(57)【要約】本開示は、例えばイメテルスタットなどのテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないこと、ならびに／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２、のうちの少なくとも１つに変異が存在することに基づく高分子リスク（ＨＭＲ）、について検査することによって、特定または選択する方法を提供する。患者は、骨髄線維症に罹患している可能性がある。本開示はまた、骨髄線維症を治療する方法を提供し、この方法は、このような患者を特定することを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、
（ａ）トリプルネガティブステータスについて患者を検査することであって、前記トリプルネガティブステータスは、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないこと含む、検査すること、ならびに／または、
（ｂ）患者を、前記患者がＨＭＲを有するかどうかを決定するために、検査することであって、ＨＭＲを有することは、付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、検査すること、ならびに／または、
（ｃ）平均相対的テロメア長について患者を検査することであって、前記患者由来の生体試料中に存在する標的細胞のテロメア核酸の前記相対的長さを分析することによって、検査することと、
前記患者を、
前記患者がトリプルネガティブステータスを有する場合、または
前記患者がＨＭＲを有する場合、または
前記患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される前記患者由来の生体試料中に存在する標的細胞の平均相対的テロメア長を有する場合、に選択することと、を含み、
前記選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
【請求項２】
前記方法が、トリプルネガティブステータスについて患者を検査することと、前記患者が、前記ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がない場合に、前記患者を選択することと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法が、患者がＨＭＲを有するかどうかを決定するために、前記患者を検査することを含み、前記患者を選択することが、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、平均相対的テロメア長について患者を検査することであって、前記患者由来の生体試料中に存在する標的細胞のテロメア核酸の前記相対的長さを分析することによって、検査することと、前記患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される前記患者由来の生体試料中に存在する標的細胞の平均相対的テロメア長を有する場合に、前記患者を選択することと、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記骨髄線維症が、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記患者が、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記患者が、
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、前記患者はＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、または
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記患者からＤＮＡを含む試料を得ることをさらに含み、前記試料は、骨髄、末梢血、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、
（ａ）前記患者が、トリプルネガティブステータスを有すると決定され、前記トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないこと含み、かつ／または
（ｂ）前記患者が、高分子リスク（ＨＭＲ）を有すると決定され、ＨＭＲを有することは、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含み、かつ／または
（ｃ）骨髄線維症を有する前記患者であって、前記患者由来の生体試料中に存在する細胞が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される平均相対的テロメア長を有すると決定されている、使用。
【請求項１１】
前記患者が、トリプルネガティブステータスを有すると決定され、前記トリプルネガティブステータスは、前記ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことを含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記患者が、高分子リスク（ＨＭＲ）を有すると決定され、ＨＭＲを有することは、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
骨髄線維症を有する前記患者であって、前記患者由来の生体試料中に存在する細胞が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される平均相対的テロメア長を有すると決定されている、請求項１０に記載の使用。
【請求項１４】
前記骨髄線維症が、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）からなる群から選択される、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を以前に受けたことがない、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記患者が、
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、前記患者はＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、または
ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に従って、本出願は、２０１８年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７１２，８４１号および２０１８年１１月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／７７２，８４９号の出願日に対する優先権の利益を主張するものであり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。当該ＡＳＣＩＩコピーは、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称で３５６ＫＢのサイズである。
【０００３】
本出願は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がない、かつ／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つに変異が存在することに基づく高分子リスク（ＨＭＲ）を有する、患者を特定することによる、方法に関する。本発明はまた、治療を必要とする対象（すなわち、患者）の骨髄線維症をテロメラーゼ阻害剤で治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
序言
骨髄線維症（ＭＦ）は、クローン性骨髄増殖、調節不全キナーゼシグナル伝達を特徴とする、古典的なＢＣＲ−ＡＢＬ１陰性慢性骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）の１つである。Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ，Ｂｌｏｏｄ，１２４（１７）：２６３５−２６４２（２０１４）。それはまた、細胞減少症、全身症状、脾腫を特徴とし、急性骨髄性白血病に変わる可能性がある。Ｋｕｙｋｅｎｄａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，９７：４３５−４３１（２０１８）。ＭＦは、予後不良のフィラデルフィア染色体陰性骨髄増殖性腫瘍であり、ＪＡＫ１／ＪＡＫ２阻害剤であるルキソリチニブが現在承認されている治療法である。ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）−１およびＪＡＫ−２阻害剤であるルキソリチニブは、高リスクおよび中等リスク骨髄線維症（ＭＦ）の治療のために米国でライセンスされるファーストインクラスの薬物である。Ｐａｒｄａｎａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．；Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．；４（１２）：ｅ２６８（２０１４）。いくつかの他のＪＡＫ阻害剤が開発中であり、いくつかは現在第３相臨床試験を受けている。同書。ＭＦの他の治療選択肢としては、アロ−ＳＣＴ、ヒドロキシ尿素、インターフェロン、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））、およびサリドマイドが挙げられる。現在、選択的ＪＡＫ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ／ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ヘッジホッグ／哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（ＭＴＯＲ）阻害剤、抗線維化剤、免疫調節物質、モノクローナル抗体、および免疫チェックポイント阻害剤を評価するためのＭＦにおける進行中の臨床試験がある。Ｓｈｒｅｅｎｉｖａｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｅｍｅｒｇ  Ｄｒｕｇｓ，２３（１）：３７−４９（２０１８）。
【０００５】
他のＭＰＮとしては、本態性血小板血症（ＥＴ）および真性赤血球増加症（ＰＶ）が挙げられる。Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ（下記）。ＭＦは、新たに（原発性ＭＦ［ＰＭＦ］）または以前のＥＴまたはＰＶの後（ＥＴ後またはＰＶ後ＭＦ）に現れ得る。同書。Ｃｅｒｖａｎｔｅｓによれば、ＭＦは、多能性造血幹細胞のクローン増殖であり、異常な細胞集団は、骨髄線維症および間質の変化を引き起こすいくつかのサイトカインおよび成長因子を骨髄中に放出し、脾臓および肝臓などの髄外臓器にコロニーを形成する。同書。骨髄線維症は、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）２遺伝子の変異（Ｖ６１７Ｆ変異など）、トロンボポエチン受容体遺伝子（ＭＰＬ）の変異、およびカルレティキュリン遺伝子（ＣＡＬＲ）の変異と関連付けられている。同書。主に高齢者に影響を及ぼし、Ｃｅｒｖａｎｔｅｓによれば、「現在、同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ−ＳＣＴ）以外に治癒療法はなく、少数の患者に適用することができる。」同書。
【０００６】
実際、Ｌａｎｇａｂｅｅｒによれば、「真性赤血球増加症、本態性血小板血症、および原発性骨髄線維症の古典的骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）を有する患者の大多数は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、またはＭＰＬ遺伝子内で明確な疾患駆動変異（ｄｉｓｅａｓｅ  ｄｒｉｖｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する。」Ｌａｎｇａｂｅｅｒ，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，５：ｅ１２４８０１１（２０１６）。これらの変異は、いわゆるドライバー変異である。例示的なドライバー変異としては、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ、ＪＡＫ２エクソン１２、ＭＰＬエクソン１０、およびＣＡＬＲエクソン９についての変異が挙げられる。同書。
【０００７】
Ｓｐｉｅｇｅｌによれば、骨髄線維症（ＭＦ）において、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、またはＣＡＬＲにおけるドライバー変異は、生存および芽球期への進行に影響を及ぼし、トリプルネガティブステータス（すなわち、非変異ＪＡＫ２、ＭＰＬ、およびＣＡＬＲ）によって付与される最大のリスクを有する。Ｓｐｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ａｄｖ．，１（２０）：１７２９−１７３８（２０１７）。実際、ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ変異の非存在（すなわち、トリプル陰性）は、最も好ましくない転帰と関連付けられる。Ｐａｒｄａｎａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．；４（１２）：ｅ２６８（２０１４）、またＴｅｆｆｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２４（１６）：２５０７−１３（２０１４）も参照されたい。さらに、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＩＤＨ１／２、およびＳＲＳＦ２などの高分子リスク（ＨＭＲ）遺伝子における変異も、予後不良と関連付けられている。Ｓｐｉｅｇｅｌら。予後的に有害な／「高分子リスク」変異（すなわち、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、および／またはＩＤＨ−１／２遺伝子）の増加する数の存在は、従来の危険因子とは無関係に、次第に悪化する生存転帰をもたらした。Ｇｕｇｌｉｅｌｍｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２８（９）：１８０４−１０（２０１４）。
【０００８】
ＪＡＫ２、ＭＰＬ、またはＣＡＬＲにおけるドライバー変異は、単独で、またはＡＳＸＬ１などの遺伝子におけるサブクローナル変異と組み合わせて、全生存期間（ＯＳ）の違いと関連している。Ｓｐｉｅｇｅｌら。ＪＡＫ２、ＭＰＬ、またはＣＡＬＲにおいてカノニカル変異のないトリプルネガティブ患者は、白血病性形質転換のリスクが増加し、ならびにＯＳが短縮される。Ｓｐｉｅｇｅｌは、ルキソリチニブまたはモメロチニブ（ＪＡＫ１／２阻害剤）で治療された骨髄線維症に罹患している患者について、これらの変異は治療の失敗までのより短い時間と関連していることを観察した。同書。同様に、「ＪＡＫ２陽性、ＣＡＬＲ陽性、ＭＰＬ陽性、およびＴＮ  ＭＦ患者の臨床特徴を比較すると、ＣＡＬＲ変異を有する患者は、他のＭＰＮコホートで報告されている傾向であるヘモグロビン（平均８．６対１０．７ｇ／ｄＬ；Ｐ  ５．００１）および白血球数（平均１１．０対２５ｇ／ｄＬ；Ｐ  ５．０３３）が有意に低かった。」Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ；１２６（６）：７９０−７９７（２０１５）。Ｐａｔｅｌらは、３以上の変異を有するルキソリチニブで治療した患者が、脾臓応答および治療中止までの時間と逆相関を示したことを観察した。ＪＡＫ阻害剤による治療を中止する骨髄線維症患者において、ドライバー変異またはトリプルネガティブ（ＪＡＫ２、ＭＰＬ、ＣＡＬＲ）状態が見出される。例えば、Ｋｕｙｋｅｎｄａｌｌらを参照されたい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ，Ｂｌｏｏｄ，１２４（１７）：２６３５−２６４２（２０１４）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、例えば、イメテルスタットなどのテロメラーゼ阻害剤による治療から得る受ける可能性が最も高い患者を特定または選択する方法であって、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないこと、ならびに／または以下の遺伝子：付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）のうちの少なくとも１つに変異が存在することに基づく高分子リスク（ＨＭＲ）、について患者を検査することによる、方法を提供する。治療を必要とする患者は、骨髄線維症に罹患している可能性がある。本発明は、このような治療を必要とする患者における骨髄線維症を治療する方法であって、このような患者を特定するステップを含む方法も提供する。
【００１１】
本発明の一実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い骨髄線維症患者を特定する方法であって、（ａ）患者を以下：（ｉ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または（ｉｉ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２、のうちの少なくとも１つにおける変異について検査することと、（ｂ）患者が、（ｉ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または（ｉｉ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）を有する場合に患者を選択することと、を含み、選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法である。
【００１２】
本発明の代替の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、（ａ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータスについて患者を検査することと、（ｂ）患者がトリプルネガティブステータスを有する場合、患者を選択することとを含み、選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い。本発明の代替の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、（ａ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）について患者を検査することと、（ｂ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）のある患者を選択することと、を含む、方法である。本発明は、例えばイメテルスタットなどのテロメラーゼ阻害剤で、トリプルネガティブおよび／またはＨＭＲのある患者の骨髄線維症を治療する方法をさらに提供する。
【００１３】
本発明の別の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い骨髄線維症を有する患者を特定する方法であって、（ａ）患者からＤＮＡ試料を得ることと、（ｂ）そのような患者からのＤＮＡ試料を、（ｉ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータスについて、ならびに／または（ｉｉ）以下の遺伝子ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）について検査することと、（ｃ）患者が、（ｉ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータスを有し、ならびに／または（ｉｉ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）を有する場合に患者を選択することと、を含み、選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法である。方法のある特定の実施形態では、ＤＮＡ試料は、骨髄、末梢血、またはその両方から得られる。
【００１４】
ＤＮＡ試料は、まず骨髄試料、末梢血試料、またはその両方を取得し、次いで、ＤＮＡを骨髄試料、末梢血試料、またはその両方から単離することによって得ることができる。一実施形態では、患者からＤＮＡ試料を得るステップは、患者から骨髄試料を得ることと、骨髄試料から細胞を単離すことと、単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む。別の実施形態では、患者からＤＮＡ試料を得るステップは、患者から末梢血試料を得ることと、末梢血試料（例えば顆粒球）から細胞を単離することと、単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む。
【００１５】
本発明のさらに別の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い骨髄線維症を有する患者を特定する方法であって、患者を、（ａ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子における任意の変異がないことに基づくトリプルネガティブステータスについて、（ｂ）以下の遺伝子ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）について、または（ｃ）これら両方について、検査することを含み、（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の存在は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を示す、方法である。
【００１６】
これらの方法のうちのいずれにおいても、患者は骨髄線維症に罹患している可能性がある。骨髄線維症は、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）、または本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）であり得る。ある特定の実施形態では、患者は、ＪＡＫ阻害剤療法を以前に受けたことがない。他の実施形態では、患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法を「失敗」している（すなわち、疾患が耐性であったか、または患者が療法に対して抵抗性であったか、または最初に治療に応答したが、疾患が再発した）。他の実施形態では、患者はＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している。
【００１７】
方法はまた、このような患者が特定されると、テロメラーゼ阻害剤を投与するステップを含んでもよい。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００１８】
これらの方法によって特定される患者を治療するためにイメテルスタットを使用する場合、イメテルスタットは、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週に１回、３週間静脈内投与すること、約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。一実施形態では、各投与サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。別の実施形態では、各投与サイクルは、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。
【００１９】
これらの方法によって特定される患者を治療するためにイメテルスタットナトリウムを使用する場合、イメテルスタットナトリウムは、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを３週間に１回静脈内投与すること、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを週に１回、３週間静脈内投与すること、約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを３週間に１回静脈内投与すること、または約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを３週間に１回静脈内投与することを含む。一実施形態では、各投与サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを３週間に１回静脈内投与することを含む。別の実施形態では、各投与サイクルは、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットナトリウムを３週間に１回静脈内投与することを含む。
【００２０】
本発明の別の実施形態は、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどのテロメラーゼ阻害剤で骨髄線維症を有する患者を治療する方法であって、
（ｉ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいてトリプルネガティブステータスであるかどうか、かつ／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）があるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることと、
（ｉｉ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬのいずれかに変異がないことに基づいてトリプルネガティブステータスである場合、かつ／または以下の遺伝子：
ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて高分子リスク（ＨＭＲ）がある場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することと、を含む、方法である。骨髄線維症は、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）、または本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）であり得る。ある特定の実施形態では、患者は、ＪＡＫ阻害剤療法を以前に受けたことがない。他の実施形態では、患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法に失敗しているか、または以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している。
【００２１】
治療方法の特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットであり、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回を超える投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週に１回、３週間静脈内投与すること、約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。ある特定の実施形態では、各投与サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。別の実施形態では、各投与サイクルは、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。
【００２２】
テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定または選択する方法のいくつかの実施形態では、方法は、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって平均相対的テロメア長を決定することをさらに含む。テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定または選択する方法のいくつかの実施形態では、方法は、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定された患者由来の生体試料中に存在する標的細胞における平均相対的テロメア長を有すると特定された患者を選択することをさらに含む。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００２３】
本開示は、骨髄線維症を有する患者をテロメラーゼ阻害剤で治療する方法であって、そのような患者がＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスである場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００２４】
本開示は、骨髄線維症を有する患者をテロメラーゼ阻害剤で治療する方法であって、そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいてトリプルネガティブステータスである場合、かつ／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて高分子リスク（ＨＭＲ）がある場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含む、方法を提供する。
【００２５】
本開示は、骨髄線維症を有する患者をテロメラーゼ阻害剤で治療する方法であって、そのような患者が以下の特徴：
（ａ）１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される、個体由来の生体試料中に存在する標的細胞の平均相対的テロメア長、
（ｂ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々における変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、
（ｃ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく高分子リスク（ＨＭＲ）のうちの１つ以上を有する場合に、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００２６】
本開示は、テロメラーゼ阻害剤での治療のために骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象を特定する方法を提供し、本方法は、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルをテロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインのｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの減少は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い患者を特定する。
【００２７】
本開示は、骨髄線維症（ＭＦ）を治療する方法であって、有効量のテロメラーゼ阻害剤を、それを必要とする対象に投与することと、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを評価することと、を含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００２８】
本開示は、骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象における治療有効性を監視する方法を提供し、本方法は、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルをテロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインのｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの５０％以上の減少は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い対象を特定する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００２９】
本開示は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって、平均相対的テロメア長について患者を検査することと、患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中の平均相対的テロメア長を有する場合に、患者を選択することと、を含み、選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法を提供する。
【００３０】
本開示は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を受ける可能性が最も高い患者を特定する方法であって、患者から生体試料を得ることと、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって平均相対的長さを決定することと、患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中の平均相対的テロメア長を有する場合に、患者を特定することと、を含み、特定された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法を提供する。
【００３１】
本開示は、骨髄線維症を有する患者をテロメラーゼ阻害剤で治療する方法であって、そのような患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中に平均相対的テロメア長を有する場合に、テロメラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００３２】
本開示は、骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象における治療有効性を監視する方法を提供し、本方法は、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインのｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの５０％以上の減少が、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い対象を特定する。ある特定の実施形態では、測定または評価されるｈＴＥＲＴ発現レベルは、ｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルである。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【００３３】
本開示は、テロメラーゼ阻害剤による治療のための、骨髄線維症（ＭＦ）を有する患者を特定する方法を提供し、本方法は、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインのｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの減少が、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い患者を特定する。
【００３４】
本開示は、骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象における治療有効性を監視する方法を提供し、本方法は、テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のテロメラーゼ活性レベルを測定することと、生体試料中のテロメラーゼ活性レベルをテロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインのテロメラーゼ活性レベルと比較することと、を含み、生体試料中のテロメラーゼ活性レベルの５０％以上の減少は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い対象を特定する。ある特定の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットまたはその薬学的に許容される塩である。他の実施形態では、イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
前述の要約、ならびに本発明の以下の詳細な説明は、添付の図と併せて読むとより良好に理解される。本発明を例示する目的のために、図は、本発明の実施形態を実証する。しかしながら、本発明は、示される正確な配置、実施例、および器具に限定されないことを理解されたい。
【００３６】
【図１】実施例１の４．７ｍｇ／ｋｇおよび９．４ｍｇ／ｋｇ治療群の２４週目における脾臓体積減少（ＳＶＲ）のウォーターフォールプロットを示す。ＳＶＲがベースラインからの変化率として示される。
【図２】実施例１の４．７ｍｇ／ｋｇおよび９．４ｍｇ／ｋｇの治療群の２４週目における全症状スコア減少（ＴＳＳ）のウォーターフォールプロットを示す。ＴＳＳがベースラインからの変化率として示される。
【図３】ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の変異状態によってグループ化された全生存期間のカプランマイヤープロット：４．７ｍｇ／ｋｇ群のＴＮ対非ＴＮ（ＭＵＴ）を示す。具体的には、図３は、時間の関数としてのトリプルネガティブステータス（ＴＮ）を有する患者および少なくとも１つの変異（ＭＵＴ）を有する患者の生存確率を示す。
【図４】ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の変異状態によってグループ化された全生存期間のカプランマイヤープロット：９．４ｍｇ／ｋｇ群のＴＮ対非ＴＮ（ＭＵＴ）を示す。具体的には、図４は、９．４ｍｇ／ｋｇ群の時間の関数としての、トリプルネガティブステータス（ＴＮ）を有する患者および少なくとも１つの変異（ＭＵＴ）を有する患者の生存確率を示す。
【図５】９．４ｍｇ／ｋｇ対４．７ｍｇ／ｋｇ群の患者に従ってグループ化された時間の関数としての全生存期間のカプランマイヤープロットを示す。
【図６】ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の変異状態によってグループ化された全生存期間（ＯＳ）のカプランマイヤープロット：９．４ｍｇ／ｋｇ群のＴＮ対非ＴＮを示す。具体的には、図６は、９．４ｍｇ／ｋｇ群の時間の関数としての、トリプルネガティブステータス（ＴＮ）を有する患者および少なくとも１つの変異（非ＴＮ）を有する患者の生存確率を示す。
【図７】ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の変異状態によってグループ化された全生存期間（ＯＳ）のカプランマイヤープロット：４．７ｍｇ／ｋｇ群のＴＮ対非ＴＮを示す。具体的には、図７は、４．７ｍｇ／ｋｇ群の時間の関数としての、トリプルネガティブステータス（ＴＮ）を有する患者および少なくとも１つの変異（非ＴＮ）を有する患者の生存確率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本出願は、骨髄線維症を有する、トリプルネガティブ（すなわち、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々における変異がないもの）である、および／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて高分子リスク（ＨＭＲ）カテゴリーにある、患者が、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどのテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得ることができる、という発見に基づく。ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ１、ＩＤＨ１／２、およびＳＲＳＦ２遺伝子に変異を有する患者は、早期死亡または白血病性形質転換のリスクが上昇する。これらの患者は、典型的には、ＪＡＫ阻害剤などの従来の療法を使用する治療から利益を得ない。Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２８：１９３１（２０１６）。したがって、これらの患者がテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得るという事実は、予想外であり、驚くべき事実である。
【００３８】
したがって、本出願は、イメテルスタットなどのテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法を提供する。方法は、患者がＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスを有するかどうか、および／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）を有するどうかを決定するために患者を検査または特定することを含む。本出願はまた、イメテルスタットなどのテロメラーゼ阻害剤で骨髄線維症を治療する方法を提供し、この方法は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスを有する、ならびに／または以下の遺伝子ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）を有する患者を特定することを含む。このような患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い。次いで、テロメラーゼ阻害剤（例えば、．イメテルスタット）を患者に投与する。開示を明確にするために、限定するものではなく、本発明の詳細な説明は、本発明の特定の特徴、実施形態、または用途を説明または例示するサブセクションに分割される。
【００３９】
Ａ．定義
本明細書で使用される場合、付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）における変異は、骨髄線維症を有する患者における生存および疾患進行に影響を与えるこれらの遺伝子における任意の変異を含むものとする。さらに、本明細書で使用される場合、ＩＤＨ１／２は、ＩＤＨ１およびＩＨＤ２を含むものとする。例示的な変異は、以下の刊行物に見出され得、その各々の開示は、骨髄線維症に関連する遺伝子変異の開示に関連するために組み込まれている。Ｌａｎｇａｂｅｅｒ，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，５：ｅ１２４８０１１（２０１６）、Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ，Ｂｌｏｏｄ；１２４（１７）：２６３５−２６４２（２０１４）、Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ；１２６（６）：７９０−７９７（２０１５）、Ｓｐｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ａｄｖ．，１（２０）：１７２９−１７３８（２０１７）、Ｎｅｗｂｕｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１３０（９）：１１２５−１１３１（２０１７）、Ｋｕｙｋｅｎｄａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，９７：４３５−４３１（２０１８）。例示的な配列は以下の通りである：高分子リスク（ＨＭＲ）は、以下の遺伝子のうちの少なくとも１つに変異が存在することに基づいて決定できる：例えば、配列番号５の核酸配列を有するＡＳＸＬ１遺伝子、例えば、配列番号６の核酸配列を有するＥＺＨ２遺伝子、例えば、配列番号７の核酸配列を有するＳＲＳＦ２遺伝子、例えば、配列番号８の核酸配列を有するＩＤＨ１遺伝子、配列番号９の核酸配列を有するＩＤＨ２遺伝子、およびこれらの組み合わせ。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ＡＳＸＬ１遺伝子における目的の変異としては、Ｑ５７５、Ｑ５８８、Ｙ５９１、Ｑ５９２、Ｓ６０４、Ｌ６１４、Ｑ６２３、Ａ６２７、Ｅ６３５、Ｔ６３８、Ａ６４０、Ｇ６４６、Ｇ６５８、Ｒ６７８、Ｃ６８７、Ｄ６９０、Ｒ６９３、Ｙ７００、Ｇ７０４、Ｅ７０５、Ｑ７０８、Ｇ７１０、Ｌ７２１、Ｅ７２７、Ｖ７５１、Ｐ７６３、Ｑ７８０、Ｗ７９６、Ｖ８０７、Ｔ８２２、Ｋ８２５、Ｓ８４６、Ｄ８５５、Ｃ８５６、Ｌ８５７、Ｌ８８５、Ｌ８９０、Ｓ９０３、Ｓ９７０、Ｙ９７４、Ｒ９６５、Ｇ９６７、Ｖ９６２、Ｌ９９２、Ｓ１０２８、Ｑ１０３９、Ｒ１０７３、Ｅ１１０２、Ｈ１１５３、Ｓ１２０９、Ｓ１２３１、Ａ１３１２、Ｆ１３０５、Ｐ１３７７、Ｒ１４１５、およびＩ１４３６の変異が挙げられる。いくつかの実施形態では、変異は、Ｑ５７５Ｘ変異、Ｑ５８８Ｘ、Ｙ５９１Ｘ変異、Ｙ５９１Ｎ変異、Ｑ５９２Ｘ変異、Ｓ６０４Ｆ変異、Ｌ６１４Ｆ変異、Ｑ６２３Ｘ変異、Ａ６２７Ｇ変異、Ｅ６３５Ｒ変異、Ｔ６３８Ｖ変異、Ａ６４０Ｇ変異、Ｇ６４６Ｗ変異、Ｇ６５８Ｘ変異、Ｒ６７８Ｋ変異、Ｃ６８７Ｒ変異、Ｃ６８７Ｖ変異、Ｄ６９０Ｇ変異、Ｒ６９３Ｘ変異、Ｙ７００Ｘ変異、Ｇ７０４Ｒ変異、Ｇ７０４Ｗ変異、Ｅ７０５Ｘ変異、Ｑ７０８Ｘ変異、Ｇ７１０Ｅ変異、Ｌ７２１Ｃ変異、Ｅ７２７Ｘ変異、Ｖ７５１Ｌ変異、Ｐ７６３Ｒ変異、Ｑ７８０Ｘ変異、Ｗ７９６Ｘ変異、Ｗ７９６Ｇ変異、Ｖ８０７Ｆ変異、Ｔ８２２Ｈ変異、Ｋ８２５Ｘ変異、Ｓ８４６Ｑ変異、Ｄ８５５Ａ変異、Ｃ８５６Ｘ変異、Ｌ８５７Ｒ変異、Ｌ８８５Ｘ変異、Ｌ８９０Ｆ変異、Ｓ９０３Ｉ変異、Ｓ９７０Ｎ変異、Ｙ９７４Ｘ変異、Ｒ９６５Ｘ変異、Ｇ９６７ｄｅｌ変異、Ｖ９６２Ａ変異、Ｌ９９２Ｑ変異、Ｓ１０２８Ｒ変異、Ｑ１０３９Ｌ変異、Ｒ１０７３Ｃ変異、Ｅ１１０２Ｄ変異、Ｈ１１５３Ｒ変異、Ｓ１２０９Ｉ変異、Ｓ１２３１Ｆ変異、Ａ１３１２Ｖ変異、Ｆ１３０５Ｗ変異、Ｐ１３７７Ｓ変異、Ｒ１４１５Ｑ変異、および／またはＩ１４３６Ｍ変異である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２遺伝子における目的の変異としては、Ｗ６０、Ｒ６３、Ｐ３１２、Ｆ１４５、Ｎ１８２、Ｒ２８８、Ｑ３２８、Ｑ５５３、Ｒ５６６、Ｔ５７３、Ｒ５９１、Ｒ６５９、Ｄ６７７、Ｖ６７９、Ｒ６９０、Ａ７０２、Ｖ７０４、Ｅ７２６、Ｄ７３０および／またはＹ７３３の変異が挙げられる。いくつかの実施形態では、変異は、Ｗ６０Ｘ変異、Ｒ６３Ｘ変異、Ｐ３１２Ｓ変異、Ｆ１４５Ｓ変異、Ｎ１８２Ｄ変異、Ｒ２８８Ｑ変異、Ｑ３２８Ｘ変異、Ｑ５５３Ｘ変異、Ｒ５６６Ｈ変異、Ｔ５７３Ｉ変異、Ｒ５９１Ｈ変異、Ｒ６５９Ｋ変異、Ｄ６７７Ｈ変異、Ｖ６７９Ｍ変異、Ｒ６９０Ｈ変異、Ａ７０２Ｖ変異、Ｖ７０４Ｌ変異、Ｅ７２６Ｖ変異、Ｄ７３０Ｘ変異、および／またはＹ７３３Ｘ変異である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ＳＲＳＦ２遺伝子における目的の変異にはＰ９５の変異が含まれる。いくつかの実施形態では、変異はＰ９５Ｈ変異、Ｐ９５Ｌ変異またはＰ９５Ｒ変異である。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＩＤＨ１／２遺伝子における目的の変異は、Ｒ１３２および／またはＲ１４０の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異はＲ１３２Ｇ変異、Ｒ１３２Ｈ変異またはＲ１４０Ｑ変異である。
【００４４】
ある特定の実施形態では、目的の変異としては、以下に記載の変異が挙げられる：
【表Ａ】
2021531793.tif 000003
【００４５】
本明細書で使用される場合、「トリプルネガティブステータス」、「トリプルネガティブ」、または「ＴＮ」は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がない患者を指すものとする。トリプルネガティブステータスは、例えば、配列番号２の核酸配列を有するＪＡＫ２遺伝子、例えば、配列番号３の核酸配列を有するＣＡＬＲ遺伝子、および例えば、配列番号４の核酸配列を有するＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づいて決定することができる。
【００４６】
ある特定の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２遺伝子における変異、例えばＧ３３５、Ｆ５５６、Ｇ５７１、Ｖ６１７、および／またはＶ６２５における変異がないことを含む。例えば、トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２遺伝子に、Ｇ３３５Ｄ変異、Ｆ５５６Ｖ変異、Ｇ５７１Ｓ変異、Ｖ６１７Ｆ変異、および／またはＶ６２５Ｓ変異がないことを含み得る。
【００４７】
ある特定の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、ＭＰＬ遺伝子における変異、例えばＴ１１９、Ｓ２０４、Ｐ２２２、Ｅ２３０、Ｖ２８５、Ｒ３２１、Ｓ５０５、Ｗ５１５、Ｙ５９１、および／またはＲ５９２における変異がないことを含む。例えば、トリプルネガティブステータスは、ＭＰＬ遺伝子に、Ｔ１１９Ｉ変異、Ｓ２０４Ｆ変異、Ｓ２０４Ｐ変異、Ｐ２２２Ｓ変異、Ｅ２３０Ｇ変異、Ｖ２８５Ｅ変異、Ｒ３２１Ｗ変異、Ｓ５０５Ｎ変異、Ｗ５１５Ｒ変異、Ｗ５１５Ｌ変異、Ｙ５９１Ｎ変異、および／またはＲ５９２Ｑ変異がないことを含み得る。
【００４８】
ある特定の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、ＣＡＬＲ遺伝子における変異、例えばＬ３６７、Ｋ３６８、Ｅ３８１、Ｋ３８５、および／またはＥ３９６における変異がないことを含む。例えば、トリプルネガティブステータスは、ＣＡＬＲ遺伝子に、Ｌ３６７Ｔ変異、Ｋ３６８Ｒ変異、Ｋ３８５Ｎ変異、Ｅ３８１Ａ変異、および／またはＥ３９６ｄｅｌ変異がないことが含み得る。
【００４９】
ある特定の実施形態では、目的の変異としては、以下に記載の変異が挙げられる：
【表Ｂ】
2021531793.tif 000004
【００５０】
本明細書で使用される場合、疾患が耐性であったとき、または患者が治療に対して抵抗性であったとき、または治療に対して最初に応答性であったが、疾患が再発したときに、患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を「失敗した」ことがある。
【００５１】
本明細書で使用される場合、量、時間持続時間などの測定可能な値を指す場合、「約」という用語は、開示される方法を実施するのに適切であるため、指定された値から±２０％〜±０．１％、好ましくは±２０％〜±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、およびさらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味する。
【００５２】
「薬学的に許容される塩」という用語は、哺乳動物などの患者への投与に許容される塩（所与の投薬レジメンについて許容される哺乳動物の安全性を有する対イオンを有する塩）を意味する。このような塩は、薬学的に許容される無機または有機塩基、ならびに薬学的に許容される無機または有機酸から誘導され得る。「薬学的に許容される塩」は、化合物の薬学的に許容される塩を指し、その塩は、当該技術分野で周知の様々な有機および無機対イオンから誘導され、一例としてのみ、ナトリウムなどを含み、分子が塩基性官能基を含む場合、塩酸塩などの有機酸または無機酸の塩などを含む。薬学的に許容される目的の塩としては、アルミニウム、アンモニウム、アルギニン、バリウム、ベンザチン、カルシウム、コリネート（ｃｈｏｌｉｎａｔｅ）、エチレンジアミン、リジン、リチウム、マグネシウム、メグルミン、プロカイン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、ピペラジン、亜鉛、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、およびトリエタノールアミン塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
「その塩（複数可）」という用語は、酸の陽子が金属陽イオンまたは有機陽イオンなどの陽イオンに置き換えられたときに形成される化合物を意味する。好ましくは、塩は、薬学的に許容される塩である。例として、本化合物の塩には、塩の陰イオン成分として無機または有機酸の共役塩基を用いて、化合物が無機または有機酸によってプロトン化されて陽イオンを形成するものが含まれる。目的の塩としては、アルミニウム、アンモニウム、アルギニン、バリウム、ベンザチン、カルシウム、セシウム、コリネート、エチレンジアミン、リチウム、マグネシウム、メグルミン、プロカイン、Ｎ−メチルグルカミン、ピペラジン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、ピペラジン、ジイソプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、およびトリエタノールアミン塩が挙げられるが、これらに限定されない。ヌクレオシド間結合の骨格を含む本明細書に示されるオリゴヌクレオチド構造のいずれかについては、かかるオリゴヌクレオチドは、任意の好都合な塩形態を含んでもよいことを理解されたい。いくつかの実施形態では、単純性のためにヌクレオシド間結合の酸性形態が示される。いくつかの場合では、主題化合物の塩は、一価のカチオン塩である。ある特定の場合では、主題化合物の塩は、二価のカチオン塩である。いくつかの場合では、主題化合物の塩は、三価カチオン塩である。「溶媒和物」は、溶媒分子と溶質の分子またはイオンとの組み合わせによって形成される複合体を指す。溶媒は、有機化合物、無機化合物、または両方の混合物であり得る。溶媒のいくつかの例には、メタノール、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、および水が含まれるが、これらに限定されない。溶媒が水である場合、形成された溶媒和物は水和物である。
【００５４】
「立体異性体」および「立体異性体」は、同じ原子連結性を有するが、空間における異なる原子配置を有する化合物を指す。立体異性体としては、例えば、シス−トランス異性体、ＥおよびＺ異性体、鏡像異性体、ならびにジアステレオマーが挙げられる。１つ以上の置換基を含有する本明細書に開示される基のいずれに関しても、そのような基は、立体的に非実用的であり、かつ／または合成的に実現不可能である任意の置換または置換パターンを含有しないことを理解されたい。すべての立体異性体は、本開示の範囲内に含まれることが意図される。
【００５５】
当業者は、本明細書に記載の基の他の互変異性体配置が可能であることを理解するであろう。主題化合物の全ての互変異性体形態は、特に示されていなくても、化合物の基の１つの可能な互変異性体配置が記載されている構造によって包含されることを理解されたい。
【００５６】
主題化合物の立体異性体の互変異性体の薬学的に許容される塩の溶媒和物を含むことが意図される。これらは、本開示の範囲内に含まれることが意図される。
【００５７】
ある特定の実施形態がより詳細に説明される前に、本発明が記載される特定の実施形態に限定されず、したがって、もちろん変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。
【００５８】
値の範囲が提供される場合、文脈が別段明確に指示しない限り、各介在値は、その範囲の上限値と下限値と、その範囲内の任意の他の記載値または介在値との間で、下限の単位の１０分の１まで、本発明内に包含されることを理解されたい。これらのより小さい範囲の上限および下限は独立して、より小さい範囲に含まれてもよく、記載された範囲内の任意の具体的に除外された制限に従うことを条件として、本発明内にも包含される。記載の範囲が制限の一方または両方を含む場合、それらの含まれる制限の一方または両方を除く範囲もまた、本発明に含まれる。
【００５９】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の任意の方法および材料も、本発明の実施または試験に使用することができるが、代表的な例示的な方法および材料がここに記載される。
【００６０】
本明細書で引用される全ての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれ、引用された刊行物に関連して方法および／または材料を開示および説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。刊行物の引用は、出願日前のその開示のためであり、本発明が、先行発明のためにそのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は実際の公開日とは異なる可能性があり、これらは個別に確認する必要があり得る。
【００６１】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと指示されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。特許請求の範囲は、あらゆる任意選択的な要素を排除するように立案され得ることにさらに留意されたい。そのため、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連する「単に」、「のみ」などの排他的な用語の使用、または「否定的」な限定の使用の先行詞としての役割を果たすことが意図される。
【００６２】
本明細書に記載および説明される個々の実施形態の各々は、別個の構成要素および特徴を有し、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離され得るか、またはそれらと組み合わされ得る。任意の列挙された方法は、列挙された事象の順序、または論理的に可能な任意の他の順序で実行され得る。
【００６３】
Ｂ．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者の特定
一態様において、本開示は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い骨髄線維症患者を特定または選択する方法を提供する。方法は、トリプルネガティブステータス患者（ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がない患者）または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）がある患者を特定することに依存する。これらのトリプルネガティブ患者またはＨＭＲ患者は、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウムなどのテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い。
【００６４】
骨髄線維症は、原発性骨髄線維症、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）、または本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）であり得る。ある特定の実施形態では、患者は、ＪＡＫ阻害剤療法を以前に受けたことがない。他の実施形態では、患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法を失敗している（すなわち、疾患が耐性であったか、または患者が療法に対して抵抗性であったか、または最初に治療に応答したが、疾患が再発した）。他の実施形態では、患者は以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している。さらに代替的な実施形態では、患者は以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法を中止している。
【００６５】
一実施形態では、患者はＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、骨髄線維症はＪＡＫ阻害剤療法に耐性であった。別の実施形態では、患者はＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者はＪＡＫ阻害剤療法に抵抗性であった。別の実施形態では、患者はＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者は再発している。代替的な実施形態では、患者はＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した。
【００６６】
一実施形態では、本発明は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないこと（すなわち、任意の変異がないこと）に基づいて、トリプルネガティブステータスのうちの１つ以上について検査することによって、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法を提供する。その実施形態では、患者はまた、以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）について検査され得る。別の実施形態では、本発明は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々における変異がないこと（すなわち、任意の変異がないこと）に基づくトリプルネガティブステータスについて、ならびに／または以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）について検査することによる、方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、患者を、（ａ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子に任意の変異がないことに基づくトリプルネガティブステータスについて、（ｂ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）について、または（ｃ）両方について、検査することを含む、方法を提供する。この実施形態では、（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）の存在は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を示す。
【００６７】
本発明の別の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、
ａ．患者を以下について検査することであって、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）、について検査することと、
ｂ．患者が以下を有する場合であって、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）を有する場合、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法である。
【００６８】
本発明のさらに別の実施形態は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータスについて、患者を検査することと、患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づくトリプルネガティブステータスを有する場合に患者を選択することと、を含み、選択された患者がテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法である。一実施形態では、この方法はまた、以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）について患者を検査することと、患者がＨＭＲを有する場合に患者を選択することと、を含む。
【００６９】
これらの方法のうちのいずれかのある特定の実施形態では、トリプルネガティブ患者は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子のコード領域（エクソン）に変異を欠く。
【００７０】
さらに、これらの方法のうちのいずれかの他の実施形態では、高分子リスク（ＨＭＲ）は、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２遺伝子のうちの少なくとも１つのコード領域（エクソン）における変異の存在によって決定される。
【００７１】
ある特定の実施形態では、高分子リスク（ＨＭＲ）は、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２もしくはＩＤＨ１／２、またはそれらの組み合わせにおける変異の存在を検出することによって決定される。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＥＺＨ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＳＲＳＦ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１およびＥＺＨ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１およびＳＲＳＦ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＥＺＨ２およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＳＲＳＦ２およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、およびＳＲＳＦ２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、方法はＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２における変異の存在を検出することを含む。本発明のさらに別の実施形態では、本発明は、患者集団におけるテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定または選択する方法を提供する。この方法では、患者集団は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異を有する患者についてスクリーニングされ、集団内のトリプルネガティブ患者を特定する。代替の実施形態では、本方法は、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、およびＣＡＬＲの各々においてカノニカル変異を欠くトリプルネガティブ患者の特定に依存する。
【００７２】
ある特定の実施形態では、本方法はまた、患者ＤＮＡ試料を採取するステップを含む。患者試料は、骨髄、末梢血、またはその両方から得られたＤＮＡ試料から収集され得る。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の方法は、患者の血液試料を得ることと、患者の血液試料からＤＮＡを単離（抽出）することと、を含む。方法はまた、患者の血液試料から細胞（例えば、顆粒球）を単離するステップを含んでもよい。同様に、本発明の方法は、骨髄試料を得ることと、骨髄試料からＤＮＡを単離（抽出）することと、を含む。本方法は、患者の骨試料から細胞を単離するステップも含み得る。
【００７３】
患者ＤＮＡ試料は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々における変異の有無について従来の技法を使用して、検査する。代替的に、患者ＤＮＡ試料は、以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在について従来の技法を使用して、検査する。ある特定の実施形態では、患者ＤＮＡ試料は、（ｉ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々における変異の有無、ならびに（ｉｉ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在について検査する。
【００７４】
ある特定の実施形態では、ＤＮＡ試料の検査は、Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ；１２６（６）：７９０−７９７（２０１５）に記載されているように、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｉＳｅｑ  ｐｌａｔｆｏｒｍを使用する次世代シーケンシングアッセイであってよく、ＤＮＡ試料検査に関連するその開示は本明細書に組み込まれる。
【００７５】
Ｃ．薬力学（ＰＤ）
本開示は、骨髄線維症を有する対象におけるテロメラーゼ阻害療法に対する応答と、ベースラインレベルからの対象におけるテロメラーゼｈＴＥＲＴ発現レベルの減少との間の関連性を実証する薬力学的効果に部分的に基づいている。ある場合には、２４週目にテロメラーゼ阻害療法に対する臨床応答（脾臓または症状）を達成した対象において、応答を達成しなかった対象よりもより高い割合の対象が、５０％以上のｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルの減少を達成する。
【００７６】
本開示は、骨髄線維症のためのテロメラーゼ阻害療法からの利益を得る可能性が高い患者の階層化および選択を提供し、治療を受ける対象における応答、再発、および予後を監視する方法を提供する。
【００７７】
本開示の態様は、テロメラーゼ阻害剤での治療のための骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象を選択する方法、およびＭＦを治療する方法を含む。ＭＦを有する対象における治療有効性を監視する方法もまた提供される。いくつかの場合では、対象の方法の実施形態が基づく薬力学的効果は、ｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現の５０％以上、例えば、６０％以上、７０％以上、８０％以上、または９０％以上の減少である。
【００７８】
テロメラーゼリボ核酸タンパク質は、成分またはサブユニットからなり、これらのうちの２つは、テロメラーゼＲＮＡテンプレート（ｈＴＲ）、およびテロメラーゼ逆転写酵素タンパク質（ｈＴＥＲＴ）である。ｈＴＥＲＴ発現レベルは、任意の好都合な方法を使用して評価、決定、および／または測定され得る。体液中のテロメラーゼ成分または関連タンパク質のｍＲＮＡの増幅、検出および測定に様々な方法を適用することができる。対象の方法における使用に適合させ得る目的の方法およびアッセイには、例えば、ＴａｑＭａｎ蛍光法に基づく、リアルタイム定量的ＲＴ−ＰＣＲアッセイ、タンパク質発現のための免疫組織化学法、ならびに米国特許第６，６０７，８９８号、Ｂｉｅｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １  ２０００（６）（２）４５２−４５９、Ｔｅｒｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（「Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｎｅａｔｅｓ  ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｉｇＶＨ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅ．」Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００７；２１：９６５−９７２）、およびＰａｌｍａ  ｅｔ  ａｌ．（「Ｔｅｌｏｍｅｒｅ  ｌｅｎｇｔｈ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．」Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２０１３；４１：６１５−６２６）に記載された方法が含まれる、これらに限定されない。
【００７９】
ｈＴＥＲＴ発現レベルは、任意の好都合な標的細胞または生体試料において評価または測定することができる。標的細胞は、患者の任意の好都合な細胞であり得、これには、患者の骨髄または末梢血の細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある場合には、標的細胞は、患者の骨髄試料から単離される。ある場合には、標的細胞は、患者の末梢血試料から単離される。標的細胞は、顆粒球であり得る。
【００８０】
ｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルは、任意の好都合な方法を使用してＲＮＡ試料中で評価または測定することができる。ＲＮＡ試料は、まず骨髄試料、末梢血試料、またはその両方を得てから、骨髄試料、末梢血試料、またはその両方からＲＮＡを単離することによって得ることができる。一実施形態では、患者から試料を得るステップは、患者から骨髄試料を得ることと、骨髄試料から細胞を単離することと、単離された細胞からＲＮＡおよび／またはＤＮＡを抽出することと、を含む。別の実施形態では、患者からＲＮＡ試料を得るステップは、患者から末梢血試料を得ることと、末梢血試料（例えば、顆粒球）から細胞を単離することと、単離された細胞からＲＮＡおよび／またはＤＮＡを抽出することと、を含む。
【００８１】
Ｄ．治療
本開示の態様は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子に任意の変異がないこと（すなわち、これらの遺伝子に変異がないか、または変異を欠くこれらの遺伝子）に基づく、トリプルネガティブステータスを有する、および／または以下の遺伝子：
ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）を有する、骨髄線維症の治療を必要とする対象（すなわち、患者）の骨髄線維症を治療する方法を含む。本発明の一実施形態は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子に任意の変異がないこと（すなわち、これらの遺伝子に変異がないか、または変異を欠く）基づく、トリプルネガティブステータスを有する、骨髄線維症の治療を必要とする対象（すなわち、患者）の骨髄線維症を治療する方法である。一実施形態では、骨髄線維症は、原発性骨髄線維症である。別の実施形態では、骨髄線維症は、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である。代替的な実施形態では、骨髄線維症は、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である。
【００８２】
治療方法のある特定の実施形態では、患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない。他の実施形態では、患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法を「失敗」している（すなわち、疾患が耐性であったか、または患者が療法に対して抵抗性であったか、または最初に治療に応答したが、疾患が再発した）。治療方法の代替の実施形態では、患者は、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している。ある特定の実施形態では、治療方法は、ジフェンヒドラミン（２５〜５０ｍｇ）およびヒドロコルチゾン（１００〜２００ｍｇ）、またはそれらの等価物による前投薬をさらに含む。
【００８３】
対象は、癌の治療を必要とする哺乳動物である。一般に、対象は、ヒト患者である。本発明のいくつかの実施形態では、対象は、非ヒト霊長類などの非ヒト哺乳動物、動物モデル（例えば、薬物のスクリーニング、特徴付け、および評価に使用されるラットなどの動物）、ならびに他の哺乳動物であり得る。本明細書で使用される場合、用語「患者」、「対象」、および「個体」は互換的に使用される。
【００８４】
本明細書で使用され、当該技術分野で十分に理解されているように、「治療」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の症状の軽減または改善、疾患の程度の減少、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の拡散の防止、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、ならびに寛解（部分的であるかまたは全体的であるかにかかわらず）が含まれるが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味し得る。
【００８５】
Ｅ．テロメラーゼ阻害剤
本発明の方法を使用して、任意の好都合なテロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定することができる。さらに、任意の好都合なテロメラーゼ阻害剤は、対象の治療方法での使用を見出すことができる。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、テロメラーゼ阻害活性を有するオリゴヌクレオチド、特にＷＯ２００５／０２３９９４および／またはＷＯ２０１４／０８８７８５で定義されるオリゴヌクレオチドであり、その開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。ある場合には、１つまたは２つ以上のテロメラーゼ阻害剤（例えば、２つまたは３つのテロメラーゼ阻害剤）を哺乳動物に投与して血液悪性腫瘍を治療することができる。
【００８６】
イメテルスタット
ある特定の実施形態において、テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットであり、その互変異性体およびその塩、例えば、薬学的に許容される塩を含む。イメテルスタットは、血液悪性腫瘍における臨床活性を有する新規ファーストインクラスのテロメラーゼ阻害剤である（Ｂａｅｒｌｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ２０１５；３７３：９２０−９２８、Ｔｅｆｆｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ  ２０１５；３７３：９０８−９１９）（以下に示す）：
【化１】
2021531793.tif 000005
式中、「ｎｐｓ」は、１つのヌクレオシドの３’−炭素を隣接するヌクレオシドの５’−炭素に連結するチオホスホルアミデート結合−ＮＨ−Ｐ（＝Ｏ）（ＳＨ）−Ｏ−を表す。
【００８７】
ある特定の場合において、テロメラーゼ阻害剤は、その互変異性体を含むイメテルスタットナトリウムである。イメテルスタットナトリウムは、合成脂質共役１３量体オリゴヌクレオチドＮ３’→Ｐ５’−チオ−ホスホルアミデートであるイメテルスタットのナトリウム塩である。イメテルスタットナトリウムは、ヒトテロメラーゼＲＮＡ（ｈＴＲ）鋳型領域に相補的な共有結合脂質化１３量体オリゴヌクレオチド（以下に示す）であるテロメラーゼ阻害剤である。イメテルスタットナトリウムの化学名は、ＤＮＡ、ｄ（３’−アミノ−３’−デオキシ−Ｐ−チオ）（Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｇ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ａ）、５’−［Ｏ−［２−ヒドロキシ−３−（ヘキサデカノイルアミノ）プロピル］ホスホロチオエート］、ナトリウム塩（１：１３）（配列番号１）である。イメテルスタットナトリウムはアンチセンス機構を通して機能せず、したがって、そのような療法で一般的に観察される副作用がない。
【化２】
2021531793.tif 000006
【００８８】
別段の指示がない限り、または文脈から明確でない限り、本明細書におけるイメテルスタットへの言及はまた、その互変異性体およびその塩、例えば、薬学的に許容される塩を含む。上述したように、イメテルスタットナトリウムは、特に、イメテルスタットのナトリウム塩である。別段の指示がない限り、または文脈から明確でない限り、本明細書におけるイメテルスタットナトリウムへの言及にはその全ての互変異性体も含まれる。
【００８９】
イメテルスタットおよびイメテルスタットナトリウムは、他の場所で説明されるように製造、製剤化、または入手することができる（例えば、Ａｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６３：３９３１−３９３９（２００３）、Ｈｅｒｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２４：５２６２−５２６８（２００５）、およびＧｒｙａｚｎｏｖ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ．，７：４７７−４９３（２０１０）を参照されたい）。別段の指示がない限り、または文脈から明確でない限り、本明細書におけるイメテルスタットへの言及にはその塩も含まれる。上述したように、イメテルスタットナトリウムは、特に、イメテルスタットのナトリウム塩である。
【００９０】
イメテルスタットは、テロメラーゼのＲＮＡ鋳型を標的とし、様々な癌細胞株およびマウスにおける腫瘍異種移植片におけるテロメラーゼ活性および細胞増殖を阻害する。乳がん、非小細胞肺がんおよび他の固形腫瘍、多発性骨髄腫、または慢性リンパ球性白血病を有する患者を対象とした第１相試験では、薬物の薬物動態および薬力学に関する情報が提供されている。本態性血小板血症を有する患者を対象としたその後の第２相試験では、ＪＡＫ２  Ｖ６１７ＦおよびＣＡＬＲ変異対立遺伝子負荷の有意な減少に伴う血小板低下活性が示された。イメテルスタットナトリウムは、日常的に静脈内に投与される。対象の方法の実施において、くも膜下腔内投与、腫瘍内注射、経口投与などの他の投与経路も使用することができることが企図される。イメテルスタットナトリウムは、日常的に臨床的に利用される用量と同等の用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、イメテルスタットナトリウムは、本明細書の他の箇所に記載されるように投与される。
【００９１】
特定の実施形態は、イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムに限定される、他の実施形態のいずれか１つに従う。
【００９２】
Ｆ．薬学的組成物
投与を容易にするために、テロメラーゼ阻害剤（例えば、本明細書に記載のもの）は、投与目的のために様々な薬学的形態に製剤化され得る。ある場合には、テロメラーゼ阻害剤は、薬学的組成物として投与される。薬学的組成物の担体または希釈剤は、組成物の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的組成物は、特に経口、直腸、経皮、非経口注射または吸入による投与に好適な単一剤形（ｕｎｉｔａｒｙ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）であり得る。ある場合には、投与は静脈内注射を介して行うことができる。例えば、経口剤形で組成物を調製する際に、例えば、懸濁液、シロップ、エリキシル、乳剤および溶液などの経口液体調製物の場合には水、グリコール、油、アルコールなどの通常の薬学的媒体のいずれかを採用してもよいか、または粉末、丸薬、カプセルおよび錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体を採用してもよい。錠剤およびカプセルは、投与が容易であるため、最も有利な経口投与単位形態であり、その場合、固体薬学的担体が明らかに採用される。非経口組成物については、担体は通常、少なくとも大部分が滅菌水を含むが、例えば、溶解性を補助するための他の成分が含まれてもよい。例えば、担体が生理食塩水、グルコース溶液、または生理食塩水とグルコース溶液の混合物を含む注射可能な溶液を調製してもよい。例えば、担体が生理食塩水、グルコース溶液、または生理食塩水とグルコース溶液の混合物を含む注射可能な溶液を調製してもよい。本明細書に記載のテロメラーゼ阻害剤を含有する注射用溶液は、長時間作用のために油中に製剤化してもよい。この目的のための適切な油は、例えば、ピーナッツ油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、大豆油、長鎖脂肪酸の合成グリセロールエステル、ならびにこれらと他の油との混合物である。注射用懸濁液を調製してもよく、その場合、適切な液体担体、懸濁剤などを採用してもよい。また、使用の直前に液体形態調製物に変換されることが意図される固体形態調製物も含まれる。経皮投与に好適な組成物では、担体は、任意選択的に浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を含み、任意選択的に少量の割合で任意の性質の好適な添加剤と組み合わされ、これらの添加剤は皮膚に有意な有害作用をもたらさない。当該添加剤は、皮膚への投与を促進し得る、および／または所望の組成物を調製するのに有用であり得る。組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏として投与され得る。
【００９３】
前述の薬学的組成物を、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために単位剤形（ｕｎｉｔ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）に製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、単回投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位が、必要な薬学的担体と共同して所望の治療効果がもたらされるように計算された所定の量の活性成分を含有する。かかる単位剤形の例は、錠剤（分割錠剤またはコーティングされた錠剤を含む）、カプセル、丸薬、粉末パケット、ウエハ、座薬、注射用溶液または懸濁液など、およびそれらの分離された複数回分である。
【００９４】
薬学的組成物中の本明細書に記載の薬物の溶解性および／または安定性を高めるために、α−、β−もしくはγ−シクロデキストリンまたはそれらの誘導体、特にヒドロキシアルキル置換シクロデキストリン、例えば、２ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンまたはスルホブチル−β−シクロデキストリンを採用することが有利であり得る。また、アルコールなどの共溶媒は、薬学的組成物中のテロメラーゼ阻害剤の溶解性および／または安定性を改善し得る。
【００９５】
投与様式に応じて、薬学的組成物は、好ましくは、０．０５〜９９重量％、より好ましくは０．１〜７０重量％、さらに好ましくは０．１〜５０重量％の本明細書に記載のテロメラーゼ阻害剤と、１〜９９．９５重量％、より好ましくは３０〜９９．９重量％、さらに好ましくは５０〜９９．９重量％の薬学的に許容される担体を含み、全ての割合は、組成物の総重量に基づく。
【００９６】
Ｇ．投与および投与レジメン
投与頻度は、対象に著しい毒性を生じることなく骨髄線維症の症状の重症度を低減させる任意の頻度であり得る。例えば、投与頻度は、約２ヶ月に１回〜約１週間に１回、代替的に約１ヶ月に１回〜約１ヶ月に約２回、代替的に約６週間に１回、約５週間に１回、代替的に約４週間に１回、代替的に約３週間に１回、代替的に約２週間に１回、または代替的に約１週間に１回であり得る。投与頻度は一定のままであってもよく、または治療期間中に変化してもよい。１つ以上のテロメラーゼ阻害剤を含有する組成物による治療の過程は、休薬期間（ｒｅｓｔ  ｐｅｒｉｏｄ）を含むことができる。例えば、テロメラーゼ阻害剤を含有する組成物は、３週間にわたって毎週投与され、その後２週間の休薬期間が続くことができ、そのようなレジメンは、複数回繰り返すことができる。有効量と同様に、様々な要因が特定の用途に使用される実際の投与頻度に影響を及ぼし得る。例えば、有効量、治療期間、複数の治療剤の使用、投与経路、ならびに骨髄線維症および関連する症状の重症度は、投与頻度の増加または減少を必要とし得る。
【００９７】
テロメラーゼ阻害剤（例えば、イメテルスタットまたはイメテルスタットナトリウム）を含有する組成物を投与するための有効期間は、対象に著しい毒性を生じさせることなく（例えば、本明細書に記載の）骨髄線維症の症状の重症度を低減する任意の期間であり得る。したがって、有効期間は、１ヶ月〜数ヶ月または数年（例えば、１ヶ月〜２年、１ヶ月〜１年、３ヶ月〜２年、３ヶ月〜１０ヶ月、または３ヶ月〜１８ヶ月）で変化し得る。一般に、骨髄線維症の治療の有効期間は、２ヶ月〜２０ヶ月の期間の範囲であり得る。ある場合には、有効期間は、個々の対象が生きている限りであり得る。複数の要因は、特定の治療に使用される実際の有効期間に影響を及ぼし得る。例えば、有効期間は、投与頻度、有効量、複数の治療剤の使用、投与経路、および骨髄線維症および関連症状の重症度によって変化し得る。
【００９８】
ある特定の事例では、治療の経過および骨髄線維症に関連する１つ以上の症状の重症度を監視することができる。骨髄線維症の症状の重症度が低減しているか否かを決定するために、任意の方法を使用することができる。例えば、（例えば、本明細書に記載されるような）骨髄線維症の症状の重症度は、生検技術を使用して評価することができる。
【００９９】
本対象の方法で使用されるテロメラーゼ阻害剤は、臨床的に日常的に利用される用量と同等の用量など、治療上有効な任意の用量で投与することができる。既知のおよび承認された抗がん剤のための特定の用量レジメン（例えば、推奨有効用量）は、医師に既知であり、例えば、ＰＨＹＳＩＣＩＡＮＳ’ＤＥＳＫ  ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ，２００３，５７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ．、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ”２００１，１０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに見られる製品の説明に示され、かつ／または連邦医薬品局（Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）から入手可能である、かつ／または医学文献で議論されている。
【０１００】
いくつかの態様では、対象に投与されるテロメラーゼ阻害剤、イメテルスタットナトリウムの用量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１３．０ｍｇ／ｋｇである。他の態様では、テロメラーゼ阻害剤の用量は、約４．５ｍｇ／ｋｇ〜約１１．７ｍｇ／ｋｇ、または約６．０ｍｇ／ｋｇ〜約１１．７ｍｇ／ｋｇ、または約６．５ｍｇ／ｋｇ〜約１１．７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の用量は、少なくとも約４．５ｍｇ／ｋｇ、４．６ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、４．９ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．１ｍｇ／ｋｇ、６．２ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．４ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、または１３ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇのいずれかである。様々な実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の有効量は、約３５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または０．５ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかよりも少ないテロメラーゼ阻害剤を含む。
【０１０２】
テロメラーゼ阻害剤を含む薬学的組成物の例示的な投薬頻度には、限定されないが、毎日、１日おき、１週間に２回、１週間に３回、休憩なしで毎週、毎週、４週間のうちの３週間、３週間に１回、２週間に１回、３週間のうちの２週間で毎週が含まれる。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、約１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、または８週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも週１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回（すなわち、毎日）、または１日３回、１日２回のうちのいずれかを投与される。いくつかの実施形態では、各投与の間隔は、約６ヶ月、３ヶ月、１ヶ月、２０日、１５日、１２日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日、または１日のうちのいずれかよりも短い。いくつかの実施形態では、各投与間の間隔は、約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、または１２ヶ月のうちのいずれかよりも長い。いくつかの実施形態では、投薬スケジュールに休憩はない。いくつかの実施形態において、各投与の間隔は約１週間以下である。
【０１０３】
イメテルスタット（例えば、イメテルスタットナトリウム）などのテロメラーゼ阻害剤は、任意の適切な方法を使用して投与することができる。例えば、イメテルスタット（例えば、イメテルスタットナトリウム）などのテロメラーゼ阻害剤は、一定期間（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、または５時間）にわたって４週間に１回静脈内投与され得る。いくつかの実施形態では、イメテルスタットは７〜１０ｍｇ／ｋｇで約２時間にわたって週に１回静脈内投与される。ある特定の実施形態では、イメテルスタットは約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇで約２時間にわたって３週間に１回静脈内投与される。一実施形態では、イメテルスタットは０．５−５ｍｇ／ｋｇで約２時間にわたり４週間に１回静脈内投与される。一実施形態では、イメテルスタットは、約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇで約２時間にわたって３週間に１回静脈内投与される。代替的に、イメテルスタットは約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇで約２時間にわたり４週間に１回静脈内投与される。
【０１０４】
本方法の特定の実施形態では、イメテルスタットは、１、２、３、４、５、６、７、８回または８回を超える投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週に１回３週間静脈内投与すること、約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。ある特定の事例では、各投与サイクルは、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む。ある場合には、各投与サイクルは、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを約３週間に１回静脈内投与することを含む。
【０１０５】
本発明の一実施形態では、イメテルスタットは、抗ヒスタミン剤、コルチコステロイド剤、またはその両方による前投薬後、３週間に１回、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの投与量で静脈内投与される。他の実施形態において、イメテルスタットは、抗ヒスタミン剤、コルチコステロイド、またはその両方による前投薬後、３週間に１回、約９．４ｍｇ／ｋｇ、代替的に約７．０ｍｇ／ｋｇ〜約９．８ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットの投与量で静脈内投与される。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、イメテルスタットは、約７．５ｍｇ／ｋｇ、代替的に約７．０ｍｇ／ｋｇ〜約７．７ｍｇ／ｋｇの投与量で、少なくとも３サイクルにわたって３週間に１回投与され、その後投与量が増加する。ある特定の実施形態では、イメテルスタットの投与量は、ＡＮＣおよび血小板最下点がそれぞれ約１．５×１０９／Ｌ〜約７５×１０９／Ｌで低下しておらず、グレード≧３の非血液毒性が存在しないことを条件に、約９．４ｍｇ／ｋｇ、あるいは約８．８ｍｇ／ｋｇ〜約９．６ｋｇ／ｍｇに増加してもよい。
【０１０７】
がんの治療は、時には薬物の投与の複数の「ラウンド」または「サイクル」を伴うことがあり、各サイクルは、指定されたスケジュールに従って１回以上の薬物の投与（例えば、３週間ごとに３日間連続して；１週間に１回など）を含むことが理解されよう。例えば、抗がん剤は、１〜８サイクル、またはより長い期間投与することができる。対象に２つ以上の薬物（例えば、２つの薬物）を投与する場合、各々独自のスケジュールに従って投与することができる（例えば、毎週、３週間に１回など）。薬物の投与は、異なる周期で投与される薬物であっても、両方の薬物が同じ日に少なくともある時間に投与されるように、または代替的に、薬物が連続する日に少なくともある時間に投与されるように、調整することができることが明らかであろう。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、イメテルスタットは、用量低減を伴うレジメンを介して投与され得る。一実施形態では、患者は最初に３週間ごとに約９．４ｍｇ／ｋｇを投与され、その後用量は３週間ごとに約７．５ｍｇ／ｋｇに変更され、次いで用量は３週間ごとに約６．０ｍｇ／ｋｇに変更される。
【０１０９】
当該技術分野で理解されるように、毒性が観察される場合、または患者の便宜のために、本発明の範囲から逸脱することなく、がん治療薬による治療を一時的に中断し、その後再開することができる。
【０１１０】
本対象の方法の態様は、患者の標的細胞（例えば、本明細書に記載されるような）における相対的テロメア長に基づいて、治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定または選択することを含む。標的細胞は、患者の任意の好都合な細胞であり得、これには、患者の骨髄または末梢血の細胞が含まれるが、これらに限定されない。ある場合には、標的細胞は、患者の骨髄試料から単離される。ある場合には、標的細胞は、患者の末梢血試料から単離される。標的細胞は、顆粒球であり得る。ある場合には、患者は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異を欠き、患者の標的細胞において特定の短いテロメア長を有する。本明細書で使用される場合、短いテロメア長は、好適な対照、例えば、本明細書に記載される１つ以上の既知の基準と比較して、テロメア長の中央値または平均以下のものである。したがって、主題の方法は、個体由来の生体試料中に存在する標的細胞のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって相対的なテロメア長を決定することと、個体由来の生体試料中に存在する標的細胞中の平均相対的テロメア長が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下、例えば、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の４５パーセンタイル以下、４０パーセンタイル以下、３５パーセンタイル以下、３０パーセンタイル以下、２５パーセンタイル以下、２０パーセンタイル以下、またはそれ以下であると決定される場合に、テロメア酵素阻害剤による治療から利益を得るであろう個体を選択することと、をさらに含むことができる。
【０１１１】
方法のいくつかの例では、１つ以上の既知の基準は、疾患と診断された複数の個体からの複数の天然に存在する標的細胞（例えば、本明細書に記載されるような）から確立されるテロメア長の範囲である。方法の特定の例において、１つ以上の既知の基準は、特徴付けられた細胞株である。「特徴付けられた細胞株」とは、細胞株中の細胞の相対的テロメア核酸が既知であり、比較的一定であることを意味する。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、生体試料中に存在するがん細胞のテロメア長は中央値または平均テロメア長以下であると決定される。いくつかの実施形態では、生体試料中に存在するがん細胞のテロメア長は、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下、４０パーセンタイル以下、３５パーセンタイル以下、３０パーセンタイル以下、２５パーセンタイル以下、２０パーセンタイル以下、１５パーセンタイル以下、１０パーセンタイル以下、または５パーセンタイル以下であると決定される。
【０１１３】
標的細胞のテロメア長は、Ｂａｓｓｅｔｔらによって米国特許第９，２００，３２７号に記載されたようなｑＰＣＲ、ｔｅｌｏ−ＦＩＳＨ、またはサザンブロットアッセイを含むが、これらに限定されない任意の好都合なアッセイを使用して決定することができる。一態様において、テロメア長は、末端制限酵素断片（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）（ＴＲＦ）の平均長を測定することによって決定することができる。ＴＲＦは、テロメア配列内の核酸を切断しない制限酵素によるゲノムＤＮＡの完全消化から生じる断片の長さ（通常は平均の長さ）として定義される。ある場合には、ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡ内で頻繁に切断するが、テロメア配列内では切断しない制限酵素で消化される。ある場合には、制限酵素は、４つの塩基認識配列（例えば、ＡｌｕＩ、ＨｉｎｆＩ、ＲｓａＩ、およびＳａｕ３Ａ１）を有し、単独でまたは組み合わせて使用される。得られた末端制限酵素断片は、テロメア反復およびサブテロメアＤＮＡの両方を含有する。サブテロメアＤＮＡは、テロメア配列のタンデムリピートに隣接するＤＮＡ配列であり、可変テロメア様配列に散在するテロメア反復配列を含有する。消化されたＤＮＡは、電気泳動によって分離され、膜などの支持体上にブロットされる。テロメア配列を含有する断片は、プローブ、すなわち標識された反復配列を膜にハイブリダイゼーションすることによって検出される。テロメア含有断片を視覚化すると、末端制限酵素断片の平均長を計算することができる（Ｈａｒｌｅｙ，Ｃ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．３４５（６２７４）：４５８−６０（１９９０）、参照により本明細書に組み込まれる）。サザンブロッティングによるＴＲＦ推定は、細胞または組織内のテロメア長の分布を示し、したがって、全ての細胞のテロメア長の中央値および平均を示す。
【０１１４】
別の態様では、テロメア長は、フローサイトメトリーによって測定することができる（Ｈｕｌｔｄｉｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２６：３６５１−３６５６（１９９８）、Ｒｕｆｅｒ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：７４３−７４７（１９９８）、参照により本明細書に組み込まれる）。フローサイトメトリー法は、ＦＩＳＨ技法の変形である。出発物質が組織である場合、細胞懸濁液は、一般的に機械的分離および／またはプロテアーゼによる処理によって作製される。細胞は、固定剤で固定され、蛍光標識で標識されたテロメア配列特異的プローブ、好ましくはＰＮＡプローブでハイブリダイゼーションされる。ハイブリダイゼーションの後、細胞を洗浄し、次いでＦＡＣＳによって分析する。バックグラウンド蛍光を適切に差し引いた後、Ｇｏ／Ｇ１中の細胞について蛍光シグナルを測定する。この技法は、多数の試料についてのテロメア長の迅速な推定に好適である。ＴＲＦと同様に、テロメア長は、細胞内のテロメアの平均長さである。
【０１１５】
他の態様では、生体試料中の細胞由来のテロメア長の中央値または平均値は、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）またはテロメア蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ｔｅｌｏ−ＦＩＳＨ）を介して決定される。ｑＰＣＲでは、ＤＮＡ結合色素が全ての二本鎖ＤＮＡに結合し、色素の蛍光を発する。ＰＣＲ反応中のＤＮＡ生成物の増加は、蛍光強度の増加をもたらし、ＰＣＲ反応の各サイクルで測定される。これにより、ＤＮＡ濃度を定量化することが可能になる。反応の対数期の間に存在するＤＮＡの相対濃度は、片対数スケールでＰＣＲサイクル数に対して蛍光レベルをプロットすることによって決定される。バックグラウンドを上回る蛍光を検出するための閾値が決定される。試料からの蛍光が閾値を超えるサイクルをサイクル閾値（Ｃｔ）と呼ぶ。ＤＮＡの量は、理論的に対数期の間、各サイクルで２倍になるため、ＤＮＡの相対量を計算することができる。ベースラインは、蛍光シグナルにほとんど変化がないＰＣＲの初期サイクルである。
【０１１６】
いくつかの態様では、テロメア長は、ｔｅｌｏ−ＦＩＳＨを使用して決定される。この方法では、細胞を固定し、蛍光標識、例えば、Ｃｙ−３、フルオレセイン、ローダミンなどにコンジュゲートされたプローブとハイブリダイゼーションさせる。この方法のプローブは、テロメア配列に特異的にハイブリダイズするように設計されたオリゴヌクレオチドである。一般に、プローブは８ヌクレオチド以上の長さ、例えば１２〜２０ヌクレオチド以上の長さである。一態様では、プローブは、天然に存在するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドである。一態様では、プローブはペプチド核酸であり、類似の天然配列よりも高いＴｍを有するため、より厳密なハイブリダイゼーション条件の使用を可能にする。細胞を、コルセミドなどの薬剤で処理して、分裂中期での細胞周期停止を誘導し、ハイブリダイゼーションおよび分析のための分裂中期染色体を提供し得る。いくつかの実施形態では、細胞ＤＮＡは蛍光色素４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色することもできる。
【０１１７】
無傷な分裂中期染色体のデジタル画像を取得し、テロメアにハイブリダイズしたプローブの蛍光強度を定量化する。これにより、細胞内のテロメア長の平均または中央値に加えて、個々の染色体のテロメア長の測定が可能になり、サブテロメアＤＮＡの存在に関連する問題を回避する（Ｚｊｉｌｍａｎｓ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：７４２３−７４２８（１９９７）、Ｂｌａｓｃｏ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ９１：２５−３４（１９９７）、参照により組み込まれる）。蛍光シグナルの強度は、テロメアの長さと相関し、より明るい蛍光シグナルは、より長いテロメアを示す。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、本発明は、骨髄線維症を治療する方法で使用するためのテロメラーゼ阻害剤に関し、その方法は、
テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定することであって、患者を、
（ａ）ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子における任意の変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、
（ｂ）以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）、または
（ｃ）両方、について、検査することを含み、
（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の存在は、患者が、テロメラーゼ阻害剤による治療と有効量のテロメラーゼ阻害剤を患者に投与することからの利益を得る可能性が最も高いことを示す。ある特定の実施形態では、本発明は、他の実施形態のいずれかにおいて定義される方法において使用するためのテロメラーゼ阻害剤に関する。
【０１１９】
本発明のさらに別の実施形態は、骨髄線維症の治療における使用のためのテロメラーゼ阻害剤であって、使用が、（ａ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスである、ならびに／または、以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）であるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることと、（ｂ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスである場合、ならびに／または以下の遺伝子ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）である場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することと、を含む、使用のためのテロメラーゼ阻害剤である。一実施形態において、使用は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、患者をトリプルネガティブステータスについてスクリーニングすることを含む。本発明のさらに別の実施形態は、骨髄線維症の治療における使用のためのテロメラーゼ阻害剤であって、使用が、（ａ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスであるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることと、（ｂ）そのような患者がトリプルネガティブステータスである場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することと、を含む、使用のためのテロメラーゼ阻害剤である。
【０１２０】
本発明のさらに別の実施形態は、骨髄線維症の治療のためのテロメラーゼ阻害剤の使用であって、（ａ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスである、ならびに／または、以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）であるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることと、（ｂ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスである場合、ならびに／または以下の遺伝子ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）である場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することと、を含む、使用である。一実施形態において、使用は、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬのそれぞれに変異がないことに基づいて、患者をトリプルネガティブステータスについてスクリーニングすることを含む。本発明のさらに別の実施形態は、骨髄線維症の治療のためのテロメラーゼ阻害剤の使用であって、（ａ）そのような患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスであるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることと、（ｂ）そのような患者がトリプルネガティブステータスである場合、患者にテロメラーゼ阻害剤を投与することと、を含む、使用である。
【０１２１】
本発明のある特定の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、配列番号２の核酸配列を有するＪＡＫ２遺伝子、配列番号３の核酸配列を有するＣＡＬＲ遺伝子、および配列番号４の核酸配列を有するＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づいて決定され得る。他の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、配列番号２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬの各々に変異がないこと基づいて決定され得る。代替の実施形態において、トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２、配列番号３、およびＭＰＬの各々に変異がないことに基づいて決定され得る。代替の実施形態では、トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、および配列番号４の各々に変異がないことに基づいて決定され得る。
【０１２２】
本発明の他の実施形態では、高分子リスク（ＨＭＲ）は、以下の遺伝子：配列番号５の核酸配列を有するＡＳＸＬ１遺伝子、配列番号６の核酸配列を有するＥＺＨ２遺伝子、配列番号７の核酸配列を有するＳＲＳＦ２遺伝子、配列番号８の核酸配列を有するＩＤＨ１遺伝子、配列番号９の核酸配列を有するＩＤＨ２遺伝子、およびこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて決定され得る。
【０１２３】
本発明の他の実施形態では、患者から得られた生体試料のテロメラーゼ活性およびｈＴＥＲＴ発現レベルを決定して、薬力学的効果を評価する、および／またはテロメラーゼ阻害で治療されている患者を監視することができる。テロメラーゼ活性は、ＴＲＡＰ（テロメア反復配列増幅プロトコル）テロメラーゼ活性アッセイを使用して測定することができる。ｈＴＥＲＴ発現レベルは、ノーザンブロットまたは遺伝子発現の逐次分析法（ＳＡＧＥ）または他の方法を使用して、生体試料中の細胞におけるｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルを測定することによって決定することができる。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、本発明は、他の実施形態のいずれかで定義されるような骨髄線維症の治療に使用するためのテロメラーゼ阻害剤に関する。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、本発明は、他の実施形態のいずれかで定義されるような骨髄線維症の治療のためのテロメラーゼ阻害剤の使用に関する。
【０１２６】
追加の実施形態
目的の追加の実施形態は、以下の条項に記載される：
【０１２７】
条項１．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、
（ａ）ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスについて患者を検査することと、
（ｂ）患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づいて、トリプルネガティブステータスを有する場合、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
【０１２８】
条項２．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、
（ｃ）以下について患者を検査することであって、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）について、検査することと、
（ｄ）以下を有する患者を選択することであって、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）、を有する患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
【０１２９】
条項３．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、
（ｅ）患者からＤＮＡ試料を得ることと、
（ｆ）患者由来のＤＮＡ試料を、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づき、トリプルネガティブステータスについて検査することと、
（ｇ）患者が、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づき、トリプルネガティブステータスを有する場合、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
【０１３０】
条項４．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を特定する方法であって、
（ｈ）患者からＤＮＡ試料を得ることと、
（ｉ）患者由来のＤＮＡ試料を、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づくトリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づいて、高分子リスク（ＨＭＲ）について検査することと、
（ｊ）患者が、
ｉ．ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことに基づく、トリプルネガティブステータス、ならびに／または
ｉｉ．以下の遺伝子：ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２、のうちの少なくとも１つにおける変異の存在に基づく、高分子リスク（ＨＭＲ）を有する場合、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
【０１３１】
条項５．患者がトリプルネガティブステータスを有すると決定される、骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、
トリプルネガティブステータスが、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないことを含む、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３２】
条項６．患者が高分子リスク（ＨＭＲ）を有すると決定される、骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、
ＨＭＲを有することは、付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３３】
条項７．骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、患者由来の生体試料中に存在する細胞が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長の範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される平均相対的テロメア長を有することが決定されている、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３４】
条項８．患者がトリプルネガティブステータスを有すると決定される、骨髄線維症を有する患者の治療のための医薬品の製造におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、トリプルネガティブステータスが、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないことを含む、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３５】
条項９．患者が高分子リスク（ＨＭＲ）を有すると決定される、骨髄線維症を有する患者の治療のための医薬品の製造におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、ＨＭＲを有することが、付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３６】
条項１０．骨髄線維症を有する患者の治療のための薬剤の製造におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、患者由来の生体試料中に存在する細胞が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長の範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される平均相対的テロメア長を有することが決定されている、テロメラーゼ阻害剤の使用。
【０１３７】
以下の実施例は、説明として提供されるが、限定するものではない。
【実施例】
【０１３８】
実施例１：イメテルスタットナトリウムは、再発したまたはヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤療法に抵抗性のある、中等度２（ｉｎｔ−２）または高リスク骨髄線維症（ＭＦ）を有する患者に有効な治療法である。
紹介
ヒトテロメラーゼのＲＮＡテンプレートを特異的に標的とする１３量体オリゴヌクレオチドであるイメテルスタットは、テロメラーゼ酵素活性の強力な競合的阻害剤である（Ａｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００３；Ｈｅｒｂｅｒｔ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００５）。臨床活性および許容される安全性プロファイルは、中等度２（ｉｎｔ−２）または高リスク骨髄線維症（ＭＦ）における３３人の患者のパイロット試験で報告され、患者の４８％は以前にヤヌスキナーゼ阻害剤（ＪＡＫｉ）で治療されていた（Ｔｅｆｆｅｒｉ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５）。この実施例は、骨髄線維症（ＭＦ）を有する患者における２つの用量レベルでのイメテルスタットナトリウムの第２相臨床試験の結果を提供する。
【０１３９】
方法
２回投与のイメテルスタットナトリウム（３週間に１回で９．４ｍｇ／ｋｇまたは４．７ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）の、無作為化、多施設、第２相試験を、動的国際予後スコアシステム（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｉｎｇ）（ＤＩＰＳＳ）スコアｉｎｔ−２の成人、または以前のＪＡＫｉ療法に対して再発／抵抗性である（すなわち、１２週間後に脾腫の減少がないか、またはＪＡＫ阻害剤（「ＪＡＫｉ」）療法開始後の任意の時点で脾腫の悪化のいずれか）高リスクＭＦを有する成人において実施した。原発性、本態性血小板血症後または真性赤血球増加症後のＭＦの診断が必要であった。他の適格性基準には、測定可能な脾腫（磁気共鳴画像法［ＭＲＩ］による）、活性ＭＦ関連全身症状、および血小板数≧７５×１０９／Ｌが含まれた。主要エンドポイントは、脾臓応答率（２４週目にＭＲＩにより脾臓体積減少［ＳＶＲ］を≧３５％達成した％）、および症状応答率（２４週目に骨髄線維症症状評価フォーム（ＭＦＳＡＦ）ｖ２に従って総症状スコア［ＴＳＳ］の≧５０％減少を達成した％）であった。副次エンドポイントには、安全性、全生存期間（ＯＳ）、治療応答、分子応答、ならびに薬物動態および薬力学的関係が含まれた。
【０１４０】
結果
１０７名の患者を５５個の施設に登録した（４．７ｍｇ／ｋｇについて４８名、９．４ｍｇ／ｋｇについて５９名）。ベースライン特徴を以下の表１に示す。追加的に、ＪＡＫｉでの時間中央値は２３ヶ月（０．９〜８９．７）であり、血小板数中央値は１４７×１０９／Ｌであった。トリプルネガティブ（ＴＮ、すなわち、ＪＡＫ２、ＭＰＬ、またはＣＡＬＲの変異はない）は、患者の２４．８％を占め、６７．６％は高分子リスク（ＨＭＲ、すなわち、≧１のＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、またはＩＤＨ１／２の変異）と見なされた。
【表１】
2021531793.tif 000007
【０１４１】
一次臨床カットオフの時点で、試験の中央値時間は２２．６ヶ月（範囲、０．２〜２７．４ヶ月）であり、治療の中央値時間は６．２ヶ月（範囲、０．０〜２７．２ヶ月）であった。９．４ｍｇ／ｋｇ群の６名（１０．２％）の患者は、ＩＲＣによって確認されたＭＲＩごとの脾臓応答を有した
【０１４２】
臨床カットオフの時点で、患者には中央値２２．６（０．２〜２７．４）ヶ月フォローアップし、中央値治療期間は６．２（０．０〜２７．２）ヶ月であった。治療期間の中央値は、９．４ｍｇ／ｋｇ群（７．７ヶ月）では４．７ｍｇ／ｋｇ群よりも長かった。９．４ｍｇ／ｋｇ群の６名（１０．２％）の患者は、ＭＲＩごとに脾臓応答を有し、４．７ｍｇ／ｋｇ群では応答はなかった（図１を参照されたい）。９．４ｍｇ／ｋｇ群の患者１９名（３２％）、４．７ｍｇ／ｋｇ群の患者３名（６％）が症状応答を有した（ＴＳＳ減少≧５０％）（図２参照されたい）。
【０１４３】
最初の臨床カットオフでは９．４ｍｇ／ｋｇ群のＯＳ中央値に達していないが、４．７ｍｇ／ｋｇ群のＯＳ中央値は１９．９ヶ月であった。９．４ｍｇ／ｋｇ群および４．７ｍｇ／ｋｇ群の１８ヵ月生存率は、それぞれ７６．７％および６２．９％であった。感度分析では、その後のＪＡＫｉ療法または幹細胞移植のための用量漸増時に患者を打ち切ることによって同様の結果が生じた。９．４ｍｇ／ｋｇ群では、ＴＮ患者とＯＳ患者の間で関連性が観察された（ＴＮ患者ではＯＳ中央値に達しておらず、非ＴＮ患者では２３．６ヶ月であった）。脾臓応答率は、１つのＨＭＲ変異（ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、またはＩＤＨ１／２）を有する患者においてより高かった。
【０１４４】
９．４ｍｇ／ｋｇでの治療で最も一般的な有害事象（全グレード）は、血小板減少症（４９％）、貧血（４４％）、好中球減少症（３６％）、および悪心（３４％）であり、４．７ｍｇ／ｋｇでは、下痢（３８％）、悪心（３１％）、貧血（３１％）、および血小板減少症（２３％）であった。グレード３／４の好中球減少症および血小板減少症は、９．４ｍｇ／ｋｇ（それぞれ３４％および４２％）で４．７ｍｇ／ｋｇ（それぞれ１３％および２９％）よりも頻繁であり、ほとんどの細胞減少症は４週間以内に解消した。グレード３／４のＬＦＴ上昇が、試験中の７名の患者において観察された。独立した肝臓審査委員会（Ｈｅｐａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって確認されたイメテルスタット関連の肝毒性は観察されなかった。
【０１４５】
２回目の臨床カットオフの時点で、患者を２７．４（０．２〜３３．０）ヶ月間フォローアップし、治療期間の中央値は２６．９（０．１〜１１８．１）週間であった。治療期間の中央値は、９．４ｍｇ／ｋｇ群（３３．３週間）では４．７ｍｇ／ｋｇ群（２３．９週間）よりも長かった。４．７ｍｇ／ｋｇ群を早期に閉鎖し、治療期間に影響を与えた。９．４ｍｇ／ｋｇ群における９５％信頼区間を有するＯＳ中央値は、９．４ｍｇ／ｋｇ群において２９．９ヶ月（２２．８、ＮＥ）（ＮＥは推定不可能である）であり、２回目の臨床カットオフに到達した。
【０１４６】
トリプルネガティブ対ＯＳ
対象は、ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の変異状態、トリプルネガティブ（ＴＮ、ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子の各々に変異がない）、および非ＴＮ（ＪＡＫ２／ＭＰＬ／ＣＡＬＲ遺伝子のいずれかに変異を有する）によってグループ化される。９．４ｍｇ／ｋｇ群で９５％信頼区間（２３．２、ＮＥ）のＴＮ対象ではＯＳ中央値は推定できず（ＮＥ）、９５％信頼区間（２０．７、ＮＥ）の非ＴＮ対象では２３．６ヶ月であったが、４．７ｍｇ／ｋｇでは９５％信頼度のＯＳ中央値は、ＴＮ対象および非ＴＮ対象でそれぞれ２２．３（１７、ＮＥ）および区間２０．３（１８．３、ＮＥ）であった。９．４ｍｇ／ｋｇ群では、トリプルネガティブ（ＴＮ）群では、非ＴＮ群と比較して低い死亡率が見られた（表２、図３および図４を参照されたい）。
【表２】
2021531793.tif 000008
【０１４７】
２回目の臨床カットオフにおいて、トリプルネガティブ（ＴＮ）群において、非ＴＮ群と比較して、より低い死亡率が９．４ｍｇ／ｋｇ群において見られた（表３、図６および図７を参照されたい）。
【表３】
2021531793.tif 000009
【０１４８】
トリプルネガティブ対２４週目の応答
９．４ｍｇ／ｋｇ群では、非ＴＮ群と比較してＴＮ群において高い応答率（ＳＶＲまたはＴＳＳ）が見られた（以下の表４を参照されたい）。
【表４】
2021531793.tif 000010
【０１４９】
分子リスク対２４週目の応答
９．４ｍｇ／ｋｇ群では、１つを超える変異を有するＨＭＲ群と比較して、１つの変異（ｍｕｔ）のみを有する低分子リスク（ＬＭＲ）群または高分子リスク（ＨＭＲ）群において高い応答率（ＳＶＲまたはＴＳＳ）が見られた（表５を参照されたい）。
【表５】
2021531793.tif 000011
【０１５０】
９．４ｍｇ／ｋｇの対象については、以下の要因と臨床応答またはＯＳとの間に関連性が観察された。
トリプルネガティブ（ＴＮ）：応答（ＳＶＲまたはＴＳＳ）はＴＮ対象で強化されていた。ＴＮに関して推定不可能なＯＳ中央値、非ＴＮ＝２３．６ヶ月、および
分子リスク：応答（ＳＶＲまたはＴＳＳ）は、１つの変異のみを有するＨＭＲを有する対象において強化され、応答は、９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットで治療された１を超える変異を有するＨＭＲを有する患者において観察された。
【０１５１】
実施例２
ベースラインテロメア長（ＴＬ）対全生存期間（ＯＳ）
対象は、ベースラインＴＬの中央値によってグループ化される。９．４ｍｇ／ｋｇ群では、最初の臨床カットオフでＯＳ中央値は推定できず（ＮＥ）、それぞれ、ベースラインＴＬがより短い対象（＜＝中央値）については９５％信頼区間で（２３．２、ＮＥ）、より長いＴＬを有する対象（＞中央値）については２２．８（１６．２、ＮＥ）ヶ月であった（表６）。４．７ｍｇ／ｋｇ群では、９５％信頼区間によるＯＳ中央値は、ベースラインＴＬがより短い対象およびＴＬがより長い対象についてそれぞれ２０．３（１７．２、ＮＥ）ヶ月および２２．３（１６．６、ＮＥ）ヶ月であった（表６）。
【０１５２】
９．４ｍｇ／ｋｇ群では、ベースラインＴＬがより短い対象、すなわちベースラインＴＬが中央値ＴＬ以下である対象について、より良好なＯＳ傾向が観察された。
【表６】
2021531793.tif 000012
【０１５３】
ベースラインＴＬ対２４週目の応答
ベースラインテロメア長（ＴＬ）：２４週目のＳＶＲまたはＴＳＳ応答は、より短いベースラインＴＬ（＜＝中央値）を有する対象において強化された。１７．３％（５／２９）のベースラインＴＬがより短い対象および４．２％（１／２４）のベースラインＴＬがより長い対象は、それぞれ脾臓応答を有した。３４．５％（１０／２９）のベースラインＴＬがより短い対象および２５％（６／２４）のベースラインＴＬがより長い対象は、それぞれＴＳＳ応答を有した。
【０１５４】
９．４ｍｇ／ｋｇ群では、２４週目に、ベースラインＴＬがより短い対象では、ＴＬがより長い対象と比較して高い応答率（ＳＶＲまたはＴＳＳ）が強化された（表７）。
【表７】
2021531793.tif 000013
【０１５５】
実施例３
用量依存性薬力学的（ＰＤ）効果
テロメラーゼ活性およびｈＴＥＲＴを分析して、イメテルスタットの薬力学的効果を評価した。利用可能なベースラインおよび治療後データを有する対象の中で、９．４ｍｇ／ｋｇ群の２３名（５１．１％）の対象および４．７ｍｇ／ｋｇ群の１０名（２９．４％）の対象は、ベースラインから＞＝５０％のテロメラーゼ活性低下を達成し、これはＰＤ効果であり、インビボでの前臨床異種移植片モデルからの抗腫瘍活性との相関を示した。加えて、９．４ｍｇ／ｋｇ群の３５名（６１．４％）の対象および４．７ｍｇ／ｋｇ群の２０名（４７．７％）の対象は、それぞれ、ベースラインから＞＝５０％のｈＴＥＲＴ  ＲＮＡレベル減少を達成した（表８）。そのため、用量依存性ＰＤ効果が実証され、標的結合（ｔａｒｇｅｔ  ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）が示された。
【表８】
2021531793.tif 000014
【０１５６】
実施例４
２４週目のＰＤ効果と応答との間の関連性
より高い割合（８３．３％）の脾臓応答者である対象が、非脾臓応答者である対象（５５．６％）よりもｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルの少なくとも＞＝５０％減少を達成し、より高い割合のＴＳＳ応答を有した対象が、非ＴＳＳ応答者よりもｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルの少なくとも＞＝５０％減少を達成した（表９）。ｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルは、治療前および治療後の患者から収集した全血試料から測定した。
【表９】
2021531793.tif 000015
【０１５７】
より高い割合の脾臓応答またはＴＳＳ応答を有した対象は、脾臓応答またはＴＳＳ応答を有しなかった対象よりもテロメラーゼ活性の少なくとも＞＝３０％または＞＝５０％の減少を達成した（表１０）。
【表１０】
2021531793.tif 000016
【０１５８】
本明細書に記載の主題の、実施形態を含む、態様は、１つ以上の他の態様または実施形態と単独または組み合わせて有益であり得る。説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様が以下に提供される。本開示を読めば当業者には明白であろうように、個々に番号付けされた態様の各々は、先行または後続の個々に番号付けされた態様のいずれかと使用または組み合わせられ得る。これは、態様のすべてのこのような組み合わせのサポートを提供することを意図しており、以下に明示的に提供される態様の組み合わせに限定されるものではない。
１．骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、患者がトリプルネガティブステータスを有すると決定され、
トリプルネガティブステータスが、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、カルレティキュリン（ＣＡＬＲ）、およびトロンボポエチン受容体（ＭＰＬ）遺伝子の各々に変異がないことを含む、使用。
２．骨髄線維症が、原発性骨髄線維症である、態様１に記載の使用。
３．骨髄線維症が、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様２に記載の使用。
４．骨髄線維症が、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様２に記載の使用。
５．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を以前に受けたことがない、態様１〜４のいずれか一つに記載の使用。
６．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様１〜４のいずれか一項に記載の使用。
７．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様１〜４のいずれか一つに記載の使用。
８．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様１〜４のいずれか一つに記載の使用。
９．テロメラーゼ阻害剤は、イメテルスタットである、態様１〜８のいずれか一つに記載の使用。
１０．イメテルスタットは、イメテルスタットナトリウムである、態様９に記載の使用。
１１．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットであり、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回よりも多くの投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週１回３週間静脈内投与すること、
約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または
約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様１０に記載の使用。
１２．各投与サイクルが、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様１１に記載の使用。
１３．各投与サイクルが、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様１２に記載の使用。
１４．平均相対的テロメア長は、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって決定される、態様１〜１３のいずれか一つに記載の使用。
１５．１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定された、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞における平均相対的テロメア長を有すると特定された患者を選択することをさらに含む、態様１〜１４のいずれか一つに記載の使用。
１６．患者が高分子リスク（ＨＭＲ）を有するかどうかを決定するために患者をスクリーニングすることをさらに含み、ＨＭＲを有することは、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、態様１〜１５のいずれか一つに記載の使用。
１７．テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを評価することをさらに含む、態様１〜１６のいずれか一つに記載の使用。
１８．ｈＴＥＲＴ発現レベルが、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインｈＴＥＲＴ発現レベルと比較して５０％以上減少される、態様１７に記載の使用。
１９．テロメラーゼ阻害剤の投与量、投与回数、または対象に投与される治療過程を変更することをさらに含む、態様１７または１８に記載の使用。
２０．骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、患者が高分子リスク（ＨＭＲ）を有すると決定され、
ＨＭＲを有することは、付加的性櫛様１（ＡＳＸＬ１）、ゼストホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）、セリンおよびアルギニンリッチスプライシング因子２（ＳＲＳＦ２）、ならびにイソクエン酸脱水素酵素１／２（ＩＤＨ１／２）からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、使用。
２１．骨髄線維症は、原発性骨髄線維症である、態様２０に記載の使用。
２２．骨髄線維症は、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様２１に記載の使用。
２３．骨髄線維症は、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様２１に記載の使用。
２４．患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、態様２０〜２３のいずれか一つに記載の使用。
２５．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様２０〜２３のいずれか一つに記載の使用。
２６．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様２０〜２３のいずれか一つに記載の使用。
２７．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様２０〜２３のいずれか一つに記載の使用。
２８．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、態様２０〜２７のいずれか一つに記載の使用。
２９．イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムである、態様２８に記載の使用。
３０．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットであり、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回よりも多くの投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週１回３週間静脈内投与すること、
約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または
約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様２８に記載の使用。
３１．各投与サイクルが、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様３０に記載の使用。
３２．各投与サイクルが、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様３１に記載の使用。
３３．患者由来の生体試料中に存在する標的細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって、平均相対的テロメア長を決定することをさらに含む、態様２０〜３２のいずれか一つに記載の使用。
３４．１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される患者由来の生体試料中に存在する標的細胞における平均相対的テロメア長を有すると特定された患者を選択することをさらに含む、態様２０〜３３のいずれか一つに記載の使用。
３５．患者がトリプルネガティブステータスであるかどうかを決定するために、患者をスクリーニングすることをさらに含み、トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬからなる群から選択される遺伝子の各々に変異のないことを含む、態様２０〜３４のいずれか一つに記載の使用。
３６．テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを評価することをさらに含む、態様２０〜３５のいずれか一つに記載の使用。
３７．ｈＴＥＲＴ発現レベルが、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインｈＴＥＲＴ発現レベルと比較して５０％以上減少される、態様３６に記載の使用。
３８．テロメラーゼ阻害剤の投与量、投与回数、または対象に投与される治療過程を変更することをさらに含む、態様３６〜３７のいずれか一つに記載の使用。
３９．骨髄線維症を有する患者の治療におけるテロメラーゼ阻害剤の使用であって、患者由来の生体試料中に存在する細胞が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長の範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される平均相対的テロメア長を有することが決定されている、使用。
４０．骨髄線維症は、原発性骨髄線維症である、態様３９に記載の使用。
４１．骨髄線維症は、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様４０に記載の使用。
４２．骨髄線維症は、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様４０に記載の使用。
４３．患者は、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、態様３９〜４２のいずれか一つに記載の使用。
４４．患者がＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様３９〜４２のいずれか一つに記載の使用。
４５．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様３９〜４２のいずれか一つに記載の使用。
４６．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様３９〜４２のいずれか一つに記載の使用。
４７．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、態様３９〜４６のいずれか一つに記載の使用。
４８．イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムである、態様４７に記載の使用。
４９．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットであり、１、２、３、４、５、６、７、８回、または８回よりも多くの投与サイクルにわたって投与され、各サイクルは、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、
約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを週１回３週間静脈内投与すること、
約２．５〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与すること、または
約０．５〜９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様４７に記載の使用。
５０．各投与サイクルが、約７〜１０ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様４９に記載の使用。
５１．各投与サイクルが、約９．４ｍｇ／ｋｇのイメテルスタットを３週間に１回静脈内投与することを含む、態様５０に記載の使用。
５２．患者由来の生体試料中に存在する細胞中のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって平均相対的テロメア長を決定することをさらに含む、態様３９〜５１のいずれか一つに記載の使用。
５３．テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られる生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを評価することをさらに含む、態様３９〜５２のいずれか一つに記載の使用。
５４．ｈＴＥＲＴ発現レベルが、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインｈＴＥＲＴ発現レベルと比較して５０％以上減少される、態様５３に記載の使用。
５５．テロメラーゼ阻害剤の投与量、投与回数、または対象に投与される治療過程を変更することをさらに含む、態様５３〜５４のいずれか一つに記載の使用。
５６．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、
トリプルネガティブステータスについて患者を検査することであって記トリプルネガティブステータスは、ＪＡＫ２、ＣＡＬＲ、およびＭＰＬ遺伝子の各々に変異がないことを含む、検査することと、
患者がトリプルネガティブステータスを有する場合に患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
５７．患者が、骨髄線維症を有する、態様５６に記載の方法。
５８．骨髄線維症が、原発性骨髄線維症である、態様５７に記載の方法。
５９．骨髄線維症が、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様５７に記載の方法。
６０．骨髄線維症が、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様５７に記載の方法。
６１．患者が、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、態様５６〜６０のいずれかに記載の方法。
６２．患者が、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法に失敗している；または
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している、態様５６〜６０のいずれか一つに記載の方法。
６３．患者がＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様５６〜６０のいずれか一つに記載の方法。
６４．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様５６〜６０のいずれか一つに記載の方法。
６５．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様５６〜６０のいずれか一つに記載の方法。
６６．テロメラーゼ阻害剤を患者に投与することをさらに含む、態様５６〜６５のいずれか一つに記載の方法。
６７．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、態様６６に記載の方法。
６８．イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムである、態様６７に記載の方法。
６９．患者からＤＮＡを含む試料を得ることをさらに含む、態様５６〜６８のいずれか一つに記載の方法。
７０．試料が、骨髄、末梢血、またはそれらの組み合わせを含む、態様６９に記載の方法。
７１．患者から試料を得るステップが、
骨髄試料、末梢血試料、またはそれらの組み合わせを得ることと、
骨髄試料、末梢血試料、またはそれらの組み合わせからＤＮＡを単離することと、を含む、態様７０に記載の方法。
７２．患者から試料を得るステップが、
患者から骨髄試料を得ることと、
骨髄試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様７０に記載の方法。
７３．患者から試料を得るステップが、
患者から末梢血試料を得ることと、
末梢血試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様７０に記載の方法。
７４．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、
患者がＨＭＲを有するかどうかを決定するために患者を検査することであって、ＨＭＲを有することは、ＡＳＸＬ１、ＥＺＨ２、ＳＲＳＦ２、およびＩＤＨ１／２からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子における変異の存在を含む、検査することと、
患者がＨＭＲを有する場合、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
７５．患者が、骨髄線維症を有する、態様７４に記載の方法。
７６．骨髄線維症が、原発性骨髄線維症である、態様７５に記載の方法。
７７．骨髄線維症が、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様７５に記載の方法。
７８．骨髄線維症が、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様７５に記載の方法。
７９．患者が、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、態様７４〜７８のいずれかに記載の方法。
８０．患者が、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法に失敗している、または
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している、態様７４〜７８のいずれか一つに記載の方法。
８１．患者がＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様７４〜７８のいずれか一つに記載の方法。
８２．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様７４〜７８のいずれか一つに記載の方法。
８３．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様７４〜７８のいずれか一つに記載の方法。
８４．テロメラーゼ阻害剤を患者に投与することをさらに含む、態様７４〜８３のいずれか一つに記載の方法。
８５．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、態様８４に記載の方法。
８６．イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムである、態様８５に記載の方法。
８７．患者からＤＮＡを含む試料を得ることをさらに含む、態様７４〜８６のいずれか一つに記載の方法。
８８．試料が、骨髄、末梢血、またはそれらの組み合わせを含む、態様８７に記載の方法。
８９．患者から試料を得るステップが、
骨髄試料、末梢血試料、またはそれらの組み合わせを得ることと、
骨髄試料、末梢血試料、またはそれらの組み合わせからＤＮＡを単離することと、を含む、態様８８に記載の方法。
９０．患者から試料を得るステップが、
患者から骨髄試料を得ることと、
骨髄試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様８８に記載の方法。
９１．患者から試料を得るステップが、
患者から末梢血試料を得ることと、
末梢血試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様８８に記載の方法。
９２．テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い患者を選択する方法であって、
平均相対的テロメア長について患者を検査することであって、患者由来の生体試料中に存在する標的細胞のテロメア核酸の相対的長さを分析することによって、検査することと、
患者が、１つ以上の既知の基準から決定される相対的テロメア長範囲の５０パーセンタイル以下であると決定される患者由来の生体試料中に存在する標的細胞の平均相対的テロメア長を有する場合に、患者を選択することと、を含み、
選択された患者は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が最も高い、方法。
９３．患者が、骨髄線維症を有する、態様９２に記載の方法。
９４．骨髄線維症が、原発性骨髄線維症である、態様９３に記載の方法。
９５．骨髄線維症が、真性赤血球増加症後に発症する骨髄線維症（ＰＶ後ＭＦ）である、態様９３に記載の方法。
９６．骨髄線維症が、本態性血小板血症後に発症する骨髄線維症（ＥＴ後ＭＦ）である、態様９３に記載の方法。
９７．患者が、以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがない、態様９２〜９６のいずれかに記載の方法。
９８．患者が、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、ＪＡＫ阻害剤療法に失敗している；または
以前にＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止している、態様９２〜９６のいずれか一つに記載の方法。
９９．患者がＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、患者がＪＡＫ阻害剤療法に対して抵抗性であった、態様９２〜９６のいずれか一つに記載の方法。
１００．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、再発している、態様９２〜９６のいずれか一つに記載の方法。
１０１．患者が、ＪＡＫ阻害剤療法を受けたことがあり、治療関連の毒性または不耐性のためにＪＡＫ阻害剤療法を中止した、態様９２〜９６のいずれか一つに記載の方法。
１０２．テロメラーゼ阻害剤を患者に投与することをさらに含む、態様９２〜１０１のいずれか一つに記載の方法。
１０３．テロメラーゼ阻害剤が、イメテルスタットである、態様１０２に記載の方法。
１０４．イメテルスタットが、イメテルスタットナトリウムである、態様１０３に記載の方法。
１０５．患者からＤＮＡを含む試料を得ることをさらに含む、態様９２〜１０４のいずれか一つに記載の方法。
１０６．試料が、骨髄、末梢血、またはそれらの組み合わせを含む、態様１０５に記載の方法。
１０７．患者から試料を得るステップが、
骨髄試料、末梢血試料、またはそれらの組み合わせを得ることと、
骨髄試料、末梢血試料または、それらの組み合わせからＤＮＡを単離することと、を含む、態様１０６に記載の方法。
１０８．患者から試料を得るステップが、
患者から骨髄試料を得ることと、
骨髄試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様１０６に記載の方法。
１０９．患者から試料を得るステップが、
患者から末梢血試料を得ることと、
末梢血試料から細胞を単離することと、
単離された細胞からＤＮＡを抽出することと、を含む、態様１０６に記載の方法。
１１０．骨髄線維症（ＭＦ）を有する対象における治療有効性を監視する方法であって、方法が、
テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られた生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、
生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、
生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの５０％以上の減少は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い対象を特定する、方法。
１１１．測定または評価されるｈＴＥＲＴ発現レベルが、ｈＴＥＲＴ  ＲＮＡ発現レベルである、態様１１０に記載の方法。
１１２．テロメラーゼ阻害剤による治療のために骨髄線維症（ＭＦ）を有する患者を特定する方法であって、方法が、
テロメラーゼ阻害剤の投与後に患者から得られた生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを測定することと、
生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルを、テロメラーゼ阻害剤の投与前のベースラインｈＴＥＲＴ発現レベルと比較することと、を含み、
生体試料中のｈＴＥＲＴ発現レベルの減少は、テロメラーゼ阻害剤による治療から利益を得る可能性が高い患者を特定する、方法。
１１３．ｈＴＥＲＴ発現レベルの減少が、５０％以上である、態様１１２に記載の方法。
【０１５９】
特定の実施形態は、理解を明確にする目的で例示および実施例としてある程度詳細に説明されてきたが、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、特定の変更および修正が行われ得ることは容易に明らかである。
【０１６０】
したがって、上記は、本発明の原理を例示するにすぎない。本明細書に明示的に記載または示されていないが、本発明の原理を具現化し、その精神および範囲内に含まれる様々な取り合わせが考案され得る。さらに、本明細書に列挙されるすべての実施例および条件付き言語は、主に、本発明の原理および本発明者らが当該技術をさらに進めるために寄与する概念を読者が理解するのを助けることを意図しており、そのような具体的に列挙される実施例および条件に限定されないと解釈されるべきである。さらに、本発明の原理、態様、および実施形態、ならびにその特定の例を列挙する本明細書の全ての記述は、その構造的および機能的等価物の両方を包含することを意図する。追加的に、そのような等価物には、構造にかかわらず、現在知られている等価物および将来開発される等価物、すなわち、同じ機能を実施するように開発された任意の要素の両方が含まれることが意図される。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され説明される例示的な実施形態に限定されることを意図するものではない。むしろ、本発明の範囲および精神は、添付の特許請求の範囲によって具体化される。
【図１】
2021531793.tif 000017
【図２】
2021531793.tif 000018
【図３】
2021531793.tif 000019
【図４】
2021531793.tif 000020
【図５】
2021531793.tif 000021
【図６】
2021531793.tif 000022
【図７】
2021531793.tif 000023
【配列表】
2021531793000001.app
【国際調査報告】
2021531793.tif 000024
2021531793.tif 000025
2021531793.tif 000026
2021531793.tif 000027
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