(57)【要約】本発明は、全長組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））を含む医薬組成物および製剤に関する。本発明はさらに、物理的および化学的ストレスに応答したタンパク質分解を受けにくい、使用中の安定性が向上した新規および／または改善されたＰＴＨ組成物に関する。
2021532110.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬製剤であって、
（ａ）治療有効量の組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）界面活性剤；
（ｃ）等張化剤；
（ｄ）抗酸化剤；
（ｅ）防腐剤；
（ｆ）生理学的に許容されるバッファー、および
（ｇ）水
を含み、該医薬製剤は、注射用液剤として製剤化され、少なくとも４８時間、物理的に安定であり、無色透明で目に見える粒子がないままである、医薬製剤。
【請求項２】
少なくとも７２時間物理的に安定である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
少なくとも９６時間物理的に安定である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４】
少なくとも７日間物理的に安定である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項５】
少なくとも１４日間物理的に安定である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項６】
少なくとも２１日間物理的に安定である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記界面活性剤が、ポロキサマー１８８、およびポリエチレングリコール、ならびにそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項８】
前記等張化剤が、塩化ナトリウム、スクロース、およびグリセロール、ならびにそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項９】
前記防腐剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、安息香酸ナトリウム、プロピルパラベン、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
前記生理学的に許容されるバッファーが、酢酸バッファー、リン酸バッファー、Ｌ−ヒスチジンバッファー、またはコハク酸バッファーである、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
抗酸化剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
前記抗酸化剤が、メチオニン、Ｎ−アセチル−メチオニン、チオ硫酸塩、Ｎ−アセチルトリプトファン、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
約４〜約６のｐＨを有する、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
約５．５のｐＨを有する、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
前記製剤が、単回投与用バイアル、複数回投与用バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジ、または注射ペン内にある、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
医薬製剤であって、
（ａ）約０．２〜約２．０ｍｇ／ｍＬの組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）約０．０３〜約３．０ｗ／ｖ％の界面活性剤；
（ｃ）約０．２〜約２０ｗ／ｖ％の等張化剤；
（ｄ）約０．０１５〜約１．５０ｗ／ｖ％の抗酸化剤；
（ｅ）約０．０３〜約３％の防腐剤；
（ｆ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭの生理学的に許容されるバッファー、および
（ｇ）水
を含み、該医薬製剤は、注射用液剤として製剤化され、少なくとも４８時間、物理的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである、医薬製剤。
【請求項１７】
少なくとも７２時間物理的に安定である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
少なくとも９６時間物理的に安定である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
少なくとも７日間物理的に安定である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
少なくとも１４日間物理的に安定である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項２１】
少なくとも２１日間物理的に安定である、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項２２】
医薬製剤であって、
（ｅ）治療有効量の組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｆ）増量剤；
（ｇ）凍結保護剤、および
（ｈ）薬学的に許容されるバッファー
を含み、該医薬製剤は、注射前に再構成される凍結乾燥粉末として製剤化され、再構成後少なくとも４８時間、物理的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである、医薬製剤。
【請求項２３】
少なくとも７２時間物理的に安定である、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
少なくとも９６時間物理的に安定である、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２５】
少なくとも７日間物理的に安定である、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
少なくとも１４日間物理的に安定である、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
少なくとも２１日間物理的に安定である、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２８】
前記増量剤がマンニトールである、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記凍結保護剤がスクロースである、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
前記薬学的に許容されるバッファーが、酢酸バッファー、リン酸バッファー、Ｌ−ヒスチジンバッファー、またはコハク酸バッファーである、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
前記薬学的に許容されるバッファーがＬ−ヒスチジンバッファーである、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
約５．５のｐＨを有する、請求項３１に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
前記薬学的に許容されるバッファーがコハク酸バッファーである、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項３４】
約４〜約４．５の間のｐＨを有する、請求項３３に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
抗酸化剤および／または界面活性剤をさらに含む、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
前記抗酸化剤がメチオニンであり、前記界面活性剤がポロキサマー１８８である、請求項３５に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
医薬製剤であって、
（ｅ）約０．０２〜約２．０ｍｇ／ｍＬの組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｆ）約０．３〜約３０ｗ／ｖ％の増量剤；
（ｇ）約０．２〜約２０ｗ／ｖ％の凍結保護剤、および
（ｈ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭの薬学的に許容されるバッファー
を含み、該医薬製剤は、注射前に再構成される凍結乾燥粉末として製剤化され、再構成後少なくとも４８時間、物理的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである、医薬製剤。
【請求項３８】
少なくとも７２時間物理的に安定である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
少なくとも９６時間物理的に安定である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
少なくとも７日間物理的に安定である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項４１】
少なくとも１４日間物理的に安定である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項４２】
少なくとも２１日間物理的に安定である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
請求項２２〜４２のいずれか一項に記載の医薬製剤を含む第１の容器と、前記医薬製剤を再構成するための滅菌水を含む第２の容器と、該製剤から再構成された製剤を調製することを指示するシートとを含む、キット。
【請求項４４】
再構成されたｒｈＰＴＨ（１−８４）溶液を注射するためのデバイスをさらに含む、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
治療有効量のｒｈＰＴＨ（１−８４）をそれを必要とする対象に投与する方法であって、請求項１〜２１のいずれかの医薬製剤を対象に皮下、静脈内、または筋肉内注射することを含む、方法。
【請求項４６】
前記注射が、注射器、自動注射器、注射ペン、またはそれらの組み合わせを用いて行われる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
治療有効量のｒｈＰＴＨ（１−８４）をそれを必要とする対象に投与する方法であって、
（ｉ）請求項２２〜４２のいずれかの医薬製剤を滅菌水で再構成すること、および
（ｉｉ）再構成された製剤を対象に皮下、静脈内、または筋肉内注射すること
を含む、方法。
【請求項４８】
前記注射が、注射器、自動注射器、注射ペン、またはそれらの組み合わせを用いて行われる、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、使用中の安定性（in-use stability）が向上した組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））を含む新規かつ改善された医薬組成物および剤形に関する。
【背景技術】
【０００２】
副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、哺乳類の副甲状腺から分泌される８４アミノ酸産物であり、骨を含むさまざまな組織への作用を介して血清カルシウムレベルを制御する。特定の形態のＰＴＨを用いたヒトでの試験は、骨に対する同化作用を示しており、骨粗鬆症および関連する骨障害の処置のためのその使用への関心を多いに高めた。
【０００３】
うまく製剤化されている他のタンパク質とは異なり、ＰＴＨは特にさまざまな形の分解を受けやすい。うまく製剤化されている他のタンパク質とは異なり、ＰＴＨは特に酸化を受けやすく、さらに、生物活性を維持するためにはそのＮ末端配列が無傷のままである必要がある。例えば、酸化は８位と１８位のメチオニン残基で起こる可能性があり、酸化されたＰＴＨ種ｏｘ−Ｍ（８）−ＰＴＨおよびｏｘ−Ｍ（１８）−ＰＴＨを生じさせるが、一方、脱アミド化は１６位のアスパラギンで起こる可能性があり、ｄ１６−ＰＴＨを生じさせる。ポリペプチド鎖は、Ｎ末端とＣ末端の両方でのペプチド結合の切断によって短縮型になる。さらに、ＰＴＨはまた、表面に吸着したり、非特異的な凝集体を形成したり、および／または沈殿したりして、薬物の利用可能な濃度が低下する可能性がある。これら全ての分解反応、およびそれらの組み合わせは、ＰＴＨ生物活性の部分的または完全な喪失につながる。
【０００４】
副甲状腺ホルモンの商業的利用は、保存安定性および使用中の安定性（in-use stability）、ならびに調製および再構成の容易さにおいて、許容可能な製剤を必要とする。副甲状腺ホルモンはタンパク質であり、従来の低分子量薬よりもはるかに不安定であるため、副甲状腺ホルモンの製剤は、製薬業界で通常は直面しない課題を提示する。
【０００５】
全長ｒｈＰＴＨ（１−８４）は、副甲状腺機能低下症の安全かつ効果的な治療薬として最近承認された（Ｓｈｉｒｅ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによりＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）／ＮＡＴＰＡＲ（登録商標）のブランド名で販売されている）。これは副甲状腺機能低下症の最初の特異的なホルモン補充療法であり、カルシウムおよびビタミンＤによる治療の補助療法として服用する１日１回の皮下注射製剤である。ＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）は現在、さまざまな用量強度で無菌の凍結乾燥粉末および希釈剤を含む複数回投与用のデュアルチャンバーガラスカートリッジとして供給されている。無菌凍結乾燥粉末は、用量強度に応じて、０．４０ｍｇ、０．８０ｍｇ、１．２１ｍｇ、または１．６１ｍｇの副甲状腺ホルモン、ならびに４．５ｍｇの塩化ナトリウム、３０ｍｇのマンニトール、および１．２６ｍｇのクエン酸一水和物を含む。滅菌希釈剤の重量は１．１３ｇであり、希釈剤は、ｍ−クレゾールの３．２ｍｇ／ｍＬ水溶液を含む。再構成すると、各用量は、ｐＨ５〜６のｒｈＰＴＨ（１−８４）の溶液で構成される。
【０００６】
使い捨てのＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）薬物カートリッジは、製品の再構成のための再利用可能な混合器、および薬物送達のための再利用可能なＱ−Ｃｌｉｑペンを用いて使用するように設計されている。Ｑ−Ｃｌｉｑペンは、７１．４μＬの固定体積用量を供給する。Ｑ−Ｃｌｉｑペンを使用して、各ＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）デュアルチャンバーカートリッジは、１４回分のＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）を供給する。
【０００７】
特定の状況下では、再構成されたＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）溶液が使用中期間（in-use period）の間にタンパク質粒子を形成する場合があることが観察されている。したがって、通常の処理条件、製品の有効期間および使用中寿命（in-use life）の間に直面する物理的および化学的ストレスに対するＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）製剤のより高い堅牢性が望まれる。
【０００８】
したがって、全長ｒｈＰＴＨ（１−８４）を含む改善されたＰＴＨ製剤、特に、ＰＴＨの物理的および化学的分解を防止し、改善された使用中の安定性を有し、さらには調製、再構成および使用が容易である製剤が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明のさまざまな非限定的な態様および実施形態を以下に説明する。
【００１０】
一態様では、組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））を含む安定な液体医薬製剤が提供される。この製剤は、粉末を再構成するステップなしで、注射用液剤として直接使用するために設計されている。一実施形態では、医薬製剤は、
（ａ）治療有効量の組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）界面活性剤；
（ｃ）等張化剤；
（ｄ）抗酸化剤；
（ｅ）防腐剤；
（ｆ）薬学的に許容されるバッファー；および
（ｇ）水
を含み、前記医薬製剤は、注射用液剤として製剤化され、その製剤は、少なくとも４８時間、物理的および化学的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００１１】
一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７２時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも９６時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも１４日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも２１日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００１２】
一実施形態では、界面活性剤はポロキサマーである。一実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一実施形態では、界面活性剤は、製剤の約０．０３〜約３ｗ／ｖ％で存在するポロキサマー１８８である。
【００１３】
一実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウム、スクロース、およびグリセロール、あるいはそれらの組み合わせから選択される。一実施形態では、等張化剤は、製剤の約０．２〜約２０ｗ／ｖ％で存在する塩化ナトリウムである。一実施形態では、等張化剤は、製剤の約０．２〜約２０ｗ／ｖ％で存在するスクロースである。一実施形態では、等張化剤は、製剤の約０．２〜約２０ｗ／ｖ％で存在するグリセロールである。
【００１４】
一実施形態では、防腐剤は、製剤の約０．０３〜約３ｗ／ｖ％で存在するｍ−クレゾールである。一実施形態では、防腐剤は、製剤の約０．３ｗ／ｖ％で存在するｍ−クレゾールである。
【００１５】
一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーは、酢酸バッファー、リン酸バッファー、Ｌ−ヒスチジンバッファー、またはコハク酸バッファーである。一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーは、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭの濃度で存在する。
【００１６】
一実施形態では、抗酸化剤はメチオニンであり、それは、製剤の約０．０１５〜約１．５０ｗ／ｖ％の濃度で存在する。一実施形態では、抗酸化剤は、約０．１５ｗ／ｖ％または１０ｍＭで存在するメチオニンである。
【００１７】
一実施形態では、医薬製剤は、約３．８〜約６．２、または約５．５のｐＨを有する。
【００１８】
一実施形態では、医薬製剤は、単回投与用バイアル、複数回投与用バイアル、カートリッジ、プレフィルドシリンジ、自動注射器、または注射ペン内にある。
【００１９】
一実施形態では、医薬製剤は、
（ａ）約０．２〜約２．０ｍｇ／ｍＬの組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）約０．０３〜約３．０ｗ／ｖ％の界面活性剤；
（ｃ）約０．２〜約２０ｗ／ｖ％の等張化剤；
（ｄ）約０．０１５〜約１．５０ｗ／ｖ％の抗酸化剤；
（ｅ）約０．０３〜約３％の防腐剤；
（ｆ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭの薬学的に許容されるバッファー、および
（ｇ）水、
を含み、前記医薬製剤は、注射用液剤として製剤化され、その製剤は、少なくとも４８時間、物理的および化学的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００２０】
一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７２時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも９６時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも１４日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも２１日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００２１】
別の態様では、組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））を含む医薬製剤は、注射前に再構成される凍結乾燥粉末として提供される。一実施形態では、医薬製剤は、
（ａ）治療有効量の組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）増量剤（bulking agent）；
（ｃ）凍結保護剤（cryoprotectant）；および
（ｄ）薬学的に許容されるバッファー
を含み、前記医薬製剤は、注射前に再構成される凍結乾燥粉末として製剤化され、その製剤は、再構成後少なくとも４８時間、物理的および化学的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００２２】
一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７２時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも９６時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも１４日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも２１日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００２３】
一実施形態では、増量剤はマンニトールである。一実施形態では、増量剤は、製剤の約０．３〜約３０ｗ／ｖ％で存在するマンニトールである。
【００２４】
一実施形態では、凍結保護剤はスクロースである。一実施形態では、凍結保護剤は、製剤の約０．２〜約２０ｗ／ｖ％で存在するスクロースである。
【００２５】
一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーは、リン酸バッファー、Ｌ−ヒスチジンバッファー、またはコハク酸バッファーである。一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーは、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーは、Ｌ−ヒスチジンバッファーである。一実施形態では、薬学的に許容されるバッファーはコハク酸バッファーである。
【００２６】
一実施形態では、医薬製剤は、抗酸化剤をさらに含む。一実施形態では、抗酸化剤はメチオニンである。一実施形態では、抗酸化剤はメチオニンであり、それは、製剤の約０．０１５〜約１．５０ｗ／ｖ％の濃度で存在する。一実施形態では、抗酸化剤は、約０．１５ｗ／ｖ％または１０ｍＭで存在するメチオニンである。
【００２７】
一実施形態では、医薬製剤は、界面活性剤をさらに含む。一実施形態では、界面活性剤はポロキサマーである。一実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。一実施形態では、界面活性剤は、製剤の約０．０３〜約３ｗ／ｖ％で存在するポロキサマー１８８である。
【００２８】
一実施形態では、医薬製剤は、約３．８〜約６．２、または約４．３、または約５．５のｐＨを有する。
【００２９】
一実施形態では、医薬製剤は、
（ａ）約０．０２〜約２．０ｍｇ／ｍＬの組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ（１−８４））；
（ｂ）約０．３〜約３０ｗ／ｖ％の増量剤；
（ｃ）約０．２〜約２０ｗ／ｖ％の凍結保護剤；および
（ｄ）約５ｍＭ〜約５０ｍＭの薬学的に許容されるバッファー
を含み、前記医薬製剤は、注射前に再構成される凍結乾燥粉末として製剤化され、その製剤は、再構成後少なくとも４８時間、物理的および化学的に安定であり、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００３０】
一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７２時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも９６時間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも７日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも１４日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。一実施形態では、医薬製剤は、少なくとも２１日間、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００３１】
本発明のこれらおよび他の態様は、添付の特許請求の範囲を含めて、本発明の以下の詳細な説明を読んだ後、当業者に明らかになるであろう。
【００３２】
特許または出願ファイルは、少なくとも１枚のカラーで作成した図面を含む。カラー図面を含むこの特許または特許出願の公報のコピーは、申請および必要な料金の支払いによって官庁から提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】参照懸濁液（ＲＳ）の乳白光（opalescence）の比較を示す。
【図２】周囲条件で２Ｒガラスバイアル内において攪拌（２２０回転／分（ｒｐｍ）、オービタル振とう）した際の、さまざまなバッファー中に配合されたｒｈＰＴＨの外観を示す。
【図３Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図３Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図３Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図４Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図４Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図４Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図５Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図５Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図５Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図６Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図６Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図６Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図７Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（（１−３０）＋（１−３３））不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図７Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（（１−３０）＋（１−３３））不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図７Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（（１−３０）＋（１−３３））不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図８Ａ】４０℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（１−４５）フラグメント不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図８Ｂ】２５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（１−４５）フラグメント不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図８Ｃ】５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨ（１−４５）フラグメント不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図９Ａ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを４０℃で保管したときのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図９Ｂ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを２５℃で保管したときのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図９Ｃ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを５℃で保管したときのｒｈＰＴＨのメインピークのＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１０Ａ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを４０℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１０Ｂ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを２５℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１０Ｃ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを５℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１１Ａ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを４０℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１１Ｂ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを２５℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１１Ｃ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを５℃で保管したときの酸化Ｍｅｔ１８  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１２Ａ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを４０℃で保管したときのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１２Ｂ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを２５℃で保管したときのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１２Ｃ】さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合されたサンプルを５℃で保管したときのＩｓｏＡｓｐ３３  ｒｈＰＴＨ不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。
【図１３】本開示のさまざまな実施形態によるｒｈＰＴＨ製剤の凍結乾燥ケーキの外観を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明の詳細な実施形態が本明細書に開示されている；しかしながら、開示される実施形態は、さまざまな形態で具体化され得る本発明の単なる例示であることを理解されたい。さらに、本発明のさまざまな実施形態に関連して与えられた実施例のそれぞれは、例示的なものであり、限定的なものではないことが意図されている。したがって、本明細書に開示される特定の構造的および機能的詳細は、限定的であると解釈されるべきではなく、単に本発明をさまざまに使用することを当業者に教示すための代表的な基礎として解釈されるべきである。
【００３５】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００３６】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数形の参照を含む。したがって、例えば、「方法」への言及は、１つまたは複数の方法、および／または本明細書に記載のおよび／または本開示を読むと当業者に明らかになるであろうタイプのステップを含む。
【００３７】
この出願使用される場合、「約」および「おおよそ」という用語は同等のものとして使用される。本出願で使用される任意の数字は、約／おおよその有無にかかわらず、関連技術の当業者によって認められる通常の変動をカバーすることが意図されている。本明細書で使用される「おおよそ」または「約」という用語は、１つまたは複数の目的値に適用される場合、記載された参照値と同様の値を指す。ある実施形態では、「おおよそ」または「約」という用語は、そうでないことが明記されていない限り、または文脈からそうでないことが明らかでない限り、記載された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％以下のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の範囲内にある数値範囲を指す（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「担体」および「希釈剤」という用語は、医薬製剤の調製に有用な薬学的に許容される（例えば、ヒトへの投与に対して安全かつ無毒の）担体または希釈物質を指す。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。
【００３９】
状況、障害または状態を「処置する（treat）」または「処置（treatment）」という用語には、（１）状況、障害または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい可能性があるが、その状況、障害または状態の臨床症状または無症候性症状をまだ経験または表していない対象において、進行している状況、障害または状態の少なくとも１つの臨床症状または無症候性症状の発生および／または出現の可能性を防止、遅延または低減すること；（２）状況、障害または状態を抑制すること、すなわち、疾患またはその再発、あるいはそれらの少なくとも１つの臨床症状または無症候性症状の進行を阻止、低減または遅延させること；および（３）疾患を緩和すること、すなわち、状況、障害または状態、あるいは少なくとも１つのその臨床症状または無症候性症状の退行を引き起こすこと；が含まれる。処置される対象への利益は、統計的に有意であるか、あるいは少なくとも対象または臨床医に感じられるかのいずれかである。
【００４０】
本明細書で使用される「対象」または「患者」または「個体」または「動物」は、ヒト、獣医動物（例えば、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタなど）、および疾患の実験動物モデル（例えば、マウス、ラット）を指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用量または量に適用される「有効」という用語は、それを必要とする対象に投与したときに所望の活性をもたらすのに十分な化合物または医薬組成物の量を指す。有効成分の組み合わせが投与される場合、組み合わせの有効量は、個別に投与された場合に有効である各成分の量を含む場合も含まない場合もあることに留意されたい。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、および全身状態、治療される状態の重症度、使用される特定の薬物、投与方法などに応じて、対象ごとに異なる。
【００４２】
本発明の組成物に関連して使用される「薬学的に許容される」という句は、生理学的に許容可能であり、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されたときに通常は有害な反応を生じないそのような組成物の分子実体および他の成分を指す。好ましくは、本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、哺乳動物、特にヒトで使用するために、米国連邦政府または州政府の規制機関によって承認されているか、あるいは米国薬局方または他の一般に認められている薬局方に掲載されていることを意味する。
【００４３】
本発明による組成物は、市販のｒｈＰＴＨ（１−８４）製剤と比較して、ｒｈＰＴＨ（１−８４）の使用中の安定性が向上している。本明細書で使用される「使用中（in-use）」という用語は、複数回投与用容器が開封された後、許容される仕様内の品質を維持しながら、複数回投与製剤（multidose formulation）を使用できる期間を指す。したがって、「使用中の安定性」とは、使用中期間（in-use period）の間の複数回投与製剤の安定性を指す。本発明のいくつかの実施形態では、使用中期間は７日である。本発明のいくつかの実施形態では、使用中期間は１４日である。本発明のいくつかの実施形態では、使用中期間は２１日である。本発明のいくつかの実施形態では、使用中期間は１ヶ月である。
【００４４】
ｒｈＰＴＨ（１−８４）
本明細書に開示される組成物は、組換え的に、ペプチド合成によって、またはヒトの体液からの抽出によって得られた、全長８４アミノ酸形態のヒト副甲状腺ホルモンを有効成分として組み込む。本明細書では、組換えヒト型ＰＴＨは、ｒｈＰＴＨ（１−８４）と略され、これは、Kimura et al, Biochem Biophys Res Comm, 114 (2):493により報告されたアミノ酸配列を有する。
【００４５】
全長ヒト型ＰＴＨの代替として、本発明の組成物は、Kimmel et al, Endocrinology, 1993, 32(4):1577（参照により本明細書に組み込まれる）によって報告された骨粗鬆症の卵巣摘出ラットモデルにおいて特定されたようにヒトＰＴＨ活性を有する、ヒトＰＴＨの相同体（ホモログ）、フラグメント、または変異体を組み込むことができる。
【００４６】
一態様では、本発明の副甲状腺ホルモン組成物は、再構成、希釈または混合のいずれも必要としない注射用の水性ホルモン溶液として、単一単位または複数単位の液体剤形（液剤）で提供される。
【００４７】
一態様では、本発明の副甲状腺ホルモン組成物は、３重量％以下の水を含む凍結乾燥粉末剤形で提供され、それは、選択された副甲状腺ホルモン、不揮発性緩衝剤、および賦形剤を混合することによって調製される無菌の水性ホルモン溶液の凍結乾燥によりもたらされる。
【００４８】
本発明のＰＴＨ組成物は、治療有効量でＰＴＨを組み込んでおり、この用語「治療有効量」は、治療的にまたは医学的診断において有用な量に関して使用される。調製物に組み込まれる副甲状腺ホルモンの特定量は、選択されたＰＴＨのタイプおよび調製物の意図された最終用途に基づいて事前に決定することができる。一態様では、組成物は、治療目的、特に骨粗鬆症および関連する骨障害、ならびに副甲状腺機能低下症の処置のために利用される。一態様では、そのような治療は、指定された処置レジメンを反映する単位用量での注射（例えば皮下注射）による、液体および／または再構成された凍結乾燥組成物の投与を伴う。一実施形態では、処置レジメンは、例えば、約０．３ｍＬ〜約２．３ｍＬ、または約０．５ｍＬ〜約２ｍＬ、または約１ｍＬ〜約１．７５ｍＬ、または約１．２ｍＬ、または約１．３ｍＬ、または約１．４ｍＬ、または約１．５ｍＬ、または約１．６ｍＬ、または約１．７ｍＬの注射容量で、患者あたり約０．０１ｍｇ  ＰＴＨ／ｍＬの注射溶液から５ｍｇ  ＰＴＨ／ｍＬの注射溶液の範囲内で組換えヒトＰＴＨ（１−８４）を投与することを含んでいてよい。したがって、一実施形態では、精製および滅菌濾過されたＰＴＨを、緩衝剤および賦形剤とともに組み込んで、０．０１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜約２．５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２５ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２５ｍｇ／ｍＬ〜約０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度範囲でＰＴＨを含む水溶液を形成する。一実施形態では、ＰＴＨを緩衝剤および賦形剤とともに組み込んで、ある濃度範囲で、あるいは約０．０２５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０５ｍｇ／ｍＬ、または約０．０７５ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＴＨを含む水溶液を形成する。
【００４９】
必要に応じて、ＰＴＨ（１−８４）の変異体およびフラグメントなどの、ＰＴＨの実質的に等効力形態のモル当量を、ヒトＰＴＨ（１−８４）の代わりに同様に組み込むことができる。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤および／または担体をさらに含む。適切な賦形剤の例は、Pramanick, S. et al, Excipient Selection in Parenteral Formulation Development, Pharma Times, 2013, 45, 3, 65-77に提供されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。適切な賦形剤の非限定的な例を以下に示す。
【００５１】
界面活性剤
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製剤は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、ポリエチレングリコール、セチルヒドロキシエチルセルロース、疎水的に修飾されたヒドロキシエチルセルロース、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル、ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル、グルコシドアルキルエーテル、ポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル、グリセロールアルキルエステル、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）、コカミドモノエタノールアミン（ＭＥＡ）、コカミドジエタノールアミン（ＤＥＡ）、ドデシルジメチルアミンオキシド、またはそれらの任意の組み合わせから選択され得る。一実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、およびポリエチレングリコール、ならびにそれらの組み合わせから選択される。
【００５２】
一実施形態では、界面活性剤はポロキサマーである。一実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８である。
【００５３】
界面活性剤は、約０．０１重量％〜約２０重量％、約０．０１％〜約１５％、約０．０１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４％、約０．０３％〜約３％、約０．０３％〜約１％、約０．０５％〜約０．５％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約２０％、約０．１％〜約１０％、約０．１％〜約５％、約０．１％〜約２．５％、０．１％〜約１％、または約０．１％〜約０．７％、または約０．１％、または約０．２％、または約０．３％、または約０．４％、または約０．５％の濃度で存在し得る。一実施形態では、界面活性剤はポロキサマー１８８であり、それは組成物の約０．３ｗ／ｖ％で存在する。
【００５４】
等張化剤
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、等張化剤をさらに含む。張度は、半透膜で分離された２つの溶液の有効浸透圧勾配（２つの溶液の水ポテンシャルによって定義される）の尺度である。張度は、外部溶液に浸された細胞の反応を説明するときに一般的に使用される。言い換えれば、張度は、拡散の方向と程度を決定する溶液の相対濃度である。体液は通常、０．９％塩化ナトリウム溶液の浸透圧に相当する浸透圧を有する。組成物（例えば、溶液またはゲル）は、その張度が０．９％塩化ナトリウム溶液の張度（すなわち、２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ）とほぼ等しい場合に等張であると見なされる。塩の大きさ（magnitude）が組成物と生理的溶液とで等しい場合、組成物は体液溶液と等張である。生理的溶液では、水は膜を横切って移動するが塩は元の溶液にとどまることによって、張度平衡に達する。細胞が溶液と接触しているときに、細胞での水の正味の増減や細胞内の他の変化がない場合、その溶液は生細胞と等張である。
【００５５】
ある実施形態において、本明細書に開示される組成物で使用される等張化剤は、電解質、単糖または二糖、無機塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、塩化マグネシウム）、ポリオール、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、等張化剤は、グルコース、スクロース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、塩化マグネシウム、デキストロース、マンニトール、グリセロール、またはそれらの任意の組み合わせである。一実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウム、スクロース、およびグリセロール、あるいはそれらの組み合わせから選択される。一実施形態では、等張化剤はスクロースである。一実施形態では、等張化剤は塩化ナトリウムである。一実施形態では、等張化剤はグリセロールである。
【００５６】
等張化剤は、等張条件を達成するために必要な任意の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、等張化剤は、組成物の約０．０１％〜約５０％、約０．０１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０１％〜約２０％、約０．０２％〜約２０％、約０．０３％〜約２０％、約０．０５％〜約１５％、約０．１％〜約１０％、約０．１％〜約２０％、約０．１％〜約１５％、約０．１％〜約９％、約０．２％〜約１０％、０．５％〜約１０％、または約１％〜約１０％、または約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％（ｗ／ｖ）の濃度で存在し得る。一実施形態では、等張化剤はスクロースであり、それは、組成物の約０．２％〜約２０％、または組成物の約８．５％（ｗ／ｖ）で存在する。一実施形態では、等張化剤はグリセロールであり、それは、組成物の約０．２％〜約２０％、または組成物の約２．３％（ｗ／ｖ）で存在する。一実施形態では、等張化剤は塩化ナトリウムであり、それは、組成物の約０．２％〜約２０％、または組成物の約０．８％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００５７】
防腐剤
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は無菌であり、防腐剤を含まない。他の実施形態では、本開示の組成物は、任意選択で防腐剤を含む。ある実施形態では、防腐剤はパラベンフリーの（パラベンを含まない）防腐剤である。パラベンは、一連のパラヒドロキシ安息香酸塩またはパラヒドロキシ安息香酸のエステルであり、サイトカインの放出および刺激を引き起こし、またいくつかの種類のがんに関連していることが知られている。パラベンの例には、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、ヘプチルパラベン、イソブチルパラベン、イソプロピルパラベン、ベンジルパラベン、およびそれらのナトリウム塩が含まれる。
【００５８】
例示的なパラベンフリーの防腐剤には、３−メチルフェノール（メタクレゾールまたはｍ−クレゾール）などのメチルフェノール（クレゾール）、フェノール、フェネチルアルコール、カプリリルグリコール、フェノキシエタノール、ソルビン酸塩、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸ナトリウム、ソルビン酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸、アセマンナン、オレウロペイン、カルバクロール、クランベリー抽出物、グルコノラクトン、緑茶抽出物、ヒマワリ種子油（Helianthus annuus seed oil）、乳酸桿菌発酵液（Lactobacillus ferment）、ウスニアバルバタエキス（Usnea barbata extract）、ポリアミノプロピルビグアニド、パルミチン酸ポリグリセリル−３、カプリル酸ポリグリセリル−６、ザクロ抽出物、アメリカヤマナラシ樹皮エキス（Populus tremuloides bark extract）、レスベラトロール、ローズマリー葉エキス（Rosmarinus officinalis leaf extract）、ベンジルアルコール、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【００５９】
一実施形態では、防腐剤は、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、安息香酸ナトリウム、およびプロピルパラベン、ならびにそれらの組み合わせから選択される。一実施形態では、防腐剤はｍ−クレゾールを含む。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、組成物の約０．００５重量％〜約１０重量％、約０．００５％〜約５％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４％、約０．０３％〜約３％、約０．０５％〜約２％、約０．１％〜約１％、約０．２％〜約０．５％、約０．０１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０１％〜約２．５％、約０．０１％〜約１％、約０．０１％〜約０．５％、約０．１％〜約１０％、約０．１％〜約５％、約０．１％〜約２．５％、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．５％、または約０．１％、または約０．２％、または約０．３％、または約０．４％、または約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で防腐剤を含み得る。一実施形態では、防腐剤は、組成物の約０．０３％〜約３％で存在するｍ−クレゾールである。一実施形態では、ｍ−クレゾールは、組成物の０．３％で存在する。
【００６１】
薬学的に許容されるバッファー
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、緩衝剤を組み込むことによって、薬学的に許容されるバッファーを含み得る。一実施形態では、本組成物に組み込まれる緩衝剤は、生理学的に許容される範囲内のｐＨに調製物を緩衝することができるものから選択される。生理学的に許容されるｐＨは、製剤が投与されたときに患者の不快感を全く生じさせないまたは最小限に抑えるものであり、したがって、投与方法に応じて変化し得る。ストック注入溶液への溶解などによって投与前に希釈される調製物の場合、調製物自体のｐＨは、例えば、約ｐＨ３〜約ｐＨ９まで大きく変動し得る。再構成の直後に調製物を投与すべき場合、ＰＴＨ調製物は３．５〜７．５のｐＨ範囲内に緩衝される。したがって、適切なバッファーは、調製物のｐＨを目的ｐＨ範囲内に緩衝することができる薬学的に許容される薬剤であり、酢酸バッファー、リン酸バッファー、Ｌ−ヒスチジンバッファー、コハク酸バッファーが含まれる。
【００６２】
薬学的に許容される任意のバッファーが本発明による製剤に適している可能性があるが、驚くべきことに、緩衝剤の性質がｒｈＰＴＨ溶液の安定性に大きな影響を及ぼすことが見出された。
【００６３】
例えば、現在ＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）で使用されているクエン酸バッファーは、周囲条件でわずか２４時間の攪拌でｒｈＰＴＨタンパク質粒子の形成をもたらす。しかしながら、酢酸バッファー、リン酸バッファー、およびＬ−ヒスチジンバッファーで調製したｒｈＰＴＨ溶液は、２４時間攪拌しても、無色透明でかつ目に見える粒子がないままである。
【００６４】
本発明による使用中安定な副甲状腺ホルモンの製剤を提供するために、選択された緩衝剤を組み込んで３．５〜６．５の範囲内の最終ｐＨをもたらし、バッファーは約５ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で存在する。本発明のいくつかの実施形態では、緩衝剤によってもたらされるｐＨは３．８〜６．２の範囲であり、バッファー濃度は約１０ｍＭ〜約３０ｍＭである。一実施形態では、製剤のｐＨは５．５である。一実施形態では、製剤のｐＨは４．３である。一実施形態では、バッファーは、約２０ｍＭの濃度で存在する酢酸バッファーである。一実施形態では、バッファーは、約２０ｍＭの濃度で存在するＬ−ヒスチジンバッファーである。一実施形態では、バッファーは、約２０ｍＭの濃度で存在するコハク酸バッファーである。
【００６５】
抗酸化剤
いくつかの実施形態において、本発明の製剤はさらに、使用中期間の間ｒｈＰＴＨタンパク質に酸化的安定性を提供するために、１つまたは複数の抗酸化剤を含み得る。適切な抗酸化剤には、アセトン亜硫酸水素ナトリウム付加物（acetone sodium bisulfite）、アルゴン、パルミチン酸アスコルビル、アスコルビン酸（塩／酸）、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、システイン／システイナート（cysteinate）ＨＣｌ、亜ジチオン酸ナトリウム（ハイドロサルファイトＮａ、スルホキシル酸Ｎａ）、ゲンチジン酸、ゲンチジン酸エタノールアミン、グルタミン酸一ナトリウム、グルタチオン、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム（ピロ亜硫酸カリウム）、メチオニン、モノチオグリセロール（チオグリセロール）、窒素、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、アルファ（α）−トコフェロール、α−トコフェロールコハク酸エステル（alpha tocopherol hydrogen succinate）、チオグリコール酸ナトリウム、またはそれらの２つ以上の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、抗酸化剤はメチオニンであり得る。
【００６６】
抗酸化剤は、製剤の酸化安定性を達成するために必要な任意の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、抗酸化剤は、約０．０００１重量％〜約２０重量％、約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０１％〜約２％、約０．０２％〜約２％、約０．０３％〜約２％、約０．０５％〜約１．５％、約０．１％〜約１％（ｗ／ｖ）の濃度で存在し得る。一実施形態では、抗酸化剤は、組成物の約０．０１５％〜約１．５％の量で存在するメチオニンである。一実施形態では、抗酸化剤は、組成物の約０．１５ｗ／ｖ％の量で存在するメチオニンである。
【００６７】
新規な凍結乾燥製剤
一態様では、本発明の副甲状腺ホルモン組成物は、３重量％以下の水を含む凍結乾燥粉末形態で提供され、これは、選択された副甲状腺ホルモン、不揮発性緩衝剤、および賦形剤を混合することによって調製された滅菌ホルモン水溶液の凍結乾燥によりもたらされる。
【００６８】
本発明の一実施形態では、凍結乾燥組成物は、約１〜１．５ｍＬ（０．７〜１．８ｍＬ）の再構成ビヒクル中に再構成したときに約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約０．１５ｍｇ／ｍＬの組換えヒトＰＴＨ（１−８４）の単位用量をもたらす形態で提供され、したがって、バイアルには、その後の凍結乾燥のために、約１〜１．５ｍＬの水性ＰＴＨ調製物が充填される。
【００６９】
本発明の一実施形態では、凍結乾燥に供されるＰＴＨ調製物は、２５〜２５０μｇ／ｍＬのヒトＰＴＨ（１−８４）、約０．３〜約３０ｗ／ｖ％の増量剤、約０．２〜約２０ｗ／ｖ％の等張化剤、および滅菌水中に再構成したときに調製物を３．５〜６．５の範囲内のｐＨに緩衝することができる量の生理学的に許容される緩衝剤を含む。本発明のある実施形態では、緩衝剤は、ｐＨを５．５±０．３、または４．３±０．３に緩衝するのに十分な量で組み込まれる。
【００７０】
増量剤
いくつかの実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、最適なケーキ構造および外観のための１つまたは複数の増量剤をさらに含み得る。適切となり得る増量剤には、適合性のある炭水化物、ポリペプチド、アミノ酸またはそれらの組み合わせが含まれる。適切な炭水化物には、ガラクトース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、トレハロースなどの二糖類；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン；ラフィノース、マルトデキストリン、デキストランなどの多糖類；およびマンニトール、キシリトールなどのアルジトールが含まれる。適切なポリペプチドには、アスパルテームが含まれる。アミノ酸には、アラニンおよびグリシンが含まれる。一実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、マンニトール、グリシン、ポリ（エチレングリコール）、硫酸アンモニウム、スクロース、トレハロース、およびそれらの組み合わせから選択される１つまたは複数の増量剤を含み得る。一実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、マンニトールを含み得る。
【００７１】
増量剤は、凍結乾燥粉末の最適な構造および外観を達成するために必要な任意の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態では、増量剤は、組成物の約０．０１重量％〜約５０重量％、約０．０１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０１％〜約２０％、約０．０２％〜約２０％、約０．０３％〜約２０％、約０．０５％〜約１５％、約０．１％〜約１０％、約０．１％〜約２０％、約０．１％〜約１５％、約０．１％〜約９％、約０．２％〜約１０％、０．５％〜約１０％、または約１％〜約１０％、または約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％（ｗ／ｖ）の濃度で存在し得る。一実施形態では、増量剤はマンニトールであり、それは、組成物の約０．２％〜約２０％、または組成物の約２％〜約８％、または組成物の約３％、または組成の約４％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００７２】
凍結保護剤
いくつかの実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、凍結乾燥プロセスおよび製品の保管中にｒｈＰＴＨタンパク質に安定性を提供するために、１つまたは複数の凍結保護剤をさらに含み得る。適切となり得る凍結保護剤には、糖およびポリオールなどの適合性のある炭水化物が含まれる。適切な炭水化物には、グルコース、スクロース、トレハロース、エチレングリコール、プロピレングリコール、２−メチル−２，４−ペンタグリコール、およびグリセロールが含まれ得る。一実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、スクロース、グリシン、マンニトール、二糖類、ポリ（エチレングリコール）およびそれらの組み合わせから選択される１つまたは複数の凍結保護剤を含み得る。一実施形態では、新規な凍結乾燥製剤は、スクロースを含み得る。
【００７３】
凍結保護剤は、凍結乾燥粉末の安定性を達成するために必要な任意の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、組成物の約０．０１重量％〜約５０重量％、約０．０１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０１％〜約２０％、約０．０２％〜約２０％、約０．０３％〜約２０％、約０．０５％〜約１５％、約０．１％〜約１０％、約０．１％〜約２０％、約０．１％〜約１５％、約０．１％〜約９％、約０．２％〜約１０％、０．５％〜約１０％、または約１％〜約１０％、または約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％（ｗ／ｖ）の濃度で存在し得る。一実施形態では、凍結保護剤はスクロースであり、それは、組成物の約０．２％〜約２０％、または組成物の約１％〜約８％、または組成物の約２％、または組成の約３％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００７４】
剤形
組成物は、例えばペンの形態で、単回用量または複数回用量の注射可能形態で提供され得る。組成物は、すでに述べたように、活性成分と担体（１つまたは複数の追加の成分からなり得る）を接触させるステップを含む任意の適切な製薬方法によって調製することができる。
【００７５】
ある実施形態において、医薬組成物は、適用のためのデバイスと共に（例えば、注射器、注射ペン、または自動注射器、例えばＱ−ｃｌｉｑペンと共に）提供され得る。そのようなデバイスは、医薬組成物と別個に提供してよく、あるいは医薬組成物を事前に充填してもよい。
【実施例】
【００７６】
以下の例は、この記載の具体的な態様を示す。これらの例は、単に実施形態およびそれらのさまざまな態様の具体的な理解および実施を提供するものであるから、限定的であると解釈されるべきではない。
【００７７】
製剤は、以下の方法で調製した：当業者に一般に知られている透析法を使用して、ｒｈＰＴＨ（１−８４）原薬（医薬品有効成分）をそれぞれのベース製剤バッファーに交換した。必要に応じて、酸性または塩基性ストック溶液を使用して、溶液のｐＨ調整をさらに行った。賦形剤のストック溶液は、ベースバッファーで別個に調製し、透析したペプチド溶液と混合して、所望のペプチドおよび賦形剤濃度を有する最終製剤を作成した。製剤を滅菌濾過し、ガラスバイアルまたはガラスカートリッジのいずれかに充填した。液体製剤を封栓およびクリンプした後、保管した。凍結乾燥用の製剤に、凍結、アニーリング、一次乾燥および二次乾燥ステップとそれに続く封栓およびクリンプからなる、事前にプログラムされた凍結乾燥サイクルを施した。
【００７８】
実施例１：ｒｈＰＴＨの新規液体製剤の組成
以下の表１は、本発明によるｒｈＰＴＨの新規液体製剤の例示的な実施形態を要約する。表１に示されるように、液体製剤＃１〜３は以下の組成を有する。
【００７９】
液体製剤＃１
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  酢酸バッファー；
１０ｍＭ  メチオニン；
１３０ｍＭ  塩化ナトリウム；
０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、および
０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール。
【００８０】
液体製剤＃２
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  酢酸バッファー；
１０ｍＭ  メチオニン；
８．５ｗ／ｖ％  スクロース；
０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、および
０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール。
【００８１】
液体製剤＃３
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  酢酸バッファー；
１０ｍＭ  メチオニン；
２．３ｖ／ｖ％  グリセロール；
０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、および
０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール。
【００８２】
製剤＃１〜＃３のｐＨは５．５である。
【００８３】
【表１】
2021532110.tif 000003
【００８４】
実施例２：ｒｈＰＴＨの新規凍結乾燥粉末製剤の組成
以下の表２は、本発明によるｒｈＰＴＨの新規凍結乾燥粉末製剤の例示的な実施形態を要約する。表２に示されるように、凍結乾燥製剤＃１〜＃３は以下の組成を有する。
【００８５】
凍結乾燥製剤＃１
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンバッファー；
４ｗ／ｖ％  マンニトール、および
２％  スクロース。
【００８６】
凍結乾燥製剤＃２
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジンバッファー；
１０ｍＭ  メチオニン；
４ｗ／ｖ％  マンニトール；
２ｗ／ｖ％  スクロース、および
０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８。
【００８７】
凍結乾燥製剤＃３
水中、
０．３５〜１．４０ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ；
２０ｍＭ  コハク酸バッファー；
１０ｍＭ  メチオニン；
３ｗ／ｖ％  マンニトール、および
３ｗ／ｖ％  スクロース。
【００８８】
凍結乾燥製剤＃１および＃２のｐＨは５．５である。凍結乾燥製剤＃３のｐＨは４．３である。
【００８９】
【表２】
2021532110.tif 000004
【００９０】
実施例３：さまざまなバッファー中に配合されたｒｈＰＴＨの攪拌試験
実際の医薬品の保管容器／クロージャーあるいは小規模の代表的な一次容器での攪拌（振とう）は、タンパク質医薬品の開発において適用されることが多く、現実のプロセスでも生じる物理的ストレス条件下での安定性の試験としての役割を果たす。これらの「過酷試験（stress test）」の全体的な目的は、そうしないとはるかに遅い速度で生じ得るタンパク質の分解／凝集を加速させ、それによって実験スループットを高めて安定性の重要なプロセスパラメータの決定をスピードアップすることである。結果は、製剤開発の重要なパラメータを決定するのに役立つ。
【００９１】
以下の表３、および図２は、さまざまなバッファーを用いて配合されたｒｈＰＴＨの攪拌試験からの外観データを示す。２Ｒガラスバイアルにおいて、塩化ナトリウム（１４０ｍＭ）を含むさまざまなバッファー（１０ｍＭ）中にｒｈＰＴＨを配合した。攪拌試験は、２２０ｒｐｍでオービタルシェーカーを使用して、バイアルを水平位置に置き、周囲条件で少なくとも４８時間実施した。一定の攪拌間隔で、攪拌されたサンプルの外観を、例えば欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ５．０，２．２．１  「Ｃｌａｒｉｔｙ  ａｎｄ  Ｄｅｇｒｅｅ  ｏｆ  Ｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｌｉｑｕｉｄｓ」）に概説されている標準的な手順に従って、参照懸濁液（ＲＳ  Ｉ〜ＩＶ）および乳白光標準（Standard of Opalescence）（ＳＯＰ）と比較した。図１は、参照懸濁液ＲＳ  Ｉ〜ＩＶおよびＳＯＰの乳白光を示す。水（Ｗａｔｅｒ）を比較のためにおいた。図２は、さまざまなバッファー中に配合されたｒｈＰＴＨの懸濁液の外観を示す。
【００９２】
【表３】
2021532110.tif 000005
【００９３】
表３および図２に示されるように、酢酸バッファーは、攪拌によって誘発されるｒｈＰＴＨの粒子形成に対して最も優れた安定性を示し、続いてリン酸バッファー、その次がＬ−ヒスチジンバッファーである。３つのバッファーは全て、現在ＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）製剤で使用されているクエン酸バッファーよりも優れた安定性を示す。
【００９４】
実施例４：新規液体製剤におけるｒｈＰＴＨの攪拌試験
以下の表４は、本発明によるｒｈＰＴＨのさまざまな液体製剤の攪拌試験からの外観データを示す。液体製剤＃１〜＃３をデュアルチャンバーカートリッジ内で配合し、周囲条件で攪拌試験（２２０ｒｐｍ、オービタル振とう）を実施した。一定の攪拌間隔で、標準的な手順に従って、攪拌されたサンプルの外観を参照懸濁液（ＲＳ  Ｉ〜ＩＶ）および乳白光標準（ＳＯＰ）と比較した。市販のＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）製剤のデータも比較のために提供する。さまざまな時点での乳白光を表４に要約する。
【００９５】
【表４】
2021532110.tif 000006
【００９６】
表４に示されるように、３つの新規液体製剤＃１〜＃３は全て、少なくとも７２時間、透明で目に見える粒子がないままであった。対照的に、現在の市販の製剤は、わずか５時間の攪拌期間で早くもかなりの粒子の存在およびより高い乳白光を示した。
【００９７】
実施例５：新規凍結乾燥製剤におけるｒｈＰＴＨの攪拌試験
以下の表５は、本発明によるｒｈＰＴＨのさまざまな再構成された凍結乾燥製剤の攪拌試験からの外観データを示す。凍結乾燥製剤＃１〜＃３をデュアルチャンバーカートリッジ内で配合し、周囲条件で攪拌試験（２２０ｒｐｍ、オービタル振とう）を実施した。次に、一定の攪拌間隔で、標準的な手順に従って、攪拌されたサンプルの外観を参照懸濁液（ＲＳ  Ｉ〜ＩＶ）および乳白光標準（ＳＯＰ）と比較した。市販のＮＡＴＰＡＲＡ（登録商標）製剤のデータも比較のために提供する。さまざまな時点での乳白光を表５に要約する。
【００９８】
【表５】
2021532110.tif 000007
【００９９】
上記の実施例が示すように、新規凍結乾燥製剤は、ｒｈＰＴＨの物理的安定性を著しく向上させることが観察できる。上に示したように、ｒｈＰＴＨの新規製剤は、少なくとも２４時間、および／または少なくとも４８時間、および／または少なくとも７２時間、および／または少なくとも９０時間、無色透明であり、かつ目に見える粒子がないままである。
【０１００】
実施例６：液体および凍結乾燥製剤の使用中の安定性試験
以下の表６は、液体製剤＃２によって例示される本発明の実施形態による液体製剤、および凍結乾燥製剤＃２によって例示される本発明の実施形態によるｒｈＰＴＨの再構成された凍結乾燥製剤の使用中試験からの外観データを示す。
【０１０１】
【表６】
2021532110.tif 000008
【０１０２】
上記の表６が示すように、液体製剤＃２および凍結乾燥製剤＃２によって例示されるｒｈＰＴＨの新規な液体および凍結乾燥製剤は、少なくとも１日、または少なくとも７日、または少なくとも１４日、または少なくとも２１日の使用中期間の間、無色透明であり、かつ目に見える粒子がないままである。
【０１０３】
実施例７：最適な物理化学的安定性のためのｒｈＰＴＨの溶液ｐＨスクリーニング
０．５ｐＨ単位の間隔で３．５〜７．５の溶液ｐＨ範囲の１４０ｍＭ  塩化ナトリウムを含む１０ｍＭクエン酸バッファー中に、組換えヒト副甲状腺ホルモンを配合した。サンプルを２ｍＬのタイプＩホウケイ酸ガラスバイアルに分注し、５±３℃（５℃）、２５±２℃（２５℃）、および４０±２℃（４０℃）の温度条件で安定に置いた。予め定めた間隔で、サンプルを取り出し、外観を観察し、いくつかの変更を加えたクロマトグラフィーアッセイ（サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ））を適切に使用してｒｈＰＴＨの安定性を分析した。
【０１０４】
供給された原薬を解凍し、２ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）透析カセットにおいてそれぞれのｐＨバッファー溶液に対して透析した。透析は５±３℃で行われ、約２４時間にわたり少なくとも３サイクルのバッファー交換が含まれた。透析後、サンプルのｐＨを検査し、必要に応じて０．２Ｎ水酸化ナトリウムで調整した。Ａ２８０測定を実施し、０．５８４（ｍＬ．ｍｇ）−１ｃｍ−１の吸光係数を使用してｒｈＰＴＨの濃度を計算した。最終溶液の調製は層流フード内で無菌的に行った。各溶液ｐＨについて、それぞれのバッファーを希釈媒体として使用することによりｒｈＰＴＨを１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。調製したサンプルを０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターでろ過し、２ｍＬのタイプＩホウケイ酸ガラスバイアルに１．５ｍＬの容量で充填した後、封栓／クリンプを行った。
【０１０５】
ライトボックスにおいて溶液の外観について各バイアルを観察した。ベースラインサンプルを分けて、ポリプロピレンチューブに分注し、−８０℃で保存した。残りのバイアルは、５℃、２５℃、および４０℃でインキュベートした。予め定めた間隔で、サンプルバイアルを各インキュベーション条件から引き出し、外観を観察し、ポリプロピレンチューブに分注し、分析まで−８０℃で保存した。注入量と注入順序にいくつかの変更を加えたＳＥＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを含めて、Ｎａｔｐａｒａ（登録商標）で検証されたアッセイを使用して、サンプルを物理的および化学的変化について試験した。
【０１０６】
物理的安定性を示すために、表７と８に、それぞれ４０℃と２５℃で６か月間保管したｒｈＰＴＨ安定性サンプルの外観結果を示す。測定された場合、参照懸濁液と比較した乳白光が記録される。粒子のような白い凝集物（flocculant）が、４０℃での保管２週間以内にｐＨ７．０および７．５のサンプルで見られた。この粒子形成は、時間とともに溶液のｐＨの塩基性側から酸性側に進行するように見えた。３か月までに、４０℃で保管されたサンプルのほとんどが粒子を有していた。２５℃で保管したサンプルは、４０℃で観察されたのと同様の粒子形成の傾向を示したが、反応速度は遅かった。また、溶液のｐＨによって粒子の大きさが異なることが分かった。６．５〜７．５のｐＨ範囲で配合されたサンプルは凝集物を有していたが、それより低いｐＨのサンプルは微粒子を有していた。５℃で保管したサンプルでは、無色透明で目に見える粒子がない最初の外観が６か月間変化しなかった。
【０１０７】
【表７】
2021532110.tif 000009
【０１０８】
【表８】
2021532110.tif 000010
【０１０９】
化学的安定性を実証するために、表９は、それぞれ４０℃および２５℃で保管した安定性サンプルのタンパク質濃度データを提供する。サンプルを完全に遠心分離し（１７，０００ｇで５分間）、上清をＡ２８０測定に使用した。適切な光散乱補正（Ａ３２０減算）を行った。４０℃でのタンパク質濃度の低下は、保管中に粒子を形成するサンプルの傾向と大まかに相関していた。２５℃（表９）および５℃で保管したサンプルでは、タンパク質濃度の経時変化は観察されなかった。
【０１１０】
【表９】
2021532110.tif 000011
【０１１１】
化学的安定性をさらに実証するために、図３〜８は、４０℃、２５℃、および５℃で最大６か月間保管したｐＨスクリーニングサンプルのｒｈＰＴＨおよび関連する不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。４０℃の保管条件では、サンプルがその後劣化しすぎてピーク積分を実行できなかったため、１か月までのデータのみを表示する。
【０１１２】
メインピーク：図３Ａ〜３Ｃに示されるように、メインピークのベル型の傾向が全ての保管温度で観察され、ｐＨ約５．０〜６．０付近で最大ピーク回収率が見られた。
【０１１３】
酸化Ｍｅｔ８：Ｍｅｔ８の酸化も、ベル型の傾向に従うことが観察された（メインピークと同様）。４０℃および２５℃で保管すると、最大のＭｅｔ８の酸化が約４．０〜５．５のｐＨ範囲で見られた。図４Ａ〜４Ｃに示されるように、５℃では、６か月までの保管で傾向は見られなかった。
【０１１４】
酸化Ｍｅｔ１８：Ｍｅｔ１８の酸化速度は、塩基性の溶液ｐＨ範囲に向かって最大になり、溶液のｐＨが酸性になるにつれて徐々に低下することが分かった。図５Ａ〜５Ｃに示されるように、この傾向は主に４０℃と２５℃の両方の保管条件で見られた。
【０１１５】
ＩｓｏＡｓｐ３３：アスパラギン３３からのイソアスパラギン酸の形成は、製剤のｐＨが酸性側にいくにつれ最小になることが観察され、また溶液のｐＨが約５．５を超えると著しく増加することが観察された。図６Ａ〜６Ｃに示されるように、この傾向は全ての保管温度で明らかであった。
【０１１６】
ｒｈＰＴＨ（（１−３０）＋（１−３３））：これらのｒｈＰＴＨ不純物は、ｐＨ５．０より低いおよびｐＨ６．０より高いｐＨに配合されたサンプルの保管で著しく増加した。ただし、６．０より高いｐＨでの不純物の増加は、低いｐＨ値で観察されたものよりもかなり少ない程度で生じた。図７Ａ〜７Ｃに示されるように、この不純物の増加は、５．０〜６．０のｐＨ範囲で最小であることが観察された。
【０１１７】
ｒｈＰＴＨ（１−４５）：このフラグメント関連不純物は、ｐＨ５．０より低いｐＨに配合されたサンプルで著しく増加することが観察され、ｐＨ５．０と７．５の間のサンプルでは大きくは変化しなかった。図８Ａ〜８Ｃに示されるように、この傾向は全ての保管温度で見られた。
【０１１８】
この例は、３．５〜７．５のｐＨ範囲に配合され、熱ストレス（thermal stress）に曝された場合のｒｈＰＴＨの物理化学的安定性に対する溶液ｐＨの影響を示す。外観（目に見える粒子形成）およびＳＥＣ（凝集体およびフラグメント形成）を使用して観察した物理的安定性特性、およびＲＰ−ＨＰＬＣ（酸化、脱アミド化、およびフラグメント化（断片化））を使用して観察した化学的安定性特性は、溶液の５．０〜６．０のｐＨ範囲がｒｈＰＴＨの物理的および化学的安定性に最適であることを示唆する。
【０１１９】
実施例８：最適な物理化学的安定性のためのｒｈＰＴＨの賦形剤スクリーニング
組換えヒト副甲状腺ホルモン（ｒｈＰＴＨ）を、５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）とともに２０ｍＭの酢酸ナトリウムバッファーを含むｐＨ５．５の溶液中に配合した。この基本製剤に賦形剤ストックを加えて、所与の賦形剤の所望の目標レベルを達成した。サンプルは、５±３℃（５℃）、２５±２℃（２５℃）、および４０±２℃（４０℃）の温度条件で安定に置いた。予め定めた間隔で、サンプルを取り出し、外観を観察し、逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用してｒｈＰＴＨの安定性を分析した。ベースライン（時間０（ｔ０））サンプルにも別個に複数回の凍結融解サイクルおよびオービタル攪拌（orbital agitation）を施し、溶液の外観を観察した。
【０１２０】
静止保存での熱ストレス、凍結融解ストレス、および攪拌ストレスからの外観データは、アルギニンおよび高レベル（≧１５０ｍＭ）のＮａＣｌの存在が、他の賦形剤と比較して有意なレベルの目に見える粒子形成をもたらすことを示した。ＲＰ−ＨＰＬＣ安定性データは、全てのインキュベーション温度で、グリシン、リジン、またはアルギニンを含むサンプルにおいて、酸化されたＭｅｔ８およびＭｅｔ１８のレベルが著しく高いことを示した。一方、メチオニンを含むサンプルは、著しく低減されたｒｈＰＴＨの酸化速度を示した。攪拌試験の結果は、界面活性剤であるポロキサマー１８８の存在が、振とうに際して目に見える粒子の形成を防止したことを示した。
【０１２１】
供給された原薬を解凍し、２ｋＤａ  ＭＷＣＯ透析カセットにおいてベースバッファー溶液に対して透析した。透析は５±３℃で行われ、約３０時間にわたり少なくとも３サイクルのバッファー交換が含まれた。透析後、サンプルのｐＨを検査し、必要に応じて０．２Ｎの水酸化ナトリウムで調整した。Ａ２８０測定を行い、０．５８４（ｍＬ．ｍｇ）−１ｃｍ−１の吸光係数に基づいてｒｈＰＴＨの濃度を計算した。最終溶液の調製は、層流フード内で無菌的に行った。各賦形剤について、希釈媒体としてベースバッファーを使用し、賦形剤ストックを加えて目的の賦形剤濃度を達成することにより、ｒｈＰＴＨを１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。さらに、各製剤にｍ−クレゾールを０．３％（ｖ／ｖ）のレベルで添加した。
【０１２２】
表１０に、賦形剤スクリーニング試験で使用したさまざまな製剤の説明を提供する。調製したサンプルを０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターでろ過し、２ＲタイプＩガラスバイアルに１．５ｍＬの容量で充填した後、封栓／クリンプを行った。ライトボックスにおいて溶液の外観について各バイアルを観察した。ベースラインサンプルをポリプロピレンチューブに分注し、−８０℃で保管した。残りのバイアルを５℃、２５℃、および４０℃でインキュベートした。予め定めた間隔で、サンプルバイアルを各インキュベーション条件から引き出し、外観を観察し、ポリプロピレンチューブに分注し、さらに分析するまで−８０℃で保管した。注入量および注入順序にいくつかの変更を加えたＳＥＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを含めて、Ｎａｔｐａｒａで検証されたアッセイを使用して、物理的および化学的変化についてサンプルを試験した。
【０１２３】
ベースラインサンプルに繰り返し凍結／解凍サイクル（−８０℃で５〜１２時間凍結し、室温で解凍する）を施し、ライトボックスにおいて溶液の外観を観察した。バイアル内のベースラインサンプルの異なるセットを、２２０ｒｐｍでオービタルシェーカーを使用して周囲温度条件下で水平に攪拌し、ライトボックスにおいて一定の間隔で溶液の外観を観察した。攪拌試験の予備結果を使用して、２Ｒバイアルおよびデュアルチャンバーカートリッジでのオービタル攪拌を行う追加の製剤を選択した。
【０１２４】
【表１０】
2021532110.tif 000012
【０１２５】
以下の表１１〜１３は、それぞれ４０℃、２５℃、および５℃で最大６か月間保管したｒｈＰＴＨ安定性サンプルの外観結果を示す。測定された場合、参照懸濁液と比較した乳白光が記録される。４０℃で保管した場合、アルギニン（１５０ｍＭ）を含むサンプルは、２週間で出現して時間の経過とともに増加するタンパク質性粒子のかなりの存在を示した。他の賦形剤を含むサンプルは、４０℃で保管した場合、３か月までベースラインに匹敵する外観を示した。４０℃での６か月の保管の終わりまでに、ほとんどのサンプルが、さまざまな色を呈する目に見える粒子および乳白光を有していた。同様に、２５℃で保管したサンプルの場合、アルギニン（１５０ｍＭ）を含む溶液が最初に粒子形成を示したサンプルであったがそれは６か月の保管まで出現せず、他の全てのサンプルはベースラインの外観を維持した。５℃で保管したサンプルは、３か月の保管の終わりにベースラインに似た外観を示したが、２５℃での結果とは異なり、６か月の終わりまでに、多くのサンプル（特に、ＮａＣｌ、グリセロール、グリシン、リジン、およびアルギニン）が目に見える粒子を有していた。
【０１２６】
【表１１】
2021532110.tif 000013
【０１２７】
【表１２】
2021532110.tif 000014
【０１２８】
【表１３】
2021532110.tif 000015
【０１２９】
化学的安定性を実証するために、図９〜１２は、さまざまな賦形剤と共に５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有するｐＨ５．５の酢酸バッファー中に配合され、４０℃、２５℃、および５℃で保管されたサンプルのｒｈＰＴＨおよび関連不純物のＲＰ−ＨＰＬＣデータを示す。報告された相対保持時間をシフトすることなく妥当なピーク積分が可能であったサンプルの結果を示す。
【０１３０】
メインピーク：グリシン、リジン、およびアルギニンを含むサンプルは、４０℃および２５℃の両方での保管で、他の賦形剤と比較して、メインピークの著しく速い減少を示した。同様の傾向が５℃での保管でも観察された。図９Ａ〜９Ｃを参照されたい。
【０１３１】
酸化されたＭｅｔ８およびＭｅｔ１８：他の賦形剤と比較して、グリシン、リジン、およびアルギニンのサンプルは、全ての保管温度で著しく高いレベルの酸化されたＭｅｔ８およびＭｅｔ１８を示した。メチオニンを含むサンプルは、全ての保管温度で、時間の経過に伴うＭｅｔ８およびＭｅｔ１８の酸化の変化が最小であった。図１０Ａ〜１０Ｃ（Ｍｅｔ８）および図１１Ａ〜１１Ｃ（Ｍｅｔ１８）を参照されたい。
【０１３２】
ＩｓｏＡｓｐ３３：２５℃および４０℃で保管すると、１５０ｍＭおよび３００ｍＭのＮａＣｌを含むサンプルはわずかに低いＩｓｏＡｓｐ３３の形成速度を示したが、賦形剤間で有意差は見られなかった（グリシン、リジン、およびアルギニンのサンプルで観察された著しく低い矛盾するＩｓｏＡｓｐ３３レベルは、これらのサンプルのクロマトグラムにおける行方不明のピーク／わずかに保持時間がシフトしたピークを統合する際の問題に起因する可能性がある）。図１２Ａ〜１２Ｃを参照されたい。
【０１３３】
凍結融解（Ｆ／Ｔ）試験
表１４は、２Ｒバイアル内で繰り返し凍結融解を行ったときのさまざまな製剤の溶液の外観を示す。目に見える粒子は、観察される場合、乳白光と一緒に報告される。１５０ｍＭ以上のＮａＣｌのサンプルは、繰り返しＦ／Ｔによる影響を大きく受け、白い繊維状タンパク様粒子を含むことがわかった。０．０２％のＰＳ２０を含むサンプルは、最初から砂のような（非タンパク性）粒子のせいで顆粒状の外観を示した。８％グリセロールを含む溶液は、目に見える粒子の形成なしに、各Ｆ／Ｔサイクル後に乳白光の悪化を示した。
【０１３４】
【表１４】
2021532110.tif 000016
【０１３５】
攪拌試験
表１５は、周囲条件下において２２０ｒｐｍで水平位置の３つの２Ｒバイアルで実施した攪拌試験からの外観結果を示す。砂様の粒子が存在するＰＳ２０を除いて、全てのサンプルは、ベースラインにおいて、無色透明で、かつ目に見える粒子は存在しなかった。ＮａＣｌを含むサンプルが粒子形成の最も早い兆候を示し、その速度は、ＮａＣｌ含有量の増加とともに高まった。２４時間までに、１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含むサンプルおよびＰＳ２０を含むサンプルは、濁った外観になった。ポロキサマー１８８（Ｐ−１８８）を含むサンプルを除く全てのサンプルが、４８時間の終わりまでに濁った外観を示した。Ｐ−１８８を含むサンプルは、試験が終了するまで（７２時間）、ベースラインの外観を維持した。
【０１３６】
【表１５】
2021532110.tif 000017
【０１３７】
上記の保存安定性、凍結融解、および攪拌試験からの予備的結果に基づいて、製剤を絞り込み、それぞれ酸化を低減するためおよび複数回投与製剤をサポートするためのメチオニンおよびｍ−クレゾールと共に、ＮａＣｌ、マンニトール、スクロース、およびグリセロールをそれらの安定化／等張性能力により賦形剤として特定した。
【０１３８】
表１６は、ＮａＣｌをベース製剤から除去して、２Ｒバイアルで周囲条件下において２２０ｒｐｍで行われた水平攪拌試験の結果を示す。ｍ−クレゾールの存在は、ｍ−クレゾールを含まない製剤よりもかなり早く乳白光形成をもたらした。ベース製剤から５０ｍＭ  ＮａＣｌを除去したにもかかわらず、ポロキサマー１８８を含むものを除いて、全ての溶液が４８時間の振とうの終わりまでに依然として濁った外観をもたらした。これらの製剤を、現在市販のＮａｔｐａｒａ（登録商標）に使用されている容器／クロージャー（１．１ｍＬの製剤充填量を使用し、シリコーン処理された中間および末端のゴム栓およびアルミニウムシールを備えた１ｍＬのシリコーン処理カートリッジ）でも振とうに曝した。２Ｒバイアルでの振とうで得られた結果（表１５）と同様の外観結果が観察され、ポロキサマー１８８は粒子形成を有意に防止し／遅延させた。
【０１３９】
【表１６】
2021532110.tif 000018
【０１４０】
表１６の試験した全ての製剤は、２〜８℃で振とうを行った場合には、７２時間（２Ｒバイアル）または４８時間（１ｍＬカートリッジ）の終わりにそれらのベースライン（透明）の外観を維持した。
【０１４１】
実施例が実証するように、塩化ナトリウム、スクロース、マンニトール、およびグリセロールは、ｒｈＰＴＨに安定性をもたらすのに適した賦形剤である。メチオニンは、ペプチドの酸化を有意に阻害する高い可能性を示す。ポロキサマー１８８は、攪拌したときに目に見える粒子の形成を防ぐのに重要であることがわかっている。
【０１４２】
実施例９：液体剤形を狙ったｒｈＰＴＨの製剤最適化試験
組換えヒト副甲状腺ホルモンを、２０ｍＭの酢酸バッファーおよび０．３ｗ／ｖ％のｍ−クレゾールを含むｐＨ５．５の溶液中に配合した。この基本製剤を、初期の製剤スクリーニング中にｒｈＰＴＨの安定性に重要であると特定された賦形剤である（実施例７を参照）、さまざまなレベルのメチオニン（抗酸化剤）およびポロキサマー１８８（界面活性剤）を含めて調製した。製剤を等張にし、さらに製剤の安定性を向上させるために、塩化ナトリウム、スクロース、グリセロール、およびマンニトールを評価した。賦形剤をスクリーニングし、それらの濃度を最適化するために、サンプルを熱および攪拌ストレスに曝した。熱ストレスについては、５±３℃（５℃）、２５±２℃（２５℃）、および４０±２℃（４０℃）で、２ＲタイプＩガラスバイアル内のサンプルを安定に置き、予め定めた間隔で、サンプルを取り出し、外観を観察し、逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用してｒｈＰＴＨの安定性を分析した。攪拌ストレスについては、２ＲタイプＩガラスバイアルおよび１ｍＬシリコーン処理デュアルチャンバーカートリッジ内のベースラインサンプルに別々にオービタル攪拌を施し、溶液の外観を経時的に観察した。
【０１４３】
熱ストレスでは、５０ｍＭ、２５ｍＭ、および１０ｍＭのメチオニン含有製剤間でｒｈＰＴＨの酸化プロファイルの違いは見られなかった。攪拌でのｒｈＰＴＨ溶液における目に見える粒子の形成は、ポロキサマー１８８の濃度に依存することは観察されなかった。ＮａＣｌ、スクロース、およびグリセロールの形の安定剤／等張化剤が、予備的な賦形剤スクリーニング中に実施された熱および攪拌ストレスで観察された分子の化学的および物理的変化の組み合わせから選択された（実施例７を参照）。安定剤／等張化剤の濃度は、等張液にするように選択された。全体として、液体剤形を狙った３つの製剤マトリックスが特定された：
ａ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、１３０ｍＭ  塩化ナトリウム、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
ｂ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、８．５ｗ／ｖ％  スクロース、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
ｃ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、２．３ｖ／ｖ％  グリセロール、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
【０１４４】
供給された原薬を解凍し、２ｋＤａ  ＭＷＣＯ透析カセットにおいてバッファーに対して透析した。透析は５±３℃で行われ、約２４〜４８時間にわたり少なくとも３サイクルのバッファー交換が含まれた。透析後、サンプルのｐＨを検査し、必要に応じて０．２Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを調整した。Ａ２８０測定を行い、０．５８４（ｍＬ．ｍｇ）−１ｃｍ−１の吸光係数に基づいてｒｈＰＴＨの濃度を計算した。最終溶液の調製は、層流フード内で無菌的に行った。希釈媒体としてベースバッファーを使用し、賦形剤ストックを加えて目的の賦形剤濃度を達成することにより、ｒｈＰＴＨを１．０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。さらに、各製剤にｍ−クレゾールを０．３ｗ／ｖ％のレベルで添加した。
【０１４５】
メチオニンおよびポロキサマー１８８の濃度の最適化：表１７に、メチオニンおよびＰ−１８８の濃度の最適化試験に使用したさまざまな製剤の説明を提供する。
【０１４６】
【表１７】
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【０１４７】
安定剤／等張化剤の最適化：表１８は、ｒｈＰＴＨの安定性に対する安定剤／等張化剤の影響を評価するために使用したさまざまな製剤の説明を提供する。
【０１４８】
【表１８】
2021532110.tif 000020
【０１４９】
サンプルを０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターでろ過し、２ＲタイプＩガラスバイアル（攪拌用）に１．５ｍＬ容量、または２ＲタイプＩガラスバイアル（保存安定性用）に１ｍＬ容量で充填した後、封栓／クリンプを行った。ライトボックスにおいて溶液の外観について各バイアルを観察した。表１７および表１８の全てのベースラインサンプルに、２２０ｒｐｍでオービタルシェーカーを使用して周囲温度条件下で水平攪拌を施し、ライトボックスにおいて一定の間隔で溶液の外観を観察した。
【０１５０】
０ｍＭ、１０ｍＭ、２５ｍＭ、および５０ｍＭのメチオニンと共に０．３％ポロキサマー１８８を含む表１７のサンプル、ならびに表１８のサンプルも保管安定に置いた。ベースラインサンプルを分けて、ポリプロピレンチューブに分注し、−８０℃で保管した。残りのバイアルは、５℃、２５℃、および４０℃でインキュベートした。予め定められた間隔で、サンプルバイアルを各インキュベーション条件から取り出し、外観を観察し、ポリプロピレンチューブに分注し、分析まで−８０℃で保管した。注入量および注入順序にいくつかの変更を加えたＳＥＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを含めて、Ｎａｔｐａｒａで検証されたアッセイを使用して、物理的および化学的変化についてサンプルを試験した。
【０１５１】
外観：表１９は、４０℃、２５℃、および５℃で最大６か月間保管した場合の、さまざまなレベルのメチオニン濃度を有するｒｈＰＴＨ安定性サンプルの外観の結果を示す。試験期間中、全てのサンプルが、無色透明であり、かつ目に見える粒子がないままであった。
【０１５２】
【表１９】
2021532110.tif 000021
【０１５３】
さまざまなメチオニン濃度で配合されたｒｈＰＴＨの保存安定性期間中のＲＰ−ＨＰＬＣデータは、メチオニンが製剤の一部として含まれる場合にペプチド酸化の著しい減少を示す。ただし、アッセイのばらつきの範囲内で、調べたさまざまなメチオニン濃度間でＭｅｔ８およびＭｅｔ１８の酸化のピーク、またはメインピークの割合に有意差は見られなかった。
【０１５４】
ポロキサマー１８８の濃度の最適化
ポロキサマー１８８の濃度を最適化するために攪拌試験を使用した。表２０〜２２は、周囲条件下において２２０ｒｐｍで水平オービタル攪拌を行った、２Ｒバイアル内のさまざまな濃度のポロキサマー１８８を含有する（さまざまなメチオニン含有量で配合した−表１７）サンプルの外観結果を示す。
【０１５５】
【表２０】
2021532110.tif 000022
【０１５６】
【表２１】
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【０１５７】
【表２２】
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【０１５８】
安定剤／等張化剤の選択
塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、スクロース、グリセロール、およびマンニトールが、ｒｈＰＴＨ賦形剤スクリーニング試験中に適切な賦形剤として選択された（実施例８）。将来の製剤で使用される濃度は、２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度の目標に基づいて選択された。
【０１５９】
全てのサンプルは、目に見える粒子が存在することなく、試験期間にわたって透明〜最小限の乳白光を示した（表２３）。
【０１６０】
【表２３】
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【０１６１】
４０℃、２５℃、および５℃で保管したときの、さまざまな安定剤／等張化剤と共に２５ｍＭのメチオニン、０．３％のＰ−１８８、および０．３％のｍ−クレゾールを含む２０ｍＭの酢酸バッファー中に配合されたｒｈＰＴＨのＲＰ−ＨＰＬＣデータは、いずれのインキュベーション温度でも、使用されたさまざまな賦形剤間で酸化Ｍｅｔ８および酸化Ｍｅｔ１８のレベルに有意な変化がないことを示す。同じ傾向が５℃の保管で観察された。ＩｓｏＡｓｐ３３の形成速度は、含まれるＩｓｏＡｓｐ３３の量が著しく少なかったＮａＣｌを除いて、検討した全ての賦形剤で同様であった。ＮａＣｌ製剤において、正体不明のテーリングピークの形成が著しく少ないことに加えて、ＩｓｏＡｓｐ３３のレベルが低いことにより、他の賦形剤と比較した場合に、ＮａＣｌでメインピークの回収率が最も高かった。
【０１６２】
攪拌試験：さまざまな安定剤を含む製剤（表１８）に、２Ｒバイアルおよびシリコーン処理カートリッジ内で周囲条件下において２２０ｒｐｍでオービタル攪拌を施した。表２４に、２Ｒバイアルでの複数の複製を有する１つの例示的な試験日からの外観結果を示す。個々のバイアルの３つの複製が、攪拌中に同じ外観プロファイルを示さなかった場合もある：最悪の外観観察が報告されている。
【０１６３】
これらの製剤は全て、シリコーン処理されたカートリッジ内で周囲条件下において２２０ｒｐｍで水平に攪拌された場合、７２時間の終わりに透明で目に見える粒子がないままであった。
【０１６４】
【表２４】
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【０１６５】
試験した製剤の中で、対照サンプル、ならびにスクロースおよびグリセロールを含むサンプルが、攪拌したときに最も優れた視覚的外観プロファイルを示した。
【０１６６】
結論として、熱ストレスでは、５０ｍＭ、２５ｍＭ、および１０ｍＭのメチオニン含有製剤間でｒｈＰＴＨの酸化プロファイルの違いは見られなかった。攪拌でのｒｈＰＴＨ溶液における目に見える粒子の形成は、ポロキサマー１８８の濃度に依存することは観察されなかった。ＮａＣｌ、スクロース、およびグリセロールの形の安定剤／等張化剤が、予備的な賦形剤スクリーニング中に行われた熱および攪拌ストレスで観察された分子の化学的および物理的変化の組み合わせから選択された（実施例７を参照）。安定剤／等張化剤の濃度は、等張液にするように選択された。熱および攪拌ストレスからの全体的なデータに基づいて、液体剤形を狙った上位３つの製剤マトリックスが特定された：
ａ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、１３０ｍＭ  塩化ナトリウム、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
ｂ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、８．５ｗ／ｖ％  スクロース、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
ｃ）ｐＨ５．５、２０ｍＭ  酢酸バッファー、１０ｍＭ  メチオニン、０．３ｗ／ｖ％  ポロキサマー１８８、２．３ｖ／ｖ％  グリセロール、０．３ｗ／ｖ％  ｍ−クレゾール
【０１６７】
これらの製剤中のｒｈＰＴＨの目標濃度は、０．３５ｍｇ／ｍＬ〜１．４ｍｇ／ｍＬの範囲である。
【０１６８】
実施例１０：皮下送達のための複数回投与凍結乾燥ｒｈＰＴＨ医薬品の開発
凍結乾燥ｒｈＰＴＨ（１−８４）の化学的および物理的安定性に対する、ｐＨ、バッファー、界面活性剤、安定剤／増量剤の影響を理解するために、処方変更(reformation)検討を実施した。ｒｈＰＴＨ（１−８４）の化学的安定性は、溶液のｐＨに大きく影響され、５．０〜６．５のｐＨ範囲で最適な安定性が見られる。より低いｐＨ（４．０〜４．５）は、ｒｈＰＴＨ（１−８４）のフラグメント化（断片化）を著しく増加させたが、振とうによって誘発される粒子形成に対する安定性を向上させた。より高いｐＨ（６．５超）では、ｒｈＰＴＨ（１−８４）の再構成された凍結乾燥製剤は、ますます粒子形成を起こしやすくなった。
【０１６９】
最適溶液ｐＨの５．５において、Ｌ−ヒスチジンバッファーおよびリン酸バッファーを含む製剤は、クエン酸バッファーを含む製剤と比較して、２Ｒバイアルおよびシリコーン処理カートリッジ内で振とうした場合に、目に見える粒子形成に対して著しい改善を示した。ｐＨ５．５のＬ−ヒスチジン製剤へのポロキサマー１８８の添加は、振とうによって誘発される粒子形成に対するｒｈＰＴＨ（１−８４）の安定性をさらに向上させた。
【０１７０】
ｐＨ４．０〜４．３のコハク酸バッファーも、ｐＨ５．５の他のバッファーと比較すると化学的安定性は劣るが、振とうによって誘発される粒子形成に対する完全な保護を提供すると思われるため、別のバッファー候補として特定された。
【０１７１】
全体として、これらのスクリーニング試験の結果は、現在の市販のデュアルチャンバーカートリッジでさらに評価するための３つの主要な凍結乾燥ｒｈＰＴＨ（１−８４）製剤候補を特定するのに役立った。これら製剤の選択は、主に、リアルタイム、加速、および過酷保存安定性試験、ならびに０．３ｖ／ｖ％のｍ−クレゾール水溶液での再構成後の振とう誘発ストレス試験の結果に基づいてなされた。３つの凍結乾燥製剤候補は次のものから構成され、これらは使用前に０．３ｗ／ｖ％のｍ−クレゾールを含むＷＦＩで再構成する必要がある：
（１）  ４％（ｗ／ｖ）マンニトールおよび２％（ｗ／ｖ）スクロースを含むｐＨ５．５の２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン中の１ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ（１−８４）
（２）  ４％（ｗ／ｖ）マンニトール、２％（ｗ／ｖ）スクロース、および０．３％（ｗ／ｖ）ポロキサマー１８８を含むｐＨ５．５の２０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン中の１ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ（１−８４）
（３）  ３％（ｗ／ｖ）マンニトールおよび３％（ｗ／ｖ）スクロースを含むｐＨ４．３の２０ｍＭ  コハク酸塩中の１ｍｇ／ｍＬ  ｒｈＰＴＨ（１−８４）
【０１７２】
ｒｈＰＴＨ（１−８４）の化学的安定性をモニタリングするために、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して、酸化、脱アミド化、フラグメント化、およびその他の分解経路に関連する不純物を定量した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、主要なｒｈＰＴＨ（１−８４）分子に加えて、あらゆる高分子量種および低分子量種を定量した。
【０１７３】
ｒｈＰＴＨ（１−８４）の物理的ストレスを評価するために、オービタル振とうによる攪拌を使用し、外観を用いて結果を評価した。全ての製剤を０．３％（ｖ／ｖ）のｍ−クレゾール水溶液で再構成し、２２０ｒｐｍに設定したオービタルシェーカーを使用して水平位置において室温で振とうした。
【０１７４】
カールフィッシャー法を使用して測定した含水量を表２５に要約する。１００ｍＭの塩化ナトリウムおよび５％のスクロースを含む製剤を除いて、全ての製剤の含水量は２％未満であった。２％未満の含水量は、市販の医薬品の含水量の仕様よりも有意に低いため、ｒｈＰＴＨ（１−８４）で安定性の問題を引き起こさない。
【０１７５】
【表２５】
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【０１７６】
集合的な結果に基づいて、３０ｍＭの塩化ナトリウム、および約−３９℃のＴｇ’を有する５％（ｗ／ｖ）スクロースから構成される製剤が、低含水量で優れたケーキ外観をもたらしたため、最初の凍結乾燥研究に選択された。
【０１７７】
凍結乾燥ｒｈＰＴＨ（１−８４）の処方変更検討により、ｒｈＰＴＨ（１−８４）の化学的分解が最小である５．０〜６．０の最適ｐＨ範囲が確認された。ｒｈＰＴＨ（１−８４）は、より低いｐＨ条件において２５℃および４０℃の高められた温度ではかなり速く分解したが、検討により、４．０〜４．３のｐＨのｒｈＰＴＨ（１−８４）製剤が、５℃の保管条件では、最大６か月のあいだ化学的安定性を維持し、さらには振とうにより誘発される粒子形成を著しく減らしたため、依然として可能であり得ることも確認された。ｒｈＰＴＨ（１−８４）の同時の液体製剤開発を加味して、広範な凍結乾燥製剤のスクリーニング試験の結果、ｒｈＰＴＨ（１−８４）の３つの主要な凍結乾燥製剤が、現在の市販のシリコーン処理デュアルチャンバーカートリッジでの評価のために選択された。選択された製剤は、それぞれ２５℃および４０℃の加速条件および過酷条件での３か月の安定性、ならびに０．３％（ｖ／ｖ）のｍ−クレゾール水溶液での再構成後の振とうにより誘発される粒子形成に対するｒｈＰＴＨ（１−８４）の安定性への影響に基づく。選択された３つの製剤は：
【０１７８】
追加の最適化検討は、１０ｍＭのメチオニンの添加が、製剤２におけるＭｅｔ８およびＭｅｔ１８残基の酸化に対して、および上記の製剤３における凝集に対して、ｒｈＰＴＨ（１−８４）の安定性を著しく向上させることを示した。
【０１７９】
本発明の範囲および精神から逸脱することなく、上記の主題にさまざまな変更を加えることができるため、上記の説明に含まれる、または添付の特許請求の範囲に記載される全ての主題は、本発明の説明および例示であると解釈されることが意図される。上記の教示を考慮して、本発明の多くの修正および変形が可能である。したがって、本説明は、添付の特許請求の範囲内にあるそのような全ての代替、修正、および変更を包含することが意図される。
【０１８０】
本明細書で引用される全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、および他の資料は、本明細書に物理的に存在するかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
2021532110.tif 000030
【図３Ｂ】
2021532110.tif 000031
【図３Ｃ】
2021532110.tif 000032
【図４Ａ】
2021532110.tif 000033
【図４Ｂ】
2021532110.tif 000034
【図４Ｃ】
2021532110.tif 000035
【図５Ａ】
2021532110.tif 000036
【図５Ｂ】
2021532110.tif 000037
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2021532110.tif 000039
【図６Ｂ】
2021532110.tif 000040
【図６Ｃ】
2021532110.tif 000041
【図７Ａ】
2021532110.tif 000042
【図７Ｂ】
2021532110.tif 000043
【図７Ｃ】
2021532110.tif 000044
【図８Ａ】
2021532110.tif 000045
【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
2021532110.tif 000047
【図９Ａ】
2021532110.tif 000048
【図９Ｂ】
2021532110.tif 000049
【図９Ｃ】
2021532110.tif 000050
【図１０Ａ】
2021532110.tif 000051
【図１０Ｂ】
2021532110.tif 000052
【図１０Ｃ】
2021532110.tif 000053
【図１１Ａ】
2021532110.tif 000054
【図１１Ｂ】
2021532110.tif 000055
【図１１Ｃ】
2021532110.tif 000056
【図１２Ａ】
2021532110.tif 000057
【図１２Ｂ】
2021532110.tif 000058
【図１２Ｃ】
2021532110.tif 000059
【図１３】
2021532110.tif 000060
【国際調査報告】
2021532110.tif 000061
2021532110.tif 000062
2021532110.tif 000063