(57)【要約】  本明細書では、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するための細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤の使用、ならびに細胞外ヒトＭＴを含有する組成物が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するための方法であって、前記障害を有するか、または前記障害のリスクがある対象に、細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤を含む組成物の治療有効量を投与して、前記障害を治療するかまたはその発症を制限することを含む、方法。
【請求項２】
前記対象が、糖尿病を有するか、または糖尿病を発症するリスクがあり、前記方法が、糖尿病を治療するかまたはその発症を制限するのに役立つ、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、１型糖尿病のリスクがあり、前記方法が、前記対象におけるＩ型糖尿病の発症を制限するのに役立つ、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、１型糖尿病を有する親もしくは兄弟、膵臓腫瘍、膵炎、膵島細胞自己抗体、インスリン自己抗体、グルタミン酸デカルボキシラーゼ自己抗体（ＧＡＤＡ）、インスリノーマ関連（ＩＡ−２）自己抗体、亜鉛トランスポーター自己抗体（ＺｎＴ８）、ＤＲＢ１  ０４０１、ＤＲＢ１  ０４０２、ＤＲＢ１  ０４０５、ＤＱＡ  ０３０１、ＤＱＢ１  ０３０２、およびＤＱＢ１  ０２０１からなる群から選択されるＩＤＤＭ１遺伝子のバリアント；多尿症、多飲症、口渇、多食症、疲労、または体重減少を含むが、これらに限定されない１型糖尿病のリスク因子のうちの１つ以上を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が１型糖尿病を有し、前記方法が前記対象におけるＩ型糖尿病を治療するのに役立つ、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記治療が、インスリン注射を必要とする頻度を低減すること、膵臓ベータ細胞の破壊、高血糖、低血糖、多尿症、多食症、多飲症、体重減少、かすみ目、疲労、創傷治癒能力の低下、尿路感染症、性機能障害、口渇、糖尿病性ケトアシドーシス、心血管疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、脳卒中、腎不全、および足部潰瘍を含むが、これらに限定されない前記対象における１型糖尿病合併症の発症または進行を遅延させること、ならびに膵臓または膵島細胞移植の必要性を遅らせることのうちの１つ以上を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が２型糖尿病のリスクがあり、前記方法が前記対象における２型糖尿病の発症を制限するのに役立つ、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、肥満、喫煙、座りがちな生活様式、２型糖尿病を有する親または兄弟、前糖尿病、前糖尿病を有する親または兄弟、貧しい食生活（例えば、脂肪の過多、繊維の不足、単純糖質の過多など）、年齢が５０歳以上、高血圧、高コレステロール、テストステロン欠乏症、メタロチオネイン１  Ａ（ＭＴ１Ａ）ｒｓ８０５２３９４遺伝子座（Ｇ変化）一塩基多型、および妊娠糖尿病の既往歴を含むが、これらに限定されない２型糖尿病の１つ以上のリスク因子を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が２型糖尿病を有し、前記方法が前記対象における２型糖尿病を治療するのに役立つ、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療が、高血糖、低血糖、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、タンパク尿、糸球体クリアランス異常、糖尿病性循環障害、腎不全、心血管疾患、多尿症、多飲症、体重減少、脳卒中を含むが、これらに限定されない２型糖尿病合併症のうちの１つ以上を制限すること、およびインスリンまたは他の療法を必要とする頻度を低減することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象が前糖尿病を有し、前記方法が前記対象における前糖尿病を治療するのに役立つ、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療が、２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない前糖尿病の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が欠陥的糖不耐症を有し、前記方法が前記対象における耐糖能異常を治療するのに役立つ、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記治療が、２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない耐糖能異常の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象が肝炎を有し、前記方法が前記対象における肝炎を治療するのに役立つ、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療が、皮膚および／または白目の黄色変色、食欲不振、嘔吐、疲労、腹痛、下痢、急性肝不全、肝臓の瘢痕化、肝不全、ならびに肝癌を含むが、これらに限定されない肝炎の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が炎症性肝疾患を有し、前記方法が前記対象における前記炎症性肝疾患を治療するのに役立つ、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記炎症性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および／または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記治療が、疲労、倦怠感、肝線維症、肝癌、および／または肝硬変を含むが、これらに限定されない炎症性肝疾患の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞外ヒトＭＴの阻害剤が、抗ＭＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および／または細胞外ヒトＭＴに特異的に結合するアプタマーを含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞外ヒトＭＴの阻害剤が、抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＭＴ抗体が、ヒト化抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞外ヒトＭＴの阻害剤が、膵臓または肝細胞標的化部分に連結されている、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞標的化部分が、膵臓細胞標的化部分であり、前記膵臓細胞標的化部分が、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４を含むが、これらに限定されない、膵臓β細胞に優先的に結合する１つ以上のペプチドまたは他の部分を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞標的化部分が肝細胞標的化部分であり、前記肝細胞標的化部分が、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ  Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、およびアラビノガラクタンを含むが、これらに限定されない、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象が、哺乳動物である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が、ヒトである、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
組成物であって、
（ａ）細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤と、
（ｂ）前記細胞外ヒトＭＴの阻害剤に連結された膵臓または肝細胞標的化部分と、を含む、組成物。
【請求項３０】
前記阻害剤が、ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）に特異的に結合する抗メタロチオネイン抗体またはそのフラグメントを含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抗ＭＴ抗体が、ヒト化抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項３０または３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記細胞標的化部分が、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４からなる群から選択される膵臓細胞標的化部分である、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記細胞標的化部分が、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ  Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、およびアラビノガラクタンからなる群から選択される肝細胞標的化部分であり、前記肝細胞標的化部分が、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ  Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、およびアラビノガラクタンを含むが、これらに限定されない、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記細胞標的化部分がペプチド性であり、前記組成物が組換えポリペプチドを含む、請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
請求項３５に記載の組換えポリペプチドをコードする、組換え核酸。
【請求項３７】
請求項３６に記載の組換え核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項３８】
請求項３７に記載の組換え発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
【請求項３９】
組成物であって、
（ａ）細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤と、
（ｂ）インスリン、メトホルミン、プラムリンチド、スルホニル尿素（グリブリド、グリピジド、およびグリメピリドを含むが、これらに限定されない）、メグリチニド（レパグリニドおよびナテグリニドを含むが、これらに限定されない）、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンを含むが、これらに限定されない）、ＤＰＰ−４阻害剤（シタグリプチン、サクサグリプチン、およびリナグリプチンを含むが、これらに限定されない）、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト（エクセナチド、リラグルチド、およびセマグルチドを含むが、これらに限定されない）、ＳＧＬＴ２阻害剤（カナグリフロジン、ダパグリフロジン、およびエンパグリフロジンを含むが、これらに限定されない）、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデフォビル、テルビブジン、シメプレビル、ソホスブビル、インターフェロン、またはリバビリンのうちの１つ以上と、を含む、組成物。
【請求項４０】
前記阻害剤が、ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）に特異的に結合する抗メタロチオネイン抗体またはそのフラグメントを含む、請求項３９記載の組成物。
【請求項４１】
前記抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントが、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記抗ＭＴ抗体が、ヒト化抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
医薬組成物であって、
（ａ）請求項２９〜３５もしくは３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物、請求項３６に記載の組換え核酸、請求項３７に記載の組換え発現ベクター、または請求項３８に記載の組換え宿主細胞と、
（ｂ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項４４】
糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するための、請求項２９〜３５もしくは３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物、請求項３６に記載の組換え核酸、請求項３７に記載の組換え発現ベクター、または請求項３８に記載の組換え宿主細胞、または請求項４３に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４５】
前記細胞外ヒトＭＴの阻害剤が、請求項２９〜３５もしくは３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物、請求項３６に記載の組換え核酸、請求項３７に記載の組換え発現ベクター、または請求項３８に記載の組換え宿主細胞、または請求項４３に記載の医薬組成物を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年１月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／６１８３３２号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、ほとんどの場合、インスリン補充療法で治療される。糖尿病で損傷した膵島を置換するために行われている研究があるが、インスリンを産生する膵島を損傷する炎症過程が阻止されない限り、膵島移植または膵臓における膵島の幹細胞再増殖は短命な治療となる。同様に、肝炎および／または炎症性肝疾患を治療するための現在の方法は不十分である。
【発明の概要】
【０００３】
第１の態様では、本開示は、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するための方法を提供し、障害を有するか、または障害のリスクがある対象に、細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤を含む組成物の治療有効量を投与して、障害を治療するかまたはその発症を制限することを含む。一実施形態では、対象は糖尿病を有するか、または糖尿病を発症するリスクがあり、本方法は糖尿病を治療するかまたはその発症を制限するのに役立つ。別の実施形態では、対象は１型糖尿病のリスクがあり、本方法は対象におけるＩ型糖尿病の発症を制限するのに役立ち、そのような一実施形態では、対象は、１型糖尿病を有する親もしくは兄弟、膵臓腫瘍、膵炎、膵島細胞自己抗体、インスリン自己抗体、グルタミン酸デカルボキシラーゼ自己抗体（ＧＡＤＡ）、インスリノーマ関連（ＩＡ−２）自己抗体、亜鉛トランスポーター自己抗体（ＺｎＴ８）、ＤＲＢ１  ０４０１、ＤＲＢ１  ０４０２、ＤＲＢ１  ０４０５、ＤＱＡ  ０３０１、ＤＱＢ１  ０３０２、およびＤＱＢ１  ０２０１からなる群から選択されるＩＤＤＭ１遺伝子のバリアント；多尿症、多飲症、口渇、多食症、疲労、または体重減少を含むが、これらに限定されない１型糖尿病のリスク因子のうちの１つ以上を有し得る。
【０００４】
別の実施形態では、対象は１型糖尿病を有し、本方法は対象におけるＩ型糖尿病を治療するのに役立ち、そのような一実施形態では、治療は、インスリン注射を必要とする頻度を低減すること、膵臓ベータ細胞の破壊、高血糖、低血糖、多尿症、多食症、多飲症、体重減少、かすみ目、疲労、創傷治癒能力の低下、尿路感染症、性機能障害、口渇、糖尿病性ケトアシドーシス、心血管疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、脳卒中、腎不全、および足部潰瘍を含むが、これらに限定されない対象における１型糖尿病合併症の発症または進行を遅延させること、ならびに膵臓または膵島細胞移植の必要性を遅らせることのうちの１つ以上を含み得る。
【０００５】
別の実施形態では、対象は２型糖尿病のリスクがあり、本方法は対象における２型糖尿病の発症を制限するのに役立ち、そのような一実施形態では、対象は、肥満、喫煙、座りがちな生活様式、２型糖尿病を有する親または兄弟、前糖尿病、前糖尿病を有する親または兄弟、貧しい食生活（例えば、脂肪の過多、繊維の不足、単純糖質の過多など）、年齢が５０歳以上、高血圧、高コレステロール、テストステロン欠乏症、メタロチオネイン１  Ａ（ＭＴ１Ａ）ｒｓ８０５２３９４遺伝子座（Ｇ変化）一塩基多型、および妊娠糖尿病の既往歴を含むが、これらに限定されない２型糖尿病の１つ以上のリスク因子を有し得る。
【０００６】
別の実施形態では、対象は２型糖尿病を有し、本方法は対象における２型糖尿病を治療するのに役立ち、そのような一実施形態では、治療は、高血糖、低血糖、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、タンパク尿、糸球体クリアランス異常、糖尿病性循環障害、腎不全、心血管疾患、多尿症、多飲症、体重減少、脳卒中を含むが、これらに限定されない２型糖尿病合併症のうちの１つ以上を制限すること、およびインスリンまたは他の療法を必要とする頻度を低減することを含み得る。
【０００７】
さらなる実施形態では、対象は前糖尿病を有し、本方法は対象における前糖尿病を治療するのに役立ち、そのような一実施形態では、治療は、２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない前糖尿病の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。
【０００８】
一実施形態では、対象は欠陥的糖不耐症を有し、本方法は対象における耐糖能異常を治療するのに役立ち、そのような一実施形態では、治療は、２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない耐糖能異常の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。
【０００９】
さらなる実施形態では、対象は肝炎を有し、本方法は対象における肝炎を治療するのに役立ち、そのような一実施形態では、治療は、皮膚および／または白目の黄色変色、食欲不振、嘔吐、疲労、腹痛、下痢、急性肝不全、肝臓の瘢痕化、肝不全、ならびに肝癌を含むが、これらに限定されない肝炎の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。
【００１０】
別の実施形態では、対象は炎症性肝疾患を有し、本方法は対象における炎症性肝疾患を治療するのに役立つ。そのような一実施形態では、炎症性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および／または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）からなる群から選択され得る。別のそのような実施形態では、治療は、疲労、倦怠感、肝線維症、肝癌、および／または肝硬変を含むが、これらに限定されない炎症性肝疾患の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。
【００１１】
一実施形態では、細胞外ヒトＭＴの阻害剤は、抗ＭＴ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および／または細胞外ヒトＭＴに特異的に結合するアプタマーを含み得る。そのような一実施形態では、細胞外ヒトＭＴの阻害剤は、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含むが、これらに限定されない抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメント、およびヒト化抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【００１２】
別の実施形態では、細胞外ヒトＭＴの阻害剤は、膵臓またはヘプティック細胞標的化部分に連結される。そのような一実施形態では、膵細胞標的化部分は、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４からなる群から選択される膵臓β細胞に優先的に結合する１つ以上のペプチドまたは他の部分を含み得る。別の実施形態では、ヘプティック細胞標的化部分は、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ領域Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、および／またはアラビノガラクタンを含み得るが、これらに限定されない。
【００１３】
一実施形態では、対象は、ヒト対象を含むがこれに限定されない哺乳動物である。
【００１４】
別の態様では、本開示は、
（ａ）細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤と、
（ｂ）細胞外ヒトＭＴの阻害剤に連結された膵臓または肝細胞標的化部分と、を含む組成物を提供する。
【００１５】
一実施形態では、阻害剤は、モノクローナル抗体および／もしくはヒト化抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントを含むが、これらに限定されない、ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）に特異的に結合する抗メタロチオネイン抗体またはそのフラグメントを含む。別の実施形態では、細胞標的化部分は、膵臓細胞標的化部分、例えば、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４からなる群から選択されるものである。別の実施形態では、細胞標的化部分は、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ領域Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、および／またはアラビノガラクタンを含み得るが、これらに限定されないヘプティック細胞標的化部分である。
【００１６】
一実施形態では、本組成物は、組換えポリペプチドを含む。他の態様では、本開示は、組換えポリペプチドをコードする組換え核酸、組換え核酸を含む組換え発現ベクター、組換え発現ベクターを含む組換え宿主細胞、および（ａ）本開示の組成物、組換え核酸、組換え発現ベクター、または組換え宿主細胞と、（ｂ）薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
別の態様では、本開示は、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するために、本組成物、組換え核酸、組換え発現ベクターを含む組換え宿主細胞、および本開示の組成物、組換え核酸、組換え発現ベクター、組換え宿主細胞を含む医薬組成物、または本明細書に開示される任意の実施形態もしくは実施形態の組み合わせの医薬組成物を使用することを提供する。
【００１８】
本開示の方法の別の実施形態では、細胞外ヒトＭＴの阻害剤は、本組成物、組換え核酸、組換え発現ベクターを含む組換え宿主細胞、および本開示の組成物、組換え核酸、組換え発現ベクター、組換え宿主細胞を含む医薬組成物、または本明細書に開示される任意の実施形態もしくは実施形態の組み合わせの医薬組成物を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴによる処置終了時に腹腔内に糖を注射したマウスの耐糖能試験の結果を示すグラフ。
【図２】図１に示したグループの各動物からの初期測定値に対して正規化した耐糖能試験結果の変化を示すグラフ。
【図３】ｑＰＣＲ研究による、精巣上体白色脂肪組織におけるＲＮＡ発現レベルに対するＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴの効果を示すグラフ。ＵＣ１ＭＴ治療は、白色精巣上体脂肪組織の遺伝子発現の一部（特に、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１−アルファ（ＰＧＣ−１ａ）、エネルギー代謝を調節する転写コアクチベーター、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アルファ（ＰＰＡＲ−ｒ））に対して効果を有した。
【図４】脂肪組織の重量に対する抗体処置の効果を示すグラフ：（Ａ）体重のパーセントとしての組織重量、（Ｂ）グラム単位の組織重量。精巣上体白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）の変化に留意されたい。（ＢＡＴ＝褐色脂肪組織、ｓＷＡＴ＝皮下白色脂肪組織）。
【図５】ｑＰＣＲ研究による、肝臓におけるＲＮＡ発現レベルに対するＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴの効果を示すグラフ。ＭＯＰＣ２１アイソタイプに適合した対照抗体で処置されたＨＦＤマウスよりも、高脂肪食で処置されたマウスにおいてＵＣ１ＭＴによる処置と相関する抗炎症性ＩＬ−１０遺伝子発現が大幅に増加している。
【図６】サーモフィッシャートリグリセリドキット（比色定量アッセイ）を使用した、肝トリグリセリドに対するＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴの効果を示すグラフ。１６週間ＨＦＤを与えられた雄マウスの平均および標準誤差Ｎ＝８  ＭＯＰＣ、１０  ＵＣ１ＭＴが示される。＊ｐ＝０．０４５３（学生の両側試験による）。
【図７】３０週間の時間経過のＮＯＤマウスにおける血糖値レベルに対するＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴの毎日の腹腔内注射（マウスあたり２週間で１００ｕｌ）の効果を示すグラフ。ＵＣ１ＭＴ治療は、ＮＯＤマウスのＴ１Ｄ発生を防いだ。
【図８】３週間（Ａ）および６週間（Ｂ）の時間経過のマウスにおける血糖値に対する、マウスあたり１００ｕｌ（週２回）のＵＣ１ＭＴまたはＭＯＰＣ２１の腹腔内注射の効果を示すグラフ。ＵＣ１ＭＴ治療は、ＮＯＤマウスのＴ１Ｄ発生を防いだ。
【図９】ランゲルハンスの膵島への炎症細胞の浸潤（インスリン炎）に対するＭＯＰＣ２１またはＵＣ１ＭＴの効果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の指示対象を含む。本明細書で使用される場合、「および」は、特に明記しない限り、「または」と互換的に使用される。
【００２１】
本開示の任意の態様のすべての実施形態は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、組み合わせて使用することができる。
【００２２】
文脈上明らかに別段に必要でない限り、発明を実施するための形態および特許請求の範囲全体を通して、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（備える）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（備えている）」などの語は、排他的意味の対語としての包括的意味、または網羅的意味で、すなわち、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ（含むがそれらに限定されない）」の意味で解釈されたい。単数または複数を使用する語は、それぞれ、複数、単数も含む。さらに、「ｈｅｒｅｉｎ（本明細書において）」、「ａｂｏｖｅ（上に）」、および「ｂｅｌｏｗ（以下に）」といった語、ならびに類似の意味の語は、本出願において使用されるときには、全体としての本出願を指すものであり、本出願のいずれの特定の個所も指すものではない。組成物およびそれらの使用方法は、本明細書全体を通して開示される成分またはステップのうちのいずれかを「含む」、「から本質的になる」、または「からなる」ことができる。
【００２３】
本開示の実施形態の説明は、網羅的であることも、本開示を、開示された正確な形態に限定することも意図していない。本開示の特定の実施形態および実施例は、例示目的で本明細書に記載されているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な同等の修正が可能である。
【００２４】
一態様では、本開示は、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するための方法を提供し、障害を有するか、または障害のリスクがある対象に、細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤を含む組成物の治療有効量を投与して、障害を治療するかまたはその発症を制限することを含む。
【００２５】
以下の実施例で開示されるように、細胞外ヒトＭＴの阻害剤は、驚くべきことに、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患を治療するかまたはそれらの発症を制限するために使用され得る。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、関連する障害を治療および／または制限するのに有効である組成物の量を指す。
【００２７】
本明細書で使用される場合、ヒトメタロチオネインは、ヒトで同定されており、ＭＴ１〜ＭＴ４としてグループ化されているメタロチオネインの１８のアイソフォームおよびサブアイソフォームのいずれかを意味する。ＭＴ３およびＭＴ４が選択的に発現される場合、ＭＴ１およびＭＴ２は多くの細胞型での高誘導が可能であり、細胞から放出され得る（Ｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．２００６、Ｌａｕｋｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。本開示の阻害剤は、放出されたメタロチオネインを特異的に標的とするかまたはそれに結合する。例示的なそのようなアイソフォームには、以下が含まれるが、これらに限定されない。
ヒトＭＴ１−Ａ：
ＭＤＰＮＣＳＣＡＴＧ  ＧＳＣＴＣＴＧＳＣＫ  ＣＫＥＣＫＣＴＳＣＫ  ＫＳＣＣＳＣＣＰＭＳ  ＣＡＫＣＡＱＧＣＩＣ
ＫＧＡＳＥＫＣＳＣＣ  Ａ（配列番号：１）
ヒトＭＴ１−Ｂ
ＭＤＰＮＣＳＣＴＴＧ  ＧＳＣＡＣＡＧＳＣＫ  ＣＫＥＣＫＣＴＳＣＫ  ＫＣＣＣＳＣＣＰＶＧ  ＣＡＫＣＡＱＧＣＶＣ
ＫＧＳＳＥＫＣＲＣＣ  Ａ（配列番号２）
ヒトＭＴ１−Ｅ
ＭＤＰＮＣＳＣＡＴＧ  ＧＳＣＴＣＡＧＳＣＫ  ＣＫＥＣＫＣＴＳＣＫ  ＫＳＣＣＳＣＣＰＶＧ  ＣＡＫＣＡＱＧＣＶＣ
ＫＧＡＳＥＫＣＳＣＣ  Ａ（配列番号３）
ヒトＭＴ１＿Ｆ
ＭＤＰＮＣＳＣＡＡＧ  ＶＳＣＴＣＡＧＳＣＫ  ＣＫＥＣＫＣＴＳＣＫ  ＫＳＣＣＳＣＣＰＶＧ  ＣＳＫＣＡＱＧＣＶＣ
ＫＧＡＳＥＫＣＳＣＣ  Ｄ（配列番号４）
ヒトＭＴ１−Ｇ：
ＭＤＰＮＣＳＣＡＡＡ  ＧＶＳＣＴＣＡＳＳＣ  ＫＣＫＥＣＫＣＴＳＣ  ＫＫＳＣＣＳＣＣＰＶ  ＧＣＡＫＣＡＱＧＣＩ
ＣＫＧＡＳＥＫＣＳＣ  ＣＡ（配列番号５）
ヒトＭＴ２：
ＭＤＰＮＣＳＣＡＡＧ  ＤＳＣＴＣＡＧＳＣＫ  ＣＫＥＣＫＣＴＳＣＫ  ＫＳＣＣＳＣＣＰＶＧ  ＣＡＫＣＡＱＧＣＩＣ
ＫＧＡＳＤＫＣＳＣＣ  Ａ（配列番号６）
ヒトＭＴ３：
ＭＤＰＥＴＣＰＣＰＳ  ＧＧＳＣＴＣＡＤＳＣ  ＫＣＥＧＣＫＣＴＳＣ  ＫＫＳＣＣＳＣＣＰＡ  ＥＣＥＫＣＡＫＤＣＶ
ＣＫＧＧＥＡＡＥＡＥ  ＡＥＫＣＳＣＣＱ（配列番号７）
ヒトＭＴ−４
ＭＤＰＲＥＣＶＣＭＳ  ＧＧＩＣＭＣＧＤＮＣ  ＫＣＴＴＣＮＣＫＴＹ  ＷＫＳＣＣＰＣＣＰＰ  ＧＣＡＫＣＡＲＧＣＩ
ＣＫＧＧＳＤＫＣＳＣ  ＣＰ（配列番号８）
【００２８】
一実施形態では、本開示の阻害剤は、ＭＴ１および／またはＭＴ２を放出するために特異的に標的または結合する。
【００２９】
メタロチオネインへの「特異的」または「選択的」結合という用語は、タンパク質および他の生物製剤の不均一な集団におけるメタロチオネインの存在を決定づける結合反応を指す。したがって、指定された免疫アッセイまたは他の条件下で、本発明の特定の抗体またはアプタマーは、バックグラウンドの少なくとも２倍のメタロチオネインに結合し、試料中に存在するメタロチオネイン以外のタンパク質に著しい量で実質的に結合しない。したがって、そのような条件下での抗体またはアプタマーへの特異的結合は、メタロチオネインに対するその特異性について選択される抗体またはアプタマーからなる群から選択される阻害剤の使用を伴い得る。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「抗体」は、ヒトＭＴと免疫学的に反応する（好ましくはヒトＭＴに選択的、または１つ以上のヒトＭＴアイソフォームに選択的である）免疫グロブリン分子またはそのフラグメントを含み、かつモノクローナル抗体を含む。抗体の様々なアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、および他のＩｇ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥアイソタイプが存在する。この用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）およびヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全ヒト化抗体、ならびにヒト抗体などの遺伝子操作された形態を含む。本出願全体で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原結合能力を有するフラグメント（例えば、Ｆａｂ‘、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｒＩｇＧ）を含む。Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）も参照されたい。例えば、Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３rd  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）も参照されたい。この用語は、組換え一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）も指す。抗体という用語には、二価または二重特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディも含まれる。二価および二重特異性分子は、例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：１５４７、Ｐａｃｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１：１５７９、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ｓｕｐｒａ，Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ：５３６８、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ６：７８１、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５、Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：４０２６、およびＭｃＣａｒｔｎｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：３０１に記載されている。抗体は、例えば、抗ＭＴアームがＭＴ機能をブロックする一方で、組織特異的決定基に結合する抗体の他のアームを介して、特定の位置でＭＴを安定化し得るヘテロ二機能性抗体を含み得る。一実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体を含む。実施例は、ＵＳ２００３／０００７９７３に記載されており、Ａｂｃａｍ  Ｉｎｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓから市販されている例示的なモノクローナル抗体ＵＣ１ＭＴを使用したその開示の方法を実証している。クローンＵＣ１ＭＴはＬｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  １９９３（８５）：１６１−１７７）にも記載されている。
【００３１】
一実施形態では、本明細書に記載の方法で使用される抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む特異的キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの抗原結合フラグメントである非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基により置き換えられるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られないが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために含まれている残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように改変されたＦｃ領域を有し得る。他の形態のヒト化抗体は、元の抗体に対して変更された１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有し、これは、元の抗体からの１つ以上のＣＤＲに“由来する”１つ以上のＣＤＲとも呼称される。ヒト化抗体はまた、親和性成熟を伴い得る。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」は、列挙された障害のうちの１つ以上を有する個体において、以下のうちの１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度を低減すること、（ｂ）治療されている障害（複数可）に特徴的な症状の発症を制限もしくは予防すること、（ｃ）治療されている障害（複数可）に特徴的な症状の悪化を抑制すること、（ｄ）以前に障害（複数可）を有したことがある患者における障害（複数可）の再発を制限もしくは予防すること、および／または（ｅ）以前に障害（複数可）の症状態であった患者における症状の再発を制限もしくは予防すること。どの程度のそのような「治療すること」も、列挙された障害のうちの１つの対象にとっては大きな利益となる。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「制限する」または「発症を制限すること」は、列挙された障害のうちの１つ以上のリスクがある個体において以下のうちの１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害への進行を遅延させること、および／または（ｂ）障害への進行に特徴的な症状の発症を制限もしくは予防すること。どの程度のそのような「発症を制限すること」も、列挙された障害のうちの１つのリスクがある対象にとっては大きな利益となる。
【００３４】
そのような治療または発症の制限は、細胞外ＭＴ阻害剤を唯一の治療薬として使用することを含むか、または担当の医療従事者が適切と見なす他の治療的介入を補完もしくは増強するためにその使用を含み得る。
【００３５】
一実施形態では、対象は糖尿病を有するか、または糖尿病を発症するリスクがあり、本方法は糖尿病を治療するかまたはその発症を制限するのに役立つ。
【００３６】
そのような一実施形態では、対象は１型糖尿病のリスクがあり、本方法は対象におけるＩ型糖尿病の発症を制限するのに役立つ。以下の実施例に示されるように、ヒトＭＴ１阻害剤は、ＮＯＤマウスモデルで１型糖尿病の発症を予防した。したがって、この実施形態の方法は、Ｔ１Ｄのリスクがある対象における１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の発症を制限するために使用され得る。Ｔ１Ｄの発症を制限することは、Ｔ１Ｄへの進行を遅延させること、および／またはＴ１Ｄに特徴的な症状の発症を遅延させることを含み得るが、これらに限定されない。この実施形態では、Ｔ１Ｄのリスクがある対象は、Ｔ１Ｄの１つ以上のリスク因子を有し、そこから担当の医療従事者が治療を適切であると見なす。そのようなリスクＴ１Ｄリスク因子には、１型糖尿病を有する親もしくは兄弟、膵臓腫瘍、膵炎、膵島細胞自己抗体、インスリン自己抗体、グルタミン酸デカルボキシラーゼ自己抗体（ＧＡＤＡ）、インスリノーマ関連（ＩＡ−２）自己抗体、亜鉛トランスポーター自己抗体（ＺｎＴ８）、ならびに／またはＤＲＢ１  ０４０１、ＤＲＢ１  ０４０２、ＤＲＢ１  ０４０５、ＤＱＡ  ０３０１、ＤＱＢ１  ０３０２、およびＤＱＢ１  ０２０１からなる群から選択されるＩＤＤＭ１遺伝子のバリアントが含まれるが、これらに限定されない。あるいは、または組み合わせて、対象は、Ｔ１Ｄの１つ以上の症状を示し得（しかし、まだＴ１Ｄと診断されていない）、そのような症状には、多尿症（排尿の増加）、多飲症（喉の渇きの増加）、口渇、多食症（空腹の増加）、疲労、および体重減少が含まれ得るが、これらに限定されない。当業者により理解されるように、Ｔ１Ｄまたはその症状の発症に対する任意の制限は、リスクのある対象にとっては大きな利益を提供する。
【００３７】
インスリン依存型（Ｉ型）糖尿病１（ＩＤＤＭ１）遺伝子は、染色体６のＭＨＣクラスＩＩ領域に位置する。この遺伝子のある特定のバリアントは、１型糖尿病に特徴的な組織適合性の低下のリスクを増加する。そのようなバリアントには、ＤＲＢ１  ０４０１、ＤＲＢ１  ０４０２、ＤＲＢ１  ０４０５、ＤＱＡ  ０３０１、ＤＱＢ１  ０３０２、およびＤＱＢ１  ０２０１が含まれる。同様に、膵島細胞自己抗体、インスリン自己抗体、グルタミン酸デカルボキシラーゼ自己抗体（ＧＡＤＡ）、インスリノーマ関連（ＩＡ−２）自己抗体、亜鉛トランスポーター自己抗体（ＺｎＴ８）などの糖尿病関連自己抗体の出現は、しばしば、いずれの高血糖が発生する前の高血糖１型糖尿病に先行する。Ｔ１Ｄのリスクは、抗体の種類の数とともに増加し、自己抗体の出現から臨床的に診断可能なＴ１Ｄまでの時間間隔は、乳幼児では数か月であり得るが、人によっては数年かかることがある。そのような自己抗体は、例えば、免疫蛍光アッセイまたは結合アッセイにより検出され得る。
【００３８】
別の実施形態では、対象は１型糖尿病を有し、本方法は対象におけるＩ型糖尿病を治療するのに役立つ。この実施形態では、対象はすでにＴ１Ｄと診断されており、本方法はＴ１Ｄを治療するために使用され得る。Ｔ１Ｄは、膵臓のベータ細胞の自己免疫を破壊し、インスリン産生をほとんどまたはまったくせず、かつ高血糖を伴う。したがって、Ｔ１Ｄの治療には、対象へのインスリンの投与が含まれる。Ｔ１Ｄを有する対象は、低血糖、多尿症、多食症、多飲症、体重減少、かすみ目、疲労、創傷治癒能力の低下、尿路感染症、性機能障害、口渇、糖尿病性ケトアシドーシス、心血管疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、脳卒中、腎不全、および足部潰瘍を含むが、これらに限定されない症状または合併症を有し得る。いくつかの場合において、Ｔ１Ｄを有する対象は、膵臓または膵島移植を必要とし得る。したがって、様々な実施形態では、治療は、インスリン注射を必要とする頻度を低減すること、膵臓ベータ細胞の破壊、高血糖、低血糖、多尿症、多食症、多飲症、体重減少、かすみ目、疲労、創傷治癒能力の低下、尿路感染症、性機能障害、口渇、糖尿病性ケトアシドーシス、心血管疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、脳卒中、腎不全、および足部潰瘍を含むが、これらに限定されない対象における１型糖尿病合併症の発症または進行を遅延させること、ならびに膵臓または膵島細胞移植の必要性を遅らせることのうちの１つ以上を含み得る。一実施形態では、治療は、例えば、阻害剤の投与後２０〜１２０分以内に、血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を１０％、１５％、２０％以上低減することを含み得る。
【００３９】
別の実施形態では、対象は２型糖尿病のリスクがあり、本方法は対象における２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）の発症を制限するのに役立つ。Ｔ２Ｄは、高血糖、インスリン抵抗性、およびインスリンの相対的欠如を特徴とする代謝障害である。症状および／または合併症には、低血糖、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、タンパク尿、糸球体クリアランス異常、糖尿病性循環障害、腎不全、心血管疾患、多尿症、多飲症、体重減少、および脳卒中が含まれるが、これらに限定されない。。一実施形態では、２型糖尿病の発症の制限は、例えば、阻害剤の投与後２０〜１２０分以内に、血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を１０％、１５％、２０％以上低減することを含み得る。
【００４０】
Ｔ２Ｄのリスク因子には、肥満、喫煙、座りがちな生活様式、２型糖尿病を有する親または兄弟、前糖尿病、前糖尿病を有する親または兄弟、貧しい食生活（例えば、脂肪の過多、繊維の不足、単純糖質の過多など）、年齢が５０歳以上、高血圧、高コレステロール、テストステロン欠乏症、メタロチオネイン１  Ａ（ＭＴ１Ａ）ｒｓ８０５２３９４遺伝子座（Ｇ変化）一塩基多型、および妊娠糖尿病の既往歴が含まれるが、これらに限定されない。したがって、様々な実施形態では、対象はこれらのリスク因子のうちの１つ以上を有し、本方法はＴ２Ｄへの進行を遅延させ、かつ／または（ｂ）Ｔ２Ｄに特徴的な症状の発症を制限もしくは予防するのに役立つ。
【００４１】
以下の実施例で開示されるように、本方法は、Ｔ２Ｄのマウスモデルにおける耐糖能を著しく改善する。したがって、別の実施形態では、対象はＴ２Ｄを有し、本方法は対象におけるＴ２Ｄを治療するのに役立つ。この実施形態では、治療は、高血糖、低血糖、インスリン抵抗性、糖尿病性腎症、糖尿病性神経症、糖尿病性網膜症、タンパク尿、糸球体クリアランス異常、糖尿病性循環障害、腎不全、心血管疾患、多尿症、多飲症、体重減少、脳卒中を含むが、これらに限定されない２型糖尿病合併症のうちの１つ以上を制限すること、およびインスリンまたは他の療法を必要とする頻度を低減することを含み得る。これらの症状／合併症をどの程度制限することも、Ｔ２Ｄを有する対象にとっては大きな利益となる。。一実施形態では、治療は、例えば、阻害剤の投与後２０〜１２０分以内に、血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を１０％、１５％、２０％以上低減することを含み得る。
【００４２】
別の実施形態では、対象は前糖尿病を有し、本方法は対象における前糖尿病を治療するのに役立つ。この実施形態では、対象は、前糖尿病を有する対象である。本明細書で使用される場合、「前糖尿病」は、糖尿病の診断基準のすべてではなく一部が満たされている状態である。したがって、前糖尿病の対象は、（ａ）ベータ細胞の経口糖負荷（ＯＧＴ）への応答が不足していることによる状態である空腹時耐糖能異常を有し得るか、または（ｂ）空腹時血糖値（ＩＦＧ）が正常レベルと考えられるレベルを超えて上昇しているが、糖尿病として分類されるほどには高くない状態である、一定して高い空腹時血糖値を有し得る。前糖尿病状態は、インスリン抵抗性および心血管病変のリスクの増加に関連し得る。前糖尿病状態を有する個人は、Ｔ２Ｄを発症するリスクが比較的高い。本開示の方法は、例えば、Ｔ２Ｄ、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない前糖尿病の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることにより、前糖尿病を有する対象を治療するために使用され得る。。一実施形態では、治療は、例えば、阻害剤の投与後２０〜１２０分以内に、血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を１０％、１５％、２０％以上低減することを含み得る。
【００４３】
別の実施形態では、対象は欠陥的糖不耐症を有し、本方法は対象における耐糖能異常を治療するのに役立つ。本明細書で使用される場合、耐糖能異常は、７５ｇの経口耐糖能試験で、１ｄＬあたり１４０〜１９９ｍｇ（７．８〜１１．０ｍｍｏｌ／ｌ）の２時間の糖レベルとして定義される。患者は、２時間後に中程度に上昇した糖レベルを有する場合、ＩＧＴの条件未満であるが、そのレベル未満の場合は、２型糖尿病とされる。空腹時血糖値は、正常か、軽度に上昇し得る。耐糖能異常は、インスリン抵抗性および心血管病変のリスクの増加に関連する高血糖の前糖尿病状態である。ＩＧＴは、２型糖尿病よりも数年前に発生し得る。この実施形態では、治療は、２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、および／または心血管疾患を含むが、これらに限定されない耐糖能異常の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。．一実施形態では、治療は、例えば、阻害剤の投与後２０〜１２０分以内に、血糖値（ｍｇ／ｄＬ）を１０％、１５％、２０％以上低減することを含み得る。
【００４４】
別の実施形態では、対象は肝炎を有し、本方法は対象における肝炎を治療するのに役立つ。以下の実施例に開示されるように、ＭＴ阻害剤は、組織の炎症を制限し、炎症誘発性サイトカインＭＣＰ−１およびＴＮＦ−ａを低下させながら、肝臓組織の抗炎症性ＩＬ−１０シグナルを増加させるのに効果的である。肝炎は、肝組織の炎症である。症状には、皮膚および白目の黄色変色、食欲不振、嘔吐、疲労感、腹痛、下痢、急性肝不全、肝臓の瘢痕化、肝不全、または肝癌が含まれるが、これらに限定されない。肝炎の最も一般的な原因は、ウイルス感染（タイプＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）、大量のアルコールの使用、ある特定の薬物、毒素、他の感染症、自己免疫疾患、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。したがって、様々な実施形態では、治療は、皮膚および／または白目の黄色変色、食欲不振、嘔吐、疲労、腹痛、下痢、急性肝不全、肝臓の瘢痕化、肝不全、ならびに肝癌を含むが、これらに限定されない肝炎の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含み得る。
【００４５】
さらなる実施形態では、対象は炎症性肝疾患を有し、本方法は対象における炎症性肝疾患を治療するのに役立つ。本明細書で使用される場合、「炎症性肝疾患」は、脂肪症を介した肝細胞におけるトリグリセリド脂肪の大きな液胞の細胞質内蓄積（すなわち、細胞内の脂質の異常保持）に関連する状態である。肝臓は全身代謝において大きな役割を果たし、エネルギーの不均衡は特に肝臓の脂質代謝の欠陥と関連している。具体的には、肥満およびインスリン抵抗性は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）に特徴的な肝臓での脂質沈着の増加と関連していることがよくある。脂質代謝は非常に動的であるが、慢性的な脂質過負荷は、肝臓において組織の損傷を引き起こし、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に特徴的な線維症を引き起こし得る肝臓常在免疫細胞および非常在免疫細胞の動員をもたらす。肝線維症は、肝硬変、癌につながる可能性があり、心血管疾患のリスクを大幅に増加させる。これは、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）のリスクを改善するための肝臓への免疫細胞の動員をブロックする可能性を高める。以下の実施例に示されるように、ＭＴ阻害剤による治療は、精巣上体白色脂肪組織の湿潤組織重量の増加、および総トリグリセリドレベルの低下、ならびに抗炎症性ＩＬ−１０シグナルの増加と共に炎症誘発性サイトカインＭＣＰ−１およびＴＮＦ−ａの低下の原因であった。炎症性肝疾患は、脂肪症であり得る（非アルコール性脂肪性肝（ＮＡＦＬ））。別の実施形態では、脂肪性肝疾患は、ＮＡＦＬＤの最も極端な形態である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含むが、これらに限定されない非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）であり得る。ＮＡＦＬＤは、過剰なアルコールの使用以外の原因により、肝臓に脂肪が蓄積する（脂肪症）ときに発生する炎症性肝疾患の種類のうちの１つである。ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤの症状には、疲労、倦怠感、鈍い右上腹部の不快感、軽度の黄疸、および定期的な血液検査中の異常な肝機能検査結果が含まれ得るが、これらに限定されず、ＮＡＳＨおよびＮＡＦＬＤの合併症には、肝線維症、肝癌、および／または肝硬変が含まれ得るが、これらに限定されない。したがって、一実施形態では、炎症性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および／または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）からなる群から選択される。さらなる実施形態では、治療は、疲労、倦怠感、肝線維症、肝癌、および／または肝硬変を含むが、これらに限定されない炎症性肝疾患の１つ以上の合併症の進行を制限または遅延させることを含む。
【００４６】
一実施形態では、抗ＭＴ抗体を含むが、これらに限定されないＭＴ阻害剤は、膵臓ベータ細胞などのＭＴを産生する膵臓細胞を特異的に標的化するために、膵臓細胞標的化部分に連結され得る。この実施形態は、Ｔ１Ｄ、Ｔ２Ｄ、前糖尿病、および／または耐糖能異常を治療するかまたはそれらの発症を制限するのに特に有用であろう。一実施形態では、膵臓β細胞特異的標的化部分は、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４を含むが、これらに限定されない膵臓β細胞に優先的に結合する１つ以上のペプチドまたは他の部分を含む。
グルカゴン様ペプチド１  ＧＬＰ１（ａａ９２−１２８）ＨＤＥＦＥＲＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号９）
グルカゴン様ペプチド２；ＧＬＰ２（ａａ１４６−１７８）
ＨＡＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤ（配列番号１０）
膵臓ペプチド（ＰＰＹ）
ＭＡＡＡＲＬＣＬＳＬＬＬＬＳＴＣＶＡＬＬＬＱＰＬＬＧＡＱＧＡＰＬＥＰＶＹＰＧＤＮＡＴＰＥＱＭＡＱＹＡＡＤＬＲＲＹＩＮＭＬＴＲＰＲＹＧＫＲＨＫＥＤＴＬＡＦＳＥＷＧＳＰＨＡＡＶＰＲＥＬＳＰＬＤＬ（配列番号１１）
ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）
ＭＬＧＮＫＲＬＧＬＳＧＬＴＬＡＬＳＬＬＶＣＬＧＡＬＡＥＡＹＰＳＫＰＤＮＰＧＥＤＡＰＡＥＤＭＡＲＹＹＳＡＬＲＨＹＩＮＬＩＴＲＱＲＹＧＫＲＳＳＰＥＴＬＩＳＤＬＬＭＲＥＳＴＥＮＶＰＲＴＲＬＥＤＰＡＭＷ（配列番号１２）
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）
ＭＶＦＶＲＲＰＷＰＡＬＴＴＶＬＬＡＬＬＶＣＬＧＡＬＶＤＡＹＰＩＫＰＥＡＰＧＥＤＡＳＰＥＥＬＮＲＹＹＡＳＬＲＨＹＬＮＬＶＴＲＱＲＹＧＫＲＤＧＰＤＴＬＬＳＫＴＦＦＰＤＧＥＤＲＰＶＲＳＲＳＥＧＰＤＬＷ（配列番号１３）
エキセンディン−４
ＭＫＩＩＬＷＬＣＶＦＧＬＦＬＡＴＬＦＰＩＳＷＱＭＰＶＥＳＧＬＳＳＥＤＳＡＳＳＥＳＦＡＳＫＩＫＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＧ（配列番号１４）
【００４７】
膵臓細胞標的化部分を、ＭＴ抗体もしくはそのフラグメント、またはアプタマーを含むが、これらに限定されないＭＴ阻害剤に付着させることは、膵臓細胞標的化部分およびＭＴ抗体もしくはそのフラグメント、またはアプタマーがそれらのそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応により達成され得る。細胞外ＭＴ阻害剤が抗体またはそのフラグメントを含む一実施形態では、本組成物は、組換え融合タンパク質を含む。他の実施形態では、膵臓細胞標的化部分とＭＴ抗体またはそのフラグメントとの間の連結は、多くの化学的メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、および複合体形成を含み得る。共有結合は、既存の側鎖を直接縮合するか、または外部の架橋分子を組み込むことにより実現され得る。多くの二価または多価の連結剤は、抗体などのタンパク質分子を他の分子に結合するのに有用である。例えば、結合剤の代表的な非限定的な例は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物であり得る。
【００４８】
すべての実施形態では、対象は、哺乳動物、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ニワトリなどを含む、本明細書に開示される治療方法から利益を得ることができる任意の対象であり得る。一実施形態では、対象は、ヒトである。
【００４９】
投与のための組成物は、典型的には、医薬的に許容される担体を含むように医薬組成物として配合される。薬学的に許容される塩を形成することができる好適な酸には、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸、リン酸などの無機酸；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、アントラニル酸、ケイ皮酸、ナフタレンスルホン酸、スルファニル酸などの有機酸が含まれる。そのような塩を形成することができる好適な塩基には、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウムなどの無機塩基；さらにモノ、ジ、およびトリアルキルおよびアリールアミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミン、ジメチルアミンなど）、ならびに任意に置換されたエタノールアミン（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミンなど）などの有機塩基が含まれる。
【００５０】
医薬組成物は、本組成物および担体に加えて、（ａ）凍結乾燥保護剤、（ｂ）界面活性剤、（ｃ）増量剤、（ｄ）張度調整剤、（ｅ）安定剤、（ｆ）防腐剤、および／または（ｇ）緩衝剤を含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の緩衝剤は、トリス緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、または酢酸緩衝剤である。医薬組成物はまた、凍結乾燥保護剤、例えば、スクロース、ソルビトール、またはトレハロースも含み得る。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム、クロロヘキシジン、フェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ｏ−クレゾール、ｐ−クレゾール、クロロクレゾール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、安息香酸、およびそれらの様々な混合物を含む。他の実施形態では、医薬組成物は、グリシンのような増量剤を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８０ポリソルベート−８５、ポロキサマー−１８８、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、トリラウリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、ソルビタントリオレアスト（ｓｏｒｂｉｔａｎ  ｔｒｉｏｌｅａｓｔｅ）、またはそれらの組み合わせを含む。医薬組成物はまた、張度調整剤、例えば、製剤をヒトの血液と実質的に等張または等浸透圧にする化合物も含み得る。例示的な張度調整剤には、スクロース、ソルビトール、グリシン、メチオニン、マンニトール、デキストロース、イノシトール、塩化ナトリウム、アルギニン、および塩酸アルギニンが含まれる。他の実施形態では、医薬組成物は、安定剤、例えば、タンパク質ベースの組成物と組み合わせると、凍結乾燥または液体形態のタンパク質の化学的および／または物理的不安定性を実質的に防止または低減する分子をさらに含む。例示的な安定剤には、スクロース、ソルビトール、グリシン、イノシトール、塩化ナトリウム、メチオニン、アルギニン、および塩酸アルギニンが含まれる。
【００５１】
本組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、直腸、または局所を含む任意の好適な経路を介して、従来の薬学的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルを含有する投薬単位製剤で投与され得る。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、胸骨内、腱内、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、注入技法、または腹腔内を含む。投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、療法的または予防的応答）を提供するように調整され得る。好適な用量範囲は、例えば、０．１ｕｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり得るか、あるいはそれは、０．５ｕｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、１ｕｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、または５ｕｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。本組成物は、単回ボーラスで送達され得るか、または担当医療従事者により決定されるように、２回以上（例えば、２、３、４、５回以上）投与され得る。本組成物は、投与される唯一の治療薬であり得るか、または担当の医療従事者により適切であると見なされる場合、１つ以上の他の治療薬と一緒に（別々にまたは組み合わせて）投与され得る。非限定的な一実施形態では、対象は、Ｔ１Ｄを有するか、またはそのリスクがあり、阻害剤は、インスリン、メトホルミン、またはプラムリンチドのうちの１つ以上と一緒に使用され得る。別の実施形態では、対象は、Ｔ２Ｄ、前糖尿病、および／または耐糖能異常を有するか、またはそれらのリスクがあり、阻害剤は、メトホルミン、スルホニル尿素（グリブリド、グリピジド、およびグリメピリドを含むが、これらに限定されない）、メグリチニド（レパグリニドおよびナテグリニドを含むが、これらに限定されない）、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンを含むが、これらに限定されない）、ＤＰＰ−４阻害剤（シタグリプチン、サクサグリプチン、およびリナグリプチンを含むが、これらに限定されない）、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト（エクセナチド、リラグルチド、およびセマグルチドを含むが、これらに限定されない）、ＳＧＬＴ２阻害剤（カナグリフロジン、ダパグリフロジン、およびエンパグリフロジンを含むが、これらに限定されない）、またはインスリンのうちの１つ以上と一緒に使用され得る。非限定的な一実施形態では、対象は肝炎を患っているか、またはそのリスクがあり、阻害剤はエンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデフォビル、テルビブジン、シメプレビル、ソホスブビル、インターフェロン、またはリバビリンのうちの１つ以上と組み合わせて使用され得る。
【００５２】
別の実施形態では、
（ａ）細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤と、
（ｂ）インスリン、メトホルミン、プラムリンチド、スルホニル尿素（グリブリド、グリピジド、およびグリメピリドを含むが、これらに限定されない）、メグリチニド（レパグリニドおよびナテグリニドを含むが、これらに限定されない）、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾンおよびピオグリタゾンを含むが、これらに限定されない）、ＤＰＰ−４阻害剤（シタグリプチン、サクサグリプチン、およびリナグリプチンを含むが、これらに限定されない）、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト（エクセナチド、リラグルチド、およびセマグルチドを含むが、これらに限定されない）、ＳＧＬＴ２阻害剤（カナグリフロジン、ダパグリフロジン、およびエンパグリフロジンを含むが、これらに限定されない）、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデフォビル、テルビブジン、シメプレビル、ソホスブビル、インターフェロン、またはリバビリンのうちの１つ以上と、を含む組成物が提供される。本組成物は、例えば、本開示の方法で使用され得る。一実施形態では、阻害剤は、ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）に特異的に結合する抗メタロチオネイン抗体またはそのフラグメントを含む。上に開示された抗体のすべての実施形態および実施形態の組み合わせは、この態様の組成物に含めるのに好適である。一実施形態では、抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。別の実施形態では、抗ＭＴ抗体は、ヒト化抗ＭＴ抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む。
【００５３】
別の態様では、本開示は、
（ａ）細胞外ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）の阻害剤と、
（ｂ）細胞外ヒトＭＴの阻害剤に連結された膵臓または肝細胞標的化部分と、を含む組成物を提供する。
【００５４】
本組成物は、例えば、本開示の方法で使用され得る。一実施形態では、阻害剤は、ヒトメタロチオネイン（ＭＴ）に特異的に結合する抗メタロチオネイン抗体またはそのフラグメントを含む。上に開示された抗体のすべての実施形態および実施形態の組み合わせは、この態様の組成物に含めるのに好適である。一実施形態では、抗ＭＴ抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。別の実施形態では、抗ＭＴ抗体は、ヒト化抗ＭＴ抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む。
【００５５】
一実施形態では、細胞標的化部分は、肝細胞標的化部分である。例示的なそのような実施形態では、肝細胞標的化部分は、スポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ領域Ｉプラス、ラクトサミン化ヒト血清アルブミン、グリコシル化リポタンパク質、および／またはアラビノガラクタンを含むが、これらに限定されない。一実施形態では、肝細胞結合部分は、ペプチド性であり、ＣＳＰ、ＣＳＰ領域Ｉ、ＣＳＰ領域Ｉプラス、またはそれらの肝細胞結合フラグメントから選択される。肝臓へのＣＳＰ標的プラスモディウムスポロゾイトは、プラスモディウムスポロゾイトの表面に存在するスポロゾイト周囲タンパク質（ＣＳＰ）に起因する（Ｒａｔｈｏｒｅ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００５；２８０２１）：２０５２４−２０５２９）。ＣＳＰは、約４００個のアミノ酸の長さで３つのドメインに編成されており、「領域Ｉ」という名前の保存ＫＬＫＱＰモチーフを含むＮ末端ドメイン、反復性の高い中央ドメイン、および「領域ＩＩ」という名前の別の保存配列を含むＣ末端ドメイン（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．２００７；１３１（３）：４９２−５０４）。保存領域Ｉ  ＫＬＫＱＰ配列に加えて、Ｎ末端領域はまた、領域Ｉの上流に、２つのコンセンサスヘパリン硫酸結合配列を含む。保存領域Ｉのアミノ酸および領域Ｉの上流の２つのコンセンサスヘパリン結合配列の両方を含むペプチドは、「領域Ｉ−プラス」という名前である（Ｐｒｕｄｅｎｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２００６；４（１１）：８４９−８５６）。
【００５６】
別の実施形態では、細胞標的化部分は、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵臓ペプチド（ＰＰＹ）、およびエキセンディン−４を含むが、これらに限定されない膵臓細胞標的化部分であり、そのようなペプチドの例示的なアミノ酸配列は上に記載される。
【００５７】
細胞標的化部分を、ＭＴ抗体もしくはそのフラグメント、またはアプタマーを含むが、これらに限定されないＭＴ阻害剤に付着させることは、細胞標的化部分およびＭＴ抗体もしくはそのフラグメント、またはアプタマーがそれらのそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応により達成され得る。細胞外ＭＴ阻害剤が抗体またはそのフラグメントを含み、細胞標的化部分がペプチド性である一実施形態では、本組成物は組換え融合タンパク質を含む。他の実施形態では、細胞標的化部分とＭＴ抗体またはそのフラグメントとの間の連結は、多くの化学的メカニズム、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、および複合体形成を含み得る。共有結合は、既存の側鎖を直接縮合するか、または外部の架橋分子を組み込むことにより実現され得る。多くの二価または多価の連結剤は、抗体などのタンパク質分子を他の分子に結合するのに有用である。例えば、結合剤の代表的な非限定的な例は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物であり得る。
【００５８】
別の態様では、本開示は、抗ＭＴ抗体の組換え融合ポリペプチドをコードする組換え核酸、または本明細書に具体的に開示されるものを含む、ペプチド標的化部分に融合したそのフラグメントを提供する。組換え核酸配列は、一本鎖または二本鎖のＲＮＡまたはＤＮＡ、およびそれらの誘導体を含み得る。そのような組換え核酸配列は、ポリＡ配列、修飾コザック配列、およびエピトープタグをコードする配列、搬出シグナル、および分泌シグナル、核局在化シグナル、ならびに血漿膜局在化シグナルを含むが、これらに限定されない、コードされたタンパク質の発現および／または精製を促進するのに有用な追加の配列を含み得る。
【００５９】
さらなる態様では、好適な制御配列に機能的に連結された本開示の任意の実施形態または実施形態の組み合わせの組換え核酸を含む組換え発現ベクターが開示される。「組換え発現ベクター」は、核酸コード領域または遺伝子を、遺伝子産物の発現をもたらすことができる任意の制御配列に機能的に連結するベクターを含む。本発明の核酸配列に機能可能に連結された「制御配列」は、核酸分子の発現をもたらすことができる核酸配列である。制御配列が核酸配列と隣接している必要がないのは、それらがその発現を指示するように機能する場合である。したがって、例えば、介在する非翻訳であるが転写された配列は、プロモーター配列と核酸配列との間に存在し得、プロモーター配列は、依然としてコード配列に「機能可能に連結されている」とみなされ得る。他のそのような制御配列には、ポリアデニル化シグナル、終結シグナル、およびリボソーム結合部位が含まれるが、これらに限定されない。そのような発現ベクターは、プラスミドおよびウイルスベースの発現ベクターを含むが、これらに限定されない任意のタイプのものであり得る。発現ベクターは、エピソームとして、または宿主染色体ＤＮＡへの組み込みにより、宿主生物において複製可能であり得る。非限定的な実施形態では、発現ベクターは、プラスミドまたはウイルスベクターを含み得る。
【００６０】
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される組換え発現ベクターを含む組換え宿主細胞を提供し、ここで、宿主細胞は、原核生物または真核生物のいずれか、例えば、哺乳動物細胞であり得る。細胞は、一時的または安定的にトランスフェクトされ得る。
【００６１】
別の態様では、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限するために、本組成物、組換え核酸、組換え発現ベクター、組換え宿主細胞、または本明細書に開示される任意の実施形態もしくは実施形態の組み合わせの医薬組成物を使用することが開示される。そのような使用は上記のとおりである。
【００６２】
さらなる実施形態では、糖尿病、前糖尿病、耐糖能異常、肝炎、および／または炎症性肝疾患からなる群から選択される障害を治療するかまたはその発症を制限する方法が開示され、これは、障害を治療するための有効量の本組成物、組換え核酸、組換え発現ベクター、組換え宿主細胞、または本明細書に開示される任意の実施形態もしくは実施形態の組み合わせの医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することによる。そのような方法は上記のとおりである。
【実施例】
【００６３】
ＵＣ１ＭＴによる２型糖尿病の治療
ＩＩ型糖尿病のインスリン抵抗性の特徴をモデル化するために、高脂肪食（ＨＦＤ）をマウスに与えた。５週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、標準的な６０％高脂肪食を１４週間与えた後、処置を開始した。マウスに週２回腹腔内投与で１００μｌの１ｍｇ／ｍｌの抗ＭＴ抗体（Ａｂｃａｍ  Ｉｎｃ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓから入手したＵＣ１ＭＴ）を８週間注入し、その後２７週齢でマウスを屠殺した（合計２２週間のＨＦＤ）。２つの処置グループ間で体重または摂食量に違いはなかった。図１は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＭＯＰＣ２１）またはＵＣ１ＭＴによる処置の終了時に腹腔内にグルコースを注射したマウスの耐糖能試験の結果を示す。図２は、グループ内の各動物からの初期測定値に対して正規化した耐糖能試験結果の変化を示す。対照動物は脂肪性肝および糖不耐症を発症したが、ＵＣ１ＭＴで処置されたマウスは対照群と比較して耐糖能の改善を示した。これらのデータは、抗ＭＴ抗体が耐糖能異常の治療に使用され得ることを提示した。耐糖能は炎症状態により調節され得るため、これらの結果はまた、ＵＣ１ＭＴがマウスの炎症プロファイルを改善し、したがってＨＦＤ給餌マウスが大きな糖負荷を管理する能力を改善することを示唆する。
【００６４】
ＵＣ１ＭＴまたはＭＯＰＣ２１で処置されたＨＦＤ給餌マウスのＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）肝炎症プロファイルに対する影響
肝臓は全身代謝において大きな役割を果たし、エネルギーの不均衡は特に肝臓の脂質代謝の欠陥と関連している。具体的には、肥満およびインスリン抵抗性は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）に特徴的な肝臓での脂質沈着の増加と関連していることがよくある（Ｋａｔｓｉｋｉ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２０１６  ＰＭＩＤ：２７２３７５７７）。脂質代謝は非常に動的であるが（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ２０１７  ＰＭＩＤ：２８０６５８２８）、慢性的な脂質過負荷は、肝臓において組織の損傷を引き起こし、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に特徴的な線維症を引き起こし得る肝臓常在免疫細胞および非常在免疫細胞の動員をもたらす（Ｎａｒａｙａｎａｎ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｅ  Ｎｅｔｗ  ２０１６  ＰＭＩＤ：２７３４０３８３）。肝線維症は、肝硬変、癌につながる可能性があり、心血管疾患のリスクを大幅に増加させる。これは、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）のリスクを改善するための肝臓への免疫細胞の動員をブロックする可能性を高める。
【００６５】
上の２型糖尿病研究で記載したのと同じ動物を、ｑＰＣＲ研究を介してｍＲＮＡ発現を評価することにより、肝臓の表現型について調べた。ＵＣ１ＭＴ治療は、白色精巣上体脂肪組織の遺伝子発現の一部（特に、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１−アルファ（ＰＧＣ−１ａ）、エネルギー代謝を調節する転写コアクチベーター、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲガンマ））に対して効果を有した（図３）。
【００６６】
動物の屠殺時に、肝臓、膵臓、扁平上皮白色脂肪組織、ｅＷＡＴ、肩甲骨内褐色脂肪組織、および血清を収集した。各試料の半分をＲＮＡに使用し、半分を組織学に使用した（Ｚ−ＦＩＸ（商標）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で固定した膵臓を除くすべての組織をホルマリンで固定した）。データは、抗ＭＴ抗体が以下の原因であることを示す：
・精巣上体白色脂肪組織の湿潤組織重量の増加（図４Ａ〜Ｂ）、
・肝臓の総トリグリセリドレベルの低下（図６）、
・一部の炎症誘発性サイトカイン（ＭＣＰ−１およびＴＮＦ−ａ）の発現の低下（図５）、
・抗炎症性ＩＬ−１０シグナルの発現の増加（図５）。
【００６７】
抗メタロチオネイン抗体は、高脂肪食で処置されたマウスの体重または体重増加を変化させず、肝組織も著しく変化させなかった。
【００６８】
上に示された改善した耐糖能と一致して、抗ＭＴ抗体で処置されたマウスの肝臓トリグリセリドレベルは低下した。これらのデータは、ＭＴ阻害剤が全身のグルコース代謝を改善でき、肝臓における栄養過多の負荷を低下させ、脂肪肝の発症を制限し得ることを示唆する。
【００６９】
１型糖尿病研究
ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウス系統（一般にＮＯＤと呼ばれる）は、自己免疫１型糖尿病の多遺伝子モデルである。ＮＯＤマウスの糖尿病は、高血糖および膵島炎、膵島の白血球浸潤を特徴とする。膵臓インスリン含有量の著しい低下は、約１２週齢の雌で発生し、数週間後に雄で発生する。雌の８０％および雄の４５％が３０週間までに糖尿病になり、雌の発生率の中央値は１７週間である。ＮＯＤバックグラウンドの免疫表現型は、抗原提示、Ｔリンパ球レパートリー、ＮＫ細胞機能、マクロファージサイトカイン産生、創傷治癒、およびＣ５補体の欠陥で構成される。これらの欠陥により、ＮＯＤバックグラウンドが免疫不全マウス系統の一般的な選択肢となっている。
【００７０】
・ＮＯＤマウスは、１９８０年に発表されて以来、１型ＤＭが自然発症することがわかっているため、１型ＤＭ予防研究では、ＮＯＤマウス（非肥満糖尿病）マウスを使用した。その病原性事象は、少なくとも生後３週間という早い時期に膵臓リンパ節に膵島抗原が現れることで始まる。最初にＡＰＣ、次にリンパ球を伴う膵島炎は、生後約４〜６週齢で始まり、その後１５週間で着実に進行する。ＢＳ＞２５０ｍｇ／ｄｌとしてのフランク糖尿病は、１８〜２０週の間に始まる。また、ＮＯＤマウスにおける自然発症糖尿病の発生率は、雌では６０〜８０％、雄では２０〜３０％である。したがって、Ｔ１  ＤＭにおける抗ＭＴモノクローナル抗体の潜在的な役割を調査するために、ＮＯＤマウスを３つのグループ（１治療グループあたり１０匹の動物）に分割することを決定した：（１）ネガティブ対照用のＰＢＳによる処置、（２）０．１ｍｇ／ｍｌの非特異的ＩｇＧによる療法、アイソタイプ対照としてのＭＯＰＣ、（３）マウスあたり０．１ｍｇ／ｍｌのＵＣＩＭＴによる毎日の腹腔内注射。各グループは、５週齢から割り当てられた処置を受けた。総治療コースは２週間であった。血糖値を毎週チェックし、２週間にわたって２５０ｍｇ／ｄｌを超える血糖値を有したマウスを屠殺した。糖尿病のないＮＯＤマウスの残りを３０週齢で屠殺した。図７および図８に示されるように、抗ＭＴ抗体治療は、アイソタイプ対照ＭＯＰＣ２１またはＰＢＳビヒクル対照と比較して、高脂肪食で処置されたマウスにおける糖不耐症の顕著な軽減をもたらした。ＵＣ１ＭＴはまた、膵島炎（すなわち、炎症細胞のランゲルハンスの膵島への浸潤）の著しい低減をもたらした（図９）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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