(57)【要約】  ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質が提供される。ＰＤ１バリアント又は４−１ＢＢＬバリアントを含む単離ポリペプチドも提供される。前記Ｄ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び核酸構築物、それらを発現する宿主細胞、並びにそれらの使用方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は
配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６〜Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８〜Ｅ２０５を含まないか；
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１〜Ｅ２３を含まないか；又は
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、並びに  
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、並びに、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項３】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、並びに
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項４】
ＰＤ１と４−１ＢＢＬとの間に（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項５】
ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドであって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は
配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６〜Ｖ１５０を含まず、及び
所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、並びに
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である、単離ポリペプチド。
【請求項６】
ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドであって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、及び
所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、並びに
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である、単離ポリペプチド。
【請求項７】
ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドであって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、並びに
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である、単離ポリペプチド。
【請求項８】
４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドであって、
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８〜Ｅ２０５を含まないか；又は
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１〜Ｅ２３を含まず、及び
所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、並びに
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、単離ポリペプチド。
【請求項９】
４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドであって、
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、並びに
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項１０】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は１４０アミノ酸長以下である、請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は請求項５〜請求項７のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２６アミノ酸長である、請求項１〜請求項７及び請求項１０のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１２】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３、又は１１５を含む、請求項１、請求項５、請求項１０、及び請求項１１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１３】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１、又は９５を含む、請求項１、請求項２、請求項４〜請求項６、請求項１０、及び請求項１１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１４】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３、又は１１５からなる、請求項１、請求項５、請求項１０、及び請求項１１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１５】
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１、又は９５からなる、請求項１、請求項２、請求項４〜請求項６、請求項１０、及び請求項１１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１６】
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸残基Ａ１〜Ｖ６及びＡ１〜Ｇ１４のいずれも含まない、請求項１、請求項２、請求項４、及び請求項８〜請求項１５のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１７】
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４、又は２５を含む、請求項１、請求項２、請求項４、及び請求項８〜請求項１６のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１８】
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４、又は２５からなる、請求項１〜請求項４及び請求項８〜請求項１６のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項１９】
前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含む、請求項１〜請求項３及び請求項１０〜請求項１８のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２０】
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の前記３回反復のそれぞれの間にリンカーを含む、請求項１、請求項８、及び請求項１０〜請求項１８のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項２１】
前記リンカーは単一アミノ酸リンカーである、請求項１９及び請求項２０のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項２２】
前記リンカーはグリシンである、請求項２１に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項２３】
前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン又はその断片である、請求項１９に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２４】
前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーである、請求項１９及び請求項２０のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項２５】
前記融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での配列番号５の産生収量よりも少なくとも１．５倍多く、前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現、並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２での５〜１３日間の培養を含む、請求項１〜請求項４及び請求項１０〜請求項２４のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２６】
前記融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での配列番号５の凝集体の量よりも少なくとも２０％少なく、
前記凝集体は、分子量が少なくとも３００ｋＤａであり、
前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現、並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２での５〜１３日間の培養を含む、請求項１〜請求項４及び請求項１０〜請求項２４のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２７】
前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１、請求項１９、請求項２５、及び請求項２６のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２８】
前記少なくとも８０％の同一性は少なくとも９０％の同一性を含む、請求項１〜請求項８及び請求項１０〜請求項２７のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項２９】
前記少なくとも８０％の同一性は少なくとも９５％の同一性を含む、請求項１〜請求項８及び請求項１０〜請求項２７のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド。
【請求項３０】
前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１、請求項１０〜請求項１９、及び請求項２５〜請求項２９のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項３１】
前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１、請求項１０〜請求項１９、及び請求項２５〜請求項２９のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項３２】
請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項３３】
請求項３２に記載のポリヌクレオチド、及び宿主細胞における前記ポリヌクレオチドの発現を指示するための調節エレメントを含む核酸構築物。
【請求項３４】
請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくはポリペプチド、又は請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド若しくは核酸構築物を含む宿主細胞。
【請求項３５】
請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物を宿主細胞において発現させることを含む、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又はポリペプチドを製造する方法。
【請求項３６】
前記融合タンパク質又はポリペプチドを単離することを含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は請求項３４に記載の宿主細胞を、治療を必要とする対象に投与することを含む、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療する方法。
【請求項３８】
前記対象に、前記疾患を治療するための治療薬を投与することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療に使用するための、請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は請求項３４に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
前記疾患を治療するための治療薬をさらに含む、請求項３９に記載の使用のための組成物。
【請求項４１】
免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための治療薬；及び
請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は請求項３４に記載の宿主細胞
を包装する包装材料を含む製品。
【請求項４２】
前記疾患の細胞がＰＤＬ１を発現する、請求項３７〜請求項４１のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【請求項４３】
前記疾患が過剰増殖性疾患を含む、請求項３７〜請求項４２のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【請求項４４】
前記過剰増殖性疾患ががんを含む、請求項４３に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【請求項４５】
前記がんが、リンパ腫、白血病、及び癌腫からなる群より選択される、請求項４４に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【請求項４６】
前記疾患が、免疫抑制、薬物誘発性免疫抑制、又は感染症に関連する疾患を含む、請求項３７〜請求項４２のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【請求項４７】
請求項１〜請求項３１のいずれか一項に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、請求項３２及び請求項３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は請求項３４に記載の宿主細胞の存在下において、インビトロで免疫細胞を活性化することを含む、免疫細胞を活性化する方法。
【請求項４８】
前記活性化が、ＰＤＬ１を発現する細胞又は外因性ＰＤＬ１の存在下で行われる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記活性化が抗がん剤の存在下で行われる、請求項４７及び請求項４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記疾患を治療するための前記治療薬又は前記抗がん剤が抗体を含む、請求項３８、請求項４０〜請求項４６、及び請求項４９のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、又は製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１８年７月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／６９６，３６５号及び２０１８年１２月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７８６，５９９号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張し、これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
配列表に関する記載
この出願の提出と同時に提出された、２０１９年７月７日に作成された２６８キロバイトを含む「７６０５０ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」というタイトルのＡＳＣＩＩファイルは、参照により本明細書に援用される。
【０００３】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
シグナル変換タンパク質（Ｓｉｇｎａｌ−Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＳＣＰ）としても知られるデュアルシグナル伝達タンパク質（Ｄｕａｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＤＳＰ）は、Ｉ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外アミノ末端）をＩＩ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外カルボキシル末端）に連結し、２つの活性面（two active sides）を有する融合タンパク質を形成する二機能性融合タンパク質として現在当技術分野で知られている（例えば、米国特許番号第７，５６９，６６３号及び第８，０３９，４３７号を参照）。
【０００５】
ＰＤ１は、免疫グロブリンスーパーファミリーの表面共阻害受容体である。ＰＤ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、及び多くの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で発現される。ＰＤ１は２つのリガンドを有し、それらは、どちらも共抑制性であるＰＤＬ１（Ｂ７Ｈ１、ＣＤ２７４とも称される）及びＰＤＬ２（Ｂ７ＤＣ、ＣＤ２７３）である。ＰＤＬ１は、休止及び活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、血管内皮細胞、及び膵島細胞で発現される。ＰＤＬ１は、様々な種類のがん、特にＮＳＣＬＣ、黒色腫、腎細胞がん、胃がん、肝細胞がん、皮膚がん、並びに様々な白血病がん、多発性骨髄腫などで発現されることも知られている。ＰＤＬ２の発現は、マクロファージ及び樹状細胞のみで見られ、腫瘍の種類を通して見ると、ＰＤＬ１よりもはるかに広がりが少ない。ＰＤＬ１の発現は、Ｉ型及びＩＩ型ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＬＰＳ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＶＥＧＦ、並びにサイトカインＩＬ−１０及びＩＬ−４を含む複数の炎症誘発性分子によって誘導され、ＩＦＮ−γは最も強力な誘導因子である。腫瘍の微小環境はＰＤＬ１の発現をアップレギュレートし、それによって免疫抑制を促進する。免疫攻撃に応答して、がん細胞はＰＤＬ１を過剰発現し、ＰＤＬ１はＴ細胞上のＰＤ１受容体に結合してＴ細胞の活性化を阻害し、それによりＴ細胞の攻撃を抑制して、腫瘍の免疫回避を誘導する。ＰＤ１／ＰＤＬ１経路は、以下のいくつかのメカニズムによって免疫抑制を調節する：
●  活性化Ｔ細胞のアポトーシスを誘導する。
●  細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ−ＣＤ８）活性を抑制する。
●  Ｔ細胞の増殖を阻害する。
●  Ｔ細胞のアネルギー及び疲弊を促進する。
●  制御性Ｔ細胞の機能を強化する。
●  Ｔ細胞活性化異常及びＩＬ−２産生を抑制する。
【０００６】
４−１ＢＢＬは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、強力な活性化誘導型Ｔ細胞共刺激分子である４−１ＢＢ受容体（ＣＤ１３７）の活性化リガンドである。４−１ＢＢＬは自然にホモ三量体を形成するが、４−１ＢＢを介したシグナル伝達には、４−１ＢＢＬの顕著なオリゴマー化（多量体化）が必要である。４−１ＢＢＬは、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、マクロファージなど、様々な抗原提示細胞（ＡＰＣ）に存在する。４−１ＢＢ受容体は休止Ｔ細胞又はＴ細胞株では検出されない（＜３％）が、Ｔ細胞が活性化されると４−１ＢＢは安定してアップレギュレートされる。４−１ＢＢの活性化は、生存遺伝子をアップレギュレートし、細胞分裂を促進し、サイトカイン産生を誘導し、Ｔ細胞の活性化誘導型細胞死を防ぐ。
【０００７】
さらなる背景技術には以下が含まれる。
【０００８】
Ｍａｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  ２０１５  Ｎｏｖ  ２４；１１２（４７）：Ｅ６５０６−１４。
国際公開第２０１８／０５３８８５号
国際公開第２０１８／０３２７９３号
国際公開第２０１８／００６８８１号
国際公開第２０１３／１４４７０４号
国際公開第２０１６／０２２９９４号
国際公開第２０１０／０２７８２８号
国際公開第２０１８／０８５３５８号
中国特許出願公開第１０７８５７８１９号
国際公開第２０１７／１９４６４１号
国際公開第２０１４／１８０２８８号
国際公開第２０１７／０５９１６８号
国際公開第２００１／０４９３１８号
国際公開第２０１６／１３９６６８号
国際公開第２０１４／１０６８３９号
国際公開第２０１２／０４２４８０号
米国特許出願公開第２０１５／０１８３８８１号
米国特許出願公開第２００７／０１１０７４６号
米国特許出願公開第２００７／００３６７８３号
米国特許第９５６２０８７号
【発明の概要】
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は：
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか；又は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復（repeats）を含み、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み；及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとの間に（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５を含む。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５からなる。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず；そして所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；そして所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、又は配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まず；そして所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は１４０アミノ酸長以下である。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２６アミノ酸長である。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１を含む。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３を含む。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５を含む。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９を含む。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含む。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８を含む。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１からなる。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３からなる。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５からなる。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９からなる。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５からなる。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５からなる。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３からなる。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８からなる。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２〜２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ａ１−Ｖ６及びＡ１−Ｇ１４のどれも含まない。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号  ２２、２３、２４又は２５を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５からなる。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５、１２７又は１２９を含む。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５、１２７又は１２９からなる。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３を含む。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３からなる。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含む。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドは、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復それぞれ同士の間にリンカーを含む。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは１〜６アミノ酸長を有する。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは単一アミノ酸リンカーである。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーはグリシンである。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン又はその断片でない。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン又はその断片である。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）リンカーである。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、ホモ三量体以上のホモ多量体（少なくともa homo-trimer）の形態である。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１００ｋＤである。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドは可溶性である。
【００５７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での配列番号５の産生収量よりも少なくとも１．５倍多く、前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での配列番号５の凝集体の量よりも少なくとも２０％少なく、前記凝集体は、分子量が少なくとも３００ｋＤａであり、前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記少なくとも８０％の同一性は、少なくとも９０％の同一性を含む。
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記少なくとも８０％の同一性は、少なくとも９５％の同一性を含む。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８２】
本発明のある実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００８３】
本発明のある実施形態によれば、前記ポリヌクレオチド、及び宿主細胞中において前記ポリヌクレオチドの発現を指示するための調節エレメントを含む、核酸構築物が提供される。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８及び１１２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８及び１１２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６及び１０８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００９０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００９１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６を含む。
【００９２】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記ポリペプチド又は前記ポリヌクレオチド又は前記核酸構築物を含む宿主細胞が提供される。
【００９３】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ポリヌクレオチド又は核酸構築物を宿主細胞において発現させることを含む、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又はポリペプチドを製造する方法が提供される。
【００９４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、前記融合タンパク質又は前記ポリペプチドを単離することを含む。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療する方法が提供される。
【００９６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、前記疾患を治療するための治療薬を前記対象に投与することをさらに含む。
【００９７】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療に使用するための、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は前記宿主細胞が提供される。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記組成物は、前記疾患を治療するための治療薬をさらに含む。
【００９９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための治療薬；並びに、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞、を包装する包装材料を含む製品が提供される。
【０１００】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患の細胞はＰＤＬ１を発現する。
【０１０１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は、過剰増殖性疾患を含む。
【０１０２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患は、硬化症、線維症、特発性肺線維症、乾癬、全身性硬化症／強皮症、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、肝線維症、放射線誘発性肺線維症の予防、骨髄線維症、又は後腹膜線維症を含む。
【０１０３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患はがんを含む。
【０１０４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記がんは、リンパ腫、白血病、及び癌腫からなる群より選択される。
【０１０５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は、免疫抑制又は薬物誘発性免疫抑制に関連する疾患を含む。
【０１０６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、麻疹、インフルエンザ、ＬＣＣＭ、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトライノウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、又はパルボウイルスが含まれる。
【０１０７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は感染症を含む。
【０１０８】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞の存在下において、インビトロで免疫細胞を活性化することを含む、免疫細胞を活性化する方法が提供される。
【０１０９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記活性化は、ＰＤＬ１又は外因性ＰＤＬ１を発現する細胞の存在下である。
【０１１０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤＬ１を発現する細胞は病的細胞を含む。
【０１１１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記病的細胞はがん細胞を含む。
【０１１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記活性化は抗がん剤の存在下である。
【０１１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患を治療するための前記治療薬又は前記抗がん剤は抗体を含む。
【０１１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、エドレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、シタツズマブボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルツマクソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ジレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、及びイピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）からなる群より選択される。
【０１１５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗体は、リツキシマブ及びセツキシマブからなる群より選択される。
【０１１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患を治療するための前記治療薬又は前記抗がん剤は、ＩＭｉＤ（例えば、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド）を含む。
【０１１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、活性化に続いて免疫細胞を、それを必要とする対象に養子移入することを含む。
【０１１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記免疫細胞はＴ細胞を含む。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び／又は科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似又は等価な方法及び材料を本発明の実施形態の実施又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料を以下に説明する。矛盾する場合は、定義を含む本特許明細書が優先される。また、材料、方法、及び例は例示にすぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。
【０１１９】
本発明のいくつかの実施形態は、添付の図面を参照して、単に例として本明細書に記載されている。ここでは詳細に図面を具体的に参照するが、示されている詳細は、例としてのものであり、本発明の実施形態の例示的な説明の目的のためであることが強調される。これに関して、図面と共に読まれる説明は、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。図面において：
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】図１は、Ｎ末端シグナルペプチド及びＨｉｓタグ（配列番号２６）を含む、本明細書で「ＤＳＰ１０５」（配列番号５）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の概略図である。シグナルペプチド（黒の下線付き、配列番号４）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ（黒太字）、ＰＤ１ドメイン（赤、配列番号２）、グリシンリンカー（黒）、及び４−１ＢＢＬドメイン（青、配列番号３）を示す。
【０１２１】
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ａは概略３Ｄモデルである。ＰＤ１は灰色のリボンで示され、ＰＤＬ１（ＰＤ１リガンド）は緑色のリボンで示され、４−１ＢＢＬは青色のリボンで示され、４−１ＢＢＬの２つの追加コピー（三量体を形成）は水色で示されている。
【図２Ｂ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｂは、概略的な完全な原子３Ｄモデルである。
【図２Ｃ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｃ〜図２Ｄは概略３Ｄモデルである。Ｘ線解像ドメインはその表面で表され、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされている。
【図２Ｄ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｃ〜図２Ｄは概略３Ｄモデルである。Ｘ線解像ドメインはその表面で表され、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされている。
【０１２２】
【図３】図３は、ＤＳＰ１０５（配列番号５）中で識別されたドメイン及びセグメントの概略図である。Ｉｇ様Ｖ型ドメインは水色で強調表示され（下線付き配列はＸ線で解像した）、Ｘ線で解像された部分は灰色で強調表示され、フランキング領域／非構造化領域は赤いボックスで印されている。
【０１２３】
【図４】図４は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１」（配列番号１２）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示す。上側のパネルでは、Ｘ線解像されたドメインが、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされた表面図示で示されている。ＰＤＬ１（ＰＤ１リガンド）が緑色のリボンで示されている。下側のパネルでは、４−１ＢＢＬが赤いリボンで、ＰＤ１が青いリボンで示されている。
【０１２４】
【図５】図５は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２」（配列番号１４）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示した図である。カラーコードは図４と同じである。
【０１２５】
【図６】図６は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３」（配列番号１６）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示す。カラーコードは図４と同じである。
【０１２６】
【図７】図７は、Ｅｘｐｉ２９３細胞で発現されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）及びＣＨＯ−３Ｅ７で発現されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を示す。両方の融合タンパク質は、ニッケルカラムでのシングルステップアフィニティー精製によって精製され、図示されるように、還元及び非還元条件下で分離された。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１−２：Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）の２つの別々の調製物、レーン３：Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）。
【０１２７】
【図８Ａ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９、図８Ａ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｂ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１８」（配列番号１０１、図８Ｂ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｃ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１９」（配列番号１０３、図８Ｃ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｄ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５、図８Ｄ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｅ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３、図８Ｅ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【０１２８】
【図９Ａ】図９Ａ及び図９Ｂは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を提示す。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元（図９Ａ）又は非還元（図９Ｂ）条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９７）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２２」（配列番号１１０）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５」（配列番号１）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２４」（配列番号１３３）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２５」（配列番号１３５）、及び「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３１」（配列番号１４７）。
【図９Ｂ】図９Ａ及び図９Ｂは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を提示す。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元（図９Ａ）又は非還元（図９Ｂ）条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９７）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２２」（配列番号１１０）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５」（配列番号１）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２４」（配列番号１３３）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２５」（配列番号１３５）、及び「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３１」（配列番号１４７）。
【０１２９】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ａは、ＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株上での、示された受容体の発現を示した図である。ＰＤＬ１又は４１ＢＢの表面発現レベルは、各細胞株を対応する抗体で免疫染色した後、フローサイトメトリー分析を行うことにより測定した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ｂ及び図１０Ｃは、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＤＬＤ１−ＰＤ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株への結合を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ｂ及び図１０Ｃは、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＤＬＤ１−ＰＤ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株への結合を示す。
【０１３０】
【図１１】図１１は、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株上における４−１ＢＢ受容体の発現を実証するフローサイトメトリー分析を示す。
【０１３１】
【図１２】図１２は、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７タンパク質（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５  ｖａｒ＿１７タンパク質（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５  ｖａｒ＿２１タンパク質（配列番号１０７）、及びＨｉｓタグ付きＰＤ１−４−１ＢＢＬ  ｖａｒ＿２２（配列番号１１０）が４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢシグナル伝達を促進することを示すグラフを示し、ここで、前記促進は、ＤＳＰ１０５分子の結合後におけるＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞からのＩＬ−８分泌レベルを示すＯＤ値によって示される。
【０１３２】
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ａは概略３Ｄリボンモデルである。ＰＤ１は濃い灰色のリボン（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色のリボン（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表される。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｂは、概略３Ｄ表面図示モデルである。ＰＤ１は濃い灰色の表面図示（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色の表面図示（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表される。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｃは、融合タンパク質及びその結合カウンターパートの概略３Ｄリボンモデルを示した図である。ＰＤ１は濃い灰色のリボン（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色のリボン（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表され、ＰＤ１に結合したＰＤ−Ｌ１は灰色のリボン（右側）で表され、３つの４１ＢＢ受容体は４１ＢＢ−Ｌ（左側）と複合体を形成した灰色のリボンで表される。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｄは、融合タンパク質及びその結合カウンターパートの概略３Ｄ表面図示モデルである。ＰＤ１は濃い灰色の表面図示（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色の表面図示（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表され、ＰＤ１に結合したＰＤ−Ｌ１は灰色のリボン（右側）で表され、３つの４１ＢＢ受容体は４１ＢＢ−Ｌ（左側）と複合体を形成した灰色のリボンで表される。
【発明を実施するための形態】
【０１３３】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質及びその使用方法に関する。
【０１３４】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載されるか、又は実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であるか、又は様々なやり方で実施又は実行することができる。
【０１３５】
シグナル変換タンパク質（ＳＣＰ）としても知られるデュアルシグナル伝達タンパク質（ＤＳＰ）は、Ｉ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外アミノ末端）をＩＩ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外カルボキシル末端）に連結して、２つの活性面（active sides）を有する融合タンパク質を形成した二機能性融合タンパク質として現在当技術分野で知られている。
【０１３６】
構造機能ツールを使用して、本発明者らは、改善された産生特性（例えば、より高い収率、より低い凝集体の割合（％））を有するＰＤ１バリアント及び／又は４−１ＢＢＬバリアントを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を生成することができた。これらは、一般的に（共刺激を介して）免疫細胞を活性化するために、特に、免疫細胞（例えば、がん）の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するために、有利に用いることができる。
【０１３７】
理論に拘束されるものではないが、例としてのがんの治療において本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が作用する様式は、本発明者らによって以下のように示唆されている。
【０１３８】
腫瘍細胞の表面及び腫瘍の微小環境におけるＰＤＬ１の発現が比較的高いため、ＰＤ１−４−１ＢＢＬキメラのＰＤ１部分は、分子を腫瘍及び転移部位に標的化し、腫瘍の微小環境内で融合タンパク質はＰＤＬ１に結合する。
【０１３９】
前記融合タンパク質を腫瘍細胞又は／及び腫瘍微小環境に標的化すると、腫瘍微小環境におけるＰＤ１−４−１ＢＢＬ濃度の増加及びそれに続く腫瘍部位での融合タンパク質の４−１ＢＢＬ部分のオリゴマー化が促進される。４−１ＢＢＬのオリゴマー化は４−１ＢＢシグナル伝達に必要なステップであるため、この４−１ＢＢＬの結合及びオリゴマー化は、腫瘍部位においてＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、特に腫瘍浸潤リンパ球（Ｔｕｍｏｒ−Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ、ＴＩＬ）、並びに他の免疫細胞の活性化を促進する４−１ＢＢ共刺激シグナルを伝達し、がん細胞を死滅させる。
【０１４０】
４−１ＢＢＬ−４−１ＢＢ共刺激シグナルに加えて、腫瘍部位における融合タンパク質のＰＤ１部分のＰＤＬ１への結合は、Ｔ細胞上で発現する内因性ＰＤ１と競合し、それによりＴ細胞の阻害を取り除き、腫瘍微小環境におけるＴＩＬの活性化にさらに貢献する。
【０１４１】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬの上記の活性は、腫瘍微小環境内のＴＩＬの活性化に相乗効果をもたらすと予想され、各部分の個別の効果と比較して、及びそれら２つの異なる部分を組み合わせて使用する場合の効果と比較して、より特異的でより強力な効果であると予想される。
【０１４２】
よって、本発明の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は：
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか；又は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４３】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４４】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）  前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４５】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間に（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１４６】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず；また、所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４７】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、また、所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４８】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４９】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；又は、配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まず；また、所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１５０】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「ＰＤ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １、ＣＤ２７９としても知られる）」という用語は、ＰＤＣＤ１遺伝子（遺伝子ＩＤ５１３３）のポリペプチド又は機能的ホモログ（例えば、その機能的断片）を指す。ある具体的な実施形態によれば、「ＰＤ１」という用語は、ＰＤ１ポリペプチドの機能的ホモログを指す。ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１はヒトＰＤ１である。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤ１タンパク質は、以下のＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００５００９に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０１５２】
これまでに、ＰＤ−１の２つのリガンド、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２（Ｂ７−ＤＣとしても知られる）が特定されている。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤＬ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００１２５４６３５及びＮＰ＿０５４８６２に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤＬ２タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿０７９５１５に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０１５３】
ＰＤ１に関する場合、本明細書で用いられる「機能的ホモログ」又は「機能的断片」という句は、完全長ＰＤ１の活性、例えばＰＤ−Ｌ１への結合、を維持する、前記ポリペプチドの部分を指す。
【０１５４】
結合を試験するためのアッセイは当技術分野で周知であり、フローサイトメトリー、ＢｉａＣｏｒｅ（ビアコア）、生体層干渉法（Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ、ＢＬＩ）Ｂｌｉｔｚ（登録商標）アッセイ、ＨＰＬＣが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、１ｎＭ〜１００μＭ、１０ｎＭ〜１０μＭ、１００ｎＭ〜１００μＭ、２００ｎＭ〜１０μＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合し、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、約２７０ｎＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、約８〜９μＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、前記ＰＤ１の細胞外ドメイン又はその機能的断片を含む。
【０１５９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２７を含む。
【０１６０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２７からなる。
【０１６１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２８を含む。
【０１６２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２８からなる。
【０１６３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２を含む。
【０１６４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２からなる。
【０１６５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２９を含む。
【０１６６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２９からなる。
【０１６７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号３０又は配列番号３１を含む。
【０１６８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号３０又は配列番号３１からなる。
【０１６９】
用語「ＰＤ１」は、所望の活性（つまり、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２への結合）を示す機能的ホモログ（天然、あるいは合成により／組換えにより製造）をも包含する。このようなホモログは、例えば、ポリペプチド配列番号２、２７、３０又は３１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であってもよい。
【０１７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１機能的ホモログは、ポリペプチド配列番号２、２７、３０又は３１と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であってもよい。
【０１７１】
本明細書で使用される場合、「同一性」又は「配列同一性」は、全体的な同一性、すなわち、本明細書に開示されるアミノ酸又は核酸配列の一部分ではなく全体を通しての同一性を指す。
【０１７２】
配列の同一性又は相同性は、Ｂｌａｓｔ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、及びＭＵＳＣＬＥなど、任意のタンパク質又は核酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して求めることができる。
【０１７３】
前記ホモログ（ホモログ）はまた、以下でさらに説明するように、オルソログ、又は欠失、挿入、若しくは置換バリアント（アミノ酸置換等）を指してもよい。
【０１７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１ポリペプチドは、保存的及び非保存的アミノ酸置換（本明細書では変異とも称される）を含み得る。そのような置換は当技術分野で公知であり、例えば、その内容の全体が参照により本明細書に援用されるＭａｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  ２０１５  Ｎｏｖ  ２４；１１２（４７）：Ｅ６５０６−１４、Ｊｕ  Ｙｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０１６  ｖｏｌｕｍｅ  ７，  Ａｒｔｉｃｌｅ  ｎｕｍｂｅｒ：  １３３５４  （ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３３５４）、及びＺａｃｋ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  ２０１５  ２３（１２）：２３４１−２３４８  （ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｒ．２０１５．０９．０１０）に開示されている。
【０１７５】
タンパク質に関して配列同一性の割合（％）を使用する場合、非同一の残基位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なっていることが多いことが認識されるが、ここで、保存的なアミノ酸置換においては、アミノ酸残基は、類似の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する他のアミノ酸残基へと置換され、したがって、分子の機能特性を変化させない。配列が保存的置換で異なる場合、パーセント配列同一性（％）は、置換の保存的性質を補正するために上方に調整され得る。このような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」又は「類似性」を有すると見なされる。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。典型的には、これには、完全なミスマッチではなく部分的なミスマッチとして保存的置換をスコアリングして、それによってパーセント配列同一性（％）が増加させる、ことが含まれる。したがって、例えば、同一のアミノ酸に１のスコアが与えられ、非保存的置換に０のスコアが与えられる場合、保存的置換には０と１との間のスコアが与えられる。保存的置換のスコアは、例えば、ヘニコフＳ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｓ）及びヘニコフＪＧ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＪＧ）のアルゴリズムに従って計算される［Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋｓ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １９９２，  ８９（２２）：１０９１５−９］。
【０１７６】
ある具体的な実施形態によれば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するＶ３９、Ｌ４０、Ｎ４１、Ｙ４３、Ｒ４４、Ｍ４５、Ｓ４８、Ｎ４９、Ｑ５０、Ｔ５１、Ｄ５２、Ｋ５３、Ａ５６、Ｑ６３、Ｇ６５、Ｑ６６、Ｖ７２、Ｈ８２、Ｍ８３、Ｒ９０、Ｙ９６、Ｌ９７、Ａ１００、Ｓ１０２、Ｌ１０３、Ａ１０４、Ｐ１０５、Ｋ１０６、及びＡ１０７から選択されるアミノ酸残基に１つ又は複数のアミノ酸変異が位置する。ある具体的な実施形態によれば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するＶ３９、Ｌ４０、Ｎ４１、Ｙ４３、Ｒ４４、Ｍ４５、Ｓ４８、Ｎ４９、Ｑ５０、Ｔ５１、Ｄ５２、Ｋ５３、Ａ５６、Ｑ６３、Ｇ６５、Ｑ６６、Ｃ６８、Ｖ７２、Ｈ８２、Ｍ８３、Ｒ９０、Ｙ９６、Ｌ９７、Ａ１００、Ｓ１０２、Ｌ１０３、Ａ１０４、Ｐ１０５、Ｋ１０６、及びＡ１０７から選択されるアミノ酸残基に１つ又は複数のアミノ酸変異が位置する。
【０１７７】
ある具体的な実施形態によれば、１つ又は複数のアミノ酸変化は、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する（１）Ｖ３９Ｈ又はＶ３９Ｒ；（２）Ｌ４０Ｖ又はＬ４０Ｉ；（３）Ｎ４１Ｉ又はＮ４１Ｖ；（４）Ｙ４３Ｆ又はＹ４３Ｈ；（５）Ｒ４４Ｙ又はＲ４４Ｌ；（６）Ｍ４５Ｑ、Ｍ４５Ｅ、Ｍ４５Ｌ、又はＭ４５Ｄ；（７）Ｓ４８Ｄ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｎ、Ｓ４８Ｇ、又はＳ４８Ｖ；（８）Ｎ４９Ｃ、Ｎ４９Ｇ、Ｎ４９Ｙ、又はＮ４９Ｓ；（９）Ｑ５０Ｋ、Ｑ５０Ｅ、又はＱ５０Ｈ；（１０）Ｔ５１Ｖ、Ｔ５１Ｌ、又はＴ５１Ａ；（１１）Ｄ５２Ｆ、Ｄ５２Ｒ、Ｄ５２Ｙ、又はＤ５２Ｖ；（１２）Ｋ５３Ｔ又はＫ５３Ｌ；（１３）Ａ５６Ｓ又はＡ５６Ｌ；（１４）Ｑ６３Ｔ、Ｑ６３Ｉ、Ｑ６３Ｅ、Ｑ６３Ｌ、又はＱ６３Ｐ；（１５）Ｇ６５Ｎ、Ｇ６５Ｒ、Ｇ６５Ｉ、Ｇ６５Ｌ、Ｇ６５Ｆ、又はＧ６５Ｖ；（１６）Ｑ６６Ｐ；（１７）Ｖ７２Ｉ；（１８）Ｈ８２Ｑ；（１９）Ｍ８３Ｌ又はＭ８３Ｆ；（２０）Ｒ９０Ｋ；（２１）Ｙ９６Ｆ；（２２）Ｌ９７Ｙ、Ｌ９７Ｖ、又はＬ９７Ｉ；（２３）Ａ１００Ｉ又はＡ１００Ｖ；（２４）Ｓ１０２Ｔ又はＳ１０２Ａ；（２５）Ｌ１０３Ｉ、Ｌ１０３Ｙ、又はＬ１０３Ｆ；（２６）Ａ１０４Ｓ、Ａ１０４Ｈ、又はＡ１０４Ｄ；（２７）Ｐ１０５Ａ；（２８）Ｋ１０６Ｇ、Ｋ１０６Ｅ、Ｋ１０６Ｉ、Ｋ１０６Ｖ、Ｋ１０６Ｒ、又はＫ１０６Ｔ；及び（２９）Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｉ、又はＡ１０７Ｖからなる群より選択される。ある具体的な実施形態によれば、１つ又は複数のアミノ酸変化は、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する（１）Ｖ３９Ｈ又はＶ３９Ｒ；（２）Ｌ４０Ｖ又はＬ４０Ｉ；（３）Ｎ４１Ｉ又はＮ４１Ｖ；（４）Ｙ４３Ｆ又はＹ４３Ｈ；（５）Ｒ４４Ｙ又はＲ４４Ｌ；（６）Ｍ４５Ｑ、Ｍ４５Ｅ、Ｍ４５Ｌ、又はＭ４５Ｄ；（７）Ｓ４８Ｄ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｎ、Ｓ４８Ｇ、又はＳ４８Ｖ；（８）Ｎ４９Ｃ、Ｎ４９Ｇ、Ｎ４９Ｙ、又はＮ４９Ｓ；（９）Ｑ５０Ｋ、Ｑ５０Ｅ、又はＱ５０Ｈ；（１０）Ｔ５１Ｖ、Ｔ５１Ｌ、又はＴ５１Ａ；（１１）Ｄ５２Ｆ、Ｄ５２Ｒ、Ｄ５２Ｙ、又はＤ５２Ｖ；（１２）Ｋ５３Ｔ又はＫ５３Ｌ；（１３）Ａ５６Ｓ又はＡ５６Ｌ；（１４）Ｑ６３Ｔ、Ｑ６３Ｉ、Ｑ６３Ｅ、Ｑ６３Ｌ、又はＱ６３Ｐ；（１５）Ｇ６５Ｎ、Ｇ６５Ｒ、Ｇ６５Ｉ、Ｇ６５Ｌ、Ｇ６５Ｆ、又はＧ６５Ｖ；（１６）Ｑ６６Ｐ；（１７）Ｃ６８Ｓ（１８）、Ｖ７２Ｉ；（１９）Ｈ８２Ｑ；（２０）Ｍ８３Ｌ又はＭ８３Ｆ；（２１）Ｒ９０Ｋ；（２２）Ｙ９６Ｆ；（２３）Ｌ９７Ｙ、Ｌ９７Ｖ、又はＬ９７Ｉ；（２４）Ａ１００Ｉ又はＡ１００Ｖ；（２５）Ｓ１０２Ｔ又はＳ１０２Ａ；（２６）Ｌ１０３Ｉ、Ｌ１０３Ｙ、又はＬ１０３Ｆ；（２７）Ａ１０４Ｓ、Ａ１０４Ｈ、又はＡ１０４Ｄ；（２８）Ｐ１０５Ａ；（２９）Ｋ１０６Ｇ、Ｋ１０６Ｅ、Ｋ１０６Ｉ、Ｋ１０６Ｖ、Ｋ１０６Ｒ、又はＫ１０６Ｔ；及び（３０）Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｉ、又はＡ１０７Ｖからなる群より選択される。
【０１７８】
ある具体的な実施形態によれば、アミノ酸変異は、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するアミノ酸残基Ｃ９３（例えば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するアミノ酸残基Ｃ６８に相当）に位置する。ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列のアミノ酸残基９３（例えば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列のアミノ酸残基６８に相当）に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含んでいていてもよい。
【０１７９】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含む。
【０１８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３からなる。
【０１８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７４を含む。
【０１８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７４からなる。
【０１８３】
本明細書において用いられる句「配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する」、句「配列番号３１に対応する」、句「配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する」、あるいは「配列番号２に対応する」は、対応するアミノ酸残基を、他の任意のＰＤ１アミノ酸配列に対して含ませることを意図している。
【０１８４】
保存的アミノ酸置換及び非保存的アミノ酸置換についての追加的説明をさらに以下に記載する。
【０１８５】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１は、ポリペプチド配列番号１８〜２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０２００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０２０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５を含まない。
【０２６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まない。
【０２６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｐ１−Ｌ５のどれも含まない。
【０２６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｆ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｐ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８もその断片も含まない。
【０２６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８を含まない。
【０２７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号９もその断片も含まない。
【０２７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号９を含まない。
【０２７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８も配列番号９もそれらの断片も含まない。
【０２７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８も配列番号９も含まない。
【０２７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５を含む。
【０２７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１１７又は１１９を含む。
【０２７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７又は１１９を含む。
【０２７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３を含む。
【０２７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む。
【０２７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む。
【０２８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１を含む。
【０２８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８又は２１を含む。
【０２８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８を含む。
【０２８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９を含む。
【０２８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０を含む。
【０２８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１を含む。
【０２８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５を含む。
【０２８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９を含む。
【０２８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３を含む。
【０２８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５を含む。
【０２９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７９を含む。
【０２９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８１を含む。
【０２９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８３を含む。
【０２９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８７を含む。
【０２９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９１を含む。
【０２９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９５を含む。
【０２９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５を含む。
【０２９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７を含む。
【０２９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９を含む。
【０２９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５からなる。
【０３００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７又は１１９からなる。
【０３０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９からなる。
【０３０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３からなる。
【０３０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５からなる。
【０３０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５からなる。
【０３０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１からなる。
【０３０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８又は２１からなる。
【０３０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８からなる。
【０３０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９からなる。
【０３０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０からなる。
【０３１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１からなる。
【０３１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５からなる。
【０３１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９からなる。
【０３１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３からなる。
【０３１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５からなる。
【０３１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７９からなる。
【０３１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８１からなる。
【０３１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８３からなる。
【０３１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８７からなる。
【０３１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９１からなる。
【０３２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９５からなる。
【０３２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５からなる。
【０３２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７からなる。
【０３２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９からなる。
【０３２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６、８０、８２、８４、８８、９２及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０を含む。
【０３７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【０３８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４又は３５を含む。
【０３８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２を含む。
【０３８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３を含む。
【０３８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４を含む。
【０３８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５を含む。
【０３８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６を含む。
【０３８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０を含む。
【０３８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２を含む。
【０３８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４を含む。
【０３８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６を含む。
【０３９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８を含む。
【０３９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０を含む。
【０３９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２を含む。
【０３９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４を含む。
【０３９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６を含む。
【０３９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６を含む。
【０３９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８を含む。
【０３９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０を含む。
【０３９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１８０又は１２０からなる。
【０３９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【０４００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５からなる。
【０４０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２からなる。
【０４０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３からなる。
【０４０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４からなる。
【０４０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５からなる。
【０４０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６からなる。
【０４０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０からなる。
【０４０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２からなる。
【０４０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４からなる。
【０４０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６からなる。
【０４１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８からなる。
【０４１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０からなる。
【０４１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２からなる。
【０４１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４からなる。
【０４１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６からなる。
【０４１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６からなる。
【０４１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８からなる。
【０４１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０からなる。
【０４１８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１００〜２００アミノ酸、１２０〜１８０アミノ酸、１２０〜１６０、１３０〜１７０アミノ酸、１３０〜１６０、１３０〜１５０、１４０〜１６０アミノ酸、１４５〜１５５アミノ酸を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４１９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１６６アミノ酸長である。
【０４２０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５６アミノ酸長である。
【０４２１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４５〜１５５アミノ酸長である。
【０４２２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５０アミノ酸長である。
【０４２３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５０未満のアミノ酸長を含む。
【０４２４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４９未満のアミノ酸長を含む。
【０４２５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４８未満、１４７未満、１４６未満、１４５未満、１４４未満、１４３未満、１４２未満、１４１未満のアミノ酸長を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４２６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３８〜１４５アミノ酸長である。
【０４２７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４５アミノ酸長である。
【０４２８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４３アミノ酸長である。
【０４２９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４０以下のアミノ酸長である。
【０４３０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０、少なくとも１３３、少なくとも１３７、少なくとも１３８アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４３１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４３２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１４８アミノ酸長を含む。
【０４３３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２６アミノ酸長である。
【０４３４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１４８アミノ酸長である。
【０４３５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１４０アミノ酸長である。
【０４３６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１４０アミノ酸長である。
【０４３７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２７〜１４０アミノ酸長である。
【０４３８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２８〜１４０アミノ酸長である。
【０４３９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３０〜１４０アミノ酸長である。
【０４４０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３０〜１３５アミノ酸長である。
【０４４１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３５〜１４０アミノ酸長を含む。
【０４４２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１３０アミノ酸長を含む。
【０４４３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２７アミノ酸長である。
【０４４４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２８アミノ酸長である。
【０４４５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３３アミノ酸長である。
【０４４６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３５アミノ酸長である。
【０４４７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３６アミノ酸長である。
【０４４８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３７アミノ酸長である。
【０４４９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３８アミノ酸長である。
【０４５０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４０アミノ酸長である。
【０４５１】
本明細書で用いられる用語「４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ及びＴＮＦＳＦ９としても知られる）」は、ＴＮＦＳＦ９遺伝子（遺伝子ＩＤ  ８７４４）のポリペプチド又はその機能的ホモログ、例えばその機能的断片を指す。ある具体的な実施形態によれば、用語「４−１ＢＢＬ」は、４−１ＢＢＬポリペプチドの機能的ホモログを指す。ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬはヒト４−１ＢＢＬである。ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬタンパク質はヒトタンパク質、例えば以下のGenBank Number NP_003802に提示されるヒトタンパク質を指す。
【０４５２】
本明細書で用いられる句「機能的ホモログ」又は「機能的断片」は、４−１ＢＢＬに関する場合、全長４−１ＢＢＬの活性を維持するポリペプチドの部分を指し、前記活性としては、例えば、（ｉ）４−１ＢＢに結合する、（ｉｉ）４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化する、（ｉｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞を活性化する、（ｉｖ）ホモ三量体を形成する、が挙げられる。
【０４５３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０４５４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０４５５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）が可能である。
【０４５６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）が可能である。
【０４５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００１５５２に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０４５８】
結合を試験するためのアッセイは当技術分野で公知であり、ここまでの記載及び以降の記載においてさらに説明される。
【０４５９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬは、ＳＰＲによって測定された場合、約０．１〜１０００ｎＭ、０．１〜１００ｎＭ、１〜１００ｎＭ、又は５５．２ｎＭのＫｄで４−１ＢＢに結合するが、ここで、それぞれの選択肢はクレーム発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４６０】
三量体化を試験するためのアッセイは当技術分野で周知であり、ＮＡＴＩＶＥ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ  ２Ｄゲル、ゲル濾過、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）質量分析（ＭＳ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０４６１】
本明細書で使用される、「活性化する」又は「活性化」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、貪食細胞）を刺激するプロセスであって、細胞増殖、成熟、サイトカイン産生、貪食及び／又は制御機能若しくはエフェクター機能の誘導をもたらすプロセスを指す。
【０４６２】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、共刺激を含む。
【０４６３】
本明細書で使用される場合、「共刺激する（こと）」又は「共刺激」という用語は、二次的な抗原非依存性刺激シグナル（例えば、４−１ＢＢシグナル）を伝達して免疫細胞の活性化をもたらすことを指す。
【０４６４】
ある具体的な実施形態によれば、活性化することは、阻害性シグナル（例えば、ＰＤＬ１シグナル）を抑制して免疫細胞の活性化をもたらすことを含む。
【０４６５】
刺激性シグナル又は抑制性シグナルのシグナル伝達を測定する方法は当技術分野で周知であり、以下の実施例のセクションにも開示されており、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ、ＨＰＬＣ、又はフローサイトメトリーを用いる結合アッセイ、キナーゼ活性アッセイなどの酵素活性アッセイ、並びに、例えば、ＰＣＲ、ウエスタンブロット、免疫沈降、及び免疫組織化学を用いるシグナル伝達カスケードに関与する分子の発現が挙げられるが、これらに限定されない。追加的又は代替的に、シグナルの伝達（共刺激性又は抑制性）の測定は、免疫細胞の活性化又は機能を評価することによって実施され得る。免疫細胞の活性化又は機能を評価する方法は、当技術分野で周知であり、ＣＦＳＥ染色、ＭＴＳ、アラマーブルー（Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ）、ＢＲＤＵ、チミジン取り込みなどの増殖アッセイ、ＣＦＳＥ染色などの細胞毒性アッセイ、クロム放出、Ｃａｌｃｉｎ−ＡＭ、細胞内サイトカイン染色、ＥＬＩＳＰＯＴ、及びＥＬＩＳＡなどのサイトカイン分泌アッセイ、フローサイトメトリーを用いるＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１、及びＣＤ６２Ｌなどの活性化マーカーの発現が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６６】
ある具体的な実施形態によれば、シグナル伝達活性又は活性化の測定は、以下でさらに説明するように、インビトロ又はエクスビボで、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において行われる。
【０４６７】
同じ培養条件について、シグナル伝達活性又は免疫細胞の活性化若しくは機能は、通常、コントロールとも称される同じ種の細胞であって、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質とも、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとも、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質をコードする宿主細胞とも接触していないか、あるいはビヒクルコントロールと接触した細胞におけるシグナル伝達、活性化又は機能と比較して表される。
【０４６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬは前記４−１ＢＢＬの細胞外ドメイン又はその機能的断片を含む。
【０４６９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３６を含む。
【０４７０】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３６からなる。
【０４７１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３７を含む。
【０４７２】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３７からなる。
【０４７３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３を含む。
【０４７４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３からなる。
【０４７５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３８を含む。
【０４７６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３８からなる。
【０４７７】
用語「４−１ＢＢＬ」は、（以降に規定される）所望の活性を示す機能的ホモログ（天然、あるいは合成により／組換えにより製造）をも包含する。該ホモログは、例えば、配列番号３、３６のポリペプチドと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。
【０４７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ機能的ホモログは、配列番号３、３６のポリペプチドと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。
【０４７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬポリペプチドは、ここまで及び以降にさらに説明するように、保存的アミノ酸置換を含んでいてもよい。
【０４８０】
本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬは、配列番号２２、２３、２４及び／又は２５のポリペプチドと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４及び／又は２５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３及び／又は２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｖ６を含まない。
【０４８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｇ１４を含まない。
【０４９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｖ６及びアミノ酸セグメントＡ１−Ｇ１４のいずれも含まない。
【０４９１】
本明細書において用いられる句「配列番号３に対応する」は、対応するアミノ酸残基を、任意の他の４−１ＢＢＬアミノ酸配列に対して含ませることを意図している。
【０４９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号６又は７又はその任意の断片を含まない。
【０４９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号６又は７を含まない。
【０４９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５を含む。
【０４９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３又は２４を含む。
【０４９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２又は２３を含む。
【０４９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２を含む。
【０４９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２３を含む。
【０４９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬαアミノ酸配列は配列番号２４を含む。
【０５００】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２５を含む。
【０５０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５からなる。
【０５０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３又は２４からなる。
【０５０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２又は２３からなる。
【０５０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２からなる。
【０５０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２３からなる。
【０５０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬαアミノ酸配列は配列番号２４からなる。
【０５０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２５からなる。
【０５０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まない。
【０５１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ｇ１９８−Ｅ２０５のどれも含まない。
【０５１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６６又はその任意の断片を含まない。
【０５１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６６を含まない。
【０５１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７又は１２９を含む。
【０５１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７又は１２９からなる。
【０５２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０５２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０５２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０５２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない。
【０５２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ａ１−Ｅ２３のどれも含まない。
【０５２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６７又はその任意の断片を含まない。
【０５２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６７を含まない。
【０５３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５を含む。
【０５３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番１２５からなる。
【０５３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０５３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０５３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０５３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３を含む。
【０５３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番１２３からなる。
【０５４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９及び／又は４０と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１又は４２を含む。
【０５４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０又は４１を含む。
【０５４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９又は４０を含む。
【０５４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９を含む。
【０５４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４０を含む。
【０５４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬα核酸配列は配列番号４１を含む。
【０５５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４２を含む。
【０５５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１又は４２からなる。
【０５５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０又は４１からなる。
【０５５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９又は４０からなる。
【０５５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９からなる。
【０５５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４０からなる。
【０５５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４１からなる。
【０５５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４２からなる。
【０５５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８又は１３０を含む。
【０５６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８又は１３０からなる。
【０５６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６を含む。
【０５６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６からなる。
【０５６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４を含む。
【０５７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４からなる。
【０５７３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１００〜３００アミノ酸、１５０〜２５０アミノ酸、１００〜２５０アミノ酸、１５０〜２２０アミノ酸、１８０〜２２０アミノ酸、１８０〜２１０アミノ酸、１８５〜２０５アミノ酸、１９０〜２１０アミノ酸を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０５７４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１９０〜２１０アミノ酸長である。
【０５７５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は２０４アミノ酸長である。
【０５７６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０５７７】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２００アミノ酸長である。
【０５７８】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜１９９アミノ酸長である。
【０５７９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０５８０】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７０〜１８２アミノ酸長である。
【０５８１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８４アミノ酸長である。
【０５８２】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５、１９１、１９７又は１９９アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０５８３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８４アミノ酸長である。
【０５８４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８３アミノ酸長である。
【０５８５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８２アミノ酸長である。
【０５８６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７６アミノ酸長である。
【０５８７】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は４−１ＢＢＬポリペプチドに含まれる４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０５８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記３回反復のそれぞれは、（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、（ｉｉ）４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、（ｉｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞を活性化すること、（ｉｖ）ホモ三量体を形成することの少なくとも１つが可能である。
【０５８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の前記３回反復のそれぞれの間にリンカーを含まない。
【０５９０】
他のある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の前記３回反復のそれぞれの間にリンカーを含む。当技術分野で公知の任意のリンカーを、本発明のある具体的な実施形態とともに使用してもよい。使用可能なリンカーの非限定的な例は、以下に詳細に記載されている。
【０５９１】
特定の一実施形態によれば、前記リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーである。
【０５９２】
ある具体的な実施形態によれば、反復される配列は、本明細書で定義される４−１ＢＢＬのうち任意のものであってもよい。
【０５９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記３回反復はいずれも同一の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９４】
他のある具体的な実施形態によれば、前記３回反復は別個である、すなわち、異なる４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９５】
他のある具体的な実施形態によれば、前記３回反復のうちの２つは、同一の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記反復のうちの少なくとも１つは、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む。
【０５９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記反復のうちの少なくとも１つは、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列からなる。
【０５９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２を含むアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０５９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２からなるアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０６００】
こうして、ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１を含む。
【０６０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１からなる。
【０６０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０６０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０６０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０６１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２を含む。
【０６１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２からなる。
【０６１２】
用語「ＤＳＰ」並びに「融合タンパク質」、「キメラタンパク質」又は「キメラ」は本明細書において互換的に用いられ、自然界において単一のアミノ酸配列の中には一緒に見ることのできない２つ以上の部分を有するアミノ酸配列を指す。
【０６１３】
本発明のいくつかの実施形態の融合タンパク質はＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む（本明細書においてはＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と称される）。
【０６１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は前記４−１ＢＢＬのＮ末端側にある。
【０６１５】
別のある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は前記４−１ＢＢＬのＣ末端側にある。
【０６１６】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、本明細書に規定される任意のＰＤ１；及び
（ａａ）１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む
任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示のものなど）を含むことができる。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１７】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、
配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含む
任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書で規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１８】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、
配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに
（ａａ）１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む
任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）
を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１９】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、本明細書に規定される任意のＰＤ１、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２０】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書で規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２１】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書に規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２２】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２３】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０及び／又は３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１及び／又は９５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０及び／又は３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０又は３１を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０又は３１を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０又は３１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０又は３１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び／又は９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５及び／又は３６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８、１９、２０及び／又は２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５及び／又は３６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び／又は９３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９又は９３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２、２３、２４又は２５を含む。
【０６５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４に記載のとおりである。
【０６５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２に記載のとおりである。
【０６６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３に記載のとおりである。
【０６６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４に記載のとおりである。
【０６６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２０を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２０２アミノ酸長である。これには、前記ＰＤ１アミノ酸配列が配列番号２０に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列が配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである実施形態も含まれる。
【０６７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９又は９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸９３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８５、８９又は９３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８５、８９又は９３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７８３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３を含む。
【０６８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に記載のとおりである。
【０６８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、本明細書中で規定される任意の４−１ＢＢＬである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む。
それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない。
【０６９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５を含む１７０〜１８２アミノ酸長である。
【０６９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５に記載のとおりである。
【０６９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である。
【０６９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３を含む１８４アミノ酸長である。
【０６９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３に記載のとおりである。
【０６９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、本明細書中で規定される任意の４−１ＢＢＬである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む。
それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まない。
【０６９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０６９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７又は１１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７又は１２９に記載のとおりである。
【０７００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０７０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７に記載のとおりである。
【０７０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１９を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２９を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０７０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２９に記載のとおりである。
【０７０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である。
【０７０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３を含む１８４アミノ酸長である。
【０７０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３に記載のとおりである。
【０７０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０７０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３を含む。
【０７０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に記載のとおりである。
【０７１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０７１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１を含む。
【０７１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１に記載のとおりである。
【０７１３】
本発明の具体的な実施形態で使用することができるＰＤ１アミノ酸配列と４−１ＢＢＬアミノ酸配列との具体的な組み合わせの非限定的な例は、本明細書の不可分な部分として働く、後述の実施例セクションにおける表４に提供されている。
【０７１４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチド又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチドは、可溶性である（すなわち、合成又は天然に存在する表面に固定化されていない）。
【０７１５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチド又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチドは、合成又は天然に存在する表面に固定化されている。
【０７１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、可溶性である（すなわち、合成又は天然に存在する表面に固定化されていない）。
【０７１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、合成又は天然に存在する表面に固定化されている。
【０７１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、ホモ三量体以上のホモ多量体（少なくともa homo-trimer）の形態である。
【０７１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％は、ホモ三量体以上のホモ多量体の形態であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ三量体を含む。
【０７２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ四量体を含む。
【０７２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ五量体を含む。
【０７２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ六量体を含む。
【０７２４】
三量体化を測定する方法は当技術分野で周知であり、ＮＡＴＩＶＥ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ  ２Ｄゲル、ゲル濾過、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）質量分析（ＭＳ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０７２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによって測定された分子量で少なくとも１００ｋＤ、少なくとも１２０ｋＤ、少なくとも１４０ｋＤ、少なくとも１６０ｋＤ、少なくとも１８０ｋＤである。
【０７２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１００ｋＤである。
【０７２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１４０ｋＤである。
【０７２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも２００ｋＤである。
【０７２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含まない。
【０７３０】
いくつかの実施形態では、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬはリンカーを含み、該リンカーは任意の長さであってよい。
【０７３１】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含む。
【０７３２】
当業界で公知の任意のリンカーを、本発明の具体的な実施形態とともに使用してもよい。
【０７３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質由来であってもよく、あるいは、例えばChichili et al.,（2013), Protein Sci. 22(2):153-167及びChen et al,（2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369（これらは、その全内容が参照により本明細書に取り込まれる）に説明されているものなどの実験的リンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Chen et al.,（2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369及びCrasto et al.,（2000), Protein Eng. 13(5):309-312（これらは、その全内容が参照により本明細書に取り込まれる）に記載されているものなどのリンカー設計データベース及びコンピュータープログラムを使用して設計されてもよい。
【０７３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ＰＥＧなどの合成リンカーである。
【０７３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、又はＩｇＥ）のＦｃドメイン若しくはヒンジ領域、又はその断片である。
【０７３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン又はヒンジ領域である。
【０７３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメインリンカーは、配列番号１６０を含む。
【０７３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン又はヒンジ領域である。
【０７３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメインリンカーは、配列番号１６３を含む。
【０７４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメイン又はヒンジ領域リンカーは、保存的及び非保存的アミノ酸置換（本明細書では変異とも称される）を含み得る。そのような置換は当技術分野で公知である。
【０７４１】
他の具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン若しくはヒンジ領域又はその断片ではない。
【０７４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは機能的であってもよい。例えば、限定されないが、前記リンカーは、折り畳み及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／又は前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の生物活性を改善するように機能してもよい。別の例では、前記リンカーは、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を特定の細胞型又は位置に標的化するように機能してもよい。
【０７４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはポリペプチドである。
【０７４４】
ポリペプチドリンカーの非限定的な例には、ＬＥ，  ＧＧＧＧＳ（配列番号１５０）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）の配列を有するリンカー、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１５１）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）の配列を有するリンカー、（Ｇｌｙ）８の配列を有するリンカー、（Ｇｌｙ）６の配列を有するリンカー、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１〜３）（配列番号１５２）の配列を有するリンカー、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ  ＝  ２〜５）（配列番号１５３）の配列を有するリンカー、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１５４）の配列を有するリンカー、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号１５５）の配列を有するリンカー、ＰＡＰＡＰ（配列番号１５６）の配列を有するリンカー、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１５７）の配列を有するリンカー、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１５８）の配列を有するリンカー、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１５９）の配列を有するリンカー、及び（ＸＰ）ｎ（ここで、Ｘは任意のアミノ酸、例えばＡｌａ、Ｌｙｓ、又はＧｌｕを表す）の配列を有するリンカーが含まれる。
【０７４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳ（配列番号１５０）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１５１）、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）からなる群より選択される。
【０７４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）リンカーである。
【０７４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳ×２（配列番号１５１）リンカーである。
【０７４８】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５を含む。
【０７５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５からなる。
【０７５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）リンカーである。  
【０７５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーである。  
【０７５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７を含む。
【０７６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる。
【０７６６】
いくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は１〜６アミノ酸長のリンカーを含む。
【０７６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはグリシン残基及び／又はセリン残基から実質的に構成される（例えば、グリシン及びセリンが約３０％、又は約４０％、又は約５０％、又は約６０％、又は約７０％、又は約８０％、又は約９０％、又は約９５％、又は約９７％又は１００％である）。
【０７６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは１アミノ酸リンカー（ｓｉｎｇｌｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｌｉｎｋｅｒ）である。
【０７６９】
本発明のある実施形態では、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとを連結する前記１アミノ酸はグリシンであり、本明細書中ではＰＤ１−Ｇ−４−１ＢＢＬ融合タンパク質とも呼ばれる。
【０７７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７を含む。
【０８２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１を含む。
【０８２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３を含む。
【０８２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５を含む。
【０８３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７を含む。
【０８３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１を含む。
【０８３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２を含む。
【０８３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４を含む。
【０８３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６を含む。
【０８３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３を含む。
【０８３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３を含む。
【０８３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５を含む。
【０８３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７を含む。
【０８３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９を含む。
【０８４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１を含む。
【０８４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３を含む。
【０８４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７を含む。
【０８４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７からなる。
【０８５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１からなる。
【０８５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３からなる。
【０８５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５からなる。
【０８５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７からなる。
【０８５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１からなる。
【０８５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２からなる。
【０８５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４からなる。
【０８５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６からなる。
【０８５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３からなる。
【０８６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３からなる。
【０８６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５からなる。
【０８６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７からなる。
【０８６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９からなる。
【０８６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１からなる。
【０８６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３からなる。
【０８６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる。
【０８６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３００〜９００アミノ酸長、３００〜８００アミノ酸長、３００〜６００アミノ酸長、３００〜５５０アミノ酸長、３００〜５００アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３００〜７５０アミノ酸長である。
【０８６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜７５０アミノ酸長である。
【０８７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４００アミノ酸長である。
【０８７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜３５０アミノ酸長である。
【０８７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４４８アミノ酸長、３０８〜３６２アミノ酸長、３０８〜３５１アミノ酸長、３１３〜３５１アミノ酸長、３１３〜３３９アミノ酸長、３１８〜３５１アミノ酸長、３１８〜３６２アミノ酸長、３１８〜３４０アミノ酸長、３１８〜３３２アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４８８アミノ酸長である。
【０８７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜３５１アミノ酸長である。
【０８７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３１８〜３５１アミノ酸長である。
【０８７６】
本発明のある具体的な実施形態で使用することができる具体的なＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の非限定的な例は、本明細書の不可分な部分として働く、後述の実施例セクションの表４に提供されている。
【０８７７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８７８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも１．５倍高い。
【０８７９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも２倍高い。
【０８８０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも少なくとも１．５倍高い。
【０８８２】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも少なくとも２倍高い。
【０８８３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号２の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号３の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８５】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％少なく、前記凝集体は、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＳＥＣ−ＭＡＬＳで測定されてもよい分子量が少なくとも３００ｋＤａである。
【０８８６】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも２０％少ない。
【０８８７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも５０％少ない。
【０８８８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号５の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号２の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号３の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９２】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性は、同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性は、同じ産生条件下での、配列番号５の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安定性は、同じ産生条件下での、配列番号２の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９５】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安定性は、同じ産生条件下での、配列番号３の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９６】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性は、同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性は、同じ産生条件下での、配列番号５の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安全性は、同じ産生条件下での、配列番号２の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安全性は、同じ産生条件下での、配列番号３の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０９００】
ある具体的な実施形態によれば、産生条件は、哺乳動物細胞での発現、及び３２〜３７℃、５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【０９０１】
本発明の特定の実施形態で使用可能な産生条件の非限定的な例は、下記の実施例のセクションに開示されている。
【０９０２】
よって、例えば、Ｎ末端に人工シグナルペプチド（例えば、配列番号４）及びＣ末端にＨｉｓタグと終止コドンとを含む、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドをコードする発現ベクターは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で発現される。次に、形質導入細胞を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞の製造業者（Ｔｈｅｒｍｏ社）の指示に従って、細胞特異的培地で３２〜３７℃、５〜１０％ＣＯ２で培養し、少なくとも培養５日後に、タンパク質を上清から収集して精製する。
【０９０３】
ある具体的な実施形態によれば、培養は、バッチ、分割バッチ（ｓｐｌｉｔ−ｂａｔｃｈ）、流加培養（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）、又は灌流様式で行われる。
【０９０４】
ある具体的な実施形態によれば、培養は流加培養条件下で行われる。
【０９０５】
ある具体的な実施形態によれば、培養は３７℃で行われる。
【０９０６】
ある具体的な実施形態によれば、培養を３７℃で行い３２℃へ温度移行する。この温度移行により、定常期に達する前に細胞の代謝を遅くすることができる。
【０９０７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、ＰＤＬ１に結合することが可能である。
【０９０８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、配列番号２と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９０９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、以下の少なくとも１つが可能である：
（ｉ）４−１ＢＢを結合すること、
（ｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する細胞において上記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること。
【０９１０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、配列番号３と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、以下の少なくとも１つが可能である：
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢを結合すること、
（ｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞（例えばＴ細胞）において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化すること。
【０９１３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列と配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列とを含む融合タンパク質と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号５と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１７】
結合、４−１ＢＢシグナル伝達経路の活性化、免疫細胞の活性化を測定する方法は、当技術分野で周知であり、本明細書の上記及び下記実施例のセクションでさらに説明されている。
【０９１８】
本発明のいくつかの実施形態の組成物（例えば、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸、又はそれを発現する宿主細胞）は免疫細胞を活性化することが可能であるため、それらは、インビトロ、エクスビボ、及び／又はインビボで免疫細胞を活性化する方法で使用され得る。
【０９１９】
よって、本発明の一態様によれば、免疫細胞を活性化する方法が提供され、上記方法は、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下において、インビトロ又はエクスビボで免疫細胞を活性化することを含む。
【０９２０】
本発明の別の態様によれば、Ｔ細胞を活性化する方法が提供され、上記方法は、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリぺプチド、並びにＣＤ４７を発現する細胞の存在下において、インビトロ又はエクスビボでＴ細胞を活性化することを含む。
【０９２１】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２２】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２３】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２４】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び、４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は４−１ＢＢを発現する。
【０９２６】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む。
【０９２７】
本明細書で使用される場合、「末梢単核血球（ＰＢＭＣ）」という用語は、単一の核を有する血球を指し、リンパ球、単球、及び樹状細胞（ＤＣ）を含む。
【０９２８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣは、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞からなる群より選択される。
【０９２９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞を含む。
【０９３０】
ＰＢＭＣを取得する方法（対象から全血を採取し、抗凝固剤（例えば、ヘパリン又はクエン酸塩）を含む容器に収集するなど）、並びにアフェレーシスは当技術分野で周知である。続いて、ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣのうち少なくとも１つのタイプが末梢血から精製される。全血からＰＢＭＣを精製するための当業者に公知のいくつかの方法及び試薬が存在し、白血球アフェレーシス、沈降、密度勾配遠心分離（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ）、遠心水簸、分画、例えば赤血球などの化学溶解（例えば、ＡＣＫによる）、細胞表面マーカーを使用した特定の細胞型の選択（例えば、ＦＡＣＳソーター、又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＣｅｌｌＰｒｏ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ社、若しくはＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社で商業的に利用可能な磁気細胞分離技術を使用）、及び特定の抗体による根絶（例えば、殺細胞性）などの方法による、又は陰性選択に基づくアフィニティーベースの精製（例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又はキャプチャＥＬＩＳＡ標識を使用）による、特定の細胞型の枯渇などが挙げられる。そのような方法は、例えば、ＴＨＥ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，（Ｄ．Ｎ．  Ｗｅｉｒ編）及びＦＬＯＷ  ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ  ＡＮＤ  ＣＥＬＬ  ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．  Ｒａｄｂｒｕｃｈ編、  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  ２０００）に記載されている。
【０９３１】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は腫瘍浸潤リンパ球を含む。
【０９３２】
本明細書で使用される場合、「腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）」という用語は、血流から外れて腫瘍に移動した単核白血球を指す。
【０９３３】
ある具体的な実施形態によれば、ＴＩＬは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球からなる群より選択される。
【０９３４】
ＴＩＬを取得する方法は、例えば、生検又は剖検により対象から腫瘍試料を取得し、その単一細胞懸濁液を調製するなど、当技術分野で周知である。単一細胞懸濁液は、任意の適切な方法で得ることができ、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン）を使用して腫瘍の塊を分解する）又は酵素的に（例えば、コラゲナーゼ又はＤＮａｓｅ）得ることができる。続いて、ＴＩＬのうち少なくとも１つのタイプを細胞懸濁液から精製することができる。ＴＩＬのうちの所望のタイプを精製するための当業者に公知のいくつかの方法及び試薬が存在し、細胞表面マーカーを使用した特定の細胞型の選択（例えば、ＦＡＣＳソーター、又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＣｅｌｌＰｒｏ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ社、若しくはＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社で商業的に利用可能な磁気細胞分離技術を使用）、及び特定の抗体による根絶（例えば、殺細胞）などの方法による、又は陰性選択に基づくアフィニティーベースの精製（例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又はキャプチャＥＬＩＳＡ標識を使用）による、特定の細胞型の枯渇などが挙げられる。そのような方法は、例えば、ＴＨＥ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，（Ｄ．Ｎ．  Ｗｅｉｒ編）及びＦＬＯＷ  ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ  ＡＮＤ  ＣＥＬＬ  ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．  Ｒａｄｂｒｕｃｈ編，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  ２０００）に記載されている。
【０９３５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は食細胞を含む。
【０９３６】
本明細書で使用される場合、「食細胞」という用語は、食作用が可能な細胞を指し、プロフェッショナル食細胞及びノンプロフェッショナル食細胞の両方を含む。食作用を分析する方法は当技術分野で周知であり、例えば、キリングアッセイ、フローサイトメトリー、及び／又は顕微鏡評価（生細胞イメージング、蛍光顕微鏡、共焦点顕微鏡、電子顕微鏡）が挙げられる。ある具体的な実施形態によれば、食細胞は、単球、樹状細胞（ＤＣ）、及び顆粒球からなる群より選択される。
【０９３７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は単球を含む。
【０９３８】
ある具体的な実施形態によれば、「単球」という用語は、循環血中の単球及び組織に存在するマクロファージ（単核食細胞とも称される）の両方を指す。
【０９３９】
ある具体的な実施形態によれば、単球はマクロファージを含む。通常、マクロファージの細胞表面表現型としては、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６４、Ｆ４／８０（マウス）／ＥＭＲ１（ヒト）、リゾチームＭ、ＭＡＣ−１／ＭＡＣ−３、及びＣＤ６８が含まれる。
【０９４０】
ある具体的な実施形態によれば、単球は循環血中の単球を含む。通常、循環血中の単球の細胞表面表現型としては、ＣＤ１４及びＣＤ１６（例えば、ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６−、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋＋、ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６＋）が含まれる。
【０９４１】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＤＣを含む。
【０９４２】
本明細書で使用される場合、「樹状細胞（ＤＣ）」という用語は、リンパ組織又は非リンパ組織に見られる形態学的に類似した細胞型の多様な集団の任意のメンバーを指す。ＤＣはプロフェッショナル抗原提示細胞のクラスであり、ＨＬＡ拘束性Ｔ細胞を感作する高い能力を有する。ＤＣとしては、例えば、形質細胞様樹状細胞、骨髄性樹状細胞（未成熟及び成熟樹状細胞を含む）、ランゲルハンス細胞、指状嵌入細胞、濾胞樹状細胞が含まれる。樹状細胞は、機能によって、又は表現型によって、特に細胞表面の表現型によって認識され得る。これらの細胞は、細胞表面にベール様の突起を有する独特の形態、中〜高レベルの表面ＨＬＡクラスＩＩ発現、及びＴ細胞、特にナイーブＴ細胞に抗原を提示する能力を特徴とする（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９１；  ９：２７１−１９６を参照）。通常、ＤＣの細胞表面表現型としては、ＣＤｌａ＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８６＋、又はＨＬＡ−ＤＲが含まれる。ＤＣという用語には、未成熟ＤＣ及び成熟ＤＣの両方が包含される。
【０９４３】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は顆粒球を含む。
【０９４４】
本明細書で使用される場合、「顆粒球」という用語は、細胞質に顆粒が存在することを特徴とする多形核白血球を指す。
【０９４５】
ある具体的な実施形態によれば、顆粒球は好中球を含む。
【０９４６】
ある具体的な実施形態によれば、顆粒球は肥満細胞を含む。
【０９４７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＴ細胞を含む。
【０９４８】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ３＋、かつＣＤ４＋又はＣＤ８＋表現型のいずれかを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）＋の分化したリンパ球を指す。Ｔ細胞はエフェクターＴ細胞又は制御性Ｔ細胞のいずれかであり得る。
【０９４９】
本明細書で使用される場合、「エフェクターＴ細胞」という用語は、例えばサイトカインを産生することにより他の免疫細胞を活性化若しくは指示する、又は細胞傷害活性を有するＴ細胞を指し、例えば、ＣＤ４＋、Ｔｈ１／Ｔｈ２、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球である。
【０９５０】
本明細書で使用される場合、「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」という用語は、エフェクターＴ細胞を含む他のＴ細胞、及び自然免疫系細胞の活性化を負に調節するＴ細胞を指す。Ｔｒｅｇ細胞は、エフェクターＴ細胞応答の持続的な抑制を特徴とする。特定の一実施形態によれば、ＴｒｅｇはＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞である。
【０９５１】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【０９５２】
他の具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０９５３】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はメモリーＴ細胞である。メモリーＴ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞が挙げられる。
【０９５４】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞は、目的の発現産物をコードする核酸配列で形質導入された改変Ｔ細胞を含む。
【０９５５】
ある具体的な実施形態によれば、目的の発現産物は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
【０９５６】
本明細書で使用される場合、「ＴＣＲをコードする核酸配列で形質導入される」又は「ＴＣＲをコードする核酸配列で形質導入する」という句は、ＭＨＣと関連して提示された目的の抗原に対する特異性を有するＴ細胞からの可変α鎖及びβ鎖のクローニングを指す。ＴＣＲで形質導入する方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２０１２；  ２０１２：４０４０８１；  Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｖｉｅｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１５  Ｍａｒ；２２（２）：８５−９４）及びＬａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（２００２）  ９，  ６１３−６２３に開示されている。
【０９５７】
本明細書で使用される場合、「ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入される」又は「ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入する」という句は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列のクローニングを指し、ＣＡＲは、抗原認識部分及びＴ細胞活性化部分を含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達又はＴ細胞活性化ドメインに連結された抗体の抗原結合ドメイン（例えば、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ））を含む、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はハイブリッドポリペプチドである。ＣＡＲで形質導入する方法は当技術分野で公知であり、Ｄａｖｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１２  Ｄｅｃ  １；１（９）：１５７７−１５８３、Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｖｉｅｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１５  Ｍａｒ；２２（２）：８５−９４）、Ｍａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１４  Ａｐｒ  ２４；１２３（１７）：２６２５−３５、Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  ２０１１，  ３６５（８）：７２５−７３３、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＨＪ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１６；１３（６）：３７０−３８３、及びＧｌｏｂｅｒｓｏｎ−Ｌｅｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１４；２２（５）：１０２９−１０３８に開示されている。
【０９５８】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＢ細胞を含む。
【０９５９】
本明細書で使用される場合、「Ｂ細胞」という用語は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）＋、ＣＤ１９＋、及び／又はＢ２２０＋表現型を有するリンパ球を指す。Ｂ細胞は、特定の抗原に結合し、体液性応答を誘発する能力を特徴とする。
【０９６０】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＮＫ細胞を含む。
【０９６１】
本明細書で使用される場合、「ＮＫ細胞」という用語は、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ−表現型を有する分化したリンパ球を指す。ＮＫは、特定の細胞溶解酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合して殺傷する能力、ＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する腫瘍細胞又は他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと称されるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
【０９６２】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＮＫＴ細胞を含む。
【０９６３】
本明細書で使用される「ＮＫＴ細胞」という用語は、半不変のαβＴ細胞受容体を発現するが、ＮＫ１．１などのＮＫ細胞に典型的に関連する様々な分子マーカーも発現するＴ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１−、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４−、ＣＤ８＋、及びＣＤ８−細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣＩ様分子ＣＤ１ｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で固有である。ＮＫＴ細胞は、炎症を促進する又は免疫寛容を促進するサイトカインのいずれをも産生する能力があるため、保護効果、有害効果のいずれも有する可能性がある。
【０９６４】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は健康な対象から得られる。
【０９６５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は、病状を有している対象から得る。
【０９６６】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤＬ１を発現する細胞又は外因性ＰＤＬ１の存在下で行われる。
【０９６７】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は外因性ＰＤＬ１の存在下で行われる。
【０９６８】
ある具体的な実施形態によれば、外因性ＰＤＬ１は可溶性である。
【０９６９】
他のある具体的な実施形態によれば、外因性ＰＤＬ１は固体支持体に固定化される。
【０９７０】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤＬ１を発現する細胞の存在下で行われる。
【０９７１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤＬ１を発現する細胞は、病的（疾患）細胞を含む。
【０９７２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤＬ１を発現する細胞は、がん細胞を含む。
【０９７３】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、細胞増殖、成熟、サイトカイン産生、食作用、及び／又は免疫細胞の制御機能又はエフェクター機能の誘導を起こす一次活性化シグナル［例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド複合体とＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とのライゲーション］を少なくとも伝達可能な刺激剤の存在下で行われる。ある具体的な実施形態によれば、刺激因子は、二次共刺激シグナルを伝達することも可能である。
【０９７４】
刺激剤の量及び刺激剤と免疫細胞との比率を決定する方法は、充分に当業者の能力の範囲内であり、したがって、本明細書では特定しない。
【０９７５】
刺激剤は、抗原依存性又は非依存性（すなわち、ポリクローナル）の方法で免疫細胞を活性化し得る。
【０９７６】
ある具体的な実施形態によれば、刺激剤は、抗原非特異的刺激因子を含む。
【０９７７】
非特異的刺激因子は当業者に公知である。よって、非限定的な例として、免疫細胞がＴ細胞を含む場合、抗原非特異的刺激因子は、Ｔ細胞表面構造に結合して、Ｔ細胞のポリクローナル刺激を誘導可能な薬剤であり得、非限定的な例として、抗ＣＤ２８抗体などの共刺激タンパク質と組み合わせた抗ＣＤ３抗体などが挙げられる。他の非限定的な例としては、抗ＣＤ２、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ１３４、ノッチリガンド（例えばＤｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  １／４（ＤＬＬ１／４）やＪａｇｇｅｄｌ／２）が挙げられ、これらは単独で又は抗ＣＤ３と様々に組み合わせられる。Ｔ細胞のポリクローナル刺激を誘発し得る他の薬剤には、マイトジェン、ＰＨＡ、ＰＭＡ−イオノマイシン、ＣＥＢ、及びＣｙｔｏＳｔｉｍ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）が含まれるが、これらに限定されない。ある具体的な実施形態によれば、抗原非特異的刺激因子は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体を含む。ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞刺激因子は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社から入手したＣＤ３ＣＤ２８  ＭＡＣＳｉＢｅａｄｓなどの、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８コーティングビーズを含む。
【０９７８】
ある具体的な実施形態によれば、刺激剤は、抗原特異的刺激因子を含む。
【０９７９】
抗原特異的Ｔ細胞刺激因子の非限定的な例としては、抗原負荷抗原提示細胞［ＡＰＣ、例えば、樹状細胞］及びペプチド負荷組換えＭＨＣが挙げられる。したがって、例えば、Ｔ細胞刺激因子は、所望の抗原（例えば、腫瘍抗原）が事前に負荷された、又は所望の抗原をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされた樹状細胞であり得る。
【０９８０】
ある具体的な実施形態によれば、抗原はがん抗原である。
【０９８１】
本明細書で使用される場合、「がん抗原」という用語は、非がん性細胞と比較して、がん性細胞で過剰発現されるか又はがん細胞のみで発現される抗原を指す。がん抗原は、公知のがん抗原、又はがん細胞で発生する新しい特異的抗原（すなわち、新生抗原）であり得る。
【０９８２】
公知のがん抗原の非限定的な例としては、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１Ｏ、ＭＡＧＥ−Ａｌｌ、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−ｌ、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃｌ／ＣＴ７、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳ０−１、ＬＡＧＥ−１、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１、及びＸＡＧＥ、メラノサイト分化抗原、ｐ５３、ｒａｓ、ＣＥＡ、ＭＵＣＩ、ＰＭＳＡ、ＰＳＡ、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−Ｉ、ｇｐｌＯＯ、ｇｐ７５、αアクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、βカテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−ｌ、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａｌｌ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡ０２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２及び３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、ＮＡ−８８、ＳＰ１７、及びＴＲＰ２−Ｉｎｔ２（ＭＡＲＴ−Ｉ）、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バール・ウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐｌＳＯｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈｌ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、α−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、Ｃ０−０２９、ＦＧＦ−５、０２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼１７０Ｋ、ＮＹＣＯ−Ｉ、ＲＣＡＳＩ、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、チロシナーゼ関連タンパク質、ＴＲＰ−１、又はＴＲＰ−２が挙げられる。
【０９８３】
発現され得る他の腫瘍抗原は当技術分野で周知である（例えば、ＷＯ００／２０５８１；Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（２０００）  Ｅｄｓ  Ｓｔｅｒｎ，  Ｂｅｖｅｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｃａｒｒｏｌｌ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅを参照）。これらの腫瘍抗原の配列は、公開データベースから容易に入手できるが、ＷＯ１９９２／０２０３５６（Ａ１）、ＷＯ１９９４／００５３０４（Ａ１）、ＷＯ１９９４／０２３０３１（Ａ１）、ＷＯ１９９５／０２０９７４（Ａ１）、ＷＯ１９９５／０２３８７４（Ａ１）、及びＷＯ１９９６／０２６２１４（Ａ１）にも記載されている。
【０９８４】
代替的に又は追加的に、腫瘍抗原は、例えば生検によって、対象から得られたがん細胞を使用して同定されてもよい。
【０９８５】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、刺激剤はがん細胞を含む。
【０９８６】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は抗がん剤の存在下で行われる。
【０９８７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は活性化後に精製される。
【０９８８】
したがって、本発明はまた、本発明の方法によって取得可能な単離された免疫細胞も意図している。
【０９８９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明によって使用及び／又は得られる免疫細胞は、任意の段階で、新たに単離され、将来使用ため、長期間（例えば、数ヶ月、数年）、例えば液体窒素温度で、凍結保存（すなわち、凍結）されて保存され得、細胞株であり得る。
【０９９０】
凍結保存の方法は、当業者に公知であり、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２００７０／５４１６０号及びＷＯ２００１／０３９５９４号並びに米国特許出願第ＵＳ２０１２／０１４９１０８に開示されている。
【０９９１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明によって得られた細胞は、細胞バンク又は保管庫若しくは貯蔵施設に貯蔵されていてもよい。
【０９９２】
結果として、本教示はさらに、本発明の単離免疫細胞の使用及び方法を、限定されないが、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患（例えば、過剰増殖性疾患；免疫抑制や感染症に関連する病気など）に対する養子免疫細胞療法の供給源として使用することを提案する。
【０９９３】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、本発明の方法は、前記活性化に続いて、必要とする対象に免疫細胞を養子移入することを含む。
【０９９４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明の方法によって得られる、養子細胞療法で使用するための免疫細胞が提供される。
【０９９５】
本発明の特定の実施形態に従って使用される細胞は、自家又は非自家であり得、それらは同系又は非同系であり得、対象に対して同種又は異種であり得、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０９９６】
本教示はまた、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療する方法において、本発明の組成物（例えば、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞）を使用することを意図している。
【０９９７】
よって、本発明の別の態様によれば、治療を必要とする対象に、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれをコードする宿主細胞を投与することを含む、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための方法が提供される。
【０９９８】
本発明の別の態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療に使用するための、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれをコードする宿主細胞が提供される。
【０９９９】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１０００】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００１】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００２】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００３】
本明細書において「治療する（treating）」又は「治療（treatment）」という用語は、病状（疾患、障害又は医学的状態）の発症を阻害、予防又は停止し、且つ／又は病状又は病状の兆候を減退、寛解、又は後戻りさせることを意味する。当業者は、種々の方法及びアッセイを使用して病状の発現を評価することができ、同様に、種々の方法及びアッセイを使用して、病状の減退、寛解又は後戻りを評価しうることを理解するであろう。
【１００４】
本明細書において「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、任意の年齢及び任意の性別のヒトを含む。ある具体的な実施形態によれば、「対象」という用語は、病状（疾患、障害又は医学的状態）に罹患している対象をいう。ある具体的な実施形態によれば、この用語は、病状を発症するおそれのある個体を包含する。
【１００５】
ある具体的な実施形態によれば、対象は、ＰＤＬ１を発現している細胞に関連する疾患に罹患している。
【１００６】
ある具体的な実施形態によれば、対象の罹患細胞はＰＤＬ１を発現する。
【１００７】
本明細書において「免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患」とのフレーズは、対象の免疫応答活性が、少なくとも疾患の症状を改善する又は症状の発症を遅延させるのには十分であり得るが、何らかの理由で、その際の対象の免疫応答の活性が最適には及ばない疾患をいう。
【１００８】
免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の非限定的な例には、過剰増殖性疾患、免疫抑制に関連する疾患、薬物療法（例えば、ｍＴＯＲ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ステロイド）によって引き起こされる免疫抑制、及び感染症が含まれる。
【１００９】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は、過剰増殖性疾患を含む。
【１０１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患は、硬化症、線維症、特発性肺線維症、乾癬、全身性硬化症／強皮症、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、肝線維症、放射線誘発性肺線維症の予防、骨髄線維症、又は後腹膜線維症を含む。
【１０１１】
他の具体的な実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患はがんを含む。
【１０１２】
よって、本発明の別の態様によれば、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを、必要とする対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。
【１０１３】
本明細書で使用される場合、がんという用語は、悪性がん及び前悪性がんの両方を包含する。
【１０１４】
前がん性又は良性の形態のがんに関して、任意で前悪性のがんの悪性形態への進行を停止させるために、前記組成物及び方法を適用してもよい。
【１０１５】
本発明のいくつかの実施形態の方法によって治療することができるがんは、任意の固形又は非固形のがん及び／又はがん転移であり得る。
【１０１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは悪性がんを含む。
【１０１７】
本発明のいくつかの実施形態の方法によって治療することができるがんは、任意の固形又は非固形のがん及び／又はがん転移であり得る。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例には：扁平上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮癌を含む）、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん（消化器がんを含む）、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞がん（ヘパトーマ）、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん又は腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、様々な種類の頭頸部がん、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；中等度／濾胞性ＮＨＬ；中等度びまん性ＮＨＬ；高度免疫芽球性ＮＨＬ；バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅｄ  ｌａｒｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ、ＤＬＢＣＬ）、高度リンパ芽球性ＮＨＬ；高度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病（ＣＭＬ）；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、及びＭｅｉｇｓ症候群が含まれる。好ましくは、前記がんは、乳がん、結腸直腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、黒色腫、卵巣がん、中皮腫、及び多発性骨髄腫からなる群より選択される。本発明の治療に適したがん性状態には、転移性がんが含まれる。
【１０１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは前悪性がんを含む。
【１０１９】
前悪性がん（又は前がん）は充分に特徴付けられており、当技術分野で公知である（例えば、Ｂｅｒｍａｎ  ＪＪ．  ａｎｄ  Ｈｅｎｓｏｎ  ＤＥ．，  ２００３．  Ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃａｎｃｅｒｓ：  ａ  ｍｅｔａｄａｔａ  ａｐｐｒｏａｃｈ．  ＢＭＣ  Ｍｅｄ  Ｉｎｆｏｒｍ  Ｄｅｃｉｓ  Ｍａｋ．  ３：８を参照）。本発明の方法による治療に適した前悪性がんのクラスには、後天性の小さな又は顕微鏡的な前悪性がん、核異型を伴う後天性の大きな病変、がんに進行する遺伝性過形成症候群で発生する前駆病変、並びに後天性びまん性過形成及びびまん性化生が含まれる。小さな又は顕微鏡的な前悪性がんの例には、ＨＧＳＩＬ（子宮頸部の高度扁平上皮内病変）、ＡＩＮ（肛門上皮内新生物）、声帯の異形成、（結腸の）異常な陰窩、ＰＩＮ（前立腺上皮内新生物）が含まれる。核異型を伴う後天性の大きな病変の例には、尿細管腺腫、ＡＩＬＤ（異常蛋白血症を伴う血管免疫芽球性リンパ節症）、非定型髄膜腫、胃ポリープ、大局面型類乾癬、骨髄異形成、乳頭状移行上皮内癌、過剰な芽球を伴う難治性貧血、及びシュナイダー乳頭腫が含まれる。がんに進行する遺伝性過形成症候群で発生する前駆病変の例には、非定型ほくろ症候群、Ｃ細胞腺腫症、及びＭＥＡが含まれる。後天性びまん性過形成及びびまん性化生の例には、ＡＩＤＳ、非定型リンパ過形成、骨パジェット病、移植後リンパ増殖性疾患、及び潰瘍性大腸炎が含まれる。
【１０２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、急性骨髄性白血病、肛門がん、基底細胞癌、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、胆管がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄細胞性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、食道がん、卵管がん、濾胞性リンパ腫、胃がん、胃食道（ＧＥ）接合部癌、胚細胞腫瘍、ジャーミノーマ（セミノーマ）胚細胞腫瘍、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、神経膠肉腫、頭頸部がん、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、喉頭がん、平滑筋肉腫、マントル細胞リンパ腫、黒色腫、メルケル細胞癌、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔（口）がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、末梢神経鞘腫瘍（神経線維肉腫）、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、腹膜がん、前立腺がん、腎細胞癌、唾液腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、軟部肉腫、扁平上皮癌、滑膜肉腫、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、尿管がん、尿道がん、子宮がん、膣がん又は外陰がんである。
【１０２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、急性骨髄性白血病、膀胱がん、乳がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、上皮性卵巣がん、上皮性腫瘍、卵管がん、濾胞性リンパ腫、多形性膠芽腫、肝細胞癌、頭頸部がん、白血病、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣がん、前立腺がん、又は腎細胞癌である。
【１０２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫、白血病及び癌腫からなる群より選択される。
【１０２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫、白血病、大腸がん、膵臓がん、卵巣がん、肺がん及び扁平上皮癌からなる群より選択される。
【１０２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは大腸がんである。
【１０２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは卵巣癌である。
【１０２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは肺癌である。
【１０２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは頭頸部癌である。
【１０２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは白血病である。
【１０２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記白血病は、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血球血症性白血病（leukocythemic leukemia）、好塩基球性白血病、芽球性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胚生細胞性白血病、好酸球性白血病、（）ｒｏｓｓ’白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病（hemoblastic Leukemia）、血球芽細胞性白血病（hemocyteblastic leukemia）、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性（リンパ行性）白血病、リンパ性白血病、リンパ肉腫細胞白血病、肥満細胞白血病、巨核球性白血病、微小骨髄芽球性白血病（micromyeloblastic leukemia）、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ型白血病、形質細胞白血病（plasma cell leukemia）、形質細胞性白血病（plasmacytic leukemia）、前骨髄球性白血病、Ｒｉｅｄｅｒ細胞白血病、シリング型白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病、及び未分化細胞白血病からなる群より選択される。
【１０３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記白血病は、前骨髄性白血病、急性骨髄性白血病又は慢性骨髄性白血病である。
【１０３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫である。
【１０３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はＢ細胞リンパ腫である。
【１０３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はＴ細胞リンパ腫である
【１０３４】
他の具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はホジキンリンパ腫である。
【１０３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫は非ホジキンリンパ腫である。
【１０３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記非ホジキンリンパ腫は、アグレッシブＮＨＬ、形質転換ＮＨＬ、インドレントＮＨＬ、再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、低悪性度ＮＨＬ、濾胞性リンパ腫、大細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、及び菌状息肉腫／セザリー症候群を含む皮膚Ｔ細胞がんからなる群より選択される。
【１０３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、多発性骨髄腫である。
【１０３８】
少なくともいくつかの実施形態によれば、前記多発性骨髄腫は：κ型の軽鎖及び／又はλ型の軽鎖を産生する多発性骨髄腫がん；原発性形質細胞白血病（ＰＣＬ）などのアグレッシブ多発性骨髄腫；ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症）、多発性骨髄腫に進行する可能性があるワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ、リンパ形質細胞性リンパ腫としても知られる）などの良性形質細胞障害；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、インドレント多発性骨髄腫、多発性骨髄腫に進行する可能性のある前悪性の多発性骨髄腫；原発性アミロイドーシスからなる群より選択される。
【１０３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、腫瘍微小環境に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を有する腫瘍、及び／又は腫瘍微小環境にＰＤＬ１が比較的高発現している腫瘍の存在によって定義される。
【１０４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんの細胞は、ＰＤＬ１を発現する。
【１０４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は、免疫抑制に関連する疾患、又は薬物療法（ｍＴＯＲ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ステロイドなど）によって引き起こされる免疫抑制を含む。
【１０４２】
本発明の具体的な実施形態によれば、前記疾患には、ＨＩＶ、はしか、インフルエンザ、ＬＣＣＭ、ＲＳＶ、ヒトライノウイルス、ＥＢＶ、ＣＭＶ、及びパルボウイルスが含まれる。
【１０４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は感染を含む。
【１０４４】
本明細書で使用される場合、「感染」又は「感染症」という用語は、病原体によって誘発される疾患を指す。病原体の具体例には、ウイルス性病原体、細菌性病原体、例えば、細胞内マイコバクテリア病原体（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）、細胞内細菌性病原体（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓなど）、又は細胞内原生動物病原体（例えば、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ及びＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａなど）などが含まれる。
【１０４５】
本発明の教示に従って治療可能な感染症を引き起こすウイルス性病原体の具体的な種類には、レトロウイルス、サーコウイルス、パルボウイルス、パポーバウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、イリドウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、ブニヤウイルス、コロナウイルス、アレナウイルス、及びフィロウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
【１０４６】
本発明の教示に従って治療され得るウイルス感染の具体的な例には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に誘発される後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、ライノウイルス感染症、ウイルス性髄膜炎、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症、Ａ型、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルス感染症、はしか、パピローマウイルス感染／疣贅、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、単純ヘルペスウイルス感染症、黄熱病、エボラウイルス感染症、狂犬病などが含まれるが、これらに限定されない。
【１０４７】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物（例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド又は核酸構築物、及び／又はそれを発現する宿主細胞）を、当技術分野で周知の鎮痛薬、化学療法剤、放射線療法剤、細胞毒性療法（コンディショニング）、ホルモン療法、抗体、及び他の治療レジメン（例えば、外科手術）を含むがこれらに限定されない他の確立された又は実験的な治療レジメンと組み合わせて対象に投与して、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患（例えば、がん）を治療することができる。
【１０４８】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物（例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド又は核酸構築物、及び／又はそれを発現する宿主細胞）を、骨髄細胞、造血幹細胞、ＰＢＭＣ、臍帯血幹細胞、及び／又は人工多能性幹細胞の移植などが挙げられるがこれに限定されない養子細胞移植と組み合わせて対象に投与することができる。
【１０４９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、抗がん剤を含む。
【１０５０】
よって、本発明の別の態様によれば、抗がん剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を必要とする対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。
【１０５１】
本発明の特定の実施形態で使用することができる抗がん剤には、以下の抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない：アシビシン（Ａｃｉｖｉｃｉｎ）；アクラルビシン（Ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）；アコダゾール塩酸塩（Ａｃｏｄａｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；アクロニン（Ａｃｒｏｎｉｎｅ）；アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）；アドゼレシン（Ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）；アルトレタミン（Ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）；アンボマイシン（Ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）；アメタントロン酢酸塩（Ａｍｅｔａｎｔｒｏｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；アミノグルテチミド（Ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）；アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；アナストロゾール（Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アントラマイシン（Ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）；アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）；アスペルリン（Ａｓｐｅｒｌｉｎ）；アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）；アゼテパ（Ａｚｅｔｅｐａ）；アゾトマイシン（Ａｚｏｔｏｍｙｃｉｎ）；バチマスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）；ベンゾデパ（Ｂｅｎｚｏｄｅｐａ）；ビカルタミド（Ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）；ビサントレン塩酸塩（Ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ビスナフィドジメシル酸塩（Ｂｉｓｎａｆｉｄｅ  Ｄｉｍｅｓｙｌａｔｅ）；ビゼレシン（Ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）；ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ブレキナルナトリウム塩（Ｂｒｅｑｕｉｎａｒ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ブロピリミン（Ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ）；ブサルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）；カクチノマイシン（Ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；カルステロン（Ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）；カラセミド（Ｃａｒａｃｅｍｉｄｅ）；カルベチマー（Ｃａｒｂｅｔｉｍｅｒ）；カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；カルムスチン（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）；カルビシン塩酸塩（Ｃａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；カルゼレシン（Ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）；セデフィンゴル（Ｃｅｄｅｆｉｎｇｏｌ）；クロラムブシル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；シロレマイシン（Ｃｉｒｏｌｅｍｙｃｉｎ）；シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）；クラドリビン（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；クリスナトールメシル酸塩（Ｃｒｉｓｎａｔｏｌ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；シクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；シタラビン（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）；ダカルバジン（Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ダクチノマイシン（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；ダウノルビシン塩酸塩（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；デシタビン（Ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；デキソルマプラチン（Ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン（Ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ）；デザグアニンメシル酸塩（Ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；ジアジクオン（Ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）；ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；ドキソルビシン塩酸塩（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ドロロキシフェン（Ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；ドロロキシフェンクエン酸塩（Ｄ��ｏｌｏｘｉｆｅｎｅ  Ｃｉｔｒａｔｅ）；ドロモスタノロンプロピオン酸塩（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ  Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；ズアゾマイシン（Ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）；エダトレキセート（Ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；エフロニチン塩酸塩（Ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エラサミトルチン（Ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）；エンロプラチン（Ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；エンプロメート（Ｅｎｐｒｏｍａｔｅ）；エピプロピジン（Ｅｐｉｐｒｏｐｉｄｉｎｅ）；エピルビシン塩酸塩（Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エルブロゾール（Ｅｒｂｕｌｏｚｏｌｅ）；エソルビシン塩酸塩（Ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エストラムスチン（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）；エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；エタニダゾール（Ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）；エトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）；エトポシドリン酸塩（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；エトプリン（Ｅｔｏｐｒｉｎｅ）；ファドロゾール塩酸塩（Ｆａｄｒｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ファザラビン（Ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）；フェンレチニド（Ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）；フロクスウリジン（Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；フルオロウラシル（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）；フルロシタビン（Ｆｌｕｒｏｃｉｔａｂｉｎｅ）；フォスキドン（Ｆｏｓｑｕｉｄｏｎｅ）；フォストリエシンナトリウム塩（Ｆｏｓｔｒｉｅｃｉｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；ゲムシタビン塩酸塩（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）；イダルビシン塩酸塩（Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；イホスファミド（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；イルモフォシン（Ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）；インターフェロンα−２ａ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−２ａ）；インターフェロンα−２ｂ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−２ｂ）；インターフェロンα−ｎ１（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−ｎ３）；インターフェロンβ−Ｉａ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｂｅｔａ−Ｉａ）；インターフェロンγ−Ｉｂ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇａｍｍａ−Ｉｂ）；イプロプラチン（Ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）；イリノテカン塩酸塩（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ランレオチド酢酸塩（Ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；レトロゾール（Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）；ロイプロリド酢酸塩（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；リアロゾール塩酸塩（Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ロメトレキソールナトリウム塩（Ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ロムスチン（Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ロソキサントロン塩酸塩（Ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；マソプロコル（Ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）；メイタンシン（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）；メクロレタミン塩酸塩（Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メゲストロール酢酸塩（Ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ  Ａｃｅｔａｔｅ）；メレンゲストロール酢酸塩（Ｍｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌ  Ａｃｅｔａｔｅ）；メルファラン（Ｍｅｌｐｈａｌａｎ）；メノガリル（Ｍｅｎｏｇａｒｉｌ）；メルカプトプリン（Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；メトトレキセートナトリウム塩（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；メトプリン（Ｍｅｔｏｐｒｉｎｅ）；メツレデパ（Ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ）；ミチンドミド（Ｍｉｔｉｎｄｏｍｉｄｅ）；ミトカルシン（Ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）；ミトクロミン（Ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）；ミトギリン（Ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）；ミトマルシン（Ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）；ミトマイシン（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）；ミトスペル（Ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；ミトタン（Ｍｉｔｏｔａｎｅ）；ミトキサントロン塩酸塩（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；マイコフェノール酸（Ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  Ａｃｉｄ）；ノコダゾール（Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）；ノガラマイシン（Ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）；オルマプラチン（Ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；オキシスラン（Ｏｘｉｓｕｒａｎ）；パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）；ペグアスパラガーゼ（Ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）；ペリオマイシン（Ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン（Ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）；ペプロマイシン硫酸塩（Ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ペルホスファミド（Ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ピポブロマン（Ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ピポスルファン（Ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；ピロキサントロン塩酸塩（Ｐｉｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；プリカマイシン（Ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）；プロメスタン（Ｐｌｏｍｅｓｔａｎｅ）；ポリフィマーナトリウム塩（Ｐｏｒｆｉｍｅｒ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ポルフィロマイシン（Ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）；プレドニムスチン（Ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン塩酸塩（Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ピューロマイシン（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）；ピューロマイシン塩酸塩（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ピラゾフリン（Ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）；リボプリン（Ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）；ログレチミド（Ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；サフィンゴール（Ｓａｆｉｎｇｏｌ）；サフィンゴール塩酸塩（Ｓａｆｉｎｇｏｌ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；セムスチン（Ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）；シムトラゼン（Ｓｉｍｔｒａｚｅｎｅ）；スパルフォセートナトリウム塩（Ｓｐａｒｆｏｓａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；スパルソマイシン（Ｓｐａｒｓｏｍｙｃｉｎ）；スピロゲルマニウム塩酸塩（Ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；スピロムスチン（Ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；スピロプラチン（Ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）；ストレプトニグリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）；ストレプトゾシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）；スロフェヌル（Ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）；タリソマイシン（Ｔａｌｉｓｏｍｙｃｉｎ）；タキソール（Ｔａｘｏｌ）；テコガランナトリウム塩（Ｔｅｃｏｇａｌ��ｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）；テガフール（Ｔｅｇａｆｕｒ）；テロキサントロン塩酸塩（Ｔｅｌｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；テモポルフィン（Ｔｅｍｏｐｏｒｆｉｎ）；テニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；テロキシロン（Ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）；テストラクトン（Ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；チアミプリン（Ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）；チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；チオテパ（Ｔｈｉｏｔｅｐａ）；チアゾフリン（Ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）；チラパザミン（Ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）；トポテカン塩酸塩（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；トレミフェンクエン酸塩（Ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ  Ｃｉｔｒａｔｅ）；トレストロン酢酸塩（Ｔｒｅｓｔｏｌｏｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；トリシリビンリン酸塩（Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；トリメトレキセート（Ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；トリメトレキセートグルクロン酸塩（Ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ  Ｇｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ）；トリプトレリン（Ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）；ツブロゾール塩酸塩（Ｔｕｂｕｌｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ）；ウレデパ（Ｕｒｅｄｅｐａ）；バプレオチド（Ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）；ベルテポルフィン（Ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）；ビンブラスチン硫酸塩（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンクリスチン硫酸塩（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンデシン（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ビンデシン硫酸塩（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビネピジン硫酸塩（Ｖｉｎｅｐｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビングリシネート硫酸塩（Ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンロイロシン硫酸塩（Ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビノレルビン酒石酸塩（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ  Ｔａｒｔｒａｔｅ）；ビンロシジン硫酸塩（Ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンゾリジン硫酸塩（Ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ボロゾール（Ｖｏｒｏｚｏｌｅ）；ゼニプラチン（Ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）；ジノスタチン（Ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）；ゾルビシン塩酸塩（Ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）。追加の抗新生物薬には、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎの“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ
ｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ“，  Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９０，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｉｎｃ．（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）の第５２章「Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ」（Ｐａｕｌ  Ｃａｌａｂｒｅｓｉ  ａｎｄ  Ｂｒｕｃｅ  Ａ．  Ｃｈａｂｎｅｒ）及びその序文（１２０２−１２６３）に開示されるものが含まれる。
【１０５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記抗がん剤は、抗体を含む。
【１０５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、エドレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、シタツズマブボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルツマクソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ジレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、及びイピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）からなる群より選択される。
【１０５４】
ある具体的な実施形態によれば、抗体は、リツキシマブ及びセツキシマブからなる群より選択される。
【１０５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記治療剤又は前記抗がん剤は、ＩＭｉＤ（例えば、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド）を含む。
【１０５６】
ある具体的な実施形態によれば、ＩＭｉＤは、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群より選択される。
【１０５７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、抗感染剤（例えば、抗生物質及び抗ウイルス剤）を含む。
【１０５８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、免疫抑制剤（例えば、ＧＣＳＦ及び他の骨髄刺激剤、ステロイド）を含む。
【１０５９】
ある具体的な実施形態によれば、併用療法には相加効果がある。
【１０６０】
ある具体的な実施形態によれば、併用療法には相乗効果がある。
【１０６１】
本発明の別の態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための治療剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を包装する包装材料を含む製品が提供される。ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療のために特定される。
【１０６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患を治療するための治療剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、は別々の容器に包装される。
【１０６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患を治療するための治療剤、並びに本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、合剤として包装される。
【１０６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１アミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６８】
よって、本発明の別の態様によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を包装する包装材料を含む製品が提供される。
【１０６９】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、別々の容器に包装される。
【１０７０】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、合剤として包装される。
【１０７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、異種の治療部分（heterologous therapeutic moiety）に付着しているか、又は異種の治療部分を含む。前記治療部分（therapeutic moiety）は、小分子化学化合物及びポリペプチドなどの任意の分子であり得る。
【１０７２】
本発明の特定の実施形態で使用され得る治療部分の非限定的な例には、細胞毒性部分、毒性部分、サイトカイン部分、免疫調節部分、ポリペプチド、抗体、薬物、化学物質、及び／又は放射性同位体が含まれる。
【１０７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記治療部分は、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、前記治療部分をコードする核酸配列と翻訳的に融合すること（translationally fusing）によって結合される。
【１０７４】
追加的又は代替的に、前記治療部分は、当業者に公知の任意の結合方法を使用して、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドに化学的に結合（カップリング）され得る。例えば、ペプチドは、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナートとも称される）（ＳＤＰＤ）（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ−３４１５；例えば、Ｃｕｍｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９８５，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １１２：  ２０７−２２４を参照）、グルタルアルデヒド結合手順（例えば、Ｇ．Ｔ．  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  １９９６，  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏを参照）、又はカルボジイミド結合手順［例えば、Ｊ．  Ｍａｒｃｈ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｒｅａｃｔｉｏｎ’ｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｐｐ．  ３４９−５０  ＆  ３７２−７４（３ｄ  ｅｄ．），  １９８５、Ｂ．  Ｎｅｉｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９７８，  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．，  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  １７：５２２、Ａ．  Ｈａｓｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９７８，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ４４７５、Ｅ．Ｐ．  Ｂｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９８６，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５０：２３９４、及びＬ．Ｊ．  Ｍａｔｈｉａｓ  １９７９，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ５６１を参照］を使用して、目的の薬剤に結合させてもよい。
【１０７５】
治療部分は、例えば、ペプチド結合（機能部分がポリペプチドである場合）を介する、又はリンカーペプチド若しくは有機ポリマーなどの他の化学部分などの、介在するリンカー要素への共有結合を介するなど、直接的又は間接的な任意の適切な化学結合を使用するなどの、当技術分野で広く実施されている標準的な化学合成技術［例えば、ｈｙｐｅｒｔｅｘｔｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ（ｄｏｔ）  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ｄｏｔ）  ｏｒｇ／ｐｏｒｔａｌ／Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を参照］を使用して本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドに付着させることができる。キメラペプチドは、ペプチドのカルボキシ（Ｃ）又はアミノ（Ｎ）末端における結合を介して、又は直鎖、分岐状、若しくは環状の側鎖、内部炭素若しくは窒素原子などの内部化学基への結合を介して、連結され得る。
【１０７６】
本明細書で使用される場合、本明細書で互換的に使用される「タンパク質」、「ペプチド」及び「ポリペプチド」という用語は、天然ペプチド（分解産物、合成的に合成されたペプチド、又は組換えペプチドのいずれか）及びペプチド模倣物（通常、合成的に合成されたペプチド）、並びに例えば、ペプチドを体内でより安定させる、又は細胞により浸透可能にする修飾（modifications）を有し得るペプチド類似体であるペプトイド及びセミペプトイドを包含する。かかる修飾には、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾、ペプチド結合修飾、骨格修飾、及び残基修飾が含まれるが、これらに限定されない。ペプチド模倣化合物を調製するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、本明細書に完全に記載されているかのように参照により援用される、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｃ．Ａ．  Ｒａｍｓｄｅｎ  Ｇｄ．，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １７．２，  Ｆ．  Ｃｈｏｐｌｉｎ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２）に明記されている。この点に関するさらなる詳細は、以下に提供される。
【１０７７】
ペプチド内のペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）は、例えば、Ｎ−メチル化アミド結合（−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−）、エステル結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ２−）、スルフィニルメチレン結合（−Ｓ（＝Ｏ）−ＣＨ２−）、α−アザ結合（−ＮＨ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯ−）（式中、Ｒは、任意のアルキル（例えば、メチル）、アミン結合（−ＣＨ２−ＮＨ−）、スルフィド結合（−ＣＨ２−Ｓ−）、エチレン結合（−ＣＨ２−ＣＨ２−）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）、チオアミド結合（−ＣＳ−ＮＨ−）、オレフィン二重結合（−ＣＨ＝ＣＨ−）、フッ素化オレフィン二重結合（−ＣＦ＝ＣＨ−）、レトロアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）、ペプチド誘導体（−Ｎ（Ｒ）−ＣＨ２−ＣＯ−）であり、Ｒは「通常の」側鎖であって、炭素原子上に天然に存在する）によって置換され得る。
【１０７８】
これらの修飾は、ペプチド鎖に沿ったいずれの結合でも生じる場合があり、いくつかの（２〜３）結合で同時に生じる場合もある。
【１０７９】
天然芳香族アミノ酸であるトリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びフェニルアラニン（Ｐｈｅ）は、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、ナフチルアラニン、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）の環メチル化誘導体、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）又はＯ−メチル−チロシン（Ｔｙｒ）のハロゲン化誘導体などの非天然芳香族アミノ酸で置換され得る。
【１０８０】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドはまた、１又は複数の修飾アミノ酸又は１又は複数の非アミノ酸モノマー（例えば、脂肪酸、複合炭水化物など）を含み得る。
【１０８１】
「アミノ酸（単数）」又は「アミノ酸（複数）」という用語は、２０の天然アミノ酸；インビボにおいてしばしば翻訳後修飾されるアミノ酸（例えばヒドロキシプロリン、ホスホセリン、及びホスホスレオニンなど）；並びに他の異常アミノ酸（例えば２−アミノアジピン酸、ヒドロキシリジン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン、及びオルニチンなどを含むがこれらに限定されない）を含むと理解される。さらに、「アミノ酸」という用語は、Ｄ−アミノ酸及びＬ−アミノ酸の両方を含む。
【１０８２】
以下の表１及び表２は、本発明のいくつかの実施形態で使用され得る天然アミノ酸（表１）、及び非従来型又は修飾アミノ酸（例えば、合成アミノ酸、表２）を列挙している。
【１０８３】
【表１】
2021531265.tif 000002
【１０８４】
【表２−１】
2021531265.tif 000003
【１０８５】
【表２−２】
2021531265.tif 000004
【１０８６】
【表２−３】
2021531265.tif 000005
【１０８７】
【表２−４】
2021531265.tif 000006
【１０８８】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、好ましくは直鎖状形態で利用されるが、環状化がペプチド特性を著しく妨害しない場合、ペプチドの環状形態も利用できることが理解されるであろう。
【１０８９】
本発明のペプチドは、ペプチドが可溶性形態であることを必要とする治療において好適に利用されるため、本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、ヒドロキシル含有側鎖によりペプチド溶解度を増加可能なセリン及びスレオニンを含むがこれらに限定されない、１又は複数の非天然又は天然の極性アミノ酸を含むことが好ましい。
【１０９０】
本発明のペプチドのアミノ酸は、保存的又は非保存的に置換され得る。
【１０９１】
本明細書で使用される「保存的置換」という用語は、ペプチドの天然配列に存在するアミノ酸を、同様の立体特性を有する天然又は非天然アミノ又はペプチド模倣物で置換することを指す。置換される天然アミノ酸の側鎖が極性又は疎水性のいずれかである場合、保存的置換は、（置換されたアミノ酸の側鎖と同じ立体特性を有することに加えて）極性若しくは疎水性である、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又はペプチド模倣部分で行う必要がある。
【１０９２】
天然アミノ酸は通常、その特性に従ってグループ化されるので、天然アミノ酸による保存的置換は、本発明によれば、立体的に類似した非荷電アミノ酸による荷電アミノ酸の置換も保存的置換と見なされるという事実を念頭に置きつつ、容易に決定することができる。
【１０９３】
非天然アミノ酸による保存的置換を生成するために、当技術分野で周知のアミノ酸類似体（合成アミノ酸）を使用することも可能である。天然アミノ酸のペプチド模倣物は、当業者に公知の文献に充分に文書化されている。
【１０９４】
保存的置換に影響を与える場合、置換アミノ酸は、元のアミノ酸と同じ又は類似の官能基を側鎖に持つ必要がある。
【１０９５】
機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野で周知である。どのアミノ酸の変化が表現型的にサイレントである可能性が高いかに関するガイダンスは、Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：  １３０６  １３１０にも記載されている。かかる保存的に改変されたバリアントは、多型バリアント、種間相同体、及び対立遺伝子に追加されるものであり、これらを除外するものではない。典型的な保存的置換には、以下が含まれるが、これらに限定されない：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。アミノ酸は、側鎖に関連する特性に基づいて置換することができる。例えば、セリン（Ｓ）やスレオニン（Ｔ）など、極性側鎖を有するアミノ酸は置換可能であり；アルギニン（Ｒ）やヒスチジン（Ｈ）など、側鎖の電荷に基づいてアミノ酸を置換可能であり；バリン（Ｖ）やロイシン（Ｌ）など、疎水性側鎖を持つアミノ酸は置換可能である。示されているように、変化は通常、タンパク質のフォールディング又は活性に有意な影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換などのマイナーな性質のものである。
【１０９６】
本明細書で使用される「非保存的置換」という句は、親配列に存在するアミノ酸を、異なる電気化学的及び／又は立体的特性を有する別の天然又は非天然アミノ酸で置換することを指す。したがって、置換アミノ酸の側鎖は、置換される天然アミノ酸の側鎖よりも著しく大きく（又は小さく）、かつ／又は置換されるアミノ酸とは著しく異なる電子特性を有する官能基を有していてもよい。このタイプの非保存的置換の例には、アラニンをフェニルアラニン又はシコヘキシルメチルグリシンに置換すること、グリシンをイソロイシンに置換すること、又はアスパラギン酸を−ＮＨ−ＣＨ［（−ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ］−ＣＯ−に置換することを含む。本発明の範囲に含まれるこれらの非保存的置換は、依然として抗菌特性を有するペプチドを構成するものである。
【１０９７】
本発明のペプチドのＮ末端及びＣ末端は、官能基によって保護され得る。適切な官能基は、その教示が参照により本明細書に援用されるＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，  “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ“，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５  ａｎｄ  ７，  １９９１に記載されている。好ましい保護基は、例えば、化合物の親水性を低下させ、親油性を増加させることによって、保護基に付着した化合物の細胞への輸送を促進するものである。
【１０９８】
ある具体的な実施形態によれば、１又は複数のアミノ酸は、例えば、官能基の付加によって修飾され得る（概念的には「化学的に修飾された」と見なされる）。例えば、天然配列に現れる側鎖アミノ酸残基が所望により修飾され得、あるいは以下に記載されるように、タンパク質の他の部分が、側鎖アミノ酸残基に加えて、又は、側鎖アミノ酸残基の代わりに、所望により修飾され得る。かかる修飾は所望により、化学合成プロセスの後に、例えば化学的に修飾されたアミノ酸を加えることによって、分子の合成中に実施することができる。ただし、アミノ酸が分子内に既に存在する場合の化学修飾（「ｉｎ  ｓｉｔｕ」修飾）も可能である。ペプチド又はタンパク質への修飾は、例えば、遺伝子合成によって、（例えば、ＰＣＲに基づく）部位特異的突然変異誘発若しくは（例えば、ＥＭＳによる）ランダム突然変異誘発によって、エキソヌクレアーゼデリーションによって、化学修飾によって、又は異種ドメイン若しくは結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の融合によって、導入することができる。
【１０９９】
本明細書で使用される場合、「化学修飾」という用語は、ペプチドに言及する場合、そのアミノ酸残基の少なくとも１つが、プロセシング若しくは他の翻訳後修飾などの自然のプロセスによって、又は当技術分野で周知の化学修飾手法によって修飾されているペプチドを指す。修飾の非限定的な例示的タイプには、カルボキシメチル化；アセチル化；アシル化；リン酸化；グリコシル化；アミド化；ＡＤＰ−リボシル化；脂肪アシル化；ファルネシル基、イソファルネシル基、炭水化物基、脂肪酸基、及び結合のためのリンカーの添加；官能基付与（functionalization）；ＧＰＩアンカー形成；脂質又は脂質誘導体の共有結合；メチル化；ミリストイル化；ペグ化（pegylation）；プレニル化；リン酸化；ユビキチン化；並びに同様のプロセス及び公知の保護基／ブロッキング基が含まれる。所望により、エーテル結合を使用して、セリン又はスレオニンのヒドロキシルを糖のヒドロキシルに結合してもよい。所望により、アミド結合を使用して、グルタミン酸又はアスパラギン酸のカルボキシル基を糖のアミノ基に結合してもよい（Ｇａｒｇ  ａｎｄ  Ｊｅａｎｌｏｚ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．  ４３，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）、Ｋｕｎｚ，  Ａｎｇ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌｉｓｈ  ２６：２９４−３０８（１９８７））。また所望により、アセタール及びケタール結合がアミノ酸と炭水化物との間に形成されてもよい。所望により、脂肪酸アシル誘導体を、例えば、遊離アミノ基（例えば、リジン）のアシル化によって作製してもよい（Ｔｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｒｉｖｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｓｈａｌ，  ｅｄｓ．，  ＥＳＣＯＭ  Ｐｕｂｌ．，  Ｌｅｉｄｅｎ，  １０７８−１０７９（１９９０））。
【１１００】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に完全に記載されているかのように参照により本明細書に援用されるＰＣＴ出願であるＷＯ２００６／０５０２６２号に記載されるように、修飾には、ペプチドへのシクロアルカン部分の付加が含まれる。これらの部分は、生体分子で使用するために設計されており、タンパク質に様々な特性を付与するために所望により使用され得る。
【１１０１】
さらに、所望により、ペプチド上の任意の部位を修飾してもよい。例えば、タンパク質上のグリコシル化部分のペグ化は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により本明細書に援用されるＰＣＴ出願であるＷＯ２００６／０５０２４７号に記載されているように、所望により実施することができる。所望により、１又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基をＯ結合型及び／又はＮ結合型グリコシル化に付加してもよい。ＰＥＧ基は、所望により分岐状又は直鎖状であり得る。所望により、任意の種類の水溶性ポリマーを、グリコシルリンカーを介してタンパク質のグリコシル化部位に結合させてもよい。
【１１０２】
「ペグ化タンパク質（PEGylated protein）」とは、タンパク質のアミノ酸残基に共有結合したポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を有する、生物学的活性を有するタンパク質又はその断片を意味する。
【１１０３】
「ポリエチレングリコール」又は「ＰＥＧ」とは、カップリング剤と、又はカップリング部分若しくは活性化部分（例えば、チオール、トリフレート、トレシレート、アジルジン、オキシラン、又は好ましくはマレイミド部分と）による誘導体化と併用した又は併用しない、ポリアルキレングリコール化合物又はその誘導体を意味する。マレイミドモノメトキシＰＥＧなどの化合物は、本発明の例示的な又は活性化されたＰＥＧ化合物である。ポリプロピレングリコールなどの他のポリアルキレングリコール化合物を本発明で使用してもよい。他の適切なポリアルキレングリコール化合物には、以下の種類の荷電性又は中性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない：デキストラン、コロミン酸又は他の炭水化物ベースのポリマー、アミノ酸のポリマー、及びビオチン誘導体。
【１１０４】
ある具体的な実施形態によれば、ペプチドは、変更されたグリコシル化パターンを持つように修飾される（すなわち、元の又は天然のグリコシル化パターンから変更される）。本明細書で使用される場合、「変更された（altered）」とは、１又は複数の炭水化物部分が欠失されていること、及び／又は元のタンパク質に少なくとも１つのグリコシル化部位が付加されていることを意味する。
【１１０５】
タンパク質のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合型グリコシル化とは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの糖の１つがヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに結合することを指しているが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
【１１０６】
ペプチドへのグリコシル化部位の付加は、ペプチドのアミノ酸配列を変更して、上記のトリペプチド配列の１又は複数を含むようにすることによって、簡便に達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。変更は、元のペプチドの配列内への１又は複数のセリン又はスレオニン残基の追加又は置換によって行ってもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。ペプチドのアミノ酸配列は、ＤＮＡレベルで変化を導入することによっても変更され得る。
【１１０７】
ペプチド上の炭水化物部分の数を増やす別の手段は、ペプチドのアミノ酸残基へのグリコシドの化学的又は酵素的カップリングによるものである。使用するカップリング様式によっては、糖が（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインなどの遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニン、又はヒドロキシプロリンなどの遊離ヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、又はトリプトファンの芳香族残基、又は（ｆ）グルタミンのアミド基に結合する場合がある。これらの方法は、例えば、ＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２２：  ２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【１１０８】
ペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的に、酵素的に、又はＤＮＡレベルでの変化の導入によって、達成され得る。化学的脱グリコシル化には、ペプチドをトリフルオロメタンスルホン酸又は同等の化合物に曝露する必要がある。この処理により、結合糖（Ｎ−アセチルグルコサミン又はＮ−アセチルガラクトサミン）を除くほとんど又は全ての糖が切断され、アミノ酸配列は未変化のまま残る。
【１１０９】
化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．，  ２５９：  ５２  （１９８７）及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １１８：  １３１  （１９８１）に記載されている。ペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  １３８：  ３５０（１９８７）に記載されているように、様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼを使用することによって達成され得る。
【１１１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは検出可能なタグを含む。本明細書で使用される場合、一実施形態では、「検出可能なタグ」という用語は、当技術分野で公知の技術を使用して当業者が検出できる任意の部分を指す。検出可能なタグはペプチド配列であり得る。所望により、検出可能なタグは、化学薬品によって、又はタンパク質分解などの酵素的手段によって、除去され得る。本発明のいくつかの実施形態の検出可能なタグは、ペプチドの精製に使用され得る。例えば、「検出可能なタグ」という用語には、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）タグ；マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ；グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ；ポリ（Ｈｉｓ）タグ；ＦＬＡＧタグ；Ｖ５タグ、ｃ−ｍｙｃタグ、ＨＡタグなどのエピトープタグ；緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、及びシアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）などの蛍光タグ；並びにこれらのタグの派生物、又は当技術分野で公知の任意のタグが含まれる。「検出可能なタグ」という用語には「検出可能なマーカー」という用語も含まれる。
【１１１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、そのＮ末端に付着した検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含む。
【１１１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、そのＣ末端に付着した検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含む。
【１１１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドのＮ末端は検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含まない。
【１１１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドのＣ末端は検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含まない。
【１１１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは切断可能部分（cleavable moiety）に融合している。したがって、例えば、回収を容易にするために、発現されるコード配列は、本発明のいくつかの実施形態のペプチド及び融合した切断可能部分をコードするように設計されてもよい。一実施形態では、前記ペプチドは、例えば、切断可能部分に特異的なカラムへの固定化によるアフィニティークロマトグラフィーによって容易に単離されるように設計されている。一実施形態では、切断部位は、前記ペプチドと切断可能部分との間に設計され、ペプチドは、この部位で融合タンパク質を特異的に切断する適切な酵素又は薬剤で処理することにより、クロマトグラフィーカラムから放出され得る［例えば、Ｂｏｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １９：６５−７０（１９８８）；及びＧａｒｄｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：１５８５４−１５８５９（１９９０）を参照］。ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは単離ペプチドである。
【１１１６】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、固相及び組換え技術などであるがこれらに限定されない、ペプチド合成の当業者に公知の任意の技術によって、合成及び精製され得る。
【１１１７】
固相ペプチド合成については、多くの技術の要約が、Ｊ．  Ｍ．  Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｄ．  Ｙｏｕｎｇ，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），  １９６３、及びＪ．  Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，  Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐ．  ４６，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），  １９７３に記載されている。従来の溶液合成については、Ｇ．  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｌｕｐｋｅ，  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ｖｏｌ．  １，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），  １９６５を参照のこと。
【１１１８】
概して、これらの方法は、成長するペプチド鎖に１又は複数のアミノ酸又は適切に保護されたアミノ酸を連続的に付加することを含む。通常、最初のアミノ酸のアミノ基又はカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保護されている。次に、この保護又は誘導体化されたアミノ酸は、不活性固体支持体に結合されるか、アミド結合を形成するのに適した条件下で、適切に保護された相補的（アミノ又はカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸を加えることによって、溶液中で利用され得る。この新しく追加されたアミノ酸残基から保護基が除去された後、次のアミノ酸（適切に保護されている）が追加され、以下同様に続く。全ての所望のアミノ酸が適切な配列で連結された後、残りの保護基（及び任意の固体支持体）が順次又は同時に除去されて、最終的なペプチド化合物が得られる。この一般的な手順を簡単に変更することにより、例えば、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドと（キラル中心をラセミ化しない条件下で）カップリングすることにより、脱保護後、ペンタペプチドなどを形成するなど、成長する鎖に一度に複数のアミノ酸を加えることが可能である。ペプチド合成のさらなる説明は米国特許第６，４７２，５０５号に開示されている。
【１１１９】
本発明のいくつかの実施形態のペプチド化合物を調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。
【１１２０】
大規模ペプチド合成についてはＡｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２０００；５５（３）：２２７−５０に記載されている。
【１１２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、インビトロ発現系を使用して合成される。かかるインビトロ合成法は当技術分野で周知であり、前記発現系の構成要素は市販されている。
【１１２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは組換えＤＮＡ技術によって生成される。「組換え」ペプチド又はタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生されたペプチド又はタンパク質を指す。すなわち、望ましいペプチド又はタンパク質をコードする外因性ＤＮＡ構築物によって形質転換された細胞から産生される。
【１１２３】
したがって、本発明の別の態様によれば、上記のポリペプチド及び融合タンパク質のいずれかをコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す  
【１１２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。  
【１１３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。  
【１１３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。  
【１１３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６に記載される核酸配列を含む。
【１１３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。      
【１１４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２に記載される核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【１１４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列からなる。
【１１４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６からなる。
【１１４８】
本発明の別の態様によれば、
１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないＰＤ１アミノ酸配列であるか；又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まないＰＤ１アミノ酸配列であって；所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含む、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、
１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか；１７０〜１９７アミノ酸長であり、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；又は、１７０〜１８２アミノ酸長であり、配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有し、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない４−１ＢＢＬアミノ酸配列であって；所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む、上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、
をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１４９】
本発明の別の態様によれば、１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含む、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１５０】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する、上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０を含む。ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【１１５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０からなる。
【１１５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【１１５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。  
【１１６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【１１６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【１１６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５を含む。
【１１６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５からなる。
【１１６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２を含む。
【１１７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２を含む。
【１１７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２からなる。
【１１７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２からなる。
【１１７４】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、単離され、ＲＮＡ配列、相補的ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノムポリヌクレオチド配列、及び／又は複合ポリヌクレオチド配列（例えば、上記の組み合わせ）の形態で提供される一本鎖又は二本鎖核酸配列を指す。
【１１７５】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド及び核酸配列のいずれも、保存的核酸置換を含み得る。保存的に修飾されたポリヌクレオチドとは、同一又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指し、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は、実質的に同一又は関連する（例えば、天然において近接する）核酸を指す。遺伝暗号の縮重のため、機能的に同一の多数の核酸がほとんどのタンパク質をコードしている。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードしている。したがって、コドンがアラニンを指定する全ての位置で、コードされているポリペプチドを変化させることなく、コドンを上記対応する別のコドンに変化させることができる。このような核酸変化は「サイレントバリエーション」であり、これは保存的に修飾されたポリヌクレオチドの一種である。ある具体的な実施形態によれば、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドをコードする本明細書に記載の任意の核酸配列は、核酸のサイレントバリエーションも記載している。当業者は、ある状況下では、核酸内の各コドン（通常メチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一な分子を得られることを認識していると考えられる。したがって、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのサイレントバリエーションは、発現産物に対して記載される各配列に黙示的に含まれる。
【１１７６】
哺乳動物細胞において外因性ポリペプチドを発現させるために、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、哺乳動物細胞の発現に適した核酸構築物に連結することが好ましい。かかる核酸構築物は、構成的又は誘導的な方法で細胞内の前記ポリヌクレオチド配列の転写を指示するためのプロモーター配列を含む。
【１１７７】
よって、ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチド及び宿主細胞における前記ポリヌクレオチドの発現を指示するための調節エレメントを含む核酸構築物が提供される。
【１１７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記調節エレメントは異種の調節エレメントである。
【１１７９】
本発明のいくつかの実施形態における前記核酸構築物（本明細書では「発現ベクター」とも称される）は、このベクターを原核生物、真核生物、又は好ましくは両方における複製及び組み込みに適したもの（例えば、シャトルベクター）にする追加の配列を含む。さらに、典型的なクローニングベクターはまた、転写及び翻訳開始配列、転写及び翻訳ターミネーター、並びにポリアデニル化シグナルを含み得る。例として、かかる構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起源、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含むであろう。
【１１８０】
本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物は、典型的には、それが配置される宿主細胞からペプチドを分泌するためのシグナル配列を含む。好ましくは、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドバリアントのシグナル配列である。
【１１８１】
真核生物のプロモーターには通常、ＴＡＴＡボックス及び上流のプロモーター要素の２種類の認識配列が含まれている。転写開始部位の２５〜３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼにＲＮＡ合成を開始するように指示することに関与していると考えられている。他の上流プロモーター要素は、転写が開始される速度を決定する。
【１１８２】
好ましくは、本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物によって利用されるプロモーターは、形質転換された特定の細胞集団において活性を有する。細胞型特異的及び／又は組織特異的プロモーターの例には、肝臓特異的なアルブミンなどのプロモーター［Ｐｉｎｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １：２６８−２７７］やリンパ球特異的プロモーター［Ｃａｌａｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４３：２３５−２７５］などのプロモーター、特にＴ細胞受容体のプロモーター［Ｗｉｎｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ８：７２９−７３３］及び免疫グロブリン［Ｂａｎｅｒｊｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）  Ｃｅｌｌ  ３３７２９−７４０］、ニューロフィラメントプロモーターなどのニューロン特異的プロモーター［Ｂｙｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：５４７３−５４７７］、膵臓特異的プロモーター［Ｅｄｌｕｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９１２−９１６］、又はミルクホエイプロモーターなどの乳腺特異的プロモーター（米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州出願公開第２６４，１６６号）が含まれる。
【１１８３】
エンハンサー要素は、連結された同種又は異種のプロモーターから最大１，０００倍の転写を刺激することができる。エンハンサーは、転写開始部位の下流又は上流に配置されると活性を示す。ウイルスに由来する多くのエンハンサー要素は、宿主範囲が広く、様々な組織で活性を示す。例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーは多くの細胞型に適している。本発明のいくつかの実施形態に適した他のエンハンサー／プロモーターの組み合わせには、ポリオーマウイルス；ヒト又はマウスのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；マウス白血病ウイルス、マウス又はラウス肉腫ウイルス及びＨＩＶなどの様々なレトロウイルスからの長末端反復、に由来するものが含まれる。参照により本明細書に援用されるＥｎｈａｎｃｅｒｓ  ａｎｄ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  １９８３を参照のこと。
【１１８４】
発現ベクターの構築において、前記プロモーターは好ましくは、異種転写開始部位からの距離が、前記プロモーターの天然の設定における転写開始部位からの距離とほぼ同じとなる位置に、配される。しかしながら、当技術分野で公知のように、この距離が多少変動しても、プロモーター機能を失うことなく適応できる。
【１１８５】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬ、ＰＤ１、又は４−１ＢＢＬのｍＲＮＡ翻訳の効率を高めるために、ポリアデニル化配列を発現ベクターに加えることもできる。正確で効率的なポリアデニル化には、ポリアデニル化部位の下流に位置するＧＵリッチ又はＵリッチな配列、及び１１〜３０ヌクレオチド上流に位置する６ヌクレオチドの高度に保存された配列ＡＡＵＡＡＡ、の２つの異なる配列要素が必要である。本発明のいくつかの実施形態に適した終結シグナル及びポリアデニル化シグナルには、ＳＶ４０に由来するものが含まれる。
【１１８６】
既述の要素に加えて、本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、典型的には、クローニングされた核酸の発現レベルを増加させること又は組換えＤＮＡを担持する細胞の同定を容易にすることを目的とする、他の特殊な要素を含み得る。例えば、多くの動物ウイルスには、許容細胞型でウイルスゲノムの染色体外複製を促進するＤＮＡ配列が含まれている。これらのウイルスレプリコンを保有するプラスミドは、プラスミド上に保持されている遺伝子又は宿主細胞のゲノムに存在する遺伝子により適切な因子が提供されている限り、エピソーマルに複製される。
【１１８７】
ベクターは真核生物のレプリコンを含む場合と含まない場合がある。真核生物のレプリコンが存在する場合、ベクターは適切な選択マーカーを使用して真核生物の細胞で増幅可能である。ベクターが真核生物のレプリコンを含まない場合、エピソーマル増幅は不可能である。代わりに、組換えＤＮＡは改変細胞のゲノムに組み込まれ、ここでプロモーターが目的の核酸の発現を指示する。
【１１８８】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、例えば、内部リボソーム侵入部位（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ、ＩＲＥＳ）やプロモーターにキメラなポリペプチドのゲノム組み込みのための配列など、単一のｍＲＮＡからのいくつかのタンパク質の翻訳などを可能にする、追加のポリヌクレオチド配列をさらに含み得る。
【１１８９】
発現ベクターに含まれる個々の要素は、様々な構成で配置することができることが理解されよう。例えば、エンハンサー要素、プロモーターなど、及びＰＤ１−４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチドでさえ、「同方向の連結（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）」構成の配置とすることが可能であり、逆相補鎖（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）として、又は相補的構成で逆平行鎖としても存在し得る。このような多様な構成は、発現ベクターの非コード要素で発生する可能性が高いが、発現ベクター内のコード配列の代替構成も想定されている。
【１１９０】
哺乳類の発現ベクターの例には、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／−）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、及びｐＮＭＴ８１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能）、ｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能）、ｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ−ＲＳＶ、及びｐＢＫ−ＣＭＶ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社から入手可能）、ｐＴＲＥＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から入手可能）、及びそれらの派生物が含まれるが、これらに限定されない。
【１１９１】
レトロウイルスなどの真核生物ウイルスからの調節エレメントを含む発現ベクターも使用され得る。ＳＶ４０ベクターにはｐＳＶＴ７及びｐＭＴ２が含まれる。ウシパピローマウイルスに由来するベクターにはｐＢＶ−１ＭＴＨＡが含まれ、エプスタイン・バール・ウイルスに由来するベクターにはｐＨＥＢＯ及びｐ２Ｏ５が含まれる。他の例示的なベクターには、ｐＭＳＧ；ｐＡＶ００９／Ａ＋；ｐＭＴＯ１０／Ａ＋；ｐＭＡＭｎｅｏ−５；バキュロウイルスｐＤＳＶＥ；及び、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ−４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳がんウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、又は真核細胞での発現に有効であることが示された他のプロモーターの指示の下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが含まれる。
【１１９２】
上記のように、ウイルスは、多くの場合、宿主の防御機構を回避するために進化してきた、非常に専門化された感染性病原体である。通常、ウイルスは特定の細胞型に感染して増殖する。ウイルスベクターの標的化特異性は、その元来の特異性を利用して、所定の細胞型を特異的に標的化し、それにより感染細胞に組換え遺伝子を導入する。したがって、本発明のいくつかの実施形態によって使用されるベクターの種類は、形質転換される細胞型に依存するであろう。形質転換される細胞型に従って適切なベクターを選択する能力は、当業者の能力の範囲内であり、したがって、選択の考慮事項の一般的な説明は本明細書では提供されない。例えば、Ｌｉａｎｇ  ＣＹ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４  （Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ．  １４９：  ５１−６０）に記載されるように、骨髄細胞はヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）を使用して標的化でき、腎臓細胞はバキュロウイルスであるＡｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ  ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ、ＡｃＭＮＰＶ）に存在する異種プロモーターを使用して標的化できる。
【１１９３】
組換えウイルスベクターは、水平感染や標的特異性などの利点を提供することから、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ、ＰＤ１、又は４−１ＢＢＬのインビボ発現に有用である。水平感染は、例えばレトロウイルスのライフサイクルに固有のものであり、単一の感染細胞が発芽して隣接細胞に感染する多くの子孫ビリオンを生成するプロセスである。その結果、そのほとんどが最初は元のウイルス粒子に感染していなかった広い領域が、急速に感染する。これは、感染性病原体が娘の子孫を通してのみ広がる垂直型の感染とは対照的である。水平方向に広がることができないウイルスベクターも生成され得る。この特性は、特定の遺伝子を局所的な数の標的細胞にのみ導入することが望ましい目的である場合に有用である。
【１１９４】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターを細胞に導入するために、様々な方法を使用することができる。かかる方法は、概してＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９，  １９９２、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，  Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｇａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  Ｍｉｃｈ．（１９９５），  Ｖｅｃｔｏｒｓ：  Ａ  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅｓ，  Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，  Ｂｏｓｔｏｎ  Ｍａｓｓ．（１９８８）、及びＧｉｌｂｏａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４（６）：  ５０４−５１２，  １９８６］に記載されており、例えば、安定的又は一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、及び組換えウイルスベクターによる感染が含まれる。また、陽性−陰性選択方法については、米国特許第５，４６４，７６４号及び第５，４８７，９９２号を参照のこと。
【１１９５】
ウイルス感染による核酸の導入は、ウイルスの感染性により高いトランスフェクション効率が得られるため、リポフェクションやエレクトロポレーションなどの他の方法に比べていくつかの利点がある。
【１１９６】
現在好ましいインビボ核酸導入技術には、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスＩウイルス、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などのウイルス又は非ウイルス構築物及び脂質ベースの系によるトランスフェクションが含まれる。脂質を介した遺伝子の伝達に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、及びＤＣ−Ｃｈｏｌである［Ｔｏｎｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，  １４（１）：  ５４−６５（１９９６）］。遺伝子治療で使用するための最も好ましい構築物は、ウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、又はレトロウイルスである。レトロウイルス構築物などのウイルス構築物は、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサー又は遺伝子座定義要素、又は選択的スプライシング、核ＲＮＡ輸出、若しくはメッセンジャー翻訳後修飾などの他の手段によって遺伝子発現を制御する他の要素を含む。このようなベクター構築物には、パッケージングシグナル、長末端反復（ＬＴＲ）又はその一部、及びウイルス構築物に既に存在しない限り、使用するウイルスに適したプラス鎖及びマイナス鎖プライマー結合部位も含まれる。さらに、かかる構築物は、典型的には、それが配置されている宿主細胞からのペプチドの分泌のためのシグナル配列を含む。好ましくは、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドバリアントのシグナル配列である。所望により、構築物はまた、ポリアデニル化を指示するシグナル、並びに１又は複数の制限部位及び翻訳終結配列を含み得る。例として、かかる構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起源、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含むであろう。カチオン性脂質、ポリリジン、デンドリマーなど、他の非ウイルス性であるベクターを使用してもよい。
【１１９７】
前述のように、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な要素を含む以外に、本発明のいくつかの実施形態の発現構築物は、発現ペプチドの安定性、産生、精製、収量、又は毒性を増強するように設計された配列も含み得る。例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドと異種タンパク質とを含む、融合タンパク質又は切断可能な融合タンパク質の発現を設計することができる。かかる融合タンパク質は、例えば異種タンパク質に特異的なカラムへの固定化による、アフィニティークロマトグラフィーによって、融合タンパク質が容易に単離され得るようにデザインすることができる。ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又は発明のいくつかの実施形態のポリペプチドと異種タンパク質との間で切断部位が設計される場合、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又はポリペプチドは、切断部位を破壊する適切な酵素又は薬剤で処理することにより、クロマトグラフィーカラムから放出され得る［例えば、Ｂｏｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １９：６５−７０；及びＧａｒｄｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：１５８５４−１５８５９を参照］。
【１１９８】
本発明はまた、本明細書に記載の組成物を含む細胞を企図する。
【１１９９】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、又はそれをコードする核酸構築物を含む、宿主細胞が提供される。
【１２００】
上記のように、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現するための宿主発現系としては、様々な原核生物又は真核生物の細胞を使用しうる。これらには、コード配列を含む、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物；コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染した、又はコード配列を含むＴｉプラスミドなどの組換えプラスミド発現ベクターで形質転換された植物細胞系が含まれるが、これらに限定されない。哺乳動物発現系を使用して、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現させてもよい。
【１２０１】
細菌性構築物の例には、大腸菌発現ベクターのｐＥＴシリーズが含まれる（Ｓｔｕｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８５：６０−８９）。
【１２０２】
本発明の教示と共に使用され得る真核細胞の例には、哺乳動物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、藻類細胞、又は植物細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【１２０３】
酵母では、米国特許出願第５，９３２，４４７号に開示されているように、構成的又は誘導性のプロモーターを含む多くのベクターを使用することができる。あるいは、酵母染色体への外来ＤＮＡ配列の組み込みを促進するベクターを使用してもよい。
【１２０４】
植物発現ベクターが使用される場合、コード配列の発現は、いくつかのプロモーターによって駆動され得る。例えば、ＣａＭＶの３５Ｓ  ＲＮＡ及び１９Ｓ  ＲＮＡプロモーターなどのウイルスプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：５１１−５１４］又はＴＭＶへのコートタンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ６：３０７−３１１］が使用され得る。あるいは、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットなどの植物プロモーター［Ｃｏｒｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ３：１６７１−１６８０、及びＢｒｏｇｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：８３８−８４３］又はヒートショックプロモーター、例えば、大豆ｈｓｐ１７．５−Ｅ又はｈｓｐ１７．３−Ｂ［Ｇｕｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ６：５５９−５６５］が使用され得る。これらの構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、及び当業者に周知の他の技術を使用して植物細胞に導入され得る。例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ  ＆  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，  １９８８，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ，  Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＶＩＩＩ，  ｐｐ  ４２１−４６３を参照。
【１２０５】
当技術分野で周知の昆虫及び哺乳動物宿主細胞系などの他の発現系もまた、本発明のいくつかの実施形態によって使用され得る。
【１２０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞は哺乳動物細胞である。
【１２０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞はヒト細胞である。
【１２０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞は細胞株（cell line）である。
【１２０９】
別の具体的な実施形態によれば、前記細胞は初代培養細胞（primary cell）である。
【１２１０】
細胞は、血液、筋肉、神経、脳、心臓、肺、肝臓、膵臓、脾臓、胸腺、食道、胃、腸、腎臓、精巣、卵巣、髪、皮膚、骨、乳房、子宮、膀胱、脊髄、又は様々な種類の体液を含むがこれらに限定されない適切な組織に由来し得る。前記細胞は、胚、胎児、及び成体の段階を含む任意の発達段階、並びに発達起源、すなわち、外胚葉、中胚葉、及び内胚葉起源に由来し得る。
【１２１１】
哺乳動物細胞の非限定的な例には、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ、例えば、ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）、ヒト胎児腎臓細胞株（ＨＥＫ２９３、又は浮遊培養における増殖のためにサブクローニングされたＨＥＫ２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，  ３６：５９  １９７７）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．，  ２３：２４３−２５１  １９８０）、サル腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ３８３：４４−６８  １９８２）、ＭＲＣ  ５細胞、ＦＳ４細胞、並びにヒト肝細胞がん細胞株（Ｈｅｐ  Ｇ２）、ＰＥＲ．Ｃ６、Ｋ５６２、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）が含まれる。
【１２１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、ＨＴ１０８０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＢＨＫ、Ｎａｍａｌｗａ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ細胞、及びＶｅｒｏ細胞からなる群より選択される。
【１２１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及び２９３（例えば、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）細胞を含む。
【１２１４】
本発明の別の態様によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチドを産生する方法であって、本明細書に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物を宿主細胞で発現させることを含む、前記方法が提供される。
【１２１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記方法は、融合タンパク質又はポリペプチドを単離することを含む。
【１２１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記組換えポリペプチドの回収は、適切な培養期間の後に行われる。「組換えポリペプチドを回収する」という句は、ポリペプチドを含む発酵培地全体を回収することを指し、分離又は精製の追加のステップを意味しなくてもよい。しかしながら、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、コンカナバリンＡクロマトグラフィー、ミックスモードクロマトグラフィー、金属アフィニティークロマトグラフィー、レクチンアフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、及び示差可溶化（differential solubilization）などであるがこれらに限定されない、様々な標準タンパク質精製技術を使用して精製されてもよい。
【１２１７】
ある具体的な実施形態によれば、合成及び精製に続いて、ペプチドの治療効果をインビボ又はインビトロのいずれかでアッセイすることができる。かかる方法は当技術分野で公知であり、例えば、細胞生存率、トランスジェニックマウスの生存、及び活性化マーカーの発現が含まれる。
【１２１８】
本発明のいくつかの実施形態の組成物（例えば、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、及び／又は細胞）は、それ自体で、又は適切な担体若しくは添加剤と混合される医薬組成物で生物に投与され得る。
【１２１９】
したがって、本発明は、いくつかの実施形態において、治療有効量の本明細書に開示される組成物を含む医薬組成物を特徴とする。
【１２２０】
本明細書において、「有効成分」という用語は、生物学的効果の原因となる組成物（例えば、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又は細胞）を指す。
【１２２１】
本明細書において、「添加剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」という用語は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。添加剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び各種デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及びポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。
【１２２２】
以下、互換的に使用され得る「生理学的に許容される担体」及び「医薬的に許容される担体」という句は、生物に重大な刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性及び特性を無効にしない担体又は希釈剤を指す。これらの句にはアジュバントが含まれる。
【１２２３】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される担体」には、生理学的に適合性のある全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸収遅延剤などが含まれる。好ましくは、前記担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に適している。投与経路に応じて、本明細書に記載の活性化合物、すなわち、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又は細胞は、１又は複数の医薬的に許容される塩を含み得る。「医薬的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効果を与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，  Ｓ．  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６：  １−１９を参照のこと）。かかる塩の例には、酸付加塩及び塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リンなどの非毒性無機酸に由来するもの、並びに脂肪族モノカルボン酸及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、並びにＮ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが含まれる。
【１２２４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物はまた、医薬的に許容される抗酸化剤を含み得る。医薬的に許容される抗酸化剤の例は、以下を含む：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤。本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物はまた、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）及び可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート−８０））、防腐剤（例えば、チメルソル、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤を含み得る。
【１２２５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物に使用され得る適切な水性及び非水性の担体の例には、水；様々な緩衝液含有量（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の緩衝生理食塩水；エタノール；ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）；及びそれらの適切な混合物；オリーブ油などの植物油；並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。
【１２２６】
適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持、及び界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）の使用によって維持することができる。
【１２２７】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含み得る。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順によって、並びに様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にされ得る。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることも望ましい場合がある。さらに、注射可能な剤形の長期吸収（prolonged absorption）は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を含めることによってもたらされ得る。
【１２２８】
医薬的に許容される担体には、無菌の注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の粉末が含まれる。医薬的に活性な物質のためのかかる媒体及び剤の使用は、当技術分野で公知である。従来の媒体又は剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物におけるそれらの使用が企図される。補足的な活性化合物もまた、前記組成物に組み込まれうる。
【１２２９】
治療用組成物は、通常、製造及び保管の条件下で無菌かつ安定でなければならない。前記組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序立った構成（ordered structure）として処方されうる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、又は塩化ナトリウムを前記組成物に含めることが好ましいであろう。注射可能な前記組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアレート塩及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらされ得る。無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて、上記に列挙された成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒に必要な量の活性化合物を組み込み、続いて滅菌精密濾過することによって調製され得る。通常、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これにより、有効成分に加えて、予め滅菌濾過された溶液から任意の追加の望ましい成分の粉末が得られる。
【１２３０】
無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて、上記に列挙された成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒に必要な量の活性化合物を組み込み、続いて滅菌精密濾過することによって調製され得る。通常、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これにより、有効成分に加えて、予め滅菌濾過された溶液から任意の追加の望ましい成分の粉末が得られる。
【１２３１】
担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる有効成分の量は、治療される対象、及び個別の投与様式に応じて変化するであろう。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる有効成分の量は、通常、治療効果を生成する組成物の量である。概して、１００％のうち、この量は、医薬的に許容される担体と組み合わせた、約０．０１％〜約９９％の有効成分、好ましくは約０．１％〜約７０％の有効成分、最も好ましくは約１％〜約３０％の有効成分の範囲内である。
【１２３２】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスが投与されてよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が、治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少又は増加されてもよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態（dosage unit form）は、治療される対象への単一投与量として適した物理的個別単位（physically discrete units）を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態による投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき個別の治療効果、及び（ｂ）個人の感受性の処置のためにかかる活性化合物を配合する当技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【１２３３】
薬物の製剤化及び投与のための技術は、参照により本明細書に援用される「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ）（最新版）に記載されている。
【１２３４】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当技術分野で周知のプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、磨り潰し（levigate)、乳化、カプセル化、捕捉、又は凍結乾燥プロセスによって製造され得る。
【１２３５】
本発明の組成物は、当技術分野で公知の様々な方法の１又は複数を使用して、１又は複数の投与経路を介して投与され得る。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／又は様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療剤の好ましい投与経路には、例えば、血管内送達（例えば、注射又は注入）；静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、経口、経腸、直腸、肺（例えば、吸入）、鼻、局所（経皮、頬側、及び舌下を含む）、膀胱内、硝子体内、腹腔内、膣、脳への送達（例えば、脳室内、脳内、及び対流により増強される拡散（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ））；中枢神経系（ＣＮＳ）送達（例えば、くも膜下腔内、脊髄周囲、及び脊髄内）；非経口（皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、及び皮内を含む）、経皮（受動的に又はイオントフォレーシス若しくはエレクトロポレーションを使用）、経粘膜（例えば、舌下投与、鼻、膣、直腸、又は舌下）投与；インプラントによる投与；又は他の非経口投与経路(例えば注射又は注入による）；又は当技術分野で公知の他の送達経路及び／又は投与形態が含まれる。本明細書で使用される「非経口投与」という句は、通常は注射による、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、被膜内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下（ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ）、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入、又は生体侵食性インサートを使用することを含むがこれらに限定されず、各投与経路に適した剤形で処方することができる。ある具体的な実施形態では、本発明の少なくともいくつかの実施形態によるタンパク質、治療剤、又は医薬組成物は、腹腔内又は静脈内に投与され得る。
【１２３６】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物は、非経口注射によって水溶液中で投与される。前記製剤は、懸濁液又は乳濁液の形態であってもよい。通常、非経口注射用の医薬組成物は、有効量の本明細書に記載の組成物を含み、所望により、医薬的に許容される希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／又は担体を含む。かかる組成物は、所望により、希釈剤；滅菌水；様々な緩衝液含有量（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の緩衝生理食塩水；並びに、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）や可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート−８０））、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性酸化防止剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤）、防腐剤（例えば、チメルソル、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、乳糖、マンニトール）などの添加剤のうち１又は複数を含む。非水性溶媒又はビヒクルの例は、エタノール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；オリーブ油、及びコーン油などの植物油；ゼラチン；並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。前記製剤はフリーズドライ（凍結乾燥）又は真空乾燥されていてよく、使用直前に及び再溶解／再懸濁され得る。前記製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、滅菌剤を前記組成物に組み込むことによって、前記組成物を照射することによって、又は前記組成物を加熱することによって、滅菌することができる。
【１２３７】
本明細書に開示される様々な組成物（例えば、ポリペプチド）は、局所的に適用され得る。局所投与は、ほとんどのペプチド製剤ではうまく機能しないが、肺、鼻、経口（舌下、頬側）、膣、又は直腸粘膜に適用した場合に特に効果的でありうる。
【１２３８】
本発明の組成物は、空気力学的直径が約５ミクロン未満のエアロゾル又は噴霧乾燥粒子のいずれかとして送達される場合、吸入しながら肺に送達され、肺上皮内層を横切って血流に移動することが可能である。ネブライザー、定量吸入器、及び粉末吸入器を含むがこれらに限定されない、治療用製品の肺送達用に設計された広範囲の機械的デバイスを使用可能であり、これらは全て当業者に周知である。市販のデバイスのいくつかの具体例は、ＵｌｔｒａＶｅｎｔネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、ミズーリ州セントルイス）、Ａｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、コロラド州イングルウッド）、Ｖｅｎｔｏｌｉｎ定量吸入器（Ｇｌａｘｏ社、ノースカロライナ州リサーチ・トライアングル・パーク）、及びＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．社、マサチューセッツ州ベッドフォード）である。Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、Ａｌｋｅｒｍｅｓ社、及びＭａｎｎｋｉｎｄ社は全て、承認済であるか又は臨床試験の段階にある吸入可能なインスリン粉末製剤を有しており、本明細書に記載の製剤に技術を適用できる可能性がある。
【１２３９】
粘膜に投与するための製剤は、通常、噴霧乾燥された薬物粒子であり、これは、錠剤、ゲル、カプセル、懸濁液、又は乳濁液に組み込まれ得る。標準的な医薬品添加剤は、任意の製剤業者（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒ）からも入手可能である。経口製剤は、チューインガム、ゲルストリップ、錠剤、又はトローチ（ｌｏｚｅｎｇｅ）の形態であり得る。
【１２４０】
経皮製剤を調製することもできる。これらは通常、軟膏、ローション、スプレー、又はパッチであり、これらはすべて標準的な技術を使用して調製できる。経皮製剤には、浸透促進剤を含める必要がある。本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に有毒とならずに、個別の患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分の量を得るように変更可能である。選択される投与量レベルは、様々な薬物動態学的要因に依存し、それらには、採用される本発明の個々の組成物の活性；投与経路；投与時間；使用されている個別の化合物の排泄速度；治療期間；採用される個々の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／又は材料；治療を受けている患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態、既往歴；並びに医療分野で周知の同様の要因が含まれる。
【１２４１】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物は、治療有効量で対象に投与される。本明細書で使用される場合、「有効量」又は「治療有効量」という用語は、治療される障害の１又は複数の症状を治療、阻害、又は軽減するのに十分な、又はその他の方法で所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を提供するのに十分な用量を意味する。正確な投与量は、対象によって決定される変数（例えば、年齢、免疫系の健康など）、疾患、及び実施される治療などの様々な要因によって異なる。本明細書に開示されるポリペプチド組成物、それをコードするポリヌクレオチド及び核酸構築物、並びに本明細書に記載される細胞の場合、さらなる研究が行われるにつれて、様々な患者の様々な状態の治療のための適切な投与量レベルに関する情報が明らかになり、当業者は、被治療者の治療状況、年齢、及び全身健康状態を考慮して、適切な投与量を確認することができるであろう。選択される投与量は、所望の治療効果、投与経路、及び所望の治療の期間によって決定される。ポリペプチド組成物の場合、一般に、一日０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量レベルが哺乳動物に投与され、より普通には０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇである。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンは、週５回、週４回、週３回、週２回、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３か月に１回、又は３〜６か月に１回の投与を伴う。一般的に、静脈内注射又は注入の場合、投与量は少なくなりうる。投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスが投与されてよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が、治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少又は増加されてもよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態（dosage unit form）は、治療される対象への単一投与量として適した物理的個別単位（physically discrete units）を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態による投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき個別の治療効果、及び（ｂ）個人の感受性の処置のためにかかる活性化合物を配合する当技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【１２４２】
場合により、前記ポリペプチド製剤は、任意の適切な投与タイミングレジメンに従って、０．０００１〜１００ｍｇ／患者の体重（ｋｇ）／日の間の量、好ましくは０．００１〜２０．０ｍｇ／ｋｇ／日の間の量で投与され得る。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療組成物は、例えば、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、又は２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間若しくは８週間ごとに１回、投与され得る。さらに、前記組成物は、短期間又は長期間（例えば、１週間、１ヶ月、１年、５年）にわたって投与され得る。
【１２４３】
あるいは、本明細書に開示される組成物は、徐放性製剤として投与することができ、その場合、必要とされる投与の頻度はより少ない。投与量と頻度は、患者における治療剤の半減期によって異なる。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、次にヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。融合タンパク質の半減期は大きく異なり得る。投与量及び投与頻度は、治療が予防的（prophylactic）であるか治療的（therapeutic）であるかによって異なり得る。予防的用途では、比較的低用量が、長期間にわたって、比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は生涯治療を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が低減又は終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い投与量が必要とされる場合がある。その後、患者に予防的投与レジメンで投与してもよい。
【１２４４】
ある実施形態において、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、又は細胞組成物は、例えば、治療される部位に直接注射することによって、局所的に投与される。典型的には、注射は、全身投与によって達成され得る濃度よりも高い、組成物の局所濃度の増加を引き起こす。治療される部位からのポリペプチドの受動拡散を低減することによって、ポリペプチド組成物の局所濃度の増加を作り出すのを助けるために、前記ポリペプチド組成物は、上記のようにマトリックスと組み合わせることができる。
【１２４５】
本発明の医薬組成物は、当技術分野で公知の医療デバイスと共に投与してもよい。例えば、所望による実施形態では、本発明のいくつかの実施形態による医薬組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、又は第４，５９６，５５６号に開示されるデバイスなどの針皮下注射デバイスを用いて投与され得る。本発明において有用な周知のインプラント及びモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号に開示される制御された速度で薬剤を分配するための埋め込み型マイクロ注入ポンプ、米国特許第４，４８６，１９４号に開示される皮膚を通して薬剤を投与するための治療デバイス、米国特許第４，４４７，２３３号に開示される正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプ、米国特許第４，４４７，２２４号に開示される連続薬物送達のための可変流量埋め込み型注入装置、米国特許第４，４３９，１９６号に開示されるマルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧ドラッグデリバリーシステム、及び米国特許第４，４７５，１９６号に開示される浸透圧ドラッグデリバリーシステムが含まれる。これらの特許は、参照により本明細書に援用される。他の多くのこのようなインプラント、送達システム、及びモジュールは、当業者に公知である。
【１２４６】
前記活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、急速放出に抗して化合物を保護する担体を用いて調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用しうる。かかる製剤を調製するための多くの方法は、特許とされているか、又は一般に当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照のこと。
【１２４７】
制御放出ポリマーデバイスは、ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスク）又は注射（微粒子）を移植し、続いて全身に長期放出を行うために作製されうる。マトリックスは、ペプチドが固体ポリマーマトリックス又はマイクロカプセル内に分散され、コアがポリマーシェルとは異なる材料であり、ペプチドが、元来液体でも固体でもよいコアに分散又は懸濁されている、ミクロスフェアなどの微粒子の形態であってもよい。本明細書で特に定義されていない限り、微粒子、ミクロスフェア、及びマイクロカプセルは互換的に使用される。あるいは、ポリマーは、数ナノメートル〜４センチメートルの範囲内の薄いスラブ又はフィルムとして成型されてもよく、粉砕又は他の標準的な技術によって生成される粉末であってもよく、あるいはヒドロゲルなどのゲルであってもよい。
【１２４８】
非生分解性又は生分解性マトリックスのいずれかを、本明細書に開示される活性剤の送達に使用することができるが、生分解性マトリックスが好ましい。これらは天然又は合成ポリマーであり得るが、分解及び放出プロファイルのより良い特徴付けのために合成ポリマーが好ましい。ポリマーは、放出が望まれる期間に基づいて選択される。線形放出が最も有用な場合もあれば、パルス放出又は「バルク放出」がより効果的な結果を提供する場合もある。ポリマーは、ヒドロゲルの形態（典型的には、最大約９０重量％の水を吸収している）であってもよく、場合により、多価イオン又は多価ポリマーで架橋されていてもよい。
【１２４９】
マトリックスは、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出、及び当業者に公知の他の方法によって形成され得る。生体侵食性ミクロスフェアは、例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ５：１３−２２（１９８７）；  Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ６：２７５−２８３（１９８７）；及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｐｐｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ＳｃＬ，  ３５：７５５−７７４（１９８８）によって記載されているように、薬物送達のためのミクロスフェアを作製するために開発された方法のいずれかを使用して調製することができる。
【１２５０】
前記デバイスは、移植又は注射の領域を治療するための局所放出（通常、全身の治療のための投与量よりもはるかに少ない投与量を送達する）又は全身送達用に製剤化され得る。これらは、皮下、筋肉、脂肪に移植又は注射されるか、嚥下されてもよい。
【１２５１】
ある実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療化合物が（必要に応じて）ＢＢＢを通過することを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中に製剤化され得る。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号、及び第５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞又は器官に選択的に輸送されて、標的化された薬物送達を増強する、１又は複数の部分を含み得る（例えば、Ｖ．  Ｖ．  Ｒａｎａｄｅ（１９８９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９：６８５を参照のこと）。例示的な標的化部分として、葉酸又はビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号〜Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．を参照のこと）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １５３：１０３８）、抗体（Ｐ．  Ｇ．  Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５７：１４０；  Ｍ．  Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ３９：１８０）、サーファクタントプロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｍ．  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １２３３：１３４）、ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：９０９０）が挙げられる。Ｋ．  Ｋｅｉｎａｎｅｎ；  Ｍ．  Ｌ．  Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３４６：１２３；  Ｊ．  Ｊ．  Ｋｉｌｌｉｏｎ；  Ｉ．  Ｊ．  Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）  Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３についても参照のこと。
【１２５２】
本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、有効成分を含む１又は複数の単位剤形を含み得る、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）に承認されたキットなどのパック又はディスペンサーデバイスで提示され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属又はプラスチックの箔を含み得る。パック又はディスペンサーデバイスには、投与のためのインストラクションが添付され得る。パック又はディスペンサーは、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の容器に関連付けられた通知によって適応される場合もあり、この通知は、人又は動物投与用組成物の形態の機関による承認を反映している。このような通知は、例えば、処方薬についてアメリカ食品医薬品局によって承認されたラベル、又は承認された添付文書に関するものである場合がある。適合性のある医薬担体中に製剤化された本発明の調製物を含む組成物もまた、上記でさらに詳述されたように、調製され、適切な容器に入れられ、そして適応とされた状態の治療のためにラベルを付され得る。
【１２５３】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。
【１２５４】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語及びそれらの複合は、「含むがそれに限定されない」ことを意味する。
【１２５５】
「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語は、「含み且つ限定される」ことを意味する。
【１２５６】
「本質的に〜からなる」という用語は、追加の成分、工程、及び／又は部分が請求の範囲の組成物、方法、又は構造の基本的及び新規の特性を実質的に（ｍａｔｅｒｉａｌｌｙ）変更しない場合に限り、組成物、方法、又は構造が追加の成分、工程、及び／又は部分を含み得ることを意味する。
【１２５７】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び定冠詞「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の参照を含む。例えば、「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」又は「少なくとも１つの化合物（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」という用語は、複数の化合物（それらの混合物を含む）を含み得る。
【１２５８】
本出願を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内の個々の数値だけでなく、全ての可能な部分的範囲を具体的に開示していると見なされるべきである。例えば、１〜６などの範囲の説明は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの部分的範囲並びにその範囲内の個々の数字（１、２、３、４、５、及び６など）を具体的に開示していると見なす必要がある。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【１２５９】
本明細書で数値範囲が示されるときは常に、示された範囲内の引用された数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の表示番号及び第２の表示番号の「間の範囲（に及んでいる）／範囲（に及ぶ）」という句、及び第１の表示番号「から」第２の表示番号「までの範囲（に及んでいる）／範囲（に及ぶ）」という句は、本明細書では互換的に使用され、１番目に示された数字及び２番目に示された数字並びにそれらの間の全ての分数と整数を含むことを意味する。
【１２６０】
本明細書で使用される場合、「方法」という用語は、所与の課題（タスク）を達成するための方法、手段、技術、及び手順を指し、化学、薬理学、生物学、生化学、及び医学の専門家に公知であるか、それらの専門家により公知の方法、手段、技術、及び手順から容易に開発される方法、手段、技術、及び手順を含むがこれらに限定されない。
【１２６１】
特定の配列表を参照する場合、かかる参照は、例えば、配列決定エラー、クローニングエラー、又は塩基置換、塩基欠失、若しくは塩基付加をもたらすその他の変化がもたらすマイナーな配列変異を含むものとして、その相補的配列に実質的に対応する配列も包含すると理解されるべきである。ただし、かかる変化の頻度は５０ヌクレオチドに１未満、あるいは１００ヌクレオチドに１未満、あるいは２００ヌクレオチドに１未満、あるいは５００ヌクレオチドに１未満、あるいは１０００ヌクレオチドに１未満、あるいは５，０００ヌクレオチドに１未満、あるいは１０，０００ヌクレオチドに１未満である。
【実施例】
【１２６２】
ここで、以下の実施例を参照する。これらの実施例は、上記の説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を非限定的な方法で示している。
【１２６３】
一般に、本明細書で使用される命名法及び本発明で利用される実験室手順は、分子、生化学、微生物学的及び組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は文献で充分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”（１９８９）；  Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｒ．Ｍ．、ｅｄ．“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ（１９９４）；  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；  Ｐｅｒｂａｌ、“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；  Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ） “Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”、Ｖｏｌｓ．１−４、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）；例えば米国特許第４，６６６，８２８号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０１，５３１号、同第５，１９２，６５９号、及び同第５，２７２，０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ、Ｊ．  Ｅ．、ｅｄ．  “Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”、Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ（１９９４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎ．Ｙ．“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  −  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”（１９９４）、Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ； “Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．  Ｅ．、ｅｄ．（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ）、“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ  （１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ  （ｅｄｓ）、“Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）；利用可能なイムノアッセイは特許及び科学文献に広範囲に記載されており、例えば  米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、同第４，０９８，８７６号、同第４，８７９，２１９号、同第５，０１１，７７１号、及び同第５，２８１，５２１号などを参照；Ｇａｉｔ、Ｍ．  Ｊ．、ｅｄ． “Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（１９８４）；Ｈａｍｅｓ、Ｂ．  Ｄ．、ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．  Ｊ．、ｅｄｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ”（１９８５）；Ｈａｍｅｓ、Ｂ．  Ｄ．、ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．、ｅｄｓ．“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”（１９８４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｒ．Ｉ．、ｅｄ．“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（１９８６）；“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ“ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ、Ｂ．、“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”（１９８４）及び“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ“  Ｖｏｌ．  １−３１７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ“、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ  （１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  −  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ“  ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照のこと。これらは全て、本明細書に完全に記載されているかのように参照として援用される。他の一般的な参考文献は、本明細書全体を通して提供される。その中の手順は、当該技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。本明細書に含まれる全ての情報は、本明細書中に参照として援用される。
【１２６４】
＜実施例１＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの選択
以下のパラメーターを最適化するために、本明細書で「ＤＳＰ１０５」と称される、Ｎ末端シグナルペプチド及びＨｉｓタグを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質（配列番号２６、図１）の構造分析を行った。
・  フォールディング…標的への結合を可能にする適切なフォールディング。潜在的なジスルフィドスクランブリングを最小限に抑える。
・  全体性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）…露出したタンパク質分解部位がない。
・  多量体化…２つのドメインの潜在的な多量体化を調査する。具体的には、Ｃ末端ドメイン形成の三量体化を最適化する。
・  哺乳類の発現系における高発現。
・  低い免疫原性。
【１２６５】
具体的には、ＰＤ１ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｑ１５１１６  細胞外ドメインの２１番目〜１７０番目のアミノ酸に対応、配列番号２）について：
１．  ＰＤＢ構造（３ＲＲＱ、５ＧＧＲ、５ＧＧＳ、５ＩＵＳ、５ＪＸＥ、４ＺＱＫ、５Ｂ８Ｃ、５ＷＴ９、及び１つのＮＭＲ構造２Ｍ２Ｄ）に基づいて包括的ＰＤ１モデルを生成した。上記のＰＤＢ構造に欠落しているＰＤ１のＣ末端部分（ＧＬＵ１５０から始まる、すなわちＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ、配列番号６）には、（ペプチドモデリングアルゴリズムによると）それ自体に折り畳まれると予想されるプロリンリッチセグメントが含まれる。
２．  ＰＲＯＳＰＥＲサーバーを使用して前記融合タンパク質のタンパク質分解部位を分析した。
【１２６６】
４−１ＢＢＬ（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ４１２７３  ＥＭドメインの５０番目〜２５４番目のアミノ酸に対応、配列番号３）について：
１．  ＰＤＢ構造（２Ｘ２９）に基づいて４−１ＢＢＬ細胞外（ＥＣ）ドメインモデルを生成した。このＰＤＢ構造では４−１ＢＢＬのＮ末端部分が欠落しており、Ｘ線で解像されなかったため、このセグメント（ＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤ、配列番号７）が、疎水性残基を溶媒に曝露し、その構造を予測しようとする試みが非構造化領域を示したと思われる。これにより、融合ＤＳＰ１０５の安定性が低下し、４−１ＢＢＬを介した三量体化の適切な配向が妨げられる可能性がある。
２．  ＰＲＯＳＰＥＲサーバーを使用して前記融合タンパク質のタンパク質分解部位を分析した。
３．  ４−１ＢＢＬの解像されたドメイン内の、溶媒に向かって外側に面しているループが検出された。これは、プロセシングを受けうる領域である可能性があることを意味する。
【１２６７】
図２Ａ〜図３及び以下の表３に、生成された３Ｄモデル、識別されたドメイン及びセグメント、並びにＤＳＰ１０５融合タンパク質の分析で検出された予測タンパク質分解部位を示す。
【１２６８】
総合すると、構造分析は下記事項を示した。
１．  ＰＤ１のＮ末端にある５残基のセグメント（ＰＧＷＦＬ、配列番号８）は、その性質上主に疎水性であり、ＰＤＬ１の認識に必要ではなく、構造化されたドメインの外側に広がっているため、これらを除去することが推奨される。
２．  ＰＤ１のＣ末端にある５残基のセグメント（ＦＱＴＬＶ、配列番号９）も、上記ポイント１で説明したものと同様の見かけの挙動のため（すなわち、これらは性質上主に疎水性であり、ＰＤＬ１の認識に必要ではなく、構造化されたドメインの外側に広がっている）、これらを除去することが推奨される。
３．  ＰＤ１のＣ末端及び４−１ＢＢＬのＮ末端に４つの予測される切断部位が見られる（非構造化セグメントのみに焦点を当てた場合）。
４．  ４−１ＢＢＬドメインのＮ末端セグメント（ＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧ、配列番号１０／ＡＣＰＷＡＶ、配列番号１１）を除去すると、ＤＳＰ１０５の可動性及び疎水性が低下すると予想される。
５．  この除去されたＮ末端セグメントには遊離Ｃｙｓ残基があり、誤ったジスルフィド結合により適切なフォールディング／再編成（ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）を妨げる場合がある。
【１２６９】
【表３】
2021531265.tif 000007
【１２７０】
構造分析に基づいて、４−１ＢＢＬ又はその任意のバリアントに融合され得る配列番号１８、１９、２０、２１、７３、７５、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、１１５、１１７、又は１１９のアミノ酸配列を有するいくつかのＰＤ１バリアントを設計した。
【１２７１】
また、構造分析に基づいて、ＰＤ１又はその任意のバリアントに融合され得る配列番号２２、２３、２４、２５、１２３、１２５、１２７、又は１２９のアミノ酸配列を有するいくつかの４−１ＢＢＬバリアントを設計した。
【１２７２】
さらに、４−１ＢＢＬ部分の活性を誘導するための融合タンパク質の三量体化の必要性を回避するために、ＰＤ１又はその任意のバリアントに融合され得る、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む４−１ＢＢＬバリアントを設計した。そのような４−１ＢＢＬバリアントの例示的な配列は、反復間に（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーを有する配列番号２３の３回反復を含み、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する。
【１２７３】
そのような３反復を有する４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＤＳＰ１０５の例として、ホモロジーモデリング並びにそれに続く側鎖及びループ精製を使用して、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）のモデルを生成した。ホモログＸ線構造に基づいて、各部のホモロジーモデリングを実施した。ＰＤ１について、ＰＤＢ  ＩＤ：３ＲＲＱ、５ＧＧＲ、５ＧＧＳ、５ＪＸＥ、及び４ＺＱＫをテンプレートとして使用した。ｈＩｇＧ４について、ＰＤＢ  ＩＤ：４Ｃ５４、４Ｃ５５、５Ｗ５Ｍ、及び５Ｗ５Ｎをテンプレートとして使用した。４１ＢＢ−Ｌについて、ＰＤＢ  ＩＤ：６ＣＰＲ、６Ａ３Ｖ、及び６ＣＵ０をテンプレートとして使用した。リンカーセグメントは、主に構造上の違反を除外して、考えられる「スペーサー」の妥当な推定を可能にするために、ＣＨＡＲＭＭのループモデリングを使用してモデル化した。これらのモデル分析は、リガンドへの結合の可能性、及び異なるドメイン間の干渉がないことを予測した（図１３Ａ〜図１３Ｄ）。
【１２７４】
さらに、三量体化後に別個のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のＰＤ１部分間のより長い距離を可能にするように、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１４９）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が設計された。
【１２７５】
続いて、いくつかのＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントを設計した。それらの選択の根拠及びそれらの３Ｄモデルを含む配列を、以下の表４及び図４〜図６に示す。
【１２７６】
【表４−１】
2021531265.tif 000008
【１２７７】
【表４−２】
2021531265.tif 000009
【１２７８】
【表４−３】
2021531265.tif 000010
【１２７９】
【表４−４】
2021531265.tif 000011
【１２８０】
【表４−５】
2021531265.tif 000012
【１２８１】
【表４−６】
2021531265.tif 000013
【１２８２】
【表４−７】
2021531265.tif 000014
【１２８３】
【表４−８】
2021531265.tif 000015
【１２８４】
【表４−９】
2021531265.tif 000016
【１２８５】
【表４−１０】
2021531265.tif 000017
【１２８６】
【表４−１１】
2021531265.tif 000018
【１２８７】
＜実施例２＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの作製
比較機能分析及び産生評価のため、いくつかのＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を作製した。これらは、それぞれ、本明細書において「ＤＳＰ１０５」（配列番号５）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、並びに本明細書で 「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２２」、「ＤＳＰ＿Ｖ２３」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０」及び「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１２、１４、１６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５及び１４７）と称される９つのＤＳＰ１０５バリアントである。
【１２８８】
産生はＥｘｐｉＣＨＯ、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＣＨＯ−３Ｅ７で行われ、細胞を、ＤＳＰ１０５及びそのバリアントのコード配列でクローニングされたｐｃＤＮＡ３．４又はｐＴＴ５発現ベクターによってトランスフェクトした。前記配列は、コザック（Ｋｏｚａｋ）配列、Ｎ末端又はＣ末端に６×Ｈｉｓタグを付加した又は付加しない人工シグナルペプチド（ＭＥＡＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ、配列番号４）、及びＣ末端に終止コドンを付加して、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素を使用してベクターにクローニングした。タンパク質は細胞培養の上清から採取した。
【１２８９】
上清は、ＨｉｓＴｒａｐ（商標）ＦＦ  Ｃｒｕｄｅカラムによるワンステップ精製により精製した。
【１２９０】
タグ付き融合タンパク質の産生は、Ｈｉｓタグ又は分子のドメインうちの１つ（すなわち、ＰＤ１又は４−１ＢＢＬのそれぞれの細胞外ドメイン）に対する特異的抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット分析によって検証した。例えば、図８Ａ〜図８Ｅを参照。
【１２９１】
例えば、還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離されたＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７、ＤＳＰ１０５−Ｖ１８、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３のバリアントのウエスタンブロット分析に続く、抗ＰＤ１抗体又は抗Ｈｉｓタグ抗体を用いたイムノブロッティングにより、これらのバリアントがＣＨＯ−３Ｅ７細胞で発現したことが確認された。
【１２９２】
所望により、産生した融合タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製して、精製された三量体の画分を収集する。この目的のために、Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラムにタンパク質をロードし、移動相としてＰＢＳを使用して１ｍＬ／分の流速で行う。タンパク質三量体に対応する主要なピークが収集される。
【１２９３】
収量は、ＢＣＡ又はブラッドフォードタンパク質濃度測定を使用して、又はタンパク質吸光度係数で割った２８０ｎｍでのＮａｎｏｄｒｏｐによる光学密度測定によって評価される。タンパク質の安定性は、保存条件及び加速条件下で評価される。
【１２９４】
＜実施例３＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントのオリゴマー状態の決定
材料
本明細書の上記実施例２に説明されたようにＥｘｐｉ２９３細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）（本明細書では「ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）」と称する。）、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２（配列番号１５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３（配列番号１７）（本明細書では「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１」、「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２」及び「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３）」と称する）、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、並びに本明細書の上記実施例２に説明されたようにＣＨＯ−３Ｅ７細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０７＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１２９５】
Ｓｐｅｃｔｒａ  ＢＲタンパク質分子量マーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号２６６３４）、４〜２０％ポリアクリルアミドゲル（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号５５６−８０９４、ｅ−Ｓｔａｉｎ  ｐｅｄ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｌ０２０１１）、Ｌａｅｍｍｅｌｉローディングバッファー（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号１６１−０７４７）、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）、ＳＥＣ−ＭＡＬＳシステム：ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ社）＋ＭｉｎｉＤａｗｎ  ＴＲＥＯＳ＋ＯＰＴＩＬＡＢ  Ｔ−ｒｅＸ（ＷＹＡＴＴ社）。  
【１２９６】
方法
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析：
各試料からの２μｇのタンパク質又は３５μＬの上清をβ−メルカプトエタノールを含む又は含まないローディングバッファーと混合し（それぞれ還元及び非還元条件）、９５℃で５分間加熱し、４〜２０％勾配ポリアクリルアミドゲル電気泳動ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。ゲル上でのタンパク質の移動は、ｅ−Ｓｔａｉｎ  ｐｅｄを使用したクーマシーブルー染色と、製造元の指示に従ってｅ−Ｓｔａｉｎシステム（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）を使用した洗浄とによって視覚化される。
【１２９７】
ＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析：
タンパク質をＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）にロードし、移動相として１０ｍＭリン酸カリウム（ＫＰＯ４）（ｐＨ８．０）＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を使用して０．８ｍＬ／分の流速で実施する。検出は、ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ社）＋ＭｉｎｉＤａｗｎ  ＴＲＥＯＳ＋ＯＰＴＩＬＡＢ  Ｔ−ｒｅＸ（ＷＹＡＴＴ社）を使用して、ＵＶ、ＭＡＬＳ、及びＲＩによって実施する。
【１２９８】
結果
図７に示すように、非還元条件下ではＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）で高分子量型（ＨＭＷ、凝集体）の割合が高いことが観察されたが、還元条件下では観察されなかった。一方、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）では、わずかなレベルの凝集体しか検出されなかった。これは、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７では誤ったジスルフィド結合の形成によるＤＳＰ１０５の凝集が防止されたことを示している。図８Ａ〜図８Ｅに示されるように、低レベルの凝集体が他のＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント（すなわち、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）で観察された。
【１２９９】
図９Ａ〜図９Ｂに示すように、非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した場合、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（ＷＴ、配列番号１）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号：９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）（ＰＤ１−４−１ＢＢＬのバリアント）が、還元条件下と同じ分子量で検出された。より高分子量のさらなるバンドがＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（ＷＴ、図９Ａ〜図９Ｂで「ＤＳＰ１０５ＷＴ」と記載される配列番号１）で検出され、還元条件と比較して非還元条件下でより強かった。これは、おそらくＳ−Ｓ架橋によって媒介される、多量体の形成を示唆している可能性がある。興味深いことに、非還元ＤＳＰ１０５ＷＴに現れたこの主要な「高分子量」バンドは、ＣＹＳ９３＞Ｓｅｒ置換を含むＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１１１）には見られず、この高分子量バンドはおそらくＣＹＳ９３によって媒介されることを強調している。
【１３００】
＜実施例４＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントは両ドメインを含む
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製されたＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。  
【１３０１】
ウエスタンブロット分析用：Ｓｐｅｃｔｒａ  ＢＲタンパク質マーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号２６６３４）、Ｌａｅｍｍｅｌｉローディングバッファー（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号１６１−０７４７）、４〜２０％ポリアクリルアミドゲル（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号５５６−８０９４）、抗４−１ＢＢＬ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社、５３６９−１００）、抗ＰＤ１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社、カタログ番号８６１６３）、抗Ｈｉｓ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ａ００１８６）、二次ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ複合体（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号１７０−６５１５）、ＥＣＬ  Ｐｌｕｓ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ウエスタンブロット用基質）（Ｐｉｅｒｃｅ社、カタログ番号３２１３２）。
【１３０２】
サンドイッチＥＬＩＳＡ用：抗４−１ＢＢＬ抗体（一致したペアから抗体を捕捉する、Ａｂｎｏｖａ社、＃Ｈ００００８７４４−ＡＰ４１）、抗ＰＤ１ビオチン化抗体、ストレプトアビジンタンパク質、ＨＲＰ（＃２１１２６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、ＴＭＢ基質（１−Ｓｔｅｐ（商標）Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃３４０２８）。
【１３０３】
方法
ウエスタンブロット分析：
タンパク質（レーンあたり５０〜５００ｎｇ）を還元条件又は非還元条件で処理し（それぞれ、β−メルカプトエタノールを含むローディングバッファー中で９５℃、５分間煮沸、又はβ−メルカプトエタノールを含まないサンプルバッファー中で加熱なし）、４〜２０％の勾配ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分離した。続いて、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写し、一次抗体、抗４−１ＢＢＬ、抗ＰＤ１、又は抗Ｈｉｓと一晩インキュベートした後、ＨＲＰ結合二次抗体と１時間インキュベートした。電気化学発光（ＥＣＬ）に引き続きシグナルを検出した。
【１３０４】
サンドイッチＥＬＩＳＡ：
プレートを抗４−１ＢＢＬ捕捉抗体（ＰＢＳ中２．５ｕｇ／ｍＬ）でコーティングし、ブロッキング溶液（ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ）でブロッキングする。産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を、ブロッキング溶液で段階希釈し、コーティングしたプレートに塗布し、２時間インキュベートした後、製造業者の推奨に従って、検出用抗ＰＤ１ビオチン化抗体とインキュベートを行い、続いてストレプトアビジン−ＨＲＰ及びＴＭＢ基質で検出する。プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、６２０ｎｍを参照波長とする。
【１３０５】
＜実施例５＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントはＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合する
【１３０６】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質のＰＤ１部分のＰＤＬ１への結合分析
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのＰＤ１ドメインのヒトＰＤＬ１への結合は、ＰＤＬ１を過剰発現するＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株を使用して測定した。ＤＬＤ１−ＷＴ細胞は陰性対照とした。細胞を異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、二次抗４−１ＢＢＬ抗体で免疫染色した。結合はフローサイトメトリーによって分析した。
【１３０７】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３０８】
ＤＬＤ１−ＷＴ及びＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４２２３０２）、抗４−１ＢＢＬ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３１１５０６）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）、抗ＰＤＬ１（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３２９７０８）、アイソタイプＩｇＧ２ｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００３２２）。
【１３０９】
方法
細胞を氷上で３０分間、異なる濃度（０．０５〜５０μｇ／ｍＬ）の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、４−１ＢＢＬに対する抗体で免疫染色し、フローサイトメトリーで分析した。
【１３１０】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質の４−１ＢＢＬ部分の４−１ＢＢへの結合分析
ＰＤ１−４−１ＢＢＬの４−１ＢＢＬドメインのヒト４−１ＢＢへの結合は、４−１ＢＢを過剰発現するＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株を使用して測定した。ＨＴ１０８０ＷＴ（野生型）細胞は陰性対照とした。細胞を異なる希釈の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、二次抗ＰＤ１抗体で免疫染色した。結合はフローサイトメトリーによって分析した。
【１３１１】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。 
【１３１２】
ＨＴ１０８０ＷＴ及びＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞（Ｗｙｚｇｏｌ  ｅｔ  ａｌ，  ２００９）、Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ（色素）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、カタログ番号５６２２４７）、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４２２３０２）、抗ＰＤ１（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３２９９０８）、抗４１ＢＢ（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３０９８０１）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）。
【１３１３】
方法
細胞を氷上で３０分間、異なる希釈（１：８〜１：１０２４）の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、ＰＤ１に対する抗体で免疫染色し、フローサイトメトリーで分析した。
【１３１４】
結果
図１０Ａに示すように、ＤＬＤ１−ＰＤ１細胞及びＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞は、それぞれ関連する受容体であるＰＤ１及び４１ＢＢを発現する。結合アッセイは、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）が用量依存的にＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞及びＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞に結合することを示した（図１０Ｂ）。（トランスフェクトされていない細胞からの）上清対照の異なる希釈は、ＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞に結合しなかった（図１０Ｂ）。次に、ＧＭＦＩ値を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアで結合曲線グラフを作成した（図１０Ｃ）。まとめると、融合タンパク質であるＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）の両端は、細胞の表面で過剰発現している関連するカウンターパートに結合する。
【１３１５】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのヒト、マウス、及びカニクイザルのＰＤＬ１カウンターパート及び４−１ＢＢカウンターパートへの結合
【１３１６】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイにより、ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質のＰＤＬ１カウンターパート及び４−１ＢＢカウンターパートへの結合を決定する
【１３１７】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。      
【１３１８】
Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  ＣＭ５（ＧＥ社、カタログ番号ＢＲ１００５３０）、抗体捕捉キット、ヒトｈＣＤ４７（陰性対照）、ヒトＰＤＬ１、マウスＰＤＬ１、カニクイザルＰＤＬ１、ヒト４−１ＢＢ、マウス４−１ＢＢ、カニクイザル４−１ＢＢ。
【１３１９】
方法
ＳＰＲアッセイは、ＢｉａｃｏｒｅＴ１００バイオセンサー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用して実施する。捕捉キットの抗体は、製造業者が推奨する標準のアミンカップリングプロトコルを使用して、チップの４つのフローチャネル全て（Ｆｃ１〜Ｆｃ４）にカップリングされる。ＰＤ１−４−１ＢＢＬのカウンターパートタンパク質（ＰＤＬ１及び４−１ＢＢ）のチップへの結合は、ＨＢＳ−ＥＰ＋ランニングバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で行う：ヒトＣＤ４７（陰性対照）は参照チャネルＦｃ１にロードされ、Ｆｃ２〜Ｆｃ４にはヒトＰＤＬ１タンパク質、マウスＰＤＬ１タンパク質、及びカニクイザルＰＤＬ１タンパク質がロードされる。チップの自動再生に続いて、チャネルＦｃ１においてヒトＣＤ４７を、チャネルＦｃ２〜Ｆｃ４においてヒト４−１ＢＢタンパク質、マウス４−１ＢＢタンパク質、及びカニクイザル４−１ＢＢタンパク質を、チップに再ロードする。カウンターパートの結合に続いて、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ分析対象物を４つのチャネルすべてに通過させる。このプロセスは、５０μＬ／分の流速で様々な濃度のＰＤ１−４−１ＢＢＬ分析物を使用して反復して繰り返される。各サイクルの最後に３Ｍ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）溶液を注入し（２０μＬ／分で４５秒）、捕捉された分子を除去して活性表面を再生する。結合パラメーターは、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアｖ．  ３．０．２（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）の動力学的結合（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ）（１：１）モデルを使用して評価する。
【１３２０】
＜実施例６＞
両側結合−力価（ｐｏｔｅｎｃｙ）アッセイ
分子の両側の、それぞれのカウンターパートに対する結合、すなわちＰＤ１のＰＤＬへの結合及び４−１ＢＢＬの４−１ＢＢへの結合をサンドイッチＥＬＩＳＡに基づく力価アッセイで試験する。異なる産生バッチにおける機能的特徴を比較するためにも本アッセイを用いる。  
【１３２１】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。ヒト組換えＰＤＬ１（ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社、Ａ００１−２１４）、ヒト組換えタンパク質４−１ＢＢ−ビオチン（カタログ番号４１Ｂ−Ｈ８２Ｅ３、ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社）、ストレプトアビジンタンパク質−ＨＲＰ（カタログ番号２１１２６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、１−Ｓｔｅｐ（商標）Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（カタログ番号３４０２８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）。
【１３２２】
方法
ＰＤＬ１をプラスチックプレートの表面に結合し、ＰＤ１−４−１ＢＢＬを添加して、固定化されたＰＤＬ１に結合させる。洗浄後、ビオチン化４−１ＢＢを添加し、分子の４−１ＢＢＬアームに結合させる。続いて、前記プレートを洗浄し、ストレプトアビジンＨＲＰを添加する。検出は、５４０ｎｍを参照波長として、４５０ｎｍでプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用する標準ＥＬＩＳＡプロトコルに従ってＴＭＢ基質で実施する。
【１３２３】
＜実施例７＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントによる４−１ＢＢの活性化
産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質による４−１ＢＢ受容体の活性化効果は、４−１ＢＢ受容体を過剰発現しているＨＴ１０８０細胞又は別の細胞株を使用して測定した。具体的には、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株は４−１ＢＢを過剰発現しており、４−１ＢＢＬの結合時にＩＬ８を分泌することが知られている（Ｗｙｚｇｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）。これらの細胞の表面にある４−１ＢＢ受容体に４−１ＢＢＬが結合すると、シグナル伝達経路が活性化され、ＩＬ８が分泌される。この目的のために、細胞を、ＰＤＬ１発現細胞の存在下又は非存在下で、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬの異なる濃度の存在下でインキュベートし、培養培地へのＩＬ８分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【１３２４】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３２５】
ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞、ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号Ｄ８０００Ｃ）、ＤＭＥＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、カタログ番号０１−０５５−１Ａ）、ＦＢＳ（Ｒｈｅｎｉｕｍ社、カタログ番号１０２７０１０６）、抗４−１ＢＢ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３５９８１０）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）。
【１３２６】
方法
ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞（ウェルあたり１００００）を、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を異なる濃度で含む培地で２４時間インキュベートした。インキュベート後、上清中のＩＬ８濃度は、製造業者のプロトコルに従ってＩＬ８ＥＬＩＳＡキットによって測定した。プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、５４０ｎｍを参照波長とした。
【１３２７】
結果
図１１に示すように、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞は関連する受容体４−１ＢＢを発現する。試験した全てのＤＳＰ１０５バリアントタンパク質（Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１３））は、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞からのＩＬ８分泌によって測定されるように、ＦＢＳを含む培地で用量依存的に４−１ＢＢシグナル伝達を引き起こすことができた（図１２）。
【１３２８】
＜実施例８＞
ＰＤＬ１の結合阻害についてのＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの影響
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのＰＤ１部分は、Ｔ細胞上に発現する内因性ＰＤ１の、腫瘍細胞上に発現するＰＤＬ１への相互作用を阻害するように設計される。この目的のため、この相互作用の阻害物質（ｂｌｏｃｋｅｒ）としての、作製されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの有効性を評価する。 
【１３２９】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３３０】
以下を含むＰＤ−１：ＰＤＬ１  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ＥＬＩＳＡ  Ａｓｓａｙ  Ｐａｉｒ（Ａｃｒｏ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＥＰ１０１）：組換えヒトＰＤＬ１、抗ｈＰＤ１中和抗体、ビオチン化ｈＰＤ１。
【１３３１】
方法
ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＰＤＬ１で一晩コーティングする。プレートを洗浄し、異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は陽性対照抗ＰＤ１抗体で１時間インキュベートする。ビオチン化ＰＤ１を添加した後、さらに１時間インキュベートする。インキュベート後、プレートを洗浄し、標準的なＥＬＩＳＡプロトコルに従ってストレプトアビジン−ＨＲＰ及びＴＭＢ基質でブロットする。
【１３３２】
プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、６２０ｎｍを参照波長とする。
【１３３３】
＜実施例９＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントによるＰＢＭＣ又はＴ細胞の活性化
Ｔ細胞の活性化には２つのシグナルが必要である：抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド複合体との、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合、及びＴ細胞上の共刺激受容体とＡＰＣ上の対応するリガンドとの架橋。４−１ＢＢはＴ細胞共刺激受容体であり、４−１ＢＢＬに結合すると、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の両方の増殖、生存、分化、及びサイトカイン発現を促進する。
【１３３４】
以下を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞の活性化を測定するための多くの方法が当技術分野で公知である。
・  Ｔ細胞の表面での活性化マーカーの発現（例えば：ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１など）。活性化マーカーの発現は、細胞を特定の抗体で染色し、フローサイトメトリー分析（ＦＡＣＳ）によって試験する。
・  炎症性サイトカインの分泌（例えば：ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＮＦγなど）。炎症性サイトカインの分泌はＥＬＩＳＡによって試験する。
・  ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）又は他の細胞増殖色素でＴ細胞を前染色し、ＦＡＣＳによって測定されるＣＦＳＥ希釈によって細胞の偏差を測定することによって測定される、増殖。増殖はまた、経時的に写真を撮影して特定のソフトウェアで写真を分析するＩｎｃｕＣｙｔｅ機器を使用して測定される。
・  標的細胞の殺細胞性、例えば、カルセイン−ＡＭ試薬を使用してがん細胞を事前標識し、発光プレートリーダーを使用して培地へのカルセイン放出を測定することによって測定される、がん細胞の殺細胞性。殺細胞性はまた、標識された標的細胞とカスパーゼ感受性蛍光基質を使用するＩｎｃｕＣｙｔｅ機器によって測定される。
【１３３５】
この目的のために、ヒトＴ細胞又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の活性化の増強についての、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の効果を評価する。
【１３３６】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（ＳＥＣＩＤＮＯ：９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、カタログ番号１７−１４４０−０３）、Ｌｅａｆ精製抗ヒトＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、カタログ番号ＢＬＧ−３１７３１５）、組換えヒトＩＬ−２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号５８９１０６）、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ６９抗体、抗ＣＤ１０７ａ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＰＤ１抗体、ＥａｓｙＳｅｐ  ＤｉｒｅｃｔＨｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ社、カタログ番号１９６６１）、抗ＣＤ３／ＣＤ２８  ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ社、カタログ番号Ｄｙ−１１１３１Ｄ）、ＩＦＮｇ  ＥＬＩＳＡキット（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、カタログ番号９００−ＴＭ２７）、ＣＦＳＥ。
【１３３７】
方法
ヒトＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ法（Ｇｒｉｅｎｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１６  Ｂｉｏｐｒｅｓｅｒｖ  Ｂｉｏｂａｎｋ．  １４（５）：４１０−４１５）を使用して健康なドナーの末梢血から分離され、Ｔ細胞は陰性選択磁気ビーズによってさらに単離される。単離後、最適未満濃度の抗ＣＤ３（３０ｎｇ／ｍＬ）若しくはＩＬ−２（１０００Ｕ／ｍＬ）又は抗ＣＤ３＋ＩＬ−２、又はαＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）（細胞あたり１：１０ビーズ）の存在下で、異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を添加して細胞を培養する。細胞は、ＰＤＬ１発現細胞存在下若しくは非存在下で、又はＰＤＬ１コーティングプレートで、１〜７日間培養する。培地へのＩＦＮγなどの炎症性サイトカインの分泌は、ＥＬＩＳＡによって測定する。増殖は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）Ｓ３  Ｌｉｖｅ−Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（生細胞分析システム）によって、又はＣＦＳＥを使用して、製造業者のプロトコルに従って測定する。フローサイトメトリーにより、様々な時点での細胞の活性化マーカー、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＰＤ１表面発現をさらに試験する。殺細胞性は、製造業者のプロトコルに従って、カルセイン−ＡＭ放出又はＩｎｃｕＣｙｔｅ機器によって評価する。
【１３３８】
＜実施例１０＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントのインビボ抗腫瘍効果
がんの治療におけるＰＤ１−４−１ＢＢＬの有効性を試験するために、３つの異なるインビボマウスモデルを使用する。
１．  ヒト幹細胞若しくはヒトＰＢＭＣ又は固定化ヒトＰＢＭＣ及びヒト腫瘍細胞を接種したＮＳＧマウス。このモデルでは、ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、ヒトＰＤＬ１（腫瘍及び免疫細胞で発現）及びヒトＴ細胞の４−１ＢＢと相互作用する。
２．  ＭＣ３８マウス結腸癌若しくは他のがん細胞株又はヒトＰＤＬ１を過剰発現するがん細胞株を接種した、Ｃ５７ＢＬ／６−ヒト４−１ＢＢノックインマウス。このモデルでは、マウス４−１ＢＢ細胞外ドメインがヒト４−１ＢＢの細胞外ドメインに置き換えられているため、ＰＤ１−４−１ＢＢＬはマウスＴ細胞に発現しているヒト４−１ＢＢと相互作用し得る。ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、腫瘍細胞に発現しているマウスＰＤＬ１及びヒトＰＤＬ１と相互作用する。
３．  マウスＰＤＬ１を発現する同系マウス腫瘍モデル。これらのモデルでは、ＰＤ１−４−１ＢＢＬは腫瘍細胞上のマウスＰＤＬ１と相互作用する。
【１３３９】
材料
３モデルの全てにおいて、マウスに腫瘍細胞を静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、又は同所に接種する。腫瘍が触知可能となった時点で（約８０ｍｍ３）、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は同所に、異なる用量及び異なるレジメンで、作製したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、例えばＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）でマウスを処置する。
【１３４０】
体重及び臨床徴候についてマウスを追跡する。腫瘍は週に数回ノギスで測定し、腫瘍体積は下記式に従って計算する：Ｖ＝長さ×幅２／２。マウスの体重は定期的に測定する。腫瘍の増殖及び生存は、実験全体を通してモニタリングする。
【１３４１】
腫瘍内の免疫細胞の浸潤及びサブタイピングは、腫瘍又は流入領域リンパ節を切除し、消化し、特定の抗体染色とフローサイトメトリー分析を使用して免疫表現型を決定することにより試験する。追加的又は代替的に、免疫細胞の浸潤又は腫瘍の壊死グレードは、腫瘍を切除し、パラフィン包埋し、切片化して特定の抗体で免疫組織化学染色することによって決定する。
【１３４２】
犠牲にする際に、マウスの臓器を採取し、ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色及び免疫組織化学染色（ＩＨＣ）染色のためにパラフィンブロックに包埋する。
【１３４３】
血液試料は、以下の試験のために、一般的な手順に従って、様々な時点でマウスから採取する。ＰＫ分析、血漿中のサイトカイン測定、循環血液中の血球亜集団のＦＡＣＳプロファイリング、血液学検査、血清化学検査、抗薬物抗体（ＡＤＡ）分析、中和抗体分析（ＮＡＢ）。
【１３４４】
本発明は、その特定の実施形態と併せて説明されてきたが、多くの代替、修正、及び変形が当業者には明らかであることは自明である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神及び広い範囲に含まれるそのような全ての代替案、修正、及び変形を包含することが意図されている。
【１３４５】
本明細書に記載されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願が、参照により本明細書に援用されることが具体的かつ個別に示された場合と同程度に、参照によりその全体が本明細書に援用される。さらに、本出願における参考文献の引用又は識別は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることを認めるものと解釈されるべきではない。セクション見出しが使用されている範囲で、それらは必ずしも限定的であると解釈されるべきではない。
【１３４６】
さらに、本出願の優先権書類は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【図１】
2021531265.tif 000019
【図２Ａ】
2021531265.tif 000020
【図２Ｂ】
2021531265.tif 000021
【図２Ｃ】
2021531265.tif 000022
【図２Ｄ】
2021531265.tif 000023
【図３】
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【図４】
2021531265.tif 000025
【図５】
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【図６】
2021531265.tif 000027
【図７】
2021531265.tif 000028
【図８Ａ】
2021531265.tif 000029
【図８Ｂ】
2021531265.tif 000030
【図８Ｃ】
2021531265.tif 000031
【図８Ｄ】
2021531265.tif 000032
【図８Ｅ】
2021531265.tif 000033
【図９Ａ】
2021531265.tif 000034
【図９Ｂ】
2021531265.tif 000035
【図１０Ａ】
2021531265.tif 000036
【図１０Ｂ】
2021531265.tif 000037
【図１０Ｃ】
2021531265.tif 000038
【図１１】
2021531265.tif 000039
【図１２】
2021531265.tif 000040
【図１３Ａ】
2021531265.tif 000041
【図１３Ｂ】
2021531265.tif 000042
【図１３Ｃ】
2021531265.tif 000043
【図１３Ｄ】
2021531265.tif 000044
【配列表】
2021531265000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年3月15日(2021.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１８年７月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／６９６，３６５号及び２０１８年１２月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７８６，５９９号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張し、これらは、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
配列表に関する記載
この出願の提出と同時に提出された、２０１９年７月７日に作成された２６８キロバイトを含む「７６０５０ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」というタイトルのＡＳＣＩＩファイルは、参照により本明細書に援用される。
【０００３】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
シグナル変換タンパク質（Ｓｉｇｎａｌ−Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＳＣＰ）としても知られるデュアルシグナル伝達タンパク質（Ｄｕａｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、ＤＳＰ）は、Ｉ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外アミノ末端）をＩＩ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外カルボキシル末端）に連結し、２つの活性面（two active sides）を有する融合タンパク質を形成する二機能性融合タンパク質として現在当技術分野で知られている（例えば、米国特許番号第７，５６９，６６３号及び第８，０３９，４３７号を参照）。
【０００５】
ＰＤ１は、免疫グロブリンスーパーファミリーの表面共阻害受容体である。ＰＤ１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、及び多くの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で発現される。ＰＤ１は２つのリガンドを有し、それらは、どちらも共抑制性であるＰＤＬ１（Ｂ７Ｈ１、ＣＤ２７４とも称される）及びＰＤＬ２（Ｂ７ＤＣ、ＣＤ２７３）である。ＰＤＬ１は、休止及び活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、血管内皮細胞、及び膵島細胞で発現される。ＰＤＬ１は、様々な種類のがん、特にＮＳＣＬＣ、黒色腫、腎細胞がん、胃がん、肝細胞がん、皮膚がん、並びに様々な白血病がん、多発性骨髄腫などで発現されることも知られている。ＰＤＬ２の発現は、マクロファージ及び樹状細胞のみで見られ、腫瘍の種類を通して見ると、ＰＤＬ１よりもはるかに広がりが少ない。ＰＤＬ１の発現は、Ｉ型及びＩＩ型ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＬＰＳ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＶＥＧＦ、並びにサイトカインＩＬ−１０及びＩＬ−４を含む複数の炎症誘発性分子によって誘導され、ＩＦＮ−γは最も強力な誘導因子である。腫瘍の微小環境はＰＤＬ１の発現をアップレギュレートし、それによって免疫抑制を促進する。免疫攻撃に応答して、がん細胞はＰＤＬ１を過剰発現し、ＰＤＬ１はＴ細胞上のＰＤ１受容体に結合してＴ細胞の活性化を阻害し、それによりＴ細胞の攻撃を抑制して、腫瘍の免疫回避を誘導する。ＰＤ１／ＰＤＬ１経路は、以下のいくつかのメカニズムによって免疫抑制を調節する：
●  活性化Ｔ細胞のアポトーシスを誘導する。
●  細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ−ＣＤ８）活性を抑制する。
●  Ｔ細胞の増殖を阻害する。
●  Ｔ細胞のアネルギー及び疲弊を促進する。
●  制御性Ｔ細胞の機能を強化する。
●  Ｔ細胞活性化異常及びＩＬ−２産生を抑制する。
【０００６】
４−１ＢＢＬは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、強力な活性化誘導型Ｔ細胞共刺激分子である４−１ＢＢ受容体（ＣＤ１３７）の活性化リガンドである。４−１ＢＢＬは自然にホモ三量体を形成するが、４−１ＢＢを介したシグナル伝達には、４−１ＢＢＬの顕著なオリゴマー化（多量体化）が必要である。４−１ＢＢＬは、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、マクロファージなど、様々な抗原提示細胞（ＡＰＣ）に存在する。４−１ＢＢ受容体は休止Ｔ細胞又はＴ細胞株では検出されない（＜３％）が、Ｔ細胞が活性化されると４−１ＢＢは安定してアップレギュレートされる。４−１ＢＢの活性化は、生存遺伝子をアップレギュレートし、細胞分裂を促進し、サイトカイン産生を誘導し、Ｔ細胞の活性化誘導型細胞死を防ぐ。
【０００７】
さらなる背景技術には以下が含まれる。
【０００８】
Ｍａｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  ２０１５  Ｎｏｖ  ２４；１１２（４７）：Ｅ６５０６−１４。
国際公開第２０１８／０５３８８５号
国際公開第２０１８／０３２７９３号
国際公開第２０１８／００６８８１号
国際公開第２０１３／１４４７０４号
国際公開第２０１６／０２２９９４号
国際公開第２０１０／０２７８２８号
国際公開第２０１８／０８５３５８号
中国特許出願公開第１０７８５７８１９号
国際公開第２０１７／１９４６４１号
国際公開第２０１４／１８０２８８号
国際公開第２０１７／０５９１６８号
国際公開第２００１／０４９３１８号
国際公開第２０１６／１３９６６８号
国際公開第２０１４／１０６８３９号
国際公開第２０１２／０４２４８０号
米国特許出願公開第２０１５／０１８３８８１号
米国特許出願公開第２００７／０１１０７４６号
米国特許出願公開第２００７／００３６７８３号
米国特許第９５６２０８７号
【発明の概要】
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は：
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか；又は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復（repeats）を含み、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１０】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み；及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとの間に（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５を含む。
【００１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１４５からなる。
【００１５】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず；そして所望により配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１６】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；そして所望により配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１７】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、又は配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まず；そして所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は１４０アミノ酸長以下である。
【００２１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２６アミノ酸長である。
【００２２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１を含む。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３を含む。
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５を含む。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９を含む。
【００２６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む。
【００２７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む。
【００２８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含む。
【００２９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８を含む。
【００３０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１からなる。
【００３１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３からなる。
【００３２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５からなる。
【００３３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９からなる。
【００３４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５からなる。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５からなる。
【００３６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３からなる。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８からなる。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２〜２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ａ１−Ｖ６及びＡ１−Ｇ１４のどれも含まない。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号  ２２、２３、２４又は２５を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５からなる。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５、１２７又は１２９を含む。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５、１２７又は１２９からなる。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３を含む。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３からなる。
【００４６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含む。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドは、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復それぞれ同士の間にリンカーを含む。
【００４８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは１〜６アミノ酸長を有する。
【００４９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは単一アミノ酸リンカーである。
【００５０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーはグリシンである。
【００５１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン又はその断片でない。
【００５２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン又はその断片である。
【００５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）リンカーである。
【００５４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、ホモ三量体以上のホモ多量体（少なくともa homo-trimer）の形態である。
【００５５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１００ｋＤである。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドは可溶性である。
【００５７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での配列番号５の産生収量よりも少なくとも１．５倍多く、前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での配列番号５の凝集体の量よりも少なくとも２０％少なく、前記凝集体は、分子量が少なくとも３００ｋＤａであり、前記産生条件は、哺乳動物細胞での発現並びに３２〜３７℃及び５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【００５９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記少なくとも８０％の同一性は、少なくとも９０％の同一性を含む。
【００６７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記少なくとも８０％の同一性は、少なくとも９５％の同一性を含む。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００７９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【００８２】
本発明のある実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記単離ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００８３】
本発明のある実施形態によれば、前記ポリヌクレオチド、及び宿主細胞中において前記ポリヌクレオチドの発現を指示するための調節エレメントを含む、核酸構築物が提供される。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８及び１１２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８及び１１２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６及び１０８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００８９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００９０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含む。
【００９１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６を含む。
【００９２】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は前記ポリペプチド又は前記ポリヌクレオチド又は前記核酸構築物を含む宿主細胞が提供される。
【００９３】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ポリヌクレオチド又は核酸構築物を宿主細胞において発現させることを含む、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又はポリペプチドを製造する方法が提供される。
【００９４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、前記融合タンパク質又は前記ポリペプチドを単離することを含む。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療する方法が提供される。
【００９６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、前記疾患を治療するための治療薬を前記対象に投与することをさらに含む。
【００９７】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療に使用するための、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド又は核酸構築物、又は前記宿主細胞が提供される。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記組成物は、前記疾患を治療するための治療薬をさらに含む。
【００９９】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための治療薬；並びに、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞、を包装する包装材料を含む製品が提供される。
【０１００】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患の細胞はＰＤＬ１を発現する。
【０１０１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は、過剰増殖性疾患を含む。
【０１０２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患は、硬化症、線維症、特発性肺線維症、乾癬、全身性硬化症／強皮症、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、肝線維症、放射線誘発性肺線維症の予防、骨髄線維症、又は後腹膜線維症を含む。
【０１０３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患はがんを含む。
【０１０４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記がんは、リンパ腫、白血病、及び癌腫からなる群より選択される。
【０１０５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は、免疫抑制又は薬物誘発性免疫抑制に関連する疾患を含む。
【０１０６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、麻疹、インフルエンザ、ＬＣＣＭ、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトライノウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、又はパルボウイルスが含まれる。
【０１０７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患は感染症を含む。
【０１０８】
本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質若しくは前記単離ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド若しくは前記核酸構築物、又は前記宿主細胞の存在下において、インビトロで免疫細胞を活性化することを含む、免疫細胞を活性化する方法が提供される。
【０１０９】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記活性化は、ＰＤＬ１又は外因性ＰＤＬ１を発現する細胞の存在下である。
【０１１０】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記ＰＤＬ１を発現する細胞は病的細胞を含む。
【０１１１】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記病的細胞はがん細胞を含む。
【０１１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記活性化は抗がん剤の存在下である。
【０１１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患を治療するための前記治療薬又は前記抗がん剤は抗体を含む。
【０１１４】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、エドレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、シタツズマブボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルツマクソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ジレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、及びイピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）からなる群より選択される。
【０１１５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、抗体は、リツキシマブ及びセツキシマブからなる群より選択される。
【０１１６】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記疾患を治療するための前記治療薬又は前記抗がん剤は、ＩＭｉＤ（例えば、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド）を含む。
【０１１７】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記方法は、活性化に続いて免疫細胞を、それを必要とする対象に養子移入することを含む。
【０１１８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記免疫細胞はＴ細胞を含む。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び／又は科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似又は等価な方法及び材料を本発明の実施形態の実施又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料を以下に説明する。矛盾する場合は、定義を含む本特許明細書が優先される。また、材料、方法、及び例は例示にすぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。
【０１１９】
本発明のいくつかの実施形態は、添付の図面を参照して、単に例として本明細書に記載されている。ここでは詳細に図面を具体的に参照するが、示されている詳細は、例としてのものであり、本発明の実施形態の例示的な説明の目的のためであることが強調される。これに関して、図面と共に読まれる説明は、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。図面において：
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】図１は、Ｎ末端シグナルペプチド及びＨｉｓタグ（配列番号２６）を含む、本明細書で「ＤＳＰ１０５」（配列番号５）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の概略図である。シグナルペプチド（黒の下線付き、配列番号４）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ（黒太字）、ＰＤ１ドメイン（赤、配列番号２）、グリシンリンカー（黒）、及び４−１ＢＢＬドメイン（青、配列番号３）を示す。
【０１２１】
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ａは概略３Ｄモデルである。ＰＤ１は灰色のリボンで示され、ＰＤＬ１（ＰＤ１リガンド）は緑色のリボンで示され、４−１ＢＢＬは青色のリボンで示され、４−１ＢＢＬの２つの追加コピー（三量体を形成）は水色で示されている。
【図２Ｂ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｂは、概略的な完全な原子３Ｄモデルである。
【図２Ｃ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｃ〜図２Ｄは概略３Ｄモデルである。Ｘ線解像ドメインはその表面で表され、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされている。
【図２Ｄ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＤＳＰ１０５（配列番号５）の予測された３Ｄ構造を示した図である。図２Ｃ〜図２Ｄは概略３Ｄモデルである。Ｘ線解像ドメインはその表面で表され、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされている。
【０１２２】
【図３】図３は、ＤＳＰ１０５（配列番号５）中で識別されたドメイン及びセグメントの概略図である。Ｉｇ様Ｖ型ドメインは水色で強調表示され（下線付き配列はＸ線で解像した）、Ｘ線で解像された部分は灰色で強調表示され、フランキング領域／非構造化領域は赤いボックスで印されている。
【０１２３】
【図４】図４は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１」（配列番号１２）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示す。上側のパネルでは、Ｘ線解像されたドメインが、疎水性スケール（青（最も親水性）〜茶色（疎水性））で色付けされた表面図示で示されている。ＰＤＬ１（ＰＤ１リガンド）が緑色のリボンで示されている。下側のパネルでは、４−１ＢＢＬが赤いリボンで、ＰＤ１が青いリボンで示されている。
【０１２４】
【図５】図５は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２」（配列番号１４）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示した図である。カラーコードは図４と同じである。
【０１２５】
【図６】図６は、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３」（配列番号１６）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の予測される３Ｄ構造を示す。カラーコードは図４と同じである。
【０１２６】
【図７】図７は、Ｅｘｐｉ２９３細胞で発現されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）及びＣＨＯ−３Ｅ７で発現されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を示す。両方の融合タンパク質は、ニッケルカラムでのシングルステップアフィニティー精製によって精製され、図示されるように、還元及び非還元条件下で分離された。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１−２：Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）の２つの別々の調製物、レーン３：Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）。
【０１２７】
【図８Ａ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９、図８Ａ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｂ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１８」（配列番号１０１、図８Ｂ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｃ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１９」（配列番号１０３、図８Ｃ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｄ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５、図８Ｄ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【図８Ｅ】図８Ａ〜図８Ｅは、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質の示された抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（ＰＡＧＥとして印した）及びウエスタンブロット（ＷＢとして印した）分析の画像を提示した図である。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元又は非還元条件下）が示されている：「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３、図８Ｅ）。画像に示した試料は以下である：レーンＭ：分子量マーカー、レーン１〜３：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、還元条件下；レーンＮＣ１：還元条件下での陰性対照；レーン４〜６：それぞれトランスフェクション後２日目、４日目、５日目に収集した細胞培養上清、非還元条件下；レーンＮＣ２：非還元条件下での陰性対照；及びレーンＰ：陽性対照としてのマルチタグ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｍ０１０１）。
【０１２８】
【図９Ａ】図９Ａ及び図９Ｂは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を提示す。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元（図９Ａ）又は非還元（図９Ｂ）条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９７）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２２」（配列番号１１０）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５」（配列番号１）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２４」（配列番号１３３）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２５」（配列番号１３５）、及び「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３１」（配列番号１４７）。
【図９Ｂ】図９Ａ及び図９Ｂは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞で産生されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の画像を提示す。本明細書で以下のように称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質（還元（図９Ａ）又は非還元（図９Ｂ）条件下）が示されている：「Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９９）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７」（配列番号９７）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２０」（配列番号１０５）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２３」（配列番号１１３）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２２」（配列番号１１０）、「Ｈｉｓ−ｔａｇｇｅｄ  ＤＳＰ１０５」（配列番号１）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２４」（配列番号１３３）、「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ２５」（配列番号１３５）、及び「ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ３１」（配列番号１４７）。
【０１２９】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ａは、ＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株上での、示された受容体の発現を示した図である。ＰＤＬ１又は４１ＢＢの表面発現レベルは、各細胞株を対応する抗体で免疫染色した後、フローサイトメトリー分析を行うことにより測定した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ｂ及び図１０Ｃは、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＤＬＤ１−ＰＤ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株への結合を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）がＰＤＬ１発現細胞又は４１ＢＢ発現細胞に結合することを実証するフローサイトメトリー分析を示す。図１０Ｂ及び図１０Ｃは、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７（配列番号９９）のＤＬＤ１−ＰＤ１細胞株又はＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞株への結合を示す。
【０１３０】
【図１１】図１１は、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株上における４−１ＢＢ受容体の発現を実証するフローサイトメトリー分析を示す。
【０１３１】
【図１２】図１２は、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿ｖａｒ１７タンパク質（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５  ｖａｒ＿１７タンパク質（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５  ｖａｒ＿２１タンパク質（配列番号１０７）、及びＨｉｓタグ付きＰＤ１−４−１ＢＢＬ  ｖａｒ＿２２（配列番号１１０）が４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢシグナル伝達を促進することを示すグラフを示し、ここで、前記促進は、ＤＳＰ１０５分子の結合後におけるＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞からのＩＬ−８分泌レベルを示すＯＤ値によって示される。
【０１３２】
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ａは概略３Ｄリボンモデルである。ＰＤ１は濃い灰色のリボン（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色のリボン（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表される。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｂは、概略３Ｄ表面図示モデルである。ＰＤ１は濃い灰色の表面図示（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色の表面図示（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表される。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｃは、融合タンパク質及びその結合カウンターパートの概略３Ｄリボンモデルを示した図である。ＰＤ１は濃い灰色のリボン（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色のリボン（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表され、ＰＤ１に結合したＰＤ−Ｌ１は灰色のリボン（右側）で表され、３つの４１ＢＢ受容体は４１ＢＢ−Ｌ（左側）と複合体を形成した灰色のリボンで表される。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜図１３Ｄは、本明細書で「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１４７）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合物の予測される３Ｄ構造を示す。図１３Ｄは、融合タンパク質及びその結合カウンターパートの概略３Ｄ表面図示モデルである。ＰＤ１は濃い灰色の表面図示（右側）で表され、４１ＢＢ−Ｌは黒色の表面図示（左側）で表され、リンカーセグメントはＰＤ１及び４１ＢＢ−Ｌの構造要素の間の白いリボンで表され、ＰＤ１に結合したＰＤ−Ｌ１は灰色のリボン（右側）で表され、３つの４１ＢＢ受容体は４１ＢＢ−Ｌ（左側）と複合体を形成した灰色のリボンで表される。
【発明を実施するための形態】
【０１３３】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント融合タンパク質及びその使用方法に関する。
【０１３４】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載されるか、又は実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であるか、又は様々なやり方で実施又は実行することができる。
【０１３５】
シグナル変換タンパク質（ＳＣＰ）としても知られるデュアルシグナル伝達タンパク質（ＤＳＰ）は、Ｉ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外アミノ末端）をＩＩ型膜タンパク質の細胞外部分（細胞外カルボキシル末端）に連結して、２つの活性面（active sides）を有する融合タンパク質を形成した二機能性融合タンパク質として現在当技術分野で知られている。
【０１３６】
構造機能ツールを使用して、本発明者らは、改善された産生特性（例えば、より高い収率、より低い凝集体の割合（％））を有するＰＤ１バリアント及び／又は４−１ＢＢＬバリアントを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を生成することができた。これらは、一般的に（共刺激を介して）免疫細胞を活性化するために、特に、免疫細胞（例えば、がん）の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するために、有利に用いることができる。
【０１３７】
理論に拘束されるものではないが、例としてのがんの治療において本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が作用する様式は、本発明者らによって以下のように示唆されている。
【０１３８】
腫瘍細胞の表面及び腫瘍の微小環境におけるＰＤＬ１の発現が比較的高いため、ＰＤ１−４−１ＢＢＬキメラのＰＤ１部分は、分子を腫瘍及び転移部位に標的化し、腫瘍の微小環境内で融合タンパク質はＰＤＬ１に結合する。
【０１３９】
前記融合タンパク質を腫瘍細胞又は／及び腫瘍微小環境に標的化すると、腫瘍微小環境におけるＰＤ１−４−１ＢＢＬ濃度の増加及びそれに続く腫瘍部位での融合タンパク質の４−１ＢＢＬ部分のオリゴマー化が促進される。４−１ＢＢＬのオリゴマー化は４−１ＢＢシグナル伝達に必要なステップであるため、この４−１ＢＢＬの結合及びオリゴマー化は、腫瘍部位においてＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、特に腫瘍浸潤リンパ球（Ｔｕｍｏｒ−Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ、ＴＩＬ）、並びに他の免疫細胞の活性化を促進する４−１ＢＢ共刺激シグナルを伝達し、がん細胞を死滅させる。
【０１４０】
４−１ＢＢＬ−４−１ＢＢ共刺激シグナルに加えて、腫瘍部位における融合タンパク質のＰＤ１部分のＰＤＬ１への結合は、Ｔ細胞上で発現する内因性ＰＤ１と競合し、それによりＴ細胞の阻害を取り除き、腫瘍微小環境におけるＴＩＬの活性化にさらに貢献する。
【０１４１】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬの上記の活性は、腫瘍微小環境内のＴＩＬの活性化に相乗効果をもたらすと予想され、各部分の個別の効果と比較して、及びそれら２つの異なる部分を組み合わせて使用する場合の効果と比較して、より特異的でより強力な効果であると予想される。
【０１４２】
よって、本発明の一態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は：
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか；又は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４３】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４４】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）  前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、の少なくとも１つが可能である。
【０１４５】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間に（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が提供され、ここで、前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１４６】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、又は配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず；また、所望により配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４７】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、また、所望により配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４８】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、
前記ポリペプチドはＰＤＬ１に結合可能である。
【０１４９】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；又は、配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まず；また、所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１５０】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドが提供され、ここで、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、
前記ポリペプチドは、
（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「ＰＤ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １、ＣＤ２７９としても知られる）」という用語は、ＰＤＣＤ１遺伝子（遺伝子ＩＤ５１３３）のポリペプチド又は機能的ホモログ（例えば、その機能的断片）を指す。ある具体的な実施形態によれば、「ＰＤ１」という用語は、ＰＤ１ポリペプチドの機能的ホモログを指す。ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１はヒトＰＤ１である。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤ１タンパク質は、以下のＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００５００９に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０１５２】
これまでに、ＰＤ−１の２つのリガンド、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２（Ｂ７−ＤＣとしても知られる）が特定されている。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤＬ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００１２５４６３５及びＮＰ＿０５４８６２に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。特定の一実施形態によれば、前記ＰＤＬ２タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿０７９５１５に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０１５３】
ＰＤ１に関する場合、本明細書で用いられる「機能的ホモログ」又は「機能的断片」という句は、完全長ＰＤ１の活性、例えばＰＤ−Ｌ１への結合、を維持する、前記ポリペプチドの部分を指す。
【０１５４】
結合を試験するためのアッセイは当技術分野で周知であり、フローサイトメトリー、ＢｉａＣｏｒｅ（ビアコア）、生体層干渉法（Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ、ＢＬＩ）Ｂｌｉｔｚ（登録商標）アッセイ、ＨＰＬＣが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、１ｎＭ〜１００μＭ、１０ｎＭ〜１０μＭ、１００ｎＭ〜１００μＭ、２００ｎＭ〜１０μＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合し、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、約２７０ｎＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、ＳＰＲ分析で求めた場合、約８〜９μＭのＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は、前記ＰＤ１の細胞外ドメイン又はその機能的断片を含む。
【０１５９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２７を含む。
【０１６０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２７からなる。
【０１６１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２８を含む。
【０１６２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２８からなる。
【０１６３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２を含む。
【０１６４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２からなる。
【０１６５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２９を含む。
【０１６６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１核酸配列は配列番号２９からなる。
【０１６７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号３０又は配列番号３１を含む。
【０１６８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号３０又は配列番号３１からなる。
【０１６９】
用語「ＰＤ１」は、所望の活性（つまり、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２への結合）を示す機能的ホモログ（天然、あるいは合成により／組換えにより製造）をも包含する。このようなホモログは、例えば、ポリペプチド配列番号２、２７、３０又は３１と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であってもよい。
【０１７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１機能的ホモログは、ポリペプチド配列番号２、２７、３０又は３１と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であってもよい。
【０１７１】
本明細書で使用される場合、「同一性」又は「配列同一性」は、全体的な同一性、すなわち、本明細書に開示されるアミノ酸又は核酸配列の一部分ではなく全体を通しての同一性を指す。
【０１７２】
配列の同一性又は相同性は、Ｂｌａｓｔ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、及びＭＵＳＣＬＥなど、任意のタンパク質又は核酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して求めることができる。
【０１７３】
前記ホモログ（ホモログ）はまた、以下でさらに説明するように、オルソログ、又は欠失、挿入、若しくは置換バリアント（アミノ酸置換等）を指してもよい。
【０１７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１ポリペプチドは、保存的及び非保存的アミノ酸置換（本明細書では変異とも称される）を含み得る。そのような置換は当技術分野で公知であり、例えば、その内容の全体が参照により本明細書に援用されるＭａｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  ２０１５  Ｎｏｖ  ２４；１１２（４７）：Ｅ６５０６−１４、Ｊｕ  Ｙｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０１６  ｖｏｌｕｍｅ  ７，  Ａｒｔｉｃｌｅ  ｎｕｍｂｅｒ：  １３３５４  （ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３３５４）、及びＺａｃｋ  ＫＭ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  ２０１５  ２３（１２）：２３４１−２３４８  （ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｒ．２０１５．０９．０１０）に開示されている。
【０１７５】
タンパク質に関して配列同一性の割合（％）を使用する場合、非同一の残基位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なっていることが多いことが認識されるが、ここで、保存的なアミノ酸置換においては、アミノ酸残基は、類似の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有する他のアミノ酸残基へと置換され、したがって、分子の機能特性を変化させない。配列が保存的置換で異なる場合、パーセント配列同一性（％）は、置換の保存的性質を補正するために上方に調整され得る。このような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」又は「類似性」を有すると見なされる。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。典型的には、これには、完全なミスマッチではなく部分的なミスマッチとして保存的置換をスコアリングして、それによってパーセント配列同一性（％）が増加させる、ことが含まれる。したがって、例えば、同一のアミノ酸に１のスコアが与えられ、非保存的置換に０のスコアが与えられる場合、保存的置換には０と１との間のスコアが与えられる。保存的置換のスコアは、例えば、ヘニコフＳ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  Ｓ）及びヘニコフＪＧ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＪＧ）のアルゴリズムに従って計算される［Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｌｏｃｋｓ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １９９２，  ８９（２２）：１０９１５−９］。
【０１７６】
ある具体的な実施形態によれば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するＶ３９、Ｌ４０、Ｎ４１、Ｙ４３、Ｒ４４、Ｍ４５、Ｓ４８、Ｎ４９、Ｑ５０、Ｔ５１、Ｄ５２、Ｋ５３、Ａ５６、Ｑ６３、Ｇ６５、Ｑ６６、Ｖ７２、Ｈ８２、Ｍ８３、Ｒ９０、Ｙ９６、Ｌ９７、Ａ１００、Ｓ１０２、Ｌ１０３、Ａ１０４、Ｐ１０５、Ｋ１０６、及びＡ１０７から選択されるアミノ酸残基に１つ又は複数のアミノ酸変異が位置する。ある具体的な実施形態によれば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するＶ３９、Ｌ４０、Ｎ４１、Ｙ４３、Ｒ４４、Ｍ４５、Ｓ４８、Ｎ４９、Ｑ５０、Ｔ５１、Ｄ５２、Ｋ５３、Ａ５６、Ｑ６３、Ｇ６５、Ｑ６６、Ｃ６８、Ｖ７２、Ｈ８２、Ｍ８３、Ｒ９０、Ｙ９６、Ｌ９７、Ａ１００、Ｓ１０２、Ｌ１０３、Ａ１０４、Ｐ１０５、Ｋ１０６、及びＡ１０７から選択されるアミノ酸残基に１つ又は複数のアミノ酸変異が位置する。
【０１７７】
ある具体的な実施形態によれば、１つ又は複数のアミノ酸変化は、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する（１）Ｖ３９Ｈ又はＶ３９Ｒ；（２）Ｌ４０Ｖ又はＬ４０Ｉ；（３）Ｎ４１Ｉ又はＮ４１Ｖ；（４）Ｙ４３Ｆ又はＹ４３Ｈ；（５）Ｒ４４Ｙ又はＲ４４Ｌ；（６）Ｍ４５Ｑ、Ｍ４５Ｅ、Ｍ４５Ｌ、又はＭ４５Ｄ；（７）Ｓ４８Ｄ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｎ、Ｓ４８Ｇ、又はＳ４８Ｖ；（８）Ｎ４９Ｃ、Ｎ４９Ｇ、Ｎ４９Ｙ、又はＮ４９Ｓ；（９）Ｑ５０Ｋ、Ｑ５０Ｅ、又はＱ５０Ｈ；（１０）Ｔ５１Ｖ、Ｔ５１Ｌ、又はＴ５１Ａ；（１１）Ｄ５２Ｆ、Ｄ５２Ｒ、Ｄ５２Ｙ、又はＤ５２Ｖ；（１２）Ｋ５３Ｔ又はＫ５３Ｌ；（１３）Ａ５６Ｓ又はＡ５６Ｌ；（１４）Ｑ６３Ｔ、Ｑ６３Ｉ、Ｑ６３Ｅ、Ｑ６３Ｌ、又はＱ６３Ｐ；（１５）Ｇ６５Ｎ、Ｇ６５Ｒ、Ｇ６５Ｉ、Ｇ６５Ｌ、Ｇ６５Ｆ、又はＧ６５Ｖ；（１６）Ｑ６６Ｐ；（１７）Ｖ７２Ｉ；（１８）Ｈ８２Ｑ；（１９）Ｍ８３Ｌ又はＭ８３Ｆ；（２０）Ｒ９０Ｋ；（２１）Ｙ９６Ｆ；（２２）Ｌ９７Ｙ、Ｌ９７Ｖ、又はＬ９７Ｉ；（２３）Ａ１００Ｉ又はＡ１００Ｖ；（２４）Ｓ１０２Ｔ又はＳ１０２Ａ；（２５）Ｌ１０３Ｉ、Ｌ１０３Ｙ、又はＬ１０３Ｆ；（２６）Ａ１０４Ｓ、Ａ１０４Ｈ、又はＡ１０４Ｄ；（２７）Ｐ１０５Ａ；（２８）Ｋ１０６Ｇ、Ｋ１０６Ｅ、Ｋ１０６Ｉ、Ｋ１０６Ｖ、Ｋ１０６Ｒ、又はＫ１０６Ｔ；及び（２９）Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｉ、又はＡ１０７Ｖからなる群より選択される。ある具体的な実施形態によれば、１つ又は複数のアミノ酸変化は、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する（１）Ｖ３９Ｈ又はＶ３９Ｒ；（２）Ｌ４０Ｖ又はＬ４０Ｉ；（３）Ｎ４１Ｉ又はＮ４１Ｖ；（４）Ｙ４３Ｆ又はＹ４３Ｈ；（５）Ｒ４４Ｙ又はＲ４４Ｌ；（６）Ｍ４５Ｑ、Ｍ４５Ｅ、Ｍ４５Ｌ、又はＭ４５Ｄ；（７）Ｓ４８Ｄ、Ｓ４８Ｌ、Ｓ４８Ｎ、Ｓ４８Ｇ、又はＳ４８Ｖ；（８）Ｎ４９Ｃ、Ｎ４９Ｇ、Ｎ４９Ｙ、又はＮ４９Ｓ；（９）Ｑ５０Ｋ、Ｑ５０Ｅ、又はＱ５０Ｈ；（１０）Ｔ５１Ｖ、Ｔ５１Ｌ、又はＴ５１Ａ；（１１）Ｄ５２Ｆ、Ｄ５２Ｒ、Ｄ５２Ｙ、又はＤ５２Ｖ；（１２）Ｋ５３Ｔ又はＫ５３Ｌ；（１３）Ａ５６Ｓ又はＡ５６Ｌ；（１４）Ｑ６３Ｔ、Ｑ６３Ｉ、Ｑ６３Ｅ、Ｑ６３Ｌ、又はＱ６３Ｐ；（１５）Ｇ６５Ｎ、Ｇ６５Ｒ、Ｇ６５Ｉ、Ｇ６５Ｌ、Ｇ６５Ｆ、又はＧ６５Ｖ；（１６）Ｑ６６Ｐ；（１７）Ｃ６８Ｓ（１８）、Ｖ７２Ｉ；（１９）Ｈ８２Ｑ；（２０）Ｍ８３Ｌ又はＭ８３Ｆ；（２１）Ｒ９０Ｋ；（２２）Ｙ９６Ｆ；（２３）Ｌ９７Ｙ、Ｌ９７Ｖ、又はＬ９７Ｉ；（２４）Ａ１００Ｉ又はＡ１００Ｖ；（２５）Ｓ１０２Ｔ又はＳ１０２Ａ；（２６）Ｌ１０３Ｉ、Ｌ１０３Ｙ、又はＬ１０３Ｆ；（２７）Ａ１０４Ｓ、Ａ１０４Ｈ、又はＡ１０４Ｄ；（２８）Ｐ１０５Ａ；（２９）Ｋ１０６Ｇ、Ｋ１０６Ｅ、Ｋ１０６Ｉ、Ｋ１０６Ｖ、Ｋ１０６Ｒ、又はＫ１０６Ｔ；及び（３０）Ａ１０７Ｐ、Ａ１０７Ｉ、又はＡ１０７Ｖからなる群より選択される。
【０１７８】
ある具体的な実施形態によれば、アミノ酸変異は、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するアミノ酸残基Ｃ７３（例えば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応するアミノ酸残基Ｃ６８に相当）に位置する。ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１ポリペプチドは、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列のアミノ酸残基７３（例えば、配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列のアミノ酸残基６８に相当）に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含んでいていてもよい。
【０１７９】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含む。
【０１８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３からなる。
【０１８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７４を含む。
【０１８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７４からなる。
【０１８３】
本明細書において用いられる句「配列番号３１に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する」、句「配列番号３１に対応する」、句「配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列に対応する」、あるいは「配列番号２に対応する」は、対応するアミノ酸残基を、他の任意のＰＤ１アミノ酸配列に対して含ませることを意図している。
【０１８４】
保存的アミノ酸置換及び非保存的アミノ酸置換についての追加的説明をさらに以下に記載する。
【０１８５】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１は、ポリペプチド配列番号１８〜２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（以降でさらに説明）と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０１９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０２００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０２０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０２１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０２３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０２４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０２５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０２６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５を含まない。
【０２６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まない。
【０２６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｐ１−Ｌ５のどれも含まない。
【０２６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｆ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２に対応するアミノ酸残基Ｐ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のどれも含まない。
【０２６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８もその断片も含まない。
【０２６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８を含まない。
【０２７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号９もその断片も含まない。
【０２７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号９を含まない。
【０２７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８も配列番号９もそれらの断片も含まない。
【０２７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８も配列番号９も含まない。
【０２７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５を含む。
【０２７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１１７又は１１９を含む。
【０２７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７又は１１９を含む。
【０２７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３を含む。
【０２７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む。
【０２７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む。
【０２８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１を含む。
【０２８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８又は２１を含む。
【０２８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８を含む。
【０２８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９を含む。
【０２８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０を含む。
【０２８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１を含む。
【０２８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５を含む。
【０２８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９を含む。
【０２８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３を含む。
【０２８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５を含む。
【０２９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７９を含む。
【０２９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８１を含む。
【０２９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８３を含む。
【０２９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８７を含む。
【０２９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９１を含む。
【０２９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９５を含む。
【０２９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５を含む。
【０２９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７を含む。
【０２９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９を含む。
【０２９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９、９３又は１１５からなる。
【０３００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１１７又は１１９からなる。
【０３０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７又は１１９からなる。
【０３０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０、２１、８５、８９又は９３からなる。
【０３０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５からなる。
【０３０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５、８３、８７、９１又は９５からなる。
【０３０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８、１９、２０又は２１からなる。
【０３０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８又は２１からなる。
【０３０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１８からなる。
【０３０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１９からなる。
【０３０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２０からなる。
【０３１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号２１からなる。
【０３１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８５からなる。
【０３１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８９からなる。
【０３１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９３からなる。
【０３１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７５からなる。
【０３１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７９からなる。
【０３１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８１からなる。
【０３１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８３からなる。
【０３１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号８７からなる。
【０３１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９１からなる。
【０３２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号９５からなる。
【０３２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１５からなる。
【０３２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１７からなる。
【０３２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号１１９からなる。
【０３２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６、８０、８２、８４、８８、９２及び／又は９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０３６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０３６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０３７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８及び／又は１２０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４及び／又は９６と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０３７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０を含む。
【０３７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【０３８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４又は３５を含む。
【０３８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２を含む。
【０３８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３を含む。
【０３８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４を含む。
【０３８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５を含む。
【０３８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６を含む。
【０３８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０を含む。
【０３８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２を含む。
【０３８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４を含む。
【０３８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６を含む。
【０３９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８を含む。
【０３９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０を含む。
【０３９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２を含む。
【０３９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４を含む。
【０３９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６を含む。
【０３９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６を含む。
【０３９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８を含む。
【０３９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０を含む。
【０３９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１８０又は１２０からなる。
【０３９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４、３５、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【０４００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２、３３、３４及び／又は３５からなる。
【０４０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３２からなる。
【０４０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３３からなる。
【０４０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３４からなる。
【０４０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号３５からなる。
【０４０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号７６からなる。
【０４０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８０からなる。
【０４０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８２からなる。
【０４０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８４からなる。
【０４０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８６からなる。
【０４１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号８８からなる。
【０４１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９０からなる。
【０４１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９２からなる。
【０４１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９４からなる。
【０４１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号９６からなる。
【０４１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１６からなる。
【０４１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１１８からなる。
【０４１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１核酸配列は配列番号１２０からなる。
【０４１８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１００〜２００アミノ酸、１２０〜１８０アミノ酸、１２０〜１６０、１３０〜１７０アミノ酸、１３０〜１６０、１３０〜１５０、１４０〜１６０アミノ酸、１４５〜１５５アミノ酸を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４１９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１６６アミノ酸長である。
【０４２０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５６アミノ酸長である。
【０４２１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４５〜１５５アミノ酸長である。
【０４２２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５０アミノ酸長である。
【０４２３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１５０未満のアミノ酸長を含む。
【０４２４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４９未満のアミノ酸長を含む。
【０４２５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４８未満、１４７未満、１４６未満、１４５未満、１４４未満、１４３未満、１４２未満、１４１未満のアミノ酸長を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４２６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３８〜１４５アミノ酸長である。
【０４２７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４５アミノ酸長である。
【０４２８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４３アミノ酸長である。
【０４２９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４０以下のアミノ酸長である。
【０４３０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０、少なくとも１３３、少なくとも１３７、少なくとも１３８アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４３１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０４３２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１４８アミノ酸長を含む。
【０４３３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は少なくとも１２６アミノ酸長である。
【０４３４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１４８アミノ酸長である。
【０４３５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２３〜１４０アミノ酸長である。
【０４３６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１４０アミノ酸長である。
【０４３７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２７〜１４０アミノ酸長である。
【０４３８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２８〜１４０アミノ酸長である。
【０４３９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３０〜１４０アミノ酸長である。
【０４４０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３０〜１３５アミノ酸長である。
【０４４１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３５〜１４０アミノ酸長を含む。
【０４４２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２６〜１３０アミノ酸長を含む。
【０４４３】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２７アミノ酸長である。
【０４４４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１２８アミノ酸長である。
【０４４５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３３アミノ酸長である。
【０４４６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３５アミノ酸長である。
【０４４７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３６アミノ酸長である。
【０４４８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３７アミノ酸長である。
【０４４９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１３８アミノ酸長である。
【０４５０】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列は１４０アミノ酸長である。
【０４５１】
本明細書で用いられる用語「４−１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ及びＴＮＦＳＦ９としても知られる）」は、ＴＮＦＳＦ９遺伝子（遺伝子ＩＤ  ８７４４）のポリペプチド又はその機能的ホモログ、例えばその機能的断片を指す。ある具体的な実施形態によれば、用語「４−１ＢＢＬ」は、４−１ＢＢＬポリペプチドの機能的ホモログを指す。ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬはヒト４−１ＢＢＬである。ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬタンパク質はヒトタンパク質、例えば以下のGenBank Number NP_003802に提示されるヒトタンパク質を指す。
【０４５２】
本明細書で用いられる句「機能的ホモログ」又は「機能的断片」は、４−１ＢＢＬに関する場合、全長４−１ＢＢＬの活性を維持するポリペプチドの部分を指し、前記活性としては、例えば、（ｉ）４−１ＢＢに結合する、（ｉｉ）４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化する、（ｉｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞を活性化する、（ｉｖ）ホモ三量体を形成する、が挙げられる。
【０４５３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０４５４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０４５５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）が可能である。
【０４５６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬに関する場合、機能的ホモログは（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）＋（ｉｖ）が可能である。
【０４５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＮＰ＿００１５５２に提示されるヒトタンパク質などのヒトタンパク質を指す。
【０４５８】
結合を試験するためのアッセイは当技術分野で公知であり、ここまでの記載及び以降の記載においてさらに説明される。
【０４５９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬは、ＳＰＲによって測定された場合、約０．１〜１０００ｎＭ、０．１〜１００ｎＭ、１〜１００ｎＭ、又は５５．２ｎＭのＫｄで４−１ＢＢに結合するが、ここで、それぞれの選択肢はクレーム発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４６０】
三量体化を試験するためのアッセイは当技術分野で周知であり、ＮＡＴＩＶＥ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ  ２Ｄゲル、ゲル濾過、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）質量分析（ＭＳ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０４６１】
本明細書で使用される、「活性化する」又は「活性化」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、貪食細胞）を刺激するプロセスであって、細胞増殖、成熟、サイトカイン産生、貪食及び／又は制御機能若しくはエフェクター機能の誘導をもたらすプロセスを指す。
【０４６２】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、共刺激を含む。
【０４６３】
本明細書で使用される場合、「共刺激する（こと）」又は「共刺激」という用語は、二次的な抗原非依存性刺激シグナル（例えば、４−１ＢＢシグナル）を伝達して免疫細胞の活性化をもたらすことを指す。
【０４６４】
ある具体的な実施形態によれば、活性化することは、阻害性シグナル（例えば、ＰＤＬ１シグナル）を抑制して免疫細胞の活性化をもたらすことを含む。
【０４６５】
刺激性シグナル又は抑制性シグナルのシグナル伝達を測定する方法は当技術分野で周知であり、以下の実施例のセクションにも開示されており、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ、ＨＰＬＣ、又はフローサイトメトリーを用いる結合アッセイ、キナーゼ活性アッセイなどの酵素活性アッセイ、並びに、例えば、ＰＣＲ、ウエスタンブロット、免疫沈降、及び免疫組織化学を用いるシグナル伝達カスケードに関与する分子の発現が挙げられるが、これらに限定されない。追加的又は代替的に、シグナルの伝達（共刺激性又は抑制性）の測定は、免疫細胞の活性化又は機能を評価することによって実施され得る。免疫細胞の活性化又は機能を評価する方法は、当技術分野で周知であり、ＣＦＳＥ染色、ＭＴＳ、アラマーブルー（Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ）、ＢＲＤＵ、チミジン取り込みなどの増殖アッセイ、ＣＦＳＥ染色などの細胞毒性アッセイ、クロム放出、Ｃａｌｃｉｎ−ＡＭ、細胞内サイトカイン染色、ＥＬＩＳＰＯＴ、及びＥＬＩＳＡなどのサイトカイン分泌アッセイ、フローサイトメトリーを用いるＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１、及びＣＤ６２Ｌなどの活性化マーカーの発現が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６６】
ある具体的な実施形態によれば、シグナル伝達活性又は活性化の測定は、以下でさらに説明するように、インビトロ又はエクスビボで、例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において行われる。
【０４６７】
同じ培養条件について、シグナル伝達活性又は免疫細胞の活性化若しくは機能は、通常、コントロールとも称される同じ種の細胞であって、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質とも、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドとも、ＰＦ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質をコードする宿主細胞とも接触していないか、あるいはビヒクルコントロールと接触した細胞におけるシグナル伝達、活性化又は機能と比較して表される。
【０４６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬは前記４−１ＢＢＬの細胞外ドメイン又はその機能的断片を含む。
【０４６９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３６を含む。
【０４７０】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３６からなる。
【０４７１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３７を含む。
【０４７２】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３７からなる。
【０４７３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３を含む。
【０４７４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３からなる。
【０４７５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３８を含む。
【０４７６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３８からなる。
【０４７７】
用語「４−１ＢＢＬ」は、（以降に規定される）所望の活性を示す機能的ホモログ（天然、あるいは合成により／組換えにより製造）をも包含する。該ホモログは、例えば、配列番号３、３６のポリペプチドと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。
【０４７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ機能的ホモログは、配列番号３、３６のポリペプチドと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。
【０４７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬポリペプチドは、ここまで及び以降にさらに説明するように、保存的アミノ酸置換を含んでいてもよい。
【０４８０】
本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬは、配列番号２２、２３、２４及び／又は２５のポリペプチドと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一又は相同であってもよく、あるいは、（以降にさらに説明される）４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％同一であってもよい。それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４及び／又は２５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０４８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３及び／又は２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０４８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｖ６を含まない。
【０４８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｇ１４を含まない。
【０４９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｖ６及びアミノ酸セグメントＡ１−Ｇ１４のいずれも含まない。
【０４９１】
本明細書において用いられる句「配列番号３に対応する」は、対応するアミノ酸残基を、任意の他の４−１ＢＢＬアミノ酸配列に対して含ませることを意図している。
【０４９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号６又は７又はその任意の断片を含まない。
【０４９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号６又は７を含まない。
【０４９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５を含む。
【０４９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３又は２４を含む。
【０４９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２又は２３を含む。
【０４９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２を含む。
【０４９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２３を含む。
【０４９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬαアミノ酸配列は配列番号２４を含む。
【０５００】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２５を含む。
【０５０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３、２４又は２５からなる。
【０５０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２、２３又は２４からなる。
【０５０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２又は２３からなる。
【０５０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２２からなる。
【０５０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２３からなる。
【０５０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬαアミノ酸配列は配列番号２４からなる。
【０５０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号２５からなる。
【０５０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まない。
【０５１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ｇ１９８−Ｅ２０５のどれも含まない。
【０５１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６６又はその任意の断片を含まない。
【０５１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６６を含まない。
【０５１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７又は１２９を含む。
【０５１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２７又は１２９からなる。
【０５２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０５２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０５２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０５２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない。
【０５２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３に対応するアミノ酸残基Ａ１−Ｅ２３のどれも含まない。
【０５２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６７又はその任意の断片を含まない。
【０５２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１６７を含まない。
【０５３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２５を含む。
【０５３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番１２５からなる。
【０５３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する。
【０５３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも８５％の同一性を有する。
【０５３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９０％の同一性を有する。
【０５３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号１２３を含む。
【０５３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番１２３からなる。
【０５４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１及び／又は４２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９及び／又は４０と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１又は４２を含む。
【０５４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０又は４１を含む。
【０５４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９又は４０を含む。
【０５４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９を含む。
【０５４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４０を含む。
【０５４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬα核酸配列は配列番号４１を含む。
【０５５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４２を含む。
【０５５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０、４１又は４２からなる。
【０５５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９、４０又は４１からなる。
【０５５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９又は４０からなる。
【０５５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号３９からなる。
【０５５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４０からなる。
【０５５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４１からなる。
【０５５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号４２からなる。
【０５５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８及び／又は１３０と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８又は１３０を含む。
【０５６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２８又は１３０からなる。
【０５６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６を含む。
【０５６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２６からなる。
【０５６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、ここで、それぞれの選択肢は、本発明のそれぞれ別個の実施形態を表す。
【０５６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０５７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０５７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４を含む。
【０５７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は配列番号１２４からなる。
【０５７３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１００〜３００アミノ酸、１５０〜２５０アミノ酸、１００〜２５０アミノ酸、１５０〜２２０アミノ酸、１８０〜２２０アミノ酸、１８０〜２１０アミノ酸、１８５〜２０５アミノ酸、１９０〜２１０アミノ酸を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０５７４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１９０〜２１０アミノ酸長である。
【０５７５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は２０４アミノ酸長である。
【０５７６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０５７７】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２００アミノ酸長である。
【０５７８】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜１９９アミノ酸長である。
【０５７９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０５８０】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７０〜１８２アミノ酸長である。
【０５８１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８４アミノ酸長である。
【０５８２】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５、１９１、１９７又は１９９アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０５８３】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８４アミノ酸長である。
【０５８４】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８３アミノ酸長である。
【０５８５】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８２アミノ酸長である。
【０５８６】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１７６アミノ酸長である。
【０５８７】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は４−１ＢＢＬポリペプチドに含まれる４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０５８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記３回反復のそれぞれは、（ｉ）４−１ＢＢに結合すること、（ｉｉ）４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、（ｉｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞を活性化すること、（ｉｖ）ホモ三量体を形成することの少なくとも１つが可能である。
【０５８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の前記３回反復のそれぞれの間にリンカーを含まない。
【０５９０】
他のある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の前記３回反復のそれぞれの間にリンカーを含む。当技術分野で公知の任意のリンカーを、本発明のある具体的な実施形態とともに使用してもよい。使用可能なリンカーの非限定的な例は、以下に詳細に記載されている。
【０５９１】
特定の一実施形態によれば、前記リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーである。
【０５９２】
ある具体的な実施形態によれば、反復される配列は、本明細書で定義される４−１ＢＢＬのうち任意のものであってもよい。
【０５９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記３回反復はいずれも同一の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９４】
他のある具体的な実施形態によれば、前記３回反復は別個である、すなわち、異なる４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９５】
他のある具体的な実施形態によれば、前記３回反復のうちの２つは、同一の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を有する。
【０５９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記反復のうちの少なくとも１つは、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む。
【０５９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記反復のうちの少なくとも１つは、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列からなる。
【０５９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２を含むアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０５９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２からなるアミノ酸配列の３回反復を含む。
【０６００】
こうして、ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０６０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１を含む。
【０６０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１からなる。
【０６０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０６０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも９５％の同一性を有する。
【０６０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０６１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２を含む。
【０６１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記４−１ＢＢＬ核酸配列は、配列番号１３２からなる。
【０６１２】
用語「ＤＳＰ」並びに「融合タンパク質」、「キメラタンパク質」又は「キメラ」は本明細書において互換的に用いられ、自然界において単一のアミノ酸配列の中には一緒に見ることのできない２つ以上の部分を有するアミノ酸配列を指す。
【０６１３】
本発明のいくつかの実施形態の融合タンパク質はＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む（本明細書においてはＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と称される）。
【０６１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は前記４−１ＢＢＬのＮ末端側にある。
【０６１５】
別のある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１は前記４−１ＢＢＬのＣ末端側にある。
【０６１６】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、本明細書に規定される任意のＰＤ１；及び
（ａａ）１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む
任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示のものなど）を含むことができる。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１７】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、
配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含む
任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書で規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１８】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないか、
配列番号１８、１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに
（ａａ）１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む
任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）
を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６１９】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、本明細書に規定される任意のＰＤ１、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２０】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書で規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２１】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに本明細書に規定される任意の４−１ＢＢＬを含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２２】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変、
を含む任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２３】
本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、
配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない任意のＰＤ１アミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）、並びに１８５〜２０２アミノ酸長であって、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する任意の４−１ＢＢＬアミノ酸配列（例えば、本明細書に開示されるものなど）を含んでもよい。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０及び／又は３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１及び／又は９５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０及び／又は３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有し、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０又は３１を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０又は３１を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、８５、８９、９３、２７、３０又は３１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２、１８〜２１、２７、３０又は３１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び／又は９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５及び／又は３６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８、１９、２０及び／又は２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５及び／又は３６と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９及び／又は９３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８〜２１、８５、８９又は９３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３、７５、８３、８７、９１又は９５を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６を含む。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８、１９、２０又は２１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３、２２〜２５又は３６に記載のとおりである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２、２３、２４又は２５を含む。
【０６５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３又は２４に記載のとおりである。
【０６５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２に記載のとおりである。
【０６６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２３に記載のとおりである。
【０６６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２４に記載のとおりである。
【０６６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２０を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は１８５〜２０２アミノ酸長である。これには、前記ＰＤ１アミノ酸配列が配列番号２０に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列が配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである実施形態も含まれる。
【０６７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５を含む１８５〜２０２アミノ酸長である。
【０６７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号２１に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９又は９３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂ）配列番号２のアミノ酸７３に対応する位置におけるＣからＳへのアミノ酸改変を含み、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長である。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８５、８９又は９３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８５、８９又は９３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、７９、８１、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５、８３、８７、９１又は９５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号８３を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、１８５〜２０２アミノ酸長であり配列番号２２を含む。
【０６８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７８３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２、２３、２４又は２５に記載のとおりである。
【０６８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は配列番号７３を含み、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は配列番号３を含む。
【０６８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号７３に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に記載のとおりである。
【０６８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、本明細書中で規定される任意の４−１ＢＢＬである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む。
それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない。
【０６９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５を含む１７０〜１８２アミノ酸長である。
【０６９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２５に記載のとおりである。
【０６９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である。
【０６９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３を含む１８４アミノ酸長である。
【０６９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３に記載のとおりである。
【０６９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、本明細書中で規定される任意の４−１ＢＢＬである。それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、
かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか、
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか、
配列番号１２５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まないか、
配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回の反復を含む。
それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０６９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であって、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まない。
【０６９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０６９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７又は１１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７又は１２９に記載のとおりである。
【０７００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０７０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１７に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２７に記載のとおりである。
【０７０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１９を含む１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２９を含む１７０〜１９７アミノ酸長である。
【０７０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１９に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２９に記載のとおりである。
【０７０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であって、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１８４アミノ酸長である。
【０７０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５を含む１２３〜１４８アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３を含む１８４アミノ酸長である。
【０７０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１１５に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１２３に記載のとおりである。
【０７０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０７０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３を含む。
【０７０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号３に記載のとおりである。
【０７１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有する。
【０７１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８を含む１２３〜１４８アミノ酸長又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１を含む。
【０７１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列は、配列番号１８に記載のとおりであり、かつ、前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号１３１に記載のとおりである。
【０７１３】
本発明の具体的な実施形態で使用することができるＰＤ１アミノ酸配列と４−１ＢＢＬアミノ酸配列との具体的な組み合わせの非限定的な例は、本明細書の不可分な部分として働く、後述の実施例セクションにおける表４に提供されている。
【０７１４】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチド又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチドは、可溶性である（すなわち、合成又は天然に存在する表面に固定化されていない）。
【０７１５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチド又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む前記単離ポリペプチドは、合成又は天然に存在する表面に固定化されている。
【０７１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、可溶性である（すなわち、合成又は天然に存在する表面に固定化されていない）。
【０７１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、合成又は天然に存在する表面に固定化されている。
【０７１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、ホモ三量体以上のホモ多量体（少なくともa homo-trimer）の形態である。
【０７１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％は、ホモ三量体以上のホモ多量体の形態であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ三量体を含む。
【０７２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ四量体を含む。
【０７２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ五量体を含む。
【０７２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体はホモ六量体を含む。
【０７２４】
三量体化を測定する方法は当技術分野で周知であり、ＮＡＴＩＶＥ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ  ２Ｄゲル、ゲル濾過、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）質量分析（ＭＳ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０７２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによって測定された分子量で少なくとも１００ｋＤ、少なくとも１２０ｋＤ、少なくとも１４０ｋＤ、少なくとも１６０ｋＤ、少なくとも１８０ｋＤである。
【０７２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１００ｋＤである。
【０７２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも１４０ｋＤである。
【０７２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ホモ三量体以上のホモ多量体は、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって測定される分子量で少なくとも２００ｋＤである。
【０７２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含まない。
【０７３０】
いくつかの実施形態では、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬはリンカーを含み、該リンカーは任意の長さであってよい。
【０７３１】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、前記ＰＤ１と前記４−１ＢＢＬとの間にリンカーを含む。
【０７３２】
当業界で公知の任意のリンカーを、本発明の具体的な実施形態とともに使用してもよい。
【０７３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質由来であってもよく、あるいは、例えばChichili et al.,（2013), Protein Sci. 22(2):153-167及びChen et al,（2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369（これらは、その全内容が参照により本明細書に取り込まれる）に説明されているものなどの実験的リンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、Chen et al.,（2013), Adv Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369及びCrasto et al.,（2000), Protein Eng. 13(5):309-312（これらは、その全内容が参照により本明細書に取り込まれる）に記載されているものなどのリンカー設計データベース及びコンピュータープログラムを使用して設計されてもよい。
【０７３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ＰＥＧなどの合成リンカーである。
【０７３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、又はＩｇＥ）のＦｃドメイン若しくはヒンジ領域、又はその断片である。
【０７３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン又はヒンジ領域である。
【０７３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメインリンカーは、配列番号１６０を含む。
【０７３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン又はヒンジ領域である。
【０７３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメインリンカーは、配列番号１６３を含む。
【０７４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記Ｆｃドメイン又はヒンジ領域リンカーは、保存的及び非保存的アミノ酸置換（本明細書では変異とも称される）を含み得る。そのような置換は当技術分野で公知である。
【０７４１】
他の具体的な実施形態によれば、前記リンカーは、抗体のＦｃドメイン若しくはヒンジ領域又はその断片ではない。
【０７４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは機能的であってもよい。例えば、限定されないが、前記リンカーは、折り畳み及び／又は安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／又は前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の生物活性を改善するように機能してもよい。別の例では、前記リンカーは、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を特定の細胞型又は位置に標的化するように機能してもよい。
【０７４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはポリペプチドである。
【０７４４】
ポリペプチドリンカーの非限定的な例には、ＬＥ，  ＧＧＧＧＳ（配列番号１５０）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）の配列を有するリンカー、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１５１）の配列を有するリンカー、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）の配列を有するリンカー、（Ｇｌｙ）８の配列を有するリンカー、（Ｇｌｙ）６の配列を有するリンカー、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１〜３）（配列番号１５２）の配列を有するリンカー、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ  ＝  ２〜５）（配列番号１５３）の配列を有するリンカー、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１５４）の配列を有するリンカー、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号１５５）の配列を有するリンカー、ＰＡＰＡＰ（配列番号１５６）の配列を有するリンカー、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１５７）の配列を有するリンカー、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１５８）の配列を有するリンカー、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号１５９）の配列を有するリンカー、及び（ＸＰ）ｎ（ここで、Ｘは任意のアミノ酸、例えばＡｌａ、Ｌｙｓ、又はＧｌｕを表す）の配列を有するリンカーが含まれる。
【０７４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳ（配列番号１５０）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１５１）、（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）からなる群より選択される。
【０７４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜４）（配列番号１４９）リンカーである。
【０７４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳ×２（配列番号１５１）リンカーである。
【０７４８】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５を含む。
【０７５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４５からなる。
【０７５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２２）リンカーである。  
【０７５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーである。  
【０７５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７を含む。
【０７６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる。
【０７６６】
いくつかの実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は１〜６アミノ酸長のリンカーを含む。
【０７６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーはグリシン残基及び／又はセリン残基から実質的に構成される（例えば、グリシン及びセリンが約３０％、又は約４０％、又は約５０％、又は約６０％、又は約７０％、又は約８０％、又は約９０％、又は約９５％、又は約９７％又は１００％である）。
【０７６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンカーは１アミノ酸リンカー（ｓｉｎｇｌｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｌｉｎｋｅｒ）である。
【０７６９】
本発明のある実施形態では、ＰＤ１と４−１ＢＢＬとを連結する前記１アミノ酸はグリシンであり、本明細書中ではＰＤ１−Ｇ−４−１ＢＢＬ融合タンパク質とも呼ばれる。
【０７７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７７９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７８９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０７９７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７９８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０７９９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８００】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８０９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０８１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８１９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０８２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７を含む。
【０８２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１を含む。
【０８２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３を含む。
【０８２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５を含む。
【０８３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７を含む。
【０８３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１を含む。
【０８３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２を含む。
【０８３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４を含む。
【０８３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６を含む。
【０８３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３を含む。
【０８３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３を含む。
【０８３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５を含む。
【０８３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７を含む。
【０８３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９を含む。
【０８４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１を含む。
【０８４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３を含む。
【０８４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７を含む。
【０８４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３及び１４７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６、４４〜５６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５、１０７及び１１１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７、１０１、１０３、１０５及び１０７からなる群より選択されるアミノ酸配列からなり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８４８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４、１６及び４４〜５６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８４９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２、１４及び１６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる。
【０８５０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号９７からなる。
【０８５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０１からなる。
【０８５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０３からなる。
【０８５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０５からなる。
【０８５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１０７からなる。
【０８５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１１からなる。
【０８５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１２からなる。
【０８５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４からなる。
【０８５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１６からなる。
【０８５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１１３からなる。
【０８６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３３からなる。
【０８６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３５からなる。
【０８６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３７からなる。
【０８６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１３９からなる。
【０８６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４１からなる。
【０８６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４３からなる。
【０８６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、配列番号１４７からなる。
【０８６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３００〜９００アミノ酸長、３００〜８００アミノ酸長、３００〜６００アミノ酸長、３００〜５５０アミノ酸長、３００〜５００アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３００〜７５０アミノ酸長である。
【０８６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜７５０アミノ酸長である。
【０８７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４００アミノ酸長である。
【０８７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜３５０アミノ酸長である。
【０８７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４４８アミノ酸長、３０８〜３６２アミノ酸長、３０８〜３５１アミノ酸長、３１３〜３５１アミノ酸長、３１３〜３３９アミノ酸長、３１８〜３５１アミノ酸長、３１８〜３６２アミノ酸長、３１８〜３４０アミノ酸長、３１８〜３３２アミノ酸長であり、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜４８８アミノ酸長である。
【０８７４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３０８〜３５１アミノ酸長である。
【０８７５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質アミノ酸配列は、３１８〜３５１アミノ酸長である。
【０８７６】
本発明のある具体的な実施形態で使用することができる具体的なＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の非限定的な例は、本明細書の不可分な部分として働く、後述の実施例セクションの表４に提供されている。
【０８７７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、ここで、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８７８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも１．５倍高い。
【０８７９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下で、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量よりも少なくとも２倍高い。
【０８８０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも少なくとも１．５倍高い。
【０８８２】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号５の産生収量よりも少なくとも２倍高い。
【０８８３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号２の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの産生収量は、同じ産生条件下での、配列番号３の産生収量よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８５】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％少なく、前記凝集体は、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＳＥＣ−ＭＡＬＳで測定されてもよい分子量が少なくとも３００ｋＤａである。
【０８８６】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも２０％少ない。
【０８８７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の凝集体の量は、同じ産生条件下での、配列番号５の凝集体の量よりも、少なくとも５０％少ない。
【０８８８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８８９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号５の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号２の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの活性は、例えば同じ産生条件下での、配列番号３の活性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９２】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性は、同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安定性は、同じ産生条件下での、配列番号５の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安定性は、同じ産生条件下での、配列番号２の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９５】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安定性は、同じ産生条件下での、配列番号３の安定性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９６】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性は、同じ産生条件下での、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列及び配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の安全性は、同じ産生条件下での、配列番号５の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安全性は、同じ産生条件下での、配列番号２の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０８９９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドの安全性は、同じ産生条件下での、配列番号３の安全性よりも、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍高く、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０９００】
ある具体的な実施形態によれば、産生条件は、哺乳動物細胞での発現、及び３２〜３７℃、５〜１０％ＣＯ２で５〜１３日間の培養を含む。
【０９０１】
本発明の特定の実施形態で使用可能な産生条件の非限定的な例は、下記の実施例のセクションに開示されている。
【０９０２】
よって、例えば、Ｎ末端に人工シグナルペプチド（例えば、配列番号４）及びＣ末端にＨｉｓタグと終止コドンとを含む、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドをコードする発現ベクターは、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で発現される。次に、形質導入細胞を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞の製造業者（Ｔｈｅｒｍｏ社）の指示に従って、細胞特異的培地で３２〜３７℃、５〜１０％ＣＯ２で培養し、少なくとも培養５日後に、タンパク質を上清から収集して精製する。
【０９０３】
ある具体的な実施形態によれば、培養は、バッチ、分割バッチ（ｓｐｌｉｔ−ｂａｔｃｈ）、流加培養（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）、又は灌流様式で行われる。
【０９０４】
ある具体的な実施形態によれば、培養は流加培養条件下で行われる。
【０９０５】
ある具体的な実施形態によれば、培養は３７℃で行われる。
【０９０６】
ある具体的な実施形態によれば、培養を３７℃で行い３２℃へ温度移行する。この温度移行により、定常期に達する前に細胞の代謝を遅くすることができる。
【０９０７】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、ＰＤＬ１に結合することが可能である。
【０９０８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、配列番号２と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９０９】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、以下の少なくとも１つが可能である：
（ｉ）４−１ＢＢを結合すること、
（ｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する細胞において上記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること。
【０９１０】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、配列番号３と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１１】
ある具体的な実施形態によれば、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、以下の少なくとも１つが可能である：
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢを結合すること、
（ｉｉ）４−１ＢＢを発現する免疫細胞（例えばＴ細胞）において４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）上記４−１ＢＢを発現する免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化すること。
【０９１３】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号２に記載のＰＤ１アミノ酸配列と配列番号３に記載の４−１ＢＢＬアミノ酸配列とを含む融合タンパク質と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、配列番号５と比較して、本明細書に開示されるように増強された活性を有する。
【０９１５】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉ）、（ｉ）＋（ｉｉｉ）、（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１６】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質は、（ｉ）＋（ｉｉ）＋（ｉｉｉ）が可能である。
【０９１７】
結合、４−１ＢＢシグナル伝達経路の活性化、免疫細胞の活性化を測定する方法は、当技術分野で周知であり、本明細書の上記及び下記実施例のセクションでさらに説明されている。
【０９１８】
本発明のいくつかの実施形態の組成物（例えば、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸、又はそれを発現する宿主細胞）は免疫細胞を活性化することが可能であるため、それらは、インビトロ、エクスビボ、及び／又はインビボで免疫細胞を活性化する方法で使用され得る。
【０９１９】
よって、本発明の一態様によれば、免疫細胞を活性化する方法が提供され、上記方法は、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下において、インビトロ又はエクスビボで免疫細胞を活性化することを含む。
【０９２０】
本発明の別の態様によれば、Ｔ細胞を活性化する方法が提供され、上記方法は、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリぺプチド、並びにＣＤ４７を発現する細胞の存在下において、インビトロ又はエクスビボでＴ細胞を活性化することを含む。
【０９２１】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２２】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２３】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２４】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び、４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞の存在下で行われる。
【０９２５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は４−１ＢＢを発現する。
【０９２６】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む。
【０９２７】
本明細書で使用される場合、「末梢単核血球（ＰＢＭＣ）」という用語は、単一の核を有する血球を指し、リンパ球、単球、及び樹状細胞（ＤＣ）を含む。
【０９２８】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣは、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞からなる群より選択される。
【０９２９】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞を含む。
【０９３０】
ＰＢＭＣを取得する方法（対象から全血を採取し、抗凝固剤（例えば、ヘパリン又はクエン酸塩）を含む容器に収集するなど）、並びにアフェレーシスは当技術分野で周知である。続いて、ある具体的な実施形態によれば、ＰＢＭＣのうち少なくとも１つのタイプが末梢血から精製される。全血からＰＢＭＣを精製するための当業者に公知のいくつかの方法及び試薬が存在し、白血球アフェレーシス、沈降、密度勾配遠心分離（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ）、遠心水簸、分画、例えば赤血球などの化学溶解（例えば、ＡＣＫによる）、細胞表面マーカーを使用した特定の細胞型の選択（例えば、ＦＡＣＳソーター、又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＣｅｌｌＰｒｏ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ社、若しくはＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社で商業的に利用可能な磁気細胞分離技術を使用）、及び特定の抗体による根絶（例えば、殺細胞性）などの方法による、又は陰性選択に基づくアフィニティーベースの精製（例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又はキャプチャＥＬＩＳＡ標識を使用）による、特定の細胞型の枯渇などが挙げられる。そのような方法は、例えば、ＴＨＥ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，（Ｄ．Ｎ．  Ｗｅｉｒ編）及びＦＬＯＷ  ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ  ＡＮＤ  ＣＥＬＬ  ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．  Ｒａｄｂｒｕｃｈ編、  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  ２０００）に記載されている。
【０９３１】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は腫瘍浸潤リンパ球を含む。
【０９３２】
本明細書で使用される場合、「腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）」という用語は、血流から外れて腫瘍に移動した単核白血球を指す。
【０９３３】
ある具体的な実施形態によれば、ＴＩＬは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球からなる群より選択される。
【０９３４】
ＴＩＬを取得する方法は、例えば、生検又は剖検により対象から腫瘍試料を取得し、その単一細胞懸濁液を調製するなど、当技術分野で周知である。単一細胞懸濁液は、任意の適切な方法で得ることができ、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社、カリフォルニア州オーバーン）を使用して腫瘍の塊を分解する）又は酵素的に（例えば、コラゲナーゼ又はＤＮａｓｅ）得ることができる。続いて、ＴＩＬのうち少なくとも１つのタイプを細胞懸濁液から精製することができる。ＴＩＬのうちの所望のタイプを精製するための当業者に公知のいくつかの方法及び試薬が存在し、細胞表面マーカーを使用した特定の細胞型の選択（例えば、ＦＡＣＳソーター、又はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ＣｅｌｌＰｒｏ社、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ社、若しくはＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社で商業的に利用可能な磁気細胞分離技術を使用）、及び特定の抗体による根絶（例えば、殺細胞）などの方法による、又は陰性選択に基づくアフィニティーベースの精製（例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又はキャプチャＥＬＩＳＡ標識を使用）による、特定の細胞型の枯渇などが挙げられる。そのような方法は、例えば、ＴＨＥ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，（Ｄ．Ｎ．  Ｗｅｉｒ編）及びＦＬＯＷ  ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ  ＡＮＤ  ＣＥＬＬ  ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．  Ｒａｄｂｒｕｃｈ編，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  ２０００）に記載されている。
【０９３５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は食細胞を含む。
【０９３６】
本明細書で使用される場合、「食細胞」という用語は、食作用が可能な細胞を指し、プロフェッショナル食細胞及びノンプロフェッショナル食細胞の両方を含む。食作用を分析する方法は当技術分野で周知であり、例えば、キリングアッセイ、フローサイトメトリー、及び／又は顕微鏡評価（生細胞イメージング、蛍光顕微鏡、共焦点顕微鏡、電子顕微鏡）が挙げられる。ある具体的な実施形態によれば、食細胞は、単球、樹状細胞（ＤＣ）、及び顆粒球からなる群より選択される。
【０９３７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は単球を含む。
【０９３８】
ある具体的な実施形態によれば、「単球」という用語は、循環血中の単球及び組織に存在するマクロファージ（単核食細胞とも称される）の両方を指す。
【０９３９】
ある具体的な実施形態によれば、単球はマクロファージを含む。通常、マクロファージの細胞表面表現型としては、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６４、Ｆ４／８０（マウス）／ＥＭＲ１（ヒト）、リゾチームＭ、ＭＡＣ−１／ＭＡＣ−３、及びＣＤ６８が含まれる。
【０９４０】
ある具体的な実施形態によれば、単球は循環血中の単球を含む。通常、循環血中の単球の細胞表面表現型としては、ＣＤ１４及びＣＤ１６（例えば、ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６−、ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋＋、ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６＋）が含まれる。
【０９４１】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＤＣを含む。
【０９４２】
本明細書で使用される場合、「樹状細胞（ＤＣ）」という用語は、リンパ組織又は非リンパ組織に見られる形態学的に類似した細胞型の多様な集団の任意のメンバーを指す。ＤＣはプロフェッショナル抗原提示細胞のクラスであり、ＨＬＡ拘束性Ｔ細胞を感作する高い能力を有する。ＤＣとしては、例えば、形質細胞様樹状細胞、骨髄性樹状細胞（未成熟及び成熟樹状細胞を含む）、ランゲルハンス細胞、指状嵌入細胞、濾胞樹状細胞が含まれる。樹状細胞は、機能によって、又は表現型によって、特に細胞表面の表現型によって認識され得る。これらの細胞は、細胞表面にベール様の突起を有する独特の形態、中〜高レベルの表面ＨＬＡクラスＩＩ発現、及びＴ細胞、特にナイーブＴ細胞に抗原を提示する能力を特徴とする（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９１；  ９：２７１−１９６を参照）。通常、ＤＣの細胞表面表現型としては、ＣＤｌａ＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８６＋、又はＨＬＡ−ＤＲが含まれる。ＤＣという用語には、未成熟ＤＣ及び成熟ＤＣの両方が包含される。
【０９４３】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は顆粒球を含む。
【０９４４】
本明細書で使用される場合、「顆粒球」という用語は、細胞質に顆粒が存在することを特徴とする多形核白血球を指す。
【０９４５】
ある具体的な実施形態によれば、顆粒球は好中球を含む。
【０９４６】
ある具体的な実施形態によれば、顆粒球は肥満細胞を含む。
【０９４７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＴ細胞を含む。
【０９４８】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ３＋、かつＣＤ４＋又はＣＤ８＋表現型のいずれかを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）＋の分化したリンパ球を指す。Ｔ細胞はエフェクターＴ細胞又は制御性Ｔ細胞のいずれかであり得る。
【０９４９】
本明細書で使用される場合、「エフェクターＴ細胞」という用語は、例えばサイトカインを産生することにより他の免疫細胞を活性化若しくは指示する、又は細胞傷害活性を有するＴ細胞を指し、例えば、ＣＤ４＋、Ｔｈ１／Ｔｈ２、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球である。
【０９５０】
本明細書で使用される場合、「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」という用語は、エフェクターＴ細胞を含む他のＴ細胞、及び自然免疫系細胞の活性化を負に調節するＴ細胞を指す。Ｔｒｅｇ細胞は、エフェクターＴ細胞応答の持続的な抑制を特徴とする。特定の一実施形態によれば、ＴｒｅｇはＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞である。
【０９５１】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。
【０９５２】
他の具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０９５３】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞はメモリーＴ細胞である。メモリーＴ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７−表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞が挙げられる。
【０９５４】
ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞は、目的の発現産物をコードする核酸配列で形質導入された改変Ｔ細胞を含む。
【０９５５】
ある具体的な実施形態によれば、目的の発現産物は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。
【０９５６】
本明細書で使用される場合、「ＴＣＲをコードする核酸配列で形質導入される」又は「ＴＣＲをコードする核酸配列で形質導入する」という句は、ＭＨＣと関連して提示された目的の抗原に対する特異性を有するＴ細胞からの可変α鎖及びβ鎖のクローニングを指す。ＴＣＲで形質導入する方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．  ２０１２；  ２０１２：４０４０８１；  Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｖｉｅｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１５  Ｍａｒ；２２（２）：８５−９４）及びＬａｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（２００２）  ９，  ６１３−６２３に開示されている。
【０９５７】
本明細書で使用される場合、「ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入される」又は「ＣＡＲをコードする核酸配列で形質導入する」という句は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列のクローニングを指し、ＣＡＲは、抗原認識部分及びＴ細胞活性化部分を含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達又はＴ細胞活性化ドメインに連結された抗体の抗原結合ドメイン（例えば、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ））を含む、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はハイブリッドポリペプチドである。ＣＡＲで形質導入する方法は当技術分野で公知であり、Ｄａｖｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２０１２  Ｄｅｃ  １；１（９）：１５７７−１５８３、Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｖｉｅｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０１５  Ｍａｒ；２２（２）：８５−９４）、Ｍａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１４  Ａｐｒ  ２４；１２３（１７）：２６２５−３５、Ｐｏｒｔｅｒ  ＤＬ  Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  ２０１１，  ３６５（８）：７２５−７３３、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＨＪ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１６；１３（６）：３７０−３８３、及びＧｌｏｂｅｒｓｏｎ−Ｌｅｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２０１４；２２（５）：１０２９−１０３８に開示されている。
【０９５８】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＢ細胞を含む。
【０９５９】
本明細書で使用される場合、「Ｂ細胞」という用語は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）＋、ＣＤ１９＋、及び／又はＢ２２０＋表現型を有するリンパ球を指す。Ｂ細胞は、特定の抗原に結合し、体液性応答を誘発する能力を特徴とする。
【０９６０】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＮＫ細胞を含む。
【０９６１】
本明細書で使用される場合、「ＮＫ細胞」という用語は、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ−表現型を有する分化したリンパ球を指す。ＮＫは、特定の細胞溶解酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合して殺傷する能力、ＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する腫瘍細胞又は他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと称されるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
【０９６２】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞はＮＫＴ細胞を含む。
【０９６３】
本明細書で使用される「ＮＫＴ細胞」という用語は、半不変のαβＴ細胞受容体を発現するが、ＮＫ１．１などのＮＫ細胞に典型的に関連する様々な分子マーカーも発現するＴ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１−、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４−、ＣＤ８＋、及びＣＤ８−細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣＩ様分子ＣＤ１ｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で固有である。ＮＫＴ細胞は、炎症を促進する又は免疫寛容を促進するサイトカインのいずれをも産生する能力があるため、保護効果、有害効果のいずれも有する可能性がある。
【０９６４】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は健康な対象から得られる。
【０９６５】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は、病状を有している対象から得る。
【０９６６】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤＬ１を発現する細胞又は外因性ＰＤＬ１の存在下で行われる。
【０９６７】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は外因性ＰＤＬ１の存在下で行われる。
【０９６８】
ある具体的な実施形態によれば、外因性ＰＤＬ１は可溶性である。
【０９６９】
他のある具体的な実施形態によれば、外因性ＰＤＬ１は固体支持体に固定化される。
【０９７０】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、ＰＤＬ１を発現する細胞の存在下で行われる。
【０９７１】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤＬ１を発現する細胞は、病的（疾患）細胞を含む。
【０９７２】
ある具体的な実施形態によれば、ＰＤＬ１を発現する細胞は、がん細胞を含む。
【０９７３】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は、細胞増殖、成熟、サイトカイン産生、食作用、及び／又は免疫細胞の制御機能又はエフェクター機能の誘導を起こす一次活性化シグナル［例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド複合体とＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とのライゲーション］を少なくとも伝達可能な刺激剤の存在下で行われる。ある具体的な実施形態によれば、刺激因子は、二次共刺激シグナルを伝達することも可能である。
【０９７４】
刺激剤の量及び刺激剤と免疫細胞との比率を決定する方法は、充分に当業者の能力の範囲内であり、したがって、本明細書では特定しない。
【０９７５】
刺激剤は、抗原依存性又は非依存性（すなわち、ポリクローナル）の方法で免疫細胞を活性化し得る。
【０９７６】
ある具体的な実施形態によれば、刺激剤は、抗原非特異的刺激因子を含む。
【０９７７】
非特異的刺激因子は当業者に公知である。よって、非限定的な例として、免疫細胞がＴ細胞を含む場合、抗原非特異的刺激因子は、Ｔ細胞表面構造に結合して、Ｔ細胞のポリクローナル刺激を誘導可能な薬剤であり得、非限定的な例として、抗ＣＤ２８抗体などの共刺激タンパク質と組み合わせた抗ＣＤ３抗体などが挙げられる。他の非限定的な例としては、抗ＣＤ２、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ１３４、ノッチリガンド（例えばＤｅｌｔａ−ｌｉｋｅ  １／４（ＤＬＬ１／４）やＪａｇｇｅｄｌ／２）が挙げられ、これらは単独で又は抗ＣＤ３と様々に組み合わせられる。Ｔ細胞のポリクローナル刺激を誘発し得る他の薬剤には、マイトジェン、ＰＨＡ、ＰＭＡ−イオノマイシン、ＣＥＢ、及びＣｙｔｏＳｔｉｍ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）が含まれるが、これらに限定されない。ある具体的な実施形態によれば、抗原非特異的刺激因子は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体を含む。ある具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞刺激因子は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社から入手したＣＤ３ＣＤ２８  ＭＡＣＳｉＢｅａｄｓなどの、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８コーティングビーズを含む。
【０９７８】
ある具体的な実施形態によれば、刺激剤は、抗原特異的刺激因子を含む。
【０９７９】
抗原特異的Ｔ細胞刺激因子の非限定的な例としては、抗原負荷抗原提示細胞［ＡＰＣ、例えば、樹状細胞］及びペプチド負荷組換えＭＨＣが挙げられる。したがって、例えば、Ｔ細胞刺激因子は、所望の抗原（例えば、腫瘍抗原）が事前に負荷された、又は所望の抗原をコードするｍＲＮＡでトランスフェクトされた樹状細胞であり得る。
【０９８０】
ある具体的な実施形態によれば、抗原はがん抗原である。
【０９８１】
本明細書で使用される場合、「がん抗原」という用語は、非がん性細胞と比較して、がん性細胞で過剰発現されるか又はがん細胞のみで発現される抗原を指す。がん抗原は、公知のがん抗原、又はがん細胞で発生する新しい特異的抗原（すなわち、新生抗原）であり得る。
【０９８２】
公知のがん抗原の非限定的な例としては、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１Ｏ、ＭＡＧＥ−Ａｌｌ、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−ｌ、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃｌ／ＣＴ７、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳ０−１、ＬＡＧＥ−１、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−３、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１、及びＸＡＧＥ、メラノサイト分化抗原、ｐ５３、ｒａｓ、ＣＥＡ、ＭＵＣＩ、ＰＭＳＡ、ＰＳＡ、チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＲＴ−Ｉ、ｇｐｌＯＯ、ｇｐ７５、αアクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、βカテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−ｌ、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａｌｌ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡ０２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２及び３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、ＮＡ−８８、ＳＰ１７、及びＴＲＰ２−Ｉｎｔ２（ＭＡＲＴ−Ｉ）、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バール・ウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐｌＳＯｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈｌ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、α−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、Ｃ０−０２９、ＦＧＦ−５、０２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼１７０Ｋ、ＮＹＣＯ−Ｉ、ＲＣＡＳＩ、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、チロシナーゼ関連タンパク質、ＴＲＰ−１、又はＴＲＰ−２が挙げられる。
【０９８３】
発現され得る他の腫瘍抗原は当技術分野で周知である（例えば、ＷＯ００／２０５８１；Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（２０００）  Ｅｄｓ  Ｓｔｅｒｎ，  Ｂｅｖｅｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｃａｒｒｏｌｌ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅを参照）。これらの腫瘍抗原の配列は、公開データベースから容易に入手できるが、ＷＯ１９９２／０２０３５６（Ａ１）、ＷＯ１９９４／００５３０４（Ａ１）、ＷＯ１９９４／０２３０３１（Ａ１）、ＷＯ１９９５／０２０９７４（Ａ１）、ＷＯ１９９５／０２３８７４（Ａ１）、及びＷＯ１９９６／０２６２１４（Ａ１）にも記載されている。
【０９８４】
代替的に又は追加的に、腫瘍抗原は、例えば生検によって、対象から得られたがん細胞を使用して同定されてもよい。
【０９８５】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、刺激剤はがん細胞を含む。
【０９８６】
ある具体的な実施形態によれば、活性化は抗がん剤の存在下で行われる。
【０９８７】
ある具体的な実施形態によれば、免疫細胞は活性化後に精製される。
【０９８８】
したがって、本発明はまた、本発明の方法によって取得可能な単離された免疫細胞も意図している。
【０９８９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明によって使用及び／又は得られる免疫細胞は、任意の段階で、新たに単離され、将来使用ため、長期間（例えば、数ヶ月、数年）、例えば液体窒素温度で、凍結保存（すなわち、凍結）されて保存され得、細胞株であり得る。
【０９９０】
凍結保存の方法は、当業者に公知であり、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２００７０／５４１６０号及びＷＯ２００１／０３９５９４号並びに米国特許出願第ＵＳ２０１２／０１４９１０８に開示されている。
【０９９１】
ある具体的な実施形態によれば、本発明によって得られた細胞は、細胞バンク又は保管庫若しくは貯蔵施設に貯蔵されていてもよい。
【０９９２】
結果として、本教示はさらに、本発明の単離免疫細胞の使用及び方法を、限定されないが、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患（例えば、過剰増殖性疾患；免疫抑制や感染症に関連する病気など）に対する養子免疫細胞療法の供給源として使用することを提案する。
【０９９３】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、本発明の方法は、前記活性化に続いて、必要とする対象に免疫細胞を養子移入することを含む。
【０９９４】
ある具体的な実施形態によれば、本発明の方法によって得られる、養子細胞療法で使用するための免疫細胞が提供される。
【０９９５】
本発明の特定の実施形態に従って使用される細胞は、自家又は非自家であり得、それらは同系又は非同系であり得、対象に対して同種又は異種であり得、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【０９９６】
本教示はまた、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療する方法において、本発明の組成物（例えば、融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞）を使用することを意図している。
【０９９７】
よって、本発明の別の態様によれば、治療を必要とする対象に、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれをコードする宿主細胞を投与することを含む、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための方法が提供される。
【０９９８】
本発明の別の態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療に使用するための、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド若しくは核酸構築物、又はそれをコードする宿主細胞が提供される。
【０９９９】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１０００】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００１】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００２】
ある具体的な実施形態によれば、治療すること又は治療は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を用いて行われる。
【１００３】
本明細書において「治療する（treating）」又は「治療（treatment）」という用語は、病状（疾患、障害又は医学的状態）の発症を阻害、予防又は停止し、且つ／又は病状又は病状の兆候を減退、寛解、又は後戻りさせることを意味する。当業者は、種々の方法及びアッセイを使用して病状の発現を評価することができ、同様に、種々の方法及びアッセイを使用して、病状の減退、寛解又は後戻りを評価しうることを理解するであろう。
【１００４】
本明細書において「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、任意の年齢及び任意の性別のヒトを含む。ある具体的な実施形態によれば、「対象」という用語は、病状（疾患、障害又は医学的状態）に罹患している対象をいう。ある具体的な実施形態によれば、この用語は、病状を発症するおそれのある個体を包含する。
【１００５】
ある具体的な実施形態によれば、対象は、ＰＤＬ１を発現している細胞に関連する疾患に罹患している。
【１００６】
ある具体的な実施形態によれば、対象の罹患細胞はＰＤＬ１を発現する。
【１００７】
本明細書において「免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患」とのフレーズは、対象の免疫応答活性が、少なくとも疾患の症状を改善する又は症状の発症を遅延させるのには十分であり得るが、何らかの理由で、その際の対象の免疫応答の活性が最適には及ばない疾患をいう。
【１００８】
免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の非限定的な例には、過剰増殖性疾患、免疫抑制に関連する疾患、薬物療法（例えば、ｍＴＯＲ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ステロイド）によって引き起こされる免疫抑制、及び感染症が含まれる。
【１００９】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は、過剰増殖性疾患を含む。
【１０１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患は、硬化症、線維症、特発性肺線維症、乾癬、全身性硬化症／強皮症、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、肝線維症、放射線誘発性肺線維症の予防、骨髄線維症、又は後腹膜線維症を含む。
【１０１１】
他の具体的な実施形態によれば、前記過剰増殖性疾患はがんを含む。
【１０１２】
よって、本発明の別の態様によれば、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドを、必要とする対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。
【１０１３】
本明細書で使用される場合、がんという用語は、悪性がん及び前悪性がんの両方を包含する。
【１０１４】
前がん性又は良性の形態のがんに関して、任意で前悪性のがんの悪性形態への進行を停止させるために、前記組成物及び方法を適用してもよい。
【１０１５】
本発明のいくつかの実施形態の方法によって治療することができるがんは、任意の固形又は非固形のがん及び／又はがん転移であり得る。
【１０１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは悪性がんを含む。
【１０１７】
本発明のいくつかの実施形態の方法によって治療することができるがんは、任意の固形又は非固形のがん及び／又はがん転移であり得る。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。かかるがんのより具体的な例には：扁平上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮癌を含む）、腹膜がん、肝細胞がん、胃がん（消化器がんを含む）、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞がん（ヘパトーマ）、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん又は腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、様々な種類の頭頸部がん、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；中等度／濾胞性ＮＨＬ；中等度びまん性ＮＨＬ；高度免疫芽球性ＮＨＬ；バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅｄ  ｌａｒｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ、ＤＬＢＣＬ）、高度リンパ芽球性ＮＨＬ；高度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病（ＣＭＬ）；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、及びＭｅｉｇｓ症候群が含まれる。好ましくは、前記がんは、乳がん、結腸直腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部がん、黒色腫、卵巣がん、中皮腫、及び多発性骨髄腫からなる群より選択される。本発明の治療に適したがん性状態には、転移性がんが含まれる。
【１０１８】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは前悪性がんを含む。
【１０１９】
前悪性がん（又は前がん）は充分に特徴付けられており、当技術分野で公知である（例えば、Ｂｅｒｍａｎ  ＪＪ．  ａｎｄ  Ｈｅｎｓｏｎ  ＤＥ．，  ２００３．  Ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃａｎｃｅｒｓ：  ａ  ｍｅｔａｄａｔａ  ａｐｐｒｏａｃｈ．  ＢＭＣ  Ｍｅｄ  Ｉｎｆｏｒｍ  Ｄｅｃｉｓ  Ｍａｋ．  ３：８を参照）。本発明の方法による治療に適した前悪性がんのクラスには、後天性の小さな又は顕微鏡的な前悪性がん、核異型を伴う後天性の大きな病変、がんに進行する遺伝性過形成症候群で発生する前駆病変、並びに後天性びまん性過形成及びびまん性化生が含まれる。小さな又は顕微鏡的な前悪性がんの例には、ＨＧＳＩＬ（子宮頸部の高度扁平上皮内病変）、ＡＩＮ（肛門上皮内新生物）、声帯の異形成、（結腸の）異常な陰窩、ＰＩＮ（前立腺上皮内新生物）が含まれる。核異型を伴う後天性の大きな病変の例には、尿細管腺腫、ＡＩＬＤ（異常蛋白血症を伴う血管免疫芽球性リンパ節症）、非定型髄膜腫、胃ポリープ、大局面型類乾癬、骨髄異形成、乳頭状移行上皮内癌、過剰な芽球を伴う難治性貧血、及びシュナイダー乳頭腫が含まれる。がんに進行する遺伝性過形成症候群で発生する前駆病変の例には、非定型ほくろ症候群、Ｃ細胞腺腫症、及びＭＥＡが含まれる。後天性びまん性過形成及びびまん性化生の例には、ＡＩＤＳ、非定型リンパ過形成、骨パジェット病、移植後リンパ増殖性疾患、及び潰瘍性大腸炎が含まれる。
【１０２０】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、急性骨髄性白血病、肛門がん、基底細胞癌、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、胆管がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄細胞性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、食道がん、卵管がん、濾胞性リンパ腫、胃がん、胃食道（ＧＥ）接合部癌、胚細胞腫瘍、ジャーミノーマ（セミノーマ）胚細胞腫瘍、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、神経膠肉腫、頭頸部がん、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、喉頭がん、平滑筋肉腫、マントル細胞リンパ腫、黒色腫、メルケル細胞癌、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔（口）がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、末梢神経鞘腫瘍（神経線維肉腫）、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、腹膜がん、前立腺がん、腎細胞癌、唾液腺がん、皮膚がん、小細胞肺がん、軟部肉腫、扁平上皮癌、滑膜肉腫、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、尿管がん、尿道がん、子宮がん、膣がん又は外陰がんである。
【１０２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、急性骨髄性白血病、膀胱がん、乳がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、上皮性卵巣がん、上皮性腫瘍、卵管がん、濾胞性リンパ腫、多形性膠芽腫、肝細胞癌、頭頸部がん、白血病、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣がん、前立腺がん、又は腎細胞癌である。
【１０２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫、白血病及び癌腫からなる群より選択される。
【１０２３】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫、白血病、大腸がん、膵臓がん、卵巣がん、肺がん及び扁平上皮癌からなる群より選択される。
【１０２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは大腸がんである。
【１０２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは卵巣癌である。
【１０２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは肺癌である。
【１０２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは頭頸部癌である。
【１０２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは白血病である。
【１０２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記白血病は、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血球血症性白血病（leukocythemic leukemia）、好塩基球性白血病、芽球性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胚生細胞性白血病、好酸球性白血病、（）ｒｏｓｓ’白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病（hemoblastic Leukemia）、血球芽細胞性白血病（hemocyteblastic leukemia）、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ性（リンパ行性）白血病、リンパ性白血病、リンパ肉腫細胞白血病、肥満細胞白血病、巨核球性白血病、微小骨髄芽球性白血病（micromyeloblastic leukemia）、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ型白血病、形質細胞白血病（plasma cell leukemia）、形質細胞性白血病（plasmacytic leukemia）、前骨髄球性白血病、Ｒｉｅｄｅｒ細胞白血病、シリング型白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病、及び未分化細胞白血病からなる群より選択される。
【１０３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記白血病は、前骨髄性白血病、急性骨髄性白血病又は慢性骨髄性白血病である。
【１０３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんはリンパ腫である。
【１０３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はＢ細胞リンパ腫である。
【１０３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はＴ細胞リンパ腫である
【１０３４】
他の具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫はホジキンリンパ腫である。
【１０３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記リンパ腫は非ホジキンリンパ腫である。
【１０３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記非ホジキンリンパ腫は、アグレッシブＮＨＬ、形質転換ＮＨＬ、インドレントＮＨＬ、再発性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、低悪性度ＮＨＬ、濾胞性リンパ腫、大細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性リンパ腫、及び菌状息肉腫／セザリー症候群を含む皮膚Ｔ細胞がんからなる群より選択される。
【１０３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、多発性骨髄腫である。
【１０３８】
少なくともいくつかの実施形態によれば、前記多発性骨髄腫は：κ型の軽鎖及び／又はλ型の軽鎖を産生する多発性骨髄腫がん；原発性形質細胞白血病（ＰＣＬ）などのアグレッシブ多発性骨髄腫；ＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症）、多発性骨髄腫に進行する可能性があるワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ、リンパ形質細胞性リンパ腫としても知られる）などの良性形質細胞障害；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、インドレント多発性骨髄腫、多発性骨髄腫に進行する可能性のある前悪性の多発性骨髄腫；原発性アミロイドーシスからなる群より選択される。
【１０３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんは、腫瘍微小環境に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を有する腫瘍、及び／又は腫瘍微小環境にＰＤＬ１が比較的高発現している腫瘍の存在によって定義される。
【１０４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記がんの細胞は、ＰＤＬ１を発現する。
【１０４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は、免疫抑制に関連する疾患、又は薬物療法（ｍＴＯＲ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ステロイドなど）によって引き起こされる免疫抑制を含む。
【１０４２】
本発明の具体的な実施形態によれば、前記疾患には、ＨＩＶ、はしか、インフルエンザ、ＬＣＣＭ、ＲＳＶ、ヒトライノウイルス、ＥＢＶ、ＣＭＶ、及びパルボウイルスが含まれる。
【１０４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患は感染を含む。
【１０４４】
本明細書で使用される場合、「感染」又は「感染症」という用語は、病原体によって誘発される疾患を指す。病原体の具体例には、ウイルス性病原体、細菌性病原体、例えば、細胞内マイコバクテリア病原体（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）、細胞内細菌性病原体（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓなど）、又は細胞内原生動物病原体（例えば、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ及びＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａなど）などが含まれる。
【１０４５】
本発明の教示に従って治療可能な感染症を引き起こすウイルス性病原体の具体的な種類には、レトロウイルス、サーコウイルス、パルボウイルス、パポーバウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、イリドウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、ブニヤウイルス、コロナウイルス、アレナウイルス、及びフィロウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
【１０４６】
本発明の教示に従って治療され得るウイルス感染の具体的な例には、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に誘発される後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、ライノウイルス感染症、ウイルス性髄膜炎、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症、Ａ型、Ｂ型又はＣ型肝炎ウイルス感染症、はしか、パピローマウイルス感染／疣贅、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、単純ヘルペスウイルス感染症、黄熱病、エボラウイルス感染症、狂犬病などが含まれるが、これらに限定されない。
【１０４７】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物（例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド又は核酸構築物、及び／又はそれを発現する宿主細胞）を、当技術分野で周知の鎮痛薬、化学療法剤、放射線療法剤、細胞毒性療法（コンディショニング）、ホルモン療法、抗体、及び他の治療レジメン（例えば、外科手術）を含むがこれらに限定されない他の確立された又は実験的な治療レジメンと組み合わせて対象に投与して、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患（例えば、がん）を治療することができる。
【１０４８】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物（例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド又は核酸構築物、及び／又はそれを発現する宿主細胞）を、骨髄細胞、造血幹細胞、ＰＢＭＣ、臍帯血幹細胞、及び／又は人工多能性幹細胞の移植などが挙げられるがこれに限定されない養子細胞移植と組み合わせて対象に投与することができる。
【１０４９】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、抗がん剤を含む。
【１０５０】
よって、本発明の別の態様によれば、抗がん剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を必要とする対象に投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。
【１０５１】
本発明の特定の実施形態で使用することができる抗がん剤には、以下の抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない：アシビシン（Ａｃｉｖｉｃｉｎ）；アクラルビシン（Ａｃｌａｒｕｂｉｃｉｎ）；アコダゾール塩酸塩（Ａｃｏｄａｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；アクロニン（Ａｃｒｏｎｉｎｅ）；アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）；アドゼレシン（Ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）；アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）；アルトレタミン（Ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）；アンボマイシン（Ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）；アメタントロン酢酸塩（Ａｍｅｔａｎｔｒｏｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；アミノグルテチミド（Ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）；アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；アナストロゾール（Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；アントラマイシン（Ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）；アスパラギナーゼ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）；アスペルリン（Ａｓｐｅｒｌｉｎ）；アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）；アゼテパ（Ａｚｅｔｅｐａ）；アゾトマイシン（Ａｚｏｔｏｍｙｃｉｎ）；バチマスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）；ベンゾデパ（Ｂｅｎｚｏｄｅｐａ）；ビカルタミド（Ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）；ビサントレン塩酸塩（Ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ビスナフィドジメシル酸塩（Ｂｉｓｎａｆｉｄｅ  Ｄｉｍｅｓｙｌａｔｅ）；ビゼレシン（Ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）；ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ブレキナルナトリウム塩（Ｂｒｅｑｕｉｎａｒ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ブロピリミン（Ｂｒｏｐｉｒｉｍｉｎｅ）；ブサルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）；カクチノマイシン（Ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；カルステロン（Ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）；カラセミド（Ｃａｒａｃｅｍｉｄｅ）；カルベチマー（Ｃａｒｂｅｔｉｍｅｒ）；カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；カルムスチン（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）；カルビシン塩酸塩（Ｃａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；カルゼレシン（Ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）；セデフィンゴル（Ｃｅｄｅｆｉｎｇｏｌ）；クロラムブシル（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；シロレマイシン（Ｃｉｒｏｌｅｍｙｃｉｎ）；シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）；クラドリビン（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）；クリスナトールメシル酸塩（Ｃｒｉｓｎａｔｏｌ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；シクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；シタラビン（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）；ダカルバジン（Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ダクチノマイシン（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）；ダウノルビシン塩酸塩（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；デシタビン（Ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；デキソルマプラチン（Ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン（Ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ）；デザグアニンメシル酸塩（Ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；ジアジクオン（Ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）；ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；ドキソルビシン塩酸塩（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ドロロキシフェン（Ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）；ドロロキシフェンクエン酸塩（Ｄ��ｏｌｏｘｉｆｅｎｅ  Ｃｉｔｒａｔｅ）；ドロモスタノロンプロピオン酸塩（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ  Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；ズアゾマイシン（Ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）；エダトレキセート（Ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；エフロニチン塩酸塩（Ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エラサミトルチン（Ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）；エンロプラチン（Ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；エンプロメート（Ｅｎｐｒｏｍａｔｅ）；エピプロピジン（Ｅｐｉｐｒｏｐｉｄｉｎｅ）；エピルビシン塩酸塩（Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エルブロゾール（Ｅｒｂｕｌｏｚｏｌｅ）；エソルビシン塩酸塩（Ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；エストラムスチン（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）；エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；エタニダゾール（Ｅｔａｎｉｄａｚｏｌｅ）；エトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）；エトポシドリン酸塩（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；エトプリン（Ｅｔｏｐｒｉｎｅ）；ファドロゾール塩酸塩（Ｆａｄｒｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ファザラビン（Ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）；フェンレチニド（Ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）；フロクスウリジン（Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；フルオロウラシル（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）；フルロシタビン（Ｆｌｕｒｏｃｉｔａｂｉｎｅ）；フォスキドン（Ｆｏｓｑｕｉｄｏｎｅ）；フォストリエシンナトリウム塩（Ｆｏｓｔｒｉｅｃｉｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；ゲムシタビン塩酸塩（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）；イダルビシン塩酸塩（Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；イホスファミド（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；イルモフォシン（Ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）；インターフェロンα−２ａ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−２ａ）；インターフェロンα−２ｂ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−２ｂ）；インターフェロンα−ｎ１（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ａｌｆａ−ｎ３）；インターフェロンβ−Ｉａ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｂｅｔａ−Ｉａ）；インターフェロンγ−Ｉｂ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇａｍｍａ−Ｉｂ）；イプロプラチン（Ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）；イリノテカン塩酸塩（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ランレオチド酢酸塩（Ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；レトロゾール（Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）；ロイプロリド酢酸塩（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；リアロゾール塩酸塩（Ｌｉａｒｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ロメトレキソールナトリウム塩（Ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ロムスチン（Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ロソキサントロン塩酸塩（Ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；マソプロコル（Ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）；メイタンシン（Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）；メクロレタミン塩酸塩（Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メゲストロール酢酸塩（Ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ  Ａｃｅｔａｔｅ）；メレンゲストロール酢酸塩（Ｍｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌ  Ａｃｅｔａｔｅ）；メルファラン（Ｍｅｌｐｈａｌａｎ）；メノガリル（Ｍｅｎｏｇａｒｉｌ）；メルカプトプリン（Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；メトトレキセートナトリウム塩（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；メトプリン（Ｍｅｔｏｐｒｉｎｅ）；メツレデパ（Ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ）；ミチンドミド（Ｍｉｔｉｎｄｏｍｉｄｅ）；ミトカルシン（Ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）；ミトクロミン（Ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）；ミトギリン（Ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）；ミトマルシン（Ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）；ミトマイシン（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）；ミトスペル（Ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；ミトタン（Ｍｉｔｏｔａｎｅ）；ミトキサントロン塩酸塩（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；マイコフェノール酸（Ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  Ａｃｉｄ）；ノコダゾール（Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）；ノガラマイシン（Ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）；オルマプラチン（Ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；オキシスラン（Ｏｘｉｓｕｒａｎ）；パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）；ペグアスパラガーゼ（Ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）；ペリオマイシン（Ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン（Ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）；ペプロマイシン硫酸塩（Ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ペルホスファミド（Ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ピポブロマン（Ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ピポスルファン（Ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；ピロキサントロン塩酸塩（Ｐｉｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；プリカマイシン（Ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）；プロメスタン（Ｐｌｏｍｅｓｔａｎｅ）；ポリフィマーナトリウム塩（Ｐｏｒｆｉｍｅｒ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ポルフィロマイシン（Ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）；プレドニムスチン（Ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン塩酸塩（Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ピューロマイシン（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）；ピューロマイシン塩酸塩（Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ピラゾフリン（Ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）；リボプリン（Ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）；ログレチミド（Ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；サフィンゴール（Ｓａｆｉｎｇｏｌ）；サフィンゴール塩酸塩（Ｓａｆｉｎｇｏｌ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；セムスチン（Ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）；シムトラゼン（Ｓｉｍｔｒａｚｅｎｅ）；スパルフォセートナトリウム塩（Ｓｐａｒｆｏｓａｔｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；スパルソマイシン（Ｓｐａｒｓｏｍｙｃｉｎ）；スピロゲルマニウム塩酸塩（Ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；スピロムスチン（Ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）；スピロプラチン（Ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）；ストレプトニグリン（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）；ストレプトゾシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）；スロフェヌル（Ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）；タリソマイシン（Ｔａｌｉｓｏｍｙｃｉｎ）；タキソール（Ｔａｘｏｌ）；テコガランナトリウム塩（Ｔｅｃｏｇａｌ��ｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）；テガフール（Ｔｅｇａｆｕｒ）；テロキサントロン塩酸塩（Ｔｅｌｏｘａｎｔｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；テモポルフィン（Ｔｅｍｏｐｏｒｆｉｎ）；テニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；テロキシロン（Ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）；テストラクトン（Ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；チアミプリン（Ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）；チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；チオテパ（Ｔｈｉｏｔｅｐａ）；チアゾフリン（Ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）；チラパザミン（Ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）；トポテカン塩酸塩（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；トレミフェンクエン酸塩（Ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ  Ｃｉｔｒａｔｅ）；トレストロン酢酸塩（Ｔｒｅｓｔｏｌｏｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；トリシリビンリン酸塩（Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；トリメトレキセート（Ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；トリメトレキセートグルクロン酸塩（Ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ  Ｇｌｕｃｕｒｏｎａｔｅ）；トリプトレリン（Ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）；ツブロゾール塩酸塩（Ｔｕｂｕｌｏｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ）；ウレデパ（Ｕｒｅｄｅｐａ）；バプレオチド（Ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）；ベルテポルフィン（Ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）；ビンブラスチン硫酸塩（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンクリスチン硫酸塩（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンデシン（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ビンデシン硫酸塩（Ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビネピジン硫酸塩（Ｖｉｎｅｐｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビングリシネート硫酸塩（Ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンロイロシン硫酸塩（Ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビノレルビン酒石酸塩（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ  Ｔａｒｔｒａｔｅ）；ビンロシジン硫酸塩（Ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ビンゾリジン硫酸塩（Ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ  Ｓｕｌｆａｔｅ）；ボロゾール（Ｖｏｒｏｚｏｌｅ）；ゼニプラチン（Ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）；ジノスタチン（Ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）；ゾルビシン塩酸塩（Ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）。追加の抗新生物薬には、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎの“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ
ｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ“，  Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９０，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｉｎｃ．（Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）の第５２章「Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ」（Ｐａｕｌ  Ｃａｌａｂｒｅｓｉ  ａｎｄ  Ｂｒｕｃｅ  Ａ．  Ｃｈａｂｎｅｒ）及びその序文（１２０２−１２６３）に開示されるものが含まれる。
【１０５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記抗がん剤は、抗体を含む。
【１０５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、エドレコロマブ（Ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブ（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビバツズマブメルタンシン（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ブブロンツベトマブ（Ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、シクスツムマブ（Ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、シタツズマブボガトックス（Ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ  ｂｏｇａｔｏｘ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エルツマクソマブ（Ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（Ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ジレンツキシマブ（Ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、及びイピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）からなる群より選択される。
【１０５４】
ある具体的な実施形態によれば、抗体は、リツキシマブ及びセツキシマブからなる群より選択される。
【１０５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記治療剤又は前記抗がん剤は、ＩＭｉＤ（例えば、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド）を含む。
【１０５６】
ある具体的な実施形態によれば、ＩＭｉＤは、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群より選択される。
【１０５７】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、抗感染剤（例えば、抗生物質及び抗ウイルス剤）を含む。
【１０５８】
ある具体的な実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態の組成物と組み合わせて投与される治療剤は、免疫抑制剤（例えば、ＧＣＳＦ及び他の骨髄刺激剤、ステロイド）を含む。
【１０５９】
ある具体的な実施形態によれば、併用療法には相加効果がある。
【１０６０】
ある具体的な実施形態によれば、併用療法には相乗効果がある。
【１０６１】
本発明の別の態様によれば、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患を治療するための治療剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を包装する包装材料を含む製品が提供される。ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、免疫細胞の活性化から恩恵を受け得る疾患の治療のために特定される。
【１０６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患を治療するための治療剤と、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、は別々の容器に包装される。
【１０６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記疾患を治療するための治療剤、並びに本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／若しくは４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、合剤として包装される。
【１０６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記製品は、ＰＤ１アミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞を含む。
【１０６８】
よって、本発明の別の態様によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞と、を包装する包装材料を含む製品が提供される。
【１０６９】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、別々の容器に包装される。
【１０７０】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、又はそれを発現する宿主細胞；及び本明細書に開示される４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核構築物、又はそれを発現する宿主細胞は、合剤として包装される。
【１０７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ＰＤ１アミノ酸配列を含む単離ポリペプチド及び／又は前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含む単離ポリペプチドは、異種の治療部分（heterologous therapeutic moiety）に付着しているか、又は異種の治療部分を含む。前記治療部分（therapeutic moiety）は、小分子化学化合物及びポリペプチドなどの任意の分子であり得る。
【１０７２】
本発明の特定の実施形態で使用され得る治療部分の非限定的な例には、細胞毒性部分、毒性部分、サイトカイン部分、免疫調節部分、ポリペプチド、抗体、薬物、化学物質、及び／又は放射性同位体が含まれる。
【１０７３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、前記治療部分は、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、前記治療部分をコードする核酸配列と翻訳的に融合すること（translationally fusing）によって結合される。
【１０７４】
追加的又は代替的に、前記治療部分は、当業者に公知の任意の結合方法を使用して、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドに化学的に結合（カップリング）され得る。例えば、ペプチドは、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナートとも称される）（ＳＤＰＤ）（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ−３４１５；例えば、Ｃｕｍｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９８５，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １１２：  ２０７−２２４を参照）、グルタルアルデヒド結合手順（例えば、Ｇ．Ｔ．  Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  １９９６，  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏを参照）、又はカルボジイミド結合手順［例えば、Ｊ．  Ｍａｒｃｈ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｒｅａｃｔｉｏｎ’ｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｐｐ．  ３４９−５０  ＆  ３７２−７４（３ｄ  ｅｄ．），  １９８５、Ｂ．  Ｎｅｉｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９７８，  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．，  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  １７：５２２、Ａ．  Ｈａｓｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９７８，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ４４７５、Ｅ．Ｐ．  Ｂｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９８６，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５０：２３９４、及びＬ．Ｊ．  Ｍａｔｈｉａｓ  １９７９，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ５６１を参照］を使用して、目的の薬剤に結合させてもよい。
【１０７５】
治療部分は、例えば、ペプチド結合（機能部分がポリペプチドである場合）を介する、又はリンカーペプチド若しくは有機ポリマーなどの他の化学部分などの、介在するリンカー要素への共有結合を介するなど、直接的又は間接的な任意の適切な化学結合を使用するなどの、当技術分野で広く実施されている標準的な化学合成技術［例えば、ｈｙｐｅｒｔｅｘｔｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ（ｄｏｔ）  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ｄｏｔ）  ｏｒｇ／ｐｏｒｔａｌ／Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を参照］を使用して本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドに付着させることができる。キメラペプチドは、ペプチドのカルボキシ（Ｃ）又はアミノ（Ｎ）末端における結合を介して、又は直鎖、分岐状、若しくは環状の側鎖、内部炭素若しくは窒素原子などの内部化学基への結合を介して、連結され得る。
【１０７６】
本明細書で使用される場合、本明細書で互換的に使用される「タンパク質」、「ペプチド」及び「ポリペプチド」という用語は、天然ペプチド（分解産物、合成的に合成されたペプチド、又は組換えペプチドのいずれか）及びペプチド模倣物（通常、合成的に合成されたペプチド）、並びに例えば、ペプチドを体内でより安定させる、又は細胞により浸透可能にする修飾（modifications）を有し得るペプチド類似体であるペプトイド及びセミペプトイドを包含する。かかる修飾には、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾、ペプチド結合修飾、骨格修飾、及び残基修飾が含まれるが、これらに限定されない。ペプチド模倣化合物を調製するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、本明細書に完全に記載されているかのように参照により援用される、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｃ．Ａ．  Ｒａｍｓｄｅｎ  Ｇｄ．，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １７．２，  Ｆ．  Ｃｈｏｐｌｉｎ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２）に明記されている。この点に関するさらなる詳細は、以下に提供される。
【１０７７】
ペプチド内のペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）は、例えば、Ｎ−メチル化アミド結合（−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−）、エステル結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ２−）、スルフィニルメチレン結合（−Ｓ（＝Ｏ）−ＣＨ２−）、α−アザ結合（−ＮＨ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯ−）（式中、Ｒは、任意のアルキル（例えば、メチル）、アミン結合（−ＣＨ２−ＮＨ−）、スルフィド結合（−ＣＨ２−Ｓ−）、エチレン結合（−ＣＨ２−ＣＨ２−）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）、チオアミド結合（−ＣＳ−ＮＨ−）、オレフィン二重結合（−ＣＨ＝ＣＨ−）、フッ素化オレフィン二重結合（−ＣＦ＝ＣＨ−）、レトロアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）、ペプチド誘導体（−Ｎ（Ｒ）−ＣＨ２−ＣＯ−）であり、Ｒは「通常の」側鎖であって、炭素原子上に天然に存在する）によって置換され得る。
【１０７８】
これらの修飾は、ペプチド鎖に沿ったいずれの結合でも生じる場合があり、いくつかの（２〜３）結合で同時に生じる場合もある。
【１０７９】
天然芳香族アミノ酸であるトリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びフェニルアラニン（Ｐｈｅ）は、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、ナフチルアラニン、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）の環メチル化誘導体、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）又はＯ−メチル−チロシン（Ｔｙｒ）のハロゲン化誘導体などの非天然芳香族アミノ酸で置換され得る。
【１０８０】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドはまた、１又は複数の修飾アミノ酸又は１又は複数の非アミノ酸モノマー（例えば、脂肪酸、複合炭水化物など）を含み得る。
【１０８１】
「アミノ酸（単数）」又は「アミノ酸（複数）」という用語は、２０の天然アミノ酸；インビボにおいてしばしば翻訳後修飾されるアミノ酸（例えばヒドロキシプロリン、ホスホセリン、及びホスホスレオニンなど）；並びに他の異常アミノ酸（例えば２−アミノアジピン酸、ヒドロキシリジン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン、及びオルニチンなどを含むがこれらに限定されない）を含むと理解される。さらに、「アミノ酸」という用語は、Ｄ−アミノ酸及びＬ−アミノ酸の両方を含む。
【１０８２】
以下の表１及び表２は、本発明のいくつかの実施形態で使用され得る天然アミノ酸（表１）、及び非従来型又は修飾アミノ酸（例えば、合成アミノ酸、表２）を列挙している。
【１０８３】
【表１】
2021531265.tif 000045
【１０８４】
【表２−１】
2021531265.tif 000046
【１０８５】
【表２−２】
2021531265.tif 000047
【１０８６】
【表２−３】
2021531265.tif 000048
【１０８７】
【表２−４】
2021531265.tif 000049
【１０８８】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、好ましくは直鎖状形態で利用されるが、環状化がペプチド特性を著しく妨害しない場合、ペプチドの環状形態も利用できることが理解されるであろう。
【１０８９】
本発明のペプチドは、ペプチドが可溶性形態であることを必要とする治療において好適に利用されるため、本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、ヒドロキシル含有側鎖によりペプチド溶解度を増加可能なセリン及びスレオニンを含むがこれらに限定されない、１又は複数の非天然又は天然の極性アミノ酸を含むことが好ましい。
【１０９０】
本発明のペプチドのアミノ酸は、保存的又は非保存的に置換され得る。
【１０９１】
本明細書で使用される「保存的置換」という用語は、ペプチドの天然配列に存在するアミノ酸を、同様の立体特性を有する天然又は非天然アミノ又はペプチド模倣物で置換することを指す。置換される天然アミノ酸の側鎖が極性又は疎水性のいずれかである場合、保存的置換は、（置換されたアミノ酸の側鎖と同じ立体特性を有することに加えて）極性若しくは疎水性である、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又はペプチド模倣部分で行う必要がある。
【１０９２】
天然アミノ酸は通常、その特性に従ってグループ化されるので、天然アミノ酸による保存的置換は、本発明によれば、立体的に類似した非荷電アミノ酸による荷電アミノ酸の置換も保存的置換と見なされるという事実を念頭に置きつつ、容易に決定することができる。
【１０９３】
非天然アミノ酸による保存的置換を生成するために、当技術分野で周知のアミノ酸類似体（合成アミノ酸）を使用することも可能である。天然アミノ酸のペプチド模倣物は、当業者に公知の文献に充分に文書化されている。
【１０９４】
保存的置換に影響を与える場合、置換アミノ酸は、元のアミノ酸と同じ又は類似の官能基を側鎖に持つ必要がある。
【１０９５】
機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野で周知である。どのアミノ酸の変化が表現型的にサイレントである可能性が高いかに関するガイダンスは、Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：  １３０６  １３１０にも記載されている。かかる保存的に改変されたバリアントは、多型バリアント、種間相同体、及び対立遺伝子に追加されるものであり、これらを除外するものではない。典型的な保存的置換には、以下が含まれるが、これらに限定されない：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。アミノ酸は、側鎖に関連する特性に基づいて置換することができる。例えば、セリン（Ｓ）やスレオニン（Ｔ）など、極性側鎖を有するアミノ酸は置換可能であり；アルギニン（Ｒ）やヒスチジン（Ｈ）など、側鎖の電荷に基づいてアミノ酸を置換可能であり；バリン（Ｖ）やロイシン（Ｌ）など、疎水性側鎖を持つアミノ酸は置換可能である。示されているように、変化は通常、タンパク質のフォールディング又は活性に有意な影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換などのマイナーな性質のものである。
【１０９６】
本明細書で使用される「非保存的置換」という句は、親配列に存在するアミノ酸を、異なる電気化学的及び／又は立体的特性を有する別の天然又は非天然アミノ酸で置換することを指す。したがって、置換アミノ酸の側鎖は、置換される天然アミノ酸の側鎖よりも著しく大きく（又は小さく）、かつ／又は置換されるアミノ酸とは著しく異なる電子特性を有する官能基を有していてもよい。このタイプの非保存的置換の例には、アラニンをフェニルアラニン又はシコヘキシルメチルグリシンに置換すること、グリシンをイソロイシンに置換すること、又はアスパラギン酸を−ＮＨ−ＣＨ［（−ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ］−ＣＯ−に置換することを含む。本発明の範囲に含まれるこれらの非保存的置換は、依然として抗菌特性を有するペプチドを構成するものである。
【１０９７】
本発明のペプチドのＮ末端及びＣ末端は、官能基によって保護され得る。適切な官能基は、その教示が参照により本明細書に援用されるＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，  “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ“，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５  ａｎｄ  ７，  １９９１に記載されている。好ましい保護基は、例えば、化合物の親水性を低下させ、親油性を増加させることによって、保護基に付着した化合物の細胞への輸送を促進するものである。
【１０９８】
ある具体的な実施形態によれば、１又は複数のアミノ酸は、例えば、官能基の付加によって修飾され得る（概念的には「化学的に修飾された」と見なされる）。例えば、天然配列に現れる側鎖アミノ酸残基が所望により修飾され得、あるいは以下に記載されるように、タンパク質の他の部分が、側鎖アミノ酸残基に加えて、又は、側鎖アミノ酸残基の代わりに、所望により修飾され得る。かかる修飾は所望により、化学合成プロセスの後に、例えば化学的に修飾されたアミノ酸を加えることによって、分子の合成中に実施することができる。ただし、アミノ酸が分子内に既に存在する場合の化学修飾（「ｉｎ  ｓｉｔｕ」修飾）も可能である。ペプチド又はタンパク質への修飾は、例えば、遺伝子合成によって、（例えば、ＰＣＲに基づく）部位特異的突然変異誘発若しくは（例えば、ＥＭＳによる）ランダム突然変異誘発によって、エキソヌクレアーゼデリーションによって、化学修飾によって、又は異種ドメイン若しくは結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の融合によって、導入することができる。
【１０９９】
本明細書で使用される場合、「化学修飾」という用語は、ペプチドに言及する場合、そのアミノ酸残基の少なくとも１つが、プロセシング若しくは他の翻訳後修飾などの自然のプロセスによって、又は当技術分野で周知の化学修飾手法によって修飾されているペプチドを指す。修飾の非限定的な例示的タイプには、カルボキシメチル化；アセチル化；アシル化；リン酸化；グリコシル化；アミド化；ＡＤＰ−リボシル化；脂肪アシル化；ファルネシル基、イソファルネシル基、炭水化物基、脂肪酸基、及び結合のためのリンカーの添加；官能基付与（functionalization）；ＧＰＩアンカー形成；脂質又は脂質誘導体の共有結合；メチル化；ミリストイル化；ペグ化（pegylation）；プレニル化；リン酸化；ユビキチン化；並びに同様のプロセス及び公知の保護基／ブロッキング基が含まれる。所望により、エーテル結合を使用して、セリン又はスレオニンのヒドロキシルを糖のヒドロキシルに結合してもよい。所望により、アミド結合を使用して、グルタミン酸又はアスパラギン酸のカルボキシル基を糖のアミノ基に結合してもよい（Ｇａｒｇ  ａｎｄ  Ｊｅａｎｌｏｚ，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．  ４３，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）、Ｋｕｎｚ，  Ａｎｇ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌｉｓｈ  ２６：２９４−３０８（１９８７））。また所望により、アセタール及びケタール結合がアミノ酸と炭水化物との間に形成されてもよい。所望により、脂肪酸アシル誘導体を、例えば、遊離アミノ基（例えば、リジン）のアシル化によって作製してもよい（Ｔｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｒｉｖｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｓｈａｌ，  ｅｄｓ．，  ＥＳＣＯＭ  Ｐｕｂｌ．，  Ｌｅｉｄｅｎ，  １０７８−１０７９（１９９０））。
【１１００】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に完全に記載されているかのように参照により本明細書に援用されるＰＣＴ出願であるＷＯ２００６／０５０２６２号に記載されるように、修飾には、ペプチドへのシクロアルカン部分の付加が含まれる。これらの部分は、生体分子で使用するために設計されており、タンパク質に様々な特性を付与するために所望により使用され得る。
【１１０１】
さらに、所望により、ペプチド上の任意の部位を修飾してもよい。例えば、タンパク質上のグリコシル化部分のペグ化は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により本明細書に援用されるＰＣＴ出願であるＷＯ２００６／０５０２４７号に記載されているように、所望により実施することができる。所望により、１又は複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基をＯ結合型及び／又はＮ結合型グリコシル化に付加してもよい。ＰＥＧ基は、所望により分岐状又は直鎖状であり得る。所望により、任意の種類の水溶性ポリマーを、グリコシルリンカーを介してタンパク質のグリコシル化部位に結合させてもよい。
【１１０２】
「ペグ化タンパク質（PEGylated protein）」とは、タンパク質のアミノ酸残基に共有結合したポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を有する、生物学的活性を有するタンパク質又はその断片を意味する。
【１１０３】
「ポリエチレングリコール」又は「ＰＥＧ」とは、カップリング剤と、又はカップリング部分若しくは活性化部分（例えば、チオール、トリフレート、トレシレート、アジルジン、オキシラン、又は好ましくはマレイミド部分と）による誘導体化と併用した又は併用しない、ポリアルキレングリコール化合物又はその誘導体を意味する。マレイミドモノメトキシＰＥＧなどの化合物は、本発明の例示的な又は活性化されたＰＥＧ化合物である。ポリプロピレングリコールなどの他のポリアルキレングリコール化合物を本発明で使用してもよい。他の適切なポリアルキレングリコール化合物には、以下の種類の荷電性又は中性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない：デキストラン、コロミン酸又は他の炭水化物ベースのポリマー、アミノ酸のポリマー、及びビオチン誘導体。
【１１０４】
ある具体的な実施形態によれば、ペプチドは、変更されたグリコシル化パターンを持つように修飾される（すなわち、元の又は天然のグリコシル化パターンから変更される）。本明細書で使用される場合、「変更された（altered）」とは、１又は複数の炭水化物部分が欠失されていること、及び／又は元のタンパク質に少なくとも１つのグリコシル化部位が付加されていることを意味する。
【１１０５】
タンパク質のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合型グリコシル化とは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの糖の１つがヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに結合することを指しているが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも使用され得る。
【１１０６】
ペプチドへのグリコシル化部位の付加は、ペプチドのアミノ酸配列を変更して、上記のトリペプチド配列の１又は複数を含むようにすることによって、簡便に達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。変更は、元のペプチドの配列内への１又は複数のセリン又はスレオニン残基の追加又は置換によって行ってもよい（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。ペプチドのアミノ酸配列は、ＤＮＡレベルで変化を導入することによっても変更され得る。
【１１０７】
ペプチド上の炭水化物部分の数を増やす別の手段は、ペプチドのアミノ酸残基へのグリコシドの化学的又は酵素的カップリングによるものである。使用するカップリング様式によっては、糖が（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインなどの遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニン、又はヒドロキシプロリンなどの遊離ヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、又はトリプトファンの芳香族残基、又は（ｆ）グルタミンのアミド基に結合する場合がある。これらの方法は、例えば、ＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２２：  ２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【１１０８】
ペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的に、酵素的に、又はＤＮＡレベルでの変化の導入によって、達成され得る。化学的脱グリコシル化には、ペプチドをトリフルオロメタンスルホン酸又は同等の化合物に曝露する必要がある。この処理により、結合糖（Ｎ−アセチルグルコサミン又はＮ−アセチルガラクトサミン）を除くほとんど又は全ての糖が切断され、アミノ酸配列は未変化のまま残る。
【１１０９】
化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．，  ２５９：  ５２  （１９８７）及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １１８：  １３１  （１９８１）に記載されている。ペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  １３８：  ３５０（１９８７）に記載されているように、様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼを使用することによって達成され得る。
【１１１０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは検出可能なタグを含む。本明細書で使用される場合、一実施形態では、「検出可能なタグ」という用語は、当技術分野で公知の技術を使用して当業者が検出できる任意の部分を指す。検出可能なタグはペプチド配列であり得る。所望により、検出可能なタグは、化学薬品によって、又はタンパク質分解などの酵素的手段によって、除去され得る。本発明のいくつかの実施形態の検出可能なタグは、ペプチドの精製に使用され得る。例えば、「検出可能なタグ」という用語には、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）タグ；マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ；グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ；ポリ（Ｈｉｓ）タグ；ＦＬＡＧタグ；Ｖ５タグ、ｃ−ｍｙｃタグ、ＨＡタグなどのエピトープタグ；緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、及びシアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）などの蛍光タグ；並びにこれらのタグの派生物、又は当技術分野で公知の任意のタグが含まれる。「検出可能なタグ」という用語には「検出可能なマーカー」という用語も含まれる。
【１１１１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、そのＮ末端に付着した検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含む。
【１１１２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、そのＣ末端に付着した検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含む。
【１１１３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドのＮ末端は検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含まない。
【１１１４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドのＣ末端は検出可能なタグ（例えば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ）を含まない。
【１１１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは切断可能部分（cleavable moiety）に融合している。したがって、例えば、回収を容易にするために、発現されるコード配列は、本発明のいくつかの実施形態のペプチド及び融合した切断可能部分をコードするように設計されてもよい。一実施形態では、前記ペプチドは、例えば、切断可能部分に特異的なカラムへの固定化によるアフィニティークロマトグラフィーによって容易に単離されるように設計されている。一実施形態では、切断部位は、前記ペプチドと切断可能部分との間に設計され、ペプチドは、この部位で融合タンパク質を特異的に切断する適切な酵素又は薬剤で処理することにより、クロマトグラフィーカラムから放出され得る［例えば、Ｂｏｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １９：６５−７０（１９８８）；及びＧａｒｄｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：１５８５４−１５８５９（１９９０）を参照］。ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは単離ペプチドである。
【１１１６】
本発明のいくつかの実施形態のペプチドは、固相及び組換え技術などであるがこれらに限定されない、ペプチド合成の当業者に公知の任意の技術によって、合成及び精製され得る。
【１１１７】
固相ペプチド合成については、多くの技術の要約が、Ｊ．  Ｍ．  Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｄ．  Ｙｏｕｎｇ，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），  １９６３、及びＪ．  Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，  Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐ．  ４６，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），  １９７３に記載されている。従来の溶液合成については、Ｇ．  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｌｕｐｋｅ，  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ｖｏｌ．  １，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），  １９６５を参照のこと。
【１１１８】
概して、これらの方法は、成長するペプチド鎖に１又は複数のアミノ酸又は適切に保護されたアミノ酸を連続的に付加することを含む。通常、最初のアミノ酸のアミノ基又はカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保護されている。次に、この保護又は誘導体化されたアミノ酸は、不活性固体支持体に結合されるか、アミド結合を形成するのに適した条件下で、適切に保護された相補的（アミノ又はカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸を加えることによって、溶液中で利用され得る。この新しく追加されたアミノ酸残基から保護基が除去された後、次のアミノ酸（適切に保護されている）が追加され、以下同様に続く。全ての所望のアミノ酸が適切な配列で連結された後、残りの保護基（及び任意の固体支持体）が順次又は同時に除去されて、最終的なペプチド化合物が得られる。この一般的な手順を簡単に変更することにより、例えば、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドと（キラル中心をラセミ化しない条件下で）カップリングすることにより、脱保護後、ペンタペプチドなどを形成するなど、成長する鎖に一度に複数のアミノ酸を加えることが可能である。ペプチド合成のさらなる説明は米国特許第６，４７２，５０５号に開示されている。
【１１１９】
本発明のいくつかの実施形態のペプチド化合物を調製する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。
【１１２０】
大規模ペプチド合成についてはＡｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２０００；５５（３）：２２７−５０に記載されている。
【１１２１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは、インビトロ発現系を使用して合成される。かかるインビトロ合成法は当技術分野で周知であり、前記発現系の構成要素は市販されている。
【１１２２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ペプチドは組換えＤＮＡ技術によって生成される。「組換え」ペプチド又はタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生されたペプチド又はタンパク質を指す。すなわち、望ましいペプチド又はタンパク質をコードする外因性ＤＮＡ構築物によって形質転換された細胞から産生される。
【１１２３】
したがって、本発明の別の態様によれば、上記のポリペプチド及び融合タンパク質のいずれかをコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１２４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す  
【１１２７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１２９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。  
【１１３０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６に記載の核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。  
【１１３１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。  
【１１３６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列を含み、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１３７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６に記載される核酸配列を含む。
【１１３８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８、１１２、１１４、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１３９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４及び１４８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２、９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６、１０８又は１１２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１４２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号９８、１０２、１０４、１０６又は１０８からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。      
【１１４３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号５７〜７２からなる群より選択される核酸配列からなり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１４４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２に記載される核酸配列と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１４５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列を含む。
【１１４６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７０〜７２からなる群より選択される核酸配列からなる。
【１１４７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号１４６からなる。
【１１４８】
本発明の別の態様によれば、
１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まないＰＤ１アミノ酸配列であるか；又は１３８〜１４５アミノ酸長であり、配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６−Ｖ１５０を含まないＰＤ１アミノ酸配列であって；所望により配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含む、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、
１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するか；１７０〜１９７アミノ酸長であり、配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８−Ｅ２０５を含まないか；又は、１７０〜１８２アミノ酸長であり、配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有し、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１−Ｅ２３を含まない４−１ＢＢＬアミノ酸配列であって；所望により前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む、上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、
をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１４９】
本発明の別の態様によれば、１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まず；所望により配列番号２の９３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含む、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１５０】
本発明の代替的又は追加的態様によれば、１２３〜１４８アミノ酸長であり、配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１−Ｌ５及びＦ１４６−Ｖ１５０のいずれも含まない、上述のＰＤ１アミノ酸配列のいずれか；又は、１８５〜２０２アミノ酸長であり、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する、上述の４−１ＢＢＬアミノ酸配列のいずれか、をコードする核酸配列を含む単離ポリヌクレオチドが提供される。
【１１５１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。    
【１１５４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１５５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０を含む。ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【１１５６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、１１６、１１８又は１２０からなる。
【１１５７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４、３５、７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【１１５８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１５９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。  
【１１６０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６を含む。
【１１６１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号７４、７６、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４又は９６からなる。
【１１６２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１６４】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５を含む。
【１１６５】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３２、３３、３４又は３５からなる。
【１１６６】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６７】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２に記載の核酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％相同であり、それぞれの選択肢は本発明の別個の実施形態を表す。
【１１６８】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１６９】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２に記載の核酸配列と少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％相同である。
【１１７０】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２を含む。
【１１７１】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２を含む。
【１１７２】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１、４２、１２６、１２８、１３０又は１３２からなる。
【１１７３】
ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチドは配列番号３９、４０、４１又は４２からなる。
【１１７４】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、単離され、ＲＮＡ配列、相補的ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノムポリヌクレオチド配列、及び／又は複合ポリヌクレオチド配列（例えば、上記の組み合わせ）の形態で提供される一本鎖又は二本鎖核酸配列を指す。
【１１７５】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド及び核酸配列のいずれも、保存的核酸置換を含み得る。保存的に修飾されたポリヌクレオチドとは、同一又は本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指し、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合は、実質的に同一又は関連する（例えば、天然において近接する）核酸を指す。遺伝暗号の縮重のため、機能的に同一の多数の核酸がほとんどのタンパク質をコードしている。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードしている。したがって、コドンがアラニンを指定する全ての位置で、コードされているポリペプチドを変化させることなく、コドンを上記対応する別のコドンに変化させることができる。このような核酸変化は「サイレントバリエーション」であり、これは保存的に修飾されたポリヌクレオチドの一種である。ある具体的な実施形態によれば、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドをコードする本明細書に記載の任意の核酸配列は、核酸のサイレントバリエーションも記載している。当業者は、ある状況下では、核酸内の各コドン（通常メチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一な分子を得られることを認識していると考えられる。したがって、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのサイレントバリエーションは、発現産物に対して記載される各配列に黙示的に含まれる。
【１１７６】
哺乳動物細胞において外因性ポリペプチドを発現させるために、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、哺乳動物細胞の発現に適した核酸構築物に連結することが好ましい。かかる核酸構築物は、構成的又は誘導的な方法で細胞内の前記ポリヌクレオチド配列の転写を指示するためのプロモーター配列を含む。
【１１７７】
よって、ある具体的な実施形態によれば、前記ポリヌクレオチド及び宿主細胞における前記ポリヌクレオチドの発現を指示するための調節エレメントを含む核酸構築物が提供される。
【１１７８】
ある具体的な実施形態によれば、前記調節エレメントは異種の調節エレメントである。
【１１７９】
本発明のいくつかの実施形態における前記核酸構築物（本明細書では「発現ベクター」とも称される）は、このベクターを原核生物、真核生物、又は好ましくは両方における複製及び組み込みに適したもの（例えば、シャトルベクター）にする追加の配列を含む。さらに、典型的なクローニングベクターはまた、転写及び翻訳開始配列、転写及び翻訳ターミネーター、並びにポリアデニル化シグナルを含み得る。例として、かかる構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起源、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含むであろう。
【１１８０】
本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物は、典型的には、それが配置される宿主細胞からペプチドを分泌するためのシグナル配列を含む。好ましくは、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドバリアントのシグナル配列である。
【１１８１】
真核生物のプロモーターには通常、ＴＡＴＡボックス及び上流のプロモーター要素の２種類の認識配列が含まれている。転写開始部位の２５〜３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼにＲＮＡ合成を開始するように指示することに関与していると考えられている。他の上流プロモーター要素は、転写が開始される速度を決定する。
【１１８２】
好ましくは、本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物によって利用されるプロモーターは、形質転換された特定の細胞集団において活性を有する。細胞型特異的及び／又は組織特異的プロモーターの例には、肝臓特異的なアルブミンなどのプロモーター［Ｐｉｎｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １：２６８−２７７］やリンパ球特異的プロモーター［Ｃａｌａｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４３：２３５−２７５］などのプロモーター、特にＴ細胞受容体のプロモーター［Ｗｉｎｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ８：７２９−７３３］及び免疫グロブリン［Ｂａｎｅｒｊｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）  Ｃｅｌｌ  ３３７２９−７４０］、ニューロフィラメントプロモーターなどのニューロン特異的プロモーター［Ｂｙｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：５４７３−５４７７］、膵臓特異的プロモーター［Ｅｄｌｕｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９１２−９１６］、又はミルクホエイプロモーターなどの乳腺特異的プロモーター（米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州出願公開第２６４，１６６号）が含まれる。
【１１８３】
エンハンサー要素は、連結された同種又は異種のプロモーターから最大１，０００倍の転写を刺激することができる。エンハンサーは、転写開始部位の下流又は上流に配置されると活性を示す。ウイルスに由来する多くのエンハンサー要素は、宿主範囲が広く、様々な組織で活性を示す。例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーは多くの細胞型に適している。本発明のいくつかの実施形態に適した他のエンハンサー／プロモーターの組み合わせには、ポリオーマウイルス；ヒト又はマウスのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；マウス白血病ウイルス、マウス又はラウス肉腫ウイルス及びＨＩＶなどの様々なレトロウイルスからの長末端反復、に由来するものが含まれる。参照により本明細書に援用されるＥｎｈａｎｃｅｒｓ  ａｎｄ  Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  １９８３を参照のこと。
【１１８４】
発現ベクターの構築において、前記プロモーターは好ましくは、異種転写開始部位からの距離が、前記プロモーターの天然の設定における転写開始部位からの距離とほぼ同じとなる位置に、配される。しかしながら、当技術分野で公知のように、この距離が多少変動しても、プロモーター機能を失うことなく適応できる。
【１１８５】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬ、ＰＤ１、又は４−１ＢＢＬのｍＲＮＡ翻訳の効率を高めるために、ポリアデニル化配列を発現ベクターに加えることもできる。正確で効率的なポリアデニル化には、ポリアデニル化部位の下流に位置するＧＵリッチ又はＵリッチな配列、及び１１〜３０ヌクレオチド上流に位置する６ヌクレオチドの高度に保存された配列ＡＡＵＡＡＡ、の２つの異なる配列要素が必要である。本発明のいくつかの実施形態に適した終結シグナル及びポリアデニル化シグナルには、ＳＶ４０に由来するものが含まれる。
【１１８６】
既述の要素に加えて、本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、典型的には、クローニングされた核酸の発現レベルを増加させること又は組換えＤＮＡを担持する細胞の同定を容易にすることを目的とする、他の特殊な要素を含み得る。例えば、多くの動物ウイルスには、許容細胞型でウイルスゲノムの染色体外複製を促進するＤＮＡ配列が含まれている。これらのウイルスレプリコンを保有するプラスミドは、プラスミド上に保持されている遺伝子又は宿主細胞のゲノムに存在する遺伝子により適切な因子が提供されている限り、エピソーマルに複製される。
【１１８７】
ベクターは真核生物のレプリコンを含む場合と含まない場合がある。真核生物のレプリコンが存在する場合、ベクターは適切な選択マーカーを使用して真核生物の細胞で増幅可能である。ベクターが真核生物のレプリコンを含まない場合、エピソーマル増幅は不可能である。代わりに、組換えＤＮＡは改変細胞のゲノムに組み込まれ、ここでプロモーターが目的の核酸の発現を指示する。
【１１８８】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、例えば、内部リボソーム侵入部位（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ、ＩＲＥＳ）やプロモーターにキメラなポリペプチドのゲノム組み込みのための配列など、単一のｍＲＮＡからのいくつかのタンパク質の翻訳などを可能にする、追加のポリヌクレオチド配列をさらに含み得る。
【１１８９】
発現ベクターに含まれる個々の要素は、様々な構成で配置することができることが理解されよう。例えば、エンハンサー要素、プロモーターなど、及びＰＤ１−４−１ＢＢＬをコードするポリヌクレオチド配列、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチドでさえ、「同方向の連結（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）」構成の配置とすることが可能であり、逆相補鎖（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）として、又は相補的構成で逆平行鎖としても存在し得る。このような多様な構成は、発現ベクターの非コード要素で発生する可能性が高いが、発現ベクター内のコード配列の代替構成も想定されている。
【１１９０】
哺乳類の発現ベクターの例には、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／−）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、及びｐＮＭＴ８１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能）、ｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能）、ｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ−ＲＳＶ、及びｐＢＫ−ＣＭＶ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社から入手可能）、ｐＴＲＥＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から入手可能）、及びそれらの派生物が含まれるが、これらに限定されない。
【１１９１】
レトロウイルスなどの真核生物ウイルスからの調節エレメントを含む発現ベクターも使用され得る。ＳＶ４０ベクターにはｐＳＶＴ７及びｐＭＴ２が含まれる。ウシパピローマウイルスに由来するベクターにはｐＢＶ−１ＭＴＨＡが含まれ、エプスタイン・バール・ウイルスに由来するベクターにはｐＨＥＢＯ及びｐ２Ｏ５が含まれる。他の例示的なベクターには、ｐＭＳＧ；ｐＡＶ００９／Ａ＋；ｐＭＴＯ１０／Ａ＋；ｐＭＡＭｎｅｏ−５；バキュロウイルスｐＤＳＶＥ；及び、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ−４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳がんウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、又は真核細胞での発現に有効であることが示された他のプロモーターの指示の下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが含まれる。
【１１９２】
上記のように、ウイルスは、多くの場合、宿主の防御機構を回避するために進化してきた、非常に専門化された感染性病原体である。通常、ウイルスは特定の細胞型に感染して増殖する。ウイルスベクターの標的化特異性は、その元来の特異性を利用して、所定の細胞型を特異的に標的化し、それにより感染細胞に組換え遺伝子を導入する。したがって、本発明のいくつかの実施形態によって使用されるベクターの種類は、形質転換される細胞型に依存するであろう。形質転換される細胞型に従って適切なベクターを選択する能力は、当業者の能力の範囲内であり、したがって、選択の考慮事項の一般的な説明は本明細書では提供されない。例えば、Ｌｉａｎｇ  ＣＹ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４  （Ａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ．  １４９：  ５１−６０）に記載されるように、骨髄細胞はヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）を使用して標的化でき、腎臓細胞はバキュロウイルスであるＡｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ  ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ、ＡｃＭＮＰＶ）に存在する異種プロモーターを使用して標的化できる。
【１１９３】
組換えウイルスベクターは、水平感染や標的特異性などの利点を提供することから、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ、ＰＤ１、又は４−１ＢＢＬのインビボ発現に有用である。水平感染は、例えばレトロウイルスのライフサイクルに固有のものであり、単一の感染細胞が発芽して隣接細胞に感染する多くの子孫ビリオンを生成するプロセスである。その結果、そのほとんどが最初は元のウイルス粒子に感染していなかった広い領域が、急速に感染する。これは、感染性病原体が娘の子孫を通してのみ広がる垂直型の感染とは対照的である。水平方向に広がることができないウイルスベクターも生成され得る。この特性は、特定の遺伝子を局所的な数の標的細胞にのみ導入することが望ましい目的である場合に有用である。
【１１９４】
本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターを細胞に導入するために、様々な方法を使用することができる。かかる方法は、概してＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９，  １９９２、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍｄ．（１９８９）、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，  Ｍｉｃｈ．（１９９５）、Ｖｅｇａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  Ｍｉｃｈ．（１９９５），  Ｖｅｃｔｏｒｓ：  Ａ  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅｓ，  Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，  Ｂｏｓｔｏｎ  Ｍａｓｓ．（１９８８）、及びＧｉｌｂｏａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４（６）：  ５０４−５１２，  １９８６］に記載されており、例えば、安定的又は一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、及び組換えウイルスベクターによる感染が含まれる。また、陽性−陰性選択方法については、米国特許第５，４６４，７６４号及び第５，４８７，９９２号を参照のこと。
【１１９５】
ウイルス感染による核酸の導入は、ウイルスの感染性により高いトランスフェクション効率が得られるため、リポフェクションやエレクトロポレーションなどの他の方法に比べていくつかの利点がある。
【１１９６】
現在好ましいインビボ核酸導入技術には、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスＩウイルス、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などのウイルス又は非ウイルス構築物及び脂質ベースの系によるトランスフェクションが含まれる。脂質を介した遺伝子の伝達に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、及びＤＣ−Ｃｈｏｌである［Ｔｏｎｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，  １４（１）：  ５４−６５（１９９６）］。遺伝子治療で使用するための最も好ましい構築物は、ウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、又はレトロウイルスである。レトロウイルス構築物などのウイルス構築物は、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサー又は遺伝子座定義要素、又は選択的スプライシング、核ＲＮＡ輸出、若しくはメッセンジャー翻訳後修飾などの他の手段によって遺伝子発現を制御する他の要素を含む。このようなベクター構築物には、パッケージングシグナル、長末端反復（ＬＴＲ）又はその一部、及びウイルス構築物に既に存在しない限り、使用するウイルスに適したプラス鎖及びマイナス鎖プライマー結合部位も含まれる。さらに、かかる構築物は、典型的には、それが配置されている宿主細胞からのペプチドの分泌のためのシグナル配列を含む。好ましくは、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドバリアントのシグナル配列である。所望により、構築物はまた、ポリアデニル化を指示するシグナル、並びに１又は複数の制限部位及び翻訳終結配列を含み得る。例として、かかる構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起源、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含むであろう。カチオン性脂質、ポリリジン、デンドリマーなど、他の非ウイルス性であるベクターを使用してもよい。
【１１９７】
前述のように、挿入されたコード配列の転写及び翻訳に必要な要素を含む以外に、本発明のいくつかの実施形態の発現構築物は、発現ペプチドの安定性、産生、精製、収量、又は毒性を増強するように設計された配列も含み得る。例えば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドと異種タンパク質とを含む、融合タンパク質又は切断可能な融合タンパク質の発現を設計することができる。かかる融合タンパク質は、例えば異種タンパク質に特異的なカラムへの固定化による、アフィニティークロマトグラフィーによって、融合タンパク質が容易に単離され得るようにデザインすることができる。ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又は発明のいくつかの実施形態のポリペプチドと異種タンパク質との間で切断部位が設計される場合、前記ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質又はポリペプチドは、切断部位を破壊する適切な酵素又は薬剤で処理することにより、クロマトグラフィーカラムから放出され得る［例えば、Ｂｏｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １９：６５−７０；及びＧａｒｄｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：１５８５４−１５８５９を参照］。
【１１９８】
本発明はまた、本明細書に記載の組成物を含む細胞を企図する。
【１１９９】
したがって、ある具体的な実施形態によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、本明細書に開示されるＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド及び／又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、又はそれをコードする核酸構築物を含む、宿主細胞が提供される。
【１２００】
上記のように、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現するための宿主発現系としては、様々な原核生物又は真核生物の細胞を使用しうる。これらには、コード配列を含む、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物；コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染した、又はコード配列を含むＴｉプラスミドなどの組換えプラスミド発現ベクターで形質転換された植物細胞系が含まれるが、これらに限定されない。哺乳動物発現系を使用して、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドを発現させてもよい。
【１２０１】
細菌性構築物の例には、大腸菌発現ベクターのｐＥＴシリーズが含まれる（Ｓｔｕｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８５：６０−８９）。
【１２０２】
本発明の教示と共に使用され得る真核細胞の例には、哺乳動物細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、藻類細胞、又は植物細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【１２０３】
酵母では、米国特許出願第５，９３２，４４７号に開示されているように、構成的又は誘導性のプロモーターを含む多くのベクターを使用することができる。あるいは、酵母染色体への外来ＤＮＡ配列の組み込みを促進するベクターを使用してもよい。
【１２０４】
植物発現ベクターが使用される場合、コード配列の発現は、いくつかのプロモーターによって駆動され得る。例えば、ＣａＭＶの３５Ｓ  ＲＮＡ及び１９Ｓ  ＲＮＡプロモーターなどのウイルスプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：５１１−５１４］又はＴＭＶへのコートタンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ６：３０７−３１１］が使用され得る。あるいは、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットなどの植物プロモーター［Ｃｏｒｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ３：１６７１−１６８０、及びＢｒｏｇｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：８３８−８４３］又はヒートショックプロモーター、例えば、大豆ｈｓｐ１７．５−Ｅ又はｈｓｐ１７．３−Ｂ［Ｇｕｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ６：５５９−５６５］が使用され得る。これらの構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、及び当業者に周知の他の技術を使用して植物細胞に導入され得る。例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ  ＆  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，  １９８８，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ，  Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＶＩＩＩ，  ｐｐ  ４２１−４６３を参照。
【１２０５】
当技術分野で周知の昆虫及び哺乳動物宿主細胞系などの他の発現系もまた、本発明のいくつかの実施形態によって使用され得る。
【１２０６】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞は哺乳動物細胞である。
【１２０７】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞はヒト細胞である。
【１２０８】
ある具体的な実施形態によれば、前記細胞は細胞株（cell line）である。
【１２０９】
別の具体的な実施形態によれば、前記細胞は初代培養細胞（primary cell）である。
【１２１０】
細胞は、血液、筋肉、神経、脳、心臓、肺、肝臓、膵臓、脾臓、胸腺、食道、胃、腸、腎臓、精巣、卵巣、髪、皮膚、骨、乳房、子宮、膀胱、脊髄、又は様々な種類の体液を含むがこれらに限定されない適切な組織に由来し得る。前記細胞は、胚、胎児、及び成体の段階を含む任意の発達段階、並びに発達起源、すなわち、外胚葉、中胚葉、及び内胚葉起源に由来し得る。
【１２１１】
哺乳動物細胞の非限定的な例には、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ、例えば、ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）、ヒト胎児腎臓細胞株（ＨＥＫ２９３、又は浮遊培養における増殖のためにサブクローニングされたＨＥＫ２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，  ３６：５９  １９７７）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．，  ２３：２４３−２５１  １９８０）、サル腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ３８３：４４−６８  １９８２）、ＭＲＣ  ５細胞、ＦＳ４細胞、並びにヒト肝細胞がん細胞株（Ｈｅｐ  Ｇ２）、ＰＥＲ．Ｃ６、Ｋ５６２、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）が含まれる。
【１２１２】
本発明のいくつかの実施形態によれば、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、ＨＴ１０８０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＢＨＫ、Ｎａｍａｌｗａ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ細胞、及びＶｅｒｏ細胞からなる群より選択される。
【１２１３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、及び２９３（例えば、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）細胞を含む。
【１２１４】
本発明の別の態様によれば、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチドを産生する方法であって、本明細書に記載のポリヌクレオチド又は核酸構築物を宿主細胞で発現させることを含む、前記方法が提供される。
【１２１５】
ある具体的な実施形態によれば、前記方法は、融合タンパク質又はポリペプチドを単離することを含む。
【１２１６】
ある具体的な実施形態によれば、前記組換えポリペプチドの回収は、適切な培養期間の後に行われる。「組換えポリペプチドを回収する」という句は、ポリペプチドを含む発酵培地全体を回収することを指し、分離又は精製の追加のステップを意味しなくてもよい。しかしながら、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、コンカナバリンＡクロマトグラフィー、ミックスモードクロマトグラフィー、金属アフィニティークロマトグラフィー、レクチンアフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、及び示差可溶化（differential solubilization）などであるがこれらに限定されない、様々な標準タンパク質精製技術を使用して精製されてもよい。
【１２１７】
ある具体的な実施形態によれば、合成及び精製に続いて、ペプチドの治療効果をインビボ又はインビトロのいずれかでアッセイすることができる。かかる方法は当技術分野で公知であり、例えば、細胞生存率、トランスジェニックマウスの生存、及び活性化マーカーの発現が含まれる。
【１２１８】
本発明のいくつかの実施形態の組成物（例えば、本明細書に開示されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、又は４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、それをコードする核酸構築物、及び／又は細胞）は、それ自体で、又は適切な担体若しくは添加剤と混合される医薬組成物で生物に投与され得る。
【１２１９】
したがって、本発明は、いくつかの実施形態において、治療有効量の本明細書に開示される組成物を含む医薬組成物を特徴とする。
【１２２０】
本明細書において、「有効成分」という用語は、生物学的効果の原因となる組成物（例えば、本明細書に記載のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、ＰＤ１アミノ酸配列を含むポリペプチド、４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又は細胞）を指す。
【１２２１】
本明細書において、「添加剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」という用語は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。添加剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び各種デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及びポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。
【１２２２】
以下、互換的に使用され得る「生理学的に許容される担体」及び「医薬的に許容される担体」という句は、生物に重大な刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性及び特性を無効にしない担体又は希釈剤を指す。これらの句にはアジュバントが含まれる。
【１２２３】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される担体」には、生理学的に適合性のある全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸収遅延剤などが含まれる。好ましくは、前記担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に適している。投与経路に応じて、本明細書に記載の活性化合物、すなわち、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又は細胞は、１又は複数の医薬的に許容される塩を含み得る。「医薬的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効果を与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，  Ｓ．  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６：  １−１９を参照のこと）。かかる塩の例には、酸付加塩及び塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リンなどの非毒性無機酸に由来するもの、並びに脂肪族モノカルボン酸及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属、並びにＮ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが含まれる。
【１２２４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物はまた、医薬的に許容される抗酸化剤を含み得る。医薬的に許容される抗酸化剤の例は、以下を含む：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤。本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物はまた、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）及び可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート−８０））、防腐剤（例えば、チメルソル、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、ラクトース、マンニトール）などの添加剤を含み得る。
【１２２５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物に使用され得る適切な水性及び非水性の担体の例には、水；様々な緩衝液含有量（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の緩衝生理食塩水；エタノール；ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）；及びそれらの適切な混合物；オリーブ油などの植物油；並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。
【１２２６】
適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持、及び界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）の使用によって維持することができる。
【１２２７】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含み得る。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順によって、並びに様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にされ得る。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含めることも望ましい場合がある。さらに、注射可能な剤形の長期吸収（prolonged absorption）は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅らせる薬剤を含めることによってもたらされ得る。
【１２２８】
医薬的に許容される担体には、無菌の注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の粉末が含まれる。医薬的に活性な物質のためのかかる媒体及び剤の使用は、当技術分野で公知である。従来の媒体又は剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の少なくともいくつかの実施形態による医薬組成物におけるそれらの使用が企図される。補足的な活性化合物もまた、前記組成物に組み込まれうる。
【１２２９】
治療用組成物は、通常、製造及び保管の条件下で無菌かつ安定でなければならない。前記組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序立った構成（ordered structure）として処方されうる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒子サイズの維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、又は塩化ナトリウムを前記組成物に含めることが好ましいであろう。注射可能な前記組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアレート塩及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらされ得る。無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて、上記に列挙された成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒に必要な量の活性化合物を組み込み、続いて滅菌精密濾過することによって調製され得る。通常、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これにより、有効成分に加えて、予め滅菌濾過された溶液から任意の追加の望ましい成分の粉末が得られる。
【１２３０】
無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて、上記に列挙された成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒に必要な量の活性化合物を組み込み、続いて滅菌精密濾過することによって調製され得る。通常、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上記に列挙されたものから必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、これにより、有効成分に加えて、予め滅菌濾過された溶液から任意の追加の望ましい成分の粉末が得られる。
【１２３１】
担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる有効成分の量は、治療される対象、及び個別の投与様式に応じて変化するであろう。担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成することができる有効成分の量は、通常、治療効果を生成する組成物の量である。概して、１００％のうち、この量は、医薬的に許容される担体と組み合わせた、約０．０１％〜約９９％の有効成分、好ましくは約０．１％〜約７０％の有効成分、最も好ましくは約１％〜約３０％の有効成分の範囲内である。
【１２３２】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスが投与されてよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が、治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少又は増加されてもよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態（dosage unit form）は、治療される対象への単一投与量として適した物理的個別単位（physically discrete units）を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態による投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき個別の治療効果、及び（ｂ）個人の感受性の処置のためにかかる活性化合物を配合する当技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【１２３３】
薬物の製剤化及び投与のための技術は、参照により本明細書に援用される「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ）（最新版）に記載されている。
【１２３４】
本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当技術分野で周知のプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、磨り潰し（levigate)、乳化、カプセル化、捕捉、又は凍結乾燥プロセスによって製造され得る。
【１２３５】
本発明の組成物は、当技術分野で公知の様々な方法の１又は複数を使用して、１又は複数の投与経路を介して投与され得る。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／又は様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療剤の好ましい投与経路には、例えば、血管内送達（例えば、注射又は注入）；静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、経口、経腸、直腸、肺（例えば、吸入）、鼻、局所（経皮、頬側、及び舌下を含む）、膀胱内、硝子体内、腹腔内、膣、脳への送達（例えば、脳室内、脳内、及び対流により増強される拡散（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ））；中枢神経系（ＣＮＳ）送達（例えば、くも膜下腔内、脊髄周囲、及び脊髄内）；非経口（皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、及び皮内を含む）、経皮（受動的に又はイオントフォレーシス若しくはエレクトロポレーションを使用）、経粘膜（例えば、舌下投与、鼻、膣、直腸、又は舌下）投与；インプラントによる投与；又は他の非経口投与経路(例えば注射又は注入による）；又は当技術分野で公知の他の送達経路及び／又は投与形態が含まれる。本明細書で使用される「非経口投与」という句は、通常は注射による、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、被膜内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下（ｓｕｂｃａｐｓｕｌａｒ）、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入、又は生体侵食性インサートを使用することを含むがこれらに限定されず、各投与経路に適した剤形で処方することができる。ある具体的な実施形態では、本発明の少なくともいくつかの実施形態によるタンパク質、治療剤、又は医薬組成物は、腹腔内又は静脈内に投与され得る。
【１２３６】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物は、非経口注射によって水溶液中で投与される。前記製剤は、懸濁液又は乳濁液の形態であってもよい。通常、非経口注射用の医薬組成物は、有効量の本明細書に記載の組成物を含み、所望により、医薬的に許容される希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／又は担体を含む。かかる組成物は、所望により、希釈剤；滅菌水；様々な緩衝液含有量（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、及びイオン強度の緩衝生理食塩水；並びに、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）や可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート−８０））、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性酸化防止剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤）、防腐剤（例えば、チメルソル、ベンジルアルコール）、及び増量物質（例えば、乳糖、マンニトール）などの添加剤のうち１又は複数を含む。非水性溶媒又はビヒクルの例は、エタノール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；オリーブ油、及びコーン油などの植物油；ゼラチン；並びにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。前記製剤はフリーズドライ（凍結乾燥）又は真空乾燥されていてよく、使用直前に及び再溶解／再懸濁され得る。前記製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、滅菌剤を前記組成物に組み込むことによって、前記組成物を照射することによって、又は前記組成物を加熱することによって、滅菌することができる。
【１２３７】
本明細書に開示される様々な組成物（例えば、ポリペプチド）は、局所的に適用され得る。局所投与は、ほとんどのペプチド製剤ではうまく機能しないが、肺、鼻、経口（舌下、頬側）、膣、又は直腸粘膜に適用した場合に特に効果的でありうる。
【１２３８】
本発明の組成物は、空気力学的直径が約５ミクロン未満のエアロゾル又は噴霧乾燥粒子のいずれかとして送達される場合、吸入しながら肺に送達され、肺上皮内層を横切って血流に移動することが可能である。ネブライザー、定量吸入器、及び粉末吸入器を含むがこれらに限定されない、治療用製品の肺送達用に設計された広範囲の機械的デバイスを使用可能であり、これらは全て当業者に周知である。市販のデバイスのいくつかの具体例は、ＵｌｔｒａＶｅｎｔネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、ミズーリ州セントルイス）、Ａｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、コロラド州イングルウッド）、Ｖｅｎｔｏｌｉｎ定量吸入器（Ｇｌａｘｏ社、ノースカロライナ州リサーチ・トライアングル・パーク）、及びＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．社、マサチューセッツ州ベッドフォード）である。Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社、Ａｌｋｅｒｍｅｓ社、及びＭａｎｎｋｉｎｄ社は全て、承認済であるか又は臨床試験の段階にある吸入可能なインスリン粉末製剤を有しており、本明細書に記載の製剤に技術を適用できる可能性がある。
【１２３９】
粘膜に投与するための製剤は、通常、噴霧乾燥された薬物粒子であり、これは、錠剤、ゲル、カプセル、懸濁液、又は乳濁液に組み込まれ得る。標準的な医薬品添加剤は、任意の製剤業者（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒ）からも入手可能である。経口製剤は、チューインガム、ゲルストリップ、錠剤、又はトローチ（ｌｏｚｅｎｇｅ）の形態であり得る。
【１２４０】
経皮製剤を調製することもできる。これらは通常、軟膏、ローション、スプレー、又はパッチであり、これらはすべて標準的な技術を使用して調製できる。経皮製剤には、浸透促進剤を含める必要がある。本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者に有毒とならずに、個別の患者、組成物、及び投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分の量を得るように変更可能である。選択される投与量レベルは、様々な薬物動態学的要因に依存し、それらには、採用される本発明の個々の組成物の活性；投与経路；投与時間；使用されている個別の化合物の排泄速度；治療期間；採用される個々の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／又は材料；治療を受けている患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態、既往歴；並びに医療分野で周知の同様の要因が含まれる。
【１２４１】
ある具体的な実施形態によれば、本明細書に開示される組成物は、治療有効量で対象に投与される。本明細書で使用される場合、「有効量」又は「治療有効量」という用語は、治療される障害の１又は複数の症状を治療、阻害、又は軽減するのに十分な、又はその他の方法で所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を提供するのに十分な用量を意味する。正確な投与量は、対象によって決定される変数（例えば、年齢、免疫系の健康など）、疾患、及び実施される治療などの様々な要因によって異なる。本明細書に開示されるポリペプチド組成物、それをコードするポリヌクレオチド及び核酸構築物、並びに本明細書に記載される細胞の場合、さらなる研究が行われるにつれて、様々な患者の様々な状態の治療のための適切な投与量レベルに関する情報が明らかになり、当業者は、被治療者の治療状況、年齢、及び全身健康状態を考慮して、適切な投与量を確認することができるであろう。選択される投与量は、所望の治療効果、投与経路、及び所望の治療の期間によって決定される。ポリペプチド組成物の場合、一般に、一日０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量レベルが哺乳動物に投与され、より普通には０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇである。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンは、週５回、週４回、週３回、週２回、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３か月に１回、又は３〜６か月に１回の投与を伴う。一般的に、静脈内注射又は注入の場合、投与量は少なくなりうる。投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単一のボーラスが投与されてよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が、治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少又は増加されてもよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態（dosage unit form）は、治療される対象への単一投与量として適した物理的個別単位（physically discrete units）を指す。各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生み出すように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態による投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき個別の治療効果、及び（ｂ）個人の感受性の処置のためにかかる活性化合物を配合する当技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【１２４２】
場合により、前記ポリペプチド製剤は、任意の適切な投与タイミングレジメンに従って、０．０００１〜１００ｍｇ／患者の体重（ｋｇ）／日の間の量、好ましくは０．００１〜２０．０ｍｇ／ｋｇ／日の間の量で投与され得る。本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療組成物は、例えば、１日３回、１日２回、１日１回、週３回、週２回、週１回、又は２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間若しくは８週間ごとに１回、投与され得る。さらに、前記組成物は、短期間又は長期間（例えば、１週間、１ヶ月、１年、５年）にわたって投与され得る。
【１２４３】
あるいは、本明細書に開示される組成物は、徐放性製剤として投与することができ、その場合、必要とされる投与の頻度はより少ない。投与量と頻度は、患者における治療剤の半減期によって異なる。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、次にヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。融合タンパク質の半減期は大きく異なり得る。投与量及び投与頻度は、治療が予防的（prophylactic）であるか治療的（therapeutic）であるかによって異なり得る。予防的用途では、比較的低用量が、長期間にわたって、比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は生涯治療を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が低減又は終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的又は完全な改善を示すまで、比較的短い間隔で比較的高い投与量が必要とされる場合がある。その後、患者に予防的投与レジメンで投与してもよい。
【１２４４】
ある実施形態において、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、核酸構築物、又は細胞組成物は、例えば、治療される部位に直接注射することによって、局所的に投与される。典型的には、注射は、全身投与によって達成され得る濃度よりも高い、組成物の局所濃度の増加を引き起こす。治療される部位からのポリペプチドの受動拡散を低減することによって、ポリペプチド組成物の局所濃度の増加を作り出すのを助けるために、前記ポリペプチド組成物は、上記のようにマトリックスと組み合わせることができる。
【１２４５】
本発明の医薬組成物は、当技術分野で公知の医療デバイスと共に投与してもよい。例えば、所望による実施形態では、本発明のいくつかの実施形態による医薬組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、又は第４，５９６，５５６号に開示されるデバイスなどの針皮下注射デバイスを用いて投与され得る。本発明において有用な周知のインプラント及びモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号に開示される制御された速度で薬剤を分配するための埋め込み型マイクロ注入ポンプ、米国特許第４，４８６，１９４号に開示される皮膚を通して薬剤を投与するための治療デバイス、米国特許第４，４４７，２３３号に開示される正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプ、米国特許第４，４４７，２２４号に開示される連続薬物送達のための可変流量埋め込み型注入装置、米国特許第４，４３９，１９６号に開示されるマルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧ドラッグデリバリーシステム、及び米国特許第４，４７５，１９６号に開示される浸透圧ドラッグデリバリーシステムが含まれる。これらの特許は、参照により本明細書に援用される。他の多くのこのようなインプラント、送達システム、及びモジュールは、当業者に公知である。
【１２４６】
前記活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、急速放出に抗して化合物を保護する担体を用いて調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用しうる。かかる製剤を調製するための多くの方法は、特許とされているか、又は一般に当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照のこと。
【１２４７】
制御放出ポリマーデバイスは、ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスク）又は注射（微粒子）を移植し、続いて全身に長期放出を行うために作製されうる。マトリックスは、ペプチドが固体ポリマーマトリックス又はマイクロカプセル内に分散され、コアがポリマーシェルとは異なる材料であり、ペプチドが、元来液体でも固体でもよいコアに分散又は懸濁されている、ミクロスフェアなどの微粒子の形態であってもよい。本明細書で特に定義されていない限り、微粒子、ミクロスフェア、及びマイクロカプセルは互換的に使用される。あるいは、ポリマーは、数ナノメートル〜４センチメートルの範囲内の薄いスラブ又はフィルムとして成型されてもよく、粉砕又は他の標準的な技術によって生成される粉末であってもよく、あるいはヒドロゲルなどのゲルであってもよい。
【１２４８】
非生分解性又は生分解性マトリックスのいずれかを、本明細書に開示される活性剤の送達に使用することができるが、生分解性マトリックスが好ましい。これらは天然又は合成ポリマーであり得るが、分解及び放出プロファイルのより良い特徴付けのために合成ポリマーが好ましい。ポリマーは、放出が望まれる期間に基づいて選択される。線形放出が最も有用な場合もあれば、パルス放出又は「バルク放出」がより効果的な結果を提供する場合もある。ポリマーは、ヒドロゲルの形態（典型的には、最大約９０重量％の水を吸収している）であってもよく、場合により、多価イオン又は多価ポリマーで架橋されていてもよい。
【１２４９】
マトリックスは、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出、及び当業者に公知の他の方法によって形成され得る。生体侵食性ミクロスフェアは、例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ５：１３−２２（１９８７）；  Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ６：２７５−２８３（１９８７）；及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｐｐｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ＳｃＬ，  ３５：７５５−７７４（１９８８）によって記載されているように、薬物送達のためのミクロスフェアを作製するために開発された方法のいずれかを使用して調製することができる。
【１２５０】
前記デバイスは、移植又は注射の領域を治療するための局所放出（通常、全身の治療のための投与量よりもはるかに少ない投与量を送達する）又は全身送達用に製剤化され得る。これらは、皮下、筋肉、脂肪に移植又は注射されるか、嚥下されてもよい。
【１２５１】
ある実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態による治療化合物が（必要に応じて）ＢＢＢを通過することを確実にするために、それらは、例えば、リポソーム中に製剤化され得る。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号、及び第５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞又は器官に選択的に輸送されて、標的化された薬物送達を増強する、１又は複数の部分を含み得る（例えば、Ｖ．  Ｖ．  Ｒａｎａｄｅ（１９８９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９：６８５を参照のこと）。例示的な標的化部分として、葉酸又はビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号〜Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．を参照のこと）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １５３：１０３８）、抗体（Ｐ．  Ｇ．  Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５７：１４０；  Ｍ．  Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ３９：１８０）、サーファクタントプロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ａｍ．  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １２３３：１３４）、ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：９０９０）が挙げられる。Ｋ．  Ｋｅｉｎａｎｅｎ；  Ｍ．  Ｌ．  Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３４６：１２３；  Ｊ．  Ｊ．  Ｋｉｌｌｉｏｎ；  Ｉ．  Ｊ．  Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）  Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３についても参照のこと。
【１２５２】
本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、有効成分を含む１又は複数の単位剤形を含み得る、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）に承認されたキットなどのパック又はディスペンサーデバイスで提示され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属又はプラスチックの箔を含み得る。パック又はディスペンサーデバイスには、投与のためのインストラクションが添付され得る。パック又はディスペンサーは、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の容器に関連付けられた通知によって適応される場合もあり、この通知は、人又は動物投与用組成物の形態の機関による承認を反映している。このような通知は、例えば、処方薬についてアメリカ食品医薬品局によって承認されたラベル、又は承認された添付文書に関するものである場合がある。適合性のある医薬担体中に製剤化された本発明の調製物を含む組成物もまた、上記でさらに詳述されたように、調製され、適切な容器に入れられ、そして適応とされた状態の治療のためにラベルを付され得る。
【１２５３】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。
【１２５４】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語及びそれらの複合は、「含むがそれに限定されない」ことを意味する。
【１２５５】
「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」という用語は、「含み且つ限定される」ことを意味する。
【１２５６】
「本質的に〜からなる」という用語は、追加の成分、工程、及び／又は部分が請求の範囲の組成物、方法、又は構造の基本的及び新規の特性を実質的に（ｍａｔｅｒｉａｌｌｙ）変更しない場合に限り、組成物、方法、又は構造が追加の成分、工程、及び／又は部分を含み得ることを意味する。
【１２５７】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び定冠詞「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の参照を含む。例えば、「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」又は「少なくとも１つの化合物（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」という用語は、複数の化合物（それらの混合物を含む）を含み得る。
【１２５８】
本出願を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内の個々の数値だけでなく、全ての可能な部分的範囲を具体的に開示していると見なされるべきである。例えば、１〜６などの範囲の説明は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの部分的範囲並びにその範囲内の個々の数字（１、２、３、４、５、及び６など）を具体的に開示していると見なす必要がある。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【１２５９】
本明細書で数値範囲が示されるときは常に、示された範囲内の引用された数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の表示番号及び第２の表示番号の「間の範囲（に及んでいる）／範囲（に及ぶ）」という句、及び第１の表示番号「から」第２の表示番号「までの範囲（に及んでいる）／範囲（に及ぶ）」という句は、本明細書では互換的に使用され、１番目に示された数字及び２番目に示された数字並びにそれらの間の全ての分数と整数を含むことを意味する。
【１２６０】
本明細書で使用される場合、「方法」という用語は、所与の課題（タスク）を達成するための方法、手段、技術、及び手順を指し、化学、薬理学、生物学、生化学、及び医学の専門家に公知であるか、それらの専門家により公知の方法、手段、技術、及び手順から容易に開発される方法、手段、技術、及び手順を含むがこれらに限定されない。
【１２６１】
特定の配列表を参照する場合、かかる参照は、例えば、配列決定エラー、クローニングエラー、又は塩基置換、塩基欠失、若しくは塩基付加をもたらすその他の変化がもたらすマイナーな配列変異を含むものとして、その相補的配列に実質的に対応する配列も包含すると理解されるべきである。ただし、かかる変化の頻度は５０ヌクレオチドに１未満、あるいは１００ヌクレオチドに１未満、あるいは２００ヌクレオチドに１未満、あるいは５００ヌクレオチドに１未満、あるいは１０００ヌクレオチドに１未満、あるいは５，０００ヌクレオチドに１未満、あるいは１０，０００ヌクレオチドに１未満である。
【実施例】
【１２６２】
ここで、以下の実施例を参照する。これらの実施例は、上記の説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を非限定的な方法で示している。
【１２６３】
一般に、本明細書で使用される命名法及び本発明で利用される実験室手順は、分子、生化学、微生物学的及び組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は文献で充分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”（１９８９）；  Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｒ．Ｍ．、ｅｄ．“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ（１９９４）；  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；  Ｐｅｒｂａｌ、“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；  Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ） “Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”、Ｖｏｌｓ．１−４、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）；例えば米国特許第４，６６６，８２８号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０１，５３１号、同第５，１９２，６５９号、及び同第５，２７２，０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ、Ｊ．  Ｅ．、ｅｄ．  “Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”、Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ（１９９４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎ．Ｙ．“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  −  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”（１９９４）、Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ； “Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．  Ｅ．、ｅｄ．（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ）、“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ  （１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ  （ｅｄｓ）、“Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）；利用可能なイムノアッセイは特許及び科学文献に広範囲に記載されており、例えば  米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、同第４，０９８，８７６号、同第４，８７９，２１９号、同第５，０１１，７７１号、及び同第５，２８１，５２１号などを参照；Ｇａｉｔ、Ｍ．  Ｊ．、ｅｄ． “Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（１９８４）；Ｈａｍｅｓ、Ｂ．  Ｄ．、ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．  Ｊ．、ｅｄｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ”（１９８５）；Ｈａｍｅｓ、Ｂ．  Ｄ．、ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．、ｅｄｓ．“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”（１９８４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｒ．Ｉ．、ｅｄ．“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（１９８６）；“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ“ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ、Ｂ．、“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”（１９８４）及び“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ“  Ｖｏｌ．  １−３１７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ“、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ  （１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．、“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  −  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ“  ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照のこと。これらは全て、本明細書に完全に記載されているかのように参照として援用される。他の一般的な参考文献は、本明細書全体を通して提供される。その中の手順は、当該技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。本明細書に含まれる全ての情報は、本明細書中に参照として援用される。
【１２６４】
＜実施例１＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの選択
以下のパラメーターを最適化するために、本明細書で「ＤＳＰ１０５」と称される、Ｎ末端シグナルペプチド及びＨｉｓタグを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質（配列番号２６、図１）の構造分析を行った。
・  フォールディング…標的への結合を可能にする適切なフォールディング。潜在的なジスルフィドスクランブリングを最小限に抑える。
・  全体性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）…露出したタンパク質分解部位がない。
・  多量体化…２つのドメインの潜在的な多量体化を調査する。具体的には、Ｃ末端ドメイン形成の三量体化を最適化する。
・  哺乳類の発現系における高発現。
・  低い免疫原性。
【１２６５】
具体的には、ＰＤ１ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｑ１５１１６  細胞外ドメインの２１番目〜１７０番目のアミノ酸に対応、配列番号２）について：
１．  ＰＤＢ構造（３ＲＲＱ、５ＧＧＲ、５ＧＧＳ、５ＩＵＳ、５ＪＸＥ、４ＺＱＫ、５Ｂ８Ｃ、５ＷＴ９、及び１つのＮＭＲ構造２Ｍ２Ｄ）に基づいて包括的ＰＤ１モデルを生成した。上記のＰＤＢ構造に欠落しているＰＤ１のＣ末端部分（ＧＬＵ１５０から始まる、すなわちＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ、配列番号６）には、（ペプチドモデリングアルゴリズムによると）それ自体に折り畳まれると予想されるプロリンリッチセグメントが含まれる。
２．  ＰＲＯＳＰＥＲサーバーを使用して前記融合タンパク質のタンパク質分解部位を分析した。
【１２６６】
４−１ＢＢＬ（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ４１２７３  ＥＭドメインの５０番目〜２５４番目のアミノ酸に対応、配列番号３）について：
１．  ＰＤＢ構造（２Ｘ２９）に基づいて４−１ＢＢＬ細胞外（ＥＣ）ドメインモデルを生成した。このＰＤＢ構造では４−１ＢＢＬのＮ末端部分が欠落しており、Ｘ線で解像されなかったため、このセグメント（ＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤ、配列番号７）が、疎水性残基を溶媒に曝露し、その構造を予測しようとする試みが非構造化領域を示したと思われる。これにより、融合ＤＳＰ１０５の安定性が低下し、４−１ＢＢＬを介した三量体化の適切な配向が妨げられる可能性がある。
２．  ＰＲＯＳＰＥＲサーバーを使用して前記融合タンパク質のタンパク質分解部位を分析した。
３．  ４−１ＢＢＬの解像されたドメイン内の、溶媒に向かって外側に面しているループが検出された。これは、プロセシングを受けうる領域である可能性があることを意味する。
【１２６７】
図２Ａ〜図３及び以下の表３に、生成された３Ｄモデル、識別されたドメイン及びセグメント、並びにＤＳＰ１０５融合タンパク質の分析で検出された予測タンパク質分解部位を示す。
【１２６８】
総合すると、構造分析は下記事項を示した。
１．  ＰＤ１のＮ末端にある５残基のセグメント（ＰＧＷＦＬ、配列番号８）は、その性質上主に疎水性であり、ＰＤＬ１の認識に必要ではなく、構造化されたドメインの外側に広がっているため、これらを除去することが推奨される。
２．  ＰＤ１のＣ末端にある５残基のセグメント（ＦＱＴＬＶ、配列番号９）も、上記ポイント１で説明したものと同様の見かけの挙動のため（すなわち、これらは性質上主に疎水性であり、ＰＤＬ１の認識に必要ではなく、構造化されたドメインの外側に広がっている）、これらを除去することが推奨される。
３．  ＰＤ１のＣ末端及び４−１ＢＢＬのＮ末端に４つの予測される切断部位が見られる（非構造化セグメントのみに焦点を当てた場合）。
４．  ４−１ＢＢＬドメインのＮ末端セグメント（ＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧ、配列番号１０／ＡＣＰＷＡＶ、配列番号１１）を除去すると、ＤＳＰ１０５の可動性及び疎水性が低下すると予想される。
５．  この除去されたＮ末端セグメントには遊離Ｃｙｓ残基があり、誤ったジスルフィド結合により適切なフォールディング／再編成（ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）を妨げる場合がある。
【１２６９】
【表３】
2021531265.tif 000050
【１２７０】
構造分析に基づいて、４−１ＢＢＬ又はその任意のバリアントに融合され得る配列番号１８、１９、２０、２１、７３、７５、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、１１５、１１７、又は１１９のアミノ酸配列を有するいくつかのＰＤ１バリアントを設計した。
【１２７１】
また、構造分析に基づいて、ＰＤ１又はその任意のバリアントに融合され得る配列番号２２、２３、２４、２５、１２３、１２５、１２７、又は１２９のアミノ酸配列を有するいくつかの４−１ＢＢＬバリアントを設計した。
【１２７２】
さらに、４−１ＢＢＬ部分の活性を誘導するための融合タンパク質の三量体化の必要性を回避するために、ＰＤ１又はその任意のバリアントに融合され得る、４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含む４−１ＢＢＬバリアントを設計した。そのような４−１ＢＢＬバリアントの例示的な配列は、反復間に（ＧＧＧＧＳ）×２＋ＧＧＧＧ（配列番号１２１）リンカーを有する配列番号２３の３回反復を含み、配列番号１３１のアミノ酸配列を有する。
【１２７３】
そのような３反復を有する４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＤＳＰ１０５の例として、ホモロジーモデリング並びにそれに続く側鎖及びループ精製を使用して、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）のモデルを生成した。ホモログＸ線構造に基づいて、各部のホモロジーモデリングを実施した。ＰＤ１について、ＰＤＢ  ＩＤ：３ＲＲＱ、５ＧＧＲ、５ＧＧＳ、５ＪＸＥ、及び４ＺＱＫをテンプレートとして使用した。ｈＩｇＧ４について、ＰＤＢ  ＩＤ：４Ｃ５４、４Ｃ５５、５Ｗ５Ｍ、及び５Ｗ５Ｎをテンプレートとして使用した。４１ＢＢ−Ｌについて、ＰＤＢ  ＩＤ：６ＣＰＲ、６Ａ３Ｖ、及び６ＣＵ０をテンプレートとして使用した。リンカーセグメントは、主に構造上の違反を除外して、考えられる「スペーサー」の妥当な推定を可能にするために、ＣＨＡＲＭＭのループモデリングを使用してモデル化した。これらのモデル分析は、リガンドへの結合の可能性、及び異なるドメイン間の干渉がないことを予測した（図１３Ａ〜図１３Ｄ）。
【１２７４】
さらに、三量体化後に別個のＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質のＰＤ１部分間のより長い距離を可能にするように、（ＧＧＧＧＳ）×２（配列番号１４９）リンカーを含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質が設計された。
【１２７５】
続いて、いくつかのＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントを設計した。それらの選択の根拠及びそれらの３Ｄモデルを含む配列を、以下の表４及び図４〜図６に示す。
【１２７６】
【表４−１】
2021531265.tif 000051
【１２７７】
【表４−２】
2021531265.tif 000052
【１２７８】
【表４−３】
2021531265.tif 000053
【１２７９】
【表４−４】
2021531265.tif 000054
【１２８０】
【表４−５】
2021531265.tif 000055
【１２８１】
【表４−６】
2021531265.tif 000056
【１２８２】
【表４−７】
2021531265.tif 000057
【１２８３】
【表４−８】
2021531265.tif 000058
【１２８４】
【表４−９】
2021531265.tif 000059
【１２８５】
【表４−１０】
2021531265.tif 000060
【１２８６】
【表４−１１】
2021531265.tif 000061
【１２８７】
＜実施例２＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの作製
比較機能分析及び産生評価のため、いくつかのＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を作製した。これらは、それぞれ、本明細書において「ＤＳＰ１０５」（配列番号５）と称されるＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、並びに本明細書で 「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２２」、「ＤＳＰ＿Ｖ２３」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９」、「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０」及び「ＤＳＰ１０５＿Ｖ３１」（配列番号１２、１４、１６、９７、１０１、１０３、１０５、１０７、１１１、１１３、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５及び１４７）と称される９つのＤＳＰ１０５バリアントである。
【１２８８】
産生はＥｘｐｉＣＨＯ、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞又はＣＨＯ−３Ｅ７で行われ、細胞を、ＤＳＰ１０５及びそのバリアントのコード配列でクローニングされたｐｃＤＮＡ３．４又はｐＴＴ５発現ベクターによってトランスフェクトした。前記配列は、コザック（Ｋｏｚａｋ）配列、Ｎ末端又はＣ末端に６×Ｈｉｓタグを付加した又は付加しない人工シグナルペプチド（ＭＥＡＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ、配列番号４）、及びＣ末端に終止コドンを付加して、ＥｃｏＲＩ制限酵素及びＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素を使用してベクターにクローニングした。タンパク質は細胞培養の上清から採取した。
【１２８９】
上清は、ＨｉｓＴｒａｐ（商標）ＦＦ  Ｃｒｕｄｅカラムによるワンステップ精製により精製した。
【１２９０】
タグ付き融合タンパク質の産生は、Ｈｉｓタグ又は分子のドメインうちの１つ（すなわち、ＰＤ１又は４−１ＢＢＬのそれぞれの細胞外ドメイン）に対する特異的抗体を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロット分析によって検証した。例えば、図８Ａ〜図８Ｅを参照。
【１２９１】
例えば、還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分離されたＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７、ＤＳＰ１０５−Ｖ１８、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３のバリアントのウエスタンブロット分析に続く、抗ＰＤ１抗体又は抗Ｈｉｓタグ抗体を用いたイムノブロッティングにより、これらのバリアントがＣＨＯ−３Ｅ７細胞で発現したことが確認された。
【１２９２】
所望により、産生した融合タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製して、精製された三量体の画分を収集する。この目的のために、Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラムにタンパク質をロードし、移動相としてＰＢＳを使用して１ｍＬ／分の流速で行う。タンパク質三量体に対応する主要なピークが収集される。
【１２９３】
収量は、ＢＣＡ又はブラッドフォードタンパク質濃度測定を使用して、又はタンパク質吸光度係数で割った２８０ｎｍでのＮａｎｏｄｒｏｐによる光学密度測定によって評価される。タンパク質の安定性は、保存条件及び加速条件下で評価される。
【１２９４】
＜実施例３＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントのオリゴマー状態の決定
材料
本明細書の上記実施例２に説明されたようにＥｘｐｉ２９３細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）（本明細書では「ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）」と称する。）、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２（配列番号１５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３（配列番号１７）（本明細書では「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１」、「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２」及び「ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３）」と称する）、ＣＨＯ−３Ｅ７細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、並びに本明細書の上記実施例２に説明されたようにＣＨＯ−３Ｅ７細胞又はＥｘｐｉＣＨＯ細胞で産生されたＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０７＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１２９５】
Ｓｐｅｃｔｒａ  ＢＲタンパク質分子量マーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号２６６３４）、４〜２０％ポリアクリルアミドゲル（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号５５６−８０９４、ｅ−Ｓｔａｉｎ  ｐｅｄ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ｌ０２０１１）、Ｌａｅｍｍｅｌｉローディングバッファー（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号１６１−０７４７）、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）、ＳＥＣ−ＭＡＬＳシステム：ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ社）＋ＭｉｎｉＤａｗｎ  ＴＲＥＯＳ＋ＯＰＴＩＬＡＢ  Ｔ−ｒｅＸ（ＷＹＡＴＴ社）。  
【１２９６】
方法
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析：
各試料からの２μｇのタンパク質又は３５μＬの上清をβ−メルカプトエタノールを含む又は含まないローディングバッファーと混合し（それぞれ還元及び非還元条件）、９５℃で５分間加熱し、４〜２０％勾配ポリアクリルアミドゲル電気泳動ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。ゲル上でのタンパク質の移動は、ｅ−Ｓｔａｉｎ  ｐｅｄを使用したクーマシーブルー染色と、製造元の指示に従ってｅ−Ｓｔａｉｎシステム（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）を使用した洗浄とによって視覚化される。
【１２９７】
ＳＥＣ−ＭＡＬＳ分析：
タンパク質をＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）にロードし、移動相として１０ｍＭリン酸カリウム（ＫＰＯ４）（ｐＨ８．０）＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を使用して０．８ｍＬ／分の流速で実施する。検出は、ＡＫＴＡ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ（ＧＥ社）＋ＭｉｎｉＤａｗｎ  ＴＲＥＯＳ＋ＯＰＴＩＬＡＢ  Ｔ−ｒｅＸ（ＷＹＡＴＴ社）を使用して、ＵＶ、ＭＡＬＳ、及びＲＩによって実施する。
【１２９８】
結果
図７に示すように、非還元条件下ではＮ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（配列番号１）で高分子量型（ＨＭＷ、凝集体）の割合が高いことが観察されたが、還元条件下では観察されなかった。一方、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）では、わずかなレベルの凝集体しか検出されなかった。これは、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７では誤ったジスルフィド結合の形成によるＤＳＰ１０５の凝集が防止されたことを示している。図８Ａ〜図８Ｅに示されるように、低レベルの凝集体が他のＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアント（すなわち、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）で観察された。
【１２９９】
図９Ａ〜図９Ｂに示すように、非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した場合、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（ＷＴ、配列番号１）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５バリアントであるＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号：９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）（ＰＤ１−４−１ＢＢＬのバリアント）が、還元条件下と同じ分子量で検出された。より高分子量のさらなるバンドがＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５（ＷＴ、図９Ａ〜図９Ｂで「ＤＳＰ１０５ＷＴ」と記載される配列番号１）で検出され、還元条件と比較して非還元条件下でより強かった。これは、おそらくＳ−Ｓ架橋によって媒介される、多量体の形成を示唆している可能性がある。興味深いことに、非還元ＤＳＰ１０５ＷＴに現れたこの主要な「高分子量」バンドは、ＣＹＳ７３＞Ｓｅｒ置換を含むＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１１１）には見られず、この高分子量バンドはおそらくＣＹＳ７３によって媒介されることを強調している。
【１３００】
＜実施例４＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントは両ドメインを含む
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製されたＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。  
【１３０１】
ウエスタンブロット分析用：Ｓｐｅｃｔｒａ  ＢＲタンパク質マーカー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号２６６３４）、Ｌａｅｍｍｅｌｉローディングバッファー（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号１６１−０７４７）、４〜２０％ポリアクリルアミドゲル（ＢｉｏＲａｄ社、カタログ番号５５６−８０９４）、抗４−１ＢＢＬ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社、５３６９−１００）、抗ＰＤ１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社、カタログ番号８６１６３）、抗Ｈｉｓ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社、カタログ番号Ａ００１８６）、二次ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ複合体（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号１７０−６５１５）、ＥＣＬ  Ｐｌｕｓ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ウエスタンブロット用基質）（Ｐｉｅｒｃｅ社、カタログ番号３２１３２）。
【１３０２】
サンドイッチＥＬＩＳＡ用：抗４−１ＢＢＬ抗体（一致したペアから抗体を捕捉する、Ａｂｎｏｖａ社、＃Ｈ００００８７４４−ＡＰ４１）、抗ＰＤ１ビオチン化抗体、ストレプトアビジンタンパク質、ＨＲＰ（＃２１１２６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、ＴＭＢ基質（１−Ｓｔｅｐ（商標）Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃３４０２８）。
【１３０３】
方法
ウエスタンブロット分析：
タンパク質（レーンあたり５０〜５００ｎｇ）を還元条件又は非還元条件で処理し（それぞれ、β−メルカプトエタノールを含むローディングバッファー中で９５℃、５分間煮沸、又はβ−メルカプトエタノールを含まないサンプルバッファー中で加熱なし）、４〜２０％の勾配ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分離した。続いて、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写し、一次抗体、抗４−１ＢＢＬ、抗ＰＤ１、又は抗Ｈｉｓと一晩インキュベートした後、ＨＲＰ結合二次抗体と１時間インキュベートした。電気化学発光（ＥＣＬ）に引き続きシグナルを検出した。
【１３０４】
サンドイッチＥＬＩＳＡ：
プレートを抗４−１ＢＢＬ捕捉抗体（ＰＢＳ中２．５ｕｇ／ｍＬ）でコーティングし、ブロッキング溶液（ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ）でブロッキングする。産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を、ブロッキング溶液で段階希釈し、コーティングしたプレートに塗布し、２時間インキュベートした後、製造業者の推奨に従って、検出用抗ＰＤ１ビオチン化抗体とインキュベートを行い、続いてストレプトアビジン−ＨＲＰ及びＴＭＢ基質で検出する。プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、６２０ｎｍを参照波長とする。
【１３０５】
＜実施例５＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントはＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合する
【１３０６】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質のＰＤ１部分のＰＤＬ１への結合分析
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのＰＤ１ドメインのヒトＰＤＬ１への結合は、ＰＤＬ１を過剰発現するＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株を使用して測定した。ＤＬＤ１−ＷＴ細胞は陰性対照とした。細胞を異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、二次抗４−１ＢＢＬ抗体で免疫染色した。結合はフローサイトメトリーによって分析した。
【１３０７】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３０８】
ＤＬＤ１−ＷＴ及びＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞株（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１６）、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４２２３０２）、抗４−１ＢＢＬ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３１１５０６）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）、抗ＰＤＬ１（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３２９７０８）、アイソタイプＩｇＧ２ｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００３２２）。
【１３０９】
方法
細胞を氷上で３０分間、異なる濃度（０．０５〜５０μｇ／ｍＬ）の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、４−１ＢＢＬに対する抗体で免疫染色し、フローサイトメトリーで分析した。
【１３１０】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質の４−１ＢＢＬ部分の４−１ＢＢへの結合分析
ＰＤ１−４−１ＢＢＬの４−１ＢＢＬドメインのヒト４−１ＢＢへの結合は、４−１ＢＢを過剰発現するＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株を使用して測定した。ＨＴ１０８０ＷＴ（野生型）細胞は陰性対照とした。細胞を異なる希釈の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、二次抗ＰＤ１抗体で免疫染色した。結合はフローサイトメトリーによって分析した。
【１３１１】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。 
【１３１２】
ＨＴ１０８０ＷＴ及びＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞（Ｗｙｚｇｏｌ  ｅｔ  ａｌ，  ２００９）、Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ（色素）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、カタログ番号５６２２４７）、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４２２３０２）、抗ＰＤ１（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３２９９０８）、抗４１ＢＢ（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号３０９８０１）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｄｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）。
【１３１３】
方法
細胞を氷上で３０分間、異なる希釈（１：８〜１：１０２４）の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質と共にインキュベートした後、ＰＤ１に対する抗体で免疫染色し、フローサイトメトリーで分析した。
【１３１４】
結果
図１０Ａに示すように、ＤＬＤ１−ＰＤ１細胞及びＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞は、それぞれ関連する受容体であるＰＤ１及び４１ＢＢを発現する。結合アッセイは、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）が用量依存的にＤＬＤ１−ＰＤＬ１細胞及びＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞に結合することを示した（図１０Ｂ）。（トランスフェクトされていない細胞からの）上清対照の異なる希釈は、ＨＴ１０８０−４１ＢＢ細胞に結合しなかった（図１０Ｂ）。次に、ＧＭＦＩ値を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアで結合曲線グラフを作成した（図１０Ｃ）。まとめると、融合タンパク質であるＨｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）の両端は、細胞の表面で過剰発現している関連するカウンターパートに結合する。
【１３１５】
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのヒト、マウス、及びカニクイザルのＰＤＬ１カウンターパート及び４−１ＢＢカウンターパートへの結合
【１３１６】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイにより、ＰＤ１−４−１ＢＢＬタンパク質のＰＤＬ１カウンターパート及び４−１ＢＢカウンターパートへの結合を決定する
【１３１７】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。      
【１３１８】
Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  ＣＭ５（ＧＥ社、カタログ番号ＢＲ１００５３０）、抗体捕捉キット、ヒトｈＣＤ４７（陰性対照）、ヒトＰＤＬ１、マウスＰＤＬ１、カニクイザルＰＤＬ１、ヒト４−１ＢＢ、マウス４−１ＢＢ、カニクイザル４−１ＢＢ。
【１３１９】
方法
ＳＰＲアッセイは、ＢｉａｃｏｒｅＴ１００バイオセンサー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を使用して実施する。捕捉キットの抗体は、製造業者が推奨する標準のアミンカップリングプロトコルを使用して、チップの４つのフローチャネル全て（Ｆｃ１〜Ｆｃ４）にカップリングされる。ＰＤ１−４−１ＢＢＬのカウンターパートタンパク質（ＰＤＬ１及び４−１ＢＢ）のチップへの結合は、ＨＢＳ−ＥＰ＋ランニングバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で行う：ヒトＣＤ４７（陰性対照）は参照チャネルＦｃ１にロードされ、Ｆｃ２〜Ｆｃ４にはヒトＰＤＬ１タンパク質、マウスＰＤＬ１タンパク質、及びカニクイザルＰＤＬ１タンパク質がロードされる。チップの自動再生に続いて、チャネルＦｃ１においてヒトＣＤ４７を、チャネルＦｃ２〜Ｆｃ４においてヒト４−１ＢＢタンパク質、マウス４−１ＢＢタンパク質、及びカニクイザル４−１ＢＢタンパク質を、チップに再ロードする。カウンターパートの結合に続いて、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ分析対象物を４つのチャネルすべてに通過させる。このプロセスは、５０μＬ／分の流速で様々な濃度のＰＤ１−４−１ＢＢＬ分析物を使用して反復して繰り返される。各サイクルの最後に３Ｍ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）溶液を注入し（２０μＬ／分で４５秒）、捕捉された分子を除去して活性表面を再生する。結合パラメーターは、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアｖ．  ３．０．２（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）の動力学的結合（Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ）（１：１）モデルを使用して評価する。
【１３２０】
＜実施例６＞
両側結合−力価（ｐｏｔｅｎｃｙ）アッセイ
分子の両側の、それぞれのカウンターパートに対する結合、すなわちＰＤ１のＰＤＬへの結合及び４−１ＢＢＬの４−１ＢＢへの結合をサンドイッチＥＬＩＳＡに基づく力価アッセイで試験する。異なる産生バッチにおける機能的特徴を比較するためにも本アッセイを用いる。  
【１３２１】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。ヒト組換えＰＤＬ１（ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社、Ａ００１−２１４）、ヒト組換えタンパク質４−１ＢＢ−ビオチン（カタログ番号４１Ｂ−Ｈ８２Ｅ３、ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社）、ストレプトアビジンタンパク質−ＨＲＰ（カタログ番号２１１２６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、１−Ｓｔｅｐ（商標）Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（カタログ番号３４０２８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）。
【１３２２】
方法
ＰＤＬ１をプラスチックプレートの表面に結合し、ＰＤ１−４−１ＢＢＬを添加して、固定化されたＰＤＬ１に結合させる。洗浄後、ビオチン化４−１ＢＢを添加し、分子の４−１ＢＢＬアームに結合させる。続いて、前記プレートを洗浄し、ストレプトアビジンＨＲＰを添加する。検出は、５４０ｎｍを参照波長として、４５０ｎｍでプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用する標準ＥＬＩＳＡプロトコルに従ってＴＭＢ基質で実施する。
【１３２３】
＜実施例７＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントによる４−１ＢＢの活性化
産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質による４−１ＢＢ受容体の活性化効果は、４−１ＢＢ受容体を過剰発現しているＨＴ１０８０細胞又は別の細胞株を使用して測定した。具体的には、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞株は４−１ＢＢを過剰発現しており、４−１ＢＢＬの結合時にＩＬ８を分泌することが知られている（Ｗｙｚｇｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）。これらの細胞の表面にある４−１ＢＢ受容体に４−１ＢＢＬが結合すると、シグナル伝達経路が活性化され、ＩＬ８が分泌される。この目的のために、細胞を、ＰＤＬ１発現細胞の存在下又は非存在下で、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬの異なる濃度の存在下でインキュベートし、培養培地へのＩＬ８分泌をＥＬＩＳＡによって測定した。
【１３２４】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３２５】
ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞、ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ社、カタログ番号Ｄ８０００Ｃ）、ＤＭＥＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社、カタログ番号０１−０５５−１Ａ）、ＦＢＳ（Ｒｈｅｎｉｕｍ社、カタログ番号１０２７０１０６）、抗４−１ＢＢ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号３５９８１０）、アイソタイプＩｇＧ１、κ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４００１２２）。
【１３２６】
方法
ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞（ウェルあたり１００００）を、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を異なる濃度で含む培地で２４時間インキュベートした。インキュベート後、上清中のＩＬ８濃度は、製造業者のプロトコルに従ってＩＬ８ＥＬＩＳＡキットによって測定した。プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、５４０ｎｍを参照波長とした。
【１３２７】
結果
図１１に示すように、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞は関連する受容体４−１ＢＢを発現する。試験した全てのＤＳＰ１０５バリアントタンパク質（Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、及びＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１３））は、ＨＴ１０８０−４−１ＢＢ細胞からのＩＬ８分泌によって測定されるように、ＦＢＳを含む培地で用量依存的に４−１ＢＢシグナル伝達を引き起こすことができた（図１２）。
【１３２８】
＜実施例８＞
ＰＤＬ１の結合阻害についてのＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの影響
ＰＤ１−４−１ＢＢＬのＰＤ１部分は、Ｔ細胞上に発現する内因性ＰＤ１の、腫瘍細胞上に発現するＰＤＬ１への相互作用を阻害するように設計される。この目的のため、この相互作用の阻害物質（ｂｌｏｃｋｅｒ）としての、作製されたＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントの有効性を評価する。 
【１３２９】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。
【１３３０】
以下を含むＰＤ−１：ＰＤＬ１  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ＥＬＩＳＡ  Ａｓｓａｙ  Ｐａｉｒ（Ａｃｒｏ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号ＥＰ１０１）：組換えヒトＰＤＬ１、抗ｈＰＤ１中和抗体、ビオチン化ｈＰＤ１。
【１３３１】
方法
ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＰＤＬ１で一晩コーティングする。プレートを洗浄し、異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質又は陽性対照抗ＰＤ１抗体で１時間インキュベートする。ビオチン化ＰＤ１を添加した後、さらに１時間インキュベートする。インキュベート後、プレートを洗浄し、標準的なＥＬＩＳＡプロトコルに従ってストレプトアビジン−ＨＲＰ及びＴＭＢ基質でブロットする。
【１３３２】
プレートは、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＦＣ）を使用して４５０ｎｍで分析し、６２０ｎｍを参照波長とする。
【１３３３】
＜実施例９＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントによるＰＢＭＣ又はＴ細胞の活性化
Ｔ細胞の活性化には２つのシグナルが必要である：抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド複合体との、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合、及びＴ細胞上の共刺激受容体とＡＰＣ上の対応するリガンドとの架橋。４−１ＢＢはＴ細胞共刺激受容体であり、４−１ＢＢＬに結合すると、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の両方の増殖、生存、分化、及びサイトカイン発現を促進する。
【１３３４】
以下を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞の活性化を測定するための多くの方法が当技術分野で公知である。
・  Ｔ細胞の表面での活性化マーカーの発現（例えば：ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１など）。活性化マーカーの発現は、細胞を特定の抗体で染色し、フローサイトメトリー分析（ＦＡＣＳ）によって試験する。
・  炎症性サイトカインの分泌（例えば：ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＮＦγなど）。炎症性サイトカインの分泌はＥＬＩＳＡによって試験する。
・  ＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）又は他の細胞増殖色素でＴ細胞を前染色し、ＦＡＣＳによって測定されるＣＦＳＥ希釈によって細胞の偏差を測定することによって測定される、増殖。増殖はまた、経時的に写真を撮影して特定のソフトウェアで写真を分析するＩｎｃｕＣｙｔｅ機器を使用して測定される。
・  標的細胞の殺細胞性、例えば、カルセイン−ＡＭ試薬を使用してがん細胞を事前標識し、発光プレートリーダーを使用して培地へのカルセイン放出を測定することによって測定される、がん細胞の殺細胞性。殺細胞性はまた、標識された標的細胞とカスパーゼ感受性蛍光基質を使用するＩｎｃｕＣｙｔｅ機器によって測定される。
【１３３５】
この目的のために、ヒトＴ細胞又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の活性化の増強についての、産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質の効果を評価する。
【１３３６】
材料
本明細書の上記実施例２に記載の方法で作製された、ＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（ＳＥＣＩＤＮＯ：９７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、カタログ番号１７−１４４０−０３）、Ｌｅａｆ精製抗ヒトＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、カタログ番号ＢＬＧ−３１７３１５）、組換えヒトＩＬ−２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号５８９１０６）、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ６９抗体、抗ＣＤ１０７ａ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＰＤ１抗体、ＥａｓｙＳｅｐ  ＤｉｒｅｃｔＨｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ社、カタログ番号１９６６１）、抗ＣＤ３／ＣＤ２８  ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ社、カタログ番号Ｄｙ−１１１３１Ｄ）、ＩＦＮｇ  ＥＬＩＳＡキット（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、カタログ番号９００−ＴＭ２７）、ＣＦＳＥ。
【１３３７】
方法
ヒトＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ法（Ｇｒｉｅｎｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１６  Ｂｉｏｐｒｅｓｅｒｖ  Ｂｉｏｂａｎｋ．  １４（５）：４１０−４１５）を使用して健康なドナーの末梢血から分離され、Ｔ細胞は陰性選択磁気ビーズによってさらに単離される。単離後、最適未満濃度の抗ＣＤ３（３０ｎｇ／ｍＬ）若しくはＩＬ−２（１０００Ｕ／ｍＬ）又は抗ＣＤ３＋ＩＬ−２、又はαＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）（細胞あたり１：１０ビーズ）の存在下で、異なる濃度の産生したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質を添加して細胞を培養する。細胞は、ＰＤＬ１発現細胞存在下若しくは非存在下で、又はＰＤＬ１コーティングプレートで、１〜７日間培養する。培地へのＩＦＮγなどの炎症性サイトカインの分泌は、ＥＬＩＳＡによって測定する。増殖は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）Ｓ３  Ｌｉｖｅ−Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（生細胞分析システム）によって、又はＣＦＳＥを使用して、製造業者のプロトコルに従って測定する。フローサイトメトリーにより、様々な時点での細胞の活性化マーカー、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＰＤ１表面発現をさらに試験する。殺細胞性は、製造業者のプロトコルに従って、カルセイン−ＡＭ放出又はＩｎｃｕＣｙｔｅ機器によって評価する。
【１３３８】
＜実施例１０＞
ＰＤ１−４−１ＢＢＬバリアントのインビボ抗腫瘍効果
がんの治療におけるＰＤ１−４−１ＢＢＬの有効性を試験するために、３つの異なるインビボマウスモデルを使用する。
１．  ヒト幹細胞若しくはヒトＰＢＭＣ又は固定化ヒトＰＢＭＣ及びヒト腫瘍細胞を接種したＮＳＧマウス。このモデルでは、ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、ヒトＰＤＬ１（腫瘍及び免疫細胞で発現）及びヒトＴ細胞の４−１ＢＢと相互作用する。
２．  ＭＣ３８マウス結腸癌若しくは他のがん細胞株又はヒトＰＤＬ１を過剰発現するがん細胞株を接種した、Ｃ５７ＢＬ／６−ヒト４−１ＢＢノックインマウス。このモデルでは、マウス４−１ＢＢ細胞外ドメインがヒト４−１ＢＢの細胞外ドメインに置き換えられているため、ＰＤ１−４−１ＢＢＬはマウスＴ細胞に発現しているヒト４−１ＢＢと相互作用し得る。ＰＤ１−４−１ＢＢＬは、腫瘍細胞に発現しているマウスＰＤＬ１及びヒトＰＤＬ１と相互作用する。
３．  マウスＰＤＬ１を発現する同系マウス腫瘍モデル。これらのモデルでは、ＰＤ１−４−１ＢＢＬは腫瘍細胞上のマウスＰＤＬ１と相互作用する。
【１３３９】
材料
３モデルの全てにおいて、マウスに腫瘍細胞を静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＣ）、又は同所に接種する。腫瘍が触知可能となった時点で（約８０ｍｍ３）、ＩＶ、ＩＰ、ＳＣ、又は同所に、異なる用量及び異なるレジメンで、作製したＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質、例えばＤＳＰ１０５（ＨＥＫ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）（配列番号１）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ１（配列番号１３）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ２（配列番号１５）、ＤＳＰ１０５（ＣＨＯ−ＮＨ）−Ｖ３（配列番号１７）、Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、Ｈｉｓタグ付きＤＳＰ１０５＿Ｖ２２（配列番号１０９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１７（配列番号９９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１８（配列番号１０１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ１９（配列番号１０３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２０（配列番号１０５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２１（配列番号１０７）、ＤＳＰ＿Ｖ２２（配列番号１１１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２３（配列番号１１３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２４（配列番号１３３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２５（配列番号１３５）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２６（配列番号１３７）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２７（配列番号１３９）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２８（配列番号１４１）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ２９（配列番号１４３）、ＤＳＰ１０５＿Ｖ３０（配列番号１４５）及びＤＳＰ１０５＿Ｖ３１（配列番号１４７）でマウスを処置する。
【１３４０】
体重及び臨床徴候についてマウスを追跡する。腫瘍は週に数回ノギスで測定し、腫瘍体積は下記式に従って計算する：Ｖ＝長さ×幅２／２。マウスの体重は定期的に測定する。腫瘍の増殖及び生存は、実験全体を通してモニタリングする。
【１３４１】
腫瘍内の免疫細胞の浸潤及びサブタイピングは、腫瘍又は流入領域リンパ節を切除し、消化し、特定の抗体染色とフローサイトメトリー分析を使用して免疫表現型を決定することにより試験する。追加的又は代替的に、免疫細胞の浸潤又は腫瘍の壊死グレードは、腫瘍を切除し、パラフィン包埋し、切片化して特定の抗体で免疫組織化学染色することによって決定する。
【１３４２】
犠牲にする際に、マウスの臓器を採取し、ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色及び免疫組織化学染色（ＩＨＣ）染色のためにパラフィンブロックに包埋する。
【１３４３】
血液試料は、以下の試験のために、一般的な手順に従って、様々な時点でマウスから採取する。ＰＫ分析、血漿中のサイトカイン測定、循環血液中の血球亜集団のＦＡＣＳプロファイリング、血液学検査、血清化学検査、抗薬物抗体（ＡＤＡ）分析、中和抗体分析（ＮＡＢ）。
【１３４４】
本発明は、その特定の実施形態と併せて説明されてきたが、多くの代替、修正、及び変形が当業者には明らかであることは自明である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神及び広い範囲に含まれるそのような全ての代替案、修正、及び変形を包含することが意図されている。
【１３４５】
本明細書に記載されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願が、参照により本明細書に援用されることが具体的かつ個別に示された場合と同程度に、参照によりその全体が本明細書に援用される。さらに、本出願における参考文献の引用又は識別は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることを認めるものと解釈されるべきではない。セクション見出しが使用されている範囲で、それらは必ずしも限定的であると解釈されるべきではない。
【１３４６】
さらに、本出願の優先権書類は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、９３、及び１１５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まないか；又は
配列番号１８、１１７、及び１１９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１３８〜１４５アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＦ１４６〜Ｖ１５０を含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、
（ａａ）配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であるか；
配列番号１２７及び１２９からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１９７アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＧ１９８〜Ｅ２０５を含まないか；
配列番号１２５と少なくとも８０％の同一性を有する１７０〜１８２アミノ酸長であり、ただし配列番号３に対応するアミノ酸セグメントＡ１〜Ｅ２３を含まないか；又は
配列番号１２３と少なくとも８０％の同一性を有する１８４アミノ酸長であり、及び／又は
（ｂｂ）４−１ＢＢＬアミノ酸配列の３回反復を含み、並びに  
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項２】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
（ａ）配列番号１８〜２１、８５、８９、及び９３からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
（ｂ）配列番号２の７３番目のアミノ酸に対応する位置にＣからＳへのアミノ酸改変を含み、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、並びに、
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は
（ｉｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する免疫細胞を共刺激すること、
の少なくとも１つが可能である、ＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質。
【請求項３】
ＰＤ１アミノ酸配列及び４−１ＢＢＬアミノ酸配列を含むＰＤ１−４−１ＢＢＬ融合タンパク質であって、
前記ＰＤ１アミノ酸配列は、
配列番号１８〜２１からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有する１２３〜１４８アミノ酸長であり、ただし配列番号２に対応するアミノ酸セグメントＰ１〜Ｌ５及びＦ１４６〜Ｖ１５０のいずれも含まず、及び／又は
前記４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、配列番号２２〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する１８５〜２０２アミノ酸長であり、並びに
前記融合タンパク質は、
（ｉ）ＰＤＬ１及び４−１ＢＢに結合すること、
（ｉｉ）前記４−１ＢＢを発現する細胞において前記４−１ＢＢシグナル伝達経路を活性化すること、及び／又は戼㹲 袼뷯覽뷯覼觥風볯銈볯ꊼ볯銂駧뺏臣讂藥ꮖ듧麃苣놅裥肿臣讂臣ꢁ胣㲁牢ਾ臣醰臣辁臣节볯ꒁ臣꾏菨ꞁ臣讂胣낼볯醼裢钼裢醼볯ꊼ볯趞郥뾂菣醃苣ꪳ胣ં⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀ꯨ花ꃩ钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†볯꒼볯ꢁ볯銈볯ꊼ볯겼臣꺁雩ꮁ볯Ꞽ볯Ꞽ볯뎼볯㲉畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢뷯㲎猯扵袼뷯鶼볯鲀볯覼菣뎃苣벃苣ꮐ苣낼볯醼裢钼裢醼볯ꊼ볯趞郥뾂菣醃苣ꪳ臣芁臣ꚁ胣趉꣨趞郥뾂菣醃苣ꪳ臣膀戼㹲 袼뷯覼볯꒼볯醼迥뎁볯銈볯ꊼ볯ꮁ뗧袐臣讂臣ꢁ胣㲁牢ਾ†볯覽뷯覼觥風볯銈볯ꊼ볯銂駧뺏臣讂듧麃臣誁臣ꚁ觥風볯銈볯ꊼ볯랂苣誃菣鶼臩貵럨銂듦Ꞁ賥馁苣鎁臣膀迥뎁볯袏臣㲯牢ਾ†볯覽뷯覽볯趉꣨钼裢醼볯ꊼ苣몙迧馁苣超雧내菨銂藥몈뿦馁苣鎁臣膀戼㹲꺁냥ꪁ臣ꢁ苣醼臣貁迥붃臣芁苣膀볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈苣ꮐ苣颍鯩鶃菣骃菣膃菣ꞁ臣ꎁ臣膀戼㹲 趉꣨낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈臣膀戼㹲 超裥ꪕ迥醼볯鲀볯醼胣颼볯膀볯馼胣馼볯膀迥뎁볯醼볯讁苣ꪁ苣꒾苣誂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣貐룤Ꞁ苣覜臣讂볯銼볯鲀볯钼볯ꊂ菣躃藩랕臣芁苣膀臣ꂁ臣超裥ꪕ迥銼臣뺯뿥馁苣ꊂ菣躃藩뮂苣ꆃ菣袃볯醼胣겼볯誏臣ꚼ볯钼볯鲀볯醼볯邼臣蒁臣貂苣ꮐ臣ꪁ臣讁볯袏臣㲯牢ਾ†藩鞈闧랏볯颼胣醼볯鞼胣誏臣醼볯馼臣覂臣讂뻧袂苣뢁諦閁苣讂苣龃菣뢅藩鞈臣醰臣辁臣节볯邼볯꺁郥肸胦銂鳦馁苣醼볯颼胣醼볯閼苣龃菣뢅闩ꞁ臣誂胣龁臣鞁藩鞈闧랏볯ꮁ꿥鲿臣讂苣龃菣뢅苣낂菣뎃菣ꚼ볯钼볯鲀볯醼볯邼苣ꮐ臣骁胣誏臣㲳牢ਾ†触鮜臣袂苣超裥ꪕ迥銼臣㲮⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯鎼⼼㹵闧꺛臣ꊂ菣躃藩ꮁ꿥鲿臣讂뷤꺽臣ꎼ臣覂볯뢁臣ꊂ菣躃藩릔ꓥ銂郥뾁胣ꚸ臣ꮁ戼㹲 趉꣨鶃菣骃菣膃菣꾁볯꒼볯醼臣邵郥꾏菨ꞁ臣讂胣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈苣ꮐ苣颍鯩鶃菣骃菣膃菣ꞁ臣ꎁ臣膀戼㹲 趉꣨낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈臣膀戼㹲 超裥ꪕ迥醼볯鲀볯醼胣颼볯膀볯馼胣誏臣馼볯讁苣ꪁ苣꒾苣誂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣貐룤Ꞁ苣覜臣讂볯銼볯鲀볯钼볯ꊂ菣躃藩랕臣芁苣膀臣ꂁ臣超裥ꪕ迥銼臣뺯뿥馁苣ꊂ菣躃藩뮂苣ꆃ菣袃볯醼胣겼볯誏臣ꚼ볯钼볯鲀볯醼볯邼臣蒁臣貂苣ꮐ臣骁胣誏臣㲳牢ਾ†触鮜臣袂苣超裥ꪕ迥銼臣㲮⁵浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯鎼⼼㹵闧꺛臣ꊂ菣躃藩ꮁ꿥鲿臣讂뷤꺽臣ꎼ臣覂볯뢁臣ꊂ菣躃藩릔ꓥ銂郥뾁胣ꚸ臣ꮁ戼㹲 趉꣨鶃菣骃菣膃菣꾁볯꒼볯醼臣邵郥꾏菨ꞁ臣讂胣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈苣ꮐ苣颍鯩鶃菣骃菣膃菣ꞁ臣ꎁ臣膀戼㹲 趉꣨낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈臣膀藩鞈闧랏볯颼胣銼볯讁苣ꪁ苣꒾苣誂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣貐룤Ꞁ苣覜臣讂볯銼볯鲀볯钼볯ꊂ菣躃藩랕臣芁苣膀臣ꂁ臣超裥ꪕ迥銼臣뺯뿥馁苣ꊂ菣躃藩뮂苣ꆃ菣袃볯醼胣겼볯誏臣ꚼ볯钼볯鲀볯醼볯邼臣蒁臣貂苣ꮐ臣骁胣ꚸ臣ꮁ戼㹲 趉꣨鶃菣骃菣膃菣꾁볯꒼볯醼臣邵郥꾏菨ꞁ臣讂胣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 钼裢醼볯ꊼ볯ꊂ菣躃藩超裥銂郥肂跥ꊛ菣ꪃ菣鞃菣覃臣芁臣ꚁ胣㲁牢ਾ†觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣膀戼㹲 超裥ꪕ迥銼볯鲀볯閼臣覂臣讂뻧袂苣뢁諦閁苣讂苣龃菣뢅藩鞈臣醰臣辁臣节볯閼볯꺁郥肸胦銂鳦馁苣醼볯閼胣銼볯銼苣龃菣뢅闩ꞁ臣讂臣鮼戼㹲 超裥ꪕ迥醼볯鞼迥뎁볯銼볯讁苣ꪁ苣꒾苣誂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣貐룤Ꞁ苣覜臣讂볯鞼볯鲀볯馼볯ꊂ菣躃藩랕臣芁苣膀臣ꂁ臣超裥ꪕ迥鎼臣뺯뿥馁苣ꊂ菣躃藩뮂苣ꆃ菣袃볯醼볯颼胣ꖼ볯邼볯銂郥뺁臣蒁臣鮼迥꾁戼㹲 超裥ꪕ迥醼볯閼臣醰臣辁臣节볯邼볯꺁郥肸胦銂鳦馁苣醼볯邼胣醼볯銼苣龃菣뢅闩ꞁ臣誂胣龁臣鞁藩鞈闧랏볯ꮁ꿥鲿臣讂苣龃菣뢅苣낂菣뎃菣ꆼ볯鲀볯銼볯銂郥뺁臣膀迥뎁戼㹲 肉鳦ꮁ苣誂觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣鎼鯥趏뻥銂郥뾁胣ꚸ臣ꮁ戼㹲 趉꣨鶃菣骃菣膃菣꾁胣㲁牢ਾ†볯覽볯钼裢醼볯ꊼ臣邵郥馁苣鎁臣膀戼㹲 袼뷯覽볯趉꣨钼裢醼볯ꊼ苣몙迧馁苣내菨ꮁ臣蒁臣趉꣨钼裢醼볯ꊼ苣낂菣ꮃ볤钁뗧꾷苣뮴胦隌臣讂臣ꢁ胣誏臣込迥꾁戼㹲 袼뷯覽뷯覼觥風볯銈볯ꊼ볯銂駧뺏臣讂藥ꮖ듧麃苣놅裥肿臣讂臣ꢁ胣㲁牢ਾ臣醰臣辁臣节볯ꒁ臣꾏菨ꞁ臣讂胣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 钼裢醼볯ꊼ볯ꊂ菣躃藩超裥銂郥肂跥ꊛ菣ꪃ菣鞃菣覃臣芁臣ꚁ胣㲁牢ਾ†觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣膀藩鞈闧랏볯銼胣銼볯讁苣ꪁ苣꒾苣誂臩麊臣貂苣ꊂ菣躃藩超裥ꢁ냥ꪁ臣ꢁ苣馼볯薼臣貐룤Ꞁ苣覜臣讂볯颼볯鲀볯邼볯ꊂ菣躃藩랕臣芁苣膀룤뎁臣㲫牢ਾ†觥風菣ꪃ菣鞃菣覃臣膀戼㹲 袼뷯覼볯銈볯ꊼ볯ꮁ뗧袐臣讂臣ꢁ胣㲁牢ਾ†볯覽뷯覼觥風볯銈볯ꊼ볯銂駧뺏臣讂듧麃臣誁臣ꚁ觥風볯銈볯ꊼ볯랂苣誃菣鶼臩貵럨銂듦Ꞁ賥馁苣鎁臣膀迥뎁볯袏臣㲯牢ਾ†볯覽뷯覽볯趉꣨钼裢醼볯ꊼ苣몙迧馁苣超雧내菨銂藥몈뿦馁苣鎁臣膀戼㹲꺁냥ꪁ臣ꢁ苣醼臣貁迥붃臣芁苣膀볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈苣ꮐ苣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯邼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯ꊂ菣躃藩超裥꾁볯钼볯ꊂ菣躃藩랕믤许臣芁苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣讫뇦薠볯鲀ꯨ花ꃩ鞼臣蒁臣貂臣肸ꃩꮁ꣨覼臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯ꊂ菣躃藩超裥꾁냥ꪁ臣ꢁ苣醼볯隼苣龃菣뢅闩ꞁ臣讂胣讫뇦薠볯鲀ꯨ花ꃩ鞼迥뎁ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯ꊂ菣躃藩超裥꾁胣超裥ꪕ迥醼볯膀볯馼胣銼볯膀볯醼胣颼볯膀볯馼胣馼볯膀迥꾁볯醼볯銂郥肂胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ閼胣讫뇦薠볯邼胣誏臣讫뇦薠볯醼臣蒁臣貂臣肸ꃩꮁ꣨覼臣낼볯醼裢钼裢醼볯ꊼ볯趞郥뾂菣醃苣ꪳ迥꾁跥ꊛ菣ꪃ菣鞃菣覃胣ં⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀ꯨ花ꃩ醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 趉꣨낼볯醼苣龃菣뢅藩鞈臣膀藩鞈闧랏볯閼胣颼볯膀볯鞼胣馼볯膀迥꾁볯閼苣ꮐ苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ钼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ醼볯膀迥뎁ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯钼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯ꊂ菣躃藩超裥꾁胣超裥ꪕ迥醼볯膀볯馼胣銼볯膀볯醼胣颼볯膀볯馼胣馼볯膀迥꾁볯醼볯讁苣ꪁ苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ醼볯膀迥뎁ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯閼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯ꊂ菣躃藩超裥꾁胣超裥ꪕ迥鞼볯膀볯馼胣颼볯膀볯鎼胣颼볯膀볯醼胣袏臣馼볯讁苣ꪁ苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ钼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ醼볯膀迥뎁ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯隼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣膀藩鞈闧랏볯ꮁ꿥鲿臣讂苣龃菣뢅껦몟볯醼胣뚼볯誏臣ꆼ볯鲀볯醼볯꺁臣骁苣节郥뺁臣蒁胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ銼胣讫뇦薠볯膀迥뎁ꯨ花ꃩ颼胣讫뇦薠볯閼臣蒁臣貂臣肸ꃩꮁ꣨覼臣낼볯醼裢钼裢醼볯ꊼ볯趞郥뾂菣醃苣ꪳ迥꾁跥ꊛ菣ꪃ菣鞃菣覃胣ં⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀ꯨ花ꃩ醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 趉꣨钼裢醼볯ꊼ볯ꊂ菣躃藩超裥꾁胣超裥ꪕ迥銼볯膀볯鎼胣銼볯膀迥꾁볯閼苣ꮐ苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ钼胣誏臣讫뇦薠볯鲀ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯颼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣膀藩鞈闧랏볯銼胣銼볯膀볯钼胣袏臣銼볯讁苣ꪁ苣膀ꯨ花ꃩ醼胣讫뇦薠볯誏臣讫뇦薠볯鲀ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨袏臣颍鯩鶃菣骃菣膃菣芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯馼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨꾁胣趉꣨낼볯醼臣趉꣨钼裢醼볯ꊼ볯ꢁ臣鎖臣ꪃ菣ꮂ菣銂郥肂胣讫뇦薠볯鲀ꯨ花ꃩ鎼迥뎁ꯨ花ꃩ醼볯鲀ꯨ花ꃩ醼볯꺁臣骁苣讁룤薠臣風볨꺁볯꒼볯銈볯銈볯ꊼ볯겼黨袐苣뎃菣꾂돨芀㰊䐯噉ਾ㰊䥄㹖胣讫뇦薠볯邼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉ਾ†觥風볯銈볯ꊼ볯겼苣龃菣뢅藩鞈臣趉꣨鎼鯥趏뻥꺁臣貂臣貂臣鎖臣ꪃ菣ꮂ菣銂郥肂胣讫뇦薠볯膀ꯨ花ꃩ颼胣誏臣讫뇦薠볯邼胣讫뇦薠볯颼臣蒁臣貂臣肸ꃩꮁ꣨覼臣낼볯醼裢钼裢醼볯ꊼ볯趞郥뾂菣醃苣ꪳ迥꾁跥ꊛ菣ꪃ菣鞃菣覃胣ં⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀ꯨ花ꃩ銼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖 趉꣨ꪃ菣ꮂ菣꾁跥肸苣龃菣뢅菣뎃苣벃臣芁苣膀ꯨ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