(57)【要約】  本発明は、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブを含む医薬組合せ；これを含む医薬組成物；並びにそのような組合せ及び組成物を、症状の処置又は予防に用いる方法に関し、ＣＤＫ４／６阻害と組み合わせたエストロゲン受容体の性能低下は、例えば、癌の処置に有益である。
2021503448.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組合せ。
【請求項２】
（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩が、別々に、同時に、又はあらゆる順序で順次、投与される、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
経口投与用である、請求項１又は２に記載の医薬組合せ。
【請求項４】
（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸は、経口投与形態である、請求項１又は２に記載の医薬組合せ。
【請求項５】
７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、経口投与形態である、請求項１又は２に記載の医薬組合せ。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組合せ、及び少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物。
【請求項７】
ＥＲ＋乳癌の処置に使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組合せ又は請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＥＲ＋乳癌の処置用の医薬を製造するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組合せ又は請求項６に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
野生型ＥＲ＋乳癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組合せ又は請求項６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１０】
ＥＲ＋乳癌を処置する方法であって、前記ＥＲ＋乳癌は、ＥＳＲ１突然変異を含有し、前記方法は、それを必要とする患者に、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組合せ又は請求項６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記ＥＳＲ１突然変異は、ＭＣＲ７発現ＥＳＲ１突然変異である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記突然変異は、Ｄ５３８Ｇ、Ｅ３８０Ｑ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｎ、及びＹ５３７Ｃからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記突然変異は、Ｄ５３８Ｇ及びＹ５３７Ｓから選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸は、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、４５０ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、又は９００ｍｇ／日の用量にて経口投与される、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１５】
７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、又は６００ｍｇ／日の用量にて経口投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドが２１日間、６００ｍｇにて経口投与されてから、７日間処置が行われない、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブを含む医薬組合せ；これを含む医薬組成物；並びにそのような組合せ及び組成物を、症状の処置又は予防に用いる方法に関し、ＣＤＫ４／６阻害と組み合わせたエストロゲン受容体の性能低下（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）は、例えば、癌の処置に有益である。
【背景技術】
【０００２】
エストロゲンは、女性及び男性の生殖組織の発達において重大な役割を果たし、そしてエストロゲン受容体の疾患又は障害、例えば乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、子宮内膜癌、及び子宮癌の発症及び進行に寄与する。
【０００３】
エストロゲン受容体（ＥＲα）−陽性疾患、例えば乳癌は通常選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）又はアロマターゼ阻害剤（ＡＩ）で処置される。これらの治療は、乳癌の進行率（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）を引き下げるのに有効であると証明されている一方、一部の患者は処置耐性を示し、そして進行した転移性乳癌に発展する。
【０００４】
処置耐性は、部分的に、腫瘍の、低いエストロゲンレベルに対する過感受性の状態への進化（ＡＩ処置）、又は転写の活性化のための抗エストロゲンへの依存性の発達（ＳＥＲＭ処置）に起因する。ＳＥＲＤは、受容体を性能低下させて、ＥＲα発現を効果的になくし、そしてその際、耐性の基礎をなす機構を回避し、これが抗内分泌単剤療法に発展する。さらに、臨床データ及び臨床前データは、かなりの数の耐性経路が、ＳＥＲＤ活性を示す抗エストロゲンを用いて回避することができることを示している。
【０００５】
サイクリンＤタンパク質は、癌細胞分裂において重大であり、そしてＣＤＫ４及びＣＤＫ６プロテインキナーゼと複合体形成して、Ｇ１進行を、網膜芽腫タンパク質（ｐＲｂ）を過剰リン酸化して活性化することによって、促進する。ＣＤＫ活性化をもたらす異常は、ルミナルＡ及びＢ乳癌サブタイプにおいて高度に富化され、その約８５％は、ＥＲ＋／ＨＥＲ２−である。ルミナルサブタイプはまた、ｐＲｂの発現を維持し、これは、ＣＤＫ４／６阻害剤による処置由来の利益にとって、必須である。ＥＲ＋乳癌細胞株は、単剤ＣＤＫ４／６阻害に対して、そして内分泌療法及びＣＤＫ４／６阻害の組合せに対して、最も感度が高い癌モデルの一つである。
【０００６】
本発明の組合せ、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブは、エストロゲン受容体の疾患又は障害、例えば、排卵障害、子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、子宮内膜症、骨粗鬆症、前立腺癌、良性の前立腺肥大、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα）−陽性乳癌、特に既存の抗エストロゲン及びアロマターゼ阻害剤に対して新規の耐性を示すＥＲα−陽性乳癌を処置する治療法として用いることができる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下を含む医薬組合せを提供する：
（ａ）構造：
【化１】
2021503448.tif 000003
を有する（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸（ＬＳＺ１０２）、又はその薬学的に許容される塩；及び
（ｂ）構造：
【化２】
2021503448.tif 000004
を有する７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド（リボシクリブ）、又はその薬学的に許容される塩。
【０００８】
ＬＳＺ１０２、又はその薬学的に許容される塩、及びリボシクリブ、又はその薬学的に許容される塩の組合せは、本明細書中で、「本発明の組合せ」とも呼ばれることとなる。
【０００９】
本発明の組合せの別の実施形態において、ＬＳＺ１０２、又はその薬学的に許容される塩、及びリボシクリブ、又はその薬学的に許容される塩は、同じ製剤中にある。
【００１０】
本発明の組合せの別の実施形態において、ＬＳＺ１０２、又はその薬学的に許容される塩、及びリボシクリブ、又はその薬学的に許容される塩は、別個の製剤中にある。
【００１１】
別の実施形態において、本発明の組合せは、同時の、又は（あらゆる順序での）順次的な投与用である。
【００１２】
別の実施形態は、癌の処置又は予防を必要とする対象において癌を処置又は予防する方法であって、対象に、治療的に有効な量の本発明の組合せを投与することを含む方法である。
【００１３】
方法の更なる実施形態において、癌は、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα）陽性乳癌である。
【００１４】
方法の更なる実施形態において、癌は、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、及び肺癌から選択される。
【００１５】
更なる実施形態において、本発明の組合せは、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲα）陽性乳癌を処置する医薬の製造での使用を提供する。
【００１６】
更なる実施形態において、本発明の組合せは、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、及び肺癌から選択される癌を処置する医薬の製造での使用を提供する。
【００１７】
別の実施形態は、本発明の組合せを含む医薬組成物である。
【００１８】
更なる実施形態において、医薬組成物はさらに、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＭＣＦ−７細胞におけるＥＲ性能低下の促進に関するＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの比較。
【図２Ａ】ＬＳＺ１０２で処理したＭＣＦ−７親（ＷＴ）細胞中のｍＲＮＡのＰＣＲ分析。
【図２Ｂ】ＬＳＺ１０２で処理したＭＣＦ−７  Ｙ５３７Ｓ突然変異細胞中のｍＲＮＡのＰＣＲ分析。
【図３】ＭＣＦ−７親（ＷＴ）細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞における、ＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの、ＥＲα性能低下活性の比較。
【図４】同所性ヒト乳癌ＭＣＦ−７異種移植モデルにおける、ＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの抗腫瘍効力。
【図５】原発性ヒト乳癌ＨＢＲＸ１２９８異種移植モデルにおける、ＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの抗腫瘍効力。
【図６】Ｙ５３７Ｓ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける、ＬＳＺ１０２及びフルベストラントの効力。
【図７Ａ】Ｄ５３８Ｇ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおけるＬＳＺ１０２及びフルベストラントの効力。
【図７Ｂ】Ｄ５３８Ｇ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７細胞における、ＬＳＺ１０２及びフルベストラントのＥＲα性能低下活性。
【図８Ａ】ＭＣＦ−７異種移植モデルにおける効力に及ぼすＬＳＺ１０２用量分割の影響。
【図８Ｂ】ＥＲ調節転写産物ＧＲＥＢ１及びＰＧＲのｍＲＮＡレベルに及ぼす、ＬＳＺ１０２用量分割の影響。
【図９】同所性ヒト乳癌ＭＣＦ−７異種移植モデルにおける、リボシクリブ（ＬＥＥ０１１）と組み合わせたＬＳＺ１０２の抗腫瘍効力。
【図１０】ＭＣＦ−７細胞の増殖に及ぼす、ＬＳＺ１０２をリボシクリブと組み合わせた効果を実証する、用量マトリックス及びアイソボログラム。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
以前、そして以降で用いられる一般的な用語は、好ましくは、特に明記しない限り、本開示の文脈内で、以下の意味を有し、用いられる場合はいつでも、より一般的な用語が、互いに独立して、より具体的な定義によって置き換えられて、又はそのままであることで、本発明のより詳細な実施形態を定義してもよい。
【００２１】
「ＥＳＲ１突然変異」は、エストロゲン受容体遺伝子（ＥＳＲ１）突然変異である。突然変異は、リガンドから独立したＥＲ活性をもたらす。ＥＲのリガンド結合ドメインを修飾するいくつかの突然変異が同定されてきた。この突然変異として、以下に限定されないが、Ｄ５３８Ｇ、Ｅ３８０Ｑ、及びＹ５３７Ｓ／Ｎ／Ｃが挙げられ、これらは、ＥＳＲ１突然変異の８０％超を表す。これらの突然変異は、後天性の分子事象である。というのも、原発性ＢＣ腫瘍中にほぼ不在であるからである（＜２％）。ＥＳＲ１突然変異は、転移性の背景でアロマターゼ阻害剤を受けた患者において、一般的である。突然変異は、早期転移性ＥＲ＋疾患の９％（Ｙ５３７Ｎ／Ｓ及びＤ５３８Ｇ）、そして遅発性転移性ＥＲ＋乳癌の２０％（Ｙ５３７Ｃ／Ｎ／Ｓ及びＤ５３８Ｇ）において存在する。野生型と比較して、腫瘍の成長は、Ｄ５３８Ｇ突然変異及びＹ５３７Ｓ突然変異でより高い。
【００２２】
本明細書中で用いられる用語「対象」又は「患者」は、癌、又は直接的若しくは間接的に癌に関わるあらゆる障害を患う、又はこれらに苦しむ虞がある動物を含むことが意図される。対象の例として、哺乳類、例えば、ヒト、類人猿、サル、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。一実施形態において、対象は、ヒトであり、例えば、癌を患っている、癌を患う危険に曝されている、又は潜在的に癌を患う虞があるヒトである。
【００２３】
本明細書中で用いられる用語「処置する」又は「処置」は、対象における少なくとも１つの病徴を和らげ、緩和し、若しくは軽減する、又は疾患の進行の遅延をもたらす処置を含む。例えば、処置は、癌等の障害の１つ若しくはいくつかの病徴の減少、又は障害の完全な根絶であり得る。本開示の意味の範囲内で、用語「処置する」はまた、開始（すなわち、疾患の臨床徴候よりも前の期間）を抑制し、遅らせ、且つ／又は疾患を発症若しくは悪化させるリスクを低下させることを表す。
【００２４】
用語「含む」及び「挙げられる」は、特に明記しない限り、本明細書中で、オープンエンド且つ非限定の意味で用いられる。
【００２５】
本発明を説明する文脈における（とりわけ以下の特許請求の範囲の文脈における）用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」、並びに類似のリファレンスは、本明細書中で特に明記しない限り、又は文脈によって明らかに相反しない限り、単数及び複数の双方を包含すると解釈されるべきである。複数形が化合物、塩等に用いられる場合、これは、単一の化合物、塩等も意味するととられる。
【００２６】
本明細書中で用いられる用語「相乗効果」は、２つの治療剤、例えば、選択的エストロゲン受容体調節因子としての化合物ＬＳＺ１０２、及びＣＤＫ４／６阻害剤としてのリボシクリブの、例えば、増殖的な疾患、特に癌、又はその病徴の症候的な進行を遅らせ、それ自体で投与される各薬物の効果の単純な追加よりも大きい効果をもたらす作用を指す。相乗効果は、例えば、適切な方法、例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ式（Ｈｏｌｆｏｒｄ，Ｎ．Ｈ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，Ｌ．Ｂ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９−４５３（１９８１））、Ｌｏｅｗｅ  ａｄｄｉｔｉｖｉｔｙの式（Ｌｏｅｗｅ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，Ｈ．，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３−３２６（１９２６））、及びｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ式（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４））を用いて算出することができる。先で言及された各式を、実験データに用いて、対応するグラフが生じて、薬物組合せの効果を評価する一助とすることができる。先で言及した式と関連する、対応するグラフはそれぞれ、濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線、及び組合せ指数曲線である。
【００２７】
本発明の組合せ、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブはまた、化合物の非標識形態、及び同位体標識形態を表すことが意図される。同位体標識された化合物は、選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置換された１つ以上の原子を有する。ＬＳＺ１０２及びリボシクリブ中に組み込むことができる同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉが挙げられる。本発明は、同位体標識されたＬＳＺ１０２及びリボシクリブを含み、例えば、これらの中に、放射性同位体、例えば３Ｈ及び１４Ｃ、又は非放射性同位体、例えば２Ｈ及び１３Ｃが存在する。同位体標識されたＬＳＺ１０２及びリボシクリブは、代謝研究（１４Ｃによる）、反応動態研究（例えば２Ｈ又は３Ｈによる）、検出若しくは撮像技術、例えば陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）若しくは単光子放出計算機トモグラフィ（ＳＰＥＣＴ）（薬物又は基質の組織分布アッセイが挙げられる）において、又は患者の放射性療法において、有用である。特に、１８Ｆで標識されたＬＳＺ１０２は、ＰＥＴ研究又はＳＰＥＣＴ研究に特に所望されてもよい。本発明の同位体標識された化合物は、通常、当業者に知られている従来の技術によって、又は、適当な同位体標識試薬を用いる添付の実施例に記載されるプロセスに類似したプロセスによって、調製することができる。
【００２８】
さらに、より重い同位体、特に、重水素（すなわち２Ｈ又はＤ）による置換は、より大きな代謝安定性に起因するある種の治療利点、例えば、インビボ半減期の増大、投薬量要件の縮小、又は治療指数の向上をもたらし得る。重水素は、この文脈において、ＬＳＺ１０２又はリボシクリブの置換基とみなされることが理解される。そのようなより重い同位体、具体的には重水素の濃度は、同位体富化係数によって定義されてもよい。本明細書中で用いられる用語「同位体富化係数」は、同位体の存在量と、指定された同位体の天然の存在量との比率を意味する。ＬＳＺ１０２又はリボシクリブ中の置換基が重水素と示されるならば、そのような化合物は、指定された各重水素原子についての同位体富化係数が、少なくとも３５００（指定された各重水素原子にて５２．５％の重水素組込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素組込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素組込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素組込み）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素組込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素組込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素組込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素組込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素組込み）、又は少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素組込み）である。
【００２９】
好ましい実施形態の説明
ＬＳＺ１０２は、動物における抗エストロゲン効果及びプロエストロゲン（ｐｒｏ−ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ）効果の双方と共に、混合ＳＥＲＤ及びＳＥＲＭ活性を有する、経口的に生物が利用可能な小分子である調査中の剤である。インビトロでの乳癌細胞株中で、ＬＳＺ１０２は、強力なＥＲアンタゴニズム及び性能低下活性を示した。
【００３０】
一実施形態は、本発明の医薬組合せに関して、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組合せである。
【００３１】
更なる実施形態において、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩は、別々に、同時に、又はあらゆる順序で順次、投与される。
【００３２】
更なる実施形態において、医薬組合せは、経口投与用である。
【００３３】
更なる実施形態において、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸は、経口投与形態である。
【００３４】
更なる実施形態において、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、経口投与形態である。
【００３５】
別の実施形態は、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩の医薬組合せ、並びに少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物である。
【００３６】
更なる実施形態は、野生型ＥＲ＋乳癌の処置への使用のための、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩の医薬組合せである。
【００３７】
別の実施形態は、ＥＳＲ１突然変異ＥＲ＋乳癌の処置への使用のための、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩の医薬組合せである。
【００３８】
更なる実施形態において、ＥＳＲ１突然変異は、ＭＣＲ７発現ＥＳＲ１突然変異である。
【００３９】
更なる実施形態において、ＥＳＲ１突然変異は、Ｄ５３８Ｇ、Ｅ３８０Ｑ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｎ、及びＹ５３７Ｃからなる群から選択される。
【００４０】
更なる実施形態において、ＥＳＲ１突然変異は、Ｄ５３８Ｇ及びＹ５３７Ｓからなる群から選択される。
【００４１】
別の実施形態は、ＥＲ＋乳癌の処置用の医薬の製造のための、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩の医薬組合せの使用である。
【００４２】
別の実施形態は、野生型ＥＲ＋乳癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、若しくはその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、若しくはその薬学的に許容される塩の医薬組合せ、又は（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、若しくはその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、若しくはその薬学的に許容される塩の医薬組合せ、並びに少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を投与することを含む方法である。
【００４３】
別の実施形態は、ＥＲ＋乳癌を処置する方法であって、前記ＥＲ＋乳癌は、ＥＳＲ１突然変異を含有し、それを必要とする患者に、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、若しくはその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、若しくはその薬学的に許容される塩の医薬の組合せ、又は（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸、若しくはその薬学的に許容される塩、及び７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、若しくはその薬学的に許容される塩の医薬の組合せ、並びに少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物を投与することを含む方法である。
【００４４】
更なる実施形態において、突然変異は、Ｄ５３８Ｇ、Ｅ３８０Ｑ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｎ、及びＹ５３７Ｃからなる群から選択される。
【００４５】
更なる実施形態において、突然変異は、Ｄ５３８Ｇ及びＹ５３７Ｓから選択される。
【００４６】
別の実施形態において、（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸は、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、又は６００ｍｇ／日の用量にて経口投与される。
【００４７】
更なる実施形態において、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、又は６００ｍｇ／日の用量にて経口投与される。
【００４８】
更なる実施形態において、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、又は６００ｍｇ／日の用量にて継続的に経口投与される。
【００４９】
更なる実施形態において、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、２１日間、約１００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、又は６００ｍｇ／日の用量にて経口投与されてから、７日間処置されない。
【００５０】
更なる実施形態において、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミドは、２１日間、６００ｍｇ／日にて経口投与されてから、７日間処置されない。
【００５１】
薬理学及び有用性
乳癌は、女性の癌死亡率の主因である。多くの場合、単一の疾患として一般化されるが、乳癌は、臨床背景において、３つの重要なバイオマーカーの特性評価から生じる分子サブタイプによって、より一般的に分類される。エストロゲン及びプロゲステロンの受容体の有無が、ホルモン受容体分類（ＨＲ＋／ＨＲ−）をもたらす一方、ヒト表皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）のレベルの増減が、ＨＥＲ２タンパク質分類（ＨＥＲ２＋／ＨＥＲ２−）をもたらす。乳癌のほぼ７４％が、エストロゲン受容体−α（ＥＲα）（ＨＲ＋癌の進行に直接関係する核ホルモン受容体）の高い発現を実証する。このリガンド誘導性の転写因子が、ホルモンエストロゲンに結合して、発癌遺伝子の発現を活性化且つ促進する。
【００５２】
ＥＲα陽性乳癌の患者において、処置は、長い間、内分泌療法、例えばタモキシフェン（及びその活性代謝物質、４−ヒドロキシタモキシフェン）及びアナストロゾール（これらは双方とも、リガンド活性化、そして最終的に遺伝子発現を妨げる）に依存してきた。タモキシフェン（そのような患者のための第一の標準治療）は、受容体へのエストロゲンの結合を効果的に遮断して、乳房組織中でのその作用を遮断するエストロゲン受容体調節因子として機能する。この第一選択の治療で処置された女性は、多くの場合、ポジティブに応答して、臨床背景において生存の増大を示すが、これらの患者において獲得される、最終的に疾患再発に至る耐性が、大きな医学的課題として残る。ＥＲα陽性腫瘍がタモキシフェンに対する耐性を発達させる具体的な機構は、完全には理解されていないが、アロマターゼ阻害剤、例えばレトラゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）は、そのような難治性癌における臨床有効性を示した。タモキシフェンと対照的に、アロマターゼ阻害剤は、その活性をエストロゲン産生の低下に負っており、より具体的には、エストロゲンの形成における重要な生合成工程を担う酵素を阻害することによる。不運にも、タモキシフェンと同様に、アロマターゼ阻害剤もまた、耐性癌をもたらす虞がある。
【００５３】
フルベストラントは、内分泌耐性癌の処置用に認可されている選択的エストロゲン受容体ディグレーダ（ＳＥＲＤ）である。このステロイドベースの抗エストロゲンは、エストロゲン受容体に結合して、その性能低下を促進する。そして、疾患が進んだ内分泌処置済み患者において、臨床的に有効である。しかしながら、フルベストラントは、大部分はその不十分な物理化学的特性のために、その臨床ユーティリティが限られている。薬物は、経口投与することができないが、その代わりとしての、毎月１回の５ｍＬの２注射での、臀部領域中に投与される５００ｍｇの認可された臨床投薬量では、受容体を完全に占めるのに十分であるように思われない。ＬＳＺ１０２が、生体利用性を向上させた一方、所望のエストロゲン受容体性能低下特性を保持した経口薬として開発された。
【００５４】
ＥＲ＋乳癌の処置へのＣＤＫ４／６阻害剤の導入は、強い臨床前データ及び原理によって、支持された。サイクリンＤタンパク質は、癌細胞分裂において重大であり、そしてＣＤＫ４及びＣＤＫ６プロテインキナーゼと複合体形成して、Ｇ１進行を、網膜芽腫タンパク質（ｐＲｂ）を過剰リン酸化して活性化することによって、促進する。ＣＤＫ活性化をもたらす異常は、ルミナルＡ及びＢ乳癌サブタイプにおいて高度に富化され、その約８５％は、ＥＲ＋／ＨＥＲ２−であった。ルミナルサブタイプはまた、ｐＲｂの発現を維持し、これは、ＣＤＫ４／６阻害剤による処置由来の利益にとって、必須である。ＥＲ＋乳癌細胞株は、単剤ＣＤＫ４／６阻害に対して、そして内分泌療法及びＣＤＫ４／６阻害の組合せに対して最も感度が高い癌モデルの一つである。
【００５５】
以下の「実施例」の節に記載される阻害研究に基づいて、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブの組合せは、治療有効性を示す。実施例８は、マウスの同所性ＭＣＦ−７乳癌モデルにおいて試験した、組み合わせたＬＳＺ１０２及びリボシクリブの有効性を詳述している。１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤのＬＳＺ１０２の、そして７５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤのリボシクリブの単剤の処置は、腫瘍増殖の阻害をもたらした（％ΔＴ／ΔＣは、それぞれ１０％及び１９％）。驚くべきことに、２つの組合せは、２８％の腫瘍退縮を誘導した（表７）。
【００５６】
医薬組成物
別の態様において、本発明は、１つ以上の薬学的に許容されるキャリア（添加物）及び／又は希釈剤と一緒に製剤化された、治療的に有効な量のＬＳＺ１０２及びリボシクリブを含む、薬学的に許容される組成物を提供する。以下に詳細に記載されるように、本発明の医薬組成物は、固体又は液体の形態での投与用に特別に製剤化されていてもよく、経口投与に適合するもの、例えば、水薬（水性又は非水性の溶液又は懸濁液）、タブレット、例えば、口腔内、舌下、及び体内吸収を対象とするもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌への塗布用のペーストが挙げられる。
【００５７】
本明細書中で用いられるフレーズ「治療的に有効な量」は、あらゆる医学的処置に適用可能な、合理的な利益／リスク比にて、動物中の細胞の少なくとも亜集団において、多少の所望の治療効果をもたらすのに有効な、本発明の化合物を含む化合物、材料、又は組成物の量を意味する。
【００５８】
フレーズ「薬学的に許容される」は、合理的な利益／リスク比に相応した、過剰な毒性も、炎症も、アレルギー反応も、他の問題も合併症もなしに、健全な医学的判断の範囲内で、ヒト及び動物の組織と接触させての使用に適した、化合物、材料、組成物、及び／又は剤型に言及するのに、本明細書中で使用される。
【００５９】
本明細書中で用いられるフレーズ「薬学的に許容されるキャリア」は、薬学的に許容される材料、組成物、又はビヒクル、例えば、液体若しくは固体のフィラー、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、潤滑剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、若しくはステアリン酸亜鉛、又はステアリン酸）、又は、一方の臓器、若しくは体の一部から、もう一方の臓器、若しくは体の一部への対象化合物の運送又は運搬に関与する材料をカプセル化する溶媒を意味する。各キャリアは、製剤の他の成分と適合するという意味において、「許容可能」でなければならず、且つ患者に有害であってはならない。薬学的に許容されるキャリアとして供給することができる材料の一部の例として：（１）糖、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース；（２）デンプン、例えばコーンスターチ及びジャガイモデンプン；（３）セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース；（４）粉末トラガカントゴム；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオバター及び坐薬ワックス；（９）油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、胡麻油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）アガー；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、及び／又はポリ無水物；並びに（２２）医薬の調合に使用される他の非毒性適合物質が挙げられる。
【００６０】
先で提示したように、本化合物の特定の実施形態は、塩基性の官能基、例えばアミノ基又はアルキルアミノ基を含有してもよく、そしてこのため、薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される酸により形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、この点で、本発明の化合物の比較的非毒性の無機酸付加塩及び有機酸付加塩を指す。この塩は、投与ビヒクル中に、若しくは剤型製造プロセスにおいて、又は本発明の精製された化合物を、その遊離塩基形態で、適切な有機酸若しくは無機酸と別個に反応させて、こうして形成された塩を、以降の精製の間に単離することによって、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができる。代表的な塩として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナプシル酸（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９参照）。
【００６１】
対象化合物の薬学的に許容される塩として、例えば非毒性の有機酸又は無機酸由来の、化合物の従来の非毒性の塩、又は四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、そのような従来の非毒性の塩として、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等に由来するもの；及び有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸等から調製される塩が挙げられる。例えばリボシクリブの薬学的に許容される塩は、コハク酸塩である。
【００６２】
その他の場合、本発明の化合物は、１つ以上の酸性の官能基を含有してもよく、そしてこのため、薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される塩基により形成することができる。用語「薬学的に許容される塩」は、この場合には、本発明の化合物の比較的非毒性の無機塩基付加塩及び有機塩基付加塩を指す。この塩は、同様に、投与ビヒクル中に、若しくは剤型製造プロセスにおいて、又は精製された化合物を、その遊離酸形態で、適切な塩基、例えば薬学的に許容される金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、若しくは重炭酸塩と、アンモニアと、又は薬学的に許容される有機一級、二級、若しくは三級アミンと別個に反応させることによって、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類塩として、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアルミニウム塩等が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとして、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、及びピペラジン等が挙げられる（例えば、前掲のＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．参照）。
【００６３】
また、湿潤剤、乳化剤、及び潤滑剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム、並びに着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味料、香料、及び芳香剤、保存剤及び抗酸化剤が、組成物中に存在してもよい。
【００６４】
薬学的に許容される抗酸化剤の例として、以下が挙げられる：（１）水溶性の抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、システイン塩酸塩、硫化水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等；（２）油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等；並びに（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等。
【００６５】
本発明の製剤は、経口、経鼻、局所的（口腔内及び舌下が挙げられる）、直腸、膣、及び／又は非経口投与に適したものが挙げられる。製剤は、好都合には、ユニット剤型で提示されてもよく、そして薬学の技術において周知であるあらゆる方法によって調製されてもよい。キャリア材料と組み合わされて単一の剤型を作製することができる活性成分の量は、処置されることとなる宿主、特定の投与モードに応じて変わることとなる。キャリア材料と組み合わされて単一の剤型を作製することができる活性成分の量は、通常、治療効果をもたらす化合物の量となるであろう。通常、１００パーセントのうち、この量は、活性成分の約０．１パーセント〜約９９パーセント、好ましくは約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセント〜約３０パーセントに及ぶこととなる。
【００６６】
特定の実施形態において、本発明の製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば胆汁酸、及びポリマーキャリア、例えばポリエステル及びポリ無水物からなる群から選択される賦形剤；並びに本発明の化合物を含む。特定の実施形態において、上述の配合により、本発明の化合物は、生物が経口的に利用可能となる。
【００６７】
この製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物を、キャリアと、そして場合によっては１つ以上の副成分と結合させる工程を含む。一般に、製剤は、本発明の化合物を、液体キャリア、若しくは微細に分割された固体キャリア、又は双方と一様に、且つ緊密に結合させ、そしてその後必要ならば、生成物を成形することによって、調製される。
【００６８】
経口投与に適した本発明の組成物は、カプセル、カシェ、ピル、タブレット、ロゼンジ（風味をつけたベース、通常、スクロース及びアラビアゴム又はトラガカントゴムを用いる）、粉末、顆粒の形態であってもよいし、水性又は非水性の液体中の溶液、懸濁液、又は固体分散系としてあってもよいし、水中油又は油中水の液体エマルジョンとしてあってもよいし、エリキシル又はシロップとしてあってもよいし、トローチ（不活性のベース、例えばゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴムを用いる）としてあってもよいし、うがい薬等としてあってもよく、それぞれ、所定の量の本発明の化合物を活性成分として含有する。本発明の化合物はまた、ボーラス、舐剤、又はペーストとして投与されてもよい。
【００６９】
経口投与用の本発明の固体剤型（カプセル、タブレット、ピル、ドラジェ、粉末、顆粒、トローチ（ｔｒｏｕｃｈｅｓ）等）中で、活性成分は、１つ以上の薬学的に許容されるキャリア、例えばクエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウム、並びに／又は以下のいずれかと混合されている：（１）フィラー若しくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／若しくはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び／若しくはアラビアゴム；（３）湿潤剤、例えばグリセロール；（４）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケート、及び炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えばパラフィン；（６）吸収促進剤、例えば四級アンモニウム化合物及び界面活性剤、例えばポロキソマー及びラウリル硫酸ナトリウム；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、及び非イオン性界面活性剤；（８）吸収剤、例えばカオリン及びベントナイトクレイ；（９）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、及びそれらの混合物；（１０）着色剤；並びに（１１）放出制御剤、例えばクロスポビドン若しくはエチルセルロース。カプセル、タブレット、及びピルの場合、医薬組成物は、緩衝剤を含んでもよい。また、類似の型の固体組成物は、ラクトース又は乳糖のような賦形剤、及び高分子量ポリエチレングリコール等を用いるソフトシェルゼラチンカプセル及びハードシェルゼラチンカプセル中で、フィラーとして使用されてもよい。
【００７０】
タブレットは、場合によっては１つ以上の副成分と共に、圧縮又は成形によって製造されてもよい。結合剤（例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム又は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤、又は分散剤を用いて、圧縮タブレットが調製されてもよい。適切な機械において、不活性の希釈液で湿らせた粉末化合物の混合物を成形することによって、成形タブレットが製造されてもよい。
【００７１】
本発明の医薬組成物のタブレット及び他の固体剤型、例えば、ドラジェ、カプセル、ピル、及び顆粒は、場合によっては、コーティング及び殻、例えば、医薬製剤技術において周知の腸溶コーティング及びその他のコーティングでスコア化又は調製されてもよい。また、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム、及び／又はマイクロスフェアを、所望の放出プロファイルを実現するような様々な割合で用いて、活性成分の徐放又は制御放出を実現するように製剤化されてもよい。例えば凍結乾燥させて、迅速に放出するように製剤化されてもよい。例えば、細菌保持フィルタによる濾過によって、又は滅菌水若しくは一部の他の滅菌注射可能な媒体中に使用直前に溶解させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌されてもよい。この組成物はまた、場合によっては乳白剤を含有してもよく、そして消化管のある部分において活性成分のみを、又は優先的に、場合によっては遅らせて、放出する組成物であってもよい。用いることができる埋込み組成物（ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の例として、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。また、活性成分は、適切な場合、先に記載される賦形剤の１つ以上と共に、ミクロカプセル化された形態であってもよい。
【００７２】
本発明の化合物の経口投与用の液体剤型として、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシルが挙げられる。活性成分に加えて、液体剤型は、当該技術において一般的に用いられている不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及び胡麻油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにそれらの混合物を含有してもよい。
【００７３】
不活性希釈剤の他に、経口組成物はまた、アジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味料、香味剤、着色剤、芳香剤、並びに保存剤を含んでもよい。
【００７４】
懸濁液は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、ミクロクリスタリンセルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、並びにトラガカントゴム、並びにそれらの混合物を含有してもよい。
【００７５】
本発明の医薬組成物に使用されてもよい適切な水性キャリア及び非水性キャリアの例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコール等）、及びそれらの適切な混合液、植物油、例えばオリーブ油、並びに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、コーティング材料、例えばレシチンの使用によって、分散系の場合に必要とされる粒子サイズの維持によって、そして界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【００７６】
この組成物はまた、アジュバント、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤を含有してもよい。対象化合物に及ぶ微生物の作用の予防が、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸（ｐｈｅｎｏｌ  ｓｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）の包含によって確実にされてもよい。また、等張剤、例えば糖及び塩化ナトリウム等を組成物中に含むことが所望されてもよい。
【００７７】
本発明の化合物は、医薬としてヒト及び動物に投与される場合、それ自体が与えられてもよいし、薬学的に許容されるキャリアと組み合わせて、例えば、０．１〜９９％（より好ましくは１０〜３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えられてもよい。
【００７８】
本発明の化合物（適切な水和形態で用いられてもよい）、及び／又は本発明の医薬組成物は、当業者に知られている従来の方法によって、薬学的に許容される剤型に製剤化される。
【００７９】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与モードについて、患者に有毒であることなく、所望の治療応答を達成するのに有効である活性成分の量が得られるように変化してもよい。
【００８０】
選択された投薬量レベルは、使用される本発明の特定の化合物、又はそのエステル、塩、若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されることとなる特定の化合物の排泄又は代謝の速度、吸収の速度及び程度、処置の継続期間、使用される特定の化合物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物、及び／又は材料、処置されることとなる患者の年齢、性別、体重、症状、健康状態、及び先の病歴、並びに医術において周知であるような要因が挙げられる、種々の要因によって決まることとなる。
【００８１】
当該技術の通常の技能を有する医師又は獣医であれば、必要とされる医薬組成物の有効な量を容易に決定且つ処方することができる。例えば、医師又は獣医であれば、所望の治療効果を達成し、且つ、所望の効果が達成されるまで、投薬量を徐々に増大させるのに必要とされるよりも低いレベルにて、医薬組成物中で使用される本発明の化合物の用量をスタートさせることができるであろう。
【００８２】
一般に、本発明の組合せの適切な一日用量は、治療効果をもたらすのに有効な、最も低い用量である各化合物の量となるであろう。そのような有効量は、通常、先に記載される要因によって決まることとなる。
【００８３】
別の態様において、本発明は、１つ以上の薬学的に許容されるキャリア（添加物）及び／又は希釈剤と一緒に製剤化された、先に記載される、治療的に有効な量の１つ以上の対象化合物を含む、薬学的に許容される組成物を提供する。
【実施例】
【００８４】
ＬＳＺ１０２及びリボシクリブ
（Ｅ）−３−（４−（（２−（２−（１，１−ジフルオロエチル）−４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）オキシ）フェニル）アクリル酸（ＬＳＺ１０２）を、国際公開第２０１４／１３０３１０号パンフレットの実施例１３９に従って合成する。７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド（リボシクリブ）を、国際公開第２０１０／０２０６７５号パンフレットの実施例７４に従って合成する。
【００８５】
本明細書中に記載されるＬＳＺ１０２及びリボシクリブの有用性を、以下の実施例における試験によって明示することができる。
【００８６】
実施例１
ＬＳＺ１０２は、ＭＣＦ−７細胞におけるＥＲ性能低下を促進する
ウェスタンブロット。有効性研究の終了時の、ＭＣＦ−７腫瘍におけるＥＲαタンパク質レベルに及ぼすＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの分析のために、急速凍結した腫瘍を粉々にして粉末にしてから、Ｌｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｔｕｂｅ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｃａｔ．＃６９１３−５００）に移して、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｉｎｉ（１タブレットを１０ｍＬに）を含有する低温溶解バッファ（１×細胞溶解バッファ；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｃａｔ．＃９８０３Ｓ）、ＰｈｏｓＳｔｏｐ（１タブレットを１０ｍＬに、そして１Ｍ尿素）と混合して、Ｆａｓｔ  Ｐｒｅｐ  ２４  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｌｙｓｅｒ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）によってホモジナイズした。溶解液の総タンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、Ｐｒｏｄ  ＃２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって、メーカーの使用説明書に従って試験した。溶解液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離して、膜上に移してから、抗ＥＲα抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＨＣ−２０）、及びローディング対照としての抗チューブリン抗体を用いて、イムノブロッティングした。イムノブロッティングしたバンドの定量化のために、ウェスタンブロットをスキャンした。残ったＥＲαのパーセントを、処置したマウス由来の腫瘍対ビヒクル対照群由来の腫瘍の比較によって求めた。図１は、ＬＳＺ１０２が、フルベストラント及びタモキシフェンと比較して、ＭＣＦ−７細胞におけるＥＲ性能低下を促進すること、ＬＳＺ１０２によるＥＲ性能低下が、等しい濃度にてフルベストラントと類似すること、そしてＥＲ性能低下に及ぼす効果が、ＭＣＦ−７細胞において、タモキシフェンにより観察されなかったことを実証している。
【００８７】
ＭＣＦ−７増殖アッセイ。成長因子枯渇ＭＣＦ−７細胞を、９６ウェルプレート内でＣＳＳ培地中に播種した（１０，０００細胞／ウェル）。一晩のインキュベーションの後、エストラジオール（０．１ｎＭ）の存在下で６日間、細胞を化合物で処理した。次に、細胞生存度を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって測定した。
【００８８】
細胞増殖アッセイにおいて、ＬＳＺ１０２は、ＭＣＦ−７細胞の成長を、０．７ｎＭのＩＣ５０で阻害した。そして、１０μＭにてＥＲ−ＭＤＡ−ＭＢ４６８細胞の成長に及ぼす効果はなかった。このことは、高い用量であっても、ＬＳＺ１０２は、ＥＲを欠いている細胞に影響を与えなかったことを示唆している。ＬＳＺ１０２は、成長因子駆動増殖アッセイ（インスリンは細胞増殖を駆動するが、エストロゲンはそうでない）を用いて実証されるように、強力なＳＥＲＤである。このアッセイは、ＳＥＲＭタモキシフェンによって影響されないが、ＳＥＲＤフルベストラントによって阻害される。ＭＣＦ−７細胞株を用いたインスリン駆動増殖アッセイにおいて、ＬＳＺ１０２は、細胞の成長を、フルベストラントよりもよく、６ｎＭのＩＣ５０で阻害した。
【００８９】
実施例２
ＭＣＦ−７親細胞及びＹ５３７Ｓ細胞におけるＬＳＺ１０２抗増殖活性及びＥＲ性能低下活性
単剤としてのＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの効果を、ＭＣＦ−７親細胞（野生型又はＷＴ）及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞において研究した。ＭＣＦ−７  ＷＴ細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞を、ＲＰＭＩ（フェノールレッドなし）プラス１０％チャコールデキストラン−ストリップド血清中でインキュベートして、０．１ｎＭエストラジオールの存在下（ＷＴ）で、又はエストラジオールなし（Ｙ５３７Ｓ）で、化合物の濃度を漸増させて処理した。化合物処理の７日後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイによって細胞生存度を求めた。ＥＲＥ−ルシフェラーゼアッセイのために、２４時間後にＢｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏアッセイを用いて、細胞ルシフェラーゼシグナルを測定した。ＩＣ５０は、ＣＴＧシグナルの５０％を５０％阻害する化合物濃度である。ＩＣ５０ナノモル（ｎＭ）値を、ＸＬｆｉｔソフトウェアを用いて算出して、近似阻害曲線の変曲点として定義する。ＭＣＦ−７  ＷＴ細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞におけるＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンの抗増殖活性についての結果を、表１に示す。
【００９０】
【表１】
2021503448.tif 000005
【００９１】
ＭＣＦ−７  ＷＴ細胞において、ＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンによる細胞増殖の阻害は、類似していた。ＬＳＺ１０２は、ＭＣＦ−７  ＷＴ細胞における細胞増殖を、５．２ｎＭのＩＣ５０にて阻害する一方、フルベストラントは２．６ｎＭにて、そしてタモキシフェンは４．５ｎＭにて細胞増殖を阻害することが見出された。ＭＣＦ−７  Ｙ５３７Ｓ突然変異細胞において、ＬＳＺ１０２による細胞増殖の阻害は、３つの中で最も強力であった。ＬＳＺ１０２は、ＭＣＦ−７  Ｙ５３７Ｓ突然変異細胞において、２７．０ｎＭのＩＣ５０にて細胞増殖を阻害する一方、フルベストラントは５３．０ｎＭにて、そしてタモキシフェンは６０．１ｎＭにて細胞増殖を阻害することが見出された。３つの全ての化合物は、ＭＣＦ−７  ＷＴからＹ５３７Ｓ突然変異まで、ＩＣ５０有効性の推移があった一方、ＬＳＺ１０２は、最も少なく推移して、試験した３つの化合物の中で最も強力な活性を保持した。
【００９２】
ＰＣＲ分析。ＬＳＺ１０２で処理したＭＣＦ−７  ＷＴ細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞由来のｍＲＮＡを単離して、ＥＲ標的遺伝子発現についてのｑＲＴ−ＰＣＲ分析にかけた（図２Ａ及び図２Ｂ）。標準的なＥＲ標的遺伝子ＧＲＥＢ１及びＰＧＲのｍＲＮＡレベルを、ＥＲそれ自体に及ぶＬＳＺ１０２の効果についての対照としてのＥＲ（ＥＳＲ１）のｍＲＮＡ発現に対して測定して、この効果が、ＥＲ  ｍＲＮＡレベルに及ぶ効果に起因しておらず、その代わりとしてＥＲタンパク質レベルに及ぶものに起因することを確実にした。ＬＳＺ１０２は、ＭＣＦ−７  ＷＴ細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞におけるＧＲＥＢ１及びＰＧＲ双方のｍＲＮＡ発現について、用量応答阻害を示した。効果は、ＷＴ細胞においてより顕著であったが、高い濃度にて、ＧＲＥＢ１及びＰＧＲの発現は、大きく引き下げられた。これに対して、ＥＳＲ１  ｍＲＮＡレベルは、どちらの細胞株においても大きく引き下げられなかった。
【００９３】
イムノブロット分析。ＭＣＦ−７親細胞及びＹ５３７Ｓ突然変異細胞を、１０％チャコールデキストランストリップド血清を有するフェノールレッドフリーＲＰＭＩ培地中で継続的に（Ｙ５３７Ｓ突然変異）、又は３日間（親）増殖させてから、単剤としてのＬＳＺ１０２、フルベストラント、及びタモキシフェンで２４時間処理した。抽出した細胞溶解液を、ＥＲαタンパク質定量化のためのイムノブロット分析（図３）にかけた。ＭＣＦ−７親細胞において、ＬＳＺ１０２及びフルベストラントは双方とも、用量応答の全体にわたって、ＥＲタンパク質レベルを大きく引き下げている。ＭＣＦ−７  Ｙ５３７Ｓ突然変異細胞において、ＬＳＺ１０２は、用量の全体にわたってＥＲタンパク質レベルを激減させたが、フルベストラントは、何らかの効果を有するように見えなかった。
【００９４】
実施例３
ＮＳＧマウスのＭＣＦ−７異種移植モデル
エストロゲン応答ＥＲ陽性（ＥＲ＋）ＭＣＦ−７細胞株は、ＬＳＺ１０２に対してインビトロ感受性であることが示された。ＮＯＤ  ｓｃｉｄ  ｇａｍｍａ（ＮＳＧ）マウスの同所性ＭＣＦ−７異種移植モデルにおける標的抗腫瘍活性を実証するために、１、３、１０、及び２０ｍｇ／ｋｇのＬＳＺ１０２を、マウス１頭あたり、１日１回（ＱＤ）経口投与し（ＰＯ）、加えて、陽性対照として、５ｍｇのフルベストラントを１週間に１回（Ｑｗｅｅｋ）皮下投与し（ＳＣ）、そして６０ｍｇ／ｋｇのタモキシフェンを、１週あたり５日間、１日１回経口投与した（ＰＯ）。細胞移植の数日前に、マウスにエストラジオール（０．７２ｍｇエストラジオール／９０日放出ペレット）を補充して、ＭＣＦ−７腫瘍成長をさらに支持した。各マウスの腋窩乳腺脂肪パッド領域中への５０％マトリゲル（登録商標）中１０×１０６細胞の注射によって、雌ＮＳＧマウスにおいてＭＣＦ−７腫瘍を確立した。腫瘍が平均２００ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍容積に従って処置群（ｎ＝８）にランダム化した。ＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける４８日目での腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表２に示す。
【００９５】
【表２】
2021503448.tif 000006
【００９６】
ＬＳＺ１０２処置は、用量依存的抗腫瘍効力をもたらし（図４）、最大活性は、２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの用量で処置したマウスにおいて観察され、対照に対する腫瘍容積の平均変化（ΔＴ／ΔＣ）のパーセンテージが２．４％（４８日目、ｐ＜０．０５）に相当した。２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの用量にて、腫瘍停滞が達成されて、４８日間維持された。１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ用量はまた、有意に有効であった（ΔＴ／ΔＣ＝２５％、ｐ＜０．０５）一方、１及び３ｍｇ／ｋｇ  ＱＤ用量は、有意に有効ではなかった（％ΔＴ／ΔＣがそれぞれ５１％及び５６％）。対照として用いたタモキシフェン及びフルベストラントはそれぞれ、腫瘍停滞及び成長の抑制を誘導した。
【００９７】
実施例４
ＮＳＧマウスのＥＲ＋原発性乳癌モデルＨＢＲＸ１２９８
エストロゲンに感受性であるＥＲ＋原発性乳癌モデルＨＢＲＸ１２９８を、ＮＳＧマウスにおいて、以下の条件下で試験した：ＬＳＺ１０２  ２０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、ＬＳＺ１０２  ８０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、タモキシフェン４０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、フルベストラント５ｍｇ／マウスを毎週ＳＣ、ビヒクル対照、及びエストラジオール持続放出性ペレットを除いた対照（図５）。ＨＢＲＸ１２９８乳癌異種移植モデルにおける６３日目での腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表３に示す。
【００９８】
【表３】
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【００９９】
鼠径部乳腺脂肪パッド領域中への腫瘍ブライ（ｔｕｍｏｒ  ｂｒｅｉ）の注射によって、ＮＳＧ雌マウスにおいてＨＢＲＸ１２９８腫瘍を確立した。細胞移植の数日前に、マウスに、０．７２ｍｇエストラジオール／９０日放出ペレットを注入した。腫瘍がおおよそ２５０ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍容積に従って３８日目に処置群（エストラジオールなしのｎ＝４以外、全てｎ＝６）にランダム化した。ＬＳＺ１０２の２０及び８０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの用量にて、効力利益があった。ＬＳＺ１０２の８０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの用量は、ビヒクル処置された対照に対して、統計学的に有意な効力を、そして、エストラジオールペレットを除いたマウスにおいて見られたのと匹敵する効力を示した。８０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤの用量は、腫瘍容積を、エストラジオールペレットを除いたマウスにおいて観察される程度に阻害した（％ΔＴ／ΔＣ＝それぞれ３２％及び２１％；ｐ＜０．０５）。
【０１００】
実施例５
ＮＳＧマウスのＹ５３７Ｓ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデル
Ｙ５３７Ｓ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデルを、ＮＳＧマウスにおいて、以下の条件下で試験した：ＬＳＺ１０２  ２０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、ＬＳＺ１０２  ８０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、フルベストラントを５ｍｇ／マウスにて毎週ＳＣ、及びビヒクル対照（図６）。Ｙ５３７Ｓ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデルにおける７０日目での腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表４に示す。
【０１０１】
【表４】
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【０１０２】
ＭＣＦ−７細胞株を、ＣＲＩＳＰＲ技術を用いて、固有の野生型官能ＥＲ及びノックイン突然変異Ｙ５３７Ｓ  ＥＲをノックアウトするように操作した。各卵巣切除雌ＮＳＧマウスの腋窩乳腺脂肪パッド領域中に、５０％マトリゲル（登録商標）中１０×１０６細胞を移植した。腫瘍が平均２５０ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍容積に従って処置群にランダム化した。
【０１０３】
２０及び８０ｍｇ／ｋｇでの毎日のＬＳＺ１０２処置は、Ｙ５３７Ｓ  ＥＲ発現ＭＣＦ−７異種移植片に復帰（ｒｅｇｒｅｓｓ）し、ＥＲのこの突然変異形態を発現する乳癌における活性を実証した一方、フルベストラントは、統計学的に有意な効力に達しなかった。
【０１０４】
実施例６
ＮＳＧマウスのＤ５３８Ｇ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデル
Ｄ５３８Ｇドキシサイクリン誘導性のＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデルを、ＮＳＧマウスにおいて、以下の条件下で試験した：ＬＳＺ１０２  ８０ｍｇ／ｋｇをＱＤ  ＰＯ、フルベストラント５ｍｇ／マウスを毎週ＳＣ、及びビヒクル対照（図７Ａ）。Ｄ５３８Ｇ  ＥＲ突然変異ＭＣＦ−７乳癌モデルにおける７４日目での腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表５に示す。
【０１０５】
【表５】
2021503448.tif 000009
【０１０６】
ＭＣＦ−７細胞株を、ドキシサイクリンによって誘導されるプロモータで、Ｄ５３８Ｇ突然変異ＥＲを発現するように操作した。各卵巣切除雌ＮＳＧマウスの腋窩乳腺脂肪パッド領域中に、５０％マトリゲル（登録商標）中１０×１０６細胞を移植した。細胞移植の８日後に、マウスは、食事を介してドキシサイクリンを受けた。腫瘍が平均２５０ｍｍ３に達したときに、マウスを、腫瘍容積に従って処置群にランダム化した。
【０１０７】
毎日の８０ｍｇ／ｋｇ  ＬＳＺ１０２は、Ｄ５３８Ｇ  ＥＲ発現ＭＣＦ−７異種移植片に復帰し、ＥＲのこの突然変異形態を発現する乳癌における活性を実証した一方、フルベストラントもまた活性があった。
【０１０８】
効力の終了時に、ウェスタンブロット分析に用いるために、タンパク質を腫瘍から単離した（図７Ｂ）。膜を、抗ＥＲ又は抗ヘマグルチニン（ＨＡ）抗体で免疫染色した。というのも、突然変異ＥＲタンパク質をＨＡでタグ付けしたからである。また、ローディング対照として供給するために、β−アクチンについて、膜を染色した。また、ＬＳＺ１０２の投薬の２週後に収集した腫瘍由来の一セットのタンパク質サンプルも含めた。サンプルは、このＤ５３８Ｇ突然変異ＥＲタンパク質の性能低下を示す。
【０１０９】
実施例７
ＭＣＦ−７異種移植片を有するマウスにおけるＬＳＺ１０２の用量分割研究
ＭＣＦ−７異種移植片を有するマウスにおける、ＱＤ投薬対毎日二回の分割用量（ＢＩＤ）投薬の効果を評価するためのＬＳＺ１０２の用量分割研究は、等しい効力を示した。このことは、総曝露によってＬＳＺ１０２が駆動されることを示唆している（図８Ａ）。６１日目のＭＣＦ−７乳癌異種移植モデルにおける腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表６に示す。
【０１１０】
【表６】
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【０１１１】
６１日目の最終処置の後、２４時間後に収集した腫瘍は、２４時間の用量間隔の間、用量レベルが高いほど、ＥＲ調節転写産物ＧＲＥＢ１及びＰＧＲのｍＲＮＡレベルの阻害が僅かに強くなるが、ＱＤ投薬とＢＩＤ分割用量間のＰＤは、同じであったことを示した（図８Ｂ）。データを、個々の動物についてプロットして、ベータ−２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の発現に対して標準化する。
【０１１２】
実施例８
マウスのＥＲ＋ＭＣＦ−７乳癌モデルにおける、リボシクリブと組み合わせたＬＳＺ１０２
ＬＳＺ１０２及びリボシクリブの、組合せとしての効力を、マウスの同所性ＭＣＦ−７乳癌モデルにおいて試験した（図９）。１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤでのＬＳＺ１０２の、そして７５ｍｇ／ｋｇ  ＱＤでのリボシクリブの単剤の処置において、それぞれ、腫瘍成長阻害（％ΔＴ／ΔＣは１０％及び１９％）を観察した。驚くべきことに、２つの組合せは、２８％の腫瘍退縮を誘導した。７０日目のＭＣＦ−７乳癌モデルにおける腫瘍応答に及ぼす処置の効果を、表７に示す。
【０１１３】
【表７】
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【０１１４】
実施例９
ＭＣＦ−７細胞におけるＬＳＺ１０２の、リボシクリブとの組合せ
増殖アッセイ。ＭＣＦ−７細胞を、ＲＰＭＩ培地プラス１０％完全血清培地中で培養して、化合物をチェッカーボード設計で組み合わせて、濃度を漸増させて処理した。細胞生存度を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイによって判定して、化合物処理の７日後に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）対照に対して標準化した。成長阻害及び過剰阻害のパーセントを、Ｃｈａｌｉｃｅソフトウェア（ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）を用いて分析した。データを、Ｌｏｅｗｅアルゴリズムで得た。これは、用量マトリックスの全体にわたって、重み付けされた「相乗効果スコア」を算出し、これは、用量サンプリング及びカバー率について調整し、且つ高い阻害レベルにて組合せ効果を支持する（ｆａｖｏｒ）ように重み付けする（Ｌｅｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。相乗効果スコア及びアイソボログラムを生成して、組合せ強度を定量化した（図１０）。自己−クロス（ｓｅｌｆ−ｃｒｏｓｓ）（自己による薬物（ｄｒｕｇ−ｗｉｔｈ−ｓｅｌｆ）；理論上の相乗効果スコアは０）内で見られる相乗効果スコアの変動と比較したときに、２よりも高い相乗効果スコアを有意と考えた（Ｌｅｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。過剰な阻害を、Ｌｏｅｗｅ相乗効果モデルを用いて算出した。これは、成長に及ぼす効果を、２つの薬物が用量相加的に挙動すると予想されたものに対して測定する。正数は、相乗効果の増大領域を表す。抗増殖性の相乗効果が、ＭＣＦ−７細胞において、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブの組合せによりインビトロで観察された（相乗効果スコア＝３．８）。これらの結果は、ＥＲ陽性乳癌の処理における、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブの組合せについての潜在的な役割を、堅固に支持している。
【０１１５】
実施例１０
進行した、又は転移性のＥＲ＋乳癌の患者におけるＬＳＺ１０２±リボシクリブのフェーズＩ／Ｉｂ研究
第１の目的は：用量制限毒性（ＤＬＴ）及び有害事象（ＡＥ）が挙げられる主要エンドポイントによって安全性及び耐容性を特徴付けること；そして、ＬＳＺ１０２のみの、且つ／又はリボシクリブと組み合わせての、推奨される用量及びレジメンを同定することである。第２の目的は、予備的抗腫瘍活性を評価すること、そして、全奏効率（ＯＲＲ）、応答期間（ＤＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、薬物動態（ＰＫ）、及び薬力学（ＰＤ）を見ることである。
【０１１６】
資格がある患者（≧１８歳）は、転移性の、若しくは局所的に進行した疾患のための内分泌療法後に進行した、又はアロマターゼ阻害剤によるアジュバント処置の終了の１２ヵ月目に、若しくは１２ヵ月以内にありながら、再発した、組織学的に確立されたＥＲ＋乳癌を有する。
【０１１７】
研究中の全患者を、絶食条件下でＬＳＺ１０２により処置した。研究の用量漸増部において、患者は、２００ｍｇの開始用量に続く、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、６００ｍｇ、及び９００ｍｇの単剤の漸増（ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ａｒｍ）用量にて、１日１回（ＱＤ）の経口ＬＳＺ１０２を受けた。２０１７年８月２８日現在、４５人の患者を、以下の用量群において処置した：ＬＳＺ１０２の２００ｍｇ  ＱＤ（ｎ＝４）、４００ｍｇ  ＱＤ（ｎ＝６）、４５０ｍｇ  ＱＤ（ｎ＝１３）、６００ｍｇ  ＱＤ（ｎ＝１６）、及び９００ｍｇ  ＱＤ（ｎ＝６）。中央年齢は６０．０歳であり、６７％は、ＥＣＯＧ性能状態がゼロであり、そして６０％は、先にフルベストラント治療を受けていた。２０１７年８月２８日現在、３４／４５（７６％）の患者は、主に疾患の進行に起因して（３１／３４の患者）、処置を中断した。これらの患者のベースライン特性及び動態（ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）を、以下の表８及び表９においてそれぞれ詳述する。
【０１１８】
【表８】
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【０１１９】
【表９】
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【０１２０】
用量制限毒性（ＤＬＴ）は、ＬＳＺ１０２の６００ｍｇ  ＱＤ（嘔吐；ｎ／Ｎ＝１／１６［６％］）群及び９００ｍｇ  ＱＤ（下痢；ｎ／Ｎ＝２／６［３３％］）群に存在した消化管障害であった。ＤＬＴは、２００〜４５０ｍｇ  ＱＤ用量群の２３人の患者において、報告されなかった。
【０１２１】
最も一般的な（≧２５％）薬物関連有害事象（ＡＥ）は、下痢（６２％）、吐き気（５６％）、及び嘔吐（２７％；表３）であった。薬物関連グレード（Ｇｒ）３のＡＥは、稀にしか報告されず：下痢（３人の患者［７％］）、吐き気（２人の患者［４％］）、嘔吐及び貧血（双方とも１人の患者［２％］）、そして薬物関連Ｇｒ  ４のＡＥは、報告されなかった（表１０）。
【０１２２】
合計６／４５人の患者（１３％）は、用量引下げを必要とした；これは、ＬＳＺ１０２の９００ｍｇ  ＱＤを受けた４人の患者（２人の患者がＧｒ  ３の下痢、１人の患者がＧｒ  ２の吐き気、そして１人の患者がＧｒ  ３の吐き気）、ＬＳＺ１０２の６００ｍｇ  ＱＤを受けた１人の患者（Ｇｒ  ３の嘔吐）、及びＬＳＺ１０２の４５０ｍｇ  ＱＤ（Ｇｒ  ２の吐き気及びＧｒ  ２の嘔吐）を受けた１人の患者を含んだ。
【０１２３】
【表１０】
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【０１２４】
＊４００及び４５０ｍｇの用量についての安全性データを、類似のＰＫプロファイルに基づいて組み合わせた。一処置下でＤＬＴが複数出現した患者は、その処置についての有害事象カテゴリーにおいて、１回だけカウントする。主要な器官別大分類（ｓｙｓｔｅｍ  ｏｒｇａｎ  ｃｌａｓｓ）内でＤＬＴが複数の患者は、集計行（ｔｏｔａｌ  ｒｏｗ）において、１回だけカウントする。
【０１２５】
合計６人の患者が、＞６ヵ月間研究処置され続けた；これらのうち５人の患者は、先にフルベストラントによる処置を受けていた。腫瘍がＥＳＲ１  Ｄ５３８Ｇ突然変異を有していた１人の患者は、先に９つの治療を受けており、進行前の１２０日間のフルベストラント、及び進行前の９４日間のレトロゾール＋パルボシクリブが挙げられる。
【０１２６】
抗腫瘍活性の予備的証拠が、単剤ＬＳＺ１０２で観察され、疾患制御率は３３％であった（表１１）。
【０１２７】
【表１１】
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【０１２８】
予備的ＰＫパラメータは、ＬＳＺ１０２が迅速に吸収されたことを実証している（中央Ｔｍａｘ２〜３時間）。Ｇｅｏｍｅａｎ累積半減期は、５〜１１時間であることが観察された。単剤ＬＳＺ１０２の曝露は、用量に比例して増大するように見える。ＡＵＣ及びＣｍａｘは、１日目及び定常状態で、概して匹敵した。このことは、薬物の蓄積の不在を示唆している。曝露レベルは、ＬＳＺ１０２の２０ｍｇ／ｋｇの用量での３５１０ｈ＊ｎｇ／ｍＬの、ＭＣＦ−７マウス異種移植モデルにおける臨床前有効曝露をかなり超えていた。全ての用量レベルにて達成されたＬＳＺ１０２曝露は、臨床前モデルにおける有効曝露を超えている。６００ｍｇ  ＱＤの、候補となる絶食での展開推奨用量（ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆａｓｔｅｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  ｄｏｓｅ  ｆｏｒ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）（ＲＤＥ）を同定した。そして、継続中の研究がさらに、ＬＳＺ１０２  ＰＫに及ぼす食物の影響を探究している。臨床データ（ｎ＝７ペア）は、食物による曝露の増大を示し、中央ＡＵＣ増大が１．７倍である。
【０１２９】
経口単剤ＬＳＺ１０２は、忍容性が良好であり、安全性プロファイルが管理可能であるように思われる。抗腫瘍活性の予備的証拠は、フルベストラント及びＣＤＫ４／６インヒビタで以前に処置された患者が挙げられる、かなり前処置されたＥＲ＋乳癌患者において見られた。６人の患者が、＞６ヵ月間研究処置され続けた。この全員が、≧６の治療経験（６〜１１の範囲）があった。
【０１３０】
臨床試験は、ＬＳＺ１０２及びリボシクリブの組合せについて、継続中であり、リボシクリブを２１日間、３００ｍｇ、その後７日間の処置なしを、ＬＳＺ１０２の２００ｍｇ（ｎ＝５）、４００ｍｇ（ｎ＝５）、又は６００ｍｇ（ｎ＝４）と組み合わせて経口投与（絶食）する。より高用量（４００ｍｇ）のリボシクリブを２１日間、その後７日間の処置なしを、ＬＳＺ１０２の４００ｍｇ（ｎ＝４）と組み合わせて経口投与（絶食）する。２０１７年１０月９日現在のデータ。また、リボシクリブを、３００ｍｇ（ｎ＝６）にて、ＬＳＺ１０２の４５０ｍｇと組み合わせて経口投与（絶食）する。臨床データに基づいて、組合せは、忍容性が良好であり、且つ活性がある。
【０１３１】
本明細書中に記載される実施例及び実施形態は、説明を目的とするだけであり、それらを考慮した種々の修飾又は変更が、当業者に示唆されているであろうこと、そして本出願及び添付の特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれ得ることが理解される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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