(57)【要約】  本発明は、ＣＸＣＲ５に特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。抗体は、アフコシル化されていてもよく、フコシル化されていること以外は同一な抗体と比較して増加したＡＤＣＣを示す。本発明は、使用、及び関連する抗体を使用する方法を含む。【選択図】図９Ｄ
2021503888.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＸＣＲ５と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、
ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、を含む抗体；
ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、を含む抗体；
ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、を含む抗体；
ｄ）ＡＴＣＣに寄託された受託番号ＰＴＡ−１２４３２４を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＬ及びＡＴＣＣに寄託された受託番号ＰＴＡ−１２４３２３を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＨ、を含む抗体；
ｅ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｇ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｈ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｊ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｋ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｌ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｍ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｎ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｏ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｐ）配列番号９５の核酸配列によってコードされたＶＬ、及び配列番号９６の核酸配列によってコードされたＶＨを含む抗体；並びに
ｑ）配列番号９７の核酸配列によってコードされたＬＣ、及び配列番号９８の核酸配列によってコードされたＨＣを含む抗体
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がロイシンではない前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がスレオニンである前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がアスパラギン酸ではない前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がアラニンである前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、かつ、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記ロイシンがスレオニンで置換されており、及び／又は前記アスパラギン酸がアラニンで置換されている前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がロイシンではないｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がスレオニンであるｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｈ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がアスパラギン酸ではないｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がアラニンであるｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
ｊ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、かつ、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記ロイシンがスレオニンで置換されており、及び／又は前記アスパラギン酸がアラニンで置換されているｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ）ＥＣ５０が約６．６０±約２．３３（標準偏差）ｐＭの見かけの親和性で、ヒトＢ細胞に発現するｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｂ）ＥＣ５０が約５．８９±約１．４０（標準偏差）ｐＭの見かけの親和性で、ヒト循環濾胞性ヘルパーＴ様細胞に発現するｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｃ）ＥＣ５０が約１０．６ｐＭの見かけの親和性で、ヒト濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞に発現するｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｄ）ＥＣ５０が約１．３２ｐＭの見かけの親和性で、カニクイザルＢ細胞に発現するｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｅ）ＥＣ５０が約１０．５ｐＭの見かけの親和性で、カニクイザルＴｆｈ様細胞に発現するｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｆ）ｃＡＭＰレポーターアッセイにおいて、ＥＣ５０が約９６１ｐＭで、ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達に拮抗する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｇ）約２．０１±約２．２８（標準偏差）ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｈ）約４．２８±約２．８８（標準偏差）ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ様細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｉ）約０．１１ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｊ）約１５．３±約１１．７（標準偏差）ｐＭのＥＣ５０で、ｃｙｎｏＣＸＣＲ５を発現するカニクイザルＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｋ）ｈＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、及びＸＣＲ１と検出可能に結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｌ）ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合を阻害する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｍ）ＥＣ５０が約２６ｐＭ未満の見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット又はウサギのオーソログを発現する細胞と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｎ）フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ放出のＣＸＣＬ１３による阻害に拮抗する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｏ）ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナーＴＭＣにおいてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｐ）ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、又はＸＣＲ１と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｑ）末梢血中のＢ細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｒ）末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｓ）脾臓中の真正Ｔｆｈ細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
ｔ）体液性免疫メモリー応答を損なう、抗体又はその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、以下の生物学的活性：
ａ）ＥＣ５０が約２６ｐＭ未満の見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット若しくはウサギのオーソログを発現する細胞と結合しないこと；
ｂ）フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ放出のＣＸＣＬ１３による阻害に拮抗すること；
ｃ）ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナーＴＭＣにおいてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させること；
ｄ）ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、若しくはＸＣＲ１と結合しないこと；
ｅ）末梢血中のＢ細胞を枯渇させること；
ｆ）末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させること；
ｇ）脾臓中の真正Ｔｆｈ細胞を枯渇させること；又は
ｈ）体液性免疫メモリー応答を損なうこと
の少なくとも１つを示す、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、アフコシル化されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸。
【請求項７】
ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ、ＶＬ又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、配列番号９５の核酸配列、配列番号９６の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【請求項８】
ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖、軽鎖又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、配列番号９７の核酸配列、配列番号９８の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【請求項９】
ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ、ＶＬ又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号ＰＴＡ−１２４３２３を有するプラスミドのインサートの核酸配列、ＡＴＣＣに寄託された受託番号ＰＴＡ−１２４３２４を有するプラスミドのインサートの核酸配列又は両者を含む、核酸。
【請求項１０】
請求項６〜９のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ-２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞又はＳｐ２．０細胞からなる群から選択される哺乳類細胞である、請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
前記細胞が、機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）を有していない、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
前記細胞が、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞又はＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞である、請求項１３に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、請求項１４に記載のPotelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが前記細胞によって発現され、アフコシル化される条件下で含む、方法。
【請求項１６】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントを単離することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１５に記載のアフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、フコシル化されていること以外は同一な抗体又はその抗原結合フラグメントと比較して、増加したＡＤＣＣ活性を有する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１９】
免疫疾患、障害又は状態の治療に使用するのための、請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
免疫疾患、障害又は状態の治療のための、請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は請求項１８に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２１】
必要とするヒト対象における、ＣＸＣＲ５によって媒介される免疫疾患、障害又は状態を治療又は予防する方法であって、前記方法は、前記対象に有効量の請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記疾患、障害又は状態は、炎症性応答、例えば、乾癬及び皮膚炎（例えばアトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患；皮膚筋炎；全身性強皮症及び硬化症；炎症性腸疾患に関連する応答（例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎）；呼吸窮迫症候群（成人呼吸窮迫症候群；ＡＲＤＳを含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；胃炎；糸球体腎炎；アレルギー性状態、例えば、湿疹及び喘息、並びにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う他の状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ（ＲＡ）；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病又はインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年型糖尿病；並びに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎で典型的に見出される、サイトカイン及びＴリンパ球が媒介する急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球遊出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（クリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血を含む）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体によって媒介される疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発性ニューロパシー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）又は自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本甲状腺炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎；ギラン−バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連の不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ、ベッカー、筋緊張性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位、エメリー−ドレフュス型）からなる群から選択され、並びに、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖を制御することを含む、方法。
【請求項２２】
前記疾患が、ＳＬＥ又は関節リウマチである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
免疫疾患、障害又は状態の治療用医薬品の製造における、請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項２４】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを使用して試料、組織又は細胞中のＣＸＣＲ５を検出する方法であって、前記試料、組織又は細胞を前記抗体と接触させること、及び前記抗体を検出することを含む、方法。
【請求項２５】
必要とする対象においてＣＸＣＲ５の生物学的活性を低減させる方法であって、前記方法は、治療有効量の請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記抗体が、脾臓中のＴｆｈ細胞、末梢血中のＢ細胞及び末梢血中のＴｆｈ様細胞からなる群から選択される、少なくとも１つのＣＸＣＲ５を発現する細胞の枯渇を媒介する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
必要とする対象において体液性免疫応答を阻害する方法であって、前記方法は、治療有効量の請求項１〜５、１７のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２８】
前記抗体が、脾臓中のＴｆｈ細胞、末梢血中のＢ細胞及び末梢血中のＴｆｈ様細胞からなる群から選択される、少なくとも１つのＣＸＣＲ５を発現する細胞の枯渇を媒介する、請求項２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、2017年12月1日に出願された米国特許出願第６２／５９３８３０号、及び2018年9月18日に出願された米国特許出願第６２／７３２９８５号の優先権を主張し、それぞれの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
配列表
本明細書は、2018年11月28日に同時に提出された配列表を参照によりさらに組み入れる。連邦規則集第37巻1.52(e)(5)に従い、配列表のテキストファイルは、PC72320A_Seq_Listing_ST25.txtとして特定され、112,891バイトであり、2018年11月15日に作成された。同時に電子的に出願された配列表は、明細書の範囲を超えず、したがって新規事項を含まない。
共同研究の陳述の当事者
ここで特許請求された発明は、以下に列挙される共同研究契約の当事者によって、又は当事者のためになされた。共同研究契約は、特許請求された発明がなされた日付又はその前に効力を有し、特許請求された発明は、共同研究契約の範囲内で行われた活動の結果としてなされた。共同研究契約の当事者は、The Regents of The University of CaliforniaのSan Diego campus及びPfizer Inc.を代表して、The Regents of The University of Californiaである。
技術分野
本発明は、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメント、並びにそれらの組成物、方法及び使用に関する。この抗体は、フコシル化及び／又はアフコシル化されており、変更されたエフェクター機能を示し得る。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）は、ＣＤ１８５又はバーキットリンパ腫受容体１（ＢＬＲ１）としても公知であり、Ｂ細胞、真正濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞、及び循環Ｔｆｈ様細胞（本明細書では同義的に「ｃＴｆｈ」及び「Ｔｆｈ様」細胞という）によって発現される天然に存在するＧタンパク質結合受容体である。ＣＸＣＲ５は、免疫応答において重要な役割を果たし、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）などの自己免疫疾患を治療する将来性のある標的である。
【０００３】
胚中心（ＧＣ）は、体液性免疫応答の重要な成分であり、抗原活性化Ｂ細胞が増殖し、分化し、体細胞超突然変異とそれらが産生する抗体の免疫グロブリン（Ｉｇ）クラススイッチを受ける部位である。真正Ｔｆｈ細胞は、このプロセスを補助する有益なシグナルを提供し、最終的には親和性成熟抗体の産生をもたらす。ＧＣ反応の体液性「メモリー」は、長生きする形質細胞によって維持されて、抗体レベルを維持し、さらに、メモリーＢ細胞によって維持されて、抗原で再攻撃されると、より高い親和性の形質細胞の産生をもたらすメモリーＴｆｈ細胞からの同族のものの助けにより二次ＧＣ反応を開始させる（(McHeyzer-Williams et al., 2011, Nature Rev. Immunol. 12(1):24-34）。循環Ｔｆｈ様細胞（以降、「Ｔｆｈ様」又は「ｃＴｆｈ」という）は、抗原と再び遭遇すると真正Ｔｆｈ細胞に分化して、これらのメモリー応答を同様に支持すると考えられる（Crotty et al., 2011, Annu. Rev. Immunol. 29:621-663）。
【０００４】
重要なことに、自己反応性Ｂ細胞の生成はまた、ＧＣ反応にも起因する可能性があるが、その結果は望ましくない。実際に、多数の慢性、全身性自己免疫疾患、例えばＳＬＥ、ＲＡ、筋炎、シェーグレン症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、及び強皮症が、自己反応性体液性応答の証拠を示す。例えば、これらの疾患の証明である自己抗体の多くは、高い親和性であり、体細胞突然変異しており、Ｉｇスイッチしており、これは、それらが自己反応性ＧＣ反応によって発生したことを示唆している（Vinuesa et al., 2009, Nature Rev. Immunol. 9(12):845-857）。加えて、これらの自己免疫疾患の多くを有する患者の末梢血で、循環Ｔｆｈ様細胞の出現頻度の増加が検出されており、そのレベルは、自己抗体力価及び／又は疾患の重症度と相関していることが多い（Tangye et al., 2013, Nature Rev. Immunol. 13(6):412-426）。総合すると、これらのデータは、Ｂ細胞、真正Ｔｆｈ細胞、及び循環Ｔｆｈ様細胞が、多くの全身性自己免疫疾患のための将来性のある治療標的であることを強調する。
【０００５】
ＣＸＣＲ５は、Ｂ細胞、真正Ｔｆｈ細胞、及び循環Ｔｆｈ様細胞によって発現され、そのＧＣ反応へのトラフィッキングを媒介し、ＣＸＣＲ５リガンドであるＣＸＣＬ１３の勾配に沿ってＧＣ反応に関与する（Vinuesa and Cyster, 2011, Immunity 35(5):671-680；Ansel et al., 1999, J. Exp. Med. 190(8):1123-1134；Ansel et al., 2000, Nature 406(6793):309-314；Cyster et al., 1999, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 246:87-92；Hardtke et al., 2005, Blood 106(6):1924-1931；Haynes et al., 2007, J. Immunol. 179(8):5099-5108）。したがって、ＣＸＣＲ５の標的化は、自己免疫疾患を治療するための治療上の利益を有する可能性がある。
【０００６】
加えて、ＣＸＣＲ５の標的化も、ＣＸＣＲ５を発現する細胞の増殖を特徴とするがん、例えば膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞性白血病、及びＢ細胞白血病において治療上の利益を有する可能性がある。
【発明の概要】
【０００７】
本出願は、ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）と特異的に結合する単離された抗体及びその抗原結合フラグメントを開示する。特定の態様において、抗体及びその抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５と結合し、ＣＸＣＬ１３へのＣＸＣＲ５の結合を減少させる。他の態様において、抗体は、フコシル化されていてもよいが、より好ましくは、それらは、アフコシル化されている。特定の態様において、抗体及びその抗原結合フラグメントは、変更されたエフェクター機能を示す。特定の態様において、抗体及びその抗原結合フラグメントは、アフコシル化されており、フコシル化されていること以外は同一な抗体及びその抗原結合フラグメントと比較して、増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す。
【０００８】
特定の態様において、本発明の開示は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する単離された抗体及びその抗原結合フラグメントであって、配列番号３２の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１（Ｌ１１）にロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）を含むエピトープに結合する、抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。
【０００９】
別の態様において、本開示は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、配列番号３２の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）を含むエピトープに結合する、抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。
【００１０】
当業者は、慣例的な実験だけを使用して、本明細書に記載される発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識すると予想され、又はそれらを確認することができる。このような均等物は、以下の実施形態（Ｅ）に包含されることが意図される。
【００１１】
Ｅ１．Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＲ５（ｈＣＸＣＲ５）又はカニクイザルＣＸＣＲ５（ｃｙｎｏＣＸＣＲ５）のＮドメイン内のエピトープと結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１２】
Ｅ２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってｈＣＸＣＲ５のアミノ酸残基１〜５０内のエピトープと結合するか、又は配列番号３３の番号付けに従ってｃｙｎｏＣＸＣＲ５のアミノ酸残基１〜５０内のエピトープに結合する、Ｅ１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１３】
Ｅ３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むエピトープと結合する、Ｅ１又はＥ２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１４】
Ｅ４．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープと結合する、Ｅ１〜Ｅ３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１５】
Ｅ５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープと結合する、Ｅ１〜Ｅ４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１６】
Ｅ６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むエピトープと結合するが、前記残基がロイシンではない場合、ｈＣＸＣＲ５と結合しない、Ｅ１〜Ｅ５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１７】
Ｅ７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むエピトープと結合するが、前記残基がスレオニンである場合、ｈＣＸＣＲ５と結合しない、Ｅ１〜Ｅ６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１８】
Ｅ８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープと結合するが、前記残基がアスパラギン酸ではない場合、ｈＣＸＣＲ５と結合しない、Ｅ１〜Ｅ７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００１９】
Ｅ９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープと結合するが、前記残基がアラニンである場合、ｈＣＸＣＲ５と結合しない、Ｅ１〜Ｅ８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２０】
Ｅ１０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープと結合するが、ロイシンがスレオニンで置換されているか、及び／又はアスパラギン酸がアラニンで置換されている場合、前記エピトープと結合しない、Ｅ１〜Ｅ９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２１】
Ｅ１１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、標準偏差がプラス・マイナス約２．３３ｐＭである約６．６０ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒトＢ細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２２】
Ｅ１２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、標準偏差がプラス・マイナス約１．４０ｐＭである約５．８９ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒト循環濾胞性ヘルパーＴ様（Ｔｆｈ様）細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２３】
Ｅ１３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１０．６ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒト濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２４】
Ｅ１４．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１．３２ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、カニクイザルＢ細胞で発現されるｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２５】
Ｅ１５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１０．５ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、カニクイザルＴｆｈ様細胞で発現されるｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２６】
Ｅ１６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ｃＡＭＰレポーターアッセイにおいて、約９６１ｐＭのＥＣ５０で、ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達に拮抗する、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２７】
Ｅ１７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、標準偏差がプラス・マイナス約２．２８ｐＭである約２．０１ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、Ｅ１〜Ｅ１６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２８】
Ｅ１８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、標準偏差がプラス・マイナス約２．８８ｐＭである約４．２８ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ様細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、Ｅ１〜Ｅ１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００２９】
Ｅ１９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約０．１１ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、Ｅ１〜Ｅ１８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３０】
Ｅ２０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、標準偏差がプラス・マイナス約１１．７ｐＭである約１５．３ｐＭのＥＣ５０で、ｃｙｎｏＣＸＣＲ５を発現するカニクイザルＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、Ｅ１〜Ｅ１９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３１】
Ｅ２１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ｈＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、及びＸＣＲ１と検出可能に結合しない、Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３２】
Ｅ２２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、末梢血中のＢ細胞を枯渇させる、Ｅ１〜Ｅ２１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３３】
Ｅ２３．末梢血中のＢ細胞の枯渇が可逆的である、Ｅ２２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３４】
Ｅ２４．抗体又はその抗原結合フラグメントが、末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させる、Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３５】
Ｅ２５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、脾臓中のＴｆｈ細胞を枯渇させる、Ｅ１〜Ｅ２４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３６】
Ｅ２６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、体液性免疫メモリー応答を損なう、Ｅ１〜Ｅ２４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３７】
Ｅ２７．カニクイザルにおいて、損なわれた体液性免疫メモリー応答が、破傷風（tetatus）トキソイドに対するものである、Ｅ２６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３８】
Ｅ２８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合を阻害する、Ｅ１又はＥ２７に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００３９】
Ｅ２９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、抗体又はその抗原結合フラグメントの非存在下におけるｃＡＭＰレベルと比較して、これ以外の状況でフォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰレベルの増加をもたらす、細胞におけるｃＡＭＰ産生のＣＸＣＬ１３阻害を阻害する、Ｅ１又はＥ２８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４０】
Ｅ３０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ｃＡＭＰ産生のＣＸＣＬ１３阻害を、約９６１ｐＭのＥＣ５０で阻害する、Ｅ１又はＥ２９に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４１】
Ｅ３１．ＣＸＣＬ１３阻害の最大阻害が、少なくとも約６０％、７０％又は８０％である、Ｅ３０に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４２】
Ｅ３２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約２６ｐＭ未満のＥＣ５０の見かけの親和性でＣＸＣＲ５発現ヒトＢ細胞（例えば、ＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞）と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット又はウサギのオーソログを発現する細胞と結合しない、Ｅ１〜Ｅ３１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４３】
Ｅ３３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ヒトドナー及びカニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）並びにヒトドナー扁桃単核細胞（tonsillar mononuclear cell：ＴＭＣ）においてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させる、Ｅ１〜Ｅ３２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４４】
Ｅ３４．ｈＣＸＣＲ５と特異的に結合し、Ｅ１〜Ｅ３３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体。
【００４５】
Ｅ３５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞と、約２６ｐＭ未満のＥＣ５０の見かけの親和性で結合するが、ＣＸＣＲ５オーソログを発現する細胞と実質的に結合しない、Ｅ１〜Ｅ３４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば、本明細書に記載されるアッセイのいずれかに基づいて、ＣＸＣＲ５オーソログを発現する細胞への検出不能な結合を示すか；又はｈＣＸＣＲ５への結合の少なくとも１０，０００倍大きいＥＣ５０の見かけの親和性で、ＣＸＣＲ５オーソログを発現する細胞に結合する。
【００４６】
Ｅ３６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、Ｅ１〜Ｅ３５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４７】
Ｅ３７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、Ｅ１〜Ｅ３６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４８】
Ｅ３８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む、Ｅ１〜Ｅ３７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００４９】
Ｅ３９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１、５、１３、３５、３７、４８〜５１、３９及び５８〜６２のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ、並びに配列番号６、１０、１２、１７、１８、３６、４０、５３〜５７及び６３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５０】
Ｅ４０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１、５、１３、３５、３７、４８〜５１、３９及び５８〜６２のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ、並びに配列番号６、１０、１２、１７、１８、３６、４０、５３〜５７及び６３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５１】
Ｅ４１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＬ及びＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ４０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５２】
Ｅ４２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５及びＥ３９〜Ｅ４０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５３】
Ｅ４３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５及びＥ３８〜Ｅ４０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５４】
Ｅ４４．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５及びＥ３８〜Ｅ４０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５５】
Ｅ４５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３６及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５６】
Ｅ４６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３６及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５７】
Ｅ４７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３６及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５８】
Ｅ４８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３６及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００５９】
Ｅ４９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３６及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６０】
Ｅ５０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６１】
Ｅ５１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６２】
Ｅ５２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６３】
Ｅ５３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣを含む、Ｅ１〜Ｅ３５及びＥ３８〜Ｅ４０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６４】
Ｅ５４．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６５】
Ｅ５５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣ、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６６】
Ｅ５６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号９５の核酸配列によってコードされたＶＬ、及び配列番号９６の核酸配列によってコードされたＶＨを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７、及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６７】
Ｅ５７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号９７の核酸配列によってコードされたＬＣ、及び配列番号９８の核酸配列によってコードされたＨＣを含む、Ｅ１〜Ｅ３５、Ｅ３７、及びＥ３９〜Ｅ４１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６８】
Ｅ５８．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列又はＶＨフレームワーク配列の一方又は両方は、その由来となるヒト生殖細胞系配列の形態に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であり、ＶＬフレームワーク配列の由来となるヒト生殖細胞系のＶＬ配列は、ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖλコンセンサス、Ｖλ１コンセンサス、Ｖλ３コンセンサス、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス及びＶκ３からなる群から選択され、ＶＨフレームワーク配列の由来となるヒト生殖細胞系のＶＨ配列は、ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１及びＶＨ４からなる群から選択される、Ｅ１〜Ｅ５７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００６９】
Ｅ５９．抗体又はその抗原結合フラグメントが、アフコシル化されている、Ｅ１〜Ｅ５８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７０】
Ｅ６０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、増強されたＡＤＣＣを示す、Ｅ５９に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７１】
Ｅ６１．配列番号６、７、８、２５、１７、１８、２３、２７、５２、５３、５４、５５、５６、５７及び６３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７２】
Ｅ６２．配列番号１、２、１３、２２、２４、２６、４７、４８、４９、５０、５１、５８、５９、６０、６１及び６２のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７３】
Ｅ６３．配列番号６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３配列を含む、Ｅ１〜Ｅ６２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７４】
Ｅ６４．配列番号１のアミノ酸配列のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３配列を含む、Ｅ１〜Ｅ６２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７５】
Ｅ６５．以下のアミノ酸置換：
ヒト生殖細胞系のＶＬ配列の対応する残基への、ＣＤＲ−Ｌ１における１、２、３、４、５又は６つの置換、
ヒト生殖細胞系のＶＬ配列の対応する残基への、ＣＤＲ−Ｌ２における１、２、３、４又は５つの置換、
ヒト生殖細胞系のＶＬ配列の対応する残基への、ＣＤＲ−Ｌ３における１、２、３、４、５又は６つの置換、
ヒト生殖細胞系のＶＨ配列の対応する残基への、ＣＤＲ−Ｈ１における１、２、３、４、５又は６つの置換、
ヒト生殖細胞系のＶＨ配列の対応する残基への、ＣＤＲ−Ｈ２における１、２、３、４、５、６、７又は８つの置換
の１つ以上を含み、
ヒト生殖細胞系のＶＬ配列は、ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス及びＶκ３コンセンサスからなる群から選択され、ヒト生殖細胞系のＶＨは、ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１及びＶＨ４からなる群から選択される、Ｅ１〜Ｅ６４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７６】
Ｅ６６．ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ７１、ＤＰ７５、ＤＰ１０、ＤＰ７、ＤＰ４９、ＤＰ５１、ＤＰ３８、ＤＰ７９、ＤＰ７８、ＤＰ７３、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１及びＶＨ４からなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＨ配列由来のＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ６５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７７】
Ｅ６７．ヒトＶＨ３生殖細胞系配列由来のフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ６６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７８】
Ｅ６８．ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０、ＤＰ３１、ＤＰ４６、ＤＰ４９及びＤＰ５１からなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＨ配列由来のフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ６７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００７９】
Ｅ６９．ＤＰ５４、ＤＰ４７、ＤＰ５０及びＤＰ３１からなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＨ配列由来のフレームワークＶＨ配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ６８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８０】
Ｅ７０．ヒト生殖細胞系のＤＰ５４配列由来のＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ６９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８１】
Ｅ７１．ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、ＤＰＬ１６、ＤＰＬ８、Ｖ１−２２、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス及びＶκ３コンセンサスからなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＬ配列由来のＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ７０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８２】
Ｅ７２．ＤＰＫ９、ＤＰＫ１２、ＤＰＫ１８、ＤＰＫ２４、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１、ＤＰＫ８、ＤＰＫ３、ＤＰＫ２１、Ｖｇ＿３８Ｋ、ＤＰＫ２２、ＤＰＫ１５、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス及びＶκ３からなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＬ配列由来のＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ７１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８３】
Ｅ７３．ヒト生殖細胞系のＶκ１配列由来のＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ７２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８４】
Ｅ７４．ＤＰＫ９、ＨＫ１０２＿Ｖ１、ＤＰＫ１及びＤＰＫ８からなる群から選択されるヒト生殖細胞系のＶＬ配列由来のＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ７３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８５】
Ｅ７５．ヒト生殖細胞系のＤＰＫ９配列由来のＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ６１〜Ｅ７４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８６】
Ｅ７６．ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列又はＶＨフレームワーク配列の一方又は両方は、その由来となるヒト生殖細胞系配列に、少なくとも９０％同一である、Ｅ６１〜Ｅ７５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８７】
Ｅ７７．ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列又はＶＨフレームワーク配列の一方又は両方は、その由来となるヒト生殖細胞系配列に、少なくとも６６％、７６％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である、Ｅ６１〜Ｅ７６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８８】
Ｅ７８．ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列又はＶＨフレームワーク配列の一方又は両方は、その由来となるヒト生殖細胞系配列と同一である、Ｅ６１〜Ｅ７７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００８９】
Ｅ７９．配列番号６に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ６１〜Ｅ７８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９０】
Ｅ８０．配列番号６に少なくとも９２％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ６１〜Ｅ７９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９１】
Ｅ８１．配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ６１〜Ｅ８０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９２】
Ｅ８２．配列番号１に少なくとも６６％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ６１〜Ｅ８１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９３】
Ｅ８３．配列番号１に少なくとも６６％、７６％、８０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ６１〜Ｅ８２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９４】
Ｅ８４．配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ６１〜Ｅ８３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９５】
Ｅ８５．Ｆｃドメインを含む、Ｅ１〜Ｅ８４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９６】
Ｅ８６．Ｆｃドメインが、ＩｇＡ（例えばＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ若しくはＩｇＧ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）のＦｃドメインである、Ｅ８５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９７】
Ｅ８７．Ｆｃドメインが、ＩｇＧのＦｃドメインである、Ｅ８６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９８】
Ｅ８８．ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４からなる群から選択される、Ｅ８７に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【００９９】
Ｅ８９．ＩｇＧが、ＩｇＧ１である、Ｅ８８に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１００】
Ｅ９０．配列番号２９に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ８９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０１】
Ｅ９１．配列番号２９に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一なアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ８９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０２】
Ｅ９２．配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１〜Ｅ８９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０３】
Ｅ９３．配列番号２８に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ９３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０４】
Ｅ９４．配列番号２８に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ９３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０５】
Ｅ９５．配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１〜Ｅ９４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０６】
Ｅ９６．ＡＴＣＣに寄託されたATCC受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされたＶＨ配列を含む単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０７】
Ｅ９７．ＡＴＣＣに寄託されたATCC受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされたＶＬ配列を含む単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０８】
Ｅ９８．ヒトＣＸＣＲ５への結合について、マウス１１Ｇ２、キメラ１１Ｇ２、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４８４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（���Ｃ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０、キメラ４１Ａ１０、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７、及びキメラ５Ｈ７の１種以上と競合する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１０９】
Ｅ９９．ヒトＣＸＣＲ５への結合について、ＣＸＣＬ１３と、Ｅ１〜Ｅ９８のいずれか一項に記載の抗体と競合する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１０】
Ｅ１００．抗体又はその抗原結合フラグメントが、Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ、マキシボディ、二価抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディである、Ｅ１〜Ｅ９９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１１】
Ｅ１０１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ及び１ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤか又はそれ未満の値のＫＤで、ヒトＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１００に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１２】
Ｅ１０２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ，１０ｐＭ、５ｐＭ及び１ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤか又はそれ未満の値のＫＤで、カニクイザルＣＸＣＲ５と結合する、Ｅ１〜Ｅ１０１に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１３】
Ｅ１０３．カニクイザルＣＸＣＲ５への抗体又はその抗原結合フラグメントの結合ＫＤが、ヒトＣＸＣＲ５への抗体又はその抗原結合フラグメントの結合ＫＤの１０倍以内である、Ｅ１〜Ｅ１０２に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１４】
Ｅ１０４．抗体又はその抗原結合フラグメントのヒトＣＸＣＲ５への結合ＫＤの、カニクイザルＣＸＣＲ５への結合と比較した比率が、５：１〜１：５である、Ｅ１〜Ｅ１０３に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１５】
Ｅ１０５．抗体又はその抗原結合フラグメントのヒトＣＸＣＲ５への結合ＫＤの、カニクイザルＣＸＣＲ５への結合と比較した比率が、２：１〜１：２である、Ｅ１〜Ｅ１０４に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１６】
Ｅ１０６．抗体又はその抗原結合フラグメントのカニクイザルＣＸＣＲ５への結合ＫＤの、ヒトＣＸＣＲ５への結合と比較した比率が、低い方の値が、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７，１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５及び６．２からなる群から選択され、高い方の値が、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、６．２、９、９．２及び１０からなる群から選択される範囲内である、Ｅ１〜Ｅ１０５に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１７】
Ｅ１０７．抗体又はその抗原結合フラグメントの配列番号３３のカニクイザルＣＸＣＲ５への結合ＫＤの、配列番号３２のヒトＣＸＣＲ５への結合と比較した比率が、約１．０〜約１０．０である、Ｅ１〜Ｅ１０６に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１８】
Ｅ１０８．ヒトにおける予測された半減期が、約１日〜２１日である、Ｅ１〜１０７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１１９】
Ｅ１０９．ヒトにおける予測された半減期が、約１７日である、Ｅ１〜１０８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２０】
Ｅ１１０．マウス１１Ｇ２ ＶＨ、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０ ＶＨ、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ヒト化４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７ ＶＨ、マウス５Ｈ７ ＶＬ、キメラ５Ｈ７ ＶＨ、及びキメラ５Ｈ７ ＶＬからなる群から選択される抗体又はその抗原結合フラグメントのＣＤＲを含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２１】
Ｅ１１１．マウス１１Ｇ２ ＶＨ、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０ ＶＨ、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ヒト化４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７ ＶＨ、マウス５Ｈ７ ＶＬ、キメラ５Ｈ７ ＶＨ及びキメラ５Ｈ７ ＶＬからなる群から選択される抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＬ及びＶＨを含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２２】
Ｅ１１２．
ａ．マウス１１Ｇ２ ＶＨ及びマウス１１Ｇ２ ＶＬを含む抗体；
ｂ．キメラ１１Ｇ２ ＶＨ及びキメラ１１Ｇ２ ＶＬを含む抗体；
ｃ．ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｄ．ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｅ．ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｆ．ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｇ．ヒト化１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｈ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｉ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｊ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｋ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）と、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｌ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｍ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｎ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｏ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｐ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｑ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｒ．ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）と、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）及びｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｓ．マウス４１Ａ１０ＶＨと、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）及びｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｔ．キメラ４１Ａ１０ＶＨと、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）及びｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｕ．ヒト化４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）と、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）及びｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｖ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４８）と、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）及びｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）からなる群から選択されるＶＬとを含む抗体；
ｗ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）と、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）及びｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）からなる群から選択されるＶＬと；
ｘ．マウス４１Ａ１０ＶＬと、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｙ．キメラ４１Ａ１０ＶＬと、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｚ．ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４３）と、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ａａ．ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４４）と、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｂｂ．ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４５）と、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｃｃ．ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４６）と、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｄｄ．ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４９）と、マウス４１Ａ１０ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ＶＨ、ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１５０）からなる群から選択されるＶＨとを含む抗体；
ｅｅ．マウス５Ｈ７ ＶＨと、マウス５Ｈ７及びキメラ５Ｈ７ ＶＬからなる群から選択されるＶＬを含む抗体；
ｆｆ．マウス５Ｈ７ ＶＬと、マウス５Ｈ７ ＶＨ及びキメラ５Ｈ７ ＶＨからなる群から選択されるＶＨと；
ｇｇ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）を含む抗体；
ｈｈ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）を含む抗体；
ｉｉ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）を含む抗体；
ｊｊ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）を含む抗体；
ｋｋ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）及びｈ１１Ｇ２（ＸＣ１５４）を含む抗体；
ｌｌ．マウス１１Ｇ２ ＶＨ及びマウス１１Ｇ２ ＶＬを含む抗体；
ｍｍ．キメラ１１Ｇ２ ＨＣ及びキメラ１１Ｇ２ ＬＣを含む抗体；
ｎｎ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）を含む抗体；
ｏｏ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）を含む抗体；
ｐｐ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）を含む抗体；
ｑｑ．ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）及びｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）を含む抗体；
ｒｒ．マウス４１Ａ１０ＶＨ及びマウス４１Ａ１０ＶＬを含む抗体；
ｓｓ．キメラ４１Ａ１０ ＨＣ及びキメラ４１Ａ１０ ＬＣを含む抗体；
ｔｔ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４２）を含む抗体；
ｕｕ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４３）を含む抗体；
ｖｖ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４４）を含む抗体；
ｗｗ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４７）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４５）を含む抗体；
ｘｘ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４２）を含む抗体；
ｙｙ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４３）を含む抗体；
ｚｚ．ｈ４１Ａ１０ＶＨ（ＸＣ１４８）及びｈ４１Ａ１０ＶＬ（ＸＣ１４４）を含む抗体；
ａａａ．マウス５Ｈ７ ＶＨ及びマウス５Ｈ７ ＶＬを含む抗体；並びに
ｂｂｂ．キメラ５Ｈ７ ＨＣ及びキメラ５Ｈ７ ＬＣを含む抗体
からなる群から選択される、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２３】
Ｅ１１３．
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｂ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号４の配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗体；
（ｃ）配列番号７の配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号４の配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗体；
（ｄ）配列番号１９の配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号１６の配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗体；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３を含む抗体；
（ｆ）ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされた、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、並びにＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされた、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３を含む抗体；
（ｇ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１５２）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｈ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１５５）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１５６）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｊ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１５７）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｋ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ３５０）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｌ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ３５１）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｍ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ３５２）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｎ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ３５３）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｏ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ３５４）と、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｐ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ１５１）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｑ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ１５３）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｒ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ１５４）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｓ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ３４６）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｔ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ３４７）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｕ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ３４８）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｖ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬ（ＸＣ３４９）と、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｗ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨ（ｍ４１Ａ１０ ＶＨ）と、配列番号１３、３７、５８、５９、６０、６１及び６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｘ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１４８）と、配列番号１３、３７、５８、５９、６０、６１及び６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｙ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１４７）と、配列番号１３、３７、５８、５９、６０、６１及び６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ｚ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＶＨ（ＸＣ１５０）と、配列番号１３、３７、５８、５９、６０、６１及び６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体；
（ａａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬ（マウスｈ４１Ａ１０ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｂｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４２ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｃｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４３ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｄｄ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４４ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｅｅ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４５ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｆｆ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４４６ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｇｇ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＶＬ（ｈ４１Ａ１０ ＸＣ１４９ ＶＬ）と、配列番号１７、１８、３８及び６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体；
（ｈｈ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨ（マウス５Ｈ７ ＶＨ）及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｊｊ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｋｋ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｌｌ）（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；
（ｍｍ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体；並びに
（ｎｎ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体
からなる群から選択される、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２４】
Ｅ１１４．ヒトＣＸＣＲ５への結合について、Ｅ１〜Ｅ１１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１２５】
Ｅ１１５．Ｅ１〜Ｅ１１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸。
【０１２６】
Ｅ１１６．Ｅ１〜Ｅ１０９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする少なくとも１つの核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１２７】
Ｅ１１７．配列番号９５、９６、９７及び９８に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１２８】
Ｅ１１８．配列番号９５に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１２９】
Ｅ１１９．配列番号９６に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３０】
Ｅ１２０．配列番号９５に記載の核酸配列及び配列番号９６に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３１】
Ｅ１２１．配列番号９７に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３２】
Ｅ１２２．配列番号９８に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３３】
Ｅ１２３．配列番号９７に記載の核酸配列及び配列番号９８に記載の核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３４】
Ｅ１２４．ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３５】
Ｅ１２５．ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含む単離された核酸分子。
【０１３６】
Ｅ１２６．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ、ＶＬ又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸が、配列番号９５の核酸配列、配列番号１０７の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【０１３７】
Ｅ１２７．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖、軽鎖又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸が、配列番号９７の核酸配列、配列番号９８の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【０１３８】
Ｅ１２８．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨをコードする単離された核酸であって、前記核酸が、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含む、核酸。
【０１３９】
Ｅ１２９．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＬをコードする単離された核酸であって、前記核酸が、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含む、核酸。
【０１４０】
Ｅ１３０．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＬ及びＶＨをコードする単離された核酸であって、前記核酸が、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列及びＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含む、核酸。
【０１４１】
Ｅ１３１．Ｅ１１５〜Ｅ１３０のいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。
【０１４２】
Ｅ１３２．Ｅ１１５〜Ｅ１３０のいずれか一項に記載の核酸分子、又はＥ１３１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０１４３】
Ｅ１３３．前記細胞が、哺乳類細胞である、Ｅ１３２に記載の宿主細胞。
【０１４４】
Ｅ１３４．前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ-２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞又はＳｐ２．０細胞である、Ｅ１３３に記載の宿主細胞。
【０１４５】
Ｅ１３５．前記宿主細胞が、機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）を有していない、Ｅ１３２〜１３４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【０１４６】
Ｅ１３６．前記細胞が、機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ酵素を発現しない、Ｅ１３２〜１３５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【０１４７】
Ｅ１３７．前記細胞が、機能的な酵素をコードするＦＵＴ８遺伝子を欠く、Ｅ１３２〜１３６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【０１４８】
Ｅ１３８．前記細胞が、機能的なＦＵＴ８遺伝子をコードする遺伝子を欠く、Ｅ１３２〜１３７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【０１４９】
Ｅ１３９．前記細胞が、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞又はＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞である、Ｅ１３２〜１３９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【０１５０】
Ｅ１４０．前記細胞が、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞である、Ｅ１３９に記載の宿主細胞。
【０１５１】
Ｅ１４１．抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントがＥ１〜Ｅ１１４のいずれか一項に記載の宿主細胞によって発現される条件下で、前記宿主細胞を培養することを含む、方法。
【０１５２】
Ｅ１４２．前記抗体又はその抗原結合フラグメントを単離することをさらに含む、Ｅ１４１に記載の方法。
【０１５３】
Ｅ１４３．アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、前記方法は、Ｅ１１５〜Ｅ１３０のいずれか一項に記載の核酸分子、又はＥ１３１に記載のベクターを含む宿主細胞を培養することを含み、前記宿主細胞は機能的なＦＵＴ８を有していない、方法。
【０１５４】
Ｅ１４４．宿主細胞が、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞である、Ｅ１４３に記載の方法。
【０１５５】
Ｅ１４５．Ｅ１４１〜Ｅ１１４のいずれか一項に記載の方法を使用して産生された、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１５６】
Ｅ１４６．前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、アフコシル化されている、Ｅ１〜Ｅ１１４のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１５７】
Ｅ１４７．前記アフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメントが、フコシル化されていること以外は同一な抗体又はその抗原結合フラグメントと比較して増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す、Ｅ１４６に記載のアフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１５８】
Ｅ１４８．前記アフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメントが、フコシル化されていること以外は同一な抗体又はその抗原結合フラグメントと比較して、約２倍、約５倍、約７倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍、約１２０倍、約１３０倍、約１４０倍及び約１４３倍大きいＡＤＣＣを示す、Ｅ１４６に記載のアフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１５９】
Ｅ１４９．Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
【０１６０】
Ｅ１５０．前記抗体又はその抗原結合フラグメントがアフコシル化されている、Ｅ１４９に記載の医薬組成物。
【０１６１】
Ｅ１５１．ＣＸＣＲ５の活性を低減する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１６２】
Ｅ１５２．炎症性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９〜Ｅ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１６３】
Ｅ１５３．免疫抑制を必要とする対象を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１６４】
Ｅ１５４．自己免疫疾患、障害又は状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１６５】
Ｅ１５５．それを必要とする対象におけるＣＸＣＲ５を発現する細胞の数を減少させる方法であって、前記方法は、対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１６６】
Ｅ１５６．細胞が、その表面上にＣＸＣＲ５を発現する、Ｅ１５５に記載の方法。
【０１６７】
Ｅ１５７．細胞が、Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞である、Ｅ１５６に記載の方法。
【０１６８】
Ｅ１５８．前記対象がヒトである、Ｅ１５１〜Ｅ１５７のいずれか一項に記載の方法。
【０１６９】
Ｅ１５９．前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を静脈内投与することを含む、Ｅ１５１〜Ｅ１５８のいずれか一項に記載の方法。
【０１７０】
Ｅ１６０．前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は医薬組成物を皮下投与することを含む、Ｅ１５１〜Ｅ１５８のいずれか一項に記載の方法。
【０１７１】
Ｅ１６１．前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は医薬組成物が、およそ、週に２回、週に１回、２週に１回、３週に１回、４週に１回、５週に１回、６週に１回、７週に１回、８週に１回、９週に１回、１０週に１回、１か月に２回、１か月に１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回、又は１２か月に１回投与される、Ｅ１５１〜Ｅ１６０のいずれか一項に記載の方法。
【０１７２】
Ｅ１６２．サンプル中のＣＸＣＲ５＋細胞の数を減少させる方法であって、前記方法は、前記細胞を、Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。
【０１７３】
Ｅ１６３．医薬品としての使用のための、Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０１７４】
Ｅ１６４．対象におけるＣＸＣＲ５の活性を低減する際における使用のための、Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０１７５】
Ｅ１６５．免疫抑制を必要とする対象の治療に使用するのための、Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０１７６】
Ｅ１６６．対象における自己免疫疾患、障害又は状態の治療に使用するのための、Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０１７７】
Ｅ１６７．免疫疾患、障害又は状態の治療用医薬品の製造におけるＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【０１７８】
Ｅ１６８．免疫疾患、障害又は状態の治療用医薬品の製造における、Ｅ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【０１７９】
Ｅ１６９．医学的状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１８０】
Ｅ１７０．状態が、炎症性応答、例えば、乾癬及び皮膚炎（例えばアトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患；皮膚筋炎；全身性強皮症及び硬化症など；炎症性腸疾患に関連する応答（例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎）；呼吸窮迫症候群（例えば成人呼吸窮迫症候群；ＡＲＤＳを含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；胃炎；糸球体腎炎；アレルギー性状態、例えば、湿疹及び喘息、並びにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う他の状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病又はインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年型糖尿病；結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎で典型的に見出される、サイトカイン及びＴリンパ球が媒介する急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球遊出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（これらに限定されるものではないが、クリオグロブリン血症（cryoglobinemia）又はクームス陽性貧血を含む）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体によって媒介される疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット（Bechet）病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発性ニューロパシー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）又は自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本甲状腺炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎；ギラン−バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連の不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ、ベッカー、筋緊張性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位、エメリー−ドレフュス型）からなる群から選択され、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞性白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖を制御する、Ｅ１６９に記載の方法。
【０１８１】
Ｅ１７１．Ｅ１〜Ｅ１１４及びＥ１４５〜Ｅ１４８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、又はＥ１４９及びＥ１５０のいずれか一項に記載の医薬組成物を使用してサンプル、組織、又は細胞中のＣＸＣＲ５を検出する方法であって、サンプル、組織又は細胞を抗体と接触させること、及び抗体を検出することを含む、方法。
【０１８２】
Ｅ１７２．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体は、
ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む抗体；
ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む抗体；
ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む抗体；
ｄ）ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＬ及びＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｅ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｆ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｇ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｈ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｊ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｋ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体；
ｌ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｍ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＬＣ及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｎ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣ及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｏ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣ及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣを含む抗体；
ｐ）配列番号９５の核酸配列によってコードされたＶＬ及び配列番号９６の核酸配列によってコードされたＶＨを含む抗体；並びに
ｑ）配列番号９７の核酸配列によってコードされたＬＣ及び配列番号９８の核酸配列によってコードされたＨＣを含む抗体
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８３】
Ｅ１７３．Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がロイシンではない前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がスレオニンである前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がアスパラギン酸ではない前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記残基がアラニンである前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｅ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５エピトープと結合するが、前記ロイシンがスレオニンで置換されており、及び／又は前記アスパラギン酸がアラニンで置換されている前記エピトープと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がロイシンではないｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がスレオニンであるｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｈ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がアスパラギン酸ではないｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記残基がアラニンであるｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
ｊ）配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、アミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合するが、前記ロイシンがスレオニンで置換されており、及び／又は前記アスパラギン酸がアラニンで置換されているｈＣＸＣＲ５又はそのフラグメントと結合しない抗体又はその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８４】
Ｅ１７４．Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）と特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体又はその抗原結合フラグメントが、
ａ）標準偏差がプラス・マイナス約２．３３ｐＭである約６．６０ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒトＢ細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｂ）標準偏差がプラス・マイナス約１．４０ｐＭである約５．８９ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒト循環濾胞性ヘルパーＴ様細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｃ）約１０．６ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、ヒト濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞で発現されるｈＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｄ）約１．３２ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、カニクイザルＢ細胞で発現されるｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｅ）約１０．５ｐＭのＥＣ５０の見かけの親和性で、カニクイザルＴｆｈ様細胞で発現されるｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｆ）ｃＡＭＰレポーターアッセイにおいて、約９６１ｐＭのＥＣ５０で、ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達に拮抗する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｇ）標準偏差がプラス・マイナス約２．２８ｐＭである約２．０１ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｈ）標準偏差がプラス・マイナス約２．８８ｐＭである約４．２８ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ様細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｉ）約０．１１ｐＭのＥＣ５０で、ｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＴｆｈ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｊ）標準偏差がプラス・マイナス約１１．７ｐＭである約１５．３ｐＭのＥＣ５０で、ｃｙｎｏＣＸＣＲ５を発現するカニクイザルＢ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示す、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｋ）ｈＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７及びＸＣＲ１と検出可能に結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｌ）ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合を阻害する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｍ）約２６ｐＭ未満のＥＣ５０の見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット又はウサギのオーソログを発現する細胞と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｎ）フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ放出のＣＸＣＬ１３阻害に拮抗する、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｏ）ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナーＴＭＣにおいてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｐ）ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、又はＸＣＲ１と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｑ）末梢血中のＢ細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｒ）末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；
ｓ）脾臓中の真正Ｔｆｈ細胞を枯渇させる、抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
ｔ）体液性免疫メモリー応答を損なう、抗体又はその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１８５】
Ｅ１７５．前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、以下の生物学的活性：
ａ）約２６ｐＭ未満のＥＣ５０の見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋ ヒトＢ細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット若しくはウサギのオーソログを発現する細胞と結合しないこと；
ｂ）フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ放出のＣＸＣＬ１３阻害に拮抗すること；
ｃ）ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナーＴＭＣにおいてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させること；
ｄ）ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、若しくはＸＣＲ１と結合しないこと；
ｅ）末梢血中のＢ細胞を枯渇させること；
ｆ）末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させること；
ｇ）脾臓中の真正Ｔｆｈ細胞を枯渇させること；又は
ｈ）体液性免疫メモリー応答を損なうこと
の少なくとも１つを示す、Ｅ１７２〜Ｅ１７４のいずれか一項に記載の抗体。
【０１８６】
Ｅ１７６．前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、アフコシル化されている、Ｅ１７２〜Ｅ１７５のいずれか一項に記載の抗体。
【０１８７】
Ｅ１７７．Ｅ１７２〜Ｅ１７６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸。
【０１８８】
Ｅ１７８．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ、ＶＬ又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、配列番号９５の核酸配列、配列番号９６の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【０１８９】
Ｅ１７９．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖、軽鎖又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、配列番号９７の核酸配列、配列番号９８の核酸配列又は両者を含む、核酸。
【０１９０】
Ｅ１８０．ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのＶＨ、ＶＬ又は両者をコードする単離された核酸であって、前記核酸は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートの核酸配列、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列又は両者を含む、核酸。
【０１９１】
Ｅ１８１．Ｅ１７７〜Ｅ１８０のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
【０１９２】
Ｅ１８２．Ｅ１８１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０１９３】
Ｅ１８３．前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ-２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞又はＳｐ２．０細胞からなる群から選択される哺乳類細胞である、Ｅ１８２に記載の宿主細胞。
【０１９４】
Ｅ１８４．前記細胞が、機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）を有していない、Ｅ１８３に記載の宿主細胞。
【０１９５】
Ｅ１８５．前記細胞が、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞又はＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞である、Ｅ１８４に記載の宿主細胞。
【０１９６】
Ｅ１８６．抗体又はその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、Ｅ１８５に記載のPotelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが前記宿主細胞によって発現され、アフコシル化される条件下で含む、方法。
【０１９７】
Ｅ１８７．前記抗体又はその抗原結合フラグメントを単離することをさらに含む、Ｅ１８６に記載の方法。
【０１９８】
Ｅ１８８．Ｅ１８６に記載のアフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、フコシル化されていること以外は同一な抗体又はその抗原結合フラグメントと比較して、増加したＡＤＣＣ活性を有する、抗体又はその抗原結合フラグメント。
【０１９９】
Ｅ１８９．Ｅ１７２〜Ｅ１７６及びＥ１８８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
【０２００】
Ｅ１９０．免疫疾患、障害又は状態の治療に使用するのための、Ｅ１７２〜Ｅ１７６、Ｅ１８８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント、及びＥ１８９に記載の医薬組成物。
【０２０１】
Ｅ１９１．免疫疾患、障害又は状態の治療のための、Ｅ１７２〜Ｅ１７６、Ｅ１８８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はＥ１８９に記載の医薬組成物の使用。
【０２０２】
Ｅ１９２．それを必要とするヒト対象における、ＣＸＣＲ５によって媒介される免疫疾患、障害又は状態を治療又は予防するための方法であって、前記方法は、対象に、有効量のＥ１８９に記載の医薬組成物を投与することであって、前記疾患、障害又は状態は、炎症性応答、例えば、乾癬及び皮膚炎（例えばアトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患；皮膚筋炎；全身性強皮症及び硬化症など；炎症性腸疾患に関連する応答（例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎）；呼吸窮迫症候群（例えば成人呼吸窮迫症候群；ＡＲＤＳを含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；大腸炎；胃炎；糸球体腎炎；アレルギー性状態、例えば、湿疹及び喘息、並びにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症性応答を伴う他の状態；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ（ＲＡ）；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病又はインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年型糖尿病；結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎で典型的に見出される、サイトカイン及びＴリンパ球が媒介する急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球遊出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（これらに限定されるものではないが、クリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血を伴う）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体によって媒介される疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発性ニューロパシー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）又は自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本甲状腺炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎；ギラン−バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連の不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ、ベッカー、筋緊張性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位、エメリー−ドレフュス型）からなる群から選択される、投与すること、並びに膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞性白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖を制御することを含む、方法。
【０２０３】
Ｅ１９３．前記疾患が、ＳＬＥ又は関節リウマチである、Ｅ１９２に記載の方法。
【０２０４】
Ｅ１９４．免疫疾患、障害又は状態の治療用医薬品の製造における、Ｅ１７２〜Ｅ１７６又はＥ１８８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【０２０５】
Ｅ１９５．Ｅ１７２〜Ｅ１７６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントを使用してサンプル、組織又は細胞中のＣＸＣＲ５を検出する方法であって、サンプル、組織又は細胞を抗体と接触させること、及び抗体を検出することを含む、方法。
【０２０６】
Ｅ１９６．それを必要とする対象においてＣＸＣＲ５の生物学的活性を低減させる方法であって、前記方法は、治療有効量のＥ１７２〜Ｅ１７６若しくはＥ１８８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又はＥ１８９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０２０７】
Ｅ１９７．抗体が、脾臓中のＴｆｈ細胞、末梢血中のＢ細胞及び末梢血中のＴｆｈ様細胞からなる群から選択される、ＣＸＣＲ５を発現する少なくとも１つの細胞の枯渇を媒介する、Ｅ１９６に記載の方法。
【０２０８】
Ｅ１９８．それを必要とする対象において体液性免疫応答を阻害する方法であって、方法は、治療有効量のＥ１７２〜Ｅ１７６又はＥ１８８のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合フラグメント又はＥ１８９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０２０９】
Ｅ１９９．抗体が、脾臓中のＴｆｈ細胞、末梢血中のＢ細胞及び末梢血中のＴｆｈ様細胞からなる群から選択される、ＣＸＣＲ５を発現する少なくとも１つの細胞の枯渇を媒介する、Ｅ１９８に記載の方法。
【０２１０】
前述の要約、加えて以下の発明の詳細な説明は、添付の図面と共に読めばよりよく理解されると予想される。本発明を例示する目的で、図面において実施形態を示す。しかしながら、本発明は示される正確な配置及び手段に限定されないことが理解されると予想される。
【図面の簡単な説明】
【０２１１】
【図１】図１は、免疫グロブリン重鎖定常領域中に特徴的に存在する標準的な２分岐型グリコフォームを示す図である。この図は、Kabat et al., 1991に記載されるように、Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85のＥｕ番号付けに従って、アミノ酸残基番号２９７（アスパラギン２９７；Ａｓｎ２９７）におけるＩｇＧ定常ドメイン上のアスパラギン結合型（N-結合型）グリコフォームを示す。
【図２】図２Ａ〜２Ｇは、免疫グロブリン重鎖定常領域中に特徴的に存在する代表的な２分岐型グリコフォームを描写する図である。「Ｇ０」は、末端シアル酸（ＮｅｕＡｃ）又はＧａｌが存在しない２分岐型構造を指し、「Ｇ１」は、１つのＧａｌを有し、ＮｅｕＡｃを有さない２分岐型構造を指し、「Ｇ２」は、２つの末端Ｇａｌを有し、ＮｅｕＡｃを有さない２分岐型構造を指す。各グリコフォームにおいて、フコースは、通常、哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞で産生された抗体中に存在する。図２ＡはＧ２Ｓ２を示し、図２ＢはＧ２Ｓ１を示し、図２ＣはＧ２を示し、図２ＤはＧ１を示し、図２ＥはＧ０を示し、図２ＦはＧ-１を示し、図２ＧはＧ-２を示す。
【図３】図３は、ヒトＣＸＣＲ５を発現するＨＥＫ２９３細胞（ｈＣＸＣＲ５ ２９３）（薄い方のバー）及び／又はカニクイザルＣＸＣＲ５を発現するＨＥＫ２９３細胞（ｃｙｎｏＣＸＣＲ５ ２９３）（濃い方のバー）に対する様々なモノクローナル抗体（ｘ軸上に示される）の結合を示す棒グラフである。図３に示されるモノクローナル抗体は、左から右へ、１１Ｂ９、１８Ｃ７、２１Ａ３、２３Ｆ１、３０Ｃ３、３１Ｆ３、３９Ｈ４、４７Ｄ１１、５１Ｄ１１、５２Ｅ７、５６Ａ９、５６Ｇ２、５７Ｈ５、５８Ｃ１２、５９Ｆ３、４Ｆ１、６Ｅ９、１２Ｅ１１、１６Ｄ１０、１８Ｇ４、１９Ｄ９、１９Ｆ８、２０Ｇ４、２６Ｅ２、４１Ａ１０、４８Ａ１０、１３Ｆ４、１７Ｄ５、１８Ｈ９、２３Ｃ６、１Ａ１１、１Ｄ１０、１Ｃ１１、３Ａ１、５Ｈ３、６Ｄ６、９Ｇ１１、１０Ｇ２、１２Ｃ１、１２Ｃ３、１５Ａ１１、１５Ｃ１０、１５Ｄ５、１８Ａ１１、１９Ｃ１１、２０Ｄ１０、２１Ｂ２、２１Ｇ３、２５Ｄ４、２５Ｅ１、５Ｈ７、１１Ｇ２、１８Ｂ１１、２３Ｄ５、２３Ｆ７、３１Ｅ５、１９Ｇ２及び３１Ｇ７である。
【図４Ａ】図４Ａは、ＣＸＣＲ１を発現する細胞への様々な抗ＣＸＣＲ５抗体の検出可能な結合の欠如を示す図を描写する。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＣＸＣＲ２を発現する細胞への様々な抗ＣＸＣＲ５抗体の結合の欠如を示す図を描写する。
【図４Ｃ】図４Ｃは、ＣＸＣＲ３を発現する細胞への様々な抗ＣＸＣＲ５抗体の結合の欠如を示す図を描写する。
【図４Ｄ】図４Ｄは、ＣＸＣＲ４を天然に発現するJurkat細胞への様々な抗ＣＸＣＲ５抗体の結合を示す図を描写する。
【図５】図５は、抗体（アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５（白丸）、フコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５（黒丸）、２Ｃ９（黒三角）、１６Ｄ７（黒四角）及び１１Ａ７（黒楕円））の、ＣＸＣＲ５を発現する細胞への結合親和性を示すグラフを示す。
【図６】図６は、ヒト及びマウスＣＸＣＲ５アミノ酸配列のアライメントを示す。この図は、ＣＸＣＲ５の様々な細胞外ドメインも示し、それらは下線を引いた「Ｎ」、「Ｌ１」、「Ｌ２」、及び「Ｌ３」で示される。
【図７】図７は、特定のアミノ酸残基がｈＣＸＣＲ５への抗体結合にとって重要であることを示す棒グラフである。すなわち、Ｄ１０Ｇ置換又はヒト配列へのＳＩの挿入は、抗体２Ｃ９による結合を壊滅させたが、他の３種の抗体による結合に影響を与えなかった。より重要なことに、Ｌ１１Ｔ又はＤ２２Ａの置換は、１１Ｇ２による結合を壊滅させたが、２Ｃ９、１６Ｄ７又は１１Ａ７の結合に影響を与えなかった。アミノ酸残基番号１９におけるＷからＫへの変更（Ｗ１９Ｋ）は、抗体１６Ｄ７及び１１Ａ７による結合を壊滅させたが、１１Ｇ２及び２Ｃ９による結合に影響を与えなかった。これらの４種の抗体は、ｈＣＸＣＲ５上の同じエピトープを共有しないことをこれらのデータは示す。
【図８】図８Ａは、雄カニクイザルにおける末梢血Ｂ細胞の枯渇及び再構成を示すグラフである。雄における血液１μｌ当たりの末梢血Ｂ細胞数を、探索的毒性試験の３５２日目まで示す。Ｂ細胞を、ＣＤ３−ＣＤ２０＋と定義した。個々の動物のデータを示す。雄サルにおけるＢ細胞の過去の範囲（２７２〜２５０３細胞／μＬ）を、点線で表示する。  図８Ｂは、雌カニクイザルにおける末梢血Ｂ細胞の枯渇及び再構成を示すグラフである。雌における血液１μｌ当たりの末梢血Ｂ細胞数を、探索的毒性試験の３５２日目まで示す。Ｂ細胞を、ＣＤ３−ＣＤ２０＋と定義した。個々の動物のデータを示す。雌サルにおけるＢ細胞の過去の範囲（２３３〜１７００細胞／μＬ）を、点線で表示する。  図８Ｃは、雄カニクイザルにおけるＴｆｈ様細胞（「ｃＴｆｈ」又は「循環Ｔｆｈ」細胞ともいう）の枯渇及び再構成を示すグラフである。雄における血液１μｌ当たりの末梢血Ｔｆｈ様細胞数を、探索的毒性試験の３５２日目まで示す。試験品は免疫表現型検査に使用されるＣＸＣＲ５抗体に干渉するため、Ｔｆｈ様細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ＣＸＣＲ５＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ｈＩｇＧ＋細胞の合計と定義した。個々の動物のデータを示す。  図８Ｄは、雌カニクイザルにおけるＴｆｈ様細胞（「ｃＴｆｈ」又は「循環Ｔｆｈ」細胞ともいう）の枯渇及び再構成を示すグラフである。雌における血液１μｌ当たりの末梢血Ｔｆｈ様細胞数を、探索的毒性試験の３５２日目まで示す。試験品は免疫表現型検査に使用されるＣＸＣＲ５抗体に干渉するため、Ｔｆｈ様細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ＣＸＣＲ５＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ｈＩｇＧ＋細胞の合計と定義した。個々の動物のデータを示す。
【図９Ａ】図９Ａは、カニクイザルにおける末梢血Ｂ細胞の枯渇及び再構成を示すグラフである。サルにおける血液１μｌ当たりの末梢血Ｂ細胞数を、ピボタルＧＬＰ毒性試験の３９３日目まで示す。Ｂ細胞を、ＣＤ３−ＣＤ２０＋ＨＬＡ−ＤＲ＋細胞と定義した。グループ平均データ（雄と雌を組み合わせた）±標準偏差を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、カニクイザルにおける末梢血ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞の枯渇及び再構成を示すグラフである。サルにおける血液１μｌ当たりの末梢血ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞数を、ピボタルＧＬＰ毒性試験の３９３日目まで示す。Ｂ細胞を、ＣＤ３−ＣＤ２０＋ＨＬＡ−ＤＲ＋細胞と定義した。グループ平均データ（雄と雌を組み合わせた）±標準偏差を示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、カニクイザルにおける末梢血循環濾胞性ヘルパーＴ細胞（ｃＴｆｈ；「Ｔｆｈ様細胞」ともいう）の枯渇及び再構成を示すグラフである。サルにおける血液１μｌ当たりの末梢血ｃＴｆｈ細胞数を、ピボタルＧＬＰ毒性試験の３９３日目まで示す。ｃＴｆｈ細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋細胞と定義した。グループ平均データ（雄と雌を組み合わせた）±標準偏差を示す。
【図９Ｄ】図９Ｄは、カニクイザルにおける検出可能な表面ＣＸＣＲ５を有する末梢血ＣＸＣＲ５＋ ｃＴｆｈ細胞（「Ｔｆｈ様細胞」ともいう）の枯渇及び再構成を示すグラフである。サルにおける血液１μｌ当たりの末梢血ＣＸＣＲ５＋ ｃＴｆｈ細胞数を、ピボタルＧＬＰ毒性試験の３９３日目まで示す。ｃＴｆｈ細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋細胞と定義した。グループ平均データ（雄と雌を組み合わせた）±標準偏差を示す。
【発明の詳細な説明】
【０２１２】
ＣＸＣＲ５に特異的に結合する抗体、さらに、ＣＸＣＲ５活性又はそのＣＸＣＬ１３との相互作用に拮抗する抗体が本明細書で開示される。ＣＸＣＲ５抗体を作製する方法、これらの抗体を含む組成物、及びこれらの抗体を使用する方法が提供される。
【０２１３】
フコシル化及びアフコシル化されたＣＸＣＲ５と結合する抗体が提供される。一部の実施形態において、ＣＸＣＲ５と結合する抗体を形成することが可能なアフコシル化された抗体の重鎖及び軽鎖も提供される。一部の実施形態において、１つ以上の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むアフコシル化された抗体の重鎖及び軽鎖が提供される。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、変更されたエフェクター機能を有する。一部の実施形態において、本発明の抗体は、本発明のフコシル化されていること以外は同一な抗ＣＸＣＲ５抗体と比べて、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。
【０２１４】
ＣＸＣＲ５と結合する抗体又はその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドが提供される。抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。フコシル化及び／又はアフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体を発現する宿主細胞が提供される。ＣＸＣＲ５に対するアフコシル化及びフコシル化された抗体を使用する治療方法が提供される。このような方法は、これらの疾患に限定されるものではないが、炎症性疾患及び免疫疾患を含む、ＣＸＣＲ５発現及び／又はＣＸＣＬ１３への結合に関連するか又はそれによって媒介される疾患を治療する方法を含むが、これらの方法に限定されるものではない。
【０２１５】
本明細書において使用される章の見出しは、単に系統化する目的のためであり、記載された主題を制限するものとして解釈されないものとする。
【０２１６】
特許出願、特許公報及びGenbank受託番号を含む本明細書において引用された全ての参考文献は、それぞれ個々の参考文献が、参照によりその全体が組み入れられると具体的に個別に示されたかのように、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２１７】
本明細書に記載又は参照される技術及び手順は、当業者に全般的によく理解されており、一般的に、従来の方法を使用して、例えば、Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al, eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al, eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)；及びCancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)；並びにそれらのアップデートされたバージョンに記載される広く利用される手法などを使用して利用される。
【０２１８】
ＣＸＣＲ５抗体は、フコシル化されたか又はアフコシル化されたかにかかわらず、ＣＸＣＲ５活性によって引き起こされる、及び／又はそれに関連する疾患、障害又は状態の予防、治療、及び／又は緩和に使用することができる。本明細書で開示された教示を用いれば当業者により理解されると予想されるとおり、このような疾患、障害又は状態としては、これらに限定されるものではないが、炎症性応答、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；慢性炎症性応答；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ；糖尿病（例えばＩ型糖尿病又はインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年型糖尿病；結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎で典型的に見出される、サイトカイン及びＴリンパ球が媒介する急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球遊出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（これらに限定されるものではないが、クリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血を含む）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体によって媒介される疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット（Bechet）病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発性ニューロパシー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）又は自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本甲状腺炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎；ギラン−バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連の不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ、ベッカー、筋緊張性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位、エメリー−ドレフュス型）が挙げられ、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞性白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖が制御される。
【０２１９】
Ｉ．定義
本発明は、以下の本発明の例示的な実施形態の詳細な説明及びそこに含まれる例を参照することによって、より容易に理解することができる。
【０２２０】
別段の指定がない限り、本明細書において使用される全ての専門用語や科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾がある場合、定義を含め本明細書を優先させる。
【０２２１】
さらに、文脈上別段の要求がなされない限り、又は明示的に示されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【０２２２】
本明細書に記載される発明の態様及び実施形態は、態様及び実施形態「からなる」及び／又は「から本質的になる」を含むことが理解される。本明細書で使用される場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」及び「その（the）」は、別段の指定がない限り、複数形の指示物を含む。
【０２２３】
本出願において、「又は」の使用は、明示的に述べられているか、又は当業者が認識している場合を除き、「及び／又は」を意味する。多数の従属請求項の文脈において、「又は」の使用は、１つより多くの先行する独立又は従属請求項に戻って参照する。
【０２２４】
「約」又は「およそ」は、測定可能な数の可変値と共に使用される場合、可変値の示された値を指し、さらに、示された値の実験誤差（例えば平均に関して９５％信頼区間）又は示された値の１０パーセントのうちどちらか大きい方の値以内の可変値の全ての値を指す。数値範囲は、範囲を定める数も含む。
【０２２５】
本発明の広範な範囲を記載する数値範囲及びパラメーターは近似値であるが、具体的な例に記載の数値は、できる限り正確に報告される。しかしながら、いずれの数値も、本来的に、それらそれぞれの試験測定で見出される標準偏差から必然的に生じる一定のエラーを含む。さらに、本明細書で開示される全ての範囲は、そこに含まれるありとあらゆる部分範囲を包含することが理解されるものとする。例えば、「１〜１０」と記述された範囲は、最小値１と最大値１０との間（それらの値を含む）のありとあらゆる部分範囲、すなわち、最小値１又はそれより大きい値、例えば１から６．１から始まり、最大値１０又はそれより小さい値、例えば５．５から１０で終わる全ての部分範囲を含むとみなされるべきである。
【０２２６】
明細書及び特許請求の範囲にわたり、「含む（comprise）」という語又は「含む（comprises）」若しくは「含むこと（comprising）」などの変化形は、述べられている整数又は整数の群の包含を意味するが、他のいずれの整数又は整数の群も排除されないことが理解されるものとする。文脈上別段の要求がなされない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。用語「例えば」に続くいずれの例も、網羅的又は限定であることを意図されない。
【０２２７】
本明細書において実施形態が「含む」という言語で記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」という用語で記載されること以外は類似の実施形態も提供されることが理解される。
【０２２８】
本発明の態様又は実施形態が、マーカッシュグループ又は選択肢の他のグループ分けの形態で記載される場合、本発明は、総じて列挙されたグループ全体を包含するだけでなく、グループの各メンバーを個々に、さらに、主要なグループのあらゆる可能なサブグループに加えて、グループのメンバーの１つ以上が欠けた主要なグループも包含する。本発明はまた、特許請求された発明におけるグループのメンバーのいずれかの１つ以上の明示的な排除も想定する。
【０２２９】
本明細書において使用される用語は、単に特定の実施形態を説明する目的のためであり、限定を意図しないことが理解されると予想される。本明細書及びそれに続く特許請求の範囲において、以下の意味を有すると定義される多数の用語について述べるものとする。
【０２３０】
用語「単離された分子」（ここで分子は、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、又は抗体若しくはそのフラグメントである）は、その起源又は由来に基づき、（１）その自然の状態でそれと共に存在する天然に付随する成分と付随していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種由来の細胞によって発現される分子、又は（４）天然に存在しない分子である。したがって、化学的に合成された分子、又はその天然の由来となる細胞と異なる細胞系で発現された分子は、その天然に付随する成分から「単離された」ということになる。分子はまた、当業界において周知の精製技術を使用する単離によって、天然に付随する成分を実質的に含まないようにすることもできる。分子の純度又は均一性は、当業界において周知の多数の手段によってアッセイすることができる。例えば、ポリペプチドサンプルの純度は、当業界において周知の技術を使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動及びポリペプチドを可視化するためのゲルの染色を使用してアッセイすることができる。特定の目的のために、ＨＰＬＣ又は精製分野において周知の他の手段を使用することによって、より高度な分解能を提供することができる。
【０２３１】
「実質的に純粋な」は、本明細書で使用される場合、目的の種が、存在する優勢種である（すなわち、モル単位で、それが組成物中で他のいずれの個々の種より豊富である）ことを意味し、好ましくは、実質的に精製した画分は、目的の種（例えば、抗体又は受容体を含む糖タンパク質）が、存在する全ての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル単位で）を構成する組成物であることを意味する。一般的に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約８０パーセントより多く、より好ましくは、約８５％、９０％、９５％及び９９％より多くを構成すると予想される。最も好ましくは、目的の種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる必須の均一性（従来の検出方法では組成物中に汚染種を検出できない）に精製される。特定の実施形態において、実質的に純粋な材料は、少なくとも５０％純粋であり（すなわち、汚染物質を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋であり、より好ましくは、少なくとも９５％純粋であり、さらにその上より好ましくは、少なくとも９８％純粋であり、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である。
【０２３２】
用語「同一性」は、当業界で公知のように、配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。当業界において、「同一性」はまた、場合によっては、ヌクレオチド又はアミノ酸配列のストリング間の一致する対によって決定される、ポリペプチド又は核酸分子配列間における配列の関連の程度も意味する。「同一性」は、ギャップアライメントがコンピュータープログラムの特定の数学モデル（すなわち「アルゴリズム」）によって割り当てられた２つ以上の配列間の同一な一致する対のパーセントを測定する。
【０２３３】
用語「類似性」は、関連する概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一な一致する対と保存的置換の一致する対の両方を含む類似性の尺度を指す。保存的置換はポリペプチドに適用され、核酸分子に適用されないため、類似性は、ポリペプチド配列比較でのみ論じられる。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個のうち１０個の同一なアミノ酸を有し、残りが全て非保存的置換である場合、同一性及び類似性パーセントは、両方とも５０％になる。同じ例において、保存的置換が存在する位置がさらに５個ある場合、同一性パーセントは５０％のままであるが、類似性パーセントは７５％（２０個のうち１５個）になる。それゆえに、保存的置換が存在する場合において、２つのポリペプチド配列間の類似性の程度は、それら２つの配列間の同一性パーセントより高くなる。
【０２３４】
本発明によるポリペプチド又は抗体の「フラグメント」又は「部分」は、短縮化によって、例えばポリペプチドのＮ及び／又はＣ末端の終端から１つ以上のアミノ酸を除去することによって作製することができる。この方法で、１０個まで、２０個まで、３０個まで、４０個まで、又はそれより多くのアミノ酸を、Ｎ及び／又はＣ末端から除去してもよい。またフラグメント又は部分は、１つ以上の内部欠失によって生成することもできる。
【０２３５】
バリアント抗体は、上記で論じられた特定の配列及びフラグメントからの、１、２、３、４、５、１０個まで、２０個まで、３０個まで、又はそれより多くのアミノ酸置換及び／又は欠失及び／又は挿入を含んでいてもよい。「欠失」バリアントは、個々のアミノ酸の欠失、２、３、４又は５アミノ酸などのアミノ酸の小さいグループの欠失、又はそれより大きいアミノ酸領域の欠失、例えば特定のアミノ酸ドメイン又は他の特徴の欠失を含んでいてもよい。「挿入」バリアントは、個々のアミノ酸の挿入、２、３、４又は５アミノ酸などのアミノ酸の小さいグループの挿入、又はそれより大きいアミノ酸領域の挿入、例えば特定のアミノ酸ドメイン又は他の特徴の挿入を含んでいてもよい。「置換」バリアントは、好ましくは、１つ以上のアミノ酸の同じ数のアミノ酸で置き換えること、及び保存的アミノ酸置換を作製することを含む。例えば、アミノ酸は、類似の特性を有する代替アミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疎水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸又は別の脂肪族アミノ酸で置換されていてもよい。好適な置換基を選択するのに使用できる２０種の主要アミノ酸の一部の特性は、以下のとおりである。
【０２３６】
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されたものである。置換変異誘発のための最も関心の高い部位としては、高度可変領域が挙げられるが、フレームワークの変更も企図される。表１の「保存的置換」の項目の下に、保存的置換を示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、以下に示される、又はアミノ酸クラスへの言及でさらに後述されるような、「代表的置換」と称されるより実質的な変化が導入されてもよく、生成物をスクリーニングしてもよい。
【０２３７】
【表１】
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【０２３８】
抗体の生物学的な特性における実質的な改変は、（ａ）例えばβシート若しくはヘリックスのコンフォメーションとしての、置換のエリアにおけるポリペプチドバックボーンの構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対するそれらの作用が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づく以下のグループに分けられる：
ｉ．非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｉｉ．極性、電荷なし：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｉｉｉ．酸性（負電荷を有する）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｉｖ．塩基性（正電荷を有する）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｖ．鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
ｖｉ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【０２３９】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスで交換することによってなされる。
【０２４０】
例えば、作製が可能な置換の１つのタイプは、例えば、これらに限定されるものではないがアラニン又はセリンなどの別の残基に化学的に反応性を有し得る、抗体中の１つ以上のシステインを変化させることである。例えば、標準的ではないシステインの置換が存在していてもよい。置換は、可変ドメインのＣＤＲ若しくはフレームワーク領域、又は抗体の定常領域中に作製することができる。一部の実施形態において、システインは、標準的である。また、抗体の適正なコンフォメーションの維持に関与しないあらゆるシステイン残基が、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を予防するために、一般的にセリンで置換されていてもよい。逆に言えば、特に抗体がＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合、その安定性を改善するために、システイン結合が抗体に追加されてもよい。
【０２４１】
「抗体」は、免疫グロブリン分子であって、免疫グロブリン分子の可変領域に配置された少なくとも１つの抗原認識部位を介して、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的への特異的な結合が可能なものである。この用語は、本明細書で使用される場合、無傷のポリクローナル又はモノクローナル抗体だけでなく、別段の規定がない限り、特異的な結合について無傷抗体と競合するそのあらゆる抗原結合フラグメント、抗原結合フラグメントを含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他のあらゆる改変された立体配置も包含する。抗原結合フラグメントとしては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ、例えば、サメ及びラクダ抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むフラグメント、単鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ-ＮＡＲ及びビス-ｓｃＦｖ、及び少なくとも、ポリペプチドに特異的な抗原結合を付与するのに十分な免疫グロブリンのフラグメントを含有するポリペプチドが挙げられる。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＭ（又はそれらのサブクラス）などのあらゆるクラスの抗体を含み、抗体は、必ずしもいずれの特定のクラスに属しているとは限らない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列によっては、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り振られる場合もある。免疫グロブリンには、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのうちいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの様々なクラスのサブユニット構造及び３次元立体配置は周知である。
【０２４２】
抗体の「抗原結合部位」又は「抗原結合フラグメント」という用語（又は単に「抗体部分」）は、本明細書で同義的に使用される場合、抗原（例えば、ＣＸＣＲ５）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。全長抗体のフラグメントによって、抗体の抗原結合機能が実行され得ることが示されている。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341:544-546）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体及びイントラボディが挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは別の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、それらをＶＬ及びＶＨ領域が対になって１価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知）にすることを可能にする合成リンカーによって接合することができる；例えば、Bird et al. Science 242:423-426 (1988)及びHuston et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)を参照されたい）。またこのような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図される。単鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディも包含される。ダイアボディは、２価の二重特異性抗体であって、ＶＨ及びＶＬドメインが、単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上での２つのドメイン間で対を形成するには短すぎるリンカーが使用されており、それによりドメインを別の鎖の相補的ドメインと対を形成させ、２つの抗原結合部位が作り出されるものである（例えば、Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)；Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-1123を参照）。
【０２４３】
抗体は、例えば、これらに限定されるものではないが、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウスなどのあらゆる哺乳動物由来であってもよいし、又は鳥類（例えばニワトリ）、魚類（例えば、サメ）及びラクダ科動物（例えば、ラマ）などの他の動物由来であってもよい。
【０２４４】
抗体の「可変領域」は、抗体の軽鎖（ＶＬ）の可変領域又は抗体の重鎖（ＶＨ）の可変領域のいずれか単独、又は組合せを指す。当業界で公知のように、重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、高度可変領域（ＨＶＲ）としても公知の３つの「相補性決定領域（ＣＤＲ）」によって接続される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。特にＣＤＲ領域の外側の（すなわち、フレームワーク領域中の）アミノ酸残基中に置換を有する対象の可変領域のバリアントが望ましい場合、適切なアミノ酸置換、好ましくは保存的アミノ酸置換は、対象の可変領域を、対象の可変領域と同じ標準的なクラス内のＣＤＲ１及びＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することによって同定することができる（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196(4): 901-917, 1987）。
【０２４５】
特定の実施形態において、ＣＤＲの決定的な区画及び抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造解析及び／又は抗体−リガンド複合体の構造解析によって達成される。特定の実施形態において、これはＸ線結晶学などの当業者公知の様々な技術のいずれかによって達成することができる。特定の実施形態において、ＣＤＲ領域を同定又は推定するために、様々な分析方法を利用することができる。特定の実施形態において、ＣＤＲ領域を同定又は推定するために、様々な分析方法を利用することができる。このような方法の例としては、これらに限定されるものではないが、Kabatの定義、Chothiaの定義、ＡｂＭの定義、接触の定義、及びコンフォメーションの定義が挙げられる。
【０２４６】
Kabatの定義は、抗体における残基の番号付けの標準であり、典型的にはＣＤＲ領域を同定するのに使用される。例えば、Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8を参照されたい。Chothiaの定義は、Kabatの定義に類似しているが、Chothiaの定義は、特定の構造的なループ領域の位置を考慮に入れる。例えば、Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17；Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-83を参照されたい。ＡｂＭの定義は、抗体構造をモデル化するOxford Molecular Groupによって生産された統合された一組のコンピュータープログラムを使用する。例えば、Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; “AbM（商標）, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,” Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltdを参照されたい。ＡｂＭの定義は、知識データベースの組合せ及び非経験的方法、例えばSamudrala et al., 1999, “Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach,” in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198によって記載されたものを使用して、一次配列から抗体の三次構造をモデル化する。
【０２４７】
接触の定義は、入手可能な複合体結晶構造の分析に基づく。例えば、MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45を参照されたい。本明細書でＣＤＲの「コンフォメーションの定義」として言及された別のアプローチにおいて、ＣＤＲの位置は、抗原結合へのエンタルピー的な寄与をもたらす残基として同定することができる。例えば、Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、厳密には上記のアプローチの１つに従っていない場合もあるが、それでもKabatのＣＤＲの少なくとも一部とオーバーラップすると予想され、ただしそれらは、特定の残基又は残基のグループが顕著に抗原結合に影響を与えないという予測又は実験的発見の観点で短くされる場合もあれば、又は長くされる場合もある。ＣＤＲは、本明細書で使用される場合、アプローチの組合せも含め当業界において公知のいずれかのアプローチによって定義されるＣＤＲを指す場合もある。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。１つより多くのＣＤＲを含有するあらゆる所与の実施形態に関して、ＣＤＲは、Kabat、Chothia、拡張（extended）、ＡｂＭ、接触、及び／又はコンフォメーションの定義のいずれかに従って定義することができる。
【０２４８】
「接触残基」は、本明細書においてそれにより特異的に結合した抗体又は抗原に関して使用される場合、同族の抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基の重原子の４Å以下の範囲内である少なくとも１つの重原子（すなわち、水素ではない）を含む抗体／抗原上に存在するアミノ酸残基を指す。
【０２４９】
「フレームワーク」（ＦＲ）残基は、ＣＤＲ残基以外の抗体可変ドメイン残基である。ＶＨ又はＶＬドメインフレームワークは、４つのフレームワーク下位領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、以下の構造：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４で、ＣＤＲが散在する。
【０２５０】
本明細書においてこれまでに述べたように、可変ドメイン中の残基は、典型的に、抗体の編集（compilation）の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムであるKabatに従って番号付けされる。Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.を参照されたい。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＣＤＲの短縮化、又はそれへの挿入に対応するより少ない若しくは追加のアミノ酸を含有する場合がある。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Kabatに従って残基５２ａ）を含んでいてもよく、重鎖ＦＲ残基８２の後に残基（例えばKabatに従って残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃ）が挿入されていてもよい。残基のKabatの番号付けは、所与の抗体の配列の相同性を有する領域で「標準」のKabatで番号付けされた配列とアライメントすることによって、その抗体に対して決定することができる。Kabatの番号付けを割り当てる様々なアルゴリズムが利用可能である。Abysisのバージョン２．３．３リリース（www.abysis.org）でインプリメントされるアルゴリズムは、可変領域ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３にKabatの番号付けを割り当てるのに使用でき、次いでＡｂＭの定義は、ＣＤＲ−Ｈ１に使用できる。
【０２５１】
「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在する可能性がある存在し得る天然に存在する突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原性部位に向けられることから、高度に特異的である。さらに、典型的に異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向けられている。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られたという抗体の特徴を示し、いずれの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されないものとする。例えば、本発明に従って使用され得るモノクローナル抗体は、最初にKohler and Milstein, 1975, Nature 256:495によって記載されたハイブリドーマ方法によって作製してもよいし、又は例えばＵＳ４８１６５６７に記載されるような組換えＤＮＡ方法によって作製してもよい。またモノクローナル抗体は、例えば、McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554に記載される技術を使用して生成したファージライブラリーから単離することもできる。「ヒト化」抗体は、本明細書で使用される場合、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらのフラグメント（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合部分配列）である非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲからの残基が、望ましい特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体でも移入したＣＤＲ又はフレームワーク配列でも見出されないが、さらに抗体の性能を洗練及び最適化するために含まれる残基を含んでいてもよい。
【０２５２】
本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、親和性成熟であり得る。例えば、親和性成熟抗体は、当業界において公知の手順によって産生することができる（Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783；Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813；Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155；Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004；Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9；Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896及びＷＯ２００４／０５８１８４）。
【０２５３】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／又は本明細書で開示されるようにヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されたものである。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。
【０２５４】
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来である抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体、又はその逆の抗体を指すことが意図される。この用語はまた、１つの種からの１つの個体（例えば、第１のマウス）由来のＶ領域及び同じ種からの別の個体（例えば、第２のマウス）由来の定常領域を含む抗体も包含する。
【０２５５】
用語「抗原（Ａｇ）」は、Ａｇを認識する抗体（Ａｂ）を産生するための、又は発現ライブラリー（例えば、とりわけ、ファージ、酵母若しくはリボソームディスプレイライブラリー）をスクリーニングするための、免疫応答性を有する脊椎動物の免疫化に使用される分子実体を指す。本明細書において、Ａｇは、広い範囲で名付けられ、一般的に、Ａｂによって特異的に認識される標的分子を含むことが意図されており、したがって、Ａｂを発生させる免疫化プロセスで、又はＡｂを選択するためのライブラリーのスクリーニングで使用される分子のフラグメント又は模擬体を含む。したがって、本発明のＣＸＣＲ５に結合する抗体に関して、それらの単量体及び多量体、例えば二量体、三量体などを含む哺乳類種（例えば、ヒト、サル、マウス及びラットＣＸＣＲ５）由来の全長ＣＸＣＲ５、加えて、ＣＸＣＲ５の短縮化及び他のバリアントが、抗原と称される。
【０２５６】
一般的に、用語「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原（例えば、タンパク質、核酸、炭水化物又は脂質など）のエリア又は領域、すなわち、抗体と物理的に接触するエリア又は領域を指す。したがって、用語「エピトープ」は、抗体の抗原結合領域の１つ以上において抗体によって認識され抗体と結合することが可能な分子の一部を指す。典型的に、エピトープは、「抗体又はその抗原結合フラグメント」（Ａｂ）と、その対応する抗原との分子相互作用との関連で定義される。エピトープはしばしば、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の表面集団からなり、特異的な３次元の構造的特徴に加えて特異的な電荷の特徴を有する。一部の実施形態において、エピトープは、タンパク質エピトープであり得る。タンパク質エピトープは、リニアであってもよいし、又はコンフォメーションであってもよい。リニアエピトープにおいて、タンパク質と相互作用する分子（例えば抗体）との相互作用点の全てが、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線的に存在する。「非リニアエピトープ」又は「コンフォメーショナルエピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原性タンパク質内に非連続のポリペプチド（又はアミノ酸）を含む。用語「抗原エピトープ」は、本明細書で使用される場合、当業界において周知のあらゆる方法によって、例えば従来のイムノアッセイによって決定される場合、抗体が特異的に結合できる抗原の部分と定義される。あるいは、発見プロセス中、抗体の生成及び特徴付けは、望ましいエピトープに関する情報を明瞭にすることができる。この情報から、同じエピトープへの結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能になる。これを達成するためのアプローチは、競合及び交差競合研究を実行して、ＣＸＣＲ５への結合について競合又は互いに交差競合する抗体、例えば、抗原への結合について競合する抗体を発見することである。
【０２５７】
エピトープと「優先的に結合する」又は「特異的に結合する」抗体（本明細書で同義的に使用される）は、当業界でよく理解されている用語であり、このような特異的又は優先的な結合を決定する方法も当業界において周知である。分子が、代替の細胞又は物質との反応又は会合と比べて、特定の細胞又は物質と、より高頻度で、より迅速に、より長い期間にわたり、及び／又はより大きい親和性で反応又は会合する場合、その分子は、「特異的な結合」又は「優先的な結合」を示すと言われる。抗体が、他の物質に結合する場合と比べて、より大きい親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い期間にわたり結合する場合、その抗体は、標的と「特異的に結合する」又は「優先的に結合する」。また、抗体がサンプル中に存在する他の物質に結合する場合と比べて、抗体が、サンプル中の標的に、より大きい親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い期間にわたり結合する場合も、その抗体は、その標的と「特異的に結合する」又は「優先的に結合する」。例えば、ＣＸＣＲ５エピトープに特異的又は優先的に結合する抗体は、抗体が他のＣＸＣＲ５エピトープ又は非ＣＸＣＲ５エピトープに結合する場合と比べて、より大きい親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い期間にわたりこのエピトープと結合する抗体である。またこの定義を読めば、例えば、第１の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（又は部分又はエピトープ）は、第２の標的に特異的又は優先的に結合する場合もあるし、又はそうではない場合もあることも理解される。そのようなものとして、「特異的な結合」又は「優先的な結合」は、必ずしも独占的な結合を必要とするとは限らない（しかしながらそれを含む場合もある）。一般的に、ただし必ずしもその限りではないが、結合への言及は、優先的な結合を意味する。「特異的な結合」又は「優先的な結合」は、特異的な分子を認識し、それと結合するが、実質的にサンプル中の他の分子を認識したり又はそれと結合したりしない、化合物、例えば、タンパク質、核酸、抗体などを含む。例えば、サンプル中の同族のリガンド又は結合パートナーを認識し、それと結合するが、実質的にサンプル中の他の分子を認識したり、又はそれと結合したりしない抗体又はペプチド受容体（例えば、ＣＸＣＲ５と結合する抗ＣＸＣＲ５抗体）は、その同族のリガンド又は結合パートナーに特異的に結合する。したがって、指示されたアッセイ条件下で、特定された結合部分（例えば、抗体若しくはその抗原結合フラグメント又はそれらの受容体若しくはリガンド結合フラグメント）は、特定の標的分子と優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の成分と有意な量で結合しない。
【０２５８】
目的の分子と特異的に結合する抗体又はペプチドを選択するために、様々なアッセイ様式を使用することができる。同族のリガンド又は結合パートナーと特異的に結合する、抗原又は受容体と特異的に反応する抗体又はそれらのリガンド結合フラグメントを同定するのに使用できる多くのアッセイのなかでも、例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降、Biacore（商標）（GE Healthcare, Piscataway, NJ）、KinExA、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、Octet（商標）（ForteBio, Inc., Menlo Park, CA）及びウェスタンブロット分析が挙げられる。特異的又は選択的な反応は、典型的には、バックグラウンドシグナル又はノイズの少なくとも２倍、より典型的には、それより１０倍大きいバックグラウンド、さらにより典型的には、それより５０倍大きいバックグラウンド、より典型的には、それより１００倍大きいバックグラウンド、さらにより典型的には、それより５００倍大きいバックグラウンド、さらにより典型的には、それより１０００倍大きいバックグラウンド、及びさらにより典型的には、それより１０，０００倍大きいバックグラウンドと予想される。加えて、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が、≦１μＭ、好ましくは、≦１００ｎＭ、より好ましくは、≦１０ｎＭ、さらにより好ましくは、≦１００ｐＭ、さらにその上より好ましくは、≦１０ｐＭ、さらにより好ましくは、≦１ｐＭである場合、抗原と「特異的に結合する」と言われる。一部の実施形態において、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が≦７ｎＭである場合、抗原と「特異的に結合する」と言われる。
【０２５９】
用語「結合親和性」は、本明細書において、２つの分子間、例えば抗体又はそのフラグメントと抗原との非共有結合相互作用の強度の尺度として使用される。用語「結合親和性」は、１価相互作用（固有の活性）を記載するために使用される。
【０２６０】
加えて、ＣＸＣＲ５を発現する細胞へのＣＸＣＲ５抗体の結合親和性を決定するために、細胞結合実験を実行して、見かけの親和性を決定することができる。標的を発現する細胞への抗体結合の見かけの親和性は、フローサイトメトリーによって抗原結合集団の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）を定量化する平衡結合滴定曲線のＥＣ５０として計算することができる。
【０２６１】
１価相互作用を介した、２つの分子間の、例えば抗体又はそのフラグメントと、抗原との間の、結合親和性は、解離定数（ＫＤ）の決定によって定量化することができる。順に、ＫＤは、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）方法（Biacore）を使用して、複合体の形成及び解離の反応速度の測定によって決定することができる。１価複合体の会合及び解離に対応する速度定数は、それぞれ、会合速度定数ｋａ（又はｋｏｎ）及び解離速度定数ｋｄ（又はｋｏｆｆ）と称される。ＫＤは、式 ＫＤ＝ｋｄ／ｋａにより、ｋａ及びｋｄと関連する。解離定数の値は、周知の方法によって直接決定でき、例えば、Caceciら（1984, Byte 9: 340-362）に記載の方法などの方法によれば、複合体混合物であってもコンピューターで計算することができる。例えば、ＫＤは、二重フィルターニトロセルロースフィルター結合アッセイ、例えばWong & Lohman （1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432）によって開示されたものを使用して確立することができる。標的抗原に対する抗体などのリガンドの結合能力を評価するための他の標準的なアッセイは、当業界において公知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＲＩＡ、及びフローサイトメトリー分析、及び本明細書で例示される他のアッセイなどが挙げられる。抗体の結合速度論及び結合親和性はまた、当業界において公知の標準的なアッセイ、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、例えばBiacore（商標）システム、又はKinExAを使用することによっても査定することができる。
【０２６２】
競合結合アッセイを実行することができ、それにおいて、抗原への抗体の結合は、標的の別のリガンド、例えば他の状況において標的と結合する別の抗体又は可溶性受容体によるその標的の結合と比較される。５０％阻害が起こる濃度は、Ｋｉとして公知である。理想的な条件下で、Ｋｉは、ＫＤに等しい。Ｋｉ値は、決してＫＤより低くはならないため、Ｋｉの測定値を都合よく置き換えて、ＫＤの上限を提供することができる。
【０２６３】
上記の定義に従って、異なる分子の相互作用に関連する結合親和性、例えば、所与の抗原に対する異なる抗体の結合親和性の比較は、個々の抗体／抗原複合体ごとのＫＤ値の比較によって比較することができる。抗体又は他の結合パートナーのＫＤ値は、当業界において十分に確立されている方法を使用して決定することができる。ＫＤを決定するための１つの方法は、表面プラズモン共鳴を使用することによるものであり、典型的にはBiacore（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムが使用される。
【０２６４】
同様に、相互作用の特異性は、目的の相互作用、例えば抗体と抗原との特異的な相互作用に関するＫＤ値を決定し、それを目的ではない相互作用、例えばＣＸＣＲ５と結合しないことがわかっている対照抗体のＫＤ値と比較することによって査定することができる。
【０２６５】
その標的と特異的に結合する抗体は、高い親和性で、すなわち、上記で論じられたように低いＫＤを示す親和性でその標的と結合することができ、それより低い親和性で他の非標的分子に結合することができる。例えば、抗体は、非標的分子に、１×１０−６Ｍ以上、より好ましくは１×１０−５Ｍ以上、より好ましくは１×１０−４Ｍ以上、より好ましくは１×１０−３Ｍ以上、さらにより好ましくは１×１０−２Ｍ以上のＫＤで結合することができる。本発明の抗体は、その標的に、好ましくは、その別の非ＣＸＣＲ５分子への結合の親和性の、少なくとも２倍、１０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１，０００倍若しくは１０，０００倍又はそれより大きい倍率の親和性で結合することができる。
【０２６６】
用語「競合する」は、本明細書で抗体に関して使用される場合、第１の抗体又はその抗原結合フラグメントが、第２の抗体又はその抗原結合フラグメントの結合と十分に類似する方式でエピトープに結合し、その結果、第１の抗体とその同族のエピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下における第１の抗体の結合と比較して第２の抗体の存在下で検出可能に減少することを意味する。しかしながら、第２抗体とそのエピトープとの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に減少する他方の例は、必ずしもそれに当てはまらない可能性がある。すなわち、第１の抗体は、第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害することができ、その第２の抗体は、第１の抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合を阻害しない。しかしながら、各抗体が、他の抗体のその同族のエピトープ又はリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、同程度か、より大きい、又はより小さい程度かにかかわらず、その抗体は、それらそれぞれのエピトープの結合について互いに「交差競合する」と言われる。競合及び交差競合する抗体のどちらも本発明に包含される。このような競合又は交差競合が起こるメカニズム（例えば、立体障害、コンフォメーション変化、又は共通のエピトープ又はその一部への結合）に関係なく、当業者は、本明細書で提供される教示に基づき、このような競合及び／又は交差競合する抗体が包含され、本明細書で開示される方法にとって有用な可能性があることを理解していると予想される。
【０２６７】
標準的な競合アッセイを使用して、２つの抗体が互いに競合するかどうかを決定することができる。抗体競合に関する１つの好適なアッセイは、Biacore技術の使用を含み、これは、典型的にはバイオセンサーシステム（例えばBIACORE（登録商標）システム）を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を使用して、相互作用の程度を測定することができる。例えば、ＳＰＲをインビトロの競合結合阻害アッセイで使用して、ある抗体の第２の抗体の結合を阻害する能力を決定することができる。抗体競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。
【０２６８】
さらに、「ビニング」抗体のための、それらの競合に基づくハイスループットプロセスが、ＷＯ２００３／０４８７３１に記載されている。ある抗体（又はフラグメント）が別の抗体（又はフラグメント）のＣＸＣＲ５への結合を低減させる場合、競合が存在する。例えば、異なる抗体を逐次的に添加する逐次的な結合競合アッセイを使用することができる。第１の抗体は、飽和に近い結合に到達するまで添加することができる。次いで、第２の抗体が添加される。第２の抗体のＣＸＣＲ５への結合が検出されないか、又は第１の抗体の非存在下における平行アッセイ（その値を１００％と設定することができる）と比較して有意に低減されている（例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％の低減）場合、２つの抗体は、互いに競合するとみなされる。
【０２６９】
加えて、例８に、いくつかの抗体のなかでも可能性のあるエピトープを査定するための、ヒト及びマウスＣＸＣＲ５タンパク質間のドメインスワッピングを使用する例示的な抗体エピトープビニングアッセイを提供する。当業者は、本明細書で提供される教示を利用した、互いに関連する少なくとも２つの抗体の標的への結合を決定するのに使用できる当業界において公知の多種多様のアッセイがあることを理解していると予想され、このようなアッセイは本明細書に包含される。
【０２７０】
ＣＸＣＲ５抗体は、当業界において周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、１つの方法は、それが結合するエピトープの同定、又は「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープの配置のマッピング及び特徴付けに関する当業界で公知の多くの方法があり、その例としては、抗体−抗原複合体の結晶構造解析、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、及び、例えば、Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999の第１１章に記載されるような、合成ペプチドベースのアッセイが挙げられる。追加の例において、エピトープマッピングを使用して、ＣＸＣＲ５抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、様々な供給元から市販されており、例えば、Pepscan Systems （Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Netherlands）から市販されている。エピトープは、リニアエピトープ、すなわち単一のアミノ酸ストレッチに含有されるエピトープであってもよく、又は必ずしも単一のストレッチに含有されていなくてもよいアミノ酸の３次元相互作用によって形成されるコンフォメーショナルエピトープであってもよい。様々な長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸の長さ）のペプチドを単離又は合成することができ（例えば、組換えによって）、ＣＸＣＲ５抗体との結合アッセイに使用することができる。
【０２７１】
加えて、ＣＸＣＲ５抗体が結合するエピトープは、ＣＸＣＲ５配列由来のオーバーラップするペプチドを使用し、抗体による結合を決定することによる系統的なスクリーニングで決定することができる。遺伝子フラグメント発現アッセイによれば、ＣＸＣＲ５をコードするオープンリーディングフレームは、ランダムに、又は特定の遺伝学的構築のいずれかによって断片化でき、ＣＸＣＲ５の発現されたフラグメントの試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子フラグメントは、例えばＰＣＲによって産生でき、次いでインビトロにおいて転写され、放射性アミノ酸の存在下でタンパク質に翻訳できる。次いで抗体の放射標識されたＣＸＣＲ５フラグメントへの結合は、免疫沈降及びゲル電気泳動によって決定される。
【０２７２】
特定のエピトープはまた、ファージ粒子（ファージライブラリー）又は酵母（酵母ディスプレイ）の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の大規模なライブラリーを使用することによっても同定することができる。あるいは、オーバーラップするペプチドフラグメントの規定のライブラリーを、単純な結合アッセイで試験抗体への結合について試験してもよい。追加の例において、抗原の変異誘発、ドメインスワッピング実験及びアラニンスキャニング変異を実行して、エピトープ結合に必要な、十分な、及び／又は必須の残基を同定してもよい。例えば、アラニンスキャニング変異実験は、ＣＸＣＲ５ポリペプチドの様々な残基がアラニンで置き換えられた突然変異ＣＸＣＲ５を使用して実行することができる。突然変異ＣＸＣＲ５への抗体の結合を査定することによって、抗体結合への特定のＣＸＣＲ５残基の重要性を査定することができる。
【０２７３】
ＣＸＣＲ５抗体を特徴付けるのに使用できるさらに別の方法は、同じ抗原に結合することがわかっている他の抗体、すなわちＣＸＣＲ５上の様々なフラグメントとの競合アッセイを使用して、ＣＸＣＲ５抗体が、他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定することである。競合アッセイは当業者に周知である。
【０２７４】
さらに、所与の抗体／抗原結合対のエピトープは、様々な実験及びコンピューターによるエピトープマッピング方法を使用して、様々なレベルで詳細に定義及び特徴付けを行うことができる。実験的方法としては、変異誘発、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、水素／重水素交換質量分析（Ｈ／Ｄ−ＭＳ）及び当業界において周知の様々な競合結合方法が挙げられる。それぞれの方法が固有の原理に頼っているため、エピトープの説明は、それが決定された方法と密接に関連する。したがって、所与の抗体／抗原対のエピトープは、利用されるエピトープマッピング方法に応じて異なって定義されることになる。
【０２７５】
その最も詳細なレベルで、ＡｇとＡｂとの相互作用に関するエピトープは、Ａｇ−Ａｂ相互作用に存在する原子の接触を定義する空間座標、加えてそれらの相対的な結合の熱力学への寄与に関する情報によって定義することができる。それほど詳細ではないレベルで、エピトープは、ＡｇとＡｂとの原子の接触を定義する空間座標によって特徴付けることができる。さらにそれほど詳細ではないレベルで、特定の基準によって、例えばＡｂ及びＡｇ中の原子（例えば、重原子、すなわち非水素原子）間の距離によって定義されるようなエピトープが含むアミノ酸残基によって、エピトープを特徴付けてもよい。さらにそれほど詳細ではないレベルで、機能によって、例えば他のＡｂとの競合結合によってエピトープを特徴付けてもよい。エピトープはまた、より一般的には、別のアミノ酸による置換がＡｂとＡｇとの相互作用の特徴を変更すると予想されるアミノ酸残基を含むものとして定義することもできる（例えばアラニンスキャニングを使用して）。
【０２７６】
エピトープの説明及び定義は、使用されるエピトープマッピング方法に依存して異なるレベルの詳細で得られるという事実から、同じＡｇに対する異なるＡｂのエピトープの比較は、同様に異なるレベルの詳細で実行できるということになる。
【０２７７】
アミノ酸レベルで記載された、例えばＸ線構造から決定されたエピトープは、それらが同じアミノ酸残基のセットを含有する場合、同一であると言われる。少なくとも１つのアミノ酸がエピトープで共有されている場合、そのエピトープはオーバーラップしていると言われる。アミノ酸残基がエピトープで共有されていない場合、そのエピトープは別個である（固有である）と言われる。
【０２７８】
競合結合によって特徴付けられるエピトープは、対応する抗体の結合が相互排他的である、すなわち１つの抗体の結合が他の抗体の同時の又は連続的な結合を排除する場合、オーバーラップすると言われる。このようなエピトープは、抗原が両方の対応する抗体の結合を同時に受け入れることができる場合、別個である（固有である）と言われる。
【０２７９】
用語「パラトープ」の定義は、上記の「エピトープ」の定義から、視点を逆転させることによって得られる。したがって、用語「パラトープ」は、抗原と特異的に結合する抗体上のエリア又は領域、すなわち抗原（ＣＸＣＲ５）と接触する抗体上のアミノ酸残基を指し、「接触」は、本明細書で定義されたとおりである。
【０２８０】
所与の抗体／抗原対のエピトープ及びパラトープは、慣例的な方法によって同定することができる。例えば、エピトープの一般的な配置は、異なるフラグメント又はバリアントＣＸＣＲ５ポリペプチドに結合する抗体の能力を査定することによって決定することができる。また、抗体と接触するＣＸＣＲ５内の特異的なアミノ酸（エピトープ）及びＣＸＣＲ５と接触する抗体中の特異的なアミノ酸（パラトープ）も、例に記載される方法などの慣例的な方法を使用して決定することができる。例えば、抗体及び標的分子は、組み合わせることができ、抗体／抗原複合体は、結晶化することができる。複合体の結晶構造を決定し、これを使用して、抗体とその標的との相互作用の特異的な部位を同定することができる。
【０２８１】
本発明による抗体は、本明細書で具体的に開示される本発明の抗体と同じＣＸＣＲ５のエピトープ又はドメインに結合することができる。このような同定の目的に使用可能な分析及びアッセイとしては、例１〜１０に記載されるような生物学的活性アッセイ、及び抗体の結晶構造の分析における、ＣＸＣＲ５の結合についての目的の抗体とＣＸＣＲ５受容体との競合を査定するアッセイが挙げられる。
【０２８２】
本発明の抗体は、本明細書に記載されるＣＸＣＲ５への結合について本発明の別の抗体と競合又は交差競合する能力を有していてもよい。例えば、本発明の抗体は、ＣＸＣＲ５への、又は本明細書で開示された抗体と結合するＣＸＣＲ５の好適なフラグメント又はバリアントへの結合について、本明細書に記載される抗体と競合又は交差競合し得る。
【０２８３】
すなわち、第１の抗体が、ＣＸＣＲ５への結合について第２の抗体と競合するが、第２の抗体が最初にＣＸＣＲ５に結合すると競合しない場合、これは、第２の抗体と「競合する」とみなされる（一方向の競合ともいわれる）。どの抗体が最初にＣＸＣＲ５に結合しているかに関係なく、抗体が別の抗体と競合する場合、その抗体は、ＣＸＣＲ５への結合について他の抗体と「交差競合する」。このような競合又は交差競合する抗体は、標準的な結合アッセイで、本発明の公知の抗体と競合／交差競合するそれらの能力に基づき同定することができる。例えば、ＳＰＲ、例えばBiacore（商標）システムを使用することによるＳＰＲ、ＥＬＩＳＡアッセイ又はフローサイトメトリーを使用して、競合／交差競合を実証することができる。このような競合／交差競合は、２つの抗体が同一な、オーバーラップする、又は類似するエピトープに結合することを示唆する可能性がある。
【０２８４】
それゆえに、本発明の抗体は、試験抗体が、標的分子上の結合部位について参照抗体と競合／交差競合できるかどうかを査定する結合アッセイを含む方法によって同定することができる。競合結合アッセイを行うための方法は、本明細書で開示され、及び／又は当業界において周知である。例えばそれらは、本発明の参照抗体を、抗体が標的分子に結合できる条件を使用して標的分子に結合させることを含んでいてもよい。次いで抗体／標的複合体を、試験抗体／第２の抗体に曝露させてもよく、試験抗体が、どれだけ抗体／標的複合体から本発明の参照抗体を置き換えることができるかの程度を査定してもよい。代替の方法は、抗体結合を可能にする条件下で、試験抗体を標的分子と接触させること、次いでその標的分子との結合が可能な本発明の参照抗体を添加すること、及び本発明の参照抗体が、どれだけ抗体／標的複合体から試験抗体を置き換えることができるのかの程度、又は標的に同時に結合できるのかの程度（すなわち、非競合抗体）を査定することを含んでいてもよい。
【０２８５】
本発明の参照抗体の標的への結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体が、標的への結合について本発明の参照抗体と競合できること、したがって試験抗体が、本発明の参照抗体と同じ、又は実質的に同じ、ＣＸＣＲ５タンパク質上のエピトープ又は領域に結合することを実証する。このような方法で本発明の参照抗体と競合すると同定される試験抗体も、本発明の抗体である。試験抗体は、本発明の参照抗体と同じ領域でＣＸＣＲ５と結合でき、さらに、本発明の参照抗体と競合できるという事実は、試験抗体が、本発明の抗体と同じ結合部位でリガンドとして作用し得ること、それゆえに試験抗体が、参照抗体の作用を模擬する可能性があり、したがって本発明の抗体であることを示唆する。これは、本明細書でより詳細に説明されるアッセイを使用して、試験抗体の存在下におけるＣＸＣＲ５の活性を、参照抗体の存在下におけるＣＸＣＲ５の活性と、それ以外の点で同一な条件下で比較することによって確認することができる。
【０２８６】
本発明の参照抗体は、本明細書に記載される抗体、例えば１１Ｇ２、４１Ａ１０、５Ｈ７、及びＣＸＣＲ５に結合する能力を保持する本明細書に記載されるそれらのあらゆるバリアント又は部分であり得る。本発明の抗体は、本明細書に記載される参照抗体、又はＣＸＣＲ５に結合する能力を保持する本明細書に記載されるそれらのあらゆるバリアント若しくは部分と同じエピトープに結合し得る。
【０２８７】
これまで本明細書で述べたように、特異的な結合は、標的ではない分子への抗体結合を参照して査定することができる。この比較は、標的に結合する抗体の能力と、別の分子に結合する抗体の能力とを比較することによってなされ得る。この比較は、ＫＤ又はＫｉの査定で上述したようになされ得る。このような比較で使用される他の分子は、標的分子ではないあらゆる分子であり得る。好ましくは、他の分子は、標的分子と同一ではない。好ましくは、標的分子は、標的分子のフラグメントではない。
【０２８８】
特異的な結合を決定するのに使用される他の分子は、構造又は機能の点で標的と関連していなくてもよい。例えば、他の分子は、関連していない材料又は環境中で添付する物質であり得る。
【０２８９】
特異的な結合を決定するのに使用される他の分子は、標的分子、すなわちＣＸＣＲ５と同じインビボの経路に関与する別の分子であってもよい。本発明の抗体が、別のこのような分子よりＣＸＣＲ５に対して特異性を有することを確実にすることによって、不要なインビボでの交差反応性を回避することができる。
【０２９０】
本発明の抗体は、標的分子に関連する一部の分子に結合する能力を保持し得る。
【０２９１】
あるいは、本発明の抗体は、特定の標的分子への特異性を有していてもよい。例えば、本発明の抗体は、本明細書に記載される１つの標的分子に結合できるが、本明細書に記載される異なる標的分子と結合しない場合があるか、又は顕著に低減された親和性でそれと結合する場合がある。例えば、全長成熟ヒトＣＸＣＲ５は、標的として使用できるが、その標的に結合する抗体は、例えば他の種由来の他のＣＸＣＲ５タンパク質、例えば他の哺乳類ＣＸＣＲ５に結合できない場合があるか、又はより低い親和性でそれと結合する場合がある。一部の実施形態において、抗体は、ヒト及びマウスＣＸＣＲ５の両方に結合する。
【０２９２】
「Ｆｃ融合」タンパク質は、１つ以上のポリペプチドがＦｃポリペプチドに作動可能に連結されているタンパク質である。Ｆｃ融合体は、免疫グロブリンのＦｃ領域を融合パートナーと組み合わせる。
【０２９３】
「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むが、それでもなお天然配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持する。バリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列のＦｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、例えば、天然配列のＦｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列のＦｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と、少なくとも約８０％の配列同一性を有し、最も好ましくは、それと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、それと、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有すると予想される。
【０２９４】
当業界で公知のように、抗体の「定常領域」は、抗体の軽鎖の定常領域又は抗体の重鎖の定常領域のいずれか単独、又は組合せを指す。
【０２９５】
用語「ＩｇＧ Ｆｃ領域」、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」及び「Ｆｃ」は、本明細書において同義的に使用される場合、ＩｇＧ分子のパパイン消化により得られた結晶化可能なフラグメントと相関するＩｇＧ分子の部分を指す。この用語は、本明細書で使用される場合、第１の定常領域の免疫グロブリンドメインを排除した抗体の定常領域に関し、さらに、その領域の一部に関する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧの最後の２つの定常領域の免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域の免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメイン又はその一部へのフレキシブルなヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡ及びＩｇＭの場合、Ｆｃは、Ｊ鎖を含む場合がある。ＩｇＧの場合、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインのＣγ２及びＣγ３、並びにＣγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、残基Ｃ２２６又はＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義され、ここで番号付けは、Kabat et al., 1991に記載されるように、Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85のＥＵインデックスに従う。典型的に、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインの約２３６〜約４４７個のアミノ酸残基を含む。例示的なヒト野生型ＩｇＧ１のＦｃドメインアミノ酸配列は、配列番号３１に記載される。Ｆｃポリペプチドは、この領域を単独で、又はこの領域を抗体又はその抗原結合フラグメントの状態で、又はＦｃ融合タンパク質を指す場合もある。
【０２９６】
重鎖定常ドメインは、Ｆｃ領域を含み、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ、加えて、ＩｇＧ重鎖のＣＨ２及びＣＨ３（任意にＩｇＡ及びＩｇＥのＣＨ４）ドメインをさらに含む。
【０２９７】
「機能的なＦｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害；貪食；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方調節などが挙げられる。このようなエフェクター機能は、一般的に、Ｆｃ領域を結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン又はその抗原結合フラグメント）と組み合わせることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当業界において公知の様々なアッセイを使用して査定することができる。
【０２９８】
「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む。天然配列のヒトＦｃ領域は、天然配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列のヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列のヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、加えてそれらの天然に存在するバリアントを含む。
【０２９９】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。
【０３００】
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。一部の実施形態において、ＦｃｙＲは、天然ヒトＦｃＲである。一部の実施形態において、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）と結合するものであり、その例としては、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ及びＦｃｙＲＩＩＩサブクラスの受容体、加えて、それらの受容体の対立遺伝子バリアント及びオルタナティブスプライシングされた形態などが挙げられる。ＦｃｙＲＩＩ受容体としては、ＦｃｙＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃｙＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が挙げられ、これらは主としてそれらの細胞質内ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃｙＲＩＩＡは、その細胞質内ドメイン中に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有し、阻害受容体ＦｃｙＲＩＩＢは、その細胞質内ドメイン中に免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（例えば、Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲは、例えば、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capel et ah, Immunomethods 4:25-34 (1994)及びde Haas et ah, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)で総論されている。他のＦｃＲも、将来的に同定されるものも含め、本明細書において用語「ＦｃＲ」に包含される。
【０３０１】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」はまた、新生児受容体、ＦｃＲｎも包含し、これは、母体ＩｇＧの胎児への移行（Guyer et ah, J. Immunol. 117:587 (1976) Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997)；Ghetie et ah, Nature Biotechnology, 15(7):637- 640 (1997)；Hinton et ah, J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004)；ＷＯ２００４／０９２２１９（Hinton et al）を参照）。
【０３０２】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプに応じて異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃｌｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方調節；及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【０３０３】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実行する白血球である。特定の実施形態において、この細胞は、少なくともＦｃｙＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が挙げられる。エフェクター細胞は、自然のソースから、例えば血液から単離することもできる。
【０３０４】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えばＮＫ細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合した分泌型Ｉｇにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原が結合している標的細胞に特異的に結合し、続いて標的細胞を細胞毒素で致死させることが可能になる、細胞傷害性の一形態を指す。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃｙＲＩＩＩのみを発現するが、それに対して単球は、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ及びＦｃｙＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を査定するために、インビトロのＡＤＣＣアッセイ、例えばＵＳ５５００３６２若しくはＵＳ５８２１３３７又はＵＳ６７３７０５６（Presta）に記載されるものを実行することができる。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、又は加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Clynes et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656 (1998)で開示されたものなどの動物モデルで査定することができる。変更されたＦｃ領域のアミノ酸配列及び増加又は減少したＡＤＣＣ活性を有する追加の抗体は、例えば、ＵＳ７９２３５３８及びＵＳ７９９４２９０に記載される。
【０３０５】
「増強されたＡＤＣＣ活性」を有する抗体は、インビトロ又はインビボでＡＤＣＣを媒介するときに、さらに、アッセイで使用されるこのような抗体及び親抗体の量が本質的に同じ場合、親抗体と比較してより有効である抗体を指し、ここで抗体と親抗体は、少なくとも１つの構造的な態様の点で異なっている。一部の実施形態において、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、抗体はアフコシル化されており、一方で親抗体はフコシル化されている。一部の実施形態において、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示されたようなインビトロのＡＤＣＣアッセイを使用して決定されることになるが、例えば動物モデルなどでＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイ又は方法も企図される。一部の実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する。一部の実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された親和性を有する。一部の実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）への増強された親和性を有する。
【０３０６】
「変更された」ＦｃＲ結合親和性又はＡＤＣＣ活性を有する抗体は、親抗体と比較して増強又は低減されたＦｃＲ結合活性及び／又はＡＤＣＣ活性のいずれかを有するものであり、ここで抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的な態様の点で異なっている。ＦｃＲへの「増加した結合を示す」抗体は、親抗体より優れた親和性で、少なくとも１つのＦｃＲと結合する。ＦｃＲへの「減少した結合を示す」抗体は、親抗体より低い親和性で、少なくとも１つのＦｃＲと結合する。このようなＦｃＲへの減少した結合を示す抗体は、ＦｃＲへの明らかな結合をわずかしか示さないかほとんど示さない可能性があり、例えば、天然配列のＩｇＧ Ｆｃ領域と比較して、ＦｃＲへの結合が０〜２０パーセントである。
【０３０７】
「ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性」は、抗体が、親抗体より大きいＦｃγＲＩＩＩＡ（一部の場合において、ＣＤ１６ａともいう）への親和性を有することを指し、ここで抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的な態様の点で異なっている。一部の実施形態において、抗体及び親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、抗体はアフコシル化されており、一方で親抗体はフコシル化されている。ＦｃγＲＩＩＩＡへの親和性を決定するためのあらゆる好適な方法を使用することができる。一部の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡへの親和性は、本明細書に記載される方法によって決定される。一部の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。一部の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された親和性を有する。一部の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）への増強された親和性を有する。
【０３０８】
L-フコースは、6-デオキシ-L-ガラクトースとも称され、動物において一部のN-及びO-結合型グリカン及びグリコリピドの成分である単糖である。Becker and Lowe, Glycobiology 13:41R-51R (2003)を参照されたい。フコースは、典型的にはグリカンへの末端修飾として付加され、その例としては、血液型抗原、セレクチン及び抗体に結合したグリカンなどが挙げられる。フコースは、特異的なフコシルトランスフェラーゼにより、α(1,2)-、α(1,3)-、α(1,4)-及びα(1,6)-結合を介してグリカンに結合させることができる。α(1,2)-フコース結合は、典型的には、Ｈ血液型抗原に付随する。α(1,3)-及びα(1,4)-フコース結合は、ルイスＸ抗原の修飾に付随する。α(1,6)-フコース結合は、N-結合型ＧｌｃＮＡｃ分子、例えば抗体上のN-結合型ＧｌｃＮＡｃ分子に付随する。
【０３０９】
本発明の炭水化物部分は、オリゴ糖の記載に一般的に使用される学術名を参照して記載されるものとする。この学術名を使用する炭水化物化学の総論は、Hubbard and Ivatt (1981) Ann. Rev. Biochem. 50:555-583に見出される。この学術名には、例えば、マンノースを表すＭａｎ、；2-N-アセチルグルコサミンを表すＧｌｃＮＡｃ；ガラクトースを表すＧａｌ；フコースに対応するＦｕｃ；及びグルコースを表すＧｌｃが含まれる。シアル酸は、略式の表記法によって記載され、ＮｅｕＮＡｃは5-N-アセチルノイラミン酸であり、ＮｅｕＮＧｃは5-グリコリルノイラミン酸である（IUB-IUPAC Joint Commission on Biochemical Nomenclature, 1982, J. Biol. Chem. 257: 3347-3351; (1982) J. Biol. Chem. 257: 3352）。
【０３１０】
本発明の炭水化物構造は、N-結合型オリゴ糖として発現されたタンパク質上に存在する。「N-結合型グリコシル化」は、ポリペプチド鎖中のアスパラギン残基へのＧｌｃＮＡｃを介した炭水化物部分の結合を指す。N-結合型炭水化物は全て、共通のＭａｎ1-6(Ｍａｎ1-3)Ｍａｎβ1-4ＧｌｃＮＡｃβ1-4ＧｌｃＮＡｃβ-Ｒコア構造を含有する。それゆえに、記載されたコア構造において、Ｒは、産生された糖タンパク質のアスパラギン残基を表す。産生されたタンパク質の配列は、アスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−スレオニン及びアスパラギン−Ｘ−システインを含有すると予想され、ここでＸは、プロリンを除くあらゆるアミノ酸である（Ａｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）。それに対して「O-結合型」炭水化物は、スレオニン又はセリンのヒドロキシル基に結合したＧａｌＮＡｃである共通のコア構造を特徴とするが、コンセンサス配列は必要ではない。N-結合型炭水化物のなかでも最も重要なものは、本明細書に記載される「２分岐型」構造などの「複合」N-結合型炭水化物である。
【０３１１】
糖タンパク質である免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、一般的にＧ０、Ｇ１及びＧ２として知られる、それぞれ、０、１又は２個のガラクトース残基を含有する３つのタイプの複合２分岐型構造と結合すると当業者は認識するであろう（Wormland et al., 1997, Biochemistry 36:1370-1380）。ＩｇＧクラスのヒト抗体分子は、それぞれ、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインの内面のβ-４ベンドのＡｓｎ２９７のアミド側鎖に結合したN-結合型オリゴ糖を有する（Beale and Feinstein, 1976, Q. Rev. Biophys. 9:253-259；Jefferis et al., 1995, Immunol. Letts. 44:111-117）。ＩｇＧ ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合したオリゴ糖は、同定された六糖コア構造及び可変外部糖残基を有する複合２分岐型である（Jefferis et al., 1997, 上記；Wyss and Wagner, 1996, Current Opinions in Biotech. 7:409-416を参照）。コア構造（ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ）は、２分岐オリゴ糖の特徴であり、図１に表される。
【０３１２】
各コア構造は、バイセクティングN-アセチルグルコサミン、コアフコース及びガラクトース又はシアル酸である外部の糖のいずれかを有し得るため、Ａｓｎ２９７部位を占有する可能性がある構造的に固有なオリゴ糖が合計で３６個存在する（Jefferis and Lund、上記）。また、特定のＣＨ２ドメイン内で、２つの鎖のＦｃドメイン内のＡｓｎ２９７残基のいずれかに結合した異なるオリゴ糖鎖のために、Ａｓｎ２９７でのグリコシル化は非対称であり得ることも認識されていると予想される。例えば、単一抗体を分泌する細胞内で合成された重鎖は、そのアミノ酸配列において均一であり得るが、一般的に、差次的にグリコシル化され、結果として多数の構造的に固有なＩｇグリコフォームが生じる。
【０３１３】
複合オリゴ糖構造の主要なタイプは、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン中に見出される「グリコフォーム」とも称され、ＷＯ９９／２２７６４の７頁に描写されている。
【０３１４】
本発明によれば、Ｇ０は、末端シアル酸（ＮｅｕＡｃ）又はＧａｌが存在しない２分岐型構造を指し、Ｇ１は、１つのＧａｌを有し、ＮｅｕＡｃを有さない２分岐型構造を指し、Ｇ２は、２つの末端Ｇａｌを有し、ＮｅｕＡｃを有さない２分岐型構造を指す。例えば、Ｇ０、Ｇ１、Ｇ−１及びＧ２の例示的な構造を描写する図２Ａ〜２Ｇを参照されたい。
【０３１５】
「アフコシル化される」抗体又は「フコースを有さない」抗体は、その定常領域のグリコシル化においてフコースを有さないＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプ抗体を指す。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、２個までのＧａｌ残基で終結した、コアがフコシル化された２分岐複合オリゴ糖グリコシル化として、Ａｓｎ２９７で起こる。一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコースを有さない。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じてＧ０、Ｇ１（α1,6又はα1,3）又はＧ２グリカン残基と名付けられる。例えば、Raju, T. S., BioProcess Int. 1: 44-53 (2003)を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Routier, F. FL, Glycoconjugate J. 14: 201-207 (1997)に記載されている。図２Ａ〜２Ｇに様々な抗体グリコフォームを示す。
【０３１６】
一部の実施形態において、「フコシル」又は「アフコシル化された」抗体は、本明細書で同義的に使用される場合、コアのフコースを有さないように糖鎖が操作された抗体を指す。グリカン部分のフコース含量が低減された抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）への増加した親和性を有し、結果として、増強された活性依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。アフコシル抗体は、フコース付加に関与する遺伝子の対立遺伝子の両方を欠くPotelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株（Lonza Biologics）を使用して産生することができる。アフコシル又はフコース（fusose）が低減された抗体はまた、様々な方法でオリゴ糖生合成活性を改変することによっても生成できる。例えば、産生細胞株のゴルジ装置におけるN-アセチルグルコサミン-トランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）の過剰発現は、抗体のＦｃ定常領域に結合する２分岐したオリゴ糖構造を生成し、フコシル化を抑制する。このような発現系において、ＧｎＴＩＩＩ発現のレベルは、は、アフコシル化されたＩｇＧ１グリコフォームの生成とその結果得られた増強されたＡＤＣＣ活性と相関する。フコシル化はまた、例えば、これに限定されるものではないが、ＷＯ２０１２／０１９１６５に記載されるようなフコース類似体などの糖類似体の使用によって、細胞培養中に減少させることもできる。したがって、アフコシル化された、又はフコースが低減された抗体は、当業界において周知の様々な方法を使用して産生することができる。
【０３１７】
一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する。一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された親和性を有する。一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）への増強された親和性を有する。
【０３１８】
「グリコフォーム」は、様々な炭水化物単位の連結を含む複合オリゴ糖構造を指す。このような構造は、例えば、Essentials of Glycobiology Varki et al., eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999)に記載されており、これはまた、標準的な糖鎖生物学の学術名の総論も提供する。このようなグリコフォームとしては、これらに限定されるものではないが、Ｇ２、Ｇ１、Ｇ０、Ｇ−１及びＧ−２が挙げられる（例えば、ＷＯ９９／２２７６４を参照）。
【０３１９】
「グリコシル化パターン」は、タンパク質（例えば、グリコフォーム）に、同様に、グリコフォームがタンパク質のペプチドバックボーンに共有結合で結合する部位に、より具体的には免疫グロブリンタンパク質に、共有結合で結合した炭水化物単位のパターンと定義される。
【０３２０】
一部の実施形態において、糖鎖修飾されていないＣＨＯ宿主細胞で組換え発現された抗体のバッチの少なくとも８５パーセントが、Ａｓｎ２９７でフコシル化されている。複数の抗体を含む組成物に言及する場合、少なくとも１つのＡｓｎ２９７にフコースを含む抗体が組成物中約５パーセント未満である場合、抗体はアフコシル化されているとみなされる。さらにより好ましくは、アフコシル化のレベルは約１００％であり、すなわちフコースは、標準的な抗体のフコシル化を測定するための方法を使用して重鎖Ａｓｎ２９７グリコフォームのいずれにおいても検出されない。フコースを測定する方法としては、本明細書に記載される方法を含む当業界において公知のあらゆる方法が挙げられる。一部の実施形態において、複数のアフコシル化された抗体を含む組成物中で、フコースは検出不能である。一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。
【０３２１】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１成分（Ｃｌｑ）が、それらの同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスの）に結合することによって開始される。補体活性化を査定するために、ＣＤＣアッセイ、例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)に記載されるアッセイを実行してもよい。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列及び増加又は減少したＣｌｑ結合能力を有する抗体は、例えば、ＵＳ６１９４５５１、ＵＳ７９２３５３８、ＵＳ７９９４２９０及びＷＯ９９／５１６４２に記載されている。例えば、Idusogie et al, Jも参照されたい。
【０３２２】
用語「野生型アミノ酸」、「野生型ＩｇＧ」、「野生型抗体」、又は「野生型ｍＡｂ」は、本明細書で使用される場合、特定の集団（例えば、ヒト、マウス、ラット、細胞など）中で天然に存在するアミノ又は核酸の配列を指す。
【０３２３】
本明細書で同義的に使用される「Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型」又は「ＣＸＣＲ５」は、当業界では「ＣＤ１８５」及び「バーキットリンパ腫受容体１（ＢＬＲ１）」とも称され、特定の細胞で発現されるＧタンパク質結合受容体である。ＣＸＣＲ５という用語は、ＣＸＣＲ５のホモログ及びオーソログを含み、なかでもヒト、カニクイザル、ラット、ウサギ及びマウスのものが挙げられる。「ＣＸＣＲ５」は、本明細書で使用される場合、哺乳類ＣＸＣＲ５、例えばヒト、ラット又はマウス、加えて非ヒト霊長類、ウシ、ヒツジ、又はブタＣＸＣＲ５を指す。ＣＸＣＲ５の非限定的な例示的な例としては、ヒト（例えば、Genbank受託番号P60568、配列番号３２を参照）、カニクイザル（例えば、Genbank受託番号Q29615、配列番号３３を参照）及びマウス（配列番号３４）のＣＸＣＲ５が挙げられる。用語「ＣＸＣＲ５」はまた、このようなＣＸＣＲ５分子の、フラグメント、バリアント、アイソフォーム及び他のホモログも包含する。バリアントＣＸＣＲ５分子は、一般的に、天然に存在するＣＸＣＲ５と同じタイプの活性、例えばＣＸＣＲ５受容体と結合する能力、受容体が媒介する活性を誘導する能力、及び本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントと結合する又は結合しない能力を有することを特徴とすると予想される。
【０３２４】
ＣＸＣＲ５は、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上、又は１５個以上の、ＣＸＣＲ５の表面の接触可能な残基を含んでいてもよい。図６は、代表的な表面の接触可能な残基を下線で示した野生型マウス及びヒトＣＸＣＲ５のアミノ酸配列を示す。ＣＸＣＲ５がＣＸＣＲ５のホモ多量体の形態を含む場合、標的は、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上又は１５個以上の、ＣＸＣＲ５の第１のサブユニットの表面の接触可能な残基、及び、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、１２個以上又は１５個以上の、ＣＸＣＲ５の第２のサブユニットの表面の接触可能な残基を含んでいてもよい。標的分子は、ＣＸＣＲ５由来の公知のエピトープを含んでいてもよい。
【０３２５】
図６に、これまでに述べた野生型ヒトＣＸＣＲ５（ｈＣＸＣＲ５）及びマウスＣＸＣＲ５（ｍＣＸＣＲ５）のアミノ酸配列のアライメントを、代表的な細胞外領域（「Ｎ」、「Ｌ１」、「Ｌ２」及び「３」）と共に、図６に示す。
【０３２６】
本明細書で概説したように、抗体分子の特定の位置は、変更されてもよい。「位置」は、本明細書で使用される場合、タンパク質配列中の配置を意味する。位置は、逐次的に、又は確立された様式に従って番号付けることができ、例えばＥＵインデックス及びKabatインデックスを使用して、抗体のアミノ酸残基を番号付けることができる。例えば、２９７位は、ヒト抗体ＩｇＧ１における位置である。対応する位置は、上記で概説したように、一般的に他の親配列とのアライメントを介して決定される。
【０３２７】
「残基」は、本明細書で使用される場合、タンパク質及びその関連するアミノ酸同一性における位置を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７ともいい、またＮ２９７ともいう）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の残基である。
【０３２８】
用語「Ｔｆｈ細胞」又は「Ｔｆｈ」又は「真正Ｔｆｈ」又は「胚中心Ｔｆｈ細胞」又は「ＧＣのＴｆｈ細胞」は、本明細書で同義的に使用される場合、胚中心（ＧＣ）内に見出される濾胞性ヘルパーＴ細胞を指し、これは、ＧＣのＴｆｈ細胞、ＧＣのＢ細胞、濾胞性樹状細胞（ＦＤＣ）、マクロファージ及び間質からなる構造である。Crotty, 2014, Immunity 41(4):529-542参照。Ｔｆｈ細胞は、Ｂ細胞濾胞ホーミング受容体ＣＸＣＲ５の構成的発現によって同定される。機能的に、Ｔｆｈ細胞は、アイソタイプスイッチ、体細胞超突然変異、及び迅速な細胞分裂をガイドして胚中心にシーディングするためのＢ細胞への有益なシグナルを提供する。
【０３２９】
本明細書で同義的に使用される用語「Ｔｆｈ様細胞」、「循環Ｔｆｈ細胞」及び「ｃＴｆｈ」は、胚中心から出たＴｆｈ細胞を指す。ＧＣから出ると、細胞は、より活性が低く、より極性が低い表現型を獲得し、これは「循環濾胞性ヘルパーＴ細胞」（ｃＴｆｈ）又は「Ｔｆｈ様細胞」と呼ばれる。Crotty, 2014, Immunity 41(4):529-542参照。これらの細胞は、ＣＸＣＲ５を発現する。胚中心のＴｆｈ細胞（すなわち、「真正Ｔｆｈ細胞」又は「ＧＣのＴｆｈ細胞」又は「Ｔｆｈ」）と比較して、ｃＴｆｈ細胞（すなわち、Ｔｆｈ様細胞）は、低減したレベルのＩＣＯＳ、Ｂｃｌ−６、並びに、ＣＤ６９及びＨＬＡ−ＤＲなどの細胞活性化マーカーを発現するが、インビトロで、同族抗原で再活性化されると、Ｂ細胞においてＡｂ産生及びＩｇクラススイッチを刺激する能力を維持する。
【０３３０】
当業界で公知のように、「ポリヌクレオチド」、又は「核酸」は、本明細書で同義的に使用される場合、あらゆる長さを有するヌクレオチド鎖を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド若しくは塩基、及び／若しくはそれらの類似体、又はＤＮＡ又はＲＮＡポリメラーゼによって鎖に取り込むことができるあらゆる基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾されたヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びその類似体を含んでいてもよい。ヌクレオチド構造への修飾は、存在する場合、鎖が組み立てられる前又はその後に付与されてもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分が途中に存在していてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後に、例えば標識成分とのコンジュゲーションによって、さらに修飾されていてもよい。他のタイプの修飾としては、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドの１つ以上の類似体での置換、ヌクレオチド間の修飾、例えば、非荷電性連結（例えば、メチルホスホン酸エステル、リン酸トリエステル、ホスホルアミデート（phosphoamidate）、カルバミン酸エステルなど）を有するもの、及び電荷を有する連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を有するものなど、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ-L-リシンなど）などを含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を有するもの、キレート化剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化性金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結（例えば、αアノマー核酸など）を有するもの、加えて、ポリヌクレオチドの修飾されていない形態が挙げられる。さらに、通常は糖に存在するヒドロキシル基のいずれかが、例えばホスホン酸基、リン酸基によって置き換えられていてもよいし、標準的な保護基によって保護されていてもよいし、又は追加のヌクレオチドに追加の連結が生じるように活性化されていてもよいし、又は固体支持体にコンジュゲートされていてもよい。５’及び３’末端のＯＨは、リン酸化されていてもよいし、又はアミン又は１〜２０個の炭素原子を有する有機キャッピング基部分で置換されていてもよい。また他のヒドロキシルも、標準的な保護基に誘導体化されていてもよい。またポリヌクレオチドは、一般的に当業界において公知のリボース又はデオキシリボース糖の類似の形態、例えば、2’-O-メチル-、2’-O-アリル、2’-フルオロ-又は2’-アジド-リボース、炭素環糖類似体、α又はβアノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及び脱塩基ヌクレオシド類似体、例えばメチルリボシドなどを含有していてもよい。１つ以上のホスホジエステル結合が、代替の結合基で置き換えられていてもよい。これらの代替の結合基としては、これらに限定されるものではないが、リン酸が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置き���えている実施形態が挙げられ、ここで各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈであるか、又は任意にエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルジル（araldyl）を含有していてもよい置換若しくは非置換のアルキル（１〜２０Ｃ）である。ポリヌクレオチド中の全ての連結が必ずしも同一でなくてもよい。前記の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む本明細書で言及された全てのポリヌクレオチドに適用される。
【０３３１】
「ベクター」は、本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の遺伝子又は配列を宿主細胞に送達すること、好ましくはそれを宿主細胞中で発現することが可能なコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、これらに限定されるものではないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン性縮合剤と結合するＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、及び特定の真核細胞、例えばプロデューサー細胞が挙げられる。
【０３３２】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの取込みのためのベクターのためのレシピエントになり得る個々の細胞又は細胞培養物、又はそのようなレシピエントであった個々の細胞又は細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の後代を含み、後代は、天然の、偶発的な、又は計画的な突然変異のために、必ずしも元の親細胞と完全に同一でなくてもよい（形態又はゲノムＤＮＡ相補体の点で）。宿主細胞としては、インビボで本発明のポリヌクレオチドでトランスフェクト及び／又は形質転換された細胞が挙げられる。
【０３３３】
宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり得る。例示的な真核細胞としては、哺乳類細胞、例えば霊長類又は非霊長類動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；及び昆虫細胞が挙げられる。
【０３３４】
細胞培養、及びタンパク質又はポリペプチドの発現の影響を受けやすいあらゆる宿主細胞が、本発明に従って利用することができる。特定の実施形態において、宿主細胞は、哺乳類細胞である。発現用の宿主として利用可能な哺乳類細胞株は当業界において周知であり、その例としては、American Type Culture Collection（ATCC）より入手可能な多くの不死化細胞株が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳類細胞としては、これらに限定されるものではないが、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにそれらの誘導体、例えば２９３−６Ｅ、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ ＤＸＢ１１及びPotelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（BioWa/Lonza, Allendale, NJ）が挙げられる。また哺乳類宿主細胞としては、これらに限定されるものではないが、ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ、ATCC CCL2）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ、ATCC CCL10）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）及びヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）も挙げられる。本発明に従って使用可能な哺乳類細胞の他の非限定的な例としては、ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）；CruCell, Leiden, The Netherlands）；ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ATCC CRL1651）；ヒト胎児腎臓株２９３（ＨＥＫ２９３）又は懸濁培養での成長に関してサブクローニングした２９３細胞（Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36:59）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251）；サル腎臓細胞（ＣＶ１、ATCC CCL70）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ-７６、ATCC CRL-1587）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ATCC CCL34）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ、ATCC CRL1442）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ATCC CCL75）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、HB8065)；マウス乳がん（ＭＭＴ０６０５６２、ATCC CCL51）；ＴＲ１細胞（Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sc
i. 383:44-68）；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；ヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）；並びに、これらに限定されるものではないが、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫株（ＮＳ０／１、ECACC番号85110503）、ＮＳ０細胞及びＳｐ２／０細胞などの多数の骨髄腫細胞株が挙げられる。
【０３３５】
加えて、あらゆる数の市販の及び市販されていないポリペプチド又はタンパク質を発現する細胞株が、本発明に従って利用できる。当業者は、異なる細胞株が、異なる栄養要求を有する場合があり、及び／又は最適な成長及びポリペプチド又はタンパク質発現に応じて異なる培養条件を必要とする場合があり、必要に応じて条件の改変が可能であることを理解しているものと予想される。
【０３３６】
本発明は、目的のタンパク質の産生のための、例えば、昆虫細胞系、酵母発現系、又は哺乳類細胞系、例えば、これに限定されるものではないが、ＣＨＯ細胞における発現のための、当業界において公知の、又は本明細書で開示されたあらゆる真核細胞発現系を含む。
【０３３７】
「発現制御配列」は、本明細書で使用される場合、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、プロモーター、例えば構成的又は誘導性プロモーター、又はエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結されている。
【０３３８】
「治療」は、本明細書で使用される場合、有益な、又は望ましい臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的に関して、有益な、又は望ましい臨床結果としては、これらに限定されるものではないが、以下：生存率の改善（死亡率の低減）、疾患に対する炎症性応答の低減、組織線維化の量の低減、疾患の病変の出現における改善、病理学的な病変の病巣部位への限定、疾患によるダメージの程度の減少、疾患の期間の減少、及び／又は疾患に関する症状の数、程度、又は期間の低減の１種以上が挙げられる。この用語は、本発明の化合物又は薬剤を投与して、疾患の症状、合併症、又は生化学的な発現の発症を予防するか又は遅延させて、症状を軽減したり、又は疾患、状態、又は障害のさらなる発生を停止又は阻害したりすることを含む。治療は、予防的であってもよいし（疾患の発症を予防するか若しくは遅延させる、又はそれらの臨床的又は不顕性症状の発現を予防する）、又は疾患の発現後の症状の治療的な抑制若しくは軽減であってもよい。
【０３３９】
「緩和する」は、ＣＸＣＲ５抗体を投与しない場合と比較した、１つ以上の症状を減らすこと、又は改善することを意味する。「緩和する」はまた、症状の期間を短縮すること、又は低減することも含む。
【０３４０】
薬物、化合物、又は医薬組成物の「有効投薬量」又は「有効量」は、本明細書で使用される場合、いずれか１つ以上の有益な、又は望ましい結果をもたらすのに十分な量である。より具体的な態様において、有効量は、疾患又は感染の症状を予防する、軽減する、又は緩和する、及び／又は治療されている対象の生存を延長する。予防的使用の場合、有益な、又は望ましい結果としては、疾患の生化学的、組織学的及び／又は行動上の症状、疾患の進行中に現れるその合併症及び中間的な病理学的表現型を含む疾患の、リスクをなくす、若しくは低減すること、その重症度を低くすること、又はその発病を遅らせることが挙げられる。治療的使用の場合、有益な、又は望ましい結果としては、ＣＸＣＲ５によって媒介される疾患、障害又は状態の１つ以上の症状を低減させること、疾患を治療するのに必要な他の薬物療法剤の用量を減少させること、別の薬物療法剤の作用を増強すること、及び／又は患者の疾患の進行を遅らせることなどの臨床結果が挙げられる。有効投薬量は、１回以上の投与で投与することができる。本発明の目的のために、薬物、化合物、又は医薬組成物の有効投薬量は、直接的又は間接的のいずれかで予防的又は治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的な状況で理解されるように、薬物、化合物、又は医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物、又は医薬組成物を併用して達成される場合もあれば、又はそうでない場合もある。したがって、「有効投薬量」は、１種以上の治療剤を投与する状況で考えることができ、単剤は、１種以上の他の薬剤と併用して、望ましい結果が達成され得るか、又は達成される場合、有効量で与えられていると考えることができる。
【０３４１】
「個体」又は「対象」は、哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。哺乳動物としてはまた、これらに限定されるものではないが、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリなど）、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス及びラットも挙げられる。一部の実施形態において、個体は、ＣＸＣＲ５のその受容体への結合及びそれによって媒介されるシグナル伝達によって媒介されるか又はそれと関連する疾患、障害又は状態のリスクがあるとみなされる。特定の実施形態において、対象は、自己免疫疾患、障害又は状態を有し、例えば１型糖尿病を有する。特定の実施形態において、対象は、免疫抑制療法を必要とする。
【０３４２】
「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容される賦形剤」は、本明細書で使用される場合、活性成分と組み合わせると、その成分が生物学的活性を保持できるようにし、対象の免疫系と反応性を有さないあらゆる材料を含む。例としては、これらに限定されるものではないが、標準的な製剤用担体、例えばリン酸緩衝塩類溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、及び様々な種類の湿潤剤のいずれかが挙げられる。エアロゾル又は非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又は規定（０．９％）食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化される（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990及びRemington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000を参照されたい）。
【０３４３】
例示的な方法及び材料がここに記載されるが、本明細書に記載されたものに類似した、又はそれと同等な方法及び材料も、本発明の実施又は試験において使用することができる。材料、方法及び例は単なる例示にすぎず、限定することを意図しない。
【０３４４】
ＩＩ．抗ＣＸＣＲ５抗体
本発明は、ＣＸＣＲ５に結合する抗体に関する。好ましくは、抗体は、ＣＸＣＲ５に特異的に結合し、すなわち抗体は、ＣＸＣＲ５に結合するが、他の分子と検出可能に結合しないか、又はより低い親和性で他の分子と結合する。本発明はさらに、変更されたエフェクター機能を示す抗ＣＸＣＲ５抗体に関する。一部の実施形態において、変更されたエフェクター機能は、増加したＡＤＣＣである。一部の実施形態において、抗体は、フコースを有さないか、又は検出可能に減少したレベルのフコースを含有する（すなわち、それらはアフコシル化されている）。本発明はまた、このような抗体を含む組成物、加えて治療的及び医薬的使用などのこのような抗体に関する使用にも関する。
【０３４５】
一実施形態において、本開示は、以下の抗体：１１Ｇ２、４１Ａ１０及び５Ｈ７のいずれか由来の、軽鎖配列又はそのフラグメント、及び重鎖又はそのフラグメントを有する抗体を含む、以下のいずれか、又は組成物（医薬組成物を含む）を提供する。
【０３４６】
本発明において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体フラグメント（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、及び必要な特異性を有する抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他のあらゆる改変された立体配置、例えば、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、及び共有結合で改変された抗体などを包含し得る。抗体は、マウス、ラット、ヒト、又は他のあらゆる起源のものであり得る（キメラ又はヒト化抗体を含む）。一部の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体は、ヒト又はヒト化抗体である。
【０３４７】
本発明のＣＸＣＲ５抗体は、当業界において公知のあらゆる方法によって作製することができる。ヒト及びマウス抗体産生のための一般的な技術は、当業界において公知であり、及び／又は本明細書に記載される。
【０３４８】
最初の同定の後、候補ＣＸＣＲ５抗体の活性は、標的化された生物学的活性を試験することで知られるバイオアッセイによって、さらに確認し、精査することができる。一部の実施形態において、候補ＣＸＣＲ５抗体をさらに特徴付けるために、インビトロの細胞アッセイが使用される。例えば、バイオアッセイは、候補を直接スクリーニングするのに使用することができる。例において、ＣＸＣＲ５抗体を同定及び特徴付けるための方法の一部を詳細に記載する。
【０３４９】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、マウス１１Ｇ２ ＶＨ、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０ ＶＨ、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７ ＶＨ、及びマウス５Ｈ７ ＶＬの配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む。
【０３５０】
部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５への結合について、上記抗体のいずれかと競合する。
【０３５１】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下の組合せ：
ヒトＣＸＣＲ５への結合について、マウス１１Ｇ２、キメラ１１Ｇ２、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４８４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）���ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）／ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０、キメラ４１Ａ１０、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）／ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７、及びキメラ５Ｈ７の１種以上と競合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含むＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を含む。
【０３５２】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５への結合について、上記抗体のいずれかと競合する。
【０３５３】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０３５４】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６、５７の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３をさらに含む。
【０３５５】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、並びに配列番号６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３５６】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、並びに配列番号１０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３５７】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、並びに配列番号１２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３５８】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、並びに配列番号５２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３５９】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３をさらに含む。
【０３６０】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３をさらに含む。
【０３６１】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３をさらに含む。
【０３６２】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号５２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の少なくとも１つのアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３をさらに含む。
【０３６３】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２７のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号２６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３をさらに含む。
【０３６４】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列に記載の、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０３６５】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされたアミノ酸配列に記載の、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３６６】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートによってコードされた、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列、並びにＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートによってコードされた、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３アミノ酸配列を含む。
【０３６７】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５への結合について、上記抗体のいずれかと競合する。
【０３６８】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３６９】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３７０】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３７１】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３７２】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３７３】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む。
【０３７４】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６、１０、１２、３６、５２、５３、５４、５５、５６及び５７の配列の少なくとも１つに記載の、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を含む。
【０３７５】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１、５、３５、４７、４８、４９、５０及び５１の配列の少なくとも１つに記載の、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３アミノ酸配列を含む。
【０３７６】
一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号５に記載の、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を含む。
【０３７７】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号６のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３７８】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１０のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３７９】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１２のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１２のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１２のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８０】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号１のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８１】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号５のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号５のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８２】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１７のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１７のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８３】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１８のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１８のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＨは、配列番号１８のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８４】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号１３のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号１３のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８５】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５８のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号５８のアミノ酸配列に少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＶＬは、配列番号５８のアミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０３８６】
一態様において、アフコシル化された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０、配列番号１２、配列番号３６、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＨから選択されるＶＨを含み、ＩｇＧ１定常ドメイン（配列番号３１）をさらに含む重鎖を含んでいてもよい。一態様において、前記抗体バリアントは、全長重鎖に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的若しくは非保存的置換、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の付加及び／若しくは欠失を含む。さらなる態様において、前記バリアントは、全長重鎖と、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を共有し、ここで前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する。
【０３８７】
本開示のアフコシル化された抗体は、配列番号１、配列番号５、配列番号３５、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、又は配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含んでいてもよく、ここで抗体は、軽鎖定常ドメインをさらに含む。本明細書でより詳細に記載されるように、アフコシル化された抗体の軽鎖の定常ドメインは、Ｃκ又はＣλ定常領域、例えば配列番号３０のＣκ定常領域から選択することができる。一態様において、前記抗体バリアントは、全長軽鎖に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の保存的若しくは非保存的置換、並びに／又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の付加及び／若しくは欠失を含む。さらなる態様において、前記バリアントは、全長軽鎖と、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を共有し、ここで前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する。
【０３８８】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号２９のアミノ酸配列に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含むＨＣを含んでいてもよい。ＨＣは、配列番号２９のアミノ酸配列を含んでいてもよい。好ましくは、抗体は、アフコシル化されている。
【０３８９】
抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号２８に、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含んでいてもよい。ＬＣは、配列番号２８のアミノ酸配列を含んでいてもよい。好ましくは、抗体は、アフコシル化されている。
【０３９０】
好ましくは、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、アフコシル化されている。さらにより好ましくは、抗体又はその抗原結合フラグメントは、アフコシル化されており、フコシル化されていること以外は同一な抗体と比較して増加したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。
【０３９１】
生殖細胞系置換
特定の実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、以下の重鎖ＣＤＲ配列：（ｉ）配列番号７を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号８を含むＣＤＲ−Ｈ２及び配列番号９又は１１を含むＣＤＲ−Ｈ３；並びに／又は（ｉｉ）以下の軽鎖ＣＤＲ配列：配列番号２を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３を含むＣＤＲ−Ｌ２及び配列番号４を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。これらは、マウスＣＤＲであり、好ましくは、ヒトＶＨ及びＶＬドメインのコンテクストにグラフト化されているか、又はそれ以外の方法で付加されている。多種多様のアクセプターヒト生殖細胞系配列が利用可能であり、ヒトで使用するために非ヒト種抗体を「ヒト化」するためのプロセスは、当業界において周知であり、本明細書の他所でも論じられる。それゆえに、当業者は、上記のマウスＣＤＲ配列を、ヒトＶドメインのアミノ酸配列のコンテクストに配置できることを理解していると予想される。そうすることによって、アクセプターヒト生殖細胞系配列への変化は、一般的に、元の親（すなわちドナー）抗体の抗体結合及び他の望ましい特徴が保存されるようになされる。ＣＤＲ及びフレームワーク領域（ＦＷ）の両方は、以下のように操作されていてもよい。
【０３９２】
特定の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ１中に、配列番号２のアミノ酸配列に対して、１１個以下、又は１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換がなされる。特定の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ２中に、配列番号３のアミノ酸配列に対して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換がなされる。特定の実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ３中に、配列番号４のアミノ酸配列に対して、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換が、なされる。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ１中に、配列番号７のアミノ酸配列に対して、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換がなされる。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ２中に、配列番号８のアミノ酸配列に対して、１７個以下、１６個以下、１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、又は１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換がなされる。一部の実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ３中に、配列番号９のアミノ酸配列に対して、又は配列番号１１のアミノ酸配列に対して、１２個以下、１１個以下、又は１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下の置換がなされる。特定の実施形態において、置換は、結合親和性（ＫＤ）値を、１０００倍より大きく、１００倍又は１０倍より大きく変化させない。特定の実施形態において、置換は、表１による保存的置換である。
【０３９３】
特定の実施形態において、置換は、（ドナー）ＣＤＲ残基が対応するヒト生殖細胞系（アクセプター）残基で置き換えられているヒト生殖細胞系置換であり、それにより、例えば、ＵＳ２０１７／００７３３９５及びTownsend et al., 2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112(50):15354-15359）に記載されるように、ヒトアミノ酸含量が増加し、抗体の免疫原性を低減させる可能性がある。例えば、ヒト生殖細胞系ＤＰＫ９フレームワークが使用され、例示的な抗体であるマウス又はヒト化（ＸＣ１５４）１１Ｇ２ ＶＬを比較すると、１１Ｇ２ ＶＬ（マウス及びヒト化ＸＣ１５４）抗体（配列番号２）及びヒト生殖細胞系ＤＰＫ９のＣＤＲ−Ｌ１のアライメントは、以下のとおりである：
【０３９４】
【化１】
2021503888.tif 000004
【０３９５】
アミノ酸位置番号２８（イタリック）に関して、ヒト生殖細胞系残基（アクセプター）及び対応する１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）残基（ドナー）は同じであり、生殖細胞系置換は起こり得ない。２７、２９、３０、３１、３２、３３、３４及び３５位（太字及び下線で示した）に関して、ヒト生殖細胞系（アクセプター）残基及び対応する１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）（ドナー）残基は異なっている。これらの位置における１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）の残基は、対応するヒト生殖細胞系ＤＰＫ９残基で置き換えられていてもよく、ヒト残基含量をさらに増加させることができる。各重鎖及び軽鎖ＣＤＲでも同じプロセスに従ってもよく、結合特徴、例えば、エピトープ結合、親和性などを保存しながらもヒトアミノ酸残基の含量を増加させることができ、同時に、マウス残基の含量を最小化することによって、あらゆる起こり得る免疫原性、例えば、ヒトにおける抗体に対するヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）免疫応答を減少させる。
【０３９６】
抗体ＣＤＲにヒト生殖細胞系残基を導入するための方法及びライブラリーは、ＵＳ２０１７／００７３３９５及びTownsend et al., 2015, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112(50):15354-15359で詳細に記載されており、どちらも参照によりそれら全体が本明細書に組み入れられる。
【０３９７】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含んでいてもよい。ＶＨフレームワーク配列は、ヒトＶＨ３生殖細胞系、ＶＨ１生殖細胞系、ＶＨ５生殖細胞系、又はＶＨ４生殖細胞系由来であってもよい。好ましいヒト生殖細胞系重鎖フレームワークは、ＶＨ１、ＶＨ３、又はＶＨ５生殖細胞系由来のフレームワークである。例えば、以下の生殖細胞系由来のＶＨフレームワーク：ＩＧＨＶ３−２３、ＩＧＨＶ３−７、又はＩＧＨＶ１−６９（生殖細胞系の名称はＩＭＧＴの生殖細胞系の定義に基づく）が使用される可能性がある。好ましいヒト生殖細胞系軽鎖フレームワークは、ＶΚ又はＶλ生殖細胞系由来のフレームワークである。例えば、以下の生殖細胞系由来のＶＬフレームワーク：ＩＧＫＶ１−３９又はＩＧＫＶ３−２０（生殖細胞系の名称はＩＭＧＴの生殖細胞系の定義に基づく）が使用される可能性がある。あるいは、又は加えて、フレームワーク配列は、ヒト生殖細胞系コンセンサスフレームワーク配列、例えば、ヒトＶλ１コンセンサス配列、ＶΚ１コンセンサス配列、ＶΚ２コンセンサス配列、ＶΚ３コンセンサス配列、ＶＨ３生殖細胞系コンセンサス配列、ＶＨ１生殖細胞系コンセンサス配列、ＶＨ５生殖細胞系コンセンサス配列、又はＶＨ４生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系フレームワークの配列は、様々な公開データベース、例えばＶ−ｂａｓｅ、ＩＭＧＴ、ＮＣＢＩ、又はAbysisから入手可能である。
【０３９８】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含んでいてもよい。ＶＬフレームワークは、その由来となる生殖細胞系と機能的及び構造的な類似性を保持しながら、１つ以上のアミノ酸置換、付加、又は欠失を含んでいてもよい。一部の態様において、ＶＬフレームワークは、ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワーク配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一である。一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワーク配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加又は欠失を含むＶＬフレームワークを含む。一部の態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸置換、付加又は欠失は、フレームワーク領域中にのみ存在する。一部の態様において、％同一性は、本明細書においてＣＤＲと定義されるフラグメントを除いたＶＬとの類似性に基づく。
【０３９９】
ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ９（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−３９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２Ｄ−２９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２−３０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２４（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ４−１）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＨＫ１０２＿Ｖ１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−５）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−３３）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ３（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ１−６）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２１（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−１５）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、Ｖｇ＿３８Ｋ（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−１１）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ２２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ３−２０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＫ１５（ＩＭＧＴ名：ＩＧＫＶ２−２８）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＬ１６（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ３−１９）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ＤＰＬ８（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ１−４０）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、Ｖ１−２２（ＩＭＧＴ名：ＩＧＬＶ６−５７）のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶλコンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶλ１コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶλ３コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶκコンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶκ１コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶκ２コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＬフレームワークは、ヒトＶΚ３コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。
【０４００】
一部の態様において、ＶＬフレームワークは、ＤＰＫ９である。他の類似のフレームワーク領域も、配列番号２、３、４、７、８、９、１１、１４、１５、１６のＣＤＲ；及び以下のＶＬアミノ酸配列：１、５、１３、２８、３５、３７、３９、４７、４８、４８、５０、５１、５８、５９、６０、６１、６２、９７、９８によって特定されるＣＤＲを含む本発明の有利な抗体を送達することが予測され、そのようなフレームワーク領域としては、ＤＰＫ−９のＦＷ領域と、それぞれ９９、９７、９７、９６、８０、７６、６６、９７、９７、９６、７６及び７４％の同一性を有し、共通の構造的特徴（Kabatの番号付け）である（Ａ）ＣＤＲの直下の残基（バーニアゾーン）、Ｌ２、Ｌ４、Ｌ３５、Ｌ３６、Ｌ４６、Ｌ４７、Ｌ４８、Ｌ４９、Ｌ６４、Ｌ６６、Ｌ６８、Ｌ６９、Ｌ７１、（Ｂ）ＶＨ／ＶＬ鎖をパッキングする残基：Ｌ３６、Ｌ３８、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｌ８７、並びに（Ｃ）標準的なＣＤＲ構造支持残基Ｌ２、Ｌ４８、Ｌ６４、Ｌ７１において１つ以下のアミノ酸の差を有する、ＤＰＫ５、ＤＰＫ４、ＤＰＫ１、ＩＧＫＶ１−５＊０１、ＤＰＫ２４、ＤＰＫ２１、ＤＰＫ１５、ＩＧＫＶ１−１３＊０２、ＩＧＫＶ１−１７＊０１、ＤＰＫ８、ＩＧＫＶ３−１１＊０１及びＤＰＫ２２が挙げられる（Lo, “Antibody Humanization by CDR Grafting”, (2004) Antibody Engineering, Vol. 248, Methods in Molecular Biology pp 135-159及びO’Brien and Jones, “Humanization of Monoclonal Antibodies by CDR Grafting”, (2003) Recombinant Antibodies for Cancer Therapy, Vol. 207, Methods in Molecular Biology pp 81-100を参照）。特に好ましくは、ＤＰＫ９と、それぞれ９９、９７、９７、９６、８０、７６、６６％の同一性を共有し、これらの共通の構造的特徴においてアミノ酸の差がない、ＤＰＫ５、ＤＰＫ４、ＤＰＫ１、ＩＧＫＶ１−５＊０１、ＤＰＫ２４、ＤＰＫ２１、及びＤＰＫ１５のフレームワーク領域である。一部の態様において、％同一性
は、本明細書においてＣＤＲと定義されるフラグメントを除いたＶＬとの類似性に基づく。
【０４０１】
抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含んでいてもよい。ＶＨフレームワークは、１つ以上のアミノ酸置換、付加、又は欠失を含んでいてもよく、それでもなおその由来となる生殖細胞系と機能的及び構造的な類似性を保持する。一部の態様において、ＶＨフレームワークは、ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワーク配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一である。一部の態様において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワーク配列に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加又は欠失を含むＶＨフレームワークを含む。一部の態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸置換、付加又は欠失は、フレームワーク領域中にのみ存在する。一部の態様において、％同一性は、本明細書においてＣＤＲと定義されるフラグメントを除いたＶＨとの類似性に基づく。
【０４０２】
ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ５４又はＩＧＨＶ３−７のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ４７又はＩＧＨＶ３−２３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７１又はＩＧＨＶ４−５９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７５又はＩＧＨＶ１−２＿０２のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ１０又はＩＧＨＶ１−６９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７又はＩＧＨＶ１−４６のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ４９又はＩＧＨＶ３−３０のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ５１又はＩＧＨＶ３−４８のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ３８又はＩＧＨＶ３−１５のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７９又はＩＧＨＶ４−３９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７８又はＩＧＨＶ４−３０−４のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ７３又はＩＧＨＶ５−５１のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ５０又はＩＧＨＶ３−３３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ４６又はＩＧＨＶ３−３０−３のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ＤＰ３１又はＩＧＨＶ３−９のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ３生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ５生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ１生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。ヒト生殖細胞系のＶＨフレームワークは、ヒトＶＨ４生殖細胞系コンセンサス配列のフレームワークであってもよい。
【０４０３】
一部の態様において、ＶＨフレームワークは、ＤＰ-５４である。他の類似のフレームワーク領域も、配列番号７、８、９、１１，１９、２０、２１のＣＤＲ、及び以下のＶＨアミノ酸配列：６、１０、１２、１７、１８、３６、３８、４０、５２、５３、５４、５５、５６、５７、６３、９６によって特定されるＣＤＲを含む本発明の有利な抗体を送達することが予測され、そのようなフレームワーク領域としては、ＤＰ-５４のＦＷ領域と、それぞれ９３、９２、９２、９９、９７、９７、９６、９６、９４、９４、９３、９２％の同一性を有し、共通の構造的特徴（Kabatの番号付け）である（Ａ）ＣＤＲの直下の残基（バーニアゾーン）、Ｈ２、Ｈ４７、Ｈ４８、及びＨ４９、Ｈ６７、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ９３、Ｈ９４、（Ｂ）ＶＨ／ＶＬ鎖をパッキングする残基：Ｈ３７、Ｈ３９、Ｈ４５、Ｈ４７、Ｈ９１、Ｈ９３、並びに（Ｃ）標準的なＣＤＲ構造支持残基Ｈ２４、Ｈ７１、Ｈ９４において１つ以下のアミノ酸の差を有する、ＤＰ−５０、ＩＧＨＶ３−３０＊０９、ＩＧＨＶ３−３０＊１５、ＩＧＨＶ３−４８＊０１、ＤＰ−７７、ＤＰ−５１、ＩＧＨＶ３−６６＊０１、ＤＰ−５３、ＤＰ−４８、ＩＧＨＶ３−５３＊０１、ＩＧＨＶ３−３０＊０２、及びＤＰ−４９が挙げられる（Lo 2004及びO’Brien and Jones 2003を参照）。特に好ましくは、ＤＰ-５４と、それぞれ９３、９２及び９２％の同一性を有し、これらの共通の構造的特徴においてアミノ酸の差がない、ＤＰ−５０、ＩＧＨＶ３−３０＊０９、ＩＧＨＶ３−３０＊１５のフレームワーク領域である。一部の態様において、％同一性は、本明細書においてＣＤＲと定義されるフラグメントを除いたＶＨとの類似性に基づく。
【０４０４】
特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／又は（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６６％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。これらのＶＬ及びＶＨ配列のいずれの組合せも本発明に包含される。
【０４０５】
特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ；及び／又は（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むＬＣを含む。これらのＨＣ及びＬＣ配列のいずれの組合せも本発明に包含される。
【０４０６】
特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＡ由来であってもよいし（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＧ由来であってもよい（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）。
【０４０７】
本発明はまた、ヒトＣＸＣＲ５への結合について、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば本明細書で提供される抗体（又はその抗原結合フラグメント）のいずれか１つのいずれかと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントも提供する。例えば、抗体又はその抗原結合フラグメントのヒトＣＸＣＲ５への結合が、それに続くＣＸＣＬ１３によるヒトＣＸＣＲ５への結合を妨害する場合、その抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＲ５結合について、ＣＸＣＬ１３と競合する。
【０４０８】
本発明によって提供される抗体及び抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体の一部を含む融合タンパク質、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ヒト化抗体、及び必要な特異性を有する抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他のあらゆる改変された立体配置、例えば、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、及び共有結合で改変された抗体を含む。抗体及び抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヒト、又は他のあらゆる起源のものであり得る（キメラ又はヒト化抗体を含む）。一部の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体である。特定の実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。
【０４０９】
エピトープマッピング
本発明はまた、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントと同じヒトＣＸＣＲ５エピトープに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントも提供する。例えば、抗体競合アッセイ（及びオーバーラップエピトープ分析）は、ＳＰＲ、フローサイトメトリー、及び当業界において公知の他のあらゆるアッセイによって査定することができる。
【０４１０】
一態様において、本発明は、ヒトＣＸＣＲ５及びカニクイザルＣＸＣＲ５と結合するが、マウスＣＸＣＲ５と結合しない抗体又はその抗原結合フラグメントを包含する。
【０４１１】
本発明はまた、ヒトＣＸＣＲ５のＮ末端領域（「Ｎ」）と結合する抗体又はその抗原結合フラグメントも含む。ＣＸＣＲ５のＮ末端は、配列番号３１のアミノ酸配列の番号付けに基づいて、アミノ酸残基番号１〜５１を含む。
【０４１２】
本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基位置番号１１にロイシン（Ｌ）を含むエピトープにおいて、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１３】
一態様において、本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基位置番号２２にアスパラギン酸（Ｄ）を含むエピトープにおいて、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１４】
一態様において、本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基位置番号１１にロイシンを含み、アミノ酸残基位置番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープにおいて、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１５】
本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１におけるアミノ酸残基がロイシンである、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１６】
本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１におけるアミノ酸残基がロイシンであるＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、位置番号１１におけるアミノ酸残基がスレオニンであるＣＸＣＲ５と結合しない抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１７】
一態様において、本発明は、野生型ヒトＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基位置番号１１がロイシンではない場合、結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１８】
本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号２２におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸である、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４１９】
一態様において、本発明は、野生型ヒトＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号２２におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸ではない場合、結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２０】
一態様において、本発明は、野生型ヒトＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基位置番号２２がアラニンである場合、結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２１】
本発明は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１におけるアミノ酸残基がロイシンであり、位置番号２２におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸である、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２２】
一態様において、本発明は、ヒトＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１におけるアミノ酸残基がロイシンではなく、位置番号２２におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸ではない場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２３】
一態様において、本発明は、ヒトＣＸＣＲ５と特異的に結合するが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１におけるアミノ酸残基がスレオニンであり、位置番号２２におけるアミノ酸残基がアラニンである場合、結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２４】
当業者は、本発明の教示を利用して、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、位置番号１１及び／又は位置番号２２におけるアミノ酸残基が、本発明の抗体の結合にとって重要であることを理解すると予想される。より具体的には、これらのアミノ酸残基は、抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントによるＣＸＣＲ５への結合にとって重要である。したがって、当業者であれば、本発明は、１１位におけるアミノ酸残基がロイシンであり、２２位におけるアミノ酸残基がアスパラギン酸である、ＣＸＣＲ５と特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを含むことを理解していると予想される。これらのアミノ酸残基の置換又は欠失は、ＣＸＣＲ５への結合の損失を引き起こす可能性がある。１１位におけるアミノ酸残基の特定の置換は、結合を保存するが、その（ロイシン）アミノ酸残基のスレオニンでの置換はそうではない。同様に、２２位におけるアミノ酸残基の特定の置換又は欠失は、結合を保存することができるが、そのアミノ酸残基番号におけるアスパラギン酸のアラニンでの置換はそうではない。それゆえに、１１Ｇ２抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又はそれと結合について競合する抗体の特徴は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、ロイシン１１及びアスパラギン酸２２が存在する場合、抗体はヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ロイシン１１がスレオニン又は別のアミノ酸残基で置き換えられている場合、抗体は結合せず、アスパラギン酸２２がアラニン又は別のアミノ酸残基で置き換えられている場合、抗体は結合しないことである。アミノ酸残基位置番号１１及び／又は番号２２でのアミノ酸置換後における結合の損失に関する試験は、当業界において周知の多種多様の方法、例えば、本明細書で例示された方法によって点変異ポリペプチドを使用する結合分析などを使用して、実行することができる。
【０４２５】
本明細書で提供される教示に基づき、当業者は、本発明の抗体は、例えば１１Ｇ２と競合することができるが、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号１１にロイシンを含み、及び／又はアミノ酸残基番号２２にアスパラギン酸を含むエピトープを含まないことを理解していると予想される。すなわち、アミノ酸残基番号１１におけるロイシン又はアミノ酸残基番号２２におけるアスパラギン酸が異なるアミノ酸で置換されている（例えば、ロイシンの代わりにスレオニン、及び／又はアスパラギン酸の代わりにアラニン）、例えば、２Ｃ９、１１Ａ７及び１６Ｄ７である場合、抗体は、ＣＸＣＲ５への結合について本発明の抗体と競合することができるが、競合抗体結合は影響されない。したがって、本発明の抗体は、ＣＸＣＲ５への結合について競合し、さらに、アミノ酸残基番号１１がロイシンではない場合、より具体的にはスレオニンである場合、及び／又はアミノ酸残基番号２２がアスパラギン酸ではない場合、より具体的にはアラニンである場合も、ＣＸＣＲ５と結合しない。これまで本明細書で述べたように、突然変異ＣＸＣＲ５タンパク質の産生及び抗体競合結合を査定するためのアッセイは、本明細書に記載される方法も含め当業界において周知である。したがって、本明細書で提供される教示に基づき、当業者は、ＣＸＣＲ５と結合し、本発明の抗体と結合について競合し、特定のアミノ酸が置換されると、例えば、全ての配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、ロイシン１１、アスパラギン酸２２又は両者が置換されると、ＣＸＣＲ５突然変異タンパク質と結合する能力を失う抗体を同定することを容易に行うことができると予想される。
【０４２６】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１がロイシンではない場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２７】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号２２がアスパラギン酸ではない場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２８】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従ってアミノ酸残基番号１１がロイシンではなく、アミノ酸残基番号２２がアスパラギン酸ではない場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４２９】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号１１がスレオニンである場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４３０】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号２２がアラニンである場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４３１】
別の態様において、本発明は、結合について抗体１１Ｇ２又はその抗原結合フラグメントと競合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、該抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って、アミノ酸残基番号１１がスレオニンである場合、及びアミノ酸残基番号２２がアラニンである場合、ＣＸＣＲ５と結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４３２】
抗ＣＸＣＲ５抗体の生物学的活性
ＣＸＣＲ５におけるエピトープの結合に加えて、本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントは、生物学的活性を媒介することができる。すなわち、本発明は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合し、以下：（ａ）高い見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット又はウサギのオーソログを発現する細胞と結合しないこと；（ｂ）フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ放出のＣＸＣＬ１３阻害に拮抗すること；（ｃ）ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナーＴＭＣにおいてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させること；（ｄ）ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、又はＸＣＲ１と結合しないこと；（ｅ）末梢血中のＢ細胞及び／又は二次リンパ器官（すなわち、リンパ節、脾臓、パイエル板及び粘膜関連リンパ組織）を枯渇させること；（ｆ）末梢血中のＴｆｈ様細胞を枯渇させること；（ｇ）二次リンパ器官において真正Ｔｆｈ細胞を枯渇させること；並びに（ｈ）体液性免疫メモリー応答を損なうことから選択される少なくとも１つの検出可能な活性を媒介する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。
【０４３３】
一態様において、本発明は、抗体を含み、又は高い見かけの親和性でＣＸＣＲ５＋細胞と結合するが、ＣＸＣＲ５のマウス、ラット又はウサギのオーソログを発現する細胞と結合しない。見かけの親和性の結合を、フローサイトメトリーを使用して査定して、標的タンパク質（例えば、ＣＸＣＲ５）を発現する細胞への抗体結合を検出することができる。細胞は、ＣＸＣＲ５をコードする核酸で一時的又は安定にトランスフェクトされていてもよい。あるいは、細胞は、その表面上にＣＸＣＲ５を天然に発現する細胞であってもよい。ＣＸＣＲ５＋細胞の由来に関係なく、細胞への抗体の結合は、当業界で認識されている様々な方法を使用して容易に査定することができる。抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＲ５又はｃｙｎｏＣＸＣＲ５と結合するが、マウス、ラット又はウサギＣＸＣＲ５と検出可能に結合しないか又はかなり低い程度で結合する。
【０４３４】
本発明は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合し、ＣＸＣＲ５へのＣＸＣＬ１３の結合によって媒介される活性に拮抗する、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達によって媒介される活性の阻害を決定するための当業界において公知の多くのアッセイがある。１つのこのようなアッセイは、ｃＡＭＰレポーターアッセイである。このようなアッセイにおいて、フォルスコリンは、ＣＸＣＲ５を安定して発現する細胞においてＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達によって阻害されるｃＡＭＰ産生を誘導する。したがって、ＣＸＣＲ５と結合し、ＣＸＣＲ５−ＣＸＣＬ１３シグナル伝達の作用に拮抗する抗ＣＸＣＲ５抗体の能力は、抗体の存在又は非存在下で産生されたｃＡＭＰのレベルを測定することによって査定される。好ましくは、抗体は、用量依存性のｃＡＭＰレベルの増加を、約５０ｐＭ、約１００ｐＭ、約２００ｐＭ、約４００ｐＭ、約６００ｐＭ、約７００ｐＭ、約７５０ｐＭ、約７９０ｐＭ、約８００ｐＭ、約８５０ｐＭ、約９００ｐＭ、約９５０ｐＭ、約９６０ｐＭ、約９７０ｐＭ、約９８０ｐＭ、約９９０ｐｍ、又は約１０００ｐＭのＥＣ５０で媒介することができる。より好ましくは、抗体又はその抗原結合フラグメントは、フォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰのＣＸＣＬ１３阻害を、約９６１ｐＭのＥＣ５０で阻害する。
【０４３５】
本発明は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合し、ヒトドナー及びカニクイザルＰＢＭＣ並びにヒトドナー扁桃単核細胞（ＴＭＣ）においてＣＸＣＲ５を発現する細胞のＡＤＣＣを開始させる、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。多くのＡＤＣＣアッセイは、抗体のＡＤＣＣ活性を査定するのに使用することができる。このような例示的なアッセイが本明細書の例６及び７に記載されているが、本発明は、この特定のＡＤＣＣアッセイに限定されるものではない。本発明は、ヒトＢ細胞、ヒトＴｆｈ様細胞、ヒトＴｆｈ細胞及びカニクイザルＢ細胞において、約０．１１ｐＭ、０．２ｐＭ、０．５ｐＭ、１ｐＭ、１．５ｐＭ、２．０ｐＭ、２．５ｐＭ、３．０ｐＭ、４．５ｐＭ、４．８ｐＭ、５．０ｐＭ、６．０ｐＭ、７．０ｐＭ、８．０ｐＭ、９．０ｐＭ、１０ｐＭ、１１ｐＭ、１２ｐＭ、１５ｐＭ、２０ｐＭ、２５ｐＭ、３０ｐＭ、３５ｐＭ、又は４０ｐＭのＥＣ５０でＡＤＣＣ活性を示す抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。より好ましくは、抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＢ細胞に対して約２．０１±２．２８ｐＭ、ヒトＴｆｈ様細胞に対して約４．８２±２．８８ｐＭ、ヒトＴｈｆ細胞に対して約０．１１ｐＭ、及びｃｙｎｏＢ細胞に対して約１５．３±１１．７ｐＭのＥＣ５０でＡＤＣＣ活性を示す。さらにより好ましくは、抗体又はその抗原結合フラグメントは、アフコシル化されている。
【０４３６】
本発明は、ヒトＣＸＣＲ５と結合するが、ヒトタンパク質ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、又はＸＣＲ１と検出可能に結合しない、抗体又はその抗原結合フラグメントを包含する。
【０４３７】
本発明は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合し、末梢血中のＢ細胞の用量依存性の枯渇を示す、抗体又はその抗原結合フラグメントを包含する。枯渇は、永続的であってもよく、又はより好ましくは、枯渇は、一時的及び／又は可逆的である。一態様において、Ｂ細胞枯渇を媒介するのに十分な抗体用量は、０．００１〜約０．２ｍｇであってもよく、この場合、０．０００１ｍｇ／ｋｇは、抗体が投与されていない場合の末梢血におけるＢ細胞又はＴｆｈ様細胞のパーセンテージと比較して約５０％のカニクイザルの末梢血中のＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇を媒介することができる。加えて、抗体は、５ｍｇ／ｋｇ未満の用量で静脈内（ＩＶ）投与されたカニクイザルの末梢血中の最大のＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇を媒介することができる。好ましくは、抗体の投与後、Ｂ細胞、Ｔｆｈ様及びＴｆｈ細胞の部分的から完全な回復が起こる。
【０４３８】
本発明は、ＣＸＣＲ５と特異的に結合し、体液性免疫メモリー応答を損なう、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む。一態様において、体液性メモリー応答は、ワクチンリコールアッセイを使用して査定される。すなわち、事前に抗原、例えば破傷風トキソイド（ＴＴ）が接種された対象に、抗体を投与する。対象に２回目の抗原投与がなされ、免疫応答、例えばＩｇＭ及びＩｇＧ力価を、抗体が投与されないこと以外は同一な対象における免疫応答と比較する。当業者は、本明細書で開示された教示が提供されれば、体液性メモリー応答を決定するための多くのアッセイは、抗体又はその抗原結合フラグメントの体液性メモリー応答を損なう能力を査定するのに使用できることを理解していると予想される。さらに、当業者は、体液性メモリー応答を損なう能力は、抗体又はその抗原結合フラグメントを、それを必要とする対象において免疫疾患を治療又は予防するための治療剤として使用するために望ましい特徴であることを理解していると予想される。
【０４３９】
本発明は、上記で論じられた生物学的活性の、少なくとも１つ、好ましくは２つ、さらにより好ましくは３つ、さらにより好ましくは４つ、さらにその上より好ましくは５つ、さらにより好ましくは６つ、より好ましくは７つ、さらにより好ましくは全てを示す抗体又はその抗原結合フラグメントを包含する。
【０４４０】
ＩＩＩ．アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合した、フコースを有さない炭水化物構造を有する抗体（すなわち、アフコシル化された抗体）が提供される。例えば、複数のこのような抗体を含む組成物中のフコースの量は、０パーセント〜約３０パーセント、０パーセント〜約２０パーセント、０パーセント〜約１５パーセント、０パーセント〜約１０パーセント、より好ましくは、０パーセント〜約５パーセントであり得る。一部の実施形態において、複数のこのような抗体を含む組成物は、少なくとも８０パーセント、より好ましくは少なくとも８５パーセント、さらにその上より好ましくは少なくとも９０パーセント、さらにより好ましくは少なくとも９５パーセントのアフコシル化された抗体、さらにその上より好ましくは少なくとも９９パーセント、最も好ましくは少なくとも９９．５パーセントのアフコシル化された抗体を含む。一部の実施形態において、抗体は、１００パーセントアフコシル化されており、すなわち、フコースは、抗体中のフコースを検出するための当業界で認識されている方法を使用して、Ａｓｎ２９７で検出されない。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。
【０４４１】
一部の実施形態において、フコシル化のレベルは、０．５％以下であり、これは試験方法の定量限界（ＬＯＱ）に基づく。したがって、一部の実施形態において、アフコシル化のレベルは、９９．５％より大きいか又はそれに等しい。N-結合型オリゴ糖プロファイル方法を使用して、サンプル中のフコシル化、シアル化、マンノシル化及び末端ガラクトシル化（glactosylation）のレベルを決定することができる。N-結合型オリゴ糖方法を使用して、N-結合型グリカンを評価することができる。手短に説明すると、ペプチド-N-グリコシダーゼＦを用いて、N-結合型グリカンを、タンパク質から酵素的に放出させる。次いでグリカンを、蛍光物質によって誘導体化し、親水性相互作用液体クロマトグラフィー及び蛍光検出を使用して分析する。次いでクロマトグラフプロファイルを参照物質のクロマトグラフプロファイルと比較する。この方法及び他の多くの方法は、抗体のフコシル化を査定することに関する分野において公知であり、本発明の抗体中に存在するフコシル化のレベルを決定するのに使用することができる。
【０４４２】
非限定的な例示的な抗体中のフコースを検出する方法としては、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析（例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のＨＰＬＣ測定（例えば、Schneider et al, "N-Glycan analysis of monoclonal antibodies and other glycoproteins using UHPLC with fluorescence detection," Agilent Technologies, Inc. (2012); Lines, J. Pharm. Biomed. Analysis, 14: 601-608 (1996); Takahasi, J. Chrom., 720: 217-225 (1996)を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のキャピラリー電気泳動測定（例えば、Ma et al., Anal. Chem., 71: 5185-5192 (1999)を参照）、及び単糖組成を測定するためのパルス電流滴定検出を用いたＨＰＬＣ（例えば、Hardy, et al, Analytical Biochem., 170: 54-62 (1988)を参照）が挙げられる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域中の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に配置されたアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるわずかな配列の変動により、２９７位のプラス・マイナス約３個のアミノ酸の上流又は下流に、すなわち２９４位と３００位との間に配置されている場合もある。本明細書に記載されるＣＸＣＲ５抗体において、Ａｓｎ２９７は、配列ＱＹＮＳＴに見出され、表１６で太字及び下線で示される（例えば、野生型ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインの配列番号３１）。
【０４４３】
フコシル化バリアントは、改善したＡＤＣＣ機能を有していてもよい。例えば、ＵＳ２００３／０１５７１０８（Presta, L.）；ＵＳ２００４／００９３６２１号（Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd）を参照されたい。「アフコシル化された」又は「フコース欠乏」抗体に関する出版物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。アフコシル化された抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質のフコシル化が欠乏したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；ＵＳ２００３／０１５７１０８、Presta, L；ＷＯ２００４／０５６３１２、Adams et al.、特に例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８を欠く細胞株、例えば、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng, 94(4):680-688 (2006)；ＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が挙げられる。
【０４４４】
２分岐オリゴ糖を有する抗体、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した２分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃで２つに分岐している抗体がさらに提供される。このような抗体は、低減したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Jean-Mairet et al.）；ＵＳ６６０２６８４（Umana et al.）；及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Umana et al.）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体も提供される。このような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体は、例えば、ＷＯ９７／３００８７（Patel et al.）；ＷＯ９８／５８９６４（Raju, S.）及びＷＯ９９／２２７６４（Raju, S.）に記載されている。
【０４４５】
本発明の一部の実施形態において、アフコシル化された抗体は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、フコースを含む親抗体より効果的にＡＤＣＣを媒介する。一般的に、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示されるようなインビトロのＡＤＣＣアッセイを使用して決定することができるが、ＡＤＣＣ活性を決定するための他のアッセイ又は方法、例えば動物モデルにおけるものなどが企図される。
【０４４６】
一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、インビトロ及び／又はインビボで増強されたＡＤＣＣ活性を有する。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、インビトロで増強されたＡＤＣＣ活性を有する。一部の実施形態において、インビトロでのＡＤＣＣ活性は、本明細書に記載される方法によって決定される。手短に説明すると、抗ＣＸＣＲ５抗体又はアイソタイプ対照の連続希釈物を、健康なヒトドナー又はカニクイザルからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と共にインキュベートする。このアッセイにおいて、ＰＢＭＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞、標的ＣＸＣＲ５＋ Ｂ及びＴｆｈ様細胞のソースである。フローサイトメトリーを使用して、およそ２０時間後に残存するＢ及びＴｆｈ様細胞の数を定量化する。ＰＦ−０６８３５３７５抗体濃度の対数に対して、抗原結合集団の細胞傷害性のパーセンテージをプロットすることによって細胞傷害性滴定曲線を作成した。ＥＣ５０値を、GraphPad Prism（登録商標）（バージョン６．０、GraphPad Software, Inc, San Diego, CA）非線形回帰曲線フィッティング及び以下の方程式に従うアゴニスト用量応答モデルのシグモイドログを使用して決定した：
Ｌｏｇ（アゴニスト）対応答−変数の傾き（４パラメーター）
Ｙ＝最小＋（最大−最小／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）×ヒルスロープ））
式中、Ｙは、細胞傷害性のパーセンテージであり、Ｘは、抗体濃度であり、最大は、シグモイド曲線の上のプラトーに対応する最大のＹ−値であり、最小は、シグモイド曲線の下のプラトーに対応する最小のＹ−値であり（０に拘束される）、ＬｏｇＥＣ５０は、曲線の屈曲点における抗体濃度の対数である。
【０４４７】
平均値及び標準偏差（ＳＴＤＥＶ）で実験全体のＥＣ５０値をまとめた。一部の実施形態において、ヒト扁桃由来の真正Ｔｆｈ細胞のＡＤＣＣを誘導するヒト化ｍＡｂの能力を、同様にＰＢＭＣから単離されたＮＫ細胞を添加して扁桃単核細胞から単離されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を使用して査定した。一部の実施形態において、ＣＸＣＲ５を発現するＢａ／Ｆ３細胞を、標的細胞として使用した。一部の実施形態において、細胞傷害性は、CytoTox Non-Radioactive Cytotoxicity Assay（Promega, Madison, WI）を使用してＬＤＨ放出を定量化することによって決定される。
【０４４８】
一部の実施形態において、最大の溶解は、５パーセントのＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を使用して決定され、自発的な放出は、抗体の非存在下で決定される。一部の実施形態において、特異的な溶解のパーセンテージは、式：（実験−自発的な放出）／（最大−自発的な放出）×１００＝特異的な溶解のパーセントを使用して決定することができる。一部の実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有するアフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、試験された抗体の少なくとも１つの濃度において、同じ量のフコシル化された抗体での特異的な溶解より、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少なくとも７５パーセントポイント大きい特異的な溶解をもたらす。一部の実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有するアフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、フコシル化された抗体での特異的な溶解より、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、又は少なくとも７５パーセントポイント大きい特異的な溶解をもたらし、この場合、各抗体は、０．０１〜１マイクロｇ／ｍｌの濃度であり、標的細胞は、ＣＸＣＲ５を発現するＢａ／Ｆ３細胞である。一部の実施形態において、抗体は、０．０００００５マイクロｇ／ｍｌ〜５マイクロｇ／ｍｌの濃度で試験される。
【０４４９】
一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された親和性を有する。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された親和性を有する。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）への増強された親和性を有する。一部の実施形態において、ＦｃγＲＩＩＩＡへの抗体の親和性は、表面プラズモン共鳴を使用して、及び／又は以下のようにして決定され、これは、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）を参照しながら記載されるが、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）への親和性の決定にも好適である。手短に説明すると、一部の実施形態において、フコシル化又はアフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体を、プロテインＡでコーティングされたデキストランチップ上に捕獲する。ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）（例えば、R and D Systemsから入手可能）を様々な濃度で注入する。フコシル化及びアフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体のＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への会合定数、解離定数及び親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴システムと共に提供されるソフトウェア（例えば、Biacore T200 Evaluationソフトウェア１：１結合モデル）を使用して決定することができる。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（例えばＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）又はＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））への増強された親和性を有する可能性があり、フコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体より、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、又は少なくとも１０００倍大きい親和性で、ＦｃγＲＩＩＩＡに結合することができる。
【０４５０】
ＩＶ．抗ＣＸＣＲ５抗体の発現及び産生
抗ＣＸＣＲ５抗体をコードする核酸
本発明はまた、本明細書に記載される抗体フラグメント及び改変された抗体を含む抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドも提供する。本発明はまた、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法も提供する。ポリヌクレオチドは、当業界において公知の手順によって作製し、発現させることができる。
【０４５１】
望ましい抗体、定義された抗体フラグメント、又はその抗原結合フラグメント、及びこのような抗体又はそれらのフラグメントをコードする核酸の配列は、標準的なシーケンシング技術を使用して決定することができる。望ましい抗体、定義された抗体フラグメント、又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列は、組換え産生及び特徴付けのために様々なベクター（例えばクローニング及び発現ベクター）に挿入させることができる。重鎖、定義された抗体フラグメント、又は重鎖の抗原結合フラグメントをコードする核酸と、軽鎖をコードする核酸、定義された抗体フラグメント、又は軽鎖の抗原結合フラグメントをコードする核酸とは、同じベクター、又は異なるベクターにクローニングすることができる。
【０４５２】
一態様において、本発明は、以下のＣＸＣＲ５抗体及びその抗原結合フラグメント：
マウス１１Ｇ２ ＶＨ、マウス１１Ｇ２ ＶＬ、キメラ１１Ｇ２ ＶＨ、キメラ１１Ｇ２ ＶＬ、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５５）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ１５７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５０）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５２）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＨ（ＸＣ３５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５１）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５３）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ１５４）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４６）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４７）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４８）、ｈ１１Ｇ２ ＶＬ（ＸＣ３４９）、マウス４１Ａ１０ ＶＨ、マウス４１Ａ１０ ＶＬ、キメラ４１Ａ１０ ＶＨ、キメラ４１Ａ１０ ＶＬ、ヒト化４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４７）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１４８）、ｈ４１Ａ１０ ＶＨ（ＸＣ１５０）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４２）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４３）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４４）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４５）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４６）、ｈ４１Ａ１０ ＶＬ（ＸＣ１４９）、マウス５Ｈ７ ＶＨ、マウス５Ｈ７ ＶＬ、キメラ５Ｈ７ ＶＨ、及びキメラ５Ｈ７ ＶＬのいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。上記のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、本明細書で開示される本発明の抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列と、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一な、より好ましくは同一なアミノ酸配列をコードする。
【０４５３】
本発明は、キメラ４１Ａ１０、ヒト化４１Ａ１０（１４２／１４７）、ヒト化４１Ａ１０（１４２／１４８）、キメラ１１Ｇ２、アフコシルキメラ１１Ｇ２、ヒト化１１Ｇ２（１５１／１５２）、ヒト化１１Ｇ２（１５３／１５５）、ヒト化１１Ｇ２（１５３／１５６）、ヒト化１１Ｇ２（１５４／１５５）、ヒト化１１Ｇ２（１５４／１５７）及びアフコシル化されたヒト化１１Ｇ２（１５４／１５５）からなる群から選択される、抗体と実質的に同じエピトープと結合する抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０４５４】
本発明は、キメラ４１Ａ１０、ヒト化４１Ａ１０（１４２／１４７）、ヒト化４１Ａ１０（１４２／１４８）、キメラ１１Ｇ２、アフコシルキメラ１１Ｇ２、ヒト化１１Ｇ２（１５１／１５２）、ヒト化１１Ｇ２（１５３／１５５）、ヒト化１１Ｇ２（１５３／１５６）、ヒト化１１Ｇ２（１５４／１５５）、ヒト化１１Ｇ２（１５４／１５７）及びアフコシルヒト化１１Ｇ２（１５４／１５５）からなる群から選択される抗体と、ＣＸＣＲ５への結合について競合する抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０４５５】
本発明は、配列番号１〜２９、配列番号３５〜４０及び配列番号４７〜６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０４５６】
本発明は、配列番号１０６、１０７、１０８及び１０９の１種以上に記載の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号９５に記載の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号９６に記載の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号９７に記載の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号９８に記載の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４５７】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323及び受託番号PTA-124324を有するプラスミドのＤＮＡインサートの核酸配列の一方又は両方を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４５８】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミド中のインサートの核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４５９】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミド中のインサートの核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４６０】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323及び受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４６１】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124323を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４６２】
本発明は、ＡＴＣＣに寄託された受託番号PTA-124324を有するプラスミドのインサートの核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
【０４６３】
本発明は、配列番号１０６、１０７、１０８及び１０９の１種以上に記載の１つ以上の核酸分子を含む細胞を提供する。本発明は、配列番号１０６及び１０７に記載の１つ以上の核酸分子を含む細胞を提供する。本発明は、配列番号１０８及び１０９に記載の１つ以上の核酸分子を含む細胞を提供する。
【０４６４】
別の態様において、本発明は、抗ＣＸＣＲ５抗体をコードするポリヌクレオチド及びそのバリアントであって、このようなバリアントポリヌクレオチドは、本明細書で開示された具体的な核酸配列のいずれかと、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を共有する、ポリヌクレオチド及びそのバリアントを提供する。これらの量は、限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の漸増値が本開示の一部として具体的に想定される。
【０４６５】
本発明は、本明細書に記載される核酸分子によってコードされたポリペプチドを提供する。
【０４６６】
一実施形態において、ＶＨ及びＶＬドメイン、又はその抗原結合フラグメント、又は全長ＨＣ若しくはＬＣは、別のポリヌクレオチドによってコードされる。あるいは、ＶＨとＶＬの両方、又はその抗原結合フラグメント、又はＨＣ及びＬＣは、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
【０４６７】
いずれのこのような配列に相補的なポリヌクレオチドも本発明の開示に包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コード又はアンチセンス）又は二本鎖であってもよいし、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡ又は合成）又はＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子としては、イントロンを含有し、１対１の方式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、及びイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が挙げられる。追加のコード又は非コード配列は、必ずしもそうとは限らないが、本発明の開示のポリヌクレオチド内に存在していてもよく、並びにポリヌクレオチドは、必ずしもそうとは限らないが、他の分子及び／又は支持材料に連結されていてもよい。
【０４６８】
ポリヌクレオチドは、天然配列（すなわち、抗体又はその部分をコードする内因性配列）を含んでいてもよいし、又はこのような配列のバリアントを含んでいてもよい。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの免疫反応性が天然の免疫反応性の分子と比べて低減されないように、１つ以上の置換、付加、欠失及び／又は挿入を含有する。コードされたポリペプチドの免疫反応性への作用は、一般的に、本明細書に記載されるように査定することができる。一部の実施形態において、バリアントは、天然抗体又はその部分をコードするポリヌクレオチド配列と、少なくとも約７０％の同一性、一部の実施形態において、少なくとも約８０％の同一性、一部の実施形態において、少なくとも約９０％の同一性、一部の実施形態において、少なくとも約９５％の同一性を示す。これらの量は、限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の漸増値が本開示の一部として具体的に想定される。
【０４６９】
２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列は、２つの配列のヌクレオチド又はアミノ酸の配列が、後述するように最大限一致するようにアライメントされたときに同じである場合、「同一である」と言われる。２つの配列間の比較は、典型的に、比較ウィンドウにわたり配列を比較して、配列類似を有する局所領域を同定及び比較することによって実行される。「比較ウィンドウ」は、本明細書で使用される場合、２つの配列を最適にアライメントした後、同じの数の連続する位置を有する参照配列と配列を比較できる、少なくとも約２０個、通常３０〜約７５、又は４０〜約５０個の連続する位置のセグメントを指す。
【０４７０】
比較のための配列の最適なアライメントは、バイオインフォマティクスソフトウェア（DNASTAR（登録商標），Inc.、Madison、WI）のLasergene（登録商標）スイートにおけるMegAlign（登録商標）プログラムを使用して、デフォルトパラメーターを使用して実行することができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載される数々のアライメントスキームを含む：Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:7
26-730。
【０４７１】
一部の実施形態において、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０個の位置の比較ウィンドウにわたり２つの最適にアライメントされた配列を比較することによって決定され、ここで比較ウィンドウ中のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の一部は、２つの配列の最適なアライメントのための参照配列（付加又は欠失を含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常５〜１５パーセント、又は１０〜１２パーセントの付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を含んでいてもよい。パーセンテージは、配列の両方に同一な核酸塩基又はアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して、一致する位置の数を得ること、参照配列中の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で一致する位置の数を割ること、及び結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【０４７２】
またバリアントは、天然遺伝子、又はその一部又は相補体に実質的に相同であってもよいし、またあるいはそれらに実質的に相同であってもよい。このようなポリヌクレオチドバリアントは、中程度にストリンジェントな条件下で、天然抗体（又は相補的配列）をコードする天然に存在するＤＮＡ配列にハイブリダイズすることが可能である。
【０４７３】
好適な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で事前に洗浄すること；５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣで、一晩ハイブリダイズすること；それに続いて、０．１％ＳＤＳを含有する２×、０．５×及び０．２×ＳＳＣのそれぞれで、６５℃で２０分、２回洗浄することを含む。
【０４７４】
「高度にストリンジェントな条件」又は「高いストリンジェンシー条件」は、本明細書で使用される場合、（１）洗浄のための低いイオン強度及び高温、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを利用するか；（２）ハイブリダイゼーション中に、変性剤、例えばホルムアミド、例えば、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／４２℃で７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含むｐＨ６．５での５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを利用するか；又は（３）４２℃で、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波破砕したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％硫酸デキストランを利用し、４２℃で、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で、及び５５℃で、５０％ホルムアミド中で洗浄し、それに続いて５５℃でのＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高いストリンジェンシーの洗浄を行う条件である。当業者は、温度、イオン強度などを、必要に応じて例えばプローブ長さなどの因子を適応させてどのように調整するかを認識していると予想される。
【０４７５】
遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列があることが当業者に認識されているものと予想される。これらのポリヌクレオチドの一部は、いずれかの天然遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン使用頻度の差のために異なるポリヌクレオチドが、本発明の開示によって具体的に企図される。さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の開示の範囲内である。対立遺伝子は、１つ以上の突然変異、例えばヌクレオチドの欠失、付加及び／又は置換の結果として変更されている内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡ及びタンパク質は、必ずしもそうとは限らないが、変更された構造又は機能を有する可能性がある。対立遺伝子は、標準的な技術（例えばハイブリダイゼーション、増幅及び／又はデータベース配列比較）を使用して同定することができる。
【０４７６】
本開示のポリヌクレオチドは、化学合成、組換え方法、又はＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は当業界において周知であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。当業者は、本明細書で提供される配列及び市販のＤＮＡシンセサイザーを使用して、望ましいＤＮＡ配列を産生することができる。
【０４７７】
組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、望ましい配列を含むポリヌクレオチドは、好適なベクターに挿入することができ、ベクターは順に、本明細書でさらに論じられるように、複製及び増幅のための好適な宿主細胞に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当業界において公知のあらゆる手段によって宿主細胞に挿入することができる。細胞は、直接の取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配（F-mating）又はエレクトロポレーションによって、外因性ポリヌクレオチドを導入することにより形質転換される。外因性ポリヌクレオチドは、一旦導入されると、非統合型ベクター（例えばプラスミド）として細胞内に維持される場合もあり、又は宿主細胞のゲノムに統合される場合もある。このようにして増幅したポリヌクレオチドは、当業界周知の方法によって宿主細胞から単離することができる。例えば、Sambrook et al., 1989を参照されたい。
【０４７８】
あるいは、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再生産を可能にする。ＰＣＲ技術は当業界において周知であり、ＵＳ４６８３１９５、ＵＳ４８００１５９、ＵＳ４７５４０６５及びＵＳ４６８３２０２、加えてPCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer Press, Boston, 1994に記載されている。
【０４７９】
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを好適な宿主細胞に挿入することにより得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写される場合、ＲＮＡは、例えばSambrook et al., 1989に記載のように、当業者周知の方法を使用して単離することができる。
【０４８０】
一部の実施形態において、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、第１のベクターと第２のベクターとは、類似の量で（例えば類似のモル量又は類似の質量で）宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施形態において、モル又は質量の比が５：１〜１：５の第１のベクターと第２のベクターとが、宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施形態において、１：１〜１：５の質量の比の重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターとが使用される。一部の実施形態において、１：２の質量の比の重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターとが使用される。
【０４８１】
ベクター
一部の実施形態において、ＣＨＯ若しくはＣＨＯ由来細胞、又はＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されているベクターが選択される。例示的なこのようなベクターは、例えば、Running Deer et al, Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)に記載されている。
【０４８２】
好適なクローニング及び発現ベクターは、様々な成分、例えばプロモーター、エンハンサー、及び他の転写調節配列を含んでいてもよい。またベクターは、それに続く異なるベクターへの抗体可変ドメインのクローニングが可能になるように構築されていてもよい。好適なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築してもよいし、又は当業界で入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されたクローニングベクターは、使用されることが意図された宿主細胞によって変更できるが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製する能力を有すると予想され、特定の制限エンドヌクレアーゼにとって単一の標的を有する可能性があり、及び／又はベクターを含有するクローンの選択で使用できるマーカーに関する遺伝子を有する可能性がある。好適な例としては、プラスミド、細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Bluescript（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、並びにシャトルベクター、例えばｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が挙げられる。これらの、及び他の多くのクローニングベクターは、商業的な業者、例えばBioRad、Strategene及びInvitrogenから入手可能である。発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般的に、本開示によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソーム又は染色体ＤＮＡの統合された部分のいずれかとして、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが必然的に含意される。好適な発現ベクターとしては、これらに限定されるものではないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスなどのウイルスベクター、コスミド、及びＷＯ８７／０４４６２で開示された発現ベクターが挙げられる。ベクター成分としては、一般的に、これらに限定されるものではないが、以下：シグナル配列；複製起点；１つ以上のマーカー遺伝子；好適な転写制御エレメント（例えばプロモーター、エンハンサー及びターミネーター）の１種以上を挙げることができる。発現（すなわち、翻訳）のために、１つ以上の翻訳制御エレメント、例えばリボソーム結合部位、翻訳開始部位、及び終止コドンも、通常必要である。
【０４８３】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクター及び／又はポリヌクレオチドそれ自体は、エレクトロポレーション、塩化カルシウムを利用するトランスフェクション、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、又は他の物質；マイクロプロジェクタイル衝撃；リポフェクション；及び感染（例えば、ベクターがワクシニアウイルスなどの感染因子である場合）などの多数の適切な手段のいずれかによって、宿主細胞に導入することができる。導入するベクター又はポリヌクレオチドの選択は、しばしば宿主細胞の特徴に依存することになる。
【０４８４】
宿主細胞
抗体又はその抗原結合フラグメントは、好適な宿主細胞を使用して組換えにより作製することができる。抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸は、発現ベクターにクローニングすることができ、次いでこれを、他の状況では免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば大腸菌（E. coli）細胞、酵母細胞、昆虫細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞に導入して、組換え宿主細胞で抗体の合成を達成することができる。好ましい宿主細胞としては、当業界において周知の多くの細胞のなかでも、ＣＨＯ細胞、ヒト胎児腎臓ＨＥＫ-２９３細胞、又はＳｐ２．０細胞が挙げられる。抗体フラグメントは、全長抗体のタンパク質分解又は他の分解によって、組換え方法によって、又は化学合成によって産生することができる。抗体のポリペプチドフラグメント、特に約５０アミノ酸までのより短いポリペプチドは、化学合成によってうまく作製することができる。タンパク質及びペプチドのための化学合成方法は当業界において公知であり、市販されている。
【０４８５】
様々な実施形態において、抗ＣＸＣＲ５重鎖及び／又は抗ＣＸＣＲ５軽鎖は、原核細胞、例えば細菌細胞；又は真核細胞、例えば真菌細胞（例えば酵母）、植物細胞、昆虫細胞及び哺乳類細胞で発現され得る。このような発現は、例えば、当業界において公知の手順に従って行うことができる。ポリペプチドを発現させるのに使用可能な例示的な真核細胞としては、これらに限定されるものではないが、ＣＯＳ細胞、例えば、ＣＯＳ７細胞；２９３細胞、例えば、２９３−６Ｅ細胞など；ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｓ、ＤＧ４４、Ｌｅｃｌ３ ＣＨＯ細胞及びＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Crucell）；並びにＮＳＯ細胞が挙げられる。一部の実施形態において、抗ＣＸＣＲ５重鎖及び／又は抗ＣＸＣＲ５軽鎖は、酵母で発現され得る。例えば、ＵＳ２００６／０２７００４５を参照されたい。一部の実施形態において、特定の真核宿主細胞は、抗ＣＸＣＲ５重鎖及び／又は抗ＣＸＣＲ５軽鎖に望ましい翻訳後修飾を作製するその能力に基づき選択される。例えば、一部の実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生された同じポリペプチドより高いレベルのシアル化を有するポリペプチドを産生する。
【０４８６】
望ましい宿主細胞への１つ以上の核酸の導入は、これらに限定されるものではないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などのあらゆる方法によって達成することができる。非限定的な例示的な方法は、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、あらゆる好適な方法に従って、望ましい宿主細胞に、一時的に、又は安定してトランスフェクトさせることができる。
【０４８７】
一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、アフコシル化された抗体を産生することが可能な細胞、例えばタンパク質フコシル化が欠乏したＬｅｃ３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；ＵＳ２００３／０１５７１０８；及びＷＯ２００４／０５６３１２、特に例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば機能的なα-1,6-フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８を欠く細胞株、例えば、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda et al, Biotechnol. Bioeng, 94(4):680-688 (2006)；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）で産生される。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、機能的なＦＵＴ８遺伝子を欠くＣＨＯ細胞で産生される。一部の実施形態において、アフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体は、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（BioWa/Lonza, Allendale, NJ）で産生される。
【０４８８】
抗ＣＸＣＲ５抗体は、あらゆる好適な方法によって精製することができる。このような方法としては、これらに限定されるものではないが、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられる。好適な親和性リガンドとしては、ＣＸＣＲ５ ＥＣＤ及び抗体定常領域と結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、又は抗体アフィニティーカラムを使用して、定常領域と結合させ、抗ＣＸＣＲ５抗体を精製することができる。また、疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチル又はフェニルカラムも、一部のポリペプチドを精製するのに好適であり得る。ポリペプチドを精製する多くの方法が当業界において公知である。
【０４８９】
一部の実施形態において、抗ＣＸＣＲ５抗体は、無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009)；Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004)；Endo et al, Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)に記載されている。
【０４９０】
Ｖ．使用及び医薬療法
一部の態様において、本発明の開示は、抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを使用してＣＸＣＲ５の活性又はシグナル伝達を除去する、阻害する、又は低減させるための治療方法であって、治療有効量の抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む、治療方法を提供する。治療される障害は、ＣＸＣＲ５の活性又はシグナル伝達の除去、阻害又は低減によって、改善される、緩和される、阻害される、又は予防されるあらゆる疾患又は状態である。
【０４９１】
一部の態様において、本発明の開示は、ＣＸＣＲ５の活性又はシグナル伝達を除去する、阻害する、又は低減させる際における使用のための抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、使用は、治療有効量の抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。一部の実施形態において、ＣＸＣＲ５の活性又はシグナル伝達の阻害又は低減は、ＣＸＣＲ５の活性又はシグナル伝達の除去、阻害又は低減によって、改善される、緩和される、阻害される、又は予防されるあらゆる疾患又は状態を治療することができる。
【０４９２】
本明細書で開示された教示を用いれば当業者により理解されると予想されるとおり、このような疾患、障害又は状態としては、これらに限定されるものではないが、炎症性応答、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；慢性炎症性応答；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ；糖尿病（例えばＩ型糖尿病又はインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年型糖尿病；結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症及び血管炎で典型的に見出される、サイトカイン及びＴリンパ球が媒介する急性及び遅延型過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球遊出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（これらに限定されるものではないが、クリオグロブリン血症又はクームス陽性貧血など）；重症筋無力症；抗原−抗体複合体によって媒介される疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート−イートン筋無力症症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；巨細胞動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発性ニューロパシー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）又は自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本甲状腺炎；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ブドウ膜網膜炎；ギラン−バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連の不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ、ベッカー、筋緊張性、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位、エメリー−ドレフュス型）が挙げられ、膵臓がん、結腸がん、膀胱がん、Ｔ細胞性白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖が制御される。
【０４９３】
本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば診断目的で、サンプル中のＣＸＣＲ５、又はＣＸＣＲ５を発現する細胞を検出及び／又は測定することにも使用することができる。例えば、抗ＣＸＣＲ５抗体又はそれらのフラグメントは、ＣＸＣＲ５の異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現の欠如など）を特徴とする状態又は疾患を診断するのに使用することができる。ＣＸＣＲ５のための例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを、本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体と接触させることを含んでいてもよく、この場合、抗ＣＸＣＲ５抗体は、検出可能な標識又はレポーター分子で標識されている。
【０４９４】
「薬学的に許容される担体」又は「医薬的な許容される賦形剤」は、本明細書で使用される場合、活性成分と組み合わせると、その成分が生物学的活性を保持できるようにし、対象の免疫系と反応性を有さないあらゆる材料を含む。例としては、これらに限定されるものではないが、標準的な製剤用担体、例えばリン酸緩衝塩類溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、及び様々な種類の湿潤剤のいずれかが挙げられる。エアロゾル又は非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又は規定（０．９％）食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化される（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990及びRemington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing, 2000を参照されたい）。
【０４９５】
ＶＩ．組成物
本開示はまた、有効量の本明細書に記載されるＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物も提供する。このような組成物の例に加えて、製剤化する方法も本明細書に記載される。一部の実施形態において、組成物は、１種以上のＣＸＣＲ５抗体を含む。他の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＲ５を認識する。他の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト抗体である。他の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、望ましい免疫応答、例えば抗体媒介性溶解又はＡＤＣＣを開始させることが可能な定常領域を含む。他の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、アフコシル化されており、フコシル化されていること以外は同一な抗体と比較して増強されたＡＤＣＣを提供する定常領域を含む。他の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、抗体の１つ以上のＣＤＲ（例えば１、２、３、４、５つの、又は一部の実施形態において６つ全てのＣＤＲ）を含む。
【０４９６】
組成物は、１種より多くのＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含んでいてもよいことが理解される（例えば、ＣＸＣＲ５の異なるエピトープを認識するＣＸＣＲ５抗体の混合物）。他の例示的な組成物は、同じエピトープを認識する１種より多くのＣＸＣＲ５抗体、又はＣＸＣＲ５の異なるエピトープに結合するＣＸＣＲ５抗体の異なる種を含む。一部の実施形態において、組成物は、ＣＸＣＲ５の異なるバリアントを認識するＣＸＣＲ５抗体の混合物を含む。
【０４９７】
本発明の開示において使用される組成物は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤（Remington: The Science and practice of Pharmacy 20th Ed., 2000, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover）をさらに含んでいてもよい。許容できる担体、賦形剤、又は安定剤は、所定の投薬量及び濃度でレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えばリン酸、クエン酸及び他の有機酸緩衝液；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニンなど；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース又はデキストランなどの他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩を形成する対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；並びに／又は非イオン界面活性剤、例えばTWEEN（商標）、PLURONICS（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでいてもよい。薬学的に許容される賦形剤はさらに本明細書に記載される。
【０４９８】
ＣＸＣＲ５抗体、その抗原結合フラグメント及びその組成物はまた、薬剤の有効性を増強する、及び／又は補うのに役立つ他の薬剤と共に使用することができる。
【０４９９】
特定の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントは、投与の前に、ＣＸＣＲ５と複合体化されている。特定の実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体は、投与の前に、ＣＸＣＲ５と複合体化されていない。
【０５００】
本開示はまた、本開示のポリヌクレオチドのいずれかを含む、組成物、例えば医薬組成物も提供する。一部の実施形態において、組成物は、本明細書に記載される抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。他の実施形態において、組成物は、本明細書に記載される抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。さらに他の実施形態において、組成物は、配列番号１及び配列番号６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号１０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号１２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５及び配列番号６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５及び配列番号１０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５及び配列番号１２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１３及び配列番号１７に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１３及び配列番号１８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１３及び配列番号６３に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５３に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５４に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５５に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１及び配列番号５７に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号６及び配列番号４８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号６及び配列番号４９に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号６及び配列番号５０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号６及び配列番号５１に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１７及び配列番号５８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１７及び配列番号５９に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１７及び配列番号６０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１７及び配列番号６１に示される配列を含むポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号１７及び配列番号６２に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号１に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号５に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号４７に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号４８に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号４９に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号５０に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、配列番号５２及び配列番号５１に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方、又は配列番号３５及び配列番号３６に示される配列をコードするポリヌクレオチドのいずれか又は両方を含む。
【０５０１】
別の態様において、ポリヌクレオチドは、本開示の抗体のＶＨ、ＶＬ及び／又はＶＨとＶＬの両方をコードしていてもよい。すなわち、組成物は、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする単一のポリヌクレオチド又は１つより多くのポリヌクレオチドを含む。
【０５０２】
本開示の医薬組成物はまた、併用療法で投与することもでき、例えば他の薬剤と組み合わせることもできる。例えば、併用療法は、少なくとも１つの他の療法と組み合わせた、本発明の開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含んでいてもよく、このような療法は、外科手術、免疫療法、又は薬物療法であり得る。
【０５０３】
本開示の医薬化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含んでいてもよい。このような塩の例としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性の無機酸、例えば塩化水素酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸など、加えて、非毒性の有機酸、例えば脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸などから誘導された酸付加塩が挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど、加えて、非毒性の有機アミン、例えばN,N’-ジベンジルエチレンジアミン、N-メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどから誘導された塩基付加塩が挙げられる。
【０５０４】
本開示の医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤を含んでいてもよい。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α-トコフェロールなど；及び（３）金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
【０５０５】
本開示の医薬組成物で利用できる好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物、植物油、例えばオリーブ油、並びに注入可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合、必要な粒度の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０５０６】
これらの組成物はまた、アジュバント、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含有していてもよい。微生物の存在の予防は、滅菌手順と、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含むことの両方によって確実にすることができる。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを組成物に含ませることも望ましい場合がある。加えて、注入可能な医薬の形態の持効性吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる物質を含ませることによって達成できる。
【０５０７】
医薬組成物は、典型的に、滅菌されており、製造及び貯蔵条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高い薬物濃度に好適な他の秩序だった構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒であってもよい。適正な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合、必要な粒度の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの場合において、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、又は塩化ナトリウムを組成物に含ませることが好適であると予想される。注入用組成物の持効性吸収は、吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に含ませることによって達成できる。
【０５０８】
滅菌注入用溶液は、活性な化合物を、必要な量で、上記で列挙された１種の成分又は成分の組合せと共に、適切な溶媒に取り込むこと、必要に応じて、それに続いて滅菌精密ろ過することによって調製することができる。
【０５０９】
一般的に、分散液は、活性な化合物を、塩基性分散媒及び上記で列挙されたものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに取り込むことによって調製される。滅菌注入用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）であり、それにより、活性成分に加えてあらゆる追加の望ましい成分の粉末が、事前に滅菌ろ過したそれらの溶液から得られる。
【０５１０】
本発明の開示の医薬組成物は、眼への投与に好適な調合物の形態で、調製し、パッケージングし、又は販売することができる。このような調合物は、例えば、点眼剤の形態であってもよく、例えば、水性又は油性液体担体中の活性成分の０．１％〜１．０％（w/w）の溶液又は懸濁液などであってもよい。このような点眼剤は、緩衝剤、塩、又は本明細書に記載される追加成分のそれ以外の１種以上をさらに含んでいてもよい。他の眼に投与可能な有用な調合物としては、微結晶性の形態又はリポソーム製剤の形態の、活性成分を含むものが挙げられる。
【０５１１】
本明細書で使用される場合、「追加成分」としては、これらに限定されるものではないが、以下：賦形剤；表面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒剤及び崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味剤；矯味矯臭剤；着色剤；保存剤；生理学的に分解可能な組成物、例えばゼラチン；水性ビヒクル及び溶媒；油性ビヒクル及び溶媒；懸濁化剤；分散剤又は湿潤剤；乳化剤、粘滑薬；緩衝液；塩；増粘剤；増量剤；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；並びに薬学的に許容されるポリマー又は疎水性材料の１種以上が挙げられる。本開示の医薬組成物に含まれていてもよい他の「追加成分」は当業界において公知であり、例えば、参照により本明細書に組み入れられるRemington's Pharmaceutical Sciences, Genaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1985)に記載されている。
【０５１２】
一実施形態において、ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントは、酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０及び塩化ナトリウムと共に、約５〜６のｐＨで、５ｍｇ／ｍＬ、又は一部の実施形態において、約１０ｍｇ／ｍＬ、又は一部の実施形態において、約１５ｍｇ／ｍＬ、又は一部の実施形態において、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、又は一部の実施形態において、約２５ｍｇ／ｍＬ、又は一部の実施形態において、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する滅菌水溶液としての静脈内調合物で投与される。一部の実施形態において、静脈内調合物は、２０ｍＭの酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、及び１４０ｍＭの塩化ナトリウムと共に、ｐＨ５．５で、５又は１０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する滅菌水溶液である。さらに、抗体又はその抗原結合フラグメントを含む溶液は、他の多くの化合物のなかでも、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシン、ポリ（エチレン）グリコール、ＥＤＴＡ、メチオニン、及びそれらのあらゆる組合せ、並びに関連分野において公知の他の多くの化合物を含んでいてもよい。
【０５１３】
一実施形態において、本発明の開示の医薬組成物は、以下の成分：５０ｍｇ／ｍＬの本発明の開示のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメント、２０ｍＭのヒスチジン、８．５％のスクロース、及び０．０２％のポリソルベート８０、ｐＨ５．８の０．００５％のＥＤＴＡを含み；別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、以下の成分：１００ｍｇ／ｍＬの本発明の開示のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメント、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、及びｐＨ５．８の０．０１％のポリソルベート８０を含む。この組成物は、液体調合物として、又は凍結乾燥粉末として提供されてもよい。粉末が完全な体積で再構成される場合、組成物は、同じ調合を保持する。あるいは、粉末は、半分の体積で再構成されてもよく、その場合、組成物は、１００ｍｇの本発明の開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメント、２０ｍＭのヒスチジン、１０％のスクロース、及びｐＨ５．８の０．０２％のポリソルベート８０を含む。
【０５１４】
一実施形態において、用量の一部は、静脈内ボーラスによって投与され、残部は抗体調合物の輸注によって投与される。例えば、ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントの０．０１ｍｇ／ｋｇの静脈注入は、ボーラスとして与えてもよく、抗体用量の残部は、静脈注入によって投与されてもよい。予め決定された用量のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントが、例えば、１時間半から２時間から５時間の期間にわたり投与されてもよい。
【０５１５】
治療剤に関して、治療剤が例えば小分子である場合、それは、当業界において周知のとおり、生理学的に許容されるエステル又は塩の形態で、例えば、生理学的に許容されるカチオン又はアニオンと組み合わせて、医薬組成物中に存在していてもよい。
【０５１６】
本明細書に記載される医薬組成物の調合物は、薬理学分野で公知の又は今後開発されるあらゆる方法によって調製することができる。一般的に、このような予備的な方法は、活性成分を担体又は１種以上の他のアクセサリー成分と会合させる工程、次いで、必要に応じて、又は望ましい場合、生成物を望ましい単回又は複数回投与単位に成形又はパッケージングする工程を含む。
【０５１７】
一実施形態において、本開示の組成物は、実質的に内毒素及び／又は関連する発熱性物質非含有のパイロジェンフリー調合物である。内毒素は、微生物の内部に閉じ込められた毒素を含み、微生物が破壊されたり又は死んだりすると放出される。発熱性物質としてはまた、細菌及び他の微生物の外膜由来の発熱を誘発する熱安定性物質（糖タンパク質）も挙げられる。これらの物質はどちらも、ヒトに投与される場合、発熱、低血圧及びショックを引き起こす可能性がある。可能性のある有害な作用のために、静脈内投与された医薬溶液から、少量であっても内毒素を除去することが有利である。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用の単回の１時間の期間で、体重１キログラム当たり１用量当たり５内毒素単位（ＥＵ）の上限を設定している（The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)）。治療用タンパク質が、体重１キログラム当たり数百又は数千ミリグラムの量で投与される場合、微量であっても内毒素を除去することが有利である。一実施形態において、組成物中の内毒素及び発熱物質レベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、又は５ＥＵ／ｍｇ未満、又は１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、又は０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態において、組成物中の内毒素及び発熱物質レベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、又は約５ＥＵ／ｍｇ未満、又は約１ＥＵ／ｍｇ未満、又は約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、又は約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、又は約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【０５１８】
一実施形態において、本開示は、組成物を投与することを含み、前記投与は、経口、非経口、筋肉内、経鼻、膣、直腸、舌、舌下、口腔、頬内、静脈内、皮膚、皮下又は経皮投与である。
【０５１９】
別の実施形態において、本開示は、組成物を他の療法、例えば外科手術、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法又は放射線療法と組み合わせて投与することをさらに含む。
【０５２０】
ＶＩＩ．用量／投与
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬品又は滅菌組成物を調製するために、抗体は、薬学的に許容される担体又は賦形剤と混合される。治療剤及び診断剤の調合物は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション、又は懸濁液の形態で、生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤と混合することによって調製することができる（例えば、Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N. Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.を参照）。
【０５２１】
治療のための投与レジメンを選択することは、実体の血清又は組織代謝率、症状のレベル、実体の免疫原性、及び生体マトリックスにおける標的細胞の影響の受けやすさなど数々の要因に依存する。特定の実施形態において、投与レジメンは、副作用の許容レベルに一致する患者に送達される治療剤の量を最大化する。したがって、送達される生物製剤の量は、治療される特定の実体及び状態の重症度に一部依存する。抗体、サイトカイン及び小分子の適切な用量を選択することにおける指針が利用可能である（例えば、Wawrzynczak, 1996, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y.; Bach (ed.),1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N. Y.; Baert, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom, et al., 1999, New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon, et al., 2001, New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz, et al., 2000, New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky, et al., 2000, New Engl. J. Med. 343:1594-1602を参照）。
【０５２２】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を与えることが当業界で公知の、又はそれが疑われる、又は治療に影響を与えることが予測される、パラメーター又は因子を使用して、臨床医によってなされる。一般的に、用量は、最適な用量より少し低い量から始め、その後、いずれかの負の副作用に関連して望ましい又は最適な作用が達成されるまで、小さい漸増量で増加させる。重要な診断の尺度としては、症状、例えば炎症の症状の尺度、又は産生された炎症性サイトカインのレベルが挙げられる。
【０５２３】
本発明の開示の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、患者にとって毒性にならずに、特定の患者、組成物及び投与様式にとって望ましい治療応答を達成するのに効果的な活性成分の量が達成されるように変更することができる。選択された投薬量レベルは、様々な薬物動態学的な因子、例えば、利用される本発明の開示の特定の組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、利用される特定の化合物の排泄率、治療の期間、利用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物及び／又は材料、治療されている患者の、年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態及びこれまでの病歴、並びに医療分野において周知の類似の因子などに依存すると予想される。
【０５２４】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物は、連続的な輸注によって、又は例えば、１日、１週間の間隔、又は１週間当たり１〜７回での投与によって供給することができる。用量は、静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、大脳内、又は吸入によって供給することができる。具体的な投与プロトコールは、顕著な望ましくない副作用を回避する最大用量又は用量頻度を含むものである。合計の１週間の用量は、体重１ｋｇ当たり少なくとも０．０５μｇ、少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、少なくとも０．５μｇ／ｋｇ、少なくとも１μｇ／ｋｇ、少なくとも１０μｇ／ｋｇ、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇであり得る（例えば、Yang, et al., 2003, New Engl. J. Med. 349:427-434；Herold, et al., 2002, New Engl. J. Med. 346:1692-1698；Liu, et al., 1999, J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456；Portielji, et al., 2003, Cancer. Immunol. Immunother. 52: 133-144を参照）。上記用量は、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５５μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６５μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７５μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８５μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９５μｇ、又は少なくとも１００μｇであり得る。対象に投与される用量は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２回、又はそれより多くであり得る。
【０５２５】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントに関して、患者に投与される投薬量は、患者の体重に対して、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであり得る。投薬量は、患者の体重に対して、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、又は０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇであり得る。
【０５２６】
ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントの投薬量は、患者の体重キログラム（ｋｇ）を投与される用量のｍｇ／ｋｇと掛けることを使用して計算することができる。本開示の抗体の投薬量は、患者の体重に対して、１５０μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、９５μｇ／ｋｇ以下、９０μｇ／ｋｇ以下、８５μｇ／ｋｇ以下、８０μｇ／ｋｇ以下、７５μｇ／ｋｇ以下、７０μｇ／ｋｇ以下、６５μｇ／ｋｇ以下、６０μｇ／ｋｇ以下、５５μｇ／ｋｇ以下、５０μｇ／ｋｇ以下、４５μｇ／ｋｇ以下、４０μｇ／ｋｇ以下、３５μｇ／ｋｇ以下、３０μｇ／ｋｇ以下、２５μｇ／ｋｇ以下、２０μｇ／ｋｇ以下、１５μｇ／ｋｇ以下、１０μｇ／ｋｇ以下、５μｇ／ｋｇ以下、２．５μｇ／ｋｇ以下、２μｇ／ｋｇ以下、１．５μｇ／ｋｇ以下、１μｇ／ｋｇ以下、０．５μｇ／ｋｇ以下、又は０．１μｇ／ｋｇ以下であり得る。
【０５２７】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントの一回量包装は、０．１ｍｇ〜２００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１７５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜７５ｍｇ、０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜３０ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜８ｍｇ、０．１ｍｇ〜７ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５〜８ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜８ｍｇ、１ｍｇ〜７ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、又は１ｍｇ〜２．５ｍｇであり得る。
【０５２８】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントの投薬量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、少なくとも２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成することができる。あるいは、本開示の抗体の投薬量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、又は少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成することができる。
【０５２９】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントの用量は、繰り返すことができ、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、又は少なくとも６か月離れていてもよい。
【０５３０】
特定の患者の有効量は、治療されている状態、患者の全体的な健康状態、方法の投与経路及び用量、並びに副作用の重症度などの要因に応じて変更することができる（例えば、Maynard, et al., 1996, A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FIa.；Dent, 2001, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ, London, UKを参照）。
【０５３１】
投与経路は、例えば、局所又は皮膚への適用、静脈内、腹膜内、大脳内、筋肉内、眼球内、動脈内、脳脊髄内、病巣内への注入若しくは輸注、又は持続放出システム若しくはインプラントによるものであり得る（例えば、Sidman et al., 1983, Biopolymers 22:547-556；Langer, et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277；Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105；Epstein, et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692；Hwang, et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034；ＵＳ６３５０４６６及びＵＳ６３１６０２４を参照）。必要に応じて、組成物はまた、注入部位の痛みを和らげるために、可溶化剤及び局所麻酔剤、例えばリドカインを含んでいてもよい。加えて、肺への投与も、例えば、吸入器又はネブライザーの使用や、エアロゾル化剤との調合によって利用することができる。例えば、それぞれ参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＵＳ６０１９９６８、ＵＳ５９８５３２０、ＵＳ５９８５３０９、ＵＳ５９３４２７２、ＵＳ５８７４０６４、ＵＳ５８５５９１３、ＵＳ５２９０５４０、及びＵＳ４８８００７８；並びにＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６及びＷＯ９９／６６９０３を参照されたい。一実施形態において、本開示のＣＸＣＲ５抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は組成物は、Alkermes AIR（商標）肺薬物送達技術（Alkermes, Inc., Cambridge, Mass.）を使用して投与される。
【０５３２】
本発明の開示の組成物もまた、当業界において公知の様々な方法の１つ以上を使用して１つ以上の投与経路を介して投与されてもよい。当業者であれば理解していると予想されるように、投与の経路及び／又は様式は、望ましい結果に応じて変更されると予想される。本開示の抗体の選択される投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹膜内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば注入又は輸注による非経口投与経路が挙げられる。非経口投与は、経腸及び局所投与以外の投与様式の代表例であってもよく、これは通常、注入によってなされ、その例としては、これらに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内への、注入及び輸注が挙げられる。あるいは、本開示の組成物は、非経口ではない経路、例えば、局所、表皮又は粘膜への投与経路を介して、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下又は局所で投与してもよい。
【０５３３】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントが制御放出又は持続放出システムで投与される場合、ポンプを使用して、制御又は持続放出を達成することができる（Langer、上記；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20；Buchwald et al., 1980, Surgery 88:501；Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:514を参照）。
【０５３４】
高分子材料を使用して、本開示の療法剤の制御又は持続放出を達成することができる（例えば、Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, FIa. (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984)；Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. ScL Rev. Macromol. Chem. 23:61を参照；また、Levy et al, 1985, Science 11 225:190；During et al., 19Z9, Ann. Neurol. 25:351；Howard et al, 1989, J. Neurosurg. 71: 105）；ＵＳ５６７９３７７；ＵＳ５９１６５９７；ＵＳ５９１２０１５；ＵＳ５９８９４６３；ＵＳ５１２８３２６；ＷＯ９９／１５１５４；及びＷＯ９９／２０２５３を参照。持続放出調合物で使用されるポリマーの例としては、これらに限定されるものではないが、ポリ（メタクリル酸2-ヒドロキシエチル）、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン-co-酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（N-ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド-co-グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが挙げられる。一実施形態において、持続放出調合物で使用されるポリマーは、不活性であり、溶出性の不純物を含まず、貯蔵安定性であり、滅菌されており、生分解性である。制御又は持続放出システムは、予防又は治療上の標的に近接して設置することができ、したがって全身性用量のほんの一部しか必要としない（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 上記, vol. 2, pp. 115-138 (1984)を参照）。
【０５３５】
制御放出システムは、Langer, 1990, Science 249:1527-1533によって総論で論じられている。当業者公知のあらゆる技術を使用して、本開示の１種以上の抗体又はそのコンジュゲートを含む持続放出調合物を生産することができる。例えば、それぞれが参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、ＵＳ４５２６９３８、ＷＯ９１／０５５４８、ＷＯ９６／２０６９８、Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy and Oncology 59:179-189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology 50:372-397, Cleek et ah, 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Ml. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, and Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Ml. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-160を参照されたい。
【０５３６】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントは、局所投与される場合、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、乳剤の形態で、又は当業者周知の他の形態で製剤化することができる。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 19th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995)を参照されたい。スプレー可能ではない局所剤形の場合、典型的には、局所適用に適合し、一部の場合において水より大きい動的粘度を有する、担体又は１種以上の賦形剤を含む粘性から半固体又は固体の形態が利用される。好適な調合物としては、これらに限定されるものではないが、溶液、懸濁液、乳剤、クリーム、軟膏、粉末、糊膏、軟膏などが挙げられ、これらは、必要に応じて、滅菌されているか、又は例えば浸透圧などの様々な特性に影響を与えるために、補助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝液、又は塩）と混合されている。局所剤形に好適な他のものとしては、スプレー可能なエアロゾル調製物が挙げられ、その場合、活性成分は、一部の場合において、固体又は液体不活性担体と組み合わせて、加圧した揮発物質（例えば、ガス状の噴射剤、例えばフレオン）との混合物の形態で、又はスクイーズボトル中にパッケージングされる。またモイスチャライザー又は潤滑剤も、必要に応じて医薬組成物及び剤形に添加することができる。このような追加成分の例は、当業界において周知である。
【０５３７】
ＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む組成物は、鼻腔内投与される場合、エアロゾル、スプレー、ミストの形態で、又は液滴の形態で製剤化することができる。特に、本発明の開示に従って使用するための予防剤又は治療剤は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適なガス）を使用した、加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー供給の形態でうまく送達することができる。加圧したエアロゾルの場合、投薬量単位は、定量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。化合物及び好適な粉末ベース、例えばラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有する吸入器又は注入器で使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えばゼラチンで構成される）を製剤化することもできる。
【０５３８】
第２の治療剤、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、又は放射線との併用投与又は治療の方法は当業界において周知である（例えば、Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10 th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.；Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.；Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.を参照）。有効量の治療剤は、症状を、少なくとも１０パーセント；少なくとも２０パーセント；少なくとも約３０パーセント；少なくとも４０パーセント、又は少なくとも５０パーセント減少させることができる。
【０５３９】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメントと組み合わせて投与できる追加の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）は、本開示の抗体から、５分未満離して、３０分未満離して、１時間離して、約１時間離して、約１〜約２時間離して、約２時間〜約３時間離して、約３時間〜約４時間離して、約４時間〜約５時間離して、約５時間〜約６時間離して、約６時間〜約７時間離して、約７時間〜約８時間離して、約８時間〜約９時間離して、約９時間〜約１０時間離して、約１０時間〜約１１時間離して、約１１時間〜約１２時間離して、約１２時間〜１８時間離して、１８時間〜２４時間離して、２４時間〜３６時間離して、３６時間〜４８時間離して、４８時間〜５２時間離して、５２時間〜６０時間離して、６０時間〜７２時間離して、７２時間〜８４時間離して、８４時間〜９６時間離して、又は９６時間〜１２０時間離して投与することができる。２つ以上の療法剤が、患者の１回の同じ来訪中に投与されてもよい。
【０５４０】
本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメント、及び他の療法剤は、サイクリング投与することができる。サイクリング療法は、療法の１つに対する耐性の発現を低減する、療法の１つの副作用を回避若しくは低減する、及び／又は療法の効能を改善するために、所定期間にわたる第１の療法剤（例えば、第１の予防剤又は治療剤）の投与、それに続き、所定期間にわたる第２の療法剤（例えば、第２の予防剤又は治療剤）の投与、任意に、それに続き、所定期間にわたる第３の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）の投与など、及びこの逐次的な投与を繰り返すこと、すなわちサイクリングすることを含む。
【０５４１】
一実施形態において、本開示のＣＸＣＲ５抗体は、これらに限定されるものではないが、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、シトキサン、フルダラビン、5-フルオロウラシル、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、6-メルカプトプリン、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症性剤、シロリムス（ラパマイシン）及びタクロリムス（FK-506）などの自己免疫疾患及び障害を治療するための組成物と併用投与することができる。代替の実施形態において、免疫調節剤又は免疫抑制剤は、ムロモナブ−ＣＤ３、アレムツズマブ（Campath（登録商標））、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ムロモナブ（ＯＫＴ３（登録商標））、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン及びＩＶＩｇ、当業者公知のその他のものからなる群から選択される抗体である。
【０５４２】
一実施形態において、本開示のＣＸＣＲ５抗体は、糖尿病を治療するための組成物、例えば、これらに限定されるものではないが、ビグアニド（例えば、ブホルミン、メトホルミン及びフェンホルミン（phenform））、ホルモン及びそれらの類似体（アミリン、インスリン、インスリンアスパルト、インスリンデテミル、インスリングラルギン、インスリングルリジン、インスリンリスプロ、リラグルチド及びプラムリンチド）、スルホニル尿素誘導体（アセトヘキサミド、カルブタミド、クロルプロパミド、グリボルヌリド、グリクラジド、グリメピリド、グリピジド、グリキドン、グリソキセピド、グリブリド、グリブチアゾール、グリブゾール、グリヘキザミド（glyhexamide）、グリミジン、トラザミド、トルブタミド及びトルシクラミド（tolcyclamide））、チアゾリジンジオン（ピオグリタゾン、ロジグリタゾン及びトログリタゾン）、アカルボース、エキセナチド、ミグリトール、ミチグリニド、ムラグリタザル、ナテグリニド、レパグリニド、シタグリプチン、テサグリタザル、ビルダグリプチン及びボグリボースなどと併用投与することができる。
【０５４３】
特定の実施形態において、本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントは、インビボにおいて適正な分布を確実にするように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本開示の治療化合物がＢＢＢを確実に通過するように（必要に応じて）、それらは、例えば、リポソームの形態で製剤化することができる。リポソームの製造方法に関して、例えば、ＵＳ４５２２８１１；ＵＳ５３７４５４８；及びＵＳ５３９９３３１を参照されたい。リポソームは、特異的な細胞又は臓器に選択的に輸送される１つ以上の部分を含んでいてもよく、したがって薬物送達の標的化を増強する（例えば、V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685を参照）。例示的な標的部分としては、葉酸塩又はビオチン（例えば、ＵＳ５４１６０１６を参照）；マンノシド（Umezawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038）；抗体（P. G. Bloeman et al., 1995, FEBS Lett. 357: 140；M. Owais et al., 1995, Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180）；サーファクタントプロテインＡ受容体（Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134）；ｐｌ２０（Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090）が挙げられる；K. Keinanen; M.L. Laukkanen, 1994, FEBS Lett. 346:123; Killion; Fidler, 1994; Immunomethods 4:273も参照されたい。
【０５４４】
本開示は、本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を、単独で、又は他の療法剤と組み合わせてそれを必要とする対象に投与するためのプロトコールを提供する。本発明の開示の併用療法の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）は、同時に、又は逐次的に対象に投与することができる。本発明の開示の併用療法の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）はまた、サイクリング投与することもできる。サイクリング療法は、療法剤（例えば、薬剤）の１つに対する耐性の発現を低減する、療法剤（例えば、薬剤）の１つの副作用を回避若しくは低減する、及び／又は療法の効能を改善するために、所定期間にわたる第１の療法剤（例えば、第１の予防剤又は治療剤）の投与、それに続き、所定期間にわたる第２の療法剤（例えば、第２の予防剤又は治療剤）の投与、及びこの逐次的な投与を繰り返すこと、すなわちサイクリングすることを含む。
【０５４５】
本開示の併用療法の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）は、同時に対象に投与することができる。用語「同時に」は、正確に同じ時間に療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）を投与することに限定されるのではなく、本開示のＣＸＣＲ５抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物が、本開示の抗体又はそのコンジュゲートが他の療法剤と共に作用して、それ以外の方法でそれらを投与した場合より増加した利益を提供できるような順番及び時間間隔内で対象に投与されることを意味する。例えば、各療法剤は、あらゆる順番で、異なる時点で、同時に、又は逐次的に対象に投与することができる；しかしながら、同時に投与されない場合、それらは、望ましい治療又は予防作用がもたらされるように、十分に近い時間で投与されるべきである。各療法剤は、あらゆる適切な形態で、あらゆる好適な経路によって、別々に対象に投与することができる。様々な実施形態において、療法（例えば、予防剤又は治療剤）は、１５分未満、３０分未満、１時間未満離して、約１時間離して、約１時間〜約２時間離して、約２時間〜約３時間離して、約３時間〜約４時間離して、約４時間〜約５時間離して、約５時間〜約６時間離して、約６時間〜約７時間離して、約７時間〜約８時間離して、約８時間〜約９時間離して、約９時間〜約１０時間離して、約１０時間〜約１１時間離して、約１１時間〜約１２時間離して、２４時間離して、４８時間離して、７２時間離して、又は１週間離して、対象に投与される。他の実施形態において、２つ以上の療法剤（例えば、予防剤又は治療剤）は、患者の同じ来訪中に投与される。
【０５４６】
併用療法の予防剤又は治療剤は、同じ医薬組成物で対象に投与することができる。あるいは、併用療法の予防剤又は治療剤は、別の医薬組成物で同時に対象に投与することができる。予防剤又は治療剤は、同一又は異なる投与経路によって対象に投与されてもよい。
【０５４７】
ＶＩＩＩ．キット
本開示はまた、本明細書に記載される抗体のいずれか又は全てを含むキットも提供する。本開示のキットは、本明細書に記載されるＣＸＣＲ５抗体を含む１つ以上の容器、及び本明細書に記載される本開示の方法のいずれかに従って使用するための説明書を含む。一般的に、これらの説明書は、上述された治療的処置のための抗体の投与の説明を含む。一部の実施形態において、キットは、単回用量の投与単位を生産するために提供される。特定の実施形態において、キットは、乾燥させたタンパク質を有する第１の容器と水性調合物を有する第２の容器の両方を含有していてもよい。特定の実施形態において、アプリケーター、例えば、シングル及びマルチチャンバーのプレフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジ及びリオシリンジ（lyosyringe））を含有するキットが挙げられる。
【０５４８】
ＣＸＣＲ５抗体の使用に関する説明書は、一般的に、意図した治療のための投薬量、投与スケジュール及び投与経路に関する情報を含む。容器は、一回量包装、バルクのパッケージ（例えば、複数回用量のパッケージ）又は小分けにした一回量包装（sub-unit dose）であり得る。本開示のキットに供給される説明書は、典型的に、ラベル上の書面の説明書又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙のシート）であるが、機械可読な説明書（例えば、磁気又は光学記憶ディスクに記録された説明書）も許容できる。
【０５４９】
本開示のキットは、好適なパッケージング中にある。好適なパッケージングとしては、これらに限定されるものではないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルなパッケージング（例えば、密封されたMylar又はプラスチックバッグ）などが挙げられる。また、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）又は輸注デバイス、例えばミニポンプなどの具体的なデバイスと組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、滅菌されたアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針を突き刺すことが可能なストッパーを有する静注溶液バッグ又はバイアルであり得る）。また容器も、滅菌されたアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針を突き刺すことが可能なストッパーを有する静注溶液バッグ又はバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、本開示のＣＸＣＲ５抗体である。容器は、第２の医薬活性薬剤をさらに含んでいてもよい。
【０５５０】
キットは、任意に、緩衝液などの追加の成分及び説明的な情報を提供することもできる。通常、キットは、容器及び容器上の、又はそれと関連付けされたラベル又は添付文書を含む。
【０５５１】
本開示はまた、本明細書に記載される抗体のいずれか又は全てを含む診断キットも提供する。診断キットは、例えば、サンプル中のＣＸＣＲ５の存在を検出することに有用である。一部の実施形態において、診断キットを使用して、ＣＸＣＲ５によって媒介される疾患、障害若しくは状態又はＣＸＣＲ５欠乏による疾患、障害若しくは状態を発生させるリスクにさらす可能性がある潜在的な疾病、障害又は状態を有する個体を同定することができる。一部の実施形態において、診断キットを使用して、ＣＸＣＲ５によって媒介される疾患又はＣＸＣＲ５欠乏による疾患、障害又は状態を有する疑いのある個体におけるＣＸＣＲ５の存在及び／又はレベルを検出することができる。
【０５５２】
本開示の診断キットは、本明細書に記載されるＣＸＣＲ５抗体を含む１つ以上の容器、及び本明細書に記載される本開示の方法のいずれかに従って使用するための説明書を含む。一般的に、これらの説明書は、ＣＸＣＲ５によって媒介される疾患又はＣＸＣＲ５欠乏による疾患、障害又は状態を有するリスクがあるか又はその疑いのある個体におけるＣＸＣＲ５の存在を検出するためのＣＸＣＲ５抗体の使用の説明を含む。一部の実施形態において、例示的な診断キットは、試薬、例えば、ＣＸＣＲ５抗体、陰性対照サンプル、陽性対照サンプルなど、及びキットを使用するための指示を含有するように設計されていてもよい。
【０５５３】
ＩＸ．均等物
前述の説明及び以下の例は、本開示の特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかしながら、どれほど詳述しようとも、前述したものは文書中に見出し得るものであり、本開示は、多くの方法で実施でき、本開示は、添付の特許請求の範囲及びそれらのあらゆる均等物に従って解釈されるものとすることが理解されると予想される。
【０５５４】
開示された教示は、様々な適用、方法、キット及び組成物を参照して記載されているが、本明細書に記載の教示及び以下の特許請求された開示から逸脱することなく様々な変更及び改変をほどこすことができることが理解されると予想される。以下の例は、開示された教示をよりよく例示するために提供され、本明細書で示された教示の範囲の限定を意図していない。本発明の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されるが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーション及び改変が、余計な実験を行うことなく可能であることを容易に理解するものと予想される。全てのこのようなバリエーション及び改変は、本教示の範囲内である。
【０５５５】
特許、特許出願、論文、教本などを含む本明細書において引用された全ての参考文献、及びそこで引用された文献は、それらがまだそうではない程度に、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。組み入れられた文献及び類似の資料の１つ以上が本出願とは異なるか又は矛盾する場合、これらに限定されないが、定義された用語、用語の使用、記載された技術などを含め本出願が優先される。
【０５５６】
Ｘ．一般的な技術
本発明は、特定の合成製造方法に限定されず、当然ながら様々であってもよいことが理解されると予想される。本明細書において別段の定義がない限り、本発明と関連して使用される科学用語及び専門用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上別段の要求がなされない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般的に、本明細書に記載される細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学、並びにハイブリダイゼーションと関連して使用される学術名とそれらの技術は、周知のものであり、当業界において一般的に使用されている。
【０５５７】
本発明の実施は、別段の指定がない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学的特徴及び免疫学の従来の技術を利用することになり、これらは当業界の技術の範囲内である。このような技術は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR:  The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Proto
cols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002); Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003);  Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies:  a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies:  a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies:  a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)などの文献で十分に説明されている。
【０５５８】
酵素反応及び精製技術は、当業界において一般的に達成されるように、又は本明細書に記載されるように、製造元の仕様書に従って実行される。本明細書に記載される分析化学、生化学的特徴、免疫学、分子生物学、合成有機化学、並びに医薬及び製薬化学と関連して使用される学術名、並びにそれらの実験手順及び技術は、周知のものであり、当業界において一般的に使用されている。化学合成、化学分析、医薬調製物、調合物、送達、及び患者の治療に関する標準的な技術が使用される。
【０５５９】
ＸＩ．生物の寄託
本発明の代表的な材料を、２０１７年７月２６日に、American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, USAに寄託した。ベクターｈ１１Ｇ２−ＶＨ（ＸＣ１５５）は、ATCC受託番号PTA-124323を有し、抗体ｈ１１Ｇ２（ＸＣ１５５）の重鎖可変領域をコードするＤＮＡインサートを含み、ベクターｈ１１Ｇ２−ＶＬ（ＸＣ１５４）は、ATCC受託番号PTA-124324を有し、抗体ｈ１１Ｇ２（ＸＣ１５４）の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡインサートを含む。寄託は、特許手続及びこれに基づく規制上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約（ブダペスト条約）の規定のもとで行われた。これは、寄託の日付から３０年にわたり寄託物の生存可能な培養物の維持を保証する。寄託は、ブダペスト条約の条項に基づきＡＴＣＣにより利用可能になり、Pfizer Inc.とＡＴＣＣとの間の同意の対象となり、これは、関連する米国特許が発行されたとき、又はいずれかの米国又は外国特許出願が一般に公開されたときのいずれか早い日に、一般にむけて寄託物の培養物の後代の永続的な非制限的な利用可能性を保証し、合衆国法典第３５巻第１２２条及びそれに準じる長官規則（連邦規則集第３７巻第１．１４条を含み、特に886OG638を参照）に従ってその資格があると米国特許商標庁長官によって決定された者に後代の利用可能性を保証する。
【０５６０】
本出願の所有者は、寄託された材料の培養物が、好適な条件下で培養したときに致死するか又は失われるか又は破壊される場合、それらの材料は、届け出の上、別の同じもので迅速に置き換えられることとなることに合意している。寄託された材料の利用可能性は、いずれかの政府当局によりその特許法に従って付与された権利に反する本発明の実施の許諾として解釈されないものとする。
【実施例】
【０５６１】
以下の実施例を参照することにより、本開示をさらに詳細に説明する。これらの例は、単に例示のために提供され、別段の規定がない限り限定することを意図しない。したがって、本開示は、以下の例に限定されると決して解釈されないものとし、そうではなく、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるあらゆるバリエーションを包含すると解釈されるものとする。
【０５６２】
実施例１  ヒトＣＸＣＲ５及びｃｙｎｏＣＸＣＲ５に結合するハイブリドーマ
雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを、５μｇのＣＰＧ（ODN1826）（Invivogen）アジュバントと共に、１×１０６個の、ヒトＣＸＣＲ５（配列番号３２）を過剰発現するＢａＦ３細胞又はヒトＣＸＣＲ５（配列番号３２）を発現する300.19細胞を含有する混合物で、３週間間隔で３回免疫した。最終的なブーストでは、マウスを、MembranePro（商標）機能性タンパク質発現系（Thermo Fisher）を使用してヒトＣＸＣＲ５（配列番号３２）を過剰発現するＨＥＫ-２９３細胞から作製した２０μｇのウイルス様粒子（ＶＬＰ）で免疫した。５回の融合を行い、ヒトＣＸＣＲ５を発現するＨＥＫ-２９３細胞（ｈＣＸＣＲ５-２９３）と結合した８８のクローンを得た。これらのモノクローナル抗体をプロテインＡで精製し、ｈＣＸＣＲ５ ＨＥＫ-２９３、及びカニクイザルＣＸＣＲ５（配列番号３３）を発現するＨＥＫ-２９３細胞、すなわちｃｙｎｏＣＸＣＲ５-２９３への結合を試験した。ｈＣＸＣＲ５-２９３又はｃｙｎｏＣＸＣＲ５-２９３細胞を、抗マウスＩｇＧ ＰＥ（Southern Biotech）で染色する前に、１０μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体で染色した。細胞を、FACSVerse分析装置（BD Biosciences）を使用したフローサイトメトリーによって分析した。ｈＣＸＣＲ５ ＨＥＫ-２９３及びｃｙｎｏＣＸＣＲ５ ＨＥＫ-２９３細胞への結合についてスクリーニングすることによって、ヒト及びカニクイザルＣＸＣＲ５の両者に結合した３４種の抗体が同定された（図３）。
【０５６３】
実施例２  Raji細胞に結合する抗ＣＸＣＲ５抗体及びカルシウムフラックスアッセイにおけるアンタゴニスト活性
ｈＣＸＣＲ５-２９３及びｃｙｎｏＣＸＣＲ５-２９３細胞の両者に結合した抗体を、FACSVerse分析装置（BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）を使用したフローサイトメトリーによって、Raji細胞に結合する細胞についてさらに分析した。Raji細胞への抗体結合の見かけの親和性を、抗原結合集団の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）をフローサイトメトリーによって定量化した平衡結合滴定曲線のＥＣ５０として算出した。表２にその結果を示す。
【０５６４】
データは、特定の抗体が、他の抗体より大きい／小さい程度にRaji細胞に結合したことを示す。これらのデータは、抗体が、バーキットリンパ腫患者由来のRaji細胞上の内因性ＣＸＣＲ５を認識することを示し、このことは、抗体がインビボでＢ細胞と結合できることを示唆している。さらに、抗体１１Ｇ２のRaji細胞上のＣＸＣＲ５への親和性は、参照抗ＣＸＣＲ５抗体１６Ｄ７（ＷＯ２００９／０３２６６１）より高く、このことは、１１Ｇ２が１６Ｄ７より有効であり得ることを示唆している。
【０５６５】
ｈＣＸＣＲ５-２９３及びｃｙｎｏＣＸＣＲ５-２９３の両者に結合した抗体を、カルシウムフラックスアッセイによりアンタゴニスト活性についても試験した。加えて、参照抗ＣＸＣＲ５抗体１６Ｄ７（ＷＯ２００９／０３２６６１）を対照として含めた。手短に説明すると、ｈＣＸＣＲ５ ＨＥＫ-２９３細胞をＤＭＥＭ高グルコース培地中の９６ウェルプレートにプレーティングした。一晩インキュベートした後、培地を除去し、１００μｌの１×Ｆｌｕｏ−４ＮＷ（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）を細胞に添加した。次いで細胞を３７℃で１時間インキュベートした。モノクローナル抗体の連続希釈物を細胞に添加し、室温で１時間インキュベートした。１１１ｎＭの組換えｈＣＸＣＬ１３（BPS Bioscience, San Diego, CA）を添加することによって、カルシウムフラックスを、Flexstation（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）で、励起４８５ｎＭ及び放出５２５ｎＭで測定した。データを１．５２秒の間隔で収集した。最大の読み取り値から最小の読み取り値を引くことによってカルシウムフラックスを決定した。リガンドによって誘発されたカルシウムフラックスの阻害に関するＩＣ５０値を、GraphPad Prism（登録商標）（バージョン６．０、GraphPad Software, Inc, San Diego, CA）非線形回帰曲線フィッティング及びアゴニスト用量応答モデルのシグモイドログを使用して決定した（表２）。カルシウムフラックスの阻害は、機能的な拮抗作用の証明である。したがって、１１Ｇ２抗体は、ＡＤＣＣを介した有力な枯渇因子というだけでなく、第２の作用機序を提供するアンタゴニストでもある。抗体１１Ｇ２の拮抗作用は、比較抗体、例えば、２Ｃ９（参照抗体、例えばＷＯ２０１２／０１０５８２を参照）及び１６Ｄ７（参照抗体、例えばＷＯ２００９／０３２６６１を参照）に匹敵する。ｃＡＭＰレポーターアッセイデータは、機能的な拮抗作用も示す（以下を参照）。
【０５６６】
【表２】
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【０５６７】
実施例３  抗ＣＸＣＲ５抗体の重鎖及び軽鎖可変領域のクローニング
実施例２でアッセイした抗体を産生するハイブリドーマをRNeasy miniキット（Qiagen, Hilden, Germany）を使用して溶解し、次いでｃＤＮＡの第１鎖を、スーパースクリプトＩＩＩ第１鎖合成システム（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）を使用して合成した。軽鎖及び重鎖可変領域（ＶＬ及びＶＨ）を、表１６に示される配列番号６４〜８８の核酸配列を含むマウス軽鎖及び重鎖の縮重プライマーを使用したＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲ後、ＶＬ及びＶＨをZero blunt TAベクター（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）にクローニングし、次いでそれらをシーケンシングした。表１６の配列番号３５〜４０に、１１Ｇ２、５Ｈ７及び４１Ａ１０抗体のマウスＶＬ及びＶＨのアミノ酸配列を示す。ＣＤＲを下線で示す。
【０５６８】
実施例４  アフコシル化及びフコシル化されたキメラ抗体の生成
抗体活性へのアフコシル化及びフコシル化の作用を決定するために、フコシル化及びアフコシル化された実施例３の抗体を哺乳類細胞で産生した。
【０５６９】
目的の抗体のＶＬ及びＶＨをさらに、それぞれ、ヒトκ定常領域及びヒトＩｇＧ１定常領域を含有するベクターにクローニングした。可変重鎖領域を、マウス−ヒトキメラ全長重鎖を産生するヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号８９）を含有するｐＳＭＥＤ２哺乳類発現ベクターにクローニングした。可変軽鎖領域を、ヒトκ定常領域（Ｃκ）（配列番号９０）を含有するｐＳＭＥＮ３哺乳類発現ベクターにクローニングして、マウス−ヒトキメラ全長軽鎖を産生した。
【０５７０】
キメラ抗体遺伝子を含有するベクターをＨＥＫ-２９３Ｆ細胞（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）に一時的にトランスフェクトして、フコシル化されたキメラ抗体を産生した。次いでフコシル化されたキメラ抗体を、プロテインＡカラムを使用して精製した。Raji細胞へのキメラ抗体結合の見かけの親和性（細胞結合ＥＣ５０）を、FACSVerse分析装置（BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ）を使用したフローサイトメトリーによって決定し、表３に示す。
【０５７１】
【表３】
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【０５７２】
アフコシル化されたキメラ抗体を、フコース付加に関与する遺伝子（α-1,6-フコシルトランスフェラーゼ、ＦＵＴ８）の両方の対立遺伝子を欠く、Potelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株（BioWa/Lonza, Allendale, NJ）を使用して生成した。ヒトκ定常領域を含有するキメラ軽鎖をLonza pEE12.4GSベクター（Lonza Biologics, Basel, Switzerland）にクローニングし、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有するキメラ重鎖をLonza pEE6.4GSベクター（Lonza Biologics, Basel, Switzerland）にクローニングした。pEE6.4からの重鎖発現カセットを、ＮｏｔＩ及びＰｖｕＩによる消化で精製し、次いでキメラ軽鎖を含有するpEE12.4中のＮｏｔＩ及びＰｖｕＩ部位にクローニングした。重鎖及び軽鎖発現カセットの両者を含有する最終的なベクターＤＧＶをＰｖｕＩで線形化し、次いでPotelligent（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞にエレクトロポレーションした。トランスフェクションから２４時間後、Potelligent（登録商標）細胞を、１×ＨＴ（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）、１ｍＭのウリジン（Sigma, St. Louis, MO）及び５０μＭのＭＳＸ（EMD Millipore, Billerica, MA）が補充されたＣＤＣＨＯ培地（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）中の９６ウェルプレートに３〜５０００細胞／ウェルでプレーティングした。３〜４週間のインキュベーションの後、クローンからの上清を、抗体力価をOctet（Pall Fortebio, Fremont, CA）でアッセイした。高発現クローンを抗体産生のためにさらにスケールアップした。次いでアフコシル化されたキメラ抗体をプロテインＡカラムで精製した。
【０５７３】
ＣＸＣＲ５に対する抗体の特異性を確認するために、他のサイトカインを発現する細胞への抗体の結合を決定した。手短に説明すると、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２又はＣＸＣＲ３を発現するFlowCellectケモカイン受容体細胞株（EMD Millipore, Billerica, MA）、及びＣＸＣＲ４を発現するJurkat（ATCC, Manassas, VA）を、５μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌの各抗ＣＸＣＲ５キメラ抗体で染色した。次いで、FACSVerse分析装置（BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）を使用したフローサイトメトリーによる分析の前に、細胞を、ＰＥとコンジュゲートしたヤギ抗ヒト抗体（Southern Biotech, Birmingham, AL）と共にインキュベートした。図４Ａ〜４Ｄで示されるように、全てのキメラ抗体が、陽性対照と比較して、ＣＸＣＲ１を発現する細胞（図４Ａ）、ＣＸＣＲ２（図４Ｂ）、ＣＸＣＲ３（図４Ｃ）又はＣＸＣＲ４／Jurkat細胞（図４Ｄ）への非常に低い結合を示した。
【０５７４】
実施例５  マウスモノクローナル抗体のヒト化
潜在的なＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）免疫原性を回避するために、ＩＧＫＶ１−３９由来のヒト生殖細胞系フレームワーク配列（ＤＰＫ９軽鎖可変ドメイン、GenBank受託番号X93627.1、配列番号９３）及びＩＧＨＶ３由来のヒト生殖細胞系フレームワーク配列（ＤＰ５４重鎖可変、GenBank受託番号AB019440、配列番号９１）を使用することによって、４１Ａ１０（Ｃ-４１Ａ１０）及び１１Ｇ２（Ｃ-１１Ｇ２）キメラ抗体をヒト化した。
【０５７５】
キメラ抗体１１Ｇ２（Ｃ-１１Ｇ２）及びキメラ４１Ａ１０（Ｃ-４１Ａ１０）のヒト化バージョンを、相補性決定領域（ＣＤＲ）グラフト化（以降、「ＣＤＲグラフト化」という）によって生成した。すなわち、重鎖ＣＤＲを、ヒトＤＰ-５４フレームワーク領域（ＶＨ３サブグループ；配列番号９１）上にＪＨ４セグメント（配列番号９２）を用いてグラフト化し、一方で軽鎖ＣＤＲを、ヒトＤＰＫ９フレームワーク（ＶＫＩサブグループ；配列番号９３）上にＪＫ４セグメント（配列番号９４）を用いてグラフト化した。
【０５７６】
ヒト化ＶＨ領域をヒトＩｇＧ１定常領域（配列番号８９）に接合し、次いで私有の発現ベクターにサブクローニングして、これに限定されるものではないが、配列番号９６（１１Ｇ２ ＣＤＲグラフトＶＨ）などのＣＤＲグラフト化重鎖を生成した。ヒト化ＶＬ領域をヒトκ定常領域（配列番号９０）に融合させ、次いで私有の発現ベクターにサブクローニングして、これに限定されるものではないが、配列番号９７（１１Ｇ２ ＣＤＲグラフトＶＬ）などのＣＤＲグラフト化軽鎖を作り出した。
【０５７７】
実施例６  アフコシル化又はフコシル化された抗ＣＸＣＲ５抗体の結合親和性
キメラ及びヒト化ＣＸＣＲ５フコシル化及びアフコシル化された抗体の細胞表面ＣＸＣＲ５への見かけの親和性を査定した。より具体的には、ＣＸＣＲ５を発現する細胞へのキメラ及びヒト化されたＣＸＣＲ５抗体の見かけの親和性を決定するために、ヒト及びカニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）並びにヒト扁桃単核細胞（ＴＭＣ）で細胞結合実験を行った。ＣＸＣＲ５＋細胞（Ｂ細胞、真正Ｔｆｈ細胞、及び循環Ｔｆｈ様細胞）へのＣＸＣＲ５ ｍａｂ結合の見かけの親和性を、抗原結合集団の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）をフローサイトメトリーによって定量化した平衡結合滴定曲線のＥＣ５０として算出した。
【０５７８】
Trima（登録商標）によるアフェレーシス採取でＰＢＭＣが濃縮された、健康なヒトドナーからのTrima（登録商標）残留物を、Blood Centers of the Pacific（San Francisco, CA）から得た。ＰＢＭＣを、SepMate（商標）チューブ及びLymphoprep（商標）を使用した密度勾配遠心分離によって、製造元（STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada）の説明書に従って単離した。
【０５７９】
扁桃単核細胞（ＴＭＣｓ）を、BioOptions（Brea, CA）から得たヒト扁桃から単離した。手短に説明すると、扁桃を、滅菌したメスを使用して冷ＲＰＭＩ１６４０培地中で小さい断片（３〜４ｍｍ）に刻んだ。次いで扁桃組織を、消化培地（３ｍＬの１０×コラゲナーゼ、３００μＬの１００×デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、６．７ｍＬのＲＰＭＩ１６４０）中で、３７℃で３０分消化した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０を添加して、酵素活性を中和し、次いで、組織を逐次的にナイロンフィルターセルストレーナー（７０μｍ及び４０μｍメッシュサイズのナイロン）を介してろ過した。遠心分離後、塩化アンモニウム溶解緩衝液を使用して、ペレットに対して赤血球溶解を行った。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／２％ＦＢＳ／２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）中、１０分の低速遠心分離（２００×ｇ）で血小板を除去した。EasySep（商標）ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞濃縮キットを、製造元（STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada）の説明書に従って使用して、ＴＭＣ混合物からＣＤ４＋ Ｔ細胞を精製した。
【０５８０】
単離後、９６ウェルＵ底プレート中で、単離緩衝液（１％ＦＢＳ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ）に、ＰＢＭＣをウェル１つ当たり細胞１．０×１０５個の密度でプレーティングし、ＣＤ４＋ ＴＭＣをウェル１つ当たり細胞２．０×１０５個の密度でプレーティングした。次いで、プレートを１５００ｒｐｍで、室温で５分遠心分離した。ＰＢＭＣ及びＣＤ４＋ ＴＭＣを、ヒト結晶化フラグメントＦｃブロック（２μＬ／ウェル；Biolegend）及び抗体の４倍連続希釈物（ＰＢＭＣの場合５０００ｎｇ／ｍＬから始め、ＣＤ４＋ ＴＭＣの場合３１２．５ｎｇ／ｍＬから始めた、１１ポイントの連続希釈）を含有する蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）緩衝液（１％ＦＢＳを含有するＰＢＳ）に再懸濁し、氷上で２時間インキュベートした。次いでＰＢＭＣ及びＣＤ４＋ ＴＭＣをＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、リンパ球サブセットを染色するための蛍光コンジュゲート抗体及びヒトＩｇに対する蛍光コンジュゲート二次抗体を含有する５０〜１００μＬのＦＡＣｓ緩衝液に再懸濁して、ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を検出した。４℃で３０分のインキュベーションの後、ＰＢＭＣ及びＣＤ４＋ ＴＭＣを、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中の１２５μＬの０．５％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）に再懸濁した。フローサイトメトリーによる分析（BD LSRFortessa（商標）細胞分析装置、BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）まで、プレートを４℃で貯蔵した。
【０５８１】
ＣＸＣＲ５抗体濃度の対数に対して抗原結合集団のｇＭＦＩをプロットすることによって、細胞結合滴定曲線を作成した。ＥＣ５０値を、GraphPad Prism（登録商標）（バージョン６．０、GraphPad Software, Inc, San Diego, CA）非線形回帰曲線フィッティング及び以下の方程式に従うアゴニスト用量応答モデルのシグモイドログを使用して決定した。
【０５８２】
Ｌｏｇ（アゴニスト） 対 応答−変数の傾き（４パラメーター）
Ｙ＝最小＋（最大−最小／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）×ヒルスロープ））。
【０５８３】
式中、ＹはｇＭＦＩ、Ｘは抗体濃度、最大はシグモイド曲線の上のプラトーに対応する最大のＹ−値、最小はシグモイド曲線の下のプラトーに対応する最小のＹ−値、ＬｏｇＥＣ５０は、曲線の屈曲点における抗体濃度の対数である。
【０５８４】
複数回の実験の平均値及び標準偏差（ＳＴＤＥＶ）で実験全体のＥＣ５０値をまとめた。結果（すなわち、ＣＸＣＲ５を発現する細胞への、フコシル化又はアフコシル化されたキメラ及びヒト化ＣＸＣＲ５ｍＡｂの見かけの親和性の平均値）を表４に示す。結果には、比較のための抗ＣＸＣＲ５対照抗体２Ｃ９（ＷＯ２０１２／０１０５８２）、１６Ｄ７（ＷＯ２００９／０３２６６１）及び１１Ａ７（ＷＯ２０１６／０２８５７３）を使用して得られた親和性結合データも含む。ここで留意すべきことに、様々なＶＬとＶＨの組合せを有するフコシル化及びアフコシル化されたキメラ及びヒト化１１Ｇ２抗体（すなわち、ｈ１１Ｇ２ ＸＣ５１／ＸＣ１５２、ｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５３／ＸＣ１５５、ｈ１１Ｇｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５３／ＸＣ１５６、ｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５、及びｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５７）は、ほぼ等しいヒトＢ細胞への見かけの親和性を有する。すなわち、データは、アフコシル化がＣＸＣＲ５発現細胞に対する抗体の親和性に影響を与えていないようであることを示す。さらに、データは、ｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５抗体（フコシル化及びアフコシル化された）の親和性が対照抗ＣＸＣＲ５抗体２Ｃ９よりおよそ１０倍高く、また１１Ａ７より約１００倍高いことを示す。対照抗ＣＸＣ５抗体１６Ｄ７は、飽和可能な結合を示さなかった。これらのデータは、アフコシル化がＣＸＣＲ５発現細胞への結合に対する１１Ｇ２抗体の親和性に影響を与えなかったことを示す。親和性は、エピトープと抗体抗原結合部位（すなわち、パラトープ）との相互作用の強さの尺度であるため、これらのデータは、抗体が類似のエピトープと結合したとしても、それらは１１Ｇ２と同じ強さでエピトープと結合しないことを示す。
【０５８５】
【表４】
2021503888.tif 000007
【０５８６】
実施例７  フコシル化された参照抗体と比較したアフコシル化又はフコシル化されたヒト化１１Ｇ２抗体の濃度依存性結合
フコシル化されたヒト化１１Ｇ２（ｈ１１Ｇ２ ＶＬ ＸＣ１５４／ＶＨ ＸＣ１５５、ｈ１１Ｇ２ １５４／１５５又はｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５ともいう）及びアフコシルヒト化１１Ｇ２ＣＸＣＲ５（アフコシルｈ１１Ｇ２ １５４／１５５）のヒトＰＢＭＣ由来のＢ細胞への濃度依存性結合を、比較ｍＡｂである２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７の結合と比較した。ＣＸＣＲ５抗体濃度の対数に対して抗原結合集団のｇＭＦＩをプロットすることによって、細胞結合滴定曲線を作成した（図５）。
【０５８７】
データは、フコシル化及びアフコシル化されたｈ１１Ｇ２ １５４／１５５は、同一な曲線を有することを示し、これは、抗体定常鎖の少なくとも一方、ただし好ましくはその両方のＡｓｎ２９７に存在するN-結合型グリコフォームにおけるフコースの存在又は非存在は、細胞上に存在するＣＸＣＲ５への抗体の親和性に影響を与えないことを示す。
【０５８８】
加えて、データはさらに、フコシル化された（黒丸、９．６３０×１０−１２Ｍ）及びアフコシル化された（白丸、１．１８８×１０−１１Ｍ）ｈ１１Ｇ２ １５４／１５５抗体のＥＣ５０は、比較抗体：２Ｃ９（黒三角、６．２４×１０−１１）、１１Ａ７（黒ひし形、９．２６５×１０−１０）及び１６Ｄ７（黒四角、およそ０．００４９４５、これは飽和しなかった）のＥＣ５０よりかなり低かったことを示す。これらのデータは、ｈ１１Ｇ２ １５４／１５５抗体が比較抗体と異なる結合特徴を有することを示す。それゆえにこれらのデータは、１１Ｇ２抗体並びに２Ｃ９、１１Ａ７及び１６Ｄ７は、ＣＸＣＲ５上の同じエピトープと結合しないことを示す。
【０５８９】
実施例８  キメラ及びヒト化ＣＸＣＲ５抗体のＡＤＣＣ活性
キメラ及びヒト化ＣＸＣＲ５抗体が活性依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を刺激する効力及び効能を決定するために、ＣＸＣＲ５抗体又はアイソタイプ対照の連続希釈物を、健康なヒトドナー又はカニクイザルからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と共にインキュベートした。このアッセイにおいて、ＰＢＭＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞、並びに標的Ｂ及びＴｆｈ様細胞のソースである。フローサイトメトリーを使用して、およそ２０時間後に残存するＢ及びＴｆｈ様細胞の数を定量化した。同様に、ヒト扁桃由来の真正Ｔｆｈ細胞のＡＤＣＣを誘発するヒト化抗体の能力を、ＰＢＭＣから単離されたＮＫ細胞を添加して扁桃単核細胞から単離されたＣＤ４＋ Ｔ細胞を使用して査定した。
【０５９０】
実施例６に記載されるように、Trima（登録商標）アフェレーシス採取でＰＢＭＣが濃縮された、健康なヒトドナーからのTrima（登録商標）残留物を、Blood Centers of the Pacific（San Francisco, CA）から得た。ＰＢＭＣを、SepMate（商標）チューブ及びLymphoprep（商標）を使用した密度勾配遠心分離によって、製造元（STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada）の説明書に従って単離した。単離後、ＰＢＭＣを、Ｕ底９６ウェルプレートに、完全ＲＰＭＩ培地中、ウェル１つ当たり細胞２．０×１０５個の密度でプレーティングした。
【０５９１】
このアッセイにおいて、ＰＢＭＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞、並びに標的Ｂ及びＴｆｈ様細胞のソースである。ＣＸＣＲ５ ｍＡｂ又はアイソタイプ対照の連続希釈物をウェルに添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２でおよそ２０時間インキュベートした。次いでプレートを、１８００ｒｐｍで、室温（ＲＴ）で５分遠心分離した。次いでＰＢＭＣを、氷冷したＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、リンパ球サブセットを染色するための蛍光コンジュゲート抗体を含有する５０μｌの氷冷したＦＡＣｓ緩衝液に再懸濁した。４℃で１５〜３０分インキュベートした後、ＰＢＭＣを、氷冷したＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中の１００μＬの０．５％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）に再懸濁した。CountBright（商標）絶対計数ビーズ（Thermo Fisher Scientific）を各ウェルに添加した（１５μＬ／ウェル）。フローサイトメトリーによる分析（BD LSRFortessa（登録商標）細胞分析装置）まで、プレートを４℃で貯蔵した。
【０５９２】
扁桃単核細胞（ＴＭＣ）も実施例６で上述したようにして単離した。
【０５９３】
細胞傷害性滴定曲線を、実施例６に関して記載された方法に従って作成した。複数回の実験の平均値及び標準偏差（ＳＴＤＥＶ）で実験全体のＥＣ５０値をまとめた。表５に結果を示す。抗ＣＸＣＲ５参照抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７を使用して得られたデータを比較のために含めた。
【０５９４】
【表５】
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【０５９５】
ここに示されたデータは、フコシル化されていたとしても、ｈ１１Ｇ２ １５４／１５５抗体は、比較抗体２Ｃ９（３８０．３１±７５７．０４）及び１６Ｄ７（２５９０．６１±６３４３．８８）より大きいＡＤＣＣ活性（２５３．７２±６７２．１４）を有することを説明する。フコシル化された抗体１１Ａ７は、試験されたいずれのフコシル化された抗体よりも大きいＡＤＣＣ活性を示した。しかし、データは、アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ １５４／１５５がフコシル化された１１Ａ７を含む試験されたいずれの抗体よりも高いＡＤＣＣ活性を有していたことを示す。本明細書で示された特徴付けの研究は、キメラＣＸＣＲ５ｍＡｂである４１Ａ１０及び１１Ｇ２が、それぞれ、１１．７３ｎＭ及び０．５６ｎＭのＥＣ５０でヒトＢ細胞のＡＤＣＣを開始させたことを示した。キメラＣＸＣＲ５ｍＡｂである４１Ａ１０及び１１Ｇ２のアフコシルバージョンは、ＡＤＣＣ活性を少なくとも約１００倍増加させた。ヒト化抗体は、それらの対応するキメラ抗体に匹敵する、又はそれより優れた効力でヒトＢ細胞のＡＤＣＣを開始させた。キメラＣＸＣＲ５ｍＡｂの場合とまったく同様に、アフコシルヒト化抗体は、その正常にフコシル化された抗体と比較してＡＤＣＣを少なくとも約１００倍増加させた。アフコシルｈ１１Ｇ２は、ＡＤＣＣにおいて２Ｃ９及び１６Ｄ７のフコシル化抗体より有効で、アフコシルｈ１１Ｇ２は、フコシル化された１１Ａ７と少なくとも同等であった。
【０５９６】
実施例９  １１Ｇ２抗体はＣＸＣＬ１３シグナル伝達に拮抗する
ＣＸＣＲ５抗体がＣＸＣＬ１３シグナル伝達に機能的に拮抗するかどうかを決定するために、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）レポーターアッセイを、ヒトＣＸＣＲ５を安定して発現する操作された細胞株で利用した。これらの細胞において、ＣＸＣＬ１３は、濃度依存的にフォルスコリンによって開始されるｃＡＭＰ産生を阻害する。
【０５９７】
ＣＸＣＲ５抗体がＣＸＣＬ１３シグナル伝達に機能的に拮抗するかどうかを決定するために、Hit Hunter（登録商標）ｃＡＭＰアッセイ（DiscoveRx Corporation, Fremont, CA）を、ヒトＣＸＣＲ５を安定して発現するＣＨＯ-Ｋ１細胞で実行した。このアッセイでは、ｃＡＭＰが生成すると、ＥＦＣ（Enzyme Fragment Complementation）によって活性なβ-ガラクトシダーゼ（β-ｇａｌ）が形成される。次いでβ-ｇａｌは、化学発光基質を変換して、標準的なマイクロプレートリーダーで検出可能な出力シグナルを生成することができる。ＣＸＣＲ５のリガンドであるＣＸＣＬ１３は、濃度依存的にフォルスコリン（２０μＭ）によって開始されるｃＡＭＰ産生を阻害する。ＣＸＣＬ１３媒介フォルスコリン誘発ｃＡＭＰ産生を阻害することにおけるＣＸＣＲ５抗体の効力及び効能を試験するために、各ＣＸＣＲ５抗体の連続希釈物を、フォルスコリン（２０μＭ）及びＣＸＣＬ１３（その６００ｐＭのＩＣ８０で使用される）の存在下で、ＣＸＣＲ５を発現するＣＨＯ-Ｋ１細胞に添加した。
【０５９８】
機能的拮抗作用滴定曲線を、ＥＣ５０値決定を含む実施例６に関して記載されたものに従って作成した。表６に結果を示す。
【０５９９】
【表６】
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【０６００】
別の実験で、アフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５を機能的な拮抗作用に関して試験したところ、フコシル化されたヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５と同様の挙動を示した（すなわち、ＥＣ５０＝９６１．４ｐＭ）。
【０６０１】
データは、ｈ１１Ｇ２ １５４／１５５が、ＣＸＣＬ１３シグナル伝達を、少なくとも参照抗体２Ｃ９、１６Ｄ７、１１Ａ７と同程度によく阻害したことを示す。実際に、ｈ１１Ｇ２は、ＣＸＣＬ１３シグナル伝達を、１６Ｄ７（１０２．４％）及び１１Ａ７（１０５．９％）より大幅に阻害した（１２０．６％）。これらのデータは、１１Ｇ２抗体が、ＣＸＣＲ５媒介ＣＸＣＬ１３シグナル伝達によって媒介されるか又はそれと関連する疾患、障害又は状態を治療するための有用な新規の治療剤であり得ることを示唆する。
【０６０２】
実施例１０  １１Ｇ２抗体のｈＣＸＣＲ５における結合部位のマッピング
ＣＸＣＲ５上のアフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５結合部位を、マウスＣＸＣＲ５の細胞外Ｎ末端からのアミノ酸をヒトＣＸＣＲ５にグラフト化することによって同定した。
【０６０３】
より具体的には、マッピング戦略は、１１Ｇ２はヒトＣＸＣＲ５（配列番号３２）と結合するが、マウスＣＸＣＲ５（配列番号３４）と結合しないという事実を利用いた。図６に、ヒトＣＸＣＲ５（ｈＣＸＣＲ５）及びマウスＣＸＣＲ５（ｍＣＸＣＲ５）のアミノ酸配列のアライメントを示し、ＣＸＣＲ５の細胞外ドメインのアミノ酸残基を下線で示す。図６では、マウス及びヒトＣＸＣＲ５タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を太字で示し、各領域の配列の下に「Ｎ」、「Ｌ１」、Ｌ２」及び「Ｌ３」と示す。これらのＥＣＤをマウス及びヒトタンパク質間でスワッピングして、ヒトＣＸＣＲ５への１１Ｇ２の特異性及びｍＣＸＣＲ５への結合の欠如に関与する領域を同定した。マウスＣＸＣＲ５からのこれらの領域のそれぞれを、ヒトＣＸＣＲ５における同じ領域と交換して、ヒトＣＸＣＲ５タンパク質が特定された対応するマウスＣＸＣＲ５ドメインを含有する、ＸＣ２５１、ＸＣ２５２、ＸＣ２５３、ＸＣ２５４、ＸＣ２５５及びＸＣ２５６と名付けられたキメラタンパク質を産生した。表７に、どのマウス（ｍ）領域がヒトＣＸＣＲ５にスワッピングされたかを示す。
【０６０４】
【表７】
2021503888.tif 000010
【０６０５】
より具体的には、マウスＬ３ドメインを、対応するヒトＬ３ドメインでスワッピングして、ヒトＣＸＣＲ５タンパク質のコンテクストにマウスＬ３ドメインを含むキメラタンパク質ＸＣ２５１（ｈＣＸＣＲ５−ｍＬ３）を産生した。同様に、マウスＬ２を、対応するヒトドメインでスワッピングして、キメラタンパク質ＸＣ２５２（ｈＣＸＣＲ５−ｍＬ２）を産生し；マウスＮドメインを、対応するヒトＮドメインでスワッピングして、キメラタンパク質ＸＣ２５３（ｈＣＸＣＲ５−ｍＮ）を産生し；マウスＬ２及びＬ３ドメインを、対応するヒトドメインでスワッピングして、キメラタンパク質ＸＣ２５４（ｈＣＸＣＲ５−ｍＬ２−ｍＬ３）を産生し；マウスｍＮ及びＬ３ドメインを、対応するヒトドメインでスワッピングして、キメラタンパク質ＸＣ２５５（ｈＣＸＣＲ５−ｍＮ−ｍＬ３）を産生し；及びマウスｍＮ及びＬ２ドメインを、対応するヒトドメインでスワッピングして、キメラタンパク質ＸＣ２５５（ｈＣＸＣＲ５−ｍＮ−ｍＬ２）を産生した。
【０６０６】
マウスＣＸＣＲ５、ヒトＣＸＣＲ５、及び様々なＥＣＤスワッピングマウス−ヒトキメラＣＸＣＲ５タンパク質（ＸＣ２５１〜ＸＣ２５６）への１１Ｇ２の結合を求め、様々な抗体、すなわち、ラット抗マウスＣＸＣＲ５（ラット）（カタログMAB6198, R&D systems, Minneapolis, MN）、ウサギ抗ヒトＣＸＣＲ５（Ｒｂ）（カタログ、ab46218, Abcam, Cambridge, MA）、２Ｃ９、１６Ｄ７の結合と比較した。表８に結果を示す。太字の数字は、タンパク質への抗体結合を示す。
【０６０７】
【表８】
2021503888.tif 000011
【０６０８】
データは、抗体がマウスＣＸＣＲ５に特異的であれば、キメラがマウスＮドメインを含む限り、抗体はＥＣＤスワッピングマウス−ヒトキメラＣＸＣＲ５と結合したことを示す。同様に、ヒトＣＸＣＲ５（１１Ｇ２、２Ｃ９、１６Ｄ７、及びＲｂ）と結合した抗体の場合も、抗体は、キメラにヒトＮドメインが存在する場合、キメラＣＸＣＲ５と結合した。したがって、抗体の種特異性は、Ｎドメイン中の結合によって決まると考えられる。より重要なことに、これらのデータは、ヒトＣＸＣＲ５のＮドメインが抗体１１Ｇ２、２Ｃ９及び１６Ｄ７の結合に必要であったことを示す。
【０６０９】
実施例１１  ｈＣＸＣＲ５への１１Ｇ２抗体の結合に特有なアミノ酸残基の同定
ｈＣＸＣＲ５への抗体結合に重要な特異的なアミノ酸残基をより正確に決定し、抗ヒトＣＸＣＲ５抗体をさらに区別するために、ＣＸＣＲ５のＮドメインのより詳細な研究に取り組んだ。より具体的には、ヒトＣＸＣＲ５のＮドメインフラグメント（配列番号３２の番号付けに従ってアミノ酸１〜５８）中に点変異を行い、それぞれＣＸＣＲ５の対応するマウスアミノ酸残基を含む点変異タンパク質を産生した。各突然変異タンパク質を発現する安定な形質転換体を作成し、フローサイトメトリーを使用して細胞を抗体結合に関して調査した。すなわち、表９に示されるように、ＣＸＣＲ５のヒト残基を対応するマウス残基で置き換えた、それぞれ単一のアミノ酸置換を含有するＸＣ２７６〜ＸＣ２９４と呼ばれる１９種のヒトＣＸＣＲ５Ｎドメイン突然変異タンパク質を産生した。ヒトＣＸＣＲ５突然変異タンパク質は、Ｎ末端に、表９において小文字で示されるＦＬＡＧエピトープ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）をさらに含んでおり、発現レベルに基づく正規化を可能にした；ＦＬＡＧタグは、突然変異タンパク質への抗体結合に影響を与えなかった。ヒトからマウスへのアミノ酸残基の置換は保存的置換で、これらの残基はイタリックで示されており、そのような残基の置換は、通常行わなかった。
【０６１０】
表９は、マウスＣＸＣＲ５のＮ領域のアミノ酸配列と比較した、ｈＣＸＣＲ５のＮ領域のアミノ酸配列を示す（最初の５８アミノ酸が示される）。２つの配列間で異なるアミノ酸は下線で示される。この図はまた、マウスアミノ酸残基がｈＣＸＣ５における対応するヒトアミノ酸で置換された、産生された様々なコンストラクト（ＸＣ２７６〜ＸＣ２９４）も示す。例えば、ＸＣ２７６は、Ｄ（ヒト）をＧ（マウス）に変化させる単一のアミノ酸置換を有するヒトＣＸＣＲ５である。ｈＣＸＣＲ５アミノ酸配列（配列番号３２）の残りは、変化がないため示されない。突然変異タンパク質を産生して、試験された抗体はマウスＣＸＣＲ５と結合しなかったことにより、ｈＣＸＣＲ５への抗体結合にどのアミノ酸残基が重要であるかを決定した。
【０６１１】
【表９】
2021503888.tif 000012
【０６１２】
各突然変異ペプチドをコードする核酸をＨＥＫ-２９３Ｔ細胞に一時的にトランスフェクトした。トランスフェクションから２日後、細胞を回収し、１μｇ／ｍｌの抗ＦＬＡＧ ＰＥ（Biolegend）又は１μｇ／ｍｌ若しくは３μｇ／ｍｌのアフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５；２Ｃ９；Ｓ１６Ｄ７若しくは１１Ａ７、続いて抗ヒトＩｇＧ ＰＥ（Southern Biotech, Birmingham, AL）で染色した。細胞を、Accuri（BD Biosciences Franklin Lakes, NJ）を使用したフローサイトメトリーによって分析した。幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）を決定し、各ＣＸＣＲ５抗体及び抗ｆｌａｇのｇＭＦＩの比率を計算した。
【０６１３】
図７で示されるように、４つ全ての抗体が野生型ヒトＣＸＣＲ５（ＸＣ２７５；ＷＴ）に結合した。さらに、抗体は様々な点変異ペプチドとの結合の異なるパターンを示した。すなわち、２Ｃ９は、ＸＣ２７６（突然変異Ｄ１０Ｇを含む）又はＸＣ２７７（ヒトＣＸＣＲ５のＮドメインへのアミノ酸残基Ｓ及びＩの挿入を含む）と結合しなかったが、１１Ｇ２、１６Ｄ７及び１１Ａ７はそれらのタンパク質と結合した。これらのデータは、これら２つのアミノ酸のｈＣＸＣＲ５配列への挿入は２Ｃ９結合を無効にしたが、３つの他の抗体の結合に影響を与えなかったことを示唆し、これは、２Ｃ９のエピトープは、１１Ｇ２、１６Ｄ７及び１１Ａ７のものとは異なることを示唆している。より重要なことに、アミノ酸残基１１位（配列番号３２の配列の番号付けに基づく）におけるロイシン（Ｌ）からスレオニン（Ｔ）への突然変異は、１１Ｇ２のＸＣ２７８への結合のみを完全に壊滅させたが、このタンパク質への抗体２Ｃ９、１６Ｄ７又は１１Ａ７の結合に影響を与えなかった。したがって、位置番号１１（配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して）に存在するロイシン残基は、１１Ｇ２のヒトＣＸＣＲ５への結合に重要であると考えられるが、２Ｃ９、１６Ｄ７又は１１Ａ７のｈＣＸＣＲ５への結合には重要ではない。これらのデータは、１１Ｇ２のエピトープが、それらの抗体のエピトープと同じではないことを示す。加えて、図７は、４つ全ての抗体がＸＣ２７９と結合したことを示し、したがって、アミノ酸残基番号１２（配列番号３２の配列に対して）におけるＥからＹへの置換がこれらの抗体のいずれかのｈＣＸＣＲ５への結合に重要ではなかった。
【０６１４】
アミノ酸残基番号１９（配列番号３２の配列の番号付けに従って）におけるＷからリシン（Ｋ）への置換を含むこれらの４つの抗体のＸＣ２８０への結合は、抗体１６Ｄ７及び１１Ａ７によるＸＣ２８０への結合の損失をもたらすが、抗体１１Ｇ２及び２Ｃ９の突然変異タンパク質への結合に影響を与えなかった（図７）。これらの結果はこれら４つの抗体は、ｈＣＸＣＲ５上の同じエピトープと結合しないことをさらに示す。
【０６１５】
図７はまた、２２位（配列番号３２の配列の番号付けに従って）におけるＤをアラニン（Ａ）に変化させることは、１１Ｇ２のＸＣ２８１突然変異タンパク質への結合を完全に無効にするが、抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７の結合に影響を与えないことも示す。これはさらに、１１Ｇ２のエピトープが、抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７のエピトープと同じではないことを強調する。
【０６１６】
４つ全ての抗体がＸＣ２８５〜２９４に等しく結合し、それらの結合は、これらの突然変異タンパク質におけるアミノ酸置換のいずれによっても影響されなかった。これらのデータは、これらの位置（２７、２８、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９及び４０；表９参照）におけるアミノ酸残基は、抗体１１Ｇ２、２Ｃ９、１１Ａ７及び１６Ｄ７のＣＸＣＲ５への抗体結合に関与していないことを示唆する。
【０６１７】
したがって、これらのデータは、アミノ酸位置番号１１におけるロイシン（Ｌ）残基及びアミノ酸位置番号２２におけるアスパラギン酸（Ｄ）残基（両者とも配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに対して）は、それらの位置でこれらの残基のいずれか（又は両者）を対応するマウスアミノ酸残基で置換することが抗体のｈＣＸＣＲ５への結合を無効にしたことから、１１Ｇ２抗体のｈＣＸＣＲ５への結合にとって重要であることを示す。これらのデータは、抗体１１Ｇ２は、Ｌ１１及び／又はＷ２２の変化がこれらの抗体のｈＣＸＣＲ５への結合に影響を与えないことから、抗体２Ｃ９、１６Ｄ７又は１１Ａ７と同じエピトープを有さないことも示す。
【０６１８】
図７は、４つ全ての抗体が、突然変異ＣＸＣＲ５タンパク質ＸＣ２８２〜ＸＣ２８４に結合したことも示す。４つ全ての抗体はまた、タンパク質ＸＣ２８５〜ＸＣ２９４にも結合した。これらのデータは、抗体１１Ｇ２、２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７のエピトープは、突然変異タンパク質ＸＣ２８２〜ＸＣ２９４によって示されるｈＣＸＣＲ５のＮドメインの領域にないことを示唆する。
【０６１９】
実施例１２  １１Ｇ２はＣＸＣＲ５に選択的で、他のケモカインＧＰＣＲと結合しない
ケモカインＧＰＣＲファミリーの２０種のメンバーに対するアフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５の選択性を、β-アレスチン共役アッセイ（DiscoveRx）を使用して調査した。このアッセイは、各受容体で安定してトランスフェクトされた全細胞を使用し、β-アレスチンと活性化ＧＰＣＲとの相互作用を検出することによってＧＰＣＲ活性を直接測定する。アレスチン補充はＧタンパク質シグナル伝達から独立しているため、これらのアッセイは、実質的にあらゆるＧｉ、Ｇｓ、又はＧｑ共役受容体に使用できる万能なスクリーニング及びプロファイリングプラットフォームを提供し、受容体又は受容体ファミリー（Ｇタンパク質共役に関係なく）にわたる標準化された効率的な比較が得られる。アッセイを、アゴニスト様式（リガンドの非存在下）及びアンタゴニスト様式（ＥＣ９０でのリガンドの存在下）で実行した。選択性パネルには、以下のケモカイン受容体：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＸＣＲ１が含まれていた。
【０６２０】
アフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５の有意な活性（２００ｎＭで試験）は、アゴニスト様式で試験した場合、他のいずれのケモカイン受容体に対しても観察されず、評価された全ての他のケモカイン受容体とアンタゴニスト様式で比較した場合、ＣＸＣＲ５のアンタゴニストとしてのみ有意に活性であり（リガンドによって誘発されたβ-アレスチン共役の９２％阻害）、すなわち、有意な阻害は、試験された他のいずれのケモカイン受容体に対しても観察されなかった。
【０６２１】
実施例１３  ｈ１１Ｇ２は、ＤＮＡ、インスリン又はＬＰＳに対する多反応性を示さない
多反応性（polyreactivity）アッセイは、抗体が、インビボで様々な関連していない抗原と反応する可能性があるかどうかを決定するために使用される。多反応性の欠如は、１１Ｇ２がＣＸＣＲ５特異的抗体であること、及びインビボで非標的に結合しないことを示唆する。
【０６２２】
黒いＤＥＬＦＩＡプレート（Thermoscientific）を１０μｇ／ｍｌの二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ；Millipore）、５μｇ／ｍｌリポ多糖（ＬＰＳ；Sigma）、１０μｇ／ｍｌインスリン（Sigma, St. Louis, MO）、又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で被覆し、４℃で一晩インキュベートした。次いでプレートを、Biotek ELx405マイクロプレートウォッシャー（Biotek, Winooski, VT）を使用して水で洗浄し、次いでプレートを、１×ＰＢＳ、０．０５％Tween20及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有する２００μｌのアッセイ緩衝液で、室温で１時間ブロッキングした。追加の洗浄後、プレートを、抗ＣＸＣＲ５抗体（全ての抗体がフコシル化された）の連続希釈物と共に室温で１時間インキュベートした。検出のために、１００μｌのＤＥＬＦＩＡ−Ｅｕ−Ｎ１−抗ヒトＩｇＧ（５０μｇ／ｍｌ；Perkin Elmer, Waltham, MA）をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。最後に、１００μｌのＤＥＬＦＩＡ増強溶液を各ウェルに添加し、プレートを室温で１５分振とうし、その後、VictorX4マルチラベルプレートリーダー（PerkinElmer, Waltham, MA）で、ユーロピウム蛍光下で読み取った。表１０にデータを示す。
【０６２３】
【表１０】
2021503888.tif 000013
【０６２４】
別の実験で、アフコシル化されたヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５を多反応性に関して試験したところ、インスリン、ＤＮＡ、ＬＰＳ、又はＰＢＳへの結合を示さなかったが、これは、上記の表１０に示されるフコシル化されたヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５の結果と一致する。
【０６２５】
これらのデータは、１１Ｇ２が、インスリン、ＤＮＡ又はＬＰＳと反応性を有さず、比較抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７より低い反応性を有することを示す。これらのデータは、１１Ｇ２が可能性のある有用な新規の治療剤であることを示唆する。多反応性抗体は、定義によれば、様々な生体分子と非特異的な方式で結合する。１１Ｇ２は、一般的な多反応性アッセイでは反応しないことから、１１Ｇ２はＣＸＣＲ５に特異的であることがさらに裏付けられる。またＰＫ、ＴＫ及びｔｏｘデータも、１１Ｇ２がＣＸＣＲ５に特異性を有することを裏付ける。
【０６２６】
実施例１４  １１Ｇ２と比較抗体との差の概要
表１１に、１１Ｇ２及び本明細書に記載された様々な比較抗体の特徴をまとめる。ＮＤは、決定しなかったことを意味する。
【０６２７】
これらのデータは、抗体１１Ｇ２は、フコシル化されたものとアフコシル化されたもの両者とも、比較抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７とまったく異なっていることを示す。すなわち、１１Ｇ２の結合は、１１及び２２位（配列番号３２のアミノ酸配列に従って番号付けされる）におけるマウスアミノ酸残基での置換によって無効にされるが、比較抗体の結合は、これらの残基の置換の影響を受けない。さらに、２Ｃ９の結合は、ｈＣＸＣＲ５への結合のためにアミノ酸残基Ｗ１９、Ｄ２２及びＲ２３を必要とするが、１１Ａ７のｈＣＸＣＲ５への結合が１９位（配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って）におけるＷのアラニンによる置換で無効にされるとしても、３つ全てを必要とする抗体はない。他の全ての抗体とは異なり、１６Ｄ７のｈＣＸＣＲ５への結合は、ヒトＣＸＣＲ５のＤ１０とＬ１１（配列番号３２のアミノ酸配列の番号付けに従って）との間に２つのマウス残基を挿入することによって無効にされる（図７参照）。したがって、本明細書に示すデータは、１１Ｇ２が、抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７と同じエピトープを有さないこと、並びにこれらの抗体が、同様にそれらの間で異なるエピトープを有することを示唆する。
【０６２８】
加えて、本明細書に示すデータは、１１Ｇ２が、ｈＣＸＣＲ５に、２Ｃ９（６５．５９ｐＭ）より少なくとも１０倍大きい親和性（７．０８ｐＭ）（ＥＣ５０として表される）を有し、１１Ａ７より少なくとも１００倍大きい親和性（５６３．６３ｐＭ）を有することを示し、１６Ｄ７とは顕著に異なるが、これは飽和しないため比較できない。
【０６２９】
【表１１】
2021503888.tif 000014
【０６３０】
これらのデータは全て、１１Ｇ２が、比較抗体２Ｃ９、１６Ｄ７及び１１Ａ７と実質的に異なること、並びに、限定されるものではないが、ＣＸＣＲ５媒介ＣＸＣＬ１３シグナル伝達などのＣＸＣＲ５の生物学的活性によって媒介されるか又はそれと関連する疾患、障害若しくは状態を治療若しくは予防するための、可能性のある新規の有用な治療剤であることを示唆する。これは特に、大幅に増強されたＡＤＣＣ活性を示した１１Ｇ２のアフコシル化された抗体に該当し、したがって、例えば、ＣＸＣＲ５の細胞発現によって媒介されるか又はそれと関連する免疫疾患を治療するための治療剤としての実用性を増加させる。
【０６３１】
実施例１５  アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のインビボでの薬力学
アフコシルヒト化１１Ｇ２ １５４／１５５のカニクイザルでの実験で、ＩＶ又はＳＣ、１投与当たり０．００１〜４００ｍｇ／ｋｇの投与量を調査した。この実験で用いたＩＶ及びＳＣ調合物は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメント、２０ｍＭのヒスチジン、８．５％のスクロース及び０．０２％のポリソルベート８０、ｐＨ５．８の０．００５％のＥＤＴＡを含んでいた。表１２に、カニクイザルによるアフコシル化された１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の実験計画を示す。
【０６３２】
【表１２】
2021503888.tif 000015
【０６３３】
末梢血における用量依存性のＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇を、カニクイザルにおいて、０．００１〜０．２ｍｇ／ｋｇのアフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＶＬ ＸＣ１５４／ＶＨ ＸＣ１５５（アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５）の単回用量で観察した；試験された最低用量（０．００１ｍｇ／ｋｇ）は、末梢血中においておよそ５０％のＢ細胞及びＴｆｈ様（すなわち、ｃＴｆｈ）細胞の枯渇をもたらした。
【０６３４】
カニクイザルにおける探索的及びピボタルＧＬＰ毒性試験において、≧５ｍｇ／ｋｇ ＩＶのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の用量が、末梢血中において著しいＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇を引き起こし、脾臓及び他のリンパ系組織（腋窩及び腸間膜リンパ節並びに消化管関連リンパ系組織）中のリンパ小節の細胞充実性を減少させた；これらの作用は、免疫組織化学的に観察されたＢ細胞領域の薬理学的に媒介される細胞充実性の低減と相関していた。探索的及びピボタル試験において、Ｂ細胞、Ｔｆｈ様細胞及びＴｆｈ細胞の部分的から完全な回復が観察された。枯渇とその後の回復の速度は、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の濃度に関連していた。
【０６３５】
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が体液性メモリー応答を損なうかどうかを決定するために、ワクチンの想起応答試験をカニクイザルで実行した。手短に説明すると、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を、試験の前にＴＴ（破傷風トキソイド）に対するワクチンを接種したカニクイザル（６匹／グループ）に、１日目及び８日目に、２及び１０ｍｇ／ｋｇ／用量をＩＶボーラス注入した。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の投与は十分に忍容され、期待される薬理作用（すなわち、循環Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞の減少）をもたらした。二次ＴＴ免疫化の７日後である２２日目に、１５日目と比較して増加した免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）及びＩｇＧメモリー応答が全ての用量グループ中の全ての動物で観察された。これらの応答は、アフコシルＨ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５（１０ｍｇ／ｋｇ／用量）が投与された動物において減弱され、ピーク抗ＴＴ ＩｇＧ平均力価は、対照グループの７２，０００と比較して４２，６６７であり、ピーク抗ＴＴ ＩｇＭ平均力価は、対照グループの３５００と比較して１５８３であった。比較物として使用されるＢ細胞枯渇抗体であるリツキサン（登録商標）（リツキシマブ）は、抗ＴＴ ＩｇＧメモリー応答に影響を与えなかった。結論として、これらのデータは、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、インビボで体液性メモリー応答を損なうことを示す。
【０６３６】
安全性薬理学
心電図検査及び心拍数測定をピボタル毒性試験の設計に取り入れた。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の投与に起因し得る異常な心電図上の所見はなかった。全ての心電図が、定性的及び定量的に正常な範囲内であり、不整脈はなかった。
【０６３７】
実施例１６  アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のインビボにおける薬物動態及び代謝
電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイを検証して、Meso Scale Discovery（登録商標）（ＭＳＤ）アッセイプラットフォームでカニクイザル血清におけるＡＤＡの存在を検出した。陽性対照である抗ＣＸＣＲ５抗イディオタイプ抗体をカニクイザル血清にスパイクし、プールした正常カニクイザル血清からなる陰性対照を各プレートに入れて、アッセイ性能をモニターした。ビオチン標識アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５及びルテニウム標識アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を、試験サンプル、陽性対照、及び陰性対照と共にインキュベートした。サンプル中に存在するアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５に対する抗体は、このアッセイで検出しようとするアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のビオチン及びルテニウム標識バージョンの両方に結合するはずである。複合体を、ビオチン化アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を介して、ストレプトアビジンでコーティングしたMSD multi-array plateに捕獲し、これをMSD Sector Imagerで読み取った。最終的な検出には、MSD Sector Imager内でＥＣＬシグナル（ＲＬＵ）を生産するために、ルテニウム標識アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５及びトリプロピルアミンを使用した。
【０６３８】
試験サンプルを、段階的な戦略でＡＤＡに関して試験した。最初にサンプルをスクリーニングアッセイにおいて７５の希釈係数で試験した。アッセイカットポイント未満のＲＬＵを生成したサンプルを陰性（＜１．８８）と報告した。アッセイカットポイントの、又はそれを超えるＲＬＵを生成したサンプルを全連続希釈物で再分析し、抗体力価を決定した。抗体力価を、カットポイントＲＬＵに等しいＲＬＵを生成すると予想されるサンプルの希釈率の逆数と定義した。その力価の１０を底とする対数で記録した。
【０６３９】
調査１日目の投与の前に収集されたサンプルと投与後のサンプルの結果の比較に基づいて、ＡＤＡの誘発に関する結論を作成した。試験された投与前サンプルがＡＤＡ陰性であり、対応する試験された投与後サンプルが陽性である場合、ＡＤＡ誘発陽性とみなした。試験された投与前及び投与後サンプルの両方がＡＤＡ陽性である場合には、投与後のサンプル力価が少なくとも０．４８（ｌｏｇ３、連続希釈係数）であるか又は投与前サンプルの力価より高い場合に限りＡＤＡ誘発に関して陽性とみなした。
【０６４０】
単回用量の薬物動態
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＰＫを、０．００１、０．００２、０．００５、０．１又は０．２ｍｇ／ｋｇのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の単回のＩＶ投与の後に特徴付けて、雄及び雌カニクイザル（１匹／性別／用量グループ）における末梢血Ｂ細胞及び濾胞性ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）様（Ｔｆｈ様）細胞の枯渇及び過多を評価した。この実験で用いたＩＶ及びＳＣ調合物は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメント、２０ｍＭのヒスチジン、８．５％のスクロース及び０．０２％のポリソルベート８０、ｐＨ５．８の０．００５％ＥＤＴＡを含んでいた。
【０６４１】
単回のＩＶ投与の後、用量を増加させるにつれて全身曝露が増加し、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＰＫは、低いＣＬ及び低いＶｓｓによって特徴付けられ、平均値は、用量レベルにわたり、それぞれおよそ０．２〜２．６ｍＬ／ｈ／ｋｇ及び０．０３〜０．１Ｌ／ｋｇであった。用量レベルにわたる平均ｔ１／２値は、およそ１〜４日であった。低い用量（０．００１〜０．００５ｍｇ／ｋｇ）で、より高いＣＬの証拠が存在した。これは、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５／ＣＸＣＲ５複合体のクリアランスをもたらす可能性もある抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）媒介細胞枯渇に起因する可能性がある（Kryzanski et al., 2016, J. Pharmacokinet. Pharmacodyn. 43(5):513-527；Wang et al., 2010, AAPS J. 12(4):729-740)）。ヒトにおいて、低い用量で、類似のクリアランスメカニズム／非直線性が見られる可能性もある。これまで本明細書で述べたように、用量依存性の末梢血中のＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇が観察され、循環Ｂ細胞の枯渇は、Ｔｆｈ様細胞の枯渇より強力であった。
【０６４２】
カニクイザルにおける反復投与の毒物動態（ＴＫ）
ＧＬＰ反復投与毒性試験の一部として、雄及び雌カニクイザル（３又は４匹／性別／用量グループ）に、５（ＩＶ）、２０（ＳＣ）、又は２００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇ（合計５回の用量につき）でアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の隔週（２週毎）のＩＶ又はＳＣ投与を行った後に、ＴＫ及びＡＤＡ評価を実行した。
【０６４３】
ビヒクル対照グループから収集され分析したサンプル中に、定量可能な濃度のアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は存在しなかった。用量グループにわたり全身曝露における明らかな性別に関連する差はなかった；したがって、雄及び雌カニクイザルを合わせたデータを使用してグループ平均ＴＫパラメーターを提示する（表１３）。
【０６４４】
５（ＩＶ）、２０（ＳＣ）又は２００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇでの隔週の投与後、全身曝露は反復投与後により高く、累積比率（調査４３日目／調査１日目）はおよそ１．４〜１．７であった。さらに、全身曝露は、ＩＶ投与後、用量に比例して増加した。５ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）用量グループからの回復した動物における最後の定量可能な濃度のアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が、１１か月の回復期間の調査１４８日目〜２８１日目に観察された。ＳＣ投与後、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のバイオアベイラビリティは、少なくとも約５０％と推測された。
【０６４５】
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５に対するＡＤＡの発生率は、それぞれ５（ＩＶ）、２０（ＳＣ）又は２００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇでアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を投与した後、１９％（１６匹中３匹の動物）、１７％（動物６匹中１匹）及び０％（動物６匹中０匹）であり、調査４３日目における血清濃度は、ＡＤＡ陰性動物と比較して、全般的にＡＤＡ陽性動物で低かった。注目すべきことに、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の循環中の濃度が、ＡＤＡの検出に干渉した可能性がある。
【０６４６】
【表１３】
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【０６４７】
分布
タンパク質結合及び組織分布研究は、非臨床的な種におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５については実行しなかった。カニクイザルにおけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＶｓｓは、単回のＩＶ投与の後、およそ０．０３〜０．１Ｌ／ｋｇであったが、これは、ＩｇＧに関して予想される限定された分布と一致する（Lin et al., 1999, J. Pharmacol. Exp. Ther. 288(1):371-378；Mascelli et al., 2007, J. Clin. Pharmacol. 47(5):553-565）。
【０６４８】
代謝
代謝研究は、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５では実行しなかった。糸球体ろ過のカットオフを超える分子量を有する他の治療用タンパク質と同様に、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、主として異化分解によって代謝されると予想される（Lobo et al., 2004, J. Pharm. Sci. 93(11):2645-2668；Mascelli et al., 2007、上記；Vugmeyster et al., 2012, World J. Biol. Chem. 3(4):73-95）。
【０６４９】
薬物動態学的な薬物相互作用
インビトロ又はインビボにおける薬物動態学的な薬物相互作用研究は、行わなかった。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、ＣＸＣＲ５に向けられたヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、インビトロでサイトカイン放出をモジュレートするが、インビボではモジュレートしないことが示されている。サイトカインは、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）酵素及び輸送体の発現を調節することが示されている（Lee et al., 2010, Clin. Pharmacokinet. 49(5):295-310；Mahmood & Green, 2007, J. Clin. Pharmacol. 47(12):1540-1554）。したがって、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５での治療は、ＣＹＰ酵素及び輸送体レベルに影響を与える可能性があり、結果として、これらの酵素又は輸送体の基質である付随する薬物療法剤のクリアランスを調節する。しかし、他の薬物に関して診療施設で観察されたサイトカイン媒介薬物相互作用は、それほど大きくなかったため、結果として共投与された小分子薬物の曝露における変化倍数は２未満であった（Huang et al., 2010, Clin. Pharmacol. Ther. 87(4):497-503；Evers et al., 2013, Drug Metab. Dispos. 41(9):1598-1609）。したがって、いかなる特定の理論に縛られることは望まないが、付随する薬物療法剤が標的発現を変更する場合、それがアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＰＫに影響を与える可能性がある。
【０６５０】
ヒト薬物動態の予測
カニクイザルにおけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＰＫプロファイルは、サルにおけるヒトＩｇＧ１ｍＡｂに典型的なものであった。それゆえ、ヒトにおける予測された２−コンパートメントＰＫパラメーターは、典型的な治療的ＩｇＧ１ｍＡｂの値と同じであると予測され、試験される用量範囲にわたり直線状と仮定される。使用されたＰＫパラメーター値は初期に報告された値と類似していた（Singh et al., 2015, In: Developability of Biotherapeutics: Computational Approaches, S. Kumar, Singh S. Kumar, Eds., CRC Press）。これらのパラメーターは、以下のとおりである：中心体積（central volume：Ｖｃ）は３．２Ｌ、末梢体積（peripheral volume：Ｖｐ）は２．２Ｌ、中心クリアランス（central clearance：ＣＬｃ）は０．２５Ｌ／日、分配クリアランス（distributive clearance：Ｑ）は０．４５Ｌ／日、ＳＣ吸収速度定数（ｋａ）は０．２６１／日、及びＳＣバイオアベイラビリティは６０％。本明細書に示されたデータに基づき、アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の予測されたヒト血清中半減期は、約１７日である。
【０６５１】
ヒトの有効用量の予測
モデルベースのアプローチを採用して、カニクイザルの血清中における、用量と、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５濃度と、Ｂ及びＴｆｈ様細胞のモジュレーションとの間の関係を特徴付けた。その後、リツキシマブのようにＢ細胞上のＣＤ−２０と結合し、Ｂ細胞を枯渇させるヒト化小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）であるＳＢＩ−０８７の公開されたサル及びヒト薬物動態学／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）データを使用して、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＢ細胞枯渇パラメーターをサルからヒトに変換した（Cohen et al., 2016, Clin. Ther. 38(6):1417-1434；Dunussi-Joannopoulos et al., 2008, Ann. Rheum. Dis. 64(Suppl II):190 (Abstr THU0171)）。Ｂ細胞とは異なり、Ｔｆｈ様枯渇に関してヒトデータは入手できなかった；それゆえに、Ｔｆｈ様細胞枯渇の変換を、Ｂ細胞のものに類似していると仮定した。ＳＬＥ患者におけるベースラインのＢ及びＴｆｈ様細胞数（Belouski et al., 2010, Cytometry B Clin. Cytom. 78(1):49-58）並びに予測されたヒト細胞枯渇パラメーターを使用して、ヒトにおけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５投与後のＢ及びＴｆｈ様細胞枯渇速度論をシミュレートした。
【０６５２】
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の予測されたヒトの有効用量は、およそ１０〜３０ｍｇ（ＩＶ）であり、これは、臨床上の効能のために、血液中のＢ細胞をおよそ８週にわたり１μＬ当たり細胞１個以下に枯渇させる必要があるという仮説に基づく。１０〜３０ｍｇ ＩＶの第２の用量後（１日目及び２９日目の用量）のアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５血清濃度を上述したように推測して、予測されたＣｍａｘはおよそ５〜１５μｇ／ｍＬであり、投与間隔ｔａｕにわたる予測された濃度時間曲線下面積（ＡＵＣｔａｕ）はおよそ３８〜１１４μｇ／日／ｍＬであり、予測された平均濃度（Ｃａｖ；ＡＵＣｔａｕ／２８として計算）は１．３６〜４．０６μｇ／ｍＬであった。
【０６５３】
実施例１７  アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の毒物学研究
アフコシル化されたｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を、表１４に示した毒性試験研究の概要において、一連の非臨床的な毒性試験で決定した。静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＣ）投与経路は、臨床的な投与の意図した経路であるため、それらを選択した。この実験で用いたＩＶ及びＳＣ調合物は、５０ｍｇ／ｍＬの本発明の開示のＣＸＣＲ５抗体又は抗原結合フラグメント、２０ｍＭのヒスチジン、８．５％のスクロース及び０．０２％のポリソルベート８０、ｐＨ５．８の０．００５％ＥＤＴＡを含んでいた。これまでに本明細書で論じたように、ヒト又はカニクイザル末梢血単核細胞を使用した試験は、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、ＣＸＣＲ５を発現する細胞と、ヒト及びサル細胞間で同等の親和性で結合し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を同様に開始させることを示した。これまで本明細書でも示されたように、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、マウス、ラット又はウサギＣＸＣＲ５のオーソログと結合しない。したがって、非臨床的な毒性試験はカニクイザルでのみ実行した。
【０６５４】
【表１４】
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【０６５５】
表１４中の略語は、以下のとおりである：ＧＬＰ＝優良試験所基準；ＩＶ＝静脈内；ＯＥＣＤ＝経済協力開発機構；ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞；ＳＣ＝皮下。
【０６５６】
全てのＧＬＰ試験を、データ規格に準拠した加盟国のＯＥＣＤ相互引受けで実行した。全てのインビボの試験を雄及び雌で実行した。特に言及しない限り、全ての用量は、１回投与当たりの体重１ｋｇ当たりのタンパク質のｍｇとして表される。ヒト全血を、１、１０、１００若しくは１０００μｇ／ｍＬ（可溶性相）でアッセイするか、又は、ヒトＰＢＭＣを、１、１０若しくは１００μｇ／ウェル（固相）でアッセイした。
【０６５７】
１７日間にわたり４００ｍｇ／ｋｇ／用量（ＩＶ）までの週１回の投与（合計３回の用量）又は２か月にわたり２００ｍｇ／ｋｇ／用量（ＩＶ）までの２週毎の投与（合計５回の用量）でのＩＶ及びＳＣ試験で、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５をサルに投与した。１７日間の探索的サル試験は、３５２日目にわたる回復期間を含んでいた。ピボタル（ＧＬＰ）の２か月のサル試験は、１１か月の回復期間（４０１日目）を含んでいた。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、インビトロのアッセイでサイトカイン放出を誘発した。これらの試験で確認された標的臓器は血管リンパ管系であった。２か月のサル試験における最大無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、４３日目に、２００ｍｇ／ｋｇ／用量（ＩＶ）の試験された最大用量であり、Ｃｍａｘは５２２０μｇ／ｍＬであり、ＡＵＣ１６８は４３８，０００μｇ・ｈ／ｍＬであった。
【０６５８】
反復投与毒性
探索的及びピボタル反復投与毒性試験を、カニクイザルでアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を用いて実行した。
【０６５９】
探索的毒性研究
探索的非ＧＬＰ試験において、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を、０（ＩＶ、ＳＣビヒクル）、４０（ＩＶ）、２６０（ＳＣ）又は４００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇ／用量で、週１回（合計３回の用量）、サルにＩＶ又はＳＣ注入によって投与し（性別当たり１〜２回／用量）、それに続き、３５２日目までビヒクル、４０（ＩＶ）及び４００（ＩＶ）グループ（性別当たり１回／グループ）で回復期間を設けた。全ての動物が、１７日目又は３５２日目のいずれかにおけるそれらの計画的な剖検まで生存した。試験品に関連した臨床徴候はなく、体重、食物消費又は血清サイトカインへの作用もなかった。
【０６６０】
投与期間中、２又は３日目から始めて、ベースラインと比較した末梢血中の全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及び循環Ｔｆｈ様細胞の減少があり（それぞれ０．００×〜０．０２×、０．００×〜０．０２×及び０．０３×〜０．０９×）、ベースラインからの最大の減少は１７日目に観察された。枯渇の規模は全ての用量で類似していた。脾臓において、全ての用量で、対照と比較して著しく少ない数のＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及び真正Ｔｆｈ細胞数が観察された（それぞれ０．０１８×〜０．１４４×、０．００３×〜０．０３３×及び０．０３７×〜０．２４５×）。末梢血において、２日目に、≧４０ｍｇ／ｋｇ／用量で１匹を除き全ての動物においてリンパ球絶対数の減少（０．３３×〜０．６７×ベースライン）が観察され、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇにおいて、１７日目に、動物において≧４０ｍｇ／ｋｇ／用量で増加（１．１１×〜１．８１×ベースライン）が観察された。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数において、２日目に一時的な減少がみられ（０．０５×〜０．１４×ベースライン）、ほとんどの動物で、６日目までに部分的ないし完全な回復がみられた。脾リンパ小節の細胞充実性において、中程度ないし顕著な減少がみられ；下顎下、腋窩及び鼠径リンパ節において、リンパ小節の細胞充実性の最小の減少がみられ、扁桃において、≧４０ｍｇ／ｋｇ／用量及び２６０ｍｇ／ｋｇ／用量（ＳＣ）で、注入部位において顕微鏡観察レベルの混合性細胞浸潤がみられた。免疫組織化学から、脾臓においてＣＤ２０陽性細胞及びＣＸＣＲ５陽性細胞の非用量依存性の減少、並びに下顎下及び鼠径リンパ節において、ＣＤ２０陽性細胞の減少が示された。リンパ系組織への作用は、末梢血中のＢ細胞及びＴｆｈ様細胞に加えてリンパ球総数における減少と相関しており、ＣＸＣＲ５を発現する細胞を標的とする枯渇性抗体であるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の薬理学的性質と一致する。
【０６６１】
回復期間中、末梢血中のＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞数の減少が１９９日目までに（ゆっくり）増加し、３５２日目の回復期間の終わりに、全ての動物がこれらの細胞型を部分的又は完全に回復させた。ＮＫ細胞及びＩｇＧは、回復期間中、ベースラインの範囲に戻った（図８Ａ〜８Ｄ）。試験品関連の顕微鏡観察レベルの所見（脾臓並びに下顎下及び鼠径のリンパ節のＣＤ２０及びＣＸＣＲ５の免疫組織化学評価を含む）はなく、脾臓において、Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及び真正Ｔｆｈ細胞の数が、ビヒクル対照動物の値に類似しているか又はそれより多かったことから、完全な回復が示唆される。
【０６６２】
いずれの用量でも、血清サイトカインへの、又は、末梢血若しくは脾臓中のＴ細胞、ヘルパーＴ細胞若しくは細胞傷害性Ｔ細胞への作用は観察されなかった。この研究において明らかな抗薬物抗体（ＡＤＡ）は検出されなかった。
【０６６３】
図８Ａ〜８Ｄは、カニクイザルにおける末梢血Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞の枯渇及び再構成を示すグラフである。雄（図８Ａ及び図８Ｃ）及び雌（図８Ｂ及び図８Ｄ）における血液１μｌ当たりの末梢血Ｂ細胞（図８Ａ及び図８Ｂ）及びＴｆｈ様細胞（図８Ｃ及び図８Ｄ）レベルを、探索的毒性試験の３５２日目まで示す。Ｂ細胞をＣＤ３−ＣＤ２０＋と定義した。試験品は免疫表現型検査に使用されるＣＸＣＲ５抗体に干渉するため、Ｔｆｈ様細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ＣＸＣＲ５＋細胞及びＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ９５＋ｈＩｇＧ＋細胞の合計と定義した。雄サルにおけるＢ細胞の過去の範囲（図８Ａ、細胞２７２〜２５０３個／μＬ）及び雌サルにおけるＢ細胞の過去の範囲（図８Ｂ、細胞２３３〜１７００個／μＬ）を、点線で示す。
【０６６４】
ピボタル（ＧＬＰ）毒性試験
ピボタル試験において、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を、０（ＩＶ、ＳＣ）、５（ＩＶ）、２０（ＳＣ）又は２００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇ／用量（合計５回の用量）で２週毎にサル（性別当たり３〜８匹／グループ）にＩＶ又はＳＣ注入によって投与し、それに続き、１１か月の回復期間（４０１日目）を設けた。２２日目（投与期間）及び２５３日目（回復期間）に、サルにキーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）及び破傷風トキソイド（ＴＴ）を注射して、それぞれ一次及び二次Ｔ細胞依存性抗体応答（ＴＤＡＲ）を決定した。動物をＴＴで免疫化したが、試験開始前はＫＬＨ未感作であった。試験開始前（ベースライン）、２２、２５、２９、３６、４３、５８、２５３日目（回復期間の免疫化の前）、２５６、２６０、２６７、２７４及び２８１日目に血液サンプルを収集し、抗ＫＬＨ-ＩｇＭ、抗ＫＬＨ-ＩｇＧ、抗ＴＴ-ＩｇＭ及び抗ＴＴ-ＩｇＧの産生に関して評価した。
【０６６５】
全ての投与期間の動物が、５８日目におけるそれらの計画的な剖検まで生存した。試験品関連の臨床徴候はなく、体重、食物消費、血漿サイトカイン、凝血、臨床化学、ＴＤＡＲ-ＫＬＨパラメーター又は心電図パラメーターへの作用もなかった。この試験における全てのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の所見には、５及び２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶ並びに２０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣでの、末梢血中の血液学的、免疫表現型検査パラメーターにおける有害ではない可逆的な変化、ＴＤＡＲ-ＴＴ ＩｇＧ値における用量とは無関係の減少、並びに雄及び雌の脾臓及び／又はリンパ節における顕微鏡観察レベルの所見及び免疫表現型検査の変化が含まれていた。回復期間中、３３０日目に１匹の対照雌を採血による合併症のために安楽死させた。４０１日目の剖検まで、全ての残りの回復動物が生存した。
【０６６６】
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の血液学的変化には、全ての用量で、一般的に用量とは無関係の軽度ないし中度のリンパ球減少（０．３４×〜０．６０×ベースライン）が含まれ、それにおいて、２日目に最大の発生、それに続くタイムポイントでより低い発生がみられ、これは、全ての用量で個々の動物につき総白血球数の減少（０．２５×〜０．５９×ベースライン）に寄与していた。リンパ球は、回復期間の最初の１〜２か月以内にベースライン及び／又は対照値に近づいた。２日目に、２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶで、及び個々の動物につき、それに続くタイムポイントで、５ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶ及び２０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣで、穏やかに減少した好塩基球（０．１７×〜０．５０×）もみられ、それに続き、回復期間の最初の１〜３か月以内の回復、及び６日目における２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶで、雌において一時的な最低限に減少した（０．７９×〜０．８２×）赤血球質量（ヘモグロビン、赤血球数及びヘマトクリット）がみられた。
【０６６７】
２日目もの早期に、全ての動物及び用量グループにおいて、ベースラインと比べて末梢血中の全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞（０．００×〜０．５６×）の著しいアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の減少がみられ、これは投与期間の終わり（５８日目）まで持続し、３９３日目までの回復期間中に動物に投与された５ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶで、ベースラインに戻るか、又はビヒクル対照動物で観察された値の範囲内である各サブセットごとの絶対値を有していた（図９Ａ〜９Ｄ）。また、２日目に、全ての動物においてベースラインに比べて末梢血中のＮＫ細胞数の著しい減少（０．０４×〜０．４６×）もみられた；しかしながら、ほとんどの動物で６日目までに部分的から完全な回収が観察されたが、１つ以上の後続のタイムポイントでＮＫ細胞がベースラインレベル未満のままであり、一部の動物は回復期間の終わりまでにベースラインに戻った。また一部の動物で、２日目に、全Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞の一時的な減少もみられたが（０．４５×〜０．６６×）；これらの細胞集団は、動物の大部分で６日目までに、全ての動物で３６日目までに、ベースラインレベルに戻った。いずれの用量でも、インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αにおいてアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の変化はみられなかった。
【０６６８】
脾リンパ小節の、並びに腋窩及び腸間膜リンパ節並びに消化管関連リンパ系組織（ＧＡＬＴ）におけるリンパ小節の、アフコシルｈ１１Ｇ２ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の用量とは無関係の減少した細胞充実性が、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶ及び２０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣで観察された。これは、免疫組織化学によって決定した脾臓中のＣＤ２０＋及びＣＸＣＲ５＋細胞のリンパ球の濾胞性細胞充実性の減少と関連していたが、２０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣでの１匹の雄は例外であった；しかしながら、この動物におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５曝露は、１５日目以降、ＡＤＡの罹患率による影響を受けていた可能性がある。加えて、５８日目の剖検で、脾臓中においてビヒクル対照と比較してより少ない数のＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ細胞がみられた。一部の動物は、脾臓中において対照と比較してより少ないＮＫ細胞数を有していた。４０１日目の回復の最後に、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が投与された全ての動物における検査された各サブセットの絶対値は、ビヒクル対照グループにおける動物の値の範囲内であったことから、投与期間中に観察されたアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連のより少ない数からの回復が示される。
【０６６９】
脾臓中のより少ない数のＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ細胞に伴う、脾臓及びリンパ節中のリンパ小節における減少したリンパ系細胞充実性は、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶ及び２０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣでの、末梢血中の、全リンパ球並びにＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞における減少と相関していた。回復期間の終わりに（４０１日目）、５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ用量グループにおいてアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の顕微鏡観察レベルの所見はみられなかった。これは完全な回復を示す。これらの所見は、ＣＸＣＲ５を発現する細胞を枯渇させると予測されるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の薬理学と一致する。末梢血及び／又は脾臓におけるより少ない数のＮＫ細胞は、ＮＫエフェクター細胞の致死に起因する可能性があり、これは、抗体依存性細胞傷害性後のＮＫ細胞（Warren et al., 2011, J. Immunol. Meth. 370:86-92）及び／又は組織再分配で説明されている；しかしながら、他のメカニズムも除外できない。
【０６７０】
キーホールリンペットヘモシニアン（ＫＬＨ）に対する一次Ｔ細胞依存性抗体応答（ＴＤＡＲ）へのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の作用はみられなかった。全てのグループで、抗ＫＬＨ−免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ及びＩｇＧ応答が観察された。全てのサルが、研究開始前に破傷風トキソイド（ＴＴ）に対するワクチンを接種していた。全ての用量グループ中の全ての動物で、増加したＩｇＭ及びＩｇＧメモリー応答が観察された。免疫化後７、１４、２１及び３６日で、５ＩＶ、２０ＳＣ及び／又は２００ＩＶ ｍｇ／ｋｇ／用量グループ中の雄及び雌動物の両方において、ＴＴに対する二次ＴＤＡＲ（ＩｇＧ力価中央値）におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の、用量とは無関係の減少が観察された。免疫化後７日で、５及び２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶグループにつき、グループ平均の抗ＴＴ ＩｇＧ抗体における統計学的に有意な減少が観察された。
【０６７１】
回復期間の免疫化後、５ｍｇ／ｋｇのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５用量グループ中の全ての動物において、ビヒクル対照グループの範囲内の１つ以上のタイムポイントで、抗ＫＬＨ ＩｇＭ及びＩｇＧメモリー応答がみられた。回復期間中の免疫化後７日で、５ｍｇ／ｋｇ用量グループの動物で観察されたグループの抗ＴＴ−ＩｇＧ力価中央（ＣＰＴ）値において、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の統計学的に有意な減少がみられた。全ての回復期間の動物のＣＰＴ値は、対照グループの範囲内であったが、５ｍｇ／ｋｇ用量グループ中の８匹の動物のうち２匹が、回復期間中のＴＴ免疫化後の２８日までの全ての時点で、対照範囲より低いＣＰＴ値を有していた。投与又は回復期間中のアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５投与に起因する抗ＴＴ ＩｇＭ値における変化はみられなかった。
【０６７２】
全てのグループにおいて抗ＫＬＨ ＩｇＭ及びＩｇＧ一次応答がみられた；５及び２００ｍｇ／ｋｇ／用量グループ中の一部の動物は、一次免疫化後のある時点で、対照の範囲を超えるＣＰＴを有していた。いずれの時点でも、グループのいずれにおいてもグループ平均の抗ＫＬＨ ＩｇＭ又はＩｇＧ抗体で統計学的に有意な差はみられなかった。個々の動物の変化は散発的であり、用量依存性が欠如し、グループのＣＰＴ値が対照動物の範囲内であったため、それらはアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連とみなさなかった。回復期間中、全ての動物は対照の範囲内であったが、５ｍｇ／ｋｇ用量グループ中の８匹の動物のうち１匹が、ＫＬＨ免疫化後１４、２１、及び２８日において対照の範囲をわずかに下回るＣＰＴ値を有していた。これらのデータ（用量又は回復期間）は、全てのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が投与された動物（雄と雌の両者）が、対照動物と類似して、ＫＬＨ免疫化に対する一次ＩｇＭ及びＩｇＧ応答を起こすことが可能であったことを示す。
【０６７３】
免疫表現型検査によって検出された、末梢血中の全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞、Ｔｆｈ様細胞及びＮＫ細胞における著しい減少、脾臓中のＢ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ細胞の著しく少ない数、リンパ球数の減少、並びに脾臓、リンパ節及びＧＡＬＴにおける減少したリンパ系細胞充実性にもかかわらず、全ての所見は、関連する臨床徴候の欠如及び一次ＴＤＡＲへの作用がないために不都合ではなかった。全白血球、好塩基球及び赤血球パラメーターにおける減少を含む他の血液学的な所見は、限定的な重症度及び顕微鏡観察レベルの相関の欠如のために有害ではなかった。４０１日目にアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の顕微鏡観察レベル及び免疫組織化学的な所見は記録されなかった。これは完全な回復を示す。
【０６７４】
２か月にわたり隔週のＳＣ又はＩＶ投与後のサルにおけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のＮＯＡＥＬは、２００ｍｇ／ｋｇ／用量であった。ＮＯＡＥＬにおける全身曝露（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ１６８）は、それぞれ、５２２０μｇ／ｍＬ及び４３８，０００μｇ・ｈ／ｍＬであった。この研究において抗アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５抗体が検出された。そのデータは、本明細書の他所に要約される。反復投与毒性プログラムで記された標的臓器毒性のリスク査定は、本明細書の他所に提供される。サルにおける主要な応答に関連するアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の閾値濃度は、本明細書の他所に見出すことができる。
【０６７５】
生殖及び発達毒性
カニクイザルにおける反復投与毒性研究で評価された雄又は雌の生殖組織における試験品関連の作用はみられなかった。
【０６７６】
局所忍容性
アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を用いた独立した局所忍容性研究は実行されなかったが、インビボでの毒性研究において、注入部位を肉眼及び顕微鏡で検査した。
【０６７７】
探索的サル研究において、対照動物のＳＣ注入部位における最小ないし軽度の浸潤と比較して、２６０ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣ注入部位に、中程度の血管周囲の混合性白血球細胞浸潤（単核白血球、好中球及びより少数の好酸球）がみられた。２６０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣの雄において、浸潤は多病巣的に小血管の筋層に拡大した。２６０ｍｇ／ｋｇ／用量のＳＣ雌において、数々の多核化された巨細胞が皮下のコラーゲンに浸潤し、これらの細胞において、細胞質内の好塩基性又は好酸球の線維性物質断片がみられた。２か月のピボタルサル試験において、ＩＶ及びＳＣ投与部位における顕微鏡観察レベルの所見は、試験品関連とみなさなかった。
【０６７８】
抗原性
カニクイザルにおける反復投与毒性研究でＡＤＡレベルを測定することによって、免疫原性を査定した；これらのデータは、これまでに本明細書に記載される。
【０６７９】
免疫毒性
インビトロ及びインビボの研究は、免疫系へのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の作用を特徴付けた。２つの異なるインビトロの様式、すなわち全血を使用した可溶性相アッセイ、並びに固定されたアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５及び末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用した固相アッセイを使用したヒトサイトカイン放出アッセイで、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のサイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６及びＩＦＮ−γ）の放出を誘発する可能性を決定した。８人の健康なヒトドナーからのサンプルを、これらの様式のそれぞれにおいて評価した。両方のサイトカイン放出アッセイ様式において、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５によって誘発されたサイトカイン放出（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、及びＩＦＮ−γ）が観察された。インビボで、サルにおける反復投与探索的及びピボタル毒性試験は、インビボでのサイトカイン放出プロファイル、加えて免疫系細胞及び組織へのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の作用を特徴付けた。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、インビボでサイトカインを誘発しなかった。リンパ球、Ｂ細胞、ＣＸＲ５＋Ｂ細胞及びＴｆｈ／Ｔｆｈ様細胞の枯渇が、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が投与されたサルの末梢血及び脾臓で観察された。これは、本明細書で記載されたとおりであり、その作用はＣＸＣＲ５を枯渇させる抗体の予測される作用機序と一致する。探索的及びピボタル毒性試験における回復期間後、脾臓及びリンパ節におけるリンパ球パラメーターは、ビヒクル対照と同等であった。
【０６８０】
それぞれＫＬＨ及びＴＴに対する一次及び二次ＴＤＡＲ応答を、本明細書で論じられたとおり２か月のピボタル毒性試験で評価した。ＫＬＨに対する一次ＴＤＡＲへのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の作用はみられなかった。投与及び回復期間中に、免疫化後７日で、ＴＴに対する二次ＴＤＡＲ応答を起こしたが、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の減少を起こさなかった全ての動物が、５及び２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶグループの力価中央値で観察された。
【０６８１】
組織交差反応性（ＴＣＲ）
複数回の試行及び方法を含む大規模な予備的な方法開発作業を、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を用いた予備的な染色方法研究で実行した。これらのアッセイ条件のうち、予測される細胞及び組織で膜染色を一貫して示したものはなかった。ＧＬＰに準拠した組織交差反応性研究において、ビオチン化アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５（アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５−Ｂｉｏ；１及び５μｇ／ｍＬ）のカニクイザル及びヒト組織の低温切開片への結合を評価した。染色パターンがカニクイザル組織とヒト組織とでオーバーラップした。ヒトとサルの両者に共通する染色が、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の予測される反応性を代表する、単核細胞、網内皮細胞、様々な上皮、グリア細胞及び／又は下垂体細胞で観察され（Breitfeld et al., 2000, J Exp Med 192(11):1545-1552；Carlsen et al., 2002, Gut 51(3):364-371；Flynn et al., 2003, J. Neuroimmunol. 136(1-2):84-93；Schaerli et al., 2000, J. Exp. Med. 192(11):1553-1562；Schmutz et al., 2005, Arthritis Res. Ther. 7(2):R217-R229）、加えて甲状腺コロイドでも観察された。陽性アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５染色は、他のサル又はヒト組織で観察された。ヒト組織について、視神経及び脊髄神経根中のニューロンの神経線維、前立腺の平滑筋細胞、精巣の間質性細胞、並びに目の水晶体線維で染色が観察された。
【０６８２】
カニクイザルでのみ染色された組織は、骨髄中の造血細胞前駆体細胞、皮膚及び子宮頸の肥満細胞、脳及び脊髄中の神経網、心筋細胞、並びに胎盤及び視神経鞘中の紡錘細胞であった。これは試験品の予想外の交差反応性を表す可能性があるが、染色は本来、細胞質内であり、微細解剖学的な特異性はなく、明確な原形質膜染色を欠如していた。このような細胞質内染色は、ＣＸＣＲ５を発現する細胞及び組織とそれを発現しないものとの区別を不十分にする。細胞質内染色は、インビボで試験品に接触可能ではないと予測され、一般的に、毒物学的な有意性はほとんどないか全くないとみなされる（Hall et al., 2008, In: Preclinical Safety Evaluation of Biopharmaceuticals: A Science-Based Approach to Facilitating Clinical Trials, p. 208-240, Cavagnaro, J.A., ed., Wiley-Interscience; Leach et al., 2010, Toxicol. Pathol. 38(7):1138-1166）。明確な膜染色の欠如は、十分な評価を作成するためのロバストな方法が入手できないことを示唆する。２か月の反復投与毒性研究で不利な所見がなかったことは、エクスビボの組織交差反応性研究で観察された染色がインビボでの作用に変換されないことを裏付ける。ロバストなＴＣＲ方法を得るために多数の試みがなされたが、観察された結合は、意図した薬理学に基づき予測されるものを超える安全性の懸念を生じなかった。
【０６８３】
所見の薬物動態学との関係
２か月にわたり２週毎（合計５回の用量）の５（ＩＶ）、２０（ＳＣ）又は２００（ＩＶ）ｍｇ／ｋｇ／用量の用量での雄及び雌サルへのＳＣ又はＩＶ投与の後に、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の血清濃度を決定した。用量グループにわたり全身曝露における明らかな性別関連の差はみられなかった；それゆえに、グループ平均ＴＫパラメーターは、雄及び雌カニクイザルの組み合わせたデータを使用して提示される。全身曝露は反復投与後により高く、累積比率（試験４３日目／試験１日目）はおよそ１．４〜１．７であった。さらに、全身曝露は、ＩＶ投与後、用量に比例して増加した。ＳＣ投与後、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５のバイオアベイラビリティは、＞５０％と推測された。
【０６８４】
表１５に、主要な応答に関連するアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の血清閾値濃度及びこれらの主要な応答に対して計算された曝露の限界点を提供する。
【０６８５】
【表１５】
2021503888.tif 000018
【０６８６】
表１５で使用される略語は、以下のとおりである：ＡＵＣ＝濃度−時間曲線下面積；Ｃａｖ＝平均濃度；Ｃｍａｘ＝最大（平均）血漿濃度；Ｔｆｈ様細胞（あるいは、ｃＴｆｈ）；ＣＸＣＲ５＝ケモカイン受容体５型；ＧＡＬＴ＝消化管関連リンパ系組織；ＩｇＧ＝免疫グロブリンＧ；ＩＶ＝静脈内；ＮＫ＝ナチュラルキラー；ＮＯＡＥＬ＝最大無毒性量；ＳＣ＝皮下；ＴＤＡＲ＝Ｔ細胞依存性抗体応答；Ｔｆｈ＝濾胞性ヘルパーＴ細胞；ＴＴ＝破傷風トキソイド；ＷＢＣ＝白血球。
【０６８７】
反復投与研究において、Ｃｍａｘ値は平均血漿濃度を示す。Ｃａｖ値は、ＡＵＣをサンプリング間隔（４８又は１６８時間）で割ることによって計算される。報告した値は、投与期間の終わりの近くで得られた。
【０６８８】
動物毒性試験におけるＣａｖ値を、予測されたヒトの有効用量である３０ｍｇ（ＩＶ）における予測されたヒトＣａｖである４．０６μｇ／ｍＬで割ることによって、曝露の限界点を計算した。
【０６８９】
標的臓器への毒性
実行された非臨床研究に基づき、血管リンパ管系（脾臓、リンパ節、ＧＡＬＴ、扁桃、循環性リンパ球、白血球、赤血球パラメーター、インビトロでのサイトカイン放出）を、可能性のある標的臓器／組織として確認した。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５を用いて実行された１７日の非ピボタルサル試験において、これらの組織における試験品関連の変化は、２か月のピボタル毒性試験で観察されたものと一致していた。全てのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の所見は、非ピボタル及びピボタル毒性試験における回復期間中、ベースライン又はビヒクル対照グループ値に完全又は部分的に戻った。いかなる臨床的な所見又は日和見感染もなかったこと、及びＴＤＡＲアッセイによって測定した免疫機能への影響が最小であったことから、有害とみなされる試験品関連の作用はなかった。それゆえに、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の作用に関するサルにおける２００ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶのＮＯＡＥＬを確立した。
【０６９０】
血管リンパ管系
カニクイザルにおける反復投与毒性試験において、試験２日目から始めて、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量（ＩＶ）及び２０ｍｇ／ｋｇ／用量（ＳＣ）の用量で、末梢血リンパ球におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の減少が観察された。これらの減少は、全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞における観察された減少と相関しており、これは５７日目まで持続した。これらのリンパ球サブセットにおける減少は、探索的毒性試験における回復期間の終わりまでにベースライン値に完全又は部分的に戻ったことを示した。２日目から始めて、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量でのＮＫ細胞、全Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及び細胞傷害性Ｔ細胞におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の減少もみられたが、投与期間の終わりまでにベースライン値への部分的から完全な戻りが達成された。末梢血中のリンパ球集団における減少に加えて、６日目に２００ｍｇ／ｋｇ／用量が投与された雌サルでＲＢＣ質量における一時的な最小の減少が観察された。
【０６９１】
末梢血中の減少したリンパ球集団は、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量での脾臓及びリンパ節におけるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連のより低いリンパ系細胞充実性と相関していた。より低いリンパ系細胞充実性は、より少ない数の全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞、真正Ｔｆｈ細胞、及びＮＫ細胞、並びに脾臓中のより少ない濾胞性ＣＤ２０＋及びＣＸＣＲ５＋細胞に反映された。より低い濾胞性リンパ系細胞充実性は、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量でのリンパ節及びＧＡＬＴ並びに≧４０ｍｇ／ｋｇ／用量での扁桃で観察された。
【０６９２】
探索的及びピボタル毒性試験における回復期間後、脾臓及びリンパ節におけるリンパ球パラメーターは、ビヒクル対照と同等であった。
【０６９３】
全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞及びＴｆｈ／Ｔｆｈ様細胞における減少は、ＣＸＣＲ５を発現する細胞を枯渇させることが予測されるアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の予測される作用機序と一致する。末梢血及び脾臓におけるより少ないＮＫ細胞数は、ＡＤＣＣ後にＮＫ細胞で起こることが分かっているエフェクター細胞の致死に起因する可能性がある。
【０６９４】
リンパ球パラメーターにおける減少がアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５が投与されたサルの末梢血及び脾臓で観察されたが、ＫＬＨに対する一次ＴＤＡＲへのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の作用はみられなかった。全ての動物がＴＴに対する二次ＴＤＡＲを起こしたが、≧５ｍｇ／ｋｇ／用量の用量で統計学的に有意な減少が観察された。
【０６９５】
全てのアフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５関連の所見は、関連する臨床徴候又は日和見感染がないために不都合ではないとみなされた。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５の末梢血リンパ球、全Ｂ細胞、ＣＸＣＲ５＋ Ｂ細胞、Ｔｆｈ様細胞及びＮＫ細胞への効果、並びに、一次及び二次ＴＤＡＲ応答は、診療施設において、ヒトでモニターすることができる。
【０６９６】
可溶性及び固体のインビトロのサイトカイン放出アッセイ様式の両方において、アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５によって誘発されたサイトカイン放出（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６及びＩＦＮ−γ）が観察された。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５によって誘発されたインビトロでのサイトカイン放出は、この分子の予測される薬理学に起因することが予想される。アフコシルｈ１１Ｇ２ ＸＣ１５４／ＸＣ１５５は、探索的又はピボタルのインビボのサル試験においてサイトカイン放出を誘発しなかった。血清サイトカイン及び全身性サイトカイン放出の臨床的なインジケーターは、診療施設で容易にモニターされる。
【０６９７】
【表１６−１】
2021503888.tif 000019
【０６９８】
【表１６−２】
2021503888.tif 000020
【０６９９】
【表１６−３】
2021503888.tif 000021
【０７００】
【表１６−４】
2021503888.tif 000022
【０７０１】
【表１６−５】
2021503888.tif 000023
【０７０２】
【表１６−６】
2021503888.tif 000024
【０７０３】
【表１６−７】
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【０７０４】
【表１６−８】
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【０７０５】
【表１６−９】
2021503888.tif 000027
【０７０６】
【表１６−１０】
2021503888.tif 000028
【０７０７】
【表１６−１１】
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【０７０８】
【表１６−１２】
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【０７０９】
【表１６−１３】
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【０７１０】
開示された教示は、様々な適用、方法、キット、及び組成物を参照して記載されているが、本明細書に記載の教示及び以下の特許請求された発明から逸脱することなく様々な変更及び改変をほどこすことができることが理解されると予想される。前述の例は、開示された教示をよりよく例示するために提供され、本明細書で示された教示の範囲の限定を意図していない。本発明の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されるが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーション及び改変が、余計な実験を行うことなく可能であることを容易に理解するものと予想される。全てのこのようなバリエーション及び改変は、本教示の範囲内である。
【０７１１】
特許、特許出願、論文、教本などを含む本明細書において引用された全ての参考文献、及びそこで引用された文献は、それらがまだそうではない程度に、あらゆる目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。組み入れられた文献及び類似の資料の１つ以上が本出願とは異なるか又は矛盾する場合、これらに限定されないが、定義された用語、用語の使用、記載された技術などを含め本出願が優先される。
【０７１２】
本発明の範囲又は本質から逸脱することなく本発明において様々な改変及びバリエーションをなすことができることが当業者には明らかであると予想される。本発明の他の実施形態は、本明細書で開示された発明の詳細と実施の考察から当業者には明らかであると予想される。明細書及び例は、単なる例示とみなされることが意図され、本発明の真の範囲及び本質は、以下の特許請求の範囲により示される。
【図１】
2021503888.tif 000032
【図２Ａ】
2021503888.tif 000033
【図２Ｂ】
2021503888.tif 000034
【図２Ｃ】
2021503888.tif 000035
【図２Ｄ】
2021503888.tif 000036
【図２Ｅ】
2021503888.tif 000037
【図２Ｆ】
2021503888.tif 000038
【図２Ｇ】
2021503888.tif 000039
【図３】
2021503888.tif 000040
【図４Ａ】
2021503888.tif 000041
【図４Ｂ】
2021503888.tif 000042
【図４Ｃ】
2021503888.tif 000043
【図４Ｄ】
2021503888.tif 000044
【図５】
2021503888.tif 000045
【図６】
2021503888.tif 000046
【図７】
2021503888.tif 000047
【図８】
2021503888.tif 000048
【図９Ａ】
2021503888.tif 000049
【図９Ｂ】
2021503888.tif 000050
【図９Ｃ】
2021503888.tif 000051
【図９Ｄ】
2021503888.tif 000052
【配列表】
2021503888000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年10月16日(2020.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７０６】
【表１６−１０】
2021503888.tif 000053
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７０７】
【表１６−１１】
2021503888.tif 000054
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2021503888000001.app
【国際調査報告】
2021503888.tif 000055
2021503888.tif 000056
2021503888.tif 000057
2021503888.tif 000058
2021503888.tif 000059
2021503888.tif 000060
2021503888.tif 000061