(57)【要約】  本発明により、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子、キメラ受容体及び改変免疫細胞が開示される。本発明は、ＤＬＬ３抗原結合分子及び改変免疫細胞を用いたベクター、組成物並びに治療及び／又は検出方法に更に関する。
2021520788.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体であって、前記抗原結合分子は、
ａ）配列番号４２、若しくは配列番号５２、若しくは配列番号６２のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１、又は
ｂ）配列番号４３、若しくは配列番号５３、若しくは配列番号６３のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２、又は
ｃ）配列番号４４、若しくは配列番号５４、若しくは配列番号６４のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３、又は
ｄ）配列番号４７、若しくは配列番号５７、若しくは配列番号６７のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１、又は
ｅ）配列番号４８、若しくは配列番号５８、若しくは配列番号６８のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２、又は
ｆ）配列番号４９、若しくは配列番号５９、若しくは配列番号６９のアミノ酸配列と３、２、１若しくは０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３、又は
ｇ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変重鎖ＣＤＲ１配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１、又は
ｈ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変重鎖ＣＤＲ２配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２、又は
ｉ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変重鎖ＣＤＲ３配列のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３、又は
ｊ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変軽鎖ＣＤＲ１配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１、又は
ｋ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変軽鎖ＣＤＲ２配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２、又は
ｌ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変軽鎖ＣＤＲ３配列のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３、又は
ｍ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変重鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１若しくは０個以下の残基だけ異なる可変重鎖配列、又は
ｎ）クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変軽鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１若しくは０個以下の残基だけ異なる可変軽鎖配列
を含む、キメラ抗原受容体。
【請求項２】
少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３】
少なくとも１つの活性化ドメインを更に含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項２に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項５】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８を含む、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項６】
前記ＣＤ２８共刺激ドメインは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号２、配列番号４、配列番号６又は配列番号８の配列と異なる配列を含む、請求項５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項７】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ８を含む、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項８】
前記ＣＤ８共刺激ドメインは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号１４の配列と異なる配列を含む、請求項７に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項９】
前記共刺激ドメインは、４−１ＢＢを含む、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１０】
前記ＣＤ８共刺激ドメインは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号１６の配列と異なる配列を含む、請求項９に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１１】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３を含む、請求項３に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１２】
ＣＤ３は、ＣＤ３ゼータを含む、請求項７に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１３】
ＣＤ３ゼータは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号１０の配列と異なる配列を含む、請求項８に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１４】
共刺激ドメインは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号２の配列と異なる配列を含み、及び活性化ドメインは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基において配列番号１０の配列と異なる配列を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１５】
請求項１に記載のキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１５に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１７】
レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１６に記載のベクター。
【請求項１８】
請求項１６に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項１９】
Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項１８に記載の免疫細胞。
【請求項２０】
自己Ｔ細胞である、請求項１９に記載の免疫細胞。
【請求項２１】
同種異系Ｔ細胞である、請求項１９に記載の免疫細胞。
【請求項２２】
前記ベクターは、患者の身体から単離されるか、又は患者の身体から採取された試料から増殖される細胞に導入される、請求項１８に記載の免疫細胞。
【請求項２３】
前記ベクターは、ドナーの身体から単離されるか、又は患者の身体から採取された試料から増殖される細胞に導入される、請求項１８に記載の免疫細胞。
【請求項２４】
請求項１８に記載の免疫細胞を含む医薬組成物。
【請求項２５】
（ａ）クローン１Ｈ２．１のＶＨ領域及びクローン１Ｈ２．１のＶＬ領域；
（ｂ）クローン８Ｄ２のＶＨ領域及びクローン８Ｄ２のＶＬ領域；又は
（ｃ）クローン６Ｂ２のＶＨ領域及びクローン６Ｂ２のＶＬ領域
を含むキメラ抗原受容体であって、前記ＶＨ及びＶＬ領域は、少なくとも１つのリンカーによって連結される、キメラ抗原受容体。
【請求項２６】
前記リンカーは、ｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー又はｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーを含む、請求項２５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２７】
共刺激ドメインを更に含む、請求項２５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２８】
活性化ドメインを更に含む、請求項２５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項２９】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項２７に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３０】
請求項２５に記載のキメラ抗原受容体を含む免疫細胞。
【請求項３１】
Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項３０に記載の免疫細胞。
【請求項３２】
自己Ｔ細胞である、請求項３１に記載のＴ細胞。
【請求項３３】
同種異系Ｔ細胞である、請求項３２に記載のＴ細胞。
【請求項３４】
請求項３０に記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項３５】
請求項２５に記載のキメラ抗原受容体をコードする配列を含む単離ポリヌクレオチド。
【請求項３６】
請求項３５に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３７】
請求項３６に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項３８】
Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項３７に記載の免疫細胞。
【請求項３９】
自己Ｔ細胞である、請求項３８に記載のＴ細胞。
【請求項４０】
同種異系Ｔ細胞である、請求項３８に記載のＴ細胞。
【請求項４１】
コンストラクト１Ｈ２．１  ＣＤ２８Ｔ、コンストラクト１Ｈ２．１  ４−１ＢＢ、コンストラクト８Ｄ２  ＣＤ２８Ｔ、コンストラクト８Ｄ２  ４−１ＢＢ、コンストラクト６Ｂ２  ＣＤ２８Ｔ又はコンストラクト６Ｂ２  ４−１ＢＢのアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド。
【請求項４２】
請求項４１に記載のポリペプチドをコードするベクター。
【請求項４３】
請求項４１に記載のポリペプチドを含む免疫細胞。
【請求項４４】
Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項４３に記載の免疫細胞。
【請求項４５】
自己Ｔ細胞である、請求項４４に記載のＴ細胞。
【請求項４６】
同種異系Ｔ細胞である、請求項４４に記載のＴ細胞。
【請求項４７】
ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記抗原結合分子は、クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２又はクローン６Ｂ２の可変重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４８】
活性化ドメインを更に含む、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３である、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記ＣＤ３は、ＣＤ３ゼータである、請求項４９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
前記ＣＤ３ゼータは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
共刺激ドメインを更に含む、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項５２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５４】
前記ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２に記載されるアミノ酸配列をコードする、請求項５３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５５】
請求項４７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項５６】
請求項５５に記載のベクターを含む免疫細胞。
【請求項５７】
Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である、請求項５６に記載の免疫細胞。
【請求項５８】
自己Ｔ細胞である、請求項５７に記載のＴ細胞。
【請求項５９】
同種異系Ｔ細胞である、請求項５７に記載のＴ細胞。
【請求項６０】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ＣＡＲ又はＴＣＲは、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含み、前記抗原結合分子は、
ａ．クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変重鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１若しくは０個以下の残基だけ異なる可変重鎖配列、及び／又は
ｂ．クローン１Ｈ２．１、クローン８Ｄ２若しくはクローン６Ｂ２の可変軽鎖配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１若しくは０個以下の残基だけ異なる可変軽鎖配列
を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６１】
活性化ドメインを更に含む、請求項６０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６２】
前記活性化ドメインは、ＣＤ３である、請求項６１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６３】
前記ＣＤ３は、ＣＤ３ゼータである、請求項６２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６４】
前記ＣＤ３ゼータは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項６３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６５】
共刺激ドメインを更に含む、請求項６０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６６】
前記共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項６５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６７】
前記ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号３に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項６６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６８】
前記ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１に記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項６７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６９】
ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号４２）、ＣＤＲ２（配列番号４３）及びＣＤＲ３（配列番号４４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号４７）、ＣＤＲ２（配列番号４８）及びＣＤＲ３（配列番号４９）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７０】
ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号５２）、ＣＤＲ２（配列番号５３）及びＣＤＲ３（配列番号５４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号５７）、ＣＤＲ２（配列番号５８）及びＣＤＲ３（配列番号５９）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７１】
ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドであって、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号６２）、ＣＤＲ２（配列番号６３）及びＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号６７）、ＣＤＲ２（配列番号６８）及びＣＤＲ３（配列番号６９）を含む、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７２】
疾患又は障害の治療を必要とする対象において、疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１５、４７、６０、６９、７０又は７１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７３】
疾患又は障害の治療を必要とする対象において、疾患又は障害を治療する方法であって、請求項４１に記載のポリペプチドを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７４】
疾患又は障害の治療を必要とする対象において、疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１又は２５に記載のキメラ抗原受容体を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７５】
疾患又は障害の治療を必要とする対象において、疾患又は障害を治療する方法であって、請求項１８、３０、３７、４３又は５６のいずれか一項に記載の細胞を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７６】
疾患又は障害の治療を必要とする対象において、疾患又は障害を治療する方法であって、請求項２４又は３４に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７７】
前記疾患又は障害は、がんである、請求項７２〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記がんは、副腎、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、子宮頸部、子宮、食道、結腸直腸、前立腺（例えば、前立腺腺癌）、膵臓、肺（小細胞及び非小細胞の両方）、甲状腺、癌腫、肉腫、グリア芽腫、頭頸部腫瘍、大細胞神経内分泌癌（ＬＣＮＥＣ）、甲状腺髄様がん、グリア芽腫、神経内分泌前立腺がん（ＮＥＰＣ）、高悪性度胃腸膵がん（ＧＥＰ）及び悪性黒色腫である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記がんは、小細胞肺がんである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記レンチウイルスベクターは、ｐＧＡＲベクターである、請求項１７に記載のレンチウイルスベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
２０１８年４月１０日に出願され、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／６５５，７２５号明細書に対する優先権が主張される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を包含し、その配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１９年４月１０日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、名称がＡ−２２４９−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが８６，３２７バイトである。
【背景技術】
【０００３】
小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）は、診断される全肺がん症例のおよそ１５％を占めるが、肺癌の攻撃的形態である（Ｅｎｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１７）Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎ  Ｏｐｅｎ  ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ４１６６９−０１７−００４５−０；Ｂｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｏｎｃｏｌ；１１：４５３−７４；Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ；６６：７−３０）。Ｄｅｌｔａ様３（ＤＬＬ３）は、Ｎｏｔｃｈ受容体に対するＤｅｌｔａ／Ｓｅｒｒａｔｅ／Ｌａｇ−２ファミリーのリガンドのメンバーであり、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達において役割を果たすと考えられている。ＤＬＬ３は、通常、細胞内膜上でのみ発現するＮｏｔｃｈシグナル伝達経路の抑制性リガンドである（Ｇｅｆｆｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ；１７８：４６５−７６）。代表的なＤＬＬ３タンパク質のオルソログとしては、ヒト（受託番号ＮＰ＿０５８６３７及びＮＰ９８２３５３）、チンパンジー（受託番号ＸＰ＿００３３１６３９５）、マウス（受託番号ＮＰ＿０３１８９２）及びラット（受託番号ＮＰ＿４４６１１８）が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトでは、ＤＬＬ３遺伝子は、染色体１９ｑ１３に位置する９．５ｋＢｐにわたる８個のエクソンからなる。最後のエクソン内における選択的スプライシングにより、２つのプロセシングされた転写物が生じ、１つは、２３８９塩基（受託番号ＮＭ＿０１６９４１）であり、１つは、２０５２塩基（受託番号ＮＭ＿２０３４８６）である。前者の転写物は、６１８アミノ酸タンパク質（受託番号ＮＰ  ０５８６３７；配列番号２９）をコードし、後者は、５８７アミノ酸タンパク質（受託番号ＮＰ  ９８２３５３；配列番号３０）をコードする。ＳＣＬＣなどの特定のがんでは、ＤＬＬ３は、細胞表面で発現し、そのため、これは、高度に腫瘍選択的な細胞表面タンパク質であることが判明している（Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ；７：３０２ｒａ１３６）。
【０００４】
改変免疫細胞は、特に腫瘍分野の治療処置における所望の品質を有することが示されている。改変免疫細胞の２つの主なタイプは、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」又は「ＣＡＲ−Ｔ」と称される）及びＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）を含有するものである。これらの改変細胞は、標的細胞を認識して死滅させるその能力を保持又は強化しながら、抗原特異性を得るように改変される。キメラ抗原受容体は、例えば、（ｉ）抗原特異的構成要素（「抗原結合分子」）、（ｉｉ）１つ以上の共刺激ドメイン、及び（ｉｉｉ）１つ以上の活性化ドメインを含み得る。各ドメインは、異質性、すなわち異なるタンパク質鎖由来の配列からなり得る。キメラ抗原受容体発現免疫細胞（Ｔ細胞など）を、がん療法を含む様々な療法に用いることができる。本明細書で定義される共刺激ポリペプチドを使用して、標的抗原に対するＣＡＲ発現細胞の活性化を強化し、したがって養子免疫療法の効力を増大させ得ることが理解されるであろう。
【０００５】
Ｔ細胞は、１種以上の所望の標的に対する特異性を有するように改変され得る。例えば、Ｔ細胞は、１つ以上のシグナル伝達分子及び／又はＣＤ３ゼータなどの１つ以上の活性化ドメインと併せて、抗体の１つ以上の単鎖可変断片（「ｓｃＦｖ」）などの抗原結合分子をコードするＤＮＡ又は他の遺伝物質を形質導入することができる。
【０００６】
標的細胞を認識し、破壊するＣＡＲ−Ｔ細胞の能力に加えて、成功したＴ細胞療法は、抗原に応答して増殖する能力を持続させて維持するＣＡＲ−Ｔ細胞の能力から利益を得る。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｅｎｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１７）Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎ  Ｏｐｅｎ  ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ４１６６９−０１７−００４５−０
【非特許文献２】Ｂｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｏｎｃｏｌ；１１：４５３−７４
【非特許文献３】Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ；６６：７−３０
【非特許文献４】Ｇｅｆｆｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ；１７８：４６５−７６
【非特許文献５】Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ；７：３０２ｒａ１３６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＤＬＬ３が関連する疾患及び障害を治療するための新規且つ改善された療法を特定する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、改変免疫細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲなど）、ＤＬＬ３特異性を有する抗原結合分子（これらの抗原結合分子の抗体、ｓｃＦｖ、重鎖及び／又は軽鎖並びにＣＤＲが挙げられるが、これらに限定されない）に関する。
【００１０】
本発明のキメラ抗原受容体は、典型的には、（ｉ）ＤＬＬ３特異性抗原結合分子、（ｉｉ）１つ以上の共刺激ドメイン、及び（ｉｉｉ）１つ以上の活性化ドメインを含む。各ドメインは、異質性、したがって異なるタンパク質鎖由来の配列からなり得ることが理解されるであろう。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体に関し、抗原結合分子は、（ａ）配列番号４２、又は配列番号５２、又は配列番号６２と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４３、又は配列番号５３、又は配列番号６３と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ２；（ｃ）４４、又は配列番号５４、又は配列番号６４と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号４７、又は配列番号５７、又は配列番号６７と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号４８、又は配列番号５８、又は配列番号６８と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ２；（ｆ）配列番号４９、又は配列番号５９、又は配列番号６９と３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖ＣＤＲ３の少なくとも１つを含む。
【００１２】
他の実施形態では、キメラ抗原受容体は、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む。更なる実施形態では、キメラ抗原受容体は、少なくとも１つの活性化ドメインを更に含む。
【００１３】
特定の実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、４−１ＢＢから誘導される。他の実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８又はＣＤ２８Ｔから誘導される。の他の実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ８から誘導される。他の実施形態では、共刺激ドメインは、ＯＸ４０から誘導される。Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２  Ｊｕｌ．１；１（４）：４５８−４６６も参照されたい。更に他の実施形態では、Ｇｕｅｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｇｕｓｔ  １４，２０１４；Ｂｌｏｏｄ：１２４（７）及びＳｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１３）６：３３に説明されるように、共刺激ドメインは、ＩＣＯＳを含む。更に他の実施形態では、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２  Ｊｕｌ．１；１（４）：５４７−５４９に説明されるように、共刺激ドメインは、ＣＤ２７を含む。
【００１５】
特定の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２、配列番号４、配列番号６又は配列番号８を含む。追加の実施形態では、ＣＤ８共刺激ドメインは、配列番号１４を含む。追加の実施形態では、４−１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６を含む。更なる実施形態では、活性化ドメインは、ＣＤ３、ＣＤ３ゼータ又は配列番号１０に記載される配列を有するＣＤ３ゼータを含む。
【００１６】
他の実施形態では、本発明は、共刺激ドメインが配列番号２を含み、及び活性化ドメインが配列番号１０を含む、キメラ抗原受容体に関する。
【００１７】
本発明は、キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチド及びポリヌクレオチドを含むベクターに更に関する。ベクターは、例えば、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター又はこれらの任意の組み合わせであり得る。本発明は、ベクターを含む免疫細胞に更に関する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｐＧＡＲベクターである。
【００１８】
例示的な免疫細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は、自己、同種異系又は異種であり得る。他の実施形態では、本発明は、本明細書で説明される免疫細胞を含む医薬組成物に関する。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明は、
（ａ）１Ｈ２．１のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び１Ｈ２．１のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域、
（ｂ）８Ｄ２のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び８Ｄ２のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域、
（ｃ）６Ｂ２のＶＨ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＨ領域及び６Ｂ２のＶＬ領域のアミノ酸配列と１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１又は０個以下のアミノ酸残基だけ異なるＶＬ領域
の少なくとも１つを含む抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）であって、１つ又は複数のＶＨ及びＶＬ領域は、少なくとも１つのリンカーによって連結される、抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）に関する。
【００２０】
他の実施形態では、本発明は、リンカーがｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー及びｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーの少なくとも１つを含む、抗原結合分子（及びこれらの分子を含むキメラ抗原受容体）に関する。
【００２１】
他の実施形態では、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするベクター及びこれらのポリペプチドを含む免疫細胞に関する。好ましい免疫細胞としては、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞が挙げられる。Ｔ細胞は、自己、同種異系又は異種であり得る。
【００２２】
他の実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドに関し、抗原結合分子は、配列番号４４又は配列番号５４、又は配列番号６４のアミノ酸配列を含む可変重（ＶＨ）鎖ＣＤＲ３を含む。ポリヌクレオチドは、活性化ドメインを更に含み得る。好ましい実施形態では、活性化ドメインは、ＣＤ３、より好ましくはＣＤ３ゼータ、より好ましくは配列番号９に記載されたアミノ酸配列である。
【００２３】
他の実施形態では、本発明は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ４０、ＣＤ８、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ３（アルファ、ベータ、デルタ、イプシロン、ガンマ、ゼータ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３リガンドなどの共刺激ドメイン又はこれらの断片若しくは組み合わせを含む。好ましい共刺激ドメインは、以下に引用される。
【００２４】
更なる実施形態では、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドに関し、前記ＣＡＲ又はＴＣＲは、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含み、抗原結合分子は、配列番号４７、配列番号５７及び配列番号６７から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ３を含む。ポリヌクレオチドは、活性化ドメインを更に含み得る。ポリヌクレオチドは、共刺激ドメインを更に含み得る。
【００２５】
他の実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドに関し、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号４２）、ＣＤＲ２（配列番号４３）及びＣＤＲ３（配列番号４４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号４７）、ＣＤＲ２（配列番号４８）及びＣＤＲ３（配列番号４９）を含む。
【００２６】
他の実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドに関し、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号５２）、ＣＤＲ２（配列番号５３）及びＣＤＲ３（配列番号５４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号５７）、ＣＤＲ２（配列番号５８）及びＣＤＲ３（配列番号５９）を含む。
【００２７】
他の実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３に特異的に結合する抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離ポリヌクレオチドに関し、抗原結合分子重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号６２）、ＣＤＲ２（配列番号６３）及びＣＤＲ３（配列番号６４）を含み、且つ抗原結合分子軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号６７）、ＣＤＲ２（配列番号６８）及びＣＤＲ３（配列番号６９）を含む。
【００２８】
本発明は、本明細書に記載される少なくとも１つの可変重鎖ＣＤＲ３又は可変軽鎖ＣＤＲ３配列を含むＤＬＬ３に対する抗原結合分子に更に関する。本発明は、本明細書で説明される少なくとも１つの可変重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むＤＬＬ３に対する抗原結合分子に更に関する。本発明は、本明細書で説明される少なくとも１つの可変軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むＤＬＬ３に対する抗原結合分子に更に関する。本発明は、本明細書に記載される可変重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３及び可変軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列の両方を含むＤＬＬ３に対する抗原結合分子に更に関する。
【００２９】
本発明によるＤＬＬ３結合分子に使用するのに好適な追加の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン並びにＣＤＲポリヌクレオチド及びアミノ酸配列は、２０１５年７月３１日出願の米国仮特許出願第６２／１９９，９４４号明細書に見出される。
【００３０】
本発明は、疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明による抗原結合分子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞又は組成物を対象に投与することを含む方法に更に関する。治療に好適な疾患としては、副腎、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、子宮頸部、子宮、食道、結腸直腸、前立腺（例えば、前立腺腺癌）、膵臓、肺（小細胞及び非小細胞の両方）、甲状腺、癌腫、肉腫、グリア芽腫、頭頸部腫瘍、大細胞神経内分泌癌（ＬＣＮＥＣ）、甲状腺髄様がん、グリア芽腫、神経内分泌前立腺がん（ＮＥＰＣ）、高悪性度胃腸膵がん（ＧＥＰ）及び悪性黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】健康なドナーからのＴ細胞におけるＤＬＬ３  ＣＡＲの発現を示す。
【図１Ｂ】健康なドナーからのＴ細胞におけるＤＬＬ３  ＣＡＲの発現を示す。
【図２Ａ】健康なドナーからのレンチウイルス形質導入ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解活性を示す。
【図２Ｂ】健康なドナーからのレンチウイルス形質導入ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解活性を示す。
【図２Ｃ】健康なドナーからのレンチウイルス形質導入ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞溶解活性を示す。
【図３Ａ】健康なドナーからのＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカイン産生を示す。
【図３Ｂ】健康なドナーからのＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカイン産生を示す。
【図３Ｃ】健康なドナーからのＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカイン産生を示す。
【図４Ａ】ＤＬＬ３発現標的細胞に応答するＴ細胞増殖のフローサイトメトリー分析を示す。
【図４Ｂ】ＤＬＬ３発現標的細胞に応答するＴ細胞増殖のフローサイトメトリー分析を示す。
【図５】ヒトＳＣＬＣのマウス異種モデルにおけるＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【図６】ＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞治療後のマウスＳＣＬＣ異種モデルの生存率分析を示す。
【図７】ｐＧＡＲのベクターマップを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ−Ｔ）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、遺伝子改変された受容体であることが理解されるであろう。これらの改変された受容体は、当技術分野で既知の技法に従い、Ｔ細胞を含む免疫細胞に容易に挿入することができ、その免疫細胞によって容易に発現され得る。ＣＡＲを用いて、特定の抗原を認識することと、その抗原と結合したとき、その抗原を有する細胞を攻撃して破壊するように免疫細胞を活性化することとの両方を行うように単一の受容体をプログラムすることができる。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在すると、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、その腫瘍細胞を標的化して死滅させることができる。
【００３３】
ＣＡＲは、標的化された抗原（細胞表面抗原などの）と相互作用する抗原結合分子を組み込むことにより、抗原に結合するように改変することができる。好ましくは、抗原結合分子は、その抗体断片、更に好ましくは１つ以上の単鎖抗体断片（「ｓｃＦｖ」）である。ｓｃＦｖは、一体に連結された抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する単鎖抗体断片である。米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書並びにＥｓｈｈａｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９７）４５：１３１−１３６を参照されたい。ｓｃＦｖは、標的抗原と特異的に相互作用する親抗体の能力を保持する。ｓｃＦｖは、他のＣＡＲ成分と共に単鎖の一部として発現されるように改変され得るため、キメラ抗原受容体での使用に好ましい。同上、Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  １８８，Ｎｏ．４，１９９８（６１９−６２６）；Ｆｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６１：２７９１−２７９７も参照されたい。抗原結合分子は、典型的には、それが対象の抗原を認識して、その抗原と結合することができるようにＣＡＲの細胞外部分内に含有されることが理解されるであろう。２つ以上の対象の標的に対する特異性を有する二重特異性及び多重特異性のＣＡＲが本発明の範囲内で検討される。
【００３４】
共刺激ドメイン。キメラ抗原受容体は、共刺激（シグナル伝達）ドメインを組み込んでその効能を高めることができる。米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書並びにＫｒａｕｓｅ，ｅｔ  ａｌ．及びＦｉｎｎｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（上記）、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９：６９６−７０６（２０１２）；Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３：９５（２０１１）；Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：７２５−３３（２０１１）及びＧｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５６：５９−８３（２０１６）を参照されたい。例えば、ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で天然に見出される共刺激タンパク質である。ＣＤ２８の完全なネイティブアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００６１３０．１に記載される。完全なネイティブのＣＤ２８核酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００６１３９．１に記載される。
【００３５】
特定のＣＤ２８のドメインがキメラ抗原受容体で使用されている。本発明によれば、「ＣＤ２８Ｔ」と称される新規のＣＤ２８細胞外ドメインは、ＣＡＲコンストラクト中で利用されると特定の利益を予想外に提供することが見出されている。
【００３６】
細胞外ＣＤ２８Ｔドメイン並びにＣＤ２８膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むＣＤ２８Ｔ分子のヌクレオチド配列は、配列番号１に記載される。
【化１】
2021520788.tif 000003
【００３７】
対応するアミノ酸配列は、配列番号２に記載される。
【化２】
2021520788.tif 000004
【００３８】
ＣＤ２８Ｔの細胞外部分のヌクレオチド配列は、配列番号３に記載される。
【化３】
2021520788.tif 000005
【００３９】
ＣＤ２８Ｔの細胞外ドメインの対応するアミノ酸配列は、配列番号４に記載される。
ＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩ  ＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰ  ＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ
【００４０】
ＣＤ２８の膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号５に記載される。
【化４】
2021520788.tif 000006
【００４１】
ＣＤ２８の膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、配列番号６に記載される。
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶ  ＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶ  ＡＦＩＩＦＷＶ
【００４２】
ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号７に記載される。
【化５】
2021520788.tif 000007
【００４３】
ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列は、配列番号８に記載される。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ
【００４４】
本発明で使用するのに好適な追加のＣＤ２８配列としては、配列番号１１に記載されるＣＤ２８のヌクレオチド配列が挙げられる。
【化６】
2021520788.tif 000008
【００４５】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１２に記載される。
ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ
【００４６】
他の好適な細胞外又は膜貫通配列は、ＣＤ８に由来し得る。好適なＣＤ８の細胞外及び膜貫通ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号１３に記載される。
【化７】
2021520788.tif 000009
【００４７】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１４に記載される。
【化８】
2021520788.tif 000010
【００４８】
他の好適な細胞内シグナル伝達配列は、４１−ＢＢから誘導され得る。好適な４１−ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインのヌクレオチド配列は、配列番号１５に記載される。
【化９】
2021520788.tif 000011
【００４９】
対応するアミノ酸配列は、配列番号１６に記載される。
ＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ
【００５０】
本発明の範囲内の好適な共刺激ドメインは、供給源の中でもとりわけ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ３（アルファ、ベータ、デルタ、イプシロン、ガンマ、ゼータ）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ  ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ−ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ−ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ−ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ−ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３リガンド又はこれらの断片若しくは組み合わせから誘導され得る。
【００５１】
活性化ドメイン。
ＣＤ３は、ネイティブＴ細胞上のＴ細胞受容体の一要素であり、ＣＡＲにおいて重要な細胞内活性化要素であることが示されている。好ましい実施形態では、ＣＤ３は、ＣＤ３ゼータであり、そのヌクレオチド配列は、配列番号９に記載される。
【化１０】
2021520788.tif 000012
【００５２】
細胞内ＣＤ３ゼータの対応するアミノ酸は、配列番号１０に記載される。
【化１１】
2021520788.tif 000013
【００５３】
ドメイン配向
構造的に、これらのドメインは、免疫細胞に対する位置に対応することが理解されるであろう。したがって、これらのドメインは、（ｉ）「ヒンジ」若しくは細胞外（ＥＣ）ドメイン（ＥＣ）、（ｉｉ）膜貫通（ＴＭ）ドメイン、及び／又は（ｉｉｉ）細胞内（細胞質）ドメイン（ＩＣ）の一部であり得る。細胞内構成要素は、部分的にＣＤ３ファミリーのメンバー、好ましくはＣＤ３ゼータを含むことが多く、これは、抗原結合分子がその標的に結合する際にＴ細胞を活性化することができる。一実施形態では、ヒンジドメインは、典型的には、本明細書で定義される少なくとも１つの共刺激ドメインからなる。
【００５４】
ヒンジ領域は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭなどの免疫グロブリンファミリーのメンバー又はこれらの断片の一部若しくは全部を含有し得ることも理解されるであろう。
【００５５】
本発明による例示的なＣＡＲコンストラクトは、表１に記載される。
【００５６】
【表１】
2021520788.tif 000014
【００５７】
細胞に対するドメイン
受容体を有する細胞に対して、本発明の改変Ｔ細胞は、抗原結合分子（ｓｃＦｖなど）、細胞外ドメイン（「ヒンジ」ドメインを含み得る）、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むことが理解されるであろう。細胞内ドメインは、少なくとも部分的に活性化ドメインを含み、これは、好ましくは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ又はそれらの一部などのＣＤ３ファミリーメンバーからなる。更に、抗原結合分子（例えば、１つ以上のｓｃＦｖ）は、分子／コンストラクトの細胞外部分内に位置するように改変されるため、その標的を認識して結合することができることも理解されるであろう。
【００５８】
細胞外ドメイン。細胞外ドメインは、シグナル伝達及び抗原に対するリンパ球の効率的な応答にとって有益である。本発明の特定の使用の細胞外ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせから誘導され得る（すなわちこれらを含み得る）。細胞外ドメインは、天然の供給源又は合成の供給源のいずれかから誘導され得る。
【００５９】
本明細書で説明されるように、細胞外ドメインは、ヒンジ部分を含む場合が多い。これは、「スペーサー」領域と呼ばれる場合のある細胞外ドメインの一部である。上記で論じた共刺激分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）配列又は他の好適な分子を含む様々なヒンジを本発明に従って採用し、標的細胞からの所望の特定の距離を達成することができる。いくつかの実施形態では、全細胞外領域がヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８Ｔ又はＣＤ２８のＥＣドメインを含む。
【００６０】
膜貫通ドメイン。ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合される膜貫通ドメインを含むように設計され得る。これは、ＣＡＲの細胞内ドメインにも同様に融合され得る。一実施形態では、ＣＡＲのドメインの１つと天然に会合する膜貫通ドメインが使用される。場合により、アミノ酸置換によって膜貫通ドメインを選択又は修飾して、同一の又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのこうしたドメインの結合を回避し、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にすることができる。膜貫通ドメインは、天然の供給源又は合成の供給源のいずれかから誘導され得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質から誘導され得る。本発明の特定の使用の膜貫通領域は、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせから誘導され得る（すなわちこれらを含み得る）。
【００６１】
任意選択的に、短いリンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインのいずれか又はいくつかの間で結合を形成し得る。
【００６２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ８の膜貫通ドメインである。一実施形態では、ＣＤ８の膜貫通ドメインは、配列番号１３の核酸配列の膜貫通部分を含む。別の実施形態では、ＣＤ８の膜貫通ドメインは、配列番号１４内に含有される膜貫通アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【００６３】
特定の実施形態では、本発明のＣＡＲにおける膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインである。一実施形態では、ＣＤ２８の膜貫通ドメインは、配列番号５の核酸配列を含む。一実施形態では、ＣＤ２８の膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。別の実施形態では、ＣＤ２８の膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【００６４】
細胞内（細胞質）ドメイン。本発明の改変Ｔ細胞の細胞内（細胞質）ドメインは、免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を提供することができる。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。
【００６５】
好適な細胞内分子としては、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム死−１（ＰＤ−１）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１、ＣＤｌ−ｌａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ、（ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＤＡＰ−１０、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤｌ  ｌｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤｌ  ｌａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤｌ  ｌｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ  ｌｃ、ＩＴＧＢｌ、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド又はこれらの任意の組み合わせが挙げられる（すなわちこれらを含む）が、これらに限定されないことが理解されるであろう。
【００６６】
好ましい実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインを、単独で又は本発明のＣＡＲとの関係において有用な任意の他の所望の細胞質ドメインとの組み合わせで含むように設計され得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分及び共刺激シグナル伝達領域を含むことができる。
【００６７】
本発明のＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列は、互いにランダムな又は特定の順序で連結され得る。
【００６８】
好ましい一実施形態では、細胞質ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインとＣＤ２８のシグナル伝達ドメインとを含むように設計される。別の一実施形態では、細胞質ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインと４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインとを含むように設計され、細胞質ＣＤ２８は、配列番号１５に記載された核酸配列及び配列番号１６に記載されたアミノ酸配列を含む。別の一実施形態では、本発明のＣＡＲにおける細胞質ドメインは、ＣＤ２８の一部とＣＤ３ゼータを含むように設計され、細胞質ＣＤ２８は、配列番号７に記載された核酸配列及び配列番号８に記載されたアミノ酸配列を含む。ＣＤ３ゼータの核酸配列は、配列番号９に記載されており、アミノ酸配列は、配列番号８に記載されている。
【００６９】
本発明によるＣＡＲの好ましい配向の１つは、共刺激ドメイン及び活性化ドメインと並行して抗原結合分子（ｓｃＦｖなど）を含むことが理解されるであろう。共刺激ドメインは、細胞外部分、膜貫通部分及び細胞内部分の１つ以上を含むことができる。複数の共刺激ドメインが並行して利用され得ることが更に理解されるであろう。
【００７０】
いくつかの実施形態では、抗原結合分子と、少なくとも１つの共刺激分子と、活性化ドメインとをコードする第１のポリヌクレオチドに操作可能に連結されたプロモータを含む核酸が提供される。
【００７１】
いくつかの実施形態では、核酸コンストラクトは、ウイルスベクター内に含有される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベクター及びワクシニアウイルスベクターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、核酸は、プラスミド内に含有される。
【００７２】
本発明は、キメラ抗原受容体をコードする単離ポリヌクレオチド及びポリヌクレオチドを含むベクターに更に関する。当技術分野で既知の任意のベクターが本発明に好適であり得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター（ｐＭＳＶＧ１など）、ＤＮＡベクター、マウス白血病ウイルスベクター、ＳＦＧベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター（ｐＧＡＲなど）又はこれらの任意の組み合わせである。ｐＧＡＲのベクターマップを図７に示す。ｐＧＡＲの配列は、以下の通りである。
【化１２】
2021520788.tif 000015
【化１３】
2021520788.tif 000016
【化１４】
2021520788.tif 000017
【化１５】
2021520788.tif 000018
【化１６】
2021520788.tif 000019
【００７３】
好適な追加の例示的ベクターとしては、例えば、ｐＢＡＢＥ−ｐｕｒｏ、ｐＢＡＢＥ−ｎｅｏ  ｌａｒｇｅＴｃＤＮＡ、ｐＢＡＢＥ−ｈｙｇｒｏ−ｈＴＥＲＴ、ｐＭＫＯ．１  ＧＦＰ、ＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ、ｐＭＳＣＶ  ＰＩＧ（Ｐｕｒｏ  ＩＲＥＳ  ＧＦＰ空プラスミド）、ｐＭＳＣＶ−ｌｏｘｐ−ｄｓＲｅｄ−ｌｏｘｐ−ｅＧＦＰ−Ｐｕｒｏ−ＷＰＲＥ、ＭＳＣＶ  ＩＲＥＳルシフェラーゼ、ｐＭＩＧ、ＭＤＨ１−ＰＧＫ−ＧＦＰ＿２．０、ＴｔＲＭＰＶＩＲ、ｐＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ｍＣｈｅｒｒｙ  ＦＰ、ｐＲｅｔｒｏＸ  ＧＦＰ  Ｔ２Ａ  Ｃｒｅ、ｐＲＸＴＮ、ｐＬｎｃＥＸＰ及びｐＬＸＩＮ−Ｌｕｃが挙げられる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、改変免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＮＫ細胞、ＴＣＲ発現細胞、樹状細胞又はＮＫ−Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、末梢血から得られるか又は調製される。いくつかの実施形態では、細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から得られるか又は調製される。いくつかの実施形態では、細胞は、骨髄から得られるか又は調製される。いくつかの実施形態では、細胞は、臍帯血から得られるか又は調製される。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、エレクトロポレーション、ソノポレーション、微粒子銃（例えば、遺伝子銃）、脂質形質移入、ポリマー形質移入、ナノ粒子又はポリプレックスからなる群から選択される方法を用いて、核酸ベクターによって形質移入又は形質導入される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、本出願の核酸を含む改変免疫細胞中で発現される。本出願のこれらのキメラ抗原受容体は、いくつかの実施形態では、（ｉ）抗原結合分子（ｓｃＦｖなど）と、（ｉｉ）膜貫通領域と、（ｉｉｉ）Ｔ細胞活性化分子又は領域とを含み得る。
【００７６】
抗原結合分子
抗原結合分子は、本発明の範囲内にある。
【００７７】
本明細書で使用する場合、「抗原結合分子」は、特定の標的抗原と結合する任意のタンパク質を意味する。本出願では、特定の標的抗原は、ＤＬＬ３タンパク質又はその断片である。抗原結合分子としては、抗体及び免疫機能性断片などのその結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。ペプチボディ（すなわちペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、腫瘍細胞上の抗原と結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患に関与する細胞上の抗原又はウイルス性若しくは細菌性抗原と結合する。特定の実施形態では、抗原結合分子は、ＤＬＬ３と結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ以上を含む、その断片の抗体である。更なる実施形態では、抗原結合分子は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【００７９】
抗原結合分子の用語「免疫機能性断片」（又は「断片」）は、完全長鎖中に存在するアミノ酸の少なくとも一部を欠いているが、なお抗原に特異的に結合することができる抗体の一部（その部分がどのように得られるか又は合成されるかに関わらず）を含む抗原結合分子の種である。そのような断片は、それが標的抗原に結合するという点で生物学的に活性であり、所与のエピトープへの結合に関してインタクトな抗体を含む他の抗原結合分子と競合し得る。いくつかの実施形態では、断片は、中和断片である。いくつかの実施形態では、断片は、ＤＬＬ３の活性を遮断又は低減することができる。一態様では、このような断片は、完全長軽鎖又は重鎖中に存在する少なくとも１つのＣＤＲを保持し、いくつかの実施形態では単一の重鎖及び／若しくは軽鎖又はその一部を含むであろう。これらの断片は、組み換えＤＮＡ技法によって生成することができるか、又はインタクトな抗体を含む、抗原結合分子の酵素的若しくは化学的な切断によって生成することができる。
【００８０】
免疫機能性の免疫グロブリン断片としては、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片（Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２など）、１つ以上のＣＤＲ、ダイアボディ（同一鎖上の２つのドメインを対合するには短すぎる短いペプチドリンカーを介して接続された軽鎖可変ドメインと同じポリペプチドにおける重鎖可変ドメイン）、ドメイン抗体及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。これらの断片は、ヒト、マウス、ラット、ラクダ又はウサギが挙げられるが、これらに限定されない任意の哺乳類供給源から誘導され得る。当業者によって理解されるように、抗原結合分子は、非タンパク質成分を含むことができる。
【００８１】
例えば、本明細書に記載される配列のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも７０〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、９５〜９７％、９７〜９９％又は９９％超の同一性を有する可変軽鎖及び／又は可変重鎖などの抗原結合分子の変異体も本発明の範囲内にある。いくつかの場合、そのような分子は、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含み、他の場合、変異形態は、２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖（又はその下位部分）を含む。当業者であれば、よく知られる手法を使用して、本明細書に記載される抗原結合分子の好適な変異体を決定することができるであろう。特定の実施形態では、当業者は、活性に重要でないと考えられる領域を標的とすることにより、活性を損なうことなく変更が可能な分子の好適な領域を同定し得る。
【００８２】
特定の実施形態では、抗原結合分子のポリペプチド構造は、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣体」と称される場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称される場合がある）及びそれぞれその断片を含むが、これらに限定されない抗体に基づく。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、アビマーを含むか又はアビマーからなる。
【００８３】
いくつかの実施形態では、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子は、単独で投与される。他の実施形態では、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子は、ＣＡＲ、ＴＣＲ又は他の免疫細胞の一部として投与される。このような免疫細胞では、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子は、同じプロモータ領域又は別々のプロモータの制御下にあり得る。特定の実施形態では、ＤＬＬ３に対するタンパク質物質及び／又は抗原結合分子をコードする遺伝子は、別々のベクターにあり得る。
【００８４】
本発明は、薬学的に許容可能な希釈剤、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存料及び／又は補助剤と共に、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子を含む医薬組成物を更に提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は、ＤＬＬ３に対する２つ以上の異なる抗原結合分子を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子が２つ以上のエピトープを結合する、ＤＬＬ３に対する２つ以上の抗原結合分子を含む。いくつかの実施形態では、様々な抗原結合分子は、ＤＬＬ３への結合に関して互いに競合しない。
【００８５】
他の実施形態では、医薬組成物は、非経口送達、吸入又は経口などの消化管を介した送達のために選択され得る。こうした薬学的に許容可能な組成物の調製は、当業者の能力の範囲内である。特定の実施形態では、緩衝剤は、組成物を生理学的ｐＨ又は僅かに低いｐＨ、典型的には約５〜約８のｐＨ範囲内に維持するために使用される。特定の実施形態では、非経口投与が検討される場合、治療組成物は、追加の治療剤の有無に関わらず、薬学的に許容可能なビヒクル中でＤＬＬ３に対する所望の抗原結合分子を含む、発熱物質を含まない、非経口で許容可能な水溶液の形態であり得る。特定の実施形態では、非経口注入のためのビヒクルは、少なくとも１つの追加の治療剤の有無に関わらず、ＤＬＬ３に対する抗原結合分子が適正に保存された無菌の等張溶液として配合されている無菌蒸留水である。特定の実施形態では、調製は、所望の分子と、その後、蓄積注射を介して送達され得る生成物の制御放出又は持続放出を提供することができるポリマー化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸など）、ビーズ又はリポソームとの配合を伴い得る。特定の実施形態では、所望の分子を導入するために、埋め込み可能な薬剤送達デバイスが使用され得る。
【００８６】
いくつかの実施形態では、抗原結合分子が診断ツール又は検証ツールとして使用される。抗原結合分子を用いて、試料及び／又は対象中に存在するＤＬＬ３の量をアッセイすることができる。いくつかの実施形態では、診断用抗原結合分子は、中和性ではない。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されている抗原結合分子は、ＤＬＬ３レベルの変化に関連する疾患又は障害をスクリーニング／診断するために、哺乳類の組織又は細胞中でＤＬＬ３を検出するためのアッセイキット及び／又は方法で使用又は提供される。キットは、存在する場合にはＤＬＬ３との抗原結合分子の結合及び任意選択的にＤＬＬ３タンパク質レベルを示す手段と共に、ＤＬＬ３を結合する抗原結合分子を含むことができる。
【００８７】
抗原結合分子は、以下の定義及び記載を考慮することで更に理解されるであろう。
【００８８】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖断片を含む。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合及びＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって一体にまとめられる。
【００８９】
「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖のＣＨ１及び可変領域とを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂ’断片」は、１つの軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメイン並びに加えてＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域も含む１つの重鎖の一部とを含み、その結果、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成することでＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つの軽鎖と、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の定常領域の一部を含む２つの重鎖とを含み、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖間に形成される。そのため、Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合によって共にまとめられた２つのＦａｂ’断片からなる。
【００９０】
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００９１】
「単鎖可変断片」（「ｓｃＦｖ」、「単鎖抗体」とも称される）は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とが可動性リンカーによって連結されることで、抗原結合領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成するＦｖ分子を指す。その開示全体が参照により組み込まれる国際公開第８８／０１６４９号パンフレット並びに米国特許第４，９４６，７７８号明細書及び同第５，２６０，２０３号明細書を参照されたい。
【００９２】
「二価の抗原結合分子」は、２つの抗原結合部位を含む。いくつかの場合、２つの結合部位は、同一の抗原特異性を有する。二価の抗原結合分子は、二重特異性であり得る。「多特異性抗原結合分子」は、２つ以上の抗原又はエピトープを標的とするものである。「二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）」、「二重特異性（ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」又は「二重特異性（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）」の抗原結合分子は、それぞれ２つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッドの抗原結合分子又は抗体である。二重特異性抗原結合分子の２つの結合部位は、同一の又は異なるタンパク質標的上に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。
【００９３】
抗原結合分子は、解離定数（Ｋｄ）が約１×１０−７Ｍである場合、その標的抗原と「特異的に結合する」と言われる。抗原結合分子は、Ｋｄが１〜５×１０−９Ｍである場合には「高親和性」で、且つＫｄが１〜５×１０−１０Ｍである場合には「非常に高い親和性」で抗原と特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は、１０−９ＭのＫｄを有する。一実施形態では、オフレートは、＜１×１０−５である。他の実施形態では、抗原結合分子は、約１０Ｍ−７〜１０−１３ＭのＫｄでヒトＤＬＬ３に結合し、更に別の実施形態では、抗原結合分子は、Ｋｄ１．０〜５×１０−１０で結合する。
【００９４】
抗原結合分子は、それが第２の標的に結合するよりも強固に１つの標的に結合する場合、「選択的」であると言われる。
【００９５】
用語「抗体」は、任意のアイソタイプのインタクトな免疫グロブリン又は標的抗原への特異的結合についてインタクトな抗体と競合することができるその断片を指し、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体及び二重特異性抗体を含む。「抗体」は、本明細書で定義される抗原結合分子の一種である。インタクトな抗体は、一般に少なくとも２つの完全長の重鎖と２つの完全長の軽鎖とを含むが、場合により重鎖のみを含むことができるラクダに天然に存在する抗体などのより少ない鎖を含むことができる。抗体は、単一の供給源のみに由来する場合があるか、又はキメラ、すなわち以下に更に記載されるように、その抗体の異なる部分が２つの異なる抗体に由来し得るものである場合がある。抗原結合分子、抗体又は結合断片は、ハイブリドーマ中において、組み換えＤＮＡ手法又はインタクトな抗体の酵素的若しくは化学的な切断により生成され得る。別段の指摘がない限り、用語「抗体」としては、２つの完全長重鎖と２つの完全長軽鎖とを含む抗体に加えて、その例が以下に記載されるその誘導体、変異体、断片及び突然変異タンパク質が挙げられる。更に、明示的に除外されない限り、抗体としては、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣体」と称される場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称される場合がある）及びこれらの断片がそれぞれ挙げられる。
【００９６】
可変領域は、典型的には、３つの超可変領域（すなわち「ＣＤＲ」）によって連結された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。各対の２つの鎖由来のＣＤＲは、典型的には、特定のエピトープへの結合を可能にし得るフレームワーク領域によって整列されている。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖可変領域の両方は、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。慣例により、重鎖におけるＣＤＲ領域は、典型的には、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される。軽鎖におけるＣＤＲ領域は、典型的には、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、典型的には、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９８７  ａｎｄ  １９９１））又はＣｈｏｔｈｉａ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７８−８８３（１９８９））の定義に従う。Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａのみならず、ＡｂＭの定義も含む種々の解析方法を使用して、ＣＤＲ領域を特定するか又は見積もることができる。
【００９７】
用語「軽鎖」は、完全長軽鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン（ＶＬ）及び定常領域ドメイン（ＣＬ）を含む。軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にある。軽鎖には、κ鎖及びλ鎖が含まれる。
【００９８】
用語「重鎖」は、完全長重鎖及び結合特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長重鎖は、可変領域ドメイン（ＶＨ）並びに３つの定常領域ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を含む。ＶＨドメインは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、ＣＨドメインは、カルボキシル末端にあり、ＣＨ３は、ポリペプチドのカルボキシ末端に最も近い。重鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブタイプを含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２サブタイプを含む）、ＩｇＭ及びＩｇＥを含む任意のアイソタイプからなり得る。
【００９９】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の一部を指し、典型的には重鎖中にほぼ１２０〜１３０のアミノ末端アミノ酸を含み、軽鎖中に約１００〜１１０のアミノ末端アミノ酸を含む。抗体の可変領域は、典型的には、その標的に対する特定の抗体の特異性を決定する。
【０１００】
可変性は、抗体の可変ドメイン全体に均一に分布しているのではなく、重鎖及び軽鎖可変領域の各々のサブドメインに集中している。これらのサブドメインは、「超可変領域」又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる。可変ドメインのより保存された（すなわち非超可変の）部分は、「フレームワーク」領域（ＦＲＭ又はＦＲ）と呼ばれ、抗原結合表面を形成する三次元空間内における６つのＣＤＲのための足場を提供する。天然に存在する重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、大部分がβシート配置をとる４つのＦＲＭ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）をそれぞれ含み、これらは、ループ接続を形成し、場合によりβシート構造の一部を形成する３つの超可変領域によって接続される。各鎖の超可変領域は、ＦＲＭによって近接して一体で保持されており、他の鎖の超可変領域と共に抗原結合部位の形成に寄与する（前掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。
【０１０１】
用語「ＣＤＲ」及びその複数形「ＣＤＲｓ」は、そのうちの３つが軽鎖可変領域の結合特性を構成し（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３）、３つが重鎖可変領域の結合特性を構成する（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）相補性決定領域を指す。ＣＤＲは、抗体と抗原との特異的相互作用を担う残基の大部分を含み、したがって抗体分子の機能的活性に寄与する。ＣＤＲは、抗原特異性の主要な決定基である。
【０１０２】
ＣＤＲの境界及び長さの厳密な定義は、各種の分類及び付番方式に従う。したがって、ＣＤＲは、本明細書に記載される付番方式を含む、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、接触又は任意の他の境界定義によって表わされ得る。境界が異なっていても、これらの方式の各々は、可変配列内のいわゆる「超可変領域」を構成する部分においてある程度の重複を有する。したがって、これらの方式によるＣＤＲの定義は、長さ及び隣接するフレームワーク領域に関する境界領域が相違する場合がある。例えば、Ｋａｂａｔ（異種間の配列可変性に基づく手法）、Ｃｈｏｔｈｉａ（抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づく手法）及び／又はＭａｃＣａｌｌｕｍを参照されたい（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９８７，１９６：９０１−９１７；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９９６，２６２：７３２）。抗原結合部位の特性決定のための更に別の基準は、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられるＡｂＭ定義である。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇを参照されたい。２つの残基同定技法が、重複するが、同一ではない領域を定義する限り、それらを組み合わせてハイブリッドＣＤＲを定義することができる。しかしながら、いわゆるＫａｂａｔ方式に従う付番が好ましい。
【０１０３】
典型的には、ＣＤＲは、カノニカル構造として分類することのできるループ構造を形成する。用語「カノニカル構造」は、抗原結合（ＣＤＲ）ループによって取られる主鎖コンホメーションを指す。比較構造研究から、６つの抗原結合ループの５つは、限られたレパートリーのコンホメーションのみが利用可能であることが分かっている。各カノニカル構造は、ポリペプチド骨格のねじれ角によって特性決定することができる。したがって、抗体間の対応するループは、ループの大部分において、高いアミノ酸配列の可変性が見られるにも関わらず、非常に類似した三次元構造を有し得る（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９８７，１９６：９０１；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８９，３４２：８７７；Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，１９９６，２６３：８００）。更に、取られるループ構造と、その周囲のアミノ酸配列との間には、関連性がある。特定のカノニカルクラスのコンホメーションは、ループの長さにより、且つそのループ内及び保存されたフレームワーク内（すなわちループ外）の重要な位置に存在するアミノ酸残基により決定される。したがって、特定のカノニカルクラスへの割り当ては、これらの重要なアミノ酸残基の存在に基づいて行われ得る。
【０１０４】
用語「カノニカル構造」は、例えば、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）により分類される通り、抗体の線状配列に関する検討も含み得る。Ｋａｂａｔの付番スキーム（方式）は、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を一貫した様式で付番するために広く採用されている基準であり、本明細書の他の箇所でも言及されるように本発明で適用される好ましいスキームである。更なる構造の検討が抗体のカノニカル構造を決定するために使用される場合もある。例えば、Ｋａｂａｔの付番法では十分に反映されない相違をＣｈｏｔｈｉａらの付番方式によって記載することができ、且つ／又は他の技術、例えば結晶学及び二次元若しくは三次元コンピュータモデリングによって明らかにすることができる。したがって、所与の抗体配列は、とりわけ、（例えば、種々のカノニカル構造をライブラリに含めるという要求に基づいて）適切なシャーシ配列の同定が可能であるカノニカルクラスに分類され得る。抗体のアミノ酸配列のＫａｂａｔ付番法及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（前掲）に記載される構造の検討並びに抗体構造のカノニカルな側面の解釈に対するそれらの意義については、文献に記載されている。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置は、当技術分野でよく知られている。抗体構造の概説については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８を参照されたい。
【０１０５】
軽鎖のＣＤＲ３及び特に重鎖のＣＤＲ３は、軽鎖及び重鎖可変領域内での抗原結合において最も重要な決定基となる場合がある。いくつかの抗体コンストラクトでは、重鎖ＣＤＲ３が抗原と抗体との間の主要な接触領域になると思われる。ＣＤＲ３のみを変化させるインビトロ選択スキームを使用して、抗体の結合特性を変化させることができるか、又はいずれの残基が抗原の結合に寄与するかを決定することができる。したがって、ＣＤＲ３は、典型的には抗体結合部位内における分子多様性の最大の供給源である。例えば、Ｈ３は、２個のアミノ酸残基ほど短いもの又は２６個超のアミノ酸であり得る。
【０１０６】
用語「中和」は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的作用を妨げるか又は低下させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ又は抗体をそれぞれ指す。これは、例えば、リガンド上の結合部位を直接遮断することにより、又はリガンドに結合し、間接的手段によってリガンドの結合する能力を変化させること（リガンドにおける構造的又はエネルギー的変化など）により行うことができる。いくつかの実施形態では、この用語は、それが結合するタンパク質が生物学的機能を実施することを妨げる抗原結合分子を意味することもできる。
【０１０７】
用語「標的」又は「抗原」は、抗原結合分子によって結合され得る分子又は分子の一部を指す。特定の実施形態では、標的は、１つ以上のエピトープを有し得る。
【０１０８】
用語「競合する」は、同じエピトープに関して競合する抗原結合分子との関連で用いられる場合、試験されている抗原結合分子（例えば、抗体又はその免疫機能性断片）が、抗原に対する参照抗原結合分子の特異的な結合を妨げるか又は阻害する（例えば、減らす）アッセイによって判定される、抗原結合分子間の競合を意味する。多くの種類の競合結合アッセイ、例えば、固相直接又は間接放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，９：２４２−２５３）；固相直接ビオチン・アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；１−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５）；固相直接ビオチン・アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１７６：５４６−５５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）を用いて、一方の抗原結合分子がもう一方の抗原結合分子と競合するかどうかを判定することができる。用語「エピトープ」には、本発明のｓｃＦｖ、抗体又は免疫細胞などの抗原結合分子によって結合され得る任意の決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的とする抗原結合分子によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗原結合分子と直接接触する特定のアミノ酸を含む。
【０１０９】
本明細書で使用する場合、用語「標識」又は「標識される」は、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組み込みによるか、又は印を付けられたアビジン（例えば、光学法又は比色分析法によって検出することができる蛍光マーカー又は酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチン部分のポリペプチドの連結による、検出可能なマーカーの組み込みを指す。特定の実施形態では、標識又はマーカーは、治療のためのものでもあり得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野で既知であり、また使用され得る。
【０１１０】
本発明によれば、オン・オフタイプ又は他のタイプの制御スイッチ技法が本明細書に組み込まれ得る。これらの技法は、二量体化ドメイン及びそのようなドメイン二量体化の任意の活性化剤の使用を採用し得る。これらの技法としては、例えば、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる、特定の細胞中でＦＫＢＰ／ラパログ二量体化系を用いるＷｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４  ３５０（６２５８）によって説明されるものが挙げられる。更なる二量体化技術は、例えば、その内容全体が参照により同様に本明細書に組み込まれるＦｅｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１０，１１０，３３１５〜３３３６並びに米国特許第５，８３０，４６２号明細書、同第５，８３４，２６６号明細書、同第５，８６９，３３７号明細書及び同第６，１６５，７８７号明細書で説明される。追加の二量体化ペアとしては、シクロスポリンＡ／シクロフィリン、受容体、エストロゲン／エストロゲン受容体（任意選択的にタモキシフェンを用いる）、グルココルチコイド／グルココルチコイド受容体、テトラサイクリン／テトラサイクリン受容体、ビタミンＤ／ビタミンＤ受容体が挙げられ得る。二量体化技術の更なる例は、例えば、その内容全体が参照により本明細書に更に組み込まれる国際公開第２０１４／１２７２６１号パンフレット、同第２０１５／０９０２２９号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０２８６９８７号明細書、同第２０１５／０２６６９７３号明細書、同第２０１６／００４６７００号明細書、米国特許第８，４８６，６９３号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０１７１６４９号明細書及び同第２０１２／０１３００７６号明細書で見出され得る。
【０１１１】
治療方法
養子免疫療法を用いて、ネイティブのＴ細胞を（ｉ）患者から取り出し、（ｉｉ）少なくとも１つの腫瘍抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変し、（ｉｉｉ）エクスビボで改変Ｔ細胞の大きい集団に増殖させ、且つ（ｉｖ）患者に再導入することができる。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号明細書及び同第６，３１９，４９４号明細書、Ｅｓｈｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、上記）；Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（上記）；  Ｆｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（上記）を参照されたい。改変Ｔ細胞が患者に再導入された後、これらは、腫瘍抗原を発現している細胞に対する免疫応答を媒介する。例えば、Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ  １８８，Ｎｏ．４，１９９８（６１９−６２６）を参照されたい。この免疫応答としては、Ｔ細胞によるＩＬ−２及び他のサイトカインの分泌、腫瘍抗原を認識するＴ細胞のクローン増殖及びＴ細胞が媒介する特異的な標的陽性細胞の殺傷が挙げられる。Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．１６７：６１２３−６１３１（２００１）を参照されたい。
【０１１２】
したがって、いくつかの態様では、本発明は、患者における望ましくない及び／又は上昇したＤＬＬ３レベルに関連する状態を治療又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書で開示される有効量の少なくとも１つの単離抗原結合分子であるＣＡＲ又はＴＣＲを投与することを含む方法を含む。
【０１１３】
がんを含む疾患又は障害を治療するための方法が提供される。いくつかの実施形態では、本発明は、本出願の有効量の改変免疫細胞を対象に投与することを含む、対象中でＴ細胞が媒介する免疫応答を生成することに関する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞が媒介する免疫応答は、標的細胞に向けられる。いくつかの実施形態では、改変免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。いくつかの態様では、本発明は、悪性腫瘍を治療又は予防する方法を含み、前記方法は、それを必要とする対象に、本明細書で説明される有効量の少なくとも１つの単離抗原結合分子を投与することを含む。いくつかの態様では、本発明は、悪性腫瘍を治療又は予防するための方法を含み、前記方法は、それを必要とする対象に、有効量の少なくとも１つの免疫細胞を投与することを含み、ここで、免疫細胞は、本明細書に記載される少なくとも１つのキメラ抗原受容体、Ｔ細胞受容体及び／又は単離抗原結合分子を含む。
【０１１４】
いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載される少なくとも１つの抗原結合分子と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、追加の活性剤を更に含む。
【０１１５】
本発明の抗原結合分子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、免疫細胞などは、副腎、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、子宮頸部、子宮、食道、結腸直腸、前立腺（例えば、前立腺腺癌）、膵臓、肺（小細胞及び非小細胞の両方）、甲状腺、癌腫、肉腫、グリア芽腫、頭頸部腫瘍、大細胞神経内分泌癌（ＬＣＮＥＣ）、甲状腺髄様がん、グリア芽腫、神経内分泌前立腺がん（ＮＥＰＣ）、高悪性度胃腸膵がん（ＧＥＰ）及び悪性黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない骨髄性疾患を治療するのに用いられ得る。
【０１１６】
ＣＡＲ＋／ＣＡＲ−Ｔ＋／ＴＣＲ＋細胞の標的用量は、好ましくは、１×１０６〜２×１０１０個の細胞／ｋｇ、より好ましくは２×１０６個の細胞／ｋｇの範囲であり得ることが理解されるであろう。特定の対象には、この範囲を上回る及び下回る用量が適当である場合があり、適当な用量のレベルは、必要に応じて医療サービス提供者によって決定され得ることが理解されるであろう。更に、本発明に従って細胞の複数回用量を提供することができる。
【０１１７】
対象における腫瘍の寸法を低減する方法であって、対象に本発明の改変細胞を投与することを含む方法も提供され、ここで、細胞は、キメラ抗原受容体、Ｔ細胞受容体を含むか、又は抗原結合分子を含むＴ細胞受容体ベースのキメラ抗原受容体は、腫瘍上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、対象は、固形腫瘍又はリンパ腫若しくは白血病などの血液悪性腫瘍を有する。いくつかの実施形態では、改変細胞は、腫瘍床に送達される。いくつかの実施形態では、がんは、対象の骨髄中に存在する。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、改変細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変細胞は、同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、改変細胞は、異種Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本出願の改変細胞は、インビボで形質移入又は形質導入される。他の実施形態では、改変細胞は、エクスビボで形質移入又は形質導入される。
【０１１９】
方法は、１つ以上の化学療法剤を投与することを更に含み得る。特定の実施形態では、化学療法剤は、リンパ球枯渇（前条件付け）化学療法剤である。有益な前条件付け治療計画は、相関関係にある有益な生体マーカーと共に、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／２６２，１４３号明細書及び同第６２／１６７，７５０号明細書に記載されている。これらは、例えば、患者に特定の有益用量のシクロホスファミド（２００ｍｇ／ｍ２／日〜２０００ｍｇ／ｍ２／日）及び特定用量のフルダラビン（２０ｍｇ／ｍ２／日〜９００ｍｇ／ｍ２／日）を投与することを含む、Ｔ細胞療法を必要とする患者を条件付けする方法を説明している。好ましい投薬計画は、治療有効量の改変Ｔ細胞を患者に投与する前に約５００ｍｇ／ｍ２／日のシクロホスファミド及び約６０ｍｇ／ｍ２／日のフルダラビンを３日間患者に毎日投与することを含む、患者を治療することを伴う。
【０１２０】
他の実施形態では、抗原結合分子、形質導入した（又は他の場合には改変した）細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲなど）及び化学療法剤をそれぞれ有効量で投与して、対象における疾患又は状態を治療する。
【０１２１】
特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物を任意の数の化学療法剤と併用して投与し得る。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチルオロメラミンレジュメを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；クロランブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソウレア；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、プロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；サイクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メソトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロミチン（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンディフティトックス）などのレチノイン酸誘導体；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン；並びに例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体などの腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤もこの定義に含められる。必要に応じて、ＣＨＯＰ、すなわちシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））及びプレドニゾンが挙げられるが、これに限定されない化学療法剤の組み合わせも投与される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、改変細胞又は核酸の投与と同時に又はそれから１週間以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、改変細胞又は核酸の投与後から１〜４週間又は１週間〜１ヵ月、１週間〜２ヵ月、１週間〜３ヵ月、１週間〜６ヵ月、１週間〜９ヵ月若しくは１週間〜１２ヵ月で投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸の投与から少なくとも１ヵ月前に投与される。いくつかの実施形態では、方法は、２つ以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
【０１２３】
本明細書に記載されている組成物と併せて様々な追加の治療剤が使用され得る。例えば、潜在的に有用な追加の治療剤としては、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ及びアテゾリズマブなどのＰＤ−１阻害剤が挙げられる。
【０１２４】
本発明と併用して使用するのに好適な追加の治療剤としては、イブルチニブ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（登録商標））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、カツマキソマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アキシチニブ、マシチニブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トセラニブ、レスタウルチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、セマクサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、トセラニブ、バンデタニブ、エントレクチニブ、カボザンチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ、ボスチニブ、レスタウルチニブ、ルキソリチニブ、パクリチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、アフリベルセプト、アジポチド、デニロイキンディフティトックス、エベロリムス及びテムシロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤、ソニデジブ及びビスモデジブなどのヘッジホッグ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤（パルボシクリブ）などのＣＤＫ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
追加の実施形態では、ＣＡＲ含有免疫を含む組成物を抗炎症剤と共に投与することができる。抗炎症剤又は抗炎症薬としては、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、ハイドロコルチゾン酢酸塩、ハイドロコルチゾン、ハイドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬物、シクロホスファミド及びミコフェノレートを含む非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なＮＳＡＩＤとしては、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤及びシアル酸塩が挙げられる。例示的な鎮痛剤としては、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポルキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとしては、コルチゾン、デキサメタゾン、ハイドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物反応調節剤としては、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）に向けられた分子、ＴＮＦ拮抗剤（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））などのサイトカイン阻害剤、ケモカイン阻害剤並びに接着分子阻害剤が挙げられる。生物反応調節剤としては、モノクローナル抗体のみならず、分子の組み換え形態が挙げられる。例示的なＤＭＡＲＤとしては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、ゴールド（経口（アウラノフィン）及び筋肉内）及びミノサイクリンが挙げられる。
【０１２６】
特定の実施形態では、本明細書で説明される組成物は、サイトカインと併用して投与される。本明細書で使用するとき、「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を指すことを意味する。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインに含められるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミュラー管抑制物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータなどの神経増殖因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポイエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンアルファ、ベータ及びガンマなどのインターフェロン；マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；並びに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−アルファ又はＴＮＦ−ベータなどの腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で使用するとき、用語サイトカインは、天然供給源由来タンパク質、組み換え細胞培養物由来タンパク質及びネイティブ配列のサイトカインの生物学的に活性な均等物を含む。
【０１２７】
いくつかの態様では、本発明は、１００ｐＭより小さいＫｄでＤＬＬ３に結合する抗原結合分子を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、１０ｐＭより小さいＫｄで結合する。他の実施形態では、抗原結合分子は、５ｐＭ未満のＫｄで結合する。
【０１２８】
製造方法
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、抗原結合分子、免疫細胞、組成物などを製造するために様々な既知の技法を利用することができる。
【０１２９】
本明細書に記載される免疫細胞のインビトロ操作又は遺伝子組み換え前に対象から細胞を入手し得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多くの供給源から入手することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に既知の任意の数の技法を用いて、対象から採取した血液の単位から入手することができる。細胞は、好ましくは、アフェレーシスによって個人の循環血液から入手され得る。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞を含むリンパ球、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含有する。特定の実施形態では、アフェレーシスによって採取された細胞は、洗浄して血漿分画を取り除き、その後の処理のために適当な緩衝液又は培地に入れられ得る。細胞は、ＰＢＳで洗浄され得る。理解されるように、半自動化フロースルー遠心機、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理機、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）などを使用することなどによって洗浄工程が用いられ得る。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液又は緩衝液を含むか若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁され得る。特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分を取り除き得る。
【０１３０】
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離を用いて単球を枯渇させることによってＰＢＭＣから単離される。ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団を、当技術分野で既知の正又は負の選択技法によって更に単離することができる。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負に選択される細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせによって達成することができる。本明細書で使用するための１つの方法は、負に選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択である。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリー及び細胞選別は、本発明で使用するための対象の細胞集団を単離するためにも使用され得る。
【０１３１】
ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を用いた免疫細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲなど）による遺伝子組み換えに直接使用され得る。特定の実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球を更に単離することができ、細胞傷害性Ｔリンパ球及びヘルパーＴリンパ球の両方を遺伝子組み換え及び／又は増殖前又は後のいずれかでナイーブ、メモリー及びエフェクターのＴ細胞亜集団に選別することができる。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞のナイーブ、セントラルメモリー及びエフェクターの型のそれぞれに関連する細胞表面抗原を特定することにより、ＣＤ８＋細胞は、これらの細胞に更に選別される。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３及びＣＤ１２７を含み、グランザイムＢに対して陰性である。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、亜集団に更に選別される。例えば、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を特定することにより、ナイーブ、セントラルメモリー及びエフェクター細胞に選別することができる。
【０１３３】
Ｔ細胞などの免疫細胞は、既知の方法を用いて単離した後で遺伝子組み換えすることができるか、又は遺伝子組み換え前にインビトロで免疫細胞を活性化又は増殖（又は前駆細胞の場合には分化）させることができる。別の実施形態では、Ｔ細胞などの免疫細胞を、本明細書に記載されているキメラ抗原受容体によって遺伝子組み換えし（例えば、ＣＡＲをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターで形質導入し）、続いてインビトロで活性化及び／又は増殖させる。Ｔ細胞を活性化及び増殖させる方法は、当技術分野で既知であり、これらは、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，９０５，８７４号明細書、同第６，８６７，０４１号明細書、同第６，７９７，５１４号明細書及び国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されている。一般に、こうした方法としては、ＩＬ−２などの適切なサイトカインを含む培養培地中において、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、ビーズ又は他の表面に概ね付着させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体などの刺激剤及び共刺激剤とを接触させることが挙げられる。同じビーズに付着させた抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。１つの例は、ヒトＴ細胞の生理学的活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化剤／刺激剤システムであるＤｙｎａｂｅａｄｓ（商標）システムである。
【０１３４】
他の実施形態では、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０４０，１７７号明細書及び同第５，８２７，６４２号明細書並びに国際公開第２０１２１２９５１４号パンフレットに記載されるものなどの方法を使用し、フィーダー細胞並びに適切な抗体及びサイトカインによってＴ細胞は、活性化及び刺激されて増殖し得る。
【０１３５】
本発明のコンストラクト及び改変免疫細胞を製造する特定の方法は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第１５／１４５２０号明細書に記載されている。コンストラクト及び細胞を製造する追加の方法は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／２４４０３６号明細書に見出すことができる。
【０１３６】
ＰＢＭＣは、ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞などの他の細胞傷害性リンパ球を更に含み得ることが理解されるであろう。本明細書で開示されるキメラ受容体のコード配列を運ぶ発現ベクターをヒトドナーのＴ細胞、ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞の集団に導入することができる。発現ベクターを運ぶ成功裏に形質導入されたＴ細胞は、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離するためにフローサイトメトリーを用いて選別し、続いて本明細書の他の箇所に記載される当技術分野で既知の抗ＣＤ３抗体及びＩＬ−２又は他の方法を用いた細胞活性化に加えて、これらのＣＡＲ発現Ｔ細胞の数を増やすために更に繁殖させることができる。ＣＡＲ発現Ｔ細胞を、ヒト対象において使用するために保存及び／又は調製するために凍結保存するために、標準の手順が用いられる。一実施形態では、Ｔ細胞のインビトロ形質導入、培養及び／又は増殖は、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ）及びウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）などの非ヒト動物由来生成物の不在下で実施される。
【０１３７】
ポリヌクレオチドのクローニングの場合、ベクターを宿主細胞（単離された宿主細胞）に導入してベクター自体の複製を可能にし、それによってその中に含有されるポリヌクレオチドのコピーを増幅させることができる。クローニングベクターは、複製開始点、プロモータ配列、転写開始配列、エンハンサ配列及び選択可能なマーカーが一般的に挙げられるが、これらに限定されない配列成分を含有し得る。これらの要素は、当業者により必要に応じて選択され得る。例えば、宿主細胞におけるベクターの自律的複製を促進するために複製開始点を選択し得る。
【０１３８】
特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるベクターを含有する単離された宿主細胞を提供する。ベクターを含有する宿主細胞は、ベクターに含有されるポリヌクレオチドの発現又はクローニングに有用であり得る。好適な宿主細胞としては、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞又は哺乳類細胞などの高等真核細胞を挙げることができるが、これらに限定されない。この目的のための好適な原核細胞としては、グラム陰性又はグラム陽性微生物などの真正細菌、例えば腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｈａｃｅａｅ）、例えばエシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えばサルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えばセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）並びにバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）、例えばＢ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びＢ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）並びにストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３９】
ベクターは、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介送達、リン酸カルシウム沈殿法、カチオン性脂質媒介送達、リポソーム媒介形質移入、エレクトロポレーション、微粒子銃、受容体媒介遺伝子送達、ポリリシン、ヒストン、キトサン及びペプチド媒介送達が挙げられるが、これらに限定されない当技術分野で既知の任意の好適な方法を用いて、宿主細胞に導入することができる。対象とするベクターを発現させるための、細胞の形質移入及び形質転換のための標準方法は、当技術分野で周知である。更なる実施形態では、免疫エフェクター細胞のドナー集団を遺伝子組み換えするのに様々な発現ベクターの混合物を使用することができ、ここで、各ベクターは、本明細書で開示されるように異なるＣＡＲをコードする。得られる形質導入された免疫エフェクター細胞は、改変細胞の混合集団を形成し、改変細胞の一部は、２つ以上の異なるＣＡＲを発現する。
【０１４０】
一実施形態では、本発明は、ＤＬＬ３タンパク質を標的とするＣＡＲ又はＴＣＲを発現する遺伝子改変細胞を保存するための方法を提供する。これは、解凍時に細胞が生存可能なままであるように免疫細胞を凍結保存することを伴う。ＣＡＲを発現する免疫細胞の画分を、当技術分野で既知の方法によって凍結保存し、悪性腫瘍を患う患者の将来の治療のための、こうした細胞の永続的な供給源を提供することができる。必要に応じて、凍結保存した形質転換された免疫細胞を解凍し、成長させ、更に多くのこうした細胞に増殖させることができる。
【０１４１】
本明細書で使用するとき、「凍結保存する」とは、（典型的には）７７ケルビン又は−１９６℃（液体窒素の沸点）などの氷点下温度に冷却することによる細胞の保存を指す。氷点下温度では、低温での凍結又は室温への加温による損傷から保存された細胞を保護するために凍結保護剤を用いることが多い。凍結保護剤及び最適な冷却速度により、細胞損傷に対する保護が可能である。本発明に従って使用できる凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ＆Ｂｉｓｈｏｐ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９５９）；１８３：１３９４−１３９５；Ａｓｈｗｏｏｄ−Ｓｍｉｔｈ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９６１）；１９０：１２０４−１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリジン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９６０）；８５：５７６）及びポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ＆Ｒａｖｄｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，（１９６２）；１９６：４８）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい冷却速度は、１℃〜３℃／分である。
【０１４２】
用語「実質的に純粋な」は、所与の成分が高濃度で存在することを示すために用いられる。成分は、望ましくは、組成物中に存在する主要成分である。好ましくは、これは、３０％超、５０％超、７５％超、９０％超又は更に９５％超の濃度で存在し、前記濃度は、検討中の全組成物に対する乾燥重量／乾燥重量基準で決定される。非常に高い濃度（例えば、９０％超、９５％超又は９９％超の濃度）では、その成分は、「純粋形態」であると見なすことができる。本発明の生物学的に活性な物質（ポリペプチド、核酸分子、抗原結合分子、部分を含む）は、他の場合には物質が結合される場合のある１つ以上の不純物を実質的に含まない形態で提供され得る。組成物が所与の不純物を実質的に含まない場合、不純物は、低濃度（例えば、上記で設定した乾燥重量／乾燥重量基準で１０％未満、５％未満又は１％未満のレベル）となる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、細胞は、最初にこれらの培養培地からこれらを採取し、続いて洗浄し、治療有効量での投与に好適な培地及び容器システム（「薬学的に許容可能な」キャリア）中で細胞を濃縮することによって配合される。好適な注入媒体は、任意の等張媒体配合物、典型的には生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ（商標）Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）又はＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ（商標）Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）であり得るが、５％デキストロース水溶液又は乳酸リンゲル液を利用することもできる。注入媒体にヒト血清アルブミンを補充し得る。
【０１４４】
組成物における細胞の所望の治療量は、一般的には少なくとも２個の細胞（例えば、少なくとも１個のＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞及び少なくとも１個のＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞のサブセット）であるか、又はより典型的には１０２個超の細胞及び最大１０６個、最大１０８若しくは１０９個までの細胞であり、また１０１０個超の細胞であり得る。細胞の数は、組成物が意図される所望の用途及びそれに含まれる細胞の種類に依存する。所望の細胞の密度は、典型的には１０６個超の細胞／ｍｌであり、一般には１０７個超の細胞／ｍｌ、一般には１０８個以上の細胞／ｍｌである。免疫細胞の臨床的に関連する数は、累積すると１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１又は１０１２個の細胞と等しいか又はこれを上回る複数回の注入に分割することができる。本発明のいくつかの態様では、特に注入される細胞の全てが特定の標的抗原（ＤＬＬ３）に再指向されるため、１０６／キログラム（患者当たり１０６〜１０１１）の範囲でのより少ない数の細胞が投与され得る。ＣＡＲ治療は、これらの範囲内での投与量で複数回投与され得る。細胞は、治療を受ける患者に対して自己、同種異系又は異種であり得る。
【０１４５】
本発明のＣＡＲ発現細胞集団は、単独で投与され得るか、又は希釈剤及び／又はＩＬ−２、若しくは他のサイトカイン、若しくは細胞集団などの他の成分と組み合わせた医薬組成物として投与され得る。本発明の医薬組成物は、１つ以上の薬学的又は生理的に許容できるキャリア、希釈剤又は賦形剤との組み合わせで、本明細書に記載されるＴ細胞などのＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞集団を含み得る。こうした組成物は、中性緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水などといった緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチド又はグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び保存剤を含み得る。本発明の組成物は、好ましくは、静脈内投与のために配合される。
【０１４６】
医薬組成物（溶液、懸濁液など）は、注射用水、生理食塩水溶液、好ましくは生理学的生理食塩水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウムなどの無菌希釈剤、溶媒又は懸濁媒としての役割を果たし得る合成モノグリセリド又はジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝液及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧を調整するための剤の１つ以上を含み得る。非経口製剤は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は複数回投与バイアルに封入することができる。注射可能な医薬組成物は、好ましくは、無菌である。
【０１４７】
有害事象は、自殺遺伝子を免疫細胞（１つ以上のＣＡＲ又はＴＣＲを含有する）に形質導入することによって最小化され得ることが理解されるであろう。更に、誘導性の「オン」又は「促進」スイッチを免疫細胞に組み込むことが望まれる場合もある。好適な技法としては、細胞に本発明のＣＡＲコンストラクトを形質導入する前、後又はそれと同時に誘導性のカスパーゼ−９（米国特許出願公開第２０１１／０２８６９８０号明細書）又はチミジンキナーゼを使用することが挙げられる。自殺遺伝子及び／又は「オン」スイッチを導入する追加の方法としては、ＴＡＬＥＮＳ、亜鉛フィンガー、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス技法及び当技術分野で既知の他の技法が挙げられる。
【０１４８】
本明細書の記述は、例示的且つ説明的であるに過ぎず、特許請求される本発明を限定するものでないことが理解されるであろう。本出願では、単数形の使用は、特に断りのない限り複数形を含む。
【０１４９】
本明細書で使用される項目の見出しは、単に構成を目的とするものに過ぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、論文、書籍及び学術論文が挙げられるが、これらに限定されない、本出願で引用される全ての文献又は文献の一部は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。本開示に従って利用される場合、以下の用語は、特に断りのない限り、以下の意味を有するものとして理解される。
【０１５０】
本出願では、「又は」の使用は、特に断りのない限り「及び／又は」を意味する。更に、用語「含んでいる」並びに「含む」及び「含まれる」などの他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」又は「構成要素」などの用語は、特に断りのない限り、１つのユニットを含む要素及び構成要素並びに２つ以上のサブユニットを含む要素及び構成要素の両方を包含する。
【０１５１】
用語「ＤＬＬ３活性」には、ＤＬＬ３の任意の生物学的効果が含まれる。特定の実施形態では、ＤＬＬ３活性には、基質又は受容体と相互作用又は結合するＤＬＬ３の能力が含まれる。
【０１５２】
「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」又は「核酸」という用語は、一本鎖のヌクレオチドポリマーと二本鎖のヌクレオチドポリマーとの両方を含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド又はいずれかの型のヌクレオチドの改変形態であり得る。前記改変には、ブロモウリジン及びイノシン誘導体などの塩基改変、２’，３’−ジデオキシリボースなどのリボース改変並びにホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホロアニラダート及びホスホロアミダートなどのヌクレオチド間連結の改変が含まれる。
【０１５３】
用語「オリゴヌクレオチド」は、２００以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを指す。オリゴヌクレオチドは、例えば、変異遺伝子の構築において使用するための一本鎖又は二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドは、検出アッセイのための放射標識、蛍光標識、ハプテン又は抗原性標識を含む、標識を含み得る。オリゴヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲプライマー、クローニングプライマー又はハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る。
【０１５４】
「制御配列」という用語は、それが連結されるコード配列の発現及びプロセシングに影響を与えることができるポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態では、原核生物用制御配列は、プロモータ、リボソーム結合部位及び転写終結配列を含み得る。例えば、真核生物用制御配列は、転写因子のための認識部位を１つ又は複数含むプロモータ、転写エンハンサ配列及び転写終結配列を含み得る。「制御配列」は、リーダー配列（シグナルペプチド）及び／又は融合パートナー配列を含み得る。
【０１５５】
本明細書で使用される「作動可能に連結される」は、この用語が適用される構成要素が、適切な条件下でそれがその固有機能を実施することが可能になる関係にあることを意味する。
【０１５６】
「ベクター」という用語は、宿主細胞へのタンパク質コード情報の導入に使用される任意の分子又は実体（例えば、核酸、プラスミド、バクテリオファージ又はウイルス）を意味する。「発現ベクター」又は「発現コンストラクト」という用語は、宿主細胞の形質転換に適しており、そこに作動可能に連結される１つ又は複数の異種性コード領域の発現を（宿主細胞と協働して）誘導及び／又は制御する核酸配列を含むベクターを指す。発現コンストラクトは、転写、翻訳に影響を及ぼすか又はそれを制御し、且つイントロンが存在する場合、それに作動可能に連結されたコード領域のＲＮＡスプライシングに影響を及ぼす配列を含み得るが、これらに限定されない。
【０１５７】
用語「宿主細胞」は、核酸配列で形質転換されているか又は形質転換され得、それによって目的遺伝子を発現する細胞を指す。この用語には、目的遺伝子が存在する限り、子孫の形態又は遺伝的構成が元の親細胞と同一であるか否かに関わらず、親細胞の子孫が含まれる。
【０１５８】
用語「形質転換」は、細胞の遺伝的特徴の変化を指し、細胞が新しいＤＮＡ又はＲＮＡを含有するように修飾されている場合、細胞は、形質転換されている。例えば、形質移入、形質導入又は他の技法を介して新しい遺伝物質を導入することにより、細胞がそのネイティブな状態から遺伝子組み換えされている場合、細胞は、形質転換されている。形質移入又は形質導入に続いて、形質転換しているＤＮＡは、細胞の染色体に物理的に組み込むことによって細胞のＤＮＡと再結合することができるか、又はエピソーム要素として複製することなく一時的に維持されることができるか、又はプラスミドとして独立して複製することができる。形質転換しているＤＮＡが細胞の分裂と共に複製する場合、細胞は、「安定して形質転換」されていると見なされる。
【０１５９】
用語「形質移入」は外来性又は外因性ＤＮＡの細胞による取り込みを指す。多くの形質移入の技法が当技術分野で周知であり、また本明細書で開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（上述）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅ１３：１９７を参照されたい。
【０１６０】
用語「形質導入」は、それによってウイルスベクターを介して外来性ＤＮＡを細胞に導入するプロセスを指す。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｂｏｓｔｏｎ：Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｐｕｂｌを参照されたい。
【０１６１】
用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、ネイティブ配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それへの付加及び／又はその置換を含む、タンパク質のアミノ酸配列を有する巨大分子を指す。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、具体的には、ＤＬＬ３抗原結合分子、抗体又は抗原結合タンパク質の１つ以上のアミノ酸からの欠失、それへの付加及び／若しくはその置換を有する配列を包含する。「ポリペプチド断片」という用語は、完全長のネイティブタンパク質と比較してアミノ末端の欠失、カルボキシル末端の欠失及び／又は内部の欠失を有するポリペプチドを指す。そのような断片は、ネイティブタンパク質と比較して改変されたアミノ酸も含み得る。有用なポリペプチド断片としては、抗原結合分子の免疫機能性断片が挙げられる。有用な断片としては、１つ以上のＣＤＲ領域、重鎖及び／又は軽鎖の可変ドメイン、抗体鎖の他の部分の一部などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
用語「単離された」は、（ｉ）通常、それと共に見出される少なくともいくつかの他のタンパク質を含まないか、（ｉｉ）例えば同一種などの同一源に由来する他のタンパク質を実質的に含まないか、（ｉｉｉ）天然ではそれに結合しているポリヌクレオチド、脂質、糖質若しくは他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離されているか、（ｉｖ）天然ではそれに結合していないポリペプチドと（共有結合的若しくは非共有結合的な相互作用によって）作動可能に結合しているか、又は（ｖ）天然には生じないことを意味する。
【０１６３】
ポリペプチド（例えば、抗原結合分子又は抗体）の「変異体」は、別のポリペプチド配列と比較してアミノ酸配列に１つ又は複数のアミノ酸残基の挿入、欠失及び／又は置換が生じたアミノ酸配列を含む。変異体には、融合タンパク質が含まれる。
【０１６４】
「同一性」という用語は、配列を整列させ、比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」は、比較分子におけるアミノ酸又はヌクレオチド間で残基が同一であるパーセントを意味し、比較される分子中で最小のもののサイズに基づいて計算される。これらの計算のために、整列におけるギャップ（存在する場合）は、好ましくは、特定の数学的モデル又はコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって対処される。
【０１６５】
同一性パーセントを計算するために、比較される配列は、典型的には配列間の最大の一致が得られる方法で整列される。同一性パーセントを決定するのに使用することができるコンピュータプログラムの一例は、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージである（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）。コンピュータアルゴリズムであるＧＡＰは、配列同一性パーセントが決定されることになる２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドを整列するために使用される。配列は、それらのそれぞれのアミノ酸又はヌクレオチドが最適に一致するように整列される（アルゴリズムによって決定される「一致スパン」）。特定の実施形態では、標準比較マトリックス（ＰＡＭ  ２５０比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：３４５−３５２を参照されたい；ＢＬＯＳＵＭ  ６２比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５−１０９１９を参照されたい）もアルゴリズムによって使用される。
【０１６６】
本明細書で使用するとき、２０種の従来の（例えば、天然に存在する）アミノ酸及びそれらの略称は、慣例的な用法に従う。あらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられるＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照されたい。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、アルファ−、アルファ−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸などの非天然アミノ酸、乳酸及び他の従来のものではないアミノ酸も本発明のポリペプチドにとって好適な成分であり得る。非従来型アミノ酸の例としては、以下：４−ヒドロキシプロリン、［γ］−カルボキシグルタミン酸、［ε］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ｅ−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、［σ］−Ｎ−メチルアルギニン並びに他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチド表記法では、標準的な用法及び慣例に従い、左手方向は、アミノ末端方向であり、右手方向は、カルボキシ末端方向である。
【０１６７】
保存的アミノ酸置換は、非天然起源のアミノ酸残基も包含し得、こうした非天然起源のアミノ酸残基は、一般的には、生物学的な系における合成によってではなく、化学的なペプチド合成によって組み込まれる。こうしたものには、ペプチド模倣体及びアミノ酸部分が逆転又は反転した他の形態が含まれる。天然起源の残基は、下記の共通の側鎖特性に基づくクラスに分類することができる：
ａ）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
ｆ）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１６８】
例えば、非保存的置換は、こうしたクラスの１つのメンバーと、別のクラスのメンバーとの交換を含み得る。そのような置換残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域又は分子の非相同領域に導入することができる。
【０１６９】
特定の実施形態による、改変Ｔ細胞の抗原結合分子、共刺激ドメイン又は活性化ドメインに変化を加える上でアミノ酸の疎水性指標が検討され得る。各アミノ酸は、その疎水性及び電荷特性に基づいてハイドロパシー指数が割り当てられている。これらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）である。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）を参照されたい。特定のアミノ酸は、類似のハイドロパシー指数又はハイドロパシースコアを有する他のアミノ酸の代わりとなり得、依然として類似の生物学的活性を保持し得ることが知られている。同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて効率的に実施できることも当技術分野において理解されており、特に、それによって創出される生物学的機能性タンパク質又はペプチドの意図は、今回の場合のように免疫学的な実施形態における使用である場合、当技術分野においてそのようにも理解される。表２に例示的なアミノ酸置換を記載する。
【０１７０】
【表２】
2021520788.tif 000020
【０１７１】
用語「誘導体」は、アミノ酸（又は核酸）の挿入、欠失又は置換以外の化学修飾を含む分子を指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質又は他の有機若しくは無機部分との化学結合が挙げられるが、これらに限定されない共有結合の修飾を含む。特定の実施形態では、化学的に修飾された抗原結合分子は、化学的に修飾されていない抗原結合分子よりも長い循環半減期を有し得る。いくつかの実施形態では、誘導体の抗原結合分子は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール又はポリプロピレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマーの連結を含むように共有結合で修飾される。
【０１７２】
ペプチド類似体は、テンプレートペプチドの特性に類似する特性を有する非ペプチド薬剤として製薬業界で商業的に使用されている。非ペプチド化合物のこれらのタイプは「ペプチド模倣薬（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」又は「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．，１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ＆Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，ＴＩＮＳ，ｐ．３９２（１９８５）；及びＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）（これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７３】
用語「治療有効量」は、哺乳類において治療応答を生じると決定されたＤＬＬ３抗原結合分子の量を指す。こうした治療有効量は、当業者によって容易に確認される。
【０１７４】
用語「患者」及び「対象」は、互換的に使用され、ヒト及び非ヒト動物対象並びに正式に診断された障害を有する対象、正式に認識された障害を有さない対象、治療を受けている対象、障害を発症するリスクのある対象などを含む。
【０１７５】
用語「治療する」及び「治療」は、治療、予防的治療及び対象が障害又は他のリスク因子を発症する危険性を低減する適用を含む。治療は、障害の完全な治癒を要求されず、症状又は内在するリスク因子を低減する実施形態を包含する。「予防」という用語は、事象の可能性を１００％排除することを要求しない。むしろ、それは、事象の発生の可能性が化合物又は方法の存在下で低減されたことを意味する。
【０１７６】
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成並びに組織培養及び形質転換に標準的な手法（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）を使用することができる。酵素反応及び精製手法は、製造業者の仕様書に従って又は当技術分野で一般に行われているように若しくは本明細書に記載されているように行うことができる。上記手法及び手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従い、また本明細書全体にわたって引用され、説明されている様々な一般的且つより具体的な参考文献に記載されるように実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい（この文献は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１７７】
以下の配列は、本発明を更に例示するであろう。
ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ  細胞外、膜貫通、細胞内
【化１７】
2021520788.tif 000021
ＣＤ２８Ｔ  細胞外、膜貫通、細胞内  ＡＡ：
【化１８】
2021520788.tif 000022
ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ  −  細胞外
【化１９】
2021520788.tif 000023
ＣＤ２８Ｔ  ＡＡ  −  細胞外
【化２０】
2021520788.tif 000024
ＣＤ２８  ＤＮＡ  膜貫通ドメイン
【化２１】
2021520788.tif 000025
ＣＤ２８  ＡＡ  膜貫通ドメイン：
【化２２】
2021520788.tif 000026
ＣＤ２８  ＤＮＡ  細胞内ドメイン：
【化２３】
2021520788.tif 000027
ＣＤ２８  ＡＡ  細胞内ドメイン
【化２４】
2021520788.tif 000028
ＣＤ３ゼータ  ＤＮＡ
【化２５】
2021520788.tif 000029
ＣＤ３ゼータ  ＡＡ
【化２６】
2021520788.tif 000030
ＣＤ２８  ＤＮＡ
【化２７】
2021520788.tif 000031
ＣＤ２８  ＡＡ
【化２８】
2021520788.tif 000032
ＣＤ８  ＤＮＡ  細胞外及び膜貫通ドメイン
【化２９】
2021520788.tif 000033
ＣＤ８  ＡＡ  細胞外及び膜貫通ドメイン
【化３０】
2021520788.tif 000034
４−１ＢＢ  ＤＮＡ  細胞内ドメイン
【化３１】
2021520788.tif 000035
４−１ＢＢ  ＡＡ  細胞内ドメイン
【化３２】
2021520788.tif 000036
クローン１Ｈ２．１  ＨＣ  ＤＮＡ
【化３３】
2021520788.tif 000037
クローン１Ｈ２．１  ＨＣ  ＡＡ  −  ＣＤＲは、下線付き
【化３４】
2021520788.tif 000038
クローン１Ｈ２．１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：
【化３５】
2021520788.tif 000039
クローン１Ｈ２．１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：
【化３６】
2021520788.tif 000040
クローン１Ｈ２．１  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：
【化３７】
2021520788.tif 000041
クローン１Ｈ２．１  ＬＣ  ＤＮＡ
【化３８】
2021520788.tif 000042
クローン１Ｈ２．１  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは、下線付き）
【化３９】
2021520788.tif 000043
クローン１Ｈ２．１  ＬＣ  ＣＤＲ１  ＡＡ：ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号４７）
クローン１Ｈ２．１  ＬＣ  ＣＤＲ２  ＡＡ：ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号４８）
クローン１Ｈ２．１  ＬＣ  ＣＤＲ３  ＡＡ：ＱＱＹＧＴＳＰＬＴ（配列番号４９）
クローン８Ｄ２  ＨＣ  ＤＮＡ
【化４０】
2021520788.tif 000044
クローン８Ｄ２  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは、下線付き）
【化４１】
2021520788.tif 000045
クローン８Ｄ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＧＹＹＭＨ（配列番号５２）
クローン８Ｄ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＷＩＤＰＮＳＧＤＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５３）
クローン８Ｄ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＤＰＮＲＲＳＷＹＹＧＭＤＶ（配列番号５４）
クローン８Ｄ２  ＬＣ  ＤＮＡ
【化４２】
2021520788.tif 000046
クローン８Ｄ２  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは、下線付き）
【化４３】
2021520788.tif 000047
クローン８Ｄ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＱＡＳＱＤＩＲＮＹＬＮ（配列番号５７）
クローン８Ｄ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＤＡＳＮＬＥＴ（配列番号５８）
クローン８Ｄ２  ＬＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＱＨＹＤＮＬＰＬＴＦ（配列番号５９）
クローン６Ｂ２  ＨＣ  ＤＮＡ
【化４４】
2021520788.tif 000048
クローン６Ｂ２  ＨＣ  ＡＡ（ＣＤＲは、下線付き）
【化４５】
2021520788.tif 000049
クローン６Ｂ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＧＹＹＭＨ（配列番号６２）
クローン６Ｂ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＷＩＮＰＮＳＧＤＴＳＹＡＱＲＦＬＧ（配列番号６３）
クローン６Ｂ２  ＨＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＥＤＤＳＳＷＹＧＳＦＤＹ（配列番号６４）
クローン６Ｂ２  ＬＣ  ＤＮＡ
【化４６】
2021520788.tif 000050
クローン６Ｂ２  ＬＣ  ＡＡ（ＣＤＲは、下線付き）
【化４７】
2021520788.tif 000051
クローン６Ｂ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＧ（配列番号６７）
クローン６Ｂ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６８）
クローン６Ｂ２  ＬＣ  ＡＡ  ＣＤＲ３：ＬＱＨＤＳＤＬＲＴＦ（配列番号６９）
コンストラクト１Ｈ２．１  ４−１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化４８】
2021520788.tif 000052
コンストラクト１Ｈ２．１  ４−１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列は、太字、ＣＤＲは、下線付き）
【化４９】
2021520788.tif 000053
コンストラクト１Ｈ２．１  ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化５０】
2021520788.tif 000054
コンストラクト１Ｈ２．１  ＣＤ２８Ｔ  ＡＡ（シグナル配列は、太字、ＣＤＲは、下線付き）
【化５１】
2021520788.tif 000055
コンストラクト８Ｄ２  ４−１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化５２】
2021520788.tif 000056
コンストラクト８Ｄ２  ４−１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列は、太字）
【化５３】
2021520788.tif 000057
コンストラクト８Ｄ２  ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化５４】
2021520788.tif 000058
コンストラクト８Ｄ２  ＣＤ２８Ｔ  ＡＡ（シグナル配列は、太字）
【化５５】
2021520788.tif 000059
コンストラクト６Ｂ２  ＣＤ２８Ｔ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化５６】
2021520788.tif 000060
コンストラクト６Ｂ２  ＣＤ２８Ｔ  ＡＡ（シグナル配列は、太字）
【化５７】
2021520788.tif 000061
コンストラクト６Ｂ２  ４−１ＢＢ  ＤＮＡ（シグナル配列は、太字）
【化５８】
2021520788.tif 000062
コンストラクト６Ｂ２  ４−１ＢＢ  ＡＡ（シグナル配列は、太字）
【化５９】
2021520788.tif 000063
ヒトＤＬＬ３  イソ型  １  ＮＭ＿０１６９４１  ＡＡ（６１８個のアミノ酸）
【化６０】
2021520788.tif 000064
ヒトＤＬＬ３  イソ型  ２  ＮＭ＿２０３４８６  ＡＡ（５８７個のアミノ酸）
【化６１】
2021520788.tif 000065
ＣＡＲ  シグナルペプチド  ＤＮＡ
【化６２】
2021520788.tif 000066
ＣＡＲ  シグナルペプチド：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号３２）
ｓｃＦｖ  Ｇ４Ｓリンカー  ＤＮＡ
ＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＧＧＧＣＴＣＣ（配列番号３３）
ｓｃＦｖ  Ｇ４ｓリンカー：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３４）
ｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー  ＤＮＡ
ＧＧＧＴＣＴＡＣＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＡＧＣＣＣＧＧＡＡＧＴＧＧＣＧＡＡＧＧＴＡＧＴＡＣＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号３５）
ｓｃＦｖ  Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号３６）
４−１ＢＢ  核酸配列（細胞内ドメイン）
【化６３】
2021520788.tif 000067
４−１ＢＢ  ＡＡ（細胞内ドメイン）
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号３８）
ＯＸ４０ＡＡ
ＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ（配列番号３９）
【０１７８】
参照による組み込み
本明細書において言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、各々の個々の刊行物、特許又は特許出願が具体的且つ個別に参照により組み込まれることが示された場合と同程度に参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることを認めるものとして解釈されるべきではない。参照により組み込まれる参考文献において提供される定義又は用語が、本明細書において提供される用語及び考察と異なる限り、本用語及び定義が優先される。
【０１７９】
均等物
前述の本明細書は、当業者が本発明を実施するのに十分であると考えられる。前述の説明及び実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態を詳細に説明し、本発明者らによって考えられた最良の形態を記載するものである。しかし、前述の内容がいかに詳細に記載されていたとしても、本発明は、多くの方法で実施され得、添付の特許請求の範囲及びその均等物に従って本発明が解釈されるべきであることが理解されるであろう。
【０１８０】
実施された実験及び達成された結果を含む以下の実施例は、例示の目的のみのために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１８１】
実施例１
異なるＣＡＲコンストラクトを含有する第３世代レンチウイルス導入ベクターをＶｉｒａＰｏｗｅｒ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に使用して、レンチウイルス上清を生成した。手短に言えば、６００μｌのＯｐｔｉＭＥＭ培地中で１５μｇのＤＮＡと２２．５μｌのポリエチレンイミン（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、１ｍｇ／ｍｌ）とを混合することによって形質移入混合物を生成した。この混合物を室温で５分間インキュベートした。同時に、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ）をトリプシン処理し、計数し、合計で１０×１０６個の全細胞を形質移入混合物と共にＴ７５フラスコに入れた。形質移入から３日後、上清を回収し、０．４５μｍのフィルターで濾過し、使用するまで−８０℃で保存した。製造元の指示に従い、Ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ密度遠心分離を用いて健康なドナーのロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋｓ）（Ｈｅｍａｃａｒｅ）からＰＢＭＣを単離した。Ｒ１０培地＋ＩＬ−２（３００ＩＵ／ｍｌ、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ（登録商標）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）中でＯＫＴ３（５０ｎｇ／ｍｌ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ））を用いてＰＢＭＣを刺激した。刺激から４８時間後、ＭＯＩ＝１０でレンチウイルスを用いて細胞に形質導入した。活性アッセイで使用する前に細胞を０．５〜２．０×１０６個の細胞／ｍｌに維持した。ＣＡＲの発現を調べるため、４℃で３０分間、染色緩衝液（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）中のＤＬＬ３−Ｆｃ検出試薬（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）又はビオチン化タンパク質Ｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によってＴ細胞を染色した。続いて、細胞を洗浄し、４℃で３０分間、染色緩衝液中の抗−Ｆｃ−ＰＥ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）又はＰＥストレプトアビジン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって染色した。続いて、細胞を洗浄し、ヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって染色緩衝液中で再懸濁させてからデータを取得した。健康なドナーに由来するＴ細胞中のＤＬＬ３  ＣＡＲの発現を図１に示す。各欄中の数字は、陽性集団の割合を示す。
【０１８２】
実施例２
レンチウイルスで形質導入したＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞における細胞溶解活性を調べるために、エフェクター細胞をＲ１０培地中で１：１のＥ：Ｔ比で標的細胞と共に培養した。共培養から１６時間及び４０時間後、上清をＬｕｍｉｎｅｘ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって分析し、ＣＤ３陰性細胞によるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）取り込みのフローサイトメトリー分析によって標的細胞の生存率を評価した。健康なドナーに由来するレンチウイルスで形質導入したＣＡＲ  Ｔ細胞の平均細胞溶解活性を図２に示し（ＥｏＬ１細胞、は対照であり、Ｈ８２及びＥｏＬ１−ＤＬＬ３は、その表面にＤＬＬ３を発現する）、健康なドナーに由来するＣＡＲ  Ｔ細胞によるサイトカインの産生を図３に示す。
【０１８３】
実施例３
ＤＬＬ３を発現している標的細胞に応答したＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を評価するために、Ｒ１０培地中で１：１のＥ：Ｔ比で標的細胞と共培養する前にＴ細胞をＣＦＳＥで標識した。５日後、ＣＦＳＥの希釈のフローサイトメトリー分析によってＴ細胞の増殖を評価した（図４）。ＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を図５に示す。
【０１８４】
実施例４
インビボ抗腫瘍活性を調べるために、ヒトＳＣＬＣの異種モデルで使用するためのＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞を生成した。ルシフェラーゼで標識したＳＨＰ−７７細胞（２×１０６個／動物）を５〜６週齢のメスＮＳＧマウスに静脈内注射した。６日後、２００μｌのＰＢＳ中の６×１０６個のＴ細胞（約５０％ＣＡＲ＋）を静脈内注射し、生物発光画像法を用いて動物の全身腫瘍組織量を毎週測定した。図６に示すように、ＤＬＬ３  ＣＡＲ  Ｔ細胞の注射により、調べた全ての時点で全身腫瘍組織量は、有意に低下した（ｎｔ＝形質移入されていない対照；ＣＡＲ１＝１Ｈ２．１−Ｃ２８Ｔ−ＣＤ２８−ＣＤ３ζ；ＣＡＲ２＝１Ｈ２．１−Ｃ２８Ｔ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ζ；ＣＡＲ３＝１Ｈ２．１−Ｃ８ｋ−ＣＤ２８−ＣＤ３ζ；ＣＡＲ４＝１Ｈ２．１−Ｃ８ｋ−４−１ＢＢ−ＣＤ３ζ）。図６に示すように、１Ｈ２−ＣＤ２８Ｔ又は１Ｈ２−４−１ＢＢを発現するＣＡＲ  Ｔ細胞の注射により、疑似形質導入された細胞を受けた動物と比較して有意な延命効果が得られたという生存率分析により、これは、更に裏付けられた。
【図１Ａ】
2021520788.tif 000068
【図１Ｂ】
2021520788.tif 000069
【図２Ａ】
2021520788.tif 000070
【図２Ｂ】
2021520788.tif 000071
【図２Ｃ】
2021520788.tif 000072
【図３Ａ】
2021520788.tif 000073
【図３Ｂ】
2021520788.tif 000074
【図３Ｃ】
2021520788.tif 000075
【図４Ａ】
2021520788.tif 000076
【図４Ｂ】
2021520788.tif 000077
【図５】
2021520788.tif 000078
【図６】
2021520788.tif 000079
【図７】
2021520788.tif 000080
【配列表】
2021520788000001.app
【国際調査報告】
2021520788.tif 000081
2021520788.tif 000082
2021520788.tif 000083