(57)【要約】本出願は、１つもしくは複数の不純物を０．１５％未満を有する、または実質的に含まない、または含まない、エリブリンもしくはその薬学的に許容される塩などのハリコンドリンＢ類似体を調製するための精製プロセスに関する。本出願はまた、エリブリンの酸付加塩およびその調製のためのプロセスを提供する。別の局面において、本出願は、式Ｉの粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製を提供する。粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製は、単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィー、および吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法によって実施することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＶの化合物、式Ｖの化合物および式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩。
【化２１】
2021532102.tif 000022
【化２２】
2021532102.tif 000023
【請求項２】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＩＶの化合物、式Ｖの化合物および式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＩＶの化合物を実質的に含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式Ｖの化合物を実質的に含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＶＩの化合物を実質的に含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＩＶの化合物、式Ｖの化合物および式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＩＶの化合物を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式Ｖの化合物を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、式ＶＩの化合物を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１に記載のエリブリンまたはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィーおよび吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法を使用して、粗エリブリンを精製するステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた前記エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に変換するステップ、
（ｃ）前記エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む、プロセス。
【請求項１１】
前記粗エリブリンがクロマトグラフィー法を使用して精製される、請求項１０に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記粗エリブリンが、フラッシュクロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーまたは超臨界流体クロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィーを使用して精製される、請求項１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記粗エリブリンが、エリブリンの酸付加塩を単離することによって精製される、請求項１０に記載のプロセス。
【請求項１４】
エリブリンの前記酸付加塩が、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、クエン酸、酢酸、安息香酸、酪酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびトリフルオロ酢酸から選択される酸でエリブリンを処理することによって調製される、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項１５】
前記粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が、水、アルコール、ケトン、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、非プロトン性極性溶媒およびニトリルから選択される１つまたは複数の溶媒から単離することによって精製される、請求項１０に記載のプロセス。
【請求項１６】
請求項１に記載のエリブリンまたはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）粗エリブリンを適切な試薬で処理して式（ＶＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化２３】
2021532102.tif 000024
（式中、Ｐはアミン保護基である）
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた式（ＶＩＩ）の化合物を必要に応じて精製するステップ、
（ｃ）式（ＶＩＩ）の前記化合物を脱保護し、エリブリンを提供するステップ、および
（ｄ）前記エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、
を含む、プロセス。
【請求項１７】
式（ＶＩＩ）の化合物またはその塩もしくは異性体
【化２４】
2021532102.tif 000025
（式中、Ｐはアミン保護基である）。
【請求項１８】
式ＶＩの化合物またはその薬学的に許容される塩またはそれらの異性体。
【化２５】
2021532102.tif 000026
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
序論
本出願の局面は、１つもしくは複数の不純物を０．１５％未満有するか、または実質的に含まないか、または含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩などのハリコンドリンＢ類似体の調製のためのプロセスに関する。
【０００２】
エリブリンという名前が採用されている薬剤化合物は、ハリコンドリンＢの合成類似体であり、式Ｉの構造で表される。
【化１】
2021532102.tif 000002
【０００３】
エリブリンは、転移性疾患の治療のために少なくとも２つの化学療法レジメンを以前受けたことがある、転移性乳がんを有する患者の治療に適応される微小管阻害剤である。米国特許第６，２１４，８６５号は、エリブリンおよびその薬学的に許容される塩を開示している。
【０００４】
エリブリンの調製のためのプロセスは、米国特許文献第６，２１４，８６５号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／１１８５６５Ａ１、ＷＯ２００９／１２４２３７Ａ１、ＷＯ２０１５／００００７０Ａ１およびＷＯ２０１５／０８５１９３Ａ１に記載されている。
【０００５】
不純物のいくつかは、通常、効能があるか、または毒性もしくは予期しない薬理学的効果を生み出すことが公知である。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁のガイダンスは、ＡＰＩが可能な限り最大限に不純物を含まないことを示唆している。
【０００６】
本出願は、１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩などのハリコンドリンＢ類似体の調製のためのプロセスを提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第６，２１４，８６５号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５／１１８５６５号
【特許文献３】国際公開第２００９／１２４２３７号
【特許文献４】国際公開第２０１５／００００７０号
【特許文献５】国際公開第２０１５／０８５１９３号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその塩を提供する。
【化２】
2021532102.tif 000003
【化３】
2021532102.tif 000004
【０００９】
第２の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、エリブリンまたはその塩を提供する。
【００１０】
第３の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその塩を提供する。
【００１１】
第４の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィーおよび吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法を使用して粗エリブリンを精製するステップ、
（ｂ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に変換するステップ、および
（ｃ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００１２】
第５の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはその異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィーおよび吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法を使用して粗エリブリンを精製するステップ、
（ｂ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に変換するステップ、および
（ｃ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００１３】
第６の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィーおよび吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法を使用して粗エリブリンを精製するステップ、
（ｂ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に変換するステップ、および
（ｃ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００１４】
第７の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩を調製するための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）粗エリブリンを適切な試薬で処理し、式（ＶＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化４】
2021532102.tif 000005
（式中、Ｐは、アミン保護基である）
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた式（ＶＩＩ）の化合物を必要に応じて精製するステップ、
（ｃ）式（ＶＩＩ）の化合物を脱保護し、エリブリンを提供するステップ、および
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、
を含む。
【００１５】
第８の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩を調製するための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）粗エリブリンを適切な試薬で処理し、式（ＶＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化５】
2021532102.tif 000006
（式中、Ｐは、アミン保護基である）
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた式（ＶＩＩ）の化合物を必要に応じて精製するステップ、
（ｃ）式（ＶＩＩ）の化合物を脱保護し、エリブリンを提供するステップ、および
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、
を含む。
【００１６】
第９の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のための精製プロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）粗エリブリンを適切な試薬で処理し、式（ＶＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化６】
2021532102.tif 000007
（式中、Ｐは、アミン保護基である）
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた式（ＶＩＩ）の化合物を必要に応じて精製するステップ、
（ｃ）式（ＶＩＩ）の化合物を脱保護し、エリブリンを提供するステップ、および
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、
を含む。
【００１７】
第１０の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化７】
2021532102.tif 000008
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化８】
2021532102.tif 000009
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００１８】
第１１の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化９】
2021532102.tif 000010
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化１０】
2021532102.tif 000011
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００１９】
第１２の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化１１】
2021532102.tif 000012
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化１２】
2021532102.tif 000013
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００２０】
第１３の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物の０．１５％未満を有する、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化１３】
2021532102.tif 000014
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化１４】
2021532102.tif 000015
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００２１】
第１４の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を実質的に含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化１５】
2021532102.tif 000016
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化１６】
2021532102.tif 000017
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００２２】
第１５の実施形態において、本出願は、式ＩＶの化合物または式Ｖの化合物または式ＶＩの化合物またはそれらの異性体から選択される１つまたは複数の不純物を含まない、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の調製のためのプロセスを提供し、前記プロセスは：
（ａ）式（ＩＩ）の化合物をスルホニル化剤で処理し、式（ＩＩＩ）の化合物を提供するステップ、
【化１７】
2021532102.tif 000018
（式中、Ｒ１は、直鎖もしくは分岐Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ５−Ｃ１２アリールから選択される）
（ｂ）式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物およびエリブリンに順番に変換するステップ、
【化１８】
2021532102.tif 000019
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた粗エリブリンを精製するステップ、
（ｄ）エリブリンをエリブリンの薬学的に許容される塩に必要に応じて変換するステップ、および
（ｅ）エリブリンの薬学的に許容される塩を必要に応じて精製するステップ、
を含む。
【００２３】
第１６の実施形態において、本出願は、マレイン酸エリブリン、フマル酸エリブリン、シュウ酸エリブリン、クエン酸エリブリン、酢酸エリブリン、安息香酸エリブリン、酪酸エリブリン、ベンゼンスルホン酸エリブリン、ｐ−トルエンスルホン酸エリブリンおよびエリブリントリフレートから選択されるエリブリンの酸付加塩を提供する。
【００２４】
第１７の実施形態において、本出願は、式（ＶＩＩ）の化合物またはその塩を提供する。
【化１９】
2021532102.tif 000020
（式中、Ｐは、アミン保護基である）
【００２５】
第１８の実施形態において、本出願は、式ＶＩの化合物またはその薬学的に許容される塩またはそれらの異性体を提供する。
【化２０】
2021532102.tif 000021
【発明を実施するための形態】
【００２６】
詳細な説明
別の局面において、本出願は、式Ｉの粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製を提供する。粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製は、単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィー、および吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法によって実施することができる。
【００２７】
粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製に使用できる、適切な単離方法は、デカンテーションまたは濾過または溶媒からの沈殿、または溶液に貧溶媒を添加することによる、もしくは溶液の蒸発によるなどの沈殿、または当該分野で公知の任意の他の適切な単離技術を含む。必要に応じて、前記沈殿は、その溶媒和物および水和物を含む結晶性化合物をもたらし得る。前記単離に使用できる適切な溶媒は、水、アルコール、ケトン、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、非プロトン性極性溶媒、ニトリル、またはそれらの任意の混合物を含む。
【００２８】
適切な溶媒中でスラリー化することによる、粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製に使用できる適切な溶媒は、水、アルコール、ケトン、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、非プロトン性極性溶媒、ニトリルまたはそれらの任意の混合物を含む。
【００２９】
粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製は、酸塩基処理を使用して実施することができる。酸塩基処理は、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩を適切な酸または適切な塩基で処理することによって実施し、エリブリンのそれぞれの酸または塩基付加塩を形成することができる。得られたエリブリンの酸または塩基付加塩は、必要に応じて、再結晶化または適切な溶媒での洗浄または適切な溶媒中でのスラリー化によって精製することができる。得られたエリブリンの酸または塩基付加塩は、必要に応じて、適切な脱塩剤で処理され、エリブリンまたはその薬学的に許容される塩が１つまたは複数の不純物を実質的に含まないようにする。酸塩基処理に使用できる適切な溶媒は、水、アルコール、ケトン、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、非プロトン性極性溶媒、ニトリル、またはそれらの任意の混合物を含む。
【００３０】
粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製は、液液抽出によって実施することができる。前記プロセスにおいて、化合物を適切な第１の溶媒に溶解して溶液を得、得られた溶液を、溶液と混和しない第２の溶媒で洗浄し、純粋な化合物を、前記洗浄後に得られた溶液から単離する。
【００３１】
粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製に使用できる適切なクロマトグラフィー技術は、カラムクロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（逆相および順相の両方）、拡張床吸着クロマトグラフィーおよび疑似移動床クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせから選択される。
【００３２】
クロマトグラフィー技術で使用できる適切な溶媒は、水、アルコール、ケトン、炭化水素、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、非プロトン性極性溶媒、ニトリル、またはそれらの任意の混合物を含む。
【００３３】
トリフルオロアセテート、スルホネート、ホスフェート、クロロアセテート、ホルメート、アセテート、ギ酸アンモニウム、重炭酸アンモニウム、ボレート、リン酸水素カリウムなどの緩衝液、または二酸化炭素（ＣＯ２）、キセノン（Ｘｅ）、亜酸化窒素（Ｎ２Ｏ）、六フッ化硫黄（ＳＦ６）、アンモニア（ＮＨ３）、水（Ｈ２Ｏ）、エタン（Ｃ２Ｈ６）、プロパン（Ｃ３Ｈ８）、ｎ−ブタン（Ｃ４Ｈ１０）などの超臨界ガスを含む適切な移動相は、上に概説した適切な溶媒と組み合わせて、粗化合物から不純物を分離するためのクロマトグラフィー技術で使用され、今度は純粋な化合物を生成する。
【００３４】
エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の純度を測定するため、またはエリブリンもしくはその薬学的に許容される塩の精製のために伴い得るクロマトグラフィー法（例えば、ＨＰＬＣ、ＵＰＬＣなど）は、Ｔｏｒｕｓ、Ｒｅｓｔｅｋ  Ｂｉｐｈｅｎｙｌ、ＹＭＣ  Ｐｒｏ  Ｃ１８、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｄｉｏｌ、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｐｈｅｎｙｌ  Ｈｅｘｙｌ、ＺＯＲＢＡＸ  Ｒｘ−ＳＩＬ、ＡＣＥ  ３  Ｃ１８、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、または任意の他の適切なクロマトグラフィーカラムから選択されるカラムの使用を含む。例えば、以下の方法を使用して、エリブリンまたは薬学的に許容される塩の純度を測定することができる。
【００３５】
ＨＰＬＣ法−１：カラム：ＡＣＥ  Ｃ１８−３００；波長：２００ｎｍ；濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ；希釈剤：水：エタノール（９５：５）、流速：０．５ｍＬ／分；移動相：水、アセトニトリルおよびＩＰＡ）
【００３６】
ＨＰＬＣ法−２：カラム：ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８；波長：２００ｎｍ；濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ；希釈剤：水：エタノール（９５：５）、流速：１ｍＬ／分；移動相：水、アセトニトリルおよびメタノール
【００３７】
ＵＰＬＣ法：カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＳＨ  １５０ｘ２．１ｍｍｘ１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）；流量：０．３Ｍｌ／分；注入：１．０μＬ；移動相：０．１％ｖ／ｖ  Ｈ３ＰＯ４（ａｑ）およびアセトニトリル；検出器：ダイオードアレイ−シングルチャネル２００ｎｍ
【００３８】
分離する必要のある特定の不純物に応じて、適切な移動相および適切な勾配プログラムを使用できる。
【００３９】
クロマトグラフィー技術において吸着剤として使用することができる適切な樹脂は、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、キレート化樹脂、合成吸着剤、非イオン性樹脂、またはそれらの組み合わせを含む。樹脂は、本質的に親油性、親水性および／または疎水性であり得る。
【００４０】
粗エリブリンまたはその薬学的に許容される塩の精製は、バッチモードにおいて吸着剤で処理することによって実施することができる。第１および第２の実施形態で提供される化合物の精製に使用できる適切な吸着剤は、シリカゲル、活性アルミナ、モレキュラーシーブ、ケイ酸マグネシウム、合成樹脂など、または当該分野で公知の任意の他の適切な吸着剤を含む。
【００４１】
精製プロセスは、本出願に記載の１つまたは複数の精製方法を使用して１回または複数回実施し、不純物を完全に除去する、またはエリブリンもしくはその薬学的に許容される塩の所望の純度を得ることができる。
【００４２】
一局面において、式（ＶＩＩ）の化合物を生成するために使用できる適切なアミン保護基は、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、２−トリメチルシリルエトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルスルホニル（ＳＥＳ）、ベンゾイル、トリクロロアセチル、ジクロロアセチル、クロロアセチル、トリフルオロアセチル、ｐ−トルエンスルホニル、ｐ−ニトロフェニルスルホニル、アリールおよびアルキルホスホリル、フェニルおよびベンジルスルホニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ｏ−ニトロフェノキシアセチルまたは当該分野で公知の任意の他のアミン保護剤を含む。そのような公知のアミン保護剤の例は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  ４９４−６５３、１９９９に見出される。
【００４３】
別の局面において、式（ＶＩＩ）の化合物を脱保護してエリブリンを生成するために使用できる適切な脱保護技術は、ラネーニッケル、パラジウム炭素などを含む、金属の存在下で水素ガスを使用する接触水素化；または酸もしくは塩基を使用した加水分解；またはフッ化物源（例えば、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド）を用いるもの；または当該分野で公知の任意の他の適切な脱保護技術を用いる技術を含む。必要に応じて、接触水素化は、１つまたは複数の適切な試薬の存在下で実施することができる。使用できる適切な試薬は、酸、塩基、樹脂、およびそれらの任意の混合物を、単独で、または水、有機溶媒もしくはそれらの混合物中のそれらの溶液としてのいずれかを含むが、これらに限定されない。式（ＶＩＩ）の化合物を脱保護するために使用できる適切な溶媒は、水、アルコール、エーテル、脂肪族および脂環式炭化水素、ハロゲン化炭化水素、芳香族炭化水素、ニトリル、非プロトン性極性溶媒、ニトロメタンまたはそれらの混合物を含む。
【００４４】
別の局面において、本出願は、式（ＶＩＩ）の化合物の精製を提供する。式（ＶＩＩ）の化合物の精製は、単離、適切な溶媒中のスラリー化、酸塩基処理、液液抽出、クロマトグラフィー、および吸着剤での処理から選択される１つまたは複数の方法によって実施することができる。
【００４５】
一局面において、式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物に変換するために使用できる適切なスルホニル化剤は、メタンスルホニルクロリド、ｐ−トルエンスルホニルクロリド、ｐ−トルエンスルホン酸無水物、メタンスルホン酸無水物、トリフルオロメタンスルホン酸無水物、２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリドなど、または当該分野で公知の任意の他の適切なスルホニル化試薬を含む。
【００４６】
式（ＩＩＩ）の化合物は、アンモニア源を使用して、式（ＩＶ）の化合物およびエリブリンに順番に変換される。使用できる適切なアンモニア源は、ＴＨＦ中のアンモニア溶液またはジオキサン中のアンモニア溶液などのような、溶媒中の水酸化アンモニウムもしくはアンモニア溶液、または当該分野で公知の任意の他のアンモニア源を含む。
【００４７】
定義
以下の定義は、文脈が別段の指示をしない限り、本出願に関連して使用される。一般に、特定のグループまたは化合物に存在する炭素原子の数は、「Ｃｘ−Ｃｙ」と示され、ここで、ｘおよびｙはそれぞれ下限および上限である。例えば、「Ｃ１−Ｃ６」と示されたグループは、１〜６個の炭素原子を含む。本明細書の定義で使用される炭素数は、炭素骨格および炭素分岐を指すが、アルコキシ置換などの置換基の炭素原子を含まない。
【００４８】
「アルコール」は、ヒドロキシル基に結合した炭素を含む有機化合物である。「Ｃ１−Ｃ６アルコール」は、メタノール、エタノール、２−ニトロエタノール、２−フルオロエタノール、２，２，２−トリフルオロエタノール、ヘキサフルオロイソプロピルアルコール、エチレングリコール、１−プロパノール、２−プロパノール（イソプロピルアルコール）、２−メトキシエタノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｉ−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、２−エトキシエタノール、ジエチレングリコール、１−、２−、または３−ペンタノール、ネオペンチルアルコール、ｔ−ペンチルアルコール、シクロヘキサノール、フェノール、グリセロールなどを含む。
【００４９】
「炭化水素溶媒」は、液体炭化水素化合物であり、直鎖、分岐、または環状であり得、飽和であり得るか、または２つもの二重結合もしくは芳香族を有し得る。「Ｃ５−Ｃ１５脂肪族または芳香族炭化水素」の例は、ｎ−ペンタン、イソペンタン、ネオペンタン、ｎ−ヘキサン、イソヘキサン、３−メチルペンタン、２，３−ジメチルブタン、ネオヘキサン、ｎ−ヘプタン、イソヘプタン、３−メチルヘキサン、ネオヘプタン、２，３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、３，３−ジメチルペンタン、３−エチルペンタン、２，２，３−トリメチルブタン、ｎ−オクタン、イソオクタン、３−メチルヘプタン、ネオオクタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、シクロヘプタン、石油エーテル、ベンゼントルエン、エチルベンゼン、ｍ−キシレン、ｏ−キシレン、ｐ−キシレン、インダン、ナフタレン、テトラリン、トリメチルベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、トリフルオロトルエン、アニソール、Ｃ６−Ｃ１２芳香族炭化水素などを含む。
【００５０】
「エーテル」は、他の２個の炭素原子に結合した酸素原子−Ｏ−を含む有機化合物である。「Ｃ２−Ｃ６エーテル」は、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、メチルｔ−ブチルエーテル、グライム、ジグリム、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジブチルエーテル、ジメチルフラン、２−メトキシエタノール、２−エトキシエタノール、アニソール、などを含む。
【００５１】
「ハロゲン化炭化水素」は、ハロゲンに結合した炭素を含む有機化合物である。ハロゲン化炭化水素は、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、トリクロロエチレン、パークロロエチレン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素などを含む。
【００５２】
「エステル」は、他の２個の炭素原子に結合したカルボキシル基−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−を含む有機化合物である。「Ｃ３−Ｃ１０エステル」は、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸イソブチル、酢酸ｔ−ブチル、ギ酸エチル、酢酸メチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、ブタン酸メチル、ブタン酸エチルなどを含む。
【００５３】
「ケトン」は、他の２個の炭素原子に結合したカルボニル基−（Ｃ＝Ｏ）−を含む有機化合物である。「Ｃ３−Ｃ１０ケトン」は、アセトン、エチルメチルケトン、ジエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ケトンなどを含む。
【００５４】
「ニトリル」は、別の炭素原子に結合したシアノ−（Ｃ≡Ｎ）を含む有機化合物である。「Ｃ２−Ｃ６ニトリル」は、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブタンニトリルなどを含む。
【００５５】
「非プロトン性極性溶媒」は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、スルホラン、Ｎ−メチルピロリドンなどを含む。
【００５６】
本明細書で使用される「を含まない（Ｆｒｅｅ  ｆｒｏｍ）」は、ＨＰＬＣ法またはＵＰＬＣ法または他の任意の分析法によって測定される場合、その検出限界未満または検出されない、１つまたは複数の個々の不純物を有する化合物を指す。検出限界の値は、１つまたは複数の不純物を検出または定量するために使用される分析方法による。
【００５７】
本明細書で使用される「実質的に含まない（Ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｆｒｅｅ）」は、ＨＰＬＣ法またはＵＰＬＣ法または任意の他の分析法で測定した場合、約０．０５％未満または約０．０１％未満または約０．００１％未満または約０．０００１％未満または約０．００００１％未満または約０．０００００１％未満の１つまたは複数の個々の不純物を有する化合物を指す。
【００５８】
本出願のある特定の局面および実施形態は、以下の実施例を参照してより詳細に説明され、これらの例は、例示の目的でのみ提供され、いかなる方法でも本出願の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。記載された手順の合理的なバリエーションは、本出願の範囲内にあることを意図している。本出願の特定の局面が図示および記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、他の様々な変更および修正を行うことができることは当業者には明らかであろう。したがって、本出願の範囲内にあるそのようなすべての変更および修正を添付の特許請求の範囲でカバーすることを意図している。
【実施例】
【００５９】
実施例−１：エリブリンの調製
ピリジン（窒素下、ジクロロメタン中で調製した１０３μｌの０．３３Ｍ溶液）およびコリジン（３５０μｌ）を、−２０〜−１０℃、窒素下でジクロロメタン（９．１ｍＬ）中の式ＩＩの化合物（４８４ｍｇ）の溶液に加えた。トルエンスルホン酸無水物の溶液（窒素下で５ｍＬのジクロロメタンに溶解した２３８ｍｇ）を−１０℃でゆっくりと加え、得られた混合物を−２０〜−１０℃で９０分間撹拌した。水（１．９ｍＬ）を加え、溶液を室温まで温めた。ＩＰＡ（４８ｍＬ）および水酸化アンモニウム（５３ｍＬ、２８％溶液）を加え、混合物を２３時間撹拌した。さらに水酸化アンモニウム（２８％溶液の５．３ｍＬ）を加え、混合物を１７時間撹拌した。得られた混合物を真空中で濃縮し、総量を約３０ｍＬにした。ジクロロメタン（１５ｍｌ）および重炭酸ナトリウム／炭酸ナトリウム／水（９：９：１８２  ｗ／ｗ／ｗ、４．５ｇ）の混合物を加えた。相を分離し、水相をジクロロメタン（１２ｍＬ）で再抽出し、合わせた有機相を３０℃未満の真空で濃縮した。アセトニトリル（６ｍＬ）を残留物に加え、３０℃未満で真空で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン；メタノール／ジクロロメタン／２８％水酸化アンモニウム）により精製して、表題化合物（３５２ｍｇ）を得た。
【００６０】
得られた化合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、重炭酸ナトリウム／炭酸ナトリウム／水（９：９：１８２  ｗ／ｗ／ｗ、２５ｍＬ）で洗浄した。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で再抽出した。合わせた有機抽出物を３０℃未満、真空で濃縮した。残留物を窒素パージし、次に窒素下で調製した無水ジクロロメタン／ペンタン（３：１  ｖ／ｖ、８．５ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を窒素下で窒素フラッシュカニューレを介して濾過し、次に無水ジクロロメタン／ペンタン（３：１  ｖ／ｖ、８．５ｍＬ）で洗浄した。濾液を３０℃未満、真空で濃縮した。残留物をアセトニトリル（２ｍＬ）に溶解し、３５℃未満、真空で濃縮して、表題化合物をガラス状の白色固体（３１１ｍｇ、６５％）として得た。
実施例−２：エリブリンの精製
【００６１】
メタノール中の粗エリブリンの濃縮溶液を、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｄｉｏｌカラムでの超臨界流体クロマトグラフィー（移動相：二酸化炭素およびメタノール；二酸化炭素：メタノールの勾配比：１５％メタノールから３５％メタノールから１５％メタノール）を使用して精製した。精製されたエリブリンを含むフラクションを合わせて濃縮し、エリブリンを得た。
【００６２】
得られた精製エリブリンを勾配ＨＰＬＣ法（カラム：ＡＣＥ  Ｃ１８−３００；波長：２００ｎｍ；濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ；希釈剤：水：エタノール（９５：５）、流速：０５ｍＬ／分；移動相：水、アセトニトリルおよびＩＰＡ）を使用して分析した。
式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。
式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。
式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−３：メシル酸エリブリンの調製
【００６３】
メタンスルホン酸（２０１ｍｇ）、水（２１．０ｇ）および２８％水酸化アンモニウム（５．５３ｇ）を使用して調製したストック溶液の一部（メタンスルホン酸４０．１ｍｇを含む５．３３ｇ）をアセトニトリル（３．９ｍＬ）中のエリブリン（３１１ｍｇ）に加えた。２０分間撹拌した後、溶液を３０℃未満で約２ｍＬまで真空で濃縮した。新鮮なアセトニトリル（１０ｍＬ）を加え、溶液を３０℃未満で約１ｍｌまで真空で濃縮した。新鮮なアセトニトリル（１０ｍＬ）を加え、溶液を３０℃未満で真空で濃縮して乾燥させた。次に、このプロセスをさらに３回繰り返し、最終濃縮を行った。残留物を窒素パージし、次に窒素下で調製した無水ジクロロメタン／ペンタン（３：１  ｖ／ｖ、７．３ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を窒素下で窒素フラッシュカニューレを介して濾過し、次に無水ジクロロメタン／ペンタン（３：１  ｖ／ｖ、３ｍＬ）で洗浄した。濾液を３０℃未満、真空で濃縮した。残留物を窒素パージし、次に窒素下で調製した無水ジクロロメタン／ペンタン（１：１  ｖ／ｖ、７．４ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を、窒素下で窒素フラッシュカニューレを介して無水ペンタン（３３．４ｍＬ）中に濾過した。得られた懸濁液を２５時間撹拌し、次に真空／窒素下で窒素フラッシュＰＴＦＥカニューレを介して濾過し、さらに無水ペンタン（１５ｍＬ）で洗浄した。材料を窒素流下、真空下で４６時間乾燥し、表題化合物を得た。
【００６４】
得られたエリブリンを勾配ＨＰＬＣ法を使用して分析した。式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−４：Ｎ−Ｆｍｏｃ−（１Ｓ、３Ｓ、６Ｓ、９Ｓ、１２Ｓ、１４Ｒ、１６Ｒ、１８Ｓ、２０Ｒ、２１Ｒ、２２Ｓ、２６Ｒ、２９Ｓ、３１Ｒ、３２Ｓ、３３Ｒ、３５Ｒ、３６Ｓ）−２０−［（２Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル］−２１−メトキシ−１４−メチル−８，１５−ビス（メチレン）−２，１９，３０，３４，３７，３９，４０，４１−オクタオキサノナシクロ［２４．９．２．１３，３２．１３，３３．１６，９．１１２，１６．０１８，２２．０２９，３６．０３１，３５］ヘンテトラコンタン−２４−オンの調製
【００６５】
エリブリン（６０ｍｇ）を１０ｍｌの２口丸底フラスコに入れ、３サイクルの真空／窒素再充填によって不活性化した。ジエチルエーテル（１ｍＬ）およびジクロロメタン（０．２ｍＬ）を加えた。攪拌した溶液を氷水浴に入れ、ジエチルエーテル（０．７ｍＬ）中の９−フルオレニルメチルクロロホルメート（２５ｍｇ）の溶液を加えた。得られた混合物を室温に温め、２３時間撹拌した。混合物をジクロロメタン（４ｍＬ）で希釈し、炭酸ナトリウム：重炭酸ナトリウム：水の溶液（９：９：１８２  ｗ：ｗ：ｗ、３ｍＬ）で洗浄した。次に、水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で再抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し（Ｋ２ＣＯ３）、濾過し、濾液を真空で濃縮した。残留物を、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）自動精製システムを使用してシリカゲルで精製し、ＭＴＢＥ／ヘプタンで溶出し、表題化合物を白色固体（５１ｍｇ）として得た。
実施例−５：エリブリンの調製
【００６６】
水酸化アンモニウム（２８〜３０％溶液の０．５ｍＬ）を、イソプロパノール（１ｍＬ）およびジクロロメタン（０．２ｍＬ）の混合物中のＮ−Ｆｍｏｃ−（１Ｓ、３Ｓ、６Ｓ、９Ｓ、１２Ｓ、１４Ｒ、１６Ｒ、１８Ｓ、２０Ｒ、２１Ｒ、２２Ｓ、２６Ｒ、２９Ｓ、３１Ｒ、３２Ｓ、３３Ｒ、３５Ｒ、３６Ｓ）−２０−［（２Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル］−２１−メトキシ−１４−メチル−８，１５−ビス（メチレン）−２，１９，３０，３４，３７，３９，４０，４１−オクタオキサノンアシクロ［２４．９．２．１３，３２．１３，３３．１６，９．１１２，１６．０１８，２２．０２９，３６．０３１，３５］ヘンテトラコンタン−２４−オン（５１ｍｇ）の氷水浴冷却撹拌溶液に加えた。６７時間撹拌した後、混合物を３０℃未満の水浴中、真空で濃縮した。ジクロロメタン（５ｍＬ）および炭酸ナトリウム：重炭酸ナトリウム：水（９：９：１８２  ｗ：ｗ：ｗ、１ｍＬ）を残留物に加えた。相を分離し、水相をジクロロメタン（５ｍＬ）で再抽出した。合わせた有機抽出物を３０℃未満の水浴中、真空で濃縮した。残留物を、ＭＴＢＥ／ＭｅＯＨ／ジクロロメタン／水酸化アンモニウムで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を得た。
【００６７】
得られたエリブリンを勾配ＨＰＬＣ法を使用して分析した。式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−６：マレイン酸エリブリン塩の調製
【００６８】
粗エリブリン（１１５ｍｇ、ＵＰＬＣにより純度９４．８％）を酢酸エチル（０．５ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌した。酢酸エチル（０．５ｍＬ）中のマレイン酸（１６．５ｍｇ）の溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。分離した固体を濾過し、酢酸エチル（５ｍＬ）で洗浄し、窒素流を用いて真空下で乾燥し、表題化合物を得た。
【００６９】
ＵＰＬＣによる純度：９８．８％；式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−７：シュウ酸エリブリン塩の調製
【００７０】
粗エリブリン（ＵＰＬＣで純度９４．８％を有する１０４ｍｇ）を酢酸エチル（０．５ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌した。酢酸エチル（０．５ｍＬ）中のシュウ酸（１２．１ｍｇ）の溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発し、白色の固体を得、これをＭＴＢＥ（２ｍＬ）でトリチュレーションした。固体を濾過し、ＭＴＢＥ（３×２ｍＬ）で洗浄し、窒素流を用いて真空下で乾燥し、表題化合物を得た。
【００７１】
ＵＰＬＣによる純度：９８．４％；式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−８：フマル酸エリブリン塩の調製
【００７２】
粗エリブリン（ＵＰＬＣで純度９４．８％を有する１０５ｍｇ）をメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌した。メタノール（０．５ｍＬ）中のフマル酸（１６ｍｇ）の溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発し、ＭＴＢＥ（１ｍＬ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、分離した固体を濾過し、ＭＴＢＥ（３×２ｍＬ）で洗浄し、窒素流を用いて真空下で乾燥し、表題化合物を得た。
【００７３】
ＵＰＬＣによる純度：９８．２％；式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−９：トシル酸エリブリン塩の調製
【００７４】
粗エリブリン（ＵＰＬＣによる純度９４．８％を有する１３６ｍｇ）をアセトニトリル（２．５ｍＬ）に溶解した。２８％水酸化アンモニウム水溶液（１．９５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中のトルエンスルホン酸一水和物（３４．７ｍｇ）の溶液を加えた。混合物を２５〜３０℃、減圧下で濃縮した。残留物をアセトニトリル（８×３ｍＬ）から共沸し、白色の泡（１８８ｍｇ）を得た。泡をＤＣＭ／ペンタン（３：１、ｖ／ｖ、３ｍＬ）に溶解し、濾過し、ＤＣＭ／ペンタン（３：１、ｖ／ｖ、２×１ｍＬ）で洗浄し、透明な溶液を得、これを濃縮して白色の泡（２０２ｍｇ）にし、次にＤＣＭ／ペンタン（１：１、ｖ／ｖ、２ｍＬ）に溶解した。窒素下、室温で撹拌しながら、溶液をペンタン（１５ｍＬ）に加えた。即時の沈殿物を観察した。残留物をＤＣＭ／ペンタン（１：１、ｖ／ｖ、２×０．２５ｍＬ）で洗浄した。スラリーを２４時間撹拌し、次に窒素下で密閉フィルターを通して濾過した。固体をペンタン（６．５ｍＬ）で洗浄し、窒素流を用いて真空下で一晩乾燥し、トシル酸塩を白色固体として得た。ＵＰＬＣを使用して分析した：式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
実施例−１０：エリブリンの精製
【００７５】
粗エリブリンは、逆相分取ＵＰＬＣ（カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム、勾配法、移動相：ギ酸水溶液およびアセトニトリル）を使用して精製した。関連するフラクションを収集し、合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮し、乾燥させてエリブリンを得た。
【００７６】
得られたエリブリンを勾配ＨＰＬＣ法を使用して分析した。式ＩＶの化合物の含有量：検出されなかった。式Ｖの化合物の含有量：検出されなかった。式ＶＩの化合物の含有量：検出されなかった。
【国際調査報告】
2021532102.tif 000027
2021532102.tif 000028
2021532102.tif 000029
2021532102.tif 000030