(57)【要約】リン酸化タウおよび脱リン酸化タウに結合する抗体および抗原結合性断片ならびにアルツハイマー病および他のタウオパチーの検出および処置における使用方法が、本明細書に開示される。また、ヒト対象におけるアルツハイマー病のステージを決定するため、および抗タウ療法の有効性をモニタリングするための方法も含まれる。アルツハイマー病および他のタウオパチーの検出、モニタリング、防止、および／または処置のための抗体、組成物、キット、および方法が本明細書に開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、
ＨＣＤＲ１が、配列番号１、または５位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、
ＨＣＤＲ２が、配列番号２、または１位、４位、５位、６位、および８位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、
ＬＣＤＲ１が、配列番号４、または２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５、または３位に置換を有する配列番号５のアミノ酸配列を含み、
ＬＣＤＲ３が、配列番号６、または４位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含む、
抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ＨＣＤＲ１の５位の前記置換がグリシンであり、ＨＣＤＲ１の６位の前記置換がグリシンであり、
ＨＣＤＲ２の１位の前記置換がバリンであり、ＨＣＤＲ２の４位の前記置換がアラニンであり、ＨＣＤＲ２の５位の前記置換がグリシンであり、ＨＣＤＲ２の６位の前記置換がセリンであり、ＨＣＤＲ２の８位の前記置換がバリンであり、
ＬＣＤＲ１の２位の前記置換がアスパラギンであり、
ＬＣＤＲ２の３位の前記置換がグリシンであり、ならびに／または
ＬＣＤＲ３の４位の前記置換がアルギニンであり、および／もしくはＬＣＤＲ３の６位の前記置換がトレオニンである、
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
ＨＣＤＲ１が、５位に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、
ＨＣＤＲ２が、８位に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、
ＨＣＤＲ３が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、
ＬＣＤＲ１が、２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、
ＬＣＤＲ２が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、および／または
ＬＣＤＲ３が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、
請求項１または２に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
ＨＣＤＲ１の５位の前記置換がグリシンであり、
ＨＣＤＲ２の８位の前記置換がバリンであり、および／または
ＬＣＤＲ１の２位の前記置換がアスパラギンである、
請求項３に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４１のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４２のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項７】
ＨＣＤＲ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
前記重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
前記重鎖可変領域が配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号４４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号４６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号４８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号５５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９８のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
前記重鎖可変領域が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１１】
タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記重鎖可変領域が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１３】
タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記重鎖可変領域が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１５】
タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）への結合について、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体と競合することができる抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体によって結合されるタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上の同じエピトープに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上のエピトープに結合することができ、前記エピトープがリン酸化されている、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
タウ上の前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含む、請求項１７に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１９】
タウ上の前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む、請求項１７または１８に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２０】
前記１つまたは複数のリン酸化された残基が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位にホスホ−トレオニンを含む、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２１】
前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含む、請求項２０に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２２】
前記エピトープが、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２の配列）を含む、またはそれからなる、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
前記エピトープが、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１の配列）を含む、またはそれからなる、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２４】
前記抗体が、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体であるか、または請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体と結合について競合する、請求項１７から２３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２５】
タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２６】
タウ上の前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含む、請求項２５に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２７】
タウ上の前記エピトープが、ＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰ（配列番号１４の配列）を含み、必要に応じて、前記エピトープ上の残基の１つまたは複数がリン酸化されており、必要に応じて、前記リン酸化がタウタンパク質２Ｎ４Ｒの１６９位にリン酸化トレオニンを含む、請求項２５または２６に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２８】
タウ上の前記エピトープが、ＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰ（配列番号１４の配列）からなる、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２９】
前記抗体が、請求項１３から１４に記載の抗体であるか、または請求項１３から１４に記載の抗体と結合について競合する、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３０】
重鎖定常領域と軽鎖定常領域とをさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３１】
ヒトＩｇＧアイソタイプ重鎖定常領域を含む、請求項３０に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３２】
前記ヒトＩｇＧアイソタイプが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプまたはヒトＩｇＧ４アイソタイプである、請求項３１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３３】
ヒトカッパ軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１から３２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３４】
齧歯類抗体またはその抗原結合性断片、キメラ抗体またはその抗原結合性断片、ＣＤＲ移植抗体またはその抗原結合性断片、およびヒト化抗体またはその抗原結合性断片から選択される、請求項１から３０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３５】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、またはＦｖ断片である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３６】
第２の薬剤にコンジュゲートされている、請求項１から１２３５１のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３７】
前記第２の薬剤が、少なくとも１つの検出可能な標識である、請求項３６に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３８】
前記少なくとも１つの検出可能な標識が、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、ビオチン、核磁気共鳴マーカー、または重金属を含む、請求項３７に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３９】
前記少なくとも１つの検出可能な標識が、放射性同位体またはビオチンを含む、請求項３８に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４０】
前記第２の薬剤が、アルツハイマー病または別のタウオパチーのための少なくとも１つの治療剤を含む、請求項３６に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４１】
請求項１から３５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片の免疫グロブリン鎖の少なくとも１つの可変領域をコードする単離された核酸。
【請求項４２】
請求項４１に記載の核酸を含む単離されたベクター。
【請求項４３】
請求項４１に記載の核酸および／または請求項４２に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
【請求項４４】
タウに結合することができる抗体またはその断片を生産する方法であって、前記抗体またはその断片を生産するのに十分な条件下で請求項４３に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項４５】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体および／または希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項４６】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の２つまたはそれより多い抗体または抗原結合性断片を含む、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
アルツハイマー病または別のタウオパチーを処置するための少なくとも１つのさらなる治療剤をさらに含む、請求項４５または４６に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
対象におけるアルツハイマー病または別のタウオパチーを処置する、その進行を遅延させる、またはその進行を防止する方法であって、前記対象に、請求項１から４０のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体または請求項４５から４７のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項４９】
アルツハイマー病を処置する、その進行を遅延させる、またはそれを防止することを必要とする対象に前記抗体または抗原結合性断片を投与することによって、アルツハイマー病を処置する、その進行を遅延させる、またはそれを防止するための医薬の製造における、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片または請求項４５から４７のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項５０】
対象におけるタウオパチーを検出する方法であって、
前記対象から生体試料を取得すること、
前記試料と、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片の有効量とを接触させること、および
前記試料中のタウへの前記抗体または抗原結合性断片の結合を検出すること、
それによって、前記対象中のタウオパチーを検出すること
を含む、方法。
【請求項５１】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片が、検出可能な標識をさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
対照試料または閾値と比較した、前記抗体または抗原結合性断片と複合体化したタウの存在および／または量の増加が、前記対象におけるタウオパチーを示し、必要に応じて、前記タウオパチーがアルツハイマー病である、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
対象におけるタウオパチーを検出する方法であって、
前記対象から生体試料を取得すること、
前記試料と、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片（「第１の抗体」）の有効量とを接触させること、および
前記生体試料と、タウとの複合体を形成することができる分子とを接触させることであって、必要に応じて、前記分子が、タウに結合することができる第２の抗体または抗原結合断片（「第２の抗体」）である、接触させること、
前記試料中のタウへの前記第１および／または第２の抗体の結合を検出すること、
それによって、前記対象中のタウオパチーを検出すること
を含む、方法。
【請求項５４】
前記第１および／または第２の抗体が、検出可能な標識をさらに含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記第１の抗体がタウに結合して、タウ−抗体複合体を形成し、前記第２の抗体が前記タウ−抗体複合体に結合するか、または前記第２の抗体がタウに結合して、タウ−抗体複合体を形成し、前記第１の抗体が前記タウ−抗体複合体に結合し、
対照試料または閾値と比較した、タウ−抗体複合体の存在および／または量の増加が、前記対象におけるタウオパチーを示す、
請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記第１の抗体が、前記第２の抗体とは異なるタウ上のエピトープに結合する、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１の抗体が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記第１の抗体が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
タウ上の前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位に少なくとも１つのリン酸化された残基を含み、必要に応じて、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含む、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６０】
タウ上の前記エピトープが、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
タウ上の前記エピトープが、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１）を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記第１の抗体が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む、請求項５３から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記第１の抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記第１の抗体が、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、または
前記第１の抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、
請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記第１の抗体が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記第１の抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記第１の抗体が、
配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号８５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または
前記重鎖可変領域が配列番号９３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号９４のアミノ酸配列を含む、
請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記第１の抗体が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項５３から６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記第２の抗体が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項５３から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記第２の抗体が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記第２の抗体が、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、請求項５３から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記第２の抗体が、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記第１および／または第２の抗体が、固相表面または粒子に連結されている、請求項５３から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記粒子がビーズである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ビーズが磁気ビーズである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ビーズが、プラスチックまたは合成ポリマービーズである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記ビーズが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリアミド、ポリウレタン、フェノール系ポリマー、ニトロセルロース、天然由来ポリマー、ラテックスゴム、多糖、ポリペプチド、複合材料、セラミック、シリカもしくはシリカベース材料、炭素、金属もしくは金属化合物、金、銀、スチール、アルミニウム、銅、無機ガラス、またはシリカ材料、あるいはそれらの組合せを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
前記ビーズが、球状、ディスク状、環状、またはキューブのような形状を有する、請求項７４から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記検出可能な標識が、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、ビオチン、核磁気共鳴マーカー、重金属、またはその組合せを含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項８０】
前記検出可能な標識に由来するシグナルを検出することをさらに含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記検出可能な標識がビオチンであり、それが、前記試料と、酵素、好ましくは、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ−ガラクトシダーゼにコンジュゲートされたストレプトアビジンとを接触させることによって検出される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
古典的ＥＬＩＳＡを含む、請求項５０から８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
デジタルＥＬＩＳＡまたは単一分子アレイを含む、請求項５０から８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記試料が、抗体または抗原結合性断片と接触される前に希釈される、請求項５０から８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記試料が、抗体または抗原結合性断片と接触される前に免疫複合体解離に付される、請求項５０から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
免疫複合体解離が、熱および／または酸を前記試料に加えることを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）または血液を含む、請求項５０から８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記試料が、血液の血漿および／または血清画分を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記方法が、前記試料中のリン酸化タウの量を検出し、必要に応じて、前記試料中で検出された前記リン酸化タウが、対照試料中よりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５倍、もしくはそれを超えて高い、および／または必要に応じて、前記試料中で検出された前記リン酸化タウが、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｐｇ／ｍｌの閾値よりも高い、請求項５０から８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記試料中で検出された前記リン酸化タウが、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌの閾値よりも高い、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記閾値が、約１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、または５９０ｐｇ／ｍｌである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記閾値が、約３００ｐｇ／ｍｌである、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記閾値が、約３０５ｐｇ／ｍｌである、請求項９１に記載の方法。  
【請求項９４】
前記閾値が、約２９５ｐｇ／ｍｌである、請求項９１に記載の方法。  
【請求項９５】
前記試料中のリン酸化タウの量と、健康な個体に由来する対照試料中のレベルとを比較することを含み、前記対照を超える前記試料中のリン酸化タウのレベルの増加が、タウオパチーを示す、請求項５０から９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
検出されたタウオパチーがＡＤである、請求項５０から９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記試料中のリン酸化タウの量と、ＡＤ以外の既知のタウオパチーを有する患者に由来する対照試料中の閾値またはレベルとを比較することを含み、前記試料中のリン酸化タウのレベルの増加が、前記対象が別のタウオパチーまたは別の原因の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
対象におけるアルツハイマー病と、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症とを区別する方法であって、
前記対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、
請求項５０から９７のいずれか一項に記載の方法を実施して、前記試料中のリン酸化タウの量を決定すること、および
リン酸化タウのレベルと、対照試料中のレベルまたは閾値とを比較すること、
を含み、
前記対照試料中のレベルまたは閾値と比較した前記試料中のリン酸化タウのレベルの上昇が、前記対象が別のタウオパチーまたは他の原因の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す、方法。
【請求項９９】
前記他のタウオパチーまたは他の原因の認知症が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）またはパーキンソン病（ＰＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、および／もしくは筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの別の神経障害を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記対照試料が、健康な個体またはＡＤ以外の既知のタウオパチーを有する患者に由来する、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記試料中で検出された前記リン酸化タウが、前記対照試料中よりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５倍、またはそれより高い、請求項９８から１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
前記試料中で検出された前記リン酸化タウが、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、９．３、もしくは１０ｐｇ／ｍｌの閾値よりも高いか、または約１００〜６００ｐｇ／ｍｌの閾値よりも高い、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記閾値が、約１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、または５９０ｐｇ／ｍｌである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記閾値が、約３００ｐｇ／ｍｌである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記閾値が、約３０５ｐｇ／ｍｌである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
前記閾値が、約２９５ｐｇ／ｍｌである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０７】
アルツハイマー病のための治療剤を、アルツハイマー病に罹患している対象に投与することを含む、処置の方法であって、前記対象が、請求項５０から１０６のいずれか一項に記載の方法に従ってアルツハイマー病を有すると同定されている、方法。
【請求項１０８】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の１つまたは複数の抗体または抗原結合断片と、アルツハイマー病または別のタウオパチーを有する対象を同定するために前記１つまたは複数の抗体または抗原結合断片を使用するための使用説明書とを含むキット。
【請求項１０９】
請求項１から４０のいずれか一項に記載の２つまたはそれより多い抗体または抗原結合性断片を含む、請求項１０８に記載のキット。
【請求項１１０】
ヒト対象におけるアルツハイマー病または別のタウオパチーを検出する方法であって、前記対象に、放射性同位体にコンジュゲートされた請求項１から３５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を投与すること、および患者の脳内の前記放射性同位体に由来するシグナルを検出することを含み、前記シグナルの検出が、前記対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有することを示す、方法。
【請求項１１１】
検出が、ポジトロン放出断層撮影によって行われる、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記脳内の前記シグナルの分布パターンが、前記対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有することを示す、請求項１１０または１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記抗体または抗原結合性断片が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項１１０から１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記抗体または抗原結合性断片が、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合する、請求項１１０から１１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１５】
タウ上の前記エピトープが、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位に少なくとも１つのリン酸化された残基を含み、必要に応じて、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含む、請求項１１３または１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
タウ上の前記エピトープが、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
タウ上の前記エピトープが、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１）を含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１８】
前記抗体または抗原結合性断片が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む、請求項１１０から１１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、または
ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記抗体または抗原結合性断片が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１１０から１１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
ヒト対象におけるアルツハイマー病のステージを決定する方法であって、
前記対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、
請求項５０から９７のいずれか一項に記載の方法を実施して、前記試料中のリン酸化タウの量を決定すること、および
リン酸化タウのレベルと、既知のＡＤステージの患者に由来する試料中のレベルまたは閾値レベルとを比較すること、
それによって、アルツハイマー病の前記ステージを同定すること
を含む、方法。
【請求項１２６】
前記閾値レベルが、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｐｇ／ｍｌまたは約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
アルツハイマー病のための抗タウ療法の有効性を決定する方法であって、
ヒト対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、
請求項５０から９７のいずれか一項に記載の方法を実施して、前記試料中のリン酸化タウの量を決定すること
を含み、
健康対照対象に由来する試料中のレベルと比較した、および／または閾値レベルと比較した、前記試料中のリン酸化タウのレベルの上昇が、前記対象がアルツハイマー病のための抗タウ療法に応答する可能性がより高いことを示す、方法。
【請求項１２８】
前記閾値レベルが、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０ｐｇ／ｍｌまたは約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
抗タウ療法に応答する可能性がより高いと同定された対象に、前記療法を投与することをさらに含む、請求項１２７または１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記抗タウ療法が、抗タウ抗体、低分子、またはペプチドワクチン療法を含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記抗タウ療法が、タウに結合し、脳からのそのクリアランスを促進する抗体を投与することを含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記抗タウ療法が、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗タウ抗体または抗原結合性断片を投与することを含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
アルツハイマー病のための抗タウ療法の有効性をモニタリングする方法であって、
ａ）処置前にヒト対象から脳脊髄液または血液試料を取得するステップ、
ｂ）請求項５０から９７のいずれか一項に記載の方法を実施して、前記試料中のリン酸化タウの量を決定するステップ、
ｃ）抗タウ療法を前記対象に投与するステップ、
ｄ）前記抗タウ療法を投与した後にステップａ）〜ｂ）を繰り返すステップ
を含み、処置前の前記試料中のレベルと比較した、処置後の前記試料中のリン酸化タウのレベルの減少が、有効な療法を示す、方法。
【請求項１３４】
処置後に取得した試料中のリン酸化タウのレベルが、処置前に取得した前記試料中のレベルと比較して低い対象への抗タウ療法の投与を継続するステップをさらに含む、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
前記抗タウ療法が、抗タウ抗体、低分子、またはペプチドワクチン療法を含む、請求項１３３または１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記抗タウ療法が、タウに結合し、脳からのそのクリアランスを促進する抗体を投与することを含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記抗タウ療法が、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を投与することを含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３８】
抗体ＤＣ２Ｅ７を産生するハイブリドーマであって、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９２の下で寄託されている、ハイブリドーマ。
【請求項１３９】
抗体ＤＣ２Ｅ２を産生するハイブリドーマであって、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９１の下で寄託されている、ハイブリドーマ。
【請求項１４０】
対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）または軽度認知障害（ＭＣＩ）を検出する方法であって、
前記対象に由来する生体試料と、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる請求項１から４０のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片の有効量とを接触させること、
前記タウ−抗体複合体の存在および／または量を検出すること、ならびに
前記試料中の前記抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
前記対照試料または閾値と比較した、前記抗体と複合体化したタウの存在および／または量の増加が、前記対象におけるＡＤまたはＭＣＩを示す、方法。
【請求項１４１】
前記ＭＣＩが、患者におけるＡＤの前兆を示す、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記タウ−抗体複合体の量が、ＭＣＩおよび／またはＡＤと、他の神経疾患とを区別する、請求項１４０または１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記他の神経疾患が、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症から選択される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む、請求項１４０から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記生体試料が、血液を含む、請求項１４０から１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４６】
前記試料が、血液の血漿および／または血清画分を含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
前記抗体と複合体化したタウの増加した量が、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウの閾値を超える量である、請求項１４０から１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記抗体と複合体化したタウの増加した量が、約０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０ｐｇ／ｍｌのタウ、または約１００〜６００ｐｇ／ｍｌのタウの閾値を超える量である、請求項１４０から１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記閾値が、約１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、または５９０ｐｇ／ｍｌである、請求項１４０から１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記閾値が、約３００または３０５ｐｇ／ｍｌである、請求項１４９に記載の方法。  
【請求項１５１】
前記閾値が、約２９５ｐｇ／ｍｌである、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）または軽度認知障害（ＭＣＩ）を検出する方法であって、
前記対象から生体試料を取得すること、
前記生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、ならびに
トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
前記対照試料または閾値と比較した、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量の増加が、前記対象におけるＡＤまたはＭＣＩを示す、方法。
【請求項１５３】
前記ＭＣＩが、患者におけるＡＤの前兆である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
量の増加が、ＭＣＩおよび／またはＡＤと、他の神経疾患とを区別する、請求項１５２または１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
前記他の神経疾患が、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症から選択される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む、請求項１５２から１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５７】
前記生体試料が、血液を含む、請求項１５２から１５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５８】
前記試料が、血液の血漿および／または血清画分を含む、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
タウの増加した量が、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウの閾値を超える量である、請求項１５２から１５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６０】
タウの増加した量が、約０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ｐｇ／ｍｌのタウの閾値を超える量である、請求項１５２から１５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６１】
タウの増加した量が、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌの閾値を超える量である、請求項１５２から１５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６２】
前記閾値が、約１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、または５９０ｐｇ／ｍｌである、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む抗体または抗原結合性断片を使用して検出される、請求項１５２から１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害と、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症とを区別する方法であって、
前記対象に由来する生体試料と、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる請求項１から４０のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片の有効量とを接触させること、
前記タウ−抗体複合体の存在および／または量を検出すること、ならびに
前記試料中の前記抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
閾値の前記対照試料と比較した、前記抗体と複合体化したタウの存在および／または量の増加が、前記対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害を示す、方法。
【請求項１６５】
前記抗体または抗原結合性断片が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害と、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症とを区別する方法であって、
前記対象から生体試料を取得すること、
前記生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、ならびに
トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
前記対照試料または閾値と比較した、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量の増加が、前記対象におけるＡＤまたはＭＣＩを示す、方法。
【請求項１６７】
前記生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む抗体または抗原結合性断片を使用して検出される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
軽度認知障害を有する患者がアルツハイマー病を発症する可能性を予測する方法であって、
対象に由来する生体試料と、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる請求項１から４０のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片の有効量とを接触させること、
前記タウ−抗体複合体の存在および／または量を検出すること、ならびに
前記試料中の前記抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
前記対照試料または閾値と比較した、前記抗体と複合体化したタウの存在および／または量の増加が、前記患者がアルツハイマー病を発症する可能性が高いことを示す、方法。
【請求項１６９】
軽度認知障害を有する患者がアルツハイマー病を発症する可能性を予測する方法であって、
対象から生体試料を取得すること、
前記生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、ならびに
トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較すること
を含み、
前記対照試料または閾値と比較した、少なくともトレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量の増加が、前記患者がアルツハイマー病を発症する可能性が高いことを示す、方法。
【請求項１７０】
前記生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量が、請求項１から１０または１３から１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含む抗体または抗原結合性断片を使用して検出される、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、前記軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号１０６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７２】
前記重鎖可変領域が配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１７１に記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１７３】
対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を処置する方法であって、
請求項５０から９７、１１０から１２４、および１４０から１６３のいずれか一項に記載の方法を使用して、前記対象におけるＡＤを検出すること、ならびに
ＡＤを有すると同定された前記対象に、ＡＤのための処置を投与すること
を含む、方法。
【請求項１７４】
前記処置が、
ａ）抗タウ抗体またはその抗原結合性断片、例えば、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片、
ｂ）アミロイドベータに結合する抗体またはその抗原結合性断片、
ｃ）アミロイドベータおよび／もしくはタウに対する遺伝子療法、ならびに／または
ｃ）例えば、アミノ酸配列がＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳからなる合成ペプチドを含むワクチンを使用する、ペプチドワクチン療法
のうちの１つまたは複数を含む、請求項１７３に記載の方法。
【請求項１７５】
請求項５０から９７、１１０から１２４、および／または１４０から１６３のいずれか一項に記載の方法に従ってアルツハイマー病を有すると同定された患者を処置する方法であって、アルツハイマー病のための処置を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項１７６】
前記処置が、
ａ）抗タウ抗体またはその抗原結合性断片、例えば、請求項１から４０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片、
ｂ）アミロイドベータに結合する抗体またはその抗原結合性断片、
ｃ）アミロイドベータおよび／もしくはタウに対する遺伝子療法、ならびに／または
ｃ）例えば、アミノ酸配列がＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳからなる合成ペプチドを含むワクチンを使用する、ペプチドワクチン療法
のうちの１つまたは複数を含む、請求項１７５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年３月２８日に出願された米国特許出願第６２／６４９，２０８号、２０１８年４月３０日に出願された米国特許出願第６２／６６４，６６２号、および２０１８年７月２５日に出願された米国特許出願第６２／７０３，２９９号に対する優先権を主張し、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
アルツハイマー病および他のタウオパチーの検出、モニタリング、防止、および／または処置のための抗体、組成物、キット、および方法が本明細書に開示される。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶および認知に関与するものなどの、高次脳構造の破壊と関連する進行性の神経変性障害である。この疾患は、認知機能の欠如ならびに記憶、学習、言語の減退、および意図的かつ目的をもった運動を行う能力の減退をもたらす。ＡＤはまた、行動、感情、個人間、および社会機能の同時的悪化も伴う。これらの認知欠如および行動欠如は、生活を困難にする（Burns  et  al.,  Alzheimer's  disease,  The  Lancet,  vol.  360,  Jul.  13,  2002）。後期ＡＤ患者は、話すこと、言葉を理解すること、および自身の基本的な身の回りの世話を行うことができないことが多く、最終的には、２４時間の介護および監視を必要とし、家族メンバーおよび介護施設に依存することが多い。ＡＤは、老年性認知症の主因であり、集団における高齢者の割合が大きくなるにつれて有病率が増大すると予測される。ＡＤを有する人の総数は、２０００年から２０５０年の間で少なくとも３倍増加すると予測されており、ＡＤを、世界的な公衆衛生問題となっている（Sloane  et  al.,  The  Public  Health  Impact  of  Alzheimer's  Disease,  2000-2050:  Potential  Implication  of  Treatment  Advances,  Annu.  Rev.  Public  Health,  23:213-31,  2002）。ＡＤの臨床的検出、管理、および処置は、大部分が不十分なままである。ＡＤを検出および処置するための有効な方法に対する依然として満たされない必要性が存在する。
【０００４】
ＡＤは組織学的に、脳切片を分析して、脳内の神経外プラークならびに細胞内および細胞外神経原線維変化の存在を同定することによって、病理学的に特徴付けられている。プラークは主にβアミロイド（Ａβ）から構成されるが、原線維変化は、タウ配座異性体およびその凝集体などの、病理学的形態のタウを含む。プラークと原線維変化との関係および疾患プロセスは、依然として不明であるが、研究は、アミロイドとタウ病原性との関連を示唆している（Hardy  et  al.,  Genetic  dissection  of  Alzheimer's  disease  and  related  dementias:  amyloid  and  its  relationship  to  tau,  Nature  Neuroscience,  vol  1,  No.  5,  1998；Oddo  et  al.,  Aβ  Immunotherapy  Leads  to  Clearance  of  Early,  but  Not  Late,  Hyperphosphorylated  Tau  Aggregates  via  the  Proteasome,  Neuron,  43:321-332,  2004；Rapoport  et  al.,  2002;  Roberson,  et  al.,  Reducing  Endogenous  Tau  Ameliorates  Amyloid  β-Induced  Deficits  in  an  Alzheimer's  Disease  Mouse  Model,  Science,  316:750,  2007；Shipton  et  al.,  Tau  Protein  Is  Required  for  Amyloid  β-Induced  Impairment  of  Hippocampal  Long-Term  Potentiation,  J.  Neuroscience,  31(5):1688-1692,  2011）。ＡＤ病理におけるＡβの中心的な役割は、Ａβ沈着の後、タウがリン酸化され、原線維変化が形成され、次いで、神経細胞死が起こる、「Ａβカスケード」と呼ばれる仮説で最初に提唱された（Hardy  and  Allsop,  Amyloid  deposition  as  the  central  event  in  the  aetiology  of  Alzheimer's  disease,  TiPS,  vol  12,  1991；Hardy  and  Selkoe,  The  Amyloid  Hypothesis  of  Alzheimer's  Disease:  Progress  and  Problems  on  the  Road  to  Therapeutics,  Science,  vol  297,  2002；概説については、Walsh  and  Selkoe,  Deciphering  the  Molecular  Basis  of  Memory  Failure  in  Alzheimer's  Disease,  Neuron,  44:181-193,  2004を参照されたい；また、Seabrook  et  al.,  Beyond  Amyloid  the  Next  Generation  of  Alzheimer's  Disease  Therapeutics,  Molecular  Intervention,  7(5),  2007も参照されたい）。
【０００５】
したがって、ＡＤのための治療手法は、Ａβおよびタウに焦点を合わせることが多く、これらの標的に関する多くの研究は現在も続いている。ＡＤ患者における臨床試験を受けている最も進行した疾患標的化療法としては、Ａβ除去のためのＢＡＮ２４０１、ＡＤＵＣＡＮＵＭＡＢ、ＧＡＮＴＥＮＥＲＵＭＡＢおよびＣＲＥＮＥＺＵＭＡＢなどの受動免疫療法；タウタンパク質を標的とするＣ２Ｎ  ８Ｅ１２、ＲＯ  ７１０５７０５およびＢＩＩＢ０９２；ならびにＡβ療法のためのＣＡＤ１０６、Ｌｕ  ＡＦ２０５１３、ＡＢｖａｃ４０などの能動ワクチンまたは疾患修飾タウを標的とするＡＣＩ−３５およびＡＡＤｖａｃ１が挙げられる。
【０００６】
最近の研究は、タウ凝集を防止する、または逆転させる化合物（Wischik  et  al.,  Selective  inhibition  of  Alzheimer's  disease-like  tau  aggregation  by  phenothiazines,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  93:11213-11218,  1996；Necula  et  al.,  Cyanine  Dye  N744  Inhibits  Tau  Fibrillization  by  Blocking  Filament  Extension:  Implications  for  the  Treatment  of  Tauopathic  Neurodegenerative  Diseases,  Biochemistry,  44:10227-10237,  2005；Pickhardt  et  al.,  Screening  for  Inhibitors  of  Tau  Polymerization,  Current  Alzheimer  Research,  2:219-226,  2005；  Taniguchi  et  al.,  Inhibition  of  Heparin-induced  Tau  Filament  Formation  by  Phenothiazines,  Polyphenols,  and  Porphyrins,  The  Journal  of  Biological  Chemistry,  280:9,  7614-7623,    2005；Larbig  et  al.,  Screening  for  Inhibitors  of  Tau  Protein  Aggregation  into  Alzheimer  Paired  Helical  Filaments:  A  Ligand  Based  Approach  Results  in  Successful  Scaffold  Hopping,  Current  Alzheimer  Research,  4:315-323,  2007）、タウキナーゼを阻害する、またはタウホスファターゼを活性化する低分子型薬物（Iqbal  and  Grundke-Iqbal,  Inhibition  of  Neurofibrillary  Degeneration:  A  Promising  Approach  to  Alzheimer's  Disease  and  Other  Tauopathies,  Current  Drug  Targets,  5:495-502,  2004；Noble  et  al.,  Inhibition  of  glycogen  synthase  kinase-3  by  lithium  correlates  with  reduced  tauopathy  and  degeneration  in  vivo,  PNAS,  102:19,  6990-6995,  2005；Iqbal  and  Grundke-Iqbal,  Developing  pharmacological  therapies  for  Alzheimer  disease,  Cell.  Mol.  Life  Sci.,  64:2234-2244,  2007）、微小管安定化薬（Zhang  et  al.,  Microtubule-binding  drugs  offset  tau  sequestration  by  stabilizing  microtubules  and  reversing  fast  axonal  transport  deficits  in  a  tauopathy  model,  PNAS,  102(1):  227-231,  2005）、ミスフォールディングされたタウタンパク質のタンパク質溶解的分解を容易にする薬物（Dickey  et  al.,  Development  of  a  High  Throughput  Drug  Screening  Assay  for  the  Detection  of  Changes  in  Tau  Levels-Proof  of  Concept  with  HSP90  inhibitors,  Current  Alzheimer  Research,  2:231-238,  2005、Dickey  et  al.,  Pharmacologic  reductions  of  total  tau  levels;  implications  for  the  role  of  microtubule  dynamics  in  regulating  tau  expression,  Molecular  Neurodegeneration,  1:6,  2006）、および免疫抑制薬（Zilka  et  al.,  Chaperon-like  Antibodies  Targeting  Misfolded  Tau  Protein:  New  Vistas  in  the  Immunotherapy  of  Neurodegenerative  Foldopathies,  Journal  of  Alzheimer's  Disease,  15:169-177,  2008）、ならびに能動および受動免疫化を含む免疫治療戦略（Schneider  and  Mandelkow  et  al.,  Tau-Based  Treatment  Strategies  in  Neurodegenerative  Diseases,  Neurotherapeutics,  5:443-457,  2008；Zilka  et  al.,  Chaperon-like  Antibodies  Targeting  Misfolded  Tau  Protein:  New  Vistas  in  the  Immunotherapy  of  Neurodegenerative  Foldopathies,  Journal  of  Alzheimer's  Disease,  15:169-177,  2008、Tabira,  T.  Immunization  Therapy  for  Alzheimer  disease:  A  Comprehensive  Review  of  Active  Immunization  Strategies.  Tohoku  J.  Exp.  Med.,  220:  95-106  (2010)）を含む、特に、タウカスケードを直接または間接に標的化するいくつかの治療手法をもたらした（総説については、例えば、Dickey  and  Petrucelli,  Pharmacologic  reductions  of  total  tau  levels;  implications  for  the  role  of  microtubule  dynamics  in  regulating  tau  expression,  Molecular  Neurodegeneration,  1:6,  2006；Schneider  and  Mandelkow,  Tau-Based  Treatment  Strategies  in  Neurodegenerative  Disease,  Neurotherapeutics,  5:443-457,  2008；Zilka  et  al.,  Chaperone-like  Antibodies  Targeting  Misfolded  Tau  Protein:  New  Vistas  in  the  Immunotherapy  of  Neurodegenerative  Foldopathies,  Journal  of  Alzheimer's  Disease,  15:169-177,  2008を参照されたい）。さらに��研究者らは、ＡＤを処置するための新規モノクローナル抗体（ｍＡｂ）療法に焦点を合わせてきた。概説については、例えば、Citron  et  al.,  Alzheimer's  disease:  strategies  for  disease  modification,  Nature  Reviews,  9:397,  2010、およびAsuni  et  al.,  Immunotherapy  Targeting  Pathological  Tau  Conformers  In  a  Tangle  Mouse  Model  Reduces  Brain  Pathology  with  Associated  Functional  Improvements,  The  Journal  of  Neuroscience,  27(34):9115-9129,  2007を参照されたい。疾患形態のタウを標的とする治療抗体は、ＡＤおよび他のタウオパチーの処置および／または診断のための有望な手法である（ＷＯ２００４／００７５４７、ＵＳ２００８／００５０３８３）。
【０００７】
ＡＤおよび他のタウオパチーを処置するための治療戦略に関する研究が増えているにも拘わらず、特に、疾患プロセスの初期段階で、適切に標的化された処置決定が行われるのを確保するために、認知症を呈する患者において、ＡＤおよび他のタウオパチーと、他の脳病理とを正確に検出し、区別することができる診断ツールの満たされない必要性が依然として存在する（Blennow  and  Hampel,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2003；Blennow,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2005）。ここ２０年で、前臨床ＡＤに関するｉｎ  ｖｉｖｏの脳指標および試料に基づくバイオマーカーを同定するために多大な努力が為されてきたが、全てほとんど成功していない。研究は、脳脊髄液（ＣＳＦ）および血液に主に焦点を合わせてきたが、異なる型の認知症を正確に検出し、区別する明確なマーカーは発見されていない。例えば、いくつかのＣＳＦおよび血液バイオマーカーが、検出精度の十分な改善なく広範に試験されてきた。これらのものとしては、神経変性（ｔ−タウ、ＮＦＬ、ＮＳＥ、ＶＬＰ−１）、ＡＰＰ代謝（Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ｓＡＰＰα、およびｓＡＰＰβ）、原線維変化病理（ｐ−タウ）、およびグリア活性化（ＹＫＬ−４０、ＭＣＰ−１、およびＧＦＡＰ）のバイオマーカーが挙げられる（Olsson  et  al.,  CSF  and  blood  biomarkers  for  the  diagnosis  of  Alzheimer's  disease:  a  systematic  review  and  meta-analysis,  Lancet  Neurol.,  7:673-84,  2016）。３つのＣＳＦバイオマーカーが、前駆軽度認知障害（ＭＣＩおよびＡＤ認知症：ＣＳＦ  Ａβ１−４２（Ａβ１−４２）、また、Ａβ１−４２：Ａβ１−４０比、ｔ−タウ、およびｐ−タウ  Ｔｈｒ１８１  ＆  Ｔｈｒ２３１タンパク質としても発現される）における使用について報告されている（Cavedo  et  al.,  The  Road  Ahead  to  Cure  Alzheimer's  Disease:  Development  of  Biological  Markers  and  Neuroimaging  Methods  for  Prevention  Trials  Across  all  Stages  and  Target  Populations,  J.  Prev.  Alzheimer's  Dis.,  3:181-202,  2014）。それにも拘わらず、患者における初期ＡＤの正確な検出、およびＡＤと、他のタウオパチーまたは他の原因の認知症とを区別する方法は、特に、ＣＳＦに基づくアッセイについてはいまだ課題である。
【０００８】
研究は、トレオニン１８１、トレオニン１８１および２３１、トレオニン２３１、トレオニン２３１および２３５、セリン１９９、セリン３９６および４０４を含む、タウの様々なリン酸化されたエピトープが、ＡＤと相関し得ると示唆しているが、一部の矛盾する報告もある（Andreasen  et  al.,  Cerebrospinal  fluid  levels  of  total-tau,  phospho-tau  and  A  beta  42  predicts  development  of  Alzheimer's  disease  in  patients  with  mild  cognitive  impairment,  Acta  Neurol.  Scand.  Suppl.,  179:47-51,  2003；Formichi  et  al.,  Cerebrospinal  fluid  tau,  A  beta,  and  phosphorylated  tau  protein  for  the  diagnosis  of  Alzheimer's  disease,  J.  Cell  Physiol.,  208:39-46,  2006；Blennow  and  Hampel,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2003）。例えば、ＣＳＦ  ｐ−タウ１８１の反復評価は、２年間にわたる疾患進行に反応しにくいため、有用な臨床バイオマーカーを提供しなかったことが示唆されている（Bouwman  et  al.,  Longtitudinal  changes  of  CSF  biomarkers  in  memory  clinic  patients,  Neurology,  69:1006-1011,  2007）。ＣＳＦタウおよびＡβバイオマーカーの予測力、ならびに経時的なそれらの動力学は、したがって、まだ議論の余地がある。ＣＳＦ中でこれらのバイオマーカーをさらに検出する限られた能力は、ＡＤの診断における課題をさらに作り上げる。例えば、いくつかの研究が、ＡＤ患者のＣＳＦ中のＡβ４２、ｔ−タウ、およびｐ−タウレベルの長期的変化を記載したが（Andersson  et  al.,  Neurobiol  Aging,  29:1466-1473,  2008；Blomberg  et  al.,  Neurosci.  Lett.,  214:163-166,  1996；Arai  et  al.,  JAGS,  45:1228-31,  1997；Kanai  et  al.,  Ann.  Neurol.,  44:17-26；Kanai  et  al.,  Neurosci.  Lett.,  267:  65-68,  1999；Hampel  et  al.,  Ann  Neurol.,  49:545-546,  2001；Hoglund  et  al.,  Dement.  Geriatr.  Cogn.  Disord.,  19:256-265,  2005）、その他の研究は、これらのＣＳＦバイオマーカーの有意な経時的変化がないことを報告した（Nishimura  et  al.,  Methods  Find.  Exp.  Clin.  Pharmacol.,  20:227-235,  1998；Andreasen  et  al.,  Arch.  Neurol.,  56:673-680,  1999；Sunderland  et  al.,  Biol.  Psychiatry,  46:750-755,  1999；Tapiola  et  al.,  Neurosci.  Lett.,  280:119-122,  2000；deLeon  et  al.,  Neurobiol.  Aging,  27:394-401,  2006；Mollenhauer  et  al.,  J.  Neural.  Transm.,  112:933-948,  2005；Zetterberg  et  al.,  Alzheimers  Res.  Ther.,  5(2):9,  2007；Mattsson  et  al.,  J.  Alzheimers  Dis.,  30(4):767-778,  2012；Toledo  et  al.,  Acta  Neuropathol.  125(5):659-70,  2013）。ＣＳＦバイオマーカーが一部の患者において経時的に疾患進行を反映しないと考えられる理由は不明である。１つの可能性は、脳由来タンパク質がＣＳＦ区画において希釈されるということである（deLeon  et  al.,  Longitudinal  cerebrospinal  fluid  tau  load  increases  in  mild  cognitive  impairment,  Neurosci  Lett.,  333:183-186,  2004）。可能性のある別の説明は、非認知症の高齢の個体（６５歳を超える）は、若年者よりも高いｐ−タウレベルを有する傾向があり、したがって、疾患進行に伴うバイオマーカーの上昇が、非認知症の高齢の個体において隠されているということである（Bouwman  et  al.,  CSF  biomarker  levels  in  early  and  late  onset  Alzheimer's  disease,  Neurobiol  Aging,  30:1895-1901,  2008）。これらの因子および他の因子は、有効なＣＳＦに基づくアッセイの欠如に寄与する。
【０００９】
ＣＳＦバイオマーカーを検出するために使用される利用可能なアッセイは、古典的なＥＬＩＳＡ形式を含むイムノアッセイにほぼ例外なく焦点を合わせたものであり、特に、ＩＮＮＯＴＥＳＴ  ｈＴＡＵ、ＩＮＮＯＴＥＳＴホスホ−Ｔａｕ（ホスホ−トレオニン１８１を認識する）およびＩＮＮＯＴＥＳＴ  Ａβ４２である。しかしながら、これらのアッセイの特異度および感度は、一般的には、特にその前臨床段階でアルツハイマー病を予測するのに十分なものではない（Wennstrom  et  al.,  The  Inflammatory  Marker  YKL-40  Is  Elevated  in  Cerebrospinal  Fluid  from  Patients  with  Alzheimer's  but  Not  Parkinson's  Disease  or  Dementia  with  Lewy  Bodies,  10(8):  e0135458,  PlosOne,  2015；Wang  et  al.,  Analysis  of  Cerebrospinal  Fluid  and  [11C]PIB  PET  Biomarkers  for  Alzheimer's  Disease  with  Updated  Protocols,  52(4):1403-13,  JAD  2016）。
【００１０】
試料に基づく診断アッセイを超えて、近年の分子イメージングにおける進歩は、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）のための潜在的なタウ特異的トレーサーに関する研究をもたらした。タウＰＥＴトレーサーとして、３つのファミリーの放射性トレーサー：アリキノリン誘導体ＴＨＫ５１１７およびＴＨＫ５３５１、ピリド−インドール誘導体ＡＶ−１４５１（Ｔ８０７およびフロルタウシピルとしても公知）、ならびにフェニル／ピリジニル−ブタジエニルベンゾチアゾール／ベンゾチアゾリウム誘導体ＰＢＢ３が開発された（Saint-Aubert  et  al.,  Tau  PET  imaging:  present  and  future  directions,  Mol.  Neurodegener.,  12:19,  2017）。タウＰＥＴトレーサーが、多くは酵素ＭＡＯ  Ｂまたはニューロメラニンを認識する、オフターゲット結合を示したため（Barrio  et  al.,  The  Irony  of  PET  Tau  Probe  Specificity,  J.  Nucl.  Med.,  59(1):115-116,  2018；Lemoine  et  al.,  Comparative  binding  properties  of  the  tau  PET  tracers  THK5117,  THK5351,  PBB3,  and  T807  in  postmortem  Alzheimer  brains,  Alzheimers  Res.  Ther.,  9(1):96,  2017；Ng  et  al.,  Monoamine  oxidase  B  inhibitor,  selegiline,  reduces  18F-THK5351  uptake  in  the  human  brain,  Alzheimers  Res.  Ther.,  9(1):25,  2017）、第２世代のタウＰＥＴトレーサー：ＰＩ−２６２０、ＭＫ−６２４０、ＧＴＰ１およびＲＯ６９５８９４８が開発された（www.alzforum.org）。しかしながら、複数の組織標的への非特異的結合が、一部の新しく開発されたトレーサー中に依然として存在し、技術の改良の余地を示唆している（The  12th  Human  Amyloid  Imaging,  Miami,  Florida,  USA  2018）。
【００１１】
いくつかの神経病理学的研究の結果、患者の脳内のタウ病理の量が、ＡＤの進行と強く相関することが示された。タウ病変の解剖学的局在化のパターンは、アルツハイマー病の経過にわたって影響される認知領域、ならびに脳萎縮のパターンおよび程度に対応してもよい（Braak  and  Braak,  Neuropathological  stageing  of  Alzheimer-related  changes,  Acta  Neuropathol,  82:239-59,  1991；Murray  et  al.,  Neuropathologically  defined  subtypes  of  Alzheimer's  disease  with  distinct  clinical  characteristics:  a  retrospective  study,  Lancet  Neurol.,  (9):785-96,  2011；Nelson  et  al.,  Correlation  of  Alzheimer  disease  neuropathologic  changes  with  cognitive  status:  a  review  of  the  literature,  J.  Neuropathol.  Exp.  Neurol.,  71:362-81,  2012）。同様に、いくつかの独立したイメージング試験により、タウＰＥＴシグナルの分布が、認知低下と相関し得ることが示された（Ossenkoppele  et  al.,  Tau  PET  patterns  mirror  clinical  and  neuroanatomical  variability  in  Alzheimer's  disease,  Brain,  139:1551-67,    2016；Bejanin  et  al.,  Tau  pathology  and  neurodegeneration  contribute  to  cognitive  impairment  in  Alzheimer's  disease,  Brain,  140(12):3286-3300,  2017；Mattsson  et  al.,  AV-1451  and  CSF  T-tau  and  P-tau  as  biomarkers  in  Alzheimer's  disease,  EMBO  Mol.  Med.,  9:1212-1223,  2017；Mattsson  et  al.,  Comparing  18F-AV-1451  with  CSF  t-tau  and  p-tau  for  diagnosis  of  Alzheimer  disease,  Neurology,  5:e388-e395,  2018）。したがって、脳内のタウのＰＥＴイメージングのための改善された試薬および方法の開発は、診断精度を向上させ、経時的にＡＤ患者をモニタリングするのを助けることができる。ＣＳＦタウバイオマーカーは、主に疾患状態のバイオマーカーとして有用であるが、タウＰＥＴイメージングは、前駆段階から認知症への移行などの、ＡＤ進行のモニタリングにおいても有用であり得る（Mattsson  et  al.,  Comparing  18F-AV-1451  with  CSF  t-tau  and  p-tau  for  diagnosis  of  Alzheimer  disease,  Neurology,  5:e388-e395,    2018）。しかし、脳のイメージング剤の侵襲的かつ放射性の性質を考慮すれば、ＡＤのための、精度および特異度が改善された非侵襲性のＣＳＦに基づくアッセイは有益である。
しかしながら、現在利用可能なバイオマーカーは、臨床使用においてはいくつかの制限を示す。総タウ、ｐ−タウおよびＡβ４２のＣＳＦレベルは、疾患事例と対照事例との間でかなり重複することが示されている（Hulstaert  et  al.,  Improved  discrimination  of  AD  patients  using  beta-amyloid(1-42)  and  tau  levels  in  CSF,  Neurology,  52:1555-1562,  1999；Hu  et  al.,  Levels  of  nonphosphorylated  and  phosphorylated  tau  in  cerebrospinal  fluid  Alzheimer's  disease  patients:  an  ultrasensitive  bienzyme-substrate-recycle  enzyme-linked  immunosorbent  assay,  Am.  J.  Pathol.,  160:1269-1278,  2002）。疾患の不均一性は、ＣＳＦバイオマーカーの重複の主因であると考えられる（Iqbal  et  al.,  Subgroups  of  Alzheimer's  disease  based  on  cerebrospinal  fluid  molecular  markers,  58:748-757,  2005）。タウＰＥＴイメージングでは、新しくタウを指向する放射性トレーサーの開発のための重要な課題は、非特異的結合を克服することである（Barrio  et  al.,  The  Irony  of  PET  Tau  Probe  Specificity,  J.  Nucl.  Med.,  59:115-116,  2018；Lemoine  et  al.  Comparative  binding  properties  of  the  tau  PET  tracers  THK5117,  THK5351,  PBB3,  and  T807  in  postmortem  Alzheimer  brains,  Alzheimers  Res.  Ther.,  9(1):96,  2017；Ng  et  al.,  Monoamine  oxidase  B  inhibitor,  selegiline,  reduces  18F-THK5351  uptake  in  the  human  brain,  Alzheimers  Res.  Ther.,  9(1):25.  2017）。さらに、最近の報告により、病理学的タウコンフォメーションが、様々なヒトタウオパチーに応じて多様であり、タウリガンドが様々なタウの病理学的疾患単位に対する示差的な結合親和性を有することが示されている（Choi  et  al.,  Development  of  tau  PET  Imaging  Ligands  and  their  Utility  in  Preclinical  and  Clinical  Studies,  52(1):24-30,  2018）。かくして、別の課題は、様々なタウ病変に対する結合効力を改善して、複数のヒトタウオパチーの診断のためにそれらを使用することである。
ＡＤを標的とするより強力な処置の最近の開発は、患者において、初期段階でＡＤを正確に検出し、それと、他の形態の認知症とを区別する必要性を強調する。プラークおよび原線維変化の相対量は、疾患の異なる段階のＡＤ患者間で顕著な相違を示し得るため、有効なバイオマーカーは、利用可能である場合、患者の階層化および疾患進行の長期的モニタリングにとっても有用である。バイオマーカーデータに基づく患者の階層化はまた、療法に対してより応答しやすい患者のサブグループを同定するための方法でもあり得る（Hampel  et  al.,  Perspective  on  future  role  of  biological  markers  in  clinical  therapy  trials  of  Alzheimer's  disease:  a  long-range  point  of  view  beyond  2020,  Biochem.  Pharmacol.,  88(4):426-46,  2014）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２００４／００７５４７号
【特許文献２】米国特許出願公開第２００８／００５０３８３号明細書
【非特許文献】
【００１３】
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【非特許文献１４】Taniguchi  et  al.,  Inhibition  of  Heparin-induced  Tau  Filament  Formation  by  Phenothiazines,  Polyphenols,  and  Porphyrins,  The  Journal  of  Biological  Chemistry,  280:9,  7614-7623,    2005
【非特許文献１５】Larbig  et  al.,  Screening  for  Inhibitors  of  Tau  Protein  Aggregation  into  Alzheimer  Paired  Helical  Filaments:  A  Ligand  Based  Approach  Results  in  Successful  Scaffold  Hopping,  Current  Alzheimer  Research,  4:315-323,  2007
【非特許文献１６】Iqbal  and  Grundke-Iqbal,  Inhibition  of  Neurofibrillary  Degeneration:  A  Promising  Approach  to  Alzheimer's  Disease  and  Other  Tauopathies,  Current  Drug  Targets,  5:495-502,  2004
【非特許文献１７】Noble  et  al.,  Inhibition  of  glycogen  synthase  kinase-3  by  lithium  correlates  with  reduced  tauopathy  and  degeneration  in  vivo,  PNAS,  102:19,  6990-6995,  2005
【非特許文献１８】Iqbal  and  Grundke-Iqbal,  Developing  pharmacological  therapies  for  Alzheimer  disease,  Cell.  Mol.  Life  Sci.,  64:2234-2244,  2007
【非特許文献１９】Zhang  et  al.,  Microtubule-binding  drugs  offset  tau  sequestration  by  stabilizing  microtubules  and  reversing  fast  axonal  transport  deficits  in  a  tauopathy  model,  PNAS,  102(1):  227-231,  2005
【非特許文献２０】Dickey  et  al.,  Development  of  a  High  Throughput  Drug  Screening  Assay  for  the  Detection  of  Changes  in  Tau  Levels-Proof  of  Concept  with  HSP90  inhibitors,  Current  Alzheimer  Research,  2:231-238,  2005
【非特許文献２１】Dickey  et  al.,  Pharmacologic  reductions  of  total  tau  levels;  implications  for  the  role  of  microtubule  dynamics  in  regulating  tau  expression,  Molecular  Neurodegeneration,  1:6,  2006
【非特許文献２２】Zilka  et  al.,  Chaperon-like  Antibodies  Targeting  Misfolded  Tau  Protein:  New  Vistas  in  the  Immunotherapy  of  Neurodegenerative  Foldopathies,  Journal  of  Alzheimer's  Disease,  15:169-177,  2008
【非特許文献２３】Schneider  and  Mandelkow  et  al.,  Tau-Based  Treatment  Strategies  in  Neurodegenerative  Diseases,  Neurotherapeutics,  5:443-457,  2008
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【非特許文献２５】Schneider  and  Mandelkow,  Tau-Based  Treatment  Strategies  in  Neurodegenerative  Disease,  Neurotherapeutics,  5:443-457,  2008
【非特許文献２６】Citron  et  al.,  Alzheimer's  disease:  strategies  for  disease  modification,  Nature  Reviews,  9:397,  2010
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【非特許文献２８】Blennow  and  Hampel,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2003
【非特許文献２９】Blennow,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2005
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【非特許文献３４】Blennow  and  Hampel,  CSF  markers  for  incipient  Alzheimer's  disease,  Lancet  Neurol.,  2:605-613,  2003
【非特許文献３５】Bouwman  et  al.,  Longtitudinal  changes  of  CSF  biomarkers  in  memory  clinic  patients,  Neurology,  69:1006-1011,  2007
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【非特許文献５４】Wennstrom  et  al.,  The  Inflammatory  Marker  YKL-40  Is  Elevated  in  Cerebrospinal  Fluid  from  Patients  with  Alzheimer's  but  Not  Parkinson's  Disease  or  Dementia  with  Lewy  Bodies,  10(8):  e0135458,  PlosOne,  2015
【非特許文献５５】Wang  et  al.,  Analysis  of  Cerebrospinal  Fluid  and  [11C]PIB  PET  Biomarkers  for  Alzheimer's  Disease  with  Updated  Protocols,  52(4):1403-13,  JAD  2016
【非特許文献５６】Barrio  et  al.,  The  Irony  of  PET  Tau  Probe  Specificity,  J.  Nucl.  Med.,  59(1):115-116,  2018
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【非特許文献５９】Braak  and  Braak,  Neuropathological  stageing  of  Alzheimer-related  changes,  Acta  Neuropathol,  82:239-59,  1991
【非特許文献６０】Murray  et  al.,  Neuropathologically  defined  subtypes  of  Alzheimer's  disease  with  distinct  clinical  characteristics:  a  retrospective  study,  Lancet  Neurol.,  (9):785-96,  2011
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【非特許文献６８】Iqbal  et  al.,  Subgroups  of  Alzheimer's  disease  based  on  cerebrospinal  fluid  molecular  markers,  58:748-757,  2005
【非特許文献６９】Barrio  et  al.,  The  Irony  of  PET  Tau  Probe  Specificity,  J.  Nucl.  Med.,  59:115-116,  2018
【非特許文献７０】Lemoine  et  al.  Comparative  binding  properties  of  the  tau  PET  tracers  THK5117,  THK5351,  PBB3,  and  T807  in  postmortem  Alzheimer  brains,  Alzheimers  Res.  Ther.,  9(1):96,  2017
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【非特許文献７２】Hampel  et  al.,  Perspective  on  future  role  of  biological  markers  in  clinical  therapy  trials  of  Alzheimer's  disease:  a  long-range  point  of  view  beyond  2020,  Biochem.  Pharmacol.,  88(4):426-46,  2014
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、アルツハイマー病および他のタウオパチーの検出、モニタリング、防止、および／または処置の改善を提供する抗体、組成物、キット、および方法が本明細書に開示される。
【００１５】
様々な実施形態では、本開示は、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、タウ中のリン酸化されたエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、リン酸化されたエピトープを有するタウ種は、別のタウオパチーを有する患者または健康な対象におけるよりも高い濃度で、ＡＤを有する患者に由来する試料（例えば、血液またはＣＳＦ）中に存在する。
【００１６】
一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上のエピトープに結合することができ、エピトープはリン酸化されている。エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含んでもよい。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、少なくとも１個のリン酸化された残基を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、１個より多いリン酸化された残基を含む。リン酸化された残基は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位にホスホ−トレオニンを含んでもよい。一部の実施形態では、エピトープはまた、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せを含む。抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含むか、またはそれからなるエピトープに結合してもよい。
【００１８】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、少なくとも１個のリン酸化された残基を含み、少なくとも１個のリン酸化された残基は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位のホスホ−トレオニンであってもよい。一部の実施形態では、エピトープはまた、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含むか、またはそれからなるエピトープに結合することができる。
【００１９】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。エピトープは、ＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰ（配列番号１４の配列）を含んでもよい。別の実施形態では、抗体は、ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片であり、ＤＣ２Ｅ７は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９２の下で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体である。
【００２０】
別の実施形態では、抗体ＤＣ２Ｅ２またはその抗原結合性断片が本明細書で開示され、ＤＣ２Ｅ２は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９１の下で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体である。
【００２１】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片は、第２の薬剤にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、薬剤は、少なくとも１つの検出可能な標識またはＡＤもしくは別のタウオパチーのための少なくとも１つの治療剤である。ある特定の実施形態では、薬剤は、放射性標識である。
【００２２】
また、対象におけるＡＤまたは別のタウオパチーを処置する、その進行を遅延させる、またはその進行を防止する方法も、本明細書に開示される。一部の実施形態では、方法は、対象に、以前に開示された実施形態のいずれか１つに記載の少なくとも１つの抗体の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、好適なＡＤ処置を投与する、またはその投与を推奨する前に、１つまたは複数の開示される抗体または抗原結合性断片を使用してＡＤを検出することを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片を使用して、ＡＤを有すると診断された患者に、ＡＤ処置を投与することを含む。
【００２３】
様々な実施形態では、対象におけるタウオパチーを検出する方法は、対象から生体試料を取得すること、対象に由来する試料と、タウと複合体を形成することができる有効量の分子とを接触させること（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる本明細書に開示される少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片を使用する）、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片を使用してタウ−分子複合体の存在および／または量を検出することを含み、タウ−分子複合体の存在および／または量は、対象におけるタウオパチーを示す。一部の実施形態では、タウ−分子複合体を形成する分子は、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる第１の抗体であり、タウ−抗体複合体の存在は、第１の抗体とは異なるタウ上のエピトープに結合することができる、第２の抗タウ抗体または抗原結合性断片を使用して検出される。ある特定の実施形態では、第１または第２の抗体または抗原結合性断片は、固相表面または粒子に連結されている（例えば、共有結合または非共有結合によってコーティングされている）。一部の実施形態では、第１または第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされている。開示される方法は、例えば、リン酸化タウに結合する本明細書に開示される抗体または断片のいずれか１つまたは複数を使用する、古典的ＥＬＩＳＡ、デジタルＥＬＩＳＡアッセイ、または他のＥＬＩＳＡアッセイ形式を含んでもよく、試料中のリン酸化タウの存在および／または量を検出することができ、試料中のリン酸化タウのレベルの増加は、対象が別のタウオパチーではなくアルツハイマー病を有することを示す。ある特定の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液である。ある特定の実施形態では、生体試料は、血清および／または血漿である。
【００２４】
様々な実施形態では、対象においてアルツハイマー病と、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症とを区別する方法は、対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、試料と、本明細書に開示される抗タウ抗体またはその抗原結合性断片とを接触させること、ならびに同じ試料中の抗体または抗原結合性断片と複合体化したリン酸化タウの存在および／または量を検出することを含み、健康対照対象に由来する試料中のレベルと比較した、試料中のリン酸化タウの存在および／もしくはそのレベルの上昇、または閾値を超えるリン酸化タウのレベルの上昇は、対象が、別のタウオパチーまたは代替的な原因（すなわち、別の形態）の認知症または別の神経変性障害ではなく、アルツハイマー病を有することを示す。一部の実施形態では、抗タウ抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含み、リン酸化タウに結合して、リン酸化タウ−抗体複合体を形成することができる。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【００２５】
様々な実施形態では、対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）または軽度認知障害（ＭＣＩ）を検出する方法は、対象に由来する生体試料と、タウと複合体を形成することができる有効量の分子とを接触させること（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる本明細書に開示される少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片を使用する）、タウ−抗体複合体の存在および／または量を検出すること、ならびに試料中の抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、抗体と複合体化したタウの存在および／またはその量の増加は、対象におけるＡＤまたはＭＣＩを示す。一部の実施形態では、ＭＣＩは、患者におけるＡＤの前兆である。一部の実施形態では、方法は、ＭＣＩおよび／またはＡＤと、他の神経疾患とを区別する。一部の実施形態では、他の神経疾患は、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症から選択される。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウまたは約５．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００２６】
様々な実施形態では、対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）または軽度認知障害（ＭＣＩ）を検出する方法は、生体試料を取得すること、生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、ならびにトレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／またはその量の増加は、対象におけるＡＤまたはＭＣＩを示す。様々な実施形態では、ＭＣＩは、患者におけるＡＤの前兆である。一部の実施形態では、方法は、ＭＣＩおよび／またはＡＤと、他の神経疾患とを区別する。一部の実施形態では、他の神経疾患は、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症から選択される。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウまたは約５．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００２７】
様々な実施形態では、対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害と、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症とを区別する方法は、対象に由来する生体試料と、タウと複合体を形成することができる有効量の分子とを接触させること（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる本明細書に開示される少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片を使用する）、同じ試料中の抗体または抗原結合性断片と複合体化したタウの存在および／またはその量を検出すること、ならびに試料中の抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、抗体と複合体化したタウの存在および／またはその量の増加は、対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害（ＭＣＩ）を示す。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００２８】
様々な実施形態では、対象におけるアルツハイマー病および／または軽度認知障害と、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、および／または前頭側頭型認知症とを区別する方法は、対象から生体試料を取得すること、生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／またはその量の増加は、対象におけるアルツハイマー病または軽度認知障害を示す。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウまたは約５．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００２９】
様々な実施形態では、軽度認知障害を有する患者がアルツハイマー病を発症する可能性を予測する方法は、対象に由来する生体試料と、タウと複合体を形成することができる有効量の分子とを接触させること（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる本明細書に開示される少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片を使用する）、同じ試料中の抗体または抗原結合性断片と複合体化したタウの存在および／または量を検出すること、ならびに試料中の抗体に結合したタウの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、抗体と複合体化したタウの存在および／またはその量の増加は、患者がアルツハイマー病を発症する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００３０】
様々な実施形態では、軽度認知障害を有する患者がアルツハイマー病を発症する可能性を予測する方法は、対象から生体試料を取得すること、生体試料中の少なくともトレオニン２１７位でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／または量を検出すること、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在／量と、対照試料中の量または閾値とを比較することを含み、対照試料または閾値と比較した、トレオニン２１７でリン酸化されたタウタンパク質２Ｎ４Ｒの存在および／またはその量の増加は、患者がアルツハイマー病を発症する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血液を含む。一部の実施形態では、生体試料は、血漿および／または血清画分を含む。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３００ｐｇ／ｍｌである。
【００３１】
本発明の一部に組み込まれ、本発明の一部を構成する添付の図面は、本発明のいくつかの非限定的な実施形態を図解し、記述と一緒に、本開示の原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、ＥＬＩＳＡを使用するモノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ２についてのアイソタイプの決定である。
【００３３】
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｄは、タウ欠失突然変異体を使用する抗体ＤＣ２Ｅ２のエピトープマッピングおよびＥＬＩＳＡにおけるタウペプチドである。（図２Ａ）タウ欠失突然変異体の略図、およびタウタンパク質上のＤＣ２Ｅ２結合性部位を評価するために使用されるペプチド。（図２Ｂ）ＥＬＩＳＡによるヒトの６つのアイソフォームに対するＤＣ２Ｅ２の免疫反応性。（図２Ｃ）ＥＬＩＳＡによるタウ欠失突然変異体を使用するＤＣ２Ｅ２結合性部位の決定。（図２Ｄ）競合ＥＬＩＳＡによるタウ由来ペプチドを使用するＤＣ２Ｅ２結合性部位の決定。
【図２Ｂ】同上。
【図２Ｃ】同上。
【図２Ｄ】同上。
【００３４】
【図３】図３は、異なるタウタンパク質に対するＤＣ２Ｅ２の免疫反応性である。レーン１：ヒトアルツハイマー病脳組織から単離されたサルコシル不溶性タウ；レーン２：タウ１５１〜３９１；レーン３：リン酸化タウ１５１〜３９１；レーン４：タウ２Ｎ４Ｒ；レーン５：リン酸化タウ２Ｎ４Ｒ。
【００３５】
【図４】図４は、ＥＬＩＳＡを使用するモノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７のアイソタイプの決定である。
【００３６】
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｄは、抗体ＤＣ２Ｅ２中の可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列である。図５Ａは、軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を示す。図５Ｂは、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲ配列は太字および下線で示す。図５Ｃは、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を示す。図５Ｄは、重鎖可変領域のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲ配列は太字および下線である。相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ＩＭＧＴの番号付け体系に従って同定した。
【図５Ｂ】同上。
【図５Ｃ】同上。
【図５Ｄ】同上。
【００３７】
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｄは、抗体ＤＣ２Ｅ７中の可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列である。図６Ａは、軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を示す。図６Ｂは、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲ配列は太字および下線である。図６Ｃは、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を示す。図６Ｄは、重鎖可変領域のアミノ酸配列を示し、ＣＤＲ配列は太字および下線である。相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ＩＭＧＴの番号付け体系に従って同定した。
【図６Ｂ】同上。
【図６Ｃ】同上。
【図６Ｄ】同上。
【００３８】
【図７】図７は、異なるタウタンパク質に対するＤＣ２Ｅ７の免疫反応性である。レーン１：タウ２Ｎ４Ｒ；レーン２：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでリン酸化された２Ｎ４Ｒ；レーン３：胎児タウ；レーン４：ヒトアルツハイマー病脳組織から単離されたサルコシル−不溶性タウ。タウタンパク質のすべての形態を認識する汎タウモノクローナル抗体であるＤＣ２５を対照として使用した。
【００３９】
【図８】図８は、タウタンパク質上のＤＣ２Ｅ７結合性部位を評価するために使用されるタウ欠失突然変異体の略図である。
【００４０】
【図９】図９は、タウ欠失突然変異体を使用する免疫ブロットによるタウタンパク質上のＤＣ２Ｅ７結合性部位の決定である。
【００４１】
【図１０】図１０は、領域１８８〜２２７におけるタウ上の可能性があるリン酸化部位の略図である。
【００４２】
【図１１】図１１は、タウ点突然変異体を使用する免疫ブロットによるタウタンパク質上のＤＣ２Ｅ７結合性部位の決定である。Ｍａｂ  ＤＣ２５を、対照として使用して、点突然変異のリン酸化の程度を測定した。
【００４３】
【図１２】図１２は、タウ由来ペプチドを使用する競合ＥＬＩＳＡによるタウタンパク質上のＤＣ２Ｅ７エピトープの決定である。
【００４４】
【図１３】図１３は、アルツハイマー病（海馬ＣＡ１）、ＦＴＤ−ピック病（歯状回、海馬）、ＣＢＤ（尾状核）およびＰＳＰ（被殻／尾状核）の脳切片における、抗体ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２の結合である。モノクローナル抗体ＡＴ８を対照として使用した。ツールバー１００μｍ。
【００４５】
【図１４】図１４は、Ｂｒａａｋステージ１、Ｂｒａａｋステージ３およびＢｒａａｋステージ６の脳切片における、抗体ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２の結合である。ツールバー１００μｍ。
【００４６】
【図１５】図１５は、アルツハイマー病（海馬ＣＡ１）、ＦＴＤにおけるピック体−ピック病（歯状回、海馬）、ならびにＣＢＤにおけるコイル小体およびアストロサイト病理（尾状核）に由来する脳切片における、抗体ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２の結合。ツールバー２０μｍ。
【００４７】
【図１６】図１６は、ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡアッセイのための例示的な較正曲線である。
【００４８】
【図１７Ａ】図１７Ａ〜Ｂは、健康な個体に由来する３つのヒトＣＳＦを使用するスパイク回復実験である。（図１７Ａ）ヒトＣＳＦ中のスパイクされたＤＣ２Ｅ７標準物質の推定濃度。（図１７Ｂ）ヒトＣＳＦ中のスパイクされたＤＣ２Ｅ７標準物質の回復％。
【図１７Ｂ】同上。
【００４９】
【図１８】図１８は、対照およびＡＤ試料に由来するＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡの結果である。
【００５０】
【図１９】図１９は、ＡＤおよび他のタウオパチー試料に由来するＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡの結果である。
【００５１】
【図２０】図２０は、ＡＤおよび他のヒトタウオパチーにおける不溶性タウ種に対するＤＣ２Ｅ７の結合である。
【００５２】
【図２１】図２１は、ｐＴ２１７タウおよびｐＴ１８１タウアッセイを使用する、ＡＤおよびＦＴＤ対象に由来するＣＳＦ試料の比較である。
【００５３】
【図２２】図２２は、ｐＴ２１７タウおよびｐＴ１８１タウアッセイを使用する、ＡＤおよび対照対象に由来するＣＳＦ試料の比較である。
【００５４】
【図２３Ａ】図２３Ａは、ｐＴ２１７タウアッセイを使用する、対照、ＭＣＩおよびＡＤ対象に由来するＣＳＦ試料の比較である（図２３Ａ）。図２３Ｂは、ｐＴ２１７タウアッセイを使用する、対照、ＡＤ、ＰＤ、ＭＳ、ＡＬＳおよびＦＴＤ対象に由来するＣＳＦ試料の比較である（図２３Ｂ）。
【図２３Ｂ】同上。
【００５５】
【図２４】図２４は、ＤＣ２Ｅ７に由来する単離されたｓｃＦＶ抗体断片の吸光度である。
【００５６】
【図２５Ａ】図２５Ａ〜Ｄは、ＤＣ２Ｅ７に由来するｓｃＦＶ抗体断片のアミノ酸配列のアライメントである。図２５Ａは、ＤＣ２Ｅ７配列と比較したｓｃＦＶ抗体の軽鎖可変ドメインを示す。図２５Ｂは、ＤＣ２Ｅ７配列と比較したｓｃＦＶ抗体の重鎖可変ドメインを示す。図２５Ｃは、ＤＣ２Ｅ７と比較してより高い親和性を示すｓｃＦＶ抗体断片の可変軽鎖ドメインを示す。図２５Ｄは、ＤＣ２Ｅ７と比較してより高い親和性を示すｓｃＦＶ抗体断片の可変重鎖ドメインを示す。ＤＣ２Ｅ７の配列と同一の残基をドットによって表す。ＣＤＲを、ＩＭＧＴの番号付け体系に従って同定した。
【図２５Ｂ】同上。
【図２５Ｃ】同上。
【図２５Ｄ】同上。
【００５７】
【図２６】図２６は、ペプチド２Ｅ７ｐｅｐに由来するタウに対するＤＣ２Ｅ７およびＤＣ１４９抗体の親和性の比較である。
【００５８】
【図２７Ａ】図２７Ａ〜Ｂは、ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ１４９のアミノ酸配列のアライメントである。図２７Ａは、ＤＣ２Ｅ７軽鎖配列との比較におけるＤＣ１４９可変軽鎖ドメインを示す。図２７Ｂは、ＤＣ２Ｅ７重鎖配列との比較におけるＤＣ１４９可変重鎖ドメインを示す。ＤＣ２Ｅ７の配列と同一の残基をドットによって表す。ＣＤＲを、ＩＭＧＴの番号付け体系に従って同定した。
【図２７Ｂ】同上。
【００５９】
【図２８Ａ】図２８Ａ〜Ｂは、ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ８０７のアミノ酸配列のアライメントである。図２８Ａは、ＤＣ２Ｅ７軽鎖配列との比較におけるＤＣ８０７可変軽鎖ドメインを示す。図２８Ｂは、ＤＣ２Ｅ７重鎖配列との比較におけるＤＣ８０７可変重鎖ドメインを示す。ＤＣ２Ｅ７の配列と同一の残基をドットによって表す。ＣＤＲを、ＩＭＧＴの番号付け体系に従って同定した。
【図２８Ｂ】同上。
【００６０】
【図２９】図２９は、リン酸化タウ標準物質（左パネル）および２Ｅ７ペプチド標準物質（２Ｅ７ｐｅｐ）（右パネル）を使用する、アルツハイマー病、他のタウオパチーおよび対照個体に由来する試料における、ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイによって測定されたｐＴ２１７タウの分布である。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
定義
本開示をより良く理解するために、ある特定の定義を最初に提供する。
用語「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との非共有相互作用の合計の強度を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、平衡解離定数（ＫＤ）（またはその逆の平衡結合定数、ＫＡ）によって表すことができる。親和性を、本明細書に記載のものを含む、当技術分野で公知の一般的方法によって測定することができる。例えば、Pope  M.E.,  Soste  M.V.,  Eyford  B.A.,  Anderson  N.L.,  Pearson  T.W.,  (2009)  J.  Immunol.  Methods.  341(1-2):86-96および本明細書に記載の方法を参照されたい。
【００６２】
用語「アミノ酸」とは、天然に存在する、改変された、および合成のアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する、アミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣物質を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、ならびに後に改変されるこれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸アナログとは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合されるアルファ炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのようなアナログは、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣物質とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化合物を指す。好適なアミノ酸としては、限定されるものではないが、ペプチド中に見出される２０種の一般的な天然に存在するアミノ酸のＤおよびＬ異性体の両方ならびに有機合成または他の代謝経路によって調製される天然に存在する、および天然には存在しないアミノ酸が挙げられる。そのような天然には存在しないアミノ酸の例としては、限定されるものではないが、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−トレオニン、およびＯ−ホスホチロシンが挙げられる。改変アミノ酸としては、限定されるものではないが、ヒドロキシプロリン、ピログルタミン酸、ガンマ−カルボキシグルタミン酸、Ｏ−ホスホセリン、アゼチジンカルボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第３級ブチルグリシン、２，４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ−ヒドロキシリシン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフタラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸およびチオプロリンが挙げられる。用語アミノ酸はまた、ある特定の生物における代謝物であるが、タンパク質への組込みのために遺伝子コードによってコードされない天然に存在するアミノ酸も含む。そのようなアミノ酸としては、限定されるものではないが、オルニチン、Ｄ−オルニチン、およびＤ−アルギニンが挙げられる。
【００６３】
用語「抗体」とは、遺伝子操作されている、天然の、または全体的もしくは部分的に合成的に、または組換え的に産生される、免疫グロブリンを指す。無傷抗体は、典型的には、それぞれ、抗原のための結合ポケットを形成する可変ドメインと、エフェクター機能に寄与する定常ドメインとから構成される、重鎖と軽鎖とを含む。抗体は、その選択される重鎖のおかげで、任意のヒトクラスを含む、任意の免疫グロブリンクラスおよびサブクラスのメンバー：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、またはその誘導体もしくは断片であってもよい。同様に、抗体の軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて決定された、ヒトカッパ（κ）またはラムダ（λ）軽鎖などの、任意の種に由来してもよい。
基本的な抗体構造単位は、典型的には、四量体を含む。様々な実施形態では、四量体は、それぞれの対が１個の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１個の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）とを有する、２個の同一の対のポリペプチド鎖を含む。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う、約１００〜１１０個またはそれより多いアミノ酸の可変領域を含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を定義する。ヒト軽鎖は、カッパおよびラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖および重鎖の中で、可変領域と定常領域とは、約１２個またはそれよい多いアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖はまた、約１０個またはそれより多いアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般的には、Fundamental  Immunology  Ch  7.  (Paul,  W.,  2nd  ed.  Raven  Press,  N.Y.  (1989))（あらゆる目的に関してその全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。それぞれの軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。かくして、無傷抗体は、典型的には、２個の結合部位を有する。二機能性または二重特異性抗体を除いて、２個の結合部位は同じである。鎖は全て、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる、３個の超可変領域によって連結された、相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。それぞれの対の２個の鎖に由来するＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特異的エピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端に向かって、軽鎖と重鎖は両方とも、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。それぞれのドメインへのアミノ酸の割り当てを、ＩＭＧＴナンバリングシステムに従って行うことができる。代替的な定義もまた、当業者には公知である。例えば、Kabat  Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest  (National  Institutes  of  Health,  Bethesda,  Md.  (1987  and  1991))、またはClothia  &  Lesk  J.  Mol.  Biol.  196:901-917  (1987)；Clothia  et  al.  Nature  342:878-883  (1989)を参照されたい。
【００６４】
「抗体断片」または「抗原結合性断片」は、完全長抗体の一部、一般的には、少なくとも抗原結合部分／ドメインまたはその可変領域を含む。抗体断片という用語は、上記で考察された抗体という用語のサブセットである。抗体断片または抗原結合性断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｖ断片、ダイアボディ、一本鎖抗体分子、イムノトキシン、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。さらに、抗体断片は、病理学的タウに結合するＶＨ鎖の特徴を有する、すなわち、ＶＬ鎖と一緒に集合することができる、または病理学的タウに結合するＶＬ鎖の特徴を有する、すなわち、ＶＨ鎖と一緒に集合して、機能的抗原結合ポケットを形成し、それによって、タウに結合する特性を提供することができる、一本鎖ポリペプチドを含む。この用語はまた、それ自体、エフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（「ＡＤＣＣ」）または補体依存性細胞傷害（「ＣＤＣ」）を提供することはできないが、適切な抗体定常ドメインと組み合わせた後にこの機能を提供する断片も含む。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「タウに結合することができる」抗体またはその結合性断片とは、他の抗原標的よりもタウに優先的に結合する抗体または結合性断片を指す。この用語は、「抗タウ」抗体または「タウに結合する抗体」と互換性である。一部の実施形態では、タウに結合することができる抗体または結合性断片は、他のものよりもその抗原に対して高い親和性でそうすることができる。一部の実施形態では、タウに結合することができる抗体または結合性断片は、例えば、表面プラズモン共鳴または当業者には公知の他の方法によって測定された場合、少なくとも約１０−１、１０−２、１０−３、１０−４、１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１１、１０−１２またはそれより高い（またはその間の任意の値）ＫＤでその抗原に結合することができる。
【００６６】
用語「キメラ」抗体とは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラス（例えば、キメラヒト化、クラススイッチ抗体）に属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同であるが、鎖の残りが、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同である抗体、ならびに所望の生物活性を示す限り、そのような抗体の断片を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison  et  al.,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  81:6851-6855  (1984)）。
【００６７】
一実施形態では、用語「キメラ抗体」とは、通常は、組換えＤＮＡ技術によって調製される、ある起源または種に由来する可変領域と、異なる起源または種に由来する定常領域の少なくとも一部とを含むモノクローナル抗体を指す。一部の実施形態では、キメラ抗体は、マウス可変領域と、ヒト定常領域とを含む。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体を、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントおよびヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントを含む免疫グロブリン遺伝子を発現させることによって産生することができる。他の形態の「キメラ抗体」は、クラスまたはサブクラスが、元の抗体のものから改変されたか、または変化したものであってもよい。そのような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも呼ばれる。キメラ抗体を産生するための方法は、今や当技術分野で公知の、従来の組換えＤＮＡおよび遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison,  S.  L.,  et  al.,  Proc.  Natl.  Acad  Sci.  USA  81  (1984)  6851-6855；米国特許第５，２０２，２３８号および第５，２０４，２４４号を参照されたい。
【００６８】
「競合的結合」を、試験下の免疫グロブリン／抗体／結合性断片が、参照抗体の、タウ（例えば、タウ配列番号１２）などの共通の抗原への特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。数多くの型の競合的結合アッセイが公知であり、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli  et  al.,  Methods  in  Enzymology  9:242  (1983)を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirkland  et  al.,  J.  Immunol  137:3614  (1986)を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow  and  Lane,  Antibodies:  A  Laboratory  Manual,  Cold  Spring  Harbor  Press  (1988)を参照されたい）；Ｉ１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel  et  al.,  Mol.  Immunol.  25(1):7  (1988)を参照されたい；固相ビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheung  et  al.,  Virology  176:546  (1990)）；および直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer  et  al.,  Scand.  J.  Immunol.  32:77  (1990)）がある。一部の実施形態では、そのようなアッセイは、固体表面またはこれらの、未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンのいずれかを担持する細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合的阻害を、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。一部の実施形態では、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、それは参照抗体の共通抗原への特異的結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれより多く阻害することになる。
【００６９】
本明細書で使用される場合、用語「コンジュゲート」とは、第１の分子（例えば、抗体）の官能基と、第２の分子（例えば、検出可能なシグナルまたは治療剤もしくは薬物）の官能基との化学反応から形成される結合または化学部分を指す。そのような結合としては、限定されるものではないが、共有結合および非共有結合が挙げられるが、そのような化学部分としては、限定されるものではないが、エステル、カルボネート、イミンリン酸エステル、ヒドラゾン、アセタール、オルトエステル、ペプチド結合、およびオリゴヌクレオチド結合が挙げられる。
【００７０】
「進行を遅延させること」および「進行を防止すること」とは、ＡＤなどの、特定の疾患に罹りやすいか、またはそうでなければ特定の疾患のリスクがある患者への治療剤の投与を指す。防止は、ＡＤのリスクがある対象への予防的投与を包含する。一般的集団にある者は誰でも、ＡＤのリスクがある。一部の個体は、ＡＤのリスクが高い。一部の個体は、ＡＤの遺伝的リスクが高い。進行を遅延させること、および進行を防止することは、疾患のリスクを除去もしくは低減するか、または疾患の開始を遅延させることができる。ＡＤの開始または進行の遅延を、類似する集団または個体における標準的な疾患進行時系列と比較することによって測定することができる。Ostrowitzki  et  al.,  Alzherimers  Res  Ther.,  9(1):95,  2017を参照されたい。進行を遅延させるための具体的な実証的および例示的実施形態を、以下に記載する。
【００７１】
用語「エピトープ」とは、免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合性断片）が特異的に結合することができる抗原上の部位を指す。かくして、タウ上のエピトープは、免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合性断片）が特異的に結合することができるタウ上の部位である。特異的結合とは、一部の実施形態では、非特異的相互作用と測定可能に異なる結合を指す。例えば、一般的には結合活性を有しない類似する構造の分子である対照分子の結合と比較した、ある分子の結合を決定することにより、または類似する結合親和性を共有するが、標識されていない対照分子を用いた競合アッセイにより、特異的結合を測定することができる。この場合、標識された標的のプローブへの結合が過剰の未標識の標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。例えば、少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１１Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１２Ｍの、またはそれより高い、標的に対するＫｄを有する分子によって、この用語を示すことができる。一実施形態では、用語「特異的結合」とは、ある分子が、他の任意のポリペプチドまたはエピトープに実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する結合を指す。
【００７２】
本明細書で使用される用語としてのエピトープは、タンパク質の三次フォールディングによって並置される連続的アミノ酸または非連続的アミノ酸のいずれかから形成させることができる。エピトープは、コアエピトープペプチドのＮおよび／またはＣ末端上に、抗体によって結合されるコア領域の周囲のアミノ酸のさらなるストレッチ、例えば、１、２、３、４、５、１０、１５、２０個またはそれより多いアミノ酸を含んでもよい。連続的アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒を用いた処理時に失われる。エピトープは、多くはユニークな空間コンフォメーションにある、典型的には、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸を含む。エピトープの空間コンフォメーションを決定する方法としては、例えば、アラニンスキャニング、ｘ線結晶解析、および２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Epitope  Mapping  Protocols  in  Methods  in  Molecular  Biology,  Vol.  66,  G.  E.  Morris,  Ed.  (1996)を参照されたい。例示的な方法が、開示される抗体について考察され、本明細書で使用される。「立体構造エピトープ」は、抗体またはそのタウ結合性断片がコンフォメーション特異的様式で結合するエピトープである。タンパク質に基づくエピトープの場合、結合は、エピトープを担持するタンパク質の二次、三次、または四次構造に依存し得る。換言すれば、抗体は、構造特異的様式で、または四次構造特異的様式で結合する。
【００７３】
本明細書で考察される場合、タウ上のエピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ上のアミノ酸残基を参照して同定される。当業者であれば、例えば、ＢＬＡＳＴ（登録商標）などのアラインメントプログラムにより、他のタウアイソフォームおよび断片上の対応するアミノ酸残基を容易に同定することができる。別途指摘しない限り、タウ上の特定のアミノ酸残基に対する参照は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒを指し、他のタウアイソフォームおよび断片上の対応する位置を包含することが理解されるべきである。
【００７４】
抗体のパパイン消化によって、それぞれ、単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と、名称が容易に結晶化するその能力を反映する、残りの「Ｆｃ」断片（結晶化できる断片）とを産生することができる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と交差結合することができるＦ（ａｂ’）２断片が得られる。「Ｆｖ」は、Ｆａｂ断片中に含まれる重鎖の可変領域部分である。これらの断片はいずれも、組換え産生することもできる。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害またはファゴサイトーシスを含む、抗体のエフェクター機能と関連する。抗体のＦｃ領域の変更（例えば、突然変異またはグリコシル化の変化）を使用して、そのエフェクター機能のいずれかをモジュレートする、ならびにその血清半減期および他の薬物動態特性を増大させることができる。
【００７５】
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含有する。Ｆａｂ’断片は、典型的には、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数個の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも遊離チオール基上に担持するＦａｂ’に関する本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、その間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生されたものである。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ」は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを含む。かくして、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２個の定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３個の定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインの可撓性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについては、Ｆｃは、Ｊ鎖を含んでもよい。ＩｇＧについては、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃｇａｍｍａ２およびＣｇａｍｍａ３）ならびにＣガンマ１（Ｃｇａｍｍａ１）とＣガンマ２（Ｃｇａｍｍａ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に対して残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むと定義され、そのナンバリングは、ＥＵナンバリングシステムによるものである（Edelman  G.  M.  et  al.,  (1969)  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  63(1);  78-85）。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）を、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することにより除去することができる。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基が除去された抗体と除去されていない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでもよい。Ｆｃは、単離したこの領域、またはＦｃポリペプチド、例えば、抗体の文脈でのこの領域を指してもよい。Ｆｃは、天然配列ＦｃまたはバリアントＦｃであってもよい。抗体エフェクター機能を変更するＦｃ部分中のアミノ酸残基の置換えは当技術分野で公知である（例えば、Winter  et  al.、米国特許第５，６４８，２６０号および第５，６２４，８２１号を参照されたい）。ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１０１５１（参照により本明細書に組み込まれる）に記載の１つの好適なＦｃは、ヒトＩｇＧ１抗体のＮ末端ヒンジ領域から、Ｆｃ領域の天然のＣ末端まで伸びる一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびBaum  et  al.,  1994,  EMBO  J.  13:3992-4001に記載されたＦｃ突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変化し、アミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化していることを除いて、ＷＯ９３／１０１５１に提示された天然Ｆｃ配列のものと同一である。突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対する減少した親和性を示してもよい。
【００７７】
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含有する最小の抗体断片を指す。この領域は、緊密に非共有結合によって会合している、１個の重鎖と１個の軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この構成においては、それぞれの可変ドメインの３個の超可変領域が相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。集合的に、６個の超可変領域が、抗体に対して抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なわずか３個の超可変領域を含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有し得るが、結合部位全体よりは親和性が低い。
【００７８】
本明細書で使用される場合、特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する重鎖または軽鎖可変「フレームワーク領域」を含むヒト化抗体は、例えば、天然に存在する体細胞突然変異または部位特異的突然変異の意図的導入のため、特定の生殖系列配列の重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域と比較してアミノ酸の相違を含有してもよい。様々な実施形態では、選択されるヒト化抗体は、重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域のアミノ酸配列において、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子の重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であってよく、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖系列配列）と比較した場合、ヒト化抗体をヒトに由来すると同定するアミノ酸残基を含有する。ある特定の場合、ヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされる重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域との少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高いアミノ酸配列同一性を有してもよい。一部の実施形態では、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト化抗体の重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域は、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされる重鎖または軽鎖可変フレームワーク領域のアミノ酸配列との１１アミノ酸以下、好ましくは、５アミノ酸以下、またはさらにより好ましくは、４、３、２、もしくは１アミノ酸以下の相違を示すことになる。
【００７９】
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。それらは、可変ドメイン中の超可変領域をひとくくりにする。ＦＲ残基を、標準的なナンバリングシステム、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、または改変型Ｃｈｏｔｉａナンバリングスキームに従って同定することができる。ＩＭＧＴユニークナンバリングシステムでは、保存されたアミノ酸は常に、同じ位置、例えば、システイン２３（第１のＣＹＳ）、トリプトファン４１（保存されたＴＲＰ）、疎水性アミノ酸８９、システイン１０４（第２のＣＹＳ）、フェニルアラニンまたはトリプトファン１１８（Ｊ−ＰＨＥまたはＪ−ＴＲＰ）を有する。例えば、Lefranc  M.  P.,  Immunology  Today  18,  509  (1997)；Lefranc  M.  P.,  The  Immunologist,  7,  132-136  (1999)；Lefranc,  M.  P.,  Pommie,  C.,  Ruiz,  M.,  Guidicelli,  V.,  Foulquier,  E.,  Truong,  L.,  Thouvenin-Contet,  V.  and  Lefranc,  Dev.  Comp.  Immunol.,  27,  55-77  (2003)を参照されたい。別の実施形態では、ＩＭＧＴユニークナンバリングは、フレームワーク領域（ＦＲ１−ＩＭＧＴ：１〜２６位、ＦＲ２−ＩＭＧＴ：３９〜５５位、ＦＲ３−ＩＭＧＴ：６６〜１０４位およびＦＲ４−ＩＭＧＴ：１１８〜１２８位）および相補性決定領域：ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ：２７〜３８位、ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ：５６〜６５位およびＣＤＲ３−ＩＭＧＴ：１０５〜１１７位の標準化された画定を提供する。ＩＭＧＴユニークナンバリングを、ＩＭＧＴ  Ｃｏｌｌｉｅｒｓ  ｄｅ  Ｐｅｒｉｅｓと命名された、２Ｄグラフィック表示で使用することができる。例えば、Ruiz,  M.  and  Lefranc,  M.  P.,  Immunogenetics,  53,  857-883  (2002)；Kaas,  Q.  and  Lefranc,  M.  P.,  Current  Bioinformatics,  2,  21-30  (2007)を参照されたい。また、それを３Ｄ構造を表示するために使用することもできる。例えば、IMGT/3Dstructure-DB  Kaas,  Q.,  Ruiz,  M.  and  Lefranc,  M.  P.,  T  cell  receptor  and  MHC  structural  data.  Nucl.  Acids.  Res.,  32,  D208-D210  (2004)を参照されたい。
【００８０】
本明細書における用語「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」は、抗体またはそのタウ結合性断片の第１と第２の定常ドメインの間のアミノ酸を含む可撓性ポリペプチドを含む。本明細書で言及される「ヒンジ領域」は、２個の重鎖を架橋するシステイン残基を包含する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧにのみ存在する、６〜６２アミノ酸長の配列であってもよい。
【００８１】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図され、例えば、ヒトから単離するか、または組換え産生することができる。抗体の定常領域は、例えば、ヒトＩｇＧ１型抗体の定常領域であってもよい。そのような領域は、アロタイプであってもよく、例えば、Johnson,  G.,  and  Wu,  T.  T.,  Nucleic  Acids  Res.  28  (2000)  214-218およびその中で参照されるデータベースによって記載される。
【００８２】
用語「ヒト化抗体」とは、フレームワーク領域（ＦＲ）および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンの残基（例えば、親マウス免疫グロブリン残基）と比較して、ヒトに由来する免疫グロブリンのアミノ酸残基を含むように改変されている抗体を指す。一実施形態では、マウスＣＤＲは、「ヒト化抗体」を調製するためにヒト抗体のフレームワーク領域中に移植される。別の実施形態では、ヒトフレームワークは、マウス抗体中に「移植」されるか、またはスプライスされ、マウス抗体のＣＤＲを保持し、そのフレームワークを、ヒト起源のフレームワークと置き換える。移植およびスプライシングを、ＰＣＲおよび突然変異誘発を含む、様々な組換えＤＮＡ技術によって行うことができる。様々なヒト化方法が、当技術分野に存在する（例えば、ＣＤＲグラフティング、再形成、トランスジェニック動物、コンビナトリアルライブラリー）。例えば、Riechmann,  L.,  et  al.,  Nature  332  (1988)  323-327；Neuberger,  M.S.,  et  al.,  Nature  314  (1985)  268-270；Sastry  L,  Alting-Mess  M,  Huse  WD,  Short  JM,  Sorge  JA,  Hay  BN,  Janda  KD,  Benkoviv  SJ,  Lerner  RA  (1989)  Cloning  of  the  immunological  repertoire  for  generation  of  monoclonal  catalytic  antibodies:  construction  of  a  heavy  chain  variable  region-specific  cDNA  library.  Proc  Natl  Acad  Sci  USA  86,  5728-5732；およびHuse  WD,  Sastry  S,  Iverson  SA,  Kang  AS,  Alting-Mees  M,  Burton  DR,  Benkoviv  SJ,  Lerner  RA  (1989)  Generation  of  a  large  combinatorial  library  of  the  immunoglobulin  repertoire  in  phage  lambda.  Science  246,  1275-1281を参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、その元の抗原結合特性を保持しながら、よりヒトのようなものである。Presta,  L.G.  Engineering  of  therapeutic  antibodies  to  minimize  immunogenicity  and  optimize  function.  Advanced  Drug  Delivery  Reviews,  Volume  58,  Issues  5-6:  640-656  (2006)。一部の実施形態では、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリーまたはヒト生殖系列配列のライブラリーに対してスクリーニングする。次いで、齧歯類のものに最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク領域として許容することができる（Sims  et  al.,  J.  Immunol.  1993;  151:2296  et  seq.；Chothia  et  al,  Chothia  and  Lesk,  J.  Mol.  Biol.  1987;  196901-917）。別の実施形態では、ヒト化は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用することを含む。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用することができる（Carter  et  al.,  PNAS  USA,  1992;  89:4285  et  seq.；Presta  et  al.,  J  Immunol  1993;  151:2623  et  seq.）。ヒト患者における抗体分子の免疫原性を低下させるように設計された他の方法としては、ベニア抗体（例えば、米国特許第６，７９７，４９２号ならびに米国特許出願公開第２００２００３４７６５号および第２００４０２５３６４５号を参照されたい）ならびにＴ細胞エピトープ分析および除去によって改変された抗体（例えば、米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号および米国特許第５，７１２，１２０号を参照されたい）が挙げられる。様々な実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体のＣＤＲは、マウスモノクローナルＤＣ２Ｅ７抗体のＣＤＲ配列、すなわち、配列番号１〜６に対応する。
【００８３】
本明細書で使用される場合、用語「超可変領域」とは、抗原結合に多くは直接的に寄与する抗体のアミノ残基を指す。この用語は、用語「相補性決定領域」（または「ＣＤＲ」）と同義である。一実施形態では、ＩＭＧＴによれば、超可変領域は、一般的には、重鎖および軽鎖可変ドメインのそれぞれの上の３つの伸長物中のアミノ酸を含む（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２７〜３２（ＬＣＤＲ１）、４９〜５１（ＬＣＤＲ２）、および８８〜９６（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３３（ＨＣＤＲ１）、５１〜５８（ＨＣＤＲ２）、および９７〜１０２（ＨＣＤＲ３）。
【００８４】
用語「不溶性タウ」とは、例えば、脳または溶液中でのその特徴的なパターンによって同定することができる、タウの凝集体（例えば、神経原線維変化、ニューロピルスレッド、ピック小体、コイル小体など）を指す。例えば、タウ凝集体を、ホモジェナイズされた脳試料の遠心分離によって分離し、例えば、ウエスタンブロットまたはＥＬＩＳＡアッセイによって評価することができる。例えば、Lasagna-Reeves  et  al.,  FASEB  J.  26:1946-59  (2012)を参照されたい。タウ凝集体は、タウ単量体、タウ二量体、三量体、または粒状タウオリゴマー（ＧＴＯ）などのオリゴマー、ならびに特に、ペアードヘリカルフィラメント（ＰＨＦ）およびストレートフィラメント（ＳＦ）を含む様々な型のフィラメントから構成されていてもよい。Cowan,  C.M.  and  Mudher,  A.,  Are  tau  aggregates  toxic  or  protective  in  tauopathies?,  Frontiers  in  Neurology,  4:114  (2013)。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「単離された核酸」は、その起源に基づいて、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全部もしくは一部と会合していない、（２）天然で連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されている、または（３）より大きい配列の一部として天然には存在しない、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源またはその一部の組合せのポリヌクレオチドを意味する。
【００８６】
「連結された」とは、ペプチド、抗体、化合物、または固体粒子への部分の結合を指す。この用語は、部分が、ペプチド、抗体、化合物、または固体粒子にカップリングされる、または複合体化される、または共有結合もしくは非共有結合によって結合される例を包含する。例えば、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片を、ビーズまたは他の固体粒子上に共有結合または非共有結合によって被覆することができる。部分を、ペプチドまたは抗体との融合物として化学的に架橋する、または発現させる、または合成することができる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「タウ−分子複合体を形成することができる分子」は、タウ種に優先的に結合して、複合体を形成することができる任意の薬剤である。この用語は、抗体、例えば、本明細書に開示される抗タウ抗体、ならびに抗原受容体、Ｆｃコンジュゲート受容体、受容体断片、補体因子、およびタウと複合体を形成することができる任意の他の好適な結合部分を包含する。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「核酸」は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよい。
【００８９】
「病理学的タウ」は、病理学的タウ配座異性体および構造を含み、以下の全てを包含する：疾患改変タウ（例えば、高リン酸化タウ、トランケートされたタウなど）、誤秩序（ｍｉｓｏｒｄｅｒｅｄ）タウ、誤無秩序（ｍｉｓｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ）タウ、誤無秩序可溶性タウ、不溶性タウ、タウオリゴマーおよびフィラメント、神経原線維変化、ニューロピルスレッド、老人斑、ゴーストタングルおよび軸索スフェロイドなどの細胞外および細胞内タウ凝集体、ピック小体、コイル小体、房状アストロサイト、アストロサイト斑、またはＡＤもしくは別のタウオパチーと関連する任意の他の形態のタウ。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「試料」または「生体試料」とは、試験目的で対象から取得される組織または体液（例えば、血液、ＣＳＦなど）の任意の部分を指す。試料を、対象から直接単離するか、または試験前にさらにプロセッシングすることができる（例えば、希釈、固定、変性、分割、分離、遠心分離、免疫複合体解離などによる）。診断またはモニタリング目的で使用される試料の部分も、この用語によって包含される。また、試料を、試験中に、または試験後にさらにプロセッシングすることもできる（例えば、免疫沈降、精製、分配などによる）。用語「試料」および「生体試料」は、これらのプロセッシングステップの前、間、および／または後の組織または体液に同等に適用される。本明細書で使用される場合、用語「対照試料」とは、健康な患者または診断された別のタウオパチーを有する患者または生体液、例えば、ＣＳＦ中に既知のレベルのタウ種を有する患者から得られる試料を指す。
【００９１】
様々な型のタウ（すなわち、タウタンパク質種）が、対象中に、例えば、脳組織またはＣＳＦもしくは血液などの試料中に存在してもよい。これらの型のタウに関する詳細は公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２００４／００７５４７Ａ２および米国特許第９，５１８，１０１号に記載されている。さらなるアイソフォームの詳述（例えば、タウ２Ｎ４Ｒ）なしで使用される場合、用語「タウ」は、別途特定されない限り、全ての形態のタウならびにタウ断片を包含する。
【００９２】
用語「薬学的に許容される」とは、動物またはヒトにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に生物学的または薬理学的に適合することを意味し、好ましくは、連邦もしくは州政府の規制当局によって認可されるか、または動物、より具体的には、ヒトにおける使用のための米国薬局方もしくは他の一般的に認識される薬局方に列挙されることを意味する。
【００９３】
用語「リン酸化タウ」とは、１つまたは複数のリン酸化されたアミノ酸を含む任意のタウアイソフォームを指す。最も長い形態のヒト成人脳タウは、８０個のセリンまたはトレオニン残基および５個のチロシン残基を有し、したがって、分子のほぼ８０％がリン酸化される可能性がある。Goedert,  M.  et  al,  Multiple  isoforms  of  human  microtubule-associated  protein  tau:  sequences  and  localization  in  neurofibrillary  tangles  of  Alzheimer's  disease.  Neuron  3,  519-526  (1989)を参照されたい。リン酸化タウという用語はまた、リン酸化タウアミノ酸の任意の組合せも指す。タウは、微小管動力学、軸索輸送および神経突起伸長の調節において重要な役割を果たす。タウのこれらの機能は全て、部位特異的リン酸化によってモジュレートすることができ、正常なリン酸化事象の変更（例えば、高リン酸化、異常リン酸化）は、ＡＤなどの神経変性疾患に寄与し得る。Johnson  GV  et  al.,  Tau  phosphorylation  in  neuronal  cell  function  and  dysfunction.  J.  Cell  Sci.  2004  Nov  15;117(Pt  24):  5721-9。
【００９４】
一部の実施形態では、リン酸化タウは、アミノ酸１８８と２２７との間に１つまたは複数のリン酸化された残基（タウタンパク質２Ｎ４Ｒ中でナンバリングされる、または別のタウ断片もしくはアイソフォーム中の同等の残基）の任意の組合せを有するタウタンパク質を指す。別の実施形態では、リン酸化タウは、少なくともトレオニン２１７（タウタンパク質２Ｎ４Ｒ中でナンバリングされる、または別のタウ断片もしくはアイソフォーム中の同等の残基）でリン酸化されたタウを指す。一部の実施形態では、タウタンパク質は、実施例で検出されるリン酸化タウタンパク質のようにリン酸化される。
【００９５】
「病理学的タウ」とは、健康な個体の脳内で見出される天然の、アンフォールディングされたタウタンパク質を指し、異なる長さのものであってもよい。そのようなタウタンパク質は、典型的には、高度に可溶性であり、一般的には、凝集の傾向が低い。Wang  et  al.,  Tau  in  physiology  and  pathology,  Nature  Reviews,  17:22-35,  2016を参照されたい。
【００９６】
本明細書で使用される場合、用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図される。そのような用語は、特定の対象の細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことが意図されるが理解されるべきである。ある特定の改変が、突然変異または環境的影響のいずれかに起因して後の世代で生じ得るため、そのような子孫は、事実、親細胞と同一でなくてもよいが、本明細書で使用される場合の用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。
【００９７】
抗体を参照して本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」とは、抗体が、構造的に異なる抗原またはエピトープに結合するよりも高い親和性で、その標的抗原またはエピトープに結合することを意味する。
【００９８】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成するのを可能にする、ＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、Pluckthun  in  The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies,  vol.  113,  Rosenburg  and  Moore  eds.,  Springer-Verlag,  New  York,  pp.  269-315  (1994)を参照されたい。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「処置」は、疾患、疾患の１つもしくは複数の症状、または疾患に対する素因を治癒させる、癒やす、軽減する、緩和する、変更する、治す、改良する、改善する、または影響する目的で、疾患、疾患の症状、または疾患に対する素因を有する対象への治療剤の適用または投与と定義される。さらに、単独の、または別の治療剤と組み合わせた本開示の組成物が、処置されるアルツハイマー病または別のタウオパチーの少なくとも１つの症状を、処置の非存在下でのその症状と比較して、治癒させる、癒やす、軽減する、緩和する、変更する、治す、改良する、改善する、または影響する限り、その結果は、障害の全ての症状が治癒される、癒やされる、軽減される、緩和される、変更される、治される、改良される、改善される、または影響されるか否かに関係なく、基礎となる障害の処置と考えるべきである。疾患、疾患の１つもしくは複数の症状、または疾患に対する素因を部分的におよび完全に処置、例えば、部分的または完全に治癒させる、癒やす、軽減する、緩和する、変更する、治す、改良する、改善する、または影響することを包含すると理解されるべきである、治療剤の「有効量」を使用して、処置を達成することができる。「有効量」は、経験的に決定することができる。同様に、「治療有効量」は、記述される治療効果を達成するのに有効な濃度である。
【０１００】
「タウオパチー」とは、病理学的タウの形成と関連する疾患を指す。タウオパチーは、患者の脳内での異常な形態の微小管結合タンパク質タウの出現を伴う全ての神経疾患を包含する。この用語は、限定されるものではないが、以下の疾患：アルツハイマー病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、英国型認知症、デンマーク型認知症、ピック病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性疾患、グアムパーキンソン認知症複合、神経原線維型老年認知症、小球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー、前頭側頭型認知症（例えば、ＦＴＤＰ−１７）、第１７染色体連鎖パーキンソニズム、慢性外傷性脳症、および頷き病を含む。例えば、Goedert  M,  Clavaguera  F  and  Tolnay  M.  The  propagation  of  prion-like  protein  inclusions  in  neurodegenerative  diseases.  Trends  Neurol.  Sci.を参照されたい。一部の実施形態では、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する対象は、非流暢／失文法型原発性進行性失語症（ｎｆＰＰＡ）、意味型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、または筋萎縮性側索硬化症／前頭側頭型認知症（ＡＬＳ／ＦＴＤ）を有してもよい。一実施形態では、１つまたは複数のこれらの異常な形態のタウは、少なくとも１つのアッセイにおいて、本明細書に記載の抗体または結合性断片の１つによって認識される。一部の実施形態では、アッセイは、ＩＨＣである。他の実施形態では、アッセイは、ＥＬＩＳＡである。用語「別のタウオパチー」は、病理学的タウの出現を伴うＡＤ以外の全ての神経疾患（例えば、タウに基づく原因の認知症）、例えば、上記に列挙された他のタウオパチーのいずれかを包含する。対照的に、認知症はまた、非タウに基づく病因からも生じることがあり、これらのものはタウオパチーという用語から外れることになる。
【０１０１】
用語「可変ドメイン」とは、免疫グロブリンのある特定の部分が、抗体の中の配列において大きく異なり、その特定の抗原に対するそれぞれの特定の抗体の結合および特異性において使用されるということを指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインを通して均等に分布しないことが多い。それは、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメイン中の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、ベータシート構造を接続し、一部の場合、その一部を形成するループを形成することが多い、３個の超可変領域によって接続された、ベータシート構成を採用することが多い、４個のＦＲを含む。それぞれの鎖の中の超可変領域（ＨＶＲ）は、ＦＲによってごく近くに一緒に保持され、他の鎖に由来する超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat,  et  al.,  Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest,  5th  Ed.  Public  Health  Service,  National  Institutes  of  Health,  Bethesda,  Md.  (1991)を参照されたい）。抗体の「定常ドメイン」は、対照的に、典型的には抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）には寄与する。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、それが連結された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。１つの型のベクターは、「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントをライゲートすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートすることができる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自己複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれることが可能であり、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を方向付けることができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に、「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、プラスミドの形態にあることが多い。プラスミドは最も一般的に使用される形態のベクターであるため、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」を、互換的に使用することができる。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの、他の形態の発現ベクターを含むことが意図される。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、本文が別途明確に示さない限り、複数形を同様に含むことが意図される。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」またはその変形が、詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかにおいて使用される限り、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同様の様式で包括的であることが意図される。本明細書で使用される場合、用語「約」および「およそ」は、当業者によって決定される特定の値に関する許容される誤差の範囲内であることを意味し、その値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定系の限界に一部依存することになる。例えば、「約」は、当技術分野における実務に従い、１〜１．５標準偏差または１〜２標準偏差を意味してもよい。あるいは、「約」は、所与の値の２０％、１０％、５％または１％以内の範囲を意味してもよい。あるいは、特に、生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、ある値の、１０分の１以上１０倍以下、５分の１以上５倍以下、および２分の１以上２倍以下を意味してもよい。特定の値が本出願および特許請求の範囲に記載される場合、別途記述しない限り、特定の値に関する許容される誤差の範囲内を意味する用語「約」が、推測されるべきである。また、本明細書に記載される全ての範囲は、終点ならびにその間の全ての点を含む。用語「または」は、本文が別途明確に示さない限り、「および／または」を意味することが理解されるであろう。本明細書で引用される全ての参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。組み込まれた参考文献における何かが、矛盾するか、または本明細書に提供される材料と一致しない程度に、本開示は制御すべきである。
抗体
【０１０４】
ＡＤの検出、モニタリング、処置、および防止にとって有用な新規抗タウ抗体が本明細書に記載される。一部の実施形態では、抗体は、リン酸化タウに結合することができる。一部の実施形態では、抗体は、生体試料（例えば、ＣＳＦまたは血液）中のリン酸化タウに結合することができ、それらを、ＡＤと、他のタウオパチーとを非侵襲的に区別するのに有用にする。一部の実施形態では、抗体を、第２の薬剤（例えば、放射性トレーサーまたは治療剤などの、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片以外の薬剤）にコンジュゲートすることができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片は、互いにコンジュゲートされている。一部の実施形態では、抗体および／またはコンジュゲートされた抗体は、血液脳関門を通過して、脳内のタウに結合し、それらを、脳におけるＡＤおよび他のタウオパチーのｉｎ  ｖｉｖｏでの検出または処置にとって有用にする。
【０１０５】
抗体ＣＤＲおよび可変ドメイン、ならびに完全長タウタンパク質２Ｎ４Ｒおよびその部分の配列を、以下の表１に示す。様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体および結合性断片は、表に開示される１つもしくは複数のＣＤＲおよび／もしくは可変ドメイン配列を含む、ならびに／または表に開示されるタウタンパク質２Ｎ４Ｒの１つもしくは複数の部分に結合する。
【表１−１】
2021520777.tif 000002
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【０１０６】
様々な実施形態では、本明細書に開示されるタウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片は、上記の表１に開示された１つまたは複数のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、タウ、例えば、２１７位でリン酸化されたタウに結合する能力を保持しながら、表１に開示された１つまたは複数の配列のバリアントを含む。
【０１０７】
例えば、一部の実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３個の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３個の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１、または５位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２、または１位、４位、５位、６位、および８位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ならびに／あるいはＬＣＤＲ１は、配列番号４、または２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５、または３位に置換を有する配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６、または４位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【０１０８】
特定の位置での置換を、ペプチド配列のアミノ末端（または表中の左端）で開始して、アミノ酸配列、例えば、表１に列挙された配列中で左から右に向かって（アミノ末端からカルボキシ末端に向かって）計数することによって決定することができる。
【０１０９】
様々な実施形態では、ＨＣＤＲ１の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ１の６位の置換はグリシンである。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２の１位の置換はバリンであり、ＨＣＤＲ２の４位の置換はアラニンであり、ＨＣＤＲ２の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の６位の置換はセリンであり、および／またはＨＣＤＲ２の８位の置換はバリンである。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンである。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ２の３位の置換はグリシンである。一部の実施形態では、ＬＣＤＲ３の４位の置換はアルギニンであり、および／またはＬＣＤＲ３の６位の置換はトレオニンである。
【０１１０】
様々な実施形態では、ＨＣＤＲ１は、５位に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、８位に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、および／もしくはＨＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含む、ならびに／またはＬＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、および／もしくはＬＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【０１１１】
様々な実施形態では、ＨＣＤＲ１の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の８位の置換はバリンであり、ＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンである。
【０１１２】
様々な実施形態では、表１に開示されたもののバリアント配列を含む抗体または抗原結合性断片は、抗体ＣＤＲのいずれか（例えば、６つのＣＤＲ全部）ならびに／または図２４〜２７Ｂに示されるものから選択される完全な重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン配列（例えば、特定の抗体クローンの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列の対となるセット）を含む。
【０１１３】
様々な実施形態では、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が開示される。様々な実施形態では、ＣＤＲおよび／または可変ドメイン配列は、表１に列挙されたものから選択される。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
様々な実施形態では、重鎖可変領域が、配列番号７、または１、２、３、９、１２、１９、３０、３１、３５、３７、４２、４３、４８、４９、５１、５４、５５、５６、５８、６２、６３、６４、６５、６６、６８、６９、７０、７３、７６、７７、７８、７９、８０、８３、８４、８８、９４、９６、１０７、１０８、および１１２位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む、ならびに／あるいは軽鎖可変領域が、配列番号８、または３、７、１１、１４、１７、１９、２０、２１、２４、２５、２８、３９、４２、４９、５２、５６、６９、７１、７５、９２、９４、９９、１０５、および１０６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が開示される。
【０１１５】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、１、２、３、９、１２、１９、３０、３１、３５、３７、４２、４３、４８、４９、５１、５４、５５、５６、５８、６２、６３、６４、６５、６６、６８、６９、７０、７３、７６、７７、７８、７９、８０、８３、８４、８８、９４、９６、１０７、１０８、および１１２位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、２位はアラニンであり、３位はアルギニンであり、９位はアルギニンであり、１２位はアラニンであり、１９位はアルギニンであり、３０位はグリシンであり、３１位はグリシンであり、３５位はアルギニンであり、３７位はアラニンであり、４２位はグリシンであり、４３位はメチオニンであり、４８位はイソロイシンであり、４９位はトレオニンであり、５１位はバリンであり、５４位はアラニンであり、５５位はグリシンであり、５６位はセリンであり、５８位はバリンであり、６２位はグリシンであり、６３位はアラニンであり、６４位はアラニンおよびグルタミン酸から選択され、６５位はグルタミン酸であり、６６位はアスパラギン酸であり、６８位はロイシンであり、６９位はアラニンであり、７０位はトレオニンであり、７３位はアスパラギンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンであり、７８位はアラニンであり、７９位はメチオニンであり、８０位はセリン、ロイシン、およびヒスチジンから選択され、８３位はトレオニンであり、８４位はアラニンであり、８８位はプロリンであり、９４位はシステインであり、９５位はグリシンであり、１０７位はアラニンであり、１０８位はプロリンであり、ならびに／または１１２位はプロリンである。
【０１１６】
一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、３、７、１１、１４、１７、１９、２０、２１、２４、２５、２８、３９、４２、４９、５２、５６、６９、７１、７５、９２、９４、９９、１０５、および１０６位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域中の３位の置換はアルギニンであり、７位はプロリンであり、１１位はセリンもしくはロイシンから選択され、１４位はプロリンであり、１７位はバリンであり、１９位はアラニンであり、２０位はアラニンであり、２１位はバリンであり、２４位はグルタミン酸であり、２５位はトレオニンであり、２８位はアスパラギンであり、３９位はイソロイシンであり、４２位はセリンおよびアスパラギン酸から選択され、４９位はプロリンであり、５２位はグリシンであり、５６位はプロリンであり、６９位はグリシンであり、７１位はヒスチジンであり、７５位はバリンであり、９２位はアルギニンであり、９４位はトレオニンであり、９９位はセリンであり、１０５位はグリシンであり、ならびに／または１０６位はバリンである。
【０１１７】
様々な実施形態では、重鎖可変領域は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７、および８０位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む、ならびに／または軽鎖可変領域は、７、１１、２０、２８、３９、および６９位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【０１１８】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の２位の置換はアラニンであり、および／または３５位の置換はアルギニンである。
【０１１９】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の４９位の置換はトレオニンであり、および／もしくは７９位の置換はメチオニンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の１９位の置換はアラニンである。
【０１２０】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の４３位の置換はメチオニンであり、６５位はグルタミン酸であり、および／もしくは８０位はセリンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の５６位の置換はプロリンであり、９４位はトレオニンである。
【０１２１】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の１２位の置換はアラニンであり、６４位はグルタミン酸であり、７８位はアラニンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の２１位の置換はバリンである。
【０１２２】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の１０７位の置換はアラニンであり、および／または軽鎖可変領域中の４２位の置換はアスパラギン酸である。
【０１２３】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の１９位の置換はアルギニンであり、５１位はバリンであり、６６位はアスパラギン酸であり、８４位はアラニンであり、および／または軽鎖可変領域中の９９位の置換はセリンである。
【０１２４】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の３１位の置換はグリシンであり、および／または８０位の置換はセリンである。
【０１２５】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の７３位の置換はアスパラギンであり、および／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０１２６】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、および／または軽鎖可変領域中の４２位の置換はセリンである。
【０１２７】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の８０位の置換はロイシンであり、および／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、１０５位の置換はグリシンである。
【０１２８】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の５４位の置換はアラニンであり、および／または５６位はセリンである。
【０１２９】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６８位はロイシンであり、８３位はトレオニンであり、９９位はシステインであり、軽鎖可変領域中の２５位の置換はトレオニンであり、４９位はプロリンであり、および／または５２位はグリシンである。
【０１３０】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の１９位の置換はアルギニンであり、４２位はグリシンであり、および／または１１２位はプロリンである。
【０１３１】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の８０位の置換はロイシンであり、軽鎖可変領域中の３位の置換はアルギニンであり、および／または１７位はバリンである。
【０１３２】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の１９位の置換はアルギニンであり、３７位はアラニンであり、５５位はグリシンであり、７０位はトレオニンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、および／または４２位はセリンである。
【０１３３】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の６４位の置換はアラニンであり、６９位の置換はアラニンであり、および／または軽鎖可変領域中の４２位の置換はセリンである。
【０１３４】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の９位の置換はアルギニンであり、および／もしくは６２位はグリシンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンであり、および／もしくは１４位はプロリンである。
【０１３５】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、および／または軽鎖可変領域中の７５位の置換はバリンである。
【０１３６】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の５６位の置換はセリンであり、８８位はプロリンであり、および／もしくは９６位はグリシンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２４位はグルタミン酸であり、４２位はアスパラギン酸であり、７１位はヒスチジンであり、９２位はアルギニンであり、および／もしくは１０６位はバリンである。
【０１３７】
一部の実施形態では、重鎖可変領域中の８０位の置換はヒスチジンであり、および／または１０８位はプロリンである。
【０１３８】
一部の実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７、および８０位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、７、１１、２０、２８、３９、および６９位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、３０位はグリシンであり、３７位はアラニンであり、４８位はイソロイシンであり、５８位はバリンであり、６３位はアラニンであり、６８位はロイシンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンであり、および／または８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、１１位はロイシンおよびセリンから選択され、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンであり、３９位はイソロイシンであり、および／または６９位はグリシンである。
【０１３９】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の６８位の置換はロイシンであり、および／または軽鎖可変領域中の３９位の置換はイソロイシンである。
【０１４０】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。
【０１４１】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、および／または５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、および／または６９位はグリシンである。
【０１４２】
様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。
【０１４３】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、および／もしくは２８位はアスパラギンである。
【０１４４】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、および／もしくは８０位はセリンであり、ならびに／または軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０１４５】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、および／または７７位はセリンである。
【０１４６】
様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０１４７】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２８のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
【０１４９】
様々な実施形態では、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が、３個の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３個の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が、配列番号１、または５位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が、配列番号２、または１位、４位、５位、６位、および８位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が、配列番号４、または２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が、配列番号５、または３位に置換を有する配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が、配列番号６、または４位および６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含む、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が開示される。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ１の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ１の６位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の１位の置換はバリンであり、ＨＣＤＲ２の４位の置換はアラニンであり、ＨＣＤＲ２の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の６位の置換はセリンであり、ＨＣＤＲ２の８位の置換はバリンであり、ＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンであり、ＬＣＤＲ２の３位の置換はグリシンであり、ならびに／またはＬＣＤＲ３の４位の置換はアルギニンであり、および／もしくはＬＣＤＲ３の６位の置換はトレオニンである。
【０１５０】
様々な実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１は、５位に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、８位に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、および／またはＬＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【０１５１】
様々な実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１の５位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の８位の置換はバリンであり、および／またはＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンである、抗体またはその抗原結合性断片。
【０１５２】
様々な実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号４１のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号４２のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号３７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、または
ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、およびＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【０１５３】
様々な実施形態では、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、または
重鎖可変領域は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、または
【０１５４】
重鎖可変領域は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
【０１５５】
また、様々な実施形態では、本段落に開示されるように、配列によって定義される抗体またはその抗原結合性断片と結合について競合し得る抗体または抗原結合性断片も本明細書に開示される。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、本段落に開示されるように、配列によって定義される抗体またはその抗原結合性断片のものと同じタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上のエピトープに結合することができる。
【０１５６】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む。様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）を含むタウ上のエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）を含む。エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位にホスホ−トレオニンを含んでもよい、少なくとも１個、または１個より多い、リン酸化された残基を含有してもよい。一部の実施形態では、エピトープはまた、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せを含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２の配列）を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、エピトープは、１個より多いリン酸化された残基を含む領域、例えば、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１の配列）を含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、エピトープは、当業者には公知の任意の方法によって決定される。一部の実施形態では、アラニンスキャニングまたは欠失／突然変異誘発試験を使用して、エピトープを決定する。一部の実施形態では、質量分析を使用して、エピトープを決定する。ある特定の実施形態では、エピトープは、抗体−タウ複合体の結晶構造によって決定され、エピトープは、抗体結合ポケットの５オングストローム以内のタウ上の任意の接触残基と定義される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７、および８０位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または７、１１、２０、２８、３９、および６９位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域中の６８位の置換はロイシンであり、軽鎖可変領域中の３９位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、６９位はグリシンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０１５７】
他の態様では、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）への結合について、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体と競合することができる抗体が本明細書に開示される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７、および８０位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または７、１１、２０、２８、３９、および６９位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域中の６８位の置換はロイシンであり、軽鎖可変領域中の３９位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、６９位はグリシンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０１５８】
様々な実施形態では、競合は、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡、ＥＬＩＳＡ、ＨＴＲＦ、および／またはＳＰＲによって測定される。一実施形態では、競合ＥＬＩＳＡを使用して、競合的結合を測定する。別の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイを使用する。一部の実施形態では、開示される抗体と競合する抗体または抗原結合性断片は、配列番号７の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号８の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、開示される抗体が競合する抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９の重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号３０の軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。一部の実施形態では、開示される抗体が競合する抗体または抗原結合性断片は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７、および８０位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに／または７、１１、２０、２８、３９、および６９位のうちの１つまたは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、開示される抗体が競合する抗体または抗体断片において、重鎖可変領域中の６８位の置換がロイシンであり、軽鎖可変領域中の３９位の置換がイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、６９位はグリシンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体と同じ、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上の１つまたは複数のアミノ酸に結合することができる。
【０１５９】
様々な実施形態では、開示される抗体が競合する抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。ある特定の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む。他の実施形態では、エピトープは、少なくとも１個のリン酸化された残基を含む。別の実施形態では、少なくとも１個のリン酸化された残基は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位にホスホ−トレオニンを含み、必要に応じて、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せも含む。別の実施形態では、エピトープは、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２の配列）を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、エピトープは、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１の配列）を含む、またはそれからなる。
【０１６０】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）を含むか、またはそれからなるタウタンパク質２Ｎ４Ｒの領域または断片に結合することができ、その領域または断片は、リン酸化される。様々な実施形態では、領域または断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）を含む、またはそれからなる。様々な実施形態では、領域または断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１７に対応する位置でリン酸化され、必要に応じて、また、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）のセリン２１０、トレオニン２１２、セリン２１４、およびトレオニン２２０に対応する１つまたは複数の位置でリン酸化される。様々な実施形態では、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの領域または断片は、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２の配列）を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、エピトープは、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１の配列）を含む、またはそれからなる。
【０１６１】
様々な実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片は、例えば、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡、ＥＬＩＳＡ、ＨＴＲＦおよび／またはＳＰＲによって測定された場合、タウ上のリン酸化されたエピトープに結合することができる。一実施形態では、ＥＬＩＳＡを使用して、リン酸化および脱リン酸化タウへの結合について測定またはチェックする。別の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥアッセイを使用する。
【０１６２】
様々な実施形態では、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が本明細書に開示される。一部の実施形態では、タウ上のエピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含む。様々な実施形態では、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）を含むタウ上のエピトープに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が本明細書に開示される。一部の実施形態では、タウ上のエピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、ＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰ（配列番号１４の配列）を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、エピトープ上の１つまたは複数の残基はリン酸化されており、例えば、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの１６９位のリン酸化トレオニンである。
【０１６３】
様々な実施形態では、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）を含むタウの一部または断片に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が本明細書に開示される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）を含むタウの一部または断片に結合することができる。
【０１６４】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体のエピトープは、当業者には公知の任意の方法によって決定される。一部の実施形態では、アラニンスキャニングまたは欠失／突然変異誘発試験を使用して、エピトープを決定する。一部の実施形態では、質量分析を使用して、エピトープを決定する。ある特定の実施形態では、エピトープは、抗体−タウ複合体の結晶構造によって決定され、エピトープは、抗体結合ポケットの５オングストローム以内のタウ上の任意の接触残基と定義される。
【０１６５】
様々な実施形態では、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、タウに結合することができる抗体またはその抗原結合性断片が開示される。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上の１つまたは複数のアミノ酸への結合について、以前に記載された抗体またはその抗原結合性断片と競合することができる。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、本段落の以前に開示された抗体または抗原結合性断片によって結合されるタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上の同じエピトープに結合することができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、本段落の以前に開示された抗体または抗原結合性断片によって結合されるタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の断片または領域に結合することができる。
【０１６６】
様々な実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体または抗原結合性断片は、重鎖定常領域と、軽鎖定常領域とを含んでもよい。重鎖定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥアイソタイプ、または無傷の重鎖の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するその誘導体もしくは断片であってもよい。重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧアイソタイプであってもよい。重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプであってもよい。軽鎖定常領域は、ヒトカッパ軽鎖もしくはラムダ軽鎖または無傷の軽鎖の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するその誘導体もしくは断片であってもよい。軽鎖定常領域は、ヒトカッパ軽鎖であってもよい。
【０１６７】
様々な実施形態では、開示される任意の抗体または抗原結合性断片は、齧歯類抗体もしくはその抗原結合性断片、キメラ抗体もしくはその抗原結合性断片、ＣＤＲ移植抗体もしくはその抗原結合性断片、またはヒト化抗体もしくはその抗原結合性断片であってもよい。別の実施形態では、開示される任意の抗体または抗原結合性断片は、ヒトフレームワークまたは１つもしくは複数の復帰変異を有するヒトフレームワークを含む、ヒトまたはヒト由来重鎖および軽鎖可変領域を含む。例えば、開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，５６６，７７１号に概略された復帰変異戦略を参照されたい。様々な実施形態では、開示される任意の抗体または抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、またはＦｖ断片であってもよい。
【０１６８】
様々な実施形態では、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその機能的な抗原結合性断片が開示され、ＤＣ２Ｅ７は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９２の下で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体である。様々な実施形態では、抗体ＤＣ２Ｅ２またはその機能的な抗原結合性断片が開示され、ＤＣ２Ｅ２は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９１の下で寄託されているハイブリドーマによって産生される抗体である。また、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）上の同じエピトープに結合することができるか、またはタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）への結合について、抗体ＤＣ２Ｅ７もしくは抗体ＤＣ２Ｅ２のいずれかと競合することができる抗体および抗原結合性断片も開示される。
【０１６９】
様々な実施形態では、開示される任意の抗体またはその抗原結合性断片を、第２の薬剤にコンジュゲートしてもよい。第２の薬剤は、例えば、限定されるものではないが、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、核磁気共鳴マーカー、または重金属を含む、少なくとも１つの検出可能な薬剤であってもよい。一実施形態では、少なくとも１つの検出可能な標識は、放射性同位体である。一部の実施形態では、検出可能な標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
【０１７０】
一部の実施形態では、検出可能な標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態では、検出可能な標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
【０１７１】
一部の実施形態では、検出可能な標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、配列によって定義されるこの抗体と同じエピトープと、結合について競合するか、またはそれに結合することができる。
【０１７２】
本開示と一致する好適な型の検出可能な標識の例としては、限定されるものではないが、酵素、放射性同位体および放射性核種、コロイド金属、蛍光化合物、化学発光化合物、ビオチニル基、二次リポーター（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体のための結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ、および化学／電気化学／生物発光化合物が挙げられる。酵素としては、限定されるものではないが、ペルオキシダーゼ（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ）、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、カルボニックアンヒドラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、またはグルコース−６リン酸デヒドロゲナーゼが挙げられる。あるいは、標識は、ビオチン、ジゴキシン−ゲニン、または５−ブロモ−デスオキシウリジンであってもよい。また、ローダミン、ランタニド系リン光体、フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ローダミンおよびその誘導体、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、ダンシル、ウンベリフェロンなどを含む蛍光標識を、抗体およびその抗原結合性断片と組み合わせることもできる。そのようなコンジュゲートを、当業者には公知の方法によって調製することができる。それらを、直接的に、ポリアルデヒド、グルタルアルデヒド、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）もしくはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）などの、スペーサー基もしくは連結基を介して、または当技術分野で日常的に公知のものなどの他の結合剤の存在下で、標識と結合させることができる。
【０１７３】
他の検出可能な標識は、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１２６、ヨウ素−１３３、ヨウ素−１３１、臭素−７７、テクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１３ｍ、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテニウム−９５、ルテニウム−９７、ルテニウム−１０３、ルテニウム−１０６、水銀−２０３、スカンジウム−４７、テルリウム−１２１ｍ、テルリウム−１２８、ツリウム−１６５、ツリウム−１６７、ツリウム−１６８、フッ素−１８、イットリウム−９９、およびジルコニウム−８９などの放射性標識を含んでもよい。直接的または間接的に、例えば、ＥＤＴＡもしくはＤＴＰＡなどのキレート剤を介して抗体を放射性同位体で標識するための当業者には公知の既存の方法を使用することができる。
【０１７４】
様々な実施形態では、開示される任意の抗体または抗原結合性断片を、アルツハイマー病または別のタウオパチーのための少なくとも１つの治療剤であってよい第２の薬剤にコンジュゲートすることができる。一部の実施形態では、アルツハイマー病のための治療剤にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示されたものから選択されるいずれか１つまたは複数の（例えば、６つのＣＤＲ全部ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン）配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、配列番号４３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号７９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号８５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、または重鎖可変領域は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
【０１７５】
一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９および配列番号３０を含む。一部の実施形態では、治療剤にコンジュゲートされた抗体または抗原結合性断片は、配列によって定義されるこの抗体と同じエピトープと、結合について競合するか、またはそれに結合することができる。
【０１７６】
一部の実施形態では、治療剤は、アミロイドベータもしくはタウに対する受動免疫療法、またはアセチルコリンエステラーゼ（acetylcholinestarase）の阻害剤であってもよい。一部の実施形態では、治療剤を、ＣＡＤ１０６、ガンテネルマブ、クレネズマブ、ＩＶＩＧ、ＡＡＤｖａｃ１、ＡＣＩ−３５、ＮＩＣ５−１５、ＣＨＦ−５０７４、ＭＫ−８９３１、ＡＺＤ３２９３、ＬＹ３３  １４８１４、エレンベセスタット、チデグルシブ、鼻内ヒューマリンＲ、鼻内グルリシン、ドネペジルを含むＳＢ７４２４５７、アゼリラゴン、ニバルジピンのうちの１つまたは複数から選択することができる。Godyn  et  al.,  Pharmacological  Reports,  68:127-138,  2016を参照されたい。一部の実施形態では、治療剤を、アデュカヌマブ、ＡＬＺＴ−ＯＰ１ａ＋ＡＬＺＴ−ＯＰ１ｂ、アリピプラゾール、ＡＶＰ−７８６、ＡＺＤ３２９３（ＬＹ３３１４８１４）、ブレクスピプラゾール（Brexprprazole）（ＯＰＣ−３４７１２）、ＣＡＤ１０６、ＣＮＰ５２０、エレンベセスタット、インスリン（ヒューマリン）、ルマテペロン、ＪＮＪ−５４８６１９１１、メチルフェニデート、ＭＫ−４３０５（スボレキサント）、ナビロン、ニルバジピン、ピオグリタゾン、ＲＶＴ−１０１（インテピルジン）、ナトリウムオリゴマニュラレート（ＧＶ−９７１）、ＴＲｘ０２３７、ＴＴｐ４８８（アゼリラゴン）、ＡＡＤｖａｃ１、ＡＢＢＶ−８Ｅ１２、ＡＤ−ＳＶＦ細胞、ＡＮＡＶＥＸ２−７３、アトモキセチン、ＡＶＰ−７８６、ＡＺＤ０５３０（サラカチニブ）、ＢＡＣ、ＢＡＮ２４０１、ベンフォチアミン、ＢＩ４０９３０６、ブリオスタチン１、カンデサルタン、ＣＢ−ＡＣ−０２、シロスタゾール、ＣＰＣ−２０１、ＣＴ１８１２、ＤＡＯＩＢ、ドロナビノール、Ｅ２６０９、フォルモテロール、ｈＵＣＢ−ＭＳＣｓ、ＪＮＪ−５４８６１９９１、レベチラセタム、リラグルチド、ＬＹ３２０２６２６、ＮｅｗＧａｍ  １０％  ＩＶＩＧ、ニロチニブ、ＯＲＭ−１２７４１、ピマバンセリン、ピロメラチン、ポジフェン、ＰＱ９１２、プロブコール、ラサギリン、リルゾール、ＲＶＴ−１０１、Ｓ４７４４５、サルグラモスチム、シンバスタチン＋Ｌ−アルギニン＋テトラヒドロビオプテリン（ＳＬＡＴ）、ＳＴＡ−１、ＳＵＶＮ−５０２、Ｔ−８１７  ＭＡ、テミサルタン、ＵＢ−３１１、バラシクロビル、ＶＸ−７４５、ザナメラから選択することができる。Cummings  et  al.,  Alzheimer's  disease  drug  development  pipeline:  2017,  Alzheimer's  &  Dementia,  3:367-384,  2017を参照されたい。一部の実施形態では、抗タウ療法は、低分子もしくはペプチドワクチン療法、または抗タウ抗体療法を含む。その全体が参照により組み込まれる、米国特許第９，５１８，１０１号を参照されたい。
【０１７７】
さらなる実施形態では、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）（式中、（Ａ）は本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片であり、（Ｌ）は必要に応じたリンカーであり、（Ｃ）は第２の薬剤（例えば、検出可能な標識またはＡＤもしくは別のタウオパチーを処置するための治療剤）であり、リンカー（Ｌ）は、（Ａ）を（Ｃ）に連結する）を有するイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、（Ｃ）は、治療剤、イメージング剤、検出可能な薬剤、または診断剤である。一部の実施形態では、これらのコンジュゲートは、本明細書では抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と呼ばれる。
【０１７８】
本明細書で使用される場合、必要に応じたリンカー（Ｌ）は、存在しても、存在しなくてもよい。存在する場合、（Ｌ）は、（Ａ）を（Ｃ）に連結するために使用される分子である。一部の実施形態では、リンカーは、抗体と、第２の薬剤との両方に対して共有結合を形成することができる。好適なリンカーは、当業者には周知であり、限定されるものではないが、直鎖もしくは分枝鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、またはペプチドリンカーを含む。抗体および第２の薬剤がポリペプチドである場合、リンカーを、その側鎖基を介して（例えば、システインへのジスルフィド結合を介して）、構成要素であるアミノ酸に連結することができる。しかしながら、別の実施形態では、リンカーを、末端アミノ酸のアルファ炭素アミノおよびカルボキシル基に連結することができる。
【０１７９】
一部の状況では、イムノコンジュゲートがその標的部位に到達した時に、第２の薬剤を抗体から遊離させるのが望ましい。したがって、これらの状況では、イムノコンジュゲートは、標的部位の近くで切断可能である連結を含んでもよい。抗体から第２の薬剤を放出させるためのリンカーの切断を、イムノコンジュゲートが標的細胞の内部に、または標的部位の近くに晒される酵素活性または条件によって促進することができる。さらに他の実施形態では、リンカー単位は切断可能ではなく、薬物は、放出されないか、または例えば、抗体分解によって放出される。
【０１８０】
薬物および／またはリンカーの抗体またはその抗原結合性断片への共有結合のために、いくつかの異なる反応が利用可能である。これは、リシンのアミン基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基および芳香族アミノ酸の様々な部分を含む、抗体分子のアミノ酸残基の反応によって達成されることが多い。共有結合の最も一般的に使用される非特異的方法の１つは、化合物のカルボキシ（またはアミノ）基を、抗体のアミノ（またはカルボキシ）基に連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、ジアルデヒドまたはイミドエステルなどの二官能性薬剤を使用して、化合物のアミノ基を、抗体分子のアミノ基に連結した。また、薬物の抗体への結合のために、シッフ塩基反応も利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシル基を含有する薬物の過ヨウ素酸塩酸化を含み、かくして、アルデヒドを形成した後、結合剤と反応させる。結合は、結合剤のアミノ基を用いたシッフ塩基の形成によって起こる。イソチオシアネートを、薬物を結合剤に共有結合させるためのカップリング剤として使用することもできる。
【０１８１】
一部の実施形態では、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ（caveolea））中に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、限定されるものではないが、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼなどの、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであってもよい。例えば、Dubowchik  and  Walker,  1999,  Pharm.  Therapeutics  83:67-123を参照されたい。そのようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号に記載されている。他の実施形態では、切断性リンカーは、ｐＨ感受性、すなわち、ある特定のｐＨ値での加水分解に対して感受性である。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解性である。例えば、リソソーム中で加水分解性である酸不安定リンカー（例えば、ヒドラゾン（hydrozone）、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することができる（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；第５，８２４，８０５号；第５，６２２，９２９号；Dubowchik  and  Walker,  1999,  Pharm.  Therapeutics  83:67-123；Neville  et  al.,  1989,  Biol.  Chem.  264:14653-14661を参照されたい）。さらに他の実施形態では、リンカーは、還元条件下で切断性である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオ酢酸）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル（N  succinimidyl）−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）酪酸）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成させることができるものなどの、様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で公知である（例えば、Thorpe  et  al.,  1987,  Cancer  Res.  47:5924-5931；Wawrzynczak  et  al.,  In  lmmunoconjugates:  Antibody  Conjugates  in  Radiolmagery  and  Therapy  of  Cancer  (C.  W.  Vogel  ed.,  Oxford  U.  Press,  1987を参照されたい。また、米国特許第４，８８０，９３５号も参照されたい）。別の実施形態では、リンカーは、マロネートリンカー（Johnson  et  al.,  1995,  Anticancer  Res.  15:1387-93）、マレイミドベンゾイルリンカー（Lau  et  al.,  1995,  Bioorg-Med-Chem.  3(10):  1299-1304）、または３’−Ｎ−アミドアナログ（Laur  et  al.,  1995,  Bioorg-Med-Chem.  3(10):  1305-12）である。
【０１８２】
別の実施形態では、リンカー単位は切断性ではなく、薬物は抗体分解によって放出される（米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号を参照されたい）。一実施形態では、リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーの文脈における「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」とは、抗体−薬物コンジュゲート化合物の試料中の、リンカーの約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約３％以下、または１％以下が、抗体−薬物コンジュゲート化合物が細胞外環境（例えば、血漿）中に存在する場合に切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性ではないかどうかを、例えば、所定の時間（例えば、２、４、８、１６、または２４時間）にわたって抗体−薬物コンジュゲート化合物を血漿と共にインキュベートし、血漿中に存在する遊離薬物の量を定量することによって決定することができる。
【０１８３】
一部の実施形態では、（Ｌ）はまた、ポリアルデヒド、グルタルアルデヒド、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはジエチレントリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）などのスペーサー基または連結基を含んでもよい。
【０１８４】
一部の実施形態では、１つより多い第２の薬剤を、直接的に、またはリンカーによって、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片に結合することができる。ある特定の実施形態では、第２の薬剤の抗体に対する比は、平均で約１：１〜約１：８の範囲であってもよい。米国特許第７，４９８，２９８号を参照されたい。ＡＤＣのローディング（薬物／抗体比）を、異なる方法で制御することができる。ＷＯ２００６／０３４４８８を参照されたい。
核酸、ベクター、宿主細胞
【０１８５】
また、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片のいずれかの免疫グロブリン鎖の少なくとも１つの可変領域をコードする単離された核酸も開示される。ある特定の実施形態では、単離された核酸は、以前に記載された抗体または抗言結合性断片のいずれか１つの抗体または抗原結合性断片をコードする。他の実施形態は、核酸を含む単離されたベクターを提供する。別の実施形態は、核酸またはベクターのいずれかを含む単離された宿主細胞を含む。
【０１８６】
本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドまたは核酸は、例えば、これらのポリヌクレオチドのいずれかを、単独で、または組み合わせて含む、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡまたは合成的に産生されたＤＮＡもしくはＲＮＡまたは組換え的に産生されたキメラ核酸分子であってもよい。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクターの一部である。そのようなベクターは、好適な宿主細胞中、および好適な条件下でのベクターの選択および／または発現を可能にする、マーカー遺伝子および／または制御エレメントなどのさらなる遺伝子を含んでもよい。
【０１８７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、原核または真核細胞中での発現を可能にする、１つまたは複数の発現制御配列に作動可能に連結されている。ポリヌクレオチドの発現は、翻訳可能なｍＲＮＡへのポリヌクレオチドの転写を含んでもよい。真核細胞、例えば、哺乳動物細胞中での発現を確保する調節エレメントは、当業者には公知である。それらは通常、転写の開始を確保する調節配列と、必要に応じて、転写の終結および転写物の安定化を確保するポリＡシグナルとを含む。さらなる調節エレメントは、転写および翻訳エンハンサー、ならびに／または天然に関連する、もしくは異種プロモーター領域を含んでもよい。
【０１８８】
これに関して、当業者は、軽鎖および／または重鎖の少なくともＣＤＲおよび／または可変ドメインをコードするポリヌクレオチドは、両方の免疫グロブリン鎖または一方のみの可変ドメインをコードしてもよいことを理解するであろう。同様に、ポリヌクレオチドは、同じプロモーターの制御下にあるか、または発現のために別々に制御することができる。原核宿主細胞中での発現を許容する可能な調節エレメントは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＰＬ、ｌａｃ、ｔｒｐまたはｔａｃを含み、真核宿主細胞中での発現を許容する調節エレメントについては、酵母におけるＡＯＸＩもしくはＧＡＬ１プロモーターまたは哺乳動物および他の動物細胞におけるＣＭＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶプロモーター、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーもしくはグロビンイントロンである。
【０１８９】
転写の開始を担うエレメントの他に、そのような調節エレメントはまた、ポリヌクレオチドの下流の、ＳＶ４０−ポリＡ部位またはｔｋ−ポリＡ部位などの、転写終結シグナルを含んでもよい。さらに、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画へ方向付ける、またはそれを培地中に分泌することができるリーダー配列を、ポリヌクレオチドのコード配列に付加することができ、それらは当技術分野で公知である。使用される場合、リーダー配列を、翻訳、開始および終結配列、必要に応じて、翻訳されるタンパク質、またはその一部の、ペリプラズム空間または細胞外培地中への分泌を方向付けることができるリーダー配列と共に適切な段階で集合させることができる。一部の実施形態では、異種配列は、所望の特徴、例えば、発現される組換え産物の安定化または単純化された精製を与えるＣまたはＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードしてもよい。これに関連して、好適な発現ベクターは、当技術分野で公知であり、限定されるものではないが、Ｏｋａｙａｍａ−Ｂｅｒｇ  ｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ＰｃＤＮＡ１、ＰｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、およびｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）が挙げられる。
【０１９０】
一部の実施形態では、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができるベクター中の真核プロモーター系であってもよいが、原核宿主のための制御配列を使用することもできる。一度、ベクターが適切な宿主に組み込まれたら、宿主を、ヌクレオチド配列の高レベル発現にとって好適な条件下で維持し、所望に応じて、免疫グロブリン軽鎖、重鎖、軽鎖／重鎖二量体または無傷抗体、結合性断片または他の免疫グロブリン形態の収集および精製を行うことができる。例えば、Beychok,  Cells  of  Immunoglobulin  Synthesis,  Academic  Press,  N.Y.,  (1979)を参照されたい。
【０１９１】
様々な実施形態では、必要に応じて、本開示の抗体の他の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードする別のポリヌクレオチドと共に、本開示の抗体の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター、特に、プラスミド、コスミド、ウイルス、およびバクテリオファージを使用することができる。一部の実施形態では、ベクターは、発現ベクターおよび／または遺伝子導入もしくは遺伝子ターゲティングベクターである。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、またはウシパピローマウイルスなどのウイルスに由来する発現ベクターを、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターの、標的細胞集団への送達のために使用することができる。当業者には公知の任意の方法を使用して、組換えウイルスベクターを構築することができる。あるいは、本発明によって提供されるポリヌクレオチドおよびベクターを、標的細胞への送達のためにリポソーム中で再構成させることができる。本開示のポリヌクレオチドを含有するベクター（例えば、免疫グロブリン鎖コード配列の重鎖および／または軽鎖可変ドメイン）を、細胞宿主の型に応じて、公知の方法によって宿主細胞中に導入することができる。例えば、原核細胞のためには、塩化カルシウムトランスフェクションが一般的に利用されるが、他の細胞宿主のためにはリン酸カルシウム処理または電気穿孔を使用することができる。
【０１９２】
一部の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを用いて形質転換される。宿主細胞は、原核または真核細胞であってもよい。宿主細胞中に存在するポリヌクレオチドまたはベクターを、宿主細胞のゲノム中に組み込むか、またはそれを染色体外で維持することができる。宿主細胞は、細菌、昆虫、真菌、植物、動物またはヒト細胞などの、任意の原核または真核細胞であってもよい。好ましい真菌細胞は、例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどのＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のものである。組換え産生手順において用いられる宿主に応じて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体またはその抗原結合性断片をグリコシル化することができる。本開示と一致するある特定の抗体またはその抗原結合性断片はまた、最初のメチオニンアミノ酸残基を含んでもよい。本明細書に記載のポリヌクレオチドを使用して、当業者には一般に公知の技術のいずれかを使用して宿主を形質転換またはトランスフェクトすることができる。さらに、融合された、作動可能に連結された遺伝子を調製し、例えば、哺乳動物細胞および細菌中でそれらを発現させるための方法は、当技術分野で周知である。一般に、挿入されたポリヌクレオチドの効率的な転写を容易にするプロモーター配列を含有する発現ベクターは、宿主に関連して使用される。発現ベクターは、典型的には、複製起点、プロモーター、およびターミネーター、ならびに形質転換された細胞の表現型選択を提供することができる具体的な遺伝子を含有する。ＤＮＡ配列のための好適な供給源細胞ならびに免疫グロブリンの発現および分泌のための宿主細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（参照によって本明細書に組み込まれる、"Catalogue  of  Cell  Lines  and  Hybridomas,"  Fifth  edition  (1985)  Manassas,  Va.,  U.S.A.および他の利用可能なバージョン）などの、いくつかの供給源から取得することができる。さらに、本発明の細胞を含む、トランスジェニック動物、例えば、哺乳動物を、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片の大規模生産のために使用することができる。
【０１９３】
別の実施形態では、抗体ＤＣ２Ｅ７を産生するハイブリドーマが開示される。このハイブリドーマは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ａｔ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９２で寄託されている。
【０１９４】
別の実施形態では、抗体ＤＣ２Ｅ２を産生するハイブリドーマが開示される。このハイブリドーマは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ａｔ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｄｅｐｏｓｉｔ番号ＰＴＡ−１２４９９１で寄託されている。
組成物、製剤および組合せ
【０１９５】
一部の例示的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、ＡＤまたは別のタウオパチーの検出、防止、および／または処置においても有用である１つまたは複数のさらなる化合物と同時製剤化および／または同時投与することができる。
【０１９６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト対象に由来する生体試料（例えば、ＣＳＦまたは血液）中のリン酸化タウを検出するためのアッセイにおける使用のために製剤化される。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、検出可能な標識、例えば、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、核磁気共鳴マーカー、または重金属にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、アッセイにおける使用にとって好適な、本明細書に記載される２つまたはそれより多い（例えば、３、４、５つなど）抗体または抗原結合性断片が製剤化される。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、単独で、または好適な検出可能な標識にコンジュゲートされた、抗体クローンＤＣ２Ｅ７もしくはＤＣ２Ｅ２および／またはこれらのクローンに由来するＣＤＲもしくは可変ドメインを含む抗体もしくは断片を含む。一部の実施形態では、製剤は、以下に記載される古典的およびデジタルＥＬＩＳＡアッセイなどの、診断アッセイにおける使用にとって好適な追加のエレメントおよび試薬（例えば、磁気ビーズなどの、固相支持体または粒子）をさらに含む。
【０１９７】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体および抗原結合性断片は、生体試料中のリン酸化タウを検出する方法における使用のために調製される。例えば、抗体を、以下の実施例３に考察されるように調製および製剤化することができる。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片、例えば、ＤＣ２Ｅ７、ＤＣ１４９、ＤＣ８０７、および／もしくはＤＣ２Ｅ２またはその抗原結合性断片もしくはバリアントを、例えば、プロテインＧ親和性カラムを使用して、無血清ハイブリドーマ上清から精製することができる。次いで、精製された上清を、例えば、０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．７で溶出させ、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９．０で中和することができる。プールされた画分を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）などの緩衝液中で透析することができる。一部の実施形態では、緩衝化された抗体溶液を、例えば、限外濾過によって濃縮することができる。一部の実施形態では、抗体濃度は、式ｃ（ｍｇ／ｍｌ）＝Ａ２８０ｎｍ／１．４３を使用して、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定される。
【０１９８】
デジタルＥＬＩＳＡにおける捕捉抗体として使用される場合、ＤＣ２Ｅ７または抗原結合性断片を、好適な緩衝液中で調製することができる。一部の実施形態では、ＤＣ２Ｅ７または抗原結合性断片は、固体支持体（例えば、固体表面またはＥＬＩＳＡ捕捉ビーズ）上に固定される。一部の実施形態では、ＤＣ２Ｅ７または抗原結合性断片は、例えば、以下の実施例１０に記載のように、固体表面に連結されている。簡単に述べると、ＤＣ２Ｅ７を、ビーズ、例えば、磁気ビーズ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ）にカップリングさせることができる。一部の実施形態では、ＤＣ２Ｅ７は、約０．１〜５．０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１．０ｍｇ／ｍＬ）の濃度でビーズにカップリングされる。一部の実施形態では、ＤＣ２Ｅ２または抗原結合性断片は、検出抗体として使用され、検出可能な標識にコンジュゲートすることができる。例えば、抗体または抗原結合性断片を、例えば、抗体濃度に対して１〜２００倍（例えば、約１２０倍）過剰のビオチンへの曝露によって、検出目的でビオチン化してもよい。
【０１９９】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、検出可能な標識と同時製剤化および／または同時投与することができる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、核磁気共鳴マーカー、または重金属である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、抗体または抗原結合性断片と会合（例えば、共有結合または非共有結合によって）している。抗体投与のための好適な添加剤および製剤条件は、例えば、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）、または静脈内、筋肉内もしくは皮下注射のための抗体を製剤化するための当技術分野で公知のものを使用することができる。
【０２００】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＡＤまたは別のタウオパチーの防止および／または処置においても有用であるさらなる化合物と共に製剤化される。これらのものとしては、限定されるものではないが、ベータ−アミロイドペプチド（例えば、Ｎ末端アミロイドベータペプチド）および突然変異型ジフテリア毒素、ＫＬＨまたは他の担体などの、他の化合物にコンジュゲートされていても、されていなくてもよいタウペプチドなどの、ＡＤのための能動および受動免疫療法において有用である化合物が挙げられる。他の選択肢としては、バピネウズマブ、ソラネウズマブ、ガンテネルマブ、クレネズマブ、ポネズマブ、およびＩＶＩＧ免疫グロブリンなどのベータ−アミロイドに対する抗体、Ａベータオリゴマーを標的とする他の免疫化療法、他のタウ抗体、タウの高リン酸化を防止する化合物、ならびにタウ凝集体を標的とする他の能動および受動免疫化療法が挙げられる。
【０２０１】
本明細書に記載の抗体およびタウ結合性断片との併用療法において役立ち得る他の薬物としては、アミロイド−ベータ凝集阻害剤（例えば、トラミプロセート）、ガンマ−セクレターゼ阻害剤（例えば、セマガセスタット）、およびガンマ−セクレターゼモジュレータ（タレンフルルビル）が挙げられる。さらに、本明細書に開示の１つまたは複数の新規抗体を、２つまたはそれより多い前記治療剤と共に使用または製剤化することができる。疾患の初期段階では、併用療法が有利であり得る。ｈＡｂと、増殖因子と、神経可塑性および再生を誘導する他の生物活性分子との組合せなどの、併用療法はまた、疾患の後期段階でも有利である。そのような併用療法は、より低用量の投与される治療剤を有利に利用し、かくして、様々な単剤療法と関連する起こり得る毒性または合併症を回避することができる。関連する実施形態によれば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル、リバスチグミン、ガランタミン、タクリン、栄養補助剤）、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体アンタゴニスト（例えば、メマンチン）、ＤＮＡ修復の阻害剤（例えば、ピレンゼピンまたはその代謝物）、遷移金属キレート剤、増殖因子、ホルモン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、酸化防止剤、脂質低下剤、選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤、タウ凝集の阻害剤、タンパク質キナーゼの阻害剤、抗ミトコンドリア機能障害薬の阻害剤、ニューロトロフィン、熱ショックタンパク質の阻害剤、リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２の阻害剤、およびその任意の薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの併用剤と組み合わせて使用することができる。一実施形態では、開示される抗体および／またはそのタウ結合性断片を、コリンエステラーゼ阻害剤（ＣｈＥＩ）および／またはメマンチンと組み合わせる。一実施形態では、併用剤は、抗アポトーシス化合物、金属キレート剤、ＤＮＡ修復の阻害剤、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（３ＡＰＳ）、１，３−プロパンジスルホン酸（１，３ＰＤＳ）、セクレターゼ活性化因子、ベータ−セクレターゼ阻害剤、ガンマ−セクレターゼ阻害剤、ベータ−アミロイドペプチド、ベータ−アミロイド抗体、神経伝達物質、ベータシート破壊剤、抗炎症分子、およびコリンエステラーゼ阻害剤からなる群から選択される。一実施形態では、コリンエステラーゼ阻害剤は、リバスチグミン、ドネペジル、ガランタミン、または栄養補助剤である。別の実施形態では、さらなる薬剤は、ＢＡＣＥ阻害剤、ムスカリン性アンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、ガンマセクレターゼモジュレータ、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体アンタゴニスト、抗アミロイド抗体、ビタミンＥ、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト、ＣＢ１受容体インバースアゴニストまたはＣＢ１受容体アンタゴニスト、抗生物質、増殖ホルモン分泌促進剤、ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、ＡＭＰＡアゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤、ＧＡＢＡＡインバースアゴニスト、アミロイド凝集の阻害剤；グリコーゲンシンターゼキナーゼベータ阻害剤、アルファセクレターゼ活性促進剤、ＰＤＥ−１０阻害剤およびコレステロール吸収阻害剤から選択される。
【０２０２】
本明細書に記載の抗体および抗原結合性断片と組み合わせて使用することができる他の化合物としては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，５１８，１０１号に記載の治療抗体およびペプチドが挙げられる。また、治療薬標的（３６〜３９頁）、アルカンスルホン酸およびアルカン硫酸（３９〜５１頁）、コリンエステラーゼ阻害剤（５１〜５６頁）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（５６〜５８頁）、エストロゲン（５８〜５９頁）、非ステロイド性抗炎症薬（６０〜６１頁）、酸化防止剤（６１〜６２頁）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト（６３〜６７頁）、コレステロール低下剤（６８〜７５頁）、アミロイド阻害剤（７５〜７７頁）、アミロイド形成阻害剤（７７〜７８頁）、金属キレート剤（７８〜７９頁）、抗精神病薬および抗鬱薬（８０〜８２頁）、栄養補助剤（８３〜８９頁）ならびに脳内の生物活性物質の利用可能性を増大させる化合物（８９〜９３頁）およびプロドラッグ（９３および９４頁）を含む、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４／０５８２５８に記載の化合物も有用である（特に、１６および１７頁を参照されたい）。組み合わせて使用することができる他の化合物としては、Cummings  et  al.,  Alzheimer's  disease  drug  development  pipeline:  2017,  Alzheimer's  &  Dementia:  Translational  Research  &  Clinical  Interventions  3  (2017)  367-384に記載のものが挙げられる。
【０２０３】
また、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片と、担体などの別の成分とを含む組成物も本明細書で提供される。また、本明細書に記載のヒト化抗体またはその抗原結合性断片と、担体、例えば、診断的または治療的使用にとって好適な担体とを含む組成物／製剤も提供される。
【０２０４】
一実施形態では、本開示に従って使用される抗体の製剤および組成物を、望ましい純度を有する抗体またはその抗原結合性断片と、必要に応じた担体、例えば、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤または安定剤（Remington's  Pharmaceutical  Sciences  21st  edition,  Mohr,  M.  Ed.  (2006)）とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって、保存および／または投与のために調製する。一実施形態では、許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸およびメチオニンなどの酸化防止剤、保存剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルもしくはベニルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸、グリコース、マンノース、もしくはデキストリンなどの単糖類、二糖類、および他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）などの塩形成性対抗イオン、ならびに／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。凍結乾燥抗体製剤の例は、参照により本明細書に明示的に組み込まれるＷＯ９７／０４８０１に記載されている。
【０２０５】
一実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片を、対象への投与にとって好適な医薬組成物中に組み込むことができる。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示される抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む。一実施形態では、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合する、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体のさらなる例は、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つまたは複数、ならびにその組合せを含む。多くの場合、組成物は、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを含むことになる。薬学的に許容される担体は、抗体またはその抗原結合性断片の保存可能期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存剤または緩衝剤などの少量の補助物質をさらに含んでもよい。
【０２０６】
開示される抗体または抗原結合性断片を含む、本明細書に記載の組成物は、様々な形態にあってもよい。これらのものとしては、例えば、液体溶液（例えば、注射溶液および輸注溶液）、分散物または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソームおよび坐剤などの、液体、半液体、半固体および固体剤形が挙げられる。一部の実施形態では、そのような組成物はまた、緩衝剤（例えば、中性緩衝食塩水もしくはリン酸緩衝食塩水）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、グリシンなどのポリペプチドもしくはアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡもしくはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および／または保存剤を含んでもよい。あるいは、本発明の組成物を、凍結乾燥物として製剤化することができる。抗体およびその抗原結合性断片を、リポソーム内に封入することもできる。
【０２０７】
診断アッセイにおける使用または内部投与にとって好適な剤形は一般に、単位または容器あたり、約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの抗体またはその抗原結合性断片を含有する。これらの組成物中で、活性成分は通常、組成物の総重量に対して約０．５〜９９．９９９重量％の量で存在することになる。好ましい剤形は、意図される使用および／または投与様式に依存する。
【０２０８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片は、血液脳関門を横断することができるか、または血液脳関門を横断するように製剤化される。ＡＤおよび関連するタウオパチーを含む、ある特定の神経変性疾患は、血液脳関門の浸透性の増大と関連し、抗体またはその抗原結合性断片を脳内に容易に導入することができる。血液脳関門が無傷のままである場合、限定されるものではないが、物理的方法、脂質に基づく方法、ならびに受容体およびチャネルに基づく方法などの、それを横断して分子を輸送するためのいくつかの当技術分野で公知の手法が存在する。血液脳関門を回避するための方法としては、限定されるものではないが、脳への直接注射（例えば、Papanastassiou  et  al.,  Gene  Therapy  9:  398-406  (2002)）および脳内への送達デバイスの植込み（例えば、Gill  et  al.,  Nature  Med.  9:  589-595  (2003):  and  Gliadel  Wafers,  T.M.,  Guildford  Pharmaceutical）が挙げられる。関門に開口部を創出する方法としては、限定されるものではないが、超音波（例えば、米国特許出願公開第２００２／００３８０８６号を参照されたい）、浸透圧（例えば、高張性マンニトールの投与による（Neuwelt,  E.  A.,  Implication  of  the  Blood-Brain  Barrier  and  its  Manipulation,  Vols  1  &  2,  Plenum  Press,  N.Y.  (1989)））、例えば、ブラジキニンまたは浸透剤Ａ−７による透過処理（例えば、米国特許第５，１１２，５９６号、第５，２６８，１６４号、第５，５０６，２０６号、および第５，６８６，４１６号を参照されたい）、ならびに抗体またはその抗原結合性断片をコードする遺伝子を含有するベクターを用いて血液脳関門をまたぐニューロンのトランスフェクション（例えば、米国特許出願公開第２００３／００８３２９９号を参照されたい）が挙げられる。血液脳関門を渡って抗体またはその抗原結合性断片を輸送する脂質に基づく方法としては、限定されるものではないが、抗体またはその抗原結合性断片を、血液脳関門の血管内皮上の受容体に結合するその活性断片にカップリングされたリポソーム中に封入すること（例えば、米国特許出願公開第２００２００２５３１３号を参照されたい）、および抗体またはその抗原結合性断片を、低密度リポタンパク質粒子（例えば、米国特許出願公開第２００４０２０４３５４号を参照されたい）またはアポリポタンパク質Ｅ（例えば、米国特許出願公開第２００４０１３１６９２号を参照されたい）中でコーティングすることが挙げられる。
【０２０９】
様々な実施形態では、組成物は、本明細書に記載のいずれか１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片と、担体および／または希釈剤とを含んでもよい。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示されたものから選択されるいずれか１つまたは複数の（例えば、６つのＣＤＲ全部ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン）配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示された配列のいずれか、例えば、表１に列挙された６つのＣＤＲのセットならびにまたは重鎖および軽鎖可変ドメイン配列の対を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９および配列番号３０を含む。一部の実施形態では、組成物は、診断アッセイ、例えば、古典的またはデジタルＥＬＩＳＡにおける使用にとって好適である。一部の実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、薬学的に許容される担体を含む。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、組成物は、以前に記載されたいずれか２つの抗体または抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、少なくとも１つのさらなる抗体もしくは抗原結合性断片、および／または少なくとも１つのさらなる薬剤を含む。例示的な実施形態では、一方の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む、ならびに他方の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
【０２１１】
一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、表１に示されたものから選択されるいずれか１つまたは複数の（例えば、６つのＣＤＲ全部ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン）配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示された配列のいずれか、例えば、表１に列挙された６つのＣＤＲのセットならびにまたは重鎖および軽鎖可変ドメイン配列の対を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９および配列番号３０を含む。一部の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、表１に示されたものから選択されるいずれか１つまたは複数の（例えば、６つのＣＤＲ全部ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン）配列を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示された配列のいずれか、例えば、表１に列挙された６つのＣＤＲのセットならびにまたは重鎖および軽鎖可変ドメイン配列の対を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２９および配列番号３０を含む。
【０２１２】
一部の実施形態では、組成物は、診断アッセイ、例えば、古典的またはデジタルＥＬＩＳＡにおける使用にとって好適である。一部の実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、薬学的に許容される担体を含む。医薬組成物は、アルツハイマー病または別のタウオパチーを処置するための少なくとも１つのさらなる治療剤をさらに含んでもよい。
処置方法
【０２１３】
本明細書に記載の抗体および組成物を、ＡＤおよび他のタウオパチーの処置および防止の様々な方法のために使用することができる。一部の実施形態では、抗体および組成物を使用して、抗タウに基づく処置にとって好適な患者を検出する、処置選択を知らせる、または処置の進展を経時的にモニタリングすることができる。他の実施形態では、１つまたは複数の抗体または組成物を、それを必要とする患者に投与することによって、ＡＤおよび他のタウオパチーのための直接的な処置または防止として、本明細書に開示される抗体および組成物を使用することができる。
【０２１４】
防止的（すなわち、予防的）適用では、本明細書に開示される抗体および医薬組成物（例えば、抗体ＤＣ２Ｅ７あるいは抗体ＤＣ２Ｅ７と同じエピトープに結合することができる、もしくは抗体ＤＣ２Ｅ７に由来するＣＤＲもしくは可変ドメインを含む抗体または抗原結合性断片）を、アルツハイマー病または別のタウオパチーに罹りやすい患者、またはそうでなければ、そのリスクがある患者に投与することができる。一部の実施形態では、抗体または医薬組成物は、疾患の生化学的、組織学的および／または行動学的症状、その合併症および疾患の発症中に呈する中間の病理学的表現型を含む、疾患のリスクを除去もしくは低減する、疾患の重症度を低下させる、または疾患の発生を遅延させるのに十分な量で投与される。治療的適用では、組成物は、その合併症および疾患の発症における中間の病理学的表現型を含む、疾患の症状（生化学的、組織学的、および／または行動学的）を治癒させる、または少なくとも部分的に低減する、停止させる、もしくは逆転させるのに十分な量で、そのような疾患が疑われる、そのような疾患を有すると診断される、および／またはそのような疾患に既に罹患している患者に投与される。
【０２１５】
一部の実施形態では、アルツハイマー病の処置は、経時的な行動学的、機能的、および認知的悪化を減少させること、または防止することを指す。一部の実施形態では、アルツハイマー病の行動学的、機能的、および認知的態様を、限定されるものではないが、神経心理学的テスト、ミニメンタルステート検査（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｘａｍ）、Ｍｉｎｉ−ｃｏｇ検査（Ｍｉｎｉ−Ｃｏｇ  ｅｘａｍ）、神経精神症状評価（Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）、Ｂｌｅｓｓｅｄ  Ｒｏｔｈ認知症評価尺度（Ｂｌｅｓｓｅｄ  Ｒｏｔｈ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）、ＳＥＮＡＳ（Ｓｐａｎｉｓｈ  ａｎｄ  Ｅｎｇｌｉｓｈ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｉｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅｓ）、ＰＢＡ（Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、機能検査（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、時計描画試験（Ｃｌｏｃｋ  Ｄｒａｗｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）、ボストン呼称検査（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｎａｍｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）、カリフォルニア言語学習テスト（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  Ｖｅｒｂａｌ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）、認知症状チェックリスト（Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  Ｃｈｅｃｋｌｉｓｔ）、持続的注意集中力検査（Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｔｅｓｔ）、ＣＯＷＡＴ（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｏｒａｌ  Ｗｏｒｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）、コグニスタット（Ｃｏｇｎｉｓｔａｔ）、ｄ２注意力テスト（ｄ２  Ｔｅｓｔ  ｏｆ  Ａｔｔｅｎｔｉｏｎ）、デリス・カプラン実行機能検査（Ｄｅｌｉｓ−Ｋａｐｌａｎ  Ｅｘｅｃｕｔｉｖｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＤＲＳ（Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）、ディジット覚醒度（Ｄｉｇｉｔ  Ｖｉｇｉｌａｎｃｅ  Ｔｅｓｔ）、図形流暢性検査（Ｆｉｇｕｒａｌ  Ｆｌｕｅｎｃｙ  Ｔｅｓｔ）、指タップ試験（Ｆｉｎｇｅｒ  Ｔａｐｐｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）、ＨＣＴ（Ｈａｌｓｔｅａｄ  Ｃａｔｅｇｏｒｙ  Ｔｅｓｔ）、ＨＲＮＢ（Ｈａｌｓｔｅａｄ−Ｒｅｉｔａｎ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｔｔｅｒｙ）、フーパーのＶＯＴ（Ｈｏｏｐｅｒ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）、ＫＢＮＡ（Ｋａｐｌａｎ  Ｂａｙｃｒｅｓｔ  Ｎｅｕｒｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、Ｋ−ＳＮＡ（Ｋａｕｆｍａｎ  Ｓｈｏｒｔ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）、ルリア・ネブラスカ神経心理学バッテリー（Ｌｕｒｉａ−Ｎｅｂｒａｓｋａ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｔｔｅｒｙ）、ＭＡＳ（Ｍｅｍｏｒｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅｓ）、ＱＮＳＴ（Ｑｕｉｃｋ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）、アーバンス検査（Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ  Ｂａｔｔｅｒｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｔｕｓ）、ストループテスト（Ｓｔｒｏｏｐ  Ｔｅｓｔ）、符号数字モダリティー検査（Ｓｙｍｂｏｌ  Ｄｉｇｉｔ  Ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ  Ｔｅｓｔ）、触覚作業検査（Ｔａｃｔｕａｌ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｔｅｓｔ）、���題統覚検査（Ｔｈｅｍａｔｉｃ  Ａｐｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）、Ｔｏｗｅｒ  ｏｆ  Ｌｏｎｄｏｎ、トレイルメイキングテスト（Ｔｒａｉｌ  Ｍａｋｉｎｇ  Ｔｅｓｔ）ＡおよびＢ、言語流暢性課題（Ｖｅｒｂａｌ（Ｗｏｒｄ）Ｆｌｕｅｎｃｙ  Ｔｅｓｔ）、ならびにウィスコンシンカード分類課題（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｃａｒｄ  Ｓｏｒｔ  Ｔｅｓｔ）を含む、当業者には公知の一連の標準化されたテストのうちのいずれか１つまたは複数によって評価することができる。当業者には公知の抑鬱、不安、失語、興奮、および行動学的パラメーターに関するさらなるテストも使用される。さらに、一部の実施形態では、１つまたは複数の開示される抗体またはその抗原結合性断片を含む、本明細書に開示される検出方法のいずれかを使用して、処置有効性について患者を診断またはモニタリングすることができる。
【０２１６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体および医薬組成物（例えば、抗体ＤＣ２Ｅ７あるいは抗体ＤＣ２Ｅ７と同じエピトープに結合することができる、もしくは抗体ＤＣ２Ｅ７に由来するＣＤＲもしくは可変ドメインを含む抗体または抗原結合性断片）を投与して、患者におけるＡＤまたは別のタウオパチーを処置することができる。一部の実施形態では、アルツハイマー病処置の有効性は、ＡＤＡＳ−ｃｏｇ（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ−ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｃａｌｅ）、ＣＤＲ−ｓｂ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｕｍ  ｏｆ  Ｂｏｘｅｓ）、ＡＤＣＳ−ＡＤＬ（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｄａｉｌｙ  Ｌｉｖｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）、ＮＰＩ（Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）、ＰＤＳ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ）、ＩＡＤＬ（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｄａｉｌｙ  Ｌｉｖｉｎｇ）、ＣＤＲ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）、ＤＡＤ（Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｓｃａｌｅ）、およびＭＭＳＥ（Ｍｉｎｉ−Ｍｅｎｔａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）からなる群から選択される少なくとも１つの評価における改善、または悪化の欠如、または悪化の速度の低下によって決定される。一部の実施形態では、処置は、ＡＤＡＳ−ｃｏｇスコアで悪化の速度の低下をもたらす。他の実施形態では、処置は、ＡＤＡＳ−ｃｏｇスコアの２〜５点の悪化の速度の低下中央値をもたらす。
【０２１７】
一部の実施形態では、１つまたは複数の開示される抗体、例えば、抗体ＤＣ２Ｅ７あるいは抗体ＤＣ２Ｅ７と同じエピトープに結合する、もしくは抗体ＤＣ２Ｅ７に由来するＣＤＲもしくは可変ドメインを含む抗体または抗原結合性断片を投与することを含む、アルツハイマー病の進行を遅延させる方法が提供される。一実施形態では、ＡＤの進行を「遅延させること」は、疾患の発症を延期させる、妨害する、減速させる、遅らせる、安定化させる、および／または先送りすることを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または個体の履歴に応じて、変動する時間の長さにわたるものであってよい。当業者には明らかなように、十分な、または有意な遅延は、実際に、個体が疾患を発症しないという点で、防止を包含してもよい。一実施形態では、ＡＤまたは別のタウオパチーの進行を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠で疾患発症の確率を低下させる、および／または所与の時間枠で疾患の程度を低減させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計学的に有意な数の対象を使用する、臨床試験に基づく。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、ＡＤまたは別のタウオパチーを、数日、数ヶ月、または数年遅延させることができる。例えば、方法は、ＡＤまたは別のタウオパチーの進行を、１または複数の週数、月数、年数だけ遅延させることができる。
【０２１９】
患者、対象、または個体は、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、およびヒツジ動物などの哺乳動物を含む。対象はヒトであってもよく、疾患に罹患していても、もしくはしていなくてもよく、または現在症状を示していてもよい。ＡＤの場合、実質的に誰でも、その人物が十分長く生きている場合、ＡＤに罹患するリスクがある。したがって、本発明の方法を、対象患者のリスクの評価を必要とすることなく、一般的な集団に予防的に投与することができる。他の実施形態では、対象は、本明細書に開示される検出方法を使用してＡＤについて評価される。
【０２２０】
一実施形態では、本明細書における患者は、必要に応じて、本明細書に開示される診断方法を含んでもよい、療法の前に診断試験に付される。一実施形態では、開示される方法は、ＡＤの既知の一般的リスクを有する個体にとって有用である。そのような個体は、この疾患を経験したことがある血縁者を有する者および遺伝子マーカーまたは生化学マーカーの分析によってリスクが決定される者を含む。ＡＤに対するリスクの遺伝子マーカーとしては、ＡＰＰ遺伝子における突然変異、特に、それぞれ、ＨａｒｄｙおよびＳｗｅｄｉｓｈの突然変異と呼ばれる、７１７位ならびに６７０位および６７１位での突然変異が挙げられる。Hardy  (1997)  Trends  Neurosci.  20:154-9を参照されたい）。リスクの他のマーカーは、プレセニリン遺伝子、ＰＳ１、ＰＳ２、およびＡｐｏＥ４における突然変異、ＡＤの家族歴、高コレステロール血症またはアテローム性動脈硬化症である。ＡＤに現在罹患している個体を、行動学的特徴から同定することもできる。無症状の患者では、処置は、任意の年齢（例えば、１０、２０、３０歳）で開始してもよい。一部の患者では、患者が高齢、例えば、４０、５０、６０、もしくは７０歳、またはそれ以後、またはその間の任意の期間に達するまで、処置および／またはモニタリングを開始する必要がない場合がある。処置は、長期間にわたって複数の用量を必然的に伴ってもよい。処置を、本明細書に開示されるＡＤ検出方法を使用することによるなど、様々な方法でモニタリングすることができる。
【０２２１】
１つまたは複数のこれらのテストの定期的使用は、アルツハイマー病および関連するタウオパチーの進行、または退縮、ならびにさらなる処置の必要性に関して医師または他の医療専門家に助言することができる。テストの選択および処置の成功の決定は、アルツハイマー病の分野の医療専門家の専門知識の範囲内にある。１つまたは複数のテストにおけるスコアの改善は、その対象におけるＡＤの重症度の低下の指標である。
【０２２２】
様々な実施形態では、対象に、本明細書に記載の少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片の有効量を投与することを含む、対象における別のタウオパチーのアルツハイマー病を処置する、その進行を遅延させる、またはその進行を防止する方法が開示される。この方法は、運動障害の低減、運動機能の改善、認知障害の低減、認知機能の改善、またはこれらの組合せをもたらすことができる。本明細書に記載の任意の抗体の使用を、抗体または抗原結合性断片を、それを必要とする対象に投与することによって、アルツハイマー病の処置、その進行の遅延、またはその防止において使用することができる。
ＡＤおよび他のタウオパチーの進行を検出およびモニタリングする方法
【０２２３】
本明細書における開示は、一部分では、タウ上のある特定のエピトープ残基、特に、タウ上の１つまたは複数のリン酸化残基を含有するある特定のエピトープ残基の発見に焦点を合わせ、これは、ある特定の生体試料（例えば、血液またはＣＳＦ）中で検出することができ、かつＡＤ、他のタウオパチーおよび他の形態の認知症を同定および区別するために使用することができる。例えば、有用なエピトープ残基は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位に少なくとも１つのリン酸化された残基、例えば、ホスホ−トレオニンを含み、必要に応じて、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含む。別の実施形態では、エピトープは、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２の配列）またはその中に１つもしくは複数のさらなるリン酸化位置を有するアミノ酸残基の伸長を含むか、またはこれからなる。別の実施形態では、エピトープは、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１の配列）を含むか、またはこれからなる。本開示は、一部分では、これらの試料中のリン酸化タウ種の量が、ＡＤと、他のタウオパチーおよび他の形態の認知症を有する対象とを区別するために使用することができ、それによって、アッセイの結果に基づいて、ＡＤ、または別のタウオパチー、または別の原因の認知症について、診断、モニタリングおよび／または処置の決定を導くことができるという驚くべき知見に基づく。理論によって拘束されないが、これらのリン酸化エピトープ（例えば、２１７位）のレベルが、ある特定の試料においてＡＤ、他のタウオパチーおよび他の形態の認知症を区別するために使用することができるという発見は、リン酸化エピトープが、多くの場合、異なるタウオパチー全体にわたって脳内で検出することができるという事実を考慮すると、特に予想外である。
【０２２４】
本明細書において提供される開示は、一部分では、ある特定の種類の生体試料（例えば、ＣＳＦまたは血液）中のこれらの特定のリン酸化タウエピトープに結合することができ、試料中の結合のレベルに基づいて、ＡＤ、他のタウオパチーおよび他の形態の認知症を同定および区別するために特に有用である、抗体（例えば、表１に示される１つまたは複数の配列、例えば、表１に示されるものから選択される、６つすべてのＣＤＲならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメインを含む任意の抗体）にも焦点を合わせる。本開示は、一部分では、これらの試料中の開示される抗体によって結合されるリン酸化タウ種の量が、ＡＤと、他のタウオパチーおよび他の形態の認知症を有する対象とを区別するために使用することができ、それによって、アッセイの結果に基づいて、ＡＤ、または別のタウオパチー、または別の原因の認知症について、診断、モニタリングおよび／または処置の決定を導くことができるという驚くべき知見に基づく。
【０２２５】
ＡＤに加えて、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、皮質基底核疾患（ＣＢＤ）および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）を含む他のタウオパチーは、当技術分野において公知である。Murray  et  al.,  Clinicopathologic  assessment  and  imaging  of  tauopathies  in  neurodegenerative  dementias,  Alzheimer's  Research  &  Therapy,  6:1,  2014。多数の他の原因の認知症も公知である。理論によって拘束されないが、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片によって結合される、ＡＤ患者および他のタウオパチーを有する患者に由来するある特定の生体試料（例えば、ＣＳＦまたは血液）中のリン酸化タウ種の量の上昇は、これらの体液において、非侵襲的に、ＡＤを検出すること、およびＡＤと、他の原因の認知症または他のタウオパチーとを区別することにおけるそれらの有用性に寄与し得る。
【０２２６】
多数のタウ種は、健康な対象および認知症を有する対象の両方に由来するある特定の種類の試料（例えば、血液および／またはＣＳＦ）中に存在する。これらの多くの可能性のある標的にもかかわらず、それらが診断能力を提供することができるように、これらの試料中の特定のタウ種に結合することができる抗体（例えば、ＡＤおよび／もしくは他のタウオパチーを有する対象に由来する試料中にのみ存在するか、または上昇および／もしくは区別されるレベルでそれらの対象に由来する試料中に存在する、タウ種に結合する抗体）は、以前に同定されていない。理論によって拘束されないが、一部の実施形態では、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片は、別のタウオパチー、他の神経疾患を有する患者に由来するか、または健康な対象における同等の試料よりも高いレベルで、ＡＤを有する患者に由来するある特定の種類の試料（例えば、血液またはＣＳＦ）中に存在するタウ上のリン酸化エピトープに結合するその能力を理由として、当技術分野全体にわたって改善を提供する。この差は、一部の実施形態では、認知症を呈する対象が、ＡＤ、別のタウオパチー、もしくは別の原因の認知症を有するか否かを検出するため、および／またはＡＤ処置の過程をモニタリングするために、使用することができる。例えば、抗体によって結合されるタウの量における区別される閾値または倍数の差（例えば、健康な対象におけるレベルと比較して、または既知の原因の認知症を有する対象と比較して）は、検出することができ、対象におけるＡＤ、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症と相関し得る。一部の実施形態では、この差は、認知症を呈する対象が、ＡＤまたは別のタウオパチーを有するか否かを検出するために使用することができる。一部の実施形態では、この差は、認知症を呈する対象が、ＡＤまたはある他の原因の認知症を有するか否かを検出するために使用することができる。一部の実施形態では、この差は、認知症を呈する対象が、ＡＤまたは別のタウオパチーを有するか否かを区別するために使用することができる。一部の実施形態では、この差は、認知症を呈する対象が、ＡＤまたはある他の原因の認知症を有するか否かを区別するために使用することができる。
【０２２７】
さまざまな実施形態では、対象におけるタウオパチーを検出する方法であって、対象から生体試料を取得すること、対象に由来する試料と、タウ−分子複合体を形成することができる分子（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる、本明細書に開示の少なくとも１つの受容体、抗体または抗原結合性断片）の有効量とを接触させること、本明細書に開示の抗体もしくは抗原結合性断片を使用して、タウ−分子複合体の存在および／または量を検出することを含み、タウ−分子複合体の存在および／または量が、対象におけるタウオパチーを示す、方法が開示される。さまざまな実施形態では、対象におけるタウオパチーを検出する方法は、対象に由来する生体試料と、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる、本明細書に開示の少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片の有効量とを接触させることを含み、タウ−抗体複合体の存在および／または量は、対象におけるタウオパチーを示す。一部の実施形態では、検出は、例えば、ＭａｇＱｕ  Ｃｏ．Ｌｔｄ製のバイオアッセイデバイスを使用する、免疫磁気低減バイオアッセイによる。
【０２２８】
一部の実施形態では、試料中で検出されるタウは、リン酸化タウである。さまざまな実施形態では、少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。さまざまな実施形態では、少なくとも１つの抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つまたは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。一部の実施形態では、本方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、本方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、２位および１２位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、および／またはＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ならびに／あるいはＬＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、および／またはＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。さまざまな実施形態では、ＨＣＤＲ１の２位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の２位の置換は、イソロイシンであり、ＨＣＤＲ２の１２位の置換はバリンであり、および／またはＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンである。
【０２３０】
さまざまな実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示される配列のいずれか、例えば、６つのＣＤＲのセット、および／または表１に列挙される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、本方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。開示される方法において使用される抗体または抗原結合性断片は、さまざまな実施形態では、ＤＣ２Ｅ７もしくはその抗原結合性断片、またはタウに結合することができる本明細書に開示のバリアントのいずれかを含み得る。さまざまな実施形態では、抗原または抗原結合性断片は検出可能な標識をさらに含む。
【０２３２】
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７、または１、２、３、９、１２、１９、３０、３１、３５、３７、４２、４３、４８、４９、５１、５４、５５、５６、５８、６２、６３、６４、６５、６６、６８、６９、７０、７３、７６、７７、７８、７９、８０、８３、８４、８８、９４、９６、１０７、１０８および１１２位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含み、ならびに／あるいは軽鎖可変領域は、配列番号８、または３、７、１１、１４、１７、１９、２０、２１、２４、２５、２８、３９、４２、４９、５２、５６、６９、７１、７５、９２、９４、９９、１０５および１０６位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、１位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、２位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、３位の重鎖可変領域における置換はアルギニンであり、９位の重鎖可変領域における置換はアルギニンであり、１２位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、１９位の重鎖可変領域における置換はアルギニンであり、３０位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、３１位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、３５位の重鎖可変領域における置換はアルギニンであり、３７位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、４２位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、４３位の重鎖可変領域における置換はメチオニンであり、４８位の重鎖可変領域における置換はイソロイシンであり、４９位の重鎖可変領域における置換はトレオニンであり、５１位の重鎖可変領域における置換はバリンであり、５４位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、５５位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、５６位の重鎖可変領域における置換はセリンであり、５８位の重鎖可変領域における置換はバリンであり、６２位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、６３位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、６４位の重鎖可変領域における置換はアラニンおよびグルタミン酸から選択され、６５位の重鎖可変領域における置換はグルタミン酸であり、６６位の重鎖可変領域における置換はアスパラギン酸であり、６８位の重鎖可変領域における置換はロイシンであり、６９位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、７０位の重鎖可変領域における置換はトレオニンであり、７３位の重鎖可変領域における置換はアスパラギンであり、７６位の重鎖可変領域における置換はグルタミン酸であり、７７位の重鎖可変領域における置換はセリンであり、７８位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、７９位の重鎖可変領域における置換はメチオニンであり、８０位の重鎖可変領域における置換はセリン、ロイシンおよびヒスチジンから選択され、８３位の重鎖可変領域における置換はトレオニンであり、８４位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、８８位の重鎖可変領域における置換はプロリンであり、９４位の重鎖可変領域における置換はシステインであり、９５位の重鎖可変領域における置換はグリシンであり、１０７位の重鎖可変領域における置換はアラニンであり、１０８位の重鎖可変領域における置換はプロリンであり、および／または１１２位の重鎖可変領域における置換はプロリンであり、ならびに／あるいは３位の軽鎖可変領域における置換はアルギニンであり、７位の軽鎖可変領域における置換はプロリンであり、１１位の軽鎖可変領域における置換はセリンおよびロイシンから選択され、１４位の軽鎖可変領域における置換はプロリンであり、１７位の軽鎖可変領域における置換はバリンであり、１９位の軽鎖可変領域における置換はアラニンであり、２０位の軽鎖可変領域における置換はアラニンであり、２１位の軽鎖可変領域における置換はバリンであり、２４位の軽鎖可変領域における置換はグルタミン酸であり、２５位の軽鎖可変領域における置換はトレオニンであり、２８位の軽鎖可変領域における置換はアスパラギンであり、３９位の軽鎖可変領域における置換はイソロイシンであり、４２位の軽鎖可変領域における置換はセリンおよびアスパラギン酸から選択され、４９位の軽鎖可変領域における置換はプロリンであり、５２位の軽鎖可変領域における置換はグリシンであり、５６位の軽鎖可変領域における置換はプロリンであり、６９位の軽鎖可変領域における置換はグリシンであり、７１位の軽鎖可変領域における置換はヒスチジンであり、７５位の軽鎖可変領域における置換はバリンであり、９２位の軽鎖可変領域における置換はアルギニンであり、９４位の軽鎖可変領域における置換はトレオニンであり、９９位の軽鎖可変領域における置換はセリンであり、１０５位の軽鎖可変領域における置換はグリシンであり、および／または１０６位の軽鎖可変領域における置換はバリンである。
【０２３３】
様々な実施形態では、重鎖可変領域中の６８位の置換はロイシンであり、軽鎖可変領域中の３９位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、６９位はグリシンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０２３４】
さまざまな実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、表１に示される配列のいずれか、例えば、６つのＣＤＲのセット、および／または表１に列挙される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０２３５】
一部の実施形態では、本方法は、対象に由来する生体試料（例えば、血液またはＣＳＦ）と、少なくとも１つの捕捉抗体および少なくとも１つの検出抗体とを接触させることを含む。一部の実施形態では、１つより多くの捕捉抗体および／または１つより多くの検出抗体が使用される。一部の実施形態では、捕捉抗体および検出抗体は同じである（例えば、試料中のタウオリゴマーを検出する場合）。一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片（例えば、検出抗体）はタウ−抗体複合体を形成することができ、タウ−抗体複合体の存在は、本明細書に開示の第２の抗タウ抗体または抗原結合性断片（例えば、検出抗体）を使用して検出される。一部の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、第１の抗体と異なるタウ上のエピトープに結合する。
【０２３６】
一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つもしくは複数、またはタウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つもしくは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位に少なくとも１つのリン酸化残基を含み、必要に応じて、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含み得る。ある特定の実施形態では、タウ上のエピトープは、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含むか、またはこれからなる。ある特定の実施形態では、タウ上のエピトープは、ＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号３１）を含むか、またはこれからなる。一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２３７】
別の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
さまざまな実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つもしくは複数を含むタウ上のエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ上の残基のうちの１つまたは複数がリン酸化される、例えば、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの１６９位のリン酸化されたトレオニン。一部の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号２１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ２またはその抗原結合性断片を含む。
【０２３９】
他の実施形態では、第１および第２の抗体は逆転し、ならびに／または１つより多くの第１および第２の抗体が使用される（これは、同じまたは異なる抗体であってもよい）。
【０２４０】
逆転した実施形態の一部では、第１の抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１５１〜１８８（配列番号１３）のうちの１つもしくは複数を含むタウ上のエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１６３〜１７２（配列番号１４）のうちの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ上の残基のうちの１つまたは複数がリン酸化される、例えば、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの１６９位のリン酸化トレオニン。一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、表１に示される配列のいずれか、例えば、６つのＣＤＲのセット、および／または表１に列挙される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０２４１】
一部の実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。実施形態では、第１の抗体または抗原結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ２またはその抗原結合性断片を含む。
【０２４２】
逆転した実施形態の一部では、第２の抗体または抗原結合性断片は、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基１８８〜２２７（配列番号１０）のうちの１つもしくは複数、またはタウタンパク質２Ｎ４Ｒの残基２１０〜２２１（配列番号１１）のうちの１つもしくは複数を含むタウ上のエピトープに結合することができる。第２の抗体または抗原結合性断片によって結合されるエピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒ（配列番号９）の２１７位に少なくとも１つのリン酸化残基を含んでいてもよい。一部の実施形態では、エピトープは、タウタンパク質２Ｎ４Ｒの２１０位にリン酸化セリン、２１２位にトレオニン、２１４位にセリン、もしくは２２０位にトレオニン、またはその任意の組合せをも含む。ある特定の実施形態では、第２の抗体は、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲ（配列番号１２）を含むタウ上のエピトープに結合し得る。一部の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、表１に示される配列のいずれか、例えば、６つのＣＤＲのセット、ならびに／または表１に列挙される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０２４３】
一部の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２４４】
さまざまな実施形態では、第１または第２の抗体もしくは抗原結合性断片は、固相表面もしくは粒子に連結および／またはコーティングされる。固相表面はマイクロタイタープレートの表面であってもよい。マイクロタイタープレートまたはマルチウェルプレートは、典型的には、例えば、２：３の矩形のマトリックスに配置された６、１２、２４、４８、９６、３８４もしくは１５３６、またはそれよりも多くの試料のウェルを有する。それぞれのウェルは、典型的には、およそ数１０ナノリットルから数ミリリットルの間の液体を保持する。固体粒子が、固相表面の代わりに、または固相表面に加えて使用される場合、これはビーズであってもよい。粒子は磁気ビーズであってもよい。ビーズは、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリアミド、ポリウレタン、フェノール系ポリマー、ニトロセルロース、天然由来ポリマー、ラテックスゴム、多糖、ポリペプチド、複合材料、セラミック、シリカもしくはシリカベース材料、炭素、金属もしくは金属化合物、金、銀、スチール、アルミニウム、銅、無機ガラス、またはシリカ材料、またはそれらの組合せを含む、プラスチックまたは合成ポリマーベッドであり得る。ビーズは、球状、ディスク状、環状、またはキューブのような形状を有し得る。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、第１および／または第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされている。標識は、酵素、放射性同位体、ビオチン、核磁気共鳴マーカー、重金属、またはその組合せを含み得る。本方法は、検出可能な標識に由来するシグナルを検出することをさらに含み得る。一実施形態では、標識の検出は、タウとの結合後の標識化抗体に由来する蛍光シグナルまたはそのシグナルの強度の検出によって達成される。一部の実施形態では、検出可能な標識はビオチンであり、これは、試料と、酵素、好ましくは、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ−ガラクトシダーゼにコンジュゲートされたストレプトアビジンとを接触させることによって検出される。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のタウ検出方法は、古典的／従来のＥＬＩＳＡアッセイ（すなわち、アナログの読み取りシステム）を含む。加えて、または代替として、本方法は、デジタルＥＬＩＳＡ（すなわち、単一の免疫複合体に依存している総アナログシグナルの測定によるのではなく、濃度をデジタル的に決定することが可能なデジタルの読み取りシステムであるが、一部の濃度では、これらの方法はアナログシグナルを読むために使用することもできる）を含み得る。Rissin,  D.M.,  et  al.,  Single-molecule  enzyme-linked  immunosorbent  assay  detects  serum  proteins  at  subfemtomolar  concentrations.  Nat.  Biotechnol.,  2010.  28(6),  555-559を参照されたい。例えば、単一分子アレイ（ｓｉｍｏａ）を使用してもよく、これは、磁気マイクロビーズ上でのサンドイッチ複合体の形成後に、ビーズが、基質溶液中でマイクロウェル、例えば、フェムトリットルサイズのマイクロウェルのアレイに移される、デジタルＥＬＩＳＡである。一部の実施形態では、これらのウェルは、それぞれ１つのビーズのみを収容する。一部の実施形態では、検出抗体が標識された酵素についての蛍光発生基質の添加後、次いで、オイルフィルムを適用して、ウェルを小体積に密封し、例えば、反応体積を５０ｆＬに制限する。一部の実施形態では、この小体積は、１つのみのサンドイッチ複合体がビーズ上に存在する場合であっても、読み取り可能なシグナルを検出することを可能にする。レポーターとして、酵素のβ−ガラクトシダーゼ、および基質のレゾルフィン−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを使用してもよく、検出可能なシグナルを有するウェルは、ビーズを含有するすべてのウェルのように、カウントされる。これらのカウントの間の比は、ビーズあたりの平均酵素アウトプット（ＡＥＢ）を提供することができる。ＡＥＢが低い（＜０．１）場合、ポアソン統計は、ビーズが、その表面上に１つのみまたはそれよりも少ない複合体を有するかのいずれかを示すために使用し得る。ＡＥＢシグナルがそれより高い場合、ビーズあたり１つより多くの複合体を有する確率が高まり、光強度計算への移行を使用してもよく、これは、＞０．１のシグナルでさえも使用可能であるＡＥＢを可能にする。移行についてのアルゴリズムは、Ｓｉｍｏａ装置のためのソフトウェア、例えば、例えば、９６ウェルのマイクロタイタープレートまたは別々のバイアルから標本抽出および較正するソフトウェアを使用して実行され得る。
【０２４７】
他のイムノアッセイは、当技術分野において公知であり、試料中のリン酸化タウを検出するために、開示される抗体および標識化抗体とともに使用してもよい。例えば、単一分子カウント（ＳＭＣ）プラットフォーム、例えば、蛍光標識を有する抗体および蛍光標識を有さない抗体が、ビーズまたはプレート上のいずれかでタウとサンドイッチ複合体を形成し、次いで、複合体が壊れ、蛍光標識された（例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ）検出抗体の分子が毛細管に引き込まれ、それらがフルオロフォアを励起するレーザービームを通過する時にカウントされるプラットフォームを使用してもよい。デジタル事象は、蛍光がバックグラウンド閾値を超えた場合にカウントすることができる。より高い濃度で、すべての放射された光子の累計は、シグナルについての読み取りとして使用され得、高ダイナミックレンジを可能にする。一部の実施形態では、検出は、例えば、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｓｉｎｇｕｌｅｘによって開発）製の単一分子カウントデバイスを使用する、単一分子カウントによる。使用し得る別の高感度のイムノアッセイは、磁気ナノ粒子を本明細書に開示の抗体に付着させること、および分析物に結合した後、濃度依存的な様式で交番磁界におけるナノ粒子の振動の変化を検出すること、例えば、免疫磁気低減（ＩＭＲ）を検出することを含む。一部の実施形態では、検出は、例えば、ＭａｇＱｕ  Ｃｏ．Ｌｔｄ製のバイオアッセイを使用する、免疫磁気低減バイオアッセイによる。
【０２４８】
さまざまな実施形態では、試料は、抗体またはその抗原結合性断片と接触する前に希釈されてもよい。ある特定の状況では、循環する抗原は、血液中でも循環するこれらの抗原に対する天然に存在する抗体によって遮蔽され得る。ＨＩＶタンパク質ｐ２４は周知の例である。加えて、天然に存在するタウ／抗タウ抗体複合体は、文献で報告されている。Wu  J,  Li  L.  Autoantibodies  in  Alzheimer's  disease:  potential  biomarkers,  pathogenic  roles,  and  therapeutic  implications.  Journal  of  Biomedical  Research.  2016;30(5):361-372。これらの複合体の存在は、本明細書に開示の検出アッセイを妨げることがある。したがって、さまざまな実施形態では、試料は、本開示の抗体または抗原結合性断片と接触する前に、免疫複合体解離（ＩＣＤ）（例えば、タウが、もはや天然に存在する抗体／分子に結合しておらず、したがって、本開示の方法によって自由に検出することができるように、試料中の天然に存在するタウ−抗体／タウ−分子複合体を解離させること）に付されてもよい。一部の実施形態では、免疫複合体解離は、試料に熱および／もしくは酸を適用することによって、またはＩＣＤを達成する任意の他の公知の方法によって、達成される。
【０２４９】
先行する実施形態のいずれかでは、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）を含むことができる。ＣＳＦは、患者から、例えば、医療機関で行われる腰椎穿刺によって取得することができる。あるいは、生体試料は、血漿および／または血清を含むことができる。
【０２５０】
さまざまな実施形態では、本明細書に開示の方法は、試料中のリン酸化タウの存在および／または量を検出し、試料中のリン酸化タウの量と、健康な個体に由来する対照試料中のレベルとを比較し、対照を超える試料中のリン酸化タウのレベルの増加は、タウオパチーを示す。別の実施形態では、検出されたタウオパチーはアルツハイマー病である。ある特定の実施形態では、健康な対照および／または既知の非ＡＤタウオパチー試料を有する患者に由来する試料を超える、対象に由来する試料中のリン酸化タウのレベルの増加は、対象が、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す。
【０２５１】
例えば、健康な対象に由来する対照試料中のレベルと比較した、認知症を有する対象に由来する試料中の抗体または抗原結合性断片によって検出されるタウのレベルの０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００倍またはそれを超える倍数の増加（またはその間の任意の倍数増加）は、ＡＤまたは別のタウオパチーの存在を示し得る。一部の実施形態では、倍数増加は、約１〜１００倍、または約２〜３倍の間である。一部の実施形態では、倍数増加は、約１〜５０、１〜２５、１〜１０、または１〜５倍の間である。一部の実施形態では、健康な対象に由来する対照試料中で観察される閾値（例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、９．３、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０もしくは１０００ｐｇ／ｍｌ、またはその間の任意の値）よりも高い、認知症を有する対象に由来する試料中の結合したタウのレベルは、ＡＤまたは別のタウオパチーの存在を示し得る。一部の実施形態では、閾値は、約９．３ｐｇ／ｍｌのタウである。一部の実施形態では、閾値は、０．９３〜９３ｐｇ／ｍｌのタウの間の任意の値である。一部の実施形態では、閾値は、約５．３７ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約３０５ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＡＤ以外の既知のタウオパチー（例えば、ＦＴＤ、ＣＢＤ、またはＰＳＰ）を有する患者に由来する対照試料、または別の形態の認知症を有する患者に由来する対照試料中のレベルと比較した、認知症を有する対象に由来する試料中の抗体または抗原結合性断片によって検出されるタウのレベルの０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０倍またはそれを超える倍数の増加（またはその間の任意の倍数増加）は、認知症を有する対象におけるＡＤの存在を示し得る。一部の実施形態では、倍数増加は、約１〜１００倍、または約１〜５０倍、または約１〜２５倍、または約１〜５倍、または約２〜３倍の間である。一部の実施形態では、ＡＤ以外の既知のタウオパチー（例えば、ＦＴＤ、ＣＢＤ、またはＰＳＰ）を有する患者に由来する対照試料、または別の形態の認知症を有する患者に由来する対照試料において観察される閾値（例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、９．３、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０もしくは１０００ｐｇ／ｍｌ、またはその間の任意の値）よりも高い、認知症を有する対象に由来する試料中の結合したタウのレベルは、認知症を有する対象におけるＡＤの存在を示し得る。さまざまな実施形態では、抗体結合によって検出されるタウのレベルは、例えば、蛍光強度を測定することによる、ウエスタンブロット、質量分析、古典的ＥＬＩＳＡ、デジタルＥＬＩＳＡまたは当業者に公知の他の方法による、日常的な方法を使用して、定量化される。
【０２５２】
一部の実施形態では、閾値は、検出アッセイが、リン酸化タウタンパク質、すなわち、１つまたは複数のリン酸化位置を含む全長タウタンパク質を使用して較正される場合、約０．１〜１０ｐｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、閾値は、検出アッセイが、以下の配列：ＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲＥＰＫを有する２Ｅ７合成ペプチド（２Ｅ７ｐｅｐ）を使用して較正される場合、約１００〜６００ｐｇ／ｍｌである。
【０２５３】
さまざまな実施形態では、対象におけるアルツハイマー病と、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症とを区別するための方法であって、対象から生体試料を取得すること、対象に由来する試料と、タウ−分子複合体を形成することができる分子（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる、本明細書に開示の少なくとも１つの受容体、または抗体、または抗原結合性断片）の有効量とを接触させること、本明細書に開示の抗体もしくは抗原結合性断片を使用して、タウ−分子複合体の存在および／または量を検出することを含み、健康対照対象に由来する試料中のレベルと比較した、および／またはＡＤ以外の公知のタウオパチー（例えば、ＦＴＤ、ＣＢＤまたはＰＳＰ）を有する対象に由来する試料中のレベルと比較した、試料中の分子に結合したリン酸化タウの存在および／またはレベルの上昇が、対象が、別のタウオパチーまたは代替の原因の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す、方法が開示される。さまざまな実施形態では、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する対象は、非流暢性／文法上の原発性進行性失語（ｎｆＰＰＡ）、意味障害型進行性失語（ｓｖＰＰＡ）、行動異常型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、または筋萎縮性側索硬化症／前頭側頭型認知症（ＡＬＳ／ＦＴＤ）を有する場合がある。
【０２５４】
さまざまな実施形態では、対象におけるアルツハイマー病と、別のタウオパチーまたは別の原因の認知症とを区別するための方法であって、対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、試料と、本明細書に開示の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片とを接触させること、ならびに本明細書に開示の抗体もしくは抗原結合性断片を使用して、タウ−抗体複合体の存在および／または量を検出することを含み、健康対照対象に由来する試料中のレベルと比較した、および／またはＡＤ以外の既知のタウオパチー（例えば、ＦＴＤ、ＣＢＤ、またはＰＳＰ）を有する対象に由来する試料中のレベルと比較した、試料中の抗体に結合したリン酸化タウの存在および／または上昇したレベルが、対象が、別のタウオパチーまたは別の形態の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す、方法が開示される。一部の実施形態では、本方法は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片を使用し、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含み、抗体または抗原結合性断片は、リン酸化タウに結合して、リン酸化タウ−抗体複合体を形成し、かつ試料中の抗体もしくは抗原結合性断片と複合体化するリン酸化タウの存在および／または量を検出することができ、健康対照対象に由来する試料中のレベルと比較した、試料中のリン酸化タウの存在および／またはレベルの上昇は、対象が、別のタウオパチーまたは代替の原因の認知症ではなくアルツハイマー病を有することを示す。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２５５】
さまざまな実施形態では、抗体−タウ複合体は、タウに結合することができる第２の抗体またはその抗原結合性断片により検出される。一部の実施形態では、第２の抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。さまざまな実施形態では、第２の抗体または抗原結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ２またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、検出抗体および捕捉抗体は逆転する。
【０２５６】
さまざまな実施形態では、アルツハイマー病のための治療剤を、アルツハイマー病に罹患している対象に投与することを含み、対象が、先行する方法のいずれかに従ってアルツハイマー病を有すると同定されている、処置の方法が開示される。処置は、ＡＤを処置する抗体、治療用ペプチドまたは低分子を投与すること、例えば、本明細書で言及される処置のいずれかを含み得る。さまざまな実施形態では、治療剤は、米国特許第９，５１８，１０１号および／またはＷＯ２０１６／０７９５９７に開示の抗体または治療用ペプチドのうちの１つまたは複数を含んでいてもよく、これらは、それらの全体が、これにより参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、治療剤は、抗体ＤＣ２Ｅ７もしくはその抗原結合性断片、および／またはＤＣ２Ｅ２もしくはその抗原結合性断片であり得る。実施形態では、治療剤は、ＤＣ２Ｅ７および／もしくはＤＣ２Ｅ２と同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片であり得る。
【０２５７】
本明細書において、ある特定の実施形態では、脳内のリン酸化タウのパターンを検出し、それによって、ＡＤまたは別のタウオパチーを診断するために、対象に投与することができる（例えば、静脈内に）、検出可能な標識（例えば、放射性標識）にコンジュゲートされた開示される抗体および抗原結合性断片の使用も開示される。
【０２５８】
さまざまな実施形態では、ヒト対象におけるアルツハイマー病または別のタウオパチーを検出する方法であって、対象に、放射性同位体などの検出可能な標識にコンジュゲートされた本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片を投与すること、および患者の脳内の放射性同位体または他の検出可能な標識に由来するシグナルを検出することを含み、シグナルの検出が、対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有することを示す、方法が開示される。一部の実施形態では、検出可能な標識にコンジュゲートされた開示される抗体および抗原結合性断片によって結合されるタウ種の脳分布は、対象がＡＤまたは別のタウオパチーを有するか否かを決定するために使用し得る。例えば、抗体の結合は、ＦＴＤ−ピック病（タウ種は、より優位に歯状回、ある程度海馬に存在し得る）、ＣＢＤ（タウ種は、より優位に尾状核に存在し得る）およびＰＳＰ（タウ種は、より優位に被殻／尾状核に存在し得る）などの他のタウオパチーと比較して、ＡＤ（タウ種は、より優位に海馬ＣＡ１に存在し得る）において相違し得る。一部の実施形態では、対象は、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗体および抗原結合性断片を投与され（例えば、静脈内投与を介して）、次いで、それらの脳は、画像化されて（例えば、ＰＥＴを介して）、脳内の標識化された抗体および抗原結合性断片に結合したタウのマップが生成される。マップは、患者がＡＤまたは別のタウオパチーを有するか否かを決定するために、ＡＤおよび他のタウオパチーについての公知のマップに対して分析され得る。
【０２５９】
ある特定の実施形態では、検出は、ポジトロン放出断層撮影によって行われる。脳内のシグナルの分布は、対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有するか否かを示し得る。Murray  et  al.,  Clinicopathologic  assessment  and  imaging  of  tauopathies  in  neurodegenerative  dementias,  Alzheimer's  Research  &  Therapy,  6:1,  2014を参照されたい。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７もしくはその抗原結合性断片と同じエピトープとの結合に競合するか、またはそれらに結合する、抗体または抗原結合性断片を含む。
【０２６０】
さまざまな実施形態では、放射性同位体にコンジュゲートされた抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載の対象に投与され得る。放射性シグナルは、ポジトロン放出断層撮影によって、脳内で検出され得る。身体内の抗体コンジュゲートの濃度の三次元画像は、次いで、コンピューター分析によって構成され得る。脳全体にわたるシグナルの濃度は、ＡＤもしくは他のタウオパチーに関連する特徴的パターンと相関させるため、または認知症を呈する患者が、ＡＤ、別のタウオパチー、もしくは別の原因のそれらの認知症を有するか、もしくは有さないかを決定するために使用することができる。これらのシグナルのパターンは、対象がＡＤまたは別のタウオパチーを有するかを決定するために、当業者によって解釈されてもよい。Murray  et  al.,  Clinicopathologic  assessment  and  imaging  of  tauopathies  in  neurodegenerative  dementias,  Alzheimer's  Research  &  Therapy,  6:1,  2014を参照されたい。
【０２６１】
さまざまな実施形態では、認知症の症状を呈するヒト対象は、最初に、処置の決定が行われる前に、本明細書に開示のアルツハイマー病もしくは別のタウオパチーを検出する方法のいずれか１つまたは複数に付される。ある特定の実施形態では、試料（例えば、ＣＳＦまたは血液）は、認知症の症状を呈するヒト対象から採取され、上記に記載の方法に従って分析され、および／またはヒト対象は、放射性同位体とコンジュゲートされた抗体ＤＣ２Ｅ７を投与され、対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有するかを決定するために、シグナルが対象の脳内で検出される。実施形態では、アルツハイマー病または別のタウオパチーを有すると決定されたヒト対象は、ＡＤまたは別のタウオパチーを処置する医薬組成物を投与され得る。実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片を含む。実施形態では、医薬組成物は、米国特許第９，５１８，１０１号および／またはＷＯ２０１６／０７９５９７に開示の抗体または治療用ペプチドのうちの１つまたは複数を含む。あるいは、対象がＡＤも別のタウオパチーも有さないと決定されると、代替の処置が投与され得る。
【０２６２】
さまざまな実施形態では、ヒト対象におけるアルツハイマー病のステージを決定する方法であって、対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、試料と、タウ−分子複合体を形成することができる分子（例えば、タウに結合して、タウ−抗体複合体を形成することができる、本明細書に開示の少なくとも１つの受容体、抗体または抗原結合性断片）の有効量とを接触させること、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片を使用して、タウ−分子複合体の量を検出すること、ならびに分子と複合体化したタウの量を、既知のＡＤのステージまたは閾値の試料中の量と比較し、それによってアルツハイマー病のステージを同定することを含む、方法が開示される。一部の実施形態では、試料中のより高い量のタウは、より進行したステージのＡＤを示す。さまざまな実施形態では、レベルおよび／または閾値は、上記に記載したようにして評価される。一部の実施形態では、進行したステージは、既知のＡＤのステージ、例えば、ＢｒａａｋステージＩ〜ＶＩの試料中で検出されたリン酸化タウの量との比較によって決定される。Braak  et  al.,  "Neuropathological  stageing  of  Alzheimer-related  changes".  Acta  Neuropathologica,  82(4):  239-59  (1991)。
【０２６３】
さまざまな実施形態では、ヒト対象におけるアルツハイマー病のステージを決定する方法であって、対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、試料と、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片とを接触させることであって、抗体または抗原結合性断片がリン酸化タウに結合して、リン酸化タウ−抗体複合体を形成することができる、接触させること、試料中の抗体または抗原結合性断片と複合体化したリン酸化タウの量を検出すること、および抗体と複合体化したタウの量を、既知のＡＤのステージまたは閾値の試料中の量と比較し、それによってアルツハイマー病のステージを同定することを含む、方法が開示される。一部の実施形態では、試料中のより高い量のタウは、より進行したステージのＡＤを示す。さまざまな実施形態では、レベルおよび／または閾値は、上記に記載したようにして評価される。一部の実施形態では、進行したステージは、既知のＡＤのステージ、例えば、ＢｒａａｋステージＩ〜ＶＩの試料中で検出されたリン酸化タウの量との比較によって決定される。Braak  et  al.,  "Neuropathological  stageing  of  Alzheimer-related  changes".  Acta  Neuropathologica,  82(4):  239-59  (1991)。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、試料中の決定されたタウのレベルは、既知のＡＤのステージの患者に由来する試料中のレベル、および／または健康な個体に由来する対照試料と比較されて、試験対象がそれらの試料中のタウの上昇した量を有するか否かが決定される。
【０２６４】
さまざまな実施形態では、アルツハイマー病のための抗タウ療法の有効性を決定する方法であって、ヒト対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、試料と、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片とを接触させることであって、抗体または抗原結合性断片がリン酸化タウに結合して、リン酸化タウ−抗体複合体を形成することができる、接触させること、ならびに試料中の抗体または抗原結合性断片と複合体化したリン酸化タウの存在および／または量を検出することを含み、健康対照対象に由来する試料中のレベルまたは閾値と比較した、試料中のリン酸化タウのレベルの上昇が、対象がアルツハイマー病のための抗タウ療法に応答する可能性がより高いことを示す、方法が開示される。さまざまな実施形態では、タウの閾値を超えるレベルの上昇または倍数増加は、上記に記載したようにして決定される。
【０２６５】
一部の実施形態では、アルツハイマー病のための抗タウ療法の有効性の決定において使用される抗タウ抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、抗タウ療法は、療法に応答する可能性がより高いと同定された対象に投与される。実施形態では、抗タウ療法は、タウに結合し、脳からのそのクリアランスを促進するか、またはタウ病理の拡大を阻害する抗体を投与することを含む。実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗タウ療法は、本明細書に開示のもののいずれか、ならびに／または米国特許第９，５１８，１０１号およびＷＯ２０１６／０７９５９７に開示のもののいずれかを含む。さまざまな実施形態では、抗タウ療法は、低分子もしくはペプチドワクチン療法、または抗体療法を含む。それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第９，５１８，１０１号およびＷＯ２０１６／０７９５９７を参照されたい。
【０２６７】
さまざまな実施形態では、アルツハイマー病のための抗タウ療法の有効性をモニタリングする方法であって、（ａ）処置の前に、ヒト対象から脳脊髄液または血液試料を取得すること、（ｂ）試料と、本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片とを接触させることであって、抗体または抗原結合性断片がリン酸化タウに結合して、リン酸化タウ−抗体複合体を形成することができる、接触させること、（ｃ）抗体または抗原結合性断片と複合体化したリン酸化タウの存在および／または量を検出すること、（ｄ）抗タウ療法を対象に投与すること、（ｅ）抗タウ療法を投与した後にステップ（ａ）〜（ｃ）を繰り返すことを含み、処置前の試料中のレベルと比較した、処置後の試料中のリン酸化タウのレベルの減少が、有効な療法を示す、方法が開示される。一部の実施形態では、抗タウ抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、本方法は、処置後に取得した試料中のリン酸化タウのレベルが、処置前に取得した試料中のレベルと比較して低い対象に抗タウ療法を再び投与することをさらに含む。実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。さまざまな実施形態では、抗タウ療法は、低分子もしくはペプチドワクチン、または抗体療法を含む。それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／０７９５９７および米国特許第９，５１８，１０１号を参照されたい。実施形態では、抗タウ療法は、タウに結合し、脳からのそのクリアランスを促進する抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態では、抗タウ療法は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗タウ抗体または抗原結合性断片を投与することを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗タウ療法は、本明細書に開示のもののいずれか、ならびに／または米国特許第９，５１８，１０１号およびＷＯ２０１６／０７９５９７に開示のもののいずれかを含む。
ＡＤをモニタリングおよび／または確認する他の方法
【０２６８】
いくつかのさらなる評価基準を、ＡＤの診断を確認するか、または処置の効果および／もしくは疾患進行を評価するための使用のために、例えば、行動評価によって、ＡＤの状態を決定、確認および／またはモニタリングするために使用し得る。一部の実施形態では、評価基準は、アルツハイマー病動作尺度−認知下位尺度１３（ＡＤＡＳ−Ｃｏｇ１３）スコアの平均変化、およびアルツハイマー病共同研究−日常生活動作（ＡＤＣＳ−ＡＤＬ）スコアの平均変化を含む。他の評価基準は、ＭＲＩ容積測定の変化、臨床的認知症尺度（ＣＤＲ−ＳＢ／ＣＤＲ−ＧＳ）の変化、神経精神医学的挙動：神経精神症状評価（ＮＰＩ）総合スコアおよびドメインスコアの変化、ならびに／または認知：ＭＭＳＥ総合スコアの変化を含んでいてもよい。別の実施形態では、評価基準は、以下のいずれかを含み得る：死亡発生までの時間、施設収容、日常生活の動作を行う能力の喪失、重症認知症までの時間、ＡＤＣＳ−ＡＤＬ、ＡＤＡＳ−ｃｏｇスコア、ＭＭＳＥスコア、認知パフォーマンス、血漿ＣＳＦバイオマーカー、ＡＤＡＳ−総合スコア、アルツハイマー病のクオリティオブライフ尺度によって評価されるクオリティオブライフ、行動試験スコア、および米国ＦＤＡの臨床的認知症重症度判定尺度。
【０２６９】
さまざまな実施形態では、ヒト対象におけるアルツハイマー病または別のタウオパチーを検出する方法は、対象に、放射性同位体にコンジュゲートされた本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片を投与すること、および患者の脳内のシグナルを検出することを含み、脳内で検出されたシグナルのパターンは、対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有するか否かを示す。シグナルの検出は、陽電子放出トポグラフィーによって行ってもよい。脳内のシグナルの分布は、対象がアルツハイマー病または別のタウオパチーを有するか否かを示すために使用され得る。実施形態では、放射性同位体にコンジュゲートされた投与される抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２７０】
治療的または診断的使用のための本明細書に開示の抗体および抗原結合性断片は、任意の好適な投与経路、例えば、非経口、局所、皮内、静脈内、経口、皮下、腹腔内、経鼻または筋肉内の経路によって投与することができる。典型的な投与経路は皮下であり得るが、他の経路も等しく有効であり得る。別の典型的な経路は筋肉内注射であり得る。この種類の注射は、典型的には、腕または脚の筋肉に行われる。静脈内注射、ならびに腹腔内注射、動脈内、頭蓋内または皮内の注射も使用し得る。本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片は、生理学的に許容される担体および／または希釈剤、例えば、水、油、生理食塩水、グリセロールまたはエタノールなどの無菌液体中の物質の溶液または懸濁液の注射可能な投薬量として投与されてもよい。本明細書に開示の抗体または抗原結合性断片はまた、投与のために頭蓋骨に小さな孔を開けることによって投与されてもよく、これは、血液脳関門を通過することを可能にし得る。
キット
【０２７１】
さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片のうちの１つまたは複数を含むキットが本明細書に開示される。ある特定の実施形態では、キットは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片を含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含む。実施形態では、抗体または結合性断片は、抗体ＤＣ２Ｅ７またはその抗原結合性断片を含む。
【０２７２】
ある特定の実施形態では、キットは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片を含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、表１におけるものから選択される３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、例えば、表１におけるものに由来する６つのＣＤＲのセットを含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとを含み、軽鎖可変ドメインは、表１におけるもの、例えば、表１におけるものから選択される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列から選択される。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、キットは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片を含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、２位および１２位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、および／またはＨＣＤＲ３は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ならびに／あるいはＬＣＤＲ１は、２位に置換を有する配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号５のアミノ酸配列を含み、および／またはＬＣＤＲ３は配列番号６のアミノ酸配列を含む。さまざまな実施形態では、ＨＣＤＲ１の２位の置換はグリシンであり、ＨＣＤＲ２の２位の置換は、イソロイシンであり、および／またはＨＣＤＲ２の１２位の置換はバリンであり、および／またはＬＣＤＲ１の２位の置換はアスパラギンである。さまざまな実施形態では、重鎖可変領域は、１、３、３０、３７、４８、５８、６３、６８、７６、７７および８０位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含み、ならびに／または軽鎖可変領域は、７、１１、２０、２８、３９および６９位のうちの１つもしくは複数に置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含む。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の６８位の置換はロイシンであり、軽鎖可変領域中の３９位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の４８位の置換はイソロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３０位の置換はグリシンであり、５８位はバリンであり、軽鎖可変領域中の７位の置換はプロリンであり、６９位はグリシンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はセリンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の７７位の置換はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンであり、２０位はアラニンであり、２８位はアスパラギンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の３７位の置換はアラニンであり、６３位はアラニンであり、８０位はセリンであり、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。様々な実施形態では、重鎖可変領域中の１位の置換はグリシンであり、３位はアルギニンであり、７６位はグルタミン酸であり、７７位はセリンである。様々な実施形態では、軽鎖可変領域中の１１位の置換はロイシンである。
【０２７４】
さまざまな実施形態では、キットは、２つまたはそれよりも多くの抗体または抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、キットは、
ａ．重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片であって、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号６のアミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合性断片；および
ｂ．重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む別の抗体または抗原結合性断片であって、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、別の抗体または抗原結合性断片
を含む。
【０２７５】
ある特定の実施形態では、キットは、２つまたはそれよりも多くの抗体または抗原結合性断片を含み、抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含み、他の抗体または抗原結合性断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号２１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、キットは、抗体もしくはＤＣ２Ｅ７、またはそれらの抗原結合性断片、および／あるいは抗体もしくはＤＣ２Ｅ２、またはそれらの抗原結合性断片を含む。
【０２７６】
さまざまな実施形態では、キットは、２つまたはそれよりも多くの抗体または抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、キットは、
ａ．表１に示される配列のいずれか、例えば、６つのＣＤＲのセット、および／もしくは表１に列挙される対の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を含む、抗体または抗原結合性断片；
ｂ．重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む別の抗体または抗原結合性断片であって、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、別の抗体または抗原結合性断片
を含む。
【０２７７】
さまざまな実施形態では、キットは、２つまたはそれよりも多くの抗体または抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、キットは、
ａ．重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む抗体または抗原結合性断片であって、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合性断片、および
ｂ．重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む別の抗体または抗原結合性断片であって、重鎖可変領域が、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含み、軽鎖可変領域が、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号２０のアミノ酸配列を含む、別の抗体または抗原結合性断片
を含む。
【０２７８】
別の実施形態では、先行するキットのいずれかは、本明細書に開示の方法に従って、対象に由来する試料中のリン酸化タウを検出するための、１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片を使用し、それによって、対象におけるアルツハイマー病を検出するための、使用説明書をさらに含んでいてもよい。使用説明書は、試料が脳脊髄液または血液であると指示し得る。キットは、古典的ＥＬＩＳＡまたはデジタルＥＬＩＳＡを用いる使用のためのさらなる構成要素をさらに含んでいてもよい。
【実施例】
【０２７９】
前述の実施形態のいくつかを下記に説明する非限定的な実施例において例示する。しかしながら、本開示の他の実施形態は、明細書の考察から全体として当業者に明らかであろう。明細書および実施例が単なる例示とみなされることを意図する。加えて、本明細書において引用されるすべての参照文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれるとみなされるべきである。
（実施例１）
組換えヒトタウタンパク質の調製
【０２８０】
ヒト全長タウ２Ｎ４Ｒおよびタウ欠失突然変異体：組換えタウタンパク質を、クローンτ４０（Goedert  et  al.,  Multiple  isoforms  of  human  microtubule-associated  protein  tau:  sequences  and  localization  in  neurofibrillary  tangles  of  Alzheimer's  disease,  Neuron  3,  519-526  (1989)）から生成し、それを発現プラスミドｐＥＴ−１７ｂ（Ｎｏｖａｇｅｎ）にサブクローニングし、細菌において発現させた。それぞれのタウ欠失突然変異体をＤＮＡ配列決定によって検証した。すべてのタウ欠失突然変異体およびタウペプチドを、４４１アミノ酸長であり、したがってタウ４４１とも呼ばれる、最長のヒトタウアイソフォーム２Ｎ４Ｒに従って番号付けした（D'Souza,  I.,  and  Schellenberg,  G.D.  (2005).  Regulation  of  tau  isoform  expression  and  dementia.  Biochimica  et  biophysica  acta  1739,  104-115）。タウタンパク質の産生は、以下のステップ：ａ）細菌におけるタウの発現；ｂ）イオン交換クロマトグラフィーによるタウの精製；ｃ）ゲル濾過によるタウの精製；ｄ）単離されたタウの濃縮および保管を含んでいた。
ａ）ヒト全長タウ（２Ｎ４Ｒ）および組換えタウ欠失突然変異体の細菌発現：ヒトタウ（上記）発現プラスミドを、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．Ｃｏｌｉ）産生株ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。SambrookおよびRussell  (2001)による"Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual"に記載されているようにして、適切な発現プラスミドを含有する細菌細胞を培養および誘導した。タウタンパク質またはその断片の発現を駆動するｐＥＴ−１７ｂプラスミドで形質転換されたＢＬ２１（ＤＥ３）細菌の単一のコロニーを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを有する５００ｍＬのルリアブロス培地中、３７℃、３００ｒｐｍで成長させ、イソプロピル−β−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）の添加によって誘導して、０．４ｍＭの最終濃度にした。３７℃で３時間のさらなるインキュベーションの後、細菌を、４℃で、３，０００×ｇで１５分間の遠心分離によって収集した。
ｂ）塩基性および中性のタウタンパク質（６つのタウアイソフォーム、タウアイソフォーム２Ｎ４Ｒの点突然変異体：Ｓｅｒ１９８Ａｌａ、Ｓｅｒ１９９Ａｌａ、Ｓｅｒ２０２Ａｌａ、Ｔｈｒ２０５Ａｌａ、Ｓｅｒ２０８Ａｌａ、Ｓｅｒ２１０Ａｌａ、Ｔｈｒ２１２Ａｌａ、Ｓｅｒ２１４Ａｌａ、Ｔｈｒ２１７Ａｌａ、Ｓｅｒ２３１Ａｌａ、タウ２２１〜４４１、タウ９９〜４４１、タウ１８８〜４４、タウ３１〜４４１、タウ１５１〜３９１、タウ１２７〜４４１、タウ２Ｎ４ＲΔ（１３４〜１６８）、タウ２Ｎ４ＲΔ（４９〜２４３））のカチオン交換クロマトグラフィー精製を、基本的に、以前に記載されているようにして行った（Krajciova  et  al.,Preserving  free  thios  of  intrinsically  disordered  tau  protein  without  use  of  a  reducing  agent,  Analytical  Biochemistry,  383:343-345,  2008）。発現後、細菌ペレットを、１０ｍｌの溶解緩衝液（５０ｍＭの１，４−ピペラジンジエタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、ｐＨ６．９、５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、５ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）、０．１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、５％（ｖ／ｖ）のグリセロール）に再懸濁させ、液体窒素中で直ちに凍結し、タウタンパク質の精製のために使用するまで−８０℃で保管した。タウタンパク質の精製のために、凍結した細菌懸濁液を直ちに解凍し、氷上に置いた。細菌細胞壁を、氷上で、５０％のデューティサイクル、５０Ｗの出力、３０秒の休止を伴う３０秒間を６回に設定したＳｏｎｏｐｕｌｓ  ＨＤ  ２２００、ｔｉｐ  ＴＴ−１３（Ｂａｎｄｅｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することによって、超音波処理によって破壊した。溶解物を、遠心分離（４℃で、２１，０００×ｇで１５分間）によって清澄化し、上清を、０．４５μｍのメンブランフィルターを通して濾過した。組換えタウタンパク質の大スケール精製を、ＡＫＴＡ−ＦＰＬＣワークステーション（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、６℃で行った。濾過した溶解物を、溶解緩衝液を用いて平衡化し、２８０ｎｍでのベースラインが安定になるまで６０ｍｌの溶解緩衝液で十分に洗浄した、５ｍｌのＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）に、３ｍｌ／分の流速でロードした。結合したタウタンパク質を、緩衝液Ｂ（１ＭのＮａＣｌで補充された溶解緩衝液）のグラジエント（１５ｍｌ中で０〜３０％）によって溶出させた。個々の１ｍｌの画分を収集し、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分析した。正に荷電したタウタンパク質と同時精製される核酸を除去するために、タウタンパク質を含有する画分をプールし、緩衝液Ｂの緩いグラジエント（４５ｍｌ中で０〜３０％）による５ｍｌのＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を使用して、第２のカチオン交換クロマトグラフィーステップによって精製した。酸性タウタンパク質（タウ１〜２２６、タウ１〜１３６、タウ１〜２４２）のアニオン交換クロマトグラフィー精製を、以前に記載されているようにして行った（Csokova  et.  al,  Rapid  purification  of  truncated  tau  proteins:  model  approach  to  purification  of  functionally  active  fragments  of  disordered  proteins,  implication  for  neurodegenerative  diseases,  Protein  Expression  and  Purification,  35:366-372,  2004）。発現後、細菌ペレットを、１０ｍｌのヒスチジン溶解緩衝液（２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＤＴＴ、０．１ｍＭのＰＭＳＦ、および５％（ｖ／ｖ）のグリセロール）に再懸濁させた。細菌細胞壁を、氷上で、５０％のデューティサイクル、５０Ｗの出力、３０秒の休止を伴う３０秒間を６回に設定したＳｏｎｏｐｕｌｓ  ＨＤ  ２２００、ｔｉｐ  ＴＴ−１３（Ｂａｎｄｅｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することによって、超音波処理によって破壊した。溶解物を、遠心分離（４℃で、２１，０００×ｇで１５分間）によって清澄化した。細菌溶解物を、１％の硫酸ストレプトマイシン（Ｍｅｄｅｘｐｏｒｔ、Ｒｕｓｓｉａ）によって沈殿させ、５分間氷上でインキュベートし、遠心分離（４℃で、２１，０００×ｇで１５分間）によって清澄化し、０．４５μｍのメンブランフィルターを通して濾過した。濾過したストレプトマイシン沈殿化溶解物を、５ｍｌのＨｉＴｒａｐ  ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｗｅｄｅｎ）に、３ｍｌ／分の流速でロードし、Ａ２８０ベースラインが安定になるまで、３０〜５０ｍｌのヒスチジン溶解緩衝液で十分に洗浄した。タウタンパク質を、ヒスチジン溶解緩衝液中の２ステップの塩のグラジエント（４０ｍｌ中０．０５〜０．５ＭのＮａＣｌ、続いて、２０ｍｌ中０．５〜１ＭのＮａＣｌ）で溶出させた。
ｃ）精製の最終のゲル濾過ステップ（すべてのタウタンパク質に対して同じ）では、イオン交換クロマトグラフィーによって得られたプールしたタウタンパク質画分を、塩基性／中性または酸性のタウタンパク質についてそれぞれ、１００ｍＭのＮａＣｌで補充されたＰＩＰＥＳまたはヒスチジン溶解緩衝液中のいずれかで、ゲル濾過カラム（ＨｉＬｏａｄ  ２６／６０  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ｐｒｅｐグレードカラム、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に３ｍｌ／分で注入した。溶出したタウタンパク質をプールした。
ｄ）ゲル濾過精製後のタウタンパク質濃縮のために、プールした画分を、１．５倍体積の２．５％グリセロールで希釈し、ＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＨＰカラム（塩基性および中性タウタンパク質）またはＨｉＴｒａｐ  Ｑ  ＨＰカラム（酸性タウタンパク質）に再びロードした。次いで、濃縮された組換えタウタンパク質を、１ＭのＮａＣｌのステップグラジエントでカラムから溶出させた。最後に、緩衝液を、５ｍＬのＨｉＴｒａｐ  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、アルゴンで飽和したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、８．０９ｍＭのリン酸二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）、１．４７ｍＭのリン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）、１３６．８９ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭの塩化カリウム（ＫＣｌ））と交換した。精製された試料のタンパク質の定量化を、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）定量化キット（Ｐｉｅｒｃｅ、ＵＳＡ）を使用して、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準物質として用いて行った。タウタンパク質を、作業アリコートにアリコートし、液体窒素中でスナップ凍結し、−７０℃で保管した。
（実施例２）
ヒトタウ１〜２４２に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系の調製、ＥＬＩＳＡによるモノクローナル抗体のスクリーニング、およびモノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ２の初期特性評価
【０２８１】
６週齢のＢａｌｂ／ｃマウスを、フロイント完全アジュバント（ＳＩＧＭＡ）中の５０μｇの組換えタウ１〜２４２（実施例１に記載されたようにして調製）で皮下に予備刺激し、フロイント不完全アジュバント中の５０μｇの同じ抗原で４週間の間隔で３回追加免疫した。融合の３日前に、マウスにＰＢＳ中の５０μｇの同じ抗原を皮下に注射した。免疫されたマウスに由来する脾臓細胞を、Kontsekova  et  al.,  The  effect  of  postfusion  cell  density  on  establishment  of  hybridomas,  Folia  Biol.  34,  18-22  (1988)の方法に従って、ＮＳ／０ミエローマ細胞と融合させた。脾細胞を、ＮＳ／０ミエローマ細胞と混合し（５：１の比）、１０％のジメチルスルホキシドで補充された無血清ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、１ｍｌの５０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）１５５０（Ｓｅｒｖａ）中で、１分間融合した。融合した細胞を、９６ウェルプレートのウェルあたり２．５×１０５脾臓細胞の密度で、２０％のウマ血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ヒポキサンチン（０．１ｍＭ）、アミノプテリン（０．０４ｍＭ）、チミジン（０．０１６ｍＭ）およびゲンタマイシン（４０Ｕ／ｍｌ）を含有するＤＭＥＭに再懸濁させた。
【０２８２】
細胞を３７℃で１０日間インキュベートし、成長したハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、抗タウ１〜２４２特異的モノクローナル抗体の産生についてスクリーニングした。マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中、３７℃でタウ１〜２４２（５μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）を用いて終夜コーティングした。プレートを、非特異的結合を低減するために１％の脱脂粉乳でブロッキングし、ＰＢＳ−０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０で洗浄し、５０μｌ／ウェルのハイブリドーマ培養上清と３７℃で１時間インキュベートした。結合したモノクローナル抗体を、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、ＤＡＫＯ）とコンジュゲートされたヒツジ抗マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）を用いて検出した。反応を、ペルオキシダーゼ基質としてＴＭＢ  ｏｎｅ（Ｋｅｍ−Ｅｎ−Ｔｅｃ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で展開し、５０μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて停止した。４５０ｎｍでの吸光度をＰｏｗｅｒｗａｖｅ  ＨＴ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）を使用して測定した。陰性対照（ＰＢＳ）の吸光度値の少なくとも２倍の値を伴う読み出しを陽性とみなした。陽性のハイブリドーマ培養物を、Kontsekova  et  al.,  One-step  method  for  establishing  8-azaguanine-resistant  hybridomas  suitable  for  preparation  of  triomas,  J.  Immunol.  Methods,  145,  247-250  (1991)に記載の手順に従って、軟寒天中でさらにサブクローニングした。
【０２８３】
モノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ２（ＡＴＣＣ特許寄託名ＰＴＡ−１２４９９１でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたマウスハイブリドーマ細胞系によって産生）を、そのようにして産生および選択された陽性のハイブリドーマ培養物の中で同定した。ＤＣ２Ｅ２を下記に記載のようにしてさらに特性評価した。抗体アイソタイプを、マウスＩｇアイソタイピングキット（ＩＳＯ−２、ＳＩＧＭＡ）を使用して、ＥＬＩＳＡによってマウスＩｇＧ１であると決定した（図１）。
（実施例３）
組換えタウ欠失突然変異体を使用するＤＣ２Ｅ２エピトープのマッピング、タウ由来ペプチドおよび質量分析
【０２８４】
ヒトタウタンパク質２Ｎ４Ｒの欠失突然変異体を、ＥＬＩＳＡを使用するＤＣ２Ｅ２のエピトープマッピングのために使用した（図２Ａ）。組換えヒトタウアイソフォーム２Ｎ４Ｒ、１Ｎ４Ｒ、２Ｎ３Ｒ、０Ｎ４Ｒ、１Ｎ３Ｒ、０Ｎ３Ｒおよびタウ欠失突然変異体を、実施例１に記載されたようにして調製した。マイクロタイタープレートを、３７℃で組換えタウタンパク質（ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）を用いて終夜コーティングした。プレートを、非特異的結合を低減するためにＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ２０（０．１％ｖ／ｖ）でブロッキングし、５０μｌ／ウェルのＤＣ２Ｅ２ハイブリドーマ培養上清と３７℃で１時間インキュベートした。結合したモノクローナル抗体を、ＨＲＰコンジュゲートされたヒツジ抗マウスＩｇ（ＤＡＫＯ）を用いて検出した。反応を、ペルオキシダーゼ基質としてＴＭＢ  ｏｎｅ溶液（Ｋｅｍ−Ｅｎ−Ｔｅｃ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で展開し、５０μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて停止した。吸光度を、Ｐｏｗｅｒｗａｖｅ  ＨＴ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）を使用して４５０ｎｍで測定した。陰性対照（ＰＢＳ）の吸光度値の少なくとも２倍の値を伴う読み出しを陽性とみなした。ＤＣ２Ｅ２は、以下のヒトタウタンパク質：６つのヒトタウアイソフォーム（図２Ｂ）のタウ１〜２４２、タウ３１〜４４１、タウ９９〜４４１、タウ１〜２２６、タウ１５１〜３９１、タウ１２７〜４４１を認識したが、欠失突然変異体タウ１〜１３６、タウ２２１〜４４１およびタウ２Ｎ４Ｒ（Δ１３４〜１６８）を認識しなかった（図２Ｃ）。総合して、これらの知見は、ＤＣ２Ｅ２が、アミノ酸１５１〜１８８の間のタウのプロリンリッチ領域に位置する、タウ上の結合性部位またはエピトープを認識することを示唆する。
【０２８５】
エピトープをさらに定義するために、競合ＥＬＩＳＡを行った。競合実験のために、ＤＣ２Ｅ２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、以下のようにして、プロテインＧアフィニティーカラムにおいて無血清ハイブリドーマ上清から精製した。ハイブリドーマ上清をｐＨ７．５に調整し、溶液を遠心分離によって事前清澄化し、０．４５μｍのメンブランフィルターを通して濾過し、５ｍｌのプロテインＧセファロースカラムにロードした。ＤＣ２Ｅ２  ｍＡｂを、０．１Ｍのグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．７を用いてカラムから溶出させた。溶出した画分を、１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９．０で直ぐに中和した。プールした画分を、ＰＢＳに対して透析し、限外濾過によって濃縮し、−７０℃で保管した。抗体の濃度を、２８０ｎｍでの吸光度を測定し、式ｃ（ｍｇ／ｍｌ）＝Ａ２８０ｎｍ／１．４３を使用することによって、決定した。
【０２８６】
競合ＥＬＩＳＡのために、ペプチド（タウ１４１〜１７０、１６１〜１９０、１８１〜２１０、１７１〜２００）を、９０％より高い純度で、ＥＺＢｉｏｌａｂｓによって合成した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ  Ｍｅｄｉｓｏｒｐ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、５０μｌ／ウェルのＰＢＳ中の０．４μｇ／ｍｌの組換え精製タウ１〜２４２を用いて、４℃で終夜コーティングした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（０．１％ｖ／ｖ）で４回洗浄し、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で、２５℃で２時間ブロッキングした。ペプチドを、５ｍＭの最終濃度で、ＰＢＳに別々に溶解した。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中のペプチドの連続希釈物（２．５倍）を、円錐状のウェル底面を有するポリプロピレンウェル（Ｇｒｅｉｎｅｒ、＃６５１２０１）中で調製した（濃度範囲２００μＭ、３２μＭ、１２．８μＭ、５．１μＭ、２μＭ、０．８μＭおよび０．３μＭ）。６０μｌのそれぞれの希釈物をウェルごとに添加した。精製ＤＣ２Ｅ２を、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中０．６μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、６０μｌのこの希釈された抗体を、ペプチドのそれぞれの連続希釈物と混合し、２００μＭ、３２μＭ、１２．８μＭ、５．１μＭ、２μＭ、０．８μＭおよび０．３μＭの濃度でそれぞれの個々の試験ペプチドを含有する、０．３６ｎｇの抗体／６０μｌを有する１２０μｌの混合物をもたらした。抗体／ペプチド混合物を、２５０ｒｐｍに設定した回転台において２５℃で１時間インキュベートした。５０マイクロリットル（５０μｌ）の抗体／ペプチド混合物を、ポリプロピレンプレートから、タウ１〜２４２でコーティングされ、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０でブロッキングされたプレートに移し（２反復）、２５０ｒｐｍに設定した回転台において２５℃で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で４回洗浄し、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中で１：１０００に希釈された５０μｌのポリクローナルヤギ抗マウス免疫グロブリン／ＨＲＰ（Ｄａｋｏ、＃Ｐ０４４７）と回転台（２５０ｒｐｍに設定）において２５℃で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で４回洗浄し、次いで、ペルオキシダーゼ基質として５０μｌ／ウェルのＴＭＢ  ｏｎｅ溶液（Ｋｅｍ−Ｅｎ−Ｔｅｃ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）とインキュベートした。反応を、５０μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４（Ｍｅｒｃｋ）を添加することによって停止した。吸光度を、Ｐｏｗｅｒｗａｖｅ  ＨＴ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）を使用して４５０ｎｍで測定した。
【０２８７】
競合ＥＬＩＳＡを、以下のペプチド：タウ１４１〜１７０、１６１〜１９０、１７１〜２００、１８１〜２１０を用いて行った（図２Ｄ）。ペプチドタウ１６１〜１９０のみが、ＤＣ２Ｅ２との結合について、タウ１〜２４２と競合した（図２Ｄ）。しかしながら、タウのＣ末端へのペプチドのシフト（１７１〜２００、１８１〜２１０）またはタウのＮ末端へのペプチドのシフト（１４１〜１７０）は、ＤＣ２Ｅ２との結合について、タウ１〜２４２との競合活性の喪失をもたらした。これらの結果は、エピトープがアミノ酸１６１〜１８１の間に位置することを示唆する。
【０２８８】
ＬＣ／ＭＡＬＤＩ質量分析アプローチを、エピトープをより正確に定義する目的で、使用した。結合性部位の配列を、磁気ビーズに固定化されたＤＣ２Ｅ２モノクローナル抗体に対するタンパク分解的に消化されたタウタンパク質の結合、およびＬＣ／ＭＡＬＤＩ質量分析による溶出したペプチドのその後の同定によって同定した。タウタンパク質（タウ２Ｎ４Ｒおよびタウ１５１〜３９１）を、トリプシン、Ｇｌｕ−Ｃ、キモトリプシンの混合物で３７℃で終夜、またはギ酸で１０８℃で２時間、消化した。結合反応を、ＰＢＳ中１％のＣＨＡＰＳ中で２時間行った。結合していないペプチドを、ＰＢＳ中１％のＣＨＡＰＳでの３回の洗浄によって除去した。結合したペプチドを、ギ酸での３回の洗浄によって溶出させ、凍結乾燥した。ペプチドをＵＨＰＬＣ（Ｄｉｏｎｅｘ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  ｎａｎｏ−ＬＣシステム）によって分離し、画分をＨＣＣＡマトリックス溶液と混合し、ＭＴＰ  Ａｎｃｈｏｒ  Ｃｈｉｐ  ３８４  ＭＡＬＤＩ試料プレート（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ）に分注した。分画された試料を、陽イオンモードで動作するＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ／ＴＯＦ（Ｕｌｔｒａｆｌｅｘｔｒｅｍｅ、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ）装置を用いて分析した。収集したＭＳおよびＭＳ／ＭＳスペクトルを、Ｍａｓｃｏｔ検索エンジン（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、タウタンパク質のデータベースに対して検索した。
【０２８９】
データベース分析は、いくつかのペプチド配列を明らかにし、それらのすべてはＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰを含有する。このペプチドは、タウ２Ｎ４Ｒ上のプロリンリッチ領域である１６３〜１７２の領域に位置する。
（実施例４）
ＤＣ２Ｅ２は、アルツハイマー病における不溶性タウ、リン酸化タウ、および非リン酸化タウに特異的なＡ６８トリプレットを認識する
【０２９０】
アルツハイマー病では、タウは高リン酸化されている。したがって、ＤＣ２Ｅ２の結合性の詳細な特性評価のために、高リン酸化ＰＨＦ−タウおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウを調べた。
【０２９１】
サルコシル不溶性タウ複合体（ＰＨＦ−タウ）を、ｓａｒｋｏｓｙｌ法（Greenberg  and  Davies,  A  preparation  of  Alzheimer's  paried  helical  filaments  that  displays  distint  tau  proteins  by  polyacrylamide  gel  electrophoresis,  PNAS,  87:5827-31,  1990）を使用して、ヒトＡＤ脳から単離した。タンパク質抽出のために、凍結ヒトＡＤ脳組織（前頭皮質、オランダ脳バンクから入手したＢｒａａｋステージＶＩの試料）を、１０倍体積の冷抽出緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ７．４、０．８ＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡおよび１０％のスクロース）中でホモジナイズし、ホモジネートを、２０，０００×ｇで２０分間遠心分離した。サルコシル−不溶性タウを調製するために、上清に、１％の最終濃度までＮ−ラウロイルサルコシン（ＳＩＧＭＡ）を補充し、振とうしながら室温で１時間インキュベートした。１００，０００×ｇで１時間の遠心分離の後、得られた上清を廃棄し、サルコシル−不溶性タウ画分を含むペレットを、不溶性タウの調製物のために使用した上清の１／５０の体積に再懸濁させた。
【０２９２】
タウ２Ｎ４Ｒおよびタウ１５１〜３９１のｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化のために、キナーゼ抽出物を使用した。成体ラット脳（１ｇ／２．５ｍｌ）を、キナーゼ緩衝液（１０ｍＭのＴＲＩＳ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４；５ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＤＴＴ；１ｍＭのＰＭＳＦ；２ｍＭのＭｇＣｌ２、ロイペプチン（２０μｇ／ｍｌ）、ペプスタチン（２０μｇ／ｍｌ）、アプロチニン（２０μｇ／ｍｌ）））中でホモジナイズし、４℃で１００，０００×ｇでの３０分間の遠心分離の後、上清（キナーゼ抽出物）を、タウのリン酸化のために使用した。リン酸化反応を、１０ｍＭのＴＲＩＳ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４；５ｍＭのＥＧＴＡ、２ｍＭのＤＴＴ；１ｍＭのＰＭＳＦ；ロイペプチン（２０μｇ／ｍｌ）；ペプスタチン（２０μｇ／ｍｌ）；アプロチニン（２０μｇ／ｍｌ）；２ｍＭのＡＴＰ；２ｍＭのＭｇＣｌ２；および１０μＭのオカダ酸中、３７℃で行った。脳キナーゼ抽出物（５μｌ）を５０μｌのタウ溶液（１μＭ）に添加し、反応物を３７℃で２４時間インキュベートした。タウのリン酸化を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および６つの組換えヒトタウアイソフォームに対して上昇したウサギ抗血清を使用する免疫ブロットによって分析した（Csokova  et  al.,  Rapid  purification  of  truncated  tau  proteins:  model  approach  to  purification  of  functionally  active  fragments  of  disordered  proteins,  implication  for  neurodegenerative  diseases,  Protein  Expression  and  Purification,  35:366-372,  2004）。
【０２９３】
リン酸化および非リン酸化のタウタンパク質２Ｎ４Ｒおよびタウ１５１〜３９１、ならびにサルコシル不溶性ＰＨＦタウを、ＤＣ２Ｅ２を使用する免疫ブロットによって分析した。可溶性タウタンパク質を、等体積の２×ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）の試料ローディング緩衝液（β−メルカプトエタノールを有する）で希釈し（Laemmli,  1970）、２５０ｎｇのタンパク質をレーンごとにロードした。不溶性ＰＨＦ−タウのために、ペレットを、１×ＳＤＳ試料ローディング緩衝液に溶解し、１／５０の体積の可溶性画分を不溶性タウ画分の調製のために使用した。次いで、等体積の可溶性タウおよびサルコシル−不溶性タウ画分を、免疫ブロットのために使用し、これは、可溶性画分中の１５μｇの総タンパク質に相当した（Filipcik  et  al.  2010を参照されたい）。試料を９５℃で５分間加熱し、５〜２０％のグラジエントＳＤＳポリアクリルアミドゲルにロードし、Ｔｒｉｓ−グリシンＳＤＳ緩衝系中、２５ｍＡで４０分間電気泳動した。タンパク質をフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）膜に移した（１０ｍＭのＣＡＰＳ、ｐＨ１２中、１５０ｍＡで１時間）。移動後、膜を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ；１３６．８９ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、８．０９ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、１．４７ｍＭのＫＨ２ＰＯ４）中の５％の脱脂粉乳で室温で１時間ブロッキングし、次いで、ＤＣ２Ｅ２ハイブリドーマ培養上清と１２時間インキュベートし、続いて、大量のＰＢＳ−Ｔ（１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）で３回洗浄した。膜を、二次抗体として、ＰＢＳ中の１％の脱脂粉乳で１：３，０００で希釈された、ＨＲＰとコンジュゲートされたヤギ抗マウスＩｇ（ＤＡＫＯ、Ｄｅｎｍａｒｋ）とインキュベートした（室温で１時間）。このインキュベーションに続いて、ＰＢＳ中の０．１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０で洗浄した（３回）。ブロットを、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｕ．Ｓ．Ａ）で展開し、タンパク質シグナルを、ＬＡＳ３０００イメージングシステム（ＦＵＪＩ  Ｐｈｏｔｏ  Ｆｉｌｍ  Ｃｏ．、Ｊａｐａｎ）を使用して検出した。化学発光シグナルの強度を、ＡＩＤＡ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍａｇｅ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｚｅｒ、Ｒａｙｔｅｓｔ、Ｓｔｒａｕｂｅｎｈａｒｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）ソフトウェアを使用して定量化した。
【０２９４】
ＤＣ２Ｅ２は、ｉｎ  ｖｉｖｏリン酸化タウ２Ｎ４Ｒ、１５１〜３９１のタウタンパク質の両方の形態、ならびにタウ２Ｎ４Ｒおよびタウ１５１〜３９１の野生型（非リン酸化）形態を認識した（図３）。
【０２９５】
さらにまた、ＤＣ２Ｅ２が、ＡＤ神経原線維変性における病的タウ（ＰＨＦ−タウ）の特性であるＡ６８トリプレットを認識したことは注目に値する。これらの結果は、ＤＣ２Ｅ２が、異なる種類のタウタンパク質、ＡＤ脳から単離された病的タウ、生理学的タウ（２Ｎ４Ｒ）、切断タウ１５１〜３９１およびそのリン酸化形態を認識および結合することができることを実証する。したがって、ＤＣ２Ｅ２は、エピトープのリン酸化とは独立して、エピトープを認識した。開示されたＤＣ２Ｅ２の結合性は、ＡＤについての診断ツールとして抗体を使用する可能性を示唆する。
（実施例５）
ＤＣ２Ｅ２可変領域の配列決定
【０２９６】
ＤＣ２Ｅ２の軽鎖および重鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列の決定（図５）。ＤＣ２Ｅ２可変領域のヌクレオチド配列（図５Ａおよび５Ｃ）を、ＤＣ２Ｅ２モノクローナル抗体を発現するマウスハイブリドーマ細胞系ＤＣ２Ｅ２（ＡＴＣＣ）から抽出された総ＲＮＡを使用して合成されたｃＤＮＡのＤＮＡ配列決定によって決定した。総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して抽出した。ファーストストランドｃＤＮＡの合成を、製造者のプロトコール（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）に従って、「大容量ｃＤＮＡ逆転写」キットを使用して行った。２倍の逆転写マスターミックスについての試薬の組成は以下の通りであった（２０μＬの反応物あたりの量）：２μＬの１０×ＲＴ緩衝液；０．８μＬの２５×ｄＮＴＰミックス（１００ｍＭ）；２μｌの１０×ＲＴランダムプライマー（５０μＭ）；１μＬのＭｕｌｔｉＳｃｒｉｂｅ（商標）逆転写酵素（５０Ｕ／μＬ）；４．２μＬの無ヌクレアーゼＨ２Ｏ。逆転写のために、１０μＬの２×逆転写マスターミックスをＲＮＡ試料（１μｇ／１０μＬ）と混合し、ｃＤＮＡを以下の条件下で合成した：２５℃で１０分、３７℃で１２０分、８５℃で５分、最後に４℃に冷却。軽鎖および重鎖の可変領域をコードする遺伝子を、Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）高フィデリティーＤＮＡポリメラーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。それぞれ、軽鎖および重鎖のためのフォワードプライマー（Ｍ１３−Ｌ６  ５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴΑＴＧＡＧＧＴＫＣＹＹＴＧＹＴＳＡＧＹＴＹＣＴＧＲＧＧ−３’およびＭ１３−Ｈ１  ５‘−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＡＴＧＡＡＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＴＣＡＴＳＴＴＣＴＴＣ−３‘）を、マウス免疫グロブリンシグナル配列フォワードプライマーのライブラリーのスクリーニング後に選択した。シグナル配列のフォワードプライマーを使用することは、可変領域の最初がプライマー設計のために使用されている場合に導入されるバイアスなしに、軽鎖および重鎖抗体鎖の両方の全Ｖ遺伝子を増幅する利点を有する。軽鎖および重鎖のためのリバースプライマー（Ｍ１３−ＫＣ  ５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’およびＭ１３−ＣＧ１  ５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’）は、それぞれ、カッパおよびＩｇＧ１鎖定常領域に由来していた。
【０２９７】
ＰＣＲ産物を配列決定し、得られたＤＣ２Ｅ２の軽鎖および重鎖の可変領域のＤＮＡ配列を、それぞれ、図５Ａおよび５Ｃに示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＤＣ２Ｅ２軽鎖および重鎖タンパク質配列に下線を付ける（それぞれ、図５Ｂおよび５Ｄ）。ＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）を、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）の番号付け体系に従って同定した（例えば、Lefranc  M.P.  The  IMGT  unique  numbering  for  immunoglobulins,  T-cell  receptors,  and  Ig-like  domains.  The  Immunologist,  7,  132-136,  1999  (1999)を参照されたい）。
（実施例６）
ヒトアルツハイマー病における不溶性タウ種に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系の調製、ＥＬＩＳＡによるモノクローナル抗体のスクリーニング、およびモノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７の初期特性評価
【０２９８】
ＡＤ脳由来のサルコシル−不溶性タウ（ＰＨＦ−タウ）をＢａｌｂ／ｃマウスの免疫のための免疫原として使用した。サルコシル不溶性タウ複合体を、実施例４に記載されたようにして、ｓａｒｋｏｓｙｌ法（Greenberg  and  Davies,  A  preparation  of  Alzheimer  paired  helical  filaments  that  diplays  distinct  tau  proteins  by  polyacrylamide  gel  electrophoresis,  PNAS,  87:5827-31,  1990）を使用して、ヒトＡＤ脳（前頭皮質、ＢｒａａｋステージＶＩ、オランダ脳バンク）から単離した。
【０２９９】
６週齢のＢａｌｂ／ｃマウスを、フロイント完全アジュバント（ＳＩＧＭＡ）中のヒトアルツハイマーの脳組織から単離されたおよそ２０〜３０μｇの不溶性タウタンパク質で皮下に予備刺激し、フロイント不完全アジュバント中の２０〜３０μｇの同じ抗原で４週間の間隔で５回追加免疫した。融合の３日前に、マウスにＰＢＳ中の２０〜３０μｇの同じ抗原を皮下に注射した。免疫されたマウスに由来する脾臓細胞を、Kontsekova  et  al.,  The  effect  of  postfusion  cell  density  on  establishment  of  hybridomas,  Folia  Biol.  34,  18-22  (1988)の方法に従って、ＮＳ／０ミエローマ細胞と融合させた。脾細胞を、ＮＳ／０ミエローマ細胞と混合し（５：１の比）、１０％のジメチルスルホキシドで補充された無血清ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、１ｍｌの５０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）１５５０（Ｓｅｒｖａ）中で、１分間融合した。融合した細胞を、９６ウェルプレートのウェルあたり２．５×１０５脾臓細胞の密度で、２０％のウマ血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ヒポキサンチン（０．１ｍＭ）、アミノプテリン（０．０４ｍＭ）、チミジン（０．０１６ｍＭ）およびゲンタマイシン（４０Ｕ／ｍｌ）を含有するＤＭＥＭに再懸濁させた。
【０３００】
細胞を３７℃で１０〜１４日間インキュベートし、成長したハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、抗ＰＨＦ−タウ特異的モノクローナル抗体の産生についてスクリーニングした。マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中、３７℃でＰＨＦ−タウ（５μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）を用いて終夜コーティングした。プレートを、非特異的結合を低減するために１％の脱脂粉乳でブロッキングし、ＰＢＳ−０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０で洗浄し、５０μｌ／ウェルのハイブリドーマ培養上清と３７℃で１時間インキュベートした。結合したモノクローナル抗体を、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、ＤＡＫＯ）とコンジュゲートされたヒツジ抗マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）を用いて検出した。反応を、ペルオキシダーゼ基質としてＴＭＢ  ｏｎｅ（Ｋｅｍ−Ｅｎ−Ｔｅｃ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で展開し、５０μｌの２ＭのＨ２ＳＯ４を用いて停止した。４５０ｎｍでの吸光度をＰｏｗｅｒｗａｖｅ  ＨＴ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）を使用して測定した。陰性対照（ＰＢＳ）の吸光度値の少なくとも２倍の値を伴う読み出しを陽性とみなした。陽性のハイブリドーマ培養物を、Kontsekova  et  al.,  One-step  method  for  establishing  8-azaguanine-resistant  hybridomas  suitable  for  preparation  of  triomas,  J.  Immunol.  Methods,  145,  247-250,  (1991)に記載の手順に従って、軟寒天中でさらにサブクローニングした。
【０３０１】
モノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７（ＡＴＣＣ特許寄託名ＰＴＡ−１２４９９２でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたマウスハイブリドーマ細胞系によって産生）を、陽性のハイブリドーマ培養物の中で同定した。ＤＣ２Ｅ７を下記に記載のようにしてさらに特性評価した。抗体アイソタイプを、マウスＩｇアイソタイピングキット（ＩＳＯ−２、ＳＩＧＭＡ）を使用して、ＥＬＩＳＡによってマウスＩｇＧ２ａであると決定した（図４）。
（実施例７）
ＤＣ２Ｅ７可変領域の配列決定
【０３０２】
ＤＣ２Ｅ７の軽鎖および重鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列の決定（図６）。ＤＣ２Ｅ７可変領域のヌクレオチド配列（図６Ａおよび６Ｃ）を、ＤＣ２Ｅ７モノクローナル抗体を発現するマウスハイブリドーマ細胞系ＤＣ２Ｅ７（ＡＴＣＣ）から抽出された総ＲＮＡを使用して合成されたｃＤＮＡのＤＮＡ配列決定によって決定した。総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して抽出した。ファーストストランドｃＤＮＡの合成を、製造者のプロトコール（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＳＡ）に従って、「大容量ｃＤＮＡ逆転写」キットを使用して行った。２倍の逆転写マスターミックスについての試薬の組成は以下の通りであった（２０μＬの反応物あたりの量）：２μＬの１０×ＲＴ緩衝液；０．８μＬの２５×ｄＮＴＰミックス（１００ｍＭ）；２μｌの１０×ＲＴランダムプライマー（５０μＭ）；１μＬのＭｕｌｔｉＳｃｒｉｂｅ（商標）逆転写酵素（５０Ｕ／μＬ）；４．２μＬの無ヌクレアーゼＨ２Ｏ。逆転写のために、１０μＬの２×逆転写マスターミックスをＲＮＡ試料（１μｇ／１０μＬ）と混合し、ｃＤＮＡを以下の条件下で合成した：２５℃で１０分、３７℃で１２０分、８５℃で５分、最後に４℃に冷却。軽鎖および重鎖の可変領域をコードする遺伝子の増幅を、Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）高フィデリティーＤＮＡポリメラーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって行った。フォワードプライマー（Ｍ１３−Ｌ１２  ５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＡＴＧＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＣＴＣＡＡＣＴＴＣＴＧＣＴＣ−３’およびＭ１３−Ｈ５  ５’−ＴＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＡＴＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＭＡＧＴＴＴＴＣＣＴＴ−３’）を、マウス免疫グロブリンシグナル配列フォワードプライマーのライブラリーのスクリーニング後に選択した。シグナル配列のフォワードプライマーの使用は、可変領域の最初がプライマー設計のために使用されている場合に導入されるバイアスなしに、軽鎖および重鎖抗体鎖の両方の全Ｖ遺伝子を増幅する利点を有する。軽鎖および重鎖のためのリバースプライマー（Ｍ１３−ＫＣ  ５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’およびＭ１３−ＣＧ２ａ  ５’−ＣＡＧＧＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＣＧＡＴＧＧＧＧＣ−３’）は、それぞれ、カッパおよびＩｇＧ２ａ鎖定常領域に由来していた。
【０３０３】
ＰＣＲ産物を配列決定し、得られたＤＣ２Ｅ７の軽鎖および重鎖の可変領域のＤＮＡ配列を、それぞれ、図６Ａおよび６Ｃに示す。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＤＣ２Ｅ７軽鎖および重鎖タンパク質配列に下線を付ける（それぞれ、図６Ｂおよび６Ｄ）。ＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）を、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）の番号付け体系に従って同定した（例えば、Lefranc  M.P.  The  IMGT  unique  numbering  for  immunoglobulins,  T-cell  receptors,  and  Ig-like  domains.  The  Immunologist  7,  132-136,  1999  (1999)を参照されたい）。
（実施例８）
モノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７はタウタンパク質のリン酸化形態に特異的である
【０３０４】
組換え全長タウ２Ｎ４Ｒ、リン酸化２Ｎ４Ｒ、ＰＨＦ−タウおよび胎児タウを、免疫ブロットによるモノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７の結合活性のさらなる特性評価のために使用した。組換えヒトタウアイソフォーム２Ｎ４Ｒを、実施例１に記載されたようにして調製した。ＰＨＦ−タウを、実施例４に記載されたようにして調製した。
【０３０５】
胎児ラットタウ抽出および精製を、基本的に、１％の過塩素酸を使用して、Ivanovova  et  al.,  High-yield  purification  of  fetal  tau  preserving  its  structure  and  phosphorylation,  J.  Immunol.  Methods,  339:17-22,  2008に記載されたようにして行った。１〜７日齢の子ラットから得た脳組織を、氷冷した１％の過塩素酸（５ｍｌの過塩素酸あたり１．５ｇの組織、Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ）中でホモジナイズし、２０分間氷上に放置した。ホモジネートを、１５，０００×ｇで２０分間スピンし、澄明な上清を濃縮し、同時に、緩衝液を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒデバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して洗浄緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）に交換した。濾過した抽出物を、固定化汎タウｍＡｂ  ＤＣ２５を有するセファロースで充填されたＰｏｌｙ−ＰｒｅｐカラムＣ１０／１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に０．２ｍｌ／分の流速でロードした。結合していないタンパク質を、溶出する画分の吸光度（２８０ｎｍ）が安定になるまで、１０〜１５ｍｌの洗浄緩衝液で洗い流した。ｍＡｂ  ＤＣ２５に結合した胎児タウを、０．１Ｍのグリシン、ｐＨ２．６で溶出させた。溶出した０．５ｍｌの画分を、１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９で直ぐに中和し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによってアッセイした。胎児タウを含有する画分を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒデバイス（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、ＰＢＳへの緩衝液交換と同時に、濃縮した。アフィニティークロマトグラフィーによって精製された胎児タウを、Chen  et  al.,  (2005)に従って、１０％のトリクロロ酢酸を含有する４倍体積の氷冷アセトンの添加によって、沈殿させた。混合物を−２０℃で２時間インキュベートし、２℃で、１５，０００×ｇで２０分間遠心分離した。上清を廃棄し、沈殿物を１ｍｌの氷冷アセトンに再懸濁させ、２０分間氷上に放置し、再び上記のようにして遠心分離した。得られたペレットを室温で乾燥し、沈殿前の体積と等しい体積のＰＢＳに溶解した。
【０３０６】
全長タウアイソフォーム２Ｎ４Ｒ、サルコシル不溶性ＰＨＦ−タウおよび胎児タウを、実施例４に記載されたようにして、ＤＣ２Ｅ７を使用する免疫ブロットによって分析した。免疫ブロットにおいて、ＤＣ２Ｅ７抗体は、ＰＨＦ−タウおよび胎児タウを認識した（図７）。試験された両方の種類のタウはリン酸化されたが、リン酸化のレベルは相違した。免疫反応性は、組換えヒトタウ２Ｎ４Ｒにおいて観察されなかった。一方、抗体は、ヒトタウアイソフォーム２Ｎ４Ｒのｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化バージョンに結合した。結果は、ＤＣ２Ｅ７がリン酸化されるエピトープを認識し、したがって、抗体がリン酸化タウ種に特異的であることを示す。抗体によって認識されるエピトープは、リン酸化ＰＨＦ−タウ、胎児タウおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウに存在する。したがって、ＤＣ２Ｅ７は、アルツハイマー病脳組織に由来するリン酸化タウ（ＰＨＦ−タウ）と、生理学的タウ（２Ｎ４Ｒ）とを区別することができる。
（実施例９）
組換えタウ欠失突然変異体、タウ点突然変異体およびタウ由来ペプチドを使用するＤＣ２Ｅ７ホスホエピトープのマッピング
【０３０７】
ＤＣ２Ｅ７の免疫反応性は、抗体がリン酸化タウ上のエピトープを認識することを示唆する（胎児タウ、ＰＨＦ−タウ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウ、上記を参照されたい）。したがって、エピトープを決定するために、タウタンパク質のリン酸化欠失突然変異体を使用した（図８）。タウ欠失突然変異体のリン酸化を、実施例４に記載されたようにして、キナーゼ抽出物を使用して行った。
【０３０８】
ヒトタウタンパク質２Ｎ４Ｒ（タウ１〜２９６、タウ１８８〜４４１、タウ２２１〜４４１、タウ１５１〜３９１、タウ１２２〜２２７）のリン酸化欠失突然変異体を、免疫ブロットにおいて、ＤＣ２Ｅ７のエピトープの局在化のために使用した（実施例４を参照されたい）。免疫ブロット分析は、ＤＣ２Ｅ７が以下の欠失突然変異体：タウ１〜２９６、タウ１８８〜４４１、タウ１５１〜３９１、タウ１２２〜２２７のすべてを、タウタンパク質２２１〜４４１を除いて認識したことを実証した（図９）。これらの結果は、ＤＣ２Ｅ７ホスホエピトープが、アミノ酸残基１８８〜２２７の間のプロリンリッチ領域にあることを示す。
【０３０９】
上述のタウ欠失突然変異体によるＤＣ２Ｅ７エピトープのマッピングは、Ｐｒｏ１８８−Ａｌａ２２７の間のエピトープを示唆した。タウのこの領域において、ＰＨＦ−タウにおいて検出された１１のリン酸化部位がある（Ｓｅｒ１９１、Ｔｙｒ１９７、Ｓｅｒ１９８、Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ２０２、Ｔｈｒ２０５、Ｓｅｒ２０８、Ｓｅｒ２１０、Ｔｈｒ２１２、Ｓｅｒ２１４、Ｔｈｒ２１７）（Hanger  et  al.,  2009、図１０）。これらのうちの４つ（Ｓｅｒ１９８、Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ２０２、Ｔｈｒ２１７）は、胎児タウにおいても見出された（Morishima-Kawashima  et  al.,1995、図１０）。ＤＣ２Ｅ７は胎児タウも認識するので、第１の焦点は、胎児タウに存在および確認されたホスホ部位に対してであった（Ｓｅｒ１９８；Ｓｅｒ１９９；Ｓｅｒ２０２；Ｔｈｒ２１７）。
【０３１０】
ＤＣ２Ｅ７についての正確なホスホ部位（複数可）を定義するために、セリンおよびトレオニン残基がアラニンによって置きかえられた単一の点突然変異を有するタウ２Ｎ４Ｒの突然変異形態を作成した。ヒト２Ｎ４Ｒタウタンパク質への所望の点突然変異（Ｓｅｒ１９８Ａｌａ；Ｓｅｒ１９９Ａｌａ；Ｓｅｒ２０２Ａｌａ；Ｔｈｒ２１７Ａｌａ）の挿入は、製造者の使用説明書に従って、ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ部位特異的突然変異生成キット（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ、ＣＡ）を使用して行った。野生型２Ｎ４Ｒタウタンパク質についてのコード配列を含有する５〜５０μｇのプラスミド、および１２５ｎｇのそれぞれのプライマーを、１つの５０μｌの反応物中で使用した。サイクルのパラメーターは以下の通りであった：９５℃で３０秒間、次いで、９５℃で３０秒間の変性、５５℃で６０秒間のアニーリング、６８℃で６分間の伸長を１６回繰り返すサイクルを続けるＰＣＲ。全反応物を、メチル化ＤＮＡに特異的なＤｐｎＩで消化して、親プラスミドを取り除いた。５０μｌの超コンピテントＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＸＬ−１ブルー（突然変異生成キットにより提供）を１μｌの反応物で形質転換し、アンピシリンで補充されたＬＢ寒天プレートに広げた。プラスミドを、成長したコロニーから単離し、突然変異生成の検証を、ＤＮＡ配列決定を使用して行った。所望の突然変異を有するプラスミドを、実施例１に記載されたようにして、組換えタンパク質の産生のために使用した。
【０３１１】
調製したタウ突然変異体を、実施例１に記載されたようにして精製し、ラット脳に由来するキナーゼ抽出物によってリン酸化し、免疫ブロットにおいてＤＣ２Ｅ７で染色した。タウの欠失突然変異体のリン酸化は、分子量のシフトを誘導し、したがって、すべてのタンパク質は、汎タウ抗体ＤＣ２５（エピトープ３４７〜３５３ａａ、ＡＸＯＮ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＳＥ）による染色で示すように、リン酸化された（図１１）。リン酸化タウ点突然変異体の分析は、ＤＣ２Ｅ７が、すべての単一突然変異（Ｓｅｒ１９８Ａｌａ、Ｓｅｒ１９９Ａｌａ、Ｓｅｒ２０２Ａｌａ）を検出したが、Ｔｈｒ２１７Ａｌａを検出しなかったことを実証した（図１１）。これらの結果は、２１７位のホスホ−トレオニンが、抗体ＤＣ２Ｅ７によって認識されるエピトープの重要な部分を作り出すことを示唆した。
【０３１２】
しかしながら、ホスホ部位Ｔｈｒ２１７に近接して位置する他のホスホ部位は、エピトープの部分であり得るか、またはエピトープの作出に関与し得る。したがって、ＤＣ２Ｅ７によって認識されるエピトープ上のホスホ部位であるＴｈｒ２０５、Ｓｅｒ２０８、Ｓｅｒ２１０、Ｔｈｒ２１２、Ｓｅｒ２１４、Ｓｅｒ２３１の可能な影響を調べた。単一の点突然変異（Ｔｈｒ２０５Ａｌａ、Ｓｅｒ２０８Ａｌａ、Ｓｅｒ２１０Ａｌａ、Ｔｈｒ２１２Ａｌａ、Ｓｅｒ２１４Ａｌａ、Ｓｅｒ２３１Ａ）を有する調製した突然変異体タウタンパク質を、キナーゼ抽出物によってリン酸化し、ＤＣ２Ｅ７による免疫ブロットにおいて試験した（図１１）。免疫ブロット分析は、抗体が点突然変異を有するすべてのタウタンパク質を認識したことを実証した（図１１）。したがって、Ｔｈｒ２１７に近接して位置するホスホ部位は、ＤＣ２Ｅ７によって認識されるエピトープに影響を及ぼさなかった。
【０３１３】
これらのマッピング実験は、ＤＣ２Ｅ７のエピトープ内のホスホ−トレオニン２１７の存在を示唆した。抗体結合におけるＤＣ２Ｅ７エピトープの領域中の残基の効果を調べるために、異なるホスホ部位を有する異なる長さの合成ペプチドを競合ＥＬＩＳＡにおいて分析した。ペプチド（タウ２１０〜２２４／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２２２／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２２１／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２２０／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２１９／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２１８／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、タウ２０１〜２３０／ｐＴ２１２、タウ１９３〜２２２／ｐＳ２０８、１９３〜２２２／ｐＳ２１４、タウ１９３〜２３１／ｐＳ２０８／ｐＳ２１０／ｐＴ２１２／ｐＳ２１４／ｐＴ２１７、タウ１９３〜２３１／ｐＳ２０２／ｐＳ２０５／ｐＴ２１２／ｐＴ２２０、タウ２０１〜２２９）を、９５％より高い純度で、ＥＺＢｉｏｌａｂｓ（ＵＳＡ）によって合成した。それぞれの合成ペプチドは、非リン酸化ペプチドタウ２０１〜２２９を除き（陰性対照として使用）、残基Ｔｈｒ２１７の周囲に位置するホスホ部位（複数可）を含有していた。陽性対照として、ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウ１５１〜３９１を使用した。
【０３１４】
次に、すべてのペプチドを、競合ＥＬＩＳＡによって、ＤＣ２Ｅ７への結合に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウ１５１〜３９１と競合するそれらの能力について分析した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ  Ｍｅｄｉｓｏｒｐ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を、ＰＢＳ中で２００倍に希釈された５０μｌ／ウェルのＰＨＦ−タウを用いて、３７℃で終夜コーティングした。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（０．０５％ｖ／ｖ）で５回洗浄し、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で、２５℃で１時間ブロッキングした。それぞれのペプチドを、１ｍＭの最終濃度で、ＰＢＳに別々に溶解した。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中のペプチドの連続希釈物（２．５倍）を、２００μＭ；８０μＭ；３２μＭ；１２．８μＭ；５．１２μＭ；２．０４８μＭ；０．８１９２μＭ；０．３２７６８μＭの濃度範囲内で、円錐状のウェル底面を有するポリプロピレンマイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）中で調製した。モノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ７を、ＰＢＳ中０．６μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、６０μｌのこの希釈された抗体を、ペプチドの連続希釈のためにそれぞれのウェルに添加し、１２０μｌ／ウェルの混合物をもたらした。抗体／ペプチド混合物を、２３０ｒｐｍに設定した回転台において２５℃で１時間インキュベートした。５０μｌ／ウェルの抗体／ペプチド混合物を、ポリプロピレンプレートから、ＰＨＦ−タウでコーティングされ、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０でブロッキングされたＥＬＩＳＡプレートに移し（２反復）、２５℃で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で５回洗浄し、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０中で１：１０００に希釈された５０μｌ／ウェルのポリクローナルヤギ抗マウス免疫グロブリン／ＨＲＰ（Ｄａｋｏ）と２５℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、次いで、プレートを、１．５μｌ／２ｍｌの３０％のＨ２Ｏ２（Ｓｉｇｍａ）で補充された０．１Ｍの酢酸Ｎａ、ｐＨ＝６．０（Ｒｏｔｈ）中の５０μｌ／ウェルの１ｍｇ／２ｍＬのｏ−ＰＤＡ（ｏ−フェニレンジアミン、Ｓｉｇｍａ）と、暗所で２５℃で２０分間インキュベートした。反応を、５０μｌ／ウェルの２ＭのＨ２ＳＯ４（Ｍｅｒｃｋ）を添加することによって停止し、続いて、４９２ｎｍでプレートを読み取った（Ｐｏｗｅｒｗａｖｅ  ＨＴ、Ｂｉｏ−Ｔｅｋ）。
【０３１５】
リン酸化トレオニン２１７を包含するすべての分析されたペプチドは、ＤＣ２Ｅ７との結合に対して、リン酸化タウ１５１〜３９１と競合した（図１２）。要約すると、ＤＣ２Ｅ７は、リン酸化トレオニン２１７を含むタウエピトープに結合する。他のホスホ部位は、抗体の免疫反応性に影響を与えるように思われなかった。しかし、とりわけ、２２４〜２２０アミノ酸（２１０〜２２０／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２１９／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７、２１０〜２１８／ｐＴ２１２／ｐＴ２１７）の試験されたペプチドのＣ末端部分の短縮は、リン酸化トレオニン２１７の存在にもかかわらず、競合活性の喪失をもたらした。したがって、データは、ＤＣ２Ｅ７が、少なくともトレオニン２１７がリン酸化される残基２１０〜ＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲ−２２１を含む１２アミノ酸のヒトリン酸化タウ上のホスホエピトープに結合することを示唆する。
（実施例１０）
モノクローナル抗体ＤＣ２Ｅ２およびＤＣ２Ｅ７はヒトアルツハイマー病の脳およびタウオパチーにおける病理を認識する
【０３１６】
この実施例は、ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２がアルツハイマー病における神経原線維病変を認識することを示す。以下の脳の領域を免疫組織化学的研究のために使用した：アルツハイマー病（Ｂｒａａｋステージ６）、ＦＴＤ（ピック病）および対照脳（Ｂｒａａｋステージ１および３）に由来する海馬および嗅内皮質、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）に由来する尾状核、ならびに進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）に由来する被殻／尾状核。脳組織のパラフィン塊をアムステルダム脳バンクから入手した。
【０３１７】
パラフィンに包埋された脳の塊を、ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ  ＲＭ２２５５）で切断して、８μＭの厚さの切片を得た。切片をＨｉｓｔｏＢｏｎｄスライド（Ｍａｒｉｅｎｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）上に置いた。免疫組織化学的検査のために、切片を、ギ酸で事前に処理し（９８％で４℃で１分間、または８０％で１時間）、加熱し（オートクレーブ、１２１℃、２０分）、続いて一次抗体（ＡＴ８  １：１０００、ＤＣ２Ｅ７  １：１００００、ＤＣ２Ｅ２  １：２００）と終夜インキュベーションした。すべての切片を、抗マウスビオチン化二次抗体と室温で１時間、およびアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ複合体と１時間、インキュベートした。免疫反応を、ＶＩＰ（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣキット、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）で可視化し、メチルグリーン（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で対比染色した。
【０３１８】
免疫組織化学的分析は、ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２の両方が、病理組織学的染色のためのゴールデンスタンダードと考えられるモノクローナル抗体ＡＴ８と同様の方法で、アルツハイマー病および他のタウオパチー（図１３）におけるタウ病理を認識したことを明らかにした。ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２は、ＡＤ患者の海馬における神経原線維病理、ＦＴＤ患者の歯状回のピック体、ＣＢＤおよびＰＳＰのいずれかに罹患した患者の尾状核のグリアタウ病理を染色した。ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ２Ｅ２は、Ｂｒａａｋステージ１の基準を満たす正常な脳におけるタウ病理を認識せず、前駆ステージ（Ｂｒａａｋステージ３）では、両方の抗体は、神経原線維変化、糸屑状構造物および老人斑の形態において広範なタウ病理を可視化する完璧なＡＤ抗体において、海馬の神経原線維病理中で同定された（図１４）。より高い倍率を使用することによって、抗体が、ＡＤにおける神経原線維変化、ＦＴＤにおけるピック体、ならびにＰＳＰおよびＣＢＤにおけるグリアタウ病理に結合することを実証した（図１５）。
（実施例１１）
ＤＣ２Ｅ７のＥＬＩＳＡ
ＤＣ２Ｅ７のＥＬＩＳＡのための標準の調製
【０３１９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウ１５１〜３９１をアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。２つのアフィニティーカラムを調製した：ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ１９０（エピトープ３６８〜３７６、ＡＸＯＮ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＳＥ）。抗体を、実施例３に記載の方法に従って精製した。抗体を、製造者の推奨に従ってＣｎＢｒ活性化セファロース４Ｂ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−０４３０−０１）とカップリングさせた。ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化反応（実施例４を参照されたい）を、４℃でＰＢＳに対して透析した（３×１００倍過剰）。すべての精製ステップは４℃で行った。ＤＣ２Ｅ７カラムを、３×５ｍｌのＷＢＮＰ０．１緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび０．１％のＮＰ４０）で洗浄した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化反応物を氷冷したＷＢＮＰ１緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび１％のＮＰ４０）で４倍に希釈し、０．２μｍのフィルターを通して濾過した。試料をＤＣ２Ｅ７カラムに適用した。試料を入れた後、樹脂カラムを以下の通り洗浄した：２×５ｍＬのＷＢＮＰ１緩衝液、２×５ｍＬのＷＢＮＰ０．１緩衝液、１×５ｍＬの５０ｍＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ。結合したタンパク質を３×２ｍｌの溶出緩衝液（１００ｍＭのグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ２．８）で溶出させた。溶出したタンパク質を、１ＭのＴｒｉｓ．ＨＣｌ  ｐＨ９でｐＨ７〜８に直ぐに調整し、ＷＢＮＰ０．１緩衝液で１：１で希釈した。試料をＤＣ１９０アフィニティーカラムに適用し、ＤＣ２Ｅ７アフィニティ精製のために記載されたようにして精製した。溶出したタンパク質をＰＢＳに対して透析し、濃度を分光光度法で推定した。精製タンパク質を「ＤＣ２Ｅ７標準物質」と指定した。
【０３２０】
ＤＣ２Ｅ７のＥＬＩＳＡを、Ｓｉｍｏａ−ＨＤ１分析器（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ）を使用して、高感度様式のデジタルＥＬＩＳＡにセットした。デジタルＥＬＩＳＡのための試薬を、以下の詳細を伴うQuanterix  Homebrew  Assay  Development  Guideに従って調製した。ＤＣ２Ｅ７抗体を捕捉抗体として使用し、ＤＣ２Ｅ２抗体を検出抗体として使用した。ＤＣ２Ｅ７を、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で磁気ビーズ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ）とカップリングさせた。検出抗体を、ＤＣ２Ｅ２のビオチン化によって調製することによって１２０倍過剰のビオチンにし、ＥＺ−Ｌｉｎｋ（商標）ＮＨＳ−ＰＥＧ４−ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃２１３２９）を抗体濃度全体にわたって使用した。ＤＣ２Ｅ７標準物質を、１００ｐｇ／ｍＬから出発して、続いて５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６および０ｐｇ／ｍｌの連続２倍希釈で、標準物質希釈剤（２０ｍＭのリン酸ナトリウム  ｐＨ７．４、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、２％のＢＳＡおよび０．０１％のカゼイン）に希釈した。調製された標準物質の濃度を、試料希釈剤（８０ｍＭのリン酸ナトリウム  ｐＨ７．４、５４８ｍＭのＮａＣｌ、１０．８ｍＭのＫＣｌ、０．０４％のカゼインおよび０．４％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０）で３：１の比で混合した。対照個体に由来するＣＳＦ試料も、以前に記載されたようにして、試料希釈剤で希釈した。ＣＳＦ試料のスパイク回復を、１０、５、２および０ｐｇ／ｍｌのＤＣ２Ｅ７標準物質を有するＣＳＦのスパイクを使用して行った。希釈された標準物質および試料を、９６ウェルプレートにピペットで入れ、Ｓｉｍｏａ  ＨＤ１分析器に挿入し、捕捉抗体ＤＣ２Ｅ７ビーズもビーズ希釈剤に希釈し、検出ＤＣ２Ｅ２を１．２μｇ／ｍｌに検出希釈剤に希釈し、ＳＢＧを２００ｐＭにＳＢＧ希釈剤に希釈し、基質のＲＧＰを分析器に挿入した（すべての緩衝液、ＳＢＧおよびＲＧＰはＱｕａｎｔｅｒｉｘから入手した）。アッセイを、Ｓｉｍｏａ  １．５ソフトウェアにプログラムし、分析を行った。分析後、評価を、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍによって、および／またはＳｉｍｏａ  １．５ソフトウェアに含まれるソフトウェアによって、行った。較正曲線の例を図１６に示す。スパイク回復実験の例を図１７に示す。
（実施例１２）
ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡはアルツハイマー病患者と対照個体とを有意に区別する
【０３２１】
ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡを、アルツハイマー病患者（ｎ＝２０）および健康な個体（ｎ＝２０）に由来するＣＳＦ試料の分析のために使用した（図１８）。分析は、ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡが、非常に高い有意性で、アルツハイマー病患者と対照個体とを区別したことを実証した。ＲＯＣ曲線の面積は１に非常に近かった。＞４．４３ｐｇ／ｍＬの濃度で、アッセイは、９５％の感度および８９．５％の特異度を与え、＞６．１９ｐｇ／ｍＬの濃度で、感度は９５％であり、特異度は１００％である。
（実施例１３）
ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥｌｉｓａはアルツハイマー病患者と他のタウオパチーに罹患している患者とを有意に区別する
【０３２２】
ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡを、アルツハイマー病患者（ｎ＝６）および前頭側頭型認知症（ｎ＝１６）に由来するＣＳＦ試料の分析のために使用した（図１９）。分析は、ＤＣ２Ｅ７のデジタルＥＬＩＳＡが、非常に高い有意性で、アルツハイマー病患者と他のタウオパチーを有する患者とを区別したことを実証した。ＲＯＣの曲線の面積は０．９７である。＞３．８９ｐｇ／ｍｌの濃度で、アッセイは、９３．８％の感度および１００％の特異度を与える。
（実施例１４）
ＤＣ２Ｅ７はアルツハイマー病およびヒトタウオパチーにおける不溶性タウ種を認識する
【０３２３】
以前の結果は、ＤＣ２Ｅ７がリン酸化タウにおいて生じるエピトープを認識したことを示した。したがって、他のタウオパチーにおいて生じるリン酸化タウタンパク質に対するＤＣ２Ｅ７の免疫反応性を分析した。
【０３２４】
不溶性タウ複合体（異常なタウ形態）を、実施例４に記載されたようにして、ヒトＡＤ脳（ＢｒａａｋステージＶ、前頭皮質、アムステルダム脳バンク）、大脳皮質基底核変性症（ロンドン脳バンク、前頭皮質）およびＦＴＤ（アムステルダム脳バンク）から単離した。抽出した不溶性タウタンパク質を、実施例４に記載されたようにして、ＤＣ２Ｅ７を使用する免疫ブロットにおいて分析した。
【０３２５】
ＡＤおよび前述のタウオパチーを有する患者に由来する脳の免疫ブロット分析は、不溶性タウ画分がＤＣ２Ｅ７を使用して検出可能であったことを明らかにした。結果は、タウオパチーにおける病理学的なタウ凝集物が、ＡＤにおけるＰＨＦ−タウと同様に、高リン酸化タウで構成されることを示唆する（図２０）。また、ＤＣ２Ｅ７は、ＡＤのものと同様に、ＣＢＤおよびＦＴＤにおける６０、６４および６８ｋＤａの３つの優位なＰＨＦ−タウ様のバンド（Ａ６８トリプレット）を認識した。
（実施例１５）
ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイは、高い感度および特異度で、ＡＤ患者とＦＴＤおよび健康な対象とを区別した
【０３２６】
抗体ＤＣ２Ｅ７を使用するｐＴ２１７タウのデジタルアッセイを使用して、ＡＤ患者（ｎ＝３０）、ＦＴＤ患者（ｎｆＰＰＡ、ｎ＝１４；ｓｖＰＰＡ、ｎ＝１０；ｂｖＦＴＤ、ｎ＝１０、ＰＳＰ、ｎ＝１９；およびＣＢＤ、ｎ＝１５）および健康な個体（ｎ＝３０）に由来するＣＳＦを分析した。アッセイは、ＩＮＮＯＴＥＳＴホスホ−タウ（１８１Ｐ）アッセイと比較した。
【０３２７】
分析は、ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイが、ＡＤ患者とＦＴＤおよび健康な対象とを区別したことを実証した。アッセイは、Ｉｎｎｏｔｅｓｔホスホ−タウ（１８１Ｐ）アッセイ（＞５２ｐｇ／ｍｌ、７８．０％の感度、１００％の特異度、図２１）と比較して、ＡＤをＦＴＤ／対照から良好に分離した（＞５．３７ｐｇ／ｍｌ、９４．１％の感度、９１．７％の特異度、図２１）。アッセイはまた、ｐ−タウ１８１アッセイ（＞５２ｐｇ／ｍｌ、ＡＵＣが０．９３、９５％のＣＩが０．８５〜０．９７、９２％の感度、８７．５％の特異度）よりも、ＡＤ患者と健康な対象とをわずかに良好に区別した（＞３．８５５ｐｇ／ｍｌ、ＡＵＣが０．９６、９５％のＣＩが０．８９〜０．９９、９５％の感度、８９．７％の特異度）（図２２）。ＡＤ群（Ｐ＜０．０００１、スピアマン係数ｒ＝０．８２２６）におけるｐＴ２１７およびｐＴ１８１アッセイの間の高い相関と健康な対照（Ｐ＜０．５、スピアマン係数ｒ＝０．４０３２）およびＦＴＤ（Ｐ＝０．３８７、スピアマン係数ｒ＝０．２３２）において観察された低い相関との比較は、ＣＳＦ中のｐＴ２１７タウ種がＣＳＦ中のＡＤ特異的バイオマーカーを提供し得ることを示唆する。ｐＴ２１７タウそれ自身と比較した場合、ＩＮＮＯＴＥＳＴ  Ａβ４２／ｐＴ２１７タウの比の使用について利益は観察されなかった。
【０３２８】
高い相関は、ＡＤ群（Ｐ＜０．０００１、スピアマン係数ｒ＝０．８２２６）におけるｐＴ２１７タウおよびｐＴ１８１タウのアッセイの間で観察され、低い相関は、非認知症対照（Ｐ＜０．５、スピアマン係数ｒ＝０．４０３２）において観察された。
【０３２９】
相関は、ＦＴＤ（Ｐ＝０．７５１７、スピアマン係数ｒ＝０．０８９２９）に由来する患者におけるｐＴ２１７タウおよびｐＴ１８１タウのアッセイの間で観察されず、それによって、強い相関は、同じＦＴＤ患者（Ｐ＝０．００１９、スピアマン係数ｒ＝０．７３２１）におけるｐＴ１８１およびＨＴＡＵアッセイの間で観察された。
【０３３０】
これらのすべての結果は、ＣＳＦ中のｐＴ２１７タウ種はＣＳＦ中のＡＤ特異的バイオマーカーを提供し得ることを示唆する。
（実施例１６）
ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイは、異なる標準物質を使用して、高い感度および特異度で、ＡＤ患者とＦＴＤおよび健康な対象とを区別した
【０３３１】
ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイは、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）を有する対象と健康な対象とを区別することができる。脳脊髄液（ＣＳＦ）中のｐＴ２１７タウの濃度は、ＭＣＩおよびＡＤを有する対象について同様である（図２３Ａ）。ＭＣＩを有する３人の対象は、後にＡＤを発症した。
【０３３２】
ｐＴ２１７タウのアッセイを使用して、タウ病理が存在し得る、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を含む他の神経障害を有する対象に由来するＣＳＦ試料を試験した（図２３Ｂ）。ＦＴＤ患者は、完全に異種性集団を表し、その患者の一部は、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）に罹患していたが、その他は、原発性進行性失語（ＰＰＡ）に典型的な症状を発症していた。ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイは、ＡＤと他の神経障害とを区別した（カットオフ９．３ｐｇ／ｍｌ、特異度９４％、感度１００％）。
【０３３３】
ｐＴ２１７タウのデジタルＥＬＩＳＡアッセイは、選択された標準物質にかかわらず同様の感度および特異度で、ＡＤ患者とＦＴＤ患者および健康な対象とを区別することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏリン酸化タウタンパク質または合成ペプチドのいずれかを使用する、ＡＤ患者、ＦＴＤ患者および健康な対象に由来するＣＳＦ試料中のｐＴ２１７タウの分布は、同様の感度および特異度を示した。リン酸化タウタンパク質標準物質を使用すると、アッセイは、９４．１％の感度および９１．７％の特異度を示した（＞５．３７ｐｇ／ｍｌ）。２Ｅ７ペプチド（２Ｅ７ｐｅｐ）を使用すると、アッセイは、９３．９％の感度および９０．０％の特異度を示した（＞３０５ｐｇ／ｍｌ）（図２９）。２Ｅ７ｐｅｐは以下のアミノ酸配列を有していた：
【化１】
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。第１の下線が付けられた配列はＤＣ２Ｅ２抗体のエピトープを表し、第２の下線が付けられた配列はＤＣ２Ｅ７抗体のエピトープを表す（最初の３アミノ酸および最後のアミノ酸はタウタンパク質に由来するが、配列（ＧＧＧＳ）３はＤＣ２Ｅ２およびＤＣ２Ｅ７のエピトープを接続するリンカーである）。
（実施例１７）
組換え技術による抗体ＤＣ２Ｅ７の最適化
【０３３４】
ＤＣ２Ｅ７抗体の親和性をリボソームディスプレイおよびファージディスプレイ技術によって最適化した。最初に、ｓｃＦｖ形式の抗体ＤＣ２Ｅ７をコードするｃＤＮＡを、増幅およびＤＣ２Ｅ７ハイブリドーマ細胞系からのクローニングによって作成した。次いで、ｓｃＦｖ  ＤＣ２Ｅ７についての遺伝子を、エラープローンＰＣＲによって突然変異させ、突然変異したｓｃＦｖ  ＤＣ２Ｅ７断片のライブラリーを、リボソームディスプレイ（Hanes  et  al.,  1998）およびファージディスプレイ技術（Harrison  at  al.,  1996）によって、２Ｅ７ｐｅｐに対して親和性選択した。
【０３３５】
４ラウンドの選択の後、単離したｓｃＦｖの断片を、ｓｃＦｖがｍｙｃ−タグと融合するように、発現ベクターにクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＪＭ１０９において発現させた（Sanmark  et.  al.,  2015）。突然変異したＤＣ２Ｅ７  ｓｃＦｖを含有する３０個のコロニーの細菌溶解物をペプチド競合イムノアッセイを使用して試験した。イムノアッセイを、１００μｌ／ウェルのＰＢＳ中の０．０１μｇ／ｍｌの２Ｅ７ｐｅｐで４℃で終夜コーティングされた９６ウェルのマイクロタイタープレートで行った。プレートを４回洗浄し、ＰＢＳ−Ｔで室温で３０分間ブロッキングした。結合を、１０，０００倍に希釈された抗ｍｙｃ抗体を含有する１００μｌのＰＢＳ−Ｔ中の１０倍に希釈された細菌溶解物を用いて、振とう台において室温で１時間行った。ウェルをＰＢＳ−Ｔで４回洗浄し、溶解物あたり１０μｇ／ｍｌの濃度での２Ｅ７ｐｅｐとの競合を、振とう台において室温で２時間行った。次いで、プレートをＰＢＳ−Ｔで４回洗浄し、ＰＢＳ−Ｔ中で１：１００００で希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートと室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−Ｔで４回洗浄し、ＴＭＢ基質を使用して５分間展開した後、比色反応を１ＭのＨ２ＳＯ４を使用して停止した。４５０ｎｍでの吸光度をマイクロタイタープレート吸光度リーダーを使用して読み取った。
【０３３６】
リボソームディスプレイおよびファージディスプレイによって生じたｓｃＦｖについての吸光度を図２４に示す。ｓｃＦｖ  Ｋ＋は未突然変異のＤＣ２１７を表す。ｓｃＦｖ  Ｋ＋に対応する線を超えるシグナルを示すすべてのｓｃＦｖは、元のＤＣ２１７  ｓｃＦｖと比較して、より高い親和性（アスタリスクで標識する）を有すると予測される。
【０３３７】
リボソームディスプレイおよびファージディスプレイによって単離されたｓｃＦｖの重鎖および軽鎖アミノ酸配列のアライメント（クローン名の最後の「ＰＤ」は、それがファージディスプレイによって得られたことを示す）を図２５に示す。ＶＬ（図２５Ａ）およびＶＨ（図２５Ｂ）配列を示す。ＤＣ２Ｅ７と比べて改善された結合を有する抗体を図２５Ｃ（軽鎖）および図２５Ｄ（重鎖）に示す。最初の線は元のＤＣ２Ｅ７抗体を表す。ＤＣ２Ｅ７中の配列と同一の残基をドットによって表す。ＶＬおよびＶＨ中のアミノ酸残基の番号付け、ならびにＣＤＲの標識付けは、ＩＭＧＴ番号付け体系に従う。
（実施例１８）
抗体ＤＣ２Ｅ７、ＤＣ１４９およびＤＣ８０７の比較
【０３３８】
抗体ＤＣ１４９は、実施例２に記載のものと同様の方法で、以下の相違を伴って生成した：マウスを、Ｔｈｒ２１２およびＴｈｒ２１７位で二重リン酸化されたペプチド、すなわち、最初のシステインを介してＫＬＨとコンジュゲートされたＣＳＲｐＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲＥＰＫ（２Ｎ４Ｒタウの２１０〜２２４）で免疫した。スクリーニングを、実施例２に記載されたようにして、ＥＬＩＳＡによって行い、それによって、ＤＣ１４９を、ＳＲＴＰＳＬＰｐＴＰＰＴＲＥＰＫ（すなわち、ＤＣ２Ｅ７が結合したＴｈｒ２１７でモノリン酸化された同じペプチド）を含むペプチドとの特異的結合によって同定し、ＤＣ８０７を、二重リン酸化ペプチドとの特異的結合によって同定した。ＤＣ１４９およびＤＣ８０７抗体は、非リン酸化ペプチドにも非リン酸化タウタンパク質にも結合しなかったが、ＤＣ８０７は、モノリン酸化ペプチドにも結合しなかった。
【０３３９】
ＤＣ２Ｅ７、ＤＣ１４９およびＤＣ８０７を、実施例１０に記載されたものと同様のセットアップを使用して、古典的ＥＬＩＳＡアッセイで分析し、それによって、２Ｅ７ｐｅｐ標準物質を使用した。３つの抗体はすべて、少なくともＴｈｒ２１７でリン酸化されたタウペプチドに、非常に類似した親和性で結合した（図２６）。
【０３４０】
抗体ＤＣ２１７、ＤＣ１４９およびＤＣ８０７についてのアミノ酸配列を、クローニングによって、および質量分析によって決定した。ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ１４９における重鎖および軽鎖配列のアライメントを図２７Ａ〜Ｂに示す。ＤＣ２Ｅ７およびＤＣ８０７における重鎖および軽鎖配列のアライメントを図２８Ａ〜Ｂに示す。ＤＣ２Ｅ７の配列と同一の残基をドットによって表す。ＶＬおよびＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を枠で囲む。ＶＬおよびＶＨ中のアミノ酸残基の番号付け、ならびにＣＤＲの標識付けは、ＩＭＧＴ番号付け体系に従う。
【化２】
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（実施例１９）
ｐＴ２１７アッセイの独立した検証
ｐＴ２１７検出および以前に議論された定量化についてのプロトコールを、ＨＤ−１分析器を使用して、ＳＩＭＯＡに適用した。プロトコールは、ヒトＣＳＦ試料中のｐＴ２１７の測定のために好適であることが見出された。アッセイの感度、直線性、平行性および回復を分析した。標準曲線を、ＣＳＦ試料に、およびＰＢＳに２Ｅ７  ｐｅｐ標準物質ペプチドをスパイクすることによって測定した。ＤＣ２Ｅ７を捕捉抗体として使用し、ＤＣ２Ｅ２を検出抗体として使用した。観察された検出限界は１８４．４ｐｇ／ｍＬであった。再現性を評価した：アッセイ内（標準曲線の線形範囲内の値について＜１５％）、アッセイ間（標準曲線の線形範囲内の値について＜１５％）、およびプレートアッセイ内（標準曲線の線形範囲内の値について＜１５％）。平行性および回復は＜１５％であると決定した。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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