(57)【要約】  本明細書では、動物用の注射可能な抗生物質の組成物を提供する。該組成物は、動物の生理学的温度でゲルを形成することを特徴とし、前記ゲルは、抗生物質の安定した反復可能な放出プロファイルを特徴とする。該組成物は、共溶媒が添加され、好ましくは、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体が添加されるとともに、ポロキサマー溶液中の高負荷量の薬物を含む。動物感染症を治療する方法も提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物活性剤、ポロキサマー、水性担体及び有機共溶媒を含む医薬組成物であって、前記組成物は、室温で注射可能な組成物であり、ただし、前記活性剤の濃度が３５重量％未満である場合、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質をさらに含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記生物活性剤の濃度が１０重量％〜３５重量％である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記生物活性剤の濃度が３５重量％を超え、前記組成物は、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質を含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記生物活性剤の濃度が３５重量％を超え、前記組成物は、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記生物活性剤の濃度が３５重量％〜５０重量％である、請求項３又は４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記生物活性剤が、フロルフェニコール、リンコマイシン、タイロシン、メトロニダゾール、チルミコシン、スピラマイシン、エリスロマイシン、ツラスロマイシン、チアムリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、トリメトプリム、スルホンアミド、スルファメトキサゾール、プレウロムチリン、アビロシン、タイルバロシン、ドキシサイクリン及びオキシテトラサイクリンから選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記生物活性剤がフロルフェニコールである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記生物活性剤が前記組成物中に約２５重量％〜約５０重量％の負荷量で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記有機共溶媒が約５〜約１５重量％の量で存在する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
有機溶媒に少なくとも部分的に溶解する前記セルロース系物質がヒドロキシプロピルセルロースである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記有機溶媒がＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール及びエタノールからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記有機溶媒がＮ−メチルピロリドンである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記有機溶媒がＮ−メチルピロリドンであり、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解する前記セルロース系物質がヒドロキシプロピルセルロースであり、さらに、前記生物活性剤が２５重量％〜５０重量％の濃度のフロルフェニコールである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記有機溶媒がＮ−メチルピロリドンであり、前記生物活性剤がフロルフェニコールであり、さらに、前記フロルフェニコールの濃度が３５重量％〜５０重量％である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記組成物中の薬理学的に有効な用量の抗生物質を非ヒト動物に投与することにより、前記動物の動物感染症の治療に使用するための、医薬組成物。
【請求項１６】
治療コースごとに前記非ヒト動物に単回投与される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記投与が筋肉内注射又は皮下注射を含む、請求項１５〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記感染症がブタ病原体によって引き起こされる、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、徐放性製剤に関し、より具体的には、動物用の難溶性抗生物質に適した徐放性製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学上、薬物の経口投与は好ましい手段と考えられているが、明白な理由により、獣医学において、特に大きな家畜に関しては、実行不可能であることが多い。同様の理由により、複数回の投薬を必要とする薬物の投与は、多くの場合困難であるか又は非現実的でさえあることが分かっている。
【０００３】
非経口投与後の薬物の持続放出は、獣医学において経口投与よりも一般的に好ましく、大型の家畜（例えば牛）やペットなどの動物の治療を可能にする。投薬頻度を減らすことにより、患者の安全性が改善され、注射部位合併症の発生率が低下し、薬物プロトコルの遵守が向上することが知られている。徐放性製剤は、注射時のボーラス効果を軽減し、薬物の副作用に有益な影響を与える。特定の予防的使用及び治療では、単回投与又は低頻度の投与が標準的な手順になっている。例えば、Ｈｅａｒｔｇｕａｒｄ（登録商標）、Ｓｅｎｔｉｎｅｌ（登録商標）、インターセプター薬など、ほとんどのフィラリア予防薬は月１回の投与が可能である。非経口制御放出製剤は、液体、ｉｎ  ｓｉｔｕ形成固体及び固体の形態であってよい［Ｍｅｄｌｉｃｏｔｔ，ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００４，５６：１３４５−１３６５］。最も売れている非経口制御放出製品としては、Ｐｏｓｉｌａｃ（登録商標）ミルクエンハンサー（液体懸濁液）、Ｍｉｃｏｔｉｌ（登録商標）抗生物質（液体溶液）、Ｎｕｆｌｏｒ（登録商標）抗生物質（液体溶液）、Ｒｅｖａｌｏｒ（登録商標）成長エンハンサー（固体インプラント）が挙げられる。
【０００４】
近年、徐放性製剤におけるポロキサマーの使用に関する研究が報告されている。ポロキサマーは、Ａ−Ｂ−Ａトリブロック構造（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）で配置された比較的親水性のポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）と比較的疎水性のポリ（プロピレンオキシド）（ＰＰＯ）のブロックで構成される非イオン性トリブロックコポリマーである。例えば米国特許第３７４０４２１号には、ポロキサマー水性ゲルが記載されている。このポロキサマーは、静脈注射用脂肪乳剤の乳化剤、エリキシル剤及びシロップ剤の透明度を維持するための可溶化剤、ならびに抗菌剤の湿潤剤として使用される。それらはまた、軟膏又は坐剤の基剤として、かつ錠剤結合剤又はコーターとして使用され得る［Ｓｗｅｅｔｍａｎ  （Ｅｄ．），Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ］。ポロキサマーの疎水性−親油性バランス（ＨＬＢ）は、コポリマー中のエチレンオキシド単位及びプロピレンオキシド単位の数によって特徴付けることができる。それらの両親媒性により、ポロキサマーコポリマーは、疎水性表面及び生体膜と相互作用する能力を含む、界面活性剤の特性を示す。臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える濃度の水溶液では、これらのコポリマーは、自己組織化してミセルになる。ポロキサマーミセルの直径は通常、約１０ｎｍから１００ｎｍまで変化する。ミセルのコアは、ＰＥＯブロックの水和シェルによって水性外部から分離された疎水性ＰＰＯブロックで構成される。コアは、様々な治療試薬又は診断試薬を組み込むことができる［Ｂａｒｔｒａｋｏｖａ  ＆  Ｋａｂａｎｏｖ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００８，  １３０：９８−１０６］。ポロキサマーは、一般的に文字Ｐ（「ポロキサマー」の略）とそれに続く３桁の数字で示される。最初の２桁に１００を掛けると、ＰＰＯコアの近似分子量となり、最後の桁に１０を掛けると、ＰＥＯの割合となる。例えば、Ｐ４０７は、ＰＰＯ分子量が４０００Ｄａ、ＰＥＯ含有量が７０％のポロキサマーである。追加の指定システム（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）及びＬｕｔｒｏｌ（登録商標）の商品名に関連して使用される）によると、コポリマーは、室温での物理的形態を定義する文字、液体はＬ、ペーストはＰ、フレーク（固体）はＦで示され、その後に２桁又は３桁の数字が続く。最初の桁（又は３桁の数字のうちの最初の２桁）に３００を掛けると、疎水性ブロックの近似分子量を示し、最後の桁に１０を掛けると、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）の割合を示す。例えば、Ｌ６１は、ＰＰＯ分子量が１８００Ｄａ、ＰＥＯ含有量が１０％の液体ポロキサマーであり、上記指定システムに従ってＰ１８１として示される。
【０００５】
米国特許出願第２００９０２１４６８５号は、ボツリヌス毒素及び生体適合性ポロキサマーを含む熱可塑性医薬組成物を記載している。該医薬組成物は液体として投与することができ、投与後にゲル化して、ボツリヌス毒素が数日間にわたって放出される徐放性薬物送達システムとなる。米国特許第７００８６２８号には、ポリアクリル酸などの生体接着性ポリマーによって末端修飾された、ポロキサマーなどの線状ブロックコポリマーを含む医薬組成物が記載されている。このポリマーは温度の上昇に応じて凝集することができる。米国特許第７２５０１７７号には、アクリレートなどの架橋性基で修飾されたゲル形成ポロキサマーが記載されており、これは架橋されて、薬物送達又は組織コーティングに有用な感熱性及び親油性ゲルを形成することができる。追加の背景技術として、米国特許第５０３５８９１号及び米国特許第２００４／０２４７６７２号が挙げられる。本発明者らの一部が出願した国際特許出願ＷＯ２０１２１３１６７８は、懸濁液の形態又は他の形態の未溶解活性剤中のポロキサマーを含む徐放性製剤に関し、開示された製剤は、投与量の許容量を維持しながら、単回投与でより多くの活性剤の使用を可能にする。
【０００６】
フロルフェニコールは、一般的に使用されている広域抗生物質であり、他の用途の中でも、特にブタの呼吸器疾患（ＳＲＤ）の治療に使用される。承認されたフロルフェニコールの動物用製品としては、通常３００ｍｇ／ｍＬを含有する注射用製剤がある。そのような上記動物用注射用製剤の承認された製品の１つは、有機溶媒Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）に溶解されている。フロルフェニコールを持続的に放出するための製剤は以前に開示されており、中国特許出願ＣＮ１０３２０２８０２は、ポロキサマー及び多糖類を含む徐放性製剤を対象としている。本開示は、いくつかの異なる多糖類と前記製剤中の様々な負荷の活性剤フロルフェニコールに関する。Ｇｅｎｇ  ｅｔ．  ａｌ．［Ｊ．  ｖｅｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．３８，  ５９６−６００］には、ブタにおけるフロルフェニコールの制御送達のためのｉｎ  ｓｉｔｕ形成ゲルの薬物動態試験が開示されており、ポロキサマーとセルロース系多糖類に基づく２０％担持ゲルの投与による動物血漿中のフロルフェニコールの半減期の増加を示している。
【０００７】
当該技術分野では、長期間にわたって制御された方法で薬物を放出することができる抗生物質の注射可能な製剤を提供することが必要である。当該技術分野では、様々な動物病原体に対して最小阻害濃度レベルを首尾よく維持することができるような製剤を提供することがさらに必要である。当該技術分野では、例えば２５％超から約５０％の高い薬物負荷量を有し、さらに通常の注射器で注射可能な抗生物質製剤を提供することがさらに必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第３７４０４２１号
【特許文献２】米国特許公開公報第２００９０２１４６８５号
【特許文献３】米国特許第７００８６２８号
【特許文献４】米国特許第７２５０１７７号
【特許文献５】米国特許第５０３５８９１号
【特許文献６】米国特許公開公報第２００４／０２４７６７２号
【特許文献７】国際公開第２０１２１３１６７８号
【特許文献８】中国特許公開公報第１０３２０２８０２号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】［Ｍｅｄｌｉｃｏｔｔ，ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００４，５６：１３４５−１３６５］
【非特許文献２】［Ｓｗｅｅｔｍａｎ  （Ｅｄ．），  Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ］
【非特許文献３】［Ｂａｒｔｒａｋｏｖａ  ＆  Ｋａｂａｎｏｖ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００８，  １３０：９８−１０６］
【非特許文献４】Ｇｅｎｇ  ｅｔ．  ａｌ．  ［Ｊ．  ｖｅｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．３８，  ５９６−６００］
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
徐放性製剤の安定性と、前記安定性が標的生物における活性剤放出プロファイルに経時的に及ぼす影響は重要な要因であり、多くの場合、製剤中の異なる成分間の微妙なバランスであることが証明された。驚くべきことに、抗菌剤の徐放性製剤において、ポロキサマー、有機溶媒、及び任意選択で有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体の組み合わせを利用することにより、生体外及び生体内の両方で、一貫した再現性のある放出プロファイルを有する安定した注射可能な分散製剤が得られることが分かった。したがって、一態様では、本発明は、難溶性抗菌剤、少なくとも１つのポロキサマー、有機溶媒、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体、及び水性媒体を含む組成物を提供し、前記組成物は注射可能である。さらに驚くべきことに、活性物質の負荷量が非常に高い場合、例えば３５重量％又は４０重量％を超える場合には、水中のポロキサマーと有機溶媒の組み合わせは、一貫した再現性のある放出プロファイルを有する注射可能な製剤を提供するのに十分であり得ることが判明した。したがって、さらなる態様では、本発明は、抗菌剤、少なくとも１つのポロキサマー、有機溶媒及び水性媒体を含む組成物を提供し、前記抗菌剤の濃度は３５重量％超から４０重量％超であり、前記組成物は注射可能である。
【００１１】
したがって、本明細書で提供されるのは、生物活性剤、ポロキサマー、水性担体及び有機共溶媒を含む医薬組成物であり、前記組成物は、室温で注射可能な組成物であり、ただし、前記活性剤の濃度が３５重量％未満である場合、組成物は、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質をさらに含む。１つの実施形態において、薬物の濃度が３５重量％を超え、例えば３５重量％から最大５０又は５５重量％までである場合、セルロース系物質が含まれる。さらなる実施形態において、薬物の濃度が３５重量％を超え、例えば、３５重量％から最大５０又は５５重量％までである場合、例えば、４０重量％〜５０重量％、又は４２．５重量％〜５０重量％、又は４５重量％〜５０重量％である場合、組成物はセルロース系物質を含まない。また、本明細書で提供されるのは、生物活性剤、ポロキサマー、水性担体、有機共溶媒、及び有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質を含む医薬組成物であり、前記組成物は室温で注射可能な組成物であり、前記生物活性剤の濃度は１０重量％を超え、最大３５重量％である。生物活性剤は、フロルフェニコール、リンコマイシン、タイロシン、メトロニダゾール、チルミコシン、スピラマイシン、エリスロマイシン、ツラスロマイシン、チアムリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、トリメトプリム、スルホンアミド、スルファメトキサゾール、プレウロムチリン、アビロシン、タイルバロシン、ドキシサイクリン及びオキシテトラサイクリンから選択されてよい。好ましくは、生物活性剤は、フロルフェニコールである。さらに好ましくは、フロルフェニコールは、組成物中に約２５重量％〜約５０重量％の間の負荷量で存在してよい。有機共溶媒は、約５〜約１５重量％の間の量で存在してよい。有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質は、ヒドロキシプロピルセルロースであってよい。有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール及びエタノールからなる群から選択されてよい。好ましくは、有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドンである。いくつかの好ましい実施形態において、医薬組成物は、Ｎ−メチルピロリドンである有機溶媒を含み、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース系物質は、ヒドロキシプロピルセルロースであり、生物活性剤は、２５重量％〜５０重量％の間の濃度のフロルフェニコールである。いくつかの他の好ましい実施形態において、医薬組成物は、Ｎ−メチルピロリドンである有機溶媒と、３５重量％〜５０重量％の間の濃度のフロルフェニコールとを含む。また、本明細書では、前記組成物中の薬理学的に有効な用量の抗生物質を非ヒト動物に投与することにより、前記動物の動物感染症の治療に使用するための、本明細書で定義される医薬組成物を提供する。好ましくは、該組成物は、治療コースごとに前記非ヒト動物に単回投与される。さらに好ましくは、投与は、筋肉内注射又は皮下注射を含む。いくつかの実施形態において、感染症は、ブタ病原体によって引き起こされ得る。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】選択された組成物からのフロルフェニコールの放出プロファイルを模式的に表す。
【図２】添加した有機溶媒の効果としてのフロルフェニコールの放出プロファイルを模式的に表す。
【図３】本発明に係る組成物の単回投与後のフロルフェニコールの血漿濃度と、市販製品の２回投与後のフロルフェニコールの血漿濃度との対比を表す。
【図４】本発明に係るさらなる組成物の単回投与後のフロルフェニコールの血漿濃度と、市販製品の２回投与後のフロルフェニコールの血漿濃度との対比を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
上述したように、本発明の徐放性組成物は、活性生物剤を含む。いくつかの実施形態において、前記生物剤は、好ましくは、水性媒体への溶解度が低いことを示す抗菌剤である。溶解度の低さは、例えば、現在の米国薬局方で定義されているように理解してよいが、以下により詳細に説明するように、製剤の文脈でよりよく理解することができる。１つの関連する実施形態において、本発明の徐放性組成物に利用される抗菌剤は、フロルフェニコール、リンコマイシン、タイロシン、メトロニダゾール、チルミコシン、スピラマイシン、エリスロマイシン、ツラスロマイシン、チアムリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、トリメトプリム、スルホンアミド、スルファメトキサゾール、プレウロムチリン、アビロシン、タイルバロシン、ドキシサイクリン及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、抗菌剤は、フロルフェニコールである。
【００１４】
本発明の原理によれば、負荷量（すなわち、注射可能な剤形で導入される生物活性剤又は抗菌剤の量）が高く、数日間にわたる長期の制御された放出が可能である。本発明の注射可能な組成物における高い負荷量は、他の要因の中でも特に、不溶性形態であり得る生物活性剤を含む製剤を有することにより促進され、それにより水性媒体中に分散体を形成する。本発明の原理によれば、製剤中に分散された抗菌剤は、ある程度、固体形態である。好ましくは、９０％を超える薬剤が不溶性形態であるが、９９．９９９％に上る薬剤が不溶性形態であってもよい。薬物の不溶性形態は、通常、溶解性のより高い塩が知られている場合でも、塩基性化合物、又は水溶性が特に低い塩を含む。
【００１５】
活性剤の固体特性によって、負荷量が異なってよい。薬物が水性媒体又はポロキサマー又は他の界面活性剤と容易に相互作用する場合、高い負荷量では、ペースト、すなわち、注射器で容易に取り込まれない（注入できない）及び／又は注射できない組成物が形成されることがある。これらの場合には、そのような薬物は、かなり低い負荷値、例えば、１２〜２０重量％で使用されてよいが、一般的には薬物負荷量は高いことが好ましい。したがって、ある実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の少なくとも約２０重量％である。
【００１６】
いくつかの他の実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の約２５〜約３０重量％の間である。いくつかの他の実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の少なくとも約３０重量％である。いくつかのさらなる実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の約３０〜約４５重量％の間である。いくつかのさらなる実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の約３５〜約５０重量％の間である。いくつかの実施形態において、負荷量は、注射可能な組成物の約３０〜約３５重量％の間である。いくつかの特定の実施形態において、生物活性剤がフロルフェニコールである場合、特定の用途に使用されるフロルフェニコールの負荷量は、２５〜５０重量％の間、例えば、２８〜３２重量％の間、又は３６〜４２重量％の間、又は４４〜４８重量％の間であってよい。
【００１７】
生物活性剤は、共溶媒とともに水性媒体中に分散体を形成する。生物活性剤は、固体の形態、例えば、粉末でなければならないことが理解される。粉末は、凝集粒子、造粒物、又はコーティングされた粉末の形態であってもよいが、好ましくは、粉末は、定義された粒径分布の純粋な原薬粉末である。いくつかの好ましい実施形態において、粉末の粒径は約９０ミクロン未満、より好ましくは約５０ミクロン未満である。より小さい粒径、又は微粉化された粉末を使用することも、有利である場合がある。理論に拘束されることなく、粒径がより小さい粉末は、通常の薬物粉末と比較して、ピーク血漿濃度の生体外での差は小さいか又はわずかであっても、生体内では、製剤から得られるピーク血漿濃度を増加させる可能性があると考えられている。微粉化された粉末又は粒径が縮小された粉末は、当該技術分野で一般に知られているように、例えば、耐衝撃性又は高せん断性の粉砕、圧力下でのふるい分け及びその他の方法により、生物活性物質の粉末から直接的に得ることができる。
【００１８】
特定の好ましい実施形態において、生物活性物質又は抗菌剤は、本発明の組成物のｉｎ  ｓｉｔｕ形成ゲルから少なくとも３日にわたって放出される。いくつかの他の実施形態において、該物質は、２〜３日にわたって放出される。いくつかのさらなる実施形態において、該物質は、４〜５日にわたって放出される。いくつかの実施形態において、該物質は、本発明の単一の注射可能な組成物から５日を超えて連続して放出される。したがって、放出は特定の速度ではなく、放出の持続時間の観点から記載してよい。生体内での放出の持続時間は、血漿中で、薬物濃度が経時的に有意なレベルを維持している間、検出される可能性がある。１つの他の実施形態において、生体内での放出の持続時間は、標的器官又は組織において、薬物濃度が経時的に有意なレベルを維持している間、検出される可能性がある。特に、活性剤が抗生物質である限り、放出の持続時間は血漿中で検出することができ、得られた濃度は特定の病原体に対する抗生物質の最小阻害濃度と比較することができる。生体外では、シンク条件の維持により、薬物放出の持続時間は、例えば以下の実施例で記載される条件で、約１２時間〜約３日となり得る。
【００１９】
本発明の原理の一部によれば、有機共溶媒、水性媒体中のポロキサマー、及び有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体の有利な組み合わせにより、相乗効果が生じ、数日間にわたって生物活性剤の安定した制御放出を可能にする。このようなセルロース誘導体を含む製剤における薬物負荷量は、約５重量％又は約１０重量％と低い可能性がある。しかしながら、抗生物質の固体特性によって、薬物負荷量は、３５重量％、又は４０重量％、又は４５重量％、又は４７．５重量％、さらには５０重量％と高くなる可能性がある。さらに、活性剤が３５重量％を超える濃度で存在する場合、ポロキサマー、水、及び本明細書で定義される有機共溶媒を含む組成物から、比較的安定した反復可能な薬物放出動態が得られることが、予想外に見出された。一方、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体の存在は、薬物負荷量が高い場合であっても有益であることが分かったが、賦形剤を含まない放出プロファイルは、制御放出剤形の薬物放出の変動性に関する現在の米国薬局方の要件を満たすのに十分な驚くべき一貫性を有していた。しかしながら、薬物負荷量が３５重量％未満である場合、組成物は、以下に記載されるように、セルロース誘導体を含むことが好ましい。
【００２０】
いくつかの実施形態によれば、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７である。
【００２１】
ポロキサマーの存在は、組成物が生理学的温度下でゲル化することを可能にし、したがって、前記ポロキサマーは、特に活性剤の未溶解粉末が大量に存在する場合に、安定したゲルの形成を可能にするために、注射可能な組成物中に適切な濃度で存在しなければならない。したがって、上述のポロキサマーの濃度は、製剤の総重量に対して８重量％を超える。薬物の性質、例えば、粒径、薬物溶解度、ポロキサマーに対するその親和性及び薬物の負荷量によって、ポロキサマーの量は、７〜９重量％と低く、最大で１６〜２０重量％であってよい。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態の相乗効果は、前記ポロキサマーを、有機共溶媒及び有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体の独特の組み合わせと組み合わせることによって達成される。セルロース誘導体と有機溶媒との化学的適合性、及びこれらの２つの成分の割合は、ポロキサマーの濃度とともに、生物活性剤の放出プロファイルを決定する。いかなるメカニズムや理論の制約も受けないとすれば、有機溶媒は生物活性剤の溶解度を増加させ得るが、ゲル自体への影響のために、生理学的条件下でのゲル形態組成物からの前記活性剤の放出速度も遅くすると仮定される。さらに、少なくともいくつかの薬物については、上述したようなセルロース誘導体の添加が生物活性剤の放出速度の増加に関与する可能性があり、有機溶媒が時間の経過に伴う全体的な放出プロファイルの変動性の減少に寄与すると仮定される。使用されるセルロース誘導体の分子量は、必要とされるレオロジー特性と意図される放出プロファイルに従って選択されてよいが、本発明のいくつかの実施形態によれば、前記セルロース誘導体と前記有機溶媒との濃度比は、通常、約１：６〜約１：２０の間であってよい。薬物が特に高い負荷量で、例えば、３５重量％を超え、４０％重量を超えて存在する場合、前記セルロース誘導体と前記有機溶媒との濃度比は、約１：１０〜約１：１００の間であってよい。
【００２３】
有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体は、通常、一般的な薬学的有機溶媒中、例えば、エタノール中にある程度溶解する。好ましくは、適切な誘導体は、例えば室温で１ｇの誘導体を１００ｍＬの９６％エタノールに溶解すると、透明な溶液を形成する。有機溶媒に少なくとも部分的に溶解する１つの適切なセルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースである。ヒドロキシプロピルセルロースは、室温で水溶液に非常に溶けやすく、温度が上がると溶けにくくなるというさらに有用な特性を有している。いかなる理論やメカニズムの制約も受けないとすれば、本発明の組成物を動物に注射すると、ヒドロキシプロピルセルロースの溶解度が低下し、それが形成されたゲルの安定性に寄与し、その結果、生物活性剤の放出をより良く制御するようになると仮定される。
【００２４】
いくつかの関連する実施形態において、上述のセルロース誘導体の濃度は、注射可能な組成物の総重量の約０．５重量％〜約１．５重量％の間である。いくつかの他の実施形態において、セルロース誘導体の濃度は、約０．５〜約１重量％の間である。薬物が非常に高い負荷量で、例えば４０％を超えて存在する場合、セルロース誘導体の濃度は、約０．０５〜約０．７重量％の間であってよい。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上述の有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール、及びエタノールからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、有機溶媒はＮＭＰである。
【００２６】
いくつかの関連する実施形態において、上述の有機溶媒の濃度は、注射可能な組成物の総重量の約１．５重量％〜約２０重量％の間である。いくつかの他の実施形態において、有機溶媒の濃度は、約３〜約１５重量％の間である。さらにいくつかの他の実施形態において、有機溶媒の濃度は、約８〜約１２重量％の間である。
【００２７】
さらに関連する実施形態において、少なくとも１つのポロキサマー、有機溶媒及びセルロース誘導体は、水性媒体に溶解する。水性媒体は通常、水であり、任意選択で塩及び／又は緩衝液などのさらに溶解した添加剤を含む。調製物中の水性媒体の量は、通常、１００％の組成物から、生物活性剤、少なくとも１つのポロキサマー、セルロース誘導体、共溶媒及び使用されている場合は他の賦形剤のそれぞれの割合を差し引いた残りである。塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム又は塩化マグネシウム等を含んでよく、緩衝液は、アルカリ金属及びリン酸塩の一塩基性、二塩基性、又は三塩基性の塩を含んでよい。
【００２８】
共溶媒、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体、及び水性媒体中のポロキサマーに存在する可能性のある相乗効果は明らかに有益であるが、薬物が非常に高い負荷量で、例えば、３５重量％超から４０重量％超で存在する場合、系の安定化に対するセルロース誘導体の効果は、薬学的に許容できる組成物を得るために必要性が少なくなる可能性があり、例えば各時点での濃度値の相対標準偏差が１０％未満の放出プロファイルを示す。以下の実施例に示されているように、例えば、４７．５重量％の負荷量のフロルフェニコールの製剤からヒドロキシプロピルセルロースを省略すると、初期の時点で相対標準偏差（ＲＳＤ）が増加するとともに穏やかなバースト効果が得られ、また、許容可能な放出プロファイルも得られた。
【００２９】
本発明の原理によれば、達成された製剤は、室温（例えば１５℃〜２５℃の間）又は低温（例えば２℃〜８℃の間）で安定した注射可能な製剤であり、（例えば、体温が３５℃を超える）動物の体内に注射すると、ゲル状に変化し、その中に組み込まれた生物活性剤の、再現性のある十分に制御された放出プロファイルを有することを特徴とする。
【００３０】
別の態様では、本発明は、抗菌剤、少なくとも１つのポロキサマー、有機溶媒、及び有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体を水性媒体中に含む注射可能な徐放性製剤の調製方法を提供し、該方法は、１）水と有機溶媒（共溶媒として知られている）を混合し、好ましくは得られた混合物を冷却するステップと、２）少なくとも１つのポロキサマー及び前記セルロース誘導体をステップ１の［冷却された］混合物に連続して又は同時に添加し、続いて溶解するまで混合するステップと、３）得られた混合物に抗菌剤を添加するステップとを有する。
【００３１】
いくつかの実施形態において、上述の有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ＤＭＳＯ、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール、及びエタノールからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、有機溶媒はＮＭＰである。
【００３２】
いくつかの実施形態において、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースである。
【００３４】
いくつかの実施形態において、ステップ３で利用される抗菌剤は、フロルフェニコール、リンコマイシン、タイロシン、メトロニダゾール、チルミコシン、スピラマイシン、エリスロマイシン、ツラスロマイシン、チアムリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、トリメトプリム、スルホンアミド、スルファメトキサゾール、プレウロムチリン、アビロシン、タイルバロシン、ドキシサイクリン及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、抗菌剤は、フロルフェニコールである。
【００３５】
本明細書及び特許請求の範囲に現れるような「生物活性剤」という用語は、「抗菌剤」、「薬物」又は「抗生物質」という用語に置き換えられる。
【００３６】
本明細書及び特許請求の範囲に現れるように、「共溶媒」という用語は、本発明の製剤において水性担体又は水と混合される有機溶媒を指す。いくつかの実施形態において、上述の有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ＤＭＳＯ、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール、及びエタノールからなる群から選択される。
【００３７】
さらなる態様では、治療を必要とする患者に、抗菌剤、少なくとも１つのポロキサマー、有機溶媒、及び任意選択で、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体を水性媒体中に含む、本明細書に一般的に記載されるような注射可能な徐放性組成物の少なくとも１回の注射を投与することにより、動物感染症を治療する方法、又は動物感染症を治療する時に使用される組成物が提供されている。好ましくは、該方法は製剤の単回投与を含むが、治療の必要性及び長さに応じて、複数回の注射を使用してよい。また、動物患者を扱う際には、動物の苦痛を減らし、病気の動物を見つけ、捕獲し、対処するために必要な労力を減らすために、取り扱いを最小限に抑えることが有利である。したがって、単回の投与が好ましい。或いは、該方法は、特定の生物活性剤に現在必要とされる回数よりも少ない投与回数である限り、製剤の複数回の投与を含む。
【００３８】
投与は、単回の注射、又は大量の注射が必要である場合の複数の部位への複数回の注射を含んでよい。本発明の製剤の利点により、難溶性薬物が比較的少量の注射で十分な量で存在するため、複数の注射部位を使用する必要がない場合がある。
【００３９】
投与は、通常、筋肉内注射である。しかしながら、投与はまた、皮下投与、腹腔内投与、皮内投与、又は特定の投与部位への投与、例えば、ウシ及びヒツジの膣内投与、肉牛の仙骨内若しくは耳内投与、乳房内投与などであってよい。
【００４０】
本発明に従って治療することができる動物感染症は、ブタの病原体によって引き起こされる感染症、ウシの感染症、家禽の感染症、愛玩動物の感染症、又は動物園の動物や野生動物の感染症を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、上述の有機溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ＤＭＳＯ、ＰＥＧ  ４００、プロピレングリコール、及びエタノールからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、有機溶媒はＮＭＰである。いくつかの実施形態において、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２３７、ポロキサマー３３８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、上述のポロキサマーは、ポロキサマー４０７である。いくつかの実施形態において、セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースである。いくつかの実施形態において、抗菌剤は、フロルフェニコール、リンコマイシン、タイロシン、メトロニダゾール、チルミコシン、スピラマイシン、エリスロマイシン、ツラスロマイシン、チアムリン、アンピシリン、アモキシシリン、クラブラン酸、ペニシリン、ストレプトマイシン、トリメトプリム、スルホンアミド、スルファメトキサゾール、プレウロムチリン、アビロシン、タイルバロシン、ドキシサイクリン及びオキシテトラサイクリンからなる群から選択される。いくつかの実際に好ましい実施形態において、抗菌剤は、フロルフェニコールである。
【実施例】
【００４２】
材料及び方法
フロルフェニコールとＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（イスラエル）から購入された。ポロキサマー４０７、１８８、３３８、及び２３７は、ＢＡＳＦの現地代理店から入手した。アモキシシリン、タイロシン、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）ポリマー（ヒドロキシプロピルセルロース）、ＰＥＧ  ４００、及びプロピレングリコールは、製薬企業からの寄贈品である。水はカラムで精製し、使用前に蒸留した。塩化ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ社（イスラエル）から購入された。
【００４３】
特に明記しない限り、フロルフェニコール注射用製剤を以下のように調製した。
【００４４】
秤量した量の水と共溶媒を室温で混合し、塩又は緩衝液を、製剤中に存在する場合は添加して混合し、溶解を達成した。秤量した量のポロキサマーとセルロース誘導体を低温室で４℃に冷却し、別々に、水と共溶媒の混合物も冷却した。次に、同じ条件下でポリマーを水と共溶媒の混合物に添加し、透明な溶液が得られるまで、マグネチックスターラーを使用して激しく混合した。次に、得られた溶液にフロルフェニコール粉末（フレーク）を添加し、低温室で２４時間混合して、調製物中での良好な分布を確保した。或いは、特に高負荷製剤の場合、秤量した量のフロルフェニコールを乳鉢に入れ、調製した溶液の秤量したアリコートを全て使い切るまで、溶液の同等のアリコートと乳鉢で混合し、幾何学的に水簸した。
【００４５】
ゲル化点の測定
ゲル化は、０．５〜１ｍＬの製剤を含むガラスチューブを、温度を上げながら反転させることによって、測定した。反転時に製剤の流下が止まった温度を一次ゲル化点とした。或いは、予備スクリーニングのために、温度を４０℃に上げ、製剤がゲル状になるまでの所要時間を記録した。
【００４６】
ゲル化点は、さらにＡｎｔｏｎ−Ｐａａｒ社のレオメーター（Ｐｈｙｓｉｃａ  ＭＣＲ  １０１）と２００μｍのギャップで分離された平行板スピンドルを使用して、せん断速度１００逆数秒の温度掃引を行い、レオメトリーで測定した。粘度曲線の二次導関数は粘度の最も急激な変化を示しており、これが真のゲル化点と考えられる。
【００４７】
フロルフェニコールの測定
ＨＰＬＣ、ＨＰ１０９０装置、及び２２４ｎｍでの吸光度を測定するＵＶ検出器を使用して、フロルフェニコールを測定した。Ａ  Ｃ−１８  ２５０ｘ４．６  ５μｍのカラムを使用し、１．２ｍｌ／ｍｉｎで溶出し、ＡＣＮ：ＤＤＷが２５：７５の移動相を使用した。フロルフェニコールは、これらの条件下で４〜４．５分で溶出した。
【００４８】
溶解試験
【００４９】
製剤からのフロルフェニコールの溶解動力学を試験するために、５ｍＬの注射器の注射筒を２ｍＬのセグメントに切断し、チューブ状のホルダーとして機能させた。一方の側面をＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）シートで閉じ、室温で製剤の約２ｍＬのアリコートを、適切な注射器を使用し１９Ｇの針を介して、前述のとおり準備したチューブ状のホルダーに正確に秤量し、製剤の注射性を評価した。次に、上面を別のＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）シートで閉じ、４０℃に予熱したオーブンに少なくとも１５分入れて、確実にゲル化されるようにした。そして、Ｐａｒａｆｉｌｍ（登録商標）シートを正確に取り外し、チューブ状のホルダーをシンカーバスケットに入れ、４０℃で２０ｒｐｍに設定されたＣａｌｅｖａ６ＳＴ溶解試験機（ＵＳＰ装置２）に直ちに移した。温度は対象動物（ブタ）の体温に合わせ、模倣するように温度を選択した。溶解媒体は、ｐＨ６．８のリン酸緩衝液ＵＳＰであり、チューブ状のホルダーあたり９００ｍＬ体積の緩衝液を使用した。所定の時間に溶解媒体からサンプルを取り出し、新しい溶解媒体でその体積を補正した。試験の終わりに、チューブ状のホルダーを溶解容器で洗浄し、激しく混合して、１００％参照として機能する材料の回収量を得た。標準偏差を伴う各時点でのフロルフェニコールの最大濃度のパーセンタイルを記録した。
【００５０】
さらに、以下に示すように、ＵＳＰ装置５（パドルオーバーディスク）を使用して、いくつかのフロルフェニコール組成物の溶解を実行した。
【００５１】
実施例１−比較例
Ａ．中国特許出願ＣＮ１０３２０２８０２に開示された製剤の効率を評価するために、前記公報の実施例７（３０％フロルフェニコール）を記載された条件下で再現して試験した。この公報には、使用したヒプロメロースのグレードに関するガイダンスがほとんどないため、試験では低濃度で見かけ粘度が２０ｃＰ未満であった２つのグレード（ＨＰＭＣ  Ｋ４Ｍ及びＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍ）を別々に試験した。簡単に説明すると、ポロキサマーを正確に秤量し、冷却し、４℃の大容量の冷水中で溶解した後、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を添加した。残りの賦形剤をストック溶液から提供し、残りの水分を添加して、完全に混合した。総量２５ｇの製剤サンプルを調製し、ＨＰＭＣ  Ｋ４Ｍを使用して調製したサンプルをサンプル調製物１．１とし、ＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍを使用して調製したサンプルをサンプル調製物１．２とした。
【００５２】
本発明に係る有機溶媒の有利な効果を試験するために、上記と同じ製剤を調製したが、今回は、Ｎ−メチルピロリドンの総溶媒重量の約２０重量％（水の２０％を有機溶媒に置き換える）を共溶媒として使用して、それぞれＨＰＭＣ  Ｋ４Ｍ及びＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍに対応するサンプル調製物１．３及びサンプル調製物１．４を得た。
【００５３】
実験条件すなわち室温では、１．１に従って調製されたサンプルと１．２に従って調製されたサンプルは、針がなくても注射器に引き込むことができないことが分かった。これは、ＣＮ１０３２０２８０２（実施例７）の開示に従って調製された前記製剤が、報告された条件下では注射不可能であるように思われたことを示す。前記注射不可能な製剤の放出プロファイル及び結果を得るために、スパチュラを利用してサンプルを供給した。さらに、共溶媒としてＮＭＰを添加すると、実用的なレベルを超えて粘度が増加したことにも言及すべきであるが（４℃でもハードゲル状態）、１．３及び１．４に従って調製したサンプルは、同様に注射できなかったが、薬物放出試験を行った。
【００５４】
Ｂ．注射可能な組成物を製造するために、従来技術の公報ＣＮ１０３２０２８０２の実施例７及び実施例６の傾向に従って、負荷量が２０％の製剤を調製した。簡単に説明すると、フロルフェニコールの負荷量は水のために減少した。サンプル調製物１．５は、共溶媒としてＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍと純水を含み、サンプル調製物１．６は、共溶媒としてＨＰＭＣＫ１５Ｍと２０重量％のＮＭＰを含んでいる。２０重量％のフロルフェニコールを有する調製物１．５及び１．６に従って得られた製剤は、試験針を介して容易に注射され、溶解試験のためのサンプル調製条件下でゲル化した。
【００５５】
１．１〜１．４に従って調製した組成物には注射可能な特性はないが、上述した製剤からのフロルフェニコールの放出プロファイルを試験するために、通常の円形半固体の充填技術でスパチュラを使用して、前記組成物をチューブに適用した。結果を以下の表１に示す。
【００５６】
表１から、一般に、例えば調製物１．１と１．３、１．２と１．４、１．５と１．６を比較すると、ＨＰＭＣを含む組成物にＮＭＰを添加すると、製剤からのフロルフェニコールの放出速度が加速し、時には変動性が減少することが分かる。
【００５７】
従来技術の公報に係る注射可能な製剤は、フロルフェニコールの負荷量が２０％しかないことが同様に分かるが、これは同じ発明者の別の公報（Ｚ．  Ｘ．  Ｇｅｎｇ，  Ｈ．  Ｍ．  Ｌｉ，  Ｊ．  Ｔｉａｎ，  Ｔ．  Ｆ．  Ｌｉｕ，  Ｚ．  Ｇ．  Ｙｕ，  Ｊ  Ｖｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，  Ｖｏｌ  ３８，  Ｉｓｓ  ６，  Ｄｅｃ  ２０１５，  ５９６−６００）によっても証明されている。従来技術に係る製剤を利用した注射可能な組成物では、より高い負荷量を達成することができなかった。
【００５８】
【表１】
2021536485.tif 000003
【００５９】
実施例２
国際特許出願ＷＯ２０１２１３１６７８に開示されている別の既知のゲルベースの徐放性製剤と比較して、本発明の原理に係るフロルフェニコール徐放性製剤の利点を評価するために、３０重量％のフロルフェニコールを含むゲルを作製した。共溶媒ＮＭＰ、セルロース系物質であるヒドロキシプロピルセルロース、及びそれらの相乗的な組み合わせの効果を分離して検討した。全ての製剤は、２５℃〜３５℃の間でゲル化を示し（個々のデータは以下に示される）、上記方法に従って放出プロファイルを評価した。製剤は、それぞれの放出プロファイルデータとともに、以下の表にまとめた。
【００６０】
調製物２．１は、本発明の実施形態によるものであり、セルロース系物質であるヒドロキシプロピルセルロースの両方を含み、調製物２．２は、共溶媒の省略による効果を示し、調製物２．３は、ヒドロキシプロピルセルロース（Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）ＥＦ）と共溶媒ＮＭＰの省略による効果を示し、調製物２．４は、共溶媒及びセルロース添加剤を含まない、ＷＯ２０１２１３１６７８による比較調製物である。（本発明の実施形態の）調製物２．５は、より低い負荷量（２０重量％のフロルフェニコール）を示し、２．６は２０％のフロルフェニコールを含み、比較のためＮＭＰを含まない。
【００６１】
調製物２．１と２．３の結果を比較すると、ＷＯ２０１２１３１６７８に係る製剤へのＮＭＰの添加により、結果間のばらつきが有意に減少するとともに、薬物放出が有意に減少することが容易に観察できる。さらに、ＷＯ２０１２１３１６７８に係る製剤にヒドロキシプロピルセルロースを添加することで、放出速度が大幅に低下し、かつ放出プロファイルの変動性が比較的大きくなる。結果によると、２つの成分（ＮＭＰとＨＰＣ）の添加だけで、変動性の低下（平均値の標準偏差が平均値に対して低くなる）をもたらす相乗効果の原因となり、純粋な水性調製物２．２及び２．３と比較して、薬物放出を増加させている。さらに、本発明に係る２０％の負荷量を有する製剤は、ヒドロキシプロピルセルロースの代わりにヒプロメロースを有するＣＮ’８０２の仮想の２０％製剤よりも変動性がさらに低く、同等であるがやや減衰したフロルフェニコールの放出を生成することが分かる（調製物１．５）。
【００６２】
結果を以下の表２及び図１にまとめた。放出プロファイルを図１に示し、エラーバーは、各時点でのＲＳＤを示す。菱形（◆）は、調製物２．１を表し、黒四角（■）は、調製物２．２を表し、黒三角（▲）は、調製物２．３を表し、Ｘ印（ｘ）は、調製物２．４を表し、「％ＦＦＣ」は、フロルフェニコールの累積的放出パーセンタイルを示し、「ｔ（ｈ）」は、実験の開始から経過した時間を時間単位で示す。
【００６３】
【表２】
2021536485.tif 000004
【００６４】
実施例３
選択した共溶媒であるＮＭＰが製剤に及ぼす影響を評価するために、調製物２．１に従ったゲルを作製し、ＮＭＰ含有量を５から２０重量％まで変化させて、調製物３．１（５重量％）及び３．２（２０重量％）を得た。
【００６５】
放出データを以下の表３に示し、プロファイルを図２に示し、エラーバーは、各時点でのＲＳＤを示す。菱形（◆）は、調製物３．１（「５重量％」として示される）を表し、黒四角（■）は、調製物２．１（「１０重量％」として示される）を表し、黒三角（▲）は、調製物３．２（「２０重量％」として示される）を表し、「％ＦＦＣ」は、フロルフェニコールの累積的放出パーセンタイルを示し、「ｔ（ｈ）」は、実験の開始から経過した時間を時間単位で示す。
【００６６】
ＮＭＰが５重量％の場合、変動性は増加するが、放出プロファイルはほとんど変化せず、２０％の場合、放出がわずかに加速されることが分かる。
【００６７】
【表３】
2021536485.tif 000005
【００６８】
実施例４
追加の共溶媒が製剤に及ぼす影響を評価するために、調製物２．１に従ってゲルを作製し、ＮＭＰをＤＭＳＯ（調製物４．１）、プロピレングリコール（調製物４．２）、ＰＥＧ  ４００（調製物４．３）又はエタノール（調製４．４）のいずれかで置換した。
【００６９】
放出プロファイルを以下の表４にまとめた。
【００７０】
ＤＭＳＯとＰＥＧ  ４００はいずれもＮＭＰと同等の放出プロファイルを示しているが、溶液のゲル化点を有意に低下させることが容易に分かる。
【００７１】
【表４】
2021536485.tif 000006
【００７２】
実施例５
本発明の生体内での効果を実証するために、ブタに対するフロルフェニコールの単回投与により、長期かつ有効な血漿レベルを実証する薬物動態試験を行った。この試験は、エルサレムのヘブライ大学の動物研究に関する内部倫理委員会によって承認された。合計６匹の動物を、２匹の３〜４ヶ月齢の雌ブタと一緒に使用した。各ブタの頸静脈に２０Ｇの中心静脈カテーテルを挿入して、採血を容易にした。全ての動物は、試験の第１の治療群において、調製物２．１の４０ｍｇ／ｋｇの単発治療を受け、そして、Ｎｕｆｌｏｒ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ−ＮＭＰにおける、フロルフェニコールが３０％の溶液）２０ｍｇ／ｋｇを４８時間ごとに２回投与するか、２週間のウォッシュアウト期間の後に、第２の治療群において別の試験治療を行った。
【００７３】
各治療投与前（時間０）と最初の投与の１、２、４、６、８、１０、２４、３０、５２、７２、９６、１４４及び１９６時間後に、血液サンプルを採取した。サンプルをヘパリン処理したチューブに収集し、血漿を直ちに分離して、分析するまで−２０℃で保存した。分析当日、サンプルに内部標準（クロラムフェニコール）を添加し、アセトニトリルで抽出した。同じ日に標準を作成した。電子スプレーイオン化（ＥＳＩ）及び多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードで２回繰り返して取得する正イオンモードで、ＵＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ａｃｃｅｓｓ  Ｍａｘ）質量分析計を使用して、親薬物であるフロルフェニコールと主代謝産物であるフロルフェニコールアミンの測定を行った。フロルフェニコール（親化合物）及びフロルフェニコールアミン（主代謝産物）の結果を得た。
【００７４】
マイクロソフト・エクセルソフトウェアを用いてデータの分析を行った。台形公式によって曲線下面積（ＡＵＣ）を得た。片対数変換によって末端勾配を特定し、指数関数的減衰データに曲線を適合させることによって勾配を算出した。適合関数を用いて、それ以降の全ての計算を行った。また、モデルが複雑であるため、特に二重注射の治療群に対しては、デコンボリューションを行わなかった。これらのＮｕｆｌｏｒ（登録商標）治療群に対して、末端勾配データも使用して４８時間の点を推定した。平均曲線からデータを算出し、該当する場合、個々の値の範囲を示す。
【００７５】
関連する比較のために、親フロルフェニコール化合物の時間に対する血漿濃度のプロットの結果を図３に示す。各グラフ上の破線は、典型的なブタの呼吸性疾患の標的病原体の最大ＭＩＣ９０の可能性を示す。エラーバーは、平均値の標準誤差を示す。矢印は、投与時間を示す。菱形（◆）は、ＮＵＦＬＯＲ（「治療：Ｎｕｆｌｏｒ  ２０ｍｇ／ｋｇｘ２、ｎ＝２」として示される）を表し、黒四角（■）は、調製物２．１（「治療Ｐ２．１、４０ｍｇ／ｋｇｘ１、ｎ＝５」として示される）を表し、「Ｃｏｎｃ．（μｇ／ｍｌ）」は、フロルフェニコールの血漿濃度を示し、「時間（時）」は、実験の開始から経過した時間を時間単位で示す。
【００７６】
これらのデータについて得られた薬物動態的パラメータを以下の表５にまとめた。
【００７７】
【表５】
2021536485.tif 000007
【００７８】
Ｎｕｆｌｏｒ（登録商標）の末端半減期を２回目の注射から算出し、１回目の注射のデータは半減期が有意に短く、初期段階で急速に排出されたことを示している。Ｎｕｆｌｏｒ治療群について報告されている最大濃度は、１回目の注射の最大濃度である。
【００７９】
本発明に係る調製物は、市販製品と比較して、単回注射の後に、ＡＵＩＣとＭＩＣに対する時間パーセンタイルによって示されるように、フロルフェニコールに対するより関連性の高い暴露をもたらすことが容易に分かる。
【００８０】
実施例６
超高負荷量の薬物を処理するシステムの能力を評価するために、フロルフェニコールの以下の製剤も本明細書に記載の方針に沿って調製した。調製物６．１は約３３重量％、調製物６．２は約３６重量％、調製物６．３は約３９重量％のフロルフェニコールを含んでいた。
【００８１】
組成物は、１６Ｇの針を介して注入可能であり、その後に注射可能であり、加熱するとゲル化し、冷却すると再び液化するなど、逆熱挙動を示した。放出プロファイルとレオロジーデータを以下の表６にまとめた。
【００８２】
【表６】
2021536485.tif 000008
【００８３】
製剤は、温度上昇に応答してゲルを生成し、各点での相対標準偏差が低いことから明らかなように、変動性が低く、制御された方法で薬物を放出したことが容易に分かる。
【００８４】
また、４５重量％以上の負荷量で組成物を調製した。フロルフェニコールを５０ミクロンのメッシュで篩にかけて、粒子径がより小さい画分を得た。製剤及び結果を以下の表７にまとめた。
【００８５】
【表７】
2021536485.tif 000009
【００８６】
パドル・オーバー・ディスク法を用いて溶解試験を行った。ｐＨ６．８のＵＳＰリン酸緩衝液９００ｍＬに１％のＣＴＡＢを添加し、約１ｇの量を試験した。レオメトリーを５００μｍのギャップで５００逆数秒行った。
【００８７】
この結果から、粒径の小ささは、放出プロファイルに悪影響を及ぼさず、非常に高い負荷量で、おそらく薬物放出をわずかに加速し、かつ超高負荷量のフロルフェニコールを注射可能な製剤として得ることができることが分かる。
【００８８】
実施例７
さらに、４７．５重量％の負荷量で組成物を調製した。実施例６と同様に、篩にかけたフロルフェニコールを用いた。製剤及び結果を以下の表８にまとめた。
【００８９】
【表８】
2021536485.tif 000010
【００９０】
この結果から、４７．５重量％のフロルフェニコールを含む組成物は、例えば周囲環境において良好な粘度と適切なゲル化点を有するとともに、注射可能とすることができることが容易に分かる。
【００９１】
さらに、ヒドロキシプロピルセルロースの量が少ない場合でも（例えば、調製物７．１及び６．７を参照）、放出プロファイルは安定したままであり（ただし実際には７．１で変動性がわずかに高くなる）、ＲＳＤは比較的低いことが分かる。
【００９２】
まったく予想外なことに、ヒドロキシプロピルセルロースなしの変動性（調製物７．２）は、依然として薬学的に許容できる範囲内であったが、わずか０．１％のセルロース添加剤であっても、放出プロファイルに悪影響を与えることなく変動性を有意に低減させた。さらに、より多くの共溶媒を添加すると（調製物７．３対７．１）、変動性がさらに改善され、セルロース添加剤を使用していない調製物７．２と比較して、さらに改善された。
【００９３】
実施例８
本発明の生体内での効果をさらに実証するために、別の薬物動態試験を実施して、ブタに対するフロルフェニコールの単回投与による長期かつ有効な血漿レベルを実証した。
【００９４】
製造者の推奨に従って、合計２０匹のブタに、調製物６．６〜６．８を４０ｍｇ／ｋｇ用いた単発治療又はＮｕｆｌｏｒ（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ−ＮＭＰにおける、フロルフェニコールが３０％の溶液）の３０ｍｇ／ｋｇの投与のいずれかを並行して行った。さらに、フロルフェニコールを４０重量％、ポロキサマー４０７を１２重量％、Ｋｌｕｃｅｌ  ＥＦを０．５重量％、ＮＭＰを５重量％、水を４２．５重量％含み、ゲル化点が２１．７℃の調製物（本明細書では８．１とする）を、４０ｍｇ／ｋｇ投与した。実施例７と同様の条件での調製物８．１の放出プロファイルを以下の表９に示す。
【００９５】
【表９】
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【００９６】
０、０．５、１、２、４、６、８、１０、１２、２４、３６、４８、５０、７２、８４、９６、１２０、１４４及び１６８時間の時点で、血液サンプルを採取した。
【００９７】
フロルフェニコールの時間に対する血漿濃度のプロットを図４に示す。図４では、各サンプル点でのフロルフェニコールの血漿濃度を示している。菱形（◆）は、Ｎｕｆｌｏｒを表し、黒四角（■）は、調製物８．１を表し、黒三角（▲）は、調製物６．６を表し、Ｘ印（ｘ）は、調製物６．７を表し、星印（＊）は、調製物６．８を表し、「Ｃ（ｎｇ／ｍＬ）」は、フロルフェニコールの血漿濃度を示し、「ｔ（ｈ）」は、実験の開始から経過した時間を時間単位で示す。
【００９８】
結果から容易に分かるように、市販製品はブタの血液から迅速に除去されるが、本発明に係る全ての調製物は、平均して７２〜８４時間の間、１０００ｎｇ／ｍＬを超える血漿レベルを維持している。注目すべきは、治療の用量補正ＡＵＣがグループ間で同等であり、生物学的利用能が制御放出製剤によって低下しなかったことが示されている点である。ピーク血漿濃度は、即時放出の市販製品で明らかに最も高かったが、調製物６．７は、薬物の粒径のみが異なる調製物６．８よりも有意に高いピーク濃度を示した。
【００９９】
病原性ブタ病原体であるブタ連鎖球菌の試験体の最小阻害濃度（実際には２ｍｃｇ／ｍＬと考えられている）を超える時間を、以下の表１０に示す。
【０１００】
【表１０】
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【０１０１】
結果から明らかなように、本発明に係る試験調製物は、ブタ連鎖球菌と戦う有意な臨床的可能性を備えた優れた結果を与える。
【０１０２】
実施例９
本発明に係る組成物が他の抗生物質を放出する能力を実証するために、３０重量％のアモキシシリンを含む製剤を調製した。調製物９．１は、共溶媒と、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース）との両方を含み、調製物９．２は、ヒドロキシプロピルセルロースのみを含み、調製物９．３は、追加の賦形剤を含まない。製剤は、フロルフェニコールについて記載された手順に沿って調製した。
【０１０３】
組成物は、１６Ｇの針を介して注入可能であり、その後に注射可能であり、加熱するとゲル化し、冷却すると再び液化するなど、逆熱挙動を示した。放出プロファイルデータを以下の表１１にまとめた。
【０１０４】
【表１１】
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【０１０５】
製剤は、ゲルを生成し、各点でのＲＳＤが低いことから明らかなように、変動性が低く、制御された方法で薬物を放出したが、ＮＭＰ又はＫｌｕｃｅｌがないと、後の段階での薬物放出がより不安定になり、これは、両方の賦形剤がない場合、製剤は、安定性の低いゲルを形成することを示す可能性があることが容易に分かる。
【０１０６】
実施例１０
本発明に係る組成物が他の抗生物質を放出する能力をさらに実証するために、タイロシン１５重量％を含む製剤を調製した。調製物１０．１は、共溶媒と、有機溶媒に少なくとも部分的に溶解するセルロース誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース）との両方を含み、調製物１０．２は、ヒドロキシプロピルセルロースのみを含み、調製物１０．３は、追加の賦形剤を含まない。製剤は、フロルフェニコールについて記載された手順に沿って調製した。
【０１０７】
組成物は、１６Ｇの針を介して注入可能であり、その後に注射可能であり、加熱するとゲル化し、冷却すると再び液化するなど逆熱挙動を示した。放出プロファイルデータを以下の表１２にまとめた。
【０１０８】
【表１２】
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【０１０９】
製剤がゲルを生成し、制御された方法で薬物を放出したことが容易に分かる。調製物１０．１は、増加した薬物溶解度をＮＭＰで補うために、わずかに多くのポロキサマーを含んでいる。１０．１の放出プロファイルは、各点、特に中間時点でのＲＳＤが低いことから明らかなように、変動性が低いことを示した。調製物１０．２は、変動性がわずかに高いことを示しているが、ＮＭＰとＫｌｕｃｅｌの両方がない場合、薬物放出の変動性はより高くなる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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