(57)【要約】  ランチオニンシンテターゼＣ様タンパク質２経路を標的とする化合物と、その化合物を用いてインビトロで調製された免疫細胞などの細胞と、を提供する。化合物及び細胞は、感染性疾患、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、及び慢性疼痛などを含む多くの状態の治療するために使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
前駆細胞から調製細胞を生成するインビトロ方法であって、前記前駆体細胞を、インビトロで、前記前駆細胞に対して前記調製細胞における化合物依存性差異を誘発するのに有効な量で及び時間の間、化合物と接触させることを含み、
前記前駆細胞は、免疫細胞を含み、
前記化合物は、式Ｚ−Ｙ−Ｑ−Ｙ´−Ｚ´の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルであり、式中、
Ｚは、
2021503936.tif 000021
Ｙは、
2021503936.tif 000022
Ｑは、ピペラジン−１，４−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，５−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン−２，５−ジイル；１，４−ジアゼパン−１，４−ジイル；ベンゼン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル；エタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；Ｎ1，Ｎ2−ジアルキルエタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；プロパン−１，３ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；Ｎ1，Ｎ3−ジアルキルプロパン−１，３−ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；１，４−ジアミノアントラセン−９，１０−ジオン−１，４−ジイル；Ｃ6アレーン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル（前記アレーンは、２、３、５、又は６位において、１〜４個の置換基で置換され、前記置換基は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒからなる群から独立して選択される）、又は置換ピペラジン−１，４−ジイル（前記ピペラジンは、２、３、５、又は６位において、１〜８個の置換基で置換され、前記置換基は、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、及びＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルからなる群から独立して選択される）であり、
Ｙ´、は
2021503936.tif 000023
又は単結合であり、
Ｚ´、は
2021503936.tif 000024
又はＲ5であり、
Ｙ´は、Ｚ´がＲ5である場合にのみ単結合であり、
Ａ1及びＡ1´は、存在する場合、各々独立してＮ、Ｎ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ6であり、
Ａ2及びＡ2´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ7であり、
Ａ3及びＡ3´は、存在する場合、各々独立してＮＲ8、Ｏ、又はＳであり、
Ａ4及びＡ4´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ9であり、
Ａ5及びＡ5´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ10であり、
Ａ6及びＡ6´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ11であり、
Ｒ1、Ｒ1´、Ｒ2、Ｒ2´、Ｒ3、Ｒ3´、Ｒ4、Ｒ4´、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ11は、存在する場合、各場合において、水素；アルキル；ハロ；トリフルオロメチル；ジアルキルアミノ（各アルキルは、独立して選択される）；−ＮＨ2；アルキルアミノ；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ヘテロシクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される、１もしくは２つの置換基で置換された置換ヘテロシクロアルキル；ならびに置換ヘテロアリールアルキルからなる群から独立して選択されるか、あるいは、
前記化合物は、式Ａ−Ｂ−Ｃの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルであり、式中、
Ａは、
2021503936.tif 000025
Ｂは、
2021503936.tif 000026
Ｃは、
2021503936.tif 000027
Ａ7、Ａ8、Ａ9、Ａ10、Ａ11、Ａ12、Ａ13、及びＡ14は、ＣＨ、ＣＲ18、及びＮから各々独立して選択され、
Ａ15、Ａ16、Ａ17、Ａ18、Ａ19、及びＡ20は、ＣＨ、ＣＲ19、Ｎ、ＮＲ20、Ｏ、及びＳから各々独立して選択され、ただし、Ａ15、Ａ16、及びＡ17のうちの１つのみが、Ｎ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、Ａ18、Ａ19、及びＡ20の１つのみが、Ｎ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、
Ｒ18及びＲ19は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル；Ｃ1〜Ｃ6ジアルキルアミノ（各Ｃ1〜Ｃ6アルキルは、独立して選択される）；−ＮＨ2；アルキルアミノ；ヘテロシクロアルキル；及び置換ヘテロシクロアルキルから各々独立して選択され、前記置換ヘテロシクロアルキルは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）及びＣ1〜Ｃ6アルキルからなる群から独立して選択される１又は２つの置換基で置換され、複数のＣＲ18を有する化合物では、各Ｒ18は、独立して選択され、複数のＣＲ19を有する化合物では、各Ｒ19は、独立して選択され、
Ｒ20は、Ｃ1〜Ｃ6アルキルである、方法。
【請求項２】
前記化合物が、前記式Ｚ−Ｙ−Ｑ−Ｙ´−Ｚ´の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記接触させることが、前記前駆細胞を、前記化合物、ならびにオールトランスレチノイン酸、ＴＧＦ−β、ホルボールミリステートアセテート、イオノマイシン、ラパマイシン、及びＩＬ−２のうちの１つ以上を含む薬剤と接触させることを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記接触させることが、前記前駆細胞を前記化合物及びＩＬ−２と接触させることを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記前駆細胞が、白血球を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記前駆細胞が、末梢血単核球及び固有層単核球からなる群から選択された細胞を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記前駆細胞が、Ｔ細胞を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記前駆細胞が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記調製細胞が、Ｔｒｅｇ細胞を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記調製細胞が、前記前駆細胞から分化される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物依存性差異が、前記前駆細胞に関する前記調製細胞の遺伝子発現における差異を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物依存性差異が、ＩＬ−１０もしくはそのオーソログの発現の増加、ＦＯＸＰ３もしくはそのオーソログの発現の増加、ＴＮＦαもしくはそのオーソログの発現の減少、ＩＦＮγもしくはそのオーソログの発現の減少、Ｔｂｅｔもしくはそのオーソログの発現の減少、Ｌａｇ３もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｓｏｃｓ２もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｉｒｆ７もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｐ２ｒｘ７もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｃａｐｎ３もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｉｋｚｆ２もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｓｔａｔ５ａもしくはそのオーソログの発現の増加、Ｐｔｅｎもしくはそのオーソログの発現の増加、Ｆｏｘｏ１もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｐｈｌｐｐ１もしくはそのオーソログの発現の増加、ＳＴＡＴ５ａもしくはそのオーソログのリン酸化の増加、ＦＯＸＯ１リン酸化もしくはそのオーソログの増加、及びピルビン酸キナーゼ活性の増加のうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の調製細胞を含む、単離された細胞。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単離された細胞で動物の状態を治療する方法であって、前記状態を治療するのに十分な量の細胞を前記動物に投与することを含み、前記状態が、炎症性障害、感染性疾患、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、及び慢性疼痛を含む、方法。
【請求項１５】
前記状態が、炎症性腸疾患を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与することが、前記細胞を前記動物に非経口的に投与することを含む、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記非経口的に投与することが、前記細胞を前記動物の血流中に注射又は点滴することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記投与することが、前記細胞を前記動物に経腸的に投与することを含む、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞が、前記動物から得られた自家前駆細胞から生成された調製細胞を含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疾患及び障害の医学的治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、感染症、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、及び慢性疼痛などの状態を治療及び予防するために使用できる、生物活性化合物及びそれを用いて調製された細胞のクラスに関する。
【背景技術】
【０００２】
ランチオニンシンテターゼＣ様タンパク質２（ＬＡＮＣＬ２）（「ランチオニンＣ様タンパク質２」又は「ランチオニンシンテターゼコンポーネントＣ様タンパク質２」とも呼ばれる）は、全身にわたって、ならびに特に消化管の細胞内で及び免疫系、神経系、内分泌系内で発現するシグナル伝達タンパク質である。ＬＡＮＣＬ２の活性化は、細胞の代謝プロセスを変更し、抗炎症性サイトカインを増加させながら、サイトカイン及びケモカインなどの炎症性メディエーターの産生を減少させる働きをする。以前は、これらの効果は、糖尿病のモデルにおける耐糖能から炎症性腸疾患のモデルにおける腸の炎症の減少まで及ぶ範囲の効果を調査するインビトロ及びインビボシステムで検査されてきた。
【０００３】
細胞代謝は、免疫細胞が炎症性サブセットに分化し、増殖し、炎症性サイトカイン及びメディエーターを生成する能力を制御する（Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｌ．Ａ．，Ｒ．Ｊ．Ｋｉｓｈｔｏｎ，ａｎｄ  Ｊ．Ｒａｔｈｍｅｌｌ，Ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１６。１６（９）：ｐ．５５３−６５）。免疫及び代謝の両方を対象とする治療は、癌などの疾患の臨床試験で成功している（Ｍｕｌｌａｒｄ，Ａ．，Ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｐｉｐｅｌｉｎｅ  ｂｒｅａｋｓ  ｎｅｗ  ｇｒｏｕｎｄ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ，２０１６．１５（１１）：ｐ．７３５−７３７）。ＢＴ−１１の背後にある作用のメカニズムであるＬＡＮＣＬ２の活性化が、天然及び食用化合物の受容体ＡＢＡ（Ｓｔｕｒｌａ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，ＬＡＮＣＬ２  ｉｓ  ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  ａｂｓｃｉｓｉｃ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｒａｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００９．２８４（４１）：ｐ．２８０４５−５７）、及び炎症におけるその役割の発見に先立って、代謝ホルモンの産生のための信号伝達物質（Ｌｕ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ−ｂａｓｅｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔ  ｌａｎｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｃ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１２．７（４）：ｐ．ｅ３４６４３）として、非免疫細胞で代謝効果を発揮することが初めて示された。ＬＡＮＣＬ２の代謝作用及び免疫学的作用の結合は、ＢＴ−１１及びＬＡＮＣＬ２を標的とする他の新規化合物の重要な作用のメカニズムである。
【０００４】
本発明は、感染症、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、慢性疼痛などを含むがこれらに限定されない疾患状態の治療のための様々な細胞における有益な免疫代謝応答を誘発する、ＬＡＮＣＬ２を標的とし、結合し、活性化することが確認された一連のクラスの化合物の使用を提供する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、疾患及び障害の医学的治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、感染症、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、慢性疼痛などの治療のための細胞における有益な免疫代謝効果の活性化のためのクラスの化合物の使用に関する。
【０００６】
本明細書に記載の治療に使用される化合物には、式Ｚ−Ｙ−Ｑ−Ｙ´−Ｚ´の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルが含まれ、式中、
Ｚは、
2021503936.tif 000002
Ｙは、
2021503936.tif 000003
Ｑは、ピペラジン−１，４−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，５−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン−２，５−ジイル；１，４−ジアゼパン−１，４−ジイル；ベンゼン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4-−ジイル；エタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；Ｎ1，Ｎ2−ジアルキルエタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；プロパン−１，３ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；Ｎ1，Ｎ3−ジアルキルプロパン−１，３−ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；１，４−ジアミノアントラセン−９，１０−ジオン−１，４−ジイル；Ｃ6アレーン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル（アレーンは、２、３、５、又は６位において、１〜４個の置換基で置換され、置換基は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される）、又は置換ピペラジン−１，４−ジイル（ピペラジンは、２、３、５、又は６位において、１〜８個の置換基で置換され、置換基は、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、及びＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルからなる群から独立して選択される）であり、
Ｙ´は、
2021503936.tif 000004
又は単結合であり、
Ｚ´は、
2021503936.tif 000005
又はＲ5であり、
Ｙ´は、Ｚ´がＲ5である場合にのみ単結合であり、
Ａ1及びＡ1´は、存在する場合、各々独立してＮ、Ｎ（Ｃ1〜6）アルキル、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ6であり、
Ａ2及びＡ2´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ7であり、
Ａ3及びＡ3´は、存在する場合、各々独立してＮＲ8、Ｏ、又はＳであり、
Ａ４及びＡ４´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ９であり、
Ａ５及びＡ５´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ１０であり、
Ａ６及びＡ６´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ１１であり、
Ｒ1、Ｒ1´、Ｒ2、Ｒ2´、Ｒ3、Ｒ3´、Ｒ4、Ｒ4´、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ11は、存在する場合、各場合において、水素、アルキル、ハロ、トリフルオロメチル、ジアルキルアミノからなる群から選択され、各アルキルは独立して選択され、−ＮＨ2、アルキルアミノ、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロアルキル、１又は２個の置換基で置換された置換ヘテロシクロアルキルは、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒ及び置換ヘテロアリールアルキルからなる群から独立して選択され、
置換ヘテロアリールアルキルは、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＮＨ（（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）2からなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換され、各アルキルは、アルキル；ハロ；アリール；−ＳＯ2Ｒ12、−ＯＲ13、−ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、アミノアルキル−、−Ｓ（Ｏ）Ｒ14、及びアルキルからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換された置換アリール；ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；アルキル、−ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換された置換アリール；アルキルアミノ−；ヘテロシクロアルキル−アルキル−アミノ−；アルキルアミノアルキルアミノ−；−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ15；−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ16Ｒ17；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ16Ｒ17；アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換された置換ヘテロアリールから独立して選択され、各アルキルは、−ＣＦ3、ならびに−Ｓ（Ｏ）2Ｒ15及びＣＮらなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換され、
Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、及びＲ17は、Ｃ1−Ｃ6アルキル；独立して選択されたＣ1−Ｃ6アルキルを含むジアルキルアミノ；−ＮＨ2；アルキルアミノ；ヘテロシクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）及びＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から独立して選択される１又は２個の置換基で置換された置換ヘテロシクロアルキルからなる群から各々独立して選択される。
【０００７】
一部の化合物では、Ａ4はＮである。一部の化合物では、Ａ3はＮＲ8であり、Ａ4はＮである。一部の化合物では、Ａ3及びＡ3´の少なくとも１つはＯ又はＳである。一部の化合物では、Ａ1及びＡ1´の一方又は両方がＮである。一部の化合物では、Ａ5及びＡ5´は、存在する場合、各々独立してＣＲ10であり、Ａ6及びＡ6´は、存在する場合、各々独立してＣＲ11である。一部の化合物では、Ａ1、Ａ2、Ａ1´、及びＡ2´の少なくとも１つはＮである。一部の化合物では、Ａ2及びＡ2´の一方又は両方がＣＨ、Ａ3はＮＨ、Ａ4はＮ、Ａ5はＣＨ、Ａ6はＣＨである。一部の化合物では、Ａ2及びＡ2´の一方又は両方がＣＨであり、Ａ3及びＡ3´の一方又は両方がＮＨであり、Ａ4及びＡ4´の一方又は両方がＮであり、Ａ5及びＡ5´の一方又は両方がＣＨであり、Ａ6及びＡ6´の一方又は両方がＣＨである。一部の化合物では、Ｑは、ピペラジン−１，４−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．１．］ヘプタン−２，５−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン−２，５−ジイル；１，４−ジアゼパン−１，４−ジイル、Ｎ1，Ｎ2−ジアルキルエタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；Ｎ1，Ｎ3−ジアルキルプロパン−１，３−ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；１，４−ジアミノアントラセン−９，１０−ジオン−１，４−ジイル；Ｃ6アレーン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル（アレーンは、２、３、５、又は６位において、１〜４個の置換基で置換され、各置換基は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ及びＢｒからなる群から独立して選択される）、又は置換ピペラジン−１，４−ジイル（ペラジンは、２、３、５、又は６位において、１〜８個の置換基で置換され、各置換基は、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、及びＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルからなる群から独立して選択される）である。一部の化合物では、Ｒ1、Ｒ1´、Ｒ2、Ｒ2´、Ｒ3、Ｒ3´、Ｒ4、Ｒ4´、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ11は、存在する場合、各々の場合において、水素、アルキル、ハロ、トリフルオロメチル、ジアルキルアミノからなる群から独立して選択され、各アルキルは、同じ又は異なる−ＮＨ2、アルキルアミノ、アリール、及びアリールアルキルである。
【０００８】
本明細書に記載の治療における使用に好適な他の化合物には、式Ａ−Ｂ−Ｃを含む化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルが含まれ、式中、
Ａは
2021503936.tif 000006
Ｂは、
2021503936.tif 000007
Ｃは、
2021503936.tif 000008
ここで、
Ａ7、Ａ8、Ａ9、Ａ10、Ａ11、Ａ12、Ａ13、及びＡ14は、ＣＨ、ＣＲ18、及びＮから各々独立して選択され、
Ａ15、Ａ16、Ａ17、Ａ18、Ａ19、及びＡ20は、ＣＨ、ＣＲ19、Ｎ、ＮＲ20、Ｏ、及びＳから各々独立して選択され、ただし、Ａ15、Ａ16、及びＡ17の１つのみがＮ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、Ａ18、Ａ19、及びＡ20の１つのみがＮ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、
Ｒ18及びＲ19は、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ジアルキルアミノから各々独立して選択され、各Ｃ1−Ｃ6アルキルは、−ＮＨ2、アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、及び置換ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、置換ヘテロシクロアルキルは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）及びＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から独立して選択される１つ又は２つの置換基で置換され、複数のＣＲ18を有する化合物では、各Ｒ18は独立して選択され、複数のＣＲ19を有する化合物では、各Ｒ19は独立して選択され、
Ｒ20はＣ1〜Ｃ6アルキルである。
【０００９】
本明細書に記載の治療における使用に好適な他の化合物には、米国特許第９，５５６、１４６号に開示されている任意の式に開示されているか又は含まれる任意の化合物が含まれる。米国特許第９，５５６、１４６号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１０】
本発明は、本明細書に記載の化合物のいずれか１つ以上で動物の状態を治療する方法を提供する。この方法は、本明細書に記載の化合物の１つ以上の有効量を動物に投与することを含んでもよい。
【００１１】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物を用いて前駆細胞から調製細胞を生成する方法を提供する。この方法は、調整細胞を生成するために、本明細書に記載の１つ以上の化合物とインビトロで前駆細胞を接触させることを含んでもよい。
【００１２】
本発明はまた、前駆細胞をインビトロで本明細書に記載の１つ以上の化合物と接触させて調製細胞を生成することにより生成された単離された細胞を提供する。
【００１３】
本発明はまた、本明細書に記載の調製細胞で動物の状態を治療する方法を提供する。この方法は、調製細胞を状態を治療するのに十分な量で動物に投与することを含む。
【００１４】
本明細書に記載の化合物又は細胞で治療可能な状態には、感染症、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、及び慢性疼痛が含まれ得る。いくつかの変形例では、感染症は、細菌性疾患を含む。いくつかの変形例では、細菌性疾患は、Ｃ．ディフィシル感染を含む。いくつかの変形例では、過剰増殖性障害は、癌を含む。いくつかの変形例では、癌は、消化管の癌を含む。いくつかの変形例では、消化管の癌は、大腸癌を含む。いくつかの変形例では、過剰増殖性障害は、家族性大腸腺腫症を含む。いくつかの変形例では、先天性代謝異常は、グリコーゲン蓄積症を含む。いくつかの変形例では、グリコーゲン蓄積症は、アンデルセン病を含む。いくつかの変形例では、慢性免疫代謝性疾患は、心血管疾患を含む。いくつかの変形例では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化を含む。いくつかの変形例では、慢性免疫代謝性疾患は、高血圧を含む。いくつかの変形例では、自己免疫は、ループス及び多発性硬化症の少なくとも１つを含む。いくつかの変形例では、自己免疫疾患は、癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患を含む。いくつかの変形例では、癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患は、癌免疫療法によって誘発されるリウマチ性疾患を含む。いくつかの変形例では、炎症性障害は、急性結腸憩室炎を含む。いくつかの変形例では、炎症性障害は、消化管の放射線誘発性炎症を含む。いくつかの変形例では、消化管の放射線誘発性炎症は、放射線直腸炎、放射線腸炎、及び放射線直腸Ｓ状結腸炎のうちの少なくとも１つを含む。いくつかの変形例では、慢性疼痛は、線維筋痛を含む。いくつかの変形例では、状態は、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患を含む。
【００１５】
本発明の目的及び利点は、添付の図面と併せてなされる本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明からより完全に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図１Ｂ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図１Ｃ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図１Ｄ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図１Ｅ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図１Ｆ】ＢＴ−１１は大腸炎のＭｄｒ１ａ−／−モデルで疾患の発症を抑制する。ＢＴ−１１は、疾患活動性指数を低下させる（図１Ａ、パネルＡ）。ビヒクル（図１Ａ、パネルＢ）及びＢＴ−１１治療（図１Ａ、パネルＣ）動物における生後１０週のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。それぞれ１０週齢の腸間膜リンパ節（図１Ｂ、パネルＤ〜Ｆ）ならびに結腸固有層（図１Ｃ、パネルＧ〜Ｉ）におけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図１Ｄ、パネルＪ）、Ｉｌ１７ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、Ｍｃｐ１（図１Ｅ、パネルＬ）、Ｔｎｆａ（図１Ｅ、パネルＭ）、Ｌａｎｃｌ２（図１Ｆ、パネルＮ）及びＩｌ６（図１Ｆ、パネルＯ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療グループ（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図２Ａ】ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＬａｎｃｌ２の喪失は、ＤＳＳモデルにおけるＢＴ−１１効果を無効にする。ＤＳＳでの７日間のチャレンジに続く３日間の標準水での疾患活動性（図２Ａ、パネルＡ）及び体重変化（図２Ａ、パネルＢ）。ビヒクル及びＢＴ−１１で治療した野生型マウスならびにビヒクル及びＢＴ−１１で治療したＬａｎｃｌ２ΔＴマウスにおけるＤＳＳチャレンジ７日目のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真（図２Ｂ、パネルＣ）。それぞれＤＳＳチャレンジ７日目の結腸固有層（図２Ｃ、パネルＤ〜Ｆ）おけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図２Ｃ、パネルＧ）、Ｉｌ１７ａ（図２Ｃ、パネルＨ）、Ｔｎｆａ（図２Ｃ、パネルＩ）、及びＩｌ６（図２Ｃ、パネルＪ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）及び＃（Ｐ＜０．０５）でマーキングされた遺伝子型群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図２Ｂ】ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＬａｎｃｌ２の喪失は、ＤＳＳモデルにおけるＢＴ−１１効果を無効にする。ＤＳＳでの７日間のチャレンジに続く３日間の標準水での疾患活動性（図２Ａ、パネルＡ）及び体重変化（図２Ａ、パネルＢ）。ビヒクル及びＢＴ−１１で治療した野生型マウスならびにビヒクル及びＢＴ−１１で治療したＬａｎｃｌ２ΔＴマウスにおけるＤＳＳチャレンジ７日目のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真（図２Ｂ、パネルＣ）。それぞれＤＳＳチャレンジ７日目の結腸固有層（図２Ｃ、パネルＤ〜Ｆ）おけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図２Ｃ、パネルＧ）、Ｉｌ１７ａ（図２Ｃ、パネルＨ）、Ｔｎｆａ（図２Ｃ、パネルＩ）、及びＩｌ６（図２Ｃ、パネルＪ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）及び＃（Ｐ＜０．０５）でマーキングされた遺伝子型群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図２Ｃ】ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＬａｎｃｌ２の喪失は、ＤＳＳモデルにおけるＢＴ−１１効果を無効にする。ＤＳＳでの７日間のチャレンジに続く３日間の標準水での疾患活動性（図２Ａ、パネルＡ）及び体重変化（図２Ａ、パネルＢ）。ビヒクル及びＢＴ−１１で治療した野生型マウスならびにビヒクル及びＢＴ−１１で治療したＬａｎｃｌ２ΔＴマウスにおけるＤＳＳチャレンジ７日目のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真（図２Ｂ、パネルＣ）。それぞれＤＳＳチャレンジ７日目の結腸固有層（図２Ｃ、パネルＤ〜Ｆ）おけるＴｈ１（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）細胞の免疫表現型検査。Ｉｆｎγ（図２Ｃ、パネルＧ）、Ｉｌ１７ａ（図２Ｃ、パネルＨ）、Ｔｎｆａ（図２Ｃ、パネルＩ）、及びＩｌ６（図２Ｃ、パネルＪ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲはβ−アクチンに対して正規化されている。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）及び＃（Ｐ＜０．０５）でマーキングされた遺伝子型群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図３Ａ】ＢＴ−１１は、調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞を介して主要な効果を発揮する。Ｒａｇ２−／−マウスからの疾患活動性指数は、ＷＴ（図３Ａ、パネルＡ）及びＬａｎｃｌ２−／−（図３Ａ、パネルＢ）エフェクタＣＤ４＋Ｔ細胞を、なし、ＷＴ、又はＬａｎｃｌ２−／−調節性ＣＤ４＋細胞と組み合わせて移入日から移入後６週間まで移入した。組織病理学的検査による移入後６週間での結腸切片内の白血球浸潤のスコアのまとめ（図３Ｂ、パネルＣ）。それぞれ結腸固有層におけるＴｈ１細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）及び好中球（Ｇｒ１ｈｉＣＤ１１ｂ＋）の免疫表現型分類（図３Ｂ、パネルＤ及びＥ、図３Ｃ、パネルＦ〜Ｈ）。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図３Ｂ】ＢＴ−１１は、調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞を介して主要な効果を発揮する。Ｒａｇ２−／−マウスからの疾患活動性指数は、ＷＴ（図３Ａ、パネルＡ）及びＬａｎｃｌ２−／−（図３Ａ、パネルＢ）エフェクタＣＤ４＋Ｔ細胞を、なし、ＷＴ、又はＬａｎｃｌ２−／−調節性ＣＤ４＋細胞と組み合わせて移入日から移入後６週間まで移入した。組織病理学的検査による移入後６週間での結腸切片内の白血球浸潤のスコアのまとめ（図３Ｂ、パネルＣ）。それぞれ結腸固有層におけるＴｈ１細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）及び好中球（Ｇｒ１ｈｉＣＤ１１ｂ＋）の免疫表現型分類（図３Ｂ、パネルＤ及びＥ、図３Ｃ、パネルＦ〜Ｈ）。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図３Ｃ】ＢＴ−１１は、調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞を介して主要な効果を発揮する。Ｒａｇ２−／−マウスからの疾患活動性指数は、ＷＴ（図３Ａ、パネルＡ）及びＬａｎｃｌ２−／−（図３Ａ、パネルＢ）エフェクタＣＤ４＋Ｔ細胞を、なし、ＷＴ、又はＬａｎｃｌ２−／−調節性ＣＤ４＋細胞と組み合わせて移入日から移入後６週間まで移入した。組織病理学的検査による移入後６週間での結腸切片内の白血球浸潤のスコアのまとめ（図３Ｂ、パネルＣ）。それぞれ結腸固有層におけるＴｈ１細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）及び好中球（Ｇｒ１ｈｉＣＤ１１ｂ＋）の免疫表現型分類（図３Ｂ、パネルＤ及びＥ、図３Ｃ、パネルＦ〜Ｈ）。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図４】ＢＴ−１１はインビトロで分化したＴｒｅｇの安定性及び抑制機能を高める。インビトロで分化されたＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトメトリビーズアレイによるＣＦＳＥ染色（パネルＡ）及びＴＮＦα（パネルＢ）及びＩＦＮγ（パネルＣ）による２４時間細胞増殖の測定は、ＢＴ−１１で処理されたＴｒｅｇを分化した（０、０．００９７５、０．０３９、０．６２５μＭ）。ＢＴ−１１での処理４８時間後のＴｒｅｇ内でのＳｏｃｓ２（パネルＤ）、Ｉｒｆ７（パネルＥ）、Ｉｋｚｆ２（パネルＦ）、Ｃａｐｎ３（パネルＧ）、Ｌａｇ３（パネルＨ）、Ｐ２ｒｘ７（パネルＩ）の遺伝子発現。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図５Ａ】ＢＴ−１１は後期解糖に影響を与えて、Ｔｒｅｇ分化に影響を与える。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．６２５μＭ）で処理したＷＴ及びＬａｎｃｌ２−／−ＴｒｅｇｓにおけるＰｋｍ２（図５Ａ、パネルＡ）及びＥｎｏ１（図５Ａ、パネルＢ）の遺伝子発現。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）で処理したＷＴ  Ｔｒｅｇｓにおけるピルビン酸キナーゼ（図５Ａ、パネルＣ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ（図５Ｂ、パネルＦ）の酵素活性。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）で処理したＷＴ  Ｔｒｅｇｓにおける細胞内ＰＥＰ濃度（図５Ｂ、パネルＤ）。ＰＳ−４８処理（０、０．００９７５、０．１５６μＭ  ＢＴ−１１、左から右）での細胞内ＰＥＰ濃度（図５Ｂ、パネルＥ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性（図５Ｂ、パネルＧ）。ＰＳ−４８、タプシガルギン又はＤＡＳＡ−５８及びＢＴ−１１（（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）の存在下でのＷＴ及びＬａｎｃｌ２−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化（図５Ｂ、パネルＨ）。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図５Ｂ】ＢＴ−１１は後期解糖に影響を与えて、Ｔｒｅｇ分化に影響を与える。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．６２５μＭ）で処理したＷＴ及びＬａｎｃｌ２−／−ＴｒｅｇｓにおけるＰｋｍ２（図５Ａ、パネルＡ）及びＥｎｏ１（図５Ａ、パネルＢ）の遺伝子発現。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）で処理したＷＴ  Ｔｒｅｇｓにおけるピルビン酸キナーゼ（図５Ａ、パネルＣ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ（図５Ｂ、パネルＦ）の酵素活性。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）で処理したＷＴ  Ｔｒｅｇｓにおける細胞内ＰＥＰ濃度（図５Ｂ、パネルＤ）。ＰＳ−４８処理（０、０．００９７５、０．１５６μＭ  ＢＴ−１１、左から右）での細胞内ＰＥＰ濃度（図５Ｂ、パネルＥ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性（図５Ｂ、パネルＧ）。ＰＳ−４８、タプシガルギン又はＤＡＳＡ−５８及びＢＴ−１１（（０、０．００９７５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ、左から右）の存在下でのＷＴ及びＬａｎｃｌ２−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｒｅｇへの分化（図５Ｂ、パネルＨ）。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図６Ａ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のインビボ検証。それぞれＰＳ−４８投与無しでビヒクル（図６Ａ、パネルＡ、Ｃ）及びＢＴ−１１治療（図６Ａ、パネルＢ、Ｄ）したマウスの１０週齢のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。１０週齢での結腸の組織学的スコア（図６Ｂ、パネルＥ〜Ｇ）。それぞれ１０週齢での結腸固有層（図６Ｂ、パネルＨ〜Ｊ）における、総合的なＣＤ４＋、Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）細胞の免疫表現型検査。１０週齢での結腸全体におけるＰＥＰ濃度（図６Ｃ、パネルＫ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性（図６Ｃ、パネルＬ）。Ｉｆｎｇ（図６Ｃ、パネルＭ）、Ｔｎｆａ（図６Ｃ、パネルＮ）、Ｆｏｘｐ３−Ｅ２（図６Ｃ、パネルＯ）、Ｆｏｘｐ３（図６Ｃ、パネルＰ）、Ｓｏｃｓ２（図６Ｃ、パネルＱ）、及びＣａｐｎ３（図６Ｃ、パネルＲ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲは、β−アクチンに対して正規化されている。パネルＥ〜Ｒについての条件は、（左から右に）ビヒクル、ＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）、ＰＳ−４８を有するビヒクル、及びＰＳ−４８を有するＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）である。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図６Ｂ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のインビボ検証。それぞれＰＳ−４８投与無しでビヒクル（図６Ａ、パネルＡ、Ｃ）及びＢＴ−１１治療（図６Ａ、パネルＢ、Ｄ）したマウスの１０週齢のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。１０週齢での結腸の組織学的スコア（図６Ｂ、パネルＥ〜Ｇ）。それぞれ１０週齢での結腸固有層（図６Ｂ、パネルＨ〜Ｊ）における、総合的なＣＤ４＋、Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）細胞の免疫表現型検査。１０週齢での結腸全体におけるＰＥＰ濃度（図６Ｃ、パネルＫ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性（図６Ｃ、パネルＬ）。Ｉｆｎｇ（図６Ｃ、パネルＭ）、Ｔｎｆａ（図６Ｃ、パネルＮ）、Ｆｏｘｐ３−Ｅ２（図６Ｃ、パネルＯ）、Ｆｏｘｐ３（図６Ｃ、パネルＰ）、Ｓｏｃｓ２（図６Ｃ、パネルＱ）、及びＣａｐｎ３（図６Ｃ、パネルＲ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲは、β−アクチンに対して正規化されている。パネルＥ〜Ｒについての条件は、（左から右に）ビヒクル、ＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）、ＰＳ−４８を有するビヒクル、及びＰＳ−４８を有するＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）である。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図６Ｃ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のインビボ検証。それぞれＰＳ−４８投与無しでビヒクル（図６Ａ、パネルＡ、Ｃ）及びＢＴ−１１治療（図６Ａ、パネルＢ、Ｄ）したマウスの１０週齢のＨ＆Ｅ染色結腸切片の代表的な顕微鏡写真。１０週齢での結腸の組織学的スコア（図６Ｂ、パネルＥ〜Ｇ）。それぞれ１０週齢での結腸固有層（図６Ｂ、パネルＨ〜Ｊ）における、総合的なＣＤ４＋、Ｔｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）、Ｔｈ１７（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＮＫ１．１−ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）細胞の免疫表現型検査。１０週齢での結腸全体におけるＰＥＰ濃度（図６Ｃ、パネルＫ）及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性（図６Ｃ、パネルＬ）。Ｉｆｎｇ（図６Ｃ、パネルＭ）、Ｔｎｆａ（図６Ｃ、パネルＮ）、Ｆｏｘｐ３−Ｅ２（図６Ｃ、パネルＯ）、Ｆｏｘｐ３（図６Ｃ、パネルＰ）、Ｓｏｃｓ２（図６Ｃ、パネルＱ）、及びＣａｐｎ３（図６Ｃ、パネルＲ）の結腸全体のｑＲＴ−ＰＣＲは、β−アクチンに対して正規化されている。パネルＥ〜Ｒについての条件は、（左から右に）ビヒクル、ＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）、ＰＳ−４８を有するビヒクル、及びＰＳ−４８を有するＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）である。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝１０）による統計的有意性。
【図７Ａ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のヒトＰＢＭＣ検証。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のクローン病のドナーのＰＢＭＣ内のＩＬ１０＋（図７Ａ、パネルＡ）、ＦＯＸＰ３＋（図７Ａ、パネルＢ）、ＴＮＦα＋（図７Ｂ、パネルＣ）、及びＩＦＮγ＋（図７Ｂ、パネルＤ）細胞の割合。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のＬａｎｃｌ２のサイレンシング内のＩＬ１０＋（図７Ｃ、パネルＥ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｃ、パネルＦ）細胞の割合。ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化したヒトＰＢＭＣから単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞内のＬａｇ３（図７Ｄ、パネルＧ）、Ｓｏｃｓ２（図７Ｄ、パネルＨ）、Ｉｒｆ７（図７Ｄ、パネルＩ）、Ｐ２ｒｘ７（図７Ｄ、パネルＪ）、Ｃａｐｎ３（図７Ｄ、パネルＫ）、Ｉｋｚｆ２（図７Ｄ、パネルＬ）の遺伝子発現。インビトロで分化したヒトＴｒｅｇのピルビン酸キナーゼ活性（図７Ｅ、パネルＭ）。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後かつタプシガルギン又は外部ＰＥＰ存在下でのＦＯＸＰ３＋（図７Ｅ、パネルＮ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｅ、パネルＯ）細胞の割合。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図７Ｂ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のヒトＰＢＭＣ検証。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のクローン病のドナーのＰＢＭＣ内のＩＬ１０＋（図７Ａ、パネルＡ）、ＦＯＸＰ３＋（図７Ａ、パネルＢ）、ＴＮＦα＋（図７Ｂ、パネルＣ）、及びＩＦＮγ＋（図７Ｂ、パネルＤ）細胞の割合。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のＬａｎｃｌ２のサイレンシング内のＩＬ１０＋（図７Ｃ、パネルＥ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｃ、パネルＦ）細胞の割合。ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化したヒトＰＢＭＣから単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞内のＬａｇ３（図７Ｄ、パネルＧ）、Ｓｏｃｓ２（図７Ｄ、パネルＨ）、Ｉｒｆ７（図７Ｄ、パネルＩ）、Ｐ２ｒｘ７（図７Ｄ、パネルＪ）、Ｃａｐｎ３（図７Ｄ、パネルＫ）、Ｉｋｚｆ２（図７Ｄ、パネルＬ）の遺伝子発現。インビトロで分化したヒトＴｒｅｇのピルビン酸キナーゼ活性（図７Ｅ、パネルＭ）。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後かつタプシガルギン又は外部ＰＥＰ存在下でのＦＯＸＰ３＋（図７Ｅ、パネルＮ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｅ、パネルＯ）細胞の割合。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図７Ｃ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のヒトＰＢＭＣ検証。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のクローン病のドナーのＰＢＭＣ内のＩＬ１０＋（図７Ａ、パネルＡ）、ＦＯＸＰ３＋（図７Ａ、パネルＢ）、ＴＮＦα＋（図７Ｂ、パネルＣ）、及びＩＦＮγ＋（図７Ｂ、パネルＤ）細胞の割合。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のＬａｎｃｌ２のサイレンシング内のＩＬ１０＋（図７Ｃ、パネルＥ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｃ、パネルＦ）細胞の割合。ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化したヒトＰＢＭＣから単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞内のＬａｇ３（図７Ｄ、パネルＧ）、Ｓｏｃｓ２（図７Ｄ、パネルＨ）、Ｉｒｆ７（図７Ｄ、パネルＩ）、Ｐ２ｒｘ７（図７Ｄ、パネルＪ）、Ｃａｐｎ３（図７Ｄ、パネルＫ）、Ｉｋｚｆ２（図７Ｄ、パネルＬ）の遺伝子発現。インビトロで分化したヒトＴｒｅｇのピルビン酸キナーゼ活性（図７Ｅ、パネルＭ）。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後かつタプシガルギン又は外部ＰＥＰ存在下でのＦＯＸＰ３＋（図７Ｅ、パネルＮ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｅ、パネルＯ）細胞の割合。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図７Ｄ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のヒトＰＢＭＣ検証。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のクローン病のドナーのＰＢＭＣ内のＩＬ１０＋（図７Ａ、パネルＡ）、ＦＯＸＰ３＋（図７Ａ、パネルＢ）、ＴＮＦα＋（図７Ｂ、パネルＣ）、及びＩＦＮγ＋（図７Ｂ、パネルＤ）細胞の割合。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のＬａｎｃｌ２のサイレンシング内のＩＬ１０＋（図７Ｃ、パネルＥ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｃ、パネルＦ）細胞の割合。ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化したヒトＰＢＭＣから単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞内のＬａｇ３（図７Ｄ、パネルＧ）、Ｓｏｃｓ２（図７Ｄ、パネルＨ）、Ｉｒｆ７（図７Ｄ、パネルＩ）、Ｐ２ｒｘ７（図７Ｄ、パネルＪ）、Ｃａｐｎ３（図７Ｄ、パネルＫ）、Ｉｋｚｆ２（図７Ｄ、パネルＬ）の遺伝子発現。インビトロで分化したヒトＴｒｅｇのピルビン酸キナーゼ活性（図７Ｅ、パネルＭ）。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後かつタプシガルギン又は外部ＰＥＰ存在下でのＦＯＸＰ３＋（図７Ｅ、パネルＮ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｅ、パネルＯ）細胞の割合。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図７Ｅ】ＢＴ−１１の免疫代謝効果のヒトＰＢＭＣ検証。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のクローン病のドナーのＰＢＭＣ内のＩＬ１０＋（図７Ａ、パネルＡ）、ＦＯＸＰ３＋（図７Ａ、パネルＢ）、ＴＮＦα＋（図７Ｂ、パネルＣ）、及びＩＦＮγ＋（図７Ｂ、パネルＤ）細胞の割合。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後のＬａｎｃｌ２のサイレンシング内のＩＬ１０＋（図７Ｃ、パネルＥ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｃ、パネルＦ）細胞の割合。ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化したヒトＰＢＭＣから単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞内のＬａｇ３（図７Ｄ、パネルＧ）、Ｓｏｃｓ２（図７Ｄ、パネルＨ）、Ｉｒｆ７（図７Ｄ、パネルＩ）、Ｐ２ｒｘ７（図７Ｄ、パネルＪ）、Ｃａｐｎ３（図７Ｄ、パネルＫ）、Ｉｋｚｆ２（図７Ｄ、パネルＬ）の遺伝子発現。インビトロで分化したヒトＴｒｅｇのピルビン酸キナーゼ活性（図７Ｅ、パネルＭ）。ＢＴ−１１（０、０．００９７５、０．０１９５、０．０３９、０．１５６、０．６２５μＭ）での２４時間培養後かつタプシガルギン又は外部ＰＥＰ存在下でのＦＯＸＰ３＋（図７Ｅ、パネルＮ）及びＩＦＮγ＋（図７Ｅ、パネルＯ）細胞の割合。＊（Ｐ＜０．０５）及び＊＊（Ｐ＜０．０１）でマーキングされた治療群（ｎ＝９）による統計的有意性。
【図８】ＬＡＮＣＬ２リガンドとしてのＢＴ−１１処理により生じたＣ．ディフィシル感染マウス及び非感染ＬＡＮＣＬ２ノックアウトマウスにおけるマイクロバイオーム変化。
【図９】Ｃ．ディフィシルコロニー形成ユニット、トキシンＡ（ＴｃｄＡ）及びトキシンＢ（ＴｃｄＢ）の産生、及びコントロール下の胞子形成、バンコマイシン処理、及びＢＴ−１１治療の刻み肉培地。
【図１０Ａ】Ｃ．ディフィシル感染の炎症、死亡率、重症度の軽減におけるＢＴ−１１の効果。
【図１０Ｂ】Ｃ．ディフィシル感染の炎症、死亡率、重症度の軽減におけるＢＴ−１１の効果。
【図１０Ｃ】Ｃ．ディフィシル感染の炎症、死亡率、重症度の軽減におけるＢＴ−１１の効果。
【図１１Ａ】ＩＬ−２お及びＢＴ−１１はＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ細胞の分化を促進する。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、野生型マウスの脾臓から単離され、ビヒクル又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）治療の存在下で調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞に分化された。フローサイトメトリによる標準的な分化培地又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）を含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１１Ａ、パネルＡ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１１Ｂ、パネルＢ）細胞への分化。フローサイトメトリによる標準的な分化培地又はＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１１Ａ、パネルＣ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１１Ｂ、パネルＤ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）はアスタリスク（＊）で、ＩＬ−２／ＩＬ−１２の存在は（＃）で示される。
【図１１Ｂ】ＩＬ−２お及びＢＴ−１１はＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ細胞の分化を促進する。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、野生型マウスの脾臓から単離され、ビヒクル又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）治療の存在下で調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞に分化された。フローサイトメトリによる標準的な分化培地又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）を含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１１Ａ、パネルＡ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１１Ｂ、パネルＢ）細胞への分化。フローサイトメトリによる標準的な分化培地又はＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１１Ａ、パネルＣ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１１Ｂ、パネルＤ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）はアスタリスク（＊）で、ＩＬ−２／ＩＬ−１２の存在は（＃）で示される。
【図１２Ａ】ＢＴ−１１はＳＴＡＴ５のリン酸化を増加させて、安定したＣＤ２５＋細胞分化を確立する。活動性疾患中の１０週齢のビヒクル及びＢＴ−１１治療Ｍｄｒ１ａ−／−マウスの結腸から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｑＲＴ−ＰＣＲによるＳＴＡＴ５ａ（図１２Ａ、パネルＡ）、Ｐｔｅｎ（図１２Ａ、パネルＢ）、ＦＯＸＯ１（図１２Ａ、パネルＣ）及びＰｈｌｐｐ１（図１２Ａ、パネルＤ）の発現。媒体又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）を用いた、又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）もしくはＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を用いたインビトロ分化Ｔｒｅｇにおけるウエスタンブロットによるｐ−ＳＴＡＴ５ａ（図１２Ｂ、パネルＥ）及びｐ−ＦＯＸＯ１（図１２Ｂ、パネルＦ）の正規化された発現。フローサイトメトリによるＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｃ、パネルＧ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｃ、パネルＨ）細胞への分化。フローサイトメトリによるＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｄ、パネルＩ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｄ、パネルＪ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）は、アスタリスク（＊）及び阻害剤の存在（＃）で示される。
【図１２Ｂ】ＢＴ−１１はＳＴＡＴ５のリン酸化を増加させて、安定したＣＤ２５＋細胞分化を確立する。活動性疾患中の１０週齢のビヒクル及びＢＴ−１１治療Ｍｄｒ１ａ−／−マウスの結腸から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｑＲＴ−ＰＣＲによるＳＴＡＴ５ａ（図１２Ａ、パネルＡ）、Ｐｔｅｎ（図１２Ａ、パネルＢ）、ＦＯＸＯ１（図１２Ａ、パネルＣ）及びＰｈｌｐｐ１（図１２Ａ、パネルＤ）の発現。媒体又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）を用いた、又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）もしくはＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を用いたインビトロ分化Ｔｒｅｇにおけるウエスタンブロットによるｐ−ＳＴＡＴ５ａ（図１２Ｂ、パネルＥ）及びｐ−ＦＯＸＯ１（図１２Ｂ、パネルＦ）の正規化された発現。フローサイトメトリによるＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｃ、パネルＧ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｃ、パネルＨ）細胞への分化。フローサイトメトリによるＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｄ、パネルＩ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｄ、パネルＪ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）は、アスタリスク（＊）及び阻害剤の存在（＃）で示される。
【図１２Ｃ】ＢＴ−１１はＳＴＡＴ５のリン酸化を増加させて、安定したＣＤ２５＋細胞分化を確立する。活動性疾患中の１０週齢のビヒクル及びＢＴ−１１治療Ｍｄｒ１ａ−／−マウスの結腸から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｑＲＴ−ＰＣＲによるＳＴＡＴ５ａ（図１２Ａ、パネルＡ）、Ｐｔｅｎ（図１２Ａ、パネルＢ）、ＦＯＸＯ１（図１２Ａ、パネルＣ）及びＰｈｌｐｐ１（図１２Ａ、パネルＤ）の発現。媒体又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）を用いた、又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）もしくはＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を用いたインビトロ分化Ｔｒｅｇにおけるウエスタンブロットによるｐ−ＳＴＡＴ５ａ（図１２Ｂ、パネルＥ）及びｐ−ＦＯＸＯ１（図１２Ｂ、パネルＦ）の正規化された発現。フローサイトメトリによるＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｃ、パネルＧ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｃ、パネルＨ）細胞への分化。フローサイトメトリによるＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｄ、パネルＩ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｄ、パネルＪ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）は、アスタリスク（＊）及び阻害剤の存在（＃）で示される。
【図１２Ｄ】ＢＴ−１１はＳＴＡＴ５のリン酸化を増加させて、安定したＣＤ２５＋細胞分化を確立する。活動性疾患中の１０週齢のビヒクル及びＢＴ−１１治療Ｍｄｒ１ａ−／−マウスの結腸から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｑＲＴ−ＰＣＲによるＳＴＡＴ５ａ（図１２Ａ、パネルＡ）、Ｐｔｅｎ（図１２Ａ、パネルＢ）、ＦＯＸＯ１（図１２Ａ、パネルＣ）及びＰｈｌｐｐ１（図１２Ａ、パネルＤ）の発現。媒体又はＢＴ−１１（１０、１００ｎＭ）を用いた、又はＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）もしくはＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）を用いたインビトロ分化Ｔｒｅｇにおけるウエスタンブロットによるｐ−ＳＴＡＴ５ａ（図１２Ｂ、パネルＥ）及びｐ−ＦＯＸＯ１（図１２Ｂ、パネルＦ）の正規化された発現。フローサイトメトリによるＩＬ−２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｃ、パネルＧ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｃ、パネルＨ）細胞への分化。フローサイトメトリによるＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍＬ）及び阻害剤ＳＦ１６７０又はＳＴＡＴ５ｉを含む分化培地でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋（図１２Ｄ、パネルＩ）及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋（図１２Ｄ、パネルＪ）細胞への分化。データはＳＥＭで平均値として表示される（ｎ＝８）。治療による統計的有意性（Ｐ＜０．０５）は、アスタリスク（＊）及び阻害剤の存在（＃）で示される。
【図１３】エクスビボでの調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞の治療は、インビボで増大した調節効果を刺激する。マウスは、ＢＴ−１１又はビヒクルで１２時間エクスビボで処理されたエフェクタＴ細胞（Ｔｅｆｆ）及び調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を養子移入された。ＢＴ−１１処理したＴｒｅｇを投与されたマウスは、累積的な疾患活動性（腸炎症）が低く、移入後５週間で結腸のＣＤ４＋Ｔ細胞集団に変化が見られた。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
「アルキル」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、特に明記しない限り、完全飽和、直鎖、分岐鎖、又は環状炭化水素ラジカル、又はそれらの組み合わせを意味し、二価及び多価ラジカルを含み得、指定された数の炭素原子を有する（例えば、Ｃ1〜Ｃ10は１個及び１０個を含めて１個〜１０個の炭素原子を意味する）。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）エチル、シクロプロピルメチル、及びそれらの同族体、ならびにそれらの異性体、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどが含まれるが、これらに限定されない。「アルキル」という用語は、特に明記しない限り、「ヘテロアルキル」及び「シクロアルキル」として以下により詳細に定義されているアルキルの誘導体も含む。
【００１８】
「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を含むことを除いて、上記で定義したアルキル基を意味する。アルケニル基の例には、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）など、ならびにより高級な同族体及び異性体が含まれる。
【００１９】
「アルキニル」という用語は、それが１つ以上の三重結合を含むことを除いて、上記で定義されているようなアルキル又はアルケニル基を意味する。アルキニル基の例には、エチニル、１−及び３−プロピニル、３−ブチニルなどが含まれ、より高級な同族体及び異性体が含まれる。
【００２０】
「アルキレン」、「アルケニレン」、及び「アルキニレン」という用語は、単独で又は別の置換基の一部として、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−で例示されるような、それぞれアルキル、アルケニル、アルキニル基由来の２価の基を意味する。
【００２１】
典型的には、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基は、１〜２４個の炭素原子を有するであろう。本発明では、１０個以下の炭素原子を有するそれらの基が好ましい。「低級」という用語は、「低級アルキル」又は「低級アルキレン」のように、これらの基のいずれかに適用される場合、１０個以下の炭素原子を有する基を示す。
【００２２】
「置換された」とは、低級アルキル、アリール、アシル、ハロゲン（例えば、ＣＦ3などのアルキルハロ）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チオアミド、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプト、チア、アザ、オキソ、飽和及び不飽和の両方の環状炭化水素、複素環などの１つ以上の置換基をさらに含む、本明細書に記載の化学基を指す。これらの基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン部分の任意の炭素又は置換基に結合してもよい。さらに、これらの基は、炭素鎖自体から垂れ下がっていてもよく、又は炭素鎖自体に組み込まれていてもよい。
【００２３】
「アリール」という用語は、本明細書では、一緒に融合、共有結合、又はジアゾ、メチレン、もしくはエチレン部分などの共通の基に結合する単一の芳香環又は複数の芳香環であり得る芳香族置換基を指すために使用される。共通の連結基はまた、ベンゾフェノンのようにカルボニルであってもよい。芳香環は、例えば、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ジフェニルメチル及びベンゾフェノンなどを含んでもよい。「アリール」という用語は、「アリールアルキル」及び「置換アリール」を包含する。フェニル基の場合、アリール環はモノ−、ジ−、トリ−、テトラ−、又はペンタ−換されていてもよい。より大きな環は、非置換であるか、又は１つ以上の置換基を有してもよい。
【００２４】
「置換アリール」は、このように、低級アルキル、アシル、ハロゲン、アルキルハロ（例えば、ＣＦ3）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、フェノキシ、メルカプト、及び芳香環に縮合した、共有結合した、又はジアゾ、メチレン、もしくはエチレン部分などの共通の基に結合した飽和及び不飽和の両方の環状炭化水素などの１つ以上の官能基を含むアリールを指す。連結基はまた、シクロヘキシルフェニルケトンにおけるようなカルボニルであってもよい。「置換アリール」という用語は、「置換アリールアルキル」を包含する。
【００２５】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、本明細書では、フッ素、臭素、塩素、及びヨウ素原子を指すために使用される。
【００２６】
本明細書では、「ヒドロキシ」という用語は、−ＯＨ基を指すために使用される。
【００２７】
「アミノ」という用語は、ＮＲＲ´を示すために使用され、Ｒ及びＲ´は、独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はそれらの置換類縁体である。「アミノ」は、第二級及び第三級アミンを表す「アルキルアミノ」、及び基ＲＣ（Ｏ）ＮＲ´を表す「アシルアミノ」を包含する。
【００２８】
本発明の方法の過程で、治療有効量の本発明の化合物を、多くの様式で哺乳動物及びヒトを含む動物に投与し得る。好ましい実施形態では、本発明の化合物は経口的又は非経口的に投与されるが、医療用化合物又はエアロゾルなどによる他の投与形態も企図される。
【００２９】
経口投与の場合、化合物の有効量を、例えば、固体、半固体、液体、又は気体の状態で投与してもよい。特定の例には、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル剤が含まれる。しかしながら、化合物はこれらの形態に限定されない。
【００３０】
本発明の化合物を錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、又は懸濁液に製剤化するために、化合物は、好ましくは、結合剤、崩壊剤及び／又は潤滑剤と混合される。必要に応じて、得られた組成物を、既知の方法を使用して、希釈剤、緩衝剤、浸潤剤、保存剤及び／又は香料と混合してもよい。結合剤の例としては、結晶セルロース、セルロース誘導体、コーンスターチ、シクロデキストリン、及びゼラチンが挙げられる。崩壊剤の例としては、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。滑沢剤の例としては、タルク、ステアリン酸マグネシウムが挙げられる。さらに、乳糖、マンニトール等の従来から使用されている添加剤も使用してもよい。
【００３１】
本発明の化合物を、直腸投与してもよい。直腸投与には、坐剤を使用してもよい。坐剤は、本発明の化合物を、体温で融解するが、室温で固体のままである薬学的に好適な賦形剤と混合することによって調製してもよい。例には、カカオバター、カーボンワックス、及びポリエチレングリコールが含まれるが、これらに限定されない。得られた組成物は、当該分野で公知の方法を使用して、任意の所望の形態に成形されてもよい。
【００３２】
非経口投与の場合、本発明の化合物を注射により投与してもよい。注射による投与の場合、本発明の化合物を、皮下、皮内、静脈内、又は筋肉内に注射してもよい。そのような注射用の医薬品を、例えば植物油、合成樹脂酸のグリセリド、高級脂肪酸のエステル、又は既知の方法によるプロピレングリコールなど水性又は非水性溶媒に本発明の化合物を、溶解、懸濁又は乳化することにより調製してもよい。また、必要に応じて、従来から使用されている可溶化剤、浸透圧調整剤、乳化剤、安定剤、防腐剤などの添加剤をまた、添加してもよい。必須ではないが、組成物は無菌又は滅菌されていることが好ましい。
【００３３】
本発明の化合物を懸濁液、シロップ、又はエリキシルに製剤化するために、薬学的に好適な溶媒を使用してもよい。これらの中に含まれているのは水の非限定的な例である。
【００３４】
本発明の化合物はまた、医薬品を調製するために、他の薬学的に好適な活性を有する追加の化合物と一緒に使用されてもよい。本発明の化合物を独立型化合物として又は組成物の一部として含む薬物を、それを必要とする対象の治療に使用してもよい。
【００３５】
本発明の化合物を、化合物を液体又は微粉末の形態で、気体又は液体の噴霧剤及び、必要に応じて、膨張剤などの既知の補助剤と一緒に、エアゾール容器又はネブライザーなどの非加圧容器に装填することにより調製されるエアロゾル又は吸入剤の形態で投与してもよい。噴霧剤としては、例えば、ジクロロフルオロメタン、プロパン又は窒素の加圧ガスを使用してもよい。
【００３６】
本発明の化合物を、それを必要とする哺乳動物及びヒトを含む動物に、錠剤、カプセル、溶液、又は乳濁液などの医薬組成物として投与してもよい。本発明に記載されている他の形態の化合物の、それらのエステル、その薬学的に好適な塩、それらの代謝産物、それらの構造的に関連する化合物、それらの類似体、及びそれらの組み合わせを含む、単回用量又は複数回用量での投与をまた、本発明が企図している。
【００３７】
本明細書で使用している「予防する」、「治療する」、「保護する」、又は「改善する」という用語及び同様の用語には、予防及び完全な又は部分的な治療が含まれる。この用語には、症状の軽減、症状の改善、症状の重症度の軽減、疾患の発生率の低下、寛解の誘導、寛解の維持、又は治療結果を改善する患者の状態のいずれかの他の変化も含まれる。
【００３８】
本発明に記載されている新しい化合物は、好ましくは、組成物の形態で使用及び／又は投与される。好適な組成物は、好ましくは、医薬組成物、食材、又は栄養補助食品である。これらの組成物は、化合物を送達するための便利な形態を提供する。本発明の組成物は、酸化又は溶解度に関する化合物の安定性を増加させるのに有効な量の抗酸化剤を含んでもよい。
【００３９】
本発明の方法で投与される、又は本発明の使用において投与するための化合物の量は、任意の好適な量である。それは好ましくは１日当たり約０．００００１ｇから約２０ｇまで（より好ましくは、０．０１ｇから１ｇまで、例えば０．０５ｇから０．５ｇまで）の化合物である。好適な組成物は、適宜、製剤化され得る。生物学的に活性な薬剤の投与の当業者は、既知のかつよく理解されているパラメータに基づいて、様々な対象のための特定の投与計画を開発することができるであろう。
【００４０】
本発明による好ましい組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、カプレット、多粒子（顆粒、ヘッド、ペレット及びマイクロカプセル化粒子を含む）、粉末、エリキシル、シロップ、懸濁液、炎症標的ヒドロゲル及び溶液などのヒドロゲルなどの医薬組成物である。医薬組成物は、典型的には、薬学的に許容可能な希釈剤又は担体を含むであろう。医薬組成物は、好ましくは、非経口的又は経口的投与に適合される。経口投与可能な組成物は、固体又は液体の形態であってもよく、とりわけ、錠剤、粉末、懸濁液、及びシロップの形態をとってもよい。必要に応じて、組成物は、１つ以上の香味剤及び／又は着色剤を含む。一般に、治療及び栄養組成物は、対象に対する化合物の作用を著しく妨害しない任意の物質を含んでもよい。
【００４１】
そのような組成物における使用に好適な薬学的に許容可能な担体は、製薬業界でよく知られている。本発明の組成物は、０．０１〜９９重量％の本発明の化合物を含んでもよい。本発明の組成物は、一般に、単位剤形で調製される。好ましくは、本発明に記載されている化合物の単位投与量は１ｍｇ〜１０００ｍｇ（より好ましくは、５０ｍｇ〜５００ｍｇ）である。これらの組成物の調製に使用される賦形剤は、当技術分野で知られている賦形剤である。
【００４２】
組成物の製品形態のさらなる例は、ゼラチン、デンプン、加工デンプン、デンプン誘導体、例えばグルコース、スクロース、乳糖、果糖からなる群から選択された封入材料を含む軟らかいゲル又は硬いカプセルの形態などの栄養補助食品である。封入材料は、架橋剤又は重合剤、安定剤、抗酸化剤、感光性フィルを保護するための光吸収剤、防腐剤などを任意に含んでもよい。好ましくは、栄養補助食品中の化合物の単位投与量は１ｍｇ〜１０００ｍｇ（より好ましくは、５０ｍｇ〜５００ｍｇ）である。
【００４３】
一般に、担体という用語は、本出願を通して、記載された化合物が混合されても、それが医薬担体、食品、栄養補助食品、又は栄養補助食品であってもよい組成物を表すために使用されてもよい。上記の材料は、本発明の目的のための担体と見なされてもよい。本発明の特定の実施形態では、担体は、本発明の化合物に対して生物学的活性を殆ど又は全く有さない。
【００４４】
用量：本発明の方法は、それを必要とする動物に治療有効量の化合物を投与することを含み得る。化合物の有効量は、投与される化合物の形態、投与期間、投与経路（例えば、経口又は非経口）、動物の年齢、ならびに哺乳動物及びヒトを含む動物の状態に依存する。
【００４５】
例えば、動物において本明細書に記載される状態を治療又は予防するのに有効な化合物の量は、０．１〜１０，０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり得る。化合物の好ましい有効量は１〜５，０００ｍｇ／ｋｇ／日であり、より好ましい用量は２〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。毒物学データが示すように化合物は無毒であるため、投与する有効量の上限は重要ではない。化合物の有効量は、約７〜１００日の範囲の期間、好ましくは１５〜５０日の期間は、最も好ましくは３０〜４２日期間動物に投与すると、動物における本明細書に記載の状態を治療又は予防するのに最も効果的である。
【００４６】
自己免疫疾患、炎症性疾患又は代謝性疾患に繋がる免疫系の過剰活性化又は調節不全を防止するのに最も効果的な化合物の量は、０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、好ましい投与量は１〜１５０ｍｇ／ｋｇ／日のであり得る。
【００４７】
本発明の化合物の有効量が治療用、医療用、又は獣医用組成物で投与される場合、好ましい用量は、製剤に対して約０．０１〜２．０％重量／重量の範囲である。
【００４８】
特定の他の実施形態では、本発明は、ＬＡＮＣＬ２結合化合物及び構造的にも関連する化合物、例えば、化合物、そのエステル、その薬学的に好適な塩、その代謝物、その構造的に関連する化合物、又は免疫代謝疾患の治療及び予防におけるそれらの組み合わせからなる群から選択される化合物の使用を提供する。
【００４９】
さらに、一般に、本発明は、自己代謝、炎症、代謝又は感染症の遮断を助ける免疫代謝の経路に関する欠陥の予防又はホメオスタシスの回復に関し、関連する経路は、グルコース代謝及び貯蔵、脂肪酸代謝及び貯蔵、アミノ酸代謝及び貯蔵、カルシウム流動、サイクリックＡＭＰ代謝、炎症促進性サイトカイン（腫瘍壊死因子アルファ、インターフェロンガンマ、インターロイキン−６及び単球走化性タンパク質１）の産生を制御するＴＬＲ信号伝達及びＮＬＲシグナル伝達又はＮＦ−κＢ信号伝達などの炎症性経路、及びＦＯＸＰ３活性又はＩＬ−１０シグナル伝達などの調節経路を含む。この効果は、生物学的効果を誘発する、体内のさまざまな種類の細胞への化合物の曝露がもたらす。細胞は、消化管組織、免疫細胞（すなわち、マクロファージ、単球、リンパ球）、筋肉細胞、内皮細胞又は上皮細胞からのものを含んでもよいが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本発明は、Ｃ．ディフィシル感染などの感染症に関連する炎症を軽減又は予防するために、例えば、経口投与される本発明の化合物で対象を治療することを提供する。
【００５０】
実施する場合、本発明の方法は、上記のように、任意の許容可能な形態を使用して、任意の許容可能な投与経路を介して対象に化合物を投与し、対象の体が自然なプロセスを通して化合物を標的細胞に分配することを可能にすることにより得る。上記のように、投与は、同様に、標的細胞（すなわち、処理される細胞）を含む部位（例えば、臓器、組織）への直接注射、又は体内に細胞を戻すように注射する前の化合物による細胞治療に使用される細胞の培養により得る。
【００５１】
さらに、投与は任意の数のレジメンにしたがい得る。したがって、それは、実験化合物の単回用量もしくは投薬、又はある期間にわたる複数回用量もしくは投薬を含み得る。したがって、治療は、所望の結果が達成されるまで、投与ステップを１回以上繰り返すことを含み得る。特定の実施形態では、治療は、数週間、数ヶ月、又は数年などの長期間にわたって継続し得る。当業者は、当技術分野における既知のパラメータに基づいて、個人に好適な投与計画を容易に開発することが十分に可能である。本発明の化合物の投薬量は、本発明のこれらの実施形態の方法において使用されてもよい。免疫代謝性疾患の治療のために、化合物は、約０．００１ｍｇ／日〜９，０００ｍｇ／日の量で投与されることが好ましい。
【００５２】
投与される量は、対象、疾患又は障害の段階、対象の年齢、対象の一般的な健康状態、及び医学分野の当業者によって既知でありかつ日常的に考慮されている他の様々なパラメータに応じて変化するであろう。一般的な問題として、罹患した部位の炎症の量又は影響を受ける代謝産物又はシグナルトランスデューサの濃度に検出可能な変化をもたらすために、十分な量の化合物が投与されるであろう。患者が活動的な症状を経験していない場合、探す可能性のある変化には、免疫細胞でのＴＮＦα発現などの免疫細胞パラメータ、血中の調節性Ｔ細胞の割合、細胞によるグルコース取り込み又は細胞内のグリコーゲンの量などの代謝パラメータが含まれてもよい。好適な量は、本明細書に開示されており、追加の好適な量は、本明細書に開示された量に基づいて、過度の又は過剰の実験を行うことなくに当業者によって特定され得る。
【００５３】
上記の方法を考慮して、本発明が、対象の細胞の治療などの細胞との接触に使用するためのＬＡＮＣＬ２結合化合物による免疫代謝治療を提供することは明らかであるはずである。上記の議論は、医薬的又は医学的設定と一般に考えられるものに使用するための組成物の一部としての本発明の化合物の使用に焦点を当てている。
【００５４】
免疫代謝疾患及び記載されている他の状態の治療のために本発明に記載されている化合物は、上記でより詳細に記載されているように、医薬、栄養組成物、機能性食品組成物、食物補助剤として又は細胞療法において製剤化されてもよい。
【００５５】
化合物を直接投与することにより状態を治療する方法の代替又は追加として、状態は、化合物を有する前駆細胞から生成された調製細胞で治療され得る。治療することができる状態には、本明細書又は米国特許第９，５５６，１４６号に記載されている任意の状態が含まれる。治療に使用される化合物は、本明細書に開示している、もしくは本明細書に開示している任意の式に包含される任意の化合物、又は米国特許第９，５５６，１４６号に開示されている任意の式に開示又は包含される任意の化合物を含み得る。
【００５６】
本明細書では、「前駆細胞」という用語は、調製細胞を生成するために治療する開始細胞として機能する任意の細胞を一般的に指すために使用される。細胞は、幹細胞、前駆細胞、又は、例えば、全能性、多能性もしくは単能性の特性を有するが、必ずしもそうである必要はない「前駆細胞」（この用語は、幹細胞と分化した細胞との間の中間体を指すために当技術分野で使用されているため）などの調製細胞に至る分化系譜の上流の細胞であってもよい。したがって、いくつかの変形例では、前駆細胞から調製細胞を生成することは、前駆細胞を調製細胞に分化することを含む。他の変形例では、前駆細胞から調製細胞を生成することは、遺伝子発現変化などの変化を誘発することを単に含むだけである。
【００５７】
調製細胞は、前駆細胞をインビトロで本発明の化合物の１つ以上と接触させ、それにより調製細胞を生成することによって、前駆細胞から生成され得る。「インビトロ」及び「エクスビボ」という用語は、「インビボ」とは対照的に、本明細書では互換的に使用され、生体外にある状態を指す。
【００５８】
本発明の前駆細胞及び／又は調製細胞は免疫細胞を含んでもよい。例示的な免疫細胞には、顆粒球、肥満細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、及びＢ細胞などが含まれる。例示的な顆粒球には、好塩基球、好酸球、及び好中球が含まれる。
【００５９】
本発明の前駆細胞及び／又は調製細胞には白血球（白血球）が含まれてもよい。例示的な白血球には、好中球、好酸球（好酸球）、好塩基球、リンパ球、及び単球が含まれる。
【００６０】
本発明の前駆細胞及び／又は調製細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）又は固有層単核細胞（ＬＰＭＣ）を含んでもよい。例示的なＰＢＭＣ及びＬＰＭＣにはリンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球が含まれる。
【００６１】
本発明の前駆細胞及び／又は調製細胞はＴ細胞を含んでもよい。Ｔ細胞は、どのタンパク質が細胞表面に存在するかに基づいて、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞の２つの広いカテゴリーに分類される。Ｔ細胞は、感染した細胞を殺滅すること、他の免疫細胞を活性化すること又は補充することなどの複数の機能を実行する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞又は細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）とも呼ばれる。それらは、ウイルス感染細胞及び癌細胞を認識して除去するために重要である。主要なＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットは、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、ＴＨ１胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ１７細胞、及びＴｒｅｇ細胞であり、「ＴＨ」は「Ｔヘルパー細胞」を指す。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ１７細胞、Ｔｒｅｇ細胞のいずれにも分化していないＴ細胞である。調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、他のＴ細胞の活動を監視及び阻害する。それらは、有害な免疫活性化を防止しかつ耐性を維持し、又は体自身の細胞及び抗原に対する免疫応答を防止する。一部の変形例では、前駆細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、調製細胞は、Ｔｒｅｇ細胞を含む。
【００６２】
前駆細胞から調製細胞を生成することは、前駆細胞に関して調製細胞に化合物依存性差異を誘発するのに有効な時間、本発明の１つ以上の化合物の量を接触させることを含んでもよい。本明細書で使用する場合、「化合物依存性差異」は、前駆細胞を本発明の１つ以上の化合物と接触させることから生じる、前駆細胞に関する調製細胞における差異を指す。化合物依存性差異は、本発明の１つ以上の化合物の存在下又は非存在下で細胞を培地と接触させることによって決定され得、化合物依存性差異は、本発明の１つ以上の存在下で培地と接触された細胞でのみ現れる特徴である。化合物依存性差異は、種類における違いだけでなく程度の違いであってもよい。
【００６３】
調製細胞における化合物依存性差異は、遺伝子発現における差異を含んでもよい。特に明記しない限り、「遺伝子発現」は、転写又は翻訳のいずれか又はすべてを指すために本明細書で広く使用されている。したがって、遺伝子発現における差異は、ｍＲＮＡ産生における差異、タンパク質産生における差異、又はその両方であり得る。特に明記しない限り、差異的発現を有する遺伝子を、遺伝子（例えば、ＦＯＸＰ３）から産生されたタンパク質を参照することにより、又は遺伝子自体（例えば、Ｌａｇ３）を参照することにより、本明細書において同定してもよい。本発明の様々な変形例において、遺伝子発現における化合物依存性差異は、ＩＬ−１０もしくはそのオーソログの発現の増加、ＦＯＸＰ３もしくはそのオーソログの発現の増加、ＴＮＦαもしくはそのオーソログの発現の減少、ＩＦＮγもしくはそのオーソログの発現の減少、Ｔｂｅｔもしくはそのオーソログの発現の減少、Ｌａｇ３もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｓｏｃｓ２もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｉｒｆ７もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｐ２ｒｘ７もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｃａｐｎ３もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｉｋｚｆ２もしくはそのオーソログの発現の増加、Ｓｔａｔ５ａもしくはそのオーソログの発現の増加、Ｐｔｅｎもしくはそのオーソログの発現の増加、Ｆｏｘｏ１もしくはそのオーソログの発現の増加、及び／又はＰｈｌｐｐ１もしくはそのオーソログの発現の増加の１つ以上を含んでもよい。オーソログには、動物種におけるオーソログが含まれてもよい。オーソログには、哺乳動物種におけるオーソログが含まれてもよい。オーソログ（上記のマウス遺伝子などについての）には、霊長類におけるオーソログが含まれてもよい。オーソログ（上記のマウス遺伝子などについての）には、ヒトにおけるオーソログが含まれてもよい。
【００６４】
調製細胞における化合物依存性差異には、ＳＴＡＴ５ａもしくはそのオーソログのリン酸化の増加、ＦＯＸＯ１もしくはそのオーソログのリン酸化の増加、及び／又はピルビン酸キナーゼ活性の増加などの他の検出可能な差異が含まれてもよい。
【００６５】
調製細胞を生成する際、前駆細胞は、約１００ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ以下から約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭ以上の量の化合物と接触されてもよい。前駆細胞は、約１２時間、６時間、１時間、約３０分以下から約２４時間、約４８時間、約７２時間以上の時間、化合物と接触されてもよい。
【００６６】
いくつかの変形例では、ＰＢＭＣ又はＬＰＭＣ全体が、本発明の化合物と接触される。ＰＢＭＣ又はＬＰＭＣは、動物から単離され得る。いくつかの変形例では、Ｔ細胞などのＰＢＭＣ又はＬＰＭＣのサブタイプをＰＢＭＣ又はＬＰＭＣから単離し、次に、本発明の化合物と接触させることができる。いくつかの変形例では、ＰＢＭＣ又はＬＰＭＣを本発明の化合物と接触させ、次に、Ｔ細胞又は特定のタイプのＴ細胞などの細胞のサブタイプをそこから単離する。ＰＢＭＣ、ＬＰＭＣ、及びそれらのサブタイプを単離する方法は、当技術分野で知られている。例えば、Ｍａｊｏｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｍａｊｏｗｉｃｚ  Ａ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍａｒｅｌ  Ｓ，ｔｅ  Ｖｅｌｄｅ  ＡＡ，Ｍｅｉｊｅｒ  ＳＬ，Ｐｅｔｒｙ  Ｈ，ｖａｎ  Ｄｅｖｅｎｔｅｒ  ＳＪ，Ｆｅｒｒｅｉｒａ  Ｖ．Ｍｕｒｉｎｅ  ＣＤ４＋ＣＤ２５−ｃｅｌｌｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｗｉｔｈ  ＰＭＡ／ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＣＤ３  ａｃｑｕｉｒｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．ＢＭＣ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１２  Ｄｅｃ  ３；１２：１７２）及びＣａｎａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１６（Ｃａｎａｖａｎ  ＪＢ，Ｓｃｏｔｔａ  Ｃ，Ｖｏｓｓｅｎｋａｍｐｅｒ  Ａ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  Ｒ，Ｅｌｄｅｒ  ＭＪ，Ｓｈｏｖａｌ  Ｉ，Ｍａｒｋｓ  Ｅ，Ｓｔｏｌａｒｃｚｙｋ  Ｅ，Ｌｏ  ＪＷ，Ｐｏｗｅｌｌ  Ｎ，Ｆａｚｅｋａｓｏｖａ  Ｈ，Ｉｒｖｉｎｇ  ＰＭ，Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ＪＤ，Ｈｏｗａｒｄ  ＪＫ，Ｙａｇｅｌ  Ｓ，Ａｆｚａｌｉ  Ｂ，ＭａｃＤｏｎａｌｄ  ＴＴ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｆｕｅｎｔｅｓ  ＭＰ，Ｓｈｐｉｇｅｌ  ＮＹ，Ｌｏｍｂａｒｄｉ  Ｇ，Ｌｏｒｄ  ＧＭ．Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ＣＤ４５ＲＡ＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ａｎ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇｕｔ．２０１６  Ａｐｒ；６５（４）：５８４−９４）を参照されたい。例えば、ＰＭＢＣのサブセットは、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体で単離することができる。抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（マサチューセッツ州ウォルサム）のＨｕｍａｎ  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８  ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）などの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズの形で提供され得る。
【００６７】
調製細胞を生成することは、調製細胞を前駆細胞から分化することを含み得る。例えば、Ｔｒｅｇ細胞などの調製細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞などの前駆細胞から分化させ得る。このような分化は、本発明の化合物の１つ以上に加えて、前駆細胞を分化因子と接触させることを含み得る。様々な分化因子には、オールトランスレチノイン酸、ＴＧＦ−β、ホルボールミリステートアセテート、イオノマイシン、ラパマイシン、及び／又はＩＬ−２が含まれる。いくつかの変形例では、分化は、前駆細胞中の部分に対する、調製細胞中のＴｒｅｇ細胞の割合を拡大することを含み得る。
【００６８】
本発明の前駆細胞及び調製細胞は、単離された細胞であり得る。「単離された」又は「精製された」という用語は、元の環境、例えば自然環境から取り除かれた物質を意味する。物質が特定の組成物中に、精製工程の前に存在する濃度よりも高い又は低い濃度で存在する場合、その物質は「精製された」と言われる。
【００６９】
本発明の調製細胞で状態を治療することは、状態を治療するのに十分な量で細胞を動物に投与することを含み得る。調製細胞は、非経口又は経腸を含む、化合物について上記の任意の経路又は方法を使用して投与され得る。非限定的な非経口投与の形態には、注射又は注入が含まれる。調製細胞は、血流又は体の他の部分に直接注射又は注入され得る。非限定的な腸内投与の形態には、調製細胞が消化管に入るような経口及び直腸投与が含まれる。調製細胞は、治療される動物に対して自己由来（すなわち、調製細胞が治療に使用されるのと同じ動物から採取された細胞から生成された）、又は治療される動物に対して異種（すなわち、調製細胞が治療に使用される異なる動物から生成された）であってもよい。上記のように調製細胞は、本明細書に記載されている状態のいずれかを治療する方法で使用され得る。例示的な状態には腸の炎症が含まれる。例示的な種類の腸の炎症には炎症性腸疾患が含まれる。例示的な種類の炎症性腸疾患にはクローン病及び潰瘍性大腸炎が含まれる。
【００７０】
本発明の一実施形態では、免疫代謝疾患を治療する方法は、顕著な体重増加、全身性免疫抑制、クッシング様外観、骨減少症／骨粗しょう症、細胞毒性又は現在利用可能な治療（すなわち、スタチン、抗生物質、コルチコステロイド、ドキソルビシン、メトトレキサート）に共通する膵炎などの識別可能な副作用を引き起こさない治療を含む。すなわち、一部の細胞におけるＬＡＮＣＬ２の発現及び／又は活性化及び／又は他の免疫代謝経路に影響を与えることによって、少なくとも部分的に治療効果を提供する本発明による治療方法は、治療を受けていない他の同様の対象と比較して、治療されている対象において、例えば、体液貯留による著しい体重増加を引き起こさない有益な効果を提供することが見出された。
【００７１】
したがって、本発明の免疫代謝方法は、免疫細胞の代謝に影響を与えることによって炎症を軽減するための治療を提供し得る。この方法は、全身的に（すなわち、対象の体全体で）又は局所的に（例えば、細胞及びマクロファージを含むがこれらに限定されない、投与の部位又は炎症細胞の部位で）炎症を軽減し得る。免疫代謝による炎症の治療又は予防の際に、観察される可能性のある１つの影響は、グルコースの代謝における変化である。特に、この変化は、ピルビン酸による乳酸塩の産生から、免疫炎症作用に関連するトリカルボン酸回路への入口に向かう可能性がある。より具体的には、この代謝における変化は、ＩＬ１７＋Ｔｈ１７細胞又はＩＦＮγ＋Ｔｈ１細胞などのエフェクタＣＤ４＋Ｔ細胞と比較して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋又は他の調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合の増加と関連し得る。別の観察された効果は、嫌気性代謝の減少及び免疫チェックポイント経路の増加の組み合わせからもたらされる細胞増殖の減少であってもよい。治療的に誘発された代謝の変化の別の影響は、脂肪酸の処理及び貯蔵の変化からもたらされるＭＣＰ−１、ＩＬ−８、又はＣＸＣＬ９などの炎症性ケモカインの発現の低下である可能性がある。したがって、方法はまた、治療が施される対象の免疫応答に影響を与え又は変化させ、それによって炎症、疾患及び病理を遮断する方法と見なし得る。
【００７２】
本発明は、関連する成分が胃、小腸、大腸、及び直腸を含む消化管における炎症を抑制する方法を提供する。
【００７３】
本発明は、ＩＢＤに罹患している対象、又は恐らくクローン病又は潰瘍性大腸炎についての遺伝的素因を有する健康な個体がＩＢＤを発症することを治療又は予防する方法を提供する。この方法はまた、寛解型のＩＢＤを有する患者を治療することを含んでもよい。本発明によれば、「ＩＢＤに罹患している対象」という用語は、ＩＢＤに典型的な１つ以上の臨床症状を示す疾患又は障害を有する対象（例えば、動物、ヒト）を意味するために使用される。一般に、本発明のこの態様による治療又は予防方法は、ＩＢＤの１つ以上の症状もしくは臨床症状の治療もしくは予防、又はそのような症状もしくは症状の発症の予防に有効な量の化合物又は細胞療法を対象に投与することを含む。
【００７４】
したがって、本発明の方法によれば、本発明は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症及び自己免疫疾患に関連する炎症の治療方法を提供することができる。治療方法は予防的方法であり得る。特定の実施形態では、方法は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症及び自己免疫疾患に関連する炎症を治療する方法である。他の実施形態では、方法は、ＩＢＤを予防する方法である。実施形態では、方法は、寛解型のＩＢＤがアクティブになるのを防止する方法である。さらに他の実施形態では、方法は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症及び自己免疫疾患に関連する炎症に罹患している対象の健康状態を改善する方法である。胃腸感染症を引き起こす微生物には、大腸菌、赤痢菌、サルモネラ菌、病原性ビブリオ菌、カンピロバクタージェジュニ菌、エルシニアエンテロコリチカ菌、トキソプラズマ原虫、赤痢アメーバ及びジアルジアランブリアが含まれるが、これらに限定されない。したがって、特定の実施形態では、本発明は、ＩＢＤ、腸内感染症に関連する炎症及び自己免疫疾患に関連する又はＩＢＤを発症する危険性がある炎症、腸内感染症に関連する炎症及び自己免疫疾患に関連する炎症に苦しむ対象の健康、臓器、及び／又は組織を保護する方法を提供する。
【００７５】
本発明の一実施形態では、ＩＢＤを治療する方法は、顕著な体重増加、全身性免疫抑制、クッシング様外観、骨減少症／骨粗しょう症、又は現在利用可能なＩＢＤ治療（すなわち、コルチコステロイド、腫瘍壊死因子アルファ阻害剤）に共通する膵炎などの識別可能な副作用を引き起こすことなくＩＢＤを治療することを含む。すなわち、一部の細胞におけるＬＡＮＣＬ２の発現及び／又は活性化に影響を与えることにより、少なくとも部分的に治療効果を提供する本発明による治療方法は、治療を受けていない他の同様の対象と比較して、治療されている対象における、例えば体液貯留による著しい体重増加を引き起こさない有益な効果を提供することが見出された。
【００７６】
したがって、本発明の方法は、炎症を軽減する方法を提供することができる。この方法は、全身的に（すなわち、対象の体全体で）又は局所的に（例えば、細胞及びマクロファージを含むがこれらに限定されない、投与の部位又は炎症細胞の部位で）炎症を軽減し得る。本発明の方法による炎症の治療又は予防において、見られ得る１つの効果は、腸に浸潤する血液単球又はマクロファージ及びリンパ球の数の減少である。もう１つは、ＣＤ４+ＣＤ２５+ＦｏｘＰ３+調節性Ｔ細胞などの調節性免疫細胞集団の増加、又はリンパ球又はマクロファージの調節特性の増加（例えば、インターロイキン４（ＩＬ−４）又はＩＬ−１０の増加、又はＴＮＦ−α及びＩＬ−６の減少）である。もう１つは、炎症性遺伝子及び／又は接着分子の存在の減少であってもよい。したがって、方法はまた、治療が施される対象の免疫応答に影響を与える又はそれを変化させる方法と見なし得る。対象は、Ｔ細胞の免疫調節又は細胞接着分子のダウンレギュレーションが望ましい結果である、炎症性腸疾患又は別の状態を有する可能性がある。
【００７７】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、感染症を治療する方法を提供する。そのような感染症の非限定的な例には、ウイルス感染症、細菌感染症、及び真菌感染症が含まれる。
【００７８】
ウイルス感染症の非限定的な例には、アデノウイルスなどのアデノウイルス科のウイルス、単純ヘルペス、１型、単純ヘルペス、２型、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス、８型などのヘルペスウイルス科のウイルス、ヒトパピローマウイルスなどのパピロマウイルス科のウイルス、ＢＫウイルス及びＪＣウイルスなどのポリオーマウイルス科のウイルス、天然痘などのポックスウイルス科のウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルス科のウイルス、ヒトボカウイルス及びパルボウイルスＢ１９などのパルボウイルス科のウイルス、ヒトアストロウイルスなどのアストロウイルス科のウイルス、ノーウォークウイルスなどのカリシウイルス科のウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルスなどのピコルナウイルス科のウイルス、急性呼吸器症候群ウイルスなどのコロナウイルス科のウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、及び西ナイルウイルスなどのフラビウイルス科のウイルス、風疹ウイルスなどのトガウイルス科のウイルス、Ｅ型肝炎ウイルスなどのヘペウイルス科のウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などのレトロウイルス科のウイルス、インフルエンザウイルスなどのオルソミクソウイルス科のウイルス、グアナリトウイルス、ジュニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、サビアウイルスなどのアリーナウイルス科のウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルスなどのブニヤウイルス科のウイルス、エボラウイルス及びマールブルグウイルスなどのフィロウイルス科のウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルスなどのパラミクソウイルス科のウイルス、狂犬病ウイルスなどのラブドウイルス科のウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスなどの割り当てられていないウイルス、ならびに、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、バンナウイルスなどのレオウイルス科のウイルスからの感染症が含まれる。
【００７９】
細菌感染症の非限定的な例には、炭疽菌、セレウス菌、百日咳菌、ボレリアブルグドルフェリ、ブルセラアボルトス、ブルセラカニス、ブルセラメリテンシス、ブルセラスイスカンピロバクタージェジュニクラミジアニューモニア、クラミジアトラコマチス、クラミジアシッタシ、ボツリヌス菌、クロストリジウムディフィシル、ウエルシュ菌、破傷風菌、ジフテリア菌、エンテロコッカスフェカーリス、エンテロコッカスフェシウム、大腸菌、野兎病菌、インフルエンザ菌、ヘリコバクターピロリ菌、レジオネラニューモフィラ、レプトスピラインタロガンス、リステリアモノサイトゲネス、らい菌、結核菌、マイコバクテリウムウルセランス、マイコプラズマニューモニエ、淋菌、髄膜炎菌、緑膿菌、リケッチアリケッチイ、チフス菌、ネズミチフス菌、ソンネ菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、腐性ブドウ球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、肺炎球菌、化膿性連鎖球菌、梅毒トレポネーマ、コレラ菌、ペスト菌、エンテロコリチカ菌、仮性結核菌、及び上記の生物の属からの他の種に加えて、上記の細菌による感染症が含まれる。
【００８０】
真菌感染症の非限定的な例には、アスペルギルス症を引き起こす、アスペルギルスフミガーツスなどのアスペルギルス属の真菌、ブラストミセス症を引き起こすブラストミセスデルマティディスなどのブラストミセス属の真菌、カンジダ症を引き起こすカンジダアルビカンスなどのカンジダ属の真菌、コクシジオイデス症（渓谷熱）を引き起こすコクシジオイデス属の真菌、クリプトコッカス症を引き起こすクリプトコッカスネオフォルマンス及びクリプトコッカスガッティなどのクリプトコッカス属の真菌、白癬を引き起こす皮膚糸状菌の真菌、フザリウム種、アスペルギルス種、カンジダ種などの真菌性角膜炎を引き起こす真菌、ヒストプラズマ症を引き起こすヒストプラズマ・カプセルタムなどのヒストプラズマ属の真菌、ムコール菌症を引き起こすムコール目の真菌、出芽酵母などのサッカロミセス属の真菌、ニューモシスチス肺炎を引き起こすニューモシスチスジロベチイなどのニューモシスチス属の真菌、スポロトリクム症を引き起こすスポロトリックスシェンキイなどのスポロトリックス属の真菌による感染症が含まれる。
【００８１】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、過剰増殖性障害を治療する方法を提供する。過剰増殖性障害には、癌などの制御されない細胞の増殖を伴う状態、又は腫瘍、腺腫、もしくはポリープの増殖を伴う状態が含まれる。過剰増殖性障害の非限定的な例には、大腸癌、家族性大腸腺腫症（ＰＡＰ）、喉癌、甲状腺癌、胃癌、消化管癌、膵臓癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、肝細胞癌、消化管間質腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、好酸球増加症候群、肥満細胞症などが含まれる。
【００８２】
本発明は、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、先天性代謝異常を治療する方法も提供する。先天性代謝異常の非限定的な例には、ウィルソン病、アンデルセン病又は他のグリコーゲン蓄積症、シスチン尿症、ファブリー病、成人発症ＩＩ型シトルリン血症、ゼルウィガー症候群、分岐鎖ケト酸尿症、レッシュ・ナイハン症候群、ニーマンピック病、ファンコーニ・ビッケル病、フォンギールケ病、遺伝性果糖不耐症、フェニルケトン尿症、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症などが含まれる。
【００８３】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、慢性免疫代謝性疾患を治療する方法を提供する。慢性免疫代謝性疾患の非限定的な例には、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、肺性心疾患、心内膜炎、心筋炎、及び高血圧などの心血管疾患が含まれる。
【００８４】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、炎症性自己免疫疾患などの自己免疫疾患を治療する方法を提供する。自己免疫疾患の非限定的な例には、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎）、ループス、全身性ループス、関節リウマチ、１型糖尿病、乾癬、多発性硬化症、及び癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患などが含まれる。癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患の非限定的な例には、癌免疫療法によって誘発されるリウマチ性疾患が含まれる。
【００８５】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、慢性炎症性疾患を治療する方法を提供する。慢性炎症性疾患の非限定的な例には、メタボリックシンドローム、肥満、前糖尿病、心血管疾患、及び２型糖尿病などが含まれる。
【００８６】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、急性結腸憩室炎及び消化管の放射線誘発性炎症などの炎症性障害を治療する方法を提供する。消化管の放射線誘発性炎症の非限定的な例には、放射線直腸炎、放射線腸炎、及び放射線直腸Ｓ状結腸炎が含まれる。
【００８７】
本発明はまた、１型糖尿病、２型糖尿病、及び他の型の糖尿病を含む、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて糖尿病を治療する方法を提供する。「糖尿病」又は「真性糖尿病」という用語は、対象が高血糖（すなわち、高血糖症）を有する代謝障害を包含するために使用される。高血糖状態には、膵臓が十分なインスリンを生成しない、又は細胞が生成されたインスリンに反応しないなどの様々な病因がある。糖尿病にはいくつかの認識されているサブタイプがある。１型糖尿病は、体が完全にインスリンを産生できないこと、又は体が十分なインスリンを産生できないことを特徴とする。２型糖尿病は、一般に、細胞がインスリンを適切に使用できない状態であるインスリン抵抗性に起因する。２型糖尿病は、インスリン欠乏症を併発することがある。妊娠糖尿病は、以前に糖尿病と診断されていない妊婦が高血糖症を発症したときに発生する。糖尿病のあまり一般的でない形態には、先天性糖尿病（インスリン分泌に関連する遺伝的欠陥による）、嚢胞性線維症関連糖尿病、高用量の糖質コルチコイドによって誘発されるステロイド糖尿病、及びいくつかの形態の単因性糖尿病（若年発症成人型糖尿病を含む）が含まれる。単因性糖尿病は、単一の常染色体上の優性遺伝子の変異によって引き起こされる糖尿病のいくつかの遺伝形式を含む（高血糖症を引き起こすより複雑な多遺伝子病因とは対照的に）。
【００８８】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、慢性疼痛を治療する方法を提供する。慢性疼痛疾患の非限定的な例には、線維筋痛症、神経損傷、片頭痛、腰痛、腹痛などが含まれる。
【００８９】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物又は細胞を用いて、追加の状態を治療する方法を提供する。これらには、慢性肉芽腫性疾患、移植片対宿主病、腫瘍壊死因子受容体関連の周期性症候群などの慢性炎症性疾患、筋萎縮性側索硬化症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、脊柱側弯症、進行性筋萎縮症などの筋肉消耗が含まれる。
【００９０】
本明細書に記載の要素及び方法のステップは、明示的に記載されているか否かにかかわらず、任意の組み合わせで使用することができる。
【００９１】
本明細書で使用される方法のステップのすべての組み合わせは、言及された組み合わせが行われる文脈によって別段に指定されていないか、又はそうではないことが明確に暗示されていない限り、任意の順序で実行することができる。
【００９２】
本明細書で使用されているように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容が明確に他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００９３】
本明細書で使用される数値範囲は、具体的に開示されているか否かにかかわらず、その範囲内に含まれるすべての数及び数のサブセットを含むことが意図されている。さらに、これらの数値範囲は、その範囲内の任意の数又は数のサブセットに向けられた請求項のサポートを提供するものとして解釈されるべきである。例えば、１から１０までの開示は、２から８まで、３から７まで、５から６まで、１から９まで、３．６から４．６まで、３．５から９．９までなどの範囲をサポートすると解釈されるべきである。
【００９４】
本明細書に引用されているすべての特許、特許公開、及び査読済みの出版物（すなわち、「参考文献」）は、あたかも各個別の参考文献が参照により組み込まれていると具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、参照により明示的に組み込まれている。本開示と組み込まれた参考文献との間に矛盾がある場合、本開示が支配する。
【００９５】
本発明は、本明細書で図示しかつ説明している部品の特定の構造及び配置に限定されず、特許請求の範囲内にあるそのような変更形態を包含することが理解される。
【００９６】
分子モデリング及びＬＡＮＣＬ２結合の例
ＢＴ−１１及び関連化合物のＬＡＮＣＬ２への結合を示す例は、米国特許第９，５５６，１４６号によって提供されていて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。予測される結合及び実際の結合（ＢＴ−１１及び他の関連化合物の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による）を表１Ａ及び表１Ｂに示す。
表１Ａ．ＢＴ−１１及び関連化合物の予測される及び実際のＳＰＲ結合
【表１Ａ】
2021503936.tif 000009
表１Ｂ．ＢＴ−１１及び関連化合物の予測される及び実際のＳＰＲ結合
【表１Ｂ】
2021503936.tif 000010
【００９７】
追加の化合物は、ＬＡＮＣＬ２とＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａの結合について実質的にスクリーニングされた（Ｔｒｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｏｍｐｕｔ  Ｃｈｅｍ，２０１０，３１（２）：４５５−６１）。トップ結合ポーズの結合エネルギーは、各化合物について決定された。以前に報告されたプロトコルとパラメータ（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｏｄｅｌ，２０１１，１７（３）：５４３−５３）が本分析に適用された。表２は、試験した化合物のいくつか及びそれらの予測されるＬＡＮＣＬ２結合エネルギーを示す。
表２．化合物のＬＡＮＣＬ２結合エネルギー。
2021503936.tif 000011
2021503936.tif 000012
【００９８】
表３は、ＢＴ−１１変異体の予測されるＬＡＮＣＬ２親和性（ｋｃａｌ／ｍｏｌで表したトップ結合ポーズの結合エネルギー）を示す。表２の各化合物のＢＴ−１１基本構造からの変化は、本明細書の式Ｚ−Ｙ−Ｑ−Ｙ´−Ｚ´について提供される変数にしたがって定義される。
表３．ＢＴ−１１変異体のＬＡＮＣＬ２親和性。
2021503936.tif 000013
【００９９】
表１Ａ、１Ｂ、２、３に示すように、ＢＴ−１１は広範囲の変更に対応でき、ＬＡＮＣＬ２を高い親和性で結合する。
【０１００】
医薬品化学の例
ＢＴ−１１及び関連化合物の合成を示す例は、米国特許第９，５５６，１４６号により提供されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０１】
実験研究の例
ＢＴ−１１は炎症中に免疫代謝経路を変更する
前書き
クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の両方を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、北米の１６０万人と全世界の４００万人を苦しめ、過去５年間でほぼ１５％増加している［１、２］。範囲によって変化する症状、危険因子、及び重症度を伴うＩＢＤの複雑で多元的な性質のために、効果的な治療法の開発はゆっくりとした困難なプロセスであった［３］。現在、主要な市場治療法は、全人口のごく一部のみに利益をもたらし［４］、高い反応喪失率を示し［５］、又は癌、感染症及び死亡を含む高率の副作用を引き起こす［６、７］。したがって、未だに対処されていないＩＢＤのためのより安全でより効果的な治療法に対する臨床的ニーズがある。
【０１０２】
ＩＢＤの発症に関連する一連の要因には、炎症性ＣＤ４＋Ｔ細胞の不均衡及び拡大がある［８］。他のサイトカインの中で、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ１７の自然発生的な高レベルの産生は、炎症のランダムなフレアの主要な促進要因となっている［９］。対照的に、調節性ＣＤ４＋Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の主な役割は、この拡大、活性化及びサイトカイン産生を防ぐことである。これらの明確な利点にもかかわらず、Ｔｒｅｇ細胞はＩＢＤ患者の消化管における予想される代償増加を経験し［１０］、健康な対照と比較してインビトロで正常な抑制機能を示し［１１］、疾患への具体的な影響について論争を引き起こしている。最近の証拠によると、従来のマーカーで特徴付けられるＴｒｅｇの数は増加するが、これらの細胞は炎症性サイトカインの共産生株であるか、又はその場でＦＯＸＰ３を不安定に発現する細胞である可能性がある［１２から１４］。この同時産生は、典型的なＴｒｅｇ細胞ではなく、エフェクタ／炎症性ＣＤ４＋Ｔ細胞とより密接に関連する中間表現型を生み出す。さらに、Ｔｒｅｇの拡大は、現在のＩＢＤ治療に対する反応性と関連している［１５］。潜在的には、完全にコミットされたＴｒｅｇプロファイルの安定性をターゲットにすることにより、消化管粘膜内の自然及び誘導されたＴｒｅｇ細胞機能の有効性を回復できる。
【０１０３】
最近、細胞の代謝及び免疫の絡み合った性質が、ヒトの疾患の研究と免疫標的療法の開発の中でより顕著になっている［１６］。特に、ＩＢＤなどの炎症性疾患及び自己免疫疾患は、免疫代謝調節因子の効力の主要な例として確認されている［１７］。エフェクタ細胞及び調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞は、乳酸産生及びグルコース利用を促進するエフェクタ細胞との代謝機能に顕著な違いを有する［１８］が、調節性細胞型は、脂肪酸とグルコース酸化との間でバランスのとれた代謝プロファイルを保持する［１９］。免疫代謝と呼ばれる免疫と代謝の間のインターフェースは、新しい代謝酵素と基質がヘキソキナーゼ［２０］及びＧＡＰＤＨ［２１］からエノラーゼ［２２］及びホスホエノールピルビン酸［２３］への免疫学的挙動に影響を与えるｍｏｏｎｌｉｇｈｔｉｎｇ  ｆｕｎｃｔｉｏｎを有していると確認されるため、より高い分解能及び信頼性を獲得する。ＩＬ−１β及びＩＦＮγの産生、ＦＯＸＰ３の発現、カルシウムシグナル伝達に影響を与えるこれらの要素は、かつてはエネルギーを産生するだけだと考えられていたが、免疫機能に対して多くの強力な影響を及ぼす。免疫細胞の代謝を制御することにより、免疫代謝療法は炎症性サブセットへの分化及び分極化を効果的に防ぐことができる［２４〜２７］。
【０１０４】
以前に同定された腸内分泌及び筋肉細胞におけるＬＡＮＣＬ２を介した代謝の調節［２８］は、ＬＡＮＣＬ２及びＢＴ−１１の治療効果の重要な側面が、消化管におけるＢＴ−１１の作用の潜在的な免疫代謝メカニズムにある可能性があることを示唆している。すなわち、ＢＴ−１１の有効性の背後にある重要な最初のステップであるＬＡＮＣＬ２の活性化は、ＡＢＡである自然及び食品化合物のための受容体［２８］、ならびに炎症におけるその役割の発見前の代謝ホルモンの産生のためのシグナルトランスデューサ［２９］として、非免疫細胞で代謝効果を発揮することが最初に示された。ただし、ＬＡＮＣＬ２経路の代謝作用と免疫学的作用との結合は未だに証明されていない。そのため、ＬＡＮＣＬ２、及び他の免疫代謝標的は、炎症性疾患及び自己免疫疾患にまたがる革新的な免疫調節方法としての機構的評価に値する。
【０１０５】
ＢＴ−１１は表面プラズモン共鳴を通じてＬＡＮＣＬ２を標的とすることが示され、インビトロ評価及び疾患のＤＳＳモデルを通じてＩＢＤで治療作用があることが実証されている［３０、３１］。経口投与後のＢＴ−１１の作用は、全身性バイオアベイラビリティが１０％未満、血漿半減期が３．１時間で、消化管粘膜に高度に限局している。さらに、ラットでの予備的な安全性試験では、１，０００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の制限用量までのクリーンな安全性プロファイルが示されている［３２］。有効性の早期評価は、ＤＳＳでチャレンジしたマウスの結腸における疾患活動性スコアの改善及び炎症マーカーの減少を定義する。ＬＡＮＣＬ２の活性化以外に、ＢＴ−１１がＩＢＤの疾患の重症度を低下させる根本的な作用メカニズムは現在のところ未定義である。
【０１０６】
次の例は、ＢＴ−１１によるＬＡＮＣＬ２の活性化が拡張し、免疫代謝メカニズムを介して調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞内の安定性を誘導し、消化管粘膜の過剰な炎症を抑制することを示している。次の例はまた、ＬＡＮＣＬ２を活性化することによるＢＴ−１１の免疫代謝効果の最初の証拠を示している。これらのデータは、多くの疾患又は状態、特に、それらに関連する炎症の免疫代謝治療におけるＢＴ−１１の使用を示唆している。
【０１０７】
材料及び方法
マウス。
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＲａｇ２−／−はＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。ＦＶＢバックグラウンドのＭｄｒ１ａ−／−は、Ｔａｃｏｎｉｃ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手した。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＬａｎｃｌ２−／−及びＬａｎｃｌ２ｆｌ／ｆｌは、商業的供給元とのコラボレーションを通じて生成された。Ｌａｎｃｌ２ｆｌ／ｆｌマウスは、Ｔ細胞特異的Ｌａｎｃｌ２ノックアウト動物（Ｌａｎｃｌ２ΔT）生成するために、ＣＤ４−ｃｒｅトランスジェニックマウスと交配させた。安楽死は、ＣＯ2麻痺とそれに続く二次性頸椎脱臼によって行われた。実験動物は、実験に入る時点で、年齢、性別及び体重を一致させた。すべての研究はＩＡＣＵＣの承認を得て行われた。
【０１０８】
実験的なＩＢＤの誘導。
Ｍｄｒ１ａ−／−モデル。Ｍｄｒ１ａ−／−マウスは自然発生的な大腸炎を発症する。４週齢のＭｄｒ１ａ−／−マウスは、経口胃管栄養法によりＢＴ−１１（８ｍｇ／ｋｇ）を毎日投与され始めた。大腸炎の発症をモニターするために、マウスの体重を量り、毎週スコアを記録した。１０週齢のＭｄｒ１ａ−／−は、ダウンストリームアッセイ用の組織の収集のために犠牲にされた。ＤＳＳモデル。Ｌａｎｃｌ２ΔT及びＬａｎｃｌ２発現制御において、７日間飲料水に入れたデキストラン硫酸ナトリウムが与えられた。７日後、標準の飲料水に戻された。マウスの体重を量り、毎日スコアを記録した。マウスは、実験スケジュールの７及び１０日で組織収集のために安楽死させた。養子移入モデル。ＷＴ及びＬａｎｃｌ２−／−ドナーの脾臓を粉砕し、磁気ソーティングによりＣＤ４＋フラクションのために濃縮した。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢhiＣＤ２５−（Ｔｅｆｆ）及びＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢloＣＤ２５−（Ｔｒｅｇ）細胞を、ＦＡＣＳＡｒｉａセルソーターでソーティングした。示された実験群に基づいて、Ｒａｇ２−／−受容マウスは、ＷＴ又はＬａｎｃｌ２−／−由来の４×１０5個のＴｅｆｆ細胞及び１×１０5個のＴｒｅｇ細胞を腹腔内注射によって受けた。移入後、マウスはＢＴ−１１の治療を毎日受けた。移入後８週間で安楽死されるまで毎週、マウスの体重を量り、スコアを記録した。
【０１０９】
フローサイトメトリ。
結腸及び腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）は、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）及びＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳバッファ内に収集された。得られた単一細胞懸濁液を濾過した後、免疫細胞をパーコール勾配によって精製した。細胞は、９６ウェルプレートでの連続ライブ染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４）及び細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ１７、ＩＬ１０）抗体の混合物で標識された。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得した。
【０１１０】
遺伝子発現。
結腸及び細胞からの全ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成された。  ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キットを使用して生成された。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成された。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラでＳｙｂｒＧｒｅｅｎスーパーミックスを用いた定量的でリアルタイムのＰＣＲ、それに続く上述のようなβ−アクチンの発現に対する正規化により得られた［３３］。
【０１１１】
組織病理学。
Ｈ＆Ｅ染色された結腸切片は、１０％緩衝ホルマリン内に収集されて、パラフィン中に埋め込まれた結腸の部分から調製された。スライドは、オリンパスの顕微鏡により当局認定の獣医病理学者によって検査され、画像はＩｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアで収集された。白血球浸潤、上皮侵食、及び粘膜肥厚について、試料のスコアを記録した（０〜４）。
【０１１２】
代謝分析。
結腸及び細胞をアッセイ特異的緩衝液内に懸濁させて、１０秒間均質化させた。ホモジネートを１０，０００ｘｇで１０分間遠心分離した。酵素活性アッセイのために、上澄みを収集して播種した。試料を酵素発現剤及び基質と混合した。ＮＡＤＨ産生の比色検出は、Ｇｅｎ５ソフトウェアと組み合わせたＢｉｏＴｅｋμＱｕａｎｔプレートリーダを使用して測定された。ＰＥＰアッセイでは、上清を過塩素酸媒介精製を使用して除タンパク質を行った。試料をプレーティングし、プローブ、コンバータ、発現剤混合物と混合した。ＰＥＰ濃度は、プレートリーダでの吸光度の定量化によって測定された。
【０１１３】
インビトロＣＤ４＋Ｔ細胞培養。
ＷＴマウス及びＬａｎｃｌ２−／−マウスの脾臓を切除して粉砕し、単一の細胞懸濁液を生成した。ＣＤ４＋Ｔ細胞フラクションは、ＢＤ  ＩＭａｇシステムを用いた磁気ソーティングを介したネガティブセレクションにより濃縮された。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、ビオチン化ＣＤ６２Ｌ抗体とのインキュベーションと、それに続くストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズへの結合によって得られた。ナイーブ細胞を、オールトランスレチノイン酸及び精製ＴＧＦ−βを含む完全なＩＭＤＭ培地で抗ＣＤ３コーティングされた組織培養プレート内で４８時間インキュベートして、Ｔｒｅｇへの分化を刺激した［１８］。指示された濃度のＢＴ−１１を含む培地に０〜４８時間、細胞を播種した。代謝モジュレータ、ＰＳ−４８（５μＭ）、ＤＡＳＡ−５８（１０μＭ）、及びタプシガルギン（１０ｎＭ）を０時間で追加した。コアッセイでは、ＣＤ４＋フラクション及びＴｒｅｇを上記のように生成し、同じウェル内に１：１の比率で２×１０5個の細胞をそれぞれＢＴ−１１なしで播種し、２４時間一緒にインキュベートした。アッセイの６時間前に、細胞をＰＭＡ及びイオノマイシンで刺激した。フローサイトメトリ、遺伝子発現、及び代謝アッセイによるダウンストリーム分析のために、プレートから細胞を収集した。
【０１１４】
ヒトＰＢＭＣの単離及び培養。
匿名化された新鮮な全血を販売業者から入手した。血液を希釈し、ＬｅｕｋｏＳｅｐチューブでＰＢＭＣフラクションを精製した。残りの赤血球を低張溶液により溶解した。細胞を、完全なＲＰＭＩ培地の抗ＣＤ３でコーティングされたウェルに播種し、ＢＴ−１１と共に２４時間インキュベートした。ｓｉＲＮＡ実験では、先ず、細胞を、ＯｒｉＧｅｎｅ  ３−ｍｅｒ  ＬＡＮＣＬ２  ｓｉＲＮＡ又はＶｉｒｏｍｅｒＧｒｅｅｎトランスフェクション試薬内に懸濁したスクランブルコントロールと共に６時間インキュベートした。６時間後、細胞を洗浄し、ＢＴ−１１を含む新鮮な培地に再懸濁した。アッセイの６時間前に、細胞をＰＭＡ及びイオノマイシンで刺激した。ＢＴ−１１治療から４８時間後、フローサイトメトリ、遺伝子発現、及び代謝アッセイのために細胞を収集した。
【０１１５】
統計分析。
データは平均値とＳＥＭとして表される。パラメトリックデータは、ＡＮＯＶＡを使用して分析され、それに続いてＳｃｈｅｆｆｅ´の多重比較テストが行われた。ＳＡＳ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ノースカロライナ州ケアリー）の一般的な線形モデル手順を使用して、ＡＮＯＶＡを実行した。遺伝子型と治療を比較する２×２の要因配置を使用した。統計的有意性は、Ｐ＜０．０５で決定された。
【０１１６】
結果
ＢＴ−１１は、ＩＢＤのＭｄｒ１ａ−／−モデルにおける炎症の組織病理学的細胞及び分子マーカーを低減する。
Ｍｄｒ１ａ−／−マウスは、４週齢から始まり、６週間にわたって、８ｍｇ／ｋｇのＢＴ−１１又はビヒクルを毎日経口投与された。ＢＴ−１１による経口治療は、６週間にわたって疾患の発症を防止し（図１Ａ、パネルＡ）、１０週齢での結腸白血球浸潤、上皮びらん、及び粘膜肥厚を低減した（図１Ａ、パネルＢ及びＣ）。フローサイトメトリにより、Ｔｈ１（ＣＤ４＋Ｔｂｅｔ＋ＩＦＮγ＋）細胞及びＴｈ１７（ＣＤ４＋ＲＯＲγＴ＋ＩＬ１７＋）細胞の有意な（Ｐ＜０．０５）減少が、ＢＴ−１１治療により、結腸固有層（ＬＰ）（図１Ｂ、パネルＤ及びＥ）ならびに腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）（図１Ｃ、パネルＧ及びＨ）内で発生した。対照的に、ＢＴ−１１は、結腸ＬＰでＣＸ３ＣＲ１＋マクロファージ（ＣＸ３ＣＲ１＋Ｆ４／８０hiＣＤ１１ｂ＋ＣＤ６４＋）を含むＩＬ−１０産生細胞サブセットの割合を増加させ、結腸ＬＰ及びＭＬＮでＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）を誘導した（図１Ｂ、パネルＦ、図１Ｃ、パネルＩ）。炎症性サイトカイン、ＩＦＮγ（図１Ｄ、パネルＪ）、ＩＬ１７Ａ（図１Ｄ、パネルＫ）、ＩＬ６（図１Ｆ、パネルＯ）、ＴＮＦα（図１Ｅ、パネルＭ）、及びＭＣＰ１（図１Ｅ、パネルＬ）は、結腸遺伝子発現及びサイトメトリビーズアレイによって検証された。さらに、ＢＴ−１１による経口治療は、結腸全体Ｌａｎｃｌ２をアップレギュレートした（図１Ｆ、パネルＮ）。ＢＴ−１１は、予防的に機能することに加えて、治療的に与えられると、症状が現れた後７週齢で効果を発揮する。
【０１１７】
ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＬＡＮＣＬ２の発現が、ＢＴ−１１の治療効果には必要である。
ＬＡＮＣＬ２のＣＤ４特異的欠失のマウス（Ｌａｎｃｌ２ｆｌ／ｆｌＣＤ４ｃｒｅ＋、Ｌａｎｃｌ２ΔT）はｃｒｅ−ｌｏｘ技術を用いて生み出された。Ｌａｎｃｌ２ΔT及びＬａｎｃｌ２発現対照は、ＤＳＳに７日間に曝露され、経口ＢＴ−１１又はビヒクル対照で処理された。ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＬＡＮＣＬ２の喪失は、ＢＴ−１１の効力を無効にした（図２Ａ〜２Ｃ）。Ｌａｎｃｌ２ΔTは、疾患活動性の増加、体重の減少及び結腸組織病理学的障害の重症度の増大を示した（図２Ａ、パネルＡ及びＢ、図２Ｂ、パネルＣ）。細胞レベルでは、ＢＴ−１１で治療されたＬａｎｃｌ２ΔTは、結腸ＬＰのＴｈ１及びＴｈ１７細胞に特徴的減少を誘導することができないだけでなく、ＩＬ−１０産生ＣＸ３ＣＲ１＋マクロファージを展開できなかった（図２Ｃ、パネルＤ及びＦ）。ＢＴ−１１治療及び未治療Ｌａｎｃｌ２ΔTマウスは、大腸内での高レベルの炎症性サイトカインを発現した（図２Ｃ、パネルＧ〜Ｊ）。
【０１１８】
ＢＴ−１１による経口治療は、Ｔｒｅｇ依存性メカニズムにおいて炎症を抑制する。
ＢＴ−１１の作用の細胞メカニズム及びその治療効果のＴ細胞依存性をさらに特徴付けるために、野生型（ＷＴ）又はＬａｎｃｌ２−／−（ＫＯ）ドナーからＲａｇ２−／−マウスへのエフェクタ（Ｔｅｆｆ）及び調節（Ｔｒｅｇ）ＣＤ４＋Ｔ細胞の同時移入を採用した（図３Ａ〜３Ｃ）。ＷＴ  Ｔｅｆｆが移入される実験群間で、ＷＴ  Ｔｒｅｇが同時移入される群のみが、疾患活動性（図３Ａ、パネルＡ及びＢ）、組織病理学的評価（図３Ｂ、パネルＣ）、結腸ＬＰにおけるＴｈ１（図３Ｂ、パネルＤ）及び好中球（図３Ｂ、パネルＥ）集団ならびに炎症性サイトカインの発現（図３Ｃ、パネルＦ及びＨ）を含むすべての測定にわたるＢＴ−１１治療による一貫した炎症の減少を経験した。特に、ＷＴ  Ｔｅｆｆ／ＫＯ  Ｔｒｅｇ群は、炎症の細胞特性又は組織病理学的特徴付けにおいてＢＴ−１１治療の利点を示さなかった。同様に、経口ＢＴ−１１治療は、ＫＯ  Ｔｅｆｆの同時移入を用いても、ＷＴ  Ｔｒｅｇ細胞のレシピエントにおいて有効性を示した。これらのマウスは、ＷＴ  Ｔｅｆｆ／ＷＴ  Ｔｒｅｇ群と同等の疾患活動性、白血球浸潤、Ｔｈ１、及び好中球測定値を有していた。これらの知見は、ＤＳＳでチャレンジしたＬａｎｃｌ２ΔTマウスにおける有効性の損失と組み合わせて、ＢＴ−１１の作用メカニズムがＴｒｅｇ細胞内のＬＡＮＣＬ２活性化によるものであることをさらに検証するものである。
【０１１９】
ＢＴ−１１によるＴｒｅｇの治療は抑制能力及び表現型安定性を高める。
養子移入モデルからの知見を直接検証するために、ＣＤ４＋細胞及びＴｒｅｇ細胞のコアッセイを実施した。ＷＴ及びＫＯドナーからのＴｒｅｇ細胞を、Ｔｒｅｇ分化培地（ＡＴＲＡ、ＴＧＦβ）内で培養して、ＢＴ−１１で２日間治療するために単離した。２日後に、細胞を収集し、新たに収集したＣＦＳＥ標識ＣＤ４＋Ｔ細胞を播種した。ＢＴ−１１で治療されたＷＴ  Ｔｒｅｇは、サイトメトリビーズアレイで測定されたＴＮＦα及びＩＦＮγの発現に加えて、ＷＴ細胞及びＫＯ細胞の両方の増殖指数を低下させた（図４、パネルＡ〜Ｃ）。対照的に、ＢＴ−１１によるＫＯ  Ｔｒｅｇの前治療では、どちらの測定値にも変化はもたらされなかった。ＢＴ−１１で前治療されたＷＴ  Ｔｒｅｇも、２４時間のコアッセイ期間後、Ｔｒｅｇ（ＦＯＸＰ３＋ＩＬ１０＋）表現型のより大きな保持を示した。この現象を検査するために、Ｓｏｃｓ２、Ｃａｐｎ３、Ｉｒｆ７、Ｌａｇ３、Ｉｋｚｆ２、及びＰ２ｒｘ７を含むＴｒｅｇ表現型［３４］の安定性を定義する一連の遺伝子の発現をアッセイした（図４、パネルＤ〜Ｉ）。Ｓｏｃｓ２、Ｃａｐｎ３、Ｉｒｆ７、及びＬａｇ３は、ＢＴ−１１治療の４８時間後にＷＴ  Ｔｒｅｇの用量依存的な増加を示し、０．６２５μＭのＢＴ−１１の用量での発現の有意なアップレギュレートをもたらした。Ｐ２ｒｘ７は低用量では効果を示さなかったが、０．６２５μＭのＢＴ−１１の用量では有意にアップレギュレートされた（Ｐ＜０．０５）。一方、Ｉｋｚｆ２は遺伝子型の有意差を示す唯一の遺伝子であった。Ｔｒｅｇ細胞表現型保持の観察と組み合わせて、これらの発現結果は、ＢＴ−１１によるＬＡＮＣＬ２の活性化がＴｒｅｇ関連遺伝子の安定した発現を誘導することを示唆している。
【０１２０】
ＢＴ−１１は、グルコースフラックスコントロールの免疫代謝メカニズムを通じてＴｒｅｇ細胞の安定性を誘導する。
グルコース代謝におけるＬＡＮＣＬ２の以前の含意［３５、３６］及びＣＤ４＋Ｔ細胞の分化における代謝プロファイルの重要性のために、解糖に対するＢＴ−１１の効果を検査した。２つの解糖系酵素Ｐｋｍ２及びＥｎｏ１の発現は、インビトロでＴｒｅｇ細胞におけるＬＡＮＣＬ２の喪失によって有意に変化した（図５Ａ、パネルＡ及びＢ）。機能的な酵素活性は、ＢＴ−１１治療で大きな変化をもたらした。酵素活性をアッセイするとき、０．６２５μＭで治療されたＷＴ  Ｔｒｅｇは、ピルビン酸キナーゼ活性の増加を示した（図５Ａ、パネルＣ）。ピルビン酸キナーゼの基質であるホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）の濃度は、ビヒクル治療対照と比較して、ＢＴ−１１治療Ｔｒｅｇで有意に低かった（図５Ｂ、パネルＥ）。さらに、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）の活性によって証明されるように、トリカルボン酸（ＴＣＡ）サイクルへの入り口は、ＢＴ−１１治療によって、特に、０．１５６μＭ及び０．６２５μＭの用量で刺激された（図５Ｂ、パネルＦ）。ＢＴ−１１が誘導するＰＥＰ及びＰＤＨ活性の低下は、ＰＤＨの小分子阻害剤であるＰＳ−４８での治療によって無効にされた（図５Ｂ、パネルＧ及びＨ）。これは、解糖経路に対するＢＴ−１１介在性効果がＴＣＡサイクルに向かう基質の効率的な進行に依存していることを示唆している。ＰＳ−４８での治療は、ＢＴ−１１によって生成されたＴｒｅｇの分化の増加を無効にする（図５Ｂ、パネルＤ）。さらに、タプシガルギンによるＳＥＲＣＡシグナル伝達の阻害は、Ｔｒｅｇ細胞分化におけるＢＴ−１１誘発増加を減少させ、ＤＡＳＡ−５８によるピルビン酸キナーゼ活性の刺激は、治療及び未治療細胞の両方で高レベルの分化を促進し、ＣＤ４＋Ｔ細胞分化におけるエンドステージ解糖プロセスの重要性を示す。
【０１２１】
ＢＴ−１１の代謝効果の阻害は、ＩＢＤでのＭｄｒ１ａ−／−マウスにおける効力を無効にする。
インビトロ免疫代謝の知見を検証するために、Ｍｄｒ１ａ−／−マウスにＰＳ−４８又はビヒクル対照の腹腔内注射を毎週行った。以前に観察されたように、ＢＴ−１１を経口投与し、ビヒクル注射を行ったマウスは、疾患活動性、組織病理学（図６Ａ、パネルＡ〜Ｄ）、及びＣＤ４＋Ｔ細胞集団（図６Ｂ、パネルＥ〜Ｇ）で予想された傾向を示した。インビトロでの代謝変化は、１０週齢の結腸内で、ＰＥＰ濃度の低下及びＢＴ−１１治療によるＰＤＨ活性の増加によって検証された（図６Ｂ、パネルＨ及びＩ）。さらに、Ｔｒｅｇ細胞安定性関連遺伝子の発現は、ＢＴ−１１治療によりアップレギュレートされた（図６Ｂ、パネルＪ、図６Ｃ、パネルＫ〜Ｏ）。ＰＳ−４８は、臨床的、細胞的、代謝的測定全体で、ＢＴ−１１によって誘発される変化を効果的にブロックした。ＰＳ−４８注射により、非ＢＴ−１１治療及びＢＴ−１１治療マウスは、組織学、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団、及び代謝測定値において差は見られなかった。ＤＳＳモデル内でも同様のパターンが観察された。
【０１２２】
ＢＴ−１１は、クローン病のドナーから単離されたＰＢＭＣに抗炎症効果を誘発する。
全血は、臨床的に軽度から中等度の疾患として分類されたクローン病患者から得られた。ＢＴ−１１で治療した場合、単離されたＰＢＭＣでは、ＩＬ−１０＋細胞及びＦＯＸＰ３＋細胞の割合は高く、ＴＮＦα＋細胞及びＩＦＮγ＋細胞の割合は低かった（図７Ａ、パネルＡ及びＢ、図７Ｂ、パネルＣ及びＤ）。ヒト細胞におけるＢＴ−１１のＬＡＮＣＬ２特異性を実証するために、ＰＢＭＣにＬａｎｃｌ２  ｓｉＲＮＡ又はスクランブルコントロールをトランスフェクトした。ｓｉＲＮＡトランスフェクション後、ＩＬ１０＋細胞及びＩＦＮγ＋細胞に対するＢＴ−１１の効果は失われた（図７Ｃ、パネルＥ及びＦ）。ＰＢＭＣフラクションから、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞が得られ、ＢＴ−１１の存在下でＴｒｅｇに分化した。マウス細胞内で観察されたように、ＢＴ−１１は、用量依存性フラクションで安定性関連Ｔｒｅｇマーカーのアップレギュレーションを誘発した（図７Ｄ、パネルＧ〜Ｌ）。さらに、ピルビン酸キナーゼ及びピルビン酸デヒドロゲナーゼ活性の代謝パターンがヒトＴｒｅｇ内で観察された（図７Ｅ、パネルＭ）。タプシガルギンは、ＢＴ−１１で治療されたＰＢＭＣにおけるＦＯＸＰ３＋細胞の誘導の増加を防止した（図７Ｅ、パネルＮ）。一方、ＢＴ−１１は、増強されたＰＥＰ濃度の存在下で、細胞がエフェクタ表現型への関与の増加させることを防止した（図７Ｅ、パネルＯ）。これらの結果は、ＢＴ−１１の有効性のヒトへの翻訳可能性を示している。
【０１２３】
討論
ＢＴ−１１は、ＩＢＤ及び他の炎症性疾患に対して経口活性で、局所的に作用するファーストインクラスの治療薬である。この研究を通じて、ＩＢＤの３つの別個のマウスモデルで治療効果を実証し、ＬＡＮＣＬ２を介してＢＴ−１１の作用の新しい免疫代謝メカニズムを定義する。ＢＴ−１１は、消化管内の局所作用のために設計及び最適化された物理化学的特性を備えた小分子治療薬であり、全身性副作用のリスクを最小限に抑える。１，０００ｍｇＢＴ−１１／ｋｇの限界用量までのラットの良性の安全性プロファイル［３２］は、潜在的な副作用のリスクが低いことをさらに示している。ＢＴ−１１はＬＡＮＣＬ２経路を標的とし、これは、その活性化を無益にするいずれの遺伝的変異も有するとは言われていないために、上皮及び免疫細胞の消化管粘膜内で強く発現する免疫調節の新しいメカニズムを利用している。本稿では、ＢＴ−１１がＩＢＤの根本的な課題であるエフェクタと調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞の不均衡に影響を与えることによって機能することを確認している。さらに、ＢＴ−１１は消化管におけるＬＡＮＣＬ２の低レベルの発現を上昇させて救済し、ＩＢＤにおける炎症によって引き起こされるいずれの機能異常も回復できることを示す。
【０１２４】
明確な動物モデルの欠如は、ＩＢＤなどの多因子性疾患における新規治療法の開発における特徴的な問題である。この目的を達成するために、化学的、細胞的、遺伝的誘導方法を含む確立されたモデルでＢＴ−１１の有効性を検証した。ＢＴ−１１は、ＤＳＳモデルで上皮細胞バリア機能の喪失及び細菌の移行があっても、活発な炎症を抑制し、一過性の上皮傷害の存在下で粘膜の恒常性を維持する能力を示唆している。一方、養子移入モデルでは、ＢＴ−１１は、認識されていない環境下でＴ細胞により駆動される炎症をブロックする能力を示す。有害ではない抗原に対してはＩＢＤの病因に対して一般的に提案されている要素の認識はないので、この能力は治療を成功させるために重要である。
【０１２５】
Ｍｄｒ１ａ−／−モデルは、特にヒトの翻訳可能性の有望なモデルである。免疫無防備状態のマウスを生成する他の疾患の遺伝モデルとは異なり、Ｍｄｒ１ａ−／−マウスは免疫能力があり［３７］、この欠落は代わりに分子を流出させて細胞のストレスを防ぐ細胞の能力に影響を及ぼす。廃棄物及び副産物の蓄積は、上皮細胞のライフサイクルの調節不全を引き起こし、炎症性サイトカイン及びケモカインの分泌を増加させる。したがって、それは、上皮内で発生する一次開始事象を伴う、疾患の慢性的かつ自然発生的な発症を提供する。さらに、ＭＤＲ１遺伝子はＩＢＤについての新たなリスク対立遺伝子であり、糖質コルチコイドに基づく治療に対する反応性に影響する［３８、３９］。ＭＤＲ１遺伝子内の特定の多型である１２３６Ｔも、ＣＤ患者の切除手術のリスク増加と関連付けられた［４０］。この遺伝子の非存在下で治療効果を提供するＢＴ−１１の能力は、遺伝子異常の存在下での頑健性の重要な指標であり、ヒトの翻訳における効果を示唆している。
【０１２６】
免疫代謝の学際的な分野での進歩は、自己免疫疾患、消化器疾患及び癌の発生の理解に益々結び付き、治療法開発のための新たな潜在的機会を提供する。後期解糖におけるＢＴ−１１の作用メカニズムの関与は、Ｔｒｅｇ細胞の分化及び安定性ならびに寛解の誘導において特に３倍の重要性を持っている。第一に、Ｅｎｏ１の転写が増加すると、ＦＯＸＰ３−Ｅ２の発現が減少し、ＦＯＸＰ３のアイソフォームはより高い抑制能力と関係している［２２］。遊離エノラーゼ自体は、変化したＦＯＸＰ３発現に関連している可能性があるが、ＦＯＸＰ３プロモーターの転写リプレッサーであるＭＢＰ１は、Ｅｎｏ１遺伝子から転写された代替アイソフォームである［４１］。解糖内の全体的なＥｎｏ１転写及び酵素アイソフォームの占有が減少することにより、ＭＢＰ１発現が減少し、ＦＯＸＰ３発現の阻害が防止される。第二に、乳酸産生とＴＣＡサイクルへの移行とのバランスは、Ｔｅｆｆ（自己免疫疾患に対する寄与）とＴｒｅｇ（自己免疫疾患の治療又は予防）ＣＤ４＋Ｔ細胞サブセットとの間の重要な分裂であり、この分裂を制御する複数の要因が、自己免疫疾患又は炎症性疾患の影響を受けた組織におけるＴｒｅｇ集団及び耐性を生成及び維持する。第三に、ＰＥＰを効率的に処理してピルビン酸にする能力は、妨げられないＳＥＲＣＡシグナル伝達の要件である［１９、２３］。ＳＥＲＣＡ経路を介した適切なシグナル伝達は、ＦＯＸＰ３の転写活性化因子の活性のためのチェックポイントであり、ヒストンアセチル化を介してサイレンサー部位であるＣＮＳ２領域に結合するＳＴＡＴ３の能力に影響する［４２］。これらのヒストン修飾は、Ｔｒｅｇ細胞の分裂におけるＦＯＸＰ３の継続的な発現のために不可欠であり、それらが失われると、腸炎を抑制することができなくなる［４３、４４］。メチル化パターンの変化により、Ｔｒｅｇは、炎症性サイトカインとＩＢＤに関連する中間表現型の同時産生の影響を受け易くなる［４５］。細胞内ＰＥＰの蓄積は、乳酸塩の生成から小胞体ストレスの生成までの複数の炎症経路を促進し［４６、４７］、炎症性免疫細胞の生成及び上皮細胞の生存に寄与する。ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＳＥＲＣＡシグナル伝達の影響はＩＢＤでは現在未開拓であるが、阻害されたＳＥＲＣＡ機能は、以前に、結腸及び小腸の収縮性の低下に結び付けられ、機械感覚行動の変化に繋がっている［４８］。
【０１２７】
Ｔｒｅｇ細胞安定性関連遺伝子のパネル全体の発現増加は、ＦＯＸＰ３活性又は転写因子の上流制御へのＢＴ−１１の直接的な影響を示唆している。遺伝子が一緒になってより優れた抑制能力及び安定性を示す一方で、これらの下流の標的は疾患に重要な個々の影響を与える。Ｉｒｆ７はＦＯＸＰ３発現を増加させることができ［４９］、その欠如は大腸炎の重症度を悪化させる［５０］。Ｌａｇ３は抑制能力のための重要な表面分子であり、その発現はＩＢＤにおけるＴｒｅｇベースの治療の有効性を大幅に高める［５１］。Ｓｏｃｓ２はＩＦＮγ発現をダウンレギュレートすることができ［５２］、抗原提示細胞の活性化を行うことができる［５３］。全体として、ＢＴ−１１は、より安定した抗炎症性Ｔｒｅｇ細胞集団の確立を促進する、規制及び抗炎症行動の増大をもたらす。
【０１２８】
コアッセイでＣＤ４＋増殖の抑制を増加させることにより、分化に加えてＢＴ−１１治療がＴｒｅｇ細胞の行動に利益をもたらすという証拠を提供する。本稿内の結果は主にｉＴｒｅｇの作用に焦点を当てているが、自然発生のＴｒｅｇの集団に対するＢＴ−１１の評価は、治療法に対する追加の洞察を提供する。特に、Ｉｋｚｆ２遺伝子ならびにｎＴｒｅｇ及びｉＴｒｅｇの識別のための候補マーカーによってコードされたＨｅｌｉｏｓは［５４，５５］、ｎＴｒｅｇ細胞の産生におけるＬＡＮＣＬ２活性化のための潜在的な役割を示唆するＬＡＮＣＬ２の発現によって影響される。ＩＢＤの発症及び疾患の重症度の再燃は、食事摂取量の小さな変化と、従来の無害な抗原に対する反応性の自然発生を伴う共生腸の微生物叢に関連している。現在の知識では、ＢＴ−１１による経口治療について、これらの状況で局所耐性を誘発及び回復することが期待されている。
【０１２９】
検証済みのマウス細胞及びＩＢＤのモデルでの治療効果に加えて、ヒトの翻訳の可能性をサポートするために、ＢＴ−１１はヒトＰＢＭＣで強力な効果を促進する。ＢＴ−１１は、中等度から重度の疾患を持つクローン病患者から得られた細胞において、２つの顕著な炎症性サイトカインであるＴＮＦα及びＩＦＮγの産生を減少させる。ＴＮＦα発現の自然な減少を誘発する能力は、中等度から重度のクローン病患者内で抗ＴＮＦα生物製剤と同様の治療空間を占める可能性を示唆している。サイトカイン産生及び細胞分化の劇的な変化は別として、ＬＡＮＣＬ２特異性及び免疫代謝経路の観点から、特定された作用メカニズムがマウス細胞からヒト細胞に翻訳されることを示している。共有された作用メカニズムは、疾患及び病理学の前臨床モデルから臨床試験への治療効果の翻訳の実現可能性を確立する。この研究と以前の取り組み［３１、３２］を通じて、ＢＴ−１１は、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び他の状態を治療するためのより安全でより効果的な経口治療法に対する未だ満たされていない臨床的ニーズに取り組むための有望な治療法として浮上している。ＬＡＮＣＬ２を介した新しい免疫代謝メカニズムを利用して、ＢＴ−１１は、治療のために特異な空間を占める。
【０１３０】
データは、Ｃ．ディフィシル感染症、他の細菌性疾患、及び他の感染症などの感染症；家族性腺腫性ポリポーシス、大腸癌、他の消化管の癌、及び他の癌などの過剰増殖性障害；アンデルセン病、他のグリコーゲン蓄積症、及び他の先天性代謝異常などの先天性代謝異常；アテローム性動脈硬化症、他の心血管疾患、高血圧症、及び他の免疫代謝疾患などの慢性免疫代謝性疾患；ループス、多発性硬化症、癌免疫療法によって誘発されるリウマチ性疾患、他の癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患、及び他の自己免疫疾患などの自己免疫疾患；臓器移植拒絶反応；急性結腸憩室炎、放射線直腸炎、放射線腸炎、及び放射線直腸Ｓ状結腸炎などの消化管の放射線誘発性炎症、及び他の炎症性障害などの炎症性障害；ならびに線維筋痛症及び他の種類の慢性痛などの慢性痛；を治療するための、本明細書に記載のＢＴ−１１もしくは他のＬＡＮＣＬ２結合化合物、又は本明細書に記載のＢＴ−１１又は他のＬＡＮＣＬ２結合化合物で活性化された細胞の効果を示す。
【０１３１】
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１２．Ｅａｓｔａｆｆ−Ｌｅｕｎｇ  Ｎ，Ｍａｂａｒｒａｃｋ  Ｎ，Ｂａｒｂｏｕｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｆｏｘｐ３＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ，Ｔｈ１７  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１０；３０：８０−９．
１３．Ｓｈｅｖａｃｈ  ＥＭ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＴＳ，Ｈｕｔｅｒ  ＥＮ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＴＧＦ−Ｂｅｔａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｏｘｐ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００８；２８：６４０−６．
１４．Ｕｈｌｉｇ  ＨＨ，Ｃｏｏｍｂｅｓ  Ｊ，Ｍｏｔｔｅｔ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  ａｎｄ  ＩＬ−１０−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｕｒｅ  ｏｆ  ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６；１７７：５８５２−６０．
１５．Ｌｉ  Ｚ，Ａｒｉｊｓ  Ｉ，Ｄｅ  Ｈｅｒｔｏｇｈ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｏｆ  Ｆｏｘｐ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｕｃｏｓａ  ｉｎ  ＩＢＤ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ．Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓ  ２０１０；１６：１２９９−３１０．
１６．Ｌｅｂｅｒ  Ａ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，Ｔｕｂａｕ−Ｊｕｎｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｉｎｔｏ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２０１６；３２：４４３−４４９．
１７．Ｍａｔｈｉｓ  Ｄ，Ｓｈｏｅｌｓｏｎ  ＳＥ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｆｒｏｎｔｉｅｒ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１；１１：８１．
１８．Ｌｅｂｅｒ  Ａ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，Ｔｕｂａｕ−Ｊｕｎｉ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．ＮＬＲＸ１  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＣＤ４＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１７；１９８：２２６０−２２６８．
１９．Ｎｅｗｔｏｎ  Ｒ，Ｐｒｉｙａｄｈａｒｓｈｉｎｉ  Ｂ，Ｔｕｒｋａ  ＬＡ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１６；１７：６１８−２５．
２０．Ｗｏｌｆ  ＡＪ，Ｒｅｙｅｓ  ＣＮ，Ｌｉａｎｇ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ  Ｉｓ  ａｎ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ．Ｃｅｌｌ  ２０１６；１６６：６２４−３６．
２１．Ｃｈａｎｇ  ＣＨ，Ｃｕｒｔｉｓ  ＪＤ，Ｍａｇｇｉ  ＬＢ，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｅｒｏｂｉｃ  ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  ２０１３；１５３：１２３９−５１．
２２．Ｄｅ  Ｒｏｓａ  Ｖ，Ｇａｌｇａｎｉ  Ｍ，Ｐｏｒｃｅｌｌｉｎｉ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＦＯＸＰ３  ｅｘｏｎ  ２  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｖａｒｉａｎｔｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５；１６：１１７４−８４．
２３．Ｈｏ  ＰＣ，Ｂｉｈｕｎｉａｋ  ＪＤ，Ｍａｃｉｎｔｙｒｅ  ＡＮ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ  Ｉｓ  ａ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｃｅｌｌ  ２０１５；１６２：１２１７−２８．
２４．Ｃａｎｔａｒｉｎｉ  Ｌ，Ｐｕｃｉｎｏ  Ｖ，Ｖｉｔａｌｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｗｉｔｈ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｆｉｌｅ，ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｒｅｇｉｍｅｎｓ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１６；１８４：１９７−２０７．
２５．Ｃａｒｂｏ  Ａ，Ｇａｎｄｏｕｒ  ＲＤ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｙｌｐｉｃｏｌｉｎｏｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ  （ＢＴ−１１）：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｌａｎｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｃ−Ｌｉｋｅ  ２−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｆｏｒ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１６．
２６．Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ  ＭＤ，Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ  ＧＲ，Ｓｃｈｅｒｔｚｅｒ  ＪＤ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ＡＭＰＫ  ｉｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２０１３；３６６：２２４−３４．
２７．Ｓｏｕｚａ  ＣＯ，Ｔｅｉｘｅｉｒａ  ＡＡ，Ｌｉｍａ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  （ｎ−７）  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｓ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ａ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ  ｄｉｅｔ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ＰＰＡＲａｌｐｈａ．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  ２０１４；２０１４：５８２１９７．
２８．Ｓｔｕｒｌａ  Ｌ，Ｆｒｅｓｉａ  Ｃ，Ｇｕｉｄａ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．ＬＡＮＣＬ２  ｉｓ  ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  ａｂｓｃｉｓｉｃ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｒａｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００９；２８４：２８０４５−５７．
２９．Ｌｕ  Ｐ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，Ｈｏｒｎｅ  ＷＴ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ−ｂａｓｅｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔ  ｌａｎｔｈｉｏｎｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｃ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２；７：ｅ３４６４３．
３０．Ｂａｓｓａｇａｎｙａ−Ｒｉｅｒａ  Ｊ，Ｃａｒｂｏ  Ａ，Ｇａｎｄｏｕｒ  ＲＤ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｏｖｅｌ  ＬＡＮＣＬ２−ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１６．
３１．Ｃａｒｂｏ  Ａ，Ｇａｎｄｏｕｒ  ＲＤ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｙｌｐｉｃｏｌｉｎｏｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ  （ＢＴ−１１）：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｌａｎｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｃ−Ｌｉｋｅ  ２−Ｂａｓｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｆｏｒ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ２０１６；５９：１０１１３−１０１２６．
３２．Ｂｉｓｓｅｌ  Ｐ，Ｂｏｅｓ  Ｋ，Ｈｉｎｃｋｌｅｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  ＢＴ−１１：Ａ  Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  Ｏｒａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｆｏｒ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ２０１６；３５：５２１−９．
３３．Ｂａｓｓａｇａｎｙａ−Ｒｉｅｒａ  Ｊ，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｋ，Ｍａｒｔｉｎｏ−Ｃａｔｔ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＰＡＲ  ｇａｍｍａ  ａｎｄ  ｄｅｌｔａ  ｂｙ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｌｉｎｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００４；１２７：７７７−９１．
３４．Ｄｅｌｇｏｆｆｅ  ＧＭ，Ｗｏｏ  ＳＲ，Ｔｕｒｎｉｓ  ＭＥ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ  ｂｙ  ａ  ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−１−ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ−４ａ  ａｘｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ２０１３；５０１：２５２−６．
３５．Ｂａｓｓａｇａｎｙａ−Ｒｉｅｒａ  Ｊ，Ｇｕｒｉ  ＡＪ，Ｌｕ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ａｂｓｃｉｓｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｌｉｇａｎｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１１；２８６：２５０４−１６．
３６．Ｚｏｃｃｈｉ  Ｅ，Ｈｏｎｔｅｃｉｌｌａｓ  Ｒ，Ｌｅｂｅｒ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ａｂｓｃｉｓｉｃ  Ａｃｉｄ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  Ｇｌｙｃｅｍｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｎｕｔｒ  ２０１７；４：２４．
３７．Ｈａａｒｂｅｒｇ  ＫＭ，Ｗｙｍｏｒｅ  Ｂｒａｎｄ  ＭＪ，Ｏｖｅｒｓｔｒｅｅｔ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．Ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｆｒｏｍ  Ｐｒｕｎｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｍｄｒ１ａ（−／−）  ｍｉｃｅ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１５；６：２２３−３７．
３８．Ｓｃｈｗａｂ  Ｍ，Ｓｃｈａｅｆｆｅｌｅｒ  Ｅ，Ｍａｒｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  Ｃ３４３５Ｔ  ＭＤＲ１  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ａｎｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｆｏｒ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００３；１２４：２６−３３．
３９．Ｙａｎｇ  ＱＦ，Ｃｈｅｎ  ＢＬ，Ｚｈａｎｇ  ＱＳ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＤＲ１  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｏｎ  ＩＢＤ  ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ  ｉｎ  ＩＢＤ  ｉｎ  ａ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  ２０１５；１６：２２−３０．
４０．Ｂｏｕｚｉｄｉ  Ａ，Ｍｅｓｂａｈ−Ａｍｒｏｕｎ  Ｈ，Ｂｏｕｋｅｒｃｈａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＭＤＲ１  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ａ  ｃｏｈｏｒｔ  ｏｆ  Ａｌｇｅｒｉａｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ２０１６；８０：８３７−８４３．
４１．Ｌｕｎｇ  Ｊ，Ｌｉｕ  ＫＪ，Ｃｈａｎｇ  ＪＹ，ｅｔ  ａｌ．ＭＢＰ−１  ｉｓ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｂｙ  ａｎ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＥＮＯ１  ｇｅｎｅ  ｂｕｔ  ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｕｒｎｏｖｅｒ．ＦＥＢＳ  Ｊ  ２０１０；２７７：４３０８−２１．
４２．Ｍｉｒｌｅｋａｒ  Ｂ，Ｇｈｏｒａｉ  Ｓ，Ｋｈｅｔｍａｌａｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＳＭＡＲ１  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｆａｔｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  （ＩＢＤ）．Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５；８：１１８４−２００．
４３．Ｌｉ  Ｃ，Ｊｉａｎｇ  Ｓ，Ｌｉｕ  ＳＱ，ｅｔ  ａｌ．ＭｅＣＰ２  ｅｎｆｏｒｃｅｓ  Ｆｏｘｐ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ’  ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ  ｔｏ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２０１４；１１１：Ｅ２８０７−１６．
４４．Ｏｈｋｕｒａ  Ｎ，Ｈａｍａｇｕｃｈｉ  Ｍ，Ｍｏｒｉｋａｗａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｈａｎｇｅｓ  ａｎｄ  Ｆｏｘｐ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｒｅ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｅｖｅｎｔｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｔｒｅｇ  ｃｅｌｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１２；３７：７８５−９９．
４５．Ｌｉ  Ｌ，Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ  ＶＡ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−１７−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｆｏｘｐ３＋  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１３；１４８：２４６−５３．
４６．Ｍｅｎｄｅｚ−Ｌｕｃａｓ  Ａ，Ｈｙｒｏｓｓｏｖａ  Ｐ，Ｎｏｖｅｌｌａｓｄｅｍｕｎｔ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ  ｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ  （ＰＥＰＣＫ−Ｍ）  ｉｓ  ａ  ｐｒｏ−ｓｕｒｖｉｖａｌ，ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  （ＥＲ）  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｇｅｎｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０１４；２８９：２２０９０−１０２．
４７．Ｖｉｎｃｅｎｔ  ＥＥ，Ｓｅｒｇｕｓｈｉｃｈｅｖ  Ａ，Ｇｒｉｓｓ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  Ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ  Ｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｅｎａｂｌｅｓ  Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ２０１５；６０：１９５−２０７．
４８．Ａｌ−Ｊａｒａｌｌａｈ  Ａ，Ｏｒｉｏｗｏ  ＭＡ，Ｋｈａｎ  Ｉ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｏｌｉｔｉｓ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｐｕｍｐ  ｉｓｏｆｏｒｍ−２．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２００７；２９８：１６９−７８．
４９．Ｗａｎｇ  Ｚ，Ｚｈｅｎｇ  Ｙ，Ｈｏｕ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ＴＬＲ９  ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｆｏｘｐ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ  ＩＲＦ−７  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｆｕｌｍｉｎａｎｔ  ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  ２０１３；４１：５０−９．
５０．Ｃｈｉｒｉａｃ  ＭＴ，Ｂｕｃｈｅｎ  Ｂ，Ｗａｎｄｅｒｓｅｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  １  ｂｙ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２８  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ  Ｗｉｔｈ  Ｃｏｌｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｉｓ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  Ｍｕｃｏｓａ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０１７；１５３：１２３−１３８  ｅ８．
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【０１３２】
ＢＴ−１１の経口投与による免疫代謝メカニズムを用いたＣ．ディフィシル感染症の治療
前書き
クロストリジウムディフィシル感染症（ＣＤＩ）率の増加は、抗生物質選択因子、感染制御対策の失敗、及び現在の治療法の欠陥を際立たせている。バンコマイシン及びメトロニダゾールを用いる抗菌療法では、８５〜９０％の予想奏効率が得られ、それに伴って両方の薬剤に対する再発リスクは２０〜２５％になる［１〜３］。メトロニダゾールは、低コストであり、バンコマイシン耐性の選択圧が低いため、第一選択療法として好ましい。しかしながら、両方の治療により、Ｃ．ディフィシルに対するコロナイゼーション抵抗性を提供する正常な結腸微生物叢は完全に破壊される［４、５］。最近の研究では、ＣＤＩの治療に対するメトロニダゾールの有効性が、準最適一次反応及び予想を上回る再発率の両方の点で、疑問視されている［６、７］。したがって、抗生物質を含まず、抗生物質の管理及びマイクロバイオームの保存を促進する化合物を最適化することが、新しく、タイムリーにかつ緊急に必要とされている。次の例では、免疫代謝作用を利用してＣ．ディフィシル感染を治療する。
【０１３３】
方法
Ｃ．ディフィシル動物モデル。
この研究は、以前に報告されたクロストリジウムディフィシル感染症のモデルにしたがった［１１、１３、１４］。細菌による攻撃の前に、飲料水中の抗生物質の混合物、すなわち、コリスチン８５０Ｕ／ｍＬ（４．２ｍｇ／ｋｇ）、ゲンタマイシン０．０３５ｍｇ／ｍＬ（３．５ｍｇ／ｋｇ）、メトロニダゾール０．２１５ｍｇ／ｍＬ（２１．５ｍｇ／ｋｇ）、及びバンコマイシン０．０４５ｍｇ／ｍＬ（４．５ｍｇ／ｋｇ）でマウスを治療し、続いて感染の１日前にクリンダマイシン３２ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射した。感染性の課題は、強制飼養を介してブルセラ培地でＣ．ディフィシル株ＶＰＩ１０４６３（ＡＴＣＣ４３２５５）１０7ｃｆｕ／マウスを用いることであった。
【０１３４】
フローサイトメトリ。
結腸及び腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）は、消化のためにコラゲナーゼ（３００Ｕ／ｍＬ）及びＤＮａｓｅ（５０Ｕ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ／ＦＢＳバッファ内に収集された。得られた単一細胞懸濁液を濾過した後、免疫細胞をパーコール勾配によって精製した。細胞は、９６ウェルプレートでの連続ライブ染色において、細胞外（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ２５、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ６４）及び細胞内（Ｔｂｅｔ、ＲＯＲγＴ、ＦＯＸＰ３、ＩＦＮγ、ＩＬ１７、ＩＬ１０）抗体の混合物で標識された。データは、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを備えたＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターを使用して取得した。
【０１３５】
遺伝子発現。
結腸及び細胞からの全ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙミニキットを使用して生成された。ｃＤＮＡは、ＢｉｏＲａｄ  ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キットを使用して生成された。標準曲線は、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いた標準ＰＣＲ反応からの精製産物の連続希釈と、それに続くＱｉａｇｅｎ  ＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ精製キットを使用した精製によって生成された。発現レベルは、ＢｉｏＲａｄ  ＣＦＸ９６サーマルサイクラでＳｙｂｒＧｒｅｅｎスーパーミックスを用いた定量的でリアルタイムのＰＣＲ、それに続く上述のようなβ−アクチンの発現に対する正規化により得られた［１２］。
【０１３６】
組織病理学。
Ｈ＆Ｅ染色された結腸切片は、１０％緩衝ホルマリン内に収集されて、パラフィン中に埋め込まれた結腸の部分から調製された。スライドは、オリンパスの顕微鏡により当局認定の獣医病理学者によって検査され、画像はＩｍａｇｅ−Ｐｒｏソフトウェアで収集された。白血球の浸潤、上皮の侵食、及び粘膜の肥厚について、試料のスコアを記録した（０〜４）。
【０１３７】
細菌の再単離。
切除された結腸から結腸内容物を収集した。試料をブルセラブロスで均質化し、６８℃で１時間インキュベートした。試料を１０，０００ｒｐｍで３０秒間遠心し、上清を回収した。上清を段階的に希釈し（１：１０、１：１００、１：１０００）、クロストリジウムディフィシル選択的サプリメントを含むオキソイドクロストリジウムディフィシル寒天プレートに播種した。ＢＤ  ＥＺ嫌気性容器システムキットを使用して、プレートを嫌気性条件下３７℃で２日間インキュベートした。コロニーを計数し、試料の重量と比較して正規化した。
【０１３８】
結果
ＬＡＮＣＬ２は、消化管の微生物叢に影響を与える。
Ｃ．ディフィシル感染マウスにおけるＬＡＮＣＬ２の活性化は、ビヒクルと比較して、ｄｐｉ４でのｂａｉＣＤ含有量を有意に増加させる（図８、パネルＡ）。優勢な酪酸ファミリーであるラクノスピラ科とルミノコッカス科は、感染していないマウスでＬＡＮＣＬ２が失われると減少する（図８、パネルＢ）。さらに、抗菌ペプチドＤｅｆＢ１及びＳ１００Ａ８の発現は、ＣＤＩでアップレギュレートされることがわかった［１１］。したがって、共生微生物叢のダイナミクスは、Ｃ．ディフィシルに反応して存在する炎症によって妨げられ、免疫調節に基づく治療法が微生物叢が介在するＣ．ディフィシルの拡大及びコロニー形成の阻害にプラスの効果があることを示している［９］。
【０１３９】
ＢＴ−１１は、Ｃ．ディフィシルに対する抗菌特性を有していない。
Ｃ．ディフィシルを、嫌気性条件下の刻んだ肉培地内でインキュベートし、ＢＴ−１１、ビヒクル、又は陽性対照としてのバンコマイシンを含有させた。ＢＴ−１１を１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬで試験した。結果を図９に示す。試験したＢＴ−１１の濃度は、接種後２４時間でコロニー形成単位の減少を誘発しなかった。一方、１０μｇ／ｍＬのバンコマイシンは、コロニー形成単位を９５％、すなわち、４００万から２０万未満に減少させた。ＢＴ−１１への曝露は、毒素Ａ又は毒素Ｂの産生、又はＣ．ディフィシルが胞子を形成する能力を変化させなかった。
【０１４０】
ＢＴ−１１は、疾患の重症度を軽減し、死亡を防ぐ。
Ｃ．ディフィシル感染マウスには、感染後に８ｍｇ／ｋｇのＢＴ−１１を投与した。結果を図１０Ａ〜１０Ｃに示す。２日目以降、ＢＴ−１１で治療されたマウスは症状のレベルが低くなり、その結果、疾患活動性スコアが低下した。ＢＴ−１１は、死亡率に対する完全な保護を提供し、ビヒクルで治療された対照において６０％の生存率が観察された。しかしながら、ＢＴ−１１は、結腸内のＣ．ディフィシルの負担の減少を誘発しなかった。ＢＴ−１１は、結腸内の白血球の浸潤の減少を含む結腸の病理を減少させた。粘膜固有層内で、ＢＴ−１１は、好中球、Ｔｈ１及びＴｈ１７細胞を減少させながら、調節性Ｔ細胞を増加させた。
【０１４１】
討論
ＬＡＮＣＬ２は、免疫介在性［８］疾患及び感染性［９］疾患の治療標的として浮上している。ＬＡＮＣＬ２は、消化（ＧＩ）管の上皮及び免疫細胞で発現された。ＬＡＮＣＬ２活性化及びＢＴ−１１治療は、免疫及び代謝の境界での反応を調節し、これらの免疫代謝メカニズムが治療作用を発揮する。これらのデータは、ＣＤＩを改善するためにＢＴ−１１で免疫代謝メカニズムを活性化する実現可能性を示している。ＣＤＩにおける疾患の病因は、部分的にその毒素によって引き起こされるだけでなく、炎症促進性免疫応答の調節不全が原因であることを考慮に入れて、抗炎症性Ｃ．ディフィシル療法としてＢＴ−１１でＬＡＮＣＬ２を標的化することの有効性を評価した。データは、ＢＴ−１１による経口治療が、ＣＤＩを有するマウスの死亡率に対する完全な保護、疾患活動性の低下、及び炎症の減少をもたらすことを示している。
【０１４２】
ＣＤＩにおける疾患の病因への免疫学的寄与の中で最も重要なのは、炎症性で組織を損傷するＴｈ１７細胞と調節性Ｔｒｅｇ細胞との間の不均衡である。重要なこととして、ＢＴ−１１がＣＤ４＋Ｔ細胞内の免疫代謝経路に影響して、制御性細胞種の分化及び安定性を促進することをここに示した。ＦＯＸＰ３発現の安定性を高めるこれらの免疫代謝経路は、ＣＤＩ中に治療作用を提供するために非常に重要である。非常に強力な細菌由来の毒素のために、消化管粘膜はますます炎症性の環境になってしまう。この環境の変化により、恒常性に関与する細胞、及びマイクロバイオームへの耐性はこれらの能力を失い、共生微生物叢の異常性が悪化する。ＢＴ−１１及び免疫代謝メカニズムにより、ＢＴ−１１治療は、炎症状態の存在下で抑制機能を保持し、疾患を予防する調節細胞を促進する。抗生物質後の共生フローラの補充が促進されることで、微生物叢自体は、Ｃ．ディフィシルの成長を打ち負かして抑制できます。
【０１４３】
本発明の調製細胞を動物に投与することが、この実施例に示しているＢＴ−１１の直接投与の効果を模倣することになるであろうと予測される。
【０１４４】
参考文献
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【０１４５】
大腸癌の治療におけるＢＴ−１１の治療的作用
大腸癌は世界で３番目に多い癌であり、２０１５年に９４０万人以上が罹患している。癌の進行における代謝は、腫瘍細胞自体の挙動及び腫瘍細胞と免疫系との間の相互作用の両方の一因となっている。よく知られた腫瘍細胞の特徴は、酸素の存在下でさえ嫌気性解糖を好むワールブルグ効果である。このグルコースの乳酸への代謝には、細胞の成長及び増殖のために高速エネルギー源を提供し、微小環境を酸性化し、細胞毒性免疫細胞に必要な代謝基質を消費するという、癌細胞についての多面的な利点がある。最近、このプロセスを標的とすることが、腫瘍の進行、成長、及び転移を制御する有効な手段であることが解明された。癌細胞は免疫細胞にアネルギー及びアポトーシスを誘発することができ、認識後の癌細胞の排除を助ける酸化的リン酸化への切り替えを防ぐ。この代謝プロファイルの切り替えにより、ＣＤ８＋細胞からの抗腫瘍応答を増強できるメモリＴ細胞の発生が可能になる。したがって、免疫代謝を標的とすることは、腫瘍細胞の増殖を制限すると同時に、免疫介在性の癌細胞の排除を可能にする治療を意味する。
【０１４６】
ＢＴ−１１は、結腸直腸癌及び他の癌の治療に安全で細胞毒性のない選択肢を提供する。癌細胞を殺滅することを直接目的とする他の治療法とは異なり、ＢＴ−１１は、免疫系からの記憶応答を刺激しながら、細胞増殖を制限する強力な免疫代謝効果を誘発することができる。細胞へのＢＴ−１１の投与は、乳酸脱水素酵素の活性及び乳酸の生成を低下させる一方、酸化的リン酸化経路を増加させる。ＢＴ−１１介在性の乳酸代謝の阻害はさらに、細胞増殖の低下と関連していて、腫瘍細胞の進行の拡大を制限する。さらに、これらの代謝の影響は、腫瘍微小環境の変調を防ぎ、完全に確立された免疫回避戦略の可能性を低下させる。さらに、ＢＴ−１１の免疫細胞代謝への直接的な影響により、酸化的リン酸化が増加し、細胞の記憶状態への移行を可能にする。ＢＴ−１１は、メモリＣＤ４＋Ｔ細胞の発生を誘発することが示されてきた。組み合わされた腫瘍及び免疫細胞の効能により、ＢＴ−１１は、結腸直腸癌及び他の癌の治療において代替可能な化学療法の選択肢である。本発明の調製された細胞を動物に投与することは、この実施例に記載しているＢＴ−１１の効果を模倣することになるであろうと予測される。
【０１４７】
アテローム性動脈硬化症におけるプラーク形成及び動脈炎症の予防
アテローム性動脈硬化症は、動脈壁内の線維性プラークによる動脈の狭窄を特徴とする心血管疾患である。アテローム性動脈硬化症は、肥満、高血圧、貧しい食生活に起因する米国の主要な死因であり、心臓発作、脳卒中、腎不全の発生の一因となっている。アテローム性動脈硬化症は、内皮細胞によって分泌される炎症性メディエーターと高濃度の低密度リポタンパク質による白血球の活性化によって引き起こされる最も重要な免疫代謝疾患である。時間が経つと、この活性化により、動脈壁に血小板、コレステロール、結晶化カルシウムが沈着する。高脂血症の状態での修飾リポタンパク質への継続的な曝露は、細胞内ストレスの慢性的な蓄積のために、炎症性マクロファージの分極化をもたらす。ＳＲＥＢＰ、ＬＸＲ、ＰＰＡＲなどの主要な転写因子の刺激が変化すると、ＮＦ−κＢ、ＮＬＲ及び他の炎症経路が活性化される。心血管疾患における免疫代謝のもう１つの重要な調節因子はＡＭＰＫである。二次免疫細胞による炎症性メディエーターの発現の増加は、免疫細胞のＡＭＰＫ活性を低下させ、かつ脂質酸化の速度を低下させる。ＡＭＰＫ活性の低下は、ＣＲＥＢ転写因子活性及び抗炎症性ＩＬ−１０産生の活性化などの有益な免疫応答の直接的な混乱につながる。シグナル伝達の混乱はまた、エネルギーのための脂肪酸の利用を減少させ、細胞のカルシウム流動を調節不全にすることにより、プラークの形成に直接一因となる。
【０１４８】
ＬＡＮＣＬ２は、ＡＭＰＫとＣＲＥＢの活動、及びＩＬ−１０の産生とカルシウムシグナル伝達の調節に関連する上流シグナル伝達要素である。その天然に存在するリガンドであるアブシジン酸は、高脂肪摂食中のＰＰＡＲ活性及び抗炎症反応の変調に関連している。ＢＴ−１１は、ヒト末梢血単核細胞に投与すると、炎症誘発性のアテローム性動脈硬化症関連サイトカインであるＩＦＮγ及びＴＮＦαの発現を低下させ、また、ＩＬ−１０産生増加させる。これらの効果と絡み合って、ＢＴ−１１は免疫細胞の酸化能力を高め、カロリー過剰の環境下で代謝ホメオスタシスを維持する能力を示唆している。ＢＴ−１１は、アテローム性動脈硬化症の影響を受ける免疫経路と代謝経路の両方に影響を与えることにより、アテローム性動脈硬化症の病理と疾患を治療し、動脈壁における細胞、細胞断片及び代謝物の継続的な補充と沈着を防ぐ。本発明の調製された細胞を動物に投与することは、この実施例に記載しているＢＴ−１１の効果を模倣することになるであろうと予測される。
【０１４９】
アンデルセン病におけるグリコーゲン代謝の変調
アンデルセン病は、グリコーゲン貯蔵の欠陥に関連する先天性代謝異常である。これは、グリコーゲンの分岐に関与する酵素をコードするＧＢＥ１遺伝子の欠陥と変異によって引き起こされる。分岐していないグリコーゲンは、溶解度が低く、心臓と肝臓内での沈殿と蓄積につながる。追加の証拠は、免疫細胞がこの異常なグリコーゲンに反応し始めることを示している。ポリグルコサンに反応する抗体は、アンデルセン病及びラフォラ病患者の心臓及び肝臓組織から単離された。免疫細胞によるポリグルコサンの取り込み及び反応性は、心臓及び肝臓組織への損傷を悪化させ、患者の健康の悪化を加速する可能性がある。これは、アンデルセン病患者におけるキトトリオシダーゼの上昇によってさらにサポートされる。キトトリオシダーゼは、防御反応及び慢性肝疾患中にマクロファージによって産生される酵素及び炎症マーカーである。
【０１５０】
ＢＴ−１１及び他の関連するＬＡＮＣＬ２リガンドは、グルコースの効率的で制御された酸化と整合しているが、ＬＡＮＣＬ２の活性化は、グルコースの恒常性に関連している。ＢＴ−１１又は他のリガンドによるＬＡＮＣＬ２の活性化は、アンデルセン病患者のグリコーゲンの蓄積を緩和する。防御応答の調節はＢＴ−１１又は他の関連するリガンドの利点にも寄与している。抗体とキトトリオシダーゼの産生は、免疫系が分岐していないグリコーゲンを異物として認識し、炎症の増加につながることを示唆している。ＢＴ−１１及び他の関連するリガンドは、典型的な抗原に対する耐性を誘導することができる。免疫寛容が維持されると、分岐していないグリコーゲンが分泌され、体から除去され得る。本発明の調製された細胞を動物に投与することは、この実施例に記載しているＢＴ−１１の効果を模倣することになるであろうと予測される。
【０１５１】
線維筋痛症における代謝性及び炎症性異常の回復
線維筋痛症は、全身に広範な痛みを引き起こす疾患である。この病気は米国内で３００万人以上を苦しめ、この病気には治療法はない。この病気によって引き起こされる慢性的な痛み、疲労、気分の変化を軽減することを目的とするセロトニン摂取阻害剤、鎮痛剤、及び非ステロイド性抗炎症薬が現在の治療法に含まれている。最近、線維筋痛症患者は、好中球誘引ケモカイン、ＩＬ−８、及び広範な炎症マーカーＣ−反応性タンパク質などの炎症マーカーのレベルが上昇していることが確認されている。特に、線維筋痛症患者のグリア細胞は、ケモカイン及びサイトカインのプロファイルが変化していて、疾患の症状及び病因に免疫系が関与していることを示している。さらに、線維筋痛症患者の免疫細胞の代謝は、健常者と比較して変化している。線維筋痛症の単核細胞は、スーパーオキシドの形成及び脂質の過酸化の増加と組み合わさって、ミトコンドリアの膜電位及びコエンザイムＱ１０が減少した。これらの変化は、炎症性の高い免疫細胞及び全体的な酸化ストレスの象徴である。さらに、疼痛の重症度及び他の症状は、調節反応に関連する単球亜集団を有する線維筋痛症患者において逆相関していた。
【０１５２】
ＬＡＮＣＬ２又は他の免疫代謝経路を標的とするＢＴ−１１及び他の関連化合物は、免疫細胞内の特定の代謝経路によって引き起こされる酸化ストレスを低減させる。この酸化ストレスの低減及びスーパーオキシドの生成は、神経細胞の過剰活性化及びグリア細胞の刺激を減らして、炎症性ケモカインを生成することができる。また、ＬＡＮＣＬ２の活性化は、単球及び他の単核細胞の規制サブセットへの分極に影響を与え得る。これらの細胞サブセットは、抗炎症反応、組織の恒常性及び創傷治癒に関連している。免疫細胞の代謝プロファイル及び調節単球サブセットの極性化に対する複合的な効果により、ＢＴ−１１は線維筋痛症及び他の慢性疼痛障害の治療の新規かつ理想的な候補になる。本発明の調製細胞を動物に投与することは、この実施例に記載しているＢＴ−１１の効果を模倣することになるであろうと予測される。
【０１５３】
炎症性疾患の治療のためのＣＤ４＋Ｔ細胞のエクスビボ治療
ＢＴ−１１は、免疫代謝シグナル伝達を介して、インビトロの細胞の表現型プロファイル及びインビボの免疫応答を変化させる。特に、ＢＴ−１１は、ＣＤ４＋Ｔ細胞を形作って、ＦＯＸＰ３の発現を増加させ、抑制能力を増加させ、炎症状態にあるこれらの調節細胞の安定性を増加させる。したがって、ＢＴ−１１でエクスビボ処理された細胞の養子移入は、炎症性腸疾患、移植片対宿主病、及び本明細書に記載されている他の疾患などの、不十分なＣＤ４＋Ｔ細胞応答を伴う炎症性疾患及び障害の治療に有益である。
【０１５４】
方法
磁気ソーティングにより、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞をマウスの脾臓から単離した。単離した細胞を、Ｔｒｅｇ分化培地中の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆９６ウェルプレートでインキュベートした。Ｔｒｅｇ分化培地は、ウシ胎仔血清、ＨＥＰＥＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミン、及び分化剤を添加したイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）の培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）であった。Ｔｒｅｇ分化因子は、１０ｎＭオールトランスレチノイン酸及び５ｎｇ／ｍＬＴＧＦ−βであった。１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−２又はＩＬ−１２を添加した場合と添加しない場合のＴｒｅｇ分化培地での分化を比較する追加の実験を行った。アッセイ前の４８時間の間、分化培地内で１０ｎＭのビヒクル又は１００ｎＭのＢＴ−１１で細胞をインキュベートした。アッセイの前に、細胞をＰＭＡ及びイオノマイシンで６時間刺激した。
【０１５５】
移植実験では、ドナーの脾臓を粉砕し、磁気ソーティングによりＣＤ４＋フラクションのために濃縮した。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢhiＣＤ２５−（Ｔｅｆｆ）及びＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢloＣＤ２５＋（Ｔｒｅｇg）細胞を、ＦＡＣＳＡｒｉａセルソーターでソーティングした。単離されたＴｒｅｇは、ビヒクル又はＢＴ−１１（１００ｎＭ）の存在下で１２時間培養された。単離されたＴｅｆｆは、ビヒクル中で１２時間培養された。示された実験群に基づいて、Ｒａｇ２−／−受容マウスは、ビヒクル又はＢＴ−１１治療群から４×１０5個のＴｅｆｆ細胞及び１×１０5個のＴｒｅｇ細胞を腹腔内注射によって受けた。移入後５週間で安楽死されるまで毎週、マウスの体重を量り、スコアを記録した。
【０１５６】
結腸粘膜固有層リンパ球及び培養細胞を、９６ウェルプレート（６×１０5細胞／ウェル）に播種し、上述のようにフローサイトメトリにより免疫表現型検査のために処理した。手短に言えば、細胞を、細胞外マーカー、すなわち、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＣＤ８に対する蛍光色素標識抗体とともにインキュベートした。二次染色を必要とする試料は、二次抗体、又はストレプトアビジン結合蛍光色素と共にインキュベートした。次に、試料を固定し、透過化した。細胞を細胞内マーカー、すなわち、Ｔｂｅｔ、ＩＦＮγ、ＩＬ１０、ＦＯＸＰ３、ＩＬ１７、ＲＯＲγＴと共にインキュベートした。データはＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃｅｌｅｓｔａフローサイトメーターで取得し、ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して分析した。
【０１５７】
結果
ＢＴ−１１の有効性に対するＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋調節性ＣＤ４＋Ｔ細胞の重要性により、それらの分化に対するＢＴ−１１の直接的な影響及びを炎症状態で表現型を保持する能力特定することを目的とした。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、上記の方法にしたがって、ＩＬ−２の存在下又は非存在下で、インビトロでＴｒｅｇに分化された。ＢＴ−１１処理（１００ｎＭ）は、ＩＬ−２の非存在下でのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋サブタイプの確立を有意に増加させ、この差は、ＩＬ−２の追加によってさらに強調された（図１１Ａ、パネルＡ）。１０ｎＭという低い濃度で、ＢＴ−１１は、ＩＬ−２の存在下で多くのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋細胞を著しく誘導した。これらの分化条件下では、低レベルの混合ＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋サブタイプのみが観察され、これはＢＴ−１１によって統計的に変更されなかった（図１１Ｂ、パネルＢ）。注目すべきは、ＢＴ−１１の存在下では存在しなかった、わずかな数値の増加が、ＩＬ−２の添加により、ビヒクルで治療された対照において起こったことである。一方、ＢＴ−１１は、ＩＬ−１２治療試料で有意に高いレベルのＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋細胞を保持した（図１１Ａ、パネルＣ）。これは、ＢＴ−１１の非存在下でのＩＬ−１２治療試料におけるＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋細胞の抑制とは対照的である（図１１Ａ、パネルＣ）。ＩＬ−１２の追加はまた、すべての群でＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋細胞の増加も誘発したが、ＢＴ−１１はこの混合サブセットに対して用量依存的な保護を提供した（図１１Ｂ、パネルＤ）。
【０１５８】
インビボでＢＴ−１１によって変調されるシグナル伝達経路を特定するために、１０週齢の大腸炎の症状で、ビヒクル及びＢＴ−１１治療Ｍｄｒ１ａ−／−マウスから結腸ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。ＣＤ４＋Ｔ細胞では、経口ＢＴ−１１治療により、ＩＬ−２シグナル伝達経路の２つのメンバーであるＳｔａｔ５ａ（図１２Ａ、パネルＡ）及びＦｏｘｏ１（図１２Ａ、パネルＣ）の有意に高い発現が得られた。一方、Ｐｔｅｎ（図１２Ａ、パネルＢ）及びＰｈｌｐｐ１（図１２Ａ、パネルＤ）の発現はわずかに増加したが、有意ではなかった。インビトロで、ＳＴＡＴ５ａは、基本的なＴｒｅｇ分化培地及びＩＬ−２又はＩＬ−１２のいずれかが補充されたＴｒｅｇ分化培地内のＢＴ−１１治療試料においてより高い速度でリン酸化される（図１２Ｂ、パネルＥ）。ＦＯＸＯ１は、基本的なＴｒｅｇ分化培地とＩＬ−２を含むＴｒｅｇ分化培地の両方で同様に影響を受けるが、ＩＬ−１２を含むＴｒｅｇ分化培地では影響を受けない（図１２Ｂ、パネルＦ）。ＰＴＥＮ（ＳＦ１６７０）又はＳＴＡＴ５（ＳＴＡＴ５ｉ）についての阻害剤の存在下でも細胞は分化した。ＩＬ−２（図１２Ｃ、パネルＧ、Ｈ）又はＩＬ−１２（図１２Ｄ、パネルＩ、Ｊ）の両方を含むＴｒｅｇ分化培地では、ＳＴＡＴ５ｉの追加により、ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋及びＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋細胞に対するＢＴ−１１の影響が防止された。対照的に、ＳＦ１６７０は、ＩＬ−２含有培地でのＣＤ２５＋Ｔｂｅｔ＋細胞に対するＢＴ−１１の影響のみを防止した（図１２Ｃ、パネルＨ）。
【０１５９】
Ｒａｇ２−／−マウスは成熟Ｔ及びＢリンパ球が欠乏している。したがって、これらのマウスについては、自己寛容、微生物の恒常性、及び全体的な免疫調節のメカニズムを開発できない。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞をＲａｇ２−／−マウスに移入すると、炎症性腸疾患を含むが、それに限定されない、活性な炎症性自己免疫疾患において経験するものと同様の様式で、移入された細胞がインビボで増殖し、炎症表現型に分化することにより、これらのメカニズムが存在しないために発生する腸炎が誘発される。ＢＴ−１１によりエクスビボで治療された調節細胞の移行が恒常性及び免疫調節のメカニズムを受容動物に付与するという仮説を立て、事実であることが判明した。
【０１６０】
ＢＴ−１１（１００ｎＭ）を用いてエクスビボで治療されたＴｒｅｇの養子移入は、全体的な疾患の重症度を低下させ、移入後５週間の試験された制限期間、免疫の利益の維持を提供した（図１３）。疾患の全体的な改善に加えて、ＢＴ−１１を用いたＴｒｅｇのエクスビボ治療により、結腸固有層細胞の表現型が変化した。ＢＴ−１１治療Ｔｒｅｇ群では、ＩＦＮγ産生及びＩＬ−１７＋ＲＯＲγＴ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞が減少した。一方、ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇが増加し、安定性の増加と制御細胞の創始者集団として機能する能力の増加が示された。さらに、ＩＬ−２／ＳＴＡＴ５シグナル伝達軸との相互作用は、移入された細胞の影響を増幅するサイトカイン及びケモカインの微小環境下での重要な変化を促進する。
【０１６１】
これらの結果は、インビボで投与された場合の免疫細胞に対するＢＴ−１１の効果がエクスビボで免疫細胞を治療する場合に再現できることを示している。本発明の調製細胞を動物に投与することは、ＩＢＤなどの炎症性疾患を超えて、本明細書に記載される状態のいずれかを治療するのに有効であるであろうと予測される。
【０１６２】
本発明の態様の例示的な実施形態
１．化合物又は前駆細胞を化合物と接触させることによって生成される調製細胞により動物の状態を治療する方法であって、有効量の化合物又は調製細胞を動物に投与することを含み、状態が感染症、過剰増殖性障害、先天性代謝異常、慢性免疫代謝性疾患、自己免疫疾患、臓器移植拒絶反応、炎症性障害、及び慢性疼痛の少なくとも１つであり、化合物が、
式Ｚ−Ｙ−Ｑ−Ｙ´−Ｚ´の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルを含み、式中、
Ｚは、
2021503936.tif 000014
Ｙは、
2021503936.tif 000015
Ｑは、ピペラジン−１，４−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２，５−ジイル；２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン−２，５−ジイル；１，４−ジアゼパン−１，４−ジイル；ベンゼン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル；エタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；Ｎ1，Ｎ2−ジアルキルエタン−１，２−ジアミン−Ｎ1，Ｎ2−ジイル；プロパン−１，３ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；Ｎ1，Ｎ3−ジアルキルプロパン−１，３−ジアミン−Ｎ1，Ｎ3−ジイル；１，４−ジアミノアントラセン−９，１０−ジオン−１，４−ジイル；Ｃ6アレーン−１，４−ジアミン−Ｎ1，Ｎ4−ジイル（前記アレーンは、２、３、５、又は６位において、１〜４個の置換基で置換され、置換基は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＯＨ、Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される）、又は置換ピペラジン−１，４−ジイル（前記ピペラジンは、２、３、５、又は６位において、１〜８個の置換基で置換され、置換基は、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、アリール、アリール（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、及びＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルからなる群から独立して選択される）であり、
Ｙ´は、
2021503936.tif 000016
又は単結合であり、
Ｚ´は、
2021503936.tif 000017
又はＲ5であり、
Ｙ´は、Ｚ´がＲ5である場合にのみ単結合であり、
Ａ1及びＡ1´は、存在する場合、各々独立してＮ、Ｎ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、Ｏ、Ｓ、又はＣＲ6であり、
Ａ2及びＡ2´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ7であり、
Ａ3及びＡ3´は、存在する場合、各々独立してＮＲ8、Ｏ、又はＳであり、
Ａ4及びＡ4´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ9であり、
Ａ5及びＡ5´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ10であり、
Ａ6及びＡ6´は、存在する場合、各々独立してＮ又はＣＲ11であり、
Ｒ1、Ｒ1´、Ｒ2、Ｒ2´、Ｒ3、Ｒ3´、Ｒ4、Ｒ4´、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ11は、存在する場合、各場合において、水素；アルキル；ハロ；トリフルオロメチル；ジアルキルアミノ（各アルキルは、独立して選択される）、−ＮＨ2；アルキルアミノ；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ヘテロシクロアルキル；、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される、１もしくは２つの置換基で置換された置換ヘテロシクロアルキル；ならびに置換ヘテロアリールアルキルからなる群から独立して選択され、
置換ヘテロアリールアルキルは、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル、−ＮＨ（（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル）2からなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換され、各アルキルは、アルキル；ハロ；アリール；−ＳＯ2Ｒ12、−ＯＲ13、−ハロ、−ＣＮ、−ＣＦ3、アミノアルキル−、−Ｓ（Ｏ）Ｒ14、及びアルキルからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換された置換アリール；ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；アルキル、−ＣＦ3、Ｆ、Ｃｌ、及びＢｒからなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換された置換アリール；アルキルアミノ−；ヘテロシクロアルキル−アルキル−アミノ−；アルキルアミノアルキルアミノ−；−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ15；−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ16Ｒ17；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ16Ｒ17；アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2からなる群から選択される１〜３個の置換基で置換された置換ヘテロアリールから独立して選択され、各アルキルは、−ＣＦ3、ならびに−Ｓ（Ｏ）2Ｒ15及びＣＮらなる群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換され、
Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、及びＲ17は、それぞれ独立して、Ｃ1−Ｃ6アルキル；独立して選択されたＣ1−Ｃ6アルキルを含むジアルキルアミノ；−ＮＨ2；アルキルアミノ；ヘテロシクロアルキル；−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）及びＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から独立して選択される１又は２個の置換基で置換された置換ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、あるいは、
化合物は、式Ａ−Ｂ−Ｃ、又はその薬学的に許容可能な塩もしくはエステルを含み、式中、
Ａは、
2021503936.tif 000018
Ｂは、
2021503936.tif 000019
Ｃは、
2021503936.tif 000020
Ａ7、Ａ8、Ａ9、Ａ10、Ａ11、Ａ12、Ａ13、及びＡ14は、ＣＨ、ＣＲ18、及びＮから各々独立して選択され、
Ａ15、Ａ16、Ａ17、Ａ18、Ａ19、及びＡ20は、ＣＨ、ＣＲ19、Ｎ、ＮＲ20、Ｏ、及びＳから各々独立して選択され、ただし、Ａ15、Ａ16、及びＡ17の１つのみがＮ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、Ａ18、Ａ19、及びＡ20の１つのみがＮ、ＮＲ20、Ｏ、又はＳであり得、
Ｒ18及びＲ19は、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ジアルキルアミノから各々独立して選択され、各Ｃ1−Ｃ6アルキルは、独立して、−ＮＨ2、アルキルアミノ、ヘテロシクロアルキル、及び置換ヘテロシクロアルキルから選択され、置換ヘテロシクロアルキルは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）及びＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から独立して選択される１又は２つの置換基で置換され、複数のＣＲ18を有する化合物では、各Ｒ18は独立して選択され、複数のＣＲ19を有する化合物では、各Ｒ19は独立して選択され、
Ｒ20は、Ｃ1〜Ｃ6アルキルである。
【０１６３】
２．感染症が細菌性疾患を含む、実施形態１に記載の方法。
【０１６４】
３．細菌性疾患がＣ．ディフィシル感染を含む、実施形態２の方法。
【０１６５】
４．過剰増殖性障害が癌を含む、実施形態１の方法。
【０１６６】
５．癌が消化管の癌を含む、実施形態４の方法。
【０１６７】
６．消化管の癌が大腸癌を含む、実施形態５の方法。
【０１６８】
７．過剰増殖性障害が家族性腺腫性ポリポーシスを含む、実施形態１の方法。
【０１６９】
８．先天性代謝異常がグリコーゲン蓄積症を含む、実施形態１の方法。
【０１７０】
９．グリコーゲン蓄積症がアンデルセン病を含む、実施形態８の方法。
【０１７１】
１０．慢性免疫代謝性疾患が心血管疾患を含む、実施形態１の方法。
【０１７２】
１１．心血管疾患がアテローム性動脈硬化症を含む、実施形態１０の方法。
【０１７３】
１２．慢性免疫代謝性疾患が高血圧を含む、実施形態１の方法。
【０１７４】
１３．自己免疫が全身性エリテマトーデス及び多発性硬化症の少なくとも１つを含む、実施形態１の方法。
【０１７５】
１４．自己免疫疾患が癌免疫療法誘発自己免疫疾患を含む、実施形態１の方法。
【０１７６】
１５．癌免疫療法によって誘発される自己免疫疾患が、癌免疫療法によって誘発されるリウマチ性疾患を含む、実施形態１４の方法。
【０１７７】
１６．炎症性障害が急性結腸憩室炎を含む、実施形態１の方法。
【０１７８】
１７．炎症性障害が、消化管の放射線誘発性炎症を含む、実施形態１の方法。
【０１７９】
１８．消化管の放射線誘発性炎症が、放射線直腸炎、放射線腸炎、及び放射線直腸Ｓ状結腸炎のうちの少なくとも１つを含む、実施形態１７の方法。
【０１８０】
１９．慢性疼痛が線維筋痛を含む、実施形態１の方法。
【０１８１】
２０．状態が炎症性腸疾患を含む、実施形態１の方法。
【０１８２】
２１．状態がクローン病を含む、実施形態１の方法。
【０１８３】
２２．状態が潰瘍性大腸炎を含む、実施形態１の方法。
【図１Ａ】
2021503936.tif 000028
【図１Ｂ】
2021503936.tif 000029
【図１Ｃ】
2021503936.tif 000030
【図１Ｄ】
2021503936.tif 000031
【図１Ｅ】
2021503936.tif 000032
【図１Ｆ】
2021503936.tif 000033
【図２Ａ】
2021503936.tif 000034
【図２Ｂ】
2021503936.tif 000035
【図２Ｃ】
2021503936.tif 000036
【図３Ａ】
2021503936.tif 000037
【図３Ｂ】
2021503936.tif 000038
【図３Ｃ】
2021503936.tif 000039
【図４】
2021503936.tif 000040
【図５Ａ】
2021503936.tif 000041
【図５Ｂ】
2021503936.tif 000042
【図６Ａ】
2021503936.tif 000043
【図６Ｂ】
2021503936.tif 000044
【図６Ｃ】
2021503936.tif 000045
【図７Ａ】
2021503936.tif 000046
【図７Ｂ】
2021503936.tif 000047
【図７Ｃ】
2021503936.tif 000048
【図７Ｄ】
2021503936.tif 000049
【図７Ｅ】
2021503936.tif 000050
【図８】
2021503936.tif 000051
【図９】
2021503936.tif 000052
【図１０Ａ】
2021503936.tif 000053
【図１０Ｂ】
2021503936.tif 000054
【図１０Ｃ】
2021503936.tif 000055
【図１１Ａ】
2021503936.tif 000056
【図１１Ｂ】
2021503936.tif 000057
【図１２Ａ】
2021503936.tif 000058
【図１２Ｂ】
2021503936.tif 000059
【図１２Ｃ】
2021503936.tif 000060
【図１２Ｄ】
2021503936.tif 000061
【図１３】
2021503936.tif 000062
【国際調査報告】
2021503936.tif 000063
2021503936.tif 000064
2021503936.tif 000065