(57)【要約】  本発明は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−２−（（Ｓ）−３−（７−ｔｅｒｔ−ブチルピラゾロ［１，５−ａ］［１，３，５］トリアジン−４−イルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドなどのＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニスト；ニボルマブなどのモノクローナル抗体；および／または化学療法を含む組み合わせを用いた、対象における癌の治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローナル抗体、式（Ｉ）：
【化１】
2021511344.tif 000014
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはそれらの混合物の組み合わせを対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法および／または化学療法。
【請求項２】
モノクローナル抗体、および式（Ｉ）：
【化２】
2021511344.tif 000015
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはそれらの混合物の組み合わせを、対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法。
【請求項３】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約２５ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約１００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約２００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約３００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約６００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約２５ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約２５ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約１００ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約２００ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
対象に投与される式（Ｉ）の化合物の分量が、約３００ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物の分量が、３００および６００ｍｇの用量で、１日１回または２回のいずれかで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
癌が悪性固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
癌が転移性および／または切除不能である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
癌が大腸癌、膵癌、肝臓癌、および肺癌、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
癌が大腸癌または膵癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象が、癌の治療のために少なくとも１つの前治療を受けたことがある、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
対象が治療未経験である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
モノクローナル抗体がニボルマブである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ニボルマブが、４週間ごとに約４８０ｍｇの用量で静脈内注入によって投与される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
化学療法がフォルフィリまたはＧｅｍ／アブラキサンである、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、米国仮特許出願第６２／６２０２０９号（２０１８年１月２２日出願）の利益を主張し、この開示は引用によってその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニスト、モノクローナル抗体、および／または化学療法の組み合わせを用いた、対象における癌の治療方法に関する。いくつかの実施態様において、腫瘍は固形腫瘍である。いくつかの実施態様において、固形腫瘍は膵癌、大腸癌、またはそれらの組み合わせである。
【背景技術】
【０００３】
膵臓腺癌は、米国において、癌による死亡の三番目の主要な原因であり、２０２０年までに癌による死亡の二番目の主要な原因になると予測されている。膵癌の５年生存率は悲惨であり、診断から５年生存しているのはわずか８％である。転移性疾患を有する患者の結果は悲惨であり、生存期間の中央値は１年未満である。転移性膵癌を有する患者の治療の選択肢は限定されている。ゲムシタビンとｎａｂ−パクリタキセルの併用は、進行膵癌を有する患者の１Ｌ治療に承認されている。進行膵癌を有する患者は、セカンドライン（２Ｌ）設定において、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）／リポソームイリノテカンによって治療することができる。しかしながら、これらの薬剤による結果は一般に不良であり、全体的な奏効率は低く、ＰＦＳの中央値はわずか２から３か月であり、全体的な生存（ＯＳ）の中央値は６から７か月である。化学療法は生存を向上させるが、有意な毒性があり、全ての患者は最終的にその疾患で死ぬ。膵癌の新たな治療の開発は、アンメット・ニーズの領域である。
【０００４】
世界中で、大腸癌（直腸癌を含む）は、男性では３番目に多く、女性では２番目に多い癌の形態である。２０１３年に米国（ＵＳ）において、推定で１４２，８２０件の大腸または直腸癌（ＣＲＣ）の新たな症例が診断され、ＣＲＣによる推定死亡者は５０，８３０人である。最初の診断において、患者の約２５％が転移性疾患を有し、患者のほぼ５０％が転移を発症し、これはＣＲＣ患者において高い死亡率の原因となることが報告されている。転移性大腸癌または直腸癌（ｍＣＲＣ）を有する患者にとっての治療の選択肢は、主にオキサリプラチンまたはイリノテカンのいずれかと組み合わせた、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を含むレジメン（フォルフォックスまたはフォルフィリ）と、ベバシズマブなどの生物学的薬剤である。ＫＲＡＳ状態が変異していない場合、ＥＧＦＲ阻害剤、セツキシマブ、およびパニツムマブもまた選択肢である。後期の治療において、以前化学療法による治療を受けていた患者において、レゴラフェニブが全体の生存期間を約６か月向上させることが示された。トリフルリジン/チピラシルについても、生存期間において同様の結果が示された。ｍＣＲＣの多くの初期治療の選択肢に反して、これらの治療の利益はわずかであり、Ｘ線検査での完全奏効はまれであり、より効果的な治療の必要性が強調されている。
【０００５】
チェックポイント阻害剤は癌治療を変えたが、それらの利益をより多くの患者に拡大するためには、さらなるアプローチが必要でありうる。システイン−システイン（Ｃ−Ｃ）ケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）およびＣ−Ｃケモカイン受容体５（ＣＣＲ５）は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）において骨髄細胞およびＴ細胞浸潤物に発現する２つのケモカイン受容体であり、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）および骨髄由来サプレッサー細胞などの、骨髄細胞のＴＭＥへの遊走と蓄積の主要な原動力であることが示されている（Mantovani, A. et al., Nat. Rev. Clin. Oncol., 2017 Jan 24. doi: 10.1038/nrclinonc.2016.217; Lesokhin, A.M. et al., Cancer Res 72(4):876-86 (2012); Schlecker, E. et al., J. Immunol., 189(12):5602-11 (2012)）。さらに、いずれの受容体も、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のＴＭＥへの輸送において重要なプレーヤーであることが示されている（Loyher, P.L. et al., Cancer Res., 76(22):6483-94 (2016); Tan M.C. et al., J. Immunol., 182(3):1746-55 (2009)）。ＴＭＥへの免疫細胞遊走の促進における主要な役割に加えて、ＣＣＲ５阻害は、免疫抑制性Ｍ２表現型から免疫活性化Ｍ１表現型にＴＡＭを再分極させることが最近示されている（Halama, N. et al., Cancer Cell, 29(4):587-601(2016)）。それぞれの受容体は、膵癌（Sanford, D.E. et al., Clin. Cancer Res., 19(13):3404-15 (2013); Tan M.C. et al., J. Immunol., 182(3):1746-55 (2009)）、大腸癌（Afik, R. et al., J. Exp. Med., 213(11):2315-31 (2016); Tanabe, Y. et al., 7(30):48335-45 (2016)）、肝臓癌（Li, X. et al., Gut, 66(1):157-67 (2017); Barashi, N. et al., Hepatology, 58(3):1021-30 (2013)）、および肺癌（Schmall, A. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 191(4):437-47 (2015); Lee, N.J. et al., Carcinogenesis, 33(12):2520-8 (2012)）などの、多くの癌モデルにおいて重要な役割を果たすことがそれぞれ示されている。ＣＣＲ２選択的およびＣＣＲ５選択的アンタゴニストは、化学療法と組み合わせて、膵癌および大腸癌を有する患者においてそれぞれ、メカニズムおよび臨床的応答の肯定的な証拠を示している（Nywening, T.M. et al., Lancet Oncol., 17(5):651-62 (2016); Halama, N. et al., Cancer Cell 29(4):587-601 (2016)）。
【０００６】
デュアルＣＣＲ２／５アンタゴニストを、抗ＰＤ−１抗体および／または化学療法と組み合わせて使用することは報告されておらず、既存の治療によって十分に治療されていない患者に、腫瘍免疫学的利益を拡大する可能性のある新しいアプローチを表す。さらに、免疫応答を調節する複数の非冗長分子経路の標的療法は、抗腫瘍免疫療法を強化することができる。許容可能な安全性プロファイルと、単剤療法および他の免疫治療との組み合わせと比較して、抗腫瘍免疫応答を増強する高い有効性を有する併用療法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、とりわけ、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニスト、モノクローナル抗体、および／または化学療法の組み合わせを対象に投与することを含む、対象における癌を治療する方法に関する。
【０００８】
いくつかの実施態様において、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施態様において、癌は大腸癌、膵癌、肝臓癌、および肺癌、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施態様において、癌は大腸癌である。いくつかの実施態様において、癌は膵癌である。
【０００９】
いくつかの実施態様において、モノクローナル抗体は抗ＰＤ−１抗体である。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１への結合に関してニボルマブと交差競合する。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブと同じエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。
【００１０】
いくつかの実施態様において、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストは、ＣＣＲ２およびＣＣＲ５の等力デュアルアンタゴニストである。いくつかの実施態様において、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストは、式（Ｉ）：
【化１】
2021511344.tif 000002
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはそれらの組み合わせである。
いくつかの実施態様において、化学療法剤は、ｎａｂ−パクリタキセル、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、およびイリノテカンから選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、マウス結腸腫瘍（ＭＣ３８）増殖に対する、化合物Ａと抗体Ｂの相乗的組み合わせを示す。
【図２】図２は、マウス結腸腫瘍（ＭＣ３８）増殖に対する、化合物Ａと抗体Ｂの相乗的組み合わせを示す。
【図３】図３は、マウス結腸腫瘍（ＣＴ２６）増殖に対する、化合物Ａと抗体Ｂの相乗的組み合わせを示す。
【００１２】
詳細な説明
本開示は、本開示の一部を形成する、付属の図面および実施例に関連して考慮される、以下の詳細な説明を参照することによってさらに容易に理解されうる。本発明は、本明細書において記載される、および／または示される、特定のデバイス、方法、応用、条件、またはパラメーターに限定されず、本明細書において用いられる専門用語は、例示のみによって特定の実施態様を説明することを目的とし、特許請求の範囲に記載された発明を限定することを意図しないことが理解されるであろう。また、付属の特許請求の範囲を含む、明細書において用いられる、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は複数形を含み、特定の数値についての言及は、文脈から明らかにそうでないことが示されていない限り、少なくともその特定の値を含む。
【００１３】
本明細書で用いられる用語「および／または」は、他の有無に関わらず、２つの特定の特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示として解釈されるべきである。そのため、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句において用いられる用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単体）、および「Ｂ」（単体）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句において用いられる用語「および／または」は、以下の局面のそれぞれを含むことが意図される：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単体）；Ｂ（単体）；およびＣ（単体）。
【００１４】
明細書および特許請求の範囲において用いられる用語「含む」は、「から成る」、「本質的に〜から成る」の実施態様を含みうる。本明細書で用いられる用語「含む(comprise)」、「含む(include)」、「有している」、「有する」、「できる」、「含む(contain)」、およびそれらのバリアントは、命名された成分／ステップの存在が必要であり、他の成分／ステップの存在が許容される、オープン・エンドな変化する語句、用語、または言葉であることが意図される。しかしながら、そのような記載は、命名された化合物のみの存在を、任意の薬学的担体と共に許容し、他の化合物を排除する、列挙された化合物「から成る」、および「本質的に」列挙された化合物「から成る」組成物またはプロセスもまた記載すると解釈されるべきである。
【００１５】
特に言及されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、この開示が関連する技術分野における当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本開示において用いられる多くの用語の一般的な辞書を、当業者に提供する。
【００１６】
単位、接頭語、および記号は、国際単位系（ＳＩ）により承認された形式で記載される。数値範囲は、範囲を定義する数値が含まれる。本明細書において提供される見出しは、明細書全体を参照することによって得ることができる、本開示の様々な局面を限定するものではない。したがって、すぐ下において定義される用語は、明細書全体を参照することによって、さらに完全に定義される。
【００１７】
本明細書において開示される全ての範囲は、列挙された端点を含み、独立して組み合わせることができる（例えば、「２００ｍｇから６００ｍｇ」の範囲は、端点の２００ｍｇおよび６００ｍｇ、並びに全ての中間の値を含む）。本明細書において開示される範囲の端点および任意の値は、正確な範囲または値に限定されず；それらは、その範囲および／または値に近い値を含むのに十分な程度に曖昧である。
【００１８】
本明細書で用いられる近似の言葉は、それが関連する基本的な機能の変化をもたらすことなく、変化しうる任意の定量的表現を修正するために適用されうる。したがって、「約」および「実質的に」などの用語によって修正された値は、いくつかの場合において、指定された正確な値に限定されない場合がある。少なくともいくつかの場合において、近似の言葉は、値を測定するための機器の精度に対応しうる。修飾語「約」はまた、２つの端点の絶対値によって定義された範囲を開示するとみなされるべきである。例えば、表現「約１００から約２００」はまた、「１００から２００」の範囲を開示する。用語「約」は、示された数の１０％プラスまたはマイナスをいいうる。例えば、「約１０％」は、９％から１１％を示す場合があり、「約１」は０．９から１．１を意味する場合がある。「約」の他の意味は、四捨五入などの、文脈から明らかである場合があり、そのため、例えば「約１」はまた０．５から１．４を意味する場合もある。
【００１９】
ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストは、ＣＣＲ２およびＣＣＲ５受容体に強力に結合する小分子アンタゴニストをいい、それぞれの同族リガンドに対する応答において、カルシウム流動および走化性などのＣＣＲ２およびＣＣＲ５介在性機能などの、インビトロ受容体介在性機能の強力な二重阻害を示す。ＣＣＲ２／５二重阻害活性を有する化合物は、例えば、米国特許第８，３８３，８１２号、および米国特許第７，１６３，９３７号において報告されている。
【００２０】
米国特許第７，１６３，９３７号（引用によって本明細書に援用される）は、（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−４−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−プロピルシクロヘキシル）−３−（（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イル）アミノ）ピロリジン−２−オン（以下、化合物Ａと称する）などの、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストを開示する。化合物Ａの構造は、
【化２】
2021511344.tif 000003
である。
【００２１】
米国特許第８，３８３，８１２号（引用によって本明細書に援用される）は、式（Ｉ）：
【化３】
2021511344.tif 000004
の化合物、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−２−（（Ｓ）−３−（７−ｔｅｒｔ−ブチルピラゾロ［１，５−ａ］［１，３，５］トリアジン−４−イルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（以下、化合物Ｃと称する）などの、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストを開示する。
【００２２】
例えば、示されるように、化合物ＡはＣＣＬ２（ＭＣＰ−１としても知られている）、ＣＣＲ２へのリガンドの、マウスＣＣＲ２発現細胞への結合を強力に阻害し；マウスＣＣＬ４（ＭＩＰ−１βとしても知られている）、ＣＣＲ５へのリガンドの、マウスＣＣＲ５発現細胞への結合を強力に阻害し；マウスＣＣＬ２およびマウスＣＣＬ４誘導性機能（カルシウム流動、インテグリンＣＤ１１ｂ上方制御）を強力に阻害し；化合物Ｃに薬学的に関連する（表１）。
【表１】
2021511344.tif 000005
【００２３】
ＣＣＲ２発現細胞およびＣＣＲ５発現細胞に対する、リガンド結合阻害についてのアッセイ
ヒトＣＣＲ２およびＣＣＲ５結合アッセイは、トレーサーリガンドとしてそれぞれ１２５Ｉ−ヒトＭＣＰ−１およびヒトＭＩＰ−１ベータを用いて、ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）およびヒトＴ細胞によって確立し、ｈＰＢＭＣおよびヒトＴ細胞は、標準的な方法を用いてヒトｌｅｕｋｏｐａｋから単離した。単離した細胞（ＣＣＲ２結合についてはｈＰＢＭＣ、ＣＣＲ５結合についてはヒトＴ細胞）を洗浄し、結合緩衝液（ＲＰＭＩ−１６４０、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４）中で１ｘ１０７／ｍｌに希釈した。１２５Ｉ−ＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータ（ＮＥＮ／Ｐｅｒｋ Ｅｌｍｅｒ）を、結合緩衝液中で０．４５ｎＭに希釈した。化合物Ｃを、結合アッセイで用いた最終濃度の３倍で、結合緩衝液中に希釈した。結合アッセイは、９６ウェルフィルタープレート（Millipore）を用いて行った。合計の１２５Ｉ−ＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータ結合を、以下のように評価した：それぞれの反応液（１５０μｌ）は、５ｘ１０５細胞、０．１５ｎＭ １２５Ｉ−ＭＣＰ−１またはＭＩＰ−１ベータ、および最終濃度が０から１００ｎＭの範囲となるように化合物Ｃを含んでいた。プレートを室温で３０分間インキュベートし、バキューム・マニホールド濾過（Millipore）を用いて、ＲＰＭＩ−１６４０、０．１％ＢＳＡ、０．４Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４で３回洗浄した。洗浄後、プレートを室温で６０分間風乾させ、次いでそれぞれのウェルに２５μｌのMicroscint 20を加えた。プレートを密封し、Trilux シンチレーションカウンターで１分間計測した。非特異的な結合は、３００ｎＭの冷却ＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータ(PeproTech Inc.)の存在下で決定した。特異的な１２５Ｉ−ＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータ結合は、総結合と非特異的結合の差として計算した。全ての条件は二回繰り返して試験した。ＩＣ５０は、特異的結合を５０％減少させるのに必要な、競合化合物Ｃの濃度として定義される。
【００２４】
マウスＣＣＲ２およびＣＣＲ５に対する、マウスリガンド結合阻害についてのアッセイは、ＷＥＨＩ−２７４．１マウス単球細胞系およびマウスＣＣＲ５を安定して発現するＬ１．２細胞を、それぞれマウスＣＣＲ２およびマウスＣＣＲ５発現細胞源として用い、マウスＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータを、それぞれマウスＣＣＲ２およびＣＣＲ５のトレーサーリガンドとして用いた以外は、ヒトアッセイと同様の方法で確立した。
【００２５】
細胞中のＣＣＲ２およびＣＣＲ５介在性カルシウム流動阻害についてのアッセイ
ＭＣＰ−１のＣＣＲ２への結合、またはＭＩＰ−１ベータのＣＣＲ５への結合によって、Ｇタンパク質共役シグナル伝達経路のカスケードにつながる。これらの１つは、インテグリン（ＣＤ１１ｂ）の上方制御および活性化などの下流の細胞機能に重要である、カルシウムの動員である。細胞内カルシウム動員は、フルオロフォアがあらかじめ充填された細胞がＭＣＰ−１で刺激された時に、蛍光色素イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）において、カルシウム結合性フルオロフォア（例えばｆｌｕｏ−３）によって放出される蛍光の増加として計測することができる。
【００２６】
ヒトＣＣＲ２介在細胞内カルシウム流動アッセイは、ヒト単球細胞株、ＴＨＰ−１によって確立した。ＴＨＰ−１細胞は、４μＭ ｆｌｕｏ−３（分子プローブ）および１．２５ｍＭ プロベネシドを含むグルコース−およびＨＥＰＥＳ−緩衝ＰＢＳ（ｐＨ７．４）に懸濁させ、３７℃で６０分間インキュベートすることによって、最初にフルオロフォアを充填した。１回洗浄して過剰なｆｌｕｏ−３を洗浄した後、細胞を１．２５ｍＭ プロベネシドと共に洗浄緩衝液（フェノールレッド・フリーのＲＰＭＩを含む）に再懸濁させ、２ｘ１０５／ウェルで９６ウェルプレートに設置した。０から１００ｎＭの濃度範囲で希釈した化合物Ｃ、または緩衝液のみをそれぞれのウェルに加え、遠心分離し、１０分間インキュベートした。アルゴンイオンレーザーを用いて細胞を励起し、蛍光の変化をモニターしながらロボット制御によりヒトＭＣＰ−１を添加する、ＦＬＩＰＲ−１（商標登録）（分子デバイス）にプレートを設置した。組み換えヒトＭＣＰ−１（PeproTech Inc.）を次いで、１０ｎＭの最終濃度で加えた。蛍光シフトをモニターし、ベースからピークの変動を自動的に計算した。全てのサンプルを２回試験した。段階的な化合物濃度によって達成した阻害を、化合物フリーのＭＣＰ−１対象の割合として計算した。ＭＩＰ−１ベータ（５０ｎＭ）がリガンドであり、細胞株がＨＴ１０８０／ＣＣＲ５であり、ここで内因性ＣＣＲ５が遺伝子発現（ＲＡＧＥ）技術のランダムな活性化によって上方制御されている以外は、上記と同様の方法を用いた。
【００２７】
ＷＥＨＩ−２７４．１マウス単球細胞系およびマウスＣＣＲ５を安定的に発現しているＬ１．２細胞をそれぞれ、マウスＣＣＲ２およびマウスＣＣＲ５発現細胞として用い、マウスＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１ベータをそれぞれ、マウスＣＣＲ２およびＣＣＲ５のリガンドとして用いたこと以外は、それぞれのリガンドへの応答における、マウスＣＣＲ２およびＣＣＲ５介在性カルシウム流動の阻害アッセイを、ヒトアッセイと同様の方法で確立した。
【００２８】
全血におけるＣＣＲ２およびＣＣＲ５介在性ＣＤ１１ｂインテグリン上方制御の阻害アッセイ
ＣＣＲ２依存性ＣＤ１１ｂ上方制御アッセイを、ヒト全血を用いて確立した。全血（１００μｌ）を、化合物Ｃの濃度範囲において３７℃で１０分間あらかじめインキュベートした。刺激されていない対照反応を除いて、ヒト組み換えＭＣＰ−１（１００ｎＭを１０μｌ）を次いで、１０ｎＭの最終濃度でそれぞれの反応液に加えた。反応液を３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベートした後、１ｍｌの氷冷したＦＡＣＳ（１０％ＦＢＳを含むＰＢＳ）緩衝液を加え、サンプルを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を次いで、２０μｌの抗ＣＤ１４−ＦＩＴＣ／抗ＣＤ１１ｂ−ＰＥ溶液と共に、暗所の氷上で２０分間インキュベートし、次いでそれぞれの反応液に１ｍｌの１ｘＦＡＣＳ溶解液（Becton Dickinson）を添加した。サンプルを次いで暗所の氷上で３０分間インキュベートした。固定化および赤血球の溶解の後、細胞を遠心分離し、２００μｌのＦＡＣＳ溶解液に再懸濁した。サンプルをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）フローサイトメーターを用いて１時間以内で染色し、フローサイトメトリーにより解析した。ＣｅｌｌＱｕｅｓｔＰｒｏ（登録商標）ソフトウェアを用いて、データの取得および解析を行った。連続ゲート戦略を用いて、ＣＤ１４高 ＣＤ１１ｂ＋ 単球集団を分析した。分析のために、ＣＤ１１ｂを平均蛍光強度（ＭＦＩ）として計測した。ＭＩＰ−１ベータ（５０ｎＭ）をリガンドとして用いたこと以外は、マウスＣＣＲ５と同様の方法を採用した。
【００２９】
マウスＣＣＲ２依存性ＣＤ１１ｂ上方制御は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス全血を用いて確立した。全血（１００ｕｌ）を、化合物Ｃの濃度範囲において、３７℃で３０分間あらかじめインキュベートした。次いで、マウス組み換えＭＣＰ−１を１０ｎＭの最終濃度で、刺激されていない対照反応以外のそれぞれの反応液に加えた。反応液を３７℃で１５分間インキュベートした。インキュベートの後、１ｍｌの氷冷ＦＡＣＳ（１０％ＦＢＳを含むＰＢＳ）緩衝液を加え、サンプルを１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を２０μｌの抗Ｆ４／８０−ＰＥ／抗マウスＣＤ１１ｂ−ＡＰＣ溶液と共に、暗所の氷上で２０分間インキュベートし、次いでそれぞれの反応液に１ｍｌの１ｘＦＡＣＳ溶解液（Becton Dickinson）を加えた。サンプルを次いで暗所の氷上で２０分間インキュベートした。固定化および赤血球の溶解の後、細胞を遠心分離し、２００ｕｌのＦＡＣＳ溶解液に再懸濁した。サンプルをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）フローサイトメーターを用いて、１時間以内の染色で解析した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを用いて、データの取得および解析を行った。連続ゲート戦略を用いて、Ｆ４／８０＋ ＣＤ１１ｂ＋単球集団を分析した。分析のために、ＣＤ１１ｂを平均強度（ＭＦＩ）として計測した。リガンドがマウスＭＩＰ−１ベータ（５０ｎＭ）であること以外は、マウスＣＣＲ２に記載されているように、マウスＣＣＲ５について同様の方法を採用した。
【００３０】
化合物ＣはマウスＰＫおよびマウスＣＣＲ２効力が低いため、化合物ＡをマウスＣＣＲ２／５−デュアルアンタゴニストの代替として用いて、マウスの腫瘍モデルにおける単剤療法および抗ＰＤ１抗体との組み合わせとして評価した。
【００３１】
いくつかの実施態様は、モノクローナル抗体、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニスト、および／または化学療法の組み合わせを対象に投与することを特徴とする、対象における癌の治療方法に関する。
【００３２】
いくつかの実施態様は、モノクローナル抗体およびＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストの組み合わせを対象に投与することを特徴とする、対象における癌の治療方法に関する。
【００３３】
いくつかの実施態様は、癌の治療に用いるためのモノクローナル抗体、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニスト、および／または化学療法の組み合わせに関する。
【００３４】
いくつかの実施態様は、癌の治療に用いるためのモノクローナル抗体およびＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストの組み合わせに関する。
【００３５】
いくつかの実施態様において、本明細書に記載される組み合わせは、１つ以上のモノクローナル抗体を投与することを含むことができる。
【００３６】
いくつかの実施態様において、ＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストは、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、またはそれらの組み合わせであり、対象に１日１回の用量で投与される、あるいは総１日用量は、１日２、３、または４回の分割用量で投与されうる。いくつかの実施態様において、総１日用量は、１回の１日用量で、または１日２回投与されうる。式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の用量は、１日あたり約１００ｍｇから１日あたり約１２００ｍｇでありうる。例えば、対象に投与される式（Ｉ）の化合物の用量は、１日あたり約１０、２５、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、および１２００ｍｇでありうる。いくつかの実施態様において、対象に投与される式（Ｉ）の化合物の用量は、１日あたり約１０ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約２５ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約５０ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約１００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約２００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約３００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約３００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約４００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約５００ｍｇから約１２００ｍｇ；１日あたり約６００ｍｇから約１２００ｍｇでありうる。いくつかの実施態様において、対象に投与される式（Ｉ）の化合物の用量は、１日あたり約１０ｍｇから約６００ｍｇ；１日あたり約２５ｍｇから約６００ｍｇ；１日あたり約５０ｍｇから約６００ｍｇ；１日あたり約１００ｍｇから約６００ｍｇ；１日あたり約２００ｍｇから約６００ｍｇ；１日あたり約３００ｍｇから約６００ｍｇでありうる。いくつかの実施態様において、対象に投与される式（Ｉ）の化合物の用量は、１日あたり約１０ｍｇから約３００ｍｇ；１日あたり約２５ｍｇから約３００ｍｇ；１日あたり約５０ｍｇから約３００ｍｇ；１日あたり約１００ｍｇから約３００ｍｇ；１日あたり約２００ｍｇから約４００ｍｇでありうる。いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物の用量は、１日１回または２回のいずれかで、３００および６００ｍｇの用量で投与される。
【００３７】
本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物の用量は、式（Ｉ）の化合物の遊離形態、すなわち非塩形態に基づく。塩が投与される場合、その用量は、塩および遊離形態の間の分子量の比の関数として計算する必要がある。
【００３８】
「薬学的に許容可能な」は、連邦または州政府の規制機関、または米国以外の国の対応する機関、または米国薬局方または他の一般に認識された薬局方に列挙されている機関によって、動物、より具体的には、ヒトにおける使用について承認された、または承認可能であることを意味する。
【００３９】
「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能であり、親化合物の目的の薬理学的活性を有する本開示の化合物の塩をいう。特に、そのような塩は非毒性の無機または有機酸付加塩、および塩基付加塩でありうる。具体的には、そのような塩としては：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；または酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ターシャリーブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸と形成される、酸付加塩；（２）親化合物に酸性プロトンが存在する場合、金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、またはアルミニウムイオンによって置換されることによって；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミンなどの有機塩基が配位することによってのいずれかで形成される塩が挙げられる。塩としてはさらに、あくまで例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど；および化合物が塩基性の官能基を含む場合は、ヒドロクロライド、ヒドロブロマイド、タートレート、メシレート、アセテート、マレアート、オキサレートなどの、非毒性の有機または無機酸の塩が挙げられる。
【００４０】
一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水または有機溶媒中で、または２つの混合物中で；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性溶媒が好ましい、化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることによって合成することができる。適切な塩の一覧は、Allen, Jr., L.V., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, London, UK (2012)に存在する。
【００４１】
「薬学的に許容可能な賦形剤」は、本開示の化合物と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、または担体をいう。「薬学的に許容可能な賦形剤」は、非毒性の、生物学的に許容可能であり、あるいは薬剤の投与を容易にし、それらと適合性がある、薬理学的組成物に添加される、あるいはビヒクル、担体、または希釈剤として用いられる不活性物質などの、対象に投与するのに生物学的に適した物質をいう。賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプンの種類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ステアリン酸、二酸化ケイ素、ポリビニルアルコール、滑沢剤、タルク、二酸化チタン、酸化鉄（ＩＩ）、およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００４２】
「対象」としてはヒトが挙げられる。用語「ヒト」、「患者」、および「対象」は、本明細書において同義で用いられる。
【００４３】
任意の疾患または障害を「治療する」または「治療」は、ある実施態様において、疾患または障害を回復させること（すなわち、疾患またはその臨床的症状の少なくとも１つの進行を抑制する、もしくは軽減すること）をいう。別の実施態様において、「治療する」または「治療」は、対象によって認識できないことがありうる、少なくとも１つ物理的パラメーターを改善することをいう。さらに別の実施態様において、「治療する」または「治療」は、疾患または障害を、物理的に（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理学的に（例えば、物理学的パラメーターの安定化）、またはその両方のいずれかで調節することをいう。さらに別の実施態様において、「治療する」または「治療」は、疾患または障害の発症を遅延させることをいう。
【００４４】
用語「抗体」および類似の用語は、広義を意味し、モノクローナル抗体（マウス、ヒト、ヒト適応、ヒト化、およびキメラモノクローナル抗体など）、抗体フラグメント、二重特異性または多重特異性抗体、二量体、四量体、または多量体抗体、および一本鎖抗体などの免疫グロブリン分子が挙げられる。免疫グロブリンは、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、５つの主なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに帰属させることができる。ＩｇＡおよびＩｇＧはさらに、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４にさらに分類される。任意の脊椎動物種の抗体の軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に区別できる種類、すなわち、カッパ（κ）およびラムダ（λ）のうちの１つに帰属させることができる。
【００４５】
「モノクローナル抗体」は、単一の分子組成の抗体分子の集合をいう。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性、または二重特異性モノクローナル抗体の場合は、２つの別のエピトープに対して二重の結合特異性を示す。そのため、モノクローナル抗体は、抗体の重鎖からのＣ末端リシンの除去などのよく知られた、起こりうる変異を除いて、それぞれの重鎖およびそれぞれの軽鎖において、単一のアミノ酸組成を有する抗体の集合をいう。モノクローナル抗体は、抗体の集合内で、不均一なグリコシル化を有しうる。モノクローナル抗体は、単一特異性もしくは多重特異性、または一価、二価、または多価でありうる。二重特異性抗体は、用語モノクローナル抗体に含まれる。
【００４６】
本発明に有用な抗ＰＤ−１抗体
当技術分野において既知の任意の抗ＰＤ−１抗体は、現在記載されている方法において用いられうる。特に、ＰＤ−１に高親和性で特異的に結合する、様々なヒトモノクローナル抗体が、米国特許第８，００８，４４９号において開示されている。米国特許第８，００８，４４９号において開示されている、抗ＰＤ−１ヒト化抗体のそれぞれが、以下の特徴の１つ以上を有することが実証されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを用いた表面プラズモン共鳴によって決定して、１ｘ１０−７Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖を増加させる；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロンγ産生を増加させる；（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいて、ＩＬ−２分泌を増加させる；（ｆ）ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に結合する；（ｇ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１に対する結合を阻害する；（ｈ）抗原特異的記憶応答を刺激する；（ｉ）抗体応答を刺激する；および（ｊ）インビボで腫瘍細胞増殖を阻害する。本発明において使用可能な抗ＰＤ−１抗体としては、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、前記の特徴のうち少なくとも１つ、いくつかの実施態様において、少なくとも５つを有するモノクローナル抗体が挙げられる。
【００４７】
他の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、７，４８８，８０２号、８，１６８，７５７号、および８，３５４，５０９号、米国公開第２０１６／０２７２７０８号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／１４５４９３号、ＷＯ２００８／１５６７１２号、ＷＯ２０１５／１１２９００号、ＷＯ２０１２／１４５４９３号、ＷＯ２０１５／１１２８００号、ＷＯ２０１４／２０６１０７号、ＷＯ２０１５／３５６０６号、ＷＯ２０１５／０８５８４７号、ＷＯ２０１４／１７９６６４号、ＷＯ２０１７／０２０２９１号、ＷＯ２０１７／０２０８５８号、ＷＯ２０１６／１９７３６７号、ＷＯ２０１７／０２４５１５号、ＷＯ２０１７／０２５０５１号、ＷＯ２０１７／１２３５５７号、ＷＯ２０１６／１０６１５９号、ＷＯ２０１４／１９４３０２号、ＷＯ２０１７／０４０７９０号、ＷＯ２０１７／１３３５４０号、ＷＯ２０１７／１３２８２７号、ＷＯ２０１７／０２４４６５号、ＷＯ２０１７／０２５０１６号、ＷＯ２０１７／１０６０６１号に記載されている。
【００４８】
いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（「オプジーボ」としても知られている；５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、またはＯＮＯ−４５３８と以前は表記されていた）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ、「キイトルーダ」、ランブロリズマブ、およびＭＫ−３４７５としても知られている、ＷＯ２００８／１５６７１２を参照されたい）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；ＷＯ２０１５／１１２９００を参照されたい）、ＭＥＤＩ−０６８０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＡＭＰ−５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３を参照されたい）、セミプリマブ（ＲＥＧＮ−２８１０）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ；ＷＯ２０１５／１１２８００を参照されたい）、ＪＳ００１（ＴＡＩＺＨＯＵ ＪＵＮＳＨＩ ＰＨＡＲＭＡ； Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい)、ＢＧＢ−Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ；ＷＯ２０１５／３５６０６およびＵＳ２０１５／００７９１０９を参照されたい）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（ＳＨＲ−１２１０；Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＷＯ２０１５／０８５８４７； Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい）、ＴＳＲ−０４２（ＡＮＢ０１１；Ｔｅｓａｒｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；ＷＯ２０１４／１７９６６４を参照されたい）、ＧＬＳ−０１０（ＷＢＰ３０５５；Ｗｕｘｉ／Ｈａｒｂｉｎ Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい）、ＡＭ−０００１（Ａｒｍｏ）、ＳＴＩ−１１１０（ソレント Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；ＷＯ２０１４／１９４３０２を参照されたい）、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ；ＷＯ２０１７／０４０７９０を参照されたい）、ＭＧＤ０１３（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）、およびＩＢＩ３０８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ；ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５、ＷＯ２０１７／１３３５４０を参照されたい）から選択される。
【００４９】
いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。ニボルマブは、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に阻害し、それによって抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を阻害する、完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害抗体である（米国特許第8,008,449号; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56）。
【００５０】
別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体はペムブロリズマブである。ペムブロリズマブは、ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１（プログラム死−１またはプログラム細胞死−１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号、および８，９００，５８７号に記載されている；www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=695789 （最終アクセス：２０１４年１２月１４日）もまた参照されたい。ペムブロリズマブは、再発性または難治性黒色腫の治療についてＦＤＡに承認されている。
【００５１】
開示された方法において使用可能な抗ＰＤ−１抗体としてはまた、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、本明細書に開示される任意の抗ＰＤ−１抗体、例えばニボルマブと、ヒトＰＤ−１との結合に交差競合する、単離抗体が挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号、および８，７７９，１０５号；ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載された任意の抗ＰＤ−１抗体、例えばニボルマブと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合に交差競合する能力は、これらのモノクローナル抗体が、抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合抗体が、その特定のエピトープ領域へ結合するのを立体的に阻害することを指す。これらの交差競合抗体は、ＰＤ−１の同じエピトープ領域に結合することによって、参照抗体、例えばニボルマブと非常に類似した機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーなどの標準的なＰＤ−１結合アッセイで、ニボルマブと交差競合する能力に基づいて、容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。
【００５２】
いくつかの実施態様において、ヒトＰＤ−１への結合に交差競合する、またはヒトＰＤ−１抗体、ニボルマブの同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与について、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、改変抗体、またはヒト化またはヒト抗体である。そのようなキメラ、改変、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって合成および単離することができる。
【００５３】
本開示の発明の方法において使用可能な抗ＰＤ−１抗体としてはまた、上記の抗体の抗原結合部位が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって発揮することができることが十分に検証されている。
【００５４】
本開示の方法または組成物において用いるのに適切な抗ＰＤ−１抗体は、高い特異性および親和性でＰＤ−１に結合し、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の結合を阻害し、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害する抗体である。本明細書に開示される任意の組成物または方法において、抗ＰＤ−１「抗体」としては、ＰＤ−１受容体に結合し、リガンド結合の阻害および免疫系の上方制御において、完全抗体と同様の機能的性質を発揮する、抗原結合部位または断片が挙げられる。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合部位は、ヒトＰＤ−１への結合についてニボルマブと交差競合する。
【００５５】
抗体Ｂ
ニボルマブはマウスＰＤ−１に対して交差反応性がないため、ラット抗マウスＰＤ−１抗体の４Ｈ２のＦｃ末端をマウス化することによって、抗マウスＰＤ−１抗体（以下抗体Ｂと称する）を生成した。抗体ＢはマウスＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａを含み、以下に示すように可変領域の軽鎖および重鎖を含む。
抗体Ｂ軽鎖可変領域：
DTVLTQSPALAVSLGQRVTISCKASETVSSSMYSYIHWYQQKPGQQPKLLIYRASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEADDVATYFCQQSWNPWTFGGGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC (配列番号：１)
抗体Ｂ重鎖可変領域：
QVQLKESGPGLVQPSQTLSLTCTVSGFSLTSYNVHWVRQPPGKGLEWMGGMRYNEDTSYNSALKSRLSISRDTSKNQVFLKMNSLQTDDTGTYYCTRDAVYGGYGGWFAYWGQGTLVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNT
FTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK (配列番号：２)
【００５６】
抗体Ｂを抗ＰＤ１マウスの代用として用いて、抗ＰＤ１抗体と組み合わせてＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストの有効性を試験した。４Ｈ２は、マウスＰＤ−１発現ＣＨＯ細胞への結合において、２．９ｎＭのＥＣ５０を示し、これはヒトＰＤ１発現ＣＨＯ細胞に結合するニボルマブと同等である（０．４ｎＭ）。さらに４Ｈ２は、マウスＰＤ−Ｌ１およびマウスＰＤ−Ｌ２に結合するマウスＰＤ１の阻害において、それぞれ３．６および４．９ｎＭのＩＣ５０を示し、これはヒトＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−Ｌ２に結合するニボルマブと同等である（それぞれ１．０４および０．９７ｎＭ）。（表２）。
【表２】
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【００５７】
ＣＨＯトランスフェクタントにおいて安定して発現されているＰＤ１に対する、抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の直接結合のアッセイ
ヒトおよびマウスＰＤ−１に対するｍＡｂを段階的に希釈し、ヒトおよびマウスＰＤ−１を安定して発現しているＣＨＯ細胞トランスフェクタントと共にそれぞれインキュベートし、次いでマウスＩｇＧＦｃγへの二次的なＦＩＴＣ結合体によって検出した。
【００５８】
ＣＨＯトランスフェクタントにおいて安定して発現されているＰＤ−１に対する、ＰＤ−Ｌ１の結合阻害アッセイ
ヒトおよびマウスＰＤ−１を安定して発現しているＣＨＯトランスフェクタントを、ヒトおよびマウスＰＤ−１に対して用量決定したｍＡｂと共にそれぞれあらかじめインキュベートし、次いでＰＤ−Ｌ１−Ｆｃを２μｇ／ｍＬで添加した。細胞結合ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃを、ヒトＩｇＧ Ｆｃγへの二次的なＦＩＴＣ結合体によって検出した。
【００５９】
ＣＨＯトランスフェクタントにおいて安定して発現されているＰＤ−１に対する、ＰＤ−Ｌ２の結合阻害アッセイ
ヒトおよびマウスＰＤ−１を安定して発現しているＣＨＯトランスフェクタントを、ヒトおよびマウスＰＤ−１に対して用量決定したｍＡｂと共にそれぞれあらかじめインキュベートし、次いでＰＤ−Ｌ２−Ｆｃを１５μｇ／ｍｌで添加した。細胞結合ＰＤ−Ｌ２−Ｆｃを、ヒトＩｇＧ Ｆｃγへの二次的なＦＩＴＣ結合体によって検出した。
【００６０】
本発明に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体
本開示の方法において、任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体が用いられうる。本開示の方法において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例としては、米国特許第９，５８０，５０７号に開示される抗体が挙げられる。米国特許第９，５８０，５０７号に開示される抗ＰＤ−Ｌ１ヒトモノクローナル抗体のそれぞれは、以下の特徴のうちの１つ以上を有することが示されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを用いた表面プラズモン共鳴によって決定して、１ｘ１０−７Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ−Ｌ１に結合する；（ｂ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖を増加させる；（ｃ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロンγ産生を増加させる；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、ＩＬ−２分泌を増加させる；（ｅ）抗体応答を刺激する；および（ｆ）Ｔ細胞エフェクター細胞および／または樹状細胞において、Ｔ調節細胞の効果を逆転させる。本発明において使用可能な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、少なくとも１つ、いくつかの実施態様において、少なくとも５つの前記の特徴を示す、モノクローナル抗体が挙げられる。
【００６１】
いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（以前は１２Ａ４またはＭＤＸ−１１０５；例えば、米国特許第７，９４３，７４３号およびＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６、アテゾリズマブ、およびテセントリクとしても知られている；米国特許第８，２１７，１４９号；Herbst et al. (2013) J Clin Oncol 31(suppl):3000もまた参照されたい）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ；ＭＥＤＩ−４７３６；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＷＯ２０１１／０６６３８９を参照されたい）、アベルマブ（Ｐｆｉｚｅｒ；ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ；バベンチオ；ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ−１０１４（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ；ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ−０７２（Ｃｙｔｏｍｘ；ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（３Ｄ Ｍｅｄ／Ａｌｐｈａｍａｂ； Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)を参照されたい）、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ Ｃｏ．；例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、およびＣＫ−３０１（Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)を参照されたい）から成る群から選択される。
【００６２】
いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ（テセントリク）である。アテゾリズマブは完全ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００６３】
いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はデュルバルマブ（イミフィンジ）である。デュルバルマブはヒトＩｇＧ１カッパモノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００６４】
いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ１抗体はアベルマブ（バベンチオ）である。アベルマブはヒトＩｇＧ１ラムダモノクローナル抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００６５】
別の実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体は、２８−８、２８−１、２８−１２、２９−８、５Ｈ１、およびそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される。
【００６６】
本開示の方法において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としてはまた、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合について、本明細書に開示される任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと競合する、単離された抗体が挙げられる。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載される任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体、例えばアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合に交差競合する能力は、これらの抗体が抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合抗体が、その特定のエピトープ領域へ結合するのを立体的に阻害することを指す。これらの交差競合抗体は、ＰＤ−Ｌ１の同じエピトープ領域に結合することによって、参照抗体、例えばアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと非常に類似した機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーなどの標準的なＰＤ−Ｌ１結合アッセイで、アテゾリズマブおよび／またはアベルマブと交差競合する能力に基づいて、容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。
【００６７】
いくつかの実施態様において、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合に交差競合する、またはヒトＰＤ−Ｌ１抗体、アテゾリズマブおよび／またはアベルマブの同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与について、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、改変抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体である。そのようなキメラ、改変、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって合成および単離することができる。
【００６８】
本開示の発明の方法において使用可能な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としてはまた、上記の抗体の抗原結合部位が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって発揮することができることが十分に検証されている。
【００６９】
本開示の方法または組成物において用いるのに適切な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、高い特異性および親和性でＰＤ−Ｌ１に結合し、ＰＤ−１の結合を阻害し、ＰＤ−１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害する抗体である。本明細書に開示される任意の組成物または方法において、抗ＰＤ−Ｌ１「抗体」としては、ＰＤ−Ｌ１に結合し、受容体結合の阻害および免疫系の上方制御において、完全抗体と同様の機能的性質を発揮する、抗原結合部位または断片が挙げられる。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合部位は、ヒトＰＤ−Ｌ１への結合についてアテゾリズマブおよび／またはアベルマブと交差競合する。
【００７０】
本発明に有用な抗ＣＴＬＡ−４抗体
当技術分野において知られている任意の抗ＣＴＬＡ−４抗体が、本開示の方法において使用されうる。本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４とヒトＢ７受容体との相互作用を阻害するようにヒトＣＴＬＡ−４に結合する。ＣＴＬＡ−４とＢ７との相互作用は、ＣＴＬＡ−４受容体を有するＴ細胞の不活性化につながるシグナルを変換するため、相互作用の遮断によって、そのようなＴ細胞の活性化を効率的に誘導、強化、または延長させ、それによって免疫応答の誘導、強化、または延長をもたらす。
【００７１】
いくつかの実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ；米国特許第６，９８４，７２０号）、ＭＫ−１３０８（Ｍｅｒｃｋ）、ＡＧＥＮ−１８８４（Ａｇｅｎｕｓ Ｉｎｃ．；ＷＯ２０１６／１９６２３７）、およびトレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；例えば、ＷＯ２０００／０３７５０４およびRibas, Update Cancer Ther. 2(3): 133-39 (2007)を参照されたい)から選択される。特定の実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４はイピリムマブである。
【００７２】
特定の実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６としても知られている）である。トレメリムマブはヒトＩｇＧ２モノクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体である。トレメリムマブは、ＷＯ／２０１２／１２２４４４、米国公開第２０１２／２６３６７７号、またはＷＯ公開第２００７／１１３６４８ Ａ２号において記載されている。
【００７３】
特定の実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は、Ｍｅｒｃｋによって開発中の抗ＣＴＬＡ−４抗体であるＭＫ−１３０８である。
【００７４】
特定の実施態様において、ＣＴＬＡ−４抗体は、Ａｇｅｎｕｓ Ｉｎｃ．によって開発された、ヒトＣＴＬＡ−４に対する組み換えヒトモノクローナル抗体であるＡＧＥＮ−１８８４である。
【００７５】
開示された方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ−４抗体としてはまた、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、本明細書に開示される任意の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと、ヒトＣＴＬＡ−４への結合について交差競合する、単離抗体が挙げられる。いくつかの実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、本明細書に記載される任意の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと同じエピトープに結合する。抗体が抗原への結合に交差競合する能力は、これらの抗体が抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合抗体が、その特定のエピトープ領域へ結合するのを立体的に阻害することを指す。これらの交差競合抗体は、ＣＴＬＡ−４の同じエピトープ領域に結合することによって、参照抗体、例えばイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと非常に類似した機能的性質を有することが期待される。交差競合抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的なＣＴＬＡ−４結合アッセイで、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する能力に基づいて、容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。
【００７６】
いくつかの実施態様において、ヒトＣＴＬＡ−４への結合に交差競合する、またはヒトＣＴＬＡ−４抗体、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブの同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与について、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、改変抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体である。そのようなキメラ、改変、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって合成および単離することができる。
【００７７】
開示された発明の方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ−４抗体としてはまた、上記の抗体の抗原結合部位が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって発揮することができることが十分に検証されている。
【００７８】
本開示の方法または組成物において用いるのに適切な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、高い特異性および親和性でＣＴＬＡ−４に結合し、ＣＴＬＡ−４の活性を阻害し、ＣＴＬＡ−４のヒトＢ７受容体との相互作用を阻害する抗体である。本明細書に開示される任意の組成物または方法において、抗ＣＴＬＡ−４「抗体」としては、ＣＴＬＡ−４に結合し、ＣＴＬＡ−４のヒトＢ７受容体との相互作用の阻害および免疫系の上方制御において、完全抗体と同様の機能的性質を発揮する、抗原結合部位または断片が挙げられる。いくつかの実施態様において、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合部位は、ヒトＣＴＬＡ−４への結合についてイピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する。
【００７９】
本明細書で用いられる「組み合わせ」は、別々に投与することができる、例えば別々の投与のための別々に製剤化された（例えば、キットにおいて提供されうる）治療、および単一剤形において共に投与することができる（すなわち、「共投与」）治療を含むことを意味する。いくつかの局面において、モノクローナル抗体および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および／または化学療法は、例えば、１つの薬剤が１つ以上の他の薬剤の前に投与される場合、連続して投与または適用される。別の実施態様において、モノクローナル抗体および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および／または化学療法は、例えば、２つ以上の薬剤が同時に、またはほぼ同時に投与される場合；２つ以上の薬剤が２つ以上の別個の製剤において存在しうる場合、あるいは単一剤形において組み合わされている場合（すなわち共製剤）、同時に投与される。２つ以上の薬剤が順次または同時に投与されるかに関わらず、それらは本開示の目的のために組み合わせて投与されることが考えられる。
【００８０】
本開示の例示的な局面において、抗体はニボルマブである。いくつかの局面において、ニボルマブは４週間ごとに約４００ｍｇから５００ｍｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。例えば、ニボルマブは４週間ごとに、約４００ｍｇ、４１０ｍｇ、４２０ｍｇ、４３０ｍｇ、４４０ｍｇ、４５０ｍｇ、４６０ｍｇ、４７０ｍｇ、４８０ｍｇ、４９０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で静脈内注入によって対象に投与されうる。好ましい局面において、ニボルマブは４週間ごとに約４８０ｍｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。
【００８１】
いくつかの局面において、ニボルマブは３週間ごとに約８０ｍｇから３６０ｍｇの用量において静脈内注入によって対象に投与されうる。例えば、ニボルマブは３週間ごとに約８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、または約３６０ｍｇの用量で、静脈内注入によって対象に投与されうる。好ましい局面において、ニボルマブは３週間ごとに約８０ｍｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。他の好ましい局面において、ニボルマブは３週間ごとに約３６０ｍｇの用量で静脈内注入によって投与される。
【００８２】
いくつかの実施態様において、ニボルマブは２週間ごとに約２００ｍｇから３００ｍｇの用量で静脈内注入によて投与されうる。例えば、ニボルマブは２週間ごとに約２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、または約３００ｍｇの用量で静脈内注入によって対象に投与されうる。好ましい局面において、ニボルマブは２週間ごとに約２４０ｍｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。
【００８３】
いくつかの局面において、ニボルマブはさらにイピリムマブと共に投与され、ここで、イピリムマブは３週間ごとに約１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。例えば、イピリムマブは３週間ごとに約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内注入によって対象に投与されうる。好ましい局面において、イピリムマブは３週間ごとに約３ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注入によって投与されうる。
【００８４】
本明細書で用いられる「対象に投与する」およびその類似の用語は、対象の体の標的細胞、組織、または部位が化合物と接触するように、化合物を患者に注入する手順を示す。本明細書において考慮される投与方法としては、限定されないが、経口、局所、吸入、または非経口投与が挙げられる。適切な非経口投与方法としては、限定されないが、静脈内、筋肉内、皮下、および皮内非経口投与が挙げられる。
【００８５】
いくつかの局面において、本明細書に記載されるモノクローナル抗体、および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせは、癌を有する対象に投与され、ここで、対象は癌の治療のために少なくとも１回の前治療を以前受けていたことがあってもよい。そのような対象は、「治療経験」または「治療未経験」と称されうる。いくつかの局面において、前治療は進行中である。別の局面において、前治療は中断されている。これらの対象において、前治療は約１２または２４時間継続しうる。別の局面において、前治療は約２、３、４、５、または６日間継続しうる。別の局面において、前治療は約１、２、３、４、５、６、７、または８週以上継続しうる。いくつかの局面において、前治療は約３、４、５、６、７、８、９、１０、または約１１ヶ月継続しうる。別の局面において、前治療は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または約１０年継続しうる。
【００８６】
前治療の例としては、限定されないが、手術、放射線療法、化学療法、免疫療法、標的療法、ホルモン療法、肝細胞移植、または精密医療療法が挙げられる。
【００８７】
本明細書で用いられる「化学療法」は、１つ以上の化学療法薬および／または他の薬剤を、静脈内、経口、筋肉内、腹腔内、膀胱内、皮下、経皮、バッカル、吸入、または坐薬の形態などの様々な方法によって癌患者に投与することをいう。
【００８８】
本明細書で用いられる「手術」は、限定されないが、腫瘍生検、または大腸（人工肛門造設術）、膀胱（膀胱全摘除術）、脾臓（脾摘出術）、胆嚢（胆嚢摘出術）、胃（胃切除術）、肝臓（肝部分切除術）、膵臓（膵切除術）、卵巣および卵管（両側卵管卵巣摘出術）、腹膜（大網切除術）および／もしくは子宮（子宮摘出術）の一部もしくは全ての除去などの、癌組織の除去を用いた外科的方法をいう。
【００８９】
いくつかの局面において、本明細書に記載されるモノクローナル抗体および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の組み合わせは、癌を有する対象に投与されてもよく、ここで対象は治療未経験である。本明細書で用いられる「治療未経験」は、対象が癌の治療のための前治療を以前受けていないことを意味する。
【００９０】
いくつかの局面において、モノクローナル抗体および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、状況下で適切な任意の方法で、さらなる治療剤とさらに組み合わせて投与されうる。本明細書に開示される癌を治療するための組み合わせにおいて用いられうる治療剤の例としては、放射線、免疫調節剤、または化学療法剤、または診断薬が挙げられる。本発明において用いられうる適切な免疫調節剤としては、本明細書に記載される他のモノクローナル抗体、ＣＤ４０Ｌ、Ｂ７、およびＢ７ＲＰ１；抗ＣＤ４０、抗ＣＤ３８、抗ＩＣＯＳ、および４−ＩＢＢリガンドなどの、刺激受容体に対する活性化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）；樹状細胞抗原ロード（インビトロまたはインビボ）；樹状細胞癌ワクチンなどの、抗癌ワクチン；ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、ＥＬＣ／ＣＣＬ１９、ＳＬＣ／ＣＣＬ２１、ＭＣＰ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−１８、ＴＮＦ、ＩＬ−１５、ＭＤＣ、ＩＦＮａ／ｂ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１３、および抗ＩＬ−１０などの、サイトカイン／ケモカイン；細菌リポ多糖（ＬＰＳ）；および免疫刺激性オリゴヌクレオチドが挙げられる。
【００９１】
化学療法剤の例としては、限定されないが、チオテパおよびシクロホスファミドなどの、アルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどの、スルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどの、アジリジン；アルトレタミン，トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホロアミド、トリエチレンチオホスホロアミド、およびトリメチロロメラミンなどの、エチレンイミン、およびメチラメラミン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロライド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの、ナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどの、ニトロソウレア；アクラルビシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、キエラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの、抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの、代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの、葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどの、プリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロクスウリジンなどの、ピリミジン類似体；カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどの、アンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの、抗副腎；フロリン酸などの、葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン；エリプチニウムアセテート；エトグルシド；ガリウムニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ−��）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金、およびシスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金配位複合体；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；および上記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【００９２】
化学療法剤としてはまた、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、およびトレミフェンなどの抗エストロゲン；およびフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、およびゴセレリンなどの、抗アンドロゲン；および上記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。いくつかの実施態様において、併用療法は、ホルモンまたは関連ホルモン剤の投与を含む。
【００９３】
化学療法剤としてはまた、シグナル伝達阻害剤（ＳＴＩ）が挙げられる。用語「シグナル伝達阻害剤」は、シグナル伝達経路の１つ以上の段階を選択的に阻害する薬剤をいう。本発明のシグナル伝達阻害剤（ＳＴＩ）としては、（ｉ）ｂｃｒ／ａｂｌキナーゼ阻害剤（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；（ｉｉ）キナーゼ阻害剤および抗体などの、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）受容体阻害剤；（ｉｉｉ）ｈｅｒ−２／ｎｅｕ受容体阻害剤（例えば、ハーセプチン（登録商標））；（ｉｖ）ＡｋｔファミリーキナーゼまたはＡｋｔ経路の阻害剤（例えば、ラパマイシン）；（ｖ）細胞周期キナーゼ阻害剤（例えば、フラボピリドール）；および（ｖｉ）ホスファチジルイノシトールキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【００９４】
化学療法剤としてはまた、オキサリプラチン、ビタミンＢ誘導体、例えば、ロイコボリン（ＦＯＬ、フォリン酸）、およびトポイソメラーゼ阻害剤、例えば、イリノテカンが挙げられる。
【００９５】
いくつかの実施態様において、化学療法剤は、パクリタキセル、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、およびイリノテカンから選択される。
【００９６】
フォルフィリは、ＦＯＬ−フォリン酸（ロイコボリン）およびＦ−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびＩＲＩ−イリノテカンを含む化学療法レジメンである。
【００９７】
フォルフォックスは、ＦＯＬ−フォリン酸（ロイコボリン）およびＦ−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、およびＯＸ−オキサリプラチンを含む化学療法レジメンである。
【００９８】
Ｇｅｍ／アブラキサン（ｎａｂ−パクリタキセル）は、ゲムシタビンおよびｎａｂ−パクリタキセルを含む化学療法レジメンである。
【００９９】
モノクローナル抗体および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩との組み合わせで用いられうる、さらなる治療モダリティとしては、ＩＬ−１２、ＩＦＮなどのサイトカインまたはサイトカインアンタゴニスト、抗上皮細胞増殖因子受容体、放射線療法、他の腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体、モノクローナル抗体およびトキシンの複合体、Ｔ細胞アジュバント、骨髄移植、または抗原提示細胞（例えば、樹状細胞療法）が挙げられる。ワクチン（例えば、可溶性タンパク質として、または核酸コードタンパク質として）もまた、本明細書において提供される。
【０１００】
「癌」は、体内の異常細胞の制御されていない増殖を特徴とする、様々な疾患の幅広いグループをいう。「癌」または「癌組織」は、腫瘍を含みうる。無秩序な細胞分裂および増殖の結果、隣接組織に侵入する悪性腫瘍が形成され、リンパ系または血流を通じて身体の離れた部分に転移することもある。転移後、遠位腫瘍は転移前腫瘍に「由来する」と言うことができる。例えば、膵癌に「由来する腫瘍」は、転移した膵癌の結果である腫瘍をいう。遠位腫瘍は転移前腫瘍に由来するから、腫瘍に「由来する」はまた、転移前腫瘍を含んでもよく、例えば、膵臓に由来する腫瘍は膵癌を含んでもよい。
【０１０１】
いくつかの局面において、癌は悪性固形腫瘍である。さらなる局面において、癌は転移および／または切除不能である。本明細書に記載される化合物および組成物を用いて治療されうる癌の例としては、限定されないが、膵癌、大腸癌、非小細胞性肺癌、腎細胞癌；頭頸部の扁平上皮細胞癌、膀胱癌、前立腺癌、頸部癌、胃癌、子宮内膜癌、脳癌、肝臓癌、卵巣癌、精巣癌、頭部癌、頸部癌、皮膚癌（黒色腫および基底細胞癌など）、中皮裏層癌、食道癌、乳房癌、筋肉癌、結合組織癌、肺癌（小細胞肺癌および非小細胞癌など）、副腎癌、甲状腺癌、腎臓癌、または骨癌；神経膠芽腫、中皮腫、胃癌、肉腫、絨毛癌、皮膚基底細胞癌、および精巣精上皮腫が挙げられる。好ましい局面において、癌は頸部癌、非小細胞性肺癌、腎細胞癌；頭頸部の扁平上皮細胞癌、膀胱癌、膵癌、黒色腫、リンパ腫または胃癌である。さらに好ましい局面において、癌は黒色腫、非小細胞性肺癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、膀胱癌、腎細胞癌または胃癌である。
【０１０２】
本開示のいくつかの局面において、対象は、本開示の任意の方法による治療後に、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスの改善を示す。いくつかの局面において、対象は、本明細書に記載される治療後、１以下のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示す。別の局面において、対象は、治療後、２以下のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示す。別の局面において、対象は、治療後、３以下のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示す。別の局面において、対象は、治療後、４以下のＥＣＯＧパフォーマンスステータスを示す。ＥＣＯＧパフォーマンスステータスは、米国東海岸癌臨床試験グループによって開発され、グレードごとに以下のステータスの説明が提供される：グレード０は完全にアクティブで、制限なく疾患前の全ての行動を行うことができる；グレード１は肉体的に激しい活動が制限されるが、歩行可能であり、軽作業または座っての作業、例えば、軽い家事、事務作業を行うことができる；グレード３は、歩行可能で、全てのセルフケアが可能であるが、活動時間の最大約５０％は任意の作業を行うことができない。
【０１０３】
いくつかの局面において、対象は成人である。例えば、成人の集団には１８歳以上の対象が含まれうる。別の局面において、対象は高齢対象である。例えば、高齢の集団には６４歳以上の対象が含まれうる。別の局面において、対象は小児対象である。例えば、小児対象は、早産新生児（新生児の出産時期が、全妊娠期間の前である）、満期産新生児（誕生から２７日）、乳児（２８日から１２ヶ月）、幼児（１３ヶ月から２歳）、幼児期（２歳から５歳）、中年幼児期（６歳から１１歳）、初期青年期（１２歳から１８歳）、または後期青年期（１９歳から２１歳）でありうる。
【０１０４】
いくつかの局面において、本明細書において開示される治療方法は、米国保健福祉省によって公表された有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）によって確立された、治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）を生じうる。有害事象（ＡＥ）は、医学的処置または手順に関連する場合がある、またはしない場合がある、医学的処置または手順の使用に一時的に関連する、任意の望ましくない、意図しない徴候（異常な検査所見など）、症状、または疾患である。ＡＥは、医療文書や科学的分析に用いられる特定の事象を一意的に表す用語である。ＣＴＣＡＥによって確立された一般的なガイドラインは以下の通りである：グレートは、ＡＥの重症度をいい、グレード１は、軽度；無症状または軽度な症状；臨床的または診断的観察のみ；介入は示されていないことであると定義される。グレード２は、中程度；最小限、局所的、または非侵襲的な介入が示されている；年齢相応の制限された手段的日常生活動作（ＡＤＬ）として定義される。グレード３は、重篤または医学的に重要であるが、すぐに生命が脅かされるわけではなく；入院または入院の延長が示されている；セルフケアＡＤＬができない；限定されている。グレード４は、生命が脅かされている結果であり；緊急の介入が示されている。グレード５はＡＥに関連する死である。ＴＲＡＥが２以上の例としては、ブドウ膜炎、食欲減退、発熱、貧血、自己免疫性肝炎、疲労、頭痛、悪心および／または嘔吐が挙げられる。グレード３／４のＴＲＡＥは、「深刻なＴＲＡＥ」とも称されるが、例としては、リパーゼの増加、低リン血症、発疹、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加、アラニンアミノトランスフェラーゼの増加、肝炎、高血圧、膵炎、および／または自己免疫性肝炎が挙げられる。
【０１０５】
いくつかの局面において、本明細書に記載される治療は、グレード４またはグレード５の有害事象を生じない場合がある。別の局面において、本明細書に記載される治療は、グレード１未満の有害事象を生じうる。さらなる局面において、本明細書に記載される治療は、グレード２未満の有害事象を生じうる。さらなる局面において、本明細書に記載される治療は、グレード３未満の有害事象を生じうる。
【０１０６】
本明細書に記載される方法の局面において、対象は、客観的奏効率（ＯＲＲ）、応答期間、および非憎悪生存（ＰＦＳ）率によって測定して、改善された抗腫瘍活性を示しうる。
【０１０７】
客観的奏効率（ＯＲＲ）は、欧州癌研究治療機構（ＥＯＲＴＣ）、国立癌研究所（ＮＣＩ）、並びに米国およびカナダ国立癌研究所の臨床試験グループの協力によって開発された、固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ） ｖ１．１を用いた応答の評価によって、研究者および／または医師によって定量化することができる。必要に応じて、ＯＲＲは適宜中央イメージング研究所によって再検討されうる。
【０１０８】
本明細書に記載される癌の文脈において用いられる「非憎悪生存（ＰＦＳ）」は、癌の治療中および治療後の対象の腫瘍進行または死までの時間の長さをいう。治療は、客観的または主観的パラメーターによって評価されうる；身体検査、神経学的診察、または精神医学的評価の結果など。好ましい局面において、ＰＦＳは盲検画像中央判定によって評価される場合があり、さらにＯＲＲまたは盲検独立中央判定（ＢＩＣＲ）によって適宜確認される場合がある。
【０１０９】
「全生存（ＯＳ）」は、カプラン・マイヤー法によって、特定の時点（例えば、１年および２年）におけるＯＳ率によって評価される場合があり、対応する９５％ＣＩは、それぞれの腫瘍についての試験療法によって、グリーンウッドの式に基づいて導き出される。ＯＳ率は、その時点で生存している参加者の割合として定義される。参加者のＯＳは、最初の投薬日から、何らかの原因による死亡日までの時間として定義される。
【０１１０】
本明細書で用いられる「有害事象」（ＡＥ）は、医療処置の使用に関連する、任意の好ましくない、一般に意図されない、または望ましくない徴候（異常な検査所見など）、症状、または疾患である。医学的処置は、１つ以上の関連するＡＥを有し、それぞれのＡＥは同じまたは異なる程度の重症度を有しうる。「有害事象を変化させる」ことができる方法についての言及は、異なる治療レジメンの使用に関連する１つ以上のＡＥの発生率および／または重症度を低下させる治療レジメンを意味する。
【０１１１】
「治療量以下の用量」は、過増殖性疾患（例えば癌）の治療のために単体で投与される場合、治療化合物の通常または典型的な用量よりも少ない、治療化合物（例えば抗体）の用量を意味する。
【０１１２】
いくつかの実施態様において、本明細書で開示される方法は、標準的な治療法の代わりに用いられる。いくつかの実施態様において、標準的な治療法は、本明細書に開示される任意の方法と組み合わせて用いられる。異なる種類の癌についての標準的な治療法は、当業者に周知である。例えば、全米総合癌ネットワーク（ＮＣＣＮ）、米国における２１の主要な癌センターの同盟は、様々な種類の癌の標準治療の詳細な最新情報を提供する、腫瘍におけるＮＣＣＮ臨床診療ガイドライン（ＮＣＣＮガイドライン（登録商標））を公表している（NCCN GUIDELINES（登録商標）、2014を参照されたい、www.nccn.org/professionals/physician_gls/ f_guidelines.aspにおいて利用可能、２０１４年３月１４日最終アクセス）。
【０１１３】
治療は、臨床的利益が観察されるまで、または許容できない毒性または疾患の進行が発生するまで、継続される。いくつかの実施態様において、抗ＰＤ−１抗体は、臨床試験において単剤療法として最も高い効果を生じることが示されている用量、例えば、約３週間ごとに１回投与される、約３ｍｇ／ｋｇのニボルマブ（Topalian et al., 2012 N Engl J Med 366:2443-54; Topalian et al., 2012 Curr Opin Immunol 24:207-12）、２４０ｍｇの一定用量、または有意に低い用量、すなわち治療量以下の用量において投与することができる。
【０１１４】
用量および頻度は、対象における抗体の半減期によって変化する。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、次にヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体である。投与量および頻度は、治療が予防であるか治療であるかによって異なりうる。予防的応用において、一般に比較的低い用量が、長期間にわたって、比較的不定期な間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって治療を受け続ける。治療的応用において、疾患の進行が軽減するまたは終了するまで、並びに患者が疾患症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔における比較的高い用量が必要である場合がある。その後、患者は予防レジメンを投与されうる。
【０１１５】
本開示の医薬組成物における活性成分の実際の用量レベルは、患者に過度な毒性がなく、特定の患者、組成物、および投与形態についての目的の治療応答を達成するのに有効な活性成分が得られるように変化しうる。選択された用量レベルは、使用される本開示の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出率、治療期間、使用される特定の組成物との組み合わせで用いられる他の薬物、化合物、および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、病状、健康状態、および以前の病歴、並びに医学分野において周知の因子などの、様々な薬物動態的因子に応じて変化するであろう。本開示の組成物は、当技術分野において周知の様々な方法の１つ以上を用いて、１つ以上の投与経路を介して投与されうる。当業者によって理解されるように、投与経路および／または形態は、目的の結果に応じて変化するであろう。
【０１１６】
キット
本明細書の範囲内にはまた、治療的使用のためのＣＣＲ２／５デュアルアンタゴニストモノクローナル抗体および／または化学療法剤を含むキットも含まれる。キットは一般に、キットの内容物の意図される使用を示すラベルと、使用説明書を含む。用語ラベルは、キット上またはキットと共に提供される、あるいはキットに付属の任意の書面または記録資料を含む。
【０１１７】
以下の実施例は単なる例示であり、そこに記載される物質、条件、または方法パラメーターに本開示を限定することを意図しない。
【実施例】
【０１１８】
実施例１．マウス結腸腫瘍（ＭＣ３８）の進行に対する、化合物Ａおよび抗体Ｂの組み合わせ
組み合わせ薬理学試験を行って、腫瘍を有するマウスにおいて、抗ＰＤ−１抗体、抗体Ｂとの組み合わせにおけるＣＣＲ２／５−デュアルアンタゴニスト、化合物Ａを評価した。
【０１１９】
Charles River Laboratories (Raleigh、NC)から、メスＣ５７ＢＬ／６マウスを６〜８週齢で受け取り、移植前に３〜７日順化させた。マウス結腸腫瘍ＭＣ３８細胞は、２５ｇニードルの１ｍＬツベルクリン注射器を用いて、１ｘ１０７細胞／ｍＬの濃度で、注射あたり０．１ｍＬで皮下移植した。
【０１２０】
移植後６日目に、マウスを無作為化し、グループごとに１０匹のマウスにグループ分けした。治療は対照ビヒクルおよびアイソタイプ対照；抗体Ｂ（抗マウスＰＤ１）１０ｍｇ／ｋｇのみ；２５、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａのみ（研究＃１）、６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａのみ（研究＃２）；１０ｍＬ／ｋｇの抗体Ｂとの組み合わせの、２５、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（研究＃１）、１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｂとの組み合わせの、６．２５、１２．５、２５および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ（研究＃２）で、６日目に開始した。化合物Ａは、２８日間の経口投与により、１日２回の継続的なスケジュールで投与した。抗体Ｂは、４日ごとに計３回、腹腔内投与した。１、４、７、および２４時間の時点において、化合物ＡのＰＫ評価の試験の中間地点において、ＤＢＳ（乾燥血液スポット）カード上に血液を収集した（１０μＬの尾からの出血）。
【０１２１】
腫瘍およびグループの体重を計測し、腫瘍が約１５００ｍｍ３の体積に到達するまで、週に２回測定した。腫瘍が約１５００ｍｍ３を超える体積に達したか、腫瘍化したと見えた場合、動物を安楽死させた。有効性を決定するために、平均値、中央値、および／または生存プロット、並びに腫瘍のないマウスの数を計測した。
【０１２２】
これらの研究の結果によって、２８日間２５、５０、および１００ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１日２回経口投与した化合物Ａ、および１０ｍｇ／ｋｇで週２回、計３回投与した抗体Ｂの組み合わせが、いずれか単体の薬剤と比較して、腫瘍体積の減少によって測定して、より優れた抗腫瘍効果を提供することが示唆される（図１参照）。
【０１２３】
化合物Ａのトラフ曝露の分析によって、２５、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ、０．６、２．５、および２６．５倍のＩＣ９０が示され、これは０．６から２６．５倍のＩＣ９０のトラフ範囲の化合物Ａが、腫瘍の進行に対して、抗体Ｂと相乗作用することが示されている（表１）。化合物Ａおよび抗体Ｂの両方、単体、または組み合わせは、十分に許容可能であった。組み合わせで治療されたマウスはいずれも、毒性の臨床的徴候を示さず、体重への影響はなかった。
【表３】
2021511344.tif 000007
【０１２４】
抗体Ｂとの組み合わせで、低用量の化合物Ａを用いた別の試験を行い、その結果、２８日間にわたり、６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１日２回経口投与した化合物Ａ、および１０ｍｇ／ｋｇで週２回、計３回投与した抗体Ｂの組み合わせが、いずれか単体の薬剤と比較して、腫瘍体積の減少によって測定して、より優れた抗腫瘍効果を提供することが示された（図２参照）。
【０１２５】
化合物Ａのトラフ曝露の分析によって、６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ、０．６、２．５、および２６．５倍のＩＣ９０が示され、これは０．０５から１．５６倍のＩＣ９０のトラフ範囲の化合物Ａが、腫瘍の進行に対して、抗体Ｂと相乗作用することが示されている（表２）。
【表４】
2021511344.tif 000008
【０１２６】
実施例２．マウス結腸腫瘍（ＣＴ２６）進行に対する、化合物Ａおよび抗体Ｂの組み合わせ
組み合わせの薬学的試験を行って、ＣＴ２６結腸腫瘍モデルにおける、抗体Ｂとの組み合わせの化合物Ａを評価した。
【０１２７】
ENVIGO (Frederick、MD)から、メスＢＡＬＢ／Ｃマウスを６〜８週齢で受け取り、移植前に３〜７日順化させた。マウス結腸腫瘍ＣＴ２６細胞を、２５ｇニードルの１ｍＬツベルクリン注射器を用いて、１ｘ１０７細胞／ｍＬの濃度で、注射あたり０．１ｍＬで皮下移植した。
【０１２８】
移植後１０日目に、マウスを無作為化し、グループごとに１０匹のマウスにグループ分けした。治療は対照ビヒクルおよびアイソタイプ対照；抗体Ｂ（抗マウスＰＤ１）１０ｍｇ／ｋｇのみ；６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａのみ；１０ｍＬ／ｋｇの抗体Ｂとの組み合わせの、６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで、１０日目に開始した。化合物Ａは、２８日間の経口投与により、１日２回の継続的なスケジュールで投与した。抗体Ｂは４日ごとに計３回、腹腔内投与した。
【０１２９】
腫瘍およびグループの体重を計測し、腫瘍が約１５００ｍｍ３の体積に到達するまで、週に２回測定した。腫瘍が約１５００ｍｍ３を超える体積に達したか、腫瘍化したと見えた場合、動物を安楽死させた。有効性を決定するために、平均値、中央値、および／または生存プロット、並びに腫瘍のないマウスの数を計測した。
【０１３０】
これらの研究の結果によって、２８日間６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇでそれぞれ１日２回経口投与した化合物Ａ、および１０ｍｇ／ｋｇで週２回、計３回投与した抗体Ｂの組み合わせが、いずれかの単体の薬剤と比較して、腫瘍体積の減少によって測定して、より優れた抗腫瘍効果を提供することが示唆され（図３および表３（引用元が存在しない）を参照されたい）、抗体Ｂとの組み合わせの１２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの群が、４つの組み合わせ群のうちで最も強い抗腫瘍活性を示した。
【０１３１】
ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける化合物ＡのＰＫ所見に基づいて、そのトラフ曝露は、６．２５、１２．５、２５、および５０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ、約０．１、０．２、０．５、および１倍のＩＣ９０を示すことが予想され、これは０．１から１倍のＩＣ９０のトラフ範囲の化合物Ａが、腫瘍の進行に対して、抗体Ｂと相乗作用することを示す（表３）。化合物Ａおよび抗体Ｂの両方、単体、または組み合わせは、十分に許容可能であった。組み合わせで治療されたマウスはいずれも、毒性の臨床的徴候を示さず、体重への影響はなかった。
【表５】
2021511344.tif 000009
【０１３２】
実施例３．進行性癌を有する患者にニボルマブまたは化学療法のいずれかとの組み合わせで投与される化合物Ｃ
フェーズ１ｂ／２非盲検、２部の臨床試験の限定されない例を、以下に記載する。
【０１３３】
目的：
この試験の目的は、とりわけ、転移性大腸癌および膵癌を有する患者において、ニボルマブまたは化学療法と併用して投与される化合物Ｃの、安全性プロファイル、許容性、ＰＫ、ＰＤ、および予備的有効性を評価することである。
【０１３４】
介入：
患者は、特定の間隔で特定の用量において、化合物Ｃを投与される。いくつかの実施態様において、患者は化合物Ｃに加えて、第二治療剤または化学療法レジメンもまた投与されるであろう。いくつかの実施態様において、第二治療剤はニボルマブであり、これが特定の間隔で投与される。いくつかの実施態様において、化学療法レジメンはフォルフィリまたはＧｅｍ／アブラキサン（ｎａｂ−パクリタキセル）であり、これが特定の間隔で投与される。
【０１３５】
試験計画
試験は２部で行う。パート１は、進行性大腸癌および膵癌を有する患者において、フォルフィリ（Ａｒｍ Ａ）、Ｇｅｍ／アブラキサン（ｎａｂ−パクリタキセル）［Ａｒｍ Ｂ］、またはニボルマブ（Ａｒｍ Ｃ）のいずれかとの組み合わせにおける、化合物Ｃの２つの異なる用量（すなわち、１日２回３００ｍｇ、または１日１回６００ｍｇ）の安全性、許容性、ＰＫ、およびＰＤを評価する。パート２は、進行性大腸癌または膵癌を有する患者において、化学療法またはニボルマブのいずれかとの組み合わせにおける、化合物Ｃの予備的有効性を評価するための、用量拡大試験である。アームＣの参加者が約１５％の客観的奏効率（ＯＲＲ）を示した場合、またはニボルマブおよび化合物Ｃの組み合わせにおいて持続的な応答が示された場合、アームＤ（化合物Ｃの単剤療法）が開始される。
【０１３６】
この研究の一次および二次分析の目的およびエンドポイントを、表３（パート１）および表４（パート２）に示す。
【表６】
2021511344.tif 000010
略語：%UR = 投与間隔にわたる尿中回収率；ADA = 抗薬物抗体；AE = 有害事象；AI = 蓄積指数；AUC(0-8) = 投与後０〜８時間の濃度時間曲線下の面積；AUC(TAU) = １回の投与間隔における濃度時間曲線下の面積；CCR2 = システイン−システインケモカイン受容体２；CL = クリアランス；CLR = 腎クリアランス；CLT/F = 見かけの全身クリアランス；Cmax = 観測された最大血漿濃度；CRC = 大腸癌；Ctau = 投与間隔の終わりに観測された血漿濃度；Ctrough = 観測された血漿濃度のトラフ；DLT = 用量規制毒性；ECG = 心電図；Gem = ゲムシタビン；MATE = 多剤および毒素排出タンパク質；MCP-1 = 単球走化性タンパク質-1；MR_AUC(TAU) = 分子量について補正した、親AUC(TAU)に対する代謝物AUC(TAU)の比；MR_Cmax = 分子量について補正した、親Cmaxに対する代謝物Cmaxの比；NMN = N-メチルニコチンアミド；OS = 全生存；PK = 薬物動態；SAE = 重篤な有害事象；TAM = 腫瘍関連マクロファージ；Tmax = 観測された最大血漿濃度の時間；Treg = 制御性Ｔ細胞
【０１３７】
【表７】
2021511344.tif 000011
略語：ADA = 抗薬物抗体；AE = 有害事象； Gem = ゲムシタビン； SAE = 重篤な有害事象； Treg = 制御性Ｔ細胞
【０１３８】
試験集団
組み入れ基準（全ての性別、１８歳以上を対象とした試験）
・参加者は転移性大腸癌または膵癌を有していなければならない
・＜１の米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス
・錠剤やカプセルを飲み込む能力
・全ての参加者は必須の治療前および治療中の生検を受ける必要がある
・適切な骨髄機能
・適切な他の臓器の機能
・試験訪問、治療、手順、ＰＫ、およびＰＤサンプル回収、および必要な試験フォローアップに従う能力
【０１３９】
除外基準：
・腺癌以外の組織診断（神経分泌細胞または腺房細胞）
・疑い、既知、または進行性のＣＮＳ転移（参加者が症状を示している場合のみ、イメージングが必要である）
・参加者は活性、既知、または疑われる自己免疫性疾患を有する
・参加者は試験治療投与の１４日以内に、コルチコステロイド（１日あたり＞１０ｍｇのプレドニゾン相当量）または他の免疫抑制剤のいずれかによる全身治療が必要である病状を有する
・症状性であるか、あるいは疑われる治療関連肺毒性の検出または管理に干渉しうる間質性肺疾患
・ＣＣＲ２および／またはＣＣＲ５阻害剤による前治療
・試験治療または参加者が登録されている試験アームの任意の構成要素に対するアレルギーの病歴
【０１４０】
治療期間（パート１）
治療期間（パート１）は、フォルフィリ、Ｇｅｍ／ｎａｂ−パクリタキセル、またはニボルマブのいずれかとの組み合わせの前に、化合物Ｃによる２週間の単剤療法の導入がある。３つのアーム全てに同時に参加者を登録する。参加者は試験のそれぞれのアームにおいて、化合物Ｃの３００ｍｇ ＢＩＤまたは６００ｍｇ ＱＤに割り当てられる。アームあたり計約１２人の参加者のうち、約６人の評価可能な参加者がそれぞれの化合物Ｃの用量（すなわち、３００ｍｇ ＢＩＤまたは６００ｍｇ ＱＤ）において治療される。スポンサーおよび調査者との協議の後、必要であれば、安全性、ＰＫ、またはＰＤプロファイルをさらに特性評価するため、およびパート２の化合物Ｃの用量選択を通知するために、最大６人のさらなる参加者が用量コホートに追加されうる。
【０１４１】
化合物Ｃの単剤療法の導入により、癌参加者における初期許容性の評価が可能になり、次の組み合わせレジメンの追加または相乗毒性の特性評価が容易になり、化合物ＣのＰＤ効果の特性評価を行うための２週目における生検が可能になる。２週間の化合物Ｃの単剤療法の後、参加者はフォルフィリ、Ｇｅｍ／ｎａｂ−パクリタキセル、またはニボルマブのいずれかとの併用フェーズが開始され、必須の生検が行われた後（±３日）、化合物Ｃによる治療も継続される。生検が２週間を超えて回収された場合、単剤療法を継続し、生検が行われた後にのみ、化学療法またはニボルマブとの組み合わせが開始されるべきである。参加者は、疾患の進行、不耐性、治療中止の基準を満たすまで、または同意が取り消されるまで、併用が継続する。
【０１４２】
治療期間（パート２）
治療期間（パート２）は、以下に記載される化合物Ｃとの様々な組み合わせの有効性の予備的なシグナルを探索する。パート１において調査された用量から、化合物Ｃの用量およびスケジュールが選択された後、パート２は登録開始される。試験のパート１から利用可能な安全性、ＰＫ、およびＰＤデータに基づいて、パート２における化合物Ｃの用量が選択され、パート１において安全であると決定された用量およびスケジュールを超過しない。パート２の参加者は、化合物Ｃの単剤療法の導入なしで、フォルフィリ、Ｇｅｍ／ｎａｂ−パクリタキセル、またはニボルマブのいずれかとの組み合わせにおける化合物Ｃによって治療される。
【０１４３】
最初は、計６個のコホート（それぞれのコホートにおいて３０〜４０人の評価可能な参加者）を含む３つの試験アーム（アームＡ、Ｂ、およびＣ）が存在する。アームＣの参加者が約１５％の客観的奏効率を示す、またはニボルマブおよび化合物Ｃの組み合わせによって持続的な応答が見られた場合に、アームＤ（化合物Ｃの単剤療法）が開始される。
【０１４４】
相関試験のパート２における初期用量の後４週間（±３日）で、生検を得る。アームＡのベバシズマブにおける参加者は、少なくとも１４日間、または出血もしくは創傷治癒の遅延を防ぐための施設ガイドラインに従って、ベバシズマブを使用しないべきである。
【０１４５】
参加者は、疾患の進行、不耐性、治療中止の基準を満たすまで、または同意が取り消されるまで、組み合わせが継続される。
【０１４６】
治療期間（パート１および２）
血液、尿、便、腫瘍生検サンプル、および心電図（ＥＣＧ）が収集され、参加者は活動スケジュールに従って試験治療を受ける。参加者は、試験開始から約２８日以内、次いで再評価のため、組み合わせ治療開始後８週間ごとに、ベースラインイメージングを受ける。腫瘍進行または応答エンドポイントは、固形腫瘍についてのＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１を用いて評価する。疾患の進行、臨床的悪化、毒性、試験治療中止の基準を満たすまで、または同意が取り消されるまで、参加者は治療を継続する。治療を終えた参加者は、安全性評価および生存状態について追跡される。
【０１４７】
特定のサイクルの終わりにＳＤ、ＰＲ、またはＣＲの応答を示した参加者は、次の治療サイクルに進む。１）ＰＤ、２）治療によるさらなる利益が得られない可能性があることが示唆される臨床的悪化、３）治療に対する不耐性、４）参加者が試験治療の中止の基準を満たすのいずれかが最初に発生するまで、参加者は一般に試験治療の継続が許可される。
【０１４８】
身体検査、バイタルサイン測定、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、および臨床試験評価は、投与間隔全体から選択された時間において行われる。単一の時点において複数の手順が必要な場合、優先順位が高いものから低いものの手順の一覧を以下に示す：ＰＫサンプリング、ＥＣＧおよびバイタルサイン、臨床検査。参加者は、試験を通してＡＥについて注意深くモニターされる。ベースライン時、および薬物動態試験のスケジュールに従った、ＰＫ、並びに多剤および毒素の排出（ＭＡＴＥ）−腎臓輸送バイオマーカー解析についての試験治療投与後に、血液および尿サンプルを回収する。
【０１４９】
治療アームおよび期間：
【表８】
2021511344.tif 000012
ａ ニボルマブは２４０ｍｇのキットとして提供され、それぞれのキットは（２）１００ｍｇバイアルおよび（１）４０ｍｇバイアルを含む
ｂ これらの製品は、現地の規制によって許可されている場合、現地の市販製品として、または調査拠点の標準的な処方手順によって、あるいはスポンサーがこれらの製品を提供することによって、取得する。
【０１５０】
【表９】
2021511344.tif 000013
略語：5-FU = 5-フルオロウラシル；BID = １日２回；IV = 静脈内；PO = per os (口から[経口])；Q4W = ４週間ごと；QD = １日１回
ａ 可能性のある用量最適化のために、化合物ＣのＰＫ／ＰＤ関係を調査するために、６００ｍｇＢＩＤレジメンが探索されうる。（セクション５．５．１を参照されたい）
【０１５１】
フォルフィリ（１日目にイリノテカン ９０分にわたり１８０ｍｇ／ｍ２；１日目にロイコボリン ２時間にわたり４００ｍｇ／ｍ２（ロイコボリンはイリノテカンと同時に投与されうる）；２８日サイクルの１日目に５−ＦＵ ４００ｍｇ／ｍ２ ボーラス、次いで１日目および２５日目に４６時間にわたり２４００ｍｇ／ｍ２ 持続注入）。必要であれば、ベバシズマブ、セツキシマブ、またはパニツムマブを１Ｌフォルフィリに追加することができ、これらの薬剤について地域保健医療局に承認されたラベルに従って投与される。ロイコボリンの代わりにレボロイコボリンを使用することができ、あるいは現地の標準的な手順に従って、ロイコボリンの一定用量を使用することができる。
【０１５２】
ｎａｂ−パクリタキセル（アブラキサン）の推奨用量は、各２８日サイクルの１日目、８日目、１５日目において、３０〜４０分にわたり静脈内注入として投与される、１２５ｍｇ／ｍ２である。各２８日サイクルの１日目、８日目、および１５日目において、ｎａｂ−パクリタキセルの直後に、３０〜４０分かけてゲムシタビン １０００ｍｇ／ｍ２を投与する。
ニボルマブ ４８０ｍｇは、４週間ごとに、３０分にわたり静脈内注入として投与する。
【０１５３】
治療期間：参加者は、疾患の進行、治療への不耐性、中止基準を満たすまで、または同意が取り消されるまで、治療される。参加者は、セクション７．４．８の基準を満たすまで、悪化を超えて治療されうる。不耐性のために部分的にまたは全体的に化学療法を中止した参加者は、研究者と、臨床モニターまたはスポンサーに指定された人との協議の後、化合物Ｃの試験を継続することができる。異なるアームにおける治療中の試験評価および手順についてのイベントスケジュールに従って、参加者は、全ての試験評価を受けることを継続する。
【０１５４】
有効性評価
コンピュータ断層撮影（ＣＴ）および／またはＭＲＩによる疾患評価は、疾患の進行、治療の中止、試験の取り消し、または次の治療の開始のいずれか早いほうまで、必要に応じてベースラインおよび約８週間ごと（サイクル１の１日目から±１週）に行われる。
【０１５５】
試験のイメージング評価
専用のＣＴ装置で収集した造影ＣＴスキャンを用いた疾患腫瘍評価が、この試験に好ましい。胸部、腹部、骨盤、および他の既知／疑われる疾患部位の造影ＣＴを、腫瘍評価のために行うべきである。参加者がＣＴ静脈造影についての禁忌を有する場合、胸部の非造影ＣＴ、および腹部、骨盤、および他の既知／疑われる疾患部位の造影ＭＲＩを取得するべきである。
【０１５６】
参加者がＭＲおよびＣＴ静脈造影の両方に禁忌を有する場合、胸部の非造影ＣＴ、および腹部、骨盤、および他の既知／疑われる疾患部位の非造影ＭＲＩを取得するべきである。
【０１５７】
参加者が、ＣＴ静脈造影に対する禁忌に加えて、ＭＲＩに禁忌を有する場合（例えば、不適合なペースメーカー）、胸部、腹部、骨盤、および他の既知／疑われる疾患部位の非造影ＣＴが許容される。
【０１５８】
ＣＴおよびＭＲＩスキャンは、５ｍｍ以下のスライス厚で、間隔なしで（連続して）得るべきである。全てのイメージング時点で同一の取得プロトコルを用いて、各参加者をイメージングする全ての試みが行われるべきである。
【０１５９】
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）−ＣＴスキャナーのＣＴコンポネントの使用：フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）ＰＥＴ−ＣＴなどによる複合モダリティスキャンは、臨床治療でますます使用されており、急速に進化しているモダリティ／技術である；したがって、ここで概説される推奨は、時間の経過とともにかなり急速に変化しうる。現在、複合ＦＤＧ ＰＥＴ−ＣＴの低用量、または減衰補正ＣＴ部位は、解剖学に基づく有効性評価における使用は制限されており、そのため解剖学に基づくＲＥＣＩＳＴ測定のための、専用造影ＣＴスキャンの代わりに使用しないことをお勧めする。しかしながら、ＦＤＧ ＰＥＴ−ＣＴの一部として行われるＣＴが、診断的ＣＴ（ＩＶおよび経口造影剤を使用）と同じ診断品質であることをサイトが文書化できる場合は、ＦＤＧ ＰＥＴ−ＣＴのＣＴ部分をＲＥＣＩＳＴ１．１測定のために用いることができる。しかしながら、ＣＴのＦＤＧ ＰＥＴ部分は追加のデータを導入し、これが定期的または連続的に実行されない場合は、試験者にバイアスをかけうることに注意されたい。
【０１６０】
骨転移の病歴を有する参加者は、臨床的に必要である場合、骨スキャンを受けうる。
【０１６１】
ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１基準に従って疾患が進行するまで、または試験が取りやめられるまで、ベースライン、およびＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１基準に記載された時点において、評価が行われる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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