(57)【要約】  本発明の脱毛治療用組成物の調製方法は、三つの治療用組成物に関し、日常の化学物質の分野に関する。治療用組成物の調製方法は、１．きくらげ多糖の膜分離、２．発酵基質の調製、３．発酵基質にアスペルギルス、ケカビ又は枯草菌の接種を含む。本発明の脱毛治療用組成物は、毛包の成長に対する有意な促進効果および脂漏性脱毛症に対する有意な改善効果を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する、きくらげ多糖の膜分離の工程１と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、十分に加熱調理して、加熱したものを３０℃〜４０℃までに冷却し、分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、室温を２８℃に保ち、麹作りが２０〜２４時間になると１回目の麹のかき混ぜが行われ、麹作りが２８時間になると２回目の麹のかき混ぜが行われ、麹作りが３４時間になると麹が製造でき、麹が製造された後、麹を洗浄し、１２時間密閉してからタンクに入れ、２８℃の恒温室に入れて３０日以上発酵させ、取り出して乾燥させて麹菌型−きくらげ多糖３００ｋＤａの保持液テンペ発酵物を得る工程２と、
を含むことを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項２】
工程２において、３０℃で３時間浸して、含水率が５０％であることを特徴とする請求項１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項３】
工程２において、調理したものを３５℃に冷却することを特徴とする請求項１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項４】
工程２において、麹作りから２２時間目になると１回目の麹のかき混ぜが行われることを特徴とする請求項１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項５】
工程２の２００ｇごとの調理済み大豆に３ｍｌのきくらげ多糖保持液およびアスペルギルス接種液を接種し、アスペルギルス胞子の濃度は１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌであることを特徴とする請求項１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項６】
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下で限外濾過して、分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得る、きくらげ多糖の膜分離工程１と、
ケカビ菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、２０℃で９６時間培養し、培養した種麹培養フラスコに滅菌生理食塩水５００ｍＬを加えてよく振り、二重ガーゼでろ過し、フィルター残渣に滅菌生理食塩水５００ｍＬを加え、１回洗浄してろ過し、２つのろ液を混合してケカビ胞子懸濁液を作成し、当該ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れる工程２と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、排水し、１２１℃で３０分間、高温オートクレーブでスチームして、冷却する工程３と、
分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、４８時間熟成処理してケカビのタイプーきくらげ多糖３００００Ｄａテンペ発酵物を得る、混合接種工程４と、
に従って行われることを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項７】
工程２で調理された大豆２００ｇごとに、合計２ｍｌのきくらげ多糖保持液およびケカビ胞子懸濁液が接種されることを特徴とする請求項６に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項８】
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、分子量カットオフ３００００Ｄａのきくらげ多糖保持液を得る、きくらげ多糖の膜分離工程１と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る工程２と、
発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種し、前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌〜きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る工程３と、
に従って行われることを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項９】
枯草菌接種液の胞子濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌであることを特徴とする請求項８に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【請求項１０】
工程１における前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃であることを特徴とする請求項１、６または８に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、様々な組成物を調製するための方法に関し、日常の化学物質の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活の加速、仕事のプレッシャーの増加、食事や生活習慣の変化により、中国の若者と中年男性の脱毛の発生率は、２０年前と比較して１０倍以上増加している。同時に、女性居住者の脱毛の発生率は年々増加している。しかし、脱毛は病院に行く必要がある病気であるという認識率はまだ非常に低いである。主な理由は、遺伝的要因、生理学的機能障害、仕事と研究の圧力、精神的ストレス、薬物反応、放射線療法、環境汚染、栄養失調などである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかし、最新の研究では、脱毛は体の腸内細菌叢の不均衡に関連していることが示されている。腸内細菌叢の障害は、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の増加を招き、次に胃腸管微生物の分泌にたよる可能性が最も高い特定の物質または酵素の欠如につながる。人間の腸内細菌叢は複雑なコミュニティである。健康な成人の腸管内の微生物の総量は約１〜１．５ｋｇである。１，０００を超える種があり、腸内微生物の数は人間の細胞の数の１０倍である。これは「見えない人体スーパーオルガン」と呼ばれる。腸内細菌叢は、消化、代謝、免疫機能に重要な役割を果たしている。腸内細菌叢の不均衡は、肥満、糖尿病、腫瘍、脱毛などのさまざまな代謝異常の重要な原因の１つである可能性がある。したがって、この特許は、本発明の組成物を経口摂取することによって、腸内細菌叢の多様性を補完し、腸内細菌叢を改善することを目的としている。
【０００４】
本発明の目的は、腸内細菌叢を改善し、それによりヒト脱毛症の技術的問題を解決し、脱毛治療用組成物の調製方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
第１の脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【０００６】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒木耳（黒きくらげ、ｂｌａｃｋ  ｆｕｎｇｕｓ）を洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、その後、超音波パワーが５００Ｗで超音波を１５分間をかけ、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｃｕｔｏｆｆ）が３００ｋＤａのきくらげ多糖（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件で限外濾過する。
【０００７】
２．完全な粒子と均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、３０℃で３時間浸し、十分に加熱調理し、調理したものを３０℃〜４０℃に冷却する。３００ｋＤａのきくらげ多糖保持（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、室温２８℃に保ち、麹のかき混ぜの１回目は２０〜２４時間、２回目は２８時間になるときに行われた。３４時間後に麹ができる。麹ができたら麹を洗い、１２時間密閉してからタンクに入れ、２８℃の恒温室に入れて３０日以上発酵させ、取り出して乾燥させて麹菌型―きくらげ多糖３００ｋＤａの保持液テンペ発酵物を得る。
【０００８】
第２の脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【０００９】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、その後、超音波パワーが５００Ｗである超音波を、１５分間かける。ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００１０】
２．ケカビ（ｍｕｃｏｒ）菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、２０℃で９６時間培養し、培養した種麹培養フラスコに５００ｍＬ滅菌生理食塩水を加えてよく振って均質化し、二重ガーゼで濾過し、５００ｍＬの滅菌生理食塩水をフィルター残留物に加え、１回洗浄して濾過し、２回の濾液を混合してケカビ胞子懸濁液を作り、ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れる。
【００１１】
３．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、排水し、１２１℃で３０分間、高温オートクレーブでスチームして、冷却する。
【００１２】
４．混合接種：分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）してケカビのタイプ−きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る。
【００１３】
第３の脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００１４】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００１５】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る。
【００１６】
３．発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種する。前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌タイプ―きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る。
【００１７】
テンペ（発酵大豆）は、主にタンパク質、遊離アミノ酸、必須脂肪酸、可溶性糖質、無機塩、ビタミンなどを含む栄養素が豊富である。さらに、テンペには大豆イソフラボン、大豆サポニン、褐色色素、テンペ線維素溶解酵素、β−グルコシダーゼ、抗生物質、その他の生理活性物質も含まれている。テンペのこれらの活性物質は、一部は生の大豆に由来し、一部は発酵プロセスに関与するさまざまな微生物や酵素による生の大豆の有機物の分解と再組織化などの複雑な生化学反応に由来する。
【００１８】
黒きくらげに含まれる多糖は、抗潰瘍、老化の遅延、血中脂質の低下、抗肝炎、抗突然変異、抗腫瘍、タンパク質および核酸代謝の促進、体の免疫の促進などの機能を持っている。真菌の多糖とテンペとの共同発酵は、膜分離によって切り詰められて分離され、毛髪固定効果は明らかである。
【発明の効果】
【００１９】
１．従来の育毛は、表皮マッサージにショウガとクロベの葉を使用して頭皮の微小循環を促進する。本発明の発酵製品の経口投与は、腸内細菌叢の構造を修復し、微生態学的バランスを回復することができる。食事によって腸内細菌叢を調節することで髪を固定する効果を達成するために、それはまだ空白の領域である。
【００２０】
２．動物実験において、本発明の組み合わせは、優れた毛髪固定効果を示し、将来、大規模な脱毛の問題を解決する新しい方法を見出した。
【００２１】
３．本発明の脱毛治療用組成物は、毛包の成長に対する有意な促進効果および脂漏性脱毛症に対する有意な改善効果を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の技術的解決策は、以下に列挙される特定の実施形態に限定されず、特定の実施形態の任意の組み合わせも含む。
【００２３】
［特定実施例１］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００２４】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００２５】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、３０℃で３時間浸して（含水率４５％〜５５％）、十分に加熱調理して、調理したものを３０℃〜４０℃までに冷却する。分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、室温を２８℃に保ち、麹を１回目は２０〜２４時間、２回目は２８時間になるとかき混ぜた。３４時間後に麹ができる。麹ができたら麹を洗い、１２時間密閉してからタンクに入れ、２８℃の恒温室に入れて３０日以上発酵させ、取り出して乾燥させて麹菌型―きくらげ多糖３００ｋＤａの保持液テンペ発酵物を得る。
【００２６】
本実施形態の工程１における前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００２７】
本実施形態の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００２８】
本実施形態の工程２の前記調理したものは調理済み大豆である。
【００２９】
本実施形態の工程２では、２００ｇごとの調理済み大豆に３ｍｌのきくらげ多糖保持液およびアスペルギルス接種液を接種し、アスペルギルス胞子の濃度は１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００３０】
本実施形態の工程２において、「密閉」とは、温度が３０±２℃の密閉インキュベーターでの処理を指す。
【００３１】
［特定実施例２］
本実施形態と実施形態１との違いは、工程２における含水率が５０％であることである。その他は実施形態１と同様である。
【００３２】
［特定実施例３］
本実施形態は、工程２で調理したものが３５℃に冷却されるという点で特定の実施例１または２とは異なる。その他は、実施形態１または２と同様である。
【００３３】
［特定実施例４］
この実施例は、工程２で麹のかき混ぜの１回目が麹作りから２２時間目に実行されるという点で、特定の実施例１〜３とは異なる。その他は、実施形態１〜３と同様である。
【００３４】
［特定実施例５］
この実施例に係る脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００３５】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００３６】
２．ケカビ菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、２０℃で９６時間培養する（三角フラスコのふすまは菌糸と灰色の胞子で覆われており、後で使用するために取り出される）。培養した種麹培養フラスコに滅菌生理食塩水５００ｍＬを加えてよく振り、二重のガーゼでろ過し、フィルター残渣に滅菌生理食塩水５００ｍＬを加え、１回洗浄してろ過し、２つのろ液を混合してケカビ胞子懸濁液を作成する。当該ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れる。
【００３７】
３．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、排水し、１２１℃で３０分間、高温オートクレーブでスチームして、冷却する。
【００３８】
４．混合接種
分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）してケカビのタイプ−きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を取得する。
【００３９】
本実施形態では、工程１のウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００４０】
本実施形態の工程１において、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００４１】
本実施形態の工程２に記載されている工程２では、調理された大豆２００ｇごとに、合計２ｍｌのきくらげ多糖保持液およびケカビ胞子懸濁液が接種される。
【００４２】
本実施形態ケカビ胞子懸濁液中の胞子の濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００４３】
［特定実施例６］
本特定の実施例に係る脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００４４】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００４５】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る。
【００４６】
３．発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種する。前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌タイプ―きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る。
【００４７】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００４８】
本実施形態の工程１において、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００４９】
本実施形態の枯草菌接種液の胞子濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００５０】
以下の実験は、本発明の効果を検証するために使用される。
【００５１】
［実施例１］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００５２】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００５３】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、大豆と水の体積比１：３で、３０℃の水に３時間浸し、排水し、高温オートクレーブで１２１℃、３０分間蒸し、冷却する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を添加し、２５℃で４８時間培養した後、テンペ予備発酵産物を得る。４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）して大豆−きくらげ多糖３００ｋＤａカットオフ発酵物を取得す。
【００５４】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００５５】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００５６】
［実施例２］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００５７】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液を選択する。
【００５８】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、大豆と水の体積比１：３で３０℃で３時間水に浸し、排水し、高温オートクレーブで１２１℃、３０分間蒸し、冷却する。きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液を添加し、２5℃で４８時間培養してテンペ予備発酵産物を得る。その後４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）が行われる。こうして、大豆−きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液発酵物を得る。
【００５９】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００６０】
この例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００６１】
［実施例３］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００６２】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００６３】
２．ケカビ菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、三角フラスコのふすまが菌糸と灰色の胞子でいっぱいになるまで２０℃で９６時間培養し、後で使用するために取り出す。培養した種麹培養フラスコに滅菌生理食塩水５００ｍＬを加えてよく振り、二重ガーゼでろ過し、フィルター残渣に滅菌生理食塩水５００ｍＬを加え、１回洗浄してろ過し、２つのろ液を混合してケカビ胞子懸濁液を作成する。当該ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れる。
【００６４】
３．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の質量比で水と混合し、３０℃で３時間浸し、排水し、１２１℃で３０分間、高温オートクレーブでスチームして、冷却する。
【００６５】
４．混合接種
分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）してケカビのタイプ−きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る。
【００６６】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００６７】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００６８】
本実施形態の工程２では、調理された大豆２００ｇごとに、合計２ｍｌのきくらげ多糖保持液およびケカビ胞子懸濁液が接種される。
【００６９】
本実施例に係るケカビ胞子懸濁液中の胞子の濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００７０】
［実施例４］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００７１】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液を選択する。
【００７２】
２．ケカビ菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、三角フラスコのふすまが菌糸と灰色の胞子でいっぱいになるまで２０℃で９６時間培養し、後で使用するために取り出す。培養した種麹培養フラスコに滅菌生理食塩水５００ｍＬを加えてよく振り、二重ガーゼでろ過し、フィルター残渣に滅菌生理食塩水５００ｍＬを加え、１回洗浄してろ過し、２つのろ液を混合してケカビ胞子懸濁液を作成する。当該ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れ、菌株として保存する。
【００７３】
３．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、大豆と水の体積比１：３で、３０℃の水に３時間浸し、排水し、間高温オートクレーブで１２１℃、３０分蒸し、冷却しておく。きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、テンペ予備発酵産物を得る。４８時間熟成処理（ｍａｔｕｒｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）してケカビのタイプ−きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液テンペ発酵物を得る。
【００７４】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００７５】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００７６】
本実施形態の工程２では、調理された大豆２００ｇごとに、合計２ｍｌのきくらげ多糖保持液およびケカビ胞子懸濁液が接種される。
【００７７】
本実施例に係るケカビ胞子懸濁液中の胞子の濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００７８】
［実施例５］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００７９】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００８０】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、含水率が４５％−５５％になるようにする。十分に加熱調理して、調理したものを３０℃〜４０℃までに冷却する。分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、室温を２８℃に保ち、麹のかき混ぜを１回目は２２時間、２回目は２８時間麹を作った。３４時間後に麹ができる。麹ができたら麹を洗い、１２時間密閉してからタンクに入れる２８℃の恒温室に入れて３０日以上発酵させ、取り出して乾燥させて麹菌型−きくらげ多糖３００ｋＤａの保持液テンペ発酵物を得る。
【００８１】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００８２】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００８３】
本実施形態の工程２では、２００ｇごとの調理済み大豆に３ｍｌのきくらげ多糖保持液およびアスペルギルス接種液を接種し、アスペルギルス胞子の濃度は１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００８４】
本実施形態の工程２における「密閉」とは、温度が３０±２℃の密閉インキュベーターでの処理を指す。
【００８５】
［実施例６］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００８６】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、その後超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液を選択する。
【００８７】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、含水率５０％になるまで大豆と水の体積比１：３で、３０℃の水に３時間浸し、十分に加熱調理して、調理したものを３５℃まで冷却する。きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、よく混ぜ、室温を２８℃に保ち、麹のかき混ぜの１回目は麹を作ってから２２時間目、２回目は２８時間目に開始される。３４時間後に麹ができる。麹が製造された後、麹を洗浄し、１２時間密閉してからタンクに入れ、２８℃の恒温室で３０日以上発酵する。麹菌型−きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液テンペ発酵物を得るためには、取り出して乾燥させる。
【００８８】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００８９】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【００９０】
本実施形態の工程２では、調理された大豆２００ｇごとに、合計３ｍｌのきくらげ多糖保持液およびアスペルギルス種菌が接種される。アスペルギルス胞子の濃度は１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００９１】
本実施形態の工程２における「密閉」とは、温度が３０±２℃の密閉インキュベーターでの処理を指す。
【００９２】
［実施例７］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【００９３】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する。
【００９４】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の質量比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る。
【００９５】
３．発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種する。前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌タイプ―きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る。
【００９６】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【００９７】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄みの黒きくらげ多糖を４ｇ／Ｌに希釈する。
【００９８】
本実施例に係る枯草菌接種液の胞子濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【００９９】
［実施例８］
脱毛治療用組成物の調製方法は、以下の工程に従って行われる。
【０１００】
１．きくらげ多糖の膜分離
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成する。黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製する。温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液を選択する。
【０１０１】
２．全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の質量比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る。
【０１０２】
３．発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種する。前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌―きくらげ多糖３００ｋＤａ透過液テンペ発酵物を得る。
【０１０３】
本実施形態では、工程１の前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃である。
【０１０４】
本実施例の工程１では、遠心分離された上澄みに蒸留水が添加され、上澄み中の黒きくらげ多糖が４ｇ／Ｌに希釈される。
【０１０５】
本実施例に係る枯草菌接種液の胞子濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌである。
【０１０６】
［実験１］脂漏性マウスの脱毛に対する本発明の経口組成物の阻害実験
１．実験材料
テストステロンプロピオン酸注射液２５ｍｇ／１ｍｌ、寧波第２ホルモン工場から購入、生産バッチ番号：１１０２５である。
サラダ油９０ｍｌ／瓶、アロワナ株式会社
成体オスのＢ６ＣＢＡＦ１／Ｊマウス、体重１８〜２２ｇ、クリーングレード、北京維通利華実験動物技術株式会社（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｗｅｉｔｏｎｇ  Ｌｉｈｕａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＣＯ．  Ｌｔｄ．）  ［ライセンス番号：ＳＣＸＫ（京）２０１７−００１１］から購入、室温２３℃、湿度５０−６０％、１日２回、毎回１時間換気マウスの自然な生活パターンによれば、Ｂ６ＣＢＡＦ１／Ｊマウスは自由に動き、自由に飲んで食べられる。
【０１０７】
２．実験方法
２．１実験グループ化
１００匹のオスのマウスから、１０匹のＢ６ＣＢＡＦ１／Jマウスが無作為に実験対照群として選択され、残りの９０匹のＢ６ＣＢＡＦ１／Jマウスが実験用マウスとして使用され、別々のケージで飼育された。すなわち、脱毛モデル群と口腔用組成物例１〜８群である。
【０１０８】
２．２動物モデルの作成と投与方法
脱毛動物モデルは注射によって作成された。注射部位は脊椎の背中と平行にマウスの背中の皮下にある。実験対照群の場合生理食塩水を注射し、他の９群にはプロピオン酸テストステロンを注射した。注射用量は５ｍｇ／ｋｇ・ｄである。注射時間は４週間である。
【０１０９】
脱毛のＢ６ＣＢＡＦ１／Jマウスモデルが確立されてから４週目に薬物治療を開始し、対照群を除いて、脱毛モデル群に各実施形態の組成物を６週間強制経口投与した。脱毛部位でのマウスの発毛状態を観察し、マウスの脱毛の重量を計算する。病理学的観察と組み合わせて、モデル群と比較して、顕微鏡下での硬毛／軟毛の比率が平均として計算される。
【０１１０】
３．データの統計分析
ＳＰＳＳ  ２０．０ソフトウェアをデータ処理に使用した。群間の差異は、一元配置分散分析によって分析され、ｐ＜０．０５を有意差とし、統計的に有意であると見なされた。
【０１１１】
４．実験結果
（１）脱毛重量の決定
表１から、実験対照群と比較して、他の実験用マウスでは脱毛の程度が異なることがわかる。実施例３、５、７の有意差（ｐ＜０．０５）を除いて、他の群では極端な有意差（ｐ＜０．０１）脱毛が見られる。モデル群と比較して、例３、５、および７群のマウスの脱毛現象は改善されている（ｐ＜０．０１）。他の実施例群では有意差はなく、脱毛には改善傾向が見えない。
【０１１２】
（２）マウスの硬毛／軟毛比の決定
表２から、実験対照群と比較して、モデル群の硬毛／軟毛の比率が大幅に減少することがわかり（ｐ＜０．０１）、モデル群と比較して、実施例３、５、７は硬毛／軟毛の比率を大幅に改善できる（ｐ＜０．０１）。比率、他の実験例における硬毛／軟毛の比率は変化しながった。
【０１１３】
（３）本発明の口腔用組成物の実施例３、５、および７は、脂漏性脱毛症に対して有意な改善効果を有し、大豆が菌株による発酵後に明らかな毛髪固定効果を発揮できることを示している。
【０１１４】
【表１】
2021516701.tif 000002
【０１１５】
【表２】
2021516701.tif 000003
【０１１６】
［実験２］発毛期マウスの毛包数に対する経口組成物の影響
１．実験材料
ロジン（Ｒｏｓｉｎ）は深セン吉田ケミカル株式会社（Ｓｈｅｎｚｈｅｎ Ｊｉｔｉａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）から購入した。パラフィンワックスはアオウェイプラスチックワックス製品（Ａｏｗｅｉ  Ｇｌｕｅ  Ｗａｘ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）から購入した。成体のメスのＣ５７ＢＬ／６マウス、体重１８〜２２g、クリーングレード、肌の色はピンク、髪の毛は中止期間（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｉｏｎ）であるマウスである。北京維通利華実験動物技術株式会社（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｗｅｉｔｏｎｇ  Ｌｉｈｕａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃo．Ｌｔｄ．）［ライセンス番号：ＳＣＸＫ（京）２０１７−０１４９］から購入され、室温２３℃、湿度５０〜６０％、１日２回、毎回１時間換気マウスの自然な生活パターンによれば、マウスは自由に動き、自由に飲んで食べられる。
【０１１７】
２．実験方法
２．１実験群化
９０匹のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスを無作為に９つの群、実験対照群、および経口組成物例１−８群に分け、別々のケージで飼育した。
【０１１８】
２．２動物モデルの作成と投与方法
ロジンとパラフィンワックスを１：１で混合した後、加熱して溶かし、マウスの背中に約２ｃｍ×３ｃｍの面積で均一に塗布する。冷却して固化した後、背中の毛を取り除く（発毛が中止期間（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｉｏｎ）でいることを確認する）。強制経口投与により蒸留水を与えられた対照群を除いて、脱毛の翌日、他の群は１日１回、強制経口投与により２ｍｌ／１００gの強制経口投与量で２０日間連続投与された。２０日目に、マウスの各群の背中の同じ位置にある皮膚組織ブロックを取り、１０％ホルマリンで固定し、切片をパラフィンワックスで包埋する。切片の厚さは約４〜５ミクロン、ＨＥ染色、高倍率視野での毛包の数（×４００）であり、平均値を取り、統計処理を実行する。
【０１１９】
３．データの統計分析
ＳＰＳＳ２０．０ソフトウェアをデータ処理に使用した。群間の差異は、一元配置分散分析によって分析され、ｐ＜０．０５を有意差とし、統計的に有意であると見なされた。
【０１２０】
４．実験結果
（１）毛包密度の影響
実験２０日目の各群の毛包数を表３に示す。実験対照群と比較して、実施例３、５、および７は実験対照群マウスの毛包の数を増やすことができ（ｐ＜０．０１）、他の群の実施例はＣ５７ＢＬ／６マウスの毛包の数に影響を与えない（ｐ＞０．０５）。当該結果は、発酵大豆は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの毛包に成長期に入り、成長期間を延長し、退化期への移行を遅らせ、毛包の成長を促進することが示唆されている。
【０１２１】
【表３】
2021516701.tif 000004
【０１２２】
（付記）
（付記１）
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、分子量カットオフが３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得るために、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒで限外濾過する、きくらげ多糖の膜分離の工程１と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、十分に加熱調理して、加熱したものを３０℃〜４０℃までに冷却し、分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とアスペルギルス種菌液を１：３の質量比で接種し、室温を２８℃に保ち、麹作りが２０〜２４時間になると１回目の麹のかき混ぜが行われ、麹作りが２８時間になると２回目の麹のかき混ぜが行われ、麹作りが３４時間になると麹が製造でき、麹が製造された後、麹を洗浄し、１２時間密閉してからタンクに入れ、２８℃の恒温室に入れて３０日以上発酵させ、取り出して乾燥させて麹菌型−きくらげ多糖３００ｋＤａの保持液テンペ発酵物を得る工程２と、
を含むことを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２３】
（付記２）
工程２において、３０℃で３時間浸して、含水率が５０％であることを特徴とする付記１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２４】
（付記３）
工程２において、調理したものを３５℃に冷却することを特徴とする付記１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２５】
（付記４）
工程２において、麹作りから２２時間目になると１回目の麹のかき混ぜが行われることを特徴とする付記１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２６】
（付記５）
工程２の２００ｇごとの調理済み大豆に３ｍｌのきくらげ多糖保持液およびアスペルギルス接種液を接種し、アスペルギルス胞子の濃度は１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌであることを特徴とする付記１に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２７】
（付記６）
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下で限外濾過して、分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液を得る、きくらげ多糖の膜分離工程１と、
ケカビ菌株を滅菌生理食塩水に加え、バクテリア液をピペットで取り、ふすま培地に接種し、２０℃で９６時間培養し、培養した種麹培養フラスコに滅菌生理食塩水５００ｍＬを加えてよく振り、二重ガーゼでろ過し、フィルター残渣に滅菌生理食塩水５００ｍＬを加え、１回洗浄してろ過し、２つのろ液を混合してケカビ胞子懸濁液を作成し、当該ケカビ胞子懸濁液を４℃の冷蔵庫に入れる工程２と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、排水し、１２１℃で３０分間、高温オートクレーブでスチームして、冷却する工程３と、
分子量カットオフ３００ｋＤａのきくらげ多糖保持液とケカビ胞子懸濁液を１：３の質量比で接種し、２５℃で４８時間培養した後、４８時間熟成処理してケカビのタイプーきくらげ多糖３００００Ｄａテンペ発酵物を得る、混合接種工程４と、
に従って行われることを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２８】
（付記７）
工程２で調理された大豆２００ｇごとに、合計２ｍｌのきくらげ多糖保持液およびケカビ胞子懸濁液が接種されることを特徴とする付記６に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１２９】
（付記８）
黒きくらげを洗浄し、不純物を取り除き、粉砕し、４０メッシュのふるいに通して、黒きくらげの乾燥粉末を生成し、黒きくらげの乾燥粉末を蒸留水に質量比１４０：１で添加し、超音波パワーが５００Ｗである超音波を１５分間かけて、ウォーターバスで３時間抽出し、抽出物を４５００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して残留物を除去し、抽出物を黒きくらげ多糖濃度４ｇ／Ｌ、ｐＨ値５．６のフィード溶液に調製し、温度４０℃、圧力０．１７ｂａｒの条件下での限外濾過では、分子量カットオフ３００００Ｄａのきくらげ多糖保持液を得る、きくらげ多糖の膜分離工程１と、
全粒で均一なサイズの大豆を選択し、計量して洗浄し、１：３の体積比で水と混合し、水に１０〜１８時間浸し、１２０℃で滅菌して、発酵基質を得る工程２と、
発酵基質中の複合溶液の濃度が２ｍｌ／Ｌになるまで、発酵基質に複合溶液を接種し、前記複合溶液は、１：３の質量比できくらげ多糖３００ｋＤａ保持液と枯草菌接種溶液と混合し、よく振って、４〜８℃で７２〜１２０時間培養し、枯草菌〜きくらげ多糖３００ｋＤａ保持液テンペ発酵物を得る工程３と、
に従って行われることを特徴とする脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１３０】
（付記９）
枯草菌接種液の胞子濃度は、１．０×１０７〜１．０×１０８胞子／ｍｌであることを特徴とする付記８に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【０１３１】
（付記１０）
工程１における前記ウォーターバス抽出の温度は、７０℃〜８５℃であることを特徴とする付記１、６または８に記載の脱毛治療用組成物の調製方法。
【国際調査報告】
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2021516701.tif 000006
2021516701.tif 000007
2021516701.tif 000008