(57)【要約】本発明は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体組成物、及びがんの治療におけるそれらの使用を提供する。いくつかの実施形態では、単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。かかる単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、該抗体は、ヒトＣＤ１１２及びヒトＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断し、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断せず、抗体は、任意選択で、完全にヒトであるか、またはヒト化される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗体であって、
ｉ）（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉ）（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉｉ）（ａ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｖ）（ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖ）（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉ）（ａ）配列番号５０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉｉ）（ａ）配列番号６０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号７０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号７０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｘ）（ａ）配列番号８０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号８０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘ）（ａ）配列番号９０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号９０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号９０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉ）（ａ）配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｉ）（ａ）配列番号２００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号３００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｖ）（ａ）配列番号４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、前記単離された抗体。
【請求項２】
前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）前記ＶＨが、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｖ）前記ＶＨが、配列番号３１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖ）前記ＶＨが、配列番号４１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号４１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉ）前記ＶＨが、配列番号５１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号５１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉｉ）前記ＶＨが、配列番号６１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号６１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号７１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｘ）前記ＶＨが、配列番号８１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号８１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘ）前記ＶＨが、配列番号９１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号９１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉ）前記ＶＨが、配列番号１０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号２０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号３０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号３０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｖ）前記ＶＨが、配列番号４０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号４０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）前記ＶＨが配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉ）前記ＶＨが配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号２１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号２１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｖ）前記ＶＨが配列番号３１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号３１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖ）前記ＶＨが配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉ）前記ＶＨが配列番号５１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号５１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉｉ）前記ＶＨが配列番号６１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号６１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号７１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号７１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｘ）前記ＶＨが配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号８１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘ）前記ＶＨが配列番号９１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号９１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉ）前記ＶＨが配列番号１０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｉ）前記ＶＨが配列番号２０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号２０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号３０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号３０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｖ）前記ＶＨが配列番号４０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号４０１８のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記抗体がモノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体が抗体断片である、先行請求項のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２である、請求項５に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記抗体が完全長抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記抗体のＦｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む、請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、変異体ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
前記変異体ＩｇＧ４重鎖定常領域が、ＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓｅｒ２２８での置換、Ｌｅｕ２３５での置換、Ａｓｎ２９７での置換、またはそれらの組み合わせから選択される変異を含む、請求項１１に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記変異体ＩｇＧ４重鎖定常領域が、ＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む、請求項１１に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、前記抗体が、
ｉ）ＮＫ細胞脱顆粒を増加させ、及び／または
ｉｉ）ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｉｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて提示される際に、腫瘍内ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｖ）インビボで腫瘍成長を阻害し、及び／または
ｖ）腫瘍を用いた再負荷時に腫瘍生着を防止する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体のヒト化または完全ヒトバージョン。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
【請求項１７】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３またはＴＩＭ−３のアンタゴニストをさらに含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
対象における抗腫瘍免疫応答を、増強、増加、及び／または維持する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、腫瘍を有する対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１９】
対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞活性化を増強する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、ＣＤ８  Ｔ細胞活性化を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２０】
対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を増強する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、ＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２１】
対象におけるＮＫ細胞活性化を増強する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、ＮＫ細胞活性化を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
対象におけるＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増強する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、ＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増加させることを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２３】
対象におけるがんを治療する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を、がんを有する対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２４】
前記がんが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、または白血病である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記がんが、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞非小細胞肺癌を含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝細胞癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、または様々な種類の頭頸部癌（頭頸部扁平上皮細胞癌を含む）である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
対象におけるＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強する方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６もしくは１７に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２７】
前記方法が、第２の療法を投与することをさらに含む、請求項１８〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記第２の療法が、放射線療法または外科手術である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の療法が、化学療法、オプソニン化剤、または制御性Ｔ細胞枯渇剤の投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２の療法が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、またはＴＩＭ−３のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２の療法が、ＴＩＧＩＴまたはＣＤ９６のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記第２の療法が、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、及びＣＤ１５５のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記第２の療法が、ＣＤ４７のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記第２の療法が、ＣＤ３９のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
前記第２の療法が、ＩＬ−２７のアンタゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
前記第２の療法が、ＳＴＩＮＧアゴニストの投与である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
前記アンタゴニストが抗体である、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸。
【請求項３９】
請求項３８に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項４０】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、前記抗体が発現される条件下で、請求項３９に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項４１】
前記抗体を精製することをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月２０日出願の米国仮出願第６２／７０１，０６５号、及び２０１９年５月８日出願の米国仮出願第６２／８４４，９５８号の利益を主張するものであり、これらの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び維持すること、がんを治療すること、ならびにＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強することにおけるそれらの使用と同様に、提供される。
【背景技術】
【０００３】
免疫系の自然アーム及び適応アームの両方は、高度に特殊化した免疫細胞を利用して身体を巡回し、悪性腫瘍の兆候を探す。自然免疫は、非特異的で自然に存在するバリア及び破壊的ペプチドなどの機構を使用して、防御の最前線及び迅速な応答を提供する。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の一部であるリンパ球の一種であり、それらの細胞質に保存されているグランザイムを使用して、ウイルスに感染した細胞及び腫瘍細胞を認識し破壊できる。
【０００４】
適応免疫は、抗原に応答して時間と共に発達し、持続的な免疫を提供する。ＣＤ８＋Ｔ細胞としても知られる細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって提示されるウイルス及び腫瘍由来の抗原を認識するため、適応免疫応答の一部である。ＣＴＬは、樹状細胞またはマクロファージなどのＡＰＣとの相互作用によって活性化される。ＡＰＣは、ＭＨＣ分子の文脈における腫瘍抗原をＴ細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に提示する。この同族の相互作用の間に、ＡＰＣは、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖、及び細胞傷害性機構を介して抗原を発現する細胞の低減または排除につながる共刺激シグナルを提供する。
【０００５】
抗ＣＤ１１２Ｒ免疫療法の投与は、免疫応答を増加、増強、及び維持する機会を提供する。ＣＤ１１２Ｒは、主にＴ細胞及びＮＫ細胞によって発現される抑制性受容体であり、活性化受容体ＣＤ２２６とＣＤ１１２結合について競合する。ＣＤ１１２ＲとのＣＤ１１２の相互作用は、ＣＤ２２６とよりも高い親和性のものであり、それによってＣＤ２２６媒介性細胞活性化を効果的に制御する。ＣＤ１１２との相互作用を遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＣＤ１１２Ｒのすぐ下流の抑制性シグナル伝達を限定する一方で、同時に、ＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増加させることによって、より大きな免疫細胞活性化を促進する。インビトロ研究では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、免疫エフェクター細胞の増殖、活性化、及び細胞傷害性を増加させることが示されている。
【０００６】
ＣＤ１１２Ｒ  ｍＲＮＡ発現は、多くのがん組織で検出され、ＴＣＧＡ（Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ）データセットを使用する予測分析に基づく。その発現は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞が豊富である腫瘍において最も強い。骨髄系細胞上で発現されることに加えて、ＣＤ１１２ＲリガンドであるＣＤ１１２の発現は、異なる細胞起源の腫瘍細胞上で日常的に上昇している。それらの状況を考えると、腫瘍浸潤免疫細胞へのＣＤ１１２Ｒの関与は、腫瘍微小環境内の局所免疫応答を負に制御する強力な可能性を有する。
【０００７】
抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での治療的治療は、それによって、ＣＤ１１２Ｒ発現免疫細胞が腫瘍細胞及び／または腫瘍微小環境内の骨髄系細胞上のＣＤ１１２に関与する際に推定的に発生する抑制性シグナル伝達を下方調節する機会を提供し、抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び維持する可能性を有する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
いくつかの実施形態では、単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。かかる単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、該抗体は、ヒトＣＤ１１２及びヒトＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断し、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断せず、抗体は、任意選択で、完全にヒトであるか、またはヒト化される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本開示は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号５０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号６０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号７０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号７０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号８０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号８０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号９０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号９０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号９０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号２００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号３００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ａ）配列番号４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、単離された抗体を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ＶＨは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号４１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号４１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号５１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号５１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号６１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号６１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号７１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号７１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号８１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号８１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号９１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号９１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号１０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号１０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号２０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号２０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号３０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号３０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ＶＨは、配列番号４０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬは、配列番号４０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である。
【００１１】
いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載される６つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）と、本明細書に記載のＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるＶＨ及び／またはＶＬ配列と、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬ配列は、本明細書に記載のアミノ酸配列と１００％同一ではない。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列と、ＣＤＲ配列の外側にあるＶＨ及び／またはＶＬ配列内の配列多様性と、を含む。かかる実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬ配列の配列多様性は、ＶＨ及び／またはＶＬの１つ以上のフレームワーク領域内にある。
【００１２】
いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるＶＨ及び／またはＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬ配列は、本明細書に記載のアミノ酸と１００％同一ではない。かかる実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬ配列の配列多様性は、別段明記されない限り、ＣＤＲ配列内及び／またはＣＤＲ配列の外側にある。
【００１３】
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ＶＨは配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号１１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号２１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号３１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号３１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号５１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号５１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号６１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号６１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号７１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号７１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号８１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号９１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号９１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号１０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号１０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号２０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号２０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号３０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号３０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ＶＨは配列番号４０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬは配列番号４０１８のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞を活性化する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞上のＣＤ１３７を上方制御する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞を活性化する及び／またはＮＫ細胞上のＣＤ１３７を上方制御する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、例えば、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６などの、配列表に記載される抗体のうちのいずれかである抗体である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞を活性化する及び／またはＮＫ細胞上のＣＤ１３７を上方制御する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、それぞれ、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６の６つのＣＤＲを含む（配列表を参照されたい）。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２から選択される抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物を提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞脱顆粒を増加させ、ＮＫ細胞の活性化を増加させ、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて提示される際に腫瘍内ＮＫ細胞の活性化を増加させ、インビボで腫瘍成長を阻害し、及び／または腫瘍を用いた再負荷時に腫瘍生着を防止する。いくつかのかかる実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、抗体は、ＮＫ細胞脱顆粒を増加させ、ＮＫ細胞の活性化を増加させ、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて提示される際に腫瘍内ＮＫ細胞の活性化を増加させ、インビボで腫瘍成長を阻害し、及び／または異なるアイソタイプのヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含む他の点では同一の抗体に対して、腫瘍を用いた再負荷時に腫瘍生着を防止する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍を有する対象に本明細書に記載の抗体または組成物を投与することを含む、対象における抗腫瘍免疫応答を増強、増加及び／または維持する方法を提供する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本開示は、がんを有する対象に本明細書に記載の抗体または組成物を投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、または白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞非小細胞肺癌を含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝細胞癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、または様々な種類の頭頸部癌（頭頸部扁平上皮細胞癌を含む）である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象に抗体または本明細書に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強する方法を提供する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ８  Ｔ細胞活性化を必要とする対象に抗体または本明細書に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞活性化を増強する方法を提供する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を必要とする対象に抗体または本明細書に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を増強する方法を提供する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＫ細胞活性化を必要とする対象に抗体または本明細書に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるＮＫ細胞活性化を増強する方法を提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増加することを必要とする対象に抗体または本明細書に記載の組成物を投与することを含む、対象におけるＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増強する方法を提供する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、第２の療法を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の療法は、放射線療法、外科手術、または第２の薬剤の投与である。いくつかの実施形態では、第２の療法は、第２の薬剤である。いくつかのかかる実施形態では、第２の薬剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、またはＴＩＭ−３のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＴＩＧＩＴまたはＣＤ９６のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、またはＣＤ１５５のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＣＤ４７、ＣＤ３９、またはＩＬ−２７のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、抗腫瘍免疫を増強、及び／または増加、及び／または維持するため、及び／またはがんを治療するため、及び／またはＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強するための、抗体または本明細書に記載の組成物の使用を提供する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本開示は、抗腫瘍免疫応答を増強、及び／または増加、及び／または維持するため、及び／またはがんを治療するため、及び／またはＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強するための、抗体または医薬品の調製における本明細書に記載の組成物の使用を提供する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される抗体をコードする核酸を提供する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含む、本明細書に開示される抗体を産生する方法を提供し、宿主細胞は、抗体が発現される条件下で培養される。いくつかの実施形態では、方法は、抗体を精製することをさらに含む。
【００３０】
本開示の例示的な実施形態は、以下を含む。
実施形態１．ヒトＣＤ１１２Ｒに結合する単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体であって、前記抗体が、ヒトＣＤ１１２及びヒトＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断し、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断せず、抗体が、任意選択で、完全にヒトであるか、またはヒト化される、単離された抗ＣＤ１１２Ｒ抗体。
実施形態２．単離された抗体が、
ｉ）（ａ）配列番号７０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号７０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉ）（ａ）配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉｉ）（ａ）配列番号２００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｖ）（ａ）配列番号３００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖ）（ａ）配列番号４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉ）（ａ）配列番号１００１の４、５、及び／または６位に対する１、２、または３つのアミノ酸変化を有する配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２の１、３、５、６、及び／または８位に対する１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化を有する配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、実施形態１に記載の単離された抗体。
実施形態３．抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）ＶＨが、配列番号７１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号７１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉ）ＶＨが、配列番号１０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号１０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉｉ）ＶＨが、配列番号２０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号２０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｖ）ＶＨが、配列番号３０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号３０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖ）ＶＨが、配列番号４０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、ＶＬが、配列番号４０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、
ただし、任意選択で、任意の配列多様性がＣＤＲに存在する場合、かかる配列多様性が、ＨＣＤＲ１またはＨＣＤＲ２内にあり、ＨＣＤＲ１の４、５、及び／または６位に対する２つ以下のアミノ酸変化などの、３つ以下のアミノ酸変化と、ＨＣＤＲ２の１、３、５、６、及び／または８位に対する２つ以下のアミノ酸変化などの、５つ以下のアミノ酸変化と、を有し、任意選択で、多様性が、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３内にはない、実施形態１または２に記載の単離された抗体。
実施形態４．抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）ＶＨが配列番号７１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号７１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉ）ＶＨが配列番号１０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号１０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉｉ）ＶＨが配列番号２０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号２０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｖ）ＶＨが配列番号３０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号３０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖ）ＶＨが配列番号４０１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが配列番号４０１８のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
実施形態５．抗体がモノクローナル抗体である、先行実施形態のいずれか１項に記載の単離された抗体。
実施形態６．抗体が、完全長抗体であるか、または抗体断片、任意選択で、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、もしくは（Ｆａｂ’）２である、先行実施形態のいずれか１項に記載の単離された抗体。
実施形態７．抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含み、抗体が、任意選択で、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、または変異体ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含み、変異体ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域が、任意選択で、ＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓｅｒ２２８での置換、Ｌｅｕ２３５での置換、Ａｓｎ２９７での置換、もしくはそれらの組み合わせ、またはＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換から選択される変異を含む、実施形態１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
実施形態８．抗体が、
ｉ）ＮＫ細胞脱顆粒を増加させ、及び／または
ｉｉ）ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｉｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて提示される際に、腫瘍内ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｖ）インビボで腫瘍成長を阻害し、及び／または
ｖ）腫瘍を用いた再負荷時に腫瘍生着を防止し、任意選択で、抗体がＩｇＧ１またはＩｇＧ４である、実施形態１〜７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
実施形態９．組成物が、任意選択で、オプソニン化剤、制御性Ｔ細胞枯渇剤、化学療法、及び／またはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、もしくはＴＩＭ−３のアンタゴニストを含む、実施形態１〜８のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
実施形態１０．任意選択で、ＣＤ８  Ｔ細胞活性化が増強されるか、もしくはＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生が対象において増強されるか、または任意選択で、ＮＫ細胞活性化が対象において増強されるか、もしくはＮＫ細胞媒介性細胞傷害性が対象において増強されるか、または任意選択で、ＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用が対象において増強される、対象における抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び／または維持することにおける使用のための、実施形態１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体または実施形態９に記載の薬学的組成物。
実施形態１１．がんが、任意選択で、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、もしくは白血病であるか、がんが、任意選択で、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞非小細胞肺癌を含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝細胞癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、もしくは様々な種類の頭頸部癌（頭頸部扁平上皮細胞癌を含む）である、対象におけるがんを治療することにおける使用のための、実施形態１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体または実施形態９に記載の薬学的組成物。
実施形態１２．使用が、第２の療法を投与することをさらに含み、第２の療法が、任意選択で、放射線療法、外科手術、または第２の薬剤の投与であり、第２の薬剤が、任意選択で、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、もしくはＴＩＭ−３のアンタゴニストであるか、またはＴＩＧＩＴもしくはＣＤ９６のアンタゴニストであるか、またはＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、及びＣＤ１５５のアンタゴニストであるか、またはＣＤ４７のアンタゴニストであるか、またはＣＤ３９のアンタゴニストであるか、またはＩＬ−２７のアンタゴニストであるか、またはＳＴＩＮＧアゴニストであり、第２の薬剤が、任意選択で、アンタゴニスト抗体である、実施形態１０または１１の使用のための単離された抗体または薬学的組成物。
実施形態１３．実施形態１〜８のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸。
実施形態１４．実施形態１３に記載の核酸を含む、宿主細胞。
実施形態１５．実施形態１〜８のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、抗体が発現される条件下で、実施形態１４に記載の宿主細胞を培養することを含み、任意選択で、抗体を精製することを含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体と比較して、ヒトＣＤ１１２Ｒを過剰発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞に結合する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を示す。結合強度を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗体標識の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価した。
【図２Ａ】ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体と比較して、ヒトＣＤ１１２Ｒを過剰発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ１１２とのＣＤ１１２Ｒの相互作用を遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を示す。細胞を、ＩｇＧ１アイソタイプ対照または抗ＣＤ１１２Ｒ抗体のいずれかとプレインキュベートした。洗浄後、細胞を、ビオチン化ｈｉｓ標識ヒトＣＤ１１２及びストレプトアビジン−ＰＥを用いて同時に染色した。ＣＤ１１２ＲへのＣＤ１１２の結合を遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、ＰＥ標識の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価し、阻害パーセントとして表示した。阻害パーセントを、［１００−（（試験試料ＭＦＩ／最大ＭＦＩ）＊１００％）］として計算した。
【図２Ｂ】ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体と比較して、ヒトＣＤ１１２Ｒを過剰発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ１１２とのＣＤ１１２Ｒの相互作用を遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を示す。本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体によるヒトＣＤ１１２Ｒ及びＣＤ１１２の間の相互作用のＥＬＩＳＡによって測定された阻害パーセントを示す。
【図３】ＩｇＧ１アイソタイプ抗体と比較して、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下でのＲＥＨ細胞（ヒト白血病細胞株）に対する増強されたヒトＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を示す。活性化されたＮＫ細胞及びｃｅｌｌＴｒａｃｅバイオレット標識されたＲＥＨ細胞を、４時間共培養した。共培養後、ＲＥＨ細胞の生存率を、７−ＡＡＤで染色することによって評価した。細胞傷害性（アイソタイプを超えるパーセント）を、（（試験死亡率−アイソタイプ死亡率）／アイソタイプ死亡率）×１００として計算した。
【図４】ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体と比較して、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で、ＩＦＮγ分泌によって測定された、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増強された抗原駆動活性化を示す。Ｃｏｌｏ２０５細胞を、ｐｐ６５ペプチドでパルスし、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはＩｇＧ１アイソタイプ対照の存在下でヒトＣＭＶ特異的Ｔ細胞と共培養した。培養細胞の上清中のＩＦＮγレベルを、Ｌｕｍｉｎｅｘによって測定した。抗ＣＤ１１２Ｒ抗体２及び５で処理されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、アイソタイプ対照で観察されたよりも多くのＩＦＮγ分泌をもたらした。
【図５】マウス抗ＣＤ１１２Ｒ及びマウス抗ＴＩＧＩＴ抗体の組み合わせが、マウス同系ＣＴ−２６腫瘍モデルにおいて治療効果を有することを示すグラフである。担がんマウスを、４つの群に無作為化し、１）アイソタイプ対照抗体、２）抗ＴＩＧＩＴ抗体、３）抗ＣＤ１１２Ｒ抗体、または４）抗ＣＤ１１２Ｒ抗体と組み合わせた抗ＴＩＧＩＴ抗体を用いて、ＩＰ注射によって週２回、２週間治療した。各治療群についての平均腫瘍体積は、時間の関数として示される。結果は、抗ＴＩＧＩＴとの抗ＣＤ１１２Ｒの組み合わせが、アイソタイプ治療動物と比較して腫瘍成長の低減に有効であった一方で、抗ＣＤ１１２Ｒまたは抗ＴＩＧＩＴ単剤療法は、腫瘍成長の低減に対して活性を示さないか、またはわずかな効果しか示さなかったことのいずれかを実証する。
【図６】抗ＣＤ３活性化後のＰＢＭＣにおけるＣＤ１１２Ｒの発現の増加を示すグラフである。ヒトＰＢＭＣを抗ＣＤ３抗体を用いてインビトロで刺激し、ＣＤ１１２Ｒ発現をフローサイトメトリーによって評価した。ＣＤ１１２Ｒ抗体結合の定量を、示された細胞タイプについてのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗体標識の幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価した。ＣＤ１１２Ｒは、陰性対照（ＦＯＮ、（アイソタイプｇＭＦＩで割ったＣＤ１１２Ｒ  ｇＭＦＩ））を超える倍率変化として示される。
【図７】ＩｇＧ１アイソタイプを有するＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で腫瘍細胞に応答した増強されたＮＫ細胞媒介性脱顆粒を示す。ヒトＮＫ細胞とＲａｊｉ．ＣＤ１１２細胞を、ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下でＣＤ１０７ａ  ＰＥ抗体と４時間共培養した。共培養後、ＮＫ細胞脱顆粒を、ＣＤ１０７ａ陽性であるＮＫ細胞の頻度によって決定した。
【図８Ａ】ＩｇＧ１アイソタイプを有するＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で増強されたＮＫ細胞活性化を示す。２人の異なるドナーとＫ５６２細胞からのヒトＰＢＭＣを、ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で１６時間共培養した。共培養後、ＮＫ細胞の活性化を、ＣＤ１３７陽性であるＮＫ細胞の頻度によって決定した。２つの独立したアッセイにおけるドナー１及びドナー２についての結果は、それぞれ、図８Ａ〜８Ｄに示される。
【図８Ｂ】ＩｇＧ１アイソタイプを有するＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で増強されたＮＫ細胞活性化を示す。２人の異なるドナーとＫ５６２細胞からのヒトＰＢＭＣを、ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で１６時間共培養した。共培養後、ＮＫ細胞の活性化を、ＣＤ１３７陽性であるＮＫ細胞の頻度によって決定した。２つの独立したアッセイにおけるドナー１及びドナー２についての結果は、それぞれ、図８Ａ〜８Ｄに示される。
【図８Ｃ】ＩｇＧ１アイソタイプを有するＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で増強されたＮＫ細胞活性化を示す。２人の異なるドナーとＫ５６２細胞からのヒトＰＢＭＣを、ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で１６時間共培養した。共培養後、ＮＫ細胞の活性化を、ＣＤ１３７陽性であるＮＫ細胞の頻度によって決定した。２つの独立したアッセイにおけるドナー１及びドナー２についての結果は、それぞれ、図８Ａ〜８Ｄに示される。
【図８Ｄ】ＩｇＧ１アイソタイプを有するＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で増強されたＮＫ細胞活性化を示す。２人の異なるドナーとＫ５６２細胞からのヒトＰＢＭＣを、ＣＤ１１２Ｒ抗体の存在下で１６時間共培養した。共培養後、ＮＫ細胞の活性化を、ＣＤ１３７陽性であるＮＫ細胞の頻度によって決定した。２つの独立したアッセイにおけるドナー１及びドナー２についての結果は、それぞれ、図８Ａ〜８Ｄに示される。
【図９】抗ＣＤ１１２Ｒ抗体で処置されたマウスにおける腫瘍成長阻害を示す。図は、群あたりＮ＝４４〜４５である、３つの実験の要約を示す。統計分析を、移植後２４日目にＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定によって実行した。
【図１０Ａ】抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での治療が、ＣＴ−２６腫瘍を接種されたマウスの全生存期間を増加させ、腫瘍再負荷からマウスを保護することを示す。抗ＣＤ１１２Ｒ治療での原発腫瘍負荷後のマウスの生存率頻度を示す。生存マウスは、接種の５０日目以降、触知可能な腫瘍を呈さず、完全奏功者であると見なされた。
【図１０Ｂ】抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での治療が、ＣＴ−２６腫瘍を接種されたマウスの全生存期間を増加させ、腫瘍再負荷からマウスを保護することを示す。ナイーブ対照マウスと比較した、腫瘍再負荷時の生存マウスにおける腫瘍成長阻害を示す。統計分析を、移植後５０日目のＭａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定（図１０Ａ）及び移植後１５日目のＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定（図１０Ｂ）によって実行した。
【図１１】ＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおけるＣＤ１１２Ｒ遮断のインビボ有効性が、ＮＫ細胞及びＣＤ８  Ｔ細胞に依存していることを示す。図は、ＮＫ細胞またはＣＤ８  Ｔ細胞のいずれかを同時に枯渇させた抗ＣＤ１１２Ｒ治療マウスの腫瘍成長阻害を示す。
【図１２】抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での処理後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける腫瘍内ＮＫ細胞上のＣＤ６９（図１２Ａ）及びグランザイムＢ（図１２Ｂ）の発現を示す。
【図１３Ａ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。
【図１３Ｂ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。
【図１３Ｃ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。
【図１３Ｄ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。
【図１３Ｅ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。
【図１３Ｆ】単独で及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与後のＣＴ−２６腫瘍モデルにおける時間の関数としての、平均（図１３Ａ）及び個々（図１３Ｂ〜Ｅ）の腫瘍体積測定を示す。移植後５０日目の全体的な無腫瘍生存率を、群あたりの無腫瘍生存者の割合として示す。
【図１４Ａ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ａ〜１４Ｃは重鎖可変領域のＣＤＲ配列を示し、図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１４Ｂ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ａ〜１４Ｃは重鎖可変領域のＣＤＲ配列を示し、図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１４Ｃ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ａ〜１４Ｃは重鎖可変領域のＣＤＲ配列を示し、図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１４Ｄ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ｄ〜１４Ｆは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列を示す。図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１４Ｅ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ｄ〜１４Ｆは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列を示す。図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１４Ｆ】本明細書に記載の抗体のＣＤＲ配列のアラインメントを示す。図１４Ｄ〜１４Ｆは軽鎖可変領域のＣＤＲ配列を示す。図１４Ａ〜１４Ｆの各々では、第１の列は、ＨＣＤＲ１（図１４Ａ）、ＨＣＤＲ２（図１４Ｂ）、及びＨＣＤＲ３（図１４Ｃ）、ＬＣＤＲ１（図１４Ｄ）、ＬＣＤＲ２（図１４Ｅ）、及びＬＣＤＲ３（図１４Ｆ）を示し、抗体クローン番号は、Ｈ１（ＨＣＤＲ１について）、Ｈ２（ＨＣＤＲ２について）、Ｈ３（ＨＣＤＲ３について）、Ｌ１（ＬＣＤＲ１について）、Ｌ２（ＬＣＤＲ２について）、及びＬ３（ＬＣＤＲ３について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、第３の列は配列中のアミノ酸の数を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ａ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ａ〜１５Ｄは、重鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示し、図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｂ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ａ〜１５Ｄは、重鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示し、図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｃ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ａ〜１５Ｄは、重鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示し、図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｄ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ａ〜１５Ｄは、重鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示し、図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｅ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ｅ〜１５Ｈは、軽鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示す。図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｆ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ｅ〜１５Ｈは、軽鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示す。図１５Ａ〜１５Ｆの各々では、第１の列は、重鎖ＦＲ１（図１５Ａ）、ＦＲ２（図１５Ｂ）、ＦＲ３（図１５Ｃ）、ＦＲ４（図１５Ｄ）及び軽鎖ＦＲ１（図１５Ｅ）、ＦＲ２（図１５Ｆ）、及びＦＲ３（図１５Ｇ）、及びＦＲ４（図１５Ｈ）を示し、抗体クローン番号は、ＶＨ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ３、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４について）、及びＶＬ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４について）の前に提供される。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｇ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ｅ〜１５Ｈは、軽鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示す。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１５Ｈ】本明細書に記載の抗体のフレームワーク領域配列のアラインメントを示す。図１５Ｅ〜１５Ｈは、軽鎖可変領域のフレームワーク領域配列を示す。第２の列は配列を示し、最後の列は親抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントを示す。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１６Ａ】本明細書に記載の抗体の可変領域配列のアラインメントを示す。重鎖可変領域配列を示す。各配列は、その対応するクローン番号で標識される。抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントが示される。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１６Ｂ】本明細書に記載の抗体の可変領域配列のアラインメントを示す。軽鎖可変領域配列を示す。各配列は、その対応するクローン番号で標識される。抗体クローン３２からの配列に対する各配列の同一性パーセントが示される。ファミリーメンバークローン３２、３３、３４、３５、及び３６は、太字で示される。
【図１７】マウスＣＤ１１２Ｒを発現する細胞への、本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体及び追加的な抗ＣＤ１１２Ｒ抗体（ヒトＣＤ１１２Ｒに結合する抗体Ａ、Ｂ、及びＣ）の結合の程度を示す。
【図１８】可溶性マウスＣＤ１１２Ｒへの、本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体及び追加的な抗ＣＤ１１２Ｒ抗体（ヒトＣＤ１１２Ｒに結合する抗体Ａ、Ｂ、及びＣ）の結合の程度を示す。
【図１９】本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体及び追加的な抗ＣＤ１１２Ｒ抗体（ヒトＣＤ１１２Ｒに結合する抗体Ａ、Ｂ、及びＣ）によるマウスＣＤ１１Ｒ及びマウスＣＤ１１２の間の相互作用の阻害パーセントを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
Ｉ．定義
本出願では、「または」の使用は、別段記載されない限り、「及び／または」を意味する。複数の従属請求項の文脈では、「または」の使用は、代替のみにおいて、２つ以上の先行する独立または従属請求項に戻ることを指す。用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有すること」は、本明細書で交換可能に使用され得る。
【００３３】
用語「ＣＤ１１２Ｒ」、「ＰＶＲ関連免疫グロブリンドメイン含有」、「ＣＤ１１２受容体」、「ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有タンパク質」、「ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有」、「ネクチン−２受容体」、「Ｃ７ｏｒｆ１５」、及び「膜貫通タンパク質ＰＶＲＩＧ」は、全て交換可能に使用され、別段具体的に示されない限り（例えば、マウスＣＤ１１２Ｒ、カニクイザルＣＤ１１２Ｒなど）、天然のヒトＣＤ１１２Ｒを指す。用語は、完全長、未加工のＣＤ１１２Ｒ、同様に細胞における加工から生じるＣＤ１１２Ｒの任意の形態を含む。用語は、ヒトＣＤ１１２Ｒの自然に生じる多様体（例えば、スプライス多様体または対立遺伝子多様体）を包含する。ＣＤ１１２Ｒ遺伝子に対する外部ＩＤは、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ：７９０３７、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２１３４１３、ＯＭＩＭ：６１７０１２、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ６ＤＫＩ７を含む。
【００３４】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、非共有結合性相互作用の総計の強度を指す。別段示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１相互作用を反映する、内在的結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための具体的な図解及び例示的実施形態は、以下に記載される。
【００３５】
「親和性成熟」抗体は、かかる改変を保有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の改変を有する抗体を指し、かかる改変は、任意選択で、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす。
【００３６】
本明細書での用語「抗体」は、最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
【００３７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。
【００３８】
２つ以上の分子間の相互作用の文脈における用語「遮断」は、２つ以上の分子の間の該相互作用の阻害または防止を指すために本明細書で使用され、２つ以上の分子の間の該相互作用の阻害または防止は、少なくとも１つの条件下で完全またはほぼ完全である。「ほぼ完全な」阻害は約７０〜９９．９％の阻害パーセントであり、「完全な」阻害は１００％である。例えば、分子は、用量依存的様式で、ある特定の濃度でかかる相互作用を完全にまたはほぼ完全に阻害する場合、２つ以上の他の分子間の相互作用を「阻害」すると言われる。
【００３９】
用語「がん」は、異常に高レベルの増殖及び成長を呈する細胞の群を指すために本明細書で使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも称される）、前悪性、または悪性であり得る。がん細胞は、固形がん細胞または白血病がん細胞であり得る。用語「腫瘍」は、がんを含む細胞（ｃｅｌｌ）または細胞（ｃｅｌｌｓ）を指すために本明細書で使用される。用語「腫瘍成長」は、がんのサイズまたは程度の対応する増加をもたらす、がんを含む細胞（ｃｅｌｌ）または細胞（ｃｅｌｌｓ）による増殖または成長を指すために本明細書で使用される。
【００４０】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りが異なる源または種に由来する、抗体を指す。
【００４１】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。５つの主要な抗体のクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４２】
１つ以上のさらなる治療剤と「組み合わせた」投与は、同時（同時期）及び任意の順序の連続（逐次）投与を含む。
【００４３】
本明細書で使用される用語「細胞傷害性薬剤」は、細胞機能を阻害もしくは阻止する、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素などの酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または多様体を含む）などの毒素；ならびに以下に開示される様々な抗腫瘍または抗がん薬剤を含むが、これらに限定されない。
【００４４】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより異なる、抗体のＦｃ領域に起因し得るそれらの生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例は、Ｃ１ｑ結合及び補体依存的細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存的細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、ならびにＢ細胞活性化を含む。
【００４５】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、必要な投薬量で一定期間にわたり、所望の治療的または予防的結果を達成するために有効な量を指す。
【００４６】
本明細書での用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。用語は、天然配列Ｆｃ領域及び多様体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００４７】
「フレームワーク」、または「フレームワーク領域」、または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００４８】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有する、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体を指すために交換可能に本明細書で使用される。
【００４９】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入されている細胞を指し、かかる細胞の後代を含む。宿主細胞は、初代形質転換細胞と、継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。後代は、核酸含有量において親細胞と完全に同一でない場合があるが、変異を含み得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００５０】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００５１】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい。）単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングするために、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００５２】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位群からのものである。一般に、配列の下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３における下位群である。いくつかの実施形態では、ＶＬについて、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、上記のような下位群カッパＩである。いくつかの実施形態では、ＶＨについて、下位群は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、上記のような下位群ＩＩＩである。
【００５３】
本明細書で使用される用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、配列において超可変であり（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。
【００５４】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１つ以上の異種分子（複数可）に複合体化される抗体である。
【００５５】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物は、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
【００５６】
「単離された」抗体は、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される場合、９５％超または９９％超の純度に精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５７】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然に生じる変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある多様体抗体は例外であり、かかるバリアントは、一般に、少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られるものとして抗体の特徴を示しており、いかなる特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない、多様な技法によって作製され得、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
【００５８】
「裸の抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合体化されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤に存在し得る。
【００５９】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然に生じる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて、定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類うちの１つが割り当てられ得る。
【００６０】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後の、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義され、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野内にある様々な方式で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成され得る。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるのに適切なパラメータを決定できる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共にＵ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に出願されており、米国著作権第ＴＸＵ５１００８７号の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、異ならない。
【００６１】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較のために用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されるであろう。別段具体的に記載されない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００６２】
用語「薬学的製剤」または「薬学的組成物」は、その中に含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であり、かつ製剤が投与される対象が受け入れられない程度に毒性である追加的な構成要素を含有しない調製物を指す。
【００６３】
「薬学的に許容される担体」は、対象に対して非毒性である、活性成分以外の薬学的製剤または組成物中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または保存剤を含むが、これらに限定されない。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然過程を改変することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に実行され得る。治療の望ましい効果は、疾患の発生または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、疾患状態の回復または緩和、及び寛解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発生を遅延させるか、または疾患の進行を減速させるために使用される。
【００６５】
用語「ベクター」は、本明細書で使用される場合、連結している別の核酸を増殖することができる核酸分子を指す。用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、同様に導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された核酸の発現を導くことができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００６６】
ＩＩ．組成物及び方法
抗ＣＤ１１２Ｒ抗体、記載された抗体を含む組成物、及びそれらの使用方法が、提供される。
【００６７】
Ａ．例示的な抗ＣＤ１１２Ｒ抗体
以下の配列表は、本明細書に開示及び請求される抗体のある特定の実施形態の配列を提供する。
【００６８】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒに結合し、及び／またはＣＤ１１２ＲのＣＤ１１２への結合を遮断し、及び／またはＴ細胞及びＮＫ細胞の活性化を増強する抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒに結合する抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２へのＣＤ１１２Ｒ結合を遮断する抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２６、Ｔ細胞、及び／またはＮＫ細胞の活性化を増強する抗体が、提供される。
【００６９】
Ｔ細胞及びＮＫ細胞などのＣＤ１１２Ｒ及びＣＤ１１２の間の結合の阻害は、ＣＤ１１２Ｒが抗体の存在下及び非存在下で結合する細胞の結合の阻害を測定することによって決定され得る。
【００７０】
本明細書で提供されるのは、ＣＤ１１２Ｒに特異的に結合する抗体である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、ヒトＣＤ１１２ＲのヒトＣＤ１１２との相互作用を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、ヒトＣＤ１１２ＲのヒトＣＤ１１２との相互作用を遮断するが、マウスＣＤ１１２ＲのマウスＣＤ１１２との相互作用を遮断しない。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、ヒトＣＤ１１２ＲのヒトＣＤ１１２との相互作用を遮断するが、マウスＣＤ１１２ＲのマウスＣＤ１１２との相互作用を遮断しない抗体は、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６を含む。
【００７３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体（すなわち、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６）のうちのいずれかのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含む。
【００７４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３を含むＶＨと、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３を含むＶＬと、を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３を含むＶＨと、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３を含むＶＬと、を含み、任意選択で、ＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲは、同じ抗体クローンに由来からのものである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、以下を含む抗体が、提供される。
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｃ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｄ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｅ）配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｆ）配列番号５０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号５０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｇ）配列番号６０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号６０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｈ）配列番号７０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号７０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｉ）配列番号８０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、有無に関わらず（ｄ）配列番号８０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｊ）（ａ）配列番号９０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号９０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号９０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｋ）（ａ）配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｌ）（ａ）配列番号２００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｍ）（ａ）配列番号３００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
（ｎ）（ａ）配列番号４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３。
【００７６】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００７７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｂ）抗体クローン番号５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｃ）抗体クローン番号４４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号４４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｄ）抗体クローン番号５８のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号５８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｅ）抗体クローン番号１０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号１０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｆ）抗体クローン番号３８のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｇ）抗体クローン番号１５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号１５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｈ）抗体クローン番号３５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｉ）抗体クローン番号４７のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号４７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｊ）抗体クローン番号４６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号４６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｋ）抗体クローン番号３２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｌ）抗体クローン番号３３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｍ）抗体クローン番号３４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、または
（ｎ）抗体クローン番号３６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに抗体クローン番号３６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。
【００７８】
以下の配列表は、ある特定の開示された抗体の重鎖及び軽鎖可変領域配列を提供する。
【００７９】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の外側の１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、ＣＤＲの外側の、１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の外側の、１、２、３、４、または５つの復帰置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨを含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、ＶＨ配列のフレームワーク領域において１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＶＨ配列のフレームワーク領域において１、２、３、４、または５つの復帰置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨを含む。
【００８２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲを含み、各ＣＤＲは、０、１、２、または３アミノ酸の付加、置換（例えば、保存的置換）、または欠失を含む。
【００８３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体うちのいずれかのＶＨ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗体のＶＨは、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、ＶＨ配列のフレームワーク領域における１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換により、配列表に示されるＶＨ配列のものとは異なる。ある特定の実施形態では、抗体のＶＨは、ＶＨ配列のフレームワーク領域における１、２、３、４、または５つの復帰置換により、配列表に示されるＶＨ配列のものとは異なる。
【００８４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨを含む。
【００８５】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体うちのいずれかのＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬのアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗体のＶＬは、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、ＶＬ配列のフレームワーク領域における１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換により、配列表に示されるＶＬ配列のものとは異なる。ある特定の実施形態では、抗体のＶＬは、１、２、３、４、または５つの復帰置換により、配列表に示されるＶＬ配列のものとは異なる。
【００８６】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬのアミノ酸配列からなるＶＬを含む。
【００８７】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれか１つのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含み、本明細書で提供される同じＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定のこれらの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨと、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬと、を含み、任意選択で、ＶＨ及びＶＬは、同じ抗体クローン番号からのものである。
【００８８】
いくつかの実施形態では、抗体のＶＨは、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、ＶＨ配列のフレームワーク領域において１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのものであり、ＶＬは、上の一覧表からの同じ抗体のうちのいずれか１つのものである。ある特定の実施形態では、抗体のＶＨは、ＶＨ配列のフレームワーク領域において１、２、３、４、または５つの復帰置換を有するが、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのものである。
【００８９】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む。
【００９０】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、同様に本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、また本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかの対応するＶＨ及びＶＬと、各々少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗体のＶＨ及びＶＬは、１、２、３、４、もしくは５つの保存的置換、または１、２、３、４、もしくは５つの復帰置換などの、配列のフレームワーク領域における１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換により、配列表に示されるＶＨ及びＶＬ配列とは異なる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列からなるＶＨ及びＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、各々、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、及び３６のうちのいずれか１つのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列からなるＶＨ及びＶＬを含む。
【００９２】
ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｂ）抗体クローン番号５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｃ）抗体クローン番号４４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号４４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｄ）抗体クローン番号５８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号５８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｅ）抗体クローン番号１０のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号１０のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｆ）抗体クローン番号３８のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３８のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｇ）抗体クローン番号１５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号１５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｈ）抗体クローン番号３５のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３５のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｉ）抗体クローン番号４７のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号４７のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｊ）抗体クローン番号４６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号４６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｋ）抗体クローン番号３２のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３２のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｌ）抗体クローン番号３３のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３３のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｍ）抗体クローン番号３４のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３４のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬ、または
（ｎ）抗体クローン番号３６のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨ、及び抗体クローン番号３６のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを含み得る。
【００９３】
ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号２のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号２のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｂ）抗体クローン番号５のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号５のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号５のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｃ）抗体クローン番号４４のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号４４のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号４４のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｄ）抗体クローン番号５８のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号５８のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号５８のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｅ）抗体クローン番号１０のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号１０のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号１０のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｆ）抗体クローン番号３８のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３８のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３８のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｇ）抗体クローン番号１５のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号１５のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号１５のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｈ）抗体クローン番号３５のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３５のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３５のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｉ）抗体クローン番号４７のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号４７のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号４７のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｊ）抗体クローン番号４６のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号４６のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号４６のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｋ）抗体クローン番号３２のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３２のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３２のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｌ）抗体クローン番号３３のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３３のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３３のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｍ）抗体クローン番号３４のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３４のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３４のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列、または
（ｎ）抗体クローン番号３６のＶＨのＶＨ  ＣＤＲを含むＶＨ、及び抗体クローン番号３６のＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬ、ならびに抗体クローン番号３６のＶＨ及びＶＬと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含み得る。
【００９４】
上記の実施形態のうちのいくつかでは、ＶＨ及び／またはＶＬは、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換の存在によって、種の各々の配列とは異なり得る。いくつかの実施形態では、ＶＨは、１、２、３、４、または５つの復帰置換を含み得る。
【００９５】
ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号２のＶＬからなるＶＬ、または
（ｂ）抗体クローン番号５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号５のＶＬからなるＶＬ、または
（ｃ）抗体クローン番号４４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号４４のＶＬからなるＶＬ、または
（ｄ）抗体クローン番号５８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号５８のＶＬからなるＶＬ、または
（ｅ）抗体クローン番号１０のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号１０のＶＬからなるＶＬ、または
（ｆ）抗体クローン番号３８のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３８のＶＬからなるＶＬ、または
（ｇ）抗体クローン番号１５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号１５のＶＬからなるＶＬ、または
（ｈ）抗体クローン番号３５のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３５のＶＬからなるＶＬ、または
（ｉ）抗体クローン番号４７のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号４７のＶＬからなるＶＬ、または
（ｊ）抗体クローン番号４６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号４６のＶＬからなるＶＬ、または
（ｋ）抗体クローン番号３２のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３２のＶＬからなるＶＬ、または
（ｌ）抗体クローン番号３３のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３３のＶＬからなるＶＬ、または
（ｍ）抗体クローン番号３４のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３４のＶＬからなるＶＬ、または
（ｎ）抗体クローン番号３６のＶＨのアミノ酸配列からなるＶＨ、及び抗体クローン番号３６のＶＬからなるＶＬを含み得る。
【００９６】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書の上記及び配列表などの他に記載の抗体の可変領域及び／または可変領域ＣＤＲ１〜３のうちのいずれかを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４抗体などのＩｇＧ抗体、または以下のセクションに記載されるその修飾された形態である。いくつかの実施形態では、定常領域はエフェクター機能を有し、いくつかの実施形態では、定常領域はエフェクターを含まない。
【００９８】
ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、本明細書で提供されるＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかの重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、抗体クローン番号２、５、４４、５８、１０、３８、１５、３５、４６、４７、３２、３３、３４、または３６のうちのいずれか１つの重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｂ）抗体クローン番号５の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｃ）抗体クローン番号４４の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｄ）抗体クローン番号５８の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号５８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｅ）抗体クローン番号１０の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｆ）抗体クローン番号３８の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３８の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｇ）抗体クローン番号１５の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号１５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｈ）抗体クローン番号３５の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３５の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｉ）抗体クローン番号４７の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号４７の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｊ）抗体クローン番号４６の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号４６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｋ）抗体クローン番号３２の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３２の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｌ）抗体クローン番号３３の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３３の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｍ）抗体クローン番号３４の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３４の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖、または
（ｎ）抗体クローン番号３６の重鎖のアミノ酸配列を含む重鎖、及び抗体クローン番号３６の軽鎖アミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。
【０１００】
ＣＤ１１２Ｒ抗体は、
（ａ）抗体クローン番号２の重鎖（ＨＣ）のＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号２のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号２のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｂ）抗体クローン番号５のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号５のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号５のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｃ）抗体クローン番号４４のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号４４のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号４４のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｄ）抗体クローン番号５８のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号５８のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号５８のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｅ）抗体クローン番号１０のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号１０のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号１０のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｆ）抗体クローン番号３８のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３８のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３８のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｇ）抗体クローン番号１５のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号１５のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号１５のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｈ）抗体クローン番号３５のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３５のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３５のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｉ）抗体クローン番号４７のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号４７のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号４７のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｊ）抗体クローン番号４６のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号４６のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号４６のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｋ）抗体クローン番号３２のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３２のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３２のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｌ）抗体クローン番号３３のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３３のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３３のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｍ）抗体クローン番号３４のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３４のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３４のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列、または
（ｎ）抗体クローン番号３６のＨＣのＨＣ  ＣＤＲを含むＨＣ、及び抗体クローン番号３６のＬＣ  ＣＤＲを含む軽鎖（ＬＣ）、ならびに抗体クローン番号３６のＨＣ及びＬＣと、それぞれ少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるＨＣ及びＬＣアミノ酸配列を含み得る。
【０１０１】
上記の実施形態のうちのいくつかでは、ＨＣ及び／またはＬＣは、１、２、３、４、または５つの保存的置換などの、１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換の存在によって、種の各々の配列とは異なり得る。上記の実施形態のうちのいくつかでは、ＨＣ及び／またはＬＣは、１、２、３、４、または５つの復帰置換などの、１、２、３、４、または５つのアミノ酸置換の存在によって、種の各々の配列とは異なり得る。
【０１０２】
１．共有された構造的及び機能的特徴を有する例示的なクラスの抗体
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１１２抗体は、ある特定の構造的及び／または機能的特徴を共有する。いくつかの実施形態では、抗体のクラスは、親抗体及びその親和性成熟多様体を含む。１つの例示的なクラスの抗体は、親クローン３２、及びその親和性成熟多様体を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、親和性成熟多様体は、抗体３３、３４、３５、及び３６を含む。いくつかの実施形態では、親和性成熟多様体は、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６と比較して、保存的置換を有する抗体を含む。
【０１０３】
ａ．例示的なクラスの抗体の構造的特徴
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、例えば、図１４及び１５に示されるものなどの構造的特徴を共有する。抗体の「クラス」または「クラスのメンバー」が本明細書に記載される際に、単一の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体または複数の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を記載する実施形態が包含／想定されることを、理解されたい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、同一のＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、同一のＬＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、同一のＬＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、同一のＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、同一のＨＣＤＲ３ならびに同一のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／またはＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、及び／または配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、及び／または配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び／または配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１００７、１００８、１００９、及び１０１０のアミノ酸配列を含む重鎖フレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、または少なくとも９３％同一である重鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１０１２に対する配列多様性のうちのいずれか及び全ては、ＨＣＤＲ１及び／またはＨＣＤＲ２にある。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１０１３、１０１４、１０１５、及び１０１６のアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１０１８の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０１０５】
この例示的なクラスの抗体のメンバーは、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２のアミノ酸配列においていくらかの多様性を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１００１のアミノ酸配列、あるいは配列番号１００１の４、５、及び／または６位に対する１、２、または３つのアミノ酸変化を有する配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体のクラスは、図１４に示される配列番号１００１、２００１、３００１、４００１、及び７０１のアミノ酸の間で異なる位置に対する１、２、または３つのアミノ酸変化を有する配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、１、２、または３つのアミノ酸変化のうちの１つ以上は、保存的置換ではない。いくつかの実施形態では、１、２、または３個のアミノ酸変化のうちの１つ以上は、保存的置換である。ある特定の実施形態では、抗体のクラスのメンバーは、配列番号２００１、３００１、７０１、または４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１を含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、配列番号１００２のアミノ酸配列、あるいは配列番号１００２の１、３、５、６、及び／または８位に対する１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化を有する配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体のクラスは、図１４に示される配列番号１００２、２００２、３００２、４００２、及び７０２のアミノ酸の間で異なる位置に対する１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化を有する配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化のうちの１つ以上は、保存的置換ではない。いくつかの実施形態では、１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化のうちの１つ以上は、保存的置換である。ある特定の実施形態では、抗体のクラスのメンバーは、配列番号２００２、３００２、７０２、または４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、同一の重鎖及び軽鎖フレームワーク領域を含む。
【０１０８】
ｂ．例示的なクラスの抗体の機能的特徴
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が提供され、抗体は、ヒトＣＤ１１２Ｒへの結合、ＣＤ１１２とのヒトＣＤ１１２Ｒの相互作用の遮断、及びＣＤ１１２とのマウスＣＤ１１２Ｒの相互作用の遮断の失敗という特別な技術的効果を共有する。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、ヒトＣＤ１１２Ｒに結合し、ヒトＣＤ１１２及びヒトＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断する。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を遮断しない。抗体のクラスのメンバーはマウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の相互作用を遮断しないが、抗体のクラスのメンバーは、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を部分的に阻害するか、マウスＣＤ１１２及びマウスＣＤ１１２Ｒの間の結合相互作用を阻害しない。いくつかのかかる実施形態では、抗体のクラスのメンバーは、マウスＣＤ１１２Ｒ及びマウスＣＤ１１２の間の相互作用を５０％を超えて阻害しない。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、可溶性マウスＣＤ１１２Ｒへの少なくともいくらかの結合を示す。いくつかの実施形態では、抗体は、完全にヒトであるか、またはヒト化される。いくつかの実施形態では、抗体のクラスの各メンバーは、ヒトＣＤ１１２Ｒ上の同じエピトープに結合する。
【０１０９】
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片を含むが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１１０】
ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
【０１１１】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照されたい）。
【０１１２】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、同様に組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製され得る。
【０１１３】
３．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの１つはＣＤ１１２Ｒに対するものであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの１つはＣＤ１１２Ｒに対するものであり、他方は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、ＣＤ１５５、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４７、ＣＤ３９、及びＩＬ−２７のうちの１つ（二重特異性の場合）またはそれ以上（多重特異性の場合）から独立して選択されるためのものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ１１２Ｒの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、細胞傷害性薬剤を、ＣＤ１１２Ｒを発現する細胞に局在化させるためにも使用され得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【０１１４】
多重特異性抗体を作製するための技法は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するために静電的ステアリング効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、及び、例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによっても作成され得る。
【０１１５】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体は、本明細書にも含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
【０１１６】
本明細書における抗体または断片は、ＣＤ１１２Ｒ、同様に別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用Ｆ抗体（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ  Ｆａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「ＤＡＦ」も含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０１１７】
４．抗体多様体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列多様体が、企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列多様体は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製され得る。かかる修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、及び／または抗体のアミノ酸配列への挿入、及び／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合を保有する場合に限り、最終構築物に到達するために作成され得る。
【０１１８】
５．置換、挿入、及び欠失多様体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体多様体が、提供される。置換型変異誘発に対する目的の部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、「例示的置換」であるとして表１に示される。アミノ酸置換は目的の抗体中に導入され得、産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
【表１】
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アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１１９】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【０１２０】
改変（例えば、置換）は、ＨＶＲにおいて、例えば、抗体親和性を改善するために行われ得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行われる場合があり、結果として生じた多様体ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築及び再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが、作成される。次いで、ライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体多様体を特定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６つの残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は、しばしば標的とされる。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で発生できる。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）は、ＨＶＲにおいて行われることができる。かかる改変は、例えば、ＨＶＲにおける抗原接触残基の外側であり得る。上に提供される多様体ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されていないか、または１、２、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。
【０１２２】
変異誘発のために標的とされ得る抗体の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）のうちのある残基または基は、特定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定する。さらなる置換は、最初の置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸の場所で導入され得る。代替的に、または追加的に、抗体及び抗原の間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基は、置換のための候補として標的とされるか、または排除され得る。多様体は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０１２３】
アミノ酸配列挿入は、１つの残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの範囲の長さである、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、同様に単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入型多様体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴについて）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合を含む。
【０１２４】
６．グリコシル化多様体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作成または除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、好都合に達成され得る。
【０１２５】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物は、改変され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって一般に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、同様に二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体多様体を作成するために行われることができる。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体多様体が、提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対して、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体における小規模な配列多様性により、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置し得る。かかるフコシル化多様体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体多様体に関連する刊行物の例は、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）を含む。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例は、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８  Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２  Ａ１，Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）を含む。
【０１２７】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖を有する抗体多様体が、さらに提供される。かかる抗体多様体は、低減したフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体多様体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖において少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体多様体もまた、提供される。かかる抗体多様体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体多様体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
【０１２８】
７．Ｆｃ領域多様体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域多様体を生成することができる。Ｆｃ領域多様体は、１つ以上のアミノ酸位置でアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないが、いくつかのエフェクター機能を保有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補となる抗体多様体を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために行われ得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にするために行われ得る。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページ上の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）を参照されたい）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的には、非放射性アッセイ方法が、用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイは、抗体が、Ｃ１ｑに結合できず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するためにも実行され得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが、実行され得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期決定���、当該技術分野で既知の方法を使用しても実行され得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１３０】
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体は、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位のうちの２つ以上で置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１３１】
ＦｃＲへの改善されたまたは縮小した結合を有するある特定の抗体多様体が、記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０１３２】
ある特定の実施形態では、抗体多様体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変された（すなわち、改善されたか、または減少したかのいずれかである）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存的細胞傷害性（ＣＤＣ）を生じる改変は、Ｆｃ領域において行われる。
【０１３４】
母体ＩｇＧの胎児への移行の原因である、増加した半減期及び新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ多様体は、Ｆｃ領域残基２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものを含む。
【０１３５】
また、Ｆｃ領域多様体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、抗体は配列表に従って提供され、アイソタイプはヒトＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、抗体は配列表に従って提供され、アイソタイプはヒトＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、抗体は配列表に従って提供され、アイソタイプはヒトＩｇＧ４であり、セリン２２８ではプロリンへの単一変異（Ｓ２２８Ｐ）がある。
【０１３７】
８．システイン操作された抗体多様体
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭ抗体」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で発生する。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基は、それによって抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、薬物部分またはリンカー−薬物部分などの他の部分に抗体を複合体化して、本明細書にさらに記載されるように、免疫複合体を作成するために使用され得る。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちのいずれか１つ以上は、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０１３８】
９．抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加的な非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分は、水溶性ポリマーを含むが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性により、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐または非分岐であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なり得、２つ以上のポリマーが結合する場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で療法において使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない考慮に基づいて、決定され得る。
【０１３９】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が、提供される。いくつかの実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであり得、通常の細胞を傷つけないが、抗体−非タンパク質性部分に隣接する細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０１４０】
Ｂ．組換え法
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような、組換え法及び組成物を使用して産生され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体をコードする単離された核酸が、提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が、提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が、提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を作製する方法が提供され、方法は、上に提供されるように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意選択で、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。
【０１４１】
抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の組換え産生のために、抗体をコードする核酸は、例えば、上記のように、単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離及び配列決定され得る。
【０１４２】
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞を含む。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない際に、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。
【０１４３】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それらのグリコシル化経路が「ヒト化」されている真菌及び酵母株を含み、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１４４】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例は、植物及び昆虫細胞を含む。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用され得る、多数のバキュロウイルス株が、特定されている。
【０１４５】
植物細胞培養物は、宿主としても利用され得る。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載する）を参照されたい。
【０１４６】
脊椎動物細胞は、宿主としても使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株は、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ  ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０１４７】
Ｃ．免疫複合体
本発明は、１つ以上の他の治療剤または放射性同位体に複合体化される本明細書の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を含む免疫複合体も提供する。
【０１４８】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。多様な放射性同位体が、放射性複合体の産生のために利用可能である。例は、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。放射性複合体が検出のために使用される際、放射性複合体は、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄などの、核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識を含み得る。
【０１４９】
抗体の複合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合体化のための、例示的キレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞において細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能リンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が、使用され得る。
【０１５０】
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、及び市販される（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａからの）ＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない、架橋剤試薬で調製されたかかる複合体を明白に企図するが、これらに限定されない。
【０１５１】
Ｄ．薬学的製剤及び組成物
本明細書に記載される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の薬学的製剤または組成物は、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体、希釈剤、及び／または賦形剤とを混合すること（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））によって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は、一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、滅菌水、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加的なグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０１５２】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝剤を含む。
【０１５３】
本明細書における製剤は、治療されている特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有できる。かかる活性成分は、好適には、意図される目的に対して有効である量で組み合わせて存在する。
【０１５４】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中に、封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において開示される。
【０１５５】
徐放性調製物が、調製され得る。徐放性調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、マトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０１５６】
インビボ投与のために使用される製剤または組成物は、一般に滅菌である。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に達成され得る。
【０１５７】
Ｅ．治療方法
本明細書で提供される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体のうちのいずれかは、治療方法において使用され得る。全体を通して、「抗体」が考察される場合、抗体を含む組成物もまた包含されることも理解されるべきである。
【０１５８】
一態様では、医薬品としての使用のための抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍を有する対象における抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び／または維持することにおける使用のための抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、がん性である。いくつかの実施形態では、がんの治療における使用のための抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強することにおける使用のための抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、提供される。
【０１５９】
さらなる一態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬品は、腫瘍を有する対象における抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び／または維持することにおける使用のためのものである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、がん性である。いくつかの実施形態では、医薬品は、がんを治療するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬品は、ＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強するためのものである。
【０１６０】
さらなる態様では、本発明は、ＣＤ１１２Ｒを遮断することが望まれる疾患及び／または障害を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を投与することを含む、腫瘍を有する対象において抗腫瘍免疫応答を増強、増加、及び／または維持するための方法が、提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、がん性である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を投与することを含む、がんを有する対象においてがんを治療するための方法が、提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を投与することを含む、任意選択でがんを有する対象においてＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強するための方法が、提供される。
【０１６１】
いくつかの態様では、本発明は、ＣＤ１１２Ｒタンパク質関連疾患もしくは障害の１つ以上の症状を軽減するための方法、またはＣＤ１１２Ｒタンパク質関連疾患もしくは障害（本明細書に記載の疾患もしくは障害のうちのいずれか、例えば、がんなど）の１つ以上の症状を軽減するための、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体もしくは抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を含む医薬品を提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＣＤ１１２Ｒタンパク質関連疾患もしくは障害の症状の数もしくは１つ以上の症状の重症度を低減するための方法、またはＣＤ１１２Ｒタンパク質関連疾患もしくは障害（本明細書に記載の疾患もしくは障害のうちのいずれか、例えば、がんなど）の症状の数もしくは１つ以上の症状の重症度を低減するための、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体もしくは抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を含む医薬品を提供する。特定の実施形態では、ＣＤ１１２Ｒタンパク質関連疾患または障害の症状は腫瘍であり、低減は、腫瘍のサイズの低減、腫瘍の成長の失敗、または腫瘍の排除である。
【０１６２】
本明細書に記載の抗体は、例えば、がんを治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、有効量の本明細書に記載の抗体を対象に投与することを含む、がんを治療するための方法が、提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、抗原特異的免疫応答などの、対象における免疫応答を誘発または増強できる。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ細胞活性を刺激できる。いくつかの実施形態では、抗体は、対象における少なくとも１つの腫瘍の成長を阻害できる。
【０１６３】
本明細書で提供されるのは、対象が治療されるように、治療有効量の本明細書に記載のＣＤ１１２Ｒ抗体を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法である。ＣＤ１１２Ｒ抗体は、単独で使用され得る。代替的には、ＣＤ１１２Ｒ抗体は、以下でさらに記載されるように、別の薬剤と併せて使用され得る。
【０１６４】
がんは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍（例えば、液体腫瘍）を伴うがんであり得る。
【０１６５】
治療のためのがんの非限定的な例は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸癌、腎癌（例えば、透明細胞癌）、卵巣癌、肝臓癌、大腸癌、子宮内膜癌、腎癌（例えば、腎明細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺癌）、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、膠芽腫（例えば、多形膠芽腫）、子宮頸癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌腫、及び頭頸部癌（または癌腫）、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、皮膚悪性黒色腫または眼内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門部癌、精巣癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳癌、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されたものを含む環境誘発性癌、ウイルス関連癌またはウイルス起源の癌（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶに関連または由来する腫瘍））、ならびに全ての種類の白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの、２つの主要な血球系統、すなわち、骨髄系細胞株（顆粒球、赤血球、血小板細胞、マクロファージ、及び肥満細胞を産生する）またはリンパ系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、及び血漿細胞を産生する）に由来する血液悪性腫瘍、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化性ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２、細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変種［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（好酸球増加を伴うＭ４またはＭ４変種［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫、及び緑色腫などの急性、慢性、リンパ球性、及び／または骨髄性白血病；ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化性（例えば、Ｋｉ  １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血液免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性などのリンパ腫；ならびにリンパ腫／白血病（Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ系系列の造血器腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉腫またはセザリー症候群とも呼ばれる）、及びワルデンストレームのマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無痛性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、及び多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫などの骨髄腫；骨髄系系列の造血器腫瘍、線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉系由来の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性癌及び奇形腫、リンパ系系列の造血器腫瘍を含む他の腫瘍、例えば、小細胞及び脳回細胞型のものを含むＴ前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）などのＴ細胞傷害を含むが、これらに限定されないＴ細胞及びＢ細胞の腫瘍；Ｔ細胞型の大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ  Ｔ−ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／成熟Ｔ細胞リンパ腫（多形性及び免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部癌、急性骨髄性リンパ腫、同様に該癌の任意の組み合わせを含む。本明細書に記載の方法は、転移性癌、切除不能、不応性癌（例えば、以前の免疫療法に不応性のがん、例えば、遮断ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１抗体を用いた）、及び／または再発性癌の治療のためにも使用され得る。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、以前の治療、例えば、免疫腫瘍学もしくは免疫療法薬での以前の治療に対して不十分な応答を呈しているか、または免疫腫瘍学もしくは免疫療法薬での以前の治療時に進行しているがんを有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、がんは、内在的に不応性もしくは抵抗性（例えば、ＰＤ−１経路アンタゴニストに対して不応性）のいずれかである以前の治療に対して不応性もしくは抵抗性であるか、または抵抗性もしくは不応性状態は、獲得される。例えば、本明細書に記載の抗体は、第１の療法に応答しないか、もしくは十分に応答しないか、または治療、例えば、単独でもしくは別の療法と組み合わせた抗ＰＤ−１経路アンタゴニスト治療（例えば、抗ＰＤ−１経路アンタゴニスト療法を用いた）の後に、疾患進行を有する対象に投与され得る。他の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、免疫腫瘍薬剤、例えば、ＰＤ−１経路アンタゴニストを以前に受けた（すなわち、治療されている）ことがない対象に投与される。
【０１６７】
Ｆ．組み合わせ
本発明の抗体は、療法において単独でまたは他の薬剤と組み合わせて使用され得る。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加的な治療剤と共投与され得る（例えば、第２の療法を投与することをさらに含む）。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、追加的な独立した阻害経路またはその組み合わせを標的とすることは、単剤療法を超えてさらに増強された免疫細胞活性化をもたらす可能性を有する。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、追加的な治療剤または第２の薬剤は、化学療法剤、オプソニン化剤、制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）枯渇剤、ＣＤ１１２Ｒ以外の標的のアンタゴニスト、またはＣＤ１１２Ｒ以外の標的のアゴニストである。ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、本明細書に記載の化学療法剤または任意の既知の化学療法剤である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤はオプソニン化剤であり、オプソニン化剤は、がんまたは腫瘍細胞を標的とする抗ＣＤ１１２Ｒ抗体以外の抗体である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、本明細書に記載のＴｒｅｇ枯渇剤または任意の既知のＴｒｅｇ枯渇剤である。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＣＤ１１２Ｒ以外の標的のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＣＤ１１２Ｒ以外の標的のアゴニストである。
【０１７０】
いくつかの場合では、第２の薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、またはＴＩＭ−３を伴う経路などの独立した阻害経路を標的とする。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、及びＴＩＭ−３のうちの１つ以上に拮抗する。本明細書に記載の併用療法で使用するのに好適なアンタゴニストは、リガンド、抗体（例えば、モノクローナル抗体及び二重特異性抗体）、及び多価剤を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、アンタゴニストは、融合タンパク質、例えば、ＡＭＰ−２４４などのＦｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【０１７１】
例示的な抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）またはＷＯ２００６／１２１１６８に記載の抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、７Ｄ３、５Ｆ４、及び４Ａ１１のうちの１つのＣＤＲまたは可変領域を含む抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載のＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）、ＷＯ２０１２／１４５４９３に記載のＡＭＰ−５１４、またはＰＤＲ００１である。さらなる既知のＰＤ−１抗体及び他のＰＤ−１阻害剤は、ＷＯ２００９／０１４７０８、ＷＯ０３／０９９１９６、ＷＯ２００９／１１４３３５、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１１／１６１６９９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７，６３５，７５７号及び同第８，２１７，１４９号、ならびに米国特許公開第２００９／０３１７３６８号に記載されるものを含む。ＷＯ２０１３／１７３２２３に開示されている抗ＰＤ−１抗体のうちのいずれかもまた、使用され得る。これらの抗体のうちの１つが併用治療においても使用され得るため、ＰＤ−１上の同じエピトープへの結合について競合する、及び／またはＰＤ−１上の同じエピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、併用療法に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４及び米国特許第７，９４３，７４３号において１２Ａ４と称される）、またはＰＣＴ公開第ＷＯ０７／００５８７４及び米国特許第７，９４３，７４３号に記載される、３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、及び１３Ｇ４のＣＤＲもしくは可変領域を含む抗体である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ及び抗Ｂ７−Ｈ１としても知られる）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ及びＲＧ７４４６としても知られる）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブとしても知られる、ＷＯ２０１３／７９１７４）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７である。ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７，６３５，７５７号及び同第８，２１７，１４９号、ならびに米国公開第２００９／１４５４９３号に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のうちのいずれかもまた、使用され得る。これらの抗体のうちのいずれかと競合する、及び／またはこれらの抗体のうちのいずれかのものと同じエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、併用治療においても使用され得る。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、本開示のＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体と共に使用され得る。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブまたは抗体１０Ｄ１、ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号に記載される）、トレメリムマブ（以前のチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）、モノクローナルまたは以下の刊行物のうちのいずれかに記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体の群から選択される抗体である：ＷＯ９８／４２７５２、ＷＯ００／３７５０４、米国特許第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５（１７）：１００６７−１００７１、Ｃａｍａｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２（１４５）：ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．２５０５（抗体ＣＰ−６７５２０６）、及びＭｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：５３０１−５３０４。ＷＯ２０１３／１７３２２３に開示される抗ＣＴＬＡ−４抗体のうちのいずれかもまた、使用され得る。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＬＡＧ−３（本明細書及び他のものにおいてＬＡＧ３とも称される）アンタゴニストと組み合わせて使用される。抗ＬＡＧ３抗体の例は、抗体２５Ｆ７、２６Ｈ１０、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２、または１７Ｅ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体を含み、米国特許公開第ＵＳ２０１１／０１５０８９２号、ＷＯ１０／１９５７０、及びＷＯ２０１４／００８２１８に記載される。一実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６である。使用され得る他の当該技術分野で認められた抗ＬＡＧ−３抗体は、ＵＳ２０１１／００７０２３、ＷＯ０８／１３２６０１、及びＷＯ０９／４４２７３に記載されるＩＭＰ７３１及びＩＭＰ−３２１を含む。これらの抗体のうちのいずれかと競合する、及び／またはこれらの抗体のうちのいずれかのものと同じエピトープに結合する抗ＬＡＧ−３抗体は、併用治療においても使用され得る。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、２つ以上のＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、及びＣＤ１１２Ｒ受容体を標的とすることは、抗ＣＤ１１２Ｒ単剤療法を超えて、ＣＤ２２６媒介性シグナル伝達を同時に増加させる。したがって、いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＴＩＧＩＴ及び／またはＣＤ９６のアンタゴニストである。本明細書に記載の併用療法で使用するのに好適なアンタゴニストは、リガンド、抗体（例えば、モノクローナル抗体及び二重特異性抗体）、及び多価剤を含むが、これらに限定されない。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、ＰＶＲ遺伝子ファミリーのメンバーは、腫瘍細胞上で上方制御され、内在的腫瘍促進特性を呈することができる。抗ＣＤ１１２Ｒ抗体と組み合わせてＰＶＲ遺伝子ファミリーの追加的メンバーを標的とすることは、単剤療法を超えて腫瘍に対する増強された感受性をもたらす。したがって、いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、及びＣＤ１５５のアンタゴニストのうちの１つ以上から選択される。本明細書に記載の併用療法で使用するのに好適なアンタゴニストは、リガンド、抗体（例えば、モノクローナル抗体及び二重特異性抗体）、及び多価剤を含むが、これらに限定されない。
【０１７７】
ＳＴＩＮＧアゴニストは、自然免疫細胞活性化を誘発し、Ｔ細胞プライミング及び腫瘍微小環境への免疫細胞の動員を増加させる。ＣＤ１１２Ｒと組み合わせてＳＴＩＮＧアゴニストを標的とすることは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の動員及び活性化のさらなる増加をもたらす可能性を有する。
【０１７８】
抗ＣＤ４７抗体を介した食作用の増加は、マクロファージによるＴ細胞へのがん由来抗原の提示の増加につながる可能性がある。本明細書で提供される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体などの抗ＣＤ４７抗体及び抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での併用治療は、がん抗原特異的Ｔ細胞応答を増強する機会を提供し、本明細書に完全に包含される。
【０１７９】
アデノシンは、免疫細胞上に発現するアデノシン受容体を介して、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化を阻害する。抗ＣＤ３９抗体は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の加水分解を防止することによってアデノシンの生成を阻害する。本明細書で提供される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体などの抗ＣＤ３９抗体及び抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での併用治療は、免疫細胞におけるアデノシン媒介性細胞シグナル伝達を阻害することによってＣＤ１１２Ｒ療法をさらに増強する機会を提供する。
【０１８０】
サイトカインは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性化を効果的に調節できる。ＩＬ−２７は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞媒介性応答を阻害する免疫抑制性サイトカインである。抗ＩＬ−２７抗体は、免疫細胞における免疫抑制性サイトカインのシグナル伝達を限定することによって、ＣＤ１１２Ｒ療法を増強する機会を提供する。したがって、抗ＩＬ−２７抗体、及び本明細書で提供される抗ＣＤ１１２Ｒ抗体などの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での併用治療が、提供される。
【０１８１】
本明細書の抗体は、他の治療様式、例えば、外科手術、化学療法、放射線療法、または別の治療用抗体などの生物学的製剤の投与の前、それと実質的に同時、またはその後にも提供され得る。いくつかの実施形態では、がんは、外科手術、化学療法、及び放射線療法、またはそれらの組み合わせから選択される療法の後に再発または進行している。例えば、本明細書に記載のＣＤ１１２Ｒ抗体は、微小転移が存在し得るリスクがある際、及び／または再発のリスクを低減するために、補助療法として投与され得る。
【０１８２】
がんの治療のために、組み合わせは、化学療法剤、成長阻害剤、遺伝子療法ワクチンなどの抗がんワクチン、抗血管新生剤、及び／または抗悪性腫瘍組成物などの１つ以上の追加的な抗がん剤と併せて投与され得る。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、抗炎症薬は、ステロイドまたは非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの組み合わせで投与され得る。本明細書に記載のＣＤ１１２Ｒ抗体での治療と併せて、またはその前に、異常増殖性細胞を静止状態にすることが望ましい場合では、１７ａ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストトラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロネアアセテート、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標）などのホルモン及びステロイド（合成類似体を含む）は、対象にも投与され得る。本明細書に記載の方法または組成物を用いる際、抗模倣薬などの、臨床設定における腫瘍成長または転移の調節に使用される他の薬剤はまた、必要に応じて投与され得る。
【０１８４】
上述のかかる併用療法は、組み合わせられた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤または組成物中に含まれる）及び別個の投与を包含し、その場合、本発明の抗体の投与は、追加的な治療剤（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）または治療剤（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）の投与の前、投与と同時に、及び／または投与の後に発生できる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の投与及び追加的な治療剤の投与は、互いの約１か月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に発生する。
【０１８５】
本発明の抗体（及び任意の追加的な治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、及び局所治療のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。投薬は、任意の好適な経路、例えば、投与が短時間または慢性的であるかどうかに部分的に応じた、静脈内または皮下注射などの注射によるものであり得る。様々な時点にわたる単回または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールが、本明細書において企図される。
【０１８６】
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化、投薬、及び投与され得る。この文脈における考慮のための因子は、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の対象の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の因子を含む。本明細書で使用される場合、「分割用量」は、単一の単位用量または総日用量の２つ以上の用量への分割、例えば、単一の単位用量の２つ以上の投与である。抗体は、「分割投与」として投与され得る。
【０１８７】
抗体は、そうである必要はないが、任意選択で、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤と共に製剤化される。有効量のかかる他の薬剤は、製剤または組成物に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の因子に依存する。これらは、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、かつ任意の経路によって、一般に使用される。いくつかの実施形態では、抗体は、即時放出のための製剤で提供され、他の薬剤は、持続放出のために製剤化されるか、またはその逆である。
【０１８８】
Ｇ．製造品
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造品が、提供される。製造品は、容器と、容器上のまたは容器と関連したラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどを含む。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体であるか、あるいは状態の治療、予防、及び／または診断に有効である別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内注射溶液バッグまたは皮下注射針によって穿孔可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選定された状態を治療するために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）組成物が本発明の抗体を含む、組成物がその中に含まれる第１の容器と、（ｂ）組成物がさらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む、組成物がその中に含まれる第２の容器と、を含み得る。本発明のこの実施形態の製造品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的に、または追加的に、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０１８９】
上の製造品のうちのいずれかは、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の代わりに、または抗ＣＤ１１２Ｒ抗体に加えて本発明の免疫複合体を含み得ることが理解される。
【実施例】
【０１９０】
ＩＩＩ．実施例
実施例１．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体生成
抗体を、ＰｉｅｒｃｅからのＥＺ−Ｌｉｎｋスルホ−ＮＨＳ−ビオチン化キットを使用してビオチン化した。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトカッパ−ＦＩＴＣ（ＬＣ−ＦＩＴＣ）、ＥｘｔｒＡｖｉｄｉｎ−ＰＥ（ＥＡ−ＰＥ）、及びストレプトアビジン−ＡＦ６３３（ＳＡ−６３３）を、それぞれ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｓｉｇｍａ、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓから入手した。ストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ及びＭＡＣＳ  ＬＣ分離カラムを、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃから購入した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（ヒト−ＰＥ）を、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈから得た。
【０１９１】
主要発見．
約１０９の多様性のうちの８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリを、各々前述のように増殖させた（例えば、Ｙ．Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ，Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｙｅａｓｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ａ  ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ，ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｔｏｏｌ．ＰＥＤＳ  ２６．１０，６６３−７０（２０１３）、ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、及びＷＯ２０１２００９５６８を参照されたい。）最初の２ラウンドの選択については、前述のように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣＳシステムを利用した磁気ビーズソーティング技法を実行した（例えば、Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｉｇｈ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｏｒｔｉｎｇ  ｏｆ  ａｎ  ｓｃＦｖ  ｙｅａｓｔ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｙ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８６（１−２），１４１−１５３（２００４）を参照されたい。）簡潔には、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリ）を、洗浄緩衝剤（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中で、１．５ｍｌの１０ｎＭビオチン化Ｆｃ融合抗原と共に１５分間３０℃でインキュベートした。４０ｍｌの氷冷洗浄緩衝剤で１回洗浄した後、細胞ペレットを２０ｍＬの洗浄緩衝剤に再懸濁させ、ストレプトアビジンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μｌ）を、酵母に添加し、１５分間４℃でインキュベートした。次に、酵母を、ペレット化し、２０ｍＬの洗浄緩衝剤に再懸濁させ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＬＳカラムに充填した。２０ｍＬを充填した後、カラムを、３ｍＬの洗浄緩衝剤を用いて３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から除去し、酵母を、５ｍＬの増殖培地で溶出させ、次いで、一晩成長させた。以下の選択ラウンドを、フローサイトメトリーを使用して実施した。およそ２×１０７個の酵母細胞を、ペレット化し、洗浄緩衝剤で３回洗浄し、平衡条件下で漸減濃度のビオチン化抗原（１００から１ｎＭ）、または選択から非特異的抗体を除去する多特異性枯渇試薬（ＰＳＲ）のいずれかと共に３０℃でインキュベートした。ＰＳＲ枯渇のために、ライブラリを、前述のようにビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈液と共にインキュベートした。（例えば、Ｙ．Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ，Ａｄｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｙｅａｓｔ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ａ  ＦＡＣＳ−ｂａｓｅｄ，ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｔｏｏｌ．ＰＥＤＳ  ２６．１０，６６３−７０（２０１３）を参照されたい。）次いで、酵母を、洗浄緩衝剤で２回洗浄し、ＬＣ−ＦＩＴＣ（１：１００希釈された）、及びＳＡ−６３３（１：５００希釈された）またはＥＡＰＥ（１：５０希釈された）のいずれかの第２の試薬を用いて１５分間４℃で染色した。洗浄緩衝剤で２回洗浄した後、細胞ペレットを、０．３ｍＬ洗浄緩衝���に再懸濁させ、ストレーナーキャップ付きのソートチューブに移した。より高い親和性抗体を選択及び単離するために親和性圧力を用いる選択を、低温（すなわち、非標識）抗原と競合することによって実行した。
【０１９２】
ソーティングを、ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して行い、ソートゲートを、所望の特徴を有する抗体を選択するために決定した。選択ラウンドを、所望の特徴の全てを有する集団が得られるまで繰り返した。ソーティングの最終ラウンド後、酵母をプレーティングし、個々のコロニーを特徴決定のために選抜した。
【０１９３】
軽鎖バッチシャッフル．
軽鎖多様化プロトコルを、抗体のさらなる発見及び改善のための主要発見段階中に使用した。
【０１９４】
軽鎖バッチ多様化プロトコル：ナイーブ選択出力からの重鎖を、ＰＣＲを介して酵母から抽出し、５×１０６の多様性を有する軽鎖ライブラリに形質転換した。選択を、ナイーブ発見に記載される１ラウンドのＭＡＣＳ及び３ラウンドのＦＡＣＳを用いて実施した。異なるＦＡＣＳラウンドでは、ライブラリを、ＰＳＲ結合、及び０．５ｎＭまで下がる抗原滴定による親和性圧力について調べた。ソーティングを、所望の特徴を有する集団を得るために実施した。
【０１９５】
抗体最適化
抗体の最適化を、下記のように重鎖可変領域へと多様性を導入することによって実行した。
【０１９６】
ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２選択：単一抗体のＣＤＲＨ３を、１×１０８の多様性のＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２多様体を有する既製のライブラリ中に組み換え、選択を、ナイーブ発見に記載されるように１ラウンドのＭＡＣＳ及び３ラウンドのＦＡＣＳを用いて実行した。異なるＦＡＣＳラウンドでは、ＰＳＲ結合、マウス交差反応性、及び滴定による親和性圧力または親ＩｇＧよりも高い親和性を有する結合剤について富化するための、親Ｆａｂまたは親ＩｇＧと抗原を事前複合化することによる親和性圧力を調べた。ソーティングを、所望の特徴を有する集団を得るために実施した。
【０１９７】
抗体産生及び精製
酵母クローンを、飽和状態まで成長させ、次いで、４８時間３０℃で振とうしながら誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。ＩｇＧを、プロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出させた。Ｆａｂ断片を、パパイン消化によって生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）上で精製した。
【０１９８】
ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＫＤ測定
ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、前述のようにＯｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４に対して一般に実行した（例えば、Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｂｉｎｎｉｎｇ．Ｍａｂｓ  ５（２），２７０−２７８（２０１３）を参照されたい）。簡潔には、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、ＩｇＧをＡＨＱセンサー上にオンラインで負荷することによって実行した。センサーをアッセイ緩衝剤中で３０分間オフラインで平衡化し、次いで、ベースライン確立のために、オンラインで６０秒間モニタリングした。ＩｇＧを充填したセンサーを、１００ｎＭ抗原に３分間曝露し、その後、オフレート測定のためにアッセイ緩衝剤に３分間移した。全ての速度論を、１：１結合モデルを使用して分析した。
【０１９９】
ＦｏｒｔｅＢｉｏエピトープビニング／リガンド遮断
エピトープビニング／リガンド遮断を、標準的なサンドイッチ形式の交差遮断アッセイを使用して実行した。対照抗標的ＩｇＧまたは受容体をＡＨＱセンサー上に負荷し、センサー上の非占有Ｆｃ結合部位を無関連（非標的）ヒトＩｇＧ１抗体で遮断した。次いで、センサーを、１００ｎＭの標的抗原、続いて、第２の抗標的抗体に曝露した。抗原会合後の二次抗体またはリガンドによる追加的結合は、非占有エピトープ（非競合物質）を示す一方で、結合がないことは、エピトープ遮断（競合物質またはリガンド遮断）を示す。
【０２００】
Ｂｉａｃｏｒｅ速度論アッセイ
Ｂｉａｃｏｒｅベースの測定については、抗原を、アミンカップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、抗マウス−Ｆｃ捕捉Ｃ１チップに共有結合させた。抗原と２７ｎＭで始まる抗体の５点３倍滴定との関連を、３００秒間測定した。続いて、抗原及び抗体の間の解離を、３６００秒間測定した。速度論的データを、１：１結合モデルを使用して分析及びグローバル適合した。
【０２０１】
実施例２．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体はＣＤ１１２Ｒに結合する。
細胞結合アッセイについて
細胞上に発現したＣＤ１１２Ｒに結合する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、評価した。野生型であるか、またはヒトＣＤ１１２Ｒを過剰発現するように操作された（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ１１２Ｒ  ＯＥ）１×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞（急性Ｔ細胞白血病細胞株、ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−１５２）を、９６ウェルＶ底プレートの各ウェルに添加し、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはＩｇＧ１アイソタイプ対照のいずれか（０．６３μｇ／ｍＬ）で、４℃で１時間染色した。細胞を、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳで２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ中に１：１００に希釈したＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０９３２０）で再懸濁させ、４℃で３０分間インキュベートした。続いて、細胞を、２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳに再懸濁させた。細胞データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。
【０２０２】
結果は、図１に示される。Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ１１２Ｒ  ＯＥ細胞に結合する抗体の定量を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７シグナルの幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価した。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体がＣＤ１１２Ｒを発現する細胞に結合することを実証する。抗体結合の要約が、表２に示される。
【０２０３】
実施例３．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＣＤ１１２がＣＤ１１２Ｒ発現細胞に結合することを遮断する。
細胞遮断アッセイについて
ＣＤ１１２Ｒ発現細胞へのＣＤ１１２結合を遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、評価した。ヒトＣＤ１１２Ｒを過剰発現するように操作された（Ｊｕｒｋａｔ−ＣＤ１１２Ｒ  ＯＥ）１×１０５個のＪｕｒｋａｔ細胞（急性Ｔ細胞白血病細胞株、ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−１５２）を、９６ウェルＶ底プレートの各ウェルに添加し、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはＩｇＧ１アイソタイプ対照のいずれか（最高濃度、１０μｇ／ｍＬ）の段階希釈を用いて、４℃で１時間染色した。細胞を、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳで２回洗浄し、ビオチン化ｈｉｓ標識ヒトＣＤ１１２（３μｇ／ｍＬ）（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、番号７１２３４）及びＰＥストレプトアビジン（５μｇ／ｍＬ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号４０５２０４）でＰＢＳ＋２％ＦＣＳに再懸濁させ、４℃で２時間インキュベートした。続いて、細胞を、２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳに再懸濁させた。細胞データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。
【０２０４】
結果が、図２Ａ及び表２に示される。細胞へのＣＤ１１２結合の定量を、ＰＥシグナルの幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価し、阻害パーセントとして表示した。阻害パーセントを、［１００−（（試験試料ＭＦＩ／最大ＭＦＩ）＊１００％）］として計算した。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体がＣＤ１１２Ｒ発現細胞に結合するＣＤ１１２の能力を用量依存的様式で阻害することを実証する。抗体の結合及び遮断の概要が、表２に示される。
【０２０５】
ヒトＣＤ１１２Ｒを遮断する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力も、ＥＬＩＳＡによって評価した。簡潔には、９６ウェルのＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのＣＤ１１２Ｒ−ｈＩｇＧ４融合タンパク質を用いて、４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを、ＰＢＳ＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）で６回洗浄し、続いて、２００μｌのＰＢＳ＋１％ＢＳＡを用いて、室温で１．５時間遮断した。遮断後、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中の１００μｌの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体を、１０μｇ／ｍＬの最終開始濃度で、４倍段階希釈を用いて添加した。プレートを、室温で１．５時間インキュベートした。次に、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、次いで、スルホ−ＮＨＳビオチン化キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号２１９２５）でビオチン化された１μｇ／ｍｌのＣＤ１１２  Ｆｃタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号９３１７−Ｎ２−０５０）と共に１００μｌのＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中で、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、続いて、製造業者の推奨に従ってＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中で希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０５２１０）と共に室温で１時間インキュベートした。このインキュベーション後、次いで、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２０２３）で発色させた。反応を、等量の停止溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＳＳ０４）で停止させた。４５０ｎｍ（Ｏ．Ｄ．４５０）での吸光度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダー上で測定した。
【０２０６】
結果が、図２Ｂ及び表２に示される。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が、ヒトＣＤ１１２ＲがヒトＣＤ１１２に結合することを遮断することを実証する。阻害パーセントを、［１００−（（試験試料Ｏ．Ｄ．４５０／最大Ｏ．Ｄ．４５０）＊１００％）］として計算した。最大Ｏ．Ｄ．４５０を、抗体の非存在下での４５０ｎｍでの吸光度として定義した。
【表２】
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【０２０７】
実施例４．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＮＫ細胞媒介性殺滅を増強する。
ＮＫ細胞傷害性アッセイ
ＮＫ細胞媒介性細胞傷害性に対する抗ヒトＣＤ１１２Ｒ抗体の効果を決定するために、ヒトＮＫ細胞を、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはアイソタイプ対照の存在下でＲＥＨ標的細胞（非Ｔ／Ｂ細胞急性リンパ球性白血病細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−８２８６）と共培養した。
【０２０８】
簡潔には、ＮＫ細胞を、負の選択（Ｅａｓｙｓｅｐ（商標）ＮＫ細胞単離キット、幹細胞番号１７９５５）を介して３人の健康なドナーのＰＢＭＣから単離し、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｒ１０）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中のＩＬ−２（１０単位／ｍＬ）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ番号２００−０２）及びＩＬ−１２（２０ｎｇ／ｍＬ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ番号２００−１２）で１６時間活性化した。ＲＥＨ細胞を、洗浄し、ＰＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に再懸濁させ、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）バイオレット（ＣＴＶ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号Ｃ３４５５７）を用いて３７℃で１２分間標識した。続いて、ＲＥＨ細胞を、ＰＢＳ＋１０％ＦＢＳで洗浄し、次いで、Ｒ１０に再懸濁させた。活性化後、ＮＫ細胞を、洗浄し、Ｒ１０に再懸濁させた。２．５×１０５個のＮＫ細胞及び５×１０４個のＲＥＨ細胞を、５：１のエフェクター−標的細胞比で９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加した。抗ＣＤ１１２Ｒ及びＩｇＧ１アイソタイプ抗体を、Ｒ１０中で希釈し、また各ウェルに１０μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。各条件を、重複して実行した。次いで、プレートを、３７℃で４時間インキュベートした。次いで、細胞を、洗浄し、７−ＡＡＤ生存率色素（１μｇ／ｍＬ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２０４０４）を用いて室温で３０分間暗所でインキュベートし、死細胞を特異的に標識した。細胞生存率データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。死んだＲＥＨ細胞を、ＣＴＶ及び７−ＡＡＤ二重陽性細胞として定義した。
【０２０９】
結果が、図３に提示される。細胞傷害性（アイソタイプを超えるパーセント）を、（（試験死亡率−アイソタイプ死亡率）／アイソタイプ死亡率）×１００として計算した。本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の各々でのＮＫ細胞の処理は、アイソタイプ対照と比較して、ＲＥＨ細胞に対する細胞媒介性細胞傷害性の増加をもたらした。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体がＮＫ細胞媒介性殺滅を促進することを実証する。
【０２１０】
実施例５．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗原駆動活性化を増強する。
抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞アッセイ．
ＣＤ８＋Ｔ細胞の抗原駆動活性化に対する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の効果を、評価した。一次ＨＬＡ−Ａ＊０２０１制限サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞株（Ａｓｔａｒｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ番号１０４９、ロット番号３７８２ＤＥ１７）を、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはアイソタイプ対照の存在下で、ペプチドパルスＣｏｌｏ２０５細胞（結腸腺癌細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２２２）と共にインキュベートした。
【０２１１】
簡潔には、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞を、解凍し、洗浄し、Ｘ−ＶＩＶＯ  １０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号ＢＷ０４３８０Ｑ）に再懸濁させた。２×１０４個のＣＭＶ  Ｔ細胞を、９６ウェル丸底プレートの各ウェルに添加し、３７℃で４時間静置した。初期静置期間の後、５×１０４個のＣｏｌｏ２０５細胞及びＣＭＶ  ｐｐ６５ペプチド（１ｎｇ／ｍＬ）（Ａｎａｓｐｅｃ番号ＡＳ−６３９３７）を、各ウェルに添加した。次に、抗ＣＤ１１２Ｒ及びアイソタイプ抗体を、Ｘ−ＶＩＶＯ  １０中で希釈し、１０μｇ／ｍＬの最終濃度で各ウェルに添加した。各条件を、重複して実行した。次いで、プレートを、３７℃で１６時間インキュベートした。各ウェルからの上清を回収し、サイトカイン評価の前に１回の凍結／解凍サイクルに供した。解凍後、アッセイ上清をＸ−ＶＩＶＯ  １０中で１：５希釈し、次いで、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）を、ＬｕｍｉｎｅｘヒトＣＤ８＋Ｔ細胞磁気ビーズパネルマルチプレックスアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ番号ＨＣＤ８ＭＡＧ−１５Ｋ）によってアッセイ上清中で測定し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＦｌｅｘＭａｐ  ３Ｄ上で実行した。
【０２１２】
結果が、図４に提示される。試験条件ＩＦＮｇレベルを、定義されたＩＦＮｇ濃度で生成された標準曲線に基づいて定量した。抗ＣＤ１１２Ｒ抗体２及び５で処理されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、アイソタイプ対照で観察されたよりも多くのＩＦＮｇ分泌をもたらした。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が抗原駆動ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増強することを実証する。
【０２１３】
実施例６．抗マウスＣＤ１１２Ｒ及び抗マウスＴＩＧＩＴ抗体の組み合わせは、マウスＣＴ−２６腫瘍モデルにおいて治療効果を有する。
ＣＤ１１２Ｒ及びＴｉｇｉｔの併用遮断のインビボ有効性
単剤及び併用剤としてのＣＤ１１２Ｒ及びＴＩＧＩＴ遮断の有効性を、ＣＴ２６結腸腺癌同系マウス腫瘍モデルにおいて試験した。７週齢のＢａｌｂ／ｃ雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、番号０２８）に、０．１×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−２６３８）を、０．１ｍＬの５０％マトリゲル接種マトリックス中で皮下移植した。マウスを、８０〜１２０ｍｍ３の腫瘍体積範囲で層化した様式で各々１０匹のマウスの群（合計４０匹のマウス）に無作為化し、表３のように腹腔内注射によって週２回２週間治療した。
【表３】
2021531764.tif 000004
【０２１４】
腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、腫瘍体積を、２〜３日ごとに測定した。
【表４】
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【０２１５】
結果が、図５に提示される。グラフは、時間の関数としての各治療群についての平均腫瘍体積を示す。結果は、抗ＴＩＧＩＴとの抗ＣＤ１１２Ｒの組み合わせが、アイソタイプ治療動物と比較して腫瘍成長の低減に有効であった一方で、抗ＣＤ１１２Ｒまたは抗ＴＩＧＩＴ単剤療法は、腫瘍成長の低減に対して活性を示さないか、またはわずかな効果しか示さなかったことのいずれかを実証する。抗ＣＤ１１２Ｒは、単独で、このアッセイにおいて活性を示さなかった一方、本明細書に提示された他の実験は、抗ＣＤ１１２Ｒ単剤療法の利点を示す。例えば、図９を参照されたい。
【０２１６】
実施例７．抗ＣＤ３活性化後のＰＢＭＣにおけるＣＤ１１２Ｒの発現の増加。
ＣＤ１１２Ｒはインビトロで活性化されたＰＢＭＣ中で上方制御される
ＣＤ１１２Ｒ発現に対する細胞活性化の影響を決定するために、ヒトＰＢＭＣを、抗ＣＤ３抗体でインビトロで刺激した。健康なドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、バフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）から単離した。個々のバフィーコートを、別々に処理した。１５ｍＬのバフィーコートを、各々５０ｍＬのコニカルチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ番号４３０２９０）に加え、１５ｍＬのＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号１４１９０１４４）＋２ｍＭのＥＤＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ番号ＢＰ２４８２−５００）で希釈して、各チューブの総量を３０ｍＬにした。希釈したバフィーコートを、１４ｍＬのＦｉｃｏｌｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ番号１７−５４４２０３）の下に置き、ブレーキをオフにして室温で２０分間２０００ＲＰＭで遠心分離した。グラジエント中間相を、収集し、ＰＢＳ＋２ｍＭのＥＤＴＡで２回洗浄した。単離された細胞を、計数し、１０％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ番号４７２３０１）＋９０％熱不活性化ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号１６１４０−０７１）中で、２．５〜５×１０７細胞／ｍＬで再懸濁させた。
【０２１７】
凍結されたＰＢＭＣを、すばやく解凍し、ＲＰＭＩ＋ＧｌｕｔａＭａｘ（１倍）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号６１８７０−０３６）、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１倍ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号１５１４０−１２２）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号１１３６００７０）、１００Ｕ／ｍＬのＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号１５１４０−１２２）、１倍の２−メルカプトエタノール（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号２１９８５０２３）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ番号１５６３０−０８０）を含有する補足ＲＰＭＩ培地に再懸濁させた。単離したＰＢＭＣを、洗浄し、計数し、濃度０．５×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させた。ウェルあたり１×１０６個の細胞を、２４ウェル平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ番号３５２６）に入れ、０．２５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号３００４１４）で刺激した。細胞を、示された時点で収集し、１倍のＰＢＳ、２％ＦＢＳ、及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＦＡＣＳ緩衝剤中で洗浄し、抗体染色のために９６ウェルＶ底プレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３８９４）に移した。
【０２１８】
細胞を１５００ＲＰＭで３分間遠沈し、上清を軽く振ることによって除去した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁させ、以下のように表５における一次抗体と共に４℃で１時間インキュベートした。
【表５】
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【０２１９】
細胞を、２回洗浄し、１：１００希釈されたＡｌｅｘａ  ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体（クローンＨＰ６０１７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４０９３２０）と共に４℃で３０分間インキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝剤で１回洗浄し、１倍のＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号Ｌ３４９６６）中で１：５００希釈されたＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ａｑｕａ生存率色素を用いて４℃で１０分間染色した。細胞を、１回洗浄し、フローサイトメーターＸ−２０  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で直接取得した。データを、Ｆｌｏｗｊｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）及びＧｒａｐｈｐａｄプリズム（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して分析した。
【０２２０】
結果が、図６に示される。ＣＤ１１２Ｒ抗体結合の定量を、示された細胞タイプについてのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７シグナルの幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価した。抗ＣＤ１１２Ｒ結合は、陰性を超える倍率（ＦＯＮ、（ＣＤ１１２Ｒ  ｇＭＦＩをアイソタイプｇＭＦＩで割ったもの））として示される。これらの結果は、ＣＤ１１２Ｒ発現が抗ＣＤ３活性化後にＮＫ細胞及びＴ細胞上で増加することを実証する。
【０２２１】
実施例８．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、腫瘍細胞共培養物におけるＮＫ細胞脱顆粒を増強する。
ＮＫ細胞媒介性脱顆粒に対する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の効果を決定するために、ヒトＮＫ細胞を、抗体３５、３８、４４、及びアイソタイプ対照の存在下で、ＣＤ１１２（Ｏｒｉｇｅｎｅ、番号ＲＣ２１３６９３Ｌ２）を発現するようにレンチウイルスで以前に形質導入されているＲａｊｉ標的細胞（Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−８６）と共培養した。
【０２２２】
簡潔には、ＮＫ細胞を、３人の健康なドナーのＰＢＭＣから負の選択を介して分離及びプールし（Ｅａｓｙｓｅｐ（商標）ＮＫ細胞単離キット、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ番号１７９５５）、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｄ１０）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で１６時間培養した。３７℃での一晩のインキュベーション後、ＮＫ細胞を、洗浄し、Ｄ１０に再懸濁させた。Ｒａｊｉ．ＣＤ１１２細胞を、回収し、洗浄し、次いで、Ｄ１０に再懸濁させた。１×１０５個のＮＫ細胞及び５×１０４個のＲａｊｉ．ＣＤ１１２細胞を、２：１のエフェクター−標的細胞比で９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加した。抗ＣＤ１１２Ｒ抗体及びＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、Ｄ１０中で希釈し、１０倍段階希釈を用いて１０μｇ／ｍＬの開始濃度で各ウェルに添加した。各条件を、重複して実行した。ＰＥ抗ＣＤ１０７ａ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３２８６０８）及びモネンシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号４２０７０１）も、製造業者の指定した濃度で各ウェルに添加した。各ウェルについての最終容量は、２００μｌであった。次いで、プレートを、３７℃で４時間インキュベートした。４時間後、抗ＣＤ３  ＦＩＴＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３００３０６）及び抗ＮＫｐ４６  ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号３３１９１４）抗体をＤ１０中で希釈し、５０μｌを各ウェルに添加した。次いで、プレートを４℃でさらに３０分間インキュベートして染色した。次いで、細胞を、Ｖ底プレートに移し、２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させた。データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）フローサイトメーターを使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。ＮＫ脱顆粒を、ＣＤ３−ＮＫｐ４６＋リンパ球ゲート内のＣＤ１０７ａ＋細胞の頻度として定義した。
【０２２３】
結果が、図７に提示される。本明細書に記載の抗ＣＤ１１２Ｒ抗体でのＮＫ細胞の処理は、アイソタイプ対照と比較して、ＣＤ１０７ａ染色によって測定されるように、ＮＫ脱顆粒の増加をもたらした。
【０２２４】
実施例９．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体は、ＰＢＭＣ腫瘍細胞共培養物におけるＮＫ細胞活性化を増加させる。
ＮＫ細胞活性化に対するＣＤ１１２Ｒ抗体の影響を評価するために、いくつかの抗体を、ＰＢＭＣ−腫瘍細胞共培養物において評価した。ＮＫ細胞活性化のマーカーとして以前に確立されているＣＤ１３７（４−１ＢＢ）の上方制御（Ｂａｅｓｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ  １１５（１５）、Ａｎｄｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｃｅｌｌ  １７５，１７３１−１７４３）を、抗ＣＤ１１２Ｒまたはアイソタイプ対照抗体を有するＫ５６２標的細胞（慢性骨髄性白血病細胞株、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２４３）と共培養されたＰＢＭＣからのＮＫ細胞上で測定した。
【０２２５】
簡潔には、健康なドナーのバフィーコートから単離された凍結されたＰＢＭＣを、解凍し、洗浄し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｄ１０）に再懸濁させ、ウェルあたり５×１０５個の細胞の濃度で９６ウェル平底プレートにプレーティングし、３７℃で４時間静置した後、標的細胞及び抗体を添加した。次に、第１の実験（図８Ａ〜８Ｂ）において、ＣＤ１１２Ｒ抗体及びＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、Ｄ１０中で希釈し、１０倍段階希釈を用いて１０μｇ／ｍＬの開始濃度で各ウェルに添加した。次の実験（図８Ｃ〜８Ｄ）では、単一濃度（１μｇ／ｍＬ）の抗ＣＤ１１２ＲまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、各ウェルに添加した。両方の実験について、各条件を、重複して実行した。次いで、Ｋ５６２細胞を、回収し、洗浄し、Ｄ１０に再懸濁させ、ウェルあたり５×１０４細胞の濃度で各ウェルに添加した。各ウェルについての最終容量は、２００μｌであった。次いで、プレートを、３７℃で１６時間インキュベートした。１６時間後、細胞を、Ｖ底プレートに移し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中で２回洗浄した。細胞を、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中で抗ＣＤ３  ＦＩＴＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３００３０６）、抗ＮＫｐ４６  ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号３３１９１４）、及び抗ＣＤ１３７  ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、番号３０９８１０）を用いて４℃で３０分間染色した。続いて、細胞を、２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させた。データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）フローサイトメーターを使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。ＮＫ細胞活性化を、ＣＤ３−ＮＫｐ４６＋リンパ球ゲート内のＣＤ１３７＋細胞の頻度として定義した。
【０２２６】
２つの独立した実験からの２人の個々のドナーからの結果が、図８Ａ〜８Ｄに提示される。ＰＢＭＣ−Ｋ５６２細胞共培養物への抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の添加は、ＮＫ細胞上のＣＤ１３７上方制御によって測定されるように、アイソタイプ対照と比較してＮＫ細胞の有意な活性化をもたらした。
【０２２７】
実施例１０．抗ＣＤ１１２Ｒは、ＣＴ−２６モデルにおいて腫瘍成長を減少させる。
ＣＤ１１２Ｒ遮断のインビボ有効性を、ＣＴ２６．ＷＴ結腸腺癌同系マウス腫瘍モデルにおいて評価した。７週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＡＬＢ−Ｆ）に、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１）中で０．２×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を、右脇腹に皮下移植した。触知可能な腫瘍を有するマウスを、移植後４日目に無作為化し、以下の表６のように無作為化の日に開始して３週間、週２回腹腔内治療した。
【０２２８】
【表６】
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【０２２９】
腫瘍体積を、腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、２〜３日ごとにノギスで測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、以下のように計算した：幅（ｍｍ）×［長さ（ｍｍ）］２×０．５。
【０２３０】
結果が、図９に提示される。グラフは、時間の関数としての各治療群についての平均腫瘍体積を示す３つの独立した実験からのプールされたデータを示す。これらの結果は、ＣＤ１１２Ｒ抗体での担がんマウスの治療が、接種後２４日目に測定されるような腫瘍成長の顕著な阻害をもたらしたことを実証する。
【０２３１】
実施例１１．ＣＤ１１２Ｒ遮断は、ＣＴ２６モデルにおける完全な腫瘍拒絶を有するマウスにおいて抗腫瘍免疫をもたらす
抗腫瘍免疫を、原発ＣＴ２６．ＷＴ腫瘍負荷からの完全奏功を呈した抗ＣＤ１１２Ｒ治療されたマウスにおいて評価した。原発負荷のために、７週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＡＬＢ−Ｆ）に、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１）中で０．２×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を、右脇腹に皮下移植した。触知可能な腫瘍を有するマウスを、移植後４日目に無作為化し、以下の表７のように無作為化の日に開始して３週間、週２回腹腔内治療した。
【表７】
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【０２３２】
腫瘍体積を、腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、２〜３日ごとにノギスで測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、以下のように計算した：幅（ｍｍ）×［長さ（ｍｍ）］２×０．５。
【０２３３】
任意の識別可能な腫瘍を欠いた移植後５０日目での全ての生存マウスを、生存者／完全奏功者であると見なした。抗ＣＤ１１２Ｒ治療群からの完全奏功者マウス（ｎ＝８）を、一次接種用量からの５倍の増加である、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１）中での１×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を用いた左脇腹における接種を介して再負荷した。対照として、年齢マッチしたナイーブＢａｌｂ／ｃ雌マウス（ｎ＝５）にも、同様に０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地中で１×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ細胞を、左脇腹に接種した。マウスは、いずれのさらなる治療も受けなかった。腫瘍体積を、腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、２〜３日ごとに測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、以下のように計算した：幅（ｍｍ）×［長さ（ｍｍ）］２×０．５。
【０２３４】
結果が、図１０Ａ〜１０Ｂに提示される。図１０Ａは、抗ＣＤ１１２Ｒで治療されたＣＴ２６原発腫瘍を移植されたマウスの生存率頻度を示す３つの独立した実験からのプールされたデータを示す。図１１Ｂは、時間の関数としての、腫瘍を再負荷及びナイーブ負荷された対照後の抗ＣＤ１１２Ｒ治療された完全奏功者についての平均腫瘍体積を示す。統計分析を、移植後５０日目のＭａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定（図１０Ａ）及び移植後１５日目のＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定（図１０Ｂ）によって実行した。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒで治療されたマウスが原発腫瘍負荷後に完全奏功を呈することを実証し、これらのマウスにおける腫瘍再負荷時のその後の急速な拒絶は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体での治療が免疫記憶及び防御免疫の発達につながることも実証する。
【０２３５】
実施例１２．ＮＫ細胞及びＣＤ８  Ｔ細胞の両方は、ＣＴ２６腫瘍負荷における抗ＣＤ１１２Ｒの治療活性に寄与する。
ＣＤ１１２Ｒ遮断のインビボ有効性を、ＮＫ細胞またはＣＤ８  Ｔ細胞の枯渇後のＣＴ２６同系マウス腫瘍モデルにおいて評価した。ＮＫ及びＣＤ８  Ｔ細胞を枯渇させるために、マウスを、それぞれＡｓｉａｌｏ−ＧＭ１抗体（図１１における「ａｓＧＭ１」、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号１４６００２、用量１００ｕＬ／マウス、腹腔内）及び抗ＣＤ８ａ抗体（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、カタログ番号ＢＥ００８５、２００μｇ／マウス、腹腔内）を用いて無作為化で開始して３週間週２回治療した。
【０２３６】
７週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＡＬＢ−Ｆ）に、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１）中で０．２×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を、右脇腹に皮下移植した。触知可能な腫瘍を有するマウスを、移植後４日目に無作為化し、抗体４６（抗ＣＤ１１２ＲマウスＩｇＧ２ａ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を、無作為化の日に開始して３週間、週２回腹腔内投与した。
【０２３７】
腫瘍体積を、腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、２〜３日ごとに測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、以下のように計算した：幅（ｍｍ）×［長さ（ｍｍ）］２×０．５。
【０２３８】
結果が、図１１に提示される。グラフは、時間の関数としての各治療群についての平均腫瘍体積を示す。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒの治療効果がＮＫ細胞またはＣＤ８  Ｔ細胞の枯渇後に顕著に縮小することを実証する。これらの結果は、ＣＤ８  Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方が抗ＣＤ１１２Ｒによって媒介される有効な腫瘍成長阻害に必要であることを示す。
【０２３９】
実施例１３．ＣＤ１１２Ｒ遮断は、インビボで腫瘍ＮＫ細胞を活性化する。
抗ＣＤ１１２Ｒ単剤療法での投薬後のＮＫ活性化マーカーのエクスビボ評価。
【０２４０】
インビボでのＮＫ細胞活性化に対する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の効果を決定するために、７週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＡＬＢ−Ｆ）に、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）中で０．２×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を、右脇腹に皮下移植した。触知可能な腫瘍を有するマウスを、移植後４日目に無作為化し、５００μｇのアイソタイプ対照抗体（クローンＣ１．１８．４、ＢｉｏＸｃｅｌｌ、カタログ番号００８５）または抗体４６（抗ＣＤ１１２ＲマウスＩｇＧ２ａ）のいずれかを投与した。両方の群にも、５００μｇのアイソタイプ対照（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、カタログ番号００８３）を共投与した。治療を滅菌１倍ＰＢＳ（ＧＩＢＣＯカタログ番号１４１９０−１３６）において調製し、１００μＬの総量を腹腔内注射した。
【０２４１】
腫瘍加工：マウスを安楽死させ、腫瘍を治療２４時間後に切除した。腫瘍を、ＦＡＣＳ緩衝剤（１倍のＰＢＳ、２％熱不活性化ＦＢＳ、ＧＩＢＣＯカタログ番号１６１４０−０７１、２ｍＭのＥＤＴＡ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｒｅａｇｅｎｔｓ、カタログ番号ＢＰ２４８２−５００）中で３ｍＬのシリンジプランジャー（ＢＤ  ３０１０７７）の粗い端を使用して、５０ｍＬ遠心分離チューブ（Ｆａｌｃｏｎ番号３５２３５０）上に配置された４４０ミクロンメッシュフィルター（Ｃｏｓｔａｒ番号３４８０）で組織を破壊することによって、単一細胞懸濁液へと加工した。除去された腫瘍を７０ミクロンのストレーナー（Ｆａｌｃｏｎカタログ番号３５２３５０）上で再度濾過し、残りの組織を３ｍＬのシリンジプランジャーを使用してさらに分解した。細胞を、８００ｇで１０分間遠沈した。細胞ペレットを、ＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁させた。
【０２４２】
エクスビボ再刺激：単一細胞懸濁液の約半分を、９６ウェルＵ底ポリプロピレンの２ｍＬの深いプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号ＡＢ−０９３２）に移し、１０００ｇで５分間４℃で遠心分離した。細胞を、２０ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ（Ａｂｃａｍ番号ａｂ１２０２９７）、５００ｎｇ／ｍＬのイオノマイシンＣａ２＋塩（Ａｂｃａｍ番号ａｂ１２０１１６）、５μｇ／ｍＬブレフェルジンＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２０６０１）、及び２μＭのモネンシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２０７０１）を含有する１０％熱不活性化ＦＢＳを用いて、予熱した１倍のＲＰＭＩ＋Ｇｌｕｔａｍａｘ（ＧＩＢＣＯ番号６１８７０−０３５）培地に再懸濁させた。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で３．５時間インキュベートした。細胞を、上記のように再度遠心分離した。
【０２４３】
ＦＡＣＳのための表面抗原抗体染色：細胞ペレットを、５００μＬの冷ＦＡＣＳ緩衝剤で１回洗浄した。細胞を、表８に示される希釈で、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ｆｃＸ（商標）（抗マウスＣＤ１６／３２）を有する１００μＬのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁させた。細胞を、氷上で１５分間インキュベートした。表面抗体カクテルを、調製し（詳細については表８を参照されたい）、事前遮断された細胞に直接添加した。細胞を、氷上で１時間インキュベートした。次いで、細胞を、５００μＬのＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄した。
【０２４４】
生存率色素染色：細胞を、１倍のＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号Ｌ３４９６６）中で１：５００希釈されたＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ａｑｕａ生存率色素を用いて４℃で１０分間染色した。
【０２４５】
固定：細胞を、１回洗浄し、２００μＬのｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｆｏｘｐ３固定／透過処理緩衝剤（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号００−５５２３−００、希釈ガイドラインについての製造業者のプロトコルを使用する）を用いて４℃で一晩固定した。
【０２４６】
ＦＡＣＳのための細胞内抗原抗体染色：細胞を、２００μＬの１倍のｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ透過処理緩衝剤を直接添加することによって透過処理した（希釈ガイドラインについては製造業者のプロトコルを参照されたい）。細胞を、１０００ｇで５分間遠心分離し、１倍のｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ透過処理緩衝剤における最終希釈での抗体の細胞内パネルを用いて染色した。細胞を、室温で１時間インキュベーションした。細胞を、５００μＬの透過処理緩衝剤で２回洗浄し、１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤に再懸濁させた。
【０２４７】
細胞を、Ｘ−２０  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で取得した。データを、Ｆｌｏｗｊｏ（Ｆｌｏｗｊｏ，ＬＬＣ）及びＧｒａｐｈｐａｄプリズム（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して分析した。
【表８】
2021531764.tif 000009
【０２４８】
結果が、図１２Ａ〜Ｂに示される。図１２Ａは、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞に浸潤する腫瘍の頻度を示す。図１２Ｂは、エクスビボ再刺激後のグランザイムＢを発現するＮＫ細胞に浸潤する腫瘍の頻度を示す。ＮＫ細胞を、以下のようにゲートした：ＣＤ４５＋、ＣＤ４５＋ＳＳＣ−Ａ低、生存、シングレット、ＮＫｐ４６＋ＴＣＲｂ−集団。陽性ゲートを、陰性対照の蛍光マイナス１（ＦＭＯ）に基づいて設定した。ｐ値を、対応のないｔ検定を使用して導出した（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１、＊＊＊、ｐ＜０．００１）。これらの結果は、ＣＤ１１２Ｒ遮断が、ＣＴ−２６腫瘍モデルにおける腫瘍内ＮＫ細胞中で、初期活性化マーカーＣＤ６９及び細胞傷害性顆粒タンパク質であるグランザイムＢの発現を顕著に増加させることを実証する。
【０２４９】
実施例１４．抗ＣＤ１１２Ｒ抗体及び抗ＰＤ１抗体の組み合わせは、マウスＣＴ−２６腫瘍モデルにおいて治療効果及び増加した無腫瘍生存率を有する。
ＣＤ１１２Ｒ及びＰＤ−１併用遮断のインビボ有効性
単剤療法及び併用療法としてのＣＤ１１２Ｒ及びＰＤ−１遮断の有効性を、ＣＴ−２６結腸腺癌同系腫瘍モデルにおいて試験した。６週齢のＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＴａｃ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂａｌｂ−Ｆ）に、０．１ｍＬの５０％Ｇｅｌｔｒｅｘ（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１４３２−０２）及び５０％ＲＰＭＩ−１６４０無血清培地（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１）中で０．２×１０６個のＣＴ２６．ＷＴ（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−２６３８）を、右脇腹に皮下移植した。マウスを、一致した分布無作為化方法を使用して９０ｍｍ３の平均腫瘍体積を有する各々１０匹のマウスの群に無作為化した。マウスを、表９におけるように、週２回、２週間腹腔内注射によって治療した。治療薬剤についての詳細は、表１０に含まれる。
【表９】
2021531764.tif 000010
【表１０】
2021531764.tif 000011
【０２５０】
腫瘍体積を、腫瘍がＩＡＣＵＣ限界サイズ（＜２０００ｍｍ３）に達するまで、週２回測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、以下のように計算した：幅（ｍｍ）×［長さ（ｍｍ）］２×０．５２。
【０２５１】
結果が、図１３Ａ〜Ｆに提示される。図１３Ａ〜Ｅは、時間の関数としての各治療群についての平均及び個々の腫瘍体積測定をそれぞれ示す。図１３Ａに示される結果は、抗ＰＤ−１との抗ＣＤ１１２Ｒの組み合わせが、アイソタイプ治療動物と比較して腫瘍成長の低減に有効であり、統計学的に有意であった（対応のないｔ検定によって２１日目に測定されたように）ことを実証する。抗ＣＤ１１２Ｒまたは抗ＰＤ−１単剤療法は、腫瘍成長を低減する活性も示した。図１３Ｆは、上記の治療後の群あたりの無腫瘍生存者の割合として、移植後５０日目の全体的な無腫瘍生存率を示す。これらの結果は、抗ＰＤ−１との抗ＣＤ１１２Ｒの組み合わせが、アイソタイプ対照またはいずれかの単剤療法薬剤よりも高い無腫瘍生存率を付与することを実証する。
【０２５２】
実施例１５．マウスＣＤ１１２Ｒを発現する細胞への抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の結合
マウスＣＤ１１２Ｒに結合する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、マウスＣＤ１１２Ｒを過剰発現する細胞上で評価した。マウスＣＤ１１２Ｒ（２９３Ｔ．ｍＣＤ１１２Ｒ）を過剰発現するように操作された０．８×１０５個の２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−３２１６）を、９６ウェルＶ底プレートの各ウェルに添加し、４℃で３０分間３倍段階希釈を用いて、１０μｇ／ｍＬの開始濃度で抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはＩｇＧ１アイソタイプ対照のいずれかで染色した。細胞を、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳで２回洗浄し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０９３２０）で再懸濁させ、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ中で１：１００希釈し、４℃で２０分間インキュベートした。続いて、細胞を、２回洗浄し、ＰＢＳ＋２％ＦＣＳに再懸濁させた。細胞データを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ−２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）で分析した。
【０２５３】
結果は、図１７及び表１１に示される。２９３Ｔ．ｍＣＤ１１２Ｒ細胞に結合する抗体の定量を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７シグナルの幾何平均蛍光強度（ｇＭＦＩ）によって評価した。これらの結果は、いくつかの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体がマウスＣＤ１１２Ｒを発現する細胞に結合したことを実証する。
【０２５４】
実施例１６．可溶性マウスＣＤ１１２Ｒへの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の結合
可溶性マウスＣＤ１１２Ｒに結合する抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、ＥＬＩＳＡによって評価した。簡潔には、９６ウェルのＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはアイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０３５０２）を用いて、４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを、ＰＢＳ＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）で６回洗浄し、続いて、２００μＬのＰＢＳ＋１％ＢＳＡを用いて、室温で１．５時間遮断した。遮断後、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中の１００μＬのマウスＣＤ１１２Ｒ−ｈＩｇＧ４融合タンパク質を、１０μｇ／ｍＬの最終開始濃度で、４倍段階希釈を用いて添加した。プレートを、室温で１．５時間インキュベートした。次に、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、次いで、１００μＬの抗ＩｇＧ４  ＨＲＰ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号ＭＡ１−３３４３７）と共に室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２０２３）で発色させた。反応を、等量の停止溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＳＳ０４）で停止させた。４５０ｎｍ（Ｏ．Ｄ．４５０）での吸光度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダー上で測定した。
【０２５５】
結果は、図１８及び表１１に示される。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体が可溶性マウスＣＤ１１２Ｒに結合したことを実証する。
【０２５６】
実施例１７．ＣＤ１１２へのマウスＣＤ１１２Ｒ結合の阻害または遮断
マウスＣＤ１１２へのマウスＣＤ１１２Ｒ結合を遮断する種交差反応性抗ＣＤ１１２Ｒ抗体の能力を、ＥＬＩＳＡによって評価した。簡潔には、９６ウェルのＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬのマウスＣＤ１１２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号５０３１８−Ｍ０８Ｈ）を用いて、４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを、ＰＢＳ＋０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）で６回洗浄し、続いて、２００μＬのＰＢＳ＋１％ＢＳＡを用いて、室温で１．５時間遮断した。遮断後、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄した。次に、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中の５０μＬの抗ＣＤ１１２Ｒ抗体またはアイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０３５０２）を、４０μｇ／ｍＬの最終開始濃度で、２倍段階希釈を用いて添加した。５０μＬのマウスＣＤ１１２Ｒ−ｈＩｇＧ４融合タンパク質も、２μｇ／ｍＬの最終濃度で各ウェルに添加した。プレートを、室温で１．５時間インキュベートした。次に、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、次いで、１００μＬの抗ＩｇＧ４  ＨＲＰ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号ＭＡ１−３３４３７）と共に室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳＴで６回洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号００２０２３）で発色させた。反応を、等量の停止溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＳＳ０４）で停止させた。４５０ｎｍ（Ｏ．Ｄ．４５０）での吸光度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダー上で測定した。
【０２５７】
結果が、図１９及び表１１に示される。これらの結果は、抗ＣＤ１１２Ｒ抗体がマウスＣＤ１１２へのマウスＣＤ１１２Ｒ結合を異なる程度で阻害したことを実証する。阻害パーセントを、［１００−（（試験試料Ｏ．Ｄ．４５０／最大Ｏ．Ｄ．４５０）＊１００％）］として計算した。最大Ｏ．Ｄ．４５０を、抗体の非存在下での４５０ｎｍでの吸光度として定義した。
【０２５８】
表１１及び図１７〜１９に示されるように、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６は、ヒトＣＤ１１２ＲとのヒトＣＤ１１２の相互作用を遮断することができるが、本明細書に記載の遮断の定義に従うと、マウスＣＤ１１２Ｒ及びマウスＣＤ１１２の間の結合相互作用を遮断することができない。例えば、抗体３２、３３、３４、３５、及び３６については、それぞれ７５．１、７８．８、８０、８１．７、及び８６．２でのヒト相互作用の阻害％と比較して、それぞれ０、２８．３、２０．３、２４．２、及び４１．６でのマウス相互作用の阻害％を示す、表１１の最後の２列を参照されたい。抗体３２に関連する例示的なクラスの抗体に属さない抗体は、かかる示差的遮断を呈さない。
【表１１】
2021531764.tif 000012
【０２５９】
上述の発明は、明確な理解のための例証及び例によっていくらか詳細に記載されているが、説明及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によってそれらの全体が明示的に組み込まれる。
【表１２−１】
2021531764.tif 000013
【表１２−２】
2021531764.tif 000014
【表１２−３】
2021531764.tif 000015
【表１２−４】
2021531764.tif 000016
【表１２−５】
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【表１２−６】
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【表１２−７】
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【表１２−８】
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【表１２−９】
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【表１２−１０】
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【表１２−１１】
2021531764.tif 000023
【表１２−１２】
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【表１２−１３】
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【表１２−１４】
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【表１２−１５】
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【表１２−１６】
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【表１２−１７】
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【表１２−１８】
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【表１２−１９】
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【表１２−２０】
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【表１２−２１】
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【表１２−２２】
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【表１２−２３】
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【表１２−２４】
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【表１２−２５】
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【表１２−２６】
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【表１２−２７】
2021531764.tif 000039
【表１２−２８】
2021531764.tif 000040
【表１２−２９】
2021531764.tif 000041
（項目１）
単離された抗体であって、
ｉ）（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉ）（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｉｉ）（ａ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｖ）（ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖ）（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉ）（ａ）配列番号５０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号５０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉｉ）（ａ）配列番号６０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号６０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号６０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号７０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号７０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号７０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号７０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号７０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｉｘ）（ａ）配列番号８０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号８０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号８０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘ）（ａ）配列番号９０１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９０２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９０３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号９０４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号９０５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号９０６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉ）（ａ）配列番号１００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号１００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｉ）（ａ）配列番号２００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号２００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号２００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号３００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号３００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号３００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、または
ｘｉｖ）（ａ）配列番号４００１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号４００２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号４００３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号４００４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号４００５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及び（ｆ）配列番号４００６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、前記単離された抗体。
（項目２）
前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）前記ＶＨが、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｖ）前記ＶＨが、配列番号３１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖ）前記ＶＨが、配列番号４１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号４１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉ）前記ＶＨが、配列番号５１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号５１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉｉ）前記ＶＨが、配列番号６１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号６１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｖｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号７１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号７１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｉｘ）前記ＶＨが、配列番号８１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号８１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘ）前記ＶＨが、配列番号９１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号９１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉ）前記ＶＨが、配列番号１０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号１０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号２０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号３０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号３０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であるか、または
ｘｉｖ）前記ＶＨが、配列番号４０１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬが、配列番号４０１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％同一である、項目１に記載の単離された抗体。
（項目３）
前記抗体が重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
ｉ）前記ＶＨが配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉ）前記ＶＨが配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号２１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号２１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｖ）前記ＶＨが配列番号３１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号３１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖ）前記ＶＨが配列番号４１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉ）前記ＶＨが配列番号５１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号５１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉｉ）前記ＶＨが配列番号６１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号６１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｖｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号７１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号７１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｉｘ）前記ＶＨが配列番号８１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号８１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘ）前記ＶＨが配列番号９１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号９１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉ）前記ＶＨが配列番号１０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号１０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｉ）前記ＶＨが配列番号２０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号２０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｉｉ）前記ＶＨが配列番号３０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号３０１８のアミノ酸配列を含むか、または
ｘｉｖ）前記ＶＨが配列番号４０１２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号４０１８のアミノ酸配列を含む、項目１または２に記載の単離された抗体。
（項目４）
前記抗体がモノクローナル抗体である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目５）
前記抗体が抗体断片である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目６）
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２である、項目６に記載の単離された抗体。
（項目７）
前記抗体が完全長抗体である、項目１〜５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目８）
前記抗体のＦｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目９）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１０）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１１）
前記抗体が、変異体ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、項目１１に記載の単離された抗体。
（項目１２）
前記変異体ＩｇＧ４重鎖定常領域が、ＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓｅｒ２２８での置換、Ｌｅｕ２３５での置換、Ａｓｎ２９７での置換、またはそれらの組み合わせから選択される変異を含む、項目１１に記載の単離された抗体。
（項目１３）
前記変異体ＩｇＧ４重鎖定常領域が、ＥＵ番号付けに従って番号付けすると、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む、項目１１に記載の単離された抗体。
（項目１４）
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、前記抗体が、
ｉ）ＮＫ細胞脱顆粒を増加させ、及び／または
ｉｉ）ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｉｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて提示される際に、腫瘍内ＮＫ細胞の活性化を増加させ、及び／または
ｉｖ）インビボで腫瘍成長を阻害し、及び／または
ｖ）腫瘍を用いた再負荷時に腫瘍生着を防止する、項目１〜９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
（項目１５）
先行項目のいずれか１項に記載の抗体のヒト化または完全ヒトバージョン。
（項目１６）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
（項目１７）
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３またはＴＩＭ−３のアンタゴニストをさらに含む、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
対象における抗腫瘍免疫応答を、増強、増加、及び／または維持する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、腫瘍を有する対象に投与することを含む、前記方法。
（項目１９）
対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞活性化を増強する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、ＣＤ８  Ｔ細胞活性化を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２０）
対象におけるＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を増強する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、ＣＤ８  Ｔ細胞インターフェロンガンマ産生を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２１）
対象におけるＮＫ細胞活性化を増強する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、ＮＫ細胞活性化を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２２）
対象におけるＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増強する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、ＮＫ細胞媒介性細胞傷害性を増加させることを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２３）
対象におけるがんを治療する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を、がんを有する対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２４）
前記がんが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、または白血病である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記がんが、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌（扁平上皮細胞非小細胞肺癌を含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜もしくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝細胞癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、または様々な種類の頭頸部癌（頭頸部扁平上皮細胞癌を含む）である、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
対象におけるＣＤ１１２とのＣＤ２２６相互作用を増強する方法であって、項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、または項目１６もしくは１７に記載の組成物を対象に投与することを含む、前記方法。
（項目２７）
前記方法が、第２の療法を投与することをさらに含む、項目１８〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記第２の療法が、放射線療法または外科手術である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記第２の療法が、化学療法、オプソニン化剤、または制御性Ｔ細胞枯渇剤の投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記第２の療法が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、Ｌａｇ−３、またはＴＩＭ−３のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３１）
前記第２の療法が、ＴＩＧＩＴまたはＣＤ９６のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３２）
前記第２の療法が、ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３、ＰＶＲＬ４、及びＣＤ１５５のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の療法が、ＣＤ４７のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３４）
前記第２の療法が、ＣＤ３９のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３５）
前記第２の療法が、ＩＬ−２７のアンタゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３６）
前記第２の療法が、ＳＴＩＮＧアゴニストの投与である、項目２７に記載の方法。
（項目３７）
前記アンタゴニストが抗体である、項目３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸。
（項目３９）
項目３８に記載の核酸を含む、宿主細胞。
（項目４０）
項目１〜１５のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、前記抗体が発現される条件下で、項目３９に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
（項目４１）
前記抗体を精製することをさらに含む、項目４０に記載の方法。
【図１】
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【図２Ａ】
2021531764.tif 000043
【図２Ｂ】
2021531764.tif 000044
【図３】
2021531764.tif 000045
【図４】
2021531764.tif 000046
【図５】
2021531764.tif 000047
【図６】
2021531764.tif 000048
【図７】
2021531764.tif 000049
【図８Ａ】
2021531764.tif 000050
【図８Ｂ】
2021531764.tif 000051
【図８Ｃ】
2021531764.tif 000052
【図８Ｄ】
2021531764.tif 000053
【図９】
2021531764.tif 000054
【図１０Ａ】
2021531764.tif 000055
【図１０Ｂ】
2021531764.tif 000056
【図１１】
2021531764.tif 000057
【図１２】
2021531764.tif 000058
【図１３Ａ】
2021531764.tif 000059
【図１３Ｂ】
2021531764.tif 000060
【図１３Ｃ】
2021531764.tif 000061
【図１３Ｄ】
2021531764.tif 000062
【図１３Ｅ】
2021531764.tif 000063
【図１３Ｆ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
2021531764.tif 000069
【図１４Ｆ】
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【図１５Ａ】
2021531764.tif 000071
【図１５Ｂ】
2021531764.tif 000072
【図１５Ｃ】
2021531764.tif 000073
【図１５Ｄ】
2021531764.tif 000074
【図１５Ｅ】
2021531764.tif 000075
【図１５Ｆ】
2021531764.tif 000076
【図１５Ｇ】
2021531764.tif 000077
【図１５Ｈ】
2021531764.tif 000078
【図１６Ａ】
2021531764.tif 000079
【図１６Ｂ】
2021531764.tif 000080
【図１７】
2021531764.tif 000081
【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2021531764.tif 000085
2021531764.tif 000086