(57)【要約】  ユーザーの歯肉健康を促進するための、特定のｐＨ範囲を有するシトルリンと第一スズイオン源とを含む口腔ケア組成物が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）第一スズイオン源と、
ｂ）遊離又は塩形態のシトルリンと
を含む口腔ケア組成物であって、
前記口腔ケア組成物が、７．２以下のｐＨを有する、口腔ケア組成物。
【請求項２】
前記組成物が、５．０〜７．０のｐＨ、好ましくは５．５〜７．０未満のｐＨを有する、請求項１に記載の口腔ケア組成物。
【請求項３】
前記シトルリンが、前記組成物の０．０１重量％〜１５重量％、好ましくは０．１重量％〜１０重量％、より好ましくは０．５重量％〜８重量％の量で存在する、請求項１又は２に記載の口腔ケア組成物。
【請求項４】
前記第一スズイオン源が、前記組成物の０．０１重量％〜５重量％、好ましくは０．０５重量％〜４重量％、又はより好ましくは０．１重量％〜２重量％の量で存在し、塩化第一スズ、フッ化第一スズ、酢酸第一スズ、グルコン酸第一スズ、シュウ酸第一スズ、硫酸第一スズ、乳酸第一スズ、酒石酸第一スズ、ヨウ化第一スズ、塩化フッ化第一スズ、ヘキサフルオロジルコン酸第一スズ、クエン酸第一スズ、リンゴ酸第一スズ、グリシン酸第一スズ、炭酸第一スズ、リン酸第一スズ、ピロリン酸第一スズ、メタリン酸第一スズ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項５】
前記組成物の０．１重量％〜１．５重量％、好ましくは０．１５重量％〜１重量％、より好ましくは０．２重量％〜０．５５重量％の亜鉛イオンの亜鉛イオン源を更に含み、好ましくは、前記亜鉛イオン源が、クエン酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、リン酸亜鉛、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項６】
前記組成物の０．０５重量％〜４重量％、好ましくは０．１重量％〜２重量％のフッ化物イオンの量のフッ化物イオン源を更に含み、前記フッ化物イオン源が、好ましくは、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、フッ化インジウム、フッ化アミン、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化亜鉛、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項７】
前記組成物の０．０１重量％〜５重量％の増粘剤を更に含み、前記増粘剤が、増粘ポリマー、増粘シリカ、又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項８】
前記組成物の１重量％〜３５重量％、より好ましくは５重量％〜２５％重量％の研磨剤を更に含み、前記研磨剤が、カルシウム含有研磨剤、シリカ研磨剤、又はこれらの組み合わせから選択され、より好ましくは、前記研磨剤がシリカ研磨剤である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項９】
前記口腔ケア組成物の１重量％〜６０重量％、好ましくは３０重量％〜５５重量％の保湿剤を更に含み、好ましくは、前記保湿剤が、ポリオールであり、より好ましくは、前記ポリオールが、ソルビトール、グリセリン、又はこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物。
【請求項１０】
口腔ケア組成物であって、
（ｉ）前記組成物の０．１重量％〜２重量％の、塩化第一スズ、フッ化第一スズ、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される第一スズイオン源と、
（ｉｉ）前記組成物の１重量％〜３重量％の遊離形態又は塩形態のシトルリンと、
（ｉｉｉ）前記組成物の０．２重量％〜２重量％の、クエン酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、又はこれらの組み合わせから選択される亜鉛イオン源と、
（ｉｖ）前記組成物の０．５重量％〜１．５重量％の、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、モノフルオロリン酸ナトリウム、又はこれらの組み合わせから選択されるフッ化物イオン源と、
（ｖ）前記組成物の０．０１重量％〜５重量％の、増粘ポリマー、増粘シリカ、又はこれらの組み合わせから選択される増粘剤であって、好ましくは、前記増粘ポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、カラギーナン、キサンタンガム、又はこれらの組み合わせから選択される増粘剤と、
（ｖｉ）前記組成物の５重量％〜２５重量％のシリカ研磨剤と、
（ｖｉｉ）前記組成物の３０重量％〜５５重量％の、ソルビトール、グリセリン、又はこれらの組み合わせから選択される保湿剤と、
を含み、
前記口腔ケア組成物が歯磨き組成物であり、
前記口腔ケア組成物が５．０〜７．２、好ましくは５．５〜７．０のｐＨを有する、口腔ケア組成物。
【請求項１１】
対象における歯肉健康を促進するための第一スズ含有口腔ケア組成物を作製するためのシトルリンの使用。
【請求項１２】
歯肉健康の促進が、
（ｉ）口腔内の歯肉創傷治癒を改善することと、
（ｉｉ）口腔内の細菌活性の低減を改善することと
を含む、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記歯肉健康の促進が、
ａ）０時間〜７２時間、
ｂ）０時間〜４８時間、
ｃ）０時間〜２４時間、
からなる群から選択される期間内に生じ、０時間が、前記口腔ケア組成物を投与する時間である、請求項１１又は１２に記載の使用。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の口腔ケア組成物を対象の口腔に投与することを含む、対象における歯肉健康を促進する方法であって、好ましくは、前記投与が、少なくとも１日１回、より好ましくは少なくとも１日２回行われる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ユーザーの歯肉健康を促進するための、特定のｐＨ範囲にて第一スズイオン源とシトルリンとを含む、口腔ケア組成物に関する。具体的に言えば、このような口腔ケア組成物は、歯肉創傷治癒を改善し、ユーザーの口腔内の細菌活性の低減を改善するのに有用である。
【背景技術】
【０００２】
歯肉炎及び／又は歯周炎などの歯肉疾患は、口腔内で急性及び慢性の歯肉炎症を引き起こす。「歯肉炎」は、この疾患の軽症の状態である。歯肉炎の症状としては、歯肉の出血、並びに歯肉の発赤、腫脹、又は柔らかくなってしまっていることを挙げることができる。未処置のまま放置した場合、歯肉炎は、「歯周炎」に進行し得る。歯周炎により、歯肉と歯の間が空き、病原性細菌により感染され得る「歯周ポケット」と呼ばれる空間が形成される。細菌は、バイオフィルムとして歯根表面上に存在する。バイオフィルム内の細菌は、歯肉と、歯肉の内側に存在している支持歯槽骨とを攻撃し得る。このような攻撃は、歯を支持する軟組織及び骨に対して重度の損傷を与える可能性がある。歯肉疾患の後期段階（すなわち、「進行した歯周炎」）では、歯の動揺、そして最終的には歯の脱落という、より深刻な問題が生じ得る。
【０００３】
いくつかの市販の口腔ケア組成物は、主に、歯肉の発赤、腫脹、若しくは柔らかくなってしまっている状態、及び／又は歯肉茎部（stem gum）の出血、の緩和が挙げられる、初期の歯肉疾患（すなわち、歯肉炎）の症状のうちの１つ以上を緩和することを目的としている。典型的には、これらの組成物は、ユーザーに対し、「歯肉ケア」、「口腔ケア」、「口腔衛生」、「歯科ケア」、又は「歯科衛生」などの効果を謳っている。このような組成物の例には、「歯肉疾患の第１段階（「歯肉炎又は歯肉の出血」として定義される）を低減するよう働く」ものであると謳われている練り歯磨きの「Ｃｏｌｇａｔｅ（登録商標）Ｔｏｔａｌ」がある（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｌｇａｔｅｔｏｔａｌ．ｃｏｍ／ｔｏｔａｌ−ｂｅｎｅｆｉｔｓ／ｗｈｏｌｅ−ｍｏｕｔｈ−ｈｅａｌｔｈ／ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ−ｃｏｎｔｒｏｌを参照されたい）。市販の口腔ケア組成物の効果を本発明によるものと比較して区別するにあたって判別しやすくするために、本発明者らは、本明細書では、これらの市販の口腔ケア組成物に関する前述の効果を総じて「歯肉ケア」と称呼する。このように称呼するのは、これらの市販の口腔ケア組成物が、主に歯肉をケアし、初期段階の歯肉疾患（すなわち、歯肉炎）に関連する症状（例えば、歯肉の出血、及び／又は発赤、膨潤、若しくは圧痛歯肉）を緩和するために配合されているからである。
【０００４】
しかしながら、本明細書で使用するとき、より広い用語であり、前述の歯肉ケア効果の少なくとも一部を包含すること、並びに歯肉炎、歯周炎、又はこれらの両方を含む歯肉疾患に関係する細菌による有害な影響を軽減する更なる抗菌効果を提供することを意図する、総合的な「歯肉健康」効果を提供する必要がある。
【０００５】
上記の従来の手法には、いくつか存在している欠点のうちの少なくとも１つが存在する。第１に、これらの市販の口腔ケア組成物は、歯肉ケアを促進し得るが、歯肉健康も促進するのに十分な程度には至らない。実際に、これらの市販の口腔ケア組成物は、一般に、何らかの顕著な抗菌効果を歯肉ケア効果（例えば、抗出血及び／又は抗腫脹）と合わせて提供することができない。バイオフィルム内の細菌が調節されないと、歯周ポケットのサイズが増加し、歯周炎につながる恐れがあることから、抗菌効果が提供されないことは問題である。第２に、歯肉健康は、全身の健康に相関し得る。換言すれば、個人の歯肉健康は、その人物の全身の健康の指標であり得る。総合的な歯肉健康が低下するにつれて、例えば、心臓疾患及び脳卒中、糖尿病、腎臓疾患、早産、及び／又は骨粗鬆症などといった、生命を脅かす可能性のある状態のうちのいずれか１つ（又はそれ以上）を発症する危険性が増加し得ることが、複数の研究により示唆されている（米国特許第６，８４６，４７８号、Ｄｏｙｌｅ，Ｍ．Ｊ．、及び米国特許第８，２８３，１３５号、Ｄｏｙｌｅ，Ｍ．Ｊ．を参照されたい）。したがって、より良好な全身の健康を確保にするために、歯肉ケアだけでなく、総合的な歯肉の健康を改善することが望ましい。
【０００６】
フッ化第一スズなどの第一スズ塩は、抗菌効果、歯肉炎の低減、歯周病への進行の減少、象牙質知覚過敏の低減、並びに歯冠及び歯根のう歯及び酸蝕の低減といった歯肉健康上の利益を提供するために、口腔ケア組成物において使用されている。しかしながら、従来の第一スズ含有組成物には問題点がある。有効なフッ化第一スズ製剤の使用中に通常生じる副次的な作用としては、第１に、当該製剤のもつ許容できないほどの渋みがある。第２に、スズ（ＩＩ）イオンは、スズ（ＩＶ）に酸化しやすく、かつ水酸化第一スズとして水溶液から沈殿しやすいので、第一スズイオンの安定的な配合にも課題がある。したがって、費用効率が高くかつ効果的な練り歯磨き及びその他の口腔ケア製剤を提供するために、配合及び加工の工程を単純化することが望ましい。
【０００７】
アルギニンは、口腔ケアにおける使用が報告されており、窩洞の形成及び歯の知覚過敏に対抗するのに顕著な効果を有すると考えられている。しかしながら、市販のアルギニン含有口腔ケア組成物は、酸性製剤と比較して微生物汚染の可能性が増大する塩基性ｐＨを有し得る。更に、塩基性ｐＨを有するアルギニン含有口腔ケア組成物の別の問題点として、特に第一スズ源と組み合わされたときに、組成物を変色させて、黄色〜褐色にするというものがある。したがって、抗菌効果を損なうことなく、長期間にわたって（over aging）改善された安定性を有する口腔ケア組成物を提供することが、継続して必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第６，８４６，４７８号
【特許文献２】米国特許第８，２８３，１３５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、ユーザーに歯肉健康上の利益を提供するか、又は市販の組成物よりも優れた関連する歯肉健康上の利益（例えば、歯肉創傷治癒及び抗菌効果）を少なくとも提供する口腔ケア組成物を提供することが継続して必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、口腔ケア組成物における特に比較的低ｐＨ（例えば、ｐＨ７．２未満）でのシトルリンと第一スズイオン源との組み合わせが、少なくとも歯肉創傷治癒効果及び抗菌効果を含む歯肉健康上の利益を促進することに加えて、長期間にわたって改善された安定性を有するという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づいて、この必要性に対処することを試みる。具体的に言えば、口腔ケア組成物は、歯肉創傷治癒のためのシトルリンと、口腔内の細菌活性の望ましくない効果に対抗するための抗菌剤としての第一スズイオン源と、を含む。
【００１１】
本発明の１つの利点は、「バイオフィルムへのより深い浸透及び／又は細菌の死滅」である。この目的に関し、更に驚くべきことに、第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透深さ及び／又は浸透速度は、シトルリンと組み合わせて使用した場合に増加させることができることが見出されている。要するに、口腔ケア組成物における、特定のｐＨでの、シトルリンと第一スズイオン源との相乗効果のある組み合わせとは、歯肉健康上の利益において改善が達成されるようなものであり得る。更に、本発明の口腔ケア組成物の使用は、改善された歯肉健康上の利益をユーザーに提供することができる。
【００１２】
本発明の別の利点は、歯肉炎、歯周炎又はこれらの両方に関連する症状全体に関連する歯肉健康を促進するための、口腔ケア組成物を提供することである。本発明の口腔ケア組成物が、改善された歯肉健康上の利益を有することは、なおも更なる利点である。本発明のなおも更なる利点は、バイオフィルム内への抗菌剤（複数可）の浸透深さが改善された口腔ケア組成物を提供するというものである。本発明のなおも更なる利点は、バイオフィルム内への抗菌剤（複数可）の浸透速度が改善された口腔ケア組成物を提供することである。本発明のなおも更なる利点は、高費用効率と、歯肉健康を促進するのに有効な口腔ケア組成物とを提供することである。なおも更なる利点は、４０℃で３ヶ月保管した後でさえも、口腔ケア組成物が最終製品の安定した品質（例えば、外観が一定でありかつ変色しない、及び歯肉創傷治癒能など）を有することである。なおも更なる利点は、口腔ケア組成物が歯磨剤であり、好ましくは心地よい味及び口当たりの体験を提供するというものである。なおも更なる利点は、口腔ケア組成物が、広範な製造条件、取り扱い条件、及び保管条件にわたって物理的安定性及び化学的安定性を有するというものである。またなおも更なる利点は、本発明の口腔ケア組成物が、抗菌剤の使用を最小限に抑えるというものである。またなおも更なる利点は、本発明の口腔用組成物が、上述の不安定性及び／又は変色の問題を低減及び／又は排除するためのシトルリンの量を、最小限に抑えるというものである。
【００１３】
一態様では、本発明は、第一スズイオン源とシトルリンとを含む口腔ケア組成物であって、当該組成物が、７．２以下のｐＨを有する、口腔ケア組成物を目的とする。好ましくは、口腔ケア組成物は、ａ）当該組成物の０．０１重量％〜５重量％、好ましくは０．０５重量％〜４重量％の第一スズイオン源と、ｂ）当該組成物の０．０１重量％〜１０重量％、好ましくは０．０５重量％〜５重量％の遊離形態又は塩形態のシトルリンと、を含む。好ましくは、口腔ケア組成物は、５．０〜７．０、より好ましくは５．５以上７．０未満のｐＨを有する。
【００１４】
本発明の別の態様では、上記口腔ケア組成物は、ｃ）組成物の０．０５重量％〜１．５重量％、好ましくは０．１重量％〜１重量％、より好ましくは０．２重量％〜０．５５重量％の亜鉛イオン源を更に含む。好ましくは、亜鉛イオン源は、クエン酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、リン酸亜鉛、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１５】
本発明の更に別の態様では、本発明の口腔ケア組成物を対象の口腔に投与することを含む、対象における歯肉健康を促進するための方法が提供される。
【００１６】
本発明のまたなおも更に別の態様では、対象における歯肉健康を促進するための口腔ケア組成物を作製するためのシトルリンの使用が提供される。
【００１７】
本発明のこれらの特徴及び他の特徴は、以下の詳細な説明を添付の特許請求の範囲と併せて検討することで当業者には明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
本明細書は、本発明を特定して指摘し明確に請求する特許請求の範囲をもって結論とするが、本発明は、添付図面についての以下の説明からより良く理解されると考えられる。
【図１】ヒドロキシアパタイト（hydroxyapatite、「ＨＡ」）ディスクが取り付けられた口腔スプリントの斜視図である。
【図２】内部に溝を有するＨＡディスクの斜視図である。
【図３】内部にバイオフィルムを有する溝の断面図の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
本明細書で使用するとき、「ａ」及び「ａｎ」などの冠詞は、特許請求の範囲で使用する場合、請求又は記載されているもののうちの１つ以上を意味するものと理解される。
【００２０】
「緩和する（alleviate）」及び「緩和する（alleviating）」という用語は、互換的に使用され、歯肉疾患の少なくとも１つの症状を予防、遅延、治療、及び／又は最小限に抑え、ユーザーに好ましい変化（すなわち、利益）をもたらすことを意味する。
【００２１】
本明細書で使用するとき、「バイオフィルム」という用語は、マトリックスに封入された細菌集団の、互いに対する及び／又は口腔内の表面若しくは界面に対する付着を意味する。
【００２２】
本明細書で使用するとき、用語「含む（comprising）」とは、特に言及したもの以外の工程及び成分を付加することができることを意味する。この用語は、「〜からなる（consisting of）」及び「〜から本質的になる（consisting essentially of）」という用語を包含する。本発明の組成物は、本明細書に記載される本発明の必須要素及び制限事項、並びに本明細書に記載されるあらゆる追加若しくは任意の成分、構成要素、工程、又は制限事項を含み、これらからなり、あるいは、これらから本質的になることができる。
【００２３】
本明細書で使用するとき、「歯磨剤」という用語は、特に指定されない限り、口腔表面を清掃するために使用されるペースト、ゲル、粉剤、錠剤、又は液体製剤を意味する。
【００２４】
本明細書で使用するとき、「歯肉ケア」という用語は、主に、早期段階の歯肉疾患（すなわち、歯肉炎）に関連する１つ以上の症状を緩和することを対象とする、口腔ケア組成物が備え持つ又は促進された利益を指す。かかる症状には、例えば、歯肉の出血、及び歯肉の発赤、腫脹又は柔らかくなってしまっている状態を含み得る。
【００２５】
本明細書で使用するとき、「歯肉健康」という用語は、歯肉創傷治癒を少なくとも改善することを含む「歯肉ケア」上の利益を提供する、並びに歯肉炎、歯周炎又はこれらの両方を含む歯肉疾患に関し細菌の有害な影響を軽減するように細菌活性の低減の更なる改善を提供する、口腔ケア組成物の固有の又は促進された利益を指す。
【００２６】
本明細書で使用するとき、「細菌活性の低減を改善する」という用語は、実施例Ｂに記載のアッセイによって評価されるとおり、口腔内の細菌活性を低減することを意味する。
【００２７】
本明細書で使用するとき、「歯肉創傷治癒を改善する」という用語は、実施例Ｃに記載の創傷治癒アッセイによって評価されるとおり、口腔内の歯肉の出血を低減することを意味する。
【００２８】
本明細書で使用するとき、「口腔ケア組成物（「oral care composition」又は「oral care compositions」）という用語は、通常の使用過程で、口腔作用の目的のために、一部又は全ての歯科表面及び／又は口腔組織に接触するのに十分な時間にわたって、口腔内で保持される製品を意味する。一例では、組成物は、口腔内で使用されたときに歯肉ケア上の利益を提供する。本発明の口腔用組成物は、練り歯磨き、歯磨剤、歯科用ゲル、歯磨き粉、錠剤、すすぎ剤、マウスウォッシュ、歯肉下用ゲル、発泡体、ムース、チューインガム、リップスティック、スポンジ、フロス、予防ペースト、ワセリンゲル、義歯用接着剤、又は義歯用製品を含む各種形態であってもよい。一例では、口腔用組成物は、ペースト又はゲルの形態である。別の例では、口腔用組成物は、歯磨きの形態である。また、口腔用組成物は、口腔表面に直接塗布するか若しくは装着するために、又はフロス内に組み込むために、ストリップ片若しくはフィルム上に組み込まれてもよい。
【００２９】
本発明の本明細書で使用される用語「アミノ酸」は、遊離形態及び塩形態の両方を含むアミノ酸を指す。
【００３０】
本明細書で使用するとき、「部分的に水溶性」という用語は、化合物が２５℃で１ｇ／１０００ｍＬ以上の溶解度を有することを意味する。
【００３１】
本明細書で使用するとき、「有効量」という用語は、当業者の妥当な判断の範囲内で、化合物又は組成物の好ましい利益、つまり口腔の健康の利益、を誘導するのに十分な量であり、かつ／又は重篤な副作用を回避するのに十分低い量である量、すなわち妥当な利益対リスク比を提供する量を意味する。一例では、「有効量」は、組成物の少なくとも０．０１重量％の、あるいは少なくとも０．１重量％の材料を意味する。
【００３２】
本明細書で使用するとき、単語「好ましい」、「好ましくは」、及びその変形は、一定の条件下において一定の利益をもたらす本発明の実施形態に関する。しかしながら、同じ、又は他の状況下においては、他の実施形態が好ましい場合もある。更に、１つ以上の好ましい実施形態の詳細説明は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものでもない。
【００３３】
本明細書で使用するとき、「促進する」という用語は、口腔内で本発明の口腔ケア組成物を使用することに関連する歯肉健康上の利益を促進及び／又は増強することを意味する。
【００３４】
本明細書で使用するとき、「実質的に含まない」という用語は、意図的な量のその材料が組成物に添加されないか、又は材料の量が組成物の０．０５％、０．０１％、若しくは０．００１％未満であることを指す。本明細書で使用するとき、「本質的に含まない」という用語は、記載の材料が組成物に意図的に添加されたものでないこと、又は好ましくは分析によって検出可能な濃度では存在しないことを意味する。すなわち、指示材料が、意図的に添加されたその他の材料のうちのいずれかの不純物としてのみ存在する、組成物を包含することを意味する。本明細書で使用するとき、「含まない」という用語は、合理的に検出可能な量の材料が組成物中に存在しないことを指す。
【００３５】
本明細書で使用するとき、「相乗的な歯肉健康上の利益」という用語は、添加剤によるものを上回る、少なくとも歯肉創傷治癒の改善と口腔内の細菌活性の低減の改善とを含む、任意の２つの歯肉健康上の利益における、分析により測定可能な増加を意味する。
【００３６】
本明細書で使用するとき、「歯」という用語は、天然歯並びに人工歯、又は歯科補綴物を意味する。
【００３７】
本明細書で使用するとき、「総含水量」という用語は、遊離水、及び口腔ケア組成物中の他の成分によって結合される水、の両方を意味する。
【００３８】
全ての百分率、部及び比率は、別途指定されない限り、本発明の組成物の総重量に基づく。列挙されている成分に関するとき、こうした重量は全て、活性レベルに基づき、このため、特に指定されない限り、市販の材料に含まれている可能性のある溶媒又は副生成物を含まない。
【００３９】
特に指定しない限り、本明細書で言及される測定は全て、２５℃（すなわち、室温）で行われる。
【００４０】
口腔ケア組成物
驚くべきことに、口腔ケア組成物における、特にｐＨ７．２以下での第一スズイオン（すなわち、抗菌剤）とシトルリンとの組み合わせが、ユーザーに対する歯肉健康上の利益を促進するのに特に有用であることが発見された。具体的に言えば、シトルリンと組み合わせたときに、第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透が著しく改善されるという驚くべき発見があった。理論に束縛されるものではないが、シトルリンは、カルボン酸基及びアミノ基の両方を含有する。第一スズイオンは、アミノ酸上のこれらの分子の部分に強く結合して、第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透に好ましい影響を及ぼし得ると考えられる。
【００４１】
驚くべきことに、シトルリンと共に配合されたとき、第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透深さ及び／若しくは浸透速度が増加し得ること、又は著しく増加し得ることも見出された。要するに、口腔ケア組成物においてシトルリンを第一スズイオン源と組み合わせて存在させると、歯肉上のバイオフィルム内の細菌による有害な作用の媒介に対する、当該組成物の有効性を支援する。
【００４２】
一態様では、本発明は、ａ）組成物の０．０１重量％〜５重量％、好ましくは０．０５重量％〜４重量％、より好ましくは０．１重量％〜２重量％の第一スズイオン源と、ｂ）組成物の０．０１重量％〜１０重量％、好ましくは０．０５重量％〜８重量％、より好ましくは０．１重量％〜５重量％のシトルリンと、を含み、７．２以下のｐＨを有する口腔ケア組成物を目的とする。
【００４３】
ｐＨ
本発明の口腔ケア組成物は、７．２以下、好ましくは５．０〜７．２のｐＨを有する。好ましくは、ｐＨは７．２未満であり、より好ましくは、ｐＨは７．０以下であり、更により好ましくは、ｐＨはｐＨ５．０〜７．０であり、あるいはｐＨはｐＨ５．５〜７．０未満、例えば、ｐＨ６．９、又はｐＨ６．８、又はｐＨ６．７、又はｐＨ６．６、又はｐＨ６．５、又はｐＨ６．４、又はｐＨ６．３、又はｐＨ６．２、又はｐＨ６．２、又はｐＨ６．１、又はｐＨ６．０、又はｐＨ５．９、又はｐＨ５．８、又はｐＨ５．７、又はｐＨ５．６、又はｐＨ５．５である。本発明の組成物の比較的低いｐＨは、変色を緩和し、任意選択で第一スズの沈殿を回避するためのものである。理論に束縛されるものではないが、ｐＨ７．３超では、第一スズイオンが、変色の可能性を増加させ得る。したがって、口腔ケア組成物には、変色を緩和するために７．２未満のｐＨをもたせることが望ましい。
【００４４】
シトルリン
本発明で使用されるシトルリンは、組成物の０．０１重量％〜１５重量％、好ましくは０．０５重量％〜１０重量％、例えば０．５重量％、又は１重量％、又は１．５重量％、又は２重量％、又は３重量％、又は４重量％、又は５重量％、又は６重量％、又は７重量％、又は８重量％の量で存在していてよい。好ましくは、シトルリンは、組成物の０．１重量％〜８重量％、又は０．５重量％〜５重量％、又は０．２〜３重量％の量で存在する。本明細書で使用されるシトルリンは、遊離形態又は塩形態であってよい。塩形態である場合、好適な塩としては、提供される量及び濃度において生理学的に許容可能であると考えられ、薬剤として許容される塩であることが当該技術分野において既知である塩が挙げられる。例えば、Ｌ−シトルリンリンゴ酸塩、Ｌ−シトルリンＤＬ−リンゴ酸塩、Ｌ−シトルリンエチルエステル一塩酸塩が、シトルリンの好適な塩形態であり得る。
【００４５】
驚くべきことに、口腔ケア組成物を比較的低いｐＨ範囲（７．２以下）で維持すると、より高いｐＨ（７．３以上）と比較して、安定した品質（例えば、外観が一定でありかつ変色しない）を最終口腔ケア製品に提供することが発見された。理論に束縛されるものではないが、ｐＨは、経時的に口腔ケア組成物の望ましくない褐変／変色を引き起こすメイラード反応に顕著に影響する。具体的には、褐変の速度及び程度は、ｐＨの増加と共に増加する。したがって、ｐＨを低くすることにより、褐変反応が緩和され、ユーザーが好む良好な外観が得られる。
【００４６】
更に、アミノ酸の導入は、歯肉創傷治癒上の利益をもたらし、したがって、他の抗出血剤、例えば、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、及びｐ−アミノメチル安息香酸の使用を最小限に抑えることができる。いくつかの好ましい例では、本発明の口腔ケア組成物は、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、及びｐ−アミノメチル安息香酸を実質的に含まず、好ましくは本質的に含まなず、より好ましくは含まない。
【００４７】
第一スズイオン源
本発明は、好ましい例において、抗菌効果を提供するために、組成物の０．０１重量％〜５重量％、好ましくは０．０５重量％〜４重量％、又はより好ましくは０．１重量％〜２重量％の量で存在する第一スズイオン源を含む、上述の口腔ケア組成物に関する。本明細書で使用されるスズイオン源は、任意の安全かつ有効な第一スズ塩を含み得る。第一スズイオン源の好適な例は、塩化第一スズ、フッ化第一スズ、酢酸第一スズ、グルコン酸第一スズ、シュウ酸第一スズ、硫酸第一スズ、乳酸第一スズ、酒石酸第一スズ、ヨウ化第一スズ、塩化フッ化第一スズ、ヘキサフルオロジルコン酸第一スズ、クエン酸第一スズ、リンゴ酸第一スズ、グリシン酸第一スズ、炭酸第一スズ、リン酸第一スズ、ピロリン酸第一スズ、メタリン酸第一スズ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましくは、第一スズイオン源は、フッ化第一スズ、塩化第一スズ及びこれらの組み合わせから選択される。好ましい一例では、第一スズイオン源は、塩化第一スズを含む。別の好ましい例では、第一スズイオン源は、フッ化第一スズを含む。
【００４８】
亜鉛イオン源
任意選択で、しかし好ましくは、口腔ケア組成物は、組成物の０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．２重量％〜２重量％の亜鉛イオン源を更に含んでもよい。好ましくは、亜鉛イオン源は、クエン酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、リン酸亜鉛、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。より好ましくは、亜鉛イオン源は、クエン酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、及びこれらの組み合わせから選択される。
【００４９】
酸化亜鉛又は炭酸亜鉛などの不溶性又は微溶性の亜鉛化合物をこの亜鉛源として使用することができる。ただし、好ましい亜鉛源は、塩化亜鉛又は硫酸亜鉛などの可溶性亜鉛源である。より好ましい亜鉛源は、クエン酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛及びグリシン酸亜鉛など、亜鉛がすでに塩又はその他の錯体の形態で好適なキレート化剤と結合しているものである。特に好ましい亜鉛イオン源は、クエン酸亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛及びこれらの混合物である。好ましくは、口腔ケア組成物は、組成物の０．１重量％〜１．５重量％、好ましくは０．１５重量％〜１重量％、又はより好ましくは０．２重量％〜０．５５重量％の可溶性亜鉛イオン源を含んでいてよい。
【００５０】
不溶性及び可溶性の亜鉛化合物が両方とも亜鉛イオン源中に存在する場合、好ましくは、可溶性亜鉛化合物は、全亜鉛イオン源の少なくとも５０重量％で存在する。
【００５１】
本発明の口腔ケア組成物は、任意選択で、好ましくは組成物の０．０３５重量％以上、０．０５重量％〜２重量％、０．１重量％〜１重量％の量で存在する他の抗菌剤も含んでいてよい。これらの他の抗菌剤の例としては、例えば、ハロゲン化ジフェニルエーテル、フェノール及びその同族体を含むフェノール化合物、モノアルキル及びポリアルキル並びに芳香族ハロフェノール、レゾルシノール及びその誘導体、キシリトール、ビスフェノール化合物及びハロゲン化サルチルアニリド、安息香酸エステル並びにハロゲン化カルバニリドなどの非カチオン性抗菌剤を挙げることができる。他の有用な抗菌剤は、エンドグリコシダーゼ、パパイン、デキストラナーゼ、ミュータナーゼ、及びこれらの組み合わせを含む酵素である。別の例では、他の抗菌剤としては、トリクロサン（５−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール）を挙げることができる。
【００５２】
増粘剤
本発明の口腔ケア組成物は、増粘剤を含んでいてよい。好ましくは、口腔ケア組成物は、組成物の０．１重量％〜５重量％、好ましくは０．８重量％〜３．５重量％、より好ましくは１重量％〜３重量％、更により好ましくは１．３重量％〜２．６重量％の増粘剤を含む。
【００５３】
好ましくは、増粘剤は、増粘ポリマー、増粘シリカ、又はこれらの組み合わせを含む。更により好ましくは、増粘剤が増粘ポリマーを含む場合、増粘ポリマーは、荷電カルボキシメチルセルロース、非イオン性セルロース誘導体、直鎖硫酸化多糖類、天然ガム、少なくともポリカルボキシル化エチレン骨格を含むポリマー、及びこれらの組み合わせから選択される。
【００５４】
一例では、増粘シリカは、超微粒子を得るために酸で不安定化することによって、ケイ酸ナトリウム溶液から得られる。市販されている一例は、Ｈｕｂｅｒ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ＭａｔｅｒｉａｌｓのＺＥＯＤＥＮＴ（登録商標）ブランドのシリカ（例えば、ＺＥＯＤＥＮＴ（登録商標）１０３、１２４、１１３、１１５、１６３、１６５、１６７）である。
【００５５】
好ましくは、直鎖硫酸化多糖類は、カラギーナン（カラギーニンとしても知られている）である。カラギーナンの例としては、κ−カラギーナン、ι−カラギーナン、λ−カラギーナン、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００５６】
一例では、ＣＭＣは、アルカリ及びモノクロロ酢酸又はそのナトリウム塩で処理することによって、セルロースから調製される。異なる種は、商業上、粘度によって特徴付けられる。市販されている一例は、Ａｓｈｌａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ製のＡｑｕａｌｏｎ（商標）ブランドのＣＭＣ（例えば、Ａｑｕａｌｏｎ（商標）７Ｈ３ＳＦ；Ａｑｕａｌｏｎ（商標）９Ｍ３ＳＦ  Ａｑｕａｌｏｎ（商標）ＴＭ９Ａ；Ａｑｕａｌｏｎ（商標）ＴＭ１２Ａ）である。
【００５７】
好ましくは、天然ガムは、カラヤガム、アラビアガム（アカシアガムとしても知られている）、トラガカントガム、キサンタンガム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。より好ましくは、天然ガムは、キサンタンガムである。キサンタンガムは、細菌キサントモナス・カメストリス（Xanthomonas camestris）によって分泌される多糖類である。一般に、キサンタンガムは、それぞれ２：２：１のモル比でグルコース、マンノース、及びグルクロン酸を含む、五糖繰り返し単位から構成される。（モノマーの）化学式は、Ｃ３５Ｈ４９Ｏ２９である。一例では、キサンタンガムは、ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ  Ｉｎｃ（Ｏｋｍｕｌｇｅ，ＵＳ）製である。
【００５８】
好ましくは、非イオン性セルロース又はその誘導体は、５０，０００〜１，３００，０００ダルトンの平均分子量範囲、好ましくは３００〜４，８００の平均重合度を有する。より好ましくは、非イオン性セルロース又はその誘導体は、ヒドロキシエチルセルロース（hydroxyethyl cellulose、「ＨＥＣ」）である。
【００５９】
好ましくは、少なくともポリカルボキシル化エチレン骨格を含むポリマーは、３０，０００〜１，０００，０００ダルトンの分子量を有する無水マレイン酸とメチルビニルエーテルとのコポリマー、アクリル酸のホモポリマー、及びマレイン酸とアクリル酸又はメタクリルとのコポリマーからなる群から選択される。
【００６０】
無水マレイン酸とメチルビニルエーテルとのコポリマーは、Ｇａｎｔｒｅｚ  ＡＮ１３９（Ｍ．Ｗ．５００，０００ダルトン）、Ｇａｎｔｒｅｚ  ＡＮ１１９（Ｍ．Ｗ．２５０，０００ダルトン）又はＳ−９７医薬品グレード（Ｍ．Ｗ．７０，０００ダルトン）のうちの少なくとも１つであり、アクリル酸のホモポリマー、及びマレイン酸とアクリル酸又はメタクリル酸とのコポリマーが、Ａｃｕｓｏｌ  ４４５、Ａｃｕｓｏｌ  ４４５Ｎ、Ａｃｃｕｓｏｌ  ５３１、Ａｃｕｓｏｌ  ４６３、Ａｃｕｓｏｌ  ４４８、Ａｃｕｓｏｌ  ４６０、Ａｃｕｓｏｌ  ４６５、Ａｃｕｓｏｌ  ４９０、Ｓｏｋａｌａｎ  ＣＰ５、Ｓｏｋａｌａｎ  ＣＰ７、Ｓｏｋａｌａｎ  ＣＰ４５、又はＳｏｋａｌａｎ  ＣＰ１２Ｓのうちの少なくとも１つである。並びに（ｖ）これらの組み合わせ。
【００６１】
実施例では、ＧＡＮＴＲＥＺ（商標）シリーズのポリマーは、３０，０００ダルトン〜１，０００，０００ダルトンの分子量（Ｍ．Ｗ．）を有する無水マレイン酸とメチルビニルエーテルとのコポリマーである。これらのコポリマーは、例えば、ＧＡＮＴＲＥＺ（商標）ＡＮ１３９（Ｍ．Ｗ．５００，０００ダルトン）、ＡＮ１１９（Ｍ．Ｗ．２５０，０００ダルトン）及びＳ−９７医薬品グレード（Ｍ．Ｗ．７０，０００ダルトン）として、Ａｓｈｌａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｋｅｎｔｕｃｋｙ，ＵＳＡ）から入手可能である。
【００６２】
別の実施例では、ＡＣＵＳＯＬ（商標）及びＳＯＫＡＬＡＮシリーズのポリマーには、アクリル酸のホモポリマー、及びマレイン酸とアクリル酸又はメタクリル酸とのコポリマーが含まれる。その例は、約２，０００〜約１，０００，０００の分子量（Ｍ．Ｗ．）を有するマレイン酸とアクリル酸との０：１０００〜１０００：０コポリマーである。これらのコポリマーは、Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｃｈｉｇａｎ，ＵＳＡ）からＡＣＵＳＯＬ（商標）４４５及び４４５Ｎ、ＡＣＵＳＯＬ（商標）５３１、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４６３、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４４８、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４６０、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４６５、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４９７、ＡＣＵＳＯＬ（商標）４９０として、またＢＡＳＦ（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）からＳｏｋａｌａｎ（登録商標）ＣＰ５、Ｓｏｋａｌａｎ（登録商標）ＣＰ７、Ｓｏｋａｌａｎ（登録商標）ＣＰ４５、及びＳｏｋａｌａｎ（登録商標）ＣＰ１２  Ｓとして市販されている。
【００６３】
別の例では、架橋ポリアクリル酸（polyacrylic acid、ＰＡＡ）ポリマーは、アクリル酸の合成高分子量ポリマーの総称である。これらは、アリルエーテルペンタエリスリトール、スクロースのアリルエーテル、又はプロピレンのアリルエーテルで架橋された、アクリル酸のホモポリマーであってもよい。また、中性ｐＨの水溶液では、ＰＡＡはアニオン性ポリマーであり、すなわちＰＡＡの側鎖の多くがそのプロトンを失い、負電荷を獲得する。Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、Ｐｅｍｕｌｅｎ（登録商標）及びＮｏｖｅｏｎ（登録商標）などのＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）型ポリマーは、ポリアルケニルエーテル又はジビニルグリコールで架橋されたアクリル酸のポリマーである。Ｃａｒｂｏｍｅｒのコマーシャルコード、例えば９４０（商標）は、ポリマーの分子量及び特定の成分を示す。
【００６４】
抗齲蝕剤
任意選択で、しかし、好ましくは、口腔ケア組成物は、有効量の抗齲蝕剤を含んでいてもよい。一態様では、抗齲蝕剤は、フッ化物イオン源である。フッ化物イオンの好適な例は、フッ化第一スズ、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、モノフルオロリン酸（monofluorophosphate、「ＭＦＰ」）ナトリウム、フッ化インジウム、フッ化アミン、フッ化亜鉛、及びこれらの混合物を含む供給源から選択され得る。好ましくは、フッ化物源は、フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、ＭＦＰ、及びこれらの組み合わせから選択される。フッ化物イオン源は、抗齲蝕効果を提供するために、組成物の０．００２５重量％〜１０重量％、又は０．０５重量％〜４重量％、又は０．１重量％〜２重量％、又は好ましくは０．２重量％〜１．５重量％の量で存在していてよい。特定の例では、フッ化物イオン源は、２５ｐｐｍ〜２５，０００ｐｐｍ、一般的には少なくとも５００ｐｐｍ〜１６００ｐｐｍ、例えば１１００ｐｐｍ又は１４５０ｐｐｍの濃度のフッ化物イオン濃度を組成物中に提供するのに十分な量で存在し得る。フッ化物の適切な濃度は、具体的な用途によって異なる。一般的なユーザーの練り歯磨きは、典型的には、約１０００〜１５００ｐｐｍを有し、小児用練り歯磨きは幾分少ない。
【００６５】
ｐＨ測定
ｐＨは、典型的には、１グラムの口腔ケア組成物（例えば、練り歯磨き）を３グラムの脱イオン水に混合し、次いで、周囲条件下で較正した、業界で受け入れられているｐＨプローブでｐＨを測定するという段取りで、１：３比のペースト：水を使用して測定した。ｐＨは、自動温度補償（Automatic Temperature Compensating、ＡＴＣ）プローブを用いてｐＨメータによって測定する。明確化のために、分析方法は、本発明を請求する目的で、新たに調製されたときの口腔ケア組成物の試験について説明しているが、ｐＨは、製品の妥当なライフサイクル（製品が店舗から購入され、ユーザーの自宅に運ばれる時間を含むが、これらに限定されない）中の任意の時点で測定してよい。
【００６６】
各使用後には、水で電極から試料溶液を洗い流す必要がある。キムワイプ又は同等物などのティッシュで拭き取り、余分な水を除去する。電極を使用していないときには、ｐＨ７の緩衝液又は電極保管液に電極の先端を浸漬させた状態を維持する。機器の詳細は以下のとおりである。
ｐＨメータ：ｐＨ０．０１又は０．００１単位で読み取りが可能なメータ。
電極：Ｏｒｉｏｎ  Ｒｏｓｓ  Ｓｕｒｅ−Ｆｌｏｗコンビネーション：ガラス体−ＶＷＲ＃３４１０４−８３４／Ｏｒｉｏｎ＃８１７２ＢＮ又はＶＷＲ＃１００１０−７７２／Ｏｒｉｏｎ＃８１７２ＢＮＷＰ。
エポキシ体−ＶＷＲ＃３４１０４−８３０／Ｏｒｉｏｎ＃８１６５ＢＮ又はＶＷＲ＃１００１０−７７０／Ｏｒｉｏｎ＃８１６５ＢＮＷＰ。
セミミクロエポキシ体−ＶＷＲ＃３４１０４−８３７／Ｏｒｉｏｎ＃８１７５ＢＮ又はＶＷＲ＃１００１０−７７４／Ｏｒｉｏｎ＃３１７５ＢＮＷＰ。
Ｏｒｉｏｎ  ＰｅｒｐＨｅｃｔコンビネーション：ＶＷＲ＃３４１０４−８４３／Ｏｒｉｏｎ＃８２０３ＢＮセミミクロガラス体。
ＡＴＣプローブ：Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ．＃１３−６２０−１６。
【００６７】
ｐＨ調整剤
本明細書における口腔ケア組成物は、任意選択で有効量のｐＨ調整剤を含んでいてもよく、あるいはｐＨ調整剤はｐＨ緩衝剤である。本明細書で使用するとき、ｐＨ調整剤は、口腔ケア組成物のｐＨを上記のｐＨ範囲に調整するために使用することができる剤を指す。ｐＨ調整剤としては、塩酸、アルカリ金属水酸化物、水酸化アンモニウム、有機アンモニウム化合物、炭酸塩、セスキ炭酸塩、ホウ酸塩、ケイ酸塩、リン酸塩、イミダゾール、及びこれらの混合物が挙げられる。
【００６８】
特定のｐＨ調整剤としては、リン酸一ナトリウム（リン酸ナトリウム一塩基性）、リン酸三ナトリウム（リン酸ナトリウム三塩基性十二水和物又はＴＳＰ）、安息香酸ナトリウム、安息香酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アルカリ金属炭酸塩、炭酸ナトリウム、イミダゾール、ピロリン酸塩、直鎖又は環状のポリリン酸塩、グルコン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸が挙げられる。
【００６９】
一例では、組成物の０．０１重量％〜３重量％、好ましくは０．１重量％〜１重量％のＴＳＰ、及び組成物の０．００１重量％〜２重量％、好ましくは０．０１重量％〜０．３重量％のリン酸一ナトリウムが使用される。理論に束縛されることを望むものではないが、ＴＳＰ及びリン酸一ナトリウムは、カルシウムイオンキレート活性を有してもよく、このため、（モノフルロリン酸塩を含有するこれらの製剤中に）若干のモノフルオロリン酸塩の安定化をもたらす。
【００７０】
水
水は、その多くの利点により、口腔ケア組成物中の担体材料として一般的に使用される。例えば、水は加工助剤として有用であり、口腔に対して害がなく、練り歯磨きの迅速な発泡を助ける。水は、そのものが成分として添加されてもよく、又は例えば、ソルビトール及びラウリル硫酸ナトリウムなどの他の一般的な原料中に担体として存在してもよい。
【００７１】
幾つかの例では、本明細書における口腔ケア組成物は、組成物の１０重量％〜７０重量％、又は好ましくは１５重量％〜３０重量％の総含水量を含んでいてよい。本明細書で使用するとき、「総含水量」という用語は、別個に添加された、又は、他の原材料のための溶媒若しくは担体として、口腔ケア組成物中に存在する水の総量を意味するが、ある特定の無機塩の結晶化に伴う水として存在し得るものを除く。好ましくは、水は、ＵＳＰ水である。
【００７２】
あるいは、他の例では、本明細書における口腔ケア組成物は、組成物の０重量％〜５重量％の総含水量を含んでいてよい。例えば、口腔ケア組成物は、水を実質的に含んでいなくてもよく、好ましくは水を含んでいなくてよい。
【００７３】
界面活性剤
口腔ケア組成物は、任意選択で、しかし好ましくは界面活性剤を含む。界面活性剤は、アニオン性、非イオン性、両性、双性イオン性、カチオン性の界面活性剤、又はこれらの組み合わせから選択してよく、好ましくは、界面活性剤はアニオン性であり、より好ましくは、アニオン性界面活性剤はラウリル硫酸ナトリウム（sodium lauryl sulfate、ＳＬＳ）である。双性イオン性界面活性剤の例は、コカミドプロピルベタインである。口腔ケア組成物は、１つ、２つ、又はそれ以上の界面活性剤を含有していてよい。組成物は、全組成物の０．１重量％〜２０重量％、好ましくは１重量％〜１０重量％の濃度の界面活性剤を含んでいてよい。
【００７４】
湿潤剤
本明細書の口腔ケア組成物は、組成物の０重量％〜７０重量％、又は１５重量％〜５５重量％の量で存在する湿潤剤を含んでもよい。湿潤剤は、空気への曝露時に口腔ケア組成物が硬化するのを防ぎ、また特定の湿潤剤は、口腔ケア組成物に所望の甘味風味を付与することもできる。湿潤剤の好適な例としては、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、キシリトール、トリメチルグリシン、及びこれらの混合物を挙げることができる。他の例としては、他の食用多価アルコールを挙げることができる。幾つかの例では、保湿剤は、ソルビトール、グリセリン、水、及びこれらの組み合わせから選択される。好ましくは、保湿剤はソルビトールである。一例では、組成物は、組成物の１０重量％〜６６重量％、あるいは３０重量％〜５５重量％の保湿剤を含む。
【００７５】
研磨剤
口腔ケア組成物は、有効量の研磨剤を含む。研磨剤の例としては、カルシウム含有研磨剤、シリカ、又はこれらの組み合わせが挙げられる。カルシウム含有研磨剤を含有する場合、カルシウム含有研磨剤は、好ましくは、炭酸カルシウム、リン酸ニカルシウム、リン酸三カルシウム、オルトリン酸カルシウム、メタリン酸カルシウム、ポリリン酸カルシウム、カルシウムオキシアパタイト、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。シリカの場合、好ましくは、シリカは、例えば、Ｈｕｂｅｒ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ製のＺＥＯＤＥＮＴ（登録商標）シリーズのもの（例えば、ＺＥＯＤＥＮＴ（登録商標）１０３、１２４、１１３、１１５、１６３、１６５、１６７）などの沈殿シリカ（例えば、超微粒子を得るために酸で不安定化することによるケイ酸ナトリウム溶液）である。これらのシリカ（例えば、合成非晶質シリカ）の一部は、研磨及び増粘の機能の両方を発揮することができるが、本明細書では、本発明の目的のために「研磨剤」という用語に含まれることが認められる。好ましくは、口腔ケア組成物は、組成物の１重量％〜３５重量％、より好ましくは５重量％〜２５重量％の研磨剤を含む。
【００７６】
着香剤
本明細書の口腔ケア組成物は、組成物の０．０１重量％〜５重量％、好ましくは０．１重量％〜２重量％の着香剤を含み得る。口腔ケア組成物で使用することができる好適な着香剤の例としては、米国特許第８，６９１，１９０号；Ｈａｕｇｈｔ，Ｊ．Ｃ．のカラム７、６１行〜カラム８、２１行に記載されているものが挙げられる。いくつかの例では、着香剤は、サリチル酸メチル、メントール、オイゲノール、及びシネオールから選択してよい。いくつかの例では、口腔ケア組成物は、サリチル酸メチル、メントール、オイゲノール、及びシネオールを含まないか又は実質的に含まない風味料混合物を含んでいてよい。
【００７７】
甘味剤
本明細書の口腔ケア組成物は、甘味剤を含んでもよい。甘味剤は、一般に、組成物の０．００５重量％〜５重量％の濃度で口腔ケア組成物中に存在する。甘味剤の好適な例としては、サッカリン、デキストロース、スクロース、ラクトース、キシリトール、麦芽糖、果糖、アスパルテーム、シクラミン酸ナトリウム、Ｄ−トリプトファン、ジヒドロカルコン、アセスルファム、スクラロース、ネオテーム、及びこれらの混合物が挙げられる。甘味剤の他の好適な例は、米国特許第８，６９１，１９０号；Ｈａｕｇｈｔ，Ｊ．Ｃ．のカラム９、１８行〜カラム１０、１８行に記載されている。
【００７８】
着色剤
本明細書の口腔ケア組成物は、組成物の０．００１重量％〜０．０１重量％の量で存在する着色剤を含んでもよい。着色剤は、水溶液、好ましくは１％着色剤水溶液の形態であってよい。着色剤の好適な例としては、顔料、パール剤（pealing agent）、充填剤粉末、タルク、雲母、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、オキシ塩化ビスマス、酸化亜鉛、及び口腔ケア組成物に視覚的変化を生みだすことができる他の物質を挙げることができる。他の好適な例としては、二酸化チタン（ＴｉＯ２）を挙げることができる。二酸化チタンは、組成物に不透明度を加え、一般に組成物の０．２５重量％〜５重量％の濃度で口腔ケア組成物中に存在する白色粉末である。
【００７９】
他の成分
本発明の口腔ケア組成物は、当業者に既知の通常及び従来の補助成分を含むことができる。任意成分としては、例えば、抗歯垢剤、抗知覚過敏剤、ホワイトニング及び酸化剤、抗炎症剤、抗結石剤、キレート剤、歯質剤（tooth substantive agent）、鎮痛剤、及び麻酔剤が挙げられるが、これらに限定されない。口腔ケア組成物のために選択された成分は、互いに、化学的かつ物理的に適合するものでなければならないことが理解されよう。
【００８０】
使用方法
一態様では、本発明は、対象の歯を清浄又は研磨するための方法に関する。本明細書の清浄又は研磨方法は、対象の歯を、本発明による口腔ケア組成物と接触させることを含む。
【００８１】
別の態様では、本発明はまた、本発明による口腔ケア組成物を対象の口腔に投与することを含む、対象における歯肉健康を促進する方法であって、好ましくは、当該投与が、少なくとも１日１回、より好ましくは少なくとも１日２回行われる方法に関する。
【００８２】
更に別の態様では、本発明は、対象における歯肉健康を促進するための口腔ケア組成物を作製するためのシトルリンの使用に関する。好ましくは、歯肉健康を促進する方法は、少なくとも、以下からなる群から選択される期間内で行われる。
ａ）０時間〜７２時間の時間、
ｂ）０時間〜４８時間の時間、
ｃ）０時間〜２４時間の時間、
ここで０時間は、本発明による口腔ケア組成物を投与する時間である。
【００８３】
更に別の態様では、本発明はまた、歯肉健康を促進する方法であって、歯肉健康の促進が、
（ｉ）口腔内の歯肉創傷治癒を改善することと、
（ｉｉ）口腔内の細菌活性の低減を改善することと、
を含む方法に関する。
【００８４】
上記の方法は、口腔ケア組成物（例えば、歯磨き）を用いてブラッシング（例えば、歯磨き）すること、又は口腔ケア組成物（例えば、歯磨きスラリー又は口内洗浄剤）ですすぐことによるものであってよい。口腔ケア組成物は、未希釈で、又は例えば歯ブラシなどの送達装置を介して適用されてもよい。他の方法としては、局所口腔用ゲル、口中スプレー、練り歯磨き、歯磨き、歯磨きゲル、歯磨き粉、タブレット、歯肉下用ゲル、フォーム、ムース、チューインガム、リップスティック、スポンジ、フロス、ペトロラタムゲル、若しくは義歯製品、又は他の形態を、対象の歯及び口腔粘膜と接触させることを含む。実施形態に応じて、口腔ケア組成物は、練り歯磨きと同じく頻繁に使用されてもよく、又はより少ない頻度、例えば週単位で使用されてもよく、又は歯面研磨ペースト若しくは他の集中治療の形態で、専門家により使用されてもよい。
【実施例】
【００８５】
以下の実施例及び説明は、本発明の範囲内にある実施形態を更に明らかにする。これらの実施例は単に例示することが目的であり、これらの多くの変形例が発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく可能であることから、本発明の制限として解釈されるべきではない。
【００８６】
実施例Ａ：実施例１〜１１
実施例１〜１１は、以下に示す歯磨き組成物であり、成分の量は、重量％である。これらは、処方者によって選択される従来の方法によって好適に調製されてもよい。実施例１〜６は、特定のｐＨで異なる濃度の第一スズイオン源及びシトルリンを用いて作製された本発明による本発明の製剤である。実施例７は、第一スズ及びシトルリンを用いて作製され、相対的に多量の亜鉛を有する。実施例８は、シトルリンなしで作製される。実施例９は、第一スズイオン源なしで作製される。実施例１０は、第一スズ及びシトルリンを用いて作製されるが、本発明の範囲外のｐＨを有する。実施例１１は、第一スズもシトルリンも亜鉛も含まない比較例である。全ての組成物は、指示された比率の表１及び２の成分の混和によって調製される。
【００８７】
【表１】
2021516246.tif 000002
【００８８】
【表２】
2021516246.tif 000003
【００８９】
実施例Ｂ．−バイオフィルム内への抗菌剤の浸透改善を測定するためのアッセイ
バイオフィルム内への抗菌剤の浸透改善を判定するために、以下のアッセイを使用して、本発明の口腔ケア組成物及び対照の、インサイツでの歯垢バイオフィルムにおける共局在化率の測定を介して、第一スズイオンの細菌への浸透効率を評価する。アッセイの詳細を以下に説明する。
【００９０】
（ａ）バイオフィルム増殖のための基質
インサイツでのバイオフィルムの増殖にはヒドロキシアパタイト（ＨＡ）ディスクを使用する。ＨＡディスクは、各ディスクに３つの平行な溝（すなわち、２つの側方溝の幅２００μｍ、深さ２００μｍ、中央溝の幅５００μｍ及び深さ５００μｍ）を有するように設計される。対象の口にディスクを取り付けるとき、一般に歯垢が蓄積する傾向がある清浄困難な領域である、歯間の隣接歯間間隙を模倣するように、これらの溝を垂直に維持する。このモデルは、溝からのそのままの状態での歯垢の収集を可能にする。ＨＡディスクは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｅｉ’ｅｒｋａｎｇ  ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）によって製造される。
【００９１】
（ｂ）スプリントを着用する
ヒト対象は、スプリントを着用する。各対象は、４８時間後に少なくとも９枚のＨＡディスクを確実に利用可能にするために、スプリント上に最大１２枚までのＨＡディスクを装着する。このようなスプリント及びＨＡディスクの非限定例を図１に示す。図１を参照すると、デバイス（１）は、複数のＨＡディスク（２ａ〜２ｄ）を保持する。特定の例では、図２を参照すると、ＨＡディスク（２０１）は、３本の平行な溝（２０３）を有する（２本の側方溝（２０３ａ及び２０３ｃ）は、幅３００μｍ及び深さ３００μｍであるが、中間溝（２０３ｂ）（２つの側面溝の間にある）は、幅５００μｍ及び深さ５００μｍである）。中間溝は、ＨＡディスクがヘッド対ヘッドの比較目的のために２つの同一の半ディスクに、より容易に分離することができるように、２つの側方溝よりも広くかつ深く設計されている。図３は、内部にバイオフィルム（２００５）を有する溝（２００３）の断面図の概略図である。ＨＡディスクの更なる詳細は、国際出願日が２０１５年９月９日であるＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１５／０８９２３８号に記載されている。
【００９２】
図３には示されていないが、ディスクは、歯間の歯間空間に後退が生じるように位置付けられ得る（この位置は歯垢を生じやすいため（清浄の困難さなどを考慮して））。対象は、食事中にのみスプリントを取り外し（不透明な容器内に湿った状態でスプリントを保存する）、口腔衛生処置を実施する。その後すぐに、スプリントを再び着用する。対象は、飲用時にはストローを使用するように求められる。
【００９３】
（ｃ）ＨＡディスクからのインサイツバイオフィルムの放出
全てのＨＡディスクは、４８時間でピンセットによってスプリントから除去される。ピンセットを使用してＨＡチップの縁部を保持し、リン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline、ＰＢＳ）溶液を入れた２ｍＬ遠心管にＨＡディスクを移す。ディスクを移す前には、毎回ピンセットを十分に洗浄する（水、７５％アルコール、次いで脱イオン水）。
【００９４】
（ｄ）練り歯磨き上清の調製
１５グラムの脱イオン水を５グラムの練り歯磨き（実施例１〜１１のいずれか１つを使用）に添加する。完全に撹拌した後、混合物を１２，０００ＲＰＭで２０分間遠心分離する。上清を使用の１日前に調製し、４℃で保管する。
【００９５】
（ｅ）共焦点レーザー走査顕微鏡検査
ＨＡディスクをスプリントから除去した後。様々な本発明の組成物及び比較組成物によるエクスビボ処置に、ＨＡディスクを使用する。対象の上清で処置し、微生物蛍光プローブ及び第一スズ蛍光プローブ（例えば、米国特許出願公開第２０１８／００７２９４４（Ａ１）号、Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている）で標識した後、溝内のバイオフィルムを、共焦点レーザー走査顕微鏡（confocal laser scanning microscopy、ＣＬＳＭ）（以下に記載される）によって測定する。好ましくは、第一スズ蛍光プローブは、ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボキサミド、Ｎ−［３’，６’−ビス（ジエチルアミノ）−３−オキソスピロ［１Ｈ−イソインドール−１，９’−［９Ｈ］キサンテン］−Ｈ）−イル］（Ｄｒ．Ｔａｏ  Ｙｕ、Ｆｕｄａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａから入手可能）である。好ましくは、微生物蛍光プローブは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（商標）ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）ＢａｃＬｉｇｈｔ（商標）システム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから入手可能）である。
【００９６】
（ｆ）ディスクの調製
ＨＡディスクをＰＢＳ溶液ですすぎ、各ＨＡディスクをピンセットで半分に分割し２つにする。その後、半分のディスクのそれぞれを５００〜１０００μＬのＰＢＳ溶液に１分間静置する。各ディスクを、ＰＢＳ溶液又は練り歯磨き上清のいずれかによって２分間処理する。各ディスクをピンセットで保持し、１ｍＬのＰＢＳ溶液中で前後に１０回振盪して洗浄し、次いでこの洗浄サイクルを繰り返す。次いで、各ディスクを５００〜１０００μＬのＰＢＳ溶液に５分間静置する。
【００９７】
（ｇ）蛍光染色及び顕微鏡検査
処理及び浸漬後、半分のディスクのそれぞれを、暗所で３０分間、Ｓｙｔｏ−９プローブと共にＳｎプローブで（５μＭのＳｙｔｏ−９及び５μＭのＳＮプローブを含有する）染色する。染色後、各ディスクを、５００〜１０００μＬのＰＢＳ溶液に浸漬して、２分間静置する。各ディスクをピンセットで保持し、１ｍＬのＰＢＳ溶液中で前後に５回振盪して再度洗浄し、この作業を繰り返す。ＳＹＴＯ−９／Ｓｎ染料で染色した試料について、以下のパラメータを使用する：λｅｘ＝４８８ｎｍ／５４３ｎｍ、λｅｍ＝５００／５８０ｎｍ、２０倍対物レンズ、及び表面細菌の底部から６０μｍにわたってステップサイズ＝３μｍで走査する。
【００９８】
（ｈ）共焦点レーザー走査顕微鏡検査
Ｌｅｉｃａ（商標）ＴＣＳ  ＳＰ８  ＡＯＢＳ分光共焦点顕微鏡を使用する。共焦点システムは、Ｌｅｉｃａ（商標）ＤＭ６０００Ｂ直立顕微鏡及びＬｅｉｃａ（商標）ＤＭＩＲＥ２反転顕微鏡からなる。直立スタンドは、スライド載置した標本を含む用途に使用されるが、３７℃のインキュベーションチャンバ及びＣＯ２富化付属品を有する反転スタンドには、生細胞向けの用途がある。この顕微鏡は、交換可能なレーザー走査ヘッド、及びそれ自体の電気モータ駆動段階に加えて、焦点（Ｚ）平面における急速撮像を容易にする、ガルバノメータ駆動型高精度Ｚステージを共有する。更に当該顕微鏡は、落射蛍光に加えて、明視野、偏光光及び微分干渉コントラストを含む様々な透過光コントラスト法に対応しており、５倍、２０倍、４０倍、６３倍（油浸及び乾燥）並びに１００倍（油浸）Ｌｅｉｃａ（商標）対物レンズを装備している。
【００９９】
レーザー走査及び検出システムについて説明する。ＴＣＳ  ＳＰ８  ＡＯＢＳ共焦点システムには、４とおりのレーザー（１つのダイオード、１つのアルゴン及び２つのヘリウムネオンレーザー）が供給され、これにより電磁スペクトルのＵＶ、可視及び近赤外範囲内の広範な蛍光色素を励起させることが可能である。レーザー走査ヘッドに音響光学的調整可能フィルタ（acousto-optical tunable filter、ＡＯＴＦ）、音響光学ビームスプリッタ（acousto-optical beam splitter、ＡＯＢＳ）及び４つのプリズム分光光度計検出器を組み込むという設計により、３とおりの蛍光色素の同時励起及び検出が可能である。正立顕微鏡も、透過光検出器を有しており、透過光画像を蛍光記録上に重ね合わせることが可能である。
【０１００】
Ｌｅｉｃａ（商標）共焦点ソフトウェアを使用する。共焦点は、デュアルモニターを接続した標準Ｐｅｎｔｉｕｍ  ＰＣ及びＬｅｉｃａ（商標）共焦点ソフトウェアを介して制御する。Ｌｅｉｃａ共焦点ソフトウェアは、３Ｄの再構成及び測定、生理学的記録及び解析、タイムラプス、蛍光色素の共局在、ＦＲＡＰ及びＦＲＥＴなどの光退色技術、スペクトル不混合及び多色回復（multicolour restoration）を含む、多次元での一連の画像の取得、処理及び解析のためのインターフェースを提供する。画像解析に関しては、ＳＹＴＯ−９／Ｓｎ染料で染色した試料を選択して、赤色及び緑色の画素の重なり効率（overlap efficiency）を定量する。ソフトウェアを使用して、「緑色」の細菌プローブと「赤色」の第一スズプローブとの画素重複を特定し、次いでこの値を、黒色以外の全ての画素（重複していない第一スズプローブを含む）で除算して、細菌中の第一スズの共局在の百分率を算出する。一般に、この共局在率が高くなるほど、当該口腔ケア製品は、より効率的に第一スズを細菌に送達する。（Ｘｉａｎｇ  Ｊ，Ｌｉ  Ｈ，Ｐａｎ  Ｂ，Ｃｈａｎｇ  Ｊ，Ｈｅ  Ｙ，Ｈｅ  Ｔ，Ｓｔｒａｎｄ  Ｒ，Ｓｈｉ  Ｙ，Ｄｏｎｇ  Ｗ．（２０１８）Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｔｗｏ  Ｏｒａｌ  Ｃａｒｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｉｎ  ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｂｉｏｆｉｌｍ  Ｍｏｄｅｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｄｅｎｔ，Ｖｏｌ．３１，Ｉｓｓｕｅ  １：５３−６０を参照）
【０１０１】
結果：対象を本発明の実施例３（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン）、実施例５（すなわち、Ｓｎ＋８．００％シトルリン）、比較例８（すなわち、Ｓｎのみ）、及び陰性対照としての対照例ＰＢＳで処理する。結果を表３に提供する。
【０１０２】
【表３】
2021516246.tif 000004
【０１０３】
結果は、本発明の実施例３（４８．８％）及び本発明の実施例５（４５．３％）は、比較例８（２５．７％）及び対照例ＰＢＳ（０％）よりも第一スズの共局在率が著しく高いことを実証する。事実上、このデータは、シトルリンと組み合わせた場合に、シトルリンを含まない比較例よりも第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透が改善されることを裏付ける。
【０１０４】
更に別の比較では、対象を本発明の実施例２（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、亜鉛源を含まない）、実施例３（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン＋０．５３３重量％クエン酸亜鉛）、実施例７（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン＋１．１６０重量％クエン酸亜鉛）で処理する。結果は、表４に提供され、陰性対照としての対照例ＰＢＳも含まれる。
【０１０５】
【表４】
2021516246.tif 000005
【０１０６】
結果は、組成物の実施例２による第一スズ共局在率（７０．１％）が、組成物の実施例３（４８．８％）よりも高く、これは更には、組成物の実施例７（２３．９％）及び対照例ＰＢＳ（０％）よりも高いことを実証する。実際に、このデータは、亜鉛と組み合わせない場合又は低濃度の可溶性亜鉛（すなわち、０．５３３重量％）と組み合わせた場合に、高濃度の可溶性亜鉛（すなわち、１．１６０重量％以上）を含む実施例よりも第一スズイオンのバイオフィルム内への浸透が改善されることを裏付ける。
【０１０７】
実施例Ｃ．−ヒト歯肉線維芽細胞の創傷治癒の改善を測定するためのアッセイ
インビトロでヒト歯肉線維芽細胞を使用して、本発明の組成物及び比較組成物による処置の結果として得られる、創傷治癒に関わる遊走に関する効果を評価する。この方法は、３つの段階を含む。
【０１０８】
段階１−初代ヒト歯肉線維芽細胞（Human Gingival Fibroblast、ＨＧＦ）を培養する
ヒト歯肉線維芽細胞を、抜歯患者から採取し、５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。この組織を小片に刻んで、１５ｍＬの遠心管に入れる。試料を、３７℃で１時間、等量の８％ディスパーゼ１ｍＬ及び６％コラゲナーゼ１ｍＬで消化する。この消化の間、試料を１５分毎に振盪する必要がある。消化プロセスが完了したら、管に室温で６分間、１１００ＲＰＭで遠心分離を行う。遠心分離後、管の底には上清液から分離された細胞のペレットが形成されている。次いでこの上清液を廃棄し、細胞ペレットを３ｍＬの新鮮な最小必須培地（Minimum Essential Medium、ＭＥＭ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから入手可能）培養培地に懸濁させた後、ペトリ皿に移す。細胞を入れたペトリ皿を、３７℃、５％  ＣＯ２のインキュベータ内に約１０日間入れる。培地の変色について２日毎にペトリ皿を確認する。培地の変色が生じた場合、新鮮な培養培地に交換する。
【０１０９】
段階２−ヒト歯肉線維芽細胞を継代培養する
ペトリ皿の細胞単層被覆率が８０〜９０％になったら、前述の培養培地を除去し、５ｍＬのＰＢＳで洗浄する。０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液１ｍＬを添加し、細胞が視覚的に丸い形状になるまで、当該細胞を３７℃で約１〜２分間静置する。ペトリ皿表面から剥がれにくい細胞を剥がするために、ペトリ皿をタップすることが必要な場合もある。少なくとも１ｍＬの新鮮なＭＥＭ培養培地を添加してトリプシンを不活性化し、細胞を１５ｍＬの遠心管に回収する。次いで管を１１００ＲＰＭで６分間室温で遠心分離する。上清を廃棄し、細胞ペレットを、同じ遠心管内で、４ｍＬの新鮮なＭＥＭ培養培地に再懸濁させる。それぞれペトリ皿上に観察される細胞単層被覆が８０〜９０％になるまで、細胞懸濁液１ｍＬ及び新鮮なＭＥＭ培養培地９ｍＬを入れた４枚のペトリ皿を３７℃、５％  ＣＯ２のインキュベータ内に約３〜５日間入れる。最も高い細胞生存率を達成するためにも、この段階は創傷治癒アッセイ前に２〜４回繰り返す必要がある。
【０１１０】
段階３−創傷治癒アッセイ
ペトリ皿の細胞単層被覆率が８０〜９０％になったら、前述の培養培地を除去し、５ｍＬのＰＢＳで洗浄する。０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ溶液１ｍＬを添加し、細胞が視覚的に丸い形状になるまで、当該細胞を３７℃で約１〜２分間静置する。ペトリ皿表面から剥がれにくい細胞を剥がすために、培養ペトリ皿をタップする必要がある場合もある。少なくとも１ｍＬの新鮮なＭＥＭ培養培地を添加してトリプシンを不活性化し、細胞を１５ｍＬの遠心管に回収する。次いで管を１１００ＲＰＭで６分間室温で遠心分離する。上清を廃棄し、細胞ペレットを、６ｍＬの新鮮なＭＥＭ培養培地に再懸濁させる。１ｍＬの細胞懸濁液及び１ｍＬの新鮮なＭＥＭ培地を、それぞれ６ウェルプレートの各ウェルに添加する。細胞単層被覆率が５０〜７０％になるまで、プレートを３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートする。次いで画像取得の間、ウェルの外側底部の中央に、基準線として線をマーキングする。滅菌した１ｍＬのピペットチップで細胞単層の右半分をこすり取ることによって、創傷を手作業で作製する。細胞を２ｍＬのＰＢＳで洗浄して、懸濁された細胞が全く観察されなくなるまで、懸濁細胞を除去する。培養培地２ｍＬと、１％の比較組成物を含有する培養培地２ｍＬ又は１％の本発明の組成物を含有する培養培地２ｍＬとをウェルに添加する。
【０１１１】
ＨＧＦの高密度デジタル画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ（登録商標）ＵＩＳ２  ＷＨＮ対物レンズ（１０倍）を有するＯｌｙｍｐｕｓ（登録商標）ＩＸ７１デジタルＳＬＲカメラを用いて撮影する。第１の画像は、プレート上の中央線のマーキングを基準線として使用して、時間０時間（すなわち、ベースライン）で取得する。次いで、プレートを、以下に記載されるように、３７℃、５％  ＣＯ２で様々な時間間隔にわたってインキュベートする。予め一致させて撮影領域を取得し、またベースライン以降の時間間隔（例えば、２４時間、４８時間、７２時間等）で画像を取得し、異なる処置下での創傷治癒性能の指標として、細胞被覆率（％）を評価する。Ｗｉｍａｓｉｓ（登録商標）ＷｉｍＳｃｒａｔｃｈソフトウェア（Ｗｉｍａｓｉｓ  ＧｍｂＨ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能）によって画像を評価して、各試料について一致するベースライン画像と比較して、創傷についてマークをつけた境界を超えるＨＧＦ細胞の被覆（すなわち、創傷治癒）の程度（すなわち、割合）を求める。ＷｉｍＳｃｒａｔｃｈソフトウェアは、高度なエッジ検出及びオーバーレイ技法を利用して、細胞及びブランクの領域を認識し、すなわち、画像内の緑色のオーバーレイは、特定の画像の細胞被覆領域を表し、灰色の領域は創傷領域を表す。読み出しは、両方の領域に対して提示され、総面積のパーセントとして正規化される。
【０１１２】
結果：以下の表５を参照すると、結果は、２．００％シトルリンを含有する本発明の組成物の実施例３では、ベースラインにおいて創傷の境界をマークした後の細胞被覆率が、シトルリンを含まない比較組成物例８でヒト歯肉線維芽細胞を処理した場合の低い細胞被覆率（８．００％＝５８．００％全被覆率−５０．００％ベースライン）と比較して増加（すなわち、１２．６０％＝６２．６０％全被覆率−５０．００％ベースライン）しており、創傷治癒を効果的に改善することを示す。
【０１１３】
【表５】
2021516246.tif 000006
【０１１４】
実施例Ｄ．加速安定性における変色
発明の組成物の実施例３（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ６．０）、実施例４（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ７．０）、比較組成物例１０（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ７．３）を、６０℃で加速安定性チャンバ内において静的に維持し、２週間遮光する。以下の等級評価尺度に従って、適格な採点者集団によって黄色度を目視検査する。
【０１１５】
【表６】
2021516246.tif 000007
【０１１６】
結果：以下の図６を参照すると、結果は、本発明の組成物の実施例３（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ６．５）及び実施例４（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ７．０）が、比較組成物例１０（すなわち、Ｓｎ＋２．００％シトルリン、ｐＨ７．３）よりも加速安定性において変色（すなわち、黄色〜褐色への変化）を著しく低減及び／又は遅らせることを示す。
【０１１７】
【表７】
2021516246.tif 000008
【０１１８】
実施例Ｅ：口内洗浄剤組成物
本発明による口内洗浄剤組成物を、以下の表７に実施例１２〜１５として示す。これらの組成物は、第一スズイオン源及びシトルリンを含有する。好ましくは、これらの組成物は、これらの成分を含まない市販の製剤と比較して改善された歯肉健康上の利益を示す。
【０１１９】
【表８】
2021516246.tif 000009
【０１２０】
本明細書にて開示された寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。その代わりに、特に指示がない限り、このような寸法はそれぞれ、列挙された値とその値を囲む機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図されている。例えば、「４０ｍｍ」と開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することが意図される。
【０１２１】
相互参照される又は関連する全ての特許又は特許出願、及び本願が優先権又はその利益を主張する任意の特許出願又は特許を含む、本願に引用される全ての文書は、除外又は限定することを明言しない限りにおいて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いかなる文献の引用も、本明細書中で開示又は特許請求される任意の発明に対する先行技術であるとは見なされず、あるいはそれを単独で又は他の任意の参考文献（単数又は複数）と組み合わせたときに、そのような発明全てを教示、示唆又は開示するとは見なされない。更に、本文書における用語の任意の意味又は定義が、参照することによって組み込まれた文書内の同じ用語の意味又は定義と矛盾する場合、本文書におけるその用語に与えられた意味又は定義が適用されるものとする。
【０１２２】
本発明の特定の実施形態を例示及び説明してきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び修正を行うことができる点は当業者には明白であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのような全ての変更及び修正を添付の特許請求の範囲に網羅することが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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