(57)【要約】  本明細書に開示するのは、CGRP産生および放出を阻害する際に使用するための組成物および方法である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記を含む感染を治療するための方法：
治療有効量の速効性神経毒素をその感染に近接する患者に投与すること。
【請求項２】
前記速効性神経毒素が、ボツリヌス神経毒素血清型Eを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記治療有効量が、約10-3U/kgと約35U/kgとの間の量を含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記治療有効量が、約１U/kgと約25U/kgとの間の量を含む、請求項４記載の方法。
【請求項５】
前記治療有効量が、約５U/kgと約15U/kgとの間の量を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記治療有効量が、約0.2ナノグラムと約２ナノグラムとの間の量を含む、請求項２記載の方法。
【請求項７】
前記治療有効量が、約0.5ナノグラムと約１ナノグラムとの間の量を含む、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記投与することが、注射により投与することを含む、請求項２記載の方法。
【請求項９】
前記注射により投与することが、筋肉内注射である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、ボツリヌス毒素サブタイプAをその患者に投与することをさらに含む、請求項２記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、オナボツリヌムトキシンAをその患者に投与することをさらに含む、請求項２記載の方法
【請求項１２】
前記方法が、回復の遅い毒素を投与することをさらに含む、請求項２記載の方法。
【請求項１３】
前記方法が、外科的壊死組織除去をさらに含む、請求項２記載の方法。
【請求項１４】
それを必要とする患者に対してcGRP放出を阻害または低減する方法であって、下記を含む、前記方法：
治療有効量の速効性神経毒素をその患者に投与すること。
【請求項１５】
前記速効性神経毒素が、ボツリヌス神経毒血清型E(BoNT/E)を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記治療有効量が、約10-4U/kgと約35U/kgとの間の量を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記治療有効量が、約0.2ナノグラムと約２ナノグラムとの間の量を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、長時間作用性神経毒素をその患者に投与することをさらに含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
ボツリヌス毒素サブタイプAをその患者に投与することをさらに含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
前記治療有効量が、筋麻痺を引き起こす用量よりも少ない量を含む、請求項１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2018年4月3日に出願された米国仮特許出願第62/651,839号の優先権の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に援用されている。
技術分野
本開示は、障害を治療するための神経毒素の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
カルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)は、ヒトにおいて、α-CGRPおよびβ-CGRPの２つの形態で存在する、ペプチドのカルシトニンファミリーのメンバーである。α-CGRPは37-アミノ酸ペプチドであり、染色体11上に位置するカルシトニン/CGRP遺伝子の代替スプライシングから形成される。あまり研究されていないβ-CGRPは３個のアミノ酸で異なり、同一の近傍に別の遺伝子でコードされている。CGRPは、末梢神経および中央ニューロンの両方において産生される。それは、強力なペプチド血管拡張剤である。脊髄において、CGRPの機能および発現は、合成の位置に応じて異なり得る。CGRPは、脊髄の前角で合成されたときに、主に運動ニューロンの細胞体から誘導され、傷害後の神経組織の再生に寄与し得る。CGRPは、また、脊髄の背角で合成されたときに、背根神経節から誘導される。三叉血管系において、三叉神経節上の細胞体はCGRPの主源である。CGRPは、心血管恒常性および侵害受容において役割を果たすと考えられる。
CGRPは、カルシトニン受容体様受容体(CALCRL)と呼ばれるGタンパク質共役型受容体と受容体活性修飾タンパク質(RAMP1)とからなるヘテロマー受容体によるその効果を媒介する。CGRP受容体は、身体全体にわたって見出され、このことは、タンパク質が、全ての主要系(例えば、呼吸、内分泌、胃腸、免疫、および心臓血管)において、種々の生理学的機能を調節できることを示唆する。細胞外ループ番号２は、リガンド誘導活性化の基本であり、R274/Y278/D280/W283のキー相互作用を有する。感覚系と免疫系との間の相互作用の態様は、CGRPの放出である。
【０００３】
前臨床的証拠は、片頭痛の間、三叉神経節放出CGRP中の活性化された一次感覚ニューロン(髄膜侵害受容体)が、髄膜内に位置する末梢に突出した神経終末からCGRPを放出することを示唆している。次いで、このCGRPは、髄膜血管の周りに配置されたCGRP受容体に結合して活性化し、血管拡張、マスト細胞脱顆粒、および血漿漏出を引き起こす。ヒトの観察は、片頭痛の病態生理学におけるCGRPの役割にさらに関係している。ヒトにおいて三叉血管系における一次感覚ニューロンの活性化は、CGRPの放出を引き起こす可能性がある。いくつかの片頭痛発作の間、外頸静脈から引き出された唾液および血漿の両方において、高濃度のCGRPを見出すことができる。さらに、α-CGRPの静脈内投与は、片頭痛を受けやすい個体における頭痛を誘導できる。
感染は、病原体による生物体組織の侵入、それらの増殖、およびその病原体およびそれらが産生する毒素に対する宿主組織の反応である。感染症は、ウイルス、ウイロイド、プリオン、細菌、寄生回虫、蟯虫などの線虫類、マダニ、コダニ、ノミ、シラミなどの節足動物類、白癬などの真菌類、条虫、他の蠕虫などのマクロ寄生虫類などによって引き起こす可能性がある。症候性感染は明らかで臨床的であり、一方、活性であるが顕著な症状を生じない感染は、明らかではない、沈黙の、無症状の、または隠れたと呼ばれることがある。不活性または休止状態の感染は潜伏感染と呼ばれ、潜伏性細菌感染の一例は潜在性結核である。いくつかのウイルス感染も潜在的であり得、潜在ウイルス感染の例は、ヘルペスウイルス科(Herpesviridae)からのもののいずれかである。短期感染は急性感染である。長期感染は慢性感染である。感染症は、原因物質(細菌、ウイルス、真菌、寄生虫)、および全身症状(敗血症)の有無によって、さらに分類できる。
【０００４】
哺乳動物宿主は、しばしば炎症を伴う先天性応答を有する感染に反応し、続いて適応性応答が続く。感染症を治療するために使用される具体的な投薬には、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原虫薬、および駆虫薬が含まれる。感染症は、2013年に920万人の死亡(全ての死亡の約17%)をもたらした。
疼痛は、強い刺激または損傷する刺激によって、しばしば引き起こされる不快感である。国際疼痛学会の広く使用されている定義は、疼痛を「実際の組織損傷もしくは組織損傷が起こりうる状態に付随する、あるいはそれに似た、感覚かつ情動の不快な体験」として規定しているが、しかしながら、複雑で主観的な現象であるために、疼痛を規定することが課題となっている。医療診断において、疼痛は基礎状態の症状とみなされる。疼痛は、個体に損傷する状況から取り戻すこと、損傷した身体部分を治癒しながら保護すること、また、将来において、同様の体験を避けることの動機を与える。一旦、有害な刺激が除去され、身体が治癒すると、ほとんどの痛みは解消されるが、刺激の除去および身体の見掛けの治癒にもかかわらず持続し得る。場合によっては、検出可能な刺激、損傷または疾患が存在しない場合にも疼痛が生じる。
【０００５】
疼痛および炎症の両方が保護応答である。しかしながら、これらの自己制限的な条件(明確に確立された負のフィードバックループを有する)は、制御されていないと病理学的になる。疼痛および炎症の両方は、多次元的に、例えば末梢、感覚および中枢神経系レベルを介して互いに相互作用できる。先天性免疫は、中枢性感作においてかつ急性疼痛を慢性症状として確立する際に重要な役割を果たす。さらに、炎症仲介物質も心理的効果を示し、したがって、疼痛に関連する感情的な要素に寄与する。しかしながら、免疫系のかなりの抗炎症性および鎮痛性の役割も存在する。
侵害受容体は、感覚ニューロンの軸索の末端における受容体の１種であり、これは、脊髄および脳に「可能な脅威」シグナルを送ることによって、刺激に損傷または潜在的に損傷を与えることに応答する。侵害受容体ニューロンは、病原体に暴露される末梢障壁組織を高密度に神経支配する：脅威が確実であると脳が考える場合、身体部分への注意を向ける疼痛の感覚を生成し、その結果、脅威は充分に媒介されることができる。このプロセスは、侵害受容と呼ばれる。哺乳動物において、侵害受容体は、有害な刺激を感知できる身体のいかなる領域にも見出される。皮膚(皮膚侵害受容体)、角膜および粘膜のような組織には、外部侵害受容体が見られる。内部侵害受容体は、筋肉、関節、膀胱、腸、消化管などの様々な器官に見られる。これらのニューロンの細胞体は、背根神経節または三叉神経節のいずれかに位置する。三叉神経節は、顔面用の特殊神経であり、一方、背根神経節は、身体の残りに関連している。軸索は末梢神経系に延び、分岐で終端して受容場を形成する。
【発明の概要】
【０００６】
概要
本明細書で開示するのは、瘢痕化を最小化する際に使用するための組成物および方法である。例えば、開示された実施形態は、創傷に近接する筋肉の張力を減少させ、それにより瘢痕を防止または減少させるための「速効性の」ボツリヌス毒素の使用を含む。
ボツリヌス神経毒素は、例えば感染中に、CGRPの神経放出を効果的に低減または遮断でき、したがって、多くの症状の治療に有効であり得る。例えば、開示された実施形態は、細菌感染、例えば壊死性病変、例えば、S.ピオゲネス(S. pyogenes)によって引き起こされるもの、を制限または予防できる。開示された実施形態は、疼痛を低減または予防できる。
第１の態様において、感染を治療する方法が提供される。１つの実施形態において、その方法は、細菌感染によって引き起こされる壊死性病変を治療することを含む。１つの実施形態において、その方法は、感染によって引き起こされる病変に近接して、治療有効量の速効性神経毒素を患者に投与することを含む。
別の態様において、cGRPの産生または放出を阻害することにより、それを必要とする患者において疼痛を治療する方法が提供される。その方法は、この患者が疼痛を感じている領域に治療有効量の速効性神経毒素を投与することを含む。
【０００７】
別の態様において、cGRPの産生または放出を阻害することにより、それを必要とする患者において疼痛の発生を減少させる方法が提供される。その方法は、治療有効量の速効性および/または短期持続性神経毒素を、この患者が疼痛を感じたおよび/または疼痛を感じる可能性がある領域に投与することを含む。
１つの実施形態において、それを必要とする患者において、術後疼痛を低減する方法が提供され、この方法は、外科的切開の領域に近接して治療有効量の速効性および/または短期持続性神経毒素を局所的に投与することを含む。
別の実施形態において、術後疼痛の発生を低減する方法が提供され、この方法は、外科的切開の領域に近接して治療有効量の速効性および/または短期持続性神経毒素を投与することを含む。
１つの実施形態において、上記速効性神経毒素は、ボツリヌス神経毒素血清型Eを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、上記投与は、外科的処置の前に行われる。他の実施形態において、この投与は、外科的処置中に行われる。さらに他の実施形態において、この投与は、外科的処置後に行われる。
１つの実施形態において、上記治療有効量は、約10-3U/kgと約35U/kgとの間の量を含む。別の実施形態において、この治療有効量は、約1U/kgと約25U/kgとの間の量を含む。さらに別の実施形態において、この治療有効量は、約5U/kgと約15U/kgとの間の量を含む。
さらに別の実施形態において、この治療有効量は約0.2ナノグラムと約2ナノグラムとの間の量を含む。
別の実施形態において、皮膚の切開または裂傷に近接する筋活性が低減され、これにより、瘢痕形成を低減または防止する。
別の実施形態において、上記ボツリヌス毒素は、早期回復性毒素である。
さらに別の実施形態において、上記「速効性の」ボツリヌス毒素もまた、早期回復性毒素である。
【０００９】
さらに別の実施形態において、上記方法は、速効性ボツリヌス神経毒素を、例えば、遅効性神経毒素と組合せて投与することをさらに含む。１つの実施形態において、この遅効性神経毒素はボツリヌス毒素サブタイプA(BoNT/A)である。
他の実施形態において、上記方法は、早期回復性ボツリヌス神経毒素を、例えば、回復の遅い神経毒素と組合せて投与することをさらに含む。
別の実施形態において、上記神経毒素は、筋麻痺を引き起こすであろう用量よりも少ない用量で投与される。
BoNT/Eによる筋弛緩効果の迅速な開始は、治癒を改善し、術後の疼痛を軽減し、また、対象者における副作用、例えば筋強直、眼瞼下垂または頸部の脱力感を低減する。BoNT/Eにより示される筋弛緩のより短い持続時間(２〜４週間)もまた、BoNT/Eが術後のより迅速な回復とリハビリを可能にすることができるように、BoNT/A製品による３〜４カ月と比較して望ましい。
他の実施形態において、BoNT/Eを含む配合物または組成物が筋肉内投与される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ボツリヌス神経毒素(BoNT)の主要構造を描写する図である。
【図２Ａ−２Ｄ】BoNT/E(図２Ａ、２Ｃ)およびBoNT/B(図２Ｂ、２Ｄ)の略図およびリボン表現である。触媒ドメイン、転移ドメイン、および結合ドメインは、それぞれ、CD、TD、およびBDと標識される。
【図３Ａ−３Ｂ】筋肉を識別する、人体、正面像(図３Ａ)および後面像(図３Ｂ)を説明する図である。
【図４】神経が識別された人体の説明図である。
【図５】実施例１に記載した試験のための額注射部位を示す。
【図６】実施例１に記載の試験における対象者のIR-2奏効％(一次有効性の結果)を示す棒グラフである。
【図７】実施例１における対象者の割合を示す棒グラフであり、治験医師評価FWSグレードは、最大限に眉をひそめたときのなしまたは軽度のGLである。
【図８】術後疼痛のラットモデルにおける、代表的な速効性毒素、BoNT/Eの単一局所投与の効果を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
詳細な説明
本明細書に開示の実施形態は、例えば感染、疼痛、炎症の間の、CGRPの神経放出を効果的に遮断することができ、したがって、多くの症状の治療に有効であり得る。例えば、開示された実施形態は、疼痛を低減または予防できる。開示された実施形態は、炎症を低減できる。開示された実施形態は、例えばS.ピオゲネスによって引き起こされる細菌性壊死性病変を制限または予防できる。
疼痛を分類するためのいくつかの方法がある。１つは、急性疼痛および慢性疼痛に分離することである。急性疼痛は、典型的には、突然来てかつ限られた持続時間を有する。これは、骨、筋肉、または器官などの組織への損傷によって頻繁に引き起こされ、発症はしばしば不安または感情苦痛を伴う。慢性疼痛は、急性疼痛よりも長く持続し、一般に医療処置に幾分抵抗性である。これは、通常、変形性関節症のような長期疾患に関連する。線維筋痛を有するような場合によっては、これはこの疾患の定義特性の１つである。慢性疼痛は、損傷した組織の結果であり得るが、非常に多くの場合、神経損傷に起因する。
【００１２】
開示された組成物および方法を使用する治療に適した疼痛の例示的なタイプには、侵害受容性、神経障害性および炎症性疼痛が含まれる。
侵害受容性は、皮膚、筋肉、内臓、関節、腱または骨などの組織の有害な傷害または外傷に対する正常な応答を表す。例としては、(a)体性筋骨格(関節痛、筋膜痛)、皮膚；多くの場合、極めて限局性；ならびに(b)内臓中空器官および平滑筋が挙げられる。
本明細書に開示の実施形態は、侵害受容性疼痛を治療するための組成物および方法を含む。
神経障害性疼痛は、体性感覚神経系における一次病変または疾患によって開始するかまたは引き起こされる。感覚異常は、麻痺として認識される欠損から過敏症(痛覚過敏またはアロディニア)まで、また刺痛などの知覚異常までの範囲である。例としては、糖尿病性神経障害、帯状疱疹後神経痛、脊髄損傷痛、幻肢(切断後)疼痛、および脳卒中後疼痛が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に開示の実施形態は、神経障害性疼痛を治療するための組成物および方法を含む。
【００１３】
炎症性疼痛は、組織炎症の部位で放出される種々のメディエーターによる侵害受容性疼痛経路の活性化および感作の結果である。キープレーヤーとして関与してきたメディエーターは、IL-1-アルファ、IL-1-ベータ、IL-6およびTNF-アルファのような炎症性サイトカイン、ケモカイン、反応性酸素種、血管作用性アミン、脂質、ATP、酸、および浸潤性白血球、血管内皮細胞または組織内在性マスト細胞により放出される他の因子である。例としては、虫垂炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、および帯状疱疹が挙げられる。
本明細書に開示の実施形態は、炎症性疼痛を治療するための組成物および方法を含む。
分類の臨床的な意味：病理学的プロセスは単離では決して発生せず、その結果、１つを超えるメカニズムが存在し得、１人の患者において、１つを超える種類の疼痛が検出され得る；例えば、炎症性メカニズムが神経障害性疼痛に関与することが知られている。容易に分類することができない、充分に認識された疼痛疾患が存在する。これらの基礎的なメカニズムの我々の理解は、依然として基本的であるが、これらの疾患の具体的な治療は周知である；これらには、癌性疼痛、片頭痛および他の主要な頭痛、ならびに線維筋痛型の広範囲の疼痛が含まれる。
【００１４】
疼痛強度は、軽度、中程度および重度として大きく分類できる。０＝無痛であり、10が考えられる最悪の痛みである場合に、痛みの強さを評価させるために、数値スケールを使用することが一般的である：
a.中程度：5/10〜6/10
b.中程度：5/10〜6/10
c.重度：≧7/10以上
本明細書に開示の実施形態は、軽度、中程度または重度の疼痛を治療するための組成物および方法を含む。
時間経過：痛みの持続時間
a.急性疼痛：３から６カ月未満の持続時間の疼痛
b.慢性疼痛：３〜６カ月を超えて持続する疼痛、または急性疾患の経過を超えて持続する疼痛、または組織治癒が完了した後の疼痛。
c.慢性疼痛の急性増悪：基礎的な慢性疼痛に重畳された急性疼痛フレア。
本明細書に開示の実施形態は、軽度、中程度または重度の急性、慢性または慢性疼痛の急性増悪を治療するための組成物および方法を含む。
開示された実施形態は、典型的には、体表面または筋骨格組織のいずれかにおいて疼痛受容体の活性化によって引き起こされる疼痛である、体性痛の治療を含むことができる。
【００１５】
開示された実施形態は、内部器官が損傷または傷害された場合に生じる、内臓痛の治療を含むことができる。内臓痛は、胸部、腹部または骨盤領域における疼痛受容体の活性化によって引き起こされる。内臓痛は、しばしば曖昧で充分に局在してなく、通常、圧迫するような、締め付けられる、鈍いまたは拡散性として記述される。内臓痛は、胃、腎臓、胆嚢、膀胱、腸のような内部器官の問題によって引き起こされる可能性がある。内臓痛は、また、痙攣などの腹筋や腹壁の問題により引き起こされる可能性がある。
開示された実施形態は、脊髄および/または末梢神経に対する傷害または機能不全によって引き起こされる神経障害性疼痛の治療を含むことができる。神経障害性疼痛は、典型的には、ひりひりする、ちくちくする、ずきずきする、刺すような、または「ピンおよび針」の感覚である。この種類の疼痛は、通常、傷害の数日、数週間、または数カ月以内に起こり、頻度および強度が断続的に発生する傾向がある。神経障害性疼痛は、拡散し、傷害のレベルまたはそれよりも低いレベルで、最も多くの場合、脚、背中、足、大腿部、および足指に起こるが、臀部、股関節部、上部背中、腕、指、腹部、および頸部にも生じ得る。
【００１６】
実施形態は、例えば、頭痛の痛み、歯痛の痛みなどを治療するために使用できる。
開示された実施形態は、免疫系経路、例えば炎症経路を中断できる。
開示された実施形態は、感染症、例えば細菌感染または真菌感染の治療を含むことができる。
壊死性軟部組織感染症は、広い範疇の細菌および真菌の皮膚感染である。記述用語は、感染の位置、深さ、および程度に基づいて変化する(例えば、フルニエ壊疽[壊死性会陰感染]、壊死性筋膜炎[深部皮下感染])。侵入の深さに応じて、壊死性軟部組織感染症は、広範な局所組織破壊、組織壊死、全身毒性、および死さえも引き起こす可能性がある。外科的進歩および抗生物質の導入にもかかわらず、壊死性軟部組織感染症の報告された死亡率は、６パーセントから76パーセントまでの範囲である。
【００１７】
本明細書で開示するのは、壊死性軟部組織感染症を治療するための方法および組成物である。本明細書に開示された実施形態は、感染の間のCGRPの神経放出を効果的に制限または遮断し、細菌性壊死性病変を制限または予防できる。例えば、開示された実施形態は、例えば、S.ピオゲネスによって引き起こされるもののような、細菌性壊死性病変に近接して、開示された組成物を投与することを含むことができる。
開示された実施形態は、筋収縮を阻害または防止するのに必要な用量よりも少ない用量の投与を含むことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の組成物は、速効性ボツリヌス毒素、例えばボツリヌスE型を含むことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の組成物は、早期回復性ボツリヌス毒素、例えばボツリヌスE型を含むことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示の組成物は、速効性、早期回復性ボツリヌス毒素、例えばボツリヌスE型を含むことができる。
【００１８】
定義
「投与」または「投与する」は、医薬組成物または活性成分を対象者に与える(すなわち、投与する)ステップを意味する。本明細書に開示の医薬組成物は、いくつかの適切な経路によって投与できる。例えば、筋肉内、皮内、皮下投与、くも膜下投与、腹腔内投与、局所(経皮)、滴下、および埋め込み(例えば、高分子埋め込み錠またはミニ浸透圧ポンプのような徐放装置の)は、全て適当な投与経路であり得る。
「軽減する」は、疼痛の発生、頭痛の発生、または症状または障害のいかなる徴候または原因の発生の減少をも意味する。したがって、軽減することには、いくらかの減少、有意な減少、ほぼ完全な減少、および完全な減少が含まれる。
【００１９】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸または合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体、立体異性体、およびアミノ酸模倣物を意味する。この定義によって含まれるのは、天然アミノ酸：(1)ヒスチジン(His；H)(2)イソロイシン(Ile；I)(3)ロイシン(Leu；L)(4)リジン(Lys；K)(5)メチオニン(Met；M)(6)フェニルアラニン(Phe；F)(7)トレオニン(Thr；T)(8)トリプトファン(Trp；W)(9)バリン(Val；V)(10)アルギニン(Arg；R)(11)システイン(Cys；C)(12)グルタミン(Gln；Q)(13)グリシン(Gly；g)(14)プロリン(Pro；P)(15)セリン(Ser；S)(16)チロシン(Tyr；Y)(17)アラニン(Ala；a)(18)アスパラギン(Asn；N)(19)アスパラギン酸(Asp；D)(20)グルタミン酸(Glu；E)(21)セレノシステイン(Sec；U)などであり、非天然アミノ酸：(a)シトルリン(Cit)；(b)シスチン；(c)gama-アミノ酪酸(GABA)；(d)オルニチン(Orn)；(f)テアニン；(g)ホモシステイン(Hey)；(h)チロキシン(Thx)；およびベタイン；カルニチン；カルノシンクレアチン；ヒドロキシトリプトファン；ヒドロキシプロリン(Hyp)；N-アセチルシステイン；S-アデノシルメチオニン(SAM-e)；タウリン；チラミンなどのアミノ酸誘導体である。
【００２０】
「動物性タンパク質を含まない」は、血液由来、血液プールおよび他の動物由来の生成物または化合物の非存在を意味する。「動物」は、哺乳動物(例えばヒト)、鳥、爬虫類、魚、昆虫、クモまたは他の動物種を意味する。「動物」は、細菌のような微生物を除外する。したがって、動物性タンパク質を含まない医薬組成物はボツリヌス神経毒素を含めてもよい。例えば、「動物性タンパク質を含まない」医薬組成物は、血清由来アルブミン、ゼラチンおよび他の動物由来タンパク質、例えば免疫グロブリンを実質的に含まないか、または本質的に含まないか、または完全に含まない医薬組成物を意味する。動物性タンパク質を含まない医薬組成物の一例は、ボツリヌス毒素(活性成分として)および安定剤または賦形剤としての適切な多糖類を含むかまたはそれらからなる医薬組成物である。
【００２１】
「ボツリヌス毒素」または「ボツリヌス神経毒素」は、クロストリジウム・ボツリヌム(Clostridium botulinum)により産生された神経毒素、ならびに非クロストリジウム種によって組換え的に作製されたボツリヌス毒素(またはその軽鎖または重鎖)を意味する。本明細書で使用される「ボツリヌス毒素」という用語は、ボツリヌス毒素血清型A、B、C、D、E、F、G、HおよびX、ならびにそれらのサブタイプ、BoNT/DCおよびBoNT/CDなどのモザイク毒素、ならびにそれらの他のいずれかのタイプのサブタイプ、またはいずれかの再設計されたタンパク質、いずれの場合にも上記いずれかのアナログ、誘導体、同族体、パーツ、サブパーツ、変異体またはバージョンを包含する。本明細書で使用される「ボツリヌス毒素」はまた、「修飾ボツリヌス毒素」を包含する。本明細書で使用されるさらなる「ボツリヌス毒素」は、ボツリヌス毒素複合体(例えば、300、600および900kda複合体)、ならびに複合タンパク質に関連しないボツリヌス毒素(150kDa)の神経毒素性成分も包含する。「純ボツリヌス毒素」は、培養または発酵プロセスから得られる、ボツリヌス毒素に付随できる他のタンパク質および不純物から単離され、または実質的に単離された純粋なボツリヌス毒素またはボツリヌス毒素複合体を意味する。したがって、純ボツリヌス毒素は、非ボツリヌス毒素タンパク質の少なくとも95%、好ましくは少なくとも99%を有することができ、不純物は除去される。
【００２２】
「クロストリジウム神経毒素」は、クロストリジウム毒素が細胞を興奮させる全体の細胞機構を実行できるクロストリジウム毒素株によって生じるいかなる毒素も意味し、低または高親和性クロストリジウム毒素受容体へのクロストリジウム毒素の結合、毒素/受容体複合体の内在化、クロストリジウム毒素軽鎖の細胞質への転移およびクロストリジウム毒素基質の酵素的修飾を包含する。クロストリジウム毒素の非限定的な例としては、BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/CD、BoNT/DC、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/H(タイプFAまたはHAとしても知られている)、BoNT/X、破傷風毒素(TeNT)、バラティ(Baratii)毒素(BaNT)、およびブチリカム毒素(BuNT)などのボツリヌス毒素が挙げられる。BoNT/C2細胞毒素およびBoNT/C3細胞毒素は、神経毒素ではなく、「クロストリジウム毒素」という用語から除外される。クロストリジウム毒素という用語にはまた、約150kDaのクロストリジウム毒素のみが含まれる(すなわち、NAPを含まない)。クロストリジウム毒素には、例えばクロストリジウム毒素イソ型、クロストリジウム毒素サブタイプなどの天然に存在するクロストリジウム毒素変異体；例えば保存性クロストリジウム毒素変異体、非保存性クロストリジウム毒素変異体、クロストリジウム毒素キメラ変異体、それらの活性クロストリジウム毒素断片などの天然に存在しないクロストリジウム毒素変異体、またはそれらのいかなる組合せも含まれる。クロストリジウム毒素には、クロストリジウム毒素複合体も含まれ、クロストリジウム毒素は、クロストリジウム毒素と非毒素関連タンパク質(NAP)を含む複合体、例えば、ボツリヌス毒素複合体、破傷風毒素複合体、バラティ毒素複合体、ブチリカム毒素複合体を意味する。クロストリジウム毒素複合体の非限定的な例としては、クロストリジウム・ボツリヌム(Clostridium botulinum)により産生されるもの、例えば、900kDa BoNT/A複合体、500kDa BoNT/A複合体、300kDa BoNT/A複合体、500kDa BoNT/B複合体、500kDa BoNT/C1複合体、500kDa BoNT/D複合体、300kDa BoNT/D複合体、300kDa BoNT/E複合体、および300kDa BoNT/F複合体が挙げられる。
【００２３】
生物学的に活性な成分に適用される「有効量」の成分は、対象における所望の変化に影響を及ぼすのに通常は充分な成分の量を意味する。例えば、所望の効果が瘢痕形成の減少である場合、有効量の成分は、瘢痕形成の少なくとも実質的な減少を引き起こし、有意な毒性をもたらすことのない量である。この実施形態の他の態様において、クロストリジウム毒素活性成分の治療上有効な濃度は、例えば、高くても10％、高くても20％、高くても30％、高くても40％、高くても50％、高くても60％、高くても70％、高くても80％、高くても90％または高くても100％で治療される栄養物と関連した症状を減少させる。
本明細書で使用される「速効性の」は、上記患者において、例えば、オナボツリヌス毒素Aのようなボツリヌス神経毒素A型により発揮されるよりも迅速に、効果を発揮するボツリヌス毒素をいう。例えば、速効性ボツリヌス毒素の効果は、12時間以内、24時間以内または36時間以内に発揮できる。したがって、E型のような速効性の毒素に対して、ボツリヌス毒素A型は、「遅効性」のボツリヌス毒素として分類できる。場合によっては、遅効性ボツリヌス毒素を「中程度作用性」ボツリヌス毒素と呼ぶこともある。いくつかの実施形態において、速効性ボツリヌス毒素は、その投与後６時間以内、12時間以内、24時間以内または36時間以内に測定可能な治療効果を生じ、かつ/またはその効果は、オナボツリヌス毒素Aにより発揮される治療効果よりも少なくとも約50％早く観察される。
【００２４】
本明細書で使用される「早期回復性」は、患者において、その効果が、例えば、オナボツリヌス毒素Aのようなボツリヌス神経毒素A型により発揮される効果よりも迅速に減少するボツリヌス毒素をいう。いくつかの実施形態において、この早期回復性ボツリヌス毒素の治療効果は、投与後約３カ月以内、２カ月以内、または６週間以内に減少し、その効果は、オナボツリヌス毒素Aにより発揮される効果よりも約50％早く減少する。例えば、早期回復性ボツリヌス毒素の効果は、例えば、120時間以内、150時間以内、300時間以内、350時間以内、400時間以内、500時間以内、600時間以内、700時間以内、800時間以内などで減少できる。ボツリヌス毒素A型は、最大で12カ月の有効性を有することができ(European J. Neurology 6 (Supp 4): S111-S1150:1999)、いくつかの状況では、過水症の治療におけるような腺を処置するために使用される場合、27カ月間の長さであることが知られている。例えば、Bushara K., Botulinum toxin and rhinorrhea, Otolaryngol Head Neck Surg 1996；114(3):507, およびThe Laryngoscope 109:1344-1346:1999を参照されたい。しかしながら、ボツリヌス神経毒素A型の筋肉内注射の通常の持続期間は、典型的には約３から４カ月である。このように、E型のような早期回復性毒素に対しては、オナボツリヌス毒素Aのようなボツリヌス毒素A型を、「回復の遅い」または「長時間作用性」ボツリヌス毒素として分類できる。
【００２５】
本明細書で使用される「中程度作用性」は、速効性毒素よりも緩徐に効果を発揮するボツリヌス毒素をいう。
「局所的投与」は、動物体上または動物体内の部位の近傍でまたはその近傍に、例えば、筋肉内注射、皮内注射、皮下注射または局所投与によって、その部位で医薬の生物学的効果が所望される医薬の直接投与を意味する。局所的投与は、静脈内または経口投与などの全身投与経路を除外する。局所投与は、薬剤が患者に適用される局所的投与の１種である。
「神経毒素」は、神経細胞表面受容体に対して特異的親和性のある生物学的に活性な分子を意味する。神経毒素には、純毒素としての、および１つまたは複数種の非毒素、毒素関連タンパク質との複合体としてのクロストリジウム毒素の両方が含まれる。
「患者」は、医療的または獣医学的ケアを受けるヒトまたは非ヒト対象を意味する。
【００２６】
「医薬組成物」は、例えばボツリヌス毒素などのクロストリジウム毒素活性成分のような活性医薬成分と、例えば安定剤または賦形剤などの少なくとも１つの追加成分とを含む組成物を意味する。したがって、医薬組成物は、ヒト患者のような対象への診断または治療的投与に適した製剤である。この医薬組成物は、例えば、凍結乾燥または真空乾燥状態であってもよく、凍結乾燥または真空乾燥された医薬組成物の再構成後に形成された溶液、または再構成を必要としない溶液または固体としてであってよい。すでに述べたように医薬組成物は、液体または固体であってよい。医薬組成物は、動物性タンパク質を含まないものとすることができる。
手術部位を「処置する」とは、本明細書に開示される組成物を投与して、切開領域の筋肉張力を低減することをいう。
本明細書で使用される「補助投与」とは、初期神経毒素投与に従うボツリヌス投与をいう。
「治療用製剤」は、周辺筋肉の活性に特徴を有する障害または疾患などの、障害または疾患および/またはそれに付随する症状を治療し、かつ、それによって、軽減するために使用できる製剤を意味する。
【００２７】
「治療的に有効な濃度」、「治療有効量」、「有効量」、「有効用量」および「治療的に有効な用量」は、所望の治療効果を達成するのに必要な薬剤(例えばボツリヌス毒素またはボツリヌス毒素を含む医薬組成物)の最小投与量を指し、有意な陰性または有害な副作用を引き起こさずに治療される疾患、障害または状態に関連する症状を減少させるのに充分な用量を含む。
「治療する」、「治療している」、または「治療」は、例えば、傷害または損傷された組織の治癒によって、あるいは既存のまたは知覚される疾患、障害または病態を部分変化させ、変化させ、向上させ、改善し、回復させかつ/または美化することによって、所望の治療的または美容的結果を達成するように、疾患、障害または病態の軽減または減少(若干の減少、顕著な減少、ほぼ完全な減少、および完全な減少を含む)、消散または予防(一時的または持続的な)を意味する。
「単位」または「U」は、１単位の市販のボツリヌス神経毒素A型と等価の神経筋遮断効果を持つよう標準化された活性ボツリヌス神経毒素の量を意味する。
本明細書で使用される「創傷」とは、例えば、傷害でまたは意図的に引き起こされる皮膚への崩壊を意味する。
【００２８】
本開示の代替の実施形態、要素、またはステップのグループは、限定と解釈されるべきではない。各グループメンバーは、単独でまたは本明細書で開示の他のグループメンバーとの何らかの組合せで、参照されるかまたは主張されてよい。利便性および/または特許性上の理由で、１グループの１つまたは複数のメンバーがグループに含まれるかまたはグループから削除され得ることが予想される。そうした包含または削除が発生した場合、本明細書は、添付の請求項において、使用される全てのマーカッシュグループの記載された説明を満たすように変更されたグループを含むと考えられる。
【００２９】
特段の指示がない限り、本発明の明細書および請求項において、使用される特徴、項目、量、パラメーター、特性、期間などを表す全ての数字は、全ての例において、用語「約」により修飾されるものと理解されるべきである。本明細書で使用するとき、用語「約」は、そのように修飾される特徴、項目、量、パラメーター、特性、または期間が、明言された特徴、項目、量、パラメーター、特性、または期間の値の上および下にプラスまたはマイナス10パーセントの範囲を含むことを意味する。したがって、特にそれと反対の指示がない限り、本明細書および添付の請求項において、明記される数値パラメーターは、変動することがある近似値である。最低限でも、また請求項の範囲への均等物の原則の適用を限定する試行としてではなく、各数値表示は、少なくとも、報告された有効数字の数に照らして、また通常の概算方法を適用することによって、解釈されるべきである。開示の広い範囲を明記している数値範囲および値が近似値であるにもかかわらず、具体的な実施例において、明記される数値範囲および値は可能な限り正確に報告される。しかし、いかなる数値範囲および値も、それら個々の試験測定において、認められる標準偏差から必然的に生じるある種の誤差を本質的に含む。本明細書での値の数値範囲の記載は、単に、各々の別個の値が範囲内に入っていることをそれぞれに表す簡潔な方法として役立つことを意図されている。本明細書において、特段の指示がない限り、数値範囲の個々の値は、あたかも本明細書で個々に記載されているかのように本発明の明細書に組み込まれる。
【００３０】
本開示を記述する文脈において、(特に以下の請求項の文脈において)使用される用語「ａ」、「an」、「the」および類似の指示対象は、本明細書において、特段の指示がない限り、あるいは文脈によって、特に明らかに否定されない限り、単数および複数の両方を含むと解釈されるべきである。本明細書で記載の全ての方法は、本明細書において、特段の指示がない限り、あるいは文脈によって、特に明らかに否定されない限り、いかなる適切な順序で行われてもよい。いずれかのおよび全ての例の使用、または本明細書で示される例示用語(例えば、「such as(などの)」)は、単に開示をより良く明らかにすることを意図されており、別に主張される範囲の限定を提示するものではない。本発明の明細書において、本明細書で開示の実施形態の実施に不可欠ないかなる非請求の要素をも示すと解釈されるべき語は、全くない。
【００３１】
神経毒素組成物
本明細書で開示の実施形態は、神経毒素組成物、例えば、早期回復性神経毒素を含む。こうした神経毒素は、医薬品に許容されるいかなる形態で、医薬品に許容されるいかなる処方に処方化されてもよい。神経毒素はまた、いかなる製造者から供給される医薬品に許容されるいかなる形態で使用されてもよい。
上記神経毒素は、クロストリジウム・ボツリヌム、クロストリジウム・ブチリカム、またはクロストリジウム・ベラッティ細菌などのクロストリジウム細菌により産生されてよい。さらに、この神経毒素は、修飾神経毒素、天然または野生型神経毒素と比較して、少なくともその１つのアミノ酸が除去、修飾または置換されている神経毒素である、であってよい。さらに、この神経毒素は、遺伝子組換え産生された神経毒素またはそれらの誘導体またはフラグメントであってよい。
図１は、ボツリヌス神経毒素(BoNT)の主要な構造を示す。図２Ａ〜図２Ｄは、BoNT/E(図２Ａ、２Ｃ)およびBoNT/B(図２Ｂ、２Ｄ)の略図およびリボン表現である。触媒ドメイン、転移ドメイン、および結合ドメインは、それぞれ、CD、TD、およびBDと標識される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、開示されたボツリヌス毒素E型(BoNT/E)組成物は、A型に対して、40％のアミノ酸相同性を有し、両者は、ジスルフィド結合で連結された100kDa重鎖(HC)および50kDa軽鎖(LC)の２つの鎖からなる同一の基本ドメイン構造を共通して有する、例えばWhelan et al., The complete amino acid sequence of the Clostridium botulinum type-E neurotoxin, derived by nucleotide-sequence analysis of the encoding gene, Eur. J. Biochem. 204(2): 657-667(1992)を参照されたい。HCは、受容体結合ドメインおよび転移メインを含むが、一方、LCは、シナプトソーム関連タンパク質(SNAP)酵素活性を含む。ドメイン構造は、全てのボツリヌス神経毒素血清型が共有する同一の構造である。
開示された実施形態において、上記神経毒素は単位投与形態に処方される、例えば、バイアルに入れた無菌溶液として、あるいは生理食塩水などの注射に適したビヒクルで再溶解する凍結乾燥粉末を含むバイアルまたはサシェとして提供されてよい。
【００３３】
いくつかの実施形態において、上記ボツリヌス毒素は、生理食塩水および低温殺菌したヒト血清アルブミンを含む溶液に処方化され、これにより毒素を安定化し、非特異的吸着による損失を最小限にする。この溶液は、無菌ろ過(0.2μmフィルター)され、個々のバイアルに充填され、次いで真空乾燥して無菌の凍結乾燥粉末が得られる。使用において、この粉末は、無菌の保存剤を含まない生理食塩水(塩化ナトリウム0.9％注射用)の添加によって再溶解されてよい。
実施形態において、ボツリヌスE型は、0.03Mリン酸ナトリウム中20ng/mLの名目上濃度、0.12M塩化ナトリウムおよび1mg/mLヒト血清アルブミン(HSA)含有、pH 6.0の注射用無菌溶液として、５mLバイアル入りで供給される。別の実施形態において、このボツリヌスE型は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよびHSAからなる液体製剤として提供される。さらに別の実施形態において、このボツリヌスE型は、界面活性剤および二糖を含む凍結乾燥または液体製剤として供給される。
【００３４】
上記組成物は、ボツリヌスE型などの、１種類の神経毒素のみを含んでもよいが、開示された組成物は、障害に対する治療効果を高めることができる２種類以上の神経毒素を含んでよい。例えば、患者に投与する組成物は、ボツリヌスA型およびE型を含んでよい。２種の異なる神経毒素を含む単一の組成物を投与することは、この患者に単一の神経毒素が投与された場合よりも、各神経毒素の有効濃度を下げることを可能にし、それでもなお所望の治療効果を達成する。この患者に投与する組成物はまた、他の薬剤的に活性な成分、例えば、タンパク質受容体またはイオンチャネルモジュレーターを、１種または複数種の神経毒素と組合せて含んでよい。これらのモジュレーターは、種々の神経細胞間の神経伝達の低減に寄与できる。例えば、組成物は、ガンマアミノ酪酸(GABA)A型受容体モジュレーターを含んでよく、GABAA受容体により媒介される抑制効果を高められる。このGABAA受容体は、細胞膜を通り抜ける電流を効果的に短絡することにより、神経活動を抑制する。GABAA受容体モジュレーターは、このGABAA受容体の抑制効果を高め、神経細胞から電気的または化学的シグナル伝達を低減できる。GABAA受容体モジュレーターの例には、ベンゾジアゼピン、例えば、ジアゼパム、オキサゼパム、ロラゼパム、プラゼパム、アルプラゾラム、ハラゼパム、コルジアゼポキシド、およびクロルアゼペートが挙げられる。組成物はまた、グルタミン酸受容体により媒介される興奮効果を低減するグルタミン酸受容体モジュレーターをも含んでよい。グルタミン酸受容体モジュレーターの例には、AMPA、NMDA、および/またはカイニン酸型のグルタミン酸受容体を介する電流フラックスを阻害する薬剤が挙げられる。
【００３５】
治療方法
本明細書で開示の方法は、患者への速効性神経毒素の投与を含むことができる。好ましい実施形態において、この神経毒素はボツリヌスE型である。
本明細書で開示の方法は、患者への速効性神経毒素の補助投与を含むことができる。補助投与を含む実施形態は、さらに、従来の神経毒素投与の結果の医師または患者の評価を含むことができる。
いくつかの実施形態において、速効性神経毒素の投与は、外科手術に先んじて行われる。いくつかの実施形態において、この投与は、例えば、手術前６時間以内、手術前５時間以内、手術前４時間以内、手術前３時間以内、手術前２時間以内、手術前60分以内、手術前50分以内、手術前40分以内、手術前30分以内、手術前20分以内、手術前10分以内、手術前５分以内、手術前２分以内、などに行われる。
代替実施形態において、上記速効性神経毒素の投与は、外科手術と同時に行われる。
他の実施形態において、上記速効性神経毒素の投与は、外科手術の後に行われる。例えば、投与は、手術後１分以内、手術後２分以内、手術後３分以内、手術後４分以内、手術後５分以内、手術後６分以内、手術後７分以内、手術後８分以内、手術後９分以内、手術後10分以内、手術後20分以内、手術後30分以内、手術後40分以内、手術後50分以内、手術後60分以内、手術後90分以内、手術後120分以内、手術後180分以内、手術後240分以内、手術後300分以内、などに行われてよい。いくつかの他の態様において、投与は、手術後１日から３日以内に行なわれてよい。さらに他の実施形態において、投与は、手術後３カ月以内に行なわれてよい。
【００３６】
補助投与を含む実施形態において、初回の神経毒素投与の結果の評価は、例えば、初回投与の６時間、初回投与の８時間、初回投与の10時間、初回投与の12時間、初回投与の14時間、初回投与の16時間、初回投与の18時間、初回投与の24時間、初回投与の30時間、初回投与の36時間、初回投与の42時間、初回投与の48時間、初回投与の54時間、初回投与の60時間、初回投与の66時間、初回投与の72時間、初回投与の78時間、初回投与の84時間、初回投与の90時間、初回投与の96時間、初回投与の102時間、初回投与の108時間、初回投与の114時間、初回投与の120時間、初回投与の１週間、初回投与の２週間、初回投与の３週間、初回投与の４週間、初回投与の５週間、初回投与の６週間、初回投与の７週間、初回投与の８週間、初回投与の９週間、初回投与の10週間、初回投与の11週間、初回投与の12週間、など以内に行われてよい。
【００３７】
補助投与を含む実施形態において、この補助用量の投与は、例えば、評価の６時間、評価の８時間、評価の10時間、評価の12時間、評価の14時間、評価の16時間、評価の18時間、評価の24時間、評価の30時間、評価の36時間、評価の42時間、評価の48時間、評価の54時間、評価の60時間、評価の66時間、評価の72時間、評価の78時間、評価の84時間、評価の90時間、評価の96時間、評価の102時間、評価の108時間、評価の114時間、評価の120時間、評価の１週間、評価の２週間、評価の３週間、評価の４週間、評価の５週間、評価の６週間、評価の７週間、評価の８週間、評価の９週間、評価の10週間、評価の11週間、評価の12週間、など以内に行われてよい。
【００３８】
実施形態において、上記補助投与は、例えば、上記速効性神経毒素の初回投与の６時間、初回投与の８時間、初回投与の10時間、初回投与の12時間、初回投与の14時間、初回投与の16時間、初回投与の18時間、初回投与の24時間、初回投与の30時間、初回投与の36時間、初回投与の42時間、初回投与の48時間、初回投与の54時間、初回投与の60時間、初回投与の66時間、初回投与の72時間、初回投与の78時間、初回投与の84時間、初回投与の90時間、初回投与の96時間、初回投与の102時間、初回投与の108時間、初回投与の114時間、初回投与の120時間、初回投与の１週間、初回投与の２週間、初回投与の３週間、初回投与の４週間、初回投与の５週間、初回投与の６週間、初回投与の７週間、初回投与の８週間、初回投与の９週間、初回投与の10週間、初回投与の11週間、初回投与の12週間、など以内に行われてよい。いくつかの実施形態において、この補助投与は、例えば、初回投与の３カ月から６カ月以内に行われてよい。いくつかの実施形態において、この補助投与は、初回投与として同時に行われてよい。
【００３９】
本明細書で開示の方法は、急速開始の効果を(例えば、速効性神経毒素を用いて)提供できる。例えば、開示された実施形態は、外科的切開に近接する筋肉活性を、例えば、投与後30分、投与後45分、投与後60分、投与後75分、投与後90分、投与後２時間、投与後３時間、投与後４時間、投与後５時間、投与後６時間、投与後７時間、投与後８時間、投与後９時間、投与後10時間、投与後11時間、投与後12時間、投与後13時間、投与後14時間、投与後15時間、投与後16時間、投与後17時間、投与後18時間、投与後19時間、投与後20時間、投与後21時間、投与後22時間、投与後23時間、投与後24時間、投与後30時間、投与後36時間、投与後42時間、投与後48時間、投与後３日、投与後４日、投与後５日、投与後６日、投与後７日、など以内に減少させることができる。
本明細書で開示の方法は、より短い持続時間(例えば、早期回復性神経毒素を用いて)の筋肉活性の低減を提供できる。例えば、開示された実施形態は、例えば、投与後３日、投与後４日、投与後５日、投与後６日、投与後７日、投与後８日、投与後９日、投与後10日、投与後11日、投与後12日、投与後13日、投与後14日、投与後15日、投与後16日、投与後17日、投与後18日、投与後19日、投与後20日、投与後21日、投与後22日、投与後23日、投与後24日、投与後25日、投与後26日、投与後27日、投与後28日、投与後29日、投与後30日、投与後45日、投与後60日、投与後75日、投与後90日、投与後105日など、以内に鎮静する筋肉活性の低減を提供できる。
【００４０】
副作用は、ボツリヌス注射と関連することがある。開示された実施形態は、従来の神経毒素治療、例えばA型のようなより長時間作用性神経毒素を用いた治療よりも副作用が少ないかまたは持続期間がより短い副作用をもたらす神経毒素治療を提供できる。
例えば、開示された実施形態は、複視またはかすみ目、眼瞼麻痺(対象者は瞼を完全に開くことができない)、顔面筋肉運動の喪失、しわがれ声、膀胱調節機能不全、息切れ、嚥下困難、しゃべりづらさ、死亡、およびこれらに類するもののより少ない(またはより持続期間が短い)結果をもたらすことができる。
開示された方法は、瘢痕化しやすい領域、例えば、外科的切開に近接する領域、または皮膚へのいかなる傷害にも近接する領域、例えば外傷性損傷への投与を含む。開示された実施形態は、例えば、骨格筋組織または平滑筋組織に、瘢痕化しやすい領域に近接する筋肉への投与を含む。
さらに、開示された実施形態は、より確かな持続期間の低減された筋肉活性を提供できる。例えば、より長期作用性の神経毒素による、効果の持続期間の20％の変動は、有効持続期間において、１カ月の差をもたらす可能性がある。開示された早期回復性神経毒素を用いると、この20％の変動は、有効持続期間において、それほど極端な差を生じることはない。
【００４１】
開示された速効性神経毒素組成物は、針または無針装置を用いて投与されてよい。ある特定の実施形態において、この方法は、個人の皮下に組成物を注射することを含む。例えば、この投与は、約30ゲージ以下の針によって、この組成物を注射することを含む。ある特定の実施形態において、この方法は、ボツリヌス毒素E型を含む組成物を投与することを含む。
上記組成物の注射は、注射器、カテーテル、針および注射のための他の手段により行われてよい。この注射は、顔面、頸部、胴体、腕、手、脚、および足を含むがこれらに限定されるものではない、治療を必要とする哺乳類の身体のいかなる部域に対して行われてもよい。この注射は、表皮、真皮、脂肪、筋肉、または皮下層などの特定の部域のいかなる位置に行われてもよい。
例えば、開示された組成物の投与に適した骨格筋は、図３Ａ〜３Ｂに示された図の筋肉または筋肉の組合せのいかなるものも含むことができる。
投与は、図４の概略図に示す神経の１つまたは複数に、またはその近傍に注射することを含むことができる。
【００４２】
開示された組成物の投与に適した平滑筋は、血管の壁、胃の壁、尿管、腸、大動脈内(中膜層)、目の虹彩、前立腺、胃腸管、気道、小動脈、細動脈、生殖器官(男女)、静脈、腎臓の糸球体(メサンギウム細胞と呼ばれる)、膀胱、子宮、皮膚の立毛筋、毛様筋、括約筋、気管、胆管などのいかなるものも含むことができる。
開示された方法下での注射の頻度および量は、治療される特定の領域の性質および位置に基づいて決定されてよい。しかしながら、ある特定の場合、反復的注射が最適な結果を達成するために所望されてよい。各特定の場合に対する注射の頻度および量は、当業者により決定されてよい。
投与の経路および投与量の例が提供されているが、適切な投与経路および投与量は、一般に、担当医師によって、ケースバイケースで決定される。こうした決定は、当業者にとっては、日常的なことである(例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine (1998)を参照されたい、Anthony Fauci et al.により編集され、第14版、McGraw Hillから出版されている)。例えば、開示された本発明のクロストリジウム神経毒素の投与の経路および投与量は、選択された神経毒素の溶解特性ならびに治療される病態の強度および範囲などの基準に基づいて選択できる。
【００４３】
上記速効性神経毒素は、約10-3U/kgと約35U/kgとの間の量で投与されてよい。一実施形態において、この神経毒素は、約10-2U/kgと約25U/kgとの間の量で投与される。別の一実施形態において、この神経毒素は、約10-1U/kgと約15U/kgとの間の量で投与される。別の一実施形態において、この神経毒素は、約１U/kgと約10U/kgとの間の量で投与される。多くの例において、約１単位から約500単位のボツリヌスE型などの神経毒素の投与は、有効な治療的救済を提供する。一実施形態において、約５単位から約200単位のボツリヌスE型などの神経毒素を使用することができ、別の一実施形態において、約10単位から約100単位のボツリヌスE型などの神経毒素を、筋肉などの標的組織に局所的に投与できる。
【００４４】
いくつかの実施形態において、投与は、約10単位の神経毒素、または約20単位の神経毒素、または約30単位の神経毒素、または約40単位の神経毒素、または約50単位の神経毒素、または約60単位の神経毒素、または約70単位の神経毒素、または約80単位の神経毒素、または約90単位の神経毒素、または約100単位の神経毒素、または約110単位の神経毒素、または約120単位の神経毒素、または約130単位の神経毒素、または約140単位の神経毒素、または約150単位の神経毒素、または約160単位の神経毒素、または約170単位の神経毒素、または約180単位の神経毒素、または約190単位の神経毒素、または約200単位の神経毒素、または約210単位の神経毒素、または約220単位の神経毒素、または約230単位の神経毒素、または約240単位の神経毒素または約250単位の神経毒素、または約260単位の神経毒素、または約270単位の神経毒素、または約280単位の神経毒素、または約290単位の神経毒素、または約290単位の神経毒素、または約300単位の神経毒素、または約310単位の神経毒素、または約320単位の神経毒素、または約330単位の神経毒素、または約340単位の神経毒素、または約350単位の神経毒素、または約360単位の神経毒素、または約370単位の神経毒素、または約380単位の神経毒素、または約390単位の神経毒素、または約400単位の神経毒素、または約410単位の神経毒素、または約420単位の神経毒素、または約430単位の神経毒素、または約440単位の神経毒素、または約450単位の神経毒素、または約460単位の神経毒素、または約470単位の神経毒素、または約480単位の神経毒素、または約490単位の神経毒素、または約500単位の神経毒素、などの用量を含んでよい。
【００４５】
いくつかの実施形態において、投与は、約0.1ナノグラム(ng)の神経毒素、0.2ngの神経毒素、0.3ngの神経毒素、0.4ngの神経毒素、0.5ngの神経毒素、0.6ngの神経毒素、0.7ngの神経毒素、0.8ngの神経毒素、0.9ngの神経毒素、1.0ngの神経毒素、1.1ngの神経毒素、1.2ngの神経毒素、1.3ngの神経毒素、1.4ngの神経毒素、1.5ngの神経毒素、1.6ngの神経毒素、1.7ngの神経毒素、1.8ngの神経毒素、1.9ngの神経毒素、2.0ngの神経毒素、2.1ngの神経毒素、2.2ngの神経毒素、2.3ngの神経毒素、2.4ngの神経毒素、2.5ngの神経毒素、2.6ngの神経毒素、2.7ngの神経毒素、2.8ngの神経毒素、2.9ngの神経毒素、3.0ngの神経毒素、3.1ngの神経毒素、3.2ngの神経毒素、3.3ngの神経毒素、3.4ngの神経毒素、3.5ngの神経毒素、3.6ngの神経毒素、3.7ngの神経毒素、3.8ngの神経毒素、3.9ngの神経毒素、4.0ngの神経毒素、4.1ngの神経毒素、4.2ngの神経毒素、4.3ngの神経毒素、4.4ngの神経毒素、4.5ngの神経毒素、5ngの神経毒素、6ngの神経毒素、7ngの神経毒素、8ngの神経毒素、9ngの神経毒素、10ngの神経毒素、などの用量を含んでよい。
【００４６】
いくつかの実施形態において、投与は、約0.1ナノグラム(ng)の神経毒素と20ngの神経毒素との間、約1ngの神経毒素と19ngの神経毒素との間、約2ngの神経毒素と18ngの神経毒素との間、約3ngの神経毒素と17ngの神経毒素との間、約4ngの神経毒素と16ngの神経毒素との間、約5ngの神経毒素と15ngの神経毒素との間、約6ngの神経毒素と14ngの神経毒素との間、約7ngの神経毒素と13ngの神経毒素との間、約8ngの神経毒素と12ngの神経毒素との間、約9ngの神経毒素と11ngの神経毒素との間、などの用量を含んでよい。実施形態において、投与は、約0.1ナノグラム(ng)の神経毒素、0.2ngの神経毒素、0.3ngの神経毒素、0.4ngの神経毒素、0.5ngの神経毒素、0.6ngの神経毒素、0.7ngの神経毒素、0.8ngの神経毒素、0.9ngの神経毒素、1.0ngの神経毒素、1.1ngの神経毒素、1.2ngの神経毒素、1.3ngの神経毒素、1.4ngの神経毒素、1.5ngの神経毒素、1.6ngの神経毒素、1.7ngの神経毒素、1.8ngの神経毒素、1.9ngの神経毒素、2.0ngの神経毒素、2.1ngの神経毒素、2.2ngの神経毒素、2.3ngの神経毒素、2.4ngの神経毒素、2.5ngの神経毒素、2.6ngの神経毒素、2.7ngの神経毒素、2.8ngの神経毒素、2.9ngの神経毒素、3.0ngの神経毒素、3.1ngの神経毒素、3.2ngの神経毒素、3.3ngの神経毒素、3.4ngの神経毒素、3.5ngの神経毒素、3.6ngの神経毒素、3.7ngの神経毒素、3.8ngの神経毒素、3.9ngの神経毒素、4.0ngの神経毒素、4.1ngの神経毒素、4.2ngの神経毒素、4.3ngの神経毒素、4.4 ngの神経毒素、4.5ngの神経毒素、5ngの神経毒素、6ngの神経毒素、7ngの神経毒素、8ngの神経毒素、9ngの神経毒素、10ngの神経毒素、などの用量を含んでよい。
【００４７】
いくつかの実施形態において、投与は、約0.1ナノグラム(ng)の神経毒素と20ngの神経毒素との間、約1ngの神経毒素と19ngの神経毒素との間、約2ngの神経毒素と18ngの神経毒素との間、約3ngの神経毒素と17ngの神経毒素との間、約4ngの神経毒素と16ngの神経毒素との間、約5ngの神経毒素と15ngの神経毒素との間、約6ngの神経毒素と14ngの神経毒素との間、約7ngの神経毒素と13ngの神経毒素との間、約8ngの神経毒素と12ngの神経毒素との間、約9ngの神経毒素と11ngの神経毒素との間、などの１または複数回の注射を含んでよい。
しかしながら、最終的に、投与される毒素の量およびその投与の頻度の両方が、治療責任医師の裁量に委ねられることになり、安全性および毒素によってもたらされる効果の問題と見合うことになる。
いくつかの実施形態において、投与は、１または複数回の注射、例えば、切開部位または１つのしわもしくは複数のしわに実質的に沿った注射を含んでよい。いくつかの実施形態において、投与は、特定のパターン、例えばWパターンおよびXパターン、Zパターン、星形パターン、円形パターン、半円形パターン、正方形パターン、矩形パターン、三日月パターン、またはこれらの組合せの注射を含んでよい。
【００４８】
ヒトにおけるBoNT/Eの作用、安全性および耐性の発症を評価するために、眉間のしわの治療を受けているヒト患者にBoNT/Eを投与した試験を行った。この試験は、実施例１に記載されている。このBoNT/Eは、図５に示すように、５つの注射点において、鼻根筋と皺眉筋に投与された。BoNT/Eは、迅速な作用の開始を有しかつ良好な安全性と忍容性プロファイルを有する眉間のしわの重症度の改善を提供する。
術後疼痛を軽減するのにBoNT/Eの作用の開始と有効性を評価するために、術後疼痛の動物モデルにおいて、BoNT/Eをラットに投与した、別の試験を行った。実施例９に記載されているように、麻酔されたラットにおいて、１cm長手方向の切開は、後肢の足底面の皮膚、筋膜および筋肉を通って行われた。損傷していない足を対照足として使用した。手術の24時間後に、切開は、電子Von Fret試験を用いて定量化された機械的異痛を生じた。３つの用量のBoNT/Eを、手術の24時間前に損傷した足と対照足の両方の後肢に投与した。手術の24時間後の電子Von Fret試験で疼痛閾値を評価した。１つの群において、モルヒネは、達成可能な最大疼痛低減を評価するために使用された。その結果を図８に示し、ビヒクル処置された群と比較して、増加(＋)または減少(−)として表される。BoNT/Eは、図８に示すように、BoNT/Eの疼痛低減能を示す疼痛閾値を有意に増加させた。
【００４９】
放出制御系は、本明細書で記述の実施形態において、神経毒素を、所定の速度で特定の時間にわたり、in vivo送達するために、使用されてよい。一般に、放出速度は系の設計により決定され、pHなどの環境条件にほとんど依存しないことがある。薬物を数年の期間にわたって送達できる放出制御系が知られている。これに反して、持続放出系は、典型的には、薬物を24時間以内に送達し、環境因子が放出速度に影響を及ぼすことがある。したがって、埋め込まれた放出制御系(「埋め込み錠」)からの神経毒素の放出速度は、埋め込み担体物質および薬物自体の生理化学的特性の関数である。典型的には、埋め込み錠は、宿主奏功をほとんどまたは全く誘発しない不活性物質で作られる。
放出制御系は、担体に組み込まれた神経毒素を含んでよい。この担体は、ポリマーまたはバイオセラミック物質であってよい。この放出制御系は、患者の身体の選択された部位に注射、挿入または埋め込みされてよく、神経毒素が埋め込み錠により、所望の治療効果を与える方法および濃度で放出される間、長期間にわたり、そこに留まる。
ポリマー物質は、拡散、化学反応または溶媒活性化によって、ならびに磁力、超音波または温度変化因子の影響を受けて神経毒素を放出できる。拡散は、リザーバーまたはマトリックスからであってよい。化学的制御は、ポリマーの分解またはポリマーからの薬物の切断に起因してよい。溶媒活性化は、ポリマーの膨潤または浸透圧効果を含んでよい。
【００５０】
埋め込み錠は、所望の量の安定化した神経毒素を塩化メチレンに溶解した適切なポリマーの溶液に混合することによって調製してよい。この溶液は、室温で調製してよい。次いで、この溶液を、ペトリ皿に移し、真空デシケーター中で塩化メチレンを蒸発させてよい。所望する埋め込み錠の寸法によって、したがって配合された神経毒素の量によって、神経毒素配合の乾燥埋め込み錠の適切な量を型の中で、約8000p.s.i.(551.6バール)で５秒間、または3000p.s.i.(206.85バール)で17秒間、圧縮して、神経毒素を被包した埋め込みディスクを形成する。
【００５１】
好ましくは、使用される埋め込み物質は、実質的に、無毒性、非発癌性、および非免疫原性である。適切な埋め込み物質には、ポリ(2-ヒドロキシエチルメタクリレート)(p-HEMA)、ポリ(N-ビニルピロリドン)(p-NVP)+、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、ポリ(アクリル酸)(PM)、ポリジメチルシロキサン(PDMS)、エチレン−酢酸ビニル(EVAc)コポリマー、ポリビニルピロリドン/メチルアクリレートコポリマー、ポリメチルメタクリレート(PMMA)、ポリ(乳酸)(PLA)、ポリ(グリコール酸)(PGA)、ポリ無水物、ポリ(オルトエステル)、コラーゲンおよびセルロース誘導体およびバイオセラミックス、例えばヒドロキシアパタイト(HPA)、リン酸三カルシウム(TCP)、およびリン酸アルミノカルシウム(ALCAP)などのポリマーが含まれる。乳酸、グリコール酸およびコラーゲンが、生分解性埋め込み錠を作製するのに使用されてよい。
埋め込み物質は、生分解性または生体浸食性であってよい。生体浸食性埋め込み錠の利点は、患者から取り除く必要がないことである。生体浸食性埋め込み錠は、生理活性物質の膜またはマトリックス放出のいずれかに基づいてよい。PLA-PGAから調製した生分解性マイクロスフィアが、皮下または筋肉内投与で知られている。
【００５２】
開示された実施形態を実施するためのキットもまた、本開示により包含される。このキットは、30ゲージ以下の針および対応する注射器を含んでよい。このキットはまた、ボツリヌE型毒素組成物などのクロストリジウム神経毒素組成物をも含む。この神経毒素組成物は、注射器に入って提供されてよい。この組成物は、針を介して注射可能である。これらのキットは、注射器および針の寸法ならびにそこに含まれる注射可能な組成物の容量に基づき、次にはこれらのキットが治療のために設計される特定の欠陥に基づいて、種々の形態に設計される。
【実施例】
【００５３】
以下の非限定的実施例は、代表的な実施形態のより完全な理解を容易にするために例証のみを目的として提供される。本実施例は、本発明の明細書に記述された実施形態のいかなるものも限定すると解釈されるべきではない。
【００５４】
実施例１
眉間のしわを治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
無作為化、二重盲検、プラセボ対照、昇順用量コホート、ヒトにおけるフェーズ2a試験を行い、開示された速効性E型組成物の単一の治療サイクルの安全性および有効性を、顔をひそめた眉間のしわを有する対象において評価した。この試験は、このプロトコールおよびすべての適用可能な連邦および州規則に準拠して行われた。ボツリヌス神経毒素サブタイプE(BoNT/E、「EB−001」)からなる組成物を対象に投与した。このファーストインヒューマン、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、昇順用量コホート試験は、EB−001(本明細書で開示のボツリヌスE型組成物)の投与(N＝35)またはプラセボ(N＝7)の投与を受けた42名の対象を登録した。有効性主要アウトカムは、最大限に顔をしかめた時のGL重症度において、治験医師の評価で２グレード(IR−2)の改善を示した対象の割合であった。安全性の評価は、有害事象(AE)、研究室試験、および身体診察を含んだ。IR−２奏功は、第３コホート(EB−001)を始めにして観察され、より高用量でより高率であった。臨床効果の発現開始は、24時間以内であり、最高用量に関して、14日間と30日間の間の範囲の持続期間を伴った。AE発生率は低く、最もよく見られたのは、軽度から中等度の頭痛であった。重篤なAEまたは眼瞼下垂は存在せず、他の安全性評価において、臨床的に有意な変化はなかった。
GLにおけるこの臨床試験において、EB−001は、好ましい安全性および忍容性、ならびに、最高用量で、奏効率80％の用量依存的有効性を示した。EB−001の最大臨床効果は、24時間以内に認められ、14日間と30日間の間持続した。この区別されるEB−001のプロファイルは、効果の迅速な開始および短い持続性が望ましい審美的および治療的応用に向けての開発を裏付ける。
【００５５】
ボツリヌス神経毒素は、アセチルコリンのシナプス前放出を抑制し、自然界で最も強力な分子のうちに入る。筋肉に注射した場合、ボツリヌス神経毒素は、神経筋伝達を抑制し、用量依存性の局所筋弛緩を生み出す。血清型AおよびBを含む、精製ボツリヌス神経毒素は、注射可能な薬物として開発され、種々の神経筋病態を治療するために広く使用されている。ボツリヌス神経毒素血清型Eは、これまで臨床用途には開発されていなかった新規の血清型である。ボツリヌス毒素E型は、全てのボツリヌス神経毒素の中で、作用の最も迅速な開始および最短の持続期間を有する。E型は、図１に示すように、ジスルフィド結合で連結された100kDa重鎖および50kDa軽鎖の２つのタンパク質鎖からなる、A型と類似のドメイン構造を有する。E型は、A型と同じシナプス前小胞タンパク質(シナプトソーム関連タンパク質25)を切断することによって、神経筋伝達を抑制するが、A型とは切断部位が異なる。運動軸索上の２つの結合部位は、ボツリヌス神経毒素によって、神経細胞の高親和性の認識を媒介する。結合は、先ず細胞表面のガングリオシドによって、次いで特異的タンパク質受容体により媒介される。これらの受容体は、神経筋結合部において、運動軸索末端に認められる。ボツリヌス毒素A型およびE型はどちらも、特異的受容体のシナプス性小胞タンパク質２と結合することが示されており、これら２つの血清型のみがこの受容体を共通して有する。本試験は、GLの対象において、昇順用量のボツリヌス毒素E型の安全性および有効性を評価する初の臨床試験であった。
【００５６】
本試験は、EB−001の安全性および有効性のファーストインヒューマン評価であり、中等度から重度のGLの治療に重点を置いていた。EB−001は、注射用液剤として処方された独自の精製形態のボツリヌス毒素E型である(Bonti, Inc., Newport Beach, California, USA)。本試験は、２つの専門臨床センター(Steve Yoelin, MD Medical Associates, Newport Beach, California, USA; Center for Dermatology Clinical Research, Fremont, California, USA)において行われた、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、昇順用量コホート試験であった。本試験は、施設内審査委員会(Aspire Institutional Review Board, Santee, California, USA)により認可され、ヘルシンキ宣言により設定されたガイドラインに従って実施された。書面によるインフォームドコンセントが全対象から、試験参加前に受領された。
【００５７】
総計42名の健常な毒素未投与の18歳から60歳の男性および女性対象が試験に登録された。各対象の参加は、約６週間継続することになっていた。主要な選択基準は：最大限に顔をしかめた時に中等度から重度と評価される左右対称なGLの存在、自らの顔のしわを正確に評価するのに眼鏡なしで充分な視力(コンタクトレンズの使用は許容される)、および試験の要件に従う能力、であった。主要な除外基準は：何らかの非制御の全身性疾患またはその他の病状、ボツリヌス神経毒素への曝露により対象のリスクを高めるおそれがある何らかの病状(診断された重症筋無力症、イートンランバート症候群、筋萎縮性側索硬化症、または神経筋機能を妨げる他の何らかの病状を含む)、現在または以前のボツリヌス神経毒素治療、ボツリヌス神経毒素に対する既知の免疫処置または過敏症、試験前３から12カ月以内の事前に定められた皮膚科学的手技(非侵襲性の表面修復、顔の美容手技、外用/経口レチノイド治療など)、および眼窩周辺の手術または治療歴であった。女性は、妊娠中、授乳中、または妊娠を予定している場合は、登録されなかった。妊娠可能な女性パートナーがいる男性は、投与後の３カ月間、二重の避妊法を使用することに同意した場合のみ、登録された。
【００５８】
スクリーニングにおいて、対象の人口統計学的特性、病歴、および前治療薬および併用薬が記録され、アルコール/薬物選別が行われた。標準化された顔面写真撮影が、治療前のベースライン時、毎回のフォローアップ来診の際、および試験終了時に行われたが、写真は、有効性の評価には使用されなかった。
【００５９】
７つのコホート(１コホート当たり６名の対象)が登録され、昇順用量のEB−001またはプラセボを５：１の割合で投与された。このファーストインヒューマン試験における最高推奨開始用量(安全係数10−fold)が、前臨床安全性および毒性試験(データ未発表)からの無毒性量に基づいて設定された。ここから、基本用量(コホート１)が算出され、かつ準有効(sub−efficacious)用量が決定され、コホート２から７が、基本用量を、それぞれ、３、９、12、16、21および28回投与された。これは、EB−001の準有効用量から最大有効用量に相当していた。総用量を５つの注射部位に等しい容量で(各部位あたり0.1mLを、鼻根筋、左右の内側皺眉筋、および左右の外側皺眉筋に)標準化された方法で投与した(図５を参照)。外側皺眉筋への注射は、眼窩上隆起から上方へ約１cm、間隔を開けた。EB−001は、５mLバイアル入りで、注射用無菌溶液として供給された。プラセボは、EB−001を含まない同型のバイアル入りで供給された。
【００６０】
各対象は、スクリーニング(−３０日から−１日)、ベースライン/注射(第０日)、第１、２、７、14日、および第30日(試験終了日)、および第42日(最終安全性フォローアップ)における来診を完了した。
【００６１】
安全性は、有害事象(AE)、研究室試験、心電図(ECG)、身体診察、バイタルサイン(脈拍数、呼吸数、および血圧)、尿妊娠検査(妊娠可能性のある女性が対象)、およびボツリヌス神経毒素の拡散可能性を評価するための集中的神経学的検査によって評価した。治療下で発現した有害事象(TEAE)は、試験治療への曝露後に始まったかまたは重症度を悪化させた何らかのAEとして定義した。AEおよびTEAEは、Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA, バージョン19.0)を用いて器官別大分類および基本用語別に集約した。重篤なAE(SAE、または医薬品重症度に関する規制基準を満たしたAE)、およびAEに起因する中止もまた評価した。AEの重症度は、軽度、中等度、重度、または生命を脅かす事象として記録した。各用量コホートへの登録の前に、安全性データ審査委員会が開催され、以前のコホートからの全ての安全性データを解析した。
【００６２】
スクリーニング時、ベースライン時、および第１、２、７、14および30日に、対象のGLを、最大限に顔をしかめた時および安静時に、顔面しわ尺度(FWS)を用いて評価した。評価は治験医師および対象により達成された。FWSは、顔のしわの重症度の評価に関して使用される広く受け入れられている方法である。本試験において、GLの重症度を示す４段階尺度は、次の通りであった：０＝なし、１＝軽度、２＝中等度、３＝重度。対象は、治験医師のFWS評価に基づき少なくとも２グレードの改善(減少)(IR−2)を達成した場合、治療奏効者とみなされた。主要有効性変数は、第30日までのいずれかのベースライン後の来診における最大限に顔をしかめた時のIR−2奏効者の割合であった。対象の追加の有効性評価項目は、第１、２、７、14、または30日において、治験医師が評価したFWSグレードで、なしまたは軽度(来診時ごとに解析)を達成した奏効者の割合であった。
【００６３】
２つの解析母集団が、安全性集団および有効性集団に、予め指定された。プラセボ投与を受けた対象は、全ての解析のためにプールした。安全性集団には、試験治療を受け、その後少なくとも１回の安全性評価を受けた全ての対象が含まれた。全てのTEAEおよびSAEが治療群ごとに集約された。研究室試験、ECG、身体診察、バイタルサイン、尿妊娠検査、および集中的神経学的検査を含む、全ての安全性パラメーターが、治験医師により審査され、臨床的有意性が評価された。有効性集団は、少なくとも１用量の試験治療を受け、かつ少なくとも１回のベースライン後有効性評価値がある全ての無作為化された対象として定義されるmodified intent-to-treat (mITT)集団であった。人口統計学的およびベースライン特性の解析は、mITT集団に関して行われた。病歴は、安全性集団に基づいており、MedDRAを用いてコード化し、器官別大分類および基本用語別に集約した。前治療薬および併用薬は、安全性集団に基づいており、WHO(World Health Organization)の解剖治療化学分類法(Anatomical Therapeutic Chemical classification)インデックスを用いてコード化し、薬物クラスおよび治療群ごとに集約した。有効性解析は、mITT集団を用いて行った。FWSグレードは、頻度カウントおよび奏効率(％)を用いて、治療および試験日ごとに集約した。各EB−001コホートのIR−2奏効者の割合対(プールされた)プラセボを比較する解析は、有意性レベル0.05のフィッシャーの正確検定を用いて行った。
【００６４】
試験のために選別された59名の対象者のうち、43名が７つのコホートのうちの１つに登録された。１名の対象は、治療を受けず、結果的に、42名の対象が、mITTおよび安全性集団に含まれた(EB−001治療35名およびプラセボ処置７名)。１名の対象はフォローアップから離脱し、41名の対象が試験をやり遂げた。対象の平均(範囲)年齢は、EB−001投与(プールされた)対象対(プールされた)プラセボ群対象で、それぞれ、47.9(22〜60)歳および50.4(32〜57)歳であった。対象の大部分は、女性であり(EB−001＝91.4％、プラセボ＝85.7％)、白人であった(どちらの群でも71.4％)。最大限に顔をしかめた時の治験医師評価によるGLのベースライン平均値(標準偏差[SD])は、EB−001群およびプラセボ群で、それぞれ、2.6(0.50)および2.9(0.38)であった。EB−001群およびプラセボ群は、実質的な群間差はなく、良くバランスされていた。
【００６５】
第30日までのいずれかのベースライン後の来診時における最大限顔をしかめた時のGLの重症度に対してIR−2奏功を達成したmITT集団中の対象の割合を用量コホートごとに図６に示す。コホート３において、40％の対象がIR−2奏効者であった。この奏効率は、全てのより高用量コホートにおいては、これと同等かまたはこれよりも高く、コホート６および７は、IR−2奏効者が80％であった。コホート６および７は、プラセボに対して有意により高いIR−2奏効者のパーセンテージを示した(Ｐ＝0.046)。図７は、第30日までのいずれかのベースライン後来診時における最大限顔をしかめた時の治験医師評価によるFWSグレードがGLなしまたは軽度GLであった各コホート中の対象の割合を集約している。コホート２から７(両端を含む)は、プラセボに対し奏効者のパーセンテージがより高く、コホート３以上では60％から100％の率を達成した。コホート３から７において、第１、２、および/または７日において、奏功なしまたは軽度の奏功が最も多く観察された。奏効者１名(20％)が観察されたのは、コホート３、５、６および７において、第14日、コホート３および５において、第30日であった。安全性の結果は、この集団において、IM注射として投与された、全ての評価された用量のEB−001の安全性を裏付ける。神経学的検査、ECG、身体診察、または研究室試験において、ベースラインからの臨床的に有意な変化は、いずれの対象においても観察されなかった。
【００６６】
EB−001治療を受けた５名の対象が、TEAEを報告したが、プラセボ群には報告した者はいなかった。SAEは報告されず、試験の中止に至るようなTEAEはなかった。全てのTEAEは、重症度において、軽度または中等度であった。咽頭痛およびインフルエンザ様症状の事象は、治療とは無関係であるとみなされた。３名の対象が頭痛のTEAEを報告し、そのうち１名は、治療に関連するとみなされた。頭痛の発症において、用量関連性の増加はなかった。眼瞼下垂の発症または毒素の拡散に関連すると思われる他のTEAEはなかった。
【００６７】
我々の知る限りでは、これは、何らかの審美的または治療的使用におけるボツリヌス毒素E型製品の初の制御された臨床試験である。IM投与された新規の精製形態のボツリヌス毒素E型であるこのEB−001のファーストインヒューマン試験は、EB−001の安全性、忍容性、および有効用量範囲を評価するという目的を果たした。EB−001のより高い用量を投与されたコホートにおいて、治療奏効者の割合がより大きく、用量反応が認められた。IR−2奏功は、コホート３を始めとして観察され、より高用量のコホートにおいて増加し、EB−001の有効用量範囲は、コホート４から７において、使用された用量であり得ることを示唆している。コホート６および７は、80％IR−2奏効者を有し、承認されているボツリヌス毒素A型製品と同様の奏効率であった。FWSグレードで、なしまたは軽度を達成した対象は、コホート２を始めとして観察された。効果の開始に関して、治療奏功は、早くも投与後24時間に観察され、これは、ボツリヌス毒素E型はA型よりも迅速な開始を有することを示唆する先の報告を裏付ける。
【００６８】
なしまたは軽度の評価を受けた奏効者の割合として定義された効果の持続期間に関して第14日までに、高い方の用量の５つのコホートの大部分において、１名の対象が、また第30日までに、高い方の用量の５つのコホートのうちの２つにおいて、１名の対象が観察された。EB−001の全ての用量が、局所注射部位反応を起こすことなく、良好な忍容性を示した。SAEまたは重篤なTEAEは報告されず、またTEAEによる中止はなかった。最もよく見られた頭痛というTEAEは、重症度において、軽度または中等度であり、その他の治療関連AEはなかった。いずれの用量レベルにおいても眼瞼下垂の発症はなく、毒素の拡散に関連すると思われる事象はなかった。したがって、本試験において、臨床的安全性および忍容性プロファイルは、好ましいと思われる。EB−001の有効性および安全性プロファイルは有望であり、GLの治療および他の顔面への審美的用途における独特な治療選択肢としてのEB−001の可能性を裏付ける。迅速な開始は、予期せぬ社会的または職業的出来事の前に顔のしわの迅速な治療を求めている人々の満たされていないニーズを満足させることができる。効果の限定された持続期間は、ボツリヌス神経毒素治療を初めて使用しようと考えている人々にとって有益であり得、また長期間の約束をするのは不本意である。EB−001治療は人々に、ボツリヌス毒素A型製品の効果持続期間12週間と比較して、より短い持続期間にわたる審美的効果の評価を可能にするであろう。GLの対象におけるこの初めての臨床試験において、EB−001は全てのコホートにおいて、好ましい安全性および忍容性を示した。７つのコホートのうち５つが、プラセボと比較して、数値的に高い奏効率を示した。これは、GLの重症度低減におけるEB−001の有効性を裏付ける。２つの最高用量は、承認されているボツリヌス毒素A型製品と同様の80％の奏効率をもたらした。A型製品の既知のタイムコースとは対照的に、EB−001の臨床効果は24時間以内に認められ(開始)、かつ14〜30日間継続した(持続期間)。この区別される臨床プロファイルは、効果の迅速な開始および短い持続時間が望ましい顔面への審美的使用および重要な治療的使用のためのEB−001の将来の進歩を裏付ける。
【００６９】
総用量は下記のように配分された：
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【００７０】
実施例２
細菌壊死性病変を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
60歳の女性は、彼女の脚に細菌壊死性病変を呈する。壊死組織切除処置の12時間前に、ボツリヌスE型をこの病変の周囲に注射する(６つの均等に間隔を置いた注射部位；各部位に5Uが注射された)。このボツリヌスE型は、この病変の周りの筋肉活性を減少させ、CGRPの神経放出を遮断する。1週間以内に、この病変は治癒する。
【００７１】
実施例３
細菌壊死性病変を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
30歳の女性は、腕に細菌壊死性病変を呈する。診断の直後に、ボツリヌスE型をこの病変の周囲に注射する(15の均等に間隔を置いた注射部位；各部位に3Uが注射された)。このボツリヌスE型は、この病変の周りの筋肉活性を減少させ、CGRPの神経放出を遮断する。1週間以内に、この病変は治癒する。
【００７２】
実施例４
細菌壊死性病変を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
14歳の少年は、彼の腕に細菌壊死性病変を呈する。診断の直後に、ボツリヌスE型をこの病変の周囲に注射する(15の均等に間隔を置いた注射部位；各部位に3Uが注射された)。このボツリヌスE型は、この病変の周りの筋肉活性を減少させ、CGRPの神経放出を遮断する。1週間以内に、この病変は治癒する。
【００７３】
実施例５
細菌壊死性病変を治療するためのボツリヌス毒素E型およびA型の使用
24歳の女性は、彼女の腹部に細菌壊死性病変を呈する。診断直後に、ボツリヌスE型およびA型の組合せを、この病変の周囲に注射する(12の均等に間隔を置いた注射部位；各部位に4Uが注射された)。このボツリヌスは、この病変の周りの筋肉活性を低下させ、CGRPの神経放出を遮断する。1週間以内に、この病変は治癒する。
実施例５
細菌壊死性病変を治療するためのボツリヌス毒素E型およびA型の使用
24歳の女性は、彼女の腹部に細菌壊死性病変を呈する。診断直後に、ボツリヌスE型およびA型の組合せを、この病変の周囲に注射する(12の均等に間隔を置いた注射部位；各部位に4Uが注射された)。このボツリヌスは、この病変の周りの筋肉活性を低下させ、CGRPの神経放出を遮断する。1週間以内に、この病変は治癒する。
【００７４】
実施例６
片頭痛を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
慢性片頭痛に罹患している40歳の男性は、頭蓋の周りにボツリヌスE型を注射する(20の均等に間隔を置いた注射部位；各部位に2Uが注射された)。この患者は、翌月には片頭痛がない。
【００７５】
実施例７
灼熱痛を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
14歳の少女は、腕に2"×2"(5cm×5cm)の３度熱傷を呈する。ボツリヌスE型を、各１単位の合計10回の注射として熱傷の周囲に投与する。痛み軽減は48時間以内に感じられ、４週間持続する。
【００７６】
実施例８
炎症を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
55歳の男性は、局所的な膨潤を伴う、下肢の感染を呈する。0.5ng/注射の20回の注射を、この患者の下肢に投与する。36時間以内に、炎症は減少する。
【００７７】
結びとして、本明細書の態様は、具体的な実施形態を参照することにより強調されるが、これらの開示された実施形態が本明細書で開示の主題の原理の例証となるのみであることを当業者であれば容易に認識するであろうことを理解されたい。したがって、開示された主題は、本明細書に記載の、特定の方法、プロトコール、および/または試薬などに限定されるものでは全くないことが理解されるべきである。したがって、開示された主題に対する種々の修正または変更、あるいは代替構成が、本発明の明細書の精神から離れることなく本明細書の教示に従ってなされてよい。最後に、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記述することのみを目的としており、請求項によってのみ定義される本開示の範囲を限定することは意図されていない。したがって、本開示の実施形態は、示されおよび記述された全くその通りの実施形態に限定されるものではない。
【００７８】
実施例９
術後疼痛を治療するためのボツリヌス毒素E型の使用
術後疼痛を治療するためのBoNT/Eの単一局所投与の効果は、Brennanモデルとして知られる術後疼痛のラットモデルにおいて評価した。簡単に言えば、このモデルは、外科的切開後の増加した機械的感受性の評価を可能にする。麻酔されたラットにおいて、１cm縦方向の切開は、後肢の足底面の皮膚、筋膜および筋肉を介して行われた。対照の足は、外科的損傷がない足を指す。手術の24時間後に、切開は、電子Von Freyテストを用いて定量化された機械的アロディニアを生じた。３用量のBoNT/Eを、手術の24時間前に、損傷した足および対照の足の両方の後肢に投与した。手術の24時間後の電子Von Freyテストで疼痛閾値を評価した。１つの群において、達成可能な最大疼痛低減を評価するためにモルヒネを使用した。その結果を図８に示し、ビヒクル処置された群と比較して、増加(＋)または減少(−)として表す。図８を参照すると、対照の足および損傷した足の両方について、(1)第１の棒グラフは、ビヒクル処置された群について得られたデータを示し、(2)第２、第３および第４の棒グラフは、それぞれ0.75ng/kg、１ng/kgおよび２ng/kgの増加濃度で、BoNT/E処置された群について得られたデータを示し、(3)最後の棒グラフは、モルヒネ処置された群で得られたデータを示す。手術後疼痛のためのこのBrennanラットモデルにおいて、治療が有効である場合、疼痛閾値は、対照の損傷されていない足の値に近づく。図８に示すように、モルヒネは、疼痛閾値を対照の損傷されていない足の痛みに完全に減少させることができた。BoNT/E治療された足は、用量依存性疼痛低減を示した。
【００７９】
筋弛緩に対するBONT/Eの効果も、筋弛緩のDASモデルにおいて評価した。簡単に言えば、このDASアッセイは、後肢の上昇(テールリフト)に応答して、マウス後肢指外転(「驚愕」、「つま先の広がり」)行動反射に対するBoNT調製物の効果を調査する。麻痺の程度は、マウスの後肢の足の指を外転させる能力を採点することによって測定する。外転の損失は、ゼロから４までスコアされ、４は指を外転させる能力の全損を表し、ゼロは指を外転させる完全な能力を表す。上記で説明したように、BoNT/Eで処置された損傷した足と損傷していない足についてこのDASアッセイを行った。用量応答プロファイルがBoNT/E処置群で観察され、DAS応答により測定された筋弛緩活性を示すことが見出された(データは示されていない)：(1)BoNT/Eは、0.75ng/kgから２ng/kgの用量でDASアッセイにおいて、用量依存性効果を示した、(2)用量にかかわらず、臨床効果の開始は約12時間までであった、(3)最大臨床効果の開始は、投与量にかかわらず約24時間までであった、(4)効果の持続時間は、最高投与量で72時間まで、および２回の低用量で48時間であった。BoNT/Eによって、得られる筋脱力のより短い持続時間は、術後のより迅速な回復およびリハビリを可能にすることができる。
【００８０】
ある特定の実施形態は、本明細書に記述されており、本明細書に記述の方法および装置を実施するための発明者が知る最良の態様を含む。当然のことながら、これらの記述された実施形態の変形例は、前述の説明を読めば、当業者には明らかになる。したがって、本開示は、適用法により許容されるように、本明細書に添付の請求項に列挙する主題の全ての変更および均等物を含む。さらに、前述の実施形態の全ての可能な変形例におけるいかなる組合せも、本明細書で特段の指示がない限りあるいは文脈によって特に明らかに否定されない限り、開示により包含される。本明細書で開示の具体的な実施形態は、語からなるあるいは基本的に語からなることを用いる請求項において、さらに限定されてよい。請求項において使用されるとき、出願としてであれ、補正による追加であれ、移行用語「consisting of(からなる)」は、請求項において、明記されないいかなる要素、ステップ、または成分をも除外する。移行用語「consisting essentially of(から基本的になる)」は、請求項の範囲を、明記された物質またはステップならびに基本的および新規の特徴に実質的に影響を与えることのないものに限定する。そのように主張された本開示の実施形態は、本明細書において、本質的にまたは明確に記述され、可能にされる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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