(57)【要約】  本発明は、韓国微生物保存センターに寄託番号ＫＣＣＭ１２４６８Ｐとして寄託したラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＬＭ１０１６）の新規な菌株に関する。本発明の前記新規な菌株は、心血管系疾患、肥満、脂肪肝または糖尿病を治療または予防する効果を有する。  本発明は、前記菌株を含む組成物に関し、前記組成物は、医薬品、機能性食品、乳製品、発酵製品、食品添加物、動物用飼料などに用いられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＬＭ１０１６）菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）。
【請求項２】
ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＬＭ１０１６）菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）を含む、心血管系疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）が心血管系疾患のリスク因子であるＣＲＰ（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、中性脂肪またはコレステロール値を低下させることを特徴とする、請求項２に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記組成物が肥満、糖尿病または脂肪肝疾患を予防または治療する追加効果を有することを特徴とする、請求項２に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）が皮下脂肪内の炎症を減少させることを特徴とする、請求項４に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）が血中グルコース、インスリンまたはレプチン値を低下させることを特徴とする、請求項４に記載の薬学組成物。
【請求項７】
前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）が肝臓の重量または肝臓内の中性脂肪の量を減少させることを特徴とする、請求項４に記載の薬学組成物。
【請求項８】
ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）を含む、心血管系疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項９】
前記食品組成物は、機能性食品、乳製品、発酵製品または食品添加物であることを特徴とする、請求項８に記載の心血管系疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項１０】
ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株（ＫＣＣＭ１２４６８Ｐ）を含む、心血管系疾患の予防または改善のための動物用飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトバチルス・ファーメンタムの新規なＬＭ１０１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＬＭ１０１６）菌株に関する。本発明の前記新規な菌株は、心血管系疾患、肥満、脂肪肝及び糖尿病を同時に治療または予防する優れた効果を有する。
【０００２】
具体的には、本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患の独立したリスク因子であるｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）の数値を低下させるだけでなく、同時に中性脂肪及びコレステロールの血中濃度を低下させる効果を有する。また、体脂肪蓄積を抑制して過体重を予防し、血中グルコース濃度及びインスリン濃度を低下させてインスリン抵抗性を抑制することにより、糖尿病を予防及び治療する効果を有する。さらに、肝臓組織中の脂肪の蓄積を抑制して脂肪肝の発症抑制及び減少をもたらす効果も有する。
【背景技術】
【０００３】
心血管系疾患とは、心臓と主要動脈に発生する疾患を意味し、主要動脈の塞栓、伸張、破裂により出血が生じる疾患である。２０１５年の韓国統計庁の資料によれば、心血管系疾患の死亡者数は２８，２６０人で韓国における死亡原因の２位であり、単一疾患の死亡原因としては１位である。特に、男性は５５才以上、女性は６５才以上において循環器系疾患の死亡率が大幅に増加する。
【０００４】
代表的な心血管系疾患には、心筋梗塞症、狭心症、心不全、心房細動、脳卒中などがあり、主な原因として中年以上の年齢、高血圧、高脂血症、糖尿病、喫煙、運動不足、過体重などが挙げられる。よって、心筋梗塞や脳卒中を予防するために、血管疾患、糖尿病または高脂血症のある患者においては、スタチン系の薬物を用いてＬＤＬを減少させるのが最近の診療指針である。しかしながら、心筋梗塞や脳卒中の発症患者の半分以上が正常なＬＤＬ値を有することが確認された。
【０００５】
最近の研究結果によれば、炎症が動脈硬化の重要な病因であり、特にＣ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）が動脈硬化などの心血管系疾患の重要な病因であると報告されており、ＣＲＰが動脈硬化の過程に直接関連するという事実が周知されるにつれて、ＣＲＰが新たな心血管系疾患のバイオマーカーとして注目されてきている。
【０００６】
ＣＲＰは、心血管系疾患の独立したリスク因子であり、周知のｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒとは独立して作用し、最も重要なｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒの一つとして知られているＬＤＬコレステロールの数値に関係なく、心血管系疾患と直接関連を有するという様々な研究結果が発表されている。このような仮説は、２００８年に終了した前向き大規模臨床試験の結果により立証されたので、臨床試験で用いられたロスバスタチン（ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ）は、ＬＤＬ値に関係なく心血管系疾患を予防するための薬剤として、米国食品医薬品局をはじめとして様々な国から許可されている。
【０００７】
ＣＲＰは、酸化窒素の産生を抑制し、エンドテリンの分泌を増加させ、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭなどの付着分子とＭＣＰ−１などの化学走性因子を増加させることにより、血管内皮細胞の機能を低下させることができる。また、ＣＲＰは、単核球が血管壁内に移動するように刺激し、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインを分泌するように刺激する。ＣＲＰは、低密度リポタンパク質をオプソニン化してマクロファージが低密度リポタンパク質を貪食することを媒介し、組織因子（ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ）の産生を刺激し、プラスミノーゲン活性因子阻害剤（ＰＡＩ−１）を増加させて血栓形成を増進する。
【０００８】
心血管系疾患の一部は糖尿病の合併症として発症することが多く、糖尿病患者の７０％が心血管系合併症で死亡しており、糖尿病を有する人は心血管系疾患発症のリスクが最大で４倍に上昇することが知られている。血糖が上昇すると血管が徐々に狭くなり、結局は塞栓されて心血管系疾患が発症する。よって、血糖を適切に管理することは、糖尿病だけでなく、心血管系疾患の予防にも役立つ。
【０００９】
また、心血管系疾患は２型糖尿病患者の最も重要な死亡原因であり、糖尿病による合併症の発症は高血糖の程度と相関関係があり、高血糖が持続すると微小血管合併症及び大血管合併症の発症が増加することが知られている。
【００１０】
肥満は、摂取エネルギーと消費エネルギーの不均衡によるエネルギー代謝異常であり、その結果として脂肪細胞に中性脂肪が過度に蓄積された状態と定義される。肥満は、全世界的に問題となっている慢性疾患であり、効果的な治療方法がなく、増加傾向を続ける深刻な疾患である。肥満は、他の疾患とは異なり、単に外形上の問題だけでなく、体重増加と共に代謝性疾患、高血圧、糖尿病、高脂血症、動脈硬化症、虚血性心臓疾患、脂肪肝、胆石症などの関連疾患を伴うという特徴がある。
【００１１】
脂肪肝は、肝臓組織中に過度な脂肪、特に中性脂肪が蓄積されて発症し、一般に肝臓重量の５％以上の脂肪が蓄積されると脂肪肝と診断される。脂肪肝はアルコール性脂肪肝と非アルコール性脂肪肝に分類され、非アルコール性脂肪肝は、主に肥満、糖尿病、高脂血症などに関連して発症する。
【００１２】
非アルコール性脂肪肝が発症すると、そうでない場合よりも４２％高い動脈硬化数値を示すが、これは脂肪肝の程度が深刻であるほど動脈硬化のリスクが高くなることを示すので、脂肪肝の有無も心血管系疾患のリスク因子として考慮されることが知られている。
【００１３】
乳酸菌は、人体の消化器に共生して繊維質及び複合タンパク質を分解することにより、重要な栄養成分を生成する役割を果たす。このように、ヒトを含む動物の胃腸内で宿主の腸内微生物環境を改善し、宿主の健康に有益な影響を及ぼす生きた微生物を総じてプロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）という。
【００１４】
プロバイオティクスは、代謝及び免疫学的機能を調節する能力を有することが知られており、代表的なプロバイオティクスとしてはラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）菌株などが挙げられる。とりわけ、ラクトバチルス属菌株は、人体の腸内に生息する正常微生物叢の主要構成員として、健康な消化器官や膣内環境を維持するのに需要な役割を果たすことが知られている。
【００１５】
心血管系疾患、肥満、糖尿病などは現代人に非常に深刻な慢性疾患であると共に、これらの疾患には相互関連性があり、長期間薬物を服用しなければならないので、それによる副作用に対する不安を持つことが多い。
【００１６】
よって、心血管系疾患、肥満、糖尿病などの慢性疾患を薬物の副作用なく予防または治療できる薬物または方法が強く求められているが、現在までこのようなあらゆる疾患に対して効果的な薬物及び治療方法は見出されていなかった。
【００１７】
本発明者らは、プロバイオティクスにより、副作用なく前記慢性疾患を治療できる効果的な方法を見出すべく研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ridker PM, Cushman M, Stampfer MJ, Tracy RP, Hennekens CH. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N Engl J Med 1997; 336:973-9.
【非特許文献２】Ridker PM, Hennekens CH, Buring JE, Rifai N. C-reactive protein and other markers of inflammation in the prediction of cardiovascular disease in women. N Engl J Med 2000; 342:836-43.
【非特許文献３】Ridker PM, Rifai N, Rose L, Buring JE, Cook NR. Comparison of C-reactive protein and low-density lipoprotein cholesterol levels in the prediction of first cardiovascular events. N Engl J Med 2002; 347:1557-65.
【非特許文献４】Koenig W, Lowel H, Baumert J, Meisinger C. C-reactive protein modulates risk prediction based on the Framingham score: implications for future risk assessment: results from a large cohort study in southern Germany. Circulation 2004; 109:1349-53.
【非特許文献５】Pai JK, Pischon T, Ma J, et al. Inflammatory markers and the risk of coronary heart disease in men and women. N Engl J Med 2004; 351:2599-610.
【非特許文献６】Boekholdt SM, Hack CE, Sandhu MS, et al. C-reactive protein levels and coronary artery disease incidence and mortality in apparently healthy men and women: the EPIC-Norfolk prospective population study 1993-2003. Atherosclerosis 2006; 187:415-22.
【非特許文献７】Ballantyne CM, Hoogeveen RC, Bang H, et al. Lipoprotein-associated phospholipase A2, high-sensitivity C-reactive protein, and risk for incident coronary heart disease in middle-aged men and women in the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) study. Circulation 2004; 109:837-42.
【非特許文献８】Paul M Ridker, et al. Rosuvastatin to Prevent Vascular Events in Men and Women with Elevated C-Reactive Protein. N Engl J Med 2008; 359:2195-207.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明者らは、プロバイオティクスにより、副作用なく心血管系疾患、肥満、糖尿病などの慢性疾患を同時に効果的に治療する方法を見出すべく研究を重ねた結果、本発明を完成するに至た。
【００２０】
本発明者らは、様々なプロバイオティクスを研究した結果、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の新規な菌株であるＬＭ１０１６が血中ＣＲＰ、中性脂肪及びコレステロール値を低下させ、心血管系疾患を予防及び治療するのに効果を有するという事実を見出した。
【００２１】
また、本発明者らは、ＬＭ１０１６が体脂肪、皮下脂肪を減少させ、肥満の予防及び治療に効果を有するだけでなく、皮下脂肪内の炎症を減少させ、血糖、インスリン及びレプチンの数値を低下させるので、糖尿病にも効果を有することをさらに見出した。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）に寄託番号ＫＣＣＭ１２４６８Ｐとして寄託した新規なラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＬＭ１０１６）菌株に関する。
【００２３】
本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６は、２０１７年１２月１３日付けで韓国微生物保存センターにＫＦＣＣ１１７５６Ｐとして国内寄託（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ｄｅｐｏｓｉｔ）され、同一菌株が２０１９年３月２２日付けで韓国微生物保存センターにＫＣＣＭ１２４６８Ｐとして国際寄託（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎｌ  ｄｅｐｏｓｉｔ）された。
【００２４】
本発明は、前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株を含む、心血管系疾患に効果を有する組成物に関する。一実施形態において、本発明は、有効量のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株を心血管系疾患の予防、改善または治療を必要とする対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与することを含む、前記対象体において心血管系疾患を予防、改善または治療する方法を提供する。具体的には、本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患の独立したリスク因子であるＣＲＰ（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、中性脂肪またはコレステロール値を低下させる効果を有する。
【００２５】
本発明は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株を含む、心血管系疾患、肥満、糖尿病または脂肪肝疾患に効果を有する組成物に関する。一実施形態において、本発明は、有効量のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株を心血管系疾患、肥満、糖尿病または脂肪肝疾患の予防、改善または治療を必要とする対象体に投与することを含む、前記対象体において心血管系疾患、肥満、糖尿病または脂肪肝疾患を予防、改善または治療する方法を提供する。
【００２６】
具体的には、前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株が皮下脂肪内の炎症を減少させる効果を有する。また、前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株が血中グルコース、インスリンまたはレプチン値を低下させる効果を有する。
【００２７】
さらに、前記ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株が肝臓の重量または肝臓内の中性脂肪の量を減少させることにより、脂肪肝疾患を予防または治療する効果を有する。
【００２８】
本発明の組成物は、医薬品、機能性食品、乳製品、発酵製品、食品添加物または動物用飼料に用いられる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患のリスク因子であるＣＲＰ、血中中性脂肪及びコレステロール濃度を低下させることにより、高血圧、高脂血症、動脈硬化などの心血管系疾患の予防及び治療効果を発揮する。
【００３０】
また、前記新規なＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患の他の原因である肝臓組織中の脂肪の蓄積を抑制することにより、脂肪肝の予防及び治療効果を発揮する。
【００３１】
さらに、前記新規なＬＭ１０１６菌株は、体脂肪蓄積を抑制し、脂肪細胞を小さくすると共に、脂肪細胞内の炎症反応を抑制することにより、肥満及び肥満により生じる疾患の予防及び治療効果を発揮する。
【００３２】
特に、本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、血中グルコース濃度を迅速に低下させ、血中インスリンの濃度を低下させ、インスリン抵抗性を改善することにより、心血管系疾患の原因となる糖尿病の予防または治療効果を発揮する。
【００３３】
よって、本発明の新規なＬＭ１０１６菌株は、副作用なく心血管系疾患、脂肪肝、肥満及び糖尿病を同時に治療及び予防する優れた効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】第１群〜第３群のマウス血清中のＣ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、中性脂肪、総コレステロール値を示す図である。
【図２】第１群〜第３群の累積体重増加量の変化を示す図である。
【図３】第１群〜第３群のマウスの皮下脂肪、副睾丸脂肪、褐色脂肪量を示す図である。
【図４】マウスの皮下脂肪、副睾丸脂肪、褐色脂肪の大きさを示す図である。
【図５】副睾丸脂肪と褐色脂肪において各群をＨ＆Ｅ  ｓｔａｉｎで染色して脂肪組織の数及び脂肪細胞の大きさを示す図である。
【図６】第２群と第３群の副睾丸脂肪を免疫化学染色法で処理して脂肪の形状と細胞間の炎症反応を示す図である。
【図７】第１群〜第３群のマウスの血中グルコース値を示す図である。
【図８】血清中のレプチンとインスリンの値を示す図である。
【図９】肝臓の重量及び肝臓中の中性脂肪の量を示す図である。
【図１０】肝臓組織をＨ＆Ｅ  ｓｔａｉｎで染色して脂肪肝の有無を観察した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明者らは、ラクトバチルス・ファーメンタムの新規なＬＭ１０１６菌株を見出した。
【００３６】
また、前記新規なＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患のリスク因子であるＣＲＰ、血中中性脂肪及びコレステロール濃度を低下させることにより、高血圧、高脂血症、動脈硬化などの心血管系疾患の予防及び治療効果を発揮する。
【００３７】
さらに、前記新規なＬＭ１０１６菌株は、心血管系疾患の他の原因である肝臓組織中の脂肪の蓄積を抑制することにより、脂肪肝の予防及び治療効果を発揮する。
【００３８】
さらに、前記新規なＬＭ１０１６菌株は、体脂肪蓄積を抑制し、脂肪細胞を小さくすると共に、脂肪細胞内の炎症反応を抑制することにより、肥満及び肥満により生じる疾患の予防及び治療効果を発揮する。
【００３９】
特に、本発明のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、血中グルコース濃度を迅速に低下させ、血中インスリンの濃度を低下させ、インスリン抵抗性を改善することにより、心血管系疾患の原因となる糖尿病の予防または治療効果を発揮する。
【００４０】
よって、本発明の新規なＬＭ１０１６菌株は、副作用なく心血管系疾患、脂肪肝、肥満及び糖尿病を同時に治療及び予防する優れた効果を有し、このように様々な慢性疾患を同時に予防及び治療する効果を有するプロバイオティクス（ラクトバチルス・ファーメンタム）は、これまで見出されていなかった。
【００４１】
よって、本発明は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６の新規な菌株に関する。
【００４２】
また、本発明は、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６を含む、心血管系疾患、脂肪肝、肥満または糖尿病に効果を有する組成物に関する。
【００４３】
本発明の組成物は、医薬品、機能性食品、乳製品、発酵製品、食品添加物、動物用飼料などに用いられる。
【００４４】
具体的には、本発明の微生物は、投与経路に応じて選択される担体、賦形剤、希釈剤などとの混合により得られる錠剤、カプセルなどの単位形態で投与してもよい。
【００４５】
本発明の組成物に適した担体、賦形剤及び希釈剤には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油などが挙げられる。
【００４６】
本明細書の「組成物」とは、必ずしも医薬品として許可されたもののみ意味するのではなく、通常の機能性食品または健康補助食品をも含む概念である。
【００４７】
本明細書における「心血管系疾病」または「心血管系疾患」とは、心臓及び／または血管に影響を及ぼす疾病を意味する。特に、心血管系疾患には、不整脈、動脈硬化症、狭心症、心拍障害、心筋虚血、心筋梗塞、心臓または血管動脈瘤、血管炎、脳卒中、四肢／器官または組織の末梢閉塞性動脈疾患、脳／心臓／腎臓または他の器官もしくは組織の虚血を伴う再灌流損傷、耐毒性、手術または外傷性ショック、高血圧、心臓弁膜症、心不全、異常血圧、ショック、血管収縮、血管異常、単一器官または組織に限られた機能不全が含まれる。
【００４８】
他の実施形態において、本発明は、有効量のラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株を心血管系疾患、脂肪肝、肥満または糖尿病の予防、改善または治療を必要とする対象体に投与することを含む、前記対象体において心血管系疾患、脂肪肝、肥満または糖尿病を予防、改善または治療する方法を提供する。
【００４９】
本発明における「対象体」には、ヒト及び非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物には、哺乳類、非哺乳類などのあらゆる脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ウマなどが含まれる。
【００５０】
さらに他の実施形態において、本発明は、心血管系疾患、脂肪肝、肥満または糖尿病の予防、改善または治療のためのラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株の用途を提供する。
【００５１】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００５２】
ＬＭ１０１６の心血管系疾患因子抑制作用の実験
韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）に寄託番号ＫＣＣＭ１２４６８Ｐとして寄託したラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株の心血管系疾患因子に対する影響を評価するために、５週齢のＣ５７ＢＬ６／Ｊマウスを１週間馴化させ、その後３つの群に分けて実験を行った。
【００５３】
第１群は通常食餌（ＮＤ，３．１ｋｃａｌ／ｇ）を１２週間投与した群であり、第２群は最初の２週間はＮＤを投与し、残りの１０週間は高脂肪食餌（ＨＦＤ，５．２ｋｃａｌ／ｇ）を投与した群であり、第３群は第２群と同じ食餌を投与すると共に１２週間にわたってＬＭ１０１６（１０9ＣＦＵ／ｍｏｕｓｅ）を週５回経口投与した群である。
【００５４】
１２週間の投与終了後にマウスの心臓から血液を採取し、血中ＣＲＰ濃度、中性脂肪及びコレステロール濃度を測定した。その結果を表１及び図１に示す。
【００５５】
【表１】
2021516984.tif 000002
【００５６】
表１に示すように、血中ＣＲＰ濃度において、第２群では５．４ｎｇ／ｍｇであるのに対して、ＬＭ１０１６を投与した第３群では４．６ｎｇ／ｍｌに大幅に低下することが確認され、通常食餌を投与した第１群（４．３３ｎｇ／ｍｌ）と同程度の数値であった。
【００５７】
また、血中中性脂肪の濃度において、第１群は６２．０ｍｇ／ｄＬ、第２群は７９．０ｍｇ／ｄＬ、第３群は７４．９ｍｇ／ｄＬであり、第２群と第３群の数値の差は大きくなかったが、総コレステロール濃度において、第２群は１７６．０ｍｇ／ｄＬ、第３群は１２９．３ｍｇ／ｄＬであり、第３群は第２群と比較して総コレステロール濃度が４６．７ｍｇ／ｄＬ低下し、第１群と同程度の数値であることが確認された。
【００５８】
結果として、ラクトバチルス・ファーメンタムＬＭ１０１６菌株は、ＣＲＰ濃度及び総コレステロール濃度を低下させ、正常に回復させる優れた効果を有することが分かる。
【実施例２】
【００５９】
ＬＭ１０１６の体重増加率、体脂肪蓄積及び炎症反応抑制効果
実施例１における心血管系疾患の動物実験と同時に毎週体重を測定すると共に、１２週目に解剖し、各主要臓器を摘出して重量を測定した。
【００６０】
１．体重増加率の低下
０週目の体重を基準として各時間における累積体重増加量を測定した。その結果を表２及び図２に示す。
【００６１】
図２に示すように、高脂肪食餌を投与するまでの２週間の体重増加量は、３群全て緩やかな増加を示す累積増加量であった。第２群及び第３群において、高脂肪食餌を投与すると徐々に体重増加量に差が生じ、５週目からは明確な差が生じた。
【００６２】
【表２】
2021516984.tif 000003
【００６３】
表２から分かるように、１１週目において、第２群の体重増加量は２３．７７ｇ、第３群の体重増加量は１７．８９ｇであることが確認され、第３群は第２群よりも体重増加量が５．８８ｇ少なかった。
【００６４】
１２週目において、第２群の体重増加量は２３．９２ｇ、第３群の体重増加量は１８．８４ｇであることが確認され、第３群は第２群よりも体重増加量が５．０８ｇ少なく、第３群は第２群よりも体重増加率が１７％以上低かった。
【００６５】
結果として、高脂肪食餌を投与した第２群と、高脂肪食餌を投与すると同時にＬＭ１０１６を投与した第３群を比較すると、１週間後から体重増加率に差が生じ、時間が経つにつれて体重増加率の差が非常に大きくなることが分かった。よって、ＬＭ１０１６が体重減少効果を有することが分かる。
【００６６】
２．皮下脂肪、副睾丸脂肪及び褐色脂肪組織の減少
１２週間にわたって皮下脂肪、副睾丸脂肪及び褐色脂肪組織の重量を測定した。その結果を表３、図３及び図４に示す。
【００６７】
【表３】
2021516984.tif 000004
【００６８】
表３から分かるように、高脂肪食餌を投与すると同時にＬＭ１０１６を投与した第３群は、高脂肪食餌を投与した第２群よりも皮下脂肪、副睾丸脂肪、褐色脂肪組織における増加量が全て低いことが確認された。
【００６９】
また、副睾丸脂肪をＨ＆Ｅ  ｓｔａｉｎで染色した。その結果を図５に示す。図５に示すように、第２群において脂肪細胞の大きさが最も大きく、第３群の脂肪細胞の大きさは第２群の半分以下に減少したことが確認された。
【００７０】
前記脂肪球の大きさを測定した。その結果を表４に示す。
【００７１】
【表４】
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【００７２】
表４から分かるように、第１群は１５，８９６μｍ2、第２群は６２，１１４μｍ2、第３群は３５，６５２μｍ2であった。
【００７３】
３．皮下脂肪内の炎症反応の減少
皮下脂肪内の炎症反応をＦ４／８０抗体を用いて免疫化学染色法で確認した。その結果を図６に示す。同図から分かるように、高脂肪食餌を投与したマウスの皮下脂肪の細胞の形状は歪んでおり、これらの細胞間に炎症と思われる青の点が確認されたが、ＬＭ１０１６を投与した群においては、整った細胞の形状が維持されており、炎症反応もほとんど生じていないことが確認された。
【実施例３】
【００７４】
ＬＭ１０１６の抗糖尿病効果
１．血糖の減少
マウスのグルコース耐性を測定するために、各群に投与開始１１週間後にグルコースを投与し、各時間における血糖の変化を測定した。その結果を表５及び図７に示す。
【００７５】
【表５】
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【００７６】
表５から分かるように、高脂肪食餌を投与した第２群は、投与初期から１２０分まで、血糖値が最も高いことが確認された。それに対して、高脂肪食餌を投与すると同時にＬＭ１０１６を投与した第３群において、初期３０分間は血糖値が上昇したものの、その第３群の血糖値は第２群の血糖値よりも低かった。
【００７７】
また、投与３０分後からは第３群の血糖が急激に低下し、１２０分後には第１群とほとんど同じレベルまで低下することが確認された。
【００７８】
よって、ＬＭ１０１６は、血糖を減少させ、高脂肪食餌によるグルコース耐性を減少させる効果を有することが分かる。
【００７９】
２．インスリン及びレプチンの数値の減少
１２週間にわたって各群におけるインスリン及びレプチンの数値を測定した。その結果を表６及び図８に示す。
【００８０】
【表６】
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【００８１】
表６から分かるように、第３群のインスリン値は第２群のインスリン値の半分程度に大幅に低下することが確認された。
【００８２】
肥満の場合は、インスリン抵抗性が増加するのでインスリン分泌が増加するが、ＬＭ１０１６は、インスリン濃度を低下させることにより、高脂肪食餌によるインスリン抵抗性を減少させる効果を有することが分かる。
【００８３】
また、第２群のレプチン値は２５．７８ｎｇ／ｍｌ、第３群のレプチン値は１７．９２ｎｇ／ｍｌであり、第３群のレプチン値が第２群の数値と比較して大幅に減少したことが分かった。
【００８４】
レプチンは脂肪細胞から分泌される食欲調節ホルモンであり、脂肪組織に中性脂肪が蓄積されて脂肪細胞の大きさが大きくなると、レプチンの合成が促進されてレプチンの濃度が増加する。よって、ＬＭ１０１６を投与すると、中性脂肪及び脂肪細胞が減少することにより、第３群のレプチンの濃度が第２群の濃度に比べて大幅に減少することが分かる。
【実施例４】
【００８５】
脂肪肝の改善効果
１．肝臓の重量及び肝臓中の中性脂肪量
投与１２週間後に、各群においてマウスの肝臓を摘出し、肝臓の重量及び肝臓組織の中性脂肪量を測定した。その結果を表７及び図９に示す。
【００８６】
【表７】
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【００８７】
表７に示すように、第３群の肝臓の重量は、第２群と比較して大幅に減少し、第１群よりも減少することが確認された。
【００８８】
また、肝臓組織中の中性脂肪量を測定した結果、第２群は９．３３ｎｍｏｌ／ｗｈｏｌｅ  ｌｉｖｅｒ、第３群は４．２０ｎｍｏｌ／ｗｈｏｌｅ  ｌｉｖｅｒであり、第３群の中性脂肪量の数値は、第２群の数値の半分以下に大幅に減少することが分かった。さらに、第２群の中性脂肪量の数値は、第１群の数値よりも低かった。
【００８９】
よって、過体重であるほど体内の脂肪代謝が異常に起こって肝臓内に脂質成分が蓄積され、肝臓の重量及び肝臓組織の中性脂肪量が増加するが、ＬＭ１０１６菌株は、肝臓における脂質代謝に関与して肝臓細胞の脂肪蓄積を抑制する効果を有することが分かる。
【００９０】
２．脂肪肝の減少
肝臓をＨ＆Ｅ  ｓｔａｉｎで染色し、ｍａｃｒｏ  ｆａｔ  ｖａｃｕｏｌｅの有無（倍率２０倍及び倍率４０倍）を観察した。その結果を図１０に示す。
【００９１】
図１０に示すように、第１群と第３群の肝臓組織はきめ細かく詰まっているが、第２群の肝臓組織においては随所にｍａｃｒｏ  ｆａｔ  ｖａｃｕｏｌｅと思われる白の部分が観察される。よって、ＬＭ１０１６菌株は、優れた脂肪肝抑制効果を有することが分かる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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