(57)【要約】  本発明は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）を含む骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物に関し、より詳細には、ＣＨＰまたはこれを含む前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロ−ヒスプロまたはその薬学的に許容可能な塩を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項２】
前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものである、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
シクロ−ヒスプロを含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【請求項５】
前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上である、請求項４に記載の健康機能食品組成物。
【請求項６】
前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものである、請求項５に記載の健康機能食品組成物。
【請求項７】
前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項８】
前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）を含む骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物に関し、より詳細には、ＣＨＰまたはこれを含む前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨の発生、成長および代謝過程には、骨の形成（ｂｏｎｅ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ）と再形成（ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）過程が重要な役割をする。骨の形成は、胎生期から始めて以後に骨格が成熟して成長が終わる青壮年期まで持続して、２０代から３０代初めまで最大骨量を形成することになる。以後、約３０年の間は、骨を除去し、再びこれを補充する骨再形成の過程を繰り返すことになるが、この際は、骨形成と骨吸収が互いにコンビを組んで均衡を維持することになる。この時期が過ぎた後には、骨吸収による骨損失を骨形成が十分に追いつくことができず、結局には、年０．３〜０．５％程度の骨量減少が発生することになり、特に女性の場合には、閉経初期に年２〜３％の相当な骨損失が発生することになる。
【０００３】
骨組織は、軟骨と骨格系を構成し、機械的機能として支持と筋付着の役割をし、生体器官および骨髄を保護する機能をし、カルシウムとリンイオンの恒常性維持のためにこれらを保存する機能を担当する。骨組織は、膠原質、糖タンパク質のような細胞基質と造骨細胞（骨芽細胞；ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）、破骨細胞および骨細胞などの様々な種類の細胞からなる。
【０００４】
また、骨組織は、造骨細胞により形成され、破骨細胞により破壊吸収が絶えず繰り返される動的な組織であって、骨粗しょう症は、造骨細胞と破骨細胞の平衡が崩れて、骨吸収が骨形成より亢進されることによって誘発される疾病であって、骨組織の石灰が減少して骨の緻密質がうすくなり、そのため、骨髓腔が広くなり、病症が進展するにつれて骨が弱くなるので、小さい衝撃でも骨折しやすい。
【０００５】
骨粗しょう症は、その病症自体よりは、骨の弱化によって容易にもたらされる各種骨折、特に大腿骨の骨折または脊椎骨節などが長期間活動を制限して、健康な生活を営むことができず、結果的に、老人層の死亡の１５％に対する原因を提供することが知られている。骨量は、遺伝的要因、栄養摂取、ホルモンの変化、運動および生活習慣の差異など様々な要因によって影響を受け、骨粗しょう症の原因としては、老齢、運動不足、低体重、喫煙、低カルシウム食、閉経、卵巣切除などが知られている。特に女性の場合、３０才以後から骨減少が持続的に進行され、閉経期に達すれば、ホルモン変化によって骨減少が急激に進行される。
【０００６】
このように骨粗しょう症は、程度に差異はあるが、老年層、特に閉経期以後の女性においては不可避な症状であって、先進国では、人口が老齢化するにつれて骨粗しょう症およびその治療剤に対する関心が次第に増加している。また、全世界的に骨疾患の治療と関連して約１３００億ドルの市場が形成されていると知られており、今後さらに増加すると予想されるので、世界的な各研究機関と製薬会社では、骨疾患治療剤の開発に多くの投資をしており、現在骨吸収抑制剤の開発が活発に進行されている。
【０００７】
骨粗しょう症治療剤として広く使用されるカルシウム補強製剤が、最近、その効果が有意でないことが報告され、エストロゲンやカルシトニンを用いたホルモン療法においても、やはり治療効果が有意でないことが報告されている。特に、エストロゲンやカルシトニンを含むホルモン療法の場合、骨密度を増加させ、直腸癌の発生を減少させるという報告もあるが、乳癌、心筋梗塞、静脈血栓症などの副作用が報告されたことがある。また、骨粗しょう症の治療剤として広く使用されるビスホスホネートは、破骨細胞を抑制する骨吸収抑制剤として新しい代替治療剤として注目されているが、正しくない経口投与時に上気道に病巣が観察されることがある。したがって、骨粗しょう症は、薬物の短期投与だけでは治療することができず、薬物の長期投与が必須の疾患であるので、新しい作用および骨格構造を有し、毒性および副作用が少なくて、骨粗しょう症の予防および治療に効果的な新物質の開発が切実に要求されている。
【０００８】
一方、本発明の以前には、亜鉛イオンおよびシクロ−ヒスプロ（Ｃｙｌｃｏ−ＨｉｓＰｒｏ；ＣＨＰ）を含む抗糖尿組成物が開示されたことがあるが、ＣＨＰの骨損失疾患の予防、改善または治療効果については知られていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、シクロ−ヒスプロを含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、シクロ−ヒスプロを含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明のさらに他の目的は、前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上述した課題を解決するために、本発明は、シクロ−ヒスプロまたはその薬学的に許容可能な塩を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００１４】
本発明は、また、シクロ−ヒスプロを含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する。
【００１５】
本発明は、また、前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００１６】
本発明は、また、前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する。
【００１７】
本発明の好ましい他の一実施例によれば、前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上でありうる。
【００１８】
本発明の好ましいさらに他の一実施例によれば、前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少によって発生するものでありうる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のシクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物は、骨芽細胞の分化促進および骨密度の増進効果に優れていて、骨損失疾患の治療に効果的である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）投与による大腿骨の骨密度の変化を分析して示したグラフである。
【図２】図２は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）の投与による骨体積比の変化を分析して示したグラフである。
【図３】図３は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）処理による骨芽細胞の分化促進効果を確認したものである。
【図４】図４は、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）処理によるＡＬＰ活性増加効果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００２２】
上述したように、本発明者らは、卵巣摘出動物モデルの骨粗しょう症の改善効果および骨芽細胞の分化促進効果を通じてシクロ−ヒスプロが骨損失疾患を予防、改善または治療するのに効果的であることを発見し、本発明を完成した。
【００２３】
したがって、本発明は、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【００２４】
本発明は、また、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物を提供する。
【００２５】
本発明において「シクロ−ヒスプロ（Ｃｙｃｌｏ−ＨｉｓＰｒｏ；ＣＨＰ）」は、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ，ＴＲＨ）の代謝産物であるヒスチジン−プロリン（Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ−Ｐｒｏｌｉｎｅ）から構成された自然的に発生する円形ジペプチド（ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ）またはＴＲＨ代謝過程とｄｅ  ｎｏｖｏで体内で合成されることがある生理活性ジペプチドであって、脳全般と脊髄および胃腸管などに広く分布する物質をいう。
【００２６】
本発明の組成物において、前記ＣＨＰは、合成して使用したり、市販されるものを使用することができる。また、ＣＨＰが含有された物質、例えば前立腺抽出物から精製して使用することができる。
【００２７】
用語「精製された」の使用によって、ＣＨＰが前立腺抽出物のような天然由来で得ることができる形態に比べて濃縮された形態であることを意味する。精製された成分は、これらの天然源から濃縮させたり、または化学的合成方法を通じて得ることができる。
【００２８】
前記「前立腺抽出物（ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｅｘｔｒａｃｔ）」の主な構成成分は、亜鉛、ＣＨＰ、プロスタグランジン前駆体およびアラキドン酸であり、ＣＨＰが高濃度で含有されていて、ＣＨＰで誘導される骨密度および骨体積比の増加効果と骨芽細胞の分化および骨形成の促進効果を合理的に予想することができる。
【００２９】
本発明の組成物において、前記「前立腺抽出物」は、牛または豚の前立腺粉末などであってもよく、好ましくはＣＨＰの含量を高めるために脂肪が除去された形態で使用することができるが、これに制限されるものではない。
【００３０】
本発明において用語「骨損失」は、破骨細胞と造骨細胞の不均衡によってもたらされる骨が損失される症状を意味するものであって、「骨損失疾患」は、前記症状に関連した疾患をすべて含むものを意味する。したがって、破骨細胞の活性が過度に高まって骨が損失されて骨密度が低くなったり、造骨細胞の活性が低下して骨の生成が円滑に起こらなくてもたらされる疾患を全部含む。前記骨損失疾患の具体的な例としては、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）などがあるが、これに制限されない。
【００３１】
この際、前記骨粗しょう症は、更年期または閉経期症状の一つであって、女性ホルモンの減少によって発生したり、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものでありうる。
【００３２】
本発明において用語「更年期」は、一般的に生殖能力を有する時期から生殖能力が消える時期に転換される時期を意味する。前記更年期は、女性の更年期を言及するのに主に使用されているが、女性の更年期は、閉経期（ｍｅｎｏｐａｕｓｅ）だけでなく、閉経周辺期（ｐｅｒｉｍｅｎｏｐａｕｓｅ）前後の時期を全部含む範囲であって、一般的に４０〜６０才の年齢層に該当する。
【００３３】
本発明のＣＨＰまたは前立腺抽出物を含む組成物は、骨芽細胞の分化を促進して骨形成を促進することによって、骨損失疾患を予防、改善または治療することができる。
【００３４】
本発明の骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物において、用語「予防」は、疾病または病症の発病を抑制したり遅延させるすべての行為を意味する。本発明においては、骨芽細胞の分化を促進して、骨損失疾患の発病時期を遅延させたり、発病を抑制することを意味する。
【００３５】
本発明の骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物において、用語「改善」は、疾病または病症状態を好転または有利に変更するすべての行為を意味するものであって、本発明においては、骨芽細胞の分化を促進する作用を通じて骨粗しょう症の症状または歯槽骨損失のような症状を好転させることを意味する。
【００３６】
本発明の骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物において、用語「治療」は、疾病または病症の進行を遅延、中断または逆転させるすべての行為を意味するものであって、本発明においては、骨芽細胞の分化を促進する作用を通じて歯槽骨または骨などの損失を中断、軽減、緩和したりまたはなくしたり、逆転させることを意味する。
【００３７】
本発明の一実施例では、卵巣摘出動物モデルにＣＨＰを単独で投与した結果、図１および図２に示されたように、大腿骨の骨密度および骨体積比を顕著に上昇することを確認した。このようなＣＨＰの効果は、亜鉛塩投与群および亜鉛塩とＣＨＰを混合して投与した混合投与群で現れる効果より顕著に優れており、これを通じてＣＨＰが既に知られた体内亜鉛吸収率を増加させる効果を通じて骨密度を増加させるものでないことを類推することができる。
【００３８】
本発明のさらに他の一実施例では、ＣＨＰ処理による骨芽細胞の分化効果を確認した。その結果、図３に示されたように、ＣＨＰ処理濃度が増加するほど骨芽細胞の分化および骨形成が促進され、陰性対照群に比べて促進される増加幅も大きくなることを確認することができた。特に、図４に示されたように、ＣＨＰは、ＡＬＰの活性を増加させることによって、骨芽細胞の分化と骨形成を促進することを確認し、ＣＨＰ  ２ｍＭ処理群は、陽性対照群（ｈＰＴＨ１−３４  １０ｎＭ）と同等または類似した水準のＡＬＰ促進活性が観察されることを確認した。本発明の骨損失疾患の予防、改善または治療用組成物において、ＣＨＰは、０．１〜５ｍｇ／Ｌ、好ましくは０．５〜３ｍｇ／Ｌで投与され得る。
【００３９】
本願において用語「薬学的に許容可能な」は、生理学的に許容され、ヒトに投与されるとき、通常的にアレルギー反応またはこれと類似した反応を起こさないことを言い、前記塩としては、薬剤学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ  ａｃｉｄ）により形成された酸付加塩が好ましい。
【００４０】
前記薬剤学的に許容可能な塩は、有機酸または無機酸を用いて形成された酸付加塩であり得、前記有機酸は、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、酪酸、イソ酪酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、コハク酸モノアミド、グルタミン酸、酒石酸、シュウ酸、クエン酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラニル酸、ジクロロ酢酸、アミノオキシ酢酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸またはメタンスルホン酸を含む。無機酸は、例えば、塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸またはホウ酸を含む。酸付加塩は、好ましくは塩酸塩または酢酸塩の形態であり得、より好ましくは塩酸塩の形態でありうる。
【００４１】
その他にも、さらに塩が可能な形態は、ガバ塩、ガバペンチン塩、プレガバリン塩、ニコチン酸塩、アジペート塩、ヘミマロン酸塩、システイン塩、アセチルシステイン塩、メチオニン塩、アルギニン塩、リシン塩、オルニチン塩またはアスパルト酸塩などがある。
【００４２】
また、本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体または非経口投与用担体をさらに含むことができる。経口投与用担体は、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。非経口投与用担体は、水、適切なオイル、食塩水、水性グルコースおよびグリコールなどを含むことができる。また、安定化剤および保存剤をさらに含むことができる。適切な安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適切な保存剤としては、ベンザルコニウムクロリド、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されているものを参考にすることができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９５）。
【００４３】
本発明の薬学組成物は、ヒトを始めとする哺乳動物にいかなる方法でも投与することができる。例えば、経口または非経口で投与することができ、非経口的な投与方法としては、これに制限されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下または直腸内投与でありうる。
【００４４】
本発明の薬学組成物は、上述したような投与経路によって経口投与用または非経口投与用製剤に剤形化することができる。剤形化する場合には、一つ以上の緩衝剤（例えば、食塩水またはＰＢＳ）、カーボハイドレート（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、またはデキストリンなど）、抗酸化剤、静菌剤、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、充填剤、増量剤、結合剤、アジュバント（例えば、アルミニウムヒドロキシド）、懸濁剤、濃厚剤、湿潤剤、崩解剤または界面活性剤、希釈剤または賦形剤を使用して調製され得る。
【００４５】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液またはカプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、本発明の薬学組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン（とうもろこしデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプンなどを含む）、カルシウムカーボネート（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチル−セルロースまたはゼラチンなどを混ぜて調製され得。例えば、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕し、適切な補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することによって、錠剤または糖衣錠剤を収得することができる。
【００４６】
単純な賦形剤以外に、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤またはシロップ剤などが該当するが、頻繁に使用される単純希釈剤である水またはリキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤または保存剤などが含まれ得る。
【００４７】
また、場合によって、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはナトリウムアルギネートなどを崩解剤として添加することができ、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含むことができる。
【００４８】
非経口的に投与する場合、本発明の薬学組成物は、適切な非経口用担体とともに注射剤、経皮投与剤および鼻腔吸入剤の形態で当業界に公知となった方法によって剤形化され得る。前記注射剤の場合には、必ず滅菌されなければならないし、バクテリアおよび真菌のような微生物の汚染から保護されなければならない。注射剤の場合、適切な担体の例としては、これに限定されないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物および／または植物油を含む溶媒または分散媒質でありうる。より好ましくは、適切な担体としては、ハンクス溶液、リンガー液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）または注射用滅菌水、１０％エタノール、４０％プロピレングリコールおよび５％デキストロースのような等張溶液などを使用することができる。前記注射剤を微生物の汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどのような多様な抗菌剤および抗真菌剤をさらに含むことができる。また、前記注射剤は、多くの場合、糖またはナトリウムクロリドのような等張剤をさらに含むことができる。
【００４９】
経皮投与剤の場合、軟こう剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ（ｐａｓｔｅ）剤、リニメント剤、エアロール剤などの形態が含まれる。前記で「経皮投与」は、薬学的組成物を局所的に皮膚に投与して薬学的組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。
【００５０】
吸入投与剤の場合、本発明によって使用される化合物は、適切な推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体を使用して、加圧パックまたは煙霧機からエアロゾルスプレーの形態で便利に伝達することができる。加圧エアロゾールの場合、投薬単位は、計量された量を伝達するバルブを提供して決定することができる。例えば、吸入器または吹き込み機に使用されるゼラチンカプセルおよびカートリッジは、化合物、およびラクトースまたはデンプンのような適切な粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化することができる。非経口投与用剤形は、すべての製薬化学に一般的に公知となった処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９７５．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １８０４２，Ｃｈａｐｔｅｒ  ８７：Ｂｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載されている。
【００５１】
本発明の薬学的組成物は、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を有効量で含むとき、好ましい骨損失疾患の予防、改善または治療効果を提供することができる。本願で、用語「有効量」は、陰性対照群に比べてそれ以上の反応を示す量を言い、好ましくは骨損失疾患を予防、改善または治療するのに十分な量をいう。本発明の薬学的組成物にシクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物が０．０１〜９９．９％含まれ得、残量は、薬学的に許容可能な担体が占めることができる。本発明の薬学的組成物に含まれるシクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物の有効量は、組成物が製品化される形態などによって変わる。
【００５２】
本発明の薬学的組成物の総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ）で患者に投与され得、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）により投与され得る。本発明の薬学組成物は、疾患の程度によって有効成分の含量を異ならしめることができる。例えば、シクロ−ヒスプロを基準として一日に体重１ｋｇ当たり好ましくは０．００１〜１００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇの量で投与されるように１〜数回に分けて投与することができる。しかしながら、前記シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物の用量は、薬学的組成物の投与経路および治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食事および排泄率など多様な要因を考慮して患者に対する有効投与量が決定されることであるから、このような点を考慮するとき、当分野における通常の知識を有する者なら、前記シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を骨損失疾患の予防、治療または改善のための特定の用途に応じた適切な有効投与量を決定することができる。本発明による薬学組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路および投与方法に特に制限されない。
【００５３】
本発明の骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物は、単独で、または手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療または生物学的反応調節剤を用いる方法と併用して使用することができる。
【００５４】
本発明の骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物は、また、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を含む外用剤の剤形で提供することができる。このような側面から、本発明の組成物は、骨損失疾患の予防または改善用医薬部外品組成物および前記組成物を含む医薬部外品でありうる。
【００５５】
前記外用剤は、皮膚または口腔内に直接適用され得る。本発明の骨損失疾患の予防または治療用薬学組成物を外用剤として使用する場合、さらに脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤およびゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（ｆｏａｍｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型乳化剤、非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性活性剤、親油性活性剤または脂質小胞など皮膚外用剤に通常的に使用される任意の他の成分のような皮膚科学分野において通常的に使用される補助剤を含有することができる。また、前記成分は、皮膚科学分野において一般的に使用される量で導入され得る。
【００５６】
本発明の組成物が外用剤として提供される場合、これに制限されるものではないが、液剤、軟膏、パッチ、ゲル、クリームまたは噴霧剤などの剤形でありうる。本発明の一具現例によれば、本発明の医薬部外品は、歯磨き粉、液体歯磨きおよびマウススプレーを含む口腔管理製品、軟こう剤、マスク、湿布剤、貼付剤および経皮吸収剤などを含むことができる。
【００５７】
本発明のシクロ−ヒスプロを処理する場合、骨芽細胞の分化が促進されたところ、前記有効成分を口腔管理製品に適用する場合、骨芽細胞の分化を促進して歯槽骨疾患の予防または改善に効果がある。したがって、前記医薬部外品組成物は、骨損失の予防または改善のための口腔管理用組成物でありうる。
【００５８】
本発明の組成物を医薬部外品組成物として使用する場合、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物をそのまま添加したり他の医薬部外品成分と共に通常の方法によって適切に使用され得る。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康または治療的処置）によって適宜決定され得る。
【００５９】
本発明の医薬部外品組成物および医薬部外品に対して本発明の薬学的組成物および健康機能食品組成物の内容が準用され得る。
【００６０】
本発明で、用語「健康機能食品」は、「機能性食品」および「健康食品」の意味を全部含む。
【００６１】
本発明において用語「機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｆｏｏｄ）」は、特定の保健用食品（ｆｏｏｄ  ｆｏｒ  ｓｐｅｃｉａｌ  ｈｅａｌｔｈ  ｕｓｅ，ＦｏＳＨＵ）と同じ用語であって、栄養供給の他にも生体調節機能が効率的に現れるように加工された医学、医療効果が高い食品を意味する。
【００６２】
本発明において用語「健康食品（ｈｅａｌｔｈ  ｆｏｏｄ）」は、一般食品に比べて積極的な健康維持や増進効果を有する食品を意味し、健康補助食品（ｈｅａｌｔｈ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｆｏｏｄ）は、健康補助目的の食品を意味する。場合によって、機能性食品、健康食品、健康補助食品の用語は混用される。前記食品は、骨損失疾患の改善または回復に有用な効果を得るために、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、液状、丸剤などの多様な形態で製造され得る。
【００６３】
このような機能性食品の具体的な例として、前記組成物を利用して農産物、畜産物または水産物の特性を生かして変形させると同時に、貯蔵性を良くした加工食品を製造することができる。
【００６４】
本発明の健康機能食品組成物は、また、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、食品添加剤（ｆｏｏｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）および飼料などの形態で製造され得、ヒトまたは家畜を始めとする動物を取食対象とする。
【００６５】
前記類型の食品組成物は、当業界に公知となった通常の方法によって多様な形態で製造することができる。一般食品としては、これに限定されないが、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実およびその加工食品（例えば：果物缶詰め、瓶詰、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類およびその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コンビーフなど）、パン類および麺類（例：うどん、ソバ、ラメン、スパゲット、マカロニなど）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チイズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：味噌、醤油、ソースなど）などにシクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を添加して製造することができる。
【００６６】
また、栄養補助剤としては、これに限定されないが、カプセル、タブレット、丸剤などにシクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を添加して製造することができる。
【００６７】
また、健康機能食品としては、これに限定されないが、例えば、前記シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物をお茶、ジュースおよびドリンクの形態で製造して飲用（健康飲料）することができるように、液状化、顆粒化、カプセル化および粉末化して摂取することができる。また、前記シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物を食品添加剤の形態で使用するためには、粉末または濃縮液の形態で製造して使用することができる。また、前記シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物と骨損失疾患の予防または改善に効果があると知られた公知の活性成分と共に混合して組成物の形態で製造することができる。
【００６８】
本発明の食品組成物が健康飲料組成物として用いられる場合、前記健康飲料組成物は、通常の飲料のように、様々な香味剤または天然炭水化物などを更なる成分として含有することができる。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド；マルトース、スクロースのようなジサッカライド；デキストリン、シクロデキストリンのようなポリサッカライド；キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールでありうる。甘味剤は、タウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤；サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤などを使用することができる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり一般的に約０．０１〜０．０４ｇ、好ましくは約０．０２〜０．０３ｇである。
【００６９】
シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物は、骨損失疾患の予防または改善用食品組成物の有効成分として含有され得るが、その量は、前記予防または改善効果を得るのに有効な量であって、例えば全体組成物の総重量に対して０．０１〜１００重量％であることが好ましいが、これに特に限定されるものではない。本発明の食品組成物は、シクロ−ヒスプロまたは前立腺抽出物と共に骨損失疾患の予防または改善に効果があると知られた他の活性成分と共に混合して製造されることができる。
【００７０】
前記の他に本発明の健康機能食品は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸、ペクチン酸の塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコールまたは炭酸化剤などを含有することができる。その他に、本発明の健康食品は、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、または野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立して、または混合して使用することができる。このような添加剤の比率は、大きく重要なことではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１〜０．１重量部の範囲で選択されることが一般的である。
【００７１】
以下、本発明を実施例を通じてより詳細に説明する。ただし、本発明は、多様な変更を加えることができ、様々な形態を有することができるところ、以下で記述する特定の実施例および説明は、本発明の理解を助けるためのものに過ぎず、本発明を特定の開示形態に対して限定しようとするものではない。本発明の範囲は、本発明の思想および技術範囲に含まれるすべての変更、均等物ないし代替物を含むものと理解されなければならない。
【００７２】
［準備例］
下記実施例で使用した亜鉛塩は、Ｃａｐｔｅｋ  Ｓｏｆｔｇｅｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌから購入し、ＣＨＰ（シクロ−ヒスプロ）は、バケムから購入して使用した。陽性対照群として使用されたｈＰＴＨ１−３４（副甲状腺ホルモン１−３４）は、トクリスから購入した。骨芽細胞の培養には、キフコのＭＥＭα、アスコルビン酸無添加（ｎｏ  ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）培地とハイクローンのＦＢＳを購入して使用し、分化に使用されたβ−グリセロホスフェート（β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）とアスコルビン酸は、シグマアルドリッチから購入して使用した。ＡＬＰ（アルカリ性リン酸分解酵素）活性を測定するためには、サーモの１−ＳＴＥＰ  ＮＢＣＴ／ＢＣＩＰ溶液を使用した。
【００７３】
［実施例１］ＣＨＰまたは亜鉛塩および混合投与による卵巣摘出動物モデルを用いた骨粗しょう症改善効果の測定
１−１．実験動物の設計および実験物質処理組成
ＣＨＰ、亜鉛塩またはこれらの混合投与による卵巣摘出動物モデルの骨粗しょう症の改善効果を測定するために、２０週齢のＳＤ雌性マウス（ＳＬＣ／中央実験動物（株）、ソウル、韓国））を購入して、一定の条件（温度：２２±２℃、相対湿度：５５±１０％、日周期：１２時間）で飼育した。７匹を一群としてケージで水と餌を自由供給し、実験前に１週間順化を経て実験に使用した。順応期間が終わった後、７個の群に分けて下記表１のようにＣＨＰまたは亜鉛塩または混合投与を飲水投与により行い、陽性対照群の場合、リセドロネート（ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ）を一週間に一回皮下投与を進めた。
【００７４】
【表１】
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【００７５】
１−２．Ｍｉｃｒｏ  ＣＴの測定
ＣＨＰ、亜鉛塩またはこれらの混合投与を６週間進めた後、卵巣摘出動物モデルの骨粗しょう症の改善効果をＭｉｃｒｏ  ＣＴを用いて分析した。卵巣摘出動物の骨密度は、ｍｉｃｒｏ−ＣＴ（ＱｕａｎｔｕｍＦＸ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）を用いて大腿骨成長板２ｍｍ前方３ｍｍの範囲を骨ＣＴ撮影を実施して測定した。また、骨体積比（ｂｏｎｅ  ｖｏｌｕｍｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＢＶ／ＴＶ，％）を測定した。大腿骨の骨密度を測定した結果は、図１に示し、骨体積比は、図２に示した。
【００７６】
実験結果、図１に示されたように、ＣＨＰ  １ｍｇ／Ｌを投与した群が、卵巣切除群より顕著に大腿骨の骨密度が増加したことを観察することができ、陽性対照群（リセドロネート）と類似していることを観察することができた。また、図２に示されたように、ＣＨＰ  １ｍｇ／Ｌを投与した群は、陽性対照群であるリセドロネートと類似した水準で骨体積比（ＢＶ／ＴＶ）が回復された。
【００７７】
前記実験結果は、卵巣摘出対照群とＣＨＰ、亜鉛塩、ＣＨＰと亜鉛塩の混合処理およびリセドロネート処理実験群間のｔ検定（ｔ−ｔｅｓｔ）で比較検証を実施して、その有意性を検証し、統計学的に有意な差異を示した（＊ｐ＜０．０５）。
【００７８】
したがって、ＣＨＰ  １ｍｇ／Ｌの投与が骨密度および骨体積比を増加させることによって、骨粗しょう症を治療する効果を示すことが分かった。
【００７９】
［実施例２］ＣＨＰによるＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞の分化促進および骨形成促進効能の測定
２−１．ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞の培養条件
１０％ＦＢＳと１％ペニシリン／ストレプトマイシンが含有されたＭＥＭα、アスコルビン酸無添加培地を利用してＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を３７℃、５％ＣＯ２条件のインキュベーターで培養した。造骨細胞への分化のためには、前記基本培地組成に１０ｍＭのβ−グリセロホスフェートと５０μｇ／μｌのアスコルビン酸を追加して使用した。
【００８０】
２−２．ＣＨＰまたは陽性対照群ｈＰＴＨ１  −３４の処理によるＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞の分化誘導
２４ウェルプレートに１×１０５個のＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を５００μｌで播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）し、細胞がいっぱいに満ちるまで２４時間の間培養した。造骨細胞に分化させるために、分化培地に培地を交替し、表２のように陽性対照群には１０ｎＭのｈＰＴＨ１  −３４を、試験群には、０．５、１、２ｍＭのＣＨＰを処理した。この際、分化に対する陰性対照群である未分化群には、分化培地でなく、基本培地を使用した。ｈＰＴＨ１−３４を処理した陽性対照群は、処理６時間後に培地を分化培地に交替する。４８時間ごとに培地を交替しつつ、各濃度のＣＨＰとｈＰＴＨ１−３４を総１４日間処理した。
【００８１】
【表２】
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【００８２】
２−３．ＡＬＰ（Ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、アルカリ性リン酸分解酵素）活性の測定
分化１４日目に、培地を除去し、ＰＢＳで１回洗浄した後、４％ＰＦＡ（パラホルムアルデヒド）で常温で５分間固定した。１−ＳＴＥＰ  ＮＢＣＴ／ＢＣＩＰ溶液を５００μｌ入れて、１時間の間常温で反応させた。蒸留水で洗浄した後、常温で乾燥し、細胞の着色された程度を顕微鏡で観察した。引き続いて、各ウェルにＤＭＳＯを入れて振とうした後、５２５ｎｍでの吸光度を測定した。
【００８３】
実験結果、図３に示されたように、ＣＨＰを処理した群の着色が、陰性対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に比べて顕著に増加することを確認し、ＣＨＰの濃度が高まるにつれて増加幅が大きくなることを確認することができた。特に、ＣＨＰ  ２ｍＭの結果は、陽性対照群（ｈＰＴＨ１−３４  １０ｎＭ）と類似した水準であることを確認することができた（図４）。これは、ＣＨＰによりＡＬＰ活性が増加して、ＣＨＰが骨芽細胞の分化と骨形成を促進させると解される。これを通じて、ＣＨＰが骨の健康と骨粗しょう症の治療に効能があると判断することができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月18日(2020.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロ−ヒスプロまたはその薬学的に許容可能な塩を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項２】
前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものである、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
シクロ−ヒスプロを含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【請求項５】
前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上である、請求項４に記載の健康機能食品組成物。
【請求項６】
前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものである、請求項５に記載の健康機能食品組成物。
【請求項７】
前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項８】
前記前立腺抽出物は、脂肪が除去された形態である、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前立腺抽出物を含む骨損失疾患の予防または改善用健康機能食品組成物。
【請求項１０】
前記前立腺抽出物は、脂肪が除去された形態である、請求項９に記載の健康機能食品組成物。
【請求項１１】
骨損失疾患の予防または治療用薬剤の製造のためのシクロ−ヒスプロまたはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１２】
前記骨損失疾患は、骨粗しょう症、ページェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、歯槽骨損失、骨軟化症および腎性骨異栄養症（ｒｅｎａｌ  ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）よりなる群から選ばれたいずれか一つ以上である、骨損失疾患請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記骨粗しょう症は、女性ホルモンの減少、骨芽細胞の破壊または活性抑制によって発生するものである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
骨損失疾患の予防または治療用薬剤の製造のための前立腺抽出物の使用。
【請求項１５】
前記前立腺抽出物は、脂肪が除去された形態である、請求項１４に記載の使用。
【国際調査報告】
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