(57)【要約】本発明は、イルジン誘導体、中間体、調製方法、医薬組成物、およびそれらの使用を提供する。具体的な例は、イルジン誘導体および正の光学的回転角を有するイルジン誘導体を調製するための新規合成経路を含み、これは治療的価値を有する。
2021536492.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
正の光学的回転角を有し、かつ式Ｉを有する、化合物。
【化１】
2021536492.tif 000030
【請求項２】
式（Ｉ）および（ＩＩ）を有する化合物を有する、混合物またはラセミ混合物。
【化２】
2021536492.tif 000031
【請求項３】
式（Ｉ）を有する化合物であって、
【化３】
2021536492.tif 000032
式中、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3が、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、メチル、またはヒドロキシルである、化合物。
【請求項４】
前記化合物が、正の光学的回転角を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
式（Ｉ）を有する化合物を合成するためのプロセスであって、
【化４】
2021536492.tif 000033
式中、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3が、独立して、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、メチル、またはヒドロキシルであり、
アルコール基を有するシクロペンテノンを選択するステップと、
前記アルコール基を保護するステップと、
前記保護されたシクロペンテノンをジアゾケトンと反応させて環化付加物を形成するステップと、
前記環化付加物を還元するステップと、を含む、プロセス。
【請求項６】
式（ＩＩ）を有するアシルフルベンを合成する方法であって、
【化５】
2021536492.tif 000034
アルコール基を有するシクロペンテノンを選択することと、
前記アルコール基を保護することと、
保護されたシクロペンテノンをジアゾケトンと反応させて環化付加物を形成することと、
前記環化付加物を還元することと、
前記環化付加物のケトン基をアルキル化することと、
前記環化付加物のオキシ基を切断することと、
前記環化付加物を酸化することと、を含む、方法。
【請求項７】
前記環化付加物からイロフルフェンを取得することをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記イロフルフェンをアミドと反応させることをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
方法の群が、グリニャール反応とそれに続くピアンカテッリ再配列を使用して保護される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
ヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ）を合成する方法（ＩＩＩ）であって、
【化６】
2021536492.tif 000035
式中、最初の出発材料が、シクロペンテノンである、方法。
【請求項１１】
ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン（ＵＭＡＦ）を合成する方法であって、
【化７】
2021536492.tif 000036
アルコール基を有するシクロペンテノンを選択することと、
前記アルコール基を保護することと、
前記保護されたシクロペンテノンをジアゾケトンと反応させて環化付加物を形成することと、
前記環化付加物を還元することと、
前記環化付加物のケトン基をアルキル化することと、
前記環化付加物のオキシ基を切断することと、
前記環化付加物を酸化することと、を含む、方法。
【請求項１２】
化合物１６のキラル分割を利用して、エナンチオピュアなアシルフルベン、ヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ）、およびヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン（ＵＭＡＦ）を合成するための方法（スキーム４）。
【化８】
2021536492.tif 000037
【請求項１３】
化合物９の酵素的分割を利用して、エナンチオピュアなアシルフルベン、ヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ）、およびヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン（ＵＭＡＦ）を合成するための方法（スキーム５）。
【化９】
2021536492.tif 000038
【請求項１４】
細胞に対する低減された毒性、および低減された副作用を有する、請求項１に記載の化合物または請求項１に記載の混合物。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物を、薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１６】
癌を治療する方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
これは、イルジン誘導体または類似体、中間体、調製方法、医薬組成物、およびそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
イルジンは、抗腫瘍抗生物質特性を持つセスキテルペンのファミリーであり、伝統的に様々なキノコによって生成されている。イルジンは、単離形態では、骨髄球性白血病および他の悪性細胞に対して選択的な毒性を示す。Ｏ．ｏｌｅａｒｉｕｓおよびＯ．ｉｌｌｕｄｅｎｓ（Ｊａｃｋ  ｏ’  Ｌａｎｔｅｒｎキノコ）、Ｏ．ｎｉｄｉｆｏｒｍｉｓ（オーストラリアのゴースト菌）などのＯｍｐｈａｌｏｔｕｓ種は、自然な形態のイルジンを生成する。イルジンは毒性が高く、自然な形態では治療上の価値がほとんどない。
【０００３】
イルジン類似体を製造する方法は、一般に、Ｏ．ｉｌｌｕｄｉｎｓ細胞培養物の液体増殖からのイルジンＳの生成を必要としてきた。図１（従来技術）は、イルジンＳからヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ）および（＋）ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベンへの現在の半合成経路を示している。イルジンＳとイルジンＭの比率が高いＯ．ｉｌｌｕｄｉｎｓ細胞株が開発されてきたが、この出発化合物の生成は、発現収量、イルジンＳの収穫の開始に必要な時間（例えば、＞４週間の培養）、イルジンＭによる汚染、および再現性の困難を含む他の複雑な問題の点で困難であった。発酵プロセスでは、毒性が高く、製造施設でのバイオハザードを表す、大量のイルジンＳの生成、取り扱い、および精製が必要になる場合がある。
【０００４】
したがって、改良されたイルジン類似体およびそれらを合成するための方法に対する差し迫った必要性があった。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、イルジン誘導体、中間体、調製方法、医薬組成物、およびそれらの使用を提供する。具体的な例は、イルジン誘導体および正の光学的回転を有するイルジン誘導体を調製するための新規合成経路を含み、これは治療的価値を有する。イルジン誘導体は、ＤＮＡと反応し、転写プロセスをブロックし、これにより、癌および炎症性疾患を効果的に治療することができる。
【０００６】
別の実施形態は、アシルフルベン、イロフルベン（６−ヒドロキシメチルアシルフルベン）、ＵＭＡＦ、および化合物Ｉまたはイルジンの他の類似体への合成経路を提供する。式（Ｉ）の化合物を合成する方法であって、式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、独立して（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、メチル、またはヒドロキシルである。さらに、特定の実施形態は、アシルフルベン、イロフルベン、およびＵＭＡＦのエナンチオピュアおよびラセミ形態の誘導体を含む。ＵＭＡＦのラセミおよび正の（＋）エナンチオマーは、本発明に開示される新規化合物である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】イルジンＳからヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ）および（＋）ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベンへの従来技術の現在の半合成経路を示す。
【図２】ピビトール中間体または第三級アルコールを調製するための本発明の一実施形態を示す。
【図３】別の実施形態は、２つの例示的な戦略によって化合物を（±）−アシルフルベンに合成するための方法を含むことを示す。
【図４】（＋）エナンチオマーがＤＵ１４５細胞株に対してより毒性があることを示す。
【図５】ＰＣ３細胞株が、ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベンの両方のエナンチオマー型に同様に感受性があることを示す。
【図６】（＋）エナンチオマーが、ＯＶＣＡＲ３細胞株に対してより毒性があることを示す。
【図７】（＋）エナンチオマーが、ＳＫ−ＯＶ３細胞株に対してより毒性があることを示す。
【図８】ＨＣＣ８２７細胞株が、ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベンの両方のエナンチオマー型に同様に感受性があることを示す。
【図９】（＋）エナンチオマーが、Ｈ１９７５細胞株に対してより毒性があることを示す。
【０００８】
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本明細書の主題が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、本発明の理解を容易にするために、以下の定義が提供される。
【０００９】
本明細書で使用される場合、「患者」、「対象」、「個体」、および「宿主」という用語は、異常な生物学的または細胞増殖活性と関連する疾患または障害を有するか、または有すると疑われるヒトまたはヒトでない動物のいずれかを指す。
【００１０】
かかる疾患または障害の「治療する」および「治療すること」という用語は、疾患または障害の少なくとも１つの症状を改善することを指す。これらの用語は、癌などの状態に関連して使用される場合、以下のうちの１つ以上を指す：癌の成長を妨げる、癌の重量または体積を縮小させる、患者の予想生存期間を延ばす、腫瘍の成長を阻害する、腫瘍量を減少させる、転移性病変のサイズまたは数を減少させる、新しい転移性病変の発生を抑制する、生存期間を延ばす、無増悪生存期間を延ばす、進行までの時間を延ばす、および／または生活の質を向上させる。
【００１１】
癌などの状態または疾患に関連して使用される場合の「予防する」という用語は、状態または疾患の症状の頻度の減少または発症の遅延を指す。したがって、癌の予防には、例えば、未治療の対照集団と比較して予防的治療を受けている患者の集団における検出可能な癌性増殖の数を減らすこと、および／または例えば、統計的および／または臨床的に有意な量によって、治療された集団対未治療の集団における検出可能な癌性増殖の出現を遅らせることが含まれる。
【００１２】
「薬学的に許容される」という用語は、一般に安全で毒性がなく、生物学的にも他の方法でも望ましい医薬組成物を調製するのに有用であることを意味し、獣医ならびにヒトの医薬使用に許容されるものを含む。
【００１３】
「立体異性体」という用語は、それらがキラルである場合、またはそれらが１つ以上の二重結合を有する場合、式（Ｉ）の化合物の任意のエナンチオマー、ジアステレオマー、または幾何異性体を指す。式（Ｉ）および関連する式の化合物がキラルである場合、それらはラセミ体または光学活性形態で存在することができる。本発明による化合物のラセミ体または立体異性体の医薬活性は異なる可能性があるので、エナンチオマーを使用することが望ましい場合がある。これらの場合、最終生成物または中間体でさえ、合成においてそのように知られているかまたは利用される化学的または物理的手段によってエナンチオマー化合物に分離することができる。
【００１４】
「治療効果」という用語は、本発明の化合物または組成物の投与によって引き起こされる、動物、特に哺乳動物、より具体的にはヒトにおける有益な局所的または全身的効果を指す。「治療有効量」という語句は、合理的な利益／リスク比で異常な生物活性によって引き起こされる疾患または状態を治療するのに有効である本発明の化合物または組成物の量を意味する。
【００１５】
かかる物質の治療有効量は、対象および治療される病状、対象の体重および年齢、病状の重症度、投与方法などに応じて変化し、これらは、当業者によって容易に決定することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本出願の一実施形態は、イルジン誘導体、中間体、調製方法、医薬組成物、およびそれらの使用を提供する。具体的な例は、イルジン誘導体および正の光学的回転を有するイルジン誘導体を調製するための新規合成経路を含み、これは治療的価値を有する。イルジン誘導体はＤＮＡと反応し、転写プロセスをブロックし、これにより、癌および炎症性疾患を効果的に治療することができる。
【００１７】
本発明の１つの例示的な実施形態は、式Ｉを有する化合物であって、
【００１８】
【化１】
2021536492.tif 000003
【００１９】
Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、独立して（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、メチル、またはヒドロキシルである、化合物を提供する。
【００２０】
別の例示的な実施形態は、以下の式ＩＩを有する、ヒドロキシメチルアシルフルベン（ＨＭＡＦ、イロフルベン）を含む。
【００２１】
【化２】
2021536492.tif 000004
【００２２】
さらに別の例示的な実施形態には、以下の式ＩＩＩを有する、（−）−
ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン（ＵＭＡＦ）が含まれる。
【００２３】
【化３】
2021536492.tif 000005
【００２４】
１つの例示的な実施形態は、ＵＭＡＦがエナンチオマーであり、室温でジクロロメタンまたはメタノール中で正の光学的回転を示すことを特徴とする。ＵＭＡＦは、正の光学活性を有するか、またはＵＭＡＦ構造のラセミ混合物／混合物の一部であり得る。混合物には、以下の構造を含めることができる。
【００２５】
【化４】
2021536492.tif 000006
【００２６】
本願は、式（ＩＶ）の化合物を合成する方法を提供する。
【００２７】
【化５】
2021536492.tif 000007
【００２８】
【化６】
2021536492.tif 000008
【００２９】
別の実施形態は、アシルフルベン、イロフルベン（６−ヒドロキシメチルアシルフルベン）、ＵＭＡＦ、および化合物Ｉまたはイルジンの他の類似体への合成経路を提供する。式（Ｉ）の化合物を合成する方法であって、式中、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、独立して（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、メチル、またはヒドロキシルである、方法。さらに、特定の実施形態は、アシルフルベン、イロフルベン、およびＵＭＡＦのエナンチオピュアおよびラセミ形態の誘導体を含む。ＵＭＡＦのラセミおよび正の（＋）エナンチオマーは、本発明に開示される新規化合物である。
【００３０】
ここで図２を参照すると、一実施形態は、（１）グリニャール反応を使用して２−フルフラールを変換し、Ｒ1が水素原子、メチル基、アルキル基、アリル、またはａ−メチルアリル基である、下記式のアルコールを生成するステップと、
【００３１】
【化７】
2021536492.tif 000009
【００３２】
（２）ラセミ体のシクロペンテノンへのピアンカテッリ再配列のステップと、（３）アルコール基を保護して９を供給するステップと、を含む。グリニャール反応によってカルボニル化合物からアルコールを生成する場合、一般的な方法は、グリニャール試薬を調製してから、それをカルボニル化合物と反応させることである。適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定することができる−例示的な保護基には、限定されないが、シリル［トリメチルシラン（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチル、ジメチルシリル（ＴＢＳ）、アセテート（アセテート（Ａｃ））、およびベンゾイル（Ｂｚ）］またはベンジル［ベンジル（Ｂｎ、パラ−メトキシベンジル（ＰＭＢ））が含まれる。シクロペンテノン９とジアゾケトン１０との間のカルボニル−イリド双極子付加環化反応を利用すると、塩基を介した脱離によって１２に変換される環化付加物１１が得られる。エノン上でのケトンの選択的アルキル化により、ピビトール中間体である第三級アルコール１３が得られ、分子から保護基を除去する（例えば、塩基を介した脱離により）。エノンよりもケトンを選択的にアルキル化すると、第三級アルコールが得られる。
【００３３】
別の実施形態は、第三級アルコールからアシルフルベン（３）、イロフルベン（４）、およびヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン（５）を合成するための方法を提供する。第三級アルコールは、ラセミ体またはエナンチオピュアな形態であり、メチルグリニャールによる２−フルフラール（６）のアルキル化で始まり、続いて、ラセミ体のシクロペンテノン（±）−８へのピアンカテッリ再配列が続き、次いで、９を供給するために保護される（スキーム２）。
【００３４】
図３をこれより参照すると、別の実施形態は、２つの例示的な戦略によって化合物１３を（±）−アシルフルベン（３）に合成するための方法を含む（スキーム３）。１つの例示的な方法において、ルイス酸を介した脱離は、ジエノン１４を提供し、これは、ケトン部分の還元および脱離の後、ジオール（±）−１６を生成する。次いで、化合物（±）−１６の酸化により、（±）−アシルフルベン（３）が生じる可能性がある。別の例示的な方法において、化合物１３の還元は、アルコール１５を生成し、これはルイス酸性条件に供された後、ジオール（±）−１６を生成し、（±）−アシルフルベン（３）は同じ方法で作製される。別の例では、次いで、（±）−イロフルベン（４）および（±）−ＵＭＡＦ（５）は、スキーム１に記載されている同様のシーケンスを介して作製され得る。開示されている６のアシルフルベン（３）、イロフルベン（４）およびＵＭＡＦ（５）への変換は、これまでのこれらの化合物の最短かつ最も効率的な合成である可能性がある。
【００３５】
エナンチオピュアなアシルフルベン（３）、イロフルベン（４）、またはＵＭＡＦ（５）が必要な場合、混合物またはラセミ中間体（±）−１６を分取キラルクロマトグラフィーまたは当業者に知られている他の方法で精製して、（＋）−（１６）および（−）−１６の両方を生成することができ、これらを使用して、アシルフルベン（３）、イロフルベン（４）、またはＵＭＡＦ（５）のいずれかのエナンチオマーを合成することができる（スキーム４）。これは、これらの化合物のエナンチオ選択的合成のプロセスを表している。
【００３６】
【化８】
2021536492.tif 000010
【００３７】
以下に示すように、アシルフルベン（３）のいずれかのエナンチオマー、イロフルベン（４）、またはＵＭＡＦ（５）がまた、ラセミ（±）−９の既知の酵素的分割を介して合成されて、（＋）−９または（−）−９のいずれかを生成することができ、これらは、スキーム２および３に記載されている手順を介してアシルフルベン（３）、イロフルベン（４）、またはＵＭＡＦ（５）のいずれかに変換することができる（スキーム５）。1
【００３８】
【化９】
2021536492.tif 000011
【００３９】
特定の実施形態はまた、薬学的に許容される担体、および式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）の任意の化合物および上記の他の化合物を含む医薬組成物を特徴とする。
【００４０】
特定の実施形態はまた、低減された毒性および副作用（眼に関連する毒性を含む）を有する組成物および化合物、例えば、ＵＭＡＦを特徴とする。他の実施形態は、それらの特性を利用する治療のための方法を可能にする。
【００４１】
これらの化合物の薬学的に許容される塩もまた、本明細書に記載の用途のために企図されている。「薬学的に許容される塩」は、その生物学的特性を保持し、毒性がないか、または他の方法で医薬用途に望ましい、本発明の化合物の任意の塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知の様々な有機および無機の対イオンに由来する可能性があり、以下を含む。かかる塩には以下が含まれる：（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンチルプロピオン酸、グリコール酸、グルタル酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、ソルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ピクリン酸、桂皮酸、マンデル酸、フタル酸、ラウリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、樟脳酸、樟脳スルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−ｏｃｔ−２−エン−ｌ−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、安息香酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、キナ酸、ムコン酸などの有機もしくは無機酸で形成された酸付加塩、あるいは（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、（ａ）金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオン、またはアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属水酸化物（ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、リチウム、亜鉛、バリウム水酸化物、アンモニアなど）によって置き換えられたとき、または（ｂ）脂肪族、脂環式、もしくは芳香族有機アミン（アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレン−ジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、Ｎ−メチルグルカミンピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、テトラメチルアンモニウムヒドロキシドなど）などの有機塩基と配位するときのいずれかの場合に形成される塩。薬学的に許容される塩には、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどがさらに含まれ、化合物が塩基性官能基を含む場合、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、ベシル酸塩、酢酸塩、鉱酸塩、シュウ酸塩などの非毒性有機酸または無機酸の塩がさらに含まれる。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、本発明の１つ以上の化合物および１つ以上の生理学的または薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に許容される担体」という用語は、任意の対象の組成物またはその成分の運搬または輸送に関与する、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを指す。各担体は、対象の組成物およびその成分と適合性があり、患者に害を及ぼさないという意味で「許容可能」でなければならない。薬学的に許容される担体として役立つ可能性のある材料のいくつかの例には、以下が含まれる。（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖、（２）コムスターチおよびポテトスターチなどのスターチ、（３）セルロース、およびカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなどのその誘導体、（４）粉末トラガント、（５）モルト、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤、（９）落花生油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油、および大豆油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）パイロジェンフリー水、（１７）等張食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝液、ならびに（２１）医薬製剤に用いられる他の非毒性適合性物質。
【００４３】
本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸的に、鼻腔的に、頬側に、膣内に、または移植されたリザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、茎内、髄腔内、肝内、病変内、および頭蓋内注射または注入技術を含む。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口的に、腹腔内に、または静脈内に投与される。本発明の組成物の無菌注射形態は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、当該技術分野で知られている技術に従って処方することができる。無菌の注射可能な調製物はまた、毒性のない非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。用いられ得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として用いられている。
【００４４】
この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の刺激の少ない固定油を使用することができる。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンと同様に、注射剤の調製に有用である。これらの油性溶液または懸濁液はまた、乳濁液および懸濁液を含む薬学的に許容される剤形の製剤で一般的に使用されるカルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤などの長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含み得る。薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造に一般的に使用される、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、および他の乳化剤または生物学的利用能増強剤などの他の一般的に使用される界面活性剤もまた、製剤の目的で使用され得る。
【００４５】
本発明の薬学的に許容される組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液、または溶液を含むがこれらに限定されない、任意の経口的に許容される剤形で経口投与され得る。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も、典型的には添加される。カプセル形態での経口投与の場合、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。経口使用のために水性懸濁液が必要な場合、有効成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。必要に応じて、特定の甘味料、香料、または着色剤を加えることもできる。
【００４６】
あるいは、本発明の薬学的に許容される組成物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与され得る。これらは、室温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって直腸で溶融して薬物を放出する好適な非刺激性賦形剤と薬剤を混合することによって調製することができる。かかる材料には、カカオバター、蜜蝋、ポリエチレングリコールが含まれる。
【００４７】
本発明の薬学的に許容される組成物はまた、鼻エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。かかる組成物は、医薬製剤の分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の好適な防腐剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を用いて、生理食塩水中の溶液として調製することができる。
【００４８】
単一の剤形で組成物を生成するために担体材料と組み合わせることができる本発明の化合物の量は、治療される宿主、特定の投与様式に応じて変化するであろう。組成物は、これらの組成物を投与されている患者に、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量の阻害剤を投与できるように処方されるべきである。
【００４９】
投与量に関して、薬学的に許容される塩および重水素化変異体を含む、本発明の化合物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。ＬＤ５０は、集団の５０％に致命的な用量である。ＥＤ５０は、集団の５０％で治療上有効な用量である。毒性効果と治療効果の用量比（ＬＤ５０／ＥＤ５０）が治療指数である。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物を使用することもできるが、感染していない細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それによって副作用を低減するために、影響を受ける組織の部位へのかかる化合物を標的とする送達システムを設計するように注意する必要がある。あるいは、二次治療薬を投与して、一次治療薬の毒性副作用を軽減することができる。
【００５０】
細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータは、ヒトで使用するための投与量の範囲を策定する際に使用することができる。かかる化合物の投与量は、毒性がほとんどまたはまったくないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にあり得る。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。いかなる化合物についても、治療上有効な用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。細胞培養で決定されるように、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、用量が動物モデルで処方され得る。かかる情報は、ヒトの有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【００５１】
任意の特定の患者に対する特定の投与量および治療計画は、用いられる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的な健康、性別、食事、投与時間、排泄率、薬剤の組み合わせ、治療を行う医師の判断、および治療中の特定の疾患の重症度を含む、様々な要因に依存することも理解されたい。組成物中の本発明の化合物の量はまた、組成物中の特定の化合物に依存するであろう。
【実施例】
【００５２】
以下の例では、以下の略語が本明細書で使用されている。
【００５３】
【表１】
2021536492.tif 000012
【００５４】
特に断りのない限り、溶媒および試薬は精製せずに使用した。ＣＨ2ＣＩ2、およびＭｅＣＮは、４Ａモレキュラーシーブで保存した。揮発性溶媒は、ブチロータリーエバポレーターを使用して減圧下で除去された。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ガラスで裏打ちされたプレコートシリカゲルプレート（厚さ０．２５ｍｍ、６０  Ｆ２５４）で実行され、次の１つ以上の方法を使用して視覚化された：ＵＶ光（２５４ｎｍ）、Ｉ２で染色した含浸シリカ、ＫＭｎＣＥ、またはモリブデン酸セリウムアンモニウム（ＣＡＭ）。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｏｎｅを使用し、プリロードされたＳｉｌｉｃｙｃｌｅ２５ｇ高性能（１４〜４０μＭ）カラムを使用して実行した。1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、特に明記されていない限り、０．０５％ｖ／ｖテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を含むＣＤＣ１３の溶液として示されているように４００ＭＨｚで得られた。示された重水素化溶媒に示すように、13Ｃ−ＮＭＲは１００ＭＨｚで得られた。化学シフトは百万分率（ｐｐｍ、δ）で報告され、ＴＭＳを参照し、結合定数はヘルツ（Ｈｚ）で報告される。スペクトル分割パターンは、ｓ、一重項、ｄ、二重項、ｔ、三重項、ｑ、四重項、ｑｕｉｎｔ、五重項、ｓｅｘ、六重項、ｓｅｐｔ、七重項、ｍ、多重項、ｃｏｍｐ、磁気的に非等価な陽子の重複する多重項、ｂｒ、広い、およびａｐｐ、明らかとして指定される。
【００５５】
【化１０】
2021536492.tif 000013
【００５６】
１−アセチルシクロプロパンカルボン酸。ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソブタノエート（３３９ｇ、３５０ｍＬ、２．１４６モル）を、フラスコ中のＫ2ＣＯ3（１１８６ｇ、８．５８モル）およびＤＭＳＯ（３．５Ｌ）の激しく攪拌した混合物に加えた。混合物を１０分間撹拌し、次に、純粋な１，２−ジブロモエタン（８０６ｇ、３７０ｍＬ、４．２９モル）を加え、混合物を一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＨ2Ｏ（２Ｌ）で希釈し、混合物をＭＴＢＥ（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分を１０％のブライン溶液（４×２００ｍＬ）で洗浄し、有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、減圧下で油に濃縮した。純粋なＴＦＡ（４８６ｇ、３２８ｍＬ、４．２９モル）を油に加え、混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、水層のｐＨが＜１１になるまで、２０％（ｗ／ｗ）のＮａＯＨの水溶液を加えた。次いで、混合物をＭＴＢＥ（３×２００ｍＬ）で洗浄し、水層を２０％（ｗ／ｗ）のＨ2ＳＯ4の水溶液で＞２にｐＨ調整し、混合物をＣＨ2ＣＩ2（３×２００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＣ＞４で乾燥し、減圧下で濃縮して、１８２ｇ（６６％）の粗１−アセチルシクロプロパンカルボン酸をオレンジ色の油として回収した。
【００５７】
【化１１】
2021536492.tif 000014
【００５８】
１−（フラン−２−イル）エタン−１−オール。（７）３つ口丸底フラスコ（２２Ｌ）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）で洗浄し、排気し、窒素（３×）で満たした。次いで、フラスコにＴＨＦ（１５００ｍＬ）およびフルフラール（６００．０ｇ、５４７．２ｍＬ、６．２４４モル）を入れ、溶液を氷浴で０℃に冷却し、窒素雰囲気下に保った。メチルマグネシウムクロリド（２２８９ｍＬ、３Ｍ、６．８３８モル）のＴＨＦ溶液を、窒素圧を使用してカニューレを使用し、反応温度を１０℃未満に注意深く維持しながら、約１８０分かけてゆっくりと滴下した。混合物を０℃に冷却し、さらに３０分間撹拌した後、ＩＮ水溶液で注意深くクエンチした。激しく撹拌しながらＨＣｌ（１０００ｍＬ）、その間に大量の固体が形成され、反応混合物が固化した。次いで、水（２０００ｍＬ）を加え、固形物を機械的に攪拌して固形物を分解してから、内部温度を≦１０℃に注意深く維持しながら、追加の１ＮのＨＣｌ水溶液（５０００ｍＬ）を加えた。混合物をＭＴＢＥ（３×１５００ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、水（１０００ｍＬ）、ブライン（１５００ｍＬ）で洗浄し、次いで、硫酸ナトリウムで乾燥させた。次いで、有機層をロータリーエバポレーターにより減圧下で濃縮して、６７８ｇ（９６％）の粗１−（フラン−２−イル）エタン−１−オールをルビー赤色液体として回収し、これを直接次のステップに移した。
【００５９】
【化１２】
2021536492.tif 000015
【００６０】
（±）−４−ヒドロキシ−５−メチルシクロペント−２−エン−１−オン。（８）還流冷却器とマグネチックスターラーバーを備えた２０００ｍＬの丸底フラスコに、脱イオン水（１６００ｍＬ）と１−（２−フリル）エタノール（７）（１３０ｇ、１１５９ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を窒素でパージし、混合物を還流させ、激しく撹拌しながら１２０分間加熱した。次いで、反応混合物を周囲温度に冷却し、水溶液を褐色の油性樹脂からデカントした。次いで、水層をＭＴＢＥとヘキサンの混合物（１：１、３×２５０ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物を廃棄した。次いで、塩化ナトリウム（２５０ｇ）を水溶液に加え、ＥｔＯＡｃ（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターで減圧下で濃縮して、８．０ｇ（６％）の（±）−４−ヒドロキシ−５−メチルシクロペント−２−エン−１−オン（８）を淡黄色の油として回収した。
【００６１】
【化１３】
2021536492.tif 000016
【００６２】
（±）−４−（メトキシメトキシ）−５−メチルシクロペント−２−エン−１−オン。（９）フラスコに（±）−ヒドロキシ−５−メチルシクロペント−２−エン−１−オン（８）（１．５ｇ、１３．３８ｍｍｏｌ）ＣＨ2Ｃｌ2（８０ｍＬ）、およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５．１９、６．９９ｍＬ  ｇ、４０．１４ｍｍｏｌ）および混合物を窒素でパージし、氷浴で０℃に冷却した。クロロメチルメチルエーテル（ＭｅＯＡｃ中に３．１４Ｍ、８．５１ｍＬ）をシリンジを介して２０分かけて滴下した。反応物を０℃でさらに１時間撹拌した後、周囲温度までゆっくりと温め、一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）で希釈し、１０％（水溶液）のＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ）でクエンチし、有機物を分離した。水層をＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターにより減圧下で濃縮した。粗残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して（カラム：４０ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＣＨ2Ｃｌ2０→１００％）、１０．５ｇ（８４％）の（±）−４−（メトキシメトキシ）−メチルシクロペント−２−エン−１−オン（９）を淡黄色の油として回収した。
【００６３】
【化１４】
2021536492.tif 000017
【００６４】
ジアゾケトン。（１０）塩化オキサリル（３９．６ｇ、２６．４ｍＬ、３１２ｍｍｏｌ）を１−アセチルシクロプロパンカルボン酸（２０ｇ、１５６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１１０ｍｇ、０．１２ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（２００ｍＬ）の溶液に室温で加え、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で油に濃縮し、無水ＣＨ2Ｃｌ2（３００ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却する（ドライアイス／アセトン浴）。純粋な２，６−ルチジン（１９．３ｇ、２１．０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ヘキサン中にＴＭＳＣＨＮ2（２．０Ｍ、２００ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）を加えた。冷却浴を取り外し、混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。混合物を減圧下で油に濃縮した後、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ）を加え、冷蔵庫で３０分間保存した。混合物をセライト（５０ｇ）で濾過し、油に濃縮し、シリカプラグ（３５０ｇ、１０００ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で溶出）で精製し、溶離液を濃縮して、内部標準としてメシチレンを使用したＮＭＲにより、１１．２３ｇのジアゾケトン（１０）（４９％）を含む２９．３ｇの深赤褐色の油を回収した。材料は次のステップに直接持ち込まれた。
【００６５】
【化１５】
2021536492.tif 000018
【００６６】
環化付加物。（１１）ＣＨ2Ｃｌ2中のジアゾケトンの攪拌溶液（１０）（１１．２３ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）および（±）−４−（メトキシメトキシ）−５−メチルシクロペント−２−エン−１−オン（９）（５．７６ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）を排気し、窒素（３×）で満たしてから、固体Ｒｈ2（ＯＡｃ）4（４２ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）を室温で加え、一晩撹拌した。次いで、反応物を減圧下で濃縮し、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（カラム：１２０ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→８０％）により精製し、メシチレンを内部標準として使用するＮＭＲにより、環化付加物（１１）の１０．８ｇ（９６％）をワックス状のオレンジ色の固体として回収した。
【００６７】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ４．９６（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１１．２Ｈｚ．１Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｄｑ，Ｊ＝６．４，１１．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３０（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．８，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ）。１．１６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ）。１．１２（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．４，７．６，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．７３（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）５  ２１２．８，２１１．８，９６．２，８７．４，８１．５，７９．９，５９．５，５０．２，４４．１，３９．０，１４．２，１３．８，１２．４，１１．２。
【００６８】
ＮＭＲの割り当て：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ４．９６（Ｃ９−Ｈ），４．８０（Ｃ７−Ｈ），４．７４（Ｃ７−Ｈ），３．９６（Ｃ４−Ｈ），３．４５（Ｃ８−Ｈ），２．９３（Ｃ３−Ｈ），２．６７（Ｃ２−Ｈ），２．５９（Ｃ５−Ｈ），１．３０（Ｃ１４またはＣ１５−Ｈ），１．２０（Ｃ１３−Ｈ）。１．１６（Ｃ１４またはＣ１５−Ｈ）。１．１２（Ｃ６−Ｈ），１．０７（Ｃ１４またはＣ１５−Ｈ），０．７３（Ｃ１４またはＣ１５−Ｈ），13Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）５  ２１２．８（Ｃｌ），２１１．８（ＣＩＯ），９６．２（Ｃ７），８７．４（Ｃ１２），８１．５（Ｃ９），７９．９（Ｃ４），５９．５（Ｃ２），５０．２（Ｃ８，Ｃ５），４４．１（Ｃ３），３９．０（Ｃｌｌ），１４．２（Ｃ１４またはＣ１５），１３．８（Ｃ１３），１２．４（Ｃ１４またはＣ１５），１１．２（Ｃ６）。
【００６９】
【化１６】
2021536492.tif 000019
【００７０】
メチル付加物。出発材料（１１）（５．６ｇ、１９．９７ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解し、ドライアイス／アセトン浴で−７８℃に冷却した。溶液を真空下に置き、窒素を再充填し（２回）、ＭｅＭｇＣｌの溶液（１０ｍＬ、ＴＨＦ中３Ｍ、３０ｍｍｏｌ、１．５当量）を滴下し、反応物を−７８℃で３．５時間撹拌した後、酢酸（１．３ｍＬ）でクエンチした。反応物を室温に温め、ＤＣＭ（３５０ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を分離した。水相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を２０％の水溶液で洗浄した。ＮａＣｌ（１００ｍＬ）およびＮａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮した。油をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：４０ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→４５％）で精製して、７７８ｍｇ（１３．２％）のメチル付加物標的生成物を、総物質収支が９２．６％の２．２３ｇ（３９．８％）の出発材料、７６２ｍｇ（１２．９％）の第２異性体、および８３３ｇ（１３．５％）のビスメチル付加物と共に、白色結晶として回収した。
【００７１】
【化１７】
2021536492.tif 000020
【００７２】
シクロペンテノン。（１３）炭酸カリウム（７０４ｍｇ、５．０９ｍｍｏｌ、１．０当量）を出発材料（１．５０ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した後、１０％の水溶液でクエンチした。ＮＨ4Ｃｌ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ  ３００ｍＬで希釈した。得られた混合物を２０％のＮａＣｌ  １００ｍＬで洗浄した。有機層を分離し、２０％のＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：２５ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→６５％）で精製して、９７４ｍｇ（８２％）のアルケンシクロペンテノン（１３）を淡黄色の結晶として回収した。
【００７３】
【化１８】
2021536492.tif 000021
【００７４】
ジエネオン。（１４）純粋なＴＭＳＯＴｆ（７．７２ｍＬ、９．４８ｇ、４２．６８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中のｂｉｃｙｃｌｅ（１３）（２．０、８．５４ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（７．４６ｍＬ、６．８６ｇ、６４．０５ｍｍｏｌ）（１００ｍＬ）の溶液に０℃で加え、溶液を窒素雰囲気下で４時間撹拌し、その後、反応物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）でクエンチし、反応混合物を減圧下で赤橙色の油に濃縮した。原油をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）およびＮＨ4Ｆ（６．３２ｇ、１７０．８ｍｍｏｌ）に懸濁し、ＡｃＯＨ（８．５５ｍＬ、８．９７ｇ、１４９．４５ｍｍｏｌ）を加え、懸濁液を室温で一晩撹拌した。次いで、反応物をＨ2Ｏ（２５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を５％（水溶液）クエン酸−ナトリウム塩（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：２５ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→５５％）で７７４ｍｇ（３９％）のジエネオン生成物（１４）を黄色がかった固体として回収した。
【００７５】
【化１９】
2021536492.tif 000022
【００７６】
ジオール。（１６）乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）中のジエノンの溶液（１４）（７７０ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）をドライアイス／アセトン浴で−７８℃に冷却した後、ヘキサン中のＤＩＢＡＬ−Ｈ（１３．６９ｍＬ、トルエン中１．２Ｍ、１６．４３ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。溶液を０．５時間撹拌し、次に、反応物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）でクエンチし、反応混合物を減圧下で油に濃縮した。別のフラスコで、Ｈ2Ｏ（１ｍＬ）、続いてＨ3ＰＯ4（Ｈ2Ｏ中に８５％ｗ／ｗ、０．３５ｍＬ）を、ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）中のシリカ（１０ｇ）の激しく攪拌した懸濁液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、シリカが自由流動性になるまで、溶媒を減圧下で除去した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ還元からの原油をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解してから、ＴｂＰＣＥをドープした水和シリカ（６．２ｇ）を添加し、懸濁液を３時間激しく撹拌した。次いで、反応物をＴＥＡ（４３０μＬ、３１２ｍｇ、３．０８ｍｍｏｌ）でクエンチし、濾過した。得られた溶液を油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：４ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→５０％）により精製して、８３ｍｇ（１２％）の化合物ジオール（１６）を黄色の固体として回収した。
【００７７】
【化２０】
2021536492.tif 000023
【００７８】
（−）−アシルフルベン。（３）ジオール（１６）（３８ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）をトルエン（５ｍＬ）に溶解し、減圧下で濃縮することにより共沸的に乾燥させた後、乾燥ＤＭＳＯ（６ｍＬ）、続いてＩＢＸ  ４５重量％（２１６ｍｇ、０．３４８ｍｍｏｌ）を加え、懸濁液を室温で２時間撹拌した。次いで、混合物をＥｂＯ（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→５０％）で精製して、３７ｍｇ（９８％）の（−）−アシルフルベン（３）を黄色いガムとして回収した。
【００７９】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．１６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｂｓ，１Ｈ），２．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ）。
ＮＭＲの割り当て：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．１６（Ｃ４−Ｈ），６．４３（Ｃｌ−Ｈ），３．９３（Ｏ−Ｈ），２．１５（Ｃ６−Ｈ），２．００（Ｃｌｌ−Ｈ），１．５２（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），１．３８（Ｃ１４−Ｈ），１．２９（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），１．０７（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），０．７１（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ）。
【００８０】
【化２１】
2021536492.tif 000024
【００８１】
（＋）−アシルフルベン。（３）ジオール（３０ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）をトルエン（５ｍＬ）に溶解し、減圧下で濃縮することにより共沸的に乾燥させた後、乾燥ＤＭＳＯ（５ｍＬ）、続いてＩＢＸ  ４５重量％（１７１ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）を加え、懸濁液を室温で２時間撹拌した。次いで、混合物をＨ2Ｏ（１５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→５０％）で精製して、３０ｍｇ（１００％）の（＋）−アシルフルベンを黄色いガムとして回収した。
【００８２】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．１６（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｂｓ，１Ｈ），２．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．７１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ）。
【００８３】
【化２２】
2021536492.tif 000025
【００８４】
（−）−イロフルベン。（４）２Ｍ（水溶液）のＨ2ＳＯ4（４ｍＬ）中のパラホルムアルデヒド（２３１ｍｇ、モノマーとして７．７ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃で３０分間加熱し、室温まで冷却してからアセトン（４ｍＬ）およびアセトン（１ｍＬ）中の（−）−アシルフルベン（３）（３７ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を４８時間室温で攪拌した。次いで、反応物をＨ2Ｏ（２５ｍＬ）で希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ3（水溶液）（１５ｍＬ）で洗浄し、次いでＨ2Ｏ（１５ｍＬ）で水洗した（ｐＨ約７）。次いで、有機抽出物をＮａ2ＣＯ3で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→６５％）で精製して、２４．６ｍｇ（５８％）の（−）−イロフルベン（４）を黄色のガムおよび８．６ｍｇ（２３％）の回収された（−）−アシルフルベンとして回収した。
【００８５】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０９（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｂｓ，１Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｄｄｄ，４．０，６．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。
ＮＭＲの割り当て：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０９（Ｃ４−Ｈ），４．６７（Ｃ１５−Ｈ），４．６３（Ｃ１５−Ｈ），３．９０（Ｏ−Ｈ），２．１９（Ｃ６−Ｈ），２．１５（Ｃｌ  １−Ｈ），１．４９（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），１．３８（Ｃ１４−Ｈ），１．３６（０２または０３−Ｈ），１．０８（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），０．７２（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ）。
【００８６】
【化２３】
2021536492.tif 000026
【００８７】
（＋）−イロフルベン。（４）１Ｍ（水溶液）のＨ2ＳＯ4（９ｍＬ）中のパラホルムアルデヒド（１８６ｍｇ、モノマーとして６．２１ｍｍｏｌ）の懸濁液を９０℃まで３０分間加熱し、室温まで冷却してからアセトン（９ｍＬ）およびアセトン（３ｍＬ）中の（＋）−アシルフルベン（３）（３０ｍｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を７２時間室温で攪拌した。次いで、反応物をＨ2Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａＨＣＯ3（水溶液）（１５ｍＬ）で洗浄し、次いでＨ2Ｏ（１５ｍＬ）で水洗した（ｐＨ約７）。次いで、有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  ０→６５％）で精製して、１２．７ｍｇ（３７％）の（＋）−イロフルベンを黄色のガムおよび１２．４ｍｇ（４１％）の回収された（＋）−アシルフルベン（３）として回収した。
【００８８】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０９（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｂｓ，１Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。
ＮＭＲの割り当て：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０９（Ｃ４−Ｈ），４．６７（Ｃ１５−Ｈ），４．６３（Ｃ１５−Ｈ），３．９０（Ｏ−Ｈ），２．１９（Ｃ６−Ｈ），２．１５（Ｃｌ  １−Ｈ），１．４９（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），１．３８（Ｃ１４−Ｈ），１．３６（０２または０３−Ｈ），１．０８（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ），０．７２（Ｃ１２またはＣ１３−Ｈ）。
【００８９】
【化２４】
2021536492.tif 000027
【００９０】
（−）−ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン。（５）アセトン（１．５ｍＬ）および２Ｍ（水溶液）のＨ2ＳＯ4（１．５ｍＬ）の混合物中の（−）−イロフルベン（４）（２４ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシ尿素（３７ｍｇ、０．４８７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間撹拌した後、Ｈ2Ｏ（１５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、有機物を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を５％のＮａＨＣＯ3（水溶液）（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  １０→９５％）により精製して、１８．９ｍｇ（６１％）の（−）−ＬＰ−  １８４（５）を黄橙色の固体として回収した。
【００９１】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０３（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｂｓ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｂｓ，１Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，７．６，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【００９２】
【化２５】
2021536492.tif 000028
【００９３】
（＋）−ヒドロキシ尿素メチルアシルフルベン。（５）アセトン（１ｍＬ）および２Ｍ（水溶液）のＨ2ＳＯ4（１ｍＬ）の混合物中の（＋）−イロフルベン（４）（１２ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドロキシ尿素（７．５ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間撹拌した後、Ｈ2Ｏ（１５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、有機物を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、ＮａＨＣＯ3（水溶液）（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、油に濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム：１２ｇのＳｉｌｉｃｙｃｌｅ、溶離液：ヘキサン中の勾配ＥｔＯＡｃ  １０→９５％）により精製して、６．６ｍｇ（４４％）の（＋）−ＬＰ−  １８４（５）を黄色の固体および３．０ｍｇ（２５％）の回収された（＋）−イロフルベン（４）として回収した。
【００９４】
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ７．０３（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），５．３７（ｂｓ，２Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｂｓ，１Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，６．４，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，６．４，９．６Ｈｚ，１Ｈ），１．３５（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝５．２，７．６，９．６Ｈｚ，１Ｈ），０．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝４．０，７．６，１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【００９５】
細胞毒性。両方の精製ＵＭＡＦ（この例ではＵＭＡＦとも呼ばれる）光学エナンチオマーの増殖阻害活性を、前立腺癌、卵巣癌、および肺癌の代表的な細胞株を使用した標準的な９６ウェル細胞ベースのアッセイで研究した。細胞増殖の５０％阻害を引き起こす濃度（ＧＩ50）は、発光バイタルアッセイ試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏR、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して決定された。ＵＭＡＦ濃度の関数としての成長阻害曲線は、代表的なアッセイから示されている。図４、６、７、および９は、（＋）エナンチオマーがそれぞれＤＵ１４５、ＯＶＣＡＲ３、ＳＫ−ＯＶ３、およびＨ１９７５細胞株に対してより毒性があることを示している。図５および８は、ＰＣ３およびＨＣＣ８２７細胞株が、化合物の両方のエナンチオマー形態に対して同様に感受性であることを示している。６つの細胞株についての２つの形態のＧＩ50濃度を以下に示す。
【００９６】
【表２】
2021536492.tif 000029
【図１】
2021536492.tif 000039
【図２】
2021536492.tif 000040
【図３】
2021536492.tif 000041
【図４】
2021536492.tif 000042
【図５】
2021536492.tif 000043
【図６】
2021536492.tif 000044
【図７】
2021536492.tif 000045
【図８】
2021536492.tif 000046
【図９】
2021536492.tif 000047
【国際調査報告】
2021536492.tif 000048
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