(57)【要約】  本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に罹患している患者を処置するための、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用した、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物であって、ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、両方の有効成分が、同時に、別々に、または連続して投与されることを特徴とする、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項２】
ＡＭＬの処置に使用するためのＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物であって、前記ＢＥＴ阻害剤が、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、両方の有効成分が、同時に、別々に、または連続して投与されることを特徴とする、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項３】
ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して、
ａ）処置サイクル中の少なくとも１日、治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を投与すること、および
ｂ）前記処置サイクルの少なくとも１日、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を投与すること
を含むかまたはこれらからなる投薬スケジュールに基づいて、ＡＭＬに罹患している患者に投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＡＭＬを処置するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項４】
ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、前記ＢＥＴ阻害剤が、ジアゼピン誘導体であることを特徴とする、請求項１または３に記載のＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項５】
ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、前記ＢＥＴ阻害剤が、トリアゾロピラジン誘導体であることを特徴とする、請求項１または３に記載のＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項６】
ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、前記ＢＥＴ阻害剤が、ピリジノン誘導体であることを特徴とする、請求項１または３に記載のＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項７】
ボラセルチブが、
【表１】
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から選択される、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与される、請求項１または３に記載のＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物。
【請求項８】
治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物、および治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む医薬組成物。
【請求項９】
前記ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物が、ジアゼピン誘導体、ピリジノン誘導体またはトリアゾロピラジン誘導体から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物が、
【表２】
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から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む医薬組成物、およびＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む別の医薬組成物を含むキット。
【請求項１２】
ＡＭＬを処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に、治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与することを含む、前記方法。
【請求項１３】
ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物、およびＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む、有効成分の同時の、別々のまたは連続的な使用のための医薬組合せ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に罹患している患者を処置するための、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用した、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
急性骨髄性白血病（Ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＡＭＬ）は、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）としても公知であり、血球の骨髄系統のがんであり、骨髄に蓄積し、正常な血球の産生を妨害する、異常な白血球の急速成長を特徴とする。急性白血病であるため、ＡＭＬは急速に進行し、典型的には、未処置のままであれば数週間または数か月内に致死的となる。ＡＭＬは、成人急性白血病の最も蔓延している形態であり、特に年長成人の中で、かつ女性よりも男性においてわずかに一般的である。ＡＭＬの推定有病率は、ＵＳでは３０，０００例、かつＥＵでは４７，０００例である。
ＡＭＬの発生率は年齢と共に増加し、診断時の年齢中央値は６７歳である。２０１３年までのＡＭＬに関する世界的な発生率ＣＡＧＲは１．４％である。高齢者人口は、がん生存者中で、処置関連ＡＭＬの発生率増加と共に、現在全てのＡＭＬ症例の１０〜２０％を占め、ＡＭＬの発生率を増大させていると予想される。加えて、ＡＭＬの発生率において、いくらかの地理的な変動がある。成人では、最も高い発生率は北アメリカ、ヨーロッパ、およびオセアニアで見られ、一方、成人ＡＭＬは、アジアおよびラテンアメリカで診断される頻度は低い。
ＡＭＬは、全てのがん死亡のおよそ１．２％を占める。ＡＭＬに関する５年生存率は低く、治療の失敗および患者の再発により増進されている。６５歳未満の患者の中で５年生存率は３４．４％であり、６５歳を超える患者の中では５％のみである。
骨髄性新生物および急性白血病のＷＨＯ分類は、ＡＭＬの分類として現在標準的であり、遺伝子異常を診断アルゴリズムに組み込んでいる。この分類は、悪性細胞の出現を光学顕微鏡下で検査することにより、かつ細胞遺伝学および分子遺伝学を使用して、あらゆる根底にある染色体異常または遺伝子変化を特徴付けすることにより行われる。サブタイプは、予後、治療に対する応答および処置決定に影響する。
【０００３】
化学療法剤の有効性は、他の化合物との併用療法を使用し、かつ／または投薬スケジュールを改善することにより、改善することができる。いくつかの治療剤の併用または投薬スケジュールの改善という概念が既に提案されていたとしても、標準的治療を超える利点を示す、がん疾患の処置に対する新規なかつ効率的な治療的概念に対する必要が依然として存在する。
ボラセルチブは、細胞周期進行の主要な制御因子である、セリンスレオニンｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ）の極めて強力なかつ選択された阻害剤である。ボラセルチブは、異なる薬物動態（ＰＫ）特性を伴う第二世代のジヒドロプテリジノン誘導体である。本発明の根底にある問題は、ＡＭＬにおいて、最大限の活性および制限された毒性を伴う、ボラセルチブおよびＢＥＴ阻害剤の併用療法のための、併用処置および投薬スケジュールの改善を開発することであった。
ボラセルチブ（Ｉ）は、化合物Ｎ−［ｔｒａｎｓ−４−［４−（シクロプロピルメチル）−１−ピペラジニル］シクロヘキシル］−４−［［（７Ｒ）−７−エチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−５−メチル−８−（１−メチルエチル）−６−オキソ−２−プテリジニル］アミノ］−３−メトキシ−ベンズアミドとして公知である。
【化１】
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【０００４】
この化合物は、ＷＯ２００４／０７６４５４に開示されている。さらに、その三塩酸塩形態および水和物は、ＷＯ２００７／０９０８４４から公知である。それらは、これらの形態を医薬的使用に特に好適なものとする特性を有する。上述の特許出願は、過剰なまたは異常な細胞増殖を特徴とする疾患の処置を特に意図する医薬組成物の調製のための、本化合物またはそのモノエタンスルホン酸塩の使用をさらに開示している。
文献ＷＯ２００６／０１８１８２は、細胞増殖に関連する疾患の処置のための他の併用を開示している。
ＢＥＴ阻害剤は、ブロモドメインの、ヒストンＨ３およびＨ４上のアセチル化リシンとの結合を阻害し、したがって遺伝子転写の重要な制御因子として作用し、かつＡＭＬの処置に有用である。種々の化合物クラスに属するＢＥＴ阻害剤が公知である。例えば、ＷＯ２０１４／０７６２３７およびＷＯ２０１４／０７６１４６は、ＢＥＴ阻害剤としてのトリアゾロピラジン誘導体を記載している。ＷＯ２０１４／０６８４０２は、ＢＥＴ阻害剤としてのチエノトリアゾロジアゼピン誘導体を記載している。ＷＯ２０１３／０３３２６８は、ＢＥＴ阻害剤としてのさらなるジアゼピン誘導体を記載している。
【発明の概要】
【０００５】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏの実験において、ボラセルチブおよびＢＥＴ阻害剤の併用からもたらされるアポトーシス効果が、各化合物の単一使用からもたらされる効果より効果的であることが見い出された。
したがって、本発明の第１の態様は、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物、およびＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む、有効成分の同時の、別々のまたは連続的な使用のための医薬併用に言及する。
本発明の別の態様は、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む医薬組成物、およびＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む別の医薬組成物を含むキットに関する。
本発明の別の態様は、治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物、および治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を含む医薬組成物に関する。
【０００６】
本発明の別の態様は、ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、両方の有効成分が、同時に、別々に、または連続して投与されることを特徴とする、ＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物に関する。
本発明の別の態様は、ＢＥＴ阻害剤が、ボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与され、両方の有効成分が、同時に、別々に、または連続して投与されることを特徴とする、ＡＭＬの処置に使用するためのＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物に関する。
本発明の別の態様は、ボラセルチブが、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して、
ａ）処置サイクル中の少なくとも１日における、治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物の投与、および
ｂ）前記処置サイクルの少なくとも１日における、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物の投与、
を含むかまたはこれらからなる投薬スケジュールに基づいて、ＡＭＬに罹患している患者に投与されることを特徴とする、ＡＭＬの処置に使用するためのボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物に関する。
【０００７】
本発明の別の態様は、ＡＭＬを処置する方法であって、そのような処置を必要とする患者に、治療有効量のボラセルチブまたはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物を、治療有効量のＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物と併用して投与することを含む、方法に関する。
本明細書に開示される本発明の全ての態様の一実施形態では、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物は、ジアゼピン誘導体である。
本明細書に開示される本発明の全ての態様の別の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物は、トリアゾロピラジン誘導体である。
【０００８】
本明細書に開示される本発明の全ての態様の別の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物は、ピリジノン誘導体である。
本明細書に開示される本発明の全ての態様の別の実施形態では、ＢＥＴ阻害剤またはその薬学的に許容される塩もしくはその水和物は、表１の化合物から選択される：
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＢＥＴ阻害剤１に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図２】ＢＥＴ阻害剤２に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図３】ＢＥＴ阻害剤３に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図４】ＢＥＴ阻害剤４に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図５】ＢＥＴ阻害剤５に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図６】ＢＥＴ阻害剤６に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図７】ＢＥＴ阻害剤７に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図８】ＢＥＴ阻害剤８に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図９】ＢＥＴ阻害剤９に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図１０】ＢＥＴ阻害剤１０に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図１１】ＢＥＴ阻害剤１１に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【図１２】ＢＥＴ阻害剤１２に関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。
【００１０】
各図は、例示されたＢＥＴ阻害剤１−１２の１つに関する、経時的な、ＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１Ｂにおける細胞成長（ａ）およびアポトーシス（ｂ）の分析を示す。分析は、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ  ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）ＦＬＲ生細胞画像システムにより行う。これによって、２４時間、自動的に画像を収集し、かつ分析することにより、経時的に、細胞挙動の観察および定量化が可能となる。この生細胞、非摂動画像手法は、標準的な細胞インキュベータという制御された環境内で全て生成された動力学的データをもたらす。
ＢＥＴ阻害剤処置細胞の細胞成長（ａ）は、ＤＭＳＯ対照処置細胞と比較して低減している。ボラセルチブ処置細胞の細胞成長は、ＤＭＳＯ対照処置細胞と比較して低減している。ボラセルチブ処置に加えたＢＥＴ阻害剤の併用は、それぞれの単一処置以上に、細胞増殖を低減させる。
ＢＥＴ阻害剤処置細胞のアポトーシス（ｂ）は、ＤＭＳＯ対照処置細胞と比較して増加している。ボラセルチブ処置細胞のアポトーシスは、ＤＭＳＯ対照処置細胞と比較して増加している。ボラセルチブ処置に加えたＢＥＴ阻害剤の併用は、それぞれの単一処置以上に、アポトーシスを増加させる。
【００１１】
細胞
ＭＶ−４−１１Ｂは、ＴＰ５３（ｃ．７４２Ｃ＞Ｔ、ｐ．Ｒ２４８Ｗ、ＴＰ５３に関してヘテロ接合性）における変異を達成した、ＡＴＣＣ（ＣＲＬ−９５９１）からのＡＭＬ細胞株ＭＶ−４−１１である。ＭＶ−４−１１Ｂ細胞を、１０％のウシ胎仔血清および５０μＭのメルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ１６４０培地を使用して、Ｔ−７５フラスコ中で成長させた。培養物を、３７℃および５％のＣＯ2において加湿雰囲気でインキュベートした。
アッセイ
ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞画像アッセイのために、細胞を９６ウェルプレートに蒔き、ポリ−Ｄ−リシンコーティングして、それぞれの化合物（ＢＥＴ阻害剤１〜１２、ボラセルチブ）と共に、単独かまたは組み合わせのいずれかでインキュベートした。アポトーシス細胞の検出のために、Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ  ＣｅｌｌＰｌａｙｅｒ（商標）９６ウェルＫｉｎｅｔｉｃ  Ｃａｓｐａｓｅ−３／７  Ｒｅａｇｅｎｔを添加した。
細胞増殖を判定するために、「コンフルエンス」（ウェル中の、細胞で覆われた領域）を読み出し情報として使用し、アポトーシス（死細胞）の量を決定するために、緑色蛍光の強度を読み出し情報として使用した。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明内では、用語「ＡＭＬ」は、世界保健機関（ＷＨＯ）の２００８年改訂版、骨髄性新生物および急性白血病の分類に基づいて、全ての形態の急性骨髄性白血病および関連する新生物を包含することを理解されたい。これらは：
●反復性遺伝子異常を伴う急性骨髄性白血病
・ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）；ＲＵＮＸ１−ＲＵＮＸ１Ｔ１を伴うＡＭＬ
・ｉｎｖ（１６）（ｐ１３．１ｑ２２）またはｔ（１６；１６）（ｐ１３．１；ｑ２２）；ＣＢＦＢ−ＭＹＨ１１を伴うＡＭＬ
・ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）；ＭＬＬＴ３−ＭＬＬを伴うＡＭＬ
・ｔ（６；９）（ｐ２３；ｑ３４）；ＤＥＫ−ＮＵＰ２１４を伴うＡＭＬ
・ｉｎｖ（３）（ｑ２１ｑ２６．２）またはｔ（３；３）（ｑ２１；ｑ２６．２）；ＲＰＮ１−ＥＶＩ１を伴うＡＭＬ
・ｔ（１；２２）（ｐ１３；ｑ１３）；ＲＢＭ１５−ＭＫＬ１を伴うＡＭＬ（巨核芽球性）
・暫定的主体：ＮＰＭ１変異を伴うＡＭＬ
・暫定的主体：ＣＥＢＰＡ変異を伴うＡＭＬ
・変異を伴うＡＭＬ：ＦＬＴ３ＩＴＤ、ＫＩＴ、Ｎ−ＲＡＳ、ＭＬＬ、ＷＴ１、ＩＤＨ１／２、ＴＥＴ２、ＤＮＭＴ３Ａ、ＡＳＸＬ１
●脊髄形成異常症関連の変化を伴う急性骨髄性白血病
●治療関連の骨髄性新生物
●特定不能の急性骨髄性白血病
・最小分化を伴うＡＭＬ
・成熟を伴わないＡＭＬ
・成熟を伴うＡＭＬ
・急性骨髄単球性白血病
・急性単芽球性／単球性白血病
・急性赤血球系白血病
純粋赤血球系白血病
赤白血病、赤血球系／骨髄性
・急性巨核芽球性白血病
・急性好塩基球性白血病
・骨髄線維症を伴う急性汎骨髄症
●骨髄性肉腫
●ダウン症候群関連骨髄性増殖
・一過性異常骨髄症
・ダウン症候群関連骨髄性白血病
●芽細胞性形質細胞様の樹状細胞新生物
である。
【００１３】
本発明に基づいて、ボラセルチブは、非経口的に（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮的または皮下注射）投与されてもよく、かつ単独または共に、各投与経路に適切な従来の無毒な薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する好適な投薬単位製剤に製剤化されてもよい。本発明内で好適な両方の有効成分の剤形および製剤は、当技術分野で公知である。例えば、そのような剤形および製剤には、ＷＯ２００６／０１８２２１におけるボラセルチブに関して開示されているものが含まれる。
本発明に基づいて、ＢＥＴ阻害剤は、経口投与経路により投与されてもよく、かつ単独または共に、各投与経路に適切な従来の無毒な薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する好適な投薬単位製剤に製剤化されてもよい。
以下の実施例は、本発明をそれに限定することなく、本発明を例示するのに役立つ。
【００１４】
ＢＥＴ阻害剤の合成
ＢＥＴ阻害剤５、７、１１および１３〜５１の合成は、特許出願ＷＯ２０１４／０７６２３７に開示されている。
ＢＥＴ阻害剤８は当技術分野で公知であり、例えばＷＯ２０１４／０６８４０２に開示されている。
ＢＥＴ阻害剤１０は当技術分野で公知であり、例えばJournal of Medicinal Chemistry (2013),56(19),7501-7515に開示されている。
ＢＥＴ阻害剤５２および５３は当技術分野で公知である。
ＢＥＴ阻害剤１〜４、６、９および１２は、本明細書に記載されるように合成される。
【００１５】
【表２】
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【００１６】
概括
別段に明記されない限り、全ての反応は、市販の装置で、化学研究室で一般的に使用される方法を使用して実行される。空気および／または水分に影響されやすい出発物質は、保護ガス下で保管され、それを用いた対応する反応および操作は、保護ガス（窒素またはアルゴン）下で実行される。
化合物は、バイルシュタイン則に基づいて、Ａｕｔｏｎｏｍソフトウェア（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ）を使用して命名される。化合物が、構造式およびその命名法の両方により表され、矛盾が生じた場合は、構造式で決定される。
【００１７】
クロマトグラフィー
薄層クロマトグラフィーを、Ｍｅｒｃｋ製のガラス上のシリカゲル６０の既製のＴＬＣプレート（蛍光指示薬Ｆ−２５４を用いる）で実行する。
本発明に基づく例示化合物の分取高圧クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、Ｗａｔｅｒｓ製のカラム（名称：Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ＯＢＤ、１０μＭ、３０×１００ｍｍ  Ｐａｒｔ．  Ｎｏ．１８６００３９７１；Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ＯＢＤ、１０μｍ、３０×１００  ｍｍ  Ｐａｒｔ．  Ｎｏ．１８６００３９３０）を用いて実行する。種々の勾配のＨ2Ｏ／ＡＣＮを使用し、０．２％のＨＣＯＯＨを水に添加して（酸性条件）、化合物を溶離する。塩基性条件下のクロマトグラフィーに関して、以下の配合に基づいて水を塩基性とする：５ｍＬの炭酸水素アンモニウム溶液（１ＬのＨ2Ｏに対して１５８ｇ）および２ｍＬの３２％アンモニア（水溶液）を、Ｈ2Ｏを用いて１Ｌとする。
中間体化合物の分析ＨＰＬＣ（反応モニタリング）を、Ｗａｔｅｒｓ製およびＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ製のカラムを用いて実行する。分析機器はまた、それぞれの場合に、質量検出器を備えて提供される。
【００１８】
ＨＰＬＣ質量分析／ＵＶ分光測定
本発明に基づく例示化合物の特徴付けのために、保持時間／ＭＳ−ＥＳＩ+が、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＨＰＬＣ−ＭＳ装置（質量検出器を備えた高速液体クロマトグラフィー）を使用してもたらされる。注入時に溶離する化合物には、ピークは保持時間ｔRet＝０が与えられる。
【００１９】
ＨＰＬＣ分取方法
分取ＨＰＬＣ１
ＨＰＬＣ：３３３および３３４ポンプ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ＯＢＤ、１０μｍ、３０×１００ｍｍ、Ｐａｒｔ．Ｎｏ．１８６００３９３０
溶媒：Ａ：Ｈ2Ｏ中の１０ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3；Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）
検出：ＵＶ／Ｖｉｓ−１５５
流量：５０ｍＬ／分
勾配：０．００〜１．５０分：１．５％Ｂ
１．５０〜７．５０分：変動
７．５０〜９．００分：１００％Ｂ
【００２０】
分取ＨＰＬＣ２
ＨＰＬＣ：３３３および３３４ポンプ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ＯＢＤ、１０μｍ、３０×１００ｍｍ、Ｐａｒｔ．Ｎｏ．１８６００３９７１
溶媒：Ａ：Ｈ2Ｏ＋０．２％のＨＣＯＯＨ；Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）＋０．２％のＨＣＯＯＨ
検出：ＵＶ／Ｖｉｓ−１５５
流量：５０ｍＬ／分
勾配：０．００〜１．５０分：１．５％Ｂ
１．５０〜７．５０分：変動
７．５０〜９．００分：１００％Ｂ
ＨＰＬＣ分析方法
ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ
ＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８、３μｍ、２×２０ｍｍ、Ｐａｒｔ．Ｎｏ．００Ｍ−４４３９−Ｂ０−ＣＥ
溶媒：Ａ：５ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3／Ｈ2Ｏ中の２０ｍＭのＮＨ3；Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）
検出：ＭＳ：ポジティブモードおよびネガティブモード
質量範囲：１２０〜９００ｍ／ｚ
流量：１．００ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
勾配：０．００〜２．５０分：５％→９５％Ｂ
２．５０〜２．８０分：９５％Ｂ
２．８１〜３．１０分：９５％→５％Ｂ
【００２１】
ＶＡＢ
ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００／１２００シリーズ
ＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８、２．５μｍ、２．１×３０ｍｍ  ＸＰ
溶媒：Ａ：５ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3／Ｈ2Ｏ中の１９ｍＭのＮＨ3；Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）
検出：ＭＳ：ポジティブモードおよびネガティブモード
質量範囲：１００〜１２００ｍ／ｚ
流量：１．４０ｍＬ／分
カラム温度：４５℃
勾配：０．００〜１．００分：５％→１００％Ｂ
１．００〜１．３７分：１００％Ｂ
１．３７〜１．４０分：１００％→５％Ｂ
【００２２】
ＭＥＴＨＯＤ  ８５＿ＧＶＫ
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒ  ＵＰＬＣ
ＭＳ：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ
溶媒：Ａ：Ｈ2Ｏ中の１０ｍＭのＮＨ4ＨＣＯ3；Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）
検出：ＥＳ／ＡＰＣＩ  ＭＯＤＥ
質量範囲：１２０〜９００ｍ／ｚ
流量：１．００ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
勾配：０．００〜１．５０分：５％Ｂ
１．５０〜３．００分：５％→１５％Ｂ
３．００〜７．００分：１５％→５５％Ｂ
７．００〜１０．００分：５５％→９５％Ｂ
１０．００〜１４．００分：９５％Ｂ
１４．００〜１７．００分：９５％→５％Ｂ
【００２３】
ＲＮＤ−ＦＡ−４．５−ＭＩＮ
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒ  ＵＰＬＣ
ＭＳ：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄ
カラム：Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ
溶媒：Ａ：水中の０．１％のギ酸、Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のギ酸；
検出：ＥＳ／ＡＰＣＩ  ＭＯＤＥ
流量：０．６ｍＬ／分
カラム温度：３５℃
勾配：０．００〜０．４０分：３％Ｂ
０．４０〜３．２０分：３％→９８％Ｂ
３．２０〜３．８０分：９８％Ｂ
３．８０〜４．２０分：９８％→３％Ｂ
４．２０〜４．５０分：３％Ｂ
【００２４】
ＢＥＴ阻害剤１〜３および１２の合成
図式１：
【化２】
2021511352.tif 000016
【００２５】
中間体Ｂの合成
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の出発物質Ａ（１．００ｇ；５．０５３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．３９７ｇ；１０．１０５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ヨードメタン（０．３４６ｍＬ；５．５５８ｍｍｏｌ）を注意深く添加する。反応混合物を、終夜（１６ｈ）室温で撹拌する。反応混合物を、次に１０％アンモニア溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、３０ｍＬの水を添加する。それを、３×５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、生成物を得る。
収率：９８％（１．０ｇ；４．９５ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２０２／２０４；ｔRet＝０．６５分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
【００２６】
中間体Ｃの合成
ＢＵＣＨＩ  ＧＬＡＳ  ＵＳＴＥＲからのカルボニル化反応器中で、中間体Ｂ（３．３０ｇ；１６．００６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（８０．００ｍＬ）に溶解し、ＴＥＡ（５．３９９ｍＬ；４０．０１５ｍｍｏｌ）を添加する。次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ2．ＣＨ2Ｃｌ2（３８９．００ｍｇ；０．４７６ｍｍｏｌ）を添加し、反応器を閉じて、一酸化炭素で満たす（８バール）。反応器を７０℃まで加熱し、終夜１８時間撹拌する。反応混合物を、シリカの小パッドを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮し、残留物を、シリカクロマトグラフィーＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（カラム：Ｒｅｄｉｓｅｐ  Ｒｆ、１２０ｇ；勾配：ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ＝１００％／０％〜５０％／５０％；流量＝３０ｍＬ／分、２８カラム体積；検出波長：２５４ｎｍ）で精製する。生成物を含有する画分を合わせて、減圧下で濃縮する。
収率：９０％（２．６ｇ；１４．３５ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１８２；ｔRet＝０．４９分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
【００２７】
中間体Ｄの合成
中間体Ｃ（２．６０ｇ；１４．３５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ中で懸濁させる。水酸化ナトリウム（１Ｍ溶液、４５ｍＬ；４５．００ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、１００℃まで２時間加熱する（Ｄｒｙｓｙｎ、還流）。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、１ＮのＨＣｌ（４６ｍＬ）をこの溶液に添加し、沈殿が起きる。沈殿物を濾別し、減圧下で乾燥させる。
収率：９８％（２．３４ｇ；１４．００ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１６８；ｔRet＝０分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
図式２
【化３】
2021511352.tif 000017
【００２８】
中間体Ｅ−１．１−５の合成
ＤＭＦ（５５０ｍＬ）中の出発物質Ｅ−１．１−６（５５．０ｇ；３３３．１ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、Ｋ2ＣＯ3（５５．２ｇ；３９９．７ｍｍｏｌ）および２−ヨード−プロパン（７３．６ｇ；４３３．０ｍｍｏｌ）を２５℃で添加する。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌する。次に、この混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機層を減圧下で濃縮し、粗製化合物を得る。粗製物を、カラムクロマトグラフィーにより、シリカゲル（２３０〜４００μＭ）を使用し、酢酸エチルおよびヘキサンの溶離混合物を用いて精製する。
収率：５１％（３５．０ｇ；１６９．０ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２０８；ｔRet＝２．０２分；方法  ＲＮＤ−ＦＡ−４．５−ＭＩＮ
【００２９】
中間体Ｅ−１．１−４の合成
エタノール（１１００ｍＬ）中の中間体Ｅ−１．１−５（３５．０ｇ；１６９．０ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、ヒドラジン水和物（５５０ｍＬ）を２５℃で添加する。反応混合物を１１０℃で１６時間加熱する。反応混合物を濃縮し、粗製物質を水で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機層を減圧下で濃縮し、粗製化合物を得て、これをカラムクロマトグラフィーにより、シリカゲル（２３０〜４００μＭ）を使用し、酢酸エチルおよびヘキサンの溶離混合物を用いて精製する。
収率：４７％（１５．３ｇ；７９．４ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１９４；ｔRet＝２．０６分；方法  ＲＮＤ−ＦＡ−４．５−ＭＩＮ
中間体Ｅ−１．１−３の合成
ＴＨＦ（４８０ｍＬ）中の中間体Ｅ−１．１−４（２４．０ｇ；１２４．４ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、水素化ナトリウム（９．５ｇ；３９７．５ｍｍｏｌ）を数回に分けて０℃で添加する。反応混合物を２５℃で２０分間撹拌し、次に、ヨウ化メチル（２４．８ｍＬ；３８５．１ｍｍｏｌ）を滴下添加する。２５℃で１時間撹拌した後、反応混合物をＮＨ4Ｃｌ飽和溶液に注入し、酢酸エチルで２回抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させる。粗製化合物を、カラムクロマトグラフィーにより、シリカゲル（２３０〜４００μＭ）を使用し、酢酸エチルおよびヘキサンの溶離混合物を用いて精製する。
収率：６２％（１７．０ｇ；７６．９ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２２２；ｔRet＝２．４２分；方法  ＲＮＤ−ＦＡ−４．５−ＭＩＮ
【００３０】
中間体Ｅ−１．１−２の合成
酢酸（５５０ｍＬ）中の中間体Ｅ−１．１−３（１７．０ｇ；７６．９ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、発煙ＨＮＯ3（８．５ｇ；１３４．９ｍｍｏｌ）を２５℃で添加する。反応混合物を２５℃で１５分間撹拌し、次に、濃Ｈ2ＳＯ4（１７．０ｇ；１７３．５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２５℃で３０分間撹拌する。反応完了後、反応混合物を氷冷水に注入した。得られた固体を濾過し、乾燥させた。この固体を、酢酸エチルを用いて再結晶し、純粋な化合物を得た。
収率：４９％（１０．０ｇ；３７．６ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋＝２６７；ｔRet＝１０．７７分；方法：ＭＥＴＨＯＤ  ８５＿ＧＶＫ
【００３１】
中間体Ｅ−１．１−１の合成
中間体Ｅ−１．１−２（４．５ｇ；１６．５ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（２０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（４．０ｍＬ；２２．３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−１−フェニル−エチルアミン（２．６５ｍＬ；２０．１ｍｍｏｌ）を２０℃で添加する。反応混合物を５０℃で３時間撹拌する。反応混合物を水に注入し、ＤＣＭで抽出する。合わせた有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。粗製化合物を、カラムクロマトグラフィーにより、シリカゲル（５０μｍ）を使用し、酢酸エチルおよびシクロヘキサンの溶離混合物を用いて精製する。
収率９５％（５．７６ｇ；１５．７ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝３２７；ｔRet＝１．２２分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
【００３２】
中間体Ｅ−１．１の合成
中間体Ｅ−１．１−１（５．７６ｇ；１５．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、ＢＵＣＨＩオートクレーブに入れる。ラネー−Ｎｉ（５００ｍｇ）を添加し、６バールで１６時間水素化する。反応混合物を、セライトのプラグを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。
収率７４％（３．７７０ｇ；１１．３２６ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝３３８；ｔRet＝０．８４分；方法  ＶＡＢ
中間体Ｅ−１．２を、Ｅ−１．１の手順に類似して合成することができる。
【表３】
2021511352.tif 000018
【００３３】
図式３
【化４】
2021511352.tif 000019
【００３４】
中間体Ｅ−１．３−１の合成
ＮＭＰ中の２，４−ジクロロ−５−ニトロ−ピリジンＥ−１．３−２（５．００ｇ；２５．９０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８．３７２ｍＬ、５１．８１７ｍｍｏｌ）およびベンジルアミン（３．０５４ｍＬ、２８．４９９ｍｍｏｌ）を添加する。この混合物をＲＴで１時間撹拌する。次に、１−メチルピペラジン（３．１７２ｍＬ；２８．４９９ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を５０℃で終夜撹拌する。残留物をｉｓｏｌｕｔｅにロードし、５つに分けて、塩基性分取逆相クロマトグラフィー（方法：分取ＨＰＬＣ１）を使用して精製する。生成物を含有する画分を合わせて、凍結乾燥する（収率：６６％、５．６１９ｇ；１７．１６３ｍｍｏｌ）。
【００３５】
中間体Ｅ−１．３の合成
中間体Ｅ−１．３−１（４００ｍｇ；１．２２２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、ＢＵＣＨＩオートクレーブに入れる。ラネー−Ｎｉを添加し、反応物を５バールの水素圧力で終夜水素化する。反応混合物をセライトのプラグで濾過する。次に、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を、さらに精製することなく次の工程で使用する。
収率：７４％（２７０ｍｇ；０．９０８ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２９８；ｔRet＝０．６８分；方法  ＶＡＢ
図式４
【化５】
2021511352.tif 000020
【００３６】
中間体Ｅ−１．４−３の合成
ＮＭＰ中のＥ−１．３−２（１０．００ｇ；５１．８１７ｍｍｏｌ）およびベンジルアミン（５．５５２ｇ；５１．８１７ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、ＤＩＰＥＡ（２０．０５３ｇ；１５５．４５１ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。この混合物をＲＴで１時間撹拌する。水を添加し、生成物の沈殿が起きる。生成物を濾別し、真空下で乾燥させる。生成物を、さらに精製することなく次の工程で使用する（収率：８８％、１２．００ｇ；４５．５１０ｍｍｏｌ）。
【００３７】
中間体Ｅ−１．４−２の合成
ＴＨＦ中の中間体Ｅ−１．４−３（１０．００ｇ；３８．０２ｍｍｏｌ）の溶液を、鋼製の爆発物容器に入れる。液体アンモニアを−７８℃で添加し、この混合物を９０℃で１６時間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮する。水を添加し、生成物の沈殿が起きる。生成物を濾別し、真空下で乾燥させる。残留物を、さらに精製することなく次の工程で使用する（収率：９７％、９．０００ｇ；３６．８５ｍｍｏｌ）。
【００３８】
中間体Ｅ−１．４−１の合成
ＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の１Ｍ、５５．２７１ｍｍｏｌ）を、−７８℃で、ＴＨＦ中の中間体Ｅ−１．４−２（９．００ｇ；３６．８５ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。この混合物を−７８℃で１５分間撹拌する。次に、Ｂｏｃ無水物（８．８３６ｇ；４０．５３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を−７８℃で１時間撹拌する。反応混合物を、ＮＨ4Ｃｌ水溶液でクエンチし、生成物の沈殿が起きる。生成物を濾別し、真空下で乾燥させる。残留物を、さらに精製することなく次の工程で使用する（収率：５５％、７．００ｇ；２０．３２７ｍｍｏｌ）。
【００３９】
中間体Ｅ−１．４の合成
エタノール中の中間体Ｅ−１．４−１（７．００ｇ；２０．３２７ｍｍｏｌ）の溶液に、水中の塩化アンモニウム（５．４２７ｇ、１０２ｍｍｏｌ）の溶液および鉄粉（５．６７１ｇ；１０２ｍｍｏｌ）を添加する。反応物を８０℃で２時間撹拌する。反応混合物を、セライトを通して濾過する。濾液を減圧下で濃縮する。残留物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、塩基性アルミナで、１〜２％のＭｅＯＨ（ＭｅｏＨ）／ＤＣＭを溶離液として使用して精製する。単離生成物を褐色固体として得る。それを、さらに精製することなく次の工程で使用する。
収率：７０％（４．５０ｇ；１４．３１４ｍｍｏｌ）
ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／９０％ＤＣＭ）：Ｒｆ＝０．０９
【００４０】
図式５
【化６】
2021511352.tif 000021
【００４１】
中間体Ｅ−１．５−２の合成
Ｅ−１．５−２を、Ｅ−１．４−３の合成に関して記載された手順に類似して合成する。
中間体Ｅ−１．５−１の合成
中間体Ｅ−１．５−２（１２５ｍｇ；０．４７ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（プロパ−１−エン−２−イル）−１，３，２−ジオキサボロラン（２００μＬ；１．０６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３００ｍｇ；０．９０ｍｍｏｌ）および［１，１−ビス［ジフェニルホスフィノ］−フェロセン］ジクロロパラジウム（３０ｍｇ；０．０４ｍｍｏｌ）を、７．５ｍＬのジメトキシエタンおよび２．５ｍＬの水の中で懸濁させ、１００℃で１時間加熱する。反応混合物の溶媒を減圧下で除去し、逆相クロマトグラフィーを使用して粗生成物を精製する（方法：分取ＨＰＬＣ１）。
収率：４３％（５５ｍｇ；０．２０ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２７１；ｔRet＝１．０９分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
【００４２】
中間体Ｅ−１．５の合成
Ｅ−１．５を、Ｅ−１．３−１からのＥ−１．３の合成に関して記載された手順に類似して合成する。
以下の中間体を、Ｅ−１．３、Ｅ−１．４およびＥ−１．５の手順に類似して合成する。
【表４】
2021511352.tif 000022
【００４３】
図式５
【化７】
2021511352.tif 000023
【００４４】
中間体Ｅ−２．１の合成
中間体Ｄ（５２ｍｇ；０．３１ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬの塩化チオニル中で懸濁させ、６０℃で１５時間加熱する。反応混合物を減圧下で濃縮する。中間体Ｅ−１．２（１０５ｍｇ；０．３１ｍｍｏｌ）を、５ｍＬのＴＨＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（１６２μＬ；１．００ｍｍｏｌ）を添加する。この反応混合物に、２ｍＬのＴＨＦに溶解した酸塩化物を添加し、得られた反応混合物を２０℃で１２時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、逆相クロマトグラフィーを使用して粗生成物を精製する（方法：分取ＨＰＬＣ１）。
収率：９４％（１４０ｍｇ；０．２９ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝４８７；ｔRet＝１．２２分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
【００４５】
ＢＥＴ阻害剤１２の合成
中間体Ｅ−２．１（１００ｍｇ；０．２１ｍｍｏｌ）を２ｍＬの酢酸に溶解し、１２０℃で７時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、逆相クロマトグラフィーを使用して粗生成物を精製する（方法：分取ＨＰＬＣ２）。
収率：３８％（３７ｍｇ；０．０８ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝４６９；ｔRet＝１．２０分；方法  ＬＣＭＳ  ＢＡＳ１
ＢＥＴ阻害剤１〜３を、ＢＥＴ阻害剤１２の手順に類似して合成する。
【表５】
2021511352.tif 000024
【００４６】
ＢＥＴ阻害剤４、６および９の合成
図式６
【化８】
2021511352.tif 000025
【００４７】
中間体Ｂ−１の合成
出発物質Ａ−１（１５ｇ；１００．６８ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物６５％（１５．５０９ｍＬ；２０１．３７ｍｍｏｌ）を、４５ｍＬのエタノールに溶解し、８０℃で１時間撹拌する。冷却中に沈殿が形成される。沈殿を少量の水でスラリー化し、濾別する。それを水で洗浄し、次に乾燥させ、生成物を得る。
収率：９３％（１３．６ｇ；９４．０７ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１４５／１４７；ｔRet＝０．３４分；方法  ＦＥＣＢ５
【００４８】
中間体Ｃ−１ａの合成
【化９】
2021511352.tif 000026
中間体Ｂ−１（１５．６ｇ；１０８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３００ｍＬ）中でスラリー化し、氷浴中で−５℃まで冷却する。トリフルオロ酢酸無水物（１７ｍＬ；１１８ｍｍｏｌ）も３００ｍＬのＴＨＦに溶解し、最初の溶液にゆっくりと滴下する。１時間後、大部分のＴＨＦを蒸発させ、次に、少量の水を添加し、この混合物をＤＣＭで抽出する。有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発乾固させる。
収率：１００％
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２４１／２４３；ｔRet＝１．３１分；方法  ＦＳＵＮ２
【００４９】
中間体Ｃ−１ｂの合成
【化１０】
2021511352.tif 000027
中間体Ｂ−１（１５．０ｇ；１０４ｍｍｏｌ）を、周囲温度でトルエン（１３５ｍＬ）中に懸濁させる。７．５ｍＬのトルエンに溶解した無水酢酸（１１．１ｇ；１０９ｍｍｏｌ）を、この懸濁液にゆっくりと添加する。反応混合物を周囲温度で２．５時間撹拌する。生成物を濾過により単離する。
収率：９９％（１９．２ｇ、１０３ｍｍｏｌ）
ＥＳＩ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１８７／１８９
【００５０】
中間体Ｄ−１ａの合成
【化１１】
2021511352.tif 000028
中間体Ｃ−１ａ（１９．５ｇ；８１．１ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＣＭに溶解し、−４０℃まで冷却する。その後、ＮＢＳ（１８．８ｇ；１０５ｍｍｏｌ）を添加し、１時間撹拌する。この溶液を水で希釈し、ＤＣＭで抽出する。次に、有機相をフラッシュクロマトグラフィーで精製する：１０カラム体積内でｃＨｅｘ／（ＥｔＯＡｃ／ＣＨ3ＣＯＯＨ＝９／１）＝８０％／２０％〜７０％／３０％。
収率：１１％（２．８３ｇ；８．８５９ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ−Ｈ）-＝３１７／３１９／３２１；ｔRet＝１．７９分；方法  ＦＳＵＮ２
【００５１】
中間体Ｄ−１ｂの合成
【化１２】
2021511352.tif 000029
１５ｍＬのＥｔＯＡｃ中の中間体Ｃ−１ｂ（４．０ｇ；２１．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０．３０ｇ（１．１ｍｏｌ）のＴＢＡＣｌを周囲温度で添加する。６０ｍＬのＡｃＯＥｔ中のＮＣＳ（２．９ｇ；２１．４ｍｍｏｌ）の溶液の添加後、反応混合物を１時間撹拌する。この溶液を約１．５時間撹拌し、その間に沈殿が形成される。生成物を濾過により単離する。
収率：２３％（１．１ｇ；５．０ｍｍｏｌ）
ＥＳＩ−ＭＳ：（Ｍ−Ｈ）+＝２２１／２２３／２２５
【００５２】
中間体Ｆ−１ａの合成
【化１３】
2021511352.tif 000030
中間体Ｄ−１ａ（１．５９ｇ；４．９７ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、３ｍＬの濃ＨＣｌで処理する。それを１００℃で２時間撹拌する。反応混合物を冷却し、水で希釈し、次に飽和ＮａＨＣＯ3溶液を用いてｐＨを８に調節する。水相をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発乾固させる。
収率：７１％（９４５ｍｇ；３．５１ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ−Ｈ）-＝２２１／２２３／２２５；ｔRet＝１．３２分；方法  ＦＥＣＢ５
【００５３】
中間体Ｇ−１ａの合成
【化１４】
2021511352.tif 000031
中間体Ｆ−１ａ（９４５ｍｇ；３．５１ｍｍｏｌ）を、１２ｍＬのオルト酢酸トリメチルに溶解し、１３０℃まで１時間加熱する。この溶液を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。次に、有機相をフラッシュクロマトグラフィーで精製する：１０カラム体積内でｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ＝７０％／３０％〜５５％／４５％。
収率：７１％（８２４ｍｇ；３．３３ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２４７／２４９／２５１；ｔRet＝１．２３分；方法  ＦＥＣＢ５
【００５４】
中間体Ｇ−１ｂの合成
【化１５】
2021511352.tif 000032
中間体Ｄ−１ｂ（５．０ｇ；２２．６ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＡＣＮに溶解し、加熱還流する。次に、ＳＯＣｌ2（３．５ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を、還流温度で約１時間、かつ０℃で４時間撹拌する。生成物を濾過により単離する。
収率：９６％（４．４ｇ；２１．６ｍｍｏｌ）
ＥＳＩ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２０３／２０５／２０７
図式７
【化１６】
2021511352.tif 000033
【００５５】
中間体Ｈ−１ａの合成
【化１７】
2021511352.tif 000034
中間体Ｇ−１ａ（３０．００ｇ；１２１．２ｍｍｏｌ）、イソプロピルアミン（１４．３０ｇ；２４２．４４ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（１７．２０ｇ；１３３．３３ｍｍｏｌ）を、１５０ｍＬのＮＭＰに溶解し、８０℃で２時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発乾固させる。
収率：７０％（４２．００ｇ；１５５．５５ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２７０／２７２；ｔRet＝０．６９分；方法  ＶＡＢ
【００５６】
中間体Ｈ−１ｂの合成
【化１８】
2021511352.tif 000035
１０．０ｍＬのＮＭＰ中のＧ−１ｂ（３．２９ｇ；１６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥｔＯＨ中のメチリルアミン３３％（６．１ｇ；６５．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１．５時間撹拌する。反応混合物を５０ｍＬの水で希釈する。生成物を濾過により単離する。
収率：８８％（２．８２ｇ；１４．３ｍｍｏｌ）
ＥＳＩ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１９８／２００
【００５７】
中間体Ｈ−１ｃの合成
【化１９】
2021511352.tif 000036
中間体Ｇ−１ｂ（５．０ｇ；２４．６ｍｍｏｌ）を５０ｍＬの水に溶解し、０℃まで冷却する。次に、イソプロピリルアミン（７．２８ｇ；１２３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を０℃で５時間撹拌する。生成物を濾過により単離する。
収率：８０％（４．５ｇ；１９．８ｍｍｏｌ）
ＥＳＩ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２２６／２２８
【００５８】
中間体Ｊ−１ａの合成
【化２０】
2021511352.tif 000037
中間体Ｈ−１ａ（１０ｇ；３７．０２ｍｍｏｌ）、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロ−メタン付加物（３．０２ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（９．３５ｇ；９２．５７ｍｍｏｌ）を、５０ｍＬのメタノールおよび５０ｍＬのＮＭＰに溶解する。反応混合物を１３０℃かつ２バールのＣＯ圧力で２時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発乾固させる。分取ＨＰＬＣ１の方法を使用して粗生成物を精製する。得られた中間体を１００ｍＬのＴＨＦに溶解し、１００ｍＬの１ＮのＬｉＯＨ水溶液で処理する。１時間後、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、蒸発乾固させる。
収率：５７％（５ｇ；２１．２７ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２３６；ｔRet＝０．０分；方法  ＶＡＢ
【００５９】
中間体Ｅ−１．８の合成
【化２１】
2021511352.tif 000038
出発物質Ｅ−１．３．２（５００ｍｇ；２．４６ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−１−メトキシプロパン−２−アミン（２１９ｍｇ；２．４６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４００μＬ；２．８２ｍｍｏｌ）を、２．５ｍＬのＮＭＰ中で懸濁させ、２５℃で１時間撹拌する。この懸濁液に、モルホリン（５００μＬ；５．７１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１６時間撹拌する。粗製の中間体を、逆相クロマトグラフィー（分取ＨＰＬＣ１）を使用して精製する。この中間体を３０ｍＬのＴＨＦに溶解し、炭素上のパラジウムを添加する。反応混合物を２５℃かつ４バールの水素圧力で３時間撹拌する。固体物質を濾別し、溶媒を蒸発させる。
収率：６５％（４２２ｍｇ；１．５９ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２６７；ｔRet＝０．５９分；方法  ＶＡＢ
【００６０】
中間体Ｅ−１．９の合成
【化２２】
2021511352.tif 000039
ＴＨＦ超乾燥（６ｍＬ）中の６−クロロ−３，３−ジメチル−５−ニトロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンのＥ−１．９．３（２５０ｍｇ；１．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ナトリウム（１８８ｍｇ；４．７０ｍｍｏｌ）を０℃で添加する。次に、２−ヨード−プロパン（６９６ｍｇ；４．１２ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を２５℃で１８時間撹拌する。反応混合物を水に注ぎ、ＤＣＭで２回抽出する。有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。得られた残留物を、順相クロマトグラフィー（カラム：Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ  ＩＲ５０−ＳＩ  ４０ｇ；流量：４０ｍＬ／分；移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル＝１：１）を介して精製する。
得られた中間体、Ｅ−１．９．２（２００ｍｇ；０．７９ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−エチルアミン（４２５ｍｇ；４．７６ｍｍｏｌ）を、１ｍＬのＮＭＰに溶解し、８０℃で１８時間撹拌する。粗製の中間体を、逆相クロマトグラフィー（分取ＨＰＬＣ１）を使用して精製する。得られた中間体、Ｅ−１．９．１を、３０ｍＬのＴＨＦに溶解し、炭素上のパラジウムを添加する。反応混合物を２５℃かつ４バールの水素圧力で３時間撹拌する。固体物質を濾別し、溶媒を蒸発させる。
収率：４２％（１４９ｍｇ；０．４９ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝３０６；ｔRet＝０．８１分；方法  ＶＡＢ
【００６１】
中間体Ｅ−１．１０を、中間体Ｅ−１．８およびＥ−１．９の手順に類似して合成する。
【表６】
2021511352.tif 000040
【００６２】
ＢＥＴ阻害剤４の合成
【化２３】
2021511352.tif 000041
３−メチル−８−［（プロパン−２−イル）アミノ］−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−６−カルボン酸のＪ−１ａ（５８ｍｇ；０．２５ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（１２５μＬ；０．７７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１００ｍｇ；０．２６ｍｍｏｌ）を、２ｍＬのＮＭＰに溶解する。反応混合物を１０分間撹拌し、次に、Ｅ−１．１０（６３ｍｇ；０．２５ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を、２５℃でさらに５時間撹拌する。反応混合物を水およびＤＣＭで希釈する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、溶媒を蒸発させる。粗製の中間体を、４ｍＬの酢酸に溶解し、１６０℃で２時間撹拌する。その後、反応混合物を、ＮａＨＣＯ3水溶液を用いて中和し、ＤＣＭで抽出する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、溶媒を蒸発させる。逆相クロマトグラフィー（方法：分取ＨＰＬＣ１）を使用して、粗生成物を精製する。
収率：２５％（３２ｍｇ；０．０６ｍｍｏｌ）
ＨＰＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝５１８；ｔRet＝１．１４分；方法  ＬＣＭＳＢＡＳ１
【００６３】
以下の実施例を、ＢＥＴ阻害剤４の手順に類似して合成する。
【表７】
2021511352.tif 000042
【図１】
2021511352.tif 000065
【図２】
2021511352.tif 000066
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2021511352.tif 000070
【図７】
2021511352.tif 000071
【図８】
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【図９】
2021511352.tif 000073
【図１０】
2021511352.tif 000074
【図１１】
2021511352.tif 000075
【図１２】
2021511352.tif 000076
【国際調査報告】
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2021511352.tif 000078
2021511352.tif 000079
2021511352.tif 000080
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