(57)【要約】  本発明は抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体および抗原結合性フラグメントを提供する。また、本発明は、癌または感染性疾患の治療における、これらの抗体および抗原結合性フラグメントの方法および使用を提供する。
2021511791.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２】
抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項３】
抗ＰＤ−１重鎖可変領域ＣＤＲ２が配列番号８６のアミノ酸配列を含む、請求項２記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項４】
（Ａ）抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１または３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、および
（Ｂ）抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントが、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項５】
抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項４記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項６】
抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項４記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項７】
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む（ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている）、請求項５記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項８】
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖とを含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む（ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている）、請求項５記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項９】
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含み、
抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域が、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項５記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１０】
（Ａ）（ｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１または３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１１】
抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項７〜１０のいずれか１項記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１２】
（Ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ−１重鎖および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（Ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖および配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体。
【請求項１３】
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１０または４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１４】
抗ＰＤ−１重鎖可変領域ＣＤＲ２が配列番号８６のアミノ酸配列を含む、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１５】
（Ａ）抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含み、および
（Ｂ）抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントが、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１６】
（Ａ）（ｉ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異Ｑ１２４ＲおよびＴ１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１７】
（Ａ）（ｉ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１８】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体が、
（Ａ）（ｉ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含み、
抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域が、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項１９】
抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項１３〜１８のいずれか１項記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２０】
（Ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ−１重鎖および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（Ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖および配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体。
【請求項２１】
（Ａ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ−１重鎖可変領域、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに
（Ｂ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体。
【請求項２２】
（Ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む抗ＰＤ−１重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに
（Ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、請求項２１記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体。
【請求項２３】
（Ａ）（ｉ）配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２４】
抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが重鎖および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖および軽鎖ＣＤＲが、
（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに
（ｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
からなる群から選択される、請求項２３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２５】
（Ａ）抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントが、
（ｉ）配列番号３７または１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号３９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）配列番号４４または１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）配列番号５０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに
（ｉｖ）配列番号５７または１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、そして、
（Ｂ）抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントが、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２３記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２６】
（ｉ）抗ＰＤ−１重鎖可変領域が、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌと、ＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、そして、抗ＰＤ−１軽鎖可変領域が、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ鎖定常領域を更に含み、並びに、
（ｉｉ）抗ＬＡＧ３重鎖可変領域が、ＣＨ１突然変異１８１Ｋと、ＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、そして、抗ＬＡＧ３軽鎖可変領域が、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域を更に含み、
ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項２５記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２７】
抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ突然変異の１以上を更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている、請求項２６記載の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体。
【請求項２８】
抗体またはその抗原結合性フラグメントが、哺乳類細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む、請求項１〜２７のいずれか１項記載の二重特異性抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項２９】
抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ＣＨＯ細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む、請求項１〜２７のいずれか１項記載の二重特異性抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３０】
請求項１〜２７のいずれか１項記載の二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項３１】
請求項３０記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターであって、該ポリヌクレオチドが、該ベクターでトランスフェクトされる宿主細胞により認識される制御配列に機能的に連結されている、発現ベクター。
【請求項３２】
請求項３１記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３３】
細菌細胞、ヒト細胞、哺乳類細胞、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項３２記載の宿主細胞。
【請求項３４】
ａ．請求項１〜２９のいずれか１項記載の二重特異性抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、該ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下で培養し、そして
ｂ．所望により、該二重特異性抗体を宿主細胞および／または培地から回収することを含む、二重特異性抗体の製造方法。
【請求項３５】
請求項１〜２９のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント、および、薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物。
【請求項３６】
（ｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｉｖ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、および、（ｘｘｖ）ＰＡＲＰインヒビターからなる群から選択される薬剤を更に含む、請求項３５記載の組成物。
【請求項３７】
ａ．癌の治療、または
ｂ．感染症もしくは感染性疾患の治療
における使用のための、請求項１〜２９のいずれか１項記載の二重特異性抗体または抗原結合性フラグメント。
【請求項３８】
癌の治療または感染症もしくは感染性疾患の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜２９のいずれか１項記載の二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項３９】
請求項１〜２９のいずれか１項記載の二重特異性抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項３１記載の発現ベクターまたは請求項３５記載の組成物の有効量を、所望により更なる治療用薬剤または治療手技と組合せて、対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法。
【請求項４０】
請求項１〜２９のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項３１記載の発現ベクターまたは請求項３５記載の組成物の有効量を、所望により更なる治療用薬剤または治療手技と組合せて、対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症または感染性疾患の治療方法。
【請求項４１】
前記の更なる治療用薬剤が、（ｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｖｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、および（ｘｘｖｉｉ）ＰＡＲＰインヒビターからなる群から選択される、請求項３９または４０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１８年２月１日付け出願の国際特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０７４９１８（その開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に基づく優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
配列表
本出願は配列表のコンピュータ可読形態（ＣＲＦ）コピーと共に提出されている。２０１９年１月２日に作成され、２０８，３９０バイトのサイズを有する、１４４６３−００１−２２８ ＳＥＱ ＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴなるタイトルのＣＲＦは、配列表の紙コピーとしても機能し、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
【０００３】
１．分野
本発明は、腫瘍媒介性免疫抑制に対抗することにより改善される症状の治療を提供する。より詳細には、本発明は、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体、ならびにがん（以下、癌と表記される）および感染性疾患のような疾患の治療におけるこれらの抗体の使用を提供する。
【背景技術】
【０００４】
２．背景
ＰＤ−１は免疫調節における及び末梢性寛容性の維持における重要な分子として認識されている。ＰＤ−１は、ナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄性細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナリングによりアップレギュレーションされる（１）。
【０００５】
ＰＤ−１に対する２つの公知リガンドであるＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）は、種々の組織において生じるヒトの癌において発現される。例えば卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌および黒色腫の大きなサンプルセットにおいて、ＰＤ−Ｌ１発現は、後続治療とは無関係に、予後不良および全生存期間の短縮と相関することが示された（２〜１３）。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上のＰＤ−１発現は乳癌および黒色腫における機能不全Ｔ細胞の指標となること（１４〜１５）、および腎癌における予後不良と相関すること（１６）が判明した。したがって、ＰＤ−Ｌ１を発現する腫瘍細胞は、ＰＤ−１を発現するＴ細胞と相互作用して、Ｔ細胞活性化の低減および免疫監視の回避をもたらし、それにより腫瘍に対する免疫応答の低下に関与することが提示されている。
【０００６】
ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の一方または両方との間の相互作用を抑制する幾つかのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）が癌治療のために臨床開発中である。そのような抗体の有効性は、他の承認されている又は実験的な癌療法、例えば放射線、手術、化学療法剤、標的化療法、腫瘍において脱調節される他のシグナル伝達経路を抑制する薬剤および他の免疫増強剤と組合せて投与されると、増強されうることが提示されている。
【０００７】
ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）は、活性化Ｔ細胞（Ｈｕａｒｄら，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３９：２１３−２１７，１９９４）、ＮＫ細胞（Ｔｒｉｅｂｅｌら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７１：１３９３−１４０５，１９９０）、Ｂ細胞（Ｋｉｓｉｅｌｏｗら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：２０８１−２０８８，２００５）および形質細胞様樹状細胞（Ｗｏｒｋｍａｎら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８２：１８８５−１８９１，２００９）上で発現される細胞表面分子であり、これらのリンパ球サブセットの機能において重要な役割を果たしている。加えて、ＬＡＧ３とその主要リガンドであるクラスＩＩ  ＭＨＣとの間の相互作用は、樹状細胞機能のモジュレーションにおいて或る役割を果たすと考えられている（Ａｎｄｒｅａｅら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６８：３８７４−３８８０，２００２）。最近の前臨床研究は、ＣＤ８  Ｔ細胞枯渇におけるＬＡＧ−３の役割を実証している（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：２９−３７，２００９）。慢性ウイルス感染の場合と同様に、腫瘍抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞はエフェクター機能の低下を示し、また、炎症性サイトカインの産生の低下および抗原再刺激に対する低反応性により特徴づけられる疲弊（ｅｘｈａｕｓｔｅｄ）表現型を示す。これは、細胞外因性メカニズム、例えば調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、および細胞内因性メカニズム、例えば、疲弊した腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）上でアップレギュレーションされる抑制性分子によりもたらされる。これらの抑制性メカニズムは、有効な抗腫瘍免疫に対する非常に大きな障壁に相当する。
【０００８】
ＬＡＧ３は寛容化ＴＩＬ上で発現され、このことは、それらが腫瘍媒介性免疫抑制に寄与することを示唆している。ＬＡＧ３の抑制は、抗原特異的Ｔ細胞の活性化の増強をもたらすことが可能であり、これにより治療上の利益が得られうる。腫瘍に対する強力な免疫応答を生成させるために使用されうる、ＬＡＧ３およびＰＤ−１の活性に拮抗する高効力治療用抗体が、当技術分野において必要とされている。
【発明の概要】
【０００９】
３．概括
本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正（連続的番号付け）の存在下または非存在下で、ヒト化０８Ａアフィニティ（親和性）成熟Ｆａｂ９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３または１０４の重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００１０】
また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正（配列の番号付け）の存在下または非存在下で、ヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３または１０４の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３ヒト化抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００１１】
また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正の存在下または非存在下で、ヒト化０８Ａの重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正の存在下または非存在下で、ヒト化０８Ａの重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントと、を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００１２】
また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１２８、１３３、１３８または１３９の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖ＣＤＲ領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。また、本発明は、ＣＤＲＨ２領域におけるＳ６１Ｎグリコシル化部位補正および／またはＧ５６Ａ脱アミド部位補正の存在下または非存在下でヒト化０８Ａアフィニティ成熟Ｆａｂ１２８、１３３、１３８または１３９の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと、抗ＬＡＧ３抗体２２Ｄ２  Ａｂ６の重鎖および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００１３】
ある実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ（ＥＵ番号付け）におけるＣＨ１突然変異を含むＩｇＧ１定常領域を含む重鎖と、Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒ（ＥＵ番号付け）における突然変異を含む軽鎖カッパ定常領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、Ｓ１８１Ｋ（ＥＵ番号付け）におけるＣＨ１突然変異を含むＩｇＧ１定常領域を含む抗ＬＡＧ３重鎖と、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅにおける突然変異を含む抗ＬＡＧ３軽鎖カッパ定常領域と、を含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。
【００１４】
他の実施形態においては、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ−３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１の重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ；Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗ；ならびにＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。
【００１５】
ある実施形態においては、抗ＬＡＧ−３および抗ＰＤ−１重鎖のそれぞれは、ＣＨ２領域における、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；Ｇ２３７Ａ；およびＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｄ突然変異の１以上を含み、ここで、突然変異はＥＵ番号付けで示されている。
【００１６】
また、本発明は、本発明で提供する抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかをコードする単離された核酸を提供する。また、本発明は、そのような核酸を含む発現ベクターを提供する（ここで、該ポリペプチドは、所望により、リーダー配列を含んでいてもよい）。これらの単離された核酸およびそれらを含む発現ベクターは、組換え宿主細胞において該抗体またはその抗原結合性フラグメントを発現させるために使用されうる。したがって、本発明はまた、そのような単離された核酸を含む宿主細胞を提供する。１つの実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞である。１つの実施形態においては、宿主細胞は、酵母細胞、例えばピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞である。
【００１７】
５．詳細な説明
５．１  用語
本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる他の全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。
【００１８】
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる単数形の語”ａ”、”ａｎ”および”ｔｈｅ”は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。
【００１９】
「投与」および「治療（処置）」は、それが動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または生物学的流体に適用される場合には、該動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または生物学的流体との外因性医薬、治療用薬剤、診断剤または組成物の接触を意味する。細胞の処置は、該細胞との試薬の接触、および該細胞に接触している流体との試薬の接触を含む。「投与」および「治療（処置）」は、試薬、診断剤、結合性化合物または別の細胞による、例えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）処置をも意味する。
【００２０】
「治療する」または「治療」は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療用薬剤を、該治療用薬剤が治療活性を示す疾患の症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該治療用薬剤は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療用薬剤の量は、患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨床的尺度により評価されうる。
【００２１】
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を意味する。したがって、それは最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体（２つの軽鎖と２つの重鎖とを含む完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体を包含するが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。
【００２３】
抗体に関して用いられる場合の「軽鎖」なる語は、アミノ末端部分が約１００〜約１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を意味する。軽鎖のおおよその長さは２１１〜２１７アミノ酸である。典型的には、ヒト軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖として分類される。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野でよく知られている。軽鎖はヒト軽鎖でありうる。
【００２４】
抗体に関して用いられる「重鎖」なる語は、アミノ末端部分が約１２０〜１３０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約５０〜７０ｋＤａのポリペプチド鎖を意味する。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と称される５つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）の１つでありうる。異なる重鎖はサイズにおいて異なり、α、δおよびγは約４５０アミノ酸を含有し、一方、μおよびεは約５５０アミノ酸を含有する。これらの異なるタイプの重鎖は、軽鎖と組合されると、免疫グロブリン（Ｉｇ）の５つのよく知られたクラス（例えば、アイソタイプ）、すなわち、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを生成し、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を包含する。重鎖はヒト重鎖でありうる。
【００２５】
軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【００２６】
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
【００２７】
「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」または「Ｖドメイン」なる語は、軽鎖または重鎖のアミノ末端に一般に位置する抗体の軽鎖または重鎖の一部を意味し、重鎖では約１２０〜１３０アミノ酸、軽鎖では約１００〜１１０アミノ酸の長さを有し、それぞれの個々の抗体の、その個々の抗原に対する結合および特異性において使用される。異なる抗体間で配列において可変性であるＩｇＧ鎖のセグメントである。いくつかの例では、それは軽鎖内のＫａｂａｔ（カバト）残基１０９および重鎖内の１１３まで伸長する。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と称されうる。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と称されうる。「可変」なる語は、可変領域の或るセグメントの配列が抗体間で大きく異なることを意味する。Ｖ領域は抗原結合を介入し、個々の抗体の、その個々の抗原に対する特異性を定める。しかし、可変性は可変領域の１１０アミノ酸の伸長全体に均等には分布していない。代わりに、Ｖ領域は、約１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より低い可変性（例えば、比較的に不変性）の伸長からなり、これらは、それぞれ約９〜１２アミノ酸長である「超可変領域」と称される、より大きな可変性（例えば、極端な可変性）の、より短い領域によって分離されている。重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、４つのＦＲを含み、これらは主として、ベータシート構造を連結し、ループを形成する３つの超可変領域により連結され、幾つかの場合には、ベータシート構造の一部を形成する。各鎖内の超可変領域はＦＲ領域により互いに接近して保持され、他方の鎖からの超可変領域と共に、免疫グロブリンの抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ  ｅｄ．１９９１）を参照されたい）。定常領域は抗原への抗体の結合には直接的に関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）における抗体の関与を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列において大きく異なる。特定の実施形態においては、可変領域はヒト可変領域である。
【００２８】
「Ｋａｂａｔによる可変領域残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔによるアミノ酸位置の番号付け」なる語およびその変形表現は、Ｋａｂａｔら（前掲）における抗体の総まとめの重鎖可変領域または軽鎖可変領域に用いられている番号付け系を意味する。この番号付け系を用いた場合、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはそれらへの挿入に対応する、より少ない又は追加的なアミノ酸を含有しうる。例えば、重鎖可変ドメインは残基５２の後の単一アミノ酸挿入（Ｋａｂａｔに基づく残基５２ａ）および残基８２の後の３つの挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔに基づく残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含みうる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同性の領域におけるアラインメントにより、所与抗体に関して決定されうる。Ｋａｂａｔ番号付け系は、一般に、可変ドメイン内の残基（軽鎖の残基約１〜１０７および重鎖の残基１〜１１３）に言及する場合に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら，前掲）。免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する場合には、「ＥＵ番号付け系」または「ＥＵインデックス」が一般に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら，前掲において報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔによるＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ  １  ＥＵ抗体の残基番号付けを意味する。他の番号付け系は、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴおよびＡＨｏｎにより記載されている。
【００２９】
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、軽鎖および重鎖の両方の可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端方向に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に基づいており、ＥＵ番号付けに関しては、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５（１９６９）を参照されたい。
【００３０】
超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメインにおけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメインにおけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）の１つ、または抗体ＶＬβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）の１つを意味する。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者によく知られており、例えば、抗体可変（Ｖ）ドメイン内の最も超可変性の領域として、Ｋａｂａｔにより定義されている（Ｋａｂａｔら，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−１６；Ｋａｂａｔ，１９７８，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（抗体のＣＤＲ領域を配列により定義している））。また、保存されたβシートフレームワークの一部ではなく、したがって、異なるコンホメーションに適応可能である残基として、ＣＤＲ領域配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ（チョチア）によって構造的に定義されている（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（抗体のＣＤＲ領域を構造により定義している））。どちらの用語法も当技術分野で十分に認識されている。ＣＤＲ領域配列は、ＡｂＭ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによっても定義されている。標準（カノニカル）抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較により決定されている（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−４８；Ｍｏｒｅａら，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９）。超可変領域内の残基数は抗体によって異なるため、標準位置に対する追加的残基には、通常、標準可変領域番号付け法における残基番号の隣にａ、ｂ、ｃなどの符号が付けられる（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら，前掲）。そのような命名法も同様に当業者によく知られている。
【００３１】
本明細書中で用いる「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」なる語は、配列において超可変性である、および／または構造的に定まったループを形成する、抗体可変領域の領域を意味する。一般に、抗体は、６つの超可変領域、すなわち、ＶＨにおける３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬにおける３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。多数の超可変領域の描写が用いられており、本発明に含まれる。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいており、最も一般的に用いられている（例えば、Ｋａｂａｔら，前掲を参照されたい）。一方、Ｃｈｏｔｈｉａは構造ループの位置に言及している（例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けされた場合のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの終末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４とで異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが該挿入をＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに配置するからである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合には、ループは３２で終了する；３５Ａのみが存在する場合には、ループは３３で終了する；３５Ａと３５Ｂとの両方が存在する場合には、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域はＫａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの折衷に相当し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用されている（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ編，２ｄ  ｅｄ．２０１０）を参照されたい）。「接触」超可変領域は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づいている。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれからの残基は後記に示されている。
【００３２】
最近、普遍的番号付け系が開発され、広く採用されている［ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃら，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７）］。ＩＭＧＴは、ヒトおよび他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報系である。この場合、ＣＤＲは、アミノ酸配列と軽鎖または重鎖内の位置との両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は種間で保存されており、ループと称される構造内に存在するため、可変ドメイン配列を構造的特徴に従い整列させる番号付け系を用いることにより、ＣＤＲおよびフレームワーク残基が容易に特定される。この情報は、１つの種の免疫グロブリンに由来するＣＤＲ残基を、典型的にはヒト抗体由来のアクセプターフレームワーク内にグラフト化および置換する際に用いられうる。追加的な番号付け系（ＡＨｏｎ）が、ＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−７０により開発されている。例えばＫａｂａｔ番号付けおよびＩＭＧＴユニーク番号付け系を含む番号付け系の間の対応は当業者によく知られている（例えば、Ｋａｂａｔ，前掲；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，前掲；Ｍａｒｔｉｎ，前掲；Ｌｅｆｒａｎｃら，前掲を参照されたい）。幾つかの実施形態においては、ＣＤＲはＩＭＧＴ番号付け系による定義のとおりである。他の実施形態においては、ＣＤＲはＫａｂａｔ番号付け系による定義のとおりである。ある実施形態においては、ＣＤＲはＡｂＭ番号付け系による定義のとおりである。他の実施形態においては、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａ系による定義のとおりである。更に他の実施形態においては、ＣＤＲはＣｏｎｔａｃｔ番号付け系による定義のとおりである。
【表１】
2021511791.tif 000003
【００３３】
超可変領域は、以下のとおりに「拡張超可変領域」を含みうる：ＶＬにおける２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、および、８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびに、ＶＨにおける２６〜３５または２６〜３５Ａ（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）、および、９３〜１０２、９４〜１０２または９５〜１０２（Ｈ３）。本明細書中で用いる「ＨＶＲ」および「ＣＤＲ」なる語は互換的に用いられる。
【００３４】
本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」なる語は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を意味する。ＦＲ残基は、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ジアボディ、線状抗体および二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、本明細書中でＣＤＲ残基として定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。
【００３５】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ３ドメインおよびＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含有する。それらの２つの重鎖フラグメントは、２以上のジスルフィド結合によって、そしてＣＨ３ドメインの疎水性相互作用を含む他の相互作用によって結合される。Ｆｃ領域は、例えば天然配列Ｆｃ領域、組換えＦｃ領域および変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域として定義される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々でありうるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、しばしば、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端までの伸長として定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け系による残基４４７）は、例えば、抗体の製造または精製中に、あるいは抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することにより、除去されうる。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を含む抗体と含まない抗体との混合物を含有する抗体集団を含みうる。
【００３６】
「定常領域」または「定常ドメイン」なる語は、抗原への抗体の結合には直接的に関与しないが、種々のエフェクター機能、例えばＦｃ受容体との相互作用を示す、軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部分を意味する。この用語は、抗原結合部位を含有する、免疫グロブリンの残りの部分である可変領域と比較して保存されたアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン分子の部分を意味する。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域と軽鎖のＣＬ領域とを含有しうる。「ＩｇＧ１定常ドメイン」には、Ｃ末端リジン（Ｋ）を含有する又は含有しない重鎖ＩｇＧ１タンパク質の全アロタイプが含まれ、限定的なものではないが、Ｇ１ｍ３、Ｇ１ｍ１７，１、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１７，１，２、Ｇ１ｍ（ｆ）、Ｇ１ｍ（ｚ，ａ）およびＧ１ｍ（ｚ，ａ，ｘ）が含まれる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓら，ｍＡｂｓ  １：４，１−７；２００９の表１、ならびにＬｅｆｒａｎｃ  ＧおよびＬｅｆｒａｎｃ  ＭＰ，ＩＭＧＴ（登録商標），ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ワールド・ワイド・ウェブ：ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ａｌｌｏｔｙｐｅｓ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｏｔｙｐｅｓ１．ｈｔｍｌ）を参照されたい。１つの実施形態においては、Ｃ末端リジンを含有しないＩｇＧ１定常ドメインは配列番号１２４である。
【００３７】
「カッパ定常領域」には、軽鎖カッパタンパク質の全アロタイプが含まれ、限定的なものではないが、Ｋｍ１、Ｋｍ２およびＫｍ３が含まれる。Ｊｅｆｆｅｒｉｓら，ｍＡｂｓ  １：４，１−７；２００９を参照されたい。１つの実施形態においては、カッパ定常ドメインは配列番号１２５である。
【００３８】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体なる語は、抗体のＶＨドメインとＶＬドメインとを含む抗体フラグメントを意味し、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖内に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの総説として、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。また、国際公開番号ＷＯ  ８８／０１６４９ならびに米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２６０，２０３号も参照されたい。１つの実施形態においては、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＶＨ領域、ペプチドリンカーおよびＶＬ領域を含む。もう１つの実施形態においては、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、ＶＬ領域、ペプチドリンカーおよびＶＨ領域を含む。
【００３９】
本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）を含む。同一鎖上で２つのドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２つの抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ  ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００４０】
「Ｆａｂ」は、重鎖のＶＨおよびＣＨ１領域と、軽鎖のＶＬおよびＣＬ領域とからなり、それらは典型的にはジスルフィド結合により互いに連結され、単一の抗原結合部位を有する。Ｆａｂ内のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ領域は、本開示に従い抗原結合能力を付与するために種々の様態で配置されうる。例えば、ＶＨおよびＣＨ１領域は１つのポリペプチド上に存在することが可能であり、ＶＬおよびＣＬ領域は別々のポリペプチド上に存在することが可能である。あるいは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬ領域の全てが同一ポリペプチド上に存在することが可能であり、所望に応じた種々の順序で配置されうる。
【００４１】
また、本発明は抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体およびその使用方法を提供する。「抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体」は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＰＤ−１抗原結合性アームと、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームとを含む。特定の実施形態においては、該二重特異性抗体は、重鎖および軽鎖を含む抗ＰＤ−１抗原結合性アームと、重鎖および軽鎖を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性アームを含むヘテロ二量体である。それらの２つの抗原結合性アームは会合して、ＣＨ３領域内に突然変異を有する２つの重鎖定常領域を介してヘテロ二量体を形成する（例えば、図６を参照されたい）。
【００４２】
また、本発明は抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントおよび抗ＰＤ−１またはＬＡＧ３抗原結合性フラグメントおよびそれらの使用方法を提供する。本明細書中で用いる「抗体フラグメント」または「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体または二重特異性抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗原結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃＦｖ；１つの抗原結合性アームの重鎖および軽鎖を含む半二重特異性分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００４３】
典型的には、何らかの方法で修飾された本発明で提供される抗体、二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントは、活性がモル基準で表された場合、（親抗体と比較した場合に）その結合活性の少なくとも１０％を保有する。ある実施形態においては、本発明で提供される抗体または二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントは、親抗体としてのＰＤ−１またはＬＡＧ３結合アフィニティの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％またはそれ以上を保有する。また、本発明で提供される抗体、二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と称される）を含みうることが意図される。
【００４４】
ある態様においては、本発明は、単離された抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体およびその抗原結合性フラグメントならびにそれらの使用方法を提供する。「単離（された）」抗体または二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の薬剤が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿主細胞からの又はその増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含有しない。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すものではない。
【００４５】
「単離された核酸分子」または「単離されたポリヌクレオチド」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくは合成由来またはそれらの何らかの組合せのＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。本開示の目的においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
【００４６】
「制御配列」なる語は、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、所望により、オペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが公知である。
【００４７】
核酸またはポリヌクレオチドが「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別の核酸配列に対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それが、該ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり；プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが該配列の転写に影響を及ぼす場合であり；あるいはリボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に（しかし常にそうである必要はないが）、「機能的に連結（されている）」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングフェーズにおけるものであることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は簡便な制限部位における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。
【００４８】
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いられ、全てのそのような表示は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」なる語は、導入（トランスファー）の数には無関係に、初代対象細胞、およびそれに由来する培養を含む。また、意図的な又は故意でない突然変異ゆえに、全ての後代が厳密に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないと理解される。元の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる。異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかであろう。
【００４９】
本明細書中で用いる「生殖系列配列」は未再構成免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を意味する。いずれかの適切な未再構成免疫グロブリン配列源が用いられうる。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈのウェブサイト上でＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ生殖系列データベースから得られうる。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄｉｃｅｌｌｉら，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３：Ｄ２５６−Ｄ２６１に記載されているとおりに得られうる。
【００５０】
５．２  抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体および抗原結合性フラグメント
１つの態様においては、本発明は、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントと抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントとを含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００５１】
１つの実施形態においては、本発明は、
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１５、１８、２１、２５、２９、３２または３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号５、２２または２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００５２】
幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３２のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号５のアミノ酸配列を含む。
【００５３】
幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３２のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
【００５４】
幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号２９のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３２のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの軽鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
【００５５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００５６】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１または３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００５８】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そして、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００５９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）を含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含む。
【００６０】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）を含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含む。
【００６１】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）を含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含み、ここで、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。
【００６２】
１つの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択される。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。
【００６３】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、（Ａ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号１４、１７、２０、２４、２８、３１または３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに、（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを含む。
【００６４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号１４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００６５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００６６】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００６７】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００６８】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００６９】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００７０】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号３４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む。
【００７１】
幾つかの特定の実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、抗ＰＤ−１の配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに、抗ＬＡＧ３の配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００７２】
もう１つの実施形態においては、本発明は、
（Ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０または４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００７３】
幾つかの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの重鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。他の実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントの重鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。
【００７４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
【００７５】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、そしてここで、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、抗ＬＡＧ３の配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００７６】
また、本発明は、
（Ａ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異Ｑ１２４ＲおよびＴ１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００７７】
また、本発明は、
（Ａ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００７８】
また、本発明は、
（Ａ）配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、およびＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域、を含む重鎖と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびＣκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域、を含む軽鎖と、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供し、
ここで、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。
【００７９】
１つの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択される。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。
【００８０】
特定の実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体は、（Ａ）抗ＰＤ−１の配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに（Ｂ）抗ＬＡＧ３の配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体は、（Ａ）抗ＰＤ−１の配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに（Ｂ）抗ＬＡＧ３の配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体は、（Ａ）抗ＰＤ−１の配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに（Ｂ）抗ＬＡＧ３の配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００８１】
もう１つの実施形態においては、本発明は、
（Ａ）（ｉ）配列番号４０または５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９または５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号４、４２、４７または６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および、（ｖｉ）配列番号５、４８または５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、を含む抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメント、ならびに
（Ｂ）（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および、（ｖｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３、を含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメント
を含む抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体を提供する。
【００８２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは重鎖および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖および軽鎖ＣＤＲは、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；ならびに、（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３；からなる群から選択される。
【００８３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８６】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８７】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８８】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００８９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９０】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９１】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９６】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９７】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９８】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【００９９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１００】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０１】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０６】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０７】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０８】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１０９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１０】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１１】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１６】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１７】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１８】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１１９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２０】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２１】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２４】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２５】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２６】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２７】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１２９】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１３０】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；および、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１３１】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、（ａ）配列番号３７または１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号３９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｂ）配列番号４４または１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；（ｃ）配列番号５０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；ならびに（ｄ）配列番号５７または１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、そしてここで、抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１３２】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントは、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。特定の実施形態においては、該二重特異性抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む抗ＬＡＧ３重鎖可変領域と、配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを更に含む。
【０１３３】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＰＤ−１軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ鎖定常領域を更に含み、そして、抗ＬＡＧ３重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＬＡＧ３軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域を更に含む。
【０１３４】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３ＬとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３６６Ｌ、３９２Ｌおよび３９４Ｗとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＰＤ−１軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ鎖定常領域を更に含み、そして、抗ＬＡＧ３重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１８１ＫとＣＨ３突然変異３５０Ｖ、３５１Ｙ、４０５Ａおよび４０７Ｖとを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＬＡＧ３軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域を更に含む。
【０１３５】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１４５Ｅ、１４７Ｔ、１７５Ｅおよび１８３Ｌを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＰＤ−１軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｒおよび１７８Ｒを含むカッパ鎖定常領域を更に含み、そして、抗ＬＡＧ３重鎖可変領域は、ＣＨ１突然変異１８１Ｋを含むＩｇＧ１定常領域を更に含み、抗ＬＡＧ３軽鎖可変領域は、Ｃκ突然変異１２４Ｅ、１３１Ｔ、１７８Ｙおよび１８０Ｅを含むカッパ定常領域を更に含み、そして、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのＩｇＧ１重鎖定常領域は、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。１つの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗ；３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗ；ならびに３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗからなる群から選択される。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｉ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｌ／３９４Ｗである。幾つかの実施形態においては、ＣＨ３突然変異のペアは、３５０Ｖ／３５１Ｙ／４０５Ａ／４０７Ｖ、および３６６Ｌ／３９２Ｍ／３９４Ｗである。
【０１３６】
前記実施形態の１つの態様においては、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体は、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＣＨ２領域における２３４Ａまたは２３４Ｄ；２３５Ａまたは２３５Ｄ；２６５Ｓまたは２６５Ａ；２３７Ａ；および２９７Ａ、２９７Ｑまたは２９７Ｄ（ＥＵ番号付け）突然変異の１以上を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ａ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｄ（ＥＵ番号付け）を更に含む。前記実施形態のもう１つの態様においては、抗ＬＡＧ３および／または抗ＰＤ−１重鎖のＩｇＧ１定常ドメインは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、哺乳類細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む。
【０１３７】
また、本発明は、前記の抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体のいずれかにおける、重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントも提供する。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１３８】
幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号９１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
【０１３９】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号９２または８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０に示されているアミノ配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号８８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１４０】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号９１、７９または８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１０または４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
【０１４１】
幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号９１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号８６のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号９１のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号４１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号８６のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号４１のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態においては、重鎖可変領域ＣＤＲ２は配列番号７９のアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域ＣＤＲ３は配列番号４１のアミノ酸配列を含む。
【０１４２】
更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号９５または９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号７５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号７８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号８１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号７６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１４３】
更にもう１つの態様においては、本発明は、前記の抗体または抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。１つの実施形態においては、該組成物は、（ｉ）抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖｉ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｖｉｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、および（ｘｘｖｉｉｉ）ＰＡＲＰインヒビターからなる群から選択される薬剤を更に含む。
【０１４４】
１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＰＡＲＰインヒビターである。
【０１４５】
本開示は、後記の表８に記載されている任意の抗体または抗原結合性フラグメントを含む。幾つかの実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、表８に列挙されているＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、表８に列挙されているＶＨ配列において示されているＣＤＲ、および表８に列挙されているＶＬ配列において示されているＣＤＲを含む。幾つかの実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、表８に列挙されているＶＨ配列、および表８に列挙されているＶＬ配列を含む。
【０１４６】
５．３  例示的な抗体の物理的および機能的特性
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質におけるアミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、該変化は、しばしば、該タンパク質の生物活性を変化させることなく施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。加えて、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を表１に示す。
【表２】
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【０１４７】
本発明で提供される抗体の機能保存的変異体も意図される。本明細書中で用いる「機能保存的変異体」は、抗原アフィニティおよび／または特異性のような所望の特性を変化させることなく、１以上のアミノ酸残基が変化している、抗体またはフラグメントを意味する。そのような変異体は、類似特性を有するアミノ酸でのアミノ酸の置換、例えば、表１の保存的アミノ酸置換を含むが、これらに限定されるものではない。また、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個まで又はそれ以上のアミノ酸置換を例えばフレームワーク領域内に有する単離された抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１４８】
５．４  ポリヌクレオチドとポリペプチド
また、本発明は、本発明で提供される抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３、抗ＰＤ−１または抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントのポリペプチドまたは免疫グロブリン鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。例えば、本発明は、配列番号１〜１１７のいずれかに記載されているアミノ酸をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【０１４９】
１つの実施形態においては、本明細書に記載されている単離された二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントのポリペプチド鎖をコードする単離されたポリヌクレオチド、例えばＤＮＡを提供する。１つの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン軽鎖と、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン重鎖とを含むその抗ＰＤ−１抗原結合性フラグメントをコードする。１つの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン軽鎖と、本発明で提供される１つの成熟免疫グロブリン重鎖とを含むその抗ＬＡＧ３抗原結合性フラグメントを更にコードする。幾つかの実施形態においては、単離されたポリヌクレオチドは単一ポリヌクレオチド分子上で軽鎖と重鎖との両方をコードする。他の実施形態においては、軽鎖および重鎖は別々のポリヌクレオチド分子上でコードされる。もう１つの実施形態においては、ポリヌクレオチドはシグナル配列を更にコードする。
【０１５０】
また、本発明は、単離されたポリヌクレオチドを含むベクター、例えば発現ベクター、例えばプラスミドを提供し、ここで、該ポリヌクレオチドは、宿主細胞がベクターでトランスフェクトされたときに宿主細胞により認識される制御配列に機能的に連結されている。更に、ベクターを含む宿主細胞、および、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはポリペプチドの製造方法を提供し、該製造方法は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターまたは核酸を含有する宿主細胞を培地内で培養し、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを宿主細胞または培地から単離することを含む。
【０１５１】
５．５  抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗体は、組換え法によって（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７発現系、哺乳類細胞発現系または下等真核生物発現系において）も製造されうる。１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ、ＶＨまたはＶＬ）をコードする核酸をｐＥＴ系プラスミド内に挿入し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／Ｔ７系内で発現させることが可能である。幾つかの実施形態においては、本発明は、抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖を宿主細胞（例えば、細菌宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、例えば、ＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３）内で発現させるための方法を提供し、該方法は、Ｔ７プロモーターに機能的に連結された免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドをも含む細胞内で、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現させることを含む。１つの実施形態においては、細菌宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ｌａｃプロモーターに機能的に連結されたＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、そして、ＩＰＴＧ（イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）の存在下の該宿主細胞のインキュベーションにより該ポリメラーゼおよび該鎖の発現が誘導される。
【０１５２】
当技術分野で公知である組換え抗体を製造するための幾つかの方法が存在する。抗体の組換え製造のための方法の一例は米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。
【０１５３】
形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞内に導入するためのいずれかの公知方法により行われうる。哺乳類細胞内に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は当技術分野でよく知られており、デキストラン媒介性トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソーム内へのポリヌクレオチドの封入、遺伝子銃注入および核内へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションを包含する。加えて、ウイルスベクターにより哺乳類細胞内に核酸分子を導入することが可能である。細胞を形質転換する方法は当技術分野でよく知られている。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照されたい。
【０１５４】
したがって、本発明はまた、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖の組換え製造方法を提供し、該製造方法は、該抗体またはフラグメントの免疫グロブリン鎖（例えば、重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン鎖、ｓｃＦｖ）の１以上をコードするポリヌクレオチドを導入し、そのような発現に好ましい条件下で宿主細胞［例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはピチア（Ｐｉｃｈｉａ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）］を培養することを含む。ある実施形態においては、該方法は、該宿主細胞からおよび／または該宿主細胞を増殖させた培地から、該抗体またはフラグメントまたは免疫グロブリン鎖を単離することを更に含む。
【０１５５】
本明細書に開示されている抗体またはフラグメントまたは免疫グロブリン鎖の発現のための宿主としての、哺乳類細胞を含む真核宿主細胞および原核宿主細胞は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞および多数の他の細胞系を包含する。哺乳類宿主細胞は、ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ブタ細胞、ヤギ細胞、ウシ細胞、ウマ細胞およびハムスター細胞を包含する。特に好ましい細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞が挙げられる。真菌細胞には、例えば以下のものを含む酵母および糸状菌細胞が含まれる：ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピチア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピチア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピチア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピチア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピチア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピチア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、ピチア・オプンチエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピチア・テルモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピチア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピチア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピチア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピチア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クライベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）。ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、任意のサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）。重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメント、あるいはｓｃＦｖをコードする組換え発現ベクターを哺乳類宿主細胞内に導入する場合、抗体は、該宿主細胞における該抗体もしくはフラグメントもしくは鎖の発現、または該宿主細胞が培養される培地内への分泌を可能にするのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することにより製造される。
【０１５６】
抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの抗体およびその抗原結合性フラグメントおよび免疫グロブリン鎖（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。ＧＳ系は、欧州特許第０  ２１６  ８４６号、第０  ２５６  ０５５号および第０  ３２３  ９９７号ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号において全体的または部分的に考察されている。したがって、１つの実施形態においては、哺乳類宿主細胞（例えば、ＣＨＯ）はグルタミンシンテターゼ遺伝子を欠いており、グルタミンの非存在下の培地内で増殖されるが、ここで、該免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドは、宿主細胞における該遺伝子の欠如を相補するグルタミンシンテターゼ遺伝子を含む。
【０１５７】
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを有するであろう。したがって、抗体の特定のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される特定の細胞系またはトランスジェニック動物に依存するであろう。しかし、抗体グリコシル化パターンとは独立して、本発明で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体が想定される。同様に、特定の実施形態においては、非フコシル化Ｎ−グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体が有利であり、というのも、これらの抗体は、インビトロおよびインビボの両方においてそれらのフコシル化対応物より高い効力を典型的に示すことが示されているからである（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらの抗体が免疫原性である可能性は低く、というのも、それらの炭水化物構造は、ヒト血清ＩｇＧにおいて存在する集団の正常成分であるからである。
【０１５８】
免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに帰属されうる。幾つかの実施形態においては、異なる定常ドメインは、ＶＬ、ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ領域に付加されうる。免疫グロブリンの、少なくとも５つの主要クラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらの幾つかは更に、サブクラス（サブタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分類されうる。
【０１５９】
１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖定常領域、例えばヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３もしくはγ４ヒト重鎖定常領域またはそれらの変異体を含む。もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。
【０１６０】
１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１または抗ＬＡＧ−３抗原結合性フラグメントまたは抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体は、ＩｇＧ１サブタイプの重鎖定常領域を含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１および／または抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ２領域において、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３４Ｄ；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｄ；Ｄ２６５ＳまたはＤ２６５Ａ；およびＧ２３７Ａ突然変異（ＥＵ番号付け）の１以上を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１および／または抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、突然変異Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＮ２９７Ｑ（ＥＵ番号付け）を更に含む。
【０１６１】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３多重特異性抗体の他の態様においては、抗ＰＤ−１および抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異；Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異；ならびにＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖの１以上の突然変異およびＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗの１以上の突然変異（ＥＵ番号付け）からなる群から選択されるＣＨ３突然変異のペアを更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＰＤ−１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ３突然変異Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。更にもう１つの実施形態においては、抗ＬＡＧ３アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７ＶのＣＨ３突然変異を更に含み、抗ＰＤ−１アームのＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＣＨ３突然変異Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗを更に含む。抗ＰＤ−１アームおよび抗ＬＡＧ３アームの重鎖定常領域におけるこれらの突然変異は、二重特異性抗体のヘテロ二量体形成を促進する。ＷＯ２０１２０５８７６８およびＷＯ２０１３０６３７０２を参照されたい。二重特異性抗体のヘテロ二量体形成を促進する他のＣＨ３突然変異には、ＷＯ２０１２０５８７６８、ＷＯ２０１３０６３７０２、ＵＳ５７３１１６８、ＵＳ８５９２５６２、ＵＳ９８２８６１９、ＵＳ９２４８１８１またはＷＯ２０１２１３１５５５（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているものが含まれる。
【０１６２】
もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖は、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３ＬにおけるＣＨ１突然変異を更に含み、抗ＰＤ−１軽鎖は、Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８ＲにおけるＣκ突然変異を含み、抗ＬＡＧ３重鎖はＳ１８１ＫにおけるＣＨ１突然変異、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）における軽鎖Ｃκ突然変異（ＥＵ番号付け）を更に含む。もう１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１重鎖は、更に、Ｑ３９Ｅ、Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５ＥにおけるＦＲおよびＣＨ１突然変異を含み、抗ＰＤ−１軽鎖は、Ｑ３８Ｒ、Ｑ１２４Ｒ、Ｑ１６０ＫおよびＴ１７８ＲにおけるＦＲおよびＣκ突然変異を含み、抗ＬＡＧ３重鎖は、Ｑ３９Ｒ、Ｈ１６８Ｒ、Ｑ１７５ＫにおけるＦＲおよびＣＨ１突然変異、Ｑ３８Ｅ、Ｑ１２４Ｅ、Ｑ１６０ＥおよびＴ１８０Ｅ（ＥＵ番号付け）における軽鎖ＦＲおよびＣκ突然変異を更に含む。これらの突然変異は、抗ＰＤ−１重鎖および軽鎖ならびに抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖の適切なペア形成を助ける。図４および図５ならびにＷＯ２０１５１８１８０５を参照されたい。適切な軽鎖および重鎖のペア形成を促進する他のＣＨ１およびＣκ突然変異には、ＷＯ２０１５１８１８０５、ＷＯ２０１６１７２４８５、ＷＯ２０１５１７３７５６、ＵＳ２０１６００３９９４７、ＷＯ２０１４１２４３２６、ＵＳ２０１４０１５４２５４またはＵＳ２０１４０３７００２０（それらの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されているものが含まれる。
【０１６３】
５．６  抗体の操作
本発明で提供される配列の可変ドメイン内のフレームワーク残基に対する修飾を含むように、例えば、該抗体またはフラグメントの特性を改善するために、該抗体およびその抗原結合性タンパク質が操作（改変）された抗体である実施形態が更に含まれる。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、該抗体またはフラグメントの免疫原性を低下させるために行われる。これは通常、親（例えば、げっ歯類）抗体またはフラグメントにおける可変ドメイン内の非ＣＤＲ残基（すなわち、フレームワーク残基）を、該抗体が使用されることになる種の免疫レパトワからの類似残基、例えば、ヒト用治療用薬剤の場合にはヒト残基で置換することにより達成される。そのような抗体またはフラグメントは、「ヒト化」抗体またはフラグメントと称される。１つのアプローチは、１以上のフレームワーク残基を対応ヒト生殖系列配列へと突然変異させることである。より詳しくは、体細胞突然変異を受けた抗体またはフラグメントは、該抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有しうる。そのような残基は、該抗体またはフラグメントが由来するヒト生殖系列配列と親抗体またはフラグメントのフレームワーク配列を比較することにより特定されうる。もう１つのアプローチは、操作された（例えば、ヒト化）抗体の位置の１以上において元の親（例えば、げっ歯類）残基へと復帰させること、例えば、フレームワーク残基の置換の過程において喪失した可能性がある結合アフィニティを回復させることである（例えば、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，５３０，１０１号を参照されたい）。
【０１６４】
ある実施形態においては、該抗体およびその抗原結合性フラグメントを、それらの特性を改善するためにフレームワークおよび／またはＣＤＲに対する修飾を含むように操作する。そのような操作される変化は分子モデリングに基づくことが可能である。抗体の構造的特徴を理解するために、親（非ヒト）抗体配列の可変領域に関する分子モデルを構築し、それを使用して、抗原と相互作用しうる抗体上の潜在的領域を特定することが可能である。通常のＣＤＲは、免疫グロブリン配列のアライメントおよび可変領域の特定に基づく。Ｋａｂａｔら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６。Ｃｈｏｔｈｉａらは抗体の結晶構造におけるループのコンホメーションを注意深く調べ、超可変ループを提示した。Ｃｈｏｔｈｉａら，（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３。「ＣＤＲ」および「超可変ループ」として分類されている領域の間には変異が存在する。後の研究（Ｒａｇｈｕｎａｔｈａｎら，（２０１２）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇ．２５，３，１０３−１１３）は幾つかの抗体−抗原結晶複合体を分析し、抗体内の抗原結合領域が「ＣＤＲ」残基または「超可変」ループに必ずしも厳密には合致しないことを観察した。抗原に潜在的に結合しうる領域の選択を導くために、非ヒト抗体の可変領域に関する分子モデルが使用されうる。実際、モデルに基づく潜在的抗原結合領域は、通常の「ＣＤＲ」または「超可変」ループとは異なる。市販の科学用ソフトウェア、例えばＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）が分子モデリングに使用されうる。フレームワーク内およびＣＤＲ内の両方の非ヒト配列との最良マッチに基づいて、ヒトフレームワークが選択されうる。ＶＨ内のＦＲ４（フレームワーク４）に関しては、ヒト生殖系列におけるＶＪ領域を対応非ヒト領域と比較する。ＶＬにおけるＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖系列配列のＪ−カッパおよびＪ−ラムダ領域を対応非ヒト領域と比較する。適切なヒトフレームワークが特定されたら、選択されたヒトフレームワーク内にＣＤＲをグラフティングする。幾つかの場合には、ＶＬ−ＶＨ境界における或る残基が、非ヒト（親）配列の場合と同様に保持されうる。ＣＤＲのコンホメーション、ひいては抗原への結合を潜在的に改変しうる残基を特定するためにも分子モデルが使用されうる。幾つかの場合には、これらの残基は、非ヒト（親）配列の場合と同様に保持される。望ましくない効果、例えばグリコシル化、脱アミド化および酸化をもたらしうる溶媒露出アミノ酸を特定するためにも、分子モデルが使用されうる。これらの潜在的問題を排除／最小化するために、設計段階の初期にデベロパビリティフィルターが導入されうる。
【０１６５】
もう１つのタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または更には１以上のＣＤＲ領域内の１以上の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより該抗体の潜在的免疫原性を低下させることを含む。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも称され、米国特許第７，１２５，６８９号に更に詳細に記載されている。
【０１６６】
特定の実施形態においては、脱アミド化または異性化を避けるために、最終的な抗体のより高い化学的安定性を得るために、露出側鎖を含有するあるアミノ酸を別のアミノ酸残基へと変化させることが望ましいであろう。アスパラギンおよびグルタミンの脱アミド化／異性化はＤＧ、ＮＧ、ＮＳ、ＮＡ、ＮＴ、ＱＧまたはＱＳ配列上で生じ、イソアスパラギン酸残基の生成をもたらす可能性があり、該残基はポリペプチド鎖内にねじれ（キンク）を導入し、その安定性を低下させる（イソアスパラギン酸効果）。異性化はＤＧ、ＤＳ、ＤＡまたはＤＴ配列において生じうる。ある実施形態においては、本開示の抗体は脱アミド化またはアスパラギン異性部位を含有しない。１つの実施形態においては、抗ＰＤ１重鎖ＣＤＲＨ２は、脱アミド化部位を除去するためのＧ５６Ａ補正を含む。
【０１６７】
例えば、特にＣＤＲ内の、いずれかのＡｓｎ−Ｇｌｙ配列におけるイソアスパルテートの形成の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）残基はＧｌｎまたはＡｌａへと改変されうる。同様の問題はＡｓｐ−Ｇｌｙ配列においても生じうる。ＲｅｉｓｓｎｅｒおよびＡｓｗａｄ（２００３）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６０：１２８１。イソアスパルテート形成は、抗体のその標的抗原への結合を減弱しまたは完全に阻止しうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４を参照されたい。１つの実施形態においては、該アスパラギンはグルタミン（Ｇｌｎ）へと改変される。小さなアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンに隣接して存在する場合にはより高い率で生じる脱アミド化の可能性を低減するために、アスパラギン（Ａｓｎ）またはグルタミン（Ｇｌｎ）残基に隣接したアミノ酸を改変することも望ましいかもしれない。Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ＆  Ｋｏｌｂｅ（１９９４）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．６６２：２６１を参照されたい。加えて、抗原結合アフィニティを低減し、そしてまた、最終抗体調製物における分子不均一性に寄与しうるメチオニン硫黄の酸化の可能性を低減するために、ＣＤＲ内のいずれかのメチオニン残基（典型的には溶媒露出Ｍｅｔ）は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、ＡｌａまたはＰｈｅまたは他のアミノ酸へと改変されうる（同誌）。更に、Ａｓｎ−Ｐｒｏペプチド結合の潜在的な切断を妨げ又は最小にするために、ＣＤＲにおいて見出されるいずれかのＡｓｎ−Ｐｒｏの組合せを、Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ａｌａ−ＰｒｏまたはＡｓｎ−Ａｌａへと改変することが望ましいかもしれない。ついで、そのような置換を有する抗体をスクリーニングして、該置換が、ＰＤ−１またはＬＡＧ３に対する抗体のアフィニティもしくは特異性または他の所望の生物活性を許容し得ないレベルに低減しないことを確認する。
【表３】
2021511791.tif 000005
【０１６８】
５．７  Ｆｃ領域の抗体操作
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、Ｆｃ領域内の修飾を含むように、典型的には、該抗体の特性、例えば血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／またはエフェクター機能（例えば、抗原依存性細胞傷害性）の１以上を変化させるために操作（改変）されうる。更に、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは、化学的に修飾可能であり（例えば、１以上の化学的部分が該抗体に結合可能である）、または、再び抗体またはフラグメントの特性の１以上を改変するために、そのグリコシル化を改変するように修飾されうる。これらの実施形態のそれぞれは後記に更に詳細に記載されている。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。
【０１６９】
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、改変されたエフェクター機能をもたらすための、修飾（または遮断）されたＦｃ領域を有する抗体およびフラグメントをも含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する変化はまた、治療用抗体における抗体の半減期を改変することが可能であり、それほど頻繁でない投与ならびにそれによる便利さの向上および物資の使用の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４−３５を参照されたい。
【０１７０】
１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖定常領域のヒンジ領域内の２２８位に対応する位置におけるセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体またはフラグメントである。この突然変異は、ヒンジ領域内の重鎖間ジスルフィド架橋の不均一性を排除することが報告されている（Ａｎｇａｌら，前掲；２４１位はＫａｂａｔ番号付け系に基づく）。
【０１７１】
１つの実施形態においては、ヒンジ領域は、該ヒンジ領域内のシステイン残基の数が増加または減少するように修飾される。このアプローチは米国特許第５，６７７，４２５号に更に詳細に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進させるために、または抗体の安定性を増強もしくは低減するために改変される。
【０１７２】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントのＦｃヒンジ領域は、該抗体またはフラグメントの生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より詳細には、該抗体またはフラグメントが、天然ＦｃヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて低減したスタヒロコッカスプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を示すように、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン境界領域内に１以上のアミノ酸突然変異が導入される。このアプローチは米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。
【０１７３】
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物学的半減期を増加させるために修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許６，２７７，３７５号に記載されているとおり、以下の突然変異の１以上が導入されうる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号に記載されているとおり、生物学的半減期を増加させるために、該抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）受容体結合性エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で改変されうる。
【０１７４】
更に他の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントのエフェクター機能を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置換することによりＦｃ領域を改変する。例えば、該抗体がエフェクターリガンドに対する改変されたアフィニティを有し、親抗体の抗原結合能を保有するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１以上のアミノ酸が別のアミノ酸残基で置換されうる。アフィニティが改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。このアプローチは米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。
【０１７５】
もう１つの実施形態においては、該抗体がＣ１ｑ結合の変化および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の低減もしくは消失を示すように、アミノ酸残基３２９、３３１および３３２から選択される１以上のアミノ酸が別のアミノ酸残基で置換されうる。このアプローチは米国特許第６，１９４，５５１号に詳細に記載されている。
【０１７６】
もう１つの実施形態においては、アミノ酸２３１位および２３９位における１以上のアミノ酸残基を改変し、それにより、補体を固定する該抗体の能力を改変する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１に更に詳細に記載されている。
【０１７７】
更にもう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントが抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をもたらす能力を低減するために、および／またはＦｃγ受容体に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティを低減するために、以下の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位における１以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ  ００／４２０７２に更に詳細に記載されている。更に、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位が位置決定されており、改善した結合を示す変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照されたい）。
【０１７８】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体がエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３および２６４を修飾することによりＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、２４３位および２６４位における残基をアラニンへと変化させることにより、該抗体またはフラグメントのＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、該抗体またはフラグメントがエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３、２６４、２６７および３２８を修飾することによりＦｃ領域を修飾する。
【０１７９】
５．８  エフェクター機能の調節
本明細書中で用いる「エフェクター機能」なる語は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介性応答、Ｆｃ媒介性食作用または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクリングの１以上を意味すると意図される。
【０１８０】
抗原結合性タンパク質の定常領域と種々のＦｃ受容体（ＦｃＲ）［ＦｃガンマＲ１（ＣＤ６４）、ＦｃガンマＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃガンマＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含む］との間の相互作用が、抗原結合性タンパク質のエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよびＣＤＣをもたらすと考えられている。Ｆｃ受容体は抗体架橋にも重要であり、これは抗腫瘍免疫に重要でありうる。
【０１８１】
エフェクター機能は、例えば、ＡＤＣＣエフェクター機能を測定するために、ナチュラルキラー細胞へのＦｃガンマＲＩＩＩの結合または単球／マクロファージへのＦｃガンマＲＩの結合による方法を含む幾つかの方法で測定されうる。ある実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞アッセイにおいてＡＤＣＣエフェクター機能に関して評価されうる。そのようなアッセイの例はＳｈｉｅｌｄｓら，２００１  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ  ６５９１−６６０４；Ｃｈａｐｐｅｌら，１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ  ２６８，ｐ  ２５１２４−２５１３１；Ｌａｚａｒら，２００６  ＰＮＡＳ，１０３；４００５−４０１０において見出されうる。
【０１８２】
本発明で提供される抗体のＡＤＣＣもしくはＣＤＣの特性またはそれらの架橋特性は、幾つかの方法で低減されうる。残基Ａｓｎ２９７におけるグリコシル化の改変または特異的突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を低減することが示されている。他の場合においては、これらの突然変異はＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することも示されている（Ｌａｚａｒら，２００６，ＰＮＡＳ，１０３；４００５−４０１０；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００１，２７６；６５９１−６６０４；Ｎｅｃｈａｎｓｋｙら，２００７，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４；１８１５−１８１７）。加えて、Ｌ２３４ＡまたはＬ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、Ｇ２３７Ａ突然変異は、ＦｃγＲＩＩ認識の低減をもたらす。Ｌｕｎｄら，１９９１，Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７，２６５７−２６６３。１つの実施形態においては、そのような突然変異は、２３９、３３２および３３０位（ＩｇＧ１）または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等位置から選択される位置の１以上に存在する。適切な突然変異の例としては、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌが挙げられる。１つの実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質は、２３９および３３２位において突然変異している（例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ）。もう１つの実施形態においては、本発明で提供される抗原結合性タンパク質は、２３９および３３２および３３０から選択される３以上の位置において突然変異しており、例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックスの番号付け）である。
【０１８３】
５．９  修飾グリコシル化を有する抗体の製造
更にもう１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体または抗原結合性フラグメントは、特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、アフコシル化または非グリコシル化（アグリコシル化）（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体またはフラグメント（すなわち、該抗体は、それぞれ、フコースまたはグリコシル化を欠く）が製造されうる。抗体またはフラグメントのグリコシル化パターンは、例えば、ＰＤ−１またはＬＡＧ３抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強するために改変されうる。そのような修飾は、例えば、該抗体またはフラグメント配列内のグリコシル化部位の１以上を改変することにより達成されうる。例えば、可変領域フレームワークグリコシル化部位の１以上の除去をもたらし、それによりその部位におけるグリコシル化を排除する、１以上のアミノ酸置換が施されうる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する該抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強しうる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。１つの実施形態においては、抗ＰＤ−１  ＣＤＲＨ２領域はＳ６１Ｎグリコシル化補正を有する。
【０１８４】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは更に、哺乳類またはヒト様グリコシル化パターンを有する糖タンパク質を産生するように遺伝的に操作された下等真核宿主細胞、特に真菌宿主細胞、例えば酵母および糸状菌において産生されるものを含みうる（例えば、Ｃｈｏｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５０２２−５０２７；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１：１２４４−１２４６；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１３：１４４１−１４４３；Ｎｅｔｔら，Ｙｅａｓｔ  ２８（３）：２３７−５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｏｃｔ；１８（５）：３８７−９２（２００７）を参照されたい）。現在使用されている哺乳類細胞系と比較した場合の、これらの遺伝的に修飾された宿主細胞の格別な利点は、該細胞内で産生される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルの制御が可能なことであり、その結果、特定のＮ−グリカン構造が優勢な糖タンパク質の組成物が製造されうる（例えば、米国特許第７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝的に修飾された宿主細胞は、特定のＮ−グリカン構造を主に有する抗体を製造するために使用されている（例えば、Ｌｉら（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：２１０−２１５を参照されたい）。
【０１８５】
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは更に、二分岐および多アンテナ（ｍｕｌｔｉａｎｔｅｎｎａｒｙ）種を含むフコシル化および非フコシル化ハイブリッドおよび複合Ｎ−グリカン（例えば、ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２のようなＮ−グリカンを含むが、これらに限定されるものではない）を含む、下等真核宿主細胞において産生されるものを含む。
【０１８６】
特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体およびその抗原結合性フラグメントは、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される少なくとも１つのハイブリッドＮ−グリカンを有する抗体またはフラグメントを含む。特定の態様においては、ハイブリッドＮ−グリカンは、組成物中の主要Ｎ−グリカン種である。
【０１８７】
特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体およびその抗原結合性フラグメントは、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される少なくとも１つの複合Ｎ−グリカンを有する抗体およびフラグメントを含む。特定の態様においては、該複合Ｎ−グリカンは該組成物中の主要Ｎ−グリカン種である。更に詳細な態様においては、該複合Ｎ−グリカンは、該組成物中の複合Ｎ−グリカンの約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％を含む特定のＮ−グリカン種である。１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体およびその抗原結合性フラグメントは複合Ｎ−グリカンを含み、ここで、複合Ｎ−グリカンの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％は構造ＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２を含み、ここで、そのような構造はアフコシル化されている。そのような構造は、例えば、操作されたピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞において産生されうる。
【０１８８】
特定の実施形態においては、該Ｎ−グリカンはフコシル化されている。一般に、フコースは、Ｎ−グリカンの還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，３−結合、Ｎ−グリカンの還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，６−結合、Ｎ−グリカンの非還元末端におけるＧａｌとのα１，２−結合、Ｎ−グリカンの非還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，３−結合、またはＮ−グリカンの非還元末端におけるＧｌｃＮＡｃとのα１，４−結合で存在する。
【０１８９】
したがって、前記の糖タンパク質組成物の特定の態様においては、グリコフォーム（ｇｌｙｃｏｆｏｒｍ）は、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，３−結合またはα１，６−結合フコース；ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，３−結合またはα１，４−結合フコース；あるいは、Ｇａｌ（Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択されるグリコフォームを与えるα１，２−結合フコースで存在する。
【０１９０】
更に詳細な態様においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ４ＧｌｃＮＡｃ２、またはＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカン構造からなるＮ−グリカン（これらに限定されるものではない）を含む高マンノースＮ−グリカンを含む。
【０１９１】
前記の更に詳細な態様においては、該複合Ｎ−グリカンは更に、フコシル化および非フコシル化二分岐および多アンテナ種を含む。
【０１９２】
本明細書中で用いる「Ｎ−グリカン」および「グリコフォーム（糖形態）」なる語は互換的に用いられ、Ｎ−結合オリゴ糖を意味し、例えば、ポリペプチドのアスパラギン残基にアスパラギン−Ｎ−アセチルグルコサミン結合により結合しているＮ−結合オリゴ糖を意味する。Ｎ−結合糖タンパク質は、タンパク質中のアスパラギン残基のアミド窒素に結合したＮ−アセチルグルコサミン残基を含有する。糖タンパク質上で見出される主な糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）およびシアル酸（例えば、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（ＮＡＮＡ））が挙げられる。糖基のプロセシングは翻訳と同時にＥＲの内腔において生じ、翻訳後はＮ−結合糖タンパク質のためにゴルジ装置において継続する。
【０１９３】
Ｎ−グリカンは、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２の共通の五糖コアを有する（「Ｍａｎ」はマンノースを意味し、「Ｇｌｃ」はグルコースを意味し、「ＮＡｃ」はＮ−アセチルを意味し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを意味する）。通常、Ｎ−グリカン構造は、非還元末端を左側に、そして還元末端を右側にして表される。Ｎ−グリカンの還元末端は、該タンパク質上のグリコシル化部位を含むＡｓｎ残基に結合している末端である。Ｎ−グリカンは、「トリマンノースコア」、「五糖コア」または「少（ｐａｕｃｉ）マンノースコア」とも称されるＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（「Ｍａｎ３」）コア構造に付加される周辺糖（例えば、ＧｌｃＮＡｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含む分岐（アンテナ）の数において異なる。Ｎ−グリカンは、その分岐（分枝）構成成分に従い分類される（例えば、高マンノース、複合またはハイブリッド）。「高マンノース」型Ｎ−グリカンは、５個以上のマンノース残基を有する。「複合」型Ｎ−グリカンは、典型的には、１，３マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと「トリマンノース」コアの１，６マンノースアームに結合した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃとを有する。複合Ｎ−グリカンは、シアル酸または誘導体（例えば、「ＮＡＮＡ」または「ＮｅｕＡｃ」が挙げられ、ここで、「Ｎｅｕ」はノイラミン酸を意味し、「Ａｃ」はアセチルを意味する）で修飾されていてもよいガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ−アセチルガラクトサミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基をも有しうる。複合Ｎ−グリカンは、「二分岐（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）」ＧｌｃＮＡｃおよびコアフコース（「Ｆｕｃ」）を含む鎖内置換をも有しうる。複合Ｎ−グリカンはまた、「トリマンノースコア」上に複数のアンテナを有することが可能であり、これは、しばしば、「多アンテナグリカン」と称される。「ハイブリッド」Ｎ−グリカンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端における少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃと、トリマンノースコアの１，６マンノースアーム上の０個以上のマンノースとを有する。種々のＮ−グリカンは、「グリコフォーム（糖形態）」とも称される。
【０１９４】
複合Ｎ−グリカンに関しては、「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」なる語は、以下を意味する。「Ｇ−２」は、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ｇ−１」なる語は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ｇ０」なる語は、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ｇ１」なる語は、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ｇ２」なる語は、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ａ１」なる語は、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味し、「Ａ２」なる語は、ＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられうるＮ−グリカン構造を意味する。特に示されていない限り、「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」なる語は、Ｎ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合したフコースを欠くＮ−グリカン種を意味する。該用語が「Ｆ」を含む場合、「Ｆ」は、該Ｎ−グリカン種が該Ｎ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基上にフコース残基を含有することを示す。例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、Ａ１ＦおよびＡ２Ｆは全て、該Ｎ−グリカンが、該Ｎ−グリカンの還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合したフコース残基を更に含むことを示す。酵母および糸状菌のような下等真核生物は、通常、フコースを有するＮ−グリカンを産生しない。
【０１９５】
多アンテナＮ−グリカンに関しては、「多アンテナＮ−グリカン」なる語は、該Ｎ−グリカンの１，６アームもしくは１，３アームの非還元末端を含むマンノース残基上のＧｌｃＮＡｃ残基、または該Ｎ−グリカンの１，６アームおよび１，３アームの非還元末端を含むマンノース残基のそれぞれにおけるＧｌｃＮＡｃ残基を更に含むＮ−グリカンを意味する。したがって、多アンテナＮ−グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、またはＮＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２により特徴づけられうる。「１−４」なる語は１、２、３または４個の残基を意味する。
【０１９６】
二分岐Ｎ−グリカンに関しては、「二分岐Ｎ−グリカン」なる語は、ＧｌｃＮＡｃ残基が該Ｎ−グリカンの還元末端においてマンノース残基に結合している、Ｎ−グリカンを意味する。二分岐Ｎ−グリカンは式ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２により特徴づけられることが可能であり、ここで、各マンノース残基はその非還元末端においてＧｌｃＮＡｃ残基に結合している。これに対して、多アンテナＮ−グリカンがＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴づけられる場合、該式は、２つのＧｌｃＮＡｃ残基が、Ｎ−グリカンの、２つのアームの一方の非還元末端においてマンノース残基に結合しており、そして、１つのＧｌｃＮＡｃ残基が、該Ｎ−グリカンの他方のアームの非還元末端においてマンノース残基に結合していることを示す。
【０１９７】
５．１０  抗体の物理的特性
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは更に、軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域内に１以上のグリコシル化部位を含有しうる。そのようなグリコシル化部位は、抗原結合の変化により該抗体のｐＫの変化または該抗体もしくはフラグメントの免疫原性の増強をもたらしうる（Ｍａｒｓｈａｌｌら（１９７２）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４１：６７３−７０２；ＧａｌａおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２：５４８９−９４；Ｗａｌｌｉｃｋら（１９８８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６８：１０９９−１０９；Ｓｐｉｒｏ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １２：４３Ｒ−５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１６：４５２−７；Ｍｉｍｕｒａら（２０００）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：６９７−７０６）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフにおいて生じることが公知である。
【０１９８】
各抗体または抗原結合性フラグメントは、一般には６〜９．５のｐＨ範囲内である特有の等電点（ｐＩ）を有する。ＩｇＧ１抗体のｐＩは、典型的には７〜９．５のｐＨ範囲内であり、そして、ＩｇＧ４抗体のｐＩは、典型的には６〜８のｐＨ範囲内である。
【０１９９】
各抗体または抗原結合性フラグメントは特徴的な融解温度を有し、より高い融解温度は、より大きなインビボ総安定性を示す（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  ＲおよびＭａｎｎｉｎｇ  ＭＣ（２００２）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：３６１−７１）。一般に、ＴＭ１（初期アンフォールディングの温度）は６０℃より高い、６５℃より高い、または７０℃より高いことが可能である。抗体またはフラグメントの融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎら（２００３）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２０：１９５２−６０；Ｇｈｉｒｌａｎｄｏら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ６８：４７−５２）または円二色性（Ｍｕｒｒａｙら（２００２）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｓｃｉ  ４０：３４３−９）を用いて測定されうる。
【０２００】
もう１つの実施形態においては、急速に分解しない抗体およびその抗原結合性フラグメントが選択される。抗体またはフラグメントの分解は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ−ＭＳ（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＡＪおよびＨｕｇｈｅｓ  ＤＥ（１９９５）Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ６７：３６２６−３２）を用いて測定されうる。
【０２０１】
もう１つの実施形態においては、望ましくない免疫応答の誘発および／または変化した若しくは好ましくない薬物動態特性を招きうる凝集作用が最小である抗体およびその抗原結合性フラグメントが選択される。一般に、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下の凝集を示す抗体およびフラグメントが許容される。凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および光散乱を含む幾つかの技術により測定されうる。
【０２０２】
５．１１  抗体コンジュゲート
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントは、化学的部分にコンジュゲート化（結合）されることも可能である。該化学的部分は、とりわけ、重合体、放射性核種または免疫調節薬剤に結合する小分子でありうる。特定の実施形態においては、該化学的部分は、対象の体内の該抗体またはフラグメントの半減期を増加させる重合体である。適切な重合体には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）（これらに限定されるものではない）を包含する親水性重合体が含まれるが、これらに限定されるものではない。Ｌｅｅら（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３−９８１）はＰＥＧコンジュゲート化一本鎖抗体を開示している。Ｗｅｎら，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５−５５３）は、放射性金属キレーター（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に結合したＰＥＧに対して抗体をコンジュゲート化することを開示している。
【０２０３】
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメントはまた、例えば９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈ、４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒおよび５６Ｆｅのような標識とコンジュゲート化されうる。
【０２０４】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、例えば、その生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅ）されることも可能である。抗体またはフラグメントをペグ化するためには、典型的には、１以上のＰＥＧ基が該抗体または抗体フラグメントに結合する条件下、該抗体またはフラグメントを、反応性形態のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。特定の実施形態においては、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似反応性水溶性重合体）とのアシル化反応またはアルキル化反応により行われる。本明細書中で用いる「ポリエチレングリコール」なる語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれか、例えばモノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを含むと意図される。ある実施形態においては、ペグ化されるべき抗体またはフラグメントは、非グリコシル化抗体またはフラグメントである。タンパク質をペグ化するための方法は当技術分野で公知であり、本発明で提供される抗体に適用されうる。例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０２０５】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントは、蛍光または化学発光標識、例えば発蛍光団、例えば希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアナート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレスカミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識および安定フリーラジカルとコンジュゲート化されることも可能である。
【０２０６】
該抗体およびその抗原結合性フラグメントを種々の部分にコンジュゲート化するための当技術分野で公知のいずれかの方法が利用可能であり、該方法は、Ｈｕｎｔｅｒら（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５；Ｄａｖｉｄら（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４；Ｐａｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７に記載されている方法を包含する。抗体およびフラグメントをコンジュゲート化するための方法は常套手段であり、当技術分野において公知である。
【０２０７】
５．１２  抗体の治療用途
更に、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントでの治療を要する対象（ヒト対象を含む）の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、そのような対象は癌または感染性疾患に罹患している。
【０２０８】
「対象」は、哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル［例えば、カニクイザル、例えば、マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）］またはウサギである。ある実施形態においては、対象はヒト対象である。
【０２０９】
「組合される」なる語は、本発明で提供される方法において投与される成分が、同時運搬のために単一組成物へまたは２以上の組成物（例えば、キット）に別々に製剤化されることが可能であることを示す。各成分は、その他の成分が投与される時点とは異なる時点で対象に投与されうる。ある実施形態においては、各投与は、ある時間にわたって幾つかの間隔をあけて非同時（例えば、別々または連続的）に行われうる。更に、別々の成分は、同じ経路または異なる経路によって対象に投与されうる。
【０２１０】
更に、本明細書に開示されている単離された抗体またはその抗原結合性フラグメントでの治療を要する対象（ヒト対象を含む）の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、そのような対象は、感染症または感染性疾患に罹患している。幾つかの実施形態においては、本発明は癌の治療における使用のための抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。他の実施形態においては、本発明は感染症または感染性疾患の治療における使用のための抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。幾つかの実施形態においては、本発明は、癌の治療用の医薬の製造のための、抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。他の実施形態においては、本発明は、感染症または感染性疾患の治療用の医薬の製造のための、抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントをコードする核酸を含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。ある実施形態においては、本発明で提供される方法は更に、別の治療用薬剤または治療手技を含み、またはそれと組合せて使用される。
【０２１１】
１つの実施形態においては、前記の別の治療用薬剤は、（ｉ）抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉ）抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｉｉ）抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｖ）抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖ）抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉ）抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉ）抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｖｉｉｉ）抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｉｘ）抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘ）抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉ）抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉ）抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｉｉ）抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｖ）抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖ）抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉ）抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｖｉｉｉ）抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｉｘ）抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘ）抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉ）抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉ）抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｉｉ）抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｉｖ）抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメント、（ｘｘｖ）ＳＴＩＮＧアゴニスト、（ｘｘｖｉ）ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、および（ｘｘｖｉｉ）ＰＡＲＰインヒビターからなる群から選択される。
【０２１２】
１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合性フラグメントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＰＡＲＰインヒビターである。
【０２１３】
もう１つの実施形態においては、対象は癌に罹患している。１つの実施形態においては、癌は、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓癌、白血病、腎移行細胞癌、膀胱癌、ウィルムス癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、骨癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、胃癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳腫瘍、神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星細胞腫、退形成性星細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性筋線維症、軟部組織肉腫、甲状腺癌、子宮内膜癌、カルチノイド癌または肝臓癌、乳癌または胃癌である。１つの実施形態においては、癌は、例えば前記の種々のものの、転移癌である。
【０２１４】
本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメント、組成物および方法により治療されうる癌には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支原性癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫過誤腫、中皮腫；胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（腺管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、尿細管腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）  結腸直腸；尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（腺癌、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣細胞腫、胚細胞腫［松果腫］、多形神経膠芽腫、乏突起膠腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌腫］、顆粒膜嚢細胞腫瘍、セルトリライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌）、乳房；血液学：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、奇形腫異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに副腎：神経芽腫。したがって、本明細書に記載されている「癌細胞」なる語は、前記状態のいずれかに罹患した細胞を含む。
【０２１５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメント、組成物および方法により治療されうる癌には、肺癌、膵臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、甲状腺癌、骨髄異形成症候群、膀胱癌、表皮癌、黒色腫、乳癌、前立腺癌、頭頸部癌、卵巣癌、脳癌（脳腫瘍）、間葉系癌、肉腫、奇形癌、神経芽細胞腫、腎癌、肝細胞癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫および未分化甲状腺癌が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２１６】
１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、対象はウイルス感染症に罹患している。１つの実施形態においては、ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス性脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスによる感染症である。
【０２１７】
１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、対象は細菌感染症に罹患している。１つの実施形態においては、細菌感染症は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、桿菌、ビブリオ・コレレ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタン（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、バシラス・アンスリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、マイコバクテリウム・レプレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）およびボリエラ（Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ）からなる群から選択される細菌による感染症である。
【０２１８】
１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、対象は真菌感染症に罹患している。１つの実施形態においては、真菌感染症は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）［アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など］、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）［フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など］、ムコラーレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）属［ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシジア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾプス（ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属］、スポロスリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストマイセス・デルマチチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）およびヒストプラスマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）からなる群から選択される真菌による感染症である。
【０２１９】
１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを使用する対象の治療方法を提供し、ここで、対象は寄生虫感染症に罹患している。１つの実施形態においては、寄生虫感染症は、エンタモエバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォウレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカンタモエバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモジウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロッティ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラスマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）およびニッポストロンジルス・ブラシリエンシス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される寄生虫による感染症である。
【０２２０】
特定の態様において、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、例えば本明細書に記載されている癌のようないずれかの疾患を予防または治療するために、そのような治療または予防を要する対象において、単独でまたは他の別の治療用薬剤および／または治療用手技と組合せて、使用されうる。別の治療用薬剤と組合されたそのような抗体およびフラグメントを含む組成物（例えば、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物）も想定される。
【０２２１】
したがって、本発明は、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。ある実施形態においては、投与は、別の治療用薬剤または治療手技と組合せて使用される。
【０２２２】
また、本発明は、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症または感染性疾患の治療方法を提供する。ある実施形態においては、投与は、別の治療用薬剤または治療手技と組合せて使用される。
【０２２３】
もう１つの実施形態においては、本発明は、別の治療用薬剤と組合された、癌の治療または感染症もしくは感染性疾患の治療における使用のための、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、癌の治療における使用のためのものである。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、感染症の治療における使用のためのものである。１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、感染性疾患の治療における使用のためのものである。ある実施形態においては、治療は別の治療用薬剤を含む。
【０２２４】
もう１つの実施形態においては、別の治療用薬剤と組合された、癌の治療または感染症もしくは感染性疾患の治療のための医薬の製造のための、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの使用を提供する。もう１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントと癌の治療または感染症もしくは感染性疾患の治療のための別の治療用薬剤との組合せを提供する。１つの実施形態においては、癌の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、感染症の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、感染性疾患の治療のための医薬の製造のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。ある実施形態においては、医薬は別の治療用薬剤と共に処方（製剤化）される。
【０２２５】
他の実施形態においては、別の治療用薬剤または治療手技と所望により組合されていてもよい、本明細書に開示されている抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは本明細書に開示されている発現ベクターもしくは宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法または感染症もしくは感染性疾患の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染性疾患の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染性疾患の治療方法を提供する。１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における癌の治療方法を提供する。もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染症の治療方法を提供する。更にもう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞の有効量を対象に投与することを含む、ヒト対象における感染性疾患の治療方法を提供する。ある実施形態においては、該方法は、追加的な治療用薬剤の投与を更に含む。他の実施形態においては、該方法は、追加的な治療手技を更に含む。
【０２２６】
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独でまたは腫瘍ワクチンと組合せて、使用されうる。腫瘍ワクチンの例には以下のものが挙げられるが、それらに限定されるものではない：ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症により引き起こされる癌に対するワクチン、例えばＧａｒｄａｓｉｌ（登録商標）、Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）およびＣｅｒｖａｒｉｘ（登録商標）；Ｂ型肝炎ウイルスにより引き起こされる肝癌を予防するワクチン、例えばＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（登録商標）およびＲｅｃｏｍｂｉｖａｘＨＢ（登録商標）；免疫応答を誘発する腫瘍溶解性ウイルス療法、例えばＩｍｌｙｇｉｃ（登録商標）；ＤＮＡワクチン、例えばＳｙｎｃｈｏｔｒｏｐｅ  ＭＡ２ＭプラスミドＤＮＡワクチンおよびＺＹＣ１０１；マンマグロビン−ａ  ＤＮＡワクチン（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４  ２０（２３）：５９６４−７５を参照されたい）；ベクターに基づくワクチン、例えばＰＳＡ−ＴＲＩＣＯＭ（プロストバック（ｐｒｏｓｔｖａｃ））、ＰＡＮＶＡＣ−ＶＦ、リステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）に基づくＰＳＡワクチン（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，２０１４，２（５）１３７−１４８を参照されたい）、リステリア−メソテリン（Ｌｉｓｔｅｒｉａ−ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）アデノ（Ａｄｅｎｏ）−ＣＥＡ；同種ワクチン、例えばＧＶＡＸ、ＢＬＰ−２５（抗アンカラムチン１）、ベラゲンプマツセル（Ｂｅｌａｇｅｎｐｕｍａｔｕｃｅｌ）−Ｌ、ＴＧ４０１０、ＣＩＭＡｖａｘ上皮増殖因子ワクチン、ＮＹ−ＥＳＯ、ＧＭ．ＣＤ４０Ｌ−ＣＣＬ２１；自己ワクチン、例えばアデノ（Ａｄｅｎｏ）−ＣＤ４０Ｌ、ＢＣＧ、ＩＮＧＮ−２２５、樹状細胞ワクチン、例えばＰｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標）（シプロイセル（Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ）−Ｔ）、ｒＦ−ＣＥＡ−ＭＵＣ１−ＴＲＩＣＯＭ（パンバック（ｐａｎｖａｃ）−ＤＣ）；抗原ワクチン、例えばＭＵＣ−１（スチムバックス（ｓｔｉｍｕｖａｘ））、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰ−１００、ＭＡＧＥ−Ａ３（黒色腫抗原コード遺伝子Ａ３）、ＩＮＧＮ−２２５（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １５３（２０１５）１−９を参照されたい）。
【０２２７】
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独でまたは化学療法剤と組合せて、使用されうる。
【０２２８】
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独でまたは放射線療法と組合せて、使用されうる。
【０２２９】
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単独でまたは標的化療法と組合せて、使用されうる。標的化療法の例には以下のものが含まれる：ホルモン療法、シグナル伝達インヒビター（例えば、ＥＧＦＲインヒビター、例えば、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））およびエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））；ＨＥＲ２インヒビター（例えば、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））およびペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）））；ＢＣＲ−ＡＢＬインヒビター（例えば、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））およびダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）））；ＡＬＫインヒビター（例えば、クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標））およびセリチニブ（ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）（Ｚｙｋａｄｉａ（登録商標）））；ＢＲＡＦインヒビター（例えば、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））およびダブラフェニブ（ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）））、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導薬剤（例えば、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））およびカルフィルゾミブ（ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ）（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標）））、血管新生インヒビター（例えば、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））およびラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））、毒素に結合したモノクローナル抗体（例えば、ブレンツキシマブ・ベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））およびアド−トラスツズマブ・エムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）））。
【０２３０】
特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗癌治療用薬剤と組合せて使用されうる。他の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは免疫調節薬と組合せて使用されうる。幾つかの実施形態においては、免疫調節薬は免疫調節受容体インヒビターである。ある実施形態においては、免疫調節薬は、受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて使用されうる。
【０２３１】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のものの１以上と組合せて使用される：抗ＰＤＬ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＣＳ１抗体（例えば、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ））、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体（例えば、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ））、抗ＣＤ１３７抗体（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ１抗体［例えば、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ピジリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＴ−０１１）］、抗ＰＤ−Ｌ１抗体［例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、ドゥルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ］、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＩＬＴ１抗体、抗ＩＬＴ２抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＩＬＴ５抗体、抗ＩＬＴ６抗体、抗ＩＬＴ７抗体、抗ＩＬＴ８抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体、抗４−１ＢＢ抗体（例えば、ＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＩＬ−１０抗体、ＩＬ−１０またはペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ）ＩＬ−１０、あるいはそのような標的の任意の小さな有機分子インヒビター。
【０２３２】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＰＤＬ１抗体［例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、ドゥルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ］と組合せて使用される。
【０２３３】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて使用される。
【０２３４】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＣＳ１抗体と組合せて使用される。
【０２３５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体と組合せて使用される。
【０２３６】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＣＤ１３７（例えば、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ））抗体と組合せて使用される。
【０２３７】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＧＩＴＲ（例えば、ＴＲＸ５１８）抗体と組合せて使用される。
【０２３８】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組合せて使用される。
【０２３９】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ１抗体と組合せて使用される。
【０２４０】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ２抗体と組合せて使用される。
【０２４１】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ３抗体と組合せて使用される。
【０２４２】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ４抗体と組合せて使用される。
【０２４３】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ５抗体と組合せて使用される。
【０２４４】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ６抗体と組合せて使用される。
【０２４５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ７抗体と組合せて使用される。
【０２４６】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＴＬ８抗体と組合せて使用される。
【０２４７】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＣＤ４０抗体と組合せて使用される。
【０２４８】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＯＸ４０抗体と組合せて使用される。
【０２４９】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体と組合せて使用される。
【０２５０】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体と組合せて使用される。
【０２５１】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体と組合せて使用される。
【０２５２】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体と組合せて使用される。
【０２５３】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体と組合せて使用される。
【０２５４】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体と組合せて使用される。
【０２５５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と組合せて使用される。
【０２５６】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体と組合せて使用される。
【０２５７】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と組合せて使用される。
【０２５８】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体と組合せて使用される。
【０２５９】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメント、は抗ＩＣＯＳ抗体と組合せて使用される。
【０２６０】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＳＩＲＰα抗体と組合せて使用される。
【０２６１】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗４−１ＢＢ抗体と組合せて使用される。
【０２６２】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＩＬ−１０抗体と組合せて使用される。
【０２６３】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、抗ＴＳＬＰ抗体と組合せて使用される。
【０２６４】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０と組合せて使用される。
【０２６５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のものの１以上と組合せて使用される：インヒビター（例えば、小さな有機分子または抗体もしくはその抗原結合性フラグメント）、例えばＭＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳類標的）インヒビター、細胞毒性薬剤、白金薬剤、ＥＧＦＲインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、微小管安定化剤、タキサン、ＣＤ２０インヒビター、ＣＤ５２インヒビター、ＣＤ３０インヒビター、ＲＡＮＫ（核因子カッパＢの受容体アクチベーター）インヒビター、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＲＡＮＫＬ（核因子カッパＢリガンドの受容体アクチベーター）インヒビター、ＥＲＫインヒビター、ＭＡＰキナーゼインヒビター、ＡＫＴインヒビター、ＭＥＫインヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、ＰＩ３Ｋインヒビター、ＨＥＲ１インヒビター、ＨＥＲ２インヒビター、ＨＥＲ３インヒビター、ＨＥＲ４インヒビター、Ｂｃｌ２インヒビター、ＣＤ２２インヒビター、ＣＤ７９ｂインヒビター、ＥｒｂＢ２インヒビターまたはファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター。
【０２６６】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のものの任意の１以上と組合せて使用される：１３−シス−レチノイン酸、３−［５−（メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、４−ヒドロキシタモキシフェン、５−デオキシウリジン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、７−ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ−４４３６５４、アビラテロンアセタート（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、アブラキサン（ａｂｒａｘａｎｅ）、ＡＢＴ−５７８、アコルビフェン（ａｃｏｌｂｉｆｅｎｅ）、ＡＤＳ−１００３８０、ＡＬＴ−１１０、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、アナグレリド（ａｎａｇｒｅｌｉｄｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、ＡＰ−２３５７３、ＡＲＱ−１９７、アルゾキシフェン（ａｒｚｏｘｉｆｅｎｅ）、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴ−９２６３、アトラセンタン（ａｔｒａｓｅｎｔａｎ）、アキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）、ＡＺＤ１１１５、カルメットゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン（ｂａｔａｂｕｌｉｎ）、ＢＣ−２１０、ベソデュトクス（ｂｅｓｏｄｕｔｏｘ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ブレオマイシン、ＢＭＳ−２１４６６２、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−２７５２９１、ＢＭＳ−３１０７０５、ボルテジミブ（ｂｏｒｔｅｚｉｍｉｂ）、ブセレリン（ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カルシトリオール（ｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、カネルチニブ（ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ＣＣ８４９０、セジラニブ（Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ）、ＣＧ−１５２１、ＣＧ−７８１、クラミドシン（ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロロトキシン（ｃｈｌｏｒｏｔｏｘｉｎ）、シレンジチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）、シミチジン（ｃｉｍｉｔｉｄｉｎｅ）、シスプラチン、クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、クロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）、ＣＯＬ−３、ＣＰ−７２４７１４、シクロホスファミド、シプロテロン（ｃｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ）、シプロテロンアセタート、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ダシノスタット（ｄａｃｉｎｏｓｔａｔ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ダヌセルチブ（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、ダサタニブ（ｄａｓａｔａｎｉｂ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デ���タニブ（ｄｅｃａｔａｎｉｂ）、デグエリン（ｄｅｇｕｅｌｉｎ）、デニロイキン（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ）、デオキシコホルマイシン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）、デプシペプチド（ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ）、ジアリールプロピオニトリル、ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ）、ジフチトックス（ｄｉｆｔｉｔｏｘ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、エドテカリン（ｅｄｏｔｅｃａｒｉｎ）、イットリウム−９０標識エドトレオチド（ｅｄｏｔｒｅｏｔｉｄｅ）、エドトレオチド、ＥＫＢ−５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、エンザルタミド（ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エンザスタウリン（ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エピチロン（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅ）Ｂ、ＥＲＡ−９２３、エルビツクス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、エストラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）、フラボピリドール（ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルドロコルチゾン（ｆｌｕｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ）、フルオキシメステロン（ｆｌｕｏｘｙｍｅｓｔｅｒｏｎｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベストラント（Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、ガレテロン（ｇａｌｅｔｅｒｏｎｅ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ギマテカン（ｇｉｍａｔｅｃａｎ）、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）、酢酸ゴセレリン、ゴシポール（ｇｏｓｓｙｐｏｌ）、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ−３３３９、ヒドロキシプロゲステロンカプロアート、ヒドロキシウレア、ＩＣ８７１１４、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、イドキシフェン（ｉｄｏｘｙｆｅｎｅ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＩＭ８６２、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン１２、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ＪＮＪ−１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ−０４０２、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ラソホキシフェン（ｌａｓｏｆｏｘｉｆｅｎｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、酢酸ロイプロリド、レバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、リポソーム封入パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ロナファルニブ（ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）、ルカントン（ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ）、���Ｙ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メドロキシプロゲステロンアセタート（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、メゲストロールアセタート（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、メスナ（ｍｅｓｎａ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、トザセルチブ（ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）、ＭＬＮ８０５４、ネオバスタット（ｎｅｏｖａｓｔａｔ）、ネラチニブ（ｎｅｒａｔｉｎｉｂ）、ニューラジアブ（ｎｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）、ニルチミド（ｎｉｌｕｔｉｍｉｄｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、オブリメルセン（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オラパリブ（ｏｌａｐａｒｉｂ）、オレゴボマブ（ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）、オルテロネル（ｏｒｔｅｒｏｎｅｌ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、パルボシクリブ（ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ−インターフェロン、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ペリホシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、フェニルアラニンマスタード（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｍｕｓｔａｒｄ）、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＰＩＫ−７５、ピペンドキシフェン（ｐｉｐｅｎｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＰＫＩ−１６６、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、ポルフィマー（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、プロゲスチン（ｐｒｏｇｅｓｔｉｎ）、ＰＸ−８６６、Ｒ−７６３、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、ラゾキシン（ｒａｚｏｘｉｎ）、リダホロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、ＲＴＡ７４４、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、スクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）、Ｓｄｘ１０２、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ）、セルメチニブ（ｓｅｌｕｍｅｔｉｎｉｂ）、セマキサニブ（ｓｅｍａｘａｎｉｂ）、ＳＦ１１２６、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、ＳＮ３６０９３、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、スピロノラクトン（ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、ＳＲ１３６６８、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、Ｓ���６６６８、スベロイルアナリド（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎａｌｉｄｅ）ヒドロキサム酸、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、合成エストロゲン、タランパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、タリモゲン  ラヘルパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、テスミリフェン（ｔｅｓｍｉｌｉｆｅｎｅ）、テストステロン、テトランドリン（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ）、ＴＧＸ−２２１、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、チピファルニブ（ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ）、チボザニブ（ｔｉｖｏｚａｎｉｂ）、ＴＫＩ−２５８、ＴＬＫ２８６、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、クエン酸トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、トラベクテジン（ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、トリコスタチン（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ、トリシリビンホスファート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）一水和物、トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）パモアート、ＴＳＥ−４２４、ウラシルマスタード、バルプロ酸、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）、バタラニブ（ｖａｔａｌａｎｉｂ）、ＶＥＧＦトラップ、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ビテスパン（ｖｉｔｅｓｐａｎ）、ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、ＶＸ−７４５、ウォートマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）、Ｘｒ３１１、ザノリムマブ（ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ−３０４７０９、ＺＭ３３６３７２、ＺＳＴＫ４７４。
【０２６７】
本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて使用される適切な抗癌性薬剤（抗癌因子）の非限定的な例には、癌および腫瘍性疾患に対する細胞増殖抑制薬剤、細胞毒性薬剤、標的化治療用薬剤（小分子、生物製剤、ｓｉＲＮＡおよびマイクロＲＮＡ）が含まれる。１つの実施形態においては、該薬剤は、代謝拮抗剤（例えば、メトクストレキサート、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、フルダラビン、カペシタビン）である。１つの実施形態においては、該薬剤は、アルキル化剤、例えばテモゾロミドまたはシクロホスファミドである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＤＮＡ相互作用性またはＤＮＡ損傷性薬剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン、またはドキソルビシンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、電離放射線、例えば放射線療法である。１つの実施形態においては、該薬剤は、トポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えばエトポシドまたはドキソルビシンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、トポイソメラーゼＩインヒビター、例えばイリノテカンまたはトポテカンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、チューブリン相互作用薬剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサナーまたはエポチロンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、キネシン紡錘体タンパク質インヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、紡錘体チェックポイントインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）インヒビター、例えばオラパリブ、ニラパリブまたはベリパリブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）インヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ロテアーゼインヒビター、例えばカテプシンＤまたはカテプシンＫインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、プロテオソームまたはユビキチン化インヒビター、例えばボルテゾミブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、突然変異体ｐ５３の、その野生型ｐ５３活性を回復させるための刺激因子である。１つの実施形態においては、該薬剤は、アデノウイルス−ｐ５３である。１つの実施形態においては、該薬剤は、Ｂｃｌ−２インヒビター、例えばＡＢＴ−２６３である。１つの実施形態においては、該薬剤は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）モジュレーター、例えばゲルダナマイシンおよび１７−ＡＡＧである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター、例えばボリノスタット（ＳＡＨＡ）である。１つの実施形態においては、該薬剤は、性ホルモン調節剤である。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗エストロゲン、例えばタモキシフェンまたはフルベストラントである。１つの実施形態においては、該薬剤は、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばラロキシフェンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗アンドロゲン、例えばビカルタミドまたはフルタミドである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＬＨＲＨアゴニスト、例えばロイプロリドである。１つの実施形態においては、該薬剤は、５’−レダクターゼインヒビター、例えばフィナステリドである。１つの実施形態においては、該薬剤は、チトクロームＰ４５０  Ｃ１７リアーゼ（ＣＹＰ４５０ｃ１７；１７αＣとも称される）である。１つの実施形態においては、該薬剤は、アロマターゼインヒビター、例えばレトロゾール、アナストロゾールまたはエキセメスタンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＥＧＦＲキナーゼインヒビター、例えばゲフチニブ、エルロチニブまたはラプチニブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、二重ｅｒｂＢ１およびｅｒｂＢ２インヒビター、例えばラパチニブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、多標的化キナーゼ（セリン／スレオニンおよび／またはチロシンキナーゼ）インヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＡＢＬキナーゼインヒビター、例えばイマチニブおよびニロチニブまたはダサチニブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、ＦＬＴ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｔｉｅ２、Ｒａｆ、ＭＥＫまたはＥＲＫインヒビター、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＰＬＸ−４０３２、アキシチニブ、ＰＴＫ７８７またはＧＳＫ−１１２０２１２である。１つの実施形態においては、該薬剤は、ポロ様キナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、オーロラキナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＪＡＫインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ｃ−ＭＥＴキナーゼインヒビターである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＰＩ３ＫまたはｍＴＯＲインヒビター、例えばＧＤＣ−０９４１、ＢＥＺ−２３５、ＢＫＭ−１２０またはＡＺＤ−８０５５である。１つの実施形態においては、該薬剤は、ラパマイシンまたはラパマイシン類似体、例えばテムシロリムス、エベロリムス、またはデフォロリムスである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）アゴニストである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＣＸＣＲ（ＣＸＣケモカイン受容体）インヒビター、ＣＸＣＲ２アンタゴニストである。
【０２６８】
他の抗癌性薬剤（抗腫瘍剤としても公知である）には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アラ（ａｒａ）−Ｃ、アドリアマイシン、サイトキサン、カルボプラチン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イフォスフミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビンリン酸塩、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ナベルビン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、テニポシド、シタラビン、ペメトレキセド、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、ドロモスタノロンプロピオナート、テストラクトン、メゲストロールアセタート、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、フルタミド  メドロキシプロゲステロンアセタート、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ドロロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、プロファイマー、チオテパ、アルトレタミン、ドキシル、オンタク、デポサイト、アラネスプ、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）またはＫｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標）。１つの実施形態においては、該薬剤は、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター、例えばＳＡＲＡＳＡＲ（商標）（４−［２−［４−［（１１Ｒ）−３，１０−ジブロモ−８−クロロ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［５，６］シクロヘプタ［１，２−ｂ］ピリジン−１１−イル−］−１−ピペリジニル］−２−オキソエチル］−ピペリジンカルボキサミド、チピファルニブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、インターフェロン、例えばイントロン（Ｉｎｔｒｏｎ）Ａまたはペグ−イントロン（Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ）である。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ｅｒｂＢ１抗体、例えばセツキシマブまたはパニツムマブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ｅｒｂＢ２抗体、例えばトラスツズマブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＣＤ５２抗体、例えばアレムツズマブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＤ３３抗体、例えばゲムツズマブ  オゾガマイシンである。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、例えばＡＶＡＳＴＩＮである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＴＲＩＡＬリガンド、例えばレキサツムマブ、マパツムマブま��はＡＭＧ−６５５である。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブである。１つの実施形態においては、該薬剤は、ＣＴＡ１、ＣＥＡ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、ＭＨＣＩＩ、ＨＧＦ、ＩＬ−６、ＭＵＣ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＬ６、ＴＡＧ−７２、ＴＲＡＩＬＲ、ＶＥＧＦＲ、ＩＧＦ−２またはＦＧＦのいずれかに対する抗体である。１つの実施形態においては、該薬剤は、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、例えばダロツズマブ（ＭＫ−０６４６）またはロバツムマブ（ＳＣＨ７１７４５４）である。
【０２６９】
「エストロゲン受容体モジュレーター」は、メカニズムには無関係に、受容体へのエストロゲンの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。エストロゲン受容体モジュレーターの例には、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ヨードキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノアート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２７０】
「アンドロゲン受容体モジュレーター」は、メカニズムには無関係に、受容体へのアンドロゲンの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。アンドロゲン受容体モジュレーターの例には、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）および他の５α−レダクターゼインヒビター、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）および酢酸アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）が含まれる。
【０２７１】
「レチノイド受容体モジュレーター」は、メカニズムには無関係に、受容体へのレチノイドの結合を阻害または抑制する化合物を意味する。そのようなレチノイド受容体モジュレーターの例には、ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチナミドおよびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドが含まれる。
【０２７２】
「細胞毒性／静細胞薬剤」なる語は、主に細胞の機能を直接的に阻害することにより細胞死を引き起こす若しくは細胞増殖を抑制する又は細胞有糸分裂を抑制もしくは阻害する化合物を意味し、例えばアルキル化剤、腫瘍壊死因子、インターカレーター、低酸素活性化性化合物、微小管インヒビター／微小管安定化剤、有糸分裂キネシンのインヒビター、ヒストンデアセチラーゼのインヒビター、有糸分裂進行に関与するキナーゼのインヒビター、増殖因子およびサイトカインシグナル伝達経路に関与するキナーゼのインヒビター、代謝拮抗剤、生体応答調節剤；ホルモン／抗ホルモン治療用薬剤、造血成長因子、モノクローナル抗体標的化治療用薬剤、トポイソメラーゼインヒビター、プロテアソームインヒビター、ユビキチンリガーゼインヒビターおよびオーロラキナーゼインヒビターを包含する。
【０２７３】
細胞毒性／静細胞薬剤の例には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：白金配位化合物、セルテネフ（ｓｅｒｔｅｎｅｆ）、カケクチン（ｃａｃｈｅｃｔｉｎ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、タソネルミン（ｔａｓｏｎｅｒｍｉｎ）、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ジブロモズルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ホテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ネダプラチン（ｎｅｄａｐｌａｔｉｎ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、トシル酸イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、塩化ジブロスピジウム（ｄｉｂｒｏｓｐｉｄｉｕｍ）、プミテパ（ｐｕｍｉｔｅｐａ）、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン（ｓａｔｒａｐｌａｔｉｎ）、プロフィロマイシン（ｐｒｏｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、イロフルベン（ｉｒｏｆｕｌｖｅｎ）、デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グルホスファミド（ｇｌｕｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−ミュー−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン（ｄｉａｒｉｚｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、三酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）、ピナフィド（ｐｉｎａｆｉｄｅ）、バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、アムルビシン（ａｍｒｕｂｉｃｉｎ）、アンチネオプラストン（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎ）、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、ガラルビシン（ｇａｌａｒｕｂｉｃｉｎ）、エリナフィド（ｅｌｉｎａｆｉｄｅ）、ＭＥＮ１０７５５および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ  ００／５００３２を参照されたい）。
【０２７４】
低酸素活性化性化合物の一例としては、チラパザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）が挙げられる。
【０２７５】
プロテアソームインヒビターの例には、ラクタシスチン（ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）およびＭＬＮ−３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２７６】
微小管インヒビター／微小管安定化剤の例には、一般にタキサンが含まれる。具体的な化合物には以下のものが含まれる：パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、硫酸ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン（ｎｏｒｖｉｎｃａｌｅｕｋｏｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドセタキソール（ｄｏｃｅｔａｘｏｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、ミボブリン（ｍｉｖｏｂｕｌｉｎ）イセチオナート、オーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、セマドチン（ｃｅｍａｄｏｔｉｎ）、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン（ａｎｈｙｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド（配列番号１２８として開示されている「Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン」）、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８１号および第６，２８８，２３７号を参照）およびＢＭＳ１８８７９７。
【０２７７】
トポイソメラーゼインヒビターの幾つかの例としては、以下のものが挙げられる：トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ヒカプタミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−シャールトルーシン（ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｎ）、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノール［１，２ｂ］キノリン−１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン，ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、ソブゾキサン（ｓｏｂｕｚｏｘａｎｅ）、２’−ジメチルアミノ−２’−デオキシ−エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソグイノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オンおよびジメスナ（ｄｉｍｅｓｎａ）。
【０２７８】
有糸分裂キネシン、特にヒト有糸分裂キネシンＫＳＰのインヒビターの例は公開公報ＷＯ０３／０３９４６０、ＷＯ０３／０５００６４、ＷＯ０３／０５０１２２、ＷＯ０３／０４９５２７、ＷＯ０３／０４９６７９、ＷＯ０３／０４９６７８、ＷＯ０４／０３９７７４、ＷＯ０３／０７９９７３、ＷＯ０３／０９９２１１、ＷＯ０３／１０５８５５、ＷＯ０３／１０６４１７、ＷＯ０４／０３７１７１、ＷＯ０４／０５８１４８、ＷＯ０４／０５８７００、ＷＯ０４／１２６６９９、ＷＯ０５／０１８６３８、ＷＯ０５／０１９２０６、ＷＯ０５／０１９２０５、ＷＯ０５／０１８５４７、ＷＯ０５／０１７１９０、ＵＳ２００５／０１７６７７６に記載されている。１つの実施形態においては、有糸分裂キネシンのインヒビターには、ＫＳＰのインヒビター、ＭＫＬＰ１のインヒビター、ＣＥＮＰ−Ｅのインヒビター、ＭＣＡＫのインヒビターおよびＲａｂ６−ＫＩＦＬのインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２７９】
「ヒストンデアセチラーゼインヒビター」の例には、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン（ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ）、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８およびスクリプタイド（ｓｃｒｉｐｔａｉｄ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。他のヒストンデアセチラーゼインヒビターに対する更なる言及は以下の原稿：Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７−５１１６（２００３）に見出されうる。
【０２８０】
「有糸分裂の進行に関与するキナーゼのインヒビター」には、オーロラキナーゼのインヒビター、Ｐｏｌｏ様キナーゼ（ＰＬＫ）のインヒビター（特にＰＬＫ−１のインヒビター）、ｂｕｂ−１のインヒビターおよびｂｕｂ−Ｒ１のインヒビターが含まれるが、これらに限定されるものではない。「オーロラキナーゼインヒビター」の一例はＶＸ−６８０である。
【０２８１】
「抗増殖性薬剤」には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１およびＩＮＸ３００１、ならびに抗代謝拮抗剤、例えばエノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルモフル（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ガロシタビン（ｇａｌｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、シタラビンオクホスファート（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、パルチトレキシド（ｐａｌｔｉｔｒｅｘｉｄ）、エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）、チアゾフリン（ｔｉａｚｏｆｕｒｉｎ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ノラトレキセド（ｎｏｌａｔｒｅｘｅｄ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ネルザラビン（ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ）、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン（ａｐｌｉｄｉｎｅ）、エクテイナスシジン（ｅｃｔｅｉｎａｓｃｉｄｉｎ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）、５−フルオロウラシル、アラノシン（ａｌａｎｏｓｉｎｅ）、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン（ｓｗａｉｎｓｏｎｉｎｅ）、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、メチオニナーゼ（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎａｓｅ）、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミカルバゾンおよびトラスツズマブ。
【０２８２】
モノクローナル抗体標的化治療用薬剤の例には、癌細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に細胞毒性薬剤または放射性同位体が結合している治療用薬剤が含まれる。具体例にはＢｅｘｘａｒが含まれる。
【０２８３】
「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビター」は、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−Ｉ）およびゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴアーゼ−ＩＩ；Ｒａｂ  ＧＧＰＴアーゼとも称される）を含むプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素の任意の１つ又は任意の組合せを阻害する化合物を意味する。
【０２８４】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの例には、以下の刊行物および特許において見出されうるものが含まれる：ＷＯ  ９６／３０３４３、ＷＯ  ９７／１８８１３、ＷＯ  ９７／２１７０１、ＷＯ  ９７／２３４７８、ＷＯ  ９７／３８６６５、ＷＯ  ９８／２８９８０、ＷＯ  ９８／２９１１９、ＷＯ  ９５／３２９８７、米国特許第５，４２０，２４５号，米国特許第５，５２３，４３０号、米国特許第５，５３２，３５９号、米国特許第５，５１０，５１０号、米国特許第５，５８９，４８５号、米国特許第５，６０２，０９８号、欧州特許公開番号０  ６１８  ２２１、欧州特許公開番号０  ６７５  １１２、欧州特許公開番号０  ６０４  １８１、欧州特許公開番号０  ６９６  ５９３、ＷＯ  ９４／１９３５７、ＷＯ  ９５／０８５４２、ＷＯ  ９５／１１９１７、ＷＯ  ９５／１２６１２、ＷＯ  ９５／１２５７２、ＷＯ  ９５／１０５１４、米国特許第５，６６１，１５２号、ＷＯ  ９５／１０５１５、ＷＯ  ９５／１０５１６、ＷＯ  ９５／２４６１２、ＷＯ  ９５／３４５３５、ＷＯ  ９５／２５０８６、ＷＯ  ９６／０５５２９、ＷＯ  ９６／０６１３８、ＷＯ  ９６／０６１９３、ＷＯ  ９６／１６４４３、ＷＯ  ９６／２１７０１、ＷＯ  ９６／２１４５６、ＷＯ  ９６／２２２７８、ＷＯ  ９６／２４６１１、ＷＯ  ９６／２４６１２、ＷＯ  ９６／０５１６８、ＷＯ  ９６／０５１６９、ＷＯ  ９６／００７３６号、米国特許第５，５７１，７９２号、ＷＯ  ９６／１７８６１、ＷＯ  ９６／３３１５９、ＷＯ  ９６／３４８５０、ＷＯ  ９６／３４８５１、ＷＯ  ９６／３００１７、ＷＯ  ９６／３００１８、ＷＯ  ９６／３０３６２、ＷＯ  ９６／３０３６３、ＷＯ  ９６／３１１１１、ＷＯ  ９６／３１４７７、ＷＯ  ９６／３１４７８、ＷＯ  ９６／３１５０１、ＷＯ  ９７／００２５２、ＷＯ  ９７／０３０４７、ＷＯ  ９７／０３０５０、ＷＯ  ９７／０４７８５、ＷＯ  ９７／０２９２０、ＷＯ  ９７／１７０７０、ＷＯ  ９７／２３４７８、ＷＯ  ９７／２６２４６、ＷＯ  ９７／３００５３、ＷＯ  ９７／４４３５０、ＷＯ  ９８／０２４３６および米国特許第５，５３２，３５９号。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼインヒビターの役割の一例に関しては、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）を参照されたい。
【０２８５】
「血管新生インヒビター」は、メカニズムには無関係に、新たな血管の形成を阻害する化合物を意味する。血管新生インヒビターの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：チロシンキナーゼインヒビター、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）のインヒビター、上皮由来、繊維芽細胞由来または血小板由来増殖因子のインヒビター、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）インヒビター、インテグリンブロッカー、インターフェロンα、インターロイキン−１２、ペントサンポリスルファート、シクロオキシゲナーゼインヒビター、例えば非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えばアスピリンおよびイブプロフェン、ならびに選択的シクロオキシゲナーゼ２インヒビター、例えばセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）およびロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイド抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ミネラルコルチコステロイド、デキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、メチルプレド（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄ）、ベタメタゾン（ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ））、カルボキシアミドトリアゾール、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ−４、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール（ｆｕｍａｇｉｌｌｏｌ）、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、アンジオスタチン（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、トロポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１−１４５（１９８５）を参照されたい）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９９）；Ｋｉｍら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）；ＷＯ００／４４７７７；およびＷＯ００／６１１８６）。
【０２８６】
血管新生インヒビターの他の例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：エンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、ウクライン（ｕｋｒａｉｎ）、ランピルナーゼ（ｒａｎｐｉｒｎａｓｅ）、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバマート、アセチルジナナリン（ａｃｅｔｙｌｄｉｎａｎａｌｉｎｅ）、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）−フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン（ｓｑｕａｌａｍｉｎｅ）、コムブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノペントースホスファート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホナート）、および３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）。
【０２８７】
血管新生をモジュレーションまたは抑制し、また、本発明で提供される化合物と組合せて使用されうる他の治療用薬剤には、凝固および線維素溶解系をモジュレーションまたは抑制する薬剤が含まれる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９−６９２（２０００）における総説を参照されたい）。本発明の化合物と組合せて使用されうる、凝固および線維素溶解経路をモジュレーションまたは抑制するそのような薬剤の例には、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３（１９９８）を参照されたい）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵインヒビター（活性トロンビン活性化性線維素溶解インヒビター（ＴＡＦＩａ）のインヒビターとしても公知である）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．１０１：３２９−３５４（２００１）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されるものではない。ＴＡＦＩａインヒビターは米国特許出願（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．）番号６０／３１０，９２７（２００１年８月８日付け出願）および６０／３４９，９２５（２００２年１月１８日付け出願）に記載されている。
【０２８８】
「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を阻害する薬剤」は、ＲＴＫを阻害する、したがって、発癌および腫瘍進行に関与するメカニズムを阻害する化合物を意味する。そのような薬剤には、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびＭＡＰＫ１のインヒビターが含まれる。他の薬剤には、Ｂｕｍｅ−ＪｅｎｓｅｎおよびＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１に記載されているＲＴＫのインヒビターが含まれる。
【０２８９】
「細胞増殖および生存シグナル伝達経路のインヒビター」は、細胞表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する化合物を意味する。そのような薬剤には以下のものが含まれる：セリン／トレオニンキナーゼのインヒビター（限定的なものではないが、例えばＷＯ  ０２／０８３０６４、ＷＯ  ０２／０８３１３９、ＷＯ  ０２／０８３１４０、ＵＳ  ２００４−０１１６４３２、ＷＯ  ０２／０８３１３８、ＵＳ  ２００４−０１０２３６０、ＷＯ  ０３／０８６４０４、ＷＯ  ０３／０８６２７９、ＷＯ  ０３／０８６３９４、ＷＯ  ０３／０８４４７３、ＷＯ  ０３／０８６４０３、ＷＯ  ２００４／０４１１６２、ＷＯ  ２００４／０９６１３１、ＷＯ  ２００４／０９６１２９、ＷＯ  ２００４／０９６１３５、ＷＯ  ２００４／０９６１３０、ＷＯ  ２００５／１００３５６、ＷＯ  ２００５／１００３４４、ＵＳ  ２００５／０２９９４１、ＵＳ  ２００５／４４２９４、ＵＳ  ２００５／４３３６１、６０／７３４１８８、６０／６５２７３７、６０／６７０４６９に記載されているもののようなＡｋｔのインヒビターを含む、）、Ｒａｆキナーゼのインヒビター（例えば、ＰＬＸ−４０３２）、ＭＥＫのインヒビター（例えば、Ａｒｒｙ−１６２、ＲＯ−４９８７６５５およびＧＳＫ−１１２０２１２）、ｍＴＯＲのインヒビター（例えば、ＡＺＤ−８０５５、ＢＥＺ−２３５およびエベロリムス）およびＰＩ３Ｋのインヒビター（例えば、ＧＤＣ−０９４１、ＢＫＭ−１２０）。
【０２９０】
前記で用いた「インテグリンブロッカー」は、αｖβ３インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻害または相殺する化合物、αｖβ５インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻害または相殺する化合物、αｖβ３およびαｖβ５の両方のインテグリンへの生理学的リガンドの結合を拮抗、阻害または相殺する化合物、ならびに毛細血管内皮細胞上で発現される個々のインテグリンの活性を拮抗、阻害または相殺する化合物を意味する。この語は、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンのアンタゴニストをも意味する。この語はまた、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの任意の組合せのアンタゴニストをも意味する。
【０２９１】
チロシンキナーゼインヒビターの幾つかの具体例には以下のものが含まれる：Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシル］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホナート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンアミンおよびＥＭＤ１２１９７４。
【０２９２】
本発明の抗体または抗原結合性フラグメントとＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとの組合せは、ある悪性疾患の治療に有用でありうる。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞上のＰＰＡＲ−γの発現および血管新生におけるその関与が文献において報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８，３１：９０９−９１３；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９，２７４：９１１６−９１２１；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００，４１：２３０９−２３１７を参照されたい）。より最近になって、ＰＰＡＲ−γアゴニストはインビトロにおけるＶＥＧＦに対する血管新生応答を抑制することが示されており、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびマレイン酸ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）の両方がマウスにおける網膜血管新生の発生を抑制する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．２００１；１１９：７０９−７１７）。ＰＰＡＲ−γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例には、以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ（登録商標）、Ｔａｌａｚｏｐａｒｉｂ（登録商標）、ニラパリブ（ｎｉｒａｐａｒｉｂ）、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ（登録商標）、チアゾリジンジオン［例えば、ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）］、フェノフィブレート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ジェムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）、クロフィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸および２（Ｒ）−７−（３−（２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−２−カルボン酸。
【０２９３】
本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、アロマターゼインヒビターと組合せて乳癌を治療または予防するのにも有用でありうる。アロマターゼインヒビターの例には、アナストロゾール、レトロゾールおよびエキセメスタンが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２９４】
本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下の化学療法剤と組合せて癌を治療するのにも有用でありうる：アバレリックス（ａｂａｒｅｌｉｘ）（Ｐｌｅｎａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ（登録商標））；アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂｂ）（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））；アリトレチノイン（ａｌｉｔｒｅｔｉｎｏｉｎ）（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホスチン（ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラギナーゼ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ）（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））；アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）カプセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）ゲル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；ブレフェルジン（ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）Ａ；静脈内ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（ＢＣＮＵ（登録商標），ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））；ポリフェプロサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ）２０インプラントと組合されたカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））；セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））；セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン（ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍ��ｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））；シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）リポソーム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｄ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパリン（ｄａｌｔｅｐａｒｉｎ）ナトリウム注射用（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダルベポエチンアルファ（Ｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ  ａｌｆａ）（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））；ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）リポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））；ダウノルビシン，ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；デガレリックス（ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイキン・ジフチトックス（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ  ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（Ｏｎｔａｋ（登録商標））；デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））；塩酸デクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニン（ｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ｂ；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））；ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標），Ｒｕｂｅｘ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；ドキソルビシンリポソーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；エクリズマブ注射用（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；エリオットＢ（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ）溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））；エルトロンボパッグ（ｅｌｔｒｏｍｂｏｐａｇ）（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ）アルファ（ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））；エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））；エチニルエストラジオール；リン酸エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））；エトポシド，ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）錠剤（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェ��モキシトール（ｆｅｒｕｍｏｘｙｔｏｌ）（Ｆｅｒａｈｅｍｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；フィルグラスチム（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））；フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ），５−ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））；ゲフィニチブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；ゲムツズマブ  オゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ・チウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎ）（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））；イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ（登録商標））；インターフェロンアルファ２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標））；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）Ｉ  １２３注射用（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））；イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））；イキサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；イアパチニブ（Ｉａｐａｔｉｎｉｂ）錠剤（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））；レナリドミド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標），Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸ロイプロイド（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ），ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ（登録商標））；メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ），ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ）（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ），Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン，６−ＭＰ（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））；メスナ（ｍｅｓｎａ）（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））；メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ  ｔａｂｓ（登録商標））；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；メトクスサレン（ｍｅｔｈｏｘｓａｌｅｎ）（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））；８−メトキシソラレン；マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン（ｍｉｔｒａｍｙｃｉｎ）；フェンプロピオン酸ナンドロロン（ｎａｎｄｒｏｌｏｎｅ）（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０（登録商標））；ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）（Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標））；ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレルベキン（Ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ）（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；パクリタクセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））；パクリタクセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））；パリフェルミン（ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ）（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロナート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）錠剤（Ｖｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ）（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標））；ペグフィルグラスチム（Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）（Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標））；プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ），ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフィメル（ｐｏｒｆｉｍｅｒ）ナトリウム（Ｐｈ
ｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキサート（ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ）注射用（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キナクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）；ラスブリカーゼ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）（Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））；塩酸ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミプロスチム（ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ）（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレイン酸スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））；テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ），ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグアニン，６−ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；チオプリン；チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））；トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））；トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トランス−レチノイン酸；トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；トレチノイン（ｔｒｅｔｉｎｏｉｎ），ＡＴＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）；ウラシルマスタード（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ）（Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））；バルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｖａｌｓｔａｒ（登録商標））；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））；ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ウォルトマンニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）；およびゾレドロナート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））。
【０２９５】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む１以上の抗嘔吐薬剤と組合せて使用される：カソピタント（ｃａｓｏｐｉｔａｎｔ）（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ）（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）および他のＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ）（ＭＧＩ  ＰｈａｒｍａによりＡｌｏｘｉとして販売されている）、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＥｍｅｎｄとして販売されている）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売されている）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｔａｒａｘ（登録商標）として販売されている）、メトクロプラミド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）（ＡＨ  Ｒｏｂｉｎｓ  Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡによりＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売されている）、ロラゼパム（ｌｏｒａｚｅｐａｍ）（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪによりＡｔｉｖａｎ（登録商標）として販売されている）、アルプラゾラム（ａｌｐｒａｚｏｌａｍ）（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＸａｎａｘ（登録商標）として販売されている）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪによりＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販売されている）、ドロペリドール（ｄｒｏｐｅｒｉｄｏｌ）（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（ｄｒｏｎａｂｉｎｏｌ）（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，ＧＡによりＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売されている）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，ＮＪによりＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売されている）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによりＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売されている）、グラニセトロン（ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪによりＫｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売されている）、オンダンセトロン（ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ）（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣによりＺｏｆｒａｎ（登録商標）として販売されている）、ドラセトロン（ｄｏｌａｓｅｔｒｏｎ）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹによりＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売されている）、トロピセトロン（ｔｒｏｐｉｓｅｔｒｏｎ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪによりＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売されている）。
【０２９６】
癌治療の他の副作用には、赤血球および白血球の欠乏症が含まれる。したがって、１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、そのような欠乏症を治療または予防する薬剤、例えばフィルグラスチム（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、ＰＥＧ−フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンアルファまたはダルベポエチンアルファと組合される。
【０２９７】
１つの実施形態においては、本発明で提供される抗体または抗原結合性フラグメントは、抗癌放射線療法と組合せて投与される。例えば、１つの実施形態においては、放射線療法は外部照射療法（ＥＢＴ）であり、これは、腫瘍の位置に高エネルギーＸ線のビームを照射するための方法である。該ビームは患者の外部で（例えば、線形加速装置により）生成され、腫瘍部位を標的化する。これらのＸ線は癌細胞を破壊することが可能であり、注意深い治療計画は周辺の正常組織が損なわれないことを可能にする。患者の体内には放射能源は配置されない。１つの実施形態においては、放射線療法は、Ｘ線ではなく陽子を罹患組織に照射する原体（ｃｏｎｆｏｒｍａｌ）療法の一種である陽子線療法である。１つの実施形態においては、放射線療法は原体外部ビーム放射線療法であり、これは、放射線療法を個々の身体構造に適合させる先進技術を用いる方法である。１つの実施形態においては、放射線療法は密封小線源治療であり、この場合、放射線の余分の線量、つまりブーストを或る領域に与えるために通常使用される放射性薬剤が体内に一時的に配置される。
【０２９８】
１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合されて適用される外科手技は外科的腫瘍摘出である。
【０２９９】
５．１３  医薬組成物および投与
本発明で提供される抗体および抗原結合性フラグメントの医薬組成物または無菌組成物を製造するために、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合されうる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。
【０３００】
治療用および診断用薬剤の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性の溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０３０１】
単独で又は別の治療用薬剤と組合せて投与される、本発明で提供される抗体またはフラグメント組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
【０３０２】
更なる実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合せて、別の治療用薬剤を、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与する。
【０３０３】
投与様式は様々でありうる。投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が含まれる。
【０３０４】
特定の実施形態においては、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントは、侵襲的経路、例えば注射により投与されうる。更に詳細な実施形態においては、抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内に、または吸入、エアゾール運搬により投与される。非侵襲的経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も想定される。
【０３０５】
また、本発明は、本発明で提供される抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穿孔針またはシリンジシリンダーを有するもの）を提供する。また、本発明は、本発明で提供される抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、例えば筋肉内、皮下または静脈内経路により患者の体内に薬剤を導入する装置である。例えば、注射装置は、シリンジ（例えば、医薬組成物が予め充填されたもの、例えば、自動注入装置）であることが可能であり、これは、例えば、注射すべき流体（例えば、抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物）を保持するためのシリンダーまたは筒状物、該流体の注射のために皮膚および／または血管を穿刺するための針、ならびに該シリンダーから及び針穿孔を介して該流体を押出すプランジャーを含む。１つの実施形態においては、本発明で提供される二重特異性抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は、静脈内（ＩＶ）注射装置である。そのような装置は、カニューレまたはトロカール／針を介して患者の体内に導入される流体（例えば、生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、所望によりグルコースを含む乳酸リンゲル液）を保持するためのバッグ（袋）またはリザーバ（貯蔵容器）に接続されうるチューブに接続されうるカニューレまたはトロカール／針の中に該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含む。幾つかの実施形態においては、トロカールおよびカニューレが対象の静脈内に挿入され、挿入カニューレからトロカールが取り外されたら、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物が装置内に導入される。ＩＶ装置は、例えば、（例えば、手または腕における）末梢静脈内；上大静脈または下大静脈、または心臓の右心房（例えば、中央ＩＶ）内；あるいは鎖骨下、内頚、または大腿静脈に挿入されることが可能であり、例えば、それが上大静脈または右心房（例えば、中心静脈線）に達するまで、心臓に向けて進入可能である。１つの実施形態においては、注射装置は、自動注入装置、ジェットインジェクターまたは外部注入ポンプである。ジェットインジェクターは、該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内へ導入するために、表皮に浸透する液体の高圧ナロー（ｎａｒｒｏｗ）ジェットを使用する。外部注入ポンプは、制御された量の該抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を患者の体内に運搬（送達）する医療装置である。外部注入ポンプは電気的または機械的に駆動されうる。ポンプは、ポンプによって異なる様態で作動する。例えば、シリンジポンプはシリンジのリザーバ内に流体を保持し、可動式ピストンが流体運搬を制御し、弾性（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ）ポンプは伸縮性バルーンリザーバ内に流体を保持し、バルーンの弾性壁からの圧力が流体運搬を駆動する。蠕動ポンプにおいては、１組のローラーが可撓性チューブの或る長さを絞り込んで、流体を前方へ押出す。マルチチャネルポンプにおいては、流体は複数のリザーバから複数の速度で運搬されうる。
【０３０６】
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。医薬組成物を含むそのような無針装置も想定される。本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られており、本発明で提供される医薬組成物を含むものも想定される。
【０３０７】
投与レジメンは、治療用抗体または抗原結合性フラグメントの血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体またはフラグメントを運搬する。したがって、運搬される生物学的薬剤の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度に左右される。治療用抗体またはフラグメントの適切な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０３０８】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又は疑われているパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量は最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効果が得られるまで、それを少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。一般に、使用される生物学的薬剤は、治療のために標的化される動物と同じ種から誘導され、それにより薬剤に対する免疫応答を最小化することが望ましい。ヒト対象の場合には、例えば、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましい可能性がある。
【０３０９】
本明細書中で用いる「有効量」なる語は、単独で又は追加的な治療用薬剤と共に細胞、組織または対象に投与された場合に、疾患の症状の１以上における測定可能な改善を引き起こすのに有効である、本発明で提供される二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントの量を意味する。有効量は、単独で投与される個々の有効成分に適用される場合には、その成分のみに関するものである。有効量は、組合せ体に適用される場合には、連続投与または同時投与のいずれで組合せ投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、有効成分の組合された量を意味する。治療用薬剤の有効量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の、診断尺度またはパラメータの改善をもたらす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するために主観的尺度が用いられる場合には、主観的尺度における改善をもたらしうる。
【０３１０】
５．１４  キット
更に、本明細書に記載されている治療用薬剤および／または薬学的に許容される担体（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的成分と共に、抗ＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体または抗原結合性フラグメント（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキットを提供する。該抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療用薬剤は、純粋な組成物として、または医薬組成物において薬学的に許容される担体と組合せて製剤化（処方）されうる。
【０３１１】
１つの実施形態においては、キットは、本発明で提供される抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に、そしてその医薬組成物および／または治療用薬剤を別の容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。
【０３１２】
もう１つの実施形態においては、キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬組成物において、一緒に製剤化された１以上の治療用薬剤と所望により組合されていてもよい、本発明で提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む組合せを含む。
【０３１３】
キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、キットは、そのような投与を行うための装置を含みうる。例えば、キットは前記の１以上の皮下針または他の注射装置を含みうる。
【０３１４】
キットは、キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明で提供される薬剤の組合せに関する以下の情報が添付文書において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。
【０３１５】
便宜上、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、キットにおいて、すなわち診断用または検出用アッセイを行うための説明を伴う所定量の試薬のパッケージ化された組合せにおいて提供されうる。抗体またはフラグメントが酵素で標識されている場合には、キットは、酵素により要求される基質および補因子（例えば、検出可能な発色団または発蛍光団を与える基質前駆体）を含みうる。加えて、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例えば、ブロッキングバッファーまたは細胞溶解バッファー）などが含まれうる。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中濃度をもたらすように大きく変動しうる。特に、試薬は、適切な濃度を有する試薬溶液を溶解時に与える賦形剤を含む乾燥粉末、通常は凍結乾燥粉末として提供されうる。
【０３１６】
また、例えば酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）（サンドイッチ型または競合形態）のようなイムノアッセイを含む種々の検出アッセイにおいて使用される１以上のそのような試薬を含む診断用または検出用試薬およびキットを提供する。キットの成分は固体支持体に予め結合していることが可能であり、あるいはキットが使用される際に固体支持体の表面に適用されることが可能である。幾つかの実施形態においては、シグナル生成手段は、本発明で提供される抗体またはフラグメントが予め結合した状態で提供されることが可能であり、あるいは使用前に１以上の成分、例えばバッファー、抗体−酵素コンジュゲート、酵素基質などと一緒にすることを要しうる。キットはまた、追加的な試薬、例えば、固相表面への非特異的結合を低減するためのブロッキング試薬、洗浄試薬、酵素基質などを含みうる。固相表面は、チューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、ミクロスフェア、またはタンパク質、ペプチドもしくはポリペプチドを固定化するのに適した他の材料の形態でありうる。特定の態様においては、化学発光性もしくは発色性産物の形成または化学発光性もしくは発色性基質の還元を触媒する酵素がシグナル生成手段の成分の１つである。そのような酵素は当技術分野でよく知られている。キットは、本明細書に記載されている捕捉剤および検出試薬のいずれかを含みうる。所望により、キットは、本発明で提供される方法を実施するための指示書をも含みうる。
【０３１７】
また、容器、例えばバイアルまたはボトル内にパッケージングされた抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体またはその抗原結合性フラグメントを含み、更に、該容器に貼付またはパッケージングされたラベルを含むキットを提供し、ラベルは容器の内容物を記載し、本明細書に記載されている１以上の病態を治療するための、容器の内容物の使用に関する表示および／または指示書を提供する。
【０３１８】
併用療法の節において前記したとおり、２つの治療用薬剤の同時投与は、それらの治療用薬剤がそれらの治療効果を奏する期間の重複が存在する限り、それらの治療用薬剤が同時に又は同じ経路によって投与されることを要しない。異なる日または週の投与と同様に、同時または連続投与が想定される。
【０３１９】
本明細書に開示されている抗体、ペプチド、抗原結合性フラグメントまたはポリヌクレオチドの少なくとも１つと、検出試薬または治療用薬剤として該組成物を使用するための指示書とを含む、本明細書に開示されている治療用キットおよび検出用キットも製造されうる。そのようなキットにおいて使用される容器は、検出用および／または治療用組成物の１以上が配置され、そして好ましくは、適切にアリコート化され、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の適切な容器を含みうる。第２の治療用薬剤も提供される場合には、キットは、この第２の検出用および／または治療用組成物が配置されうる第２の異なる容器をも含有しうる。あるいは複数の化合物が単一医薬組成物において調製可能であり、単一収容手段、例えばバイアル、フラスコ、シリンジ、ボトルまたは他の適切な単一容器内にパッケージングされうる。本明細書に開示されているキットはまた、典型的には、商業的販売のために密封された、バイアルを収容するための手段、例えば、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形プラスチック容器を含む。放射能標識、発色性、蛍光性または他のタイプの検出可能な標識または検出手段がキット内に含まれる場合、標識剤は、検出用または治療用組成物自体と同じ容器において提供されることが可能であり、あるいは、第２の組成物が配置されうる、そして適切にはアリコート化されうる第２の異なる収容手段内に配置されうる。あるいは検出試薬および標識は単一収容手段において調製されることが可能であり、ほとんどの場合、キットは、典型的には、商業的販売および／または簡便な包装および運搬のために密封してバイアルを収容するための手段をも含む。
【０３２０】
本明細書に記載されている検出またはモニタリング方法を実施するための装置または器具をも提供する。そのような装置は、サンプルが入れられうるチャンバーまたはチューブ、サンプルの流れを装置に通すためのバルブまたはポンプを所望により含んでいてもよい流体処理系、血液から血漿または血清を分離するための所望により含まれていてもよいフィルター、捕捉剤または検出試薬の添加のための混合チャンバー、および捕捉剤免疫複合体に結合した検出可能な標識の量を検出するための所望により含まれていてもよい検出装置を含みうる。サンプルの流れは受動的（例えば、サンプルが適用されたら該装置の更なる操作を要しない毛管力、流体静力または他の力）または能動的（例えば、機械ポンプ、電気浸透ポンプ、遠心力または空気圧の増加により生じる力の適用によるもの）、または能動的力と受動的力との組合せでありうる。
【０３２１】
更なる実施形態においては、プロセッサ、コンピュータ可読メモリおよびルーチンをも提供し、これは、該コンピュータ可読メモリ上で保存され、本明細書に記載されている方法のいずれかを実施するために該プロセッサ上で実行されるように適合化される。適切なコンピューティングシステム、環境および／または設定の例には、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハンドヘルドまたはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサベースシステム、セットトップボックス、プログラマブルコンシューマエレクトロニクス、ネットワークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、前記のシステムまたはデバイスのいずれかを含む分散コンピューティング環境、あるいは当技術分野で公知のいずれかの他のシステムが含まれる。
【０３２２】
５．１５  一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２  ＆  １９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１−４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０３２３】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０３２４】
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
【０３２５】
一本鎖抗体およびジアボディが記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０；ＨｕｄｓｏｎおよびＫｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１７７−１８９；ならびに米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい）。二官能性抗体が提供される（例えば、Ｍａｃｋら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：７０２１−７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５；Ｖｏｌｋｅｌら（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １４：８１５−８２３；Ｓｅｇａｌら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１−６；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３；Ｒａｓｏら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９；ならびに米国特許第５，９３２，４４８号、第５，５３２，２１０号および第６，１２９，９１４号を参照されたい）。
【０３２６】
二重特異性抗体も提供される（例えば、Ａｚｚｏｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３；Ｋｉｔａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８７５を参照されたい）。
【０３２７】
抗原の精製は抗体の製造に必要ではない。関心のある抗原を含有する細胞で動物を免疫化することが可能である。ついで免疫化動物から脾細胞を単離し、脾細胞を骨髄腫細胞系と融合させてハイブリドーマを得ることが可能である（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら，前掲；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４を参照されたい）。
【０３２８】
抗体は、例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は、治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。
【０３２９】
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０３３０】
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０３３１】
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
【０３３２】
４．図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【０３３３】
【図１】図１は、操作されたＪｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ＋ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１アッセイにおける、本発明で提供されるＦａｂおよび二重特異性抗体の試験を示す。二重特異性抗体およびＦａｂは、ＰＤ１−ＰＤＬ１相互作用により生じる免疫抑制を逆転させることが可能であった。これは、抗体／ＦａｂをＪｕｒｋａｔ細胞（ＰＤ１＋ｖｅ）およびＴＨＰ１ＰＤＬ１細胞（＋ＬＰＳ、ＩＦＮｇ、ａＣＤ３）と共にインキュベートした場合の、ＩＬ２媒介性ルシフェラーゼレベルの増加として測定された。
【図２】図２は、混合リンパ球反応において二重特異性抗体により誘導されたＩＬ−２（下パネル）およびＩＦＮ−γ（上パネル）の産生を示す。
【図３】図３は、二重特異性抗体によりＰＤ−Ｌ１トランスフェクト化ＪＹ細胞で再刺激されたＣＤ４＋  Ｔ細胞クローン４−４９のＩＦＮ−γ産生を示す。
【図４】図４は、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（商標）突然変異（棒状物）の導入に際して９０ＡＳＵまたは１８ＡＳＳ二重特異性抗体の抗ＰＤ１アームにおいて形成されるＣＨ１（灰色）およびＣＬ（白色）の境界の三次元（３Ｄ）表示を示す。適切にペア形成された界面の選択的形成を促進させ、重−軽鎖の過誤ペア形成を回避するために、異なる組合せの突然変異が抗ＬＡＧ３第２アームに導入されている。
【図５】図５は、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（商標）突然変異（棒状物）の導入に際して９０ＡＳＵまたは１８ＡＳＳ二重特異性抗体の抗ＬＡＧ３第２アームにおいて形成されるＣＨ１（灰色）およびＣＬ（白色）の境界の三次元（３Ｄ）表示を示す。適切にペア形成された界面の選択的形成を促進させ、重−軽鎖の過誤ペア形成を回避するために、異なる組合せの突然変異が抗ＰＤ−１第１アームに導入されている。
【図６】図６は、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（商標）突然変異（棒状物）の導入に際して重鎖１（灰色）および重鎖２（白）により二重特異性抗体（１８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵ）において形成されるＣＨ３ヘテロ二量体境界の三次元（３Ｄ）表示を示す。
【０３３４】
６．実施例
この節（すなわち、第６節）における実施例は、限定的なものとしてではなく、例示として記載されている。
【０３３５】
６．１  実施例１：ヒト化０８Ａ抗体のアフィニティ成熟および結合アフィニティの研究
６．１．１  単一ＣＤＲコドンベース突然変異誘発ライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
ヒト０８Ａ（Ｓ６１Ｎグリコシル化部位補正を含有する；配列番号に従う配列の番号付け）Ｆａｂ００１（配列番号１および２）のＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ３を、コドンベース突然変異誘発のために標的化した。Ｈ３、Ｌ１およびＬ３ライブラリーを、それぞれＨ９５〜Ｈ１００Ｂ位、Ｌ２７Ｂ〜Ｌ３２位およびＬ９０〜Ｌ９７位においてランダム化した。各ライブラリーからの代表的な個々のコロニーの配列決定は、標的化残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を証明した。各ライブラリーは１０８個を超えるコロニーを生成し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内の全ての可能なアミノ酸の組合せを示すのに十分であることを示唆している。
【０３３６】
ライブラリーを、各ラウンドで抗原の濃度を減少させながら、４ラウンドのアフィニティベース液相ファージ提示選択に付した。比較的高い抗原濃度（２０ｎＭ）を第１ラウンドに用いた。高アフィニティ変異体を選択するために、後続の３ラウンドのそれぞれで、抗原濃度を１０倍減少させた。第４ラウンドからの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡスクリーニングにより、抗原への陽性結合に関して試験した。
【０３３７】
野生型より低いＫＤを有する変異体ｓｃＦｖを特定するために、細菌ＰＰＥにおける未精製天然ｓｃＦｖにおいて、ＯＣＴＥＴ  ＲＥＤ９６（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，ＵＳＡ）により、見掛けＫｏｆｆを測定した。４ラウンドの選択からの合計１５６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を示す２０個のクローンをＦａｂ変換のために選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ２００評価ソフトウェアを使用してＫＤを計算した。ただ１つのＦａｂ、すなわちＦａｂ  ００４、または３Ｇ９が、０８Ａと比較してＫＤにおける２倍の改善を示した。
【０３３８】
６．１．２  ランダム突然変異誘発ライブラリーおよびＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリーによる０８Ａのアフィニティ成熟
Ｈ３、Ｌ１およびＬ３に焦点を合わせるのではなくＫＤの改善を達成するために、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを構築するために、ランダム化突然変異誘発のために０８ＡからのＣＤＲ３のＶＨおよびＶＬ領域の６つ全てを標的化した。該配列は、野生型配列と比較して大きな多様性を有するが、減少させた抗原濃度を用いるパンニングは、結合を保持するより高いアフィニティのクローンの富化をもたらすはずである。パンニング用の以下の３つのＶＨ／ＶＬコンビナトリアルライブラリーを作製した：（１）０８Ａ  ＶＨ  ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを使用する軽鎖シャッフリング、（２）Ｆａｂ  ００４  ＶＨ  ＋コンビナトリアルＶＬライブラリーを使用する軽鎖シャッフリング、および（３）ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアルライブラリー。
【０３３９】
ＶＨおよびＶＬにおける６つ全てのＣＤＲにわたる多様性を増大させるために、本発明者らはランダム突然変異誘発法を用いた。具体的には、６つのＣＤＲを２０アミノ酸のいずれかに変化させるために、ＮＮＫコドンランダム化を用いて突然変異誘発を行った。ＣＤＲループ内の各残基にランダム突然変異を含有する配列ライブラリーを得るために、合計１２個のライブラリーを構築した。６つのＶＨライブラリーを、それぞれ、Ｈ３１〜Ｈ３５位（Ｈ１ライブラリー）、Ｈ５１〜Ｈ５４位（Ｈ２Ａライブラリー）、Ｈ５５〜Ｈ５９位（Ｈ２Ｂライブラリー）、Ｈ６０〜Ｈ６４位（Ｈ２Ｃライブラリー）、Ｈ９６〜Ｈ１００位（Ｈ３Ａライブラリー）およびＨ９６Ａ〜Ｈ１０２位（Ｈ３Ｂライブラリー）においてランダム化した。６つのＶＬライブラリーを、それぞれ、Ｌ２１〜Ｌ２７Ａ位（Ｌ１Ａライブラリー）、Ｌ２７Ｂ〜Ｌ２９位（Ｌ１Ｂライブラリー）、Ｌ３０〜Ｌ３４位（Ｌ１Ｃライブラリー）、Ｌ５１〜Ｌ５５位（Ｌ２ライブラリー）、Ｌ８９〜Ｌ９３位（Ｌ３Ａライブラリー）およびＬ９３〜Ｌ９７位（Ｌ３Ｂライブラリー）においてランダム化した。各ライブラリーからの代表的な個々のコロニーの配列決定は、標的化残基の予想ＣＤＲにおけるランダム化を証明した。各ライブラリーは１０８個を超えるコロニーを生成し、このことは、ライブラリーのサイズが標的領域内の全ての可能なアミノ酸の組合せを示すのに十分であることを示唆している。
【０３４０】
１２個全てのライブラリーを３ラウンドのパンニングに付した。第３ラウンド生成プラスミドＤＮＡを調製し、突然変異ＣＤＲフラグメントを増幅するための鋳型として使用した。コンビナトリアルＶＨ突然変異誘発ｓｃＦｖを２工程オーバーラップＰＣＲにより作製して、３つのＣＤＲを互いに合体させた。コンビナトリアルＶＬ突然変異誘発ｓｃＦｖを同様にして作製した。重鎖および軽鎖コンビナトリアルライブラリーを、前記のとおりファージミドベクター内にｓｃＦｖをクローニングすることにより作製した。
【０３４１】
１２個全てのライブラリーを別々に、各ラウンドで抗原濃度を減少させながら、３ラウンドのオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）ファージ提示選択に付した。比較的高い抗原濃度（１０ｎＭ）を第１ラウンドに用いた。抗原濃度を後続の２ラウンドのそれぞれで１０倍減少させた。第３ラウンド生成物からのＶＨまたはＶＬプール化レパートリーを使用して、３つのＣＤＲを互いに合体させる２工程オーバーラップＰＣＲにより、コンビナトリアルＶＨまたはＶＬ突然変異誘発ライブラリーを作製した。また、オーバーラップＰＣＲを用いて、クローンＦａｂ  ００４の重鎖をコンビナトリアル軽鎖と合体させることにより、鎖シャッフリングライブラリーを作製した。これらのコンビナトリアルライブラリーを、漸減濃度（１００ｐＭおよび１０ａｍ）の抗原の存在下、オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）選択の更なる２つのラウンドに付した。
【０３４２】
Ｆａｂ  ００４から開始することによる、アフィニティのより大きな増加の可能性ゆえに、Ｆａｂ  ００４  ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーからのパンニングおよびスクリーニングを、０８Ａ  ＶＨ軽鎖シャッフリングライブラリーより優先させた。Ｆａｂ  ００４  ＶＨ軽鎖シャッフリングコンビナトリアルライブラリーの第２ラウンド生成物からの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡスクリーニングにより抗原への陽性結合に関して試験した。合計１０８個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を伴う７つのクローンをＦａｂ変換用に選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＫＤを計算した。７つ全てのＦａｂが、０８Ａと比較してＫＤにおける５〜１０倍の改善を示し、これは、単一突然変異誘発ライブラリーを使用する従来の方法で観察されたものより大きなＫＤにおける改善であった（表４）。コンビナトリアル軽鎖ライブラリーと組合された３Ｇ９重鎖の第２ラウンドの選択からＦａｂ０９８、Ｆａｂ０９９、Ｆａｂ１００、Ｆａｂ１０１、Ｆａｂ１０２、Ｆａｂ１０３およびＦａｂ１０４を単離した。
【０３４３】
ＶＨ＋ＶＬコンビナトリアル突然変異誘発ライブラリーを作製するために、ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーの第１ラウンド生成物からのＶＨおよびＶＬプール化レパートリーを重複ＰＣＲにより組換えて、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の両方に突然変異を有する組換え変異体の単一ライブラリーを作製した。ＶＨおよびＶＬコンビナトリアルライブラリーを、１０ｐＭの抗原を使用するオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）選択の更なる２つのラウンドに付した。コンビナトリアルライブラリーの第２ラウンド生成物からの個々の変異体を、ＥＬＩＳＡにより抗原への陽性結合に関して試験した。合計２１６個のｓｃＦｖをｋｏｆｆによりランク付けした。ｋｏｆｆの改善を伴う４つのクローンをＦａｂ変換用に選択した。ｋｏｎおよびｋｏｆｆをＢＩＡＣＯＲＥにより測定し、ＫＤを計算した。４つのＦａｂ（Ｆａｂ１２８、Ｆａｂ１３３、Ｆａｂ１３８およびＦａｂ１３９）は、０８Ａと比較してＫＤにおける５〜１８倍の改善を示した（表４）。
【０３４４】
６．１．３  選択されたクローンの配列
オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）改善クローン（ＶＨおよびＶＬ）の可変領域をＰＣＲ増幅した（プライマーはＧｅｎｅｗｉｚ，Ｓｕｚｈｏｕにより合成された）。ＰＣＲ反応は、９５℃で２分、９５℃３０秒、５２℃で１分、７２℃で１分の１５サイクル、７２℃１０分、そしてそれに続く４℃で行った。最終的なＰＣＲ産物を、１％  アガロースゲルにおいて確認し、Ｑｉａｇｅｎ  ＱＩＡＱＵＩＣＫ精製キットを使用して精製した。
【０３４５】
精製したＶＬおよびＶＨ  ＰＣＲ産物を、それぞれｐＣＰ−ｈＣｋ（ＶＬ）またはｐＣＰ−ｈＣｇ４（Ｆａｂベクター）内にクローニングした。ついで陽性クローンを、配列決定のためにＢｉｏＳｕｎｅ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）に送った。ＭＮ  ｍｉｄｉ−ｐｒｅｐキット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ，ＵＳＡ）を使用して、プラスミドＤＮＡを調製した。
【０３４６】
Ｆａｂ９８〜１０４のアフィニティ成熟突然変異アラインメントを表３に示す。
【表４】
2021511791.tif 000006
2021511791.tif 000007
2021511791.tif 000008
【０３４７】
６．１．４  ２９３細胞における一過性トランスフェクション
トランスフェクションの約２４時間前に、２９３−Ｆ細胞をＯＰＭ−２９３  ＣＤ０３培地（ＯＰＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ）内で２．２×１０６細胞／ｍｌで継代し、シェーカー上、１２０ｒｐｍ／分、３７℃、５％  ＣＯ２においてインキュベートした。トランスフェクション当日、細胞密度は約４×１０６細胞／ｍｌであった。最適なトランスフェクションを確保するには、細胞の生存率は９５％を超えている必要がある。
【０３４８】
細胞培養１００ｍｌ当たり１５０μｇのプラスミドＤＮＡ（Ｆｄ：ＬＣ＝２：３）を調製した。ＤＮＡを、トランスフェクションされる培養液の２０分の１に相当する容量でＯＰＴＩ−ＭＥＭ発現培地（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）中で希釈し、１ｍｇのＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）を、該ＤＮＡ溶液の場合と同等の容量でＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地中で希釈した。ＰＥＩ溶液を該希釈ＤＮＡ溶液に加え、ＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を穏やかに混合し、トランスフェクション前に室温で１５分間インキュベートした。フラスコの細胞をゆっくりと渦巻かせながら、ＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を細胞培養に加え、ＤＮＡ−ＰＥＩ混合物を該細胞と共に４時間インキュベートした。培地容量の２０分の１のペプトン（Ｆｌｕｋａ，ＵＳＡ）をフラスコに加えた。ついで細胞を１２５ｒｐｍ／分、３７℃および５％  ＣＯ２において培養した。
【０３４９】
６．１．５  Ｆａｂの精製
上記の第６日の馴化培地を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０）で平衡化された０．６ｍｌのＫＡＰＰＡＳＥＬＥＣＴ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＳＡ）カラム上にローディングした。ついで、サンプルのローディングの後、カラムを平衡化バッファーでベースラインまで洗浄した。洗浄後、カラムを５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出し、ついで直ちに１Ｍ  アルギニン、４００ｍＭ  コハク酸（ｐＨ９．０）を加えてｐＨ値を５．５に調整した。最終生成物をＰＢＳ溶液に対して透析した。タンパク質純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析し、その濃度をブラッドフォード法により測定した。
【０３５０】
６．１．６  精製Ｆａｂのサイズ排除クロマトグラフィー分析
外界温度で、ＨＰＬＣ系（Ｅ２６９５，Ｗａｔｅｒｓ）を使用するＳＥＣ  ＳＩＺＥＳＥＰ−ＳＩＨカラム（Ｗａｔｅｒｓ，内径７．８ｍｍ、長さ３０ｃｍ）で、精製抗体を分析するためのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行った。移動相として、５倍量のＰＢＳバッファーを流速１ｍｌ／分で使用した。注入体積は２０μｌで、２８０ｎｍで検出を行った。
【０３５１】
６．１．７  精製ＦａｂのＢｉａｃｏｒｅアッセイ
ＣＭ５チップ上への組換えヒトまたはカニクイザルＰＤ−１の固定化：  新たに調製された１：１  ５０ｍＭ  ＮＨＳ：２００ｍＭ  ＥＤＣの７分間の注入（１０μｌ／分）により、ＣＭ５センサーチップをＦＣ２において活性化した。１０ｍＭ  酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．０）中の０．２μｇ／ｍｌの濃度のＰＤ−１を、活性化チップ上に５μｌ／分で１２０秒間注入した（ＨＢＳ−ＥＰランニングバッファー：１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％  界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）。残存活性カップリング部位を、１Ｍ  エタノールアミンの１０μｌ／分での７分間の注入によりブロッキングした。
【０３５２】
結合速度論測定：  会合段階において、種々の濃度のＦａｂを３０μｌ／分の流速で１８０秒間注入した。ＨＢＳ−ＥＰバッファーをチップ表面上に６００秒間流すことにより、結合抗体の解離をモニターした。各サイクルの終了時に、再生バッファー（ｐＨ１．７を有する１０ｍＭ  グリシンバッファー）を１８０秒間注入することにより、センサー表面を再生させた。参照フローからのシグナルに関してセンソグラムを補正した後、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ  ２００評価ソフトウェアｖｅｒ．１．０（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ，ＵＳＡ）を使用して、速度論を計算した。
【表５】
2021511791.tif 000009
【０３５３】
６．２  実施例２：ヒトＰＤ１に対するマウスおよびヒト化抗ＰＤ−１  ｍＡｂのアフィニティ
６．２．１  ＢＩＡｃｏｒｅによる表面速度論
捕捉モードを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付きヒトＰＤ−１（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ，９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ−１に対する抗体の結合速度論およびアフィニティを決定した。製造業者の説明に従い、アミンカップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を使用して、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）を活性化させた。供給されたｐＨ５．０の１０ｍＭで酢酸ナトリウムバッファー中で希釈されたヒト捕捉キット（抗ヒトＦｃ、２５μｇ／ｍＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３９）またはマウス捕捉キット（抗マウスＦｃ、３０μｇ／ｍＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００８３８）抗体を、活性化表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍ  エタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルは、４つのフローセルのそれぞれにおいて、マウス捕捉の場合には約８，０００共鳴単位（ＲＵ）、またはヒト捕捉の場合には約１２，０００  ＲＵに達した。
【０３５４】
ＨＢＳ−ＥＰ＋［０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  ｖ／ｖ  界面活性剤Ｐ２０］ランニングバッファー中、ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００で、２５℃で結合速度論を測定した。流速１０μｌ／分でマウスまたはヒトＦｃ捕捉表面上に抗体を捕捉した。抗体を、フローセル２、３および４上に捕捉した。フローセル１は捕捉抗体の非存在下の参照体として使用した。２０ｎＭから開始するアナライト９８ＡＦＫ（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ）の６点２倍系列希釈液をランニングバッファー（ＨＢＳ−ＥＰ＋）中で調製した。二重参照のために２つのバッファーブランクを含めた。滴定系列物を５０μｌ／分で３分間注入し、ついで６００秒間の解離を行った。各サイクルの後、抗ヒトＦｃチップ上の１０μｌ／ｍＬでの３Ｍ  ＭｇＣｌ２の３０秒間の注入または抗マウスＦｃチップ上の１０μｌ／分での１０ｍＭ  グリシン（ｐＨ１．７）の１８０秒間の注入により、表面を再生させた。
【０３５５】
センサーグラム処理およびデータ分析をＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ）２．０．４（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行った。参照フローセル１におけるシグナルおよびブランク注入からのシグナルの減算による二重参照の後、抗体結合を示すセンサーグラムを得た。処理された曲線を１：１結合モデルに全体的（グローバル）にフィットさせて、結合速度定数ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１；ここで、「Ｍ」はモル濃度に相当し、「ｓ」は秒に相当する）および解離速度定数ｋｏｆｆ（ｓ−１）を決定した。これらの速度定数を使用して、平衡解離定数ＫＤ（Ｍ）＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎを計算した。
【０３５６】
６．２．２  ＢＩＡｃｏｒｅによる溶液アフィニティ
溶液モードを使用するＳＰＲに基づくアッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付きヒトＰＤ−１（ｈＰＤ１−Ｈｉｓ，９８ＡＦＫ）に対する抗ＰＤ−１ヒト化抗体の溶液アフィニティを決定した。製造業者の説明に従い、アミンカップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１０００５０）を使用して、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＢＲ１００５３０）を活性化させた。ヒトＰＤ１−Ｈｉｓ（ｐＨ５．０の１０ｍＭ  酢酸ナトリウムバッファー中で希釈された４０μｇ／ｍＬの９８ＡＦＫ）を活性化表面上に７分間固定化した。固定化後、表面を１Ｍ  エタノールアミン／ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で７分間不活性化した。最終的な固定化レベルはフローセルにおいて約６，０００共鳴単位（ＲＵ）に達した。
【０３５７】
一連の滴定において抗体パラトープの未結合画分を測定することにより、溶液のアフィニティを決定し、この場合、抗体濃度を一定に保ち（５００ｐＭまたは１００ｐＭ）、抗原ｈＰＤ１−Ｈｉｓ（９８ＡＦＫ）濃度を１６点滴定系列において１００ｎＭから３ｐＭまで１：２希釈した。滴定系列物を、室温で１６〜２４時間インキュベートして平衡に到達させた。抗原が固定化されたＢＩＡｃｏｒｅチップを使用して、競合モードで未結合部位を測定した。この場合、検出されたＳＰＲシグナルは未結合抗体に対応した。
【０３５８】
ＨＢＳ−ＥＰ＋（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  ｖ／ｖ  界面活性剤Ｐ２０）ランニングバッファー中、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｔ２００において、２５℃で溶液アフィニティを測定した。１６時間を超えるインキュベーションの後の滴定系列物を、ｈＰＤ１−Ｈｉｓ（前記）が固定化されたセンサーチップ上に注入した。１０μＬ／分で１２０秒間（５００ｐＭ  ｍＡｂ系列の場合）または４００秒間（１００ｐＭ  ｍＡｂ系列の場合）の注入の後、ＲＵに比例するものとして遊離未結合抗体濃度を測定した。各サイクルの後、３Ｍ  ＭｇＣｌ２とｐＨ２．０の１０ｍＭ  グリシンとの１：１混合物の３０秒間の注入により、表面を再生させた。
【０３５９】
ＫＩＮＥＸＡ  Ｐｒｏバージョン１．０２（Ｓａｐｙｄｙｎｅ）を使用して、データ分析を行った。この場合、ＲＵを正規化し、濃度に対してプロットした。２つの滴定（１００ｐＭおよび５００ｐＭの一定の抗体濃度を使用）からの正規化データを、ｎ−カーブ分析（Ｃｕｒｖｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）バージョン１．０２（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）を使用してフィットさせて、各相互作用に関するＫＤ（Ｍ）値を得た。
【０３６０】
標準的な表面ベースアフィニティ測定において、親マウス０８Ａ抗体は０．２４ｎＭのアフィニティを示した。これとは対照的に、ＶＨ  ＣＤＲ２における親マウス０８Ａ抗体変異体Ｎ５９Ｑ、Ｎ５９ＥおよびＮ５９Ａは、親マウス０８Ａ抗体と比較して低下したアフィニティを示した。ヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体変異体は全て、親マウス０８Ａ抗体より高いアフィニティを示した。ＣＤＨＲ２におけるＧ５６Ａ、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ／Ｓ６１Ｎ補正を含有する後続ヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体変異体はアフィニティの改善への傾向を示したが、Ｎ５５Ｅはそうではなかった。Ｇ５６Ａ補正を含有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟形態Ｆａｂ０９８  ＩｇＧ４抗体は、アフィニティを約３倍改善させた。Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するヒト化０８Ａアフィニティ成熟形態Ｆａｂ１００  ＩｇＧ４抗体は、アフィニティを約６倍改善させた（表５を参照されたい）。
【表６】
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【０３６１】
溶液モードアフィニティの決定において、Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するアフィニティ成熟ヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４  Ｆａｂ  １００抗体は、Ｓ６１Ｎ補正を含有するヒト化０８Ａ  ＩｇＧ４抗体と比較して有意なアフィニティの改善を示した（表６を参照されたい）。
【表７】
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【０３６２】
６．３  実施例３：抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体の製造
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）１８ＡＳＳは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するアフィニティ成熟Ｆａｂ１００の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０２）；アフィニティ成熟Ｆａｂ１００の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１０３）；ＷＯ  ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｓ１８１Ｋ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号９６）；ＷＯ  ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を有する。
【０３６３】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体９０ＡＳＵは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を有するヒト化０８Ａ重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７Ｔ、Ｑ１７５ＥおよびＳ１８３Ｌ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０１）；ヒト化０８Ａの軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｒ、Ｔ１７８Ｒを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１００）；ＷＯ  ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｓ１８１Ｋ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号９６）；ＷＯ  ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｔ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号９８）を有する。
【０３６４】
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体３３ＡＲＫは、ＣＤＲＨ２  Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正およびＦＲ突然変異Ｑ３９Ｅを有するヒト化０８Ａ重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｌ１４５Ｅ、Ｋ１４７ＴおよびＱ１７５Ｅ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１重鎖（配列番号１０８）；ＦＲ突然変異Ｑ３８Ｒを有するヒト化０８Ａの軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｒ、Ｑ１６０ＫおよびＴ１７８Ｒを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＰＤ−１軽鎖（配列番号１１０）；ＦＲ突然変異Ｑ３９Ｒを有するＷＯ  ２０１６０２８６７２のヒト化２２Ｄ２抗体Ａｂ６の重鎖可変領域と、ＣＨ１突然変異Ｈ１６８ＲおよびＱ１７５Ｋ、ＣＨ２突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＤ２６５Ｓ、ＣＨ３突然変異Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖを有するＩｇＧ１定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３重鎖（配列番号１０４）；Ｑ３８Ｅ  ＦＲ突然変異を有するＷＯ  ２０１６０２８６７２の抗体Ａｂ６の軽鎖可変領域と、Ｃκ突然変異Ｑ１２４Ｅ、Ｑ１６０ＥおよびＴ１８０Ｅを有するカッパ定常領域と、を含有する抗ＬＡＧ３軽鎖（配列番号１０６）を有する。
【０３６５】
抗ＰＤ−１重鎖および抗ＬＡＧ３重鎖のそれぞれにおけるＣＨ３突然変異（ＥＵ番号付け）は、抗ＰＤ−１アームと抗ＬＡＧ３アームとのヘテロ二量体形成を促進する。抗ＰＤ−１重鎖および軽鎖ならびに抗ＬＡＧ３重鎖および軽鎖におけるＣＨ１およびＣκ突然変異（ＥＵ番号付け）は、重鎖および軽鎖の適切なペア形成を促進する。３３ＡＲＫにおいては、ＦＲ突然変異も重鎖および軽鎖の適切なペア形成を促進する。ＣＨ２突然変異（ＥＵ番号付け）は、エフェクター機能を低下させる。Ｓ６１Ｎ補正は、グリコシル化部位を除去し、Ｇ５６Ａ補正は脱アミド化部位（配列番号における連番）を除去する。
【０３６６】
６．３．１  １８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵのトランスフェクション、発現および精製
ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥトランスフェクション試薬を使用する一過性トランスフェクションにより、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において１８ＡＳＳおよび９０ＡＳＵを組換え発現させた。抗体の重鎖および軽鎖の２つのペア（９０ＡＳＵ：抗ＰＤ−１：配列番号１００および１０１；抗ＬＡＧ３：配列番号９６および９８）（１８ＡＳＳ：抗ＰＤ−１：配列番号１０２および１０３；抗ＬＡＧ３：配列番号９６および９８）をコードする遺伝子を、哺乳動物発現用に最適化されたコドンを使用する遺伝子合成により構築した。４つの鎖をコードする発現カセットを、ｐＴＴ５哺乳類発現ベクター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ｃａｎａｄａ）内にクローニングした。異なるタンパク質鎖（２つの重鎖および２つの軽鎖）をコードする４つのプラスミドＤＮＡを１：１：１：１のプラスミドＤＮＡ比でトランスフェクトし、７日間発現させた後、細胞生存率９３％で回収した。構築された分泌抗体を、プロテインＡクロマトグラフィー樹脂（ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ  ＬＸ；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の存在下の一晩のインキュベーションにより培養上清から捕捉し、通常のタンパク質精製法によって更に精製した。キャピラリーゲル電気泳動、分析サイズ排除クロマトグラフィーおよび質量分析（無傷質量）で測定した最終的な二重特異性抗体の純度は９８％を超えた。
【０３６７】
６．３．２  ３３ＡＲＫのクローニング、トランスフェクション、発現および精製
抗ＰＤ−１／ＬＡＧ３二重特異性抗体３３ＡＲＫの遺伝子産物を哺乳類発現ベクターｐＴＴ５内にクローニングし、ＣＨＯ細胞内で一過性に発現させた（Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｃ．ら，Ｍｅｔｈｏｄｓ．５５（１）：４４−５１（２０１１））。ＣＨＯ−３Ｅ７細胞を、４ｍＭ  グルタミンおよび０．１％  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号２４０４０−０３２）で補足されたＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＴＭ  Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ａ−１３８３５０１）内で、３７℃で培養した。２つの重鎖および２つの軽鎖［（抗ＰＤ−１：配列番号１０８および１１０）および（抗ＬＡＧ３：配列番号１０４および１０６）］をコードする４つのプラスミドＤＮＡを、１５：１５：２０：５０（抗ＬＡＧ３  ＨＣ：抗ＰＤ−１  ＨＣ：抗ＬＡＧ３  ＬＣ：抗ＰＤ−１  ＬＣ）のＤＮＡ比で３Ｌのスケールでトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後に温度を３２℃に低下させ、１０日後に細胞上清を集めた。
【０３６８】
プロテインＡカートリッジ（ＰＯＲＯＳＡ２０カラム，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，Ｐａｒｔ＃  ２−１００１−００，２．１ｍｍＤ×３０ｍｍＨ，１０４μＬ）と共に６００／７１７／９９６  ＨＰＬＣ系（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して、上清中の抗体の定量を行った。ＮＡＮＯＳＥＰ  ＭＦ  ＧＨＰ  ０．４５μｍ遠心装置（Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐａｒｔ＃ＯＤＧＨＰＣ３５）を使用する８０００〜１１０００ｇで３分間の遠心分離により、サンプルを濾過した後、ＰＢＳを使用して２ｍｌ／分の流速でカラム上に注入した。０．１５Ｍ  ＮａＣｌ（ｐＨ２．０）で溶出を行った。ＥＭＰＯＷＥＲソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用してデータを処理し、曲線を線形回帰によりフィットさせた。
【０３６９】
２Ｌおよび３Ｌの細胞培養ブロスを遠心分離し、濾過した後、１０ｍＬのＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）プロテインＡカラム上に１０ｍＬ／分でローディングした。３３ＡＲＫ二重特異性抗体をｐＨ３．０の１００ｍＭ  クエン酸バッファーで溶出し、ＴＲＩＳバッファー（ｐＨ１１）でｐＨ６〜７に中和した。サンプルをサンプル変性溶液（還元条件用）またはタンパク質発現サンプルバッファー（非還元用）と混合し、ＢｉｏＲａｄ硬殻９６ウェルプレート上にローディングした。ついでサンプルを７０℃で１５分間加熱し、遠心分離し、水およびゲル色素溶液と混合した後、ＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ上で移動させた。ｐＨ７．４のＰＢＳバッファー中の流速１ｍｌ／分のＡＫＴＡ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ＦＰＬＣにより、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １６／６０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上の１回の注入において、プロテインＡ溶出液を精製した。ＣＥ−ＳＤＳにより９０％を超える純度を有する画分を一緒にプールして最終サンプルを得、２０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、７％  スクロース中で、２ｍｇ／ｍＬを超える濃度にバッファー交換した。
【０３７０】
６．４  実施例４：操作されたＪｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ＋ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１アッセイ
クローンＤＴ９９９Ａ１は、ＩＬ−２媒介性ルシフェラーゼレポーター（Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ）を含有するＰＤ−１トランスジーン発現Ｊｕｒｋａｔ細胞クローンである。ＲＰＭＩ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ  １０  ０４０−ＣＶ）＋熱不活性化１０％  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＳＨ３０９１０．０３）＋２ｍＭ  Ｌグルタミン（Ｃｅｌｌｇｒｏ  ２５−００５−ＣＩ）＋２μｇ／ｍｌ  ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ  Ｐ９６２０）＋０．５ｍｇ／ｍｌ  ジェネテシン（Ｇｉｂｃｏ  １０１３１  ０２７）中でＪｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ細胞を培養した。細胞を、２×１０５細胞／ｍｌで播いた後、週２回分割し、密度が１×１０６細胞／ｍｌを超えたら分割した。ＲＰＭＩ培地＋熱不活性化１０％  ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌグルタミン＋０．５μｇ／ｍｌ  ピューロマイシン中でＰＤ−Ｌ１トランスジーン発現ＴＨＰ−１細胞（ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１）を培養した。細胞を、３×１０５細胞／ｍｌで播いた後、週２回分割し、１×１０６細胞／ｍｌに達したら分割した。
【０３７１】
アッセイ培地［フェノールレッド非含有ＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ  １１８３５−０３０）＋１０％  透析ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３００７９．０３）］を使用して、バイオアッセイを準備した。開始濃度３０μｇ／ｍｌの抗体の４倍系列希釈液５０μｌを、白色壁組織培養処理プレートに加えた。４×１０６細胞／ｍｌ  ＴＨＰ−１．ＰＤ−Ｌ１＋１×１０６細胞／ｍｌ  Ｊｕｒｋａｔ．ｈＰＤ−１．ＩＬ２ｌｕｃ細胞および２×刺激条件の２ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｌ４３９１）および１００ｎｇ／ｍｌ  ＩＦＮ−ｇ（Ｒ＆Ｄシステム２８５−ＩＦ／ＣＦ）を含有する５０μｌの細胞懸濁液を抗体滴定物に加えた。２２時間のインキュベーション（インキュベーター内で３７℃）の終了時に、５５ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ５５５３３６；１１×実施溶液）１０μｌを更に２時間加えた。１００μｌのＯＮＥ−ＧＬＯ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｅ６１２０）を加え、０．１秒の積分時間でＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥＮＶＩＳＩＯＮでプレートを読取った。相対光単位（ＲＬＵ）の生データを、ＧＲＡＰＨＰＡＤソフトウェアを使用してプロットし、ＥＣ５０値を計算した。図１も参照されたい。
【表８】
2021511791.tif 000012
【０３７２】
アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するもの）を有する二重特異性抗体１８ＡＳＳは、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するもの）を有する二重特異性抗体９０ＡＳＵより５〜６倍強力である。同様に、アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１Ｎ補正を含有するもの）を有するＦａｂ  ３１ＡＲＬは、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１Ｎ補正を含有するもの）を有するＦａｂ  ００ＡＰＥより５〜６倍強力である。また、アフィニティ成熟Ｆａｂ１００配列（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａ補正を含有するもの）を有する二重特異性抗体１８ＡＳＳは、非アフィニティ成熟ヒト化０８Ａ配列（Ｓ６１Ｎ補正を含有するもの）ならびに適切な軽鎖および重鎖のペア形成を促進するための異なるＣＨ１−ＣκおよびＦＲ突然変異を有する二重特異性抗体３３ＡＲＫより５〜６倍強力である。
【０３７３】
６．５  実施例５：混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をロイコパックから精製し、液体窒素冷凍庫内で凍結した。凍結ヒトＰＢＭＣを解凍し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ：２００１２０２７）中で希釈し、４５０×ｇで５分間遠心分離し、細胞ペレットを細胞分離バッファー、ＰＢＳ、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１０４３８０２６）およびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩溶液（ＥＤＴＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｅ７８８９−１００ＭＬ）で再懸濁させた。ヒト単球富化キット（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ）（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；１９０５９）を使用して単球を富化した。１００ｎｇ／ｍＬ  ＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２１５−ＧＭ−１１０）および５０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２０４−ＩＬ−０１０／ＣＦ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１１８７５−１１９）、ＦＢＳおよびペニシリン−ストレプトマイシン（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１５１４０１２２）中で１×１０６細胞／ｍｌ（５ｍｌ／ウェル）で細胞を６ウェルプレートに移した。単球を３７℃で５日間インキュベートして、樹状細胞（ＤＣ）の分化を可能にした。単球由来樹状細胞（Ｍｏ−ＤＣ）を第６日に採取し、計数し、ＲＰＭＩ  １６４０培地、ヒト血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｈ４５２２−１００ＭＬ）およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中に再懸濁させ、刺激因子としてＭＬＲアッセイにおいて使用した。
【０３７４】
実験開始日に、凍結ヒトＰＢＭＣを解凍し、細胞分離バッファー中で希釈した。各ドナーからのＣＤ４  Ｔ細胞を、ＥＡＳＹＳＥＰヒトＣＤ４  Ｔ細胞単離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬテクノロジー；１７９５２）を使用して富化した。単離されたＣＤ４  Ｔ細胞をＲＰＭＩ  １６４０培地、ヒト血清およびＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中に１×１０６細胞／ｍＬで懸濁させた。Ｍｏ−ＤＣをＣＤ４＋  Ｔ細胞（１×１０５細胞／ｍＬ）と１：１０の比（１×１０４細胞／ｍＬ）で混合し、細胞混合物を平底９６ウェルプレート内に２００μｌ／ウェルで播いた。二重特異性抗体を、６倍希釈系列を用いて系列希釈し、５倍実施ストックを調製した。５０μｌの各希釈液を２００μｌの培養液に添加して、１×最終濃度の二重特異性抗体を得た。対照ウェルをアイソタイプ対照抗体で処理し、または未処理のままにした。Ｖ−ＰＬＥＸヒトＩＬ−２キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙカタログ番号Ｋ１５１ＱＱＤ−４）を使用するＩＬ−２の定量のために、実験開始後第２日に培養上清を採集した。
【０３７５】
この実施例は、抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３二重特異性抗体３３ＡＲＫ、９０ＡＳＵと１８ＡＳＳが、同種異系単球由来樹状細胞で刺激された初代ＣＤ４  Ｔ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２産生を誘導することを実証した（図２を参照されたい）。アイソタイプ対照抗体処理（３７ＡＳＫ）および未処理（Ａｂ無し）ＭＬＲサンプルは対照として示されている。
【０３７６】
６．６  実施例６：ヒトＴ細胞クローン＋ＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１アッセイ
６．６．１  ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞クローンの作製および培養
ＭＨＣクラスＩＩ同種抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞クローンＢＣ４−４９をＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株ＪＹとの２ラウンドの混合白血球反応により作製し、限界希釈によりクローニングした。該クローンを２週間ごとの間隔で同種特異的抗原で再刺激し、イッセル（Ｙｓｓｅｌ’ｓ）培地（ＩＭＤＭ，Ｇｉｂｃｏ  １２４４０−０５３；ヒト血清ＡＢ、Ｇｅｍｉｍｉ  １００５１２；ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ３０−００２−ＣＩ；ヒトアルブミン、Ｓｉｇｍａ  Ａ９０８０；ＩＴＳ−Ｘ、Ｇｉｂｃｏ  ５１５０００５６；Ｔｒａｎｓｆｅｒｉｎ、Ｒｏｃｈｅ  １０６５２２０２００１；ＰＡ  Ｂｉｏｘｔｒａ  Ｓｉｇｍａ  ｐ５５８５；ＬＡ−ＯＡ−アルブミン、Ｓｉｇｍａ  Ｌ９６５５）内で培養した。新鮮なＰＢＭＣを、スタンフォード血液センター（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ）により提供された２つのヒトバフィーコートから単離し、１：１の細胞比でプールした。ＰＢＭＣを、使用前に、ガンマ線照射装置において４０００ラドの線量で照射した。野生型ＪＹ細胞を調製し、５０００ラドの線量で照射した。最終濃度０．２×１０６／ｍＬのＣＤ４＋  Ｔ細胞、１×１０６／ｍＬの照射ＰＢＭＣ、０．１×１０６／ｍＬの照射ＪＹおよび１００ｎｇ／ｍＬのＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｌ９０１７）を使用して、Ｔ細胞クローンを、フィーダーの存在下、２４ウェルプレート内で１ｍｌ／ウェルで培養した。組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；２０２−ＩＬ／ＣＦ）を再刺激後第３日に最終濃度１００ｎｇ／ｍＬで加え、増殖中に３〜４日ごとに補充した。細胞を０．５〜１．０×１０６／ｍＬの最適濃度まで継代した。再刺激後第７日に、十分なレベルのＬＡＧ−３および中程度のレベルのＰＤ−１がＴ細胞表面上で発現された。
【０３７７】
６．６．２  ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞機能アッセイ
同種抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞を抗原再刺激後第７日の２４ウェル培養プレートから採取し、ついで、２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１５５７５−３８）を含有する２０ｍｌのＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＳＨ３００２８０２）で遠心分離により２回洗浄した。ペレットをイッセル培地内の単細胞懸濁液に再懸濁させた。二重特異性抗体９０ＡＳＵ、１８ＡＳＳを、９６ウェルＵ底培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ，３５３０７７）において、１００μＬの容量中で合計７回の希釈で、最終最高濃度１３３ｎＭから始めるイッセル培地内での５倍系列希釈により滴定した。該二重特異性抗体は、ｈＩｇＧ１  Ｆｃ  Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ突然変異を有していた。アイソタイプ対照３７ＡＳＫ（配列番号１２６および１２７）は、同じ突然変異を有する抗ＲＳＶであった。４×１０５細胞／ｍＬの密度のＴ細胞懸濁液５０μｌを、滴定抗体を含有するウェルに加えた。抗体／Ｔ細胞混合物を、５％  ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で１時間プレインキュベートした。ヒトＰＤ−Ｌ１トランスジーン発現ＪＹ細胞（ＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１）を共培養において使用して、アロ特異的抗原を得た。Ｔ−７５フラスコ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，１５６４９９）内で、１０％  ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ，１０−０４０−ＣＶ）内で培養されたＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１細胞を採集し、ガンマ線照射装置において５０００ラドの線量で照射し、ついで、２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで遠心分離により２回洗浄した。ペレットをイッセル培地で再懸濁させ、プレーティング前に４０μｍのセルストレーナーで濾過した。２×１０５細胞／ｍＬの濃度の５０μｌ／ウェルのＪＹ．ｈＰＤ−Ｌ１懸濁液を、プレインキュベートされた抗体−Ｔ細胞混合物中に、２：１のＴ細胞：ｈＰＤ−Ｌ１細胞の比で分注した。全ての条件を重複反復して行った。約３日間の培養の後、ウェル当たり１００μｌの上清をヒトＩＦＮγの定量のために回収した。ｈＩＦＮγ  ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＳＩＦ５０）を使用して、重複反復物からのプール化上清におけるＩＦＮγレベルを評価するために、ヒトＩＦＮγＥＬＩＳＡを行った。製造業者により提供された標準的なプロトコルに従い、アッセイを行った。ＧＲＡＰＨＰＡＤプリズムソフトウェアを使用して、ＥＣ５０値を計算した。これらの実験からのデータを図３に示す。
【０３７８】
この実施例が実証したところによると、二重特異性抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３抗体９０ＡＳＵ（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａを含有する抗ＰＤ−１  ｈｕ−０８Ａ／抗ＬＡＧ−３  ｈｕ−２２Ｄ２  Ａｂ６）および１８ＡＳＳ（Ｓ６１ＮおよびＧ５６Ａを含有する抗ＰＤ−１  Ｆａｂ１００アフィニティ成熟体／抗ＬＡＧ３  ｈｕ−２２Ｄ２  Ａｂ６）は、Ｔ細胞クローンにより発現されたヒトＰＤ−１およびヒトＬＡＧ−３の両方に結合し、ＰＤ−Ｌ１とのＰＤ−１の相互作用を遮断し、ＭＨＣクラスＩＩとのＬＡＧ−３の相互作用を遮断し、それにより、ＰＤ−Ｌ１媒介性およびＭＨＣクラスＩＩ媒介性の二重抑制の阻害に基づく同種刺激に対してＩＦＮγを産生するようにＴ細胞が応答することを可能にした。また、この実施例は、二重特異性抗ヒトＰＤ−１／ＬＡＧ−３  ９０ＡＳＵおよび１８ＡＳＳが、Ｔ細胞ＩＦＮγ産生の促進において同等の効力を有することを示した。アイソタイプ対照抗体３７ＡＳＫは、活性化Ｔ細胞クローンによるＩＦＮγ産生を増強しなかった。
【０３７９】
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【０３８９】
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１６．Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，ＰＤ−１  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００７）１５：１７５７−１７６１。
【０３９５】
本明細書中に引用されている全ての参考文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されている場合と同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。参照により組み入れるというこの陳述は、そのような引用が、参照により組み入れるという宣誓陳述の直前直後にない場合であっても、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従い、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許［それらのそれぞれは３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従い明らかに特定されるものである］に関連づけることを出願人が意図しているものである。参照により組み入れるという宣誓陳述が本明細書中に含まれている場合、それは、参照により組み入れるというこの一般的（ｇｅｎｅｒａｌ）陳述を何ら弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、該参考文献が関連先行技術であると自認するものではなく、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何ら自認するものでもない。
【０３９６】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態により範囲において限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明および添付図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような修飾は添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれると意図される。
【０３９７】
前記の明細書は、当業者が本発明を実施しうるのに十分なものであるとみなされる。本明細書に示され記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【表９】
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【０３９８】
太字の突然変異（可変領域における突然変異は連続的番号を用いており、定常領域における突然変異はＥＵ番号付けを用いている）；下線はＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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