(57)【要約】本出願は、抗ＣＤ３８抗体、その抗原結合フラグメント、および医薬用途を提供する。具体的には、本出願は、抗ＣＤ３８抗体のＣＤＲ領域を含むマウス由来抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物、および薬物としてのそれらの用途を提供する。特に、本出願は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害を治療するための薬物を調製する際のヒト化抗ＣＤ３８抗体の用途を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ３８に特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは以下を含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｉ）
そのアミノ酸配列は、配列番号９に示されるか、または配列番号９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号１０に示されるか、または配列番号１０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ２；
そのアミノ酸配列は、配列番号１１に示されるか、または配列番号１１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ３；
そのアミノ酸配列は、配列番号１２に示されるか、または配列番号１２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号１３に示されるか、または配列番号１３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ２；および
そのアミノ酸配列は、配列番号１４に示されるか、または配列番号１４と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）
そのアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号１６に示されるか、または配列番号１６と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ２；
そのアミノ酸配列は、配列番号１７に示されるか、または配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ３；
そのアミノ酸配列は、配列番号１８に示されるか、または配列番号１８と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるか、または配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ２；および
そのアミノ酸配列は、配列番号２０に示されるか、または配列番号２０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）
そのアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号２１に示されるか、または配列番号２１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ２；
そのアミノ酸配列は、配列番号１７に示されるか、または配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＨＣＤＲ３；
そのアミノ酸配列は、配列番号２２に示されるか、または配列番号２２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ１；
そのアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるか、または配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ２；および
そのアミノ酸配列は、配列番号２３に示されるか、または配列番号２３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有する、重鎖ＬＣＤＲ３。
【請求項２】
前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記マウス抗体またはキメラ抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
（ａ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号３に示されるか、または配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号３に示されるか、または配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し；
（ｂ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５に示されるか、または配列番号５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５に示されるか、または配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し；または
（ｃ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号７に示されるか、または配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号７に示されるか、または配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体は、ヒト抗体に由来するフレームワーク領域またはフレームワーク領域バリアントを含むヒト化抗体であり、前記フレームワーク領域バリアントは、ヒト抗体の軽鎖フレームワーク領域および／または重鎖フレームワーク領域にそれぞれ最大１０個のアミノ酸復帰突然変異を有し、
好ましくは、前記ヒト化抗体は、以下の（ｄ）〜（ｆ）から選択されるいずれか１つを含む、請求項２に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｄ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号９に示されるか、または配列番号９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０に示されるか、または配列番号１０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は、配列番号１１に示されるか、または配列番号１１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記重鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１２に示されるか、配列番号１２と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３に示されるか、配列番号１３と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４に示されるか、配列番号１４と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、軽鎖可変領域；
（ｅ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６に示されるか、または配列番号１６と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は、配列番号１７に示されるか、または配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記重鎖フレームワーク領域は、７９Ｆ、８２Ａ  Ｔ、９１Ｓおよび７６Ｓからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１８に示されるか、配列番号１８と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２０に示されるか、配列番号２０と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、軽鎖可変領域；および
（ｆ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２１に示されるか、または配列番号２１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は、配列番号１７に示されるか、または配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸の違いを有し、前記重鎖フレームワーク領域は、４８Ｉ、７７Ｔおよび８２Ａ  Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号２２に示されるか、配列番号２２と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２３に示されるか、配列番号２３と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸の違いを有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を含む、軽鎖可変領域；
ここで、前記復帰突然変異部位は、Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って番号付けされる。
【請求項５】
前記ヒト化抗体は、配列番号２４、３２、または３７に示される重鎖可変領域、またはそのバリアントを含み、前記バリアントは、配列番号２４、３２、または３７に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０個のアミノ酸突然変異を有する、請求項４に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記バリアントは、以下の（ｇ）〜（ｉ）のいずれか１つから選択される、請求項５に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｇ）配列番号２４に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｈ）配列番号３２に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の７９Ｆおよび９１Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；および
（ｉ）配列番号３７に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の４８Ｉの復帰突然変異；
好ましくは、前記ヒト化抗体は、
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に示される重鎖可変領域、または
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域
を含む。
【請求項７】
前記ヒト化抗体は、配列番号２５、３３または３８に示される軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、前記バリアントは、配列番号２５、３３または３８に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０個のアミノ酸突然変異を有する。請求項４に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記バリアントは、以下の（ｊ）〜（ｌ）のいずれか１つから選択される、請求項７に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｊ）配列番号２５に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｋ）配列番号３３に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｌ）配列番号３８に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
好ましくは、前記ヒト化抗体は、
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域、または
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含む。
【請求項９】
以下を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｍ）配列番号２４、２６、２７、２８または２９に示される重鎖可変領域、および
配列番号２５、３０または３１に示される軽鎖可変領域；
（ｎ）配列番号３２または３４に示される重鎖可変領域、および配列番号３３、３５または３６に示される軽鎖可変領域；または
（ｏ）配列番号３７または３９に示される重鎖可変領域、および配列番号３８、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域；
好ましくは、前記ヒト化抗体は以下を含む：
（ｐ）配列番号２６に示される重鎖可変領域および配列番号３０に示される軽鎖可変領域；または
（ｑ）配列番号３２に示される重鎖可変領域および配列番号３３に示される軽鎖可変領域；または
（ｒ）配列番号３７に示される重鎖可変領域および配列番号３８に示される軽鎖可変領域。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は定常領域を含み；
好ましくは、前記抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体であり、その重鎖定常領域は、ヒト抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の従来のバリアントに由来し、その軽鎖定常領域は、ヒト抗体κ、λ鎖、またはκ、λ鎖の従来のバリアントに由来し；
より好ましくは、前記重鎖定常領域のアミノ酸配列は、配列番号４３または４４に示されるか、または配列番号４３または４４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、
より好ましくは、前記軽鎖定常領域のアミノ酸配列は、配列番号４５に示されるか、または配列番号４５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
以下を含む、請求項１０に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
配列番号４６、４８、４９、５１、５２または５４のアミノ酸配列に示されるか、または配列番号４６、４８、４９、５１、５２または５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、重鎖；および／または
配列番号４７、５０または５３のアミノ酸配列に示されるか、または配列番号４７、５０または５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、軽鎖。
【請求項１２】
請求項１１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は以下を含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
配列番号４６に示される重鎖および配列番号４７に示される軽鎖；
配列番号４８に示される重鎖および配列番号４７に示される軽鎖；
配列番号４９に示される重鎖および配列番号５０に示される軽鎖；
配列番号５１に示される重鎖および配列番号５０に示される軽鎖；
配列番号５２に示される重鎖および配列番号５３に示される軽鎖；または
配列番号５４に示される重鎖および配列番号５３に示される軽鎖。
【請求項１３】
ヒトＣＤ３８への結合について、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
以下を含む医薬組成物：
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の治療有効量の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、および
１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、緩衝液または賦形剤。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、単離された核酸分子。
【請求項１６】
請求項１５に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１７】
請求項１６に記載のベクターを含む宿主細胞であって；好ましくは、前記宿主細胞は、原核細胞および真核細胞からなる群から選択され、好ましくは真核細胞であり、より好ましくは哺乳動物細胞である、宿主細胞。
【請求項１８】
以下のステップを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを調製するための方法：
請求項１７に記載の宿主細胞を培養するステップ；
前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを回収するステップ；
任意に、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを精製するステップ。
【請求項１９】
以下を含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための方法：
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを、試験するサンプルと接触させること；
前記試験するサンプル中のヒトＣＤ３８の存在またはレベルを決定すること。
【請求項２０】
以下を含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための試薬：
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント；または
請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
疾患または障害の治療または予防のための医薬品の調製における、以下の（ｍ）〜（ｏ）のいずれかから選択される物質の使用：
（ｍ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、
（ｎ）請求項１４に記載の医薬組成物、および
（ｏ）請求項１５に記載の核酸分子；
好ましくは、前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【請求項２２】
疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患であり、
前記免疫疾患は、リウマチ性継手炎、乾癬、継手乾癬、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患、クローン病、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化、白血球接着不全、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター疾患、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症症状、溶血性貧血、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、リウマチ様皮膚炎からなる群より選択される  天疱瘡、グレーブス疾患、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群および脈絡網膜炎、移植片対宿主疾患、およびウイルス感染による免疫疾患からなる群から選択され；
好ましくは、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ぜん息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎、移植片対宿主疾患、免疫介在性血小板減少症症状からなる群から選択され；
好ましくは、前記免疫介在性血小板減少症状は、急性特発性血小板減少性紫斑病または慢性特発性血小板減少性紫斑病であり；
より好ましくは、前記免疫疾患は関節リウマチであり；
前記腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、血漿細胞悪性腫瘍および骨髄腫からなる群から選択され；
好ましくは、前記Ｂ細胞リンパ腫は、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群より選択され；
より好ましくは、前記腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄性白血病、急性または慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、前延髄腫瘍、軽鎖リンパ球性白血病、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、血漿細胞腫瘍、前延髄性腫瘍、Ｂ細胞性骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血漿細胞白血病および未分化大細胞型リンパ腫および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択され；
より好ましくは、前記腫瘍は多発性骨髄腫である、請求項２１または２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、バイオテクノロジーの分野に属する。より具体的には、本開示は、抗ＣＤ３８抗体およびその組成物の治療的使用、ならびに抗体分子を産生するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書の記載は、本開示に関する背景情報を提供するだけであり、必ずしも先行技術を構成するものではない。
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は悪性形質細胞疾患であり、腫瘍細胞は骨髄の形質細胞に由来しますが、形質細胞はＢリンパ球から発生した最終機能段階の細胞である。したがって、多発性骨髄腫はＢリンパ球リンパ腫として分類することもできる。
【０００４】
多発性骨髄腫は、単クローン性免疫グロブリンまたは軽鎖（Ｍタンパク質）の過剰産生を伴う、骨髄血漿細胞の異常増殖を特徴とする；一方、Ｍタンパク質を産生しない非分泌型ＭＭは少数例である。多発性骨髄腫では、多発性の溶骨性損傷、高カルシウム血症、貧血、腎損傷を伴うことが多い。正常な免疫グロブリンの産生が阻害されるため、各種バクテリア感染が容易に見つかる。
【０００５】
中国の国内罹患率は１００，０００人あたり２〜３人、男女比は１．６：１と推定されている。ほとんどの患者は４０歳以上であり、ほとんどの患者は６０歳以上である。現在、中国では約７万人の患者がいると推定されており、毎年世界中に約８万人の新規患者がいる。多発性骨髄腫は各種造血器腫瘍の約１０％を占める。加齢に伴い、患者数はさらに増加する傾向にある。
【０００６】
現在、多発性骨髄腫は不治の血液悪性腫ようである。現在主な処置としては、骨髄移植、多種の低分子化学療法、とくにカルフィルゾミブに代表される蛋白分解酵素阻害薬、レナリドミドに代表される免疫調節薬などがあり、多発性骨髄腫の延命効果が大きく期待されている。しかし、終末期にはほぼ必ず疾患が再発し、再燃後の平均生存期間は約９カ月に過ぎない。Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｃｏｍｐａｎｙのみから入手可能なダラツムマブ（Ｄａｒａ）は再発または難治性多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）患者において良好な結果を示したため、米国食品医薬品局はこれを画期的な成果とみなし、２０１５年１１月にＲＲＭＭ患者の処置のために製造販売を承認した。現在、Ｄａｒａと小分子を併用した複数の臨床試験が行われている。低分子薬物との併用により、有効性を大幅に向上させることができる。
【０００７】
ＣＤ３８は２５６アミノ酸の細胞外領域を有するＩＩ型膜貫通多機能タンパク質である。ある局面において、ＣＤ３８は細胞接着を引き起こすことができ、リンパ球活性化およびＢ細胞分化において役割を果たすことができる配位子ＣＤ３１を介する側方信号において役割を果たすことが間接的に実証されている。しかし、この機能に関する直接的な生化学的証拠はない。一方、ＣＤ３８はシクラーゼやヒドロラーゼとしての機能を有し、ｃＡＤＰＲ（ｃｙｃｌｉｃ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｒｉｂｏｓｅ）へのＮＡＤ（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  Ａｄｅｎｉｎｅ  Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）のｃＡＤＰＲ（ｃｙｃｌｉｃ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｒｉｂｏｓｅ）への変換をシクラーゼの作用により促進他だけでなく、ｃＡＤＰＲヒドロラーゼの作用によりｃＡＤＰＲからＡＤＰＲ（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｒｉｂｏｓｅ）へ。ＣＤ３８はＣａ２＋の流れを調節することができ、細胞内のアデノシンの産生を促進して免疫を抑制することもできる。Ｃａ２＋流の変化はインスリン分泌に影響を及ぼす可能性がある。ＣＤ３８遺伝子をノックアウトしたマウスは正常な生存を示したが、体液性免疫反応の低下、インシュリンの減少、心臓／肺筋肉欠陥などの様々な症状を示した。ヒトのＣＤ３８は、造血細胞、免疫細胞、および脳臓、膵臓、腎臓、筋肉などの種々の正常組織に発現している。ＲＮＡレベルでは前立腺と胸腺に高発現していたが、種々の血液腫瘍細胞、特に多発性骨髄腫細胞では発現レベルが有意に増加していた。また、Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂの臨床データから、多発性骨髄腫分野におけるＣＤ３８抗体の有効性と安全性が検証され、ＣＤ３８標的開発の潜在的価値が示唆された。文献における種々の研究は、ＭＭと抗ＣＤ３８抗体との処置の基礎をなす機構が主に以下を含むことを示している：
１）ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、主にエピトープおよびＩｇＧ１−Ｆｃに関係する機構；
２）アポトーシスによる直接的な殺傷効果；
３）ＣＤ３８酵素活性を阻害することによって腫瘍細胞の生存に影響を及ぼす；
４）ＣＤ３８を発現するＴｒｅｇ細胞の電位クリアランス。
【０００８】
ＣＤ３８標的は多発性骨髄腫の処置におけるホットスポットとなっている。もう一つの重要なＣＤ３８標的抗体はサノフィから入手可能なイサルツキシマブであり、これは単回使用および低分子薬物との併用についても多くの治験で使用されている。既存のデータから、ＩｓａｒｔｕｘｉｍａｂはＤａｒａｔｕｍｕｍａｂと同じ有効性および安全性を示している。現在、ＭＯＲ２０２（Ｍｏｒｐｈａｓｙｓ社）、ＴＡＫ−０７９（武田社）などの抗体が臨床に入り、前臨床研究段階にあるＣＤ３８／ＣＤ３二重特異抗体やＣＤ３８−ＣＡＲ−Ｔもある。標的としてのＣＤ３８に対する抗体に関連する他の特許は例えば、ＷＯ２００６０９９８７５、ＷＯ２００７０４２３０９、ＷＯ２００８０４７２４２、ＷＯ２０１２０９２６１２、ＷＯ２０１６１６４６５６、ＷＯ２０１７１４９１２２などに見出すことができる。
【０００９】
現在、高い選択性、高い親和性、および好ましい有効性を備えた抗体を開発し続けることが依然として緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【００１０】
本開示は、より高い親和性、インビボでのより良好な抗腫瘍活性、およびインビボでの好ましい代謝活性を有する一連のＣＤ３８抗体を提供する。具体的には、本開示は、ヒトＣＤ３８に特異的に結合するモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本開示は、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体はヒトＣＤ３８に特異的に結合し、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下に示されるようなＣＤＲを含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する：
（ｉ）それぞれ配列番号９、１０および１１に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号９、１０、および１１示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、それぞれアミノ酸配列番号１２、１３および１４に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号１２、１３および１４に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＬＣＤＲバリアント；または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１５、１６および１７に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号１５、１６、および１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、それぞれアミノ酸配列番号１８、１９および２０に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号１８、１９および２０に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＬＣＤＲバリアント；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１５、２１および１７に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号１５、２１、および１７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、それぞれアミノ酸配列番号２２、１９および２３に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、またはそれぞれ配列番号２２、１９および２３に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有するＬＣＤＲバリアント。
【００１２】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体または抗原結合フラグメントのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む）の３、２または１アミノ酸の違いを有するＣＤＲバリアントは、親和性成熟法によるスクリーニングによって得られた３つ、２つまたは１つのアミノ酸の違いを有するＣＤＲバリアントである。
【００１３】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントのヒトＣＤ３８に対する親和性（ＫＤ）は、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、または１０−１１Ｍ未満である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、マウス、キメラまたはヒト化抗体であり、好ましくは、ヒト化抗体である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗体またはキメラ抗体であり、抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３、５、７に示されるとおりであり、または配列番号３、５、７に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有し、および／または抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４、６、８に示されるとおりであり、または配列番号４、６、８に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下に示されるように、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む：
（ａ）：
そのアミノ酸配列は、配列番号３に示されるとおりであるか、または配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は、配列番号４に示されるとおりであるか、または配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域；
（ｂ）：
そのアミノ酸配列は、配列番号５に示されるとおりであるか、または配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は、配列番号６に示されるとおりであるか、または配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域；
（ｃ）：
そのアミノ酸配列は、配列番号７に示されるとおりであるか、または配列番号７に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は、配列番号８に示されるとおりであるか、または配列番号８に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体であり、ヒト化抗体はヒト生殖細胞系列に由来するフレームワーク（ＦＲ）領域またはフレームワーク領域バリアントを含み、フレームワーク領域バリアントはそれぞれ、ヒト抗体の軽鎖フレームワーク領域および／または重鎖フレームワーク領域上に１０個まで（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個まで）のアミノ酸バック突然変異を有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体が以下の（ｄ）〜（ｆ）から選択されるいずれか１つを含む：
（ｄ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号９に示されるとおりであるか、または配列番号９と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１０に示されるとおりであるか、または配列番号１０の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１１に示されるとおりであるか、または配列番号１１の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１２に示されるとおりであるか、配列番号１２と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１３に示されるとおりであるか、配列番号１３の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１４に示されるとおりであるか、配列番号１４の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、軽鎖可変領域；
（ｅ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるとおりであるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１６に示されるとおりであるか、または配列番号１６の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１７に示されるとおりであるか、または配列番号１７の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、７９Ｆ、８２Ａ  Ｔ、９１Ｓおよび７６Ｓからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１８に示されるとおりであるか、配列番号１８と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるとおりであるか、配列番号１９の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２０に示されるとおりであるか、配列番号２０の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、軽鎖可変領域；
（ｆ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号１５に示されるとおりであるか、または配列番号１５と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号２１に示されるとおりであるか、または配列番号２１の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号１７に示されるとおりであるか、または配列番号１７の配列と比較した場合に３、２または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、４８Ｉ、７７Ｔおよび８２Ａ  Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号２２に示されるとおりであるか、配列番号２２と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるとおりであるか、配列番号１９の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２３に示されるとおりであるか、配列番号２３の配列と比較した場合に３、２、または１つのアミノ酸の違いを有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上の復帰突然変異を有する、軽鎖可変領域；
ここで、上記の復帰突然変異部位はＫａｂａｔナンバリング基準に従って番号付けされ、「２Ｆ」などの上記の突然変異は、２位（Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って番号付けされた）のアミノ酸がフェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）に復帰突然変異したことを指し、「８２Ａ  Ｔ」は、８２Ａ位（Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って番号付けされた）のアミノ酸がスレオニン（ＴｈｒまたはＴ）に復帰突然変異したことを指す。
【００１８】
いくつかの実施形態において、抗体重鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ１−３＊０１とｈＪＨ４．１との組み合わせから選択されるか、またはそれに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、軽鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ３−１１＊０１とｈＪＫ４．１との組み合わせから選択されるか、またはそれに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、重鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１  ＦＲ４の組み合わせから選択されるか、またはそれに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２１】
いくつかの実施形態において、軽鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ４−１＊０１およびｈＪＫ４．１の組み合わせから選択されるか、またはそれに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２４、３２、または３７に示されるような重鎖可変領域またはそれらのバリアントを含み；前記バリアントは、上記の重鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１）のアミノ酸変異を有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸突然変異は、以下のいずれかから選択される：
（ｇ）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｈ）配列番号３２に示されるような重鎖可変領域のフレームワーク領域上の７９Ｆおよび９１Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｉ）配列番号３７に示されるような重鎖可変領域のフレームワーク領域での４８Ｉの復帰突然変異。
【００２３】
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に示される重鎖可変領域、または配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号２５、３３、または３８に示されるような軽鎖可変領域またはそれらのバリアントを含み；前記バリアントは、配列番号２５、３３、または３８のいずれかに示されるような軽鎖可変領域中に１〜１０（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１）のアミノ酸変異を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、アミノ酸突然変異は、以下の（ｊ）から（ｌ）のいずれか１つから選択される：
（ｊ）配列番号２５に示されるような軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｋ）配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
（ｌ）配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰突然変異；
ここで、前記復帰突然変異部位は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に示されるような、または配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１、または４２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、以下を含む：
（ｍ）配列番号２４、２６、２７、２８または２９に示されるような重鎖可変領域、および配列番号２５、３０または３１に示されるような軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号３２または３４に示されるような重鎖可変領域、および配列番号３３、３５または３６に示されるような軽鎖可変領域；または
（ｏ）配列番号３７または３９に示されるような重鎖可変領域、および配列番号３８、４０、４１または４２に示されるような軽鎖可変領域。
いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、以下を含む：
（ｐ）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域、および配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域；または
（ｑ）配列番号３２に示されるような重鎖可変領域、および配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域；または
（ｒ）配列番号３７に示されるような重鎖可変領域、および配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域。
【００２８】
いくつかの実施形態では抗体が定常領域をさらに含み；好ましくは抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体であり、その重鎖定常領域はヒト抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の従来のバリアントに由来し；その軽鎖定常領域はヒト抗体κ、λ鎖またはそれらの従来のバリアントに由来する。いくつかの特定の実施形態において、重鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４３または４４に示されるようなものであるか、またはそれと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有し；軽鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４５に示されるようなものであるか、またはそれと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、重鎖は、配列番号４６、４８、４９、５１、５２、または５４に示されているとおりであるか、またはそれらに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有し；かつ／または
軽鎖は、配列番号４７、５０または５３に示されるとおりであるか、またはそれらに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００３０】
いくつかの特定の実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、以下を含む：
（ｉ）配列番号４６または４８に示されるような重鎖、および配列番号４７に示されるような軽鎖；または
（ｉｉ）配列番号４９または５１に示されるような重鎖、および配列番号５０に示されるような軽鎖；または
（ｉｉｉ）配列番号５２または５４に示されるような重鎖、および配列番号５３に示されるような軽鎖。
【００３１】
いくつかの特定の実施形態において、抗ＣＤ３８抗体は、以下を含む：
（ｉｖ）配列番号４８に示されるような重鎖および配列番号４７に示されるような軽鎖；または
（ｖ）配列番号５１に示されるような重鎖および配列番号５０に示されるような軽鎖；または
（ｖｉ）配列番号５４に示されるような重鎖および配列番号５３に示されるような軽鎖。
【００３２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片がＦｃｙＩＩＩａに対する抗体のＦｃ領域またはその抗原結合断片の親和性を改変することによって達成される、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。例えば、突然変異Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌおよびそれらの組み合わせはＸｅｎｃｏｒの特許ＵＳ２００８０２６０７３１に記載されているＩｇＧ１  Ｆｃ領域上のＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ、突然変異Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅまたはそれらの組み合わせの特許ＷＯ２００８１４０６０３に記載されており、他の突然変異は当技術分野で開示されているＡＤＣＣ機能を増強することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、およびｄｓＦｖからなる群から選択される。
【００３４】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８への結合について上記の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、またはＣＤ３８抗原の同じエピトープへの結合について上記の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗ＣＤ３８抗体を提供する。
【００３５】
本発明はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片の治療有効量、および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、緩衝液、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましくは、医薬組成物が単位投与量中に０．０１〜９９質量％の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片を含有してもよく；または医薬組成物が単位投与量中に、好ましくは０．１〜２０００ｍｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇの抗体またはその抗原結合断片を含有する可能性がある。
【００３６】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸分子を提供する。
【００３７】
本開示はまた、上記の核酸分子を含むベクターを提供する。
【００３８】
本開示はまた、上記のベクターで形質転換された（または形質導入されたまたは形質移入された）宿主細胞を提供する。また、上記のベクターを含む宿主細胞を開示する。宿主細胞は原核細胞と真核細胞から選択される。いくつかの実施形態では宿主細胞がヒト胚幹細胞、受精卵、および生殖細胞などの完全な個体に発達することができるヒト細胞を含まず；好ましくは、宿主細胞は真核細胞、より好ましくは哺乳動物細胞であり、哺乳動物細胞はＣＨＯ、２９３、ＮＳＯ、および抗体のグリコシル化修飾またはその抗原結合断片を変化させるために遺伝子編集が行われる哺乳動物細胞を含み、それによって抗体のＡＤＣＣ機能またはその抗原結合断片を修飾し、例えば、ＦＵＴ８またはＧｎＴ−ＩＩＩなどの遺伝子をノックアウトし；いくつかの実施形態では哺乳動物細胞はヒト細胞を含まない。
【００３９】
本発明はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片を調製するための方法を提供し、この方法は上記の宿主細胞を培養する工程、次いで、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片を回収する工程を包含し；任意に、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片を精製する工程を包含する。
【００４０】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための方法を提供し、これは、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを、試験されるサンプルと接触させることを含む。
【００４１】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための試薬を提供し、試薬は、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【００４２】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８に関連する疾患の診断薬を提供し、診断薬は、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【００４３】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを使用してヒトＣＤ３８またはＣＤ３８陽性細胞を検出または測定することを含む、ヒトＣＤ３８に関連する疾患を診断するための方法を提供する。
【００４４】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８に関連する疾患の診断薬の調製における上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供する。
【００４５】
本発明はまた、被験体に、上記の抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合断片、またはそれらを含む医薬組成物、または上記の核酸分子の治療有効量もしくは予防的有効量を投与することを含む、疾患を治療または予防するための方法を提供する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は腫瘍である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、上述の腫瘍が白血病、Ｂ細胞リンパ腫、血漿細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、白血病が急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、骨髄腫が多発性骨髄腫、前髄腫瘍、軽鎖アミロイドーシスなどからなる群から選択される。いくつかの実施形態ではでは、リンパ腫は非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、腫瘍が例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群から選択されるＢ細胞リンパ腫／白血病である。いくつかの実施形態では腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞様リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度／中等度／高悪性度濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、血漿細胞腫瘍／血漿細胞骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血漿細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００５２】
いくつかの実施形態において、上記の疾患または障害は、ＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球、およびＴ細胞が関与する免疫疾患などの免疫疾患である。
【００５３】
いくつかの実施形態において、免疫疾患は限定されるわけではないが、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、若年性糖尿病、ライター病、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫媒介性血小板減少症症状を含む。急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、橋本病、ヴェーゲナー肉芽腫症、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群および脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ウイルス感染による免疫疾患（原因または原因）  エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって媒介される）。
【００５４】
いくつかの実施形態では、免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎、移植片対宿主病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、疾患または障害は関節リウマチである。
【００５５】
本開示はさらに、疾患または障害の治療または予防のための薬剤の調製における、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは上記の医薬組成物または核酸分子の使用を提供する。
【００５６】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【００５７】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００５８】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は腫瘍であり得、例えば、疾患は、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、上記の腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。
【００６０】
いくつかの実施形態において、白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。
【００６１】
いくつかの実施形態において、骨髄腫は、多発性骨髄腫、前髄質腫瘍、および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。
【００６３】
いくつかの実施形態において、上記の腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫／白血病であり、例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍または前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫から選択されるか、またはＢ細胞非ホジキンリンパ腫またはＢ細胞ホジキンリンパ腫から選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、上述の腫瘍がＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞様白血病、リンパ形質細胞様リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低グレード、中等度または高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、血漿細胞腫瘍、血漿細胞骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血漿細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、疾患または障害は、ＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球、およびＴ細胞が関与する免疫疾患などの免疫疾患である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、若年性糖尿病、ライター病、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症症状（例えば）からなる群から選択され得る。急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、橋本病、ウェゲナー肉芽腫症、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶ・ヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ウイルス感染による免疫疾患（病気など）  エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるか、媒介される）。いくつかの実施形態では、免疫疾患が慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ぜん息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫疾患または障害は関節リウマチである。
【００６９】
本開示はさらに、上記の疾患または障害の治療または予防に使用するための、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、あるいは医薬組成物、または核酸分子を提供する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、疾患または障害は腫瘍または免疫疾患である。いくつかの実施形態において、疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害が腫瘍である。例えば、この疾患は、ＣＤ３８発現腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、腫瘍が白血病、Ｂ細胞リンパ腫、血漿細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、白血病が急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、骨髄腫が多発性骨髄腫、前髄腫、および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。いくつかの実施形態ではでは、リンパ腫は非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、腫瘍が例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群から選択されるＢ細胞リンパ腫／白血病である。いくつかの実施形態では、腫瘍がＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病、Ｂ細胞性後リンパ球性白血病、リンパ形質細胞様リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低グレード、中等度または高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、血漿細胞腫瘍、血漿細胞骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血漿細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫ようはＢ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、腫ようは多発性骨髄腫である。
【００７２】
いくつかの実施形態において、上記の疾患または障害は、免疫疾患、例えば、ＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球、およびＴ細胞が関与する免疫疾患である。
【００７３】
いくつかの実施形態において、免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化症、多発性硬化症、レイノー症候群、若年性糖尿病、ライター病、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症症状（例えば）からなる群から選択され得る。急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、橋本病、ヴェーゲナー肉芽腫症、慢性腎不全、急性感染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、感染したＢ細胞によって引き起こされる疾患などの免疫疾患  エボラウイルス（ＥＢＶ）で。いくつかの実施形態では、免疫疾患が関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ぜん息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫疾患は関節リウマチである。
【００７４】
本発明の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、生化学的試験およびインビボ薬力学的アッセイの両方において良好な有効性を示す。抗原に対する抗体の親和性を検出するための試験において、本開示の抗体ｈｕ９ＥはヒトＣＤ３８に対して１．３１ｎＭのＫＤ値を示し、ｈｕ１１ＥはヒトＣＤ３８に対して０．５６８ｎＭのＫＤ値を示し、ｈｕ１６０ＥはヒトＣＤ３８に対して０．０５８５ｎＭのＫＤ値を示したが、対照抗体は２．３５ｎＭのＫＤ値を示し、本開示の抗体がより高い親和性を有することを示唆した（表１８）。
【００７５】
腫瘍のインビボ阻害の試験において、本開示の抗体ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅの両方が、マウスにおける腫瘍増殖を効果的に阻害発明することが見出された。１ｍｐｋの投与量でのｈｕ１１Ｅのがん抑制率は９３．１４％までであり、ｈｕ１６０Ｅは７０．０２％のがん阻害率を示したが、両者は対照抗体ダラより有意に高かった（がん阻害率は５６．８３％）（表２０）。
【００７６】
さらに、本開示の抗ＣＤ３８モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラットにおいて好ましい代謝動態特性を有し、より長い半減期およびより高い生物学的利用能を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】Ｍｏｌｐ−８細胞に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰテスト結果を示す図である（図１Ａ）。Ｄａｕｄｉ細胞に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰテスト結果を示す図である（図１Ｂ）。
【図２】マウスにおけるＣＤ３８抗体の腫瘍抑制効果を示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００７８】
・用語
本開示をより容易に理解するために、特定の技術的および科学的用語を以下に具体的に定義する。本明細書で明示的に定義されない限り、本明細書で使用される他のすべての技術的および科学的用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解される意味を有する。
【００７９】
本開示で使用されるアミノ酸の３文字コードおよび１文字コードは、Ｊ．  ｂｉｏｌ．  ｃｈｅｍ，  ２４３，  ３５５８頁（１９６８年）に記載されているとおりである。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、「抗体」は、免疫グロブリン（２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖との間のジスルフィド結合によって一緒に連結された４ペプチド鎖構造）をいう。異なる免疫グロブリン重鎖定常領域は異なるアミノ酸組成物および配列を示し、したがって、異なる抗原性を示す。したがって、免疫グロブリンは重鎖μ、δ、γ、αおよびεにそれぞれ対応する５つのタイプ（または免疫グロブリンアイソタイプ）、すなわちＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥに分けることができ、ヒンジ領域のアミノ酸組成物ならびに重鎖ジスルフィド結合の数および位置に応じて、同じタイプのＩｇをさらに様々なサブタイプに分けることができ、例えば、ＩｇＧをＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に分けることができる。軽鎖は、異なる定常領域に基づいてκ鎖またはλ鎖に分けることができる。５種類のＩｇのそれぞれはκ鎖またはλ鎖を有する。
【００８１】
抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端に隣接する約１１０個のアミノ酸配列は、可変領域（Ｆｖ領域）として知られる高度に可変であり；Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列が定常領域として知られる比較的安定である。可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）および４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。抗体の特異性を決定する３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られている。各軽鎖可変領域（ＶＬまたはＬＣＶＲ）および各重鎖可変領域（ＶＨまたはＨＣＶＲ）は３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシル末端への順序は、以下のとおりである：  ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲ領域はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指す。
【００８２】
本開示の抗体には、マウス抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体、好ましくはヒト化抗体が含まれる。
【００８３】
本明細書中で使用される場合、用語「マウス抗体」は、当該分野の知識および技術に従って調製された抗ヒトＣＤ３８モノクローナル抗体をいう。調製の間、試験被験体にＣＤ３８抗原を注射し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する。本開示の好ましい実施形態において、マウスＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、マウスκ、λ鎖またはそのバリアントの軽鎖定常領域をさらに含むか、またはマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはそのバリアントの重鎖定常領域をさらに含む。
【００８４】
「キメラ抗体」という用語は種（マウスなど）抗体の可変領域を別の種（ヒトなど）抗体の定常領域と融合させることによって得られる抗体であり、キメラ抗体は、マウス抗体誘導免疫反応を軽減することができる。キメラ抗体を調製するために、比マウスモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを最初に調製し、可変領域遺伝子をマウスハイブリドーマからクローニングし、次いで必要に応じて定常領域遺伝子をヒト抗体からクローニングする；マウス可変領域遺伝子をヒト定常領域遺伝子に連結してキメラ遺伝子を形成し、これを続いて発現ベクターに挿入することができる。最後に、キメラ抗体分子は、真核または原核システムで発現される。本開示の具体的な実施形態において、ＣＤ３８キメラ抗体の抗体軽鎖は、ヒトカッパ、ラムダ鎖またはそれらのバリアントの軽鎖定常領域をさらに含む。ＣＤ３８キメラ抗体の抗体重鎖はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の重鎖定常領域またはその従来のバリアントをさらに含み、好ましくはヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域を含み、より好ましくはＣＤＣ機能を増強するアミノ酸突然変異（Ｅ３３３Ａ突然変異など）を有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。
【００８５】
「ヒト化抗体」とはマウスのＣＤＲ上記をヒト抗体可変領域フレームワークに移植することにより生成される抗体、すなわち、ヒト生殖細胞系列抗体フレームワーク上記の種々の型において産生される抗体をいう。ヒト化抗体は多数のマウスタンパク質成分を有するキメラ抗体により誘導される異種応答を回避することができる。このようなフレームワーク上記が生殖細胞系列抗体遺伝子の上記を網羅する公開されたＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ上記は「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列上記データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃｏｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ）、ならびにＫａｂａｔ、ＥＡ、ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆタンパク質ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄに見出すことができる。免疫原性の低下に起因する活性の低下を避けるために、ヒト抗体可変領域のフレームワーク配列を最小限の復帰突然変異または復帰突然変異にかけて活性を維持することができる。本発明のヒト化抗体はまた、ファージディスプレイまたはイーストディスプレイによるＣＤＲ親和性成熟後に得られるヒト化抗体を含む。
【００８６】
ＣＤＲの移植は抗原との接点に関与する骨格残渣の変化のために、抗原に対する抗体またはその抗原結合断片の親和性の低下をもたらすことができる。このような相互作用は、高度に体細胞性の突然変異から生じ得る。従って、供与体骨格アミノ酸をヒト化抗体骨格に移植することが必要である。非ヒト抗体またはその抗原結合断片に由来する抗原結合に関与するアミノ酸残基は、動物モノクローナル抗体可変領域の配列および構造を調べることによって同定することができる。ドナーＣＤＲ骨格と生殖細胞系列との間の異なるアミノ酸残基は、関連すると考えられ得る。最も密接な関係生殖細胞系列を決定することができない場合には、その配列を亜型間で共有されている共通配列に対して、または高類似率を有するネズミ配列に対してアラインメントすることができる。骨格中のまれな残渣は体細胞の突然変異の試験結果であり、結合に重要な役割を果たすと考えられている。
【００８７】
本開示のいくつかの特定の実施形態において、ＣＤ３８ヒト化抗体の抗体軽鎖は、ヒトカッパ、ラムダ鎖、またはそれらの従来のバリアントの軽鎖定常領域非ヒト抗体またはその抗原結合断片に由来する抗原結合に関与するアミノ酸残基は、動物モノクローナル抗体可変領域の配列および構造を調べることによって同定することができる。をさらに含む。ＣＤ３８ヒト化抗体の抗体重鎖は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはその従来のバリアントの重鎖定常領域をさらに含み、好ましくはヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域を含み、より好ましくはＣＤＣ機能を強化するアミノ酸変異（Ｅ３３３Ａ変異など）を伴うＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。
【００８８】
本開示に記載されるヒト抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域の「従来のバリアント」は抗体可変領域の構成および機能を変化させない、先行技術に開示されるヒト重鎖または軽鎖定常領域バリアントを指す。例示的なバリアントには、部位特異的修飾によるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域バリアント、および重鎖定常領域上のアミノ酸置換が含まれる。特異的置換は例えば、ＹＴＥ突然変異、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異、Ｓ２２８Ｐ突然変異、Ｅ３３３Ａ突然変異、および／または突然変異であり、ノブ−ホール構造を生じる（抗体重鎖をノブ−Ｆｃおよびホール−Ｆｃの組合せを有するようにする）などである。これらの突然変異は、抗体可変部の機能に影響を与えることなく、新しい性質をもつ抗体を与えることが証明されている。
【００８９】
「復帰突然変異」という用語は、ヒト抗体に由来するＦＲ領域のアミノ酸残基を、元の抗体に由来するものに対応するアミノ酸残基に戻すことを指す。ヒト化抗体によって引き起こされる活性の低下を回避するために、通常、ヒト化抗体の可変領域は、抗体の活性を維持するために最小限の復帰突然変異を受けることができる。
【００９０】
「ヒト抗体（ＨｕＭＡｂ）」、「ヒト由来抗体」、「完全ヒト抗体」および「完全ヒト抗体」は互換的に使用することができ、ヒト由来の抗体、または抗原刺激に応答して特異的ヒト抗体を産生するために当技術分野で公知の任意の方法によって「操作」された遺伝子改変生物から得られた抗体であってもよい。一部の技術では、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子座のエレメントを、内因性重鎖および軽鎖遺伝子座が特異的にノックアウトされた、胚性幹細胞株由来の生物細胞株に導入する。トランスジェニック生物はヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、この生物は、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用することができる。ヒト抗体はまた、重鎖および軽鎖が、ヒト供給源の１つ以上のＤＮＡに由来するヌクレオチド配列によってコードされるような抗体であり得る。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体形質トランスフェクション法およびファージディスプレイ法によって構築することもでき、またはインビトロで活性化されたＢ細胞から構築することもでき、すべての方法は当技術分野で公知である。
【００９１】
「完全長抗体」、「完全抗体」、「全抗体」および「完全抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、以下に定義される抗原結合フラグメントとは区別される、実質的に完全な形態の抗体を指す。この用語は、特に、軽鎖および重鎖に定常領域を含む抗体を指す。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本発明の全長抗体が以下の表１に示すように、軽鎖可変領域を軽鎖定常領域に連結し、重鎖可変領域を重鎖定常領域に連結することによって形成される全長抗体を含む。当業者は、ヒト抗体由来軽鎖定常領域（またはその従来のバリアント）および重鎖定常領域（またはその従来のバリアント）などの、必要に応じて様々な抗体源から軽鎖定常領域および重鎖定常領域を選択することができる。同時に、表１に記載の軽鎖および重鎖可変領域の組合せは、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、高速原子衝撃、またはｓｃＦｖもしくは高速原子衝撃を含む他の形態の抗原結合断片を形成することができる。
【００９３】
【表１】
2021536254.tif 000002
【００９４】
注：例えば、「ｈ００９−０１Ｖ」は、重鎖可変領域はｈ００９ＶＨ１（配列番号２４）であり、軽鎖可変領域はｈ００９ＶＬ１（配列番号２５）であるｈ００９−０１Ｖの軽鎖／重鎖可変領域のペアなどを表す。
【００９５】
「モノクローナル抗体」という語は実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は考えられるバリアント抗体（例えば、通常最小量で存在する、モノクローナル抗体調製物の作製中に産生される天然に存在する突然変異または突然変異を含むバリアント）を除いて、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、モノクローナル抗体調製物（剤型）のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、接頭辞「モノクローナル」は実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特性を示し、特定の方法によって製造される抗体と解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は様々な技術（ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む遺伝子導入動物を使用する方法を含むが、これらに限定されない）によって調製され得る。このような方法、およびモノクローナル抗体を調製するための他の例示的な方法は、本明細書中に記載される。
【００９６】
抗体の「抗原結合断片」または「機能的断片」という用語は抗原（例えば、ＣＤ３８）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）高速原子衝撃断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィドブリッジ部によって連結された２つの高速原子衝撃断片によって形成される二価断片；（ｉｉｉ）抗体の一方のアームのＶＨおよびＶＬドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）鎖間ジスルフィド結合を介してＶＨおよびＶＬによって形成される安定な抗原結合断片であるｄｓＦｖ；ならびに（ｖ）ダイアボディ、二重特異性抗体およびｓｃＦｖ、ｄｓＦｖなどの断片を含む多重特異性抗体を含む。高速原子衝撃．。さらに、Ｆｖ断片中のＶＬドメインおよびＶＨドメインは２つの別個の遺伝子によってコードされる；しかし、それらは、組換え方法を使用することによって、合成リンカーによって連結されて、ＶＬドメインおよびＶＨドメイン（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  ４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）を対合することによって、一価の分子が形成される単タンパク質鎖を生成し得る。このような一本鎖抗体はまた、「抗原結合断片」という語に含まれることが意図される。このような上記ボディ断片は、当該分野で公知の従来の技術を使用して得られ、そして無傷の上記体についてのものと同じ方法を使用することによって機能性断片についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、または完全な免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的消化によって産生され得る。抗体は異なるアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４亜型）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体の形成であり得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗原結合断片としてはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、二量体化Ｖ領域（ダイアボディ）、ジスルフィド結合により安定化されたＶ領域（ｄｓＦｖ）などが挙げられる。
【００９７】
Ｆａｂは、ＩｇＧ抗体分子をパパイン（Ｈ鎖の２２４位のアミノ酸残基を切断する）で処理することによって得られる抗体フラグメントである。得られたフラグメントは、分子量が約５０，０００であり、Ｎ末端側のＨ鎖の約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合を介して結合している抗原結合活性を有する。
【００９８】
本開示のＦａｂは、本開示のモノクローナル抗体をパパインで処理することによって生成することができる。さらに、Ｆａｂは、抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、そのベクターを原核生物または真核生物に導入してＦａｂを発現させることにより作製することができる。
【００９９】
「Ｆ（ａｂ’）２」は、ヒンジ領域の２つのジスルフィド結合の下流部分でペプシンによってＩｇＧを消化することによって得られる、分子量が約１００，０００で抗原結合活性を有する抗体フラグメントを指す。Ｆ（ａｂ’）２には、ヒンジ領域で接続された２つのＦａｂが含まれている。
【０１００】
本開示のＦ（ａｂ’）２は、本開示のモノクローナル抗体をペプシンで処理することによって生成することができる。また、Ｆ（ａｂ’）２は、以下に説明するＦａｂ’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合を介して結合することによって生成できる。
【０１０１】
「Ｆａｂ’」は約５０，０００の分子量を有し、抗原結合活性を有する抗体断片であり、上記のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域でジスルフィド結合を切断することによって得られる。本開示のＦａｂ’は、本開示のＦ（ａｂ’）２をジチオトレイトールなどの還元剤で処理することによって製造することができる。さらに、Ｆａｂ’は抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、Ｆａｂ’を発現させるためにベクターを原核生物または真核生物に導入することによって産生することができる。
【０１０２】
用語「単鎖抗体」、「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、リンカーによって抗体軽鎖可変ドメイン（または領域；  ＶＬ）に連結された抗体重鎖可変ドメイン（または領域；  ＶＨ）を含む分子を指す。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ２−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＯＯＨまたはＮＨ２−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ＣＯＯＨの一般構造を有する。先行技術における適切なリンカーは繰り返しＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアント、例えば、１〜４繰り返しを有するバリアントからなる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８）。本開示において使用することができる他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８：７２５−７３１，  Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１），  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：９４−１０６，  Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５６：３０５５−３０６１，  Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９），  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９３：４１−５６  ａｎｄ  Ｒｏｏｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌによって記載されている。
【０１０３】
本開示のｓｃＦｖは、以下の工程によって産生され得る：本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得る工程、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築する工程、ＤＮＡを原核生物または真核生物発現ベクターに挿入する工程、次いで発現ベクターを原核生物または真核生物に導入してｓｃＦｖを発現させる工程。
【０１０４】
「ダイアボディ」は、ｓｃＦｖが二量体化された抗体フラグメントであり、二価「Ｆａｂ’」は約５０，０００の分子量を有し、抗原結合活性を有する抗体断片であり、上記のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域でジスルフィド結合を切断することによって得られる。の抗原結合活性を有する抗体フラグメントである。二価抗原結合活性において、２つの抗原は、同じであっても異なっていてもよい。
【０１０５】
二重特異性および多重特異性抗体とは、ＣＤ３８に結合できるｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントを含む、２つ以上の抗原または抗原決定基に同時に結合できる抗体を指す。
【０１０６】
本開示のダイアボディは、本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得る工程、８以下のアミノ酸残基のリンカーペプチドの長さを作製するためにｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築する工程、原核生物または真核生物発現ベクターにＤＮＡを挿入する工程、次いで、ダイアボディを発現するために発現ベクターを原核生物または真核生物に導入する工程によって産生され得る。
【０１０７】
「ｄｓＦｖ」はＶＨおよびＶＬの各々における１つのアミノ酸残基をシステイン残基で置換し、次いで、２つのシステイン残基間のジスルフィド結合を介して置換されたポリペプチドを連結することによって得られる。システイン残基で置換されるアミノ酸残基は、公知の方法（タンパク質Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７、６９７（１９９４））に従って、抗体の三次元構造予測に基づいて選択することができる。
【０１０８】
本開示のｄｓＦｖは、以下の工程によって産生され得る：本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得る工程、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築する工程、ＤＮＡを原核生物または真核生物発現ベクターに挿入する工程、次いで発現ベクターを原核生物または真核生物に導入してｄｓＦｖを発現させる工程。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）」という用語は、可変ドメイン（ＶＬまたはＶＨのいずれか）の一部を指し、これは、可変ドメインにおける抗原結合ループ（ＣＤＲ）の足場として機能する。基本的に、これはＣＤＲのない可変ドメインである。
【０１１０】
「アミノ酸差異」または「アミノ酸突然変異」という語はポリペプチドとそのバリアントとの間の差異または突然変異を指し、元のタンパク質またはポリペプチドに基準１、２、３またはそれ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含む、元のタンパク質またはポリペプチドと比較した場合にタンパク質またはポリペプチドバリアント中に存在するアミノ酸変化または突然変異を指す。
【０１１１】
「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」または「超可変領域」という用語は抗原結合に主に寄与する抗体可変ドメインに存在する６つの超可変領域のうちの１つを指し、一般的に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、「Ｋａｂａｔ」番号基準（Ｋａｂａｔら（１９９１）、「免疫学的関心のタンパク質の配列」、第５版、米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤを参照）、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号基準（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７）、ＪＭＢ  ２７３：９２７−９４８）およびＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号基準（Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ、７、１３２１３６（１９９９）；  Ｌｅｆｒａｎｃ、ＭＰ、ｅｔｃＤｅｖ．を参照）を含む、任意の周知の基準によって決定することができる。例えば、古典的フォーマットについてはＫａｂａｔ基準に従うことができ、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲ酸残基は３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）として番号付けされ；軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲ酸残基は２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）として番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａ基準に従い、ＶＨ中のＣＤＲ酸残基を２６−３２（ＨＣＤＲ１）、５２−５６（ＨＣＤＲ２）および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けし、ＶＬ中の酸残基を２６−３２（ＬＣＤＲ１）、５０−５２（ＬＣＤＲ２）および９１−９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けする。ＣＤＲを定義するためにＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方を組み合わせることによって、ＣＤＲは、ヒトＶＨにおける酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬにおける酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）から構成される。ＩＭＧＴ基準に従って、ＶＨ中のＣＤＲ酸残基はおおよそ２６〜３５（ＣＤＲ１）、５１〜５７（ＣＤＲ２）および９３〜１０２（ＣＤＲ３）と番号付けされ、ＶＬ中のＣＤＲ酸残基はおおよそ２７〜３２（ＣＤＲ１）、５０〜５２（ＣＤＲ２）および８９〜９７（ＣＤＲ３）と番号付けされる。ＩＭＧＴ基準に従い、ＩＭＧＴ／ドメインギャップアラインプログラムを用いて抗体のＣＤＲ領域を決定することができる。
【０１１２】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位（例えば、ＣＤ３８分子上の特定部位）をいう。エピトープは、典型的には固有の空間コンホメーションにおいて、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５の連続または非連続アミノ酸を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ。６６、ＧＥＭｏｒｒｉｓ  Ｅｄ（１９９６）を参照されたい。
【０１１３】
「特異的に結合する」または「選択的に結合する」という用語は、抗原上の所定のエピトープへの抗体の結合を指す。典型的には、抗体は、約１０−８Ｍ未満、例えば、約１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたは１０−１１Ｍまたはそれ以下の親和性（ＫＤ）で結合する。
【０１１４】
「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指す。典型的には、本開示の抗体は、約１０−７Ｍ未満、例えば、約１０−８Ｍ、１０−９Ｍまたは１０−１０Ｍ、あるいはそれ以下、例えば、約１０−７Ｍ未満のＢＩＡＣＯＲＥ機器の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定される解離平衡定数（ＫＤ）でＣＤ３８に結合する。
【０１１５】
「競合」という語が同じエピトープについて競合する抗原結合タンパク質（例えば、中和抗原結合タンパク質または中和抗体）の文脈において使用される場合、競合は試験されるべき抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）が一般的な抗原（例えば、ＣＤ３８抗原またはその断片）に対する参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンドまたは参照抗体）の特異的結合を妨げるかまたは阻害する（例えば、減少させる）アッセイによって決定される抗原結合タンパク質の間で生じることを意味する。抗原結合タンパク質が別のものと競合するかどうかを決定するために、多数のタイプの競合結合アッセイが利用可能である。これらのアッセイは例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉら、１９８３、酵素学の方法９：  ２４２−２５３を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄら、１９８６、ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１３７：  ３６１４−３６１９；  Ｃｈｅｕｎｇら、１９９０、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：  ５４６−５５２）；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照）；Ｉ−１２５標識を有する固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌら、１９８８、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌを参照）である。２５：  ７−１５）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ、１９９０、ＳｃａｎｄＪＩｍｍｕｎｏｌ。３２：  ７７−８２）。典型的には、本アッセイが非標識試験抗原結合タンパク質および標識基準抗原結合タンパク質の両方に結合することができる精製抗原の使用を含む（抗原が固体表面または細胞表面上にある）。競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞表面に結合した標識の量を測定することによって決定される。通常、試験抗原結合タンパク質は過度に存在する。競合的アッセイ（競合的抗原結合タンパク質）によって同定される抗原結合タンパク質には、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質；および参照抗原結合タンパク質が結合するエピトープに十分に近いエピトープに結合する抗原結合タンパク質が含まれ、ここで２つのエピトープは互いに空間的に干渉し、それによって結合を妨害する。競合的結合を決定するための方法に関するさらなる詳細は、本明細書の実施例において提供される。典型的には競合抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、それは一般的な抗原に対する基準抗原結合タンパク質の特異的結合の少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上を阻害（例えば、減少）する。場合によっては、結合が少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％またはさらに多く阻害される。
【０１１６】
本明細書で使用する「核酸分子」という用語はＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を指す。核酸分子が一本鎖または二本鎖であってもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。核酸は別の核酸配列と機能的関係に置かれる場合、「作動可能に連結される」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結される。
【０１１７】
「ベクター」または「発現ベクター」という用語はそれが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指し、一実施形態ではベクターは「プラスミド」であり、これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。本明細書に開示されているベクターはそれらが導入される宿主細胞内で自己複製することが可能であるか（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）、または宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に組み込まれ、それにより宿主ゲノムとともに複製されることができる（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）。
【０１１８】
抗体およびその抗原結合断片を産生および精製するための方法は当該分野で周知であり、例えば、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５−８および１５。例えば、マウスはヒトＣＤ３８またはその断片で免疫化され得、次いで、得られた抗体は当該分野で周知の従来の方法を使用することによって、アミノ酸配列について、再生され、精製され、そして配列決定され得る。抗原結合断片はまた、従来の方法によって調製され得る。本発明の抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ上に１つ以上のヒトＦＲ領域を移植するように操作される。ヒトＦＲ生殖細胞系列配列はそれらのウェブサイトｈｔｔｐ：／／ＩＭＧＴ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒを介して免疫遺伝学（ＩＭＧＴ）から、またはＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ、２００１、ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から、ＭＯＥソフトウェアを用いてＩＭＧＴヒト抗体バリアント生殖細胞系列遺伝子データベースに対して整列させることによって得ることができる。
【０１１９】
「宿主細胞」という用語は、発現ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞には、微生物（バクテリアなど）、植物または動物細胞が含まれ得る。形質転換されやすい細菌には、エシェリヒア属大腸菌またはサルモネラ菌の歪みのような腸内細菌科のメンバー；枯草菌のようなバチルス科；肺炎球菌；レンサ球菌およびインフルエンザ菌が含まれる。好適な微生物としては、サッカロミセス・セレビシエおよびピキア・パストリスが挙げられる。適切な動物宿主細胞株には、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）およびＮＳ０細胞が含まれる。
【０１２０】
本発明の操作された抗体またはその抗原結合断片は、公知の方法を使用して調製および精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ発現ベクターに操作することができる。次いで、組換え免疫グロブリンを発現するベクターは、ＣＨＯ細胞に安定にトランスフェクトされ得る。当該分野で周知のより推奨される方法として、哺乳動物発現系は、典型的にはＦｃ領域中の高度に保存されたＮ−末端部位において、グリコシル化を生じる。ヒトＣＤ３８に特異的に結合する抗体を発現する安定なクローンを得た。陽性クローンは、抗体産生のためのバイオリアクター中の無血清培養培地中で増殖させることができる。抗体が分泌された培養培地は、従来の技術によって精製され得る。例えば、精製は、緩衝液で修飾されたタンパク質ＡまたはＧセファロースＦＦコラムで行うことができる。非特異的結合成分を洗浄により除去する。結合した抗体をｐＨ傾きによって溶出し、抗体断片をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって検出し、次いでプールする。抗体は一般的な技術を用いて濾過し、濃縮することができる。水溶性混合物および集合体は、サイズ排除またはイオン交換などの一般的な技術によって効果的に除去することができる。得られた生成物は、−７０℃などで直ちに凍結するか、または凍結乾燥する必要がある場合がある。
【０１２１】
「投与」、「投与する」または「処置」は動物、ヒト、被験体、細胞、組織、臓器、または生体液に適用されるように、動物、ヒト、治療方法、診断薬、診断薬、または組成物を動物、ヒト、被験体、細胞、細胞、組織、臓器、または生体液と接触させることを指し、「投与する」または「処置」は例えば、治療方法、薬物動態、診断、研究、実験方法を指し得る。細胞の処置は試薬を細胞と接触させることを含み、流体と接触させる。「投与する」、「投与する」または「処置」は細胞のインビトロまたはエクスビボ処置、例えば、試薬、診断、結合化合物、または別の細胞と接触させることも意味する。「処置」はヒト、獣医学、または研究被験体に適用されるように、治療方法処置、予防または予防措置および診断アプリケーションを指す。
【０１２２】
「処置」とは、本発明の抗体またはその抗原結合断片のいずれかを含む組成物などの治療方法剤、または抗体またはその抗原結合断片を符号化する核酸分子を、治療方法作用を有することが知られている１つ以上の疾患症状を有する被験体の内部または外部に投与することを意味する。典型的には、薬剤が臨床的に測定可能な程度でそのような症状の退縮を誘導することによって、またはその進行を阻害することによって、治療される患者または集団における１以上の疾患症状を軽減するために効果的な量で投与される。任意の特定の疾患症状（「治療有効量」とも呼ばれる）を軽減するのに効果的な治療方法剤の量は、患者の疾患の状態、年齢、および体重、ならびに患者において所望の反応を引き出す薬物の能力などの様々な要因に従って変化上記。疾患症状が緩和されたかどうかは、その症状の重症度または進行状況を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって一般的に使用される任意の臨床計測によって評価することができる。本発明の一実施形態（例えば、処置法または製品）はそれぞれの標的疾患症状を軽減するのに効果的ではないかもしれないが、生徒ｔ検定、カイ二乗検定、マンおよびホイットニーによるＵ検定、クルスカル・ウォリス検定（Ｈ検定）、ジョンケア・テルプストラ検定、およびウィルコクソン検定など、当技術分野で知られている任意の統計的検定によって決定されるような統計的に有意な数の被験体において、標的疾患症状を軽減すべきである。
【０１２３】
「保存的上記」または「保存的置換または置換」はタンパク質の生物学的活性に影響を及ぼすことなく頻繁に変更を行うことができるように、類似の特徴（例えば、充電、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、背骨コンホメーションおよび硬さなど）を有する他のアミノ酸でのタンパク質中のアミノ酸の置換を指す。当業者は一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識する（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ、Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂを参照のこと）。株式会社、第２２４頁（第４版）。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換は、以下の表２「例示的なアミノ酸保存的置換」に記載される。
【０１２４】
表２．例示的なアミノ酸保存的置換
【表２】
2021536254.tif 000003
【０１２５】
「有効量」または「有効投与量」は、任意の１つ以上の有利なまたは所望の結果を得るのに要する薬剤、化合物、または医薬組成物の量を指す。予防的適用のために、有益なまたは所望の結果は、状態の生化学的、組織学的、および行動学的症状、その複雑化、ならびに状態の発生の間の中間体の病理学的表現型を含む、危険性の排除または減少、重症度の減少、または疾患の発症の遅延を含む。治療方法の適用について、有益なまたは所望の結果は臨床結果（例えば、本開示の標的抗原に関連する種々の状態の発生率の減少、または状態の１つ以上の症状の改善、状態を処置するために必要とされる他の薬剤の投与量の減少、別の薬剤の効力の向上、および／または患者における本開示の標的抗原に関連する状態の進行の遅延）を含む。
【０１２６】
「外因性」とは、状況に応じて、生物、細胞、または人間の外部で生成される物質を指す。
【０１２７】
「内因性」とは、状況に応じて生物、細胞、または人体の内部で生成される物質を指す。
【０１２８】
本開示において言及される「変異配列」は、適切な置換、挿入または欠失によって本開示のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を修飾した後に得られる、本開示のものと配列アイデンティティ割合が変化するヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。本開示に記載される配列同一性は少なくとも８５％、９０％または９５％、非限定的な例としては８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％が挙げられる。
【０１２９】
本明細書中で使用される場合、「相同性」または「アイデンティティ」は、２つのポリヌクレオチド配列間または２つのポリペプチド配列間の配列類似性をいう。比較されるべき２つの配列の両方における位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占有される場合（例えば、２つのＤＮＡ分子の各々における位置が同じ塩基によって占有される場合）、その分子は、その位置において相同であるとして公知である。２つの配列間の相同性のパーセントは２つの配列によって共有される一致するまたは相同な位置の数を、比較されるべき全位置の数で割り、次いで１００を掛ける関数である。例えば、２つの配列が最適に整列される場合、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致または相同である場合、２つの配列は６０％相同であり；２つの配列中の１００個の位置のうち９５個が一致または相同である場合、２つの配列は９５％相同である。一般に、比較されるべき２つの配列は、最大の相同性割合を与えるためにアラインメントに供される。例えば、この比較はＢＬＡＳＴアルゴリズムによって実施され得、ここで、このアルゴリズムのパラメーターは各参照配列の全長にわたる各配列間の最大のマッチングを与えるように選択される。以下の参考文献は配列解析のために頻繁に使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに言及する：  ＢＬＡＳＴアルゴリズム（ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ）：  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０；  Ｇｉｓｈ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．  ３：２６６−２７２；  Ｍａｄｄｅｎ，  ＴＬ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２６６：１３１−１４１；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２；  Ｚｈａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ７：６４９−６５６。ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴから入手可能なものような上記従来のＢＬＡＳＴアルゴリズムもまた、当業者に公知である。
【０１３０】
本明細書中で使用される場合、式「細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」は互換的に使用され、そして全てのそのような名称は子孫を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」は継代の回数にかかわらず、一次被験体細胞およびそれに由来する培養物を含む。また、意図された、あるいは意図されていない突然変異のために、すべての子孫がＤＮＡ含量において正確に同一ではない可能性があることも理解すべきである。元来形質転換された細胞でスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する突然バリアント子孫が含まれる。異なる名称が意図される場合、文脈から明確に理解されるのであろう。
【０１３１】
本明細書中で使用される場合、「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」は、微量の核酸、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの特定の部分が例えば、米国特許第４，６８３，１９５号に記載されるように増幅される手順または技術をいう。一般に、オリゴヌクレオチドプライマーが設計され得るように、目的の領域の端部またはそれを超える配列情報が利用可能である必要があり；これらのプライマーは、増幅されるテンプレートの相補鎖の配列と同一または類似である。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅された物質の端部と同一であり得る。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、全ゲノム由来の特定のＤＮＡ配列および全細胞ＲＮＡ、バクテリオファージまたはプラスミド配列から転写されたｃＤＮＡなどを増幅するために使用することができる。一般的には、Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．  Ｏｕａｎｔ．  Ｂｉｏｌ．  ５１：２６３；  Ｅｒｌｉｃｈ  ｅｄｉｔｏｒ，  （１９８９）  ＰＣＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  （Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ）を参照のこと。本発明において使用されるＰＣＲは試験される核酸サンプルを増幅するためのポリメラーゼ反応方法の１つ（ただし、唯一ではない）の実施例であると考えられる。この方法は、核酸の特定の部分を増幅または生成するための、核酸ポリメラーゼと一緒のプライマーとして公知の核酸配列の使用を包含する。
【０１３２】
「単離された」とは指定された分子が核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残屑や増殖培地のような他の物質のような他の生物学的分子を実質的に含まない精製された状態をいう。通常、「単離された」とは本明細書に記載の化合物の実験的または治療方法的使用を著しく妨害する量で存在しない限り、これらの物質が完全に存在しないこと、または水、緩衝液または塩が存在しないことを意味するものではない。
【０１３３】
「任意の」または「任意に」は後に続く事象または状況が起こり得るが必ずしも起こらないことを意味し、説明は事象または状況が起こる場合または起こらない場合を示す。例えば、「任意に１〜３抗体重鎖可変領域を含む」は特定の配列を有する抗体重鎖可変領域が存在し得るが、存在する必要はないことを意味する。
【０１３４】
「医薬組成物」は、本発明による１つ以上の抗体またはその抗原結合断片と、生理学的／薬学的に許容される担体または賦形剤などの他の化学成分とを含む混合物を指す。本医薬組成物は生物への投与を促進し、活性成分の吸着を促進し、それによって生物学的作用を発揮することを目的とする。
【０１３５】
「薬学的に許容される担体」という語は、抗体または抗原結合断片の送達のための剤型における使用に適した任意の不活性物質を指す。担体は、抗接着剤、結合剤、被覆剤、崩壊剤、充填剤または希釈剤、防腐剤（抗酸化剤、抗菌剤または防黴剤など）、甘味料、吸着遅延剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などであり得る。好適な薬学的に許容される担体としては、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）デキストロース、植物油（例えば、オリーブ油）、生理食塩水、緩衝液、緩衝化生理食塩水、および等張剤（例えば、糖、ポリオール、ソルビトールおよび塩化ナトリウム）が挙げられる。
【０１３６】
「ＣＤ３８陽性疾患または障害」は、ＣＤ３８発現細胞が存在する疾患または障害である。限定することなく、ＣＤ３８発現Ｂ細胞、血漿細胞、単球およびＴ細胞が関与する免疫疾患に関して、疾患の１つの特性は例えば、ＣＤ３８発現白血病、Ｂ細胞リンパ腫、血漿細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫などのＣＤ３８発現腫瘍細胞を伴う腫瘍疾患である。本開示のいくつかの実施形態でに、白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、骨髄腫が多発性骨髄腫、前髄腫、および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。いくつかの実施形態ではでは、リンパ腫は非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では腫瘍がＢ細胞リンパ腫／白血病から選択され得るが、これに限定されない：前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫またはＢ細胞ホジキンリンパ腫、成熟Ｂ細胞腫瘍。いくつかの実施形態では、腫瘍がＢ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病、Ｂ細胞性後リンパ球性白血病、リンパ形質細胞様リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低グレード、中等度または高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキットリンパ腫、血漿細胞腫瘍、血漿細胞骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、血漿細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫ようは多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態において、免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化症、白血球接着不全、レイノー症候群、若年性糖尿病、ライター病、免疫複合体腎炎、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症症状（例えば）からなる群から選択され得る。急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、橋本病、ウェゲナー肉芽腫症、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶ・ヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ウイルス感染による免疫疾患（病気など）エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるか、媒介される）。いくつかの実施形態では、免疫疾患が関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ぜん息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫疾患は関節リウマチである。
【０１３７】
さらに、本発明は標的抗原（例えば、ＣＤ３８）陽性細胞に関連する疾患の処置または予防のための薬剤を提供する。薬剤は活性成分として本発明の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片を含み、治療的または予防的に有効な量の薬剤を、ＣＤ３８陽性疾患の処置または予防を必要とする被験体に投与することができる。抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３８によって誘導される疾患関連活性を阻害するか、またはＣＤ３８発現細胞の数を排除または減少させることができる。組成物の治療的または予防的に有効な量は、単位投与量において、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合断片０．１〜３０００ｍｇ（好ましくは０．１〜２０００ｍｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇ）を上昇させる。
【０１３８】
さらに、本開示は標的抗原（例えば、ＣＤ３８）の免疫検出または決定のための方法、標的抗原の免疫検出または決定のための試薬（例えば、ＣＤ３８）、標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ３８）の免疫検出または決定のための方法、ならびに標的抗原（例えば、ヒトＣＤ３８）を特異的に認識し、それに結合する本開示の抗体または抗体断片を活性成分として含む、標的抗原に関連する疾患を診断するための診断薬（例えば、ＣＤ３８）に関する。
【０１３９】
本開示において、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）の量を検出または測定するための方法は、任意の既知の方法であり得る。例えば、それはイムノアッセイまたは免疫検出法を含む。
【０１４０】
イムノアッセイまたは免疫検出法は、標識された抗原または抗体を用いて抗体または抗原の量を検出または測定する方法である。イムノアッセイまたは免疫検出法の例には、放射性物質（ＲＩＡ）で標識された抗体を使用するイムノ法、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、発光イムノアッセイ、ウエスタンブロッティング、物理化学的方法などが含まれる。
【０１４１】
上記のＣＤ３８陽性細胞に関連する疾患は、本開示の抗体またはその抗体フラグメントを使用してＣＤ３８発現細胞を検出または測定することによって診断することができる。
【０１４２】
ポリペプチドを発現する細胞は、既知の免疫検出法によって、好ましくは免疫沈降、蛍光細胞染色、免疫組織化学染色などによって検出することができる。また、ＦＭＡＴ８１００ＨＴＳシステム（アプライドバイオシステムズ）を用いた蛍光抗体の染色法などの方法も利用できる。
【０１４３】
本開示において、組織細胞、血液、血漿、血清、膵臓分泌物、尿、糞便、組織液または培地などの標的抗原（例えばＣＤ３８）を発現する細胞を含むことが可能である限り、標的抗原（例えばＣＤ３８）について検出または測定されるサンプルは特に限定されない。
【０１４４】
必要とされる診断法に応じて、本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片を含む診断薬はまた、抗原−抗体反応を実施するための試薬、または反応を検出するための試薬を含み得る。抗原抗体反応を行うための試薬としては、緩衝液、塩等が挙げられる。検出のための試薬には、イムノアッセイまたは免疫検出法において一般に使用される薬剤、例えば、モノクローナル抗体、抗体断片またはその結合体を認識する標識二次抗体、および標識に対応する基質が含まれる。
【０１４５】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、上記の説明に記載されている。好ましい方法および材料は以下に記載されるが、本明細書に記載されるものと類似または同一の任意の方法および材料が、本開示の実施または試験において使用され得る。本明細書および特許請求の範囲を通じて、本開示の他の特徴、目的、および利点が明らかになるのであろう。
【０１４６】
本明細書および特許請求の範囲において、単数形はまた、文脈が明らかにそわないことを示さない限り、その複数の対応物を指す。本明細書で特に明示的に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書に引用される全ての特許および刊行物は、参照により組み込まれる。以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態をより完全に例示するために提供される。これらの実施例は本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、本開示の範囲は特許請求の範囲によって定義される。
【実施例】
【０１４７】
・実施例および試験例
以下の実施例および試験例は本開示をさらに記載するために提供されるが、本開示の範囲を限定することは意図されない。本開示の実施例および試験例において特定の条件が示されていない実験方法は一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、ｂｙ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙなどの従来の条件に従って、または製造業者によって推奨される条件に従って実施される。供給源が特に示されていない試薬は、市販の試薬である。
【０１４８】
（実施例１）ＣＤ３８抗原の調製
本発明で用いた抗原およびタンパク質のアミノ酸配列はＣＤ３８テンプレートとしてＵｎｉＰｒｏｔ  ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｃｙｃｌｉａｓｅ／Ｃｙｃｌｉｃ  ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ１（ヒトＣＤ３８タンパク質、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ２８９０７）を用いて設計し、必要に応じて、種々のタグ（例えば、ＨｉｓタグまたはＦｃ）をＣＤ３８タンパク質上に融合させた。本発明で使用される抗原および検出タンパク質は、ｐＴＴ５ベクター（バイオベクター、カタログ番号：１０２７６２）またはｐＴａｒｇｅＴベクター（プロメガ、Ａ１４１０）にそれぞれクローニングすること、２９３細胞で一過性に発現すること、またはＣＨＯ−Ｓ細胞で安定に発現すること、および精製を含む方法によって得られた。
【０１４９】
ＣＤ３８細胞外ドメインとマウスＩｇＧ２ａ−Ｆｃの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−ｍＦｃ、免疫原として使用。
【化１】
2021536254.tif 000004
注：下線部分はマウスＩｇＧ２ａ−Ｆｃ部分を表す。
【０１５０】
ＣＤ３８細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１Ｆｃの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ、免疫原として使用。
【化２】
2021536254.tif 000005
注：下線部分はヒトＩｇＧ１−Ｆｃ部分を表す。
【０１５１】
免疫原または検出試薬として使用するための、Ｈｉｓタグ付きＣＤ３８細胞外ドメインの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ：
【化３】
2021536254.tif 000006
注：下線部分は６×Ｈｉｓタグを表す。
【０１５２】
（実施例２）ＣＤ３８関連組換えタンパク質の精製
１．Ｈｉｓタグで組換えタンパク質を精製する手順：
細胞発現上澄みのサンプルを高速遠心分離して不純物を除去し、緩衝液をＰＢＳに置換し、イミダゾールを最終濃度５ｍＭになるように添加した。ニッケルカラムを、５ｍＭイミダゾールを含有するＰＢＳ溶液で平衡化し、カラム容量の２〜５倍で洗浄した。置換細胞上清サンプルをＮｉセファロースエクセルカラム（ＧＥ、１７−３７１２−０２）に適用した。Ａ２８０の読みがベースラインに落ちるまで、５ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳで洗浄した。クロマトグラフィーカラムをＰＢＳ＋１０ｍＭイミダゾールですすぎ、非特異的に結合したタンパク質不純物を除去し、流出液を回収した。標的タンパク質を３００ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳ溶液で溶出し、溶出ピークを回収した。回収した溶出液を濃縮し、移動相としてＰＢＳを用いたゲルクロマトグラフィーＳｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ，２８−９８９３−３５）によりさらに精製した。集合体ピークを除去し、主ピークを収集した。得られたタンパク質を、電気泳動、ペプチドマップおよびＬＣ−ＭＳによって同定し、そして確認されたタンパク質を、使用のためにアリコートした。本開示の抗体を調製するための免疫原として、または検出試薬として使用するために、Ｈｉｓタグ化ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ（配列番号５７）を得た。ＣＤ３８−ＥＣＤ−  彼は、インビトロ化学によってＫＬＨに結合され、マウス免疫を刺激するための免疫原として使用された。
【０１５３】
２．ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質を精製するためのステップ：
細胞発現上澄みのサンプルを高速で遠心分離して不純物を除去し、上澄みをＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅ（ＧＥ，１７−５４３８−０１）アフィニティークロマトグラフィーにかけた。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅカラムを、最初に０．１Ｍ  ＮａＯＨで再生し、純水で洗浄し、次いでＰＢＳで平衡化し、上清を結合させた後、ＰＢＳを使用して、Ａ２８０値がベースラインに低下するまで洗浄した。標的タンパク質を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）で溶出し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで中和した。溶出したサンプルを適切に濃縮し、次いでＰＢＳ平衡ゲルクロマトグラフィーＳｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ，２８−９８９３−３５）によってさらに精製し、標的タンパク質のいくつかのチューブをプールし、適切な濃度に濃縮した。この手法を用いて、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ（配列番号２）融合タンパク質を精製した。それはまた、本発明においてヒト化抗体タンパク質を精製するために使用され得る。
【０１５４】
（実施例３）抗ヒトＣＤ３８ハイブリドーマモノクローナル抗体の入手と調製
１．免疫化
抗ヒトＣＤ３８モノクローナル抗体は、マウスを免疫することによって産生された。実験には、４〜６週齢のＳＪＬホワイトマウス（雌）を使用した（北京チャールズリバー実験動物技術株式会社、動物生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（北京）２０１２−０００１）。
【０１５５】
給餌環境：ＳＰＦグレード。マウスを購入した後、２０〜２５℃の温度で１週間、１２／１２時間の明／暗サイクルで実験室環境に適応させた。湿度４０〜６０％。環境に適応したマウスは、さまざまなプロトコルに従って免疫され、各グループに３〜５匹のマウスがいた。
【０１５６】
免疫抗原は、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ、ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯＳ（ＣＤ３８のヒト完全長をトランスフェクトしたＣＨＯＳ細胞）などであり得る。免疫化は種々の免疫アジュバントと組合せた単一の試薬、または交差免疫化のための種々の型の免疫原のいずれかを用いて実施した：免疫化部位は腹腔内または背中の皮下のいずれかであり、あるいは、免疫化は両方の部位で交互に実施した。例示的な免疫化方法は例えば、Ｔｉｔｅｒｍａｘ（Ｓｉｇｍａ  Ｌｏｔ  Ｎｕｍ：  Ｔ２６８４）またはミョウバン（Ｔｈｒｅｍｏ  Ｌｏｔ  Ｎｕｍ：  ７７１６１）による免疫化であった。抗原対アジュバントの比（ｔｉｔｅｒｍａｘ）は１：１であり、抗原対アジュバント（ミョウバン）の比は、４：１、２５〜５０μｇまたは１×１０７細胞／マウス（一次免疫）、２５〜５０μｇまたは１×１０７細胞／マウス（昇圧）であった。０日目に抗原を腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）に注射し、免疫化を一次免疫後２週間毎に繰り返した。血中サンプルを３週間毎に採取し、マウス血清中の抗体価をＥＬＩＳＡ法により測定した。８〜１２回の免疫後、プラトーに達する高血清抗体価のマウスを脾細胞溶融のために選択した。脾細胞溶融の３日前に、生理食塩水で調製した抗原溶液に、昇圧のために、２５〜５０μｇ／マウスまたは１×１０７細胞／マウスを腹腔内注射した（ＩＰ）。
【０１５７】
２．細胞融合
プラトーに達する高血清抗体価を有するマウス（試験例１、ＣＤ３８結合についてのＥＬＩＳＡ法を参照のこと）を脾細胞溶融のために選択し、そして選択されたマウスを、溶融の３日前に追加免疫に供した。ハイブリドーマ細胞は、脾臓リンパ球を骨髄腫Ｓｐ２／０細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−８２８７ＴＭ）と、最適化されたＰＥＧ媒介融合手順を用いて融合させることによって得た。融合ハイブリドーマ細胞を、ハット完全培地（２０％ＦＢＳ、１×ハットおよび１×ＯＰＩを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地）に懸濁し、９６ウェル細胞培養プレート（１×１０５細胞／１５０μｌ／ウェル）にアリコートし、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。溶融後５日目に、ハット完全培地（５０μｌ／ウェル）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。溶融後７日から８日目にかけて、培地はＨＴ完成媒体（２０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ‐１６４０媒体、１×ＨＴ及び１×ＯＰＩ），２００μｌ／井戸で細胞成長密度に応じて完成に変化し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０１５８】
３．ハイブリドーマ細胞のスクリーニング
融合の１０〜１１日後、細胞の増殖密度に従ってＣＤ３８結合ＥＬＩＳＡアッセイを行った（試験例１参照）。ＥＬＩＳＡにより検出された陽性ウェルの細胞上清を、ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓの結合についてＦＡＣＳ法により試験した（試験例２参照）。陽性ウェル中の培地を交換し、細胞の密度に従って２４ウェルプレート中で細胞を増殖させた。２４ウェルプレートに移された細胞株を確認のために再び試験し、次いで時間サブクローニングした。最初のサブクローン化細胞（試験例１および２参照）をスクリーニングした後、陽性細胞を保存し、２回目のサブクローニングに供した。第２のクローン化（試験例１および２参照）でスクリーニングした陽性細胞を保存し、タンパク質発現に使用した。ＣＤ３８に対して高い親和性を有するハイブリドーマ細胞を、いくつかの融合後に得た。
【０１５９】
ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０は、ブロッキングアッセイおよび結合アッセイを介したスクリーニングによって得られた。抗体はさらに無血清細胞培養法により調製した。抗体は、精製例に従って精製し、試験例に使用した。
【０１６０】
ハイブリドーマクローン００９のマウス抗体可変領域の配列を以下に示す：
【化４】
2021536254.tif 000007
【０１６１】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６２】
ハイブリドーマクローンｍ０１１のマウス抗体可変領域配列は以下のとおりである：
【化５】
2021536254.tif 000008
【０１６３】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６４】
ハイブリドーマクローンｍ１６０のマウス抗体可変領域配列は以下のとおりである。
【化６】
2021536254.tif 000009
【０１６５】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６６】
各重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域の配列を表３に示す。
【０１６７】
【表３】
2021536254.tif 000010
【０１６８】
４．ヒトＩｇＧ１キメラ抗体の調製
ハイブリドーマスクリーニングから得られた候補分子を増幅し、配列決定して、可変領域をコードする遺伝子配列を得た。配列決定により得られた配列に基づいて、前後進プライマーを設計し、配列決定した遺伝子を鋳型として用いて、ＰＣＲによりそれぞれの抗体のＶＨ／ＶＫ遺伝子断片を構築し、次いで相同組換えにより発現ベクターｐＨｒ（シグナルペプチドおよびｈＩｇＧ１／ｈκ定常領域遺伝子（ＣＨ１−Ｆｃ／ＣＬ）断片を用いて）に挿入し、組換えキメラ抗体ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ−ｐＨｒ／ＶＬ−ＣＬ−ｐＨｒの全長の発現のための発現プラスミドを構築し、ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０のキメラ抗体ｃｈ−００９、ｃｈ−０１１およびｃｈ−１６０を得た。
【０１６９】
（実施例４）抗ＣＤ３８ハイブリドーマモノクローナル抗体のヒト化
ＭＯＥソフトウェア分析を用いてＩＭＧＴヒト抗体重鎖および軽鎖可変領域の生殖細胞系列遺伝子データベースを整列させることによって、ｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０に対してそれぞれ高い相同性を有する重鎖／軽鎖可変領域の生殖細胞系列遺伝子を鋳型として選択した。３つのマウス抗体のＣＤＲを対応するヒトテンプレートに移植し、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序でヒト化抗体可変領域配列を形成した。
【０１７０】
ＦＲ領域に対するヒトＦＲ領域およびアミノ酸バック突然変異の選択：得られたネズミ抗体ＶＨ／ＶＬ  ＣＤＲの典型的な構造に基づいて、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）の相同配列をヒト生殖細胞系列データベースから検索し、高から低までＦＲ相同性を有する生殖細胞系列を主要テンプレートとして選択した；さらに、ネズミ抗体のＣＤＲ領域をヒトテンプレート上に移植した；さらに、埋め込まれた残基、ＣＤＲ領域と直接的に相互作用する残基、ならびにネズミ抗体の三次元構造に基づくソフトウェアを用いてＶＬおよびＶＨのコンホメーションに重大な影響を及ぼす残基についてバック突然変異設計を行い；化学的に不安定なアミノ酸残基を最適化し、最終的なヒト化分子を得た。
【０１７１】
１．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ００９のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ００９の場合、ヒト化軽鎖テンプレートはＩＧＫＶ３−１１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖テンプレートはＩＧＨＶ１−３＊０１およびｈＪＨ４．１であった。ｍ００９のＣＤＲをヒトテンプレートに移植し、得られたヒト化可変領域配列は次のとおりである：
【化７】
2021536254.tif 000011
【０１７２】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１７３】
２．ハイブリドーマクローンｍ００９のヒト化のために設計された復帰突然変異を表４に示す。
【０１７４】
【表４】
2021536254.tif 000012
【０１７５】
注：移植とは、マウス抗体のＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に移植されたことを意味する。「Ａ４３Ｓ」は、位置４３の「Ａ」（Ｋａｂａｔの番号付け基準に従って番号が付けられている）が「Ｓ」に復帰突然変異したことを意味する。
【０１７６】
ハイブリドーマクローンｍ００９のヒト化抗体可変領域配列は以下のとおりである：
【化８】
2021536254.tif 000013
【０１７７】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによってｍ００９（ｈ００９）の完全ヒト化抗体を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ００９−０１〜ｈ００９−１５）を、上記のｈ００９抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示すヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示すヒトκ軽鎖定常領域と組み合わせることによって得た。可変領域配列を表５に示す：
【０１７８】
【表５】
2021536254.tif 000014
【０１７９】
注：例えば、表の「ｈ００９−０７」の場合、ヒト化抗体ｈ００９−０７の重鎖および軽鎖可変領域はそれぞれｈ００９ＶＨ２およびｈ００９ＶＬ２であることが示唆される。
【０１８０】
３．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ０１１のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ０１１については、ヒト化軽鎖鋳型はＩＧＫＶ４−１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖鋳型はＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１であった。電位ホットスポットを排除するために、Ｎ  ８２Ａ  Ｔ（Ｋａｂａｔ  Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ基準によれば、８２Ａ位置のアスパラギン（ａｂｂｒＮまたはＡｓｎ）をトレオニン（ａｂｂｒＴまたはＴｈｒ）で置き換え）およびＮ７６Ｓ（Ｋａｂａｔ  Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ基準によれば、７６位置のアスパラギン（ａｂｂｒＮまたはＡｓｎ）をセリン（ａｂｂｒＳまたはＳｅｒ）で置き換え）をヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１のＦＲ領域に導入し、ｍ０１１のＣＤＲをヒトテンプレートに移植し、得られたヒト化可変領域配列は以下のとおりである：
【化９】
2021536254.tif 000015
【０１８１】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１８２】
４．ハイブリドーマクローンｍ０１１用に設計された復帰突然変異を表６に示す。
【０１８３】
【表６】
2021536254.tif 000016
【０１８４】
注：移植とは、マウス抗体ＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域配列に移植されたことを意味する。Ｇ６８Ｒは、位置６８の「Ｇ」（Ｋａｂａｔの番号付け基準に従って番号が付けられている）が、接ぎ木後にＲに逆突然変異したことを意味する。
【０１８５】
ｈ０１１ヒト化抗体の可変領域の特定の配列は以下のとおりである：
【化１０】
2021536254.tif 000017
【０１８６】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによってｍ０１１（ｈ０１１）の完全ヒト化抗体を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ０１１−０１〜ｈ０１１−０６）を、上記のｈ０１１抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示すヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示すヒトκ軽鎖定常領域と組み合わせることによって得た。可変領域配列を表７に示す：
【０１８７】
【表７】
2021536254.tif 000018
【０１８８】
注：例えば、表の「ｈ０１１−０４」の場合、ヒト化抗体ｈ０１１−０４の重鎖および軽鎖可変領域はそれぞれｈ０１１ＶＨ２およびｈ０１１ＶＬ２であることが示唆される。
【０１８９】
５．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ１６０のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ１６０については、ヒト化軽鎖鋳型はＩＧＫＶ４−１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖鋳型はＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１であった。ヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に存在する可能性のあるホットスポットを排除するために、突然変異Ｓ７７Ｔ（Ｋａｂａｔ番号付け基準によれば、７７位のセリン（ａｂｂｒＳまたはＳｅｒ）をトレオニン（ＡｂｂｒＴまたはＴｈｒ）で置換し、Ｎ  ８２Ａ  Ｔ（Ｋａｂａｔ番号付け基準によれば、８２Ａ位のアスパラギン（ａｂｂｒＮまたはＡｓｎ）をトレオニン（ａｂｂｒＴまたはＴｈｒ）で置換）をヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１のＦＲ領域に導入した。ｍ１６０  ＣＤＲをヒトテンプレート上に移植し、得られたヒト化可変領域配列は以下のとおりである：
【化１１】
2021536254.tif 000019
【０１９０】
注：Ｋａｂａｔナンバリング基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１９１】
６．ハイブリドーマクローンｍ１６０のヒト化のために設計された復帰突然変異を表８に示す。
【０１９２】
【表８】
2021536254.tif 000020
【０１９３】
注：移植とは、マウス抗体のＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に移植されたことを意味する。「Ｍ４Ｌ」は、位置４の「Ｍ」（Ｋａｂａｔの番号付け基準に従って番号が付けられている）が接ぎ木後に「Ｌ」に復帰突然変異したことを意味する。
【０１９４】
ヒト化抗体ｈ１６０の可変領域の特定の配列は以下のとおりである：
【化１２】
2021536254.tif 000021
【０１９５】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域、またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによってｍ１６０（ｈ１６０）の完全ヒト化抗体を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ１６０−０１〜ｈ１６０−０８）は、上記のｈ１６０抗体重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示されるヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトκ軽鎖定常領域と組み合わせることによって得られた。可変領域配列を表９に示す：
【０１９６】
【表９】
2021536254.tif 000022
【０１９７】
注：例えば、表の「ｈ１６０−０７」の場合、ヒト化抗体ｈ１６０−０７の重鎖および軽鎖可変領域はそれぞれｈ１６０ＶＨ２およびｈ１６０ＶＬ３であることが示唆される。
【０１９８】
（実施例５）抗ヒトＣＤ３８ヒト化抗体ＩｇＧ１またはＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａフォーマットの構築および発現
種々のプライマーを設計し、それぞれのヒト化抗体のＶＨ／ＶＫ遺伝子断片をＰＣＲにより増幅し、次いで相同組換えにより発現ベクターｐＨｒ（実験室で構築したシグナルペプチドおよび定常領域遺伝子（ＣＨ１−ＦＣ／ＣＬ）断片を用いて）に挿入し、全長抗体ＶＨ−ＣＨ１−ＦＣ−ｐＨｒ／ＶＫ−ＣＬ−ｐＨｒの発現ベクターを構築した。ヒト化抗体については軽鎖定常領域がヒトκまたはλ鎖軽鎖定常領域から選択され得、重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域またはそのバリアントから選択され得る。非限定的な例としては、抗体の機能を改善するために、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の定常領域を最適化することが挙げられる。例えば、ＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａ定常領域はＩｇＧ１にＥ３３３Ａ点突然変異を導入することによって得ることができ、これは、ＩｇＧ１−ＦｃのＣ１ｑへの結合能を増強し、その結果、抗体のＣＤＣ機能を増強することができる（ＵＳ６５２８６２４参照）。以下の特定の軽鎖／重鎖定常領域は、本発明の抗体定常領域を限定することを意図するものではなく、当技術分野で公知の他の抗体軽鎖／重鎖定常領域およびそのバリアントも使用することができる。
【０１９９】
例示的な重鎖および軽鎖定常領域は以下のとおりである：
【化１３】
2021536254.tif 000023
【０２００】
一例として、上記ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１、およびｍ１６０のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、配列番号４３に示すヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示すヒトκ軽鎖定常領域とそれぞれ組み合わせ、得られた全長ヒト化抗体を表５、表７、および表９に示す；別の例として、上記ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１、およびｍ１６０のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、配列番号４４に示すヒトＩｇＧ１〜Ｅ３３３Ａ重鎖定常領域および配列番号４５に示すヒトκ軽鎖定常領域とそれぞれ組み合わせ、得られた全長ヒト化抗体を表１０に示す：
【０２０１】
表１０．ヒト化抗体の可変領域配列（重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａ、軽鎖定常領域はカッパ）
【表１０】
2021536254.tif 000024
【０２０２】
例として、ヒト化抗体ｈ００９−０７、ｈｕ９Ｅ、ｈ０１１−０１、ｈｕ１１Ｅ、ｈ１６０−０１およびｈｕ１６０Ｅの完全長アミノ酸配列は以下のとおりである：
【化１４−１】
2021536254.tif 000025
【化１４−２】
2021536254.tif 000026
【化１４−３】
2021536254.tif 000027
【０２０３】
抗ＣＤ３８抗体であるダラツムマブ（略称ダラ、配列についてはＷＨＯドラッグインフォメーション、Ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．１、２０１０を参照）を本開示の対照抗体として使用し、その重鎖および軽鎖配列は以下のとおりである：
【化１５】
2021536254.tif 000028
【０２０４】
本抗体の性能と効果は、以下のテストによって検証された。
【０２０５】
（試験例１）ＣＤ３８抗体のＣＤ３８タンパク質結合ＥＬＩＳＡテスト
抗ＣＤ３８抗体の親和性はＥＬＩＳＡ板上に固定化されたＣＤ３８に対する抗体の量によって決定され、２μｇ／ｍｌストレプトアビジン（Ａｂｃａｍ、ＣＡＴ  ＃ａｂ１２３４８０）を９６ウェルＥＬＩＳＡ板（Ｃｏｓｔａｒ、ＣＡＴ＃３５９０）上にコーティングし、板を洗浄し、ブロックし、次いで２μｇ／ｍｌビオチン標識ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓを添加した。培養後、種々の濃度の希釈抗ＣＤ３８抗体サンプルを添加し、洗浄し、次いで西洋ワサビペルオキシダーゼ−ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２抗体（ジャクソン、ＣＡＴ＃  １０９−０３６−０９７）を添加した。プレートを再び洗浄し、着色反応のためにテトラメチルベンジジン溶液を添加した。最後に、停止溶液を添加した。ＯＤ４５０をマイクロプレートリーダーで測定し、ＥＣ５０値を計算した。結果を表１１に示す。
【０２０６】
【表１１】
2021536254.tif 000029
【０２０７】
結果は、本開示のヒト化抗体が、強力な結合能力でＣＤ３８タンパク質に特異的に結合できることを示している。
【０２０８】
（試験例２）ＣＤ３８抗体のＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓ細胞への結合アッセイ
完全長ヒトＣＤ３８（Ｕｎｉｐｒｏｔ数：  Ｐ２８９０７）（ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯＳ）で安定にトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｓ細胞（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｒ８０００７）（ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯＳ）を、ＣＤ  ＣＨＯ培養培地（Ｇｉｂｃｏ、ＲＥＦ＃１０７４３−０２９）中で培養した。１×１０６  ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓ細胞１ｍｌ当たりのＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓ細胞を１％ＢＳＡでブロックし、希釈した種々の濃度の抗ＣＤ３８抗体サンプルを添加し、２回洗浄し、次いでＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８−ヤギ抗ヒト（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡＴ＃Ａ１１０１３）を添加し、２回洗浄し、蛍光信号値をフローサイトメーターで読み取った。結果を表１２に示す。
【０２０９】
【表１２】
2021536254.tif 000030
【０２１０】
ＦＡＣＳ試験結果は、本開示のヒト化抗体が、細胞表面に存在する天然のＣＤ３８に対して強い結合能力を有することを示している。
【０２１１】
（試験例３）ＣＤ３８酵素活性に対するＣＤ３８抗体の阻害アッセイ
ＣＤ３８−ＥＣＤ−  ２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．５）緩衝液で４μｇ／ｍｌに調製した。同様に、種々の濃度の抗ＣＤ３８抗体サンプルを緩衝液で調製した。ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓおよび抗ＣＤ３８抗体サンプルの各々２５μＬを、透明な底部および黒壁（コーニング、ＣＡＴ＃３６０３）を有する９６ウェルプレートに添加した。室温で１５分間インキュベートした後、５０μｌの２００μＭ基材ＮＧＤ（Ｓｉｇｍａ、ＣＡＴ＃Ｎ５１３１−２５ＭＧ）を添加した。室温で２時間インキュベートした後、環状ＧＤＰリボース（ｃＧＤＰＲ）の産生を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）により、発光波長４１０ｎｍ（励起光３００ｎｍ）で測定した。結果を表１３に示す。
【０２１２】
【表１３】
2021536254.tif 000031
【０２１３】
試験結果は、ｈｕ９Ｅが酵素活性に対して８９．６３％の最大阻害率を示し、対照抗体Ｄａｒａよりも有意に優れていることを示している；一方、ｈｕ１１Ｅとｈｕ１６０Ｅの酵素活性の最大阻害率はそれぞれ４４．３１％と４７．６７％であり、対照抗体と同等である。
【０２１４】
（試験例４）Ｍｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞上のＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏＡＤＣＣアッセイ
ヒト多発性骨髄腫細胞株Ｍｏｌｐ−８（Ｃｏｂｉｏｅｒ、Ｎａｎｊｉｎｇ、ＣＢＰ６０５６２）またはヒトバーキットリンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−１２３）を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％超低ＩｇＧウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃  １９２１００５ＰＪ）を含むフェノールレッドフリーＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃  １１８３５−０３０）で懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）で計数し、１×１０５細胞／ｍｌに希釈した。
【０２１５】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ、ＣＡＴ＃１７−５４４２−０２）によって新鮮なヒト血液から分離され、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地に再懸濁され、サイトメーターでカウントされ、３×１０６細胞／ｍｌに希釈された。
【０２１６】
５０  Ｍｏｌｐ−８（またはＤａｕｄｉ）の各々のμｌおよび種々の濃度のＣＤ３８抗体またはネガティブコントロールＩｇＧ（Ｃ２５ｈＩｇＧ１（ＷＴ）、実験室で調製）を９６ウェルプレートに１：１の比率で添加し、３０分間インキュベートし（３７℃、５％  ＣＯ２）、５０μｌのエフェクター細胞ＰＢＭＣを３０：１の比率で添加した（エフェクター細胞：標的細胞）。４時間（３７℃、５％  ＣＯ２）インキュベートした後、ＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）の放出を、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｔｅｓｔ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＣＡＴ＃Ｇ１７８０）を用いて検出した。５０  細胞上清μｌおよびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）試薬５０μｌを添加した。室温で３０分間インキュベートした後、停止溶液を添加した。吸光度値（４９０ｎｍ）をＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で検出した。結果を表１４に示す。
【０２１７】
【表１４】
2021536254.tif 000032
【０２１８】
実験結果は、本開示のヒト化抗体が、インビトロで、Ｍｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞に対して強いＡＤＣＣ効果を有し、標的細胞の溶解を有意に達成できることを示している。
【０２１９】
（試験例５）ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによるＭｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞上のＣＤ３８抗体のＣＤＣ
Ｍｏｌｐ−８またはＤａｕｄｉ細胞を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）で計数し、１０％超低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃  １９２１００５ＰＪ）を含むフェノールレッドフリーＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃  １１８３５−０３０）に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。続いて、細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＡＴ＃３９０３）に５×１０４細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）でプレーティングした。次いで、５０μＬの種々の濃度の抗ＣＤ３８抗体およびネガティブコントロールを添加した。３０分間インキュベートした後（３７℃、５％  ＣＯ２）、５０μＬのヒト血清（研究所製）を各ウェルに添加した。２時間（３７℃、５％  ＣＯ２）インキュベートした後、１６．６μｌのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ、ＣＡＴ＃ＤＡＬ１０２５）を各ウェルに添加し、２０時間（３７℃、５％  ＣＯ２）インキュベートした。最後に、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、発光波長５８５ｎｍ（励起波長５７０ｎｍ）で検出を行い、その結果を表１５に示す。
【０２２０】
【表１５】
2021536254.tif 000033
【０２２１】
実験結果は、本開示のヒト化抗体がインビトロでＭｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞に対して強力なＣＤＣ効果を有し、標的細胞の溶解を有意に達成できることを示している。
【０２２２】
（試験例６）Ｍｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞でのＣＤ３８抗体のｉｎｖｉｔｒｏＡＤＣＰレポートシステムテスト
Ｍｏｌｐ−８またはＤａｕｄｉ細胞を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）で計数し、１０％超低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃１９２１００５ＰＪ）を含むフェノールレッドフリーＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡＴ＃１１８３５−０３０）に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。続いて、細胞を９６ウェルプレート（コーニング、ＣＡＴ＃３９０３）に２．５×１０４細胞／ウェル（２５μｌ／ウェル）でプレーティングし、２５μｌの種々の濃度の抗ＣＤ３８抗体およびネガティブコントロールを添加し、３０分間インキュベートした（３７℃、５％  ＣＯ２）。全長ヒトＦｃγＩＩａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ数：  Ｐ１２３１８）で安定に形質転換されたＪｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ（商標）ＮＦＡＴ細胞、Ｉｎｖｉｖｏ遺伝子）細胞をエフェクター細胞として収集し、７．５×１０４細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）のエフェクター細胞を、ターゲット細胞抗体と共にインキュベートした９６ウェルプレートに添加した。６時間（３７℃、５％  ＣＯ２）インキュベートした後、１０μｌの上澄みを新しい９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＣＡＴ＃３９０３）に移し、９０μｌ／ウェルのＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎｅ、ｒｅｐ−ｑｌｃ１）を添加し、化学発光をＶＩＴＯＲ（ＶＩＴＯＲ３、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で検出した。結果を表１６および図１に示す。
【０２２３】
表１６．標的細胞に対するＣＤ３８ヒト化抗体のｉｎｖｉｔｒｏＡＤＣＰレポーターシステムテスト結果
【表１６】
2021536254.tif 000034
【０２２４】
実験結果は、本開示のすべてのヒト化抗体が、対照抗体ダラのそれよりも有意に良好に、Ｍｏｌｐ−８およびダウディ細胞に対してインビトロＡＤＣＰレポーターシステム試験効果を有することを示している。
【０２２５】
（試験例７）ＢＩＡｃｏｒｅによって検出されたＣＤ３８抗体の親和性
キメラ抗体（実施例３に従って調製されたｃｈ−００９、−０１１および−１６０）、本開示のヒト化抗体、およびヒトＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ抗原に対するＤａｒａの親和性が、Ｂｉａｃｏｒｅ機器によって検出された。
【０２２６】
ヒトＦｃ捕捉分子を、試験される抗体の親和性捕捉のために、ヒトＦｃ捕捉キット（ＣＡＴ＃ＢＲ−１００８−３９、ＧＥ）のマニュアルに記載される方法に従って、ＣＭ５バイオセンシングチップ（ＣＡＴ＃ＢＲ−１００５−３０、ＧＥ）に共有結合させた。次いで、ヒトＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ抗原をチップの表面に通過させ、反応シグナルのリアルタイム検出をＢｉａｃｏｒｅ装置を用いて行った。得られた結合および解離曲線を適合させて、親和性値を計算した。実験で各サイクルの解離が完了した後、バイオチップを洗浄し、ヒトＦｃ捕捉キット（ＧＥ）に供給された再生溶液で再生した。結果を表１７〜表１８に示す。
【０２２７】
【表１７−１】
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【表１７−２】
2021536254.tif 000036
【０２２８】
結果は、本開示で得られたすべてのヒト化抗体がヒトＣＤ３８に対して高い親和性を有することを示している。
【０２２９】
【表１８】
2021536254.tif 000037
【０２３０】
結果は、本開示で得られた抗体ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０ＥはすべてヒトＣＤ３８に対して高い親和性を有し、ＫＤ値は対照抗体Ｄａｒａの値よりも低く、対照抗体の値よりも優れていることを示している。
【０２３１】
・生物活性のｉｎ  ｖｉｖｏ評価
【０２３２】
（試験例８）ＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ薬物動態試験
１８  ＳＤラット、オスを等しく６群に分けた。動物は、Ｓｉｐｕｒ−Ｂｉｋａｉ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ、Ｌｔｄ．により提供され；動物はそれぞれ、静脈内注射または皮下注射により、３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与された。静脈内投与群では、投与前に抗凝固剤なしで全血０．２ｍＬを採取し、投与後５分、８時間、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８日、採取後４℃で３０分間遠心分離し、１０００ｇで１５分間遠心分離し、上清（血清）をＥＰチューブに移し−８０℃で保存した。皮下投与群では投与前に全血を採取し、投与後１時間、８時間、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄであった。７、１０、１４、２１および２８日目に全血を採取した。血清を単離し、ＥＰチューブに移し、−８０℃で保存した。
【０２３３】
種々のサンプルについての検量線を、試験例１に記載の方法（抗ＣＤ３８抗体のＣＤ３８タンパク質結合ＥＬ血清を単離し、ＥＰチューブに移し、−８０℃で保存した。ＩＳＡ）に従って作製した。抗ＣＤ３８抗体の置換に、１：１０００希釈の血清サンプルを反応系に添加した。種々の時点での抗ＣＤ３８抗体の血清濃度をＯＤ４５０に基づいて計算し静脈内投与群では、投与前に抗凝固剤なしで全血０．２ｍＬを採取し、投与後５分、８時間、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８日、採取後４℃で３０分間遠心分離し、１０００ｇで１５分間遠心分離し、上清（血清）をＥＰチューブに移し−８０℃で保存した。皮下投与群では投与前に全血を採取し、投与後１時間、８時間、１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ、１０ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄであった。、薬動物は、Ｓｉｐｕｒ−Ｂｉｋａｉ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ、Ｌｔｄ．により提供され；動物はそれぞれ、静脈内注射または皮下注射により、３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与された。物動態パラメーターをフェニックスウインノンリンソフトウエアにより収集したデータに基づいて分析し、計算した。抗体ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅのインビボ薬物動態結果を表１９に示す。
【０２３４】
【表１９】
2021536254.tif 000038
【０２３５】
注：表では、Ｔ１／２は半減期を意味し、ＩＶは静脈内注射を意味し、ＳＣは皮下注射を意味する。
【０２３６】
ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅ、ｈｕ１６０ＥのＰＫ（ファーマコキネティクス）を３ｍｐｋの投与量で皮下注および静注後のラットで測定した。その結果、抗体はラットにおいて良好なＰＫ性能を有することが示された：皮下注射した場合、全ての抗体において高いバイオアベイラビリティが観察され、静脈注射の平均Ｔ１／２はそれぞれ１１．４日、１３．３日および１３．６日である；皮下注射の平均Ｔ１／２はそれぞれ１１．１日、１２．１日および１０．９日であり、ラットにおける抗体の良好な安定性および皮下剤型を発症する可能性が示唆される。
【０２３７】
（試験例９）ＣＤ３８抗体のマウス腫瘍に対するｉｎ  ｖｉｖｏ薬力学試験
Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス、ＳＰＦ、１４〜１６ｇ、雌を、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．から購入した。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを実験室環境に６日間適応させ、ＡＭＯ−１細胞（Ｃｏｂｉｏｅｒ、Ｎａｎｊｉｎｇ、ＣＢＰ６０２４２、５×１０６＋５０％マトリゲル／マウス、基底膜マトリゲル、ＢＤ、カタログ番号３５６２３７）を右肋骨に皮下接種し、９日後、マウスを合計７群、８マウス／群に分け、平均腫瘍体積は約１９７．２１±９．２５ｍｍ３（ｄ０）であった。群は次のとおりである：
ブランク対照群、ＩｇＧ（３ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ２５−ｈＩｇＧ１（ＷＴ）、ラボ製）；
ダラ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
ダラ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１１Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１１Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１６０Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１６０Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
【０２３８】
腹腔内注射を週２回、３週間行った。腫瘍体積および体重を週間測定し、データを記録した。マウスを屠殺し、全投与終了後に腫瘍を摘出した。
【０２３９】
Ｅｘｃｅｌ２００３統計ソフトウェアを用いて、平均値（ａｖｇ）、ＳＤ値（ＳＴＤＥＶ）およびＳＥＭ値（ＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴ）を計算し、群間差のＰ値をＴＴＥＳＴによって計算した。
【０２４０】
腫瘍体積（Ｖ）は、以下の式に従って計算した：
Ｖ＝１／２×Ｌｌｏｎｇ×Ｌｓｈｏｒｔ２
【０２４１】
相対体積（ＲＴＶ）＝ＶＴ／Ｖ０
腫瘍抑制率（％）＝（ＣＲＴＶ−ＴＲＴＶ）／ＣＲＴＶ（％）
ここで、Ｖ０およびＶＴは、それぞれ実験の開始時および終了時の腫瘍体積を指す。ＣＲＴＶおよびＴＲＴＶは、それぞれ、実験終了時の対照群および試験群の相対腫瘍体積を指す。結果を表２０および図２に示す。
【０２４２】
【表２０】
2021536254.tif 000039
【０２４３】
マウスにおけるインビボ抗腫瘍効率の試験結果は、本開示のヒト化抗体ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅの両方が腫瘍の成長を有意に阻害発明することを示す。ブランク対照ＩｇＧ（３ｍｇ／ｋｇ）群と比較して、ｈｕ１１Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群及びｈｕ１６０Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群はそれぞれ９３．１４％及び７０．０２％の腫瘍抑制率を示し、ｈｕ１１Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群及びｈｕ１６０Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群はそれぞれ９９．５２％及び８９．８９％の腫瘍抑制率を示す。投与プロセスの間、各群の動物は正常な体重を示し、これは、本開示の抗体が明らかな毒性および副作用を有さないことを示す。
【図１Ａ】
2021536254.tif 000040
【図１Ｂ】
2021536254.tif 000041
【図２】
2021536254.tif 000042
【配列表】
2021536254000001.app
【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年8月16日(2021.8.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、バイオテクノロジーの分野に属する。より具体的には、本開示は、抗ＣＤ３８抗体およびその組成物の治療的使用、ならびに前記抗体分子を産生するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書の記載は、本開示に関する背景情報を提供するだけであり、必ずしも先行技術を構成するものではない。
【０００３】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、腫瘍細胞が骨髄中の形質細胞に由来する悪性形質細胞疾患であるが、該形質細胞はＢリンパ球から発生した最終機能段階の細胞である。したがって、多発性骨髄腫はＢリンパ球リンパ腫として分類することもできる。
【０００４】
多発性骨髄腫は、モノクローナル免疫グロブリンまたは軽鎖（Ｍタンパク質）の過剰産生を伴う骨髄形質細胞の異常増殖を特徴とする；一方、Ｍタンパク質を産生しない非分泌型ＭＭは少数例である。多発性骨髄腫は、多くの場合、多発性の溶骨性損傷、高カルシウム血症、貧血、腎損傷を伴う。正常な免疫グロブリンの産生が阻害されるため、さまざまな細菌感染症が容易に発見される。
【０００５】
中国の国内罹患率は１００，０００人あたり２〜３人と推定されており、男女比は１．６：１である。ほとんどの患者は４０歳以上であり、ほとんどの患者は６０歳以上である。現在、中国には約７万人の患者がいると推定されており、毎年世界中で約８万人の新規患者がいる。多発性骨髄腫は、各種造血器腫瘍の約１０％を占める。加齢に伴い、患者数はさらに増加する傾向にある。
【０００６】
現在、多発性骨髄腫は不治の血液悪性腫瘍である。現在の主な処置には、骨髄移植、多種の小分子化学療法、特にカルフィルゾミブに代表されるプロテアーゼ阻害剤、レナリドミドに代表される免疫調節剤などがあり、これらはＭＭ患者の生存期間を大幅に延長する。しかし、終末期にはほぼ必ず疾患が再発し、再発後の平均生存期間は約９カ月に過ぎない。ヤンセン社（Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ）のみから入手可能なダラツムマブ（Ｄａｒａ）は、再発または難治性多発性骨髄腫（ＲＲＭＭ）患者において良好な結果を示したため、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）はこれを画期的な成果とみなし、ダラツムマブはＲＲＭＭ患者の処置のために２０１５年１１月に販売が承認された。現在、Ｄａｒａと小分子を組み合わせた複数の臨床試験が行われている。Ｄａｒａを小分子薬と組み合わせると、臨床効果を大幅に向上させることができる。
【０００７】
ＣＤ３８は、２５６アミノ酸の細胞外ドメインを有するＩＩ型膜貫通型多機能タンパク質である。一態様では、ＣＤ３８は、リガンドＣＤ３１を介したラテラルシグナル伝達（ｌａｔｅｒａｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）において役割を果たすことが間接的に実証されており、これにより、細胞接着を引き起こし、リンパ球の活性化とＢ細胞の分化において役割を果たす可能性がある。しかしながら、この機能に関する直接的な生化学的証拠はない。一方、ＣＤ３８はシクラーゼおよびヒドロラーゼとしての機能を有し、シクラーゼの作用によりＮＡＤ（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド）からｃＡＤＰＲ（環状アデノシン二リン酸リボース）への変換を促進するだけでなく、ｃＡＤＰＲヒドロラーゼの作用によりｃＡＤＰＲからＡＤＰＲ（アデノシン二リン酸リボース）への変換も促進する。ＣＤ３８はＣａ２＋のフローを調節することができ、細胞内のアデノシンの産生を促進して免疫を抑制することもできる。Ｃａ２＋のフローの変化は、インスリン分泌に影響を与える可能性がある。ＣＤ３８遺伝子をノックアウトしたマウスは正常な生存を示したが、液性免疫応答の低下、インスリンの低下、心臓／肺の筋肉の欠陥などのさまざまな症状を示した。ヒトのＣＤ３８は、造血細胞、免疫細胞、および脳、膵臓、腎臓、筋肉などのさまざまな正常組織に発現している。ＲＮＡレベルでは前立腺と胸腺に高発現していることが明らかになったが、発現レベルはさまざまな血液腫瘍細胞、特に多発性骨髄腫細胞で有意に増加していた。また、ダラツムマブの臨床データから、多発性骨髄腫の分野におけるＣＤ３８抗体の有効性と安全性が実証され、ＣＤ３８標的の開発の潜在的価値が示唆された。文献のさまざまな研究は、抗ＣＤ３８抗体によるＭＭの処置の基礎をなすメカニズムには、主に以下が含まれることを示している：
１）ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、主にエピトープおよびＩｇＧ１−Ｆｃに関連するメカニズム；
２）アポトーシスによって引き起こされる直接的な殺傷効果；
３）ＣＤ３８酵素活性を阻害することによって腫瘍細胞の生存に影響を与えること；
４）ＣＤ３８を発現するＴｒｅｇ細胞の潜在的なクリアランス。
【０００８】
ＣＤ３８標的は、多発性骨髄腫の処置におけるホットスポットとなっている。もう一つの重要なＣＤ３８ターゲティング抗体は、サノフィから入手可能なイサルツキシマブ（Ｉｓａｒｔｕｘｉｍａｂ）であり、これは単回使用および小分子薬との組み合わせで多くの臨床試験でも使用されている。既存のデータから、イサルツキシマブはダラツムマブと同じ有効性および安全性を示している。現在、ＭＯＲ２０２（モルフォシス）、ＴＡＫ−０７９（武田）などの抗体が臨床に入っており、ＣＤ３８／ＣＤ３二重特異性抗体およびＣＤ３８−ＣＡＲ−Ｔも前臨床試験段階にある。標的としてのＣＤ３８に対する抗体に関連する他の特許は、例えば、ＷＯ２００６０９９８７５、ＷＯ２００７０４２３０９、ＷＯ２００８０４７２４２、ＷＯ２０１２０９２６１２、ＷＯ２０１６１６４６５６、ＷＯ２０１７１４９１２２などに見出すことができる。
【０００９】
現在、高い選択性、高い親和性、および好ましい有効性を備えた抗体を開発し続けることが依然として緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【００１０】
本開示は、より高い親和性、ｉｎ  ｖｉｖｏでのより良好な抗腫瘍活性、およびｉｎ  ｖｉｖｏでの好ましい代謝活性を有する一連のＣＤ３８抗体を提供する。具体的には、本開示は、ヒトＣＤ３８に特異的に結合するモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントを提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本開示は、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体はヒトＣＤ３８に特異的に結合し、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下に示されるＣＤＲを含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する：
（ｉ）配列番号９、１０および１１にそれぞれ示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、または配列番号９、１０および１１にそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、アミノ酸配列の配列番号１２、１３および１４にそれぞれ示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、または配列番号１２、１３および１４にそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＬＣＤＲバリアント；または
（ｉｉ）配列番号１５、１６および１７にそれぞれ示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、または配列番号１５、１６および１７にそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、アミノ酸配列の配列番号１８、１９および２０にそれぞれ示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、または配列番号１８、１９および２０にそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＬＣＤＲバリアント；または
（ｉｉｉ）配列番号１５、２１および１７にそれぞれ示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、または配列番号１５、２１および１７にそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＨＣＤＲバリアント；ならびに、アミノ酸配列の配列番号２２、１９および２３にそれぞれ示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、または配列番号２２、１９および２３にそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有するＬＣＤＲバリアント。
【００１２】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体または抗原結合フラグメントのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む）の３、２または１個のアミノ酸差異を有するＣＤＲバリアントは、親和性成熟法によるスクリーニングによって得られる３、２または１個のアミノ酸差異を有するＣＤＲバリアントである。
【００１３】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントのヒトＣＤ３８に対する親和性（ＫＤ）は、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、または１０−１１Ｍ未満である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体であり、好ましくはヒト化抗体である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、前記抗体はマウス抗体またはキメラ抗体であり、前記抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３、５、７に示されるか、配列番号３、５、７に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、かつ／または、前記抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４、６、８に示されるか、配列番号４、６、８に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む：
（ａ）：
そのアミノ酸配列は配列番号３に示されるか、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は配列番号４に示されるか、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変領域；
（ｂ）：
そのアミノ酸配列は配列番号５に示されるか、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は配列番号６に示されるか、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変領域；
（ｃ）：
そのアミノ酸配列は配列番号７に示されるか、配列番号７に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変領域、および
そのアミノ酸配列は配列番号８に示されるか、配列番号８に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変領域。
【００１７】
いくつかの実施形態では、前記抗体はヒト化抗体であり、前記ヒト化抗体はヒト生殖細胞系列に由来するフレームワーク（ＦＲ）領域またはフレームワーク領域バリアントを含み、前記フレームワーク領域バリアントは、前記ヒト抗体の軽鎖フレームワーク領域および／または重鎖フレームワーク領域上にそれぞれ最大１０個（例えば、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個）のアミノ酸復帰変異を有する。いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、以下の（ｄ）〜（ｆ）から選択されるいずれか１つを含む：
（ｄ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号９に示されるか、配列番号９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０に示されるか、配列番号１０の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１１に示されるか、配列番号１１の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２に示されるか、配列番号１２と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３に示されるか、配列番号１３の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４に示されるか、配列番号１４の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、軽鎖可変領域；
（ｅ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６に示されるか、配列番号１６の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７に示されるか、配列番号１７の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、７９Ｆ、８２Ａ  Ｔ、９１Ｓおよび７６Ｓからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１８に示されるか、配列番号１８と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号１９に示されるか、配列番号１９の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号２０に示されるか、配列番号２０の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、軽鎖可変領域；
（ｆ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、
前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２１に示されるか、配列番号２１の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１７に示されるか、配列番号１７の配列と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、
前記重鎖フレームワーク領域は、４８Ｉ、７７Ｔおよび８２Ａ  Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、
前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号２２に示されるか、配列番号２２と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１９に示されるか、配列番号１９の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２３に示されるか、配列番号２３の配列と比較した場合に３、２、または１個のアミノ酸差異を有し、
前記軽鎖フレームワーク領域は、４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を有する、軽鎖可変領域；
ここで、上記の復帰変異部位は、Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされ、上記の変異、例えば「２Ｆ」は、位置２（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされた）のアミノ酸がフェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）に復帰変異したことを指し、「８２Ａ  Ｔ」は、位置８２Ａ（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされた）のアミノ酸がスレオニン（ＴｈｒまたはＴ）に復帰変異したことを指す。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記抗体重鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ１−３＊０１とｈＪＨ４．１の組み合わせから選択されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、前記軽鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ３−１１＊０１とｈＪＫ４．１の組み合わせから選択されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、前記重鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１とｈＪＨ６．１  ＦＲ４の組み合わせから選択されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記軽鎖ＦＲ領域は、ヒト生殖細胞系列ＩＧＫＶ４−１＊０１とｈＪＫ４．１の組み合わせから選択されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、配列番号２４、３２もしくは３７に示される重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、当該バリアントは、上記の重鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０個（例えば、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個）のアミノ酸変異を有する。いくつかの実施形態では、前記アミノ酸変異は、以下のいずれかから選択される：
（ｇ）配列番号２４に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰変異；
（ｈ）配列番号３２に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の７９Ｆおよび９１Ｓからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰変異；
（ｉ）配列番号３７に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の４８Ｉの復帰変異。
【００２３】
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に示される重鎖可変領域、または
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域。
【００２４】
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、配列番号２５、３３もしくは３８に示される軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、当該バリアントは、前記配列番号２５、３３または３８のいずれかに示される軽鎖可変領域中に１〜１０個（例えば、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個または１個）のアミノ酸変異を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、前記アミノ酸変異は、以下の（ｊ）〜（ｌ）のいずれか１つから選択される：
（ｊ）配列番号２５に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰変異；
（ｋ）配列番号３３に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰変異；
（ｌ）配列番号３８に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸復帰変異；
ここで、前記復帰変異部位は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域、または
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域。
【００２７】
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
（ｍ）配列番号２４、２６、２７、２８または２９に示される重鎖可変領域、および配列番号２５、３０または３１に示される軽鎖可変領域；または
（ｎ）配列番号３２または３４に示される重鎖可変領域、および配列番号３３、３５または３６に示される軽鎖可変領域；または
（ｏ）配列番号３７または３９に示される重鎖可変領域、および配列番号３８、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域。
いくつかの実施形態では、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
（ｐ）配列番号２６に示される重鎖可変領域および配列番号３０に示される軽鎖可変領域；または
（ｑ）配列番号３２に示される重鎖可変領域および配列番号３３に示される軽鎖可変領域；または
（ｒ）配列番号３７に示される重鎖可変領域および配列番号３８に示される軽鎖可変領域。
【００２８】
いくつかの実施形態では、前記抗体は定常領域をさらに含み；好ましくは、前記抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体であり、その重鎖定常領域は、ヒト抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の従来のバリアントに由来し、その軽鎖定常領域は、ヒト抗体カッパ（κ）、ラムダ（λ）鎖またはそれらの従来のバリアントに由来する。いくつかの特定の実施形態では、前記重鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４３または４４に示されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、前記軽鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４５に示されるか、それに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号４６、４８、４９、５１、５２または５４に示されるか、それらに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、かつ／または
前記軽鎖は、配列番号４７、５０または５３に示されるか、それらに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体は、以下を含む：
（ｉ）配列番号４６または４８に示される重鎖、および配列番号４７に示される軽鎖；または
（ｉｉ）配列番号４９または５１に示される重鎖、および配列番号５０に示される軽鎖；または
（ｉｉｉ）配列番号５２または５４に示される重鎖、および配列番号５３に示される軽鎖。
【００３１】
いくつかの特定の実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体は、以下を含む：
（ｉｖ）配列番号４８に示される重鎖および配列番号４７に示される軽鎖；または
（ｖ）配列番号５１に示される重鎖および配列番号５０に示される軽鎖；または
（ｖｉ）配列番号５４に示される重鎖および配列番号５３に示される軽鎖。
【００３２】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは増強されたＡＤＣＣ活性を有し、これは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃ領域のＦｃｙＩＩＩａに対する親和性を改変することによって達成される。例えば、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓの特許ＷＯ２００８１４０６０３に記載されている変異Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌおよびそれらの組み合わせ、Ｘｅｎｃｏｒの特許ＵＳ２００８０２６０７３１に記載されているＩｇＧ１  Ｆｃ領域の変異Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅまたはそれらの組み合わせ、ならびに当技術分野で開示されているＡＤＣＣ機能を増強することができるその他の変異。
【００３３】
いくつかの実施形態では、前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディおよびｄｓＦｖからなる群から選択される。
【００３４】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８への結合について上記の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、またはＣＤ３８抗原の同じエピトープへの結合について上記の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗ＣＤ３８抗体を提供する。
【００３５】
本開示はまた、治療有効量の上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、および１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、緩衝液または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましくは、前記医薬組成物は、単位用量で０．０１〜９９重量％の前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る；あるいは、前記医薬組成物は、単位用量で、好ましくは０．１〜２０００ｍｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇの前記抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。
【００３６】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸分子を提供する。
【００３７】
本開示はまた、上記の核酸分子を含むベクターを提供する。
【００３８】
本開示はまた、上記のベクターで形質転換された（または形質導入されたまたはトランスフェクトされた）宿主細胞を提供する。また、上記のベクターを含む宿主細胞も開示する。前記宿主細胞は、原核細胞および真核細胞から選択される。いくつかの実施形態では、前記宿主細胞は、ヒト胚性幹細胞、受精卵、生殖細胞などの完全な個体に成長することができるヒト細胞を含まない；好ましくは、前記宿主細胞は真核細胞、より好ましくは哺乳動物細胞であり、当該哺乳動物細胞は、限定されるものではないが、ＣＨＯ、２９３、ＮＳＯ、および抗体またはその抗原結合フラグメントのグリコシル化修飾を変化させるために遺伝子編集（例えば、ＦＵＴ８またはＧｎＴ−ＩＩＩなどの遺伝子のノックアウト）が行われ、それによって抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣ機能を改変する哺乳動物細胞を含む；いくつかの実施形態では、前記哺乳動物細胞はヒト細胞を含まない。
【００３９】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを調製するための方法であって、上記の宿主細胞を培養するステップと、次いで前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを回収するステップとを含み、任意に、前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを精製するステップを含む、方法を提供する。
【００４０】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを、試験対象のサンプルと接触させるステップを含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための方法を提供する。
【００４１】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための試薬を提供する。
【００４２】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、ヒトＣＤ３８に関連する疾患の診断薬を提供する。
【００４３】
本開示はまた、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを使用してヒトＣＤ３８またはＣＤ３８陽性細胞を検出または測定することを含む、ヒトＣＤ３８に関連する疾患を診断するための方法を提供する。
【００４４】
本開示はまた、ヒトＣＤ３８に関連する疾患の診断薬の調製における、上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供する。
【００４５】
本開示はまた、対象に、上記の抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそれを含む医薬組成物、または上記の核酸分子の治療有効量または予防有効量を投与することを含む、疾患を処置または予防するための方法を提供する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【００４７】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は腫瘍である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、上記の腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記骨髄腫は、多発性骨髄腫、前部髄様腫瘍（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）、軽鎖アミロイドーシスなどからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍はＢ細胞リンパ腫／白血病であり、例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度／中悪性度／高悪性度の濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫瘍／形質細胞骨髄腫、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【００５１】
いくつかの実施形態では、前記腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００５２】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は、免疫疾患、例えばＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球およびＴ細胞が関与する免疫疾患である。
【００５３】
いくつかの実施形態では、前記免疫疾患には、限定されるわけではないが、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、動脈硬化症、白血球接着不全症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症状（急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病を含む）、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群および脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ならびにウイルス感染によって引き起こされる免疫疾患（エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるまたは媒介される疾患など）が含まれる。
【００５４】
いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は関節リウマチである。
【００５５】
本開示はさらに、疾患または障害の処置または予防のための医薬品の調製における、上記の抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは上記の医薬組成物もしくは核酸分子の使用を提供する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【００５７】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００５８】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は腫瘍であり得、例えば、前記疾患は、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、上記の腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。
【００６０】
いくつかの実施形態では、前記白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。
【００６１】
いくつかの実施形態では、前記骨髄腫は、多発性骨髄腫、前部髄様腫瘍（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。
【００６２】
いくつかの実施形態では、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。
【００６３】
いくつかの実施形態では、上記の腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫／白血病であり、例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍または前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）から選択されるか、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫またはＢ細胞ホジキンリンパ腫から選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、上記の腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低悪性度、中悪性度または高悪性度のＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫瘍、形質細胞骨髄腫、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。
【００６６】
いくつかの実施形態では、前記腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、免疫疾患、例えばＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球およびＴ細胞が関与する免疫疾患である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、喘息、動脈硬化症、白血球接着不全症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症状（例えば、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病）、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ならびにウイルス感染によって引き起こされる免疫疾患（エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるまたは媒介される疾患など）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記免疫疾患または障害は関節リウマチである。
【００６９】
本開示はさらに、上記の疾患または障害の処置または予防に使用するための、抗ＣＤ３８抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または医薬組成物、または核酸分子を提供する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である；いくつかの実施形態において、前記疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は腫瘍である。例えば、前記疾患は、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞の存在によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記骨髄腫は、多発性骨髄腫、前部髄様腫瘍（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍はＢ細胞リンパ腫／白血病であり、例えば、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低悪性度、中悪性度または高悪性度のＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫瘍、形質細胞骨髄腫、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫または多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、前記腫瘍は多発性骨髄腫である。
【００７２】
いくつかの実施形態では、上記の疾患または障害は、免疫疾患、例えばＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球およびＴ細胞が関与する免疫疾患である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、喘息、動脈硬化症、白血球接着不全症、多発性硬化症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症状（例えば、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病）、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、ならびにウイルス感染によって引き起こされる免疫疾患（エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるまたは媒介される疾患など）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記免疫疾患は関節リウマチである。
【００７４】
本開示の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは、生化学的試験およびｉｎ  ｖｉｖｏ薬力学的アッセイの両方において良好な有効性を示す。抗原に対する抗体の親和性を検出するための試験において、本開示の抗体ｈｕ９ＥはヒトＣＤ３８に対して１．３１ｎＭのＫＤ値を示し、ｈｕ１１ＥはヒトＣＤ３８に対して０．５６８ｎＭのＫＤ値を示し、ｈｕ１６０ＥはヒトＣＤ３８に対して０．０５８５ｎＭのＫＤ値を示したが、コントロール抗体は２．３５ｎＭのＫＤ値を示し、本開示の抗体がより高い親和性を有することを示唆している（表１８）。
【００７５】
腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏ抑制試験において、本開示の抗体ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅの双方が、マウスにおける腫瘍成長を効果的に抑制できることが見出された。１ｍｐｋのｙでのｈｕ１１Ｅの腫瘍抑制率は最大９３．１４％であり、ｈｕ１６０Ｅは７０．０２％の腫瘍抑制率を示し、どちらもコントロール抗体Ｄａｒａの腫瘍抑制率（腫瘍抑制率は５６．８３％）よりも有意に高かった（表２０）。
【００７６】
さらに、本開示の抗ＣＤ３８モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ラットにおいて好ましい代謝動態特性を有し、より長い半減期とより高いバイオアベイラビリティを示す。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】Ｍｏｌｐ−８細胞に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰ試験結果を示す図である（図１Ａ）。Ｄａｕｄｉ細胞に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰ試験結果を示す図である（図１Ｂ）。
【図２】マウスにおけるＣＤ３８抗体の腫瘍抑制効果を示す図である。
【発明の詳細な説明】
【００７８】
・用語
本開示をより容易に理解するために、特定の技術的および科学的用語を以下に具体的に定義する。本明細書で明示的に定義されない限り、本明細書で使用される他のすべての技術的および科学的用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解される意味を有する。
【００７９】
本開示で使用されるアミノ酸の３文字コードおよび１文字コードは、Ｊ．  ｂｉｏｌ．  ｃｈｅｍ，  ２４３，  ３５５８頁（１９６８年）に記載されているとおりである。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「抗体」は、免疫グロブリン、すなわち２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖の間のジスルフィド結合によって一緒に接続された４本のペプチド鎖構造を指す。異なる免疫グロブリン重鎖定常領域は、異なるアミノ酸組成および配列を示し、したがって、異なる抗原性を示す。したがって、免疫グロブリンは、それぞれ重鎖μ、δ、γ、αおよびεに対応する５つのタイプ（または免疫グロブリンアイソタイプ）、すなわちＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥに分類することができる。ヒンジ領域のアミノ酸組成と重鎖ジスルフィド結合の数および位置に応じて、同じタイプのＩｇをさらに異なるサブタイプに分類することができる。例えば、ＩｇＧはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に分類することができる。軽鎖は、異なる定常領域に基づいて、κ鎖またはλ鎖に分類することができる。５つタイプのＩｇのそれぞれが、κ鎖またはλ鎖を有する。
【００８１】
抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端に隣接する約１１０アミノ酸の配列は非常に可変的であり、可変領域（Ｆｖ領域）として知られている；Ｃ末端に近い残りのアミノ酸配列は比較的安定であり、定常領域として知られている。可変領域には、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が含まれる。抗体の特異性を決定する３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られている。各軽鎖可変領域（ＶＬまたはＬＣＶＲ）および各重鎖可変領域（ＶＨまたはＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲ領域と４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシル末端への順序は、次のとおりである：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲ領域はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を指す。
【００８２】
本開示の抗体には、マウス抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体、好ましくはヒト化抗体が含まれる。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「マウス抗体」という用語は、当技術分野の知識および技術に従って調製された抗ヒトＣＤ３８モノクローナル抗体を指す。その調製中に、試験対象にＣＤ３８抗原を注入し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する。本開示の好ましい実施形態において、マウスＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウスκ、λ鎖もしくはそのバリアントの軽鎖定常領域をさらに含むか、またはマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはそのバリアントの重鎖定常領域をさらに含む。
【００８４】
「キメラ抗体」という用語は、ある種（マウスなど）の抗体の可変領域を別の種（ヒトなど）の抗体の定常領域に融合させることによって得られる抗体であり、キメラ抗体はマウス抗体によって誘導される免疫応答を軽減することができる。キメラ抗体を調製するためには、最初に特定のマウスモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを調製し、次に必要に応じて、可変領域遺伝子を当該マウスハイブリドーマからクローニングする；マウス可変領域遺伝子をヒト定常領域遺伝子に接続してキメラ遺伝子を形成し、該キメラ遺伝子をその後、発現ベクターに挿入することができる。最後に、キメラ抗体分子は真核生物系または原核生物系で発現される。本開示の特定の実施形態では、ＣＤ３８キメラ抗体の抗体軽鎖は、ヒトのカッパ（κ）、ラムダ（λ）鎖またはそれらのバリアントの軽鎖定常領域をさらに含む。ＣＤ３８キメラ抗体の抗体重鎖は、さらに、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの従来のバリアントの重鎖定常領域を含み、好ましくはヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域を含み、より好ましくはＣＤＣ機能を強化するアミノ酸変異（Ｅ３３３Ａ変異など）を有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。
【００８５】
「ヒト化抗体」という用語は、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体の可変領域フレームワークに移植することによって生成される抗体、すなわち、異なるタイプのヒト生殖細胞系列抗体フレームワーク配列において産生される抗体を指す。ヒト化抗体は、多数のマウスタンパク質成分を有するキメラ抗体によって誘導される異種応答を回避することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子の配列をカバーする公共のＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から取得することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃｏｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ）、ならびに、Ｋａｂａｔ，  ＥＡ，  ｅｔ  ａｌ．１９９１年  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  第５版に見出すことができる。免疫原性の低下によって引き起こされる活性の低下を回避するために、ヒト抗体可変領域中のフレームワーク配列は最小限の逆変異（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）または復帰変異（ｂａｃｋ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）を受けて、活性を維持することができる。本開示のヒト化抗体には、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイによるＣＤＲ親和性成熟後に得られるヒト化抗体も含まれる。
【００８６】
ＣＤＲの移植は、抗原との接触に関与するフレームワーク残基の変化のために、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原に対する親和性の低下をもたらす可能性がある。このような相互作用は、高度な体細胞変異（ｈｉｇｈｌｙ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）に起因する可能性がある。したがって、ドナーフレームワークのアミノ酸をヒト化抗体フレームワークに移植することが必要である。非ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントに由来する抗原結合に関与するアミノ酸残基は、動物モノクローナル抗体の可変領域の配列および構造を調べることによって同定することができる。ドナーＣＤＲフレームワークと生殖細胞系列の間で異なるアミノ酸残基は、関連していると見なされ得る。最も密接に関連する生殖細胞系列を決定することが不可能な場合、配列は、サブタイプ間で共有されるコンセンサス配列に対して、または高い類似性パーセンテージを有するマウス配列に対してアラインメントされ得る。フレームワーク中のまれな残基は、体細胞の変異の結果であると考えられ、結合において重要な役割を果たす。
【００８７】
本開示のいくつかの特定の実施形態では、ＣＤ３８ヒト化抗体の抗体軽鎖は、ヒトのカッパ（κ）、ラムダ（λ）鎖またはそれらの従来のバリアントの軽鎖定常領域をさらに含む。ＣＤ３８ヒト化抗体の抗体重鎖は、さらに、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの従来のバリアントの重鎖定常領域を含み、好ましくはヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域を含み、より好ましくはＣＤＣ機能を強化するアミノ酸変異（Ｅ３３３Ａ変異など）を有するＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。
【００８８】
本開示に記載されるヒト抗体重鎖定常領域および抗体軽鎖定常領域の「従来のバリアント」は、抗体可変領域の構造および機能を変化させない、先行技術に開示されたヒト重鎖または軽鎖定常領域バリアントを指す。例示的なバリアントには、重鎖定常領域上の部位特異的改変およびアミノ酸置換による、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４重鎖定常領域バリアントが含まれる。具体的な置換は、例えば、ＹＴＥ変異、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ変異、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｅ３３３Ａ変異、および／またはノブイントゥホール構造（ａ  ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）をもたらす（抗体重鎖がノブ−Ｆｃおよびホール−Ｆｃの組み合わせを有するようにする）変異などである。これらの変異は、抗体可変領域の機能に影響を与えることなく、抗体に新しい特性を与えることが証明されている。
【００８９】
「復帰変異」という用語は、ヒト抗体に由来するＦＲ領域中のアミノ酸残基を、元の抗体に由来するものに対応するアミノ酸残基に戻すことを指す。ヒト化抗体によって引き起こされる活性の低下を回避するために、通常、ヒト化抗体の可変領域は最小限の逆変異を受けて、抗体の活性を維持することができる。
【００９０】
「ヒト抗体（ＨｕＭＡｂ）」、「ヒト由来抗体（ヒト由来の抗体、ヒトに由来する抗体）」、「完全ヒト抗体（ｆｕｌｌ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「完全ヒト抗体（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は互換的に使用することができ、ヒト由来の抗体、または抗原刺激に応答して特定のヒト抗体を産生するように当技術分野で既知の任意の方法によって「操作」された遺伝子改変生物から得られる抗体であり得る。いくつかの技術では、ヒトの重鎖および軽鎖遺伝子座の要素が、内因性の重鎖および軽鎖遺伝子座が特異的にノックアウトされた胚性幹細胞株に由来する生物細胞株に導入される。トランスジェニック生物は、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成することができ、該生物は、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用することができる。ヒト抗体はまた、重鎖および軽鎖が１つ以上のヒトＤＮＡ供給源に由来するヌクレオチド配列によってコードされるような抗体であり得る。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体トランスフェクション法およびファージディスプレイ技術によって構築され得るか、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞から構築され得、すべての方法は当技術分野で知られている。
【００９１】
「全長抗体（ｆｕｌｌ−ｌｅｎｇｔｈ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「完全抗体（ｆｕｌｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「全抗体（ｗｈｏｌｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「完全抗体（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、本明細書では互換的に使用され、以下に定義される抗原結合フラグメントとは区別される、実質的に完全な形態の抗体を指す。この用語は、特に、軽鎖および重鎖に定常領域を含む抗体を指す。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本開示の全長抗体は、以下の表１に示されるように、軽鎖可変領域を軽鎖定常領域に連結し、重鎖可変領域を重鎖定常領域に連結することによって形成される全長抗体を含む。当業者は、必要に応じて、さまざまな抗体源から軽鎖定常領域および重鎖定常領域、例えば、ヒト抗体由来の軽鎖定常領域（またはその従来のバリアント）および重鎖定常領域（またはその従来のバリアント）を選択することができる。同時に、表１に記載されている軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組み合わせは、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Fａｂ、またはｓｃＦｖもしくはFａｂを含む他の形態の抗原結合フラグメントを形成することができる。
【００９３】
表１：抗ＣＤ３８ヒト化抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の組み合わせ
【表１】
2021536254.tif 000043
【００９４】
注：例えば、「ｈ００９−０１Ｖ」は、ｈ００９−０１Ｖの軽鎖／重鎖可変領域のペアを表し、ここで、当該重鎖可変領域はｈ００９ＶＨ１（配列番号２４）であり、当該軽鎖可変領域はｈ００９ＶＬ１（配列番号２５）である。
【００９５】
「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、可能なバリアント抗体（例えば、天然に存在する変異またはモノクローナル抗体調製物の製造中に生成された変異を含むバリアント。これらは、通常、最小限の量で存在する。）を除いて、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。通常、異なる決定基（エピトープ）に対して異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、モノクローナル抗体調製物（製剤）の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、接頭辞「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法で製造された抗体として解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、さまざまな技術、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を使用する方法を含むがこれらに限定されないものによって調製することができる。そのような方法、およびモノクローナル抗体を調製するための他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
【００９６】
抗体の「抗原結合フラグメント」または「機能的フラグメント」という用語は、抗原（例えばＣＤ３８）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。全長抗体のフラグメントを用いて、特定の抗原に結合するという機能を達成できることが示されている。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれる結合フラグメントの例には、以下が含まれる：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから構成される一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって接続された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）抗体の片方のアームのＶＨおよびＶＬドメインから構成されるＦｖフラグメント；（ｉｖ）鎖間ジスルフィド結合を介してＶＨとＶＬによって形成される安定な抗原結合フラグメントであるｄｓＦｖ；および（ｖ）ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂなどのフラグメントを含む、ダイアボディ、二重特異性抗体および多重特異性抗体。さらに、ＦｖフラグメントのＶＬドメインとＶＨドメインは２つの別々の遺伝子によってコードされているが、組換え法を使用することによりそれらを合成リンカーによって連結して、一本のタンパク質鎖を生成することができ、該一本のタンパク質鎖では、ＶＬドメインとＶＨドメインをペアリングすることで一価分子が形成されている（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３頁を参照）。そのような一本鎖抗体も、「抗原結合フラグメント」という用語に含まれることが意図されている。このような抗体フラグメントは、当該分野で既知の従来技術を使用して得られ、インタクト抗体の場合と同じ方法を使用することによって機能的フラグメントについてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクト免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的消化によって生成され得る。抗体は、異なるアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体の形態であり得る。いくつかの実施形態では、本開示のその抗原結合フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、二量体化Ｖ領域（ダイアボディ）、ジスルフィド結合によって安定化されたＶ領域（ｄｓＦｖ）などが含まれる。
【００９７】
Ｆａｂは、ＩｇＧ抗体分子をパパイン（Ｈ鎖の２２４位のアミノ酸残基を切断する）で処理することによって得られる抗体フラグメントである。得られるフラグメントは、約５０，０００の分子量と抗原結合活性を有し、Ｎ末端側のＨ鎖の約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合を介して結合している。
【００９８】
本開示のＦａｂは、本開示のモノクローナル抗体をパパインで処理することによって生成することができる。さらに、Ｆａｂは、抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物に導入してＦａｂを発現させることによって生成することができる。
【００９９】
「Ｆ（ａｂ’）２」は、ヒンジ領域の２つのジスルフィド結合の下流部分でペプシンによってＩｇＧを消化することによって得られる、分子量約１００，０００で抗原結合活性を有する抗体フラグメントを指す。Ｆ（ａｂ’）２は、ヒンジ領域で接続された２つのＦａｂを含む。
【０１００】
本開示のＦ（ａｂ’）２は、本開示のモノクローナル抗体をペプシンで処理することによって生成することができる。また、Ｆ（ａｂ’）２は、以下に記載されるＦａｂ’をチオエーテル結合またはジスルフィド結合を介して結合させることによって生成することができる。
【０１０１】
「Ｆａｂ’」は、上記のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域でジスルフィド結合を切断することによって得られる、分子量約５０，０００で抗原結合活性を有する抗体フラグメントである。本開示のＦａｂ’は、本開示のＦ（ａｂ’）２をジチオトレイトールなどの還元剤で処理することによって生成することができる。さらに、Ｆａｂ’は、抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、該ベクターを原核生物または真核生物に導入してＦａｂ’を発現させることによって生成することができる。
【０１０２】
「一本鎖抗体」、「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、リンカーによって抗体軽鎖可変ドメイン（または領域；ＶＬ）に接続された抗体重鎖可変ドメイン（または領域；ＶＨ）を含む分子を指す。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ２−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−ＣＯＯＨまたはＮＨ２−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ＣＯＯＨの一般構造を有する。先行技術における適切なリンカーは、繰り返されるＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアント（例えば、１〜４回の繰り返しを有するバリアント）からなる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３年），  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８頁）。本開示において使用することができる他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５年），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８：７２５−７３１頁、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１年），  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１：９４−１０６頁、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６年），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５６：３０５５−３０６１頁、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９年），  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９３：４１−５６頁、およびＲｏｏｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１年），  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌによって記載されている。
【０１０３】
本開示のｓｃＦｖは、以下のステップによって産生することができる：本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得るステップ、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築するステップ、該ＤＮＡを原核生物または真核生物発現ベクターに挿入するステップ、および、次いで該発現ベクターを原核生物または真核生物に導入してｓｃＦｖを発現させるステップ。
【０１０４】
「ダイアボディ」は、ｓｃＦｖが二量体化された抗体フラグメントであり、二価の抗原結合活性を有する抗体フラグメントである。二価の抗原結合活性において、２つの抗原は、同じであっても異なっていてもよい。
【０１０５】
二重特異性および多重特異性抗体とは、ＣＤ３８に結合できるｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントを含む、２つ以上の抗原または抗原決定基に同時に結合できる抗体を指す。
【０１０６】
本開示のダイアボディは、以下のステップによって産生することができる：本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得るステップ、リンカーペプチドの長さを８アミノ酸残基以下にするように、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築するステップ、該ＤＮＡを原核生物または真核生物発現ベクターに挿入するステップ、および、次いで該発現ベクターを原核生物または真核生物に導入してダイアボディを発現させるステップ。
【０１０７】
「ｄｓＦｖ」は、ＶＨおよびＶＬのそれぞれの１つのアミノ酸残基をシステイン残基で置換し、次いで、２つのシステイン残基間のジスルフィド結合を介して置換されたポリペプチドを接続することによって得られる。システイン残基で置換されるアミノ酸残基は、既知の方法に従って、抗体の三次元構造予測に基づいて選択することができる（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  ７，  ６９７頁（１９９４年））。
【０１０８】
本開示のｄｓＦｖは、以下のステップによって産生することができる：本開示のモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬをコードするｃＤＮＡを得るステップ、ｄｓＦｖをコードするＤＮＡを構築するステップ、該ＤＮＡを原核生物または真核生物発現ベクターに挿入するステップ、および、次いで該発現ベクターを原核生物または真核生物に導入してｄｓＦｖを発現させるステップ。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）」という用語は、可変ドメイン中の抗原結合ループ（ＣＤＲ）のスキャフォールドとして機能する、可変ドメイン（ＶＬまたはＶＨのいずれか）の一部を指す。基本的に、それは、ＣＤＲのない可変ドメインである。
【０１１０】
「アミノ酸差異」または「アミノ酸変異」という用語は、ポリペプチドおよびそのバリアントの間の差異または変異を指し、元のタンパク質またはポリペプチドと比較した場合にタンパク質またはポリペプチド中に存在するアミノ酸変化または変異（元のタンパク質またはポリペプチドに基づく１個、２個、３個またはそれ以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を含む）を指す。
【０１１１】
「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」または「超可変領域」という用語は、抗原結合に主に寄与する抗体可変ドメインに存在する６つの超可変領域のうちの１つを指す。一般的に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、「Ｋａｂａｔ」番号付け基準（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１年），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、メリーランド州を参照）、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付け基準（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７年）ＪＭＢ  ２７３：９２７−９４８頁を参照）およびＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け基準（Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２−１３６頁（１９９９年）；Ｌｅｆｒａｎｃ，  ＭＰ，  ｅｔｃ．，  Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２７、５５−７７頁（２００３年））などを含む、任意のよく知られた基準によって決定することができる。例えば、古典的フォーマットの場合、Ｋａｂａｔ基準に従うことができ、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１−３５（ＨＣＤＲ１）、５０−６５（ＨＣＤＲ２）および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）として番号付けされ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４−３４（ＬＣＤＲ１）、５０−５６（ＬＣＤＲ２）および８９−９７（ＬＣＤＲ３）として番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａ基準に従い、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、２６−３２（ＨＣＤＲ１）、５２−５６（ＨＣＤＲ２）および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）として番号付けされ、ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６−３２（ＬＣＤＲ１）、５０−５２（ＬＣＤＲ２）および９１−９６（ＬＣＤＲ３）として番号付けされる。ＣＤＲを定義するためにＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの双方を組み合わせることによって、ＣＤＲは、ヒトＶＨのアミノ酸残基２６−３５（ＨＣＤＲ１）、５０−６５（ＨＣＤＲ２）および９５−１０２（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬのアミノ酸残基２４−３４（ＬＣＤＲ１）、５０−５６（ＬＣＤＲ２）および８９−９７（ＬＣＤＲ３）から構成される。ＩＭＧＴ基準に従い、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、２６−３５（ＣＤＲ１）、５１−５７（ＣＤＲ２）および９３−１０２（ＣＤＲ３）としておおよそ番号付けされ、ＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、２７−３２（ＣＤＲ１）、５０−５２（ＣＤＲ２）および８９−９７（ＣＤＲ３）としておおよそ番号付けされる。ＩＭＧＴ基準に従い、抗体のＣＤＲ領域は、ＩＭＧＴ／ドメイン・ギャップ・アライン・プログラム（ＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ  Ａｌｉｇｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ）を用いて決定することができる。
【０１１２】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位（例えば、ＣＤ３８分子上の特定の部位）を指す。エピトープは、典型的には、固有の三次元コンホメーション中に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個の連続または非連続なアミノ酸を含む。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第６６巻、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６年）を参照されたい。
【０１１３】
「特異的に結合する」または「選択的に結合する」という用語は、抗原上の所定のエピトープへの抗体の結合を指す。典型的には、抗体は、約１０−８Ｍ未満、例えば、約１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満もしくは１０−１１Ｍ未満またはそれより低い親和性（ＫＤ）で結合する。
【０１１４】
「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用についての解離平衡定数を指す。典型的には、本開示の抗体は、約１０−７Ｍ未満、例えば、約１０−８Ｍ、１０−９Ｍもしくは１０−１０Ｍまたはそれより小さい解離平衡定数（ＫＤ）でＣＤ３８に結合し、当該解離平衡定数（ＫＤ）は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ装置の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定される。
【０１１５】
「競合」という用語が同じエピトープに対して競合する抗原結合タンパク質（例えば、中和抗原結合タンパク質または中和抗体）との関連において使用される場合、それは競合が試験される抗原結合タンパク質間で起こることを意味し、試験される抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）が共通抗原（例えば、ＣＤ３８抗原またはそのフラグメント）への参照抗原結合タンパク質（例えば、リガンドまたは参照抗体）の特異的結合を防止または阻害する（例えば、低減する）アッセイによって決定される。ある抗原結合タンパク質が別の抗原結合タンパク質と競合するかどうかを決定するために、多数のタイプの競合結合アッセイが利用可能である。これらのアッセイは、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ，  １９８３年，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：  ２４２−２５３頁を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ，  １９８６年，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３７：  ３６１４−３６１９頁；  Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０年，  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：  ５４６−５５２頁を参照）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  １９８８年，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照）；Ｉ−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ，  １９８８年，  Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２５：  ７−１５頁）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  １９９０年，  Ｓｃａｎｄ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３２：  ７７−８２頁）である。典型的には、アッセイは、非標識試験抗原結合タンパク質および標識参照抗原結合タンパク質の両方に結合することができる精製抗原（抗原は固体表面または細胞表面上にある）の使用を含む。競合阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞表面に結合した標識の量を測定することによって決定される。通常、試験抗原結合タンパク質は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗原結合タンパク質（競合抗原結合タンパク質）には、以下のものが含まれる：参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質；および参照抗原結合タンパク質が結合するエピトープに十分に近いエピトープに結合する抗原結合タンパク質（ここで、それら２つのエピトープは互いに空間的に干渉し、それによって結合を妨害する）。競合的結合を決定するための方法に関するさらなる詳細は、本明細書の実施例において提供される。典型的には、競合する抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、それは共通抗原への参照抗原結合タンパク質の特異的結合の少なくとも４０〜４５％、４５〜５０％、５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上を阻害（例えば、低減）する。いくつかの場合には、結合は、少なくとも８０〜８５％、８５〜９��％、９０〜９５％、９５〜９７％、またはそれ以上阻害される。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を指す。核酸分子は一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれると、「作動可能に連結」される。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を与える場合、該コード配列に作動可能に連結されている。
【０１１７】
「ベクター」または「発現ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。一実施形態では、ベクターは、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。本明細書で開示されるベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製することが可能であるか（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）、または宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に組み込まれ、それにより宿主ゲノムとともに複製され得る（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）。
【０１１８】
抗体およびその抗原結合フラグメントを産生および精製するための方法は、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌｆｏｒ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ５−８章および１５章など、当技術分野で周知である。例えば、マウスをヒトＣＤ３８またはそのフラグメントで免疫化することができ、次いで、当技術分野で周知の従来の方法を使用することにより、得られた抗体を再生し、精製し、そしてアミノ酸配列を配列決定することができる。抗原結合フラグメントはまた、従来の方法によって調製することができる。本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ上に１つ以上のヒトＦＲ領域を移植するように操作される。ヒトＦＲ生殖細胞系列配列は、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）からそれらのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ＩＭＧＴ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）を介して、またはＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ、２００１年、ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から、ＭＯＥソフトウェアを用いてＩＭＧＴヒト抗体可変生殖細胞系列遺伝子データベースに対してアラインメントすることによって得ることができる。
【０１１９】
「宿主細胞」という用語は、発現ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞には、微生物（細菌など）、植物または動物細胞が含まれ得る。形質転換されやすい細菌には、大腸菌またはサルモネラ菌株などの腸内細菌科；枯草菌などのバチルス科；肺炎球菌；連鎖球菌およびインフルエンザ菌のメンバーが含まれる。好適な微生物としては、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）およびピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）が挙げられる。好適な動物宿主細胞株には、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）およびＮＳ０細胞が含まれる。
【０１２０】
本開示の操作された抗体またはその抗原結合フラグメントは、既知の方法を使用して調製および精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ発現ベクターに組み込むことができる。次いで、組換え免疫グロブリンを発現するベクターは、ＣＨＯ細胞に安定にトランスフェクトされ得る。当該分野で周知のより推奨される方法として、哺乳動物発現系は、典型的にはＦｃ領域中の高度に保存されたＮ末端部位において、グリコシル化を生じる。ヒトＣＤ３８に特異的に結合する抗体を発現する安定なクローンが得られた。陽性クローンは、抗体産生のためのバイオリアクター内の無血清培養培地中で増殖させることができる。抗体が分泌された培養培地は、従来の技術によって精製され得る。例えば、精製は、緩衝液でモディファイされた（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｗｉｔｈ  ｂｕｆｆｅｒ）タンパク質ＡまたはＧセファロースＦＦカラムで行うことができる。非特異的結合成分を洗浄により除去する。結合した抗体をｐＨグラジエントによって溶出し、抗体フラグメントをＳＤＳ−ＰＡＧＥによって検出し、その後プールする。抗体は、一般的な技術を用いて、ろ過および濃縮され得る。可溶性混合物および凝集体は、サイズ排除またはイオン交換などの一般的な技術によって効果的に除去することができる。得られた生成物は、−７０℃などで直ちに凍結するか凍結乾燥する必要がある場合がある。
【０１２１】
「投与」、「投与する」または「処置」は、動物、ヒト、対象、細胞、組織、臓器、または生体液に適用される場合、外因性の医薬品、治療薬、診断薬、または組成物を、当該動物、ヒト、対象、細胞、組織、臓器、または生体液と接触させることを指す。「投与」、「投与する」または「処置」は、例えば、治療方法、薬物動態学的方法、診断法、研究方法および実験方法を指すことができる。細胞の処置（処理）は、試薬を細胞と接触させること、ならびに試薬を流体と接触させることを含み、ここで、該流体は細胞と接触している。「投与」、「投与する」または「処置」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ処置、例えば、試薬、診断、結合化合物または別の細胞による細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ処置も意味する。「処置」は、ヒト、獣医、または研究対象に適用される場合、治療的処置、予防的または予防的措置（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ  ｍｅａｓｕｒｅｓ）、研究および診断への適用を指す。
【０１２２】
「処置」とは、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを含む組成物、または該抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子などの治療薬を、該治療薬が治療効果を有することが知られている１つ以上の疾患症状を有する患者に、内部的にまたは外部的に投与することを意味する。典型的には、該治療薬は、臨床的に測定可能な程度でそのような症状の退行を誘導することによって、またはその進行を抑制することによって、処置される患者または集団における１つ以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。任意の特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療薬の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、患者の病状、年齢および体重、ならびに患者において所望の反応を誘発する該治療薬の能力などのさまざまな要因によって変動し得る。
疾患症状が軽減されたかどうかは、その症状の重症度または進行状況を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって通常使用される任意の臨床計測によって評価することができる。本発明の一実施形態（例えば、処置方法または製品）は、それぞれの標的疾患症状を軽減するのに有効ではないかもしれないが、スチューデントのｔ検定、カイ２乗検定、マンおよびホイットニー（Ｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｎｅｙ）によるＵ検定、クラスカル−ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）検定（Ｈ検定）、ヨンクヒール−タプストラ（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａ）検定、およびウィルコクソン検定などの当技術分野で既知の任意の統計的検定によって決定される統計的に有意な数の対象において、標的疾患症状を軽減するはずである。
【０１２３】
「保存的改変」または「保存的置換（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｏｒ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）」は、タンパク質の生物学的活性に影響を与えることなく頻繁にその変更を行うことができるように、タンパク質中のアミノ酸を類似の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、主鎖のコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換することを指す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７年）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，  Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，２２４頁（第４版）を参照）。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物学的活性を破壊する可能性が低い。例示的な保存的置換は、以下の表２「例示的なアミノ酸保存的置換」に記載されている。
【０１２４】
表２．例示的なアミノ酸保存的置換
【表２】
2021536254.tif 000044
【０１２５】
「有効量」または「有効投与量」は、任意の１つ以上の有益なまたは所望の結果を得るために必要な薬剤、化合物または医薬組成物の量を指す。予防的適用の場合、有益なまたは所望の結果には、状態の生化学的、組織学的および行動的症状、その合併症、ならびに状態の進行中の中間の病理学的表現型を含む、リスクの排除または低減、重症度の低減、または疾患の発症の遅延が含まれる。治療的適用の場合、有益なまたは所望の結果には、臨床結果、例えば、本開示の標的抗原に関連するさまざまな状態の発生率の低下または状態の１つ以上の症状の改善、状態を処置するために必要な他の薬剤（ａｇｅｎｔｓ）の投与量の減少、別の薬剤（ａｇｅｎｔ）の効力の増強、および／または患者における本開示の標的抗原に関連する状態の進行の遅延が含まれる。
【０１２６】
「外因性」とは、状況に応じて、生物、細胞、またはヒトの外部で産生される物質を指す。
【０１２７】
「内因性」とは、状況に応じて、生物、細胞、または人体の内部で産生される物質を指す。
【０１２８】
本開示において言及される「変異配列」は、適切な置換、挿入または欠失によって本開示のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を改変した後に得られる、本開示のものに対してさまざまなパーセンテージの配列同一性のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。本開示に記載される配列同一性は少なくとも８５％、９０％または９５％であり得、非限定的な例としては８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％が挙げられる。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、「相同性」または「同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列間または２つのポリペプチド間の配列類似性を指す。比較される２つの配列の両方のある位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々のある位置が同じ塩基によって占められている場合、それらの分子はその位置で相同であると呼ばれる。２つの配列間の相同性の割合（％）は、２つの配列によって共有される一致したまたは相同な位置の数を、比較する位置の総数で割ってから、１００を掛けた関数である。例えば、２つの配列を最適にアラインメントしたときに、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致または相同である場合、それらの２つの配列は６０％相同である；２つの配列中の１００個の位置のうち９５個が一致または相同である場合、それらの２つの配列は９５％相同である。一般に、比較される２つの配列は、最大の相同性パーセントを与えるためにアラインメントに供される。例えば、比較はＢＬＡＳＴアルゴリズムによって実行することができ、そこではアルゴリズムのパラメーターは各参照配列の全長にわたる各配列間の最大の一致を与えるように選択される。以下の参考文献は、配列解析に頻繁に使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに言及している：ＢＬＡＳＴ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ）：Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０頁；Ｇｉｓｈ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３年）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．  ３：２６６−２７２頁；Ｍａｄｄｅｎ，  ＴＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６年）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２６６：１３１−１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７年）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２頁；Ｚｈａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９７年）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ７：６４９−６５６頁。ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴから利用可能なものなどの他の従来のＢＬＡＳＴアルゴリズムも当業者によく知られている。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」という表現は互換的に使用され、すべてのそのような名称は子孫を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」は、継代の回数にかかわらず、主要な対象細胞およびそれに由来する培養物を含む。また、意図されたまたは意図されていない変異のために、すべての子孫がＤＮＡの内容において正確に同一ではない可能性があることも理解されるべきである。最初に形質転換された細胞でスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が含まれる。異なる名称が意図されている場合、それは文脈から明確に理解されるであろう。
【０１３１】
本明細書中で使用される場合、「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」は、微量の核酸、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの特定の部分が、例えば米国特許第４，６８３，１９５号に記載されるように増幅される手順または技術を指す。一般に、オリゴヌクレオチドプライマーを設計できるように、目的の領域の末端またはそれを超える配列情報が利用可能である必要がある；これらのプライマーは、増幅されるテンプレートの相補鎖の配列と同一または類似である。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅される物質の末端と同一であり得る。ＰＣＲを用いて、特定のＲＮＡ配列、全ゲノムおよび全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ由来の特定のＤＮＡ配列、バクテリオファージまたはプラスミド配列などを増幅することができる。一般的には、Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．  Ｏｕａｎｔ．  Ｂｉｏｌ．  ５１：２６３頁；Ｅｒｌｉｃｈ編（１９８９年）ＰＣＲ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ）を参照されたい。本開示において使用されるＰＣＲは、試験対象の核酸サンプルを増幅するためのポリメラーゼ反応法の１つ（ただし、唯一ではない）の例であると考えられる。該方法は、プライマーとして知られる核酸配列を核酸ポリメラーゼと共に使用して、核酸の特定の部分を増幅または生成することを含む。
【０１３２】
「単離された」とは、指定された分子が、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物などの他の生体分子、または細胞破片および増殖培地などの他の物質を実質的に含まない精製された状態を指す。一般に、「単離された」という用語は、本明細書に記載の化合物の実験的または治療方法的使用を著しく妨害する量で存在しない限り、これらの物質が完全に存在しないこと、または水、緩衝液もしくは塩が存在しないことを意味するものではない。
【０１３３】
「任意の」または「任意に」とは、その後に続く出来事または状況が発生する可能性があるが、必ずしも発生するとは限らないことを意味し、当該記載は、出来事または状況が発生する場合と発生しない場合を示す。例えば、「任意に１〜３個の抗体重鎖可変領域を含む」とは、特定の配列を有する抗体重鎖可変領域が存在し得るが、存在する必要はないことを意味する。
【０１３４】
「医薬組成物」は、本開示による１つ以上の抗体またはその抗原結合フラグメントと、生理学的／薬学的に許容される担体または賦形剤などの他の化学成分とを含む混合物を指す。医薬組成物は、生物への投与を促進し、有効成分の吸収を促進し、それによって生物学的効果を発揮することを目的とする。
【０１３５】
「薬学的に許容される担体」という用語は、抗体または抗原結合フラグメントの送達のための製剤での使用に適した任意の不活性物質を指す。担体は、粘着防止剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、充填剤または希釈剤、防腐剤（抗酸化剤、抗菌剤または抗真菌剤など）、甘味料、吸収遅延剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などであり得る。好適な薬学的に許容される担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、デキストロース、植物油（例えば、オリーブ油）、生理食塩水、緩衝液、緩衝生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）、および等張剤（例えば、糖、ポリオール、ソルビトールおよび塩化ナトリウム）が挙げられる。
【０１３６】
「ＣＤ３８陽性疾患または障害」は、ＣＤ３８発現細胞が存在する疾患または障害である。限定されることなく、ＣＤ３８を発現するＢ細胞、形質細胞、単球およびＴ細胞が関与する免疫疾患に関して、当該疾患の１つの特徴は、例えば、ＣＤ３８を発現する腫瘍細胞を伴う腫瘍疾患（例えば、ＣＤ３８を発現する白血病、Ｂ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍、Ｔ／ＮＫ細胞リンパ腫および骨髄腫など）である。本開示のいくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、骨髄腫は、多発性骨髄腫、前部髄様腫瘍（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）、および軽鎖アミロイドーシスからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫／白血病から選択され得、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫またはＢ細胞ホジキンリンパ腫、成熟Ｂ細胞腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（低悪性度、中悪性度または高悪性度のＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、リンパ節ＭＺＢＬ型、脾臓ＭＺＢＬ型を含む）、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫瘍、血漿細胞骨髄腫、血漿細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）および有毛細胞リンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫瘍は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、喘息、動脈硬化症、白血球接着不全症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症状（例えば、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病）、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ（ＲＡ）、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群、脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ならびにウイルス感染によって引き起こされる免疫疾患（エボラウイルス（ＥＢＶ）に感染したＢ細胞によって引き起こされるか、媒介される疾患など）からなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎および移植片対宿主病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫疾患は関節リウマチである。
【０１３７】
加えて、本開示は、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）陽性細胞に関連する疾患の処置または予防のための薬剤（ａｇｅｎｔｓ）を提供する。薬剤は、本開示の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを有効成分として含み、治療有効量または予防有効量の薬剤は、ＣＤ３８陽性疾患の処置または予防を必要とする対象に投与され得る。抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ３８によって誘導される疾患関連活性を阻害するか、ＣＤ３８発現細胞の数を排除または減少させることができる。治療有効量または予防有効量の組成物は、単位用量で、０．１〜３０００ｍｇ（好ましくは０．１〜２０００ｍｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇ）の上記の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【０１３８】
加えて、本開示は、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）の免疫検出または決定のための方法、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）の免疫検出または決定のための試薬、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）を発現する細胞の免疫検出または決定のための方法、ならびに標的抗原（例えば、ＣＤ３８）に関連する疾患を診断するための診断薬であって、標的抗原（例えば、ヒトＣＤ３８）を特異的に認識し、それに結合する本開示の抗体または抗体フラグメントを有効成分として含むものに関する。
【０１３９】
本開示において、標的抗原（例えば、ＣＤ３８）の量を検出または測定するための方法は、任意の既知の方法であり得る。例えば、当該方法には、イムノアッセイまたは免疫検出法が含まれる。
【０１４０】
イムノアッセイまたは免疫検出法は、標識された抗原または抗体を用いて抗体または抗原の量を検出または測定する方法である。イムノアッセイまたは免疫検出法の例には、放射性物質（ＲＩＡ）で標識された抗体を使用する免疫法、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、発光イムノアッセイ、ウエスタンブロッティング、物理化学的方法などが含まれる。
【０１４１】
上記のＣＤ３８陽性細胞に関連する疾患は、本開示の抗体またはその抗体フラグメントを使用してＣＤ３８発現細胞を検出または測定することによって診断することができる。
【０１４２】
ポリペプチドを発現する細胞は既知の免疫検出法によって、好ましくは免疫沈降、蛍光細胞染色、免疫組織化学染色などによって検出することができる。加えて、ＦＭＡＴ８１００ＨＴＳシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）を用いた蛍光抗体の染色法などの方法も利用できる。
【０１４３】
本開示において、標的抗原（例えばＣＤ３８）について検出または測定されるサンプルは、標的抗原（例えばＣＤ３８）を発現する細胞を含むことが可能である限り、特に限定されず、例えば、組織細胞、血液、血漿、血清、膵臓分泌物、尿、糞便、組織液または培養培地である。
【０１４４】
必要な診断法に応じて、本開示のモノクローナル抗体またはその抗体フラグメントを含む診断薬は、抗原−抗体反応を行うための試薬または当該反応を検出するための試薬も含み得る。抗原−抗体反応を行うための試薬には、緩衝液、塩などが含まれる。検出のための試薬には、イムノアッセイまたは免疫検出法において一般に使用される薬剤（ａｇｅｎｔｓ）、例えば、モノクローナル抗体、その抗体フラグメントまたはコンジュゲートを認識する標識二次抗体、およびその標識に対応する基質が含まれる。
【０１４５】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、上記の説明において記載されている。本明細書に記載されるものと類似または同一の任意の方法および材料が、本開示の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法および材料を以下に記載する。本明細書および特許請求の範囲を通じて、本開示の他の特徴、目的および利点が明らかになるのであろう。
【０１４６】
本明細書および特許請求の範囲において、文脈が明確に別段の指示をしない限り、単数形はその複数の対応物も指す。本明細書で明示的に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関係する当業者によって一般に理解される意味を有する。本明細書で引用されているすべての特許および刊行物は、参照により組み込まれる。以下の例は、本開示の好ましい実施形態をより完全に説明するために提供される。これらの例は、いかなる方法でも本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、本開示の範囲は特許請求の範囲によって規定される。
【実施例】
【０１４７】
・実施例および試験例
以下の実施例および試験例は、本開示をさらに説明するために提供されるが、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。本開示の実施例および試験例において特定の条件が示されていない実験方法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）などの従来の条件に従って、または製造業者が推奨する条件に従って実施される。供給源が特に示されていない試薬は、市販の試薬である。
【０１４８】
（実施例１）ＣＤ３８抗原の調製
本開示で使用される抗原および検出用のタンパク質のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ  ＡＤＰ−リボシクリアーゼ／サイクリックＡＤＰ−リボヒドロラーゼ１（ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｃｙｃｌｉａｓｅ／Ｃｙｃｌｉｃ  ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ１）（ヒトＣＤ３８タンパク質、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ２８９０７）をＣＤ３８テンプレートとして用いて設計され、任意に、ＨｉｓタグまたはＦｃなどのさまざまなタグがＣＤ３８タンパク質に融合された。本開示で使用される抗原および検出用のタンパク質は、ｐＴＴ５ベクター（Ｂｉｏｖｅｃｔｏｒ、カタログ番号：１０２７６２）またはｐＴａｒｇｅＴベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ａ１４１０）にそれぞれクローニングすること、２９３細胞で一過性に発現させるか、ＣＨＯ−Ｓ細胞で安定に発現させること、および精製を含むプロセスによって得られた。
【０１４９】
ＣＤ３８細胞外ドメインとマウスＩｇＧ２ａ−Ｆｃの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−ｍＦｃ、免疫原として使用；
【化１】
2021536254.tif 000045
注：下線部分はマウスＩｇＧ２ａ−Ｆｃ部分を表す。
【０１５０】
ＣＤ３８細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１Ｆｃの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ、免疫原として使用；
【化２】
2021536254.tif 000046
注：下線部分はヒトＩｇＧ１−Ｆｃ部分を表す。
【０１５１】
ＣＤ３８細胞外ドメインとＨｉｓタグの融合タンパク質：ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ、免疫原または検出試薬として使用；
【化３】
2021536254.tif 000047
注：下線部分は６×Ｈｉｓタグを表す。
【０１５２】
（実施例２）ＣＤ３８関連組換えタンパク質の精製
１．Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質を精製するステップ：
細胞発現上清のサンプルを高速で遠心分離して不純物を除去し、緩衝液をＰＢＳに置換し、イミダゾールを最終濃度５ｍＭになるように添加した。５ｍＭイミダゾールを含有するＰＢＳ溶液でニッケルカラムを平衡化し、カラム容量の２〜５倍で洗浄した。置換した細胞上清サンプルをＮｉセファロースエクセル（Ｎｉ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ｅｘｃｅｌ）カラム（ＧＥ、１７−３７１２−０２）にアプライした。Ａ２８０の読み取り値がベースラインに低下するまで、５ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳでカラムを洗浄した。クロマトグラフィーカラムをＰＢＳ＋１０ｍＭイミダゾールでリンスして、非特異的に結合したタンパク質不純物を除去し、流出液を回収した。３００ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳ溶液で標的タンパク質を溶出し、溶出ピークを回収した。回収した溶出液を濃縮し、移動相としてＰＢＳを用いたゲルクロマトグラフィーＳｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ，２８−９８９３−３５）によりさらに精製した。凝集体のピークを除去し、メインピークを回収した。得られたタンパク質を、電気泳動、ペプチドマップおよびＬＣ−ＭＳによって同定し、確認したタンパク質を使用のために分注した。Ｈｉｓタグ付きＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ（配列番号５７）は、本開示の抗体を調製するための免疫原として、または検出試薬として使用するために得られた。ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏケミストリーによってＫＬＨに結合され、マウス免疫を刺激するための免疫原として使用された。
【０１５３】
２．ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質を精製するステップ：
細胞発現上清のサンプルを高速で遠心分離して不純物を除去し、上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅ（ＧＥ，１７−５４３８−０１）アフィニティークロマトグラフィーにかけた。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅカラムを、最初に０．１Ｍ  ＮａＯＨで再生し、純水で洗浄してからＰＢＳで平衡化し、上清を結合させた後、ＰＢＳを使用して、Ａ２８０値がベースラインに低下するまで洗浄した。標的タンパク質を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）で溶出し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで中和した。溶出したサンプルを適切に濃縮し、次いでＰＢＳ平衡化ゲルクロマトグラフィーＳｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ，２８−９８９３−３５）でさらに精製し、標的タンパク質のいくつかのチューブをプールし、適切な濃度に濃縮した。この方法を用いて、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ（配列番号２）融合タンパク質を精製した。それは、本開示においてヒト化抗体タンパク質を精製するためにも使用され得る。
【０１５４】
（実施例３）抗ヒトＣＤ３８ハイブリドーマモノクローナル抗体の取得および調製
１．免疫化
抗ヒトＣＤ３８モノクローナル抗体は、マウスを免疫化することによって産生された。ＳＪＬ白色マウス（雌、４〜６週齢）を実験に使用した（Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ株式会社、動物生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（北京）２０１２−０００１）。
【０１５５】
給餌環境：ＳＰＦグレード。購入後、マウスを２０〜２５℃の温度、湿度４０〜６０％、１２／１２時間の明／暗サイクルで１週間、実験室環境に適応させた。環境に適応したマウスは、さまざまなプロトコルに従って免疫化され、各群には３〜５匹のマウスがいた。
【０１５６】
免疫抗原は、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｆｃ、ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯＳ（ヒト全長ＣＤ３８でトランスフェクトされたＣＨＯＳ細胞）などであり得る。免疫化は、異なる免疫アジュバントと組み合わせた単一の試薬、または交差免疫化の目的のための異なるタイプの免疫原のいずれかを用いて実施された。免疫化部位は腹腔内または背中の皮下のいずれかであり、あるいは、免疫化は両方の部位で交互に実施された。例示的な免疫化方法は、例えば、Ｔｉｔｅｒｍａｘ（Ｓｉｇｍａ、ロット番号：Ｔ２６８４）またはａｌｕｍ（Ｔｈｒｅｍｏ、ロット番号：７７１６１）による免疫化であった。抗原とアジュバント（ｔｉｔｅｒｍａｘ）の比は１：１、抗原とアジュバント（ａｌｕｍ）の比は４：１、２５〜５０μｇまたは１×１０７細胞／マウス（一次免疫化）、２５〜５０μｇまたは１×１０７細胞／マウス（追加免疫化）。０日目に抗原を腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）に注射し、一次免疫化後２週間ごとに免疫化を繰り返した。血液サンプルを３週間ごとに採取し、マウス血清中の抗体価をＥＬＩＳＡ法により決定した。８〜１２回の免疫化の後、プラトーに達した高い血清抗体価を有するマウスを脾細胞融合のために選択した。脾細胞融合の３日前に、生理食塩水で調製した抗原溶液を追加免疫化のために２５〜５０μｇ／マウスまたは１×１０７細胞／マウスで腹腔内注射（ＩＰ）した。
【０１５７】
２．細胞融合
プラトーに達した高い血清抗体価を有するマウス（試験例１、ＣＤ３８結合ＥＬＩＳＡ法を参照のこと）を脾細胞融合のために選択し、選択したマウスを融合の３日前に追加免疫化に供した。ハイブリドーマ細胞は、最適化されたＰＥＧを介した融合手順を用いて、脾臓リンパ球を骨髄腫Ｓｐ２／０細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−８２８７（商標））と融合させることによって得た。融合したハイブリドーマ細胞をＨＡＴ完全培地（２０％ＦＢＳ、１×ＨＡＴおよび１×ＯＰＩを含むＲＰＭＩ−１６４０培地）に懸濁し、９６ウェル細胞培養プレートに分注し（１×１０５細胞／１５０μｌ／ウェル）、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。融合後５日目に、ＨＡＴ完全培地を５０μｌ／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。融合後７日目から８日目まで、細胞増殖密度に応じて、培地をＨＴ完全培地（２０％ＦＢＳ、１×ＨＴおよび１×ＯＰＩを含むＲＰＭＩ−１６４０培地）２００μｌ／ウェルに完全に交換し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０１５８】
３．ハイブリドーマ細胞のスクリーニング
融合後１０〜１１日目に、細胞の増殖密度に従って、ＣＤ３８結合ＥＬＩＳＡアッセイを実施した（試験例１を参照）。ＥＬＩＳＡにより検出された陽性ウェルの細胞上清を、ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓの結合についてＦＡＣＳ法によって試験した（試験例２を参照）。陽性ウェル中の培地を交換し、細胞の密度に応じて細胞を２４ウェルプレートで増殖させた。２４ウェルプレートに移された細胞株は確認のために再び試験され、その後、初めてサブクローニングされた。最初のサブクローニングされた細胞をスクリーニングした後（試験例１および２を参照）、陽性細胞を保存し、２回目のサブクローニングに供した。２回目のサブクローニングでスクリーニングした陽性細胞（試験例１および２を参照）を保存し、タンパク質発現に使用した。数回の融合後に、ＣＤ３８に対して高い親和性を有するハイブリドーマ細胞が得られた。
【０１５９】
ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０は、ブロッキングアッセイおよび結合アッセイを介したスクリーニングによって得られた。抗体はさらに無血清細胞培養法により調製した。抗体は、精製例に従って精製し、試験例に使用した。
【０１６０】
ハイブリドーマクローン００９のマウス抗体可変領域の配列を以下に示す：
【化４】
2021536254.tif 000048
【０１６１】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６２】
ハイブリドーマクローンｍ０１１のマウス抗体可変領域配列は以下のとおりである：
【化５】
2021536254.tif 000049
【０１６３】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６４】
ハイブリドーマクローンｍ１６０のマウス抗体可変領域配列は以下のとおりである：
【化６】
2021536254.tif 000050
【０１６５】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１６６】
各重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域の配列を表３に示す：
【０１６７】
表３．重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域の配列
【表３】
2021536254.tif 000051
【０１６８】
４．ヒトＩｇＧ１キメラ抗体の調製
ハイブリドーマスクリーニングから得られた候補分子を増幅および配列決定して、可変領域をコードする遺伝子配列を得た。配列決定により得られた配列に基づいてフォワードおよびリバースプライマーを設計し、配列決定した遺伝子をテンプレートとして用いて、ＰＣＲにより各抗体のＶＨ／ＶＫ遺伝子フラグメントを構築し、次いで相同組換えにより発現ベクターｐＨｒ（シグナルペプチドおよびｈＩｇＧ１／ｈカッパ（κ）定常領域遺伝子（ＣＨ１−Ｆｃ／ＣＬ）フラグメントを含む）に挿入し、全長の組換えキメラ抗体の発現用の発現プラスミドＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ−ｐＨｒ／ＶＬ−ＣＬ−ｐＨｒを構築し、ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０のキメラ抗体ｃｈ−００９、ｃｈ−０１１およびｃｈ−１６０を得た。
【０１６９】
（実施例４）抗ＣＤ３８ハイブリドーマモノクローナル抗体のヒト化
ＭＯＥソフトウェア分析を用いてＩＭＧＴヒト抗体重鎖および軽鎖可変領域の生殖細胞系列遺伝子データベースをアラインメントすることによって、ｍ００９、ｍ０１１およびｍ１６０に対してそれぞれ高い相同性を有する重鎖／軽鎖可変領域の生殖細胞系列遺伝子をテンプレートとして選択した。３つのマウス抗体のＣＤＲを対応するヒトテンプレートに移植して、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序でヒト化抗体可変領域配列を形成した。
【０１７０】
ヒトＦＲ領域の選択とＦＲ領域のアミノ酸復帰変異：得られたマウス抗体ＶＨ／ＶＬ  ＣＤＲの典型的な構造に基づいて、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）の相同配列をヒト生殖細胞系列データベースから取得し、ＦＲ相同性の高いものから低いものの順に並べ、ＦＲ相同性が最も高い生殖細胞系列をメインテンプレートとして選択した；マウス抗体のＣＤＲ領域をヒトテンプレートに移植した；さらに、マウス抗体のＣＤＲ領域をヒトテンプレート上に移植した；さらに、マウス抗体の三次元構造に基づいてソフトウェアを用いて、埋め込まれた残基、ＣＤＲ領域と直接的に相互作用する残基、ならびにＶＬおよびＶＨのコンホメーションに重大な影響を与える残基に対して復帰変異の設計を行った；化学的に不安定なアミノ酸残基を最適化し、最終的なヒト化分子を得た。
【０１７１】
１．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ００９のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ００９の場合、ヒト化軽鎖テンプレートはＩＧＫＶ３−１１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖テンプレートはＩＧＨＶ１−３＊０１およびｈＪＨ４．１であった。ｍ００９のＣＤＲをヒトテンプレートに移植し、得られたヒト化可変領域配列は次のとおりである：
【化７】
2021536254.tif 000052
【０１７２】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１７３】
２．ハイブリドーマクローンｍ００９のヒト化のために設計された復帰変異を表４に示す：
【０１７４】
表４．ハイブリドーマクローンｍ００９のヒト化のための復帰変異
【表４】
2021536254.tif 000053
【０１７５】
注：移植とは、マウス抗体のＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に移植されたことを意味する；例えば、「Ａ４３Ｓ」は、（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされた）位置４３の「Ａ」が「Ｓ」に復帰変異したことを意味する。
【０１７６】
ハイブリドーマクローンｍ００９のヒト化抗体可変領域配列は以下のとおりである：
【化８】
2021536254.tif 000054
【０１７７】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列の軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の重鎖定常領域またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによりｍ００９の完全なヒト化抗体（ｈ００９）を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ００９−０１〜ｈ００９−１５）は、上記のｈ００９抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示されるヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトカッパ（κ）軽鎖定常領域と組み合わせることによって得られた。可変領域配列を表５に示す：
【０１７８】
表５．ヒト化抗体ｈ００９の重鎖可変領域および軽鎖可変配列
【表５】
2021536254.tif 000055
【０１７９】
注：例えば、表中の「ｈ００９−０７」の場合、それは、ヒト化抗体ｈ００９−０７の重鎖可変領域および軽鎖可変領域がそれぞれｈ００９  ＶＨ２およびｈ００９  ＶＬ２であることを示している。
【０１８０】
３．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ０１１のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ０１１の場合、ヒト化軽鎖テンプレートはＩＧＫＶ４−１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖テンプレートはＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１であった。潜在的なホットスポットを排除するために、Ｎ  ８２Ａ  Ｔ（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って、位置８２Ａのアスパラギン（略号：ＮまたはＡｓｎ）をスレオニン（略号：ＴまたはＴｈｒ）で置換）、Ｎ７６Ｓ（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って、位置７６のアスパラギン（略号：ＮまたはＡｓｎ）をセリン（略号：ＳまたはＳｅｒ）で置換）が、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１のＦＲ領域に導入された；ｍ０１１のＣＤＲをヒトテンプレートに移植し、得られたヒト化可変領域配列は以下のとおりである：
【化９】
2021536254.tif 000056
【０１８１】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１８２】
４．ハイブリドーマクローンｍ０１１のために設計された復帰変異を表６に示す：
【０１８３】
表６．ハイブリドーマクローンｍ０１１のヒト化のための復帰変異
【表６】
2021536254.tif 000057
【０１８４】
注：移植とは、マウス抗体ＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域配列に移植されたことを意味する。例えば、Ｇ６８Ｒは、（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされた）位置６８の「Ｇ」が移植後にＲに復帰変異したことを意味する。
【０１８５】
ｈ０１１ヒト化抗体の可変領域の具体的な配列は以下のとおりである：
【化１０】
2021536254.tif 000058
【０１８６】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列の軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の重鎖定常領域またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによりｍ０１１の完全なヒト化抗体（ｈ０１１）を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ０１１−０１〜ｈ０１１−０６）は、上記のｈ０１１抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示されるヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトカッパ（κ）軽鎖定常領域と組み合わせることによって得られた。可変領域配列を表７に示す：
【０１８７】
表７：ヒト化抗体ｈ００１１の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の組み合わせ
【表７】
2021536254.tif 000059
【０１８８】
注：例えば、表中の「ｈ０１１−０４」の場合、それは、ヒト化抗体ｈ０１１−０４の重鎖可変領域および軽鎖可変領域がそれぞれｈ０１１  ＶＨ２およびｈ０１１  ＶＬ２であることを示している。
【０１８９】
５．ヒト化ハイブリドーマクローンｍ１６０のフレームワークの選択
マウス抗体ｍ１６０の場合、ヒト化軽鎖テンプレートはＩＧＫＶ４−１＊０１およびｈＪＫ４．１であり、ヒト化重鎖テンプレートはＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１であった。ヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に存在する潜在的なホットスポットを排除するために、変異Ｓ７７Ｔ（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って、位置７７のセリン（略号：ＳまたはＳｅｒ）をスレオニン（略号：ＴまたはＴｈｒ）で置換）およびＮ  ８２Ａ  Ｔ（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って、位置８２Ａのアスパラギン（略号：ＮまたはＡｓｎ）をスレオニン（略号：ＴまたはＴｈｒ）で置換）が、ヒト生殖細胞系列ＩＧＨＶ３−７＊０１およびｈＪＨ６．１のＦＲ領域に導入された。ｍ１６０のＣＤＲをヒトテンプレートに移植し、得られたヒト化可変領域配列は以下のとおりである：
【化１１】
2021536254.tif 000060
【０１９０】
注：Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って決定されたＣＤＲ配列には下線が引かれ、ＦＲ配列はイタリック体で示され、配列はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配置されている。
【０１９１】
６．ハイブリドーマクローンｍ１６０のヒト化のために設計された復帰変異を表８に示す：
【０１９２】
表８．ハイブリドーマクローンｍ１６０のヒト化のための復帰変異
【表８】
2021536254.tif 000061
【０１９３】
注：移植とは、マウス抗体のＣＤＲがヒト生殖細胞系列ＦＲ領域に移植されたことを意味する；例えば、「Ｍ４Ｌ」は、（Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされた）位置４の「Ｍ」が移植後に「Ｌ」に復帰変異したことを意味する。
【０１９４】
ヒト化抗体ｈ１６０の可変領域の具体的な配列は以下のとおりである：
【化１２】
2021536254.tif 000062
【０１９５】
上記のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれヒト生殖細胞系列の軽鎖定常領域（ヒトκ、λ鎖軽鎖定常領域など）および重鎖定常領域（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の重鎖定常領域またはそのバリアントなど）と組み合わせて、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖を形成し、それによりｍ１６０の完全なヒト化抗体（ｈ１６０）を得た。一例として、全長ヒト化抗体（ｈ１６０−０１〜ｈ１６０−０８）は、上記のｈ１６０抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示されるヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトカッパ（κ）軽鎖定常領域と組み合わせることによって得られた。可変領域配列を表９に示す：
【０１９６】
表９．ヒト化抗体ｈ０１６の重鎖可変領域および軽鎖可変配列
【表９】
2021536254.tif 000063
【０１９７】
注：例えば、表中の「ｈ１６０−０７」の場合、それは、ヒト化抗体ｈ１６０−０７の重鎖可変領域および軽鎖可変領域がそれぞれｈ１６０  ＶＨ２およびｈ１６０  ＶＬ３であることを示している。
【０１９８】
（実施例５）抗ヒトＣＤ３８ヒト化抗体ＩｇＧ１またはＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａフォーマットの構築および発現
さまざまなプライマーを設計し、各ヒト化抗体のＶＨ／ＶＫ遺伝子フラグメントをＰＣＲにより増幅し、次いで相同組換えにより発現ベクターｐＨｒ（実験室で構築したシグナルペプチドおよび定常領域遺伝子（ＣＨ１−ＦＣ／ＣＬ）フラグメントを含む）に挿入し、全長抗体用の発現ベクターＶＨ−ＣＨ１−ＦＣ−ｐＨｒ／ＶＫ−ＣＬ−ｐＨｒを構築した。ヒト化抗体については、軽鎖定常領域はヒトκまたはλ鎖軽鎖定常領域から選択され得、重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の重鎖定常領域またはそのバリアントから選択され得る。非限定的な例には、抗体の機能を改善するために、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の定常領域を最適化することが含まれる。例えば、ＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａ定常領域は、ＩｇＧ１にＥ３３３Ａ点変異を導入することによって得ることができ、ＩｇＧ１−ＦｃのＣ１ｑへの結合能力を増強し、その結果、抗体のＣＤＣ機能を増強することができる（ＵＳ６５２８６２４を参照）。以下の特定の軽鎖／重鎖定常領域は、本開示の抗体定常領域を限定することを意図するものではなく、当技術分野で既知の他の抗体軽鎖／重鎖定常領域およびそのバリアントも使用することができる。
【０１９９】
例示的な重鎖定常領域および軽鎖定常領域は以下のとおりである：
【化１３】
2021536254.tif 000064
【０２００】
一例として、上記ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１、およびｍ１６０のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれ配列番号４３に示されるヒトＩｇＧ１重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトカッパ（κ）軽鎖定常領域とそれぞれ組み合わせ、得られた全長ヒト化抗体を表５、表７および表９に示す；別の例として、上記ハイブリドーマクローンｍ００９、ｍ０１１、およびｍ１６０のヒト化軽鎖可変領域および重鎖可変領域を、それぞれ配列番号４４に示されるヒトＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａ重鎖定常領域および配列番号４５に示されるヒトカッパ（κ）軽鎖定常領域と組み合わせ、得られた全長ヒト化抗体を表１０に示す：
【０２０１】
表１０．ヒト化抗体の可変領域配列（重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１−Ｅ３３３Ａであり、軽鎖定常領域はカッパ（κ）である）
【表１０】
2021536254.tif 000065
【０２０２】
一例として、ヒト化抗体ｈ００９−０７、ｈｕ９Ｅ、ｈ０１１−０１、ｈｕ１１Ｅ、ｈ１６０−０１およびｈｕ１６０Ｅの全長アミノ酸配列は、以下のとおりである：
【化１４−１】
2021536254.tif 000066
【化１４−２】
2021536254.tif 000067
【化１４−３】
2021536254.tif 000068
【０２０３】
抗ＣＤ３８抗体であるダラツムマブ（略称Ｄａｒａ、配列についてはＷＨＯ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．１、２０１０年を参照）を本開示のコントロール抗体として使用し、その重鎖および軽鎖配列は以下のとおりである：
【化１５】
2021536254.tif 000069
【０２０４】
本抗体の性能および効果は、以下の試験によって検証された：
【０２０５】
（試験例１）ＣＤ３８抗体のＣＤ３８タンパク質結合ＥＬＩＳＡ試験
抗ＣＤ３８抗体の親和性は、ＥＬＩＳＡプレート上に固定化されたＣＤ３８に結合する抗体の量によって決定された。２μｇ／ｍｌのストレプトアビジン（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ１２３４８０）を９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３５９０）上にコーティングし、プレートを洗浄、ブロックした後、２μｇ／ｍｌのビオチン標識ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓを添加した。インキュベーション後、さまざまな濃度の希釈した抗ＣＤ３８抗体サンプルを加え、洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ−ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、カタログ番号１０９−０３６−０９７）を添加した。プレートを再度洗浄し、呈色反応のためにテトラメチルベンジジン溶液を加えた。最後に、停止溶液を添加した。マイクロプレートリーダーでＯＤ４５０を測定し、ＥＣ５０値を算出した。結果を表１１に示す。
【０２０６】
表１１．ＣＤ３８ヒト化抗体の親和性
【表１１】
2021536254.tif 000070
【０２０７】
結果は、本開示のヒト化抗体が強力な結合能力でＣＤ３８タンパク質に特異的に結合できることを示している。
【０２０８】
（試験例２）ＣＤ３８抗体のＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓ細胞への結合アッセイ
全長ヒトＣＤ３８（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ２８９０７）で安定にトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｓ細胞（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｒ８０００７）（ＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯＳ）を、ＣＤ  ＣＨＯ培養培地（Ｇｉｂｃｏ、ＲＥＦ＃１０７４３−０２９）で培養した。１×１０６細胞／ｍｌのＣＤ３８−ＦＬ−ＣＨＯ−Ｓ細胞を１％ＢＳＡでブロックし、希釈したさまざまな濃度の抗ＣＤ３８抗体サンプルを添加し、２回洗浄し、次いでＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８−ヤギ抗ヒト（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ１１０１３）を添加し、２回洗浄し、フローサイトメーターで蛍光シグナル値を読み取った。結果を表１２に示す。
【０２０９】
表１２．ＣＤ３８ヒト化抗体の親和性
【表１２】
2021536254.tif 000071
【０２１０】
ＦＡＣＳ試験結果は、本開示のヒト化抗体が細胞表面に存在する天然のＣＤ３８に対して強い結合能力を有することを示している。
【０２１１】
（試験例３）ＣＤ３８酵素活性に対するＣＤ３８抗体の阻害アッセイ
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．５）緩衝液を用いて、ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓを４μｇ／ｍｌの濃度の溶液に調製した。同様に、さまざまな濃度の抗ＣＤ３８抗体サンプルを緩衝液で調製した。ＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓおよび抗ＣＤ３８抗体サンプルの各々２５μＬを、透明な底部および黒色の壁（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３６０３）を備える９６ウェルプレートに添加した。室温で１５分間インキュベートした後、５０μｌの２００μＭ基質ＮＧＤ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｎ５１３１−２５ＭＧ）を加えた。室温で２時間インキュベートした後、環状ＧＤＰリボース（ｃＧＤＰＲ）の生成を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）により、発光波長４１０ｎｍ（励起光３００ｎｍ）で測定した。結果を表１３に示す。
【０２１２】
表１３．ＣＤ３８酵素活性に対するＣＤ３８ヒト化抗体の阻害結果
【表１３】
2021536254.tif 000072
【０２１３】
試験結果は、ｈｕ９Ｅが酵素活性に対して８９．６３％の最大阻害率を示し、コントロール抗体Ｄａｒａの最大阻害率よりも有意に優れていることを示している；一方、ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅは、酵素活性に対してそれぞれ４４．３１％および４７．６７％の最大阻害率を有し、コントール抗体の最大阻害率と同等である。
【０２１４】
（試験例４）Ｍｏｌｐ−８細胞およびＤａｕｄｉ細胞に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ
ヒト多発性骨髄腫細胞株Ｍｏｌｐ−８（Ｃｏｂｉｏｅｒ、Ｎａｎｊｉｎｇ、ＣＢＰ６０５６２）またはヒトバーキットリンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−１２３）を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％のｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ＩｇＧウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１９２１００５ＰＪ）を含む、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１８３５−０３０）で懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）でカウントし、１×１０５細胞／ｍｌに希釈した。
【０２１５】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ、カタログ番号１７−５４４２−０２）によって新鮮なヒト血液から単離され、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地に再懸濁され、サイトメーターでカウントされ、３×１０６細胞／ｍｌに希釈された。
【０２１６】
Ｍｏｌｐ−８（またはＤａｕｄｉ）および異なる濃度のＣＤ３８抗体またはネガティブコントロールＩｇＧ（Ｃ２５−ｈＩｇＧ１（ＷＴ）、実験室で調製）のそれぞれ５０μｌを９６ウェルプレートに１：１の比率で添加し、３０分間インキュベートし（３７℃、５％ＣＯ２）、５０μｌのエフェクター細胞ＰＢＭＣを３０：１の比率（エフェクター細胞：標的細胞）で添加した。４時間インキュベートした後（３７℃、５％ＣＯ２）、ＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）の放出を、ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｔｅｓｔ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ１７８０）で検出した。５０μｌの細胞上清と５０μｌのＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）試薬を加えた。室温で３０分間インキュベートした後、停止溶液を加えた。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で吸光度値（４９０ｎｍ）を検出した。結果を表１４に示す。
【０２１７】
表１４．標的細胞に対するＣＤ３８ヒト化抗体のＡＤＣＣ結果
【表１４】
2021536254.tif 000073
【０２１８】
実験結果は、本開示のヒト化抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏでＭｏｌｐ−８細胞およびＤａｕｄｉ細胞に対して強いＡＤＣＣ効果を有し、標的細胞の溶解を有意に達成できることを示している。
【０２１９】
（試験例５）Ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによるＭｏｌｐ−８細胞およびＤａｕｄｉ細胞に対するＣＤ３８抗体のＣＤＣ
Ｍｏｌｐ−８またはＤａｕｄｉ細胞を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）でカウントし、１０％ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ＩｇＧウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１９２１００５ＰＪ）を含有するフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１８３５−０３０）に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。続いて、細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９０３）に５×１０４細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）で播種した。次いで、５０μＬのさまざまな濃度の抗ＣＤ３８抗体およびネガティブコントロールを添加した。３０分間インキュベートした後（３７℃、５％ＣＯ２）、５０μＬのヒト血清（実験室で作製）を各ウェルに添加した。２時間インキュベートした後（３７℃、５％ＣＯ２）、１６．６μｌのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号ＤＡＬ１０２５）を各ウェルに添加し、２０時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。最後に、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、発光波長５８５ｎｍ（励起波長５７０ｎｍ）で検出を行った。結果を表１５に示す。
【０２２０】
表１５．標的細胞に対するヒト化ＣＤ３８抗体のＣＤＣ結果
【表１５】
2021536254.tif 000074
【０２２１】
実験結果は、本開示のヒト化抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏでＭｏｌｐ−８細胞およびＤａｕｄｉ細胞に対して強力なＣＤＣ効果を有し、標的細胞の溶解を有意に達成できることを示している。
【０２２２】
（試験例６）Ｍｏｌｐ−８およびＤａｕｄｉ細胞でのＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰレポーティングシステム試験
Ｍｏｌｐ−８またはＤａｕｄｉ細胞を回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、再懸濁した。細胞をサイトメーター（Ｃｏｕｎｔｓｔａｒ、ＩＣ１０００）でカウントし、１０％ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ＩｇＧウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１９２１００５ＰＪ）を含有するフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１８３５−０３０）に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。続いて、細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９０３）に２．５×１０４細胞／ウェル（２５μｌ／ウェル）で播種し、２５μｌのさまざまな濃度の抗ＣＤ３８抗体およびネガティブコントロールを添加し、３０分間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ２）。全長ヒトＦｃγＩＩａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号：Ｐ１２３１８）で安定的に形質転換されたＪｕｒｋａｔ（Ｊｕｒｋａｔ−Ｌｕｃｉａ（商標）ＮＦＡＴ細胞、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎｅ）細胞をエフェクター細胞として収集し、７．５×１０４細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）のエフェクター細胞を、標的細胞および抗体と共にインキュベートした９６ウェルプレートに加えた。６時間インキュベートした後（３７℃、５％ＣＯ２）、１０μｌの上清を新しい９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９０３）に移し、９０μｌ／ウェルのＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎｅ、ｒｅｐ−ｑｌｃ１）を添加し、化学発光をＶＩＴＯＲ（ＶＩＴＯＲ３、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で検出した。結果を表１６および図１に示す。
【０２２３】
表１６．標的細胞に対するＣＤ３８ヒト化抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰレポーターシステム試験結果
【表１６】
2021536254.tif 000075
【０２２４】
実験結果は、本開示のすべてのヒト化抗体が、Ｍｏｌｐ−８細胞およびＤａｕｄｉ細胞に対して、コントロール抗体Ｄａｒａのそれよりも有意に優れたｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰレポーターシステム試験効果を有することを示している。
【０２２５】
（試験例７）ＢＩＡｃｏｒｅによって検出されたＣＤ３８抗体の親和性
ヒトＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ抗原に対するキメラ抗体（実施例３に従って調製したｃｈ−００９、ｃｈ−０１１およびｃｈ−１６０）、本開示のヒト化抗体およびＤａｒａの親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ装置によって検出された。
【０２２６】
ヒトＦｃ捕捉分子は、試験される抗体の親和性捕捉のために、ヒトＦｃ捕捉キット（カタログ番号ＢＲ−１００８−３９、ＧＥ）のマニュアルに記載されている方法に従って、ＣＭ５バイオセンシングチップ（カタログ番号ＢＲ−１００５−３０、ＧＥ）に共有結合された。次いで、ヒトＣＤ３８−ＥＣＤ−Ｈｉｓ抗原がチップの表面を通過し、反応シグナルのリアルタイム検出がＢｉａｃｏｒｅ装置を用いて行われた。得られた結合および解離曲線をフィッティングして、親和性値を算出した。実験で各サイクルの解離が完了した後、バイオチップを洗浄し、ヒトＦｃ捕捉キット（ＧＥ）で提供される再生溶液で再生した。結果を表１７および表１８に示す。
【０２２７】
表１７．ＢＩＡｃｏｒｅによるヒトＣＤ３８に対する抗ＣＤ３８抗体の親和性の結果
【表１７−１】
2021536254.tif 000076
【表１７−２】
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【０２２８】
結果は、本開示で得られたすべてのヒト化抗体がヒトＣＤ３８に対して高い親和性を有することを示している。
【０２２９】
表１８．ＢＩＡｃｏｒｅによるヒトＣＤ３８に対する抗ＣＤ３８抗体の親和性の結果
【表１８】
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【０２３０】
結果は、本開示で得られた抗体ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０ＥがすべてヒトＣＤ３８に対して高い親和性を有し、それらのＫＤ値はコントロール抗体ＤａｒａのＫＤ値よりも低く、コントロール抗体のＫＤ値よりも優れていることを示している。
【０２３１】
生物学的活性のｉｎ  ｖｉｖｏ評価
【０２３２】
（試験例８）ＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ薬物動態試験
１８匹のオスのＳＤラットを６つ群に均等に分けた。動物は、Ｓｉｐｕｒ−Ｂｉｋａｉ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ、Ｌｔｄ．により提供された；動物はそれぞれ、３ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内注射または皮下注射によって投与された。静脈内注射で投与された群では、投与前、投与後５分、８時間、１日、２日、４日、７日、１０日、１４日、２１日および２８日に、抗凝固剤を使用せずに全血０．２ｍＬを採取した；採取後、血液を４℃で３０分間置き、１０００ｇで１５分間遠心分離し、上清（血清）をＥＰチューブに移して−８０℃で保存した；皮下注射で投与された群では、投与前、投与後１時間、８時間、１日、２日、４日、７日、１０日、１４日、２１日および２８日に全血を採取した。７、１０、１４、２１および２８日目に全血を採取した。血清を単離し、ＥＰチューブに移して−８０℃で保存した。
【０２３３】
異なるサンプルについての標準曲線を、試験例１に記載の方法（抗ＣＤ３８抗体のＣＤ３８タンパク質結合ＥＬＩＳＡ）に従って作成した。１：１０００希釈の抗ＣＤ３８抗体の代わりに血清サンプルを反応系に加えた。異なる時点での抗ＣＤ３８抗体の血清濃度はＯＤ４５０に基づいて計算され、薬物動態パラメーターはＰｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアによって収集されたデータに基づいて分析および計算された。抗体ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅのｉｎ  ｖｉｖｏ薬物動態の結果を表１９に示す。
【０２３４】
表１９．ラットにおける抗体の薬物動態の評価
【表１９】
2021536254.tif 000079
【０２３５】
注：表中、Ｔ１／２は半減期を意味し、ＩＶは静脈内注射を意味し、ＳＣは皮下注射を意味する。
【０２３６】
ｈｕ９Ｅ、ｈｕ１１Ｅ、およびｈｕ１６０ＥのＰＫ（薬物動態）は、３ｍｐｋの投与量で皮下および静脈内注射した後のラットで測定された。結果は、抗体がラットにおいて好ましいＰＫパフォーマンスを有することを示している：皮下注射した場合、すべての抗体において高いバイオアベイラビリティが観察され、静脈内注射の平均Ｔ１／２はそれぞれ１１．４日、１３．３日および１３．６日である；皮下注射の平均Ｔ１／２はそれぞれ１１．１日、１２．１日および１０．９日であり、ラットにおける抗体の良好な安定性と皮下製剤の開発の可能性を示唆している。
【０２３７】
（試験例９）マウス腫瘍に対するＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ薬力学試験
Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（ＳＰＦ、１４〜１６ｇ、雌）は、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．から購入した。Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスを実験室環境に６日間適応させ、ＡＭＯ−１細胞（Ｃｏｂｉｏｅｒ、Ｎａｎｊｉｎｇ、ＣＢＰ６０２４２、５×１０６＋５０％マトリゲル／マウス、基底膜マトリゲル、ＢＤ、カタログ番号３５６２３７）を右肋骨に皮下接種した。９日後、マウスを合計７つの群（８匹のマウス／群）に分け、平均腫瘍体積は約１９７．２１±９．２５ｍｍ３（ｄ０）であった。群は次のとおりである：
ブランクコントロール群、ＩｇＧ（３ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ２５−ｈＩｇＧ１（ＷＴ）、実験室で作製）；
Ｄａｒａ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
Ｄａｒａ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１１Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１１Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１６０Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群；
ｈｕ１６０Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群；
【０２３８】
腹腔内注射を週に２回、３週間行った。腫瘍体積および体重を週に２回測定し、データを記録した。すべての投与が終了した後、マウスを屠殺し、腫瘍を除去した。
【０２３９】
Ｅｘｃｅｌ  ２００３統計ソフトウェアを使用して、平均値（ａｖｇ）、ＳＤ値（ＳＴＤＥＶ）およびＳＥＭ値（ＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴ）を計算した；群間の差についてのＰ値はＴＴＥＳＴによって計算した。
【０２４０】
腫瘍体積（Ｖ）は、以下の式に従って計算した：
Ｖ＝１／２×Ｌｌｏｎｇ×Ｌｓｈｏｒｔ２
【０２４１】
相対体積（ＲＴＶ）＝ＶＴ／Ｖ０
腫瘍抑制率（％）＝（ＣＲＴＶ−ＴＲＴＶ）／ＣＲＴＶ（％）
式中、Ｖ０およびＶＴは、それぞれ、実験の開始時および終了時の腫瘍体積を指す。ＣＲＴＶおよびＴＲＴＶは、それぞれ、実験終了時のコントロール群および試験群の相対腫瘍体積を指す。結果を表２０および図２に示す。
【０２４２】
表２０．抗ＣＤ３８抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍結果
【表２０】
2021536254.tif 000080
注：ｍｐｋはｍｇ／ｋｇを意味する。
【０２４３】
マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効率の結果は、本開示のヒト化抗体ｈｕ１１Ｅおよびｈｕ１６０Ｅの両方が腫瘍の成長を有意に抑制できることを示している。ブランクコントロールＩｇＧ（３ｍｇ／ｋｇ）群と比較して、ｈｕ１１Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群およびｈｕ１６０Ｅ（１ｍｇ／ｋｇ）群は、それぞれ９３．１４％および７０．０２％の腫瘍抑制率を示す；ｈｕ１１Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群およびｈｕ１６０Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）群は、それぞれ９９．５２％および８９．８９％の腫瘍抑制率を示す。投与プロセスの間、各群の動物は正常な体重を示し、本開示の抗体が明らかな毒性および副作用を有さないことを示している。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ３８に特異的に結合する抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは以下を含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｉ）
そのアミノ酸配列は配列番号９に示されるか、配列番号９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号１０に示されるか、配列番号１０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ２、
そのアミノ酸配列は配列番号１１に示されるか、配列番号１１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ３、
そのアミノ酸配列は配列番号１２に示されるか、配列番号１２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号１３に示されるか、配列番号１３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ２、および
そのアミノ酸配列は配列番号１４に示されるか、配列番号１４と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ３；または
（ｉｉ）
そのアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号１６に示されるか、配列番号１６と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ２、
そのアミノ酸配列は配列番号１７に示されるか、配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ３、
そのアミノ酸配列は配列番号１８に示されるか、配列番号１８と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ２、および
そのアミノ酸配列は配列番号２０に示されるか、配列番号２０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ３；または
（ｉｉｉ）
そのアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号２１に示されるか、配列番号２１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ２、
そのアミノ酸配列は配列番号１７に示されるか、配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、重鎖ＨＣＤＲ３、
そのアミノ酸配列は配列番号２２に示されるか、配列番号２２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ１、
そのアミノ酸配列は配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ２、および
そのアミノ酸配列は配列番号２３に示されるか、配列番号２３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有する、軽鎖ＬＣＤＲ３。
【請求項２】
前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
前記マウス抗体またはキメラ抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
（ａ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号３に示されるか、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号４に示されるか、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；
（ｂ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号５に示されるか、配列番号５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号６に示されるか、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；または
（ｃ）前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示されるか、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示されるか、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、
請求項２に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
前記抗体は、ヒト抗体に由来するフレームワーク領域またはフレームワーク領域バリアントを含むヒト化抗体であり、前記フレームワーク領域バリアントは、前記ヒト抗体の軽鎖フレームワーク領域および／または重鎖フレームワーク領域上にそれぞれ最大１０個のアミノ酸復帰変異を有し、
好ましくは、前記ヒト化抗体は、以下の（ｄ）〜（ｆ）から選択されるいずれか１つを含む、請求項２に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｄ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号９に示されるか、配列番号９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１０に示されるか、配列番号１０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は配列番号１１に示されるか、配列番号１１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記重鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１２に示されるか、配列番号１２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１３に示されるか、配列番号１３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１４に示されるか、配列番号１４と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、軽鎖可変領域；
（ｅ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１６に示されるか、配列番号１６と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は配列番号１７に示されるか、配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記重鎖フレームワーク領域は、７９Ｆ、８２Ａ  Ｔ、９１Ｓおよび７６Ｓからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１８に示されるか、配列番号１８と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２０に示されるか、配列番号２０と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、軽鎖可変領域；および
（ｆ）重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、および重鎖フレームワーク領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１５に示されるか、配列番号１５と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２１に示されるか、配列番号２１と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸は配列番号１７に示されるか、配列番号１７と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記重鎖フレームワーク領域は、４８Ｉ、７７Ｔおよび８２Ａ  Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、重鎖可変領域；および／または
軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、および軽鎖フレームワーク領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号２２に示されるか、配列番号２２と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１９に示されるか、配列番号１９と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２３に示されるか、配列番号２３と比較した場合に３、２または１個のアミノ酸差異を有し、前記軽鎖フレームワーク領域は、４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上の復帰変異を含む、軽鎖可変領域；
ここで、前記復帰変異部位は、Ｋａｂａｔ番号付け基準に従って番号付けされる。
【請求項５】
前記ヒト化抗体は、配列番号２４、３２もしくは３７に示される重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、当該バリアントは、前記配列番号２４、３２または３７に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０個のアミノ酸変異を有する、請求項４に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
前記バリアントは、以下の（ｇ）〜（ｉ）のいずれか１つから選択される、請求項５に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｇ）配列番号２４に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、３８Ｋ、４４Ｓ、４８Ｉ、６７Ａ、６６Ｋ、６９Ｌ、７１Ｖおよび７３Ｑからなる群から選択される１つ以上の復帰変異；
（ｈ）配列番号３２に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の７９Ｆおよび９１Ｓからなる群から選択される１つ以上の復帰変異；および
（ｉ）配列番号３７に示される重鎖可変領域のフレームワーク領域上の４８Ｉの復帰変異；
好ましくは、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に示される重鎖可変領域、または
配列番号２６、２７、２８、２９、３４または３９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域。
【請求項７】
前記ヒト化抗体は、配列番号２５、３３もしくは３８に示される軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、当該バリアントは、前記配列番号２５、３３または３８に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域に１〜１０個のアミノ酸変異を有する、請求項４に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
前記バリアントは、以下の（ｊ）〜（ｌ）のいずれか１つから選択される、請求項７に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｊ）配列番号２５に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の２Ｆ、４３Ｓ、４９Ｋおよび８７Ｆからなる群から選択される１つ以上の復帰変異；
（ｋ）配列番号３３に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の５８Ｉ、６８Ｒおよび８５Ｔからなる群から選択される１つ以上の復帰変異；
（ｌ）配列番号３８に示される軽鎖可変領域のフレームワーク領域上の４Ｌ、９Ａ、２２Ｓ、５８Ｉ、６０Ａおよび６８Ｒからなる群から選択される１つ以上の復帰変異；
好ましくは、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域、または
配列番号３０、３１、３５、３６、４０、４１または４２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域。
【請求項９】
以下を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
（ｍ）配列番号２４、２６、２７、２８または２９に示される重鎖可変領域、および配列番号２５、３０または３１に示される軽鎖可変領域；
（ｎ）配列番号３２または３４に示される重鎖可変領域、および配列番号３３、３５または３６に示される軽鎖可変領域；または
（ｏ）配列番号３７または３９に示される重鎖可変領域、および配列番号３８、４０、４１または４２に示される軽鎖可変領域；
好ましくは、前記ヒト化抗体は、以下を含む：
（ｐ）配列番号２６に示される重鎖可変領域および配列番号３０に示される軽鎖可変領域；または
（ｑ）配列番号３２に示される重鎖可変領域および配列番号３３に示される軽鎖可変領域；または
（ｒ）配列番号３７に示される重鎖可変領域および配列番号３８に示される軽鎖可変領域。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は定常領域を含み；
好ましくは、前記抗体はキメラ抗体またはヒト化抗体であり、その重鎖定常領域は、ヒト抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の従来のバリアントに由来し、その軽鎖定常領域は、ヒト抗体κ、λ鎖、またはκ、λ鎖の従来のバリアントに由来し；
より好ましくは、前記重鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４３または４４に示されるか、配列番号４３または４４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、
より好ましくは、前記軽鎖定常領域のアミノ酸配列は配列番号４５に示されるか、配列番号４５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
以下を含む、請求項１０に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント：
配列番号４６、４８、４９、５１、５２または５４のアミノ酸配列に示されるか、配列番号４６、４８、４９、５１、５２または５４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、重鎖；および／または
配列番号４７、５０または５３のアミノ酸配列に示されるか、配列番号４７、５０または５３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、軽鎖。
【請求項１２】
請求項１１に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体は、
配列番号４６に示される重鎖および配列番号４７に示される軽鎖；
配列番号４８に示される重鎖および配列番号４７に示される軽鎖；
配列番号４９に示される重鎖および配列番号５０に示される軽鎖；
配列番号５１に示される重鎖および配列番号５０に示される軽鎖；
配列番号５２に示される重鎖および配列番号５３に示される軽鎖；または
配列番号５４に示される重鎖および配列番号５３に示される軽鎖
を含む、抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
ヒトＣＤ３８への結合について、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、および
１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、緩衝液または賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする、単離された核酸分子。
【請求項１６】
請求項１５に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１７】
請求項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞；好ましくは、前記宿主細胞は、原核細胞および真核細胞からなる群から選択され、好ましくは真核細胞であり、より好ましくは哺乳動物細胞である。
【請求項１８】
以下のステップを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを調製するための方法：
請求項１７に記載の宿主細胞を培養するステップ；
前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを回収するステップ；
任意に、前記抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを精製するステップ。
【請求項１９】
以下を含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための方法：
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメントを、試験対象のサンプルと接触させるステップ；
前記試験対象のサンプル中のヒトＣＤ３８の存在またはレベルを決定するステップ。
【請求項２０】
以下を含む、ヒトＣＤ３８を検出または測定するための試薬：
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント；または
請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
疾患または障害の処置または予防のための医薬品の調製における、以下の（ｍ）〜（ｏ）のいずれか１つから選択される物質の使用：
（ｍ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ３８抗体またはその抗原結合フラグメント、
（ｎ）請求項１４に記載の医薬組成物、および
（ｏ）請求項１５に記載の核酸分子；
好ましくは、前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患である。
【請求項２２】
前記疾患または障害は、ＣＤ３８陽性の疾患または障害である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記疾患または障害は、腫瘍または免疫疾患であり、
前記免疫疾患は、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、関節乾癬、皮膚炎、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、髄膜炎、脳炎、胃炎、ブドウ膜炎、糸球体腎炎、湿疹、喘息、動脈硬化症、白血球接着不全症、レイノー症候群、シェーグレン症候群、若年性糖尿病、ライター病、ベーチェット病、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発性神経障害、免疫介在性血小板減少症状、溶血性貧血、重症筋無力症、ループス腎炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、オーメン症候群、慢性腎不全、急性伝染性単核球症、多発性硬化症、ＨＩＶおよびヘルペスウイルス関連疾患、重症急性呼吸器症候群および脈絡網膜炎、移植片対宿主病、ならびにウイルス感染によって引き起こされる免疫疾患からなる群から選択され；
好ましくは、前記自己免疫疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、喘息、炎症性腸疾患、多発性硬化症、クローン病、胃炎、橋本甲状腺炎、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、免疫介在性血小板減少症状からなる群から選択され；
好ましくは、前記免疫介在性血小板減少症状は、急性特発性血小板減少性紫斑病または慢性特発性血小板減少性紫斑病であり；
より好ましくは、前記免疫疾患は関節リウマチであり；
前記腫瘍は、白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、形質細胞悪性腫瘍および骨髄腫からなる群から選択され；
好ましくは、前記Ｂ細胞リンパ腫は、成熟Ｂ細胞腫瘍、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞ホジキンリンパ腫からなる群から選択され；
より好ましくは、前記腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性または慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、前部髄様腫瘍（ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｍｏｒ）、軽鎖アミロイドーシス、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、小リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫瘍、形質細胞骨髄腫、形質細胞白血病、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞白血病および未分化大細胞リンパ腫ならびに有毛細胞リンパ腫からなる群から選択され；
より好ましくは、前記腫瘍は多発性骨髄腫である、請求項２１または２２に記載の使用。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】全図
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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