(57)【要約】  改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードする核酸、及び改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つ以上を含むＶＬＰが提供される。植物、植物の一部、又は植物細胞内での改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、及びノロウイルスＶＬＰの産生方法も記載される。
2021503962.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のノロウイルスＶＰ１をコードするヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドであって、前記ノロウイルスＶＰ１は以下を含む、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列におけるアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸から選択された位置における、１つもしくは２つ以上の置換、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列におけるアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１とアラインメントされた配列におけるアミノ酸３９〜４６は、配列ＳＳＴＡＶＡＴＡに改変されていること、又は
それらの組合せ；
前記ヌクレオチド配列は、遺伝子型ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１に由来するものではない。
【請求項２】
ヌクレオチド配列が、遺伝子型ＧＩ．３．ＧＩ．５、ＧＩ．７、ＧＩＩ．２、ＧＩＩ．３、ＧＩＩ．４、ＧＩＩ．６、ＧＩＩ．１２及びＧＩＩ．１７からなる群から選択されるノロウイルスＶＰ１に由来する、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項３】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸４３との１つ又は複数の置換が、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項４】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸５７との１つ又は複数の置換が、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項５】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸８４との１つ又は複数の置換が、セリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項６】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸９４との１つ又は複数の置換が、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジンへのものである、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項７】
ヌクレオチド配列のコドン使用頻度が、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化される、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項８】
ポリヌクレオチドがベクターを含む、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドによってコードされるノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項１０】
請求項９に記載のノロウイルスＶＰ１を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項１１】
ノロウイルスＶＰ２タンパク質をさらに含む、請求項１０に記載のＶＬＰ。
【請求項１２】
以下を含む、植物、植物の一部、又は植物細胞内でノロウイルスＶＰ１タンパク質を産生する方法：
請求項１〜８のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドを導入することと、
前記ノロウイルスＶＰ１タンパク質の発現を可能にする条件下で、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞をインキュベートすること。
【請求項１３】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
植物、植物の一部、又は植物細胞からノロウイルスＶＰ１タンパク質を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項１６】
導入する工程では、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドが、植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され、
インキュベートする工程では、条件が、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞内でのノロウイルスＶＰ１タンパク質及び前記ノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にする、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
以下を含む、植物、植物の一部、又は植物細胞内でノロウイルスウイルス様粒子（ＶＬＰ）を産生する方法：
請求項１から８のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドを導入することと、
前記ノロウイルスＶＬＰの発現を可能にする条件下で、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞をインキュベートすること。
【請求項２０】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
植物、植物の一部、又は植物細胞からノロウイルスＶＬＰを抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＬＰ。
【請求項２３】
導入する工程では、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドが、植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され、
インキュベートする工程では、条件が、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞内でのノロウイルスＶＰ１タンパク質及び前記ノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にする、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
植物、植物の一部、又は植物細胞からウイルス様粒子（ＶＬＰ）を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含み、前記ＶＬＰは、ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項２７】
抗体又は抗体断片を産生する方法であって、請求項９に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む方法。
【請求項２８】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項２９】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む方法。
【請求項３０】
抗体又は抗体断片を産生する方法であって、請求項１１に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３１】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３２】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３３】
請求項９に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３４】
請求項１４又は１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３５】
請求項１０に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３６】
請求項１１に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３７】
請求項１９又は２０に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３８】
請求項２３又は２４に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３９】
請求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項４０】
請求項１４に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物抽出物。
【請求項４１】
請求項１８に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１を含む植物抽出物。
【請求項４２】
請求項２１に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＬＰを含む植物抽出物。
【請求項４３】
請求項２５に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＬＰを含む植物抽出物。
【請求項４４】
請求項９に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４５】
請求項１０に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４６】
請求項１１に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４７】
請求項１５に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４８】
請求項２２に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４９】
請求項２６に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項５０】
免疫応答を誘発するための、請求項９に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量を含むワクチン。
【請求項５１】
免疫応答を誘発するための、請求項１０に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５２】
免疫応答を誘発するための、請求項１１に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５３】
免疫応答を誘発するための、請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量を含むワクチン。
【請求項５４】
免疫応答を誘発するための、請求項２２に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５５】
免疫応答を誘発するための、請求項２６に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５６】
請求項９に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５７】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５８】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５９】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６０】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６１】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６２】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６３】
請求項１１に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６４】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６５】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６６】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ、及びそれらを産生する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ノロウイルス感染に起因する世界的な疾病負荷は高く、ノロウイルス感染は世界の下痢性の全症例の推定２０％に関連しており、毎年２０万超の死亡例を引き起こしている。ノロウイルスは、北米では、食物媒介疾患の集団発生の主要な原因であり、高齢者の間では、医療関連の集団発生の大部分の原因病原体である。ノロウイルス株は、世界中の小児消化管疾患の主要な原因としても認識されている。
【０００３】
ノロウイルスは、カリシウイルス（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）科のいくつかの属のうちの１つを構成する。ヒトノロウイルスゲノムは、３つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードする一本鎖ポジティブセンスＲＮＡ分子であり、ＶＰｇタンパク質によってその５’末端がキャップされている。ＯＲＦ１は、ＶＰｇと、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼと、ウイルスプロテアーゼとを含む６つの非構造ウイルスタンパク質をコードする。ＯＲＦ２は、メジャー構造キャプシドタンパク質（ＶＰ１）をコードする。ＯＲＦ３は、マイナーキャプシドタンパク質（ＶＰ２）をコードする。
【０００４】
ＶＰ１は、シェル（Ｓ）ドメイン及び突出（Ｐ）ドメインという２つのドメインから構成されている。例えば、ＧＩ．１株のＳドメインは、第１の２２５個のＮ末端アミノ酸を含み、キャプシドの集合とウイルスの正二十面体の形成とに必要な構造要素を含む。Ｐドメインは、ＶＰ１タンパク質の残りを構成し、Ｐ１サブドメイン及びＰ２サブドメインからさらに構成される。Ｐ２サブドメインは、超可変ドメインと呼ばれ、受容体結合及び免疫反応に重要な役割を果たすと考えられている。
【０００５】
ＶＰ１タンパク質は、Ｐドメイン媒介タンパク質相互作用を介して二量体を形成する。二量体化は、ビリオンキャプシドの安定性を高め、Ｓドメインによって形成されたノロウイルス粒子のベースコアから伸びる突起の形成をもたらす。ノロウイルスＶＰ１タンパク質は、発現すると、自動的に集合して、２つのビリオン構造、すなわち、直径３８〜４０ｎｍのＴ＝３正二十面体対称を有する１８０量体キャプシド構造、及び直径２３ｎｍのＴ＝１正二十面体対称を有する６０量体キャプシド構造を形成することができる。
【０００６】
マイナー構造タンパク質であるＶＰ２は、約２１ｋＤａ〜約２４ｋＤａの分子量（ＭＷ）を有する。試験では、ＶＰ２が高度に塩基性であり、キャプシド内に位置することが示唆される。ＶＰ２の機能はまだ完全には理解されていないが、ビリオンを脱集合及び分解から保護することによってキャプシドの安定性に何らかの役割を果たすと一般に考えられている（Ｂｅｒｔｏｌｏｔｔｉ−Ｃｉａｒｌｅｔ  Ａ．，Ｃｒａｗｆｏｒｄ  Ｓ．Ｅ．，Ｈｕｔｓｏｎ  Ａ．Ｍ．，Ｅｓｔｅｓ  Ｍ．Ｋ．２００３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１１６０３−１１６１５）。ＶＰ２はまた、ＲＮＡゲノムのパッケージングの最中に何らかの機能を有し得る。ビリオン中のＶＰ２マイナー構造タンパク質の量は比較的少なく、成熟ビリオン中に１．５〜８コピーが組み込まれている。Ｂｅｒｔｏｌｏｔｔｉ−Ｃｉａｒｌｅｔら（２００３）は、昆虫細胞及び哺乳動物細胞では、ＶＰ１／ＶＰ２から構成されるＶＬＰの方が、ＶＰ１のみを有するものよりもプロテアーゼ切断に対して耐性であり、シスでのＶＰ２の発現がＶＰ１タンパク質産生を増加させることを報告している。さらに、ＯＲＦ２遺伝子の下流に３’ＵＴＲが存在すると、ＮＶ  ＯＲＦ２  ｍＲＮＡの定常状態レベルが増加する。ＶＰ１発現の最大の増加は、同じ構築物上に存在し、１つのプロモーターの制御下にあるＯＲＦ２＋ＯＲＦ３＋３’ＵＴＲが発現した際に観察された。トランスでのＶＰ２の発現はＶＰ１発現の増加をもたらさず、ＯＲＦ２−ＯＲＦ２−３’ＵＴＲのサブゲノム構成が、ＶＰ１産生の観察された増加に必要であることが示された。
【０００７】
ノロウイルスは、ＶＰ１アミノ酸配列の系統発生的クラスタリングに従って分類される。これまでに７つの遺伝子群が分類されており（ＧＩからＧＶＩＩ）、遺伝子群ＧＩ、ＧＩＩ及びＧＩＶのみがヒトに感染することが知られている。現在ヒトの感染に関連している３２の特定の遺伝子型のうち、ＧＩＩ．４ノロウイルスが最近のノロウイルス集団発生の大部分の原因となっている。ＧＩＩ．４の新しい株は２〜３年ごとに出現し、ＶＰ１の超可変Ｐ２ドメインのエピトープ決定領域の変異によって促進されるプロセスによって進化する。このプロセスにより、ノロウイルスは、以前の株に対する以前の曝露によって獲得された液性免疫応答を逃れることができる。
【０００８】
急速に進化し、遺伝的に多様なノロウイルス株という困難に直面している一方で、効果的なノロウイルスワクチンの開発は新たな課題によって悪化している。例えば、最近まで、ヒトノロウイルスは細胞培養で増殖させることができず、現在でも、ＶＬＰ及び弱毒生ノロウイルスの両方に対する強力な細胞培養系は欠如している。
【０００９】
ワクチン開発におけるもう１つの課題は、ノロウイルス感染に対する免疫が、株及び遺伝子型特異的であり、他の遺伝子群に対して付与される交差免疫が最小限であることである。さらに、ノロウイルス株に対する免疫は生涯免疫ではなく、６カ月から９年の間どこからでも持続すると推定されている。
【００１０】
ノロウイルス感染に対する好適なワクチンを開発するために、昆虫発現系及び植物発現系での組換えノロウイルスタンパク質の産生を含め、様々なアプローチが行われている。
【００１１】
Ｈｕｏら（Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，２０４：１−５）は、昆虫のＳＦ９細胞内で産生されるノロウイルスＶＰ１  ＶＬＰのＭ２７Ｇ変異体キャプシドタンパク質が、５８ｋＤａ及び５５ｋＤａのタンパク質を含む３８ｎｍ及び２１ｎｍのＶＬＰの産生をもたらすことを実証した。５５ｋＤａのタンパク質は、内部開始コドンの翻訳産物とは対照的に、完全長Ｐ１キャプシドタンパク質の分解又は切断の結果であった。ＶＰ１タンパク質のアミノ酸残基が２６個又は３８個欠失したＮ末端欠失変異体は、２１ｎｍのＶＬＰを産生した。２６アミノ酸欠失変異体は３８ｎｍのＶＬＰを少数産生し、３８アミノ酸欠失変異体は３８ｎｍのＶＬＰを形成しなかった。
【００１２】
米国特許第２０１３／０２７３１０５号は、遺伝子群Ｉ（Ｇ１）、遺伝子群ＩＩ（ＧＩＩ）、又はコンセンサスウイルス配列に由来する抗原ペプチド、タンパク質又はＶＬＰを含むノロウイルス製剤の製造を教示している。ノロウイルス抗原は、ＶＬＰ内で発現されるキャプシドタンパク質の変異体を含み得る。
【００１３】
米国特許第２０１５／００２３９９５号は、昆虫のＳｆ９細胞内で産生されたＶＬＰを含むワクチン製剤を提供しており、ＶＬＰは、少なくとも２つのウイルスタンパク質配列に由来する複合アミノ酸配列を含む。例えば、ＧＩＩ．４  Ｍｉｎｅｒｖａ  ２００６−ａ、ならびにＧＩＩ．４  Ｌａｕｒｅｎｓ  ２００６−ｂ及びＧＩＩ．４  Ｈｏｕｓｔｏｎ  ２００２ノロウイルス株由来のＶＰ１配列を含む複合ＧＩＩ．４  ＶＰ１  ＶＬＰが記載されている。また、ＧＩＩ．１、ＧＩＩ．２  Ｓｎｏｗ  Ｍｏｕｎｔａｉｎ及びＧＩＩ．３に由来する複合配列、ならびにＮｏｒｗａｌｋ  ＧＩ．１、Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ  ＧＩ．１及びＣｈｉｂａ  ＧＩ．１に由来するＧＩ複合配列も記載されている。
【００１４】
Ｍａｓｏｎら（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９６，９３（１１）：５３３５−４０）は、天然ＶＰ１タンパク質からＧＩ．１ノロウイルスＶＬＰを発現させるための遺伝子組換えタバコ植物及びジャガイモ塊茎の使用を教示している。植物が産生するノロウイルスＶＬＰは、昆虫細胞内で産生される３８ｎｍ  Ｎｏｒｗａｌｋ  ＶＬＰと形態学的及び物理的に類似している。天然のキャプシドタンパク質に由来するかＧＩ．１キャプシドタンパク質を発現するジャガイモ塊茎に由来する、タバコによって産生された精製されたＮｏｒｗａｌｋ  ＶＬＰの経口投与は、マウス及びヒトに液性免疫応答を誘発した（Ｔａｃｋｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，２０００，１８２（１）：３０２−５）。
【００１５】
Ｈｕａｎｇら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００９，１０３（４）：７０６−１４）は、植物内でＧＩ．１ノロウイルスＶＬＰを産生するためのジェミニウイルス由来のＤＮＡレプリコンベクターについて記載している。ニコチアナベンサミアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）におけるインゲンマメ萎縮ウイルス由来ベクターとＲｅｐ／ＲｅｐＡ供給ベクターとの同時送達により、迅速かつ強力なタンパク質産生がもたらされた。
【発明の概要】
【００１６】
本発明は、改変ノロウイルスタンパク質、改変ノロウイルスタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）、及びノロウイルスタンパク質を産生する方法、及び改変ノロウイルスタンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）に関する。
【００１７】
本発明の目的は、改変ノロウイルスタンパク質を産生すること、改変ノロウイルスタンパク質を含むＶＬＰを産生すること、及び植物内で、改変ノロウイルスタンパク質を含むＶＬＰを産生することである。
【００１８】
本明細書に記載されるように、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドが提供され、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質は、以下を含む、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列におけるアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸から選択された位置における、１つもしくは２つ以上の置換、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列におけるアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１とアラインメントされた配列におけるアミノ酸３９〜４６は、配列ＳＳＴＡＶＡＴＡに改変されていること、又は
それらの組合せ。
ヌクレオチド配列は、遺伝子型ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１に由来しない。
【００１９】
ヌクレオチド配列が、遺伝子型ＧＩ．２、ＧＩ．３．ＧＩ．５、ＧＩ．７、ＧＩＩ．２、ＧＩＩ．３、ＧＩＩ．４、ＧＩＩ．６、ＧＩＩ．１２及びＧＩＩ．１７からなる群から選択されるノロウイルスＶＰ１に由来する上記の組換えポリヌクレオチドも提供される。例えば、限定と考えられるべきではないが、ヌクレオチド配列は、Ｇ１．２／Ｌｅｕｖｅｎ／２００３／ＢＥＬ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ、ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ−ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ、ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３、ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ；ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ、ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ及びＧＩＩ．１７＿Ｋａｗａ＿２０１４＿Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６から構成される群に由来し得る。
【００２０】
上記の組換えポリヌクレオチドは、
ＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアラインメントされた配列内のアミノ酸４３の位置でのバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換、改変又は変異、
ＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアラインメントされた配列内のアミノ酸５７の位置でのイソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換、改変又は変異、
ＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアラインメントされた配列内のアミノ酸８４の位置でのセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンへの置換、改変又は変異、及び
ＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアラインメントされた配列内のアミノ酸９４の位置でのロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換、改変又は変異から独立して選択される特定の置換、改変又は変異を含み得る。
【００２１】
上記の組換えポリヌクレオチドのいずれかはまた、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化され得る。
【００２２】
上記の組換えポリヌクレオチドのいずれか１つによってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質もまた、本明細書に記載される。さらに、上記の組換えポリヌクレオチドのいずれか１つによってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰもまた開示される。上記の組換えポリヌクレオチドのいずれか１つによってコードされるノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をさらに含み得る。
【００２３】
植物、植物の一部、又は植物細胞内で改変ノロウイルスＶＰ１を産生する方法もまた、本明細書に提供される。改変ノロウイルスＶＰ１は、上記の組換えポリヌクレオチドのいずれか１つによってコードされ得る。方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞に、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つ又は複数を導入することと、１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質の発現を可能にする条件下で、植物、植物の一部、又は植物細胞をインキュベートすることとを含む。本明細書に提供される方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含み得る。さらに、方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞から、１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程を含み得る。さらに、導入する工程では、方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞に、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２の核酸配列を導入することをさらに含み得、インキュベートする工程では、条件は、植物、植物の一部、又は植物細胞内での１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にする。
【００２４】
また、植物、植物の一部、又は植物細胞内でノロウイルスウイルス様粒子（ＶＬＰ）を産生する方法も記載されており、ＶＬＰは、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つ又は複数を含む。方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞に、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つ又は複数を導入することと、１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質の発現を可能にする条件下で、植物、植物の一部、又は植物細胞をインキュベートし、それによりノロウイルスＶＬＰを産生することとを含む。本明細書に提供される方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含み得る。さらに、方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞からノロウイルスＶＬＰを抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程を含み得る。さらに、導入する工程では、方法は、植物、植物の一部、又は植物細胞に、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２の核酸配列を導入することをさらに含み得、インキュベートする工程では、条件は、植物、植物の一部、又は植物細胞内で改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にし、それによりノロウイルスＶＬＰを産生する。本明細書に記載の方法によって産生されたノロウイルスＶＬＰは、約１５ｎｍ〜約５０ｎｍの直径を有し得る。あるいは、ＶＬＰは、約２３ｎｍ（Ｔ＝１正二十面体対称の場合）又は約３８ｎｍ（Ｔ＝３正二十面体対称の場合）の直径を有し得る。
【００２５】
本明細書では、抗体又は抗体断片を生成する方法が提供され、方法は、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上、又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上を含むノロウイルスＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより抗体又は抗体断片を生成することを含む。
【００２６】
また、上記の組換えポリヌクレオチドを含む植物、植物の一部、もしくは植物細胞、組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１、又は１つもしくは２つ以上の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むノロウイルスＶＬＰも本明細書に提供される。
【００２７】
免疫応答を誘発するための組成物も本明細書に記載される。組成物は、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上の有効用量、又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上を含むノロウイルスＶＬＰ、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクルもしくは賦形剤を含む。
【００２８】
本開示はまた、免疫応答を誘発するためのワクチンを提供し、ワクチンは、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上の有効用量、又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上を含むＶＬＰを含む。
【００２９】
ノロウイルスの複数の株が特徴付けられており、ノロウイルス株は経時的に進化し得る。したがって、本開示はまた、ＶＰ１タンパク質が植物内で発現することができ、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にＶＰ１タンパク質がノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件で、図２Ａ及び図２Ｂに列挙されたノロウイルス株のいずれかのＶＰ１タンパク質、ＶＰ２タンパク質、又はＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の両方に対して、約３０％〜約１００％又はそれらの間の任意の量のアミノ酸配列同一性を示す、ノロウイルス由来のＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質に関する。例えば、ノロウイルス株には、ＶＰ１タンパク質が植物内で発現することができ、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にＶＰ１タンパク質がノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件で、図２Ａ及び図２Ｂに列挙された株のいずれかとともに、ＶＰ１タンパク質、ＶＰ２タンパク質、又はＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の両方に対して、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、１００％又はそれらの間の任意の量のアミノ酸配列同一性（配列類似性、パーセント同一性、パーセント類似性）を有する株が含まれる。
【００３０】
本明細書では、抗体又は抗体断片が提供され、抗体又は抗体断片は、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１のうちの１つもしくは２つ以上、又は改変ノロウイルスＶＰ１のうちの１つもしくは２つ以上を含むノロウイルスＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される。
【００３１】
また、本明細書では、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発する方法が記載されており、方法は、上記の組換えポリヌクレオチドのうちの１つもしくは２つ以上によってコードされる改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上、又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上を含むノロウイルスＶＬＰを投与することを含む。改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のうちの１つもしくは２つ以上、又はノロウイルスＶＬＰは、対象に経口投与、鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与皮下投与、直腸内投与又は膣内投与され得る。
【００３２】
本発明のこの概要は、必ずしも本発明のすべての特徴を説明しているわけではない。
【００３３】
本発明のこれら及び他の特徴は、添付の図面を参照する以下の説明から、さらに明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１Ａ】ノロウイルスゲノムならびにそれから翻訳されたポリタンパク質及びタンパク質の線形構造の略図を示す。
【図１Ｂ】シェル（Ｓ）ドメイン、Ｐ１サブドメイン（Ｐ１）及びＰ２サブドメイン（Ｐ２）を含むノロウイルスＶＰ１タンパク質の三次元構造のリボン図表示を示す。
【図１Ｃ】２つのＳドメイン（Ｓ）、２つのＰ１サブドメイン（Ｐ１）及び２つのＰ２サブドメイン（Ｐ２）から構成されるノロウイルスＶＰ１タンパク質二量体の三次元構造のリボン図表示を示す。
【００３５】
【図２Ａ】いくつかのノロウイルスＶＰ１タンパク質（上部パネル）及びＶＰ２タンパク質（下部パネル）のＵｎｉｐｒｏｔ参照及びＮＣＢＩ参照を示す。
【図２Ｂ】いくつかのノロウイルスＶＰ１核酸配列（上部パネル）及びＶＰ２核酸配列（下部パネル）に関するＮＣＢＩ参照を示す。
【図２Ｃ】ノロウイルスＶＰ１タンパク質のいくつかのＳドメインのアラインメントを示す。ノロウイルスＧＩ．１配列（配列番号１）は、他のノロウイルスＶＰ１配列（ＧＩ．２、配列番号４；ＧＩ．３、配列番号６；ＧＩ．５、配列番号１２；ＧＩ．７  配列番号１０１；ＧＩＩ．１．配列番号１３；ＧＩＩ．２．配列番号１４；ＧＩＩ．３、配列番号１５；ＧＩＩ．４、配列番号１６；ＧＩＩ．５、配列番号１７；ＧＩＩ．６、配列番号２０；ＧＩＩ．７、配列番号１８；ＧＩＩ．１２、配列番号１９；ＧＩＩ．１３、配列番号２２；ＧＩＩ．１４、配列番号３２；ＧＩＩ．１７、配列番号２４；及びＧＩＩ．２１、配列番号２６）がアラインメントされる参照配列として使用される。ＶＰ１タンパク質の「ＧＩＩ」ファミリーに関するＶＰ１アミノ酸配列は、アミノ酸１４〜１６に３つのアミノ酸欠失と、２６位に１つのアミノ酸欠失を含み、これによりＧＩＩ  ＶＰ１配列とＧＩ  ＶＰ１配列との間に４つのアミノ酸のアラインメントオフセットがもたらされる。
【００３６】
【図３Ａ】左パネル：野生型（ｗｔ）ヒトコドン最適化（ｈＣｏｄ）ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８  ＶＰ１（構築物番号２７２４；配列番号３（ヌクレオチド）；配列番号１（アミノ酸））及びｈＣｏｄ  ＧＩ．５  ＶＰ１（構築物番号３９８０；配列番号３３（ヌクレオチド）；配列番号１２（アミノ酸）；中央パネル：野生型ＧＩ．１及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１２／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／ＨＳ２０６／２０１０  ＶＰ１（構築物番号３９９５；配列番号８７（ヌクレオチド）；配列番号１９（アミノ酸））；ならびに右パネル：野生型ＧＩ．１及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２  ＶＰ１（構築物番号３７６０；配列番号５２（ヌクレオチド）；配列番号１６（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたニコチアナベンサミアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。矢印：ＶＰ１ノロウイルスタンパク質。各パネルの第１のレーン、モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図３Ｂ】上部パネルは、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８  ＶＰ１（構築物番号２７２４）又はｗｔ  ｈＣｏｄ  ＶＰ１（構築物番号２７２４）を発現し、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＶＰ２（構築物番号２７２５）と共発現したＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配分離からの画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を使用したノロウイルスタンパク質発現及びＶＬＰ集合を示す。下部パネルは、ＶＰ１の３３％イオジキサノール勾配画分から精製されたノロウイルスＶＬＰの電子顕微鏡写真、又はＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の共発現を示す。比較のために、天然ノロウイルスＶＬＰの電子顕微鏡写真を示す。
【図３Ｃ】左パネル：ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｈｕｎｇａｒｙ／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３  ＶＰ１（構築物番号３９８０；配列番号３３（ヌクレオチド）；配列番号１２（アミノ酸））；右パネル：ＧＩＩ．１２／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／ＨＳ２０６／２０１０  ＶＰ１（構築物番号３９９５；配列番号８７（ヌクレオチド）；配列番号１９（アミノ酸）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図３Ｄ】各製剤の１μｇ又は１０μｇの１回投与（２１日目）及び２回投与（４２日目）によるＩＭ免疫後の動物から得られた血清試料に対して測定されたＧＬ．１  ＶＬＰ特異的総ＩｇＧ力価を示す。ＧＩ．１  ＶＬＰコーティングプレートを使用したＥＬＩＳＡによって、総ＩｇＧ力価を測定した（ＬＯＱ＝１００）。９５％信頼区間を伴う幾何平均力価（ＧＭＴ）によって、処置群（ｎ＝８匹／群）ごとの総ＩｇＧ力価を表す。同じ文字（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）：処置群間に有意差は検出されなかった（ｐ＞０．０５）。
【００３７】
【図４Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．２  ＶＰ１（構築物番号３３００；配列番号５（ヌクレオチド）；配列番号４（アミノ酸））を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図４Ｂ】ＶＰ１の２９〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたノロウイルスＶＬＰの電子顕微鏡写真を示す。
【００３８】
【図５Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ２（構築物番号３３０３；配列番号９５（ヌクレオチド）；配列番号９４（アミノ酸））の有無にかかわらず、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１（構築物番号３９７９；配列番号７（ヌクレオチド）；配列番号６（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ＿Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４１；配列番号９（ヌクレオチド）；配列番号８（アミノ酸））、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４２；配列番号１１（ヌクレオチド）；配列番号１０（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。第１のレーン：モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図５Ｂ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１（構築物番号３９７９、左パネル）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１＿Ｓ９４Ｌ（構築物番号４１４１、中央パネル）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（構築物番号４１４２、右パネル）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図５Ｃ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１（構築物番号３９７９、左パネル；図５Ｂの画分Ｆ２＋Ｆ３、Ｆ６＋Ｆ７）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１＿Ｓ９４Ｌ（構築物番号４１４１、中央パネル；図５Ｂの画分Ｆ２〜Ｆ６）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ  ＶＰ１＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（構築物番号４１４２、右パネル；図５Ｂの画分Ｆ２〜Ｆ６）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【図５Ｄ】ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１８０；配列番号１７１（ヌクレオチド）；配列番号１７２（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。
【図５Ｅ】ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１８０）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【図５Ｆ】野生型ＧＩ．３（ＧＩ．３  Ｓ９４；１の「倍率変化」として設定）のＶＬＰ収量と比較した、アミノ酸位置９４に置換を有する非天然ＶＰ１  ＧＩ．３を含むＶＬＰの相対収量を示す。Ｃ＃：構築物番号。
【００３９】
【図６Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８  ＶＰ１（構築物番号２７２４；配列番号３（ヌクレオチド）；配列番号１（アミノ酸））、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ  ＶＰ１（構築物番号３９８０；配列番号３３（ヌクレオチド）；配列番号１２（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３０；配列番号３５（ヌクレオチド）；配列番号３４（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３１；配列番号３７（ヌクレオチド）；配列番号３６（アミノ酸））又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築番号４１３２；配列番号３９（ヌクレオチド）；配列番号３８（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。矢印：ＶＰ１ノロウイルスタンパク質；第１のレーン＝モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図６Ｂ】左から右に、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ  ＶＰ１（構築物番号３９８０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３０、左パネル）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３１、中央パネル）、又はｍｕｔ  ＨＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３２、右パネル）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図６Ｃ】左から右に、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ  ＶＰ１（構築物番号３９８０）、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３０、左パネル）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３１、中央パネル）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３２、右パネル）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝２００ｎｍ。
【図６Ｄ】左から右に、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４  ＶＰ１（構築物番号４２０９；配列番号１０１（ヌクレオチド）；配列番号２０４（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｒ８４Ｓ（構築物番号４２１０；配列番号１７６（ヌクレオチド）；配列番号１７７（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ（構築物番号４２１７；配列番号１７８（ヌクレオチド）；配列番号１７９（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ構築物番号４２１８；配列番号１８０（ヌクレオチド）；配列番号１８１（アミノ酸））を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。＊ＴＥＭ分析のために得られた試料（図６Ｅを参照）。
【図６Ｅ】左上：ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４  ＶＰ１（構築物番号４２０９）、右上：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｒ８４Ｓ（構築物番号４２１０）；左下：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ（構築物４２１７）；右下ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ構築物番号４２１８）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【図６Ｆ】野生型ＧＩ．７（ＧＩ．７  Ｍ５７；１の「倍率変化」として設定）のＶＬＰ収量と比較した、アミノ酸位置５７に置換を有する非天然ＶＰ１  ＧＩ．７を含むＶＬＰの相対収量を示す。Ｃ＃：構築物番号。
【００４０】
【図７Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ  ＶＰ１（構築物番号３９８２；配列番号４０（ヌクレオチド）；配列番号１４（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１４３；配列番号８６（ヌクレオチド）；配列番号８５（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ  ＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４４；配列番号４２（ヌクレオチド）；配列番号４１（アミノ酸））又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４５；配列番号４４（ヌクレオチド）；配列番号４３（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。矢印：ＶＰ１ノロウイルスタンパク質；第１のレーン＝モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図７Ｂ】左から右に、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ  ＶＰ１（構築物番号３９８２）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１４３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ａ９０Ｌ（構築物番号４１４４）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４５）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図７Ｃ】左上パネル：ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ  ＶＰ１（構築物番号３９８２）、右上パネルｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４５）；左下パネル：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１８２；配列番号１８３（ヌクレオチド）；配列番号１８２（アミノ酸））；右下パネル：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ＿Ｍ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１８３配列番号１８５（ヌクレオチド）；配列番号１８４（アミノ酸））を発現する、Ｎ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（各パネルの上部）、及びＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の２９〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）（各パネルの下部）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【００４１】
【図８Ａ】左から右に、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ  ＶＰ１（構築物番号３９８３；配列番号４５（ヌクレオチド）；配列番号１５（アミノ酸；第１のパネル））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１４６；配列番号４７（ヌクレオチド）；配列番号４６（アミノ酸；第２のパネル））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４７；配列番号４９（ヌクレオチド）；配列番号４８（アミノ酸；第３のパネル））、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１４８、配列番号５１（ヌクレオチド）；配列番号５０（アミノ酸；第４のパネル））を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図８Ｂ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ  ＶＰ１（構築物番号３９８３、第１のパネル）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１４６、第２のパネル）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【００４２】
【図９Ａ】ｗｔ  ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８  ＶＰ１（構築物番号２７２４；配列番号３（ヌクレオチド）；配列番号１（アミノ酸））、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０；配列番号５２（ヌクレオチド）；配列番号１６（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１（構築物番号４１５５；配列番号５４（ヌクレオチド）；配列番号５３（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１（構築物番号４１５６；配列番号５６（ヌクレオチド）；配列番号５５（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（構築物番号４１５７；配列番号５８（ヌクレオチド）；配列番号５７（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３；配列番号６０（ヌクレオチド）；配列番号５９（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３４；配列番号６２（ヌクレオチド）；配列番号６１（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Δ３５−４２  ＶＰ１（構築物番号４１５８；配列番号６４（ヌクレオチド）；配列番号６３（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１（構築物番号４１５９；配列番号６６（ヌクレオチド）；配列番号６５（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｖ（構築物番号４１６５；配列番号６８（ヌクレオチド）；配列番号６７（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１（構築物番号４１６６；配列番号７０（ヌクレオチド）；配列番号６９（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿  Ｐ８０Ｓ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（構築物番号４１６７；配列番号７２（ヌクレオチド）；配列番号７１（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３５；配列番号７４（ヌクレオチド）；配列番号７３（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ＶＰ１（構築物番号４１６８；配列番号７６（ヌクレオチド）；配列番号７５（アミノ酸））、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１（構築物番号４１６９；配列番号７８（ヌクレオチド）；配列番号７７（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。矢印：ＶＰ１ノロウイルスタンパク質；第１のレーン＝モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図９Ｂ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３４）、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３５）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（上部パネル）及び透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ；下部パネル；倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝２００ｎｍ）を示す。
【図９Ｃ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１（構築物番号４１５５）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿  Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｖ（構築物番号４１６５）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Δ３５−４２  ＶＰ１（構築物番号４１５８）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ＶＰ１（構築物番号４１６８）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（上部パネル）及び透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ；下部パネル；倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝２００ｎｍ）を示す。
【図９Ｄ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（構築物番号４１５７）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１６７）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（上部パネル）及び透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ；下部パネル；倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝２００ｎｍ）を示す。
【図９Ｅ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１（構築物番号４１５６、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ＋Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１（構築物番号４１６６）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図９Ｆ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１（構築物番号３７６０）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３３）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１（構築物番号４１５９）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１６９）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図９Ｇ】左パネル：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１６７）；右パネルｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１８６；配列番号１９１（ヌクレオチド）；配列番号１９０（アミノ酸））を発現する、Ｎ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（上部パネル）、及びＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）（下部パネル）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【図９Ｈ】野生型（天然）ＧＩＩ．４／２０１２（ＧＩＩ．４／２０１２  Ｐ８０；１の「倍率変化」として設定）のＶＬＰ収量と比較した、アミノ酸位置８０に置換を有する非天然ＶＰ１  ＧＩＩ．４／２０１２を含むＶＬＰの相対収量を示す。Ｃ＃：構築物番号。
【図９Ｉ】Ａ３９．ＧＩＩ．４／２０１２（Ｐ８０Ｓ）Ａ３９；１の「倍率変化」として設定）を含むＧＩＩ．４／２０１２（Ｐ８０Ｓ）のＶＬＰ収量と比較した、アミノ酸位置３９に追加の置換を有するＶＰ１  ＧＩＩ．４／２０１２（Ｐ８０Ｓ）を含むＶＬＰの相対収量を示す。Ｃ＃：構築物番号。
【００４３】
【図１０Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ  ＶＰ１（構築物番号３９９３；配列番号２１（ヌクレオチド）；配列番号２０（アミノ酸））及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７；配列番号９７（ヌクレオチド）；配列番号９６（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１４９；配列番号８０（ヌクレオチド）；配列番号７９（アミノ酸））及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１５０；配列番号８２（ヌクレオチド）；配列番号８１（アミノ酸）））及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７）、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１５１；配列番号  ８４（ヌクレオチド）；配列番号８３（アミノ酸））及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図１０Ｂ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ  ＶＰ１（構築物番号３９９３）及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７）、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１５０）及びｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．６／ＨＳ２４５／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ２（構築物番号３３０７）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝２００ｎｍ。
【００４４】
【図１１Ａ】ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８  ＶＰ１（構築物番号２７２４；配列番号３（ヌクレオチド）；配列番号１（アミノ酸））、ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ１（構築物番号３９９５；配列番号８７（ヌクレオチド）；配列番号１９（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３６；配列番号８９（ヌクレオチド）；配列番号８８（アミノ酸））、ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３７；配列番号９１（ヌクレオチド）；配列番号９０（アミノ酸））、又はｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３８；配列番号９３（ヌクレオチド）；配列番号９２（アミノ酸））をインフィルトレーションした９日後（ＤＰＩ）の時点での、アグロインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。第１のレーン＝モックインフィルトレーションされたＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物。
【図１１Ｂ】ｗｔ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ１（構築物番号３９９５）、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３６）、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３７）、又はＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３８）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図１１Ｃ】ｗｔ  ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ  ＶＰ１（構築物番号３９９５、第１のパネルＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（構築物番号４１３６、第２のパネル）、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３７、第３のパネル）、又はＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４１３８、第４のパネル）を発現するＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を示す。倍率１５，０００Ｘ、スケールバー＝５００ｎｍ。
【図１１Ｄ】左上パネル：ｗｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６ＶＰ１（構築物番号３９９８；配列番号２５（ヌクレオチド）；配列番号２４（アミノ酸））、右上パネルｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（構築物番号４２３２；配列番号１９７（ヌクレオチド）；配列番号１９６（アミノ酸））；左下パネル：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１（構築物番号４２３４；配列番号１９３（ヌクレオチド）；配列番号１９２（アミノ酸））；右下パネル：ｍｕｔ  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（構築物番号４２３５；配列番号１９５（ヌクレオチド）；配列番号１９４（アミノ酸））を発現する、Ｎ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（各パネルの上部）、及びＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉から調製された粗タンパク質抽出物の３１〜３５％イオジキサノール勾配画分から精製されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）の透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）（各パネルの下部）を示す。倍率１５，０００Ｘ；スケールバー＝５００ｎｍ。
【００４５】
【図１２Ａ】ＶＰ１  ＧＩ．１  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎｏｒｗａｌｋ  １９６８のアミノ酸配列を示す（配列番号１）。
【図１２Ｂ】野生型ＶＰ１  ＧＩ．１  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎｏｒｗａｌｋ  １９６８の核酸配列を示す（配列番号２）。
【図１２Ｃ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．１  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎｏｒｗａｌｋ  １９６８の核酸配列を示す（配列番号３）。
【００４６】
【図１３Ａ】ＶＰ１  Ｇ１．２  Ｌｅｕｖｅｎ  ２００３  Ｄ２ＤＥＬ３のアミノ酸配列を示す（配列番号４）。
【図１３Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  Ｇ１．２  Ｌｅｕｖｅｎ  ２００３  Ｄ２ＤＥＬ３の核酸配列を示す（配列番号５）。
【００４７】
【図１４Ａ】ＶＰ１  ＧＩ．３  ＬｉｌｌａＥｄｅｔ  ２００８  Ｈ２ＤＧ７０のアミノ酸配列を示す（配列番号６）。
【図１４Ｂ】ｈＣｏｄ  ＧＩ．３  ＬｉｌｌａＥｄｅｔ  ２００８  Ｈ２ＤＧ７０の核酸配列を示す（配列番号７）。
【００４８】
【図１５Ａ】ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  ＨＵＮ５４０７  ２０１３  ＨＵＮ  ＡＨＷ９９８３２のアミノ酸配列を示す（配列番号１２）。
【図１５Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  ＨＵＮ５４０７  ２０１３  ＨＵＮ  ＡＨＷ９９８３２の核酸配列を示す（配列番号３３）。
【００４９】
【図１６Ａ】ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４  ＶＰ１のアミノ酸配列を示す（配列番号１０１）。
【図１６Ｂ】ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４  ＶＰ１の核酸配列を示す（配列番号１７５）。
【図１６Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１  Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ２０８  ２０１０  ＵＳＡ  ＡＦＡ５５１７４のアミノ酸配列を示す（配列番号１３）。
【００５０】
【図１７Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  ２０１１  ＴＷ  ＡＧＴ３９２０６のアミノ酸配列を示す（配列番号１４）。
【図１７Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  ２０１１  ＴＷ  ＡＧＴ３９２０６の核酸配列を示す（配列番号４０）。
【００５１】
【図１８Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．３  Ｊｉｎｇｚｈｏｕ  ２０１３４０２  ＣＨＮ  ＡＧＸ０１０９５のアミノ酸配列を示す（配列番号１５）。
【図１８Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．３  Ｊｉｎｇｚｈｏｕ  ２０１３４０２  ＣＨＮ  ＡＧＸ０１０９５の核酸配列を示す（配列番号４５）。
【００５２】
【図１９Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４  Ｓｙｄｎｅｙ  ＮＳＷ０５１４  ２０１２のアミノ酸配列を示す（配列番号１６）。
【図１９Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４  Ｓｙｄｎｅｙ  ＮＳＷ０５１４  ２０１２の核酸配列を示す（配列番号５２）。
【図１９Ｃ】ＶＰ１  ＵＳ９６：ＧＩＩ．４  Ｄｒｅｓｄｅｎ１７４  １９９７  ＤＥ  ＡＹ７４１８１１のアミノ酸配列を示す（配列番号２７）。
【図１９Ｄ】ＶＰ１  ＦＨ０２：ＧＩＩ．４  ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ  ２００２  ＵＳ  ＡＹ５０２０２３のアミノ酸配列を示す（配列番号２８）。
【図１９Ｅ】ＶＰ１  Ｈｎｔ０４：ＧＩＩ．４  Ｈｕｎｔｅｒ−ＮＳＷ５０４Ｄ  ２００４  ＡＵ  ＤＱ０７８８１４のアミノ酸配列を示す（配列番号２９）。
【図１９Ｆ】ＶＰ１  ２００６ｂ：ＧＩＩ．４  Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ−ＮＳＷ６９６Ｔ  ２００６  ＡＵ  ＥＦ６８４９１５のアミノ酸配列を示す（配列番号３０）。
【図１９Ｇ】ＶＰ１ＮＯ０９：ＧＩＩ．４  Ｏｒａｎｇｅ−ＮＳＷ００１Ｐ  ２００８  ＡＵ  ＧＱ８４５３６７のアミノ酸配列を示す（配列番号３１）。
【００５３】
【図２０】ＶＰ１  ＧＩＩ．５  Ａｌｂｅｒｔａ  ２０１３  ＣＡ  ＡＬＴ５４４８５のアミノ酸配列を示す（配列番号１７）。
【００５４】
【図２１Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．６  Ｏｈｉｏ  ２０１２  Ｍ９Ｔ０２０のアミノ酸配列を示す（配列番号２０）。
【図２１Ｂ】ｈＣｏｄ最適化ＶＰ１  ＧＩＩ．６  Ｏｈｉｏ  ２０１２  Ｍ９Ｔ０２０の核酸配列を示す（配列番号２１）。
【００５５】
【図２２】ＶＰ１  ＧＩＩ．７  Ｍｕｓａ  ２０１０  ＡＩＩ７３７７４のアミノ酸配列を示す（配列番号１８）。
【００５６】
【図２３Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ２０６＿２０１０＿ＵＳＡ＿ＡＥＩ２９５８６のアミノ酸配列を示す（配列番号１９）。
【図２３Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ２０６＿２０１０＿ＵＳＡ  ＡＥＩ２９５８６の核酸配列を示す（配列番号８７）。
【００５７】
【図２４Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１３  ＶＡ１７３  ２０１０  Ｈ９ＡＷＵ４のアミノ酸配列を示す（配列番号２２）。
【図２４Ｂ】ヒトコドン最適化ＶＰ１  ＧＩＩ．１３  ＶＡ１７３  ２０１０  Ｈ９ＡＷＵ４の核酸配列を示す（配列番号２３）。
【００５８】
【図２５】ＶＰ１  ＧＩＩ．１４  Ｓａｇａ  ２００８  ＪＰＮ  ＡＤＥ２８７０１のアミノ酸配列を示す（配列番号３２）。
【００５９】
【図２６Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６のアミノ酸配列を示す（配列番号２４）。
【図２６Ｂ】ヒトコドン最適化ＶＰ１  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６の核酸配列を示す（配列番号２５）。
【００６０】
【図２７】ＶＰ１  ＧＩＩ．２１  Ｓａｌｉ  ２０１１  ＵＳＡ  ＡＦＣ８９６６５のアミノ酸配列を示す（配列番号２６）。
【００６１】
【図２８Ａ】改変ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８＿Ｑ８４Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号９８）。
【図２８Ｂ】ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８＿Ｑ８４Ｓの核酸配列を示す（配列番号１６７）。
【図２８Ｃ】ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｓ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号８）。
【図２８Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｓ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号９）。
【図２８Ｅ】ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１０）。
【図２８Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号１１）。
【図２８Ｇ】ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１７０）。
【図２８Ｈ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号１６９）。
【図２８Ｉ】ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１７２）。
【図２８Ｊ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号１７１）。
【図２８Ｋ】ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１７４）。
【図２８Ｌ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．３  Ｌｉｌ０８＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号１７３）。
【図２８Ｍ】ＶＰ１＿ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８＿Ｓ９４Ｘのアミノ酸配列を示す（配列番号２９２）。ここで、Ｘは、Ｖ、Ｉ  Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。
【図２８Ｎ】ＶＰ１＿ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８＿Ｓ９４Ｘのヒトコドン最適化配列を示す（配列番号２９３）。ここで、Ｘは、Ｖ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＴＧ）、Ｉ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＴＣ）、Ｍ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＴＧ）、Ｔ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＣＣ）、Ｅ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＡＧ）、Ｄ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＡＣ）、Ｎ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＣ）、Ｑ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＧ）、Ｋ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＧ）又はＨ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＣ）をコードするコドンから選択される。
【００６２】
【図２９Ａ】改変ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ｑ８４Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号３４）。
【図２９Ｂ】改変ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ｑ８４Ｓの核酸配列を示す（配列番号３５）。
【図２９Ｃ】ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ａ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号３６）。
【図２９Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ａ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号３７）。
【図２９Ｅ】ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号３８）。
【図２９Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩ．５  Ｓｉｋｌｏｓ  Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌの核酸配列を示す（配列番号３９）。
【図２９Ｇ】改変ＶＰ１  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｒ８４Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号１７７）。
【図２９Ｈ】改変ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｒ８４Ｓの核酸配列を示す（配列番号１７６）。
【図２９Ｉ】改変ＶＰ１  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号１７９）。
【図２９Ｊ】改変ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉの核酸配列を示す（配列番号１７８）。
【図２９Ｋ】改変ＶＰ１ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号１８１）。
【図２９Ｌ】改変ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓの核酸配列を示す（配列番号１８０）。
【図２９Ｍ】ＶＰ１＿ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｘのアミノ酸配列を示す（配列番号２９０）。ここで、Ｘは、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。
【図２９Ｎ】ヒトコドン最適化ＶＰ１＿ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４＿Ｍ５７Ｘを示す（配列番号２９１）。ここで、Ｘは、Ｌ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＴＧ）、Ｇ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＧＣ）、Ｓ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＧＣ）、Ｔ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＣＣ）、Ｎ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＣ）、Ｑ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＧ）、Ｋ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＧ）又はＨ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＣ）をコードするコドンから選択される。
【００６３】
【図３０Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  Ｅ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号８５）。
【図３０Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  Ｅ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号８６）。
【図３０Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号４１）。
【図３０Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ＣＧＭＨ４７  Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号４２）。
【図３０Ｅ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号４３）。
【図３０Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号４４）。
【図３０Ｇ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１８２）。
【図３０Ｈ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号１８３）。
【図３０Ｉ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１８４）。
【図３０Ｊ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号１８５）。
【図３０Ｋ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１８６）。
【図３０Ｌ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１＿ＧＩＩ．２＿ＣＧＭＨ４７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号１８７）。
【００６４】
【図３１Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ｅ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号４６）。
【図３１Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ｅ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号４７）。
【図３１Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ａ９０Ｌのアミノ酸配列（配列番号４８）。
【図３１Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号４９）。
【図３１Ｅ】ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列（配列番号５０）。
【図３１Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｊｉｎｇ＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号５１）。
【００６５】
【図３２Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４  Ｓｙｄ１２  Ａ３９Ｖのアミノ酸配列を示す（配列番号５３）。
【図３２Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ａ３９Ｖの核酸配列を示す（配列番号５４）。
【図３２Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｖ４７Ｐのアミノ酸配列を示す（配列番号５５）。
【図３２Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｖ４７Ｐの核酸配列を示す（配列番号５６）。
【図３２Ｅ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｒ５３Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号５７）。
【図３２Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｒ５３Ｉの核酸配列を示す（配列番号５８）。
【図３２Ｇ】ＶＰ１；ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号５９）。
【図３２Ｈ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号６０）。
【図３２Ｉ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｓ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号６１）。
【図３２Ｊ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｓ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号６２）。
【図３２Ｋ】ＶＰ１ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Δ３５−４２のアミノ酸配列を示す（配列番号６３）。
【図３２Ｌ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Δ３５−４２の核酸配列を示す（配列番号６４）。
【図３２Ｍ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿ＳＳＴＡＶＡＴＡのアミノ酸配列を示す（配列番号６５）。
【図３２Ｎ】ｈＣｏｄＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿ＳＳＴＡＶＡＴＡの核酸配列を示す（配列番号６６）。
【図３２Ｏ】ＶＰ１ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｖのアミノ酸配列を示す（配列番号６７）。
【図３２Ｐ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｖの核酸配列を示す（配列番号６８）。
【図３２Ｑ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｖ４７Ｐのアミノ酸配列を示す（配列番号６９）。
【図３２Ｒ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｖ４７Ｐの核酸配列を示す（配列番号７０）。
【図３２Ｓ】ＶＰ１ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｒ５３Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号７１）。
【図３２Ｔ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｒ５３Ｉの核酸配列を示す（配列番号７２）。
【図３２Ｕ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号７３）。
【図３２Ｖ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号７４）。
【図３２Ｗ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２のアミノ酸配列を示す（配列番号７５）。
【図３２Ｘ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２の核酸配列を示す（配列番号７６）。
【図３２Ｙ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡのアミノ酸配列を示す（配列番号７７）。
【図３２Ｚ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡの核酸配列を示す（配列番号７８）。
【図３２ＡＡ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４  Ｓｙｄ１２  Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号１８８）。
【図３２ＢＢ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉの核酸配列を示す（配列番号１８９）。
【図３２ＣＣ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４  Ｓｙｄ１２  Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号１９０）。
【図３２ＤＤ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号１９１）。
【図３２ＥＥ】ヒトコドン最適化ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｘの核酸配列を示す（配列番号２８７）。ここで、Ｘは、Ａ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＣＣ）、Ｎ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＣ）、Ｋ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＧ）又はＨ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＣ）をコードするコドンから選択される。
【図３２ＦＦ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｘのアミノ酸配列を示す（配列番号２８６）。ここで、Ｘは、Ａ、Ｎ、Ｋ又はＨから選択される。
【図３２ＧＧ】ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｘのヒトコドン最適化配列の核酸配列を示す（配列番号２８９）。ここで、Ｘは、Ｉ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＴＣ）、Ｍ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＴＧ）、Ｇ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＧＣ）、Ｓ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＧＣ）、Ｅ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＡＧ）、Ｄ（例えば、ＸＸＸ＝ＧＡＣ）、Ｎ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＣ）、Ｑ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＧ）、Ｋ（例えば、ＸＸＸ＝ＡＡＧ）又はＨ（例えば、ＸＸＸ＝ＣＡＣ）をコードするコドンから選択される。
【図３２ＨＨ】ＶＰ１＿ＧＩＩ．４＿Ｓｙｄ１２＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｘのアミノ酸配列を示す（配列番号２８８）。ここで、Ｘは、Ｉ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。
【００６６】
【図３３Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｅ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号７９）。
【図３３Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｅ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号８０）。
【図３３Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｓ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号８１）。
【図３３Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｓ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号８２）。
【図３３Ｅ】ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号８３）。
【図３３Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｏｈｉｏ＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号８４）。
【図３４Ａ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ｅ８０Ｓのアミノ酸配列を示す（配列番号８８）。
【図３４Ｂ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ｅ８０Ｓの核酸配列を示す（配列番号８９）。
【図３４Ｃ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号９０）。
【図３４Ｄ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号９１）。
【図３４Ｅ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号９２）。
【図３４Ｆ】ｈＣｏｄ  ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿ＨＳ１０＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号９３）。
【図３４Ｇ】ＶＰ１  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ３９Ｖのアミノ酸配列を示す（配列番号１９２）。
【図３４Ｈ】ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ３９Ｖの核酸配列を示す（配列番号１９３）。
【図３４Ｉ】ＶＰ１ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ｒ５３Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号１９４）。
【図３４Ｊ】ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ｒ５３Ｉの核酸配列を示す（配列番号１９５）。
【図３４Ｋ】ＶＰ１ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号１９６）。
【図３４Ｌ】ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号１９７）。
【図３４Ｍ】ＶＰ１ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ３９Ｖ＋Ｍ５３Ｉのアミノ酸配列を示す（配列番号１９８）。
【図３４Ｎ】ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ａ３９Ｖ＋Ｍ５３Ｉの核酸配列を示す（配列番号１９９）。
【図３４Ｏ】ＶＰ１ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌのアミノ酸配列を示す（配列番号２００）。
【図３４Ｐ】ＶＰ１  ｈＣｏｄ  ＧＩＩ．１７  Ｋａｗａ  ２０１４  Ａ０Ａ０７７ＫＶＵ６＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの核酸配列を示す（配列番号２０１）。
【００６７】
【図３５Ａ】ＶＰ２＿ＧＩ．１＿Ｎｏｒｗａｌｋのアミノ酸配列を示す（配列番号９９）。
【図３５Ｂ】ヒトコドン最適化ＶＰ．２＿ＧＩ１＿Ｎｏｒｗａｌｋの核酸配列を示す（配列番号１００）。
【００６８】
【図３６Ａ】ＶＰ２＿ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８のアミノ酸配列を示す（配列番号９４）。
【図３６Ｂ】ヒトコドン最適化ＶＰ２＿ＧＩ．３＿Ｌｉｌ０８の核酸配列を示す（配列番号９５）。
【００６９】
【図３７Ａ】ＶＰ２＿ＧＩＩ．６＿ＨＳ１０のアミノ酸配列を示す（配列番号９６）。
【図３７Ｂ】ヒトコドン最適化ＶＰ２＿ＧＩＩ６＿ＨＳ１０の核酸配列を示す（配列番号９７）。
【００７０】
【図３８Ａ】左Ｔ−ＤＮＡから右Ｔ−ＤＮＡまでのクローニングベクター１１９０を示す（配列番号１６２）。
【図３８Ｂ】２Ｘ３５ＳプロモーターからＮＯＳターミネーターまでの構築物２７２４を示す（配列番号１６３）。
【図３８Ｃ】左Ｔ−ＤＮＡから右Ｔ−ＤＮＡまでのクローニングベクター３６７７を示す（配列番号１６４）。
【図３８Ｄ】２Ｘ３５ＳプロモーターからＮＯＳターミネーターまでの構築物４１３３を示す（配列番号１６５）。
【図３８Ｅ】２Ｘ３５ＳプロモーターからＮＯＳターミネーターまでの構築物４１３５を示す（配列番号１６６）。
【００７１】
【図３９Ａ】構築物２７２４（ＶＰ１  Ｗｔ  ＧＩ．１  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図３９Ｂ】構築物３３００（ＶＰ１  Ｗｔ  ＧＩ．２  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図３９Ｃ】構築物３９７９（ＶＰ１  Ｗｔ  ＧＩ．３  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【００７２】
【図４０Ａ】構築物４１４０（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４０Ｂ】構築物４１４１（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４０Ｃ】構築物４１４２（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｐ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４０Ｄ】構築物４１７９（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４０Ｅ】構築物４１８０（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４０Ｆ】構築物４１８１（ＶＰ１  ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【００７３】
【図４１Ａ】構築物３９８０（ＶＰ１  Ｗｔ  ＧＩ．５  ｈＣｏｄ（Ｗｔ  ＧＩ．５  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４１Ｂ】構築物４１３０（ＶＰ１  ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ）の略図を示す。
【図４１Ｃ】構築物４１３１（ＶＰ１  ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４１Ｄ】構築物４１３２（ＶＰ１  ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４１Ｅ】構築物４２１０（ＶＰ１  ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４１Ｆ】構築物４２１７（ＶＰ１  ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４１Ｇ】構築物４２１８（ＶＰ１  ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【００７４】
【図４２Ａ】構築物３９８２（Ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩＩ．２  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４２Ｂ】構築物４１４３（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ）の略図を示す。
【図４２Ｃ】構築物４１４４（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４２Ｄ】構築物４１４５（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４２Ｅ】構築物４１８２（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４２Ｆ】構築物４１８３（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４２Ｇ】構築物４１８４（ＶＰ１  ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【００７５】
【図４３Ａ】構築物３９８３（Ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩＩ．３  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４３Ｂ】構築物４１４６（ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４３Ｃ】構築物４１４７（ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４３Ｄ】構築物４１４８（ＶＰ１  ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）の略図を示す。
【００７６】
【図４４Ａ】構築物３７６０（Ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩＩ．４  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｂ】構築物４１５５（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｃ】構築物４１５６（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｄ】構築物４１５７（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｅ】構築物４１３３（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｆ】構築物４１３４（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｇ】構築物４１５８（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｈ】構築物４１５９（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｉ】構築物４１６５（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｊ】構築物４１６６（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｋ】構築物４１６７（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｌ】構築物４１３５（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｍ】構築物４１６８（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｎ】構築物４１６９（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｏ】構築物４１８５（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４４Ｐ】構築物４１８６（ＶＰ１  ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【００７７】
【図４５Ａ】構築物３９９３（Ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩＩ．６  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４５Ｂ】構築物４１４９（ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４５Ｃ】構築物４１５０（ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４５Ｄ】構築物４１５１（ＶＰ１  ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ）の略図を示す。
【００７８】
【図４６Ａ】構築物３９９５（Ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩＩ．１２  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４６Ｂ】構築物４１３６（ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４６Ｃ】構築物４１３７（ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４６Ｄ】構築物４１３８（ＶＰ１  ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）の略図を示す。
【図４６Ｅ】構築物４２３４（ＶＰ１  ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ）の略図を示す。
【図４６Ｆ】構築物４２３５（ＶＰ１  ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ）の略図を示す。
【図４６Ｇ】構築物４２３２（ＶＰ１  ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ）の略図を示す。
【図４６Ｈ】構築物４２３６（ＶＰ１  ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ）の略図を示す。
【図４６Ｉ】構築物４２３３（ＶＰ１  ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）の略図を示す。
【００７９】
【図４７Ａ】構築物２７２５（Ｗｔ  ＶＰ２  ＧＩ．１）の略図を示す。
【図４７Ｂ】構築物３３０３（Ｗｔ  ＶＰ２  ＧＩ．３  ｈＣｏｄ）の略図を示す。
【図４７Ｃ】構築物３３０７（Ｗｔ  ＶＰ２  ＧＩＩ．６）の略図を示す。
【００８０】
【図４８】構築物１１９０（クローニングベクター１１９０）の略図を示す。
【００８１】
【図４９】構築物３６７７（クローニングベクター３６７７）の略図を示す。
【００８２】
【図５０Ａ】ＧＩＩ．４  Ｐ８０Ｘ構築物（クローニングベクター）の略図を示し、ここで、Ｘは、Ａ（構築物４２８１）、Ｎ（構築物４２８５）、Ｋ（構築物４２８６）又はＨ（構築物４２８７）から選択される。
【図５０Ｂ】ＧＩＩ．４  Ｐ８０ｓ＋Ａ３９Ｘ構築物（クローニングベクター）の略図を示し、ここで、Ｘは、Ｉ（構築物４２５６）、Ｍ（構築物４２５７）、Ｇ（構築物４２５８）、Ｓ（構築物４２５９）、Ｅ（構築物４２６０）、Ｄ（構築物４２６１）、Ｎ（構築物４２６２）、Ｑ（構築物４２６３）、構築物Ｋ（４２６４）又はＨ（構築物４２６５）から選択される。
【００８３】
【図５１】ＧＩ．７  Ｍ５７Ｘ構築物（クローニングベクター）の略図を示し、ここで、Ｘは、Ｌ（構築物４２６６）、Ｇ（構築物４２６８）、Ｓ（構築物４２６９）、Ｔ（構築物４２７０）、Ｎ（構築物４２７３）、Ｑ（構築物４２７４）、Ｋ（構築物４２７５）又はＨ（構築物４２７６）から選択される。
【００８４】
【図５２】Ｇ．３  Ｓ９４Ｘ構築物（クローニングベクター）の略図を示し、ここで、Ｘは、Ｖ（構築物４２８８）、Ｉ（構築物４２８９）、Ｍ（構築物４２９０）、Ｔ（構築物４２９２）、Ｅ（構築物４２９３）、Ｄ（構築物４２９４）、Ｎ（構築物４２９５）、Ｑ（構築物４２９６）、Ｋ（構築物４２９７）又はＨ（構築物４２９８）から選択される。
【００８５】
【発明を実施するための形態】
【００８６】
以下に、好ましい実施形態について説明する。
【００８７】
本明細書で使用される場合、用語「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」ならびにそれらの文法的変形は、包括的であるか、制限のないものであり、かつ追加の、記載されていない要素及び／又は方法工程を除外しない。用語「から本質的になる」は、使用又は方法に関連して本明細書で使用される場合、追加の要素及び／又は方法工程が存在し得るが、これらの追加は、記載される方法又は使用が機能する方法に実質的に影響を及ぼさないことを意味する。用語「からなる」は、使用又は方法に関連して本明細書で使用される場合、追加の要素及び／又は方法工程の存在を除外する。特定の要素及び／又は工程を含むものとして本明細書に記載される使用又は方法はまた、特定の実施形態では、これらの実施形態が具体的に言及されているかどうかにかかわらず、それらの要素及び／又は工程から本質的になり得、他の実施形態では、それらの要素及び／又は工程からなる。さらに、単数形の使用は複数形を含み、「又は」は、特に明記しない限り「及び／又は」を意味する。本明細書で使用される場合、用語「複数の」は、１つよりも大きい、例えば２つ以上、３つ以上、４つ以上などを意味する。本明細書で他に定義されない限り、本明細書で使用されるあらゆる技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約」は、所与の値からの約±１０％の変動を指す。そのような変動は、それが具体的に言及されているかどうかにかかわらず、本明細書で提供される任意の所与の値に常に含まれることを理解されたい。本明細書で用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と組み合わせて使用される場合、「ａ」又は「ａｎ」という語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」及び「１つ又は複数」の意味とも一致する。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「植物」、「植物の一部」、「植物部分」、「植物物質」、「植物バイオマス」、「植物材料」、植物抽出物」又は「植物葉」は、本明細書に記載される１つ又は複数の核酸の発現のための転写機構、翻訳機構及び翻訳後機構を提供することができ、及び／又はそこから発現されたタンパク質又はＶＬＰが抽出及び精製され得る、植物全体、組織、細胞もしくはそのいずれかの画分、細胞内植物成分、細胞外植物成分、植物の液体抽出物もしくは固体抽出物、又はそれらの組合せを含み得る。植物には、限定するものではないが、例えば、カノーラ、ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）種、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、ニコチアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）種、（タバコ）例えば、ニコチアナベンサミアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）、ニコチアナルスティカ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｒｕｓｔｉｃａ）、ニコチアナタバカム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ）、ニコチアナアラタ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ａｌａｔａ）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ）、アルファルファ、ジャガイモ、サツマイモ（イポモアバタタス（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｂａｔａｔｕｓ））、チョウセンニンジン、エンドウ豆、カラス麦、イネ、大豆、小麦、大麦、ヒマワリ、ワタ、トウモロコシ（ｃｏｒｎ）、ライ麦（セカレセレアレ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ））、ソルガム（ソルガムビコロ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ）、ソルガムバルガレ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ））、ベニバナ（カーサムスティントリウス（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ））を含む農作物が含まれ得る。
【００８９】
本明細書で使用される場合、用語「植物部分」は、限定するものではないが、葉、茎、根、花、果実；葉、茎、根、花、果実から得られる植物細胞；葉、茎、根、花、果実から得られる植物抽出物；又はそれらの組合せを含む植物の任意の部分を指す。本明細書で使用される場合、用語「植物抽出物」は、植物、植物の一部、植物細胞又はそれらの組合せを物理的に（例えば、凍結後、好適な緩衝液中で抽出することによって）、機械的に（例えば、植物又は植物の一部を粉砕又は均質化した後、好適な緩衝液中で抽出することによって）、酵素的に（例えば、細胞壁分解酵素を使用して）、化学的に（例えば、１つ以上のキレート剤又は緩衝液を使用して）、又はそれらの組合せによって処理した後に得られる植物由来生成物を指す。植物抽出物をさらに処理して、望ましくない植物成分、例えば細胞壁破片を除去してもよい。植物、植物の一部、又は植物細胞からの１つ以上の成分、例えば、植物、植物の一部、又は植物細胞からのタンパク質（タンパク質複合体、タンパク質超構造体及び／又はＶＬＰを含む）、核酸、脂質、炭水化物又はそれらの組合せの回収を補助するために、植物抽出物が得られてもよい。植物抽出物がタンパク質を含む場合、それはタンパク質抽出物と呼ばれ得る。タンパク質抽出物は、植物組織からの１つ以上のタンパク質、タンパク質複合体、タンパク質超構造体及び／又はＶＬＰを含む粗植物抽出物、部分的に精製された植物もしくはタンパク質抽出物又は精製生成物であり得る。所望により、タンパク質抽出物又は植物抽出物は、当業者に公知の技術を使用して部分的に精製されてもよく、例えば、抽出物は、塩類析出又はｐＨ析出、遠心分離、勾配密度遠心分離、濾過、クロマトグラフィー、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー又はそれらの組合せに供されてもよい。当業者に公知の技術を使用して、タンパク質抽出物を精製してもよい。
【００９０】
本明細書で使用される場合、用語「核酸セグメント」は、目的のタンパク質をコードする核酸の配列を指す。核酸セグメントは、核酸の配列に加えて、核酸の配列に機能的に連結された調節領域及びターミネーターを含む。調節領域は、例えば、プロモーター、及び場合により、プロモーターに機能的に連結されたエンハンサー要素を含み得る。
【００９１】
本明細書で使用される場合、用語「核酸複合体」は、２つ、又は２つを超える核酸セグメントの組合せを指す。２つ、又は２つを超える核酸セグメントは、単一の核酸中に存在し得、それにより、核酸複合体は、２つ、又は２つを超える核酸セグメントを含み、各核酸セグメントは、調節領域及びターミネーターの制御下にある。あるいは、核酸複合体は、２つ以上の別個の核酸を含み得、核酸の各々は、１つ又は複数の核酸セグメントを含み、各核酸セグメントは、調節領域及びターミネーターの制御下にある。例えば、核酸複合体は、２つの核酸セグメントを含む１つの核酸を含み得、核酸複合体は２つの核酸を含み得、各核酸は１つの核酸セグメントを含むか、核酸複合体は２つ、又は２つを超える核酸を含み得、各核酸は１つ又は複数の核酸セグメントを含む。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」又は「発現ベクター」は、宿主細胞（例えば植物細胞）に外因性核酸配列を移入し、宿主細胞内の外因性核酸配列の発現を導くための組換え核酸を指す。「発現カセット」は、宿主細胞内の目的の核酸の転写のための適切なプロモーター又は他の調節エレメントの制御下にあり、それらに動作可能に（又は機能的に）連結された目的の核酸を含むヌクレオチド配列を指す。当業者が理解するように、発現カセットは、植物宿主において活性な任意の配列である終結（ターミネーター）配列を含み得る。例えば、終結配列は、ｂｉｐａｒｔｉｔｅ  ＲＮＡウイルス（ｂｉｐａｒｔｉｔｅ  ＲＮＡ  ｖｉｒｕｓ）、例えば、コモウイルスのＲＮＡ−２ゲノムセグメントに由来し得、終結配列はＮＯＳターミネーターであり得るか、ターミネーター配列は、アルファルファプラストシアニン遺伝子の３’ＵＴＲから得られ得る。
【００９３】
本開示の構築物は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）をさらに含み得る。３’非翻訳領域は、ポリアデニル化シグナルと、ｍＲＮＡプロセシング又は遺伝子発現に影響を与えることができる任意の他の調節シグナルとを含む。ポリアデニル化シグナルは、通常、ｍＲＮＡ前駆体の３’末端にポリアデニル酸トラックを付加することを特徴とする。ポリアデニル化シグナルは、一般に、標準形５’ＡＡＴＡＡＡ−３’に対する相同性の存在によって認識されるが、変異は珍しくはない。好適な３’非翻訳領域の非限定的な例には、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）腫瘍誘導（Ｔｉ）プラスミド遺伝子、例えば、ノパリンシンターゼ（Ｎｏｓ遺伝子）、及び大豆貯蔵タンパク質遺伝子などの植物遺伝子のポリアデニル化シグナルを含む３’転写非翻訳領域、リブロース−１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ遺伝子の小サブユニット（ｓｓＲＵＢＩＳＣＯ；参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，９６２，０２８号）、プラストシアニン発現の調節に使用されるプロモーターが挙げられる。
【００９４】
「調節領域」、「調節エレメント」又は「プロモーター」とは、常にではないが、典型的には、ＤＮＡもしくはＲＮＡのいずれか、又はＤＮＡ及びＲＮＡの両方から構成され得る遺伝子のタンパク質コード領域の上流の核酸の一部を意味する。調節領域が活性であり、目的のヌクレオチド配列と機能的に会合しているか、機能的に連結されている場合、これは目的のヌクレオチド配列の発現をもたらし得る。調節エレメントは、器官特異性を媒介することができるか、発生的又は一時的な遺伝子活性化を制御することができ得る。「調節領域」には、プロモーターエレメント、基本のプロモーター活性を示すコアプロモーターエレメント、外的な刺激に応答して誘導可能なエレメント、負の調節エレメントなどのプロモーター活性を媒介するエレメント、又は転写エンハンサーが含まれる。本明細書で使用される場合、「調節領域」には、転写後に活性であるエレメント、例えば、遺伝子発現を調節する調節エレメント、例えば、翻訳及び転写エンハンサー、翻訳及び転写リプレッサー、上流活性化配列ならびにｍＲＮＡ不安定デターミナントも含まれる。これらの後者のエレメントのいくつかは、コード領域に対して近位に位置し得る。
【００９５】
本開示の文脈では、用語「調節エレメント」又は「調節領域」は、典型的には、構造遺伝子のコード配列に対して常にではないが通常上流（５’）のＤＮＡの配列を指し、これはＲＮＡポリメラーゼ及び／又は特定の部位で転写を開始するのに必要とされる他の因子のための認識の提供によって、コード領域の発現を制御する。しかし、イントロン内、又は配列の３’内に位置する他のヌクレオチド配列もまた、目的のコード領域の発現の調節に寄与し得ることを理解されたい。特定の部位での開始を確実にするためにＲＮＡポリメラーゼ又は他の転写因子に対する認識を提供する調節エレメントの例には、プロモーターエレメントが挙げられる。すべてではないが大部分の真核生物プロモーターエレメントは、通常は転写開始部位の約２５塩基対上流に位置するアデノシン及びチミジンのヌクレオチド塩基対から構成される保存された核酸配列であるＴＡＴＡボックスを含む。プロモーターエレメントは、転写の開始に関与する基本のプロモーターエレメント、ならびに遺伝子発現を改変する他の調節エレメントを含み得る。
【００９６】
発生的に調節されるもの、誘導可能なもの、又は構成的なものを含むいくつかのタイプの調節領域がある。発生的に調節される調節領域、又はその制御下の遺伝子の差次的発現を制御する調節領域は、特定の器官、又は器官の組織内でその器官又は組織の発生の間の特定の時間に活性化される。ただし、発生的に調節されるいくつかの調節領域は特定の発生段階で特定の器官又は組織内で優先的に活性であってよく、それらは発生的に調節される様式で、又は植物内の他の器官もしくは組織内で基底レベルで同様に活性であってもよい。組織特異的調節領域の例は、例えば、ナピンプロモーター及びクルシフェリンプロモーターを含む特異的な調節領域を参照されたい（Ｒａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５２：５９５−５９９；Ｂｉｌｏｄｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  １４：１２５−１３０）。葉特異的プロモーターの例には、プラストシアニンプロモーターが挙げられる（参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１２５，９７８号を参照）。
【００９７】
誘導可能調節領域とは、誘導物質に応答して１つ以上のＤＮＡ配列又は遺伝子の転写を直接的又は間接的に活性化することができるものである。誘導物質の非存在下では、ＤＮＡ配列又は遺伝子は転写されない。典型的には、転写を活性化するために誘導可能調節領域に特異的に結合するタンパク質因子は、不活性形態で存在し得、その後、誘導物質によって直接的又は間接的に活性形態に転換される。ただし、タンパク質因子が存在しない場合もある。誘導物質は、化学物質、例えば、タンパク質、代謝物質、増殖調節物質、除草剤もしくはフェノール化合物、又は熱、低温、塩もしくは毒性元素によって直接的に、もしくは病原体もしくは病因物質、例えば、ウイルスの作用を介して間接的に課される生理学的ストレスであり得る。誘導可能調節領域を含む植物細胞は、噴霧、散水、加熱又は類似の方法などによって細胞又は植物に対して誘導物質を外部から適用することによって、誘導物質に曝露され得る。誘導可能調節エレメントは、植物遺伝子又は非植物遺伝子のいずれかに由来し得る（例えば、Ｃ．ａｎｄ  Ｌｅｎｋ，Ｉ．Ｒ．Ｐ．，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．３，３５２−３５８）。潜在的な誘導可能プロモーターの例には、限定するものではないが、テトラサイクリン誘導可能プロモーター（Ｇａｔｚ，Ｃ．，１９９７，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，８９−１０８）、ステロイド誘導可能プロモーター（Ａｏｙａｍａ，Ｔ．ａｎｄ  Ｃｈｕａ，Ｎ．Ｈ．，１９９７，Ｐｌａｎｔ  Ｊ．２，３９７−４０４）及びエタノール誘導可能プロモーター（Ｓａｌｔｅｒ，Ｍ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １６，１２７−１３２；Ｃａｄｄｉｃｋ，Ｍ．Ｘ．，ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６，１７７−１８０）サイトカイニン誘導可能ＩＢ６及びＣＫＩ１遺伝子（Ｂｒａｎｄｓｔａｔｔｅｒ，Ｉ．ａｎｄ  Ｋｉｅｂｅｒ，Ｊ．Ｊ．，１９９８，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  １０，１００９−１０１９；Ｋａｋｉｍｏｔｏ，Ｔ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４，９８２−９８５）及びオーキシン誘導可能エレメント、ＤＲ５（Ｕｌｍａｓｏｖ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ９，１９６３−１９７１）が挙げられる。
【００９８】
構成的調節領域は、植物の様々な部分を通して、及び植物発生を通して連続的に、遺伝子の発現を導く。公知の構成的調節エレメントの例には、ＣａＭＶ  ３５Ｓ転写物（ｐ３５Ｓ；Ｏｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ，３１３：８１０−８１２；参照により本明細書に組み込まれる）、コメアクチン１（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，１９９１，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，３：１１５５−１１６５）、アクチン２（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｌａｎｔ  Ｊ．，１０：１０７−１２１）、又はｔｍｓ２（米国特許第５，４２８，１４７号）、及びトリオースリン酸イソメラーゼ１（Ｘｕ  ｅｔ．ａｌ．，１９９４，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０６：４５９−４６７）遺伝子、トウモロコシユビキチン１遺伝子（Ｃｏｒｎｅｊｏ  ｅｔ  ａｌ，１９９３，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９：６３７−６４６）、アラビドプシス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）ユビキチン１及び６遺伝子（Ｈｏｌｔｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ，１９９５，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９：６３７−６４６）、タバコ翻訳開始因子４Ａ遺伝子（Ｍａｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９５  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９：９９５−１００４）；キャッサバ葉脈モザイクウイルスプロモーター、ｐＣＡＳ、（Ｖｅｒｄａｇｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）；リブロース二リン酸カルボキシラーゼ（ｒｉｂｕｌｏｓｅ  ｂｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）の小サブユニットのプロモーター、ｐＲｂｃＳ：（Ｏｕｔｃｈｋｏｕｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、ｐＵｂｉ（単子葉植物及び双子葉植物用）と会合するプロモーターが挙げられる。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「構成的」は、構成的調節領域の制御下のヌクレオチド配列があらゆる細胞型で同じレベルで発現されることを必ずしも示さないが、存在量の変動が多くの場合観察されても、遺伝子が広範囲の細胞型で発現されることを示す。
【０１００】
上記の発現構築物は、ベクター内に存在し得る。ベクターは、生物又は宿主のゲノムへの発現カセットの移入及び組み込みを可能にする境界配列を含み得る。構築物は、植物バイナリーベクター、例えば、ｐＰＺＰに基づくバイナリー形質転換ベクター（Ｈａｊｄｕｋｉｅｗｉｃｚ，ｅｔ  ａｌ．１９９４）であり得る。他の例示的な構築物には、ｐＢｉｎ１９が挙げられる（Ｆｒｉｓｃｈ，Ｄ．Ａ．，Ｌ．Ｗ．Ｈａｒｒｉｓ−Ｈａｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２７：４０５−４０９を参照）。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「天然の」、「天然のタンパク質」又は「天然のドメイン」は、野生型と同一の一次アミノ酸配列を有するタンパク質又はドメインを指す。天然のタンパク質又はドメインは、野生型配列に対して１００％の配列類似性を有するヌクレオチド配列によってコードされ得る。天然のアミノ酸配列はまた、ｈＣｏｄ−ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列が、天然のアミノ酸配列と１００％の配列同一性を示すという条件で、野生型ヌクレオチド配列と比較した場合に増加したＧＣ含量を有するヒトコドン（ｈＣｏｄ）最適化ヌクレオチド配列又はヌクレオチド配列によってコードされ得る。
【０１０２】
「ヒトコドン最適化」又は「ｈＣｏｄ」ヌクレオチド配列であるヌクレオチド配列とは、ヒトヌクレオチド配列のオリゴヌクレオチド配列内に一般的に見られるコドン使用頻度に近づくオリゴヌクレオチド配列又はその断片の合成のための適切なＤＮＡヌクレオチドの選択を意味する。「増加したＧＣ含量」とは、対応する天然のオリゴヌクレオチド配列と比較した場合に、オリゴヌクレオチド配列のコード部分の長さにわたって、例えば、約１％〜約３０％又はそれらの間の任意の量のＧＣ含量の増加を有するコドン使用頻度に近づくための、オリゴヌクレオチド配列又はその断片の合成のための適切なＤＮＡヌクレオチドの選択を意味する。例えば、オリゴヌクレオチド配列のコード部分の長さにわたって、約１％、約２％、約４％、約６％、約８％、約１０％、約１２％、約１４％、約１６％、約１８％、約２０％、約２２％、約２４％、約２６％、約２８％、約３０％又はそれらの間の任意の量から。以下に記載されるように、ヒトコドン最適化ヌクレオチド配列、又は（野生型ヌクレオチド配列と比較した場合に）増加したＧＣ含量を有するヌクレオチド配列は、非ヒト最適化（又は低いＧＣ含量の）ヌクレオチド配列の発現と比較した場合に、植物、植物の一部、又は植物細胞内で増加した発現を示す。
【０１０３】
ノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質（改変ＶＰ１タンパク質又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質とも呼ばれる）、及び植物内でノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質を産生する方法が本明細書に記載される。改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質のいくつかは、非ＧＩ．１  ＶＰ１のＳドメインに、ＧＩ．１  Ｓドメインに見出される対応するアミノ酸への特異的置換、改変又は変異を含む。特定のノロウイルス遺伝子型では、特定のアミノ酸をＧＩ．１  ＶＰ１に見出される対応するアミノ酸に変異させると、野生型（非ＧＩ．１）ＶＰ１及び／又はＶＬＰと比較して、同等の、又は改善されたＶＰ１及び／又はＶＬＰ特性がもたらされることが観察されている。ＶＰ１及び／又はＶＬＰの改善された特性の例には、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１の収量と比較して、植物細胞内で発現した場合のＶＰ１タンパク質収量の増加、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１を含むＶＬＰの密度と比較して、（例えば、密度勾配分離、及び場合によりＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び／又はウエスタン分析を使用して決定して）改変ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰの密度の増加、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１を含むＶＬＰの完全性、安定性又はその両方と比較して、改変ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰの完全性、安定性、又は完全性及び安定性の両方の改善、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型のＶＬＰ産生の野生型レベルと比較して、植物細胞内で発現した場合のＶＬＰ収量の増加、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１を含むＶＬＰの蓄積と比較して、改変ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰの蓄積の改善、
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１と比較して、２３ｎｍ  ＶＬＰとは対照的に、３８ｎｍ  ＶＬＰに集合するＶＬＰの割合の増大、ならびに
・それらの組合せが挙げられる。
【０１０４】
例えば、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、及び改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を産生する方法は、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１；図２Ｃを参照）のアラインメントされた配列内の４３位、５７位、８４位及び９４位の任意の１つ以上のアミノ酸にＳドメインの置換、変異もしくは改変、もしくはノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失、又はそれらの組合せを含むＶＰ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み得る。ノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質をコードする配列は、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化され得る。
【０１０５】
図２Ｃに示される配列を参照すると、ノロウイルスＧＩ．１配列（配列番号１）は、他のノロウイルスＶＰ１配列がアラインメントされ得る参照配列として使用される。ＶＰ１タンパク質の「ＧＩＩ」ファミリーでは、ＶＰ１アミノ酸配列は、ＧＩ．１配列と比較して４アミノ酸の欠失を含み、１４〜１６位に３アミノ酸の欠失を含み、２６位に１アミノ酸の欠失を含む。結果として、ＧＩＩ  ＶＰ１配列とＧＩ  ＶＰ１配列との間のアラインメントは、アミノ酸１３の後に３アミノ酸、２６位の後に４アミノ酸だけオフセットされる。例えば、ＧＩ．１のアミノ酸８４はＧＩＩ．４のアミノ酸８０とアラインメントする（図２Ｃを参照）。したがって、８４位（ＧＩ．１）及び８０位（ＧＩＩ．４）での置換、改変又は変異への言及は、同じアラインメントされたアミノ酸を指す。
株            アミノ酸アラインメント      
ＧＩ：  ３９〜４６  ４３  ５７  ８４  ９４
ＧＩＩ：３５〜４２  ３９  ５３  ８０  ９０
【０１０６】
本明細書では、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの産生を植物内で増加させる方法も提供される。例えば、方法は、本明細書に記載されるように、植物、植物の一部、又は植物細胞に、ノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質をコードする核酸を導入することを含み得る。１つ又は複数の改変ノロウイルスタンパク質を含むＶＬＰを産生するために、植物、植物の一部、又は植物細胞内に、１つ又は複数のノロウイルス変異体タンパク質を発現させてもよい。あるいは、方法は、本明細書に記載の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードする核酸を含む植物、植物の一部、又は植物細胞を提供することと、１つ又は複数の改変ノロウイルスタンパク質を含むＶＬＰを産生するために改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードする核酸を発現させることとを含み得る。
【０１０７】
ＶＰ１変異体タンパク質を含むＶＬＰを産生する方法はまた、植物、植物の一部、又は植物細胞内で、ＶＰ２タンパク質をコードする核酸配列を共発現させる工程を含み得る。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「単一の構築物（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」又は「単一の構築物（ｓｉｎｇｌｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ）」は、単一の核酸配列を含む核酸ベクターを指す。本明細書で使用される場合、用語「二重構築物（ｄｕａｌ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」又は「二重構築物（ｄｕａｌ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ）」は、２つの核酸配列を含む核酸ベクターを指す。
【０１０９】
共発現とは、２つ以上のヌクレオチド配列の導入及び発現を意味し、２つ以上のヌクレオチド配列の各々は、植物、植物の一部、又は植物細胞内で、目的のタンパク質、又は目的のタンパク質の断片をコードする。２つ以上のヌクレオチド配列は、２つ以上のヌクレオチド配列の各々が別個の調節領域の制御下にあるように、１つのベクター内の植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され得る（例えば、二重構築物を含む）。あるいは、２つ以上のヌクレオチド配列は、別個のベクター（例えば、単一の構築物を含む）内の植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され得、各ベクターは、対応する核酸の発現のための適切な調節領域を含む。例えば、それぞれ別個のベクター上にあり、別個のアグロバクテリウムツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）宿主に導入された２つのヌクレオチド配列は、バキュームインフィルトレーションの前に、所望の体積（例えば、等しい体積、又は各Ａ．ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）宿主の比を変更してもよい）でそれぞれのＡ．ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）宿主の懸濁液を混合することによって共発現され得る。この方法では、複数のＡ．ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）懸濁液の共インフィルトレーションにより、複数の導入遺伝子の共発現が可能になる。
【０１１０】
本明細書に記載のノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質をコードすることを含む核酸は、植物、植物の一部、又は植物細胞内でのノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質の発現を増強する配列をさらに含み得る。発現を増強する配列には、ＣＰＭＶエンハンサー要素、又はノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質をコードする核酸と機能的に会合する植物由来の発現エンハンサーが含まれ得る。ＶＰ１変異体タンパク質をコードする配列はまた、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化され得る。さらに、ＶＰ２をコードする核酸は、ＶＰ１変異体タンパク質をコードする配列とともに共発現され得る。ＶＰ２をコードする核酸の共発現は、１つ又は複数のタイプのＶＰ１変異体タンパク質を含むＶＬＰの収量の増加、密度の増加、完全性の増加又はそれらの組合せをもたらし得る。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＰＭＶエンハンサー要素」は、当技術分野で公知のササゲモザイクウイルス（ＣＰＭＶ）ＲＮＡ２ポリペプチド又は改変ＣＰＭＶ配列を調節する５’ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列を指す。例えば、ＣＰＭＶエンハンサー要素又はＣＰＭＶ発現エンハンサーは、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１４３６７号、国際公開第２０１５／１０３７０４号、国際公開第２００７／１３５４８０号、国際公開第２００９／０８７３９１号、Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ  Ｆ．，ａｎｄ  Ｌｏｍｏｎｏｓｓｏｆｆ  Ｇ．Ｐ．，（２００８，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４８：ｐｐ．１２１２−１２１８）に記載されているヌクレオチド配列を含む。ＣＰＭＶエンハンサー配列は、それらが接続されている下流の異種オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の発現を増強することができる。ＣＰＭＶ発現エンハンサーは、ＣＰＭＶ  ＨＴ、ＣＰＭＶＸ（Ｘ＝１６０、１５５、１５０、１１４）、例えば、ＣＰＭＶ  １６０、ＣＰＭＶＸ＋（Ｘ＝１６０、１５５、１５０、１１４）、例えば、ＣＰＭＶ  １６０＋、ＣＰＭＶ−ＨＴ＋、ＣＰＭＶ  ＨＴ＋［ＷＴ１１５］又はＣＰＭＶ  ＨＴ＋［５１１］を含み得る（参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１４３５６７号、国際公開第２０１５／１０３７０４号）。ＣＰＭＶ発現エンハンサーは、ＣＰＭＶ発現エンハンサー配列及び目的のヌクレオチド配列と機能的に連結された調節領域を含む植物発現系内で使用され得る。用語「５’ＵＴＲ」もしくは「５’非翻訳領域」又は「５’リーダー配列」は、翻訳されないｍＲＮＡの領域を指す。５’ＵＴＲは、典型的に、転写開始部位で開始し、コード領域の翻訳開始部位又は開始コドンの直前で終結する。５’ＵＴＲは、ｍＲＮＡ転写物の安定性及び／又は翻訳を調節し得る。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、用語「植物由来の発現エンハンサー」は、植物に由来するヌクレオチド配列を指し、ヌクレオチド配列は５’ＵＴＲをコードする。植物由来の発現エンハンサーの例は、米国仮特許出願第６２／６４３，０５３号（２０１８年３月１４日に出願；参照により本明細書に組み込まれる）又はＤｉａｍｏｓ  Ａ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．（２０１６，Ｆｒｏｎｔ  Ｐｌｔ  Ｓｃｉ．７：１−１５；参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。植物由来の発現エンハンサーは、ｎｂＭＴ７８、ｎｂＡＴＬ７５、ｎｂＤＪ４６、ｎｂＣＨＰ７９、ｎｂＥＮ４２、ａｔＨＳＰ６９、ａｔＧＲＰ６２、ａｔＰＫ６５、ａｔＲＰ４６、ｎｂ３０Ｓ７２、ｎｂＧＴ６１、ｎｂＰＶ５５、ｎｂＰＰＩ４３、ｎｂＰＭ６４（配列番号１４）、及び米国特許第６２／６４３，０５３号）に記載のｎｂＨ２Ａ８６から選択され得る。植物由来の発現エンハンサーは、植物由来の発現エンハンサー配列及び目的のヌクレオチド配列と機能的に連結された調節領域を含む植物発現系内で使用され得る。
【０１１３】
用語「５’ＵＴＲ」もしくは「５’非翻訳領域」又は「５’リーダー配列」は、翻訳されないｍＲＮＡの領域を指す。５’ＵＴＲは、典型的に、転写開始部位で開始し、コード領域の翻訳開始部位又は開始コドンの直前で終結する。５’ＵＴＲは、ｍＲＮＡ転写物の安定性及び／又は翻訳を調節し得る。
【０１１４】
「機能的に連結された」とは、特定の配列が直接的又は間接的に相互作用して、核酸配列の発現の媒介又は調節などの意図された機能を実行することを意味する。機能的に連結された配列の相互作用は、例えば、機能的に連結された配列と相互作用するタンパク質によって媒介され得る。
【０１１５】
１つ又は複数のタイプの改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質が植物、植物の一部、又は植物細胞内で発現すると、１つ又は複数の改変ＶＰ１タンパク質はＶＬＰに自動集合する。植物、又は植物の一部は、好適な抽出及び精製条件下で収穫されてＶＬＰの完全性を維持し得、１つ又は複数のタイプのＶＰ１変異体（改変）タンパク質を含むＶＬＰは、精製されてもよい。１つ又は複数のＶＰ１変異体タンパク質はまた、ＶＰ２をコードするヌクレオチド配列と共発現し得、その結果、ＶＬＰは、改変ＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の両方を含み得る。本開示はまた、本明細書に記載の１つ又は複数のタイプのＶＰ１変異体タンパク質の植物、植物の一部、又は植物細胞内での産生、ならびに改変（変異体）ＶＰ１タンパク質を含む植物物質、植物抽出物又はタンパク質抽出物を生成するための、植物、植物の一部、又は植物細胞からの１つ又は複数のタイプのＶＰ１変異体タンパク質の抽出及び精製を提供する。
【０１１６】
本明細書に記載のノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質を含む植物物質、植物抽出物又はタンパク質抽出物も提供される。植物物質、植物抽出物又はタンパク質抽出物を使用して、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発してもよい。あるいは、ＶＰ１変異体タンパク質、又はＶＰ１変異体タンパク質（及び場合によりＶＰ２）を含むＶＬＰを精製又は部分精製してもよく、精製又は部分精製した調製物を使用して、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発してもよい。
【０１１７】
本開示はまた、免疫応答を誘発するために、有効用量の１つもしくは２つ以上のタイプの改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、又は１つもしくは２つ以上の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、及び場合によりＶＰ２を含むＶＬＰ、ならびに薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクルもしくは賦形剤を含む組成物を提供する。
【０１１８】
また、本明細書では、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発する方法であって、１つもしくは２つ以上のタイプの変異体（改変）ノロウイルスＶＰ１タンパク質、又は１つもしくは２つ以上のタイプのノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質を含むＶＬＰを対象に経口投与、鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与することから構成される方法が提供される。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、用語「ノロウイルス」は、一本鎖ポジティブセンスＲＮＡを有することを特徴とする、カリシウイルス（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）科のノロウイルス属の非エンベロープウイルス株を指す。ノロウイルスゲノムの長さは７，６５４ヌクレオチドである。ＯＲＦ１は、ウイルス３Ｃ様プロテアーゼによって、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを含む６つのタンパク質に切断される非構造ポリタンパク質をコードする。ＯＲＦ２及びＯＲＦ３は、それぞれメジャーキャプシドタンパク質（ＶＰ１）及びマイナーキャプシドタンパク質（ＶＰ２）をコードする（図１Ａを参照）。
【０１２０】
本明細書に開示されるノロウイルス株は、任意の公知のノロウイルス株を含むが、経時的に定期的に発生することが知られている公知のノロウイルス株への改変も含む。例えば、ノロウイルス株は、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩ．１／Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８（ＧＩ．１；配列番号１；図１２Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．２／Ｌｅｕｖｅｎ／２００３／ＢＥＬ（ＧＩ．２；配列番号４；図１３Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（ＧＩ．３；配列番号６；図１４Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／Ｈｕｎ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（ＧＩ．５；配列番号１２；図１５Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３（ＧＩ．７；配列番号１０１；図１６Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１／Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ２０８／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１；配列番号１３；図１６Ｂ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（ＧＩＩ．２；配列番号１４；図１７Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（ＧＩＩ．３；配列番号１５；図１８Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（ＧＩＩ．４；配列番号１６；図１９Ａ）、ＵＳ９６／ＧＩＩ．４／Ｄｒｅｓｄｅｎ１７４／１９９７／ＤＥ＿ＡＹ７４１８１１（配列番号２７；図１９Ｃ）、ＦＨ０２／ＧＩＩ．４／ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ／２００２／ＵＳ＿ＡＹ５０２０２３（配列番号２８；図１９Ｄ）、Ｈｎｔ０４：ＧＩＩ．４／Ｈｕｎｔｅｒ−ＮＳＷ５０４Ｄ／２００４／ＡＵ＿ＤＱ０７８８１４（配列番号２９；図１９Ｅ）、２００６ｂ：ＧＩＩ．４／Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ−ＮＳＷ６９６Ｔ／２００６／ＡＵ＿ＥＦ６８４９１５（配列番号３０；図１９Ｆ）、ＮＯ０９：ＧＩＩ．４／Ｏｒａｎｇｅ−ＮＳＷ００１Ｐ／２００８／ＡＵ＿ＧＱ８４５３６７（配列番号３１；図１９Ｇ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．５／ＡｌｂｅｒｔａＥＩ３９０／２０１３／ＣＡ（ＧＩＩ．５；配列番号１７；図２０）、Ｈｕ／ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（ＧＩＩ．６；配列番号２０；図２１Ａ）、ＧＩＩ．７／Ｍｕｓａ／２０１０／Ａｌｌ７３７７４（ＧＩＩ．７；配列番号１８；図２２）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１２；配列番号１９；図２３Ａ）、ＧＩＩ．１３／ＶＡ１７３／２０１０／Ｈ９ＡＷＵ４（ＧＩＩ．１３；配列番号２２；図２４Ａ）、ＧＩＩ．１４＿Ｓａｇａ＿２００８＿ＪＰＮ＿ＡＤＥ２８７０１天然ＶＰ１（ＧＩＩ．１４；配列番号３２；図２５）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（ＧＩＩ．１７；配列番号２４；図２６Ａ）及びＨｕ／ＧＩＩ．２１／Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ１５０／２０１１／ＵＳＡ（ＧＩＩ．２１；配列番号２６；図２７）を（それらのアミノ酸配列によって記載されるように）含み得る。ノロウイルス株は毎年容易に変異することが知られている。したがって、ノロウイルス株には、ＶＰ１タンパク質が植物内で発現することができ（すなわち、産生されることができ）、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にＶＰ１タンパク質がノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件��、上記ならびに図２Ａ及び図２Ｂに列挙された株の上記ノロウイルス株のいずれかとともに、ＶＰ１タンパク質、ＶＰ２タンパク質、又はＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の両方に対して、約３０％〜約１００％又はそれらの間の任意の量のアミノ酸配列同一性を有する株も含まれる。例えば、ノロウイルス株には、ＶＰ１タンパク質が植物内で発現することができ、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にＶＰ１タンパク質がノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件で、上記ならびに図２Ａ及び図２Ｂに列挙された株の上記ノロウイルス株のいずれかとともに、ＶＰ１タンパク質、ＶＰ２タンパク質、又はＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質の両方に対して、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、１００％又はそれらの間の任意の量のアミノ酸配列同一性（配列類似性、パーセント同一性、パーセント類似性）を有する株も含まれる。限定と考えられるべきではないいくつかのノロウイルス株のＶＰ１タンパク質のＳドメイン間のアミノ酸配列同一性比較を図２Ｃに示す。
【０１２１】
特定の配列に言及する場合、用語「パーセント類似性」、「配列類似性」、「パーセント同一性」又は「配列同一性」は、例えば、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＧＣＧソフトウェアプログラムに記載されているように、又は手動アラインメント及び目視検査によって使用される（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．１９９５  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔを参照）。比較のために配列をアラインメントする方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ、（１９８１，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２）のアルゴリズムを使用して、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ、（１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３）のアラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ、（１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４）の類似性方法の研究によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理の実施（例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）によって、行うことができる。
【０１２２】
パーセント配列同一性及び配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの例には、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０）に記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムが挙げられる。ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ  ２．０は、本明細書に記載されているパラメーターとともに、本発明の核酸及びタンパク質のパーセント配列同一性を決定するために使用される。例えば、ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両鎖の比較を使用し得る。ＢＬＡＳＴＰプログラムは、アミノ酸配列に関して、デフォルトとしてワード長３、及び期待値（Ｅ）１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５を参照）アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両鎖の比較を使用し得る。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＵＲＬ：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／を参照）を通して公開されている。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、用語「ＶＰ１」は、本明細書に記載のノロウイルスの１つ以上の株のＯＲＦ２によってコードされるタンパク質又はポリペプチドと同様のアミノ酸配列を含むノロウイルスメジャーキャプシドタンパク質又はポリペプチドを指す。メジャーキャプシドタンパク質は、シェル（Ｓ）ドメイン及び突出（Ｐ）ドメインの２つの主要なドメインに折りたたまれる（図１Ｂを参照）。ＶＰ１タンパク質は、ウイルス様粒子、すなわち、ＶＬＰに組み込まれると、二量体（図１Ｃ）を形成する。ＶＰ１のＮ末端の最初の部分はＳドメインを構成し、ＶＰ１ポリペプチドの残りはＰドメインを構成する。例えば、ＧＩ．１では、Ｎ末端ＶＰ１タンパク質の最初の２２５アミノ酸がＳドメインを構成する。ＶＰ１は、折りたたまれると、図１Ｂに示すように、球状Ｓドメイン（リボン構造の底部）及びＰドメイン（リボン構造の上部）から構成されるコンフォメーションをとる。
【０１２４】
図１Ｃに示すように、ＶＰ１タンパク質は、Ｐドメイン相互作用を介して二量体化する。これらの相互作用は、ノロウイルスキャプシド分子の自発的な集合を安定化する。
【０１２５】
植物、植物の一部、又は植物細胞内で、ノロウイルスＶＰ１タンパク質又は改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を産生する方法であって、ノロウイルスＶＰ１タンパク質又は改変ＶＰ１タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドを導入することと、ノロウイルスＶＰ１タンパク質又は改変ノロウイルスタンパク質の発現を可能にする条件下で植物、植物の一部、又は植物細胞をインキュベートすることとを含む方法が本明細書に記載される。ただし、Ａｕｓａｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｕｓａｒ  Ｓ．Ｆ．，Ｆｏｕｂｅｒｔ  Ｔ．Ｒ，Ｈｕｄｓｏｎ  Ｍ．Ｈ．，Ｖｅｄｖｉｃｋ  Ｔ．Ｓ．，Ｍｉｄｄａｕｇｈ  Ｃ．Ｒ．，２００６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：１９４７８−１９４８８）に記載されているように、ノロウイルスＶＰ１タンパク質は、ＶＰ１タンパク質を含むノロウイルスＶＬＰから得ることができることも理解されたい。例えば、ノロウイルスタンパク質又は改変ノロウイルスタンパク質を含むノロウイルスＶＬＰは、ｐＨ８以上で、又は５５℃を超える温度でＶＰ１タンパク質成分に解離し、それによりＶＰ１タンパク質を生じ得る。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、用語「ウイルス様粒子（ｖｉｒｕｓ  ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ）」、「ＶＬＰ」、「ウイルス様粒子（ｖｉｒｕｓ  ｌｉｋｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）」又は「ＶＬＰｓ」は、１つもしくは２つ以上のタイプのノロウイルスＶＰ１タンパク質、１つもしくは２つ以上のタイプのＶＰ１変異体タンパク質又はそれらの組合せを含み、ノロウイルスゲノムのあらゆる部分を欠く非複製、非エンベロープ、非感染性ウイルスキャプシド構造に自己集合するノロウイルス様粒子を指す。例えば、ＶＬＰは、本明細書に記載の１つのタイプの改変ＶＰ１タンパク質を含み得るか、ＶＬＰは、本明細書に記載の２つ以上の異なる改変ＶＰ１タンパク質を含み得る。さらに、ＶＬＰは、ＶＰ２タンパク質を含み得る。ＶＰ１タンパク質、ＶＰ１＋ＶＰ２タンパク質、改変ＶＰ１タンパク質、又は改変ＶＰ１タンパク質＋ＶＰ２タンパク質を含むＶＬＰは、約１５ｎｍ〜約５０ｎｍのサイズ又はそれらの間の任意の量、例えば、１５ｎｍ、１６ｎｍ、１７ｎｍ、１８ｎｍ、１９ｎｍ、２０ｎｍ、２１ｎｍ、２２ｎｍ、２３ｎｍ、２４ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４１ｎｍ、４２ｎｍ、４３ｎｍ、４４ｎｍ、４５ｎｍ、４６ｎｍ、４７ｎｍ、４８ｎｍ、４９ｎｍ、５０ｎｍ又はそれらの間の任意の量である。例えば、Ｔ＝１正二十面体対称の場合、ＶＬＰは約２３ｎｍであり得、又はＴ＝３正二十面体対称の場合、ＶＬＰは約３８ｎｍ〜約４０ｎｍであり得る。
【０１２７】
図３Ｂ、図４Ｂ、図５Ｃ、図５Ｅ、図６Ｃ、図６Ｅ、図７Ｃ、図８Ｂ、図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ、図９Ｇ、図１０Ｂ、図１１Ｃ及び図１１Ｄの電子顕微鏡写真に示すように、植物は、いくつかのノロウイルス株に由来し、ＶＬＰに自己集合するＶＰ１タンパク質及び改変ＶＰ１タンパク質を産生した。
【０１２８】
植物内のノロウイルスＶＰ１タンパク質の産生
ＶＰ１タンパク質には、ＶＰ１タンパク質が植物内で発現し、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件で、ノロウイルスＧＩ．１（配列番号１；図１２Ａ）、ＧＩ．２（配列番号４；図１３Ａ）、ＧＩ．３（配列番号６；図１４Ａ）、ＧＩ．５（配列番号１２；図１５Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３（ＧＩ．７；配列番号１０１；図１６Ａ）、ＧＩＩ．１（配列番号１３；図１６Ｂ）、ＧＩＩ．２（配列番号１４；図１７Ａ）、ＧＩＩ．３（配列番号１５；図１８Ａ）、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ（配列番号１６；図１９Ａ）、ＧＩＩ．４／Ｄｒｅｓｄｅｎ（配列番号２７；図１９Ｃ）、ＧＩＩ．４／ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ（配列番号２８；図１９Ｄ）、ＧＩＩ．４／Ｈｕｎｔｅｒ（配列番号２９；図１９Ｅ）、ＧＩＩ．４／Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ（配列番号３０；図１９Ｆ）、ＧＩＩ．４／Ｏｒａｎｇｅ（配列番号３１；図１９Ｇ）、ＧＩＩ．５（配列番号１７；図２０）、ＧＩＩ．６（配列番号２０；図２１Ａ）、ＧＩＩ．７（配列番号１８；図２２）、ＧＩＩ．１２（配列番号１９；図２３Ａ）、ＧＩＩ．１３（配列番号２２；図２４Ａ）、ＧＩＩ．１４／Ｓａｇａ（配列番号３２；図２５）、ＧＩＩ．１７（配列番号２４；図２６Ａ）、ＧＩＩ．２１（配列番号２６；図２７）由来のＶＰ１アミノ酸配列と約３０〜約１００％、約４０〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、約８５〜約１００％、約９０〜約１００％、もしくは約９５〜約１００％約９８〜約１００％、又はそれらの間の任意の量の配列同一性（配列類似性とも呼ばれ得る）を有するアミノ酸配列を含む任意のＶＰ１タンパク質が含まれる。
【０１２９】
本明細書に記載のＶＰ１タンパク質は、改変されており、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１；図２Ｃを参照）のアラインメントされた配列内の４３位、５７位、８４位及び９４位の任意の１つ以上のアミノ酸にＳドメインの置換、改変もしくは変異、もしくはノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失、又はそれらの組合せを含む。改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化され得る。改変ＶＰ１タンパク質は、植物、植物の一部、又は植物細胞内で発現し得る。
【０１３０】
図２Ｃに示すように、超可変Ｐドメインと比較して、ノロウイルスＶＰ１  Ｓドメインの一次アミノ酸配列はよく保存されている。例えば、図２Ｃに示すノロウイルス株のＶＰ１  Ｓドメイン配列は、ＧＩ．１  ＶＰ１のＳドメインに対して５５．２〜９８．９％同一である配列を有する。例えば、本明細書に記載の核酸配列は、ＧＩ．１  ＶＰ１のＳドメインに対して、約５５％〜約９９％又はそれらの間の任意の量の配列同一性を示し得る。例えば、本明細書に記載の核酸配列は、ＧＩ．１  ＶＰ１のＳドメインに対して、約５５％、約５６％、約５８％、約６０％、約６２％、約６４％、約６６％、約６８％、約７０％、約７２％、約７４％、約７６％、約７８％、約８０％、約８２％、約８４％、約８６％、約８８％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれらの間の任意の量の配列同一性を示し得る。
【０１３１】
米国仮特許出願第６２／４７５，６６０号（２０１７年３月２３日に出願；参照により本明細書に組み込まれる）及びＰＣＴ／ＣＡ２０１８／０５０３５２（２０１８年３月２３日に出願、参照により本明細書に組み込まれる）に以前に示されているように、野生型（天然とも呼ばれる）ノロウイルスＶＰ１タンパク質は植物内で産生され得、ＶＬＰは産生されたＶＰ１タンパク質を含む。単一の核酸構築物としてのＧＩ．１  ＶＰ１、単一の核酸構築物としてのＧＩ．１  ＶＰ２、ＧＩ．１  ＶＰ１及びＶＰ２の両方をコードする発現ベクターを含むアグロバクテリウムツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）を用いた葉（Ｎ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）由来）のバキュームインフィルトレーションにより、別個のベクター（「ＶＰ１＋ＶＰ２」；二重構築物）に、又は同じベクター（「ＶＰ１／ＶＰ２」又は「ＶＰ１／ＶＰ２／３’ＵＴＲ」；単一の核酸構築物）にＶＰ１及びＶＰ２核酸配列を導入して、ＶＰ１及び／又はＶＰ２配列の共発現を可能にし、ＶＰ１及び／又はＶＰ２産生について葉を検査した。インフィルトレーションの６日後又は９日後（それぞれ６  ＤＰＩ及び９  ＤＰＩ）、葉のホモジネートから全粗タンパク質抽出物を調製し、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥにより分離し、クーマシーブリリアントブルー色素により染色した。ＶＰ１タンパク質をコードする野生型ＧＩ．１  ＯＲＦ２に対応するヌクレオチド配列を含む発現ベクターをインフィルトレーションした葉は、クーマシー染色ゲルを使用して測定したところ、低レベル又は検出不能レベルのＧＩ．１  ＶＰ１を産生した。対照的に、ヒト発現に対してコドンが最適化された（ｈＣｏｄ）、又は野生型ＶＰ１核酸配列のＧＣ含量と比較した場合にＧＣ含量が豊富なＧＩ．１  ＶＰ１ヌクレオチド配列を含む発現ベクターをインフィルトレーションした葉は、クーマシー染色ゲルではＧＩ．１  ＶＰ１タンパク質の量を増加させた。ＶＰ１をそれ自体で発現させると、植物内でｈＣｏｄ  ＧＩ．１  ＶＰ１が産生され得ることを示している。
【０１３２】
さらに、米国仮特許出願第６２／４７５，６６０号及びＰＣＴ／ＣＡ２０１８／０５０３５２（それぞれ、２０１７年３月２３日及び２０１８年３月２３日に出願、いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、野生型ＧＩ１  ＶＰ１及びＶＰ２、又はヒトコドン最適化ＧＩ１  ＶＰ１及びＶＰ２のいずれかを含むベクターをインフィルトレーションした葉は、クーマシー染色ゲルでは低レベルのＧＩ１  ＶＰ１タンパク質を産生し、ウイルスゲノムに見出されるのと同じ構成を使用して（発現を制御する１つのプロモーターを使用して）同じベクター上のシスに共発現させた場合に、ＶＰ２の存在によってＶＰ１の発現が増強されないことが示唆された。ただし、それぞれＶＰ２又はｈＣｏｄ  ＶＰ２とともにトランスに（別個の構築物に）ＶＰ１又はヒトコドン最適化ＶＰ１を共発現させると（ｈＣｏｄ  ＶＰ１＋ＶＰ２）、ＶＰ１タンパク質の増加が観察された。ＶＰ１及びＶＰ２核酸セグメントの各々は調節領域及びターミネーターを含み、核酸複合体として構築物を植物に導入し、これにより、ＶＰ１タンパク質収量に対応する増加をもたらした。
【０１３３】
この観察は、ＶＰ１発現の増加が観察されたのは、ＶＰ１及びＶＰ２（又はＶＰ１＋ＶＰ２＋３’ＵＴＲ）がシスに存在し、１つのプロモーター及びターミネーターの制御下でウイルスゲノムに見出されるのと同じ構成を使用して共発現させた場合にのみであったと報告されている、昆虫細胞及び哺乳動物細胞に観察されたものとは対照的である（Ｂｅｒｔｏｌｏｔｔｉ−Ｃｉａｒｌｅｔ  Ａ．，Ｃｒａｗｆｏｒｄ  Ｓ．Ｅ．，Ｈｕｔｓｏｎ  Ａ．Ｍ．，Ｅｓｔｅｓ  Ｍ．Ｋ．２００３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１１６０３−１１６１５）。Ｂｅｒｔｏｌｏｔｔｉ−Ｃｉａｒｌｅｔ（２００３）によれば、ＶＰ１及びＶＰ２をトランスに共発現させた場合、昆虫細胞又は哺乳動物細胞にＶＰ１発現の増加は観察されなかった。
【０１３４】
以下でさらに詳細に説明するように、本明細書に記載するように、植物内で改変ＶＰ１タンパク質を発現させる場合、改変ＶＰ１配列を得るために使用されたものと同じノロウイルス遺伝子型及び株から、ＶＰ２をコードするＯＲＦ３配列を得ることが好ましい。本明細書で提供される例では、特に明記しない限り、改変ＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質は、同じノロウイルス遺伝子型及び株から得られ、改変ＶＰ１タンパク質及びＶＰ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、別個の発現系を使用して、例えば、別個のプラスミド上で植物内で共発現するか、ＶＰ１及びＶＰ２は同じベクター上で発現し得るが、ＶＰ１及びＶＰ２をコードする配列の各々は、別個の発現系を有するように、別個のプロモーター及びターミネーター配列の制御下にあるべきである。
【０１３５】
植物では、ノロウイルスＶＰ１タンパク質の収量又は抽出量、及びノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの産生は、発現するノロウイルスＶＰ１の遺伝子型によって異なる。例えば、図３Ａに示すように、野生型ＧＩ．１  ＶＰ１、ＧＩ．５  ＶＰ１及びＧＩＩ．１２  ＶＰ１の発現は堅牢であり、タンパク質収量は良好であった（ＳＤＳ  ＰＡＧＥを使用して決定）。さらに、大部分が直径３８ｎｍの良好に形成されたキャプシドを有する高密度野生型ＧＩ．１  ＶＬＰも産生され（図３Ｂ）、野生型ＧＩ．５  ＶＬＰ、ＧＩＩ．１２  ＶＬＰ（図３Ｃ）及びＧＩ．２  ＶＬＰ、（図４Ａ）を発現する植物から高密度ＶＬＰが産生された。対照的に、野生型ＧＩＩ．４  ＶＰ１は植物内にほとんど発現せず（図３Ａ右側パネル）、植物内の他の野生型ＶＰ１タンパク質、例えば、ＧＩＩ．２  ＶＰ１、ＧＩＩ．３  ＶＰ１及びＧＩＩ．６  ＶＰ１の発現後に、低収量のＶＰ１タンパク質又は検出不能量のＶＰ１タンパク質（ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して）が観察された（表５、例３）。
【０１３６】
さらに、植物での天然ＶＰ１タンパク質の発現は、３８ｎｍ  ＶＬＰではなく２３ｎｍ  ＶＬＰの方が高い割合を構成することを特徴とするＶＬＰをもたらす可能性がある。例えば、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１の発現は、顕著な数の２３ｎｍ  ＶＬＰの産生をもたらす（図５Ｃ、左側パネルを参照）。また、２３ｎｍ  ＶＬＰの割合が増大するほど、密度勾配遠心分離によって低密度であると特徴付けられるＶＬＰがもたらされる（図５Ｂ左側パネルを参照）。
【０１３７】
本開示は、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードする核酸配列を提供し、改変ノロウイルスＶＰ１は、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸に１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異、もしくはノロウイルス遺伝子型ＶＰ１  ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸３９〜４６とアラインメントされた配列内のペプチド断片の欠失、又はそれらの組合せを含む。改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードし、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１とアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸に１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異、もしくはノロウイルス遺伝子型ＶＰ１  ＧＩ．１とアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６ペプチド断片の欠失、又はそれらの組合せを含む核酸配列を発現する植物は、１つ又は複数の置換、改変又は変異を含まない野生型ＶＰ１及び／又はＶＬＰと比較して、同等の、又は改善されたＶＰ１及び／又はＶＬＰ特性を示す。
【０１３８】
改変ＶＰ１及び／又はＶＬＰの改善された特性の例には、以下が挙げられる。
・１つ又は複数の置換、改変又は変異を含まない野生型ＶＰ１と比較して、植物細胞内で発現させた場合、改変ＶＰ１タンパク質収量の増加（例えば、クーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタン分析を使用して決定）。例えば、改変ＶＰ１タンパク質の収量の増加は、対応する野生型ＶＰ１収量の１．５〜５０倍又はそれらの間の任意の量の範囲であり得る；
・１つ又は複数の置換、改変又は変異を含まない野生型ＶＰ１の密度勾配分離と比較して、例えば、タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配分離を使用して決定した場合、改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの密度の増加。例えば、改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、密度勾配遠心分離後、同じ画分又はさらに密度の高い画分に観察される；
・１つ又は複数の置換、改変又は変異を含まない野生型ＶＰ１と比較して、改変ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰの完全性の改善。例えば、中断された、又は部分的に集合したＶＬＰの数は、ＴＥＭを使用して決定され得る；
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型のＶＬＰ産生の野生型レベルと比較して、植物細胞内で発現した場合のＶＬＰ収量の増加。ＶＬＰ収量は、ＴＥＭを使用した密度勾配遠心分離後のＶＬＰ含有画分から得られた洗浄済み試料に対して決定され得る。例えば、改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量の増加は、野生型ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの対応する収量の１．５〜２０倍又はそれらの間の任意の量の範囲であり得る；
・置換、改変又は変異を含まない同じ遺伝子型の野生型ＶＰ１を含むＶＬＰの蓄積と比較して、改変ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰの蓄積の改善；
・１つ又は複数の置換、改変又は変異を含まない野生型ＶＰ１を含むＶＬＰと比較して、２３ｎｍ  ＶＬＰとは対照的に、３８ｎｍ  ＶＬＰに集合するＶＬＰの割合の増大（ＴＥＭを使用して決定）；
・これらの改善された特性の組合せ。
【０１３９】
理論に束縛されることを望むものではないが、野生型ノロウイルスＶＬＰと比較して、密度勾配遠心分離後に高密度画分に観察されるＶＬＰは、天然ＶＰ１を含むＶＬＰの集合が、改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰよりも、植物内で発現され、植物から抽出された場合に不安定である可能性があることを示す。したがって、天然ＶＬＰの方が、異常なキャプシド粒子、及び断片化産物の生成の影響を受けやすい場合がある。結果として、密度が増加したことを特徴とする改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、対応する野生型ＶＰ１を使用して産生されたＶＬＰよりも高い構造的完全性を示す可能性もある。
【０１４０】
本明細書に記載の核酸配列は、ＧＩを除き、上記で同定され、図２Ａ〜Ｃに列挙される、ＶＰ１をコードする核酸配列のいずれかと約５０％〜約９９％の配列類似性を示し得る。例えば、本明細書に記載の核酸配列は、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にＶＰ１タンパク質がノロウイルスに対する免疫を対象に誘発するという条件で、例えば、Ｈｕ／ＧＩ．２／Ｌｅｕｖｅｎ／２００３／ＢＥＬ（ＧＩ．２；配列番号４；図１２Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（ＧＩ．３；配列番号６；図１４Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／Ｈｕｎ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（ＧＩ．５；配列番号１２；図１５Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３（ＧＩ．７；配列番号１０１；図１６Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１／Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ２０８／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１；配列番号１３；図１６Ｂ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４；図１７Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（ＧＩＩ．３；配列番号１５；図１８Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（ＧＩＩ．４；配列番号１６；図１９Ａ）、ＵＳ９６／ＧＩＩ．４／Ｄｒｅｓｄｅｎ１７４／１９９７／ＤＥ＿ＡＹ７４１８１１（配列番号２７；図１９Ｃ）、ＦＨ０２／ＧＩＩ．４／ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ／２００２／ＵＳ＿ＡＹ５０２０２３（配列番号２８；図１９Ｄ）、Ｈｎｔ０４：ＧＩＩ．４／Ｈｕｎｔｅｒ−ＮＳＷ５０４Ｄ／２００４／ＡＵ＿ＤＱ０７８８１４（配列番号２９；図１９Ｅ）、２００６ｂ：ＧＩＩ．４／Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ−ＮＳＷ６９６Ｔ／２００６／ＡＵ＿ＥＦ６８４９１５（配列番号３０；図１９Ｆ）、ＮＯ０９：ＧＩＩ．４／Ｏｒａｎｇｅ−ＮＳＷ００１Ｐ／２００８／ＡＵ＿ＧＱ８４５３６７（配列番号３１；図１９Ｇ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．５／ＡｌｂｅｒｔａＥＩ３９０／２０１３／ＣＡ（ＧＩＩ．５；配列番号１７；図２０）、Ｈｕ／ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（ＧＩＩ．６；配列番号２０；図２１Ａ）、Ｇ１１．７／Ｍｕｓａ／２０１０／Ａｌｌ７３７７４（ＧＩＩ７；配列番号１８；図２２）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１２；配列番号１９；図２３Ａ）、ＧＩＩ．１３／ＶＡ１７３／２０１０／Ｈ９ＡＷＵ４（配列番号２２；図２４Ａ）、ＧＩＩ．１４＿Ｓａｇａ＿２００８＿ＪＰＮ＿ＡＤＥ２８７０１天然ＶＰ１（配列番号３２；図２５）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（ＧＩＩ．１７；配列番号２４；図２６Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．２１／Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ１５０／２０１１／ＵＳＡ（ＧＩＩ．２１；配列番号２６；図２７）からのノロウイルスＶＰ１をコードする核酸配列のいずれかと約５０％、約５２％、約５４％、約５６％、約５８％、約６０％、約６２％、約６４％、約６６％、約６８％、約７０％、約７２％、約７４％、約７６％、約７８％、約８０％、約８２％、約８４％、約８６％、約８８％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれらの間���任意の量の配列同一性を示し得る。
【０１４１】
同様に、本発明は、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＶＰ１配列のいずれか、例えば、Ｈｕ／ＧＩ．２／Ｌｅｕｖｅｎ／２００３／ＢＥＬ（ＧＩ．２；配列番号４；図１２Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（ＧＩ．３；配列番号６；図１４Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／Ｈｕｎ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（ＧＩ．５；配列番号１２；図１５Ａ）、Ｈｕ／ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３（ＧＩ．７；配列番号１０１；図１６Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１／Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ２０８／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１；配列番号１３；図１６Ｂ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４；図１７Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（ＧＩＩ．３；配列番号１５；図１８Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（ＧＩＩ．４；配列番号１６；図１９Ａ）、ＵＳ９６／ＧＩＩ．４／Ｄｒｅｓｄｅｎ１７４／１９９７／ＤＥ＿ＡＹ７４１８１１（配列番号２７；図１９Ｃ）、ＦＨ０２／ＧＩＩ．４／ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ／２００２／ＵＳ＿ＡＹ５０２０２３（配列番号２８；図１９Ｄ）、Ｈｎｔ０４：ＧＩＩ．４／Ｈｕｎｔｅｒ−ＮＳＷ５０４Ｄ／２００４／ＡＵ＿ＤＱ０７８８１４（配列番号２９；図１９Ｅ）、２００６ｂ：ＧＩＩ．４／Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ−ＮＳＷ６９６Ｔ／２００６／ＡＵ＿ＥＦ６８４９１５（配列番号３０；図１９Ｆ）、ＮＯ０９：ＧＩＩ．４／Ｏｒａｎｇｅ−ＮＳＷ００１Ｐ／２００８／ＡＵ＿ＧＱ８４５３６７（配列番号３１；図１９Ｇ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．５／ＡｌｂｅｒｔａＥＩ３９０／２０１３／ＣＡ（ＧＩＩ．５；配列番号１７；図２０）、Ｈｕ／ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（ＧＩＩ．６；配列番号２０；図２１Ａ）、Ｇ１１．７／Ｍｕｓａ／２０１０／Ａｌｌ７３７７４（ＧＩＩ７；配列番号１８；図２２）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１２；配列番号１９；図２３Ａ）、ＧＩＩ．１３／ＶＡ１７３／２０１０／Ｈ９ＡＷＵ４（配列番号２２；図２４Ａ）、ＧＩＩ．１４＿Ｓａｇａ＿２００８＿ＪＰＮ＿ＡＤＥ２８７０１天然ＶＰ１（配列番号３２；図２５）、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（ＧＩＩ．１７；配列番号２４；図２６Ａ）、Ｈｕ／ＧＩＩ．２１／Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ１５０／２０１１／ＵＳＡ（ＧＩＩ．２１；配列番号２６；図２７）と約３０％〜約９９％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を示すアミノ酸配列を含む。例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列は、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された際にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、上記で定義されたＶＰ１アミノ酸配列のいずれかと約３０％、約３２％、約３４％、約３６％、約３８％。約４０％、約４２％、約４４％、約４６％、約４８％、約５０％、約５２％、約５４％、約５６％、約５８％、約６０％、約６２％、約６４％、約６６％、約６８％、約７０％、約７２％、約７４％、約７６％、約７８％、約８０％、約８２％、約８４％、約８６％、約８���％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。
【０１４２】
「ＶＰ１変異体タンパク質」、「変異体ＶＰ１タンパク質」、「改変ＶＰ１タンパク質」、「改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質」などとは、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１、以下の表１を参照）とアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４の位置又はアミノ酸に１つもしくは２つ以上の置換、変異もしくは改変、もしくはノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失、又はそれらの組合せを含むノロウイルスＶＰ１タンパク質を意味する。用語「残基」、「残基アミノ酸」及び「アミノ酸」は区別なく使用され、典型的にはアミノ酸配列内の特定の位置（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）（位置（ｌｏｃａｔｉｏｎ））にあるアミノ酸を指す。
【０１４３】
【表１】
2021503962.tif 000003
【０１４４】
本明細書で使用される場合、用語「保存された置換」又は「保存的置換」は、異なるが、記載された置換と同じクラスのアミノ酸である、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質の配列内のアミノ酸残基の存在を指す。例えば、非極性アミノ酸は非極性アミノ酸を置換するために使用され得、芳香族アミノ酸は芳香族アミノ酸を置換するために使用され得、極性非荷電アミノ酸は極性非荷電アミノ酸を置換するために使用され得、及び／又は荷電アミノ酸は荷電アミノ酸を置換するために使用され得る）。さらに、保存的置換は、対応する野生型アミノ酸を置換しているアミノ酸と同じ符号の、及び一般に同様の大きさの界面ハイドロパシー値を有するアミノ酸を包含することができる。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、用語「非極性アミノ酸」は、グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）、アラニン（Ａ、Ａｌａ）、バリン（Ｖ、Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）及びプロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）を指し、用語「芳香族残基」（又は芳香族アミノ酸）は、フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）、チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）及びトリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）を指し、用語「極性非荷電アミノ酸」は、セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）、システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）及びグルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）を指し、用語「荷電アミノ酸」は、負に荷電したアミノ酸アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）及びグルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）、ならびに正に荷電したアミノ酸リジン（Ｋ、Ｌｙｓ）、アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）及びヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）を指す。アミノ酸の他の分類は以下の通りであり得る：疎水性側鎖を有するアミノ酸（脂肪族）：アラニン（Ａ、Ａｌａ）、イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）及びバリン（Ｖ、Ｖａｌ）；疎水性側鎖を有するアミノ酸（芳香族）：フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）、チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；極性中性側鎖を有するアミノ酸：アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）、システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）、セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）及びスレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；電気的に荷電した側鎖を有するアミノ酸（酸性）：アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；電気的に荷電した側鎖を有するアミノ酸（塩基性）：アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；リジン（Ｋ、Ｌｙｓ）、グリシンＧ、Ｇｌｙ）及びプロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）。
【０１４６】
保存的アミノ酸置換は、元の置換又は改変として、得られた改変ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質の活性に対して同様の効果を有する可能性が高い。保存的置換に関する追加の情報は、例えば、Ｂｅｎ  Ｂａｓｓａｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，１６９：７５１−７５７，１９８７）、Ｏ’Ｒｅｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅ，７７：２３７−２５１，１９８９）、Ｓａｈｉｎ−Ｔｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＳｃＬ，３：２４０−２４７，１９９４）、Ｈｏｃｈｕｌｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：１３２１−１３２５，１９８８）に見出すことができる。
【０１４７】
ポリペプチド配列の関連性を決定するために、Ｂｌｏｓｕｍ行列が一般的に使用される（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９，１９９２）。ＢＬＯＳＵＭ９０行列の高度に保存された標的頻度に対して９０％同一性の閾値を使用した。ＢＬＯＳＵＭ６５行列に対して６５％同一性の閾値を使用した。Ｂｌｏｓｕｍ行列で０以上のスコアは、選択したパーセント同一性で「保存的置換」と考えられる。以下の表は、保存的アミノ酸置換の例を示している：表２。
【０１４８】
【表２】
2021503962.tif 000004
【０１４９】
本明細書に記載される改変では、アミノ酸は、表２に概説されるような極めて高度に保存された置換、高度に保存された置換又は保存された置換、ならびに上記のような芳香族アミノ酸、極性アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、極性中性アミノ酸、又は非極性アミノ酸、負に荷電したアミノ酸、正に荷電したアミノ酸、疎水性アミノ酸を使用して置換され得る。
【０１５０】
本明細書に記載されるように、アミノ酸４３、５７、８４及び９４（ＧＩ株では；ＧＩＩ株のアミノ酸３９、５３、８０及び９０に相当）にアミノ酸の１つ又は複数の置換を含む改変ＶＰ１タンパク質は、改変ＶＰ１タンパク質を使用して産生される改変ＶＰ１タンパク質又はＶＬＰの改善された特性をもたらした。当業者であれば、類似の特性を有するアミノ酸が、同定された位置のアミノ酸と置換され得ることを理解するであろうことから、改善された特性は、特定の部位での特定のアミノ酸の置換に限定されないことを理解されたい。例えば、改変Ｑ８４Ｓは、８４位のグルタミンを極性中性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸であるセリンにより置換することを含む。この位置のグルタミンはまた、極性中性側鎖、例えば、アスパラギン、システイン又はスレオニンのいずれかを有することを特徴とする代替アミノ酸、すなわち、Ｑ８４Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）により置換され得る。同様に、セリンによる８０位のグルタマートの置換、すなわちＰ８０Ｓ（プロリンからセリンへの置換）を含むＥ８０Ｓでは、この位置のアミノ酸はまた、セリンにより天然のアミノ酸を置換することに加えて、極性中性側鎖を有するアミノ酸、例えばアスパラギン、システイン又はスレオニン、すなわちＰ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）により置換され得る。さらに、本明細書に記載されるように、追加のＰ８０Ｘ変異体を使用してＶＰ１を産生してもよく、ここで、Ｘは、Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｋ又はＨから選択される。ロイシン（疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸）によりセリン又はアラニンを置換することを含む改変Ｓ９４Ｌ、Ｓ９０Ｌ、Ａ９４Ｌ又はＡ９０Ｌでは、天然のアミノ酸は、疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸、例えば、イソロイシン、メチオニン、バリン、又はＳ９４ＸもしくはＳ９０Ｘの場合にはアラニン、すなわち、Ｓ９４Ｘ（Ｓ９０Ｘ）（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｖ又はＡ）又はＡ９４Ｘ（Ａ９０Ｘ）（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）を使用して置換され得る。さらに、本明細書に記載されるように、追加のＳ９４Ｘ変異体を使用してＶＰ１を産生してもよく、ここで、Ｘは、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。３９位でバリン（疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸）によりアラニンを置換することを含む改変Ａ３９Ｖでは、天然のアミノ酸はまた、バリンに加えて、疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸、例えば、イソロイシン、ロイシン又はメチオニン、すなわち、Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ）により置換され得る。さらに、本明細書に記載されるように、追加のＡ３９Ｘ変異体を使用してＶＰ１を産生してもよく、ここで、Ｘは、Ｉ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。プロリンによるバリンの置換を含む改変Ｖ４７Ｐはまた、グリシンによるバリンの置換、すなわち、Ｖ４７Ｘ（Ｘ＝Ｐ又はＧ）を含み得る。５３位でイソロイシン（疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸置換）によりアルギニンを置換することを含む改変Ｒ５３Ｉでは、アルギニンはまた、イソロイシンに加えて、疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸、例えば、ロイシン、バリン、アラニン又はメチオニン、すなわち、Ｒ５３Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ）により置換され得る。５７位でイソロイシン（疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸）によりメチオニンを置換することを含む改変Ｍ５７Ｉでは、メチオニンはまた、イソロイシンに加えて、疎水性側鎖を有することを特徴とするアミノ酸、例えば、ロイシン、バリン又はアラニン、すなわち、Ｍ５７Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｖ又はＡ）により置換され得る。さらに、本明細書に記載されるように、追加のＭ５７Ｘ変異体を使用してＶＰ１を産生してもよく、ここで、Ｘは、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨから選択される。
【０１５１】
ＶＰ１変異体タンパク質（改変ＶＰ１タンパク質）の例には、限定するものではないが、以下が挙げられる。
・ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１（ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミンは、例えば、セリン（ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ；配列番号９８、図２８Ａ）、又はＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＧＩ．３  Ｑ８４Ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号９８、図２８Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するセリンは、例えば、ロイシン（ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ；配列番号８、図２８Ｃ）、バリン、イソロイシン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミンリジンもしくはヒスチジン（ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ；配列番号２９２、図２８Ｍ））、又はＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ  ＶＰ１タンパク質（Ｘ＝Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えば、ロイシン、バリン、イソロイシン、メチオニン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミンリジン又はヒスチンのままであり、ＧＩ．３  Ｓ９４Ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３  Ｓ９４Ｘ  ＶＰ１タンパク質（Ｘ＝Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ  ＶＰ１タンパク質）のアミノ酸配列（配列番号８、図２８Ｃ、配列番号２９２；図２８Ｍ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．３＿Ａ４３Ｘ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｌ、Ｉ又はＭ、及びｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３及び９４にそれぞれ対応するアラニン及びセリンは、例えば、限定するものではないが、それぞれバリン及びロイシン（ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ；配列番号１７０、図２８Ｇ）、又はＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に置換されているか変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｖ、Ｌ、Ｉ又はＭ、例えばバリン、及びＬ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばロイシンのままであり、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｘ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１７０、図２８Ｇ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６、アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｘ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、及びｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７及び９４にそれぞれ対応するメチオニン及びセリンは、例えば、それぞれイソロイシン及びロイシン（ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ；配列番号１７２、図２８Ｉ）、又はＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７と９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばイソロイシン、及びＬ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ、例えばロイシンのままであり、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｘ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１７２、図２８Ｉ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６、アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｘ＋Ｓ９４ｘ、ＶＰ１（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、及びｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン及びセリンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ；配列番号１０、図２８Ｅ）、又はＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばロイシンのままであり、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｘ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１０、図２８Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６、アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．３＿Ａ４３Ｘ＋Ｍ５７ｚ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｌ、Ｉ又はＭ、ｚ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、及びｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３、５７及び９４にそれぞれ対応するアラニン、メチオニン及びセリンは、例えば、それぞれバリン、イソロイシン及びロイシン（ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ；配列番号１７４、図２８Ｋ）、又はＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３、５７及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｖ、Ｌ、Ｉ又はＭ、例えばバリン、及びＩ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばイソロイシン、及びＬ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばロイシンのままであり、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｘ＋Ｍ５７ｚ＋Ｓ９４ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１７４、図２８Ｋ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（配列番号６、アミノ酸；配列番号７、ヌクレオチド；図１４Ａ、図１４Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１（ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミンは、例えば、セリン（ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ；配列番号３４、図２９Ａ）、又はＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．５  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号３４、図２９Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．５  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．５株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（配列番号１２、アミノ酸；図１５Ａ）から得ることができる。
・ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（ＧＩ．５＿Ａ９４Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するアラニンは、例えば、ロイシン（ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ；配列番号３６、図２９Ｃ）、又はＧＩ．５＿Ａ９４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．５  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号３６、図２９Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．５  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．５株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（配列番号１２、アミノ酸；図１５Ａ）から得ることができる。
・ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１（ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９４Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン及びアラニンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ；配列番号３８、図２９Ｅ）、又はＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．５  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号３８、図２９Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．５  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．５株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／ＨＵＮ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（配列番号１２、アミノ酸；図１５Ａ）から得ることができる。
・ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７に対応するメチオニンは、例えば、イソロイシン（ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ；配列番号１７９、図２９Ｉ）、バリン、アラニン、ロイシン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジンもしくはヒスチジン（ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）；配列番号２９０；図２９Ｍ）、又はＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ  ＶＰ１タンパク質（Ｘ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えば、イソロイシン、バリン、アラニン、ロイシン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ  ＶＰ１タンパク質（Ｘ＝Ｉ、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）のアミノ酸配列（配列番号１７９、図２９Ｉ；配列番号２９０；図２９Ｍ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．７株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４（配列番号１０１、アミノ酸；図１６Ａ）から得ることができる。
・ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１（ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するアルギニンは、例えば、セリン（ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ；配列番号１７７、図２９Ｇ）、又はＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１７７、図２９Ｇ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．７株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４（配列番号１０１、アミノ酸；図１６Ａ）から得ることができる。
・ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ＋Ｒ８４ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ、又はＨ、及びｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７及び８４にそれぞれ対応するメチオニン及びアルギニンは、例えば、それぞれイソロイシン及びセリン（ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ；配列番号１８１、図２９Ｋ）、又はＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７及び８４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｌ、Ｉ、Ａ、Ｖ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばイソロイシン、及びＳ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ＋Ｒ８４ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩ．７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１８１、図２９Ｋ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩ．７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩ．７株、例えば、限定するものではないが、ＧＩ．７／ＧＡ５０４３／ＵＳＡ／２０１４（配列番号１０１、アミノ酸；図１６Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミン酸は、例えば、セリン（ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ；配列番号８５、図３０Ａ）、又はＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号８５、図３０Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するアラニンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ；配列番号４１、図３０Ｃ）、又はｍｕｔ  ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４１、図３０Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号４３、図３０Ｅ）、又はｍｕｔ  ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４３、図３０Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｌ．Ｉ又はＭ）＋Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３、８４及び９４にそれぞれ対応するアラニン、グルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれバリン、セリン及びロイシン（ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号１８２、図３０Ｇ）、又はＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３、８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ、例えばバリン、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１８２、図３０Ｇ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２  Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ又はＡ）＋Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７、８４及び９４にそれぞれ対応するアルギニン、グルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれイソロイシン、セリン及びロイシン（ＧＩＩ．２＿Ｍ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号１８４、図３０Ｉ）、又はＧＩＩ．２＿Ｍ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７、８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｉ、Ｌ、Ｍ又はＡ、例えばイソロイシン、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ｍ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１８４、図３０Ｉ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．２  Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ）＋Ｒ５３Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ａ又はＶ）＋Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３、５７、８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれバリン、イソロイシン、セリン及びロイシン（ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号１８６、図３０Ｋ）、又はＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３、５７、８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ、例えばバリン、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ａ又はＶ、例えばイソロイシン、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１８６、図３０Ｋ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．２株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（配列番号１４、アミノ酸；図１７Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミン酸は、例えば、セリン（ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ；配列番号４６、図３１Ａ）、又はｍｕｔ  ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４６、図３１Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（配列番号１５、アミノ酸；図１８Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するアラニンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ；配列番号４８、図３１Ｃ）、又はＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４８、図３１Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（配列番号１５、アミノ酸；図１８Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号５０、図３１Ｅ）、又はＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．３  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号５０、図３１Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．３  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．３株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（配列番号１５、アミノ酸；図１８Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３に対応するアラニンは、例えば、バリン（ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ；配列番号５３、図３２Ａ）、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジン、又はＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号５３、図３２Ａ）と約０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｘ（Ｘ＝Ｐ又はＧ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５１に対応するバリンは、例えば、プロリン（ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ；配列番号５５、図３２Ｃ）、又はＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５１に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｐ又はＧ、例えばプロリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号５５、図３２Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７に対応するアルギニンは、例えば、イソロイシン（ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ；配列番号５７、図３２Ｅ）、又はＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ、例えばイソロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号５７、図３２Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するプロリンは、例えば、セリン（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ；配列番号５９、図３２Ｇ）、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、又はＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号５９、図３２Ｇ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る  ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するセリンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ；配列番号６１、図３２Ｉ）、又はＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号６１、図３２Ｉ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２  ＶＰ１：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）の３９〜４６位に対応するアミノ酸は、欠失しているか（ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２；配列番号６３、図３２Ｋ）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列である。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）の３９〜４６位に対応するアミノ酸が欠失したままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号６３、図３２Ｋ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）の３９〜４６位に対応するアミノ酸は、ペプチド配列ＳＳＴＡＶＡＴＡ（配列番号１６８；ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ；配列番号６５、図３２Ｍ）、又はｍｕｔ  ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸３９〜４６に対応する位置がペプチド配列ＳＳＴＡＶＡＴＡのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号６５、図３２Ｍ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｒ５３ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、及びｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３及び５７にそれぞれ対応するアラニン及びアルギニンは、例えば、それぞれバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジンもしくはヒスチジン及びイソロイシン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ；配列番号１８８、図３２ＡＡ）、又はＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３及び５７に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＶ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジン、及びＩ、Ｌ、Ｍ、Ｖ又はＡ、例えばイソロイシンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｒ５３ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１８８、図３２ＡＡ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｐ８０ｘ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、及びｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３及び８４にそれぞれ対応するアラニン及びプロリンは、例えば、限定するものではないが、それぞれバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジンもしくはヒスチジン、及びセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジンもしくはヒスチジン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ；配列番号６７、図３２Ｏ）、又はＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｐ８０ｘ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に置換されているか変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３及び８４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＶ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジン、及びＳ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｐ８０ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号６７、図３２Ｏ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｘ（Ｘ＝Ｐ又はＧ）＋Ｐ８０ｘ（ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５１及び８４にそれぞれ対応するバリン及びプロリンは、例えば、それぞれプロリン、及びセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジンもしくはヒスチジン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ；配列番号６９、図３２Ｑ）、又はＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に置換されているか変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５１及び８４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＰ又はＧ、例えばプロリン、及びＳ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｘ＋Ｐ８０ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号６９、図３２Ｑ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ）＋Ｐ８０ｘ（ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７及び８４にそれぞれ対応するアルギニン及びプロリンは、例えば、それぞれイソロイシン、及びセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジンもしくはヒスチジン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ；配列番号７１、図３２Ｓ）、又はＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７及び８４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＩ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ、例えばイソロイシン、及びＳ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン、ヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｘ＋Ｐ８０ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７１、図３２Ｓ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）＋Ｓ９０ｘ（ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するプロリン及びセリンは、例えば、それぞれセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジンもしくはヒスチジン、及びロイシン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ；配列番号７３、図３２Ｕ）、又はＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＳ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジン、及びＬ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ＋Ｓ９０ｘ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７３、図３２Ｕ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｒ５３ｘ＋Ｐ８０ｚ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ａ又はＶ、及びｚ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）、ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３、５７及び８４にそれぞれ対応するアラニン及びアルギニンはそれぞれ、例えば、３９位で、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジンもしくはヒスチジン、５３位で、イソロイシン、及び８０位で、セリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジンもしくはヒスチジン（例えば、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ；配列番号１９０、図３２ＣＣ）、又はＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に置換されているか変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３、５７及び８４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれＶ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ、例えばバリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、グリシン、セリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジン、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ又はＡ、例えばイソロイシン、及びＳ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｒ５３ｘ＋Ｐ８０ｚ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１９０、図３２ＣＣ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）＋Δ３５−４２、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）の８４位に対応するプロリンは、例えば、セリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンに変異しており、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１の３９〜４６位に対応するアミノ酸は、欠失しているか（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２；配列番号７５、図３２Ｗ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列である。例えば、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１の３９〜４６位に対応するアミノ酸が欠失したままであり、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ＋Δ３５−４２  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７５、図３２Ｗ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ）＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）の８４位に対応するプロリンは、例えば、セリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンに変異しており、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１の３９〜４６位に対応するアミノ酸は、ペプチド配列ＳＳＴＡＶＡＴＡ（配列番号１６８；ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ；配列番号７７、図３２Ｙ）、又はｍｕｔ  ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置が、Ｓ、Ｎ、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｋ又はＨ、例えばセリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンのままであり、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸３９〜４６に対応する位置がペプチド配列ＳＳＴＡＶＡＴＡのままであり、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７７、図３２Ｙ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．４  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．４株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（配列番号１６、アミノ酸；配列番号５２、ヌクレオチド；図１９Ａ及び図１９Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミン酸は、例えば、セリン（ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ；配列番号７９、図３３Ａ）、又はＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．６  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号７９、図３３Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．６  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．６株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（配列番号２０、アミノ酸；配列番号２１、ヌクレオチド；図２１Ａ及び図２１Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するセリンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ；配列番号８１、図３３Ｃ）、又はＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．６  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号８１、図３３Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．６  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．６株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（配列番号２０、アミノ酸；配列番号２１、ヌクレオチド；図２１Ａ及び図２１Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ｓ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びセリンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ；配列番号８３、図３３Ｅ）、又はＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ、Ａ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．６  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号８３、図３３Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．６  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．６株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（配列番号２０、アミノ酸；配列番号２１、ヌクレオチド；図２１Ａ及び図２１Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４に対応するグルタミン酸は、例えば、セリン（ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ；配列番号８８、図３４Ａ）、又はＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号８８、図３４Ａ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１２株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（配列番号１９、アミノ酸；図２３Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するアラニンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ；配列番号９０、図３４Ｃ）、又はＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号９０、図３４Ｃ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１２株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（配列番号１９、アミノ酸；図２３Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号９２、図３４Ｅ）、又はＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１２  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号９２、図３４Ｅ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１２  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１２株、例えば、限定するものではないが、ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（配列番号１９、アミノ酸；図２３Ａ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３に対応するアラニンは、例えば、バリン（ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ；配列番号１９２、図３４Ｇ）、又はＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ、例えばバリンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１９２、図３４Ｇ）と約０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１７株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（配列番号２４、アミノ酸；配列番号２５、ヌクレオチド；図２６Ａ及び図２６Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１７  Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸５７に対応するアルギニンは、例えば、イソロイシン（ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ；配列番号１９４、図３４Ｉ）、又はＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸５７に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ａ又はＭ、例えばイソロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１９４、図３４Ｉ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１７株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（配列番号２４、アミノ酸；配列番号２５、ヌクレオチド；図２６Ａ及び図２６Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸９４に対応するセリンは、例えば、ロイシン（ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ；配列番号１９６、図３４Ｋ）、又はＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸９４に対応する位置での置換、改変又は変異が、Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１９６、図３４Ｋ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１７株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（配列番号２４、アミノ酸；配列番号２５、ヌクレオチド；図２６Ａ及び図２６Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１（ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ）＋Ｒ５３Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ａ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸４３及び５７にそれぞれ対応するアラニン及びアルギニンは、例えば、それぞれバリン及びイソロイシン（ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ；配列番号１９８、図３４Ｍ）、又はＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸４３及び５７に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｖ、Ｉ、Ｌ又はＭ、例えばバリン、及びＩ、Ｌ、Ｍ、Ｖ又はＡ、例えばイソロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１９８、図３４Ｍ）と約０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１７株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（配列番号２４、アミノ酸；配列番号２５、ヌクレオチド；図２６Ａ及び図２６Ｂ）から得ることができる。
・ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（ＧＩＩ．４＿Ｅ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ）＋Ａ９０Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｉ、Ｍ又はＶ）、ＶＰ１）：ここで、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のアミノ酸８４及び９４にそれぞれ対応するグルタミン酸及びアラニンは、例えば、それぞれセリン及びロイシン（ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；配列番号２００、図３４Ｏ）、又はＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列と約８０％〜約１００％もしくはそれらの間の任意の量の配列類似性を示す配列に変異している。例えば、ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸８４及び９４に対応する位置での置換、改変又は変異がそれぞれ、Ｓ、Ｎ、Ｃ又はＴ、例えばセリン、及びＬ、Ｉ、Ｍ又はＶ、例えばロイシンのままであり、ＶＰ１タンパク質が対象に投与された場合にノロウイルスに対する免疫を誘発するという条件で、ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質は、ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列（配列番号２００、図３４Ｏ）と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又はそれらの間の任意の量の配列類似性を有し得る。ＧＩＩ．１７  ＶＰ１をコードする配列は、任意のＧＩＩ．１７株、例えば、限定するものではないが、Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（配列番号２４、アミノ酸；配列番号２５、ヌクレオチド；図２６Ａ及び図２６Ｂ）から得ることができる。
【０１５２】
ＶＬＰ収量
ＶＰ１の改善された特性の例は、図５Ｂを参照して示す、ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量を比較して観察され得る（例３を参照）。植物内での改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）（図５Ｆを参照）、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（図５Ｄを参照）及びＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（図５Ｂを参照）の発現は、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１の収量と比較して、同等の、又はそれよりも高いＶＬＰ収量をもたらした。さらに、植物内での改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）（図６Ｆを参照）の発現は、野生型ＧＩ．７  ＶＰ１の収量と比較して、同等の、又はそれよりも高いＶＬＰ収量をもたらした。
【０１５３】
増加したＶＬＰ収量の類似の改善された特性は、図９Ａ〜図９Ｅ及び図９Ｈを参照して示される。野生型ＧＩＩ．４  ＶＰ１を含むＶＬＰと比較して、ノロウイルス改変ＶＰ１タンパク質ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（図９Ｄ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｋ又はＨ）（図９Ｂ及び図９Ｈ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｒ５３Ｉ（図９Ｄ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）（図９Ｃ及び図９Ｉ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（図９Ｂ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２（図９Ｃ）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ（図９Ｆ）及びＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＿Ｐ８０Ｓ（図９Ｇ）を含むＶＬＰは、植物でのＶＬＰ収量の増強を示し、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ及びＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐはタンパク質収量のわずかな増加を示した。
【０１５４】
野生型と比較して増加したＶＬＰ収量はまた、ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１を発現する植物抽出物にも観察された（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。
【０１５５】
８４位（ＧＩ株）又は８０位（ＧＩＩ株；ＧＩ．１  ＶＰ１の８４位に対応するか、それとアラインメントした）のアミノ酸が置換された改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、対応する野生型（天然）ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量と比較した場合、同じ（ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ；ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ、図６Ｂも参照；ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ、図８Ａも参照）又は増加した（ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ；ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ；図６Ｄも参照；ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ、図９Ｂ〜図９Ｆも参照；ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ）ＶＬＰ収量を示した。
【０１５６】
９４位（ＧＩ株）又は９０位（ＧＩＩ株；ＧＩ．１  ＶＰ１の９４位に対応するか、それとアラインメントした）のアミノ酸が置換された改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、検査したあらゆる改変ＶＰ１タンパク質（ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）（図５Ｂ及び図５Ｆ）；ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ（図６Ｂを参照）；ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ（図７Ｂを参照）；ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ（図９Ｂを参照）；ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ（図１０Ａを参照）；ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ（図１１Ｂを参照）；及びＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ（図１１Ｄを参照）について、対応する野生型又は天然のＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量と比較した場合、同じ又は増加したＶＬＰ収量を示した。
【０１５７】
同様に、８４位及び９４位（ＧＩ株）又は８０位及び９０位（ＧＩＩ株；ＧＩ．１  ＶＰ１の８４位及び９４位に対応するか、それとアラインメントした）のアミノ酸が置換された改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰは、検査したあらゆる改変ＶＰ１タンパク質（ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ、図５Ｂも参照；ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ、図６Ｂも参照；ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ、図７Ｂ及び図７Ｃも参照；ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ、図９Ｂも参照；ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ、図１１Ｂも参照）について、対応する野生型又は天然のＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量と比較した場合、ＶＬＰ収量の増加を示した。
【０１５８】
ＶＬＰ収量を増加させるための追加の改変も観察した。これらの改変には、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（図５Ｄ）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ（図６Ｄ）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ（図６Ｄ）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（図７Ｃ）、ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（図７Ｃ）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（図９Ｄ）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｋ又はＨ）（図９Ｃ及び図９Ｉ）；ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（図９Ｄ）；ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ（図９Ｅ）；ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ（図９Ｃ）及びＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（図９Ｇ）が含まれる。
【０１５９】
ＶＬＰのサイズ、密度、安定性及び品質
図５Ｂに示すように、変異体ノロウイルスＶＰ１タンパク質ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ及びＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌは、ＶＬＰが画分１（Ｆ１）で観察され、画分Ｆ２〜Ｆ６でピークに達するように、野生型ノロウイルスＧＩ．３  ＶＰ１よりも高い密度（タンパク質抽出物のイオジキサノール密度勾配画分のクーマシー染色ＳＤＳ  ＰＡＧＥによって決定した）を有するＶＬＰの改善された特性を示した。これらの結果は、天然ＧＩ．３  ＶＬＰの集合の方がＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ  ＶＬＰよりも安定性が低い場合があり、天然ＧＩ．３  ＶＬＰの方が異常なキャプシド粒子、及び断片化産物の生成の影響を受けやすい場合があることを示している。結果として、ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ及びＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１を含むＶＬＰは、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１よりも高い構造的完全性を示す。また、ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ及びＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を使用して決定したところ、直径２３ｎｍのＶＬＰに対して直径３８ｎｍのＶＬＰの相対的な割合が野生型よりも高いことが観察されている（図５Ｃ及び図５Ｅ）。
【０１６０】
ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ  ＶＰ１、ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ  ＶＰ１又はＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰは、収量の増加を示し、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ  ＶＰ１もまた、野生型ノロウイルスＧＩ．５  ＶＰ１よりも（改変ＧＩ．３  ＶＰ１を使用して産生されたＶＬＰについて上記で説明したものと同様に）高い密度、安定性及び構造的完全性を示した（図６Ｂ）。図６Ｃに示すように、得られたＶＬＰでは、野生型と比較して、損傷したＶＬＰ粒子が少なく、直径２３ｎｍのＶＬＰに対して直径３８ｎｍの粒子の相対的な割合が高かった。
【０１６１】
ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ  ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰも、野生型ノロウイルスＧＩ．７  ＶＰ１と比較して、同じかそれよりも高い密度を示すことが観察された（図６Ｄ）。図６Ｅに示すように、改変ＶＬＰでは、野生型と比較して、損傷したＶＬＰ粒子が少なく、直径２３ｎｍのＶＬＰに対して直径３８ｎｍの粒子の相対的な割合が高かった。
【０１６２】
ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰは、野生型ノロウイルスＧＩＩ．２  ＶＰ１よりも（上記で説明したものと同様に）高い密度、安定性及び構造的完全性を示した（図７Ｃ）。図７Ｃに示すように、改変ＶＬＰでは、野生型と比較して、損傷したＶＬＰ粒子が少なく、直径２３ｎｍのＶＬＰに対して直径３８ｎｍの粒子の相対的な割合が高かった。
【０１６３】
植物内でのＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓの発現は、直径３８ｎｍの粒子のＶＬＰをもたらした（図８Ｂ）。ただし、ＶＰ１タンパク質の収量（ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定）は低いままであった。
【０１６４】
図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ及び図９Ｇに示すように、改変ＶＰ１タンパク質、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２及びＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓはいずれも、野生型ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰよりも高い密度、安定性及び構造的完全性を有するＶＬＰを示した。さらに、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２及びＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓを含むＶＬＰはいずれも、ＴＥＭによって見られるように、ウイルスキャプシドの完全性が改善され、損傷した粒子が少なかった（図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ及び図９Ｅ）。ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ及びＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２を含むＶＬＰも、野生型ＧＩＩ．４  ＶＬＰと比較して、直径２３ｎｍの粒子に対して直径３８  ｎｍの粒子の割合が高いことが観察された（図９Ｂ及び図９Ｃ）。ＶＬＰはまた、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ；ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ、ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ；ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡからも産生された（図９Ｅ及び図９Ｆ）。
【０１６５】
図１０Ａ及び図１０Ｂに示すように、改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌの発現は、透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を使用して決定された、直径３８ｎｍのＶＬＰをもたらした。
【０１６６】
ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ、ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ及びＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌを含むＶＬＰも、透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を使用して決定したところ、野生型ＧＩＩ．１２  ＶＰ１（図１１Ｃ）を含むＶＬＰよりも高い直径３８ｎｍのＶＬＰの密度を有するという改善された特性を示した。
【０１６７】
ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ、ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ及びＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉを含むＶＬＰも、透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）を使用して決定したところ、野生型ＧＩＩ．１７  ＶＰ１を含むＶＬＰよりも高い直径３８ｎｍのＶＬＰの密度を有するという改善された特性を示した（図１１Ｄ）。
【０１６８】
ノロウイルス感染に対する免疫の誘発
「免疫応答」は一般に、対象の適応免疫系の応答を指す。適応免疫系は、一般に、体液性応答及び細胞性応答を含む。体液性応答は、Ｂリンパ球系の細胞（Ｂ細胞）内で産生される分泌抗体によって媒介される免疫の一側面である。分泌抗体は、侵入してきた微生物（ウイルス又は細菌など）の表面にある抗原に結合し、それにより破壊のための警告を発する。体液性免疫は、一般に、抗体産生及びそれに付随するプロセス、ならびにＴｈ２細胞活性化及びサイトカイン産生、メモリー細胞生成、食作用のオプソニン促進、病原体除去などを含む抗体のエフェクター機能を指すために使用される。用語「調節する」又は「調節」などは、一般に知られているか使用されているいくつかのアッセイのいずれかによって決定される特定の応答又はパラメーターの増加又は減少を指し、そのいくつかは本明細書に例示されている。
【０１６９】
細胞性応答は、抗体を伴わないが、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化、及び抗原に反応した様々なサイトカインの放出を伴う免疫応答である。細胞性免疫は、一般に、いくつかのＴｈ細胞活性化、Ｔｃ細胞活性化及びＴ細胞性応答を指すために使用される。細胞性免疫は、ウイルス感染に対する反応に特に重要であり得る。
【０１７０】
例えば、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔリンパ球の誘導は、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して測定され得る。ＣＤ４陽性Ｔリンパ球の刺激は、増殖アッセイを使用して測定され得る。抗ノロウイルス抗体価はＥＬＩＳＡアッセイを使用して定量され得る。抗原特異的抗体又は交差反応性抗体のアイソタイプも、抗アイソタイプ抗体（例えば、抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＥ又は抗ＩｇＭ）を使用して測定され得る。そのようなアッセイを行うための方法及び技術は、当技術分野で周知である。
【０１７１】
サイトカインの存在又はレベルも定量され得る。例えば、Ｔヘルパー細胞応答（Ｔｈ１／Ｔｈ２）は、ＥＬＩＳＡ（例えば、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＯｐｔＥＩＡキット）によるＩＦＮ−γ分泌細胞及びＩＬ−４分泌細胞の測定によって特徴付けられる。対象から得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）又は脾細胞を培養し、上清を分析してもよい。また、Ｔリンパ球は、当技術分野で知られているマーカー特異的蛍光標識及び方法を使用して、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって定量してもよい。
【０１７２】
また、対象の免疫応答を特徴付けるためにマイクロ中和アッセイが行われてもよく、例えば、Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３の方法を参照されたい。以下を含むいくつかの方法、すなわち、細胞のクリスタルバイオレット固定／呈色に続く溶菌プラークの計数（プラークアッセイ）；インビトロ培養における細胞溶解の顕微鏡観察；及び２）ノロウイルスのＥＬＩＳＡ及び分光光度検出でウイルス中和力価を定量してもよい。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）」又は「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅｓ）」は、抗体が特異的に結合する抗原の構造部分を指す。
【０１７４】
植物産生野生型ノロウイルス天然ＧＩ．１（配列番号１）ＶＬＰ投与に対する免疫応答は、ＢＡＬＢ／ｃマウスを使用して行った（例４）。例えば、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１４０；配列番号１６７）、ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ（構築物４１４１；配列番号９）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１７９；配列番号１６９）、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８０；配列番号１７１）、ＧＩ．３＿Ｐ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１４２；配列番号１１）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８１；配列番号１７３）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１３０；配列番号３５）、ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ（構築物４１３１；配列番号３７）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ（構築物４１３２；配列番号３９）、ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ（構築物４２１０；配列番号１７６）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ（構築物４２１７；配列番号１７８）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ（構築物４２１８；配列番号１８０）、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４３；配列番号８６）、ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４４；配列番号４２）、ＧＩＩ．２＿Ｑ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４５；配列番号４４）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｑ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８２；配列番号１８３）、ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｉ＋Ｑ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８３；配列番号１８５）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｑ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８４；配列番号１８７）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４６；配列番号４７）、ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４７；配列番号４９）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４８；配列番号５１）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ（構築物４１５５；配列番号５４）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ（構築物４１５６；配列番号５６）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（構築物４１５７；配列番号５８）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ（構築物４１３３；配列番号６０）、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１３４；配列番号６２）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２（構築物４１５８；配列番号６４）、ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１５９；配列番号６６）。ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４１８５；配列番号１８９）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６５；配列番号６８）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６６；配列番号７０）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６７；配列番号７２）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１３５；配列番号７４）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６８；配列番号７６）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１６９；配列番号７８）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１８６；配列番号１９１）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４９；配列番号８０）、ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１５０；配列番号８２）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１５１；配列番号８４）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１３６；配列番号８９）、ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１３７；配列番号９１）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１３８；配列番号９３）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ（構築物��２３４；配列番号１９３）、ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ（構築物４２３５；配列番号１９５）、ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ（構築物４２３２；配列番号１９７）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４２３６；配列番号１９９）、ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４２３３；配列番号２０１）又はそれらの組合せを使用して産生された植物産生改変ＶＰ１タンパク質、又は改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰをマウスに投与してもよい。ＧＩ．１  ＶＬＰコーティングプレートを使用して、ＧＩ．１  ＶＬＰ特異的総ＩｇＧ及びＩｇＡ抗体について、動物から採取した血液からの血清試料をＥＬＩＳＡにより分析した。図３Ｄを参照すると、各処置群について、ＧＩ．１遺伝子型由来の植物ノロウイルス天然ＶＰ１  ＶＬＰを用いて免疫したマウスは、血清中にＧＩ．１  ＶＬＰ特異的ＩｇＧ抗体価を示す。各処置によって誘発されたＩｇＧ力価レベルは、プラセボ群について定量された力価よりも統計的に高かった（ｐ＜０．０５）。ＩｇＧ力価レベルは用量依存的に増加した（アルハイドロゲルの有無にかかわらず、処方された１μｇと１０μｇとの処置間に有意差が検出された；ｐ＜０．０５）。ＩｇＧ力価レベルの有意な増加は、２１日目から４２日目まで各処置群に検出された（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、植物産生ノロウイルス天然ＶＰ１  ＶＬＰがマウスに対して強力な免疫応答を誘発する能力をまとめて示している。
【０１７５】
したがって、本明細書では、抗体又は抗体断片を産生する方法であって、対象又は宿主動物に改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、又は１つもしくは２つ以上の改変ＶＰ１タンパク質を含むノロウイルスＶＬＰを投与し、それにより抗体又は抗体断片を産生することを含む方法が提供される。ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４の位置から選択されるアミノ酸残基に、１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異；ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失；ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１のアミノ酸残基３９〜４６に対応するアミノ酸に、１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異を含む改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質（ＧＩ  ＶＰ１タンパク質又はＧＩＩ  ＶＰ１タンパク質のいずれか）は、配列ＳＳＴＡＶＡＴＡ又はそれらの組合せに変異し、ヌクレオチド配列は遺伝子型ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１に由来しない。ＶＬＰは、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をさらに含み得る。
【０１７６】
改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物も提供される。
【０１７７】
植物発現
本発明の構築物は、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、直接的ＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどを使用して植物細胞に導入することができる。そのような技術の概説については、例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ＶＩＩＩ，ｐｐ．４２１−４６３（１９８８）；Ｇｅｉｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｅｙ，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｄ  Ｅｄ．（１９８８）；及びＭｉｋｉ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔｓ．Ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２ｄ  Ｅｄ．ＤＴ．Ｄｅｎｎｉｓ，ＤＨ  Ｔｕｒｐｉｎ，ＤＤ  Ｌｅｆｅｂｒｖｒｅ，ＤＢ  Ｌａｙｚｅｌｌ（ｅｄｓ），Ａｄｄｉｓｏｎ  Ｗｅｓｌｙ，Ｌａｎｇｍａｎｓ  Ｌｔｄ．Ｌｏｎｄｏｎ，ｐｐ．５６１−５７９（１９９７）を参照されたい。他の方法には、直接的ＤＮＡ取り込み（リポソームエレクトロポレーションの使用）、例えば、プロトプラスト、マイクロインジェクション、マイクロプロジェクタイル又はウィスカー、及びバキュームインフィルトレーションの使用が含まれる。例えば、Ｂｉｌａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１，Ｇｅｎｅ  １００：２４７−２５０）、Ｓｃｈｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２８：１０４−１１２）、Ｇｕｅｒｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７，Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ５２：１１１−１１６）、Ｎｅｕｈａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７，Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ  Ｇｅｎｅｔ．７５：３０−３６）、Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２９８７，Ｎａｔｕｒｅ  ３２７：７０−７３）；Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９：１３５３）、Ｈｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０８：１２６５）、Ｈｏｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２７：１２２９−１２３１）、ＤｅＢｌｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ９１：６９４−７０１）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，１９８８）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓｃｈｕｌｅｒ  ａｎｄ  Ｚｉｅｌｉｎｓｋｉ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）、国際公開第９２／０９６９６号、国際公開第９４／００５８３号、欧州特許第３３１０８３号、欧州特許第１７５９６６号、Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｌｏｍｏｎｏｓｓｏｆｆ（２００２，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈ，１０５：３４３−３４８）、欧州特許第２９０３９５号、国際公開第８７０６６１４号、米国特許第４，９４５，０５０号、米国特許第５，０３６，００６号及び米国特許第５，１００，７９２号、１９９５年５月１０日に出願された米国特許出願番号第０８／４３８，６６６号ならびに１９９２年９月２５日に出願された米国特許��願番号第０７／９５１，７１５号、（これらはいずれも参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０１７８】
一過性発現法を使用して、本発明の構築物を発現させてもよい（Ｄ’Ａｏｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ４８３，ｐａｇｅｓ  ４１−５０；Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｌｏｍｏｎｏｓｓｏｆｆ，２００２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１０５：３４３−３４８を参照；参照により本明細書に組み込まれる）。あるいは、Ｋａｐｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７，Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．１２２，１０１−１０８；参照により本明細書に組み込まれる）、又は国際公開第００／０６３４００号、国際公開第００／０３７６６３号（参照により本明細書に組み込まれる）によって記載されているような真空ベースの一過性発現方法が使用されてもよい。これらの方法には、例えば、限定するものではないが、アグロイノキュレーション又はアグロインフィルトレーション、シリンジインフィルトレーションが含まれ得るが、他の一過性の方法も上記のように使用され得る。アグロイノキュレーション、アグロインフィルトレーション又はシリンジインフィルトレーションにより、所望の核酸を含むアグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）の混合物が、組織、例えば葉、植物の地上部分（茎、葉及び花を含む）、植物の他の一部（茎、根、花）又は植物全体の細胞間隙に侵入する。アグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）は、表皮の通過後に感染し、細胞内にｔ−ＤＮＡコピーを移行させる。ｔ−ＤＮＡはエピソームとして転写され、ｍＲＮＡは翻訳され、感染細胞内で目的のタンパク質の産生を引き起こすが、核の内部へのｔ−ＤＮＡの通過は一過性である。
【０１７９】
また、本発明の一部と考えられるのは、本明細書に記載の一過性のタンパク質発現に適したプラットフォーム植物として使用され得る、本発明の遺伝子構築物を含むトランスジェニック植物、植物細胞又は種子である。植物細胞から植物全体を再生する方法も当技術分野では知られている（例えば、Ｇｕｅｒｉｎｅａｕ  ａｎｄ  Ｍｕｌｌｉｎｅａｕｘ（１９９３，Ｐｌａｎｔ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒｓ．Ｉｎ：Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｆａｘ（Ｃｒｏｙ  ＲＲＤ  ｅｄ）Ｏｘｆｏｒｄ，ＢＩＯＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ｐｐ  １２１−１４８を参照）。一般に、形質転換植物細胞は、抗生物質などの選択剤を含有し得る適切な培地で培養され、ここでは、形質転換植物細胞の同定を容易にするために選択可能マーカーが使用される。カルスが形成されると、公知の方法に従って適切な植物ホルモンを使用することによりシュート形成を促進し、そのシュートを発根培地に移して植物を再生させることができる。次いで、それらの植物を使用して、種子から、又は栄養繁殖技法を使用して、反復的発生（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を樹立してもよい。組織培養物を使用せずにトランスジェニック植物を生成することもできる。これらの生物の安定した形質転換及び再生の方法は、当技術分野で樹立されており、当業者に知られている。利用可能な技術は、Ｖａｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔｓ，ＶｏＩ  Ｉ，Ｉｌ  ａｎｄ  ＩＩＩ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８４）、及びＷｅｉｓｓｂａｃｈ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に概説されている。形質転換及び再生された植物を得る方法は、本発明にとって重要ではない。
【０１８０】
植物、植物部分又は植物細胞が２つ以上の核酸構築物によって形質転換又は同時形質転換される場合、核酸構築物は、核酸がプールされ、細菌細胞がトランスフェクトされるように、１回のトランスフェクションでアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に導入され得る。あるいは、構築物は連続的に導入されてもよい。この場合、第１の構築物が、記載されているようにアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に導入され、単一の形質転換された細菌のみが成長することができる選択的条件下（例えば、抗生物質の存在下）で、細胞を増殖させる。この第１の選択工程に続いて、第２の核酸構築物が、記載されているようにアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に導入され、二重に形質転換された細菌のみが成長することができる二重選択的条件下で、細胞を増殖させる。次いで、二重に形質転換された細菌は、本明細書に記載の植物、植物部分又は植物細胞を形質転換するために使用され得るか、追加の形質転換工程に供されて、第３の核酸構築物を受け入れ得る。
【０１８１】
あるいは、植物、植物部分又は植物細胞が２つ以上の核酸構築物によって形質転換又は同時形質転換される場合、核酸構築物は、植物、植物部分又は植物細胞にアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）細胞の混合物を共インフィルトレーションすることによって植物に導入されてもよく、各アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）細胞は、植物内に導入される１つ以上の構築物を含み得る。構築物内の目的のヌクレオチド配列の植物、植物部分又は植物細胞内の相対的発現レベルを変化させるために、インフィルトレーションの工程中に、所望の構築物を含む様々なアグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）集団の濃度を変化させてもよい。
【０１８２】
したがって、本明細書では、１つもしくは２つ以上の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、又は１つもしくは２つ以上の改変ＶＰ１タンパク質を含むノロウイルスＶＬＰを含む植物、植物の一部、植物細胞又は植物抽出物が提供される。ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸残基から選択される位置に、１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異；ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失；又はそれらの組合せを含む１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、ならびにヌクレオチド配列は、遺伝子型ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１に由来しない。ＶＬＰは、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をさらに含み得る。
【０１８３】
また、本明細書では、１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む植物、植物の一部、植物細胞又は植物抽出物も提供される。ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）のとアラインメントされた配列内のアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸残基から選択される位置に、１つもしくは２つ以上の置換、改変もしくは変異；ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列内のアミノ酸３９〜４６のペプチド断片の欠失；又はそれらの組合せを含む１つ又は複数の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質、ならびにヌクレオチド配列は、遺伝子型ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１に由来しない。
【０１８４】
ノロウイルス株及び構築物の一覧を表３に示す。
【表３−１】
2021503962.tif 000005
【表３−２】
2021503962.tif 000006
【表３−３】
2021503962.tif 000007
【表３−４】
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【表３−５】
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【表３−６】
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【表３−７】
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【表３−８】
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【０１８５】
本発明を以下の例でさらに説明する。
【０１８６】
例１：ノロウイルスＶＰ１構築物
ＶＰ１及びＶＰ２の候補配列はＧｅｎｂａｎｋで入手可能である（図２Ａ及び図２Ｂを参照）。これらの配列の非限定的な例は以下の通りである；
【０１８７】
Ｈｕ／ＧＩ．２／Ｌｅｕｖｅｎ／２００３／ＢＥＬ（ＧＩ．２；配列番号４；図１３Ａ）；
【０１８８】
Ｈｕ／ＧＩ．３／Ｓ２９／２００８／Ｌｉｌｌａ  Ｅｄｅｔ／Ｓｗｅｄｅｎ（ＧＩ．３；配列番号６；図１４Ａ）；
【０１８９】
Ｈｕ／ＧＩ．５／Ｓｉｋｌｏｓ／Ｈｕｎ５４０７／２０１３／ＨＵＮ（ＧＩ．５；配列番号１２；図１５Ａ）；
【０１９０】
Ｈｕ／ＧＩ．７／ＵＳＡ／２０１４／ＧＡ５０４３（ＧＩ．７、配列番号１０１、図１６Ａ）
【０１９１】
Ｈｕ／ＧＩＩ．１／Ａｓｃｅｎｓｉｏｎ２０８／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１；配列番号１３；図１６Ｃ）；
【０１９２】
Ｈｕ／ＧＩＩ．２／ＣＧＭＨ４７／２０１１／ＴＷ（ＧＩＩ．２；配列番号１４；図１７Ａ）；
【０１９３】
Ｈｕ／ＧＩＩ．３／Ｊｉｎｇｚｈｏｕ／２０１３４０２／ＣＨＮ（ＧＩＩ．３；配列番号１５；図１８Ａ）；
【０１９４】
Ｈｕ／ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ（ＧＩＩ．４；配列番号１６；図１９Ａ）；
【０１９５】
ＵＳ９６／ＧＩＩ．４／Ｄｒｅｓｄｅｎ１７４／１９９７／ＤＥ＿ＡＹ７４１８１１（ＧＩＩ．４；配列番号２７；図１９Ｃ）；
【０１９６】
ＦＨ０２／ＧＩＩ．４／ＦａｒｍｉｎｇｔｏｎＨｉｌｌｓ／２００２／ＵＳ＿ＡＹ５０２０２３（ＧＩＩ．４；配列番号２８；図１９Ｄ）；
【０１９７】
Ｈｎｔ０４：ＧＩＩ．４／Ｈｕｎｔｅｒ−ＮＳＷ５０４Ｄ／２００４／ＡＵ＿ＤＱ０７８８１４（ＧＩＩ．４；配列番号２９；図１９Ｅ）；
【０１９８】
２００６ｂ：ＧＩＩ．４／Ｓｈｅｌｌｈａｒｂｏｕｒ−ＮＳＷ６９６Ｔ／２００６／ＡＵ＿ＥＦ６８４９１５（ＧＩＩ．４；配列番号３０；図１９Ｆ）；
【０１９９】
ＮＯ０９：ＧＩＩ．４／Ｏｒａｎｇｅ−ＮＳＷ００１Ｐ／２００８／ＡＵ＿ＧＱ８４５３６７（ＧＩＩ．４；配列番号３１；図１９Ｇ）；
【０２００】
ＧＩＩ．１４＿Ｓａｇａ＿２００８＿ＪＰＮ＿ＡＤＥ２８７０１天然ＶＰ１（ＧＩＩ．１４；配列番号３２；図２５）；
【０２０１】
Ｈｕ／ＧＩＩ．５／ＡｌｂｅｒｔａＥＩ３９０／２０１３／ＣＡ（ＧＩＩ．５；配列番号１７；図２０）；
【０２０２】
Ｈｕ／ＧＩＩ．６／Ｏｈｉｏ／４９０／２０１２／ＵＳＡ（ＧＩＩ．６；配列番号２０；図２１Ａ）；
【０２０３】
Ｇ１１．７／Ｍｕｓａ／２０１０／Ａｌｌ７３７７４（ＧＩＩ．７；配列番号１８；図２２）；
【０２０４】
Ｈｕ／ＧＩＩ．１２／ＨＳ２０６／２０１０／ＵＳＡ（ＧＩＩ．１２；配列番号１９；図２３Ａ）；
【０２０５】
ＧＩＩ．１３／ＶＡ１７３／２０１０／Ｈ９ＡＷＵ４（ＧＩＩ．１３；配列番号２２；図２４Ａ）；
【０２０６】
Ｈｕ／ＧＩＩ．１７／Ｋａｗａｓａｋｉ３２３／２０１４／ＪＰ（ＧＩＩ．１７；配列番号２４；図２６Ａ）；
【０２０７】
Ｈｕ／ＧＩＩ．２１／Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ１５０／２０１１／ＵＳＡ（ＧＩＩ．２１；配列番号２６；図２７）。
【０２０８】
表４に列挙したプライマーを使用して、下記の構築物を調製した。
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【表４−６】
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【０２０９】
ＷＴ  ＧＩ．１ノロウイルスＶＰ１：Ａ２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ｗｔ  ＶＰ１  ＧＩ．１／ＮＯＳ（構築物番号２７２４）
以下のＰＣＲに基づく方法を使用して、ノロウイルス株ＧＩ．１／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８／ＵＳ由来のＶＰ１をコードするヒトコドン最適化配列を２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ発現系にクローニングした。プライマーＩＦ‐ＮｏＶ（ＵＳ６８）ＶＰ１（ＯＲＦ２）（ｈＣｏｄ）．ｃ（配列番号１０２）及びＩＦ−ＮｏＶ（ＵＳ６８）ＶＰ１（ＯＲＦ２）（ｈＣｏｄ）．ｒ（配列番号１０３）を使用して、テンプレートとしてヒトコドン最適化ＧＩ．１  ＶＰ１遺伝子配列（配列番号３）を使用して、ＧＩ．１  ＶＰ１コード配列を含む断片を増幅した。配列最適化のために、ＧＩ．１／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８／ＵＳ  ＶＰ１タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０５６８２１）を逆翻訳し、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量及びｍＲＮＡ構造に対して最適化した。Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ発現系にＰＣＲ産物をクローニングした。ＳａｃＩＩ及びＳｔｕＩ制限酵素を用いて構築物番号１１９０（配列番号１６２；図３８Ａ及び図４８）を消化し、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎアセンブリ反応に線状化プラスミドを使用した。構築物番号１１９０は、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳベースの発現カセットでの目的の遺伝子の「Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングを目的としたアクセプタープラスミドである。また、構築物番号１１９０には、アルファルファプラストシアニン遺伝子プロモーター及びターミネーターの下でサイレンシングのＴＢＳＶ  Ｐ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物も組み込まれている。バックボーンはｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左Ｔ−ＤＮＡ境界から右Ｔ−ＤＮＡ境界までの配列は配列番号１６２に示されている。得られた構築物には番号２７２４を付与した（図３８Ｂ；配列番号１６３）。ノロウイルス株ＧＩ．１／Ｎｏｒｗａｌｋ／１９６８／ＵＳ由来の天然ＶＰ１のアミノ酸配列を配列番号１に示す。プラスミド２７２４の図を図３９Ａに示す。
【０２１０】
２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ（ｈＣｏｄ）／ＮＯＳ＋ＭＡＲ（構築物番号４１３３）
以下のＰＣＲに基づく方法を使用して、ＳドメインにＰ８０Ｓ置換を含む、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ由来のＶＰ１をコードするヒトコドン最適化配列を２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲ発現系にクローニングした。ＰＣＲの第１ラウンドでは、プライマーＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｃ（配列番号１３０）及びＧＩＩ．４（Ｐ８０Ｓ）．ｒ（配列番号１３８）を使用して、テンプレートとしてヒトコドン最適化ＧＩＩ．４  ＶＰ１遺伝子配列（配列番号５２）を使用して、Ｐ８０Ｓアミノ酸が変異した、Ｓドメインを含む断片を増幅した。ＧＩＩ．４（Ｐ８０Ｓ）．ｃ（配列番号１３９）及びＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｒ（配列番号１３１）を使用して、テンプレートとしてヒトコドン最適化ＧＩＩ．４  ＶＰ１遺伝子配列（配列番号５２）を使用して、Ｓ及びＰドメインの残りを有する、Ｐ８０Ｓ置換を含む第２の断片を増幅した。配列最適化のために、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦＶ０８７９５）を逆翻訳し、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量及びｍＲＮＡ構造に対して最適化した。次いで、両増幅からのＰＣＲ産物を混合し、プライマーとしてＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｃ（配列番号１３０）及びＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｒ（配列番号１３１）を使用して、第２ラウンドの増幅のためのテンプレートとして使用した。Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲ発現系に最終ＰＣＲ産物をクローニングした。ＳａｃＩＩ及びＳｔｕＩ制限酵素を用いて構築物番号３６７７（配列番号１６４；図３８Ｃ及び図４９）を消化し、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎアセンブリ反応に線状化プラスミドを使用した。構築物番号３６７７は、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲベースの発現カセットでの目的の遺伝子の「Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングを目的としたアクセプタープラスミドである。また、構築物番号１１９０には、アルファルファプラストシアニン遺伝子プロモーター及びターミネーターの下でサイレンシングのＴＢＳＶ  Ｐ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物も組み込まれている。バックボーンはｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左Ｔ−ＤＮＡ境界から右Ｔ−ＤＮＡ境界までの配列は配列番号１６４に示されている。得られた構築物には番号４１３３を付与した（図３８Ｄ；配列番号１６５）。変異ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓのアミノ酸配列を配列番号５９に示す。プラスミド４１３３の図を図４４Ｅに示す。
【０２１１】
２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（ｈＣｏｄ）／ＮＯＳ＋ＭＡＲ（構築物番号４１３５）
以下のＰＣＲに基づく方法を使用して、ＳドメインにＰ８０Ｓ置換及びＳ９０Ｌ置換を含む、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ由来のＶＰ１をコードするヒトコドン最適化配列を２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲ発現系にクローニングした。ＰＣＲの第１ラウンドでは、プライマーＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｃ（配列番号１３０）及びＧＩＩ．４（Ｓ９０Ｌ）．ｒ（配列番号１４０）を使用して、テンプレートとしてヒトコドン最適化ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１遺伝子配列（配列番号６０）を使用して、Ｐ８０Ｓアミノ酸及びＳ９０Ｌアミノ酸が変異した、Ｓドメインを含む断片を増幅した。ＧＩＩ．４（Ｓ９０Ｌ）．ｃ（配列番号１４１）及びＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｒ（配列番号１３１）を使用して、テンプレートとしてヒトコドン最適化ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１遺伝子配列（配列番号６０）を使用して、Ｓ及びＰドメインの残りを有する、Ｓ９０Ｌ置換を含む第２の断片を増幅した。配列最適化のために、ＧＩＩ．４／Ｓｙｄｎｅｙ／ＮＳＷ０５１４／２０１２／ＡＵ  ＶＰ１タンパク質配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦＶ０８７９５）を逆翻訳し、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量及びｍＲＮＡ構造に対して最適化した。次いで、両増幅からのＰＣＲ産物を混合し、プライマーとしてＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｃ（配列番号１３０）及びＩＦ−ＧＩＩ．４Ｓｙｄ１２ＶＰ１．ｒ（配列番号１３１）を使用して、第２ラウンドの増幅のためのテンプレートとして使用した。Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎクローニングシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲ発現系に最終ＰＣＲ産物をクローニングした。ＳａｃＩＩ及びＳｔｕＩ制限酵素を用いて構築物番号３６７７（配列番号１６４；図３８Ｃ及び図４９）を消化し、Ｉｎ−Ｆｕｓｉｏｎアセンブリ反応に線状化プラスミドを使用した。構築物番号３６７７は、２Ｘ３５Ｓ／ＣＰＭＶ  １６０／ＮＯＳ＋ＭＡＲベースの発現カセットでの目的の遺伝子の「Ｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ」クローニングを目的としたアクセプタープラスミドである。また、構築物番号１１９０には、アルファルファプラストシアニン遺伝子プロモーター及びターミネーターの下でサイレンシングのＴＢＳＶ  Ｐ１９サプレッサーを共発現させるための遺伝子構築物も組み込まれている。バックボーンはｐＣＡＭＢＩＡバイナリープラスミドであり、左Ｔ−ＤＮＡ境界から右Ｔ−ＤＮＡ境界までの配列は配列番号１６４に示されている。得られた構築物には、番号４１３５を付与した（配列番号１６６）。変異ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌのアミノ酸配列を配列番号７３に示す。プラスミド４１３５の図を図４４Ｌに示す。
【０２１２】
野生型及び変異ＶＰ１及びＶＰ２タンパク質、プライマー、テンプレート及び産物の概要を表３及び表４に示す。単一の改変については構築物番号４１３３、ならびに二重、三重及び四重の改変については構築物番号４１３５を参照して、上記と同じ方法を使用して、単一、二重、三重及び四重の改変、置換又は変異を有するＶＰ１タンパク質を構築した。構築物番号２７２４について記載したのと本質的に同じ方法を使用して、ＶＰ２タンパク質を集合させる。
【０２１３】
例２：方法
アグロバクテリウムツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）トランスフェクション
Ｄ’Ａｏｕｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００８（Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｊ．６：９３０−４０）によって記載された方法を使用して、天然ノロウイルスＶＰ１、天然ノロウイルスＶＰ２、又はノロウイルスＶＰ１変異体タンパク質発現ベクターを用いたエレクトロポレーションによって、アグロバクテリウムツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＡＧＬ１株をトランスフェクトした。１０ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２０μＭアセトシリンゴン、５０μｇ／ｍｌカナマイシン及び２５μｇ／ｍｌカルベニシリンｐＨ５．６を添加したＹＥＢ培地で、ＯＤ６００が０．６〜１．６になるまで、トランスフェクトしたアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）を増殖させた。アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）懸濁液を使用前に遠心分離し、インフィルトレーション培地（１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び１０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ５．６）に再懸濁した。
【０２１４】
植物バイオマス、イノキュラム及びアグロインフィルトレーションの調製
商業用ピートモス基質を満たした平面で、種子からＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）植物を生長させた。１６／８の光周期及び２５℃昼／２０℃夜の温度体制下の温室内で植物を生長させた。播種の３週間後に、個別の苗木を選び、ポットに移植し、同じ環境条件下でさらに３週間にわたり温室内で生長させた。
【０２１５】
１０ｍＭ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２０μＭアセトシリンゴン、５０μｇ／ｍｌカナマイシン及び２５μｇ／ｍｌカルベニシリンｐＨ５．６を添加したＹＥＢ培地で、アグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）が０．６〜１．６のＯＤ６００に達するまで、各天然ノロウイルスＶＰ１、天然ノロウイルスＶＰ２又はノロウイルスＶＰ１変異体発現ベクターをトランスフェクトしたアグロバクテリア（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ）を増殖させた。アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）懸濁液を使用前に遠心分離し、インフィルトレーション培地（１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び１０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ５．６）に再懸濁し、４℃で一晩保存した。インフィルトレーションの日に、培養バッチを２．５培養体積に希釈し、使用前に暖めた。２０〜４０Ｔｏｒｒの真空下の気密性のステンレス鋼タンク内の細菌懸濁液中に、Ｎ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）の植物全体を上下逆さまにして２分間入れた。収穫までの６〜９日のインキュベーション期間に、植物を温室に戻した。
【０２１６】
葉の収穫及び総タンパク質抽出物
インキュベーション後、植物の地上部を収穫し、−８０℃で凍結し、細かく破砕した。２体積の冷１００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．４μｇ／ｍｌメタバイスルファイト及び１ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル中で、凍結破砕した植物材料の各試料をホモジナイズ（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）することによって、総可溶性タンパク質を抽出した。ホモジナイゼーション後、スラリーを１０，０００ｇで１０分間４℃で遠心分離し、これらの清澄化された粗抽出物（上清）を分析のために保存した。
【０２１７】
参照標準としてウシ血清アルブミンを使用するＢｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によって、清澄化された粗抽出物の総タンパク質含有量を決定した。Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ（商標）ＴＧＸ  Ｓｔａｉｎ−Ｆｒｅｅ（商標）プレキャストゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用して、還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによりタンパク質を分離した。クーマシーブリリアントブルーを用いてゲルを染色することによって、タンパク質を可視化した。あるいは、タンパク質をＧｅｌ  Ｄｏｃ（商標）ＥＺイメージングシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いて可視化し、免疫検出のためにポリビニレンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ）に電気泳動転写した。イムノブロッティングの前に、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ−Ｔ）中の５％スキムミルク及び０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０により、４℃で１６〜１８時間かけて膜をブロッキングした。
【０２１８】
タンパク質分析及びイムノブロッティング
ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０  ０．１％中の２％スキムミルクで１／５００に希釈した、ＧＩ及びＧＩＩ遺伝子型由来のＶＰ１に特異的な一次ｍＡｂ  ２４２Ｐ抗体との第１のインキュベーションによって、イムノブロッティングを行った。化学発光検出用の二次抗体として、１／１００００に希釈したペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１１５−０３５−１４６）を使用し、ＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０  ０．１％中の２％スキムミルクで希釈した。基質（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）としてルミノールを使用する化学発光によって、免疫反応性複合体を検出した。ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｐｌｕｓ（登録商標）活性化ペルオキシダーゼコンジュゲーションキット（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）を使用して、ヒトＩｇＧ抗体の西洋ワサビペルオキシダーゼ−酵素コンジュゲーションを行った。
【０２１９】
ＶＬＰ形成／イオジキサノール勾配の分析
２体積の抽出物緩衝液（１００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）を入れたブレンダー内での機械的抽出により、凍結バイオマスからタンパク質を抽出した。大孔ナイロンフィルターでスラリーを濾過して、大きな残骸を除去し、５０００ｇで５分間４℃で遠心分離した。上清を採取し、再び５０００ｇで３０分（４℃）遠心分離して、さらに残骸を除去した。次いで、不連続イオジキサノール密度勾配に上清をロードする。分析的密度勾配遠心分離を以下のように行った：酢酸緩衝液中の不連続イオジキサノール密度勾配（イオジキサノール４５％を１ｍｌ、３５％を２ｍｌ、３３％を２ｍｌ、３１％を２ｍｌ、２９％を２ｍｌ及び２５％を５ｍｌ）を含む３８ｍｌチューブを調製し、ウイルス様粒子を含有する２５ｍｌの抽出物で重層した。勾配を１７５０００ｇで４時間（４℃）遠心分離した。遠心分離後、１ｍｌ画分を下部から上部まで集め、タンパク質染色又はウエスタンブロットと組み合わせたＳＤＳ−ＰＡＧＥによって画分を分析した。
【０２２０】
電子顕微鏡法
上記のように、不連続イオジキサノール密度勾配で部分的に清澄化した植物抽出物を遠心分離した後、試料を含有する画分（１ｍｌ／画分）をプールし、１００ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．２＋１５０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液と混合してチューブを完全に満たし、１０００００ｇで１２０分間遠心分離した。ＶＰ１の量に応じて、３００〜１０００μｌの緩衝液にペレットを再懸濁した。
【０２２１】
ペトリ皿内のＷｈａｔｍａｎ紙上に炭素側面を上にして置き、４℃で一晩インキュベートすることによって、２００ｎｍメッシュサイズの炭素被覆銅グリッドを親水性にした。透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）によって観察される密度勾配遠心分離からのプールされた画分２０μｌをパラフィルム上に堆積させ、グリッドを炭素側を下にして浮遊させ、室温で５分間インキュベートした。次いで、グリッドを２０μｌの水滴上で４回洗浄し、グリッドの側面をＷｈａｔｍａｎ紙に接触させることによって、最後の洗浄からの過剰な水を排出する。次いで、２％酢酸ウラニル水溶液の２０μｌ液滴上でグリッドを１分間インキュベートする。Ｗｈａｔｍａｎ紙上でグリッドを５分間乾燥させる。透過型電子顕微鏡下で１０，０００Ｘ〜１５０，０００Ｘの範囲の倍率で観察を行った。
【０２２２】
例３：植物内のＶＰ１タンパク質及びＶＬＰの産生
例２に記載されているように、ＶＰ１配列の発現を可能にする野生型ノロウイルスＶＰ１又は変異体ノロウイルスＶＰ１構築物をコードする発現ベクターを含むアグロバクテリウムツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）をＮ．ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）葉にバキュームインフィルトレーションし、ＶＰ１タンパク質及び／又はＶＬＰ産生について葉を検査した。インフィルトレーションの９日後（ＤＰＩ）、葉のホモジネートから調製した全粗タンパク質抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、クーマシー（ＶＰ１産生）を用いて染色するか、上記例２に記載されているように、不連続イオジキサノール密度勾配を使用して分離した（ＶＬＰ産生）。密度勾配からの画分は、クーマシー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して検査した。ノロウイルスＶＰ１タンパク質は、約５５〜６０ｋＤａのバンドに現れる。密度勾配の画分内でのＶＰ１タンパク質の存在は、密度勾配遠心分離中にＶＬＰが平衡化する画分を示す。また、密度勾配遠心分離後のピーク画分から得られたＶＬＰの収量も測定した。
【０２２３】
植物から抽出された野生型ノロウイルスＶＰ１タンパク質の収量又は量は、発現されるノロウイルスＶＰ１の遺伝子型によって異なる。野生型ＧＩ．１  ＶＰ１、ＧＩ．５  ＶＰ１及びＧＩＩ．１２  ＶＰ１は、ＳＤＳ  ＰＡＧＥを使用して測定すると、容易に検出可能なタンパク質収量を示す（図３Ａ）。対照的に、野生型ＧＩＩ．４  ＶＰ１は植物内にほとんど発現せず（図３Ａ右側パネル）、例えば、野生型ＧＩＩ．２  ＶＰ１、ＧＩＩ．３  ＶＰ１及びＧＩＩ．６  ＶＰ１の発現後に、低収量のＶＰ１タンパク質又は検出不能量のＶＰ１タンパク質（ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して）が観察された（表５）。
【表５】
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【０２２４】
ＧＩ．３  ＶＬＰ、及び改変ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
８４位（Ｑ８４Ｓ）にグルタミンからセリンへの置換を有するノロウイルスＧＩ．３  ＶＰ１構築物は、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１と同等の収量をもたらしたのに対して、９４位（Ｓ９４Ｌ）にセリンからロイシンへの置換を有するノロウイルスＧＩ．３  ＶＰ１構築物、又はＳ９４Ｌ置換を含む置換の組合せは、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１を含むＶＬＰと比較して、１．９〜３．８倍の増加（Ｓ９４Ｌ）、４．２倍の増加（Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ）、１．８倍の増加（Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ）及び１０．２倍の増加（Ａ３４Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ）という、ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰの収量の増大を示した。さらに、９４位にセリンからロイシン、バリン、イソロイシン、メチオニン、スレオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換を有する構築物（ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｘ（Ｘ＝Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ））は、野生型ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰと比較して、約１．２〜約２．７５倍の収量の増大を示した（図５Ｆ）。
【０２２５】
図５Ｂ及び図５Ｄに示すように、９４位にセリンからロイシンへの置換（Ｓ９４Ｌ）、又は８４位にグルタミンからセリンへの置換（Ｑ８４Ｓ）及び９４位にセリンからロイシンへの置換（Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ）もしくは５７位にメチオニンからイソロイシンへの置換（Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ）を含む組合せを有するノロウイルスＧＩ．３構築物の発現は、主に低密度画分（Ｆ８〜Ｆ１１；２５〜２９％イオジキサノール）に分離した野生型ＧＩ．３  ＶＰ１を含むＶＬＰと比較して、ＶＬＰを高密度画分（Ｆ２〜Ｆ６；３１〜３５％イオジキサノール）にシフトした。
【０２２６】
Ｓ９４Ｌ置換、Ｑ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌの組合せ、又はＭ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌの組合せを有する改変ＧＩ．３  ＶＰ１タンパク質から構成されるＶＬＰは、野生型ＧＩ．３  ＶＬＰと比較すると、損傷したウイルス粒子が少なく、２３ｎｍ粒子に対して３８ｎｍ粒子の割合が高かった（図５Ｃ及び図５Ｅ）。
【０２２７】
ＧＩ．５  ＶＬＰ、及び改変ＧＩ．５  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
８４位にセリンからプロリンへの置換（Ｑ８４Ｓ）、９４位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ９４Ｌ）、又はこれらの置換の組合せ（Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ）を有するノロウイルスＧＩ．５  ＶＰ１構築物は、植物内で発現した野生型ＧＩ．５  ＶＰ１タンパク質の収量と比較した場合、植物抽出物中にＶＰ１タンパク質の同等の収量を示した（図６Ａ）。勾配精製、遠心分離及び再懸濁後に、９４位にアラニンからロイシンへの置換を有するノロウイルスＧＩ．５構築物（Ａ９４Ｌ）は、野生型ＧＩ．５  ＶＰ１と比較した場合、収量の増大、１．５倍の増加を示した。
【０２２８】
図６Ｂに示すように、８４位のグルタミンからセリンへの置換と、９４位のアラニンからロイシンへの置換とを組み合わせた（Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ）ＧＩ．５  ＶＰ１構築物は、野生型ＧＩ．５  ＶＰ１（２５〜２９％イオジキサノール画分に主に見られる）と比較して、高密度のイオジキサノール画分（２９〜３１％）へのシフトを示すＶＰ１タンパク質をもたらした。ＶＬＰ調製物は、野生型ＧＩ．５  ＶＬＰと比較した場合、損傷したウイルス粒子も少なかった（図６Ｃ）。
【０２２９】
ＧＩ．７  ＶＬＰ、及び改変ＧＩ．７  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
８４位にアルギニンからセリンへの置換（Ｒ８４Ｓ）、５７位にメチオニンからイソロイシンへの置換（Ｍ５７Ｉ）、又はこれらの置換の組合せ（Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ）を有するノロウイルスＧＩ．７  ＶＰ１構築物は、野生型ＧＩ．７  ＶＰ１と比較した場合、勾配精製、遠心分離及び再懸濁後にＶＰ１タンパク質の収量の増加を示した。さらに、５７位にメチオニンからイソロイシン、ロイシン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換を有するＧＩ．７構築物（ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｘ（Ｘ＝Ｉ、Ｌ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ））は、野生型ＧＩ．７  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰと比較して、約１．１〜約１．９５倍の収量の増大を示した（図６Ｆ）。
【０２３０】
図６Ｄに示すように、Ｍ５７Ｉ置換、Ｒ８４Ｓ置換又はＭ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ置換を有するＧＩ．７  ＶＰ１構築物は、野生型ＧＩ．７  ＶＰ１と比較して、高密度のイオジキサノール画分（３１〜３５％）へのシフトを示すＶＰ１タンパク質をもたらした。Ｍ５７Ｉ置換、Ｒ８４Ｓ置換又はＭ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ置換を有するＧＩ．７  ＶＬＰ調製物はまた、野生型ＧＩ．７  ＶＬＰと比較した場合、同じ又はそれよりも少ない損傷したウイルス粒子を含んでいた（図６Ｅ）。
【０２３１】
ＧＩＩ．２  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．２  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
植物内の改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ及びＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌの発現により、野生型ＧＩＩ．２  ＶＰ１の収量と比較して、ＶＰ１タンパク質の収量が増加した（図７Ａを参照）。
【０２３２】
８４位にグルタマートからセリンへの置換及び９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ｅ８４Ｓ＋Ａ９０Ｌ）、３９位にアラニンからバリンへの置換、８４位にグルタマートからセリンへの置換及び９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ３９Ｓ＋Ｅ８４Ｓ＋Ａ９０Ｌ）、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換、８４位にグルタマートからセリンへの置換及び９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８４Ｓ＋Ａ９０Ｌ）、３９位にアラニンからバリンへの置換、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換、８４位でのグルタマートからセリンへの置換及び９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８４Ｓ＋Ａ９０Ｌ）を有するノロウイルスＧＩＩ．２  ＶＰ１構築物はいずれも、野生型ＧＩＩ．２  ＶＰ１と比較した場合、勾配精製、遠心分離及び再懸濁後にＶＰ１タンパク質の収量の増加を示した。
【０２３３】
８０位にグルタミン酸からセリンへの置換（Ｅ８０Ｓ）、９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ９０Ｌ）、又は８０位にグルタミン酸からセリンへの置換ならびに８０位及び９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）を有するＧＩＩ．２  ＶＰ１構築物の発現により、野生型ＧＩＩ．２と同等のＶＬＰが産生された（図７Ｂ）。Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ置換又はＡ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ置換を有するＧＩＩ．２  ＶＬＰ調製物はまた、野生型ＧＩＩ．２  ＶＬＰと比較した場合、同じ又はそれよりも少ない損傷したウイルス粒子を含んでいた（図７Ｃ）。
【０２３４】
ＧＩＩ．３  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．３  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
８０位にセリンによるグルタミン酸の置換を有するノロウイルスＧＩＩ．３  ＶＰ１構築物（Ｅ８０Ｓ）は、植物内で発現した野生型ＧＩＩ．３  ＶＰ１タンパク質の収量と比較した場合、植物抽出物中にＶＰ１タンパク質の同等の収量を示した。野生型の改変ＶＰ１タンパク質のいずれかを含むＶＬＰの収量は一般に低かった。
【０２３５】
８０位にグルタミン酸からセリンへの置換（Ｅ８０Ｓ）を有するＧＩＩ．３  ＶＰ１構築物の発現により、野生型ＧＩＩ．３と同等の密度のイオジキサノール画分（３５％）に存在するＶＬＰが同等に産生された（図８Ｂ）。
【０２３６】
ＧＩＩ．４  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
図９Ａ、図９Ｈ及び図９Ｉを参照すると、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ）；８０位にプロリンからセリン、アラニン、アスパラギン、リジン又はヒスチジンへの置換（Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｋ又はＨ））；９０位にセリンからロイシンへの置換（Ｓ９０Ｌ）；８０位でのプロリンからセリンへの置換と組み合わせて、３９位にアラニンからバリン、イソロイシン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへの置換（Ａ３９Ｘ（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ））（Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ）；８０位でのプロリンからセリンへの置換と組み合わせて、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ）；８０位でのプロリンからセリンへの置換と組み合わせて、９０位にセリンからロイシンへの置換（Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ）；及び８０位でのプロリンからセリンへの置換（Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ）と組み合わせて、３５〜４２位（Δ３５−４２）の欠失を有するノロウイルスＧＩＩ．４  ＶＰ１構築物では、野生型ＧＩ．４を使用したＶＰ１収量と比較して、植物の抽出後に、ＶＰ１タンパク質収量が増加した。
【０２３７】
試験した各改変ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質について、様々な改変ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ収量は、野生型ＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ収量よりも高かった。ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の１０倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｘ（Ｘ＝Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｋ、Ｈ）を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の約１．４倍〜約２．７倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１又はＧＩＩ．４＿Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１のいずれかを含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の８倍超の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｐ９０Ｌ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の１４倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｘ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１（Ｘ＝Ｖ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｋ又はＨ）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（２１倍の増加）又はＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ  ＶＰ１（３８．５倍の増加）を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の約１．３〜約３．４倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の５倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の４倍の増加が観察され、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ  ＶＰ１を含むＶＬＰでは、ＶＬＰ収量の１．５倍の増加が観察された。
【０２３８】
改変ＧＩＩ．４タンパク質を含むＶＬＰの結果を図９Ｂ〜図９Ｄ及び図９Ｇに示す。８０位にプロリンからセリンへの置換（Ｐ８０Ｓ；図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ）；９０位にセリンからロイシンへの置換（Ｓ９０Ｌ；図９Ｂ）；８０位でのプロリンからセリンへの置換と組み合わせて、３９位にアラニンからバリンへの置換（Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ；図９Ｃ）；８０位でのプロリンからセリンへの置換と組み合わせて、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ；図９Ｄ）；９０位でのセリンからロイシンへの置換と組み合わせて、８０位にプロリンからセリンへの置換（Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ；図９Ｂ）；３５〜４２位の欠失と組み合わせて、８０位にプロリンからセリンへの置換（Ｐ８０Ｓ＋Δ３５−４２；図９Ｃ）、ならびに８０位でのプロリンからセリンへの置換及び９０位でのセリンからロイシンへの置換と組み合わせて、３９位にアラニンからバリンへの置換（ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；図９Ｇ）を有するＧＩＩ．４  ＶＰ１を含む構築物では、高密度のイオジキサノール画分（２９〜３３％）に存在するＶＬＰが産生された。
【０２３９】
Ｓ９０Ｌ置換と組み合わせてＰ８０Ｓ置換（Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ；図９Ｂ）；Ｐ８０Ｓ置換と組み合わせてＡ３９Ｖ置換（Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ；図９Ｃ）；３５〜４２位の欠失と組み合わせてＰ８０Ｓ置換（Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ；図９Ｃ）；Ｐ８０Ｓ置換と組み合わせてＲ５３Ｉ置換（Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ；図９Ｄ）；ならびに８０位でのプロリンからセリンへの置換及び９０位でのセリンからロイシンへの置換と組み合わせて３９位にアラニンからバリンへの置換（ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ；図９Ｇ）を有するＧＩＩ．４  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰでは、ウイルス粒子の損傷が少なく、及び／又は野生型ＧＩＩ．４  ＶＬＰと比較して、３８ｎｍ粒子：２３ｎｍ粒子の比率が高い。
【０２４０】
ＧＩＩ．６  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．６  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ  ＶＰ１を発現する植物抽出物でも、野生型と比較して２．２倍を超えるＶＬＰ収量の増加（勾配精製、遠心分離及び再懸濁後に決定した）が観察された。
ＧＩＩ．１２  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．１２  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
【０２４１】
改変ＧＩＩ．１２、例えば、８０位にグルタミン酸からセリンへの置換（Ｅ８０Ｓ）、９０位にアルギニンからロイシンへの置換（Ａ９０Ｌ）、又はこれらの置換の組合せ（Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）を含むＧＩＩ．１２の収量は、野生型と比較して約１．２倍〜約１．４倍の増加をもたらした（勾配精製、遠心分離及び再懸濁後に決定した；図１１Ａ）。
【０２４２】
８０位にグルタミン酸からセリンへの置換（Ｅ８０Ｓ）；９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ９０Ｌ）；及びそれらの組合せ（Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ）を有するＧＩＩ．１２構築物は、野生型ＧＩＩ．１２  ＶＰ１（３１〜３３％）と比較して、高密度のイオジキサノール画分（３３〜３５％）に存在するＧＩＩ．１２  ＶＰ１タンパク質の発現をもたらした。
【０２４３】
ＧＩＩ．１７  ＶＬＰ、及び改変ＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰ
改変ＧＩＩ．１７、例えば、３９位にアラニンからバリンへの置換（Ａ３９Ｖ）、５３位にアルギニンからイソロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ）又は９０位にアラニンからロイシンへの置換（Ａ９０Ｌ）を含むＧＩＩ．１７の収量は、野生型と比較して約１．１倍〜約３．４倍の増加をもたらした（勾配精製、遠心分離及び再懸濁後に決定した）。
【０２４４】
位置３９にアラニンからバリンへの置換（Ａ３９Ｖ）、位置５３にアルギニンからイソロイシンへの置換（Ｒ５３Ｉ）又は位置９０にアラニンからロイシンへの置換（Ａ９０Ｌ）を有するＧＩＩ．１７構築物は、野生型ＧＩＩ．１２  ＶＰ１（３１〜３３％）と比較して、高密度のイオジキサノール画分（３３〜３５％）に存在するＧＩＩ．１７  ＶＰ１タンパク質の発現をもたらした。
【０２４５】
まとめると、上記の結果は、高密度イオジキサノール勾配画分からのタンパク質成分が、ノロウイルスＶＰ１タンパク質及び改変ノロウイルスＶＰ１タンパク質が植物内でＶＬＰに自己集合することが見出されたことを示すことを示している。変異体ＶＰ１タンパク質から構成される単離されたＶＬＰは、野生型ノロウイルスビリオン粒子と同様の構造的コンフォメーションを示した。
【０２４６】
例４：ＶＰ１を使用した免疫応答
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて、ノロウイルス天然ＧＩ．１（配列番号１）ＶＬＰ投与に対する免疫応答に関する試験を行った。ノロウイルスＶＬＰワクチン用の８匹の４群及びプラセボ用の５匹の１群に、３７匹のマウスを無作為に分けた。筋肉内免疫を使用して全群に注射した。２回投与レジメンで全群を免疫し、初回免疫の３週間後にブースト免疫を投与した。
【０２４７】
後肢に対する筋肉内投与のために、ノロウイルスＧＩ．１遺伝子型ワクチン（１又は１０μｇ）由来の植物由来ＶＬＰ天然ＶＰ１を用いて、２群（８匹）の麻酔していないマウスを免疫した。ワクチン緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ６．０）を使用して、候補ワクチンと同じ経路及びレジメンを使用して、プラセボ群（５匹）を免疫した。
【０２４８】
アジュバントの潜在的な利点を測定するために、１又は１０μｇの植物由来ＶＬＰノロウイルスワクチン＋１体積のアルハイドロゲル２％（ミョウバン、Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を、麻酔していないマウスの後肢に筋肉内投与することにより、２群の動物（８匹）を免疫した。プライム−ブーストレジメンに従って全群を免疫し、初回免疫の３週間後にブースト免疫を行った。
【０２４９】
死亡率及び臨床徴候に対する毎日のモニタリング、毎週の詳細な検査、注射部位観察、ならびに体重測定に従って、生存期間中の臨床観察を通じてマウスを評価した。全動物を観察下に置き、肉眼検査のために４２日目に殺処分した。０日目、２１日目及び４２日目（各免疫から２１日後）の投与前に、全動物から血液を採取した。試料を処理して、特異的抗体応答分析のために血清を分離した。
【０２５０】
ＧＩ．１  ＶＬＰコーティングプレートを使用して、ＧＩ．１  ＶＬＰ特異的総ＩｇＧ及びＩｇＡ抗体について、２１日目及び４２日目に全動物から採取した血液からの血清試料をＥＬＩＳＡにより個別に分析した。全動物から採取した免疫前血清試料（０日目〜投与前）を処置群ごとにプールし、各プールを分析して、それらが陰性（又は分析試験のカットオフ値未満）であることを確認した。
【０２５１】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６．０５；ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、記述統計を行った。９５％信頼区間（ＣＩ）を伴う幾何平均力価（ＧＭＴ）として、各群について測定された抗体価を報告した。検出限界の値の半分は、試験した抗体に特異的な方法の検出限界を下回る抗体価に起因した。したがって、この試験では、決定された条件のＧＭＴ値がその方法の検出限界以上であれば、動物は陽性応答個体であると考えられた（ＬＯＱ＝１００）。一方向ＡＮＯＶＡに続き、ｌｏｇ１０変換データに対するＴｕｋｅｙ検定を使用して、処置群のＩｇＧ力価間の統計的比較を行った。また、一方向ＡＮＯＶＡに続き、ｌｏｇ１０変換データに対するｐｏｓｔ  ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を使用して、プラセボ群と各処置群との間の比較を行った。
【０２５２】
各製剤の１μｇ又は１０μｇの１回投与（２１日目）及び２回投与（４２日目）によるＩＭ免疫後に全動物から得られた血清試料に対して測定されたＧＬ．１  ＶＬＰ特異的総ＩｇＧ力価。ＧＩ．１  ＶＬＰコーティングプレートを使用したＥＬＩＳＡによって、総ＩｇＧ力価を測定した（ＬＯＱ＝１００）。結果を図３Ｄに示す。９５％信頼区間を伴う幾何平均力価（ＧＭＴ）によって、処置群（ｎ＝８匹／群）ごとの総ＩｇＧ力価を表す。一方向ＡＮＯＶＡに続き、ｌｏｇ１０変換データに対するＴｕｋｅｙ検定を使用して、処置群のＩｇＧ力価間の統計的比較を行った。また、一方向ＡＮＯＶＡに続き、ｌｏｇ１０変換データに対するｐｏｓｔ  ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ検定を使用して、プラセボ群と各処置群との間の比較を行った。図３Ｄでは、文字として有意差を注記した（同じ文字は、処置群間に有意差が検出されなかったことを示している；ｐ＞０．０５）。
【０２５３】
同様に、本明細書に記載されているように、例えば、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１４０；配列番号１６７）、ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ（構築物４１４１；配列番号９）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１７９；配列番号１６９）、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８０；配列番号１７１）、ＧＩ．３＿Ｐ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１４２；配列番号１１）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８１；配列番号１７３）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１３０；配列番号３５）、ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ（構築物４１３１；配列番号３７）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ（構築物４１３２；配列番号３９）、ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ（構築物４２１０；配列番号１７６）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ（構築物４２１７；配列番号１７８）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ（構築物４２１８；配列番号１８０）、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４３；配列番号８６）、ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４４；配列番号４２）、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４５；配列番号４４）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８２；配列番号１８３）、ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８３；配列番号１８５）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８４；配列番号１８７）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４６；配列番号４７）、ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４７；配列番号４９）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４８；配列番号５１）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ（構築物４１５５；配列番号５４）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ（構築物４１５６；配列番号５６）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（構築物４１５７；配列番号５８）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ（構築物４１３３；配列番号６０）、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１３４；配列番号６２）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２（構築物４１５８；配列番号６４）、ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１５９；配列番号６６）。ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４１８５；配列番号１８９）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６５；配列番号６８）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６６；配列番号７０）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６７；配列番号７２）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１３５；配列番号７４）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６８；配列番号７６）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１６９；配列番号７８）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１８６；配列番号１９１）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４９；配列番号８０）、ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１５０；配列番号８２）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１５１；配列番号８４）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１３６；配列番号８９）、ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１３７；配列番号９１）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１３８；配列番号９３）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ（構築物４２３４；配列番号１９３）、ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ（構築物４２３５；配列番号１９５）、��ＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ（構築物４２３２；配列番号１９７）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４２３６；配列番号１９９）、ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４２３３；配列番号２０１）又はそれらの組合せを使用して産生された植物産生改変ＶＰ１タンパク質は、この例に記載されているのと同じプロトコルに従ってマウスに投与されてもよい。
【０２５４】
ノロウイルス天然ＶＰ１  ＶＬＰに対するマウス免疫応答
【０２５５】
図３Ｄに示すように、ＧＩ．１遺伝子型由来の植物由来ノロウイルス天然ＶＰ１  ＶＬＰを用いて免疫したマウスは、血清中にＧＩ．１  ＶＬＰ特異的ＩｇＧ抗体価を示し、２１日目及び４２日目に各処置群に対いて検出された。２１日目及び４２日目の各処置によって誘発されたＩｇＧ力価レベルは、プラセボ群について定量された力価よりも統計的に高かった（ｐ＜０．０５）。アルハイドロゲル配合又は非配合の１μｇ処置と１０μｇ処置との間に検出された有意差（ｐ＜０．０５）によって示されるように、ＩｇＧ力価レベルは用量依存的に連日増加し、１μｇ及び１０μｇの用量では、ＮｏＶ  ＶＬＰワクチンにアルハイドロゲルを加えると、誘発される免疫応答が有意に増強された（ｐ＜０．０５）。ＩｇＧ力価レベルの有意な増加は、２１日目から４２日目まで各処置群に検出された（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、植物産生ノロウイルス天然ＶＰ１  ＶＬＰがマウスに対して強力な免疫応答を誘発する能力をまとめて示している。
【０２５６】
同様の結果が、例えば、この例に記載されているのと同じプロトコルに従って、ＧＩ．３＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１４０；配列番号１６７）、ＧＩ．３＿Ｓ９４Ｌ（構築物４１４１；配列番号９）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１７９；配列番号１６９）、ＧＩ．３＿Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８０；配列番号１７１）、ＧＩ．３＿Ｐ８４Ｓ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１４２；配列番号１１）、ＧＩ．３＿Ａ４３Ｖ＋Ｍ５７Ｉ＋Ｓ９４Ｌ（構築物４１８１；配列番号１７３）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ（構築物４１３０；配列番号３５）、ＧＩ．５＿Ａ９４Ｌ（構築物４１３１；配列番号３７）、ＧＩ．５＿Ｑ８４Ｓ＋Ａ９４Ｌ（構築物４１３２；配列番号３９）、ＧＩ．７＿Ｒ８４Ｓ（構築物４２１０；配列番号１７６）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ（構築物４２１７；配列番号１７８）、ＧＩ．７＿Ｍ５７Ｉ＋Ｒ８４Ｓ（構築物４２１８；配列番号１８０）、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４３；配列番号８６）、ＧＩＩ．２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４４；配列番号４２）、ＧＩＩ．２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４５；配列番号４４）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８２；配列番号１８３）、ＧＩＩ．２＿Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８３；配列番号１８５）、ＧＩＩ．２＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１８４；配列番号１８７）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ（構成４１４６；配列番号４７）、ＧＩＩ．３＿Ａ９０Ｌ（構築物４１４７；配列番号４９）、ＧＩＩ．３＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１４８；配列番号５１）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ（構築物４１５５；配列番号５４）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ（構築物４１５６；配列番号５６）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ（構築物４１５７；配列番号５８）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ（構築物４１３３；配列番号６０）、ＧＩＩ．４＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１３４；配列番号６２）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２（構築物４１５８；配列番号６４）、ＧＩＩ．４＿ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１５９；配列番号６６）。ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４１８５；配列番号１８９）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６５；配列番号６８）、ＧＩＩ．４＿Ｖ４７Ｐ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６６；配列番号７０）、ＧＩＩ．４＿Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６７；配列番号７２）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１３５；配列番号７４）、ＧＩＩ．４＿Δ３５−４２＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１６８；配列番号７６）、ＧＩＩ．４＿Ｐ８０Ｓ＋ＳＳＴＡＶＡＴＡ（構築物４１６９；配列番号７８）、ＧＩＩ．４＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ＋Ｐ８０Ｓ（構築物４１８６；配列番号１９１）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１４９；配列番号８０）、ＧＩＩ．６＿Ｓ９０Ｌ（構築物４１５０；配列番号８２）、ＧＩＩ．６＿Ｅ８０Ｓ＋Ｓ９０Ｌ（構築物４１５１；配列番号８４）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ（構築物４１３６；配列番号８９）、ＧＩＩ．１２＿Ａ９０Ｌ（構築物４１３７；配列番号９１）、ＧＩＩ．１２＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４１３８；配列番号９３）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ（構築物４２３４；配列番号１９３）、ＧＩＩ．１７＿Ｒ５３Ｉ（構築物４２３��；配列番号１９５）、ＧＩＩ．１７＿Ａ９０Ｌ（構築物４２３２；配列番号１９７）、ＧＩＩ．１７＿Ａ３９Ｖ＋Ｒ５３Ｉ（構築物４２３６；配列番号１９９）、ＧＩＩ．１７＿Ｅ８０Ｓ＋Ａ９０Ｌ（構築物４２３３；配列番号２０１）又はそれらの組合せを使用して産生された改変ＶＰ１タンパク質を含むＶＬＰを投与しても観察され得る。
【０２５７】
すべての引用は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５８】
１つ以上の実施形態に関して本発明を説明してきた。しかし、記載された主題に対して多くの変更及び修正を加えることができることは、当業者には明らかであろう。特許請求の範囲は、例に記載されている好ましい実施形態によって限定されるべきではなく、全体としての説明と一致する最も広い解釈を与えられるべきである。
【図１Ａ】
2021503962.tif 000020
【図１Ｂ】
2021503962.tif 000021
【図１Ｃ】
2021503962.tif 000022
【図２Ａ】
2021503962.tif 000023
【図２Ｂ】
2021503962.tif 000024
【図２Ｃ−１】
2021503962.tif 000025
【図２Ｃ−２】
2021503962.tif 000026
【図３Ａ】
2021503962.tif 000027
【図３Ｂ】
2021503962.tif 000028
【図３Ｃ】
2021503962.tif 000029
【図３Ｄ】
2021503962.tif 000030
【図４Ａ】
2021503962.tif 000031
【図４Ｂ】
2021503962.tif 000032
【図５Ａ】
2021503962.tif 000033
【図５Ｂ】
2021503962.tif 000034
【図５Ｃ】
2021503962.tif 000035
【図５Ｄ】
2021503962.tif 000036
【図５Ｅ】
2021503962.tif 000037
【図５Ｆ】
2021503962.tif 000038
【図６Ａ】
2021503962.tif 000039
【図６Ｂ】
2021503962.tif 000040
【図６Ｃ】
2021503962.tif 000041
【図６Ｄ】
2021503962.tif 000042
【図６Ｅ】
2021503962.tif 000043
【図６Ｆ】
2021503962.tif 000044
【図７Ａ】
2021503962.tif 000045
【図７Ｂ】
2021503962.tif 000046
【図７Ｃ】
2021503962.tif 000047
【図８Ａ】
2021503962.tif 000048
【図８Ｂ】
2021503962.tif 000049
【図９Ａ】
2021503962.tif 000050
【図９Ｂ】
2021503962.tif 000051
【図９Ｃ】
2021503962.tif 000052
【図９Ｄ】
2021503962.tif 000053
【図９Ｅ】
2021503962.tif 000054
【図９Ｆ】
2021503962.tif 000055
【図９Ｇ】
2021503962.tif 000056
【図９Ｈ】
2021503962.tif 000057
【図９Ｉ】
2021503962.tif 000058
【図１０Ａ】
2021503962.tif 000059
【図１０Ｂ】
2021503962.tif 000060
【図１１Ａ】
2021503962.tif 000061
【図１１Ｂ】
2021503962.tif 000062
【図１１Ｃ】
2021503962.tif 000063
【図１１Ｄ】
2021503962.tif 000064
【図１２Ａ】
2021503962.tif 000065
【図１２Ｂ】
2021503962.tif 000066
【図１２Ｃ】
2021503962.tif 000067
【図１３Ａ】
2021503962.tif 000068
【図１３Ｂ】
2021503962.tif 000069
【図１４Ａ】
2021503962.tif 000070
【図１４Ｂ】
2021503962.tif 000071
【図１５Ａ】
2021503962.tif 000072
【図１５Ｂ】
2021503962.tif 000073
【図１６Ａ】
2021503962.tif 000074
【図１６Ｂ】
2021503962.tif 000075
【図１６Ｃ】
2021503962.tif 000076
【図１７Ａ】
2021503962.tif 000077
【図１７Ｂ】
2021503962.tif 000078
【図１８Ａ】
2021503962.tif 000079
【図１８Ｂ】
2021503962.tif 000080
【図１９Ａ】
2021503962.tif 000081
【図１９Ｂ】
2021503962.tif 000082
【図１９Ｃ】
2021503962.tif 000083
【図１９Ｄ】
2021503962.tif 000084
【図１９Ｅ】
2021503962.tif 000085
【図１９Ｆ】
2021503962.tif 000086
【図１９Ｇ】
2021503962.tif 000087
【図２０】
2021503962.tif 000088
【図２１Ａ】
2021503962.tif 000089
【図２１Ｂ】
2021503962.tif 000090
【図２２】
2021503962.tif 000091
【図２３Ａ】
2021503962.tif 000092
【図２３Ｂ−１】
2021503962.tif 000093
【図２３Ｂ−２】
2021503962.tif 000094
【図２４Ａ】
2021503962.tif 000095
【図２４Ｂ】
2021503962.tif 000096
【図２５】
2021503962.tif 000097
【図２６Ａ】
2021503962.tif 000098
【図２６Ｂ−１】
2021503962.tif 000099
【図２６Ｂ−２】
2021503962.tif 000100
【図２７】
2021503962.tif 000101
【図２８Ａ】
2021503962.tif 000102
【図２８Ｂ−１】
2021503962.tif 000103
【図２８Ｂ−２】
2021503962.tif 000104
【図２８Ｃ】
2021503962.tif 000105
【図２８Ｄ−１】
2021503962.tif 000106
【図２８Ｄ−２】
2021503962.tif 000107
【図２８Ｅ】
2021503962.tif 000108
【図２８Ｆ】
2021503962.tif 000109
【図２８Ｇ】
2021503962.tif 000110
【図２８Ｈ】
2021503962.tif 000111
【図２８Ｉ】
2021503962.tif 000112
【図２８Ｊ】
2021503962.tif 000113
【図２８Ｋ】
2021503962.tif 000114
【図２８Ｌ】
2021503962.tif 000115
【図２８Ｍ】
2021503962.tif 000116
【図２８Ｎ】
2021503962.tif 000117
【図２９Ａ】
2021503962.tif 000118
【図２９Ｂ】
2021503962.tif 000119
【図２９Ｃ】
2021503962.tif 000120
【図２９Ｄ】
2021503962.tif 000121
【図２９Ｅ−１】
2021503962.tif 000122
【図２９Ｅ−２】
2021503962.tif 000123
【図２９Ｆ】
2021503962.tif 000124
【図２９Ｇ】
2021503962.tif 000125
【図２９Ｈ】
2021503962.tif 000126
【図２９Ｉ】
2021503962.tif 000127
【図２９Ｊ】
2021503962.tif 000128
【図２９Ｋ】
2021503962.tif 000129
【図２９Ｌ】
2021503962.tif 000130
【図２９Ｍ】
2021503962.tif 000131
【図２９Ｎ】
2021503962.tif 000132
【図３０Ａ】
2021503962.tif 000133
【図３０Ｂ】
2021503962.tif 000134
【図３０Ｃ】
2021503962.tif 000135
【図３０Ｄ−１】
2021503962.tif 000136
【図３０Ｄ−２】
2021503962.tif 000137
【図３０Ｅ】
2021503962.tif 000138
【図３０Ｆ−１】
2021503962.tif 000139
【図３０Ｆ−２】
2021503962.tif 000140
【図３０Ｇ】
2021503962.tif 000141
【図３０Ｈ−１】
2021503962.tif 000142
【図３０Ｈ−２】
2021503962.tif 000143
【図３０Ｉ】
2021503962.tif 000144
【図３０Ｊ】
2021503962.tif 000145
【図３０Ｋ】
2021503962.tif 000146
【図３０Ｌ】
2021503962.tif 000147
【図３１Ａ−１】
2021503962.tif 000148
【図３１Ａ−２】
2021503962.tif 000149
【図３１Ｂ】
2021503962.tif 000150
【図３１Ｃ】
2021503962.tif 000151
【図３１Ｄ】
2021503962.tif 000152
【図３１Ｅ】
2021503962.tif 000153
【図３１Ｆ−１】
2021503962.tif 000154
【図３１Ｆ−２】
2021503962.tif 000155
【図３２Ａ】
2021503962.tif 000156
【図３２Ｂ−１】
2021503962.tif 000157
【図３２Ｂ−２】
2021503962.tif 000158
【図３２Ｃ】
2021503962.tif 000159
【図３２Ｄ−１】
2021503962.tif 000160
【図３２Ｄ−２】
2021503962.tif 000161
【図３２Ｅ】
2021503962.tif 000162
【図３２Ｆ】
2021503962.tif 000163
【図３２Ｇ】
2021503962.tif 000164
【図３２Ｈ】
2021503962.tif 000165
【図３２Ｉ−１】
2021503962.tif 000166
【図３２Ｉ−２】
2021503962.tif 000167
【図３２Ｊ】
2021503962.tif 000168
【図３２Ｋ】
2021503962.tif 000169
【図３２Ｌ】
2021503962.tif 000170
【図３２Ｍ】
2021503962.tif 000171
【図３２Ｎ−１】
2021503962.tif 000172
【図３２Ｎ−２】
2021503962.tif 000173
【図３２Ｏ】
2021503962.tif 000174
【図３２Ｐ−１】
2021503962.tif 000175
【図３２Ｐ−２】
2021503962.tif 000176
【図３２Ｑ】
2021503962.tif 000177
【図３２Ｒ−１】
2021503962.tif 000178
【図３２Ｒ−２】
2021503962.tif 000179
【図３２Ｓ】
2021503962.tif 000180
【図３２Ｔ】
2021503962.tif 000181
【図３２Ｕ】
2021503962.tif 000182
【図３２Ｖ】
2021503962.tif 000183
【図３２Ｗ−１】
2021503962.tif 000184
【図３２Ｗ−２】
2021503962.tif 000185
【図３２Ｘ】
2021503962.tif 000186
【図３２Ｙ】
2021503962.tif 000187
【図３２Ｚ】
2021503962.tif 000188
【図３２ＡＡ】
2021503962.tif 000189
【図３２ＢＢ】
2021503962.tif 000190
【図３２ＣＣ】
2021503962.tif 000191
【図３２ＤＤ】
2021503962.tif 000192
【図３２ＥＥ−１】
2021503962.tif 000193
【図３２ＥＥ−２】
2021503962.tif 000194
【図３２ＦＦ】
2021503962.tif 000195
【図３２ＧＧ−１】
2021503962.tif 000196
【図３２ＧＧ−２】
2021503962.tif 000197
【図３２ＨＨ】
2021503962.tif 000198
【図３３Ａ】
2021503962.tif 000199
【図３３Ｂ】
2021503962.tif 000200
【図３３Ｃ】
2021503962.tif 000201
【図３３Ｄ−１】
2021503962.tif 000202
【図３３Ｄ−２】
2021503962.tif 000203
【図３３Ｅ】
2021503962.tif 000204
【図３３Ｆ−１】
2021503962.tif 000205
【図３３Ｆ−２】
2021503962.tif 000206
【図３４Ａ】
2021503962.tif 000207
【図３４Ｂ−１】
2021503962.tif 000208
【図３４Ｂ−２】
2021503962.tif 000209
【図３４Ｃ】
2021503962.tif 000210
【図３４Ｄ】
2021503962.tif 000211
【図３４Ｅ】
2021503962.tif 000212
【図３４Ｆ】
2021503962.tif 000213
【図３４Ｇ−１】
2021503962.tif 000214
【図３４Ｇ−２】
2021503962.tif 000215
【図３４Ｈ】
2021503962.tif 000216
【図３４Ｉ−１】
2021503962.tif 000217
【図３４Ｉ−２】
2021503962.tif 000218
【図３４Ｊ】
2021503962.tif 000219
【図３４Ｋ−１】
2021503962.tif 000220
【図３４Ｋ−２】
2021503962.tif 000221
【図３４Ｌ】
2021503962.tif 000222
【図３４Ｍ−１】
2021503962.tif 000223
【図３４Ｍ−２】
2021503962.tif 000224
【図３４Ｎ】
2021503962.tif 000225
【図３４Ｏ−１】
2021503962.tif 000226
【図３４Ｏ−２】
2021503962.tif 000227
【図３４Ｐ】
2021503962.tif 000228
【図３５Ａ】
2021503962.tif 000229
【図３５Ｂ】
2021503962.tif 000230
【図３６Ａ】
2021503962.tif 000231
【図３６Ｂ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３８Ａ−１】
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【図３８Ａ−２】
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【図３８Ｂ−１】
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【図３８Ｂ−２】
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【図３８Ｃ−１】
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【図３８Ｃ−２】
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【図３８Ｃ−３】
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【図３８Ｄ−１】
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【図３８Ｄ−２】
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【図３８Ｅ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４０Ｃ】
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【図４０Ｄ】
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【図４０Ｅ】
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【図４０Ｆ】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４１Ｄ】
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【図４１Ｅ】
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【図４１Ｆ】
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【図４１Ｇ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【図４２Ｄ】
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【図４２Ｅ】
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【図４２Ｆ】
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【図４２Ｇ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４３Ｃ】
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【図４３Ｄ】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４４Ｃ】
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【図４４Ｄ】
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【図４４Ｅ】
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【図４４Ｆ】
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【図４４Ｇ】
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【図４４Ｈ】
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【図４４Ｉ】
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【図４４Ｊ】
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【図４４Ｋ】
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【図４４Ｌ】
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【図４４Ｍ】
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【図４４Ｎ】
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【図４４Ｏ】
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【図４４Ｐ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４５Ｃ】
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【図４５Ｄ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
2021503962.tif 000293
【図４６Ｃ】
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【図４６Ｄ】
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【図４６Ｅ】
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【図４６Ｆ】
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【図４６Ｇ】
2021503962.tif 000298
【図４６Ｈ】
2021503962.tif 000299
【図４６Ｉ】
2021503962.tif 000300
【図４７Ａ】
2021503962.tif 000301
【図４７Ｂ】
2021503962.tif 000302
【図４７Ｃ】
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【図４８】
2021503962.tif 000304
【図４９】
2021503962.tif 000305
【図５０Ａ】
2021503962.tif 000306
【図５０Ｂ】
2021503962.tif 000307
【図５１】
2021503962.tif 000308
【図５２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月28日(2020.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、野生型ノロウイルスＶＰ１タンパク質のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含む、改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質、
ノロウイルスＶＰ１遺伝子型ＧＩ．１（配列番号１）とアラインメントされた配列におけるアミノ酸４３、５７、８４及び９４のアミノ酸から選択された位置における、１つもしくは２つ以上の、野生型ノロウイルスＶＰ１のアミノ酸の置換、及び
前記野生型ノロウイルスＶＰ１タンパク質は遺伝子型ＧＩ．１ではない。
【請求項２】
野生型ノロウイルスＶＰ１が、遺伝子型ＧＩ．３．ＧＩ．５、ＧＩ．７、ＧＩＩ．２、ＧＩＩ．３、ＧＩＩ．４、ＧＩＩ．６、ＧＩＩ．１２及びＧＩＩ．１７からなる群から選択される、請求項１に記載の、改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項３】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸４３との１つ又は複数の置換が、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項４】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸５７との１つ又は複数の置換が、イソロイシン、ロイシン、バリン、アラニン、グリシン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項５】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸８４との１つ又は複数の置換が、セリン、アスパラギン、システイン、スレオニン、アラニン、リジン又はヒスチジンへのものである、請求項１に記載の改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項６】
アラインメントされた配列内の位置でのアミノ酸９４との１つ又は複数の置換が、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジンへのものである、請求項１に記載の改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の改変されたノロウイルスＶＰ１タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項８】
ヌクレオチド配列のコドン使用頻度が、ヒトコドン使用頻度、ＧＣ含量の増加、又はそれらの組合せに対して最適化される、請求項７に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項９】
ポリヌクレオチドがベクターを含む、請求項７に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項１１】
ノロウイルスＶＰ２タンパク質をさらに含む、請求項１０に記載のＶＬＰ。
【請求項１２】
以下を含む、植物、植物の一部、又は植物細胞内でノロウイルスＶＰ１タンパク質を産生する方法：
請求項７〜９のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドを導入することと、
前記ノロウイルスＶＰ１タンパク質の発現を可能にする条件下で、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞をインキュベートすること。
【請求項１３】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
植物、植物の一部、又は植物細胞からノロウイルスＶＰ１タンパク質を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質。
【請求項１６】
導入する工程では、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドが、植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され、
インキュベートする工程では、条件が、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞内でのノロウイルスＶＰ１タンパク質及び前記ノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にする、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
以下を含む、植物、植物の一部、又は植物細胞内でノロウイルスウイルス様粒子（ＶＬＰ）を産生する方法：
請求項請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換えポリヌクレオチドを導入することと、
前記ノロウイルスＶＬＰの発現を可能にする条件下で、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞をインキュベートすること。
【請求項２０】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
植物、植物の一部、又は植物細胞からノロウイルスＶＬＰを抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法によって産生されるノロウイルスウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項２３】
導入する工程では、ノロウイルスＶＰ２タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドが、植物、植物の一部、又は植物細胞に導入され、
インキュベートする工程では、条件が、前記植物、前記植物の一部、又は前記植物細胞内でのノロウイルスＶＰ１タンパク質及び前記ノロウイルスＶＰ２タンパク質の両方の共発現及び共産生を可能にする、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
植物、植物の一部、又は植物細胞を収穫する工程をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
植物、植物の一部、又は植物細胞からウイルス様粒子（ＶＬＰ）を抽出する工程、精製する工程、又は抽出及び精製する工程をさらに含み、前記ＶＬＰは、ノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質及びノロウイルスＶＰ２タンパク質を含むウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項２７】
抗体又は抗体断片を産生する方法であって、請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む方法。
【請求項２８】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項２９】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む方法。
【請求項３０】
抗体又は抗体断片を産生する方法であって、請求項１１に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３１】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３２】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与し、それにより前記抗体又は前記抗体断片を産生することを含む、抗体又は抗体断片を産生する方法。
【請求項３３】
請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３４】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３５】
請求項１０に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３６】
請求項１１に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３７】
請求項２２に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３８】
請求項２６に記載のＶＬＰを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項３９】
請求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを含む植物、植物の一部、又は植物細胞。
【請求項４０】
請求項１４に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１タンパク質を含む植物抽出物。
【請求項４１】
請求項１８に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＰ１を含む植物抽出物。
【請求項４２】
請求項２１に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＬＰを含む植物抽出物。
【請求項４３】
請求項２５に記載の方法によって産生されるノロウイルスＶＬＰを含む植物抽出物。
【請求項４４】
請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４５】
請求項１０に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４６】
請求項１１に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４７】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４８】
請求項２２に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項４９】
請求項２６に記載のＶＬＰの有効用量、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、ビヒクル又は賦形剤を含む、免疫応答を誘発するための組成物。
【請求項５０】
免疫応答を誘発するための、請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量を含むワクチン。
【請求項５１】
免疫応答を誘発するための、請求項１０に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５２】
免疫応答を誘発するための、請求項１１に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５３】
免疫応答を誘発するための、請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質の有効用量を含むワクチン。
【請求項５４】
免疫応答を誘発するための、請求項２２に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５５】
免疫応答を誘発するための、請求項２６に記載のＶＬＰの有効用量を含むワクチン。
【請求項５６】
請求項１〜６のいずれかに記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５７】
請求項１５に記載のノロウイルスＶＰ１タンパク質を対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５８】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項５９】
請求項１１に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６０】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６１】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象又は宿主動物に投与することによって調製される抗体又は抗体断片。
【請求項６２】
請求項１０に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６３】
請求項１１に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６４】
請求項２２に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６５】
請求項２６に記載のＶＬＰを対象に投与することを含む、ノロウイルス感染に対する免疫を対象に誘発するための方法。
【請求項６６】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６７】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６８】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
ＶＬＰが、対象に経口投与鼻腔内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、直腸内投与又は膣内投与される、請求項６２に記載の方法。
【国際調査報告】
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2021503962.tif 000312
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