(57)【要約】  白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー４（ＬＩＬＲＢ４）としても公知の免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に特異的なヒト化非乱交性モノクローナル抗体を記載する。【選択図】図３Ｂ
2021503280.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が、配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）３を含む、重鎖（ＨＣ）を含む、ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に結合する抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２】
抗体または抗原結合性フラグメントがヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、エピトープが、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上からの少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３】
（ａ）配列番号１７、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５または１０３に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１；配列番号１８、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６または１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号２３、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７または１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；ならびにＨＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）と、
（ｂ）配列番号２７、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８または１０６に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１；配列番号４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９または１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４、６０、６８、７６、８４、９２、１００または１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；ならびにＬＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む、ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に結合する抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項４】
（ａ）ＨＣ−ＣＤＲ１が、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２が、配列番号１９、２０または２１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、
（ｂ）ＬＣ−ＣＤＲ１が、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２が、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３が、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有する、請求項３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項５】
（ａ）ＨＣ−ＣＤＲ１が、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２が、配列番号２０に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、
（ｂ）ＬＣ−ＣＤＲ１が、配列番号４１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２が、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３が、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有する、請求項４記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項６】
ＶＨが、ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを含み、ＶＬが、ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを含む、請求項３、４または５記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項７】
抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメインを有するＨＣ、または天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその変異体を有するＨＣを含む、請求項３、４、５または６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項８】
抗体が、ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインを有するＬＣ、または天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を有するＬＣを含む、請求項６または７記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項９】
抗体が、
（ｉ）ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６から選択されるフレームワークを有するＶＨ、ならびにヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメインまたは天然ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体と、
（ｉｉ）ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０から選択されるフレームワークを有するＶＬ、ならびにヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインまたは天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体とを含む、請求項５記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１０】
抗体または抗原結合性フラグメントが、それぞれ配列番号１５および配列番号１６、それぞれ配列番号４５および配列番号４６、それぞれ配列番号５３および配列番号５４、それぞれ配列番号６１および配列番号６２、それぞれ配列番号６９および配列番号７０、それぞれ配列番号７７および配列番号７８、それぞれ配列番号８５および配列番号８６、それぞれ配列番号９３および配列番号９４、またはそれぞれ配列番号１０１および配列番号１０２に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬを含む、請求項６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１１】
抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１７、１１８、１１９、１２３、１２４または１２５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０または１４１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む、請求項６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１２】
抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１４０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む、請求項１１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１３】
抗体が、配列番号９、１０、１１、１２または１３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）定常ドメインを含む、請求項９、１０、１１または１２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１４】
抗体が、配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）定常ドメインを含む、請求項９、１０、１１または１２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１５】
抗体が、配列番号１４２、１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１９１、１９２または１９３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、請求項９、１０、１１または１２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１６】
抗体が、配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項９、１０、１１、１２、１３、１４または１５記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１７】
抗体が、配列番号１４３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号１６５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）、ならびにＣ末端リジン残基またはＣ末端グリシン−リジンをＨＣが欠いているそれらの変異体を含む、請求項９記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１８】
ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）上のエピトープに結合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントであって、エピトープが、配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列の１以上からの少なくとも１つのアミノ酸を含む、キメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１９】
配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む抗体の結合を、ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）への結合から交差遮断し、または該結合と競合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項２１】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項２０記載の組成物を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。
【請求項２２】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントをＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のインヒビターまたはアンタゴニストと組合せて同時または連続的に対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。
【請求項２４】
抗ＰＤ−１抗体がペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）またはピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
ＰＤ−Ｌ１インヒビターはデュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５である、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントを対象に投与することを含む対象における癌の治療のための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２８】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストを含む、対象における癌の治療方法のための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２９】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストが、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）およびピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）からなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、請求項２８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３０】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストが、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣおよびＭＤＸ−１１０５からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１インヒビターである、請求項２８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３１】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項２７または２８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３２】
癌の治療のための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項３３】
癌の治療用の医薬の製造のための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項３４】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、癌の治療用の医薬の製造のための、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項３５】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子。
【請求項３６】
請求項３５記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項３７】
請求項３６記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３８】
（ａ）請求項３５記載のベクターを含む宿主細胞を準備し、
（ｂ）該ベクターによりコードされる抗体または抗原結合性フラグメントの発現を可能にする条件下、該宿主細胞を培地内で培養し、
（ｃ）培地から抗体または抗原結合性フラグメントを得ることを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨髄性免疫細胞の表面上で発現される抑制性受容体である免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に特異的な非乱交性（ｎｏｎ−ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）モノクローナル抗体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ８５ｋと称され、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー４（ＬＩＬＲＢ４）および白血球免疫グロブリン様受容体５（ＬＩＲ−５）としても公知である免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）は、細胞質免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）モチーフを含有するＩ型膜タンパク質であり、免疫応答のダウンレギュレーションに関与している（Ｃｅｌｌａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８５  （１０）：１７４３−５１（１９９７）；Ｓａｍａｒｉｄｉｓら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（３）：６６０−６６５（１９９７））。ＩＬＴ３の発現は免疫寛容原性樹状細胞においてアップレギュレーションされる。この遺伝子は白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）ファミリーのメンバーであり、これは染色体領域１９ｑ１３．４における遺伝子クラスターに見出される。コード化タンパク質はＬＩＲ受容体のサブファミリーＢクラスに属し、これは２個または４個の細胞外免疫グロブリンドメイン、膜貫通ドメインおよび２〜４個のＩＴＩＭを含有する。ＩＬＴ３は、骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば単球、マクロファージ、および樹状細胞、例えば、ＩＬ−１０またはビタミンＤ３の存在下で分化した単球由来樹状細胞によって選択的に発現される。ＩＬＴ３は４４７アミノ酸からなり、約４７ｋＤの推定分子量を有する。ＩＬＴ３のアミノ末端部分は２３アミノ酸の疎水性シグナルペプチドから始まり、それに続いて、２つのＣ２型免疫グロブリンスーパーファミリードメインから構成され、Ｃ末端のＨｉｓタグを欠く配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有する細胞外ドメインを含有する（アカゲザルＩＬＴ３細胞外ドメインは、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を有する）。ＩＬＴ３の推定膜貫通ドメインは２１アミノ酸からなり、その後、１６７アミノ酸の長い細胞質領域が続き、これは、２６アミノ酸残基の間隔で位置する複数のモチーフの存在により特徴づけられ、それらは、タンパク質チロシンホスファターゼＳＨＰ−１に対する結合部位としてＫＩＲ（ナチュラルキラー細胞Ｉｇ受容体）において特定されるＩＴＩＭモチーフを暗示する。ＩＬＴ３は免疫細胞上で発現され、該細胞において、それは抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子に結合し、免疫応答の刺激を抑制する負のシグナルを伝達する。受容体は抗原の捕捉および提示においても機能する。ＩＬＴ３は炎症反応および細胞傷害性を制御して、免疫応答を集中させること、および自己反応性を制限することを助けると考えられている。ＩＬＴ３の種々のアイソフォームをコードする複数の転写産物変異体が特定されている。
【０００３】
移植拒絶を抑制するための又はがん（以下、癌と称される）もしくは感染症の治療における使用のための用途を有する、ＩＬＴ３活性を調節するための抗体の使用を開示している特許公開には、米国特許出願公開番号２００９０２０２５４４、２０１５０１１０７１４、２０１５０１３９９８６および２０１７０２６７７５９；ならびに国際特許出願公開番号ＷＯ２０１３０４３５６９、ＷＯ２０１３１８１４３８、ＷＯ２０１４１１６８４６、ＷＯ２０１６０４９６４１、ＷＯ２０１６１２７４２７、ＷＯ２０１８０８９３００およびＷＯ２０１８１４８４９４が含まれる。興味深いのは国際特許出願公開番号ＷＯ２０１７０１５２２７であり、これは、ＩＬＴ３のリガンドとしてリンパ球細胞接着分子（ＡＬＣＡＭ）としても公知であるＣＤ１６６を開示しており、幾つかの実施形態においてはＣＤ１６６またはＡＬＣＡＭに対する抗体を含む癌の治療方法を提供する。米国特許第７，７７７，００８号および第８，９０１，２８１号も興味深く、これらは、抗癌治療のために免疫系をアップレギュレーションし移植拒絶反応の抑制のために免疫系をダウンレギュレーションすることが望ましい種々の治療における使用のためのモノクローナル抗体９Ｂ１１を開示している。
【０００４】
これらの特許公開は抗ＩＬＴ３抗体を開示しているが、幾つかの場合には、特異的抗体が開示されておらず、幾つかの場合には、それらは乱交性（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ、無差別的）であり、１以上のＩＬＴ３関連受容体、例えばＬＩＬＲＡ６およびＩＬＴ８と交差反応することが示されている。乱交性抗ＩＬＴ３抗体はオフターゲット（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）効果をもたらす可能性があり、これは、治療用途のためのその使用に禁忌となる望ましくない効果をもたらしうる。したがって、ＩＬＴ３に特異的に結合し、他の関連受容体に対して測定可能な乱交性を示さない抗体および抗原結合性フラグメントが必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
発明の簡潔な概要
本発明は、（ｉ）１０μｇ／ｍＬの抗体または抗原結合性フラグメントを使用する細胞ＥＬＩＳＡ、あるいは（ｉｉ）１０μｇ／ｍＬの抗体または抗原結合性フラグメントを使用するＢｉａｃｏｒｅ（ビアコア）による測定で、密接に関連したタンパク質（例えば、ＩＬＴ５、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８またはＩＬＴ１１）への測定可能な結合を示すことなく、免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に特異的に結合するモノクローナル抗体および抗原結合性フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、抗体および抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３およびアカゲザルＩＬＴ３の両方に特異的に結合する。これらの抗体および抗原結合性フラグメントはＩＬＴ３活性に拮抗することが可能であり、それにより、樹状細胞活性化およびＴ細胞プライミングを増強しうる。寛容化樹状細胞および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）もこれらの抗体に応答する。更に、ヒト化ＮＳＧ（商標）マウスモデル系（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）におけるこれらの抗体のインビボ研究は、これらの抗体が腫瘍負荷を低減し、細胞表現型を、より活性化した状態へと移行させる能力を有しうることを示している。
【０００６】
臨床試験サンプルにおいて、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３およびＧＥＰシグネチャー（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ）のようなＩＬＴ３発現が抗ＰＤ−１抗体ペンブロリズマブに対する応答性に関連していることが判明した。循環中の可溶性ＩＬＴ３は特定の癌型においても増加する。総合すると、本発明の抗ＩＬＴ３抗体は、単剤療法として、あるいは、特に癌が抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１単剤療法に対して非応答性である癌治療において抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体に対する応答性を増強するために抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組合せて、特定の癌の治療に有用でありうる。特定の実施形態においては、本発明は、キメラまたはヒト化抗ＩＬＴ３抗体を提供する。特定の実施形態においては、抗体は、本明細書に開示されているＩＬＴ３エピトープへの結合に関して、本明細書に開示されている抗体と競合する完全ヒト抗体でありうる。
【０００７】
本発明は、重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１、２および３を有する重鎖可変ＶＨドメインの１、２または３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ＬＣ−ＣＤＲ１、２および３を有する軽鎖可変ドメインＶＬの１、２または３個のＣＤＲとを含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３に特異的に結合可能であり、抗体または抗原結合性フラグメントの結合は細胞ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅにより測定されうる。
【０００８】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上における少なくとも１つのアミノ酸を含む。更なる実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上を含む。更なる実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態においては、エピトープは水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析により決定される。
【０００９】
本発明は更に、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が、配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）３を含む重鎖（ＨＣ）を含む、ヒトＩＬＴ３に結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。幾つかの実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。特定の実施形態においては、ヒトＩＬＴ３に結合する抗体または抗原結合性フラグメントは重鎖（ＨＣ）を含み、ここで、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、配列番号２３、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）３、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）３を含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１０】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上からの少なくとも１つのアミノ酸を含む。更なる実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上を含む。更なる実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、またはヒトＩＬＴ３上のエピトープへの結合に関して、開示されている抗体と競合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態においては、エピトープは水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析により決定される。
【００１１】
本発明は更に、（ａ）配列番号１７、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５または１０３に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１；配列番号１８、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６または１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号２３、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７または１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；ならびにＨＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＨ）を有するＨＣと、（ｂ）配列番号２７、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８または１０６に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１；配列番号４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９または１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４、６０、６８、７６、８４、９２、１００または１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；ならびにＬＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む、ヒトＩＬＴ３に結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１２】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、ＨＣ−ＣＤＲ１は、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２は、配列番号１９、２０または２１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３は、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ１は、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２は、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３は、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有し、それらの変異体においては、ＨＣ−ＣＤＲおよびＬＣ−ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１３】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、ＨＣ−ＣＤＲ１は、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２は、配列番号２０に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３は、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ１は、配列番号４１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２は、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３は、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有し、それらの変異体においては、ＨＣ−ＣＤＲおよびＬＣ−ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１４】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、（ａ）ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６ファミリーならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを有するＶＨと、（ｂ）ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０ファミリーならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを有するＶＬとを含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１５】
特定の実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、（ａ）ヒトＶＨ１ファミリーフレームワークまたは１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその変異体を有するＶＨと、（ｂ）ヒトＶκ５ファミリーフレームワークまたは１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその変異体を有するＶＬとを含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００１６】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメイン、または天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその変異体を含む。特定の態様においては、定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、あるいはＣ末端リジンまたはＣ末端グリシンリジンジペプチドを欠いていることが可能である。
【００１７】
特定の実施形態においては、重鎖定常ドメインは、エフェクター機能が低下または最小化するように改変されたヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。更なる態様においては、最小エフェクター機能は、エフェクターを欠くＦｃ変異から生じ、これは、Ｋａｂａｔ（カバト）番号付けを用いて特定された突然変異Ｎ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ変異を含む又はそれからなることが可能であり、この場合、最小エフェクター機能はアグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）から生じる（例えば、配列番号２１１に記載されているアミノ酸配列を参照されたい；該アミノ酸配列においては、Ｎ２９７Ａ突然変異はアミノ酸１８０位に対応し、Ｄ２６５Ａ突然変異は、存在する場合には、アミノ酸１４８位に対応するであろう）。特定の態様においては、ＩｇＧ１は、Ｆｃを低エフェクターにするために、Ｋａｂａｔ番号付けを用いて特定されたＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ突然変異を含む又はそれらからなるように修飾されている（例えば、配列番号１２または１３に示されているアミノ酸配列を参照されたい；該アミノ酸配列においては、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ突然変異は、それぞれ、アミノ酸１１７、１１８および１４８位に対応する）。
【００１８】
もう１つの態様においては、ＨＣ定常ドメインはヒトＩｇＧ４アイソタイプのものであり、そのアイソタイプは、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基の、プロリンへの置換を更に含み、これは配列番号９または１０の１０８位（１０８位のセリン）に対応する。
【００１９】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体はヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメイン、または天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００２０】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体は、（ｉ）ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６ファミリーから選択されるフレームワークを有するＶＨ、ならびにヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメインまたは天然ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体と、（ｉｉ）ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０ファミリーから選択されるフレームワーク有するＶＬ、ならびにヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインまたは天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体とを含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００２１】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体は、（ｉ）ヒトＶＨ２ファミリーフレームワークを有するＶＨおよびヒトＶκ５ファミリーフレームワークを有するＶＬ、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメイン、または天然ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体、ならびに（ｉｉｉ）ヒトカッパＬＣ定常ドメイン、または天然ヒトカッパＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００２２】
抗体またはその抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体は、（ｉ）ヒトＶＨ１ファミリーフレームワークを有するＶＨおよびヒトＶκ５ファミリーフレームワークを有するヒトＶＬ、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメイン、または天然ヒトＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体、ならびに（ｉｉｉ）ヒトカッパＬＣ定常ドメイン、または天然ヒトカッパＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００２３】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号１５および配列番号１６、それぞれ配列番号４５および配列番号４６、それぞれ配列番号５３および配列番号５４、それぞれ配列番号６１および配列番号６２、それぞれ配列番号６９および配列番号７０、それぞれ配列番号７７および配列番号７８、それぞれ配列番号８５および配列番号８６、それぞれ配列番号９３および配列番号９４に、またはそれぞれ配列番号１０１および配列番号１０２に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬを含む。
【００２４】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号１１７、１１８、１１９、１２３、１２４または１２５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０または１４１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
【００２５】
抗体または抗原結合性フラグメントのもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号１１８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１４０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む。
【００２６】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体は、配列番号９、１０、１１、１２または１３に記載されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む。特定の態様においては、配列番号９、１１、１２または１３に記載されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインはＣ末端リジンまたはＣ末端グリシン−リジンジペプチドを欠いていてもよい。特定の実施形態においては、ＨＣ定常ドメインは、配列番号１０に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００２７】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体は、配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む。
【００２８】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体は、配列番号１４２、１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１９１、１９２または１９３のアミノ酸配列を含むＨＣを含む。特定の態様においては、ＨＣは、配列番号１４２、１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４または１７５に記載されているアミノ酸配列を含むＨＣは、Ｃ末端リジンまたはＣ末端グリシン−リジンジペプチドを欠いていてもよい。特定の実施形態においては、ＨＣは、配列番号１４３または１７７に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態においては、配列番号１７７に示されるＨＣは更に、Ｃ末端グリシンを欠いている。
【００２９】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体は、配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６に記載されているアミノ酸配列を含むＬＣを含む。特定の実施形態においては、ＬＣは、配列番号１６５に記載されているアミノ酸を含む。
【００３０】
抗体のもう１つの実施形態においては、抗体は、配列番号１４３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号１６５に記載されているアミノ酸配列を含むＬＣとを含む。特定の態様においては、配列番号１４３に記載されているアミノ酸配列を含むＨＣはＣ末端リジンまたはＣ末端グリシン−リジンジペプチドを欠いている。
【００３１】
本発明は更に、ヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸を含む。もう１つの実施形態においては、キメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列を含むヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合する。これらの実施形態においては、エピトープは水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析により決定される。
【００３２】
本発明は更に、ＩＬＴ３に結合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該結合は、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体の結合を交差遮断し、または該結合と競合する。もう１つの実施形態においては、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１６に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体の結合を交差遮断し、または該結合と競合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列を含むＩＬＴ３上のエピトープに結合する。
【００３３】
本発明は更に、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの１以上と薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【００３４】
本発明は更に、対象における癌を治療するのに十分な、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法を提供する。
【００３５】
もう１つの実施形態においては、癌は膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である。
【００３６】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のインヒビターまたはアンタゴニストと組合せて同時または連続的に対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、ＰＤ−１のアンタゴニストは、ヒトＰＤ−１に結合しヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２へのＰＤ１の結合を遮断する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストは、ヒトＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２  ＰＤ１の結合を遮断する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。
【００３７】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ１アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体であり、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）またはピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）であり、ＰＤ−Ｌ１インヒビターはデュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５である。
【００３８】
本発明は更に、対象における癌の治療のための、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【００３９】
もう１つの実施形態においては、癌は膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である。
【００４０】
本発明は更に、対象における癌の治療のための、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該治療は更に、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストを含む。
【００４１】
１つの実施形態においては、ＰＤ−１のアンタゴニストは、ヒトＰＤ−１に結合しＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２へのＰＤ１の結合を遮断する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。
【００４２】
１つの実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストは、ヒトＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に結合しヒトＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２  ＰＤ１の結合を遮断する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。
【００４３】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体であり、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）またはピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）であり、ＰＤ−Ｌ１インヒビターはデュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５である。
【００４４】
本発明は更に、癌の治療のための、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。
【００４５】
本発明は更に、癌の治療用の医薬の製造のための、本明細書に開示または特許請求されている抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。
【００４６】
もう１つの実施形態においては、癌は膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である。
【００４７】
本発明は更に、前記の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか１つと薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。特定の実施形態においては、組成物は、Ｃ末端リジンを有する重鎖を含む抗体と、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む抗体との混合物を含む。特定の実施形態においては、組成物は、本明細書に開示されている抗体を含み、ここで、主要抗体形態は、Ｃ末端リジンを有する重鎖を含む。特定の実施形態においては、組成物は、本明細書に開示されている抗体を含み、ここで、主要抗体形態は、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む。特定の実施形態においては、組成物は、本明細書に開示されている抗体を含み、ここで、組成物中の抗体の約１００％は、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む。
【００４８】
発明の詳細な説明
本発明は、骨髄性免疫細胞の表面上で発現される抑制性受容体であるヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に特異的な非乱交性（ｎｏｎ−ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ）モノクローナル抗体を提供する。
【００４９】
定義
本明細書中で用いる「免疫グロブリン様転写産物３」（本明細書においては「ＩＬＴ３」と略記され、ＬＩＲ−５、ＬＩＬＲＢ４またはＣＤ８５ｋとしても公知である）なる語は、特に示されていない限り、骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば単球、マクロファージ、および樹状細胞、例えばＩＬ−１０またはビタミンＤ３の存在下で分化した単球由来樹状細胞により選択的に発現されるＩＬＴ３ファミリーのヒトメンバーを意味する。
【００５０】
本明細書中で用いる「抗体」は、組換え製造形態を含む完全免疫グロブリンを意味し、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を含む。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、バイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体、ヒト化ラクダ類重鎖抗体および非ヒト／ヒトキメラ抗体を含むが、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、意図される使用のための抗体の修飾（例えば、ヒト治療用抗体としての使用のための非ヒト抗体のヒト化）の前の、抗体への免疫系の暴露により得られる抗体である。
【００５１】
「抗体」は、１つの実施形態においては、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）を含む糖タンパク質またはその抗原結合性部分を意味する。各重鎖は重鎖可変領域またはドメイン（本明細書においてはＶＨと略記される）および重鎖定常領域またはドメインから構成される。ある天然に存在するＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡ抗体においては、重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。ある天然に存在する抗体においては、各軽鎖は軽鎖可変領域またはドメイン（本明細書においてはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域またはドメインから構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、すなわち、ＣＬから構成される。ヒトＶＨは６個のファミリーメンバー、すなわち、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６を含み、ヒトＶＬファミリーは１６個のファミリーメンバー、すなわち、Ｖκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０を含む。これらのファミリーメンバーのそれぞれは特定のサブタイプに更に分類されうる。
【００５２】
ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分されうる。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域から構成され、それらはアミノ末端からカルボキシ末端の方向に以下の順序で位置している：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合をもたらしうる。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に基づいている。
【００５３】
一般に、抗体は６個のＣＤＲ（ＶＨ上の３個およびＶＬ上の３個）を含むが、ほとんどの場合、重鎖のＣＤＲ３領域が抗体特異性の主要決定因子であることが最先端の技術において認識されており、重鎖のみのＣＤＲ３に基づく特異的抗体生成の例が当技術分野において公知である（Ｂｅｉｂｏｅｒら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３−８４９（２０００）；Ｋｌｉｍｋａら，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８３：２５２−２６０（２０００）；Ｒａｄｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８９１０−８９１５（１９９８）；Ｘｕら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００））。Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（配列によって抗体のＣＤＲ領域を定めている）を参照されたい。また、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（構造によって抗体のＣＤＲ領域を定めている）も参照されたい。
【００５４】
表１に示す以下の一般的な規則を用いて、抗体配列においてＣＤＲを特定することが可能である。これらの実質的に普遍的な特徴が見られない稀な例も存在するが、Ｃｙｓ残基は最も保存された特徴である。
【表１】
2021503280.tif 000003
【００５５】
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとしての、抗体のアイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【００５６】
抗体の重鎖は、末端リジン（Ｋ）、または末端グリシンおよびリジン（ＧＫ）を含有する又は含有しないことが可能である。したがって、末端リジンを欠くがグリシン残基で終結する本明細書に示されている重鎖定常領域アミノ酸配列を含む本発明における抗ＩＬＴ３抗体の特定の実施形態は、末端グリシン残基も存在しない実施形態を更に含む。これは、末端リジン、そして時にはグリシンおよびリジンが、抗体の発現中に、一緒に切断されたり、またはヒト体内への導入の際に切除されうるが、抗体の有効性、安定性または免疫原性に対する明白な悪影響は認められないからである。幾つかの場合には、重鎖をコードする核酸分子は、末端リジンをコードするコドンまたは末端リジンおよびグリシンのコドンが故意に省略されていてもよい。
【００５７】
本明細書中で用いる「抗原結合性フラグメント」は、抗体のフラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗体結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；一本鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体およびナノボディが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本明細書中で用いる「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖の可変領域およびＣＨ１から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
【００５９】
本明細書中で用いる「Ｆａｂ’フラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分またはフラグメント、そしてまた、ＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの、２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
【００６０】
本明細書中で用いる「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分およびＶＨドメインを含有する２個の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物でありうる。
【００６１】
本明細書中で用いる「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００６２】
これらの及び他の潜在的構築物はＣｈａｎ  ＆  Ｃａｒｔｅｒ（２０１０）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３０１に記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の通常の技術を用いて得られ、該フラグメントは、無傷抗体の場合と同様にして有用性に関して選別（スクリーニング）される。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ技術により、または無傷免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断により製造されうる。
【００６３】
本明細書中で用いる「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上のジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
【００６４】
本明細書中で用いる「ジアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）を含む。同一鎖上で２個のドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２個の抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ  ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００６５】
本明細書中で用いる「二重特異性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペア、したがって２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。例えば、二重特異性抗体は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体の６個のＣＤＲを少なくとも含む第１抗体または変異体実施形態（ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する）の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第１重鎖／軽鎖ペアを、ＩＬＴ３以外の関心抗原に対する特異性を有する第２抗体の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第２重鎖／軽鎖ペアと共に含みうる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む種々の方法により製造されうる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉら（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３を参照されたい。また、二重特異性抗体は「ジアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８）または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２）として形成されうる。
【００６６】
本明細書中で用いる「単離（された）」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿主細胞からの又はその増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含有しないことが可能である。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すものではない。
【００６７】
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」は実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる考えられうる自然突然変異以外は、アミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに対して特異的であることが多い可変ドメインに異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による該抗体の製造を要するとは解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１−５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
【００６８】
本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、第１抗体からの可変ドメインと第２抗体からの定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、（ｉ）第１抗体および第２抗体は異なる種からのものであり（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５）、または（ｉｉ）第１抗体および第２抗体は異なるアイソタイプからのものである（例えば、ＩｇＧ１抗体からの可変ドメインおよびＩｇＧ４抗体からの定常ドメイン）。１つの態様においては、可変ドメインは非ヒト抗体、例えばマウス抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列はヒト抗体から得られる。もう１つの態様においては、可変ドメインはマウス抗体からのヒト化可変ドメインであり、定常ドメインはヒト抗体のものである。
【００６９】
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」は、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウス、ラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全部を含み、ここで、超可変ループは非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全部または実質的に全部はヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、ヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含みうる。
【００７０】
「ヒト化」（リシェーピング（Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）またはＣＤＲグラフト化とも称される）は、異種（一般にはげっ歯類）由来のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の免疫原性を低減するための、およびエフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体活性化、Ｃ１ｑ結合）を改善するための今や十分に確立された技術である。操作されるｍＡｂは、分子生物学の技術を用いて操作されるが、ヒトフレームワーク内へのげっ歯類相補性決定領域（ＣＤＲ）の単なるＣＤＲグラフト化は、しばしば、元のｍＡｂの結合アフィニティおよび／または特異性の喪失を引き起こす。抗体をヒト化するために、ヒト化抗体の設計は、変異、例えば、ＣＤＲの残基における保存的アミノ酸置換、およびげっ歯類ｍＡｂからの残基の、ヒトフレームワーク領域内への逆置換（逆突然変異）を含む。位置は、構造分析のための配列比較により、または可変領域の３Ｄ構造のホモロジーモデルの分析により識別または特定されうる。アフィニティ成熟のプロセスは、ごく最近では、選択された位置においてアミノ酸を変化させるためにファージライブラリーを使用している。同様に、げっ歯類のＣＤＲをグラフト化するための最も適切なヒトフレームワークを選択するために、多数のアプローチが用いられている。抗体構造の既知パラメーターのデータセットが増加するにつれて、これらの技術の高度化および洗練も促進される。単一抗体からのコンセンサスもしくは生殖系列配列、または幾つかの異なるヒトｍＡｂからの各軽鎖もしくは重鎖可変領域内のフレームワーク配列の断片が使用されうる。ヒト化のためのもう１つのアプローチは、げっ歯類配列の表面残基のみを、ヒトｍＡｂにおいて見られる最も一般的な残基で修飾することであり、「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」または「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」と称される。しばしば、ヒト抗体またはヒト化抗体はヒトにおいて実質的に非免疫原性である。
【００７１】
本明細書中で用いる、抗体または免疫グロブリンに関する「非ヒトアミノ酸配列」は、非ヒト哺乳動物のアミノ酸配列に特徴的なアミノ酸配列を意味する。この語は、ライブラリーにおける多様性がインシリコで生成される完全ヒト抗体ライブラリーから得られる抗体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含まない（例えば、米国特許第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を参照されたい）。
【００７２】
本明細書中で用いる「エフェクター機能」は、抗体イソタイプによって様々である、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を意味する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；ならびにＢ細胞活性化が含まれる。
【００７３】
本明細書中で用いる「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、アミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、ここで、該変化は、しばしば、タンパク質の生物活性を改変することなく施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を以下の表２に示す。
【表２】
2021503280.tif 000004
【００７４】
本明細書中で用いる「エピトープ」または「抗原決定基」なる語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原（例えば、ＩＬＴ３）上の部位を意味する。タンパク質抗原内のエピトープは、連続的アミノ酸（通常は直線状エピトープ）、またはタンパク質の三次フォールディングよって並置された不連続的アミノ酸（通常はコンホメーションエピトープ）の両方から形成されうる。連続的アミノ酸から形成されるエピトープは、常にというわけではないが典型的には、変性溶媒にさらされても保持され、一方、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理されると消失する。連続的直鎖状エピトープは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む抗原上のペプチドドメインを含む。不連続的コンホメーションエピトープは、抗体により結合される１以上のアミノ酸またはペプチドドメインが散在する、抗体により結合される抗原上の１以上のペプチドドメインまたは領域を含み、各ドメインは、独立して、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。与えられた抗体がどのエピトープに結合するのかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は当技術分野においてよく知られており、例えば、イムノブロッティングおよび免疫沈降アッセイを包含し、それらにおいては、重複または連続的ペプチド（例えば、ＩＬＴ３からのもの）を、与えられた抗体（例えば、抗ＩＬＴ３抗体）との反応性に関して試験する。エピトープの空間的コンホメーションを決定する方法には、当技術分野における技術および本明細書に記載されている技術、例えば、Ｘ線結晶学、２次元核磁気共鳴およびＨＤＸ−ＭＳが含まれる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編，（１９９６）を参照されたい）。
【００７５】
「エピトープマッピング」なる語は、当技術分野における技術および本明細書に記載されている技術、例えばＸ線結晶学、二次元核磁気共鳴および水素重水素交換マススペクトロスコピー（ＨＤＸ−ＭＳ）を用いて、抗体−抗原認識に関与する抗原上の分子決定基を特定する方法を意味する。
【００７６】
２つ以上の抗体に関する「同じエピトープに結合する」なる語は、与えられた方法により判定された場合、抗体がアミノ酸残基またはアミノ酸セグメントの組合せの同一セグメントに結合することを意味する。抗体が、本明細書に記載されている抗体との「ＩＬＴ３上の同じエピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術には、例えば、エピトープマッピング法、例えば、エピトープの原子分解能をもたらす、抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析、およびＨＤＸ−ＭＳが含まれる。抗原断片（例えば、タンパク質分解断片）への抗体の結合および抗原の突然変異体への抗体の結合をモニターする他の方法もあり、この場合、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失は、しばしば、エピトープ成分の指標とみなされる（例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発−Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＆  Ｗｅｌｌｓ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１）。また、エピトープマッピングのためのコンピューター利用コンビナトリアル法も用いられうる。これらの方法は、コンビナトリアル・ファージ・ディスプレイ・ペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを関心抗体がアフィニティ分離する能力に基づいている。
【００７７】
「ＩＬＴ３のような標的への結合に関して他の抗体と競合する」抗体は、標的、すなわちＩＬＴ３への前記の他の抗体の結合を（部分的または完全に）阻害（抑制）する抗体を意味する。２つの抗体が標的への結合に関して互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が標的への他方の抗体の結合を阻害するかどうか及びその阻害の度合は、公知競合実験を用いて決定されうる。ある実施形態においては、抗体は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％、標的への別の抗体の結合と競合し、該結合を阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と共に最初にインキュベートされるコールド（ｃｏｌｄ）抗体）であるかによって異なりうる。競合アッセイは、例えば、Ｅｄ  ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７または“Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”（Ｅｄ  ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ  １９９９）の第１１章に記載されているとおりに行われうる。競合抗体は同一エピトープ、重複エピトープまたは隣接エピトープ（例えば、立体障害により実証されるもの）に結合する。
【００７８】
他の競合結合アッセイには以下のものが含まれる：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；１−１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））。
【００７９】
本明細書中で用いる、ヒトＩＬＴ３のような抗原または分子に対して「特異的に結合する」は、抗体または他のリガンドが、全体的または部分的に、ヒトＩＬＴ３とは優先的に会合し、他の分子、特に、ヒト血液または血清中で見出される分子とは会合しないことを意味する。抗体は、典型的には、１０−７〜１０−１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）により表される高いアフィニティで、その同種（ｃｏｇｎａｔｅ）抗原に特異的に結合する。約１０−６Ｍを超えるいずれのＫＤも非特異的結合を示すと一般にみなされる。本明細書中で用いる、ヒトＩＬＴ３に「特異的に結合する」抗体は、１０μｇ／ｍＬの抗体を使用して細胞ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて測定された場合に、１０−７Ｍ以下のＫＤ、特定の実施形態においては１０−８Ｍ以下もしくは５×１０−９Ｍ以下、または１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍ以下のＫＤを有することを意味する高いアフィニティで、ヒトＩＬＴ３には結合するが、密接に関連したタンパク質、例えばヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１には、測定可能な結合では結合しない抗体を意味する。
【００８０】
本明細書において、抗原が、与えられた抗原と「実質的に同一」であると言えるのは、それが、その与えられた抗原に対して高度のアミノ酸配列同一性を示す場合、例えば、それが、その与えられた抗原のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％または少なくとも９９％またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を示す場合である。例えば、ヒトＩＬＴ３に特異的に結合する抗体はまた、ある非ヒト霊長類種（例えば、アカゲザルまたはカニクイザル）からのＩＬＴ３と交差反応しうる。
【００８１】
本明細書中で用いる「単離された核酸分子」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合成由来のＤＮＡまたはＲＮＡあるいはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示の目的においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
【００８２】
本明細書中で用いる「治療する」または「治療」は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療剤を、該治療剤が治療活性または予防活性を示す疾患症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該治療剤は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療剤の量は患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨床的尺度により評価されうる。この語は更に、障害に関連した症状の発生の遅延および／またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。この語は更に、既存の無制御の又は望ましくない症状の改善、追加的な症状の予防、およびそのような症状の根本原因の改善または予防を含む。したがって、この語は、障害、疾患もしくは症状を有するヒトまたは動物対象、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発生する可能性を有するヒトまたは動物対象に、有益な結果がもたらされていることを示す。
【００８３】
本明細書中で用いる「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用される場合には、治療的処置および診断的適用を意味する。「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用される場合には、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの、ヒトまたは動物対象との接触を含む。
【００８４】
本明細書中で用いる「治療的有効量」は、治療されている対象において所望の効果を達成するのに十分な特定の物質の量を意味する。例えば、これは、ＩＬＴ３の活性化を抑制するのに必要な量、またはペンブロリズマブと同時投与された場合にペンブロリズマブの応答性を増強するのに必要な量でありうる。
【００８５】
本明細書中で用いる「ＰＤ−１」なる語はＴ細胞調節因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの抑制性メンバーであるプログラム死１（ＰＤ−１）タンパク質を意味する（Ｏｋａｚａｋｉら（２００２）  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４：３９１７７９−８２；Ｂｅｎｎｅｔｔら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：７１１−８）。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが含まれる。ＰＤ−１遺伝子は５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質をコードしている（Ａｇａｔａら，（１９９６）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７６５−７２）。ＰＤ−１の２つのリガンド、すなわち、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）が特定されており、これらは、ＰＤ−１への結合に際してＴ細胞活性化をダウンレギュレーションすることが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎら（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７−３４；Ｃａｒｔｅｒら（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４−４３）。ＰＤ−１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫抑制タンパク質として公知である（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ら（１９９２）ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：３８８７−３８９５；Ｂｌａｎｋ，Ｃ．ら（Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｄｅｃ．２９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６（５）：７３９−７４５）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用は免疫チェックポイントとして作用することが可能であり、これは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介性増殖の低減および／または癌細胞による免疫回避をもたらしうる（Ｄｏｎｇら（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋら（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との局所相互作用を抑制することにより、免疫抑制が逆転可能であり、また、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用が遮断される場合、効果は相加的である（Ｉｗａｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：１２２９３−７；Ｂｒｏｗｎら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−６６）。
【００８６】
抗体および抗原結合性フラグメント
本発明は、１０μｇ／ｍＬの抗体を使用する細胞ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅにおける測定で、ＩＬＴ３に特異的に結合し、密接に関連したタンパク質（例えば、ＩＬＴ５、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８およびＩＬＴ１１）への測定可能な結合を示さない単離されたキメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体ならびに抗原結合性フラグメントを提供する。抗ＩＬＴ３抗体は抗原提示細胞および樹状細胞の活性を増強し、単球抑制因子の活性を低下させ、Ｔ細胞のプライミングを増強する。したがって、本発明は更に、癌の治療のための第１選択、第２選択または第３選択療法における、癌の治療のための単剤療法における、および抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用のための、抗ＩＬＴ３抗体の使用を含む。
【００８７】
抗ＩＬＴ３抗体は、アミノ酸配列により本明細書に開示されている任意の抗体を含み、（ｉ）アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗体の、少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む任意の抗体を含み、あるいは（ｉｉ）本明細書に開示されているＣＤＲアミノ酸配列を有さないが、アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗体と同じ、ＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ＩＬＴ３受容体シグナル伝達をモジュレーションして、該抗体が抗原提示細胞および樹状細胞の活性を増強し、単球抑制因子の活性を低下させ、ならびにＴ細胞のプライミングを増強することを可能にする任意の抗体を含む。特定の態様においては、抗体は、１０μｇ／ｍＬの抗体を使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイまたは細胞ＥＬＩＳＡにおいて測定された場合、ヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１への測定可能な結合を示さない。この語は、特に、抗体ＺＭ４．１または抗体９Ｂ１１、あるいは米国特許第７，７７７，００８号および第８，９０１，２８１号または米国特許出願公開番号２００９０２０２５４４、２０１５０１１０７１４、２０１５０１３９９８６および２０１７０２６７７５９；ならびに国際公開番号ＷＯ２０１３０４３５６９、ＷＯ２０１３１８１４３８、ＷＯ２０１４１１６８４６、ＷＯ２０１６０４９６４１、ＷＯ２０１６１２７４２７、ＷＯ２０１８０８９３００およびＷＯ２０１８１４８４９４に開示されているその他の抗体のいずれかの、少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体を除外する。
【００８８】
抗ＩＬＴ３抗原結合性フラグメントなどは、（ｉ）アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子、（ｉｉ）アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗体の、少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子、あるいは（ｉｉｉ）本明細書に開示されているＣＤＲアミノ酸配列を有さないが、アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体と同じ、ＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ＩＬＴ３受容体シグナル伝達をモジュレーションして、該抗原結合性フラグメントが抗原提示細胞および樹状細胞の活性を増強し、単球抑制因子の活性を低下させ、ならびにＴ細胞のプライミングを増強することを可能にする任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。特定の態様においては、抗原結合性フラグメントは、１０μｇ／ｍＬの抗ＩＬＴ３抗原結合性フラグメントを使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイまたは細胞ＥＬＩＳＡにおいて測定された場合、ヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１への測定可能な結合を示さない。この語は、特に、抗体ＺＭ４．１または抗体９Ｂ１１、あるいは米国特許第７，７７７，００８号および第８，９０１，２８１号または米国特許出願公開番号２００９０２０２５４４、２０１５０１１０７１４、２０１５０１３９９８６および２０１７０２６７７５９；ならびに国際公開番号ＷＯ２０１３０４３５６９、ＷＯ２０１３１８１４３８、ＷＯ２０１４１１６８４６、ＷＯ２０１６０４９６４１、ＷＯ２０１６１２７４２７、ＷＯ２０１８０８９３００およびＷＯ２０１８１４８４９４に開示されているその他の抗体のいずれかの、少なくとも１つのＣＤＲを含む抗原結合性フラグメントを除外する。
【００８９】
もう１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、（ｉ）アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗体の少なくともＨＣ−ＣＤＲ３を含む任意の抗体を含み、あるいは（ｉｉ）本明細書に開示されているＨ３−ＣＤＲ３アミノ酸配列を有さないが、アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗体と同じ、ＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ＩＬＴ３受容体シグナル伝達をモジュレーションして、該抗体が抗原提示細胞および樹状細胞の活性を増強し、単球抑制因子の活性を低下させ、ならびにＴ細胞のプライミングを増強することを可能にする任意の抗体を含む。特定の態様においては、抗体は、１０μｇ／ｍＬの抗体を使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイまたは細胞ＥＬＩＳＡにおいて測定された場合、ヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１への測定可能な結合を示さない。この語は、特に、抗体ＺＭ４．１または抗体９Ｂ１１、あるいは米国特許第７，７７７，００８号および第８，９０１，２８１号または米国特許出願公開番号２００９０２０２５４４、２０１５０１１０７１４、２０１５０１３９９８６および２０１７０２６７７５９；ならびに国際公開番号ＷＯ２０１３０４３５６９、ＷＯ２０１３１８１４３８、ＷＯ２０１４１１６８４６、ＷＯ２０１６０４９６４１、ＷＯ２０１６１２７４２７、ＷＯ２０１８０８９３００およびＷＯ２０１８１４８４９４に開示されているその他の抗体のいずれかの、少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体を除外する。
【００９０】
抗ＩＬＴ３抗原結合性フラグメントなどは、（ｉ）アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子、（ｉｉ）配列により本明細書に開示されている抗体の少なくともＨＣ−ＣＤＲ３を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子、あるいは（ｉｉｉ）本明細書に開示されているＨＣ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を有さないが、アミノ酸配列により本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体と同じ、ＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ＩＬＴ３受容体シグナル伝達をモジュレーションして、該抗原結合性フラグメントが抗原提示細胞および樹状細胞の活性を増強し、単球抑制因子の活性を低下させ、ならびにＴ細胞のプライミングを増強することを可能にする任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。特定の態様においては、抗原結合性フラグメントは、１０μｇ／ｍＬの抗ＩＬＴ３抗原結合性フラグメントを使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイまたは細胞ＥＬＩＳＡにおいて測定された場合、ヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１への測定可能な結合を示さない。この語は、特に、抗体ＺＭ４．１または抗体９Ｂ１１、あるいは米国特許第７，７７７，００８号および第８，９０１，２８１号または米国特許出願公開番号２００９０２０２５４４、２０１５０１１０７１４、２０１５０１３９９８６および２０１７０２６７７５９；ならびに国際公開番号ＷＯ２０１３０４３５６９、ＷＯ２０１３１８１４３８、ＷＯ２０１４１１６８４６、ＷＯ２０１６０４９６４１、ＷＯ２０１６１２７４２７、ＷＯ２０１８０８９３００およびＷＯ２０１８１４８４９４に開示されているその他の抗体のいずれかの、少なくとも１つのＣＤＲを含む抗原結合性フラグメントを除外する。
【００９１】
特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体分子のＨＣ−ＣＤＲ３または表３に示されているＨ３−ＣＤＲ３を含む、ヒトもしくはヒト化抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメント、あるいはキメラ抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントである。
【００９２】
特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、本明細書または表３に開示されている抗ＩＬＴ３抗体分子のＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３を含む、ヒトもしくはヒト化抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメント、あるいはキメラ抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントである。
【表３】
2021503280.tif 000005
【００９３】
特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、ヒトもしくはヒト化抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメント、あるいはキメラ抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントであり、各場合において、それらは、配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）３を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列の１以上からの少なくとも１つのアミノ酸を含む。もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩＬＴ３上のエピトープに結合し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群に記載されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００９４】
特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、本明細書に開示されているヒト化またはキメラ抗ＩＬＴ３抗体である。特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体により結合される同じエピトープ、または本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体の結合と競合する同じエピトープに結合する、ヒトもしくはヒト化抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメント、あるいはキメラ抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントであり、該抗体は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＣＤＲの３個未満を含み、または該ＣＤＲを全く含まない。
【００９５】
本発明は更に、（ｉ）抗免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、あるいは（ｉｉ）抗ＩＬＴ３抗体の、６個のＣＤＲを少なくとも含む抗体または抗原結合性フラグメントであって、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失または組合せを有する、抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、抗ＩＬＴ３抗体の、６個のＣＤＲは、配列番号１７、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５または１０３に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）−ＣＤＲ１；配列番号１８、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６または１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７または１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；配列番号２７、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８または１０６に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）−ＣＤＲ１；配列番号４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９または１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４、６０、６８、７６、８４、９２、１００または１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３を含み、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントはヒトもしくはアカゲザルＩＬＴ３またはヒトＩＬＴ３とアカゲザルＩＬＴ３との両方に特異的に結合する。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【００９６】
特定の実施形態においては、本発明は、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）−ＣＤＲ１；配列番号１９、２０または２１に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；配列番号２３、２４、２５または２６に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）−ＣＤＲ１；配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３を含む、抗ＩＬＴ３抗体の６個のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【００９７】
特定の実施形態においては、本発明は、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）−ＣＤＲ１；配列番号２０に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；配列番号４１に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）−ＣＤＲ１；配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３を含む、抗ＩＬＴ３抗体の６個のＣＤＲを含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【００９８】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体または抗原結合性フラグメントが、（ａ）ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６ファミリーならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、（ｂ）ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０ファミリーならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【００９９】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４重鎖（ＨＣ）定常ドメイン、または天然ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１００】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体がヒトカッパもしくはラムダ軽鎖定常ドメイン、または天然ヒトカッパもしくはラムダ軽鎖ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０１】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、（ｉ）ヒトＶＨ３ファミリーから選択されるフレームワークを有するヒト重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ならびにヒトＶκ１、Ｖκ３およびＶκ４ファミリーから選択されるフレームワークを有するヒト軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４重鎖（ＨＣ）定常ドメイン、または天然ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体；ならびに（ｉｉｉ）ヒトカッパもしくはラムダ軽鎖定常ドメイン、または天然ヒトカッパもしくはラムダ軽鎖ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。特定の実施形態においては、アミノ酸配列の差異は保存的変化／置換である。
【０１０２】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体または抗原結合性フラグメントが、それぞれ配列番号１５および配列番号１６、それぞれ配列番号４５および配列番号４６、それぞれ配列番号５３および配列番号５４、それぞれ配列番号６１および配列番号６２、それぞれ配列番号６９および配列番号７０、それぞれ配列番号７７および配列番号７８、それぞれ配列番号８５および配列番号８６、それぞれ配列番号９３および配列番号９４に、またはそれぞれ配列番号１０１および配列番号１０２に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０３】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４または１２５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０または１４１に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０４】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１８に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１４０に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。。
【０１０５】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号９、１０、１１、１２または１３に記載されているアミノ酸配列、および配列番号９、１１、１２または１３の変異体（ここで、ＨＣはＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いている）を含む重鎖（ＨＣ）定常ドメインを含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０６】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）定常ドメインを含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０７】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号１４２、１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１９１、１９２または１９３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４または１７５のアミノ酸配列を含むＨＣの変異体（ここで、ＨＣはＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いている）を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０８】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１０９】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号１４２、１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１９１、１９２または１９３のアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）、および配列番号１４３、１４４、１４８、１４９、１５０、１６７、１６８、１６９、１７０、１７４または１７５のアミノ酸配列を含む変異体（ここで、ＨＣはＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いている）を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１１０】
特定の実施形態においては、本発明は、表４に示されている抗体から選択される抗体を提供する。
【０１１１】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体が、配列番号１４３に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）、および配列番号１６５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）、および変異体（ここで、ＨＣはＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いている）を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１１２】
特定の実施形態においては、本発明は、抗体がヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４重鎖（ＨＣ）定常ドメイン、または天然ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくは組合せを含むその変異体、およびＨＣがＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いているその変異体を含む、前記抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１１３】
幾つかの実施形態においては、異なる定常ドメインが、本発明で提供されるＣＤＲを含むＶＬおよびＶＨ領域に融合されうる。特定の実施形態においては、本発明で提供されるＣＤＲを含むＶＨ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４重鎖（ＨＣ）定常ドメイン、または天然もしくは野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較し１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体、およびＨＣがＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いているその変異体に融合されうる。
【０１１４】
特定の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体（または抗原結合性フラグメント）は、変化したエフェクター機能を有し、天然（野生型）ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメイン、例えば、補体結合能を含む１以上のエフェクター機能を阻止または最小化する突然変異を有するヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ４またはハイブリッドヒトＩｇＧ１／ヒトＩｇＧ４、およびＨＣがＣ末端リジンまたはグリシン−リジンを欠いているその変異体を含みうる。
【０１１５】
天然ヒトＩｇＧ１抗体は長い半減期、およびエフェクター機能、例えば補体活性化、および抗体依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は抗体の全ての使用に望ましいとは限らない可能性がある。したがって、特定の実施形態においては、重鎖定常ドメインまたはＦｃが、最小の又は低下したエフェクター機能（「低エフェクター（ｅｆｆｅｃｔｏｒ−ｌｅｓｓ）」）を有することが望ましい。それらの例においては、抗ＩＬＴ３  ＨＣ可変ドメインは、低エフェクターであることが一般に公知であるヒトＩｇＧ４定常ドメイン、または低エフェクターとなるように突然変異に付されたＩｇＧ１定常ドメインに融合されうる。これらの低エフェクター分子は、野生型ＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して最小の又は低下した、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγ．ＲＩへの結合を示し、この場合、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＡおよびＦｃγＲＩのそれぞれに対するアフィニティは、野生型ＩｇＧ定常ドメインを含むポリペプチドと比較して１．１５倍〜１００倍低下し、該分子により誘発される抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインを含むポリペプチドにより誘発されるＡＤＣＣの０〜２０％である。
【０１１６】
したがって、特定の実施形態においては、本発明は、ヒトＩｇＧ４定常ドメインを含むキメラまたはヒト化抗ＩＬＴ３抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。もう１つの実施形態においては、ヒトＩｇＧ４定常ドメインは、ＥＵ系の２２８位およびＫａｂａｔ系の２４１位に対応する位置で天然（野生型）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なるように修飾されることが可能であり、この場合、ＨＣ定常ドメインの１０８位の天然セリン（Ｓｅｒ１０８）はプロリン（Ｐｒｏ）で置換される。例えば、配列番号９を参照されたい。この修飾は、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうる、１０６位のシステイン（Ｃｙｓ１０６）および１０９位のシステイン（Ｃｙｓ１０９）［これらは、ＥＵ系のＣｙｓ２２６およびＣｙｓ２２９ならびにＫａｂａｔ系のＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位に対応する］の間の潜在的な鎖間ジスルフィド結合の形成を妨げる。Ａｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５（１９９３）を参照されたい。また、Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１−８，（２００１）；配列番号１４および４１も参照されたい。特定の実施形態においては、ヒトＩｇＧ４定常ドメインは、Ｓ２２８Ｐ置換に加えて、Ｌ２３５Ｅ置換を更に含みうる。
【０１１７】
もう１つの実施形態においては、キメラまたはヒト化抗ＩＬＴ３抗体は、低エフェクターとなるように修飾されている修飾ヒトＩｇＧ１定常ドメインに融合されうる。１つの実施形態においては、ヒトＩｇＧ１  ＨＣは、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを大幅に低減する、２３３〜２３６位のヒトＩｇＧ２  ＨＣ残基ならびに３２７位、３３０位および３３１位のＩｇＧ４  ＨＣ残基の置換を含みうる（Ａｒｍｏｕｒら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３−２４（１９９９）；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４（２００１）。特定の実施形態においては、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖（ＨＣ）定常ドメイン、または天然ＩｇＧのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体であって、低下した又は最小のエフェクター機能を有する抗体をもたらすものを含む。特定の態様においては、ＩｇＧ１は、Ｆｃを低エフェクターにするＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ突然変異を含むように又はそれらからなるように修飾されている。ＩｇＧ１  Ｆｃを低エフェクターにするために使用されうる他の突然変異は米国特許第８，９６９，５２６号に見出されうる。
【０１１８】
もう１つの実施形態においては、ヒトＩｇＧ１  ＨＣは、ＨＣの約２９７位におけるアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮ−グリコシル化を欠くように修飾される。Ｎ−グリコシル化のコンセンサス配列はＡｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒである（ここで、ＸａａはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）。ＩｇＧ１においては、Ｎ−グリコシル化コンセンサス配列はＡｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒである。修飾は、ＨＣをコードする核酸分子における２９７位のＡｓｎのコドンを別のアミノ酸、例えばＧｌｎのコドンで置換することにより達成されうる。あるいは、ＳｅｒのコドンはＰｒｏのコドンで置換されることが可能であり、あるいは、ＴｈｒのコドンはＳｅｒのコドン以外の任意のコドンで置換されうる（例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｄ）。そのような修飾ＩｇＧ１分子は、検出可能なエフェクター機能をほとんど又は全く有さない。あるいは、３つ全てのコドンが修飾される。
【０１１９】
もう１つの実施形態においては、ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上のアミノ酸置換を含むように修飾され、ここで、該残基は、ＫａｂａｔのＥＵ指針に従い番号付けされており、該ポリペプチドは、野生型ＩｇＧ定常ドメイン領域を含むポリペプチドと比較して低下した、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩに対するアフィニティを示す。特定の実施形態においては、ヒトＩｇＧ定常ドメインは、例えば配列番号４により示されるとおり、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓの置換を含む。特定の実施形態においては、ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、Ｐｒｏ３２９位でのアミノ酸置換および少なくとも１つの更なるアミノ酸置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｄ２６５ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。これらおよび他の置換はＷＯ９４２８０２７、ＷＯ２００４０９９２４９、ＷＯ２０１２１３００８３１；米国特許第９，７０８，４０６号、第８，９６９，５２６号、第９，２９６，８１５号；Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ４０６，２６７−２７３（２０００年７月２０日））に開示されている。
【０１２０】
本発明の１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、定常領域を含む２つの重鎖と２つの軽鎖を有する完全な四量体構造を含む実施形態を含む。各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同一である。
【０１２１】
特定の実施形態においては、本発明は、表４に示されている抗ＩＬＴ３抗体を提供する。ＶＨの１０１位におけるトリプトファン残基の置換を含むそれらの抗体の場合を除き、本明細書に開示されている抗体はヒトＩＬＴ３に結合する。
【表４】
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【０１２２】
実施例４に記載されている水素−重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）によるエピトープマッピングは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体が、ＩＬＴ３の細胞外ドメインのＤ１およびＤ２ドメイン間の境界近くの細胞外ドメイン上のエピトープに結合することを示している。ＨＤＸ−ＭＳを用いて特定されたエピトープは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体により結合されるエピトープが、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群から選択されるペプチドドメインアミノ酸配列の１以上における少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなることを示している。もう１つの実施形態においては、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群から選択されるペプチドドメインアミノ酸配列の１以上を含む又はそれらからなる。ある実施形態においては、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群から選択されＨＤＸ−ＭＳにおいて特定されるペプチドドメインアミノ酸配列のそれぞれにおける少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなる。特定の実施形態においては、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８からなる群から選択されるペプチドドメインアミノ酸配列の１以上を含む又はそれらからなる。特定の実施形態においては、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８に示されているペプチドドメインを含む又はそれからなる。
【０１２３】
したがって、本発明は更に、ＩＬＴ３上のエピトープに結合するキメラ、ヒト化もしくはヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、エピトープは、水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析により決定された配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列により示されるアミノ酸配列を含むペプチドドメインの１以上における少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなる。
【０１２４】
もう１つの実施形態においては、本発明は更に、ＩＬＴ３上のエピトープに結合するキメラ、ヒト化もしくはヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８の１以上において示されるペプチドドメイン内のアミノ酸を含む又はそれらからなる。ある実施形態においては、エピトープは、図３に示されているＨＤＸ−ＭＳにより決定されたヒートマップにおいて特定されたペプチドドメインのそれぞれにおける少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなる。
【０１２５】
本発明は更に、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインと配列番号１６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む抗体の、ＩＬＴ３上のエピトープへの結合を交差遮断するキメラ、ヒト化もしくはヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態においては、エピトープは、水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析により決定された配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列によりに示されるアミノ酸配列を含む又はそれらからなるペプチドドメインの１以上における少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなる。もう１つの実施形態においては、エピトープは、配列番号３、４、５、６、７および８の１以上において示されるペプチドドメイン内のアミノ酸を含む又はそれらからなる。ある実施形態においては、エピトープは、ＨＤＸ−ＭＳにおいて特定されたペプチドドメインのそれぞれにおける少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなる。
【０１２６】
本発明は更に、ＩＬＴ３に結合する第１抗体または抗原結合性フラグメントと、ＩＬＴ３以外の分子に結合する第２抗体または抗原結合性フラグメントとを含む二重特異性抗体および抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供し、ここで、第１抗体または抗原結合性フラグメントは、少なくとも、配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のアミノ酸配列、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列との３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ここで、第１抗体は、配列番号３、４、５、６、７および８の配列内のアミノ酸を含むＩＬＴ３エピトープに結合し、第２の抗体はＩＬＴ３以外の分子に結合する。
【０１２７】
本発明は更に、ＩＬＴ３に結合する第１抗体または抗原結合性フラグメントと、ＩＬＴ３以外の分子に結合する第２抗体または抗原結合性フラグメントとを含む二重特異性抗体および抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供し、ここで、第１抗体または抗原結合性フラグメントは、少なくとも、抗ＩＬＴ３抗体の６個のＣＤＲ、または該ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその実施形態を含み、ここで、第１抗体は、配列番号３、４、５、６、７および８の配列内のアミノ酸を含むＩＬＴ３エピトープに結合し、第２抗体はＩＬＴ３以外の分子に結合する。
【０１２８】
本発明は更に、配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、または配列番号２２、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７および１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列内に３、２もしくは１個の差異を有するアミノ酸配列を有する少なくともＨＣ−ＣＤＲ３を含む第１抗体の第１重鎖／軽鎖ペアと、第１重鎖／軽鎖ペアにより認識されるエピトープとは異なる抗ＩＬＴ３エピトープに対する特異性を有する第２抗体の第２重鎖／軽鎖ペアとを有するバイパラトピック抗体（同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体）を提供し、ここで、第１重鎖／軽鎖ペアは、配列番号３、４、５、６、７および８の配列内のアミノ酸を含むＩＬＴ３エピトープに結合し、第２抗体はＩＬＴ３以外の分子に結合する。
【０１２９】
本発明は更に、抗ＩＬＴ３抗体の６個のＣＤＲを含む、または該ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む第１抗体の第１重鎖／軽鎖ペアと、第１重鎖／軽鎖ペアにより認識されるエピトープとは異なる抗ＩＬＴ３エピトープに対する特異性を有する第２抗体の第２重鎖／軽鎖ペアとを有するバイパラトピック抗体（同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体）を提供し、ここで、第１抗体は、配列番号３、４、５、６、７および８の配列内のアミノ酸を含むＩＬＴ３エピトープに結合し、第１重鎖／軽鎖ペアは、配列番号３、４、５、６、７および８の配列内のアミノ酸を含むＩＬＴ３エピトープに結合し、第２抗体はＩＬＴ３以外の分子に結合する。
【０１３０】
医薬組成物および投与
抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントの医薬組成物または無菌組成物を製造するためには、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを薬学的に許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）、およびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ（ＵＳＰ）１２６０１  Ｔｗｉｎｂｒｏｏｋ  Ｐａｒｋｗａｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ  ２０８５２−１７９０，ＵＳＡによるインターネット上の継続的更新を参照されたい。
【０１３１】
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０１３２】
もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２０１７（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；７５ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与される。抗体分子を投与する方法は当技術分野で公知であり、以下に記載される。使用される分子の適切な投与量は対象の年齢および体重ならびに使用される個々の薬物に左右される。抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントの投与量および治療レジメンは当業者により決定されうる。ある実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは約１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇの用量で注射（例えば、皮下または静脈内）により投与される。幾つかの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇまたは約４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。幾つかの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは約１〜３ｍｇ／ｋｇまたは約３〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。幾つかの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは約０．５〜２、２〜４、２〜５、５〜１５または５〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。投薬スケジュールは、例えば、週１回から、２、３または４週間に１回まで変動しうる。１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で隔週で投与される。
【０１３３】
投与方法は様々でありうる。適切な投与経路は、好ましくは、非経口または皮下である。他の投与経路には、経口、経粘膜、皮内、直接心室内、静脈内、鼻腔内、吸入、吹送または動脈内が含まれうる。
【０１３４】
特定の実施形態においては、該抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントは、侵襲的経路、例えば注射により投与されうる。本発明の更なる実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は静脈内、皮下、動脈内、または吸入、エアゾール運搬により投与されうる。非侵襲性経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も本発明の範囲内である。
【０１３５】
組成物は、当技術分野で公知の医療装置で投与されうる。例えば、本発明の医薬組成物は、例えば予め充填されたシリンジまたは自動注入装置を含む、皮下針を使用する注射により投与されうる。
【０１３６】
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。
【０１３７】
本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られている。
【０１３８】
投与レジメンは、該治療用抗体の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体を運搬する。したがって、運搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度に左右される。治療量抗体の適切な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０１３９】
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が得られるように調節される。例えば、単回ボーラスを投与することが可能であり、幾つかの分割量を経時的に投与することが可能であり、あるいは、治療状況の緊急性により示されるとおりに用量を比例的に減少または増加させることが可能である。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を投与単位形態で処方することが特に有利である。本明細書中で用いる投与単位形態は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を意味する。各単位は、所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性化合物を、必要とされる医薬担体と共に含む。本明細書に記載されている投与単位形態の詳細は、（ａ）抗体または抗体結合性フラグメントの特有の特徴および達成されるべき個々の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療のためにそのような活性分子を配合する分野に固有の制約によって決まり、それらに直接左右される（例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい）。
【０１４０】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントの使用
関連ＩＬＴに対して非乱交性である本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体および抗原結合性フラグメントは、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学のような通常のイムノアッセイを用いて、（例えば、生物学的サンプル、例えば、血清または血漿中の）ヒトＩＬＴ３を特異的に検出するために使用されうる。したがって、本発明は、生物学的サンプルを抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントと接触させ、ヒト抗ＩＬＴ３に結合したヒトＩＬＴ３または抗原結合性フラグメント、あるいは本明細書に開示されている未結合抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを検出し、それにより、生物学的サンプル中のヒトＩＬＴ３を検出することを含む、生物学的サンプル中のヒトＩＬＴ３の検出方法を提供する。抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、結合または未結合抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメント（本明細書に開示されているもの）の検出を容易にするための検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる。適切な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓおよび３Ｈが含まれる。
【０１４１】
抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを標識する代わりに、ヒトＩＬＴ３は、検出可能な物質で標識されたＩＬＴ３標準と、本明細書に開示されている未標識抗ヒトＩＬＴ３抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントとを利用する競合イムノアッセイにより、生物学的流体中でアッセイされうる。このアッセイにおいては、生物学的サンプル、標識ＩＬＴ３標準および抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントが組合され、本明細書に開示されている未標識抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントに結合した標識ＩＬＴ３標準の量が決定される。生物学的サンプル中のヒトＩＬＴ３の量は、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントに結合した標識ＩＬＴ３標準の量に反比例する。
【０１４２】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントはまた、ヒト以外の種からのＩＬＴ３、特に霊長類（例えば、カニクイザルまたはアカゲザル）からのＩＬＴ３を検出するためにも使用されうる。
【０１４３】
インビボで免疫応答をアップモジュレーションする方法
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、免疫刺激組成物として、例えば、単独で、またはワクチンもしくは併用療法の一部として、対象におけるＢ細胞および／またはＴ細胞活性化、例えばＴｈ１またはＴｈ２細胞活性化を促進するために使用されうる。すなわち、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、関心のある抗原に対する免疫応答をインビボで増強するために、関心のある抗原と組合せて使用されるアジュバントとして有用でありうる。例えば、関心のある抗原に対する抗体または細胞性免疫応答を刺激するために（例えば、ワクチン接種の目的で）、本明細書に開示されている抗原および抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは共投与されうる（例えば、同一組成物または別々の組成物において同時に、あるいは免疫応答の増強が生じるように時間的に連続して、共投与されうる）。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントおよび関心のある抗原は単一の医薬組成物または別々の組成物に一緒に製剤化されうる。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントおよび関心のある抗原は対象に同時投与される。あるいは、ある状況においては、最初に抗原を投与し、次に本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを投与すること、あるいはその逆の順序で投与を行うことが望ましいかもしれない（例えば、Ｔｈ１応答を自然誘発する抗原の場合、最初に抗原のみを投与してＴｈ１応答を刺激し、次に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを、単独で、または抗原のブースト（追加抗原）と共に投与して、免疫応答をＴｈ２応答にシフトさせることが有益でありうる）。好ましい実施形態においては、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、抗原でのプライミング（初回刺激）時に、すなわち、抗原の最初の投与の時点、例えば、−３日、−２日、−１日、０日、＋１日、＋２日、＋３日に投与される。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントの特に好ましい投与日は−１日である。
【０１４４】
１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、関心のある抗原と共に投与される。関心のある抗原は、免疫応答が望まれる抗原である。例えば、関心のある抗原は、抗原が由来する感染性因子によるチャレンジに対して対象における免疫防御を刺激しうる抗原である。更に、抗原を投与する必要性を伴うことなく免疫応答を増強するために、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを投与することも想定される。
【０１４５】
したがって、関心のある例示的抗原には、感染性因子に由来するものが含まれ、この場合、抗原に対する免疫応答は、該因子により引き起こされる疾患を予防または治療するのに役立つ。そのような抗原には、ウイルス、細菌、真菌または寄生生物（寄生虫）のタンパク質、および任意の他のタンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、糖脂質などが含まれるが、これらに限定されるものではない。関心のある抗原には、腫瘍に罹患するリスクを有する、または腫瘍を有すると診断された対象に利益をもたらすものも含まれる。対象は、好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
【０１４６】
関心のある典型的な抗原は以下のとおりに分類されうる：タンパク質抗原、例えばセルロプラスミンおよび血清アルブミン；細菌抗原、例えばテイコ酸、鞭毛抗原、莢膜多糖、および細胞外細菌産物および毒素；糖タンパク質および糖脂質；ウイルス、例えば動物、植物、細菌ウイルス；複合抗原および合成抗原、例えばタンパク質／ハプテン複合体、正常組織と比較して腫瘍によって優先的に発現される分子；合成ポリペプチド；ならびに核酸、例えばリボ核酸およびデオキシリボ核酸。本明細書中で用いる「感染性因子」なる語は、宿主細胞免疫応答を誘発する、抗原を発現する任意の因子を含む。有用だとみなされうるウイルス抗原の非限定的な例には、インフルエンザウイルスの核タンパク質（ＮＰ）およびＨＩＶのＧａｇタンパク質が含まれるが、これらに限定されるものではない。他の異種抗原には、ＨＩＶ  Ｅｎｖタンパク質またはその構成要素ｇｐ１２０およびｇｐ４１、ＨＩＶ  Ｎｅｆタンパク質、ならびにＨＩＶ  Ｐｏｌタンパク質、逆転写酵素およびプロテアーゼが含まれるが、これらに限定されるものではない。また、他のウイルス抗原、例えばエボラウイルス（ＥＢＯＶ）抗原、例えばＥＢＯＶ  ＮＰまたは糖タンパク質（ＧＰ）の完全長形態または該分子のムチン領域が欠失したＧＰ欠失形態（Ｙａｎｇら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ６：８８６（２０００））、天然痘抗原、Ａ型、Ｂ型またはＣ型肝炎ウイルス、ヒトライノウイルス、例えばその２型または１４型、単純ヘルペスウイルス、ポリオウイルス２型または３型、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、狂犬病ウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、コクサッキーウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、例えば１６型パピローマウイルス、そのＥ７タンパク質およびＥ７タンパク質またはそのエピトープを含有する断片；ならびにサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が使用されうる。関心のある抗原はウイルス由来の抗原に限定される必要はない。真菌抗原、細菌抗原および腫瘍抗原と同様に、寄生生物抗原、例えばマラリア抗原も含まれる。細菌由来の抗原の例としては、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、百日咳菌）由来の抗原（例えば、Ｐ６９タンパク質および線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）抗原）、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、バシラス・アンスラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原、例えば大腸菌熱不安定性毒素Ｂサブユニット（ＬＴ−Ｂ）、大腸菌Ｋ８８抗原および毒素原性大腸菌抗原が挙げられる。抗原の他の例には、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ）Ｐ２８グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ抗原（Ｐ２８抗原）、および吸虫、マイコプラズマ、回虫、サナダムシ、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）およびマラリア原虫、例えばプラスモジウム（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）属またはバベシア（ｂａｂｅｓｉａ）属の寄生生物、例えばプラスモジウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、熱帯熱マラリア原虫）、ならびに前記抗原からの免疫原性エピトープをコードするペプチドが含まれる。
【０１４７】
本明細書中で用いる「腫瘍関連抗原」なる語は、宿主生物における腫瘍の成長または転移に影響を及ぼす抗原を意味する。腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞により発現される抗原でありうる。あるいは、それは、非腫瘍細胞により発現されるがそのように発現されると腫瘍細胞の増殖または転移を促進する抗原でありうる。腫瘍抗原および腫瘍関連抗原のタイプには、公知または未知の任意の腫瘍抗原が含まれ、限定的なものではないが、白血病におけるｂｃｒ／ａｂｌ抗原、子宮頸癌に関連した発癌性ウイルスのＨＰＶＥ６およびＥ７抗原、黒色腫における又はそれに関連したＭＡＧＥ１およびＭＺ２−Ｅ抗原、ならびに乳癌における又はそれに関連したＭＶＣ−１およびＨＥＲ−２抗原が含まれる。
【０１４８】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物の投与により治療または予防されうる感染、疾患または障害には、感染、疾患または障害を予防するように宿主免疫応答が作用する任意の感染、疾患または障害が含まれる。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物の投与により治療または予防されうる感染、疾患または障害には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：真菌、寄生生物、ウイルスまたは細菌に起因または関連している任意の感染、疾患または障害、バイオテロにおいて使用される種々の因子、リステリア症、エボラウイルス、ＳＡＲＳ、天然痘、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎に起因または関連している疾患、障害または感染、ヒトライノウイルス、ＨＩＶおよびエイズ、ヘルペス、ポリオ、口蹄疫、狂犬病に起因する疾患および障害、ロタウイルス、インフルエンザ、コクサッキーウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＳＩＶ、マラリア、癌、例えば腫瘍に起因する疾患または障害、ならびにボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、百日咳菌）、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、バシラス・アンスラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、吸虫、マイコプラズマ、回虫、条虫、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）およびマラリア原虫による感染に起因または関連している疾患または障害など。
【０１４９】
腫瘍細胞に対する免疫応答
調節性Ｔ細胞は、自己免疫疾患および癌に対する免疫応答を抑制することにより、免疫学的自己寛容の維持において重要な役割を果たしている。したがって、１つの実施形態においては、免疫応答のアップモジュレーションは、癌における免疫応答を増強するのに有益であろう。したがって、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、腫瘍の成長または転移を抑制するために、悪性疾患の治療において使用されうる。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは全身的または局所的に腫瘍部位に投与されうる。
【０１５０】
１つの実施形態においては、ヒトＩＬＴ３機能の調節は腫瘍免疫の誘導において有用でありうる。ＩＬＴ３結合分子は、対象における腫瘍特異的寛容に打ち勝つために、腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌腫）を有する患者に投与される。
【０１５１】
本明細書中で用いる「新生物性（腫瘍性）疾患」なる語は、悪性腫瘍の成長により特徴づけられ、あるいは疾患状態における良性過剰増殖性および過形成性細胞により特徴づけられる。「新生物性」なる語の一般的な医学的意味は、正常な成長制御に対する応答性の喪失として生じる「新たな細胞成長」、例えば新生物性細胞成長を意味する。
【０１５２】
本明細書中で用いる「過剰増殖性」、「過形成性」、「悪性」および「新生物性」なる語は互換的に用いられ、急速な増殖または新形成を特徴とする異常な状態または条件にある細胞に関するものである。この語は、組織病理学的タイプまたは侵襲段階に無関係に、過剰増殖性成長、過形成性成長、癌性成長または発癌プロセス、転移組織または悪性転換した細胞、組織もしくは器官の全てのタイプを含むと意図される。「過形成」は、異常に高い速度で成長（増殖）する細胞を意味する。しかし、本明細書中で用いる新生物および過形成なる語は互換的に使用可能であり、それらの文脈が明らかにするとおり、一般に、異常な細胞成長速度を示す細胞に関するものである。新生物および過形成は「腫瘍」を包含し、これは良性、前悪性または悪性でありうる。
【０１５３】
「新生物」、「過形成」および「腫瘍」なる語は、しばしば、「癌」と一般に称され、これは、細胞の無制御な異常成長により特徴づけられる１００個を超える疾患の一般名である。癌の例には、乳癌、結腸癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、腎臓癌、黒色腫、および消化管（例えば、膵臓および胃）癌、ならびに骨肉腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１５４】
１つの実施形態においては、膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱、脳または中枢神経系癌（例えば、神経膠芽腫）、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫および血液組織の癌からなる群から選択される。
【０１５５】
感染性因子に対する免疫応答
免疫応答のアップレギュレーションは既存免疫応答の増強または初期免疫応答を誘発の形態でありうる。例えば、ＩＬＴ３の調節による免疫応答の増強はウイルス感染の場合に有用でありうる。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、免疫応答を増強するように作用しうるため、それらは、病原体、例えば細菌およびウイルスの、より迅速または完全な除去が有益である状況において、治療的に有用であろう。
【０１５６】
本明細書中で用いる「ウイルス感染」なる語は、ＨＩＶ（例えば、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）、ヒトヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（特にヒト）、ロタウイルス、エプスタインバーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、例えばＢ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびＥ型肝炎ウイルス、パラミクソウイルス：呼吸器合胞体ウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）またはインフルエンザウイルスを含む生物による感染を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１５７】
本明細書中で用いる「細菌感染」なる語は、グラム陽性菌およびグラム陰性菌を含む種々の細菌性生物による感染を含む。具体例には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：ナイセリア属種（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐｐ）、例えばナイセリア・ゴノレア（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）およびナイセリア・メニンジティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、ストレプトコッカス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ）、例えばストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・アガラクチエ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・ムタンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）；ヘモフィルス属種（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｐ）、例えばヘモフィルス・インフルエンゼ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｂ型、分類不能ヘモフィルス・インフルエンゼ、ヘモフィルス・デュクレイ（Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ）；モラクセラ属種（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｓｐｐ）、例えばモラクセラ・カタラーリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）［ブランハメラ・カタラーリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）としても公知である］；ボルデテラ属種（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｓｐｐ）、例えばボルデテラ・ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボルデテラ・パラペルツッシス（Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）およびボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）；マイコバクテリウム属種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、例えばマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・パラツベルクローシス（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）；レジオネラ属種（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ）、例えばレジオネラ・ニューモフィラ（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）；エシェリキア属種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐｐ）、例えば腸毒性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）、腸管出血性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒａｇｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）、腸管病原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｅ．ｃｏｌｉ）；ビブリオ属種（Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐｐ）、例えばビブリオ・コレラ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ）、シゲラ属種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ）、例えばシゲラ・ソネイ（Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ）、シゲラ・ディセンテリエ（Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ・フレクスネリ（Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉ）；エルシニア属種（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐｐ）、例えばエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、エルシニア・ペスチス（Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・シュードツベルクローシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、カンピロバクター属種（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ）、例えばカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）およびカンピロバクター・コリ（Ｃ．ｃｏｌ���）；サルモネラ属種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ）、例えばサルモネラ・チフィ（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・パラチフィ（Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）；リステリア属種（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．）、例えばリステリア・モノシトゲネス（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；ヘリコバクター属種（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ）、例えばヘリコバクター・ピロリ（Ｈ  ｐｙｌｏｒｉ）；シュードモナス属種（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ）、例えばシュードモナス・エルジノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス属種（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、例えばスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）；エンテロコッカス属種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、例えばエンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）；クロストリジウム属種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）、例えばクロストリジウム・テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）；バシラス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、バシラス・アンスラシス（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）；コリネバクテリウム属種（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、例えばコリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；ボレリア属種（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐｐ．）、例えばボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、ボレリア・ガリニイ（Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ）、ボレリア・アフゼリイ（Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ）、ボレリア・アンデルソニイ（Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）、ボレリア・ヘルムシイ（Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉ）；エーリキア属種（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．）、例えばエーリキア・エクイ（Ｅ．ｅｑｕｉ）およびヒト顆粒球エーリキア症の原因因子；リケッチア属種（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐｐ）、例えばリケッチア・リケッチ（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）；クラミジア属種（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．）、例えばクラミジア・トラコマーチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃ．ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・シッタシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）；レプトシラ属種（Ｌｅｐｔｓｉｒａ  ｓｐｐ．）、例えばレプトシラ・インテロガンス（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）；トレポネーマ属種（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐｐ．）、トレポネーマ・パリダム（Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・デンティコラ（Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ）、トレポネーマ・ヒオディセンテリエ（Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）。好ましい細菌には、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、マイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）［例えば、ツベルクローシス（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）］、アンスラックス（Ａｎｔｈｒａｘ）（炭疽）、サルモネラ��Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）およびリステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１５８】
もう１つの実施形態においては、Ｔ細胞を患者から取り出し、本明細書でに示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントと、所望により活性化シグナル（例えば、抗原＋ＡＰＣまたはポリクローナル抗体）の存在下、インビトロで接触させ、患者に再導入することが可能である。
【０１５９】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは種々の病原体に対するワクチンにおいて予防的に使用されうる。病原体、例えばウイルスに対する免疫は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントと共にウイルスタンパク質をワクチン接種することにより誘導されうる。あるいは、病原性抗原と本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントとの両方の遺伝子をコードする発現ベクター（例えば、ウイルスタンパク質をコードする核酸と、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントをコードする核酸とを発現するように設計されたワクシニアウイルス発現ベクター）がワクチン接種に使用されうる。ワクチンが有用でありうる病原体には、例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、結核、マラリアおよび住血吸虫症が含まれる。
【０１６０】
本発明は更に、診断用または治療用物質にコンジュゲート化（結合）された、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを含む。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、例えば、所定の治療レジメンの有効性を決定するための臨床試験手順の一部として、腫瘍の発生または進行をモニターするために、診断用に使用されうる。検出可能な物質に該抗体を結合させることにより、検出が促進されうる。検出可能な物質の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽電子放出断層撮影法を用いる陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが含まれる。検出可能な物質は、当技術分野で公知の技術を用いて、中間体（例えば、当技術分野で公知のリンカー）を介して、結合性分子に直接的または間接的に結合またはコンジュゲート化されうる。米国特許第４，７４１，９００号は、結合性分子にコンジュゲート化されうる金属イオンを開示している。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる。生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが含まれる。適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉおよび９９Ｔｃが挙げられる。
【０１６１】
更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、治療用部分、例えば細胞毒、例えば細胞増殖抑制物質または殺細胞物質、治療用物質または放射性金属イオン、例えばアルファ放出体、例えば２１３Ｂｉにコンジュゲート化されうる。例えば、細胞毒素または細胞毒性物質には、細胞に有害である任意の物質が含まれる。具体例には、パクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体または同族体が含まれる。治療用物質には、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤［例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン］、アントラサイクリン［例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）およびドキソルビシン］、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１６２】
本発明は更に、本明細書に開示されている疾患、障害または状態の１以上を治療、検出および／または予防するために、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒト患者に投与することを含む療法に関する。本発明の治療用化合物には、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントが含まれる、これらに限定されるものではない。本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書に記載されている疾患、障害または状態の任意の１以上（これらに限定されるものではない）を含む、ＩＬＴ３の異常な活性に関連した疾患、障害または状態を治療、診断、抑制または予防するために使用されうる。
【０１６３】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、他のモノクローナルもしくはキメラ結合性分子、またはリンホカインもしくは造血増殖因子（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３およびＩＬ−７など）（これらは、例えば、結合性分子と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を増加させるのに有用である）と組合せて、有利に利用されうる。
【０１６４】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、単独で、または他のタイプの治療、例えば免疫刺激治療、または活性化免疫細胞の標的（例えば、癌細胞または病原体）の増殖を制御するように設計された治療と組合せて、投与されうる。例示的な療法には、例えば、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、免疫療法、および抗腫瘍剤、抗生物質、および免疫グロブリンが含まれる。
【０１６５】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは治療目的でヒト対象に投与されうる。更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、獣医学的目的のために、またはヒト疾患の動物モデルとして、該結合性分子が交差反応するＩＬＴ３を発現する非ヒト哺乳動物（例えば、霊長類）に投与されうる。
【０１６６】
組合せ
本発明における抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは非コンジュゲート化形態で使用可能であり、あるいは第２の物質、例えば細胞毒性薬、放射性同位体またはタンパク質、例えばタンパク質毒素もしくはウイルスタンパク質にコンジュゲート化されうる。この方法は、本発明における抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを、単独で、または細胞毒性薬へのコンジュゲート化形態で、そのような治療を要する対象に投与することを含む。本発明における抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、種々の治療用物質、例えば細胞毒性部分、例えば治療薬、放射性同位体、植物、真菌もしくは細菌由来の分子、または生物学的タンパク質（例えば、タンパク質毒素）または粒子（例えば、組換えウイルス粒子、例えば、ウイルスコートタンパク質を介して）、またはそれらの混合物を運搬するために使用されうる。
【０１６７】
追加的な併用療法
本発明における抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは他の療法と組合せて使用されうる。例えば、併用療法（組合せ療法）は、１以上の追加的な治療用物質、例えば１以上の抗癌剤、細胞毒性または細胞増殖抑制物質、ホルモン療法、ワクチンおよび／または他の免疫療法と共処方および／または共投与される抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物を含みうる。他の実施形態においては、抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、他の治療法、例えば外科手術、放射線、凍結手術および／または温熱療法と組合せて投与される。そのような併用療法は、投与される治療用物質の、より少ない投与量を有利に利用可能であり、したがって、それらの種々の単剤療法に関連した生じうる毒性または合併症を回避する。
【０１６８】
「と組合せて」は、療法または治療用物質が同時に投与されなければならないこと、および／または一緒に運搬（送達）されるために製剤化（処方）されなければならないことを意味するものではないが、これらの運搬方法は、本明細書に記載されている範囲に含まれる。抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、１以上の他の追加的な療法または治療用物質と同時に、またはその前に、またはその後で投与されうる。抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントおよびその他の物質または治療プロトコルは任意の順序で投与されうる。一般に、各物質は、その物質に関して決定された用量および／または時間スケジュールで投与される。更に、この組合せで使用される追加的な治療用物質は単一組成物において一緒に投与されうる、あるいは異なる組成物において別々に投与されうると理解されるであろう。一般に、組合せて使用される追加的な治療用物質は、それらが個別に使用されるレベルを超えないレベルで使用されると予想される。幾つかの実施形態においては、組合せて使用されるレベルは、個別に使用されるレベルよりも低くなる。
【０１６９】
ある実施形態においては、本明細書に記載されている抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントは、プログラム死受容体１（ＰＤ−１）またはそのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の、１以上のチェックポイントインヒビターまたはアンタゴニストと組合せて投与される。該インヒビターまたはアンタゴニストは抗体、抗原結合性フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドでありうる。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ，Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ，Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｃｏｒｐ，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ  ＵＳＡ）、セチプリマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ，Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ，ＮＹ）またはピジリズマブ（ＣＴ−０１１）から選択される。幾つかの実施形態においては、ＰＤ−１インヒビターは、イムノアドヘシン［例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合性部分を含むイムノアドヘシン］である。幾つかの実施形態においては、ＰＤ−１インヒビターはＡＭＰ−２２４である。幾つかの実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１インヒビターはデュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ，Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｏｎ，ＤＥ）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ，Ｒｏｃｈｅ，Ｚｕｒｉｃｈ，ＣＨ）またはアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ，ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）である。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−Ｌ１結合性アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５から選択される。
【０１７０】
ＭＤＸ−１１０５はＢＭＳ−９３６５５９としても公知であり、ＷＯ２００７／００５８７４に記載されている抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０は、ＷＯ  ２０１０／０７７６３４に記載されている抗ＰＤ−Ｌ１（それぞれ、配列番号２０および２１に示されている重鎖および軽鎖可変領域配列）である。
【０１７１】
ニボルマブはＯＰＤＩＶＯ、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８またはＢＭＳ−９３６５５８としても公知であり、ＷＯ２００６／１２１１６８および米国特許第８，００８，４４９号に記載されている完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１抗体である。
【０１７２】
ペンブロリズマブはＫＥＹＴＲＵＤＡ、ラムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５またはＳＣＨ−９００４７５としても公知であり、米国特許第８，３５４，５０９号およびＷＯ２００９／１１４３３５に記載されている、および例えば、Ｈａｍｉｄら，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．３６９（２）：１３４−１４４（２０１３）に開示されているヒト化抗ＰＤ−１抗体である。プレムブロリズマブの重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号２２５および２２６に記載されているアミノ酸配列により示される。
【０１７３】
ピジリズマブはＣＴ−０１１（Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）としても公知であり、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ピジリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体はＷＯ２００９／１０１６１１に開示されている。他の抗ＰＤ−１抗体には、とりわけ、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）が含まれ、例えば、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開番号２０１００２８３３０および米国特許出願公開番号２０１２０１１４６４９に開示されている抗ＰＤ−１抗体が含まれる。
【０１７４】
ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に開示されているもの）は、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。
【０１７５】
ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ、およびＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号および米国特許出願公開番号２０１２００３９９０６に開示されている。
【０１７６】
他の抗ＰＤ−Ｌ１結合性物質には、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（重鎖および軽鎖可変領域はＷＯ２０１０／０７７６３４における配列番号２０および２１に示されている）およびＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９とも称される）が含まれる。それ及び他の抗ＰＤ−Ｌ１結合性物質はＷＯ２００７／００５８７４に開示されている。
【０１７７】
キット
更に、本明細書に記載されているもう１つの治療用物質（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的成分と共に、本明細書に記載されている抗ＩＬＴ３抗体またはそお抗原結合性フラグメント（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキットを提供する。抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療用物質は、純粋な組成物として、または医薬組成物において医薬上許容される担体と組合せて製剤化されうる。
【０１７８】
１つの実施形態においては、キットは、抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に、そしてもう１つの治療用物質をもう１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。
【０１７９】
もう１つの実施形態においては、キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬組成物において、一緒に製剤化される１以上の治療用物質と組合された、本発明の抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む、本発明の組合せを含む。
【０１８０】
キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、キットは、そのような投与を行うための装置を含みうる。例えば、キットは前記の１以上の皮下針または他の注射装置を含みうる。したがって、本発明は、注射装置と抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントとを含むキットを含み、例えば、ここで、注射装置は該抗体またはフラグメントを含み、あるいは該抗体またはフラグメントは別個の容器内に存在する。
【０１８１】
キットは、キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明の組合せに関する以下の情報が添付文書（インサート）において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。
【０１８２】
抗体および抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体およびそのフラグメントは組換え法によっても製造されうる。この実施形態においては、抗体分子をコードする核酸をベクター（プラスミドまたはウイルス）内に挿入し、宿主細胞内にトランスフェクトまたは形質転換し、該宿主細胞においてそれを発現させ、該宿主細胞から分泌させることが可能である。当技術分野で公知である組換え抗体を製造するための幾つかの方法が存在する。
【０１８３】
特定の態様においては、本発明は、ＨＣとＬＣとをコードする核酸分子を提供し、ここで、ＨＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ３が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む。更なる実施形態においては、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１８４】
特定の態様においては、本発明は、ＨＣとＬＣとをコードする核酸分子を提供し、ここで、ＨＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含み、ＬＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含む。更なる実施形態においては、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１８５】
特定の態様においては、本発明は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子を含む第１発現ベクター、あるいは３つのＨＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＨＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子を含む第１発現ベクターと、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子を含む第２発現ベクター、あるいは３つのＬＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子を含む第２発現ベクターとを提供する。
【０１８６】
特定の態様においては、本発明は、ＶＨとＶＬとをコードする核酸分子を提供し、ここで、ＶＨは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ３が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む。更なる実施形態においては、ＶＨおよび／またはＶＬ可変領域フレームワークは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１８７】
特定の態様においては、本発明は、ＶＨとＶＬとをコードする核酸分子を提供し、ここで、ＨＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含み、ＶＬは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含む。更なる実施形態においては、ＶＨおよび／またはＶＬ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１８８】
特定の態様においては、本発明は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３のＨＣ  ＣＤＲ、あるいは３つのＨＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、ならびに／またはＶＨおよび／もしくはＶＬ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＶＨをコードする核酸分子と、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３のＬＣ  ＣＤＲ、あるいは３つのＬＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、ならびに／またはＶＨおよび／もしくはＶＬ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＶＬをコードする核酸分子とを提供する。
【０１８９】
本明細書に開示されている抗体またはフラグメントの発現のための宿主として利用可能な哺乳類細胞系は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ヒト胎児腎２９３（ＨＥＫ−２９３）細胞および多数の他の細胞系を包含する。特に好ましい細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞、糸状真菌細胞［例えば、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）］および酵母細胞［例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）］が挙げられる。特定の態様においては、宿主細胞は原核宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）でありうる。
【０１９０】
重鎖または抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを宿主細胞内に導入する場合、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは、宿主細胞が培養される培地内への抗体の分泌を可能にするのに十分な条件下および時間にわたって、宿主細胞を培養することにより、抗体を製造する。抗体を培地から回収し、更に精製または加工して、本発明の抗体を得ることが可能である。
【０１９１】
特定の態様においては、ＨＣとＬＣとをコードする核酸分子を含む発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、ＨＣは抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ３が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む。更なる実施形態においては、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１９２】
特定の態様においては、ＨＣとＬＣとをコードする核酸分子を含む発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、ＨＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含み、ＬＣは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含む。更なる実施形態においては、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１９３】
特定の態様においては、第１発現ベクターおよび第２発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、第１発現ベクターは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子を含み、あるいは３つのＨＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＨＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子を含み、第２発現ベクターは、本明細書に開示されている抗体のＬＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子を含み、あるいは３つのＬＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子を含む。
【０１９４】
特定の態様においては、ＶＨとＶＬとをコードする核酸分子を含む発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、ＶＨは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ３が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む。更なる実施形態においては、ＶＨおよび／またはＶＬ可変領域フレームワークは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１９５】
特定の態様においては、ＶＨとＶＬとをコードする核酸分子を含む発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、ＶＨは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含み、ＶＬは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ−ＣＤＲ１、２および３、あるいはＨＣ−ＣＤＲ１、２および３の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を含む。更なる実施形態においては、ＶＨおよび／またはＶＬ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む。
【０１９６】
特定の態様においては、第１発現ベクターおよび第２発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトし、ここで、第１発現ベクターは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＨＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＶＨをコードする核酸分子を含み、あるいは３つのＨＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＶＨ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＶＨをコードする核酸分子を含み、第２発現ベクターは、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体のＬＣ  ＣＤＲを少なくとも含むＶＬをコードする核酸分子を含み、あるいは３つのＬＣ  ＣＤＲの１以上が１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有する、および／またはＶＬ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＶＬをコードする核酸分子を含む。
【０１９７】
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣまたはＶＨおよびＶＬは融合タンパク質として発現され、該融合タンパク質においては、分泌経路を通る抗体の輸送が促進されるようにＨＣおよびＬＣのＮ末端がリーダー配列に融合されている。使用されうるリーダー配列の例には、ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号１２）またはＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号１１）が含まれる。
【０１９８】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは該抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＨＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＨＣをコードする核酸分子と、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは該抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＬＣをコードする核酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
【０１９９】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントのＨＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターと、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントのＬＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターとを提供する。
【０２００】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＨＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＨＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターと、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは該抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＬＣ可変領域フレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＬＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターとを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態においては、宿主細胞はＣＨＯまたはＨＥＫ−２９３宿主細胞である。
【０２０１】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは該抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＶＨフレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＶＨをコードする核酸分子と、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは該抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＬＣフレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＶＬをコードする核酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
【０２０２】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントのＶＨをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターと、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントのＶＬをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターとを提供する。
【０２０３】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＶＨフレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＶＨをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターと、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは本明細書に開示されている抗ＩＬＴ３抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの変異実施形態（ここで、３つのＣＤＲの１以上は１、２もしくは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有し、および／またはＶＬフレームワークは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含む）のＶＬをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターとを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態においては、宿主細胞はＣＨＯまたはＨＥＫ−２９３宿主細胞である。
【０２０４】
抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントは、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの本発明の抗体（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。
【０２０５】
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを有する（例えば、Ｃｒｏｓｅｔら，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６１：３３６−３４８（２０１２）を参照されたい）。したがって、抗体の個々のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に左右される。しかし、本発明で提供される核酸分子によりコードされる、または本発明で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、該抗体が有しうるグリコシル化パターンには無関係に、本発明を構成する。
【図面の簡単な説明】
【０２０６】
【図１】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、図１Ｄ、図１Ｅおよび図１Ｆは、細胞に基づくＥＬＩＳＡ形態を用いた、モノクローナル抗体９Ｂ１１およびマウスＩｇＧ１（ｍＩＧｇＧ１）に対する、本明細書に開示されている幾つかの抗ＩＬＴ３抗体の選択性の比較を示す。ヒトＩＬＴ３（図１Ａ）、アカゲザルＩＬＴ３（図１Ｂ）、ヒトＩＬＴ５（図１Ｃ）、ヒトＩＬＴ７（図１Ｄ）、ヒトＩＬＴ８（図１Ｅ）またはヒトＩＬＴ１１（図１Ｆ）を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞のそれぞれを、モノクローナル抗体ｐ４０Ｂ５（ＬＢ１７９．４０Ｂ５．１Ａ１）、ｐ４９Ｃ６（ＬＢ１８１．４９Ｃ６．１Ａ１）およびｐ５２Ｂ８  ｌｂ１８１．５２Ｂ８．１Ｂ１；抗体９Ｂ１１［配列番号３３（軽鎖）および配列番号３４（重鎖）のアミノ酸配列を有するものとしての米国特許第７，７７７，００８号］ならびにマウスＩｇＧ１を使用して試験した。
【図２】図２Ａは、ｍＡｂ  １０の変異体の結合アフィニティ、等電点、モノマー種の純度および熱安定性測定に関するデータ特性を示す。「ｈｕＩＬＴ３」なる語はヒトＩＬＴ３を意味する。「ｒｈＩＬＴ３」はアカゲザルＩＬＴ３を意味する。「ｐＩ」は等電点を意味する。「Ｔｍ」は熱展開曲線の温度中点を指す。「タグ」は熱凝集曲線の中点を意味する。「ＳＥＣ」はサイズ排除超高速液体クロマトグラフィーを意味する。図２Ｂは、ｍＡｂ  １０（Ｍ６４Ｖ  ＶＨ１  ＩｇＧ４）のヒト化軽鎖変異体のＳＥＣ純度と融解温度との関係を示す。ＶＬ１〜ＶＬ８は、それぞれ、配列番号１２６〜１３３に記載されているアミノ酸配列を有する変異体を意味する。
【図３】図３Ａは、キメラ抗ＩＬＴ３  ５２Ｂ８マウス５２Ｂ８  ＶＨ親／ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）：マウス５２Ｂ８親ＶＬ／ヒトカッパ抗体（「ｃ５８Ｂ２」；ｍＡｂ  ７３）が結合するヒトＩＬＴ３細胞外ドメインアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。抗体が結合するエピトープを含むこれらの６つのペプチドドメイン［残基１８〜２３（ＩＳＷＧＮＳ；配列番号３）、残基６４〜６９（ＩＰＳＭＴＥ；配列番号４）、残基９６〜１０１（ＭＴＧＡＹＳ；配列番号５）、残基１２４〜１３１（ＱＳＲＳＰＭＤＴ；配列番号６）、残基１５２〜１５９（ＡＱＱＨＱＡＥＦ；配列番号７）および残基１８４〜１８７（ＬＬＳＨ；配列番号８）］はＩＬＴ３細胞外ドメインのＤ１ドメインとＤ２ドメインとの境界の近くに位置する。Ｃ末端Ｈｉｓタグを含有するヒト細胞外ドメインのアミノ酸配列は配列番号１に記載されている。図３ＢはヒトＩＬＴ３の細胞外ドメインの表面構造モデルの第１図および第２図を示す。該モデルの暗色領域は、ｃ５８Ｂ８（ｍＡｂ  ７３）が結合するヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓエピトープを含む６つのペプチドドメインの位置を示す。図３Ｃは、ＩＬＴ３細胞外ドメイン上のエピトープの配置を示すリボン図である：ＩＳＷＧＮＳ（配列番号３）、ＩＰＳＭＴＥ（配列番号４）、ＭＴＧＡＹＳ（配列番号５）、ＱＳＲＳＰＭＤＴ（配列番号６）、ＡＱＱＨＱＡＥＦ（配列番号７）およびＬＬＳＨ（配列番号８）。図３Ｄは、抗体ＺＭ４．１が結合するヒトＩＬＴ３細胞外ドメインアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。図３Ｅは、抗体ＤＸ４４６が結合するヒトＩＬＴ３細胞外ドメインアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。図３Ｆは、抗体ＤＸ４３９が結合するヒトＩＬＴ３細胞外ドメインアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。図３Ｇは、抗体９Ｂ１１が結合するヒトＩＬＴ３細胞外ドメインアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。
【図４】図４はヒト化腫瘍モデル（Ｐａｎｃ０８．１３およびＳＫ−ＭＥＬ−５）における複数回投与後の血中遊離ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ  ７３）濃度を示す。遊離ｃ５２Ｂ８濃度は円形および四角形により表されている。破線はＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける１、３、１０または３０ｍｇ／ｋｇのヒト化ＩｇＧ４のＩＶボーラス投与後のシミュレーション抗体レベル履歴を示す。
【図５】図５Ａは、ｐ５２Ｂ８からのＶＨおよびＶＬがＩｇＧ４  Ｆｃ（ｃ５２Ｂ８；ｍＡｂ  ７３）、ＩｇＧ１  Ｆｃ（ｍＡｂ  ７８）またはＩｇＧ１（Ｎ２９７Ａ）Ｆｃ（ｍＡｂ  ７６）に融合した抗ＩＬＴ３抗体キメラ抗体が、樹状細胞（ＤＣ）を活性化する同等の能力を有していたことを示すヒト樹状細胞（ＤＣ）機能アッセイを示す。ヒト未熟ＤＣを調製し、ＧＭ−ＣＳＦ（１０００Ｕ／ｍＬ）およびＩＬ−４（１０００Ｕ／ｍＬ）で５日間にわたってＣＤ１１ｃ＋  樹状細胞に分化させた。これらの細胞をＩＬ−１０、ＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁成分およびＴＬＲ４リガンド（Ｒａｅｔｚら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７１：６３５−７００（２００２））、および種々の濃度の、示された抗体で４２時間処理した。示されているデータは２つの技術的反復実験の平均および標準偏差である。この実験は４つの独立した研究の代表例である。対照ＩｇＧは無効であった（非表示）。図５Ｂおよび図５Ｃは、ヒト化５２Ｂ８（ロット２６ＡＶＹ；ｍＡｂ４６）が、２人の異なる健常ヒトドナーからのＤＣを使用するヒトＤＣ機能アッセイにおいてｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）から区別できないことを示す。示されているデータは２つの技術的反復実験の平均および標準偏差である。示されているデータは、これら２人のドナーを用いた３つの独立した研究の代表例である。
【図６】図６Ａおよび図６Ｂは、抗ＩＬＴ３抗体ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）およびヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６；ロット２６ＡＶＹ）が骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の抑制能を低下させることを示している。Ｔ細胞抑制アッセイを４：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比で行った。示されているデータは、Ｔ細胞アッセイ工程のレベルにおける３つの技術的反復実験の平均および標準偏差である。示されている実験は、質的に類似した結果を示す同じ２人のドナーからのＰＢＭＣを使用した２つの独立した研究の代表例である。
【図７】図７は、ｃ５２Ｂ８が、ＳＫ−ＭＥＬ−５皮下腫瘍を含有するＳＫ−ＭＥＬ−５ヒト−ＮＳＧマウスにおけるＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍の成長を抑制することを示す。動物を、移植後第２１日の腫瘍体積に基づいて、処置に応じて無作為化し、第２１日から週１回、２０ｍｇ／ｋｇのｃ５２Ｂ８またはアイソタイプ対照を皮下投与した。上パネルに示されているデータは平均および標準誤差である（１群当たり９匹）。個々の動物の腫瘍成長曲線が中央パネルおよび下パネルに示されている。体重は対照群と５２Ｂ８群との両方において類似した度合で減少した。この研究は３つの独立した研究の代表例である。
【図８】図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃおよび図８ＤはＳＫ−ＭＥＬ−５  ｈｕ−ＮＳＧモデルにおける腫瘍成長および免疫活性化におけるｃ５２Ｂ８の効果を示す。図８Ａは腫瘍成長曲線を示す。図８Ｂは、第２投与の７日後に収集されたＴＩＬのＣｙＴＯＦ定量、すなわち、ＣＤ４＋  Ｔ細胞上のＣＤ４＋  Ｔ調節細胞（％）およびＣＤ６９発現レベルを示す。図８Ｃは、研究の終了時に採取された血漿におけるｓＨＬＡ−Ｇレベルを示す。図８Ｄは腫瘍（各群において４つの腫瘍）におけるヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞浸潤のＩＨＣ分析を示す。
【図９】図９Ａ、図９Ｂ、図９Ｃおよび図９ＤはＰａｎｃ  ０８．１３ヒトＮＳＧマウスにおけるｃ５２Ｂ８とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。図９Ａは腫瘍成長曲線を示す。図９Ｂは、研究の終了時に採取された腫瘍からのＣＤ４＋  Ｔ細胞上のＴｒｅｇ（％）およびＣＤ６９発現レベルのＣｙＴＯＦ定量を示す。図９Ｃは最終（ｔｅｒｍｉｎａｌ）血液サンプルにおける血漿ｓＨＬＡ−Ｇレベルを示す。図９Ｄは、１０プレックスＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用して定量された最終血液サンプルにおける血漿ＩＦＮγおよびＩＬ−８レベルを示す。
【図１０】図１０は、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）が、４：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比のＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおいて、キメラ抗ＩＬＴ３抗体ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）に匹敵する程度でＭＤＳＣの抑制能を低下させることを示している。
【図１１】図１１は、ヒトドナーＤ００１００３８３５から得られたＭＤＳＣ細胞を使用する、４：１または８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比のＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおける、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。
【図１２】図１２は、ヒトドナーＤ００１００３１８０から得られたＭＤＳＣ細胞を使用する、８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比のＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおける、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。
【図１３】図１３は、ヒトドナーＤ００１００３５０７から得られたＭＤＳＣ細胞を使用する、４：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比のＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおける、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。
【図１４】図１４は、ヒトドナーＤ００１００３４２８から得られたＭＤＳＣ細胞を使用する、８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比のＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおける、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。
【図１５】図１５は、４日間インキュベートされ、ついでＴ細胞活性化の指標として培養上清中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）が測定されたＩＬ−１０偏向（ｐｏｌａｒｉｚｅｄ）ヒト単球由来樹状細胞と同種ＣＤ８＋  Ｔ細胞との混合リンパ球反応における、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）とペンブロリズマブとの組合せの効果を示す。
【０２０７】
以下の実施例は本発明の更なる理解を促すことを意図したものである。
【０２０８】
一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２  ＆  １９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０２０９】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０２１０】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
【０２１１】
ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ  Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。
【０２１２】
抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。
【０２１３】
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０２１４】
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０２１５】
例えば抗原断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
【０２１６】
純度測定：サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＰＬＣ）または（ＳＥＣ）をＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  Ｈ−Ｃｌａｓｓ系において行った。使用したカラムはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＥＨ  ＳＥＣカラム（部品番号１８６００５２２５、１．７μｍ、２００オングストローム、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）であった。用いたカラム温度は２５℃であり、０．５ｍｌ／分の系流量を用いて１ｍｇ／ｍＬのサンプル１０μｌを注入した。使用した移動相は１００  ｍＭリン酸ナトリウム、２００ｍＭ  塩化ナトリウムおよび０．０２％  アジ化ナトリウム（ｐＨ７．０）であった。データを２１４ｎｍおよび２８０ｎｍの両方で定量し、Ｅｍｐｏｗｅｒ  ３ソフトウェアを使用して分析した。Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＢＥＨ２００  ＳＥＣタンパク質標準ミックス（部品番号１８６００６５１８）を使用し、１０μｇで注入し、ＵＳＰ分解能、理論的プレートおよびテーリングを測定した。
【０２１７】
ＮＡＮＯ−ＤＳＦ（固有のトリプトファンまたはチロシン蛍光を使用してタンパク質安定性を決定するための、修飾された示差走査蛍光分析法の商品名）：ＰＲ  ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌ  ｖ２．０．４ソフトウェアにより制御されたＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓ  ＮＴ．４８示差走査蛍光光度計（Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＮＡＮＯ−ＤＳＦにより、熱アンフォールディング曲線の温度中点Ｔｍおよび熱凝集曲線の中点Ｔａｇｇが決定された。励起力は４０％であり、温度を１℃／分の速度で２０℃から９５℃に増加させた。ＴｍおよびＴａｇｇは自動的に測定された。サンプルは、２０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）バッファー中で１ｍｇ／ｍＬに希釈することにより調製し、毛細管現象によりプロメテウス（Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ）ガラス毛細管（ＰＲ−Ｌ００２）中に吸引した。
【０２１８】
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）：装置制御およびデータ分析のためにｉＣＥ  ＣＦＲソフトウェア４．１．１を使用して、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のｉＣＥ３系においてｃＩＥＦを行った。使用したｃＩＥＦカートリッジはＦｃコーティングされており（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ，１０１７０１）、製造業者の説明に従い調製した。４０μｇのアナライトおよび１％  ｖ／ｖ  ３−１０  Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ、０．５％  ｖ／ｖ  ８−１０．５  Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ、０．５％  ｖ／ｖ  ５−８  Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、３７．５％  ｖ／ｖ  ８．０Ｍ尿素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、３５％  ｖ／ｖ  １％  メチルセルロースならびにそれぞれ１μＬの５．８５および９．２２  ｐＩマーカー（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ）からなる２００μＬのサンプルを調製した。サンプルを６０秒間注入した。等電点電気泳動パラメータは１５００Ｖで１分間、および３０００Ｖで８分間であった。２点校正標準として機能する内部ｐＩマーカーを使用して、ｐＩを自動的に測定した。校正データを、Ｅｍｐｏｗｅｒ形式への変換およびＥｍｐｏｗｅｒ  ３の使用により更に分析し、定量した。
【０２１９】
実施例１
ハイブリドーマクローン５２Ｂ８を標準的なマウスおよびラット免疫化およびハイブリドーマ選択により特定した。一般に、Ｂａｌｂ／Ｃマウスまたはラットを、標準的な４週間の足蹠免疫化において、ヒトＩＬＴ３−ＨＩＳ組換えタンパク質で免疫して、過免疫応答を生成させた。Ｐ３骨髄腫融合相手との、流入リンパ節からのバルクリンパ球の電気融合は、不死化ハイブリドーマを与えた。ヒトＣＨＯ−ヒトＩＬＴ３細胞に対する初代細胞ベースＥＬＩＳＡ結合アッセイにおいてハイブリドーマ上清液をスクリーニングした。ＣＨＯ親細胞、ＣＨＯ−ＩＬＴ３  ＳＮＰ、ＣＨＯ−アカゲザルＩＬＴ３、ＣＨＯ−ＩＬＴ５、ＣＨＯ−ＩＬＴ８およびＣＨＯ−ＩＬＴ１１細胞の二次スクリーニングを細胞ベースＥＬＩＳＡ形態で行った（実施例２を参照されたい）。ＩＬＴ３特異的およびアカゲザル陽性ハイブリドーマ細胞に対して限界希釈によるサブクローニングを行いた。サブクローンを拡張して精製タンパク質を得、Ｂｉａｃｏｒｅ分析および機能スクリーニングの追加的な試験を可能にした。表５は、一緒にビニングされヒトＩＬＴ３に対して高いアフィニティを有する抗体を産生した１０個のハイブリドーマクローンを示し、これらは、それぞれ実施例２および４に開示されているとおりに行われたＣＥＬＩＳＡおよびＢｉａｃｏｒｅにより示されるとおりである。
【表５】
2021503280.tif 000011
【０２２０】
表６は、前記クローンから得られたｍＡｂの重鎖および軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【表６】
2021503280.tif 000012
【０２２１】
リード（ｌｅａｄ）抗体の選択を最終的に導くために、一連の生物機能的、生物物理学的および物理化学的アッセイにおいて抗体を更に分析し、再評価した。最後に、ヒトＳＫＭＥＬ５黒色腫でチャレンジされたヒト化マウスを使用して、インビボ生物証明（ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｙ）腫瘍退縮研究において抗体を試験した。
【０２２２】
実施例２
種々の抗ＩＬＴ３抗体の選択性
表５に示されている種々の親抗ＩＬＴ３抗体および米国特許第７，７７７，００８号に開示されているヒト化抗ＩＬＴ３モノクローナル抗体９Ｂ１１［配列番号３３（軽鎖）および配列番号３４（重鎖）のアミノ酸配列を有する］の選択性を示すために、細胞に基づくＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ）を用いた。
【０２２３】
ヒトＩＬＴ３への結合ならびにアカゲザルＩＬＴ３、ヒトＩＬＴ５、ヒトＩＬＴ７、ヒトＩＬＴ８およびヒトＩＬＴ１１発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞に対する交差反応性に関して、細胞に基づくＥＬＩＳＡ形態を用いてマウス抗ヒトＩＬＴ３抗体を試験した。５０μＬのＤＭＥＭ  ／Ｆ１２、１０％  ＢＣＳおよびゲンタマイシン（ＣＨＯ−Ｋ１培地）中、９６ウェル組織培養プレート内でＣＨＯ−Ｋ１細胞をプレーティングした。アッセイの２日前に２×１０４細胞／ウェルで、またはアッセイの１日前に４×１０４細胞／ウェルで、細胞をプレーティングした。試験サンプルを加える前に、ウェルから培地を除去した。精製抗体をＣＨＯ−Ｋ１培地内で連続希釈し、ＣＨＯ−Ｋ１プレートに加えた。サンプルを室温で３０〜６０分間インキュベートし、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５ｘ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＣＷプレート洗浄機において細胞洗浄プログラムを使用して、ＰＢＳ／０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０でプレートを３回洗浄した。結合を検出した。ＣＨＯ−Ｋ１培地に１：２０００希釈で添加されたＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  カタログ番号１０３１−０５）二次抗体を使用し、室温で３０〜６０分間インキュベートして、結合を検出した。アッセイプレートを前記のとおりに洗浄し、ＴＭＢで展開し、ＴＭＢ停止溶液（ＫＰＬ  カタログ番号５０−８５−０６）で停止させた。４５０ｎｍ〜６２０ｎｍでの吸光度を測定した。マウスＩｇＧ１（ＭＩｇＧ１）を対照として使用した。
【０２２４】
結果を図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄおよび１Ｅに示す。これらの図は、クローンｐ４０Ｂ５、ｐ４９Ｃ６およびｐ５２Ｂ８からの代表的な抗体がＩＬＴ３に特異的であり、ＩＬＴ５、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８およびＩＬＴ１１に交差反応も結合もしなかったことを示している。クローンｐ４９Ｃ６およびｐ５２Ｂ８からの抗体は、その他のクローンからの抗体と同様に、アカゲザルＩＬＴ３に結合することが可能であった。（１）ヒトＩＬＴ３への高いアフィニティ、（２）他のＩＬＴファミリーメンバーへの結合の欠如、および（３）アカゲザルＩＬＴ３に対する交差反応に基づいて、インビボ特徴づけのためにｐ５２Ｂ８クローンを選択した。
【０２２５】
実施例３
親マウス５２Ｂ８重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン配列をヒト生殖系列配列と比較した。マウス抗体のフレームワークに非常に相同であるヒトフレームワーク配列を選択した。
【０２２６】
マウス抗ヒトＩＬＴ３  ｍＡｂ  ５２Ｂ８クローンのマウスＶＨドメインはＪ領域の亜群ＩＩＩおよびＪＨ４におけるヒト重鎖生殖細胞系３−０７に対して高いスコアを示した。構造上の考慮点に基づいて、親抗体と同等の結合を維持するために２つのフレームワーク置換（Ｒ８７ＫおよびＡ９７Ｇ）を組込んだ。抗体クローンのマウスＶＬドメインはカッパ亜群Ｉにおけるヒト軽鎖生殖細胞系１−Ｏ２に対して高いスコアを示した。Ｊ領域の１−Ｏ２およびＪＫ２の可変軽鎖配列上にマウス５２Ｂ８  ＣＤＲを操作した。構造上の考慮点に基づいて、３つのフレームワーク置換（Ｍ４Ｌ、Ｓ６４ＡおよびＧ７２Ｒ）を組込んだ。
【０２２７】
ヒト化変異体を作製するために、ヒト化ＶＨ配列を、ヒトＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ重鎖定常ドメインをコードするベクター内にクローニングし、ヒト化ＶＬドメインを、カッパ軽鎖定常ドメインをコードするベクター内にクローニングした。合計２個のヒト化ＶＨ（ＶＨ１およびＶＨ２）および８個のヒト化ＶＬを設計した。マウス５２Ｂ８のインシリコ配列および構造解析は分子上の以下の６個の潜在的「ホットスポット」を示した：ＶＨ−ＣＤＲ２（Ｍ６４）およびＶＨ−ＣＤＲ３（Ｗ１０１）における２個の潜在的酸化部位、ＶＨ−ＣＤＲ２（Ｄ６２）における１個の潜在的異性化部位、ＶＬ−ＣＤＲ１（Ｎ３４）における１個の潜在的脱アミド化部位、ＶＬ−ＣＤＲ１（Ｄ３０）およびＶＬ−ＣＤＲ２（Ｄ５９）における２個の潜在的異性化部位。Ｍ６４をＶ６４またはＬ６４へと修飾し、これらは好ましい物理化学的属性および結合／機能性を維持していた。
【０２２８】
図２Ａは、設計されたヒト化変異体の結合アフィニティ、等電点、モノマー種の純度および熱安定性測定に関するデータ特性を示す表を示す。Ｂｉａｃｏｒｅを使用して結合アフィニティを測定し、ｃＩＥＦを使用してｐＩを測定し、純度をＳＥ−ＵＰＬＣにより測定し、ＴｇおよびＴｇｇをＮａｎｏ−ＤＳＦにより測定した。図２Ｂは種々のヒト化軽鎖変異体のＳＥＣ純度と融解温度との関係を示す。データは、８個のヒト化軽鎖変異体のそれぞれから得られた値としてプロットされており、ＶＬ５が最高の純度および熱安定性の両方を有することを示している。図２Ａおよび図２Ｂのデータに基づいて、軽鎖にはＶＬ５を選択した。
【０２２９】
一過性ＣＨＯ細胞内で産生されたヒト化ＶＨ１  Ｍ６４Ｖ  ／ＶＬ５において初期研究を行った。未製剤化（ｕｎｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）ヒト化５２Ｂ８  ＶＨ１  Ｍ６４Ｖ／ＶＬ５に対して行った５０℃のインキュベーションと高いｐＨストレスとの両方を用いる強制的脱アミド化条件はＶＬ−ＣＤＲ１におけるＬＣ  Ｎ３４の脱アミド化（それぞれ、４．０および７．２％）を示し、１×光ストレス曝露を伴うＨＣ−ＣＤＲ３におけるＷ１０１酸化は１５．４％であった。Ｎ３４からＱ３４への置換は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲアッセイにより評価されたヒトおよびアカゲザルＩＬＴ３に対する結合アフィニティ、ならびにＤＣＴＮＦα産生アッセイにより評価された機能活性を維持した。しかし、Ｗ１０１残基の置換は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲアッセイによる測定で、結合における有意な喪失をもたらした。
【０２３０】
要約すると、ヒト化５２Ｂ８は抗ＩＬＴ３モノクローナル抗体（５２Ｂ８  ＶＨ１  Ｍ６４Ｖ／ＶＬ５  Ｎ３４Ｑ  ＩｇＧ４のＳ２２８Ｐ／カッパ）はであり、ＶＬ（Ｍ４Ｌ）内の１個のフレームワーク置換およびＶＨ（Ａ９７Ｇ）内の１個のフレームワーク置換を含有する。
【０２３１】
実施例４
ヒトまたはアカゲザルＩＬＴ３−Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質に対する抗ヒトＩＬＴ３クローンの結合速度およびアフィニティを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００系（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴により測定した。ＨＢＳ−ＥＰ  ＋  バッファー（ＢＲ−１００６−６９）をランニングバッファーとして使用した。製造業者の説明に従い、抗ヒトＦｃ抗体（Ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔ，ＢＲ１００８３９，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をシリーズ（Ｓｅｒｉｅｓ）Ｓ  ＣＭ５センサーチップ（ＢＲ１００５３０または２９１４９６０３，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の４個全てのフローセル上にアミンカップリング化学により固定化した。フローセル１をバックグラウンド減算のための参照体として使用し、捕捉には使用しなかった。前記の抗ヒトＩＬＴ３抗体（ＨＢＳ−ＥＰ  ＋  バッファー中で１μｇ／ｍＬに希釈したもの）をフローセル２、３および４における抗ヒトＦｃ捕捉表面上に１０μＬ／ｍＬで１０秒間注入し、これは６０〜７０  ＲＵの６点の範囲（２０ｎＭ〜０．３１ｎＭの範囲のヒトまたはアカゲザルＩＬＴ３−Ｈｉｓタンパク質の２倍希釈系列）の抗体捕捉レベルを与え、２つのゼロ（ＨＢＳ−ＥＰ  ＋）を参照および捕捉抗体表面上に５０μＬ／ｍＬで、結合のためには１８０秒間、ついで解離のためには６００秒間注入した。各注入サイクルの後、１０μＬ／分の流速での３Ｍ  ＭｇＣｌ２溶液の３０秒間の注入を用いて４個全てのフローセルを再生させた。参照減算センサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェア（バージョン２．０）における１：１ラングミュア結合モデルにフィットさせて、結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数ならびに平衡解離定数ＫＤ（＝ｋｄ／ｋａ）を決定した。
【０２３２】
表７は組換えヒトまたはアカゲザルＩＬＴ３に対する抗ヒトＩＬＴ３抗体の結合速度論およびアフィニティを要約したものである。
【表７】
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【０２３３】
実施例５
水素重水素交換（ＨＤＸ）マススペクトロメトリーによるヒトＩＬＴ３へのキメラ抗ＩＬＴ３  ５２Ｂ８マウスＶＨ／ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）：マウスＶＬ／ヒトカッパ（「ｃ５８Ｂ８」；ｍＡｂ７３）結合のエピトープマッピング
ヒトＩＬＴ３細胞外ドメインに対する抗体の接触領域を水素重水素交換マススペクトロメトリー（ＨＤＸ−ＭＳ）分析の使用により決定した。ＨＤＸ−ＭＳはタンパク質のアミドバックボーン内への重水素の取り込みを測定し、この取り込みの変化は水素の溶媒曝露による影響を受ける。抗原のみのサンプルおよび抗体結合サンプルにおける重水素交換レベルの比較を行って、抗体と接触している可能性のあるＩＬＴ３細胞外ドメイン上の領域を特定した。Ｃ末端Ｈｉｓタグを含有するヒトＩＬＴ３細胞外ドメイン（ヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓ）は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有する。
【０２３４】
Ｈｉｓタグ付きヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓ細胞外ドメインを、配列番号１１３のアミノ酸配列を有するＨＣと配列番号１１６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを有するキメラ抗ＩＬＴ３  ５２Ｂ８マウスＶＨ  Ｍ６４Ｖ／ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）：マウスＶＬ／ヒトカッパである抗体ｃ５８Ｂ８（ｍＡｂ７３）と共に、重水素緩衝液中でのインキュベーション前にプレインキュベートした。ヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓおよび該抗体を、３ｋ  ＭＷＣＯスピンカラムを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）にバッファー交換した。ヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓ（８０ｐｍｏｌ／μＬ）を等量の該抗体（４０ｐｍｏｌ／μＬ）と、または未結合対照としてのＰＢＳ（ｐＨ７．４）と混合した。抗体に結合したサンプルおよび未結合対照を、標識実験を開始する前に、室温で１時間インキュベートした。
【０２３５】
サンプルを重水素標識するために、２μＬのサンプルを２５μＬのＰＢＳと重水（ｐＨ７．６）中で混合した。標識時点は３０、３００、３０００、６０００または１２０００秒であった。設定時間後、２５μＬの標識混合物を３０μＬの冷却クエンチバッファー（８Ｍ  尿素、１５０ｍＭ  ＴＣＥＰ）に加えた。クエンチしたサンプルを１．５℃で２分間インキュベートした。ついで５３μＬをカラム冷却チャンバー内に注入し、該チャンバーにおいて、サンプルをペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムに通し、得られたペプチドを捕捉カラム上にローディングした。３分後、分析勾配および質量分析計を始動させた。２μＬのヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓを１０８μＬの重水素化変性バッファー（４Ｍ  尿素、９９．５％  重水中の１５０ｍＭ  ＴＣＥＰ）と共にインキュベートすることにより、完全重水素化サンプルを生成させた。サンプルを３７℃で一晩インキュベートした。ついで５５μＬをカラムチャンバー内に直接注入し、データを取得した。
【０２３６】
タンパク質の消化が成功したことを確認するために、そしてペプチドの一覧を作製するために、重水素標識の前に、未標識サンプルのＬＣ−ＭＳ／ＭＳデータを取得し、検索した。Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ  １．４およびＳＥＱＵＥＳＴ  ＨＴ検索アルゴリズム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、データをデータベース検索した。使用したタンパク質データベースは、酵母サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）データベースに連結されたヒトＬＡＧ３−Ｈｉｓ配列であった。
【０２３７】
標識後、５５μＬのサンプルアリコートをＮｏｖａＢｉｏＡｓｓａｙｓペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムに適用し、ついで、２％  アセトニトリル、０．１％  ＴＦＡを含有するローディングバッファー中のＷａｔｅｒｓ  ＣＳＨ  Ｃ１８  ＧｕａｒｄカラムおよびＷａｔｅｒｓ  ＣＳＨ  Ｃ１８  １×５０ｍｍ分析カラムでのクロマトグラフィーを行った。ヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓの細胞外ドメイン内への重水素の取り込みを質量分析（マススペクトロメトリー）により測定した。クエンチ：８Ｍ  尿素、１５０ｍＭ  ＴＣＥＰ；標識バッファー：ＰＢＳ（ｐＨ７．６）；ブランクバッファー：ＰＢＳ（ｐＨ７．４）。質量分析計はＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ−Ｅｌｉｔｅであった。重水素標識サンプルの測定のために、１２０，０００分解能、１Ｅ６の標的イオン数および５００ミリ秒の最大イオン注入時間でオービトラップにおいて１つのフルスキャンＭＳデータを取得するように質量分析計を設定した。ペプチド特定のためのＭＳ／ＭＳデータの取得のために、１２０，０００分解能での１つのフルスキャンスペクトルを取得し、ついでイオントラップにおける１０個のデータ依存ＭＳ／ＭＳスペクトルを取得するように質量分析計を設定した。
【０２３８】
使用した液体クロマトグラフィー系は分析カラム勾配用のＷａｔｅｒｓ  ｎａｎｏＡＣＱＵＩＴＹ、ならびにサンプルの消化およびローディング用のＷａｔｅｒｓ  ５１５アイソクラティックポンプであった。サンプルの消化およびローディングに使用したバッファーは流量１００μＬ／分の２％  アセトニトリルおよび０．１％  トリフルオロ酢酸であった。分析勾配では、バッファーは、バッファーＡ）水中の０．１％  ギ酸、およびバッファーＢ）アセトニトリル中の０．１％  ギ酸であった。勾配は、４０μＬ／分で２％  Ｂから３６％  Ｂへの１０分間、ついで８０％  Ｂの１．５分間の洗浄、および２％  Ｂで３分間の再平衡化であった。ついで、３回（各段階１分間）にわたり、２％から８０％のＢ勾配を循環させることにより、カラムを洗浄し、ついで２％  Ｂで５分間の最終平衡化を行った。捕捉（トラッピング）カラムはＷａｔｅｒｓ  Ｖａｎｇｕａｒｄ  Ｃ１８  ＢＥＨ  １．７μｍ  ガード（Ｇｕａｒｄ）カラムであり、分析カラムはＷａｔｅｒｓ  Ｃ１８  ＢＥＨ３００，１．７μｍ１×５０ｍｍカラムであった。
【０２３９】
重水素標識のためのサンプル処理をＬｅａｐｔｅｃ  Ｈ／Ｄ−Ｘ  ＰＡＬ系により行った。標識サンプルトレイを２５℃の温度に設定し、クエンチングトレイを１．５℃に設定し、トラップおよび分析カラムチャンバーを１．５℃に設定した。固定化ペプシンカラム（ペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムＮＢＡ２０１４００２、２．１×３０ｍｍ、ＮｏｖａＢｉｏＡｓｓａｙ）を室温でカラムチャンバーの外に維持した。
【０２４０】
抗体が結合したヒトＩＬＴ３−Ｈｉｓアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを図３Ａに示す。ＨＤＸ質量分析は、該抗体、および該抗体と交差競合する本明細書に開示されているその他の抗体ファミリーが、ＩＬＴ３のアミノ酸残基１８〜２３（ＩＳＷＧＮＳ；配列番号番号３）、６４〜６９（ＩＰＳＭＴＥ；配列番号４）、９６〜１０１（ＭＴＧＡＹＳ；配列番号５）、１２４〜１３１（ＱＳＲＳＰＭＤＴ；配列番号６）、１５２〜１５９（ＡＱＱＨＱＡＥＦ；配列番号７）および１８４〜１８７（ＬＬＳＨ；配列番号８）の１以上における少なくとも１つのアミノ酸を含む又はそれらからなるエピトープに結合することを示している。図３Ｂは、保護されたアミノ酸残基が示されているヒトＩＬＴ３細胞外ドメインの三次元表面構造モデルの第１図および第２図を示す。これらの保護されたアミノ酸残基は、細胞外ドメインのＤ１ドメインとＤ２ドメインとの間の境界にまたがる分割または不連続エピトープを含む。図３Ｃは、ヒトＩＬＴ３細胞外ドメイン上のエピトープの配置を示すリボン図である。黒色部分の残基は抗体による標識から保護されている。白色の残基は標識の変化を示さず、濃灰色の残基については、それらに関するデータが取得されなかった。各残基の重水素標識差を平均し、ＩＬＴ３の結晶構造上にマッピングした（Ｃｈｅｎｇら，“Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｉｇ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＬＩＬＲＢ４（ＩＬＴ３／ＬＩＲ−５／ＣＤ８５ｋ）：ａ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．”Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６：１８０１３−２５（２０１１））。
【０２４１】
抗体ＺＭ４．１、ＤＸ４３９、ＤＸ４４６および９Ｂ１１を使用して同様のＨＤＸマッピング実験を行った。抗体ＺＭ４．１はＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡまたはＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから商業的に入手可能である。抗体ＤＸ４３９およびＤＸ４４６はＷＯ２０１８０８９３００に開示されており、抗体９Ｂ１１は、米国特許第７，７７７，００８号に開示されている。これらの抗体のうち、抗体ＺＭ４．１のみが、本発明の抗体が結合するエピトープと部分的に重複するエピトープに結合することが観察された。しかし、ビニング研究は、抗体ＺＭ４．１が本発明の抗体の結合を交差遮断しないことを示した。図３Ｄ、３Ｅ、３Ｆおよび３ＧはヒトＩＬＴ３への抗体ＺＭ４．１、ＤＸ４３９、ＤＸ４４６および９Ｂ１１の結合のヒートマップを示す。
【０２４２】
実施例６
ＮＳＧマウスにおけるキメラ抗ＩＬＴ３  ５２Ｂ８マウスＶＨ／ヒトＩＧｇ４（Ｓ２２８Ｐ）：マウスＶＬ／ヒトカッパ（「ｃ５８Ｂ８」；ｍＡｂ７３）の薬物動態
キメラ抗ＩＬＴ３  ５２Ｂ８マウスＶＨ／ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）：マウスＶＬ／ヒトカッパ（ｃ８５Ｂ８；ｍＡｂ７３）の薬物動態をＰａｎｃ０８．１３ヒトＮＳＧマウスモデルおよびＳＫ−ＭＥＬ−５ヒトＣＤ３４  ＋  −ＮＳＧマウスモデルにおいて評価した。
【０２４３】
ＳＫ−ＭＥＬ−５は、皮下腫瘍として増殖しうるヒトメラノーマ由来系統である。Ｐａｎｃ  ０８．１３はヒト膵臓癌由来腫瘍系統である。Ｐａｎｃ  ０８．１３ヒトＮＳＧモデルはペンブロリズマブおよびイピリムマブ治療に感受性であることが示されている。ＳＫ−ＭＥＬ−５モデルは、Ｐａｎｃ  ０８．１３モデルと比較して、腫瘍において頑強（ロバスト）で多様な骨髄浸潤物を有する。どちらのモデルも腫瘍および脾臓におけるヒトＣＤ１４＋  骨髄細胞上のＩＬＴ３発現の増強を示している。
【０２４４】
ＥＣＬに基づく標的捕捉イムノアッセイを用いて、ヒト化マウスの血漿における抗体を定量した。捕捉試薬としてのビオチン化組換えＩＬＴ３、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（カタログ番号９１９０−０１）のスルホＴＡＧ標識マウス抗ｈｕＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、このアッセイを確立させた。校正物質およびＱＣの両方を原液（ニート）Ｃ５７ＢＬ／６血漿において調製し、プレートにおける試験の際に１００倍希釈した。このアッセイは適格であり、該アッセイのＬＬＯＱは１００のＭＲＥＤで４０ｎｇ／ｍＬであると決定された。
【０２４５】
Ｐａｎｃ０８．１３  ｈｕ−ＮＳＧマウスモデルにおいて、２０ｍｇ／ｋｇの抗体を、ペンブロリズマブ（５ｍｇ／ｋｇ）の存在下または非存在下、最初の３用量では毎週、そして第４用量には第３用量の投与の２週間後にＩＰ投与した。第３用量の投与の前（Ｃｔｒｏｕｇｈ）および第３用量の投与後２４時間（Ｃｍａｘ）、血液サンプルを集めた。また、第４用量の投与の後の第５日および第６日に最終血液サンプルを集めた。ＳＫ−ＭＥＬ−５  ｈｕＣＤ３４＋  −ＮＳＧマウスモデルにおいては、該抗体を２および２０ｍｇ／ｋｇで毎週、ＩＰ投与した。第３用量の投与の前（Ｃｔｒｏｕｇｈ）および第３用量の投与の２４時間（Ｃｍａｘ）に血液サンプルを集めた。また、第３用量の投与の後の第３日および第７日に最終血液サンプルを集めた。遊離（非結合）抗体濃度を抗原捕捉アッセイにより決定した。
【０２４６】
Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＮＬＭＥを使用して、ＩｇＧ４抗体の履歴データ（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける１、３、１０、３０ｍｇ／ｋｇのヒト化ＩｇＧ４抗体のＩＶボーラス投与）から薬物動態パラメータを得た。得られた薬物動態パラメータに基づいて、抗体の試験用量でのＰＫプロファイルをシミュレーションした。
【０２４７】
ＩｇＧ４抗体の履歴データのＰＫ分析はＡＵＣと試験用量との間に線形関係を示した（図４を参照された）。ｃ５２Ｂ８の種々の試験用量にわたる線形ＰＫ、種々のマウス系統間でのＰＫの差異の非存在、迅速な吸収および抗体のＩＰ投与後の１００％のバイオアベイラビリティを含む仮定により、ｃ５２Ｂ８の試験用量におけるＰＫプロファイを、ＩｇＧ４抗体の履歴データに基づいてシミュレーションした。結果は、Ｐａｎｃ０８．１３ヒト−ＮＳＧモデルおよびＳＫ−ＭＥＬ−５  ｈｕＣＤ３４  ＋  −ＮＳＧモデルの両方において、２０ｍｇ／ｋｇでのシミュレーションプロファイルが、観察されたｃ５２Ｂ８濃度に追従することを示した。
【０２４８】
実施例７
抗ＩＬＴ３モノクローナル抗体は樹状細胞を活性化し、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の抑制能を低下させる
新鮮な白血球から単離されたヒトＰＢＭＣを凍結し、解凍し、ＣＤ１４＋  単球をネガティブ選択により精製した。精製した細胞をＧＭ−ＣＳＦ（１０００Ｕ／ｍＬ）およびＩＬ４（１０００Ｕ／ｍＬ）の存在下で５日間培養した。ついでこれらの未熟ＤＣを、抗ＩＬＴ３抗体の存在下または非存在下、ＩＬ−１０（５０ｎｇ／ｍＬ）およびＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）を添加しながら４２時間更に培養した。培養上清中のＴＮＦαを測定する。
【０２４９】
滴定実験が示したところによると、ｃ５２Ｂ８は、分極段階で添加された場合、培養培地内のＴＮＦα分泌の用量依存的増加を引き起こしたが、対照ＩｇＧ４はそれを引き起こさなかった［対照はＲＳＶに対する市販抗体（商品名Ｓｙｎａｇｉｓ）の変異体である］（図５Ａ）。ＴＮＦαレベルの最大増加の半分（ＥＣ５０）をもたらすのに必要な抗体の濃度は約１．９ｎｇ／ｍＬであった。これは、ヒトＩｇＧ１フレームワーク（ｍＡｂ７８）またはＮ２９７Ａ突然変異ヒトＩｇＧ１フレームワーク（ｍＡｂ７６）を含有するＦｃにｐ５８Ｂ８のＶＨおよびＶＬが融合したキメラ変異体では、異なっていなかった。これらのデータは、このアッセイにおいて、Ｆｃ受容体結合が機能的活性において何ら役割を果たしていないことを示している。Ｆｃ受容体結合からの非依存性は、このアッセイにおける活性化のメカニズムが、ＩＬＴ３に無関係なメカニズムである抗体で修飾される培養内の他のＤＣの認識により活性化されるＤＣである可能性を制御する。
【０２５０】
図５Ｂおよび５Ｃは、２名のドナーにおいて、ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）とヒト化抗ＩＬＴ３  ｍＡｂ  ５２Ｂ８  ＶＨ１  Ｍ６４Ｖ／ＶＬ５  Ｎ３４Ｑ）ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ／カッパ（ｍＡｂ  ４６）との間に機能的活性において有意差がなかったことを示している。示されているとおり、抗体ｃ５２Ｂ８は、Ｔ細胞のプライミング中ではなく、ＤＣの分極中に添加されたため、ＩＬ１０で寛容化されていないＤＣと同様に、ＤＣは、増殖のためにＴ細胞をより良好に活性化することが可能であった。ｃ５２Ｂ８を、ＤＣの分極中ではなく、Ｔ細胞のプライミング中に添加した場合には、Ｔ細胞は、その後の再刺激に対して、より良好に応答することが可能であった。ヒト化の後、該キメラ体に匹敵する結合を保持した変異体をこの同じアッセイにおいて試験したところ、それらは活性であることが判明し、それらの間で効力における有意な差は認められなかった。これらのデータは、ｃ５２Ｂ８を使用して得られたデータが、ヒト化ｍＡｂ  ４６が使用された場合のデータの代表例であることを示している。
【０２５１】
実施例８
抗ＩＬＴ３抗体は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の抑制能を低下させる
いずれの特定の理論または仮説にも基づくことなく、本発明者らは、腫瘍に対する生産的Ｔ細胞応答が、幾つかの場合には、未熟かつ抑制性の骨髄細胞の存在によって制限されうると仮定している。これらの細胞はＩＬＴ３を発現し、本発明者らは、ＩＬＴ３が、低いＨＬＡ−ＤＲ発現、ＩＬ−１０産生ならびにＴ細胞の活性化および増殖の有効な抑制により特徴づけられる未熟状態を維持するように、抑制的様態として機能すると仮定している。ヒトＰＢＭＣとＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞とのインビトロ共培養に基づくモデルの確立、ならびにそれに続く、ＭＤＳＣの精製、および自己ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を抑制するそれらの能力の試験は、ＩＬＴ３生物学のこの側面の研究を可能にした。この実施例は、ｃ５２Ｂ８およびヒト化５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）がＴ細胞抑制表現型の獲得（または維持）を損ないうることを示している。
【０２５２】
ＭＤＳＣを作製するために、健常ヒトＰＢＭＣをＳＫＭＥＬ５細胞および２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦと共に７日間培養した。ＣＤ３３＋  細胞をポジティブ抗体ベース磁気ビーズ選択により収集し、ついで、ポリクローナル刺激の存在下、示されている比率で精製自己ＣＤ８＋  Ｔ細胞と共に３日間共培養した。培養は、共培養およびＴ細胞抑制の両方の工程において、ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）、ヒト化５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）またはアイソタイプ対照抗体（１μｇ／ｍＬ）を含んでいた。Ｔ細胞とＭＤＳＣとを４：１の比で使用し、産生インターフェロンガンマ（ＩＮＦγ）の量を測定することにより、Ｔ細胞抑制アッセイを行った。
【０２５３】
図６Ａおよび図６ＢはＴ細胞対ＭＤＳＣの或る比におけるＭＤＳＣモデルでのヒト化５２Ｂ８およびｃ５２Ｂ８の両方の活性を例示しており、この場合、これらの抗体の効果が最も明白であり、抗体がＭＤＳＣの抑制能を同等の様態で低下させることが示されている。これらのデータは、ｃ５２Ｂ８で得られたデータが、ヒト化ｍＡｂ４６で見られるものの代表例であることを更に示している。
【０２５４】
実施例９
抗ＩＬＴ３抗体ｃＣ５２Ｂ８は、ＳＫ−ＭＥＬ−５皮下腫瘍を有するＳＫ−ＭＥＬ−５  ｈｕ−ＮＳＧマウスにおけるＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍の成長を抑制する
定着皮下腫瘍を有するマウスへの週１回のｃ５２Ｂ８の全身投与は腫瘍成長の抑制をもたらした（図７）。動物を、移植後第２１日の腫瘍体積に基づいて、処置に応じて無作為化し、第２１日から週１回、２０ｍｇ／ｋｇのｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３）またはアイソタイプ対照を皮下投与した。左パネルに示されているデータは平均および標準誤差である（１群当たり９匹）。個々の動物の腫瘍成長曲線が右側に示されている。体重は対照群と５２Ｂ８群との両方において類似した度合で減少した。この研究は３つの独立した研究の代表例である。
【０２５５】
腫瘍成長の抑制の度合は３つの別々の研究において一貫しており、類似しており、抗ＩＬＴ４の効果に非常に類似していた。これまでに試験されたその他のメカニズム（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＩＬＴ４、抗ＣＤ２７、抗ＧＩＴＲ）はいずれも、腫瘍状態がこのモデルの底を表しうると推測させる退縮をもたらしていない。これは、前臨床有効性アッセイに一般に使用されるマウス同系モデルとは明らかに異なる。
【０２５６】
実施例１０
ｃ５２Ｂ８処置後のＳＫ−ＭＥＬ−５  ｈｕ−ＮＳＧにおける免疫活性化
腫瘍効果をもたらす免疫メカニズムを理解するために、腫瘍浸潤性免疫細胞をプロファイリングし、ｓＨＬＡ−Ｇ測定レベルを血中で測定した。マウスをｃ５２Ｂ８（２および２０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．ＱＷ）で処置した。過去の研究を用いて小規模ＰＫおよびシミュレーションにおいて検出されたＣｍａｘおよびＣｔｒｏｕｇｈレベルに基づいて、抗体用量を選択した。ＰＫ、ｓＨＬＡ−Ｇおよびサイトカイン分析のために血液サンプルを収集した。３６個のマーカーを同時に検出するために、ＣｙＴＯＦを使用してＴＩＬプロファイリングを行った。最終腫瘍サンプルを固定し、ヒトＣＤ３＋  Ｔ細胞ＩＨＣ分析に使用した。２０  ｍｐｋ  ５２Ｂ８で処置されたマウスにおいて、３０％の腫瘍成長抑制が観察された。しかし、ヒト化腫瘍モデルに関連した大きな変動性ゆえに、統計的有意差は検出されなかった。５２Ｂ８の適度な腫瘍効果は腫瘍ＣＤ４＋  ＣＤ１２７−ＣＤ２５＋  Ｔサプレッサー細胞（２１％対１４％）および血液ｓＨＬＡ−Ｇレベルの適度な減少ならびに腫瘍におけるＴ細胞の活性化の増強（ＣＤ６９強度、１４対２３）に関連していた。図８において見られるとおり、ｃ５２Ｂ８処置ではサイトカインの変化は検出されなかった。
【０２５７】
実施例１１
Ｐａｎｃ  ０８．１３  ｈｕ−ＮＳＧモデルにおけるペンブロリズマブと組合された抗ＩＬＴ３抗体ｃ５２Ｂ８の効果：腫瘍効果および免疫活性化
抗ＩＬＴ３抗体ｃ５２Ｂ８をＰａｎｃ  ０８．１３  ｈｕ−ＮＳＧモデルにおいて評価した。単剤として使用した５２Ｂ８は腫瘍成長抑制に対して最小限の効果を示した。図９Ａ、図９Ｂ、図９Ｃおよび図９Ｄにおいて見られるとおり、５２Ｂ８をペンブロリズマブと組合せて使用した場合には、ヒト化マウスの、５つのコホート（５つの異なるヒトドナー）のうちの１つが、５０％の腫瘍成長抑制（ＴＧＩ）を示し、ＴＧＩはＴ細胞活性化およびＩＦＮγ産生の増加ならびに血液ｓＨＬＡ−Ｇレベルの減少に関連していた。
【０２５８】
実施例１２
ＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおけるペンブロリズマブと組合された抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８の効果
ペンブロリズマブの存在下および非存在下のヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）はＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおけるＴ細胞活性の増加をもたらした。ｍＡｂ４６をペンブロリズマブと組合せて使用した場合、この効果は相加的であった。
【０２５９】
ＭＤＳＣを生成させるために、特定のドナーからの健常ヒトＰＢＭＣをＳＫＭＥＬ５細胞および２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦと共に７日間培養した。培養物を５２Ｂ８（１μｇ／ｍＬ）またはアイソタイプ対照抗体（１μｇ／ｍＬ）で処置した。ＣＤ３３＋  細胞を抗ＣＤ３３磁性マイクロビーズおよびＬＳカラム分離（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で収集し、ついで、ポリクローナル刺激の存在下、示されている比率の精製自己ＣＤ８＋  Ｔ細胞と共に３日間共培養した。自己ＣＤ８＋  Ｔ細胞を、ネガティブ抗体ベース磁気ビーズ選択（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、健常ヒトＰＢＭＣから分離し、ついで８：１（Ｔ細胞：ＭＤＳＣ）の比のＣＤ３３＋  骨髄細胞と共に９６ウェルプレート内で２日間共培養した。培養は、共培養およびＴ細胞抑制の両方の工程において、ヒト化５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）（１μｇ／ｍＬ）を、単独で、またはペンブロリズマブ（２μｇ／ｍＬ）と組合せて含んでいた。各処置における総抗体濃度はアイソタイプ対照抗体で３μｇ／ｍＬに調整される。Ｔ細胞の増殖をポリクローナル刺激抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズおよびＩＬ２により誘導した。ＭＳＤ  ＥＬＩＳＡ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＤ）を使用して、培養上清においてＩＦＮγレベルを決定した。Ｔ細胞抑制アッセイを４：１または８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比で行い、産生したインターフェロンガンマ（ＩＮＦγ）の量を測定した。結果を図１０〜１４に示す。
【０２６０】
図１０は、２つの異なるヒトドナー（それぞれＤ００１００３８５およびＤ００１００３５０７）由来のＰＢＭＣから得られたＭＤＳＣを使用するＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおいて、ヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）が、キメラ抗ＩＬＴ３抗体ｃ５２Ｂ８（ｍＡｂ７３；ロット２６ＡＶＹ）に匹敵する程度で、ＭＤＳＣの抑制能を低下させることを示している。
【０２６１】
図１１〜１４に示されているとおり、（ａ）ヒトドナーＤ００１００３８３５由来のＰＢＭＣから得られたＭＤＳＣを使用する４：１または８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比において（図１１）、（ｂ）ヒトドナーＤ００１００３１８０由来のＰＢＭＣから得られたＭＤＳＣを使用する４：１または８：１のＭＤＳＣ対Ｔ細胞の比において（図１２）、（ｃ）ヒトドナーＤ００１００３５０７由来のＰＢＭＣから得られたＭＤＳＣを使用する４：１または８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比において（図１３）、およびヒトドナー由来のＰＢＭＣから得られたＭＤＳＣを使用する８：１のＴ細胞対ＭＤＳＣの比において（図１４）、ペンブロリズマブと組合されたヒト化抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８（ｍＡｂ４６）は、ＭＤＳＣ／Ｔ細胞抑制アッセイにおいて、単独の場合より高いレベルで、Ｔ細胞活性化のＭＤＳＣ抑制を低下させた。結果を表８および９に要約する。図１０〜１３ならびに表８および９に示されているとおり、抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８をペンブロリズマブを組合せると、ペンブロリズマブまたは５２Ｂ８を単独で使用した場合に達成可能なものと比較してＴ細胞の活性化を増強するという相加効果が得られた。示されているとおり、他の治療と比較した場合の該組合せに関するＩＦＮγの増加は４１％〜７４％の範囲であった。これらの結果は、ペンブロリズマブと５２Ｂ８との組合せが、Ｔ細胞活性化の、過剰または無制御な増強を引き起こさないことを示している。
【表８】
2021503280.tif 000019
【表９】
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【０２６２】
実施例１３
分極化ＩＬ−１０  ＤＣおよび同種ＣＤ８  ＋  Ｔ細胞の混合リンパ球反応における、ペンブロリズマブと組合された抗ＩＬＴ３抗体５２Ｂ８の効果
この実施例においては、ＩＬ−１０分極化ヒト単球由来樹状細胞および同種ＣＤ８＋  Ｔ細胞の混合リンパ球反応を４日間培養し、ついで培養上清中のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）をＴ細胞活性化の指標として測定した。この実験においては、ペンブロリズマブ、５２Ｂ８またはそれらの２つの組合せの活性を９つの同種ドナーペアにおいてアイソタイプ対照抗体（どちらの場合にもＩｇＧ４）と比較した。
【０２６３】
単球由来樹状細胞（ＤＣ）−ＩＬ１０  ＤＣ（３名のＣＤ１４＋  単球ドナーからのもの）を７日間分化させて［顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）およびＩＬ４で５日間、ついでＩＬ１０で２日間；ＩｇＧ４（ロット９２ＡＳＪ）の存在下および非存在下、１μｇ／ｍＬの５２Ｂ８（ロット４１ＢＡＢ）の存在下または非存在下］、ＤＣ１２９、ＤＣ２２６およびＤＣ１９６を生成させた。３名のドナーからのＣＤ８＋  細胞を単離し、９６ウェル形態（３０ｋ  ＤＣ対１５０ｋ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞）において、３名のドナーからの１：５のＤＣ：Ｔ細胞の比で混合白血球反応（ＭＬＲ）を確立し、この場合、細胞をＩｇＧ４（ロット９２ＡＳＪ）の存在下および非存在下、２μｇ／ｍＬのペンブロリズマブ（ロット４２ＡＳＮ）の存在下および非存在下で処置した。また、ＩｇＧ４または５２Ｂ８を１μｇ／ｍＬでＭＬＲに再び添加した。ＩＬ１０  ＤＣ：ＣＤ８＋  Ｔ細胞の、９個のＭＬＲペアで終了する。
【０２６４】
ＤＣ１２９対Ｔ３０、Ｔ３７８８およびＴ３２５９
ＤＣ２２６対Ｔ３０、Ｔ３７８８およびＴ３２５９
ＤＣ１９６対Ｔ３０、Ｔ３７８８およびＴ３２５９
ＩＦＮγ上清を第４日に収集し、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を使用して定量した。追加的な上清画分を第５日に収集し、細胞を収集し、ＰＤ１およびＰＤＬ１発現に関して染色した。分化の第７日の樹状細胞染色（ＭＬＲの準備の直前）。ＭＬＲアッセイの第５日におけるＣＤ８＋  Ｔ細胞のＴ細胞染色。
【０２６５】
図１５は、１つの図にまとめられた全てのドナーペアの結果を示す（各印はドナーペアである）。示されているとおり、ペンブロリズマブと組合された５２Ｂ８はＴ細胞寛容化の逆転をもたらして、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化の統計的に有意な増強をもたらした。
【表１０】
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本発明は例示実施形態に関して本明細書に記載されているが、本発明はそれらに限定されないと理解されるべきである。当業者および本教示を利用する者は本発明の範囲内の追加的な修飾および実施形態を認識するであろう。したがって、本発明は本明細書における特許請求の範囲のみによって限定される。
【図１Ａ】
2021503280.tif 000036
【図１Ｂ】
2021503280.tif 000037
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
2021503280.tif 000040
【図１Ｆ】
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【図２Ａ】
2021503280.tif 000042
【図２Ｂ】
2021503280.tif 000043
【図３Ａ】
2021503280.tif 000044
【図３Ｂ】
2021503280.tif 000045
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
2021503280.tif 000050
【図４】
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【図５Ａ】
2021503280.tif 000052
【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
2021503280.tif 000054
【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
2021503280.tif 000059
【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
2021503280.tif 000061
【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
2021503280.tif 000063
【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
2021503280.tif 000065
【図１０】
2021503280.tif 000066
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月1日(2020.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１７、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５または１０３に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＨＣ−ＣＤＲ）１；配列番号１８、４８、５６、６４、７２、８０、８８、９６または１０４に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２；および配列番号２３、４９、５７、６５、７３、８１、８９、９７または１０５に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３；ならびにＨＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＨ）を有する重鎖（ＨＣ）と、
（ｂ）配列番号２７、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８または１０６に記載されているアミノ酸配列を有する可変ドメイン相補性決定領域（ＬＣ−ＣＤＲ）１；配列番号４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９または１０７に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２；および配列番号４４、６０、６８、７６、８４、９２、１００または１０８に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３；ならびにＬＣ−ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体を含む可変ドメイン（ＶＬ）を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む、ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）に結合する抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２】
（ａ）ＨＣ−ＣＤＲ１が、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２が、配列番号１９、２０または２１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、
（ｂ）ＬＣ−ＣＤＲ１が、配列番号３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２が、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３が、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有する、請求項１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３】
（ａ）ＨＣ−ＣＤＲ１が、配列番号１７に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ２が、配列番号２０に記載されているアミノ酸配列を有し、ＨＣ−ＣＤＲ３が、配列番号２３に記載されているアミノ酸配列を有し、
（ｂ）ＬＣ−ＣＤＲ１が、配列番号４１に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ２が、配列番号４３に記載されているアミノ酸配列を有し、ＬＣ−ＣＤＲ３が、配列番号４４に記載されているアミノ酸配列を有する、請求項２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項４】
ＶＨが、ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを含み、ＶＬが、ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するそれらの変異体からなる群から選択されるフレームワークを含む、請求項１、２または３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項５】
抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメインを有するＨＣ、または天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを有するその変異体を有するＨＣを含む、請求項１、２または３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項６】
抗体が、ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインを有するＬＣ、または天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むその変異体を有するＬＣを含む、請求項４または５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項７】
抗体が、
（ｉ）ヒトＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５およびＶＨ６から選択されるフレームワークを有するＶＨ、ならびにヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４  ＨＣ定常ドメインまたは天然ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４アイソタイプＨＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体と、
（ｉｉ）ヒトＶκ１、Ｖκ２、Ｖκ３、Ｖκ４、Ｖκ５、Ｖκ６、Ｖλ１、Ｖλ２、Ｖλ３、Ｖλ４、Ｖλ５、Ｖλ６、Ｖλ７、Ｖλ８、Ｖλ９およびＶλ１０から選択されるフレームワークを有するＶＬ、ならびにヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインまたは天然ヒトカッパもしくはラムダＬＣ定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体とを含む、請求項３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項８】
抗体または抗原結合性フラグメントが、それぞれ配列番号１５および配列番号１６、それぞれ配列番号４５および配列番号４６、それぞれ配列番号５３および配列番号５４、それぞれ配列番号６１および配列番号６２、それぞれ配列番号６９および配列番号７０、それぞれ配列番号７７および配列番号７８、それぞれ配列番号８５および配列番号８６、それぞれ配列番号９３および配列番号９４、またはそれぞれ配列番号１０１および配列番号１０２に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶＬを含む、請求項４記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項９】
抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１７、１１８、１１９、１２３、１２４または１２５に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０または１４１に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む、請求項４記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１０】
抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１１８に記載されているアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号１４０に記載されているアミノ酸配列を有するＶＬとを含む、請求項９記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１１】
抗体が、配列番号１４３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号１６５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）、ならびにＣ末端リジン残基またはＣ末端グリシン−リジンをＨＣが欠いているそれらの変異体を含む、請求項７記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１２】
ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）上のエピトープに結合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメントであって、エピトープが、配列番号３、４、５、６、７および８に記載されているアミノ酸配列の１以上からの少なくとも１つのアミノ酸を含む、キメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１３】
配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む抗体の結合を、ヒト免疫グロブリン様転写産物３（ＩＬＴ３）への結合から交差遮断し、または該結合と競合するキメラ、ヒト化もしくは組換えヒト抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項１４記載の組成物を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。
【請求項１６】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
対象における癌の治療における使用のための、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１８】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストを含む、対象における癌の治療における使用のための、請求項１７記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項１９】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストが、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、セミプリマブ（ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）およびピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）からなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、請求項１８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２０】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の、１以上のインヒビターまたはアンタゴニストが、デュルバルマブ（ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣおよびＭＤＸ−１１０５からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１インヒビターである、請求項１８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２１】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、請求項１７または１８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２２】
癌の治療のための、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項２３】
癌の治療用の医薬の製造のための、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項２４】
癌が膵臓癌、黒色腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳または中枢神経系癌、末梢神経系癌、食道癌、子宮頸癌、子宮または子宮内膜癌、口腔または咽頭癌、肝臓癌、腎臓癌、精巣癌、胆道癌、小腸または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫または血液組織の癌である、癌の治療用の医薬の製造のための、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項２５】
請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗ＩＬＴ３抗体または抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子。
【請求項２６】
請求項２５記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２７】
請求項２６記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２８】
（ａ）請求項２６記載のベクターを含む宿主細胞を準備し、
（ｂ）該ベクターによりコードされる抗体または抗原結合性フラグメントの発現を可能にする条件下、該宿主細胞を培地内で培養し、
（ｃ）培地から抗体または抗原結合性フラグメントを得ることを含む、請求項１〜１３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法。
【国際調査報告】
2021503280.tif 000072
2021503280.tif 000073
2021503280.tif 000074
2021503280.tif 000075
2021503280.tif 000076
2021503280.tif 000077
2021503280.tif 000078