(57)【要約】  ＩＬ−４、ＩＬ−６等の各種炎症サイトカイン又は炎症細胞の移動に連関されたケモカインＣＸＣＬ８の過発現を抑制して、炎症関連疾患の改善、予防又は治療に有用な新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物、その製造方法及びこれを有効成分として含有する免疫調節剤が開示される。前記１，２−ジアシルグリセロール化合物は明細書内に化学式２で表示される。
2021516689.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物。
（化学式２）
2021516689.tif 000042
（前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000043
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000044
又は
2021516689.tif 000045
であり、
2021516689.tif 000046
は結合部を表す。）
【請求項２】
Ｒ１はオクタノイル（ｏｃｔａｎｏｙｌ）、ラウロイル（ｌａｕｒｏｙｌ）、デカノイル（Ｄｅｃａｎｏｙｌ）又はパルミトイル（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）であり、Ｒ３はブチリル（ｂｕｔｙｒｙｌ）、２−メチルブチリル（２−Ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｒｙｌ）、ピバロイル（Ｐｉｖａｌｏｙｌ）、又はリノレオイル（Ｌｉｎｏｌｅｏｙｌ）であり、Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基である、請求項１に記載の１，２−ジアシルグリセロール化合物。
【請求項３】
Ｒ２は
2021516689.tif 000047
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族、又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000048
又は
2021516689.tif 000049
である、請求項１に記載の１，２−ジアシルグリセロール化合物。
【請求項４】
下記反応式１に表される、グリシジルクロリドと脂肪酸（Ｒ１−ＯＨ、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基である）を反応させ、化合物Ａを得る段階、
［反応式１］
2021516689.tif 000050
下記反応式２に表される、化合物ＡとＲ２−ＯＨ（Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000051
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000052
又は
2021516689.tif 000053
であり、
2021516689.tif 000054
は結合部を表す）を反応させ、化合物Ｂを得る段階、
［反応式２］
2021516689.tif 000055
下記反応式３に表される、化合物Ｂと脂肪酸（Ｒ３−ＯＨ、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基である）を反応させる段階、
［反応式３］
2021516689.tif 000056
を含む１，２−ジアシルグリセロール化合物の製造方法。
【請求項５】
下記反応式４に表される、ソルケタールと脂肪酸（Ｒ１−ＯＨ、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基である）を反応させ、化合物Ｃを得て、そして化合物Ｃを加水分解反応させ、化合物Ｄを得る段階、
［反応式４］
2021516689.tif 000057
下記反応式５に表される、化合物ＤとＲ２−ＯＨ（Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000058
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000059
又は
2021516689.tif 000060
であり、
2021516689.tif 000061
は結合部を表す）を反応させ、化合物Ｂを得る段階、
［反応式５］
2021516689.tif 000062
下記反応式３に表される、化合物Ｂと脂肪酸（Ｒ３−ＯＨ、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基である）を反応させる段階、
［反応式３］
2021516689.tif 000063
を含む１，２−ジアシルグリセロール化合物の製造方法。
【請求項６】
下記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含む免疫調節剤。
（化学式２）
2021516689.tif 000064
（前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000065
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000066
又は
2021516689.tif 000067
であり、
2021516689.tif 000068
は結合部を表す。）
【請求項７】
前記１，２−ジアシルグリセロール化合物はＩＬ−４、ＩＬ−６及びＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）からなる群から選択される一つ以上の炎症サイトカインの過剰発現を抑制することである、請求項６に記載の免疫調節剤。
【請求項８】
前記１，２−ジアシルグリセロール化合物はバクテリア又はウイルス感染疾患、急性及び慢性炎症肺疾患、肺炎、自己免疫疾患、アレルギー疾患及び癌からなる群から選択される免疫疾患を予防又は治療する、請求項６に記載の免疫調節剤。
【請求項９】
前記１，２−ジアシルグリセロール化合物の含量は０．０００１乃至１００．０重量％である、請求項６に記載の免疫調節剤。
【請求項１０】
下記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含む免疫調節用健康機能食品組成物。
（化学式２）
2021516689.tif 000069
（前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000070
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000071
又は
2021516689.tif 000072
であり、
2021516689.tif 000073
は結合部を表す。）
【請求項１１】
請求項６乃至９のいずれか一項に記載の免疫調節剤を非ヒト個体に投与する段階を含む免疫調節方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は１，２−ジアシルグリセロール化合物に関するもので、更に詳細には、ＩＬ−４、ＩＬ−６等の各種炎症サイトカイン又は炎症細胞の移動に連関されたケモカインＣＸＣＬ８の過発現を抑制し、炎症関連疾患の改善、予防又は治療に有用で新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物、その製造方法及びこれを有効成分として含有する免疫調節剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
免疫はいろいろの疾病要因（ｐａｔｈｏｇｅｎ）から生体を防御することで、免疫欠乏とは免疫係の一部構成要素に欠陥が発生することである。その結果、多くの種類の抗原に対して免疫反応が起こらなくなるが、このような免疫欠乏は大きくは先天性免疫欠乏（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｏｒ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）と後天性免疫欠乏（ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｏｒ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）で分かれる。先天性免疫欠乏はＢ細胞、Ｔ細胞等免疫細胞が元から存在しないことで遺伝子治療や抗体注入、骨髄移植等の治療法だけが可能な治療法である。それに対して、後天性免疫欠乏症は免疫構成要素自体は元より存在するがこれらによって現れる免疫反応過程に異常が生じたものなので免疫構成要素の機能を増進させることで免疫欠乏状態を改善できる。
【０００３】
近来免疫機能の異常増加で発生する免疫疾患が多く発生しているし、主に免疫抑制剤を使用してこのような免疫疾患を治療している。しかし、免疫抑制剤を使用する場合、身体全体の免疫力を落として他の問題を引き起こす場合が多い。最近免疫機能の作用機序が知られながら全世界的に免疫機能を増進又は抑制できる免疫調節物質を開発しようとする試しが進行されている。このような試しは免疫調節物質を通じて免疫細胞たちを刺激して生体の免疫機能を増進又は抑制等調節することで、疾病要因から生体の防御力を増進させると同時に免疫機能の過発現による不作用を最少化させることである。このような免疫調節物質として、韓国特許公開１０−２００６−００４７４４７号には下記化学式１で表されるモノアセチルジアシルグリセロール化合物が開示されている。下記化学式１で表される化合物は１−パルミトイル−２−リノレオイル−３−アセチルグリセロールとして、通常ＥＣ−１８又はＰＬＡＧと知られている。
【０００４】
【化１】
2021516689.tif 000003
【０００５】
前記化学式１で表される化合物は各種免疫体系の機能低下によって発生する疾患、各種癌に対する予防及び治療だけではなく、関節炎、アトピー、痴呆、敗血症等自己免疫作用による細胞損傷（自己免疫疾患）の抑制、予防及び治療に効能を持つと知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物及びその製造方法を提供することである。
【０００７】
本発明の他の目的は従来の免疫調節物質である１−パルミトイル−２−リノレオイル−３−アセチルグリセロール（ＥＣ−１８）と類似な免疫調節機能を持つ新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物及びその製造方法を提供することである。
【０００８】
本発明の又他の目的は、ＩＬ−４、ＩＬ−６等の各種炎症サイトカイン又は炎症細胞の移動に連関されたケモカインＣＸＣＬ８の過発現を抑制して、炎症関連疾患の改善、予防又は治療に有用で新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物及びこれを有効成分として含有する免疫調節剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記目的を達成するために、本発明は下記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を提供する。
【００１０】
【化２】
2021516689.tif 000004
【００１１】
前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000005
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000006
又は
2021516689.tif 000007
であり、
2021516689.tif 000008
は結合部を表せる。
【００１２】
又、本発明は前記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含む免疫調節剤及び免疫調節用健康機能食品組成物を提供する。又、本発明は前記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含む免疫調節剤を非人間個体に投与する段階を含む免疫調節方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明による新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物は、従来の免疫調節物質である１−パルミトイル−２−リノレオイル−３−アセチルグリセロール（ＥＣ−１８）と類似な免疫調節機能を持つし、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８等の各種炎症サイトカインの過発現を抑制して、炎症関連疾患の改善、予防又は治療に有用に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
図１及び２は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＩＬ−６分泌減少効果を示すグラフ。
【００１５】
図３及び４は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＳＴＡＴ３活性減少効果を示すグラフ。
【００１６】
図５は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）発現減少効果を示すグラフ。
【００１７】
図６は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＨＬ−６０細胞株の移動減少効果を示すグラフ。
【００１８】
図７及び図８は本発明のグリセロール誘導体化合物のバクテリア菌肺感染動物モデルの感染抑制実験結果を示すグラフ及び写真。
【００１９】
図９及び１０は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＳＴＡＴ６活性減少効果を示すグラフ。
【００２０】
図１１及び１２は従来及び本発明のグリセロール誘導体化合物のＩＬ−４分泌減少効果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２２】
本発明は下記化学式２で表される新規な１，２−ジアシルグリセロール化合物を提供する。
【００２３】
【化２】
2021516689.tif 000009
【００２４】
前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ３は炭素数４乃至１８の脂肪酸基であり、Ｒ２は炭素数１乃至３のアルキル基、
2021516689.tif 000010
（Ｒ４は炭素数２乃至８の脂肪族又は芳香族炭化水素基）、
2021516689.tif 000011
（２−Ａｍｉｎｏａｃｅｔｙｌ）又は
2021516689.tif 000012
（１−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ）であり、
2021516689.tif 000013
は結合部を表す。
【００２５】
前記化学式２にあって、脂肪酸基は鎖状又は分枝状及び飽和又は不飽和脂肪酸でヒドロキシ基（−ＯＨ）が除去されたアシル基を意味する。前記化学式２で、Ｒ１は炭素数８乃至１６の脂肪酸基である可能性があるし、例えば、オクタノイル（ｏｃｔａｎｏｙｌ）、ラウロイル（ｌａｕｒｏｙｌ）、デカノイル（Ｄｅｃａｎｏｙｌ）、パルミトイル（Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）等である可能性があるし、Ｒ３はブチリル（ｂｕｔｙｒｙｌ）、２−メチルブチリル（２−Ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｒｙｌ）、ピバロイル（Ｐｉｖａｌｏｙｌ）、リノレオイル（Ｌｉｎｏｌｅｏｙｌ）等であることができる。Ｒ２はメチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基であることができる。Ｒ４は炭素数２乃至８の鎖状、分枝状又は丸状及び飽和又は不飽和脂肪族炭化水素基又は炭素数６乃至８の芳香族基であることができる。例えば、前記丸状飽和脂肪族炭化水素基はシクロプロピル基、シクロヘキシル基等である可能性があるし、前記芳香族基はフェニル基であることができる。前記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物はラセミ体又は光学活性体である。前記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物の好ましい例としては化学式２のＲ１がパルミトイルであり、Ｒ２が２−メチルブチリルであり、Ｒ３がリノレオイルである化合物（以下、ＥＣ−Ａ２０）又はＲ１がパルミトイルであり、Ｒ２がイソプロピルであり、Ｒ３がリノレオイルである化合物（以下、ＥＣ−Ａ２１）を例示できる。
【００２６】
前記化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物はグリシジルクロリド（Ｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｃ３Ｈ５ＣｌＯ、分子量：９２．５２）又はソルケタール（Ｓｏｌｋｅｔａｌ、Ｃ６Ｈ１２Ｏ３、分子量：１３２．１６）を出発物質に使用して製造できる。出発物質としてグリシジルクロリドを利用する合成法は次の反応式１乃至３に従って遂行できる。
【００２７】
［反応式１］
2021516689.tif 000014
【００２８】
先に、前記反応式１に表すように、グリシジルクロリドと脂肪酸（Ｒ１−ＯＨ、Ｒ１は化学式２で定義した通りである）を反応させ、化合物Ａを得る。
【００２９】
［反応式２］
2021516689.tif 000015
【００３０】
次に、前記反応式２に表すように、化合物ＡとＲ２−ＯＨ（Ｒ２は化学式２で定義した通りである）を反応させ、化合物Ｂを得る。
【００３１】
［反応式３］
2021516689.tif 000016
【００３２】
次に、前記反応式３に表すように、化合物Ｂと脂肪酸（Ｒ３−ＯＨ、Ｒ３は化学式２で定義した通りである）を反応させ、化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を得られる。
【００３３】
一方、出発物質としてソルケタール（Ｓｏｌｋｅｔａｌ）を利用する合成法は、先ず、下記反応式４及び５で表される反応を遂行して化合物Ｂを得る。
【００３４】
［反応式４］
2021516689.tif 000017
【００３５】
先に、前記反応式４に表すように、ソルケタールと脂肪酸（Ｒ１−ＯＨ、Ｒ１は化学式２で定義した通りである）を反応させ、化合物Ｃを得て、化合物Ｃを加水分解反応させ、化合物Ｄを得る。
【００３６】
［反応式５］
2021516689.tif 000018
【００３７】
次に、前記反応式５に表すように、化合物ＤとＲ２−ＯＨ（Ｒ２は化学式２で定義した通りである）を反応させ、化合物Ｂを得る。このような得た化合物Ｂを出発物質に使用して、反応式３の反応を遂行すると化学式２で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を得られる。
【００３８】
本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物は、既存に免疫調節及び抗癌剤として多様な急，慢性炎症疾患で効果を表す化学式１で表されるモノアセチルジアシルグリセロール誘導体（ＥＣ−１８）と類似に、人体感染時初期対応するマクロファージたちの炎症サイトカインの発現を調節して、免疫調節剤として使用できる。具体的に、本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物は、炎症サイトカインであるＩＬ−６の過発現を抑制して、ＩＬ−６発現調節因子であるＳＴＡＴ３活性を減少させることができるので、各種急慢性炎症疾患及び免疫疾患関連疾病の改善、予防及び治療剤として使用できる。又、本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物は、各種アレルギー及び自己免疫疾患、そして癌の微細環境に影響を及ぼすＴ  ｈｅｐｌｅｒ  ２  ｔｙｐｅ（Ｔｈ２）のＴ細胞で発現するＩＬ−４の発現を調節し減少させてこれらサイトカインの発現調節因子であるＳＴＡＴ６活性を減少させる効果があって、Ｔｈ２関連慢性疾患及び癌予防及び治療剤としても使用できる。又、本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物は、ＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）の発現を調節し減少させて、結局過度な好中球移動を軽減して、動物モデルでの気管支内菌急性感染モデルでの感染を抑制する効果があって、過度な好中球移動に従った炎症反応を調節する免疫調節剤又は初期感染に対応する治療剤として、各種急慢性炎症疾患及び免疫疾患関連疾病の予防及び治療剤として有用に使用できる。従って、本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物はＩＬ−４、ＩＬ−６及びＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）からなる群から選択される一つ以上の炎症サイトカインの過発現を抑制して、炎症関連疾患の改善、予防又は治療に有用に使用できる。本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物の投与によって予防又は治療できる免疫関連疾患の例としては各種バクテリア及びウイルス感染疾患、急性及び慢性炎症肺疾患、肺炎、自己免疫疾患、アレルギー疾患、癌等を例示できる。本発明で用語、“予防”は前記化合物の投与で免疫の過発現を抑制する全ての行為を意味し、“治療”は前記化合物によって免疫関連疾患による症状が好転されたり有利に変更される全ての行為を意味する。
【００３９】
本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物は他の物質との混合なく単独で免疫調節剤に使用されたり、前記１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含む薬学的組成物の形態で免疫調節剤に使用できる。本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物が薬学的組成物に使用される場合、薬学的組成物の製造に通常的に使用する適切な担体、賦形体又は希釈剤を含むことができる。この時、前記組成物に含まれる１，２−ジアシルグリセロール化合物の含量は特別に制限されないが、組成物総重量に対して０．０００１乃至１００．０重量％、具体的には０．００１乃至９５．０重量％含むことができる例えば、組成物中１，２−ジアシルグリセロール化合物の含量は０．０１乃至５０重量％、更に具体的には１乃至２０重量％で含むことができる。又、組成物中１，２−ジアシルグリセロール化合物の含量は５０乃至１００重量％、更に具体的には５０乃至９５重量％で含むことができる。
【００４０】
前記薬学的組成物は錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、油剤、シロップ剤、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、油剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれか一つの剤形持つことができるし、経口又は非経口のいろいろな剤形であることができる。製剤化する場合には普通使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤等の希釈剤又は賦形剤を使用して調剤される。経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等が含まれるし、このような固形製剤は一つ以上の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）又はラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチン等を混ぜて調剤される。又、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルク等のような潤滑剤たちも使用される。経口投与のための液状製剤としては懸濁剤、内用液剤、油剤、シロップ剤等が該当されるがよく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外にいろいろな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤等が含まれることができる。非経口投与のための製剤には滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、油剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としてはプロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステル等が使用できる。坐剤の基剤としてはウィテプソル（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチン等が使用できる。
【００４１】
本発明の組成物は薬学的に有効な量で投与できる。本発明で用語、“薬学的に有効な量”は医学的治療に適用可能な合理的な受恵／危険比率で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量水準は個体種類及び重症度、年齢、性別、疾病の種類、薬物の活性、薬物に対した敏感度、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時使用される薬物を含む要素及び他の医学分野によく知られた要素に従って決定できる。本発明の組成物は個別治療剤に投与したり他の治療剤と併用して投与できるし、従来の治療剤と順次的又は同時に投与できる。そして単一又は多重投与できる。前記要素を全て考えて不作用なく最小限の量で最大効果を得られる量を投与することが重要であり、当業者によって容易に決定できる。本発明の組成物の好ましい投与量は患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び期間によって違うし、適した総１日使用量は正しい医学的判断範囲内で処置医によって決定できるが、一般的に０．００１乃至１０００ｍｇ／ｋｇの量、好ましくは０．０５乃至２００ｍｇ／ｋｇ、更に好ましくは０．１乃至１００ｍｇ／ｋｇの量を一日１回乃至数回に分けて投与できる。前記化合物又は組成物は免疫低下予防、免疫増進又は免疫疾患の治療を目的とする個体であれば特別に限定されず、どのような個体であろうが適用可能である。例えば、猿、犬、猫、ウサギ、モルモット、ラット、マウス、牛、羊、豚、ヤギ等のような非人間動物、人間、鳥類及び魚類等どんな個体にも適用できるし、投与の方式は当業界の通常的な方法であれば制限なく含む。例えば、経口、直腸又は静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜又は脳血管内注射によって投与できる。
【００４２】
もう一つの様態として、本発明は前記化学式１で表される１，２−ジアシルグリセロール化合物を有効成分として含有する、免疫調節用健康機能食品組成物を提供する。具体的に、本発明の１，２−ジアシルグリセロール化合物を免疫過発現の防止、免疫機能の増進、免疫関連疾患の予防又は改善を目的に健康機能食品組成物に含ませることができる。ここで、用語、“改善”は前記組成物を利用して免疫関連疾患の疑心及び発病個体の症状が好転されたり有利になる全ての行為を言う。
【００４３】
本発明の組成物を健康機能食品に含めて使用する場合、前記組成物をそのまま添加したり他の健康機能食品又は健康機能食品成分と一緒に使用できるし、通常的な方法に従って適切に使用できる。有効成分の混合量は使用目的に従って適合に決定できる。一般的に、食品又は飲料の製造の時に本発明の組成物は原料に対して好ましくは１５重量部以下、更に好ましくは１０重量部以下の量で添加できる。しかし、健康調節及び衛生を目的とする長期間の摂取の場合には前記量は前記範囲以下であることができるし、安定性の面で問題がないため、有効成分は前記範囲以上の量でも使用できる。
【００４４】
本発明の組成物を含むことができる健康機能食品の種類には特別な制限はないし、具体的な例としては肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディ類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤等があり、通常的な意味での健康機能食品を全て含むことができるし、動物のための飼料で利用される食品を含むことができる。又、本発明の健康機能食品組成物が飲料の形態で使用される場合には通常の飲料のようにいろいろな甘味剤、香味剤又は天然炭水化物等を追加成分として含有できる。前記天然炭水化物はブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド、マルトース、シュークロスのようなジサッカライド、デキストリン、サイクロデキストリンのようなポリサッカライド、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールのような糖アルコールであることができる。前記天然炭水化物の比率はこれに制限されるのではないが、本発明の組成物１００ｍｌ当たり好ましくは約０．０１乃至０．０４ｇ、より好ましくは０．０２乃至０．０３ｇであることができる。前記甘味剤はタウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤及びサッカリン、アスファルタムのような合成甘味剤であることができる。前記外に本発明の健康機能食品組成物はいろいろな栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクと酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤等を含有できる。その他に天然果物ジュース、果物ジュース飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含有できる。
【００４５】
もう一つの様態として、本発明は前記薬学的組成物を免疫過発現又は免疫関連疾患の疑心個体に投与する段階を含む、免疫調節方法又は免疫関連疾患の予防又は治療方法を提供する。本発明で前記免疫過発現又は免疫関連疾患の疑心個体は免疫関連疾患が発病したり発病する可能性がある人間を含む全ての動物を意味し、本発明の化合物又はこれの薬学的に許容可能な塩を含む薬学的組成物を免疫関連疾患疑心個体に投与することで、個体を効率的に治療できる。本発明で用語、“投与”はどのような適切な方法で免疫関連疾患疑心個体に本発明の薬学的組成物を導入することを意味し、投与経路は目的組織に到達できる限り経口又は非経口の多様な経路を通じて投与できる。本発明の治療方法は前記化学式１の１，２−ジアシルグリセロール化合物を含む薬学的組成物を薬学的有効量で投与することを含むことができる。適した総１日使用量は正しい医学的判断範囲内で処置医によって決定できるし、一般的に０．００１乃至１０００ｍｇ／ｋｇの量、好ましくは０．０５乃至２００ｍｇ／ｋｇ、更に好ましくは０．１乃至１００ｍｇ／ｋｇの量を一日１回乃至数回に分けて投与できる。しかし本発明の目的上、特定患者に対した具体的な治療的有効量は達成しようとする反応の種類と程度、場合によって他の製剤が使用されるかの可否をはじめとする具体的組成物、患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食餌、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、具体的組成物と一緒に使用されたり同時使用される薬物をはじめとする多様な因子と医薬分野によく知られた類似因子によって違うように適用することが好ましい。
【実施例】
【００４６】
以下、具体的な実施例を通じて本発明を更に詳細に説明する。下記実施例は本発明の理解を助けるためのものであるだけであり、本発明が下記実施例によって限定されるのではない。
【００４７】
［実施例１］グリシジルクロリドを利用した１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成（ＥＣ−Ａ１４）
【００４８】
Ａ．下記反応式１ａに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）で１．５ｍｌのＰＥ（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ  ｅｔｈｅｒ）にグリシジルクロリド（８３２．６８ｍｇ、９．０ｍｍｏｌ、１．８ｅｑ．）、Ｒ１−ＯＨ（１ｅｑ．、Ｒ１＝パルミトイル（ｐａｌｍｉｔｏｙｌ））、ＮａＯＨ（１．８ｅｑ．）及び触媒としてｎ−Ｂｕ４ＮＢｒ（０．０５  ｅｑ．）を入れて、５０℃に昇温して５時間の間攪拌した。反応物を３０ｍｌのＰＥで希釈した後、濾過した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した後濃縮した後、フラッシュカラム（ｆｌａｓｈ  ｃｏｌｕｍｎ、ＰＥ：ＥＡ（酢酸エチル）＝５０：１）で精製して目的化合物Ａ（Ｒ１＝パルミトイル）を得た（収率＝６３．６５％）。
【００４９】
［反応式１ａ］
2021516689.tif 000019
【００５０】
Ｂ．下記反応式１ｂに表すように、ＡＣＮ（アセトニトリル）２ｍｌに前記段階Ａで得た化合物Ａ２００ｍｇ（６４０ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、Ｒ２−ＯＨ（０．８ｅｑ．  Ｒ２＝エチル）、触媒としてｎ−Ｂｕ４ＮＢｒ（０．１ｅｑ．）を入れて、１００℃に昇温して１８時間の間攪拌した。反応物を濃縮し、フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝２０．：１、Ｒｆ＝０．１８）で精製して目的化合物Ｂを得た（Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝エチル、収率＝２５．０３％）。
【００５１】
［反応式１ｂ］
2021516689.tif 000020
【００５２】
Ｃ．下記反応式１ｃに表すように、ヘキサン（Ｈｅｘ）１８ｍｌにＲ３−ＯＨ（１．０２ｅｑ．、Ｒ３＝リノレオイル（ｌｉｎｏｌｅｏｙｌ））及びピバロイルクロリド（ｐｉｖａｌｏｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ、１ｅｑ．）を入れて、５℃以下に冷却した後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、２ｅｑ．）を１０〜１５℃に維持しながらゆっくり滴加した後、同温度で３０分間攪拌した。段階Ｂで得た化合物Ｂ２．２８４ｇ（６．３７ｍｍｏｌｅ、１ｅｑ．  Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝エチル）と４−ジメチルアミノピリジン（４−（Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｐｙｒｉｄｉｎｅ、ＤＭＡＰ、０．１ｅｑ．）を投入した後、２０〜２５℃を維持しながら一晩維持（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）した。精製水０．１６ｍｌを入れて、２時間の間攪拌した後、精製水１４ｍｌを入れて、層分離した。メタノール（ＭｅＯＨ）９．１３ｍｌ、精製水４．５ｍｌ、ＫＯＨ  ０．２５ｍｇを混ぜた溶媒で２回層分離して、メタノール１３ｍｌ、精製水０．７ｍｌを混ぜた溶媒で２回層分離した後、精製水１４ｍｌにｃ−ＨＣｌ  ４２ｍｇを混ぜた溶媒で層分離して、精製水１４ｍｌにＮａＨＣＯ３  ６．８ｍｇを混ぜた溶媒で層分離した。有機層にＭｇＳＯ４  １．１６ｇ、活性クレー（ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｌａｙ）２．９ｇ、活性炭素（ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃａｒｂｏｎ）２．９ｇを入れて、１０〜１５℃で１時間の間攪拌した後、濾過した。冷却ヘキサンで洗浄し、濃縮して化学式１で表される目的化合物（ＥＣ−Ａ１４、Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝エチル、Ｒ３＝リノレオイル）を得た（収率＝２２．０３％）。
【００５３】
［反応式１ｃ］
2021516689.tif 000021
【００５４】
［実施例２］ソルケタールを利用した１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成（ＥＣ−Ａ７８）
【００５５】
Ａ．下記反応式２ａに表すように、メチレンクロリド（ＭＣ）３３ｍｌにトリエチルアミン（ＴＥＡ、２．０９ｅｑ．）とＲ１−ＯＨ（１ｅｑ．、Ｒ１＝パルミトイル）を溶解させた後、反応温度を５〜１５℃まで冷却して、ピバロイルクロリド（１．０５ｅｑ．）を１５℃以下を維持しながら投入し、３０分間攪拌した。反応液にソルケタール（ｓｏｌｋｅｔａｌ）２．５４ｍｌ（２０．４７ｍｍｏｌｅ、１．０５ｅｑ．）を早く投入して、ＤＭＡＰ（０．０１ｅｑ．）を入れて２０〜２５℃で１時間攪拌した。反応が完結されると精製水１２．５ｍｌを入れて、層分離した後、また精製水１２．５ｍｌを入れて、ｃ−ＨＣｌ  ０．３ｍｌを入れてｐＨを７〜８に合わせた。有機層を分離した後、濃縮してオイル（ｏｉｌ）状の化合物を得た。ここにメタノール（ＭｅＯＨ）１５ｍｌ、精製水１．７５ｍｌを投入して、温度を２２〜２３℃に合わせた後、ｃ−ＨＣｌ  ２ｍｌをゆっくり滴加して、温度を２５℃以下に維持しながら２〜２．５時間の間攪拌すると、白色固体が徐徐に析出される、ここにヘキサン１３ｍｌ及び精製水１６ｍｌを入れた後、２５℃を維持しながらピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ）１．９ｍｌを入れて、ｐＨ４〜５に調整した後、１５℃まで冷却後濾過した。ヘキサンで洗浄し、乾燥して目的化合物Ｄを得た（Ｒ１＝パルミトイル、収率＝８５％）。
【００５６】
［反応式２ａ］
2021516689.tif 000022
【００５７】
Ｂ．次に、下記反応式２ｂに表すように、メチレンクロリド（ＭＣ）３０ｍｌにピリジン８．５３ｍｌ、段階Ａで得た化合物Ｄ５ｇ（Ｒ１＝パルミトイル、１５．１３ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）とＤＭＡＰ（０．０２ｅｑ．）を入れて、２５〜３０℃で溶解させた後、温度を２０℃まで冷却して、プロピオニルクロリド（ｐｒｏｐｉｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ、０．２ｅｑ）をゆっくり滴加した。反応温度を１８乃至１９℃に冷却して、メチレンクロリドに溶解されたプロピオニルクロリド（０．３ｅｑ）を滴加して、温度を１３乃至１５℃に冷却して、プロピオニルクロリド（０．５  ｅｑ）を滴加した後、また温度を５乃至１０℃に冷却して、プロピオニルクロリド（０．５ｅｑ）を滴加した後１時間攪拌した。同温度で精製水２０ｍｌを入れて、ｃ−ＨＣｌ  ６ｍｌを投入してｐＨ１〜２に調節した。層分離して有機層をＫ２ＣＯ３、ＭｇＳＯ４に中和及び脱水して濃縮した。残存メチレンクロリドを除去するためにヘキサンで濃縮した。ヘキサン１５ｍｌを入れた後、温度を１８〜２０℃に冷却して、ｓｅｅｄｉｎｇして結晶を析出させた。温度１３乃至１５℃で反応物を析出させた後、また１０℃に冷却して、冷却されたヘキサンで洗浄して乾燥して目的化合物Ｂを得た（Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝プロピオニル、収率＝７１．２３％）。
【００５８】
［反応式２ｂ］
2021516689.tif 000023
【００５９】
このように得た化合物Ｂ（１ｅｑ．  Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝プロピオニル）を利用して、実施例１の反応式１ｃに従って、化学式２で表される目的化合物（ＥＣ−Ａ７８、Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ２＝プロピオニル、Ｒ３＝リノレオイル）を得た。
【００６０】
［実施例３］１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成（ＥＣ−Ａ１６）
【００６１】
Ａ．下記反応式３ａに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）でアセトニトリル（ＡＣＮ）１０ｍｌに実施例１の段階Ａの目的化合物Ａ  ２．２４ｇ（７．１８ｍｍｏｌ、１ｅｑ．）、リノール酸（１ｅｑ．）及び触媒としてｎ−Ｂｕ４ＮＢｒ（０．１ｅｑ．）を１５℃で一度に投入して攪拌した後、１００℃に昇温して１６時間の間攪拌した。反応が完結されると０℃に冷却して、２０ｍｌ  ＮＨ４Ｃｌ溶液を入れて反応を終結した。水層をメチレンクロリド（ＭＣ）１２５ｍｌで３回抽出して、ｂｒｉｎｅ溶液で水洗して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝２０．：１）で精製して目的化合物Ｅを得た（Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ３＝リノレオイル、収率＝５．５８％）。
【００６２】
［反応式３ａ］
2021516689.tif 000024
【００６３】
Ｂ．下記反応式３ｂに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）でメチレンクロリド３ｍｌに前記段階Ａの目的化合物Ｅ６０ｍｇ（１０１．１９μｍｏｌｅ、１ｅｑ．）、安息香酸（Ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、１．２ｅｑ．）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、１．２ｅｑ．）及びＤＭＡＰ（０．１ｅｑ．）を０℃で入れて、１５分間攪拌した。反応物を２０℃に昇温して４８時間の間攪拌した。反応が完了されると濾過して、精製水とｂｒｉｎｅ溶液で３回抽出して、抽出した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１０．：１）で精製して目的化合物Ｆを得た（ＥＣ−Ａ１６、Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ３＝リノレオイル、Ｒ２＝ベンゾイル、収率＝２６．９４％）。
【００６４】
［反応式３ｂ］
2021516689.tif 000025
【００６５】
［実施例４］１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成（ＥＣ−Ａ５７）
【００６６】
Ａ．下記反応式４ａに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）でメチレンクロリド４ｍｌに実施例３、段階Ｂの目的化合物Ｅ８００ｍｇ（１．３５ｍｍｏｌｅ、１ｅｑ．）、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）グリシン（Ｎ−（ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｇｌｙｃｉｎｅ、Ｂｏｃ−ｇｌｙｃｉｎｅ、１．２ｅｑ．）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ、１．２ｅｑ．）及びＤＭＡＰ（０．２ｅｑ．）を２５℃で入れて、１８時間攪拌した。反応が完了されると濾過して、精製水とｂｒｉｎｅ溶液で３回抽出した。抽出した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した後、フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）で精製して目的化合物Ｇを得た（Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ３＝リノレオイル、収率＝４６．９１％）。
【００６７】
［反応式４ａ］
2021516689.tif 000026
【００６８】
Ｂ．下記反応式４ｂに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）でメチレンクロリド１ｍｌに前記段階Ａの目的化合物Ｇ１００ｍｇ（１３３．３２μｍｏｌｅ、１ｅｑ．）及びＴＦＡ（Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ、２０ｅｑ．）を０℃で投入して、１０分間攪拌した。反応が完結されると反応物を濃縮して、フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）で精製して目的化合物Ｈを得た（ＥＣ−Ａ５７、収率＝５２．５１％）。
【００６９】
［反応式４ｂ］
2021516689.tif 000027
【００７０】
［実施例５］１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成（ＥＣ−Ａ７０−１）
【００７１】
Ａ．下記反応式５ａに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）でメチレンクロリド５ｍｌに１，１−ジメトキシエタン５０ｍｇ（１，１−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｅ、５５４．８２μｍｏｌｅ、１ｅｑ．）、２，４，６−トリメチルピリジン（２，４，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ、２，４，６−ｃｏｌｌｉｄｉｎｅ、３ｅｑ．）、及びトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ  ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ、ＴＭＳＯＴｆ、２ｅｑ．）を０℃で入れて２時間の間攪拌して、目的化合物Ｉを得た。得られた反応液をｗｏｒｋ−ｕｐ及び精製なくすぐに次の反応に使用した。
【００７２】
［反応式５ａ］
2021516689.tif 000028
【００７３】
Ｂ．下記反応式５ｂに表すように、窒素雰囲気（Ｎ２−ｐｕｒｇｅ）で前記段階Ａの反応液に実施例３、段階Ａの目的化合物Ｅ２５０ｍｇ（４２１．６３μｍｏｌｅ、１ｅｑ．）を入れて、２８℃で２０時間攪拌した。反応が完結されると精製水２０ｍｌを入れて反応を終結して、メチレンクロリド２０ｍｌで２回抽出し、抽出した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。フラッシュカラム（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）で精製して目的化合物Ｊを得た（ＥＣ−Ａ７０−１、Ｒ１＝パルミトイル、Ｒ３＝リノレオイル、収率＝２０．７７％）。
【００７４】
［反応式５ｂ］
2021516689.tif 000029
【００７５】
［実施例６乃至３３］１，２−ジアシルグリセロール化合物の合成
【００７６】
実施例１乃至５と実質的に同一な方法で、下記表１に表せた１，２−ジアシルグリセロール化合物を合成したし、最終合成段階の収率と一緒に表１に表せた。
【００７７】
【表１】
2021516689.tif 000030
【００７８】
［実験例１］ＬＰＳで誘導されたＩＬ−６分泌減少
【００７９】
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、マウスｍａｃｒｏｐｈａｇｅ系列の細胞であるＲＡＷ２６４．７細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＲＡＷ２６４．７細胞を５ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌで４８ウェルプレート（ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）に接種して１５時間安定化させた後、下記表２及び３に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間の間培養液を処理した。１時間後、細胞刺激原にリポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ、ＬＰＳ）を１μｇ／ｍｌ処理して２４時間の間追加に培養した。２４時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液０．５ｍｌを回収して遠心分離機（３０００ｒｐｍ、５分間）を利用して上層液を回収した。回収された上層液でＩＬ−６水準をＭｏｕｓｅ  ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ  ｓｅｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で提供するマニュアルに従って測定した。ＥＬＩＳＡ施行前日ＩＬ−６  ｃａｐｔｕｒｅ抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）をリン酸緩衝液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）に希釈してｍｉｃｒｏｗｅｌｌにコーティングした後４℃で一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）保管した。各ｗｅｌｌを緩衝液で３回洗浄した後、２％  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）で１時間の間室温でブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）した。以後緩衝液で３回洗浄した後、各ｗｅｌｌに１００μｌずつｓａｍｐｌｅを分注して室温で２時間の間放置した後、ワッシング緩衝液で３回洗浄し、希釈した検出抗体（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を各ｗｅｌｌに分注して室温で１時間の間反応させた。１時間室温放置した後、２次ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ抗体を３０分間室温で反応させた後、緩衝液で３回洗浄して各ｗｅｌｌ当たり５０μｌ  Ｓｔｏｐ溶液を処理した後ＥＬＩＳＡ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ４５０ｎｍで吸光度を測定したし、ＩＬ−６発現減少率（ＩＬ−６  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を下記表２、表３、図１及び図２に表せた。
【００８０】
【表２】
2021516689.tif 000031
【００８１】
【表３】
2021516689.tif 000032
【００８２】
前記表２、表３、図１及び図２に表すように、ＲＡＷ２６４．７細胞に炎症誘発因子であるＬＰＳを処理すると、陰性対照群に比べて約６−１０倍程度炎症サイトカインであるＩＬ−６分泌が増加されるが（実験番号３）、すでに炎症サイトカインの発現を阻害する物質であるＥＣ−１８（１−パルミトイル−２−リノレオイル−３−アセチルグリセロール、ＰＬＡＧ）化合物が添加されるとＬＰＳ処理群よりＩＬ−６発現が約３０％程度減少する（実験番号４）。一方、本発明の化合物中、Ａ１５、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２１、Ａ２２、Ａ５７、Ａ７０−１の化合物はＲＡＷ２６４．７細胞で３０％乃至８０％のＩＬ−６サイトカイン分泌を減少させるので、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似したり優秀にＩＬ−６発現を阻害した。
【００８３】
［実験例２］ＩＬ−６で誘導されたＳＴＡＴ３活性減少
【００８４】
ＨＥＫ−ＢｌｕｅＴＭ  ＩＬ−６細胞を利用してＳＴＡＴ３誘導ＳＥＡＰ（ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）発現でＳＴＡＴ３活性を確認した。ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、ＨＥＫ−ＢｌｕｅＴＭ  ＩＬ−６細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＨＥＫ−ＢｌｕｅＴＭ  ＩＬ−６細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに接種して、下記表４に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間処理した後、ＳＴＡＴ３活性のためにＩＬ−６（５ｎｇ／ｍｌ）を２４時間の間追加に培養した。２４時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液を回収して遠心分離機（３０００ｒｐｍ、５分間）を利用して上層液を回収した。回収された上層液でＳＥＡＰ発現水準をＱｕａｎｔｉ  ｂｌｕｅ  ｒｅａｇｅｎｔと上層液を１：１０比率に混ぜて約３０分間３７℃で放置した後分光器（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）を利用して６５０ｎｍ波長でＳＥＡＰ濃度を確認したし、その結果（ＳＴＡＴ３活性阻害能）を下記表４及び図３に表せた。
【００８５】
【表４】
2021516689.tif 000033
【００８６】
前記表４及び図３に表すように、ＨＥＫ−ＢｌｕｅＴＭ  ＩＬ−６細胞にＩＬ−６サイトカインを処理すると陰性対照群に比べてＳＴＡＴ３活性が約２．３倍増加されるが（実験２）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）処理群はＩＬ−６サイトカイン処理群に比べて約２５％程度ＳＴＡＴ３活性が減少された（実験３）。一方、本発明の化合物中、Ａ１３、Ａ１６、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１８、Ａ２２化合物は大部分約２５％程度ＳＴＡＴ３活性を減少させるので、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似な程度にＳＴＡＴ３活性を減少させることを確認した。
【００８７】
［実験例３］ＩＬ−６で誘導されたＳＴＡＴ３活性減少
【００８８】
ＳＴＡＴ３と結合するｓｉｓ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔを含むｐＧＬ４．４７［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＩＥ／Ｈｙｇｒｏ］ベクターをＲＡＷ２６４．７細胞に注入してＳＴＡＴ３活性程度を確認した。ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、ＲＡＷ２６４．７細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＲＡＷ２６４．７細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで４８  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに接種して１８時間安定化させた。以後ｓｉｓ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔを含むｐＧＬ４．４７［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＩＥ／Ｈｙｇｒｏ］ベクターをＡｔｔｒａｃｔｅｎｅと一緒に混ぜて室温で１５分間複合体形成を誘導させた。この複合体を細胞に処理した後１８時間追加培養した。追加培養以後、各ｗｅｌｌに下記表５に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間処理した後、ＳＴＡＴ３活性のためにＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を処理して１８時間の間追加に培養した。１８時間後、各ｗｅｌｌ当たり培養上層液を除去して残っている細胞をＣｅｌｌ  ｌｙｓｉｓバッファで溶解（ｌｙｓｉｓ）させた後ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅを回収した。回収したｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅ  １０μｌにｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｒｅａｇｅｎｔ  ９０μｌを混ぜてＬｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒを使用して蛍光程度を確認したし、その結果を下記表５及び図４に表せた。
【００８９】
【表５】
2021516689.tif 000034
【００９０】
前記表５及び図４に表すように、ＲＡＷ２６４．７細胞にＬＰＳを処理すると陰性対照群に比べてＳＴＡＴ３活性が約２．２倍増加されるが（実験３）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）処理群は陰性対照群とほぼ類似の程度にＳＴＡＴ３活性が減少された。一方、本発明のグリセロール誘導体化合物中、Ａ８３、Ａ９３、Ａ９７、Ａ９８、Ａ９９、Ａ１００、Ａ１０１、Ａ１０２化合物は大部分陰性対照群及びＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似にＳＴＡＴ３活性が減少されることを確認した。
【００９１】
［実験例４］ＴＨＰ−１細胞でのＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）発現減少
【００９２】
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、人間ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ系列の細胞であるＴＨＰ−１細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＴＨＰ−１細胞を１ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌで１２  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに接種して３０分間安定化させた後、下記表６に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間前記培養液を処理した。１時間後、細胞刺激原としてＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ（２μｇ／ｍｌ）を処理して２４時間の間追加に培養した。２４時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液１．５ｍｌを回収して遠心分離機（３０００ｒｐｍ、５分間）を利用して上層液を回収した。回収された上層液でＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）水準をｈｕｍａｎ  ＩＬ−８  ＥＬＩＳＡ  ｓｅｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で提供するマニュアルに従って測定した。ＥＬＩＳＡ施行前日ＩＬ−８  ｃａｐｔｕｒｅ抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）をリン酸緩衝液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）に希釈してｍｉｃｒｏ  ｗｅｌｌにコーティングした後４℃で一晩保管した。各ｗｅｌｌを３回緩衝液で洗浄した後に２％  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）で１時間の間室温でｂｌｏｃｋｉｎｇした。以後緩衝液で３回洗浄した後、各ｗｅｌｌに１００μｌずつｓａｍｐｌｅを分注して室温で２時間の間放置した後、緩衝液で３回洗浄して希釈したＤｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙを各ｗｅｌｌに分注して室温で１時間の間反応させた。１時間室温放置した後、２次ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ抗体を３０分間室温で反応させた後、緩衝液で３回洗浄して各ｗｅｌｌ当たり５０μｌ  Ｓｔｏｐ溶液を処理した後ＥＬＩＳＡ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ４５０ｎｍで吸光度を測定した。測定されたＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）発現増加率を下記表６及び図５に表せた。
【００９３】
【表６】
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【００９４】
前記表６及び図５に表すように、ＴＨＰ−１細胞に抗癌剤の一種であるＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅを処理すると陰性対照群に比べて約１３倍程度好中球細胞募集因子であるＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）ケモカインの分泌を増加させるが（実験２）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）を処理すると約２０％程度ＣＸＣＬ８発現を減少させる（実験３）。一方、本発明のグリセロール誘導体化合物中、Ａ１５、Ａ１８、Ａ２１化合物はＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似な程度にＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）ケモカインの分泌を２０％程度減少させた。
【００９５】
［実験例５］ＨＬ−６０細胞株の移動減少
【００９６】
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、人間ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ系列の細胞であるＴＨＰ−１細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で継代培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。Ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ時下部ｗｅｌｌに処理するＴＨＰ−１細胞培養液を準備するために、先ず培養していたＴＨＰ−１細胞を１ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌで１２  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに接種して３０分間安定化させた後、下記表７に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間処理した。１時間後、細胞刺激原にＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ（２μｇ／ｍｌ）を処理して２４時間の間追加に培養した。２４時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液１．５ｍｌを回収して遠心分離機（３０００ｒｐｍ、５分間）を利用して上層液を回収した。回収した上層液をＣｕｌｔｒｅｘ  ９６  ｗｅｌｌ  Ｌａｍｉｎｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  ａｓｓａｙで提供するマニュアルに従って実験を進行した。本実験であるＴｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙを遂行する一日前の日上部のＩｎｖａｓｉｏｎ  Ｃｈａｍｂｅｒに１  ｘ  Ｌａｍｉｎ  Ｉ溶液を処理してコーティングした。２４時間後、ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＲＰＭＩ１６４０培地に培養したＨＬ−６０細胞を５ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｈａｍｂｅｒに分注して、下部チャンバー（ｃｈａｍｂｅｒ）には予め準備したＴＨＰ−１培養上層液を１５０μｌずつ入れてやった。２４時間の間培養した後、上部チャンバーを除去して遠心分離機で細胞を下部チャンバー床に付着し上層液は除去した。Ｃｅｌｌ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ／Ｃａｌｃｅｉｎ−ＡＭ溶液を入れて１時間反応させた後蛍光分光器を利用して出た値を細胞数に換算して計算した。ＨＬ−６０細胞の移動減少結果は下記表７及び図６に表せた。
【００９７】
【表７】
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【００９８】
前記表７及び図６で表れた通り、ＴＨＰ−１細胞に抗癌剤の一種であるＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅを処理すると陰性対照群に比べて約２倍程度好中球細胞移動が増加したし（実験２）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）を処理すると陰性対照群と類似にＨＬ−６０細胞の移動が減少した（実験３）。一方、本発明のグリセロール誘導体化合物中、Ａ２１、Ａ２２、Ａ８４、Ａ９２化合物はＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似したり更に多く細胞移動を減少させたし、特に、Ａ２２化合物はＥＣ−１８より２倍程度もっと細胞移動を減少させることを確認した。
【００９９】
［実験例６］バクテリア菌肺感染動物モデルの感染抑制試験
【０１００】
バクテリア菌肺感染マウスモデルは１２週齡Ｂａｌｂ／ｃ雄マウスをＫｏａｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｏｕｔｈ  Ｋｏｒｅａ）で購入し、適度な温度及び光サイクル下の特定病原体不在施設で維持した。肺感染を誘導するためのバクテリア菌はシュードモナス（Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ）属である緑膿菌（ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｋ（ＰＡＫ）をＬＢ培地（ＬＢ  ＢＲＯＴＨ）又はＬＢ寒天培地プレート（ＬＢ  ＡＧＡＲ  ＰＬＡＴＥ）に３７℃に一晩培養した後、培養液を２分の間１３，０００  ｘ  ｇで遠心分離してバクテリアペレットを収得した。その後、バクテリアペレットをＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）に懸濁して、系列希釈液の光学密度を測定して寒天（ａｇａｒ）プレートにプレーティングすることで一定コロニー形成単位（ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ；  ＣＦＵ）を持つバクテリア接種液を得た。２０μｌ当たり１ｘ１０５ＣＦＵ濃度の感染用バクテリア接種液を準備して、準備したＰＡＫバクテリア接種液（２０μｌ  ＰＢＳ内にマウス当たり１ｘ１０５ＣＦＵ）を総８匹の１２週齡Ｂａｌｂ／ｃマウスに鼻腔注射で投与した。ＰＡＫ投与群中４匹には本発明の化合物（ＥＣ＿Ａ２１）を２５０ｍｇ／ｋｇで経口投与したし対照群にはＰＢＳを投与した。
【０１０１】
４時間経過した後、Ｐ．緑膿菌感染マウスの気管支肺胞洗浄液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ｆｌｕｉｄ、ＢＡＬＦ）サンプルを収集した後、収集したＢＡＬＦサンプルをＰＢＳで１：１０００に希釈して、希釈されたサンプルをＬＢ寒天上にプレーティングした後、３７℃で一晩インキュベーションした。プレート計数法（ｐｌａｔｅ  ｃｏｕｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ）で生存したバクテリアの数を測定してＢＡＬＦ内ＣＦＵ水準を確認したし、その結果を下記表８、図７及び図８に表せた。
【０１０２】
【表８】
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【０１０３】
前記表８、図７及び図８に表すように、ＰＡＫ投与４時間目に肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）内バクテリアＣＦＵが急激に上昇した。反面、本発明のグリセロール誘導体中、好中球移動を多く減少させたＡ２１誘導体とＰＡＫを一緒に投与すると、４時間目に肺胞洗浄液内バクテリアＣＦＵがＰＡＫ単独投与群より顕著に低かった。前記結果はＰＡＫ感染されたマウスで本発明のグリセロール誘導体化合物が感染初期にバクテリア除去を促進させることを示す。
【０１０４】
［実験例７］ＩＬ−４で誘導されたＳＴＡＴ６活性減少
【０１０５】
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、Ａ５４９細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で継代培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＡ５４９細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで４８  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに接種して１８時間安定化させた。以後ＳＴＡＴ６結合ｐｒｏｍｏｔｅｒ部分を含むｐＧＬ４−ＳＴＡＴ６  ｒｅｐｏｒｔｅｒベクターをＡｔｔｒａｃｔｅｎｅと一緒に混ぜて室温で１５分間複合体形成を誘導させた。この複合体を細胞に処理した後２４時間追加培養した。追加培養後、各ｗｅｌｌに下記表９及び１０に表された種類のグリセロール誘導体化合物で１時間処理した後、ＳＴＡＴ６活性のためにＩＬ−４（２ｎｇ／ｍｌ又は１０ｎｇ／ｍｌ）を２０時間の間追加に培養した。２０時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液を除去して残っている細胞をＣｅｌｌ  ｌｙｓｉｓバッファで溶解（ｌｙｓｉｓ）させた後、ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅを回収した。回収したｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅ  １０μｌにｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｒｅａｇｅｎｔ  ９０μｌを混ぜてＬｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒを使用して蛍光程度を確認したし、その結果を下記表９、表１０、図９及び図１０に表せた。
【０１０６】
【表９】
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【０１０７】
【表１０】
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【０１０８】
前記表９、表１０、図９及び図１０に表すように、Ａ５４９細胞にＩＬ−４を処理すると陰性対照群に比べてＳＴＡＴ６活性がＩＬ−４処理量に従って約１２０倍から２０００倍まで増加されるが（実験２）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）を処理すると約２０％乃至５０％までＳＴＡＴ６活性が減少される（実験３）。一方、本発明のグリセロール誘導体化合物中、Ａ１４、Ａ１５、Ａ１７、Ａ２０、Ａ２１、Ａ２２、Ａ７８、Ａ７９、Ａ８３、Ａ８５、Ａ８６、Ａ８７、Ａ８８、Ａ８９、Ａ９２、Ａ９３、Ａ９４、Ａ９５、Ａ９６、Ａ９７、Ａ９８、Ａ９９、Ａ１００、Ａ１０１、Ａ１０２化合物はＥＣ−１８処理群と類似にＳＴＡＴ６活性を減少させることを確認した。
【０１０９】
［実験例８］ＰＫＣ  ａｃｔｉｖａｔｏｒで誘導されたＩＬ−４分泌減少
【０１１０】
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）を１０％添加したＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）培地に、マウスｌｙｍｐｈｏｍａ系列の細胞であるＥＬ−４細胞を１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ濃度で継代培養して、５％  ＣＯ２湿潤インキュベーターで３７℃に維持した。培養していたＥＬ−４細胞を５ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌで４８  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに接種して３０分間安定化させた後、下記表１１及び表１２に表された種類のグリセロール誘導体化合物で２時間培養液を処理した。２時間後、細胞刺激原にＰＫＣ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ（ｐ１０、ＰＭＡ一種）０．５μｇ／ｍｌを処理して１８時間の間追加に培養した。１８時間後に各ｗｅｌｌ当たり培養上層液０．５ｍｌを回収して遠心分離機（３０００ｒｐｍ、５分間）を利用して上層液を回収した。回収された上層液でＩＬ−４水準をＭｏｕｓｅ  ＩＬ−４  ＥＬＩＳＡ  ｓｅｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で提供するマニュアルに従って測定した。ＥＬＩＳＡ施行前日ＩＬ−４  ｃａｐｔｕｒｅ抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）をリン酸緩衝液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）に希釈してｍｉｃｒｏｗｅｌｌにコーティングした後４℃で一晩保管した。各ｗｅｌｌを緩衝液で３回洗浄した後に２％  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）で１時間の間室温でブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）した。以後緩衝液で３回洗浄した後、各ｗｅｌｌに１００μｌずつｓａｍｐｌｅを分注して室温で２時間の間放置した後、緩衝液で３回洗浄して希釈したＤｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙを各ウエル（ｗｅｌｌ）に分注して室温で１時間の間反応させた。１時間室温放置した後、２次ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ抗体を３０分間室温で反応させた後、緩衝液で３回洗浄して各ｗｅｌｌ当たり５０μｌ  Ｓｔｏｐ溶液を処理した後ＥＬＩＳＡ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ４５０ｎｍで吸光度を測定した。測定された発現減少率結果を下記表１１、表１２、図１１及び図１２に表せた。
【０１１１】
【表１１】
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【０１１２】
【表１２】
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【０１１３】
前記表１１、表１２、図１１及び図１２に表すように、マウスＥＬ−４細胞にＰＫＣ  ａｃｔｉｖａｔｏｒを処理すると陰性対照群に比べて急激にＩＬ−４サイトカインの分泌が増加されるが（実験２）、ＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）を処理すると約２０％乃至６０％程度ＩＬ−４発現を減少させる（実験３）。一方、本発明のグリセロール誘導体化合物中、Ａ８５、Ａ８６、Ａ８７、Ａ９１、Ａ９２、Ａ９３化合物はＥＣ−１８（ＰＬＡＧ）と類似な程度にＩＬ−４ケモカインの分泌を約２０％まで減少させた。特に、Ａ２０及びＡ２１化合物はＥＣ−１８よりもずっと強く最大８０％までＩＬ−４発現を減少させることを確認した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2021516689.tif 000080
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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