上には存在しない(Wang et al., JEM 208(3):577-592 (2011); Flies et al., J. Immunology 187(4):1537-1541 (2011))。ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞および骨髄細胞集団において活性化または免疫誘導の際に誘導され、炎症がその発現を誘導することが示唆される(Wang et al., 前掲)。他方、腫瘍細胞ではＶＩＳＴＡの発現は検出されなかったが(Le Mercier et al., Cancer Res; 74:1933−44 (2014))、ヒト胃癌細胞はＶＩＳＴＡを低頻度で発現することが報告されている(Boger et al., OncoImmunology, 6:4, e1293215 (2017))。存在する場合には、ＶＩＳＴＡの発現は、結腸または肺癌の腫瘍微小環境中の浸潤性ＣＤ１１ｂ＋細胞に限定されていると思われる。しかしながら、腫瘍微小環境中のＶＩＳＴＡの発現に関連し得る腫瘍の特徴を特定するにはさらなる研究が必要とされると記載されていた(Lines et al., Cancer Immunol Res; 2(6):510−7 (2014))。
【０００５】
ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞上の負の受容体およびＡＰＣ上で発現される、Ｔ細胞上の未知の受容体と相互作用するリガンドの両方として働くと思われる。
【０００６】
いくつかの所見が、ＶＩＳＴＡはＴ細胞上の未知の受容体と相互作用するリガンドとして作用することによりＴ細胞応答に負の調節を行うことを示唆している。ＰＤ−Ｌ１と同様に、ＶＩＳＴＡは、免疫を著しく抑制するリガンドである(Lines et al., Cancer Res; 74:1924−32 (2014))、ＰＤ−Ｌ１と同様に、ＶＩＳＴＡの遮断は、前臨床腫瘍学モデルにおいて癌に対する治療免疫の生成を可能とする(Le Mercier et al., 前掲参照)。ＶＩＳＴＡの遮断は免疫、特に、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋が介在するＴ細胞免疫を増強するが、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインの可溶性Ｉｇ融合タンパク質（ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）による処置は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＴ細胞の増殖およびサイトカインの産生を阻害し、マウスにおいて、ＭＣＡ１０５腫瘍細胞上のＶＩＳＴＡの過剰発現は、防御型の抗腫瘍免疫に干渉する(Wang et al., 前掲)。さらに、ＶＩＳＴＡ特異的モノクローナル抗体の投与は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＣＤ４＋  Ｔ細胞応答を、マウスにおいて自己免疫の生成を増強した(Wang et al., 前掲)。他方、ＶＩＳＴＡは、他のＩｇスーパーファミリーメンバーとは重複しない機能的活性を有すると思われ、癌における自己免疫および免疫監視の生成に役割を果たす可能性がある。特に、Ｆｃ融合タンパク質を用いた研究は、ＶＩＳＴＡがリガンド活性を有することを明らかに示すが(Wang et al., 前掲, Lines et al., 前掲)、受容体様シグナル伝達活性もまた記載されている(Flies et al., J Clin Invest; 124:1966−75 (2014))。実際に、Ｔ細胞上の受容体としてのＶＩＳＴＡの直接的な負の役割がいくつかの研究によって裏づけられている。
【０００７】
免疫細胞浸潤物の組成は腫瘍実体が違えば異なるだけでなく、同じ解剖学的部位の腫瘍内でも異なることが周知である。著者らは、異なる免疫治療組合せに対する応答はおそらく患者の免疫環境によるものであると推測していた(Farkona et al., BMC Medicine 14: 73 (2016))。これに関して、ＰＤＬ−１の発現は免疫攻撃を回避するように誘導されることが知られている(Sharma et al., Cell, 168: 707-23 (2017))。ＰＤＬ−１の発現は、腫瘍内および腫瘍間変動を示す(Mino-Kenudson, Cancer Biol Med, 13(2): 157-70 (2016))が、抗ＰＤ−１抗体に対する客観的応答に関連している(Topalian et al., 前掲)。他方、タンパク質の作用を媒介するＶＩＳＴＡ結合相手はまだ同定されていない(Le Mercier et al., Frontiers in Immunology, 6:418 (2015))。抗ＶＩＳＴＡ分子を用いた２つの第Ｉ相臨床試験が開始されているが、これらの治療に対する患者の応答を予測し得るバイオマーカーは存在しない。よって、ＶＩＳＴＡの結合相手位を同定する必要があるが、それは治療薬の開発を促し、抗ＶＩＳＴＡ治療薬による処置に感受性のある患者の選択を可能とするからである。
【０００８】
本明細書に記載されるものと類似または同一のあらゆる方法および材料が本発明の実施または試験に使用可能であり、本明細書には好適な方法および材料を記載する。本発明の実施には、別段の定めがない限り、従来の技術または当技術分野の技術の範囲内のタンパク質化学、分子ウイルス学、微生物学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学が用いられる。このような技術は文献に詳細に説明されている(例えば、Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, Current Protocols; 第5版, 2002; Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985;およびSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 第3版, 2001参照)。本明細書に記載の分子・細胞生物学、タンパク質生化学、酵素学および医化学・薬化学に関して使用する命名法、ならびにそれらの実験室手順および技術は、当技術分野で周知かつ慣用されている。本明細書に記載の総ての刊行物、特許出願、特許、および他の参照文献は、引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。さらに、材料、方法、および例は単に例示であって、特に断りのない限り、限定を意図するものではない。
【０００９】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ＴＲＩＣＥＰＳ試薬を用いたＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）スクリーニング手順の流れ図を示す。対象リガンドはＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質であった。対照リガンドは抗ＣＤ２８抗体であった。
【図２】図２は、ＰＳＧＬ−１のプロッターイラストである。Ｎ−グリコシル化部位は、四角で囲んだ残基で表し、実験的に観察されたペプチドは、埋めた丸で表す。
【図３】図３は、ＰＳＧＬ−１構築物Ａの細胞外ドメインに対するＶＩＳＴＡ−Ｆｃの例示的結合アッセイの結果を示す。
【図４】図４は、ＰＳＧＬ−１構築物Ｂの細胞外ドメインに対するＶＩＳＴＡ−Ｆｃの例示的結合アッセイの結果を示す。
【図５】図５は、フローサイトメトリーによるＨＬ−６０細胞におけるＰＳＧＬ−１の検出の例示的ヒストグラムを示す。アイソタイプおよびバックグラウンドはグレーの網掛けピークで表し、ＰＳＧＬ−１発現細胞は白い網掛けピークで表す。
【図６】図６は、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の間の相互作用を検出する例示的ウエスタンブロットを示す。ＰＳＧＬ−１を矢印で示し、ＰＳＧＬ−１の不完全な還元は、２本以上のバンドとなることが知られている。
【図７】図７は、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の間の相互作用を減弱する抗ＶＩＳＴＡ抗体の棒グラフを示す。各バーは、ＰＳＧＬ−１タンパク質に相当するバンド強度を表す。「−」の記号は、抗ＶＩＳＴＡ抗体を添加しなかったことを表す。「＋」の記号は、抗ＶＩＳＴＡ抗体とのプレインキュベーションを表す。
【図８】図８は、フローサイトメトリーによるＰＢＭＣにおけるＰＳＧＬ−１の検出の例示的ヒストグラムを示す。アイソタイプおよびバックグラウンドはグレーの網掛けピークで表し、ＰＳＧＬ−１発現細胞は白い網掛けピークで表す。
【図９】図９は、抗ＶＩＳＴＡ抗体および抗ＰＳＧＬ−１抗体を用いたＰＳＧＬ−１の共免疫沈降を示す例示的ウエスタンブロットを示す。ＰＳＧＬ−１を矢印で示す。
【図１０】図１０は、ナイーブ・休止中エフェクターおよび疲弊エフェクターＴ細胞サブセットの例示的フローサイトメトリーアッセイにおけるＰＳＧＬ−１発現を示す。
【図１１】図１１は、循環セントラルメモリーＴ細胞サブセットおよび循環エフェクターメモリーＴ細胞サブセットの例示的フローサイトメトリーアッセイにおけるＰＳＧＬ−１発現を示す。
【図１２】図１２は、扁平上皮肺腫瘍上のＰＳＧＬ１、ＶＩＳＴＡおよびＰＤＬ１のｍＲＮＡの多重染色の例を示す。
【図１３】図１３は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞からのＶＩＳＴＡ依存性ＩＬ−２放出を阻害するＰＳＧＬ−１の棒グラフを示す。
【発明の具体的説明】
【００１１】
定義
別段の定めがない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解しているものと同じ意味を有する。総ての特許、特許出願、公開特許出願およびその他の刊行物は、引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。本明細書の用語に関して複数の定義が存在する場合には、別段の定めがない限り、本節のものが優先される。
【００１２】
用語「約」または「およそ」は、当業者に知られている所与の値または範囲に関する通常の誤差範囲を指す。それは通常、所与の値または範囲の２０％以内、例えば１０％以内、または５％以内（または１％以下）を意味する。
【００１３】
本明細書で使用する場合、「投与する」または「投与」は、ある物質（例えば、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体および／または抗ＶＩＳＴＡ抗体）を、それが体外に存在する場合に、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達および／または本明細書に記載されるまたは当技術分野で公知の物理的送達の他のいずれかの方法によって患者に注射する、またはそうでなければ物理的に送達する行為を指す。疾患またはその症状が治療される場合には、その物質の投与は一般に疾患またはその症状の発症後に行われる。疾患またはその症状が予防される場合には、その物質の投与は一般に疾患またはその症状の発症前に行われる。
【００１４】
本明細書で使用する場合、「拮抗剤」または「阻害剤」は、標的タンパク質の生物活性のうち１以上を阻害またはそうでなければ低減し得る分子、例えば、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡまたは本明細書に記載される異なる共抑制分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１の拮抗剤（例えば、本明細書で提供される拮抗性抗体）は、例えば、ＰＳＧＬ−１を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）および／またはＶＩＳＴＡを発現する細胞（例えば、ＶＩＳＴＡ保有腫瘍細胞、制御性Ｔ細胞、骨髄由来免疫抑制細胞または免疫抑制樹状細胞）の活性化および／または細胞シグナル伝達経路を阻害またはそうでなければ低減し、それにより、細胞の生物活性を拮抗剤の不在下での生物活性に比べて阻害することにより作用し得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、拮抗性抗ＰＳＧＬ−１抗体である。いくつかの実施形態では、共抑制分子の拮抗剤（例えば、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＢＴＮＬ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ブチロフィリン、ＣＤ４８、ＣＤ２４４、ＴＩＭ−３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２００、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ガレクチン９、ＴＩＭ３、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３またはＴＩＧＩＴに対する拮抗性抗体）は、例えば、共抑制分子を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞または抗原提示細胞）の活性化および／または細胞シグナル伝達経路を阻害またはそうでなければ低減し、それにより、細胞の生物活性を拮抗剤の不在下での生物活性に比べて阻害することにより作用し得る。いくつかの実施形態において、拮抗性分子は、拮抗性抗体、すなわち、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡまたは本明細書に記載される異なる共抑制分子などの抗原の生物活性のうち１以上を阻害するまたは低減する抗体である。特定の拮抗性抗体は、前記抗原の生物活性のうち１以上を実質的にまたは完全に阻害する。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「作動剤」または「活性剤」は、標的タンパク質の生物活性のうち１以上を活性化またはそうでなければ増強し得る、共刺激分子などの分子を指す。いくつかの実施形態では、共刺激分子の作動剤（例えば、ＣＤ１５４、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＭＩＧＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＨＨＬＡ２、ＩＣＯＳＬ、サイトカイン、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、Ｂ７−Ｈ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ４、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ２、およびＣＤ２２６の作動性抗体）は、例えば、共刺激分子を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞または抗原提示細胞）の活性化および／または細胞シグナル伝達経路を活性化またはそうでなければ増強し、それにより、細胞の生物活性を作動剤の不在下での生物活性に比べて増強することにより作用し得る。いくつかの実施形態において、作動性分子は、作動性抗体、すなわち、抗原の生物活性のうち１以上を活性化または増強する抗体、例えば、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡまたは本明細書に記載される異なる共抑制分子である。特定の作動性抗体は、前記抗原の生物活性のうち１以上を実質的にまたは完全に活性化する。
【００１６】
用語「抗体」および「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は、本明細書では互換的に使用される。これらの用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、特に、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなどの任意のアイソタイプのモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、および抗体フラグメント（前記フラグメントが所望の生物学的機能を保持する限り）を包含する。特定の抗原と反応性のある抗体は、ファージもしくは類似のベクターにおける組換え抗体ライブラリーの選択などの組換え法によるか、または抗原もしくは抗原コード核酸で動物を免疫することにより作製することができる。これらの用語は、特定の分子抗原と結合することができ、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成され、各対は１本の重鎖（約５０〜７０ｋＤａ）と１本の軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は約１００〜約１３０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分は定常領域を含む免疫グロブリン種のポリペプチドの範囲内にＢ細胞のポリペプチド産物を含むことを意図する（Borrebaeck (編) (1995) Antibody Engineering, 第2版, Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology, 第3版, W.H. Freeman and Company, New York参照）。いくつかの実施形態では、特定の分子抗原には本明細書で提供される抗体が結合可能であり、標的ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、フラグメントまたはエピトープを含む。
【００１７】
抗体としてはまた、限定されるものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え生産抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、およびフラグメントが由来する抗体の結合活性の一部または総てを保持する抗体重鎖または軽鎖ポリペプチドの一部を指す上記のいずれかの機能的フラグメントが含まれる。機能的フラグメントの限定されない例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよびミニボディが含まれる。特に、本明細書で提供される抗体としては、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子に免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメインまたはＶＩＳＴＡ抗原に結合する抗原結合部位（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有する分子が含まれる。このような抗体フラグメントは、例えば、Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (編), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189−224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989)およびDay, E.D., Advanced Immunochemistry, 第2版, Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990)の記載を見出すことができる。本明細書で提供される抗体は、いずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、いずれのクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはいずれのサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子であってもよい。本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体は、作動性抗体または拮抗性抗体であり得る。
【００１８】
用語「抗ＰＳＧＬ−１抗体」、「ＰＳＧＬ−１に結合する抗体」、「ＰＳＧＬ−１エピトープに結合する抗体」、および類似の用語は本明細書では互換的に使用され、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、例えば、ＰＳＧＬ−１抗原またはエピトープに結合する抗体を指す。このような抗体には、ヒト化抗体が含まれる。ＰＳＧＬ−１抗原に結合する抗体は、関連の抗原と交差反応する可能性がある。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体は、他の抗原と交差反応しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１とＰ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンの結合を遮断も阻害もしない。ＰＳＧＬ−１に結合する抗体は、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、または当業者に公知の他の技術によって同定することができる。抗体はＰＳＧＬ−１に結合し、例えば、それがラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を用いて決定した場合にいずれの交差反応性抗原よりも高い親和性でＰＳＧＬ−１に結合する場合には、例えば、ＰＳＧＬ−１に特異的に結合する抗体である。一般に、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合もある。例えば、抗体の特異性に関する考察については、Paul編, 1989, Fundamental Immunology 第2版 Raven Press, New York at pages 332−336を参照。いくつかの実施形態では、対象とする抗原と「結合する」抗体は、その抗体がその抗原を発現する細胞または組織を標的とする診断薬および／または治療薬として有用であるように十分な親和性で抗原と結合し、他のタンパク質とは有意に交差反応しないものである。このような実施形態において、抗体と「非標的」タンパク質の結合の程度は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降（ＲＩＡ）で決定した場合に、抗体とその特定の標的タンパク質の結合の約１０％未満である。抗体と標的分子の結合に関して、「特異的結合」または特定のポリペプチドもしくは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「に特異的に結合する」もしくは「に対して特異的」であるという用語は、非特異的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、ある分子の結合を、一般的には結合活性を持たない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して決定することによって評価することができる。例えば、特異的結合は、その標的と類似の対照分子、例えば、過剰量の非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、標識された標的とプローブの結合が過剰量の非標識標的によって競合的に阻害されれば、特異的結合が示される。「特異的結合」または本明細書で使用されるような特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「と特異的に結合する」もしくは「に特異的」であるという用語は、例えば、標的に対するＫＤが少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは少なくとも���１０−１１Ｍ、あるいは少なくとも約１０−１２Ｍであるかまたはそれを超える分子によって示され得る。いくつかの実施形態では、「特異的結合」という用語は、分子が他のいずれのポリペプチドまたはポリペプチドエピトープとも実質的に結合せずに、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する場合の結合を指す。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体は、異種のＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡ間で保存されているＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡのエピトープに結合する。
【００１９】
「抗原」は、抗体が選択的に結合し得る所定の抗原である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテンまたはその他の天然または合成化合物であり得る。いくつかの実施形態では、標的抗原は、例えばＰＳＧＬ−１ポリペプチドを含むポリペプチドである。
【００２０】
用語「抗原結合フラグメント」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」および類似の用語は、抗原と相互作用し、その抗原に対する特異性および親和性を結合剤に付与するアミノ酸残基（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含んでなる抗体の一部を指す。
【００２１】
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、Ｔ細胞などの特定のリンパ球による認識のために抗原を処理および提示することによる細胞性免疫応答を媒介するヘテロな免疫細胞群を指す。ＡＰＣとしては、限定されるものではないが、樹状細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞およびＢ細胞が含まれる。
【００２２】
用語「結合する」または「結合」は、本明細書で使用する場合、分子間の相互作用による複合体の形成を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、および／またはファンデルワールス相互作用を含む非共有結合的相互作用であり得る。複合体はまた、共有結合または非共有結合、相互作用または力により相互に保持される２つ以上の分子の結合も含み得る。抗体上の単一の抗原結合部位とＰＳＧＬ−１などの標的分子の単一のエピトープとの間の合計の非共有結合的相互作用の強度が、そのエピトープに対するその抗体または機能的フラグメントの親和性である。一価抗原に対する抗体の会合（ｋ１）／解離（ｋ−１）比（ｋ１／ｋ−１）が、親和性の尺度である会合定数Ｋである。Ｋの値は抗体と抗原の異なる複合体では異なり、ｋ１およびｋ−１の両方に依存する。本明細書で提供される抗体の会合定数Ｋは、本明細書で提供されるいずれの方法によってもまたは当業者に周知のいずれの方法によっても決定することができる。１つの結合部位における親和性は、抗体と抗原の間の相互作用の真の強度をいつも表しているわけではない。多価ＰＳＧＬ−１など、複数の反復抗原決定基を含む複合抗原が複数の結合部位を含む抗体と接触すると、ある１つの部位での抗体と抗原の相互作用は第２の部位における反応の確率を高める。このような多価抗体および抗原間の多重相互作用の強度はアビディティーと呼ばれる。抗体のアビディティーは、その個々の結合部位の親和性よりも良好な結合能尺度となり得る。例えば、五量体ＩｇＭ抗体で見られることがあるように、高いアビディティーは低い親和性を補償することができ、五量体ＩｇＭ抗体は、ＩｇＧよりも親和性は低いが、その多価性によるＩｇＭの高いアビディティーはそれが効果的に抗原と結合することを可能とする。
【００２３】
用語「生体試料」は、患者または対象などの生物学的供給源から得られた試料を指す。いくつかの実施形態では、生体試料としては、限定されるものではないが、全血、部分的に精製された血液、ＰＢＭＣ、組織生検などが含まれる。好ましくは、生体試料は、腫瘍試料である。いくつかの好ましい実施形態において、生体試料は、組織生検（例えば、免疫浸潤物を含み得る腫瘍生検）により得られる。
【００２４】
用語「遮断」またはその文法的同等表現は、抗体に関して使用する場合、抗体が結合する抗原の生物活性を妨げるまたは停止させる抗体を指す。遮断抗体としては、反応を惹起することなく抗原と会合するが、後に別のタンパク質がその抗原と会合または複合体形成することを遮断する抗体が含まれる。抗体の遮断効果は、抗原の生物活性に測定可能な変化をもたらすものであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１に対するＶＩＳＴＡの結合能力を遮断し、これがＶＩＳＴＡの抑制シグナルの阻害または遮断をもたらし得る。本明細書に記載される特定の抗ＰＳＧＬ−１抗体は、適当な対照（例えば、対照は供試抗体で処理されない細胞である）に比べて約９８％〜約１００％など、ＶＩＳＴＡ発現細胞上のＶＩＳＴＡの抑制シグナルを阻害または遮断する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１と細胞外ドメインＶＩＳＴＡの結合を遮断し、かつ／またはＶＩＳＴＡ発現細胞とＰＳＧＬ−１発現細胞の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１とＰ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、および／またはＥ−セレクチンなどのＶＩＳＴＡ以外のタンパク質との結合を遮断しない。
【００２５】
用語「ＶＩＳＴＡ」または「ＶＩＳＴＡポリペプチド」および類似の用語は、当技術分野でＢ７−Ｈ５、血小板受容体Ｇｉ２４、ＧＩ２４、Ｓｔｒｅｓｓ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ＳＩＳＰ１、およびＰＰ２１３５としても知られるヒト染色体１０オープンリーディングフレーム５４(Chromosome 10 Open Reading Frame 54)（ＶＩＳＴＡ）遺伝子によりコードされているポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に使用される）を指し、例えば、以下のアミノ酸配列：
【化１】
2021531007.tif 000002
およびそのＳＮＰ変異体を含む関連のポリペプチドを含んでなる。ＶＩＳＴＡポリペプチドは、アミノ酸配列内に、シグナル配列（残基１〜３２；Zhang et al., Protein Sci. 13:2819−2824 (2004)参照）；免疫グロブリンドメイン−ＩｇＶ様（残基３３〜１６２）；および膜貫通領域（残基１９５〜２１５）を含むいくつかの異なる領域を含んでなることが示されているか、または推定される。成熟ＶＩＳＴＡタンパク質は、配列番号１のアミノ酸残基３３〜３１１を含む。ＶＩＳＴＡタンパク質の細胞外ドメインは、配列番号１のアミノ酸残３３〜１９４を含む。関連ポリペプチドとしては、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；フラグメント；誘導体；置換、欠失、および挿入変異体；融合ポリペプチド；および種間ホモログが含まれ、好ましくは、それらはＶＩＳＴＡの活性を保持し、かつ／または抗ＶＩＳＴＡ免疫応答を生じるに十分なものである。ＶＩＳＴＡは、天然型または変性型で存在し得る。本明細書に記載されるＶＩＳＴＡポリペプチドは、ヒト組織種もしくは別の供給源などの様々な供給源から単離され、または組換えもしくは合成法により作製され得る。「天然配列ＶＩＳＴＡポリペプチド」は、天然由来の対応するＶＩＳＴＡポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでなる。このような天然配列ＶＩＳＴＡポリペプチドは天然から単離することもできるし、または組換えもしくは合成手段によって生産することもできる。用語「天然配列ＶＩＳＴＡポリペプチド」は、特に、特定のＶＩＳＴＡポリペプチドの天然に存在する末端切断型または分泌型（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異体型（例えば、選択的スプライス形態）およびポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子変異体を包含する。
【００２６】
ＶＩＳＴＡポリペプチドをコードするｃＤＮＡ核酸配列は、例えば、以下を含んでなる。
【化２】
2021531007.tif 000003
【００２７】
本明細書に記載されるように、ＶＩＳＴＡは、免疫応答の負のチェックポイントレギュレーターである（例えば、免疫応答を阻害または抑制する）免疫調節剤である。また本明細書に記載されるように、ＰＳＧＬ−１は、ＶＩＳＴＡの受容体である。また本明細書に記載されるように、ＰＳＧＬ−１およびＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡに結合する薬剤（例えば、抗体）との相互作用を調節する（例えば、妨げる、阻害する、遮断する）ための方法は、例えば、ＶＩＳＴＡの抑制シグナルを阻害または遮断するためなどに有用である。ＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１の相互作用の調節は、免疫の活性化（例えば、Ｔ細胞の増殖などのＴ細胞の活性化）の増強を含む免疫応答の増強をもたらし得る。本明細書に記載されるような方法において有用な、ＶＩＳＴＡに結合する抗体には、ＷＯ２０１４／１９７８４９（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４１３８８）に開示されているものが含まれる。
【００２８】
ＶＩＳＴＡポリペプチドに対するオーソログもまた当技術分野で周知である。例えば、ＶＩＳＴＡポリペプチドに対するマウスオーソログは、Ｖ−ｒｅｇｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）（ＰＤ−Ｌ３、ＰＤ−１Ｈ、ＰＤ−ＸＬ、Ｐｒｏ１４１２およびＵＮＱ７３０としても知られる）であり、ヒトポリペプチドとおよそ７０％の配列同一性を有する。ＶＩＳＴＡのオーソログはまた、チンパンジー、ウシ、ラットおよびゼブラフィッシュを含むさらなる生物にも見出すことができる。
【００２９】
「ＶＩＳＴＡ発現細胞」、「ＶＩＳＴＡ発現を有する細胞」またはその文法的同等表現は、細胞表面に内因性のまたはトランスフェクトされたＶＩＳＴＡを発現する細胞を指す。ＶＩＳＴＡ発現細胞としては、ＶＩＳＴＡ保有腫瘍細胞、制御性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋  Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞）、骨髄由来免疫抑制細胞（例えば、ＣＤ１１ｂ＋またはＣＤ１１ｂｈｉｇｈ骨髄由来免疫抑制細胞）および／または免疫抑制樹状細胞（例えば、ＣＤ１１ｂ＋またはＣＤ１１ｂｈｉｇｈ樹状細胞）が含まれる。ＶＩＳＴＡ発現細胞は、抗ＶＩＳＴＡ抗体がそれに結合可能であり、かつ／またはＰＳＧＬ−１もしくはＰＳＧＬ−１発現細胞はそれに結合可能である十分なレベルのＶＩＳＴＡをその表面に産生する。いくつかの態様において、このような結合の阻害または遮断は、治療効果を有し得る。ＶＩＳＴＡを「過剰発現する」細胞は、ＶＩＳＴＡを発現することが知られる同じ組織種の細胞に比べて、その細胞表面に有意に高いレベルのＶＩＳＴＡを有するものである。このような過剰発現は、遺伝子の増幅または転写もしくは翻訳の増大によって引き起こされ得る。ＶＩＳＴＡ過剰発現は、診断アッセイまたは予後アッセイで、細胞表面に存在するＶＩＳＴＡタンパク質レベルの増大を評価することによって（例えば、免疫組織化学アッセイ；ＦＡＣＳ分析による）決定され得る。その代わりに、またはそれに加えて、例えば、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション；（ＦＩＳＨ；１９９８年１０月公開のＷ０９８／４５４７９参照）、サザンブロット法、ノーザンブロット法、またはリアルタイム定量的ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲなどのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術によって細胞におけるＶＩＳＴＡコード核酸またはｍＲＮＡのレベルを測定することもできる。上記のアッセイの他、様々なｉｎ  ｖｉｖｏアッセイが当業者に利用可能である。例えば、患者の体内の細胞を、場合により検出可能な薬剤で標識されていてもよい抗体に曝し、その抗体と患者における細胞の結合を、例えば、放射能の外部スキャンまたは従前に抗体に曝された患者から採取した生検の分析によって評価することができる。ＶＩＳＴＡ発現腫瘍細胞としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）腫瘍細胞が含まれる。
【００３０】
「ＶＩＳＴＡ介在疾患」、「ＶＩＳＴＡ介在障害」および「ＶＩＳＴＡ介在病態」は互換的に使用され、ＶＩＳＴＡにより全面的にもしくは部分的に引き起こされた、またはＶＩＳＴＡの結果であるいずれの疾患、障害または病態も指す。このような疾患、障害または病態としては、ＶＩＳＴＡ発現細胞（例えば、腫瘍細胞、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、免疫抑制樹状細胞（免疫抑制ＤＣ）、および／または制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇｓ））によるものまたは関連するものを含む、ＶＩＳＴＡにより引き起こされるもの、またはそうでなければ関連するものが含まれる。いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡは、細胞表面に異常に（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡは、特定の細胞種に異常に上方調節されている場合がある。他の実施形態では、正常、異常または過剰な細胞シグナル伝達は、ＶＩＳＴＡと、ＶＩＳＴＡと結合し得る、またはそうでなければ相互作用し得るＶＩＳＴＡ受容体（例えば、ＰＳＧＬ−１）の結合により引き起こされる。
【００３１】
用語「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖と関連する障害を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、腫瘍または癌である。「腫瘍」は、本明細書で使用する場合、悪性であれ良性であれ、総ての新生細胞の成長および増殖、ならびに総ての前癌および癌性細胞および組織を指す。用語「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」および「腫瘍」は、本明細書に言及される場合、相互に排他的なものではない。用語「癌」および「癌性」は、一般に制御されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指す、または記載する。癌の例としては、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ系悪性腫瘍が含まれる。このような癌のさらに詳しい例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、肺癌(小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む)、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（gastric or stomach cancer）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、口腔癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌(kidney or renal cancer)、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫、脳癌、ならびに頭頸部癌、および関連の転移が含まれる。いくつかの実施形態では、癌は血液癌であり、これは骨髄などの血液形成組織、または免疫系細胞を起源とする癌を指す。血液癌の例は、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、または急性単球性白血病（ＡＭｏＬ））、リンパ腫（ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫）、および骨髄腫（多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局骨髄腫または髄外性骨髄腫）である。
【００３２】
「共抑制分子」（「負のチェックポイントレギュレーター」または「ＮＣＲ」としても知られる）は、リガンドまたは対抗受容体が結合した後にＴ細胞に負のシグナルを送達することにより免疫応答（例えば、Ｔ細胞の活性化）を下方調節する分子を指す。共抑制分子の例示的機能は、調和を欠いた免疫の活性化を防ぎ、付帯する損傷を最小とし、かつ／または末梢の自己免疫寛容を維持することである。いくつかの実施形態では、共抑制分子は、抗原提示細胞により発現されるリガンドまたは受容体である。いくつかの実施形態では、共抑制分子は、Ｔ細胞により発現されるリガンドまたは受容体である。いくつかの実施形態では、共抑制分子は、抗原提示細胞およびＴ細胞の両方により発現されるリガンドまたは受容体である。
【００３３】
「共刺激分子」は、リガンドまたは対抗受容体が結合した後にＴ細胞に正のシグナルを送達することにより免疫応答（例えば、Ｔ細胞の活性化）を上方調節する分子を指す。Ｔ細胞が完全に活性化されるようになるには２つのシグナルが必要とされる：１）抗原特異的シグナルは、抗原提示細胞上のペプチドＭＨＣ分子と相互作用するＴ細胞受容体を介して提供され；２）抗原非特異的な共刺激シグナルは、抗原提示細胞およびＴ細胞の膜で発現される共刺激分子間の相互作用により提供される。Ｔ細胞の共刺激は、Ｔ細胞の増殖、分化および生存をもたらす。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、抗原提示細胞により発現されるリガンドまたは受容体である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、Ｔ細胞により発現されるリガンドまたは受容体である。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、抗原提示細胞およびＴ細胞の両方により発現されるリガンドまたは受容体である。
【００３４】
「化学療法薬」は、作用機序に関わらず、癌の治療において有用な化学的または生物学的薬剤（例えば、小分子薬または生物製剤、例えば、抗体または細胞を含む薬剤）である。化学療法薬としては、標的療法および従来の化学療法において使用される化合物が含まれる。化学療法薬の例としては、限定されるものではないが、チオテパおよびサイトキサン（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどのアジリジン；エチレンイミンおよびメチルメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロロメラミンを含む）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＡＲ１ＮＯＬ（登録商標））；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、カンプトサール（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクロチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγＩおよびカリケアマイシンωＩＩ（例えば、Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994)参照）などの抗生物質；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連の発色タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン���ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝産物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナリン作用薬；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ユージーン、オレゴン州）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベルカリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（エルジシン（登録商標）、フィルデシン（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、プリンストン、Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン（商標）パクリタキセルのクレモフォールフリー、アルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、シャンバーグ、ＩＬ．）、およびタキソテール（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン（ベルバン（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン（ゼローダ（登録商標））；上記のいずれかの薬学上許容可能な塩、酸または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組合せ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略号ＣＨＯＰ、ならびに５−ＦＵおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（エロキサチン（商標））を用いる投与計画の略号ＦＯＬＦＯＸが含まれる。さらなる化学療法薬としては、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１とＤＭ４）およびオーリスタチン（例えば、ＭＭＡＥとＭＭＡＦ）などの抗体薬物複合体として有用な細胞傷害性薬剤が含まれる。
【００３５】
化学療法薬の定義にはまた、（ｉ）腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害する働きをする抗ホルモン薬、例えば、タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ  １１７０１８、オナプリストン、およびフェアストン（登録商標）（クエン酸トレミフェン）を含む抗エストロゲン作用薬および選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン生産を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、フォルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、ＲＩ  ＶＩＳｏｒ（登録商標）（ボロゾール）、フェマラ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびアリミデックス（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン作用薬；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）ＭＥ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）などのタンパク質キナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路の遺伝子、例えば、ＰＫＣ−α、ＲａｆおよびＨ−Ｒａｓの発現を阻害するもの、例えば、オブリメルセン（ゲナセンス（登録商標）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、アンジオザイム（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子療法ワクチン、例えば、アロベクチン（登録商標）、ロイベクチン（登録商標）、およびＶＡＸ１Ｄ（登録商標）などのワクチン；プロロイキン（登録商標）ｒＩＬ−２；ルルトテカン（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；アバレリクス（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（アバスチン（登録商標、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの抗血管新生薬、（ｘ）二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢＩＴＥ）抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞などの免疫調整薬；ならびに上記のいずれかの薬学上許容可能な塩、酸および誘導体も含まれる。
【００３６】
「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨ  β−シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬ  β−シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）のうちの１つを指す。よって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在した可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者に周知であり、例えばＫａｂａｔにより、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の超可変性の最も高い領域として定義されている(Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978))。ＣＤＲ領域配列はまた、Ｃｈｏｔｈｉａによっても、保存されているβ−シートフレームワークの部分ではなく、従って異なる立体配座を採り得る残基と構造的に定義されている(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。どちらの術語も当技術分野でよく認識されている。ＣＤＲ領域配列はまた、ＡｂＭ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによっても定義されている。カノニカル抗体可変ドメイン内のＣＤＲの位置は多数の構造の比較によって決定されたものである(Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000))。超可変領域内の残基の数は異なる抗体では変動するので、カノニカルな位置に対して付加的な残基は、カノニカルな可変ドメインナンバリングスキームの残基番号の横にａ、ｂ、ｃなどを付けて慣例的に符番される(Al-Lazikani et al., 前掲(1997))。このような術語も同様に当業者に周知である。
【００３７】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」は、本明細書で使用する場合、配列が超可変であり、かつ／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌｌ、Ｌ２、Ｌ３）の６つの超可変領域を含んでなる。いくつかの超可変領域の描写が用いられ、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲは配列の可変性に基づき、最もよく使用されている(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Ｃｈｏｃｈｉａは、その代わりに構造ループの位置に言及する(Chothia and Lesk J Mol. Bioi. 196:901-917 (1987))。Ｃｈｏｃｈｉａ  ＣＤＲ−ＨＩループの末端を、Ｋａｂａｔナンバリング法を用いて符番すると、ループの長さによってＨ３２とＨ３４の間で異なる（これはＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入をおくからであり、３５Ａも３５Ｂも存在しなければループは３２で終わり、３５Ａだけが存在すればループは３３で終わり、３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在すればループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｃｈｉａ構造ループの間の妥協案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウエアによって用いられている。「Ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。これらの超可変領域のそれぞれからの残基を以下に示す。
【００３８】
最近、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）というユニバーサルナンバリングシステムが開発され、広く採用されている (Lafranc et al., Dev. Comp. mmunol. 7(1):55-77 (2003))。ＩＭＧＴは、ヒトおよびその他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＲ）および主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。ここでは、ＣＤＲは、アミノ酸配列と軽鎖または重鎖内の位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存され、ループと呼ばれる構造で存在するので、構造的特徴に従って可変ドメイン配列をアラインするナンバリングシステムを用いることで、ＣＤＲおよびフレームワーク残基が容易に特定される。この情報は、ある種の免疫グロブリン由来のＣＤＲ残基を一般にヒト抗体由来のアクセプターフレームワークにグラフトおよび置換する場合に使用することができる。ＫａｂａｔナンバリングとＩＭＧＴ独自ナンバリングシステムの対応もまた当業者に周知である（例えば、Lefranc et al., 前掲）。本明細書に示される例としてのシステムはＫａｂａｔとＣｈｏｃｈｉａを組み合わせたものである。
【００３９】
【表１】
2021531007.tif 000004
【００４０】
超可変領域は、次のような「延長超可変領域」を含んでなってもよい：ＶＬでは、２４〜３６または２４〜３４（Ｌｌ）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ＶＨでは、２６〜３５または２６〜３５Ａ（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）および９３〜１０２、９４〜１０２、または９５〜１０２（Ｈ３）。これらの定義のそれぞれに関して、可変ドメイン残基は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲によれば２５と数えられる。本明細書で使用する場合、用語「ＨＶＲ」および「ＣＤＲ」は互換的に使用される。
【００４１】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗体と抗原の結合には直接関与しないがＦｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す、軽鎖および重鎖のカルボキシ末端を指す。この用語は、免疫グロブリンの他の部分、すなわち、抗原結合部位を含む可変ドメインに比べて保存性の高いアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインと軽鎖のＣＬドメインを含む。
【００４２】
ポリペプチドに関して、用語「誘導体」は、本明細書で使用する場合、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１ポリペプチドに結合する抗体の、アミノ酸残基の置換、欠失または付加の導入によって変更されたアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドを指す。用語「誘導体」はまた、本明細書で使用する場合、例えば、ポリペプチドへのいずれかのタイプの分子の共有結合によって化学的に修飾されたＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１ポリペプチドに結合する抗体も指す。例えば、限定されるものではないが、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって化学的に修飾されてよい。誘導体は、付加される分子のタイプまたは場所のいずれかにおいて天然のまたは出発するペプチドまたはポリペプチドとは異なる様式で修飾される。誘導体はさらに、ペプチドまたはポリペプチドに天然に存在する１以上の化学基の欠失も含む。ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１抗体の誘導体は、限定されるものではないが、特異的化学切断、アセチル化、構成、ツニカマイシンの代謝合成などを含む当業者に公知の技術を用いた化学修飾により化学的に修飾され得る。さらに、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１抗体の誘導体は、１以上の非古典的アミノ酸を含有してもよい。ポリペプチド誘導体は、本明細書に記載されるＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドのフラグメント、またはＰＳＧＬ−１抗体と類似または同一の機能を有する。
【００４３】
用語「検出可能なプローブ」は、本明細書で使用する場合、検出可能なシグナルを提供する組成物を指す。この用語には、限定されるものではないが、その活性を介して検出可能なシグナルを提供する任意の蛍光団、発色団、放射性標識、酵素、抗体または抗体フラグメントなどが含まれる。
【００４４】
用語「診断薬」は、対象に投与される、疾患の診断を補助する物質を指す。このような物質は、疾患を引き起こすプロセスの局在を解明する、正確に指摘する、および／または定義するために使用することができる。いくつかの実施形態では、診断薬は、本明細書で提供される抗体にコンジュゲートされた、対象に投与するかまたは対象からの試料に接触させた際に、癌、腫瘍形成、または他のいずれかのＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態の診断を補助する物質を含む。
【００４５】
用語「検出可能な薬剤」は、試料または対象において、本明細書で提供される抗体などの所望の分子の存在を確認するために使用できる物質を指す。検出可能な薬剤は、可視化され得る物質またはそうでなければ判定および／もしくは測定（例えば、定量による）され得る物質であり得る。
【００４６】
用語「検出する」は、本明細書で使用する場合、定量的検出または定性的検出を包含する。
【００４７】
用語「コードする」またはその文法的同等表現は、それが核酸分子に関して使用する場合、その天然状態にあるまたは当業者に周知の方法により操作された場合に、転写されてｍＲＮＡを生産することができ、次に翻訳されてポリペプチドおよび／またはそのフラグメントとなる核酸分子を指す。アンチセンス鎖はこのような核酸分子の相補物であり、コード配列はそれから導き出すことができる。
【００４８】
用語「エピトープ」は、本明細書で使用する場合、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドまたはＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメントなどの、抗体が結合する抗原の領域を指す。好ましくは、エピトープは、本明細書で使用する場合、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドまたはＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメントなどの、抗体の１以上の抗原結合領域に結合し得る、および哺乳動物（例えばヒト）などの動物において抗原活性または免疫原性活性を有する、すなわち、免疫応答を惹起し得る、抗原表面に局在する領域である。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を惹起するポリペプチドの部分である。抗原活性を有するエピトープは、当技術分野で周知のいずれかの方法、例えば、イムノアッセイにより決定した場合に、抗体が結合するポリペプチドの部分である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖などの化学的に活性な表面分子群からなり、特定の三次元構造的特徴ならびに特定の電荷特徴を有する。エピトープは、連続する残基によって形成されてもまたは抗原性タンパク質の折り畳みによって近接された不連続残基によって形成されてもよい。連続するアミノ酸によって形成されるエピトープは一般に変性溶媒に曝されても保持されるが、不連続アミノ酸によって形成されるエピトープは一般に前記の曝露下では失われる。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１エピトープは、三次元表面特徴のＰＳＧＬ−１ポリペプチドである。他の実施形態では、ＰＳＧＬ−１エピトープは、線形特徴のＰＳＧＬ−１ポリペプチドである。一般に、抗原はいくつかのまたは多数の異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体と反応する。
【００４９】
用語「賦形剤」は、本明細書で使用する場合、希釈剤、ビヒクル、保存剤、結合剤、または分解防止剤として慣用される不活性物質を指し、限定されるものではないが、タンパク質（例えば、血清アルブミンなど）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジンなど）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリル酸塩など）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤など）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロースなど）およびポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）が含まれる。引用することによりその全内容が本明細書の一部とされるRemington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PAも参照。
【００５０】
ペプチドまたはポリペプチドに関して、用語「“フラグメント」は、本明細書で使用する場合、全長より少ないアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたはポリペプチドを指す。このようなフラグメントは、例えば、アミノ末端の末端切断、カルボキシ末端の末端切断、および／またはアミノ酸配列からの残基の内部欠失から生じ得る。フラグメントは、例えば、選択的ＲＮＡスプライシングまたはｉｎ  ｖｉｖｏプロテアーゼ活性から生じ得る。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡフラグメントとしては、ＰＳＧＬ−１もしくはＶＩＳＴＡポリペプチドまたはＰＳＧＬ−１もしくはＶＩＳＴＡポリペプチドに結合する抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドが含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１もしくはＶＩＳＴＡポリペプチドまたはＰＳＧＬ−１もしくはＶＩＳＴＡ抗原に結合する抗体のフラグメントは、そのポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を保持する。
【００５１】
用語「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。ＦＲ残基は、ＣＤＲに隣接する可変ドメイン残基である。ＦＲ残基は、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体、ダイアボディ、線状抗体、および二重特異性抗体で存在する。
【００５２】
抗体の「機能的フラグメント」は、無傷抗体に寄与する生物学的機能のいくつかまたは総てでなくとも、少なくとも標的抗原に対する特異的結合を含んでなる少なくとも１つの機能を示す。
【００５３】
用語「融合タンパク質」は、本明細書で使用する場合、抗体のアミノ酸配列と、異種のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、通常その抗体の一部ではないポリペプチドまたはタンパク質（例えば、非抗ＰＳＧＬ−１抗体または非抗ＶＩＳＴＡ抗体））のアミノ酸配列とを含んでなるポリペプチドを指す。用語「融合」は、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡ、抗ＰＳＧＬ−１抗体、または抗ＶＩＳＴＡ抗体に関して使用する場合、ペプチドまたはポリペプチド、またはそのフラグメント、変異体および／もしくは誘導体と異種ペプチドまたはポリペプチドとの連結を指す。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡ、抗ＰＳＧＬ−１抗体、または抗ＶＩＳＴＡ抗体の生物活性を保持する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＨ  ＣＤＲ）、および／またはＶＬ  ＣＤＲ（１つ、２つまたは３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含んでなり、ここで、融合タンパク質は、ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡエピトープに結合する。
【００５４】
用語「重鎖」は、抗体に関して使用する場合、アミノ末端部分が約１２０〜１３０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約５０〜７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と呼ばれる５つの異なるタイプのうちの１つであり得る。異なる重鎖は大きさが異なり、α、δおよびγはおよそ４５０個のアミノ酸を含み、μおよびεはおよそ５５０個のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わさると、これらの異なるタイプの重鎖は、抗体、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ（ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）という５つの周知のクラスの抗体を生じる。重鎖はヒト重鎖であり得る。
【００５５】
用語「ヒンジ領域」は、本明細書では、ＩｇＧおよびＩｇＡ免疫グロブリンクラスの重鎖の中央部で、これらの二鎖をジスルフィド結合により連結するフレキシブルなアミノ酸ストレッチを指す。ヒンジ領域は一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６〜Ｐｒｏ２３０のストレッチとして定義される(Burton, Mol Immunol, 22: 161−206, 1985)。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖内Ｓ−Ｓ結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによってＩｇＧ１配列とアラインすることができる。ヒトＩｇＧ  Ｆｃ部分の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｃγ２」ドメインとも呼ばれる）は通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０まで伸びる。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点で独特である。それよりもむしろ、無傷の天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に２つのＮ−結合分岐型炭水化物鎖が挿入されている。この炭水化物はドメインとドメインの対合の代わりとなり、ＣＨ２ドメインの安定化を補助している可能性があると推測されている(Burton, MoI Immunol, 22: 161-206, 1985)。「ＣＨ３ドメイン」は、Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインのＣ末端に残基のストレッチ（すなわち、ＩｇＧのほぼアミノ酸残基３４１からほぼアミノ酸残基４４７）を含んでなる。
【００５６】
用語「宿主」は、本明細書で使用する場合、哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物を指す。
【００５７】
用語「宿主細胞」は、本明細書で使用する場合、核酸分子でトランスフェクトされた特定の対象細胞およびそのような細胞の後代もしくは潜在的後代を指す。このような細胞の後代は、後世に生じ得る突然変異もしくは環境の影響または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組込みのために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞とは同一でない場合がある。
【００５８】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の対応するＣＤＲ由来の残基で置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含むキメラ抗体である。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンの１以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含んでなり得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに精密化するために行われる。ヒト化抗体重鎖または軽鎖は、少なくとも１つまたは複数の可変ドメインのうち実質的に総てを含んでなり得、ここで、ＣＤＲの総てまたは実質的に総ては非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに相当し、ＦＲの総てまたは実質的に総てはヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般には、ヒト免疫グロブリンのものを含んでなる。さらに詳しくは、Jones et al., Nature, 321:522−525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323−329 (1988);およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593−596 (1992); Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285−4289 (1992);ならびに米国特許第６，８００，７３８号（２００４年１０月５日発行）、同第６，７１９，９７１号（２００５年９月２７日発行）、同第６，６３９，０５５号（２００３年１０月２８日発行）、同第６，４０７，２１３号（２００２年６月１８日発行）、および同第６，０５４，２９７号（２０００年４月２５日発行）を参照。
【００５９】
「有効量」は、有益なまたは所望の結果を果たすのに十分な量である。有効量は１回以上投与、適用または用量で投与することができる。このような送達は、個々の投与単位が使用される期間、薬剤のバイオアベイラビリティ、投与経路などを含むいくつかの変数によって決まる。いくつかの実施形態では、有効量はまた、指定された結果（例えば、細胞のＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡの生物活性の阻害、例えば、Ｔ細胞の活性化の調節）を達成するための、本明細書で提供される抗体の量も指す。いくつかの実施形態では、この用語は、所与の疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状の重症度および／または持続期間を軽減および／または改善するために十分な、療法（例えば、本明細書で提供される抗体）の量を指す。この用語はまた、所与の疾患、障害もしくは病態の発達もしくは進行の軽減もしくは改善、所与の疾患、障害もしくは病態の再発、発症もしくは徴候の軽減もしくは改善、および／または別の療法（例えば、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体以外の療法）の予防効果もしくは治療効果の改善もしくは増強のために必要な量も包含する。いくつかの実施形態では、抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重ｋｇ当たりの抗体ｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ（またはその中の範囲）である。
【００６０】
用語「阻害する」またはその文法的同等表現は、抗体に関して使用する場合、抗体が結合する抗原の生物活性を抑制、制限または低減する抗体を指す。抗体の阻害効果は、抗原の生物活性に測定可能な変化をもたらすものであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１に対するＶＩＳＴＡの結合能を阻害し、これはＶＩＳＴＡの共抑制活性の阻害をもたらし得る。本明細書に記載される特定の抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＶＩＳＴＡ発現細胞においてＶＩＳＴＡの抑制シグナルを、適当な対照（例えば、対照は供試抗体で処理されない細胞である）と比較して、５％を超えて、例えば、約５％〜約５０％、または５０％を超えて（例えば、約５０％〜約９８％）阻害するまたは遮断する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、細胞外ドメインＶＩＳＴＡに対するＰＳＧＬ−１の結合を阻害し、および／またはＰＳＧＬ−１発現細胞に対するＶＩＳＴＡ発現細胞の結合を阻害する。さらに、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＶＩＳＴＡ以外のタンパク質、例えば、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、および／またはＥ−セレクチンに対するＰＳＧＬ−１の結合を阻害しない。
【００６１】
用語「免疫浸潤物」または「腫瘍免疫細胞」は、限定されるものではないが、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージを含む、腫瘍の微小環境へ浸潤する細胞を指す。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「組合せ」は、他の療法の投与に関して、２つ以上の療法（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体および抗ＶＩＳＴＡ抗体）の使用を指す。「組合せ」という用語の使用は、療法が対象に投与される順序または時間を（例えば、ある療法を別の療法の前、同時、後に）限定しない。ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態を有していた、有している、またはそれに感受性のある対象に対し、第１の療法は、第２の療法の投与の前（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間）、同時、または後（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間）に投与することができる。いずれの付加的療法も、他の付加的療法（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体および抗ＶＩＳＴＡ抗体）といずれの順序または時間で投与可能である。いくつかの実施形態では、抗体は、１以上の療法（例えば、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態を予防、治療、管理および／または改善するために目下投与されている抗体ではない療法）と組み合わせて投与することができる。抗体と組み合わせて投与することができる療法の限定されない例としては、共抑制分子に対する拮抗剤、共刺激分子に対する作動剤、化学療法薬、放射線、鎮痛薬、麻酔薬、抗生物質、もしくは免疫調節薬または米国薬局方および／もしくは米国薬品便覧(Physician’s Desk Reference)に収載されている他のいずれの薬剤も含まれる。
【００６３】
「単離された」抗体は、細胞もしくは組織供給源由来の細胞材料もしくはその他の夾雑タンパク質および／または抗体が由来する他の夾雑成分を実質的に含まないか、あるいは化学合成された際には、化学前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という用語には、抗体が単離されたまたは組換え生産された細胞の細胞成分からその抗体が分離されている抗体調製物が含まれる。よって、細胞材料を実質的に含まない抗体には、異種タンパク質（本明細書では「夾雑タンパク質」ともよばれる）が約３０％、２０％、１０％、または５％（乾重による）未満の抗体調製物が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体が組換え生産される場合、それは培養培地を実質的に含まず、例えば、培養培地は、タンパク質調製物の容量の約２０％、１０％、または５％未満である。いくつかの実施形態では、抗体が化学合成により生産される場合、それは化学前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まず、例えば、それはタンパク質の合成に関与する化学前駆体またはその他の化学物質から分離されている。従って、このような抗体調製物は、対象抗体以外の化学前駆体または化合物が約３０％、２０％、１０％、５％（乾重による）未満である。夾雑成分としてはまた、限定されるものではないが、抗体の治療的使用に干渉すると考えられる材料も含む可能性があり、酵素、ホルモン、およびその他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）ローリー法(Lowry et al. J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951)で決定した場合に抗体の９５重量％を超える、例えば９９重量％まで、（２）スピニングカップシークエネーターの使用により少なくとも１５残基のＮ末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いた還元または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一となるまで、精製される。単離された抗体には、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体も含まれる。しかしながら通常には、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は単離される。
【００６４】
「単離された」核酸分子は、核酸分子の天然源に存在する他の核酸分子から分離されているものである。さらに、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、その他の細胞材料もしくは組換え技術により生産される場合には培養培地を実質的に含まないか、または化学合成される場合には化学前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体をコードする核酸分子は単離または精製される。
【００６５】
用語「軽鎖」は、抗体に関して使用する場合、アミノ末端部分が約１００〜約１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。軽鎖のおよその長さは２１１〜２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）、ラムダ（λ）と呼ばれる２つの異なるタイプが存在する。軽鎖のアミノ酸配列は当技術分野では周知である。軽鎖はヒト軽鎖であり得る。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「管理する」、「管理すること」および「管理」は、疾患の治癒をもたらさないが、対象が療法（例えば、予防薬または治療薬）から引き出す有益な効果を指す。いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の進行または増悪を防ぐようにその疾患、障害または病態（その１以上の症状を含む）を「管理する」ために対象に１以上の療法（例えば、本明細書で提供される抗体などの予防薬または治療薬）を投与する。
【００６７】
用語「モノクローナル抗体」は、均質または実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、この集団を形成する抗体は、微量に存在し得る天然に存在する潜在的突然変異以外は本質的に同一である。言い換えれば、モノクローナル抗体は、単細胞クローン（例えば、ハイブリドーマ、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた真核生物宿主細胞、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた原核生物宿主細胞など）の増殖から生じる均質な抗体であり、一般に、１つ、しかもただ１つのクラスおよびサブクラスの重鎖とただ１つのタイプの軽鎖を特徴とする。これらの抗体は特異性が高く、単一の抗原に向けられる。さらに、一般に様々な決定基またはエピトープに向けられた様々な抗体を含むポリクローナル抗体の調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原の単一のエピトープに向けられる。いくつかの実施形態では、「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用する場合、単一のハイブリドーマまたは他の細胞によって生産された抗体であり、この抗体は、例えばＥＬＩＳＡまたは当技術分野で公知のその他の抗原結合もしくは競合結合アッセイにより決定した場合にＶＩＳＴＡエピトープだけに結合する。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するためのいずれの特定の方法にも限定されない。例えば、本明細書で提供されるモノクローナル抗体は、Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975)に記載されているようなハイブリドーマ法によって作製可能であるか、または複数の技術を用いてファージライブラリーから単離可能である。クローン細胞株およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の作製のための他の方法は当技術分野で周知である（例えば、Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 第5版, Ausubel et al.編, John Wiley and Sons, New Yorkの第11章参照）。その他のモノクローナル抗体を生産する他の例示的方法は本明細書の実施例に示される。
【００６８】
用語「天然」は、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞などの生物材料に関して使用する場合、自然界に見られ、ヒトによって操作されていないものを指す。
【００６９】
用語「薬学上許容可能」は、本明細書で使用する場合、連邦政府または州政府の規制当局により承認されているか、または動物、より特にヒトにおける使用に関して米国薬局方、欧州薬局方またはその他の一般に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。
【００７０】
「ポリクローナル抗体」は、本明細書で使用する場合、多くのエピトープを有するタンパク質に対する免疫原性応答において生成される抗体集団を指し、従って、タンパク質内の同じエピトープおよび異なるエピトープに対する様々な異なる抗体を含む。ポリクローナル抗体を生産するための方法は当技術分野で公知である（例えば、Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 第5版, Ausubel et al.編, John Wiley and Sons, New Yorkの第11章参照）。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「核酸」、「核酸分子」およびその他の類似の用語は互換的に使用され、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡなどを含む。
【００７２】
本明細書で使用する場合、用語「予防する」、「予防すること」および「予防」は、本明細書で提供される療法または療法の組合せ（例えば、本明細書で提供される抗体などの予防薬または治療薬の組合せ）の投与から得られるＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状の発症、再発、徴候または拡散の全面的または部分的阻害を指す。
【００７３】
本明細書で使用する場合、用語「予防薬」は、対象におけるＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態、および／またはそれに関連する症状の発症、再発、徴候または拡散を全面的または部分的に阻害することができるいずれの薬剤も指す。いくつかの実施形態では、用語「予防薬」は、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体を指す。いくつかの他の実施形態において、用語「予防薬」は、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、予防薬は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態、および／またはそれに関連する症状を予防する、あるいはＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態、および／またはそれに関連する症状の発症、発生、進行および／または重症度を抑制するために有用であることが知られている、または使用されていた、または目下使用されている薬剤である。いくつかの実施形態では、予防薬は、ヒト化抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体などのヒト化抗ＰＳＧＬ−１抗体である。
【００７４】
用語「Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１(P-selectin glycoprotein ligand 1)」（ＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ１、セレクチンＰリガンド、ＳＥＬＰＬＧ、ＣＬＡ、およびＣＤ１６２としても知られる）は、例えば、アミノ酸配列：
【化３】
2021531007.tif 000005
を含んでなるＳＥＬＰＬＧ遺伝子によりコードされるポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に使用される）およびそのＳＮＰ変異体を含む関連のポリペプチドを指す。ＰＳＬＧ−１は、３つ総てのセレクチン（Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、およびＬ−セレクチン）に結合するが、Ｐ−セレクチンと最も高い親和性で結合することが知られるヒトムチン型糖タンパク質リガンドである(McEver et al., J. Clin. Invest., 100(3):485−492 (1997)およびCarlow et al., Immunological Reviews, 230:75−96 (2009))。ＰＳＧＬ−１は、２つの１２０ｋＤサブユニットを有するジスルフィド結合したホモ二量体であり、単球、リンパ球、顆粒球の表面、および一部のＣＤ３４＋幹細胞で発現される。従って、このタンパク質は、白血球を活性化された血小板またはセレクチンを発現する内皮に係留することによって炎症中の白血球輸送に役割を果たすことが知られている。ＰＳＧＬ−１は一般に、その高い親和性の結合活性のために、チロシンの硫酸化およびそのＯ−結合グリカンへのシアリルルイスｘ四糖（ｓＬｅｘ）の付加という２つの翻訳後修飾を有する。ＳＥＬＰＬＧ遺伝子の異常発現およびこの遺伝子の多形は、自然免疫応答および適応免疫応答の欠陥と関連している。
【００７５】
当業者には自明であるように、エピトープはより大きな抗原の一部であり、例えばそれはより大きなポリペプチドフラグメントの一部であり、さらにそれは例えばより大きなポリペプチドの一部であるので、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、抗原、および／またはエピトープに結合し得る。ＰＳＧＬ−１は、天然型または変性型で存在し得る。本明細書に記載されるＰＳＧＬ−１ポリペプチドは、ヒト組織タイプもしくは別の供給源などの様々な供給源から単離してもよいし、または組換えもしくは合成法により作製してもよい。「天然配列ＰＳＧＬ−１ポリペプチド」は、天然由来の対応するＰＳＧＬ−１ポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでなる。このような天然配列ＰＳＧＬ−１ポリペプチドは、天然から単離することもできるし、または組換えもしくは合成手段によって作製することもできる。用語「天然配列ＰＳＧＬ−１ポリペプチド」は、特に、特異的ＰＳＧＬ−１ポリペプチドの天然に存在する末端切断型または分泌型（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異型（例えば、選択的スプライス型）およびポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子変異体を包含する。
【００７６】
ＰＳＧＬ−１ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ核酸配列は、例えば、以下の配列を含んでなる。
【化４】
2021531007.tif 000006
【化５】
2021531007.tif 000007
【００７７】
ヒトＰＳＧＬ−１ポリペプチドのオーソログもまた当技術分野で周知である。例えば、ＰＳＧＬ−１のオーソログは、マウス(Mus musculus)、ラット(Rattus norvegicus)、イヌ(Canis lupus familiaris)、ウシ(Bos Taurus)、ゼブラフィッシュ(Danio rerio)、ウマ(Equus caballus)、チンパンジー(Pan troglodytes)などの生物に見出すことができる。
【００７８】
「ＰＳＧＬ−１介在疾患」、「ＰＳＧＬ−１介在障害」および「ＰＳＧＬ−１介在病態」は互換的に使用され、ＰＳＧＬ−１により全面的にもしくは部分的に引き起こされるか、またはＰＳＧＬ−１の結果であるいずれの疾患、障害または病態も指す。このような疾患、障害または病態には、ＰＳＧＬ−１発現細胞（例えば、腫瘍細胞、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、免疫抑制樹状細胞（免疫抑制ＤＣ）、および／または制御性Ｔ細胞（Ｔ−ｒｅｇｓ））により引き起こされるまたは関連するものを含め、ＰＳＧＬ−１により引き起こされるまたはそうでなければ関連するものが含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１は、細胞の表面に異常に（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１は、特定の細胞種上に異常に上方調節される場合がある。他の実施形態において、正常な、異常なまたは過剰な細胞シグナル伝達が、ＰＳＧＬ−１と結合可能な、またはそうでなければ相互作用可能なＰＳＧＬ−１リガンド（例えば、ＶＩＳＴＡ）へのＰＳＧＬ−１の結合により引き起こされる。好ましい実施形態では、ＰＳＧＬ−１介在疾患は、他のリガンド（例えば、セレクチン）へではなく特定のＰＳＧＬ−１リガンド（例えば、ＶＩＳＴＡ）へのＰＳＧＬ−１の結合により引き起こされる。
【００７９】
用語「放射線」は、治療に関して使用する場合、標的細胞（例えば、癌細胞）を死滅させるために強いエネルギーのビームを使用するタイプの処置を指す。放射線療法には、外部ビームによって投与されるＸ線、陽子または他の形態のエネルギーの使用が含まれる。放射線療法はまた患者の体内に置かれる放射線療法（例えば、近接照射療法）も含み、それにより、放射性物質の小型の容器が腫瘍中またはその近傍に直接移植される。
【００８０】
用語「相対発現レベル」は、所与の試料におけるタンパク質の発現レベルを、同じ試料中の別の参照タンパク質および／または別の参照試料と比較して定量したものを指す。本明細書に記載される方法に関して、ＰＳＧＬ−１の発現レベルは、標準曲線に基づくなど絶対数値で表すこともできるし、または試料中でアッセイされる１以上の他のタンパク質（例えば、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、またはＣＤ８）に対する相対発現レベルで表すこともできる。
【００８１】
用語「組換え抗体」は、組換え手段により調製、発現、作出または単離された抗体を指す。組換え抗体は、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックおよび／またはトランスクロモゾーマルである動物（例えば、マウスまたはウシ）から単離された抗体(例えば、Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287−6295参照)、または他のＤＮＡ配列への免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む他のいずれかの手段によって調製、発現、作出もしくは単離された抗体であり得る。このような組換え抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有し得る（Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91−3242参照）。いくつかの実施形態では、しかしながら、このような組換え抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（またはヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される場合には、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）を受け、従って、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨおよびＶＬ配列に由来しそれに関連しているもののｉｎ  ｖｉｖｏのヒト抗体生殖細胞系レパートリー内には本来存在し得ない配列である。
【００８２】
本明細書で使用する場合、用語「副作用」は、療法（例えば、予防薬または治療薬）の望まれない作用および有害作用を指す。望まれない作用は、必ずしも有害ではない。療法（例えば、予防薬または治療薬）からの有害な作用は、害をもたらすものまたは不快なものまたはリスクのあるものであり得る。副作用の例としては、下痢、咳、胃腸炎、喘鳴音、悪心、嘔吐、食欲不振症、腹痛、発熱、疼痛、体重減少、脱水、脱毛、呼吸困難、不眠、目眩、粘膜炎、神経および筋肉作用、倦怠感、口渇、および食欲不振、投与部位の発疹または腫脹、発熱、悪寒および倦怠感などの風邪様症状、消化管障害およびアレルギー反応が挙げられる。患者が呈する望まれないさらなる作用は数多くあり、当技術分野で公知である。多くが米国薬品便覧(Physician’s Desk Reference)（第６７版、２０１３年）に記載されている。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「対象」および「患者」は互換的に使用される。本明細書で使用する場合、いくつかの実施形態では、対象は、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、サルおよびヒト）などの哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態および／またはそれに関連する症状を有する哺乳動物（例えば、ヒト）である。別の実施形態では、対象は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態および／またはそれに関連する症状を発症するリスクを有する哺乳動物（例えば、ヒト）である。
【００８４】
本明細書で使用する場合、「実質的に総て」は、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％を指す。
【００８５】
本明細書で使用する場合、用語「治療薬」は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、もしくは病態および／またはそれに関連する症状の１以上の症状の治療、予防または緩和を含め、疾患、障害または病態の治療、予防または緩和において使用可能ないずれの薬剤も指す。いくつかの実施形態では、治療薬は、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体を指す。いくつかの実施形態では、治療薬は、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、治療薬は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、病態、および／またはそれに関連する症状の１以上の症状の治療、予防または緩和に有用であることが知られる、またはそのために使用されていた、または目下使用されている薬剤である。
【００８６】
療法（例えば、治療薬の使用）の組合せは、いずれか２つ以上の単独療法の相加作用よりも有効であり得る。例えば、治療薬の組合せの相乗作用は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状を有する対象に対して、薬剤の１または複数におけるより低用量の使用および／またはより低頻度の薬剤投与を可能とする。より低用量の治療法を使用することおよび／または療法をより低頻度で投与することができれば、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状の１以上の症状の予防、治療または緩和において療法の有効性を低下することなく、対象へのそれらの療法の投与に関連する毒性が低減される。さらに、相乗作用は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状の１以上の症状の予防、治療または緩和において療法の有効性の向上をもたらし得る。最後に、療法（例えば、治療薬）の組合せの相乗作用は、いずれかの単独療法の使用に関連する有害なまたは望まれない副作用を回避または軽減し得る。
【００８７】
用語「治療上有効な量」は、本明細書で使用する場合、所与の疾患、障害もしくは病態および／またはそれに関連する症状の重症度および／または持続期間を軽減および／または改善するために十分な治療薬（例えば、抗ＰＳＧＬ抗体または他のいずれかの治療薬（例えば抗ＶＩＳＴＡ抗体を含む本明細書に記載されるものを含む））の量を指す。治療薬の治療上有効な量は、所与の疾患、障害もしくは病態の進展もしくは進行の軽減もしくは改善、所与の疾患、障害もしくは病態の再発、発症もしくは徴候の軽減もしくは改善、および／または別の療法（例えば、本明細書に記載されるものを含む抗ＰＳＧＬ−１抗体の投与以外の療法）の予防効果もしくは治療効果の改善もしくは増強のために必要な量であり得る。
【００８８】
本明細書で使用する場合、用語「療法」は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の予防、管理、治療および／または改善に使用可能ないずれのプロトコール、方法および／または薬剤も指す。いくつかの実施形態では、用語「療法」は、医療従事者などの当業者に公知のＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の治療、予防および／または改善に有用な生物学的療法、支持療法、および／またはその他の療法を指す。
【００８９】
本明細書で使用する場合、用語「治療する」、「治療」、および「治療すること」は、１以上の療法の投与（限定されるものではないが、本明細書に記載されるものを含む抗ＰＳＧＬ−１抗体などの１以上の治療薬の投与を含む）から得られるＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の進行、重症度、および／または持続期間の軽減または改善を指す。いくつかの実施形態では、このような用語は、癌（例えば、血液癌）の軽減または阻害を指す。いくつかの実施形態では、このような用語は、免疫調節（このような免疫調節はＴ細胞の活性化の増強から得られる）に応答する疾患、障害または病態の進行、重症度、および／または持続期間の軽減または改善を指す。
【００９０】
用語「腫瘍微小環境」は、腫瘍が存在する細胞環境を指す。腫瘍微小環境は、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症細胞、リンパ球、シグナル伝達分子および細胞外マトリックスを含み得る。
【００９１】
用語「可変ドメイン」または「可変領域」は、一般に軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖では約１２０〜１３０アミノ酸、軽鎖では約１００〜１１０アミノ酸の長さを有し、各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合および特異性において使用される、抗体の軽鎖または重鎖の部分を指す。可変ドメインは異なる抗体間で配列が広範囲に異なる。配列の変動はＣＤＲ内に集中するが、可変ドメイン内で変動の低い部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。各可変領域は、４つのＦＲに接続されている３つのＣＤＲを含んでなる。軽鎖および重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用を主要に担う。抗原結合には直接関与しないが、ＦＲは分子の折り畳み、従って、抗原との相互作用のために可変領域の表面に提示されるＣＤＲの量を決定する。いくつかの実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
【００９２】
用語「Ｋａｂａｔと同様の可変ドメイン残基のナンバリング」または「Ｋａｂａｔと同様のアミノ酸位置のナンバリング」、およびその変形表現は、Kabat et al., Sequences of Proteins of lmmunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)において抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを用いると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはそれへの挿入に相当してより少ないアミノ酸または付加的なアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２ｎ後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによれば残基５２ａ）および重鎖ＦＲの残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、所与の抗体に関して、抗体の配列相同性領域における「標準」Ｋａｂａｔナンバリング配列とのアラインメントによって決定することができる。Ｋａｂａｔナンバリングシステムは一般に、可変ドメインの残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７および重鎖の残基１〜１１３）を参照する場合に使用される（例えば、Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。「ＥＵナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域の残基を参照する場合に使用される（例えば、Kabat et al.,前掲で報告されたＥＵインデックス）。「Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。別段の定めがない限り、抗体の可変ドメインの残基番号の参照は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する。例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｃｈｉａ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによるものを含む他のナンバリングシステムも記載されている。
【００９３】
用語「変異体」は、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡまたは抗ＰＳＧＬ−１抗体もしくは抗ＶＩＳＴＡ抗体に関して使用する場合、天然または非改変配列と比較した場合に１以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５）のアミノ酸配列の置換、欠失、および／または付加を含んでなるペプチドまたはポリペプチドを指す。例えば、ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡ変異体は、それぞれ天然ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡのアミノ酸配列に対する１以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５）の変化から生じてよい。また例として、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体の変異体は、天然または従前に改変されてない抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体のアミノ酸配列に対する１以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５）の変化から生じてよい。変異体は、対立遺伝子変異体もしくはスプライス変異体など天然に存在するものであっても、または人工的に構築されたものでもよい。ポリペプチド変異体は、変異体をコードする対応する核酸分子から作製されてもよい。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１変異体、ＶＩＳＴＡ変異体または抗ＰＳＧＬ−１抗体もしくは抗ＶＩＳＴＡ抗体変異体はそれぞれ少なくともＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡ、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体の機能活性を保持する。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＧＬ−１抗体変異体はＰＳＧＬ−１と結合し、かつ／またはＰＳＧＬ−１活性に対する拮抗剤である。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体変異体はＶＩＳＴＡと結合し、かつ／またはＶＩＳＴＡ活性に対する拮抗剤である。いくつかの実施形態では、変異体は、ＰＳＧＬ−１、ＶＩＳＴＡ、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＨまたはＶＬ領域または下位領域をコードする核酸分子の一塩基多型（ＳＮＰ）変異体によりコードされる。
【００９４】
用語「ベクター」は、宿主細胞に核酸分子を導入するために使用される物質を指す。使用に適合可能なベクターには、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソームおよび人工染色体が含まれ、これらは宿主細胞の染色体への安定な組込みのために機能し得る選択配列またはマーカーを含み得る。さらに、これらのベクターは、１以上の選択マーカー遺伝子および適当な発現制御配列も含み得る。含まれ得る選択マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質もしくは毒素耐性、相補的栄養要求性欠乏、または培養培地への必須栄養素の供給不要を提供する。発現制御配列には、構成的および誘導プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを含むことができ、これらは当技術分野で周知である。２つ以上の核酸分子（例えば、抗体の重鎖と軽鎖）が共発現される場合、両核酸分子は例えば単一の発現ベクターに挿入することも、または別の発現ベクターに挿入することもできる。単一のベクター発現の場合、これらのコード核酸は１つの共通の発現制御配列に機能的に連結することもできるし、または１つの誘導プロモーターおよび１つの構成プロモーターなどの異なる発現制御配列に連結することもできる。宿主細胞への核酸分子の導入は、当技術分野で周知の方法を用いて確認することができる。このような方法には、例えば、ｍＲＮＡのノーザンブロットもしくはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などの核酸分析、または遺伝子産物の発現に関する免疫ブロット法、または導入された核酸配列もしくはその対応する遺伝子産物の発現を試験するための他の好適な分析方法が含まれる。核酸分子が目的生成物（例えば、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体）を生産するために十分な量で発現されるということは当業者には理解され、さらに、発現レベルが当技術分野で周知の方法を用いて十分な発現を得るために最適化され得ることも理解される。
【００９５】
詳細な説明
本開示の実施には、特に断りのない限り、分子生物学、微生物学、遺伝学的分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、および当技術分野の技術の範囲内の関連分野における従来技術を使用する。これらの技術は、本明細書に引用される参照文献に記載され、文献で詳細に説明されている。例えば、Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (編) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (編) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (編) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照。
【００９６】
ＰＳＧＬ−１はＶＩＳＴＡの受容体である
発癌の際、腫瘍細胞は、間葉細胞、血管内皮細胞および炎症細胞または免疫細胞を含む細胞外マトリックスおよび非新生宿主細胞から構成される複雑な微小環境と相互作用する。微小環境は、腫瘍特異的Ｔ細胞応答の抑制に重要な役割を果たす。腫瘍抗原が一度応答を刺激しても免疫炎症性応答が活性化され続けないようにするために、複数のチェックポイントが配備され、または活性化される。これらのチェックポイントは、主として、Ｔ細胞受容体が周囲の微小環境中の細胞上のリガンドに結合し、免疫シナプスを形成し、次にこれがＴ細胞の機能を調節することによって呈される。
【００９７】
ＶＩＳＴＡは、これらの免疫チェックポイントの１つである。このタンパク質は造血系に限定され、複数の癌モデルにおいて、腫瘍浸潤白血球でのみ検出され、腫瘍細胞では検出されていない。ＶＩＳＴＡは異なる受容体／リガンドを会合させることによるＴ細胞への直接的影響を介してＴ細胞免疫に負の調節を行い、リガンドとしても受容体としても働くので免疫チェックポイントタンパク質の中でも独特である(Le Mercier, 前掲)。
【００９８】
本発明者らは、今般、ＶＩＳＴＡタンパク質の結合相手（例えば、リガンドまたは受容体）としてＰＳＧＬ−１を同定した。ＰＳＧＬ−１は、Ｏ−結合グリカンおよびＮ−結合グリカンを保持する１２０ｋＤａのホモ二量体膜貫通糖タンパク質であり、その最もよく知られている役割は、セレクチン結合を介した免疫細胞輸送におけるものである。ＰＳＧＬ−１は、リンパ系細胞、骨髄細胞、および樹状系譜において発現される(Laszik et al., Blood, 88(8): 3010−21 (1996))。ナイーブＴ細胞は非セレクチン結合型のＰＳＧＬ−１を発現し、おそらくこれは現在知られていない他の結合相手と会合し得る(Veerman et al., Nat. Immunol. 8(5), 532−539 (2007))。腫瘍細胞での発現も見られている。最近、未知の相手の誘導を介してＰＳＧＬ−１がＴ細胞の疲弊、従って、黒色腫の腫瘍成長を促すことが実証された(Tinoco et al., Immunity, 44: 1190−03 (2016))。
【００９９】
本発明者らは、これらの２つのタンパク質間の直接的結合を実証し、ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡが共働してＴ細胞の活性化を妨げることを示した。実際に、両遺伝子がいくつかの腫瘍で共発現されることから、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の間の物理的相互作用が機能的なものの基礎にある。このような共局在を示す推定ＶＩＳＴＡ受容体は他にはなく、この関係の特異性を強調している。さらに、ＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１腫瘍細胞微小環境中でも発現される。より具体的には、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションで、腫瘍微小環境中で隣接する細胞内に両遺伝子が発現されることが明らかになった。免疫浸潤物中では、どのＰＳＧＬ−１発現細胞もＶＩＳＴＡ発現細胞に隣接し、このことはＰＳＧＬ−１が活性化されたＶＩＳＴＡの信頼性のある代用となることを示している。
【０１００】
ＶＩＳＴＡ介在疾患の診断
上記のデータは、ＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡ介在癌などのＶＩＳＴＡ介在障害を診断するための信頼性のあるバイオマーカーであることを示す。従って、ＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に結合する本明細書で提供される標識核酸プローブまたは抗体などの試薬は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態を検出、診断、または経過観察するために診断目的で使用することができる。
【０１０１】
よって、第１の態様において、本発明は、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１タンパク質または核酸と結合することができる試薬と接触させる工程；および
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を検出する工程
を含んでなる方法に関する。
【０１０２】
本方法によれば、ＰＳＧＬ−１の結合は、ＶＩＳＴＡ介在癌の存在を示す。好ましくは、腫瘍微小環境の免疫浸潤物におけるＰＳＧＬ−１の結合は、ＶＩＳＴＡ介在癌の存在を示す。
【０１０３】
ＰＳＧＬ−１タンパク質または核酸と結合することができる試薬は、ＰＳＧＬ−１と特異的に結合することができる当業者に公知のいずれの試薬または化合物であってもよい。例えば、当業者は、ＰＳＧＬ−１と特異的にハイブリダイズするＤＮＡまたはＲＮＡプローブがＰＳＧＬ−１に特異的に結合することをすぐに理解するであろう。同様に、当業者は、本明細書に記載されるものなどの抗ＰＳＧＬ−１抗体がＰＳＧＬ−１と特異的に結合することをすぐに理解するであろう。
【０１０４】
本発明はまた、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１タンパク質または核酸と結合することができる試薬と接触させる工程；および
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量する工程
を含んでなる方法に関する。
【０１０５】
本方法によれば、ＰＳＧＬ−１の結合は、ＶＩＳＴＡ介在癌の存在を示す。好ましくは、腫瘍微小環境の免疫浸潤物におけるＰＳＧＬ−１の結合は、ＩＳＴＡ介在癌の存在を示す。
【０１０６】
当業者に自明であるように、ＰＳＧＬ−１への試薬の結合レベルは、以下に記載するように、当業者に公知のいずれの手段によって定量してもよい。好ましい方法には、ＥＬＩＳＡもしくはＥＬＩＳＰＯＴなどの免疫酵素アッセイ、免疫蛍光、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、またはＦＡＣＳの使用が含まれる。
【０１０７】
本方法の工程ｂ）の定量は、試料における、特に、腫瘍微小環境の免疫浸潤物におけるＰＳＧＬ−１発現のレベルを直接反映したものである。よって、本方法は、上記のようにＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定することによりＶＩＳＴＡ介在癌を特定することを可能とする。好ましい実施形態では、試料における、特に、腫瘍微小環境の免疫浸潤物におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較する。
【０１０８】
さらなる好ましい実施形態によれば、本発明は、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定する工程；および
ｂ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較する工程
を含んでなり、工程ａ）のＰＳＧＬ−１のアッセイレベルが参照レベルに比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の指標となる方法に関する。
【０１０９】
本発明はまた、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を診断するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定する工程；および
ｂ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較する工程
を含んでなり、工程（ｂ）のＰＳＧＬ−１のアッセイレベルが参照レベルに比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の指標となる方法に関する。
【０１１０】
ＰＳＧＬ−１の発現レベルは、有利には、「参照レベル」または「参照発現レベル」とも呼ばれる対照細胞または試料におけるレベルに対して比較または測定される。「参照レベル」、「参照発現レベル」、「対照レベル」および「対照」は、本明細書では互換的に使用される。「対照レベル」は、一般に疾患または癌の存在しない比較可能な対照細胞で測定される独立したベースラインレベルを意味する。前記対照細胞は、癌患者であっても、腫瘍部位である組織はなお非腫瘍性の健常な組織を含んでなるので、同じ個体に由来してよい。対照細胞はまた、正常であるか、または罹患試料または試験試料が得られたものと同じ疾患を呈さない別の個体に起源してもよい。本発明の文脈の範囲内で、用語「参照レベル」は、患者の癌細胞含有試料におけるＰＳＧＬ−１の試験発現レベルを評価するために使用されるＰＳＧＬ−１発現の「対照レベル」を指す。例えば、患者の生体試料におけるＰＳＧＬ−１レベルがＰＳＧＬ−１の参照レベルより高い場合、それらの細胞はＰＳＧＬ−１の高レベル発現、または過剰発現を有すると見なされる。参照レベルは複数の方法により決定することができる。よって、発現レベルは、ＰＳＧＬ−１保持細胞あるいはまたＰＳＧＬ−１発現細胞の数に依存しないＰＳＧＬ−１の発現レベルを定義し得る。従って、各患者の参照レベルはＰＳＧＬ−１の参照比によって規定することができ、この参照比は、本明細書に記載される参照レベルを決定するためのいずれの方法によっても決定することができる。
【０１１１】
例えば、対照は所定の値であってもよく、様々な形態を採り得る。対照は中央値または平均値などの単一のカットオフ値であり得る。「参照レベル」は、どの患者にも個々に等しく適用可能な単一の数値であり得、または参照レベルは患者の特定の部分集団によって変えることができる。よって、例えば、同じ癌に関して高齢者は若年者とは異なる参照レベルを有してもよく、同じ癌に関して女性は男性とは異なる参照レベルを有してもよい。あるいは、「参照レベル」は、供試される新生細胞の組織と同じ組織に由来する非発癌性癌細胞におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを測定することにより決定することができる。同様に、「参照レベル」は、同じ患者内の非腫瘍細胞におけるＰＳＧＬ−１レベルに対する、患者の新生細胞におけるＰＳＧＬ−１の特定の比であり得る。「参照レベル」はまた、腫瘍細胞を模擬するように操作され得る、または参照レベルを正確に決定する発現レベルを得る他のいずれかの様式で操作され得るｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養細胞のＰＳＧＬ−１レベルであってもよい。他方、「参照レベル」は、高いＰＳＧＬ−１レベルを有さない群と高いＰＳＧＬ−１レベルを有する群などの比較群に基づいて確立することができる。比較群の別の例は、特定の疾患、病態または症状を有する群と疾患を有さない群である。所定の値は、例えば試験集団が低リスク群、中リスク群および高リスク群などの群に等しく（または不等に）分けられる場合に設定することができる。
【０１１２】
参照レベルはまた、同じ癌を有する患者集団におけるＰＳＧＬ−１レベルの比較によって決定することもできる。これは、例えば、患者の全コホートが、第１の軸はＰＳＧＬ−１レベルを表し、第２の軸はその腫瘍細胞が所与のレベルでＰＳＧＬ−１を発現するコホート内の患者数を表すグラフで表示されるヒストグラム分析によって達成することができる。同じまたは類似のＰＳＧＬ−１レベルを有するコホートのサブセット集団を特定することによって２つ以上の独立した患者群を決定することができる。次に、これらの独立した群を最も良く識別するレベルに基づいて参照レベルの決定を行うことができる。参照レベルはまた２つ以上のマーカーのレベルを表すこともでき、そのうち１つがＰＳＧＬ−１である。２つ以上のマーカーは、例えば各マーカーのレベルの値の比によって表すことができる。
【０１１３】
同様に、見掛け上健康な集団は、ＰＳＧＬ−１の発現に関連する病態を有することが分かっている集団が有するものとは異なる「正常」範囲を有する。従って、選択される所定の値は、個々が属するカテゴリーを考慮に入れることができる。適当な範囲およびカテゴリーは、当業者により通常の実験だけを用いて選択することができる。「高い」、「増加した」は、選択された対照に比べて高いことを意味する。一般に、対照は、適当な年齢層における見掛け上健康な正常個体に基づく。
【０１１４】
また、本発明による対照は、所定の値に加え、実験材料と並行して試験される材料の試料であり得ると理解される。例としては、同じ対象から同時に得られた組織または細胞、例えば、単一の生検の一部、または対象からの単細胞試料の一部が含まれる。
【０１１５】
好ましくは、ＰＳＧＬ−１の参照レベルは、正常組織試料（例えば、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態を有さない患者から得たもの、または疾患の徴候の前に同じ患者から得たもの）におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルである。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、所与のタンパク質の発現は、試料中のある特定のタイプの細胞の存在の指標となる。例えば、試料中の細胞によるＰＳＧＬ−１、ＣＤ４および／またはＣＤ８の発現は、試料中のＴ細胞の存在の指標となり得る。同様に、試料中の細胞によるＶＩＳＴＡ単独またはＣＤ１１ｂもしくはＣＤ３３との組合せにおける発現は、ＶＩＳＴＡ保持腫瘍細胞、制御性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞）、骨髄由来免疫抑制細胞（例えば、ＣＤ１１ｂ＋もしくはＣＤ１１ｂｈｉｇｈおよび／またはＣＤ３３＋骨髄由来免疫抑制細胞）および／または免疫抑制樹状細胞（例えば、ＣＤ１１ｂ＋もしくはＣＤ１１ｂｈｉｇｈ樹状細胞）の存在の指標となり得る。好ましくは、特に腫瘍微小環境の免疫浸潤物における、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８の発現は、対象におけるＶＩＳＴＡ介在癌の存在を示す。
【０１１７】
これらの特定の実施形態によれば、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法は、
ａ）前記対象の生体試料においてＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定する工程；ならびに
ｂ）工程ａ）のＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを参照レベルと比較する工程
を含んでなり、工程（ｂ）のＰＳＧＬ−１のアッセイレベルが参照レベルと比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の指標となる。
【０１１８】
本発明はまた、対象においてＶＩＳＴＡ介在癌を診断するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象の生体試料においてＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定する工程；ならびに
ｂ）工程ａ）のＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを参照レベルと比較する工程
を含んでなり、工程（ｂ）のＰＳＧＬ−１のアッセイレベルが参照レベルと比べて増加していることがＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の指標となる方法に関する。
【０１１９】
ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態のより明確な診断は、医療従事者がより早期に予防処置または積極的治療を採り、それによりＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の発症またはさらなる進行を予防することを可能とし得る。
【０１２０】
抗ＶＩＳＴＡ治療薬に対して応答感受性のある患者の特定
上記のデータは、ＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡ介在癌などのＶＩＳＴＡ介在障害を診断するための信頼性のあるバイオマーカーであることを示す。このようにして特定された患者は、抗ＶＩＳＴＡ治療薬に対して応答感受性がある。
【０１２１】
別の態様において、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ治療薬により治療され得る腫瘍患者を特定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法に関する。有利には、前記患者は、特に免疫浸潤物においてＰＳＧＬ−１を発現し、ＰＳＧＬ−１の発現は、前記患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬により治療され得ることを示す。
【０１２２】
第１の実施形態において、本発明は、患者においてＶＩＳＴＡ遮断薬による治療に感受性のある癌を診断するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記患者の生体試料においてＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定する工程；および
ｂ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較する工程；および
ｃ）前記比較からその癌がＶＩＳＴＡ遮断薬による治療に感受性があることを診断する工程
を含んでなる方法に関する。
【０１２３】
別の実施形態では、前記参照レベルは、第１の患者と同じＶＩＳＴＡ介在癌を有する第２患者に由来する第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルであり、ここで、第２の患者はその治療に応答性がある。好ましい実施形態では、第１の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルが第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルに類似していることが、第１の患者が治療に応答性があることを示す。
【０１２４】
別の実施形態では、工程ａ）は、前記生体試料において、好ましくは、免疫浸潤物により、ＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定することを含んでなる。有利には、第１の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルを、第１の患者と同じＶＩＳＴＡ介在癌を有する第２の患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８の少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルと比較し、ここで、第２の患者はその治療に応答性がある。好ましい実施形態では、第１の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルが、第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルと類似していることが、第１の患者が治療に応答性があることを示す。
【０１２５】
ＰＳＧＬ−１発現の測定
ＰＳＧＬ−１発現は、当業者に利用可能ないずれの手段によって測定することもできる。よって、ＰＳＧＬ−１の発現は、ＰＳＧＬ−１核酸（例えば、ＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡまたは対応するｃＤＮＡ）のレベルを測定することによりまたはＰＳＧＬ−１タンパク質のレベルを測定することにより測定することができる。
【０１２６】
この場合、本発明による方法は、生体試料の採取とＰＳＧＬ−１発現の測定の間に１または複数の中間工程を含んでなってもよく、前記工程は前記生体試料からのｍＲＮＡ試料（または対応するｃＤＮＡ）またはタンパク質試料の抽出に相当する。細胞試料からのｍＲＮＡまたはタンパク質の調製または抽出（およびｃＤＮＡへのその逆転写）は単に当業者に周知の常法にすぎない。
【０１２７】
ｍＲＮＡ（または対応するｃＤＮＡ）またはタンパク質試料がひと度得られると、ＰＳＧＬ−１の発現を、ｍＲＮＡ（すなわち、試料中に存在する総てのｍＲＮＡもしくはｃＤＮＡにおいて）、またはタンパク質（すなわち、試料中に存在する総てのタンパク質において）のいずれかに関して測定することができる。そして、この目的で使用される方法は、形質転換のタイプ（ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはタンパク質）および利用可能な試料のタイプによって異なる。
【０１２８】
マーカーの発現がｍＲＮＡ（または対応するｃＤＮＡ）に関して測定される場合、当業者により慣用されているいずれの方法も適用可能である。例えば、トランスクリプトーム分析などの遺伝子発現のレベルを分析するためのこれらの技術には、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応、ＤＮＡを用いる場合）、ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写−ＰＣＲ、ＲＮＡを用いる場合）もしくは定量的ＲＴ−ＰＣＲまたはより大きな処理能力のためには核酸アレイ（ＤＮＡアレイおよびオリゴヌクレオチドアレイを含む）などの周知の方法が含まれる。
【０１２９】
用語「核酸アレイ」は、本明細書で使用する場合、マイクロチップ、スライドグラス、またはミクロスフェアサイズのビーズであり得る支持体に結合された複数の異なる核酸プローブを指す。マイクロチップは、ポリマー、プラスチック、樹脂、多糖類、シリカ、またはシリカ、炭素、金属、無機ガラス、もしくはニトロセルロースに基づく材料からなり得る。
【０１３０】
これらのプローブは、ｃＤＮＡ（「ｃＤＮＡアレイ」）、ｍＲＮＡ（「ｍＲＮＡアレイ」）またはオリゴヌクレオチド（「オリゴヌクレオチドアレイ」）などの核酸であり得、前記オリゴヌクレオチドは一般に、およそ２５〜６０ヌクレオチドの長さを有するために好適である。
【０１３１】
特定の遺伝子の発現プロファイルを決定するために、前記遺伝子の総てまたは一部に対応する核酸を標識し、次いで、そのアレイと接触させてハイブリダイゼーション条件下に置くと、前記の標識標的核酸と、チップ表面に結合されている、この核酸に相補的なプローブの間で複合体が形成される。その後、標識されたハイブリダイズ複合体の存在を検出する。
【０１３２】
これらの技術は、生体試料（細胞、組織など）中の特に、１つの遺伝子、または複数の遺伝子またはさらにはゲノムの総ての遺伝子（全ゲノムまたは全トランスクリプトーム）の発現レベルをモニタリングするために好適である。
【０１３３】
好ましい実施形態では、発現プロファイルは、定量的ＰＣＲを用いて決定される。定量的、またはリアルタイムＰＣＲは周知であり、当業者にとって容易に利用できる技術であり、詳細な説明は不要である。
【０１３４】
本発明の範囲の限定と考えるべきではない特定の実施形態では、定量的ＰＣＲを用いた発現プロファイルの決定は、次のように行うことができる。簡単に述べれば、リアルタイムＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行う。６μＬのｃＤＮＡを、７．５μＬのＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ、０．７５μＬのプローブとプライマーの２０倍混合物および０．７５μｌの水を含有する９μＬのＰＣＲ混合物に加える。反応は、５０℃で２分、次いで、９５℃で１０分の初期工程１回、ならびに９５℃で１５秒および６０℃で１分を含む４０回の増幅からなった。反応およびデータ取得は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行うことができる。試料中の鋳型転写産物分子の数は、対数増殖期（この時にバックグラウンド蛍光を超える蛍光シグナルが検出できる）における増殖回数（サイクル閾値またはＣＴ）を記録することにより決定される。よって、鋳型転写産物分子の最初の数はＣＴに反比例する。
【０１３５】
別の好ましい実施形態では、発現プロファイルは、核酸マイクロアレイの使用によって決定される。
【０１３６】
本発明はさらに、多くても５００、好ましくは多くても３００、多くても２００、より好ましくは多くても１５０、多くても１００、さらにより好ましくは多くても７５、多くても５０、多くても４０、多くても３０、多くても２０、多くても１０の異なるプローブを含んでなり、そのうち少なくとも１つがＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡ（または対応するｃＤＮＡ）またはタンパク質と特異的に結合する、本発明による方法の実装形態に専用のマイクロアレイに関する。好ましい実施形態では、前記マイクロアレイは、多くても５００、好ましくは多くても３００、多くても２００、より好ましくは多くても１５０、多くても１００、さらにより好ましくは多くても７５、多くても５０、多くても４０、多くても３０、多くても２０、多くても１０の異なるプローブ（従って、例えば、パンゲノミックマイクロアレイを除く）を含んでなり、そのうち少なくとも１がＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡ（または対応するｃＤＮＡ）と特異的にハイブリダイズする、核酸マイクロアレイである。前記マイクロアレイはまた、ＰＳＧＬ−１と特異的にハイブリダイズするプローブに加えて、ハウスキーピング遺伝子と特異的にハイブリダイズする少なくとも１つのプローブも含有し得る。例えば、ハウスキーピング遺伝子は、β−２−ミクログロブリン遺伝子である。
【０１３７】
あるいは、試料中のｍＲＮＡの量に基づいて遺伝子発現を決定するために好適な現行または今後のいずれの技術を使用することもできる。例えば、当業者は、例えば、ノーザンブロット（ｍＲＮＡに関して）またはサザンブロット（ｃＤＮＡに関して）の手段によるなどの標識核酸プローブとのハイブリダイゼーションによって、また、ｓｅｒｉａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＳＡＧＥ）法およびその派生法、例えば、ＬｏｎｇＳＡＧＥ、ＳｕｐｅｒＳＡＧＥ、ＤｅｅｐＳＡＧＥなどの技術を用いて、遺伝子の発現を測定することができる。
【０１３８】
また、出発材料として組織マイクロアレイ（ＴＭＡとしても知られる）を使用することも可能である。ＴＭＡは、多重組織学的分析を可能とするために最大１０００の分離した組織コアがアレイ様式に構成されたパラフィンブロックからなる。組織マイクロアレイ技術では、臨床生検または腫瘍試料などのパラフィン包埋組織中の関心領域から０．６ｍｍ径の小さい組織コアを取り出すために中空針が使用される。次に、これらの組織コアは、正確な空間配置のアレイパターンでレシピエントパラフィンブロックに挿入される。ミクロトームを用いてこのブロックから切片をとり、顕微鏡スライドに載せ、次いで、標準的な組織学的分析の任意の方法によって分析する。各マイクロアレイブロックから１００〜５００切片をとることができ、これらに独立して試験を行うことができる。組織マイクロアレイにおいて一般に使用される試験には、免疫組織化学、および蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが含まれる。ｍＲＮＡレベルでの分析のためには、組織マイクロアレイ技術を蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションと組み合わせることができる。ＲＮＡｓｃｏｐｅ  ２．５（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ヘイワード、ＣＡ）を用いるｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの例を実施例に示す。
【０１３９】
最後に、試料中のｍＲＮＡの量を決定するためにマスパラレルシーケンシングを使用することができる（ＲＮＡ−Ｓｅｑまたは「全トランスクリプトームショットガンシーケンシング」）。この目的で、複数のマスパラレルシーケンシング法が利用可能である。このような方法は、例えば、米国特許第４，８８２，１２７号、同第４，８４９，０７７号；同第７，５５６，９２２号；同第６，７２３，５１３号；ＷＯ０３／０６６８９６；ＷＯ２００７／１１１９２４；ＵＳ２００８／００２０３９２；ＷＯ２００６／０８４１３２；ＵＳ２００９／０１８６３４９；ＵＳ２００９／０１８１８６０；ＵＳ２００９／０１８１３８５；ＵＳ２００６／０２７５７８２；ＥＰ−Ｂ１−１１４１３９９；Shendure & Ji, Nat Biotechnol., 26(10): 1135−45 (2008); Pihlak et al., Nat Biotechnol., 26(6): 676−684 (2008); Fuller et al., Nature Biotechnol., 27(11): 1013−1023 (2009); Mardis, Genome Med., 1(4): 40 (2009); Metzker, Nature Rev. Genet., 11(1): 31−46 (2010)に記載されている。
【０１４０】
マーカーの発現がタンパク質に関して測定される場合、ＰＳＧＬ−１に対する特異的抗体を使用することができる。抗ＰＳＧＬ−１抗体の結合は、例えば、免疫沈降、免疫化学（ＩＨＣ）、ウエスタンブロット、ドットブロット、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、タンパク質アレイ、抗体アレイ、または免疫組織化学と組み合わせた組織アレイなど、当業者に利用可能な様々なアッセイによって検出および／または定量および／または決定することができる。使用可能な他の技術には、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）、ＦＲＥＴまたはＢＲＥＴ技術、顕微鏡または組織化学法（特に、共焦点顕微鏡法および電子顕微鏡法を含む）、１または複数の励起波長の使用に基づく方法、および好適な光学的方法、例えば、電気化学的方法（ボルタンメトリーおよびアンペロメトリー技術）、原子間力顕微鏡法、および無線周波数的方法、例えば、多極性、共焦点および非共焦点共鳴分光法、蛍光、発光、化学発光、吸光度、反射率、透過率、および複屈折または屈折率の検出（例えば、表面プラズモン共鳴の手段による、偏光解析法による、レゾナントミラー法の手段よるなど）、フローサイトメトリー、放射性同位体法または磁気共鳴画像法、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）の手段による分析；ＨＰＬＣ−質量分光光度法の手段による分析、液体クロマトグラフィー／質量分光光度法／質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）の手段による分析が含まれる。これらの技術は総て当業者に周知であり、ここでそれらを詳細する必要はない。
【０１４１】
上記方法はいずれも本方法の実施に好適であるが、特にＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、ウエスタンブロット法およびＩＨＣを挙げることができる。好ましい方法として、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＦＡＣＳおよびＩＨＣが含まれる。
【０１４２】
腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の決定
ＰＳＧＬ−１への試薬の結合の決定（上記のとおり）は、処置する腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の決定を可能とする。ＰＳＧＬ−１状態は、既知のまたは当業者が現行使用している、一般にはＰＳＧＬ−１の発現レベルの決定に基づく、いずれの方法または技術によって決定することもできる。腫瘍のＰＳＧＬ−１状態に基づき、次に、患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に応答するかどうかを予測することができる。
【０１４３】
最近、免疫学的データ（腫瘍試料内の免疫細胞のタイプ、濃度、および局在）が結腸直腸癌の病期判定に現行使用されている組織学的方法よりも患者生存率の良好な予測因子であることが明らかになった。
【０１４４】
さらに、臨床試験からのますます多くのエビデンスが、癌の特定のタイプにおいて免疫活性を標的とする療法の可能性を裏づけている(Robert et al., Stagg et al.)。このことが、様々な癌における免疫療法に対する予後診断および患者の選択を補助するために、標準化された臨床パラメーターに加えてｉｎ  ｓｉｔｕ免疫浸潤物を定量することを目的とする「免疫スコア」などの、癌の腫瘍免疫浸潤物を特徴付けるより標準化された方法の開発につながった（例えば、Galon et al., J Pathol 232(2): 199−209 (2014); Galon et al., J Transl Med 14: 273 (2016)参照）。
【０１４５】
よって、本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ介在癌を検出または診断する方法には、腫瘍のＰＳＧＬ−１スコアの決定が含まれる。
【０１４６】
この実施形態によれば、方法は、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１タンパク質または核酸と結合することができる試薬と接触させる工程；
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量する工程；および
ｃ）染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づいて適当な尺度と工程ａ）で得られた定量レベルを比較することにより腫瘍細胞をスコア化する工程
を含んでなる。
【０１４７】
好ましい実施形態では、工程ｂ）は、前記生体試料の腫瘍微小環境の免疫浸潤物において前記試薬とＰＳＧＬ−１との結合を定量することを含んでなる。
【０１４８】
この好ましい実施形態によれば、方法は、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１タンパク質または核酸と結合することができる試薬と接触させる工程；
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量する工程；および
ｃ）すなわち、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と工程ａ）で得られた定量レベルを比較することにより腫瘍免疫細胞をスコア化する工程
を含んでなる。
【０１４９】
腫瘍免疫細胞（または免疫浸潤物）は、腫瘍微小環境中に存在する免疫細胞、特に、一部のマクロファージ、単球などのような腫瘍微小環境の免疫抑制細胞を含んでなる。好ましい実施形態では、免疫浸潤物には、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージが含まれる。よって、この実施形態では、工程ｂ）は、前記試薬と前記生体試料の腫瘍微小環境中に存在するリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージ上のＰＳＧＬ−１との結合を定量することを含んでなる。
【０１５０】
従来のハザード分析法はいずれも、ＰＳＧＬ−１の予後値を評価するために使用可能である。代表的な分析法としては、打ち切り例の存在下で生存データまたは時間事象データをモデル化するためのセミパラメトリック法としてのコックス回帰分析が含まれる(Hosmer and Lemeshow, 1999; Cox, 1972)。他の生存分析、例えば、生命表またはカプラン・マイヤー法とは対照的に、コックス法ではモデルに予測因子変数（共変量）を含めることができる。慣例の分析法を用い、例えば、コックス法は、原発腫瘍のＰＳＧＬ−１発現状態と、疾患再発（無病生存期間、もしくは転移疾患までの期間）、または疾患を原因とする死亡までの期間（全生存期間）のいずれかの発生までの時間との相関に関する仮説を検定することを可能とし得る。コックス回帰分析はまた、コックス比例ハザード分析としても知られる。この方法は、患者の生存期間に対する腫瘍マーカーの予後値を検定するための標準法である。多変量モードを使用する場合、独立した予後値を有する個々の共変量が識別できるように（すなわち、最も有用なマーカー）、複数の共変量の効果が並行して検定される。陰性または陽性の「ＰＳＧＬ−１状態」という用語は、［ＰＳＧＬ−１（−）］または［ＰＳＧＬ−１（＋）］として示すこともできる。
【０１５１】
試料は、癌の診断または経過観察の際に「スコア化」することができる。最も単純な形態では、スコア化は、免疫組織化学による試料の視覚的検査により判断して陰性または陽性のカテゴリーとしてもよい。より定量的なスコア化は、染色強度と採取した細胞が染色された（「陽性の」）割合という２つのパラメーターの判断を含む。
【０１５２】
ある実施形態では、標準化を保証するために、試料は種々の尺度でＰＳＧＬ−１発現レベルのスコア化を行ってもよく、それらのほとんどは反応生成物の強度と陽性細胞のパーセンテージの評価に基づくものである(Payne et al., Predictive markers in breast cancer - the present, Histopathology 2008, 52, 82−90)。
【０１５３】
別の実施形態では、前記スコア化は、染色強度と陽性細胞のパーセンテージに基づく適当な尺度の使用を含んでなる。
【０１５４】
第１の例として、エストロゲン受容体とプロゲステロン受容体のＩＨＣ評価に関するクイック・オールレッド・スコアリングとの類似から、試料において、反応強度に関するスコアと染色された細胞の割合に関するスコアを合わせた０〜８の総合尺度でＰＳＧＬ−１発現レベルのスコア化を行うことができる(Harvey JM, Clarck GM, Osborne CK, Allred DC; J. Clin. Oncol. 1999; 17; 1474−1481)。より詳しくは、反応強度の第１の基準は０〜３の尺度でスコア化され、０は「無反応」に相当し、３は「強い反応」に相当する。反応の割合の第２の基準は０〜５の尺度でスコア化され、０は「無反応」に相当し、５は「反応の割合６７〜１００％」に相当する。次に、反応強度のスコアと反応の割合のスコアを合計して総スコア０〜８とする。総スコア０〜２は陰性と見なし、総スコア３〜８は陽性と見なす。
【０１５５】
この尺度によれば、本明細書において使用される腫瘍の陰性または陽性「ＰＳＧＬ−１状態」という用語は、オールレッド尺度でそれぞれスコア０〜２または３〜８に相当するＰＳＧＬ−１の発現レベルを指す。
【０１５６】
以下の表２にオールレッド法に従ってＩＨＣ結果を解釈するための指針を示す。
【０１５７】
【表２】
2021531007.tif 000008
【０１５８】
本発明によれば、前記適当な尺度は、無反応をスコア０とし、反応の割合６７〜１００％での強い反応をスコア８とする０〜８の尺度であり得る。
【０１５９】
言い換えれば、これはｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍の状態を決定する方法と言え、前記方法は、（ａ）オールレッド尺度に従って対象の腫瘍をスコア化する工程；および（ｂ）オールレッドスコア３〜８で腫瘍の状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であることを決定する工程；または（ｃ）オールレッドスコア０〜２で腫瘍の状態を［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程を含んでなる。
【０１６０】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア３で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６１】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア４で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６２】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア５で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６３】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア６で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６４】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア７で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６５】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア８で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６６】
本発明の別の特定の態様において、腫瘍は、オールレッドスコア３〜８で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１６７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態を決定するための、本明細書に記載される別の特定の方法は、
（ａ）ＰＳＧＬ−１腫瘍細胞を上記のようにスコア化する工程；および
（ｂ）スコア３〜８で腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であると決定する工程；または
（ｃ）スコア０〜２で腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程
を含んでなることを特徴とする。
【０１６８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態を決定するための、本明細書に記載される別の特定の方法は、
（ａ）ＰＳＧＬ−１腫瘍免疫細胞を上記のようにスコア化する工程；および
（ｂ）スコア３〜８で腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であると決定する工程；または
（ｃ）スコア０〜２で腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程
を含んでなることを特徴とする。
【０１６９】
好ましい実施形態では、腫瘍免疫細胞（すなわち、免疫浸潤物）としては、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージが含まれる。よって、この実施形態において、工程ａ）は、前記試薬と、前記生体試料の腫瘍微小環境中に存在するリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージ上のＰＳＧＬ−１との結合を定量することを含んでなる。
【０１７０】
第２の例として、例えば、ＨＥＲ−２受容体のＩＨＣ評価に関する従来のスコア化との類似から、試料において、染色（優先的には、膜性染色）の強度と染色を呈する細胞の割合を統合して０〜３＋の合成尺度とするいくらか簡略化されたスコア化法でＰＳＧＬ−１発現レベルのスコア化を行うことができる。
【０１７１】
簡略化尺度と呼ばれるこの尺度において、０および１＋は陰性であり、２＋および３＋は陽性染色を表す。しかしながら、スコア１＋〜３＋は、各陽性スコアがスコア０（陰性）と比べた場合に再発および致死性疾患の有意に高いリスクを伴い得るので陽性と記録することができるが、陽性スコア間での強度の高まりは、さらなるリスク軽減をもたらし得る。
【０１７２】
一般的に言えば、本明細書で使用する腫瘍の陰性または陽性「ＰＳＧＬ−１状態」という用語は、それぞれ簡略化尺度でスコア０〜１＋または２＋〜３＋に相当するＰＳＧＬ−１の発現レベルを指す。浸潤性腫瘍の完全な周辺の膜性反応だけが考慮されるべきであり、しばしば「金網」の外観になぞらえられる。現行の指針の下では、ＰＳＧＬ−１に関してボーダーライン（スコア２＋または３＋）としてスコア化された試料はさらなる評価を受ける必要がある。非限定例として、対照が期待通りではなく、アーティファクトが大部分の試料に関わり、試料が正常な乳管（内部対照）の強い膜性陽性を示して過剰な抗原賦活が示唆される場合には、ＩＨＣ分析は棄却され、繰り返されるか、またはＦＩＳＨもしくは他のいずれかの方法によって検定されるべきである。
【０１７３】
より明解にするために、以下の表３にこれらのパラメーターをまとめる。
【０１７４】
【表３】
2021531007.tif 000009
【０１７５】
適当な尺度は、腫瘍細胞または腫瘍免疫細胞の膜性反応なしをスコア０とし、１０％を超える腫瘍細胞での強い完全な反応をスコア３＋とする０〜３＋の尺度であり得る。
【０１７６】
より詳しくは、上記のとおり、前記の適当な尺度は、腫瘍細胞または腫瘍免疫細胞の膜性反応なしをスコア０とし；１０％を超える腫瘍細胞または腫瘍免疫細胞でのかろうじて知覚できる膜性反応をスコア１＋とし；１０％を超える腫瘍細胞または腫瘍免疫細胞での弱〜中等度の完全な膜性反応をスコア２＋とし；１０％を超える腫瘍細胞または腫瘍免疫細胞での強い完全な反応をスコア３＋とする０〜３の尺度である。
【０１７７】
言い換えれば、これはｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍の状態を決定する方法と言え、前記方法は、（ａ）上記のような簡略化尺度に従って対象の腫瘍をスコア化する工程；および（ｂ）スコア２＋もしくは３＋で腫瘍の状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であると決定する工程；または（ｃ）スコア０もしくは１＋で腫瘍の状態が［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程を含んでなる。
【０１７８】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、スコア２＋で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１７９】
本発明の特定の態様において、腫瘍は、スコア３＋で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１８０】
本発明の別の特定の態様において、腫瘍は、スコア２＋または３＋で［ＰＳＧＬ−１（＋）］である。
【０１８１】
別の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態を決定するための方法は、
（ａ）上記の方法に従って前記対象のＰＳＧＬ−１腫瘍細胞をスコア化する工程；および
（ｂ）スコア２＋もしくは３＋で腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であると決定する工程；または
（ｃ）スコア０もしくは１＋で腫瘍細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程
を含んでなり得る。
【０１８２】
別の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおいて対象の腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態を決定するための方法は、
（ａ）上記の方法に従って前記対象のＰＳＧＬ−１腫瘍免疫細胞をスコア化する工程；および
（ｂ）スコア２＋もしくは３＋で腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（＋）］であると決定する工程；または
（ｃ）スコア０もしくは１＋で腫瘍免疫細胞のＰＳＧＬ−１状態が［ＰＳＧＬ−１（−）］であると決定する工程
を含んでなり得る。
【０１８３】
好ましい実施形態では、腫瘍免疫細胞（すなわち、免疫浸潤物）としては、リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージが含まれる。よって、この実施形態において、工程ａ）は、前記試薬と、前記生体試料の腫瘍微小環境中に存在するリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、樹状細胞、肥満細胞、およびマクロファージ上のＰＳＧＬ−１との結合を定量することを含んでなる。
【０１８４】
一般に、検定またはアッセイの結果は、様々な形式のいずれで表示してもよい。結果は定性的に表すことができる。例えば、検定報告は特定のポリペプチドが検出されたか否かで、おそらくは検出限界の表示を伴って示すことができる。結果は半定量的に示してもよい。例えば、様々な範囲が定義されてもよく、それらの範囲に、ある程度の定量的情報を提供するスコア（使用する尺度に応じて例えば０〜３＋または０〜８）を割り当てることができる。このようなスコアは、例えば、ＰＳＧＬ−１が検出される細胞の数、シグナル強度（これはＰＳＧＬ−１の発現レベルまたはＰＳＧＬ−１保持細胞を示し得る）などの様々な係数を表し得る。結果は、例えば、ＰＳＧＬ−１が検出される細胞のパーセンテージ、タンパク質濃度など、定量的に表示してもよい。
【０１８５】
当業者に認識されるように、検定によって提供される出力のタイプは、その検定の技術的限界およびそのポリペプチドの検出に関連する生物学的有意性によって異なる。例えば、特定のポリペプチドの場合、純粋に定性的な出力（例えば、特定の検出レベルでそのポリペプチドが検出されるか否か）が有意な情報を提供する。他の場合では、より定量的な出力（例えば、正常レベルに対する供試試料中のポリペプチドの発現レベルの比）が必要である。
【０１８６】
抗ＰＳＧＬ−１抗体
本方法において使用するための抗体は、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメント、またはＰＳＧＬ−１エピトープを含むＰＳＧＬ−１に結合する抗体である。抗ＰＳＧＬ−１抗体には、ヒト化抗ＰＳＧＬ−１抗体が含まれる。また、本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体がＰＳＧＬ−１ポリペプチドに結合するのを競合的に遮断する抗体（例えば、ヒト化抗ＰＳＧＬ−１抗体）も提供される。
【０１８７】
本開示はまた、ＰＳＧＬ−１と結合し、かつ、ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を促進するまたは相互作用に拮抗する抗体も提供する。好ましくは、抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの、特に、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインへの結合を阻害または遮断する。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＶＩＳＴＡ発現細胞の、例えば、骨髄細胞、樹状細胞、マクロファージまたはＴ細胞などのＰＳＧＬ−１発現Ｔ細胞への結合を阻害または遮断する。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１の、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンへの結合を遮断も阻害もしない。
【０１８８】
本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体（例えば、ヒト化抗ＰＳＧＬ−１抗体）はまた、診断薬、検出可能な薬剤または治療薬にコンジュゲートすることもできるし（例えば、抗体−薬物複合体）、または組換え的に融合させることもできる。例えば、検出可能な薬剤は、検出可能なプローブであり得る。さらに、抗ＰＳＧＬ−１抗体（例えば、ヒト化抗ＰＳＧＬ−１抗体）を含んでなる医薬組成物を含む組成物も提供される。
【０１８９】
抗原、例えば、ＰＳＧＬ−１に結合する本明細書で提供される抗体は、抗体の合成に関して当技術分野で公知の任意の方法により、特に、化学合成または組換え発現技術により作製することができる。例えば、いくつかの抗ＰＳＧＬ−１抗体およびそのような抗体を生産する方法は従前に記載されている（例えば、ＷＯ２００５／１１０４７５、ＷＯ２００３／０１３６０３；米国特許出願公開第２００９／０１９８０４４号、同第２００５／０２６６００３号、同第２００９／０２８５８１２号、同第２０１３／００１１３９１号、および同第２０１５／０１８３８７０号；および米国特許第７，８３３，５３０号、および同第８，３６１，４７２号参照）。
【０１９０】
抗原に結合するポリクローナル抗体は、当技術分野で周知の様々な手法により生産することができる。例えば、ヒト抗原は、そのヒト抗原に特異的なポリクローナル抗体を含有する血清の生産を誘導するために、限定されるものではないが、ウサギ、マウス、ラットなどを含む様々な宿主動物に投与することができる。免疫応答を増強するために、宿主種によって様々なアジュバントが使用可能であり、限定されるものではないが、フロイントの（完全および不完全）アジュバント、水酸化アルミニウムなどの無機ゲル、界面活性物質、例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリ陰イオン、ペプチド、オイルエマルション、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびに潜在的に有用なヒトアジュバント、例えば、ＢＣＧ（bacille Calmette-Guerin）およびコリネバクテリウム・パルブム（Corynebacterium parvum）が含まれる。このようなアジュバントもまた当技術分野で周知である。
【０１９１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレー技術、またはその組合せの使用を含む当技術分野で公知の多様な技術を用いて作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、例えば、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版 1988); Hammerling et al., Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)（引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる）に教示されている当技術分野で公知のものを含むハイブリドーマ法を用いて生産することができる。用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用する場合、ハイブリドーマ技術によって生産される抗体に限定されない。モノクローナル抗体を生産する他の例示的方法は、例えば、ＫＭマウス（商標）の使用など、本明細書の他所に述べられる。モノクローナル抗体を生産するさらなる例示的方法は本明細書の実施例に示される。あるいはまた、例えばＷＯ２００３／０１３６０３、ＷＯ２００５／１１０４７５、ＷＯ２００９／１４０６２３、Dimitroff et al., Cancer Res, 65(13): 5750−60 (2005)、Veerman et al., Nature Immunol 8(5):532−9 (2007)、Tinocco et al., Immunity 44: 1190−1203 (2016)に記載の抗体などの抗ＰＳＧＬ−１抗体を使用することもできる。
【０１９２】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を生産およびスクリーニングするための方法は、当技術分野で慣例かつ周知である。簡単に述べれば、マウスをＰＳＧＬ−１抗原で免疫することができ、免疫応答が検出されれば、例えば、ＰＳＧＬ−１抗原に特異的な抗体がマウス血清中に検出されれば、マウスの脾臓を採取し、脾細胞を単離する。次に、脾細胞を周知の技術によって任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣから入手可能なＳＰ２０細胞株由来の細胞に融合させる。限界希釈法によりハイブリドーマを選択およびクローニングする。
【０１９３】
さらに、ＲＩＭＭＳ(repetitive immunization multiple sites)技術を用いて動物を免疫することもできる（引用することによりその全内容が本明細書の一部とされるKilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381−9）。次に、ハイブリドーマクローンを、当技術分野で公知の方法によって、所与のポリペプチドと結合し得る抗体を分泌する細胞に関してアッセイする。一般に高レベルの抗体を含有する腹水は、マウスを陽性ハイブリドーマクローンで免疫することにより作製することができる。
【０１９４】
よって、また、本明細書で提供される改変抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することにより抗体を作出する方法も本明細書において提供され、いくつかの実施形態では、ハイブリドーマは、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメントまたはＰＳＧＬ−１エピトープを含むＰＳＧＬ−１で免役されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次いでその融合から得られたハイブリドーマをＰＳＧＬ−１に結合することができる抗体を分泌するハイブリドーマクローンに関してスクリーニングすることにより作出される。
【０１９５】
ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を調節（例えば、増強または阻害）することができる抗ＰＳＧＬ−１抗体は、当業者に公知のいずれの方法によって同定してもよい。ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を検出および測定するためのアッセイの例を実験の節に記載する。これらのアッセイはいずれも、抗ＰＳＧＬ−１抗体がＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を調節し得るかどうかを試験するために使用することができる。
【０１９６】
ＰＳＧＬ−１を認識する（例えば、それに結合する）抗体フラグメントは、当業者に公知のいずれの技術によって作出してもよい。例えば、本明細書で提供されるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを作製するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを作製するため）などの酵素を用いた免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生産し得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。さらに、本明細書で提供される抗体はまた、当技術分野で公知の様々なファージディスプレー法を用いて作製することもできる。
【０１９７】
例えば、抗体はまた、様々なファージディスプレー法を用いて作製することもできる。ファージディスプレー法では、機能的抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に提示される。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、感染組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリー）から増幅させる。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡをＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーを用いて一緒に組換えし、ファージミドベクターにクローニングする。このベクターをエレクトロポレーションによって大腸菌に導入し、その大腸菌にヘルパーファージを感染させる。これらの方法に使用するファージは一般に、ｆｄおよびＭ１３を含む線維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインを通常、組換えによりファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに融合させる。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、例えば固相表面またはビーズに結合または捕捉された標識抗原または抗原を用い、選択または抗原で識別することができる。本明細書で提供される抗体を作製するために使用可能なファージディスプレー法の例は、Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41−50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177−186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952−958; Persic et al., 1997, Gene 187:9−18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191−280；ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、およびＷＯ９７／１３８４４；および米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号に開示されているものが含まれ、これらはそれぞれ引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。
【０１９８】
上記の参照文献に記載されるように、ファージの選択の後、そのファージから抗体コード領域を単離し、それを用いて、ヒト抗体を含む完全抗体、または他のいずれかの所望の抗原結合フラグメントを作製し、例えば下記のように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む所望の任意の宿主で発現させることができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメント組換え生産するための技術もまた、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号；Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864−869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26−34;およびBetter et al., 1988, Science 240:1041−1043（引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる）に開示されているものなどの当技術分野で公知の方法を用いて使用することができる。
【０１９９】
完全抗体を作出するためには、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、およびその制限部位を保護するためのフランキング配列を含むＰＣＲプライマーを、ｓｃＦｖクローン中のＶＨまたはＶＬ配列を増幅するために使用することができる。当業者に公知のクローニング技術を用い、ＰＣＲ増幅されたＶＨドメインを、ＶＨ定常領域、例えば、ヒトγ４定常領域を発現するベクターにクローニングし、ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインを、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトκまたはλ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現するベクターにクローニングしてもよい。次に、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、当業者に公知の技術を用いて、細胞株に共トランスフェクトして、全長抗体、例えばＩｇＧを発現する安定なまたは一過性の細胞株を作出する。
【０２００】
ヒトにおける抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ使用およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ検出アッセイを含むいくつかの使用では、ヒトまたはキメラ抗体を使用することができる。完全ヒト抗体はヒト対象の治療的処置に特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いる上記のファージディスプレー法を含む当技術分野で公知の様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；およびＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１もまた参照；これらはそれぞれ引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、ヒト抗体が生産される。ヒト抗体および／または完全ヒト抗体は、当技術分野で公知のいずれの方法を用いて生産してもよい。例えば、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することができないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウス。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体をマウス胚性幹細胞にランダムにまたは相同組換えにより導入することができる。あるいは、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域を、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えてマウス胚性幹細胞に導入することができる。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別にまたはそれと同時に非機能的とされてもよい。特に、ＪＨ領域の同型接合性の欠失は、内因性抗体の生産を妨げる。改変された胚性幹細胞を拡大培養し、胚盤胞にマイクロインジェクションを行い、キメラマウスを作出する。次に、このキメラマウスを飼育してヒト抗体を発現する同型接合性の後代を作出する。トランスジェニックマウスを選択された抗原、例えば、そのポリペプチドの総てまたは一部を用いて、規定の様式で免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は、免疫されたトランスジェニックマウスから従来のハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子はＢ細胞分化の際に再配列し、その後、クラススイッチングおよび体細胞突然変異を受ける。よって、このような技術を用いると、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を生産することができる。ヒト抗体を生産するためのこのような技術の概要については、Lonberg and Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65−93)を参照。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生産するためのこの技術およびこのような抗体を生産するためのプロトコールの詳細な考察については、例えば、引用することにより全内容が本明細書の一部とされるＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６、およびＷＯ９６／３３７３５；および米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照。他の方法は、本明細書の実施例に詳述されている。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ社（フリーモント、ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ社（サンノゼ、ＣＡ）などの会社が、上記と類似の技術を用いて選択された抗原に対するヒト抗体の提供に従事することができる。
【０２０２】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。キメラ抗体を生産するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、引用することにより全内容が本明細書の一部とされるMorrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191−202；および米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、および同第６，３３１，４１５号参照。
【０２０３】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、かつ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域と非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含んでなる抗体またはその変異体もしくはそのフラグメントである。ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および一般には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ）の実質的に総てを含んでなり、ＣＤＲ領域の総てまたは実質的に総てが非ヒト免疫グロブリン（例えば、ドナー抗体）のものに相当し、フレームワーク領域の総てまたは実質的に総てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものに相当する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、一般に、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含んでなる。通常、この抗体は、軽鎖ならびに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含む。この抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域をも含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含むいずれのクラス、またＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むいずれのアイソタイプの免疫グロブリンから選択することもできる。通常、定常ドメインは、ヒト化抗体が細胞傷害活性を示すことが望まれる場合には補体結合定常ドメインであり、クラスは一般にＩｇＧ１である。このような細胞傷害活性が望ましくない場合には、定常ドメインはＩｇＧ２クラスであってもよい。使用可能なＶＬおよびＶＨ定常ドメインの例は、いくつかの実施形態では、限定されるものではないが、Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215−1224に記載されているＣκおよびＣγ−１（ｎＧ１ｍ）および米国特許第５，８２４，３０７号に記載されているものが含まれる。ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでなってもよく、所望のエフェクター機能を最適化するために特定の定常ドメインを選択することは当技術分野の通常の技術の範囲内である。ヒト化抗体のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域は親配列に厳密に対応する必要は無く、例えば、ドナーＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基がコンセンサスまたはインポート抗体のいずれにも相当しないように少なくとも１つの残基の置換、挿入または欠失によって突然変異誘発してもよい。しかしながら、このような突然変異は広範囲にわたるものではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、多くの場合では９０％、または９５％超が親ＦＲおよびＣＤＲ配列の残基に相当する。ヒト化抗体は、限定されるものではないが、ＣＤＲ−グラフティング（ＥＰ２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリングまたはリサーフェイシング（ＥＰ５９２１０６およびＥＰ５１９５９６；Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489−498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805−814;およびRoguska et al., 1994, Proc Natl Acad Sci 91:969−973）、チェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、同第５，７６６，���８６号、ＷＯ９３／１７１０５、Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353−60 (2000)、Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000)、Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678−84 (1997)、Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996)、Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s−5977s (1995)、Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717−22 (1995)、Sandhu JS, Gene 150(2):409−10 (1994)、およびPedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959−73 (1994)に開示されている技術を含む当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。また、引用することにより全内容が本明細書の一部とされる米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１号も参照。多くの場合、抗原結合を変更する（例えば、改善する）ために、フレームワーク領域内のフレームワーク残基を、ＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換する。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法により、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用をモデル化して抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定し、配列比較により特定の位置における特異なフレームワーク残基を特定することによって特定される（例えば、引用することにより全内容が本明細書の一部とされるQueen et al.、米国特許第５，５８５，０８９号；およびReichmann et al., 1988, Nature 332:323参照）。
【０２０４】
シングルドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当技術分野で周知の方法によって生産することができる。Riechmann et al., 1999, J. Immunol. 231:25−38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253−263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302；米国特許第６，００５，０７９号；ならびにＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９４／２５５９１、およびＷＯ０１／４４３０１参照、これらはそれぞれ引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。
【０２０５】
さらに、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体は、次に、当業者に周知の技術を用いて、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を作出するために使用することができる（例えば、Greenspan & Bona, 1989, FASEB J. 7(5):437−444; Nissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429−2438参照）。
【０２０６】
本明細書で提供される抗体としては、限定されるものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え生産抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかの機能的フラグメントが含まれる。機能的フラグメントの限定されない例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよびミニボディが含まれる。
【０２０７】
特に、本明細書で提供される抗体としては、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子、例えば、ＰＳＧＬ−１（例えば、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメント、ＰＳＧＬ−１エピトープ）に結合する抗原結合部位を含有する分子の免疫学的に活性な部分が含まれる。本明細書で提供される免疫グロブリン分子は、いずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスの免疫グロブリン分子であってもよい。
【０２０８】
抗体の変異体および誘導体としては、ＰＳＧＬ−１（例えば、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメント、ＰＳＧＬ−１エピトープ）との結合能を保持する抗体の機能的フラグメントが含まれる。例示的機能的フラグメントとしては、Ｆａｂフラグメント（抗原結合ドメインを含有し、かつ、ジスルフィド結合により架橋された軽鎖と重鎖の一部を含んでなる抗体フラグメント）；Ｆａｂ’（ヒンジ領域を介したＦａｂと重鎖のさらなる部分を含んでなる単一の抗原結合ドメインを含有する抗体フラグメント）；Ｆ（ａｂ’）２（重鎖のヒンジ領域で鎖間ジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ’分子；これらのＦａｂ’分子は、同じまたは異なるエピトープに向けられたものであり得る）；二重特異性Ｆａｂ（それぞれが異なるエピトープに向けられ得る２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子）；ｓＦｖとしても知られる、可変領域を含んでなる一本鎖Ｆａｂ鎖（１０〜２５アミノ酸の鎖により相互連結された抗体の単一の軽鎖および重鎖の、可変性の抗原結合決定領域）；ジスルフィド結合Ｆｖ、すなわちｄｓＦｖ（ジスルフィド結合により相互連結された抗体の単一の軽鎖および重鎖の、可変性の抗原結合決定領域）；ラクダ化ＶＨ（ＶＨ境界のいくつかのアミノ酸が天然ラクダ抗体の重鎖に見られるものである、抗体の単一の重鎖の、可変性の抗原結合決定領域）；二重特異性ｓＦｖ（それぞれが異なるエピトープに向けられ得る２つの抗原結合ドメインを有するｓＦｖまたはｄｓＦｖ分子）；ダイアボディ（第１のｓＦｖのＶＨドメインが第２のｓＦｖのＶＬドメインと会合し、かつ、第１のｓＦｖのＶＬドメインが第２のｓＦｖのＶＨドメインと会合する場合に形成される二量体化ｓＦｖ；ダイアボディのこれら２つの抗原結合領域は同じまたは異なるエピトープに向けられ得る）；およびトリアボディ（ダイアボディと同様の形式で形成されるが、単一の複合体において３つの抗原結合ドメインが作出される三量体化ｓＦｖ；これら３つの抗原結合ドメインは同じまたは異なるエピトープに向けられ得る）が含まれる。抗体の誘導体はまた、抗体合体部位の１以上のＣＤＲ配列も含む。２以上のＣＤＲ配列が存在する場合には、ＣＤＲ配列は１つの足場に相互連結されてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）を含んでなる。ｓｃＦｖは、抗体のＶＨドメインとＶＬドメインを含んでなり、これらのドメインが単一のポリペプチド鎖に存在する抗体フラグメントである。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが抗原結合に望まれる構造を形成することを可能とするポリペプチドリンカーをさらに含んでなる。ｓｃＦｖの総説としては、Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore編 Springer-Verlag, New York, pp. 269−315 (1994)を参照。
【０２０９】
本明細書で提供される抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性またはそれを超える多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、またはＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ならびに異種エピトープ、例えば、異種ポリペプチドもしくは固相支持体材料の両方に特異的であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドの所与のエピトープに対して単一特異性であり、他のエピトープには結合しない。
【０２１０】
また、本明細書では、ＰＳＧＬ−１および異種ポリペプチドに結合する本明細書で提供される抗体を含んでなる融合タンパク質も提供される。いくつかの実施形態では、抗体が融合される異種ポリペプチドは、細胞表面発現ＰＳＧＬ−１を有する細胞の抗体を標的とするために有用である。
【０２１１】
また、本明細書では、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体のパネルも提供される。いくつかの実施形態では、抗体のパネルは、異なる会合速度定数、異なる解離速度定数、ＰＳＧＬ−１に対する異なる親和性、および／またはＰＳＧＬ−１に対する異なる特異性を有する。いくつかの実施形態では、これらのパネルは、約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、または約１０００またはそれを超える抗体を含んでなるまたはからなる。抗体のパネルは、例えば、ＥＬＩＳＡのようなアッセイ用などの９６ウェルまたは３８４ウェルプレートで使用することができる。
【０２１２】
ＰＳＧＬ−１結合試薬の診断使用
本明細書で提供される抗ＰＳＧＬ−１抗体は、本明細書に記載されるまたは当業者に公知のような古典的な免疫組織学的方法を用いて、生体試料のＰＳＧＬ−１レベルをアッセイするために使用することができる（例えば、Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976−985;およびJalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087−3096参照）。タンパク質の遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体に基づく方法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などのイムノアッセイが含まれる。好適な抗体アッセイ標識は当技術分野で公知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位元素；ルミノールなどの発光標識；およびフルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識ならびにビオチンが含まれる。
【０２１３】
また、本明細書では、ヒトにおいてＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の検出および診断も提供される。いくつかの実施形態において、診断は、ａ）対象に、ＰＳＧＬ−１に結合する有効量の標識抗体を投与すること（例えば、非経口、皮下、または腹腔内）；ｂ）投与後に、対象のＰＳＧＬ−１発現部位への標識抗体の優先的集中を可能とする（かつ結合してない標識分子がバックグラウンドレベルまでクリアランスされる）一定の時間待つこと；ｃ）バックグラウンドレベルを決定すること；およびｄ）対象において標識抗体を検出し、その結果、バックグラウンドレベルを上回る標識抗体の検出が、その対象がＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態を有することを示すことを含んでなる。バックグラウンドレベルは、検出された標的分子の量を特定の系に関して従前に決定された標準値と比較することを含む様々な方法によって決定することができる。
【０２１４】
当技術分野において、対象の大きさおよび使用するイメージングシステムが診断画像の作成に必要なイメージング部分の量を決定することは理解されるであろう。放射性同位元素部分の場合、ヒト対象に関して、注入される放射能の量は通常、９９Ｔｃで約５〜２０ミリキュリーの範囲である。その後、標識抗体が特異的タンパク質を含有する細胞の場所に優先的に蓄積する。ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍イメージングは、S.W. Burchiel et al., “Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments.” (Tumor Imagingの第13章: The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel and B.A. Rhodes編, Masson Publishing Inc. (1982)に記載されている。
【０２１５】
使用する標識のタイプおよび投与様式を含むいくつかの変数に応じて、対象の部位への標識抗体の優先的集中を可能とし、かつ、結合してない標識抗体がバックグラウンドレベルまでクリアランスされる投与後の時間は、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間である。別の実施形態では、投与後の時間は５〜２０日または５〜１０日である。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態を診断するための方法を、例えば、最初の診断の１か月後、最初の診断の６か月後、最初の診断の１年後などに繰り返すことによってＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の経過観察が行われる。
【０２１７】
標識分子の存在は、ｉｎ  ｖｉｖｏスキャニングのための当技術分野で公知の方法を用いて対象において検出することができる。これらの方法は、使用する標識のタイプによって異なる。当業者ならば、特定の標識を検出するための適当な方法を決定することができる。本明細書で提供される診断方法で使用可能な方法および装置としては、限定されるものではないが、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、全身スキャン、例えば、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波検査が含まれる。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、分子は、放射性同位元素で標識され、放射線応答性外科器械を用いて患者において検出される（Thurston et al.、米国特許第５，４４１，０５０号）。別の実施形態では、分子は蛍光化合物で標識され、蛍光応答性スキャニング器械を用いて患者において検出される。別の実施形態では、分子は陽電子放射金属で標識され、陽電子放出断層撮影法を用いて患者において検出される。さらに別の実施形態では、分子は常磁性標識で標識され、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を用いて患者において検出される。
【０２１９】
抗ＶＩＳＴＡ治療薬
第１の実施形態において、抗ＶＩＳＴＡ治療薬は、ＶＩＳＴＡチェックポイント阻害剤機能を阻害する薬剤である。ＶＩＳＴＡ阻害機能の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルで行うことができる。複数の実施形態において、阻害核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）は、ＶＩＳＴＡの発現を阻害するために使用することができる。他の実施形態において、ＶＩＳＴＡ阻害シグナルの阻害剤は、ＶＩＳＴＡに結合するポリペプチド、例えば、可溶性リガンド（例えば、ＰＳＧＬ−１−Ｆｃ）、または抗体もしくはその抗原結合フラグメント（本明細書では「抗体分子」とも呼ばれる）である。好ましくは、抗ＶＩＳＴＡ治療薬は抗体である。
【０２２０】
ＶＩＳＴＡ機能を阻害する抗体は、癌を治療するために特に有用である。本発明者らは、従前に、強い腫瘍成長阻害を誘導するＶＩＳＴＡに対する抗体を記載している（ＷＯ２０１４／１９７８４９およびＷＯ２０１６／０９４８３７参照、両方とも引用することにより本明細書の一部とされる）。抗癌特性を有する他の抗ＶＩＳＴＡ抗体も当技術分野で記載されている（例えば、ＷＯ２０１４／０３９９８３Ａ１、ＷＯ２０１５／１４５３６０Ａ１、ＷＯ２０１５／０９７５３６、ＷＯ２０１７／１３７８３０、ＷＯ２０１７／１８１１３９参照、これらは総て引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる）。
【０２２１】
このような極めて特異的なおよび／または特異的な抗ＶＩＳＴＡ抗体（本明細書では「抗ＶＩＳＴＡ抗体」と呼ばれる）は、ポリクローナル（「抗ＶＩＳＴＡ  ＰＡｂ」）またはモノクローナル（「抗ＶＩＳＴＡ  ＭＡｂ」）であり得るが、治療的使用のためには、また、場合によっては、診断または他のｉｎ  ｖｉｔｒｏ使用のためには、モノクローナル抗体が好ましい。
【０２２２】
特定の実施形態において、抗体はヒト化抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合フラグメントまたはそれらの任意の組合せである。特定の実施形態において、抗体は、ＷＯ２０１６／０９４８３７（例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、および／またはＶＬ  ＣＤＲ３を有する、その中に記載されている５Ｂ、４６Ａ、９７Ａ、１２８Ａ、１４６Ｃ、２０８Ａ、２１５Ａ、２６Ａ、１６４Ａ、２３０Ａ、７６Ｅ１、５３Ａ、２５９Ａ、３３Ａ、３９Ａ、１２４Ａ、１７５Ａ、３２１Ｄ、１４１Ａ、５１Ａ、３５３Ａ、または３０５Ａ（例えば、ＷＯ２０１６／０９４８３７の表１２〜３３））に記載されているような、ＶＩＳＴＡポリペプチド（例えば、細胞表面発現ＶＩＳＴＡもしくは可溶性ＶＩＳＴＡ）、ＶＩＳＴＡフラグメント、またはＶＩＳＴＡエピトープに結合するヒト化モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントである。
【０２２３】
他の実施形態において、本発明の方法において使用される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、（ｉ）ＷＯ２０１６／０９４８３７に記載されるような抗ＶＩＳＴＡ抗体をＶＩＳＴＡポリペプチド（例えば、細胞表面発現ＶＩＳＴＡもしくは可溶性ＶＩＳＴＡ）、ＶＩＳＴＡフラグメント、またはＶＩＳＴＡエピトープへの結合から競合的に遮断（例えば、用量依存的に）し、かつ／または（ｉｉ）ＷＯ２０１６／０９４８３７に記載されているような抗ＶＩＳＴＡ抗体（例えば、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体）により結合されるＶＩＳＴＡエピトープに結合する抗体である。他の実施形態において、抗体は、本明細書に記載されるモノクローナル抗体５Ｂ、４６Ａ、９７Ａ、１２８Ａ、１４６Ｃ、２０８Ａ、２１５Ａ、２６Ａ、１６４Ａ、２３０Ａ、７６Ｅ１、５３Ａ、２５９Ａ、３３Ａ、３９Ａ、１２４Ａ、１７５Ａ、３２１Ｄ、１４１Ａ、５１Ａ、３５３Ａ、または３０５Ａ（例えば、表１２〜３３）またはそれらのヒト化変異体をＶＩＳＴＡポリペプチド（例えば、細胞表面発現ＶＩＳＴＡもしくは可溶性ＶＩＳＴＡ）、ＶＩＳＴＡフラグメント、またはＶＩＳＴＡエピトープへの結合への結合から競合的に遮断する（例えば、用量依存的に）。他の実施形態において、抗体は、ＷＯ２０１６／０９４８３７（例えば、ＷＯ２０１６／０９４８３７の表１２〜３３）に記載されているモノクローナル抗体５Ｂ、４６Ａ、９７Ａ、１２８Ａ、１４６Ｃ、２０８Ａ、２１５Ａ、２６Ａ、１６４Ａ、２３０Ａ、７６Ｅ１、５３Ａ、２５９Ａ、３３Ａ、３９Ａ、１２４Ａ、１７５Ａ、３２１Ｄ、１４１Ａ、５１Ａ、３５３Ａ、もしくは３０５Ａまたはそれらのヒト化変異体（例えば、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体）により結合される（例えば、認識される）ＶＩＳＴＡエピトープに結合する。
【０２２４】
より好ましくは、本発明の方法の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＷＯ２０１６／０９４８３７に記載の抗体２６Ａである。第１の実施形態において、この抗体は、３つのＣＤＲを含んでなる重鎖と３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖を含んでなり、前記ＣＤＲＳを表４に示す。別の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、３つのＣＤＲを含んでなる重鎖と３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖を含んでなり、前記ＣＤＲＳを表５に示す。
【０２２５】
【表４】
2021531007.tif 000010
【０２２６】
【表５】
2021531007.tif 000011
【０２２７】
本開示の抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体は、ＶＩＳＴＡに特異的に結合することができる無傷分子、および抗体フラグメント（例えば、ＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）の両方を含む。ＦａｂフラグメントおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、無傷抗体よりも、動物または植物の循環からより迅速にクリアランスされ、非特異的組織結合がより少ない可能性がある(Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med. 24:316)。従って、抗体フラグメントは、他の適用の中でも治療適用に有用である。
【０２２８】
用語「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部、一般に、標的結合または可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメントが含まれる。「Ｆｖ」フラグメントは、完全な標的認識・結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの強固な非共有結合的会合の二量体（ＶＨ−ＶＬ二量体）からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面の標的結合部位を画定するのは、この立体配置である。多くの場合、これら６つのＣＤＲは抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら、いくつかの場合において、単一可変ドメイン（すなわち標的に特異的なＣＤＲを３つだけ含んでなるＦｖの半分）であっても、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、標的を認識しそれと結合する能力を有し得る。「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含んでなり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが標的結合のために望まれる構造を形成することを可能とするポリペプチドリンカーをさらに含んでなる。「シングルドメイン抗体」は、ＶＩＳＴＡに対して十分な親和性を示す単一のＶＨまたはＶＬドメインから構成される。特定の実施形態において、シングルドメイン抗体は、ラクダ化抗体である（例えば、Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25−38参照）。
【０２２９】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端の、抗体ヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む数個の残基の付加により、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆ（ａｂ’）フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断によって作出される。抗体フラグメントのさらなる化学的組合せは当業者に公知である。
【０２３０】
本開示の抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体は、キメラ抗体であり得る。用語「キメラ」抗体は、本明細書で使用する場合、ラットまたはマウス抗体などの非ヒト免疫グロブリン由来の可変配列と一般にヒト免疫グロブリン鋳型から選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体を指す。キメラ抗体を生産するための方法は当技術分野で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229(4719):1202−7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214−221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191−202;米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および同第４，８１６３９７号参照、これらは引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。
【０２３１】
本開示の抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体はヒト化することができる。非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖または非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の標的結合部分配列）である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、一般には２つの可変ドメインの実質的に総てを含んでなり、ここで、ＣＤＲ領域の総てまたは実質的には、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の総てまたは実質的に総てはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものであり、「ＣＤＲグラフト」と呼ぶことができる。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものも含んでなり得る。ヒト化抗体を設計する方法を含む抗体のヒト化の方法は当技術分野で公知である。例えば、Lefranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27:55−77; Lefranc et al., 2009, Nucl. Acids Res. 37: D1006−1012; Lefranc, 2008, Mol. Biotechnol. 40: 101−111; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323−7; Queen et al.に対する米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号；ＥＰ２３９４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；ＥＰ５９２１０６；ＥＰ５１９５９６； Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489−498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805−814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. 91:969−973;および米国特許第５，５６５，３３２号参照、これらは総て引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。
【０２３２】
抗体をコードするポリヌクレオチド
また、本明細書では、ＰＳＧＬ−１（例えば、ＰＳＧＬ−１ポリペプチド、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドフラグメント、ＰＳＧＬ−１エピトープ）に結合する本明細書で提供される抗体をコードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドも提供される。また、本明細書では、例えば前記に定義されるような高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で本明細書で提供される抗体または改変抗体をコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドが提供される。
【０２３３】
また、本明細書では、ＶＩＳＴＡ（例えば、ＶＩＳＴＡポリペプチド、ＶＩＳＴＡポリペプチドフラグメント、ＶＩＳＴＡエピトープ）に結合する本明細書で提供される抗体をコードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドも提供される。また、本明細書では、例えば前記に定義されるような高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で本明細書で提供される抗体または改変抗体をコードするポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドも提供される。
【０２３４】
特定の実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、本明細書に開示されるＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列をコードする核酸配列、またはそれらの任意の組合せ（例えば、本明細書で提供される抗体、例えば、本明細書で提供される全長抗体、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、または一本鎖抗体をコードするヌクレオチド配列として）を含んでなる、またはからなる。
【０２３５】
抗体の組換え発現
様々な発現系が、本抗体、例えば、本明細書に記載されるような抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体を発現させるために使用可能である。１つの態様において、このような発現系は、それにより対象とするコード配列が生産され、次に精製され得るビヒクルに相当し、また、適当なヌクレオチドコード配列で一過性にトランスフェクトされた際に本発明の抗体をｉｎ  ｓｉｔｕで発現し得る細胞にも相当する。
【０２３６】
本発明は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含んでなるベクターを提供する。１つの実施形態では、ベクターは、本発明のＩｇＧ抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド、すなわち、Ｆｃドメインに突然変異を有する抗体を含む。別の実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、本発明のＩｇＧ抗体の軽鎖をコードする。本発明はまた、その融合タンパク質、改変抗体、抗体フラグメント、およびプローブをコードするポリヌクレオチド分子を含んでなるベクターも提供する。
【０２３７】
抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体などの本明細書に開示される抗体の重鎖および／または軽鎖を発現させるために、前記重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを、遺伝子が転写配列および翻訳配列に機能的に連結されるように発現ベクターに挿入する。
【０２３８】
「機能的に連結された」配列には、対象とする遺伝子と連続する発現制御配列と対象とする遺伝子を制御するためにトランスでまたは遠隔で働く発現制御配列の両方を含む。用語「発現制御配列」は、本明細書で使用する場合、それらが連結されているコード配列の発現およびプロセシングを果たすのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列には、適当な転写開始配列、終結配列、プロモーター配列およびエンハンサー配列；スプライシングシグナルおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を高める配列；および場合によりタンパク質の分泌を高める配列が含まれる。このような制御配列の性質は宿主生物によって異なり；原核生物では、このような制御配列は一般に、プロモーター、リボゾーム結合部位、および転写終結配列を含み；真核生物では、一般に、このような制御配列はプロモーターおよび転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、少なくともその存在が発現およびプロセシングに必須の総ての成分を含むこと意図し、また、その存在が有利である付加的成分、例えば、リーダー配列および融合相手配列も含み得る。
【０２３９】
用語「ベクター」は、本明細書で使用する場合、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すものとする。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは、付加的ＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、付加的ＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。特定のベクターは、それらが導入された宿主細胞内で自律的複製能がある（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入された際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。
【０２４０】
特定のベクターは、それらが機能的に連結された遺伝子の発現を命令し得る。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドはベクターの最も慣用される形態であるので、「プラスミド」と「ベクター」は互換的に使用することができる。しかしながら、本発明は、細菌プラスミド、ＹＡＣ、コスミド、レトロウイルス、ＥＢＶ由来エピソーム、ならびに当業者が本発明の抗体の重鎖および／または軽鎖の発現を保証するために好都合であることを知っている他の総てのベクターなどのような形態の発現ベクターを含むことを意図する。当業者は、重鎖および軽鎖をコードするポリヌクレオチドが異なるベクターまたは同じベクターにクローンニングされ得ることを理解するであろう。好ましい実施形態では、前記ポリヌクレオチドは、２つのベクターにクローニングされる。
【０２４１】
本発明のポリヌクレオチドおよびこれらの分子を含んでなるベクターは、好適な宿主細胞の形質転換のために使用することができる。用語「宿主細胞」は、本明細書で使用する場合、本抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体）を発現するために組換え発現ベクターが導入された細胞を指すものとする。このような用語は特定の対象細胞だけでなくこのような細胞の後代も指すと意図されることが理解されるべきである。ある種の改変が突然変異または環境の影響のために後世に生じ得ることから、このような後代は実際には親細胞と同一でない場合があるが、本明細書で使用されるような「宿主細胞」という用語の範囲内になお含まれる。
【０２４２】
形質転換は、ポリヌクレオチドを細胞宿主に導入するためのいずれの既知の方法によって行ってもよい。このような方法は当業者に周知であり、デキストラン媒介形質転換、リン酸カルシウム沈殿法、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチドのリポソームへの封入、微粒子銃注入およびＤＮＡの核への直接マイクロインジェクションが含まれる。
【０２４３】
宿主細胞は、本発明のタンパク質を発現するベクターを含む２つ以上の発現ベクターで共トランスフェクトしてもよい。特に、他の発現ベクターは、グリコシル化などの翻訳後修飾に関与する酵素をコードし得る。例えば、宿主細胞は、上記のような抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体）をコードする第１のベクター、およびグリコシルトランスフェラーゼポリペプチドをコードする第２のベクターでトランスフェクトすることができる。あるいは、宿主細胞は、抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体）をコードする第１のベクター、上記のようなグリコシルトランスフェラーゼをコードする第２のベクター、および別のグリコシルトランスフェラーゼをコードする第３のベクターで形質転換することもできる。哺乳動物細胞は、組換え治療用免疫グロブリンの発現のため、特に、完全組換え抗体の発現のために慣用される。例えば、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞と、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期遺伝子プロモーターエレメントを有するものなどの発現シグナルを含有するベクターの組合せが、本抗体、特に、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体を発現させるために有効な系である(Foecking et al., 1986, Gene 45:101; Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2)。
【０２４４】
また、挿入配列の発現を調節するまたは所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞を選択することも可能である。タンパク質産物のこのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシングは、タンパク質の機能にとって重要であり得る。種々の宿主細胞が、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび修飾に特徴および特定の機序を有する。対象とする発現抗体の適正な修飾およびプロセシングを保証するために適当な細胞株または宿主系が選択される。ゆえに、一次転写産物の適正なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化の細胞機構を有する真核生物宿主細胞が使用され得る。このような哺乳動物宿主細胞としては、限定されるものではないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ／０、ＢＨＫ、Ｙ２／０、３Ｔ３または骨髄腫細胞が含まれる（これらの細胞株は総てＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅｓ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ、パリ、フランスまたはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナサス  ＶＡ，  Ｕ．Ｓ．Ａなどの公的な寄託機関から入手可能である。
【０２４５】
組換えタンパク質の長期高収率生産のためには、安定な発現が好ましい。本発明の１つの実施形態において、抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体）を安定に発現する細胞株が操作可能である。ウイルス複製起点を含む発現ベクターを使用するよりもむしろ、宿主細胞を、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、および当業者に公知の他の適当な配列、ならびに選択マーカーを含む適当な発現調節エレメントの制御下、ＤＮＡで形質転換させる。外来ＤＮＡの導入の後、操作された細胞を富化培地で１〜２日増殖させてよく、次いで、選択培地に移行する。組換えプラスミドの選択マーカーは選択に対して耐性を付与し、細胞がプラスミドを染色体に安定に組み込み、細胞株として拡大培養されることを可能とする。安定細胞株を構築するための他の方法は当技術分野で公知である。特に、部位特異的組込みのための方法が開発されている。これらの方法によれば、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位、および他の適当な配列を含む適当な発現調節エレメントの制御下で形質転換されたＤＮＡは、宿主細胞ゲノムの従前に切断された特異的標的部位に組み込まれる(Moele et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 104(9): 3055−3060；米国特許第５，７９２，６３２号；同第５，８３０，７２９号；同第６，２３８，９２４号；ＷＯ２００９／０５４９８５；ＷＯ０３／０２５１８３；ＷＯ２００４／０６７７５３、これらは総て、引用することにより本明細書の一部とされる)。
【０２４６】
限定されるものではないが、それぞれｔｋ、ｈｇｐｒｔまたはａｐｒt細胞における単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子(Wigler et al., Cell 11:223, 1977)、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子(Szybalska et al., Proc Natl Acad Sci USA 48:202, 1992)、メチオニンスルホキシミドの存在下でのグルタミン酸シンターゼ遺伝子選択(Adv Drug Del Rev, 58:671, 2006、ならびにLonza Group Ltdのウェブサイトおよび文献)ならびにアデニンスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子(Lowy et al., Cell 22:817, 1980)を含むいつくかの選択系が使用可能である。また、代謝拮抗物質耐性も以下の遺伝子の選択の基礎として使用可能である：メトトレキサート耐性を付与するｄｈｆｒ(Wigler et al., Proc Natl Acad Sci USA 77: 357, 1980)；ミコフェノール酸耐性を付与するｇｐｔ(Mulligan et al., Proc Natl Acad Sci USA 78: 2072, 1981)；アミノグリコシドＧ−４１８耐性を付与するｎｅｏ(Wu et al., Biotherapy 3: 87, 1991)；およびハイグロマイシン耐性を付与するｈｙｇｒｏ(Santerre et al., Gene 30: 147, 1984)。組換えＤＮＡ技術に関する当技術分野で公知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために慣例的に適用可能であり、このような方法は例えば、Ausubel et al.編, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1993)に記載されている。抗体の発現レベルは、ベクターの増幅により増大させることができる。抗体を発現するベクター系においてマーカーが増幅可能である場合、培養物中に存在する阻害剤のレベルの増加はマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域は対象とする抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ抗体）をコードする遺伝子と関連しているので、前記抗体の生産もまた増加する(Crouse et al., Mol Cell Biol 3: 257, 1983)。本発明の遺伝子を発現させる別法も存在し、当業者に公知である。例えば、本発明の遺伝子の上流の発現調節エレメントと結合することができる修飾ジンクフィンガータンパク質を操作により作出することができ；前記の操作型ジンクフィンガータンパク質（ＺＦＮ）を本発明の宿主細胞で発現させると、タンパク質生産の増大がもたらされる（例えば、Reik et al., Biotechnol. Bioeng., 97(5), 1180−1189, 2006）。さらに、ＺＦＮは、所定のゲノム位置へのＤＮＡの組込みを促し、高効率の部位特異的遺伝子付加をもたらし得る(Moehle et al, Proc Natl Acad Sci USA 104:3055, 2007)。
【０２４７】
本発明の抗体は、形質転換宿主細胞の培養物を所望の抗体を発現させるために必要な培養条件下で増殖させることにより作製することができる。結果として発現された抗体は次に培養培地または細胞抽出物から精製することができる。可溶型の抗体は培養上清から回収することができる。次にこれを免疫グロブリン分子の精製に関して当技術分野で公知の任意の方法により、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特に、Ｆｃに対するプロテインＡアフィニティーによるなど）、遠心分離、示差溶解度またはタンパク質精製のための他のいずれかの標準的技術によって精製することができる。好適な精製方法は当業者には自明である。
【０２４８】
抗体複合体および融合タンパク質
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体は、診断薬、検出可能な薬剤もしくは治療薬または任意の他の分子とコンジュゲートまたは組換え的に融合される。コンジュゲートされたまたは組換え的に融合された抗体は、例えば、特定の療法の有効性を決定するなど、臨床試験手順の一部として、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の徴候、発症、進行および／または重症度に関して経過観察または予後診断を行うために有用であり得る。
【０２４９】
このような診断および検出は、例えば、抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体）を、限定されるものではないが、例えば、限定されるものではないが、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどの様々な酵素；限定されるものではないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族；限定されるものではないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンなどの蛍光材料；限定されるものではないが、ルミノールなどの発光物質；限定されるものではないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンなどの生物発光物質；限定されるものではないが、アクリジニウム系化合物またはＨＡＬＯＴＡＧなどの化学発光物質；限定されるものではないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、および１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、および１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｓｎなどの放射性物質；ならびに様々な陽電子放射断層撮影法を用いる陽電子放射金属、および非放射性常磁性金属イオンを含む検出可能な物質に結合させることによって達成することができる。
【０２５０】
また、治療部分（または１以上の治療部分）にコンジュゲートされたまたは組換え的に融合された抗体、ならびにそれらの使用も本明細書で提供される。この抗体は、細胞毒素、例えば、細胞増殖抑制剤もしくは細胞破壊剤、治療薬または放射性金属イオン、例えば、α放射体などの治療部分にコンジュゲートするか、または組換え的に融合させることができる。細胞毒素または細胞傷害性薬剤には、細胞に有害ないずれの薬剤も含まれる。治療部分としては、限定されるものではないが、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、およびシスプラチン）；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧称、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）；抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧称、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））；オーリスタチン分子（例えば、オーリスタチンＰＨＥ、オーリスタチンＦ、モノメチルオーリスタチンＥ、ブリオスタチン１、およびドラスタチン(solastatin)１０；Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802−8 (2002)、Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580−4 (2001)、Mohammad et al., Anticancer Drugs 12:735−40 (2001)、Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:76−80 (1999)、Mohammad et al., Int. J. Oncol. 15:367-72 (1999)参照、これらは総て引用することにより本明細書の一部とされる）；ホルモン（例えば、グルココルチコイド、プロゲスチン、アンドロゲン、およびエストロゲン）、ＤＮＡ修復酵素阻害剤（例えば、エトポシドまたはトポテカン）、キナーゼ阻害剤（例えば、化合物ＳＴ１５７１、メシル酸イマチニブ(Kantarjian et al., Clin Cancer Res. 8(7):2167−76 (2002))；細胞傷害性薬剤（例えば、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンおよびそれらの類似体またはホモログ、ならびに米国特許第６，２４５，７５９号、同第６，３９９，６３３号、同第６，３８３，７９０号、同第６，３３５，１５６号、同第６，２７１，２４２号、同第６，２４２，１９６号、同第６，２１８，４１０号、同第６，２１８，３７２号、同第６，０５７，３００号、同第６，０３４，０５３号、同第５，９８５，８７７号、同第５，９５８，７６９号、同第５，９２５，３７６号、同第５，９２２，８４４号、同第５，９１１，９９５号、同第５，８７２，２２３号、同第５，８６３，９０４号、同第５，８４０，７４５号、同第５，７２８，８６８号、同第５，６４８，���３９号、同第５，５８７，４５９）に開示されている化合物；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、Ｒ１１５７７７、ＢＭＳ−２１４６６２、ならびに例えば、米国特許第６，４５８，９３５号、同第６，４５１，８１２号、同第６，４４０，９７４号、同第６，４３６，９６０号、同第６，４３２，９５９号、同第６，４２０，３８７号、同第６，４１４，１４５号、同第６，４１０，５４１号、同第６，４１０，５３９号、同第６，４０３，５８１号、同第６，３９９，６１５号、同第６，３８７，９０５号、同第６，３７２，７４７号、同第６，３６９，０３４号、同第６，３６２，１８８号、同第６，３４２，７６５号、同第６，３４２，４８７号、同第６，３００，５０１号、同第６，２６８，３６３号、同第６，２６５，４２２号、同第６，２４８，７５６号、同第６，２３９，１４０号、同第６，２３２，３３８号、同第６，２２８，８６５号、同第６，２２８，８５６号、同第６，２２５，３２２号、同第６，２１８，４０６号、同第６，２１１，１９３号、同第６，１８７，７８６号、同第６，１６９，０９６号、同第６，１５９，９８４号、同第６，１４３，７６６号、同第６，１３３，３０３号、同第６，１２７，３６６号、同第６，１２４，４６５号、同第６，１２４，２９５号、同第６，１０３，７２３号、同第６，０９３，７３７号、同第６，０９０，９４８号、同第６，０８０，８７０号、同第６，０７７，８５３号、同第６，０７１，９３５号、同第６，０６６，７３８号、同第６，０６３，９３０号、同第６，０５４，４６６号、同第６，０５１，５８２号、同第６，０５１，５７４号、および同第６，０４０，３０５号に開示されているもの）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン；イリノテカン；ＳＮ−３８；トポテカン；９−アミノカンプトテシン；ＧＧ−２１１（ＧＩ１４７２１１）；ＤＸ−８９５１ｆ；ＩＳＴ−６２２；ルビテカン；ピラゾロアクリジン；ＸＲ−５０００；サイントピン；ＵＣＥ６；ＵＣＥ１０２２；ＴＡＮ−１５１８Ａ；ＴＡＮ１５１８Ｂ；ＫＴ６００６；ＫＴ６５２８；ＥＤ−１１０；ＮＢ−５０６；ＥＤ−１１０；ＮＢ−５０６；およびレベッカマイシン）；ブルガレイン；ヘキスト色素３３３４２およびヘキスト色素３３２５８などのＤＮＡ副溝結合剤；ニチジン；ファガロニン；エピベルベリン；コラリン；β−ラパコン；ＢＣ−４−１；ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート、シマドロネート、クロドロネート、チルドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、ネリドロネート、オルパンドロネート、リセドロネート、ピリドロネート、パミドロネート、ゾレンドロネート）、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（例えば、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、スタチン、セリバスタチン、レスコール、ルピトール、ロスバスタチンおよびアトルバスタチン）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第６，２７７，８３２号、同第５，９９８，５９６号、同第５，８８５，８３４号、同第５，７３４，０３３号、および同第５，６１８，７０９号に開示されているもの）；アデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、リン酸フルダラビンおよび��−クロロデオキシアデノシン）；イブリツモマブ・チウキセタン（ゼヴァリン（登録商標））；トシツモマブ（ベキサール（登録商標）））ならびにそれらの薬学上許容可能な塩、溶媒和物、包接体、およびプロドラッグが含まれる。
【０２５１】
さらに、本明細書で提供される抗体は、所与の生物学的応答を改変する治療部分または薬物部分にコンジュゲートするか、または組換え的に融合させることができる。治療部分または薬物部分は、古典的化学治療薬に限定されると解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質、ペプチド、またはポリペプチドであり得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、コレラ毒素、またはジフテリア毒素；タンパク質、例えば、腫瘍壊死因子、γ−インターフェロン、α−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、アポトーシス薬、例えば、ＴＮＦ−γ、ＴＮＦ−γ、ＡＩＭ  Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８９９号参照）、ＡＩＭ  ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号参照）、Ｆａｓリガンド(Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6:1567−1574)、およびＶＥＧＦ（国際公開第ＷＯ９９／２３１０５号参照）、抗血管新生薬、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンまたは凝固経路の成分（例えば、組織因子）；または生物反応修飾物質、例えば、リンホカイン（例えば、インターフェロンγ、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−５（「ＩＬ−５」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン−７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン９（「ＩＬ−９」）、インターロイキン−１０（「ＩＬ−１０」）、インターロイキン−１２（「ＩＬ−１２」）、インターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）、インターロイキン−２３（「ＩＬ−２３」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、および顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」））、または増殖因子（例えば、成長ホルモン（「ＧＨ」））、または凝固薬（例えば、カルシウム、ビタミンＫ、組織因子、例えば、限定されるものではないが、ハーゲマン因子（因子ＸＩＩ）、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、プレカリクレイン（ＰＫ）、凝固タンパク質因子ＩＩ（プロトロンビン）、因子Ｖ、ＸＩＩａ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩＩａ、ＸＩ、ＸＩａ、ＩＸ、ＩＸａ、Ｘ、リン脂質、およびフィブリンモノマー）を含み得る。
【０２５２】
また、融合タンパク質を作製するために異種タンパク質もしくはポリペプチド（またはそのフラグメント、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０もしくは約１００アミノ酸のポリペプチド）と組換え的に融合されたまたは化学的にコンジュゲートされた（共有結合的または非共有結合的コンジュゲーション）抗体ならびにそれらの使用も本明細書で提供される。特に、本明細書で提供される抗体の抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメインまたはＶＬ  ＣＤＲ）と異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドとを含んでなる融合タンパク質が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体が融合されている異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドは、ＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡを発現する細胞などの特定の細胞種に抗体を標的化するために有用である。例えば、特定の細胞種（例えば、免疫細胞）により発現される細胞表面受容体に結合する抗体を本明細書で提供される改変抗体に融合させるまたはコンジュゲートすることができる。
【０２５３】
さらに、本明細書で提供される抗体を、治療部分、例えば放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉなどのα放射体、または限定されるものではないが、１３１Ｉｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍを含む放射性金属イオンをポリペプチドとコンジュゲートするのに有用な大環状キレーターとコンジュゲートすることができる。いくつかの実施形態では、大環状キレーターは、リンカー分子を介して抗体に結合させることができる１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。このようなリンカー分子は当技術分野で一般に知られ、Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483−90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553−7;およびZimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943−50に記載されており、それぞれ引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。
【０２５４】
さらに、精製を容易にするために、本明細書で提供される抗体をペプチドなどのマーカー配列と融合させることもできる。いくつかの実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、とりわけｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．）に提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチドであり、それらの多くが市販されている。Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821−824に記載されているように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の好都合な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定されるものではないが、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する血球凝集素（「ＨＡ」）タグ(Wilson et al., 1984, Cell 37:767)および「ＦＬＡＧ」タグが含まれる。
【０２５５】
治療部分（ポリペプチドを含む）と抗体の融合またはコンジュゲーションのための方法は周知である、例えば、Arnon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (編), pp. 243−56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, in Controlled Drug Delivery (第2版), Robinson et al. (編), pp. 623−53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (編), pp. 475−506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (編), pp. 303−16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119−58; 米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、同第５，７２３，１２５号、同第５，７８３，１８１号、同第５，９０８，６２６号、同第５，８４４，０９５号、および同第５，１１２，９４６号；ＥＰ３０７，４３４；ＥＰ３６７，１６６；ＥＰ３９４，８２７；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０６５７０、ＷＯ９６／０４３８８、ＷＯ９６／２２０２４、ＷＯ９７／３４６３１、およびＷＯ９９／０４８１３; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535−10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331:84−86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154: 5590−5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337−11341, 1992参照、これらは引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。
【０２５６】
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（「ＤＮＡシャッフリング」と総称される）の技術によって作製することができる。ＤＮＡシャッフリングは、本明細書で提供される抗体の活性を変更するために使用可能である（例えば、親和性がより高く、解離速度がより低い抗体）。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３７，４５８号；Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724−33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76−82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265−76;およびLorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308−313参照（これらの特許および刊行物はそれぞれ引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる）。抗体、またはコードされる抗体は、組換え前にエラープローンＰＣＲ、ランダムなヌクレオチド挿入または他の方法によりランダムな突然変異を誘発することによって変更することができる。本明細書で提供される抗体をコードするポリヌクレオチドを、１以上の異種分子の１以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えることができる。
【０２５７】
本明細書で提供される抗体はまた、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているように、抗体ヘテロコンジュゲートを形成するために第２の抗体とコンジュゲートすることもできる。
【０２５８】
ＰＳＧＬ−１に結合する本明細書で提供される抗体にコンジュゲートされるまたは組換え的に融合される治療部分または薬物は、所望の予防効果または治療効果を達成するために選択されるべきである。いくつかの実施形態では、抗体は、改変抗体である。臨床医または他の医療従事者は、本明細書に記載される抗体と、どの治療部分または薬物をコンジュゲートするかまたは組換えにより融合するかを判断する際に、以下を考慮するべきである：疾患の性質、疾患の重症度、および対象の状態。
【０２５９】
本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体または抗ＶＩＳＴＡ）はまた、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に特に有用である固相支持体に結合させてもよい。このような固相支持体としては、限定されるものではないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンが含まれる。
【０２６０】
医薬組成物
本明細書で提供される１以上の治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体などの抗ＶＩＳＴＡ治療薬）を含有する医薬組成物（治療用製剤を含む）は、所望の純度の抗体と任意選択の生理学上許容可能な担体、賦形剤および／または安定剤を混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保存用に調製することができる(Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA)。許容可能な担体、賦形剤、および／または安定剤は、使用する用量および濃度でレシピエントに非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（残基約１０未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、およびその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはツィーン（商標）、プルロニック（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０２６１】
本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬、特に、抗ＶＩＳＴＡ抗体はまた、リポソーム中に処方することもできる。対象とする分子を含有するリポソームは、Epstein et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030;および米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載のものなどの当技術分野で公知の方法によって調製される。循環時間が延長されたリポソームは米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０２６２】
特に有用な免疫リポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含有する脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって作製することができる。所望の直径のリポソームを得るためには、規定の孔径のフィルターからリポソームを押し出す。本明細書で提供される抗体のＦａｂ’フラグメントは、Martin et al. (1982) J. Biol. Chem. 257:286−288に記載されているように、ジスルフィド交換反応を介して、これらのリポソームとコンジュゲートさせることができる。場合により化学療法剤（ドキソルビシンなど）がこのリポソーム内に含有されてもよい；Gabizon et al., (1989) J. National Cancer Inst. 81(19):1484参照。
【０２６３】
本明細書に記載されるものなどの製剤はまた、治療される特定の適応症のために必要な２つ以上の有効化合物を含有し得る。いくつかの実施形態では、製剤は、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）と、互いに悪影響を与えない補完的活性を有する１以上の有効化合物とを含んでなる。このような分子は、意図する目的にとって有効な量で好適に組み合わされて存在する。例えば、本明細書で提供される抗体は、２つ以上の他の治療薬と組み合わせることができる。このような併用療法は、逐次にまたは同時にまたは順に患者に投与することができる。
【０２６４】
本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）はまた、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）、またはマクロエマルションにおける、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどに封入することもできる。このような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PAに開示されている。
【０２６５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は無菌であり得る。これは、例えば、濾過除菌膜による濾過により容易に達成される。
【０２６６】
徐放性調製物も調製することができる。徐放性調製物の適切な例としては、ポリペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸リュープロリドからなる注入可能なマイクロスフェア）、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日より長く分子の放出を可能にするが、特定のヒドロゲルはより短期間でタンパク質を放出する。封入された抗体が長時間体内に残ると、３７℃での水分への曝露の結果として抗体が変性または凝集する可能性があり、その結果、生物活性の損失および免疫原性の変化が起こることがある。関与する機構によって、安定化のために合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換による細胞間Ｓ−−Ｓ結合形成であることが見出された場合、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥させ、水分含量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより安定化が達成され得る。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、薬学上許容可能な担体中に、治療上有効な量の本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の１以上および場合により１以上の予防薬または治療薬(prophylactic of therapeutic agents)を含有する。このような医薬組成物は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療、または緩和において有用である。
【０２６８】
本明細書で提供される化合物の投与に好適な医薬担体としては、特定の投与様式に好適であることが当業者に公知であるこのような任意の担体が含まれる。
【０２６９】
さらに、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬、特に、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、組成物中の唯一の薬学上有効な成分として調剤されてもよいし、または他の有効成分（例えば、1以上の他の予防薬または治療薬）と組み合わせてもよい。
【０２７０】
組成物は、本明細書で提供される１以上の抗体を含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、好適な医薬調製物へ、例えば、経口投与の場合には液剤、懸濁剤、錠剤、分散錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤もしくはエリキシル剤に、または非経口投与の場合には無菌液剤もしくは懸濁剤へ、ならびに経皮パッチ調製物およびドライパウダー吸入剤中に調剤される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、当技術分野において周知の技術および手順を使用して医薬組成物に調剤される（Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 第4版, p. 126参照）。
【０２７１】
組成物のいくつかの実施形態において、有効濃度の１以上の抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を好適な医薬担体と混合する。いくつかの実施形態では、組成物中の化合物の濃度は、投与した際に、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態、またはその症状を治療、予防、または改善する量を送達するために有効なものである。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、組成物は単位量投与用に調剤される。組成物を調剤するために、重量分率の化合物を、治療される病態が緩和される、予防される、または１以上の症状が改善されるような有効濃度で、選択した担体中に、溶解、懸濁、分散、またはそうでなければ混合する。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、治療される患者に対して望ましくない副作用なく治療上有用な効果を示すために十分な有効量で、薬学上許容可能な担体中に含まれる。治療的有効な濃度は、常法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ系で化合物を試験し、次いでヒトに対する用量についてそれから推定することによって、実験的に決定することができる。
【０２７４】
医薬組成物中の抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の濃度は、例えば、その治療薬の物理化学的特徴、投与スケジュール、および投与される量、ならびに当業者に公知の他の因子によって異なる。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、約０．１ｎｇ／ｍｌから約５０〜１００μｇ／ｍｌまでの抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の血清濃度を生じる。医薬組成物は、別の実施形態において、１日当たり体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約２０００ｍｇの治療薬（例えば、抗体）の用量を提供する。医薬単位投与形は、単位投与形当たり約０．０１ｍｇ、０．１ｍｇまたは１ｍｇ〜約５００ｍｇ、１０００ｍｇまたは２０００ｍｇ、およびいくつかの実施形態では約１０ｍｇ〜約５００ｍｇの抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）および／または他の任意選択の必須成分の組合せを提供するように調製することができる。
【０２７６】
抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、一度で投与することもできるし、またはある時間間隔で投与されるいくつかのより小さな用量へ分割してもよい。正確な用量および治療期間は、治療される疾患の関数であり、公知の試験プロトコールを用いて、またはｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏの試験データから推定することによって、実験的に決定され得ることと理解される。また、濃度および投与値は、緩和される病態の重症度によって変動し得ることに留意されたい。任意の特定の対象に関して、特定の投与計画は、個々の必要性、およびこの組成物を投与する者または組成物の投与を監督する者の専門的判断に従って経時的に調整することができること、また、本明細書に示される濃度範囲は単に例示であって特許請求される組成物の範囲または実施の限定を意図したものでないことが、さらに理解されるべきである。
【０２７７】
抗ＶＩＳＴＡ治療薬を混合または添加すると、得られる混合物は、溶液、懸濁液、エマルションなどであり得る。得られる混合物の形態は、意図される投与様式および選択される担体またはビヒクル中における化合物の溶解度を含むいくつかの因子によって異なる。有効濃度は、治療される疾患、障害または病態の症状を改善するために十分であり、実験的に決定され得る。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、適切な量の化合物またはその薬学上許容可能な誘導体を含有する単位投与形、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、無菌非経口用液剤もしくは懸濁剤、および経口用液剤もしくは懸濁剤、ならびに油−水エマルションで、ヒトおよび動物への投与のために提供される。抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、いくつかの実施形態において、単位投与形または複数回投与形で調剤および投与される。「単位投与」形は、本明細書で使用する場合、当技術分野において公知のように、個々に包装され、ヒトおよび動物対象に適した物理的に分離した単位を指す。各単位用量は、必要とされる医薬担体、ビヒクルまたは希釈剤と会合された、所望の治療効果をもたらすのに十分な所定量の治療薬を含有する。単位投与形の例としては、アンプルおよびシリンジならびに個々に包装された錠剤またはカプセル剤が含まれる。単位投与形は、その分数または倍数で投与することができる。「複数回投与」形は、分離された単位投与形で投与される、単一の容器に包装された複数の同一の単位投与形である。複数回投与形の例としては、バイアル、錠剤もしくはカプセル剤の瓶、またはパイント瓶もしくはガロン瓶が含まれる。従って、複数回投与形は、包装では分離されていない複数の単位用量である。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、１以上の本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、液体医薬製剤である。薬学的に投与可能な液体組成物は、例えば、上記で定義されたような有効化合物と、任意選択の医薬アジュバントとを、例えば、水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、グリコール、エタノールなどのような担体中に溶解させるか、分散させるか、またはそうでなければ混合し、それによって、溶液もしくは懸濁液を形成させることにより調製することができる。所望により、投与する医薬組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、ｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸塩、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、トリエタノールアミンオレエート、および他のそのような剤などの、少量の非毒性補助物質を含有することもできる。
【０２８０】
このような投与形を調製する実際の方法は公知であるか、または当業者に自明である；例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA参照。
【０２８１】
０．００５％〜１００％の範囲の治療薬、特に抗体を含有し、残部は非毒性担体で構成される投与形または組成物を作製することができる。これらの組成物の調製方法は、当業者に公知である。
【０２８２】
経口医薬投与形は、固体、ゲル、または液体である。固体投与形には、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、および原末が含まれる。経口錠剤のタイプには、腸溶コーティング、糖衣、またはフィルムコーティングが施されてもよい圧縮された咀嚼可能なロゼンジおよび錠剤が含まれる。カプセル剤は硬ゼラチンカプセルまたは軟ゼラチンカプセルでもよく、顆粒剤および散剤は、当業者に公知の他の成分の組合せとともに非発泡性または発泡性の形態で提供され得る。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、製剤は固体投与形である。いくつかの実施形態では、製剤はカプセル剤または錠剤である。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分または同様の性質の化合物の１以上を含有し得る：結合剤；滑沢剤；希釈剤；流動促進剤；崩壊剤；着色剤；甘味剤；着香剤；湿潤剤；腸溶コーティング；およびフィルムコーティング。結合剤の例には、微晶質セルロース、トラガカントガム、グルコース溶液、アラビアガム漿、ゼラチン溶液、糖蜜、ポリビニルピロリジン、ポビドン、クロスポビドン、スクロース、およびデンプン糊が含まれる。滑沢剤には、タルク、デンプン、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム、セキショウシ、およびステアリン酸が含まれる。希釈剤には、例えば、ラクトース、スクロース、デンプン、カオリン、塩、マンニトール、およびリン酸二カルシウムが含まれる。流動促進剤には、限定されるものではないが、コロイド状二酸化ケイ素が含まれる。崩壊剤には、クロスカルメロースナトリウム、グリコール酸ナトリウムデンプン、アルギン酸、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、ベントナイト、メチルセルロース、寒天、およびカルボキシメチルセルロースが含まれる。着色剤には、例えば、承認済み水溶性ＦＤおよびＣ色素のいずれか、その混合物；およびアルミナ水和物に懸濁された水不溶性のＦＤおよびＣ色素が含まれる。甘味剤には、スクロース、ラクトース、マンニトール、および人工甘味剤、例えば、サッカリン、ならびに任意の数の噴霧乾燥フレーバーが含まれる。着香剤には、果実などの植物から抽出された天然フレーバー、および好ましい感覚を生じる化合物の合成ブレンド、例えば、限定されるものではないが、ペパーミントおよびサリチル酸メチルが含まれる。湿潤剤には、プロピレングリコールモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ジエチレングリコールモノラウレート、およびポリオキシエチレンラウリルエーテルが含まれる。腸溶コーティングには、脂肪酸、脂肪、ろう、シェラック、アンモニア処理シェラック、および酢酸フタル酸セルロースが含まれる。フィルムコーティングには、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリエチレングリコール４０００、および酢酸フタル酸セルロースが含まれる。
【０２８４】
本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、胃の酸性環境からそれを保護する組成物として提供することができる。例えば、組成物は、胃の中でその完全性を維持し、腸の中で有効化合物を放出する腸溶コーティングとして調剤することができる。組成物はまた、制酸剤または他のこのような成分と組み合わせて調剤することもできる。
【０２８５】
単位投与形がカプセル剤である場合、上記のタイプの材料に加えて、脂肪油などの液体担体を含有することができる。さらに、単位投与形は、投与単位の物理的形態を改変する様々な他の材料、例えば、糖衣および他の腸溶剤を含有することもできる。化合物はまた、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤、スプリンクル、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップ剤は、有効化合物に加えて、甘味剤としてスクロース、ならびにある特定の保存剤、色素および着色剤およびフレーバーを含有してもよい。
【０２８６】
治療薬はまた、所望の作用を損なわない他の有効材料と混合することもできるし、または所望の作用を補う材料、例えば、制酸剤、Ｈ２遮断薬、および利尿薬と混合することもできる。有効成分は、本明細書に記載されるような抗ＶＩＳＴＡ治療薬、特に、抗体、またはその薬学上許容可能な誘導体である。約９８重量％までのさらに高い濃度の有効成分を含めてもよい。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、有効成分の溶解を改変または維持するために、当業者に公知のように、錠剤およびカプセル製剤をコーティングすることができる。よって、例えば、それらは、腸内で消化可能な従来のコーティング、例えば、サリチル酸フェニル、ろう、および酢酸フタル酸セルロースでコーティングしてもよい。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、製剤は液体投与形である。液体経口投与形には、非発泡性顆粒剤から再構成された水溶液、エマルション、懸濁液、溶液、および／または懸濁液、ならびに発泡性顆粒剤から再構成された発泡性調製物が含まれる。水溶液には、例えば、エリキシル剤およびシロップ剤が含まれる。エマルションは水中油型または油中水型である。
【０２８９】
エリキシル剤は、透明な加糖した水アルコール性調製物である。エリキシル剤において使用される薬学上許容可能な担体には溶媒が含まれる。シロップ剤は、糖、例えば、スクロースの高濃度水溶液であり、保存剤を含有してもよい。エマルションは、ある液体が別の液体に小球の形態で分散している二相系である。エマルションにおいて使用される薬学上許容可能な担体は、非水性液体、乳化剤、および保存剤である。懸濁液では、薬学上許容可能な懸濁化剤および保存剤が使用される。液体経口投与形に再構成される非発泡性顆粒剤において使用される薬学上許容可能な物質には、希釈剤、甘味剤、および湿潤剤が含まれる。液体経口投与形に再構成される発泡性顆粒剤において使用される薬学上許容可能な物質には、有機酸および二酸化炭素源が含まれる。上記の投与形の総てにおいて着色剤および着香剤が使用される。
【０２９０】
溶媒には、グリセリン、ソルビトール、エチルアルコールおよびシロップが含まれる。保存剤の例には、グリセリン、メチルおよびプロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウムおよびアルコールが含まれる。エマルションに使用される非水性液の例には、鉱油および綿実油が含まれる。乳化剤の例には、ゼラチン、アラビアガム、トラガカントガム、ベントナイト、および界面活性剤、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンが含まれる。懸濁化剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ペクチン、トラガカントガム、ビーガムおよびアラビアガムが含まれる。甘味剤には、スクロース、シロップ、グリセリンおよび人工甘味剤、例えば、サッカリンが含まれる。湿潤剤には、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコールおよびポリオキシエチレンラウリルエーテルが含まれる。有機酸には、クエン酸および酒石酸が含まれる。二酸化炭素源には、重炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムが含まれる。着色剤には、認可済み水溶性ＦＤおよびＣ色素のいずれか、ならびにそれらの混合物が含まれる。着香剤には、果実などの植物から抽出された天然フレーバー、および好ましい味覚を生じる化合物の合成ブレンドが含まれる。
【０２９１】
固体投与形の場合、例えば、炭酸プロピレン、植物油、またはトリグリセリド中の溶液または懸濁液は、いくつかの実施形態において、ゼラチンカプセル中に封入される。このような溶液ならびにその調製および封入は、米国特許第４，３２８，２４５号；同第４，４０９，２３９号；および同第４，４１０，５４５号に開示されている。液体投与形の場合、例えば、ポリエチレングリコール中の溶液は、投与のために簡単に測定される十分な量の薬学上許容可能な液体担体、例えば、水で希釈することができる。
【０２９２】
あるいは、液体または半固体経口製剤は、有効化合物または塩を植物油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル（例えば、炭酸プロピレン）およびその他のこのような担体に溶解または分散させ、これらの溶液または懸濁液を硬ゼラチンカプセルシェルまたは軟ゼラチンカプセルシェルに封入することによって調製することができる。他の有用な製剤としては、米国特許第ＲＥ２８，８１９号および同第４，３５８，６０３号に示されているものが含まれる。簡単に述べれば、このような製剤には、限定されるものではないが、本明細書で提供される化合物、ジアルキル化モノ−またはポリ−アルキレングリコール（限定されるものではないが、１，２−ジメトキシメタン、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、ポリエチレングリコール−３５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール−５５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングリコール−７５０−ジメチルエーテルを含む、ここで、３５０、５５０および７５０はポリエチレングリコールのおよその平均分子量を指す）、および１以上の抗酸化剤、例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、ヒドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、レシチン、ケファリン、アスコルビン酸、リンゴ酸、ソルビトール、リン酸、チオジプロピオン酸およびそのエステル、ならびにジチオカルバメートを含有するものが含まれる。
【０２９３】
他の製剤には、限定されるものではないが、薬学上許容可能なアセタールを含むアルコール水溶液が含まれる。これらの製剤において使用されるアルコールは、限定されるものではないが、プロピレングリコールおよびエタノールを含む、１以上のヒドロキシル基を有する薬学上許容可能な任意の水混和性溶媒である。アセタールには、限定されるものではないが、低級アルキルアルデヒドのジ(低級アルキル)アセタール、例えば、アセトアルデヒドジエチルアセタールが含まれる。
【０２９４】
非経口投与は、いくつかの実施形態において、皮下、筋肉内、腫瘍内、または静脈内いずれかの注射を特徴とし、これもまた本明細書において企図される。注射剤は、液体溶液もしくは懸濁液として従来の形態で、注射の前に液体に溶解もしくは懸濁させるのに適した固体形態で、またはエマルションとして調製することができる。注射剤、溶液、およびエマルションはまた１以上の賦形剤を含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。さらに、所望により、投与される医薬組成物はまた、微量の非毒性の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解促進剤、ならびに他のこのような薬剤、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、およびシクロデキストリンを含有することもできる。
【０２９５】
一定レベルの用量が維持されるような、遅延放出システムまたは徐放性システムの移植（例えば、米国特許第３，７１０，７９５号参照）も本明細書において企図される。簡単に述べれば、本明細書で提供される化合物は、例えば、体液に不溶性のポリマー外膜、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン／プロピレンコポリマー、エチレン／アクリル酸エチルコポリマー、エチレン／酢酸ビニルコポリマー、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、ネオプレンゴム、塩素化ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、塩化ビニルの酢酸ビニルと塩化ビニリデンとエチレンとプロピレンのコポリマー、イオノマーポリエチレンテレフタレート、ブチルゴムエピクロロヒドリンゴム、エチレン／ビニルアルコールコポリマー、エチレン／酢酸ビニル／ビニルアルコールターポリマー、およびエチレン／ビニルオキシエタノールコポリマーで囲まれた固体内部マトリックス、例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリブチルメタクリレート、可塑化または無可塑ポリ塩化ビニル、可塑化ナイロン、可塑化ポリエチレンテレフタレート、天然ゴム、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、エチレン−酢酸ビニルコポリマー、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、シリコーンカーボネートコポリマー、親水性ポリマー、例えば、アクリル酸エステルとメタクリル酸エステルのヒドロゲル、コラーゲン、架橋ポリビニルアルコール、および部分的に加水分解した架橋ポリ酢酸ビニルの中に分散される。治療薬（例えば、抗体）は、放出速度制御段階において、ポリマー外膜を通って拡散する。このような非経口組成物に含まれる治療薬の量は、その特定の性質、ならびに化合物の活性および対象の必要性に強く依存する。
【０２９６】
非経口投与のための調製物には、注射にすぐに使える無菌溶液、皮下注射用錠剤を含む、使用直前に溶媒と合わせるだけの無菌の乾燥可溶性製品、例えば、凍結乾燥粉末、注射にすぐに使える無菌懸濁液、使用直前にすぐにビヒクルと合わせるだけの無菌の乾燥不溶性製品、および無菌エマルションが含まれる。溶液は水性でもまたは非水性でもよい。
【０２９７】
静脈内投与する場合、好適な担体には、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールを含有する溶液、ならびにその混合物が含まれる。
【０２９８】
非経口調製物において使用される薬学上許容可能な担体には、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張剤、バッファー、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁化剤および分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の薬学上許容可能な物質が含まれる。
【０２９９】
水性ビヒクルの例には、塩化ナトリウム注射剤、リンゲル注射剤、等張デキストロース注射剤、滅菌水注射剤、デキストロースおよび乳酸加リンゲル注射剤が含まれる。非水性非経口ビヒクルには、植物由来の不揮発性油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、および落花生油が含まれる。多用量容器として包装された非経口調製物には、静菌濃度または静真菌濃度の抗菌剤を添加することができ、これには、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルおよびｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルエステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、ならびに塩化ベンゼトニウムが含まれる。等張剤には塩化ナトリウムおよびデキストロースが含まれる。バッファーにはリン酸塩およびクエン酸塩が含まれる。抗酸化剤には重硫酸ナトリウムが含まれる。局所麻酔剤には塩酸プロカインが含まれる。懸濁化剤および分散剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが含まれる。乳化剤には、ポリソルベート８０（ツィーン（登録商標）８０）が含まれる。金属イオン封鎖剤または金属イオンキレート剤にはＥＤＴＡが含まれる。医薬担体には、水混和性ビヒクル用のエチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコール；ならびにｐＨ調節用の水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸も含まれる。
【０３００】
薬学上有効な抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の濃度は、注射が所望の薬理学的効果をもたらす有効量を提供するように調節される。正確な用量は、当技術分野において公知であるように、患者または動物の年齢、体重、および状態によって異なる。
【０３０１】
単位用量非経口調製物は、アンプル、バイアル、または針付き注射器として包装することができる。非経口投与用の総ての調製物は、当技術分野において公知であり、かつ実施されるように無菌とすることができる。
【０３０２】
例示として、有効化合物を含有する無菌水溶液の静脈内注入または動脈内注入は有効な投与様式である。別の実施形態様は、所望の薬理学的効果を生じるように必要に応じて注射される有効物質を含有する無菌の水性または油性溶液または懸濁液である。
【０３０３】
注射剤は局所投与用および全身投与用に設計される。いくつかの実施形態では、治療上有効な用量は、治療される組織に対して、少なくとも約０．１％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗまたはそれを超える濃度、いくつかの実施形態では、１％ｗ／ｗを超える濃度の有効化合物を含有するように調剤される。
【０３０４】
抗体などの治療薬は、微粉化形態または他の好適な形態で懸濁させることができる。結果として得られる混合物の形態は、意図される投与様式、および選択される担体またはビヒクル中での化合物の溶解度を含むいくつかの因子によって異なる。有効濃度はＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の症状を改善するために十分なものであり、実験的に決定することができる。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、医薬製剤は、溶液、エマルション、および他の混合物として投与するために再構成することができる凍結乾燥粉末である。それらはまた固体またはゲルとして再構成および調剤してもよい。
【０３０６】
凍結乾燥粉末は、本明細書で提供される抗体などの治療薬またはその薬学上許容可能な誘導体を好適な溶媒に溶解させることによって調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥粉末は無菌である。溶媒は、安定性を改善する賦形剤、または粉末もしくは粉末から調製された再構成溶液の他の薬理学的成分を含有してもよい。使用可能な賦形剤としては、限定されるものではないが、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が含まれる。溶媒はまた、バッファー、例えば、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウムバッファー、または当業者に公知の他のこのようなバッファー、いくつかの実施形態では、ｐＨがほぼ中性のバッファーを含有してもよい。続いて、溶液を濾過除菌した後に当業者に公知の標準的な条件下で凍結乾燥を行うことによって、所望の製剤が得られる。いくつかの実施形態では、結果として得られる溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配される。各バイアルは、化合物の単回用量または複数回用量を含有する。凍結乾燥粉末は、約４℃〜室温などの適切な条件下で保管することができる。
【０３０７】
注射用水を用いてこの凍結乾燥粉末を再構成すると、非経口投与において使用するための製剤が得られる。再構成のために、凍結乾燥粉末を滅菌水または他の好適な担体に添加する。正確な量は、選択される化合物によって異なる。このような量は実験的に決定することができる。
【０３０８】
局部用混合物は、局所投与および全身投与に関して記載した通りに調製される。結果として得られる混合物は、溶液、懸濁液、エマルションなどであり得、クリーム、ゲル、軟膏、エマルション、溶液、エリキシル剤、ローション剤、懸濁液、チンキ剤、パスタ剤、フォーム剤、エアロゾル剤、灌注剤、スプレー剤、坐剤、包帯、皮膚パッチ、または局部投与に好適な他の任意の製剤として調剤することができる。
【０３０９】
本明細書に提供される治療薬は、吸入によるなどの局部適用のためのエアロゾル剤として調剤することができる（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達のためのエアロゾル剤を記載している米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、および同第４，３６４，９２３号参照）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独で、またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせて、ネブライザー用のエアロゾルまたは溶液の形態をとってもよく、または吹送用の超微粉末としてもよい。このような場合、製剤の粒子は、いくつかの実施形態では、５０ミクロン未満、いくつかの実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有する。
【０３１０】
治療薬は、局所適用または局部適用のために、例えば、皮膚および眼などの粘膜への局部適用のために、ゲル、クリーム、およびローション剤の形態で、ならびに眼への適用または槽内適用もしくは脊髄内適用のために調剤することができる。局部投与は、経皮送達のために、眼もしくは粘膜への投与または吸入療法のためにも企図される。有効化合物単独、または他の薬学上許容可能な賦形剤と組み合わせた鼻用溶液も投与することができる。
【０３１１】
これらの溶液、特に、眼への使用を目的とした溶液は、適当な塩で０．０１％〜１０％等張液、ｐＨ約５〜７として処方することができる。
【０３１２】
他の投与経路、例えば、イオン導入装置および電気泳動装置を含む経皮パッチ、ならびに直腸投与も本明細書において企図される。
【０３１３】
イオン導入装置および電気泳動装置を含む経皮パッチは当業者に周知である。例えば、このようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、および同第５，８６０，９５７号に開示されている。
【０３１４】
直腸投与用の医薬投与形は、全身作用のための直腸用坐剤、カプセル剤、および錠剤である。直腸用坐剤は本明細書において使用され、体温で融解または軟化して１以上の薬理学的または治療的に有効な成分を放出する、直腸に挿入するための固体本体を意味する。直腸用坐剤において使用される薬学上許容可能な物質は、基剤またはビヒクルおよび融点を上昇させる薬剤である。基剤の例としては、カカオ脂（テオブロマ脂）、グリセリン−ゼラチン、カーボワックス（ポリオキシエチレングリコール）、ならびに脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドの適当な混合物が含まれる。様々な基剤の組合せを使用することができる。坐剤の融点を上昇させる薬剤には、鯨ろうおよびろうが含まれる。直腸用坐剤は、圧縮法または成形によって調製することができる。直腸用坐剤の重量は、いくつかの実施形態では、約２〜３ｇｍである。
【０３１５】
直腸投与用の錠剤およびカプセル剤は、経口投与用の製剤と同じ薬学上許容可能な物質を用いて、経口投与用の製剤と同じ方法によって製造することができる。
【０３１６】
本明細書で提供される治療薬（例えば、抗体）および他の組成物はまた、特定の組織、受容体、または治療される対象の身体の他の領域へ標的化されるように調剤されてもよい。このような多くの標的化法が当業者に周知である。本組成物に使用するためのこのような総ての標的化法が本明細書において企図される。標的化法の非限定例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、および同第５，７０９，８７４号参照。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、組織標的化リポソーム、例えば、腫瘍標的化リポソームを含むリポソーム懸濁液もまた、薬学上許容可能な担体として好適であり得る。これらは、当業者に周知の方法に従って調製することができる。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるようにリポソーム製剤を調製することができる。簡単に述べれば、卵ホスファチジルコリンと脳ホスファチジルセリン（７：３のモル比）をフラスコの内側で乾燥させることによって多重ラメラ小胞（ＭＬＶ）のようなリポソームを形成することができる。二価のカチオンを欠いているリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の本明細書で提供される化合物の溶液を添加し、脂質膜が分散されるまでフラスコを振盪する。得られた小胞を洗浄して、封入されていない化合物を除去し、遠心分離によってペレット化し、その後、ＰＢＳに再懸濁させる。
【０３１８】
治療、予防および／または緩和の方法
別の態様において、本発明はまた、患者においてＶＩＳＴＡ介在疾患障害または病態の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関する。本明細書では、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態、特に、ＶＩＳＴＡ介在癌などの疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和において使用するための、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ−療法（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）が提供される。有利には、前記ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態は、本明細書で提供される方法の１つによって従前に検出または診断されている。
【０３１９】
ある実施形態において、本発明は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、または病態の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態は、本明細書で提供される方法の１つによって従前に検出または診断されている。よって、言い換えれば、本発明は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、または病態を治療するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬に関し、この抗ＶＩＳＴＡ治療薬は、上記の方法を用いてＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、または病態と診断された患者に投与される。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、本明細書において、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態の管理、予防、もしくは治療および／またはＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態の１以上の症状の緩和において使用するための本明細書で提供される１以上の抗体（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる組成物が提供される。例示的なＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態としては、細胞増殖性障害、腫瘍、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、またはそれらの症状が含まれる。好ましくは、前記ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態は癌である。
【０３２１】
よって本明細書において、患者においてＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）が提供され、前記使用は、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に特異的に結合することができる試薬と接触させること；および
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量し、前記試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること
を含んでなる。
【０３２２】
好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程をさらに含んでなる。
【０３２３】
別の実施形態では、本発明は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記使用は、上記のような前記腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の事前の決定を含んでなる。この実施形態によれば、［ＰＳＧＬ−１（＋）］である腫瘍はＶＩＳＴＡ介在癌の指標となり、よって、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）による治療に応答し得る。
【０３２４】
別の好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較することをさらに含んでなる。
【０３２５】
この好ましい実施形態によれば、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するためのものであり、前記使用は、
ａ）前記対象の生体試料における、例えば、前記生体試料中の腫瘍微小環境の免疫浸潤物によるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；
ｂ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較すること；および
ｃ）工程ａ）の発現レベルが参照レベルよりも高い場合にＶＩＳＴＡ介在癌を判定すること
を含んでなる。
【０３２６】
別の好ましい実施形態によれば、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するためのものであり、前記使用は、
ａ）前記対象の生体試料における、例えば、前記生体試料中の腫瘍微小環境の免疫浸潤物によるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；
ｂ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較すること；および
ｃ）工程ａ）の発現レベルが参照レベルよりも高い場合にＶＩＳＴＡ介在癌を診断すること
を含んでなる。
【０３２７】
有利には、本発明の方法は、
・対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程；および
・対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較する工程
の両方を含んでなる。
【０３２８】
有利には、抗ＶＩＳＴＡ治療薬の上記使用は、上記で詳細に述べたようにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定することをさらに含んでなる。このような場合、ＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルが参照レベルより高ければ、ＶＩＳＴＡ介在癌を示す。
【０３２９】
別の実施形態によれば、本発明は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に向けられ、前記使用は、
ａ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に特異的に結合することができる試薬と接触させること；および
ｂ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量すること、よって、前記試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；および
ｃ）工程ａ）のレベルに基づいて抗ＶＩＳＴＡ治療薬の治療を適合させること
を含んでなる。
【０３３０】
好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程をさらに含んでなる。
【０３３１】
別の実施形態では、本発明は、患者におけるＶＩＳＴＡ介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記使用は、上記のような前記腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の事前の決定を含んでなる。この実施形態によれば、［ＰＳＧＬ−１（＋）］である腫瘍はＶＩＳＴＡ介在癌の指標となり、よって、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）による治療に応答し得る。
【０３３２】
別の好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較することをさらに含んでなる。
【０３３３】
前記の抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の適合は、以下からなり得る：
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に不応であると診断された場合には、前記抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の低減もしくは抑制、または
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に応答すると診断された場合には、前記ＶＩＳＴＡ治療薬治療の継続。
【０３３４】
工程ａ）の発現レベルと参照レベルの間でＰＳＧＬ−１発現に違いがあれば、患者は前記治療に応答している。例えば、工程ａ）の発現レベルと治療される前に得られた患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルの間のＰＳＧＬ−１発現の違いは、前記患者が前記治療に応答しているかどうかを示す。有利には、治療される前に得られた患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルに比べて工程ａ）のＰＳＧＬ−１発現レベルが高ければ、前記患者が前記治療に応答していることを示す。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、上記使用は、ＰＳＧＬ−１に加えてＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定すること、および第１の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルを、治療される前に得られた患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルと比較することを含んでなる。この場合、第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルまたは相対発現レベルに比べて、第１の生体試料における差次的なＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルまたは相対発現レベルが、患者が治療に応答していることを示す。
【０３３６】
この方法のいくつかの態様において、この治療は、本明細書に記載されるような抗ＶＩＳＴＡ抗体および／または抗ＰＳＧＬ−１抗体を投与することを含む。
【０３３７】
いくつかの態様において、この方法は、第１の生体試料が腫瘍微小環境の免疫浸潤物を含んでなることを含む。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるようなもの、またはその組成物を含む、治療上有効な量の抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を対象に投与することにより本明細書に記載される疾患、障害または病態を予防または治療するための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、疾患、障害または病態を治療するための方法は、抗ＶＩＳＴＡ抗体ならびに薬学上許容可能な担体、賦形剤および／または安定剤を含んでなる、治療上有効な量の医薬組成物を対象に投与することを含んでなる。本明細書で提供される方法はまた、場合により、本明細書に記載されるもの（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）などの少なくとも１つの付加的治療薬を、別の治療としてまたは組み合わせて含むことができる。また、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態などの疾患、障害または病態の１以上の症状の治療、予防、および／または緩和において使用するための、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる組成物（医薬組成物を含む）も本明細書に記載される。例示的ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態としては、細胞増殖性障害（例えば、癌もしくは腫瘍）またはその症状が含まれる。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害などのＶＩＳＴＡ介在疾患、障害、または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる組成物が本明細書に記載される。細胞増殖性障害には、癌または腫瘍形成、またはその症状が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、ＶＩＳＴＡの発現および／または活性の増強に関連する。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害は、癌細胞の表面のＶＩＳＴＡ発現の増強に関連する。
【０３４０】
別の態様において、本発明はまた、患者におけるＰＳＧＬ−１介在疾患障害または病態の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関連する。ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害または病態、特に、ＰＳＧＬ−１介在癌などの疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和において使用するための、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ−療法（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）が本明細書で提供される。有利には、前記ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害または病態は、本明細書で提供される方法の１つにより従前に検出または診断されている。
【０３４１】
ある実施形態において、本発明は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在疾患、障害、または病態の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害または病態は、本明細書で提供される方法の１つにより従前に検出または診断されている。よって、言い換えれば、本発明は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在疾患、障害、または病態を治療するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬に関し、この抗ＶＩＳＴＡ治療薬は、上記の方法を用いてＰＳＧＬ−１介在疾患、障害、または病態と診断された患者に投与される。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害もしくは病態の管理、予防、もしくは治療および／またはＰＳＧＬ−１介在疾患、障害もしくは病態の１以上の症状の緩和において使用するための本明細書で提供される１以上の抗体ｓ（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる組成物が本明細書で提供される。例示的ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害または病態としては、細胞増殖性障害、腫瘍、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、またはその症状が含まれる。好ましくは、前記ＰＳＧＬ−１介在疾患、障害または病態は癌である。
【０３４３】
よって、本明細書では、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）が提供され、前記使用は、
ｃ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に特異的に結合することができる試薬と接触させること；および
ｄ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量すること、よって、前記試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること
を含んでなる。
【０３４４】
好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程をさらに含んでなる。
【０３４５】
別の実施形態では、本発明は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記使用は、上記のような前記腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の事前の決定を含んでなる。この実施形態によれば、［ＰＳＧＬ−１（＋）］である腫瘍がＰＳＧＬ−１介在癌の指標となり、よって、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）による治療に応答し得る。
【０３４６】
別の好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較することをさらに含んでなる。
【０３４７】
この好ましい実施形態によれば、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するためのものであり、前記使用は、
ｄ）前記対象の生体試料における、例えば、前記生体試料の腫瘍微小環境の免疫浸潤物によるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；
ｅ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較すること；および
ｆ）工程ａ）の発現レベルが参照レベルより高い場合にＰＳＧＬ−１介在癌を判定すること
を含んでなる。
【０３４８】
別の好ましい実施形態によれば、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するためのものであり、前記使用は、
ｄ）前記対象の生体試料における、例えば、前記生体試料の腫瘍微小環境の免疫浸潤物によるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；
ｅ）工程ａ）の発現レベルを参照レベルと比較すること；および
ｆ）工程ａ）の発現レベルが参照レベルより高い場合にＰＳＧＬ−１介在癌を判定すること
を含んでなる。
【０３４９】
有利には、本発明の方法は、
・対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程；および
・対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較する工程
の両方を含んでなる。
【０３５０】
有利には、抗ＶＩＳＴＡ治療薬の上記使用は、上記で詳細に述べたようにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベルを決定することをさらに含んでなる。この場合、ＰＳＧＬ−１ならびにＶＩＳＴＡ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ４、およびＣＤ８のうち少なくとも１つの発現レベル、またはその相対発現レベルが参照レベルより高ければ、ＰＳＧＬ−１介在癌を示す。
【０３５１】
別の実施形態によれば、本発明は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に向けられ、前記使用は、
ｄ）前記対象の生体試料をＰＳＧＬ−１核酸またはタンパク質に特異的に結合することができる試薬と接触させること；および
ｅ）前記試薬と前記生体試料との結合を定量すること、よって、前記試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルを決定すること；および
ｆ）工程ａ）のレベルに基づいて抗ＶＩＳＴＡ治療薬の治療を適合させること
を含んでなる。
【０３５２】
好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを、染色強度と陽性細胞のパーセンテージである２つのパラメーターに基づく適当な尺度と比較することにより腫瘍をスコア化する工程をさらに含んでなる。
【０３５３】
別の実施形態では、本発明は、患者におけるＰＳＧＬ−１介在癌の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）に関し、前記使用は、上記のような前記腫瘍のＰＳＧＬ−１状態の事前の決定を含んでなる。この実施形態によれば、［ＰＳＧＬ−１（＋）］である腫瘍がＰＳＧＬ−１介在癌の指標となり、よって、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）による治療に応答し得る。
【０３５４】
別の好ましい実施形態によれば、本使用は、対象の生体試料における（例えば、腫瘍微小環境の免疫浸潤物による）ＰＳＧＬ−１の発現レベルを参照レベルと比較することをさらに含んでなる。
【０３５５】
前記の抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の適合は、以下からなり得る：
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に不応であると診断された場合には、前記抗ＶＩＳＴＡ治療薬治療の低減もしくは抑制、または
患者が抗ＶＩＳＴＡ治療薬に応答すると診断された場合には、前記ＶＩＳＴＡ治療薬治療の継続。
【０３５６】
工程ａ）の発現レベルと参照レベルの間でＰＳＧＬ−１発現に違いがあれば、患者は前記治療に応答している。例えば、工程ａ）の発現レベルと治療される前に得られた患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルの間のＰＳＧＬ−１発現の違いは、前記患者が前記治療に応答しているかどうかを示す。有利には、治療される前に得られた患者由来の第２の生体試料におけるＰＳＧＬ−１の発現レベルに比べて工程ａ）のＰＳＧＬ−１発現レベルが高ければ、前記患者が前記治療に応答していることを示す。
【０３５７】
治療、予防される、またはその症状が本明細書で提供される抗体により緩和され得る細胞増殖性障害の例としては、限定されるものではないが、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫）、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結合組織癌、直腸癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉頭癌、腎臓癌、口腔癌、卵巣癌、もしくは前立腺癌、または肉腫、黒色腫、もしくは神経膠腫、またはこれらの癌のいずれもの転移が含まれる。例示的血液癌としては、限定されるものではないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、限局性骨髄腫または髄外性骨髄腫が含まれる。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、血液癌はリンパ腫である。他の実施形態では、血液癌は白血病である。いくつかの実施形態では、血液癌は骨髄腫である。別の実施形態では、血液癌は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。別の実施形態では、血液癌は急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。別の実施形態では、血液癌は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。別の実施形態では、血液癌は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。別の実施形態では、血液癌は急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）である。別の実施形態では、血液癌はホジキンリンパ腫である。別の実施形態では、血液癌は非ホジキンリンパ腫である。別の実施形態では、血液癌は多発性骨髄腫である。別の実施形態では、血液癌は形質細胞腫である。別の実施形態では、血液癌は限局性骨髄腫である。別の実施形態では、血液癌は髄外性骨髄腫である。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、血液癌は、骨髄異形成症候群、急性白血病、例えば、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、Ｂ前駆細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ前駆細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）、または急性二重表現型白血病；慢性白血病、例えば、慢性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性単球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、またはＢ細胞前リンパ球性白血病；有毛細胞リンパ腫；Ｔ細胞前リンパ球性白血病；またはリンパ腫、例えば、組織球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞新生物（例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着症、またはＨ鎖病）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫（セザリー症候群）、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖症（例えば、原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫またはリンパ腫様丘疹症）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型未分化大細胞型リンパ腫、ホジキンリンパ腫または結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫である。
【０３６０】
本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、治療目的でヒトに投与することができる。さらに、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、獣医学的目的のためにまたはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＶＩＳＴＡを発現する非ヒト哺乳動物（例えば、霊長類、ブタ、ラット、またはマウス）に投与することもできる。後者に関して、このような動物モデルは、本明細書で提供される抗体の治療効力を評価する（例えば、用量および投与の経過を試験する）ために有用であり得る。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ治療薬は、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合におより媒介されるＴ細胞機能を調節する方法において使用可能な抗体である。このような方法は、Ｔ細胞を本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体に接触させることを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１のＰ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンへの結合を遮断も阻害もしない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞機能を調節するための方法は、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ抗体を含んでなる有効量の組成物を対象に投与することを含む。いくつかの態様において、調節されるＴ細胞機能には、Ｔ細胞の活性化の増増強が含まれる。このようなＴ細胞の活性化は、Ｔ細胞の増殖の増大をさらに含み得る。免疫応答の調節をアッセイするための方法は当業者に周知であり、当業者はこのようなアッセイを容易に行うことができると理解される。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるものを含む、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）または抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる組成物は単独で、または別の化合物もしくは治療と組み合わせて使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、他の化合物は、共抑制分子に対するアンタゴニストまたは共刺激分子に対するアゴニストである。このような実施形態において、この併用療法は、活性化されたＴ細胞による免疫系の、化合物または治療のいずれかの個々の投与よりも大きい再活性化またはｄｅ  ｎｏｖｏ活性化をもたらす。この免疫系の活性化は、癌治療（例えば、血液癌治療）に関するものを含め、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の治療において極めて有益な生理反応をもたらし得る。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、治療上有効な量の抗ＶＩＳＴＡ抗体を治療上有効な量の、共抑制分子に対するアンタゴニストと組み合わせて投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、共抑制分子は、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＢＴＮＬ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ブチロフィリン、ＣＤ４８、ＣＤ２４４、ＴＩＭ−３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２００、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ガレクチン９、ＴＩＭ３、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３およびＴＩＧＩＴからなる群から選択される。共抑制分子に対するアンタゴニストには、共抑制分子に対する抗体が含まれる。Mercier et al., Frontiers in Immunology, 6:418 (2015)、Kyi et al., FEBS Letters, 588:368-376 (2014)およびPardoll, Nature Reviews, 12:252−264 (2012)に記載されているものなど、他の共抑制分子に対するアンタゴニストも当技術分野で周知であることが認識される。この実施形態によれば、本発明は、上記のようにＶＩＳＴＡ介在腫瘍の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の使用に関し、前記使用は、共抑制分子に対するアンタゴニストの投与をさらに含んでなり、前記共抑制分子は、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＢＴＮＬ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ブチロフィリン、ＣＤ４８、ＣＤ２４４、ＴＩＭ−３、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２００、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ガレクチン９、ＴＩＭ３、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３およびＴＩＧＩＴからなる群から選択される。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、治療上有効な量の抗ＶＩＳＴＡ抗体を、治療上有効な量の、共刺激分子に対するアゴニストと組み合わせて投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ１５４、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＭＩＧＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＨＨＬＡ２、ＩＣＯＳＬ、サイトカイン、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、Ｂ７−Ｈ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ４、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ２、およびＣＤ２２６からなる群から選択される。共刺激分子に対するアゴニストには、共刺激分子に対するアゴニスト抗体が含まれる。Mercier et al., Frontiers in Immunology, 6:418 (2015)、Kyi et al., FEBS Letters, 588:368−376 (2014)およびCapece et al., J. Biomed. Biotechnol. 2012:926321, 第17頁 (2012)に記載されているものなど、共刺激分子に対するアゴニストは当技術分野で周知であることが認識される。この実施形態によれば、本発明は、上記のようにＶＩＳＴＡ介在腫瘍の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の使用に関し、前記使用は、共刺激分子に対するアゴニストの投与をさらに含んでなり、前記共刺激分子は、ＣＤ１５４、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＭＩＧＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＨＨＬＡ２、ＩＣＯＳＬ、サイトカイン、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、Ｂ７−Ｈ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ４、ＴＩＭ１、ＳＬＡＭ、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ２、およびＣＤ２２６からなる群から選択される。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、治療上有効な量の抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を、治療上有効な量の本明細書に記載される化学療法薬または本明細書に記載される放射線療法などの、癌治療のための従来型の療法と組み合わせて投与することを含み得る。この実施形態によれば、本発明は、上記のようにＶＩＳＴＡ介在腫瘍の治療において使用するための抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の使用に関し、前記使用は、治療上有効な量の本明細書に記載される化学療法薬または本明細書に記載される放射線療法などの、癌治療のための従来型の療法の投与をさらに含んでなる。
【０３６６】
限定されるものではないが、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、その抗体を発現することができる組換え細胞、受容体介在エンドサイトーシス（Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429−4432 (1987)参照）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などを含む様々な送達系が知られ、抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、本明細書に記載されるような抗ＶＩＳＴＡ抗体）を投与するために使用することができる。治療薬（例えば、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ抗体）、または医薬組成物を投与する方法には、限定されるものではないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、腫瘍内、および皮下）、硬膜外、および粘膜（例えば、鼻腔内および経口経路）が含まれる。いくつかの実施形態では、治療薬（例えば、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ抗体）、または医薬組成物は、鼻腔内、筋肉内、静脈内、腫瘍内、または皮下に投与される。これらの治療薬、または組成物は、例えば、注入またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜内面（例えば、口腔粘膜、鼻腔粘膜、直腸粘膜および腸管粘膜など）からの吸収によるなど、いずれの好都合な経路によって投与してもよく、他の生物学的に有効な薬剤とともに投与してもよい。投与は全身的でも局所でもよい。さらに、例えば吸入器またはネブライザー、およびエアロゾル化剤を用いた製剤の使用による肺投与を使用することもできる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、および同第４，８８０，０７８号；ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、および同第ＷＯ９９／６６９０３号参照、これらはそれぞれ引用することによりそれらの全内容が本明細書の一部とされる。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療薬、または医薬組成物を、治療を要する領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、限定されるものではないが、局所注入によるか、局所投与による（例えば、鼻腔内スプレーによる）か、注射（特に、腫瘍内注射）によるか、またはインプラントの手段によって達成することができ、このインプラントは、シラスティック膜などの膜、または繊維を含む、多孔性、非多孔性、またはゼラチン性材料のものである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体を投与する場合、抗体が吸収しない材料を用いるように注意しなければならない。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療薬は、小胞、特に、リポソーム内で送達することができる（Langer, 1990, Science 249:1527−1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (編), Liss, New York, pp. 353−365 (1989); Lopez-Berestein, 同書, pp. 317−327参照；概要は同書を参照）。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される治療薬は、放出制御または徐放系で送達することができる。いくつかの実施形態では、制御放出または徐放を達成するためにポンプを用いてもよい（Langer, 前掲; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574参照）。別の実施形態では、本明細書で提供される治療薬（例えば、本明細書で提供される抗体）または組成物の放出制御または徐放を達成するためにポリマー材料を使用することができる（例えば、Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (編), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (編), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., MacroMol. Sci. Rev. MacroMol. Chem. 23:61参照；また、Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105); 米国特許第５，６７９，３７７号；同第５，９１６，５９７号；同第５，９１２，０１５号；同第５，９８９，４６３号；同第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１５１５４号；および同第ＷＯ９９／２０２５３号も参照）。徐放性製剤において使用されるポリマーの例としては、限定されるものではないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリアンヒドリド、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、およびポリオルトエステルが含まれる。いくつかの実施形態では、徐放性製剤において使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性の不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、かつ生分解性である。さらに他の実施形態では、制御放出または徐放系を、治療標的、例えば、鼻腔または肺の近位に配置することができ、よって、全身用量の一部を必要とするだけである（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 前掲, vol. 2, pp. 115−138 (1984)参照）。制御放出系はLanger (1990, Science 249:1527−1533)により総説されている。当業者に公知のいずれの技術も、本明細書で提供される１以上の抗体を含んでなる徐放性製剤を作製するために使用可能である。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０５５４８、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２０６９８、Ning et al., 1996, Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel,” Radiotherapy & Oncology 39:179−189、Song et al., 1995, “Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions,” PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372−397、Cleek et al., 1997, “Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application,” Pro. Int’l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853−854、およびLam et al., 1997, “Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery,” Proc. Int’l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759−760参照。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法において有用な組成物は、１つ、２つまたはそれを超える本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）を含んでなる。別の実施形態では、本明細書で提供される方法において有用な組成物は、１つ、２つまたはそれを超える本明細書で提供される抗体と本明細書で提供される抗体以外の治療薬とを含んでなる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和に有用であることが知られているか、またはそのために使用されていたか、またはそのために目下使用されている。治療薬に加え、本明細書で提供される組成物はまた担体も含んでなり得る。
【０３７１】
本明細書で提供される組成物には、単位投与形の調製に使用することができる医薬組成物（例えば、対象または患者への投与に好適な組成物）の製造において有用なバルク組成物が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は医薬組成物である。このような組成物は、予防上または治療上有効な量の１以上の治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ治療薬、例えば、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ抗体、または他の治療薬）、および薬学上許容可能な担体を含んでなる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対象に対する投与経路に好適なように調剤される。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として常法に従って調剤される。一般に、静脈内投与用の組成物は、無菌等張水性バッファー中の溶液である。必要であれば、組成物は、可溶化剤および注射部位の痛みを軽減するためにリドカインまたはリグノカインなどの局所麻酔薬も含み得る。しかしながら、このような組成物は、静脈内以外の経路によって投与してもよい。
【０３７３】
本明細書で提供される組成物の成分は、個別にまたは併せて混合するかのいずれかで、単位投与形で、例えば、凍結乾燥粉末、または無水濃縮物として、有効剤の量を表示するアンプルまたは小袋などの密封容器中で供給される。組成物を注入により投与する場合、無菌製薬等級の水または食塩水を含有する注入ビンで分配することができる。組成物を注射により投与する場合、投与前に成分を混合できるように注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供することができる。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体の量を表示するアンプルまたは小袋などの密封容器中に包装される。いくつかの実施形態では、抗体は、密封容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給され、例えば、対象へ投与するための適切な濃度に、水または食塩水で再構成することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも０．１ｍｇ、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、または少なくとも３ｍｇ、例えば、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも８０ｍｇ、少なくとも８５ｍｇ、少なくとも９０ｍｇ、少なくとも９５ｍｇ、または少なくとも１００ｍｇの単位用量で、密封容器中の乾燥滅菌凍結乾燥粉末として供給される。凍結乾燥抗体は、その当初の容器において２〜８℃で保存することができ、抗体は、再構成された後１２時間以内、例えば、６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与することができる。別の実施形態では、抗体は、抗体の量および濃度を示す密封容器中に液体形態で供給される。いくつかの実施形態では、液体形態の抗体は密封容器中に、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも９０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。
【０３７５】
ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和に有効であると思われる本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）または組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定することができる。
【０３７６】
よって、約０．１μｇ／ｍｌ〜約４５０μｇ／ｍｌ、いくつかの実施形態では、少なくとも０．１μｇ／ｍｌ、少なくとも０．２μｇ／ｍｌ、少なくとも０．４μｇ／ｍｌ、少なくとも０．５μｇ／ｍｌ、少なくとも０．６μｇ／ｍｌ、少なくとも０．８μｇ／ｍｌ、少なくとも１μｇ／ｍｌ、少なくとも１．５μｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも２μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５μｇ／ｍｌ、少なくとも２０μｇ／ｍｌ、少なくとも２５μｇ／ｍｌ、少なくとも３０μｇ／ｍｌ、少なくとも３５μｇ／ｍｌ、少なくとも４０μｇ／ｍｌ、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも７５μｇ／ｍｌ、少なくとも１００μｇ／ｍｌ、少なくとも１２５μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも２００μｇ／ｍｌ、少なくとも２５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも３５０μｇ／ｍｌ、少なくとも４００μｇ／ｍｌ、または少なくとも４５０μｇ／ｍｌの血清力価をもたらす抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）または組成物の用量を、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状の予防、治療および／または緩和のためにヒトに投与することができる。さらに、最適な用量範囲を特定する助けとするために場合によりｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いてもよい。製剤に使用する正確な用量はまた、投与経路、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の重症度によっても異なり、医師の判断および各患者の状況に応じて決定されるべきである。
【０３７７】
有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から推定してもよい。
【０３７８】
本明細書で提供される抗体に関して、患者に投与する用量は、いくつかの実施形態では、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重であり得る。いくつかの実施形態では、患者に投与する用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。いくつかの実施形態では、患者に投与する用量は、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ患者体重、例えば、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ患者体重である。一般に、ヒト抗体のヒト体内での半減期は、外来ポリペプチドに対する免疫応答のために他種由来の抗体よりも長い。従って、多くの場合、より低用量のヒト抗体および低頻度の投与が可能である。さらに、本明細書で提供される抗体の用量および投与頻度は、例えば脂質化などの修飾により抗体の取り込みおよび組織浸透を高めることによって低減される得る。
【０３７９】
いくつかの実施形態において、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状を予防、治療または緩和するために、およそ１００ｍｇ／ｋｇ以下、およそ７５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ２５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１ｍｇ／ｋｇ以下、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ以下、またはおよそ０．１ｍｇ／ｋｇ以下の本明細書で提供される抗体が５回、４回、３回、２回または１回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は約１〜１２回投与され、これらの用量は、医師により決定されるように、必要に応じて、例えば、毎週、隔週、毎月、隔月、３か月毎などで投与され得る。いくつかの実施形態では、より低用量（例えば、１〜１５ｍｇ／ｋｇ）を高頻度（例えば、３〜６回）で投与することができる。他の実施形態では、より高用量（例えば、２５〜１００ｍｇ／ｋｇ）を低頻度（例えば、１〜３回）で投与することができる。しかしながら、当業者には自明であるように、他の投与量およびスケジュールも容易に決定可能であり、本開示の範囲内にある。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡ介在疾患の１以上の症状を予防、治療および／または緩和するために、およそ１００ｍｇ／ｋｇ、およそ７５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ２５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１ｍｇ／ｋｇ以下、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ０．１ｍｇ／ｋｇ以下の本明細書で提供される抗体が徐放性製剤で、ヒトなどの対象に投与される。別のいくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状を予防、治療および／または緩和するために、およそ１００ｍｇ／ｋｇ、およそ７５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ２５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１ｍｇ／ｋｇ以下、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ以下、またはおよそ０．１ｍｇ／ｋｇ以下の本明細書で提供される抗体の、徐放性製剤ではなくボーラスが、ヒトなどの対象に投与され、ある特定の期間の後に、およそ１００ｍｇ／ｋｇ、およそ７５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ２５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１０ｍｇ／ｋｇ以下、およそ５ｍｇ／ｋｇ以下、およそ１ｍｇ／ｋｇ以下、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ以下、またはおよそ５ｍｇ／ｋｇ以下の本明細書で提供される抗体が徐放性として、対象に（例えば、鼻腔内または筋肉内に）１回、２回、３回または４回投与される。この実施形態によれば、ある特定の期間は、１〜５日、１週間、２週間、または１か月であり得る。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、単回用量の本明細書で提供される抗体がＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状を予防、治療および／または緩和するために、１年にわたって隔週（例えば約１４日）の間隔などで、１回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、２０回、２１回、２２回、２３回、２４回、２５回、または２６回などで患者に投与され、その用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの組合せ（例えば、毎月の各用量は同じであってもなくてもよい）からなる群から選択される。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、単回用量の本明細書で提供される抗体が、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の１以上の症状を予防、治療および／または緩和するために、１年にわたって約毎月（例えば約３０日）の間隔などで、１回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回などで患者に投与され、その用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの組合せ（例えば、毎月の各用量は同じであってもなくてもよい）からなる群から選択される。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、単回用量の本明細書で提供される抗体が、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の症状を予防、治療および／または緩和するために、１年にわたって約隔月（例えば約６０日）の間隔などで、１回以上、例えば、２回、、３回、４回、５回、６回などで、患者に投与され、その用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの組合せ（例えば、隔月の各用量は同じであってもなくてもよい）からなる群から選択される。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、単回用量の本明細書で提供される抗体が、ＶＩＳＴＡ介在疾患障害または病態の１以上の症状を予防、治療および／または緩和するために、１年にわたって約３か月毎（例えば約１２０日）の間隔で、１回以上、例えば、２回、３回、または４回などで、患者に投与され、その用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはそれらの組合せ（例えば、３か月毎の各用量は同じであってもなくてもよい）からなる群から選択される。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体の用量に関する患者への投与経路は、鼻腔内、筋肉内、静脈内、またはそれらの組合せであるが、本明細書に記載される他の経路も許容される。各用量は、同一の投与経路によって投与されても投与されなくてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、本明細書で提供される同じまたは異なる抗体の他の用量と同時にまたは逐次に、複数の投与経路によって投与されてもよい。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、対象に予防的または治療的に投与される。抗ＶＩＳＴＡ治療薬（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）は、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害もしくは病態、またはその症状を予防、軽減または緩和するために対象に予防的または治療的に投与することができる。
【０３８７】
キット
また、１以上の本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１および／または抗ＶＩＳＴＡ抗体）などの本明細書で提供される医薬組成物の成分の１以上を充填した１以上の容器を含んでなる医薬パックまたはキットも本明細書で提供される。場合により、このような容器に、医薬品または生物製剤の製造、使用または販売に関する政府機関によって規定された形式で注意事項を添えることがき、この注意事項は、ヒト投与に関する製造、使用または販売当局による承認を表す。いくつかの実施形態では、このキットは添付文書を含んでなる。用語「添付文書」は、治療用製品の市販包装に慣例的に含まれ、適応、用法、用量、投与、禁忌に関する情報および／またはこのような治療用製品の使用に関する警告、ならびに使用説明を含む説明書を指して使用される。
【０３８８】
また、上記方法において使用可能名キットも本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書で提供される抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１および／または抗ＶＩＳＴＡ抗体）、例えば、単離された抗体（例えば、抗ＰＳＧＬ−１および／または抗ＶＩＳＴＡ抗体）を１以上の容器に含んでなる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるキットは、実質的に単離されたＰＳＧＬ−１またはＶＩＳＴＡを対照として含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるキットは、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡと反応しない対照抗体をさらに含んでなる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるキットは、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡに対する改変抗体の結合を検出するための手段を含む（例えば、抗体を蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物などの検出可能な基質にコンジュゲートさせてもよいし、または第１の抗体を認識する第２の抗体を検出可能な基質にコンジュゲートさせてもよい）。いくつかの実施形態では、キットは、組換え的に生産されたまたは化学的に合成されたＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡを含み得る。このキットに提供されるＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡはまた固相支持体に結合させてもよい。いくつかの実施形態では、上記キットの検出手段は、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡが結合された固相支持体を含む。このようなキットはまた、非結合型のリポーター標識抗ヒト抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡへの抗体の結合は、リポーター標識抗体の結合により検出することができる。
【０３８９】
本開示の様々な実施形態の活性に実質的に影響を及ぼさない改変も本明細書で提供されると理解される。よって、以下の実施例は本開示を説明するものであって限定することを意図しない。
【実施例】
【０３９０】
実施例Ｉ
ＶＩＳＴＡに対する受容体の同定
本実施例は、ＴＲＩＣＥＰＳ（商標）に基づくリガンド−受容体捕捉システムであるＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）（Ｄｕａｌｓｙｓｔｅｍｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＧ）を用いてＶＩＳＴＡの受容体の同定を初めて記載する。
【０３９１】
対象リガンドとしてＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質および対照リガンドとして抗ＣＤ２８抗体を用いるＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）法をヒト初代Ｔ細胞から単離されたナイーブＴ細胞に対して行った。以下の実験で使用したＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質構築物のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を以下に示す。
ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質ヌクレオチド配列（下線の配列はＶＩＳＴＡをコードし；太字の配列はヒトＩｇＧ１抗体のＦｃフラグメントをコードする）
【化６】
2021531007.tif 000012
【０３９２】
ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列（下線の配列はＶＩＳＴＡであり；太字の配列はヒトＩｇＧ１抗体のＦｃフラグメントである）
【化７】
2021531007.tif 000013
【０３９３】
ＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）法の概要を図１に示す。簡単に述べれば、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質および抗ＣＤ２８抗体をそれぞれＴＲＩＣＥＰＳ（商標）にカップリングさせた。ナイーブヒトＴ細胞を市販の初代ヒトＴ細胞から単離した。ナイーブＴ細胞表面糖タンパク質を選択的に酸化した。酸化したナイーブＴ細胞の細胞表面へのリガンドの結合および受容体のカップリングを行った。反応したＴ細胞を次いで溶解させ、得られた溶解液をリガンド−受容体タンパク質複合体に関してアフィニティー精製した。精製されたタンパク質を次いでトリプシン消化により切断し、それにより、受容体ペプチドを放出させた。得られた受容体ペプチドを液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により分析した。統計分析を可能とするために、実験を生物学的３反復で行った。
【０３９４】
ナイーブＴ細胞の単離は、ＡＬＬＣＥＬＬＳ（アラメダ、ＣＡ）から購入した健常ドナーのヒト初代Ｔ細胞からのナイーブＴ細胞の負の選択により行った。所望の細胞に負の選択を行うために、ミルテニー・ナイーブ・パンＴ細胞単離キット（＃１３０−０９７−０９５）を製造者のプロトコールに従って使用した。簡単に述べれば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＭＡＣＳランニングバッファーに再懸濁させ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１２３、ＣＤ２４４、ＣＤ２３５ａおよび抗ＴＣＲ  γ／δに対するモノクローナル抗ヒト抗体のビオチンコンジュゲートの混合物とともに５分間インキュベートした後に、モノクローナル抗ＣＤ６１および抗ビオチン抗体にコンジュゲートされた抗ビオチン磁性ビーズとともに１０分のインキュベーションを行った。次いで、ａｕｔｏＭＡＣＳ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、サンディエゴ  ＣＡ）を用いてナイーブＴ細胞に対して負に選択を行った。１回のＴＲＩＣＥＰＳ（商標）リガンド捕捉反応につき１００×１０６個のナイーブＴ細胞を使用した。
【０３９５】
ＴＲＩＣＥＰＳ（商標）へのＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質または抗ＣＤ２８抗体のカップリング、ナイーブＴ細胞の表面糖タンパク質の選択的酸化、酸化したＴ細胞の細胞表面へのリガンドの結合および受容体のカップリング、Ｔ細胞の溶解、細胞溶解液のアフィニティー精製、およびトリプシンでの消化を含む、ＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）の残りの工程を、Frei et al., Nat. Protoc., 8(7):1321−1336 (2013)およびFrei et al., Nat. Biotechnol., 30(10):997−1001 (2012)に記載されている改変法に従って行った。
【０３９６】
得られた受容体ペプチドを、エレクトロスプレーイオン原を備えたＴｈｅｒｍｏ  ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＸＬ分光計でのＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。これらの試料を、１０ｃｍ  Ｃ１８充填カラムを用い、１２０分グラジェントで、データ依存型取得モードにて測定した。ＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）データセットの６つの個々の試料を統計的ＡＮＯＶＡモデルで分析した。このモデルでは、測定誤差はガウス分布に従うと仮定し、個々の特徴をタンパク質の存在量の増幅として捉え、この冗長性を明確に説明する。これは各タンパク質の差次的存在量をリガンドと対照試料の総ての一対比較で検定し、ｐ値を報告する。次に、多重比較向けに実験規模の偽陽性率（ＦＤＲ）を制御するためにｐ値を補正する。
【０３９７】
ペプチド同定では、ＦＤＲ≦１％となるようにフィルタリングを行い、ＭＳ１に基づく標識フリーアプローチを用いて定量する。ＭＳ１定量については、プロテオミクスソフトウエア用の非線形ＤＹＮＡＭＩＣＳ  Ｐｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ＱＩを用い、特異なペプチドの総てを考慮するように設定した。同定されたタンパク質に対して、Ｕｎｉｐｒｏｔにより提供されている情報を用い、膜、分泌、グリコシル化という用語に関してフィルタリングを行った。この分析では、１つのペプチドのみに頼るタンパク質同定は考慮しなかった。
【０３９８】
処理されたＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）データをタンパク質レベルに対するボルカノプロット（統計的有意性に対する変化倍率をプロットする）の形でグラフ化した。全タンパク質に対して得られた補正ｐ値を、２つの実験受験間のフォールドエンリッチメントの大きさに対してプロットする。受容体候補のスペースをエンリッチメントファクター＞４倍および統計的有意性（ＦＤＲ補正ｐ値＜０．０１）により定義する。
【０３９９】
観察された糖タンパク質のうち、ＣＤ２８は対照データセットにおいて５つのペプチドで同定された。これはＣＡＰＴＩＲＥＣ（商標）ワークフローの成功を示した。ＰＳＧＬ−１は６つのペプチドで同定され、ＶＩＳＴＡ自体もまた、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質データセットにおいて１２のペプチドで同定された（表６参照）。
【０４００】
【表６】
2021531007.tif 000014
【０４０１】
同定された結合相手ＰＳＧＬ−１に関して、プロッターイラストが作成され（図２）、これにはＮ−グリコシル化部位（四角で囲まれた残基）および実験的に観察されたペプチド（埋めた丸）の注釈がついている(Omasits et al., Bioinformatics: advance online pub., October, 2013)。このマッピングは、検出された６つのペプチドが総てＰＳＧＬ−１の細胞内ドメインに局在することを示す。ＰＳＧＬ−１の細胞外ドメインの分析から、ドメインの大きさに関わらず細胞外ドメインにはトリプシンペプチド切断部位がほとんど存在しないことが明らかである。ＰＳＧＬ−１は３つのＮ−グリコシル化部位を含み、これらの部位を有するペプチドは、上記のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析から失われていたと思われる。可能性のある残りのペプチドは、長すぎるか、短すぎるか、またはタンパク質選別中に処理されて、ＰＳＧＬ−１の細胞内ドメインにマッピングされるペプチドのみが検出されたという所見に根拠を与える。
【０４０２】
上記の分析から、ＰＳＧＬ−１は、ＶＩＳＴＡに対するヘテロ親和性の結合相手であると決定された。ＶＩＳＴＡは造血細胞で発現される広域ネガティブチェックポイントレギュレーターであることが従前に示されているので(Lines et al., Cancer Res., 74(7)1924−1932 (2014))、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１との相互作用はＴ細胞の抑制をもたらす可能性がある。従って、ＰＳＧＬ−１および／またはＶＩＳＴＡを標的とする薬剤、例えば、抗ＰＳＧＬ−１抗体および／または抗ＶＩＳＴＡ抗体を用いてその相互作用に干渉（例えば、阻害または遮断）すれば、活性化されたＴ細胞を介して免疫系の再活性化またはｄｅ  ｎｏｖｏ活性化をもたらし得る。この免疫系の活性化は、癌治療（例えば、血液癌治療）に関するものを含め、ＶＩＳＴＡ介在疾患、障害または病態の治療において極めて有益な生理反応をもたらすであろう。
【０４０３】
実施例ＩＩ
ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合
本実施例は、ＰＳＧＬ−１に対するＶＩＳＴＡの結合特性を記載する。
【０４０４】
ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、実施例Ｉに記載）を固相表面に固定し、ＰＳＧＬ−１の細胞外ドメインへのその結合をアッセイした。これらの実験のために、ＰＳＧＬ−１の細胞外ドメインを含有する２つの異なる構築物を作製した。両構築物をＩｇＧκシグナル配列およびＦｃフラグメントに融合させた。さらに、適正な機能に重要である可能性のあるプロペプチド配列またはタンデムリピートユニットを付加した（例えば、Cummings R.D., Brazilian J Med Biol Res, 32:519−28 (1999)参照）。ＰＳＧＬ−１とＰ−セレクチンの高親和性結合に重要であることが知られている(Sako et al., Cell, 75(6):1179−86 (1993); Yang et al., Thrombosis and Haemostasis, 81(1):1−7 (1999); Carlow et al., Immunol Rev 230(1):75−96 (2009); Kumar et al., Blood, 88(10):3872−9 (1996); Cummings R.D., Brazilian J Med Biol Res, 32:519−28 (1999))タンパク質の適正な翻訳後修飾を保証するためのＧＣＮＴ１およびＦＵＴ３グリコシルトランスフェラーゼを発現する構築物で細胞を同時トランスフェクトした。ＰＳＧＬ−１構築物のアミノ酸配列を以下に示す。
【０４０５】
ＰＳＧＬ−１構築物Ａ−アミノ酸配列（ＩｇＧκシグナル配列およびプロペプチド配列を有するＦｃ融合ＰＳＧＬ−１）。ＩｇＧκシグナル配列＝斜体；プロペプチド配列＝太字；Ｆｃ配列＝下線。
【化８】
2021531007.tif 000015
【０４０６】
ＰＳＧＬ−１構築物Ｂ−アミノ酸配列（ＩｇＧκシグナル配列およびタンデムリピートユニットを有するＦｃ融合ＰＳＧＬ−１）。ＩｇＧκシグナル配列＝斜体；タンデムリピートユニット＝太字；Ｆｃ配列＝下線。
【化９】
2021531007.tif 000016
【０４０７】
これらの実験では、ＰＳＧＬ−１構築物Ａ（ＰＳＧＬ−１Ａ）および構築物Ｂ（ＰＳＧＬ−１Ｂ）を固定ＶＩＳＴＡ−Ｆｃに対して試験した。
【０４０８】
固定ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ試料をカルシウム（１．５ｍＭ塩化カルシウム）およびマグネシウム（１．０ｍＭ塩化マグネシウム）を含有するＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）中で平衡化した。同じバッファーをランニングバッファーとして使用した。ＰＳＧＬ−１ＡまたはＰＳＧＬ−１Ｂを含有する試料（カルシウムおよびマグネシウムも含有する）を、固定ＶＩＳＴＡ−Ｆｃを含む固相表面に流速６０μｌ／分で流し、表面を３秒パルスのグリシン（ｐＨ１．５）で再生した後、接触時間１２０秒および解離３００秒とした。６種類の異なる濃度のＰＳＧＬ−１ＡおよびＰＳＧＬ−１Ｂをアッセイした（０．３μＭ、０．６０μＭ、１．２０μＭ、２．４μＭ、４．８μＭおよび９．６μＭ）。
【０４０９】
これらの実験で２つの異なる分析を行った：（１）二状態結合モデル；および（２）平衡親和性分析（１：１モデル）。ＰＳＧＬ−１Ａでは、二状態結合モデルは３２．１μＭの結合親和性（ＫＤ）を示し、１：１モデルは３．０１μＭのＫＤを示した（図３）。ＰＳＧＬ−１Ｂでは、二状態結合モデルは５．０９μＭのＫＤを示し、１：１モデルは４．７６μＭのＫＤを示した（図４）。
【０４１０】
上記の分析は、ＰＳＧＬ−１ＡおよびＰＳＧＬ−１Ｂの両構築に関して正味のシグナル  応答が存在したことを示した。得られたセンソグラムは、結合および解離に関連する特徴を示す。この親和性評価は質的なものであったことに留意されたい。結合の量的評価は、表面活性が本実験の活性より大きい場合（例えば、精製ＰＳＧＬ−１構築物で＞０．５％）に可能であり得る。さらに、これらの実験では、ＰＳＧＬ−１Ａの注入を用いると次の実施に試料のキャリーオーバーが生じる。これらの実験では、評価されるＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の親和性は、ＰＳＧＬ−１Ａ約３μＭ）およびＰＳＧＬ−１Ｂ（約５μＭ）と比較的類似していた。
【０４１１】
実施例ＩＩＩ
ＶＩＳＴＡの細胞上のＰＳＧＬ−１への結合
本実施例は、二官能性架橋アプローチを用いた前骨髄球性細胞株（ＨＬ−６０；ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−２４０）により発現されるＰＳＧＬ−１へのＶＩＳＴＡの結合を記載する。
【０４１２】
これらの実験では、ＰＳＧＬ−１の発現を、ＫＰＬ−１と呼称されるＰＥコンジュゲート抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ；ａｂ７８１８８）を用いて評価した。ＨＬ−６０細胞によるＰＳＧＬ−１の発現を、標準法を用いたフローサイトメトリーにより検出した（図５）。ＰＳＧＬ−１タンパク質のコピー数は、細胞当たりおよそ２６３，０００±２，８００であると見積もられた。
【０４１３】
また、これらの実験において、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質（実施例Ｉに記載）の試料ならびに抗ＣＤ２８抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、ＢＥ０２４８）およびＩｇＧ１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；１１０−ＨＧ−１００）の陰性対照を、製造推奨条件を用いて、二官能性リンカー（Ｓｕｌｆｏ−ＳＢＥＤ−ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；３３０７３）に共有結合させた。得られた試料をＨＬ−６０細胞とともに、暗所にて室温で３０分間インキュベートした。架橋は、ＵＶ光源を用いて２０分間、光で活性化した。次に、細胞を溶解させ、プロテインＡセファロースプルダウンを行った。これらの試料に対して抗ＰＳＧＬ−１ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＡＦ３３４５）またはストレプトアビジン−ＨＲＰを用いてウエスタンブロットを行った。
【０４１４】
図６に示されるように、ＶＩＳＴＡ−ＦｃはＰＳＧＬ−１と相互作用するが、陰性アイソタイプ対照ＩｇＧ−Ｆｃまたは抗ＣＤ２８抗体とは相互作用しない。
【０４１５】
この相互作用の特異性を確認するために更なる実験を行った。Ｓｕｌｆｏ−ＳＢＥＤ標識タンパク質をＨＬ−６０細胞とともにインキュベートする前にその細胞に抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体を加えたこと以外は上記の実験を繰り返した。分析はＩｍａｇｅＱｕａｎｔを用いて行った。
【０４１６】
図７に示されるように、抗ＶＩＳＴＡ抗体を加えると、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の相互作用に減弱化が生じた。
【０４１７】
これらの実験は、ＨＬ−６０細胞上で発現されたＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡの結合相手であることを示す。これらの実験はまた、この相互作用が特異的であり、抗ＶＩＳＴＡ遮断抗体により減弱化されることを示す。
【０４１８】
実施例ＩＶ
ＰＢＭＣ上のＰＳＧＬ−１へのＶＩＳＴＡの結合
本実施例は、架橋アプローチを用いる、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）により発現されるＰＳＧＬ−１へのＶＩＳＴＡの結合を記載する。
【０４１９】
これらの実験では、ＰＳＧＬ−１の発現を、ＫＰＬ−１と呼称されるＰＥコンジュゲート抗ＰＳＧＬ−１モノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ；ａｂ７８１８８）を用いて評価した。ＰＢＭＣによるＰＳＧＬ−１の発現を、標準法を用いたフローサイトメトリーにより検出した（図８）。ＰＳＧＬ−１タンパク質のコピー数は、細胞当たりおよそ３８，０００であると見積もられた。
【０４２０】
さらに、ＰＢＭＣを未処理とするか、または架橋剤（１０ｍＭ  ＢＳ３；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；２１５８０）とともに氷上で９０分間インキュベートした。必要であれば架橋反応を急冷した後、細胞を溶解させ、得られた溶解液をハーセプチンおよびＧａｍｍａＢｉｎｄ  Ｐｌｕｓ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；１７−０８８６−０１）でプレクリアリングした。得られた試料を抗ＶＩＳＴＡ抗体または抗ＰＳＧＬ−１抗体（ＫＰＬ−１）のいずれかで一晩免疫沈降させた。これらの免疫沈降試料を、抗ＰＳＧＬ−１ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＡＦ３３４５）を用いたウエスタンブロットによりアッセイした。
【０４２１】
図９のライン４に示されるように、抗ＶＩＳＴＡ抗体による免疫沈降の後、架橋後では、ＰＳＧＬ−１特異的バンドは検出されなかった。例えば、ＶＩＳＴＡ−ＰＳＧＬ−１複合体形成時に特定のエピトープが遮断され、それにより免疫沈降が妨げられたためであり得る。ＢＳ３で処理したＰＢＭＣでは、いくつかのより高分子量の複合体（約２５０〜４５０ｋＤａ）の抗ＰＳＧＬ−１抗体が沈降し（図９、最後のレーン）、これもＰＳＧＬ−１陽性であった。
【０４２２】
これらの実験では、抗ＶＩＳＴＡ抗体および抗ＰＳＧＬ−１抗体は両方とも、いずれの架橋剤でも処理しなかったＰＢＭＣから約２４０ｋＤａのタンパク質を沈降させた。この複合体はＰＳＧＬ−１陽性であり、ＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡと相互作用することを示している（図９、レーン３および５）。アイソタイプ対照抗体による免疫沈降では、このようなバンドは生じなかった（図９、レーン１および２）。
【０４２３】
これらの実験は、ＰＢＭＣ上で発現されたＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡの結合相手であることを示す。
【０４２４】
実施例Ｖ
ＰＳＧＬ−１の発現
本実施例は、様々なＴ細胞サブセットにおけるＰＳＧＬ−１の発現を記載する。
【０４２５】
これらの実験では、ＰＳＧＬ−１の発現を、ＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ１６２抗体を用いて評価した。以下のＴ細胞サブセットを評価した：ナイーブな休止中の細胞（例えば、レポート表現型：ＣＤ４５ＲＯ−／ＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋／ＣＤ６２Ｌ＋／ＣＤ２７＋／ＣＤ２８＋／ＣＤ１２７＋）、エフェクター細胞（例えば、レポート表現型：ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ５７＋／ＣＤ２７９−／ＣＤ９５＋／ＣＣＲ７−／ＣＤ６２Ｌ−）、疲弊エフェクター細胞（例えば、レポート表現型：ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ５７＋／ＣＤ２７９＋／ＣＤ９５＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−／ＣＤ６２Ｌ−）および循環メモリー細胞（例えば、レポート表現型：セントラル：ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７＋／ＣＤ６２Ｌ＋、またはエフェクター：ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−／ＣＤ６２Ｌ＋）。
【０４２６】
これらの実験では、ヒトＰＢＭＣ試料をＡＬＬＣＥＬＬＳ（エメリービル、ＣＡ）から入手した。２種類のＴ細胞マーカーパネルを次のように作製した：
ａ．パネル１：Ｔ細胞マーカー＋エフェクター／疲弊エフェクター特異的マーカー
ｉ．ＣＤ４５ＲＡ−ＦＩＴＣ
ｉｉ．ＣＤ４５ＲＯ−ＰｅｒＣＰ−ｅＦｌｕｏｒ  ７１０
ｉｉｉ．ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）−Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ５１０
ｉｖ．ＣＤ６２Ｌ−ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ  ７８０
ｖ．ＣＤ５７−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ
ｖｉ．ＣＤ９５（Ｆａｓ）−ＰＥ−Ｃｙ７
ｖｉｉ．ＣＤ２７９−ＡＰＣ
ｖｉｉｉ．ＣＤ１６２−ＰＥ
ｂ．パネル２：Ｔ細胞マーカー＋ナイーブ／休止中の特異的マーカー
ｉｘ．ＣＤ４５ＲＡ−ＦＩＴＣ
ｘ．ＣＤ４５ＲＯ−ＰｅｒＣＰ−ｅＦｌｕｏｒ  ７１０
ｘｉ．ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）−Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ５１０
ｘｉｉ．ＣＤ６２Ｌ−ＡＰＣ−ｅＦｌｕｏｒ  ７８０
ｘｉｉｉ．ＣＤ２７−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ
ｘｉｖ．ＣＤ２８−ＰＥ−Ｃｙ７
ｘｖ．ＣＤ１２７−ＡＰＣ
ｘｖｉ．ＣＤ１６２−ＰＥ
【０４２７】
これらの実験では、各パネルにおよそ１×１０６個の細胞およびＦｃＲブロッキング試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｌ−Ｂｉｏｔｅｃ、１３０−０９２−２４７）を各抗体に対する適当なアイソタイプ対照とともに加え、暗所にて４℃で３０分間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、各試料についてＭＡＣＳＱｕａｎｔアナライザーで蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を計算した。ＭＦＩ値は、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｓｉｍｐｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ抗マウスＩｇＧキット（Ｂａｎｇｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、８１５Ｂ）を用いて定量した。生存力のある集団（ＤＡＰＩ陰性）から１蛍光団につき１×１０５イベントを収集し、分析のためにＦｌｏｗＪｏにエクスポートした。
【０４２８】
図１０および１１に示されるように、ＰＳＧＬ−１はナイーブ／休止中、エフェクター、疲弊エフェクター、ならびに循環セントラルおよびエフェクターの両Ｔ細胞サブセットに存在していた。図１０および１１に示されるように、、ＰＳＧＬ−１発現は、ナイーブおよび疲弊Ｔ細胞に比べてエフェクターサブタイプにおいて上昇していた。エフェクターサブセットでの発現レベルが最も高く、ナイーブ／休止中サブセットでの発現レベルが最も低かった。表７は、各サブセットにおけるＰＳＧＬ−１発現に関するコピー数を示す。
【０４２９】
【表７】
2021531007.tif 000017
【０４３０】
これらの実験は、ＰＳＧＬ−１がヒトＰＢＭＣの様々なＴ細胞サブセットにおいて差次的に発現されることを示す。
【０４３１】
実施例ＶＩ
ＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１発現のｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ分析
【０４３２】
本実施例は、いくつかの適応症においてＶＩＳＴＡ発現がＰＳＧＬ１と相関していることを示す。
【０４３３】
Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ（ＴＣＧＡ）は、次世代シークエンシングおよびマイクロアレイに基づく方法を含むハイスループット技術を用いた癌ゲノムプロファイルの包括的分析を提供する。ＴＣＧＡに寄託されたデータは、ヌクレオチド配列および遺伝子発現の両方に関する情報を含む。よって、Ｃａｎｃｅｒ  ＧｅｎｏｍｉｃｓのｃＢｉｏｐｏｒｔａｌサイト(http://www.cbioportal.org/)は、大規模な癌ゲノミクスデータセットの可視化、分析およびダウンロードを提供する。これにはＴＣＧＡからのゲノミクス、トランスクリプトミクス研究が含まれる。
【０４３４】
各ＴＣＧＡ適応症に関して、ｃＢｉｏｐｏｒｔａｌサイトに、発現がＶＩＳＴＡと最も相関があるｍＲＮＡを特定するようにクエリを出した。この相関分析はスピアマン検定を用いて行った。統計学的結果（ｐ値＜０．０５）を表８に報告する；ｍＲＮＡはＶＩＳＴＡとの相関に基づいてランク付けされている。
【０４３５】
【表８】
2021531007.tif 000018
【０４３６】
表８は、いくつかの癌で、ＰＳＧＬ１発現がＶＩＳＴＡ発現によく相関していることを示す。この相関はＮＳＣＣＬＣで最も高い。比較すると、他の推定受容体（すなわち、ＶＳＩＧ３およびＶＳＩＧ８）は低い相関しか示さなかった。
【０４３７】
実施例ＶＩＩ
ＲＮＡ  Ｓｃｏｐｅを用いたＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ１  ｍＲＮＡ発現の評価
本実施例は、肺扁平上皮癌（ＳＣＣ）および腺癌（ＡＤＫ）組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）におけるＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ１のｍＲＮＡ発現および共局在のパターンを示す。
【０４３８】
材料および方法
パラフィン包埋した肺ＳＣＣおよびＡＤＫ  ＴＭＡブロック（各３ブロック）を新たに切片とし、スライドグラスに加工した後にｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）技術工程を行った。切り出した組織試料を新鮮な１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）に入れ、室温（ＲＴ）で１６〜３２時間置いた。この試料を次に脱水し、パラフィンに包埋し、５±１μｍの切片とし、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ（登録商標）Ｐｌｕｓスライドに載せた。これらのスライドを乾燥器にて６０℃で１時間焼き付けた。
【０４３９】
５μｍ厚の組織切片をキシレン中で脱パラフィンした後、エタノールシリーズで脱水した。次に、組織切片を、ホットプレートを用いて沸騰温度（１００℃〜１０３℃）に維持したクエン酸バッファー（１０ｎｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ６）中で１５分間インキュベートし、脱イオン水ですすぎ、すぐにＨｙｂＥＺハイブリダイゼーションオーブン（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ヘイワード、ＣＡ）内で、４０℃で３０分間、１０μｇ／ｍＬプロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ＭＯ）で処理した。
【０４４０】
処理した組織切片を次に、ＲＮＡｓｃｏｐｅ（登録商標）２．５アッセイ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、ＭＯ）を製造者の説明書に従って用いて、ＰＳＧＬ−１プローブまたはＶＩＳＴＡプローブとハイブリダイズさせた。
【０４４１】
これらのスライドをヘマトキシリンおよびエオジンで染色して各コアの品質の確認と顕微鏡的評価を行った。検査は標準的な光学顕微鏡を用い、２０〜４０倍の倍率で行った。データの取得にはエクセルシートを使用した。
【０４４２】
陰性対照および陽性対照の確認は２つの特異的プローブを用いて行った。これらのスコアを評価して、夾雑がないこと（陰性プローブ）およびユビキタスｍＲＮＡが存在すること（陽性プローブ）を確認した。このプロトコールは手動で行った。
【０４４３】
標識組織を、各標的に関してダブルスコアリングシステムの半定量的方法を用いて評価した。
【０４４４】
組織分布スコアリングシステムは０〜３の範囲であり、集団（免疫浸潤物）内の陽性細胞の程度を表し、免疫スコアとして見なした。
【０４４５】
免疫スコア序列システム：  次のように０〜３の範囲とした：
・０：  不在
・１：  低
・２：  中
・３：  高
【０４４６】
ＡＣＤ序列システム、すなわち、ＲＮＡｓｃｏｐｅ（登録商標）２．５アッセイの製造者（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ヘイワード、ＣＡ）により推奨されている序列システムを用いて細胞内のＲＮＡドットの量を評価した。ＲＮＡｓｃｏｐｅは個々のＲＮＡ分子を検出するので、各ドットは、単一のＲＮＡ分子を表す。このシステムの範囲は細胞質におけるドットの数および／またはクラスターに関して０〜４（０：ドットなし；４：多数のドットおよびクラスター）であり、細胞内スコアリングシステムと見なすことができた。
【０４４７】
結果
肺ＳＣＣ  ＴＭＡ
３種類の肺ＳＣＣ  ＴＭＡを分析した。各患者３反復のコアが存在した。
【０４４８】
【表９】
2021531007.tif 000019
【０４４９】
腫瘍微小環境（免疫細胞浸潤物）では、ほとんどの場合でＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１の両方のｍＲＮＡの標識が見られた。陽性標識細胞は骨髄様の形態（マクロファージに関連）を示した。しかしながら、時折、いくらかの陽性ドットがリンパ球（両方のｍＲＮＡ）および好中球（ＶＩＳＴＡのみ）に見られた。
【０４５０】
腫瘍微小環境浸潤物内ではＶＩＳＴＡ  ｍＲＮＡが優勢であった。総ての肺ＳＣＣコアがこの標的をある程度発現していた。ドットは細胞質内に小さいが多数見られた。時折、内皮細胞がＶＩＳＴＡドットを示した。陽性ｍＲＮＡ  ＶＩＳＴＡ腫瘍細胞がコアの８０％超に見られた。
【０４５１】
ＶＩＳＴＡに比べ、ＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡ発現は腫瘍微小環境浸潤物内に低かった。ドットは細胞質内にＶＩＳＴＡドットよりも大きいが少数で見られた。腫瘍細胞は時折ＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡを発現し（コアの３０％）、ほとんどの場合、ＡＣＤグレード（すなわち、細胞質内のドットの数）は極めて低かった。
【０４５２】
ＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡでは３５％であったのに対し、ほとんど総てのコアが中〜高の陽性ＶＩＳＴＡ−ｍＲＮＡ標識を示した。両標的とも陰性を示したコアはなく、すなわち、コアはそれぞれＶＩＳＴＡ、ＰＳＧＬ−１のいずれか、または両方に関して陽性であった。これらの結果を表１０にまとめる。
【０４５３】
【表１０】
2021531007.tif 000020
【０４５４】
結論として：
・腫瘍微小環境内ではＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡの共局在が見られ、その例を図１２に示す；
・ＰＳＧＬ１陽性細胞のほとんど総てがＶＩＳＴＡ陽性細胞に隣接していた；
・各コアでは、ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの両方を発現している細胞が少なくともいくらか見られた；
・ＶＩＳＴＡ陽性細胞はＰＳＧＬ−１陽性細胞に隣接せずに見られた。いくつかのＶＩＳＴＡ陽性細胞は、ＰＳＧＬ−１陽性細胞との明らかな隣接なく見られた。しかしながら、ＶＩＳＴＡ陽性細胞に隣接していないＰＳＧＬ−１陽性細胞は見られず、このことはＰＳＧＬ−１陽性細胞が常にＶＩＳＴＡ陽性細胞に隣接していたことを意味する。これは１つには、免疫浸潤物にはＶＩＳＴＡ陽性細胞が優性であったことによるものであった。
【０４５５】
肺ＡＤＫ  ＴＭＡ
３種類の肺ＡＤＫ  ＴＭＡを分析した。各患者４反復のコアが存在した。
【０４５６】
【表１１】
2021531007.tif 000021
【０４５７】
肺ＳＣＣについて、腫瘍微小環境（免疫細胞浸潤物）にＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡ標識が見られた。陽性標識細胞は骨髄様の形態（マクロファージに関連）を示した。しかしながら、時折、いくらかの陽性ドットがリンパ球（両方の標的）および好中球（ＶＩＳＴＡのみ）に見られた。
【０４５８】
肺ＡＤＫでのＶＩＳＴＡおよびＰＳＧＬ−１の両方の発現パターンは、肺ＳＣＣで見られたものと極めて類似していた。
【０４５９】
コアの５０％より多くが  ＶＩＳＴＡ  ｍＲＮＡに関して高い陽性標識を示し、コアのおよそ５０％が陽性ＰＳＧＬ１  ｍＲＮＡ標識を示した。ＰＳＧＬ−１では、少数のコアが陰性と見られた（７％）。これらの結果を表１２にまとめる。
【０４６０】
【表１２】
2021531007.tif 000022
【０４６１】
肺ＳＣＣと同様に、肺ＡＤＫでもＶＩＳＴＡ  ｍＲＮＡとＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡの間には類似の共局在または関係性のパターンが見られた。
【０４６２】
二重ＲＮＡｓｃｏｐｅによるＶＩＳＴＡ  ｍＲＮＡおよびＰＳＧＬ−１  ｍＲＮＡの発現パターンの半定量的分析は、これらの標的が頻繁に共局在しているか、または腫瘍微小環境中の隣接する細胞内で発現されていることを明らかにした。ＶＩＳＴＡ  ｍＲＮＡはＰＳＧＬ１よりも多く発現されると見られた。しかしながら，総ての肺ＳＣＣコアおよび肺ＡＤＫコアの８３％が両標的を発現していた。
【０４６３】
ＲＮＡｓｃｏｐｅは、ＰＳＧＬ−１がＶＩＳＴＡ発現細胞と同じ細胞でまたはその近傍で発現され得ることを明らかにする。
【０４６４】
実施例ＶＩＩＩ
ＩＬ−２はＰＳＧＬ−１Ｆｃ＋／−抗ＶＩＳＴＡまたは抗ＰＳＧＬ１抗体の存在下でＣＤ４＋Ｔ細胞から放出する（７２時間）
本実施例は、Ｔ細胞活性化のＰＳＧＬ−１介在阻害を記載する。
【０４６５】
方法：
実験は３反復で行った。
【０４６６】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を２名のヒト健常ドナーからＭｉｌｅｎｙｉキットを用いた負の選択により単離した。
【０４６７】
抗ＣＤ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓにより市販、ＢｉｏｘＣｅｌｌ  ｒｅｆ  ＢＥ０００１−２クローンＯＫＴ３  ロット６４０４１７Ｊ１（ｍＩｇＧ２ａ））を９６ウェルプレート内に、１００μｌ中２．５μｇ／ｍｌ濃度で３７℃にて４時間コーティングした。次に、これらのプレートをＰＢＳで２回洗浄した。Ｃ９Ｇ４抗体およびＰＳＧＬ−１−Ｆｃ融合タンパク質を１００μｌ中２２４ｎＭ濃度で４℃にて一晩、３反復でコーティングした。
【０４６８】
これらのプレートをＰＢＳで４回洗浄した。１００．０００のＣＤ４＋Ｔ細胞を各ウェルの、ＷＯ２０１４／１９７８４９に記載されている抗ＶＩＳＴＡ抗体２６Ａ（１０μｇ／ｍｌ）（より具体的には、使用した抗体は、ＷＯ２０１４／１９７８４９に記載されているような以下のＣＤＲ配列を有するヒト化抗体であった：ＣＤＲＨ１：配列番号１２９７、ＣＤＲＨ２：配列番号１５５９、ＣＤＲＨ３：配列番号１３９４、ＣＤＲＬ１：配列番号１４３２、ＣＤＲＬ２：配列番号１４７７、およびＣＤＲＬ３：配列番号１４９９、またはＷＯ２０１５／１６２２９２Ａに記載されている対照抗体Ｃ９Ｇ４）を伴ってまたは伴わずに、抗ＣＤ２８抗体（２．５μｇ／ｍｌ）を含有する２００μｌ培地に加えた。
【０４６９】
７２ｈ時間のインキュベーションの後、上清を取り出し、１２００ｒｐｍで５分間回転させた。遠心分離の後、上清を新しい９６ウェルプレートに移し、ＩＬ−２をアッセイするまで−８０℃で冷凍した。
【０４７０】
上清中のＩＬ−２濃度を、市販のキット（ＢＤ（商標）ＣＢＡ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ２  Ｆｌｅｘ  Ｓｅｔ、Ｒｅｆ＃５５８２７０）を用いて測定した。
【０４７１】
結果：
ＰＳＧＬ−１の免疫抑制特性を調べるために、このタンパク質の存在または不在下で刺激した後にＴ細胞の活性化状態を調べた。このために、まず、ＰＳＧＬ−１の細胞外ドメインとヒトＩｇＧのＦｃ領域からなるＰＳＧＬ−１−Ｆｃ融合タンパク質を作出した。次に、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＰＳＧＬ−１−Ｆｃまたは対照ＩｇＧの存在下で、抗ＣＤ３抗体およびＣＤ２８により活性化した。これらの細胞の活性化のマーカーとしてＩＬ−２の放出をモニタリングした。
【０４７２】
図１３に示されるように、対照、すなわち、同じ濃度でコーティングした無関連のタンパク質（ｃ９Ｇ４）に比べて、ＰＳＧＬ−１の存在下でのＴ細胞のインキュベーションは、Ｔ細胞の活性化のマーカーであるＩＬ−２に２倍の低下を誘導する。得られた結果は２名の異なるドナーで類似していた。よって、ＰＳＧＬ−１はＴ細胞の活性化を阻害する。
【０４７３】
抗ＶＩＳＴＡ抗体の添加はこの阻害を部分的に逆転させる（図１３参照）。実際に、阻害の５０％超が抗ＶＩＳＴＡ抗体により軽減された。対照抗体（ｃ９Ｇ４）の添加はＰＳＧＬ１−ＦｃによるＩＬ−２放出の阻害に影響を及ぼさず、このことは抗ＶＩＳＴＡ抗体で見られた効果の特異性を強調する。抗ＶＩＳＴＡ抗体添加時のこの特異的な逆転は、Ｔ細胞の活性化のＰＳＧＬ−１依存的阻害が少なくとも部分的にＶＩＳＴＡにより媒介されることを示す。
【０４７４】
これらの結果から、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ１が物理的および機能的の両面で相互作用することが確認される。この相互作用の中断（ここでは抗ＶＩＳＴＡ抗体による）は、ＩＬ−２の放出、ひいてはＴ細胞の活性化を促進する。
【図１】
2021531007.tif 000023
【図２】
2021531007.tif 000024
【図３】
2021531007.tif 000025
【図４】
2021531007.tif 000026
【図５】
2021531007.tif 000027
【図６】
2021531007.tif 000028
【図７】
2021531007.tif 000029
【図８】
2021531007.tif 000030
【図９】
2021531007.tif 000031
【図１０】
2021531007.tif 000032
【図１１】
2021531007.tif 000033
【図１２】
2021531007.tif 000034
【図１３】
2021531007.tif 000035
【配列表】
2021531007000001.app
【国際調査報告】
2021531007.tif 000036
2021531007.tif 000037