(57)【要約】  本開示は、それを必要とする対象における眼障害の予防または治療における使用のための、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の１つ以上のサブユニットの阻害剤、および治療上有効な量のポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの１つ以上の阻害剤を使用して、対象における眼障害、例えば、非癌性障害を治療する方法を提供する。  本開示の方法の特定の複数の実施形態において、眼障害は、網膜ニューロンの変性または細胞死を特徴とする。  本開示の方法の特定の複数の実施形態において、ＰＲＣ２のサブユニットは、ＥＺＨ１またはＥＺＨ２であり、阻害剤は、Ｈ３Ｋ２７トリメチル化の阻害剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象における眼障害の予防または治療における使用のための、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の１つ以上のサブユニットの阻害剤。
【請求項２】
眼障害が、遺伝性網膜障害、網膜変性、網膜の神経変性疾患、網膜に影響を与える眼自己免疫疾患または網膜に影響を与える炎症性疾患からなる群から選択される、請求項１に記載の阻害剤。
【請求項３】
眼障害が、色覚異常、コンピュータービジョン症候群、糖尿病性網膜症、飛蚊症および斑点、緑内障、学習関連視覚問題、黄斑変性、眼振、眼アレルギー、高眼圧症、網膜剥離、網膜色素変性症、結膜下出血、ブドウ膜炎、レーバー先天性黒内障、錐体桿体ジストロフィー、夜盲症、硝子体網膜ジストロフィー、びらん性硝子体網膜症、アッシャー症候群、網膜上膜、黄斑円孔からなる群から選択される、請求項１および２のいずれかに記載の阻害剤。
【請求項４】
眼障害が、網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、錐体桿体ジストロフィー、夜盲症、硝子体網膜ジストロフィー、びらん性硝子体網膜症、黄斑変性、網膜剥離、アッシャー症候群からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項５】
眼障害が、網膜ニューロンの変性または細胞死を特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項６】
ＰＲＣ２の１つ以上のサブユニットが、ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサー（ＥＺＨ１）、ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー（ＥＺＨ２）、ｚｅｓｔｅ１２サプレッサー（ＳＵＺ１２）、胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)（ＥＥＤ）、網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６（ＲｂＡｐ４６）、網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８（ＲｂＡｐ４８）、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２（ＡＥＢＰ２）、ポリコーム様１タンパク質（ＰＣＬ１）、ポリコーム様２タンパク質（ＰＣＬ２）、ポリコーム様３タンパク質（ＰＣＬ３）、十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２（ＪＡＲＩＤ２）、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項７】
ＰＲＣ２の１つのサブユニットが阻害される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項８】
ＰＲＣ２の１つのサブユニットが阻害され、前記サブユニットが、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２、またはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体である、請求項７に記載の阻害剤。
【請求項９】
前記サブユニットが、ＳＵＺ１２、ＥＥＤ、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８、ＡＥＢＰ２、ＰＣＬ１、ＰＣＬ２、ＰＣＬ３、ＪＡＲＩＤ２、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択される、請求項７に記載の阻害剤。
【請求項１０】
ＰＲＣ２の２つ以上のサブユニットが阻害され、１つのサブユニットが、ＥＺＨ１、またはそのアイソフォーム、パラログもしくは変異体であり、１つ以上の他のサブユニットが、ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２、ＥＥＤ、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８、ＡＥＢＰ２、ＰＣＬ１、ＰＣＬ２、ＰＣＬ３、ＪＡＲＩＤ２、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項１１】
ＰＲＣ２の２つ以上のサブユニットが阻害され、１つのサブユニットが、ＥＺＨ２、またはそのアイソフォーム、パラログもしくは変異体であり、１つ以上の他のサブユニットが、ＥＺＨ１、ＳＵＺ１２、ＥＥＤ、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８、ＡＥＢＰ２、ＰＣＬ１、ＰＣＬ２、ＰＣＬ３、ＪＡＲＩＤ２、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項１２】
エピジェネティック薬、例えば、ヒストン修飾因子の阻害剤、好ましくは、ヒストン−リシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤またはリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、Ｈ３Ｋ２７メチル化の阻害剤またはＨ３Ｋ２７トリメチル化の阻害剤である化合物を含んでなる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項１３】
ＥＺＨ１阻害剤および／またはＥＺＨ２阻害剤を含んでなる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の阻害剤。
【請求項１４】
前記化合物が、ＵＮＣ１９９９、ＥＰＺ００５６８７、ＥＰＺ−６４３８（タゼメトスタット）、ＧＳＫ１２６、ＧＳＫ３４３、ＧＳＫ５０３、ＧＳＫ２８１６１２６、Ｅｌ１、ＣＰＩ−１６９、ＣＰＩ−１２０５、ＣＰＩ−３６０、ＥＰＺ０１１９８９、ＺＬＤ１０３９、ＰＦ−０６８２１４９７、ＪＱＥＺ５、ＪＱＥＺ２３、３−デアザネプラノシン（ＤＮＺｅＰ）、５Ｒ−（４−アミノ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−１−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−３−シクロペンテン−１Ｓ，２Ｒ−ジオール、シネフンギン、ならびにそれらの類似体、機能的誘導体または薬学上許容可能な塩からなる群から選択されるＥＺＨ１阻害剤および／またはＥＺＨ２阻害剤である、請求項１３に記載の阻害剤。
【請求項１５】
前記化合物が、ＳＵＺ１２、ＥＥＤ、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８、ＡＥＢＰ２、ＰＣＬ１、ＰＣＬ２、ＰＣＬ３、ＪＡＲＩＤ２、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択されるＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤である、請求項１３に記載の阻害剤。
【請求項１６】
それを必要とする対象に、治療上有効な量のポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの１つ以上の阻害剤を投与することを含んでなる、対象における眼障害を予防または治療する方法。
【請求項１７】
請求項６〜１１のいずれか一項に記載のポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの阻害を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の１つ以上の阻害剤を使用することを含んでなる、請求項１６および１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
対象に１つ以上のさらなる治療剤を投与することをさらに含んでなる、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
１つ以上のさらなる剤が、ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤ではない、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
１つ以上のさらなる治療剤が、対象における眼障害を治療するために使用される治療剤の中から選択される、請求項１９および２０のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、徐々に失明につながる網膜ニューロンの変性または細胞死を特徴とする眼障害の治療または予防のための、非癌治療法およびポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの阻害剤の使用、ならびにＥＺＨ１阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤などの阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
網膜機能に影響を与える遺伝的欠損に起因する進行性の視力喪失を有する欧州における１７０,０００例超の患者に関して、症例の９９％に対して治療法が存在しない。大多数の患者が、２０〜３０年の間に完全に視力を失う。これらの患者によるこのハンディキャップの認識は、末期癌または重度脳卒中に罹患した患者と類似する生活の質に相当し(Yuzawa et al., 2013)、よって、治療に対する期待は大きい。
【０００３】
多くの異なる突然変異は、徐々に失明につながる遺伝性網膜ジストロフィー（ＩＲＤ）の起源である。これらの突然変異は、主に桿体光受容体の生存に影響を及ぼす。そして、それらの死は錐体変性を誘発するが、突然変異はそれらの代謝を直接的に変えるものではなかった。これまでのところ、遺伝性網膜ジストロフィーに対する網膜変性の進行を遅延させるための薬剤は、市場に存在しない。
【０００４】
遺伝子療法が、動物モデルおよび先天性ＲＤであるレーバー先天性黒内障の１つの非常にまれな型（ＬＣＡ２、ＲＰＥ６５の欠損）を有する患者群において、一部の視覚機能を回復させることに最近成功したことを示した(Smith et al., 2012)。しかしながら、２つの異なるグループが、遺伝子療法による治療は、網膜変性を予防しなかったことを明らかにした(Jacobson et al., 2012, Cideciyan et al., 2013)。２０，０００超の遺伝子がＲＤの起源であると同定され、これは症例の６０％を説明するものであり、遺伝子導入用ベクターは、ごくわずかしか現在動物モデルにおいて試験されていない。さらに、動物モデルを用いた前臨床試験では、遺伝子療法は、疾患の非常に初期に提供した場合は有効であることが示されているが（例えば、Bemelmans et al., 2006）、現実には、低視力および視力障害の検出は、変性過程がすでに十分始まっているときに生じることが多い。このような臨床表現型は、遺伝子療法の有効性を維持できるようにするための神経保護的支持を必要とするはずである。
【０００５】
代替の治療法として、エクソンスキッピングが開発中であり、これは、１つのエクソンに対するコード領域の損失が、得られる短縮タンパク質にとって有害ではない、特定の遺伝子に対してのみ実現可能である。これまでのところ、市販されている薬剤はないが、ＣＥＰ２９０に関する臨床試験が間もなく開始予定であり、このアプローチは有望であるが、血液循環に薬剤を反復注射する必要がある。全身性副作用が生じないことを実証することが期待される。
【０００６】
盲目患者における残存する網膜ニューロンを光感受性にし、オプトジェネティクスを利用して、視力を潜在的に回復させるための最近の臨床試験が、ＧｅｎＳｉｇｈｔ社によって開始された。まだ薬剤は利用可能ではない。添加されるタンパク質の光感受性は、非常に低く、光の刺激を強め、コントラストを感じるには、眼鏡を必要とする。興味深いものではあるが、このアプローチは、まだヒトにおいて概念実証に達していない。この治療展望において、網膜神経節細胞を標的とし、そのため光受容体と網膜神経節細胞との間の情報処理はなく、これにより、コントラスト知覚の質、視力および運動知覚の有効性にかなり影響を与える。オプトジェネティクスアプローチは、多くの光受容体を持たない患者に対するものである。
【０００７】
シュタルガルト病に対する薬物治療として、この疾患における網膜により産生される「廃棄物」を低減させるようにＡｌｋｅｕｓ社によって開発された薬剤ＡＬＫ−００１が挙げられるが、これは現在、臨床試験において試験中である。この薬剤は、有病率１〜５／１０,０００(Orphanet)を有するこの疾患のみを標的とする。
【０００８】
別の代替の治療法としては、ＲｄＣＶＦが挙げられ、これは、桿体が乾燥したときに錐体を変性から保護するものとして同定された(Leveillard et al., 2004)。
【０００９】
他のアプローチは、残存する網膜を直接刺激する電子デバイスを使用して、完全に盲目の患者における一部の視知覚を再構築することを目的としている。このアプローチは、ある程度成功を収めたが(Gekeler et al., 2018)、視力および光受容体を失っている患者集団のみを対象とするものであるため、オプトジェネティクスアプローチの代替であるが、網膜ニューロンの変性または細胞死の問題には適用されない。
【００１０】
このため、網膜ニューロンの変性または細胞死を遅延または停止させることができる治療法の開発の必要性が存在する。したがって、良好な視力の期間を延長することができるこのような治療法は、網膜変性などの眼障害の治療に有用であろう。
【発明の概要】
【００１１】
本開示は、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの阻害剤、例えば、ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサー（ＥＺＨ１）の阻害剤またはｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー（ＥＺＨ２）の阻害剤は、網膜ニューロンの変性または細胞死を遅延または停止させる能力を有する、という知見に基づく。したがって、本開示は、ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤（例えば、ＥＺＨ１阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤）は、網膜ニューロンの変性または細胞死を特徴とする網膜変性または網膜の神経変性疾患などの眼障害を効果的に治療することができるため、網膜機能に影響を与える遺伝的欠損または体細胞欠損に起因する徐々に視力喪失につながることを特徴とする眼障害の療法を標的とする新たな領域を提示する。
【００１２】
本発明者らは、ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤（例えば、ＥＺＨ１阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤）が、網膜変性の２つの異なるマウスモデル、すなわち、それぞれ急速なおよび遅い変性過程を有するＲｄ１およびＦａｍ１６１ａ  ＫＯマウスにおいて、網膜ニューロン（例えば、光受容体）の生存を延長するのに有効であることを同定した。ＥＺＨ２活性の上昇は、ＲＤの優性型のモデルおよび劣性ＲＤの他の型、ならびに網膜色素変性症に罹患している２例の患者においても認められた。したがって、本発明者らは、このような阻害剤は、光受容体の生存を有意に延長するための最初の有効な治療法であると考える。さらに、これらの阻害剤は、光伝達の過程に影響を及ぼさない、よって、視覚処理にも影響を及ぼさないという利点を有する。
【００１３】
欧州において、１７０,０００例の患者が、遺伝性網膜ジストロフィーに罹患している。それらのうち、１５歳未満の小児は、ＥＺＨ２薬の適用に関して除外されるべきであるが、それは、ＥＺＨ２は、正常な網膜および脳の発達にとって必須であることが知られているからである。さらに、４０〜４５歳以降の総てのＲＤ患者は、光受容体を失っていると考えることができる。このため、１５〜４５歳の集団は、ＲＤ患者のおよそ３１％を示している。結果として、年間およそ５２,７００例の患者が、ＥＺＨ２薬の治療に適格である。患者の生活の質に対する認識は、視力喪失の程度に密接に関連するが、視力喪失は、進行癌または脳卒中を有する患者に相当する認識をもたらす最も重度の形態である。患者の治療に対する需要は高い。
【００１４】
提案された治療は、反復硝子体内注射による慢性治療であり、その頻度は、依然として異なるモデルにおいて決定されている。
【００１５】
本発明者らはまた、細胞死が多いヒト網膜剥離のモデルにおいて、ＥＺＨ２活性がアップレギュレートされることを観察し、これは、ＥＺＨ２阻害剤は、網膜剥離が長引く患者も標的とし得ることを示唆している。この集団は、欧州において年間およそ１０,０００例の患者を示す。この場合において、一次医療で１回の注射で十分なはずである。
【００１６】
このため、これらの神経保護阻害剤は、桿体光受容体などの網膜ニューロンおよびその結果それらの機能を保護することによって、多くの患者に対して視力の延長を確実にするはずである。さらに、大多数のＩＲＤ患者が、桿体の機能に部分的に影響を及ぼし、それにもかかわらず細胞喪失に至るが、イメージ知覚および視力は保証される突然変異を有する。ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤（例えば、ＥＺＨ１阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤）は、網膜色素変性症に罹患している患者のおよそ８０％において、視力および自律性を有意に延長し、その結果、患者の生活の質を有意に改善するはずである。
【００１７】
ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）は、哺乳動物、昆虫および植物において発見されている、高度に進化的に保存されているポリコーム群タンパク質（ＰｃＧ）である。ＰＲＣ２は、エピジェネティック制御において重要な役割を果たすが、細胞分化および発達(Bracken et al., 2006)またはＸ染色体不活性化(Plath et al., 2003)の維持および調節においても重要な役割を果たす。ＰＲＣ２は、ヒストンＨ３上のリシン２７のジメチル化およびトリメチル化（ヒストンＨ３リシン２７、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）（それぞれがクロマチン転写サイレンシングと関連する）を調節することによって、重要なクロマチン修飾因子として働く(Holoch, Margueron, 2017)。ＰＲＣ２は、いくつかのサブユニットからなる動的複合体である。Ｈ３Ｋ２７のメチル化は、ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー（ＥＺＨ２）(Cao et al., 2002)またはその機能的ホモログであるｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサー（ＥＺＨ１）のＳＥＴドメインによって触媒され、それらの酵素活性には、以下の３つのさらなるタンパク質の存在を少なくとも必要とする：胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)（ＥＥＤ）、ｚｅｓｔｅ１２サプレッサー（ＳＵＺ１２）およびヒストン結合タンパク質である網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６（ＲｂＡｐ４６）または網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８（ＲｂＡｐ４８）。ＥＺＨ２、ＥＥＤ、ＳＵＺ１２およびＲｂＡｐ４６／ＲｂＡｐ４８は、クロマチン調節ＰＲＣ２のコアサブユニットを含んでなる。他のサブユニットまたは補因子、例えば、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２（ＡＥＢＰ２）、ポリコーム様１タンパク質（ＰＣＬ１）、ポリコーム様２タンパク質（ＰＣＬ２）、ポリコーム様３タンパク質（ＰＣＬ３）、十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２（ＪＡＲＩＤ２）、ＥＰＯＰまたはＬＣＯＲは、ＰＲＣ２に関連づけられ、その漸増および活性を調節する。
【００１８】
ＥＺＨ２もしくは他のＰＲＣ２成分、例えば、ＳＵＺ１２もしくはＥＥＤの調節不全、および／またはＨ３Ｋ２７のトリメチル化も、多数の癌と関連している。例えば、ＰＲＣ２およびＥＺＨ２の異常な発現は、乳癌、骨髄腫、前立腺癌およびリンパ腫を含む広範囲の癌において認められている(Chase et al., 2011, Yoo, et al., 2012)。ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤（例えば、ＥＺＨ１阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤）は、他の病態にも適用可能であり得る。
【００１９】
発明
本発明は、第１に、それを必要とする対象における眼障害の治療における使用のための、より具体的には、癌、遺伝性網膜障害、網膜変性、網膜の神経変性疾患、網膜に影響を与える眼自己免疫疾患または網膜に影響を与える炎症性疾患、色覚異常、コンピューター視覚症候群、糖尿病性網膜症、飛蚊症および斑点、緑内障、学習関連視覚問題、黄斑変性、眼振、眼アレルギー、高眼圧症、網膜剥離、網膜色素変性症、結膜下出血、ブドウ膜炎、レーバー先天性黒内障、錐体桿体ジストロフィー、夜盲症、硝子体網膜ジストロフィー、びらん性硝子体網膜症、アッシャー症候群、網膜上膜、黄斑円孔、網膜色素変性症のいずれかであり得る障害の予防または治療における使用のための、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の１つ以上のサブユニットの阻害剤を提供する。
【００２０】
本発明は、さらに、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の１つ以上のサブユニットの阻害剤であって、前記サブユニットが、ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサー（ＥＺＨ１）、ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー（ＥＺＨ２）、ｚｅｓｔｅ１２サプレッサー（ＳＵＺ１２）、胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)（ＥＥＤ）、網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６（ＲｂＡｐ４６）、網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８（ＲｂＡｐ４８）、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２（ＡＥＢＰ２）、ポリコーム様１タンパク質（ＰＣＬ１）、ポリコーム様２タンパク質（ＰＣＬ２）、ポリコーム様３タンパク質（ＰＣＬ３）、十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２（ＪＡＲＩＤ２）、ＥＰＯＰ、ＬＣＯＲまたはそれらのアイソフォーム、パラログもしくは変異体からなる群から選択される、阻害剤を提供する。
【００２１】
本発明は、なおさらに、エピジェネティック薬、例えば、ヒストン修飾因子の阻害剤、好ましくは、ヒストン−リシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤またはリシンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、Ｈ３Ｋ２７メチル化の阻害剤またはＨ３Ｋ２７トリメチル化の阻害剤である化合物を含んでなる、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の１つ以上のサブユニットの阻害剤を提供する。前記阻害剤は、網膜ニューロンの変性または細胞死を遅延または停止させ得る。
【００２２】
本発明はまた、それを必要とする対象に、治療上有効な量の上記に定義されるポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のサブユニットの１つ以上の阻害剤を投与することを含んでなる、対象における眼障害を治療する方法を開示する。
【００２３】
本発明はまた、対象に、１つ以上のさらなる治療剤、特に、ＰＲＣ２のサブユニットの阻害剤ではない治療剤を投与することをさらに含んでなる方法を開示する。
【００２４】
本発明のさらなる目的は、添付の特許請求の範囲に記載しているか、または本明細書および以下の関連する実施例を通じて明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】Ｒｄ１マウスにおけるエピジェネティック依存的な変性の提唱モデル。遺伝性Ｐｄｅ６突然変異の後、胎仔期におけるＥＺＨ２の欠損または機能獲得およびＥＺＨ２のターンオーバーに応答して、不適切なヒストン修飾が生じる。重要な生物学的経路の重度の撹乱が、異常な細胞周期の進行および発達異常を誘導する。細胞は、全体的な細胞ホメオスタシスの維持の失敗に起因して、早期に死滅し得る。
【図２】光受容体の変性は、Ｒｄ１マウスにおける増大したＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークに匹敵した。（Ａ）オプシンプロモーターにより駆動される条件的なＢｍｉ１欠失は、Ｒｄ１における光受容体の変性に影響を及ぼさない。オプシン：：ＣＲＥ；Ｂｍｉ１ｌｏｘＰ／ｌｏｘ動物は、モザイクパターンでＯＮＬ内のＢｍｉ１の標的特異的欠失を示す（上段）。Ｒｄ１マウス対照と比較して、ＰＮ１６においてＲｄ１；オプシン：：ＣＲＥ；Ｂｍｉ１ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰには、光受容体のレスキューは認められなかった（下段）。（Ｂ）ＰＮ１５での、いくつかの変性Ｒｄ１；オプシン：：ＣＲＥ；Ｂｍｉ１ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ光受容体におけるＨ３ｋ２７ｍｅ３マークの顕著な蓄積。（Ｃ）Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３細胞集団の潤沢、分布（白色矢印）および核局所化は、Ｒｄ１網膜において時間依存的である（上段、赤色染色）。視細胞のサブセットにおける増殖マーカーＫｉ−６７の発現も示されている（下段のパネルおよび（Ｆ））。（Ｄ）ロドプシン（Ｒｈｏ、赤色の標識、矢印）で染色されたＨ３Ｋ２７ｍｅ３の共局在によって示されるように、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積が桿体細胞において生じる。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の数は、疾患の重症度とともに増加し、Ｒｄ１マウスにおいてＰＮ１３でプラトーに達し（Ｅ）、中心網膜において開始されることが示された（Ｇ）。（Ｈ）Ｒｄ１と比較して、Ｒｄ１；Ｂｍｉ１−／−マウス網膜において、ＯＮＬにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の数の顕著な減少が認められた。（Ｉ）Ｃｒｘ−ＧＦＰおよびＲｄ１；Ｃｒｘ−ＧＦＰ網膜から単離された光受容体のウエスタンブロット解析により、変性光受容体におけるＥＺＨ２の発現の増大が明らかとなっている。ヒストグラムおよびプロットは、８個超の切片の平均からのものであり、ｎ＝４匹／群。（＊＊）＝ＡＮＯＶＡ  ｔ検定、ｐ＜０．０１、（＊＊＊）＝ＡＮＯＶＡ  ｔ検定ｐ＜０．００１。エラーバーは、ＳＥＭを示す。スケールバー：Ａ〜Ｃでは６０μｍおよびＤでは２０μｍ。
【図３】他の網膜変性（ＲＤ）モデルにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の検出。ＰＮ１２におけるロドプシンＰ２３Ｈマウス（上段）およびＰＮ１５におけるロドプシンＳ３３４−ｔｅｒ（中段）網膜変性ラットモデルならびにＰＮ１８におけるＲｄ１０から得た網膜切片を、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３に対して染色した。高レベルのＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークが、分析した全サンプルからの光受容体において認められた。ロドプシンＳ３３４−ｔｅｒラットは、外顆粒層においてより大量のＨ３ｋ２７ｍｅ３陽性細胞を示す。スケールバーは、５０μｍを表す。
【図４】ＷＴおよびＲｄ１網膜におけるＨ３Ｋ４ｍｅ３およびＨ３Ｋ９ｍｅ２の均一な発現および分布。ＰＮ１２において、Ｒｄ１およびＷＴ網膜切片に対して染色を行った。共焦点分析では、Ｈ３Ｋ４ｍｅ３（上段）およびＨ３Ｋ９ｍｅ２（下段）の染色時に、ＷＴとＲｄ１との間の明らかな変化は明らかにされなかった。スケールバー＝２０μｍ。
【図５】網膜色素変性症（ＲＰ）に罹患している患者からのヒト光受容体における高レベルのＨ３Ｋ２７ｍｅ３マーク。１例のヒト健常ドナー（Ａ）および中心網膜における中等度の変性および網膜周辺領域における進行した細胞喪失を有する１例のＲＰ患者（Ｂ）からの網膜切片。増大したＨ３Ｋ２７ｍｅ３は、進行した網膜変性を有する領域（周辺、矢印）においてかなり支配的であった。正常な光受容体構造を有する網膜領域において、少数の核もＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークを含有していることに留意されたい（矢印）。キャリブレーションバー：（Ａ）および（Ｂ）に対してそれぞれ６０μｍおよび４０μｍ。
【図６】Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの増大は、Ｒｄ１マウスにおけるｃＧＭＰ蓄積とＤＮＡ断片化（ＴＵＮＥＬ）との間の中間事象である。（Ａ）Ｒｄ１網膜における視細胞を、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびそれぞれｃＧＭＰ（上段のパネル）、ＣＤＫ４（中段のパネル）またはＴＵＮＥＬ（下段のパネル）のいずれかで二重染色した。ｃＧＭＰおよびＨ３Ｋ２７ｍｅ３では共局在は認められなかったが、ＣＤＫ４およびＴＵＮＥＬ陽性細胞の画分は、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３も含有していた。（Ｂ）１２におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３およびＴＵＮＥＬまたは（Ｃ）ＣＤＫ４を有する細胞のパーセンテージを示す棒グラフ。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の４０％未満が、ＴＵＮＥＬ陽性でもあったことに留意されたい（ｎ＝４）。スケールバー＝２０μｍ。エラーバーは、ＳＥＭを示す。（Ｄ）ＰＮ０９、１０および１１でのＲｄ１およびＷＴマウスにおけるＣＤＫ４およびＨ３Ｋ２７ｍｅ３の経時的分析（ｎ＝４匹／年齢）。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の数は、ＣＤＫ４発現前にピークに達する。
【図７】ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＥＺＨ２の薬理学的阻害は、Ｒｄ１およびＦａｍ１６１ａ−／−マウスにおける視細胞死を遅延させる。（Ａ）マウス胚線維芽細胞を、示されるようにＥＺＨ２阻害剤ＵＮＣ１９９９の増量した用量で処理し、２．５および５μＭは、毒性が少なく最も有効なであり、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの顕著な減少をもたらすことが示された。（Ｂ）Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の免疫細胞化学による標識は、マークの強い減少によるＥＺＨ２の阻害を確証した（透明な標識）。ＥＺＨ２のレベル（透明な標識）も、わずかに影響を受けた。（Ｃ〜Ｆ）Ｒｄ１眼に対し、ビヒクル（ＤＭＳＯ）またはＵＮＣ１９９９（２．５μＭ最終眼中濃度）をＰＮ８において注射した。ＵＮＣ１９９９は、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（Ｃ、Ｅ）およびＴＵＮＥＬ（Ｄ、Ｆ）陽性細胞の顕著な減少を誘導した。（Ｇ、Ｈ）２ヵ月齢で開始し、４ヵ月齢まで行った反復投与において、類似の実験をＦａｍ１６１−／−マウスにおいて実施した。データは、変性網膜の腹側の軸に沿った光受容体の列の統計学的に有意な保存を示しているが（Ｇ）、背腹の軸全体ではＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークの変化は認められなかった（Ｈ）。最終注射後４日目に、分析を行った。二元配置分散分析、ｐ＜０．０５、ｎ＝５条件あたりに分析した網膜。キャリブレーションバー：Ｂでは２０μｍ、ならびにＣおよびＤでは６０μｍ。
【図８】ＲＰＥ欠落網膜剥離片における光受容体変性および細胞死経路のパターン。図は、５つの採用したパラメーター総てに対する、２つの群：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ対照群（Ａ）およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＲＤ群（Ｂ）における、全４個のヒト網膜剥離片の要約データを示す。５つ総てのパラメーターに関して群間に有意差が認められたが、異なる時点であったことに留意されたい。最も重要な差は、特に、ＲＤ群におけるＴＵＮＥＬおよびＨ３Ｋ２７ｍｅ３陽性光受容体の経時的な増大に関してのものであり、ＡＩＦは、ＴＵＮＥＬ陽性細胞のピークに次いで、３ＤＩＶにてピークを示したが、ＣＤＫ４は、ＲＤ群において中等度に多く発現し、特定の細胞における細胞周期再突入が示唆された。＊：ｐ＜０．０５。
【図９】ＴＵＮＥＬ陽性細胞は、ＲＰＥ細胞の非存在後に増大した。ＲＰＥを有さないヒトｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＲＤモデルおよびＲＰＥを有するヒトｉｎ  ｖｉｔｒｏ網膜組織の対照群における、１ＤＩＶ、３ＤＩＶ、５ＤＩＶ、７ＤＩＶでのＴＵＮＥＬ陽性細胞（矢印）。ＲＰＥの存在は、アーチファクト蛍光バックグラウンドをもたらした。ＯＮＬ：外顆粒層、ＩＮＬ：内顆粒層、ＲＰＥ：網膜色素上皮、キャリブレーションバー：２０μｍ。
【図１０】ヒト網膜剥離片変性の中／後期におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークの増大。ＲＤ（ＲＰＥを有さない）のヒトｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルおよびＲＰＥを有する網膜組織のヒトｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおける、１ＤＩＶおよび７ＤＩＶでのＨ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞。ＯＮＬ：外顆粒層、ＩＮＬ：内顆粒層、ＲＰＥ：網膜色素上皮。倍率：４００倍。キャリブレーションバー：２０μｍ。
【図１１】腫瘍形成により誘導された網膜剥離は、変性ＯＮＬにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の増大を誘発する。局所網膜剥離に至る網膜の周辺部の黒色腫腫瘍に罹患している患者の眼球中の網膜。中心網膜のＯＮＬは、均一なＨ３Ｋ２７ｍｅ３の標識を示すが、網膜剥離が生じた領域では、核における高度に陽性のＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークを有する光受容体が検出された（矢印参照）。スケール：２０μｍ。
【図１２】健常成人眼へのＵＮ１９９９の注射は、ビヒクル注射と同様に網膜機能に影響を及ぼす。（Ａ）網膜機能を、薬剤（黒色の線）またはビヒクル（灰色の線）の注射前に、暗順応条件下で記録した。注射の１週後に、ＤＭＳＯ群（灰色の破線）およびＵＮＣ１９９９処置群（黒色の破線）の同じ動物を、同じ範囲の光刺激で再度刺激した。暗順応条件下での網膜活性の（最大ｂ波振幅）の差は、２群間に認められなかった。明順応条件下で同様の分析を行った（Ｂ）。２つの高刺激（３および１０ｃｄａ／ｓ．ｍ２）に関して、ｂ波の最大振幅は、ベースラインと比較して、２群において減少した。２群間に差は認められなかった。（Ｃ）２群の動物を、注射の前（黒色のカラム）または後（斜線のカラム）に、異なる刺激周波数での明順応刺激に関して調べた。５および１０Ｈｚ刺激では、両群に有意な減少が認められたが、１５Ｈｚでは認められず、桿体は、注射手技によって錐体よりも影響を受けたことが示唆された。対照群と処置群との間には、差は認められなかった。
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【発明を実施するための形態】
【００２６】
定義
以下の定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするために、ここにまとめたものであり、本開示の範囲を限定することを意図したものではない。便宜上、本明細書で使用する略語は、生物学的および化学的技術の範囲内での従来の意味を有する。
【００２７】
本明細書で使用する場合、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、その冠詞の文法的目的語の１つまたは１つより多い（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例示として、「１つの要素(an element)」は、１つ以上の要素の列挙を参照した、１つの要素または１つより多くの要素を意味し、前記列挙におけるいずれか１つ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を意味するが、前記列挙内に具体的に列挙される少なくとも１つの各々および総ての要素を必ずしも含むものではなく、前記列挙における要素の任意の組合せを除外するものではないと理解されるべきである。
【００２８】
本明細書で使用する場合、用語「癌」および「癌性」は、制御されない細胞成長を一般に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、または説明する。この定義に含まれるものは、良性および悪性の癌、例えば、眼の癌である。このような癌の例としては、ぶどう膜黒色腫および結膜黒色腫を含む黒色腫、網膜芽細胞腫、眼内リンパ腫、扁平上皮癌、涙腺癌、眼瞼癌または二次眼癌が挙げられる。
【００２９】
本明細書で使用する場合、用語「障害」は、「疾患」と互換的であり、その両方とも、治療から利益が得られる任意の状態を指し、その例としては、限定されるものではないが、慢性および急性障害、遺伝性障害および非遺伝性障害または哺乳動物をこのような障害に罹患させやすくするそれらの病態を含む障害が挙げられる。この定義に含まれるものは、眼障害、例えば、遺伝性網膜障害、網膜変性、網膜の神経変性疾患、網膜に影響を与える眼自己免疫疾患または網膜に影響を与える炎症性疾患である。
【００３０】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサー」、「ＥＺＨ１」、「ＥＺＨ１酵素」、「ヒストン−リシンＮ−メチルトランスフェラーゼＥＺＨ１」、「ヒストン−リシンＮ−メチルトランスフェラーゼＥＺＨ１」は、ＥＺＨ１遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＥＺＨ１遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１０８７９９である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３１】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサー」、「ＥＺＨ２」、「ＥＺＨ２酵素」、「ヒストン−リシンＮ−メチルトランスフェラーゼＥＺＨ２」、「ｚｅｓｔｅ２ポリコーム抑制複合体２サブユニットのエンハンサー」は、ＥＺＨ２遺伝子によりコードされる酵素を指す。ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）のコア触媒成分であるＥＺＨ２は、ヒストンＨ３上のリシン２７のジメチル化およびトリメチル化（ヒストンＨ３リシン２７、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）を触媒し、それによりクロマチン転写をサイレンシングするヒストン−リシンＮ−メチルトランスフェラーゼである。本定義の例示として、ヒトＥＺＨ２遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１０６４６２である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３２】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅ１２サプレッサー」および「ＳＵＺ１２」は、ＳＵＺ１２遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＳＵＺ１２遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１７８６９１である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３３】
本明細書で使用する場合、用語「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)」および「ＥＥＤ」は、ＥＥＤ遺伝子によりコードされる酵素を指す。この定義に含まれるものは、「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)１」または「ＥＥＤ１」、「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)２」または「ＥＥＤ２」、「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)３」および「ＥＥＤ３」ならびに「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)４」および「ＥＥＤ４」を含んでなるＥＥＤ遺伝子のアイソフォームである。本定義の例示として、ヒトＥＥＤ遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ００００００７４２６６である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３４】
本明細書で使用する場合、用語「網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６」、「ＲｂＡｐ４６」および「ＲＢＢＰ７」は、ＲＢＢＰ７遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＲＢＢＰ７遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１０２０５４である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３５】
本明細書で使用する場合、用語「網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８」、「ＲｂＡｐ４８」および「ＲＢＢＰ４」は、ＲＢＢＰ４遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＲＢＢＰ４遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１６２５２１である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３６】
本明細書で使用する場合、用語「脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２」および「ＡＥＢＰ２」は、ＡＥＢＰ２遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＡＥＢＰ２遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１３９１５４である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３７】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様タンパク質」または「ＰＣＬ」は、ポリコーム様ホモログ（例えば、ＰＣＬ１、ＰＣＬ２またはＰＣＬ３）である酵素を指す。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３８】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様１タンパク質」、「ＰＣＬ１」または「ＰＨＦ１」は、ＰＨＦ１遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＰＨＦ１遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１１２５１１である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００３９】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様２タンパク質」、「ＰＣＬ２」または「ＭＴＦ２」は、ＭＴＦ２遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＭＴＦ２遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１４３０３３である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００４０】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様３タンパク質」、「ＰＣＬ３」または「Ｐｈｆ１９」は、ＰＨＦ１９遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＰＨＦ１９遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１１９４０３である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００４１】
本明細書で使用する場合、用語「十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２」および「Ｊａｒｉｄ２」は、ＪＡＲＩＤ２遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＪＡＲＩＤ２遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００００８０８３である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「ＥＰＯＰ」または「Ｃ１７ｏｒｆ９６」は、ＥＰＯＰ遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＥＰＯＰ遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００２７３６０４である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００４３】
本明細書で使用する場合、用語「ＬＣＯＲ」または「Ｃ１０ｏｒｆ１２」は、ＬＣＯＲ遺伝子によりコードされる酵素を指す。本定義の例示として、ヒトＬＣＯＲ遺伝子のＥＮＳＥＭＢＬは、ＥＮＳＧ０００００１９６２３３である。この定義に含まれるものは、アイソフォーム、パラログまたは変異体である。
【００４４】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサーの阻害剤」、「ＥＺＨ１の阻害剤」、「ＥＺＨ１阻害剤」、「ｚｅｓｔｅホモログ１エンハンサーのアンタゴニスト」、「ＥＺＨ１のアンタゴニスト」および「ＥＺＨ１アンタゴニスト」は、ＥＺＨ１に結合することができる、ＥＺＨ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＥＺＨ１媒介メチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＺＨ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＥＺＨ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＥＺＨ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＡＥＢＰ２）上の１つ以上のＥＺＨ１結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＥＺＨ１阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＥＺＨ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＥＺＨ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＥＺＨ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＥＺＨ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＥＺＨ１に対する阻害性核酸、ＥＺＨ１に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＥＺＨ１に対する三重らせん分子、ＥＺＨ１を標的とするリボザイム、ＥＺＨ１に対する抗体、ＥＺＨ１を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＥＺＨ１を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＥＺＨ１を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＥＺＨ１を標的とするメガヌクレアーゼ、ＥＺＨ１を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＥＺＨ１に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＥＺＨ１阻害剤として含まれるものは、ＥＺＨ１に結合することができる、ＥＺＨ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＥＺＨ１媒介メチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＺＨ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＥＺＨ１阻害剤は、ＥＺＨ１の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＥＺＨ１特異的阻害剤およびＥＺＨ１の非特異的阻害剤、例えば、ＥＺＨ１アイソフォームの阻害剤、ＥＺＨ１パラログの阻害剤またはＥＺＨ１変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＥＺＨ１／ＥＺＨ２二重阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤が含まれる。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサーの阻害剤」、「ＥＺＨ２の阻害剤」、「ＥＺＨ２阻害剤」、「ｚｅｓｔｅホモログ２エンハンサーのアンタゴニスト」、「ＥＺＨ２のアンタゴニスト」および「ＥＺＨ２アンタゴニスト」は、ＥＺＨ２に結合することができる、ＥＺＨ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＥＺＨ２媒介メチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＺＨ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＥＺＨ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＥＺＨ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＥＤ、ＳＵＺ１２）上の１つ以上のＥＺＨ２結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＥＺＨ２阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＥＺＨ２に対する阻害性核酸、ＥＺＨ２に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＥＺＨ２に対する三重らせん分子、ＥＺＨ２を標的とするリボザイム、ＥＺＨ２に対する抗体、ＥＺＨ２を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＥＺＨ２を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＥＺＨ２を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＥＺＨ２を標的とするメガヌクレアーゼ、ＥＺＨ２を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＥＺＨ２に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＥＺＨ２阻害剤として含まれるものは、ＥＺＨ２に結合することができる、ＥＺＨ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＥＺＨ２媒介メチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＺＨ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＥＺＨ２阻害剤は、ＥＺＨ２の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＥＺＨ２特異的阻害剤およびＥＺＨ２の非特異的阻害剤、例えば、ＥＺＨ２アイソフォームの阻害剤、ＥＺＨ２パラログの阻害剤またはＥＺＨ２変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＥＺＨ１／ＥＺＨ２二重阻害剤またはＥＺＨ１阻害剤が含まれる。
【００４６】
本明細書で使用する場合、用語「ｚｅｓｔｅ１２サプレッサーの阻害剤」、「ＳＵＺ１２の阻害剤」、「ＳＵＺ１２阻害剤」、「ｚｅｓｔｅ１２サプレッサーのアンタゴニスト」、「ＳＵＺ１２のアンタゴニスト」および「ＳＵＺ１２アンタゴニスト」は、ＳＵＺ１２に結合することができる、ＳＵＺ１２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＳＵＺ１２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＳＵＺ１２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＳＵＺ１２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＺＨ２、ＥＥＤ）上の１つ以上のＳＵＺ１２結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＳＵＺ１２阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＳＵＺ１２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＳＵＺ１２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＳＵＺ１２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＳＵＺ１２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＳＵＺ１２に対する阻害性核酸、ＳＵＺ１２に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＳＵＺ１２に対する三重らせん分子、ＳＵＺ１２を標的とするリボザイム、ＳＵＺ１２に対する抗体、ＳＵＺ１２を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＳＵＺ１２を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＳＵＺ１２を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＳＵＺ１２を標的とするメガヌクレアーゼ、ＳＵＺ１２を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＳＵＺ１２に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＳＵＺ１２阻害剤として含まれるものは、ＳＵＺ１２に結合することができる、ＳＵＺ１２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＳＵＺ１２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＳＵＺ１２阻害剤は、ＳＵＺ１２の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＳＵＺ１２特異的阻害剤およびＳＵＺ１２の非特異的阻害剤、例えば、ＳＵＺ１２アイソフォームの阻害剤、ＳＵＺ１２パラログの阻害剤またはＳＵＺ１２変異体の阻害剤である。
【００４７】
本明細書で使用する場合、用語「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)の阻害剤」、「ＥＥＤの阻害剤」、「ＥＥＤ阻害剤」、「胚性外胚葉発生(embryonic ectoderm development)のアンタゴニスト」、「ＥＥＤのアンタゴニスト」および「ＥＥＤアンタゴニスト」は、ＥＥＤに結合することができる、ＥＥＤ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＥＤ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＥＥＤ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＥＥＤ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＺＨ２、ＳＵＺ１２）上の１つ以上のＥＥＤ結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＥＥＤ阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＥＥＤポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＥＥＤポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＥＥＤポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＥＥＤポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＥＥＤに対する阻害性核酸、ＥＥＤに対するギャップマーもしくはアプタマー、ＥＥＤに対する三重らせん分子、ＥＥＤを標的とするリボザイム、ＥＥＤに対する抗体、ＥＥＤを標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＥＥＤを標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＥＥＤを標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＥＥＤを標的とするメガヌクレアーゼ、ＥＥＤを標的とするアルゴノートタンパク質、またはＥＥＤに結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＥＥＤ阻害剤として含まれるものは、ＥＥＤに結合することができる、ＥＥＤ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＥＤ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＥＥＤ阻害剤は、ＥＥＤの発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれ��ものは、ＥＥＤ特異的阻害剤およびＥＥＤの非特異的阻害剤、例えば、ＥＥＤアイソフォームの阻害剤、ＥＥＤパラログの阻害剤またはＥＥＤ変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＥＥＤ１阻害剤、ＥＥＤ２阻害剤、ＥＥＤ３阻害剤、またはＥＥＤ４阻害剤が含まれる。
【００４８】
本明細書で使用する場合、用語「網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６の阻害剤」、「ＲｂＡｐ４６の阻害剤」、「ＲｂＡｐ４６阻害剤」、「網膜芽細胞腫サプレッサー（Ｒｂ）関連タンパク質４６のアンタゴニスト」、「ＲｂＡｐ４６のアンタゴニスト」および「ＲｂＡｐ４６アンタゴニスト」は、ＲｂＡｐ４６に結合することができる、ＲｂＡｐ４６発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるクロマチン構築およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＲｂＡｐ４６生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＲｂＡｐ４６発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＲｂＡｐ４６生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＳＵＺ１２、ＰＣＬ）上の１つ以上のＲｂＡｐ４６結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＲｂＡｐ４６阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＲｂＡｐ４６ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＲｂＡｐ４６ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＲｂＡｐ４６ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＲｂＡｐ４６ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＲｂＡｐ４６に対する阻害性核酸、ＲｂＡｐ４６に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＲｂＡｐ４６に対する三重らせん分子、ＲｂＡｐ４６を標的とするリボザイム、ＲｂＡｐ４６に対する抗体、ＲｂＡｐ４６を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＲｂＡｐ４６を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＲｂＡｐ４６を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＲｂＡｐ４６を標的とするメガヌクレアーゼ、ＲｂＡｐ４６を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＲｂＡｐ４６に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＲｂＡｐ４６阻害剤として含まれるものは、ＲｂＡｐ４６に結合することができる、ＲｂＡｐ４６発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるクロマチン構築およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＲｂＡｐ４６生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＲｂＡｐ４６阻害剤は、ＲｂＡｐ４６の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＲｂＡｐ４６特異的阻害剤およびＲｂＡｐ４６の非特異的阻害剤、例えば、ＲｂＡｐ４６アイソフォームの阻害剤、ＲｂＡｐ４６パラログの阻害剤またはＲｂＡｐ４６変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＲｂＡｐ４６／ＲｂＡｐ４８二重阻害剤またはＲｂＡｐ４８阻害剤が含まれる。
【００４９】
本明細書で使用する場合、用語「網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８の阻害剤」、「ＲｂＡｐ４８の阻害剤」、「ＲｂＡｐ４８阻害剤」、「網膜芽細胞腫サプレッサー（ｒｂ）関連タンパク質４８のアンタゴニスト」、「ＲｂＡｐ４８のアンタゴニスト」および「ＲｂＡｐ４８アンタゴニスト」は、ＲｂＡｐ４８に結合することができる、ＲｂＡｐ４８発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるクロマチン構築およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＲｂＡｐ４８生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＲｂＡｐ４８発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＲｂＡｐ４８生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＳＵＺ１２、ＰＣＬ）上の１つ以上のＲｂＡｐ４８結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＲｂＡｐ４８阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＲｂＡｐ４８ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＲｂＡｐ４８ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＲｂＡｐ４８ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＲｂＡｐ４８ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＲｂＡｐ４８に対する阻害性核酸、ＲｂＡｐ４８に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＲｂＡｐ４８に対する三重らせん分子、ＲｂＡｐ４８を標的とするリボザイム、ＲｂＡｐ４８に対する抗体、ＲｂＡｐ４８を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＲｂＡｐ４８を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＲｂＡｐ４８を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＲｂＡｐ４８を標的とするメガヌクレアーゼ、ＲｂＡｐ４８を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＲｂＡｐ４８に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＲｂＡｐ４８阻害剤として含まれるものは、ＲｂＡｐ４８に結合することができる、ＲｂＡｐ４８発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるクロマチン構築およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＲｂＡｐ４８生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＲｂＡｐ４８阻害剤は、ＲｂＡｐ４８の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＲｂＡｐ４８特異的阻害剤およびＲｂＡｐ４８の非特異的阻害剤、例えば、ＲｂＡｐ４８アイソフォームの阻害剤、ＲｂＡｐ４８パラログの阻害剤またはＲｂＡｐ４８変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＲｂＡｐ４６／ＲｂＡｐ４８二重阻害剤またはＲｂＡｐ４６阻害剤が含まれる。
【００５０】
本明細書で使用する場合、用語「脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２の阻害剤」、「ＡＥＢＰ２の阻害剤」、「ＡＥＢＰ２阻害剤」、「脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質２のアンタゴニスト」、「ＡＥＢＰ２のアンタゴニスト」および「ＡＥＢＰ２アンタゴニスト」は、ＡＥＢＰ２に結合することができる、ＡＥＢＰ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＡＥＢＰ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＡＥＢＰ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＡＥＢＰ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＪＡＲＩＤ２、ＥＥＤ）上の１つ以上のＡＥＢＰ２結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＡＥＢＰ２阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＡＥＢＰ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＡＥＢＰ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＡＥＢＰ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＡＥＢＰ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＡＥＢＰ２に対する阻害性核酸、ＡＥＢＰ２に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＡＥＢＰ２に対する三重らせん分子、ＡＥＢＰ２を標的とするリボザイム、ＡＥＢＰ２に対する抗体、ＡＥＢＰ２を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＡＥＢＰ２を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＡＥＢＰ２を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＡＥＢＰ２を標的とするメガヌクレアーゼ、ＡＥＢＰ２を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＡＥＢＰ２に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＡＥＢＰ２阻害剤として含まれるものは、ＡＥＢＰ２に結合することができる、ＡＥＢＰ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＡＥＢＰ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＡＥＢＰ２阻害剤は、ＡＥＢＰ２の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＡＥＢＰ２特異的阻害剤およびＡＥＢＰ２の非特異的阻害剤、例えば、ＡＥＢＰ２アイソフォームの阻害剤、ＡＥＢＰ２パラログの阻害剤またはＡＥＢＰ２変異体の阻害剤である。
【００５１】
本明細書で使用する場合、用語「十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２の阻害剤」、「ＪＡＲＩＤ２の阻害剤」、「ＪＡＲＩＤ２阻害剤」、「十文字ＡＴリッチ相互作用ドメイン２のアンタゴニスト」、「ＪＡＲＩＤ２のアンタゴニスト」および「ＪＡＲＩＤ２アンタゴニスト」は、ＪＡＲＩＤ２に結合することができる、ＪＡＲＩＤ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＪＡＲＩＤ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＪＡＲＩＤ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＪＡＲＩＤ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＥＤ、ＡＥＢＰ２）上の１つ以上のＪＡＲＩＤ２結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＪＡＲＩＤ２阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＪＡＲＩＤ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＪＡＲＩＤ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＪＡＲＩＤ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＪＡＲＩＤ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＪＡＲＩＤ２に対する阻害性核酸、ＪＡＲＩＤ２に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＪＡＲＩＤ２に対する三重らせん分子、ＪＡＲＩＤ２を標的とするリボザイム、ＪＡＲＩＤ２に対する抗体、ＪＡＲＩＤ２を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＪＡＲＩＤ２を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＪＡＲＩＤ２を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＪＡＲＩＤ２を標的とするメガヌクレアーゼ、ＪＡＲＩＤ２を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＪＡＲＩＤ２に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＪＡＲＩＤ２阻害剤として含まれるものは、ＪＡＲＩＤ２に結合することができる、ＪＡＲＩＤ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＪＡＲＩＤ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＪＡＲＩＤ２阻害剤は、ＪＡＲＩＤ２の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＪＡＲＩＤ２特異的阻害剤およびＪＡＲＩＤ２の非特異的阻害剤、例えば、ＪＡＲＩＤ２アイソフォームの阻害剤、ＪＡＲＩＤ２パラログの阻害剤またはＪＡＲＩＤ２変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＫＤＭ５Ｂ阻害剤が含まれる。
【００５２】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様タンパク質の阻害剤」、「ＰＣＬの阻害剤」、「ＰＣＬ阻害剤」、「ポリコーム様タンパク質のアンタゴニスト」、「ＰＣＬのアンタゴニスト」および「ＰＣＬアンタゴニスト」は、１つ以上のＰＣＬに結合することができる、１つ以上のＰＣＬ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含む１つ以上のＰＣＬ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、１つ以上のＰＣＬ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または１つ以上のＰＣＬ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＡＥＢＰ２、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８）上の１つ以上のＰＣＬ結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＰＣＬポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＰＣＬポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＰＣＬポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＰＣＬポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＰＣＬに対する阻害性核酸、ＰＣＬに対するギャップマーもしくはアプタマー、ＰＣＬに対する三重らせん分子、ＰＣＬを標的とするリボザイム、ＰＣＬに対する抗体、ＰＣＬを標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＰＣＬを標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＰＣＬを標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＰＣＬを標的とするメガヌクレアーゼ、ＰＣＬを標的とするアルゴノートタンパク質、または少なくとも１つのＰＣＬに結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ阻害剤として含まれるものは、１つ以上のＰＣＬに結合することができる、１つ以上のＰＣＬ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含む１つ以上のＰＣＬ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＰＣＬ阻害剤は、１つ以上のＰＣＬの発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＰＣＬ特異的阻害剤およびＰＣＬの非特異的阻害剤、例えば、ＰＣＬアイソフォームの阻害剤、ＰＣＬパラログの阻害剤またはＰＣＬ変異体の阻害剤である。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様１タンパク質の阻害剤」、「ＰＣＬ１の阻害剤」、「ＰＣＬ１阻害剤」、「ＰＨＦ１の阻害剤」、「ＰＨＦ１阻害剤」、「ポリコーム様１タンパク質のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ１のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ１アンタゴニスト」、「ＰＨＦ１のアンタゴニスト」および「ＰＨＦ１アンタゴニスト」は、ＰＣＬ１に結合することができる、ＰＣＬ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるＤＮＡ損傷応答およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＰＣＬ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＰＣＬ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＡＥＢＰ２、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８）上の１つ以上のＰＣＬ１結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ１阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＰＣＬ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＰＣＬ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＰＣＬ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＰＣＬ１ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＰＣＬ１に対する阻害性核酸、ＰＣＬ１に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＰＣＬ１に対する三重らせん分子、ＰＣＬ１を標的とするリボザイム、ＰＣＬ１に対する抗体、ＰＣＬ１を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＰＣＬ１を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＰＣＬ１を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＰＣＬ１を標的とするメガヌクレアーゼ、ＰＣＬ１を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＰＣＬ１に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ１阻害剤として含まれるものは、ＰＣＬ１に結合することができる、ＰＣＬ１発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるＤＮＡ損傷応答およびメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ１生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＰＣＬ１阻害剤は、ＰＣＬ１の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＰＣＬ１特異的阻害剤およびＰＣＬ１の非特異的阻害剤、例えば、ＰＣＬ１アイソフォームの阻害剤、ＰＣＬ１パラログの阻害剤またはＰＣＬ１変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＰＣＬ２阻害剤およびＰＣＬ３阻害剤が含まれる。
【００５４】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様２タンパク質の阻害剤」、「ＰＣＬ２の阻害剤」、「ＰＣＬ２阻害剤」、「ＭＴＦ２の阻害剤」、「ＭＴＦ２阻害剤」、「ポリコーム様２タンパク質のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ２のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ２アンタゴニスト」、「ＭＴＦ２のアンタゴニスト」および「ＭＴＦ２アンタゴニスト」は、ＰＣＬ２に結合することができる、ＰＣＬ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＰＣＬ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＰＣＬ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＡＥＢＰ２、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８）上の１つ以上のＰＣＬ２結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ２阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＰＣＬ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＰＣＬ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＰＣＬ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＰＣＬ２ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＰＣＬ２に対する阻害性核酸、ＰＣＬ２に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＰＣＬ２に対する三重らせん分子、ＰＣＬ２を標的とするリボザイム、ＰＣＬ２に対する抗体、ＰＣＬ２を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＰＣＬ２を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＰＣＬ２を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＰＣＬ２を標的とするメガヌクレアーゼ、ＰＣＬ２を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＰＣＬ２に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ２阻害剤として含まれるものは、ＰＣＬ２に結合することができる、ＰＣＬ２発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ２生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＰＣＬ２阻害剤は、ＰＣＬ２の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＰＣＬ２特異的阻害剤およびＰＣＬ２の非特異的阻害剤、例えば、ＰＣＬ２アイソフォームの阻害剤、ＰＣＬ２パラログの阻害剤またはＰＣＬ２変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＰＣＬ１阻害剤およびＰＣＬ３阻害剤が含まれる。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「ポリコーム様３タンパク質の阻害剤」、「ＰＣＬ３の阻害剤」、「ＰＣＬ３阻害剤」、「Ｐｈｆ１９の阻害剤」、「Ｐｈｆ１９阻害剤」、「ポリコーム様３タンパク質のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ３のアンタゴニスト」、「ＰＣＬ３アンタゴニスト」、「Ｐｈｆ１９のアンタゴニスト」および「Ｐｈｆ１９アンタゴニスト」は、ＰＣＬ３に結合することができる、ＰＣＬ３発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ３生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＰＣＬ３発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＰＣＬ３生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＡＥＢＰ２、ＲｂＡｐ４６、ＲｂＡｐ４８）上の１つ以上のＰＣＬ３結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ３阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＰＣＬ３ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＰＣＬ３ポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＰＣＬ３ポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＰＣＬ３ポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＰＣＬ３に対する阻害性核酸、ＰＣＬ３に対するギャップマーもしくはアプタマー、ＰＣＬ３に対する三重らせん分子、ＰＣＬ３を標的とするリボザイム、ＰＣＬ３に対する抗体、ＰＣＬ３を標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＰＣＬ３を標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＰＣＬ３を標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＰＣＬ３を標的とするメガヌクレアーゼ、ＰＣＬ３を標的とするアルゴノートタンパク質、またはＰＣＬ３に結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＰＣＬ３阻害剤として含まれるものは、ＰＣＬ３に結合することができる、ＰＣＬ３発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＰＣＬ３生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＰＣＬ３阻害剤は、ＰＣＬ３の発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＰＣＬ３特異的阻害剤およびＰＣＬ３の非特異的阻害剤、例えば、ＰＣＬ３アイソフォームの阻害剤、ＰＣＬ３パラログの阻害剤またはＰＣＬ３変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、アイソフォーム１阻害剤、アイソフォーム２阻害剤、ＰＣＬ１阻害剤およびＰＣＬ２阻害剤が含まれる。
【００５６】
本明細書で使用する場合、用語「ＥＰＯＰの阻害剤」、「ＥＰＯＰ阻害剤」、「Ｃ１７ｏｒｆ９６の阻害剤」、「Ｃ１７ｏｒｆ９６阻害剤」、「ＥＰＯＰのアンタゴニスト」および「ＥＰＯＰアンタゴニスト」、「Ｃ１７ｏｒｆ９６のアンタゴニスト」、「Ｃ１７ｏｒｆ９６アンタゴニスト」は、ＥＰＯＰに結合することができる、ＥＰＯＰ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＰＯＰ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＥＰＯＰ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＥＰＯＰ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＥＤ、ＥＺＨ２、ＰＣＬ）上の１つ以上のＥＰＯＰ結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＥＰＯＰ阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＥＰＯＰポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＥＰＯＰポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＥＰＯＰポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＥＰＯＰポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＥＰＯＰに対する阻害性核酸、ＥＰＯＰに対するギャップマーもしくはアプタマー、ＥＰＯＰに対する三重らせん分子、ＥＰＯＰを標的とするリボザイム、ＥＰＯＰに対する抗体、ＥＰＯＰを標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＥＰＯＰを標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＥＰＯＰを標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＥＰＯＰを標的とするメガヌクレアーゼ、ＥＰＯＰを標的とするアルゴノートタンパク質、またはＥＰＯＰに結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＥＰＯＰ阻害剤として含まれるものは、ＥＰＯＰに結合することができる、ＥＰＯＰ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＥＰＯＰ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＥＰＯＰ阻害剤は、ＥＰＯＰの発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＥＰＯＰ特異的阻害剤およびＥＰＯＰの非特異的阻害剤、例えば、ＥＰＯＰアイソフォームの阻害剤、ＥＰＯＰパラログの阻害剤またはＥＰＯＰ変異体の阻害剤である。
【００５７】
本明細書で使用する場合、用語「ＬＣＯＲの阻害剤」、「ＬＣＯＲ阻害剤」、「Ｃ１０ｏｒｆ１２の阻害剤」、「Ｃ１０ｏｒｆ１２阻害剤」、「ＬＣＯＲのアンタゴニスト」および「ＬＣＯＲアンタゴニスト」、「Ｃ１０ｏｒｆ１２のアンタゴニスト」、「Ｃ１０ｏｒｆ１２アンタゴニスト」は、ＬＣＯＲに結合することができる、ＬＣＯＲ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＬＣＯＲ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子を指す。例えば、ＬＣＯＲ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、またはＬＣＯＲ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる分子は、ＰＲＣ２複合体（例えば、ＥＺＨ２）上の１つ以上のＬＣＯＲ結合部位に結合することによって、その効果を発揮し得る。本開示の方法に使用され得るＬＣＯＲ阻害剤として含まれるものは、小化合物、例えば、少なくともＬＣＯＲポリペプチドをコードする核酸分子の断片と相補的である小ＲＮＡ（例えば、アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、少なくともＬＣＯＲポリペプチドをコードする核酸分子の断片とハイブリダイズするロックド核酸、少なくともＬＣＯＲポリペプチドをコードする核酸分子の断片と結合するペプチド核酸、少なくともＬＣＯＲポリペプチドをコードする核酸分子の断片を標的とするモルホリノ、ＬＣＯＲに対する阻害性核酸、ＬＣＯＲに対するギャップマーもしくはアプタマー、ＬＣＯＲに対する三重らせん分子、ＬＣＯＲを標的とするリボザイム、ＬＣＯＲに対する抗体、ＬＣＯＲを標的とするジンクフィンガータンパク質（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼもしくはジンクフィンガー転写因子）、ＬＣＯＲを標的とする転写活性化因子様エフェクタータンパク質（例えば、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼもしくは転写活性化因子様エフェクターに基づく転写因子）、ＬＣＯＲを標的とするＣＲＩＳＰＲベースシステム（例えば、ガイドＲＮＡと、ＤＮＡもしくはＲＮＡを切断するための触媒活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム、ガイドＲＮＡと、遺伝子サイレンシングおよびエピジェネティック修飾のための機能ドメインと融合した、もしくはしていない触媒不活性ＣＲＩＳＰＲ酵素とを組み合わせたシステム）、ＬＣＯＲを標的とするメガヌクレアーゼ、ＬＣＯＲを標的とするアルゴノートタンパク質、またはＬＣＯＲに結合するキメラのものを含む任意のポリペプチドである。本開示の方法に使用され得るＬＣＯＲ阻害剤として含まれるものは、ＬＣＯＲに結合することができる、ＬＣＯＲ発現レベルを阻害もしくは低減することができる、または、限定されるものではないが、ＰＲＣ２のコアサブユニット、例えば、ＥＺＨ１もしくはＥＺＨ２により媒介されるメチルトランスフェラーゼ活性を含むＬＣＯＲ生物学的活性を中和、遮断、低減もしくは妨害することができる、非ペプチド小分子、例えば、化合物である。例えば、ＬＣＯＲ阻害剤は、ＬＣＯＲの発現レベルまたは生物活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上低減または阻害する。この定義に含まれるものは、ＬＣＯＲ特異的阻害剤およびＬＣＯＲの非特異的阻害剤、例えば、ＬＣＯＲアイソフォームの阻害剤、ＬＣＯＲパラログの阻害剤またはＬＣＯＲ変異体の阻害剤であり、これには、限定されるものではないが、ＰＲＣ２関連ＬＣＯＲアイソフォーム１（ＰＡＬＩ１）の阻害剤およびＰＲＣ２関連ＬＣＯＲアイソフォーム２（ＰＡＬＩ２）の阻害剤が含まれる。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「治療する(treat)」、「治療する(treating)」および「治療」は、障害、疾患と戦って、障害もしくは疾患と関連する１つ以上の症状もしくは合併症を軽減もしくは抑制する、または、障害もしくは疾患の１つもしくは複数の原因、もしくは障害もしくは疾患自体を根絶することを目的とした、患者の管理およびケアを指す。用語「治療する(treat)」、「治療する(treating)」および「治療」はまた、障害もしくは疾患、および／もしくはその付随症状の発症を遅延および／もしくは防止する；対象が障害もしくは疾患を獲得することを阻止する；または対象が障害もしくは疾患を獲得するリスクを低減させる方法を指す。用語「治療する(treat)」、「治療する(treating)」および「治療」はまた、動物モデルまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞の治療（処置）も含み得る。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「対象」は、「それを必要とする対象」と互換的であり、その両方とも、眼障害と診断されている、眼障害の症状を有する、または全体の集団と比較して眼障害を発症するリスクが高い、任意の哺乳動物を指す。哺乳動物は、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、雌ウシ、ヒツジ、ブタまたはウマであり得る。好ましくは、哺乳動物はヒトである。眼障害は、任意の眼障害、例えば、癌であるまたは癌ではない眼障害であり得る。好ましくは、眼障害は、癌ではなく、例えば、遺伝性眼障害、眼に影響を与える神経変性障害、眼自己免疫疾患、眼に影響を与える炎症性疾患である。より好ましくは、眼障害は、遺伝性網膜障害、網膜変性、網膜の神経変性疾患、網膜に影響を与える眼自己免疫疾患または網膜に影響を与える炎症性疾患である。眼障害はまた、網膜ニューロンに影響を与える障害を含む。例示すると、予防の目的で、対象は、網膜ニューロンの細胞死を特徴とする網膜機能の変性などを有するヒト対象であり得る。このような眼障害の例としては、限定されるものではないが、色覚異常、コンピューター視覚症候群、糖尿病性網膜症、飛蚊症および斑点、緑内障、学習関連視覚問題、黄斑変性、眼振、眼アレルギー、高眼圧症、網膜剥離、網膜色素変性症、結膜下出血、ブドウ膜炎、レーバー先天性黒内障、錐体桿体ジストロフィー、夜盲症、硝子体網膜ジストロフィー、びらん性硝子体網膜症、アッシャー症候群、網膜上膜、黄斑円孔が挙げられる。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「網膜ニューロン」は、視覚情報の伝達および処理に特異的な役割を果たす、哺乳動物網膜の任意の神経細胞を指す。この定義に含まれるものは、桿体および錐体光受容体などの光受容体、網膜神経節細胞、双極細胞、アマクリン細胞および水平細胞である。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「治療上有効な量」および「有効量」は、哺乳動物に投与されたとき、治療される障害または状態の少なくとも１つの症状の発症を予防する、またはある程度まで軽減するのに十分である化合物の量を指す。これらの用語はまた、生体分子（例えば、タンパク質、酵素、ＤＮＡまたはＲＮＡ）、細胞、組織、システム、動物またはヒトなどの生物の生物学的または医学的応答を誘発するのに十分である化合物の量を指す。
【００６２】
材料と方法
マウスおよび家畜：
野生型（ＷＴ）マウス、網膜変性１（Ｒｄ１）マウス、およびＦＶＢバックグラウンドのＲｄ１；Ｂｍｉ１−／−マウス、ならびに緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）錐体−桿体ホメオボックス（Ｃｒｘ）遺伝子活性化を発現するＣ５７／Ｂｌ６ＷＴマウスを、室温２５℃および湿度５０〜６０％にて、１２時間明／１２時間暗周期で動物施設において飼育した。Ｃｒｘ−ＧＦＰマウスをＲｄ１マウスと交配させて、Ｒｄ１；Ｃｒｘ−ＧＦＰを得た。総ての動物の遺伝型を、以前に記載のように（Zencak et al., PNAS 2013；表１におけるジェノタイピングに使用したプライマーの組を参照）、特異的なプライマーを用いた従来のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅法により検証した。遅い変性過程を示すＦａｍ１６１ａ−／−マウスは、親切にもＤｒｏｒ  Ｓｈａｒｏｎ（ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｈａｄａｓｓａｈ、エルサレム）によって提供された。動物は、視覚と眼科学研究協会会議（ＡＲＶＯ）ガイドラインに従って処置し、総ての実験手順は、Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｔａｔｅ  ｏｆ  Ｖａｕｄ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによって承認された。
【００６３】
ヒトサンプル：
ヒト網膜色素変性症およびドナーからのスライド切片は、Ｊｕｌｅｓ−Ｇｏｎｉｎ’ｓ  Ｅｙｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ローザンヌ、スイス）のアイバンクによって提供され、後ろ向き研究のプロトコールは、スイスのＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｉｏｒ  Ａｆｆａｉｒｓによって承認された（認可番号０３５−０００３−４８／ＣＯＣ）。研究は、網膜剥離のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルとしてのヒト網膜剥離片に対して実施された。総ての手順は、ヒト対象が関与する生物医学的研究に関するヘルシンキ宣言の教義に従った。ローザンヌアイバンクから受領したヒト眼球は、移植には不適であるとみなした。州（ＶＤ）のヒト研究の倫理に関する委員会（ＣＥＲ−ＶＤ、プロトコール番号３４０−１５）による倫理承認およびスイスの法律に従って、死亡前のドナーの全般的健康を検討し、網膜を損傷する恐れのある既往歴または治療歴を有するドナーからの組織は拒否した。
【００６４】
化合物および原液の調製：
ＵＮＣ１９９９阻害剤は、商業的供給源（番号ＳＭＬ０７７８−５ＭＧ、ＳＩＧＭＡ社）から凍結乾燥粉末として供給された。原液は、製造業者の説明書に従って、１００％ＤＭＳＯ中で調製した。十分な量のＤＭＳＯをバイアルに加え、１０ｍＭ原液を作製した。最適な注射手技のために、本発明者らは、中間溶液の調製前に、３つの異なるパラメーターを検討した。第１に、およそ５．３μｌである幼若マウス（生後８日目、ＰＮ０８）の硝子体の容量を検討し；注射可能であった（最終容量６．３μｌ）最大安全量（１μｌ）、および細胞培養実験（下記参照）とともに増量した用量から得られた６μＭの計算有効量を検討した。したがって、次いで、その後の実験用の２０μＭ中間溶液を作製するために、原液を生理的緩衝液（０．９％ＮａＣｌ）で希釈した。
【００６５】
細胞培養およびＵＮＣ１９９９による処置：
マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）の培養液中で、３７℃、５％ＣＯ２にて維持した。処置の前日に、細胞をトリプシン処理し、２４ウェルプレート中のポリオルニチンコーティングしたカバーガラスに、密度５０,０００個で播種した。翌日に、培地を捨て、１μＭ〜５０μＭの範囲の、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した種々の用量のＵＮＣ１９９９阻害剤を含有する新鮮培地を３回加え、次いで、３７℃で４８時間再度インキュベートした。対照細胞に、ＵＮＣ１９９９とともに使用した各ジメチルスルホキシドＤＭＳＯを与えた。カバーガラスを、予熱したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）１倍で室温（ＲＴ）にて３回洗浄した。細胞を、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で室温にて１２分間固定した。ＰＢＳ中でさらに２回洗浄した後、細胞を直ちに免疫染色に進めた。ウエスタンブロット解析のために、２００,０００個の細胞を６ウェルプレートに３回播種し、上記のように処置した。
【００６６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験：
化合物を、ＰＮ０８  Ｒｄ１同腹仔の眼球に、硝子体内注射によって送達した。動物（計０８匹）を最初に、２０ｍｇ／ｋｇケタミン＋３００μｇ／ＫｇのＤｏｒｂｅｎｅの混合物で腹膜内（ｉｐ）麻酔した。３０分後、３００μｇ／ｋｇのＡｌｚａｎｅのｉｐ注射によって、回復を行った。必要な場合、眼瞼のふち（future edge）を強制的に開き、鉗子で保持した。２０μＭ  ＵＮＣ１９９９溶液で満たした注射針を、強膜を介して硝子体内に慎重に挿入した。単一用量（１μｌ）の中間溶液を徐々に送達し、終濃度２．５〜３μＭに達し、これはＤＭＳＯ濃度０．０３１７％に相当した。各動物に対し、一方の眼に化合物を投与し、一方、他方の眼にはビヒクルを注射した。注射された動物は、麻酔から目覚めるまで、保温し、厳密な検査から恩恵を受けた。動物が通常の習慣に戻る前の回復の助けとなるよう、４００μｌの５％グルコースおよびパラセタモールをそれぞれ皮下および腹膜内投与した。注射後４日目にマウスを屠殺し、以下に説明するように眼球を切除した。処理の前に、白内障および予期しない病変の何らかの徴候に関して、眼を慎重に検査した。同様に、単一用量のＵＮＣ１９９９（３６μＭの溶液）を、２ヵ月齢のＦａｍ１６１ａ−／−マウス（遅い変性過程）に、硝子体内注射により投与し、毎週反復注射した。４回目の注射後４日目に、動物を屠殺した。
【００６７】
ヒト網膜剥離片を調製するためのプロトコール：
眼の解剖の手順：角膜ドナーの回収後、後眼部を回収し；硝子体を除去した後、次いで、強膜および網膜を、４回の切開で花形に切り出した。次に、網膜剥離のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを達成するために、網膜を、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、脈絡膜および強膜から剥離した。対照剥離片を、ＲＰＥとともに培養した。周辺部網膜を、最大５ｍｍ×５ｍｍの小片に解剖した。網膜剥離片をＭｉｌｌｉｐｏｒｅメンブレンインサート（ミリセルカルチャープレートインサート、ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｍｅｒｃｋ社、ダルムシュタット、ドイツ）に置き、次いで、６ウェルプレート（ＮａｌｇｅｎｅＮｕｎｃ社、ロチェスター、ニューヨーク州、米国）に入れ、次いで、１．５ｍＬの培地を各ウェルに投与した。ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地は、Ｂ２７（１／５０）、ＦＢＳ（１％）、ペニシリン（１％）およびストレプトマイシン（１％）を含有していた。培地を３７℃で維持し、４８時間毎に交換した。このプロトコール中、解剖後２４時間、７２時間、５日目および７日目に固定を行った。固定は、４％ＰＦＡおよび３０％スクロースを用いて達成し、剥離片を、Ｙａｚｕｌｌａを用いて載せ、その後−２０℃で凍結させた。組み入れ基準を満たした網膜剥離片は４個存在した（ｎ＝４）。４個総ての剥離片が、既知の網膜疾患に対して陰性であった。各生体サンプルを、２群、すなわち、ＲＤ群（ＲＰＥを有さない）、ｎ＝４および対照群（ＲＰＥを有する）、ｎ＝４に分け、分析した総ての時点に供した。
【００６８】
組織学的検査および組織処理：
動物を、ＣＯ２への７分間の曝露によって屠殺した。摘出した眼に対して組織学的検査を行った。凍結薄切前に、眼球を視神経から切除し、２５Ｇ針を用いて角膜レベルで穿孔し（単一の小さい穴）、室温で４％ＰＦＡ（ｗ／ｖ）に移した。１時間のインキュベーション期間の後、眼を、４℃で一晩３０％スクロースに移す前に、ＰＢＳ１倍中で洗浄した。眼をｙａｚｕｌａに包埋し、−２０℃で凍結させ、次いで、クリオスタットを用いて１４μｍの薄切を行った。切片を、各眼につき６枚の連続スライドに回収した。総ての定量化は、視神経を含む（またはそれを囲む）最も中心の凍結切片に対して行った。核の列の測定を、分析した総ての切片およびスライドにおける網膜の背側および腹側の両方に対して同じ位置的領域にて行った。データは、網膜の背側帯または腹側帯に対する平均としてプールした。
【００６９】
ＷＴおよびＲｄ１マウスからの精製された光受容体の作製：
ＧＦＰを発現するＣｒｘ−ＧＦＰ；ＷＴおよびＣｒｘ−ＧＦＰ；Ｒｄ１マウスを、ＰＮ１２において屠殺し、上記のように摘出した。次いで、網膜を眼球から単離し、単離された網膜組織を、還元型血清培地ＯｐＴｉ−ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）のアリコートを含有する２ｍｌ微量遠心管に移した。同じ同腹仔からの４〜６個の網膜を、製造業者の説明書に従って、パパイン−Ｉ解離（パパイン解離キット、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ社）の前に合わせた。サンプル調製物を、ＧＦＰを励起するための４８８ｎｍ緑色レーザーを備えたＭｏＦｌｏ  Ａｓｔｒｉｏシステム（ＵＮＩＬプラットフォーム、ＣＨＵＶにおけるＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社）のカラムにさらにロードした。細胞を一定励起で選別し、ＰＢＳ１倍中に回収し、ペレット化し、次いで、スナップ凍結し、分析日まで−８０℃で直ちに保存した。
【００７０】
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３染色のためのエピトープ回収：
凍結スライドを、室温で温め、再水和し、ＰＢＳ１倍で３回洗浄した。スライドをプラスチック容器（２５×７５ｍｍ）に入れ、１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で満たし、家庭用マイクロ波オーブンに移した。液体が煮沸し始めるまで、サンプルを６００Ｗ（中出力）でおよそ２分間加熱した。緩衝液を永久的に補充し、合計期間５分間、逐次的に再度煮沸した。次いで、切片を、室温で３０分間、クエン酸緩衝液中で徐々に冷却し、免疫組織化学の前に、ＰＢＳ１倍で徹底的にすすいだ。
【００７１】
免疫組織化学：
処置および非処置スライドに対して、免疫組織化学を行った。切片を、冷却したＰＢＳ１倍で３回洗浄した後、トリトンＸ−１００で２０分間透過処理し、組織および細胞中の至る所での最適な抗体−抗原相互作用をさらに可能にした。切片を、０．３％トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳ１倍中の３％ＢＳＡ（ｗ／ｖ）、５％ＮＧＳ（ｖ／ｖ）を含有する緩衝液で、１時間ブロックした。適当な抗体希釈物（表２におけるそれぞれの用途を備えた抗体の一覧を参照）を、ブロッキング溶液中で調製し、十分な量を置き、４℃で一晩移した。翌日、抗体溶液を流し、残りの非相互作用プローブを、ＰＢＳ１倍で３回洗い流した。次いで、相互作用プローブを、室温で１時間ＰＢＳ１倍に希釈した適当なコンジュゲート二次抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８またはＡｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６３３の溶液を適用することによって、検出した。最後に、ＰＢＳ中で調製した４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）溶液で、核を対比染色した。あるいは、ｃＧＭＰおよびＣＤＫ４などの抗原を回収することが困難な場合には、特別な条件を適用した：ＣＤＫ４の検出に成功するには、供給業者の説明書に従った、ＴＳＡ（登録商標）フルオレセイン検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）または３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）顕色システム（Ｄａｋｏ社）のいずれかを用いたシグナル増幅を必要とする。ｃＧＭＰの検出は、ソフト洗剤溶液（０．１％トリトンＸ−１００）を用いてメンブレンを透過処理することにより、およびインキュベーション工程全体を通じてトリス緩衝液（ＴＢＳ）を使用することにより、達成した。総ての調製物は、Ｍｏｗｉｏｌを用いてマウントし、測定は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ６０蛍光顕微鏡またはＺｅｉｓｓ共焦点顕微鏡（ＬＳＭ  ５１０  ３．２  ソフトウェア）を用いて行った。
【００７２】
シグナルの定量化および分析：
各抗原につき、スライド１枚あたり、視神経に隣接する８枚の切片を分析した。個々の切片を、対物レンズ２０倍の倍率で描写された６つの主要な（背側３つおよび腹側３つ）視野に細分することによって、外顆粒層（ＯＮＬ）核における陽性シグナルを、背腹側面に沿って数えた。各背側視野または腹側視野は、視神経に最も近い場合、中心に割り当て、一方、視神経から最も遠いものは、周辺とみなした。次いで、Ｒｄ１における染色された細胞の総数を、切片１枚あたりで推定し、１視野あたりの平均を、ＷＴマウスと比較してスコア化した。
【００７３】
末端ｄＵＴＰ鎖切断標識：
細胞死を、ｉｎ−Ｓｉｔｕ細胞死検出キット（カタログ番号：１２１５６７９２９１０。Ｒｏｃｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社；ロートクロイツ、スイス）を用いてモニタリングし、末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）を、製造業者の説明書に従って行った。
【００７４】
組織ホモジネートの調製：
精製された光受容体を、氷上で解凍し、ＰＢＸ１倍で２回洗浄し、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、１５０ｍＭ  Ｎａｃｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．２５％トリトンＸ−１００および０．２５％ノニデットＮＰ４０、ならびにプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ社）中でホモジナイズした。引き続き、４℃での３０％振幅で３秒間の超音波処理工程を行い、核の成分を放出させた。細胞骨格およびデブリを、１４,０００ｇで１０分間ペレット化し、透明なライセートを回収し、新鮮なエッペンドルフチューブ中の小さなアリコートに移し、分析日まで−８０℃で保存した。
【００７５】
ウエスタンブロット：
等量（２０μｇ）のライセートを、定電圧下での１２％ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。次いで、タンパク質を、室温でポリビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレンに移した（ＢｉｏＲａｄ社、スイス）。メンブレンを、室温でＰＢＳ１倍中の５％脱脂粉乳で１時間ブロックした。メンブレンを、示したように（表１および表２参照）、５％脱脂粉乳、０．１％ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で希釈した一次抗体でインキュベートした。メンブレンを、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄し、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート二次抗体で、室温にて１時間さらにインキュベートした。メンブレンをＰＢＳＴで２回洗浄し、ＰＢＳ１倍で１回洗浄した。最後に、最高感度の化学発光ＨＲＰ基質（Ｗｉｔｅｃ  ＡＧ社）を加え、製造業者の説明書に従って、富士フイルム化学発光カセット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）を用いてバンドを明らかにした。
【実施例】
【００７６】
実施例１：網膜変性マウスモデルの光受容体におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積
先行研究において、本発明者らは、Ｒｄ１光受容体における細胞死は、ＢＭＩ１ポリコーム群タンパク質（Ｂ細胞特異的ＭＭＬＶ組込み部位１）と密接に依存していたが、その分子作用は、下流の従来のＩｎｋ４ａ／Ａｒｆ経路と非依存的であったことを示した(Zencak et al., 2013)。ＢＭＩ１がＲｄ１光受容体における自律的な効果を有するかどうかを明らかにするため、本発明者らは、光受容体においてＢｍｉ１欠失を特異的および独特に明確に誘導するために、条件的なＲｄ１；Ｂｍｉ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスをオプシン：：Ｃｒｅ系統と交配し、Ｒｄ１；オプシン：：Ｃｒｅ；Ｂｍｉ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスを作製した（図２Ａ）。Ｃｒｅリコンビナーゼ活性を有するマウスにおいて、生後１６日目（ＰＮ１６）でのＢＭＩ１の免疫組織化学によって、Ｂｍｉ１の細胞型特異的な欠失を光受容体において確認した（図２Ａ）。しかしながら、光受容体から構成される外顆粒層（ＯＮＬ）の広い領域においてＢＭＩ１の発現は存在しなかったにもかかわらず、Ｒｄ１；Ｂｍｉ１−／−と比較して、ＯＮＬの厚さのレスキューはＰＮ１６に認められなかった（図２ＡおよびZencak et al., 2013）。このことは、細胞死を引き起こす分子センサーが、光受容体の分化の直後、およびオプシンプロモーター活性の開始中に光受容体が自身の完全な成熟を獲得する時点の前に、切り替わり得ることを示唆する。
【００７７】
ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）は、ＢＭＩ１の前に遺伝子を調節するように作用するため、本発明者らは、ＰＣＲ２はすでにこの死滅過程に関与している可能性があると仮定し、ヒストン翻訳後修飾（ＨＰＴＭ）を検討した。Ｚｅｓｔホモログ２エンハンサー（ＥＺＨ２）は、ＰＲＣ２に属し、ヒストン３のリシン２７上のトリメチル化（Ｈ３Ｋ７２ｍｅ３）を媒介して、クロマチンの凝集、およびＢＭＩ１を介したＰＲＣ１と関連した遺伝子抑制を支持する。選択されたヒストン翻訳後修飾（ＨＰＴＭ）に関するＰＮ１６のＲｄ１；オプシン：：Ｃｒｅ；Ｂｍｉ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスからの変性中の網膜切片のスクリーニングによって、ＯＮＬ中のいくつかの細胞における部位特異的Ｈ３Ｋ２７過剰トリメチル化が明らかにされている（図２Ｄ）。変性網膜内の光受容体におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３のこの独特の濃縮を考慮し、本発明者らは、その生物学的意義および疾患過程に対する潜在的な寄与をより注目することを検討した。
【００７８】
ＰＮ１２のＲｄ１マウスにおいて、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３に対する免疫組織化学によって、外顆粒層（ＯＮＬ）を構成するいくつかの核における強い核標識が示されている（図２Ｃ）。ＥＺＨ２およびＨ３Ｋ２７ｍｅ３のレベルは、出生後の幼若ＷＴマウスにおいてすでに定量的に減少していることから(Rao et al., 2010)、および抗体の非特異的相互作用に起因するいずれかの交差反応性を除外するために、本発明者らは、異なる商業的供給源からさらなる抗体（ｍＡｂ６００２）を得た。強い共局在が両方の標識で得られ、このため、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３染色の特異性が確証された。対照的に、ＷＴ網膜のＯＮＬにおいては、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の濃いマークは認められず（図２Ｃ）、この観察所見は、成熟ＷＴ網膜に関して以前に説明されたものと一致している(Rao et al., 2010)。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３は、光受容体特異タンパク質であるロドプシン（Ｒｈｏ、図２Ｄ）を発現する細胞に共局在しており、亢進したＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークが、これらの網膜ニューロンに存在することが証明された。
【００７９】
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積が、網膜変性の異なる齧歯類モデルにおいても生じるかどうかを検証するため、本発明者らは、Ｒｄ１０、ロドプシンＰ２３Ｈ、ロドプシンＳ３３４ｔｅｒ、ロドプシン−／−、およびＦａｍ１６１ａ−／−網膜におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークを検討した。Ｒｄ１０マウスは、Ｒｄ１とほぼ類似する別の網膜変性モデルである（ＰＤＥ６欠損）(Chang et al., 2007, Barhoum et al., 2008)。しかしながら、網膜細胞喪失の発症は遅延しているが、変性過程はさらに速い（本発明者らのコロニーにおいて）。このモデルにおいて、中心網膜における核濃縮細胞の数は、ＰＮ２５にピークに達し、視細胞死の半数がＰＮ１３〜１４にＯＮＬにおいて生じるＲｄ１とは異なっている(Portera-Cailliau et al., 1994.)。興味深いことに、抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３ポリクローナル抗体によるＲｄ１０網膜切片の染色は、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの顕著な増大も示した（図３、下段のパネル）。さらに、本発明者らはまた、２つの他の常染色体優性ＲＰのモデル、すなわち、それぞれＰ２３ＨマウスおよびＳ３３４ｔｅｒラット（図３、それぞれ上段および中段のパネル）のＯＮＬ、ならびに遅い変性速度を有するＦａｍ１６１−／−およびロドプシン−／−マウス（資料未記載）における、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの強い存在を観察した。
【００８０】
したがって、これらのデータは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積は、異なる種類の網膜変性に影響を及ぼす一般的な現象であることを明らかにしている。
【００８１】
さらに、Ｒｄ１におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークの分布およびその基礎レベルの変化は、特別なものであるかどうか、またはＨＰＴＭホメオスタシスの一般的な調節緩和を明らかにするかどうかを決定するため、本発明者らは、それぞれサイレント遺伝子および活性遺伝子のＴＳＳにおいて濃縮されていることでも知られるＨ３Ｋ９ｍｅ２およびＨ３Ｋ４ｍｅ３マークのパターンおよび分布を調べた。染色時、本発明者らは、ＷＴとＲｄ１のＯＮＬとの間のＨ３Ｋ９ｍｅ２およびＨ３Ｋ４ｍｅ３のいずれの発現差異も検出しなかった（図４ＡおよびＢ）。
【００８２】
まとめると、これらの結果は、齧歯類の光受容体は、変性過程中に特異的なクロマチンリモデリングを受け、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの調節緩和は、変性光受容体に特別なものであると思われることを強く明らかにしている。
【００８３】
実施例２：網膜色素変性症に罹患しているヒト患者網膜におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積
網膜障害におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の過剰メチル化の関連性をよりよく与えるために、本発明者らは、この表現型は、ヒト網膜においても生じる可能性があるのではないかと考えた。網膜色素変性症に罹患している１例のヒトおよび１例の健常ドナーからの眼球を採取および処理し、それらの網膜におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の存在を検討した。ヒトドナーサンプル（図５Ａ）とは対照的に、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３過剰トリメチル化マークの存在は、最初に変性過程が開始した領域、および周辺付近の領域においても、両方のＲＤ網膜の周辺部において著しく濃縮していた（図５Ｂ、資料未記載）。対照的に、中心網膜においては、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークはほとんど認められなかった。周辺部においてＨ３Ｋ７ｍｅ３マークの数が多く、中心網膜に向かって希薄化していくというパターンは、網膜色素変性症に罹患している患者において一般に認められる細胞死のパターンと一致する。
【００８４】
まとめると、これらのデータは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３メチル化をＲＤにおける変性過程の特徴として見出すものであり、細胞死の機序と関連している可能性がある。
【００８５】
実施例３：網膜変性マウスモデルにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積は、視細胞死の過程の遅い事象に先行する
Ｒｄ１網膜におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３の時間的な発現をよく理解するために、本発明者らは、疾患発症前のＰＮ５から、３０％未満の細胞のみがＲｄ１網膜に残存するＰＮ１５までの、このマークの時間的経過を評価した。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３は、ＰＮ８においてすでに検出可能であり（図２Ｅ）、その時間的な発現パターンは、すでに説明した変性経過と密接に関連しており(Zencak et al., 2013)、増殖マーカーＫｉ−６７の発現に先行する（図２Ｃ、下段のパネルおよび２Ｆ）。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３を有する細胞の数は、５０％超の細胞がＲｄ１マウスにおいて変性を示した時点と一致するＰＮ１３まで、経時的に増加する。さらに、本発明者らは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３シグナルは、視神経に隣接する領域における網膜の中心部で主に濃縮されており（ＰＮ８〜１２）、疾患が進行するにつれ、周辺に向かって進むことに気づいた（図２Ｇ、データはＰＮ１２においてのみ示す）。重要なことに、また、Ｂｍｉ１の欠失は網膜変性を遅延させることを明らかにした本発明者らの先行研究と一致して、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の数は、Ｒｄ１；Ｂｍｉ１−／−マウスにおいて有意に減少した（図２Ｈ）。それにもかかわらず、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの存在は消失されておらず、このため、図２Ｂにおいて示唆されるように、残存するメチルトランスフェラーゼ活性は、ＢＭＩ１の存在と非依存的であることが明らかにされている。興味深いことに、精製されたＣｒｘ−ＧＦＰ陽性光受容体のウエスタンブロット解析によって、光受容体サンプルにおけるＲｄ１中のポリコーム抑制コア成分ＥＺＨ２タンパク質含量の増加が明らかにされている（図２Ｉ）。
【００８６】
まとめると、これらのデータは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の蓄積は、ＥＺＨ２のアップレギュレーションおよび活性の結果であり、そのパターンは、Ｒｄ１マウスにおける疾患重症度の進行と強く相関することを示唆している。
【００８７】
光受容体における細胞死の経過は、別々の分子事象の複雑化によって組織化されている(Paquet-Durand et al., 2014)。Ｒｄ１桿体光受容体において、ｃＧＭＰの蓄積は、視細胞死カスケードの非常に初期に一般に生じるが、末端ｄＵＴＰ鎖切断標識（ＴＵＮＥＬ）は、細胞がそれらのＤＮＡ断片化段階を受けることを明らかにしている。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３が出現する初期の時間枠は、Ｐｄｅ６βヌルマウス網膜におけるｃＧＭＰ細胞内増加の時間枠と一致するため(Farber & Lolley, 1974)、本発明者らは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３が下流または上流で出現するかどうかを決定するために、ｃＧＭＰおよびＨ３Ｋ２７ｍｅ３が同じ細胞内で共存かどうかを検討した。本発明者らは、ｃＧＭＰ染色が、ＰＮ１２でのＲｄ１網膜におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３と共局在している細胞はないことを観察し（図６Ａ上段のパネル）、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３は、ｃＧＭＰの蓄積後に出現し得ることが示唆された。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性光受容体のうち、６０％がＴＵＮＥＬ陽性でもあり、一方、ＴＵＮＥＬ陽性集団の４０％がＨ３Ｋ２７ｍｅ３と局在しており、このマウスモデルにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３と細胞死との関係性が示唆された（図６Ａ下段のパネル、図６ｂ）。さらに、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の６５％が、ＰＮ１２においてＣＤＫ４に対しても陽性であり（図６Ａ中段のパネル、図６Ｃ）、このキナーゼの発現との強い関係性が示唆された。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびＣＤＫ４の経時的発現は、分析の時間的経過総てにわたり、ＣＤＫ４陽性細胞の出現前に、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の数が増加したことを実証した（図６Ｃ）。先行研究において、本発明者らは、ＯＮＬにおけるＴＵＮＥＬ陽性細胞の７５％が、ＣＤＫ４に対しても陽性であったことを観察した。
【００８８】
まとめると、これらの結果は、細胞死の前のＨ３Ｋ２７ｍｅ３およびＣＤＫ４の連続的な出現を明らかにしており、光受容体の死の中間誘導因子としてのＥＺＨ２が関与する変性の段階的機序が示唆された。
【００８９】
実施例４：ＥＺＨ２の薬理学的阻害は、光受容体をｉｎ  ｖｉｖｏでの変性から保護する
ＷＴと比較したＲｄ１マウスにおけるＥＺＨ２の基礎レベルの増加（図２Ｉ）および細胞同一性を制御する生物学的過程におけるその顕著な位置付けは、この特別なメチルトランスフェラーゼ酵素の活性は、変性過程の初期における新たな組の遺伝子を標的とするために増大し得ることを示している。ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３のレベルを薬理学的に制御するために、本発明者らは、ＥＺＨ１／ＥＺＨ２阻害剤であるＵＮＣ１９９９を使用して、その触媒ＳＥＴドメインを標的とした(Konze et al., 2013, Xu et al., 2015)。増殖性マウス胚線維芽細胞において、２．５μＭのＵＮＣ１９９９は、ＤＭＳＯ対照と比較して、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の内因性レベルを遮断するのに有効であり（図７Ａ、図７Ｂ）、これにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの検討のための有効量が示唆された。この結果に基づき、次いで、Ｒｄ１（ＰＮ８）網膜を２．５μＭのＵＮＣ１９９９（注射後の眼において外挿された濃度）に曝露させ、注射後４日目におけるＴＵＮＥＬ染色時のＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークおよび細胞死の程度をモニタリングすることによって、処置の有効性を評価した。過剰なＨ３Ｋ２７ｍｅ３シグナルが、ＤＭＳＯ処置眼において保たれたが、このようなシグナルは、ＵＮＣ１９９９注射網膜のＯＮＬにおいては強く減少した（７５％）（図７Ｃ、図７Ｅ）。興味深いことに、ＴＵＮＥＬ陽性細胞の数は、ＤＭＳＯ処置眼と比較して、対応する領域において実質的に７０％減少している（図７Ｄ、図７Ｆ）。
【００９０】
Ｆａｍ１６１ａ  ＫＯマウスは、６ヵ月時の光受容体のおよそ８０％の喪失の結果生じた、遅い網膜変性を有するＲＰの別の疾患モデルである。Ｒｄ１と比較して、Ｆａｍ１６１ａ−／−は、遅い変性過程を模倣する。同様に、Ｒｄ１マウスに対して、本発明者らは、単一用量のＵＮＣ１９９９を、２ヵ月齢のＦａｍ１６１ａ−／−マウスに投与した。しかしながら、実験は４回目の注射まで毎週繰り返し、動物を４日齢後に屠殺した。動物を１週後に屠殺し、網膜切片を、視細胞の生存および背腹の軸に沿ったＨ３Ｋ２７ｍｅ３の存在に関して分析した（図７Ｇ、図７Ｈ）。本発明者らのデータは、本発明者らが定量した腹側ＯＮＬにおける列の数の有意な保存を示した。背側区画において有意差は認められなかった。本発明者らは、注射側と非注射側との間で、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３過剰トリメチル化のレベルに関して統計学的差を認めなかったが、これはおそらく、注射の最終日および屠殺時間を含めた時間に起因する、化合物の有効性の喪失が原因である。
【００９１】
試験したＵＮＣ１９９９用量（１０  Ｍ）が、網膜機能に対する毒性作用を有するかどうかを試験するため、対照（ビヒクル、ＤＭＳＯを注射）およびＵＮＣ１９９９処置Ｃ５７／Ｂｌ６健常マウスの網膜活性を、硝子体内注射の前および１週後にＥＲＧによって記録した（図１２）。暗順応条件下において、ＤＭＳＯ処置群のｂ波最大振幅ベースラインは、注射の前に、ＵＮＣ１９９９群よりわずかに高かった。両群とも、注射の１週後に同様の応答を示し、ベースラインに関する有意差は認められなかった（図１２Ａ）。同様の観察を明順応観察において行ったが、３ｃｄａ／ｓ．ｍ２刺激は例外であり、それに対しては、ＤＭＳＯおよびＵＮＣ１９９９処置動物の両方とも、減少した応答を示した（図１２Ｂ）。フリッカー条件下において、応答の減少が、５Ｈｚにおいて両処置群に生じ、１０Ｈｚではより少ない程度で生じ、１５Ｈｚでは全群間に差は認められなかった。全体的な結果は、注射手技は、一部の桿体をごく部分的に変化させるが、錐体に対しては実質的な効果を示さなかったことを示唆している。
【００９２】
まとめると、これらのデータは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＥＺＨ２活性の阻害は、網膜変性のマウスモデルにおいて、ＴＵＮＥＬ陽性細胞の数を減少させ、視細胞変性を遅延させることに寄与することを強く示唆している。
【００９３】
実施例５：ヒト光受容体の死の過程における細胞死経路の活性化および網膜変性におけるＥＺＨ２活性の証拠
本発明者らは、どの死経路が活性化されるかを検討するため、ヒト網膜剥離（ＲＤ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを開発した。このモデルは、ＲＰＥ細胞を有する網膜と比較して、網膜色素上皮（ＲＰＥ）を有さないヒト網膜剥離片の培養物からなる。
【００９４】
光受容体層の数：
全４個の剥離片において、光受容体層の数は、対照群において極めて安定していたが、ＲＤ群において経時的にわずかな減少が認められた。この群では、５ＤＩＶおよび７ＤＩＶにおいて、光受容体の列の数が、１ＤＩＶと比較しておよそ２５％減少した（Ｐ＜０．０４）。全時点において分析した群間差は、統計学的に有意ではなかったが、１ＤＩＶ後（図８Ａ〜Ｂ、表３）は例外であり、ＲＤ群は、実験の最初において多数の光受容体を示した。このことは、同じドナーからの網膜片が、２群間で分布していたが、ある程度の不均一性が、同じ組織サンプル中に存在することを明らかにしている。それにもかかわらず、各群は、同程度の数の光受容体の列を有する網膜を含んでいた（図８中のＳＥＭバー参照）。このため、同じ群における光受容体数の進化が、網膜の健康をよりよく明らかにする。ＲＤ網膜は、光受容体の列の有意な減少を示したが、対照群はそうではなかったことに留意されたい（表４）。
【００９５】
ＴＵＮＥＬ染色；細胞死マーカー：
様々な死後の遅延（１２ｈ、１４ｈ、２３ｈおよび２４ｈ）ならびに組織の解剖手技にもかかわらず、ＴＵＮＥＬ陽性細胞が、対照群において低レベルで実験の最初から存在した。ＴＵＮＥＬ陽性細胞の数は、３ＤＩＶにおいて有意に増加し、３および７ＤＩＶにおいてピークに達した。ＴＵＮＥＬ陽性細胞の１０倍超の増加が、ＲＤ群と対照群との間に３ＤＩＶにおいて認められた（Ｐ＝０．００１４）（図９ならびに表３および５）。興味深いことに、細胞死のこのピークは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける裂孔原性網膜剥離に関して記載されたものと一致する(Hisatomi et al., 2001, Arroyo et al., 2005)。ＴＵＮＥＬ陽性細胞の有意な３０％の増加は、３ＤＩＶ〜７ＤＩＶの間で生じ続け、５日目に高い変動を示し、二相性の細胞死過程が示唆された（図８〜９、表５）。次いで、本発明者らは、細胞死過程の潜在的な行為者を検討した。
【００９６】
正準アポトーシス経路は、ヒトＲＤ群において活性化されない：
カスパーゼ３は、アポトーシスの最終的なエフェクターであり、ＲＰＥを有するおよび有さない網膜におけるアポトーシス事象の程度を明らかにするために選択された。意外にも、ＯＮＬにおける非常にまれな細胞が、両群に存在しており、アポトーシスのピークは同定されなかった（資料未記載）。
【００９７】
アポトーシス誘導因子（ＡＩＦ）染色：
ＡＩＦは、カスパーゼ非依存的アポトーシス誘導因子を表す。ＡＩＦは、通常、ミトコンドリア膜に局在する。細胞死の間、ＡＩＦが放出され、次いで、核に移動する（レビューおよび網膜に関しては、Hisatomi et al., 2001, Hisatomi et al., 2008参照）。本発明者らは、ＡＩＦが１ＤＩＶにおいてＯＮＬに存在し、ＲＤ群において３ＤＩＶに顕著なピークを示したことを観察した。ＡＩＦ陽性細胞のピークは、３ＤＩＶに認められたＴＵＮＥＬ陽性細胞のピークと類似していた（図８、表３）。増加は、対照群と比較して約１４倍であった（ｐ＝０．０２）。５ＤＩＶおよび７ＤＩＶにおいて、目に見えるＡＩＦ陽性細胞はほとんど存在しなかった。
【００９８】
細胞周期マーカーＣＤＫ４は、ＲＰＥの非存在下で、変性過程中に中程度に発現する：
１ＤＩＶ後に、対照群の光受容体の核においてＣＤＫ４は認められず、３〜７ＤＩＶの間には、ごく少数の細胞のみが、このタンパク質を発現した。ＲＤ群において、１ＤＩＶからＣＤＫ４陽性細胞が存在し（図８、表３および表６）、それらの数は、その後中程度に増加し、３〜７ＤＩＶの間に安定を維持した。ＲＤを模倣する剥離片の群におけるＣＤＫ４陽性細胞の数の平均は、全時点において３．０７±２．３１であったが、対照群においては、この数は１．２５±１．３８であった。ＣＤＫ４陽性細胞の数は、ＴＵＮＥＬ陽性細胞と比較してかなり少ないことに留意されたい（図８）。２群間の比較は、５ＤＩＶを除き、各時点で統計学的差を示した（図８、表３）。
【００９９】
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークのエピジェネティック修飾は、変性過程の後期で生じる：
最近の研究では、網膜抽出物におけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークレベルの小さな増大を伴った、網膜変性の経過中のエピジェネティック修飾を説明した(Zheng et al., 2018)。本発明者らはまた、エピジェネティック修飾が、網膜色素変性症の一部の齧歯類モデルにおいてヒストンレベルで生じることを観察し（未発表データ）、本発明者らは、遺伝子抑制を調節することで知られるＨ３Ｋ２７ｍｅ３マークを検討した(Wahlin et al., 2013)。対照群において、ＯＮＬにおけるＨ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の数は、５ＤＩＶまで低値を維持し、７ＤＩＶにおいてわずかな上昇を示したが、このマークの顕著な増大が、ＲＤ群において５ＤＩＶに認められ、７ＤＩＶに上昇した状態を維持したが、部分的に減少した（図８、図９、図１０、表３および表７）。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３陽性細胞の上昇した数は、３ＤＩＶにおけるＴＵＮＥＬ陽性細胞のピーク後に出現しているが、その後の瀕死の光受容体の数と匹敵していたことに留意されたい。本発明者らの施設のアイバンクの機会を捉え、本発明者らは、網膜周辺部の局所網膜剥離を引き起こすぶどう膜黒色腫に罹患している患者からの眼球を分析した。ＯＮＬのより薄い部分において、本発明者らは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークに対して陽性のいくつかの光受容体を観察したが、腫瘍位置から遠い中心部の網膜は、このマークの均一な別々の標識を示した（図１１）。
【０１００】
これらのデータは、ＥＺＨ２は、長期網膜剥離中の光受容体の死に関与していることを示唆している。
【０１０１】
結論として、ＡＩＦ発現は、細胞死の第１のピークと一致しているが、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークは、細胞死の第２の上昇前に増加し、このことにより、光受容体の死は、網膜剥離後の異なる連続的な経路により誘導されることが示唆された。
【０１０２】
このｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルは、臨床的関連を有し得る神経保護薬の同定を可能にするはずであり、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３は、網膜変性の後期において重要な役割を果たし得ることを示している。
【０１０３】
実施例の結論：
まとめると、これらのデータは、マウスおよびヒト網膜におけるいくつかの網膜病態において、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークは、光受容体の死の事象と相関しており、ＵＮＣ１９９９によるＥＺＨ１／２活性の阻害は、Ｒｄ１マウスにおける網膜変性を顕著に遅延させ、このため、異なるファミリーの網膜ジストロフィーの新たな治療法を提供することを実証している。
【０１０４】
他の実施形態
本開示は、その説明とともに記載されているが、前述の説明は、例示することを意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を限定するものではないと理解されるべきである。他の側面、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内にある。
【０１０５】
例えば、当業者に明らかであるように、本開示は、多数のＥＺＨ１またはＥＺＨ２阻害剤が潜在的な解決策として説明されているが、他の病態に対して現在研究中の他のＥＺＨ２阻害剤（大部分が癌の治療用−レビューに関しては、Tanaka et al., 2015およびStazi et al. 2017参照；いくつかのＥＺＨ２阻害剤が、前臨床および臨床の状況下で最近評価されている）も、眼障害の治療に適用され得る。
【０１０６】
例えば、Ｅｐｉｚｙｍｅ，  Ｉｎｃ．、米国は、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、置換６，５−縮合二環式ヘテロアリール化合物、置換ベンゼン化合物、Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−ｌ，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−５−（エチル（テトラヒドロ−２ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）−４−メチル−４’−（モルホリノメチル）−［ｌ，１’−ビフェニル］−３−カルボキサミド臭化水素酸塩、１，４−ピリドン二環式ヘテロアリール化合物、塩酸塩の形態が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１２／０３４１３２、ＷＯ２０１２／１１８８１２、ＷＯ２０１２／１４２５１３、ＷＯ２０１２／１４２５０４、ＷＯ２０１３１５５４６４、ＷＯ２０１３／１５５３１７、ＷＯ２０１４／０６２７３２、ＷＯ２０１４／０６２７３３、ＷＯ２０１４／１００６６５、ＷＯ２０１４／１００６４６、ＷＯ２０１４／１７２０４４、ＷＯ２０１５／０１００７８、ＷＯ２０１５／０１００４９、ＷＯ２０１５／０５７８５９、ＷＯ２０１５／２００６５０、米国特許第８，６９１，５０７号、第９，３７６，４２２号、第８，４１０，０８８号、第８，７６５，７３２号、第９，０９０，５６２号、第９，５４９，９３１号、第９，８５５，２７５号、第９，００６，２４２号、第９，７０１，６６６号、第９，６２４，２０５号）。
ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ｐｌｃ、英国も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、アザインダゾール、インダゾール、インドール誘導体、置換ベンズアミド化合物が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１２／００５８０５、ＷＯ２０１１／１４０３２５、ＷＯ２０１１／１４０３２４、ＷＯ２０１２／０７５０８０、ＷＯ２０１３／０３９９８８、ＷＯ２０１３／０６７２９６、ＷＯ２０１３／１７３４４１、ＷＯ２０１４／１０７２７７、ＷＯ２０１４／１７７９８２、ＷＯ２０１４／１９５９１９、ＷＯ２０１５／００４６１８、ＷＯ２０１５／１３２７６５、ＷＯ２０１６／０６６６９７、ＷＯ２０１７／１９１５４５、米国特許第８，６３７，５０９号、第８，８４６，９３５号、第９，０１８，３８２号、第８，５３６，１７９号、第８，９７５，２９１号、第９，１１４，１４１号、第９，４０２，８３６号、第９，６４９，３０７号、第８，７６５，７９２号、第９，０７３，９２４号、第９，２４，２９６２号、第９，４４６，０４１号、第９，５６２，０４１号、第９，９５６，２１０号、第９，３８２，２３４号、第９，５０５，７４５号、第９，７９０，２１２号、第９，５５６，１５７号）。
【０１０７】
Ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、米国も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、インドール誘導体、例えば、インドールまたはピロール−ピリジン系６−メチルピリドン含有化合物、６−メチルピリドン含有化合物およびピリジン含有誘導体が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１２０６８５８９、ＷＯ２０１３／１２０１０４、ＷＯ２０１４／１２４４１８、ＷＯ２０１４／１５１１４２、ＷＯ２０１５／０２３９１５、ＷＯ２０１６／１３０３９６、ＷＯ２０１８／０７５５９８、米国特許第９，０８５，５８３号、第９，３７１，３３１号、第９，４６９，６４６号、第９，９８０，９５２号、第９，７４５，３０５号、第９，９６９，７１６号）。
【０１０８】
Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．、米国も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、ベンズアミドおよびヘテロベンズアミド化合物、アリールおよびヘテロアリール縮合ラクタム、置換ジヒドロイソキノリン化合物が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１４／０４９４８８、ＷＯ２０１４／０９７０４１、ＷＯ２０１５／１９３７６８、ＷＯ２０１５／１９３７６５、米国特許第９，０４０，５１５号、第９，４８１，６６６号）。
【０１０９】
Ｐｉｒａｍａｌ  Ｇｒｏｕｐ，Ｌｔｄ．、インドも、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、置換二環式化合物、複素環式化合物が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１４／１５５３０１、ＷＯ２０１５／１０４６７７、ＷＯ２０１５／１１０９９９）。
【０１１０】
Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、台湾も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、ブチリデンフタリドが挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１７／０２８６０２、米国特許出願第２０１７／０４９７４６号）。
【０１１１】
Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｉｎｃ．、米国も、過剰増殖性、炎症性、感染性、および免疫調節性の障害および疾患を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発している（例えば、国際出願ＷＯ２０１５／０７７１９３、ＷＯ２０１５／０７７１９４、米国特許第９，７３８，６３０号、第９，８２２，１０３号）。
【０１１２】
Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｉｎｃ．、米国も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発している（例えば、国際出願ＷＯ２０１６／０８９８０４、ＷＯ２０１７／０３５０６０、米国特許第９，５２７，８３７号、第９，７１８，８３８号）。
【０１１３】
さらに、学術研究者も、大部分がこれもまた癌を治療するための、ＥＺＨ２阻害剤を開示している。
【０１１４】
例えば、Ｙａｎｔａｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、中国は、癌などの疾患を予防および治療するための合成化合物を開発している。このような化合物は、このような疾患に関与する酵素、例えば、ヒストンメチルトランスフェラーゼＥＺＨ２を阻害するために使用することができる（例えば、国際出願ＷＯ２０１４／０４８３１３、米国特許第９，５１８，０３８号、中国出願第１０３６９０５３１号、第１０３６９０５２９号、第１０３６９０５２８号、第１０３６９０５３０号、第１０３８４５３２４号、第１０３８４５３２５号、第１０３１１０６２１号）。
【０１１５】
Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、米国も、癌を治療するためのヒトＥＺＨ２の阻害剤を開発しており、例えば、ピラゾロ−ピリジン系およびインドール系化合物が挙げられる（例えば、国際出願ＷＯ２０１４／１９００３５、ＷＯ２０１６／０７３９５６、ＷＯ２０１７／１８４９９９およびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ、米国と共同出願されたＷＯ２０１６／０７３９０３）。
【０１１６】
Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、シンガポールも、癌を治療するためのタンパク質リシンメチルトランスフェラーゼなどのメチルトランスフェラーゼの阻害剤、およびエピジェネティック薬、例えば、キノリンおよび５，６，７，８−テトラヒドロアクリジン誘導体を開発している（例えば、国際出願ＷＯ２０１７／０６１９５７）。
【０１１７】
本明細書に記載の総ての刊行物、特許、および特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的および個々に、引用することにより本明細書の一部とされると示される場合と同じ程度まで、引用することにより本明細書の一部とされる。
【０１１８】
参考文献
Arroyo JG, Yang L, Bula D, Chen DF. Photoreceptor apoptosis in human retinal detachment. Am J Ophthalmol. 2005 Apr;139(4):605-10.
Arrowsmith CH, Audia JE, Austin C, Baell J, Bennett J, Blagg J, Bountra C, Brennan PE, Brown PJ, Bunnage ME, Buser-Doepner C, Campbell RM, Carter AJ, Cohen P, Copeland RA, Cravatt B, Dahlin JL, Dhanak D, Edwards AM, Frederiksen M, Frye SV, Gray N, Grimshaw CE, Hepworth D, Howe T, Huber KV, Jin J, Knapp S, Kotz JD, Kruger RG, Lowe D, Mader MM, Marsden B, Mueller-Fahrnow A, Muller S, O'Hagan RC, Overington JP, Owen DR, Rosenberg SH, Roth B, Ross R, Schapira M, Schreiber SL, Shoichet B, Sundstrom M, Superti-Furga G, Taunton J, Toledo-Sherman L, Walpole C, Walters MA, Willson TM, Workman P, Young RN, Zuercher WJ. The promise and peril of chemical probes. Nat Chem Biol. 2015 Aug;11(8):536-41.
Barhoum R, Martinez-Navarrete G, Corrochano S, Germain F, Fernandez-Sanchez L, de la Rosa EJ, de la Villa P, Cuenca N. Functional and structural modifications during retinal degeneration in the rd10 mouse. Neuroscience. 2008 Aug 26;155(3):698-713.
Bemelmans AP, Kostic C, Crippa SV, Hauswirth WW, Lem J, Munier FL, Seeliger MW, Wenzel A, Arsenijevic Y. Lentiviral gene transfer of RPE65 rescues survival and function of cones in a mouse model of Leber congenital amaurosis. PLoS Med. 2006 Oct;3(10):e347.
Bracken AP, Dietrich N, Pasini D, Hansen KH, Helin K. Genome-wide mapping of Polycomb target genes unravels their roles in cell fate transitions. Genes Dev. 2006 May 1;20(9):1123-36.
Cao, R., Wang, L., Wang, H., Xia, L., Erdjument-Bromage, H., Tempst, P., Jones, R.S., and Zhang, Y. Role of histone H3 lysine 27 methylation in Polycomb-group silencing. Science. 2002 Nov 1;298(5595):1039-43.
Chang B, Hawes NL, Pardue MT, German AM, Hurd RE, Davisson MT, Nusinowitz S, Rengarajan K, Boyd AP, Sidney SS, Phillips MJ, Stewart RE, Chaudhury R, Nickerson JM, Heckenlively JR, Boatright JH. Two mouse retinal degenerations caused by missense mutations in the beta-subunit of rod cGMP phosphodiesterase gene. Vision Res. 2007 Mar;47(5):624-33.
Chase A, Cross NC. Aberrations of EZH2 in cancer. Clin Cancer Res. 2011 May 1;17(9):2613-8.
Czermin B, Melfi R, McCabe D, Seitz V, Imhof A, Pirrotta V. Drosophila enhancer of Zeste/ESC complexes have a histone H3 methyltransferase activity that marks chromosomal Polycomb sites. Cell. 2002 Oct 18;111(2):185-96.
Cideciyan AV, Jacobson SG, Beltran WA, Sumaroka A, Swider M, Iwabe S, Roman AJ, Olivares MB, Schwartz SB, Komaromy AM, Hauswirth WW, Aguirre GD. Human retinal gene therapy for Leber congenital amaurosis shows advancing retinal degeneration despite enduring visual improvement. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Feb 5;110(6):E517-25.
Farber DB, Lolley RN Cyclic guanosine monophosphate: elevation in degenerating photoreceptor cells of the C3H mouse retina. Science. 1974 Nov 1;186(4162):449-51.
Gekeler K, Bartz-Schmidt KU, Sachs H, MacLaren RE, Stingl K, Zrenner E, Gekeler F. Implantation, removal and replacement of subretinal electronic implants for restoration of vision in patients with retinitis pigmentosa. Curr Opin Ophthalmol. 2018 May;29(3):239-247.
Hisatomi T, Sakamoto T, Murata T, Yamanaka I, Oshima Y, Hata Y, Ishibashi T, Inomata H, Susin SA, Kroemer G. Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo. Am J Pathol. 2001 Apr;158(4):1271-8.
Hisatomi T, Nakazawa T, Noda K, Almulki L, Miyahara S, Nakao S, Ito Y, She H, Kohno R, Michaud N, Ishibashi T, Hafezi-Moghadam A, Badley AD, Kroemer G, Miller JW. HIV protease inhibitors provide neuroprotection through inhibition of mitochondrial apoptosis in mice. J Clin Invest. 2008 Jun;118(6):2025-38.
Gimenez E, Montoliu L. A simple polymerase chain reaction assay for genotyping the retinal degeneration mutation (Pdeb(rd1)) in FVB/N-derived transgenic mice. Lab Anim. 2001 Apr;35(2):153-6.
Holoch D, Margueron R. Chapter 9 - Polycomb Repressive Complex 2 Structure and Function. Polycomb Group Proteins, 2017, p191-224
Jacobson SG, Cideciyan AV, Ratnakaram R, Heon E, Schwartz SB, Roman AJ, Peden MC, Aleman TS, Boye SL, Sumaroka A, Conlon TJ, Calcedo R, Pang JJ, Erger KE, Olivares MB, Mullins CL, Swider M, Kaushal S, Feuer WJ, Iannaccone A, Fishman GA, Stone EM, Byrne BJ, Hauswirth WW. Gene therapy for leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch Ophthalmol. 2012 Jan;130(1):9-24.
Konze KD, Ma A, Li F, Barsyte-Lovejoy D, Parton T, Macnevin CJ, Liu F, Gao C, Huang XP, Kuznetsova E, Rougie M, Jiang A, Pattenden SG, Norris JL, James LI, Roth BL, Brown PJ, Frye SV, Arrowsmith CH, Hahn KM, Wang GG, Vedadi M, Jin J. An orally bioavailable chemical probe of the Lysine Methyltransferases EZH2 and EZH1. ACS Chem Biol. 2013;8(6):1324-34.
Kuzmichev A, Nishioka K, Erdjument-Bromage H, Tempst P, Reinberg D. Histone methyltransferase activity associated with a human multiprotein complex containing the Enhancer of Zeste protein. Genes Dev. 2002 Nov 15;16(22):2893-905.
Leveillard T, Mohand-Said S, Lorentz O, Hicks D, Fintz AC, Clerin E, Simonutti M, Forster V, Cavusoglu N, Chalmel F, Dolle P, Poch O, Lambrou G, Sahel JA. Identification and characterization of rod-derived cone viability factor. Nat Genet. 2004 Jul;36(7):755-9.
Muller J, Hart CM, Francis NJ, Vargas ML, Sengupta A, Wild B, Miller EL, O'Connor MB, Kingston RE, Simon JA. Histone methyltransferase activity of a Drosophila Polycomb group repressor complex. Cell. 2002 Oct 18;111(2):197-208.
Plath K, Fang J, Mlynarczyk-Evans SK, Cao R, Worringer KA, Wang H, de la Cruz CC, Otte AP, Panning B, Zhang Y. Role of histone H3 lysine 27 methylation in X inactivation. Science. 2003 Apr 4;300(5616):131-5.
Paquet-Durand F, Sahaboglu A, Dietter J, Paquet-Durand O, Hitzmann B, Ueffing M, Ekstrom PA. How long does a photoreceptor cell take to die? Implications for the causative cell death mechanisms. Adv Exp Med Biol. 2014;801:575-81.
Portera-Cailliau C, Sung CH, Nathans J, Adler R. Apoptotic photoreceptor cell death in mouse models of retinitis pigmentosa. Proc Natl Acad Sci U S A. 1994 Feb 1; 91(3): 974-978.
Rao RC, Tchedre KT, Malik MT, Coleman N, Fang Y, Marquez VE, Chen DF. Dynamic patterns of histone lysine methylation in the developing retina. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010 Dec;51(12):6784-92.
Smith AJ, Bainbridge JW, Ali RR. Gene supplementation therapy for recessive forms of inherited retinal dystrophies. Gene Ther. 2012 Feb;19(2):154-61.
Stazi G, Zwergel C, Mai A, Valente S. EZH2 inhibitors: a patent review (2014-2016). Expert Opin Ther Pat. 2017 Jul;27(7):797-813.
Tanaka M, Roberts JM, Qi J, Bradner JE. Inhibitors of emerging epigenetic targets for cancer therapy: a patent review (2010-2014). Pharm Pat Anal. 2015;4(4):261-84.
Wahlin KJ, Enke RA, Fuller JA, Kalesnykas G, Zack DJ, Merbs SL. Epigenetics and cell death: DNA hypermethylation in programmed retinal cell death. PLoS One. 2013 Nov 11;8(11):e79140.
Xu B, On DM, Ma A, Parton T, Konze KD, Pattenden SG, Allison DF, Cai L, Rockowitz S, Liu S, Liu Y, Li F, Vedadi M, Frye SV, Garcia BA, Zheng D, Jin J, Wang GG. Selective inhibition of EZH2 and EZH1 enzymatic activity by a small molecule suppresses MLL-rearranged leukemia. Blood. 2015 Jan 8;125(2):346-57.
Yoo KH, Hennighausen L. EZH2 Methyltransferase and H3K27 Methylation in Breast Cancer. Int J Biol Sci. 2012; 8(1): 59-65.
Yuzawa M, Fujita K, Tanaka E, Wang EC. Assessing quality of life in the treatment of patients with age-related macular degeneration: clinical research findings and recommendations for clinical practice. Clin Ophthalmol. 2013;7:1325-32.
Zencak D, Schouwey K, Chen D, Ekstrom P, Tanger E, Bremner R, van Lohuizen M, Arsenijevic Y. Retinal degeneration depends on Bmi1 function and reactivation of cell cycle proteins. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Feb 12;110(7):E593-601.
Zheng S, Xiao L, Liu Y, Wang Y, Cheng L, Zhang J, Yan N, Chen D. DZNep inhibits H3K27me3 deposition and delays retinal degeneration in the rd1 mice. Cell Death Dis. 2018 Feb 22;9(3):310.
【図１】
2021531340.tif 000002
【図２−１】
2021531340.tif 000003
【図２−２】
2021531340.tif 000004
【図３】
2021531340.tif 000005
【図４】
2021531340.tif 000006
【図５】
2021531340.tif 000007
【図６】
2021531340.tif 000008
【図７】
2021531340.tif 000009
【図８】
2021531340.tif 000010
【図９】
2021531340.tif 000011
【図１０】
2021531340.tif 000012
【図１１】
2021531340.tif 000013
【図１２】
2021531340.tif 000014
【図１３】
2021531340.tif 000015
【図１４】
2021531340.tif 000016
【図１５】
2021531340.tif 000017
【図１６】
2021531340.tif 000018
【図１７】
2021531340.tif 000019
【配列表】
2021531340000001.app
【国際調査報告】
2021531340.tif 000020
2021531340.tif 000021
2021531340.tif 000022
2021531340.tif 000023