(57)【要約】  本発明は、水溶性抗がん剤であるペメトレキセドを含む経口用医薬組成物及びその製造方法に関し、より詳細には、経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体とペメトレキセドのイオン結合による複合体を形成し、これを薬剤学的添加剤と混合した後、カプセル或いは錠剤の形態に圧縮するか、水中油中水型（water-in-oil-in-water、ｗ／ｏ／ｗ）の多重乳化ナノエマルジョンの内水相に含めて水溶性抗がん剤であるペメトレキセドの経口生体利用率を向上させることによって、現在注射剤の剤形としてのみ投与されているペメトレキセドを経口投与が可能な剤形に製造して注射剤使用の不便と問題を改善し、患者の順応度の改善及び医療費の削減に貢献できる経口用医薬組成物に関する。
2021503494.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペメトレキセド、正電荷を呈する胆汁酸誘導体及び分散剤からなるイオン結合複合体を含むことを特徴とする経口用医薬組成物。
【請求項２】
前記胆汁酸誘導体がＮα−デオキシコリル−Ｌ−リシル−メチルエステル（ＤＣＫ）であることを特徴とする請求項１に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物。
【請求項３】
前記胆汁酸誘導体は、ペメトレキセド１ｍｏｌに対して、０．５〜５ｍｏｌで含まれることを特徴とする請求項２に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物。
【請求項４】
前記分散剤がポロキサマ、ポリビニルピロリドン、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）、マンニトール、スクロース、ラクトース、グルコース、トレハロース、グリセロール、フルクトース、マルトース、デキストラン、シクロデキストリン、グリシン、アラニン、リシンからなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする請求項１に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物。
【請求項５】
（ａ）ペメトレキセド及び分散剤混合物に正電荷を呈する胆汁酸誘導体を添加してイオン結合複合体を形成する段階と、
（ｂ）前記イオン結合複合体に薬剤学的添加剤として結合剤、崩壊剤及び希釈剤を混合して顆粒を製造する段階と、
（ｃ）前記顆粒に滑沢剤を添加し、カプセルに充填するか、錠剤の形態に圧縮する段階と、
を含むことを特徴とするペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項６】
（ａ）ペメトレキセド及び分散剤混合物に正電荷を呈する胆汁酸誘導体を添加してイオン結合複合体を形成する段階と、
（ｂ）前記イオン結合複合体溶液に１次界面活性剤と１次補助界面活性剤を添加する段階と、
（ｃ）前記（ｂ）段階の混合物を１次油相に分散させて油中水型（water-in-oil、ｗ／ｏ）１次ナノエマルジョンを製造する段階と、
（ｄ）前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンに２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物を添加して水中油中水型（water-in-oil-in-water、ｗ／ｏ／ｗ）２次ナノエマルジョンを製造する段階と、
を含むことを特徴とするペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項７】
前記１次油相はシリコンオイル、エステル系オイル、ハイドロカーボン系オイル、プロピレングリコールモノカプリレート（Ｃａｐｒｙｏｌ  ９０）、プロピレングリコールジカプリロカプレート（Ｌａｂｒａｆａｃ  ＰＧ）、オレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ１９４４  ＣＳ）、ラウロイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１３０  ＣＳ）、リノレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１２５  ＣＳ）、中鎖トリグリセリド（Ｌａｂｒａｆａｃ）、オレイン酸、ステアリン酸、グリセリルベヘネート（Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ  ８８８）、グリセロールモノステアレート及びヒマシ油からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
前記１次及び２次界面活性剤は、互いに独立してポロキサマ（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）及びソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項９】
前記１次及び２次補助界面活性剤は、互いに独立してジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ）、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１０】
前記ｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョン内の１次油相は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１１】
前記１次界面活性剤と１次補助界面活性剤の混合物及び２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１２】
前記１次及び２次補助界面活性剤は、それぞれ１次及び２次界面活性剤に対して互いに独立して１：０．１〜１：１０の重量比で混合されることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
前記分散剤は、ペメトレキセド１重量部に対して、０．１〜１００重量部で含まれることを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１４】
前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンは、内水相に５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）又はロイコボリンの中から選択される親水性活性成分を更に含むことを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【請求項１５】
前記（ｄ）段階でｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンは、１次油相に難溶性抗がん剤、クルクミン、クェルセチン、クルクミン又はクェルセチンを活性成分として含有する天然抽出物、及びこれらの混合物の中から選択される脂溶性活性成分を更に含むことを特徴とする請求項６に記載のペメトレキセドを含む経口用医薬組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水溶性活性物質であるペメトレキセドと経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体のイオン結合による複合体を含む経口用医薬組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペメトレキセド（pemetrexed、ＰＭＸ）は、葉酸の細胞内の主な移動通路である還元型葉酸キャリア（reduced folate carrier；ＲＦＣ）を介して細胞内に流入した後、ホリルポリグルタミン酸シンテターゼ（folylpolyglutamate synthetase；ＦＰＧＳ）によりポリグルタメート（polyglutamate）誘導体に活性化されてチミジル酸シンターゼ（thymidylate synthase；ＴＳ）とジヒドロ葉酸レダクターゼ（dihydrofolate reductase；ＤＨＦＲ）を標的とすることが知られている。
【０００３】
現在、ペメトレキセドは、アリムタ（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））という商品名として開発され、悪性胸膜中皮腫の治療及び非小細胞肺がんの治療剤として発売されている。アリムタは、投与前に再構成しなければならない凍結乾燥製剤の形態、即ち患者に投与時に０．９％塩化ナトリウム溶液で再構成し、最終的に０．９％塩化ナトリウム溶液で希釈（最終０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度）しなければならない凍結乾燥粉末（１００ｍｇ又は５００ｍｇ）状の剤形として発売されている。
【０００４】
現在、ペメトレキセドは注射剤としてのみ患者に投与されており、凍結乾燥製剤の形態で、患者に投与する直前に注射用水、グルコース溶液又は０．９％塩化ナトリウム溶液で希釈して用いなければならない。しかし、凍結乾燥工程は複雑であり、製造コストが多くかかり、更に凍結乾燥した製品を用いるためには再構成が必要である。しかし、このような再構成過程でペメトレキセドの損失、沈殿の発生、再構成時の不適な粒子の生成、汚染への露出の危険性などの問題が発生するおそれがあり、特に汚染問題は抗腫瘍物質の毒性のため、非常に深刻である。
【０００５】
近年、経口投与による坑がん治療法は、患者の通院後の注射剤投与の不便を最小化し、自宅で行われることができ、これにより患者の服用の利便性及び暮らしの質を向上させることができることから注目されている。また、長時間に渡って血液中の薬物濃度を維持させて、がん細胞に抗がん剤を低い濃度で長期間露出させることによって薬物の効果を維持し、副作用を最小化することで、がんの再発及び転移を防止するための予防目的の慢性治療法であって、抗がん剤の適用を容易にすることができる。
【０００６】
しかし、抗がん剤の経口薬物伝達は、活性成分の物理化学的特性と生理学的障害によって多くの制約がある。このような障壁には、薬物の全身循環血への移行前の代謝過程、胃腸管における薬物の不安定性、低い溶解性、低い腸管膜透過性、Ｐ糖タンパク質（p-glycoprotein）（ｐ−ｇｐ）による排出が含まれる。
【０００７】
特に、ペメトレキセドは、低い腸管膜透過性のため低い経口生体利用率を示すことから、経口用製剤の使用が制限される。これまでペメトレキセドの非経口投与のために安定性が改善された組成物などに対する研究は行われてきたが、水溶性活性物質であるペメトレキセドを含む経口投与用剤形に関する技術は未だに開発されていないのが現状である。
【０００８】
これにより、本発明者らは、前記ペメトレキセドのような水溶性活性物質を経口投与用剤形に製造するために研究を重ねた結果、ペメトレキセドを分散剤が含まれている溶液で経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体とイオン結合による複合体を形成した後、これを薬剤学的添加剤と混合して顆粒を製造した後にカプセルに充填するか、錠剤の形態に圧縮するか、ｗ／ｏ／ｗ（water-in-oil-in-water）多重乳化ナノエマルジョンの内水相に含めると、薬物の腸管膜透過性が増加し、経口投与用剤形として製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明と関連する文献として、特許文献１及び特許文献２を参考にした。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】韓国公開特許第１０−２０１５−００２０２６６号公報
【特許文献２】韓国特許第１０−１２６０６３６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そこで、本発明は上記事情に鑑みてなされたものであって、その目的は、水溶性抗がん剤であるペメトレキセドを経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体とイオン結合による複合体を形成した後、顆粒状に製造するか、水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ（water-in-oil-in-water））多重乳化ナノエマルジョンの内水相に含めて薬物の腸管膜透過性を増加させ、経口投与用剤形に製造することによって、注射剤使用の不便と問題を改善し、患者の順応度の改善及び医療費の削減に貢献できるペメトレキセドを含む経口用医薬組成物及びその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、前記目的を達成するために、ペメトレキセド及び胆汁酸誘導体が含まれることを特徴とするペメトレキセド経口投与用製剤の組成物を提供する。
【００１３】
本発明によるペメトレキセドを含む経口用製剤は、ペメトレキセド及び薬剤学的に許容可能なその塩と分散剤の混合物に薬物の親油性の向上及び腸管膜の表面に存在する胆汁酸伝達体（bile acid transporter）との相互作用により結合された薬物の促進拡散を増進するための胆汁酸誘導体の経口吸収促進剤とのイオン結合による複合体を製造した後、薬剤学的に使用可能な添加剤と混合して顆粒化して錠剤の形態に圧縮するか、ソフトカプセルに充填されることができる。
【００１４】
前記胆汁酸誘導体は、Ｎα−デオキシコリル−Ｌ−リシル−メチルエステル（Nα-deoxycholyl-L-lysyl-methylester）（ＤＣＫ）であり、ペメトレキセド１ｍｏｌに対して、０．５〜５ｍｏｌで含まれることを特徴とする。
【００１５】
前記分散剤は特に制限されないが、互いに独立してポロキサマ（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ポリビニルピロリドン、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）、マンニトール、スクロース、ラクトース、グルコース、トレハロース、グリセロール、フルクトース、マルトース、デキストラン、シクロデキストリン、グリシン、アラニン、リシンからなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする。
【００１６】
本発明の経口用製剤には希釈剤、結合剤、膨潤剤、滑沢剤などの薬剤学的添加剤が更に含まれることができる。
【００１７】
前記希釈剤は特に制限されないが、例えば乳糖、デキストリン、マンニトール、ソルビトール、澱粉、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム、糖類などを含む。
【００１８】
前記結合剤は特に制限されないが、例えばポリビニルピロリドン、コポビドン、ゼラチン、澱粉、スクロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルアルキルセルロースなどを含む。
【００１９】
前記膨潤剤は、架橋されたポリビニルピロリドン、架橋されたナトリウムカルボキシメチルセルロース、架橋されたカルシウムカルボキシメチルセルロース、架橋されたカルボキシメチルセルロース、ナトリウム澱粉グリコールレート、カルボキシメチル澱粉、ナトリウムカルボキシメチル澱粉、カリウムメタクリルレート−ジビニルベンゼン共重合体、アミロース、架橋されたアミロース、澱粉誘導体、微結晶セルロース及びセルロース誘導体、シクロデキストリン及びデキストリン誘導体からなる群より選択された１つ以上の成分を含む。
【００２０】
前記滑沢剤は特に制限されないが、例えばステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、トウモロコシ澱粉、カルナウバロウ、軽質無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、硬化油、白ロウ、酸化チタン、微結晶セルロース、マクロゴール４０００及び６０００、ミリスチン酸イソプロピル、リン酸水素カルシウム、滑石などを含む。
【００２１】
また、本発明によるペメトレキセドを含む経口用製剤は、（ａ）ペメトレキセドと分散剤の混合物に正電荷を呈する胆汁酸誘導体を添加してイオン結合複合体を形成する段階と、（ｂ）前記イオン結合複合体溶液に１次界面活性剤と１次補助界面活性剤を添加する段階と、（ｃ）前記（ｂ）段階の混合物を１次油相に分散させて油中水型（water-in-oil、ｗ／ｏ）１次ナノエマルジョンを製造する段階と、（ｄ）前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンに２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物を添加して水中油中水型（water-in-oil-in-water、ｗ／ｏ／ｗ）２次ナノエマルジョンがカプセルに充填された形状に製造されることができる。
【００２２】
前記胆汁酸誘導体は、Ｎα−デオキシコリル−Ｌ−リシル−メチルエステル（ＤＣＫ）であり、ペメトレキセド１ｍｏｌに対して、０．５〜５ｍｏｌで含まれることを特徴とする。
【００２３】
前記１次油相はシリコンオイル、エステル系オイル、ハイドロカーボン系オイル、プロピレングリコールモノカプリレート（Ｃａｐｒｙｏｌ  ９０）、プロピレングリコールジカプリロカプレート（Ｌａｂｒａｆａｃ  ＰＧ）、オレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ１９４４  ＣＳ）、ラウロイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１３０  ＣＳ）、リノレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１２５  ＣＳ）、中鎖トリグリセリド（Ｌａｂｒａｆａｃ）、オレイン酸、ステアリン酸、グリセリルベヘネート（Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ  ８８８）、グリセロールモノステアレート及びヒマシ油からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする。
【００２４】
前記ｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョン内の１次油相は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることを特徴とする。
【００２５】
前記１次及び２次界面活性剤は、互いに独立してポロキサマ（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）及びソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする。
【００２６】
前記１次及び２次補助界面活性剤は、互いに独立してジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ）、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることを特徴とする。
【００２７】
前記１次界面活性剤と１次補助界面活性剤の混合物及び２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることを特徴とする。
【００２８】
前記１次及び２次補助界面活性剤は、それぞれ１次及び２次界面活性剤に対して互いに独立して１：０．１〜１：１０の重量比で混合されることを特徴とする。
【００２９】
前記（ａ）段階で単糖類、多糖類、食物繊維、ガム類、界面活性剤又はタンパク質の中から選択される分散剤を更に含むことができ、前記分散剤はペメトレキセド１重量部に対して、０．１〜１００重量部で含まれることを特徴とする。
【００３０】
前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンは、内水相に５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）又はロイコボリンの中から選択される親水性活性成分を更に含むことを特徴とする。
【００３１】
前記（ｄ）段階でｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンは、１次油相に難溶性抗がん剤、クルクミン、クェルセチン、クルクミン又はクェルセチンを活性成分として含有する天然抽出物及びこれらの混合物の中から選択される脂溶性活性成分を更に含むことを特徴とする。
【００３２】
また、本発明は、前記製造方法によって製造されたペメトレキセドを含む経口用医薬組成物を提供する。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によるペメトレキセドを含む経口用医薬組成物は、水溶性抗がん剤であるペメトレキセドを経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体と結合させてイオン結合複合体を形成し、これをｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョンに担持することによって経口生体利用率を向上させることで、経口投与が可能な剤形に製造可能であり、これにより従来の注射剤使用の不便と問題を改善し、患者の順応度を向上させ、医療費の削減に貢献できるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ラットにペメトレキセド５ｍｇ／ｋｇで静脈注入した後、時間に伴う血漿中の薬物濃度を示す。
【図２】ラットにペメトレキセド５０ｍｇ／ｋｇ又は実施例３のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むカプセル或いは錠剤組成物をペメトレキセドとして５０ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、時間に伴う血漿中の薬物濃度を示す。
【図３】ラットにペメトレキセド１０ｍｇ／ｋｇで静脈注入した後、時間に伴う血漿中の薬物濃度を示す。
【図４】ラットにペメトレキセド２０ｍｇ／ｋｇ又は実施例５のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むナノエマルジョン組成物をペメトレキセドとして２０ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、時間に伴う血漿中の薬物濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
以下、本発明によるペメトレキセドを含む経口用医薬組成物及びその製造方法について具体的に説明する。
【００３６】
本発明によるペメトレキセドを含む経口用薬学顆粒組成物の製造方法は、（ａ）ペメトレキセドを分散剤が含まれている溶液に溶解させる段階と、（ｂ）ペメトレキセド溶液に正電荷を呈する胆汁酸誘導体を添加してイオン結合複合体を形成する段階と、（ｃ）イオン結合複合体溶液を乾燥させる段階と、（ｄ）前記乾燥物に薬剤学的添加剤として結合剤及び希釈剤を混合して顆粒を製造する段階と、（ｅ）前記顆粒に滑沢剤を添加し、カプセルに充填するか、錠剤の形態に圧縮する段階と含む。
【００３７】
また、本発明によるペメトレキセドを含む経口用薬学エマルジョン組成物の製造方法は、（ａ）ペメトレキセドと分散剤が含まれている溶液に正電荷を呈する胆汁酸誘導体を添加してイオン結合複合体を形成する段階と、（ｂ）前記イオン結合複合体溶液に１次界面活性剤と１次補助界面活性剤を添加する段階と、（ｃ）前記（ｂ）段階の混合物を１次油相に分散させて油中水型（water-in-oil、ｗ／ｏ）１次ナノエマルジョンを製造する段階と、（ｄ）前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンに２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物を添加して水中油中水型（water-in-oil-in-water、ｗ／ｏ／ｗ）２次ナノエマルジョンを製造する段階とを含む。
【００３８】
前記ペメトレキセドは親水性であり、負電荷を呈する活性物質であって、ペメトレキセド水溶液に正電荷を呈する経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体を添加してイオン結合による複合体を形成する。
【００３９】
前記胆汁酸誘導体は、水溶液相で正電荷を呈する両親媒性物質であって、Ｌ−リシンとデオキシコール酸を化学的に結合したＮα−デオキシコリル−Ｌ−リシル−メチルエステル（ＤＣＫ）であることが好ましい。また、ペメトレキセド１ｍｏｌに対して、０．５〜５ｍｏｌで含まれることが好ましく、より好ましくは１〜２ｍｏｌで含まれることができる。
【００４０】
前記ＤＣＫは経口吸収促進剤としての役割を果たし、水溶液の状態で正電荷を呈し、負電荷を呈する親水性活性成分とイオン結合により複合体を形成することによって親水性薬物分子の親油性を増加させて油相への分配を向上させることができる。デオキシコール酸は、疏水性α部分と親水性β部分で構成された両親媒性分子であって、細胞脂質二重層の膜表面に垂直に結合し、脂質マトリクスのアシル鎖を撹乱させて腸管細胞膜の柔軟性及び膜に対する脂溶性薬物の溶解性を増加させることによって、薬物の膜透過性を向上させることができる。また、薬物と結合された胆汁酸誘導体であるデオキシコール酸は、腸管膜の表面に存在する胆汁酸再吸収伝達体により認識されることができ、これは腸管粘膜の表面で薬物の高い濃度勾配を誘発して腸管膜に対する薬物の促進拡散を増加させる。従って、薬物と吸収促進剤のイオン結合複合体の胆汁酸再吸収伝達体との選択的相互作用による吸収増進効果は、単に物理的混合により添加される従来の吸収促進剤とは異なり、投与後に胃腸管で吸収促進剤が胃腸管内に存在する流体により希釈されてその作用が減少するのを最小化できるため、最小限の使用により親水性薬物の胃腸管吸収率を増加させることができる。
【００４１】
水溶液の状態で形成されたイオン結合複合体を固形の粉末状態に製造するために熱風乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥など追加的な乾燥過程を経ることができ、また乾燥粉末状のイオン結合複合体の水溶液状態での迅速な再分散のためにイオン結合複合体の製造時に分散剤が更に追加されることができる。
【００４２】
前記分散剤は単糖類、多糖類、食物繊維、ガム類、界面活性剤又はタンパク質の中から選択されることができ、好ましくはポロキサマ（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、ポリビニルピロリドン、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）、マンニトール、スクロース、ラクトース、グルコース、トレハロース、グリセロール、フルクトース、マルトース、デキストラン、シクロデキストリン、グリシン、アラニン、リシンの中から選択されることができ、より好ましくはポロキサマ、ポリビニルピロリドン、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、シクロデキストリン、ラクトース又はマンニトールの中から選択されることができる。
【００４３】
また、前記分散剤は、ペメトレキセド１重量部に対して、０．１〜１００重量部で含まれることが好ましく、より好ましくは０．１〜６０重量部で含まれることができる。
【００４４】
前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンは、内水相にイオン結合複合体と併用投与して坑がんの相乗効果を発揮できる親水性活性成分を更に含むことができ、前記親水性活性成分は５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）又はロイコボリンの中から選択されることができる。親水性活性成分をナノエマルジョン製剤に含めることによって、薬物の胃腸管吸収率を高めて経口生体利用率を向上させることができる。
【００４５】
前記ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンの製造時に用いる１次油相は、シリコンオイル、エステル系オイル、ハイドロカーボン系オイル、プロピレングリコールモノカプリレート（Ｃａｐｒｙｏｌ  ９０）、プロピレングリコールジカプリロカプレート（Ｌａｂｒａｆａｃ  ＰＧ）、オレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ１９４４  ＣＳ）、ラウロイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１３０  ＣＳ）、リノレオイルマクロゴール−６グリセリド（Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ２１２５  ＣＳ）、中鎖トリグリセリド（Ｌａｂｒａｆａｃ）、オレイン酸、ステアリン酸、グリセリルベヘネート（Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ  ８８８）、グリセロールモノステアレート及びヒマシ油からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることが好ましい。
【００４６】
前記ｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョン内の１次油相は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることが好ましく、より好ましくは１〜２０重量％で含まれることができる。前記油相の含有量が１重量％未満であるか、２０重量％を超えると、エマルジョンの粒子が大きくなり、乳化安定性が低下するおそれがある。このとき、油相の含有量は、エマルジョン安定化剤を含まず、２次外水相を含むｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの総重量のうち油相の総量を意味する。
【００４７】
前記（ｄ）段階でｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンは、１次油相にイオン結合複合体の薬理学的治療効果を向上させることができる脂溶性活性成分を更に含むことができ、前記脂溶性活性成分は、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）のような難溶性抗がん剤とクルクミン、クェルセチン又はこれらの活性成分を含有する天然抽出物及びこれらの混合物であり得る。脂溶性活性成分は、ナノエマルジョン製剤の油相に含まれることによって活性成分を可溶化させて胃腸管吸収率を高めることで、経口生体利用率と薬理学的活性を向上させることができる。
【００４８】
前記１次及び２次界面活性剤は、イオン結合複合体が分散された内水相が油相に分散され得るようにし、ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンがｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの外水相によく分散され得るようにする。前記１次及び２次界面活性剤は、互いに独立してポロキサマ（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）、カプリロカプリルマクロゴール−８グリセリド（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）、グリセロールモノカプリロカプレート（Ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ）、ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４）、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｒｏｌ）、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）及びソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ）からなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることが好ましい。
【００４９】
前記１次及び２次補助界面活性剤は、イオン結合複合体が分散された内水相が界面活性剤により油相に分散され得るように表面エネルギーを減少させる役割を果たし、ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンが界面活性剤によりｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの外水相によく分散され得るようにする。前記１次及び２次補助界面活性剤は、互いに独立してジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ）、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール及びイソプロパノールからなる群より選択される何れか１つ又は１種以上であることが好ましい。
【００５０】
前記１次界面活性剤と１次補助界面活性剤の混合物及び２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物は、組成物の総重量に対して、０．１〜４０重量％で含まれることが好ましく、より好ましくは１〜２０重量％で含まれることができる。前記含有量が１重量％未満であるか、２０重量％を超えると、エマルジョンの安定性が低下するおそれがある。このとき、１次界面活性剤と１次補助界面活性剤の混合物及び２次界面活性剤と２次補助界面活性剤の混合物の含有量は、２次外水相を含むｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの総重量のうち１次及び２次界面活性剤と１次及び２次補助界面活性剤の総量を意味する。
【００５１】
また、前記１次及び２次補助界面活性剤は、それぞれ前記１次及び２次界面活性剤と混合して用いられ、それぞれ１次及び２次界面活性剤に対して互いに独立して１：０．１〜１：１０の重量比で混合されることが好ましく、より好ましくは１：０．５〜１：２の重量比で混合されることができる。
【００５２】
更に、本発明は、前記製造方法によって製造されたペメトレキセドを含む経口用医薬組成物を含む。
【００５３】
本発明によるペメトレキセドと胆汁酸誘導体のイオン結合複合体の薬物伝達体としてｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョンの形態を用いることができる。このシステム内の油相は、胃腸管内でイオン結合複合体を保護し、吸収促進剤の希釈効果を最小化するだけでなく、服用後に胃腸管内で両親媒性であるイオン結合複合体の高い分散性を可能にする。また、多重乳化ナノエマルジョンは、胃腸管内で腸管膜の構造と流動性を変形させて薬物の吸収を増進させることが知られている。特に、内水相に胆汁酸誘導体とイオン結合を形成できない親水性薬物である５−フルオロウラシルを共に担持する場合、薬物の腸管膜透過性と経口生体利用率は多重乳化ナノエマルジョンにより向上し得る。
【００５４】
また、多重乳化ナノエマルジョンに用いられる界面活性剤であるＬａｂｒａｓｏｌとＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬは、それぞれ１次内水相を油相に分散させるか、ｗ／ｏ１次ナノエマルジョンをｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの外水相に分散させるために用いられることができる。Ｌａｂｒａｓｏｌは、Ｆ−アクチン（filamentous actin）とＺＯ−１（zonula occludens-1）と相互作用して小腸上皮細胞間の密着結合（tight junction）を開放できることが知られており、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬの場合、細胞膜の流動性を増加させるだけでなく、密着結合を緩めて吸収を促進させることができることが確認された。従って、小腸上皮細胞間結合の減少を誘導させる界面活性剤の適用により細胞間の経路を通じて親水性活性成分である５−ＦＵの膜透過性が増加し得る。また、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬはＰ−ｇｐの疏水性領域と結合でき、これによりＰ−ｇｐの形態に変化がもたらされ、薬物の腸管内への排出を減少させて５−ＦＵのようにＰ−ｇｐにより排出される薬物の制限的な胃腸管吸収率が向上し得る。
【００５５】
以下、本発明を実施例を通じて更に詳細に説明する。しかし、下記実施例は本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれに制限されるものではない。
【００５６】
実施例１：胆汁酸誘導体の製造
経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体は、デオキシコール酸に正電荷を呈するリシンを化学的に結合させて製造した。
【００５７】
デオキシコール酸２．６ｇをクロロギ酸エチル（ethyl chloroformate）６．４ｍＬ、Ｎ−メチルモルホリン（N-methylmorpholine）７．４ｍＬ及びテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）８００ｍＬの混合液に溶解した後、２．７％（ｗ／ｖ）Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＭｅＨＣｌのＮ−メチルモルホリン溶液を添加した後、２時間還流させた。その後、常温で一晩撹はんした後に沈殿物を濾過し、溶媒を蒸発させて乾燥させた。得られた沈殿物をクロロホルムとメタノールの混合液を用いてカラムを通過させてＬｙｓ（Ｂｏｃ）ＤＯＣＡを分離した。得られたＬｙｓ（Ｂｏｃ）ＤＯＣＡを再び冷却水槽（氷浴）でエチルクロリドとメタノールの混合液に溶解した後、溶媒を完全に除去した後に残存物を精製水に溶解した後、クロロホルムで洗浄した。水溶液層を回収した後、凍結乾燥して粉末状のデオキシコール酸−リシン誘導体（ＤＣＫ）が得られた。
【００５８】
実施例２：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の製造
精製水にペメトレキセド（ＰＭＸ）を溶解した後、ペメトレキセド：ＤＣＫのモル比が１：１になるように撹はんしながら、ＤＣＫ水溶液を徐々に添加してイオン結合複合体を形成した。前記混合液を遠心分離した後、凍結乾燥して粉末状のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を製造した。
【００５９】
実施例３：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む錠剤及びカプセルの製造
精製水１０ｍＬにポロキサマ５００ｍｇとＬａｂｒａｓｏｌ３７５ｍｇを溶解させた後、ペメトレキセド５０ｍｇを添加して溶解させた。別途に精製水１０ｍＬにＤＣＫ６６．８２５ｍｇを溶解させた後、ペメトレキセド：ＤＣＫのモル比が１：１になるようにペメトレキセド溶液を撹はんしながら、ＤＣＫ水溶液を徐々に添加してイオン結合複合体を形成した。製造した混合液を凍結乾燥して粉末状の分散剤が添加されたＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を製造した。このとき、ポロキサマ及びＬａｂｒａｓｏｌは、分散剤として用いられた。前記製造したＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体と分散剤混合物１９８．３６４ｍｇにコポビドン３０ｍｇ、微結晶セルロース３０ｍｇ及び乳糖３８．６３６ｍｇを添加して混合した後、ステアリン酸マグネシウム３ｍｇを添加し、再び混合した後に適切な形状に圧縮して錠剤を製造するか、カプセルに充填した。
【００６０】
実施例４：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の製造
精製水にペメトレキセドを溶解した後、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ）水溶液をペメトレキセドと１：１のモル比で添加して一晩撹はんした。その後、ポロキサマ１８８をペメトレキセドと同一の重量比で添加して撹はんした後、ペメトレキセド：ＤＣＫのモル比が１：１になるように撹はんしながら、ＤＣＫ水溶液を徐々に添加してＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を形成した。前記混合液を凍結乾燥して粉末状のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体と分散剤の混合物を製造した。このとき、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン及びポロキサマ１８８は、分散剤として用いられた。
【００６１】
実施例５：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの製造
ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体と分散剤（ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン及びポロキサマ）の凍結乾燥混合粉末１０８．８２ｍｇを精製水に再分散させた後、１次界面活性剤−１次補助界面活性剤１：２混合物（Ｌａｂｒａｓｏｌ：Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ＝１：２（ｗ／ｗ））１００ｍｇを添加した。１次油相に５７．２ｍｇのＣａｐｒｙｏｌ  ９０を添加及び混合して１次ｗ／ｏナノエマルジョンを製造した。前記１次ｗ／ｏナノエマルジョンに２次界面活性剤−２次補助界面活性剤１：２混合物（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ  ＨＰ＝１：１（ｗ／ｗ））６００ｍｇを添加して混合した後、精製水１２００ｍｇに分散させてｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンを製造した。
【００６２】
実施例６：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びクェルセチンを含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの製造
ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体６６．０２ｍｇ（１０ｍｇのペメトレキセドに相応）と分散剤（ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン及びポロキサマ）の混合物を精製水３８ｍｇに再分散させた後、１次界面活性剤−１次補助界面活性剤１：１混合物（Ｌａｂｒａｓｏｌ：Ｔｗｅｅｎ８０＝１：１、ｗ／ｗ）１１２ｍｇを添加した。１次油相に５０ｍｇのＬａｂｒａｆｉｌ  Ｍ１９４４を添加及び混合して１次ｗ／ｏナノエマルジョンを製造した。
【００６３】
前記１次ｗ／ｏナノエマルジョンにクェルセチン２０ｍｇと２次界面活性剤−２次補助界面活性剤の混合物（Ｔｗｅｅｎ  ８０：Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ：ＰＥＧ４００＝１：２：２、ｗ／ｗ／ｗ）６３０ｍｇを添加して混合した後、精製水８００ｍｇに分散させてｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンを製造した。
【００６４】
実施例７：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む経口組成物の人工腸管膜透過性の測定
ペメトレキセド（ＰＭＸ）、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとペメトレキセドの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ）、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ）、前記実施例４で製造したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びポロキサマの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ／Ｐ１８８）及び前記実施例５で製造したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びポロキサマの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ／Ｐ１８８）を含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの腸管膜透過性を人工腸管膜（ＰＡＭＰＡ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて評価し、その結果を下記表１に示した。
【００６５】
各試料をペメトレキセドの濃度が２００μｇ／ｍＬになるようにリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ６．８）で希釈した後、ＰＡＭＰＡプレート各ウェルの供与体に２００μＬずつ添加し、それぞれの受容体にはリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ６．８）３００μＬを添加した後、供与体と受容体を結合した。室温で５時間放置した後、ＰＡＭＰＡプレート各ウェルの供与体と受容体から試料を回収して透過した薬物の濃度を次の通り測定した。
【００６６】
ＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫの濃度は、２０μＬの試料をＣ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、１００Å）を装着したＨＰＬＣシステムに注入し、精製水（ｐＨ３．２、リン酸で調整）とアセトニトリルの８０：２０（ｖ／ｖ）混合液を移動相として１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速で流して分析した。ＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫの検出は、２５４ｎｍで行った。
【００６７】
各薬物の有効透過性（Ｐe）は、下記式を用いて計算した。
【００６８】
Ｐe＝−ｌｎ［１−ＣA（ｔ）／Ｃequilibrium］／［Ａ×（１／ＶD＋１／ＶA）×ｔ］
【００６９】
（Ｐe：透過性（ｃｍ／ｓ）；Ａ：有効フィルタの面積（ｆ×０．３ｃｍ2；ｆ：フィルタの表面上気孔（ｆ＝０．７６））；ＶD：供与体の体積（０．２ｍＬ）；ＶA：受容体の体積（０．３ｍＬ）；ｔ：透過時間（秒）；ＣA（ｔ）：時間ｔで受容体における薬物の濃度；Ｃequilibrium：［ＣD（ｔ）×ＶD＋ＣA（ｔ）×ＶA］／（ＶD＋ＶA）；ＣD（ｔ）：時間ｔで供与体の残存薬物の濃度）
【００７０】
【表１】
2021503494.tif 000003
【００７１】
前記表１から見られるように、ペメトレキセドの人工腸管膜透過性は、ＤＣＫとのイオン結合複合体の形成後に３．７５倍増加し、これをｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョン剤形に含める場合、ペメトレキセドの人工腸管膜透過性はペメトレキセドに対して５．６３倍増加した。
【００７２】
実施例８：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体とクェルセチンを含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの人工腸管膜透過性の測定
ペメトレキセド（ＰＭＸ）、クェルセチン及び前記実施例５で製造したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びポロキサマ混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ／Ｐ１８８）とクェルセチンを含むｗ／ｏ／ｗ２次ナノエマルジョンの腸管膜透過性を人工腸管膜（ＰＡＭＰＡ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて評価し、その結果を下記表２に示した。
【００７３】
それぞれの試料をペメトレキセド２００μｇ／ｍＬとクェルセチン４００μｇ／ｍＬの濃度で含むようにリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ６．８）で希釈した後、ＰＡＭＰＡ  ｐｌａｔｅ各ｗｅｌｌの供与体に２００μＬずつ添加し、それぞれの受容体には３００μＬのリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ６．８）を添加した後、供与体と受容体を結合した。室温で５時間放置した後、ＰＡＭＰＡプレート各ウェルの供与体と受容体から試料を回収して透過した薬物の濃度を次の通り測定した。
【００７４】
ＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫの濃度は、２０μＬの試料をＣ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、１００Å）を装着したＨＰＬＣシステムに注入し、精製水（ｐＨ３．２、リン酸で調整）とアセトニトリルの８０：２０（ｖ／ｖ）混合液を移動相として１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速で流して分析した。ＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫの検出は、２５４ｎｍで行った。
【００７５】
クェルセチンの濃度は、２０μＬの試料をＣ１８カラム（４．６×１５０ｍｍ、５μｍ、１００Å）を装着したＨＰＬＣシステムに注入し、精製水（ｐＨ２．６、２％酢酸で調整）とアセトニトリルの４０：４０（ｖ／ｖ）混合液を移動相として１．０ｍＬ／ｍｉｎの流速で流して３５℃で分析し、ＵＶ検出は３７０ｎｍで行った。
【００７６】
各薬物の有効透過性（Ｐe）は、前記実施例７と同一の方式で計算した。
【００７７】
【表２】
2021503494.tif 000004
【００７８】
前記表２から見られるように、前記実施例６のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョンからペメトレキセドの人工腸管膜透過性は、ペメトレキセドに対して１４．１倍増加し、クェルセチンも前記実施例６のｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョンに含める場合、クェルセチンの可溶化によりクェルセチンに対する人工腸管膜透過性がクェルセチンに比べて６．５０倍増加した。
【００７９】
実施例９：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの腸管細胞膜透過性の測定
ペメトレキセド（ＰＭＸ）、前記実施例３で製造したＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む錠剤或いはカプセル組成物、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとペメトレキセドの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ）、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ）、前記実施例４で製造したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びポロキサマの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ／Ｐ１８８）及び前記実施例５で製造したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンとＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体及びポロキサマの混合物（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ／Ｐ１８８）を含むｗ／ｏ／ｗナノエマルジョンの腸管細胞膜透過性をＣａｃｏ−２細胞断層膜を用いて評価し、その結果を下記表３に示した。
【００８０】
Ｃａｃｏ−２細胞を１２−ウェルのトランスウェル（ポアサイズ：０．４μｍ、表面積：１．１２ｃｍ2；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ，ＵＳＡ）の各ウェル当たり３×１０5ｃｅｌｌｓに処理した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）培地は、４８時間毎に２１日〜２９日間交換され、３５０Ωｃｍ2以上の経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）を有するＣａｃｏ−２細胞膜をｉｎ  ｖｉｔｒｏ腸管細胞膜透過性の試験に用いた。
【００８１】
まず、培養液を除去した後、３７℃で２０分間ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）０．５ｍＬで培養した後にＨＢＳＳを除去した後、各試料を２００μｇ／ｍＬのペメトレキセドになるようにＨＢＳＳで希釈した後、希釈した各試料を０．５ｍＬずつＴｒａｎｓｗｅｌｌの上部コンパートメント（apical compartment）に添加し、各Ｔｒａｎｓｗｅｌｌの側底部コンパートメント（basolateral compartment）に１．５ｍＬのＨＢＳＳを添加した後、３７℃で培養した。試料を処理した後、０．５、１、２、３、４、５時間目に各ｗｅｌｌの側底部コンパートメントから１００μＬの試料を取ってメンブレインフィルタで濾過した後、前記実施例７と同一のＨＰＬＣシステムを用いて腸管細胞膜を透過したＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の濃度を測定した。また、ＰＭＸ及びＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の見かけの透過係数（Ｐapp）は、下記式によって算出した。
【００８２】
Ｐapp＝ｄＱ／ｄｔ×１／（Ａ×Ｃ0）
【００８３】
（ｄＱ／ｄｔ：単位時間当たり側底部コンパートメントに透過された薬物の重量（μｍｏｌ／s）、Ｃ0：上部コンパートメントでＰＭＸ又はＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体の初期濃度（μｍｏｌ／Ｌ）、Ａ：透過面積（ｃｍ2））。
【００８４】
【表３】
2021503494.tif 000005
【００８５】
前記表３から見られるように、ペメトレキセドのＣａｃｏ−２腸管細胞膜透過性は、ＤＣＫとのイオン結合複合体の形成後に錠剤又はカプセル組成物に製造した結果、ペメトレキセドに対して４２．６倍向上した。ペメトレキセドとＤＣＫのイオン結合複合体（ＨＰ−ｂｅｔａ  ＣＤ／ＰＭＸ／ＤＣＫ）の形成後、Ｃａｃｏ−２腸管細胞膜透過性がペメトレキセドに対して２．３０倍増加し、これを実施例５のｗ／ｏ／ｗ多重乳化ナノエマルジョン剤形に含める場合、Ｃａｃｏ−２腸管細胞膜透過性は、ペメトレキセドに対して９．７８倍増加した。
【００８６】
実施例１０：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む経口用医薬組成物のｉｎ  ｖｉｖｏ生体利用率の測定実験
ペメトレキセド及び前記実施例３で製造したＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む錠剤或いはカプセル組成物を蒸溜水に溶解させた後、ラットに５００μＬずつ経口投与した。これと別途に、経口生体利用率を評価するために、ペメトレキセドを蒸溜水に溶解させた溶液をラットに２００μＬずつ尻静脈を通して注射した。各薬物の投与後に予定された時間毎に血液サンプル（２００μＬ）を取り次第直ちに５０μＬのクエン酸ナトリウム（sodium citrate、３．８％）溶液と混合した。採取した血液試料を２，５００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離した後、固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジを用いて血漿中のペメトレキセドを抽出し、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）でペメトレキセドの濃度を測定した。
【００８７】
図１及び２は、ラットに前記ペメトレキセドを静脈注射（５ｍｇ／ｋｇ）及び経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ）又は前記実施例３のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む錠剤或いはカプセル組成物（ペメトレキセドとして５０ｍｇ／ｋｇ）の経口投与した後、静脈血漿中のペメトレキセド濃度−時間プロファイルである。各値は平均±標準偏差（各グループ当たりｎ＝４）を意味する。図２によれば、５０ｍｇ／ｋｇのペメトレキセドを経口投与した後、Ｃmaxは４５１．７８±２２１．３８ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣlastは１，３９３．３±３９５．１２ｎｇ・ｈ／ｍＬであり、静脈注射と比較した経口生体利用率は１．４９％±０．４２％と評価された。反面、表４から見られるように、実施例３のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む錠剤或いはカプセル組成物をペメトレキセドとして５０ｍｇ／ｋｇを経口投与した場合、ペメトレキセドを単独で経口投与した場合と比較したとき、Ｃmaxは６．１５倍（２，７７９．８±１，０５１．３ｎｇ／ｍＬ）、ＡＵＣlastは３．９４倍（５，４９０．２±１，０１３．４ｎｇ・ｈ／ｍＬ）増加し、経口生体利用率は３．９４倍（５．８６％±１．０８％）増加した。従って、ラットでペメトレキセドの腸管膜透過性と経口吸収率は、胆汁酸誘導体とのイオン結合複合体の形成により有意義に増加した。
【００８８】
【表４】
2021503494.tif 000006
【００８９】
｛前記表４において、Ｔmax：最大血漿薬物濃度の到達時間；Ｔ1/2：血漿薬物濃度の半減期；Ｃmax：最大血漿薬物の濃度；ＡＵＣlast：最終血漿薬物濃度の測定時間までの血漿薬物濃度−時間曲線の下面積；ＡＵＣinf：無限時間までの血漿薬物濃度−時間曲線の下面積；生体利用率：（ＡＵＣlast、経口投与／経口投与容量）／（ＡＵＣlast、静脈注射／静脈注射投与容量）×１００｝
【００９０】
実施例１１：ＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む経口用ナノエマルジョンのｉｎ  ｖｉｖｏ生体利用率の測定実験
ペメトレキセド及び前記実施例５で製造したＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含む経口ナノエマルジョン組成物を蒸溜水に溶解させた後、各ラットに５００μＬずつ経口投与した。これと別途に、経口生体利用率を評価するために、ペメトレキセドを蒸溜水に溶解させた溶液を各ラットに２００μＬずつ尻静脈を通して注射した。薬物投与後に予定された時間毎に血液サンプル（２００μＬ）を取り次第直ちに５０μＬのクエン酸ナトリウム（sodium citrate、３．８％）溶液と混合した。採取した血液試料を２，５００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離した後、固相抽出（ＳＰＥ）カートリッジを用いて血漿中のペメトレキセドを抽出し、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）でペメトレキセドの濃度を測定した。
【００９１】
図３及び４は、ラットにペメトレキセドを静脈注射（１０ｍｇ／ｋｇ）及び経口投与（２０ｍｇ／ｋｇ）又は前記実施例５のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むナノエマルジョン組成物（ペメトレキセドとして２０ｍｇ／ｋｇ）の経口投与後、静脈血漿中のペメトレキセド濃度−時間プロファイルである。各値は平均±標準偏差（各グループ当たりｎ＝４）を意味する。図４によれば、２０ｍｇ／ｋｇのペメトレキセドを経口投与した後、Ｃmaxは１，４８７±３３２ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣlastは７，５４６±９３８ｎｇ・ｈ／ｍＬであり、静脈注射と比較した経口生体利用率は１２．０％±１．５０％であった。反面、表５から見られるように、実施例５のＰＭＸ／ＤＣＫイオン結合複合体を含むナノエマルジョン組成物をペメトレキセドとして２０ｍｇ／ｋｇで経口投与した場合、ペメトレキセドを単独で経口投与した場合と比較したとき、Ｃmaxは３．２３倍（４，８０２±５７９ｎｇ／ｍＬ）、ＡＵＣlastは２．２３倍（１６，８１０±１，８６８ｎｇ・ｈ／ｍＬ）増加し、経口生体利用率は２．２３倍（２６．８％±２．９８％）増加した。従って、ラットでペメトレキセドの腸管膜透過性と経口吸収率は、胆汁酸誘導体とのイオン結合複合体の形成及びナノエマルジョン組成物により有意義に増加した。
【００９２】
【表５】
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【００９３】
｛前記表５において、Ｔmax：最大血漿薬物濃度の到達時間；Ｔ1/2：血漿薬物濃度の半減期；Ｃmax：最大血漿薬物の濃度；ＡＵＣlast：最終血漿薬物濃度の測定時間までの血漿薬物濃度−時間曲線の下面積；ＡＵＣinf：無限時間までの血漿薬物濃度−時間曲線の下面積；生体利用率：（ＡＵＣlast、経口投与／経口投与容量）／（ＡＵＣlast、静脈注射／静脈注射投与容量）×１００｝
【００９４】
以上、本発明を例示的に説明し、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者であれば、本発明の本質的な特性から逸脱しない範囲内で多様な変形が可能である。従って、本明細書に開示された実施例は本発明を限定するためのものではなく、説明するためのものであって、このような実施例によって本発明の思想と範囲が限定されるものではない。本発明の保護範囲は下記の請求範囲によって解釈されるべきであり、それと同等な範囲内にある全ての技術は、本発明の権利範囲に含まれるものとして解釈されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月19日(2020.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、水溶性活性物質であるペメトレキセドと経口吸収促進剤である胆汁酸誘導体のイオン結合による複合体を含む経口用医薬組成物及びその製造方法に関する。また、本発明は次の研究プロジェクトの下でなされた。
＜プロジェクトデータ＞
課題固有番号：Ｓ２８３３７２２
部処名：韓国中小ベンチャー企業部
研究管理専門機関：韓国中小企業技術情報振興院
研究事業名：創業成長技術開発支援事業
研究課題名：経口メトロノミック抗がん剤を用いた免疫抑制剤の活性促進薬物の開発(Development of activation enhancement drugs of immunosuppressant using oral metronomic anticancer drug)
主管機関：ＩＣＵＲＥ  ＢＮＰ  ＣＯ．，  ＬＴＤ．（株式会社アイキュアＢＮＰ）
研究期間：２０１９．１２．０２〜２０２１．１２．０１
【国際調査報告】
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