(57)【要約】  本発明は、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）に特異的な抗体、及びその治療及び診断における用途に関する。本発明は、ＴＲＯＰ２に結合する細胞外抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）、及びそれを発現する免疫細胞をさらに提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１からなる群から選択される参照抗体と同じヒトＴＲＯＰ２エピトープに結合する、Ｔｒｏｐ２に結合する単離された抗体。
【請求項２】
（ｄ）Ｘ1がＲ又はＴであり、Ｘ2がＤ、Ｓ又はＮであり、かつＸ3がＶ又はＷであるＧＹＸ1ＦＴＸ2ＹＸ3として示される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）と、
（ｅ）Ｘ1がＹ又はＦであり、Ｘ2がＧ又はＳであり、Ｘ3がＳ、Ｈ又はＧであり、Ｘ4がＤ又はＳであり、Ｘ5がＳ、Ｙ、Ｔ又はＧであり、かつＸ6がＦ又はＴであるＩＸ1ＰＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6として示される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）と、
（ｆ）Ｘ1がＡ又はＴであり、Ｘ2がＦ、Ｇ又はＳであり、Ｘ3がＦ又はＳであり、Ｘ4がＥ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ5がＧ又は非存在であり、Ｘ6がＬ、Ｆ又は非存在であり、かつＸ7がＡ又はＤであるＸ1ＲＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｙとして示される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）と、のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域（ＶH）を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３が全体的に前記参照抗体のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３と少なくとも８５％同じであるＶHを含む、請求項１又は２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記ＶHは、前記参照抗体と同じＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記ＶHは、前記参照抗体のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３に対して最大５、４、３、２又は１つの突然変異を全体的に含むＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項６】
（ｄ）Ｘ1がＧ、Ｎ又はＤであり、Ｘ2がＮ又はＧであり、Ｘ3がＮ、Ｔ又はＷであり、かつＸ4がＹ又はＳであるＱＸ1ＩＸ2Ｘ3Ｘ4として示される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）と、
（ｅ）Ｘ1がＲ又はＹであり、Ｘ2がＡ又はＳであり、かつＸ3がＮ又はＳであるＸ1Ｘ2Ｘ3として示される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）と、
（ｆ）Ｘ1がＬ又はＱであり、Ｘ2がＱ又はＨであり、Ｘ3がＹ又はＳであり、Ｘ4がＤ、Ｙ又はＥであり、Ｘ5がＥ、Ｓ又はＴであり、Ｘ6がＦ又はＷであり、かつＸ7がＬ又はＦであるＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6ＰＸ7Ｔとして示される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）と、のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域（ＶL）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３が全体的に前記参照抗体のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３と少なくとも８５％同じであるＶLを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記ＶLは、前記参照抗体と同じＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記ＶLは、前記参照抗体のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３に対して最大５、４、３、２又は１つの突然変異を全体的に含むＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む、請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
ヒトＴｒｏｐ２に特異的に結合する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
ヒトＴｒｏｐ２及び非ヒトＴｒｏｐ２と交差反応する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記非ヒトＴｒｏｐ２は、齧歯動物Ｔｒｏｐ２又は霊長類動物Ｔｒｏｐ２である、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
全長抗体又はその抗原結合断片、又は一本鎖抗体である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
ＩｇＧ分子である、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記参照抗体と同じＶH及び／又はＶLを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗Ｔｒｏｐ２抗体を全体的にコードする、核酸又は核酸セット。
【請求項１８】
請求項１７に記載の核酸を含む、ベクター又はベクターセット。
【請求項１９】
発現ベクターである、請求項１８に記載のベクター又はベクターセット。
【請求項２０】
請求項１８又は１９に記載のベクター又はベクターセットを含む宿主細胞。
【請求項２１】
（ｉ）請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体と、
（ｉｉ）少なくとも１種の治療剤と、を含み、
前記抗体は、前記少なくとも１種の治療剤に共有結合的に複合体化される、抗体−医薬複合体（ＡＤＣ）。
【請求項２２】
前記抗体は、前記治療剤にリンカーを介して複合体化される、請求項２１に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２３】
前記リンカーは、切断可能又は切断不可能なリンカーである、請求項２１に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２４】
前記切断可能なリンカーは、プロテアーゼ感受性リンカー、ｐＨ感受性リンカー又はグルタチオン感受性リンカーである、請求項２３に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２５】
前記リンカーは、２〜５アミノ酸のペプチド配列を含むプロテアーゼ感受性リンカーである、請求項２４に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２６】
前記２〜５アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸残基、非天然に存在するアミノ酸残基又はそれらの組み合わせを含む、請求項２５に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２７】
前記ペプチド配列は、バリン−シトルリンを含む、請求項２５に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２８】
前記リンカーは、任意に置換されたアルカン又はチオエーテルを含む切断不可能なリンカーである、請求項２３に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項２９】
前記リンカーは、前記抗体及び前記リンカーと共有結合を形成する官能基を含む、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項３０】
前記官能基は、マレイミド基、ヨードアセトアミド基、ビニルスルホン基、アクリレート基、アクリルアミド基、アクリロニトリル基又はメタクリレート基を含む、請求項２９に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項３１】
前記リンカーは、式Ｉの分子スペーサをさらに含み、
【化１】
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式中、Ｒ１は、任意に置換されたＣ１−６アルキル基、任意に置換されたフェニル基、任意に置換されたＣ２−６アルキレン基、任意に置換されたＣ２−６アルケニレン基、任意に置換されたＣ２−６アルキニレン基又は任意に置換されたトリアゾールであり、かつＸは、Ｏ、Ｓ又はＮである請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項３２】
前記少なくとも１種の治療剤は、細胞毒性薬である、請求項２１〜３１のいずれか一項に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項３３】
前記細胞毒性薬は、モノメチルオーリスタチンＥである、請求項３２に記載の抗体−医薬複合体。
【請求項３４】
（ｉ）Ｔｒｏｐ２に結合する抗原結合断片を含む細胞外ドメインと、
（ｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｉｉ）１つ以上の細胞内共刺激ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体。
【請求項３５】
前記抗原結合断片は、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１からなる群から選択される参照抗体と同じヒトＴＲＯＰ２エピトープに結合する、請求項２９に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３６】
前記抗原結合断片は、請求項２〜９のいずれか一項に記載のＨＣ  ＣＤＲ及び／又はＬＣ  ＣＤＲを含む、請求項３５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３７】
前記抗原結合断片は、前記参照抗体と同じＶH及びＶLを含む、請求項３５に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３８】
前記抗原結合断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である、請求項３４〜３７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３９】
前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２８又はＣＤ８受容体に由来する膜貫通ドメインを含む、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４０】
（ｉｉｉ）は、ＣＤ３ζに由来するシグナル伝達ドメインを含む、請求項３３〜３９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４１】
（ｉｉｉ）は、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項３３〜４０のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４２】
前記共刺激シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１又はＬＦＡ−１受容体に由来する、請求項４１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４３】
請求項３３〜４２のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
【請求項４４】
請求項４３に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項４５】
請求項３３〜４２のいずれか一項に記載のキメラ受容体を発現する、宿主細胞。
【請求項４６】
免疫細胞である、請求項４５に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、請求項４６に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
（ｉ）請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の核酸又は核酸セット、請求項２１〜３３のいずれか一項に記載の抗体−医薬複合体又は請求項４６又は４７に記載の宿主細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項４９】
ＴＲＯＰ２+細胞の数の減少を必要とする対象に有効量の請求項４８に記載の医薬組成物を投与することを含む、Ｔｒｏｐ２+細胞の数を減少させる方法。
【請求項５０】
前記対象は、癌に罹患しているか、又は罹患している疑いがある、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ｉ、Ｔｒｏｐ２+細胞を有する疑いがある試料を、標識試薬に複合体化される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体と接触させることと、
ｉｉ、前記抗体と試料中の細胞との結合に基づいて前記試料中のＴｒｏｐ２+細胞の存在を検出することと、を含む、Ｔｒｏｐ２+細胞の存在を検出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
栄養膜細胞表面抗原２（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ａｎｔｉｇｅｎ  ２、ＴＲＯＰ２）は、胃腸腫瘍関連抗原ＧＡ７３３１、膵臓癌マーカータンパク質ＧＡ７３３−１／ＧＡ７３３、膜成分染色体１表面マーカー１  Ｍ１Ｓ１、上皮糖タンパク質−１、ＥＧＰ−１、ＣＡＡ１、膠様滴状角膜ジストロフィ（Ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ  Ｄｒｏｐ−Ｌｉｋｅ  Ｃｏｒｎｅａｌ  Ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）ＧＤＬＤ及びＴＴＤ２とも呼ばれ、膜貫通糖タンパク質であり、細胞内カルシウムシグナル伝達物質として機能し、かつＥｐＣＡＭシグナル伝達のモジュレータであると考えられる。報告によると、ＴＲＯＰ２は、多くの癌、例えば腺癌、肺癌、乳癌、結腸癌及び胃癌において過剰発現する。したがって、該受容体は、このような癌の治療及び／又は診断の標的となり得る。
【背景技術】
【０００２】
したがって、癌の治療及び診断で使用するための抗ＴＲＯＰ２抗体などの効果的なＴＲＯＰ２アンタゴニストを開発することは非常に重要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本開示は、ＴＲＯＰ２に特異的な複数種の抗体の開発に少なくとも部分的に基づく。このような抗体は、標的ＴＲＯＰ２抗原に対する高い結合親和性及び／又はＴＲＯＰ２+細胞に対する高い阻害活性を示す。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
したがって、本開示の一態様は、それぞれの構造的特徴が本明細書で提供されるＴＲＯＰ２−Ａｂ７、ＴＲＯＰ２−Ａｂ８、ＴＲＯＰ２−Ａｂ２２、ＴＲＯＰ２−Ａｂ４０、ＴＲＯＰ２−Ａｂ４６、ＴＲＯＰ２−Ａｂ５０又はＴＲＯＰ２−Ａｂ５１である参照抗体と同じヒトＴＲＯＰ２エピトープに結合する、ＴＲＯＰ２に結合する単離された抗体（抗ＴＲＯＰ２抗体）を特徴とする。
【０００５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、（ａ）Ｘ1がＲ又はＴであり、Ｘ2がＤ、Ｓ又はＮであり、かつＸ3がＶ又はＷであるＧＹＸ1ＦＴＸ2ＹＸ3として示される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）と、（ｂ）Ｘ1がＹ又はＦであり、Ｘ2がＧ又はＳであり、Ｘ3がＳ、Ｈ又はＧであり、Ｘ4がＤ又はＳであり、Ｘ5がＳ、Ｙ、Ｔ又はＧであり、かつＸ6がＦ又はＴであるＩＸ1ＰＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6として示される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）と、（ｃ）  Ｘ1がＡ又はＴであり、Ｘ2がＦ、Ｇ又はＳであり、Ｘ3がＦ又はＳであり、Ｘ4がＥ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ5がＧ又は非存在であり、Ｘ6がＬ、Ｆ又は非存在であり、かつＸ7がＡ又はＤであるＸ1ＲＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｙとして示される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）と、のうちの１つ以上を含む重鎖可変領域（ＶH）を含んでよい。
【０００６】
このような抗ＴＲＯＰ２抗体は、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３が全体的に前記参照抗体のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３と少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又はそれ以上）同じ重鎖可変領域（ＶH）を含んでよい。いくつかの場合では、前記抗体は、上記参照抗体のうちの１つと同じＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含むＶHを含んでよい。他の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、前記参照抗体のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３に対して最大５、４、３、２又は１つの突然変異を全体的に含むＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含むＶHを含んでよい。
【０００７】
代替的又は追加的に、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、（ａ）Ｘ1がＧ、Ｎ又はＤであり、Ｘ2がＮ又はＧであり、Ｘ3がＮ、Ｔ又はＷであり、かつＸ4がＹ又はＳであるＱＸ1ＩＸ2Ｘ3Ｘ4として示される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）と、（ｂ）Ｘ1がＲ又はＹであり、Ｘ2がＡ又はＳであり、かつＸ3がＮ又はＳであるＸ1Ｘ2Ｘ3として示される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）と、（ｃ）Ｘ1がＬ又はＱであり、Ｘ2がＱ又はＨであり、Ｘ3がＹ又はＳであり、Ｘ4がＤ、Ｙ又はＥであり、Ｘ5がＥ、Ｓ又はＴであり、Ｘ6がＦ又はＷであり、かつＸ7がＬ又はＦであるＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6ＰＸ7Ｔとして示される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）と、のうちの１つ以上を含む軽鎖可変領域（ＶL）を含んでよい。
【０００８】
このような抗体は、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３が全体的に前記参照抗体のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３と少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又はそれ以上）同じＶLを含んでよい。いくつかの場合では、前記抗体は、上記参照抗体のうちの１つと同じＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含んでよい。他の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、前記参照抗体のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３に対して最大５、４、３、２又は１つの突然変異を全体的に含むＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含んでよい。
【０００９】
いくつかの例では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、上記参照抗体のうちの１つと同じ重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの場合では、このような抗ＴＲＯＰ２抗体は、前記参照抗体と同じＶH及び／又はＶLを含んでよい。
【００１０】
本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体は、ヒトＴＲＯＰ２に特異的に結合してよい。いくつかの場合では、前記抗ＴＲＯＰ２抗体は、ヒトＴＲＯＰ２及び非ヒトＴＲＯＰ２（例えば、齧歯類動物ＴＲＯＰ２又は霊長類動物ＴＲＯＰ２）と交差反応してよい。前記抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であってよい。いくつかの例では、それは、キメラ抗体であってよい。
【００１１】
いくつかの実施形態では、前記抗ＴＲＯＰ２抗体は、全長抗体（例えば、ＩｇＧ分子）又はその抗原結合断片であってよい。又は、それは、一本鎖抗体であってよい。
【００１２】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体を全体的にコードする核酸又は核酸セット（例えば、２つの核酸）、及び前記抗ＴＲＯＰ２抗体をコードする核酸を含むベクター又はベクターセット（例えば、２つのベクター）を特徴とする。いくつかの場合では、前記ベクター又はベクターセットは、発現ベクターであってよい。本明細書は、前記核酸又はベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。また、本開示に係る、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体を製造する方法は、適切なプロモータに作動可能に結合される前記抗体のコード配列を含むベクター又はベクターセットを含む宿主細胞を培養し、かつこのように産生された抗体を（例えば、前記宿主細胞又は培地から）収集することを含む。
【００１３】
また、本開示に係る抗体−医薬複合体（ＡＤＣ）は、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体と、前記抗体に共有結合的に複合体化される少なくとも１種の治療剤とを含む。いくつかの実施形態では、前記治療剤は、細胞毒性薬、例えばモノメチルオーリスタチンＥ（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ  ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  Ｅ）であってよい。
【００１４】
いくつかの実施形態では、前記抗体は、前記治療剤にリンカーを介して複合体化されてよい。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、切断可能なリンカー、例えば、プロテアーゼ感受性リンカー、ｐＨ感受性リンカー又はグルタチオン感受性リンカーであってよい。いくつかの場合では、前記リンカーは、２〜５アミノ酸を有するペプチドを含んでよいプロテアーゼ感受性リンカーであってよい。前記ペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基、非天然に存在するアミノ酸残基又はそれらの組み合わせを含んでよい。一例では、前記ペプチドは、バリン−シトルリンを含んでよい。他の例では、前記リンカーは、切断不可能なリンカーであってよい。このような切断不可能なリンカーは、任意に置換されたアルカン又はチオエーテルを含んでよい。
【００１５】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、抗体とリンカーとの間に共有結合を形成する官能基を含んでよい。例示的な官能基は、マレイミド基、ヨードアセトアミド基、ビニルスルホン基、アクリレート基、アクリルアミド基、アクリロニトリル基及びメタクリレート基を含むが、これらに限定されない。一例では、前記リンカーは、さらに式Ｉの分子スペーサであってよく、
【化１】
2021531826.tif 000003
式中、Ｒ１は、任意に置換されたＣ１−６アルキル基、任意に置換されたフェニル基、任意に置換されたＣ２−６アルキレン基、任意に置換されたＣ２−６アルケニレン基、任意に置換されたＣ２−６アルキニレン基又は任意に置換されたトリアゾールであり、かつＸは、Ｏ、Ｓ又はＮである。
【００１６】
また、本開示に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、（ｉ）ＴＲＯＰ２に結合する抗原結合断片を含む細胞外ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）１つ以上の細胞内刺激ドメインと、を含んでよい。前記抗原結合断片は、本明細書に記載の任意の参照抗体と同じヒトＴＲＯＰ２エピトープに結合してよい。いくつかの例では、前記抗原結合断片は、任意の前記参照抗体と同じＨＣ  ＣＤＲ及び／又はＬＣ  ＣＤＲを含んでよい。このような抗原結合断片は、前記参照抗体と同じＶH及びＶLを含んでよい。いくつかの例では、前記抗原結合断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）であってよい。
【００１７】
本明細書に記載の任意のＣＡＲにおいて、前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２８又はＣＤ８に由来する膜貫通ドメインを含んでよい。代替的又は追加的に、前記１つ以上の細胞内刺激ドメインは、ＣＤ３ζに由来するシグナル伝達ドメインと、４−１ＢＢ、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１又はＬＦＡ−１に由来してよい、任意に存在する共刺激シグナル伝達ドメインと、を含んでよい。本明細書に記載の任意のＣＡＲをコードする核酸、このような核酸を含むベクター、及び前記ＣＡＲを発現する宿主細胞も本開示の範囲内にある。いくつかの例では、前記ＣＡＲを発現する宿主細胞は、免疫細胞、例えばＴ細胞である。
【００１８】
別の態様では、本開示に係る医薬組成物は、（ｉ）１種以上の本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体、前記抗体をコードする核酸又は核酸セット、本明細書に記載の抗体−医薬複合体、又は本明細書に記載の任意のＣＡＲ構築物を発現する宿主細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体と、を含む。
【００１９】
また、本開示は、ＴＲＯＰ２+細胞の数の減少を必要とする対象に有効量の本明細書に記載の任意の医薬組成物を投与することを含む、ＴＲＯＰ２+細胞の数を減少させる方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記対象は、癌（例えば、上皮癌）に罹患しているか、又は罹患している疑いがあるヒト患者であってよい。本開示の範囲内に含まれるのは、本明細書に記載の任意の標的疾患（例えば、上皮癌などの癌）の治療、又は標的疾患の治療のための医薬の製造に用いられる、本明細書に記載の医薬組成物である。
【００２０】
また、本開示は、（ｉ）ＴＲＯＰ２+細胞を有する疑いがある試料を、標識試薬に複合体化される、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体と接触させることと、（ｉｉ）前記抗体と試料中の細胞との結合に基づいて試料中のＴＲＯＰ２+細胞の存在を検出することと、を含む、ＴＲＯＰ２+細胞の存在を検出する方法を特徴とする。いくつかの場合では、前記試料は、癌（例えば、上皮癌）に罹患しているか、又は罹患している疑いがあるヒト患者に由来する。
【００２１】
以下の説明では、本発明の１つ以上の実施形態の詳細について説明する。本発明の他の特徴又は利点は、以下の図面及びいくつかの実施形態の詳細な説明、及び添付の特許請求の範囲から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｂ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｃ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｄ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｅ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｆ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図１Ｇ】Ｔｒｏｐ２を表面で発現する細胞に結合するＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を示す。
【図２Ａ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｂ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｃ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｄ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｅ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｆ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【図２Ｇ】抗ＴＲＯＰ２抗体の、ＴＲＯＰ２+であるＭＤＡ−４６８細胞に対する阻害作用を例示的に示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本明細書は、標的ＴＲＯＰ２抗原に対する高い結合親和性及び／又はＴＲＯＰ２+細胞に対する高い阻害活性を含む優れた特徴を示す複数の抗ＴＲＯＰ２抗体を開示する。
【００２４】
したがって、本明細書は、ＴＲＯＰ２に結合可能な抗体、このような抗体をコードする核酸、上記抗ＴＲＯＰ２抗体を含む抗体−医薬複合体（ＡＤＣｓ）及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、並びにその治療及び診断目的における用途を提供する。本明細書は、上記抗体及び／又はＡＤＣ及びそれを含むＣＡＲの治療及び／又は診断用途のためのキット、並びに上記抗ＴＲＯＰ２抗体を産生するための方法をさらに提供する。
【００２５】
ＴＲＯＰ２に結合する抗体
本開示は、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）に結合する抗体を提供する。膜貫通糖タンパク質として、ＴＲＯＰ２は、細胞内カルシウムシグナル伝達物質として機能し、かつＥｐＣＡＭシグナル伝達のモジュレータであると考えられる。人体では、ＴＲＯＰ２は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子によりコードされる。ＴＲＯＰ２は、複数種の腫瘍、例えば、肺癌及び胃癌において過剰発現することが発見された。したがって、この受容体は、標的癌の治療及び診断のための標的及び／又はバイオマーカーとなってよい。したがって、本明細書に開示された抗ＴＲＯＰ２抗体は、単独で、又は他の部分に複合体化されて本明細書に記載の標的癌の治療及び／又は診断に用いられ、例えば、治療剤に複合体化されて抗体−医薬複合体を形成するか又はキメラ抗原受容体において細胞外抗原結合ドメインとすることができる。
【００２６】
抗体（複数形と互換的に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合できる免疫グロブリン分子である。本明細書に使用されるように、「抗体」という用語は、無傷の（すなわち、全長の）ポリクローナル又はモノクローナル抗体だけでなく、その抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重抗体、ナノボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、並びに、抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミノ酸配列変異体及び共有結合により修飾された抗体を含む、所望の特異性を有する抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された立体配置も含む。抗体は、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＭなどの任意のクラス（又はそのサブクラス）の抗体を含み、かつ、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに分類することができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという５つの主要なクラスが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２へとさらに分類されてよい。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知である。
【００２７】
一般的な抗体分子は、一般的に抗原結合に関連する重鎖可変領域（ＶH）及び軽鎖可変領域（ＶL）を含む。ＶHとＶL領域は、より保存された領域、すなわち「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）が散在する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶHとＶLは、一般的に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシル末端に向かって配列される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される。本分野で既知の方法を使用し、例えばＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義及び／又は接触定義によりフレームワーク領域及びＣＤＲの範囲を正確に認識することができ、全てのこれらは、いずれも本分野で周知である。例えば、Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．ら（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃ．ら（１９８７年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７、Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８、及びＡｌｍａｇｒｏ，  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２−１４３（２００４年）を参照する。また、ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ及びｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓを参照する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、ＴＲＯＰ２に結合してその活性を少なくとも５０％（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれ以上）阻害することができる。見かけの阻害定数（Ｋｉapp又はＫi,app）は、阻害剤の効力の尺度を提供し、酵素活性を低下させるのに必要な阻害剤の濃度に関連し、酵素の濃度に関連しない。本分野で既知の従来の方法により本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体の阻害活性を決定することができる。
【００２９】
抗体のＫi,app値は、異なる濃度の抗体の反応程度（例えば、酵素活性）に対する阻害作用を測定することにより決定することができ、阻害剤の濃度の関数に従う擬１次速度定数（ｖ）の変化を修正後のＭｏｒｒｉｓｏｎ方程式（方程式１）にフィットさせることにより見かけのＫｉ値の推定値を得ることができる。競合的阻害剤の場合、Ｋi,appの基質濃度に対するプロットの線形回帰分析から得られるｙ切片からＫｉappを得ることができる。
【００３０】
【数１】
2021531826.tif 000004
ここで、Ａは、ｖｏ／Ｅに等しく、阻害剤（Ｉ）の非存在時の酵素反応の初期速度（ｖ0）を総酵素濃度（Ｅ）で割ったものである。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体のＫｉapp値は、ＴＲＯＰ２抗原又はその抗原エピトープに対して１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１００、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５ｐＭ又はそれ以下であってよい。いくつかの実施形態では、第２標的について、抗ＴＲＯＰ２抗体は、第１標的に対してより低いＫｉappを有してよい。Ｋｉappの差異（例えば、特異性又は他の比較に対する）は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１００００又は１０5倍であってよい。
【００３２】
本明細書に記載の抗体は、（キメラ又はヒト化抗体を含む）マウス、ラット、ヒト又は任意の他の由来の抗体であってよい。このような抗体は、非天然に存在するものであり、すなわち人為的な行為（例えば、所望の抗原又はその断片でこのような動物を免疫すること）がない場合に動物内に産生しないものである。
【００３３】
本明細書に記載の任意の抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであってよい。「モノクローナル抗体」とは、均一な抗体集団を指し、「ポリクローナル抗体」とは、不均一な抗体集団を指す。これら２つの用語は、抗体の由来又は製造方式を限定するものではない。
【００３４】
一例では、本明細書に記載の方法で使用された抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの抗原結合断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。多くの場合では、ヒト化抗体は、受容体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲに由来する残基で置換されるヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換される。また、ヒト化抗体は、受容体抗体にも、導入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されないが抗体性能をさらに改善して最適化するために含まれる残基を含んでよい。一般的に、ヒト化抗体は、実質的に全て、少なくとも１つ、一般的に２つの可変ドメインを含み、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンに対応し、全て又は実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列である。ヒト化抗体は、最適には、一般的にヒト免疫グロブリンの定常領域又はドメイン（Ｆｃ）である免疫グロブリンの定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部をさらに含む。抗体は、ＷＯ  ９９／５８５７２において記載されるように修飾されたＦｃ領域を有してよい。他の形態のヒト化抗体は、元の抗体由来の１つ以上のＣＤＲ「に由来する」１つ以上のものとも呼ばれる、元の抗体に関して改変された１つ以上のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ及び／又は６つ）を有する。ヒト化抗体はまた、親和性成熟を伴ってもよい。
【００３５】
別の例では、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体に由来する重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含んでよいキメラ抗体であってよい。キメラ抗体とは、第１種に由来する可変領域又は可変領域の一部及び第２種に由来する定常領域を有する抗体を指す。一般的に、これらのキメラ抗体において、軽鎖及び重鎖の可変領域は、いずれも、哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ウサギ及びラットなどの非ヒト哺乳動物）に由来する抗体の可変領域を模倣するが、定常部分は、ヒトなどの別の種の哺乳動物に由来する抗体中の配列と相同である。いくつかの実施形態では、可変領域及び／又は定常領域においてアミノ酸修飾を行ってよい。
【００３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、対応する標的抗原又はそのエピトープに特異的に結合する。抗原又はエピトープに「特異的に結合する」抗体は、本分野で周知の用語である。分子と特定の標的抗原との反応は、他の標的抗原との反応より頻繁で、より速く、より長い持続時間を有し及び／又はより大きな親和性を有すると、「特異的に結合する」ことを示す。抗体は、他の物質との結合よりも大きな親和性で、アビディティ（ａｖｉｄｉｔｙ）で、より容易に、及び／又は、より長い持続時間、結合すると、標的抗原又はエピトープに「特異的に結合する」。例えば，ＴＲＯＰ２抗原又はその中の抗原エピトープに特異的に（又は優先的に）結合する抗体は、他の抗原又は同じ抗原中の他のエピトープとの結合よりも大きな親和性で、アビディティで、より容易に、及び／又は、より長い持続時間で、この標的抗原に結合する抗体である。この定義から理解されるように、例えば、第１標的抗原に特異的に結合する抗体は、第２標的抗原に特異的若しくは優先的に又は非特異的若しくは非優先的に結合することができる。このように、「特異的に結合する」こと又は「優先的に結合する」ことは、排他的に結合することを（含んでよいが）必ずしも必要とするものではない。いくつかの例では、標的抗原又はそのエピトープに「特異的に結合する」抗体は、他の抗原又は同じ抗原中の他のエピトープに結合しない可能性がある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、ヒトＴＲＯＰ２に特異的に結合する。いくつかの例では、非ヒトＴＲＯＰ２抗原との結合活性は、従来のアッセイにおいて検出できないか又は非常に低いため、当業者に知られているように、それは顕著な生物学的な意味を有さない。他の例では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、例えば、ヒトＴＲＯＰ２と非ヒトＴＲＯＰ２（例えば、非ヒト霊長類、マウス、又はラットなどの実験動物に由来するＴＲＯＰ２）との間で、異なる種に由来するＴＲＯＰ２と交差反応してよい。
【００３７】
本明細書に使用されるように、「ＴＲＯＰ２」又は「栄養膜細胞表面抗原２」という用語とは、任意の適切な種、例えば、ヒト、非ヒト霊長類動物又は齧歯動物（例えば、マウス又はラット）などの非ヒト哺乳動物のＴＲＯＰ２タンパク質を指す。ＴＲＯＰ２は、一本鎖膜タンパク質であり、主な機能は、細胞内カルシウムシグナルを伝達することである。以下、例示的なヒトＴＲＯＰ２のアミノ酸配列を提供する（またＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０９７５８を参照）：
【化２】
2021531826.tif 000005
他の種に由来するＴＲＯＰ２分子は、本分野で周知であり、かつそのアミノ酸配列は、公的に利用可能なデータベース、例えばＧｅｎＢａｎｋから得ることができる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、標的抗原（例えば、ヒトＴＲＯＰ２）又はその抗原エピトープに対して適切な結合親和性を有する。本明細書に使用されるように、「結合親和性」とは、見かけの会合定数又はＫAを指す。ＫAは、解離定数（ＫD）の逆数である。本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体の標的抗原又は抗原エピトープに対する結合親和性（ＫD）は、少なくとも１０-5、１０-6、１０-7、１０-8、１０-9、１０-10Ｍ又はそれ以下である。結合親和性の増加は、ＫDの低下に対応する。第２抗原と比較して第１抗原に対してより高い抗体の親和性結合は、上記第２抗原への結合のＫA（又は数値ＫD）よりも、第１抗原への結合のＫAが高い（又は数値ＫDが小さい）ことによって示すことができる。このような場合では、抗体は、第２抗原（例えば、同じ第１タンパク質の第２立体配座若しくはその模倣物、又は第２タンパク質）と比較して、第１抗原（例えば、第１タンパク質の第１立体配座又はその模倣物）に対して特異性を有する。いくつかの実施形態では、異なる種のＴＲＯＰ２に対する結合親和性と比較して、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、ヒトＴＲＯＰ２に対してより高い結合親和性（より高いＫA又はより小さいＫD）を有する。結合親和性の差異（例えば、特異性又は他の比較に対する）は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１００００又は１０5倍であってよい。いくつかの実施形態では、任意の抗ＴＲＯＰ２抗体は、抗体の標的抗原又はその抗原エピトープに対する結合親和性を増加させるためにさらに親和性成熟されてよい。
【００３９】
結合親和性（又は結合特異性）は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、又は（例えば、蛍光アッセイを使用する）分光法を含む様々な方法によって決定されてよい。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（ｐＨ７．４の１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）界面活性剤Ｐ２０）にあることである。このような技術は、結合された結合タンパク質の濃度を標的タンパク質の濃度の関数として測定するために用いることができる。結合された結合タンパク質（［Ｂｏｕｎｄ］）の濃度は、一般的に遊離標的タンパク質（［Ｆｒｅｅ］）の濃度に関連し、その関係式は以下のとおりである：
［Ｂｏｕｎｄ］＝［Ｆｒｅｅ］／（Ｋｄ＋［Ｆｒｅｅ］）。
【００４０】
しかしながら、ＫAを正確に決定することは、必ずしも必要ではないが、時として、（例えば、ＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳ分析などの方法を用いて測定された）親和性の定量的測定を得ることは十分であり、ＫAに比例するので、比較に用いることができ、例えばより高い親和性が例えば２倍高いか否かを決定して親和性の定量的測定を得るか、又は例えば機能的アッセイ（例えば、インビトロ又はインビボ分析）における活性により親和性の推定を得る。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、本明細書で提供される参照抗体のうちの１つとＴＲＯＰ２抗原（例えば、ヒトＴＲＯＰ２）中の同じエピトープに結合するか、又は参照抗体と競合してＴＲＯＰ２抗原に結合する。本明細書で提供される参照抗体は、それぞれの構造的特徴が本明細書に提供されるＴｒｏｐ２−Ａｂ７、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ８、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ２２、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４０、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ４６、Ｔｒｏｐ２−Ａｂ５０及びＴｒｏｐ２−Ａｂ５１を含む。本明細書に記載の参照抗体と同じエピトープに結合する抗体は、参照抗体とは、（例えば、３つ未満の非重複アミノ酸残基、２つ未満の非重複アミノ酸残基又は１つのみの非重複アミノ酸残基を含む）完全に同じエピトープ又は実質的に重複するエピトープに結合することができる。２種の抗体が相同抗原に結合することにより互いに競合するか否かは、本分野で周知である競合アッセイにより決定されてよい。当業者に知られているように、実質的に類似する構造的特徴（例えば、相補性決定領域）を有するもの、及び／又は本分野で既知のアッセイにより同定されたものなどのこのような抗体を同定することができる。例えば、参照抗体のうちの１つを用いて競合アッセイを行うことにより、候補抗体が参照抗体と同じエピトープに結合するか又はＴＲＯＰ２抗原との結合を競合するか否かを決定することができる。
【００４２】
本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、（ａ）Ｘ1がＲ又はＴであり、Ｘ2がＤ、Ｓ又はＮであり、かつＸ3がＶ又はＷであるＧＹＸ1ＦＴＸ2ＹＸ3として示される重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、（ｂ）  Ｘ1がＹ又はＦであり、Ｘ2がＧ又はＳであり、Ｘ3がＳ、Ｈ又はＧであり、Ｘ4がＤ又はＳであり、Ｘ5がＳ、Ｙ、Ｔ又はＧであり、かつＸ6がＦ又はＴであるＩＸ1ＰＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6として示される重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、（ｃ）  Ｘ1がＡ又はＴであり、Ｘ2がＦ、Ｇ又はＳであり、Ｘ3がＦ又はＳであり、Ｘ4がＥ、Ｙ又は非存在であり、Ｘ5がＧ又は非存在であり、Ｘ6がＬ、Ｆ又は非存在であり、かつＸ7がＡ又はＤであるＸ1ＲＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｙとして示される重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、又は（ｄ）（ａ）−（ｃ）の任意の組み合わせを含んでよい重鎖可変領域（ＶH）を含んでよい。いくつかの場合では、上記抗体は、（ａ）のＨＣ  ＣＤＲ１、（ｂ）のＨＣ  ＣＤＲ２及び（ｃ）のＨＣ  ＣＤＲ３を含んでよい。
【００４３】
いくつかの例では、ＨＣ  ＣＤＲ１モチーフＧＹＸ1ＦＴＸ2ＹＸ3は、位置Ｘ1でのＲ、位置Ｘ2でのＤ、及び／又は位置Ｘ3でのＶを含んでよい。代替的又は追加的に、ＨＣ  ＣＤＲ２モチーフＩＸ1ＰＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6は、位置Ｘ1でのＹ、位置Ｘ2でのＧ、位置Ｘ3でのＳ、位置Ｘ4でのＤ、位置Ｘ5でのＳ及び／又は位置Ｘ6でのＦを含んでよい。代替的又は追加的に、ＨＣ  ＣＤＲ３モチーフＸ1ＲＸ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6Ｘ7Ｙは、位置Ｘ1でのＡ、位置Ｘ2でのＦ、位置Ｘ3でのＦ、位置Ｘ4でのＥ、位置Ｘ5でのＧ、位置Ｘ6でのＦ及び／又は位置Ｘ7でのＡを含んでよい。
【００４４】
表１は、（ＩＭＧＴ定義による）例示的な抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を提供する。これらの例示的な抗ＴＲＯＰ２抗体と同じ重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を有する抗体も本開示の範囲にある。
【００４５】
【表１】
2021531826.tif 000006
【００４６】
代替的又は追加的に、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、（ａ）Ｘ1がＧ、Ｎ又はＤであり、Ｘ2がＮ又はＧであり、Ｘ3がＮ、Ｔ又はＷであり、かつＸ4がＹ又はＳであるＱＸ1ＩＸ2Ｘ3Ｘ4として示される軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、（ｂ）Ｘ1がＲ又はＹであり、Ｘ2がＡ又はＳであり、かつＸ3がＮ又はＳであるＸ1Ｘ2Ｘ3として示される軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、（ｃ）Ｘ1がＬ又はＱであり、Ｘ2がＱ又はＨであり、Ｘ3がＹ又はＳであり、Ｘ4がＤ、Ｙ又はＥであり、Ｘ5がＥ、Ｓ又はＴであり、Ｘ6がＦ又はＷであり、かつＸ7がＬ又はＦであるＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6ＰＸ7Ｔとして示される軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）、又は（ｄ）（ａ）−（ｃ）の任意の組み合わせを含む軽鎖可変領域（ＶL）を含む軽鎖可変ドメイン（ＶL）を含んでよい。
【００４７】
いくつかの例では、ＬＣ  ＣＤＲ１モチーフＱＸ1ＩＸ2Ｘ3Ｘ4は、位置Ｘ1でのＧ、位置Ｘ2でのＮ、位置Ｘ3でのＮ及び／又は位置Ｘ4でのＹを含む。代替的又は追加的に、ＬＣ  ＣＤＲ２モチーフＸ1Ｘ2Ｘ3は、位置Ｘ1でのＲ、位置Ｘ2でのＡ及び／又は位置Ｘ3でのＮを含む。代替的又は追加的に、ＬＣ  ＣＤＲ３モチーフＸ1Ｘ2Ｘ3Ｘ4Ｘ5Ｘ6ＰＸ7Ｔは、位置Ｘ1でのＬ、位置Ｘ2でのＱ、位置Ｘ3でのＹ、位置Ｘ4でのＤ、位置Ｘ5でのＥ、位置Ｘ6でのＦ及び／又は位置Ｘ7でのＬを含む。
【００４８】
表２は、例示的な抗ＴＲＯＰ２抗体の軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を提供する。これらの例示的な抗ＴＲＯＰ２抗体と同じ軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を有する抗体も本開示の範囲にある。
【００４９】
【表２】
2021531826.tif 000007
【００５０】
本明細書で提供される参照抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲは、本分野で周知であるＩＭＧＴ方法に基づいて決定される。いくつかの場合では、本明細書に開示された抗ＴＲＯＰ２抗体は、本明細書に開示された任意の参照抗体と同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含んでよい。同じＶH及び／又はＶL  ＣＤＲを有する２種の抗体は、同じ方法（例えば、本明細書に記載及び／又は本分野で既知のもの）によって決定される場合にそれらのＣＤＲが同じであることを示す。
【００５１】
いくつかの例では、本明細書に開示された抗ＴＲＯＰ２抗体は、以下に提供される（ＣＤＲが太字で示される）参照抗体のうちの１つと同じＶH及び／又はＶL配列を含んでよい。
【化３】
2021531826.tif 000008
【化４】
2021531826.tif 000009
【００５２】
同様に本開示の範囲内にあるのは、本明細書に開示された任意の参照抗ＴＲＯＰ２抗体の機能的変異体（例えば、上記表１及び表２に列挙されるもの）である。機能的変異体は、参照抗体の１つ以上の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域において最大５つ（例えば、４、３、２又は１つ）のアミノ酸残基変異を含み、かつ（例えば、同じオーダーのＫD値を有する）実質的に類似する親和性でＴＲＯＰ２抗原の同じエピトープに結合することができる。いくつかの場合では、参照抗体中の対応するＣＤＲと比較して、機能的変異体中の各重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲは、２つ以下のアミノ酸残基変異を含む。いくつかの例では、参照抗体中の対応するＣＤＲと比較して、機能的変異体中の各重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲは、１つ以下のアミノ酸残基変異を含む。
【００５３】
一例では、アミノ酸残基変異は、保存的アミノ酸残基置換である。本明細書に使用されるように、「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対的な電荷又はサイズ特性を変化させないアミノ酸置換を指す。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら編、第２版、コールドスプリングハーバー研究所出版社、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、１９８９年、又は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ社、ニューヨークなどの、このような方法を編集する参考文献に見出され得る、当業者に知られる、ポリペプチド配列を変化させるための方法に従って、変異体を製造することができる。アミノ酸の保存的置換は、（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ、（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ、（ｄ）Ａ、Ｇ、（ｅ）Ｓ、Ｔ、（ｆ）Ｑ、Ｎ、及び（ｇ）Ｅ、Ｄという群内のアミノ酸の間で行われる置換を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、上記抗ＴＲＯＰ２抗体は、全体的に参照抗体の重鎖ＣＤＲと少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％又は９８％）同じ重鎖ＣＤＲ、及び／又は全体的に参照抗体の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％又は９８％）同じ軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、上記抗ＴＲＯＰ２抗体は、任意の参照抗体の重鎖可変領域と少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％又は９８％）同じ重鎖可変領域（ＶH）、及び／又は参照抗体の軽鎖可変領域と少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％又は９８％）同じ軽鎖可変領域（ＶL）を含む。
【００５５】
Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−６８、１９９０年を、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−７７、１９９３年に修正するアルゴリズムを用いて２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」を決定する。このようなアルゴリズムは、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０、１９９０年のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。標的タンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３でＢＬＡＳＴタンパク質検索を行うことができる。２つの配列間にギャップが存在する場合に、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２、１９９７年に記載されるようにギャップのあるＢＬＡＳＴ（Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ）プログラムを用いることができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）を用いる場合に、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータを用いることができる。
【００５６】
本開示は、本明細書に開示された任意の参照抗ＴＲＯＰ２抗体の生殖系列変異体をさらに提供する。生殖系列変異体は、それに対応する生殖系列配列の親抗体と比較して、フレームワーク領域に１つ以上の突然変異を含む。生殖系列変異体を産生するために、親抗体又はその一部の重鎖若しくは軽鎖可変領域配列（例えば、フレームワーク配列）をクエリ配列として抗体生殖系列配列データベース（例えば、ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／、ｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ又はｉｍｇｔ．ｏｒｇ）にクエリを行うことにより、親抗体に用いられる対応する生殖系列配列、及び生殖系列配列と親抗体との間の１つ以上のフレームワーク領域におけるアミノ酸残基変異を同定することができる。次に、生殖系列配列に基づいて１つ以上のアミノ酸置換を親抗体に導入することにより生殖系列変異体を産生することができる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖は、重鎖定常領域（ＣＨ）又はその一部（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３又はそれらの組み合わせ）をさらに含んでよい。重鎖定常領域は、ヒト、マウス、ラット又はウサギなどの任意の適切な供給源由来のものであってよい。特定の例では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ（γ重鎖）に由来する。必要に応じて、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、修飾された定常領域を含んでよい。例えば、それは、修飾された免疫学的に不活性な定常領域を含んでよく、例えば、補体媒介性溶解を誘発しないか、又は抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＡＤＣＣ）を刺激しない。ＡＤＣＣ活性は、米国特許第５５００３６２号に開示された方法を用いて評価されてよい。他の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９年）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１、及び／又は英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されるように修飾される。
【００５８】
本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体は、軽鎖可変領域と、本分野で既知の任意のＣＬであってよい任意に存在する軽鎖定常領域（ＣＬ）と、を含む軽鎖をさらに含んでよい。いくつかの例では、ＣＬは、κ軽鎖である。他の例では、ＣＬは、λ軽鎖である。抗体の重鎖及び軽鎖定常領域は、本分野で周知であり、例えば、ＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）又はｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ／ｖｂｓｔａｔ．ｐｈｐで提供されるものであり、それらはいずれも参照により本明細書に組み込まれる。
【００５９】
抗ＴＲＯＰ２抗体の製造
本明細書に記載の、ＴＲＯＰ２に結合可能な抗体は、本分野で既知の任意の方法により製造することができる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、（１９９８年）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、コールドスプリングハーバー研究所、ニューヨークを参照する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、従来のハイブリドーマ技術により、標的ＴＲＯＰ２抗原（例えば、ヒトＴＲＯＰ２）に特異的な抗体を製造することができる。ＫＬＨなどの担体タンパク質に任意に結合する全長標的抗原又はその断片は、その抗原に結合する抗体を産生するために宿主動物を免疫するために用いることができる。本明細書にさらに記載されるように、宿主動物の免疫経路及びスケジュールは、一般的に、抗体刺激及び産生のための確立された従来の技術と一致している。マウス抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体を産生する一般的な技術は、本分野で既知であり、かつ本明細書中に記載される。ヒト又はそれに由来する抗体産生細胞を含む任意の哺乳動物対象は、ヒトハイブリドーマ細胞株を含む哺乳動物の産生のための基礎として役立つように操作することができることが企図される。一般的に、宿主動物は、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内及び／又は皮内で、本明細書中に記載されるものを含む一定量の免疫原を接種される。
【００６１】
Ｋｏｈｌｅｒ、Ｂ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ．（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７に記載の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を用いて、又はＢｕｃｋ、Ｄ．Ｗ．ら、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７−３８１（１９８２年）により改善された方式で、リンパ球及び不死化骨髄腫細胞からハイブリドーマを製造することができる。適用された骨髄腫細胞株は、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３と米国カリフォルニア洲サンディエゴ細胞配送センターのＳａｌｋ研究所（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）からの骨髄腫細胞株を含むが、これらに限定されず、いずれもハイブリダイゼーションに用いることができる。一般的に、該技術は、融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を用いて、又は当業者に周知の電気的衝撃方式で、骨髄腫細胞とリンパ球を融合させることを含む。融合後、細胞を融合培地から単離し、かつヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的増殖培地中で増殖させることにより、ハイブリダイゼーションされていない親細胞を除去する。本明細書に記載の、血清を補充するか又は含まない任意の培地は、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマの培養に用いることができる。細胞融合技術の別の代替方法として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞は、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２モノクローナル抗体の産生に用いることができる。必要に応じて、ハイブリドーマを増幅してサブクローニングし、かつ従来の免疫測定手順（例えば、放射免疫測定、酵素免疫測定又は蛍光免疫測定）により上清を抗免疫原活性について測定する。
【００６２】
抗体の供給源として用いられてよいハイブリドーマは、ＴＲＯＰ２活性を妨害できるモノクローナル抗体を産生する全ての誘導体、親ハイブリドーマの子孫細胞を含む。このような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の方法を用いてインビトロ又はインビボで増殖することができる。必要に応じて、硫酸アンモニウム沈降、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー及び限外濾過などの従来の免疫グロブリンの精製方法により培地又は体液からモノクローナル抗体を単離することができる。望ましくない活性は、（存在する場合）、例えば、固相に付着した免疫原で製造された吸着剤上に調製物を流し、かつ免疫原から所望の抗体を溶出するか又は放出することによって除去することができる。標的抗原又は標的アミノ酸配列を含む断片を用いて宿主動物を免疫すると、抗体集団（例えば、モノクローナル抗体）を産生することができ、上記標的抗原又は標的アミノ酸配列を含む断片は、二官能性又は誘導体化試薬（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した複合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介した複合体化）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ又はＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ、ここでＲとＲ１が異なるアルキル基である）を用いることにより、免疫される種中の免疫原性を有するタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又は大豆トリプシン阻害剤）に複合体化することができる。
【００６３】
必要に応じて、（例えば、ハイブリドーマによって産生される）関心対象の抗体（モノクローナル又はポリクローナル）を配列決定し、次に、ポリヌクレオチド配列を、発現又は増殖のためのベクター中にクローニングすることができる。関心対象の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター中で維持されてよく、次いで上記宿主細胞は、将来の使用のために増幅されて凍結されてよい。又は、ポリヌクレオチド配列は、遺伝子操作により抗体を「ヒト化」するか又は抗体の親和性（親和性成熟）又は他の特徴を改善するために用いられてよい。例えば、抗体が臨床試験及びヒトの治療に用いられると、定常領域は、免疫反応を回避するために、ヒトの定常領域により類似するように操作されてよい。標的抗原に対するより大きな親和性及びＴＲＯＰ２活性の阻害におけるより大きな有効性を得るために、抗体配列を遺伝子操作することが望ましい可能性がある。抗体に１つ以上のポリヌクレオチドの変化を行い、かつ依然として標的抗原との結合特異性を維持してもよいことは、当業者には明らかである。
【００６４】
他の実施形態では、特定のヒト免疫グロブリンを発現するように操作された市販のマウスを使用することによって完全ヒト抗体を得ることができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）又はより強力な免疫反応を生成するように設計された遺伝子組換え動物は、ヒト化又はヒト抗体の産生に用いられてもよい。このような技術の例は、Ａｍｇｅｎ、Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆ．）からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅRTM、並びにＭｅｄａｒｅｘ、Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）からのＨｕＭＡｂ−ＭｏｕｓｅRTM及びＴＣ  ＭｏｕｓｅTMである。別の代替形態では、ファージディスプレイ技術又は酵母技術により抗体を組み換え的に製造してよい。例えば、米国特許第５５６５３３２号、第５５８０７１７号、第５７３３７４３号、第６２６５１５０号、及び、Ｗｉｎｔｅｒら（１９９４年）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５を参照する。又は、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３）を用いて、免疫されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリから、ヒト抗体及び抗体断片をインビトロで産生してよい。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ファージディスプレイ抗体ライブラリ又は酵母ディスプレイ抗体ライブラリなどの抗体ライブラリから、ＴＲＯＰ２抗原に結合できる抗体を単離してよい。一例では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、例えば、ＵＳ  ２０１５／０１５３３５６に開示された方法に従ってモノクローナル抗体ライブラリから単離されてよく、その関連する開示内容は、本明細書で参照される目的又は主題のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００６６】
従来の方法により無傷抗体（全長抗体）の抗原結合断片を製造してよい。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体分子のペプシン消化によって産生されてよく、かつＦａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド結合を還元することによって産生されてよい。
【００６７】
ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、及び二重特異性抗体などの、遺伝子操作された抗体は、例えば、従来の組換え技術により産生されてよい。一例では、従来の方法を用いることにより（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、標的抗原に特異的なモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離して配列決定してよい。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源となる。単離すると、ＤＮＡを１つ以上の発現ベクター中に入れ、次に、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は他に免疫グロブリンを産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞内に形質移入することにより、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得てよい。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号を参照する。次に、ＤＮＡは、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１では、相同なマウス配列をヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって、又は非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部又は一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合させることによって、修飾することができる。このようにして、標的抗原への結合特異性を有する、遺伝子操作された抗体、例えば「キメラ」又は「ハイブリッド」抗体を製造することができる。
【００６８】
「キメラ抗体」を製造するために開発された技術は、本分野で周知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１、６８５１、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１２、６０４、及びＴａｋｅｄａら（１９８４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２を参照する。
【００６９】
ヒト化抗体を構築する方法も本分野で周知である。例えば、Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８６：１００２９−１００３３（１９８９年）を参照する。一例では、本分野で既知の方法に従って親非ヒト抗体のＶH及びＶLの可変領域に対して三次元分子モデル分析を行う。次に、正確なＣＤＲ構造の形成に重要であると予測されるフレームワークアミノ酸残基を、同じ分子モデル分析を用いて同定する。並行して、親ＶH及びＶL配列を検索クエリとして用いることにより、親非ヒト抗体のアミノ酸配列に相同なアミノ酸配列を有するヒトＶH及びＶL鎖を任意の抗体遺伝子データベースから同定する。その後、ヒトＶH及びＶL受容体遺伝子を選択する。
【００７０】
選択されたヒト受容体遺伝子内のＣＤＲ領域は、親非ヒト抗体又はその機能的変異体に由来するＣＤＲ領域で置換されてもよい。必要な場合に、ＣＤＲ領域との相互作用において重要な役割を有すると予測される親鎖のフレームワーク領域内の残基（上記記載を参照）で、ヒト受容体遺伝子内の対応する残基を置換してよい。
【００７１】
重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を結合して、組換え技術により一本鎖抗体を製造することができる。好ましくは、２つの可変領域の間に可撓性リンカーを含む。又は、一本鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４９４６７７８号及び第４７０４６９２号）は、ファージ又は酵母ｓｃＦｖライブラリの産生に適用されてよく、かつＴＲＯＰ２に特異的なｓｃＦｖクローンは、従来の手順に従ってライブラリから同定されてよい。陽性クローンをさらにスクリーニングすることにより、ＴＲＯＰ２活性を阻害するクローンを同定することができる。
【００７２】
本分野で既知の方法及び本明細書に記載の方法に従って得られた抗体を、本分野で周知の方法を用いて特徴付けることができる。例えば、１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、又は「エピトープマッピング」である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、コールドスプリングハーバー研究所出版社、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、１９９９年、第１１章に記載されるように、抗体−抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ及び合成ペプチドに基づくアッセイを含む、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングして特徴付けるための多くの方法は、本分野で既知である。別の例では、エピトープマッピングは、抗体が結合する配列を決定するために用いられてよい。エピトープは、直鎖状エピトープ、すなわちアミノ酸の単一のストレッチ（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒｅｔｃｈ）に含まれるか、又は必ずしも単一のストレッチ（一次構造直鎖状配列）に含まれないアミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体配座エピトープであってよい。異なる長さ（例えば、少なくとも４−６アミノ酸長）のペプチドは、単離又は合成され、かつ抗体との結合分析に用いられてよい。別の例では、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列由来の重複ペプチドを用い、かつ抗体との結合活性を決定することにより、系統的スクリーニングにおいて決定されてよい。遺伝子断片発現分析によれば、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、ランダムに又は特異的な遺伝的構築によって断片化され、かつ発現された抗原断片と試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えばＰＣＲによって産生され、次いで放射性アミノ酸の存在下でインビトロでのタンパク質への転写及び翻訳を行うことができる。次に、抗体と放射性標識された抗原断片との結合は、免疫沈降及びゲル電気泳動によって決定される。あるエピトープは、ファージ粒子の表面にディスプレイされた大量のランダムペプチド配列のライブラリ（ファージライブラリ）を用いることにより同定されてもよい。又は、重複ペプチド断片の規定のライブラリーは、単純な結合分析において試験される抗体への結合について試験されてよい。別の例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験及びアラニンスキャンニング突然変異誘発を行うことにより、エピトープ結合のために要求される十分な及び／又は必要な残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験は、標的抗原の突然変異体を用いて行われてよく、ＴＲＯＰ２ポリペプチドの各断片は、密接に関連するが抗原性が異なるタンパク質由来の配列で置換（交換）される。抗体の突然変異体ＴＲＯＰ２への結合を評価することによって、抗体結合への特定の抗原断片の重要性を評価してよい。
【００７３】
又は、同じ抗原に結合することが知られている他の抗体を用いて競合分析を行うことにより、抗体が他の抗体とは同じエピトープに結合するか否かを決定することができる。競合分析は、当業者に周知である。
【００７４】
いくつかの例では、抗ＴＲＯＰ２抗体は、以下に例示されるような組換え技術により製造される。
【００７５】
本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、１つの発現ベクター中にクローニングされてよく、各ヌクレオチド配列は、適切なプロモータに作動可能に結合される。一例では、重鎖及び軽鎖をコードする各ヌクレオチド配列は、異なるプロモータに作動可能に結合される。又は、重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、重鎖と軽鎖がいずれも同じプロモータから発現されるように、単一のプロモータに作動可能に結合されてよい。必要に応じて、重鎖と軽鎖のコード配列の間に内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を挿入してよい。
【００７６】
いくつかの例では、抗体の２つの鎖をコードするヌクレオチド配列は、同じ又は異なる細胞内に導入されてよい２つのベクター中にクローニングされる。２つの鎖が異なる細胞内で発現される場合、それぞれは、それを発現する宿主細胞から単離されてよく、かつ単離された重鎖と軽鎖は、抗体を形成するように、混合されて適切な条件下でインキュベートされてよい。
【００７７】
一般的に、本分野で既知の方法を用いると、抗体の１つ又は全ての鎖をコードする核酸配列を適切なプロモータに作動可能に結合して適切な発現ベクター中にクローニングすることができる。例えば、ヌクレオチド配列及びベクターを、適切な条件下で、制限酵素と接触させることにより、互いに対を成しリガーゼで一緒に結合することができる相補的末端を各分子上に生成することができる。又は，合成された核酸リンカーは、遺伝子の末端に結合されてよい。これらの合成されたリンカーは、ベクター内の特定の制限酵素部位に対応する核酸配列を含む。発現ベクター／プロモータの選択は、抗体の産生のための宿主細胞のタイプに依存する。
【００７８】
複数種のプロモータは、本明細書に記載の抗体の発現に用いられてよく、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモータ、ウイルスＬＴＲ（例えば、ラウス肉腫（Ｒｏｕｓ  ｓａｒｃｏｍａ）ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ−ＬＴＲ、ＨＴＬＶ−１  ＬＴＲ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモータ、大腸菌ｌａｃ  ＵＶ５プロモータ及び単純ヘルペスウィルスプロモータを含むが、これらに限定されない。
【００７９】
調節可能なプロモータを用いてもよい。このような調節可能なプロモータは、ｌａｃオペロンを保持する哺乳動物細胞プロモータからの転写を調節するための転写モジュレータ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として大腸菌由来のｌａｃリプレッサーを用いるもの［Ｂｒｏｗｎ、Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ、４９：６０３−６１２（１９８７年）］、及び、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を用いるもの［Ｇｏｓｓｅｎ、Ｍ．及びＢｕｊａｒｄ、Ｈ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２年）、Ｙａｏ、Ｆ．ら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、９：１９３９−１９５０（１９９８年）、Ｓｈｏｃｋｅｌｔ、Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２：６５２２−６５２６（１９９５年）］を含む。他の系には、ＦＫ５０６ダイマー、アストラジオール（ａｓｔｒａｄｉｏｌ）を用いるＶＰ１６若しくはｐ６５、ＲＵ４８６、ジフェノールムリスレロン（ｄｉｐｈｅｎｏｌ  ｍｕｒｉｓｌｅｒｏｎｅ）又はラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）が含まれる。誘導可能な系は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ及びＡｒｉａｄから入手可能である。
【００８０】
オペロン付きのリプレッサーを含有する調節可能なプロモータを使用することができる。一実施形態では、大腸菌由来のｌａｃリプレッサーは、ｌａｃオペロンを保持する哺乳動物細胞プロモータからの転写を調節するための転写モジュレータとして用いられてよく［Ｍ．Ｂｒｏｗｎら、Ｃｅｌｌ、４９：６０３−６１２（１９８７年）］、Ｇｏｓｓｅｎ及びＢｕｊａｒｄ  （１９９２年）、［Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：５５４７−５５５１（１９９２年）］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）は、転写活性化因子（ＶＰ１６）と組み合わせられてｔｅｔＲ−哺乳動物細胞転写活性化因子融合タンパク質、ｔＴａ（ｔｅｔＲ−ＶＰ１６）を産生し、かつヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）の主要最初期プロモータ由来のｔｅｔＯを保持する最小プロモータと組み合わせられて哺乳動物細胞中の遺伝子発現を制御するためのｔｅｔＲ−ｔｅｔオペロン系を産生する。一実施形態では、テトラサイクリン誘導性スイッチが用いられる。テトラサイクリンオペロンがＣＭＶＩＥプロモータのＴＡＴＡ要素の下流に適切に位置する場合、ｔｅｔＲ−哺乳動物細胞転写因子融合誘導体ではなくテトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）のみは、哺乳動物細胞中の遺伝子発現を調節する強力なトランス−モジュレータとして用いられてよい（Ｙａｏら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）。このテトラサイクリン誘導性スイッチの特別な利点の１つは、その調節可能という効果を達成するのに、いくつかの場合では細胞に対して毒性である可能性があるテトラサイクリンリプレッサー−哺乳動物細胞トランス活性化因子又はリプレッサー融合タンパク質の使用（Ｇｏｓｓｅｎら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：５５４７−５５５１（１９９２年）、Ｓｈｏｃｋｅｔｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２：６５２２−６５２６（１９９５年））を必要としないということである。
【００８１】
また、ベクターは、例えば、哺乳動物細胞における安定な又は一過性のトランスフェクタントの選択のためのネオマイシン遺伝子などの選択マーカー遺伝子と、高レベルの転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子に由来するエンハンサ／プロモータ配列と、ｍＲＮＡの安定性のためのＳＶ４０に由来する転写終結及びＲＮＡプロセシングシグナルと、適切なエピソーム複製（ｅｐｉｓｏｍａｌ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）のためのＳＶ４０ポリオーマの複製開始点及びＣｏｌＥ１と、内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳｅｓ）と、多用途のマルチクローニング部位と、センス及びアンチセンスＲＮＡのインビトロ転写のためのＴ７及びＳＰ６  ＲＮＡプロモータと、のうちのいくつか又は全てを含んでよい。導入遺伝子を含むベクターを製造するのに好適なベクター及び方法は、本分野において周知であり、かつ利用可能である。
【００８２】
本明細書に記載の方法を実施するために用いられてよいポリアデニル化シグナルの例としては、ヒトコラーゲンＩポリアデニル化シグナル、ヒトコラーゲンIIポリアデニル化シグナル、及びＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
任意の上記抗体をコードする核酸を含む１種以上のベクター（例えば、発現ベクター）を適切な宿主細胞内に導入して抗体を産生することができる。宿主細胞を適切な条件下で培養して抗体又はその任意のポリペプチド鎖を発現することができる。これらの抗体又はそのポリペプチド鎖を、従来の方法（例えば、親和性精製）により、培養された細胞（例えば、細胞又は培養液上清）から回収することができる。必要に応じて、抗体のポリペプチド鎖を適切な条件下で適切な時間インキュベートすることにより、抗体の産生を可能にすることができる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の、抗体を製造するための方法は、本明細書にも記載されるように、抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖及び軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターに関する。従来の方法、例えばリン酸カルシウム媒介性形質移入によって、組換え発現ベクターを適切な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞）内に導入することができる。適切な条件下で陽性形質転換体宿主細胞を選択して培養することにより、細胞又は培地から回収できる、抗体を形成する２つのポリペプチド鎖の発現を可能にすることができる。必要に応じて、宿主細胞から回収された２つの鎖を、抗体の形成を可能にする適切な条件下でインキュベートすることができる。
【００８５】
一例では、２種の組換え発現ベクターを提供し、１種は、抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖をコードし、もう１種は、抗ＴＲＯＰ２抗体の軽鎖をコードする。従来の方法、例えばリン酸カルシウム媒介性形質移入によって、２種の組換え発現ベクターを適切な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞）内に導入することができる。又は、各発現ベクターを適切な宿主細胞内に導入することができる。抗体のポリペプチド鎖の発現を可能にする適切な条件下で陽性形質転換体を選択して培養することができる。２種の発現ベクターが同じ宿主細胞内に導入される場合、産生された抗体を宿主細胞又は培地から回収することができる。必要に応じて、宿主細胞又は培地からポリペプチド鎖を回収し、次に適切な条件下でインキュベートして抗体を形成することができる。２種の発現ベクターが異なる宿主細胞内に導入される場合、それらの各々を、対応する宿主細胞又は対応する培地から収集することができる。その後、適切な条件下で該２つのポリペプチド鎖をインキュベートして抗体を形成することができる。
【００８６】
標準的な分子生物学技術を用いて組換え発現ベクターを製造し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、かつ培地から抗体を回収する。例えば、いくつかの抗体は、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇ結合マトリックスを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより単離することができる。
【００８７】
本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖、軽鎖又は両方をコードする任意の核酸、このような核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）、及び上記ベクターを含む宿主細胞は、いずれも本開示の範囲内にある。
【００８８】
抗体−医薬複合体
本開示は、治療剤に共有結合する、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体を含む抗体医薬複合体をさらに提供する。
【００８９】
本明細書で使用される「抗体−医薬複合体」又は「ＡＤＣ」という用語は、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体が治療剤に共有結合する複合体を指す。一般的に、この抗体−医薬複合体は、上記抗ＴＲＯＰ２抗体、治療剤、及び、任意に存在する、抗体と治療剤との間に位置するリンカーを含んでよい。治療剤を、抗体によって標的とされるＴＲＯＰ２+細胞、具体的にはＴＲＯＰ２+癌細胞に送達することにより、ＡＤＣは、治療効果を向上させることができる。抗体−医薬複合体は、本分野で既知の、抗体−医薬複合体を製造する複数種の方法により製造することができる。
【００９０】
本明細書に記載のＡＤＣ中の治療剤は、毒素、化学治療剤、抗生物質、ＡＤＰ−リボース転移酵素、放射性同位元素又は核酸分解酵素（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ  ｅｎｚｙｍｅ）であってよい。いくつかの場合では、治療剤は、細胞毒性薬である。例としては、アントラサイクリン、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）（例えば、オーリスタチンＥ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｃｉｎｃｉｎ）、エンジイン、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、インドリノベンゾジアゼピンダイマー（ｉｎｄｏｌｉｎｏ−ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  ｄｉｍｅｒ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピンダイマー、タキサン、ビンカアルカロイド（ｖｉｎｃａ  ａｌｋａｌｏｉｄ）、チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）、ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ、スプライソスタチン（ｓｐｌｉｃｅｏｓｔａｔｉｎ）、プラジエノライド（ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ）、及びカリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
いくつかの実施形態では、上記抗ＴＲＯＰ２抗体は、治療剤にリンカーを介して結合する。このようなリンカーは、切断可能なリンカー、例えば、一定のｐＨ条件下で切断可能なもの（ｐＨ感受性リンカー）、プロテアーゼによって切断可能なもの（プロテアーゼ感受性リンカー）、又はグルタチオンの存在下で切断可能なもの（グルタチオン感受性リンカー）であってよい。いくつかの例では、リンカーは、適切なプロテアーゼによって認識可能及び／又は切断可能である２〜５つのアミノ酸残基を含んでよいプロテアーゼ切断部位を含む。このようなペプチドは、天然に存在するアミノ酸残基、非天然に存在するアミノ酸残基又はそれらの組み合わせを含んでよい。一例では、ペプチドリンカーは、ジペプチドリンカーであってよい。例としては、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）リンカー、フェニルアラニン−リジン（ｐｈｅ−ｌｙｓ）リンカー、又はマレイミドカプロン酸−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ｖｃ）リンカーが挙げられる。又は、リンカーは、切断不可能なもの、例えば、任意に置換されたアルカン又はチオエーテルを含むリンカーであってよい。
【００９２】
いくつかの例では、リンカーは、抗体と共有結合を形成することができる官能基を含んでよい。例示的な官能基は、マレイミド基、ヨードアセトアミド基、ビニルスルホン基、アクリレート基、アクリルアミド基、アクリロニトリル基又はメタクリレート基を含むが、これらに限定されない。いくつかの場合では、リンカーは、アセチルリジン−バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＡｃＬｙｓ−ＶＣ−ＰＡＢＣ）又はアミノＰＥＧ６−プロピオニルを含むがこれらに限定されない１種以上の反応性アミンを含んでよい。例えば、ＷＯ２０１２／０５９８８２を参照する。他の例示的なリンカーは、スルホスクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（Ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−４−［Ｎｍａｌｅｉｍｉｄｏｍｅｔｈｙｌ］ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−１−ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ、ｓｍｃｃ）を含む。スルホ−ｓｍｃｃの複合体化は、スルフヒドリル基（チオール、−ＳＨ）と反応するマレイミド基を介して行われるのに対し、そのスルホ−ＮＨＳエステルは、第一級アミンに対して反応性を有する（リジン及びタンパク質又はペプチドのＮ末端において発見される）。
【００９３】
いくつかの例では、リンカーは、分子スペーサ、例えば式Ｉの部分を含んでよく、
【化５】
2021531826.tif 000010
ここでＲ1は、任意に置換されたＣ1-6アルキル基（例えば、Ｃ1-3アルキル基）、任意に置換されたフェニル基、任意に置換されたＣ2-6アルキレン基、任意に置換されたＣ2-6アルケニレン基、任意に置換されたＣ2-6アルキニレン基又は任意に置換されたトリアゾールであってよく、及び／又はＸは、Ｏ、Ｓ又はＮであってよい。
【００９４】
細胞毒性薬又は他の治療剤と抗体とを複合体化する方法は、本分野で既知であり、かつ様々な出版物において記載される。例えば、複合体化反応を発生させるために、リジン側鎖のアミンを介して、又は鎖間ジスルフィド結合を還元することによって活性化されるシステインスルフヒドリル基を介して、抗体を化学的に修飾することができる。例えば、Ｔａｎａｋａら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５７９：２０９２−２０９６、（２００５年）、及びＧｅｎｔｌｅら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１５：６５８−６６３（２００４年）を参照する。規定された化学量論により特異的な医薬複合体化を行うための、抗体の特異的部位で操作された反応性システイン残基も記載されている。例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６：９２５−９３２、（２００８年）を参照する。ＷＯ２０１２／０５９８８２、Ｓｔｒｏｐら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０（２）：１６１−１６７（２０１３年）、及びＦａｒｉａｓら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２５（２）：２４５−２５０（２０１４年）にも、トランスグルタミナーゼ及びアミン（例えば、反応性アミンで修飾された細胞毒性薬）の存在下で、ポリペプチド操作により反応性を有するアシルドナーグルタミン含有タグ及び／又は内因性グルタミンを用いる複合体化が記載されている。これらの出版物の関連する開示内容は、参照される目的又は主題のために、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９５】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びこのような受容体を発現する免疫細胞
本開示はまた、ＴＲＯＰ２を標的とするキメラ抗原受容体及びこのような受容体を発現する免疫細胞を特徴とする。本明細書に開示されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）は、人工細胞表面受容体であり、このような受容体を発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の結合特異性を、上皮由来の癌細胞などのＴＲＯＰ２+細胞にリダイレクトすることにより、例えば免疫細胞のエフェクタ活性を介して標的疾患細胞を排除する。ＣＡＲ構築物は、一般的に、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインと融合する細胞外抗原結合ドメインを含む。Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら、Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１０：９５６３０４、２０１０年。細胞外抗原結合ドメインは、一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）であってよく、ＴＲＯＰ２抗原に対して特異性を有し、かつ細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞の活性化をもたらす細胞シグナル伝達を媒介することができる。このように、ＴＲＯＰ２に特異的なＣＡＲ構築物を発現する免疫細胞は、ＴＲＯＰ２を発現する罹患細胞（例えば、腫瘍細胞）に結合することにより、免疫細胞の活性化及び罹患細胞の排除をもたらすことができる。
【００９６】
本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、いずれも本明細書に記載のＣＡＲ構築物を産生するために用いられてよい。例えば、従来の組換え技術を用いて抗ＴＲＯＰ２抗体のＶH及びＶLドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに融合することによりＣＡＲ構築物を産生することができる。いくつかの例では、抗ＴＲＯＰ２のＶHとＶLドメインは、ペプチドリンカーを介して結合されてｓｃＦｖ断片を形成する。
【００９７】
本明細書に開示されたＣＡＲ構築物は、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含んでよい。いくつかの例では、ＣＡＲは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ、ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。このような細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来してよい。また、ＣＡＲ構築物は、共刺激受容体、例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１又はＬＦＡ−１に由来してよい１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含んでよい。
【００９８】
本明細書に開示されたＣＡＲ構築物は、適切な細胞表面受容体、例えばＣＤ２８又はＣＤ８から得られてよい膜貫通ヒンジドメインをさらに含んでよい。
【００９９】
本発明は、本明細書に開示された任意の抗ＴＲＯＰ２  ＣＡＲをコードする単離された核酸分子及びベクター、並びに、宿主免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及びナチュラルキラー細胞）などの、上記核酸分子又はベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。ＴＲＯＰ２に特異的な抗体結合断片を含む、抗ＴＲＯＰ２  ＣＡＲを発現する免疫細胞は、ＴＲＯＰ２を発現する癌を治療するために用いることができる。したがって、本明細書は、ＴＲＯＰ２を発現する癌に罹患する対象を選択し、かつＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する治療有効量の免疫細胞を対象に投与することにより、ＴＲＯＰ２+癌に罹患する上記対象を治療する方法をさらに提供する。
【０１００】
医薬組成物
本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体、コードする核酸又は核酸セット、このような核酸を含むベクター又は上記ベクターを含む宿主細胞、及び上記抗ＴＲＯＰ２抗体を含むＡＤＣ及び／又はＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する免疫細胞は、薬学的に許容可能な担体（ｃａｒｒｉｅｒ）（賦形剤）と混合することにより、標的疾患を治療するための医薬組成物を形成することができる。「許容可能」とは、担体が組成物の活性成分と適合性でなければならず（かつ好ましくは活性成分を安定化することができ）、かつ治療される対象にとって有害でないことを指す。薬学的に許容可能な賦形剤（担体）は、本分野で周知の緩衝液を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（２０００年）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ出版社、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編を参照する。
【０１０１】
本発明の方法に用いられる医薬組成物は、凍結乾燥製剤、又は水溶液形態の薬学的に許容可能な担体、賦形剤若しくは安定剤を含んでよい。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（２０００年）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ出版社、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）。許容可能な担体、賦形剤若しくは安定剤は、使用された用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、かつリン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤、防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブタノール又はベンジルアルコール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルなどのｐ−ヒドロキシ安息香酸アルキルエステル、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖、二糖及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、及び／又はＴＷＥＥＮTM、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳTM又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでよい。
【０１０２】
いくつかの例では、本明細書に記載の医薬組成物は、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５年）、Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０年）、米国特許第４４８５０４５号及び第４５４４５４５号に記載されるような本分野で既知の方法で製造可能な抗体（コードする核酸又はＡＤＣ）を含むリポソームを含む。増強された循環時間を有するリポソームは、米国特許第５０１３５５６号に記載される。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、規定の孔径のフィルタを通して押し出されて、所望の直径を有するリポソームを生成する。
【０１０３】
抗体、コードする核酸又はＡＤＣは、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンのマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）のマイクロカプセルなどの、例えばコアセルベーション（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ）技術又は界面重合（ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）によりそれぞれ製造されるマイクロカプセル、コロイド医薬送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルジョン（ｍａｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ）に封入されてもよい。このような技術は、本分野で既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ出版社（２０００年）を参照する。
【０１０４】
他の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、持続放出形態で製剤化されてよい。持続放出調製物の適切な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、上記マトリックスは、フィルム又はマイクロカプセルなどの成形品の形態である。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７−エチル−Ｌ−グルタミン酸塩のコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴTM（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドで構成された注射可能なマイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、イソ酪酸酢酸スクロース及びポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１０５】
インビボ投与のための医薬組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜による濾過により容易に実現される。治療用抗体組成物は、一般的に、無菌入口を有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル内に配置される。
【０１０６】
本明細書に記載の医薬組成物は、経口、非経口若しくは直腸投与、又は吸入若しくは吹送による投与のための錠剤、丸剤、カプセル、粉末、粒子、溶液、懸濁液、又は坐剤などの単位剤形であってよい。
【０１０７】
錠剤などの固体組成物を製造するために、主な活性成分を、医薬担体、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム又はガムなどの従来の打錠成分、及び、水などの他の医薬希釈剤と混合することにより、本発明の化合物又はその無毒性の薬学的に許容可能な塩の均質混合物を含む固体予備製剤組成物を形成することができる。これらの予備製剤組成物を均質なものと呼ぶ場合とは、活性成分が組成物全体に均一に分散されることにより、組成物が錠剤、丸剤及びカプセル剤などの同等に有効な単位剤形に容易に細分されてよいことを指す。次に、固体予備製剤組成物は、本発明の活性成分を０．１〜約５００ｍｇ含む上記タイプの単位剤形に細分される。新規組成物の錠剤又は丸剤をコーティングするか又は他の方式で配合することにより、長期作用という利点を有する剤形を提供することができる。例えば、錠剤又は丸剤は、内部用量及び外部用量成分を含んでよく、後者は、前者の外被の形態である。２種の成分は、胃での崩壊を阻止し、内部成分が十二指腸へ無傷で送られるか又は放出を遅延させることを可能にするための腸溶性層により分離することができる。多くの材料は、このような腸溶性層又はコーティングに用いられてよく、このような材料は、複数種のポリマー酸、及び、ポリマー酸と、シェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースなどの材料との混合物を含む。
【０１０８】
適切な界面活性剤は、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔａｎ）（例えば、ＴｗｅｅｎTM  ２０、４０、６０、８０又は８５）及び他のソルビタン（例えば、ＳｐａｎTM  ２０、４０、６０、８０又は８５）などの非イオン性試薬を含む。界面活性剤を有する組成物は、０．０５〜５％の界面活性剤を容易に含み、かつ０．１〜２．５％であってよい。必要に応じて、マンニトール又は他の薬学的に許容可能な担体などの他の成分を添加することができることが理解される。
【０１０９】
適切なエマルジョンは、ＩｎｔｒａｌｉｐｉｄTM、ＬｉｐｏｓｙｎTM、ＩｎｆｏｎｕｔｒｏｌTM、ＬｉｐｏｆｕｎｄｉｎTM及びＬｉｐｉｐｈｙｓａｎTMなどの市販の脂肪エマルジョンを使用して製造することができる。活性成分は、予備混合エマルジョン組成物中に溶解されてよく、油（例えば、大豆油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油又はアーモンド油）中と、リン脂質（例えば、レシチン、大豆リン脂質又は大豆レシチン）及び水を混合した後に形成されたエマルジョン中に溶解されてよい。グリセロール又はグルコースなどの他の成分を添加することによりエマルジョンの張性を調節することができることが理解される。適切なエマルジョンは、一般的に、最大２０％、例えば５〜２０％の油を含有する。
【０１１０】
エマルジョン組成物は、抗体とＩｎｔｒａｌｉｐｉｄTM又はその成分（大豆油、レシチン、グリセロール及び水）とを混合することにより製造されるものであってよい。
【０１１１】
吸入又は吹送のための医薬組成物は、薬学的に許容可能な水性又は有機溶媒又はそれらの混合物中の溶液及び懸濁液、並びに粉末を含む。液体又は固体組成物は、上記のような適切な薬学的に許容可能な賦形剤を含んでよい。いくつかの実施形態では、組成物は、経口又は鼻呼吸経路によって投与されて、局所的又は全身的効果を達成する。
【０１１２】
好ましくは、無菌の薬学的に許容可能な溶媒中の組成物は、ガスを用いて噴霧されてよい。噴霧される溶液を噴霧装置から直接的に吸入してよいか、又は噴霧装置を、フェイスマスク、テント、又は間欠的陽圧呼吸機に取り付けてよい。溶液、懸濁液又は粉末組成物は、適切な方式で製剤を送達する装置から投与されてよく、好ましくは経口的又は経鼻的に投与される。
【０１１３】
治療及び診断の方法
本明細書に記載されるように、任意の抗ＴＲＯＰ２抗体、コードする核酸又は核酸セット、このような核酸を含むベクター、抗ＴＲＯＰ２抗体を含むＡＤＣ、及びＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＴＲＯＰ２+癌細胞などのＴＲＯＰ２+疾患細胞の阻害及び／又は排除に用いられて、さらにＴＲＯＰ２+疾患細胞に関連する疾患又は障害の治療に役立つ。
【０１１４】
本明細書に開示された方法を実施するために、本明細書に記載の有効量の医薬組成物は、例えば、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、髄腔内、経口、吸入又は局所的経路などの適切な経路を介して、一定期間にわたるボーラス又は連続注入による静脈内投与のように、治療を必要とする対象（例えば、ヒト）に投与することができる。ジェット噴霧器及び超音波噴霧器を含む、液体製剤のための市販の噴霧器は、投与に用いることができる。液体製剤は、直接的に噴霧されてよいのに対し、凍結乾燥粉末は、再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）後に噴霧されてよい。又は、本明細書に記載の抗体は、フルオロカーボン製剤及び計量式吸入器を用いて噴霧されるか、又は凍結乾燥及び粉砕粉末として吸入されてよい。
【０１１５】
本明細書に記載の方法により治療される対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであってよい。哺乳動物は、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類動物、馬、犬、猫、マウス及びラットを含むが、これらに限定されない。治療を必要とするヒト対象は、ＴＲＯＰ２+疾患細胞に関連する標的疾患／障害に罹患するか、罹患するリスクがあるか又は罹患する疑いがあるヒト患者であってよい。いくつかの実施形態では、ＴＲＯＰ２+疾患細胞は、癌細胞、例えば、上皮癌細胞（すなわち、上皮細胞に由来するもの）である。例としては、卵巣癌細胞、乳癌細胞、腎臓癌細胞、肺癌細胞、結腸直腸癌細胞、及び脳癌細胞が挙げられるが、これらに限定されない。標的疾患又は障害に罹患する対象は、研究所検査、臓器機能検査、ＣＴスキャン、又は超音波などの従来の医学的検査によって同定されてよい。このような標的疾患／障害に罹患する疑いがある対象は、疾患／障害の１種以上の症状を示す可能性がある。疾患／障害のリスクがある対象は、その疾患／障害についての１種以上のリスク因子を有する対象であってよい。
【０１１６】
本明細書に使用されるように、「有効量」とは、単独で又は１種以上の他の活性剤と組み合わせて投与するかに関わらず対象に治療効果を与えるのに必要な各活性剤の量を指す。いくつかの実施形態では、治療効果は、ＴＲＯＰ２活性又はＴＲＯＰ２+細胞の活性を低下させることである。抗体又はこのような抗体を含む他の治療剤（例えば、ＡＤＣ又はＣＡＲ−Ｔ細胞）の量が治療効果を達成したか否かを決定することは、当業者には明らかである。当業者に認識されるように、有効量は、治療される特定の障害、障害の重篤度、（年齢、身体的状態、サイズ、性別及び体重を含む）個々の患者のパラメータ、治療持続時間、併用治療の性質（もしあれば）、特定の投与経路、及び医療関係者の知識及び専門的技術の範囲内の同様の因子に依存する。これらの因子は、当業者に周知であり、かつ従来の実験のみにより対処することができる。一般的に、個々の成分又はそれらの組み合わせの最大用量、すなわち健全な医学的判断に従った最大安全用量を使用することが好ましい。
【０１１７】
半減期などの経験的考察は、一般的に用量の決定に役立つ。例えば、ヒト免疫系に適合する抗体（例えば、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体）を用いて、抗体の半減期を延長し、かつ抗体が宿主の免疫系に攻撃されるのを防ぐことができる。投与頻度は、治療過程にわたって決定され調整されてよく、必ずしもではないが、一般的に、標的疾患／障害の治療及び／又は阻害及び／又は改善及び／又は遅延に基づく。又は、抗体の持続性連続放出製剤は、適切である可能性がある。持続放出を達成するための様々な製剤及び装置は、本分野で既知である。
【０１１８】
一例では、本明細書に記載の抗体の用量は、１種以上の抗体を投与した個体において経験的に決定されてよい。個体に漸増用量のアンタゴニストを投与する。アンタゴニストの有効性を評価するために、疾患／障害の指標を追跡してよい。
【０１１９】
一般的に、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体又はこのような抗体を含むＡＤＣの投与には、初期候補用量は、約２ｍｇ／ｋｇであってよい。本開示の目的のために、一般的な１日用量は、上述因子に応じて、約０．１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上のうちの任意の用量であってよい。数日以上にわたる反復投与では、障害に応じて、所望の症状緩和が生じるまで、又は標的疾患若しくは障害若しくはその症状を緩和するのに十分な治療レベルが達成されるまで、治療を持続する。例示的な投与計画は、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、続いて毎週の抗体の約１ｍｇ／ｋｇの維持用量、又は続いて１週おきの約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を投与することを含む。しかしながら、医師が達成を望む薬物動態学的減衰のパターンに応じて、他の投与計画が有用である可能性がある。例えば、毎週１〜４回の用量投与が企図される。いくつかの実施形態では、約３μｇ／ｍｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇ及び約２ｍｇ／ｋｇ）の用量を用いてよい。いくつかの実施形態では、用量の投与頻度は、毎週、２週ごと、４週ごと、５週ごと、６週ごと、７週ごと、８週ごと、９週ごと、若しくは１０週ごとに１回、又は毎月、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、若しくはそれよりも長い期間に１回である。このような治療の進行は、従来の技術及びアッセイにより容易にモニタリングされる。投与計画（使用される抗体を含む）は、時間と共に変化してよい。
【０１２０】
本開示の目的のために、本明細書に記載の抗体の適切な用量は、使用される特異性抗体、抗体及び／又は非抗体ペプチド（又はその組成物）、疾患／障害のタイプ及び重篤度、抗体が予防又は治療目的で投与されるか否か、以前の治療、患者の病歴及びアンタゴニストに対する応答、並びに担当医の判断に依存する。一般的に、臨床医は、所望の結果を達成する用量に達するまで抗体を投与する。いくつかの実施形態では、所望の結果は、血栓形成の減少である。用量が所望の結果をもたらしたか否かを決定する方法は、当業者には明らかである。１種以上の抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療であるか予防であるか、及び熟練した医師にとって既知である他の因子に応じて、連続的又は間欠的であってよい。抗体の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であってもよく、例えば、標的疾患又は障害を発症する前、間、又は後の間隔を空けた一連の用量であってもよい。
【０１２１】
本明細書に使用されるように、「治療」という用語は、障害、疾患の症状、又は疾患若しくは障害に対する素因の治癒、治療、緩和、軽減、改変、是正、寛解、改善、又はそれへの影響を目的として、標的疾患若しくは障害、疾患／障害の症状、又は疾患／障害に対する素因を有する対象に、１種以上の活性剤を含む組成物を適用するか又は投与することを指す。
【０１２２】
標的疾患／障害の緩和には、疾患の発症若しくは進行の遅延、又は疾患の重篤度の低減が含まれる。疾患の緩和は、必ずしも治癒的な結果を必要としない。本明細書で使用されるように、標的疾患又は障害の発症の「遅延」とは、疾患の進行を遅延させ、阻止し、遅くさせ、妨害し、安定化させ、及び／又は延期させることを指す。この遅延は、疾患の履歴及び／又は治療される個体に応じて、様々な時間の長さであってよい。疾患の発症を「遅延」若しくは緩和するか、又は疾患の発病を遅延させる方法は、このような方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患の１種以上の症状を発症する可能性を低減し、及び／又は所与の時間枠内で症状の程度を低減する方法である。このような比較は、一般的に、統計学的に有意な結果を得るのに十分な複数の対象を使用する臨床研究に基づくものである。
【０１２３】
疾患の「発症」又は「進行」とは、疾患の初期症状及び／又はその後の進行を指す。本分野で周知の標準的な臨床技術を用いて疾患の発症を検出して評価してよい。しかしながら、発症とは、検出できない可能性がある進行も指す。本開示の目的のために、発症又は進行とは、症状の生物学的経過を指す。「発症」には、発生、再発、及び発病が含まれる。本明細書で使用されるように、標的疾患若しくは障害の「発症」又は「発生」には、初期発症及び／又は再発が含まれる。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、１種又は２種の標的抗原のインビボ活性を少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上）阻害するのに十分な量で、治療を必要とする対象に投与される。他の実施形態では、上記抗体は、標的抗原の活性レベルを少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上）低下させるのに有効な量で投与される。
【０１２５】
医学分野の当業者にとって既知である従来の方法を用いて、治療される疾患のタイプ又は疾患の部位に応じて対象に医薬組成物を投与することができる。このような組成物は、他の従来の経路を介して投与されてもよく、例えば、経口的に、非経口的に、吸入噴霧によって、局所的に、直腸内に、経鼻的に、口腔内に、膣内に、又は移植されたデポを介して投与されてもよい。本明細書で使用される用語「非経口」は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。また、それは、１ヶ月、３ヶ月、若しくは６ヶ月のデポ注射可能又は生分解性の材料及び方法の使用などの注射可能なデポ投与経路を介して対象に投与されてよい。いくつかの例では、医薬組成物は、眼内又は硝子体内に投与される。
【０１２６】
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール及びポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）などの様々な担体を含んでよい。静脈内注射の場合、水溶性抗体を点滴法によって投与してよいことにより、抗体及び生理学的に許容可能な賦形剤を含む医薬製剤が注入される。生理学的に許容可能な賦形剤は、例えば、５％デキストロース、０．９％食塩水、リンゲル溶液又は他の適切な賦形剤を含んでよい。筋肉内製剤、例えば、抗体の適切な可溶性塩形態の無菌製剤を、注射用水、０．９％食塩水、又は５％グルコース溶液などの医薬賦形剤中に溶解させて投与することができる。
【０１２７】
一実施形態では、抗体は、部位特異的又は標的化局所送達技術により投与される。部位特異的又は標的化局所送達技術の例としては、抗体の様々な移植可能なデポ供給源、又は注入カテーテル、留置カテーテル若しくはニードルカテーテルなどの局所送達カテーテル、合成グラフト、外膜ラップ、シャント及びステント若しくは他の移植可能な装置、部位特異的担体、直接注射、又は直接適用が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号及び米国特許第５９８１５６８号を参照する。
【０１２８】
アンチセンスポリヌクレオチド、発現ベクター、又はサブゲノムポリヌクレオチドを含む治療用組成物の標的化送達が用いられてもよい。受容体媒介性ＤＮＡ送達技術は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３年）１１：２０２、Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編）（１９９４年）、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８年）２６３：６２１、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４年）２６９：５４２、Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０年）８７：３６５５、及びＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１年）２６６：３３８に記載される
【０１２９】
遺伝子治療プロトコルにおいて、ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするもの）を含む治療用組成物は、局所投与を行うために、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡという範囲内で投与される。いくつかの実施形態では、遺伝子治療プロトコルにおいて、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、及び約２０μｇ〜約１００μｇ又はそれ以上のＤＮＡの濃度範囲を用いてもよい。
【０１３０】
本明細書に記載の治療用のポリヌクレオチド及びポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを用いて送達されてよい。遺伝子送達ビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）は、ウイルス又は非ウイルス由来のものであってよい（全体的に、Ｊｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４年）１：５１、Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４年）５：８４５、Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９５年）１：１８５、及びＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４年）６：１４８を参照）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物又は異種プロモータ及び／又はエンハンサを用いて誘導されてよい。コード配列の発現は、構成的又は調節性のいずれかであってよい。
【０１３１】
所望のポリヌクレオチドの送達及び所望の細胞における発現のためのウイルスベースのベクターは、本分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルは、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号、第ＷＯ９４／０３６２２号、第ＷＯ９３／２５６９８号、第ＷＯ９３／２５２３４号、第ＷＯ９３／１１２３０号、第ＷＯ９３／１０２１８号、第ＷＯ９１／０２８０５号、米国特許第５２１９７４０号及び第４７７７１２７号、英国特許第２２００６５１号、及び欧州特許第０３４５２４２号を参照）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビス（Ｓｉｎｄｂｉｓ）ウイルスベクター、セムリキ（Ｓｅｍｌｉｋｉ）森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバー（Ｒｏｓｓ  Ｒｉｖｅｒ）ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）、及びベネズエラウマ脳炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ  ｅｑｕｉｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ  ＶＲ１２４９、ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、第ＷＯ９３／０３７６９号、第ＷＯ９３／１９１９号、第ＷＯ９４／２８９３８号、第ＷＯ９５／１１９８４号及び第ＷＯ９５／００６５５号を参照）を含むが、これらに限定されない。また、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２年）３：１４７に記載されるような死滅アデノウイルスに結合したＤＮＡの投与を用いてもよい。
【０１３２】
また、死滅アデノウイルスのみに結合されるか又は結合されないポリカチオン凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２年）３：１４７を参照）、リガンド結合（ｌｉｇａｎｄ−ｌｉｎｋｅｄ）ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９年）２６４：１６９８５を参照）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５８１４４８２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／０７９９４号、第ＷＯ９６／１７０７２号、第ＷＯ９５／３０７６３号及び第ＷＯ９７／４２３３８号を参照）、及び核酸電荷中和（ｎｕｃｌｅｉｃ  ｃｈａｒｇｅ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）又は細胞膜との融合を含むがこれらに限定されない非ウイルス送達ビヒクル及び方法を用いてもよい。また、裸のＤＮＡを用いてもよい。例示的な裸のＤＮＡの導入方法は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／１１０９２号及び米国特許第５５８０８５９号に記載される。遺伝子送達ビヒクルとして働くことができるリポソームは、米国特許第５４２２１２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、第ＷＯ９４／２３６９７号、第ＷＯ９１／１４４４５号、及び欧州特許第０５２４９６８号に記載される。他の方法は、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９４年）１４：２４１１、及びＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４年）９１：１５８１に記載される。
【０１３３】
本明細書に記載の方法において使用される特定の投与計画、すなわち、用量、時期及び反復は、特定の対象及び対象の病歴に依存する。
【０１３４】
ＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する免疫細胞を疾患の治療に用いる場合、患者は、体重１キログラムあたり約１０5〜１０10個又はそれ以上の細胞（細胞／Ｋｇ）という治療上有効な用量で、Ｔリンパ球又はＮＫ細胞などのこのような免疫細胞を注入することにより治療されてよい。所望の応答が達成されるまで、注入の繰り返しの頻度及び回数は、患者の耐容性に応じて実行されてよい。適切な注入用量及びスケジュールは、患者によって異なるが、特定の患者について担当医が決定できる。一般的には、約１０6個の細胞／Ｋｇの初期用量を注入し、１０8個以上の細胞／Ｋｇまで増加させる。ＩＬ−２は、注入細胞を増幅するために同時投与されてよい。ＩＬ−２の量は、体表面積１平方メートルあたり約１−５ｘ１０6国際単位であってよい。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、１種以上の抗体、又は抗体と別の適切な治療剤との組み合わせは、治療を必要とする対象に投与されてよい。上記抗体、このような抗体を含むＡＤＣ及び／又はＣＡＲ−Ｔ細胞は、試薬の有効性を増強し及び／又は補足するための他の試薬と組み合わせて使用されてもよい。
【０１３６】
標的疾患／障害の治療効果は、本分野で周知の方法によって評価されてよい。
【０１３７】
本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体は、試料中のＴＲＯＰ２+細胞の存在又はレベルを検出するために用いられてもよい。このような診断アッセイは、インビトロ又はインビボで行われてよい。
【０１３８】
抗ＴＲＯＰ２抗体は、インビボ又はインビトロでの診断目的のために、検出可能な標識（例えば、造影剤などのイメージング剤）に複合体化される。本明細書に使用されるように、「複合体化（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）」又は「付着（ａｔｔａｃｈｅｄ）」とは、２つの実体が、好ましくは２つの実体間の結合の治療／診断効果を達成するのに十分な親和性で結合することを指す。２つの実体間の結合は、直接的であってもよく、ポリマーリンカーなどのリンカーを介して行われてもよい。複合体化又は付着は、共有又は非共有結合、並びに、例えば、１つの実体が別の実体上又は内にあるか、又はこれら２つの実体のうちの１つ又は２つがいずれもミセル（ｍｉｃｅｌｌｅ）などの第３実体上又は内にある封入などの他の形態の結合を含んでよい。
【０１３９】
一例では、本明細書に記載の抗ＴＲＯＰ２抗体は、検出可能な標識に付着してよく、上記検出可能な標識は、検出可能なシグナルを直接的又は間接的に放出できる化合物であり、さらにアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）は、インビトロ又はインビボで検出され、測定され、及び／又は定性されてよい。このような「検出可能な標識」の例としては、蛍光標識、化学発光標識、比色標識、酵素標識、放射性同位元素、及びビオチンなどの親和性標識が挙げられるが、これらに限定されないことが意図される。このような標識は、従来の方法によって、直接的又は間接的にアプタマーに複合体化されてよい。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、放射性分子、放射性医薬、又は酸化鉄粒子であってよい、インビボでＴＲＯＰ２+細胞をイメージングするのに適する試薬である。インビボでのイメージングに適する放射性分子は、122Ｉ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、76Ｂｒ、77Ｂｒ、211Ａｔ、225Ａｃ、177Ｌｕ、153Ｓｍ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、67Ｃｕ、213Ｂｉ、212Ｂｉ、212Ｐｂ及び67Ｇａを含むが、これらに限定されない。インビボでのイメージングに適する例示的な放射性医薬は、111Ｉｎヒドロキシキノリン、131Ｉヨウ化ナトリウム、99mＴｃメブロフェニン（Ｍｅｂｒｏｆｅｎｉｎ）、99mＴｃ赤血球、123Ｉヨウ化ナトリウム、99mＴｃエキサメタジム（Ｅｘａｍｅｔａｚｉｍｅ）、99mＴｃ大凝集アルブミン（Ｍａｃｒｏａｇｇｒｅｇａｔｅ  Ａｌｂｕｍｉｎ）、99mＴｃメドロネート（Ｍｅｄｒｏｎａｔｅ）、99mＴｃメルチアチド（Ｍｅｒｔｉａｔｉｄｅ）、99mＴｃオキシドロネート（Ｏｘｉｄｒｏｎａｔｅ）、99mＴｃペンテテート（Ｐｅｎｔｅｔａｔｅ）、99mＴｃペルテクネテート（Ｐｅｒｔｅｃｈｎｅｔａｔｅ）、99mＴｃ  Ｓｅｓｔａｍｉｂｉ、99mＴｃ硫黄コロイド、99mＴｃテトロホスミン（Ｔｅｔｒｏｆｏｓｍｉｎ）、タリウム−２０１及びキセノン−１３３を含む。レポータはまた、組織試料中のＴＲＯＰ２+細胞によって媒介される疾患を検出するための蛍光団などの染料であってよい。
【０１４１】
インビトロで診断アッセイを行うために、抗ＴＲＯＰ２抗体を、ＴＲＯＰ２+細胞を含む疑いがある試料と接触させてよい。抗体及び試料は、抗体をＴＲＯＰ２抗原に結合させるために、適切な条件下で適切な期間作用してよい。次に、このような相互作用は、ＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳなどの従来の方法により検出されてよい。インビボで診断アッセイを行うために、標識に結合した適量の抗ＴＲＯＰ２抗体を、検査を必要とする対象に投与してよい。標識された抗体の存在は、従来の方法により標識から放出されたシグナルに基づいて検出されてよい。
【０１４２】
治療及び診断のためのキット
本開示は、ＴＲＯＰ２+疾患細胞を阻害し及び／又は排除することによりこのような疾患細胞に関連する疾患／障害を緩和するためのキットをさらに提供する。このようなキットは、抗ＴＲＯＰ２抗体、このような抗体を含むＡＤＣ、又はＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲポリペプチドを発現する免疫細胞、例えば、本明細書に記載のもののいずれかを含む１つ以上の容器を含んでよい。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の任意の方法による使用のための説明書を含んでよい。含まれる説明書は、本明細書に記載されるような標的疾患を治療するか、発症を遅らせるか、又はそれを緩和するための抗ＴＲＯＰ２抗体、ＡＤＣ又は免疫細胞の投与についての記載を含んでよい。キットは、個体が標的疾患に罹患するか否かを同定することに基づいて、治療に適した個体を選択することについての記載をさらに含んでよい。他の実施形態では、該説明書は、標的疾患のリスクがある個体に抗体、ＡＤＣ、又は免疫細胞を投与することについての記載を含む。
【０１４４】
抗ＴＲＯＰ２抗体、このような抗体を含むＡＤＣ、又はＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する免疫細胞の使用についての説明書は、一般的に、意図される治療のための用量、投与スケジュール及び投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）又はサブユニット用量であってよい。本発明のキットにおいて提供された説明書は、一般的に、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）における書面の説明書であるが、機械可読説明書（例えば、磁気又は光学記憶ディスクに保持された説明書）も許容される。
【０１４５】
ラベル又は添付文書は、組成物が、上皮癌などのＴＲＯＰ２+細胞に関連する疾患又は障害を治療し、発症を遅らせ、及び／又はそれを緩和するために用いられることを示す。説明書は、本明細書に記載の任意の方法を実施するために提供されてよい。
【０１４６】
本発明のキットは、適切な包装内にある。適切な包装は、バイアル、ボトル、タンク、柔軟な包装（例えば、密封されたポリエステルフィルム又はプラスチックバッグ）などを含むが、これらに限定されない。吸入器、経鼻投与用装置（例えば、噴霧器）、又はミニポンプなどの注入装置などの、特定の装置と組み合わせて使用されるための包装がまた企図される。キットは、無菌入口を有してよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってよい）。容器は、無菌入口を有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、抗ＴＲＯＰ２抗体、このような抗体を含むＡＤＣ、又は本明細書に記載のＴＲＯＰ２を標的とするＣＡＲを発現する免疫細胞である。
【０１４７】
キットは、緩衝液及び解釈情報などの追加的な構成要素を選択的に提供してよい。一般的に、キットは、容器上の又は容器に付随するラベル又は添付文書を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、上記キットの内容物を含む製品を提供する。
【０１４８】
本明細書は、試料中のＴＲＯＰ２+細胞を検出するためのキットをさらに提供する。このようなキットは、本明細書に記載の任意の抗ＴＲＯＰ２抗体を含んでよい。いくつかの場合では、上記抗ＴＲＯＰ２抗体は、本明細書に記載の検出可能な標識に複合体化されてよい。本明細書に使用されるように、「複合体化」又は「付着」とは、２つの実体が、好ましくは２つの実体間の結合の治療／診断効果を達成するのに十分な親和性で結合することを指す。２つの実体間の結合は、直接的であってもよく、ポリマーリンカーなどのリンカーを介して行われてもよい。複合体化又は付着は、共有又は非共有結合、並びに、例えば、１つの実体が別の実体上又は内にあるか、又はこれら２つの実体のうちの１つ又は２つがいずれもミセルなどの第３実体上又は内にある封入などの他の形態の結合を含んでよい。
【０１４９】
代替的又は追加的に、キットは、抗ＴＲＯＰ２抗体に結合できる第２抗体を含んでよい。キットは、抗ＴＲＯＰ２抗体を用いてＴＲＯＰ２+を検出することについての説明書をさらに含んでよい。
【０１５０】
一般的な技術
本開示の実施は、別途の記載のない限り、本分野の技術的範囲内の分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技術を利用する。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年）コールドスプリングハーバー出版社、オリゴヌクレオチド合成（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ出版社、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９８９年）Ａｃａｄｅｍｉｃ出版社、動物細胞培養（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７年）、細胞及び組織培養の紹介（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ及びＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８年）Ｐｌｅｎｕｍ出版社、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、及びＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３−８年）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ出版社、酵素学的方法（Ａｃａｄｅｍｉｃ出版社）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ及びＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）、哺乳動物細胞の遺伝子導入ベクター（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ及びＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年）、ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１年）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ出版社、１９９９年）、免疫生物学（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ及びＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７年）、抗体（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７年）、抗体：実用的な方法（Ｄ．  Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ出版社、１９８８−１９８９年）、モノクローナル抗体：実用的な方法（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ及びＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ出版社、２０００年）、使用抗体：研究所マニュアル（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ及びＤ．Ｌａｎ（コールドスプリングハーバー研究所出版社、１９９９年））、Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ及びＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ出版社、１９９５年）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、第Ｉ及びＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編、１９８５年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ及びＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８５年）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ及びＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８４年）、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８６年）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ｌＲＬ出版社）（１９８６年）、及びＢ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）などの文献において完全に説明される。
【０１５１】
さらに詳述することなく、当業者であれば、上記記載に基づいて、本発明を最大限に利用できると考えられる。したがって、以下の特定の具体的な実施例は、単なる例示として解釈されるべきであり、任意の方式で本開示の残りの部分を限定するものではない。本明細書で引用される全ての出版物は、本明細書で参照される目的又は主題のために参照により組み込まれる。
【実施例】
【０１５２】
実施例１  抗ＴＲＯＰ２抗体の産生
試薬及び一般的な方法
ハイブリドーマ細胞培地（ＰＦＨＭ−II無タンパク質ハイブリドーマ培地、＃１２０４００７７）は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから購入された。
【０１５３】
標準的な方法及びＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ（＃１５５９６０１８）のＴＲＩｚｏｌ試薬を用いてＲＮＡを単離した。ＴａｋａｒａからのｃＤＮＡ合成キット（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  II第１鎖ｃＤＮＡ合成キット、＃６２１０Ａ）を用いて得られたｃＤＮＡ分子を生成した。ＴａｋａｒａのＰｒｅｍｉｘ  Ｔａｑ（＃ＲＲ９０１Ａ）を用いて抗体Ｖ領域の増幅を行った。標準的なＰＣＲプライマーセット（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ＃ＴＢ３２６）は、Ｎｏｖａｇｅｎから入手された。（いずれもＮＥＢからの）ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄIII、ＳａｌＩ、及びＴ４リガーゼの使用を含む標準的な技術を用いて遺伝子をｐＥＴ２８ａベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ、＃６９８６４）にクローニングした。ＱＩＡＥＸ  II  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキット（ＱＩＡｇｅｎ、＃２００２１）を用いることにより、全てではなく一部のオリゴヌクレオチド分子を精製した。
【０１５４】
ＭＤＡ−４６８及びＨｅｐＧ２細胞培養物を、３７℃及び５％ＣＯ2の雰囲気下で単層培養物としてインビトロで培養した。必要に応じて、腫瘍細胞を定期的に継代した。
【０１５５】
抗ＴＲＯＰ２抗体を発見するための抗体ライブラリのスクリーニング
以前にＵＳ２０１５／０１５３３５６に記載されるように、プロテオームとペプチド抗原の混合物を用いて大きなモノクローナル抗体ライブラリ（合計＞１０００００）を生成した。抗体ライブラリは、一連の高密度抗体アレイに分割され、その後、癌腫瘍試料及びＦＤＡ正常組織パネルに対してスクリーニングされた。
【０１５６】
抗体ライブラリ内の多くの抗体（ＴＲＯＰ２−Ａｂ７、ＴＲＯＰ２−Ａｂ８、ＴＲＯＰ２−Ａｂ２２、ＴＲＯＰ２−Ａｂ４０、ＴＲＯＰ２−Ａｂ４６、ＴＲＯＰ２−Ａｂ５０、及びＴＲＯＰ２−Ａｂ５１）は、ＭＤＡ−４６８細胞株を差別的に標的とすることが発見された。抗体を用いて免疫沈降を行い、その後質量分析を行うと、標的タンパク質をＴＲＯＰ２として同定することができた。その後、標準的なアンチセンスオリゴヌクレオチド技術を用いてＴＲＯＰ２をノックアウトし、かつＴＲＯＰ２を過剰発現することにより、ＴＲＯＰ２がこれらの抗体の標的であることが確認された。
【０１５７】
抗体クローンの産生
個々のハイブリドーマクローンを、１０ｍＬのハイブリドーマ細胞培地（ＰＦＨＭ−IIタンパク質を含まないハイブリドーマ培地）を含むＴ２５フラスコで培養した。８０％コンフルエントになるまで細胞を３７℃で増殖させた。次に、培地を除去し、かつ１ｘＰＢＳで細胞を２回洗浄した。ＴＲＩｚｏｌ試薬（１ｍＬ体積）をフラスコに直接添加し、かつピペット混合により細胞を溶解させた。次に、細胞溶解物をＴ２５フラスコから回収し、かつ標準的な方法を用いて全ＲＮＡを単離した。続いて、ＲＮＡ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ  ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）で測定した。その後、Ｔａｋａｒａ  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＩＩ第１鎖ｃＤＮＡ合成キット方法に従って、単離されたＲＮＡから鎖ｃＤＮＡを産生した。その後、Ｎｏｖａｇｅｎの使用方法ＴＢ３２６に従って、得られたｃＤＮＡのハイブリドーマＶ領域の増幅を行った。以下の表３に示すようなプライマー対は、増幅に用いられた。
【０１５８】
【表３】
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【表４】
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【０１５９】
１％の寒天ゲルでＰＣＲ産物を検査した。ＱＩＡｇｅｎ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを用いて陽性ＰＣＲ産物を回収し、次にプライマー配列に対応する制限酵素（ＮＥＢ）を用いてそれをｐＥＴ２８ａベクターにクローニングした。ＰＣＲ産物が挿入されたｐＥＴ２８ａベクターをＤＨ５α細菌細胞中に形質転換し、かつアンピシリン陽性寒天プレート上で培養した。ＭｕＩｇＧＶＨ３’−２、ＭｕＩｇｋＶＬ３’−１、又はＭｕＩｇｌＶＬ３’−１プライマーを用いて、細菌クローン毎にＳａｎｇｅｒ配列決定を行った。得られた配列の一致性を比較することにより、標的ＶHとＶL配列をそれぞれ確認した。その後、ＩＧＭＴデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）でＶH及びＶL配列を分析することにより、ＶHとＶLのＶ領域、フレームワーク領域及びＣＤＲ要素を提供した。
【０１６０】
実施例２  抗ＴＲＯＰ２抗体の評価
トリプシン−ＥＤＴＡで部分消化し、その後１０００ｒｐｍで５分間遠心分離することにより、ＴＲＯＰ２を過剰発現するＭＤＡ−４６８細胞（ＴＲＯＰ２+ＭＤＡ−４６８）とＴＲＯＰ２の発現に対して陰性であるＨｅｐＧ２細胞（ＴＲＯＰ２−ＨｅｐＧ２）とを収集した。細胞を冷ＰＢＳに再懸濁し、かつ等分した。抗ＴＲＯＰ２抗体をＰＢＳで希釈し、かつＴＲＯＰ２+ＭＤＡ−４６８細胞又はＴＲＯＰ２-ＨｅｐＧ２細胞に添加した。細胞溶液を混合し、暗所で４℃でインキュベートし、かつＰＢＳで洗浄した後、（検出のための）二次抗体複合体を添加した。インキュベートした後、細胞をＰＢＳで洗浄し、固定剤で固定し、その後ＦＡＣＳ分析を行った。図１Ａ−１Ｇに示すように、これらの抗体は、ＴＲＯＰ２+ＭＤＡ−４６８への飽和結合を示した。これらの抗体は、ＴＲＯＰ２-ＨｅｐＧ２への飽和結合を示さなかった。
【０１６１】
ＥＬＩＳＡ滴定実験を用いて抗原結合アッセイにおいて抗体を試験した。抗体を、異なる濃度の組換えＴＲＯＰ２タンパク質［ｒＰｒｏｔｅｉｎ］と共にインキュベートした。以下の表４に示すように、全ての抗体は、＜０．１〜０．１９ｎＭの親和性で結合した。
【０１６２】
ＭＤＡ−４６８細胞に全ての７つの抗ＴＲＯＰ２抗体クローンを投与した。実験の目的のために、ＩｇＧ単独の投与を対照実験とした。用量投与後、細胞生存率を決定することにより全ての抗体クローンの間接細胞毒性を評価した。２種の細胞株において、以下の表４及び図２Ａ−２Ｇに示すように、抗ＴＲＯＰ２抗体は、細胞生存率を総生存率の２６−４５％まで低下させ、ＩＣ50値が２７−９９ｐＭの間である。ＩｇＧ対照抗体は、細胞生存率の著しい低下を引き起こさなかった。
【０１６３】
【表５】
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【０１６４】
その他の実施形態
本明細書に開示された全ての特徴は、任意の組み合わせで組み合わせられてよい。本明細書に開示された各特徴は、同じ、同等、又は類似の目的を果たす代替の特徴により置換されてよい。したがって、明確に記載されない限り、開示された各特徴は、同等又は類似の一般的な一連の特徴の一例に過ぎない。
【０１６５】
上記記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、その趣旨及び範囲から逸脱せずに、本発明に対して様々な変更及び修正を行ってそれを様々な用途及び条件に適応させることができる。したがって、の他の実施形態も特許請求の範囲内にある。
【０１６６】
同等
本明細書では、本発明のいくつかの実施形態が記載されて解明されるが、当業者は、機能を実行し、及び／又は、結果及び／又は本明細書に記載の１つ以上の利点を得るための他の様々な手段及び／又は構造を容易に想到し、かつこのような変形及び／又は修正のそれぞれは、本明細書に記載の発明の実施形態の範囲内に含まれると考えられる。より一般的には、当業者は、本明細書に記載の全てのパラメータ、サイズ、材料及び構成が例示的であることを意味し、かつ実際のパラメータ、サイズ、材料及び／又は構成が本発明の教示を使用する特定の適用又は適用に依存することを容易に理解する。当業者は、本明細書に記載の具体的な発明の実施形態の多くの同等物を認識するか、又は通常の実験のみを用いて確認する。したがって、前述の実施形態は、例としてのみ示され、添付の特許請求の範囲及びその同等物の範囲内で、発明の実施形態は、具体的に記載され請求される以外の方式で実施できることを理解すべきである。本開示の発明の実施形態は、本明細書に記載の各個々の特徴、系、物品、材料、キット、及び／又は方法に関する。また、これらの特徴、系、物品、材料、キット及び／又は方法が相互に矛盾しない場合に、２つ以上のこのような特徴、系、物品、材料、キット及び／又は方法の任意の組み合わせは、いずれも本開示の発明の範囲内に含まれる。
【０１６７】
本明細書において定義され、用いられる全ての定義は、辞典の定義、参照により組み込まれる文献における定義、及び／又は定義される用語の通常の意味より優れていると理解すべきである。
【０１６８】
本明細書に開示された全ての参考文献、特許及び特許出願は、それぞれが引用される主題に関して参照により組み込まれ、いくつかの場合には文書全体を包含することができる。
【０１６９】
本明細書及び特許請求の範囲において用いられる不定冠詞「１種」及び「１つ」は、反対の意味が明確に指摘されない限り、「少なくとも１つ」と理解されるべきである。
【０１７０】
特許請求の範囲において用いられる「及び／又は」という語句は、結合された要素の「どちらか又は両方」、すなわち、ある場合には結合的に存在し、別の場合には分離的に存在する要素を指すと理解すべきである。「及び／又は」を用いて列挙された複数の要素は、同じように、すなわち、このように結合された要素の「１つ以上」と解釈すべきである。「及び／又は」節によって特に識別される要素以外の他の要素が、これらの特に識別された要素に関連するか関連しないかに関係なく、任意に存在してよい。したがって、非限定的な例として、「含む」などの非限定的な語と組み合わせて用いられると、「Ａ及び／又はＢ」の参照が、一例では、Ａのみ（任意にＢ以外の要素を含む）を指す場合があり、他の実施形態では、Ｂのみ（任意にＡ以外の要素を含む）を指す場合があり、さらに他の実施形態では、Ａ及びＢの両方（任意に他の要素を含む）などを指す場合がある。
【０１７１】
本明細書及び特許請求の範囲において用いられるように、「又は」は、上記定義される「及び／又は」と同じ意味を有すると理解すべきである。例えば、リスト内の項目を分離する場合、「又は」又は「及び／又は」は、包括的なものとして、すなわち、複数の要素又は要素のリスト内の少なくとも１つを含むが、２つ以上も含み、そして任意に他の列挙されない項目を含むものとして解釈されるべきである。「１つのみ」又は「１つだけ」などの、反対の意味を明確に指摘した用語のみ、又は特許請求の範囲に「…で構成される」が用いられる場合は、列挙された複数の要素又は要素のリスト内の１つの要素のみを含むことを指す。一般的に、本明細書で使用される用語「又は」は、「いずれか」、「のうちの１つ」、「１つのみ」又は「１つだけ」などの排他的な用語が先行する場合、排他的な代替品（すなわち、「一方又は他方であるが、両方ではない」）を示すものとして解釈すべきである。「主に…で構成される」は、特許請求の範囲に用いられる場合、特許法の分野で用いられる通常の意味を有するべきである。
【０１７２】
特許請求の範囲において用いられるように、１つ以上の要素のリストに関して、「少なくとも１つ」という語句は、要素のリスト内のいずれか１つ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を指すと理解すべきであるが、必ずしも要素のリスト内に具体的に列挙された各要素及び個々の要素のうちの少なくとも１つを含まず、かつ要素のリスト内の要素の任意の組み合わせを排除しない。この定義はまた、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリスト内で具体的に識別される要素以外の要素が、これらの特に識別される要素に関連するか関連しないかに関係なく、任意に存在してよいことを可能にする。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」（又は、同等に「Ａ又はＢのうちの少なくとも１つ」又は同等に「Ａ及び／又はＢのうちの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、少なくとも１つ、任意に２つ以上のＡを含むが、Ｂが存在しない（任意にＢ以外の要素を含む）ことを指す場合があり、他の実施形態では、少なくとも１つ、任意に２つ以上のＢを含むが、Ａが存在しない（任意にＡ以外の要素を含む）ことを指す場合があり、他の実施形態では、少なくとも１つ、任意に２つ以上のＡを含み、かつ少なくとも１つ、任意に２つ以上のＢを含む（任意に他の要素を含む）ことなどを指す場合がある。
【０１７３】
反対の意味が明確に指摘されない限り、本明細書において特許請求された２つ以上のステップ又は動作を含む任意の方法において、方法のステップ又は動作の順序は、列挙された方法のステップ又は動作の順序に必ずしも限定されないことも理解すべきである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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