(57)【要約】本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、それを含む組成物、その作製及び／または精製方法、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のバッチの選択方法、ならびに疾患（例えば、ＩＢＤ）の治療のための組成物の使用方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物であって、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲の平均シアル酸を有する、前記組成物。
【請求項２】
前記ＩＬ−２２ポリペプチドがＮ−グリコシル化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３に対応する１つ以上の位置でグリコシル化されている、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物であって、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３に対応する１つ以上の位置でグリコシル化されており、及び：
（ａ）残基Ａｓｎ２１でのＮ−グリコシル化部位占有率が、７０〜９０の範囲であり；
（ｂ）残基Ａｓｎ３５でのＮ−グリコシル化部位占有率が、９０〜１００の範囲であり；
（ｃ）残基Ａｓｎ６４でのＮ−グリコシル化部位占有率が、９０〜１００の範囲であり；及び／または
（ｄ）残基Ａｓｎ１４３でのＮ−グリコシル化部位占有率が、２５〜３５の範囲である、前記組成物。
【請求項５】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８または９モルの平均シアル酸含有量を有する、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記シアル酸のグリコシル化が、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮＧＮＡ１モル未満の平均Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）含有量を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、液体組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
（ｉ）前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約８，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１９，０００ｎｇの最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を有し；及び／または
（ｉｉ）前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬの、０から最後の測定可能な時点までの血清濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣｌａｓｔ）を有し；及び／または
（ｉｉｉ）前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日のクリアランス（ＣＬ）を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記Ｃｍａｘ、ＡＵＣｌａｓｔ、及び／またはＣＬを、約１，０００μｇ／ｋｇの前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＣＤ１マウスへの静脈内投与後に評価する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、単鎖構造、二分岐構造、三分岐構造、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含む、請求項２〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
（ｉ）前記Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が、単鎖構造を有し；
（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が、二分岐構造を有し；
（ｉｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が、三分岐構造を有し；及び／または
（ｉｖ）前記Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が、四分岐構造を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含む、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
（ｉ）前記Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％が、ガラクトース部分を有さず；
（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が、１つのガラクトース部分を有し；
（ｉｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が、２つのガラクトース部分を有し；
（ｉｖ）前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が、３つのガラクトース部分を有し；
（ｖ）前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が、４つのガラクトース部分を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含む、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
（ｉ）前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約３５％が、シアル酸部分を有さず；
（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、１つのシアル酸部分を有し；
（ｉｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、２つのシアル酸部分を有し；
（ｉｖ）前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、３つのシアル酸部分を有し；
（ｖ）前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、４つのシアル酸部分を有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
（ｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端マンノース部分を有する約０％〜約１０％のＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する約３０％〜約５５％のＮ−グリカンを含む、請求項２〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記Ｎ−グリカンが、１、２、３、または４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
（ｉ）前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；
（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；
（ｉｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；及び／または
（ｉｖ）前記Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
（ｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端ガラクトース（Ｇａｌ）部分を有する約２０％〜約４５％のＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンが、１、２、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する、請求項２〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
（ｉ）前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約３０％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有し；
（ｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有し；及び／または
（ｉｉｉ）前記Ｎ−グリカンの約０．１％〜約６％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
（ｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含み；（ｉｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、フコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含み；及び／または（ｉｉｉ）前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、アフコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含む、請求項２〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記Ｆｃ領域がグリコシル化されていない、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
（ｉ）前記Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基が、ＧｌｙまたはＡｌａであり；及び／または（ｉｉ）前記Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有するか、またはそれからなる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、ヒトＩＬ−２２ポリペプチドである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記リンカーが、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有するかまたはそれからなる、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２受容体に結合する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ＩＬ−２２受容体がヒトＩＬ−２２受容体である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ヒトＩＬ−２２受容体が、ＩＬ−２２Ｒ１ポリペプチド及びＩＬ−１０Ｒ２ポリペプチドからなるヘテロ二量体を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ＩＬ−２２Ｒ１ポリペプチドが、配列番号８２のアミノ酸配列を有し、前記ＩＬ−１０Ｒ２ポリペプチドが、配列番号８４のアミノ酸配列を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結された２つの単鎖ユニットからなり、各単鎖ユニットが、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ４のＦｃ領域と融合したＩＬ−２２を含むヒトＩＬ−２２融合タンパク質からなる、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物が、医薬組成物である、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物が、水性及び／または無菌である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
治療薬をさらに含む、請求項３８または請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
ゲル化剤をさらに含む、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
それを必要とする対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法であって、前記方法が、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項４３】
前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記潰瘍性大腸炎が、中等度〜重度の潰瘍性大腸炎である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＩＢＤが、クローン病である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
医薬品として使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のインターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む、組成物。
【請求項４８】
（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、
（ｉｉ）腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内での、上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強、
（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、
（ｉｖ）それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善、
（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、
（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、あるいは
（ｖｉｉ）急性内毒素血症または敗血症の治療に使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のインターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物。
【請求項４９】
（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、
（ｉｉ）腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強、
（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、
（ｉｖ）それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善、
（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、
（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、あるいは
（ｖｉｉ）急性内毒素血症または敗血症の治療に使用するための医薬品の調製のための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のインターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の使用。
【請求項５０】
それを必要とする対象における、腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強の方法であって、前記方法が、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項５１】
それを必要とする対象における急性腎障害または急性膵炎の治療方法であって、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項５２】
それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善方法であって、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記加速または改善方法。
【請求項５３】
アテローム性動脈硬化巣形成症の病状を含む、それを必要とする対象における心血管状態の予防または治療方法であって、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記予防または治療方法。
【請求項５４】
それを必要とする対象におけるメタボリックシンドロームの治療方法であって、前記方法が、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項５５】
それを必要とする対象における急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の治療方法であって、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【請求項５６】
前記組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、または局所的に投与する、請求項４２〜５５のいずれか一項に記載の方法、組成物、または使用。
【請求項５７】
前記対象に、少なくとも１つの追加の治療薬を共投与する、請求項４２〜５６のいずれか一項に記載の方法、組成物、または使用。
【請求項５８】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の作製方法であって、前記方法が：
複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を、生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で少なくとも約１０日間培養することを含み、その場合、前記宿主細胞が、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、前記宿主細胞が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それによってＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む前記組成物が作製され、
前記ＩＬ−２２ポリペプチドがグリコシル化されており、前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する、前記作製方法。
【請求項５９】
前記培養期間が、少なくとも１１日、少なくとも１２日、または少なくとも１３日である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記培養期間が１２日である、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記生産培地中で前記播種トレイン培養物を培養する前に、シードトレイン培地中でシードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することにより、前記シードトレイン培養物を生成することをさらに含む、請求項５８〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記生産培地中で前記播種トレイン培養物を培養する前に、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で、前記シードトレイン培養物を播種培地に播種することをさらに含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記宿主細胞が真核生物宿主細胞である、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記真核生物宿主細胞が哺乳類宿主細胞である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記哺乳類宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記生産培養物から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を回収することをさらに含む、請求項５８〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞培養液を回収することが：（ｉ）前記生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により前記生産培地から前記宿主細胞を除去して前記細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）前記細胞培養液を濾過することを含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞培養液中の前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することをさらに含む、請求項５８〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することが、以下のサブ工程を含む、請求項６８に記載の方法：
（ｉ）前記細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記アフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、前記アフィニティクロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合により前記アフィニティプール内のウイルスを不活化し；
（ｉｉ）前記アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により前記陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び
（ｉｉｉ）前記陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収して前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により前記疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを前記精製された生成物プールに加える。
【請求項７０】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することが、以下の１つ以上のサブ工程をさらに含む、請求項６９に記載の方法：
（ｉｖ）前記精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；
（ｖ）前記精製された生成物プールを限外濾過し；
（ｖｉ）前記濃縮生成物プールの前記緩衝液を交換して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または
（ｖｉｉ）前記ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。
【請求項７１】
サブ工程（ｉ）が、前記細胞培養液を前記アフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を前記細胞培養液に加えることによりウイルスを不活化することをさらに含む、請求項６９または７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記方法が、前記組成物の前記シアル酸含有量を濃縮することをさらに含む、請求項５８〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜８モルの範囲の初期平均シアル酸含有量を有する、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６、７、または８モルの初期平均シアル酸含有量を有する、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記方法が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで、平均シアル酸含有量を濃縮することを含む、請求項７２〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記方法が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで、平均シアル酸含有量を濃縮することをさらに含む、請求項６２〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記アフィニティクロマトグラフィー支持体が、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む、請求項７０〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記プロテインＡ樹脂がＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む、請求項７０〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの平均シアル酸含有量を有する、請求項５８〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８または９モルの平均シアル酸含有量を有する、請求項５８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結された２つの単鎖ユニットからなり、各単鎖ユニットが、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ４のＦｃ領域と融合したＩＬ−２２を含むヒトＩＬ−２２融合タンパク質からなる、請求項５８〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
請求項５８〜８３のいずれか一項に記載の方法により生産される、組成物。
【請求項８５】
前記組成物が、医薬組成物である、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
以下の工程を含む、出荷用のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチの選択方法：
（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチを提供し；
（ｂ）前記バッチ中のシアル酸のレベルを評価し；そして
（ｃ）前記バッチが前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する場合に、前記出荷用のバッチを選択する。
【請求項８７】
工程（ｃ）が、前記バッチが前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、前記出荷用のバッチを選択することを含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
工程（ｃ）が、前記バッチが前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、前記出荷用のバッチを選択することを含む、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項８９】
工程（ｃ）が、前記バッチが前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、前記出荷用のバッチを選択することを含む、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項９０】
工程（ｂ）が、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、または比色アッセイを使用してバッチ中のシアル酸のレベルを評価することを含む、請求項８６〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
工程（ｂ）が、ＨＰＬＣを使用してシアル酸のレベルを評価することを含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物のシアル酸含有量の制御方法であって、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、前記方法が：
複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を、生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で少なくとも１０日間培養することを含み、その場合、前記宿主細胞が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、前記組成物が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有し；そして
前記方法がまた、前記組成物の前記平均シアル酸含有量を、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮し、それにより前記組成物の前記シアル酸含有量を制御することを含む、前記制御方法。
【請求項９３】
前記方法が、前記組成物の前記平均シアル酸含有量を、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することを含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記平均シアル酸含有量を濃縮することが、前記生産培養物から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を回収することを含む、請求項９２または９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記細胞培養液を回収することが：（ｉ）前記生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により前記生産培地から前記宿主細胞を除去して細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）前記細胞培養液を濾過することを含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記組成物の前記平均シアル酸含有量を濃縮することが、前記細胞培養液中の前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することをさらに含む、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することが、以下のサブ工程を含む、請求項９６に記載の方法：
（ｉ）前記細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記アフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、前記アフィニティクロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合により前記アフィニティプール内のウイルスを不活化し；
（ｉｉ）前記アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により前記陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び
（ｉｉｉ）前記陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収して前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により前記疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを前記精製された生成物プールに加える。
【請求項９８】
前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することが、以下の１つ以上のサブ工程をさらに含む、請求項９７に記載の方法：
（ｉｖ）前記精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；
（ｖ）前記精製された生成物プールを限外濾過し；
（ｖｉ）前記濃縮生成物プールの前記緩衝液を交換して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または
（ｖｉｉ）前記ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。
【請求項９９】
サブ工程（ｉ）が、前記細胞培養液を前記アフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を前記細胞培養液に加えることによりウイルスを不活化することをさらに含む、請求項９７または９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記アフィニティクロマトグラフィー支持体が、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む、請求項９７〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記プロテインＡ樹脂がＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む、請求項９７〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む、請求項１０２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体を参照として本明細書に援用する。２０１９年１月２４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーの名称は５０４７４−１８０ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１．２４．１９＿ＳＴ２５であり、サイズは１２１，８２７バイトである。
【０００２】
本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、それを含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびにその作製方法、精製方法、及び使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
インターロイキン（ＩＬ）−２２は、Ｔｈ２２細胞、ＮＫ細胞、リンパ組織誘導因子（ＬＴｉ）細胞、樹状細胞、Ｔｈ１７細胞などによって産生されるサイトカインのＩＬ−１０ファミリーのメンバーである。ＩＬ−２２は、自然免疫細胞（例えば、上皮細胞、肝細胞、及びケラチノサイト）及びいくつかの器官（例えば、真皮、膵臓、腸、及び呼吸器系）の上皮バリア組織で発現するＩＬ−２２Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２受容体複合体に結合する。
【０００４】
ＩＬ−２２は粘膜の免疫に重要な役割を果たし、細菌性病原体の付着と除去に対する初期の宿主防御を媒介する。ＩＬ−２２は、上皮細胞由来の抗菌ペプチド及び炎症誘発性サイトカインの産生を促進し、腸内の結腸上皮細胞の増殖及び遊走を刺激する。細菌感染時に、ＩＬ−２２ノックアウトマウスは腸上皮の再生障害、高い細菌負荷、及び死亡率の増加を示した。同様に、ＩＬ−２２ノックアウトマウスをインフルエンザウイルスに感染させると、重度の体重減少ならびに気管及び気管支上皮細胞の再生障害が誘発された。したがって、ＩＬ−２２は、微生物感染の抑制においては炎症誘発性の役割を、また、炎症反応においては上皮再生における抗炎症性保護の役割を果たす。
【０００５】
潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ならびに微生物感染、急性腎障害、急性膵炎、創傷、心血管疾患、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び敗血症を含む他の障害の治療のための治療薬及び治療法の改善の必要性が残されている。また、そのような治療薬の製造方法及び精製方法の改善の必要性も残されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、とりわけ、インターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質、それを含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびに、例えば、ＩＢＤ、微生物感染、急性腎障害、急性膵炎、創傷、心血管疾患、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症、ＧＶＨＤ、及び敗血症を含む障害の治療のための、その作製方法、精製方法、及び使用方法、ならびに出荷用のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチの選択方法を提供する。本明細書ではまた、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量の調節方法、ならびにＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のシアル酸含有量を調整することによる、ｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスの低減方法及び／または半減期の増加方法を提供する。
【０００７】
一態様では、本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を特徴とし、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜１２モルの範囲のシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはＮ−グリコシル化されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３に対応する１つ以上の位置でグリコシル化されている。
【０００８】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を特徴とし、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、ＩＬ−２２ポリペプチドは配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３に対応する１つ以上の位置でグリコシル化され、（ａ）残基Ａｓｎ２１でのＮ−グリコシル化部位占有率は７０〜９０の範囲であり；（ｂ）残基Ａｓｎ３５でのＮ−グリコシル化部位占有率は９０〜１００の範囲であり；（ｃ）残基Ａｓｎ６４でのＮ−グリコシル化部位占有率は９０〜１００の範囲であり；及び／または（ｄ）残基Ａｓｎ１４３でのＮ−グリコシル化部位占有率は２５〜３５の範囲である。
【０００９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜９モルの範囲のシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８または９モルのシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８モルのシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。他の実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり９モルのシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。
【００１０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シアル酸グリコシル化は、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）を含む。
【００１１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり１モル未満のＮＧＮＡの平均Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）含有量を有する。
【００１２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は液体組成物である。
【００１３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では：（ｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約８，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１９，０００ｎｇの最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を有し；（ｉｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、時点０から最後の測定可能な時点（ＡＵＣｌａｓｔ）までの血清濃度−時間曲線下の面積が約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬであり；及び／または（ｉｉｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日のクリアランス（ＣＬ）を有する。いくつかの実施形態では、約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をＣＤ１マウスに静脈内投与した後に、Ｃｍａｘ、ＡＵＣｌａｓｔ、及び／またはＣＬを評価する。
【００１４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、単鎖、二分岐、三分岐、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が単鎖構造を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が二分岐構造を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が三分岐構造を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が単鎖構造を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が二分岐構造を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が三分岐構造を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が四分岐構造を有する。
【００１５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％がガラクトース部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が１つのガラクトース部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が２つのガラクトース部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が３つのガラクトース部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％がガラクトース部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が１つのガラクトース部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が２つのガラクトース部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が３つのガラクトース部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が４つのガラクトース部分を有する。
【００１６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約３５％がシアル酸部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が１つのシアル酸部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が２つのシアル酸部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が３つのシアル酸部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの１２％〜３５％がシアル酸部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が１つのシアル酸部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が２つのシアル酸部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が３つのシアル酸部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が４つのシアル酸部分を有する。
【００１７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する約０％〜約１０％のＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する約３０％〜約５５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する０％〜１０％のＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する３０％〜５５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する０％〜１０％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する３０％〜５５％のＮ−グリカンを含む。
【００１８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、３つ、または４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの５％〜２５％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの０％〜１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【００１９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ガラクトース（Ｇａｌ）部分を有する約２０％〜約４５％のＮ−グリカンを含み；及び／または（ｉｉ）Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｇａｌ部分を有する２０％〜４５％のＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉ）Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【００２０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１５％〜約３０％が１つの末端Ｇａｌ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が２つの末端Ｇａｌ部分を有し；及び／または（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約０．１％〜約６％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）１５％〜３０％のＮ−グリカンが、１つの末端Ｇａｌ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１％〜１５％が２つの末端Ｇａｌ部分を有し；及び／または（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの０．１％〜６％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【００２１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では：（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含み；（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、フコシル化Ｎ−グリカンを有するＮ−グリカンを含み、及び／または（ｉｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、アフコシル化Ｎ−グリカンを有するＮ−グリカンを含む。
【００２２】
別の態様では、本発明は、表１２または１３に示すＮ−グリカン分布を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を提供する。
【００２３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍＬ〜約１２ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。
【００２４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも約５００Ｌの容量を有する生産培養物から産生されている。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約５００Ｌ〜約５，０００Ｌの容量を有する生産培養物から産生されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約１，０００Ｌ〜約３，０００Ｌの容量を有する生産培養物から産生されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約１，５００Ｌ〜約２，５００Ｌの容量を有する生産培養物から産生されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約２０００Ｌの容量を有する生産培養物から産生されている。
【００２５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はグリコシル化されていない。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基は、ＧｌｙまたはＡｌａであり；及び／または（ｉｉ）Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基は、ＧｌｙまたはＡｌａである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はＧｌｙである。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はＡｌａである。
【００２６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【００２７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）の配列同一性を有する。
【００２８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ヒトＩＬ−２２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【００３０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有するかまたはそれからなる。
【００３１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２受容体はヒトＩＬ−２２受容体である。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−２２受容体は、ＩＬ−２２Ｒ１ポリペプチド及びＩＬ−１０Ｒ２ポリペプチドからなるヘテロ二量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２Ｒ１ポリペプチドは、配列番号８２のアミノ酸配列を有し、ＩＬ−１０Ｒ２ポリペプチドは、配列番号８４のアミノ酸配列を有する。
【００３２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結された２つの単鎖ユニットからなり、各単鎖ユニットは、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ４のＦｃ領域と融合したＩＬ−２２を含むヒトＩＬ−２２融合タンパク質からなる。
【００３３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は水性及び／または無菌である。いくつかの実施形態では、組成物は、追加の治療薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物はゲル化剤をさらに含む。
【００３４】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎またはクローン病である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、中程度〜重度の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤはクローン病である。
【００３５】
別の態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書に記載の任意の組成物を特徴とする。
【００３６】
別の態様では、本発明は、（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、（ｉｉ）腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強、（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、（ｉｖ）それを必要とする対象での創傷治癒の加速または改善、（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、（ｖｉｉ）急性内毒素血症または敗血症の治療、あるいは（ｖｉｉｉ）ＧＶＨＤの治療に使用するための本明細書に記載の組成物のいずれかを特徴とする。
【００３７】
別の態様では、本発明は、（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、（ｉｉ）腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強、（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、（ｉｖ）それを必要とする対象での創傷治癒の加速または改善、（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、（ｖｉｉ）急性の内毒素血症または敗血症の治療、あるいは（ｖｉｉｉ）ＧＶＨＤの治療に使用するための薬剤の調製のための本明細書に記載の組成物のいずれかを特徴とする。
【００３８】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象の腸内の微生物感染の阻害、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強方法を特徴とする。
【００３９】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における急性腎障害または急性膵炎の治療方法を特徴とする。
【００４０】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善方法を特徴とする。
【００４１】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるアテローム性動脈硬化巣形成症などの心血管疾患の予防または治療方法を特徴とする。
【００４２】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるメタボリックシンドロームの治療方法を特徴とする。
【００４３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の治療方法を特徴とする。
【００４４】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるＧＶＨＤの治療方法を特徴とする。
【００４５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、または局所的に投与する。
【００４６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象に、少なくとも１つの追加の治療薬を共投与する。
【００４７】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の作製方法を特徴とし、方法は以下の工程を含む：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを有し；（ｂ）シードトレイン培養物を形成するのに適した条件下でシードトレイン培地中で宿主細胞を培養し；（ｃ）播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で、シードトレインを播種培地に播種し；及び（ｄ）生産培養物を形成するのに適した条件下で播種トレインを生産培地で培養し、生産培養物の宿主細胞はＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、工程（ｄ）の期間は少なくとも１０日であり、それにより、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物が作製され、その場合、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、組成物は、１モルのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質あたり６〜１２モルの範囲のシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の期間は、少なくとも１１日、少なくとも１２日、または少なくとも１３日である。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の期間は１２日である。
【００４８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、以下の工程をさらに含む：（ｅ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を生産培養物から採取する。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は：（ｉ）生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により生産培地から宿主細胞を除去し、細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）細胞培養液を濾過することを含む。
【００４９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、以下の工程をさらに含む：（ｆ）細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し、及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程の１つ以上をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過し；（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し、及び／または（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を細胞培養液に加えることによってウイルスを不活化することをさらに含む。
【００５０】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の作製方法を特徴とし、方法は：複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を、生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で少なくとも約１０日培養することを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それによりＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物が作製され、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり６〜１２モルの範囲のシアル酸の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、培養の期間は、少なくとも１１日、少なくとも１２日、または少なくとも１３日である。いくつかの実施形態では、培養期間は１２日である。
【００５１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、生産培地中で播種トレイン培養物を培養する前に、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を、シードトレイン培地中でシードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養することによりシードトレイン培養物を生成することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、生産培地中で播種トレイン培養物を培養する前に、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下でシードトレイン培養物を播種培地に播種することをさらに含む。
【００５２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、宿主細胞は真核生物宿主細胞である。いくつかの実施形態では、真核生物宿主細胞は哺乳類宿主細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、細胞培養液を回収することは：（ｉ）生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により生産培地から宿主細胞を除去し、細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）細胞培養液を濾過することを含む。
【００５３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することは、以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し、及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することは、以下のサブ工程の１つ以上をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過し；（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を細胞培養液に加えることによってウイルスを不活化することをさらに含む。
【００５４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、組成物のシアル酸含有量を濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり６〜８モルの範囲のシアル酸の初期平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり６、７、または８モルのシアル酸の初期平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜１２モルの範囲のシアル酸に濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜９モルの範囲のシアル酸に濃縮することをさらに含む。
【００５５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む。いくつかの実施形態では、プロテインＡ樹脂は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である。
【００５６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、多モード官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む。
【００５７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの平均シアル酸含有量を有する。
【００５８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８または９モルの平均シアル酸含有量を有する。
【００５９】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかによって生成される組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、組成物は医薬組成物である。
【００６０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結された２つの単鎖ユニットからなり、各単鎖ユニットはヒト免疫グロブリンＩｇＧ４のＦｃ領域と融合したＩＬ−２２を含むヒトＩＬ−２２融合タンパク質からなる。
【００６１】
別の態様では、本発明は、出荷用のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチの選択方法を特徴とし、方法は以下の工程を含む：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチを提供し；（ｂ）バッチ中のシアル酸のレベルを評価し；及び（ｃ）バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する場合、出荷用のバッチを選択する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、そのバッチを出荷用に選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、そのバッチを出荷用に選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルの平均シアル酸含有量を有する場合に、そのバッチを出荷用に選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、または比色分析を使用してバッチ中のシアル酸のレベルを評価することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、ＨＰＬＣを使用してシアル酸のレベルを評価することを含む。
【００６２】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物のシアル酸含有量の調節方法を特徴とし、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、方法は：複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を生産培地中で少なくとも１０日間、生産培養物を形成するのに適した条件下で培養することを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有し；方法はまた、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮し、それにより組成物のシアル酸含有量を調節することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することを含む。
【００６３】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物のシアル酸含有量の調節方法を特徴とし、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、方法は：複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を、生産培地中で少なくとも１０日間、生産培養物を形成するのに適した条件下で培養することを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有し；方法はまた、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮し、それにより組成物のシアル酸含有量を調節することを含む。
【００６４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することを含む。
【００６５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、平均シアル酸含有量を濃縮することは、生産培養物からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を回収することを含む。いくつかの実施形態では、細胞培養液を回収することは：（ｉ）生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により生産培地から宿主細胞を除去して細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）細胞培養液を濾過することを含む。
【００６６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物の平均シアル酸含有量を濃縮することは、細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することは、以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することは、以下のサブ工程の１つ以上をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過し；（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を細胞培養液に添加することによってウイルスを不活化することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む。いくつかの実施形態では、プロテインＡ樹脂は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、多モード官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む。
【００６７】
一態様では、本発明は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を特徴とし、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する。特定の態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルとは、１モルのＩＬ−２２融合タンパク質に８〜１２のシアル酸部分が含まれることを意味する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲のシアル酸含有量を有する。
【００６８】
別の態様では、本発明は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を特徴とし、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約４０％〜約１３０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約８０％〜約１２０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約６０％〜約１１０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約８０％〜約１００％の効力を有する。いくつかの実施形態では、受容体結合アッセイまたは細胞ベースの結合アッセイで効力を評価する。いくつかの実施形態では、参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、表１２及び／または表１３に示すＮ−グリカン分布を有する。
【００６９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１１モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１０モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルのシアル酸含有量を有する。
【００７０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、シアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約９，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１８，０００ｎｇ／ｍＬの最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１マウスに約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を静脈内投与した後にＣｍａｘを評価する。いくつかの実施形態では、時間０から最後の測定可能な時点（ＡＵＣｌａｓｔ）までのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の血清中濃度−時間曲線下面積は、約０〜約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１マウスに約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を静脈内投与した後にＡＵＣｌａｓｔを評価する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日のクリアランス（ＣＬ）を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１マウスに約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を静脈内投与した後にＣＬを評価する。
【００７１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはＮ−グリコシル化されている。
【００７２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、単鎖構造、二分岐構造、三分岐構造、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．５％〜約１．５％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約２１％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２８％〜約３５％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３１％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５％〜約４８％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４２％が四分岐構造を有する。
【００７３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２１％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約１６％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約１６％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１３％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２２％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１９％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２４％が４つのガラクトース部分を有する。
【００７４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約３５％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約３０％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２４％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２１％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約２４％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約９％が４つのシアル酸部分を有する。
【００７５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する約０％〜約１０％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約４％が末端マンノース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％が末端マンノース部分を有する。
【００７６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する約３０％〜約５５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５％〜約５０％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４２％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【００７７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、３つ、または４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４％〜約１２％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【００７８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ガラクトース（Ｇａｌ）部分を有する約２０％〜約４５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、約２５％〜約３５％のＮ−グリカンが末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３２％が末端Ｇａｌ部分を有する。
【００７９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約３０％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約２５％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２３％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％〜約１２％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約６％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約３％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【００８０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約１０％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３％〜約６％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。
【００８１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、フコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６０％〜約８０％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６５％〜約７５％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７０％がフコシル化される。
【００８２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、アフコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％がアフコシル化される。
【００８３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３でグリコシル化される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３でグリコシル化される。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１のグリコシル化占有率は、約７０％〜約９０％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１のグリコシル化占有率は、約７５％〜約８５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１のグリコシル化占有率は、約８１％〜約８４％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１のグリコシル化占有率は約８２％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５のグリコシル化占有率は、約９０％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５のグリコシル化占有率は、約９５％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５のグリコシル化占有率は約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４のグリコシル化占有率は、約９０％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４のグリコシル化占有率は、約９５％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４のグリコシル化占有率は約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は、約１５％〜約４５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は、約２５％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は、約３２％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は約３３％である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３でグリコシル化され、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１でのグリコシル化占有率は、約８１％〜約８４％、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５のグリコシル化占有率は約１００％、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４のグリコシル化占有率は約１００％、及び配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は約３２％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３でグリコシル化され、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１でのグリコシル化占有率は、約８１％〜約８４％、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５のグリコシル化占有率は約１００％、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４のグリコシル化占有率は約１００％、及び配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３のグリコシル化占有率は約３２％〜約３５％である。
【００８５】
別の態様では、本発明は、表１２または１３に示すＮ−グリカン分布を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。
【００８６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はグリコシル化されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はグリシン（Ｇｌｙ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はアラニン（Ａｌａ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはバリン（Ｖａｌ）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【００８７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＮ−グリコシル化されない。
【００８８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、二量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。前述の態様のいずれかの他の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ヒトＩＬ−２２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【００８９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる。
【００９０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２受容体はヒトＩＬ−２２受容体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２ＲＡ１及び／またはＩＬ−１０Ｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２ＲＡ１に結合する。
【００９１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下でＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を培養する工程を含む方法によって生成する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞培養物または培養培地からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を取得する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【００９２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５ＧｃまたはＮＧＮＡとしても知られる）約５モル未満のＮＧＮＡ含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮＧＮＡ１モル未満のＮＧＮＡ含有量を有する。
【００９３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１０モルの範囲のシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲のシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、シアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。
【００９４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、医薬組成物は、追加の治療薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物はゲル化剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、ゲル化剤は多糖である。いくつかの実施形態では、ゲル化剤はセルロース系薬剤である。いくつかの実施形態では、ゲル化剤は、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。いくつかの実施形態では、ゲル化剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は局所投与用である。
【００９５】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法を特徴とし、方法は、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の任意の医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎またはクローン病である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、中程度〜重度の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤはクローン病である。
【００９６】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における、腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒の増強方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、上皮細胞は腸上皮細胞である。
【００９７】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における急性腎障害または急性膵炎の治療方法を特徴とし、方法は、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかまたは本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む。
【００９８】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のいずれかまたは本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷または感染創である。いくつかの実施形態では、対象は糖尿病である。いくつかの実施形態では、糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、創傷は糖尿病性足部潰瘍である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、完全な創傷閉鎖があるまで投与する。
【００９９】
別の態様では、本発明は、アテローム性動脈硬化巣形成症の病状を含む、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における心血管病態の予防または治療方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、心血管疾患は、冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である。いくつかの実施形態では、方法は、アテローム性動脈硬化巣形成症の進行を遅延させるか、またはアテローム性動脈硬化症の徴候を予防することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化症の徴候には、プラークの蓄積及び／または血管の炎症が含まれる。
【０１００】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるメタボリックシンドロームの治療方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、方法は、腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症の１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における細菌リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む。
【０１０１】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における急性内毒血症、敗血症、またはその両方の治療方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質特性の変化を必要としている。
【０１０２】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを対象に投与することを含む、それを必要とする対象におけるＧＶＨＤの治療方法を特徴とする。
【０１０３】
さらなる態様では、本発明は、医薬品として使用するための、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む組成物または本明細書に記載の医薬組成物を特徴とする。
【０１０４】
別の態様では、本発明は、（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、（ｉｉ）腸内の微生物感染の阻害、微生物感染時の腸内の杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒、（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、（ｉｖ）それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善、（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、（ｖｉｉ）急性内毒素血症または敗血症の治療、あるいは（ｖｉｉｉ）ＧＶＨＤの治療に使用するための、本明細書に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む組成物または本明細書に記載の医薬組成物を特徴とする。
【０１０５】
さらに別の態様では、本発明は、（ｉ）炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、（ｉｉ）腸内での微生物感染の抑制、微生物感染時の腸内杯細胞の保存、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒、（ｉｉｉ）急性腎障害または急性膵炎の治療、（ｉｖ）それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善、（ｖ）冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患などの心血管疾患の予防または治療、（ｖｉ）メタボリックシンドロームの治療、（ｖｉｉ）急性内毒素血症または敗血症の治療、あるいは（ｖｉｉｉ）ＧＶＨＤの治療に使用するための薬剤の調製のための、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを含む組成物または本明細書に記載の医薬組成物の使用を特徴とする。
【０１０６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１０モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、シアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。
【０１０７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、または局所的に投与する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、静脈内投与する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を皮下投与する。
【０１０８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象に、少なくとも１つの追加の治療薬を共投与する。
【０１０９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【０１１０】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかの作製方法を特徴とし、方法は以下の工程を含む：（ａ）本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかをコードする核酸を含む宿主細胞を提供し；（ｂ）シードトレインを形成するのに適した条件下で、シードトレイン培地中で宿主細胞を培養し；（ｃ）シードトレインを播種培地に播種し、播種トレインを形成するのに適した条件下で培養し；及び（ｄ）生産培養物を形成するのに適した条件下で播種トレインを生産培地中で培養し、生産培養物の宿主細胞がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それによりＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が作製される。
【０１１１】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の作製方法を特徴とし、方法は、以下の工程を含む：（ａ）リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供し；（ｂ）シードトレインを形成するのに適した条件下で、シードトレイン培地中で宿主細胞を培養し；（ｃ）播種トレインを形成するのに適した条件下で、シードトレインを播種培地に播種し；及び（ｄ）生産培養物を形成するのに適した条件下で播種トレインを生産培地中で培養し、生産培養物の宿主細胞はＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それによりＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が作製され、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲のシアル酸含有量を有する。
【０１１２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、宿主細胞は凍結した宿主細胞であり、工程（ａ）はさらに、凍結した宿主細胞をシードトレイン培地中で解凍することを含む。
【０１１３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、工程（ｄ）の前に播種トレインを約１〜約１０回継代することをさらに含む。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の前に播種トレインを約２〜約６回継代する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の前に播種トレインを約５回継代する。
【０１１４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地は、宿主細胞を選択することができる選択剤を含む。いくつかの実施形態では、選択剤は、メチオニンスルホキシミン、メトトレキサート、または抗生物質である。いくつかの実施形態では、選択剤はメチオニンスルホキシミンである。いくつかの実施形態では、選択剤は抗生物質である。いくつかの実施形態では、抗生物質は、ブラストサイジン、ジェネティシン、ハイグロマイシンＢ、ピューロマイシン、ミコフェノール酸、またはゼオシンから選択される。
【０１１５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地、播種培地、及び／または生産培地は、消泡剤を含む。いくつかの実施形態では、消泡剤は、シメチコンエマルジョン、消泡剤２０４、消泡剤Ａ、消泡剤Ｂ、消泡剤Ｃ、消泡剤Ｙ−３０、または消泡剤ＳＥ−１５である。いくつかの実施形態では、消泡剤はシメチコンエマルジョンである。
【０１１６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地、播種培地、及び／または生産培地は、緩衝剤、細胞保護剤、多糖、及び／または浸透圧調節剤を含む。
【０１１７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約３７℃の温度で実施する。
【０１１８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、スピナー、スピンチューブ、振盪フラスコ、使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）またはＡＭＢＲ（登録商標）バイオリアクター（例えば、ＡＭＢＲ（登録商標）１５バイオリアクター））、またはシードトレインバイオリアクター中で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、シードトレインスピナーまたは振盪フラスコ中で実施する。他の実施形態では、工程（ｂ）を、使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）またはＡＭＢＲ（登録商標）バイオリアクター（例えば、ＡＭＢＲ（登録商標）１５バイオリアクターまたはＡＭＢＲ（登録商標）２５０バイオリアクター））中で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、継代あたり約１日〜約１２日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、継代あたり約２日〜約７日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、シードトレインバイオリアクター中で実施する。
【０１１９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地のｐＨは、約６〜約８である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地のｐＨは、約６．５〜約７．５である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地のｐＨは約７．１５である。
【０１２０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地の溶存酸素は、約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地の溶存酸素は、約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地の溶存酸素は約３０％である。
【０１２１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約１日〜約１０日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約５日の期間を有する。
【０１２２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約３７℃の温度で実施する。
【０１２３】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、１つ以上のバイオリアクター中で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、３つまたは４つのバイオリアクター中で実施する。
【０１２４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、播種培地のｐＨは、約６〜約８である。いくつかの実施形態では、播種培地のｐＨは、約６．５〜約７．５である。いくつかの実施形態では、播種培地のｐＨは約７．１である。
【０１２５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、播種培地の溶存酸素は、約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、播種培地の溶存酸素は、約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、播種培地の溶存酸素は約３０％である。
【０１２６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約１日〜約５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約３日の期間を有する。
【０１２７】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、初期温度からシフト後温度への温度シフトを含む。いくつかの実施形態では、初期温度は、約２５℃〜約４０℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約３５℃〜約３９℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は約３７℃である。いくつかの実施形態では、シフト後温度は、約２５℃〜約４０℃である。いくつかの実施形態では、シフト後温度は約３０℃〜約３５℃である。いくつかの実施形態では、シフト後温度は約３３℃である。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約１２時間〜約１２０時間の期間にわたって行う。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約４８時間〜約９６時間の期間にわたって行う。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約７２時間の期間にわたって行う。
【０１２８】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、生産培地のｐＨは、約６〜約８である。いくつかの実施形態では、生産培地のｐＨは、約６．５〜約７．５である。いくつかの実施形態では、生産培地のｐＨは約７．０である。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）を、生産バイオリアクター中で実施する。いくつかの実施形態では、生産培地の溶存酸素は、約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、生産培地の溶存酸素は、約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、生産培地の溶存酸素は約３０％である。
【０１２９】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約５日〜約２５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約７日〜約１６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約８日〜約１６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は約１２日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、栄養供給によって栄養素を生産培地に加えることをさらに含む。
【０１３０】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は真核細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は哺乳類細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、懸濁液に適合させたＣＨＯ細胞である。
【０１３１】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、以下の工程を含む：（ｅ）生産培養物からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を回収する。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、生産培養物を冷却することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、生産培養物を約２℃〜約８℃に冷却することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、遠心分離によって生産培地から宿主細胞を除去して細胞培養液を形成することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、細胞培養液を濾過することをさらに含む。
【０１３２】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、以下の工程を含む：（ｆ）細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを精製した生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程をさらに含む：（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過する。いくつかの実施形態では、限外濾過は、１０ｋＤａの複合再生セルロース限外濾過膜で精製生成物プールを濾過することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程をさらに含む：（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成する。いくつかの実施形態では、濃縮生成物プールの緩衝液を、最終濃度が０．０１Ｍのリン酸ナトリウム，ｐＨ７．２を含むダイアフィルトレーション緩衝液と交換する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は以下のサブ工程をさらに含む：（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、細胞培養液に界面活性剤を加えることによってウイルスを不活化することをさらに含む。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、界面活性剤をアフィニティプールに加えることによってウイルスを不活化することを含む。いくつかの実施形態では、洗浄剤は、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００またはＴＲＩＴＯＮ（登録商標）ＣＧ１１０である。いくつかの実施形態では、洗剤の最終濃度は、約０．０１％〜約２％（ｖ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、洗剤の最終濃度は、約０．１％〜約１％（ｖ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、洗剤の最終濃度は、約０．３％〜約０．５％（ｖ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、洗剤��最終濃度は約０．５％である。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化を、約１２℃〜約２５℃で実施する。いくつかの実施形態では、不活化ウイルスは、約０．５時間を上回る持続時間を有する。
【０１３３】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製方法を特徴とし、方法は、以下を含む：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を提供し、場合により細胞培養液中のウイルスを不活化し；（ｂ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合により、アフィニティプール内のウイルスを不活性化し；（ｃ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｄ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含量を有する。
【０１３４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む。いくつかの実施形態では、プロテインＡ樹脂は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である。いくつかの実施形態では、洗浄緩衝液は、終濃度０．４Ｍリン酸カリウム，ｐＨ７．０を含む。
【０１３５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の溶出緩衝液は、終濃度で、０．３Ｍ  Ｌ−アルギニン塩酸塩，０．０１３Ｍリン酸ナトリウム，ｐＨ３．８を含む。
【０１３６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む。いくつかの実施形態では、第１の平衡緩衝液は、終濃度０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８を含む。いくつかの実施形態では、第２の溶出緩衝液は、勾配溶出緩衝液である。いくつかの実施形態では、勾配溶出緩衝液は、勾配溶出緩衝液の緩衝液Ａとして０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８及び勾配の緩衝液Ｂとして０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，０．３Ｍ硫酸ナトリウム  ｐＨ５．８を含み、勾配は、１０％の緩衝液Ｂで開始する。いくつかの実施形態では、第２の平衡化緩衝液は、終濃度で、０．０２５Ｍ  ＭＯＰＳ，０．３Ｍ硫酸ナトリウム，ｐＨ７．０を含む。
【０１３７】
別の態様では、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の任意の医薬組成物は、それを必要とする対象におけるＩＢＤの治療方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。いくつかの実施形態では、潰瘍性大腸炎は、中程度〜重度の潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、ＩＢＤはクローン病である。
【０１３８】
別の態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象の、腸内の微生物感染を抑制し、微生物感染中の腸内の杯細胞を保存し、腸内の上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または上皮の創傷治癒を増強する方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、上皮細胞は腸上皮細胞である。
【０１３９】
別の態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象における急性腎障害または急性膵炎の治療方法において使用することができる。
【０１４０】
別の態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象における創傷治癒の加速または改善方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷または感染創である。いくつかの実施形態では、対象は糖尿病である。いくつかの実施形態では、糖尿病の対象は、ＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、創傷は糖尿病性足部潰瘍である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、完全な創傷閉鎖があるまで投与する。
【０１４１】
別の態様では、本明細書に記載の任意のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、アテローム性動脈硬化巣形成症の病状を含む、それを必要とする対象の心血管病態の予防または治療方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、心血管疾患は、冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である。いくつかの実施形態では、方法は、アテローム性動脈硬化巣形成症の進行を遅延させるか、またはアテローム性動脈硬化症の徴候を予防することを含む。いくつかの実施形態では、アテローム性動脈硬化症の徴候には、プラークの蓄積及び／または血管の炎症が含まれる。
【０１４２】
別の態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象のメタボリックシンドロームの治療方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、方法は、腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症の１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における細菌リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む。
【０１４３】
別の態様では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれか、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを、それを必要とする対象の急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の治療方法において使用することができる。
【０１４４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質特性の変化を必要としている。
【０１４５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、または局所的に投与する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を静脈内投与する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を皮下投与する。
【０１４６】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象に、少なくとも１つの追加の治療薬を共投与する。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【０１４７】
文脈から明らかにそうでないことが示唆されない限り、すべての実施形態は組み合わせることができる。文脈から明らかにそうでないことが示唆されない限り、すべての実施形態は、本発明のすべての態様に適用することができる。
【０１４８】
本発明の特定の実施形態は、特定の好ましい実施形態の以下のより詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１Ａ】それぞれヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）Ｆｃ領域に融合された２つのヒトインターロイキン２２（ＩＬ−２２）ポリペプチドを有する例示的な二量体型ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の概略設計構成を示す概略図である。２つのＦｃ領域は、２つの鎖間ジスルフィド結合によって接続されている。各ＩＬ−２２ポリペプチド上の４つのＮ−グリカンの存在も示す。
【図１Ｂ】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒトインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）サイトカイン領域の注釈付きアミノ酸配列である。ＩＬ−２２受容体結合領域を太字で示す。Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３のグリコシル化部位を［Ｎ］として示す。
【図１Ｃ】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）Ｆｃ領域の注釈付きアミノ酸配列である。Ｎ−グリカンを除去し、Ｆｃエフェクター機能の効力を最小限に抑えるためのＮ８１ＧのＦｃ変異を［Ｇ］で示す。
【図２】図２Ａは、インタクトな脱グリコシル化ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチの質量分析特性を示すクロマトグラムであり、インタクトな分子について予測された分子量を確認している。８５，２６５Ｄａ及び８５，３９３Ｄａの種は、それぞれ１つのＣ末端リジン残基と２つのＣ末端リジン残基を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。図２Ｂは、還元型脱グリコシル化ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチの質量分析特性を示すクロマトグラムであり、還元された分子について予測された分子量を確認している。４２，７０６Ｄａの種は、１つのＣ末端リジン残基を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。
【図３−１】Ａ及びＢは、０〜５０分（３Ａ）及び５０〜１１０分（３Ｂ）のトリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチのクロマトグラフ特性の拡大図を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチと臨床バッチ１、２、及び３の０〜５０分（３Ｃ）及び５０〜１１０分（３Ｄ）のクロマトグラム特性の比較の拡大図を示す一連のクロマトグラムであり、一次構造を検証し、ペプチドパターンのバッチ間の一貫性を示す。
【図３−２】Ａ及びＢは、０〜５０分（３Ａ）及び５０〜１１０分（３Ｂ）のトリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチのクロマトグラフ特性の拡大図を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチと臨床バッチ１、２、及び３の０〜５０分（３Ｃ）及び５０〜１１０分（３Ｄ）のクロマトグラム特性の比較の拡大図を示す一連のクロマトグラムであり、一次構造を検証し、ペプチドパターンのバッチ間の一貫性を示す。
【図４】図４Ａ及び図４Ｂは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ及び臨床バッチ１、２、及び３のサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）特性の全体図（４Ａ）及び拡大図（４Ｂ）を示す一連のクロマトグラムであり、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分子サイズの不均一性に関する定量的情報を示す。主要ピークの頂点で観察される差異は、グリコシル化に起因する。
【図５−１】Ａ及びＢは、非還元型の蛍光標識ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３のキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム  非ゲルふるい（ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ）分析の全体図（５Ａ）及び拡大図（５Ｂ）を示す一連のクロマトグラムであり、一貫したピークパターン及び補正後ピーク面積（ＣＰＡ）百分率を有する１つの主要ピークの存在を示す。主要ピークの形状の差異は、グリコシル化に起因する。Ｃ及びＤは、還元型の蛍光標識ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ分析の全体図（５Ｃ）及び拡大図（５Ｄ）を示す一連のクロマトグラムであり、一貫したピークパターンと補正後ピーク面積（ＣＰＡ）百分率を有する１つの主要ピークの存在を示す。主要ピークの形状の差異は、グリコシル化に起因する。ＩＲＳ＝不完全還元種。
【図５−２】Ａ及びＢは、非還元型の蛍光標識ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３のキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム  非ゲルふるい（ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ）分析の全体図（５Ａ）及び拡大図（５Ｂ）を示す一連のクロマトグラムであり、一貫したピークパターン及び補正後ピーク面積（ＣＰＡ）百分率を有する１つの主要ピークの存在を示す。主要ピークの形状の差異は、グリコシル化に起因する。Ｃ及びＤは、還元型の蛍光標識ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ分析の全体図（５Ｃ）及び拡大図（５Ｄ）を示す一連のクロマトグラムであり、一貫したピークパターンと補正後ピーク面積（ＣＰＡ）百分率を有する１つの主要ピークの存在を示す。主要ピークの形状の差異は、グリコシル化に起因する。ＩＲＳ＝不完全還元種。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３の還元試料（６Ａ）及び非還元試料（６Ｂ）のＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｒｕｂｙ染色ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を示し、すべてのバッチにわたって一貫したバンドパターンが示されている。レーン１：Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｐｌｕｓ非染色タンパク質標準（Ｂｉｏｒａｄ）、レーン２：８ｎｇウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、レーン３：２ｎｇ  ＢＳＡ、レーン４：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ、レーン５：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ１、レーン６：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ２、及びレーン７：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ３。
【図７−１】Ａ及びＢは、未変性ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の画像化キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）の全体図（７Ａ）及び拡大図（７Ｂ）を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、カルボキシペプチダーゼＢ（ＣｐＢ）で処理したＣ末端リジン除去後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の不均一性のＩＣＩＥＦの全体図（７Ｃ）及拡大図（７Ｄ）を示す一連のクロマトグラムである。特性のｐＩのわずかな差異は機器に関連しており、ピーク面積百分率には影響しない。Ｅは、未変性及びＣｐＢ処理したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチのＩＣＩＥＦ特性を示すクロマトグラムである。
【図７−２】Ａ及びＢは、未変性ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の画像化キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）の全体図（７Ａ）及び拡大図（７Ｂ）を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、カルボキシペプチダーゼＢ（ＣｐＢ）で処理したＣ末端リジン除去後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の不均一性のＩＣＩＥＦの全体図（７Ｃ）及拡大図（７Ｄ）を示す一連のクロマトグラムである。特性のｐＩのわずかな差異は機器に関連しており、ピーク面積百分率には影響しない。Ｅは、未変性及びＣｐＢ処理したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチのＩＣＩＥＦ特性を示すクロマトグラムである。
【図７−３】Ａ及びＢは、未変性ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の画像化キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）の全体図（７Ａ）及び拡大図（７Ｂ）を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、カルボキシペプチダーゼＢ（ＣｐＢ）で処理したＣ末端リジン除去後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２及び３の不均一性のＩＣＩＥＦの全体図（７Ｃ）及拡大図（７Ｄ）を示す一連のクロマトグラムである。特性のｐＩのわずかな差異は機器に関連しており、ピーク面積百分率には影響しない。Ｅは、未変性及びＣｐＢ処理したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチのＩＣＩＥＦ特性を示すクロマトグラムである。
【図８−１】Ａ及びＢは、０〜４０分（８Ａ）及び４０〜７５分（８Ｂ）の、２−アミノ安息香酸親水性相互作用液体クロマトグラフィー−超高速液体クロマトグラフィー（２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣ）によるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３の相対的Ｎ−グリカン分布を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３（８Ｃ）及び臨床バッチ２、３、４、５、及び６（３Ｄ）の、２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるピーク面積百分率（％）として表される相対Ｎ−グリカン分布を示す一連のグラフである。
【図８−２】Ａ及びＢは、０〜４０分（８Ａ）及び４０〜７５分（８Ｂ）の、２−アミノ安息香酸親水性相互作用液体クロマトグラフィー−超高速液体クロマトグラフィー（２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣ）によるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３の相対的Ｎ−グリカン分布を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３（８Ｃ）及び臨床バッチ２、３、４、５、及び６（３Ｄ）の、２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるピーク面積百分率（％）として表される相対Ｎ−グリカン分布を示す一連のグラフである。
【図８−３】Ａ及びＢは、０〜４０分（８Ａ）及び４０〜７５分（８Ｂ）の、２−アミノ安息香酸親水性相互作用液体クロマトグラフィー−超高速液体クロマトグラフィー（２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣ）によるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３の相対的Ｎ−グリカン分布を示す一連のクロマトグラムである。Ｃ及びＤは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３（８Ｃ）及び臨床バッチ２、３、４、５、及び６（３Ｄ）の、２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるピーク面積百分率（％）として表される相対Ｎ−グリカン分布を示す一連のグラフである。
【図９】Ｌｙｓ−Ｃペプチドマッピング及びＬＣ−ＭＳによるＡｓｎ２１部位でのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３のピーク面積百分率として表される相対Ｎ−グリカン分布を示すグラフである。
【図１０】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３の円二色性（ＣＤ）スペクトルであり、バッチ間で高次構造特性に識別可能な差異がないことを示している。
【図１１】内在的にＩＬ−２２受容体を発現し、ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定して発現する、ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５を使用する細胞ベースのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質結合効力アッセイの概略図である。
【図１２】図１２Ａは、細胞ベースのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質結合効力アッセイと比較した、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおけるシアル酸含有量と効力との間の関係を示すグラフである。図１２Ｂは、シアリダーゼによる脱シアリル化の前後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ２、４、５、及び６の効力を比較するグラフである。すべての脱シアリル化試料及び参照標準バッチでは、エラーバーは、ｎ＝２の差異の百分率を表す。出荷時効力の値の場合、エラーバーはｎ＝３の標準偏差である。アスタリスク（＊）は、効力の推定値であり、アッセイの検証範囲外の結果であることを示す。
【図１３】ＰＮＧａｓｅ  Ｆ酵素による脱グリコシル化後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチならびに臨床バッチ２、４、５、及び６の効力を調べる一連のグラフである。このプロセスの対照には、試料と同じインキュベーションを施したが、ＰＮＧａｓｅ  Ｆは加えなかった。
【図１４】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸バリアントについて、単回静脈内（ＩＶ）投与後のマウスにおける経時的な血清ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度を比較するグラフである。
【図１５】指定のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質シアル酸バリアントの単回ＩＶ投与後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効力及びマウスにおけるその曝露に対するシアル酸レベルの影響の相反する効果を示すグラフである。
【図１６】図１６Ａは、マウスにおける単回ＩＶ投与後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質シアル酸バリアントに対するＲＥＧ３β応答の影響を示すグラフであり、経時的な血清ＲＥＧ３β濃度（ｎｇ／ｍＬ）として示す。図１６Ｂは、マウスへの単回ＩＶ投与後のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質曝露とＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質シアル酸バリアントに対する血清ＲＥＧ３β応答との間の関係を示すグラフであり、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ＡＵＣ（日×ｎｇ／ｍＬ）に対するＲＥＧ３β  ＡＵＣ（日×ｎｇ／ｍＬ）として表される。
【図１７】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生産のためのインプロセス制御、処理段階、及び培地を示す細胞培養プロセスのフローチャートである。
【図１８】ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製のための処理段階及びインプロセス制御を示す精製プロセスのフローチャートである。
【図１９】異なる哺乳類種由来の成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列アラインメントを示す：ヒト（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９ＧＺＸ６、配列番号４、チンパンジー（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿００３３１３９０６、配列番号４８）、オランウータン（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿００２８２３５４４、配列番号４９）、マウス（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ９ＪＪＹ９、配列番号５０）及びイヌ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＸＰ＿５３８２７４、配列番号５１）。
【図２０】細胞培養の経過にわたるシアル酸レベルの変化を示すグラフである。各折れ線グラフは、異なる生産工程を示す。逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）アッセイを使用して、シアル酸レベルを測定した。ＩＬ−２２  Ｆｃタンパク質１モルあたりのシアル酸レベル（ｙ軸に表示）は、細胞培養期間の増加（ｘ軸に表示）とともに減少する。
【発明を実施するための形態】
【０１５０】
Ｉ．定義
特に定義されない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語、表記法及び他の科学用語は、本発明が関係する当業者によって一般に理解される意味を有することが意図されている。いくつかの場合では、一般的に理解される意味を有する用語を、明確にするために、及び／またはすぐに参照できるように本明細書中で定義するが、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般的に理解される意味に対する実質的な差異を表すものと解釈すべきではない。
【０１５１】
本明細書中で使用する用語「約」とは、当技術分野の当業者であれば容易に公知であるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書中の値またはパラメータの「約」への言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（及び説明する）。
【０１５２】
本明細書中で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「単離されたペプチド」への言及は、１つ以上の単離されたペプチドを意味する。
【０１５３】
本明細書及び特許請求の範囲を通して、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、述べられた整数または整数のグループを包含することを意味するが、他の整数または整数のグループを除外することを意味しないものと理解される。
【０１５４】
本明細書中で使用する用語「ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質」または「ＩＬ−２２融合タンパク質」または「ＩＬ−２２  Ｉｇ融合タンパク質」とは、ＩＬ−２２タンパク質またはポリペプチドがＩｇＧ  Ｆｃ領域に直接的または間接的に連結されている融合タンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質またはポリペプチドはグリコシル化されている。特定の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質またはポリペプチドはシアル化されている。特定の好ましい実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域に連結されたヒトＩＬ−２２タンパク質またはポリペプチドを含む。特定の好ましい実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）Ｆｃ領域に融合した２つのヒトインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）ポリペプチドを含み、２つのＦｃ領域は２つの鎖間ジスルフィド結合によって接続されている。特定の実施形態では、ヒトＩＬ−２２タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を有する。しかしながら、ＩＬ−２２またはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／または活性に影響を与えないＩＬ−２２またはＦｃのマイナーな配列変化、例えば、挿入、欠失、置換、特に保存的アミノ酸置換もまた、本発明によって企図される。本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２受容体に結合することができ、これはＩＬ−２２受容体の下流シグナル伝達を誘導することができる。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２受容体に結合することができ、及び／またはＩＬ−２２受容体下流シグナル伝達を誘導することができる。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／または活性は、ＥＬＩＳＡ、リガンド−受容体結合アッセイ及びＳｔａｔ３ルシフェラーゼアッセイを含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の方法によってアッセイすることができる。特定の実施形態では、本発明は、ＩＬ−２２受容体に結合するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供し、その結合は、ＩＬ−２２受容体下流シグナル伝達を誘導することができ、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、Ｆｃ領域はグリコシル化されていない。ある特定の実施形態では、ＩＬ−２２融合タンパク質のＦｃ領域は、エフェクター活性を有していない（例えば、ＦｃγＩＩＩＲに結合しない）か、または全長（例えば、野生型）ＩｇＧ抗体よりも実質的に低いエフェクター活性を示す。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの細胞傷害を引き起こさない。特に明記しない限り、「ＩＬ−２２融合タンパク質」、「ＩＬ−２２  Ｆｃ融合」、「ＩＬ−２２  Ｉｇ融合タンパク質」、「ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質」、または「ＩＬ−２２  Ｆｃ」は、本明細書全体を通して同じ意味で用いられる。
【０１５５】
本明細書中で使用する用語「ＩＬ−２２」または「ＩＬ−２２ポリペプチド」または「ＩＬ−２２タンパク質」とは、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む任意の哺乳類供給源由来の任意の天然ＩＬ−２２を広く指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ−２２、及び細胞内でのプロセシングから生じるＩＬ−２２のあらゆる形態を包含する。例えば、Ｎ末端リーダー配列を含む全長ＩＬ−２２及び成熟型ＩＬ−２２の両方が、本発明に包含される。リーダー配列（すなわちシグナルペプチド）は、内在性ＩＬ−２２リーダー配列または別の哺乳類分泌タンパク質の外来性リーダー配列であり得る。特定の実施形態では、リーダー配列は、真核生物または原核生物の分泌タンパク質に由来し得る。この用語はまた、ＩＬ−２２の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントを包含する。例示的なヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列を、配列番号４に示す（成熟型、シグナルペプチドなし）。特定の実施形態では、内在性リーダー配列を有する全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列を、配列番号７１に提供する。一方、他の実施形態では、外来性リーダー配列を有する成熟ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列を、配列番号２に提供する。マイナーな配列変化、特にＩＬ−２２の機能及び／または活性（例えば、ＩＬ−２２受容体への結合）に影響を及ぼさないＩＬ−２２の保存的アミノ酸置換もまた、本発明により企図される。図１９は、いくつかの例示的な哺乳類種由来の成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列アラインメントを示す。アスタリスクは、種間で高度に保存されたアミノ酸残基であることを示しており、ＩＬ−２２の機能及び／または活性に重要であると考えられる。したがって、特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４に対して、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＩＬ−２２ポリペプチドを含む。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２２タンパク質は、配列番号７１と９５％以上の配列同一性、配列番号７１と９６％以上の配列同一性、配列番号７１と９７％以上の配列同一性；配列番号７１と９８％以上の配列同一性；または配列番号７１と９９％以上の配列同一性を有する。本明細書に記載のＩＬ−２２ポリペプチドは、ヒト組織または別の供給源などの様々な供給源から単離するか、組換えまたは合成方法により調製することができる。
【０１５６】
用語「ＩＬ−２２受容体」または「ＩＬ−２２Ｒ」とは、ＩＬ−２２Ｒ１及びＩＬ−１０Ｒ２またはその天然に存在する対立遺伝子バリアントからなるヘテロ二量体を指す。例えば、Ｏｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１５９−６３参照。ＩＬ−１０Ｒ２は、多くの細胞型で遍在的に発現しており、ＩＬ−２２Ｒ１は、上皮細胞、肝細胞、ケラチノサイトなどの自然免疫細胞でのみ発現する。ＩＬ−２２Ｒ１は、ＩＬ−２２Ｒａ１またはＩＬ−２２Ｒα１としても知られる。ＩＬ−２２Ｒ１を他のポリペプチドと対にして、他のＩＬ−１０ファミリーメンバー、例えばＩＬ−２０またはＩＬ−２４のヘテロ二量体受容体を形成させてもよい。例えば、上記のＯｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１を参照のこと。例示的なＩＬ−２２Ｒ１ポリペプチドの全長アミノ酸配列を、配列番号８１に示す。このＩＬ−２２Ｒ１の全長配列は、最終的な機能性分子（その例示的なアミノ酸配列を配列番号８２に示す）では切断されるＮ末端シグナル配列（アミノ酸１〜１５）を含む。例示的なＩＬ１０Ｒ２ポリペプチドの全長アミノ酸配列を、配列番号８３に示す。ＩＬ１０Ｒ２のこの全長配列は、最終的な機能性分子（その例示的なアミノ酸配列を配列番号８４に示す）では切断されるＮ末端シグナル配列（アミノ酸１〜１９）を含む。
【０１５７】
「天然配列ＩＬ−２２ポリペプチド」または「天然配列ＩＬ−２２Ｒポリペプチド」は、天然由来の対応するＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。そのような天然配列のＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドは、自然から単離することができるか、または組換え手段または合成手段によって産生することができる。この用語は、特に、特定のＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドの天然のトランケート型または分泌型（例えば、関連するシグナルペプチドを欠くＩＬ−２２）、天然のバリアント型（例えば、選択的スプライス型）、及びポリペプチドの天然の対立遺伝子バリアントを包含する。本発明の様々な実施形態では、本明細書に開示する天然配列ＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドは、成熟または全長の天然配列のポリペプチドである。例示的な全長天然ヒトＩＬ−２２を、配列番号７０（ＤＮＡ）及び配列番号７１（タンパク質）に示す。ＩＬ−２２及びＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列は、本明細書中でアミノ酸１位と指定されるメチオニン残基で始まることが示されているが、アミノ酸１位の上流または下流のいずれかに位置する他のメチオニン残基を、ＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドの開始アミノ酸残基として使用することができると考えられ、また、可能である。
【０１５８】
「ＩＬ−２２バリアント」、「ＩＬ−２２Ｒバリアント」、「ＩＬ−２２バリアントポリペプチド」、または「ＩＬ−２２Ｒバリアントポリペプチド」とは、全長の天然配列のＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する、上記で定義した活性型ＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドを意味する。通常、ＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチドバリアントは、全長または成熟型の天然配列のＩＬ−２２またはＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０１５９】
用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、または「Ｆｃ」とは、定常領域の少なくとも一部分を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端非抗原結合領域を指す。この用語には、天然Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域が含まれる。特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からカルボキシル末端まで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を与えることなく、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）が存在する場合と存在しない場合がある。本明細書において特に明記されていない限り、ＩｇＧまたはＦｃ領域のアミノ酸残基の付番は、ＥＵインデックスとも呼ばれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている抗体のＥＵナンバリングシステムに従う。
【０１６０】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域（Ｃｙｓ２２６で開始する）、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンＩｇＧ重鎖定常領域を指す。本明細書中で使用する用語「ヒンジ領域」または「ヒンジ配列」とは、リンカーとＣＨ２ドメインの間に位置するアミノ酸配列を指す。特定の実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号３１）を含む。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  ＩｇＧ４  Ｆｃ融合タンパク質のヒンジ領域に、天然のＩｇＧ１ヒンジ領域に見出される配列であるＣＰＰＣＰ配列（配列番号３１）を含ませて二量体化を容易にする。特定の他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域で始まり、ＩｇＧ重鎖のＣ末端まで及ぶ。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。特定の他の特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【０１６１】
特定の実施形態では、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインはＡｌａ２３１で開始する。特定の他の実施形態では、ＣＨ３ドメインはＧｌｙ３４１で開始する。ヒトＩｇＧのＣ末端Ｌｙｓ残基は場合により存在しなくてもよいことが理解される。Ｆｃの所望の構造及び／または安定性に影響を及ぼさないＦｃ領域の保存的アミノ酸置換が本発明の範囲内で企図されることもまた理解される。
【０１６２】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２を、リンカーを介してＦｃ領域に連結する。ある特定の実施形態では、リンカーは、本明細書に記載するように、ＩＬ−２２のＣ末端をＦｃ領域に接続するペプチドである。特定の実施形態では、天然ＩｇＧ配列をリンカー及び／またはヒンジ領域に存在させて、免疫原性のリスクを最小化及び／または回避する。他の実施形態では、マイナーな配列変化を天然配列に導入して製造を容易にすることができる。高い活性（例えば、ルシフェラーゼアッセイにより測定される）を示す外来性リンカーまたはヒンジ配列を含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合構築物もまた、本発明の範囲内である。特定の実施形態では、リンカーは、８〜２０アミノ酸、８〜１６、８〜１５、８〜１４、８〜１３、８〜１２、８〜１１、８〜１０、８〜９、１０〜１１、１０〜１２、１０〜１３、１０〜１４、１０〜１５、１０〜１６、１１〜１６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６アミノ酸長のアミノ酸配列を有する。特定の他の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＤＫＴＨＴ（配列番号３２）を有する。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号４５）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号４６）、またはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号４７）を含まない。
【０１６３】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含む。用語「連結する」または「融合する」とは、２つの部分の間に形成される共有結合、例えばペプチド結合を指す。
【０１６４】
本明細書中で使用する用語「グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」及び「グリコシル化した（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」とは、生体分子（例えば、タンパク質または脂質）に結合した炭水化物（例えば、オリゴ糖または多糖、「グリカン」とも呼ばれる）の存在を指す。特定の実施形態では、グリコシル化は、目的のタンパク質（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）またはタンパク質部分（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２ポリペプチド部分）に結合したグリカン（例えば、Ｎ−グリカン）の存在を指す。Ｎ−結合型グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。Ｏ−結合型グリコシル化とは、糖類であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンに結合することを指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもＯ−結合型グリコシル化に関与し得る。グリコシル化の概説については、例えば、Ｖａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０１５−２０１７を参照のこと。
【０１６５】
本明細書中で互換的に使用する用語「非グリコシル化」及び「グリコシル化されていない」とは、グリコシル化されていない（例えば、Ｎ−グリコシル化されていない）目的のタンパク質またはタンパク質部分（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域）を指す。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）の部分（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２ポリペプチド部分）がグリコシル化され、一方、目的のタンパク質の別の部分（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域）はグリコシル化されていないことは理解すべきである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｆｃ領域またはＣＨ２ドメインがグリコシル化されていないＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、ＣＨ２ドメイン中のＮ−グリコシル化部位に変異を導入し、グリコシル化を防止する。例えば、非グリコシル化Ｆｃ領域を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインの、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）（残基Ｎ８１とも呼ばれる、例えば、図１Ｃを参照のこと）に変異導入することによって作成することができる。特定の実施形態では、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化は、グリコシル化コンセンサス部位、すなわち、２９７位のＡｓｎと、それに続く任意のアミノ酸残基（ヒトＩｇＧの場合はＳｅｒ）及びＴｈｒを変更することによって排除することができる。グリコシル化部位は、アミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換によって変更することができる。例えば、１つ以上のアミノ酸残基をＡｓｎとＳｅｒの間、またはＳｅｒとＴｈｒの間に挿入して、元のグリコシル化部位を変更することができ、この場合、挿入によってＮ−グリコシル化部位が再生されることはない。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ  ＦｃのＣＨ２ドメイン内のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基（例えば、ＦｃのＮ−グリコシル化部位）を変異させて、グリコシル化部位を無効にする。ある特定の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）を、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、またはＧｌｕに変更する。いくつかの特定の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）を、ＧｌｙまたはＡｌａに変更する。他の特定の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）をＧｌｙに変更する。特定の他の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基を、別のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＧｌｙに置換することができる。ある特定の実施形態では、非グリコシル化Ｆｃをもたらす変異は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の構造及び／または安定性に影響を与えない。
【０１６７】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＨ２ドメインのＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基を変異させたＦｃ領域を含む。特定の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基を、ＧｌｙまたはＡｌａ、好ましくはＧｌｙに変更する。特定の他の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基を欠失させる。特定の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基にアミノ酸置換を有するＦｃを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、非グリコシル化であるかまたはグリコシル化されていない。
【０１６８】
他の実施形態では、ＥＵインデックスにおける２９７位の野生型アミノ酸残基（例えば、Ｎ２９７）に結合したＮ−グリカンを、例えば、脱グリコシル化により酵素的に除去することができる。適切な解糖酵素として、ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６９】
本明細書中で使用する用語「グリコシル化占有率」とは、特定のグリコシル化部位（例えば、コンセンサスグリコシル化部位のＡｓｎ残基）でタンパク質がグリコシル化される確率、または特定のグリコシル化部位でグリコシル化されるタンパク質集団中のタンパク質の割合を指す。例えば、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３上でグリコシル化され得る。さらなる特定の例では、（ａ）残基Ａｓｎ２１におけるＮ−グリコシル化部位占有率は７０〜９０の範囲であり得；（ｂ）残基Ａｓｎ３５におけるＮ−グリコシル化部位占有率は、９０〜１００の範囲であり得；（ｃ）残基Ａｓｎ６４におけるＮ−グリコシル化部位占有率は、９０〜１００の範囲であり得；及び／または（ｄ）残基Ａｓｎ１４３におけるＮ−グリコシル化部位占有率は、２５〜３５の範囲であり得る。
【０１７０】
用語「シアリル化（ｓｉａｌｙｌａｔｉｏｎ）」及び「シアリル化した（ｓｉａｌｙｌａｔｅｄ）」とは、目的のタンパク質またはタンパク質部分における、特にタンパク質に結合したグリカン（例えば、Ｎ−グリカン）鎖の成分としてのシアル酸の存在を指す。シアル酸（本明細書中では「シアル酸部分」とも呼ばれる）とは、一般的に、ノイラミン酸のＮ−またはＯ−置換誘導体を指す。Ｎ−アセチルノイラミン酸（５−アセトアミド−２−ケト−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクトノン酸；ＮＡＮＡまたはＮｅｕ５Ａｃとしても知られる）は、哺乳類で最も一般的なシアル酸である。他の例示的なシアル酸として、限定されないが、２−ケト−３−デオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクトノニック酸（Ｋｄｎとしても知られる）、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５ＧｃまたはＮＧＮＡとしても知られる）、ノイラミン酸（Ｎｅｕとしても知られる）、及び２−デオキシ−２，３−ジデヒドロ−Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎｅｕ２ｅｎ５Ａｃとしても知られる）が挙げられる。遊離シアル酸（Ｓｉａ）は、ヌクレオチドドナーＣＭＰ−Ｓｉａにおいて活性化された後、グリカン合成に使用することができる。ＣＭＰ−Ｓｉａから真核生物のゴルジ体で新規合成された複合糖質（例えば、糖タンパク質）へのＳｉａの転移は、結合特異的シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ）のファミリーによって触媒される。シアル酸は、一般的にはグリカン（例えば、Ｎ−グリカン）分岐の末端残基である。いくつかの実施形態では、シアル酸は、最も一般的に１つのシアル酸残基が別のシアル酸残基に結合している場合、グリカン内の内部位置を占めることができる。シアリル化及びシアル酸の概説については、例えば、Ｖａｒｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０１５−２０１７の第１５章を参照のこと。
【０１７１】
用語「シアル酸含有量」とは、目的のグリコシル化タンパク質（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）またはタンパク質部分のシアリル化のレベルまたは量を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約４〜約１６モル（例えば、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、または約１６モル）のシアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８、９、１０、１１、または１２モルのシアル酸含有量を有する。
【０１７２】
本発明によるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物（例えば、医薬組成物またはバッチ）に関する用語「平均シアル酸含有量」とは、組成物中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりの組成物中のシアル酸のモルの総数を指す。したがって、例えば、そのような組成物は、様々なレベルのシアリル化（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり０〜２５モルの範囲のシアル酸）を有する組成物中の個々のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の不均一なプールを含み得る。特に明記しない限り、本明細書に記載の平均シアル酸含有量を含むシアル酸含有量のすべての値は、二量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を指す。
【０１７３】
本明細書中で使用する用語「バッチ」とは、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物を含む、一連の製造プロセスの産物を指す。例えば、本明細書に記載の方法を用いて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のバッチを製造することができる。バッチは、本明細書に記載の方法に従って、例えば、バッチの平均シアル酸含有量を評価することにより、出荷用に（すなわち、流通または販売用に）選択することができる。
【０１７４】
用語「アフコシル化」、「アフコシル化した」、「脱フコシル化」、または「脱フコシル化した」とは、Ｎ−グリカン、例えば、タンパク質（例えば、ＩＬ−２２ポリペプチド）またはタンパク質部分（例えば、ＦｃのＣＨ２ドメイン）に結合したＮ−グリカンからのコアフコースの欠失または除去を指す。
【０１７５】
用語「二量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質」とは、各単量体がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を指す。用語「単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質」とは、一方の単量体がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−２２  Ｆｃアーム）を含み、他方の単量体がＩＬ−２２ポリペプチドを含まないＦｃ領域（Ｆｃアーム）を含む二量体を指す。したがって、二量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２Ｒ結合に関して二価であり、一方、単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２Ｒ結合に関して一価である。単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヘテロ二量体化は、限定されないが、ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ技術によるヘテロ二量体化を含む、当技術分野で公知の方法により促進することができる。ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ技術の構造及び組立方法は、例えば、ＵＳ５，８２１，３３３、ＵＳ７，６４２，２２８、ＵＳ２０１１／０２８７００９、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５９８１０に見出すことができ、それらの全体を参照により本明細書に援用する。この技術は、一方のＦｃのＣＨ３ドメインにおいて、小さなアミノ酸残基を大きなアミノ酸残基に置き換えることによって「ノブ」（または隆起）を導入し、他方のＦｃのＣＨ３ドメインにおいて、１つ以上の大きなアミノ酸残基を小さなアミノ酸残基に置き換えることによって「ホール」（または空洞）を導入することにより開発された。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合アームはノブを含み、Ｆｃのみのアームはホールを含む。
【０１７６】
ノブを形成するための好ましい残基は、一般的には天然アミノ酸残基であり、好ましくはアルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される。最も好ましくは、トリプトファン及びチロシンである。一実施形態では、ノブを形成するための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニンまたはバリンなどの小さな側鎖体積を有する。ノブを形成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換として、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ、またはＦ４０５Ｗ置換が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
ホールの形成に好ましい残基は、一般的には天然アミノ酸残基であり、好ましくは、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、ホールを形成するための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンなどの大きな側鎖体積を有する。ホールを生成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸置換として、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｔ、及びＹ４０７Ｖ置換が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ノブはＴ３６６Ｗ置換を含み、ホールはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換を含む。ある特定の実施形態では、単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、単量体型ＩＬ−２２  ＩｇＧ１  Ｆｃ融合体は、ＩＬ−２２  Ｆｃノブアーム及びＦｃホールアームを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  ＦｃノブアームはＴ３６６Ｗ置換（配列番号６１）を含み、ＦｃホールアームはＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（配列番号６２）を含む。特定の他の実施形態では、両方のアームのＦｃ領域は、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ａ変異をさらに含む。特定の実施形態では、単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞で発現させる。ヘテロ二量体化を容易にする当技術分野で公知のＦｃ領域への他の改変も企図され、本出願に包含されることを理解されたい。
【０１７８】
用語「創傷」とは、損傷、特に皮膚または別の外面を断裂、穿刺、切断、または破壊する損傷を指す。
【０１７９】
用語「潰瘍」とは、皮膚または粘膜の損傷部位であり、膿の形成、組織の死滅を特徴とし、炎症反応を伴うことが多い。
【０１８０】
本明細書中で互換的に使用する用語「腸」または「消化管」は、小腸及び大腸を広く包含する。
【０１８１】
用語「創傷治癒を加速すること」または「創傷治癒の加速」とは、治癒速度の増加、例えば、完全な創傷閉鎖が生じるまでの時間の短縮、または創傷面積の割合（％）の減少が生じるまでの時間の短縮を指す。
【０１８２】
「糖尿病性創傷」は、糖尿病に関連する創傷である。
【０１８３】
「糖尿病性潰瘍」は、糖尿病に関連する潰瘍である。
【０１８４】
「慢性創傷」とは、治癒しない創傷を指す。例えば、Ｌａｚａｒｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｗｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅａｌｉｎｇ，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３０：４８９−９３（１９９４）を参照のこと。慢性創傷として、例えば、動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡または床ずれ、静脈性潰瘍などが挙げられるが、これらに限定されない。急性創傷は、慢性創傷に発展する可能性がある。急性創傷として、例えば、熱傷（例えば、火傷）、外傷、手術、広範囲の皮膚癌の切除、深層真菌感染症及び深層細菌感染症、血管炎、強皮症、天疱瘡、中毒性表皮壊死症などが挙げられる。したがって、特定の実施形態では、慢性創傷は感染創である。「通常の創傷」とは、通常の創傷治癒修復を受ける創傷を指す。「親和性」とは、分子（例えば、リガンドまたは抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、受容体または抗原）との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。特に明記しない限り、本明細書中で使用する場合、「結合親和性」とは、結合ペアのメンバー（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質とＩＬ−２２受容体）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の説明的及び例示的な実施形態を、以下に記載する。
【０１８５】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に関して本明細書中で使用する用語「効力」とは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質がＩＬ−２２Ｒ（例えば、ＩＬ−２２−Ｒ１ａ、またはその部分、例えば、細胞外ドメイン）に結合する能力、及び／または下流のＩＬ−２２Ｒシグナル伝達（例えばＳＴＡＴ３シグナル伝達）を活性化する能力を指す。いくつかの実施形態では、効力を、例えば実施例２に記載するように、受容体結合アッセイまたは細胞ベースの結合アッセイで評価する。いくつかの実施形態では、効力を、例えば実施例２に記載するように、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを使用して評価する。いくつかの実施形態では、効力を、参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、例えば、表１２及び／または表１３に示すＮ−グリカン分布を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較する。
【０１８６】
本明細書中の用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、所望の抗原に対する結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
【０１８７】
「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【０１８８】
抗体の「クラス」とは、その重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に分類し得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【０１８９】
「エフェクター機能」または「エフェクター活性」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指し、これは抗体のアイソタイプによって様々に異なる。抗体エフェクター機能の例として：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が挙げられる。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能を、または検出可能なエフェクター機能を示さない。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、実質的に低下したエフェクター機能、例えば、約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の低下したエフェクター機能を示す。
【０１９０】
薬剤、例えば医薬製剤の「有効量」または「治療有効量」とは、所望の治療または予防結果を達成するために必要な用量及び期間で有効な量を指す。
【０１９１】
例えば、心臓血管の疾患または病態の場合、治療有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、アテローム性動脈硬化巣形成症の程度を低減し；アテローム性動脈硬化巣（複数可）のサイズを縮小し；アテローム性動脈硬化巣を抑制し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させ）；アテローム性動脈硬化巣の血栓症または破裂を抑制し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させ）；及び／または疾患または病態に関連する１つ以上の症状をある程度緩和することができる。
【０１９２】
「低減または抑制する」とは、好ましくは２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。低減または抑制とは、治療しようとする障害の症状、アテローム性動脈硬化巣の存在もしくはサイズ、またはアテローム性動脈硬化巣（複数可）の数を指し得る。
【０１９３】
「準最適量」とは、特定の治療に通常使用する治療薬の最適量より少ない量を指す。２つの治療薬を同時にまたは連続して対象に投与する場合、各治療薬は、各治療薬を単独で投与する場合の治療と比較して、最適以下の量で投与することができる。例えば、特定の実施形態では、ＩＢＤ治療を必要とする対象に、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及び最適以下の量のデキサメタゾンを含む医薬組成物とともに投与する。
【０１９４】
用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、天然の抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書中で定義するＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【０１９５】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は同じ意味で用いられ、外来性核酸を導入した細胞を指し、これにはそのような細胞の子孫が含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、継代数に関係なく、初代形質転換細胞及びそれに由来する子孫が含まれる。形質転換細胞には、一過性または安定的に形質転換された細胞が含まれる。子孫は、核酸含量が親細胞と完全に同一ではない可能性があるが、変異を含んでいる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体の子孫は本明細書に含まれる。特定の実施形態では、宿主細胞に、外来性核酸を一過性に形質移入する。特定の他の実施形態では、宿主細胞に、外来性核酸を安定的に形質移入する。
【０１９６】
「免疫複合体」は、細胞傷害剤を含むがこれに限定されない、１つ以上の異種分子（複数可）に複合体化させた抗体または抗体断片である。
【０１９７】
「個体」、「対象」、または「患者」は哺乳類である。哺乳類には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、個体、対象または患者はヒトである。
【０１９８】
「単離された」ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質とは、この融合タンパク質を組換えにより産生する宿主細胞の環境から分離されたＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）アプローチによる測定で、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％を超える純度まで精製する。
【０１９９】
「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、通常、その核酸分子を保有している細胞に保有されている核酸分子であって、ただし、その核酸分子が、染色体外に、またはその本来の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子が含まれる。
【０２００】
用語「ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸」とは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする１つ以上の核酸分子を指し、これには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるそのような核酸分子（複数可）が含まれ、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞に一過性または安定的に形質移入され、及びそのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞の１つ以上の場所に存在する。
【０２０１】
用語「調節配列」とは、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した調節配列には、例えば、プロモーター、場合によりオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。
【０２０２】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれると「作動可能に連結」される。例えば、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現させる場合、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡをポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結し；プロモーターまたはエンハンサーを、それが配列の転写に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結し；または、リボソーム結合部位を、翻訳を容易にするように配置する場合、コード配列に作動可能に連結する。一般的に、「作動可能に連結」とは、連結されるＤＮＡ配列が隣接しており、分泌リーダーの場合は隣接していてリーディングフェーズにあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、便利な制限酵素部位でのライゲーションによって実施する。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを従来の慣行に従って使用する。
【０２０３】
本明細書中で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、例えば、自然変異を含むかまたはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除けば、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、及び／または、同じエピトープに結合し、そのようなバリアントは一般的に少量存在する。通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する抗体である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を保有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製してもよい。そのような方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を、本明細書に記載する。
【０２０４】
「天然抗体」とは、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのいずれかが割り当てられる。
【０２０５】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、限定されないが、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然バリアントが含まれる。
【０２０６】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域において、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１〜約１０アミノ酸置換、好ましくは約１〜約５アミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域に対して、少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくはそれに対して少なくとも約９０％の相同性、より好ましくはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域はグリコシル化されていない。
【０２０７】
本明細書中で同じ意味で用いられる「障害」、「疾患」、または「病態」とは、本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物（例えば、医薬組成物）による治療により恩恵を受ける任意の病態である。これには、哺乳類を問題の障害にかかりやすくする病的状態を含む慢性及び急性障害または疾患が含まれる。いくつかの実施形態では、障害はＩＬ−２２関連障害である。例示的な障害として、ＩＢＤ（例えば、ＵＣまたはクローン病）、微生物感染、急性腎障害、急性膵炎、創傷、心血管病態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症、及び敗血症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０８】
本明細書中で同じ意味で用いられる用語「炎症性腸障害」、「炎症性腸疾患」、及び「ＩＢＤ」は、本明細書中では最も広い意味で用いられ、その病因が小腸及び結腸を含む腸における再発性炎症を含むすべての疾患及び病的状態が含まれる。ＩＢＤには、例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病が含まれる。ＩＢＤは、ＵＣ及びＣＤに限定されない。疾患の徴候には、炎症及び腸の上皮の完全性の低下が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０９】
用語「心血管疾患」または「心血管障害」は、本明細書中では最も広い意味で用いられ、その病因が血管の異常に関与するすべての疾患及び病的状態、例えば、アテローム性動脈硬化巣形成症（安定または不安定／易損性プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の上昇が含まれる。この用語にはさらに、アテローム性動脈硬化巣の形成の阻害により恩恵を受ける疾患及び病的状態が含まれる。心血管疾患には、冠動脈アテローム性動脈硬化症、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する病態、脳血管疾患、末梢血管疾患、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、糖尿病、メタボリックシンドローム性腎疾患、虚血及び再灌流後の遠隔組織損傷、ならびに心肺バイパス術が含まれるが、これらに限定されない。その発症、進展、または進行をアテローム性動脈硬化巣の形成の阻害によって調節することができる、アテローム性動脈硬化巣の形成に関連するすべての心血管病態及び疾患がこの群に具体的に含まれる。
【０２１０】
用語「心血管病態」は、本明細書中では最も広い意味で用いられ、その病状がアテローム性動脈硬化巣形成症（安定または不安定／易損性プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の上昇を含む、すべての心血管病態及び疾患が含まれる。その発症、進展、または進行をアテローム性動脈硬化巣の形成の阻害によって調節することができる、アテローム性動脈硬化巣の形成に関連するすべての心血管病態及び疾患がこの群に具体的に含まれる。この用語には、特に、アテローム性動脈硬化巣の形成の阻害により恩恵を受ける疾患及び病的状態が含まれる。心血管病態には、冠動脈アテローム性動脈硬化症、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する病態、脳血管疾患及び脳血管疾患に関連する病態、末梢血管疾患及び末梢血管疾患に関連する病態、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、糖尿病、メタボリックシンドローム性腎疾患、虚血及び再灌流後の遠隔組織損傷、ならびに心肺バイパスに関連する病態が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中で使用する「脳血管疾患に関連する病態」には、例えば、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）及び脳卒中が含まれる。本明細書中で使用する「末梢血管疾患に関連する病態」には、例えば、跛行が含まれる。その発症、進展、または進行をアテローム性動脈硬化巣の形成の阻害によって調節することができる、アテローム性動脈硬化巣の形成に関連するすべての心血管病態及び疾患がこの群に具体的に含まれる。
【０２１１】
アテローム性動脈硬化巣形成症は、代謝性内毒血症に対する自然免疫応答の結果として生じる可能性があり、これは、腸内微生物叢に由来する全身性リポ多糖（ＬＰＳ）のレベルの上昇、及び腸粘膜バリアの機能的完全性の喪失を特徴とする。内毒血症に対する自然免疫応答は、プラーク形成の原因である軽度の慢性炎症を引き起こす。
【０２１２】
用語「メタボリックシンドローム」は、本明細書中では最も広い意味で用いられる。メタボリックシンドロームは、以下の５つの形質のうちの少なくとも３つを含むいくつかのメタボリックリスク因子の成人対象での併発を伴う：腹部肥満、例えば、胴囲が男性で９０ｃｍ以上、女性で８０ｃｍ以上；例えば、１５０ｍｇ／ｄＬ以上の血清トリグリセリドの上昇、またはトリグリセリドの上昇に対する薬物治療；血清ＨＤＬコレステロールレベルの低下、例えば、男性で４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性で５０ｍｇ／ｄＬ未満、または低ＨＤＬコレステロールに対する薬物治療；高血圧、例えば、１３０ｍｍＨｇ超の収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇ超の拡張期血圧、または高血圧に対する薬物治療；ならびに、例えば１００ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時血漿グルコース上昇、グルコース上昇に対する薬物治療、または以前に診断された２型糖尿病。
【０２１３】
１６歳より年上の子供には、上記の大人用の基準を用いることができる。１０〜１６歳の子供のメタボリックシンドロームは、以下の５つの形質のうちの少なくとも３つを含むいくつかのメタボリックリスク因子の対象での併発を含む：腹部肥満、例えば、９０パーセンタイル超の胸囲；例えば、１１０ｍｇ／ｄＬ以上、９５パーセンタイル超であり得る血清トリグリセリドの上昇、またはトリグリセリドの上昇に対する薬物治療；例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、５パーセンタイル未満の血清ＨＤＬコレステロールレベルの低下、または低ＨＤＬコレステロールに対する薬物治療；高血圧、例えば、１３０ｍｍＨｇ超の収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇ超、９０パーセンタイル超であり得る拡張期血圧、または高血圧に対する薬物治療；ならびに、例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上であり得る空腹時血漿グルコースの上昇、耐糖能障害、グルコース上昇に対する薬物治療、または以前に診断された２型糖尿病。
【０２１４】
一般的に述べると、メタボリックシンドロームにおいて併発するリスク因子として、肥満（腹部肥満など）、高血糖、脂質異常症、インスリン抵抗性、及び／または高血圧が挙げられる。これらのリスク因子はすべて、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、またはその両方の発症を促進する。メタボリックシンドロームは、慢性脂肪組織炎症を特徴とし得る。
【０２１５】
メタボリックシンドロームは、炎症性、血栓形成促進性の病態として認識することができ、Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１のうちの１つ以上のレベルの上昇に関連し得；そのようなマーカーは、アテローム性動脈硬化性心血管疾患、糖尿病、またはその両方のその後の発症のリスク増加と関連し得る。
【０２１６】
メタボリックシンドロームは、脂肪症、線維症、及び肝硬変を伴う脂肪肝疾患、肝細胞及び肝内胆管癌、慢性腎疾患、多嚢胞性卵巣症候群、閉塞性睡眠時無呼吸を含む睡眠呼吸障害、ならびに高尿酸血症及び痛風を含む、いくつかの肥満関連障害に関連し得る。
【０２１７】
用語「インスリン関連障害」は、耐糖能障害を特徴とする疾患または病態を包含する。一実施形態では、インスリン関連障害は、限定されないが、Ｉ型（インスリン依存型糖尿病またはＩＤＤＭ）、ＩＩ型（非インスリン依存型糖尿病またはＮＩＤＤＭ）糖尿病、妊娠糖尿病、及び任意の他の障害を含む糖尿病であり、インスリン分泌を刺激する薬剤によって恩恵を受けるであろう。別の実施形態では、インスリン関連障害は、インスリン抵抗性を特徴とする。
【０２１８】
用語「敗血症」とは、最も広い意味で用いられ、重度の感染によって引き起こされる全身性の炎症状態を包含し得る。敗血症は、重度の感染、すなわち、血液、尿路、肺、皮膚、または他の組織における、最も一般的には細菌、それだけでなく、真菌、ウイルス、寄生虫に対する免疫系の応答によっても引き起こされ得る。
【０２１９】
用語「急性内毒素血症」は、最も広い意味で用いられ、血漿細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の増加の病態を包含し得る。急性内毒素血症は、次に敗血症を引き起こし得る。体循環におけるＬＰＳの増加は、低度の慢性炎症を誘発し、内在性の防御宿主応答を活性化して血漿脂質を上昇させ、これは、慢性病態では、食事誘発性肥満、インスリン抵抗性とアテローム性動脈硬化症、及び最終的なＣＶＤ事象に寄与する。
【０２２０】
用語「移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）」とは、同種幹細胞移植の合併症を指す。ＧＶＨＤでは、ドナーの造血幹細胞が移植レシピエントを異物として認識し、患者の組織及び器官を攻撃し、これにより、組織もしくは器官の機能を損なわせるか、または機能を停止させ得る。本明細書中で使用する場合、ＧＶＨＤには、例えば、急性ＧＶＨＤまたは慢性ＧＶＨＤが含まれる。さらに、非限定的な例には、腸のＧＶＨＤが含まれる。
【０２２１】
本明細書中で使用する場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法的変形）は、治療対象の個体の自然な経過を変更しようとする臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の経過中に行うことができる。治療の望ましい効果として、疾患の発症または再発の予防、症状の軽減、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の軽減、転移の予防、疾患の進行速度の低下、病状の改善または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２２】
例えば、ＩＢＤに関して、「治療」は、ＩＢＤを発症する可能性の低下、ＩＢＤの発症率の低下、及び疾患の重症度の低下を指し得る。別の例として、アテローム性動脈硬化巣形成症に関して、「治療」は、アテローム性プラーク沈着物が発生する可能性の低下、沈着物の発生速度の低下、既存の沈着物の数もしくはサイズの減少、またはプラークの安定性の向上を指し得る。治療を必要とする対象には、すでに障害を患っている対象、及び障害を予防すべき対象が含まれる。治療の望ましい効果として、疾患の発症または再発の予防、症状の軽減、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の軽減、疾患の予防、疾患の進行速度の低下、病状の改善または緩和、及び寛解または予後の改善の誘発が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を用いて、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を遅延させる。
【０２２３】
特定の実施形態では、心血管病態の予防または治療に関する「それを必要とする対象」とは、心血管疾患もしくは心血管病態（ＣＶＤ）もしくはメタボリックシンドロームと診断されるか、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する１つ以上の病態を示す対象、過去にＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームと診断されたか、またはそれに関連する１つ以上の病態を示した対象、あるいは遺伝的または環境的要因により、将来的にＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームを、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する１つ以上の病態を発症するリスクがあるとみなされた対象を指す。したがって、特定の実施形態では、それを必要とする対象は、ＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームを、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する病態を示す対象、または過去にＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームを、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する病態を示した対象、あるいは将来的にＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームを、またはＣＶＤもしくはメタボリックシンドロームに関連する病態を発症するリスクがあるとみなされた対象であり得る。
【０２２４】
心血管疾患または心血管病態の治療において、治療薬は、免疫応答の構成要素の応答の強度を直接変更するか、または他の治療薬、例えば抗生物質、抗真菌薬、抗炎症薬、化学療法薬などによる治療に対する疾患の感受性を高めることができる。動脈疾患の治療において、治療は、例えば、疾患の進行を予防または減速させることができる。したがって、動脈疾患の治療には、具体的には、病態の発症、または病態のある段階から別の、より進行した段階への進行、もしくはより重篤な関連する病態への進行の予防、抑制、または減速が含まれる。
【０２２５】
疾患または病態の「病理」には、対象の健康を損なうすべての現象が含まれる。心血管疾患または心血管病態の場合、これには、限定されないが、アテローム性動脈硬化巣形成症（安定または不安定／易損性プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露の上昇が含まれる。
【０２２６】
「軽減」、「軽減する」、またはその同意語は、治療的処置及び予防的または防止的手段の両方を指し、その目的は、疾患または病態、例えば、アテローム性硬化巣形成症を改善、予防、減速（減少）、低減または抑制することである。治療を必要とする対象には、すでに疾患もしくは病態を罹患している対象、及び疾患もしくは病態に罹患しやすい対象、または疾患もしくは病態を予防すべき対象が含まれる。
【０２２７】
「慢性」投与とは、初期の治療効果を長期間維持するために、急性モードとは対照的な連続モードでの薬剤（複数可）の投与を指す。
【０２２８】
「間欠」投与は、中断なしに連続して行うのではなく、本質的に周期的な治療である。
【０２２９】
用語「添付文書」とは、治療製品の市販パッケージに慣習的に同梱される説明書を指すために用いられ、添付文書には、そのような治療製品の使用に関する指示、用法、用量、投与法、併用療法、禁忌、及び／または警告に関する情報が含まれる。
【０２３０】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性の割合（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性を達成するために必要に応じてギャップを導入した後の、保存的置換を配列同一性の一部として考慮しない、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性の割合を決定する目的でのアラインメントは、当業者の範囲内である様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性の割合の値を、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成する。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードはユーザードキュメントとともに米国著作権局、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，サウスサンフランシスコ，カリフォルニアから公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、不変である。
【０２３１】
ＡＬＩＧＮ−２をアミノ酸配列の比較に使用する状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、またはそれに対するアミノ酸配列同一性の割合（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂと、またはそれに対して特定のアミノ酸配列同一性の割合を有するか、もしくは含む、所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算する：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によるＡとＢのアラインメントにおいて、プログラムによって同一マッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さは、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない。Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性の割合は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性の割合と等しくない。特に明記しない限り、すべての本明細書中で使用するアミノ酸配列同一性の割合の値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用して直前の段落に記載されているように取得する。
【０２３２】
以下は、「比較タンパク質」または「参照タンパク質」と指定されたアミノ酸配列の、「ＩＬ−２２」と指定されたアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性の計算方法の例であり、「ＩＬ−２２」は目的のＩＬ−２２ポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は、目的の「ＩＬ−２２」ポリペプチドと比較するポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」、及び「Ｚ」は、それぞれ異なるアミノ酸残基を表す。
2021511297.tif 000002
【０２３３】
用語「アゴニスト」は、最も広い意味で用いられ、ＩＬ−２２ポリペプチドの生物活性を部分的または完全に模倣する任意の分子が含まれる。「アゴニスト」には、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの転写または翻訳を刺激する分子も包含される。
【０２３４】
適切なアゴニスト分子として、例えば、アゴニスト抗体または抗体断片；天然ポリペプチド；天然ポリペプチドの断片またはアミノ酸配列バリアント；ペプチド；アンチセンスオリゴヌクレオチド；有機小分子；及びポリペプチドのアゴニストまたは抗体をコードする核酸が挙げられる。「１つの（ａｎ）」アゴニストへの言及には、単一のアゴニストまたは２つ以上の異なるアゴニストの組み合わせが包含される。
【０２３５】
用語「ＩＬ−２２アゴニスト」は、最も広い意味で用いられ、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドの（上記で定義したような）定性的生物活性を模倣する任意の分子が含まれる。ＩＬ−２２アゴニストとして、具体的にはＩＬ−２２−ＦｃまたはＩＬ−２２  Ｉｇポリペプチド（イムノアドヘシン）が挙げられるが、少なくとも１つのＩＬ−２２生物活性を模倣する小分子も含まれる。好ましくは、生物活性は、ＩＬ−２２受容体の結合、ＩＬ−２２ＢＰとの相互作用、先天性免疫応答経路の促進、または心血管疾患もしくは心血管病態の場合、アテローム性動脈硬化巣の形成に影響を及ぼすことであり、特にアテローム性動脈硬化巣の形成を阻害することである。動脈硬化巣の形成の阻害は、当業者に公知の任意の適切な画像化法によって評価することができる。
【０２３６】
ＩＬ−２２Ｒ１は、他のタンパク質と対になって、特定のＩＬ−１０ファミリーメンバーの受容体としてヘテロ二量体を形成する。上記のＯｕｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１を参照のこと。したがって、特定の実施形態では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２Ｒ１に結合し、その下流シグナル伝達を誘導するサイトカイン（またはその融合タンパク質もしくはアゴニスト）を含むＩＬ−２２受容体アゴニストを含み得る。特定の実施形態では、ＩＬ−２２アゴニストには、抗ＩＬ−２２Ｒ１アゴニスト抗体を含むがこれに限定されないＩＬ−２２Ｒ１アゴニスト；ＩＬ−２０ポリペプチドまたはＩＬ−２０  Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＩＬ−２０アゴニスト；ＩＬ−２４ポリペプチドまたはＩＬ−２４融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＩＬ−２４アゴニストが含まれる。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２２Ｒ１アゴニストには、ＩＬ−１９ポリペプチドまたはＩＬ−１９Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＩＬ−１９アゴニスト；及びＩＬ−２６ポリペプチドまたはＩＬ−２６  Ｆｃ融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＩＬ−２６アゴニストが含まれる。本明細書において、ＩＬ−１９（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＧ１６７５５．１、配列番号７７）、ＩＬ−２０（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ６９３１１．１、配列番号７８）、ＩＬ−２４（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＨ０９６８１．１、配列番号７９）及びＩＬ−２６（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０６０８７２．１、配列番号８０）の例示的な配列を提供する。特定の実施形態では、ＩＬ−１９ポリペプチドは、配列番号７７またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質のアミノ酸配列を有する。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２０ポリペプチドは、配列番号７８またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質のアミノ酸配列を有する。さらに他の実施形態では、ＩＬ−２４ポリペプチドは、配列番号７９またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質のアミノ酸配列を有する。特定の他の実施形態では、ＩＬ−２６ポリペプチドは、配列番号８０またはシグナルペプチドを含まない成熟タンパク質のアミノ酸配列を有する。
【０２３７】
「小分子」は、本明細書中では、約６００ダルトン未満、好ましくは約１０００ダルトン未満の分子量を有すると定義される。
【０２３８】
本明細書中で使用する場合、「アゴニスト抗体」とは、ＩＬ−２２ポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に模倣する抗体である。
【０２３９】
用語「医薬製剤」または「医薬組成物」とは、そこに含まれる有効成分の生物学的活性が効果的であることを可能にするような形態であり、製剤を投与しようとする対象が許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
【０２４０】
「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって非毒性の、医薬製剤中の活性成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、賦形剤、希釈剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４１】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は一般的に類似した構造を有し、各ドメインは４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を有する。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照のこと）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、その抗原に結合する抗体に由来するＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングしてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと。
【０２４２】
本明細書中で使用する場合、用語「ベクター」とは、それに連結されている別の核酸を増幅させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれを導入した宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを、本明細書中では「発現ベクター」と呼ぶ。
【０２４３】
本出願内では、特に明記しない限り、使用する手法は、以下のようないくつかの周知の参考文献に見出し得る：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ），ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．  １９９０．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）。
【０２４４】
必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を伴う手順は、特に明記しない限り、一般的に製造元が定義したプロトコール及び／またはパラメータに従って実行する。したがって、本方法及び使用を説明する前に、本発明は、それ自体、記載する特定の方法論、プロトコール、細胞株、動物種または属、構築物、及び試薬に限定されず、当然ながら変化し得ることを理解されたい。また、本明細書中で使用する用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されたい。
【０２４５】
ＩＩ．組成物及び方法
本発明は、例えば、ＩＢＤなどのＩＬ−２２関連疾患（例えば、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病）、心血管病態、メタボリックシンドローム、ＧＶＨＤの治療のための、及び創傷治癒の加速（例えば、糖尿病性創傷治癒）のための、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、その組成物（例えば、医薬組成物）、及びその使用を提供する。本明細書において、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の作製方法及び精製方法も提供する。本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２ポリペプチド部分がシアリル化され、そしてシアリル化含有量が、本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の効力及び薬物動態特性の両方に関連するという発見に、少なくとも部分的に基づく。この発見は、部分的に、製造プロセスによって影響を受け、分子の活性及びＰＫ／ＰＤ特性に影響を与える分子の特定の特性を同定することに関連してなされた。例えば、本明細書に記載するように、グリコシル化が全体的に低いＩＬ−２２  Ｆｃ含有組成物（例えば、限定されないが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８モル未満の平均シアル酸含有量を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物が挙げられる）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで望ましくない速いクリアランスを有し、さらに、それらの組成物（例えば、限定されないが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２モル超のシアル酸を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物が挙げられる）の高いグリコシル化は、ＩＬ−２２受容体への望ましくない結合特性を有することが、現在発見されている。したがって、特定の態様では、特定された問題に対する解決策は、本明細書に記載するように、適切なクリアランス速度及び適切な結合活性の両方を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物の平均シアル酸含有量の範囲を同定することであった。より具体的には、望ましい範囲は、例えば製造を容易にするために当業者であれば通常選択するであろう完全なシアリル化よりも少ない範囲であることが現在発見されている。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物の平均シアル酸含有量の特に好ましい範囲は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜９モルのシアル酸である。
【０２４６】
Ａ．ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及び組成物
本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物を提供する。一般的に、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化（例えば、Ｎ−グリコシル化）されている。特定の実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはシアリル化されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はグリコシル化されておらず、したがって、シアル化されていない。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約３モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約４モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１３モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１４モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１５モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１６モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１７モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１８モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１９モル超のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約２０モル超のシアル酸である。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約２０モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１９モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１８モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１７モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１６モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１５モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１４モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１３モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６モル未満のシアル酸である。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５モル未満のシアル酸である。
【０２４９】
例えば、一態様では、本発明は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供し、その場合、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合物タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約４〜約２０モル（例えば、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５モル、約１６モル、約１７モル、約１８モル、約１９モル、または約２０モル）のシアル酸含有量を有する。
【０２５０】
別の態様では、本発明は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供し、その場合、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に対して、約２０％〜約１８０％（例えば、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約１６０％、約１７０％、または約１８０％）の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約４０％〜約１３０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モル〜約１２モル（例えば、約８、約９、約１０、約１１、または約１２モル）のシアル酸含量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約８０％〜約１２０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モル〜約１２モル（例えば、約８、約９、約１０、約１１、または約１２モル）のシアル酸含量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約６０％〜約１１０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モル〜約１２モル（例えば、約８、約９、約１０、約１１、または約１２モル）のシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約８０％〜約１０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約４０％〜約１３０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約６０％〜約１１０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８のシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較して、約８０％〜約１０％の効力を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載するように（例えば、実施例２において）、受容体結合アッセイまたは細胞ベースの結合アッセイで効力を評価する。いくつかの実施形態では、参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、表１２及び／または表１３に示すＮ−グリカン分布を有する。
【０２５１】
例えば、前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約１０モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約９モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約８モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約７モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５〜約６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１５モルのシアル酸融合タンパク質、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約１０モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約９モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約８モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約６〜約７モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約１０モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約９モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約７〜約８モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１０モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９〜約１０モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１０〜約１１モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１１〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり１モルあたり約１１〜約１２モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１２〜約１３モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１３〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１３〜約１５モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１３〜約１４モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１４〜約１６モルのシアル酸、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１４〜約１５モルのシアル酸、またはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１５〜約１６モルのシアル酸である。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８〜約１２モル（例えば、約８、約９、約１０、約１１、または約１２モル）である。例えば、特定の実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約８モルのシアル酸である。他の特定の実施形態では、シアル酸含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約９モルのシアル酸である。
【０２５３】
シアル酸は、当技術分野で公知の任意の適切なシアル酸またはそれらの任意の適切な組み合わせであってよい。例えば、いくつかの実施形態では、シアル酸は、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）、Ｋｄｎ、ＮＧＮＡ、Ｎｅｕ、Ｎｅｕ２ｅｎ５Ａｃ、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、主要なシアル酸はＮＡＮＡである。いくつかの実施形態では、シアル酸の実質的にすべてがＮＡＮＡである。
【０２５４】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はいずれも、約６，０００ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００ｎｇ、例えば、約６，０００ｎｇ／ｍＬ、約７，０００ｎｇ／ｍＬ、約８，０００ｎｇ／ｍＬ、約９，０００ｎｇ／ｍＬ、約１０，０００ｎｇ／ｍＬ、約１１，０００ｎｇ／ｍＬ、約１２，０００ｎｇ／ｍＬ、約１３，０００ｎｇ／ｍＬ、約１４，０００ｎｇ／ｍＬ、約１５，０００ｎｇ／ｍＬ、約１６，０００ｎｇ／ｍＬ、約１７，０００ｎｇ／ｍＬ、約１８，０００ｎｇ／ｍＬ、約１９，０００ｎｇ／ｍＬ、約２０，０００ｎｇ／ｍＬ、約２１，０００ｎｇ／ｍＬ、約２２，０００ｎｇ／ｍＬ、約２３，０００ｎｇ／ｍＬ、約２４，０００ｎｇ／ｍＬ、または約２５，０００ｎｇ／ｍＬの最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を有し得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約９，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１８，０００ｎｇ、例えば、約９，０００ｎｇ／ｍＬ、約１０，０００ｎｇ／ｍＬ、約１１，０００ｎｇ／ｍＬ、約１２，０００ｎｇ／ｍＬ、約１３，０００ｎｇ／ｍＬ、約１４，０００ｎｇ／ｍＬ、約１５，０００ｎｇ／ｍＬ、約１６，０００ｎｇ／ｍＬ、約１７，０００ｎｇ／ｍＬ、または約１８，０００ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘを有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約８，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１９，０００ｎｇのＣｍａｘを有する。いくつかの実施形態では、Ｃｍａｘは、約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をＣＤ１マウスへ静脈内投与した後に評価するか、または同等のヒトＣｍａｘ値である。
【０２５５】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はいずれも、時点０から最後の測定可能な時点（ＡＵＣｌａｓｔ）までの血清濃度−時間曲線下面積が、約２，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約４２，０００日・ｎｇ／ｍＬ、例えば、約２，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約４，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約６，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約７，５００日・ｎｇ／ｍＬ、約８，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約８，５００日・ｎｇ／ｍＬ、約９，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約９，５００日・ｎｇ／ｍＬ、約１０，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約１２，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約１６，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約２０，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約２４，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約３０，０００日・ｎｇ／ｍＬ、約３６，０００日・ｎｇ／ｍＬ、または約４２，０００日・ｎｇ／ｍＬであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬのＡＵＣｌａｓｔを有する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣｌａｓｔは、約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をＣＤ１マウスへ静脈内投与した後に評価するか、または同等のヒトＡＵＣｌａｓｔ値である。
【０２５６】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はいずれも、約２５ｍＬ／ｋｇ／日〜約４００ｍＬ／ｋｇ／日、例えば、約２５ｍＬ／ｋｇ／日、約５０ｍＬ／ｋｇ／日、約７５ｍＬ／ｋｇ／日、約１００ｍＬ／ｋｇ／日、約１２５ｍＬ／ｋｇ／日、約１５０ｍＬ／ｋｇ／日、約１７５ｍＬ／ｋｇ／日、約２００ｍＬ／ｋｇ／日、約２２５ｍＬ／ｋｇ／日、約２５０ｍＬ／ｋｇ／日、約２７５ｍＬ／ｋｇ／日、約３００ｍＬ／ｋｇ／日、約３２５ｍＬ／ｋｇ／日、約３５０ｍＬ／ｋｇ／日、約３７５ｍＬ／ｋｇ／日、または約４００ｍＬ／ｋｇ／日のクリアランス（ＣＬ）を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬは、約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日である。いくつかの実施形態では、ＣＬは、約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をＣＤ１マウスへ静脈内投与した後に評価するか、または同等のヒトＣＬ値である。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約５モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約４モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約３モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約２モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約１モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．５モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．２モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．１モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．０８モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．０５モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．０１モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．００１モル未満のＮＧＮＡである。いくつかの実施形態では、ＮＧＮＡ含有量は、ＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．００１モル〜約５モルのＮＧＮＡ、ＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．００１モル〜約１モルのＮＧＮＡ、ＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．０１モル〜約１モルのＮＧＮＡ、ＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．１モル〜約１モルのＮＧＮＡ、またはＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり約０．５モル〜約１モルのＮＧＮＡである。
【０２５８】
前述の態様のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドはＮ−グリコシル化されていてもよい。前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、単鎖構造、二分岐構造、三分岐構造、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含み得る。
【０２５９】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．０１％〜約５％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．５％〜約１．５％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．６％〜約１．５％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．３％〜約１．７％が単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％が単鎖構造を有する。
【０２６０】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約４０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、単鎖構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１３．１％〜約２０．４％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０．６％〜約２２．８％が二分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７％が二分岐構造を有する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約５０％（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、または約５０％）が、三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約４０％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２５％〜約３５％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２８．２％〜約３３．５％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２６．５％〜約３５．３％が三分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３１％が三分岐構造を有する。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約６０％（例えば、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、または約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、または約６０％）が、四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３０％〜約５０％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５％〜約４５％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５．９％〜約４７％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２６．５％〜約３５．３％が四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４２％が四分岐構造を有する。
【０２６３】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含み得る。
【０２６４】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約４０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、ガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１３．７％〜約２７．５％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約９．１％〜約３２．１％がガラクトース部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２１％がガラクトース部分を有さない。
【０２６５】
別の例では、いくつかの実施形態において、Ｎ−グリカンの約１％〜約３５％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、または約３５％）が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約１６％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２．３％〜約１５．６％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１１．２％〜約１６．７％が１つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４％が１つのガラクトース部分を有する。
【０２６６】
さらに別の例では、いくつかの実施形態において、Ｎ−グリカンの約１％〜約３５％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、または約３５％）が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約１６％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０．９％〜約１５．７％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約９．３％〜約１７．４％が２つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１３％が２つのガラクトース部分を有する。
【０２６７】
さらに別の例では、いくつかの実施形態において、Ｎ−グリカンの約５％〜約４０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１６．４％〜約２０．６％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２２％が３つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１９％が３つのガラクトース部分を有する。
【０２６８】
別の例では、いくつかの実施形態において、Ｎ−グリカンの約５％〜約４５％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、または約４５％）が、４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０．８％〜約２６．４％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１８．９％〜約２８．３％が４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２４％が４つのガラクトース部分を有する。
【０２６９】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含み得る。
【０２７０】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約５０％（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、または約５０％）が、シアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約３５％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約３０％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７．３％〜約３０％がシアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１３．１％〜約３４．３％が、シアル酸部分を有さない。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２４％がシアル酸部分を有さない。
【０２７１】
別の例では、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約４５％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、または約４５％）が、１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７．６％〜約２２．３％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１６％〜約２３．９％が１つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％が１つのシアル酸部分を有する。
【０２７２】
さらに別の例では、いくつかの実施形態において、Ｎ−グリカンの約５％〜約４５％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、または約４５％）が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７．５％〜約２３．７％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５．５％〜約２５．８％が２つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２１％が２つのシアル酸部分を有する。
【０２７３】
別の例では、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約４０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２％〜約２４％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４．２％〜約１９．１％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１２．５％〜約２０．７％が３つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７％が３つのシアル酸部分を有する。
【０２７４】
例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約３０％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、または約３０％）が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６．４％〜約１２％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４．５％〜約１３．９％が４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約９％が４つのシアル酸部分を有する。
【０２７５】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する、約０％〜約２０％（例えば、約０％、約０．１、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％）のＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約５％が末端マンノース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約４％が末端マンノース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１．６％〜約２．９％が末端マンノース部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１．２％〜約３．３％が末端マンノース部分を有する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％が末端マンノース部分を有する。
【０２７６】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する、約１０％〜約７０％（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、または約７０％）のＮ−グリカンを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３０％〜約５０％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５％〜約４５％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３５．１％〜約４９．２％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３０．４％〜約５３．８％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４２％が末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０２７７】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約３５％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、または約３５％）が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約８．４％〜約１２．５％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７％〜約１３．８％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％が１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０２７８】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約３５％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、または約３５％）が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約８．１％〜約１２．５％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６．７％〜約１４％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％が２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０２７９】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約４０％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％）が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０．１％〜約１８．６％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７．２％〜約２１．５％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４％が３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０２８０】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２５％（例えば、約０．１％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、または約２５％）が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４％〜約２４％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２．３％〜約１１．８％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約１５％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７％が４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０２８１】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、末端ガラクトース部分を有する、約１０％〜約７０％（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、または約７０％）のＮ−グリカンを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％〜約５０％が末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２５％〜約３５％が末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２６．１％〜約３８．３％が末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２２．１％〜約４２．３％が末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３２％が末端Ｇａｌ部分を有する。
【０２８２】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有し得る。
【０２８３】
例えば、前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約５０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、または約５０％）が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１９．８％〜約２７．１％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１７．４％〜約２９．５％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２３％が１つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【０２８４】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０％〜約２５％（例えば、約０％、約０．１％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、または約２５％）が、２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％〜約１２％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約４．６％〜約９．２％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３％〜約１０．８％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７％が２つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【０２８５】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％（例えば、約０％、約０．１％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、または約１５％）が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０．１％〜約１０％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約５％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１．１％〜約２．６％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、約０．７％〜約３％のＮ−グリカンが３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％が３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【０２８６】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約０％〜約２０％（例えば、約０％、約０．１％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、または約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％）がＬａｃＮＡｃリピートを有する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１％〜約１０％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２％〜約８％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３．７％〜約５．２％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約３．２％〜約５．７％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％がＬａｃＮＡｃリピートを有する。
【０２８７】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、フコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５０％〜約１００％（例えば、約５０％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％）がフコシル化される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６０％〜約８０％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６５％〜約７５％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６５．１％〜約７５％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約６１．７％〜約７８．３％がフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約７０％がフコシル化される。
【０２８８】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、アフコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約５％〜約５０％（例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、または約５０％）がアフコシル化される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１６．４％〜約２３．７％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約１４％〜約１６．１％がアフコシル化される。いくつかの実施形態では、Ｎ−グリカンの約２０％がアフコシル化される。
【０２８９】
前述のＩＬ−２２ポリペプチドのいずれも、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３でグリコシル化することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３でグリコシル化される。
【０２９０】
例えば、前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１におけるグリコシル化占有率は、約５０％〜約１００％（例えば、約５０％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％）であり得る。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１におけるグリコシル化占有率は、約７０％〜約９０％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１におけるグリコシル化占有率は、約７５％〜約８５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１におけるグリコシル化占有率は約８２％である。
【０２９１】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５におけるグリコシル化占有率は、約６０％〜約１００％（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％）であり得る。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５におけるグリコシル化占有率は、約９０％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５におけるグリコシル化占有率は、約９５％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５におけるグリコシル化占有率は約１００％である。
【０２９２】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４におけるグリコシル化占有率は、約６０％〜約１００％（例えば、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％）であり得る。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４におけるグリコシル化占有率は、約９０％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４におけるグリコシル化占有率は、約９５％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４におけるグリコシル化占有率は約１００％である。
【０２９３】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３におけるグリコシル化占有率は、約１％〜約６０％（例えば、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、または約６０％）であり得る。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３におけるグリコシル化占有率は、約１５％〜約４５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３におけるグリコシル化占有率は、約２５％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３におけるグリコシル化占有率は、約３３％である。
【０２９４】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はグリコシル化されない。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はＧｌｙである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はＡｌａである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基はＡｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【０２９５】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＮ−グリコシル化されない。
【０２９６】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかは、二量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質であり得る。他の実施形態では、前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかは、単量体型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質であり得る。
【０２９７】
前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかは、ヒトＩＬ−２２ポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、配列番号４のアミノ酸配列である。
【０２９８】
任意の適切なリンカーを、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれも、ＩＬ−２２受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２受容体はヒトＩＬ−２２受容体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２ＲＡ１及び／またはＩＬ−１０Ｒ２に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２ＲＡ１に結合する。
【０３００】
いくつかの実施形態では、前述のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下でＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を培養する工程を含む方法によって産生される。いくつかの実施形態では、方法は、細胞培養物または培養培地からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を取得する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０３０１】
本明細書に記載の（例えば、上記に記載の）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを、組成物（例えば、医薬組成物）に含ませることができる。例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に関して上述した値のいずれかは、ＩＬ−２２  Ｆｃタンパク質の組成物の平均値であり得る。
【０３０２】
例えば、本明細書において、インターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を提供し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはＮ−グリコシル化される。
【０３０３】
別の例では、本明細書において、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物を提供し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３でグリコシル化され：（ａ）残基Ａｓｎ２１でのＮ−グリコシル化部位占有率は７０〜９０の範囲であり；（ｂ）残基Ａｓｎ３５でのＮ−グリコシル化部位占有率は９０〜１００の範囲であり；（ｃ）残基Ａｓｎ６４でのＮ−グリコシル化部位占有率は９０〜１００の範囲であり；及び／または（ｄ）残基Ａｓｎ１４３でのＮ−グリコシル化部位占有率は２５〜３５の範囲である。
【０３０４】
組成物のいずれかは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲の平均シアル酸含有量を有し得る。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８または９モルの平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの平均シアル酸含有量を有する。他の実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルの平均シアル酸含有量を有する。
【０３０５】
本明細書に記載の組成物のいずれかにおいて、シアル酸は、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）であり得る。
【０３０６】
組成物のいずれかは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮＧＮＡ１モル未満の平均ＮＧＮＡ含有量を有し得る。
【０３０７】
いくつかの実施形態では：（ｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）が約８，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１９，０００ｎｇであってもよく；（ｉｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、時点０から最後の測定可能な時点（ＡＵＣｌａｓｔ）までの血清濃度−時間曲線下面積が約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬであってもよく；及び／または（ｉｉｉ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、クリアランス（ＣＬ）が約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｃｍａｘ、ＡＵＣｌａｓｔ、及び／またはＣＬを、約１，０００μｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をＣＤ１マウスへ静脈内投与した後に評価する。
【０３０８】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、単鎖構造、二分岐構造、三分岐構造、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では、（ｉ）Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が単鎖構造を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が二分岐構造を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が三分岐構造を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が、四分岐構造を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの０．１％〜２％が単鎖構造を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜２５％が二分岐構造を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの２５％〜４０％が三分岐構造を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの３０％〜５１％が四分岐構造を有する。
【０３０９】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％が、ガラクトース部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が、１つのガラクトース部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が、２つのガラクトース部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が、３つのガラクトース部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が、４つのガラクトース部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの９％〜３２％が、ガラクトース部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜２０％が、１つのガラクトース部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの８％〜２５％が、２つのガラクトース部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの１２％〜２５％が、３つのガラクトース部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの１２％〜３０％が、４つのガラクトース部分を有する。
【０３１０】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含み得る。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１２％〜約３５％が、シアル酸部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、１つのシアル酸部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、２つのシアル酸部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、３つのシアル酸部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、４つのシアル酸部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの１２％〜３５％が、シアル酸部分を有さず；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が、１つのシアル酸部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が、２つのシアル酸部分を有し；（ｉｖ）Ｎ−グリカンの１０％〜３０％が、３つのシアル酸部分を有し；及び／または（ｖ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が、４つのシアル酸部分を有する。
【０３１１】
組成物のいずれかにおいて、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する約０％〜約１０％のＮ−グリカンを含み得；及び／または（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する約３０％〜約５５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する０％〜１０％のＮ−グリカンを含み；及び／または（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する３０％〜５５％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端マンノース部分を有する０％〜１０％のＮ−グリカンを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する３０％〜５５％のＮ−グリカンを含む。
【０３１２】
組成物のいずれかにおいて、Ｎ−グリカンは、１、２、３、または４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し得る。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１％〜２０％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの５％〜２５％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有し；及び／または（ｉｖ）Ｎ−グリカンの０％〜１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する。
【０３１３】
組成物のいずれかにおいて、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端ガラクトース（Ｇａｌ）部分を有する約２０％〜約４５％のＮ−グリカンを含み得；及び／または（ｉｉ）Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する。いくつかの実施形態では、（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、末端Ｇａｌ部分を有する２０％〜４５％のＮ−グリカンを含み；及び／または（ｉｉ）Ｎ−グリカンは、１つ、２つ、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【０３１４】
組成物のいずれかにおいて：（ｉ）Ｎ−グリカンの約１５％〜約３０％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有していてもよく；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有していてもよく；及び／または（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの約０．１％〜約６％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有していてもよい。いくつかの実施形態では、（ｉ）Ｎ−グリカンの１５％〜３０％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有し；（ｉｉ）Ｎ−グリカンの１％〜１５％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有し；及び／または（ｉｉｉ）Ｎ−グリカンの０．１％〜６％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する。
【０３１５】
組成物のいずれかにおいて：（ｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含み得；（ｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、フコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含み得；及び／または（ｉｉｉ）ＩＬ−２２ポリペプチドは、アフコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含み得る。
【０３１６】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていなくてもよい。いくつかの実施形態では：（ｉ）Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基は、ＧｌｙまたはＡｌａであり；及び／または（ｉｉ）Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基は、ＧｌｙまたはＡｌａである。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基は、Ｇｌｙである。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基はＡｌａである。
【０３１７】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
【０３１８】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）の配列同一性を有し得る。
【０３１９】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有するか、またはそれからなり得る。
【０３２０】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドはヒトＩＬ−２２ポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
【０３２１】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有するか、またはそれからなり得る。
【０３２２】
組成物のいずれかにおいて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２受容体に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２受容体はヒトＩＬ−２２受容体である。
【０３２３】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の任意の適切な濃度を使用してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約８ｍｇ／ｍＬ〜約１２ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬである。
【０３２４】
本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも約５００Ｌの容量を有する生産培養物から産生し得る。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約５００Ｌ〜約５，０００Ｌの容量を有する生産培養物から生成されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約１，０００Ｌ〜約３，０００Ｌの容量を有する生産培養物から生産されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ  融合タンパク質は、約１，５００Ｌ〜約２，５００  Ｌの容量を有する生産培養から生産されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約２０００Ｌの容量を有する生産培養から生産されている。
【０３２５】
組成物のいずれかは医薬組成物であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、追加の治療薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物はゲル化剤をさらに含む。
【０３２６】
１．例示的なＩＬ−２２ポリペプチド
本明細書中で提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質には、任意の適切なＩＬ−２２ポリペプチドを含ませることができる。例えば、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかにおいて、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号７１（内在性ＩＬ−２２リーダー配列を有するヒトＩＬ−２２）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド、または配列番号７１に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。特定の実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４を有するアミノ酸配列（リーダー配列を含まないヒトＩＬ−２２）または配列番号４に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号４を有するアミノ酸配列を有する。
【０３２７】
天然ＩＬ−２２分子の調製は、それらの核酸及びポリペプチド配列とともに、当業者に公知の方法によって達成することができる。例えば、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ＩＬ−２２核酸を含むベクターで形質転換または形質移入した細胞を培養することにより産生することができる。当然のことながら、当技術分野で周知の代替の方法を使用して、ＩＬ−２２を調製することができると考えられる。例えば、ＩＬ−２２配列またはその部分は、固相技術を使用する直接ペプチド合成によって生成することができる（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９６９）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６３，８５：２１４９−２１５４を参照のこと）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏタンパク質合成は、手動の手法を使用して、または自動化によって実行することができる。自動合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓペプチド合成機（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して、製造元の指示に従って実施することができる。ＩＬ−２２の様々な部分を別々に化学合成し、化学的または酵素的方法を使用して組み合わせて、全長のＩＬ−２２を生成することができる。
【０３２８】
ＩＬ−２２バリアントは、天然配列のＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入することにより、または所望のＩＬ−２２ポリペプチドの合成により調製することができる。当業者であれば、アミノ酸の変化が、グリコシル化部位の数または位置の変化または膜アンカー特性の変化などの、ＩＬ−２２の翻訳後プロセスを変化させることができることを理解しているであろう。
【０３２９】
例えば、米国特許第５，３６４，９３４号に示される保存的及び非保存的変異についての手法及びガイドラインのいずれかを使用して、本明細書に記載の天然配列のＩＬ−２２ポリペプチドのバリエーションを作製することができる。バリエーションは、対応する天然配列または変異体ＩＬ−２２と比較してそのアミノ酸配列に変化をもたらす天然配列またはバリアントＩＬ−２２をコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、または挿入であり得る。場合により、バリエーションは、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドのドメインの１つ以上における少なくとも１つのアミノ酸から任意の他のアミノ酸への置換によるものである。所望の活性に悪影響を与えることなく、挿入、置換、または欠失させることができるアミノ酸残基を決定する際のガイダンスは、ＩＬ−２２の配列を既知の相同タンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域におけるアミノ酸配列の変更の数を最小限に抑えることにより見出すことができる。アミノ酸置換は、１つのアミノ酸を類似の構造的及び／または化学的特性を有する別のアミノ酸に置換すること、例えば、ロイシンからセリンへの置換、すなわち保存的アミノ酸置換の結果であり得る。挿入または欠失は、場合により、１〜５アミノ酸の範囲であり得る。許容されるバリエーションは、配列内のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を体系的に実施し、得られたバリアントの活性を、例えば以下の実施例に記載のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで試験することにより、決定することができる。
【０３３０】
特定の実施形態では、目的の保存的置換を、表Ａにおいて、好ましい置換の見出しの下に示す。そのような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表Ａにおいて例示的な置換と称されるか、またはアミノ酸クラスに関して以下でさらに記載する、より実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングする。
【０３３１】
本発明の範囲内に含まれるＩＬ−２２ポリペプチドの別のタイプの共有結合修飾は、ポリペプチドの天然のグリコシル化パターンを変更することを含む。「天然グリコシル化パターンの変更」は、本明細書において、天然配列のＩＬ−２２に見出される１つ以上の炭水化物部分の欠失、及び／または天然配列のＩＬ−２２に存在しない１つ以上のグリコシル化部位の付加、及び／またはグリコシル化部位（複数可）に結合した糖残基の比率及び／または組成の変更を意味することを目的として意図する。
【０３３２】
ポリペプチドのグリコシル化は、通常、Ｎ−結合またはＯ−結合のいずれかである。ＩＬ−２２ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変更することにより達成することができる。変更は、例えば、天然配列のＩＬ−２２への１つ以上のセリンもしくはスレオニン残基の付加もしくは置換（Ｎ−結合型グリコシル化部位の場合）、またはＯ−結合グリコシル化の認識配列の付加によって実施することができる。場合により、特に、予め選択された塩基においてＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させ、それにより、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成することによる、ＤＮＡレベルでの変化によって、ＩＬ−２２アミノ酸配列を変更することができる。
【０３３３】
ＩＬ−２２ポリペプチドの炭水化物部分の数を増やす別の手段は、ポリペプチドへのグリコシドの化学的または酵素的カップリングによるものである。そのような方法は、当技術分野において、例えば、ＷＯ８７／０５３３０及びＡｐｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【０３３４】
ＩＬ−２２ポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的または酵素的に、あるいはグリコシル化の標的として役立つアミノ酸残基をコードするコドンの変異置換によって達成することができる。化学的脱グリコシル化手法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２（１９８７）及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１（１９８１）に記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（１９８７）によって記載されているように、様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼを使用することによって達成することができる。
【０３３５】
バリエーションは、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング、及びＰＣＲ変異誘発などの当技術分野で公知の方法を使用して作出することができる。部位特異的変異誘発（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：４３３１；Ｚｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：６４８７）、カセット変異誘発（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ  ３４：３１５）、制限酵素選択変異誘発（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ  Ａ  ３１７：４１５）、または他の公知の手法をクローニングしたＤＮＡにおいて実行して、ＩＬ−２２バリアントＤＮＡを生成することができる。
【０３３６】
本明細書ではまた、ＩＬ−２２ポリペプチドの断片も提供する。そのような断片は、例えば、全長の天然タンパク質と比較した場合、Ｎ末端またはＣ末端でトランケートされているか、または内部残基を欠いている可能性がある。特定の断片は、本発明のＩＬ−２２ポリペプチドの所望の生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。したがって、特定の実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドの断片は生物学的に活性である。特定の実施形態では、全長ＩＬ−２２の断片は、Ｎ末端シグナルペプチド配列を欠く。
【０３３７】
天然配列及びバリアントＩＬ−２２ポリペプチドの共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれる。共有結合修飾の１つのタイプには、ＩＬ−２２の標的アミノ酸残基を、ＩＬ−２２ポリペプチドの選択された側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることが含まれる。二官能性薬剤による誘導体化は、例えば、抗ＩＬ−２２抗体の精製方法で使用するために、例えば、ＩＬ−２２を水不溶性支持マトリックスまたは表面に架橋するのに有用である。一般的に使用される架橋剤として、例えば、１，１−ビス（ジアゾ−アセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル、ホモ二官能性イミドエステル、例えば、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジル−プロピオネート）などのジスクシンイミジルエステル、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどの二官能性マレイミド、及びメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの薬剤が挙げられる。
【０３３８】
他の修飾として、グルタミニル及びアスパラギニル残基から、それぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９−８６ｉ）、Ｎ末端アミンのアセチル化、及びＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０３３９】
ＩＬ−２２の共有結合修飾の別のタイプは、ＩＬ−２２ポリペプチドを、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号；または４，１７９，３３７号に記載されている方法で、様々な非タンパク質性ポリマーの１つ、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンに連結することを含む。天然配列及びバリアントＩＬ−２２はまた、ＩＬ−２２の断片を含むＩＬ−２２を別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合させたキメラ分子を形成するように修飾することもできる。
【０３４０】
一実施形態では、そのようなキメラ分子には、ＩＬ−２２と、抗タグ抗体が選択的に結合することができるエピトープを提供するタグポリペプチドとの融合体が含まれる。エピトープタグは、一般的に、ＩＬ−２２ポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端に配置される。ＩＬ−２２ポリペプチドのそのようなエピトープタグ付き形態を存在させることにより、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出することができる。また、エピトープタグの提供により、抗タグ抗体またはエピトープタグに結合する別のタイプのアフィニティマトリックスを使用したアフィニティ精製により、ＩＬ−２２ポリペプチドを容易に精製することができる。様々なタグポリペプチド及びそれらのそれぞれの抗体は、当技術分野で周知である。例として、ポリヒスチジン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ）またはポリヒスチジン−グリシン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ−ｇｌｙ）タグ；ｆｌｕ  ＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５（Ｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８：２１５９−２１６５）；ｃ−ｍｙｃタグならびにそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、及び９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３６１０−３６１６）；単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ３（６）：５４７−５５３）が挙げられる。他のタグポリペプチドとして、Ｆｌａｇペプチド（Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４−１２１０）；ＫＴ３エピトープペプチド（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：１９２−１９４）；チューブリンエピトープペプチド（Ｓｋｉｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１５１６３−１５１６６）；及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ（Ｌｕｔｚ−Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３９３−６３９７）が挙げられる。
【０３４１】
別の実施形態では、キメラ分子には、ＩＬ−２２ポリペプチドまたはその断片と免疫グロブリンまたは免疫グロブリンの特定の領域との融合体が含まれ得る。二価形態のキメラ分子の場合、そのような融合体は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域に対するものであり得る。これらの融合ポリペプチドは、異種タンパク質の結合特異性（「アドヘシン」）と免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を組み合わせた抗体様分子であり、多くの場合、イムノアドヘシンと呼ばれる。構造的に、イムノアドヘシンには、ＩＬ−２２またはそのバリアントのアミノ酸配列と免疫グロブリン定常ドメイン配列の融合体が含まれる。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は、通常、少なくとも受容体またはリガンドの結合部位を含む連続したアミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭなどの免疫グロブリンから取得することができる。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、改変されたエフェクター活性を示す。
【０３４２】
ＩＬ−２２ポリペプチドまたはその断片を、例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域配列に融合させて、ＩＬ−２２−Ｉｇ融合タンパク質（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）を生成することができる。ＩＬ−２２ポリペプチドは、ヒトまたはマウスＩＬ−２２であり得る。免疫グロブリン重鎖定常領域配列は、ヒトまたはマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列であり得る。
【０３４３】
２．例示的なＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質
特定の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はいずれも、ＩＬ−２２受容体に結合し、その活性を誘導するかまたはシグナル伝達を誘導し、及び／またはＩＬ−２２受容体活性のアゴニストである。
【０３４４】
別の態様では、本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを有する。他の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを有し、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、ただし、その配列を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２受容体に結合する能力を保持している。特定の実施形態では、配列番号８、１０、１２、１４、１６、２４、または２６において、合計１〜１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または欠失させる。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失を、ＩＬ−２２の外側の領域（すなわち、Ｆｃにおいて）で生じさせる。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のリンカー、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン内とすることができる。ある特定の実施形態では、ＦｃのＣ末端のＬｙｓ残基を欠失させる。特定の他の実施形態では、ＦｃのＣ末端のＧｌｙ残基及びＬｙｓ残基の両方を欠失させる。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、リンカーは、ＤＫＴＨＴ（配列番号３２）、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３３）、ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３４）、ＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３５）、ＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３６）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３７）、ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３８）、ＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号３９）、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号４０）、ＧＧＧＤＫＴＨＴ（配列番号４１）、ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ（配列番号４２）、ＳＫＹＧＰＰ（配列番号４３）、ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）、ＧＧＧＳＴＨＴ（配列番号６３）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号６４）、ＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号６５）、またはＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号６６）に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。例えば、その全体を参照により本明細書に援用する米国特許第９，８１５，８８０号の表２を参照のこと。
【０３４６】
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バリアントを提供する。保存的置換を、表Ａにおいて「好ましい置換」の見出しの下に示す。より実質的な変化を、表Ａにおいて「例示的置換」の見出しの下で、及びアミノ酸側鎖クラスに関して以下でさらに記載するように提供する。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に、及び所望の活性、例えば、ＩＬ−２２受容体結合の保持／向上、免疫原性の低下、またはＩＬ−２２受容体シグナル伝達の向上についてスクリーニングした生成物に、アミノ酸置換を導入してもよい。
【０３４７】
表Ａ
2021511297.tif 000003
【０３４８】
アミノ酸は、一般的な側鎖の特性に従ってグループ化し得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０３４９】
非保存的置換では、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換する必要がある。
【０３５０】
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されているように、変異誘発の標的となり得るタンパク質の残基または領域を同定するための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基または標的残基の群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えて、タンパク質とその結合パートナーとの相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。アミノ酸位置にさらなる置換を導入して、最初の置換に対する機能的感受性を実証してもよい。あるいは、またはさらに、タンパク質複合体（例えば、サイトカイン受容体複合体）の結晶構造を使用して、タンパク質とその結合パートナーとの間の接触点を同定することができる。そのような接触残基及び隣接残基を、置換の候補として標的化するか、または除外してもよい。バリアントをスクリーニングして、所望の特性を有しているかどうかを判定してもよい。
【０３５１】
アミノ酸配列の挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの範囲のアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合体、及び単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。
【０３５２】
本明細書において、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２４または配列番号２６、好ましくは配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６、より好ましくは配列番号８のアミノ酸配列を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする。特定の他の実施形態では、核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３または配列番号２５のポリヌクレオチド配列を有する。ある特定の実施形態では、核酸は、配列番号７または配列番号１１、好ましくは配列番号７のポリヌクレオチド配列を有する。特定の実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３；配列番号２３または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を有する。特定の実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を有し、その場合、単離された核酸は、ＩＬ−２２Ｒに結合し、及び／またはＩＬ−２２Ｒ活性を誘発することができるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができ、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。特定の実施形態では、単離された核酸は、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号２３または配列番号２５のポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を有し、その場合、単離された核酸は、配列番号８、１０、１２、または１４のアミノ酸配列を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができる。関連する態様では、本発明は、上記の核酸を含むベクター、及びそのベクターを保有する宿主細胞を提供する。特定の実施形態では、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞である。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を含むがこれに限定されない原核細胞である。特定の他の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞を含むがこれに限定されない真核細胞である。特定の実施形態では、宿主細胞は、配列番号８のアミノ酸配列を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを保有する。
【０３５３】
ａ）グリコシル化バリアント
特定の実施形態では、本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、融合タンパク質のＦｃ部分がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更する。タンパク質へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を作出または除去するようにアミノ酸配列を変更することによって簡便に達成することができる。
【０３５４】
融合タンパク質がＦｃ領域を含む場合、それに結合する糖を変更してもよい。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、通常、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ−結合によって一般的に結合している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖には、様々な糖、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態では、特定の向上した特性を有するＦｃバリアントを作製するために、抗体または抗体のＦｃ領域内のオリゴ糖の改変を実施してもよい。
【０３５５】
Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに結合しているフコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析での測定による、Ａｓｎ２９７またはＮ２９７に結合しているすべての糖構造体（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比較した、Ａｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することで決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位にあるアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）が；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小さな配列バリエーションのために、２９７位の上流または下流の約±３アミノ酸、すなわち、２９４位〜３００位に位置し得る。そのようなフコシル化バリアントは、向上したＡＤＣＣ機能を有する場合がある。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号；第ＵＳ２００４／００９３６２１号を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１号、特に実施例１１）、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８などのノックアウト細胞株、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７）が挙げられる。
【０３５６】
さらに、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された二分岐オリゴ糖を有する抗体バリアントを提供する。そのような抗体バリアントは、フコシル化が減少し、及び／またはＡＤＣＣ機能が向上している場合がある。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８；米国特許第６，６０２，６８４号；及びＵＳ２００５／０１２３５４６に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供する。そのような抗体バリアントは、向上したＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７；ＷＯ１９９８／５８９６４；及びＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。
【０３５７】
ｂ）Ｆｃ領域バリアント
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸改変を、本明細書において提供するＦｃ融合タンパク質のＦｃ領域に導入し、それによりＦｃ領域バリアントを生成してもよい。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０３５８】
特定の実施形態では、本発明は、すべてではないがいくつかのエフェクター機能を有するＦｃバリアントを企図し、そのようなＦｃバリアントは、抗体またはＦｃ領域を含む融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期が重要であり、さらに特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害であるような用途に対する、望ましい候補となる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体またはＦｃがＦｃγＲ結合を欠いている（したがってＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力は保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号に記載されている（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣＹＴＯＴＯＸ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて、対象分子のＡＤＣＣ活性をｉｎ  ｖｉｖｏで評価してもよい。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体またはＦｃがＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）��ＦｃＲｎ結合及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期の測定は、当技術分野で公知の方法を使用して行うこともできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照のこと）。
【０３５９】
エフェクター機能が低下した抗体として、Ｆｃ領域残基２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、３２７位及び３２９位の１つ以上が置換された抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃバリアントとして、２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のアミノ酸の２つ以上が置換されたＦｃ変異体が挙げられ、これには２６５位及び２９７位の残基をアラニンに置換したいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０３６０】
ＦｃＲへの結合が向上または減少した特定の抗体またはＦｃバリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）。
【０３６１】
特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、Ｎ−グリコシル化部位を除去し、それでもＦｃＲｎ結合活性を保持するＦｃ領域の２９７位での置換などのＡＤＣＣを低下させる１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃバリアントを含む（ＥＵナンバリングの残基）。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の低下をもたらすＦｃ領域の変更を実施する。
【０３６３】
半減期が増加し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が向上した抗体（母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する）（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。これらの抗体は、その内部に、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を向上させる１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃバリアントには、以下のＦｃ領域残基の１つ以上に置換を有するバリアントが含まれる：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０３６４】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
【０３６５】
ｃ）システイン改変バリアント
特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域の１つ以上の残基をシステイン残基で置換した、システイン改変Ｆｃ融合タンパク質を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基を、Ｆｃのアクセス可能な部位に生じさせる。本明細書中でさらに説明するように、これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基をＦｃのアクセス可能な部位に配置し、これを用いて、Ｆｃを他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー薬物部分に複合体化させて、免疫複合体を作製することができる。例えば、重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）をシステインで置換することができる。例えば、米国特許第７，５２１，５４１号を参照のこと。
【０３６６】
Ｂ．ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の製造方法及び／または精製方法
本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、任意の適切な方法、例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、断片、またはそのバリアントをコードする核酸を含むベクターで形質転換または形質移入した細胞を培養することにより調製することができる。そのようなベクターを保有する宿主細胞も提供する。任意の適切な宿主細胞、例えば、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉ、または酵母を使用することができる。本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかを生成するためのプロセスをさらに提供し、一般的に、所望のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で宿主細胞を培養し、細胞培養物から所望のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を回収し、場合により精製することを含む。本明細書ではまた、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチの選択方法も提供する。
【０３６７】
例えば、本明細書において、以下の工程の１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかの作製方法を提供する：（ａ）本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかをコードする核酸を含む宿主細胞を提供し（例えば、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）；（ｂ）シードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で、シードトレイン培地中で宿主細胞を培養し；（ｃ）シードトレイン培養物を播種培地に播種し、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養し；及び／または（ｄ）播種トレイン培養物を、生産培養物を形成するのに適した条件下で、生産培地中で培養し、生産培養物の宿主細胞がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それによりＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が作製される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、グリコシル化される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約６〜約１６モル（例えば、シアル酸約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、または約１６モル）のシアル酸含有量を有する。
【０３６８】
前述の方法のいずれにおいても、宿主細胞は凍結した宿主細胞であり得、そして工程（ａ）はさらに、凍結した宿主細胞をシードトレイン培地中で解凍することを含む。宿主細胞は、任意の適切な温度、例えば、約０℃、約−１０℃、約−２０℃、約−３０℃、約−４０℃、約−５０℃、約−６０℃、約−７０℃、約−８０℃、約−９０℃、約−１００℃、またはそれ未満で凍結させることができる。凍結された宿主細胞は、任意の適切な時間及び任意の適切な温度（複数可）で解凍することができる。他の例では、ローリングシードトレインをＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の産生に使用することができる。この例では、凍結した宿主細胞を使用するのではなく、シードトレインを継続的に（特定の細胞齢まで）成長させて、播種トレインに播種する。
【０３６９】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、約１Ｌ〜約１００Ｌ、例えば、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約１０Ｌ、約１５Ｌ、約２０Ｌ、約２５Ｌ、約３０Ｌ、約３５Ｌ、約４０Ｌ、約４５Ｌ、約５０Ｌ、約５５Ｌ、約６０Ｌ、約７０Ｌ、約７５Ｌ、約８０Ｌ、約８５Ｌ、約９０Ｌ、約９５Ｌ、または約１００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、約５Ｌ〜約５０Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、約１０Ｌ〜約４０Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、約１５Ｌ〜約２５Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、約２０Ｌの容量を有する。
【０３７０】
播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、任意の適切な容量を有し得る。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約１０Ｌ〜約４，０００Ｌ、例えば、約１０Ｌ、約１５Ｌ、約２０Ｌ、約２５Ｌ、約３０Ｌ、約３５Ｌ、約４０Ｌ、約４５Ｌ、約５０Ｌ、約５５Ｌ、約６０Ｌ、約７０Ｌ、約７５Ｌ、約８０Ｌ、約８５Ｌ、約９０Ｌ、約９５Ｌ、約１００Ｌ、約１０５Ｌ、約１１０Ｌ、約１１５Ｌ、約１２０Ｌ、約１２５Ｌ、約１３０Ｌ、約１３５Ｌ、約１４０Ｌ、約１４５Ｌ、約１５０Ｌ、約１５５Ｌ、約１６０Ｌ、約１６５Ｌ、約１７０Ｌ、約１７５Ｌ、約１８０Ｌ、約１８５Ｌ、約１９０Ｌ、約１９５Ｌ、約２００Ｌ、約３００Ｌ、約４００Ｌ、約５００Ｌ、約６００Ｌ、約７００Ｌ、約８００Ｌ、約９００Ｌ、約１０００Ｌ、約１，５００Ｌ、約２，０００Ｌ、約２，５００Ｌ、約３，０００Ｌ、約３，５００Ｌ、または約４，０００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約５０Ｌ〜約１００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約７５Ｌ〜約９０Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約８０Ｌの容量を有する。他の実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約３００Ｌ〜約５００Ｌ（例えば、約３００Ｌ、約３２０Ｌ、約３４０Ｌ、約３６０Ｌ、約３８０Ｌ、約４００Ｌ、約４２０Ｌ、約４４０Ｌ、約４６０Ｌ、約４８０Ｌ、または約５００Ｌ）の容量を有する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約３５０Ｌ〜約４５０Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培地または播種トレイン培養物は、約４００Ｌの容量を有する。
【０３７１】
生産培地または生産培養物は、任意の適切な容量を有し得る。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物は、約１００Ｌ〜約３０，０００Ｌ、例えば、約１００Ｌ、約２００Ｌ、約３００Ｌ、約４００Ｌ、約５００Ｌ、約６００Ｌ、約７００Ｌ、約８００Ｌ、約９００Ｌ、約１０００Ｌ、約１，５００Ｌ、約２，０００Ｌ、約２，５００Ｌ、約３，０００Ｌ、約３，５００Ｌ、約４，０００Ｌ、約４，５００Ｌ、約５，０００Ｌ、約５，５００Ｌ、約６，０００Ｌ、約６，５００Ｌ、約７，０００Ｌ、約７，５００Ｌ、約８，０００Ｌ、約８，５００Ｌ、約９，０００Ｌ、約９，５００Ｌ、約１０，０００Ｌ、約１２，０００Ｌ、約１５，０００Ｌ、約２０，０００Ｌ、約２５，０００Ｌ、または約３０，０００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物は、約５００Ｌ〜約５，０００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物は、約１，０００Ｌ〜約３，０００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物は、約１，５００Ｌ〜約２，５００Ｌの容量を有する。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物は、約２０００Ｌの容量を有する。
【０３７２】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約１〜約２０回、例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、または約２０回、継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約１〜約１０回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約２〜約６回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約２〜約３回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約５回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約２回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約３回継代する。いくつかの実施形態では、播種トレイン培養物を、工程（ｄ）の前に、約４回継代する。
【０３７３】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、シードトレイン培地、播種トレイン培地、及び／または生産培地は、宿主細胞を選択することができる選択剤を含む。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地は選択剤を含む。任意の適切な選択剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、選択剤は、メチオニンスルホキシミン、メトトレキサート、または抗生物質（例えば、ブラストサイジン、ジェネティシン、ハイグロマイシンＢ、ピューロマイシン、ミコフェノール酸、またはゼオシン）である。特定の実施形態では、選択剤はメチオニンスルホキシミンである。
【０３７４】
前述の方法のいずれにおいても、シードトレイン培地、播種培地、及び／または生産培地には、消泡剤を含ませることができる。任意の適切な消泡剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、消泡剤は、シメチコンエマルジョン、消泡剤２０４、消泡剤Ａ、消泡剤Ｂ、消泡剤Ｃ、消泡剤Ｙ−３０、または消泡剤ＳＥ−１５である。特定の実施形態では、消泡剤はシメチコンエマルジョンである。いくつかの実施形態では、消泡剤の濃度は、約１０％〜約５０％、例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、または約５０％（例えば、ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、消泡剤の濃度は約３０％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、３０％シメチコンを使用して１％または１０％消泡溶液を作成し、必要に応じて培養物（例えば、シードトレイン培養物、播種培養物、及び／または生産培養物）に添加して発泡を最小限に留める。
【０３７５】
前述の方法のいずれかにおいて、シードトレイン培地、播種培地、及び／または生産培地は、緩衝剤、細胞保護剤、多糖、及び／または浸透圧調整剤を含み得る。
【０３７６】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｂ）を、任意の適切な温度、例えば、約２０℃〜約４５℃、例えば、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、または約４５℃の温度で実施することができる。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約３６℃〜約３８℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、約３７℃の温度で実施する。
【０３７７】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｂ）を、任意の適切な培養容器、例えば、スピナー、振盪フラスコ、またはシードトレインバイオリアクター（例えば、ステンレス鋼バイオリアクターまたは使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）またはＡＭＢＲ（登録商標）バイオリアクター（例えば、ＡＭＢＲ（登録商標）１５またはＡＭＢＲ（登録商標）２５０バイオリアクター）））内で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）を、スピードトレインスピナーまたは振盪フラスコ内で実施する。他の実施形態では、工程（ｂ）を、使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）またはＡＭＢＲ（登録商標）バイオリアクター（例えば、ＡＭＢＲ（登録商標）１５バイオリアクターまたはＡＭＢＲ（登録商標）２５０バイオリアクター））内で実施する。他の実施形態では、工程（ｂ）を、スピードトレインバイオリアクター内で実施する。
【０３７８】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｂ）は、１継代あたり約１日〜約２０日の期間、例えば、１継代あたり約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、または約２０日の期間を有し得る。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約１日〜約１２日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約２日〜約７日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約２日〜約６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約２日〜約５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約２日〜約４日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、１継代あたり約２日〜約３日の期間を有する。
【０３７９】
前述の方法のいずれかにおいて、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、任意の適切なｐＨを有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物のｐＨは、約５〜約９、例えば、約５、約５．５、約６、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約８．０、約８．５、または約９である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物のｐＨは、約６．５〜約７．５である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物のｐＨは、約７．０〜約７．５、例えば、約７．０、約７．０５、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．２５、約７．３、約７．３５、約７．４、約７．４５、または約７．５である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物のｐＨは、約７．１５である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培養物のｐＨは約７．１５である。
【０３８０】
前述の方法のいずれかにおいて、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物は、任意の適切な溶存酸素（例えば、溶存酸素の割合、この場合、１００％は培地が飽和していることを示す）、例えば、約１０％〜約６０％を有し得る（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、または約６０％。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物の溶存酸素は、約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物の溶存酸素は、約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物の溶存酸素は、約２５％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培地またはシードトレイン培養物の溶存酸素は約３０％である。いくつかの実施形態では、シードトレイン培養物の溶存酸素は約３０％である。
【０３８１】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｂ）は、任意の適切な期間、例えば、約６時間〜約２０日、例えば、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日、約１．５日、約２日、約２．５日、約３日、約３．５日、約４日、約４．５日、約５日、約５．５日、約６日、約６．５日、約７日、約７．５日、約８日、約８．５日、約９日、約９．５日、約１０日、約１０．５日、約１１日、約１１．５日、約１２日、約１２．５日、約１３日、約１３．５日、約１４日、約１４．５日、約１５日、約１５．５日、約１６日、約１６．５日、約１７日、約１７．５日、約１８日、約１８．５日、約１９日、約１９．５日、または約２０日を有し得る。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約１日〜約１０日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約８日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約７日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約４日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、約２日〜約３日の期間を有する。
【０３８２】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｃ）を、任意の適切な温度、例えば、約２０℃〜約４５℃、例えば、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、または約４５℃の温度で実施することができる。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約３６℃〜約３８℃の温度で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、約３７℃の温度で実施する。
【０３８３】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｃ）を、１つ以上のバイオリアクター、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、またはそれ以上のバイオリアクター（例えば、ステンレス鋼バイオリアクターまたは使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）））内で実施することができる。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、３つのバイオリアクターまたは４つのバイオリアクター内で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）を、３つのバイオリアクター内で実施する。
【０３８４】
前述の方法のいずれかにおいて、播種培地または播種培養物は、任意の適切なｐＨを有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物のｐＨは、約５〜約９、例えば、約５、約５．５、約６、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約８．０、約８．５、または約９である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物のｐＨは、約６．５〜約  ７．５である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物のｐＨは、約７．０〜約７．５、例えば、約７．０、約７．０５、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．２５、約７．３、約７．３５、約７．４、約７．４５、または約７．５である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物のｐＨは、約７．１である。いくつかの実施形態では、播種培養物のｐＨは約７．１である。
【０３８５】
前述の方法のいずれかにおいて、播種培地または播種培養物は、例えば、約１０％〜約６０％の任意の適切な溶存酸素を有し得る（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、または約６０％。いくつかの実施形態では、播種培地または接種培養物の溶存酸素は約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物の溶存酸素は約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物の溶存酸素は約２５％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、播種培地または播種培養物の溶存酸素は約３０％である。いくつかの実施形態では、播種培養物の溶存酸素は約３０％である。
【０３８６】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｃ）は、任意の適切な期間、例えば、約６時間〜約２０日、例えば、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日、約１．５日、約２日、約２．５日、約３日、約３．５日、約４日、約４．５日、約５日、約５．５日、約６日、約６．５日、約７日、約７．５日、約８日、約８．５日、約９日、約９．５日、約１０日、約１０．５日、約１１日、約１１．５日、約１２日、約１２．５日、約１３日、約１３．５日、約１４日、約１４．５日、約１５日、約１５．５日、約１６日、約１６．５日、約１７日、約１７．５日、約１８日、約１８．５日、約１９日、約１９．５日、または約２０日を有し得る。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約１日〜約１０日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約８日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約７日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約４日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約２日〜約３日の期間を有する。
【０３８７】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｄ）は、初期温度からシフト後の温度への温度シフトを含み得る。いくつかの実施形態では、初期温度は、約２０℃〜約４５℃、例えば、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、または約４５℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約２５℃〜約４０℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約３５℃〜約３９℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約３６℃〜約３８℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は約３７℃である。
【０３８８】
前述の方法のいずれかにおいて、シフト後の温度は、初期温度より低くまたは高くすることができる。いくつかの実施形態では、シフト後は、約２０℃〜約４５℃、例えば、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、または約４５℃である。いくつかの実施形態では、シフト後は、約２５℃〜約３５℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約３０℃〜約３５℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は、約３２℃〜約３４℃である。いくつかの実施形態では、初期温度は約３３℃である。
【０３８９】
前述の方法のいずれかにおいて、温度シフトを、約１時間〜約１４０時間、例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２５時間、約３０時間、約３５時間、約４０時間、約４５時間、約５０時間、約５５時間、約５６時間、約５７時間、約５８時間、約５９時間、約６０時間、約６１時間、約６２時間、約６３時間、約６４時間、約６５時間、約６６時間、約６７時間、約６８時間、約６９時間、約７０時間、約７１時間、約７２時間、約７３、約７４時間、約７５時間、約７６時間、約７７時間、約７８時間、約７９時間、約８０時間、約８５時間、約９０時間、約９５時間、約１００時間、約１０５時間、約１１０時間、約１１５時間、約１２０時間、約１２５時間、約１３０時間、約１３５時間、または約１４０時間にわたって生じさせることができる。例えば、いくつかの実施形態では、温度シフトを、約１２時間〜約１２０時間の期間にわたって生じさせる。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約２４時間〜約９６時間の期間にわたって生じさせる。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約４８時間〜約９６時間の期間にわたって生じさせる。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約６０時間〜約８０時間の期間にわたって生じさせる。いくつかの実施形態では、温度シフトを、約７２時間の期間にわたって生じさせる。
【０３９０】
前述の方法のいずれかにおいて、生産培地または生産培養物は、任意の適切なｐＨを有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物のｐＨは、約５〜約９、例えば、約５、約５．５、約６、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約８．０、約８．５、または約９である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物のｐＨは、約６．５〜約７．５である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物のｐＨは、約７．０〜約７．５、例えば、約７．０、約７．０５、約７．１、約７．１５、約７．２、約７．２５、約７．３、約７．３５、約７．４、約７．４５、または約７．５である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物のｐＨは約７．０である。いくつかの実施形態では、生産培養物のｐＨは約７．０である。
【０３９１】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｄ）は、適切な培養容器、例えば、生産バイオリアクター（例えば、ステンレス鋼バイオリアクターまたは使い捨てバイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）））内で実施することができる。
【０３９２】
前述の方法のいずれかにおいて、生産培地または生産培養物は、例えば、約１０％〜約６０％の任意の適切な溶存酸素を有し得る（例えば、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、または約６０％。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物の溶存酸素は、約１５％〜約５０％である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物の溶存酸素は、約２０％〜約４０％である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物の溶存酸素は、約２５％〜約３５％である。いくつかの実施形態では、生産培地または生産培養物の溶存酸素は約３０％である。いくつかの実施形態では、生産培養物の溶存酸素は約３０％である。
【０３９３】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｄ）は、任意の適切な期間、例えば、約６時間〜約３０日、例えば、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約１日、約１．５日、約２日、約２．５日、約３日、約３．５日、約４日、約４．５日、約５日、約５．５日、約６日、約６．５日、約７日、約７．５日、約８日、約８．５日、約９日、約９．５日、約１０日、約１０．５日、約１１日、約１１．５日、約１２日、約１２．５日、約１３日、約１３．５日、約１４日、約１４．５日、約１５日、約１５．５日、約１６日、約１６．５日、約１７日、約１７．５日、約１８日、約１８．５日、約１９日、約１９．５日、約２０日、約２０．５日、約２１日、約２１．５日、約２２日、約２２．５日、約２３日、約２３．５日、約２４日、約２４．５日、約２５日、約２５．５日、約２６日、約２６．５日、約２７日、約２７．５日、約２８日、約２８．５日、約２９日、約２９．５日、または約３０日を有し得る。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約１日〜約１０日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約２日〜約２５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約５日〜約２５日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約７日〜約１４日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約８日〜約１６日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、約１０日〜約１４日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約１１日〜約１３日の期間を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、約１２日の期間を有する。
【０３９４】
別の態様では、本明細書において、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の作製方法を提供し、方法は以下の工程を含む：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を提供し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み；（ｂ）シードトレイン培地中でシードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で宿主細胞を培養し；（ｃ）播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で、シードトレインを播種培地に播種し；（ｄ）生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で播種トレインを培養し、生産培養物の宿主細胞がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、工程（ｄ）の期間は少なくとも１０日であり、それにより、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物が作製され、その場合、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲の平均シアル酸含量を有する。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の期間は、少なくとも１１日、少なくとも１２日、または少なくとも１３日である。いくつかの実施形態では、工程（ｄ）の期間は１２日である。
【０３９５】
前述の方法のいずれかにおいて、工程（ｄ）は、栄養供給によって栄養素を生産培地または生産培養物に加えることをさらに含み得る。
【０３９６】
前述の方法のいずれかにおいて、任意の適切な宿主細胞を使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は原核細胞である。他の実施形態では、宿主細胞は真核細胞である。いくつかの実施形態では、真核細胞は哺乳類細胞（ＣＨＯ細胞、例えば、懸濁液に適応させたＣＨＯ細胞）である。さらなる適切な宿主細胞は、当技術分野で公知であり、例えば、昆虫細胞または植物細胞を以下に記載する。
【０３９７】
前述の方法のいずれかは、以下の工程をさらに含み得る：（ｅ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を生産培養物から回収する。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、生産培養物を冷却することを含む（例えば、約１℃〜約１０℃（例えば、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約８℃、約９℃、または約１０℃）、例えば、２℃〜約８℃に）。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、遠心分離によって生産培地から宿主細胞を除去して細胞培養液を形成することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）は、細胞培養液を濾過することをさらに含む。
【０３９８】
前述の方法のいずれかは、以下の工程をさらに含み得る：（ｆ）細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）は、以下のサブ工程の１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを精製された生成物プールに加える。
【０３９９】
別の態様では、本発明は、以下の工程の１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製方法を提供する：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を提供し、場合により、細胞培養液中のウイルスを不活化し；（ｂ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合により、アフィニティプール内のウイルスを不活性化し；（ｃ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｄ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化される。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり、シアル酸約６〜約１６モル（例えば、シアル酸約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、または約１６モル）のシアル酸含有量を有する。
【０４００】
前述の方法のいずれかは、精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成することを含み得る。前述の方法のいずれかは、精製された生成物プールを限外濾過することを含み得る。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、限外濾過は、精製された生成物プールを再生セルロース限外濾過膜、例えば１０ｋＤａ複合再生セルロース限外濾過膜で濾過することを含む。前述の方法のいずれかは、濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成することを含み得る。いくつかの実施形態では、濃縮生成物プールの緩衝液を、終濃度０．０１Ｍリン酸ナトリウム，ｐＨ７．２を含む透析濾過緩衝液で交換する。前述の方法のいずれかは、製剤緩衝液でＵＦＤＦプールを調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成することを含み得る。
【０４０１】
前述の方法のいずれかは、１つ以上のウイルス不活化工程を含み得る。例えば、前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ウイルス不活化は、細胞培養液、アフィニティプール、陰イオン交換プール、及び／または精製された生成物プールに界面活性剤を加えることを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化は、細胞培養液に界面活性剤を加えることを含む。例えば、いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、細胞培養液に界面活性剤を加えてウイルスを不活化することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化は、アフィニティプールに界面活性剤を加えることを含む。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、アフィニティプールに界面活性剤を加えることによってウイルスを不活化することを含む。
【０４０２】
ウイルスを不活化するために、任意の適切な界面活性剤、例えば、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００またはＴＲＩＴＯＮ（登録商標）ＣＧ１１０を使用することができる。いくつかの実施形態では、細胞培養液中の界面活性剤の終濃度は、約０．００１％〜約５％（例えば、ｖ／ｖ）、例えば、約０．００１％、約０．０１％、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約２％、約３％、約４％、または約５％である。いくつかの実施形態では、細胞培養液中の界面活性剤の終濃度は、約０．０１％〜約２％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の終濃度は、約０．１％〜約１％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の終濃度は、約０．３％〜約０．５％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の終濃度は約０．５％である。ウイルス不活化は、任意の適切な温度、例えば、約４℃〜約４０℃、例えば、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、または約４０℃で実施することができる。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化を、約２０１２°〜約２５℃で実施する。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化は、約０．２５時間超、例えば、約０．２５時間超、約０．５時間超、約１時間超、約１．５時間超、約２時間超、約２．５時間超、約３時間超、３．５時間超、約４時間超、約４．５時間超、約５時間超、約５．５時間超、約６時間超、またはそれ以上の持続時間を有する。いくつかの実施形態では、ウイルス不活化は、約０．５時間超、例えば、約５時間〜４８時間、約５時間〜約２４時間、または任意の他の適切な期間を有する。
【０４０３】
別の例では、本発明は、生産培養物を形成するのに適した条件下で、複数の宿主細胞を含有する播種トレイン培養物を生産培地中で培養することを含む、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物の作製方法を提供し、その場合、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、培養期間は少なくとも１０日であり、それによりＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物が作製され、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化され、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲の平均シアル酸含量を有する。いくつかの実施形態では、培養期間は、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、または少なくとも１３日間である。いくつかの実施形態では、培養期間は１２日間である。
【０４０４】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法は、播種トレイン培養物を生産培地中で培養する前に、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を、シードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で、シードトレイン培地中で培養することによってシードトレイン培養物を生成することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法はさらに、播種トレイン培養物を生産培地中で培養する前に、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で、シードトレイン培養物を播種培地に播種することを含む。
【０４０５】
任意の適切な宿主細胞を使用し得る。いずれの方法においても、宿主細胞は、真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞であってよい。いくつかの実施形態では、真核生物宿主細胞は哺乳類宿主細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、細胞培養液の採取は：（ｉ）生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により生産培地から宿主細胞を除去して、細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）細胞培養液を濾過することを含む。
【０４０６】
方法のいずれかは、細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製は、以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄してフロースルーを回収し、これを精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製は、以下のサブ工程の１つ以上をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して濃縮生成物プールを形成し；（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過し；（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、細胞培養液に界面活性剤を加えることによってウイルスを不活化することをさらに含む。別の例では、本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物のシアル酸含有量の調節方法を提供し、その場合、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーによって抗体Ｆｃ領域に連結されたグリコシル化ＩＬ−２２ポリペプチドを含み、方法は：複数の宿主細胞を含む播種トレイン培養物を、生産培養物を形成するのに適した条件下で少なくとも１０日間、生産培地中で培養することを含み、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含み、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６〜１２モルの範囲のシアル酸含有量を有し；方法はまた、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮し、それによって組成物のシアル酸含有量を調節することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、組成物の平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することを含む。
【０４０７】
本明細書に記載の方法のいずれかは、組成物のシアル酸含有量を濃縮することを含み得る。濃縮は、任意の適切なアプローチを使用して、例えば、本明細書に記載するようにＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することにより、実施してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、平均シアル酸含有量の濃縮は、生産培養物からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を採取することを含む。いくつかの実施形態では、細胞培養液の採取は：（ｉ）生産培養物を冷却し；（ｉｉ）遠心分離により生産培地から宿主細胞を除去して、細胞培養液を形成し；及び／または（ｉｉｉ）細胞培養液を濾過することを含む。組成物の平均シアル酸含有量の濃縮は、細胞培養液中のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製することを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製は、以下のサブ工程を含む：（ｉ）細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合によりアフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、アフィニティクロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；（ｉｉ）アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び（ｉｉｉ）陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収してＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを精製された生成物プールに加える。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製は、以下のサブ工程の１つ以上をさらに含む：（ｉｖ）精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成し；（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過し；（ｖｉ）濃縮生成物プールの緩衝液を交換して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成し；及び／または（ｖｉｉ）ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。いくつかの実施形態では、サブ工程（ｉ）は、細胞培養液をアフィニティカラムに接触させる前に、細胞培養液に界面活性剤を加えることによってウイルスを不活化することをさらに含む。いくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む。いくつかの実施形態では、プロテインＡ樹脂は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む。いくつか��実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約１〜約８モル（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、または約８モル）の範囲の初期平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約６、約７、または約８モルの初期平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６モルの初期平均シアル酸含有量を有する。他の実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸７モルの初期平均シアル酸含有量を有する。さらに他の実施形態では、組成物は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの初期平均シアル酸含有量を有する。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。
【０４０９】
例えば、いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸１〜８モル（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸１、２、３、４、５、６、７、または８モル）の範囲の初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸４モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸５モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸７モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。
【０４１０】
他の例では、いくつかの実施形態において、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約１〜約８モルの初期平均シアル酸含有量（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７モル、または約８モル）から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約４モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約５モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約６モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約７モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。
【０４１１】
他の例では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約１〜約８モルの初期平均シアル酸含有量（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７モル、または約８モル）から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約４モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約５モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約６モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約７モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。
【０４１２】
さらに他の実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸１〜８モルの初期平均シアル酸含有量（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸１、２、３、４、５、６、７、または８モル）から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸３モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸４モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸５モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸６モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸７モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、平均シアル酸含有量を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの初期平均シアル酸含有量から、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの範囲まで濃縮することをさらに含む。
【０４１３】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む。前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィー支持体は、プロテインＡ樹脂を含む。いくつかの実施形態では、プロテインＡ樹脂は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である。いくつかの実施形態では、洗浄緩衝液は、終濃度０．４Ｍリン酸カリウム，ｐＨ７．０を含む。いくつかの実施形態では、第１の溶出緩衝液は、終濃度で０．３Ｍ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、０．０１３Ｍリン酸ナトリウム，ｐＨ３．８を含む。
【０４１４】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む。いくつかの実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー支持体は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む。いくつかの実施形態では、第１の平衡緩衝液は、終濃度０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８を含む。
【０４１５】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の溶出緩衝液は、勾配溶出緩衝液である。いくつかの実施形態では、勾配溶出緩衝液は、０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８〜０．０４Ｍ酢酸ナトリウム、０．３Ｍ硫酸ナトリウム  ｐＨ５．８を含む。
【０４１６】
前述の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の平衡化緩衝液は、終濃度で０．０２５Ｍ  ＭＯＰＳ、０．３Ｍ硫酸ナトリウム，ｐＨ７．０を含む。
【０４１７】
本発明はまた、出荷用のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチの選択方法を提供し、方法は、以下の工程の１つ、２つ、または３つすべてを含む：（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むバッチを提供し；（ｂ）バッチ内のシアル酸のレベルを評価し；及び（ｃ）バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜１２モルの範囲の平均シアル酸含有量を有する場合、出荷用のバッチを選択する。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８〜９モルの平均シアル酸含有量を有する場合、出荷用のバッチを選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸８モルの平均シアル酸含有量を有する場合、出荷用のバッチを選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸９モルの平均シアル酸含有量を有する場合、出荷用のバッチを選択することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を含む）、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、または比色分析を使用してバッチ中のシアル酸のレベルを評価することを含む。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、ＨＰＬＣ（例えば、ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用することを含む。
【０４１８】
本明細書に記載の方法のいずれかを、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のシアル酸含有量の調節方法において使用することができる。本明細書に記載の方法のいずれかを、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のシアル酸含有量を調整することにより、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物のｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスを減少させる／半減期を増加させる方法において使用することができる。
【０４１９】
宿主細胞を、ＩＬ−２２ポリペプチド産生のための本明細書に記載の発現ベクターまたはクローニングベクターで形質移入または形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地中で培養する。当業者であれば、培地、温度、ｐＨなどの培養条件を、過度の実験をすることなく選択することができる。一般的に、細胞培養の生産性を最大化するための原理、プロトコール、及び実用的な手法は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ，ｅｄ．（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）及び上記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．に見出すことができる。
【０４２０】
形質移入の方法は、当業者には公知であり、例えば、ＣａＰＯ４及び電気穿孔法、またはリポフェクション（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）を使用する）による。使用する宿主細胞に応じて、そのような細胞に適した標準的な手法を使用して形質転換を実施する。実質的な細胞障壁を保有する原核生物または他の細胞に対しては、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．に記載されているように、塩化カルシウムを使用するカルシウム処理法、または電気穿孔法を一般的に使用する。特定の植物細胞の形質転換には、Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２３：３１５（１９８３）及び１９８９年６月２９日に公開されたＷＯ８９／０５８５９に記載されているように、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓによる感染を用いる。そのような細胞壁を有していない哺乳類細胞には、Ｇｒａｈａｍ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４５７（１９７８）のリン酸カルシウム沈殿法を用いることができる。哺乳類細胞宿主系形質転換の一般的な態様は、米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。酵母への形質転換は、通常、Ｖａｎ  Ｓｏｌｉｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔ，１３０：９４６（１９７７）及びＨｓｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９（１９７９）の方法に従って実施することができる。しかしながら、核マイクロインジェクション、電気穿孔法、インタクトな細胞との細菌プロトプラスト融合、またはポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチンなどによる、細胞にＤＮＡを導入する他の方法も使用することができる。哺乳類細胞を形質転換するための様々な手法については、Ｋｅｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７−５３７（１９９０）及びＭａｎｓｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８−３５２（１９８８）を参照のこと。
【０４２１】
本発明の組換え発現ポリペプチドは、培養培地または宿主細胞溶解物から回収することができる。以下の手順は、適切な精製手順の例である：イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂によるクロマトグラフィー；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用したゲル濾過；ＩｇＧなどの混入物質を除去するプロテインＡセファロースカラム；及び本発明のポリペプチドのエピトープタグ付き形態を結合するための金属キレートカラム。タンパク質精製の様々な方法を使用することができ、そのような方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択する精製工程（複数可）は、例えば、使用する生産プロセスの性質及び生産する特定のポリペプチドに依存する。
【０４２２】
当技術分野で周知の代替方法を使用して、本発明のポリペプチドを調製することができる。例えば、ポリペプチドまたはその部分をコードする配列は、固相技術を使用する直接ペプチド合成によって生成することができる（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．１９６３，Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４を参照のこと。ｉｎ  ｖｉｔｒｏタンパク質合成は、手動技術または自動化を使用して実施することができる。自動合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓペプチド合成装置（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用して、製造元の指示書を使用して、達成することができる。本発明のポリペプチドの様々な部分またはその一部を別々に化学合成し、化学的または酵素的方法を使用して組み合わせて、全長ポリペプチドまたはその部分を生成することができる。
【０４２３】
他の実施形態では、本発明は、異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合させた本明細書に記載のポリペプチドのいずれかを含むキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例として、エピトープタグ配列または免疫グロブリンのＦｃ領域に融合させた本明細書に記載のポリペプチドのいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２４】
本明細書中のベクターにおいてＤＮＡをクローニングするかまたは発現させるための適切な宿主細胞として、原核生物、酵母、または高等真核生物細胞が挙げられる。適切な原核生物として、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの腸内細菌科が挙げられるが、これらに限定されない。Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）；Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）；Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）及びＫ５  ７７２（ＡＴＣＣ５３，６３５）などの様々なＥ．ｃｏｌｉ株が公的に入手可能である。
【０４２５】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、ＩＬ−２２をコードするベクターの適切なクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、一般的に使用される下等真核生物の宿主微生物である。
【０４２６】
グリコシル化−ＩＬ−２２の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例として、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓ２及びＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  Ｓｆ９などの昆虫細胞、ならびに植物細胞が挙げられる。有用な哺乳類宿主細胞株の例として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びＣＯＳ細胞が挙げられる。より具体的な例として、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）によって形質転換したサル腎臓ＣＶ１細胞；ヒト胎児腎臓細胞（懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１（１９８０））；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ８０６５）；及びマウス乳腺腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）が挙げられる。適切な宿主細胞の選択は、当業者の範囲内であるとみなされる。
【０４２７】
ＩＬ−２２をコードする核酸（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）は、クローニング（ＤＮＡの増幅）用または発現用の複製可能なベクターに挿入することができる。様々なベクターが公的に利用可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの形態であり得る。適切な核酸配列は、様々な手順によってベクターに挿入することができる。一般的に、当技術分野で公知の技術を使用してＤＮＡを適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入する。ベクターの構成要素には、一般的に、１つ以上のシグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。これらの構成要素の１つ以上を含む適切なベクターの構築には、当業者に公知の標準的なライゲーション手法を使用する。
【０４２８】
ＩＬ−２２ポリペプチドは、直接的にだけでなく、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチド、及びＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質として組換え産生することもでき、異種ポリペプチドは、シグナル配列であるか、または成熟タンパク質もしくは成熟ポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する他のポリペプチドであり得る。一般的に、シグナル配列は、ベクターの構成要素であるか、またはベクターに挿入するＩＬ−２２  ＤＮＡの一部であり得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、１ｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であり得る。酵母での分泌のために、シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓを含む因子リーダー、後者は米国特許第５，０１０，１８２号に記載されている）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼリーダー（１９９０年４月４日公開のＥＰ３６２，１７９）、または１９９０年１１月１５日公開のＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナルであり得る。哺乳類細胞の発現では、哺乳類シグナル配列、例えば、同種または近縁種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列、及びウイルス分泌リーダーを使用して、タンパク質の分泌を指示することができる。
【０４２９】
発現ベクター及びクローニングベクターはいずれも、１つ以上の選択された宿主細胞内でベクターが複製できるようにする核酸配列を有する。そのような配列は、様々な細菌、酵母、及びウイルスで周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製起点はほとんどのグラム陰性菌に適しており、２：プラスミド起点は酵母に適しており、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶまたはＢＰＶ）は、哺乳類細胞内でのベクターのクローニングに有用である。
【０４３０】
発現ベクター及びクローニングベクターは通常、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を有する。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、またはテトラサイクリンに対する耐性を付与するか、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するか、または（ｃ）例えば、桿菌のＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子などの、天然培地では得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【０４３１】
哺乳類細胞に適した選択可能なマーカーの例は、ＤＨＦＲまたはチミジンキナーゼなどのＩＬ−２２核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするマーカーである。野生型ＤＨＦＲを使用する場合の適切な宿主細胞は、Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０）に記載されているように調製及び増殖させたＤＨＦＲ活性欠損型ＣＨＯ細胞株である。酵母での使用に適した選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［例えば、Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０）を参照のこと］。ｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファンで増殖する能力を欠く酵母の変異株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６またはＰＥＰ４−１［Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７）］の選択マーカーを提供する。
【０４３２】
発現ベクター及びクローニングベクターは通常、ＩＬ−２２核酸配列に作動可能に連結し、ｍＲＮＡ合成を指示するプロモーターを含む。様々な潜在的宿主細胞によって認識されるプロモーターは周知である。原核生物宿主での使用に適したプロモーターとして、クアドラチュア（ｑｕａｄｒａｔｕｒｅ）ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系（例えば、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）；Ｇｏｅｄｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７９）を参照のこと）、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系（例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，８：４０５７（１９８０）；ＥＰ３６，７７６を参照のこと）、及びｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーター（例えば、ｄｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３））が挙げられる。細菌系で使用するプロモーターには、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡに作動可能に連結されたシャインダルガーノ（Ｓ．Ｄ．）配列も含まれる。
【０４３３】
酵母宿主での使用に適したプロモーター配列の例として、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ（例えば、Ｈｉｔｚｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２５５：２０７３（１９８０）を参照のこと）または他の解糖系酵素（例えば、Ｈｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇ．，７：１４９（１９６８）；Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００（１９７８）を参照のこと）、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが挙げられる。
【０４３４】
増殖条件によって調節される転写の追加の利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコール脱水素酵素２、イソチトクロームＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、ならびにマルトース及びガラクトースの利用を担う酵素のプロモーター領域である。酵母発現での使用に適したベクター及びプロモーターは、ＥＰ７３，６５７にさらに記載されている。
【０４３５】
哺乳類宿主細胞のベクターからのＩＬ−２２転写は、宿主細胞系に適合する限りにおいて、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（１９８９年７月５日公開のＵＫ２，２１１，５０４）、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、異種哺乳類プロモーター、例えばアクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、及び熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって調節される。
【０４３６】
高等真核生物によるＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクターにエンハンサー配列を挿入することにより増加させることができる。エンハンサーは、通常約１０〜３００ｂｐのＤＮＡのシス作用エレメントであり、プロモーターに作用してその転写を増加させる。現在、哺乳類遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン、及びインスリン）に由来する多くのエンハンサー配列が知られている。しかしながら、一般的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用されるであろう。例として、複製起点の後方側（１００〜２７０塩基対）のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後方側のポリオーマエンハンサー、アデノウイルスエンハンサーなどが挙げられる。エンハンサーは、ＩＬ−２２コード配列の５’位または３’位でベクターにスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターの５’側の部位に位置している。
【０４３７】
真核生物の宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物由来の有核細胞）で使用する発現ベクターには、転写の停止及びｍＲＮＡの安定化に必要とされる配列も含まれる。そのような配列は、一般的に、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域から、時として３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、ＩＬ−２２をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
【０４３８】
組換え脊椎動物細胞培養でのＩＬ−２２合成に適合させるのに好適なさらなる他の方法、ベクター、及び宿主細胞は、Ｇｅｔｈｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０−６２５（１９８１）；Ｍａｎｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０４６（１９７９）；ＥＰ１１７，０６０；及びＥＰ１１７，０５８に記載されている。
【０４３９】
遺伝子増幅及び／または発現は、本明細書において提供する配列に基づいて、適切に標識されたプローブを使用して、例えば、従来のサザンブロッティング、ノーザンブロッティングによるｍＲＮＡ転写の定量（例えば、Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１−５２０５（１９８０）を参照のこと）、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより、試料において直接測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖、及びＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二本鎖またはＤＮＡ−タンパク質二本鎖を含む特定の二本鎖を認識することができる抗体を使用することができる。その抗体は、次いで標識することができ、二重鎖が表面に結合する箇所においてアッセイを行うことができ、それにより、表面上で二重鎖が形成される際、二重鎖に結合している抗体の存在を検出することができる。
【０４４０】
あるいは、遺伝子発現を、免疫学的方法、例えば、細胞または組織切片の免疫組織化学的染色、及び細胞培養物または体液のアッセイによって測定して、遺伝子産物の発現を直接定量することができる。免疫組織化学染色及び／または試料液のアッセイに有用な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであり得、任意の哺乳類において調製することができる。好都合なことに、抗体は、天然配列のＩＬ−２２ポリペプチドに対して、または本明細書において提供するＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対して、またはＩＬ−２２  ＤＮＡに融合し、特異的抗体エピトープをコードする外来配列に対して、調製することができる。
【０４４１】
ＩＬ−２２の形態は、培地または宿主細胞溶解物から回収することができる。膜に結合している場合は、適切な界面活性剤溶液（例えば、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００）を使用するか、または酵素的切断によって膜から遊離させることができる。ＩＬ−２２の発現に使用する細胞は、凍結融解サイクリング、超音波処理、機械的破壊、細胞溶解剤などの様々な物理的または化学的手段によって破壊することができる。
【０４４２】
組換え細胞タンパク質またはポリペプチドからＩＬ−２２を精製することが望ましい場合がある。以下の手順は、適切な精製手順の例である：イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂によるクロマトグラフィー；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用したゲル濾過；ＩｇＧなどの混入物質を除去するプロテインＡセファロースカラム；及びＩＬ−２２ポリペプチドのエピトープタグ付き形態を結合するための金属キレートカラム。タンパク質精製の様々な方法を使用してもよく、そのような方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択する精製工程（複数可）は、例えば、使用する生産プロセスの性質及び生産する特定のＩＬ−２２に依存する。上記の一般的な方法は、ＩＬ−２  Ｆｃ融合タンパク質の調製にも同様に適用することができる。
【０４４３】
同様に、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）及びＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．  １９９０．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されているように、組換え法及び組成物を使用して生産してもよい。一実施形態では、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸を提供する。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。さらなる実施形態では、そのような核酸を保有する宿主細胞を提供する。そのような一実施形態では、宿主細胞は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターを保有する（例えば、そのベクターで形質転換されている）。特定の実施形態では、ベクターは発現ベクターである。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の作製方法を提供し、方法は、上記で提供するような、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を保有する宿主細胞を、Ｆｃ融合タンパク質の発現に好適な条件下で培養し、場合により宿主細胞（または宿主細胞培養培地）からＦｃ融合タンパク質を回収することを含む。
【０４４４】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の組換え産生のために、例えば、本明細書に記載するように、Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を単離し、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離し、配列決定し得る。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を調製する場合、ＩＬ−２２ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸を、免疫グロブリン定常ドメイン配列をコードする核酸に、定常ドメイン上の特定の位置で連結して、ＩＬ−２２のＣ末端でのＦｃ融合を生じさせることができ；しかしながら、Ｎ末端融合も可能である。
【０４４５】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の構築例として、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡを、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡの３’末端もしくはその近傍、及び成熟ポリペプチドのＮ末端をコードするＤＮＡ位置もしくはその近傍（異なるリーダーの使用が考えられる場合）、またはＩＬ−２２全長タンパク質のＮ末端コード領域もしくはその近傍（天然のシグナルを使用する場合）において、制限酵素によって切断する。次いで、このＤＮＡ断片は、免疫グロブリンの軽鎖または重鎖定常領域をコードするＤＮＡに容易に挿入され、必要に応じて、欠失変異誘発によって適合させる。好ましくは、これは、融合タンパク質がヒトのｉｎ  ｖｉｖｏ治療用に意図されている場合、ヒト免疫グロブリンである。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２−免疫グロブリンキメラを、単量体、ヘテロもしくはホモ多量体として、または二量体もしくは四量体として構築する。一般的に、これらの構築された免疫グロブリンは、以下の図に示すように既知のユニット構造を有している。基本的な四鎖構造ユニットは、ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＥが存在する形態である。高分子量免疫グロブリンでは四鎖ユニットが反復され；ＩｇＭは、一般的に、基本的な四鎖ユニットがジスルフィド結合によって結合した五量体として存在する。ＩｇＡグロブリン、及び時としてＩｇＧグロブリンも、血清中に多量体の形態で存在する場合がある。多量体の場合、四鎖ユニットはそれぞれ同じであっても異なっていてもよい。参照によりその全体を本明細書に援用するＣａｐｏｎらの米国特許第５，１１６，９６４号も参照のこと。
【０４４７】
免疫グロブリン軽鎖または重鎖定常領域をコードするＤＮＡは、既知であるか、ｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能であるか、または合成される。例えば、Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９：２７１１−２７１９（１９８０）；Ｇｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９：２７０２−２７１０（１９８０）；Ｄｏｌｂｙ  ｅｔ  ａｌ；Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ，７７：６０２７−６０３１（１９８０）；Ｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ  Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ  ＵＳＡ  ７９：７８６２−７８６５（１９８２）；Ｆａｌｋｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ；Ｎａｔｕｒｅ  ２９８：２８６−２８８（１９８２）；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ；Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２３９−２５６（１９８４）を参照のこと。本明細書において、内在性リーダー配列を有するヒトＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列を提供する（配列番号７０）。既知であるか、またはｃＤＮＡライブラリーから容易に入手できる他の所望の結合パートナーをコードするＤＮＡ配列は、本発明の実施に適している。
【０４４８】
本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを、発現のために宿主細胞に形質移入する。多量体を所望する場合、次いで、多量体を構成する各鎖をコードするＤＮＡで宿主細胞を形質転換し、所望の様式で多量体の鎖を構築することができるように宿主細胞を最適に選択する。宿主細胞が形質移入前に免疫グロブリンを産生している場合、ヘテロ抗体を産生するには、軽鎖または重鎖に融合させた結合パートナーを形質移入するだけで済む。結合パートナードメインを有する１つ以上のアーム及び随伴可変領域を有する１つ以上のアームを有する前述の免疫グロブリンは、結合パートナーリガンド及び抗原または治療部分に対する二重の特異性をもたらす。上記の組換え法とともに、多重に共形質転換した細胞を使用して、上記で考察したヘテロ四量体免疫グロブリンなどの複数の特異性を有するポリペプチドを生産する。
【０４４９】
本発明のイムノアドヘシンでは免疫グロブリン軽鎖の存在は必要とされないが、免疫グロブリン軽鎖は、ＩＬ−２２免疫グロブリン重鎖融合ポリペプチドに共有結合して存在し得る。この場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、通常、ＩＬ−２２免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡと共発現させる。分泌に際して、ハイブリッド重鎖及び軽鎖は共有結合して、２つのジスルフィド結合免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアを含む免疫グロブリン様構造を提供する。そのような構造の調製に適した方法は、例えば、１９８９年３月２８日発行の米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。標的タンパク質をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞として、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能を必要としないか、またはそれらが有害である場合、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を細菌で生産してもよい。細菌でのポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、及び第５，８４０，５２３号を参照のこと。Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載したＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照のこと。発現後、Ｆｃ融合タンパク質を細菌細胞ペーストから可溶性画分に単離し、さらに精製することができる。実施例の節で例示するように、さらなる精製方法として、限定されないが、プロテインＡカラムを使用する精製が挙げられる。
【０４５０】
原核生物に加えて、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、グリコシル化経路が「ヒト化」されている真菌及び酵母株を含む、糸状菌または酵母などの真核微生物は、適切なクローニング宿主または発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照のこと。
【０４５１】
グリコシル化タンパク質の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞の形質移入用に、昆虫細胞と組み合わせて使用し得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。
【０４５２】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号；第６，０４０，４９８号；第６，４２０，５４８号；第７，１２５，９７８号；及び第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）を参照のこと。
【０４５３】
脊椎動物細胞を宿主として使用してもよい。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓系統（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されているＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。その他の有用な哺乳類宿主細胞株として、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））；及びＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８  （Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照のこと。
【０４５４】
Ｃ．アッセイ
本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、当技術分野で公知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／または生物活性について、同定、スクリーニング、または特徴決定し得る。
【０４５５】
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、その受容体結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング分析、スキャッチャードによる細胞表面結合、表面プラズモン共鳴などの公知の方法により試験する。別の態様では、競合アッセイを使用して、ＩＬ−２２受容体への結合についてＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と競合する抗体を同定してもよい。さらなる態様では、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、生物学的試料中に存在するＩＬ−２２受容体またはＩＬ２２結合タンパク質（可溶性受容体）の存在または量を検出するために使用することができる。さらなる態様では、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、生物学的試料中に存在するＩＬ−２２受容体の存在または量を検出するために使用することができる。特定の実施形態では、生体試料を最初に非特異的アイソタイプ対照抗体でブロックして、試料中の任意のＦｃ受容体を飽和させる。
【０４５６】
２．活性アッセイ
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生物活性を同定するためのアッセイを提供する。ＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性には、例えば、ＩＬ−２２受容体への結合、ＩＬ−２２シグナル伝達の刺激、及びＳＴＡＴ３、ＲｅｇＩＩＩ及び／またはＰａｎｃｒｅＰＡＰ発現の誘導が含まれ得る。いくつかの実施形態では、アッセイは、実施例２に記載するような効力アッセイ（例えば、受容体結合アッセイ、細胞ベースの効力アッセイ、またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ）である。いくつかの実施形態では、効力を、参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質、例えば、表１２及び／または表１３に示すＮ−グリカン分布を有するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と比較する。さらに、心臓血管疾患または病態の場合では、生物学的活性は、特にアテローム性動脈硬化巣形成症の形成を阻害するために、アテローム性動脈硬化巣の形成に影響を与えることを含み得る。プラーク形成の阻害は、当業者に公知の任意の適切な画像化法によって評価することができる。
【０４５７】
Ｄ．複合体
本発明はまた、検出、製剤化、半減期延長、免疫原性または組織浸透の緩和のための１つ以上の薬剤に複合体化した、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む複合体を提供する。例示的な複合体化として、ペグ化及び放射性同位元素への結合が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５８】
別の実施形態では、複合体は、放射性複合体を形成するために放射性原子と複合体化した、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む。放射性複合体の生成には、様々な放射性同位元素が利用可能である。例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性複合体を検出に使用する場合、それには、シンチグラフィー試験用の放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても知られる）のスピン標識、例えば、ここでもヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄が含まれ得る。
【０４５９】
Ｅ．医薬製剤
本明細書中の組成物（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物）を、良好な医療行為と整合した様式で製剤化し、調薬し、投与する。これに関して考慮すべき要因として、治療する特定の障害、治療する特定の哺乳類、個々の対象の臨床状態、障害の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に公知の他の要因が挙げられる。一実施形態では、組成物は、疾患または状態疾患に罹患しやすいかまたは診断されたヒト対象の生存期間を延長するために使用することができる。生存期間は、薬剤の最初の投与から死亡までの時間として定義される。
【０４６０】
所望の純度を有する活性成分を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することにより、当技術分野で公知の標準的な方法を使用して、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で医薬製剤を調製する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ）。薬学的に許容される担体は、一般的に、使用する用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、以下が含まれるが、これらに限定されない：リン酸、クエン酸、その他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、デキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体として、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの腸内薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含む特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと併用する。
【０４６１】
場合により、製剤は、薬学的に許容される塩、好ましくは塩化ナトリウムを、好ましくはほぼ生理学的濃度で含有する。
【０４６２】
場合により、本発明の製剤に、薬学的に許容される保存剤を含有させることができる。いくつかの実施形態では、保存剤の濃度は、一般的にはｖ／ｖで、０．１〜２．０％の範囲である。適切な保存剤として、製薬業界で公知の保存剤が挙げられる。ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルパラベン、塩化ベンザルコニウム及びプロピルパラベンは、好ましい保存剤である。場合により、本発明の製剤に、薬学的に許容される界面活性剤を０．００５〜０．０２％の濃度で含ませることができる。
【０４６３】
本明細書の製剤にはまた、治療する特定の適応症に必要な場合、複数の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有させることもできる。そのような分子を、意図する目的に対して有効な量で組み合わせて適切に存在させる。
【０４６４】
例示的な凍結乾燥製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性製剤として、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されている製剤が挙げられ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０４６５】
本明細書の製剤にはまた、治療する特定の適応症に必要な場合、複数の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性成分を含有させてもよい。例えば、ステロイド、ＴＮＦアンタゴニストまたは他の抗炎症治療薬をさらに提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分を、意図する目的に対して有効な量で組み合わせて適切に存在させる。
【０４６６】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術もしくは界面重合によって調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）内に、またはマクロエマルジョン内に、それぞれ封入してもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
【０４６７】
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の適切な例として、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルなどの成形品の形態である。徐放性マトリックスの例として、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間以上分子を放出することができるが、特定のヒドロゲルは、タンパク質を放出する期間がより短い。カプセル化抗体が体内に長期間留まると、３７℃の湿気にさらされた結果、変性または凝集して、生物活性が失われ、免疫原性が変化し得る。関与するメカニズムに応じて、安定化のための合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集メカニズムがチオジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合の形成であることが判明した場合、安定化を、スルフヒドリル残基の改変、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の調節、適切な添加剤の使用、及び特定のポリマーマトリックス組成の開発によって達成してもよい。
【０４６８】
局所投与用の医薬組成物は、例えば、局所ゲルの形態で製剤化することができる。例えば、ＵＳ４，７１７，７１７；ＵＳ５，１３０，２９８；ＵＳ５，４２７，７７８；ＵＳ５，４５７，０９３；ＵＳ５，７０５，４８５；ＵＳ６，３３１，３０９；及びＷＯ２００６／１３８，４６８を参照のこと。特定の実施形態では、組成物を、セルロース誘導体の存在下で製剤化することができる。特定の他の実施形態では、局所製剤を、投与前に十分な緩衝液または希釈剤で凍結乾燥製剤から再構成することができる。特定の実施形態では、ＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、上皮の創傷治癒に欠陥を有する対象への局所投与のために製剤化する。ある特定の実施形態では、上皮の創傷治癒は皮膚で生じる。特定の他の特定の実施形態では、対象は、創傷治癒に欠陥を有するヒトである。特定の他の実施形態では、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む局所製剤を使用して、内部または外部の外科的切開後の創傷治癒を向上させることができる。
【０４６９】
本発明の一実施形態では、創傷治癒を加速、促進、または向上させる際に使用するためのＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、予め充填されたシリンジまたは容器中の局所ゲルの製剤中に存在させるか、あるいは、本発明の化合物を、患者への局所投与の直前にゲルマトリックスと混合することができる。特定の実施形態では、追加の治療薬もまた、同時または逐次的のいずれかにより局所的に投与する。他の投与経路もまた、場合により使用することができ、例えば、非経口、皮下、腹腔内、肺内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、くも膜下腔内、経口、及び鼻腔内投与を含むがこれらに限定されない任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。
【０４７０】
創傷治癒の場合、通常、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を部位特異的送達用に製剤化する。局所的に塗布する場合、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、担体及び／またはアジュバントなどの他の成分と適切に組み合わせる。そのような他の成分の性質に制限はないが、ただし、それらはそれらの意図する投与に対して薬学的に許容可能であり、効果的でなければならず、組成物の活性成分の活性を低下し得ない。適切なビヒクルの例として、精製コラーゲンを含むかまたは含まない、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー、または懸濁液が挙げられる。組成物はまた、場合により液体または半液体の形態で、滅菌包帯、経皮パッチ、絆創膏、及び包帯に含浸させてもよい。酸化された再生セルロース／コラーゲンマトリックス、例えばＰＲＯＭＯＧＲＡＮ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｗｏｕｎｄ  ＤｒｅｓｓｉｎｇまたはＰＲＯＭＯＧＲＡＮ  ＰＲＩＳＭＡ  ＭＡＴＲＩＸも使用することができる。
【０４７１】
ゲル製剤を得るために、液体組成物中に製剤されたＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、有効量の水溶性多糖または合成ポリマーと混合して、ポリエチレングリコールなどのゲル（例えば、ゲル化剤）を形成し、局所塗布するのに適切な粘度の製剤を形成してもよい。使用し得る多糖類またはゲル化剤として、例えば、セルロース誘導体、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、及びアルキルヒドロキシアルキルセルロースを含むエーテル化セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びヒドロキシプロピルセルロース；ナトリウムカルボキシメチルセルロース；ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー：様々なグレードのポロクサマーＵＳＰ；ヒアルロン酸；カルボポール９４０などのポリアクリル酸；デンプン及び分別デンプン；寒天；アルギン酸及びアルギン酸塩；アラビアゴム；プルラン；アガロース；カラギーナン；デキストラン；デキストリン；フルクタン；イヌリン；マンナン；キシラン；アラビナン；キトサン；グリコーゲン；グルカン；及び合成生体高分子；ならびにガム、例えば、キサンタンガム；グアーガム；ローカストビーンガム；アラビアゴム；トラガカントガム；及びカラヤガム；ならびにその誘導体、組み合わせ及び混合物が挙げられる。本発明の一実施形態では、本明細書のゲル化剤は、例えば、生体系に対して不活性であり、無毒であり、調製が簡単であり、及び／または柔らかすぎないかまたは粘性が高くなく、その内部に保持されたＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２  Ｆｃ融合体を不安定化しないゲル化剤である。
【０４７２】
本発明の特定の実施形態では、多糖はエーテル化セルロース誘導体であり、別の実施形態では、明確に定義され、精製され、ＵＳＰにリストされているもの、例えば、メチルセルロースならびにヒドロキシアルキルセルロース誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（すべてセルロース系薬剤と呼ばれる）である。いくつかの実施形態では、多糖は、ヒドロキシエチルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
【０４７３】
ゲル化に有用なポリエチレングリコールは、通常、適切な粘度を得るために、低分子量と高分子量のポリエチレングリコールの混合物である。例えば、分子量４００〜６００のポリエチレングリコールと分子量１５００のポリエチレングリコールの混合物は、ペーストを得るために適切な比率で混合する場合、この目的に効果的である。
【０４７４】
多糖類及びポリエチレングリコールに適用する用語「水溶性」とは、コロイド溶液及び分散液を含むことを意味する。一般的に、セルロース誘導体の溶解度はエーテル基の置換度によって決定され、本明細書において有用な安定化誘導体は、誘導体を水溶性にするために、セルロース鎖の無水グルコース単位あたり十分な量のそのようなエーテル基を有するべきである。エーテル置換度は、無水グルコース単位あたり少なくとも０．３５エーテル基であれば一般的に十分である。さらに、セルロース誘導体は、アルカリ金属塩、例えば、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ、またはＣｓ塩の形態であってもよい。
【０４７５】
特定の実施形態では、メチルセルロースをゲル中に使用し、例えば、それはゲルの約１〜５％、すなわち約１％、約２％、約３％、約４％または約５％を構成し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ゲル１ｍｌあたり約５０〜２０００μｇ、１００〜２０００μｇ、または１００〜１０００μｇの量で存在する。特定の実施形態では、局所投与による創傷治癒のためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、創傷面積１ｃｍ２あたり、約２５μｇ〜約５００μｇ、約５０μｇ〜約３００μｇ、約１００μｇ〜約２５０μｇ、約５０μｇ〜約２５０μｇ、約５０μｇ〜約１５０μｇ、約７５μｇ、約１００μｇ、約１２５μｇ、約１５０μｇ、約１７５μｇ、約２００μｇ、約２２５μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、または約３５０μｇであり得る。
【０４７６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用する製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、無菌濾過膜による濾過により、容易に達成し得る。
【０４７７】
本発明は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に基づく治療のための用量を提供する。例えば、疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるものであっても、連続注入によるものであっても、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）のポリペプチドが、対象への投与の初期候補用量である。典型的な日用量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日またはそれ以上の反復投与の場合、病態に応じて、所望の疾患症状の抑制が生じるまで治療を持続させる。しかしながら、他の投与計画が有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術及びアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０４７８】
疾患の予防または治療のために、本発明のポリペプチドの適切な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療薬と併用する場合）は、治療する疾患のタイプ、ポリペプチドのタイプ、疾患の重症度及び経過、ポリペプチドを予防目的または治療目的のどちらで投与するか、以前の治療、対象の臨床歴及びポリペプチドに対する応答、ならびに担当医の裁量に依存する。ポリペプチドは、一度にまたは一連の治療にわたって対象に適切に投与する。疾患のタイプ及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるものであっても、連続注入によるものであっても、約１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ）のポリペプチドが、対象への投与の初期候補用量である。１つの典型的な日用量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日またはそれ以上の反復投与の場合、一般的に、病態に応じて、所望の疾患症状の抑制が生じるまで、治療を持続させる。ポリペプチドの１つの例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の用量の１つ以上を、対象に投与してもよい。特定の実施形態では、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ．ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）を対象に投与してもよい。そのような用量を、断続的に、例えば、毎週、２週間ごと、または３週間ごとに（例えば、対象が、約２〜約２０回、または例えば約６回のポリペプチドの投与を受けるように）投与してもよい。初回により高い負荷用量を、それに続いて１回以上のより低い用量を投与してもよい。例示的な投与計画は、約４ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量、続いて毎週約２ｍｇ／ｋｇの維持用量の抗体を投与することを含む。しかしながら、他の投与計画が有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術及びアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０４７９】
心血管疾患または病態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症もしくは敗血症、ＧＶＨＤ、または糖尿病の予防または治療のための本発明の化合物は、通常、静脈内注射によって投与する。
【０４８０】
局所、非経口、静脈内、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、点眼、眼内、硝子体内、病巣内、脳脊髄内、関節内、関節滑液嚢内、くも膜下腔内、経口、または吸入投与を含むがこれらに限定されない他の投与方法も使用することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。さらに、本明細書に記載の化合物は、ボーラスとしての静脈内投与などの既知の方法に従って、またはある期間にわたる持続注入によって、ヒト対象に投与する。
【０４８１】
Ｆ．治療方法及び組成物
本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びその組成物（例えば、医薬組成物）のいずれかを、治療方法で使用してもよい。
【０４８２】
ａ） 炎症性腸疾患
一態様では、医薬品として使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。さらなる態様では、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤの治療に使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、治療方法で使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、本発明は、有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与することを含む、ＵＣまたはＣＤを有する個体の治療方法で使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。そのような一実施形態では、方法は、例えば、以下に記載するように、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、上皮の増殖、分化及び／または遊走を増強する際に使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。ある特定の実施形態では、上皮組織は腸上皮組織である。特定の実施形態では、本発明は、有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与して上皮の増殖、分化及び／または遊走を増強することを含む、個体の上皮の増殖、分化及び／または遊走の増強方法で使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。さらに他の実施形態では、本発明は、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、メタボリックシンドローム及びアテローム性動脈硬化症の治療に使用するためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を提供する。特定の実施形態では、本発明は、有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与することを含む、個体における糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、メタボリックシンドローム及びアテローム性動脈硬化の治療方法で使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。参照によりその全体を本明細書に援用する国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／１４５０１６号を参照のこと。上記の実施形態のいずれかによる「個体」または「対象」または「患者」は、好ましくはヒトである。
【０４８３】
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製におけるＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。一実施形態では、薬剤は、ＩＢＤの治療及び創傷治癒用である。さらなる実施形態では、薬剤は、ＩＢＤを有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む、ＩＢＤの治療及び創傷治癒の方法で使用するための薬剤である。そのような一実施形態では、方法は、例えば、以下に記載するように、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、薬剤は、腸上皮細胞における炎症反応を抑制するための薬剤である。さらなる実施形態では、医薬品は、上皮の増殖、分化及び／または遊走を増強するのに有効な量の医薬品を個体に投与することを含む、個体における上皮の増殖、分化及び／または遊走の増強方法で使用するための医薬品である。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０４８４】
さらなる態様では、本発明は、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤの治療方法を提供する。一実施形態では、方法は、ＩＢＤを有する個体に有効量のＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法は、以下に記載するように、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０４８５】
さらなる態様では、本発明は、個体における上皮の増殖、分化及び／または遊走の増強方法を提供する。一実施形態では、方法は、有効量のＩＬ−２２ポリペプチドまたはＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与して、上皮の増殖、分化及び／または遊走を増強することを含む。一実施形態では、「個体」はヒトである。
【０４８６】
ｂ）他の治療適用
本発明は、心血管疾患及び病態、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症及び敗血症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ならびに糖尿病のためのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ベースの治療薬を提供する。所与の疾患または病態の予防、治療または重症度の軽減のために、本発明の化合物の適切な用量は、上記で定義したように、治療する疾患または病態のタイプ、疾患または病態の重症度及び経過、薬剤を予防目的または治療目的のどちらで投与するか、以前の治療、対象の病歴及び化合物に対する応答、ならびに担当医の裁量に依存する。化合物は、一度にまたは一連の治療にわたって対象に適切に投与する。好ましくは、用量反応曲線及び本発明の医薬組成物を、最初にｉｎ  ｖｉｔｒｏで、次いでヒトで試験する前に有用な動物モデルで決定することが望ましい。
【０４８７】
一態様では、本発明は、心血管疾患または障害、メタボリックシンドローム、急性内毒素血症及び敗血症、ＧＶＨＤ、ならびにインスリン関連障害の治療方法を提供する。一実施形態では、方法は、治療有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を必要とする対象に投与することを含む。別の態様では、本発明は、心血管疾患または障害、メタボリックシンドローム、ＧＶＨＤ、及びインスリン関連障害の進行の遅延または減速方法を提供する。一実施形態では、方法は、疾患、病態、または障害と診断された対象に、有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。別の態様では、本発明は、心血管疾患または障害、ＧＶＨＤ、及びインスリン関連障害の徴候の予防方法を提供する。一実施形態では、方法は、有効量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、疾患、病態、または障害のリスクがある対象に投与することを含み、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、疾患、病態、または障害の徴候の発症に対して有効である。一態様では、本発明は、ＧＶＨＤの治療方法を提供する。別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤの進行の遅延または減速方法を提供する。一実施形態では、方法は、疾患、病態、または障害と診断された対象に、有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む。
【０４８８】
心血管疾患及び病態
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、対象における心血管疾患または病態の、臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的徴候（症状及び徴候の両方を含む）の発症または進行に対する治療効果、防止効果または予防効果を提供する。一実施形態では、疾患または病態はアテローム性動脈硬化症である。一実施形態では、徴候は、アテローム性動脈硬化巣形成症及び／または血管炎症を含む。別の実施形態では、対象は心血管疾患のリスクがある。一般的に、リスクにさらされている対象は、本明細書に記載するように、以前に心血管疾患または病態を有したことがあるか、または心血管疾患または病態の遺伝的素因を有するであろう。
【０４８９】
心血管疾患及び病態の治療の有効性は、心血管疾患の評価に一般的に使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、心血管の健康状態を評価することができる。心血管の健康状態は、例えば、血液検査（例えば、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｃ反応性タンパク質、フィブリノーゲン、ホモシステイン、空腹時インスリン、フェリチン、リポタンパク質、及びＬＰＳ）、血圧、聴診、心電図、心臓ストレス検査、心臓画像（例えば、冠動脈カテーテル法、心エコー、血管内超音波、陽電子放射断層撮影、コンピュータ断層撮影血管造影、及び磁気共鳴画像）によって評価することができるが、これらに限定されない。
【０４９０】
メタボリックシンドローム
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、対象におけるメタボリックシンドローム（または代謝障害もしくは疾患）の、臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的徴候（症状及び徴候の両方を含む）の発症または進行に対する治療効果、防止効果または予防効果を提供する。１つ以上の実施形態では、対象はメタボリックシンドロームのリスクがある。
【０４９１】
メタボリックシンドロームの治療効果は、メタボリックシンドロームの評価で一般的に使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、肥満を測定することができる。さらなる例として、高血糖、脂質異常症、インスリン抵抗性、慢性脂肪組織炎症、及び／または高血圧を測定することができる。Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲン活性化因子阻害剤１の１つ以上のレベルの低下を測定することができる。これらの測定は、当技術分野で周知の任意の方法によって実行することができる。
【０４９２】
インスリン関連障害
インスリン関連障害の場合、用語「治療」とは、障害の治療的処置及び予防的または防止的手段の両方を指し、その目的は、標的とする病的状態または障害を防止または遅延（軽減）することである。治療を必要とする対象には、すでにインスリン関連障害を罹患している対象、及びそのような障害に罹患しやすい対象、または障害を予防すべき対象が含まれる。
【０４９３】
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、対象におけるインスリン関連障害の、臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的徴候（症状及び徴候の両方を含む）の発症または進行に対する防止または予防効果を提供する。一実施形態では、障害は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、または妊娠時糖尿病である。一実施形態では、病状または病理学的徴候には：膵臓（例えば、膵島細胞）によるインスリン産生がほとんどまたは全くない、インスリン抵抗性、及び高血糖のうちの１つ以上が含まれる。別の実施形態では、対象はインスリン関連障害のリスクがある。一般的に、リスクのある対象は、インスリン関連障害の遺伝的素因を有するか、膵島細胞の自己免疫破壊を引き起こすウイルス（例えば、エプスタインバーウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルスまたはサイトメガロウイルス）にさらされているか、肥満であるか、前糖尿病性（通常の血糖値よりも高い）であるか、または妊娠時糖尿病に罹患している。
【０４９４】
インスリン関連障害の治療の有効性は、そのような障害の評価に一般的に使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、Ｉ型とＩＩ型の両方の糖尿病は、以下の１つ以上で評価することができる：糖化ヘモグロビン検査（Ａ１Ｃ）、定期的血糖検査、及び空腹時血糖検査。Ｉ型は、血液中の自己抗体及び／または尿中のケトンの検査によっても評価することができる。ＩＩ型は、経口ブドウ糖負荷試験で評価することもできる。
【０４９５】
急性内毒素血症及び敗血症
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、対象における急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の、臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的徴候（症状及び徴候の両方を含む）の発症または進行に対する治療効果、防止効果または予防効果を提供する。１つ以上の実施形態では、対象は、急性内毒素血症、敗血症、またはその両方のリスクがある。
【０４９６】
急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の治療の有効性は、急性内毒血症、敗血症、またはその両方の評価に一般的に使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、ＬＰＳまたは炎症マーカーのレベルの低下を測定することができる。これらの測定は、当技術分野で周知の任意の方法によって実施することができる。
【０４９７】
創傷治癒
創傷治癒を測定するための様々な方法が存在する。多くの場合、画像を取得して、線寸法、周囲長、及び面積を計算する。ＮＩＨには、画像から創傷領域の測定を可能にする無料プログラムＩｍａｇｅ  Ｊがある。最終的な治癒の予後は、末梢の中心への移動に基づいて、初期の治癒率から推定することができる。これは、いくつかの数式を用いて行われ、その中で最も一般的なものは、修正ギルマン方程式である。目視検査に加えて、分光法またはＭＲＩによっても創傷治癒の測定を支援することができる。例えば、Ｄａｒｇａｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，２０１３，４１：３０−４２，Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｒａｄｉｏｌ．８０：９３９−４８を参照のこと。治癒が遅い／不十分な場合、創縁部の生検を実施して、感染症及び悪性腫瘍を除外または同定してもよい。特定の実施形態では、創傷治癒の加速または向上は、ＩＬ−２２処置した創傷及び対照創傷における創傷閉鎖を比較することによって評価することができる。特定の実施形態では、創傷治癒の加速または向上は、対照に比べて、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％速いか、または良好である。
【０４９８】
特定の態様では、本発明は、創傷における活発な感染、微生物混入またはコロニー形成を伴うかまたは伴わない創傷の治癒の促進／加速／向上方法を提供する。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、感染した創傷の治療、または感染した創傷の治癒の促進／加速／向上に使用することができる。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、感染の存在下で、創傷の治療、または創傷治癒の促進／加速／向上に使用することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、感染のリスクがある微生物混入またはコロニー形成の存在下で、創傷の治療または創傷治癒の促進／加速／向上に使用することができる。さらなる実施形態では、創傷治癒治療を必要とする患者は、糖尿病患者であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷、例えば糖尿病性足部潰瘍である。いくつかのさらなる実施形態では、創傷は、感染した糖尿病性創傷、例えば、感染した糖尿病性足部潰瘍である。
【０４９９】
本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも１つの追加の治療薬と共投与してもよい。特定の実施形態では、追加の治療薬は、メトトレキサート、ＴＮＦ阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、メサラジン、ステロイド、デキサメタゾン、アザチオプリン、及びそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない、炎症反応を低減する免疫抑制剤である。炎症反応を低減する適切な追加の治療薬には、限定されないが、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、メルカプトプリン（６−メルカプトプリンまたは６−ＭＰとも呼ばれる）、またはそれらの組み合わせが含まれる。特定の実施形態では、ＩＢＤの治療のために、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合体を、炎症反応を低減する１つ以上の追加の治療薬（例えば、５−ＡＳＡ、６−ＭＰ、またはＴＮＦアンタゴニスト）と共投与してもよい。特定の他の実施形態では、ＩＢＤの治療のために、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合体を、エトロリズマブなどのインテグリンアンタゴニストと共投与してもよい。一実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、ＩＬ−２２アゴニストと併用する。
【０５００】
糖尿病性足部潰瘍の治療などの慢性創傷治癒を促進するために、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の投与を、１つ以上の追加の創傷治癒剤と組み合わせることができる。適切な追加の創傷治癒剤として、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ、及びＶＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管新生因子（例えば、ＨＧＦ、ＴＮＦ−α、アンギオゲニン、ＩＬ−８、アンジオポエチン１及び２、Ｔｉｅ−２、インテグリンα５、マトリックスメタロプロテイナーゼ、一酸化窒素、及びＣＯＸ−２）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、及びＰＤＧＦ−Ｄ）、インスリン成長因子（ＩＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）ファミリーのメンバー（例えば、ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β）、及び同化酸素（真空療法）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合体は、本明細書に記載の１つ以上の追加の創傷治癒剤及び／または局所投与での使用に適した１つ以上の抗菌剤または抗生物質と共投与することができる。参照によりその全体を本明細書に援用するＷＯ２００６／１３８４６８を参照のこと。そのような実施形態では、抗生物質は、スルファジアジン銀、すなわち、ｓｉｌｖａｄｅｅｎを含むがこれに限定されない硫黄抗生物質である。共投与する１つ以上のさらなる薬剤を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と同時に、代替的に、または連続的に投与することができる。
【０５０１】
さらなる例示的な実施形態では、目的が心血管疾患もしくは病態またはメタボリックシンドロームの予防または治療である場合、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の投与は、スタチンなどのコレステロール低下剤（例えば、ロバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、及びシンバスタチン）、胆汁酸結合樹脂（コレスチポール、コレスチラミンスクロース、及びコレセベラム）、エゼチミブ、またはエゼチミブとシンバスタチンの組み合わせ；抗血小板薬、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、アスピリン）、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害剤（例えば、クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロル、及びチクロピジン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、シロスタゾール）、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤（例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、及びチロフィバン）、アデノシン再取り込み阻害剤（例えば、ジピリダモール）、トロンボキサン阻害剤（例えば、トロンボキサンシンターゼ阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、及びテルトロバン）；β遮断薬、例えば、アルプレノロール、ブシンドロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トチュウ、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、セリプロロール、エスモロール、メトプロロール、ネビボロール、ブタキサミン、ＩＣＩ−１１８，５５１及びＳＲ５９２３０Ａ；アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、例えば、カプトプリル、ゾフェノプリル、ジカルボキシレート含有薬（例えば、エナラプリル、ラミプリル、キナプリル、ペリンドプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、及びゾフェノプリル）、ホスホネート含有薬（例えば、フォシノプリル）、カソキニン、ラクトキニン、ラクトトリペプチド（例えば、プロバイオティックＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓによって生成されるか、またはカゼインに由来するＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ）；カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ジヒドロピリジン（例えば、アムロジピン、アラニジピン、アゼルニジピン、バルニジピン、ベニジピン、シルニジピン、クレビジピン、イスラジピン、エフォニジピン、フェロジピン、ラシジピン、レルカニジピン、マニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、及びプラニジピン）、フェニルアルキルアミン（例えば、ベラパミル）、ベンゾチアゼピン（例えば、ジルチアゼム）、ミベフラジル、ベプリジル、フルスピリレン、及びフェンジリン；利尿薬、例えば、強力（ｈｉｇｈ−ｃｅｉｌｉｎｇ）ループ利尿薬（例えば、フロセミド、エタクリン酸、トルセミド、及びブメタニド）、チアジド（例えば、ヒドロクロロチアジド酸）、炭酸脱水酵素阻害剤（例えば、アセタゾラミド及びメタゾラミド）、カリウム保持性利尿薬（例えば、アルドステロンアンタゴニスト：スピロノラクトン、及び上皮ナトリウムチャネル遮断薬：アミロライド及びトリアムテレン）、及びカルシウム保持性利尿薬、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体の投与と併用またはこれを補足することができる。
【０５０２】
インスリン関連障害またはメタボリックシンドロームの場合、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の投与は、様々な治療薬の投与と併用またはこれを補足することができる。Ｉ型糖尿病（インスリン依存性糖尿病すなわちＩＤＤＭ）の場合、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、１つ以上の通常のインスリン補充療法（速効型及び長時間作用型インスリンを含む）、免疫抑制治療、膵島移植、及び幹細胞療法と併用することができる。一実施形態では、レギュラーインスリン補充療法には、限定されないが、レギュラーインスリン（例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｒ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＩＮ  Ｒ（登録商標））、インスリンイソファン（例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ  Ｎ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＩＮ  Ｎ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））、インスリンアスパルト（例えば、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、インスリングラルギン（例えば、ＬＡＮＴＵＳ（登録商標））、及びインスリンデテミル（例えば、ＬＥＶＥＭＩＲ（登録商標））が含まれる。他の実施形態では、インスリン補充療法には、プラムリンチド（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標））がさらに含まれる。
【０５０３】
ＩＩ型糖尿病（非インスリン依存型糖尿病すなわちＮＩＤＤＭ）またはメタボリックシンドロームの場合、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、１つ以上のインスリン補充療法（上記のような）、肝臓によるグルコース産生を低下させる薬剤、インスリンの膵臓での産生及び放出を刺激する薬剤、炭水化物の酵素分解を遮断する薬剤、またはインスリン感受性を増加させる薬剤と併用することができる。一実施形態では、グルコース産生を低下させる薬剤は、メトホルミン（例えば、ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）及びＧＬＵＭＥＴＺＡ（登録商標））である。別の実施形態では、インスリンの膵臓での産生及び放出を刺激する薬剤は、グリピジド（例えば、ＧＬＵＣＯＴＲＯＬ（登録商標）及びＧＬＵＣＯＴＲＯＬ  ＸＬ（登録商標））、グリブリド（例えば、ＤＩＡＢＥＴＡ（登録商標）及びＧＬＹＮＡＳＥ（登録商標））またはグリメピリド（例えば、ＡＭＡＲＹＬ（登録商標））である。他の一実施形態では、炭水化物の酵素分解を遮断するか、またはインスリン感受性を増加させる薬剤は、ピオグリタゾン（例えば、アクトス）である。別の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、メトホルミンの以下の代替物と併用することができる：シタグリプチン（例えば、ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、サクサグリプチン（例えば、ＯＮＧＬＹＺＡ（登録商標））、レパグリニド（例えば、ＰＲＡＮＤＩＮ（登録商標））及びナテグリニド（例えば、ＳＴＡＲＬＩＸ（登録商標））、エクセナチド（例えば、ＢＹＥＴＴＡ（登録商標））、及びリラグルチド（例えば、ＶＩＣＴＯＺＡ（登録商標））。別の実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、経口血糖降下薬、例えばスルホニル尿素と併用することができる。
【０５０４】
妊娠時糖尿病またはメタボリックシンドロームの場合、本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、経口血糖コントロール薬と併用することができる。一実施形態では、薬剤はグリブリドである。
【０５０５】
ＧＶＨＤ
一態様では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＧＶＨＤの臨床的及び／または組織学的及び／または生化学的及び／または病理学的徴候（症状及び徴候の両方を含む）の発症に対する予防効果、または進行に対する治療効果を提供し得る。例えば、方法は、本明細書に記載の有効量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物（医薬組成物を含む）を、それを必要とする対象に投与することを含むＧＶＨＤの治療方法を提供する。本明細書に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物の投与は、疼痛、発疹、皮膚厚、黄色皮膚または黄色眼、口腔乾燥症もしくは口腔内潰瘍、味覚異常、ドライアイ、感染症または体重減少を含むＧＶＨＤの１つ以上の症状を軽減し得る。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質またはその組成物は、例えば、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、またはタクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムスまたはエベロリムス）、化学療法薬（例えば、イマチニブ、ペントスタチン、メトトレキサート、サリドマイド）、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト）、ステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、局所ステロイド、またはステロイド点眼薬）、光線療法（例えば、体外循環式光化学療法）、ヒドロキシクロロキン、抗線維化剤（例えば、ハロフジノン）、モノクローナル抗体（例えば、アレムツズマブ、インフリキシマブ、またはリツキシマブ）、またはそれらの組み合わせを含む、追加のＧＶＨＤ療法と併用して投与することができる。
【０５０６】
併用療法は、「相乗作用」を提供し、「相乗効果」、すなわち、一緒に使用する有効成分が、化合物を別々に使用することから生じる効果の合計よりも大きい場合に達成される効果を証明することができる。相乗効果は、有効成分が以下の場合に達成することができる：（１）組み合わせ単位用量製剤に一緒に製剤化し、同時に投与または送達するか；（２）別の製剤として交互にまたは並行して送達するか；または（３）いくつかの他のレジメンによる。交互療法で送達する場合、例えば、別々のシリンジでの異なる注射によって化合物を連続して投与または送達する場合に相乗効果を達成することができる。一般的に、交互療法中は、各有効成分の有効用量を、連続して、すなわち連続的に投与するが、併用療法では、２つ以上の有効成分の有効用量を一緒に投与する。
【０５０７】
上記のそのような併用療法は、併用投与（２つ以上の治療薬が同じまたは別個の製剤に含まれる場合）及び別個の投与を包含し、その場合、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の投与は、追加の治療薬の投与の前に、同時に、及び／または後に行うことができる。一実施形態では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の投与と追加の治療薬の投与は、相互に、約１か月以内、または約１、２もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日間以内に行う。
【０５０８】
本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質（及び任意の追加の治療薬）は、非経口、肺内、局所及び鼻腔内を含む任意の適切な手段によって、及び局所治療が望ましい場合は病変内投与によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投与は、投与が短期的であるか慢性的であるかに一部依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によって行うことができる。本明細書では、様々な時点にわたる単回投与または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投与計画が企図される。
【０５０９】
本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、良好な医療行為と整合した様式で製剤化し、調薬し、投与する。これに関して考慮すべき要因として、治療する特定の障害、治療する特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の病因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に公知の他の要因が挙げられる。必ずしも必要ではないが、場合により、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、問題の障害を予防または治療するために現在使用している１つ以上の薬剤とともに製剤化する。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する融合タンパク質の量、障害または治療のタイプ、及び上記の他の要因に依存する。これらは一般的に、本明細書に記載するものと同じ用量及び投与経路で、または本明細書に記載の用量の約１〜９９％で、または経験的／臨床的に適切であると判断される任意の用量及び任意の経路で使用される。
【０５１０】
疾患の予防または治療に関して、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の適切な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療薬と併用する場合）は、治療する疾患のタイプ、Ｆｃ領域のタイプ、疾患の重症度及び経過、融合タンパク質を予防目的と治療目的のどちらで投与するか、以前の治療、患者の病歴及びＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に対する応答、ならびに担当医の裁量に依存するであろう。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、一度にまたは一連の治療にわたって患者に適切に投与する。疾患のタイプ及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）または約０．１μｇ／ｋｇ〜１．５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または持続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補用量であり得る。１つの典型的な日用量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００  ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日またはそれ以上の反復投与の場合、一般的に、病態に応じて、所望の疾患症状の抑制が生じるまで治療を持続させるであろう。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の１つの例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。特定の他の用量として、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、及び約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲が挙げられる。したがって、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１つ以上の用量を患者に投与してもよい。局所創傷治癒の場合、約０．００１ｍｇ／ｃｍ２〜約１０ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２〜約５ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２〜約１ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２〜約０．５ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２〜約０．５ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ２〜約０．２ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積、または約０．１ｍｇ／ｃｍ２〜約０．５ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積（またはそれらの任意の組み合わせ）の１つ以上の用量を患者に投与してもよい。特定の実施形態では、約０．０１ｍｇ／ｃｍ２、０．０２ｍｇ／ｃｍ２、０．０３ｍｇ／ｃｍ２、０．０４ｍｇ／ｃｍ２、０．０５ｍｇ／ｃｍ２、０．０６ｍｇ／ｃｍ２、０．０７ｍｇ／ｃｍ２、０．０８ｍｇ／ｃｍ２、０．０９ｍｇ／ｃｍ２、０．１ｍｇ／ｃｍ２、０．１５ｍｇ／ｃｍ２、０．２ｍｇ／ｃｍ２、０．２５ｍｇ／ｃｍ２、０．３ｍｇ／ｃｍ２、０．４ｍｇ／ｃｍ２、または０．５ｍｇ／ｃｍ２の創傷面積の１つ以上の用量を患者に投与してもよい。そのような用量を、間欠的に、例えば、毎週または３週間ごとに（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば約６回の用量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を受容するように）投与してもよい。初回により高い負荷用量を、それに続いて１回以上のより低い用量を投与してもよい。しかしながら、他の投与計画が有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術及びアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０５１１】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の代わりに、またはそれに加えて、上記の製剤または治療方法のいずれかを、本発明の複合体を使用して実施してもよいことを理解されたい。
【０５１２】
Ｇ．製品
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防及び／または診断に有用な物質を含む製品を提供する。製品は、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含む。適切な容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成し得る。容器は、それ自体で、または病態を治療、予防、及び／または診断するのに有効な別の組成物との組み合わせで、組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針で貫通可能なストッパー付きバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書において提供するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質である。ラベルまたは添付文書は、選択された病態を治療するために組成物を使用することを示す。さらに、製品は、（ａ）内部に組成物を含む第１の容器を含む場合があり、その場合、組成物は、本発明のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含み；製品はまた（ｂ）内部に組成物を含む第２の容器を含む場合があり、その場合、組成物は、さらなる細胞傷害剤または治療剤を含む。本発明のこの実施形態における製品は、特定の病態を治療するために組成物を使用することができることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、またはさらに、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。それはさらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、ニードル、及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の物質を含み得る。
【０５１３】
上記の製品のいずれかは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の代わりに、またはそれに加えて、本発明の複合体を含み得ることを理解されたい。
【実施例】
【０５１４】
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上記で提供した一般的な記載を前提として、様々な他の実施形態を実施してもよく、実施例は特許請求の範囲を限定することを意図していないことを理解されたい。
【０５１５】
実施例１：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の構造的及び分子的特徴決定
例示的なＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の一次構造
本発明の例示的なＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、２つの鎖間ジスルフィド架橋によって連結された２つの単鎖ユニットからなる。各単鎖は、ヒトインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）融合タンパク質からなり、これはヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）のＦｃ領域と融合したサイトカインＩＬ−２２からなる。
【０５１６】
Ｆｃ領域は、サイトカインの薬物動態特性を向上させる。融合タンパク質のＦｃ領域には、グリコシル化を除去し、Ｆｃエフェクター機能の可能性を最小限に抑えるＮ８１Ｇ変異が組み込まれている（これは、サイトカインとＦｃの融合ポリペプチド全体のＮ末端からナンバリングした場合ではＮ２２７Ｇ変異に、ＥＵインデックスによるＦｃ領域のナンバリングではＮ２９７Ｇ変異に対応する）。さらに、例えば、ＣＰ［Ｐ］ＣＰのアミノ酸配列（配列番号３１）の括弧書きのＰｒｏ残基で示すように、部位特異的変異を介してＳｅｒをＰｒｏに置換することによって生成した改変ヒンジ領域は、分子の安定性を増加させる。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞によって産生され、予測分子量はおよそ８５，１３１Ｄａ（インタクト、ペプチド鎖のみ、ＦｃのＣ末端リジン残基なし）である。炭水化物を含まないＩＬ−２２サイトカインの計算された分子量は１６，７４９．４Ｄａである（システイン残基は還元型）。Ｃ末端リジン残基のないＩｇＧ４  Ｆｃの計算された分子量は２５，８４４．３Ｄａである（システイン残基は還元型）。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の構造を図１Ａに示す。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２サイトカイン及びＩｇＧ４  Ｆｃ領域のアミノ酸配列を、それぞれ図１Ｂ及び図１Ｃに示す。
【０５１７】
特徴決定の試験方法
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の構造的及び分子的特性を、以下の生理化学的属性に重点を置いて調べた：一次構造、サイズと電荷の不均一性、等電点、消衰係数、Ｎ−グリカン分布及びシアル酸含有量、高次構造、及び生物学的活性。特徴決定に使用した試験方法を表１に示し、本明細書中に記載する。
【０５１８】
特徴決定試験は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチ及び臨床バッチ１、２、及び３で実施した。すべてのバッチは、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２４０ｍＭスクロース、５ｍＭメチオニン、及び０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ７．１、最終公称濃度１０ｍｇ／ｍＬ  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質で製剤化した。
表１：特徴決定の試験方法
2021511297.tif 000004
【０５１９】
生理化学的特性
質量分析
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質試料を、ＰＮＧａｓｅ  Ｆによる脱グリコシル化後、及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）による脱グリコシル化とジスルフィド結合の還元後のインタクトな状態でエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）によって分析した。ＥＳＩ−ＭＳ分析は、直接オンラインＭＳ分析用の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）による試料の脱塩後に実施した。
【０５２０】
非還元型脱グリコシル化ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分析を用いて、インタクトなＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の主要種の質量を取得し（図２Ａ）、一方、還元型脱グリコシル化ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分析を用いて単鎖分子の質量を取得した（図２Ｂ）。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の観測された質量は、アミノ酸配列から推定された予測質量に対応している（表２）。インタクトな分子について得られた主要な質量は、カルボキシ末端リジン残基がなく、Ｎ−結合型グリカンがないＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の予測質量に対応している。
【０５２１】
ＭＳ分析により、分子量がＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列から推定される予測質量と整合していることが確認される。
表２：脱グリコシル化されたインタクト型及び還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のエレクトロスプレーイオン化質量分析
2021511297.tif 000005
【０５２２】
トリプシンペプチドマップ
高解像度液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ）分析によるペプチドマップ分析を使用して、予測された一次構造を確認し、ペプチドパターンのバッチ間の一貫性を実証した。さらに、翻訳後修飾、及び組換えタンパク質のプロセシングまたは保存によって引き起こされるアミノ酸側鎖への化学修飾を検出した。
【０５２３】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ペプチドマップを生成するために、タンパク質を、塩酸グアニジニウムによる変性条件、ジチオスレイトールによる還元、及びヨード酢酸によるシステインのカルボキシメチル化に供した後、トリプシンで消化した。得られたペプチドを、ＭＳ−ＭＳ対応の質量分析計に接続したＲＰ−ＨＰＬＣで分離し、ペプチドの溶出を２１４ｎｍでモニタリングした。トリプシン消化したペプチドの質量を、分離された消化混合物のＬＣ−ＭＳ分析によって測定した。
【０５２４】
ペプチドの割り当ては、インタクトなペプチドの観測された質量に基づいた（図３Ａ及び図３Ｂ）。Ｎ−結合型炭水化物に関連するトリプシン消化したペプチドを、グループ化したピークとして示す。ペプチドの配列とそれらの予測質量及び観測された質量を、表３及び表４の参照標準バッチに示す。観測されたすべてのペプチドは、一般的な翻訳後修飾を含む、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の配列を有するタンパク質のトリプシン消化から予想されるペプチドと整合していた。配列バリアントは観測されなかった。
表３：トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−２２サイトカイン由来ペプチド
2021511297.tif 000006
2021511297.tif 000007
表３：トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−２２サイトカイン由来ペプチド（続き）
2021511297.tif 000008
表４：トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）Ｆｃ由来ペプチド
2021511297.tif 000009
2021511297.tif 000010
表４：トリプシン消化したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）Ｆｃ由来ペプチド（続き）
2021511297.tif 000011
【０５２５】
ペプチドマップを、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチとすべての臨床バッチで比較した（図３Ｃ及び図３Ｄ）。参照標準バッチとすべての臨床バッチのペプチドマップは、ペプチドパターンに関して整合しており、このことは製造プロセスのバッチ間整合性を示している。
【０５２６】
ＳＥ−ＨＰＬＣ
サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）を、バッチ出荷試験の一部として実施した。臨床バッチと参照標準バッチの定量的出荷データを表５に並べて示す。
表５：ＳＥ−ＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分子サイズ分布（ピーク面積％）
2021511297.tif 000012
【０５２７】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、約１６分の保持時間で主要ピークとして溶出される。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチのＳＥ−ＨＰＬＣ特性の全体図及び拡大図は、臨床バッチがピークパターン及び主要ピーク含有量に関して整合していることを示した（図４Ａ及び図４Ｂ）。さらに、分析用超遠心法（ＡＵＣ）を、特徴決定の拡張の一部として、直交的なサイズ不均一性試験法として利用した。様々なレベルの凝集体の一連のストレスを受けた試料を分析する場合、ＡＵＣからのデータはＳＥ−ＨＰＬＣとよく相関する。
【０５２８】
ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ
非還元条件下でのキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム−非ゲルふるい（ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ）を、バッチ出荷試験の一部として実施した。定量的出荷データを表６に並べて示す。特徴決定の拡張として、還元条件下（ジチオスレイトールの存在下）でのＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳを実施した。追加の種を、特徴決定試験の拡張の一部として評価した（表７）。
表６：ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳによる非還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分子サイズ分布（％ＣＰＡ）
2021511297.tif 000013
表７：ＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳによる還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分子サイズ分布（％ＣＰＡ）
2021511297.tif 000014
【０５２９】
非還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は顕著なピークとして移動し、残りのマイナーピークは、見かけ上、分子量が低いまたは高い種を表す（図５Ａ（全体図）及び図５Ｂ（拡大図））。非還元試料のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳで分離したバリアントの相対分布を表６に示す。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチのＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ特性は、整合したピークパターン及び補正後ピーク面積百分率（ＣＰＡ）を示した。さらに、この方法は、存在する場合、タンパク質のジスルフィド還元を検出することができた。
【０５３０】
還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ分析の電気泳動図は、単鎖分子に対応する１つの主要なピークの存在を示した（図５Ｃ及び図５Ｄ）。還元型の相対分布を表７に示す。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチのＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ特性は、整合したピークパターンと補正後ＣＰＡ百分率を示した。
【０５３１】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析
ＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｒｕｂｙ染色を用いたドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析を使用して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ロットの純度を評価した。この方法は定量的ではないが、微量のタンパク質不純物の検出に使用することができる。還元型（図６Ａ）及び非還元型（図６Ｂ）の両方のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファーの存在下で加熱することにより、試料を変性させた。非還元型試料は、ヨードアセトアミドの存在下で６０℃に５分間加熱し、一方、還元型試料は還元剤（ＤＴＴ）を添加して６０℃に１０分間加熱した。すべての試料を５μｇでローディングした。調製した試料、分子量標準、及び感度標準（レーンあたり２ｎｇ及び８ｎｇのウシ血清アルブミン）を、４％〜２０％ポリアクリルアミドグラジエントゲルで分離した。次いでタンパク質成分をＳＹＰＲＯ（登録商標）Ｒｕｂｙ染色で可視化した。
【０５３２】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチ及びＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質臨床バッチの整合したバンドパターンが、還元型（図６Ａ、レーン４〜７）及び非還元型（図６Ｂ、レーン４〜７）試料の両方で観察された。
【０５３３】
還元型試料（図６Ａ、レーン４〜７）では、１つの主要なバンドが移動し、見かけの質量はおよそ５０ｋＤａであったが、これは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の単鎖と一致する。還元型試料で観察されたバンドパターンは、還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ分析で観察された移動パターンとも一致した（図５Ｃ及び図５Ｄ）。ゲルのすべてのバンドを切り出し、トリプシンで消化し、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）で分析した。トリプシンマップの質量分析の結果は、ゲルのすべてのバンドが製品に関連していることを示した。
【０５３４】
非還元型試料（図６Ｂ、レーン４〜７）では、インタクトなＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が主要バンドであり、およそ１２５ｋＤａの見かけの質量で移動する。非還元型試料で観察されたバンドパターンは、非還元型ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＣＥ−ＳＤＳ−ＮＧＳ分析で観察された移動パターンとも一致した（図５Ａ及び図５Ｂ）。ゲルのすべてのバンドを切り出し、トリプシンで消化し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳで分析した。トリプシンマップの質量分析の結果は、ゲルのすべてのバンドが製品に関連していることを示した。
【０５３５】
ＩＣＩＥＦ
画像化キャピラリー等電点電気泳動（ＩＣＩＥＦ）は、タンパク質の電荷の不均一性を定量的に評価する手段を提供する。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチを、ＣｐＢ処理あり及びなしで分析した。ＣｐＢは、Ｃ末端のリジン残基を除去する酵素である。Ｃ末端リジン残基の不均一性は、細胞培養操作中の内在性ＣＨＯ塩基性カルボキシペプチダーゼ（複数可）によるタンパク質分解の結果であると考えられている。Ｃ末端のリジン残基によって付与される電荷の不均一性を取り除くことにより、タンパク質に存在する残りの電荷バリアントのより完全な評価が可能である。
【０５３６】
ＣｐＢ及びシアリダーゼ処理後のＩＣＩＥＦを、バッチ出荷試験の一部として実施した。定量的な出荷データを表８に並べて示す。さらに、ＣｐＢ処理なしのＩＣＩＥＦ（Ｃ末端にリジンの不均一性を有する天然ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）を、特徴決定の拡張として実施した。
【０５３７】
表８にまとめるとともに図７Ａ（全体図）及び図７Ｂ（拡大図）に示す、ＣｐＢ処理なしの天然ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＣＩＥＦ分析の結果から、バッチが、Ｃ末端のリジン電荷の不均一性に起因する可変的な電荷バリアント分布を有することが示された。表９にまとめるとともに図７Ｃ（全体図）及び図７Ｄ（拡大図）に示す、ＣｐＢ処理したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の分析結果から、電荷バリアントの分布においてバッチ間での整合性が示された。ＣｐＢ処理ありとなしで得られた結果を比較すると、塩基性バリアントは主にリジンの不均一性が原因であることがわかる（図７Ｅ）。
表８：
天然ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＣＩＥＦによる電荷バリアントの分布（ピーク面積％）
2021511297.tif 000015
略語：ＩＣＩＥＦ＝画像化キャピラリー等電点電気泳動。
表９：
ＣｐＢ処理したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＣＩＥＦによる電荷バリアントの分布（ピーク面積％）
2021511297.tif 000016
略語：ＩＣＩＥＦ＝画像化キャピラリー等電点電気泳動。
【０５３８】
等電点
ｐＩは、タンパク質が正味電荷を有さないｐＨである。天然ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のｐＩを、シアリダーゼ処理後にＩＣＩＥＦによって測定した。この分析から、主成分のｐＩは６．５と決定された。ＩＣＩＥＦ電荷不均一性試験法の主要ピークで観測されたｐＩは、この値とわずかに異なる場合があるが、これは、電荷不均一性試験法が狭い範囲の両性電解質を使用して、２つのブラケットｐＩマーカーで校正されたｐＨ勾配を生成するためである。
【０５３９】
消衰係数の決定
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質溶液のタンパク質濃度は、タンパク質分解により開裂し、アンフォールドしたＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のスペクトルを、アミノ酸配列から計算したスペクトルと比較することにより決定した。この計算は、個々のアミノ酸の既知の吸光度値に基づいた（Ｂｅｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２３：５５−６５，１９８２）。この方法を使用して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の消衰係数を、２８０ｎｍで０．９８ｍＬｍｇ−１ｃｍ−１と決定した。この消衰係数を紫外可視分光スキャン分析で使用して、試験したすべてのバッチのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度を計算した。
【０５４０】
Ｎ−グリコシル化部位の占有
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、分子の２つのサイトカインドメインのそれぞれに４つのＮ−グリコシル化部位（Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３）を有する。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の酵素的脱グリコシル化と、それに続くＬｙｓ−Ｃペプチドマッピング及びＬＣ−ＭＳ分析によって、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＮ−グリコシル化部位占有率を決定した。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ペプチドマップを生成するために、タンパク質を、塩酸グアニジニウムによる変性条件、ジチオトレイトールによる還元、及びヨード酢酸によるシステインのカルボキシメチル化に供した後、エンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃで消化した。ＰＮＧａｓｅ  Ｆ酵素を使用してＮ−グリカンをタンパク質から切断した。得られたペプチドを、質量分析計に連結されたＵＨＰＬＣによって分離した。
【０５４１】
部位占有率は、脱グリコシル化ペプチドの抽出イオンクロマトグラムの積分ピーク面積を、脱グリコシル化ペプチドと天然ペプチドの合計ピーク面積で割って計算した。（ＰＮＧａｓｅ  Ｆはアスパラギンをアスパラギン酸に変換し、脱グリコシル化ペプチドの１Ｄａの質量シフトをもたらす）。抽出イオンクロマトグラムの計算では、ペプチドの最も豊富な電荷状態を考慮した。
【０５４２】
Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３のＮ−グリコシル化部位占有率を表１０に示す。部位占有率は、参照標準バッチと臨床バッチ１、２、及び３の４つのＮ−グリコシル化部位間で整合していることが示された。
表１０：Ｌｙｓ−Ｃペプチドマッピング及びＬＣ−ＭＳによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＮ−グリコシル化部位占有率
2021511297.tif 000017
【０５４３】
Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３のＮ−グリコシル化部位占有率のさらなる特徴決定を、臨床バッチ４、５、及び６において実施した。６つの臨床バッチすべてで、整合した部位占有率が示された（表１１）。
表１１：Ｌｙｓ−Ｃペプチドマッピング及びＬＣ−ＭＳによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ１〜６のＮ−グリコシル化部位占有率
2021511297.tif 000018
【０５４４】
２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるＮ−結合型グリカン分析
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、単鎖分子あたり４つのＮ−グリコシル化部位を有し、そのすべてが分子のサイトカインドメインのＡｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３に位置している。部位占有率は、参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、３、４、５、及び６の４つのＮ−グリコシル化部位間で整合していることが示された。
【０５４５】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＮ−結合型グリカンの相対分布を、蛍光検出を備えたＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによって定量的に評価した。この方法では、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ酵素を用いた変性条件下でＮ−グリカンをタンパク質から切断した。遊離したグリカンを、蛍光ラベル２−ＡＡで誘導体化し、蛍光検出と組み合わせたＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによって分離及び検出した。
【０５４６】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチならびに臨床バッチ１、２、及び３で観察されたグリカンのクロマトグラムを図８Ａ及び図８Ｂに示す。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチの相対的Ｎ−結合型グリカン分布を表１２に提供し、図８Ｃに示す。図８Ｄは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチならびに臨床バッチ２、３、４、５、及び６の相対的なＮ−結合型グリカン分布を示す。Ｎ−結合型グリカンを、属性に従ってグループ化した（図８Ａ及び図８Ｂ）。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチのグリコシル化パターンとグリコシル化属性との整合性が示された。６つの臨床バッチすべてが、ピーク面積率（％）として表される同様の分布を示した（表１３）。これらの拡張特徴決定分析の結果は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチが整合したグリカン特性を有していることを示した。
【０５４７】
さらに、ガラクトース−α−１，３−ガラクトースの分析も、特徴決定の拡張の一部として実施した。高速陰イオン交換クロマトグラフィー−アンペロメトリック電気化学検出法（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）によって、ガラクトース−α−１，３−ガラクトースを定量的に評価した。この方法を使用した参照標準バッチ及び臨床バッチでは、ガラクトース−α−１，３−ガラクトースは検出されなかった。
表１２：２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の相対Ｎ−グリカン分布（ピーク面積％）
2021511297.tif 000019
2021511297.tif 000020
表１２：２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の相対Ｎ−グリカン分布（ピーク面積％）（続き）
2021511297.tif 000021
2021511297.tif 000022
表１２：２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ−ＵＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の相対Ｎ−グリカン分布（ピーク面積％）（続き）
2021511297.tif 000023
2021511297.tif 000024
表１３：２−ＡＡ  ＨＩＬＩＣ  ＵＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチ１〜６の相対的Ｎ−グリカン分布  
2021511297.tif 000025
2021511297.tif 000026
2021511297.tif 000027
2021511297.tif 000028
【０５４８】
部位特異的Ｎ−グリコシル化
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のサイトカインドメインのＡｓｎ２１  Ｎ−グリコシル化部位は、ＩＬ−２２受容体との相互作用界面またはその近傍に位置する（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  １６：１３３３−４４，２００８；Ｌｏｇｓｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４２（２）：５０３−１４，２００４）。
【０５４９】
Ａｓｎ２１部位でのＮ−結合型グリカンの相対分布を、Ｌｙｓ−Ｃペプチドマッピング及びＬＣ−ＭＳ分析によって決定した。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質ペプチドマップを生成するために、タンパク質を、塩酸グアニジニウムによる変性条件、ジチオトレイトールによる還元、及びヨード酢酸によるシステインのカルボキシメチル化に供した後、エンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃで消化した。得られたペプチドを、質量分析計に連結されたＵＨＰＬＣによって分離した。
【０５５０】
ＬＣ−ＭＳ法によるＬｙｓ−Ｃペプチドマッピングは、所与のＮ−グリコシル化部位におけるＮ−結合型グリカンの同定及び相対的存在量に関する情報を提供する。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の多くの糖ペプチドのイオン化効率には潜在的な違いがあるため、相対定量を使用してバッチ間の糖ペプチドの存在量を比較した。Ａｓｎ２１の相対的なＮ−結合型グリカン分布を図９に示す。Ｎ−結合型グリカンを、選択した主要なグリコシル化属性に従ってグループ化した。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の臨床バッチのＡｓｎ２１におけるグリコシル化パターンとグリコシル化属性との整合性が示された。
【０５５１】
ＮＡＮＡ含有量のシアル酸分析
Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）含有量を測定するためにシアル酸ＲＰ−ＨＰＬＣ法を使用し、これをバッチ出荷試験の一部として実施した。臨床バッチと参照標準バッチの定量的出荷データを表１４に並べて示す。シアル酸分析の結果から、バッチが、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質出荷仕様（８〜１２モル  ＮＡＮＡ／モル  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）に整合するＮＡＮＡ含有量を有していることが示された。さらに、Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）の分析を、特徴決定の拡張の一部として実施した。ＮＧＮＡの量は、参照標準バッチと臨床バッチの間で一貫して低いままであった（表１４）。
表１４：ＲＰ  ＨＰＬＣによるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＮ−アセチルノイラミン酸とＮ−グリコリルノイラミン酸の含有量
2021511297.tif 000029
略語：ＮＡＮＡ＝Ｎ−アセチルノイラミン酸；ＮＧＮＡ＝Ｎ−グリコリルノイラミン酸；ＲＰ−ＨＰＬＣ＝逆相高速液体クロマトグラフィー。
【０５５２】
構造的特徴決定
ジスルフィド結合は、タンパク質の高次構造に寄与する。コンセンサス配列から、サイトカインに２つ（Ｃｙｓ７−Ｃｙｓ９９及びＣｙｓ５６−Ｃｙｓ１４５）及びＦｃに２つ（Ｃｙｓ４５−Ｃｙｓ１０５及びＣｙｓ１５１−Ｃｙｓ２０９）の単鎖あたり合計４つの鎖内ジスルフィド結合が推定された。インタクトな分子では、単鎖あたり２つのシステイン残基が鎖間ジスルフィド結合に関与していると予想される。これらの結合はＦｃにあり、コンセンサス配列から推定することができる：２つの単鎖間の２つのジスルフィド結合（Ｃｙｓ１０−Ｃｙｓ１０及びＣｙｓ１３−Ｃｙｓ１３）。
【０５５３】
タンパク質の高次構造は、アミノ酸配列と翻訳後修飾によって決定される。したがって、タンパク質の一次構造の確認は、その構造特性の特徴決定の基礎である。分子の共有結合構造と機能特性の直接評価を提供する方法を、分子表面の特性の微妙な変化に対して感受性が高く、定量的な方法とともに使用した。円偏光二色性（ＣＤ）分光法を、特徴決定の拡張の一部として使用して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質における高次構造エレメントの存在を探した。αヘリックス及びβシートを含む二次構造の特徴は、ＣＤスペクトルの遠紫外線（ＵＶ）領域（１９０〜２５０ｎｍ）に現れる。これらのバンドは、タンパク質のバックボーンに沿ったペプチド結合の、タンパク質の残りの部分に対する相対的配向によって生じる。さらに、ＣＤスペクトルの近紫外領域（２５０〜３４０ｎｍ）は、疎水的な三次構造の接触に関与し得る芳香族残基（例えば、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン）のキラル配向の変化に関する情報を提供する。参照標準バッチ及び臨床バッチのスペクトルは互いに類似しており、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の高次構造に識別可能な差異はないことがＣＤ分析によって示された（図１０）。
【０５５４】
実施例２：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の効力及びシアリル化の効果
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質効力アッセイは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質がＩＬ−２２  ＲＡ１  ＥＣＤに結合する能力を測定する。このアッセイでは、様々な濃度のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準バッチ、対照、及び試料を、ＩＬ−２２  ＲＡ１  ＥＣＤでコーティングされた９６ウェルプレートに添加する。結合したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）抗体とテトラメチルベンジジン基質溶液で検出する。光学密度（ＯＤ）単位で表される結果を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度に対してプロットし、平行曲線プログラムを使用して、参照標準バッチに対する、測定されるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質試料（複数可）の効力を計算する。
【０５５５】
効力測定の結果から、バッチが整合した効力を有し、許容基準（４０％〜１３０％の相対効力）を満たし、意図する用途に適していることが示された（表１５）。
表１５：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の効力
2021511297.tif 000030
【０５５６】
シアリル化の存在及びレベルは、ＩＬ−２２などの糖タンパク質の相互作用に影響を与えることが知られている（Ｍａｒｃｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ３８２：１５１−９，２００１）。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質とＩＬ−２２受容体との相互作用に対するシアル酸の影響を調べるために、様々なレベルのシアル酸（アッセイの定量限界３ｍｏｌ／ｍｏｌ）を有する異なる開発バッチ由来のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質試料（０．７、４．６、８．１、１２．０、または１５．４ｍｏｌシアル酸／ｍｏｌ  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質）を生成し、結合アッセイ及び細胞ベースのレポーター遺伝子アッセイで試験した。細胞ベースのアッセイは、ＩＬ−２２受容体を内在的に発現する改変された安定的なｃｏｌｏ２０５細胞内でルシフェラーゼ発現を活性化するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の能力を測定するレポーター遺伝子アッセイである。改変された安定的なｃｏｌｏ２０５細胞レポーター細胞株では、レポーター遺伝子のプロモーター内での、シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）のそのＤＮＡ応答エレメントへの結合がホタルルシフェラーゼ発現を誘導する。アッセイでは、ｃｏｌｏ２０５レポーター遺伝子発現細胞を、９６ウェルアッセイプレート内で、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準、アッセイ対照、及び被験試料の調製希釈液とともにインキュベートした。時間の計られたインキュベーションの後、ルシフェラーゼ試薬をアッセイプレートのウェルに加え、発光プレートリーダーを使用してレポーター遺伝子活性を測定した。アッセイプレートの各ウェルで放出される光の量は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準、アッセイ対照、及び被験試料によって誘導されるルシフェラーゼの量に正比例する。発光単位（ＬＵＭ）として表される結果を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度に対してプロットし、平行線分析を使用して、参照標準に対する、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質試料（複数可）の活性を推定した。このアッセイの模式図を図１１に示す。様々なレベルのシアル酸を含む物質を生成するために、細胞培養及び精製プロセスを改変した。
【０５５７】
細胞ベースのアッセイで活性を測定した場合、シアル酸含有量と結合の間の相関は維持される（図１２Ａ）。相関関係の線は平行ではないが、同じ傾向を示す。
【０５５８】
結合アッセイと細胞ベースのアッセイを使用した効力試験の前に、低レベルのシアル酸バリアントと高シアル酸バリアントをシアリダーゼで処理すると、効力は、シアル酸単独では決定されないが、基礎となるグリカンによって影響を受けることが示された（表１６）。ＳＡバリアントを０．０１Ｕ／ｍｇのシアリダーゼＡとともにインキュベートし、プロセシングし、シアリダーゼＡを除去し、製剤化した。シアル酸（ＳＡ）バリアント１５（ｍｏｌ／ｍｏｌ）物質を脱シアル化して、ＳＡバリアント０  Ｈｉｇｈ物質を生成した。ＳＡバリアント４物質を脱シアル化して、ＳＡバリアント０  Ｌｏｗ物質を生成した。ＳＡバリアント０  Ｈｉｇｈ物質は、ＳＡレベル０  Ｌｏｗ物質に比べて、より多くの四分岐グリカン（すなわち、より多くの分岐、したがって「Ｈｉｇｈ」という表示）、より多くのガラクトシル化グリカン、及びより少ない末端ＧｌｃＮＡｃ含有グリカンを含む。換言すると、ＳＡバリアント０  Ｈｉｇｈ物質は、ＳＡバリアント０  Ｌｏｗ物質に比べて、より完全なグリカン構造を有する。より多くの分岐とガラクトシル化を有するＳＡバリアント０  Ｈｉｇｈ物質は、ガラクトース残基にのみ付加することができるシアル酸を、より多く付加することができる。分岐の増加とガラクトシル化の程度（利用可能なガラクトース残基）は、１５以上のシアル酸レベルの達成に関与していると考えられている。
表１６：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質シアル酸バリアントの効力  
2021511297.tif 000031
差異（％）：  アッセイ間の差異  （ｎ  ＝  ２）
＊効力の推定値
【０５５９】
シアル酸含有量と結合の関係をさらに調査するために、いくつかの臨床バッチをシアリダーゼで処理してシアル酸を除去した。脱シアル化した試料を結合アッセイで分析した。臨床バッチ（２、４、５、及び６）及び参照標準バッチの脱シアル化物質は、均一な効力値に収束せず、このことは他の製品品質属性が効力の差異に寄与していることを示唆している（図１２Ｂ）。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２  ＲＡ１への結合に影響を与え得る、総シアル酸含有量以外のグリカン属性として、分岐（分岐性）ならびにガラクトシル化及びシアリル化のレベルが挙げられる。臨床バッチに対する参照標準バッチの効力の増加は、より多くの末端マンノース及び末端ＧｌｃＮＡｃ、より少ない分岐、より少ないガラクトシル化、ならびにより少ないシアリル化に起因していたが、その結果、臨床バッチで観測されたグリカン構造に比べて、より完全性の低いグリカン構造であったことが示された。すべての臨床バッチについて、グリコシル化パターンとグリコシル化属性の整合性が示された。
【０５６０】
基礎となるグリカン構造の結合活性における役割を調べるために、上記と同じ臨床バッチをＰＮＧａｓｅ  Ｆ酵素で処理してすべてのＮ−グリカンを除去し、効力アッセイで分析した。ＰＮＧａｓｅ  Ｆを添加すること以外は試料と同じ処理で参照標準バッチから調製したプロセス対照試料の効力は、参照標準バッチの効力とは異なっていた。さらに、参照標準バッチと比較したプロセス対照の分子サイズの不均一性の差異が観測された。サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）での測定によると、プロセス対照には、参照標準バッチに比べて、より多くの高分子量（ＨＭＷ）形態、及びより少ない低分子量（ＬＭＷ）形態が含まれていた。プロセス対照のＳＥ−ＵＨＰＬＣクロマトグラムは、インキュベーション及び精製プロセスの後、グリカン組成の変化を示すピーク形状及び保持時間の変化を示した。
【０５６１】
参照標準バッチを含むすべての脱グリコシル化試料は、アッセイの有効範囲を超えたレベルに収束する結合レベルを有していた。すべての脱グリコシル化試料のＥＣ５０（図１３を参照のこと）は類似しており、シアル酸以外の基礎となるグリカンも結合活性に寄与していることが示唆された。ＳＥ−ＵＨＰＬＣピークの変化によって示されるように、プロセス対照の効力シフトは、グリカン組成の差異が原因である可能性がある。上記の結果から、効力アッセイが、ＩＬ−２２  ＲＡ１に結合するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の能力に影響を与える製品品質属性に高感受性であることが示された。
【０５６２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量が薬物動態（ＰＫ）及び血清ＲＥＧ３β  ＰＤ応答に及ぼす影響をマウスで評価した。ＣＤ１株の９６匹の雌マウスを６つの群の１つに割り当てた（ｎ＝１６マウス／群）。群１の動物には、単回ボーラス用量のビヒクル対照を与え、群２〜６の動物には、０．７、４．６、８．１、１２．０、または１５．４ｍｏｌシアル酸／ｍｏｌ  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸レベルを有する単回１，０００μｇ／ｋｇ（１ｍｇ／ｋｇ）ＩＶボーラス用量のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バリアントを尾静脈経由で与えた。投与後２１日までの様々な時点で、血清試料（ｎ＝４／時点）を採取し、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度及び血清ＲＥＧ３β濃度について分析した。個々の動物の血清濃度−時間データを使用して、非コンパートメントスパース分析を用いてＰＫパラメータを推定した。
【０５６３】
平均±ＳＤ（標準偏差）血清ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濃度−時間特性を図１４に示し、群平均ＰＫパラメータ推定値を表１７に示す。
表１７：ＣＤ１マウスにおけるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バリアントの１，０００μｇ／ｋｇ静脈内投与後の非コンパートメント薬物動態パラメータ推定
2021511297.tif 000032
【０５６４】
ＣＤ１マウスに、シアル酸レベル０．７、４．６、８．１、１２．０、または１５．４ｍｏｌ／ｍｏｌ  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を１，０００μｇ／ｋｇで単回ＩＶボーラス投与した後、平均クリアランス（ＣＬ）推定値は、それぞれ、９４５、３９９、１３２、４２．６、及び２５．１ｍＬ／ｋｇ／日であり；最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は、３，１００、６，８５０、１０，３００、１５，８００、及び２３，２００ｎｇ／ｍＬであり；定常状態（Ｖｓｓ）での分布容積の推定値は、２，４３０、７９７、３０１、１０７、及び７１．２ｍＬ／ｋｇであった。末端半減期の推定値は、シアル酸レベルが異なる物質間で類似しており、その範囲は１．９３〜２．６６日であった。全体的に、シアル酸レベルの増加に伴い、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の露出が増加し、Ｖｓｓが増加し、ＣＬが減少したが（図１５）、これは、おそらくは、露出したガラクトース残基のアシアロ糖タンパク質（ＡＳＧＰ）受容体による認識を介した肝臓取り込みによって媒介される（Ｓｔｅｆａｎｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３２７：３０８−１５，２００８）。
【０５６５】
ＲＥＧ３αは、腸上皮細胞及び膵腺房細胞によって産生される抗菌ペプチドであり、ＩＬ−２２Ｒ標的の関与を示す関連ＰＤバイオマーカーである。ＲＥＧ３βは、ヒト及びカニクイザルＲＥＧ３αのマウスオーソログである。平均±ＳＤ血清ＲＥＧ３β濃度−時間特性を図１６Ａに示す。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸レベルの増加に伴うＲＥＧ３βの血清レベルの単調増加が、ＣＤ１マウスでの１，０００μｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス投与後に観測された。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の曲線下面積の変化（ＡＵＣ）と、異なるシアル酸レベルでの血清Ｒｅｇ３βＡＵＣの対応する変化との関係性を図１６Ｂに示す。ＰＫ／ＰＤデータの組み合わせから、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸レベルの増加に伴い、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の露出と血清ＲＥＧ３β応答が増加することが示された。このことは、シアル酸含有量の増加に伴うＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の露出の増加が、シアル酸含有量の増加に伴うｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力の低下にもかかわらず、ＣＤ１マウスで１，０００μｇ／ｋｇ  ＩＶの用量で、ｉｎ  ｖｉｖｏでの血清ＲＥＧ３β  ＰＤ応答の増加をもたらしたことを示唆している。
【０５６６】
これらの試験は、結合効力アッセイが、予備的な細胞ベースのアッセイと整合する様式でシアル酸含有量に高感受性であることを示した。
【０５６７】
マウスＰＫ／ＰＤ試験でシアル酸含有量と  ＰＤ応答の間に観察された正の相関を考えると、シアル酸含有量と効力の間に観察された負の相関は、ｉｎ  ｖｉｖｏの薬理効果の低下をもたらさない。シアル酸の増加に伴い効力が低下した一方で、ｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス及び分布容積もまた減少し、より高い露出をもたらした（ＣｍａｘとＡＵＣの両方で）。ＰＫ／ＰＤデータの組み合わせは、シアル酸含有量がｉｎ  ｖｉｔｒｏ効力に正反対の影響を及ぼすにもかかわらず、シアル酸含有量の差異に起因するＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質露出の変化が、ｉｎ  ｖｉｖｏ血清ＲＥＧ３β  ＰＤ応答で観察された変化の主要因であったことを示した。
【０５６８】
実施例３：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の化学、製造プロセス、及びプロセス制御
バッチ及びスケールの定義
懸濁液に適応させたＣＨＯ細胞株を使用して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をバイオリアクター内で製造した。細胞の供給源はＭａｓｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ（ＭＣＢ）であったが、ＭＣＢの解凍物を使用して、いくつかの生産実行を供給し得る。回収細胞培養液（ＨＣＣＦ）の単一のバッチを、各細胞培養生産実行から生産した。ＨＣＣＦの１つ以上のバッチを精製及び最終調整によって処理して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の単一のバッチを生産した。すべての製造はｃＧＭＰに準拠した。本明細書に記載のプロセスを使用した生産は、表１８に記載するスケールで実施した。
表１８：細胞培養プロセスの製造スケール
2021511297.tif 000033
【０５６９】
細胞培養及び回収
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生産に使用する細胞培養プロセスは：シードトレイン、播種トレイン、生産、及び回収の４つの段階からなる。図１７の流れ図は、インプロセス制御（ＩＰＣ）の段階と、細胞培養及び回収プロセスの関連情報を示す。本節に記載するプロセスを使用した生産は、表１８に記載するスケールで実施した。プロセスパラメータを、表１９に記載する。
【０５７０】
細胞培養プロセスの記載
細胞培養培地
細胞培養段階では、異なるタイプの培地を使用したが、これらはすべて化学的に定義された培地である。シードトレイン段階ではメチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）を含有する選択培地を使用し、一方、播種段階及び生産段階では非選択培地を使用した。非選択的栄養供給培地も生産段階で使用した。生産細胞培養中に使用する基本培地は、外来性物質に関して動物由来原材料の使用に関連する潜在的なリスクを最小限に抑えるように選択された、化学的に定義された培地である。培地は、アミノ酸、ビタミン、微量元素、及び緩衝成分を含有する。
【０５７１】
すべての細胞培養培地は、無血清であり、化学的に定義されており、細胞保護剤、多糖類、及び浸透圧調整剤を含有する。プロセスでは、動物由来成分を含有する１つの原料を使用し：必要に応じて３０％シメチコンエマルジョンを加えて発泡を調節した。
【０５７２】
シードトレイン
シードトレインを開始するために、無血清ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のＭＣＢ由来の細胞アンプルを液体窒素貯蔵庫から取り出し、解凍し、これを用いて、スピナー、振盪フラスコ、またはシードトレインバイオリアクターのいずれかに播種した。
【０５７３】
細胞を解凍後に継代培養し、その後シードトレイン選択培地で継代した。シードトレインの培養条件を表１９に示す。シードトレインの細胞を使用して、第１の播種トレインのバイオリアクターに播種した。
【０５７４】
他の例では、ローリングシードトレインをＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生産に使用することができる。この例では、シードトレインを継続的に（特定の細胞齢まで）成長させて、播種トレインに播種する。
【０５７５】
播種トレイン
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生産培養に播種源を提供するために、非選択培地での継代培養により、シードトレインの細胞塊を増殖させ、より大きなサイズのバイオリアクターに入れる。シードトレインと生産段階の間の継代培養は、播種トレイン（Ｎ−２及びＮ−１培養）と呼ばれる。播種トレインの最大継代数は、現在４以下に制限されているが、非選択培地でのＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質発現の安定性に関する将来の研究によって定義されるであろう。播種トレインの培養条件を表１９に示す。
【０５７６】
生産段階
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の生産段階は、非選択培地を使用してバイオリアクター内で実施した。生産培養に播種するために、播種トレインの最終段階（Ｎ−１培養と呼ばれる）の細胞を、生産培地を含有する生産バイオリアクターに移した。細胞の生存率と生産性を維持するために、培養過程で栄養供給物を生産バイオリアクターに加えた。生産プロセスでは、温度変化を利用して培養物の生存率を高め、生産性を増強した。生産培養条件を表１９にまとめた。
【０５７７】
生産培養液を回収する前に、試料を採取して分析し、微生物及びウイルスに関する製品の安全性を確認した。
【０５７８】
プロセス制御
細胞培養のパフォーマンスインジケーター（例えば、細胞密度、生存率、及び力価）とプロセスパラメータ（培養ｐＨ、温度、及び溶存酸素）をモニタリングした。モニタリングし、調節したプロセスパラメータを表１９に示す。インプロセス制御試験の処置限界及び棄却限界を表２０に示す。バイオリアクター培養物のｐＨを、必要に応じて、ＣＯ２ガス（酸）及び／またはＮａ２ＣＯ３、ＮａＯＨ、または他の適切な塩基を加えて調整した。バイオリアクター培養物に消泡剤（シメチコンエマルジョン）を添加して、泡の形成を最小限に抑えた。すべての培地溶液を、使用前に滅菌グレードのメンブレンフィルター（孔径０．１μｍ）で濾過した。ｐＨと溶存酸素の調節に使用するすべてのガスを、使用前に滅菌グレードのメンブレンフィルター（孔径０．２２μｍ）で濾過した。インプロセス制御試験の実行及び棄却の限界を表２０に示す。製造プロセスは、流加培養プロセスを使用して動作するように設計された。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のプロセシングには中間体は存在していなかった。
表１９：各細胞培養プロセス段階のプロセスパラメータのターゲット
2021511297.tif 000034
表２０：制限付きインプロセス制御
2021511297.tif 000035
【０５７９】
プロセス関連の不純物
インプロセス制御試験の一環として、宿主細胞ＤＮＡ、残留プロテインＡ、及び宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を含むプロセス関連の不純物を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質で定期的にモニタリングした。
【０５８０】
本節では、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスにおける、ＭＳＸ、消泡剤（シメチコンエマルジョン）とも呼ばれるメチオニンスルホキシミン、またはポロクサマー１８８とも呼ばれるＫｏｌｌｉｐｈｏｒ  Ｐ１８８などの不純物の除去能力の評価について、不純物がプロセス中で許容可能な低いレベルまで大幅に希釈されていること（ＭＳＸ）、または不純物の濃度が精製プロセス中で許容可能な低いレベルまで大幅に減少していること（シメチコン及びポロクサマー１８８）を実証することにより説明する。
【０５８１】
選択圧のために、ＭＳＸを５０μＭのレベルでシードトレイン培養物に加えた。ＭＳＸは、播種トレインまたは生産バイオリアクターには加えず；したがって、生産培地中のＭＳＸの最大濃度は、最大容量と１．５ｇ／Ｌの最低予想力価に基づいて、８１μｇ／ＬまたはＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１ｍｇあたり５４ｎｇ  ＭＳＸである。精製プロセスにおいてＭＳＸのクリアランスがないと仮定した場合、潜在的に残存するＭＳＸの最大量は、第Ｉ相臨床試験で提案されている最大用量（４２ｍｇ）あたり２．３μｇ  ＭＳＸであろう。しかしながら、クロマトグラフィー及び限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）の工程により、ＭＳＸなどの小分子のレベルがさらに低下するだろうと予想された。
【０５８２】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスにおけるシメチコン及びポロクサマー１８８などのプロセス関連不純物を、アフィニティプールにおいて、第１のクロマトグラフィー工程の後に核磁気共鳴法（ＮＭＲ）によって測定した。シメチコン及びポロクサマー１８８は、アフィニティプールでのアッセイの定量限界（ＬＯＱ）（１０μｇ／ｍＬ）未満であった（表２１を参照のこと）。
表２１：アフィニティプール内のプロセス関連の不純物レベル
2021511297.tif 000036
【０５８３】
残留溶媒
クラス１またはクラス２の溶媒を、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の製造に使用した。低濃度の氷酢酸をＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製に使用した。残留溶媒（Ｑ３Ｃ）に関するＴｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｆｏｒ  Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ（ＩＣＨ）ガイドラインによれば、氷酢酸は毒性が低く、ヒトの健康に対するリスクが低い。
【０５８４】
回収
生産培養の最後に、細胞培養液を細胞から分離した。回収のために、生産バイオリアクター内で培養物を冷却した。その後、ディスクスタックセパレーターを使用した遠心分離によって細胞を除去し、続いて、使い捨て型のデプスフィルター及び微生物保持フィルターを使用して濾過した。
【０５８５】
ｍＡｂまたはｍＡｂ関連形態において、ジスルフィド結合の還元が生じる可能性がある。これまで、この現象はＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質では観察されていない。しかしながら、予防策として、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の開発中にいくつかの緩和戦略が実装されている。回収した細胞培養液からＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を以下に記載するように精製した。
【０５８６】
精製及び修飾反応
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製及び最終調整に使用するプロセス工程及びＩＰＣを図１８に示す。
【０５８７】
精製プロセスの工程で使用する緩衝液の組成を、表２２、表２３、表２４、表２５、及び表２６に示す。
表２２：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスで使用する界面活性剤ウイルス不活化溶液の組成
2021511297.tif 000037
表２３：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスで使用するアフィニティクロマトグラフィー緩衝液の組成
2021511297.tif 000038
表２４：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスで使用するマルチモーダル陰イオン交換クロマトグラフィー緩衝液の組成
2021511297.tif 000039
表２５：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスで使用する疎水性相互作用クロマトグラフィー緩衝液の組成
2021511297.tif 000040
表２６：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質精製プロセスで使用する限外濾過及び透析濾過緩衝液の組成  
2021511297.tif 000041
【０５８８】
界面活性剤によるウイルス不活化
界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の１０％ストック溶液を添加して、回収細胞培養液（ＨＣＣＦ）を生成し、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の終濃度を達成した。ＨＣＣＦを２０℃〜２４℃で≧１時間保持して潜在的なウイルス粒子を不活性化した。
【０５８９】
アフィニティクロマトグラフィー
アフィニティクロマトグラフィーの工程は、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴＳＵＲＥ（登録商標）樹脂を使用したｂｉｎｄ−ａｎｄ−ｓｔｅｐ−ｅｌｕｔｅプロセスであった。細胞分離及びトリトン添加後、ＨＣＣＦを平衡化カラムにアプライした。タンパク質性及び非タンパク質性の不純物を、カラムを洗浄することにより除去した。生成物を、低ｐＨの溶出緩衝液でカラムから回収した。アフィニティプーリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｐｏｏｌｉｎｇ）を容量単位で開始し、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて終了した。このクロマトグラフィー工程により、ＤＮＡ、宿主細胞タンパク質、エンドトキシン、ウイルス、小分子などの残留不純物を除去した。
【０５９０】
マルチモーダル陰イオン交換クロマトグラフィー
マルチモーダル陰イオン交換工程は、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を使用したｂｉｎｄ−ａｎｄ−ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｅｌｕｔｉｏｎプロセスであった。マルチモーダル陰イオン交換カラムを平衡化緩衝液で平衡化した後、伝導率とｐＨを調整したアフィニティプールをカラムにロードした。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が樹脂に結合した後、カラムを平衡化緩衝液で洗浄した。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、溶出緩衝液で塩勾配の増加を利用してカラムから溶出した。マルチモーダル陰イオン交換プールは、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて開始及び終了した。このクロマトグラフィー工程により、ＤＮＡ、宿主細胞タンパク質、ウイルス、及び高分子量形態（ＨＭＷＦ）などの残留不純物を除去した。
【０５９１】
小型ウイルス捕捉濾過によるウイルス除去
前述の工程の生成物プールを、使い捨て型の全量濾過小型ウイルス捕捉フィルター（ＶＩＲＥＳＯＬＶＥ（登録商標）Ｐｒｏ  Ｍａｇｎｕｓ）で濾過した。使用前及び使用後にフィルターの完全性試験を実施した。
【０５９２】
疎水性相互作用クロマトグラフィー
疎水性相互作用の工程は、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥＴＭ（登録商標）ＦＦ樹脂を使用したフロースルーモードで実施した。疎水性相互作用カラムを平衡化緩衝液で平衡化した後、前述の工程由来の導電率とｐＨ調整済み生成物プールをカラムにロードした。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をカラムに流し、次いで平衡化緩衝液で洗浄した。疎水性相互作用プーリングを、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて開始及び終了した。このクロマトグラフィー工程により、宿主細胞タンパク質、ウイルス、及びＨＭＷＦなどの残留不純物を除去した。
【０５９３】
限外濾過及びダイアフィルトレーション
１０ｋＤａの複合再生セルロース限外濾過膜を使用した限外濾過によって、生成物プールをおよそ２０ｇ／Ｌまで濃縮した。次いで、濃縮したプールをダイアフィルトレーションして（緩衝液交換して）ダイアフィルトレーション緩衝液に入れた。
【０５９４】
調整
限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールをダイアフィルトレーション緩衝液で希釈し、０．０１０Ｍリン酸ナトリウム、０．２４Ｍスクロース、０．００５Ｍメチオニン、０．０２％ポリソルベート２０，ｐＨ７．１中の終濃度１０．０±１．０ｇ／Ｌ  ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に調整した。
【０５９５】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の最終濾過、充填、及び保存
調整したＵＦＤＦプールを０．２２μｍのメンブレンで濾過して、ＩＬ−２０  Ｆｃ融合タンパク質を取得し、これを≦−２０℃以下で保存した。
【０５９６】
同工程のインプロセスプールの結合
生成物を含有するインプロセスプールは、プロセス工程間で室温または２℃〜８℃で保存してもよく、さらなる処理のために組み合わせてもよい。結果として生じるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の出荷が許容されるためには、組み合わせた個々のプールがそれぞれインプロセス制限を個別に満たされなければならない。プールを組み合わせて品質の問題に対処することは許容されない。
【０５９７】
再濾過
再濾過は、インプロセスプールのリスクを防ぐためにのみ許可された予防的な措置である。まれに、以下のような運用事象が原因でインプロセスプールがリスクにさらされている場合に、プロセスで再濾過が必要になる場合がある。
ａ．）濾過工程を除外した、前述の濾過工程での許容できない使用後フィルター完全性試験。
ｂ．）保管コンテナの完全性を損なう可能性のある機器の問題（例えば、バルブの故障または不適切なベントフィルターの取り付け）。
ｃ．）洗浄または蒸気処理した機器の有効な保持時間を超過
微生物混入の除去または任意の他の製品品質問題の解決のために、再濾過は許可されない。
【０５９８】
再処理
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質バッチの再処理は、明確に識別可能な機器の故障などの限られた状況下で実行してもよい。例は以下のとおりである：
ａ．）非一体型カラムベッド
ｂ．）勾配ポンプの欠陥
ｃ．）プロセスの説明に記載されている濾過工程の繰り返しをもたらす、前述の濾過工程の許容できない使用後フィルター完全性試験（例えば、深層濾過、ナノ濾過［小型ウイルス捕捉フィルター］、または最終的なＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質濾過）。
【０５９９】
本節に記載する製造工程の１つ以上を繰り返すことにより、再処理を実施した。再処理工程（複数可）に関連するすべてのＩＰＣ制限を満たさなければならない。
【０６００】
バッチの品質を調査し、再処理の影響を受けていないことを示さなければならない。したがって、すべてのＩＰＣ制限と出荷仕様を満たさなければならない。該当する場合、品質への影響を排除するために、再処理した物質の拡張された特徴決定と安定性を評価した。
【０６０１】
充填及び保管
調整したＵＦＤＦプールを、濾過して使い捨て型バイオプロセスバッグに入れて、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を生成し、これを、さらに処理するために２℃〜８℃で保存するか、または≦−２０℃以下で長期保存するために凍結させた。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、製造拠点で保管するか、または長期保管するために、もしくは出荷手順に従ってＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物を製造するために、調節された温度条件下で他の引受業者の拠点／医薬品製造受託機関の拠点に輸送してもよい。
【０６０２】
仕様
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に使用する出荷仕様及び承認基準を表２７に示す。
表２７：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の出荷仕様
2021511297.tif 000042
【０６０３】
実施例４：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準
本実施例は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準としての参照標準バッチ番号１の使用に関するデータを提供する。このバッチは、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準を必要とするすべての出荷アッセイ及び安定性アッセイで使用した。
【０６０４】
定性的、定量的、及び半定量的なインプロセス試料試験、ならびにＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物の出荷試験及び安定性試験において参照標準を使用し、整合した製品品質を確認した。参照標準は、適用可能な場合、系の適合性に対しても使用した。
【０６０５】
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の参照標準としての使用に適した許容可能な組成、純度、及び強度を示すために、適切な出荷試験を使用して各参照標準バッチを分析した。
【０６０６】
参照標準バッチ試験の結果を表２８に示し、これは、参照バッチの出荷時に実施した出荷試験手順に基づいた。参照標準バッチ１の効力に１００％の値を割り当てた。参照標準バッチの後続のバッチは、以前の参照と比較して定量化し、新規活性（すなわち、新規相対効力値）を割り当てた。
表２８：ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質参照標準バッチの出荷試験結果
2021511297.tif 000043
【０６０７】
実施例５：細胞培養期間に伴うシアル酸レベルの変化
ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸レベルに対する細胞培養期間の影響を評価した。ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を、本明細書に記載するように生産した（例えば、実施例３を参照のこと）。生産バイオリアクターでの培養中に、複数の時点でＲＰ−ＨＰＬＣを用いてシアル酸レベルを評価した。二量体ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりのシアル酸レベルは、細胞培養期間の増加に伴い減少した（図２０）。これらの結果は、１０日間の細胞培養期間では、シアル酸含有量は約８ｍｏｌ／ｍｏｌであるのに対し、１２日間の細胞培養後は、シアル酸含有量は約６ｍｏｌ／ｍｏｌであることを示している。例えば、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴＳＵＲＥ（登録商標）樹脂などのアフィニティクロマトグラフィー樹脂と、例えば、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を使用したマルチモーダル陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、本明細書中に記載する精製プロセス（実施例３を参照のこと）によってシアル酸含有量をさらに濃縮する。したがって、生産バイオリアクターにおいて生産フェーズで１０日間の細胞培養期間を使用して生産したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のおよそ８ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸含有量は、本明細書に記載の精製によって、８〜１２ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸（例えば、８〜９ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸）に濃縮することができる。同様に、生産バイオリアクターにおいて生産フェーズで１２日間の細胞培養期間を使用して生産したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のおよそ６ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸含有量もまた、本明細書に記載の精製によって、８〜１２ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸（例えば、８〜９ｍｏｌ／ｍｏｌのシアル酸）に濃縮することができる。
【０６０８】
これらのデータは、例えば、生産バイオリアクターでの培養中の細胞培養期間が、本明細書に記載するように生産したＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質のシアル酸含有量を調節するためのプロセスレバーとして使用し得ることを示している。細胞培養期間を本明細書に記載の精製プロセスと組み合わせて使用して、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりのシアル酸の平均含有量が８〜１２モル（例えば、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたり８〜９モルのシアル酸）であるＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質組成物に濃縮することができる。
【０６０９】
他の実施形態
本明細書に記載する技術のいくつかの実施形態は、以下のナンバリングされた実施形態のいずれかによって定義することができる：
１．リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを有するインターロイキン（ＩＬ）−２２  Ｆｃ融合タンパク質であって、前記ＩＬ−２２ポリペプチドがグリコシル化されており、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１０】
２．リンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含むＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質であって、前記ＩＬ−２２ポリペプチドがグリコシル化されており、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に比べて約４０％〜約１３０％の効力を有し、場合により、前記参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、表１２及び／または表１３に示すＮ−グリカン分布を有する、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１１】
３．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に比べて約８０％〜約１２０％の効力を有する、実施形態２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１２】
４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に比べて約６０％〜約１１０％の効力を有する、実施形態２または３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１３】
５．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する参照ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質に比べて約８０％〜約１００％の効力を有する、実施形態２〜４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１４】
６．効力を受容体結合アッセイまたは細胞ベースの結合アッセイで評価する、実施形態２〜５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１５】
７．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態２〜６のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１６】
８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１１モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１または７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１７】
９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１０モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１または８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１８】
１０．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１、８、または９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６１９】
１１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１または８〜１０のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２０】
１２．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１または８〜１０のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２１】
１３．前記シアル酸がＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である、実施形態１または８〜１１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２２】
１４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約８，０００ｎｇ／ｍＬ〜約１９，０００ｎｇ／ｍＬの最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）を有する、実施形態１〜１３のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２３】
１５．前記Ｃｍａｘを、ＣＤ１マウスへの約１，０００μｇ／ｋｇの前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の静脈内投与後に評価する、実施形態１４に記載の方法。
【０６２４】
１６．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約７，０００日・ｎｇ／ｍＬ〜約２５，０００日・ｎｇ／ｍＬの、０時間から最後の測定可能な時点までの血清濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣｌａｓｔ）を有する、実施形態１〜１５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２５】
１７．前記ＡＵＣｌａｓｔを、ＣＤ１マウスへの約１，０００μｇ／ｋｇの前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の静脈内投与後に評価する、実施形態１６に記載の方法。
【０６２６】
１８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、約４０ｍＬ／ｋｇ／日〜約１４０ｍＬ／ｋｇ／日のクリアランス（ＣＬ）を有する、実施形態１〜１７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２７】
１９．前記ＣＬを、ＣＤ１マウスへの約１，０００μｇ／ｋｇの前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の静脈内投与後に評価する、実施形態１８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２８】
２０．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、Ｎ−グリコシル化されている、実施形態１〜１９のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６２９】
２１．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、単鎖構造、二分岐構造、三分岐構造、及び／または四分岐構造を有するＮ−グリカンを含む、実施形態２０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３０】
２２．前記Ｎ−グリカンの約０．１％〜約２％が、単鎖構造を有する、実施形態２１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３１】
２３．前記Ｎ−グリカンの約０．５％〜約１．５％が、単鎖構造を有する、実施形態２２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３２】
２４．前記Ｎ−グリカンの約１％が、単鎖構造を有する、実施形態２３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３３】
２５．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約２５％が、二分岐構造を有する、実施形態２１〜２４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３４】
２６．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約２１％が、二分岐構造を有する、実施形態２５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３５】
２７．前記Ｎ−グリカンの約１７％が、二分岐構造を有する、実施形態２６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３６】
２８．前記Ｎ−グリカンの約２５％〜約４０％が、三分岐構造を有する、実施形態２１〜２７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３７】
２９．前記Ｎ−グリカンの約２８％〜約３５％が、三分岐構造を有する、実施形態２８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３８】
３０．前記Ｎ−グリカンの約３１％が、三分岐構造を有する、実施形態２９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６３９】
３１．前記Ｎ−グリカンの約３０％〜約５１％が、四分岐構造を有する、実施形態２１〜３０のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４０】
３２．前記Ｎ−グリカンの約３５％〜約４８％が、四分岐構造を有する、実施形態３１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４１】
３３．前記Ｎ−グリカンの約４２％が、四分岐構造を有する、実施形態３２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４２】
３４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、０、１、２、３、または４つのガラクトース部分を有するＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜３３のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４３】
３５．前記Ｎ−グリカンの約９％〜約３２％が、ガラクトース部分を有さない、実施形態３４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４４】
３６．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が、ガラクトース部分を有さない、実施形態３５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４５】
３７．前記Ｎ−グリカンの約２１％が、ガラクトース部分を有さない、実施形態３６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４６】
３８．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が、１つのガラクトース部分を有する、実施形態３４〜３７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４７】
３９．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約１６％が、１つのガラクトース部分を有する、実施形態３８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４８】
４０．前記Ｎ−グリカンの約１４％が、１つのガラクトース部分を有する、実施形態３９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６４９】
４１．前記Ｎ−グリカンの約８％〜約２５％が、２つのガラクトース部分を有する、実施形態３４〜４０のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５０】
４２．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約１６％が、２つのガラクトース部分を有する、実施形態４１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５１】
４３．前記Ｎ−グリカンの約１３％が、２つのガラクトース部分を有する、実施形態４２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５２】
４４．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約２５％が、３つのガラクトース部分を有する、実施形態３４〜４３のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５３】
４５．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２２％が、３つのガラクトース部分を有する、実施形態４４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５４】
４６．前記Ｎ−グリカンの約１９％が、３つのガラクトース部分を有する、実施形態４５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５５】
４７．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約３０％が、４つのガラクトース部分を有する、実施形態３４〜４６のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５６】
４８．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が、４つのガラクトース部分を有する、実施形態４７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５７】
４９．前記Ｎ−グリカンの約２４％が、４つのガラクトース部分を有する、実施形態４８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５８】
５０．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、０、１、２、３、または４つのシアル酸部分を有するＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜４９のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６５９】
５１．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約３５％が、シアル酸部分を有さない、実施形態５０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６０】
５２．前記Ｎ−グリカンの約２０％〜約３０％が、シアル酸部分を有さない、実施形態５１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６１】
５３．前記Ｎ−グリカンの約２４％が、シアル酸部分を有さない、実施形態５２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６２】
５４．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、１つのシアル酸部分を有する、実施形態５０〜５３のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６３】
５５．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が、１つのシアル酸部分を有する、実施形態５４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６４】
５６．前記Ｎ−グリカンの約２０％が、１つのシアル酸部分を有する、実施形態５５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６５】
５７．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、２つのシアル酸部分を有する、実施形態５０〜５６のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６６】
５８．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％が、２つのシアル酸部分を有する、実施形態５７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６７】
５９．前記Ｎ−グリカンの約２１％が、２つのシアル酸部分を有する、実施形態５８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６８】
６０．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％が、３つのシアル酸部分を有する、実施形態５０〜５９のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６６９】
６１．前記Ｎ−グリカンの約１２％〜約２４％が、３つのシアル酸部分を有する、実施形態６０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７０】
６２．前記Ｎ−グリカンの約１７％が、３つのシアル酸部分を有する、実施形態６１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７１】
６３．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、４つのシアル酸部分を有する、実施形態５０〜６２のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７２】
６４．前記Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が、４つのシアル酸部分を有する、実施形態６３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７３】
６５．前記Ｎ−グリカンの約９％が、４つのシアル酸部分を有する、実施形態６４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７４】
６６．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端マンノース部分を有する約０％〜約１０％のＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜６５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７５】
６７．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約４％が、末端マンノース部分を有する、実施形態６６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７６】
６８．前記Ｎ−グリカンの約２％が、末端マンノース部分を有する、実施形態６７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７７】
６９．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）部分を有する約３０％〜約５５％のＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜６８のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７８】
７０．前記Ｎ−グリカンの約３５％〜約５０％が、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態６９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６７９】
７１．前記Ｎ−グリカンの約４２％が、末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８０】
７２．前記Ｎ−グリカンが、１、２、３、または４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態６９〜７１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８１】
７３．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８２】
７４．前記Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８３】
７５．前記Ｎ−グリカンの約１０％が、１つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８４】
７６．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約２０％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７２〜７５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８５】
７７．前記Ｎ−グリカンの約５％〜約１５％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８６】
７８．前記Ｎ−グリカンの約１０％が、２つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８７】
７９．前記Ｎ−グリカンの約５％〜約２５％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７２〜７８のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８８】
８０．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約２０％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６８９】
８１．前記Ｎ−グリカンの約１４％が、３つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態８０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９０】
８２．前記Ｎ−グリカンの約０％〜約１５％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態７２〜８１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９１】
８３．前記Ｎ−グリカンの約４％〜約１２％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態８２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９２】
８４．前記Ｎ−グリカンの約７％が、４つの末端ＧｌｃＮＡｃ部分を有する、実施形態８３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９３】
８５．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、末端ガラクトース（Ｇａｌ）部分を有する約２０％〜約４５％のＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜８４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９４】
８６．前記Ｎ−グリカンの約２５％〜約３５％が、末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９５】
８７．前記Ｎ−グリカンの約３２％が、末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９６】
８８．前記Ｎ−グリカンが、１、２、または３つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８５〜８７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９７】
８９．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約３０％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９８】
９０．前記Ｎ−グリカンの約２０％〜約２５％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０６９９】
９１．前記Ｎ−グリカンの約２３％が、１つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態９０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７００】
９２．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約１５％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８８〜９１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０１】
９３．前記Ｎ−グリカンの約２％〜約１２％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態９２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０２】
９４．前記Ｎ−グリカンの約７％が、２つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態９３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０３】
９５．前記Ｎ−グリカンの約０．１％〜約６％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態８８〜９４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０４】
９６．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約３％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態９５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０５】
９７．前記Ｎ−グリカンの約２％が、３つの末端Ｇａｌ部分を有する、実施形態９６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０６】
９８．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、ガラクトースＮ−アセチルグルコサミン（ＬａｃＮＡｃ）リピートを有するＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜９７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０７】
９９．前記Ｎ−グリカンの約１％〜約１０％が、ＬａｃＮＡｃリピートを有する、実施形態９８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０８】
１００．前記Ｎ−グリカンの約３％〜約６％が、ＬａｃＮＡｃリピートを有する、実施形態９９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７０９】
１０１．前記Ｎ−グリカンの約５％が、ＬａｃＮＡｃリピートを有する、実施形態１００に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１０】
１０２．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、フコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜１０１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１１】
１０３．前記Ｎ−グリカンの約６０％〜約８０％がフコシル化されている、実施形態１０２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１２】
１０４．前記Ｎ−グリカンの約６５％〜約７５％が、フコシル化されている、実施形態１０３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１３】
１０５．前記Ｎ−グリカンの約７０％がフコシル化されている、実施形態１０４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１４】
１０６．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、アフコシル化Ｎ−グリカンを含むＮ−グリカンを含む、実施形態２０〜１０５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１５】
１０７．前記Ｎ−グリカンの約１０％〜約３０％がアフコシル化されている、実施形態１０６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１６】
１０８．前記Ｎ−グリカンの約１５％〜約２５％がアフコシル化されている、実施形態１０７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１７】
１０９．前記Ｎ−グリカンの約２０％がアフコシル化されている、実施形態１０８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１８】
１１０．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及び／またはＡｓｎ１４３でグリコシル化されている、実施形態１〜１０９のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７１９】
１１１．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１、Ａｓｎ３５、Ａｓｎ６４、及びＡｓｎ１４３でグリコシル化されている、実施形態１１０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２０】
１１２．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１における前記グリコシル化の占有率が、約７０％〜約９０％である、実施形態１１０または１１１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２１】
１１３．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１における前記グリコシル化の占有率が、約７５％〜約８５％である、実施形態１１２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２２】
１１４．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ２１における前記グリコシル化の占有率が、約８２％である、実施形態１１３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２３】
１１５．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５における前記グリコシル化の占有率が、約９０％〜約１００％である、実施形態１１１〜１１４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２４】
１１６．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５における前記グリコシル化の占有率が、約９５％〜約１００％である、実施形態１１５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２５】
１１７．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ３５における前記グリコシル化の占有率が、約１００％である、実施形態１１６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２６】
１１８．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４における前記グリコシル化の占有率が、約９０％〜約１００％である、実施形態１１１〜１１７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２７】
１１９．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４における前記グリコシル化の占有率が、約９５％〜約１００％である、実施形態１１８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２８】
１２０．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ６４における前記グリコシル化の占有率が、約１００％である、実施形態１１９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７２９】
１２１．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３における前記グリコシル化の占有率が、約１５％〜約４５％である、実施形態１１１〜１２０のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３０】
１２２．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３における前記グリコシル化の占有率が、約２５％〜約３５％である、実施形態１２１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３１】
１２３．配列番号４のアミノ酸残基Ａｓｎ１４３における前記グリコシル化の占有率が、約３３％である、実施形態１２２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３２】
１２４．前記Ｆｃ領域が、グリコシル化されていない、実施形態１〜１２３のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３３】
１２５．前記Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基がＧｌｙである、実施形態１２４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３４】
１２６．前記Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９７位のアミノ酸残基がＡｌａである、実施形態１２４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３５】
１２７．前記Ｆｃ領域のＥＵインデックスにおける２９９位のアミノ酸残基が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、またはＶａｌである、実施形態１２４〜１２６のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３６】
１２８．前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態１〜１２７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３７】
１２９．前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、実施形態１２８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３８】
１３０．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１〜１２９のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７３９】
１３１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１３０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４０】
１３２．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１３１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４１】
１３３．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１３２に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４２】
１３４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１３３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４３】
１３５．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態１〜１３４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４４】
１３６．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列を有する、実施形態１３５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４５】
１３７．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列からなる、実施形態１３６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４６】
１３８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１０のアミノ酸配列を有する、実施形態１３５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４７】
１３９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１０のアミノ酸配列からなる、実施形態１３８に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４８】
１４０．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態１３５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７４９】
１４１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列からなる、実施形態１４０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５０】
１４２．前記Ｆｃ領域が、Ｎ−グリコシル化されていない、実施形態１２４〜１４１のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５１】
１４３．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質二量体である、実施形態１〜１４２のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５２】
１４４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質単量体である、実施形態１〜１４２のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５３】
１４５．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、ヒトＩＬ−２２ポリペプチドである、実施形態１〜１４４のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５４】
１４６．前記ＩＬ−２２ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を有する、実施形態１４５に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５５】
１４７．前記リンカーが、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）を有する、実施形態１〜１４６のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５６】
１４８．前記リンカーが、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号４４）からなる、実施形態１４７に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５７】
１４９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２受容体に結合する、実施形態１〜１４８のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５８】
１５０．前記ＩＬ−２２受容体がヒトＩＬ−２２受容体である、実施形態１４９に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７５９】
１５１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２ＲＡ１及び／またはＩＬ−１０Ｒ２に結合する、実施形態１４９または１５０に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６０】
１５２．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２ＲＡ１に結合する、実施形態１５１に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６１】
１５３．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を培養する工程を含む方法によって産生される、実施形態１〜１５２のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６２】
１５４．前記方法が、細胞培養物または培養培地から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を取得する工程をさらに含む、実施形態１５３に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６３】
１５５．前記宿主細胞がＣＨＯ細胞である、実施形態１５３または１５４に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６４】
１５６．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮＧＮＡ約５モル未満のＮＧＮＡ含有量を有する、実施形態１〜１５５のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６５】
１５７．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりＮＧＮＡ１モル未満のＮＧＮＡ含有量を有する、実施形態１５６に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質。
【０７６６】
１５８．実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【０７６７】
１５９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１５８に記載の医薬組成物。
【０７６８】
１６０．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１０モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１５８または１５９に記載の医薬組成物。
【０７６９】
１６１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１５８〜１６０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７０】
１６２．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１５８〜１６１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７１】
１６３．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１５８〜１６２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７２】
１６４．前記シアル酸がＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である、実施形態１５８〜１６３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７３】
１６５．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態１５８〜１６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７４】
１６６．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列を有する、実施形態１６５に記載の医薬組成物。
【０７７５】
１６７．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態１６５に記載の医薬組成物。
【０７７６】
１６８．追加の治療薬をさらに含む、実施形態１５８〜１６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７７】
１６９．ゲル化剤をさらに含む、請求項１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７７８】
１７０．前記ゲル化剤が多糖である、実施形態１６９に記載の医薬組成物。
【０７７９】
１７１．前記ゲル化剤がセルロース系薬剤である、実施形態１６９または１７０に記載の医薬組成物。
【０７８０】
１７２．前記ゲル化剤が、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー、アルギン酸塩、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである、実施形態１６９〜１７１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【０７８１】
１７３．前記ゲル化剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、実施形態１７２に記載の医薬組成物。
【０７８２】
１７４．前記医薬組成物が局所投与用である、実施形態１７３に記載の医薬組成物。
【０７８３】
１７５．実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法。
【０７８４】
１７６．前記ＩＢＤが、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、実施形態１７５に記載の方法。
【０７８５】
１７７．前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、実施形態１７６に記載の方法。
【０７８６】
１７８．前記潰瘍性大腸炎が、中等度〜重度の潰瘍性大腸炎である、実施形態１７７に記載の方法。
【０７８７】
１７９．前記ＩＢＤがクローン病である、実施形態１７６に記載の方法。
【０７８８】
１８０．それを必要とする対象における、腸内の微生物感染の抑制、微生物感染中の腸内の杯細胞の保存、上皮細胞の完全性、上皮細胞の増殖、上皮細胞の分化、上皮細胞の遊走または腸内の上皮の創傷治癒の増強方法であって、前記方法が、実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【０７８９】
１８１．前記上皮細胞が、腸内の上皮細胞である、実施形態１８０に記載の方法。
【０７９０】
１８２．実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象における急性腎疾患または急性膵炎の治療方法。
【０７９１】
１８３．実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１７４のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象における創傷治癒の加速または改善方法。
【０７９２】
１８４．前記創傷が、慢性創傷または感染創である、実施形態１８３に記載の方法。
【０７９３】
１８５．前記対象が糖尿病である、実施形態１８３または１８４に記載の方法。
【０７９４】
１８６．前記糖尿病対象が、ＩＩ型糖尿病に罹患している、実施形態１８５に記載の方法。
【０７９５】
１８７．前記創傷が糖尿病性足部潰瘍である、実施形態１８３〜１８６のいずれか一項に記載の方法。
【０７９６】
１８８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または前記医薬組成物を、完全な創傷閉鎖があるまで投与する、実施形態１８３〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
【０７９７】
１８９．それを必要とする対象における心血管病態の予防方法または治療方法であって、前記病態が、アテローム性動脈硬化巣形成症の病状を含み、前記方法が、実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記予防方法または治療方法。
【０７９８】
１９０．前記心血管疾患が、冠動脈疾患、冠微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、または慢性腎疾患である、実施形態１８９に記載の方法。
【０７９９】
１９１．アテローム性動脈硬化巣形成症の進行を遅延させるか、またはアテローム性動脈硬化症の徴候を予防することをさらに含む、実施形態１８９または１９０に記載の方法。
【０８００】
１９２．前記アテローム性動脈硬化症の徴候が、プラーク蓄積または血管炎症を含む、実施形態１９１に記載の方法。
【０８０１】
１９３．それを必要とする対象におけるメタボリックシンドロームの治療方法であって、前記方法が、実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【０８０２】
１９４．腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧症のうちの１つ以上を含む、メタボリックシンドロームに関連する１つ以上のリスク因子を低減することをさらに含む、実施形態１９３に記載の方法。
【０８０３】
１９５．前記対象における細菌リポ多糖のレベルを低下させることをさらに含む、実施形態１９３または１９４に記載の方法。
【０８０４】
１９６．それを必要とする対象における急性内毒素血症、敗血症、またはその両方の治療方法であって、前記方法が、実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または実施形態１５８〜１６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記治療方法。
【０８０５】
１９７．前記対象が、ＨＤＬ／ＬＤＬ脂質特性の変化を必要としている、実施形態１９３〜１９６のいずれか一項に記載の方法。
【０８０６】
１９８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１７５〜１９７のいずれか一項に記載の方法。
【０８０７】
１９９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１０モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１９８に記載の方法。
【０８０８】
２００．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約９モルの範囲のシアル酸含有量を有する、実施形態１９８または１９９のいずれか一項に記載の方法。
【０８０９】
２０１．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１９８〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【０８１０】
２０２．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約９モルのシアル酸含有量を有する、実施形態１９８〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【０８１１】
２０３．前記シアル酸がＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）である、実施形態１９８〜２０２のいずれか一項に記載の方法。
【０８１２】
２０４．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８、配列番号１０、または配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態１７５〜２０３のいずれか一項に記載の方法。
【０８１３】
２０５．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８のアミノ酸配列を有する、実施形態２０４に記載の方法。
【０８１４】
２０６．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列を有する、実施形態２０４に記載の方法。
【０８１５】
２０７．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、静脈内、皮下、腹腔内、または局所的に投与する、実施形態１７５〜２０６のいずれか一項に記載の方法。
【０８１６】
２０８．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、静脈内投与する、実施形態２０７に記載の方法。
【０８１７】
２０９．前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質または医薬組成物を、皮下投与する、実施形態２０７に記載の方法。
【０８１８】
２１０．前記対象に、少なくとも１つの追加の治療薬を共投与する、実施形態１７５〜２０９のいずれか一項に記載の方法。
【０８１９】
２１１．前記対象がヒトである、実施形態１７５〜２１０のいずれか一項に記載の方法。
【０８２０】
２１２．以下の工程を含む、実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の作製方法：
（ａ）実施形態１〜１５７のいずれか一項に記載のＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を保有する宿主細胞を提供し；
（ｂ）前記宿主細胞を、シードトレイン培地中でシードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養し；
（ｃ）前記シードトレインを播種培地に播種し、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養し；そして
（ｄ）前記播種トレインを、生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で培養し、前記生産培養物の前記宿主細胞が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それにより前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が作製される。
【０８２１】
２１３．以下の工程を含む、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の作製方法：
（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を保有する宿主細胞を提供し、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質はリンカーによってＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み；
（ｂ）前記宿主細胞を、シードトレイン培地中でシードトレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養し；
（ｃ）前記シードトレインを播種培地に播種し、播種トレイン培養物を形成するのに適した条件下で培養し；そして
（ｄ）前記播種トレインを、生産培地中で生産培養物を形成するのに適した条件下で培養し、前記生産培養物の前記宿主細胞が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を発現し、それにより前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が作製され、
その場合、前記ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化されており、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含量を有する。
【０８２２】
２１４．前記宿主細胞が、凍結した宿主細胞であり、工程（ａ）がさらに、前記凍結した宿主細胞をシードトレイン培地中で解凍することを含む、実施形態２１２または２１３に記載の方法。
【０８２３】
２１５．前記方法がさらに、工程（ｄ）の前に前記播種トレインを約１〜約１０回継代することを含む、実施形態２１２〜２１４のいずれか一項に記載の方法。
【０８２４】
２１６．前記播種トレインを工程（ｄ）の前に約２〜約６回継代する、実施形態２１５に記載の方法。
【０８２５】
２１７．前記播種トレインを工程（ｄ）の前に約２回継代する、実施形態２１６に記載の方法。
【０８２６】
２１８．前記シードトレイン培地が、前記宿主細胞を選択することができる選択剤を含む、実施形態２１２〜２１７のいずれか一項に記載の方法。
【０８２７】
２１９．前記選択剤が、メチオニンスルホキシミン、メトトレキサート、または抗生物質である、実施形態２１８に記載の方法。
【０８２８】
２２０．前記選択剤がメチオニンスルホキシミンである、実施形態２１９に記載の方法。
【０８２９】
２２１．前記選択剤が抗生物質である、実施形態２１９に記載の方法。
【０８３０】
２２２．前記抗生物質が、ブラストサイジン、ジェネティシン、ハイグロマイシンＢ、ピューロマイシン、ミコフェノール酸、またはゼオシンから選択される、実施形態２２１に記載の方法。
【０８３１】
２２３．前記シードトレイン培地、前記播種培地、及び／または前記生産培地が、消泡剤を含む、実施形態２１２〜２２２のいずれか一項に記載の方法。
【０８３２】
２２４．前記消泡剤が、シメチコンエマルジョン、消泡剤２０４、消泡剤Ａ、消泡剤Ｂ、消泡剤Ｃ、消泡剤Ｙ−３０、または消泡剤ＳＥ−１５である、実施形態２２３に記載の方法。
【０８３３】
２２５．前記消泡剤がシメチコンエマルジョンである、実施形態２２４に記載の方法。
【０８３４】
２２６．前記シードトレイン培地、前記播種培地、及び／または前記生産培地が、緩衝剤、細胞保護剤、多糖、及び／または浸透圧調節剤を含む、実施形態２１２〜２２５のいずれか一項に記載の方法。
【０８３５】
２２７．工程（ｂ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する、実施形態２１２〜２２５のいずれか一項に記載の方法。
【０８３６】
２２８．工程（ｂ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する、実施形態２２７に記載の方法。
【０８３７】
２２９．工程（ｂ）を、約３７℃の温度で実施する、実施形態２２８に記載の方法。
【０８３８】
２３０．工程（ｂ）を、スピナー、スピンチューブ、振盪フラスコ、またはシードトレインバイオリアクター内で実施する、実施形態２１２〜２２９のいずれか一項に記載の方法。
【０８３９】
２３１．工程（ｂ）を、シードトレインスピナー、使い捨て型バイオリアクター（例えば、ＷＡＶＥ  ＢＩＯＲＥＡＣＴＯＲ（商標）またはＡＭＢＲ（登録商標）バイオリアクター（例えば、ＡＭＢＲ（登録商標）１５バイオリアクター））、または振盪フラスコ内で実施する、実施形態２３０に記載の方法。
【０８４０】
２３２．工程（ｂ）が、継代あたり約１日〜約１２日の期間を有する、実施形態２３１に記載の方法。
【０８４１】
２３３．工程（ｂ）が、継代あたり約２日〜約７日の期間を有する、実施形態２３２に記載の方法。
【０８４２】
２３４．工程（ｂ）を、シードトレインバイオリアクター内で実施する、実施形態２３０のいずれか一項に記載の方法。
【０８４３】
２３５．前記シードトレイン培養物のｐＨが約６〜約８である、実施形態２３４に記載の方法。
【０８４４】
２３６．前記シードトレイン培養物のｐＨが約６．５〜約７．５である、実施形態２３５に記載の方法。
【０８４５】
２３７．前記シードトレイン培養物のｐＨが約７．１５である、実施形態２３６に記載の方法。
【０８４６】
２３８．前記シードトレイン培養物の溶存酸素が、約１５％〜約５０％である、実施形態２３４〜２３７のいずれか一項に記載の方法。
【０８４７】
２３９．前記シードトレイン培養物の溶存酸素が、約２０％〜約４０％である、実施形態２３８に記載の方法。
【０８４８】
２４０．前記シードトレイン培養物の溶存酸素が約３０％である、実施形態２３９に記載の方法。
【０８４９】
２４１．工程（ｂ）が、約１日〜約１０日の期間を有する、実施形態２３４〜２４０のいずれか一項に記載の方法。
【０８５０】
２４２．工程（ｂ）が、約２日〜約５日の期間を有する、実施形態２４１に記載の方法。
【０８５１】
２４３．工程（ｃ）を、約２５℃〜約４０℃の温度で実施する、実施形態２１２〜２４２のいずれか一項に記載の方法。
【０８５２】
２４４．工程（ｃ）を、約３５℃〜約３９℃の温度で実施する、実施形態２４３に記載の方法。
【０８５３】
２４５．工程（ｃ）を、約３７℃の温度で実施する、実施形態２４４に記載の方法。
【０８５４】
２４６．工程（ｃ）を、１つ以上のバイオリアクター内で実施する、実施形態２１２〜２４５のいずれか一項に記載の方法。
【０８５５】
２４７．工程（ｃ）を、３つまたは４つのバイオリアクター内で実施する、実施形態２４６に記載の方法。
【０８５６】
２４８．前記播種培養物のｐＨが、約６〜約８である、実施形態２４６または２４７に記載の方法。
【０８５７】
２４９．前記播種培養物のｐＨが、約６．５〜約７．５である、実施形態２４８に記載の方法。
【０８５８】
２５０．前記播種培養物のｐＨが約７．１である、実施形態２４９に記載の方法。
【０８５９】
２５１．前記播種培養物の溶存酸素が、約１５％〜約５０％である、実施形態２４６〜２５０のいずれか一項に記載の方法。
【０８６０】
２５２．前記播種培養物の溶存酸素が、約２０％〜約４０％である、実施形態２５１に記載の方法。
【０８６１】
２５３．前記播種培養物の溶存酸素が約３０％である、実施形態２５２に記載の方法。
【０８６２】
２５４．工程（ｃ）が、約１日〜約５日の期間を有する、実施形態２４６〜２５３のいずれか一項に記載の方法。
【０８６３】
２５５．工程（ｃ）が、約２日〜約３日の期間を有する、実施形態２５４に記載の方法。
【０８６４】
２５６．工程（ｄ）が、初期温度からシフト後温度への温度シフトを含む、実施形態２１２〜２５５のいずれか一項に記載の方法。
【０８６５】
２５７．前記初期温度が、約２５℃〜約４０℃である、実施形態２５６に記載の方法。
【０８６６】
２５８．前記初期温度が、約３５℃〜約３９℃である、実施形態２５７に記載の方法。
【０８６７】
２５９．前記初期温度が約３７℃である、実施形態２５８に記載の方法。
【０８６８】
２６０．前記シフト後温度が、約２５℃〜約４０℃である、実施形態２５６〜２５９のいずれか一項に記載の方法。
【０８６９】
２６１．前記シフト後温度が、約３０℃〜約３５℃である、実施形態２６０に記載の方法。
【０８７０】
２６２．前記シフト後温度が約３３℃である、実施形態２６１に記載の方法。
【０８７１】
２６３．前記温度シフトを、約１２時間〜約１２０時間の期間にわたって行う、実施形態２５６〜２６２のいずれか一項に記載の方法。
【０８７２】
２６４．前記温度シフトを、約４８時間〜約９６時間の期間にわたって行う、実施形態２６３に記載の方法。
【０８７３】
２６５．前記温度シフトを、約７２時間の期間にわたって行う、実施形態２６４に記載の方法。
【０８７４】
２６６．前記生産培養物のｐＨが、約６〜約８である、実施形態２１２〜２６５のいずれか一項に記載の方法。
【０８７５】
２６７．前記生産培養物のｐＨが、約６．５〜約７．５である、実施形態２６６に記載の方法。
【０８７６】
２６８．前記生産培養物のｐＨが約７．０である、実施形態２６７に記載の方法。
【０８７７】
２６９．工程（ｄ）を、生産バイオリアクター内で実施する、実施形態２１２〜２６８のいずれか一項に記載の方法。
【０８７８】
２７０．前記生産培養物の溶存酸素が、約１５％〜約５０％である、実施形態２６９に記載の方法。
【０８７９】
２７１．前記生産培養物の溶存酸素が、約２０％〜約４０％である、実施形態２７０に記載の方法。
【０８８０】
２７２．前記生産培養物の溶存酸素が約３０％である、実施形態２７１に記載の方法。
【０８８１】
２７３．工程（ｄ）が、約５日〜約２５日の期間を有する、実施形態２６９〜２７２のいずれか一項に記載の方法。
【０８８２】
２７４．工程（ｄ）が、約７日〜約１６日の期間を有する、実施形態２７３に記載の方法。
【０８８３】
２７５．工程（ｄ）が、約１２日の期間を有する、実施形態２７４に記載の方法。
【０８８４】
２７６．工程（ｄ）が、栄養供給によって栄養素を前記生産培養物に加えることをさらに含む、実施形態２１２〜２７５のいずれか一項に記載の方法。
【０８８５】
２７７．前記宿主細胞が、原核細胞または真核細胞である、実施形態２１２〜２７６のいずれか一項に記載の方法。
【０８８６】
２７８．前記宿主細胞が真核細胞である、実施形態２７７に記載の方法。
【０８８７】
２７９．前記真核細胞が哺乳類細胞である、実施形態２７８に記載の方法。
【０８８８】
２８０．前記哺乳類細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、実施形態２７９に記載の方法。
【０８８９】
２８１．前記ＣＨＯ細胞が、懸濁液に適合したＣＨＯ細胞である、実施形態２８０に記載の方法。
【０８９０】
２８２．以下の工程をさらに含む、実施形態２１２〜２８１のいずれか一項に記載の方法：
（ｅ）前記生産培養物から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を回収する。
【０８９１】
２８３．工程（ｅ）が、前記生産培養物を冷却することを含む、実施形態２８２に記載の方法。
【０８９２】
２８４．工程（ｅ）が、前記生産培養物を、約２℃〜約８℃に冷却することを含む、実施形態２８３に記載の方法。
【０８９３】
２８５．工程（ｅ）が、遠心分離によって前記生産培地から前記宿主細胞を除去して前記細胞培養液を形成することを含む、実施形態２８２〜２８４に記載の方法。
【０８９４】
２８６．工程（ｅ）が、前記細胞培養液を濾過することをさらに含む、実施形態２８５に記載の方法。
【０８９５】
２８７．以下の工程をさらに含む、実施形態２８２〜２８６のいずれか一項に記載の方法：
（ｆ）前記細胞培養液中の前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を精製する。
【０８９６】
２８８．工程（ｆ）が、以下のサブ工程を含む、実施形態２８７に記載の方法：
（ｉ）前記細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記アフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、前記アフィニティクロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合により前記アフィニティプール内のウイルスを不活化し；
（ｉｉ）前記アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により前記陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び
（ｉｉｉ）前記陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収して前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により前記疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを前記精製された生成物プールに加える。
【０８９７】
２８９．工程（ｆ）が、以下のサブ工程をさらに含む、実施形態２８８に記載の方法：
（ｉｖ）前記精製された生成物プールを濃縮して、濃縮生成物プールを形成する。
【０８９８】
２９０．工程（ｆ）が、以下のサブ工程をさらに含む、実施形態２８９に記載の方法：
（ｖ）精製された生成物プールを限外濾過する。
【０８９９】
２９１．限外濾過が、前記精製された生成物プールを１０ｋＤａの複合再生セルロース限外濾過膜で濾過することを含む、実施形態２９０に記載の方法。
【０９００】
２９２．工程（ｆ）が、以下のサブ工程をさらに含む、実施形態２８９〜２９１のいずれか一項に記載の方法：
（ｖｉ）前記濃縮生成物プールの前記緩衝液を交換して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む限外濾過プール及びダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）プールを形成する。
【０９０１】
２９３．前記濃縮生成物プールの前記緩衝液を、終濃度０．０１Ｍリン酸ナトリウム，ｐＨ７．２を含むダイアフィルトレーション緩衝液と交換する、実施形態２９２に記載の方法。
【０９０２】
２９４．工程（ｆ）が、以下のサブ工程をさらに含む、実施形態２９２または２９３に記載の方法：
（ｖｉｉ）前記ＵＦＤＦプールを製剤緩衝液で調整して、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む調整されたＵＦＤＦプールを形成する。
【０９０３】
２９５．サブ工程（ｉ）が、前記細胞培養液を前記アフィニティカラムに接触させる前に、界面活性剤を前記細胞培養液に加えることによりウイルスを不活化することをさらに含む、実施形態２８８〜２９４のいずれか一項に記載の方法。
【０９０４】
２９６．サブ工程（ｉ）が、前記アフィニティカラムに界面活性剤を加えることによりウイルスを不活化することを含む、実施形態２８８〜２９４のいずれか一項に記載の方法。
【０９０５】
２９７．前記界面活性剤が、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００またはＴＲＩＴＯＮ（登録商標）ＣＧ１１０である、実施形態２９５または２９６に記載の方法。
【０９０６】
２９８．前記界面活性剤の終濃度が、約０．０１％〜約２％（ｖ／ｖ）である、実施形態２９５〜２９７に記載の方法。
【０９０７】
２９９．前記界面活性剤の終濃度が、約０．１％〜約１％（ｖ／ｖ）である、実施形態２９８に記載の方法。
【０９０８】
３００．前記界面活性剤の終濃度が、約０．３％〜約０．５％（ｖ／ｖ）である、実施形態２９９に記載の方法。
【０９０９】
３０１．前記界面活性剤の終濃度が、約０．５％である、実施形態３００に記載の方法。
【０９１０】
３０２．前記ウイルス不活化を、約１２°〜約２５℃で実施する、実施形態２９５〜３０１のいずれか一項に記載の方法。
【０９１１】
３０３．ウイルスの不活化が、約０．５時間超の期間を有する、実施形態２８８〜３０２のいずれか一項に記載の方法。
【０９１２】
３０４．前記アフィニティクロマトグラフィー支持体が、プロテインＡ樹脂、プロテインＧ樹脂、またはＩＬ−２２受容体樹脂を含む、実施形態２８８〜３０３のいずれか一項に記載の方法。
【０９１３】
３０５．前記プロテインＡ樹脂がＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）樹脂である、実施形態３０４に記載の方法。
【０９１４】
３０６．前記洗浄緩衝液が、終濃度０．４Ｍリン酸カリウム，ｐＨ７．０を含む、実施形態２８８〜３０５のいずれか一項に記載の方法。
【０９１５】
３０７．前記第１の溶出緩衝液が、終濃度で、０．３Ｍ  Ｌ−アルギニン塩酸塩、０．０１３Ｍ  リン酸ナトリウム，ｐＨ３．８を含む、実施形態２８８〜３０６のいずれか一項に記載の方法。
【０９１６】
３０８．前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、マルチモーダル官能性樹脂を有する強陰イオン交換体を含む、実施形態２８８〜３０７のいずれか一項に記載の方法。
【０９１７】
３０９．前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体が、ＣＡＰＴＯ（商標）接着樹脂を含む、実施形態３０８に記載の方法。
【０９１８】
３１０．前記第１の平衡化緩衝液が、終濃度０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８を含む、実施形態２８８〜３０９のいずれか一項に記載の方法。
【０９１９】
３１１．前記第２の溶出緩衝液が勾配溶出緩衝液である、実施形態２８８〜３１０のいずれか一項に記載の方法。
【０９２０】
３１２．前記勾配溶出緩衝液が、前記勾配溶出緩衝液の緩衝液Ａとして０．０４Ｍ酢酸ナトリウム，ｐＨ５．８を、前記勾配の緩衝液Ｂとして０．０４Ｍ酢酸ナトリウム、０．３Ｍ硫酸ナトリウム  ｐＨ５．８を含み、前記勾配を１０％の緩衝液Ｂで開始する、実施形態３１１に記載の方法。
【０９２１】
３１３．前記第２の平衡化緩衝液が、終濃度０．０２５Ｍ  ＭＯＰＳ、０．３Ｍ硫酸ナトリウム，ｐＨ７．０を含む、実施形態２８８〜３１２のいずれか一項に記載の方法。
【０９２２】
３１４．以下を含む、ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質の精製方法：
（ａ）ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む細胞培養液を提供し、場合により前記細胞培養液中のウイルスを不活化し；
（ｂ）前記細胞培養液をアフィニティクロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記アフィニティクロマトグラフィー支持体を洗浄緩衝液で洗浄し、前記アフィニティクロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第１の溶出緩衝液で溶出してアフィニティプールを形成し、場合によりアフィニティプール内のウイルスを不活化し；
（ｃ）前記アフィニティプールを陰イオン交換クロマトグラフィー支持体に接触させ、場合により前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体を第１の平衡化緩衝液で洗浄し、前記陰イオン交換クロマトグラフィー支持体から前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を第２の溶出緩衝液で溶出して陰イオン交換プールを形成し、場合により前記陰イオン交換プールを濾過してウイルスを除去し；及び
（ｄ）前記陰イオン交換プールを疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体に接触させ、フロースルーを回収して前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質を含む精製された生成物プールを形成し、場合により前記疎水性相互作用クロマトグラフィー支持体を第２の平衡化緩衝液で洗浄し、フロースルーを回収し、これを前記精製された生成物プールに加える。
【０９２３】
３１５．前記ＩＬ−２２ポリペプチドがグリコシル化されており、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質が、前記ＩＬ−２２  Ｆｃ融合タンパク質１モルあたりシアル酸約８〜約１２モルのシアル酸含有量を有する、実施形態３１４に記載の方法。
【０９２４】
本明細書は、当業者が本発明の実施を可能とする上で十分なものであるとみなされる。前述の発明は、理解を明確にする目的で、例証及び実施例としてある程度詳細に説明してきたが、これらの記載及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。実際、本明細書中に示し、記載した改変に加えて、本発明の様々な改変が、前述の記載から当業者には明らかとなり、それらは添付の特許請求の範囲内にある。
【０９２５】
本明細書中で言及するすべての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に参照により援用されることを示すかのように、参照によりその全体が本明細書に援用される。矛盾する場合は、本明細書における任意の定義を含む本出願が優先する。
【図１Ａ】
2021511297.tif 000044
【図１Ｂ】
2021511297.tif 000045
【図１Ｃ】
2021511297.tif 000046
【図２】
2021511297.tif 000047
【図３−１】
2021511297.tif 000048
【図３−２】
2021511297.tif 000049
【図４】
2021511297.tif 000050
【図５−１】
2021511297.tif 000051
【図５−２】
2021511297.tif 000052
【図６】
2021511297.tif 000053
【図７−１】
2021511297.tif 000054
【図７−２】
2021511297.tif 000055
【図７−３】
2021511297.tif 000056
【図８−１】
2021511297.tif 000057
【図８−２】
2021511297.tif 000058
【図８−３】
2021511297.tif 000059
【図９】
2021511297.tif 000060
【図１０】
2021511297.tif 000061
【図１１】
2021511297.tif 000062
【図１２】
2021511297.tif 000063
【図１３】
2021511297.tif 000064
【図１４】
2021511297.tif 000065
【図１５】
2021511297.tif 000066
【図１６】
2021511297.tif 000067
【図１７】
2021511297.tif 000068
【図１８】
2021511297.tif 000069
【図１９】
2021511297.tif 000070
【図２０】
2021511297.tif 000071
【配列表】
2021511297000001.app
【国際調査報告】
2021511297.tif 000072
2021511297.tif 000073
2021511297.tif 000074
2021511297.tif 000075
2021511297.tif 000076
2021511297.tif 000077