(57)【要約】加齢に伴う状態を治療する及び／または予防するための方法及び組成物が記載されている。方法で使用される組成物には、たとえば、認知障害のような加齢に伴う状態を治療すること及び／または予防することにおいて有効性がある血液血漿及び血液血漿に由来する血液血漿画分が含まれる。方法は血液血漿または血液血漿画分のパルス状投薬の計画に関する。
2021531294.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
認知障害と診断された対象を治療する方法であって、
パルス投与される投薬計画を用いて有効量の血漿画分を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記血漿画分が血漿タンパク質画分である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記血漿タンパク質画分が８３％〜９５％の間のアルブミンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記血漿タンパク質画分が市販の血漿タンパク質画分である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記血漿画分がタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記血漿画分が若齢個体のプールからの血漿に由来する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記血漿画分が哺乳類の血液製剤から製造される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳類の血液製剤がヒト血液製剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
認知障害と診断された対象を治療する方法であって、
パルス投与される投薬計画を用いて有効量の若齢血漿を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
認知機能の改善について前記対象をモニターすることをさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象が哺乳類である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳類がヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記血漿画分または若齢血漿が若齢個体のプールに由来する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記パルス投与される投薬計画が、連続５〜７日間、前記血漿画分または若齢血漿を投与することを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記有効量は１００ｍｌである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記有効量は２５０ｍｌである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、前記パルス投与される投薬計画が完全に投与された後、運動負荷計画に従う、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記投与は前記対象におけるシナプスの数を増加させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与は前記対象のシナプスの統合性を増加させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与は前記対象の神経ネットワークの統合性を増加させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与は前記対象のニューロンの結合性を増加させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
認知障害について対象を治療するために使用するためのキットであって、
請求項１〜８及び１３のいずれか一項に記載された血漿画分を含む容器を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加齢に関連した疾患の予防及び治療に関する。本発明は、たとえば、認知障害、運動障害及び神経炎症のような加齢に関連する状態を種々の投薬規範を用いて治療する及び／または予防するための血液製剤、たとえば、血液血漿画分の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
以下は背景情報としてのみ提供され、本発明に対する従来技術としては認められない。
【０００３】
老化は、認知障害、がん、関節炎、失明、骨粗鬆症、糖尿病、循環器疾患及び脳卒中を含む複数のヒト疾患にとって重要なリスク因子である。自然な老化の間での正常なシナプス消失に加えて、シナプス消失は多数の神経変性状態に共通する早期の病的な事象であり、これらの状態に関連する神経障害及び認知障害に対する最大の関連要因である。そのようなものとして、加齢は、たとえば、アルツハイマー病（ＡＤ）のような認知症関連の神経変性疾患の単一で最も有力なリスク因子のままである（Ｂｉｓｈｏｐ，Ｎ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｅｃｌｉｎｅ．Ｎａｔｕｒｅ，４６４（７２８８），５２９−５３５（２０１０）；Ｈｅｅｄｅｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ａｇｅｉｎｇ  ｍｉｎｄ：ａ  ｖｉｅｗ  ｆｒｏｍ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５（２），８７−９６（２００４）；Ｍａｔｔｓｏｎ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７（４），２７８−２９４（２００６））。
【０００４】
加齢は、中枢神経系を含む生体のあらゆる組織及び機能に影響を及ぼし、神経変性及び認知または運動の技能のような機能の低下は生活の質に深刻に影響を与え得る。認知低下、運動障害及び神経変性疾患の治療は、障害を防ぐ及び元に戻す点である程度の成功を有している。従って、加齢の影響に対して保護する、対抗するまたはそれを元に戻すことによって認知の完全性を維持するための新しい治療を特定することが重要である。さらに、新しい治療が開発されると、それらの治療の有効性を最適化するために投薬規範を検討しなければならない。
【０００５】
老齢マウスと若齢マウスとの間での並体結合実験は、認知機能が若齢マウスとの異時性血液交換にて老齢マウスで改善できることを示しているが、最近の報告は若齢血液の１回の交換によっては老齢マウスにおけるニューロン新生での増強はないことを見いだしている（Ｒｅｂｏ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｎｉｃ  ｂｌｏｏｄ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｒａｐｉｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｂｙ  ｏｌｄ  ｂｌｏｏｄ．Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．（２０１６））。さらに、若齢血漿の注入から生じる認知機能とニューロン新生とが連鎖していることが疑わしい。従って、ニューロン新生及び認知機能の改善を刺激する血液血漿または血液血漿画分を用いた投薬規範はいまだに記載されていなかった。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、たとえば、認知障害の状態、加齢性認知症、運動機能の障害、神経炎症及び神経変性疾患のような加齢に伴う疾病を治療する及び／または予防するための血液製剤の製造及び使用に基づく。本発明は、とりわけ、認知障害、加齢性認知症、運動障害、神経炎症及び神経変性疾患の治療及び／または予防のための新しい治療法の必要性を認識している。血液及び血液血漿に由来して、本発明の本組成物は、認知障害、加齢性認知症、運動障害、神経炎症及び神経変性疾患の治療及び／または予防において有効性を示す血液血漿画分の利用を介した現在の治療法の失敗及び欠点のための溶液に関する。
【０００７】
本発明は血液血漿タンパク質が２〜３日の平均半減期を有することを認識している。本発明は、治療された対象にてニューロン新生、細胞の生存、神経炎症の減少、認知または運動の機能の改善を最適化する血液血漿または血漿画分の投薬計画を使用する。本発明の投薬計画は、対象におけるこれらのプロセス（ニューロン新生、細胞の生存、認知の改善、神経炎症の減少、運動機能の改善）すべてを引き起こすことが見いだされ、そのプロセスはすべて最後の投薬の数週間後でさえも活発であることが見いだされている。
【０００８】
本発明の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を認知障害であると診断された対象に投与することによってその対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、続いて認知機能の改善について対象をモニターすることが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を認知障害であると診断された対象に投与することによってその対象を治療することが含まれ、その際、血液血漿または血漿画分は認知機能の改善またはニューロン新生を生じる方法で投与される。
【０００９】
本発明の実施形態には、たとえば、例として且つ限定ではなく、パーキンソン病のような神経変性運動障害と診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、続いて運動機能の改善について対象をモニターすることが含まれる。本発明の別の実施形態には、神経変性運動障害と診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれ、その際、血液血漿または血漿画分は運動機能の改善またはニューロン新生を生じる方法で投与される。
【００１０】
本発明の実施形態には、神経炎症または神経炎症関連の障害と診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、続いて神経炎症の軽減について対象をモニターすることが含まれる。本発明の別の実施形態には、神経炎症または神経炎症関連の障害と診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれ、その際、血液血漿または血漿画分は神経炎症の軽減を生じる方法で投与される。
【００１１】
本発明の別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。本発明のさらなる実施形態には、少なくとも連続３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる（本明細書では「パルス状投薬」、「パルス状投与」、「パルス投薬」、「パルス投与」、または「パルス投与された」と呼ばれる）。本発明のさらに別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して且つ最後の投与の日付の後で血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。本発明の別の実施形態には、投与間の各間隔がそれぞれ０〜３日であってもよい非連続の２〜１４日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。本発明の別の実施形態には、最後の投与の日付の少なくとも３日後に認知もしくは運動の機能の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善について対象をモニターすることが含まれる。本発明の別の実施形態には、血液血漿または血漿画分におけるタンパク質の平均半減期に達したときを過ぎて認知もしくは運動の機能の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善について対象をモニターすることが含まれる。
【００１２】
場合によっては、本発明に係るパルス状投薬には、たとえば、上記に記載されているような第１のセットの用量の投与と、それに続く投薬しない期間、たとえば、「投薬がない期間」、次に続く別の用量または別のセットの用量の投与とが含まれる。この「投薬がない期間」の持続期間は変化してもよいが、一部の実施形態では、７日以上、たとえば、１４日以上を含めて１０日以上であり、場合によっては、投薬がない期間は、たとえば、３０〜９０日及び３０〜６０日を含めて１５日から３６５日に及ぶ。そのようなものとして、方法の実施形態には、非慢性的な（すなわち、非連続の）投薬、たとえば、血液血漿製剤の非慢性的な投与が含まれる。一部の実施形態では、パルス状投薬とその後に続く投薬がない期間とのパターンは所望のような回数繰り返され、その際、場合によっては、このパターンは対象の生涯に至るまで及び生涯を含めて１年以上、たとえば、２年以上継続される。本発明の別の実施形態には、連続５日間の投薬計画に２〜３日の投薬がない期間を伴い、その後の連続２〜１４日間の投与を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。
【００１３】
本発明はまた、様々な血液血漿画分（たとえば、画分、溶出物、血漿タンパク質画分、ヒトアルブミン溶液）間でのタンパク質含量の差異が特定の認知または運動の障害を予防する及び／または改善すること、及び神経変性疾患を緩和することに関与し得ることも認識している。例として且つ限定ではなく、本発明の実施形態は、組換えヒトアルブミン製剤またはヒトアルブミン溶液（ＨＡＳ）製剤の単に高いアルブミン濃度が、アルブミン濃度が低い血漿タンパク質画分（ＰＰＦ）製剤に関連する認知の改善、運動機能の改善、神経炎症の軽減、細胞の生存、またはニューロン新生の背後にある推進力ではないことを実証する。
【００１４】
若齢ドナーに由来する血液及び血液血漿は、脳の老化の既存の影響を分子、構造、機能及び認知のレベルを含めて改善し、元に戻すことを示している（Ｓａｕｌ，Ａ．Ｖｉｌｌｅｄａ，ｅｔ  ａｌ．Ｙｏｕｎｇ  ｂｌｏｏｄ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０  ６５９−６６３（２０１４））。本発明は、その一部が患者のショックを治療するために従来使用されてきた血液血漿の画分及び溶出物に関するものである、且つ、それらが加齢に伴う認知障害、運動機能の低下、及び神経炎症または神経変性関連疾患の治療の方法として有効であるという発見に関する。
【００１５】
本発明の態様によれば、次いで、血液血漿の血液製剤画分を用いた加齢に伴う認知障害、加齢性の認知症、運動障害、神経炎症及び／または神経変性疾患の治療の方法が提供される。方法の態様には、加齢に伴う認知障害、運動障害、神経炎症または神経変性疾患を患っているまたはそれを発症するリスクがある個体に血液血漿画分を投与することが含まれる。方法の追加の態様には、加齢に伴う認知障害、運動障害、神経炎症または神経変性疾患を患っているまたはそれを発症するリスクがある個体に特定の年齢範囲のドナーのプールに由来する血液血漿画分を投与することが含まれる。方法のさらなる態様には、パルス状の投薬計画を用いた血液血漿または血漿画分の投与が含まれる。提供されるものはまた、主題の方法を実践するために使用される試薬、用具及びそのキットである。
【００１６】
実施形態では、血液血漿画分は、たとえば、以下に記載されているＣｏｈｎ分画法のような血液分画法から得られる幾つかの血液血漿画分の１つであってもよい。別の実施形態では、血液血漿画分は、個々にまたは複合体として正常ヒトアルブミン、アルファ及びベータグロブリン、ガンマグロブリン、及びその他のタンパク質で構成される溶液である、本明細書では「血漿画分」と呼ばれる種類であってもよい。別の実施形態では、血液血漿画分は「血漿タンパク質画分」（ＰＰＦ）として当業者に知られる血液血漿画分の種類であってもよい。別の実施形態では、血液血漿画分は「ヒトアルブミン溶液」（ＨＡＳ）画分であってもよい。さらに別の実施形態では、血液血漿画分は血栓症のリスクが少ない分画の有効性を保持するために凝固因子の実質的にすべてが除去されるものであってもよい。本発明の実施形態は、たとえば、若齢ドナーまたは若齢ドナーのプールに由来する画分を投与することも含んでもよい。本発明の別の実施形態には、血液血漿画分で治療した対象にて認知の改善、運動機能の改善、神経炎症の減少またはニューロン新生の増加をモニターすることが含まれてもよい。
【００１７】
本発明の実施形態には、認知障害、神経変性運動障害、または神経炎症関連の疾患であると診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、その後、認知機能の改善、運動機能の改善、神経炎症の減少またはニューロン新生の増加について対象をモニターすることが含まれる。本発明の別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、最後の投与の日付の少なくとも２日後、認知機能の改善、運動機能の改善、神経炎症の減少またはニューロン新生の増加について対象をモニターすることが含まれる。本発明のさらなる実施形態には、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４日の投薬計画を介して有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、最後の投与の日付の少なくとも３日後、認知機能の改善、運動機能の改善、神経炎症の減少またはニューロン新生の増加について対象をモニターすることが含まれる。本発明のさらに別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して有効量の血液血漿または血漿画分を投与し、且つ、最後の投与の日付の後、血液血漿または血漿画分におけるタンパク質の平均半減期に達した後、認知の改善、運動機能の改善、神経炎症の減少またはニューロン新生の増加についてモニターすることが含まれる。
【００１８】
本発明の実施形態には、認知障害、運動機能障害、神経炎症、またはニューロン新生の低下であると診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれ、対象は投与の後、運動負荷療法に従う。本発明の別の実施形態には、対象に処方される運動負荷療法に従うことが含まれる。本発明の別の実施形態には、投与に先立って運動した対象よりも高い強度で及び／または多い頻度で運動する対象が含まれる。本発明の別の実施形態には、投与に先立って運動した対象に類似する強度及び／または頻度で運動する対象が含まれる。
【００１９】
本発明の実施形態には、幹細胞療法を受けている、受ける予定である、または受けたことがある対象にあって有効量の血液血漿または血漿画分を対象に投与することによって、認知障害、運動機能障害、神経炎症、またはニューロン新生の低下であると診断された対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、対象が幹細胞療法を受けている、受ける予定である、または受けたことがある対象に有効量の血液血漿または血漿画分を対象に投与することが含まれ、その際、治療法で使用される幹細胞は、胚性幹細胞、非胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、臍帯血幹細胞、羊水幹細胞等であることができる。本発明の別の実施形態には、幹細胞療法を受けている、受ける予定である、または受けたことがある、外傷性脊髄損傷、脳卒中、網膜疾患、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、難聴、心疾患、関節リウマチ、または重度熱傷であると診断された対象を有効量の血液血漿または血漿画分で治療することが含まれる。
【００２０】
本明細書で言及される出版物及び特許出願はすべて、各個々の出版物または特許出願が具体的に且つ個々に参照によって組み入れられるように指示されたかのように同程度に参照によって本明細書に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１Ａ】パルス投与及び３×／週の投薬計画を用いてＰＰＦ１で処理したマウスにおけるオープンフィールド試験にて移動した距離を示す図である。
【図１Ｂ】パルス投与及び３×／週の投薬計画を用いてＰＰＦ１で処理したマウスにおけるオープンフィールド試験にて中央で費やした時間を示す図である。
【図２】パルス状投与及び３×／週の投薬計画を用いてＰＰＦ１で処理したマウスについての経時的な体重を示す図である。
【図３】パルス投与または３×／週の投薬計画を用いてＰＰＦ１で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図４】パルス投与または３×／週の投薬計画を用いてＰＰＦ１で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図５】パルス投与または３×／週の投薬計画を用いたＰＰＦ１、若齢ヒト血漿（「ＹＰ」）または老齢ヒト血漿（「ＯＰ」）で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図６】パルス投与または３×／週の投薬計画を用いたＰＰＦ１、ＹＰまたはＯＰで処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図７】ＰＰＦ１またはＹＰでパルス状投与したマウスについての１日当たり試行当たりの標的穴を見つけるまでの時間を示す図である。
【図８】パルス投与される計画を用いて若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）またはＰＰＦ１のいずれかで処理したマウスの群における歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図９】パルス投与される計画を用いて若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）またはＰＰＦ１のいずれかで処理したマウスの群における歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図１０】Ｙ迷路試験における処理群により各走行路に入る総進入のうち精通走行路または新規走行路に入る進入の総数のパーセントを示す図である。１２ヵ月齢のマウスをＰＰＦ１または５×濃縮ＰＰＦ１でパルス投与処理した。
【図１１】Ｙ迷路試験における精通走行路に対する新規走行路のへの進入の比率を示す図である。１２ヵ月齢のマウスをＰＰＦ１または５×濃縮ＰＰＦ１でパルス投与処理した。
【図１２】ＰＰＦ１または５×濃縮ＰＰＦ１でパルス投与した１２ヵ月齢のマウスにおける海馬切片当たりのＢｒｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図１３】ＰＰＦ１または５×濃縮ＰＰＦ１でパルス投与した１２ヵ月齢のマウスにおける海馬切片当たりのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図１４】（１）連続５日間［ＰＰＦ１−５ｄ］、（２）連続７日間［ＰＰＦ１−７ｄ］、（３）連続５日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続５日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ］、（４）連続７日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続７日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ］の１つの投薬計画を用いて、ＰＰＦ１または生理食塩水でパルス投与した１０．５ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図１５】（１）連続５日間［ＰＰＦ１−５ｄ］、（２）連続７日間［ＰＰＦ１−７ｄ］、（３）連続５日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続５日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ］、（４）連続７日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続７日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ］の１つの投薬計画を用いて、ＰＰＦ１または生理食塩水でパルス投与した１０．５ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図１６】（１）連続５日間［ＰＰＦ１−５ｄ］、（２）連続７日間［ＰＰＦ１−７ｄ］、（３）連続５日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続５日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ］、（４）連続７日間と、最初の投薬の完了の６週後に発生する追加の連続７日間の投薬（「追加投与」）［ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ］の１つの投薬計画を用いて、ＰＰＦ１または生理食塩水でパルス投与した１０．５ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＥｄＵ標識した細胞の数を示す図である。
【図１７】回し車の有無でのＰＰＦ１または生理食塩水で処理した３ヵ月齢または６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ標識した細胞の数を示す図である。
【図１８】回し車の有無でのＰＰＦ１または生理食塩水で処理した３ヵ月齢または６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＫｉ６７陽性標識した細胞の数を示す図である。
【図１９】回し車の有無でのＰＰＦ１または生理食塩水で処理した３ヵ月齢または６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ陽性標識した細胞の数を示す図である。
【図２０】ＰＰＦ１または生理食塩水対照のいずれかでパルス投与した１１ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける所与の時間での回し車の回転数を示す図である。網掛け領域は暗期を示し、四角で囲んだ領域はホットプレート試験を施したときを示す。
【図２１Ａ】若齢血漿、組換えヒトアルブミン（「ｒｈアルブミン」）及び生理食塩水対照で処理した１０．５ヵ月齢のＮＳＧマウスの３つの処理群における歯状回の顆粒層内のＢｒｄＵ標識細胞の数を示す図である。
【図２１Ｂ】若齢血漿、組換えヒトアルブミン（「ｒｈアルブミン」）及び生理食塩水対照で処理した１０．５ヵ月齢のＮＳＧマウスの３つの処理群における歯状回の顆粒層内のＤＣＸ標識細胞の数を示す図である。
【図２２Ａ】対照、ＰＰＦ1（二つの異なるロット）、ＨＡＳ1またはｒｈアルブミンで処理したマウスＥ１６の皮質に由来する解離混合神経細胞を含むＭＥＡウェルでの７日目、１２日目、１６日目及び２１日目での神経スパイク活動及び神経ネットワーク活動の上昇の度合いを示す図である。処理条件ごとの２つのＭＥＡウェルから代表的なスパイクトレインを示す図であり、対照またはＨＡＳ1で処理したセルに比べてＰＰＦ1で処理したセルに関して強度に同時性の発火パターンを示す図である。
【図２２Ｂ】対照、ＰＰＦ1（二つの異なるロット）、ＨＡＳ1またはｒｈアルブミンで処理したマウスＥ１６の皮質に由来する解離混合神経細胞を含むＭＥＡウェルでの７日目、１２日目、１６日目及び２１日目での神経スパイク活動を示す図である。神経スパイク活動の量子化を示す。３度の独立実験からＮ＝２５〜４５ウェル±ＳＥＭ、対応のないスチューデントのｔ検定、 *ｐ＜０．０５、＃ｐ＜０．０１、夫々の時点での溶剤処理に対して算出された。
【図２２Ｃ】対照、ＰＰＦ1（二つの異なるロット）、ＨＡＳ1またはｒｈアルブミンで処理したマウスＥ１６の皮質に由来する解離混合神経細胞を含むＭＥＡウェルでの７日目、１２日目、１６日目及び２１日目での神経ネットワーク活動の上昇の度合いを示す図である。対照、ｒｈアルブミン、ＰＰＦ1（二つのロット）およびＨＡＳ1の存在下で２１日間維持された初代マウスの皮質神経細胞の培養物における神経ネットワークのバーストを示す。３度の独立実験からＮ＝２５〜４５ウェル±ＳＥＭ、対応のないスチューデントのｔ検定、 *ｐ＜０．０５、＃ｐ＜０．０１、夫々の時点での溶剤処理に対して算出された。
【図２３】清澄化した老齢ヒト血漿（老齢血漿）または生理食塩水を投与される８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの投与の４種の規範を示す図である。
【図２４】Ａは、最後の用量を投与した４８時間後に老齢血漿の週２回投薬により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの海馬におけるＶＣＡＭ−１陽性標識を示す図である。Ｂは、最後の用量を投与した４８時間後に老齢血漿の週３回投薬により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの海馬におけるＶＣＡＭ−１陽性標識を示す図である。Ｃは、最後の用量を投与した４８時間後に老齢血漿のパルス状投薬により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの海馬におけるＶＣＡＭ−１陽性標識を示す図である。Ｄは、最後の用量を投与した２１日後に老齢血漿のパルス状投薬により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの海馬におけるＶＣＡＭ−１陽性標識を示す図である。
【図２５】Ａは、最後の用量を投与した４８時間後に老齢血漿の週２回投与により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの歯状回におけるＤＣＸ陽性細胞の数を示す図である。Ｂは、最後の用量を投与した４８時間後に老齢血漿の週３回投与により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの歯状回におけるＤＣＸ陽性細胞の数を示す図である。Ｃは、最後の用量を投与した２１日後に老齢血漿のパルス状投薬により処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの歯状回におけるＤＣＸ陽性細胞の数を示す図である。
【図２６】老齢血漿及び生理食塩水で処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスについてＢａｒｎｅｓの迷路脱出時間経過を示し、脱出穴に達し、それに入る時間を示す図である。マウスは老齢ヒト血漿または生理食塩水で連続７日間処理し、最後の注射の４週後に調べた。
【図２７】老齢ヒト血漿または生理食塩水で連続７日間処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスの試験の４日目での最後の３回のＢａｒｎｅｓ迷路試行における平均脱出時間を示す図である。試験は注射の４週後に行った。
【図２８】老齢ヒト血漿または生理食塩水で連続７日間処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスにおけるＢａｒｎｅｓ迷路試行１と３との間での脱出時間の差異を示す図である。試験は最後の注射の４週後に発生した。
【図２９】老齢ヒト血漿または生理食塩水で連続７日間処理した８週齢（若齢）ＮＳＧマウスにおけるＤＣＸ、小胞性グルタミン酸受容体（ｖｇｌｕｔ１）、シナプシン１（ｓｙｎ１）、ベータＩＩＩチューブリン（ｔｕｊ１）及び脳由来の神経栄養因子（ｂｄｎｆ）のｍＲＮＡレベルを定量する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）の結果を示す図である。
【図３０】３５ｍｇ／ｋｇのカイニン酸または生理食塩水で処理し、その後ＰＰＦ１または生理食塩水で毎日連続５日間処理する８週齢（若齢）ＮＳＧマウスのための投薬規範を示す図である。
【図３１Ａ】図２８に示した規範どおりに処理したマウスの海馬のＣＡ１領域におけるＣＤ６８陽性領域のパーセントを示す図である。
【図３１Ｂ】図２８に示した規範どおりに処理したマウスの海馬のＣＡ１領域におけるＧＦＡＰ陽性領域のパーセントを示す図である。
【図３２】ＢｒｄＵの同時投与と共にＰＰＦ１または生理食塩水対照で連続７日間パルス投与した６ヵ月齢のＮＳＧマウスの歯状回におけるＢｒｄＵについて染色された細胞の数を示す図である。最初の２つのカラムはＰＰＦ１／生理食塩水対照及びＢｒｄＵの最後の処理の７日後に分析したコホートを構成し、２番目の２つはＰＰＦ１／生理食塩水対照及びＢｒｄＵの最後の処理の１４日後に分析したコホートを構成する。
【図３３】ＰＰＦ１によるパルス投与計画の完了の１０日後での６ヵ月齢のＮＳＧマウスの歯状回における増殖している細胞（Ｋｉ６７＋）の増加を示す図である。
【図３４】ＰＰＦ１によるパルス投与計画の完了の１０日後での６ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける歯状回及び脳室下帯の切片を示す図である。
【図３５Ａ】７日間のパルス投薬計画によりＰＰＦ１または生理食塩水対照のいずれかで処理した６ヵ月齢のＮＳＧマウスの歯状回における細胞の細胞運命を示す図である。ＢｒｄＵはパルス投薬計画の開始の直前に連続５日間投与した。ＢｒｄＵで染まるＮｅｕＮ＋同時局在化は神経前駆細胞がニューロンになる程度を示す。ＢｒｄＵで染まるＧＦＡＰ＋同時局在化の程度は神経前駆細胞が星状細胞になる程度を示す。
【図３５Ｂ】図３５Ａに類似する実験から得た結果を示す図であるが、ＮＳＧマウスは１２ヵ月齢だった。
【図３６Ａ】７日間のパルス投薬計画により老齢血漿または生理食塩水対照のいずれかで処理した３ヵ月齢のＮＳＧマウスの歯状回における細胞の細胞運命を示す図である。ＢｒｄＵはパルス投薬計画の開始の直前に連続５日間投与した。ＢｒｄＵで染まるＮｅｕＮ＋同時局在化は神経前駆細胞がニューロンになる程度を示す。
【図３６Ｂ】図３６Ａで詳述した実験から得られた結果を示す図であるが、ＢｒｄＵで染まるＧＦＡＰ＋同時局在化の程度は神経前駆細胞が星状細胞になる程度を示す。
【図３７Ａ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの大脳全体におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３７Ｂ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３７Ｃ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの等皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３８Ａ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの前頭皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３８Ｂ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの眼窩皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３８Ｃ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの辺縁内皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３８Ｄ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの縁前方皮質におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３９Ａ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの副嗅核におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図３９Ｂ】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの嗅結節におけるｃＦｏｓ陽性細胞の数を示す図である。
【図４０】ＰＰＦ１または生理食塩水の７日間のパルス投薬計画で処理した１８ヵ月齢のマウスの前頭皮質（ＦＲＰ）、眼窩皮質（ＯＲＢ）、辺縁内皮質（ＩＬＡ）、及び縁前方皮質（ＰＬ）及び副嗅核（ＡＯＮ）における局所皮質活性化のボクセル統計に基づく視覚化を示す図である。
【図４１Ａ】ＰＰＦ１または生理食塩水対照による７日間のパルス投薬計画での処理の１０日後の２２ヵ月齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ野生型マウスの海馬におけるＣＤ６８免疫反応性領域のパーセントを示す図である。
【図４１Ｂ】ＰＰＦ１または生理食塩水対照による７日間のパルス投薬計画での処理の１０日後の２２ヵ月齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ野生型マウスの海馬におけるＩｂａ−１免疫反応性領域のパーセントを示す図である。
【図４１Ｃ】ＰＰＦ１または生理食塩水対照による７日間のパルス投薬計画での処理の１０日後の２２ヵ月齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ野生型マウスの海馬におけるＧＦＡＰ免疫反応性領域のパーセントを示す図である。
【図４１Ｄ】ＰＰＦ1または生理食塩水対照による７日間のパルス投薬計画での処理の４週間後の２１ヵ月齢のＣ５７ＢＬ／６野生型マウスの海馬におけるＣＤ６８免疫反応性領域のパーセントを示す図である。
【図４１Ｅ】ＰＰＦ1または生理食塩水対照による７日間のパルス投薬計画での処理の４週間後の２１ヵ月齢のＣ５７ＢＬ／６野生型マウスの海馬におけるＩｂａ−1免疫反応性領域のパーセントを示す図である。
【図４２Ａ】連続７日間のパルス状投薬計画を用いた投薬の６、９及び１２週後での生理食塩水対照と比べたＰＰＦ１処理した２３ヵ月齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにおけるＢｒｄＵ染色の変化のパーセントを示す図である。
【図４２Ｂ】連続７日間のパルス状投薬計画を用いた投薬の６、９及び１２週後での生理食塩水対照と比べたＰＰＦ１処理した２３ヵ月齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにおけるＤＣＸ染色の変化のパーセントを示す図である。
【図４３Ａ】Ａ及びＢは、ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）の体重測定の結果を示す図である。
【図４３Ｂ】Ａ及びＢは、ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）の体重測定の結果を示す図である。
【図４４】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における営巣の結果を示す図である。
【図４５Ａ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）におけるそれぞれ、パスタ齧り及び関連する運動の改善の結果を示す図である。
【図４５Ｂ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）におけるそれぞれ、パスタ齧り及び関連する運動の改善の結果を示す図である。
【図４６】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における金網懸垂試験の結果を示す図である。
【図４７Ａ】困難さが増す５回の様々な梁歩行試験で使用された様々な梁の形状及びサイズを示す図である。
【図４７Ｂ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における５回の様々な梁歩行試験の結果を示す図である。梁歩行試験は最後の処理投与の７２時間後に行った。
【図４７Ｃ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における５回の様々な梁歩行試験の結果を示す図である。梁歩行試験は最後の処理投与の３週後に行った。
【図４８Ａ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における線条体の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＣＤ６８である。
【図４８Ｂ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における海馬の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＣＤ６８である。
【図４８Ｃ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における線条体の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＩｂａ−１である。
【図４８Ｄ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における海馬の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＩｂａ−１である。
【図４８Ｅ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）における線条体の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＮｅｕＮである。
【図４８Ｆ】ＰＰＦ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した４〜４．５ヵ月齢のオスのアルファ−シヌクレインマウス（ライン６１）（パーキンソン病のモデル）におけるＣＡ３の染色の組織学的な結果を示す図である。調べた組織学的なマーカーはＮｅｕＮである。
【図４９】ＰＰＦ１、ＨＡＳ１または溶媒対照を用いた連続７日間のパルス状投薬計画で処理した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスにおけるＢａｒｎｅｓ迷路の脱出時間を示す図である。
【図５０】シナプスがない脳の領域（脳梁（ＣＣ））でなく、相当量のシナプス（海馬（ＨＰ）、線条体（ＳＴ）、及び黒質（ＳＮ））を含む脳領域において、２４ヵ月齢のマウス（２４Ｍ）は、３ヵ月齢の若齢マウス（３Ｍ）に比べてシナプス後マーカーＰＳＤ−９５の減少がみられることをを示す図である。
【図５１】シナプスがない脳の領域（脳梁（ＣＣ））でなく、相当量のシナプス（海馬（ＨＰ）、線条体（ＳＴ）、及び黒質（ＳＮ））を含む脳領域において、２４ヵ月齢のマウス（２４Ｍ）は、３ヵ月齢の若齢マウス（３Ｍ）に比べてシナプス後マーカーＰＳＤ−９５の減少がみられることをを示す図である。
【図５２Ａ】ＰＰＦ１をパルス投与したマウスはかなり高レベルのシナプス後マーカーＰＳＤ−９５を有することを示す図である。独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５である。
【図５２Ｂ】ＰＰＦ１をパルス投与したマウスはかなり高レベルのシナプス前マーカーＳＹＮＡＰＳＩＮ１を有することを示す図である。独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５である。
【図５３】図５５に関連付けられるＣＡ１海馬切片の組織学的な図である。
【図５４Ａ】高解像度共焦点顕微鏡像を示す図である。
【図５４Ｂ】シナプス前ＳＹＮＡＰＳＩＮ１マーカー（赤）及びシナプス後ＰＳＤ−９５マーカー（白）からなる黄色の矢印で同定したシナプスが並んだ状態を示す拡大挿入図である。
【図５５Ａ】ＰＰＦ１をパルス投与したマウスは高解像度顕微鏡像で観察されるように非常に多数に並んだシナプス前後マーカーがみられること示す図である。
【図５５Ｂ】シナプス前後マーカーの定量化を示す図である。
【図５５Ｃ】ＳＹＮＡＰＳＩＮ１の斑点の数もパルス投与でＰＰＦ１処理したマウスの方が対照と比べて多数であったことを示す図である。
【図５５Ｄ】シナプス後マーカの斑点の数は処理群の間で変化がなかったことを示す図である。独立ｔ検定による、 *ｐ＜０．０５である。
【図５６Ａ】組換えヒトアルブミン（ｒｈアルブミン）、ＰＰＦ１、またはＨＡＳ１の存在下で１４日間培養した初代マウスの皮質のニューロンを示し、その細胞組成及び形態をＭａｐ２（ニューロン）、Ｇｆａｐ（星状細胞）及びＮｅｓｔｉｎ（前駆細胞）についての免疫染色によって評価した図である。
【図５６Ｂ】組換えヒトアルブミン（ｒｈアルブミン）、ＰＰＦ１、またはＨＡＳ１の存在下で１４日間培養した初代マウスの海馬のニューロンを示し、その細胞組成及び形態をＭａｐ２（ニューロン）、Ｇｆａｐ（星状細胞）及びＮｅｓｔｉｎ（前駆細胞）についての免疫染色によって評価した図である。
【図５７Ａ】ＰＰＦ１またはまたはＨＡＳ１で１４日間処理した皮質神経細胞培養は対照または組換えヒトアルブミンで処理した培養と比べたときに、βアクチン発現に比べてＧｆａｐ蛋白発現が増加したことを示す図である。
【図５７Ｂ】１４日間のＰＰＦ１またはＨＡＳ１での処理によって、対照処理と比べたときにＳｏｘ２陽性細胞集団が増加したことを示す図である。ｎ＝３独立実験±ＳＥＭ、対応があるスチューデントのｔ検定比較、 *ｐ＜０．０５である。
【図５８Ａ】試験の６週間前にＰＰＦ１または生理食塩水対照をパルス投与した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの２択水泳（Ｔ字迷路）試験における脱出時間を示す図である。ＰＰＦ１処理したマウスは脱出時間が短時間である傾向を示す。生理食塩水ｎ＝１５、ＰＰＦ１ｎ＝１０である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍであって、２元配置ＡＮＯＶＡである。
【図５８Ｂ】試験の６週間前にＰＰＦ１または生理食塩水対照をパルス投与した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの２択水泳試験（Ｔ字迷路）の正誤選択を示す図である。ＰＰＦ１処理したマウスは、正解の選択が極めて高い遂行率を示す。生理食塩水ｎ＝１５マウス、ＰＰＦ１ｎ＝１０である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍであって。カイ２乗検定、 *ｐ＜０．０５である。
【図５９】ＢｒｄＵ、ＮｅｕＮ及びＧＦＡＰでトリプル標識された１２ヵ月齢のＮＧＳマウスにおける歯状回の代表的な共焦点画像を示す図である。矢印はＢｒｄＵ標識した細胞を示す。
【図６０Ａ】生理食塩水、ＹＰ、ＰＰＦ１またはＯＰで処理したマウスの歯状回におけるＢｒｄＵ／ＮｅｕＮまたはＢｒｄＵ／ＧＦＡＰ共陽性細胞の総数を示す図である。ＰＰＦ１処理マウスは、歯状回において明らかに多数のＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ共陽性細胞を示す。生理食塩水ｎ＝１３、ＹＰｎ＝１３、ＰＰＦ１ｎ＝１５、ＯＰｎ＝１４である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍである。１元配置ＡＮＯＶＡ、テューキー事後検定、**Ｐ＜０．０１である。
【図６０Ｂ】生理食塩水、ＹＰ、ＰＰＦ１またはＯＰで処理したマウスの歯状回におけるＢｒｄＵ陽性細胞の総数に対するＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ及びＢｒｄＵ／ＧＦＡＰ共陽性細胞のパーセントを示す図である。ＰＰＦ１処理後に神経系統が増強する傾向にある。生理食塩水ｎ＝１３、ＹＰｎ＝１３、ＰＰＦ１ｎ＝１５、ＯＰｎ＝１４である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍであって、１元配置ＡＮＯＶＡ、テューキー事後検定である。
【図６１Ａ】試験の６週間前に生理食塩水対照、若齢血漿（ＹＰ）またはＰＰＦ１をパルス投与した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスに関するＢａｒｎｅｓの迷路の脱出時間を示す図である。ＰＰＦ１で処理したマウスは生理食塩水またはＹＰで処理した動物と比べて極めて短い迷路の脱出時間を示す。生理食塩水ｎ＝１３、ＹＰ=１４、ＰＰＦ１ｎ＝１３である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍであって、２元配置ＡＮＯＶＡ、 *ｐ＜０．０５である。
【図６１Ｂ】試験の６週間前に生理食塩水対照、若齢血漿（ＹＰ）またはＰＰＦ１をパルス投与した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスに関するＢａｒｎｅｓの迷路１４及び１５回目の実験についての平均脱出時間を示す図である。ＰＰＦ１処理したマウスは、生理食塩水またはＹＰで処理したマウスと比べて脱出時間が短くなる傾向を示す。生理食塩水ｎ＝１３、ＹＰ=１４、ＰＰＦ１ｎ＝１３である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍであって、１元配置ＡＮＯＶＡ、テューキー事後検定である。
【図６２Ａ】生理食塩水対照またはＰＰＦ１で処理した４．５ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ１ｎ＝８）、７．５ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ５ｎ＝６）及び１２ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝１５、ＰＰＦ５ｎ＝１４）のＮＧＳマウスの歯状回におけるダブルコルチン（ＤＣＸ）陽性細胞の数を示す図である。７．５ヵ月齢及び１２ヵ月齢のマウスにおいて非常に助けとなったＤＣＸ陽性細胞数の年齢依存性の減少がみられる。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍである。対応がないＴ検定であって、 *ｐ＜０．０５、****Ｐ＜０．０００１である。
【図６２Ｂ】処理開始時のダブルコルチン（ＤＣＸ）陽性細胞の数に対するＤＣＸ陽性細胞のパーセンテージを示す図である。。ＰＰＦ１処理はニューロン新生のレベルを処理時と同レベルに保ち、年齢依存性のＤＣＸ数の減少から救う。３ヵ月齢ｎ＝８、６ヵ月齢ｎ＝７、１０．５ヵ月齢ｎ＝１９、４．５ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ１ｎ＝８）、７．５ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ５ｎ＝６）、１２ヵ月齢（生理食塩水ｎ＝１５、ＰＰＦ５ｎ＝１４）である。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍである。対応がないＴ検定であって、 *ｐ＜０．０５、****Ｐ＜０．０００１である。
【図６３】生理食塩水またはＰＰＦ１で処理した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの海馬におけるＣＤ６８陽性領域のパーセント閾値を示す図である。ＰＰＦ１処理が完了した２４時間後にＣＤ６８免疫反応性の明らかな低下を生じる。生理食塩水ｎ＝１０、ＰＰＦ１ｎ＝１０、対応のないＴ検定であって、 *ｐ＜０．０５である。
【図６４Ａ】生理食塩水またはＰＰＦ１で処理したマウスにおけるＣＤ６８免疫反応性の代表画像を示す図である。
【図６４Ｂ】生理食塩水またはＰＰＦ１で処理したマウスにおけるＩｂａ−１免疫反応性の代表画像を示す図である。
【図６５Ａ】６ヵ月齢で開始するＮＧＳマウス群への２度の強化パルス投薬計画を示す図である。マウス群は当初６ヵ月齢で処理され、２度の連続７日間の強化投薬を８週間隔で受けた。最後のパルス投薬計画の６週後に、マウスが１２ヵ月齢であるとき、行動試験が行われた。
【図６５Ｂ】３ヵ月齢で開始するＮＧＳマウス群への２度の強化パルス投薬計画を示す図である。マウス群は当初３ヵ月齢で３度の連続７日間の強化投薬を８週、８週、及び７週間隔で受けた。最後のパルス投薬計画の６週後に、マウスが１２ヵ月齢であるとき、行動試験が行われた。
【図６６】溶媒、運動負荷なし；ＰＰＦ１を７日間パルス投与；ＰＰＦ１を７日間パルス投与とそれに続く８週間隔をおいた２度の連続強化投薬計画；及び残りの研究のための溶媒プラス運動負荷の処理を３ヵ月齢で受けた１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの海馬の５つの部分から数えられた海馬におけるＤＣＸ陽性細胞の総数を示す図である。データのすべては平均値±ｓ．ｅ．ｍである。****Ｐ＜０．０００１、 ***Ｐ＜０００１、ダネット事後検定によるＡＮＯＶＡである。
【図６７】溶媒、運動負荷なし；ＰＰＦ１を７日間パルス投与；ＰＰＦ１を７日間パルス投与とそれに続く８週、８週、及び７週間隔での３度の連続強化投薬計画；及び残りの研究のための溶媒プラス運動負荷の処理を３ヵ月齢で受けた１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの海馬の５つの部分から数えられた海馬におけるＤＣＸ陽性細胞の総数を示す図である。
【図６８】当初６ヵ月齢のコホート（図６５Ａ及び図６６参照）のマウスからの１２ヵ月齢のＮＳＧマウス群のＹ迷路での行動遂行を示す図である。ＰＰＦ１及びＰＰＦ１プラス強化剤で処理したマウス群についてのＹ迷路の新しい分枝への総進入数の割合は、対照と比べて空間学習記憶を明らかにに増加させる傾向を強める。
【図６９Ａ】９６時間のＰＰＦ１（２つの異なるロット）またはＨＡＳ１での処理によって、ｒｈアルブミンまたは対照処理した細胞と比べたときに皮質に明らかに大きな神経突起伸長を生じることを示す図である。Ｎ＝１１〜１６独立した実験±ＳＥＭ、１元配置ＡＮＯＶＡ、 *ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１である。
【図６９Ｂ】９６時間のＰＰＦ１（２つの異なるロット）またはＨＡＳ１での処理によって、ｒｈアルブミンまたは対照処理した細胞と比べたときに海馬神経細胞に明らかに大きな神経突起伸長を生じることを示す図である。Ｎ＝１１〜１６独立した実験±ＳＥＭ、１元配置ＡＮＯＶＡ、 *ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１である。
【図７０Ａ】対照で処理した細胞と比べてＰＰＦ１(２つのロット)およびＨＡＳ１の存在下で１４日間培養した初代マウスの皮質神経細胞において、通常の神経細胞マーカーＴｕｊ１によるｍＲＮＡレベル(ｑＰＣＲ)の発現に対して、ＳＹＮ１及びＰＳＤ−９５のシナプスマーカーは発現量が多いことを示す図である。
【図７０Ｂ】対照で処理した細胞と比べてＰＰＦ１(２つのロット)およびＨＡＳ１の存在下で１４日間培養した初代マウスの皮質神経細胞において、ウエスタンブロット解析に従うＳｙｎ1のタンパク質レベルの増加を示す図である。
【図７１】１００ｍＬまたは２５０ｍＬの何れかのＰＰＦ1で連続５日間治療された軽度から中程度のアルツハイマー病のヒトの患者は、６カ月間に渡ってＡＤＡＳ−Ｃｏｇ、ＡＤＣＳ−ＡＤＬ、及びＣＤＲ-ＳＢのスケールによって評価されるように大幅な認知または機能の低下を呈しないことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
１．序論
本発明は、加齢性認知症または運動機能の低下を含む認知及び運動の障害、及び／または神経変性疾患の治療及び／または予防のための方法及び組成物の特定及び発見に関する。本明細書に記載されているものは、そのような障害を患っている対象の治療のための方法及び組成物であり、それらは本発明の態様である。本明細書に記載されているものはまた、認知または運動の障害を患っている対象にてニューロン新生または神経炎症の減少及び／または認知または運動の改善をもたらす投薬計画である。本明細書に記載されている方法及び組成物は、認知及び運動の障害、加齢性認知症、神経炎症、及び／または神経変性疾患を予防すること、認知及び運動の障害、加齢性認知症、神経炎症、及び／または神経変性疾患の症状を改善すること、加齢に伴う認知もしくは運動の障害、加齢性認知症、神経炎症、及び／または神経変性疾患の進行を減速すること、及び／または加齢に伴う認知及び運動の障害、加齢性認知症、神経炎症、及び／または神経変性疾患の進行を元に戻すことにおいて有用である。本発明の実施には、治療としての血液血漿画分、たとえば、以下に記載されているＣｏｈｎ分画法のような血液分画法から得られる１以上の画分または溶出物を使用することが含まれる。本発明の実施形態には、血漿画分（以後、「血漿画分」と呼ばれる個々にまたは複合体として正常ヒトアルブミンとアルファ及びベータのグロブリンとガンマグロブリンと他のタンパク質とで構成される溶液）を使用することが含まれる。本発明の別の実施形態には、治療として血漿タンパク質画分（ＰＰＦ）を使用することが含まれる。本発明の別の実施形態には、治療としてヒトアルブミン溶液（ＨＡＳ）画分を使用することが含まれる。さらに別の実施形態には、以下に記載される溶出物Ｉまたは溶出物ＩＩ／ＩＩＩのような血液分画法に由来する溶出物を使用することが含まれる。追加の実施形態には、血栓症のリスクを減らす一方で有効性を保持するために実質的にすべての凝固因子を取り除いている血液血漿画分が含まれる（たとえば、全体として参照によって本明細書に組み入れられる米国特許出願公開番号６２／２３６，７１０及び６３／３７６，５２９を参照のこと）。
【００２３】
本発明を詳細に記載する前に、本発明は記載されている特定の方法または組成物に限定されないので、当然、変化してもよいことが理解されるべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される専門用語は特定の実施形態のみを記載する目的のためのものであって、限定を意図するものではないことも理解される。
【００２４】
本明細書で議論される出版物は、本出願の出願日に先立って単にそれらの開示のために提供されている。本発明は先行発明のせいでそのような出版物に先行する権利がないという承認と解釈されるものは本明細書にはない。さらに、提供されている出版の日付は独立して確認される必要があってもよい実際の出版日とは異なってもよい。
【００２５】
値の範囲が提供される場合、文脈が明瞭に指示しない限り、その範囲の下端と上端との間で下端の単位の１０分の１までの各介在する値も具体的に開示される。定められた範囲における定められた値または介在する値とその言及される範囲における他の言及される値または介在する値との間の各さらに小さな範囲は本発明内に包含される。定められた範囲とにて具体的に除外される端次第で、これらのさらに小さな範囲の上端及び下端は独立してその範囲に含まれてもよいし、または除外されてもよく、そのさらに小さな範囲に端の一方が含まれる、両方とも含まれない、または両方とも含まれる各範囲も本発明内に包含される。定められた範囲が一方または両方の端を含む場合、それらの含まれる端のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。
【００２６】
特許請求の範囲は任意の要素を除外するように下書きされてもよいことが言及される。そのようなものとして、この記述は、特許請求の範囲の要素の引用または「否定的な」限定の使用と併せた「単に」、「のみ」等のような排他的な用語の使用について先行詞として役立つように意図される。
【００２７】
本開示を読む際に当業者に明らかであるように、本明細書で記載され、説明されている個々の実施形態のそれぞれは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく他の幾つかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離されてもよい、または容易にそれと組み合わせられてもよい別個の成分及び特徴を有する。引用された方法は引用された事象の順に、または理論的に可能である他の順に実施することができる。
【００２８】
２．定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語はすべて本発明が属する技術の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似するまたは同等である方法及び物質を本発明の実践または試験で使用することができるが、一部の可能性がある且つ好まれる方法及び物質がここで記載されている。本明細書で言及される出版物はすべて、出版物が併せて引用される方法及び／または物質を開示し、記載するために参照によって本明細書に組み入れられる。本開示は矛盾が存在する程度まで組み込まれた出版物の開示に優先することが理解される。
【００２９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形態「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には文脈が明瞭に指示しない限り、複数の指示対象が含まれることが言及されなければならない。従って、たとえば、「ａ細胞」への言及は複数のそのような細胞を含み、「ｔｈｅペプチド」への言及は当業者等に既知の１以上のペプチド及びその同等物、たとえば、ポリペプチドを含む。
【００３０】
本発明の方法を記載することにおいて、用語「宿主」、「対象」、「個体」及び「患者」は相互交換可能に使用され、開示される方法に係るそのような治療を必要とする哺乳類を指す。そのような哺乳類には、たとえば、ヒト、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、マウス及びラットが挙げられる。特定の実施形態では、対象は非ヒト哺乳類である。一部の実施形態では、対象は家畜である。一部の実施形態では、対象はペットである。一部の実施形態では、対象は哺乳類である。特定の実施形態では、対象はヒトである。他の対象には、家庭内ペット（たとえば、イヌ及びネコ）、家畜（たとえば、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ等）、齧歯類（たとえば、疾患の動物モデルのような、たとえば、マウス、モルモット、及びラット）、及び非ヒト霊長類（たとえば、チンパンジー及びサル）を挙げることができる。そのようなものとして、本発明の対象には、哺乳類、たとえば、ヒト及び他の霊長類、たとえば、チンパンジー及び他の類人猿及びサル種等が挙げられるが、これらに限定されず、特定の実施形態では、対象はヒトである。用語、対象はまた、任意の年齢、体重または他の身体的特徴のヒトまたは生物を含むことにし、その際、対象は成人、小児、幼児または新生児であってもよい。
【００３１】
「若齢」または「若齢個体」によって、３０歳以下、たとえば、２５歳以下または２２歳以下を含む４０歳以下、たとえば、３５歳以下の実年齢である個体を意味する。場合によっては、若齢血漿を含む血液製剤の供給源として役立つ個体は、１０歳以下、たとえば、１歳以下を含む、５歳以下である者である。場合によっては、対象は新生児であり、血漿製剤の供給源は臍帯血であり、その際、血漿製剤は新生児の臍帯血から採取される。そのようなものとして、「若齢」及び「若齢個体」は０〜４０歳の間、たとえば、０、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５または４０歳である対象を指してもよい。他の例では、「若齢」及び「若齢個体」は比較的老齢個体で示される血漿における炎症性サイトカインがレベルを示さない個体のような生物年齢（実年齢とは対照的に）を指してもよい。逆に、「若齢」及び「若齢個体」は、比較的老齢個体でのレベルと比べて血漿での抗炎症性サイトカインが高いレベルを示す個体のような生物年齢（実年齢とは対照的に）を指してもよい。例として、且つ限定ではなく、炎症性サイトカインはエオタキシンであり、若齢対象または若齢個体と老齢個体との間の倍率差は少なくとも１．５倍である。同様に、他の炎症性サイトカインにて老齢個体と若齢個体との間での倍率差を用いて生物年齢を指してもよい（参照によって本明細書に組み入れられる米国特許出願番号１３／５７５，４３７を参照のこと）。普通、個体は健康であり、たとえば、個体は採取の時点で血液悪性腫瘍または自己免疫疾患を有さない。
【００３２】
「加齢に関連した認知障害を患っている個体またはそれを患うリスクがある個体」によって、平均寿命のほぼ５０％を超える、たとえば、平均寿命の６０％を超える、たとえば、７０％を超える、たとえば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９９％超える個体を意味する。個体の年齢は当該種に依存する。従って、この比率は当該種の予測平均余命に基づく。たとえば、ヒトでは、そのような個体は、たとえば、以下でさらに記載されている加齢に関連した状態、たとえば、自然な加齢過程に関連する認知障害を患っている５０歳以上、たとえば、６０歳以上、７０歳以上、８０歳以上、９０歳以上、及び普通、１００歳未満、たとえば、９０歳、すなわち、約５０〜１００歳の間の年齢、たとえば、５０．．．５５．．．６０．．．６５．．．７０．．．７５．．．８０．．．８５．．．９０．．．９５．．．１００歳以上、５０〜１００歳の間の任意の年齢であり、加齢に関連した状態、たとえば、認知障害の症状をまだ示し始めていない約５０歳以上、たとえば、６０歳以上、７０歳以上、８０歳以上、９０歳以上、及び普通、１００歳未満、すなわち、約５０〜１００歳の間の年齢、たとえば、５０．．．５５．．．６０．．．６５．．．７０．．．７５．．．８０．．．８５．．．９０．．．９５．．．１００歳である個体であり、以下でさらに記載されている加齢に関連した疾患による認知障害を患っている任意の年齢の個体であり、及び通常、認知障害を伴う加齢に関連した疾患であると診断されているが、個体はまだ認知障害の症状を示し始めていない任意の年齢の個体である。非ヒト対象について対応する年齢は知られており、本明細書に適用するように意図される。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、「治療」は（ｉ）疾患もしくは障害の予防、または（ｉｉ）疾患もしくは障害の症状の軽減もしくは除去のいずれかを指す。治療は予防上（疾患の発症に先立って）または治療上（疾患の発症に続いて）達成されてもよい。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に防ぐという点で予防的であってもよいし、及び／または疾患及び／または疾患に起因する有害効果についての部分治癒または完全治癒という点で治療的であってもよい。従って、用語「治療」は本明細書で使用されるとき、哺乳類における加齢に伴う疾患または障害の治療を対象とし、それには、（ａ）疾患に罹り易くてもよいが、まだそれを有すると診断されていない対象にて疾患が発生することを防ぐこと、ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、その発症を止めること、または（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退縮を引き起こすことが含まれる。治療は、種々の異なる身体的発現、たとえば、遺伝子発現の改変、組織または臓器の若返り等を生じてもよい。治療剤は疾患の発症の前に、発症の間に、または発症の後で投与されてもよい。治療が患者の望ましくない臨床症状を安定化するまたは軽減する進行中の疾患の治療は特に興味深い。そのような治療は冒された組織にて機能の完全な喪失に先立って実施されてもよい。主題の治療法は疾患の症候性段階の間に、且つ場合によっては、疾患の症候性段階の後で投与されてもよい。
【００３４】
一部の実施形態では、治療される加齢に関連した状態は個体における認知能力の加齢に関連した障害である。認知能力または「認知」によって、注意及び集中を含む精神機能、複雑な作業及び概念を習得すること、記憶（短い及び／または長い用語で新しい情報を獲得すること、保持すること、及び取り戻すこと）、情報処理（五感によって集めた情報に対応すること）、視空間機能（心的イメージ、コピー描画、物体または形状を構築すること用いた視覚的知覚、奥行き知覚）、言語を作り出すこと及び理解すること、会話流暢性（単語発見）、問題を解決すること、決心すること、及び実行機能（計画を立てること及び優先順位を決めること）を意味する。「認知低下」によって、これらの能力の１以上における進行性の低下、たとえば、記憶、言語、思考、判断等の低下を意味する。「認知能力における障害」及び「認知障害」によって、健常な個体、たとえば、年齢が一致する健常な個体と比べた、または前の時点、たとえば、２週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、６ヵ月、１年、２年、５年または１０年以上前のその個体の能力と比べた認知能力の低下を意味する。「加齢に関連した認知障害」によって、たとえば、自然な加齢過程に関連する認知障害、たとえば、軽い認知障害（Ｍ.Ｃ.Ｉ.）を含む通常加齢に関連した認知能力の障害及び老化が増すと共に高頻度で見られる障害である加齢に関連した障害、たとえば、神経変性状態、たとえば、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、緑内障、筋強直性ジストロフィー、血管性認知症等に関連する認知障害を意味する。
【００３５】
一部の実施形態では、治療される加齢に関連した状態は個体における運動能力の加齢に関連した障害である。運動能力によって、小さな且つ正確な動きを生じる微細運動技能（たとえば、書くこと、靴紐を結ぶこと）及び大きな動きのための粗大運動技能（たとえば、歩行、走行、蹴ること）のような動きを生じる複雑な筋と神経との活動を実施する能力を含む運動過程を意味する。「運動低下」によって、これらの能力、たとえば、微細な動きまたは粗大運動の技能等の１以上における進行性の低下を意味する。「損傷された運動」及び「運動障害」によって、健常な個体、たとえば、年齢が一致した健常な個体と比べた、または前の時点、たとえば、２週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、６ヵ月、１年、２年、５年または１０年以上前のその個体の能力と比べた運動の能力／技能の低下を意味する。「加齢に関連した運動障害」によって、たとえば、自然な加齢過程に関連する運動の障害または低下、及び加齢に関連した障害、すなわち、老化が増すと共に高頻度で見られる障害、たとえば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症等の神経変性状態に関連する運動の障害または低下を含む、通常、加齢に関連した運動能力の障害または低下を意味する。
【００３６】
一部の実施形態では、治療される加齢に関連した状態は、個体における神経炎症の加齢に関連した増加である。「神経炎症」によって、傷害、感染または神経変性疾患に対する神経系の生化学的な及び細胞性の反応を意味する。そのような反応は、潜在的危害に対して防御する中枢神経系の免疫を含むことによって誘発因子を減らすことに向けられる。神経変性は中枢神経系で発生し、神経の構造及び機能の喪失の顕著な特徴を示す。神経炎症性疾患または神経炎症に関連する状態もしくは疾患には、例として且つ限定ではなく、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症等のような神経変性疾患が挙げられる。
【００３７】
血漿成分を含む血液製剤
主題の方法を実践することにおいて、血漿を含む血液製剤がそれを必要とする個体、たとえば、認知障害または運動障害、神経炎症及び／または加齢性認知症を患っているまたは患うリスクがある個体に投与される。そのようなものとして、本発明の実施形態に係る方法には、個体（「ドナー個体」または「ドナー」）に由来する血漿成分を含む血液製剤を、認知障害または運動障害、神経炎症、神経変性及び／または加齢性認知症を少なくとも患うリスクがあるまたは患っている個体（「レシピエント個体」または「レシピエント」）に投与することが含まれる。「血漿成分を含む血液製剤」によって、血漿を含む血液（たとえば、全血、血液血漿またはその画分）に由来する製剤を意味する。用語「血漿」は、約９２％の水分と、たとえば、アルブミン、ガンマグロブリン、抗血友病因子及び他の凝固因子のような７％のタンパク質と１％の鉱物塩、糖、脂肪、ホルモン及びビタミンとで構成される血液の麦わら色／淡黄色の液体成分を指すために従来の意味で使用される。主題の方法で使用するために好適な血漿を含む血液製剤の非限定例には、抗凝固剤（たとえば、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、シュウ酸塩、ヘパリン等）で処理した全血、全血を濾過して白血球を除くことによって作製した血液製剤（「白血球除去」）、血漿交換に由来するまたはアフェレーシスに由来する血漿から成る血液製剤、新鮮凍結血漿、精製血漿から本質的に成る血液製剤、及び血漿画分から本質的に成る血液製剤が挙げられる。場合によっては、採用される血漿製剤は非全血血漿製剤であり、それによって製剤は全血ではないことが意味されるので、それは、たとえば、赤血球、白血球等のような全血で見いだされる１以上の成分を、少なくともこれらの成分が全血に存在する範囲において欠いている。場合によっては、血漿製剤は、完全ではないにしても実質的に無細胞であり、その際、そのような例では、細胞成分は５体積％、たとえば、０．５％以下を含めて１％以下であってもよく、その際、場合によっては、無細胞血漿画分は細胞を完全に欠く組成物であり、すなわち、それらは細胞を含まない。
【００３８】
血漿成分を含む血液製剤の採取
本明細書に記載されている方法の実施形態には、ヒトボランティアを含むドナーに由来することができる血漿成分を含む血液製剤の投与が含まれる。用語「ヒト由来」はそのような製剤を指すことができる。血漿を含む血液製剤をドナーから採取する方法は当該技術で周知である（たとえば、参照によって本明細書に組み入れられるＡＡＢＢ  ＴＥＣＨＮＩＣＡＬ  ＭＡＮＵＡＬ，（Ｍａｒｋ  Ａ．Ｆｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１８ｔｈ  ｅｄ．２０１４）を参照のこと）。
【００３９】
一実施形態では、供血は静脈穿刺によって得られる。別の実施形態では、静脈穿刺はたった１回の静脈穿刺である。別の実施形態では、生理食塩水による体積補充は採用されない。好まれる実施形態では、血漿交換のプロセスを用いて血漿を含む血液製剤を得る。血漿交換は、重量調整した体積の血漿を取り出し、細胞成分をドナーに戻すことを含むことができる。好まれる実施形態では、細胞の凝固を防ぐために血漿交換の間、クエン酸ナトリウムが使用される。ドナーから採取される血漿の体積はクエン酸塩投与の後、好ましくは６９０〜８８０ｍＬであり、好ましくはドナーの体重と調整する。
【００４０】
３．血漿画分
第二次世界大戦の間に、兵士が大量の血液を失った際、戦場で採用され得る安定な血漿増量剤の必要性が生じた。その結果、凍結乾燥血漿を調製する方法が開発された。しかしながら、再構成には無菌水が必要だったので、凍結乾燥血漿の使用は戦闘の状況では困難だった。代替として、Ｅ．Ｊ．Ｃｏｈｎ博士はアルブミンを使用し、ショックの治療に直ちに導入できる使用準備済みの安定な溶液を調製し得ることを提案した（Ｊｏｈａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ）  １６５  （Ｊａｃｋ  Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｄ．，１ｓｔ  ｅｄ．１９９１）を参照のこと）。血漿画分を精製するＣｏｈｎ博士の手順は変性効果のために冷エタノールを利用したが、ｐＨ及び温度の変化を採用して分離を達成する。
【００４１】
本明細書に記載されている方法の実施形態には、血漿画分の対象への投与が含まれる。分画は特定のタンパク質サブセットが血漿から分離されるプロセスである。分画技術は当該技術で既知であり、１９４０年代の間にＣｏｈｎ，ｅｔ  ａｌによって開発された工程（参照によって本明細書に組み入れられるＥ．Ｃｏｈｎ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＩＶ．Ａ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  ｆｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ａｎｄ  ｆｌｕｉｄｓ．６８Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ４５９（１９４６））を頼りにする。幾つかの工程がこのプロセスに含まれ、各工程は、選択的なタンパク質の沈殿を生じる特定のエタノール濃度及びｐＨ、温度及び浸透圧のシフトを含む。沈殿物も遠心分離または沈殿を介して分離される。元々の「Ｃｏｈｎの分画プロセス」は、画分Ｉ、画分ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＶ−１、画分ＩＶ−４及び画分Ｖと名付けられた５つの画分への沈殿物を介したタンパク質の分離を含んだ。アルブミンは、このプロセスの元々同定された終点（画分Ｖ）産物だった。本発明の実施形態によれば、各画分（または前の分離工程からの溶出物）は治療上有用なタンパク質画分を含有するまたは含有する可能性がある（参照によって本明細書に組み入れられるＴｈｉｅｒｒｙ  Ｂｕｒｎｏｕｆ，Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ，２１（２），Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１０１（２００７）；Ａｄｉｌ  Ｄｅｎｉｚｌｉ，Ｐｌａｓｍａ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ：ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，４Ｊ．Ｂｉｏｌ．＆  Ｃｈｅｍ．３１５，（２０１１）；及びＴ．Ｂｒｏｄｎｉｅｗｉｃｚ−Ｐｒｏｂａ，Ｈｕｍａｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ−ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，５ Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２４５（１９９１），及び米国特許第３８６９４３１号、同第５１１０９０７号、同第５２１９９９５号、同第７５３１５１３号、及び同第８７７２４６１号を参照のこと）。特定のタンパク質画分を得るために上記の実験パラメーターの調整を行うことができる。
【００４２】
さらに最近、分画はさらなる複雑さに達し、そのようなものとして、本発明の追加の実施形態を含む。複雑さにおけるこの最近の増加は、寒冷沈降物、冷却不足の血漿、及びＣｏｈｎの画分のような既存の画分からの新しいタンパク質の単離を生じるクロマトグラフィーの導入、クロマトグラフィーとエタノール分画法を統合することによるＩｇＧ回収の増加、及びウイルスの減少／不活化／除去を介して生じている（同文献）。生理的なｐＨ及びイオン強度でタンパク質を捕捉するために、アニオン交換クロマトグラフィーを利用することができる。これによってタンパク質及び／またはタンパク質画分の機能的活性が保護される。ヘパリン及びモノクローナル抗体もアフィニティークロマトグラフィーで使用される。当業者は、上記に記載されているパラメーターを調整して具体的に所望の血漿タンパク質を含有する画分を得てもよいことを認識することになる。
【００４３】
血漿画分は硫酸アンモニウムベースでもなされ得る(参照によって本明細書に組み入れられるＯｄｕｎｕｇａ  ＯＯ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，１：３（２０１３）；Ｗｉｎｇｆｉｅｌｄ  ＰＴ,Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ，Ａｐｐｘ．３（２００１）)。特定の血漿画分を得ることに加えて、硫酸アンモニウムベースの画分が血漿から多量のタンパク質を減少させるために用いられてきた(参照によって本明細書に組み入れられるＳａｈａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ，５（８）  （２０１２）)。
【００４４】
本発明の実施形態では、血液血漿は工業環境で分画される。凍結血漿は１℃〜４℃で解凍される。連続冷蔵遠心分離が解凍血漿に適用され、寒冷沈降物が単離される。回収された寒冷沈降物は−３０℃以下で凍結され、保存される。寒冷沈降物が少ない（「寒冷物が少ない」）血漿を、たとえば、第ＩＸ因子複合体及びその成分のような不安定な凝固因子と同様に抗トロンビン及びＣ１エステラーゼ阻害剤のようなプロテアーゼ阻害剤の捕捉（たとえば、一次クロマトグラフィーを介して）のために直ちに処理する。その後の工程で連続遠心分離及び沈殿単離を適用することができる。そのような技法は当業者に既知であり、たとえば、その開示が全体として参照によって本明細書に組み入れられる米国特許第４６２４７８０号、同第５２１９９９５号、同第５２８８８５３号、及び米国特許出願番号２０１４０３４３２５５及び２０１５０３４３０２５に記載されている。
【００４５】
本発明の実施形態では、血漿画分は実質的な濃度のアルブミンを含有する血漿画分を含んでもよい。本発明の別の実施形態では、血漿画分は実質的な濃度のＩｇＧまたは静脈内免疫グロブリン（ＩＧＩＶ）（たとえば、Ｇａｍｕｎｅｘ−Ｃ（登録商標））を含有する血漿画分を含んでもよい。本発明の別の実施形態では、血漿画分は、たとえば、プロテインＡが介在する枯渇のような当業者に周知の方法によって免疫グロブリン（ＩｇＧ）を実質的に枯渇させているＧａｍｕｎｅｘ−Ｃ（登録商標）のようなＩＧＩＶ血漿画分を含んでもよい（Ｋｅｓｈｉｓｈｉａｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｗｏｒｋｆｌｏｗ  ｆｏｒ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｉｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｙｉｅｌｄｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｅａｒｌｙ  Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＆  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，１４  ａｔ  ２３７５−９３（２０１５）を参照のこと）。追加の実施形態では、血液血漿画分は、血栓症のリスクが低下した画分の有効性を保持するために実質的にすべての凝固因子が取り除かれているものであってもよい。たとえば、血漿画分は、その開示が全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１６年８月１８日に出願された米国特許第６２／３７６，５２９号に記載されているような血漿画分であってもよい。
【００４６】
４．アルブミン製剤
当業者にとって、血漿タンパク質画分（「ＰＰＦ」）とヒトアルブミン溶液（「ＨＡＳ」）とのアルブミン血漿製剤（「ＡＰＰ」）の２つの一般的なカテゴリーが存在する。ＰＰＦはＨＡＳよりも収率が高いプロセスに由来するが、ＨＡＳよりも低い最小アルブミン純度を有する（ＰＰＦについては＞８３％及びＨＡＳについては＞９５％）。（ヒトアルブミン溶液の製造：ａ  ｃｏｎｔｉｎｕａｌｌｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｃｏｌｌｏｉｄ，Ｐ．Ｍａｔｅｊｔｓｃｈｕｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．ｏｆ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ，８５（６）：８８７−９５，ａｔ  ８８８（２０００））。場合によっては、ＰＰＦは８３％〜９５％の間での、または代わりに８３％〜９６％の間でのアルブミン純度を有する。アルブミン純度は、電気泳動または、たとえば、質量分析によるような他の定量アッセイによって決定することができる。さらに、一部は、ＰＰＦが、たとえば、ＰＫＡのようなタンパク質「混入物」の存在のゆえに短所を有することを言及している（同文献）。結果として、ＰＰＦ製剤はアルブミン血漿製剤としての需要を失っており、特定の国の薬局方からはリストからの削除さえなされている（同文献）。これらの懸念に反して、本発明はこれらの「混入物」の有益な利用を行う。前述のＰＫＡと同様にα、β及びγのグロブリンに加えて、本発明の方法は、たとえば、ニューロン新生、神経細胞の生存、認知または運動の機能の改善、及び神経炎症の減少のようなプロセスを促進する「混入物」内の追加のタンパク質または他の因子を利用する。
【００４７】
当業者はＰＰＦの幾つかの市販の供給源（たとえば、「市販のＰＰＦ製剤」）があるまたはあったことを認識する。これらには、Ｐｌａｓｍａ−Ｐｌｅｘ（商標）ＰＰＦ（Ａｒｍｏｕｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）、Ｐｌａｓｍａｎａｔｅ（商標）ＰＰＦ（Ｇｒｉｆｏｌｓ，Ｃｌａｙｔｏｎ，ＮＣ）、Ｐｌａｓｍａｔｅｉｎ（商標）（Ａｌｐｈａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）、及びＰｒｏｔｅｎａｔｅ（商標）ＰＰＦ（Ｂａｘｔｅｒ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）が挙げられる。
【００４８】
当業者はまた、ＨＡＳの幾つかの市販の供給源（「市販のＨＡＳ製剤」）があるまたはあったことも認識する。これらには、Ａｌｂｕｍｉｎａｒ（商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）、ＡｌｂｕＲｘ（商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）、Ａｌｂｕｔｅｉｎ（商標）（Ｇｒｉｆｏｌｓ，Ｃｌａｙｔｏｎ，ＮＣ）、Ｂｕｍｉｎａｔｅ（商標）（Ｂａｘａｔｌａ，Ｉｎｃ．，Ｂａｎｎｏｃｋｂｕｒｎ，ＩＬ）、Ｆｌｅｘｂｕｍｉｎ（商標）（Ｂａｘａｔｌａ，Ｉｎｃ．，Ｂａｎｎｏｃｋｂｕｒｎ，ＩＬ）、及びＰｌａｓｂｕｍｉｎ（商標）（Ｇｒｉｆｏｌｓ，Ｃｌａｙｔｏｎ，ＮＣ）が挙げられる。
【００４９】
ａ．血漿タンパク質画分（ヒト）（ＰＰＦ）
米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）によれば、「血漿タンパク質画分（ヒト）」またはＰＰＦは「ヒト血漿に由来するアルブミンとグロブリンとで構成されるタンパク質の無菌溶液」として定義される製品の適正な名称である（参照によって本明細書に組み入れられる連邦規制のコード“ＣＦＲ”２１  ＣＦＲ６４０．９０）。ＰＰＦの供給源物質は２１  ＣＦＲ６４０．１〜６４０．５（参照によって本明細書に組み入れられる）にて処方されたように調製される全血から回収される血漿、または２１  ＣＦＲ６４０．６０〜６４０．７６（参照によって本明細書に組み入れられる）にて処方されたように調製される供給源血漿である。
【００５０】
ＰＰＦは、２１  ＣＦＲ６４０．９２（参照によって本明細書に組み入れられる）による以下の基準をそれが満たすことを判定するために調べられる。
（ａ）最終製剤がタンパク質の５．０±０．３０パーセント溶液であるべきである。且つ
（ｂ）最終製剤における総タンパク質が少なくとも８３パーセントのアルブミンと１７パーセント以下のグロブリンとから成るべきである。総タンパク質の１パーセント以下はガンマグロブリンであるべきである。タンパク質の組成は食品医薬品局の生物製剤評価及び研究センターの所長によって各製造元について認可されている方法によって決定される。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、「血漿タンパク質画分」または「ＰＰＦ」はヒト血漿に由来するアルブミンとグロブリンとで構成されるタンパク質の無菌溶液を指し、アルブミン含量は少なくとも８３％であり、１７％以下のグロブリン（α１、α２、β及びγのグロブリンを含む）と他の血漿タンパク質とを伴い、電気泳動で判定されるとき１％以下のガンマグロブリンを伴う（Ｈｉｎｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｈｅａｔ−Ｔｒｅａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＶＯＸ  ＳＡＮＧＵＩＮＩＳ，２（１７４）（１９５７））。ＰＰＦは溶媒に懸濁すると類似の組成を有する固体形態を指すこともできる。総グロブリン画分は総タンパク質からアルブミンを差し引くことを介して決定することができる（Ｂｕｓｈｅｒ，Ｊ．，Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ａｎｄ  Ｇｌｏｂｕｌｉｎ，  ＣＬＩＮＩＣＡＬ  ＭＥＴＨＯＤＳ：ＴＨＥ  ＨＩＳＴＯＲＹ，ＰＨＹＳＩＣＡＬ，ＡＮＤ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＥＸＡＭＩＮＡＴＩＯＮＳ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｗａｌｋｅｒ  ＨＫ，Ｈａｌｌ  ＷＤ，Ｈｕｒｓｔ  ＪＤ，ｅｄｓ．（１９９０））。
【００５２】
ｂ．アルブミン（ヒト）（ＨＡＳ）
ＦＤＡによれば、「アルブミン（ヒト）」（本明細書では「ＨＡＳ」とも呼ばれる）は「ヒト血漿に由来するアルブミンの無菌溶液」として定義される製剤の適正な名称である（参照によって本明細書に組み入れられる連邦規制のコード「ＣＦＲ２１  ＣＦＲ  ６４０．８０）。アルブミン（ヒト）の供給源物質は２１  ＣＦＲ６４０．１〜６４０．５（参照によって本明細書に組み入れられる）にて処方されたように調製される全血から回収される血漿、または２１  ＣＦＲ６４０．６０〜６４０．７６（参照によって本明細書に組み入れられる）にて処方されたように調製される供給源血漿である。アルブミン（ヒト）についての他の要件は２１  ＣＦＲ６４０．８０〜６４０．８４（参照によって本明細書に組み入れられる）にてリストにされている。
【００５３】
アルブミン（ヒト）は２１  ＣＦＲ６４０．８２による以下の基準をそれが満たすことを判定するために調べられる。
（ａ）タンパク質濃度。最終製剤は、４．０±０．２５パーセント、５．０±０．３０パーセント、２０．０±１．２パーセント、及び２５.０±１．５パーセントのタンパク質の溶液の１つの濃度に一致すべきである。
（ｂ）タンパク質組成。食品医薬品局の生物製剤評価及び研究センターの所長によって各製造元について認可されている方法によって判定されるとき、最終製剤における総タンパク質の少なくとも９６パーセントがアルブミンであるべきである。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、「アルブミン（ヒト）」または「ＨＡＳ」はヒト血漿に由来するアルブミンとグロブリンとで構成されるタンパク質の無菌溶液を指し、少なくとも９５％のアルブミン含量と５％以下のグロブリン（α１、α２、β及びγのグロブリンを含む）と他の血漿タンパク質を伴う。ＨＡＳは溶媒に懸濁すると類似の組成を有する固体形態を指すこともできる。総グロブリン画分は総タンパク質からアルブミンを差し引くことによって決定することができる。
【００５５】
当業者によって認識され得るように、ＰＰＦ画分及びＨＡＳ画分は凍結乾燥することもでき、または他の固形形態であることもできる。そのような調製物を適当な添加剤と共に用いて、たとえば、錠剤、粉剤、顆粒剤またはカプセル剤を作ることができる。固形形態は、水性溶媒または非水性溶媒、たとえば、植物油または他の類似の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪族酸のエステル、またはプロピレングリコールに、所望であれば、たとえば、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存剤のような従来の添加剤と共にそれらを溶解する、懸濁するまたは乳化することによって注射用製剤に製剤化することができる。
【００５６】
５．凝固因子を減らした画分
本発明の別の実施形態は、血栓症のリスクを減らした画分の有効性を保持するために実質的にすべての凝固因子が取り除かれる血液血漿画分を使用する。都合上、血液製剤は若齢ドナーまたは若齢ドナーのプールに由来することができ、ＡＢＯが適合する若齢血液製剤を提供するためにＩｇＭを欠くようにすることができる。現在、Ａ及びＢの抗原に対する天然に存在する抗体の存在が輸血反応を生じ得るので、輸注される血漿はＡＢＯ血液型について一致する。ＩｇＭは、ＡＢＯが一致しない血漿を患者が与えられるときの輸血反応に関与すると思われる。血液製剤または血液画分からのＩｇＭの除去は本発明の血液製剤または血液血漿画分を投与される対象にて輸血反応を排除するために役立つ。
【００５７】
従って、一実施形態では、本発明は、対象にて、たとえば、認知障害または運動障害、神経炎症または神経変性のような加齢に伴う状態を治療するまたは予防する方法に関する。方法は、個体または個体のプールからの全血に由来する血液製剤または血液画分を対象に投与することを含み、その際、血液製剤または血液画分は（ａ）少なくとも１つの凝固因子及び／または（ｂ）ＩｇＭを実質的に欠いている。一部の実施形態では、血液製剤または血液画分が由来する個体（複数可）は若齢個体である。一部の実施形態では、血液製剤は少なくとも１つの凝固因子及びＩｇＭを実質的に欠いている。特定の実施形態では、血液製剤はフィブリノーゲン（第Ｉ因子）を実質的に欠いている。追加の実施形態では、血液製剤は赤血球及び／または白血球を実質的に欠く。さらなる実施形態では、血液製剤は実質的に無細胞である。他の実施形態では、血液製剤は血漿に由来する。本発明のそのような実施形態は、全体として参照によって本明細書に組み入れられる２０１６年８月１８日に出願された米国特許出願番号６２／３７６，５２９によってさらに支持される。
【００５８】
６．タンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤の処理
本発明の追加の実施形態は、ＰＰＦと比べてアルブミン濃度を減らしたが、グロブリンと他の血漿タンパク質（一部によって「混入物」と呼ばれているもの）との量を増やした血漿画分を使用する。実施形態は、ＰＰＦ、ＨＡＳ、溶出物Ｉ及び溶出物ＩＩ／ＩＩＩと同様に、凝固因子をすべて効果的に欠いている。そのような血漿画分を以後、「タンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤」と呼ぶ。たとえば、本発明の実施形態は、８２％のアルブミンと１８％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の別の実施形態は、８１％のアルブミンと１９％のα、β及びγのグロブリン及び／または他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の別の実施形態は、８０％のアルブミンと２０％のα、β及びγのグロブリン及び／または他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、７０〜７９％のアルブミンと２１〜３０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、６０〜６９％のアルブミンと３１〜４０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、５０〜５９％のアルブミンと４１〜５０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、４０〜４９％のアルブミンと５１〜６０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、３０〜３９％のアルブミンと６１〜７０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、２０〜２９％のアルブミンと７１〜８０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、１０〜１９％のアルブミンと８１〜９０％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明の追加の実施形態は、１〜９％のアルブミンと９１〜９９％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。本発明のさらなる実施形態は、０％のアルブミンと１００％のα、β及びγのグロブリン及び他の血漿タンパク質とで構成されるタンパク質を濃縮した血漿タンパク質製剤を使用してもよい。
【００５９】
上記に記載されている本発明の実施形態は、１〜５％の総ガンマグロブリン濃度も有してもよい。
【００６０】
血漿画分におけるタンパク質の特定の濃度は関連技術の当業者に周知の技法を用いて決定されてもよい。例として且つ限定でなく、そのような技法には、電気泳動、質量分析、ＥＬＩＳＡ解析及びウエスタンブロット解析が挙げられる。
【００６１】
７．血漿画分の調製
ＰＰＦ及び他の血漿画分を調製する方法は当業者に周知である。本発明の実施形態は、ヒト血漿タンパク質画分を調製するために使用される血液が凝固の抑制のためのクエン酸塩または抗凝固剤クエン酸デキストロース溶液と共にフラスコに回収されることを可能にし、さらにＨｉｎｋ，ｅｔ  ａｌ．（参照によって本明細書に組み入れられるＨｉｎｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｈｅａｔ−Ｔｒｅａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＶＯＸ  ＳＡＮＧＵＩＮＩＳ，２（１７４）（１９５７）を参照のこと）で開示された方法のとおりに画分Ｉ、ＩＩ＋ＩＩＩ、ＩＶ及びＰＰＦに分離する。この方法によれば、混合物を２〜８℃に回収することができる。血漿を次いでその後、７℃にて遠心分離によって分離し、取り出し、−２０℃で保存することができる。次いで血漿を３７℃で解凍し、好ましくは−２０℃での保存から取り出した後、８時間以内に分画することができる。
【００６２】
血漿は、ｐＨ７．２及び−２〜−２．５℃の温度にて５．１〜５．６パーセントのタンパク質濃度で８％エタノールを用いて画分Ｉから分離することができる。冷たい５３．３パーセントのエタノール（１７６ｍＬ／血漿のＬ）を酢酸緩衝液（２００ｍＬの４Ｍの酢酸ナトリウム、２３０ｍＬの氷酢酸量子塩をＨ2 Ｏで１Ｌにする）と共に、ノズルを用いて、たとえば、４５０ｍＬ／分の速度で血漿温度を−２℃に下げている間に加えることができる。画分Ｉは遠心分離を介して溶出物（溶出物Ｉ）から分離し、取り出すことができる。フィブリノーゲンは当業者に周知の方法のとおりに画分Ｉから得ることができる。
【００６３】
画分ＩＩ＋ＩＩＩは、ｐＨ６．８、−６℃の温度で４．３パーセントのタンパク質濃度と共に２１パーセントのエタノールに溶出物を調整することを介して溶出物Ｉから分離することができる。冷たい９５パーセントのエタノール（１７６ｍＬ／溶出物ＩのＬ）をｐＨ調整に使用される１０Ｍの酢酸と共に、ノズルを用いて、たとえば、５００ｍＬ／分の速度で溶出物Ｉの温度を−６℃に下げている間に加えることができる。得られる沈殿物（画分ＩＩ＋ＩＩＩ）は−６℃にて遠心分離によって取り出すことができる。ガンマグロブリンは当業者に周知の方法を用いて画分ＩＩ＋ＩＩＩから得ることができる。
【００６４】
画分ＩＶ−１は、ｐＨ５．２、−６℃の温度にて３パーセントのタンパク質濃度にて１９パーセントのエタノールに溶出物を調整することを介して溶出物ＩＩ＋ＩＩＩ（「溶出物ＩＩ／ＩＩＩ」）から分離することができる。Ｈ2 Ｏ及びｐＨ調整のために使用される１０Ｍの酢酸は溶出物ＩＩ／ＩＩＩを−６℃で６時間維持しながら、ノズルを用いて加えることができる。沈殿する画分ＩＶ−１は−６℃で６時間沈殿することができ、その後、同じ温度で遠心分離によって溶出物から分離することができる。安定な血漿タンパク質画分は、ｐＨ４．６５、−７℃の温度で２．５パーセントのタンパク質濃度にてエタノール濃度を３０パーセントに調整することを介して溶出物ＩＶ−１から回収することができる。これは、冷たい酸・アルコール（２部の２Ｍ酢酸と１部の９５パーセントエタノール）で溶出物ＩＶ−１のｐＨを調整することによって達成することができる。−７℃の温度を維持しながら、調整した溶出物ＩＶ−１のリットルごとに１７０ｍＬの冷エタノール（９５％）を加える。沈殿するタンパク質は３６時間沈殿させることができ、その後、−７℃での遠心分離によって取り出すことができる。
【００６５】
回収したタンパク質（安定な血漿タンパク質画分）を乾燥させて（たとえば、凍結乾燥によって）アルコール及びＨ2 Ｏを取り除くことができる。得られた乾燥粉末を、たとえば、１５リットルの水／ｋｇの粉末を用いて無菌蒸留水に溶解することができ、１ＭのＮａＯＨで溶液をｐＨ７．０に調整する。５パーセントタンパク質の最終濃度は、アセチルトリプトファン酸ナトリウム、カプリル酸ナトリウム、及びＮａＣｌを含有する無菌蒸留水を加え、０．００４Ｍのアセチルトリプトファン酸塩、０．００４Ｍのカプリル酸塩及び０．１１２ＭのＮａＣｌの最終濃度に調整することによって達成することができる。最終的に、溶液を１０℃で濾過して透明な溶液を得ることができ、その後、病原体の不活化のために６０℃で少なくとも１０時間熱処理することができる。
【００６６】
当業者は、上記に記載されている様々な画分及び溶出物のそれぞれが疾患を治療するための本発明の方法と共に使用されてもよいことを認識する。たとえば、且つ限定の目的ではなく、溶出物Ｉまたは溶出物ＩＩ／ＩＩＩを利用して、認知障害、運動障害、及び神経変性障害のような疾患を治療してもよく、それらは本発明の実施形態である。
【００６７】
血漿画分及び血漿タンパク質画分（ＰＰＦ）を調製する先行する方法は単に例示であり、単に本発明の実施形態を含む。当業者は、これらの方法が変化し得ることを認識する。たとえば、とりわけ、ｐＨ、温度及びエタノール濃度を調整して本発明の様々な実施形態及び方法にて血漿画分及び血漿タンパク質画分の様々な変形を作り出すことができる。別の例では、本発明の追加の実施形態は血漿画分及び血漿タンパク質画分に由来する病原体の除去／不活化にナノ濾過の使用を考慮する。
【００６８】
本発明の追加の実施形態は追加の血漿画分を用いた及び／または含む方法及び組成物を考慮する。たとえば、本発明はとりわけ、アルブミンの特定の濃度が認知活動または運動活動を改善するために決定的に重要ではないことを実証する。従って、アルブミン濃度を減らした画分、たとえば、８３％未満のアルブミンを有するそれら画分が本発明によって考慮される。
【００６９】
８．治療
本明細書に記載されている本発明の方法の態様には、血漿を含む血液製剤、たとえば、上記に記載されているような血液血漿画分による対象の治療が含まれる。実施形態には、血漿を含む血液製剤によるヒト対象の治療が含まれる。当業者は、血漿を含む血液製剤による対象の治療の方法が当該技術で認識されていることを認識する。例として且つ限定ではなく、本明細書に記載されている本発明の方法の一実施形態は、認知または運動の障害、神経炎症、神経変性及び／または加齢性認知症の治療のために新鮮凍結血漿を対象に投与することで構成される。一実施形態では、血漿を含む血液製剤はドナーから採取して直ちに、たとえば、１２〜４８時間以内に、認知または運動の障害、神経炎症、神経変性及び／または加齢性認知症を患っているまたはそのリスクがある個体に投与される。そのような例では、製剤は冷蔵下で、たとえば、０〜１０℃で保存されてもよい。別の実施形態では、新鮮凍結血漿は−１８℃以下で凍結保存（低温保存）されているものである。投与に先立って、新鮮凍結血漿は解凍され、いったん解凍されると、解凍過程が開始した後６０〜７５分で対象に投与される。各対象は好ましくは単回単位の新鮮凍結血漿（２００〜２５０ｍＬ）を受け取り、新鮮凍結血漿は予め決定された年齢範囲のドナーに由来する。本発明の一実施形態では、新鮮凍結血漿は若齢個体によって提供される（に由来する）。本発明の別の実施形態では、新鮮凍結血漿は同一性別のドナーによって提供される（に由来する）。本発明の別の実施形態では、新鮮凍結血漿は１８〜２２歳の間での年齢範囲のドナーによって提供される（に由来する）。
【００７０】
本発明の実施形態では、血漿を含む血液製剤は血液型による供血の後、検査される。本発明の別の実施形態では、血漿を含む血液製剤は、たとえば、ＨＩＶ  Ｉ及びＩＩ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＴＬＶ  Ｉ及びＩＩ、抗ＨＢｃのような感染性疾患の病原体についてＦＤＡガイダンス文書に含有される２１  ＣＦＲ６４０．３３の要件及び推奨のとおりに検査される。
【００７１】
本発明のさらに別の実施形態では、対象は血漿画分で治療される。本発明の実施形態では、血漿画分はＰＰＦまたはＨＡＳである。本発明のさらなる実施形態では、血漿画分は市販のＰＰＦ製剤または市販のＨＡＳ製剤の１つである。本発明の別の実施形態では、血漿画分は特定の年齢範囲の個体、たとえば、若齢個体のプールに由来するＰＰＦもしくはＨＡＳであり、または追加の分画もしくは処理に供されている改変されたＰＰＦもしくはＨＡＳの画分（たとえば、１以上の特定のタンパク質が部分的にまたは実質的に取り除かれたＰＰＦまたはＨＡＳ）である。本発明の別の実施形態では、血漿画分は免疫グロブリン（ＩｇＧ）を実質的に枯渇させているＩＧＩＶ血漿画分である。「実質的に枯渇させる」または「実質的に取り除かれた」ＩｇＧのような特定のタンパク質を有する血液画分は、当該技術で周知の標準アッセイを用いて測定されたとき、参照製剤または全血血漿に存在する量の約５０％未満、たとえば、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、．２５％、．１％未満、検出できないレベル、またはこれらの値の間での任意の整数を含有する血液画分を指す。
【００７２】
９．投与
本明細書に記載されている本発明の方法の態様には、たとえば、上記に記載されているような血漿を含む血液製剤、たとえば、血液血漿または血漿画分による対象の治療が含まれる。実施形態には、血漿を含む血液製剤によるヒト対象の治療が含まれる。当業者は、血漿を含む血液製剤による対象の治療の方法が当該技術で認識されていることを認識する。例として且つ限定ではなく、本明細書に記載されている本発明の方法の一実施形態は、認知または運動の障害、神経炎症、神経変性及び／または加齢性認知症の治療及び／または予防のために対象に新鮮凍結血漿を投与することで構成される。一実施形態では、血漿を含む血液製剤はドナーから採取して直ちに、たとえば、１２〜４８時間以内に、認知または運動の障害、神経炎症、神経変性及び／または加齢性認知症を患っているまたはそのリスクがある個体に投与される。そのような例では、製剤は冷蔵下で、たとえば、０〜１０℃で保存されてもよい。別の実施形態では、新鮮凍結血漿は−１８℃以下で凍結保存（低温保存）されているものである。投与に先立って、新鮮凍結血漿は解凍され、いったん解凍されると、解凍過程が開始した後６０〜７５分で対象に投与される。各対象は好ましくは単回単位の新鮮凍結血漿（２００〜２５０ｍＬ）を受け取り、新鮮凍結血漿は予め決定された年齢範囲のドナーに由来する。本発明の一実施形態では、新鮮凍結血漿は若齢個体によって提供される（に由来する）。本発明の別の実施形態では、新鮮凍結血漿は同一性別のドナーによって提供される（に由来する）。本発明の別の実施形態では、新鮮凍結血漿は１８〜２２歳の間での年齢範囲のドナーによって提供される（に由来する）。
【００７３】
本発明の実施形態では、血漿を含む血液製剤は血液型による供血の後、検査される。本発明の別の実施形態では、血漿を含む血液製剤は、たとえば、ＨＩＶ  Ｉ及びＩＩ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＴＬＶ  Ｉ及びＩＩ、抗ＨＢｃのような感染性疾患の病原体についてＦＤＡガイダンス文書に含有される２１  ＣＦＲ６４０．３３の要件及び推奨のとおりに検査される。
【００７４】
本発明のさらに別の実施形態では、対象は血漿画分で治療される。本発明の実施形態では、血漿画分はＰＰＦまたはＨＡＳである。本発明のさらなる実施形態では、血漿画分は市販のＰＰＦ製剤または市販のＨＡＳ製剤の１つである。本発明の別の実施形態では、血漿画分は特定の年齢範囲の個体、たとえば、若齢個体のプールに由来するＰＰＦもしくはＨＡＳであり、または追加の分画もしくは処理に供されている改変されたＰＰＦもしくはＨＡＳの画分（たとえば、１以上の特定のタンパク質が部分的にまたは実質的に取り除かれたＰＰＦまたはＨＡＳ）である。本発明の別の実施形態では、血漿画分は免疫グロブリン（ＩｇＧ）を実質的に枯渇させているＩＧＩＶ血漿画分である。「実質的に枯渇させる」または「実質的に取り除かれた」ＩｇＧのような特定のタンパク質を有する血液画分は、当該技術で周知の標準アッセイを用いて測定されたとき、参照製剤または全血血漿に存在する量の約５０％未満、たとえば、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２５％、０．１％未満、検出できないレベル、またはこれらの値の間での任意の整数を含有する血液画分を指す。
【００７５】
本発明の実施形態には、認知または運動の障害、神経変性または神経炎症であると診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を投与することと、その後、認知または運動の障害の改善、または神経炎症の減少、またはニューロン新生の増加について対象をモニターすることとが含まれる。本発明の別の実施形態には、認知または運動の障害、神経変性または神経炎症であると診断された対象に有効量の血液血漿または血漿画分を投与することによってその対象を治療することが含まれ、その際、血液血漿または血漿画分は、最も最近投与された投薬（本明細書では「パルス状投薬」または「パルス投与された」と呼ぶ）と比べて、血液血漿タンパク質または血漿画分タンパク質の平均または中央値の半減期に到達した後、認知または運動の障害の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善を生じる方法で投与される。本発明の別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することと、最後の投与の日付の少なくとも３日後に認知または運動の機能の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善について対象をモニターすることとが含まれる。本発明のさらなる実施形態には、少なくとも連続３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することと、最後の投与の日付の少なくとも３日後に認知または運動の機能の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善について対象をモニターすることとが含まれる。本発明のさらに別の実施形態には、少なくとも連続２日間の投薬計画を介して及び最後の投与の日付の後で血液血漿または血漿画分を投与することと、血液血漿または血漿画分におけるタンパク質の平均半減期に到達した時を過ぎて認知または運動の機能の改善、神経炎症の減少、またはニューロン新生の改善についてモニターすることとが含まれる。本発明の別の実施形態には、投薬間の各間隔がそれぞれ０〜３日であってもよい連続しない２〜１４日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。
【００７６】
場合によっては、本発明に係るパルス状投薬には、たとえば、上記に記載されているような第１のセットの用量の投与と、それに続く無投薬の期間、たとえば、「投薬がない期間」、その次に続く別の用量または用量のセットの投与とが含まれる。この「投薬がない期間」の継続期間は変化してもよいが、一部の実施形態では、７日以上、たとえば、１４日以上を含む１０日以上であり、場合によっては、投薬がない期間は、、たとえば、３０〜９０日及び３０〜６０日を含めて１５日から３６５日に及ぶ。そのようなものとして、方法の実施形態には、非慢性的な（すなわち、非連続的な）投薬、たとえば、血液血漿製剤の非慢性的な投与が含まれる。一部の実施形態では、パルス状投薬とその後に続く投薬がない期間とのパターンは所望のように多数の回数繰り返され、場合によっては、このパターンは１年以上、たとえば、対象の生涯まで及び対象の生涯を含めて２年以上継続される。本発明の別の実施形態には、２〜３日の投薬がない期間とそれに続く連続２〜１４日間の投与を伴う連続５日間の投薬計画を介して血液血漿または血漿画分を投与することが含まれる。
【００７７】
生化学的に、活性剤の「有効量」または「有効用量」によって、認知または運動の障害、神経炎症、神経変性または加齢性認知症の進行を約２０％以上、たとえば、３０％以上、４０％以上、または５０％以上、場合によっては、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上、場合によっては約１００％、すなわち、無視できる量まで抑制する、拮抗する、減らす、軽減する、または抑える、及び場合によっては、それを元に戻す活性剤の量を意味する。
【００７８】
１０．血漿タンパク質画分
本発明の方法を実践することにおいて、血漿画分が対象に投与される。実施形態では、血漿画分は血漿タンパク質画分（ＰＰＦ）である。追加の実施形態では、ＰＰＦは市販のＰＰＦ製剤から選択される。
【００７９】
別の実施形態では、ＰＰＦは電気泳動によって測定したとき、８８％正常ヒトアルブミンと１２％のアルファ及びベータのグロブリンと１％以下のガンマグロブリンとで構成される。本発明の方法を実践するために使用されるこの実施形態のさらなる実施形態には、たとえば、炭酸ナトリウムで緩衝化され、０．００４Ｍのカプリル酸ナトリウム及び０．００４Ｍのアセチルトリプトファンで安定化されたＰＰＦの５％溶液としての実施形態が含まれる。溶媒及び安定剤の濃度と同様に溶液におけるＰＰＦの比率（たとえば、約１％〜約１０％、約１０％〜約２０％、約２０％〜２５％、約２５％〜３０％）を改変しているものを含む追加の製剤が本発明の方法を実践することで利用されてもよい。
【００８０】
１１．特定のドナー年齢の血漿画分
本発明の追加の実施形態には、特定の年齢範囲の個体の血漿に由来する血漿タンパク質画分を投与することが含まれる。実施形態には、若齢個体の血漿に由来しているＰＰＦまたはＨＡＳを投与することが含まれる。本発明の別の実施形態では、若齢個体は単一の特定の年齢または特定の年齢範囲である。さらに別の実施形態では、ドナーの平均年齢は対象のそれ未満であり、または治療される対象の平均年齢未満である。
【００８１】
本発明の特定の実施形態には、特定の年齢範囲の個体に由来する血液または血液血漿をプールすることと、上記に記載されているような血液血漿を分画してＰＰＦまたはＨＡＳのような血漿タンパク質画分製剤を得ることとが含まれる。本発明の代わりの実施形態では、血漿タンパク質画分または特定の血漿タンパク質画分は特定の年齢範囲に適合する特定の個体から得られる。
【００８２】
１２．適応症
主題の方法及び血漿を含む血液製剤及び血液画分は、加齢に関連した状態、たとえば、個体の認知または運動の能力における障害、たとえば、加齢性認知症、免疫状態、がん、及び身体的または機能的な低下を含む（がこれらに限定されない）認知障害、パーキンソン病のような（しかし、これらに限定されない）運動障害を予防することを含めて治療することに使用される。たとえば、本明細書で開示されている方法による主題の血漿を含む血液製剤での治療から効果が得られる、加齢に関連した認知または運動の障害、神経炎症及び／または神経変性を患っているまたはそれを発症するリスクがある個体には、約５０歳以上、たとえば、６０歳以上、７０歳以上、８０歳以上、９０歳以上及び１００歳以上であり、すなわち、約５０〜１００歳の年齢の間、たとえば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または約１００歳であり、且つ自然な加齢過程に関連する認知または運動の障害、神経炎症及び／または神経変性、たとえば、軽度認知障害（Ｍ.Ｃ.Ｉ）を患っている個体、及び約５０歳以上、たとえば、６０歳以上、７０歳以上、８０歳以上、９０歳以上及び普通１００歳未満であり、すなわち、約５０〜９０歳の年齢の間、たとえば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または約１００歳であり、認知または運動の障害、神経炎症及び／または神経変性の症状をまだ示し始めていない個体が挙げられる。自然な加齢のせいである認知または運動、神経炎症及び／または神経変性の障害の例には以下が挙げられる。
【００８３】
（ａ）軽度認知障害（Ｍ.Ｃ.Ｉ.）
軽度認知障害は、全体的な精神機能及び日常活動は損傷されていない一方で、経時的に悪化している記憶またはたとえば、計画を立てること、指示に従うこと、または決心することのような他の精神機能での問題として現れる認知の穏やかな崩壊である。従って、著しい神経細胞の死は通常発生していないが、加齢した脳におけるニューロンはシナプスでの構造、シナプスの完全性及びシナプスでの分子処理にて半致死性の加齢に伴う変化の影響を受け易く、そのすべては認知機能を損なう。
【００８４】
たとえば、本明細書で開示されている方法による、主題の血漿を含む血液製剤または血液画分での治療から効果が得られる加齢に関連した認知障害を患っているまたはそれを発症するリスクがある対象には、加齢に関連した障害のせいで認知障害を患っている任意の年齢の対象、及び個体は認知障害の症状をまだ現し始めてはいない、通常認知障害が伴う加齢に関連した障害であると診断されている任意の年齢の対象も挙げられる。そのような加齢に関連した障害には以下が挙げられる。
【００８５】
（ｂ）アルツハイマー病
アルツハイマー病は、βアミロイドとタウタンパク質から成る神経線維のもつれとを含有する大脳皮質及び皮質下灰白質における過剰な数の老人斑に関連する認知機能の進行性で止められない喪失である。一般型は６０歳以上の人々を冒し、その発生率は年齢の進行につれて増加する。それは高齢者における認知症の６５％余りを占める。
【００８６】
アルツハイマー病の原因は不明である。その疾患は約１５〜２０％の症例で家族性に進行する。残りのいわゆる散発症例は何らかの遺伝的決定要因を有する。疾患は、ほとんどの早期発症症例及び一部の晩期発症症例では常染色体優性の遺伝パターンを有するが、変わりやすい晩年の浸透度を有する。環境因子は活発な調査の焦点である。
【００８７】
疾患の経過では、シナプス及び最終的にはニューロンが大脳皮質、海馬、及び皮質下構造（マイネルト基底核における選択的細胞喪失を含む）、青斑核、及び背側縫線核の内部で失われる。脳グルコースの使用及び潅流は脳の幾つかの領域（早期段階の疾患では頭頂葉及び側頭葉、後期段階の疾患では前頭前皮質）で低下する。老人斑または老人斑（アミロイドコアの周りにて神経突起、星状細胞及びグリア細胞で構成される）及び神経原線維のもつれ（対合したらせん状のフィラメントで構成される）はアルツハイマー病の病態形成で役割を担っている。老人斑及び神経原線維のもつれは正常な加齢で発生するが、アルツハイマー病の人でははるかに高頻度である。
【００８８】
（ｃ）パーキンソン病
パーキンソン病（ＰＤ）は遅い且つ低下した動き（動作緩慢）、筋肉のこわばり、休止時振戦（筋失調症）、筋肉麻痺、及び姿勢不安定を特徴とする特発性の進行が遅い変性ＣＮＳ障害である。元々主として運動障害と見なされていたＰＤは今やうつ病及び情動変化も引き起こすことが認識されている。ＰＤは認知、行動、睡眠、自律神経機能及び感覚機能も冒すことになる。最も一般的な認知障害には、注意及び集中、作業記憶、実行機能、言語を発すること、及び視空間機能における障害が挙げられる。ＰＤの特徴は、認知障害に関連するものに普通先行する運動機能の低下に関連する症状であり、それは疾患の診断に役立つ。
【００８９】
初期のパーキンソン病では、黒質の色素性ニューロン、青斑核及び他の脳幹のドーパミン作動性細胞群が変性する。原因は不明である。尾状核及び果核に突き出る黒質ニューロンの喪失はこれらの領域での神経伝達物質であるドーパミンの枯渇を生じる。発症は一般に４０歳以降であり、老齢群で発生率は増加する。
【００９０】
パーキンソン病は毎年約６０，０００人のアメリカ人で新しく診断され、現在、およそ１００万人のアメリカ人を冒している。ＰＤはそれ自体致命的ではないけれども、その合併症は米国での死因の１４番目である。現在、ＰＤは治癒できず、治療は一般に症状を管理するように処方され、後期の重度の症例では手術が処方される。
【００９１】
ＰＤのための治療選択肢には、運動障害を管理するために役立つ医薬の投与が挙げられる。これらの選択肢は、ＰＤ患者では脳での濃度が低い神経伝達物質であるドーパミンを増やすまたは置き換える。そのような薬物には、カルビドパ／レボドパ（脳でさらに多くのドーパミンを作り出す）、アポモルフィン、プラミペキソール、ロピニロール、及びロチゴチン（ドーパミン作動薬）、セレギリン及びラサギリン（ドーパミンの分解を防ぐＭＡＯ−Ｂ阻害剤）、エンタカポン及びトルカポン（脳で利用できるさらに多くのレボドパを作るカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ［ＣＯＭＴ］阻害剤）、ベンズトロピン及びトリヘキシフェニジル（抗コリン剤）、ならびにアマンタジン（振戦及びこわばりを管理する）が挙げられる。運動負荷／理学療法も一般に処方され、身体機能及び精神機能を維持するために役立つ。
【００９２】
しかしながら、現在の治療選択肢はＰＤの症状を治療するが、治癒的ではなく、疾患の進行を防ぐことはできない。さらに、現在の薬物は晩期ＰＤにおける有効性を失う傾向がある。最も多く処方されている薬剤であるレボドパは一般に、薬物開始後５〜１０年以内に有害効果を生じる。これらの有害効果は深刻である可能性があり、投薬間での運動管理にて運動変動及び予測できない揺れを生じるとともに、管理することが難しく、ＰＤ自体の症状と同様に機能障害でさえある痙攣／単収縮（ジスキネジア）を生じる。従って、現在のＰＤ薬物と共にまたは併用して投与することができる作用の新しいメカニズムを持つ新しい治療法に対する必要性が残っている。
【００９３】
（ｄ）パーキンソニズム
二次パーキンソニズム（非定型パーキンソン病またはパーキンソンプラスとも呼ばれる）は他の特発性変性疾患、薬剤または外因性毒素のせいで大脳基底核におけるドーパミンの作用の喪失または妨害から生じる。二次パーキンソニズムの最も一般的な原因はドーパミン受容体を遮断することによってパーキンソニズムを生じる抗精神病薬またはレセルピンの摂取である。あまり一般的ではない原因には、一酸化炭素またはマンガンの中毒、水頭症、構造的病変（腫瘍、中脳または大脳基底核を冒す梗塞）、硬膜下血種、及び黒質線条体変性を含む変性疾患が挙げられる。進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）及びレビー小体型認知症（ＤＬＢ）のような特定の疾病は、特定診断に必要な主症状が構成され得る前にパーキンソニズムの症状を呈し得るので、「パーキンソニズム」として分類されてもよい。
【００９４】
（ｅ）前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性の劣化から生じる状態である。時間をかけて変性は側頭葉に進むこともある。有病率ではアルツハイマー病（ＡＤ）に次いで２番目で、ＦＴＤは初老期認知症の２０％を占める。症状は冒された前頭葉及び側頭葉の機能に基づいて３群に分類される。
【００９５】
症状による行動異形のＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）には、一方の手での倦怠感及び自発性喪失及び他方の手での脱抑制、明瞭発音の困難さの故の会話流暢性の破壊、音韻論的な及び／または統語的なエラーが観察されるが、単語の理解力は保たれている進行性の非能弁的失語症（ＰＮＦＡ）、及び患者は正常な音韻論及び統語論で流暢なままであるが、命名及び単語の理解力で困難さが増している意味認知症（ＳＤ）が挙げられる。ＦＴＤ患者すべてに共通する他の認知症状には、実行機能及び集中力の損傷が挙げられる。知覚、空間能力、記憶及び応用を含む他の認知能力は無傷のままである。ＦＴＤは構造ＭＲＩ走査にて前頭葉及び／または前側頭葉の委縮を示す所見によって診断することができる。
【００９６】
ＦＴＤの多数の形態が存在し、そのうちのいずれかは主題の方法及び組成物を用いて治療されまたは予防されてもよい。たとえば、前頭側頭型認知症の１つの形態は意味認知症（ＳＤ）である。ＳＤは言語能力の領域及び非言語能力の領域の双方での意味記憶の喪失を特徴とする。ＳＤ患者は喚語困難の症状を呈することが多い。臨床兆候には、流暢性失語症、健忘性失語症、語義の理解力の損傷、及び関連する視覚失認症（意味的に関連する絵または物を一致させることができない）が挙げられる。疾患が進行するにつれて、症例は遅発性の行動症状が少ない「純粋な」意味認知症と記載されているが、前頭側頭型認知症で見られるものに類似して行動及び人格の変化が見られることが多い。構造ＭＲＩ画像解析は、側頭葉（左で優勢）における委縮の特徴的なパターンを示し、下側の関与の方が上側の関与よりも大きく、前側頭葉の委縮は後側頭葉よりも大きい。
【００９７】
別の例として、前頭側頭型認知症の別の形態はピック病（ＰｉＤ、またＰｃＤ）である。その疾患の決定的な特徴はニューロンにおけるタウタンパク質の蓄積であり、「ピック体」として知られる銀染色の球状凝集物を蓄積する。症状には会話の喪失（失語症）及び認知症が挙げられる。眼窩前頭不全の患者は狂暴になり、社会的に不適切になり得る。彼らは、こっそり動き、強迫的なまたは反復的な定型的行動を示すこともある。背内側または背外側の前頭葉不全の患者は、関心の欠如、無気力症、または自発的な行為の減少を示すこともある。患者は、自己監視の欠如、異常な自己認識、及び意味を十分に理解することができないことを示す。両側性の後側部の眼窩前頭皮質及び右側前島における灰白質の喪失を伴う患者は、摂食行動の変化、たとえば、病的な甘党を示すこともある。前外側の眼窩前頭皮質におけるさらに局在性の灰白質喪失を伴う患者は過食症を発症することもある。症状の一部は当初緩和することができる一方で、疾患は進行し、患者は２〜１０年以内に死亡することが多い。
【００９８】
（ｆ）ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、情動的な、行動上の及び精神医学上の異常状態の発生、知的なまたは認知の機能の喪失、及び行動異常（運動障害）を特徴とする遺伝性で進行性の神経変性障害である。ＨＤの従来の兆候には、舞踏病−顔面、腕、脚または胴体に影響を与えてもよい不随意の素早い不規則な痙攣様の動きの発生−と同様に思考処理及び獲得した知的能力の緩慢な喪失を含む認知低下が挙げられる。記憶、抽象的思考、及び判断の損傷、時、場所及び同一性の不適正な知覚（見当識障害）、興奮の増大、ならびに人格変化（人格崩壊）があってもよい。症状は通常、４０歳代〜５０歳代の間に明らかになるが、発症の年齢は変動し、幼児期から後期成人期（７０歳代または８０歳代）に及ぶ。
【００９９】
ＨＤは常染色体優性形質として家族内で伝えられる。疾患は、第４染色体（４ｐ１６．３）における遺伝子内でのコードされた指示の異常に長い配列または「繰り返し」の結果として発生する。ＨＤに関連した神経系機能の進行性の喪失は大脳基底核及び大脳皮質を含む脳の特定の領域におけるニューロンの喪失から生じる。
【０１００】
（ｇ）筋萎縮性側索硬化症
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は運動ニューロンを攻撃する進行が早い、常に致死性の神経疾患である。筋肉の衰弱及び委縮及び前角細胞の機能不全の兆候が多くは手で且つあまり多くはないが脚で最初に気付かれる。発症の部位は無作為であり、進行は非対称である。筋痙攣は一般的であり、衰弱に先行することもある。稀に患者は３０年生き延びるが、５０％は発症の３年以内に死亡し、２０％は５年生存し、１０％は１０年生存する。
【０１０１】
診断の特徴には、中年または老年での発症及び感覚異常がない進行性で一般化された運動の関与が挙げられる。神経伝導速度は疾患の後期まで正常である。最近の研究は、同様に認知障害の提示、特に即時言語記憶、視覚記憶、言語及び実行機能での低下を明らかにしている。
【０１０２】
細胞体領域、シナプスの数及び総シナプス長の低下はＡＬＳ患者の正常に見えるニューロンでさえ報告されている。活性帯の可塑性がその限界に達すると、シナプスの継続する喪失が機能的な損傷につながり得ることが示唆されている。新しいシナプスの形成を促進することまたはシナプスの喪失を防ぐことがこれらの患者にてニューロンの機能を維持してもよい。
【０１０３】
（ｈ）多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、寛解と再発する増悪とを伴う種々の症状及びＣＮＳ機能不全の兆候を特徴とする。最も一般的な症候性の症状は１以上の四肢、胴体または顔面の片側における知覚障害、脚または手の衰弱または不器用さ、あるいは視覚障害、たとえば、部分的な失明及び片目における疼痛（球後視神経炎）、視界の暗さまたは暗点である。一般的な認知障害には、記憶（新しい情報を獲得すること、保持すること及び取り戻すこと）、注意及び集中（特に分割的注意）、情報処理、実行機能、視空間機能及び言語流暢性における損傷が挙げられる。一般的な初期症状は、複視（複視）を生じる眼筋麻痺、１以上の四肢における一時的な衰弱、軽いこわばりまたは四肢の異常な易疲労感、軽い歩行困難、膀胱制御の困難、眩暈、及び軽い情緒不安定であり、すべては散在性のＣＮＳの関与を示し、疾患が認識される数ヵ月または数年前に発生することが多い。異常な高温が症状及び兆候を際立たせてもよい。
【０１０４】
経過は高度に変化し、予測不能であり、ほとんどの患者では弛張性である。特に球後視神経炎で疾患が始まる場合、最初は、数ヵ月または数年の寛解が症状の発現を分離することもある。しかしながら、一部の患者は頻繁な攻撃を有し、急速に能力を奪われ、わずかな間に経過は急速に進展し得る。
【０１０５】
（ｉ）緑内障
緑内障は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）を冒す一般的な神経変性疾患である。証拠は、シナプス及びＲＧＣを含む樹状突起での区切られた変性プログラムの存在を支持している。最近の証拠はまた、高齢者における認知障害と緑内障との間の相関も示している（Ｙｏｃｈｉｍ  ＢＰ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ  ａｎｘｉｅｔｙ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ａｍｏｎｇ  ｏｌｄｅｒ  ａｄｕｌｔｓ  ｗｉｔｈ  ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ．２０１２；２１（４）：２５０−２５４）。
【０１０６】
（ｊ）筋強直性ジストロフィー
筋強直性ジストロフィー（ＤＭ）は、ジストロフィー筋衰弱及び筋強直を特徴とする常染色体優性の多系統疾病である。分子欠陥は、第１９ｑ染色体におけるミオトニンタンパク質キナーゼ遺伝子の３’非翻訳領域での伸長した三ヌクレオチド（ＣＴＧ）の反復である。症状はどんな年齢でも発生する可能性があり、臨床重症度の範囲は広い。筋強直は手の筋肉で目立ち、眼瞼下垂症は軽い症例でも共通する。重度の症例では、顕著な末梢筋の衰弱が発生し、白内障、早期の脱毛、斧状顔貌、不整脈、精巣委縮及び内分泌異常（たとえば、糖尿病）を伴うことが多い。精神遅滞は重度の先天性形態で一般的である一方で、前頭葉及び側頭葉の認知機能、特に言語及び実行機能の加齢に伴う低下は疾患の軽度成人形態で観察される。重度に冒された人は５０歳代前半までに死亡する。
【０１０７】
（ｋ）認知症
認知症は、日常の機能を妨げるために大幅に十分な思考能力及び社会能力を冒す症状を有する疾患の部類を記載している。上記で議論されている加齢に関連した疾病の後期段階で見られる認知症に加えて認知症の他の例には、以下に記載されている血管性認知症及びレビー小体型認知症が挙げられる。
【０１０８】
血管性認知症または「多発梗塞性認知症」では、認知障害は、脳への血液の供給での問題によって、通常、一連の軽微な脳卒中、または時には先行する１回の大きな脳卒中によって、または後に続く他の小さな脳卒中によって引き起こされる。血管病変は小血管疾患または局所性病変またはその双方のようなびまん性脳血管疾患の結果であることができる。血管性認知症を患っている患者は、急性脳血管事象の後、急性にまたは亜急性に認知障害を呈し、その後、進行性の認知低下が観察される。脳における関連する変化はＡＤの病理によるものではなく、最終的に認知症を生じる脳での慢性的な血流の低下によるが、言語、記憶、複雑な視覚処理または実行機能における損傷を含む認知障害はアルツハイマー病で見られるものに類似する。単光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）及びポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）による神経画像を用いて精神状態に関する検査を含む評価と併せて多発梗塞性認知症の診断を確認してもよい。
【０１０９】
レビー小体型認知症（ＤＬＢ、レビー小体認知症、びまん性レビー小体疾患、皮質性レビー小体疾患、及びレビー型加齢性認知症を含む種々の他の名称でも知られる）は、検視脳組織学で検出できるニューロンにおけるレビー小体（アルファ−シヌクレイン及びユビキチンタンパク質の塊）の存在によって解剖学的に特徴付けられる認知症の型である。その主な特徴は特に実行機能の認知低下である。注意力及び短期の記憶は増減する。
【０１１０】
鮮明で詳細な絵柄を伴った持続するまたは再発する幻視は初期の診断症状であることが多い。アルツハイマー病は普通、全く緩慢に始まるのに対してＤＬＢは迅速で急性の発症を呈することが多いが、ＤＬＢはその早期でアルツハイマー病及び／または血管性認知症と混同されることが多い。ＤＬＢの症状にはまた、パーキンソン病のそれに類似する運動症状も含まれる。ＤＬＢは、認知症の症状がパーキンソンの症状に関連して現れる時間枠によって時にはパーキンソン病で発生する認知症とは区別される。認知症を伴うパーキンソン病（ＰＯＤ）は認知症の発症がパーキンソン病の発症の１年を超えて後である場合の診断である。ＤＬＢは、パーキンソンの症状と同時またはその１年以内に認知症状が始まる場合に診断される。
【０１１１】
（ｌ）進行性核上性麻痺
進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）は、複雑な眼球運動及び思考の問題と共に歩行及び平衡の制御で深刻な且つ進行性の問題を引き起こす脳の障害である。疾患の従来の兆候の１つは眼球運動を調整する脳の領域における病変のために発生する、適正に目を向けることができないことである。一部の人はこの影響をぼやけと表現している。冒された人は、進行性の軽度認知症と同様にうつ及び無気力を含む気分及び行動の変化を示すことが多い。疾患の長い名称は、疾患がゆっくり始まり、悪化し続け（進行性）、眼球運動を制御する核と呼ばれる豆粒大の構造の上（核上）の脳の特定の部分を損傷することによって衰弱（麻痺）を引き起こすことを示す。ＰＳＰは、３人の科学者がパーキンソン病から状態を区別した論文を出版した際、１９６４年に初めて異なる疾病として記載された。それは、疾病を定義した科学者の合わせた名前を反映してＳｔｅｅｌｅ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ−Ｏｌｓｚｅｗｓｋｉ症候群と呼ばれることもある。ＰＳＰは進行性に悪化するが、ＰＳＰ自体で死亡した人はいない。
【０１１２】
（ｍ）運動失調
運動失調の人々は、運動及び平衡を制御する神経系の一部が冒されるので協調に問題を有する。運動失調は、指、手、腕、脚、身体、会話及び眼球運動を冒してもよい。単語、運動失調は、中枢神経系における感染、外傷、他の疾患または変性変化に関連し得る非協調の症状を記載するために使用されることが多い。運動失調を用いて、米国運動失調財団の重点である遺伝性及び散発性の運動失調と呼ばれる神経系の特定の変性疾患の群も意味する。
【０１１３】
（ｎ）多系統萎縮症
多系統萎縮症（ＭＳＡ）は変性神経疾患である。ＭＳＡは脳の特定の領域における神経細胞の変性に関連する。この細胞変性は、たとえば、膀胱制御または血圧調節のような身体の運動、平衡及び他の自律性の機能に関する問題を引き起こす。
【０１１４】
ＭＳＡの原因は不明であり、特定のリスク因子は同定されていない。症例の約５５％は男性で発生し、発症の典型的な年齢は５０歳代後半から６０歳代前半である。ＭＳＡはパーキンソン病と同じ症状の幾つかを呈する。しかしながら、ＭＳＡ患者は一般にパーキンソン病に使用されるドーパミン薬に対してあったとしても最少限の応答しか示さない。
【０１１５】
（ｏ）フレイル
フレイル症候群（「フレイル」）は、可動性の低下、筋肉の衰弱、動作緩慢、乏しい持久力、少ない身体活動、栄養不足状態及び無意識の体重減少を含む機能的な及び身体的な低下を特徴とする老年症候群である。そのような低下は、たとえば、認知機能不全及びがんのような疾患の因果関係を伴うことが多い。しかしながら、フレイルは疾患がなくても発生し得る。フレイルを患っている人は骨折、偶発的な転倒、身体障害、併存疾患及び若年死亡率から見た否定的な予後の高いリスクを有する（Ｃ．Ｂｕｉｇｕｅｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｆｒａｉｌｔｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，Ｄｏｕｂｌｅ−Ｂｌｉｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１６，１７，９３２）。さらに、フレイルを患っている人は高い医療費の高い発生率を有する。（同文献）。
【０１１６】
フレイルの共通する症状は特定の型の試験によって決定することができる。たとえば、意図的ではない体重減少は少なくとも１０ｌｂの減少または前年の体重の５％を超える減少を含み、筋肉の衰弱は（性別とＢＭＩについて調整して）ベースラインでの最低２０％での握力の低下によって決定することができ、動作緩慢は１５フィートの距離を歩行するために要する時間に基づくことができ、乏しい持久力は極度の疲労状態のその人自身の報告によって決定することができ、少ない身体活動は標準化されたアンケートを用いて測定することができる（Ｚ．Ｐａｌａｃｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｆｒａｉｌｔｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｔｏｄａｙ’ｓ  Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，７（１），ａｔ  １８（２０１４））。
【０１１７】
一部の実施形態では、主題の方法及び組成物は、加齢に関連した認知、運動、神経炎症、または加齢に伴う他の障害または状態の進行を減速することに使用される。言い換えれば、開示されている方法による治療の前よりもまたは治療がない場合よりも開示されている方法による治療に続いて、個体における認知、運動、神経炎症または他の能力または状態はさらにゆっくり低下する。一部のそのような例では、治療の主題の方法には、治療の後の認知、運動、神経炎症または他の加齢に伴う能力または症状の低下の進行を測定し、低下の進行が軽減されていることを判定することが含まれる。一部のそのような例では、たとえば、主題の血液製剤の投与に先立つ２以上の時点で前もって認知、運動、神経炎症または他の加齢に伴う能力または状態を測定することによって判定されるように、判定は、参照に対して、たとえば、治療に先立つ個体における低下の速度を比べることによって行われる。
【０１１８】
主題の方法及び組成物は、個体、たとえば、加齢に関連した認知低下を患っている個体または加齢に関連した認知低下を患うリスクがある個体の認知、運動、神経炎症または他の能力または状態を安定化することにおいても使用される。たとえば、個体は何らかの加齢に関連した認知障害を示してもよく、開示されている方法による治療に先立って観察される認知障害の進行は開示されている方法による治療に続いて停止される。別の例として、個体は加齢に関連した認知低下を発症するリスクがあってもよく（たとえば、個体は５０歳以上であってもよく、または加齢に関連した障害かあると診断されていてもよく）、個体の認知能力は、開示されている方法による治療の前と比べて開示されている方法による治療に続いて実質的に無変化であり、すなわち、認知低下は検出できない。
【０１１９】
主題の方法及び組成物は、加齢に関連した障害を患っている個体における認知、運動、神経炎症または他の加齢に伴う障害を軽減することにおいても使用される。言い換えれば、冒された能力は主題の方法による治療に続いて個体にて改善される。たとえば、個体における認知または運動の能力は、主題の方法による治療に先立って個体で観察される認知または運動の能力と比べて主題の方法による治療に続いて、たとえば、５０倍以上、６０倍以上、７０倍以上、８０倍以上、９０倍以上、または１００倍以上を含めて２倍以上、５倍以上、１０倍以上、１５倍以上、２０倍以上、３０倍以上、または４０倍以上上昇する。
【０１２０】
場合によっては、主題の方法及び組成物による治療は、加齢に関連した認知または運動の低下を患っている個体にて認知、運動またはその他の能力を、たとえば、個体が約４０歳以下だった時のレベルまで回復させる。言い換えれば、認知または運動の障害は抑止される。
【０１２１】
１３．障害についての診断及びモニターの方法
場合によっては、認知疾患、運動障害、神経変性疾患及び／または神経炎症性疾患における疾患の進行及び改善を診断し、モニターする種々の方法の間で、以下の型の評価が単独で、または所望どおりに神経変性疾患を患っている対象と組み合わせて使用される。以下の型の方法は例として提示され、引用される方法に限定されない。疾患をモニターする好都合な方法を所望どおりに本発明を実践することで使用されてもよい。それらの方法は本発明の方法によっても考慮される。
【０１２２】
（ａ）一般認知
本発明の方法の実施形態はさらに、認知障害及び／または加齢性認知症を治療するために対象に対する薬物または治療の効果をモニターする方法を含み、該方法は治療の前及び後での認知機能を比較することを含む。当業者は、認知機能を評価する周知の方法があることを認識している。たとえば、且つ限定の目的ではなく、方法は、病歴、家族歴、認知症及びに認知機能を専門とする臨床医による身体的及び神経学的な検査、臨床検査及び神経心理学的評価に基づくに認知機能の評価を含んでもよい。本発明によって考慮される追加の実施形態には、たとえば、Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡尺度（ＥＭＶ）を用いた意識の評価、簡易知能検査スコア（ＡＭＴＳ）またはミニ精神状態の検査（ＭＭＳＥ）を含む精神状態の検査（Ｆｏｌｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ，１９７５、１２：１２８９−１９８）、高等機能の全体的評価、たとえば、眼底検査による頭蓋内圧の推定が含まれる。一実施形態では、認知障害及び／または加齢性認知症に対する効果をモニターすることには、アルツハイマー病評価スケール・認知サブスケール（ＡＤＡＳ−ＣＯＧ）を用いた１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２点の改善が含まれる。
【０１２３】
一実施形態では、個々に調べることができる嗅覚、視野及び視力、眼球運動及び瞳孔（交感神経及び副交感神経）、顔面の感覚機能、顔面及び肩甲の帯筋の強度、聴力、味覚、咽頭運動及び咽頭反射、舌の動き（たとえば、視力はＳｎｅｌｌｅｎチャートによって調べることができ、咬筋、二頭筋及び三頭筋の腱、膝の腱、くるぶしの反射及び足底（すなわち、Ｂａｂｉｎｓｋｉサイン）を含む反射を調べるために使用される反射ハンマー）、１〜５のＭＲＣスケールであることが多い筋力、筋緊張及びこわばりの兆候のいずれか１つを含む末梢神経系の検査を使用して認知機能を評価してもよい。
【０１２４】
（ｂ）パーキンソン病
本発明の方法の実施形態はさらに、運動障害を治療するために対象に対する薬物または治療の効果をモニターする方法を含み、該方法は、治療の前及び後での運動機能を比較することを含む。当業者は運動機能を評価する周知の方法があることを認識している。たとえば、且つ限定の目的ではなく、方法は、病歴、家族歴、神経変性及びに運動障害を専門とする臨床医による身体的及び神経学的な検査、臨床検査及び神経変性評価に基づく運動機能の評価を含んでもよい。本発明によって考慮される追加の実施形態は、以下で議論されている評定尺度の採用を含む。
【０１２５】
ＰＤの進行を評価するために幾つかの評定尺度が利用されている。最も広く使用されている尺度にはパーキンソン病統一評定スケール（ＵＰＤＲＳ、１９８７年に導入された）（Ｊ．Ｒｅｈａｂｉｌ  Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２０１２，４９（８）：１２６９−７６），及びＨｏｅｈｎ及びＹａｈｒのスケール（Ｎｅｒｕｏｌｏｇｙ，１９６７，１７（５）：４２７−４２）が挙げられる。追加のスケールには、運動障害疾患学会（ＭＤＳ）が更新するＵＰＤＲＳスケール（ＭＤＳ−ＵＰＤＲＳ）と同様にＳｃｈｗａｂ及びＥｎｇｌａｎｄの日常生活動作（ＡＤＬ）スケールが挙げられる。
【０１２６】
ＵＰＤＲＳスケールは、（１）知的活動、行動及び気分、（２）日常生活動作、及び（３）運動検査の３つのサブスケールに寄与する３１項目を評価する。Ｈｏｅｈｎ及びＹａｈｒのスケールは、慎重なサブステージを伴う５つのステージ：０−疾患の兆候なし、１−一方側のみでの症状、１．５−一方側でしかし、首と脊椎も含む症状、２−両側で症状があり平衡障害はない、２．５−「引き試験」を行うと回復がある両側での軽度の症状、３−軽度から中程度の疾患で平衡障害がある、４−重度の身体障害、しかし、自力で歩行する、または立つ能力はある、及び５−車椅子を必要とする、または支援なしでは寝たきり、にＰＤを分類する。Ｓｃｈｗａｂ及びＥｎｇｌａｎｄのスケールはＰＤを幾つかの比率（１００％−完全に自立から１０％−完全な依存まで）に分類する。
【０１２７】
一般的な運動機能は一般運動機能スケール（ＧＭＦ）を含む広く使用されているスケールを用いて評価することができる。これは依存性、疼痛及び不安定性の３つの成分を調べる（Ａｂｅｒｇ，Ａ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３），Ｄｉｓａｂｉｌ．Ｒｅｈａｂｉｌ．２００３，Ｍａｙ，６；２５（９）：４６２−７２．）。運動機能は、家庭でのモニタリングまたは装着できるセンサーを用いて評価することもできる。たとえば、歩行（移動の速度、変動、脚のこわばり）は加速度計で感知することができ、ジャイロスコープによる姿勢（体幹の傾き）、加速度計による脚の動き、加速度計及びジャイロスコープによる手の動き、加速度計による振戦（大きさ、頻度、持続時間、非対称性）、加速度計による転倒、加速度計によるすくみ足、加速度計、ジャイロスコープ及び慣性センサーによるジスキネジア、加速度計とジャイロスコープとによる動作緩慢（持続時間及び頻度）、ならびにマイクを用いた失語症（ピッチ）を感知できる。（Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃｓ：Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｒｉｅｓ，４５０（２０１３），０１２０５５）。
【０１２８】
（ｃ）多発性硬化症
認知に関連する症状についてのモニタリングの改善に加えて、当業者に周知の技法を用いて、多発性硬化症（ＭＳ）に関連する神経変性の進行または改善をモニターすることができる。例として且つ限定ではなく、モニタリングは、たとえば、脳脊髄液（ＣＳＦ）のモニタリング、病変及び脱髄斑の発生を検出するための磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）、誘発電位試験、及び歩行モニタリングのような技法を介して行うことができる。
【０１２９】
ＣＳＦの分析は、たとえば、腰椎穿刺を介して行って、圧力、外見及びＣＳＦ含量を得てもよい。正常値は通常以下のような範囲であり、すなわち、圧力（７０〜１８０ｍｍＨ2 ０）、外見は透明で無色であり、総タンパク質（１５〜６０ｍｇ／１００ｍＬ）、ＩｇＧは総タンパク質の３〜１２％であり、グルコースは５０〜８０ｍｇ／１００ｍＬであり、細胞数は０〜５の白血球で赤血球はなく、塩化物（１１０〜１２５ｍＥｑ／Ｌ）である。異常な結果はＭＳの存在または進行を示してもよい。
【０１３０】
ＭＲＩは、疾患の進行及び改善をモニターするために実施されてもよい別の技法である。ＭＲＩでＭＳをモニターするための典型的な基準には、大脳半球及び脳室周辺部の領域における異常な白質の斑状領域の出現、小脳及び／または脳幹と同様に脊髄の頚部及び胸部の領域に存在する病変が挙げられる。
【０１３１】
誘発電位を用いて対象におけるＭＳの進行及び改善をモニターしてもよい。誘発電位は、たとえば、視覚誘発反応（ＶＥＲ）、脳幹聴覚誘発反応（ＢＡＥＲ）及び体性感覚誘発反応（ＳＳＥＲ）におけるように電気的刺激の減速を測定する。異常な反応は中枢感覚経路における伝導の速度に低下があることを示すために役立つ。
【０１３２】
歩行のモニタリングを用いてＭＳ対象における疾患の進行及び改善をモニターすることもできる。ＭＳにはある程度疲労のせいでの可動性の障害及び異常な歩行が伴うことが多い。モニタリングは、たとえば、対象が装着した移動型のモニタリング装置の使用で実施されてもよい。（Ｍｏｏｎ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｇａｉｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｖｅｌ  ｗｅａｒａｂｌｅ  ｍｏｔｉｏｎ  ｓｅｎｓｏｒｓ，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，１２（２）：ｅ０１７１３４６  （２０１７））。
【０１３３】
（ｄ）ハンチントン病
認知に関連する症状についての改善をモニターすることに加えて、当業者に周知の技法を用いてハンチントン病（ＨＤ）に関連する神経変性の進行または改善をモニターすることができる。例として且つ限定ではなく、モニタリングは、たとえば、運動機能、行動、機能的評価、及び画像解析のような技法を介して実施することができる。
【０１３４】
疾患の進行または改善の指標としてモニターされてもよい運動機能の例には、舞踏病及び筋失調症、こわばり、動作緩慢、眼球運動機能不全、及び歩行／平衡の変化が挙げられる。これらの測定基準のモニタリングを実施する技法は当業者に周知である。（Ｔａｎｇ，Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅｓ，  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  Ｄｉｓ  Ｍａｎａｇ，２（４）：４２１−３５（２０１２）を参照のこと）。
【０１３５】
ＨＤの精神医学的影響は、疾患の進行及び改善をモニターする機会を提示する。たとえば、精神医学的診断は、対象がうつ病、易刺激性、興奮、不安症、無気力症、及び偏執症による精神病を患っているか否かを判定するために精神医学的診断が行われてもよい。（同文献）。
【０１３６】
機能的評価を採用して疾患の進行または改善もモニターしてもよい。全機能スコア法が報告されており（同文献）、一部のＨＤ群にて年当たり１点低下することが多い。
【０１３７】
ＭＲＩまたはＰＥＴを採用して疾患の進行または改善もモニターしてもよい。たとえば、ＨＤでは線条体投射ニューロンの喪失があり、これらのニューロンの数の変化が対象にてモニターされてもよい。ＨＤ対象におけるニューロンの変化を測定する技法にはドーパミンＤ２受容体の結合を画像化することが挙げられる。（同文献）
【０１３８】
（ｅ）ＡＬＳ
認知に関連する症状について改善をモニターすることに加えて、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に関連する神経変性の進行または改善は当業者に周知の技法を用いてモニターすることができる。例として且つ限定ではなく、モニタリングは、たとえば、機能的評価、筋力を判定すること、呼吸機能を測定すること、下位運動ニューロン（ＬＭＮ）の喪失を測定すること、及び上位運動ニューロン（ＵＭＮ）の機能不全を測定することのような技法を介して行うことができる。
【０１３９】
機能的な評価は、延髄、手足及び呼吸の機能に関連する症状を評価するＡＬＳ機能評定尺度（ＡＬＳＦＲＳ−Ｒ）のような当業者に周知の機能的尺度を用いて行うことができる。変化の割合は生存と同様に疾患の進行または改善を予測することにおいて有用である。別の評価尺度には、機能と生存の併用評価（ＣＡＦＳ）、生存期間をＡＬＳＦＲＳ−Ｒの変化と組み合わせることによる対象の臨床転帰のランク付けが挙げられる。（Ｓｉｍｏｎ，ＮＧ，ｅｔ  ａｌ．，Ｑｕａｎｔｉｆｙｉｎｇ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．７６：６４３−５７（２０１４））。
【０１４０】
筋力は、複合徒手筋力テスト（ＭＭＴ）の得点の使用を介して調べられてもよいし、定量されてもよい。これは、医学研究審議会（ＭＲＣ）の筋力評価尺度を用いて幾つかの筋群から得られる平均化測定量を伴う。（同文献）。他の技法の間で、手で操作できる動力測定法（ＨＨＤ）も使用されてもよい。（同文献）
【０１４１】
呼吸機能は、ベースラインでの努力性肺活量（ＦＶＣ）を得るために使用される携帯肺活量測定ユニットを用いて実行され疾患の進行または改善を予測することができる。さらに、最大呼吸圧、経鼻呼吸圧（ＳＮＩＰ）及びサッピング（ｓｕｐｐｉｎｇ）ＦＶＣを測定し、それを用いて疾患の進行または改善をモニターしてもよい。（同文献）
【０１４２】
下位運動ニューロンの喪失はＡＬＳにおける疾患の進行または改善をモニターするために利用することができる別の利点である。神経生理学的な指標は、運動神経伝導試験にて複合筋活動電位（ＣＭＡＰ）を測定することによって決定されてもよく、そのパラメーターにはＣＭＡＰの大きさ及びＦ波の周波数が挙げられる。（同文献及びｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ，Ｍ.，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｒｖｅ  ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ，２３：３４４−３５２，（２０００））。下位運動ニューロンの単位数（ＭＵＮＥ）を同様に推定してもよい。ＭＵＮＥでは、個々の運動単位の寄与の推定を介して筋肉を最大ＣＭＡＰ反応に供給する残りの運動性軸索の数を推定し、それを用いて疾患の進行または改善を判定する（Ｓｉｍｏｎ，ｅｔ  ａｌ，上記）。ＬＭＮの喪失を判定する追加の技法には、神経の興奮性を調べること、電気インピーダンス筋運動記録法、及び筋肉の厚さの変化を検出するために筋超音波法を使用することが挙げられる。（同文献）
【０１４３】
上位運動ニューロンの機能不全はＡＬＳにおける疾患の進行または改善をモニターするために利用することができる別の利点である。機能不全を判定するための技法には、脳及び脊髄にてＭＲＩ走査またはＰＥＴ走査を行うこと、経頭蓋磁気刺激、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）における生体マーカーのレベルを測定することが挙げられる。
【０１４４】
（ｆ）緑内障
認知に関連する症状についての改善をモニターすることに加えて、緑内障に関連する神経変性の進行または改善は、当業者に周知の技法を用いてモニターすることができる。例として且つ限定ではなく、モニタリングは、たとえば、眼内圧を測定すること、損傷についての視神経円板または視神経頭の評価、周辺視野喪失についての視野テスト、及び断層撮影解析のための視神経円板及び網膜の画像化のような技法を介して行うことができる。
【０１４５】
（ｇ）進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）
認知に関連する症状についての改善をモニターすることに加えて、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）に関連する神経変性の進行または改善は、当業者に周知の技法を用いてモニターすることができる。例として且つ限定ではなく、モニタリングは、たとえば、機能的な評価（日常生活動作またはＡＤＬ）、運動評価、精神医学的症状の判定、ならびに容積測定の及び機能的な磁気共鳴画像解析（ＭＲＩ）のような技法を介して行うことができる。
【０１４６】
非依存性、他者への部分的依存性または完全な依存性という点での対象の機能のレベルは疾患での進行または改善を判定するために有用であることができる。（Ｄｕｆｆ，Ｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８０：３８０−８４，（２０１３）を参照のこと）。進行性核上性麻痺評定尺度（ＰＳＰＲＳ）は、６つのカテゴリーである日常動作（病歴による）、行動、延髄、眼球運動、四肢運動及び歩行／正中線における２８個の測定基準を含む評定尺度である。成績は０〜１００に及ぶスコアである。６つの項目は０〜２に採点され、２２個の項目は考えられる合計１００について０〜４で採点される。ＰＳＰＲＳスコアは実践的な測定量であり、患者の生存の厳しい予測因子である。それらは疾患の進行に対して感度もよく、疾患の進行または改善をモニターするために有用である。（Ｇｏｌｂｅ  ＬＩ，ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒａｔｉｎｇ  ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ，Ｂｒａｉｎ，１３０：１５５２−６５，（２００７））。
【０１４７】
ＵＰＤＲＳ（パーキンソン病統一評定スケール）に由来するＡＤＬの区分を用いてＰＳＰ対象にて機能的な動作を定量することもできる。（Ｄｕｆｆ，ｅｔ  ａｌ．，上記）。同様に、非依存性を評価するためにＳｃｈｗａｂ及びＥｎｇｌａｎｄの日常生活動作スコア（ＳＥ−ＡＤＬ）を使用することができる。（同文献）。さらに、ＵＰＤＲＳの運動機能の区分はＰＳＰ患者にて疾患の進行を評価するための信頼できる評価基準として有用である。運動の区分は、たとえば、ＰＳＰ患者における運動機能を定量するための２７個の異なる評価基準を含有してもよい。これらの例には、休止時振戦、こわばり、指叩き、姿勢及び歩行が含まれる。対象の疾患の進行または改善は、訓練された医療関係者によって完了されるベースライン神経心理学的評価を、行動異常（たとえば、妄想、幻覚、興奮、うつ、不安、強い高揚感、無気力症、脱抑制、易刺激性、及び異常な運動行動）の頻度及び重症度を判定する神経精神医学的一覧表（ＮＰＩ）を用いた評価を行うことによって評価されてもよい。（同文献）
【０１４８】
機能的ＭＲＩ（ｆＭＲＩ）を採用して同様に疾患の進行または改善をモニターすることができる。ｆＭＲＩは脳の特定の領域にて、普通、それらの領域での血流に基づいて脳の活動の変化を測定するＭＲＩを用いた技法である。血流は脳の領域の活性化と相関すると見なされている。ＰＳＰのような神経変性疾患の患者はＭＲＩスキャナーで走査される前にまたはその間に身体検査または知能検査に供され得る。例として且つ限定ではなく、検査は、ＰＳＰで最も冒された手及び最大随意収縮（ＭＶＣ）で力を出すように頼まれたときの患者を検査が行われた直後にｆＭＲＩによって測定する十分に確立された力制御規範であることができる。（Ｂｕｒｃｉｕ，ＲＧ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｍｏｖ．  Ｄｉｓｏｒｄ．３０（９）：１２４８−５８（２０１５））。
【０１４９】
容量測定ＭＲＩはＭＲＩスキャナーが局部脳容積における容積差を測定する技法である。これは、たとえば、様々な障害を対比させることによって、または患者における脳領域の容積の差異を経時的に測定することによって行われてもよい。容量測定ＭＲＩを採用してＰＳＰのような神経変性疾患にて疾患の進行または改善を判定してもよい。その技法は当業者に周知である。（Ｍｅｓｓｉｎａ，Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  ａｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｔｒｏｐｈｙ，Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，１７（３）：１７２−７６（２０１１））。測定されてもよい脳の領域の例には、頭蓋内容積、大脳皮質、小脳皮質、視床、尾状葉、果核、淡蒼球、海馬、扁桃、側脳室、第三脳室、第四脳室及び脳幹が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
（ｈ）ニューロン新生
本発明はまた、たとえば、低下した認知もしくは運動の機能を介して、または神経炎症との関連を介してそれ自体現れてもよい低下したまたは損傷したニューロン新生を伴う対象にてニューロン新生を治療することまたは改善することも考慮する。本発明の実施形態には、例として且つ限定ではなく、パルス状投薬治療計画を用いて、低下したまたは損傷したニューロン新生を伴う対象に血液血漿、血漿画分またはＰＰＦを投与することが含まれる。
【０１５１】
本発明の実施形態はまた、血液血漿、血漿画分またはＰＰＦの投与の前に、その間に及び／またはその後でニューロン新生のレベルを判定することも考慮する。ニューロン新生を評価するための非侵襲性技法が報告されている。（Ｔａｍｕｒａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２０１６），３６（３１）：８１２３−３１）。ＢＢＢ輸送体阻害剤であるプロベネシドと併用した、トレーサー［１８Ｆ］ＦＬＴと共に使用されるポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）は、脳におけるニューロン新生領域にてトレーサーの蓄積を可能にする。そのような画像解析によって神経変性疾患について治療されている患者におけるニューロン新生の評価が可能になる。
【０１５２】
（ｉ）神経炎症
本発明はまた、たとえば、低下した認知もしくは運動の機能を介して、または低下したニューロン新生もしくは神経炎症との関連を介してそれ自体現れてもよい亢進した神経炎症を伴う対象にて神経炎症を治療することまたは改善することも考慮する。本発明の実施形態には、例として且つ限定ではなく、パルス状投薬治療計画を用いて、神経炎症を伴う対象に血液血漿、血漿画分またはＰＰＦを投与することが含まれる。
【０１５３】
本発明の実施形態はまた、血液血漿、血漿画分またはＰＰＦの投与の前に、その間に及び／またはその後でニューロン新生のレベルを判定することも考慮する。たとえば、11Ｃ−ＰＫ１１１９５及び他のそのようなトレーサーを用いたＴＳＰＯポジトロン放出断層撮影（ＴＳＰＯＰＥＴ）のような、神経炎症を評価するための非侵襲性の技法が報告されている。（参照によって本明細書に組み入れられるＶｉｖａｓｈ，Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２０１６，５７：１６５−６８；及びＪａｎｓｓｅｎ，Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，２０１６，４２５−４１を参照のこと）。神経炎症を評価するための侵襲性の技法には、脳脊髄液を採取し、たとえば、プロスタグランジンＥ２、シクロオキシゲナーゼ−２、ＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、ＩＦＮガンマ、ＩＬ−１０、エオタキシン、ベータ−２ミクログロブリン、ＶＥＧＦ、グリア細胞株由来の神経栄養因子、キトトリオシダーゼ−１、ＭＭＰ−９、ＣＸＣモチーフケモカイン１３、終末補体複合体、キチナーゼ−３様タンパク質１及びオステオポンチンのような（しかし、これらに限定されない）神経炎症マーカーまたは因子の発現レベルを検出することが挙げられる。（参照によって本明細書に組み入れられるＶｉｎｔｈｅｒ−Ｊｅｎｓｅｎ，Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｒｕｏｌ  Ｎｅｕｒｉｍｍｕｎｏｌ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ，２０１６，３（６）：ｅ２８７；及びＭｉｓｈｒａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ．，２０１７，１４：２５１を参照のこと）。
【０１５４】
１４．幹細胞及びパルス状投薬療法の併用
本発明の実施形態には、幹細胞療法を受けている、受ける予定であるまたは受けたことがある対象にて有効量の血液血漿または血漿画分を対象に投与することによって、認知障害、運動機能の障害、神経炎症またはニューロン新生の低下であると診断された対象を治療することが含まれる。本発明の別の実施形態には、有効量の血液血漿または血漿画分を対象に投与することが含まれ、対象は幹細胞療法を受けている、受ける予定であるまたは受けたことがあり、治療法で使用される幹細胞は、胚性幹細胞、非胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、臍帯血幹細胞、羊水幹細胞等であることができる。
【０１５５】
幹細胞療法及びそのような治療法を実施するための技法は当業者に既知である（すべて参照によって本明細書に組み入れられるＡｎｄｒｅｓ，ＲＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，２０１１，１３４；１７７７−８９；Ｄａａｄｉ，ＭＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１３，２２（５）：８８１−９２；Ｈｏｒｉｅ，Ｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，２０１１，２９（２）：ｄｏｉ：１０．１００２／ｓｔｅｍ．５８４；Ｔｈｏｍｓｅｎ，ＧＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，２０１８，ｄｏｉ：１０．１００２／ｓｔｅｍ．２８２５；米国特許出願番号０９／９７３，１９８；１２／２５８，２１０；１２／５９６，８８４；及び１３／２９０，４３９）。本発明の別の実施形態には、外傷性脊髄損傷、脳卒中、網膜疾患、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、難聴、心疾患、関節リウマチ、重度熱傷であるまたは骨髄移植が必要であると診断され、幹細胞療法を受けている、受ける予定であるまたは受けたことがある対象を有効量の血液血漿または血漿画分で治療することが含まれる。
【０１５６】
１５．組成物を選別する方法
提供されるものはまた、認知もしくは運動の障害を治療する、神経炎症を軽減するまたはニューロン新生を増やすことにおける活性のための組成物を選別する方法である。そのような方法は、本発明によって考慮され、それには以下の実験例で記載されている方法が挙げられる。本発明の実施形態によって選別されてもよい組成物には、生物組成物（たとえば、タンパク質、タンパク質の組み合わせ、抗体、小分子アンタゴニスト）、血漿画分または他の血液組成物が挙げられる。組成物を選別する方法からの結果には、海馬（たとえば、歯状回）または他のＣＮＳの領域における炎症／神経炎症マーカーの結果、海馬または他のＣＮＳの領域における細胞増殖の結果、海馬または他のＣＮＳの領域における細胞の生存、海馬または他のＣＮＳの領域における増殖している神経前駆細胞（ＮＰＣ）の細胞運命（たとえば、星状細胞、新しいニューロン）及び海馬または他のＣＮＳの領域におけるニューロン新生が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５７】
認知もしくは運動の障害を治療する、神経炎症を軽減するまたはニューロン新生を増やすことにおける活性のために組成物を選別する方法の別の実施形態には、齧歯類または別の動物モデルにて選別される組成物または対照（パルス状に投与される）の付随する連続５〜７日間の毎日投与と共にＢｒｄＵの連続５〜７日間の毎日投与を含む、海馬の炎症及び増殖に対する組成物の急性効果を判定することが含まれる。選別される組成物のパルス状投薬の結末の後、１０日間（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０日間）まで、歯状回における細胞の数はＢｒｄＵ染色によって判定され、ＣＤ６８染色を示す（炎症の指標）領域のパーセントが決定される。
【０１５８】
認知もしくは運動の障害を治療する、神経炎症を軽減するまたはニューロン新生を増やすことにおける活性のために組成物を選別する方法の別の実施形態には、齧歯類または別の動物モデルにて選別される組成物または対照の５〜７日間のパルス状投薬計画を開始する前に連続５日間（１日１回）ＢｒｄＵを投与することが含まれる。その４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２週後、海馬の細胞生存はＢｒｄＵで染まる歯状回における細胞の数として判定され、ニューロン新生はダブルコルチン（ＤＣＸ）で染まる歯状回における細胞の数として判定され、星状細胞（加齢に関連する）またはニューロン（加齢に関連しない）のいずれかになる神経前駆細胞の細胞運命は、それぞれＢｒｄＵのＧＦＡＰとの、またはＮｅｕＮとの同時局在化によって判定される。
【０１５９】
認知もしくは運動の障害を治療する、神経炎症を軽減するまたはニューロン新生を増やすことにおける活性のために組成物を選別する方法の別の実施形態には、ＢｒｄＵと選別される組成物または対照とを同時に（及び毎日）５〜７日間投与し、その後、海馬におけるＤＣＸ染色によってニューロン新生の程度を、または上述のように増殖しているＮＰＣの細胞運命を判定することが含まれる。
【０１６０】
認知もしくは運動の障害を治療する、神経炎症を軽減するまたはニューロン新生を増やすことにおける活性のために組成物を選別する方法の別の実施形態には、選別される組成物または対照のパルス状投与計画を投与し、以下の実施例に記載されているように齧歯類または別の動物モデルにて認知または運動の機能の改善を判定することが含まれる。
【０１６１】
１６．試薬、装置及びキット
提供されるものはまた、上記に記載されている方法の１以上を実践するための試薬、装置及びそれらのキットである。主題の試薬、装置及びそれらのキットは大きく変化してもよい。
【０１６２】
対象とする試薬及び装置には、それを必要とする対象に輸注するための血漿を含む血液製剤を調製する方法に関して上記で言及されたもの、たとえば、抗凝固剤、低温保存剤、緩衝液、等張溶液等が挙げられる。
【０１６３】
キットは、採血バッグ、配管、針、遠沈管等も含んでもよい。さらに他の実施形態では、本明細書に記載されているようなキットは、たとえば、血漿タンパク質画分のような血液血漿製剤の２つ以上の容器、たとえば、血液血漿製剤の６つ以上を含む、３つ以上、４つ以上、５つ以上の容器を含む。場合によっては、キットにおける血液血漿製剤の異なる容器の数は、３６個以上、たとえば、４８個以上を含めて９つ以上、１２個以上、１５個以上、１８個以上、２１個以上、２４個以上、３０個以上であってもよい。各容器は、その中に含有される血液血漿製剤についての種々のデータを含む識別情報と関連してもよく、識別情報には、血液血漿製剤のドナーの年齢、血液血漿製剤に関する処理の詳細、たとえば、血漿製剤は平均分子量を上回ってタンパク質を除くように処理されたか否か（たとえば、上記に記載されている）、血液型の詳細等の１つ以上が含まれてもよい。場合によっては、キットにおける各容器は、その中に含有される血液血漿についての識別情報を含み、識別情報には、血液血漿製剤のドナーの年齢についての情報が含まれ、たとえば、識別情報は、血液血漿製剤のドナーの年齢関連のデータを確認することを提供する（そのような識別情報は採取時点でのドナーの年齢であってもよい）。場合によっては、キットの各容器は実質的に同じ年齢のドナーに由来する血液血漿製剤を含有する、すなわち、容器のすべては同じではないにしろ、実質的に同じ年齢であるドナーに由来する製剤を含む。実質的に同じ年齢によって、キットの血液血漿製剤が得られる種々のドナーがそれぞれ、場合によっては、５歳以下、たとえば、４歳以下、たとえば、２歳以下、たとえば、１歳以下を含めて３歳以下、たとえば、９ヵ月以下、６ヵ月以下、１ヵ月以下を含めて３ヵ月以下それぞれ年齢が異なることを意味する。識別情報は、たとえば、ラベル、ＲＦＩＤチップ等のような容器の好都合な成分に存在することができる。識別情報は、所望のようにヒトが読めてもよいし、コンピューターで読み出しできてもよい。容器は好都合な形状を有してもよい。容器の容積は変化してもよい一方で、場合によっては、容積は１０ｍＬから５０００ｍＬに及び、たとえば、２５ｍＬ〜２５００ｍＬ、たとえば、１００ｍＬ〜５００ｍＬを含めて５０ｍＬ〜１０００ｍＬに及ぶ。容器は剛性であっても柔軟性であってもよいし、好都合な材料、たとえば、医学等級のプラスチック材料を含むポリマー材料から製造されてもよい。場合によっては、容器はバッグまたはポーチの形状を有する。容器に加えて、そのようなキットはさらに、たとえば、上記に記載されているような投与用具を含んでもよい。そのようなキットの成分は好適な包装、たとえば、容器及び他のキット成分を保持するように構成される箱または類似の構造で提供されてもよい。
【０１６４】
上記の成分に加えて、主題のキットはさらに主題の方法を実践するための指示書を含む。これらの指示書は種々の形態で主題のキットに存在してもよく、その１つ以上がキットに存在してもよい。これらの指示書が存在してもよい形態の１つは好適な媒体または基材、たとえば、キットの包装にて、添付文書等にて情報が印刷される１枚または数枚の紙にて印刷された情報のようなものである。さらに別の手段は、情報が記録されているコンピューターで読み出せる媒体、たとえば、ディスク、ＣＤ、携帯用フラッシュドライブ等である。存在してもよいさらに別の手段は、移動させたサイトで情報にアクセスするインターネットを介して使用されてもよいウェブサイトのアドレスである。どんな好都合な手段もキットに存在してもよい。
【０１６５】
１７．運動負荷
運動負荷は有酸素活動または非有酸素活動を特徴とすることができ、高カロリー燃焼活動及び中程度カロリー燃焼活動を含むことができる。運動負荷は筋力トレーニング（たとえば、ウエイトトレーニングまたは等尺性運動負荷）を含んでもよい。運動負荷はまた、たとえば、ランニング、自転車に乗ること、ウォーキング、ダンス、マーチング、水泳、ヨガ、太極拳、平衡運動負荷、脚帯、縄跳び、サーフィン、漕艇、腕または脚を回し、屈曲すること、ガーデニング、清掃、たとえば、ボーリング、エアロビクス、ピラティス及び武道のような活発な競技も含んでもよい。
【０１６６】
運動負荷計画は、特定の頻度で単一の運動負荷を実施すること、または特定の頻度で運動負荷の組み合わせを実施することを含んでもよい。頻度は週に１、２、３、４、５、６または７回であってもよい。頻度は週単位で異なってもよい。運動負荷計画は本発明の組成物の投与の前に対象が実践した場合と同じレベルの強度及び／または頻度であってもよい。運動負荷計画は本発明の組成物の投与の前に対象が実践したレベルと比べて高いレベルの強度及び／または頻度であってもよい。運動負荷計画は医療関係者もしくはフィットネス関係者によって提案もしくは処方されていてもよいし、または運動負荷計画は対象彼自身もしくは彼女自身で開始されていてもよい。
【実施例】
【０１６７】
１８．実験的実施例
（ａ）実施例１
清澄化した若齢ヒト血漿（若齢血漿）または市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を老化した免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。ＰＰＦ１は、電気泳動で判定したとき、およそ８８％の正常ヒトアルブミン（総タンパク質に対して）と１２％のアルファ及びベータのグロブリンと１％以下のガンマグロブリンとを伴うＰＰＦである。言及される場合を除いて、ＰＰＦ１は本明細書の実施例では５％溶液（ｗ／ｖ、５０ｇ／Ｌ）を用いて生体内に投与される。マウスはすべて４つの異なる基準である自分のケージでの営巣の採点、当初の体重、オープンフィールドでの移動した距離、及びオープンフィールドの中央にいる時間の％に従って処理群にわたって均質化した。群の決定に続いて、５日間１５０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）にて処方したＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン）を腹腔内（ＩＰ）でマウスに注射した。これに続いて、１５０μＬのＰＰＦ１を週に３回４週間マウスに静脈内（ＩＶ）で注射した。行動試験は５週目と６週目とに発生したが、その際、マウスは並行する試験日での注射を回避するために週２回の注射を受けた。６週間の期間にわたる合計１６回の注射について最後のＩＶ注射の２４時間後にマウスを安楽死させた。マウスの追加の２つのコホートには１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水を連続７日間静脈内で（ＩＶ）注射した（パルス状投与した）。週群当たり３回と同じ回数で行動試験は５週目と６週目とに発生した。
【０１６８】
ＣｌｅｖｅｒＳｙｓソフトウェア（Ｒｅｓｔｏｎ，ＶＡ）を用いて行動試験を解析した。ＣｌｅｖｅｒＳｙｓ  ＴｏｐＳＣａｎ  Ｖ３．０を用いて、迷路なし、Ｂａｒｎｅｓの迷路、オープンフィールド及びＹ迷路にてマウスの行動を追跡した。Ｂａｒｎｅｓの迷路はＣｌｅｖｅｒＳｙｓによって構築した。握力計を設計し、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）が作製した。Ｙ迷路及びオープンフィールドのチャンバーはＳａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の仕様書に従って構築した。海馬切片の組織学的解析は、ＤＣＦ７０００Ｔ明視野／蛍光色顕微鏡カメラを備えたＬｅｉｃａ（Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）撮像顕微鏡モデルＤＭ５５００Ｂで実施した。
【０１６９】
行動試験
図１Ａは、ＰＰＦ１でパルス投与を受けた群が、生理食塩水対照群及びＰＰＦ１で週３回処理された群の双方と比べてオープンフィールド試験にて移動距離を増やす傾向があったことを示している。この結果はパルス投与群における移動性を増やす傾向を示している。図１Ｂは、ＰＰＦ１でパルス投与を受けた群が、生理食塩水対照群及びＰＰＦ１で週３回処理された群の双方と比べてオープンフィールドの中央で過ごす時間の比率を増やす傾向があったことを示している。この結果はパルス投与群における不安低下の傾向を示している。
【０１７０】
体重
図２はＰＰＦ１の体重に対する影響を示す。双方のＰＰＦ１処理群（パルス状投薬または週３回）は注射からの有害効果を示さなかった。
【０１７１】
組織学
図３は歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。週３回処理群及び生理食塩水群と比べてパルス状投与ＰＰＦ１処理群との間でニューロン新生に有意な増加があった。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、**ｐ＜０．０１である。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較事後解析による一元配置ＡＮＯＶＡ（ｎ：生理食塩水＝８、ＰＰＦ１パルス状投与＝１０、ＰＰＦ１  ３×／週＝１０）。図４は、３つの別々に処理したマウス群の歯状回の顆粒層内におけるＢｒｄＵ陽性標識細胞の数を示す。週３回処理群及び生理食塩水群と比べてパルス状投与ＰＰＦ１処理群との間で細胞生存に有意な増加があった。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、****ｐ＜０．０００１、 *ｐ＜０．０５である。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較事後解析による一元配置ＡＮＯＶＡ（ｎ：生理食塩水＝８、ＰＰＦ１パルス状投与＝１０、ＰＰＦ１  ３×／週＝１０）。
【０１７２】
海馬切片の解析はＤＣＦ７０００Ｔ明視野／蛍光色顕微鏡カメラを備えたＬｅｉｃａ（Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）撮像顕微鏡モデルＤＭ５５００Ｂで実施した。Ｋｉ６７染色は１：５００でのＡｂｃａｍ（ａｂ１５５８０）であり、二次抗体は１：３００でのヤギ抗ウサギ（Ａｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ５５５）（ａｂ１５００９０）である。
【０１７３】
（ｂ）実施例２
清澄化した若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）または市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を老化した免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスはすべて４つの異なる基準である自分のケージでの営巣の採点、当初の体重、オープンフィールドでの移動した距離、及びオープンフィールドの中央にいる時間の％に従って処理群にわたって均質化した。群の決定に続いて、５日間１５０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）にて処方したＢｒｄＵを腹腔内（ＩＰ）でマウスに注射した。これに続いて、マウスには、清澄化した若齢ヒト血漿またはＰＰＦ１のいずれかの１５０μＬを（１）週３回で６週間（「３×／週」）、（２）週３回で１週間だけ（「３×」）、（３）７日間で１週間、静脈内に（ＩＶ）注射した。マウスの追加の群には生理食塩水をパルス状で７日間投与した。若齢血漿または老齢血漿、ＰＰＦ１または溶媒の投薬の開始の６週間後、マウスをすべて屠殺した。
【０１７４】
組織学
図５は、若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）、ＰＰＦ１または生理食塩水のいずれかで処理したマウスの９つの別々の処理群での歯状回の顆粒層内におけるＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。ＰＰＦ１処理したマウスはパルス投与または週３回処理の双方とも他の群と比べてニューロン新生の増加を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、 *ｐ＜０．０５である。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。ＰＰＦ１処理（パルス状または３×／週）及び生理食塩水処理（ｎ：生理食塩水＝４、ＰＰＦ１パルス状＝５、ＰＰＦ１  ３×／週＝５、ＰＰＦ１  ３×＝４、ＹＰパルス状＝６、ＹＰ３×／週＝６、ＹＰ３×＝４、ＡＰパルス状＝６、ＡＰ３×＝６）。
【０１７５】
図６は、若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）、ＰＰＦ１または生理食塩水のいずれかで処理したマウスの９つの別々の処理群での歯状回の顆粒層内におけるＢｒｄＵ陽性標識細胞の数を示す。ＰＰＦ１で処理したマウスは他の群と比べて細胞生存で有意な増加を示し、パルス投与したＰＰＦ１処理マウスは週３回投与ＰＰＦ１処理マウスよりも大きな有意差を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、**ｐ＜０．０１、 *ｐ＜０．０５である。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。ＰＰＦ１処理（パルス状または３×／週）及び生理食塩水処理（ｎ：生理食塩水＝４、ＰＰＦ１パルス状＝５、ＰＰＦ１  ３×／週＝５、ＰＰＦ１  ３×＝４、ＹＰパルス状＝６、ＹＰ３×／週＝６、ＹＰ３×＝４、ＡＰパルス状＝６、ＡＰ３×＝６）。
【０１７６】
（ｃ）実施例３
清澄化した若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）または市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を老化した免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスは１週間の投薬計画にて７日間毎日静脈内（ＩＶ）投与で処理した。
【０１７７】
マウスはすべて４つの異なる基準である自分のケージでの営巣の採点、当初の体重、オープンフィールドでの移動した距離、及びオープンフィールドの中央にいる時間の％に従って処理群にわたって均質化した。群の決定に続いて、５日間１５０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）にて処方したＢｒｄＵを腹腔内（ＩＰ）でマウスに注射した。すべてのマウスに、１５０μＬの若齢血漿または老齢血漿、ＰＰＦ１または生理食塩水を連続７日間（パルス状投薬と呼ぶ）静脈内で（ＩＶ）注射した。パルス状投薬が完了した３週間後、３０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でのＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）で処方したＥｄＵ（５−エチニル−２’−デオキシウリジン）をマウスに腹腔内で（ＩＰ）５日間注射した。８週目（パルス状投薬の終了に続いて６週）にＢａｒｎｅｓの迷路を実施した。
【０１７８】
ＣｌｅｖｅｒＳｙｓソフトウェア（Ｒｅｓｔｏｎ，ＶＡ）を用いて行動試験を解析した。ＣｌｅｖｅｒＳｙｓ  ＴｏｐＳＣａｎ  Ｖ３．０を用いて、Ｂａｒｎｅｓ迷路におけるマウスの行動を追跡した。海馬切片の解析は、ＤＣＦ７０００Ｔ明視野／蛍光色顕微鏡カメラを備えたＬｅｉｃａ（Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）撮像顕微鏡モデルＤＭ５５００Ｂで実施した。
【０１７９】
行動試験
図７は、Ｂａｒｎｅｓの迷路によって調べたときの各処理群について１日当たり試行当たり標的穴を見つけるためにかかった時間（待ち時間）を示す。ＰＰＦ１のパルス状投与で処理したマウスは幾つかの個々の試験区分についての試行待ち時間で有意な減少を示したということは認知能力の改善を示している。 *ｐ＜０．０５。平均値±ｓ．ｅ．ｍ．、独立ｔ検定（ｎ：生理食塩水＝１３、ＰＰＦ１＝１３、ＡＰ＝１４、ＹＰ＝１４）。
【０１８０】
組織学
図８は、若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）、ＰＰＦ１または生理食塩水のいずれかで処理した４つの別々の処理群の歯状回の顆粒層内におけるＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。生理食塩水処理と比べてパルス状投与のＰＰＦ１及びパルス状投与の若齢ヒト血漿ではニューロン新生で有意な増加があった。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、****ｐ＜０．０００１、**ｐ＜０．０１である。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較事後解析による一元配置ＡＮＯＶＡ。（ｎ：生理食塩水＝１４、ＰＰＦ１＝１４、ＡＰ＝１４、ＹＰ＝１５）。この実験がより長く実施され、最初のパルス状の投与計画から１２週間後に組織学的検査がなされるとき、ＰＰＦ１はより多数のＤＣＸ陽性標識細胞を示してＰＰＦ１とＹＰとの乖離がより明示される。
【０１８１】
図９は、若齢ヒト血漿（ＹＰ）、老齢ヒト血漿（ＯＰ）、ＰＰＦ１または生理食塩水のいずれかで処理したマウスの歯状回の顆粒層内におけるＢｒｄＵ標識細胞の数を示す。生理食塩水処理と比べてパルス状投与のＰＰＦ１及びパルス状投与のＹＰでは細胞生存で有意な増加があった。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、****ｐ＜０．０００１である。平均値±ＳＥＭ、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較事後解析による一元配置ＡＮＯＶＡ。（ｎ：生理食塩水＝１４、ＰＰＦ１＝１４、ＡＰ＝１４、ＹＰ＝１５）。
【０１８２】
（ｄ）実施例４
市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を老化した免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。１週間投薬計画にて７日間毎日の尾静脈内（ＩＶ）投与で１２ヵ月齢のマウスを処理した。処理後、行動試験に先立って４．５週間、マウスを自分のケージ環境に置いたままにした。注射及び行動試験はすべて各コホートについて７週間の経過にわたって行われ、９週間の合計期間にわたって実施された。マウスはすべて最初の投薬に先立って５日間ＢｒｄＵをＩＰで受け入れた。最後の行動試験の結論の翌日、マウスを屠殺した。
【０１８３】
行動試験はＣｌｅｖｅｒＳｙｓソフトウェア（Ｒｅｓｔｏｎ，ＶＡ）を用いて解析した。ＣｌｅｖｅｒＳｙｓ  ＴｏｐＳＣａｎ  Ｖ３．０を用いて、Ｙ迷路におけるマウスの行動を追跡した。
【０１８４】
行動試験
図１０は、Ｙ迷路試験における処理群による各走行路に入る総進入のうち精通走行路または新規走行路に入る進入の総数のパーセントを示す。１２ヵ月齢のマウスを生理食塩水、ＰＰＦ１または５×濃度のＰＰＦ１によってパルス投与で処理した。ＰＰＦ１及びＰＰＦ１（×５）のパルス投与で処理したマウスは双方とも生理食塩水で処理したマウスによる新規走行路への進入の量に比べて新規走行路に進入することで有意な増加を示したということは、認知における改善を示している。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。 *ｐ＜０．０５。対応があるｔ検定。
【０１８５】
図１１は、各処理群についてのＹ迷路の精通走行路に対する新規走行路への進入回数の比を示す。１２ヵ月齢のマウスを生理食塩水、ＰＰＦ１または５×濃度のＰＰＦ１によってパルス投与で処理した。ＰＰＦ１及びＰＰＦ１（×５）のパルス投与で処理したマウスは双方とも生理食塩水で処理したマウスに比べて新規走行路への進入の増加の傾向を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。
【０１８６】
組織学
図１２は、海馬切片すべての中でのＢｒｄＵ陽性標識細胞の数を示す。ＰＰＦ１のパルス投与で処理したマウスは生理食塩水及びＰＰＦ１（×５）で処理したマウスに比べて細胞生存の増加傾向を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。
【０１８７】
図１３は、海馬切片すべての中でのＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。ＰＰＦ１及びＰＰＦ１（×５）パルス投与のマウスは生理食塩水で処理したマウスに比べてニューロン新生の増加傾向を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍである。
【０１８８】
（ｅ）実施例５
市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を老化した（１０．５ヵ月齢）免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスはすべて４つの異なる基準である自分のケージでの営巣の採点、当初の体重、オープンフィールドでの移動した距離、及びオープンフィールドの中央にいる時間の％に従って処理群にわたって均質化した。群の決定に続いて、５日間１５０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）にて処方したＢｒｄＵを腹腔内（ＩＰ）でマウスに注射した。これに続いて、マウスには、（１）連続５日間［ＰＰＦ１−５ｄ］、（２）連続７日間［ＰＰＦ１−７ｄ］、（３）連続５日間と最初の投薬の完了の６週後に発生する強化（Ｂ）投薬の追加の連続５日間［ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ］、（４）連続７日間と最初の投薬の完了の６週後に発生する強化（Ｂ）投薬の追加の連続７日間［ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ］のいずれかでＰＰＦ１を静脈内（ＩＶ）で注射した。追加の群には連続７日間と最初の投薬の完了の６週後に発生する強化（Ｂ）投薬の追加の連続７日間［ＳＡＬ−７ｄ−Ｂ］で生理食塩水を注射した。パルス状投薬の５週後、マウスには、３０ｍｇ／ｋｇで投薬される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でのＰＢＳで処方したＥｄＵ（５−エチニル−２’−デオキシウリジン）をＩＰで５日間注射した。マウスはすべて、ＰＰＦ１または溶媒のパルス投薬の完了の１２週後に屠殺した。
【０１８９】
海馬切片の解析は、ＤＣＦ７０００Ｔ明視野／蛍光色顕微鏡カメラを備えたＬｅｉｃａ（Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）撮像顕微鏡モデルＤＭ５５００Ｂで実施した。図１４は、ＰＰＦ１及び生理食塩水で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。これらの結果は、強化投薬が後に続く連続５日間処理した群で著しい改善があることを示し、それは連続７日間処理した群に匹敵する。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍである。生理食塩水に対するＰＰＦ１−７ｄ、ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂは *ｐ＜０．０５。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。（ｎ：生理食塩水＝５、ＰＰＦ１−５ｄ＝８、ＰＰＦ１−７ｄ＝７、ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ＝８、ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ＝７）。
【０１９０】
図１５は、ＰＰＦ１及び生理食塩水で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ陽性標識細胞の数を示す。これらの結果は、増殖している細胞という点で、強化投薬がない連続５日間または連続７日間で処理した群と比べて強化投薬が後に続く連続５日間処理した群で刺激は本格的に増加させることを示している。さらに、強化投薬処理は細胞生存を全体で有意に増やす。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ.である。生理食塩水に対するＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ、ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂは ***ｐ＜０．００１、 *ｐ＜０．０５。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂに対するＰＰＦ１−５ｄ、＋ｐ＜０．０５、独立ｔ検定。（ｎ：生理食塩水＝７、ＰＰＦ１−５ｄ＝８、ＰＰＦ１−７ｄ＝７、ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ＝８、ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ＝７）。
【０１９１】
図１６は、若齢血漿、ＰＰＦ１及び生理食塩水で処理したマウスにおける歯状回の顆粒層内でのＥｄＵ陽性標識細胞の数を示す。これらの結果は、強化投薬で観察された効果は存在する増殖している細胞の総数での増加のせいではなく、強化投与によって引き出された高い生存メカニズムのせいであることを示している。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ.である。（ｎ：生理食塩水＝４、ＰＰＦ１−５ｄ＝７、ＰＰＦ１−７ｄ＝６、ＰＰＦ１−５ｄ−Ｂ＝７、ＰＰＦ１−７ｄ−Ｂ＝６）。
【０１９２】
（ｆ）実施例６
市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）を成熟（３ヵ月齢及び６ヵ月齢）免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスはすべて４つの異なる基準である自分のケージでの営巣の採点、当初の体重、オープンフィールドでの移動した距離、及びオープンフィールドの中央にいる時間の％に従って処理群にわたって均質化した。群の決定に続いて、５日間１５０ｍｇ／ｋｇで投与される１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度でＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）にて処方したＢｒｄＵを腹腔内（ＩＰ）でマウスに注射した。これに続いて、マウスには、生理食塩水またはＰＰＦ１を静脈内で（ＩＶ）連続７日間（パルス投薬）注射した。生理食塩水及びＰＰＦ１処理の双方に由来するマウスのサブセットには自分のケージ内にて回し車を提供した。パルス投薬の完了の３日後、１０日後または４２日後にマウスを屠殺した。
【０１９３】
図１７は、回し車の有無にかかわらず、ＰＰＦ１または生理食塩水の処理で処理した３ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ陽性標識細胞の数を示す。示したデータはすべて平均値±ｓ．ｅ．ｍ.である。生理食塩水の４２日後に対する回し車＋ＰＰＦ１の４２日後、回し車の４２日後、****ｐ＜０．０００１、 *ｐ＜０．０５。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。ＰＰＦ１の４２日後に対する回し車、 ***ｐ＜０．０００１、独立ｔ検定。（ｎ：生理食塩水３日後＝８、ＰＰＦ１の３日後＝８、ＰＰＦ１の１０日後＝７、溶媒４２日後＝８、ＰＰＦ１の４２日後＝８、回し車４２日後＝８、回し車＋ＰＰＦ１の４２日後＝８）。図１７はまた、回し車の有無にかかわらず、ＰＰＦ１または生理食塩水の処理で処理した６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＤＣＸ陽性標識細胞の数も示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。生理食塩水の４２日後に対する回し車＋ＰＰＦ１の４２日後、回し車の４２日後、****ｐ＜０．０００１、**ｐ＜０．０１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。ＰＰＦ１の４２日後に対する回し車、 ***ｐ＜０．０００１、対応がないｔ検定。生理食塩水の４２日後に対するＰＰＦ１の４２日後、 *ｐ＜０．０５、独立ｔ検定。（ｎ：生理食塩水３日後＝７、ＰＰＦ１の３日後＝８、ＰＰＦ１の１０日後＝６、生理食塩水４２日後＝８、ＰＰＦ１の４２日後＝６、回し車４２日後＝８、回し車＋ＰＰＦ１の４２日後＝９）。
【０１９４】
図１８は、回し車の有無にかかわらず、ＰＰＦ１または生理食塩水の処理で処理した３ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＫｉ６７陽性標識細胞の数を示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。生理食塩水の４２日後に対する回し車＋ＰＰＦ１の４２日後、 ***ｐ＜０．００１、Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。（ｎ：生理食塩水３日後＝６、ＰＰＦ１の３日後＝６、ＰＰＦ１の１０日後＝７、生理食塩水４２日後＝８、ＰＰＦ１の４２日後＝８、回し車４２日後＝８、回し車＋ＰＰＦ１の４２日後＝８）。
【０１９５】
図１８はまた、回し車の有無にかかわらず、ＰＰＦ１または生理食塩水の処理で処理した６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＫｉ６７陽性標識細胞の数も示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。生理食塩水の４２日後に対する回し車＋ＰＰＦ１の４２日後、回し車の４２日後、 ***ｐ＜０．００１、 *ｐ＜０．０５。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。（ｎ：生理食塩水３日後＝７、ＰＰＦ１の３日後＝７、ＰＰＦ１の１０日後＝８、生理食塩水４２日後＝８、ＰＰＦ１の４２日後＝７、回し車４２日後＝７、回し車＋ＰＰＦ１の４２日後＝９）。
【０１９６】
図１９は、回し車の有無にかかわらず、ＰＰＦ１または生理食塩水の処理で処理した３ヵ月齢及び６ヵ月齢のＮＳＧ動物における歯状回の顆粒層内でのＢｒｄＵ陽性標識細胞の数を示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。溶媒の４２日後に対する回し車＋ＰＰＦ１の４２日後、 ***ｐ＜０．００１、Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ。（****ｐ＜０．０００１、 ***ｐ＜０．００１、**ｐ＜０．０１、 *ｐ＜０．０５、Ｄｕｎｎｅｔｔの事後解析によるＡＮＯＶＡ）。
【０１９７】
これらのデータは、３ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける投薬の６週後に溶媒と比べてＰＰＦ１及び回し車にてニューロン新生で有意な増強があることを示している。さらに、３ヵ月齢のＮＳＧマウスにおいて投薬の６週後に回し車単独と比べてＰＰＦ１及び回し車にてニューロン新生で有意な増強がある。６ヵ月齢のＮＳＧマウスにおいても投薬の６週後に溶媒と比べてＰＰＦ１及び回し車にてニューロン新生で有意な増強がある。これらの結果はまた、６ヵ月齢のＮＳＧマウスにおける投薬の６週後に回し車単独と比べてＰＰＦ１及び回し車にてニューロン新生で有意な増強も示している。さらに、３ヵ月齢及び６ヵ月齢双方のＮＳＧマウスにおける投薬の６週後に溶媒と比べてＰＰＦ１及び回し車にて前駆細胞の増殖に有意な増強がある。
【０１９８】
６ヵ月齢での成熟ＮＳＧマウスにおけるこれらの知見は、運動負荷またはＰＰＦ１処理のいずれかと別々に比べてニューロン新生の有意な増強を生じる運動負荷とＰＰＦ１投与とによる潜在的な相乗効果を示している。このことは、臨床現場における運動負荷計画と併せたＰＰＦ１治療の潜在的な有用性を支持している。さらに、これらのデータは、複数の独立したまたは重複したメカニズムを介してアクセスされ得る脳におけるニューロン新生について有意な受容能力があることを明らかにしている。
【０１９９】
（ｇ）実施例７
ＰＰＦ１または生理食塩水対照を１１ヵ月齢の免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）の２つの処理群に投与した。マウスはすべて連続７日間、投与当たり１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水のＩＶ注射を受けた。回し車（ＭｅｄＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ）は、試験の７週目に開始するランナーと名付けた（ｎ＝８、ＰＰＦ１及び生理食塩水についてｎ＝８）マウスのケージに入れた。車の回転数は昼夜、連続５日間記録した。
【０２００】
図２０は、暗期を示す網掛け領域を伴う所与の期間での車の回転数を示す。対応がないｔ検定を用いて、明暗サイクルにおける処理群及び非処理群双方についての総走行の統計的有意性に評価した。リズム発現プロファイルを抽出し、マウス当たり５つの１３時点系列を持つ処理群及び未処理群に由来する各マウスについて別々に、１３時点系列についての時間と頻度との領域解析を用いて特徴付けた。期間、相及び大きさは各リズムについて定義されたパラメーターであり、対応がない両側ｔ検定を用いて２群間で比較した。ＰＰＦ１で処理したマウスは未処理のマウスよりも有意に多く走行し、運動活動の改善の指標である。足での正常な痛覚を検査するためにホットプレート試験にマウスを供した。感覚の喪失は行動の読み出しに先立って影響を与えたはずである。ホットプレート試験は、図２０の四角で囲った区分で示した車の回転のスパイクによって明らかなように回し車のケージ環境に戻した後、活動での軽い増加につながった。
【０２０１】
（ｈ）実施例８
組換えヒトアルブミン（「ｒｈアルブミン、Ａｌｂｕｍｅｄｉｘ，Ｌｔｄ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）、清澄化した若齢ヒト血漿（「ＹＰ」）または生理食塩水対照を１０．５ヵ月齢の免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスはすべて、７日間のパルス投薬に先立って１週目に５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵのＩＰを受けた。ｒｈアルブミンを注射用水（ＷＦＩ、０．９％生理食塩水）で５０ｍｇ／ｍＬに希釈した。マウスはすべて投与当たり１５０μＬのｒｈアルブミン、ＹＰまたは生理食塩水の連続７日間のＩＶ注射を受けた。処理の最終日の６週後、マウスを屠殺した。
【０２０２】
図２１Ａは、歯状回（「ＤＧ」）にてＢｒｄＵ標識細胞の数によって判定されたように３つの処理群すべてにおける細胞生存の量を示す。若齢血漿は生理食塩水及びｒｈアルブミンと比べて細胞生存を有意に増やすのに対してｒｈアルブミンは細胞生存に有意な効果を有さなかった。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である（独立ｔ検定によって ***ｐ＜０．００１）。
【０２０３】
図２１Ｂは、歯状回（「ＤＧ」）にてＤＣＸ陽性細胞の数によって判定されたように３つの処理群すべてにおけるＤＣＸ染色の量を示す。若齢血漿は生理食塩水及びｒｈアルブミンと比べてニューロン新生を有意に増やすのに対してｒｈアルブミンは生理食塩水対照と比べてニューロン新生の減少に関連した。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である（独立ｔ検定によって**ｐ＜０．０１、 ***ｐ＜０．００１）。
【０２０４】
（ｉ）実施例９
マウスの未発達の皮質に由来する解離混合神経細胞を４８穴多重電極アレイプレート（Ａｘｉｏｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に入れ、増殖させた。各ウェルは入れた神経細胞と物理的に接触し、細胞膜特性のわずかな変化を測定する１６の電極を含有する。この設定は、種々の異なるパラメーターを評価して単一電極レベルでのニューロンのスパイク活動及び発火行動についての情報を得るとともに、ウェル内での複数の電極にわたってニューロンの発火特性の同期生を評価することによってニューロンの結合性の程度についての情報を得ることを可能にする。
【０２０５】
1日目から前方へ処理条件の存在下でニューロンの培養物を維持した。処理条件は、１０％（ｖ／ｖ）の組換えヒトアルブミン（「ｒｈアルブミン」Ａｌｂｕｍｅｄｉｘ，Ｌｔｄ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）、ＰＰＦ1、またはＨＡＳ1を含有するＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地にＢ２７および脳由来の神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の補完剤を加えたものを含んだ。溶媒は対照を構成した。ニューロンの活動は培養の７日目、1２日目、１６日目、２１日目に測定した。
【０２０６】
図２２Ａ〜図２２Ｃは、ＰＰＦ１とＨＡＳ１との双方での処理が対照またはｒｈアルブミンの処理と比べてニューロンのスパイク活動（図２２Ａの二つのＭＥＡスパイクトレイン及び図２２Ｂのニューロンのスパイク活動の定量化）を促進させ、ＰＰＦ１のみでの処理がニューロンの培養物の成熟中における神経ネットワークのバースト数を増加させる（図２２Ｃ）ことを示している。ＨＡＳ１は、冷アルコール分画法によって調製し、ドナーからのプールしたヒト血漿に由来する、５％溶液（ｗ／ｖ、５０ｇ／Ｌ）にて９５％余りがヒトアルブミン（総タンパク質に対して）である市販のＨＡＳである。ＰＰＦ１及びＨＡＳ１は双方とも５％溶液（ｗ／ｖ、５０ｇ／Ｌ）で入荷し、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地＋Ｂ２７補完剤で１：１０に希釈した。このＰＰＦ１の神経ネットワーク活動に対する効果は培養で２１日まで持続する。このことは、ＰＰＦ1が神経ネットワークの成熟の促進に関連することを示している。示したデータはすべて３度の独立実験からのｎ＝２５〜４５ウェルの平均値±ＳＥＭであり、対応がないスチューデントのｔ検定、 *ｐ＜０．０５、＃ｐ＜０．０１である。
【０２０７】
（ｊ）実施例１０
清澄化した老齢ヒト血漿（ＯＰ）または無菌生理食塩水を８週齢の（若齢）免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。各実験では、マウスは体重によって処理群にわたって均質化した。マウスすべてには、無菌ＰＢＳ中の１５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵを連続５日間ＩＰで注射した。ＢｒｄＵ注射には投与当たり１５０μＬでの異なる治療規範の老齢血漿のＩＶ投与が続いた。規範はすべて図２３で要点を述べる。
【０２０８】
規範１には、５週間にわたる合計１０回の注射のための週２回の注射が含まれる。組織学的解析は最後の血漿投与の４８時間後に実施される。規範２には、４週間にわたる合計１０回の注射のための週３回の注射が含まれ、最後の血漿投与の４８時間後に組織学的解析を伴う。規範３では、マウスは連続７日間毎日注射を受け、最後の投与の４８時間後に組織学的に解析される。規範４では、マウスは連続７日間毎日注射を受け、最後の投与の２１日後に解析される。老齢血漿で処理したマウスの脳を内皮炎症のマーカー、海馬におけるＶＣＡＭ−１及び歯状回にてダブルコルチン（ＤＣＸ）陽性細胞によって標識される新生ニューロンの数について解析した。ＶＣＡＭ−１は３０μｍの浮遊切片にて免疫組織化学処理の後、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ  ＨＴ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）にて画像化し、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて解析した。歯状回におけるＤＣＸ陽性細胞はＬｅｉｃａ広視野顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）にてライブで計数した。
【０２０９】
海馬におけるパーセントＶＣＡＭ−１陽性領域の解析（図２４Ａ〜図２４Ｄ）は、内皮の炎症が最後の血漿の投与の４８時間後有意に上昇し、週２回投薬ではその傾向があり（図２４Ａ）、週３回投薬（図２４Ｂ）及びパルス状投薬（図２４Ｃ）では有意に上昇した。最後の老齢血漿を投与した２１日後ではＶＣＡＭ−１はもはや有意に上昇しなかった（図２４Ｄ）。
【０２１０】
ダブルコルチンに対する効果は３〜４週の期間の後でしか観察することができないので、ＤＣＸ陽性細胞の数は規範１、２及び４における歯状回にて解析した。解析は、週２回（図２５Ａ）または週３回（図２５Ｂ）の投薬規範によるニューロン新生に対する老齢血漿の効果はなかったが、連続７日間のパルス状投薬（図２５Ｃ）はＤＣＸ陽性細胞の数の有意な低下を生じた。このデータは老齢ヒト血漿のパルス状投薬のみがニューロン新生に対して有意な効果を有したことを示唆している。
【０２１１】
（ｋ）実施例１１
老齢ヒト血漿（６５〜６８歳起源）で連続７日間処理した８週齢のＮＳＧマウスを老齢血漿の最後の注射の４週後に改変Ｂａｒｎｅｓ迷路を用いて調べた。図２６は、Ｂａｒｎｅｓ迷路の脱出にかかった時間経過を示し、老齢血漿及び生理食塩水で処理したＮＳＧマウスについて脱出穴に達し、それに入る時間を示す。群間での脱出にかかった時間には有意差はなかったが、４日目での老齢血漿で処理したマウスは生理食塩水対照よりも上手く実行しなかった。このデータは海馬機能に関連する空間記憶作業における低下した学習と記憶とを示している。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。二元配置ＡＮＯＶＡ、Ｓｉｄａｋ事後検定。
【０２１２】
図２７は、４日目における最後の３回のＢａｒｎｅｓ迷路の試行での平均脱出時間を示す。老齢血漿で処理したマウスは記憶機能の障害を示す脱出時間の増加傾向を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定）。
【０２１３】
図２８は、Ｂａｒｎｅｓ迷路の試行１と試行３との間での脱出時間の差異を示し、これらの試行が１日内での学習の測定基準として使用できることを示す。老齢血漿で処理したマウスはこれらの試行間での脱出時間の有意に少ない差異を有するということは、学習能力の低下を明らかにしている。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５）。
【０２１４】
図２９は、ニューロン新生及びシナプス機能に関連する様々なマーカーのｍＲＮＡレベルを定量するために使用されるｑＰＣＲの結果を示す。新生ニューロンのマーカーであるダブルコルチン（ＤＣＸ）の相対的な発現レベルは同じマーカーの組織学的な解析と一致して低下した。加えて、グルタミン酸作動性シナプスのマーカーであるｖｇｌｕｔ１（小胞性グルタミン酸輸送体１）、シナプスマーカーｓｙｎ１（シナプシン１）、ｔｕｊ１（ベータＩＩＩチューブリン）及びｂｄｎｆ（脳由来神経栄養因子）のレベルの低下に向かう傾向があった。これらの低下は老齢血漿を注射したマウスの脳における全体的に損傷したシナプスネットワーク及び神経ネットワークを示している。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定による *ｐ＜０．０５）。
【０２１５】
（ｌ）実施例１２
若齢（８週齢）免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）を体重によって処理群にわたって均質化した。マウスには無菌生理食塩水中３５ｍｇ／ｋｇのカイニン酸（Ｓｉｇｍａ）または生理食塩水対照を皮下で（ｓ.ｃ.）注射した。カイニン酸の末梢投与は、海馬における急性発作活動、炎症を生じ、マウスのサブセットでは、海馬のＣＡ１領域にてニューロンの欠損も生じた。カイニン酸注射の２時間後、マウスに１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水を静脈内に投与した。ＰＰＦ１または生理食塩水の投与は合計５日間毎日継続した（図３０）。６日目に分析のために組織を回収した。ミクログリアの活性化（ＣＤ６８）及び星状細胞の活性化（ＧＦＡＰ）についての免疫蛍光染色の後、海馬のＣＡ１領域にて炎症性の変化を分析した。切片は３０μｍの浮遊切片にて免疫組織化学処理の後、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ  ＨＴ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）にて画像化し、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて解析した。
【０２１６】
海馬のＣＡ１領域におけるパーセントＣＤ６８陽性領域の解析は、カイニン酸投与がＣＤ６８免疫反応性の上昇を生じ、それはミクログリアの活性化を示唆している（図３１Ａ）。５日間のＰＰＦ１投与は、ＣＤ６８陽性領域の比率の有意な低下を生じるので、ミクログリア活性化の低下を生じる。同様に、ＣＦＡＰ陽性領域の比率（図３１Ｂ）の解析はカイニン酸投与の後、有意な上昇を示し、それはＰＰＦ１投薬の後、有意に低下する。データは、ＰＰＦ１がカイニン酸を投与されているマウスの脳で急性の抗炎症効果を有することを示唆している。 *ｐ＜０．０５。Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較事後解析による一元配置ＡＮＯＶＡ。
【０２１７】
（ｍ）実施例１３
６ヵ月齢のＮＳＧマウスに１５０μＬ（１０ｍｇ／ｍＬ）の用量でＰＰＦ１または生理食塩水対照のいずれかをＩＶで１週間（７日間）毎日注射した。マウスはすべて、ＰＰＦ１または生理食塩水対照を受け入れるのと同じ日に１日１回５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵで処理した。次いでマウスを２つのコホートに分けた。第１のコホートはＢｒｄＵ及びＰＰＦ１による同時処理の７日間の直後の日に屠殺した。第２のコホートは７日後屠殺され、追加の７日間のＢｒｄＵの毎日投与を受けた。
【０２１８】
図３２は、コホート１及び２（左から右）の歯状回にて染色された細胞の数を示す。双方のコホートは生理食塩水対照と比べて歯状回にて細胞増殖の増加を示した（ ***ｐ＜０．００１、独立ｔ検定）。
【０２１９】
（ｎ）実施例１４
３ヵ月齢または６ヵ月齢のＮＳＧマウスにＰＰＦ１または生理食塩水溶媒のいずれかをＩＶで１週間（７日間）毎日注射した。その後、マウスは７日間の毎日投与が投与された３、１０または４２日後に屠殺した。歯状回のブレードにおける神経幹細胞及び神経前駆細胞を標識する増殖している細胞にしか存在しない核マーカーであるＫｉ６７で脳を染色した。図３３は、ＰＰＦ１を用いた連続７日間のパルス投薬計画の終了の１０日後、６ヵ月齢のマウスが歯状回にて総前駆細胞（Ｋｉ６７陽性または「Ｋｉ６７＋」）の増加を呈したことを示す。図３４は、ＰＰＦ１を用いた連続７日間のパルス投薬計画の終了の１０日後、ＮＳＧマウスにおける歯状回でのＫｉ６７の染色（明るい領域）を示す。これは、投薬停止の４２日後に細胞生存全体及びニューロン新生を増やすことにおけるＰＰＦ１についての考えられる作用機序の１つが総前駆細胞（神経幹細胞）の増加によるものであり得ることを示している。
【０２２０】
（ｏ）実施例１５
市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１」）または生理食塩水対照を６ヵ月齢と１２ヵ月齢との免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）の２つの異なる集団に投与した。マウスはすべて、試験剤の７日間パルス投薬に先立って１週目に５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵを受け入れた。マウスはすべて、投与当たり１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水のＩＶ注射を受けた。各処理群に由来する１コホートを用いて増殖を調べ、最後の施された投与の６週後に屠殺した。
【０２２１】
図３５Ａは、ＰＰＦ１で処理した６ヵ月齢マウスのコホートが生理食塩水対照と比べてニューロンに分化する前駆細胞（ＮｅｕＮ＋）の数で有意な増加、及び対照と比べて星状細胞に分化する前駆細胞（ＧＦＡＰ＋）の数で低下を示している。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって**ｐ＜０．０１）。
【０２２２】
図３５Ｂは、ＰＰＦ１で処理した１２ヵ月齢マウスのコホートが生理食塩水対照と比べてニューロンに分化する前駆細胞（ＮｅｕＮ＋）の数で有意な増加、及び対照と比べて星状細胞に分化する前駆細胞（ＧＦＡＰ＋）の数で統計的に有意ではない差異を示している。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって**ｐ＜０．０１）。
【０２２３】
（ｐ）実施例１６
清澄化した老齢ヒト血漿（老齢血漿）または無菌の生理食塩水を３ヵ月齢のマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。各実験では、マウスは体重によって処理群にわたって均質化した。マウスはすべて無菌生理食塩水中の１５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵの連続５日間のＩＰ注射を受けた。ＢｒｄＵ注射には、投与当たり１５０μＬの老齢血漿または無菌生理食塩水の連続７日間毎日のＩＶ投与が続き、最後の投与の４週後、組織学的に解析した。
【０２２４】
図３６Ａ及び図３６Ｂは、最後の投与の４週後、ＢｒｄＵで標識した増殖している神経前駆細胞の細胞運命を示す。老齢血漿を注射したマウスでは、生存しているＢｒｄＵ標識細胞は星状細胞よりもニューロンに有意に少なく分化する。このことは、老齢ヒト３６Ｂ血漿が若齢マウスにおける神経前駆細胞の細胞運命を星状細胞系列に変化させ（図３６Ｂ）、歯状回における新生ニューロンの数に負の影響を与える（図３６Ａ）ことを示している（群当たりｎ＝１２）。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって ***ｐ＜０．００１、****ｐ＜０．０００１）。
【０２２５】
（ｑ）実施例１７
皮質活性化
老齢（１８ヵ月齢）Ｃ５７ＢＬ／６マウスは１５０ｕＬのＰＰＦ１または０．９％生理食塩水のＩＶ注射を毎日７日間受けた。最後の試験剤投与の２時間半（２．５時間）後、ケタミンとキシラジンによる深麻酔下での０．９％生理食塩水とそれに続く４％ホルムアルデヒドとによる経心臓潅流によってマウスを屠殺した。脳を切断し、後固定し、ｉＤｉｓｃｏ手順によって処理し、２×２×３マイクロメーターのボクセル解像にて光シート蛍光顕微鏡（ＬＳＦＭ）を介してｃＦｏｓ陽性細胞を視覚化した。画像化した脳を三次元体積として割り当て、活性化されたｃＦｏｓ陽性細胞をコンピューターで検出した。群間の統計的比較は、偽発見率により多重比較について補正された負の二項回帰によって行った（＊は０．０５未満のｐ値を示す）。
【０２２６】
マウスの脳の解析は、ＰＰＦ１で処理した１８ヵ月齢マウスにおける皮質及び等皮質と同様に脳全体体積にてｃＦｏｓ陽性細胞の数の全体的増加を示した（図３７Ａ〜図３７Ｃ）。多重比較について補正した二項回帰を用いて、陽性ｃＦｏｓ全体の数におけるこれらの増加の差異は有意性に達しなかった。しかしながら、たとえば、前頭皮質、眼窩皮質、辺縁内皮質及び縁前方皮質のようなさらに定義された皮質領域の解析はｃＦｏｓ陽性細胞の数の有意な増加を示した（図３８Ａ〜図３８Ｄ）ということは、ニューロン活動の上昇を示している。前部前頭皮質領域での活動の増強が認知能力の向上と相関するということは、ＰＰＦ１処理が老齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスにて認知の改善を生じることを示唆している。ｃＦｏｓ陽性細胞の数の類似の有意な増加は副嗅核及び嗅結節でも見いだされた（図３９Ａ及び図３９Ｂ）。これらの領域は嗅覚情報の処理と関連し、活動の増強は嗅覚機能の増加を示唆している。赤色におけるｃＦｏｓ活性化のボクセル統計に基づく視覚化は、ＰＰＦ１で処理したマウスの皮質におけるｃＦｏｓシグナルの増加を示した（図４０）。
【０２２７】
（ｒ）実施例１８
市販のＰＰＦ（“ＰＰＦ１”）または生理食塩水対照を２２ヵ月齢の野生型（ＷＴ）マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ，“ＷＴ”，系統コード０６６４，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に投与した。マウスはすべて７日間パルス投薬に先立って１週目に５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵを受け入れた。続いて、マウスはすべて、連続７日間、投与当たり１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水のＩＶ注射を受けた。最後のＰＰＦ１または生理食塩水の注射の１０日後、マウスを屠殺し、組織検査のために脳を処理した。
【０２２８】
図４１Ａは投与の１０日後の海馬（ｎ＝１０、１０）におけるＣＤ６８免疫反応性領域のパーセントを示す。図４１Ｂは投与の１０日後の海馬（ｎ＝１０、１０）におけるＩｂａ−１免疫反応性領域のパーセントを示す。図４１Ｃは投与の１０日後の海馬（ｎ＝１０、１０）におけるＧＦＡＰ免疫反応性領域のパーセントを示す。図４１Ｄは投与の４週間後の海馬（ｎ＝１１、１２）におけるＣＤ６８免疫反応性領域のパーセントを示す。図４１Ｅは投与の４週間後の海馬（ｎ＝１１、１２）におけるＩｂａ−1免疫反応性領域のパーセントを示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である（独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１、 ***ｐ＜０．００１）。これらの結果は、ＰＰＦ１で処理後１０日及び４週間の老齢マウスの海馬におけるミクログリアのマーカーであるＣＤ６８及びＩｂａ−１の明白な低下を示している。
【０２２９】
（ｓ）実施例１９
市販のＰＰＦ（「ＰＰＦ１）または生理食塩水対照を２３ヵ月齢の野生型（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ，“ＷＴ”，系統コード０６６４，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に投与した。マウスはすべて連続７日間パルス投薬に先立って１週目に５０ｍｇ／ｋｇのＢｒｄＵを受け入れた。続いて、マウスはすべて、連続７日間、投与当たり１５０μＬのＰＰＦ１または生理食塩水のＩＶ注射を受けた。各処理群に由来する１コホートを用いて神経炎症についての組織学マーカーを調べ、最後に施された投与の６週後に屠殺した。
【０２３０】
図４２Ａは、投薬後、６、９及び１２週での生理食塩水対照と比べた、海馬における細胞生存の指標であるＢｒｄＵの発現の変化のパーセントを示す。マウスは連続７日間のパルス状投薬計画で処理した。
【０２３１】
図４２Ｂは、投薬後、６、９及び１２週での生理食塩水対照と比べた、海馬におけるニューロン新生の指標であるダブルコルチン（ＤＣＸ）の変化のパーセントを示す。マウスは連続７日間のパルス状投薬計画で処理した。
【０２３２】
（ｔ）実施例２０
４〜４．５ヵ月齢の３０匹のオスのアルファ−シヌクレイントランスジェニックマウス（ライン６１、野生型背景Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）を１５匹の２群に分け、ＰＰＦ１または溶媒のいずれかで連続７日間処理した。ＰＰＦ１処理は体重のグラム当たり５μＬにてＩＶで投与した。アルファ−シヌクレインマウスはパーキンソン病のトランスジェニックモデルとして役立ち、アルファ−シヌクレインタンパク質を過剰発現する。このトランスジェニックモデルはＮＳＧマウスとは異なり、免疫不全ではない。
【０２３３】
ＰＰＦ１または溶媒の最後の処理の翌日、マウスをすべて、たとえば、営巣、パスタ齧り、金網懸垂、ロタロッド及び梁歩行のような行動及び運動機能の試験に供した。パスタ齧り、金網懸垂、及び梁歩行は試験の終了時二度実行した。試験は無作為化した順で行った。
【０２３４】
マウスは週１回体重を測定した。図４３Ａ及び図４３ＢはＰＰＦ１処理した及び溶媒処理したアルファ−シヌクレイントランスジェニックマウス（「Ｔｇ」）の間で有意差がなかったことを示す。
【０２３５】
図４４は営巣についての結果を示す。木質チップの寝床材とプレス綿の四角片１つと（巣材）を含有するケージにマウスを個々に収容した。他の巣材（たとえば、木質ウール）は存在しなかった。巣の状態を評価する前日、暗期が開始される約２〜３時間前に巣材を導入し、実験の翌日、明期が開始した後約２〜３時間以内に営巣行動を評価した。綿四角片の導入と巣の状態の評価との間の時間の長さは実験すべてで同じだった。５点スケール（Ｄｅａｃｏｎ，ＲＭ２００６，Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｎｅｓｔ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．１：１１１７−１９．）に従って巣材の操作及び営巣の構造を評価した。図４４に示すように、溶媒処理したマウスと比べてＰＰＦ１処理したマウスでは、営巣行動で上昇傾向があった。
【０２３６】
図４５Ａ及び図４５Ｂは、最後の処理の３週後、溶媒処理群と比べてＰＰＦ１処理群にてパスタ齧りに有意な増加があったことを示し、運動の改善を示している（図４５Ｂ）。試験は小型齧歯類における運動障害を研究するために開発された。試験の少なくとも２時間前にマウスを実験室に入れた。ケージのフタ、給水ビン、餌ペレットを取り除き、乾燥スパゲティの小片（およそ５ｍｍ）をケージに入れた。スパゲティ片の上にマイクを置いた。マウスが食べ始めるとすぐに記録を開始した。齧りエピソード当たりの噛みつきの数及び噛みつきの頻度を評価し、Ａｖｉｓｏｆｔ  ＳＡＳＬａｂ  Ｐｒｏソフトウェアを用いて齧りパターンを解析した。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５）。
【０２３７】
図４６は、運動力の神経筋異常を評価する金網懸垂試験の結果を示す。最後の処理の３週後、溶媒処理群と比べてＰＰＦ１処理群にて落下までの時間で有意な増加があった。試験を行うために、金網のケージフタを用い、外周の周りにダクトテープを配置し、マウスが出っ張りから立ち去ることを防いだ。マウスをケージフタの上に置いた。フタを３回軽く振り、強制的にマウスに金網を掴ませ、次いでフタを上下逆さまにした。フタは、マウスがジャンプして降りることを防ぐために十分高く、落下して損傷を引き起こすほど高くない柔らかい下敷きの上でおよそ５０〜６０ｃｍの高さに保持した。落下するまでの待ち時間を定量し、３００秒カットオフ時間を使用した。普通、野生型マウスは数分間逆さまにぶら下がることができる。
【０２３８】
図４７Ａ、４７Ｂ及び４７Ｃは梁歩行試験の結果を示す。図４７Ａは困難さが増す５つの異なる試行で使用された様々な梁の形状及びサイズ（四角または円筒状の棹）を示す。図４７Ｂは最後の処理の７２時間後の５つの試行の結果を示す。図４７Ｃは最後の処理の３週後の５つの試行の結果を示す。ＰＰＦ１で処理したマウスは、試験１の試行５（処置の７２時間後）及び試験２の試行４（処理の３週後）での梁を縦走することで有意に高い成功を示した。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（二項検定によって**ｐ＜０．０１）。
【０２３９】
図４８Ａ〜図４８Ｆは、線条体及び海馬の染色の組織学的結果を示す。図４８Ａは線条体のＣＤ６８の染色を示す。図４８Ｂは海馬のＣＤ６８の染色を示す。図４８Ｃは線条体のＩｂａ−１の染色を示す。図４８Ｄは海馬のＩｂａ−１の染色を示す。
【０２４０】
図４８Ｅは線条体のＮｅｕＮ染色を示す。図４８Ｆは海馬のＮｅｕＮ染色を示す。これらの図は、ＰＰＦ１で処理したマウスが線条体及び海馬の双方でＩｂａ−１及びＣＤ６８によるミクログリオーシス（神経炎症）の低下を、及び線条体及び海馬におけるＮｅｕＮによるニューロン生存の増加を実証したことを示す。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である（独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１、 ***ｐ＜０．００１）。
【０２４１】
（ｕ）実施例２１
ＰＰＦ１、ＨＡＳ１または生理食塩水対照を１２ヵ月齢のマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。ＨＡＳ１は冷アルコール分画法によって調製し、ドナーからのプールしたヒト血漿に由来する、５％溶液（ｗ／ｖ、５０ｇ／Ｌ）にて９５％余りがヒトアルブミン（総タンパク質に対して）である市販のＨＡＳである。言及された場合を除いて、ＨＡＳ１は本明細書の実施例では５％を用いて生体内で投与された。マウスには、連続７日間毎日、用量当たり１５０μＬでのＰＰＦ１、ＨＡＳ１または無菌生理食塩水をＩＶ投与で注射し、最後の投与の４週後に行動の面で解析した。
【０２４２】
図４９は、ＰＰＦ１、ＨＡＳ１及び溶媒で処理したマウスについて脱出穴に入るまでのマウスにとってＢａｒｎｅｓ迷路脱出にかかった時間を示す。ＰＰＦ１処理したマウスは、溶媒処理したマウスよりも有意に早く脱出穴を見つけた。このデータは、ＰＰＦ１が老齢ＮＳＧ動物における認知を効果的に向上させる一方でＨＡＳ１は海馬依存性の記憶に効果を有さないことを示している。示したデータはすべて平均値±ｓ.ｅ.ｍ.である。（独立ｔ検定によって *ｐ＜０．０５）。
【０２４３】
（ｖ）実施例２２
ＰＰＦを用いた臨床規範
（１）軽度から中程度のＡＤ
軽度から中程度のＡＤの６０歳以上の男女を、６ヵ月の総期間での試験の１週目と１３週目とに５日間毎日１回、１００ｍＬまたは２５０ｍＬのＰＰＦ１（「パルス状投薬」）を受け入れるように無作為に割り振る。２回の５日間投薬の期間の間、対象は入院観察ユニットに居住し、安全性評価を円滑にし、対象はすべてスクリーニング来診、ベースライン来診、治療来診、経過観察来診、及び試験終了の来診／早期終了の来診を受ける。安全性及び忍容性の評価は来診ごとに発生する。神経認知評価及び運動評価はベースライン及び投薬に続く定期的な中間来診で行う。
【０２４４】
主な評価項目は、各投薬計画の安全性、忍容性、及び実行可能性である。安全性は治療・緊急有害事象の発生によって測定される。忍容性は、少なくとも５回の点滴を受けた８週後に完了する対象の数及び少なくとも１０回の点滴を受けた２４週後に完了する対象の数によって測定される。試験の実行可能性は５回及び１０回の点滴を完了する対象の数によって測定される。副次的評価項目は、アルツハイマー病評価スケール・認知サブスケールを含む種々の確立された認知評価基準を用いて認知に対する可能性がある効果を評価する。予備的な評価項目には、血液系生体マーカーの組成及び分布における変化と同様に磁気共鳴画像における変化の評価が挙げられる。
【０２４５】
（２）軽度から中程度のＡＤ
軽度から中程度のＡＤであると診断された対象の２群を二重盲検法での積極的な治療に対して無作為化する。対象はすべて、合計６ヵ月間の試験期間で１週目と１３週目とにて連続５日間無作為化投与での１日当たり１回の点滴を受ける。対象は、２つの投与レベルである１００ｍＬ及び２５０ｍＬのＰＰＦ１の１つに対して無作為化される。投薬群を性別によっても階層化する。投与時間は２〜２．５時間であり、投与全体が施されるように投与専用の指針に従って流速を設定する。
【０２４６】
対象は最適なＣＳＦ生体マーカー研究に参加する。そのような対象は、最初の投薬に先立って１回目の、及び最終投薬に続く２回目のＣＳＦ採取のための２回の腰椎穿刺を受ける。神経認知評価及び運動評価はベースライン及び投薬に続いて実施される定期的な中間評価にて行われる。
【０２４７】
各投薬計画の安全性、忍容性及び実行可能性が判定される。認知スコアが決定され、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、１１項目のアルツハイマー病評価スケール・認知サブスケール（ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ／１１）、溝付きペグボード検査、カテゴリー流暢性検査（ＣＦＴ）、臨床認知症評定スケール・箱の合計（ＣＤＲ−ＳＯＢ）、アルツハイマー病共同研究・日常生活動作（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）、アルツハイマー病共同研究・変化の臨床的な全体印象（ＡＤＣＳ−ＣＧＩＣ）、神経精神病学的目録アンケート（ＮＰＩ−Ｑ）、及びＳａｖｏｎｉｘの神経認知評価及び数唱を含む試験について要約される。
【０２４８】
（３）パーキンソン病
パーキンソン病及び認知障害の対象を、２つの群である積極的治療とプラセボとの２つの期間に無作為化する。対象は、試験の第１週の間に連続５日間（「パルス状投薬」）積極的治療またはプラセボ治療の１日１回の点滴を受ける。１３週目の間に両群は連続５日間積極的治療を受け、試験期間はおよそ７ヵ月である。投与時間は２〜２．５時間であり、投与全体が施されるように投与専用の指針に従って流速を設定する。
【０２４９】
各投薬計画の安全性、忍容性及び実行可能性が判定される。認知機能及び運動機能は、ＭｏＣＡ、ＣＤＲ−ＣＣＢにおける注意、作業、記憶及びエピソード記憶の継続及び能力、ＭＤＳ−ＵＰＤＲＳ３、ＭＤＳ−ＵＰＤＲＳ２、ＳＥ−ＡＤＬ、及びＣＩＳＩ−ＰＤを含む試験にわたって要約される。
【０２５０】
（ｗ）実施例２３−パルス投薬によるシナプスの数及びシナプスの結合性の増加
組織の採取及び組織検査が以下の通り行われた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにアベルティン（２５０ｍｇ／ｋｇＩＰ）で深麻酔をかけた。ＰＰＦ１または対照の投与を受けたマウスに投与終了後１０日間麻酔をかけた。脳を生理食塩水による潅流後に採取し、正中のスライスで分割された片方の半分を新たに調整された４％のＰＦＡに固定した。２４〜４８時間後にＰＦＡを３０％スクロースに交換した。二度目の３０％スクロースの交換を２４時間後に行った。残りの半分を海馬及び皮質に切断し、次いでドライアイス上で急速凍結した。固定された脳の組織を切断し、シナプスのマーカーであるＳＹＮＡＰＳＩＮ１及びＰＳＤ−９５について分析し、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ８００  ｗｉｔｈ  Ａｉｒｙｓｃａｎを使って撮像した。Ｚスタックをシナプス前及びシナプス後の斑点の数及びサイズを定量するＩｍａｇｅＪのシナプスカウントマクロを使って解析した。シナプス総数を共存化または並列されたシナプス前及びシナプス後の斑点数を数えることによって定量した。凍結された脳組織をシナプスのマーカーについてｑＲＴ-ＰＣＲによって解析した。
【０２５１】
老齢マウスは、若齢マウスと比べて大幅なシナプスの欠如を呈する（Ｍｏｒｉｓｓｏｎ  ＪＨ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ Ａｇｅｉｎｇ  Ｃｏｒｔｉｃａｌ  Ｓｙｎａｐｓｅ：Ｈａｌｌｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｄｅｃｌｉｎｅ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．７Ｍａｒ２０１２；ａｎｄ  Ｓｈｉ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｃ３−Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｉｃｅ  Ｆａｉｌ  ｔｏ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  Ｄｅｃｌｉｎｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２３  Ｓｅｐｔ  ２０１２参照のこと）。図５０及び図５１は、シナプスがない脳の領域（脳梁（ＣＣ））でなく、相当量のシナプス（海馬（ＨＰ）、線条体（ＳＴ）、及び黒質（ＳＮ））を含む脳領域において、２４ヵ月齢の老齢マウス（２４Ｍ）には３ヵ月齢の若齢マウス（３Ｍ）に比べてシナプス後マーカーＰＳＤ−９５の減少がみられることを示す。
【０２５２】
図５２Ａ及び図５２Ｂは、ＰＰＦ１をパルス投与したマウスには、ＣＡ１海馬における積分光学濃度（ＩＯＤ）を計測することによって定量した極めて高レベルのシナプス後マーカーＰＳＤ−９５（図５２Ａ）及び高レベルの（統計学的トレンドはｐ＝０．０７）シナプス前マーカーＳＹＮＡＰＳＩＮ１（図５２Ｂ）がみられることを示す。対応がないＴ検定 *ｐ＜０．０５である。図５３は、図５２で定量したＣＡ１海馬切片の組織学的な図示である。
【０２５３】
図５４Ａ及び図５４Ｂは、高解像度共焦点顕微鏡像（図５４Ａ）及び拡大挿入図（図５４Ｂ）を示し、シナプスが、前（ＳＹＮＡＰＳＩＮ１、赤）及び後（ＰＳＤ−９５、白）シナプスマーカーを並列した状態で黄色の矢印で同定されている。画像は図５２Ａ及び図５２Ｂで定量した同一の組織から得た。
【０２５４】
図５５Ａ〜図５５Ｄは、ＰＰＦ１をパルス投与したマウスでは、シナプス前の斑点数が対照処理したマウスより明らかに多く、一方シナプス後の斑点数（ＰＳＤ−９５）は変化がなかったことを示す。図５５Ａは、前（ＳＹＮＡＰＳＩＮ１、赤）及び後（ＰＳＤ−９５、白）シナプスマーカーが並んだ状態の生理食塩水及びＰＰＦ１で処理したマウスの一組の代表的な高解像度顕微鏡像を示す。図５５Ｂは、並んだ前及び後シナプスの定量化を示す一方、図５５Ｃは、ＳＹＮＡＰＳＩＮ１の斑点数の定量化を示す。シナプス後マーカの斑点数は双方の処理群の間で変わらない（図５５Ｄ）。対応がないＴ検定で *ｐ＜０．０５である。これらの結果によって、パルス状に投与されたＰＰＦ１は、シナプスの数及びニューロン間のシナプスの結合性を増加させることが分かり、認知の改善と結び付けられる。
【０２５５】
（ｘ）実施例２４
Ｅ１６マウスの脳から切断した皮質または海馬を分離し、ＰＤＬでコーティングされた９６ウェルのガラスボトムプレート上で１ウェルあたり２０Ｋ細胞の濃度で別々に培養した。ニューロンの培養物を処理条件の存在下で１４日間維持した。処理条件は、１０％（ｖ／ｖ）の組換えヒトアルブミン（“ｒｈアルブミン”，Ａｌｂｕｍｅｄｉｘ，Ｌｔｄ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）、ＰＰＦ１またはＨＡＳ１を含んだＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地にＢ２７補完剤及びＢＤＮＦを加えることと、２週に一度の培地の交換からなる。細胞を１４日間の培養後固定し、以下のマーカーによる免疫細胞化学を行った。ヘキストを細胞核のすべてを染色するするために使用し、ニューロンを同定するために抗Ｍａｐ２抗体を、星状細胞を同定するために抗Ｇｆａｐ抗体を、前駆細胞を同定するために抗Ｎｅｓｔｉｎ抗体を使用した。画像をＩＮＣｅｌｌ  ２０００  ａｎａｌｙｚｅｒ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して得た。
【０２５６】
図５６Ａ及び図５６Ｂは、組換えヒトアルブミン（ｒｈアルブミン）、ＰＰＦ１、またはＨＡＳ１の存在下で１４日間培養した初代マウスの皮質（図５６Ａ）及び海馬（図５６Ｂ）のニューロンを示し、その細胞組成及び形態をＭａｐ２（ニューロン）、Ｇｆａｐ（星状細胞）及びＮｅｓｔｉｎ（前駆細胞）についての免疫染色によって評価した。
【０２５７】
ニューロン新生の発現初期および発達中、神経前駆細胞または放射状グリア細胞の増殖は、神経細胞系に関与し、神経細胞系及び有糸分裂後のニューロンを産生するか、成熟して星状細胞になる（Ｂｅｒｇ  ＡＤ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｄｉａｌ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｄｅｎａｔｅ  ｇｙｒｕｓ：ｗｈａｔ  ａｒｅ  ｔｈｅｙ  ａｎｄ  ｗｈｅｒｅ  ｄｏ  ｔｈｅｙ  ｃｏｍｅ  ｆｒｏｍ？，Ｆ１０００Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１８）。これらの放射状グリア細胞は、マーカータンパク質Ｎｅｓｔｉｎ及びＧｆａｐ陽性であり、Ｇｆａｐのみを発現するより成熟した星状細胞に分化する前にさらに分裂及び伸長し、より複雑な形態を表す。星状細胞は、脳全体の健康を維持する重要な役割を果たしており、細胞内及び細胞外のイオン及び代謝物の緩衝作用及び輸送、代謝物の交換、脈管構造への結合、グルタミン酸の調節、ＧＡＢＡ及び他の神経伝達物質の取り込みのような機能の仲介、または抗酸化機能の仲介を行う（Ｋｉｍｅｌｂｅｒｇ  ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ，Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７（４）：３３８−５３，２０１０）。しかし、過去２０年で星状細胞は脳内の細胞を単に補助する以上のより積極的な役割を果たすことが分かった。星状細胞は、シナプスの形成、成熟及び可塑性を促進する可溶性因子を分泌すると言われてきたので、シナプス形成に積極的に関与しており、神経ネットワークの統合性を維持する（Ｂａｌｄｗｉｎ  ＫＴ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｙｎａｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，４５：１１３−２０  ２０１７；ａｎｄ  Ｃｌａｒｋｅ  ＬＥ ｅｔ  ａｌ．，Ｅｍｅｒｇｅｉｎｇ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  ｉｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｃｉｒｃｕｉｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｒｕｏｓｃｉ．１４：３１１−２１ ２０１３．）
【０２５８】
図５６Ａ及び図５６Ｂは、１４日間のＰＰＦ１処理は、非処理またはｒｈアルブミンで処理した培養物と比べたときに皮質の培養物においてＮｅｓｔｉｎ及びＧＦＡＰ陽性細胞の増加がみられることを示す。増加傾向はＨＡＳ１に関しても観察され得る。同様に、図５７Ａ及び５７Ｂは、ＰＰＦ１処理は、非処理またはｒｈアルブミンで処理した条件と比べたときに海馬の培養物においてＮｅｓｔｉｎ及びＧＦＡＰ発現細胞の増加が見られることを示す。また、ＧＦＡＰ単発現細胞だけでなくＮｅｓｔｉｎ及びＧＦＡＰ共陽性細胞は、対照で処理された細胞と比べたときにより複雑な形態を示し、これらのグリア細胞は対照条件と比べてＰＰＦ1で処理された条件においてより成熟していることを示唆する。同様の傾向はＨＡＳ１処理でも観察される。
【０２５９】
図５７Ａはウエスタンブロット解析によってＰＰＦ１またはＨＡＳ１で１４日間処理された皮質神経細胞培養物においてＧｆａｐ蛋白発現の増加が見られたことを示す。βアクチンがローディング対照として利用された。同様に、皮質のニューロン培養物における全細胞に対するＳｏｘ２陽性細胞の割合を計数することによって、１４日間ＰＰＦ１処理したときのＳｏｘ２陽性細胞集団に明白な増加が見られることが判明した（図５７Ｂ）。同様の傾向はＨＡＳ１で処理したものにも観察される。Ｓｏｘ２は、成熟星状細胞だけでなくグリア前駆細胞を同定するために使用される核神経細胞マーカーである。
【０２６０】
ＰＰＦ１処理はグリア前駆細胞及び成熟ＧＦＡＰ陽性星状細胞の集団を増加させるようだという観察とＰＰＦ１で処理したニューロンの培養物はニューロン活動の増大を示すという観察との組み合わせは、ＰＰＦ１処理は健康な星状細胞プールの産生を増強する傾向があり、次いで生体外でのニューロンの結合性を促進させることを示唆する。
【０２６１】
（ｙ）実施例２５
ＰＰＦ１または生理食塩水対照を１０．５ヵ月齢の免疫不全マウスに投与した（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）。マウスは、１５０μＬのＰＰＦ１（ｎ＝１０）または生理食塩水（ｎ＝１５）のＩＶ注射を連続７日間受け、マウスが１２ヵ月齢になった投与の６週間後に２択水泳試験での認知行動の試験を実施した。２択水泳試験は、脱出プラットフォームまでの待ち時間を定量することによる海馬依存性の記憶と、迷路の開始分枝を脱出するときの最初の方向選択の正誤を記録することによる皮質依存性の実行記憶とを計測する。検定は、Ｔ字の両分枝の一方端に脱出プラットフォームを設けて不透明な水に浸漬させたＴ字迷路を構成した。１日目、マウス群を可視のプラットフォームで訓練し、Ｔ字の分枝の底部に徐々に配置し、プラットフォームへと水泳させる実験を４度行った。２日目、脱出プラットフォームを水面の真下に沈めた状態でそのマウス群をＴ字の分枝の底部に再度配置した。検定の結果は底部の分枝を脱出するときの正誤の選択及び脱出プラットフォームまでの待ち時間として記録された。図５８Ａは、ＰＰＦ１で処理したマウスは２日目に脱出時間が短くなる強い傾向がみられ、これは増強された海馬依存性の認知を示す。図５８Ｂは、ＰＰＦ１で処理したマウスは生理食塩水で処理したマウスと比べてプラットフォームへの正しい選択に大いに成功し、これは増強された皮質依存性の記憶を示す。このデータはカイ２乗検定により０．０４１のＰ値に関して重要である。データ全体は、ＰＰＦ１処理は海馬及び皮質依存性の記憶を高めることを示し、老齢マウスの脳の１以上の領域に有益な効果があることを示唆する。
【０２６２】
（ｚ）実施例２６
ＰＰＦ１、若齢血漿（ＹＰ）、生理食塩水対照または老齢血漿（ＯＰ）を１０．５ヵ月齢の免疫不全マウスに投与した（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）。マウスはＢｒｄＵＩＰを１５０ｍｇ／ｋｇ日毎に５日間受けた後、１５０μＬの生理食塩水（ｎ＝１３）、若齢血漿（ＹＰ，ｎ＝１３）、ＰＰＦ１（ｎ＝１５）または老齢血漿（ＯＰ，１４）のＩＶ注射を連続７日間受け、マウスが１２ヵ月齢になったとき屠殺した。ＢｒｄＵ注射はすべての増殖している細胞を標識し、歯状回において主に神経幹細胞及び神経前駆細胞を標識する。処理の投与６週間後及びＢｒｄＵ注射の７週後、ＢｒｄＵ陽性細胞の数を計測し、その計測値を使って細胞の生存を評価し得る。また、そのとき標識された神経幹細胞及び神経前駆細胞はＮｅｕＮ陽性ニューロンまたはＧＦＡＰ陽性星状細胞に分化し得る。ＢｒｄＵ、ＮｅｕＮ及びＧＦＡＰ共染色することによって、処理済みの動物の脳により多数の新生ニューロンが有るかどうか、処理によって細胞運命に変化があるか否かの判定を行い得る。歯状回の新生ニューロンは海馬のネットワークに一体化され、これを増強させる。図５９は、１２ヵ月齢のＮＧＳマウスの歯状回におけるＢｒｄＵ、ＮｅｕＮ及びＧＦＡＰ染色の代表画像を示す。図６０Ａは、生理食塩水対照、若齢血漿（ＹＰ）、ＰＰＦ１、または老齢血漿（ＯＰ）で処理したマウスにおいて、定量したＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ共標識細胞及びＢｒｄＵ／ＧＦＡＰの共標識細胞の総数を示す。生理食塩水またはＯＰで処理したマウスよりもＰＰＦ１で処理したマウスにより明らかに多数のＢｒｄＵ／ＮｅｕＮダブル陽性細胞が見られる。ＹＰで処理したマウスとＰＰＦ１で処理したマウスとを比べたときにもＢｒｄＵ／ＮｅｕＮダブル陽性細胞は増加する傾向があり、これによって、ＹＰ、生理食塩水またはＯＰでの処理に比べてＰＰＦ１処理後により多くの新生ニューロンがみられることを示唆する。ＢｒｄＵ／ＧＦＡＰダブル陽性細胞の数には変化がなかった。図６０Ｂは図６０Ａと同じデータを示すが、ＢｒｄＵ標識した細胞の総数に対するＢｒｄＵ／ＮｅｕＮダブル陽性細胞及びＢｒｄＵ／ＧＦＡＰダブル陽性細胞のパーセントとして定量する。定量することによって処理が神経幹細胞又は神経前駆細胞の運命を変えるか否かについて計測できる。ここで、ＹＰ及びＰＰＦ１で処理したものに関して、ＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ共陽性細胞のパーセントの増加傾向が観察され、その傾向はＰＰＦ１で処理した動物においてわずかに強い。ＯＰ処理後のものにもニューロンの形成を犠牲にして星状細胞の増加傾向がみられ、これによって、ＯＰはＹＰまたはＰＰＦ１と逆の効果を有することを示唆する。これら双方のデータによって、ＰＰＦ１はＹＰよりも新生ニューロンの形成をより強く大きく増加させ、幹細胞および前駆細胞の運命を神経細胞系の方にわずかに変化させる。これらの新生ニューロンは海馬のネットワークに一体化されかつ記憶の機能を高める得る。
【０２６３】
（ａａ）実施例２７
ＰＰＦ１、若齢血漿（ＹＰ）または生理食塩水対照を１０．５ヵ月齢の免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスは、１５０μＬの生理食塩水（ｎ＝１３）、若齢血漿（ＹＰ、 ｎ＝１４）またはＰＰＦ１（ｎ＝１３）のＩＶ注射を連続７日間受け、投与６週間後のマウスが１２ヵ月齢になったときにＢａｒｎｅｓ迷路における認知行動の検定を実施した。Ｂａｒｎｅｓ迷路は、マウスが迷路の辺りに配置された視覚的な手がかりを使って、逃げ穴の方に移動するために要する時間を測定することによって海馬依存性の記憶を計測する。要するに、この具体的な検定において、マウスは連続３日間逃げ穴を見つけるための試行を１日当たり５度受け、その逃げ穴は３日間同じ場所のままにする。図６１Ａは、ＰＰＦ１で処理したマウスは生理食塩水またはＹＰで処理したマウスよりも明らかにに速く逃げ穴を見つけることを示し、認知機能の改善を示す。図６１Ｂは、Ｂａｒｎｅｓ迷路の結果に関する追加的な手段として、１４回目及び１５回目の試行についての平均脱出時間を示し、ここで、ＰＰＦ１で処理した動物はＹＰまたは生理食塩水対照で処理したマウスよりも記憶が改善する強い傾向があることも示している。
【０２６４】
（ｂｂ）実施例２８
ＰＰＦ１または生理食塩水対照を３ヵ月齢、６ヵ月齢及び１０．５ヵ月齢の免疫不全マウスに投与した（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）。マウスは、１５０μＬの生理食塩水対照またはＰＰＦ１のＩＶ注射を連続７日間受け、ダブルコルチン免疫組織化学によるニューロン新生の分析のために６週間後に夫々が４．５ヵ月齢、７．５ヵ月齢及び１２ヵ月齢で屠殺した。ダブルコルチンは新生ニューロンを標識し、歯状回における新生ニューロンの数を定量することを可能にする。図６２Ａは、ダブルコルチン（ＤＣＸ）陽性新生ニューロンの数に年齢依存性の減少が見られることと、ＰＰＦ１処理が７．５ヵ月齢及び１２ヵ月齢の動物において明らかにＤＣＸ陽性細胞の数を増加させることとを示す（４．５ヵ月齢、生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ１ｎ＝８；７．５ヵ月齢、生理食塩水ｎ＝８、ＰＰＦ１ｎ＝６；１２ヵ月齢、生理食塩水ｎ＝１５、ＰＰＦ１ｎ＝１４）。また、４．５ヵ月齢のマウスにＤＣＸ陽性細胞の数の増加傾向が見られた。図６２Ｂは、同じデータを異なる態様でとらえ、投与時のニューロン新生のレベルと屠殺時のニューロン新生のレベルとを比較する。このグラフによって、ＰＰＦ１処理が７．５ヵ月齢及び１２ヵ月齢のマウスの年齢依存性のニューロン新生の減少から救出し、夫々の投与時の６ヵ月齢及び１０．５ヵ月齢のマウスと同じレベルのＤＣＸ陽性細胞の数に回復または維持することが分かる。
【０２６５】
（ｃｃ）実施例２９
ＰＰＦ１または生理食塩水対照を６ヵ月齢の免疫不全マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ  １  Ｗｊ１／ＳｚＪ，「ＮＳＧ」系統）に投与した。マウスは、１５０μＬＰＰＦ１（ｎ＝１０）または生理食塩水（ｎ＝１５）のＩＶ注射を連続７日間受け、最後の投与の２４時間後に分析のために屠殺した。活性化したミクログリアを標識するＣＤ６８免疫組織化学を使って、海馬の炎症性変化を定量した。図６３は、生理食塩水（ｎ＝１０）及びＰＰＦ１（ｎ＝１０）で処理したマウスの海馬におけるＣＤ６８陽性領域の定量化を示す。ＣＤ６８レベルに明らかな低下が見られ、このことは、これらのマウスの脳における炎症の低下を示唆する。
【０２６６】
（ｄｄ）実施例３０
ＰＰＦ１または生理食塩水対照を２４ヵ月齢の野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６，“ｗｔ”）に投与した。マウスは、１５０μＬのＰＰＦ１（ｎ＝１０）または生理食塩水（ｎ＝１０）のＩＶ注射を連続７日間受け、最後に投与してから１０日後に分析のために屠殺した。ミクログリアのマーカーであるＣＤ６８及びＩｂａ−１の組織学的な分析を、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ｓｌｉｄｅｓｃａｎｎｅｒによって取り込んだ免疫蛍光画像を使って行った。図６４Ａ及び図６４Ｂは、生理食塩水またはＰＰＦ１で処理したマウスのＣＤ６８（図６４Ａ）及びＩｂａ−１（図６４Ｂ）についての代表画像を示す。両マーカーは、ＰＰＦ１で処理したマウスの脳において減少し、年齢依存性のミクログリアの活性の減少とそれによる炎症の低下とを示唆する。
【０２６７】
（ｅｅ）実施例３１
６ヵ月齢（図６５Ａ）または３ヵ月齢（図６５Ｂ）の何れか一方で開始する２度の強化パルス投薬計画をＮＳＧマウスに施す。当初６ヵ月齢で静脈を通して処理されたマウスのコホートは、２度の連続７日間の強化投薬を８週間隔で受けた。当初３ヵ月齢で静脈を通して処理されたマウスのコホートは、３度の連続７日間の強化投薬を８週、８週、及び７週間隔で受けた。両方の群に関して、行動試験を最後のパルス投薬計画から６週後、マウスのすべてが１２ヵ月齢になったときに行った。
【０２６８】
図６６は、溶媒、運動負荷なし；ＰＰＦ１を７日間パルス投与；ＰＰＦ１を７日間パルス投与に続く８週間隔での２回の強化投薬計画；及び残りの研究のための溶媒プラス運動負荷の条件にて３ヵ月齢で処理した１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの海馬の５つの部分から数えられた海馬におけるＤＣＸ陽性細胞の総数（ニューロン新生を表す）を示す。データのすべては平均値±ｓ．ｅ．ｍであって、****Ｐ＜０．０００１、 ***Ｐ＜０００１、ダネット事後検定によるＡＮＯＶＡである。
【０２６９】
これは、１回のＰＰＦ１のパルス投薬（強化投薬計画なし）および溶媒処理の両方に比べて明らかにニューロン新生の増強がみられる結果となった。この観察は、神経前駆細胞（ＮＰＣ）の未熟ニューロンへの形成が２ヵ月ごとの反復強化パルス投薬に関わらず依然生じていたので、ＰＰＦの反復投与はＮＰＣプールを枯渇させる結果とならない。
【０２７０】
同様の傾向が３ヵ月齢で最初に処理されたマウスにも観察された。図６７は、溶媒、運動負荷なし；ＰＰＦ１を７日間パルス投与；ＰＰＦ１を７日間パルス投与に夫々続く８週、８週、７週間隔での３回の強化投薬計画；及び残りの研究のための溶媒プラス運動負荷の条件下で３ヵ月齢で処理された１２ヵ月齢のＮＳＧマウスの海馬の５つの部分から数えられた海馬におけるＤＣＸ陽性細胞の総数（ニューロン新生を示す）を示す。
【０２７１】
図６８は当初６ヵ月齢のコホート（図６５Ａ及び図６６参照）のマウスからの１２ヵ月齢のＮＳＧマウスのＹ迷路での行動遂行を示す。ＰＰＦ１及びＰＰＦ１プラス強化剤で処理されたマウスについての総進入数に対するＹ迷路の新しい分枝への進入の割合は、対照と比べて空間学習記憶を明らかに増加させる傾向を強める。
【０２７２】
（ｆｆ）実施例３２
初代マウスの皮質神経細胞（図６９Ａ）及び海馬神経細胞（図６９Ｂ）は、対照治療、ｒｈアルブミン、ＰＰＦ１（２つの異なるロット）及びＨＡＳ1の存在下で維持された。軸索突起の長さは９６時間の培養後に評価された。両方のタイプの神経細胞をＰＰＦ１またはＨＡＳ１で処理することによって、対照処理と比べて神経突起伸長が明らかに促進する結果となる。ＰＰＦ１またはＨＡＳ１での処理はｒｈアルブミンでの処理と比べても神経突起伸長の促進を増大する結果となる。神経突起伸長は、新生ニューロンが神経ネットワークに接続および一体化する前に生じる関連的な生理的過程である。Ｎ＝１１〜１６独立した実験±ＳＥＭであって、１元配置ＡＮＯＶＡ *ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１である。
【０２７３】
初代マウスの皮質神経細胞を非処理、または対照、ｒｈアルブミン、ＰＰＦ１（２つの異なるロット）及びＨＡＳ１処理の存在下で１４日間維持した。図７０Ａは、対照と比べてＰＰＦ１及びＨＡＳ１で処理した細胞においてシナプスマーカー（ＳＹＮ１及びＰＳＤ−９５）のｍＲＮＡ発現に増加がみられ、ＰＰＦ１処理したものと比べてＨＡＳ１処理したものにおいてシナプス後マーカー、ＰＳＤ−９５についてのｍＲＮＡ発現の減少が観察された。図７０Ｂは、対照、非処理、及びｒｈアルブミン  処理されたニューロンと比較してＰＰＦ１及びＨＡＳ１で処理したニューロンの培養物において、シナプス前マーカー、ＳＹＮ１のタンパク質レベルの増加を示す。Ｔｕｊ１、一般的な神経細胞マーカーが正規化により使用される。
【０２７４】
（ｇｇ）実施例３３
第２相臨床試験をアルツハイマー病患者にＰＰＦ１を使って実施した。主たる選択規準:年齢６０〜９０；米国国立老化研究所／アルツハイマー病協会（ＮＩＡ-ＡＡ）の基準に従うｐｒｏｂａｂｌｅ  ＡＤ（参照によって本明細書に組み入れられるＪａｃｋ  ＣＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．，１４（４）：５３５−６２（２０１８））；ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）１２〜２４点である。主たる除外基準規準は、ＡＤ以外の如何なる変性神経疾患；＞２磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）でのラクナ梗塞；最後の３ヵ月のコリンエステラーゼ阻害薬またはメマチンの投与における変化である。対象は、夫々ベースライン来診を受け、総期間で６ヵ月の間に２度のの５日間投与期間（ＩＶ）とその各々に伴う３ヵ月の無治療期間とを有する。対象を１：１の割合で無作為化しＰＰＦ１を１００ｍＬまたは２５０ｍＬだけ受けさせ、投与の割り当ては対象、介護者、査定人及び研究者に対して知らせなかった。プラセボ対照群はなかった。主要評価項目は安全性及び忍容性である一方、副次評価項目にはアルツハイマー病評価スケール・認知サブスケール（ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ）、臨床認知症尺度（ＣＤＲ）、アルツハイマー病共同研究の日常生活動作評価尺度（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）、ＭＭＳＥ、及びサボニックスコグニティブバッテリが挙げられた。予備的な評価項目には、血液及び脳脊髄液の生物マーカー、及び構造的及び機能的ＭＲＩが挙げられた。研究は２０１８年３月〜２０１９年３月の期間アメリカ合衆国の９つの場所で行われた。
【０２７５】
８９人の対象がスクリーニングされ、５２人の対象が無作為化され、５１人の対象が少なくとも１回の投与を受け、４３人の対象が最初の５日間の投与期間を完了し、４０人の対象が双方の投与期間を完了した。少なくとも１度（ｎ＝５１）の投与を受けた全ての対象についてのベースラインの人口統計（患者背景）及び神経障害及び認知障害のレベルを図７１に要約する。
【０２７６】
図７１は、ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ、ＡＤＣＳ−ＡＤＬ及びＣＤＲ-ＳＢで計測されるように６ヵ月の総期間での試験においていかなる認知または機能の明らかな低下は見られなかったことを示す。別の試験においてプラセボを受けた同様のベースラインでの深刻さのＡＤ対象の６ヵ月間での予測される低下は、ＡＤＡＳ−Ｃｏｇに関して２〜３ポイントの悪化、ＡＤＣＳ−ＡＤＬに関して３〜４ポイントの悪化である（参照によって本明細書に組み入れられるＩｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．，６：３９ー５３（２０１０）；Ｉｔｏ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．，7：１５１−６０（２０１１）；ＤｏｏｄｙＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．７０：３１１−２１（２０１４）；Ｒｅｌｋｉｎ  ＮＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８８：１７６８ー７５（２０１７））。
【０２７７】
このアルツハイマー病患者の結果から、第２相臨床試験は、ＰＰＦ１の毎日連続５日間投与はこの集団において安全かつ忍容性がよいことを実証する。対象の疾患の進行も予想されるものより緩やかであったことも示す。
【０２７８】
米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、本出願は、その出願の開示が参照によって本明細書に組み入れられる２０１８年７月２０日に出願された米国仮特許出願番号６２／７０１，４１１、２０１８年１０月２６日に出願された米国仮特許出願番号６２／７５１，４３４及び２０１９年６月１７日に出願された米国仮特許出願番号６２／８６２，３６４の出願日に対して優先権を主張する。
【０２７９】
本出願は２０１８年４月２４日に出願された米国特許出願番号１５／９６１，６１８の一部継続出願でもあり、米国特許法第１１９条（ｅ）に従って、その出願の開示が参照によって本明細書に組み入れられる２０１７年４月２６日に出願された米国仮特許出願番号６２／４９０，５１９、２０１７年１１月１０日に出願された米国仮特許出願番号６２／５８４，５７１、２０１８年１月２９日に出願された米国仮特許出願番号６２／６２３，４６８及び２０１８年３月９日に出願された米国仮特許出願番号６２／６４１，１９４の出願日に対して優先権を主張する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４１Ｄ】
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【図４１Ｅ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４４】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４７Ｃ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
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【図４８Ｃ】
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【図４８Ｄ】
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【図４８Ｅ】
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【図４８Ｆ】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２Ａ】
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【図５２Ｂ】
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【図５３】
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【図５４Ａ】
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【図５４Ｂ】
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【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
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【図５５Ｃ】
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【図５５Ｄ】
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【図５６Ａ】
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【図５６Ｂ】
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【図５７Ａ】
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【図５７Ｂ】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５９】
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【図６０Ａ】
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【図６０Ｂ】
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【図６１Ａ】
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【図６１Ｂ】
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【図６２Ａ】
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【図６２Ｂ】
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【図６３】
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【図６４Ａ】
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【図６４Ｂ】
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【図６５Ａ】
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【図６５Ｂ】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９Ａ】
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【図６９Ｂ】
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【図７０Ａ】
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【図７０Ｂ】
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【図７１】
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【国際調査報告】
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2021531294.tif 000117
2021531294.tif 000118