(57)【要約】  本開示は、既存の結合相互作用を最小化するために、結合分子を改変することに向けられたものであり、薬物非特異的な結合相互作用により引き起こされる試料基質中のバックグラウンド反応性を最小化する又は緩和するように操作された結合分子を含む。【選択図】図４
2021531245.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非天然のモノクローナル抗体であって、配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択される配列を含むＣ末端重鎖配列又はその抗原結合部分を含む、非天然のモノクローナル抗体。
【請求項２】
前記Ｃ末端重鎖配列は、ＣＨ３ドメイン配列である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記Ｃ末端重鎖配列は、配列番号７を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項４】
前記Ｃ末端重鎖配列は、配列番号１３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項５】
前記Ｃ末端重鎖配列は、配列番号８を含むＣＨドメイン配列を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項６】
前記Ｃ末端重鎖配列は、配列番号２２を含むＣＨドメイン配列を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
非天然のモノクローナル抗体であって、当該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＨ３ドメイン、又はその抗原結合部分を含む、非天然のモノクローナル抗体。
【請求項９】
抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、又はその抗原結合部分を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ１領域を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ２領域を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ＩｇＧ４  ＣＨ２領域は、ヒンジ領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記ヒンジ領域は、ＡＰＥＦＬＧ（配列番号１７）の配列を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
当該抗体は、免疫原性の解析中の高いバックグラウンドシグナルを緩和する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相と、
（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、請求項１から１４のいずれか一項に記載の第１の非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの捕捉試薬と、
（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、請求項１から１１のいずれか一項に記載の第２の非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの検出試薬と、を含む、アッセイであって、
前記第１の成分及び前記第２の成分は、互いに対して選択的に結合する、アッセイ。
【請求項１６】
前記検出試薬は、デュピルマブを含む、請求項１５に記載のアッセイ。
【請求項１７】
前記第２の非天然のモノクローナル抗体は、デュピルマブを含む、請求項１５又は請求項１６に記載のアッセイ。
【請求項１８】
前記第１の成分は、ストレプトアビジンを含む、請求項１５から１７のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１９】
前記第２の成分は、ビオチンを含む、請求項１５から１８のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２０】
（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相と、
（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、請求項１から１４のいずれか一項に記載の前記非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの捕捉試薬と、
（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、デュピルマブを含む、少なくとも１つの検出試薬と、を含む、アッセイであって、
前記第１の成分及び前記第２の成分は、互いに対して選択的に結合する、アッセイ。
【請求項２１】
前記第１の成分は、ストレプトアビジンを含む、請求項２０に記載のアッセイ。
【請求項２２】
前記第２の成分は、ビオチンを含む、請求項２０又は２１に記載のアッセイ。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの捕捉試薬は、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合するものではない抗体を結合しない、請求項２０から２２のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの捕捉試薬及び前記少なくとも１つの検出試薬は、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合する抗体に結合する、請求項２０から２２のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２５】
対象におけるモノクローナル抗体療法の免疫原性のレベルを決定する方法であって、当該方法は、
（ａ）生体試料中の少なくとも１つの抗体が少なくとも１つの捕捉試薬と及び少なくとも１つの検出試薬に結合できるのに好適な条件下で、対象からの生体試料を請求項１５から２４のいずれか一項に記載のアッセイと接触させることであって、該対象は、この接触させるステップの前に前記モノクローナル抗体療法を施与されていたものである、当該接触させることと、
（ｂ）前記少なくとも１つの検出試薬からのシグナルを検出することと、
（ｃ）（ｂ）からの前記シグナルが閾値を超える場合に、前記対象の免疫原性のレベルを高と特定すること、又は
（ｄ）（ｂ）からの前記シグナルが前記閾値を下回る場合に、前記対象の免疫原性のレベルを低と特定することとを含む、方法。
【請求項２６】
前記モノクローナル抗体療法は、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記モノクローナル抗体療法は、デュピルマブを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記閾値は、所定の値である、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記閾値は、安全閾値である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記モノクローナル抗体療法の分量は、治療有効量である、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
免疫原性のレベルは、ベースラインレベルである、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
免疫原性のレベルは、後続レベル（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｌｅｖｅｌ）である、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象は、臨床試験の参加者である、請求項２５から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象は、治療中の患者である、請求項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療は開始したところであり、かつ、免疫原性のレベルはベースラインレベルである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記治療は進行中であり、かつ、免疫原性のレベルは後続レベルである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記治療は終了するところであり、かつ、免疫原性のレベルは最終レベルである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象は、健常な個体である、請求項２５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象は、炎症性疾患もしくは炎症性障害、自己免疫性疾患もしくは自己免疫性障害、アレルギー性疾患もしくはアレルギー性障害、免疫性疾患もしくは免疫性障害、又は良性増殖性疾患もしくは良性増殖性障害である、請求項２５から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記対象は、アトピー性皮膚炎、ぜん息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ又はこれらの組み合わせである、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１８年７月１０日出願の米国仮出願第６２／６９５，９８８号の優先権及び利益を主張し、その内容は、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
配列表
本願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由でＡＳＣＩＩ形式で提出した配列表を含有し、その全体を参照によりここに援用する。２０１９年７月８日作成の当該ＡＳＣＩＩコピーは、名称を“ＲＥＧＥ−００４＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ”とし、サイズは３２，８１３バイトである。
【０００３】
本開示は、既存の結合相互作用を最小化するために、結合分子を改変することに向けられたものであり、薬物非特異的な結合相互作用により引き起こされる試料基質中のバックグラウンド反応性を最小化する又は緩和するように操作された結合分子を含む。
【背景技術】
【０００４】
生物学的療法は、対象の免疫系の成分を除去、補充、又は置換して疾患を治療するための有益な手段である。外来性の生物由来物質は、治療している対象から免疫応答を誘発する可能性を有する。当該免疫応答は、生物学的治療の施与が契機となることがある。しかしながら、対象は、生物学的治療の導入の前にシグナルを生成して、それによって抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイで試験したときに高いバックグラウンドレベル又はノイズレベルを生じるような、対象の血清タンパク質の成分を有することがある。
【０００５】
生物学的治療の開発および調査中に採用する標準アッセイは、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイである。このアッセイを用いて、対象の免疫系は施与された生物学的治療に対して抗体を産生したかどうかが検出される。有効なアッセイとするために、シグナル対ノイズ比は、有意義なデータが観察され解析され得るようでなければならない。ある対象では、治療下で発生する真のＡＤＡの検出は、バックグラウンドシグナルが原因で不明確になり、また有効なＡＤＡアッセイが希薄化するというように、何らかの生物学的治療の施与がなくとも、高いバックグラウンド（ノイズ）が既に存在している。
【０００６】
本発明の組成物及び方法では、一部のＡＤＡアッセイで観察される一部のヒトの血清又は血漿の試料中に存在する薬物非特異的な既存のバックグラウンド反応性を低減又は除去することへの道を提供する。この薬物非特異的な結合は、有効である治療の能力に干渉するかもしれず、もしくはしないかもしれず、又は循環中に残されたままかもしれず、もしくは残されていないかもしれないということも理解されなければならない。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、結合分子であって、該結合分子の投与前又は投与後のいずれにおける対象の試料中の薬物非特異的な既存のバックグラウンド反応性を緩和するように操作された当該結合分子に向けられる。本発明は、既存の結合相互作用を最小化するために、結合分子を改変することに向けられたものであり、薬物非特異的な結合相互作用により引き起こされる試料基質中のバックグラウンド反応性を最小化する又は緩和するように操作された結合分子を含む。
【０００８】
本開示は、１又は複数の特定の標的に対して特異的である結合分子をさらに提供する。一態様においては、本開示は、ＩＬ４Ｒα（インターロイキン４アルファ）又はＩＬ１３Ｒ（インターロイキン１３）に対して特異的である結合分子に向けられる。別の態様においては、本開示は、ＩｇＧ４抗体又はその断片に向けられる結合分子を提供する。本明細書で理解される結合分子は、特定の標的と特異的に相互作用する分子である。こうした結合分子の例としては、抗体（モノクローナル抗体を含む）及びその断片、操作された抗体、融合タンパク質、ならびに当業者に周知の他の同様の抗原結合分子が挙げられるが、これに限定されない。一態様においては、標的はＩＬ４Ｒαである。本発明の別の態様においては、Ｃ末端重鎖配列ＬＳＰＧ（配列番号２１）又はその抗原結合部分を含む非天然の結合分子を開示するが、当該分子は、薬物非特異的な結合相互作用によって引き起こされる、試料基質中のバックグラウンド反応性を最小化する又は緩和するように操作されている。
【０００９】
本開示は、Ｃ末端重鎖配列、配列番号２１又はその抗原結合部分を含む非天然の結合分子であって、既存の血清タンパク質との相互作用を緩和し、それによってＡＤＡ解析中の高いバックグラウンドシグナルを低減する、当該結合分子を提供する。
【００１０】
本発明のある実施形態においては、結合分子は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、及び配列番号８からなる群から選択されるＣＨドメイン配列又はその抗原結合部分を含む。ある実施形態においては、結合分子は、配列番号７、及び配列番号８からなる群から選択されるＣＨドメイン配列又はその抗原結合部分を含む。ある実施形態においては、結合分子は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＨドメインを含む。
【００１１】
本発明のある実施形態においては、結合分子は、切断型ＣＨドメイン（ＲＥＧＮ−Ｅ）を含むものであって、当該配列は配列番号２２である。
【００１２】
本開示の非天然の結合分子のある実施形態においては、結合分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに配列番号５、配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるＣＨ３ドメインを含む。
【００１３】
本発明のある実施形態においては、結合分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＨ３ドメインを含む。
【００１４】
本開示は、非天然の結合分子を提供するものであって、当該結合分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに配列番号５、又は配列番号６、又は配列番号７、又は配列番号２１、又は配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＨ３ドメインを含む。
【００１５】
本発明のある実施形態では、結合分子は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００１６】
本発明のある実施形態においては、結合分子は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ１領域を含む。
【００１７】
本発明のある実施形態においては、結合分子は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ２領域を含む。
【００１８】
本開示の非天然の結合分子のある実施形態においては、結合分子は、ヒンジ領域を含む。ある実施形態においては、ヒンジ領域は、ＡＰＥＦＬＧ（配列番号１７）の配列を含む。
【００１９】
本開示の非天然の結合分子のある実施形態においては、結合分子は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４定常領域を含む。
【００２０】
本開示は、（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相（ｓｏｌｉｄ  ｓｕｐｐｏｒｔ）と、（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、モノクローナル抗体等である第１の非天然の結合分子を含み、モノクローナル抗体等である当該第１の非天然の結合分子が、ＶＨ  ＣＤＲ１領域をコードする配列、ＶＨ  ＣＤＲ２領域をコードする配列、ＶＨ  ＣＤＲ３領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ１領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ２領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ３領域をコードする配列、及び重鎖定常領域をコードする配列を含み、また該重鎖定常領域は配列番号２１の配列を含むものである、少なくとも１つの捕捉試薬と、（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、モノクローナル抗体等である第２の非天然の結合分子を含むものであり、当該検出試薬をコードする配列は、（ｂ）の第１の非天然の結合分子の、ＶＨ  ＣＤＲ１領域をコードする配列、ＶＨ  ＣＤＲ２領域をコードする配列、ＶＨ  ＣＤＲ３領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ１領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ２領域をコードする配列、ＶＬ  ＣＤＲ３領域をコードする配列を含む、少なくとも１つの検出試薬と、を含むアッセイを提供するものであり、また第１の成分および第２の成分は、互いに対して選択的に結合するものである。
【００２１】
開示のアッセイのある実施形態においては、第１の非天然の結合分子は、重鎖可変領域をコードする配列及び軽鎖可変領域をコードする配列を含み、また第２の非天然の結合分子は、重鎖可変領域をコードする配列及び第１の非天然の結合分子の軽鎖可変領域をコードする配列を含む。
【００２２】
開示のアッセイのある実施形態においては、第１の非天然の結合分子は、配列番号７を含む重鎖定常領域をコードする配列を含む。
【００２３】
開示のアッセイのある実施形態においては、第１の非天然の結合分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む。
【００２４】
開示のアッセイのある実施形態においては、第１の非天然の結合分子は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００２５】
本発明の一実施形態においては、例えばデュピルマブなどのＩｇＧ４抗体のＣＨ３ドメインを、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインに変えている。さらなる実施形態においては、デュピルマブのようなＩｇＧ４抗体のＣＨ３ドメインは、切断されている。一態様においては、当該切断は、セリン４４４において生じる。
【００２６】
開示のアッセイのある実施形態においては、検出試薬は、デュピルマブを含む。ある実施形態においては、第２の非天然の結合分子は、デュピルマブを含む。
【００２７】
開示のアッセイのある実施形態においては、第１の成分は、ストレプトアビジンを含む。ある実施形態においては、第２の成分は、ビオチンを含む。
【００２８】
本開示は、（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相と、（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、本開示の非天然の結合分子又は本開示の組成物を含む、少なくとも１つの捕捉試薬と、（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、デュピルマブを含む少なくとも１つの検出試薬とを含む、アッセイを提供するものであって、第１の成分及び第２の成分は、互いに対して選択的に結合するものである。ある実施形態においては、第１の成分は、ストレプトアビジンを含む。ある実施形態においては、第２の成分は、ビオチンを含む。ある実施形態においては、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合するものではない結合分子は、少なくとも１つの捕捉試薬を結合しない。ある実施形態においては、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合する結合分子は、少なくとも１つの捕捉試薬及び少なくとも１つの検出試薬に結合する。
【００２９】
本開示は、対象における生物学的療法の免疫原性のレベルを決定する方法を提供するものであり、当該方法は、（ａ）生体試料中の少なくとも１つの結合分子が少なくとも１つの捕捉試薬と及び少なくとも１つの検出試薬に結合できるのに好適な条件下で、対象からの生体試料を本開示のアッセイと接触させることであって、該対象は、この接触させるステップの前に結合分子療法を施与されていたものである、当該接触させることと、（ｂ）少なくとも１つの検出試薬からのシグナルを検出することと、（ｃ）（ｂ）からのシグナルが閾値を超える場合に、対象の免疫原性のレベルを高と特定すること、又は（ｄ）（ｂ）からのシグナルが閾値を下回る場合に、対象の免疫原性のレベルを低と特定することと、を含む。
【００３０】
本発明のある実施形態は、生物学的療法の免疫原性のレベルを決定する方法に向けられるものであって、当該生物学的療法は、本明細書に記載の結合分子を含む。一態様においては、生物学的療法は、デュピルマブを含む。
【００３１】
本発明の特定の実施形態においては、生物学的療法の免疫原性のレベルを決定する方法を開示するものであって、閾値は、所定の値である。ある態様においては、閾値は、安全閾値である。
【００３２】
本発明のある実施形態においては、生物学的療法の分量は、治療有効量であって、治療有効量は、例えば本発明の結合分子である治療薬の、対象に投与されたときに意図した目的を達成するのに十分な量となる量である。
【００３３】
本発明の一部の実施形態においては、免疫原性のレベルは、ベースラインレベルである。ある態様においては、免疫原性のレベルは、後続レベル又は治療後レベルである。
【００３４】
本発明の他の実施形態においては、対象は、臨床試験の参加者である。一態様においては、対象は、治療中の患者である。別の態様においては、治療は開始したところであり、かつ、免疫原性のレベルはベースラインレベルである。さらに別の態様においては、治療は進行中であり、かつ、免疫原性のレベルは後続レベル（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｌｅｖｅｌ）である。さらにまた別の態様においては、治療は終了するところであり、かつ、免疫原性のレベルは最終レベルである。別の態様においては、対象は、健常な個体である。
【００３５】
本発明のさらに他の実施形態においては、対象は、炎症性疾患もしくは炎症性障害、自己免疫性疾患もしくは自己免疫性障害、アレルギー性疾患もしくはアレルギー性障害、免疫性疾患もしくは免疫性障害、又は良性増殖性疾患もしくは良性増殖性障害である。一態様においては、対象は、アトピー性皮膚炎、ぜん息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ、ＡＢＰＡ（アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、水疱性類天疱瘡、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ＨＦＥ（手足湿疹（Ｈａｎｄ  ａｎｄ  ｆｏｏｔ  ｅｃｚｅｍａ））、結節性痒疹、又は任意の２型炎症反応、又はこの組み合わせである。対象は、任意の病状又は医学的状態であり得る。
【００３６】
本開示は、配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択される配列を含むＣ末端重鎖配列又はその抗原結合部分を含む非天然のモノクローナル抗体を提供する。Ｃ末端重鎖配列は、ＣＨ３ドメイン配列であり得る。Ｃ末端重鎖配列は、配列番号７を含み得る。Ｃ末端重鎖配列は、配列番号１３を含み得る。Ｃ末端重鎖配列は、配列番号８を含むＣＨドメイン配列を含み得る。Ｃ末端重鎖配列は、配列番号２２を含むＣＨドメイン配列を含み得る。
【００３７】
配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択される配列からなるＣＨ３ドメイン又はその抗原結合部分を含む非天然のモノクローナル抗体である。
【００３８】
配列番号８及び配列番号２２からなる群から選択される配列からなるＣ末端重鎖配列又はその抗原結合部分を含む非天然のモノクローナル抗体である。
【００３９】
非天然のモノクローナル抗体であって、当該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるＣＨ３ドメイン、又はその抗原結合部分を含む。
【００４０】
先述の抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域をさらに含み得る。
【００４１】
本開示は、非天然のモノクローナル抗体を提供するものであって、当該抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；ＬＧＳのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域、ならびに配列番号５、配列番号６、配列番号７及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＨ３ドメイン、又はその抗原結合部分を含む。
【００４２】
先述の抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み得、又はその抗原結合部分を含み得る。先述の抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ１領域を含み得る。先述の抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩｇＧ４  ＣＨ２領域を含み得る。ＩｇＧ４  ＣＨ２領域は、ヒンジ領域を含み得る。ヒンジ領域は、ＡＰＥＦＬＧ（配列番号１７）の配列を含み得る。
【００４３】
本開示の抗体は、免疫原性の解析中の高いバックグラウンドシグナルを緩和することが可能である。
【００４４】
本開示は、（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相と、（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、本開示の第１の非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの捕捉試薬と、（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、本開示の第２の非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの検出試薬とを含む、アッセイを提供するものであって、第１の成分及び第２の成分は、互いに対して選択的に結合するものである。
【００４５】
検出試薬は、デュピルマブを含み得る。第２の非天然のモノクローナル抗体は、デュピルマブを含み得る。第１の成分は、ストレプトアビジンを含み得る。第２の成分は、ビオチンを含み得る。
【００４６】
本開示は、（ａ）第１の成分が操作可能に結合する固相と、（ｂ）第２の成分が操作可能に結合する少なくとも１つの捕捉試薬であって、本開示の非天然のモノクローナル抗体を含む、少なくとも１つの捕捉試薬と、（ｃ）検出可能な標識が操作可能に結合する少なくとも１つの検出試薬であって、デュピルマブを含む、少なくとも１つの検出試薬とを含む、アッセイを提供するものであって、第１の成分及び第２の成分は、互いに対して選択的に結合するものである。第１の成分は、ストレプトアビジンを含み得る。
【００４７】
第２の成分は、ビオチンを含み得る。
【００４８】
一部の態様においては、少なくとも１つの捕捉試薬は、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合するものではない抗体を結合しない。一部の態様においては、少なくとも１つの捕捉試薬及び少なくとも１つの検出試薬は、デュピルマブの可変領域の配列に対して特異的に結合する抗体に結合する。
【００４９】
本開示は、対象におけるモノクローナル抗体療法の免疫原性のレベルを決定する方法を提供するものであり、当該方法は、（ａ）生体試料中の少なくとも１つの抗体が少なくとも１つの捕捉試薬と及び少なくとも１つの検出試薬に結合できるのに好適な条件下で、対象からの生体試料を本開示のいずれかのアッセイと接触させることであって、該対象は、この接触させるステップの前にモノクローナル抗体療法を施与されていたものである、当該接触させることと、（ｂ）少なくとも１つの検出試薬からのシグナルを検出することと、（ｃ）（ｂ）からのシグナルが閾値を超える場合に、対象の免疫原性のレベルを高と特定すること、又は（ｄ）（ｂ）からのシグナルが閾値を下回る場合に、対象の免疫原性のレベルを低と特定することと、を含む。
【００５０】
モノクローナル抗体療法は、本開示の抗体を含み得る。
【００５１】
モノクローナル抗体療法は、デュピルマブを含み得る。閾値は、所定の値であり得る。閾値は、安全閾値であり得る。モノクローナル抗体療法の分量は、治療有効量であり得る。免疫原性のレベルは、ベースラインレベルであり得る。免疫原性のレベルは、後続レベルであり得る。
【００５２】
対象は、臨床試験の参加者であり得る。対象は、治療中の患者であり得る。治療は開始したところであり得、かつ、免疫原性のレベルはベースラインレベルであり得る。治療は進行中であり得、かつ、免疫原性のレベルは後続レベルであり得る。治療は終了するところであり得、かつ、免疫原性のレベルは最終レベルであり得る。対象は、健常な個体であり得る。対象は、炎症性疾患もしくは炎症性障害、自己免疫性疾患もしくは自己免疫性障害、アレルギー性疾患もしくはアレルギー性障害、免疫性疾患もしくは免疫性障害、又は良性増殖性疾患もしくは良性増殖性障害であり得る。対象は、アトピー性皮膚炎、ぜん息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ又はこの組み合わせであり得る。
【００５３】
上記態様のいずれかを、その他の態様と組み合わせることが可能である。
【００５４】
別段で規定しない限り、本明細書で用いる全ての技術的および科学的な語は、本開示が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。本明細書において、単数形はまた、別段で文脈で明示していない限り複数形を含むものであり、例えば、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」の語は、単数形又は複数形として理解するものであり、そして「又は（ｏｒ）」の語は、包括的であるものとして理解する。例えば、「（ある）要素」（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）は、１又は複数の要素を意味する。本明細書全体を通して、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の文言、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、示した要素、整数もしくはステップ、又は要素、整数もしくはステップの群の包含を意図しているものであるが、その他の要素、整数もしくはステップ又は要素、整数もしくはステップの群の除外は意図していないことが理解されるであろう。約（ａｂｏｕｔ）については、明示した値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％の範囲内として理解できる。別段に文脈から明らかでない限り、本明細書で提供する全ての数値は、「約」の語で修飾される。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイにおいて競合抗体コンストラクトを用いた、ベースラインの患者試料中の既存の反応性の特異性を特徴づけるプロットである。ｙ軸は、増分を２５とした０〜１００の阻害率である。Ｘ軸は、このブリッジングアッセイで用いた特異的な競合抗体コンストラクトであり、左から右に向かって、デュピルマブ、ＲＥＧＮ−Ａ、野生型ＩｇＧ４（ｗｔ  ＩｇＧ４）、野生型ＩｇＧ１（ｗｔ  ＩｇＧ１）、野生型ＩｇＧ２（ｗｔ  ＩｇＧ２）、野生型ＩｇＧ３（ｗｔ  ＩｇＧ３）、ＲＥＧＮ−Ｂ及びＲＥＧＮ−Ｃを列記している。６種の患者試料（Ｓ１〜Ｓ６）を、順に、円形、四角形、三角形、アスタリスク、ダイヤ、及び逆三角形で表す。このグラフで言及する抗体試薬は、ＡＤＡ確認アッセイフォーマットにおける競合阻害剤として２００μｇ／ｍＬで用いた。このアッセイにおいて高阻害率であることは、当該競合者が、これら試料中の既存のシグナルを阻害することができたことを示しており、当該競合分子は、既存の反応性が結合する領域を含有しているということを示唆する。低い方の阻害率であることは、競合分子は、既存の反応性が結合できる領域を含有していないことを示す。
【図２】図２は、３つの重要なコンストラクト、及びデュピルマブと比較した際のそれらの構造上の相違を図示した図である。ＲＥＧＮ−Ｂ、ＲＥＧＮ−Ｃ及びＲＥＧＮ−Ｅは、デュピルマブの分子類似体である。３つのコンストラクトは全て、抗ＩＬ４Ｒに対してデュピルマブと同じ特異性及び類似の親和性を有し、またデュピルマブに存在する同じＣＰＰＣヒンジ領域の変異配列を所有する、ＩｇＧ４ｋコンストラクトである。
【図３】図３は、野生型のＩｇＧ４、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２のサブタイプのアミノ酸配列ならびにＣＨ３ドメインの比較を図示した図である。４４５位のロイシンは、矢印で示すとおり、ＣＨ３ドメイン配列のＣ末端から３番目である。
【図４】図４は、薬物特異的なブリッジング（パネルＡ、ＡＤＡアッセイ＃１）、現在のＡＤＡアッセイにおける既存の反応性に起因する非薬物特異的なブリッジング（パネルＢ）、及び捕捉試薬としてＲＥＧＮ−Ｃを使用したことに起因する非薬物特異的なブリッジングなし（パネルＣ、ＡＤＡアッセイ番号２）を表す図を示す一実施形態である。プレート上のストレプトアビジンを、灰色の十字で示し、ビオチン部分を小さい黒四角形で示し、またルテニウム標識を星で示している。パネルＡ及びＢで、ビオチン化ＲＥＧＮ−Ｄ（デュピルマブ）捕捉試薬（黒い二又構造）が示されているが、パネルＣでは、ビオチン化ＲＥＧＮ−Ｃが示されている（黒白格子模様の二又構造）。パネルＢ及びＣでは、既存の反応性が、小さめの破線輪郭の二又構造で表されている。
【図５Ａ】図５Ａは、図４のパネルＡで図示される、捕捉試薬としてビオチン化ＲＥＧＮ−Ｄを用いた元来のＡＤＡアッセイ（アッセイ＃１）による、患者ベースライン試料のサブセットからのアッセイシグナルを示すプロットである。ｙ軸は、対数目盛での０〜１００のシグナル／ノイズ比である。ｘ軸は、個々の患者試料を、シグナル／ノイズ比の順で並べた。カットポイントを、破線で示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、図４のパネルＣで図示される、捕捉試薬としてビオチン化ＲＥＧＮ−Ｃを用いた改変したＡＤＡアッセイ（アッセイ＃２）による、同一の患者ベースライン試料のアッセイシグナルを示すプロットである。ｙ軸は、対数目盛での０〜１００のシグナル／ノイズ比である。ｘ軸は、個々の患者の試料を、図５Ａで示したのと同じ順で示す。カットポイントを、破線で示す。
【図６】図６Ａは、捕捉試薬及び検出試薬としてインタクトなデュプリウマブ（ｄｕｐｌｉｕｍａｂ）を用いた、図４で示したものと類似する、薬物特異的なブリッジングの抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイによる、患者ベースライン試料のサブセットからのアッセイシグナルを示すプロットである。  図６Ｂは、捕捉試薬及び検出試薬としてＲＥＧＮ−Ｂ（図２、ＩｇＧ４のＣＨ３全体をＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインに変えたヒトＩｇＧ４  ｍＡｂ）を用いた改変したブリッジングＡＤＡアッセイによる、図６Ａで試験した患者ベースライン試料の同じサブセットからのアッセイシグナルを示すプロットである。  図６Ｃは、捕捉試薬及び検出試薬としてＲＥＧＮ−Ｅ（図２、ＣＨ３ドメインがセリン４４４の後の終止コドンで切断されているヒトＩｇＧ４  ｍＡｂ）を用いた改変したブリッジングＡＤＡアッセイによる、図６Ａで試験した患者ベースライン試料の同じサブセットからのアッセイシグナルを示すプロットである。
【図７】図７は、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイにおいて競合抗体コンストラクトを用いた、ベースラインの患者試料中の既存の反応性の特異性を特徴づける一連のプロットである。ｙ軸は、増分を２５とした０〜１００の阻害率である。Ｘ軸は、ブリッジングアッセイで用いられた特異的な競合抗体コンストラクトであり、左から右に向かって、上のプロットではデュピルマブ、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｆ（Ｌ４４５Ｐ）であり、又は下のプロットではデュピルマブ、ＲＥＧＮ−Ｇ及びＲＥＧＮ−Ｇ（Ｌ４４５Ｐ）である。６種の患者試料（Ｓ１〜Ｓ６）を、順に、円形、四角形、三角形、アスタリスク、ダイヤ、及び逆三角形で表す。このグラフで言及する抗体試薬は、ＡＤＡ確認アッセイフォーマットにおける競合阻害剤として２００μｇ／ｍＬで用いた。このアッセイにおいて高阻害率であることは、当該競合者が、これら試料中の既存のシグナルを阻害することができたことを示しており、当該競合分子は、既存の反応性が結合する領域を含有しているということを示唆する。低い方の阻害率であることは、競合分子は、既存の反応性が結合できる領域を含有していないことを示す。
【図８】図８は、捕捉試薬及び検出試薬の両方として用いたＲＥＧＮ−Ｆを伴うか（上図）、又は捕捉試薬として用いたＲＥＧＮ−Ｆ（Ｌ４４５Ｐ）を検出試薬としてのＲＥＧＮ−Ｆと組み合わせた、図４に示すものと類似の薬物特異的ブリッジングの抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイによる、患者ベースライン試料のサブセットからのアッセイシグナルを示す一連のプロットである。
【図９】図９は、捕捉試薬及び検出試薬の両方として用いたＲＥＧＮ−Ｇを伴うか（上図）、又は捕捉試薬として用いたＲＥＧＮ−Ｇを検出試薬としてのＲＥＧＮ−Ｇ（Ｌ４４５Ｐ）と組み合わせた、図４に示すものと類似の薬物特異的ブリッジングの抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイによる、患者ベースライン試料のサブセットからのアッセイシグナルを示す一連のプロットである。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
この開示は、本明細書に記載の組成物及び方法のみならず記載の実験条件に限定されないものであって変動し得ることを認識されたい。また、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることとなるため、本明細書で用いる文言は、単に特定の実施形態を説明する目的のものであり、限定を意図していないものであるということを理解されたい。
【００５７】
別段で規定しない限り、本明細書で用いる全ての技術的および科学的な語は、本開示が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。しかしながら本明細書に記載するのと類似又は均等である任意の組成物、方法及び材料を、本発明の実施又は試験において用いることができる。言及する刊行物の全ては、その全体を参照により本明細書に援用する。
【００５８】
本明細書で用いられる場合、「ヒトＩＬ４Ｒ」（ｈＩＬ−４Ｒ）の語は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、ＩＬ−４Ｒα（配列番号１８）を特異的に結合するヒトサイトカイン受容体を指すことを意図する。「ヒトインターロイキン−１３」（ｈＩＬ−１３）の語は、ＩＬ−１３受容体を特異的に結合するサイトカインを指し、また「ｈＩＬ−１３／ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体」は、ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体に結合するｈＩＬ−１３により形成された複合体を指し、当該複合体は、ｈＩＬ−４受容体を結合し、生物活性を惹起する。
【００５９】
本明細書で用いる場合、「結合分子（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」の語は、特定の標的と特異的に相互作用及び結合する分子を指すことを意図する。標的は、生物学的分子又は小（化学的）分子を含むことが可能である。標的分子は、抗原又は抗原部分を画成し得る。結合分子の例としては、抗体（モノクローナル抗体、二重特異性抗体、及び抗体断片を含む）、融合タンパク質、及び当業者に公知の他の抗原結合分子が挙げられるが、これに限定されない。
【００６０】
本明細書で用いる場合、「抗体」の語は、結合分子の一例であり、また免疫グロブリンとも呼ばれ、典型的には、ジスルフィド結合で相互に結合した、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖である４つのポリペプチド鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ又はＶＨ）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ又はＶＬ）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へと、さらに下位に分割でき、より保存的であるフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域を組み込んでいる。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、以下の順序で、アミノ末端からカルボキシ末端へと配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のサブクラスの抗体を含み得る。抗体はまた、異なるサブクラスからの領域の組み合わせを含み得る。ＩｇＧ４抗体は、デュピルマブ及びセミプリマブを含み得るが、これに限定されない。
【００６１】
「結合分子」の他の例としては、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体及び五重特異性抗体を含むが、これに限定されない。一部の態様においては、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、及び五重特異性抗体は、抗体のＦｃ部分を含み得る。一部の態様においては、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、五重特異性抗体は、ＩｇＧ４骨格を含み得る。「結合分子」の別の例としては、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）が挙げられる。一部の態様においては、ＡＤＣはＩｇＧ４骨格を含み得る。「結合分子」の別の例としては、二重特異性Ｔ細胞結合体（ＢｉＴＥ）が挙げられる。一部の態様においては、ＢｉＴＥはＩｇＧ４骨格を含み得る。「結合分子」の別の例としては、ＴＲＡＰ融合タンパク質が挙げられる。一部の態様においては、ＴＲＡＰ融合タンパク質は、ＩｇＧ４骨格を有する。「結合分子」の別の例は、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）が挙げられる。
【００６２】
本明細書で用いる場合、抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」もしくは「抗体断片」）の語は、抗原（例えば、ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長の抗体の断片により実行可能であることがわかっている。抗体の「抗原結合部分」の語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ１及びＣＨ１ドメインを含む一価の断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって結合された２つのＦ（ａｂ’）断片を含む二価の断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインを含むＦｃ断片；（ｉｖ）抗体の１つのアームのＶＬ及びＶＨドメインを含むＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインを含む、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ２４１：５４４−５４６）、ならびに（ｖｉ）ＣＤＲが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは、異なる遺伝子によってコードされるが、それらは、単一の接触鎖（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ  ｃｈａｉｎ）であってそこでＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価の分子（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照）を形成するものである単一の接触鎖としてそれらを作らせることができるような合成リンカーによって、組換え法を用いて、連結され得る。こうした単一鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」の語に包含することを意図する。例えば二重特異性抗体等である他の形態の単一鎖抗体もまた、包含される（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８を参照）。
【００６３】
本明細書で用いられる場合、「中和」又は「遮断」抗体は、そのｈＩＬ−４Ｒαへの結合がｈＩＬ−４及び／又はｈＩＬ−１３の生物活性の阻害を結果的にもたらすものである抗体を指すことを意図する。このｈＩＬ−４及び／又はＩＬ−１３の生物活性の阻害は、例えばｈＩＬ−４により及び／又はＩＬ−１３により誘発される細胞内活性ならびにｈＩＬ−４ＲαへのｈＩＬ−４結合（以下の実施例を参照）等である、この技術分野で公知のｈＩＬ−４及び／又はｈＩＬ−１３の生物活性の１又は複数の兆候を測定することによって評価することが可能である。
【００６４】
「ＣＤＲ」又は相補性決定領域は、より保存的な、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれる領域内に分散した超可変的な領域である。開示の抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体又は断片の様々な実施形態においては、ＦＲは、ヒト生殖系列配列と一致し得るか、又は、天然もしくは人工的に改変してもよい。
【００６５】
「エピトープ」の語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基である。１つの抗原が、１以上のエピトープを有してもよい。エピトープは、立体構造であるか又は直線状であるかのいずれかであり得る。立体構造のエピトープは、直線状ポリペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に並列するアミノ酸によって産生する。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接し合うアミノ酸残基によって産生されたものである。ある状況においては、エピトープは、抗原上に、糖類、ホスホリル基、又はスルホニル基の部分を含み得る。
【００６６】
「免疫原性」の語は、抗原又は免疫原の、ヒト又は動物の体内で免疫応答を誘発する能力を指す。タンパク質治療は、薬物の薬物動態及び効能に干渉する可能性がある有害な免疫反応を惹起する能力を有する。この免疫応答は、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の産生の形態を取り得る。
【００６７】
核酸又はその断片に対して言及する場合、「実質同一性」又は「実質的に同一」の語は、別の核酸（又はその相補鎖）と、適切なヌクレオチドの挿入又は欠失を含めて、最適に配列したときに、以下に述べる例えばＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧａｐ等の任意の周知の配列同一性アルゴリズムによって測定されるとおり、ヌクレオチド塩基の、少なくとも約９５％で、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％で、ヌクレオチド配列同一性がある、ということを示す。
【００６８】
ポリペプチドに用いる場合、「実質類似性」又は「実質的に類似」の語は、２つのペプチド配列が、例えばＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴのプログラムによって、デフォルトのギャップ重量を用いて、最適に配列されたときに、少なくとも９５％配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。典型的には、同一でない残基位置同士は、保存的アミノ酸置換が異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的性質（例えば、電荷又は疎水性）をもつ側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換されている置換である。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の官能性を実質的に変化させないこととなる。２以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合には、配列同一性の百分率又は類似性の度合いを上方調節して、置換の保存的性質を補正してもよい。この調節を行う手段は、当業者にとって周知である。例えばＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１が参照され、これは参照により本明細書に援用する。類似する化学的性質をもつ側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、（１）脂肪族の側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン；（２）脂肪性−水酸基の側鎖：セリン及びトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、ならびに（７）システイン及びメチオニンである硫黄含有側鎖、が挙げられる。ある実施形態においては、保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換は、参照により本明細書に援用する、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３  ４５に開示の、ＰＡＭ２５０対数尤度表内のプラスの値を有するあらゆる変更である。「中程度に保存的」な置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度表内のマイナスでない値を有するあらゆる変更である。
【００６９】
ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼び、典型的には、配列解析ソフトウェアを用いて測定する。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含めた、種々の置換、欠失及び他の修飾に割り当てられる類似性の測定により、類似配列同士をマッチングする。例えばＧＣＧソフトウェアは、デフォルトパラメータと共に使用されて異なる種の生物からの相同ポリペプチド等の密接に関連するポリペプチド間もしくは野生型タンパク質及びその変異体間での配列相同性又は配列同一性を決定することが可能である、Ｇａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔ等のプログラムを含有する。例えばＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、デフォルトの又は推奨されるパラメータを用いて、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムである、ＦＡＳＴＡを用いて比較可能である。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列及び探索配列間で最も重複する領域のアラインメントと配列同一性の百分率とを提供する（上記Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００））。開示の配列を様々な生物からの多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の、別のアルゴリズムとしては、デフォルトパラメータを用いた、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴがある。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２が参照され、これらそれぞれは、参照により本明細書に援用する。
【００７０】
ヒト抗体を産生する方法としては、例えば米国特許第６，５９６，５４１号、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１）、米国特許第５，５４５，８０７号、第６，７８７，６３７号に記載された方法が挙げられる。
【００７１】
当技術分野で公知の任意の方法によれば、げっ歯類が免疫され得る（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  １９８８  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｌｉｌｌｅｈｏｊ（１９９４）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＣＡを参照）。本開示の抗体は、典型的には、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（米国特許第６，５９６，５４１号）を用いて調製する。内因性免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖可変領域が対応するヒト可変領域で置換されている遺伝子導入マウスに、関心の抗原を接種して、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（例えば、Ｂ細胞）を回収する。このリンパ細胞を、骨髄腫細胞株と融合して、不死のハイブリドーマ細胞株を調製し得、またこうしたハイブリドーマ細胞株を、スクリーニング及び選択して、関心の抗原に特異的である抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を特定する。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離して、重鎖及び軽鎖の所望のアイソタイプの定常領域に結合してもよい。こうした抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞等の細胞内で産生できる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体又は軽鎖及び重鎖の可変領域をコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ細胞から直接単離してもよい。
【００７２】
抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離して、ヒトの重鎖及び軽鎖の定常領域をコードするＤＮＡに操作可能に結合してもよい。そしてこのＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現することが可能である細胞において発現できる。ある実施形態においては、細胞はＣＨＯ細胞である。
【００７３】
抗体は、補体の固定（補体依存性細胞傷害）（ＣＤＣ）を介した細胞死滅及び抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）の関与による細胞死滅によるよりも、リガンド受容体相互作用を遮断又は受容体成分相互作用を阻害する上で治療上有用であり得る。抗体の定常領域は、抗体の、補体を固定して細胞依存性細胞障害を介在する能力において重要である。そのため、抗体のアイソタイプは、細胞障害性を介在する抗体にとって望ましいか否かに基づいて選択され得る。
【００７４】
ヒト免疫グロブリンは、ヒンジ不均一性を伴う２つの形態で存在可能である。第１の形態では、免疫グロブリン分子は、鎖間の重鎖ジスルフィド結合によって二量体が共に保持されるものである、約１５０〜１６０ｋＤａの安定な４鎖のコンストラクトを含む。第２の形態では、二量体は、鎖間のジスルフィド結合を介して結合しておらず、共有結合した軽鎖及び重鎖（半抗体）から構成される、約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される。これらの形態は、親和性精製後であってさえも、分離が極めて困難であった。種々のインタクトなＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域のアイソタイプに関連する構造上の相違に起因するが、これに限定されない。実際には、ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における１つのアミノ酸置換により、ヒトＩｇＧ１ヒンジを用いて典型的に観測されたレベルに対して、第２の形態の出現が有意に減少することがある（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５）。本開示は、例えば産生において、所望の抗体の形態の収量を向上するために所望され得るような、ＣＨ２又はＣＨ３のヒンジ領域内に１又は複数の変異を有する抗体を包含する。
【００７５】
はじめに、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する、高親和性のキメラ抗体を単離する。以下に記載するように、この抗体は、ｈＩＬ−４Ｒαに対する結合親和性、ｈＩＬ−４のｈＩＬ−４Ｒαへの結合を遮断する能力、及び／又はヒトタンパク質に対する選択性を含めた、所望の特性に関して特徴づけられて選択される。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域で置換されて、例えば野生型又は改変されたＩｇＧ４又はＩｇＧ１（例えば、配列番号４、１９、２０及び２３）である、本開示の完全ヒト抗体を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、可変領域には、高親和性の抗原結合特性及び標的特異性が存在する。
【００７６】
免疫原性アッセイ
本開示は、Ｃ末端重鎖配列ＬＳＰＧ（配列番号２１）を含む、モノクローナル抗体又はその抗原結合部分等の非天然の結合分子を提供する。ある実施形態においては、Ｃ末端重鎖は、ヒトＣＨ３ドメインである。ある実施形態においては、ヒト抗体は、ＩｇＧ４クラスのものである。ある実施形態においては、重鎖配列は、配列番号７を含む。ある実施形態においては、重鎖配列は、配列番号８を含む。
【００７７】
本開示は、免疫原性アッセイを提供するものであって、本開示の抗体又はその抗原結合断片等である、抗ＩＬ−４Ｒα結合分子を含む。本開示の免疫原性アッセイは、抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイの形態を取ることが可能である。本開示のＡＤＡアッセイは、ＡＤＡ結合アッセイであり得るか、又は酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）アッセイに向けられ得る。ＡＤＡブリッジングアッセイにおいては、関心の結合分子のビオチン化形態が、プレート上のストレプトアビジンに結合する。そして抗体に似た結合分子は、試料中に存在すると、ビオチン化結合分子及び同一の結合分子の標識化形態の両方に結合して、標識からの検出可能なシグナルを伴うブリッジング相互作用を形成する。好適な標識は、当業者にとって公知であるだろう。例示的な標識としては、ルテニウム、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びフルオロフォアが挙げられる。ＡＤＡブリッジングアッセイは、ブリッジング反応を行って標準曲線を生成するものである試料の滴定と、反応を阻害する非標識の寒冷競合抗体の使用とを含み得る。
【００７８】
図４は、パネルＡに薬物特異的ブリッジングＡＤＡアッセイを、パネルＢに、現在のＡＤＡアッセイにおける既存の反応性に起因する非薬物特異的ブリッジングアッセイを、そしてパネルＣに、捕捉試薬としてＲＥＧＮ−Ｃを用いたことに起因する非薬物特異的ブリッジングなしのＡＤＡアッセイを、示している。既存の反応性は、破線輪郭の小さめの二又構造としてパネルＢ及びＣで見られる。開示の実施形態のアッセイ用試薬の分子類似体ＲＥＧＮ−Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、互いに交換可能であり、それにより当業者は、記載のアッセイに様々な並べ替えを設計することが許容されるということを理解されたい。一態様においては、バックグラウンドを低減するため、当業者は、ＲＥＧＮ−Ｄを、以下の試薬：ＲＥＧＮ−Ｂ、ＲＥＧＮ−Ｃ又はＲＥＧＮ−Ｅのいずれかと、配列順が「捕捉試薬」＋「検出試薬」となるように（Ｄ＋Ｂ、Ｄ＋Ｃ、Ｄ＋Ｅ、又はＢ＋Ｄ、Ｃ＋ＤもしくはＥ＋Ｄのようにひっくり返す）組み合わせて、新規の組み合わせを形成してもよい。別の態様においては、当業者は、バックグラウンドシグナルを低減するために、以下の対を作ってもよい：Ｂ＋Ｂ、Ｃ＋Ｃ、又はＥ＋Ｅ。
【００７９】
本開示のある実施形態においては、免疫原性（又はＡＤＡ）のレベルは、例えば抗体（又はその抗原結合部分）等である結合分子を用いて決定する。ある実施形態においては、免疫原性のレベルは、ＩｇＧ４抗体を用いてデュピルマブで評価する。これら免疫原性試験において典型的に対処が必要である１つの問題は高いバックグラウンドシグナルであるが、これは用いられるＩｇＧ４抗体と関連していることが多い。この高いバックグラウンドを緩和するために、本開示は、配列番号２１、配列番号２２、配列番号７又は配列番号８のいずれかの重鎖配列を含み、結果としてより低いバックグラウンドシグナルをもたらす、ＩｇＧ４抗体を提供する。
【００８０】
本開示のある実施形態においては、例えば抗体又はその抗原結合部分等である結合分子は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４、及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号７及び配列番号８からなる群から選択されるＣＨ３又はＣＨ配列を含むものであって、当該結合分子は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号７及び配列番号８からなる群から選択されないＣＨ３又はＣＨ配列を含む結合分子と比較して、免疫原性（ＡＤＡ）アッセイにおいて、低減したバックグラウンド反応性を呈する。ある実施形態においては、（３）のＣＨドメイン配列は、配列番号５及び配列番号６を含み得る。
【００８１】
本発明の一実施形態においては、例えばデュピルマブ等のＩｇＧ４抗体のＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインに変えられ、より低いバックグラウンドシグナルを結果としてもたらす（図６Ｂ）。さらなる実施形態においては、デュピルマブのようなＩｇＧ４抗体のＣＨ３ドメインは、切断されている。一態様においては、当該切断は、セリン４４４において生じて、より低いバックグラウンドシグナルを結果としてもたらす（図６Ｃ）。
【００８２】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号１３、配列番号７及び配列番号８からなる群から選択されるＣＨ３又はＣＨ配列、を含む結合分子を提供する。
【００８３】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）ＣＨ３又はＣＨ配列であって、配列番号２１、配列番号２２、配列番号１３、配列番号７及び配列番号８からなる群から選択される１つ又は複数の配列を含むＣＨ３又はＣＨ配列、を含む結合分子を提供する。
【００８４】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）ＣＨ３配列であって、配列番号７、配列番号１３又は配列番号２１からなる群から選択される１つ又は複数の配列を含むＣＨ３配列、を含む結合分子を提供する。
【００８５】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）ＣＨ配列であって、配列番号８、配列番号２１及び配列番号２２からなる群から選択される１つ又は複数の配列を含むＣＨ配列、を含む結合分子を提供する。
【００８６】
一部の態様においては、本開示は、ＣＨ配列であって、配列番号８、配列番号２１及び配列番号２２からなる群から選択される１つ又は複数の配列を含むＣＨ配列、を含む結合分子を提供する。
【００８７】
一部の態様においては、本開示は、ＣＨ３配列であって、配列番号７、配列番号１３又は配列番号２１からなる群から選択される１つ又は複数の配列を含むＣＨ３配列、を含む結合分子を提供する。
【００８８】
一部の態様においては、本開示は、４４５位にプロリンからロイシンへのアミノ酸置換を含むＩｇＧ４  ＣＨドメインを含む結合分子を提供する。
【００８９】
一部の態様においては、本開示は、配列番号１、配列番号２及び配列番号５を含む結合分子を提供する。
【００９０】
一部の態様においては、本開示は、配列番号１、配列番号２及び配列番号６を含む結合分子を提供する。
【００９１】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）配列番号１、配列番号２、及び配列番号５を含むＣＨ配列を含む結合分子を提供する。
【００９２】
一部の態様においては、本開示は、（１）配列番号１２、ＬＧＳ、配列番号１４及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＬ鎖配列、（２）配列番号９、配列番号１０、配列番号１１及びその組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数のＶＨ鎖配列、ならびに（３）配列番号１、配列番号２、及び配列番号６を含むＣＨ配列を含む結合分子を提供する。
【００９３】
一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９９％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９８％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９７％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９６％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９５％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９４％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９２％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９１％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９０％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。
【００９４】
一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９９％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９８％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９７％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９６％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９５％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９４％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９２％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９１％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９０％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。
【００９５】
一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９９％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９８％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９１３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９６％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９５％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９４％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９２％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９１％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。一部の態様においては、本開示は、配列番号１３に対して少なくとも約９０％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供する。
【００９６】
一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９９％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９８％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９７％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９６％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９５％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９４％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９２％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９１％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号７に対して少なくとも約９０％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。
【００９７】
一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９９％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９８％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９７％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９６％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９５％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９４％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９３％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９２％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９１％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。一部の態様においては、本開示は、配列番号８に対して少なくとも約９０％の配列同一性を伴う少なくとも１つのポリペプチド配列を含む結合分子を提供するものであって、当該少なくとも１つのポリペプチド配列は、配列番号２１を含む。
【００９８】
一部の態様においては、本開示のいずれの結合分子は、配列番号３を含むＣＨ配列を含む結合分子と比較して、免疫原性（ＡＤＡ）アッセイにおいて低減したバックグラウンド反応性を呈することが可能である。一部の態様においては、本開示のいずれの結合分子は、配列番号４を含むＣＨ配列を含む結合分子と比較して、免疫原性（ＡＤＡ）アッセイにおいて低減したバックグラウンド反応性を呈することが可能である。
【００９９】
治療的投与及び製剤
本開示は、本開示の抗ＩＬ−４Ｒα結合分子を含む治療組成物を提供する。本開示に従う治療組成物の投与は、製剤に包含されて改善された輸送、送達及び耐性等を提供する、好適な担体、賦形剤、ならびに他の試薬と共に投与されることとなる。多数の適切な製剤が、全ての薬剤師に公知である以下の処方集に見ることが可能である：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルベニア州イーストン。これら製剤としては、例えば、粉剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー、蝋、オイル、脂質、ベシクルを含有する脂質（陽イオン性又は陰イオン性）（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）等）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油型乳剤及び油中水型乳剤、カーボワックス乳剤（種々の分子量のポリエチレングリコール類）、半固体状ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体状混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１もまた参照されたい。
【０１００】
投与量は、投与しようとする対象の年齢及び体格、標的となる疾患、症状、投与経路等に応じて、変動し得る。本開示の結合分子が、成人患者において、ＩＬ−４Ｒαに関連する種々の症状及び疾患を治療するために用いられる場合には、本開示の結合分子を、通常、体重１ｋｇ当たり約０．０１から約２０ｍｇの、より典型的には、体重１ｋｇ当たり、約０．０２から約７ｍｇ、約０．０３から約５ｍｇ、又は約０．０５から約３ｍｇの単一用量で、静脈内投与することが有利である。一部の態様においては、本開示の結合分子が、ＩＬ−４Ｒαに関連する種々の症状及び疾患を治療するために用いられる場合には、投与計画は、３００ｍｇを２週間毎（Ｑ２Ｗ）に１回とすることができ、また最大４週間毎（Ｑ４Ｗ）まで延長することができる。治療の頻度及び期間は、症状の重症度に応じて、調節可能である。
【０１０１】
種々の送達系が知られており、またそれを用いて本開示の医薬組成物を投与することが可能であり、例えば、リポソームでのカプセル封入、微小粒子、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することが可能である組換え細胞、受容体依存性エンドサイトーシスがある（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照）。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び口腔内の経路が上げられるが、これに限定されない。組成物は、任意の従来の経路によって、例えば、点滴又はボーラス注入によって、上皮層又は粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸管の粘膜等）を介した吸収によって、投与され得、また他の生物学的に活性な薬剤と共に投与され得る。投与は、全身投与又は局所投与とすることが可能である。
【０１０２】
医薬組成物はまた、例えばリポソームであるベシクルで送達することも可能である（Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ  Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３−３６５のＴｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，ｉｂｉｄ．，ｐｐ．３１７−３２７を参照。
【０１０３】
ある実施形態においては、医薬組成物は、徐放システムで送達することが可能である。一実施形態においては、ポンプを用いてもよい（上記のＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照）。別の実施形態においては、ポリマー材料を用いることが可能である（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）を参照。さらに別の実施形態においては、徐放システムを、組成物のターゲット近傍に設け、それによりわずかな全身用量の部分のみを要することになる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、同上、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８，１９８４のＧｏｏｄｓｏｎを参照）。他の徐放システムは、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３によるレビューで論じられている。
【０１０４】
注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内、及び筋肉内の注射、点滴注入等の剤形を含み得る。これら注射用製剤は、公知の方法によって調製され得る。例えば、注射用製剤は、例えば無菌水性媒体中もしくは注射に従来用いられる油性媒体中に上記した抗体もしくはその塩を溶解、懸濁又は乳化することによって、調製され得る。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水や、ブドウ糖及び他の助剤等を含有する等張液があり、これらは例えばアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］等である適切な可溶化剤と組み合わせて用いてもよい。油性媒体としては、例えばゴマ油、ダイズ油等が用いられ、これらは、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の可溶化剤と組み合わせて用いてもよい。このように調製された注射剤は、適切なアンプル中に充填することが好ましい。
【０１０５】
上記に記載した経口用又は非経口用の医薬組成物は、有効成分の用量に相応であるように適した単位用量の剤形に調製することが有利である。こうした単位用量の剤形は、例えば、錠剤、丸薬、カプセル剤、注射剤（アンプル）、座薬等が挙げられる。含有される先述の結合分子の量は、概して、単位用量での剤形当たり約５から５００ｍｇであり、ある実施形態においては、特に注射剤の形態で、先述の結合分子は、約５から１００ｍｇで、及び他の剤形では約１０から２５０ｍｇで含有される。
【０１０６】
単独療法及び併用療法  本開示の結合分子は、ＩＬ−４活性を低減することによって改善、阻害、又は寛解するような疾患及び障害を治療するのに有用である。これら疾患は、ＩＬ−４の異常発現もしくは過剰発現、又はＩＬ−４産生に対する異常宿主応答を特徴とする疾患である。
【０１０７】
本開示は、抗ＩＬ−４Ｒα結合分子（例えば、抗体又は抗体断片）が第２の治療薬と組み合わせて投与されるものである併用療法を包含する。同時投与及び併用療法は、同時での投与に限定されるものではなく、抗ＩＬ−４Ｒα結合分子を、少なくとも１つの他の治療薬を患者に投与することを伴う一連の治療中に少なくとも１回投与するという治療レジメンを含む。第２の治療薬は、例えば別の結合分子等である別のＩＬ−４拮抗薬、又は可溶性サイトカイン受容体、ＩｇＥ拮抗薬、吸入もしくは他の適切な手段により送達され得る抗ぜん息薬（コルチコステロイド、非ステロイド薬、β−アゴニスト、ロイコトリエン拮抗薬、キサンチン、フルチカゾン、サルメテロール、アルブテロール）であり得る。特定の実施形態においては、本開示の結合分子等である抗ＩＬ−４Ｒα結合分子を、例えばリロナセプト（ｒｉｌｏｎａｃｅｐｔ）等であるＩＬ−１拮抗薬又はＩＬ−１３拮抗薬と共に投与してもよい。一部の態様においては、本開示の結合分子等の抗ＩＬ−４Ｒα結合分子は、１型又は２型の炎症反応において、サイトカイン及び／又は受容体を標的とする結合分子と組み合わせて投与してもよい。第２の薬剤は、１又は複数のロイコトリエン受容体拮抗薬を含み、例えばぜん息及びアレルギーであるアレルギー炎症性疾患等の疾患を治療することができる。ロイコトリエン受容体拮抗薬の例としては、モンテルカスト、プランルカスト、及びザフィルルカストが挙げられるがこれに限定されない。第２の薬剤としては、例えばＴＮＦ（エタネルセプト、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ＩＬ−９、ＩＬ−５、又はＩＬ−１７の拮抗薬のうちの１又は複数等である、サイトカイン阻害薬を挙げることができる。
【０１０８】
治療用途
本開示は、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療するための組成物及び方法を提供するものであって、本開示の治療有効量の結合分子を対象に投与することを含む。
【０１０９】
本開示は、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療するための組成物及び方法を提供するものであって、本開示の治療有効量の組成物を対象に投与することを含む。
【０１１０】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、１型又は２型の炎症性の疾患又は障害である。
【０１１１】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、自己免疫性疾患又は自己免疫性障害である。
【０１１２】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、アレルギー性疾患又はアレルギー性障害である。
【０１１３】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、免疫性疾患又は免疫性障害である。
【０１１４】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、良性増殖性疾患又は良性増殖性障害である。本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、悪性の増殖性疾患又は増殖性障害である。
【０１１５】
本開示のある実施形態においては、当該疾患又は障害は、アトピー性皮膚炎、ぜん息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、好酸球性食道炎、鼻ポリープ、又はこれらの組合せである。
【０１１６】
本開示のある実施形態においては、本発明の結合分子は、全身投与される。一態様においては、結合分子は、静脈内に又は皮下に投与される。別の態様においては、結合分子は、注射又は点滴により投与される。さらに別の態様においては、結合分子は、皮下注射により投与される。
【０１１７】
本開示のある実施形態においては、結合分子は、全身投与される。一態様においては、結合分子は、皮下注射により投与される。別の態様においては、治療有効量は、約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、又は６００ｍｇの皮下注射を含む。さらに別の態様においては、治療有効量は、約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、もしくは６００ｍｇの、少なくとも１回の皮下注射、少なくとも２回の皮下注射、少なくとも３回の皮下注射、又は少なくとも４回の皮下注射を含む。さらにまた別の態様においては、治療有効量は、疾患の症状をコントロールする維持量として、毎週１回、２週毎に１回、４週毎に１回又は長期的に投与される、約７５ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、もしくは６００ｍｇの皮下注射を含む。
【０１１８】
本開示のある実施形態においては、結合分子は、全身投与される。一態様においては、結合分子は、皮下注射により投与される。別の態様においては、治療有効量は、約６００ｍｇの初回量を含む。さらに別の態様においては、初回量は、２箇所の異なる注射部位で投与される、それぞれ３００ｍｇの一対の注射を含む。さらにまた別の態様においては、治療有効量が初回量を含む態様を含めて、治療有効量は、約３００ｍｇの維持量をさらに含む。別の態様においては、維持量は、隔週で投与される。
【０１１９】
本開示の方法のある実施形態においては、結合分子は、全身投与される。一態様においては、結合分子は、約１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、又は１２．０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内に投与される。
【０１２０】
本開示のある実施形態においては、結合分子は、第２の治療薬と組み合わせて投与される。一態様においては、第２の治療薬は、免疫抑制剤を含む。一態様においては、第２の治療薬は、アゴニスト抗体を含む。一態様においては、第２の治療薬は、免疫活性化剤（ｉｍｍｕｎｏａｃｔｉｖａｔｏｒ）を含む。別の態様においては、第２の治療薬は、ＩＬ−１  β−阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、ＩＬ−９阻害剤、ＩＬ−３阻害剤、ＩＬ−１３阻害剤、ＩＬ−１７阻害剤、ＩＬ−２５阻害剤、ＴＮＦα阻害剤、エオチキシン−３（ｅｏｔｉｘｉｎ−３）阻害剤、ＩｇＥ阻害剤、プロスタグランジンＤ２阻害剤、免疫抑制剤、コルチコステロイド、グルココルチコイド、プロトンポンプ阻害剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、又はこれらの組み合わせを含む。
【０１２１】
本開示のある実施形態においては、結合分子は、第２の治療薬と組み合わせて投与される。一態様においては、第２の治療薬は、コルチコステロイドを含む。特定の態様においては、コルチコステロイドは、局所コルチコステロイドである。
【０１２２】
本開示の組成物、製剤、キット、方法は、任意の１つの病状及び／又は医学的状態に限定されないということを認識されたい。本開示の組成物、製剤、キット及び方法は、患者が抗体医薬に対して既存の反応性を呈するようなあらゆる病状及び／又は医学的状態に適用することが可能である。
【０１２３】
【表１−１】
2021531245.tif 000003
【０１２４】
【表１−２】
2021531245.tif 000004
【実施例】
【０１２５】
実施例１：ＩｇＧ４  ＣＨ３定常領域の置換により、いくつかの患者試料において既存の免疫反応性が低減される。
競合阻害試験を行い、いくつかの試料中で観察された高い既存の反応性のシグナルを特徴づけた。これら試験において、市販の抗体薬剤又はこの目的のために特別に構築されたモノクローナル抗体を用いた。この既存の反応性の特異性を解明するのに役立てた抗体コンストラクト又は抗体薬剤の一覧を、表２に示す。
【０１２６】
【表２】
2021531245.tif 000005
【０１２７】
これら抗体コンストラクトを、抗薬物抗体（ＡＤＡ）確認アッセイフォーマットにおける競合阻害剤として、２００μｇ／ｍＬで使用した。このアッセイフォーマットは、図４に示しており、このアッセイの結果を、図１に示している（図１及び図４）。このアッセイにおいて高阻害率であることは、所与の競合者が、これら試料中の既存の反応性のシグナルを阻害することができたことを示しており、当該競合分子は、既存の反応性が結合する領域を含有しているということを示唆する。低い方の阻害率であることは、競合分子は、既存の反応性が結合できる領域を含有していないことを示す。上記表１に列記した薬剤は、ＩｇＧ４骨格／Ｆｃヒンジ領域コンストラクト、市販のアイソタイプ抗体、及びデュピルマブ遺伝子操作コンストラクトの３つのカテゴリーに大きく分類することが可能である。最初の実験では、このアッセイの高い反応性が、デュピルマブのＣＤＲ又はＩｇＧ４骨格に向けられるか否かを調べた。ＲＥＧＮ−Ａは、デュピルマブと同じＩｇＧ４骨格を有するが異なるＣＤＲ配列を有するヒトモノクローナル抗体であり、ＩＬ−４Ｒαに結合しない。
【０１２８】
図１に示すように、デュピルマブ及びＲＥＧＮ−Ａの両方を用いた競合阻害実験では、調べた患者からの６種のベースライン試料において、高いアッセイシグナルの有意な阻害を示した。これら２つの抗体のＣＤＲ領域配列は異なるため、この阻害結果は、高いシグナル反応性は、デュピルマブのＣＤＲ部分を標的にしているのではなく、むしろいくつかの共通の抗体骨格配列を標的としていることを示唆する。デュピルマブ及びＲＥＧＮ−Ａの両方は、これらＩｇＧ４分子内で抗体ヒンジ領域を安定化する、ＩｇＧ１の「ＣＰＰＣ」ヒンジ領域配列を含有する。既存の免疫反応性が、このＣＰＰＣ変異を標的としているか否かを判断するために、競合阻害実験で、ヒンジ領域に野生型（ｗｔ）ＣＰＳＣ配列を有する市販のＩｇＧ４κ抗体を調べた。図１でわかるように、野生型ＩｇＧ４抗体もまた、デュピルマブ及びＲＥＧＮ−Ａに類似した有意な阻害を示した。この結果は、高いベースラインアッセイシグナルが、デュピルマブ内のＣＰＰＣヒンジ領域変異に向けられるのではなく、おそらく、ＩｇＧ４分子の野生型定常領域に対して向けられていることを示唆する。これら結果は、ベースラインで観察された高いシグナルは、デュピルマブに対して特異的でないことを示す。
【０１２９】
このアッセイの高い既存の反応性が、様々なＩｇＧサブタイプの中で共通しているであろう定常領域配列に対して向けられるかどうかを判断するために、さらなる実験を行った。同じ競合阻害アプローチを用いて、この既存の反応に対する３つの市販のヒトＩｇＧ１κ、ＩｇＧ２κ、ＩｇＧ３κ抗体の影響を調べた。これら抗体のうち、これら試料において高いベースラインシグナルを示すものはなかった（図１を参照）。このことは、既存の反応性は、おそらく、ＩｇＧ４定常領域配列に固有の、かつ、試験したＩｇＧサブタイプのいずれでも共通していなかったものである領域と関連していることを示唆した。
【０１３０】
ヒトモノクローナル抗体（ＲＥＧＮ−Ｂ）が構築されたが、これはＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインがＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインで置換されていることを除いてデュピルマブと類似している（図２を参照）。この抗体を、既存の反応性がデュピルマブのＣＨ３ドメインを標的としていたか否かを判断するために競合試験で調べた。ＲＥＧＮ−Ｂは、試料中で高いシグナルを有意に阻害しなかったが（図１を参照）、これは既存の反応性が、おそらく、ＩｇＧ４分子のＣＨ３ドメイン内の一部の領域を標的としていることを示唆した。
【０１３１】
デュピルマブのＣＨ３ドメイン内のこれら高いシグナルと関連するであろう領域をさらに特定するために、ＩｇＧ４、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２抗体のＣＨ３ドメインのアミノ酸配列のアラインメントを行った（図３を参照）。ＩｇＧ４及びＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン配列間の６つの別個のアミノ酸位置での違いと、ＩｇＧ４及びＩｇＧ２のＣＨ３ドメイン配列間の５つの別個のアミノ酸位置での違いとを記録した（図３を参照）。
【０１３２】
４４５位におけるロイシン（Ｌ）をプロリン（Ｐ）で置換したｎ  ＩｇＧ４コンストラクトが利用可能であり、競合阻害アッセイで調べた。このコンストラクトは、これら高いアッセイシグナルの有意な阻害は見せなかった。このことは、既存の反応性は、おそらく、デュピルマブのＬ４４５領域に対して特異的であることを示した。高いアッセイシグナルを含むさらなる試料について、４４５位におけるＬをＰで置換したこのコンストラクトを用いて、競合阻害アッセイで調べたところ、同様の低いレベルの阻害が観察された。これにより、既存の反応性は、Ｌ４４５周辺の領域を特異的に標的としていることが確認されたようであった。したがって、デュピルマブ内のロイシン（野生型ＩｇＧ４にある）をプロリン（野生型のＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３の同位置に存在する）に変えることで、ＡＤＡアッセイにおいて高いシグナルを導くこの既存の反応が抑制される。
【０１３３】
４４５位におけるロイシン（Ｌ）をプロリン（Ｐ）で置換したＩｇＧ４コンストラクトが利用可能であり、競合阻害アッセイで調べた。このコンストラクトは、これら高いアッセイシグナルの有意な阻害は見せなかった。このことは、既存の反応性は、おそらく、デュピルマブのＬ４４５領域に対して特異的であることを示した。高いアッセイシグナルを含むさらなる試料について、４４５位におけるＬをＰで置換したこのコンストラクトを用いて、競合阻害アッセイで調べたところ、同様の低いレベルの阻害が観察された。これにより、既存の反応性は、Ｌ４４５周辺の領域を特異的に標的としていることが確認されたようであった。したがって、デュピルマブ内のロイシン（野生型ＩｇＧ４にある）をプロリン（野生型のＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３の同位置に存在する）に変えることで、ＡＤＡアッセイにおいて高いシグナルを導くこの既存の反応が抑制される。
【０１３４】
第２のデュピルマブ系のヒトモノクローナル抗体コンストラクト（ＲＥＧＮ−Ｃ）を生成した。このコンストラクトは、抗体配列内の４４５残基において、ロイシンをプロリンに変える（Ｌ＞Ｐとして略記される）ものである点変異を挿入したことを除いて、デュピルマブと同一である。ＲＥＧＮ−Ｃは、試験したベースライン試料において、高いシグナルを有意に阻害することができなかった（図１及び図２を参照）。このことにより、既存の反応性は、デュピルマブ内のＬ４４５周辺の領域を特異的に標的としていることが確認され、またＡＤＡアッセイにおいてこの遺伝子操作されたデュピルマブを用いることにより、現在のＡＤＡアッセイで観察される高いレベルのバックグラウンドシグナルの、全てではないが大部分が除去されるということが示唆された。
【０１３５】
抗体配列内の４４５残基におけるロイシンからプロリンへの改変が、既存の反応性を抑制することを実証するために、２つのさらなる抗体ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇを用いて、さらなる実験を行った。図７に示すように、デュピルマブ、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇを用いた競合阻害実験により、６種のベースライン試料における高いアッセイシグナルの有意な阻害が実証され、これによりデュピルマブ、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇが高いレベルの既存の反応性を呈することが示された。しかしながら、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇが高いアッセイシグナルを阻害することができなかった場合、本明細書においてＲＥＧＮ−Ｆ（Ｌ４４５Ｐ）及びＲＥＧＮ−Ｇ（Ｌ４４５Ｐ）とそれぞれ称する、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇの４４５位においてロイシンをプロリンへと置換したものにより、この既存の反応性は抑制された。ＲＥＧＮ−Ｆ、ＲＥＧＮ−Ｆ（Ｌ４４５Ｐ）、ＲＥＧＮ−Ｇ及びＲＥＧＮ−Ｇ（Ｌ４４５Ｐ）はまた、図４に示すものと類似の、薬物特異的ブリッジングの抗薬物抗体アッセイにおける薬剤として試験した。図８及び図９に示すように、ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇをいずれも捕捉試薬及び検出試薬として用いたとき、高い既存の反応性の兆候である、高いアッセイシグナルを示した。対照的に、捕捉試薬としてのＲＥＧＮ−Ｆ（Ｌ４４５Ｐ）を、検出試薬としてのＲＥＧＮ−Ｆと組み合わせて用いた場合（図８）、又は、捕捉試薬としてのＲＥＧＮ−Ｇを、検出試薬としてのＲＥＧＮ−Ｇ（Ｌ４４５Ｐ）と組み合わせて用いた場合（図９）、アッセイシグナルが有意に低減したが、これは、Ｌ４４５Ｐ置換が、既存の反応性を抑制することを実証している。ＲＥＧＮ−Ｆ及びＲＥＧＮ−Ｇは、図１に示す結果において、試験された抗体の可変ドメインと異なるものでもある別個の可変ドメインを含む。すなわち、図７〜９で示す結果は、既存の反応性は、可変ドメイン及びＣＤＲとは無関係であるが、代わりにＬ４４５周辺の領域に対して特異的であるということを実証する。さらに、これは、Ｌ４４５Ｐの置換は概してＩｇＧ４抗体のＣＤＲの同一性に関係なくＩｇＧ４抗体に適用して、既存の反応性を低減することが可能であるということを実証する。
【０１３６】
既存の反応性の少なくとも大部分がそれを標的としているデュピルマブ配列内の領域が、特定された。ＡＤＡアッセイにおける高いシグナルは、ＣＨ３ドメイン内のＬ４４５で又は当該Ｌ４４５付近で結合することによって、アッセイにおいて標識されたデュピルマブ分子間を架橋することが可能であるこれら血清試料中の一部の基質構成に起因して生じていたように思われる。このことは、この既存の反応性は、デュピルマブ薬物特異的ではないが、任意のＩｇＧ４分子と結合することが可能であるということを示す。さらに、この結果は、ＡＤＡアッセイにおいて、Ｌ４４５Ｐ変異を伴うこの改変した形態のデュピルマブを用いることにより、高いレベルのバックグラウンドシグナルの、全てではないが大部分が除去されるということを示唆する。
【０１３７】
実施例２：患者試料中のバックグラウンド免疫反応性を低減する、改変した抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイの開発
改変したＡＤＡアッセイを開発したが、これは捕捉試薬としてビオチン化したＲＥＧＮ−Ｃ（Ｌ４４５Ｐ変異を伴う）を使用する。図４は、現在のＡＤＡアッセイとＲＥＧＮ−Ｃを用いる改変したＡＤＡアッセイとの間の、アッセイ設計上の差異を図示している。簡単のため、現在のＡＤＡアッセイは、「ＡＤＡアッセイ＃１」とすることとし、また改変されたＡＤＡアッセイは、「ＡＤＡアッセイ＃２」とすることとする。図５は、全ての患者ベースライン試料からの、現在のＡＤＡアッセイ＃１対ＡＤＡアッセイ＃２により得られたＡＤＡスクリーニングシグナルの比較解析を示す。パネル５Ａは、現在のＡＤＡスクリーニングアッセイ（アッセイ＃１）におけるこれら高いＡＤＡシグナルベースライン試料により生成されたシグナル対ノイズ比のプロットを示し、一方、パネル５Ｂは、ＡＤＡアッセイ＃２における全く同じ試料により生成されたシグナル対ノイズ比のプロットを示す。ＡＤＡアッセイ＃２のアッセイフォーマットにより、現在のＡＤＡスクリーニングアッセイで観察された高いシグナルが有意に低減された。ＡＤＡアッセイ＃２において、いまだ反応性を示す試料もあったが、スクリーニング陽性数は、スクリーニングアッセイに関して予測された偽陽性率とより調和しており、またこうした陽性試料に関するシグナル反応レベルは、概して、現在のＡＤＡアッセイを用いて観察されたレベルよりもはるかに低かった。このように観察された、ＡＤＡアッセイ＃２の大部分の場合でこれら高いアッセイシグナルがベースライン値付近まで低下することは、患者母集団において、治療下で発現したＡＤＡおよび薬物特異的ＡＤＡの改善された検出を可能にするはずである。
【０１３８】
参照による援用
本明細書において引用した全ての文書は、あらゆる相互参照のもしくは関連の特許又は出願を含めて、明文で除外又は別段で限定していない限り、その全体を参照により本明細書に援用する。あらゆる文書の引用は、それが本明細書において開示又は主張したあらゆる開示に対する先行技術であるということ、又はそれが単独でもしくはその他の参考文献との任意の組合せでそうした開示を教示、示唆もしくは開示しているということ、についての承認ではない。また、本文書における語の任意の意味又は定義が、参照により援用した文書内の同一の語の任意の意味又は定義と矛盾するという範囲に対しては、本文書内で当該語に割り当てた意味又は定義が支配するものである。
【０１３９】
他の実施形態
本開示の特定の実施形態について説明して記述してきたが、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な他の変更及び変形をなすことが可能である。添付の特許請求の範囲は、本開示の範囲内にある当該変更及び変形の全てを含める。
【図１】
2021531245.tif 000006
【図２】
2021531245.tif 000007
【図３】
2021531245.tif 000008
【図４】
2021531245.tif 000009
【図５Ａ】
2021531245.tif 000010
【図５Ｂ】
2021531245.tif 000011
【図６】
2021531245.tif 000012
【図７】
2021531245.tif 000013
【図８】
2021531245.tif 000014
【図９】
2021531245.tif 000015
【配列表】
2021531245000001.app
【国際調査報告】
2021531245.tif 000016
2021531245.tif 000017
2021531245.tif 000018
2021531245.tif 000019
2021531245.tif 000020