(57)【要約】  本発明は、ＣＤ７０（Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０）に特異的に結合する抗体を提供する。本発明はさらに、ＣＤ７０と別の抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する二特異性抗体を提供する。本発明はさらに抗体をコードする核酸、および当該抗体（一特異性および二特異性）を取得する方法に関連する。本発明はさらに、癌を含むＣＤ７０介在性の病態の治療のためのこれら抗体の使用に関する治療方法に関連する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０（ＣＤ７０）に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、
ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７または４６３に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または
ｂ）（ｉ）配列番号１９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、４６４、４６７、４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む、単離抗体。
【請求項２】
Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０（ＣＤ７０）に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、
ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９または３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または
ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８または３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、を含む、単離抗体。
【請求項３】
ＣＤ７０に特異的に結合し、請求項１に記載の抗体と競合する、単離抗体。
【請求項４】
二特異性抗体であって、前記二特異性抗体は全長抗体であり、標的抗原に特異的に結合する前記二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原に特異的に結合することにより前記ヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる前記二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含み、前記第一の抗体可変ドメインは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、もしくは３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、もしくは３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、二特異性抗体。
【請求項５】
二特異性抗体であって、前記二特異性抗体は全長抗体であり、標的抗原に特異的に結合する前記二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原に特異的に結合することにより前記ヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる前記二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含み、前記第一の抗体可変ドメインは、
ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７または４６３に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または
ｂ）（ｉ）配列番号９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、４６４、４６７、４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む、二特異性抗体。
【請求項６】
前記第二の抗体可変ドメインが、エフェクター抗原ＣＤ３に特異的に結合する、請求項５に記載の二特異性抗体。
【請求項７】
前記第二の抗体可変ドメインが、
ａ）（ｉ）配列番号２６７、２６８、２６９に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号２７０または２７１に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；およびｉｉｉ）配列番号２７２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域：および／または
ｂ）（ｉ）配列番号２７３に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２７４に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２７５に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む、請求項６に記載の二特異性抗体。
【請求項８】
ヘテロ二量体タンパク質の前記第一および第二の抗体可変ドメインの両方は、ヒトＩｇＧ２（配列番号２７９）のヒンジ領域中の２２３位、２２５位および２２８位、ならびにＣＨ３領域中の４０９位または３６８位（ＥＵナンバリングスキーム）でアミノ酸改変を含有する、請求項４に記載の二特異性抗体。
【請求項９】
前記ヒトＩｇＧ２の２６５位、３３０位および３３１位のうちの一つまたは複数でアミノ酸改変をさらに含む、請求項８に記載の二特異性抗体。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１２】
請求項１０に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項１３】
医薬品としての使用のための請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記医薬品が、腎細胞癌、グリア芽腫、例えば低グレードグリオーマなどのグリオーマ、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または非小細胞肺癌からなる群から選択されるＣＤ７０関連癌の治療における使用のためである、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
その必要のある対象を治療する方法であって、
ａ）  請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を提供すること、および
ｂ）  前記対象に前記抗体を投与すること、を含む、方法。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
対象においてＣＤ７０を発現する悪性細胞と関連した状態を治療する方法であって、その必要のある対象に、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体、または請求項１６に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１８】
前記状態が、癌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が、腎細胞癌、グリア芽腫、例えば低グレードグリオーマなどのグリオーマ、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または非小細胞肺癌からなる群から選択されるＣＤ７０関連癌である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＤ７０を発現する悪性細胞を有する対象において腫瘍の増殖または進行を阻害する方法であって、その必要のある前記対象に、請求項１６に記載の医薬組成物の前記対象に対する有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
対象においてＣＤ７０を発現する悪性細胞の転移を阻害する方法であって、その必要のある前記対象に、請求項１６に記載の医薬組成物の前記対象に対する有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
ＣＤ７０を発現する悪性細胞を有する対象において腫瘍の退縮を誘導する方法であって、その必要のある前記対象に、請求項１６に記載の医薬組成物の前記対象に対する有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２３】
抗体を作製する方法であって、前記抗体の産生を生じさせる条件下で、請求項１２に記載の宿主細胞を培養すること、および前記宿主細胞または培養物から前記抗体を単離すること、を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／６４１，８７３号明細書、および２０１８年２月１日に出願された米国仮特許出願第６２／６２５，０１９号明細書の優先権を主張するものであり、当該出願の各々がその全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表への参照
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で電子的に出願され、．ｔｘｔフォーマットで電子的に提出された配列表を含む。．ｔｘｔファイルには、２３４，８６１バイトのサイズを有する、２０１９年１月３日に作成された“ＡＬＧＮ−０１５＿０２ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔ”と題された配列表が含まれる。この．ｔｘｔファイルに含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０（ＣＤ７０）に特異的に結合する例えば全長抗体またはその抗原結合断片などの抗体に関する。さらに本発明は、一つのアーム上にＣＤ７０抗体を含むヘテロ多量体抗体（例えば二特異性抗体）に関する。ＣＤ７０抗体を含む組成物、当該抗体の作製方法および精製方法、ならびに診断および治療におけるその使用も提供される。
【背景技術】
【０００４】
腎細胞癌（ＲＣＣ：Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）は、腎皮質を起源とする癌であり、腎臓の癌の約９０％を占めている。組織学的には、ＲＣＣはいくつかのサブタイプに分類されることができる。その中で明細胞腎細胞癌（ｃｃＲＣＣ：Ｃｌｅａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｎａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ）が最も普遍的であり、最も多くの死者が発生している。毎年、３２万件を超えるＲＣＣが世界で報告されており、おおよそ１４万人が死亡している。ＲＣＣの発生率はこの１０年間で着実に上昇しており、すべての成人の悪性腫瘍の２〜３％を占めている。初期ステージの限局性腫瘍を有する患者は外科的切除を選択することができる。しかし限局性疾患が早期に血行性に播種する場合には、転移が発生する。早期転移の部位としては、肺、リンパ節、肝臓、骨および脳が挙げられ、そして数は少ないが副腎、および対側腎が挙げられる。進行性疾患の患者は高い死亡率を有し、ステージＩＩＩの疾患で５年生存率の中央値は５３％、転移性疾患ではわずか８％である。進行性疾患に対する現在のファーストライン治療選択肢には、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ：Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）受容体を標的とする例えばスニチニブおよびパゾパニブなどの低分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ：Ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、例えばベバシズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体、ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）の阻害剤であるテムシロリムス、ならびに高用量ＩＬ−２が含まれる。これらＶＥＧＦを標的とする治療法は全体的な生存率を改善してきたが、長期間の薬剤耐性により疾患の再発が生じており、進行性疾患に対する治療法はいまだアンメットニーズである（例えば、Ｚａｒｒａｂｉ,Ｋ．ｅｔ  ａｌ．,Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ,１０：３８（２０１７）を参照のこと）。
【０００５】
Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０（ＣＤ７０、ＣＤ２７ＬＧまたはＴＮＦＳＦ７）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ：ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ）スーパーファミリーの１種であり、そしてＴＮＦスーパーファミリー受容体であるＣＤ２７のリガンドである。ＣＤ２７とＣＤ７０との間の一時的な相互作用によってＴ細胞の共刺激がもたらされ、この刺激はＣＤ２８による刺激に対して相補的である。ＣＤ７０は、例えば非ホジキンリンパ腫およびホジキン病などの血液の癌、ならびに例えばグリア芽腫および腎細胞癌などの固形腫瘍で発現されており、ｃｃＲＣＣ上でのその発現は、ほぼ均一である（例えば、Ｇｒｅｗａｌ  Ｉ．,ｅｔ  ａｌ．,Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔｓ,１２（３）：３４１−３５１（２００８）を参照のこと）。
【０００６】
Ｔ細胞に会合する二特異性アプローチの形式でのＣＤ７０二特異性抗体が近年開発された。しかし多くの二特異性の形態は低分子量であり、そして半減期が短いという制限がある。そのために継続的な注入が必要となってくる。そこで、有効性および安全性プロファイルが改善され、ヒト患者での使用に適した、ＣＤ７０が発現される癌、特にｍＲＣＣを治療する抗体（例えば一特異性または二特異性）に対するニーズがいまだ存在している。
【発明の概要】
【０００７】
本明細書に開示される発明は、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７０（ＣＤ７０）に特異的に結合する抗体（例えば一特異性抗体または二特異性抗体）を目的としている。一部の実施形態では、全長二特異性形式の本明細書に記載されるＣＤ７０抗体は、半減期が長く、Ｆｃ相互作用が最小化され、そしてインビボでの免疫細胞との相互作用を介した非特異的サイトカイン放出が最小化されている。
【０００８】
ゆえに一つの態様では、本発明は、ＣＤ７０に特異的に結合する単離抗体を提供するものであり、当該抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９、または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎｅ）；（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１、または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７、または４６３に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに／または（ｉ）配列番号１９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、��６４、４６７、４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４、または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５、または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６、または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む。
【０００９】
別の態様では、ＣＤ７０に特異的に結合する単離抗体が提供され、当該抗体は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、もしくは３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、もしくは３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＶＨ領域は、ＣＤＲ内ではない残基に一つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有するバリアントを含み、および／または本明細書に記載されるＶＬ領域は、ＣＤＲ内ではないアミノ酸に一つまたは複数のアミノ酸置換を有するバリアントを含む。例えば一部の実施形態では、ＶＨ領域またはＶＬ領域は、上述のアミノ酸配列、またはＣＤＲ内ではない残基に、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個以下の保存的置換を有するそのバリアントを含み得る。
【００１０】
一部の実施形態では、ＣＤ７０に特異的に結合する単離抗体が提供され、当該抗体は、配列番号１８に示される配列を含むＶＨ領域、および／または配列番号１７に示される配列を含むＶＬ領域、を含む。
【００１１】
一部の実施形態では、ＣＤ７０に特異的に結合し、ＣＤ７０に特異的に結合する本明細書に提示される単離抗体と競合する抗体が提供される。
【００１２】
別の態様では、二特異性抗体が提供され、この場合において当該二特異性抗体は全長抗体であり、標的抗原（例えばＣＤ７０）に特異的に結合する二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原（例えば、Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３（ＣＤ３））に特異的に結合することによりヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含む。一部の態様では、第一の抗体可変ドメインは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、もしくは３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、もしくは３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む。一部の実施形態では、第一の抗体可変ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９、または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎｅ）；（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１、または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７、または４６３に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに／または（ｂ）（ｉ）配列番号１９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、４６４、４６７、４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４、または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５、または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６、または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む。
【００１３】
一部の実施形態では、第二の抗体可変ドメインは、ＣＤ３に特異的なＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む。たとえば、第二の抗体可変ドメインは、配列番号２６６に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号２６５に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。  一部の実施形態では、第二の抗体可変ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号２６７、２６８または２６９に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２７０または２７１に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２７２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含むＶＨ領域、ならびに／または（ｉ）配列番号２７３に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２７４に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２７５に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含むＶＬ領域、を含有する。
【００１４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスの抗体である。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、グリコシル化された定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、一つまたは複数のヒトＦｃガンマ受容体に対する結合アフィニティが低下した定常領域を含む。
【００１５】
一部の実施形態では、二特異性抗体の第一および第二の抗体可変ドメインの両方が、ヒトＩｇＧ２（配列番号２７９）のヒンジ領域中の２２３位、２２５位および２２８位（例えば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、ならびにＣＨ３領域中の４０９位または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵナンバリングスキーム）でアミノ酸改変を含有する。
【００１６】
一部の実施形態では、二特異性抗体の第一および第二の抗体可変ドメインの両方が、ヒトＩｇＧ２の２６５位でアミノ酸改変（例えば、Ｄ２６５Ａ）を含有する。
【００１７】
一部の実施形態では、二特異性抗体の第一および第二の抗体可変ドメインの両方が、ヒトＩｇＧ２の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）のうちの一つまたは複数でアミノ酸改変を含有する。一部の実施形態では、二特異性抗体の第一および第二の抗体可変ドメインの両方が、ヒトＩｇＧ２の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）の各々でアミノ酸改変を含有する。
【００１８】
他の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体のいずれかを含有する医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、本明細書に記載される抗体のいずれかを組み換えにより産生する細胞株も提供する。
【００２０】
本発明はさらに、本明細書に記載される抗体のいずれかをコードする核酸も提供する。本発明はさらに、本明細書に記載される抗体のいずれかの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする核酸も提供する。
【００２１】
本発明はさらに、本明細書に提供される核酸またはベクターを含有する宿主細胞も提供する。さらに、本明細書に提供される抗体（例えば一特異性または二特異性）を作製する方法が提供され、当該方法は、当該抗体の産生を生じさせる条件下で本明細書に提供される宿主細胞を培養すること、および当該宿主細胞または培養物から当該抗体を単離することを含む。
【００２２】
本発明はさらに、本明細書に記載される抗体または抗体結合体のいずれかの有効量を含むキットも提供する。
【００２３】
さらに、医薬品としての使用のための本明細書に提供される抗体または二特異性抗体も提供される。
【００２４】
本発明はさらに、その必要のある対象を治療する方法も提供し、当該方法は、本明細書に記載される単離抗体または二特異性抗体を提供すること、および当該抗体を当該対象に投与することを含む。
【００２５】
さらに、対象においてＣＤ７０を発現する悪性細胞と関連した状態を治療する方法が提供され、当該方法は、その必要のある対象に、本明細書に記載される抗体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、当該状態は、癌である。一部の実施形態では、癌は、腎細胞癌、グリア芽腫、例えば低グレードグリオーマなどのグリオーマ、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または非小細胞肺癌からなる群から選択されるＣＤ７０関連癌（例えば、ＣＤ７０発現を伴う任意の癌）である。
【００２６】
別の態様では、本発明は、ＣＤ７０を発現する悪性細胞を有する対象において、腫瘍の増殖または進行を阻害する方法を提供するものであり、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載される単離抗体または二特異性抗体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００２７】
別の態様では、本発明は、対象においてＣＤ７０を発現する悪性細胞の転移を阻害する方法を提供するものであり、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載される単離抗体または二特異性抗体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００２８】
別の態様では、本発明は、ＣＤ７０を発現する悪性細胞を有する対象において、腫瘍の退縮を誘導する方法を提供するものであり、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載される単離抗体または二特異性抗体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本明細書に開示される本発明は、ＣＤ７０（例えば、ヒトＣＤ７０）に特異的に結合する抗体（例えば、一特異性または二特異性）を提供する。本発明はさらに、これら抗体をコードするポリヌクレオチド、これらの抗体を含む組成物、ならびにこれらの抗体を作製する方法および使用する方法も提供する。本発明はさらに、例えば癌など、対象においてＣＤ７０介在性の病態と関連した状態を治療する方法も提供する。特に本発明の発明者らは、全長二特異性形式の本明細書に記載されるＣＤ７０抗体は、半減期が長く、Ｆｃ相互作用が最小化され、そしてインビボでの免疫細胞との相互作用を介した非特異的サイトカイン放出が最小化されていることを見出した。
【００３０】
一般的技術
本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、免疫学、ウイルス学、モノクローナル抗体の作製法および操作法の従来的な技術を採用し、それら技術は当分野の技術範囲内にある。こうした技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ、ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ、ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ、ｅｄｓ．，１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、ｅｄｓ．）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ、ｅｄｓ．，１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ、ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ、ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）などの文献で完全に説明されている。
【００３１】
定義
「抗体」は、少なくとも一つの抗原認識部位を介して、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的への特異的結合ができる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、当該用語は、インタクトなポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけではなく、その抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）抗体およびドメイン抗体（例えば、サメ抗体およびラクダ科抗体を含む）、ならびに抗体を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を備える免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造を包含する。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を含み、抗体は任意の特定のクラスである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには五つの主なクラスがある。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、ならびにこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分割されてもよい。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造が公知である。
【００３２】
本明細書において使用される場合、抗体の「抗原結合断片」または「抗原結合部分」という用語は、特異的に所与の抗原（例えば、ＣＤ７０）に結合する能力を保持するインタクトな抗体の一つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片によって実施され得る。抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖ断片、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．,Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６,１９８９）、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００３３】
標的（例えば、ＣＤ７０タンパク質）に「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書において相互交換可能に使用される）抗体またはポリペプチドは、当分野においてよく理解された用語であり、そうした特異的な結合または優先的な結合を決定するための方法も当分野に公知である。分子は、別の細胞または物質よりも特定の細胞または物質と、より頻繁に、より早く、長い期間および／もしくは高いアフィニティで反応する、または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を呈すると言われる。他の物質との結合よりも高いアフィニティ、アビディティで、より早く、および／または長い期間、結合する場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＣＤ７０エピトープに特異的に、または優先的に結合する抗体は、他のＣＤ７０エピトープまたは非ＣＤ７０エピトープに結合するよりも高いアフィニティ、アビディティで、より早く、および／または長い期間、当該エピトープに結合する抗体である。この定義を読むことで、例えば第一の標的に特異的に、または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第二の標的に特異的に、または優先的に結合しても、または結合しなくてもよいことが理解されるであろう。したがって「特異的結合」または「優先的結合」は必ずしも排他的結合を必須とはしない（が、排他的結合も含み得る）。必ずではないが一般的に、結合に対する参照とは、優先的結合を意味する。
【００３４】
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域、または抗体重鎖の可変領域を単独で、あるいは組み合わせで指す。当分野で知られるように、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された四つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって近接して保持され、そして他の鎖のＣＤＲとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。ＣＤＲ決定法は少なくとも二つある：（１）異種間の配列多様性に基づく方法（すなわち、ＫａｂａｔらのＳｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ,（５ｔｈ  ｅｄ．,１９９１,Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ,Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ）、および（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づく方法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．,１９９７,Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８）。本明細書において使用される場合、ＣＤＲとは、いずれか方法により規定されるＣＤＲ、または両方の方法の組み合わせにより規定されるＣＤＲを指す場合がある。
【００３５】
可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、ＡｂＭ定義、接触定義、および／もしくはコンフォメーション定義、または当分野において公知のＣＤＲ決定の任意の方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、Ｋａｂａｔらにより最初に規定された超可変領域として規定される場合もある。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．,１９９２,Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃを参照のこと。ＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａらにより最初に報告された構造的ループ構造として規定される場合もある。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３，１９８９を参照のこと。ＣＤＲ特定の他の方法としては、「ＡｂＭ定義」が挙げられる。この方法は、Ｋａｂａｔ法とＣｈｏｔｈｉａ法の間を取り、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアを使用して導かれる（現在では、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））。または、観察された抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」も挙げられ、この方法は、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５，１９９６に記載されている。別の方法は、本明細書においてＣＤＲの「コンフォメーション定義」と呼称されており、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に貢献する残基として規定され得る。例えば、Ｍａｋａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１１５６−１１６６，２００８を参照のこと。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、厳密には上述の方法の一つに従っていない場合があるが、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲの少なくとも一部とは重複している。それでも特定の残基または残基群、さらには全ＣＤＲがそれほど抗原結合に影響を与えないという予測、または実験結果を鑑みると、それらは短すぎる、または長すぎる場合がある。本明細書において使用される場合、ＣＤＲとは、方法の組み合わせを含む当分野に公知の任意の方法により規定されるＣＤＲを指す場合がある。本明細書において使用される方法は、これら方法のいずれかに従い規定されたＣＤＲを利用する場合がある。複数のＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態に関し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｘｔｅｎｄｅｄ（拡張）、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ（接触）、および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従い規定され得る。
【００３６】
本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体群から取得される抗体を指す。すなわち、当該群を構成する個々の抗体は、わずかに存在し得る可能性がある自然発生の突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に指向する。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）に指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に指向する。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に均質な抗体群から取得されたときの抗体の特徴を示すが、任意の特定の方法による抗体の産生が必要とはみなされないものとする。例えば本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５，１９７５により最初に報告されたハイブリドーマ法により作製されてもよく、または例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組み換えＤＮＡ法により作製されてもよい。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４，１９９０に記載される技術を使用して作製されたファージライブラリーから単離されてもよい。
【００３７】
本明細書において使用される場合、「ヒト化した」抗体とは、非ヒト免疫グロブリン由来の配列を最小限含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合部分配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補的決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、アフィニティ、および能力を有する例えばマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基で置換される。さらにヒト化抗体は、レシピエント抗体においても、輸入されるＣＤＲ配列またはフレームワーク配列においても存在しないが、抗体性能のさらなる改善または最適化のために含有される残基を含む場合がある。概してヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的にすべてを含有し、その中で、ＣＤＲ領域のすべて、または実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、そしてＦＲのすべて、または実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。さらにヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域または定常ドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含有するのが最適である。ＷＯ９９／５８５７２に記載されるように改変されたＦｃ領域を有する抗体が好ましい。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に対し改変された一つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ  Ｌ１、ＣＤＲ  Ｌ２、ＣＤＲ  Ｌ３、ＣＤＲ  Ｈ１、ＣＤＲ  Ｈ２またはＣＤＲ  Ｈ３）を有し、それらは元の抗体の一つまたは複数のＣＤＲから「誘導された」一つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。
【００３８】
本明細書において使用される場合、「ヒト抗体」とは、ヒトによって生成される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、および／または当業者に公知のヒト抗体、もしくは本明細書に開示されたヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも一つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも一つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。こうした一例は、マウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当分野で知られている様々な技術を使用して生成することができる。一つの実施形態では、ヒト抗体はファージライブラリーから選択され、当該ファージライブラリーはヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９−３１４，１９９６；Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６１５７−６１６２，１９９８；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１，１９９１；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１，１９９１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン座位が内因性座位の代わりにトランスジェニック導入された動物の免疫化によっても作製されうる、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスによっても作製され得る。この方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、および第５，６６１，０１６号に記載されている。あるいはヒト抗体は、標的抗原に対して指向される抗体を生成するヒトＢリンパ球を不死化することによって調製されてもよい（そうしたＢリンパ球は個体から採取されてもよく、またはｃＤＮＡのシングルセルクローニングから採取されてもよく、またはインビトロで免疫化されてもよい）。例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、ｐ．７７，１９８５；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５，１９９１；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照のこと。
【００３９】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が一つの種に由来し、定常領域配列は別の種に由来する抗体を指すことが意図され、例えば、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する抗体などである。
【００４０】
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において相互交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸鎖を指す。例えば、鎖は比較的短くてもよく（例えば１０〜１００アミノ酸）または長くてもよい。鎖は、直鎖状または分枝状であってもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、および／または非アミノ酸が割り込んでもよい。さらに当該用語は、自然に改変されたアミノ酸鎖、または以下の介入により改変されたアミノ酸を包含する：例えばジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または例えば標識構成要素との結合などの他の任意の操作もしくは改変。この定義にはさらに、例えば一つまたは複数のアミノ酸アナログ（例えば非天然アミノ酸などを含む）ならびに当分野に公知の他の改変を含有するポリペプチドが含有される。ポリペプチドは、一本鎖または関連鎖として生じ得ると理解される。
【００４１】
「一価抗体」は、１分子当たり、一つの抗原結合部位を含有する（例えば、ＩｇＧまたはＦａｂ）。一部の例では、一価抗体は複数の抗原結合部位を有し得るが、当該結合部位は異なる抗原に由来する。
【００４２】
「一特異性抗体」は、１分子当たり、二つの同一の抗原結合部位を含有し（例えば、ＩｇＧ）、それにより二つの結合部位が抗原上の同一のエピトープに結合する。したがって、一特異性抗体は、一つの抗原分子への結合を互いに競合する。自然に存在する抗体の多くが一特異性である。一部の例では、一特異性抗体は、一価抗体でもあり得る（例えば、Ｆａｂ）。
【００４３】
「二価抗体」は、１分子当たり、二つの抗原結合部位を含有する（例えば、ＩｇＧ）。一部の例では、当該二つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。しかし二価抗体は、二特異性である場合もある。
【００４４】
「二特異性」または「二重特異性」は、二つの異なる抗原結合部位を有するハイブリッド抗体である。二特異性抗体の二つの抗原結合部位は、二つの異なるエピトープに結合し、それらエピトープは、同じ、または異なるタンパク質標的上に存在し得る。
【００４５】
「二機能性」抗体は、二つのアームに同一の抗原結合部位（すなわち同一のアミノ酸配列）を有するが、各結合部位は二つの異なる抗原を認識し得る抗体である。
【００４６】
「ヘテロ多量体」、「ヘテロ多量体複合体」、または「ヘテロ多量体ポリペプチド」は、少なくとも第一のポリペプチドと第二のポリペプチドを含有する分子であり、当該第二のポリペプチドは、当該第一のポリペプチドとはアミノ酸配列において少なくとも１アミノ酸残基異なっている。ヘテロ多量体は、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドにより形成される「ヘテロ二量体」を含み、または第一および第二のポリペプチドに加えて複数のポリペプチドが存在する高次の三次構造を形成し得る。
【００４７】
「ヘテロ二量体」、「ヘテロ二量体タンパク質」、「ヘテロ二量体複合体」、または「ヘテロ多量体ポリペプチド」は、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドを含有する分子であり、当該第二のポリペプチドは、当該第一のポリペプチドとはアミノ酸配列において少なくとも１アミノ酸残基異なっている。
【００４８】
「ヒンジ領域」、「ヒンジ配列」、およびその変化型は、本明細書において使用される場合、当分野で公知の意味を含み、例えば、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＩｍｍｕｎｏＢｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．，ＮＹ）（４ｔｈ  ｅｄ．，１９９９）；Ｂｌｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７），６：４０７−４１５；Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９７），２０９：１９３−２０２に例示される。
【００４９】
本明細書において使用される場合、「免疫グロブリン様ヒンジ領域」、「免疫グロブリン様ヒンジ配列」、およびその変化型とは、免疫グロブリン様分子または抗体様分子（例えば、イムノアドヘシン）のヒンジ領域およびヒンジ配列を指す。一部の実施形態では、免疫グロブリン様ヒンジ領域は、任意のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４サブタイプに由来、またはそれらから誘導されてもよく、またはＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤもしくはＩｇＭに由来またはそれらから誘導されてもよく、例えばキメラＩｇＧ１／２ヒンジ領域などのそのキメラ型を含む。
【００５０】
「免疫エフェクター細胞」または「エフェクター細胞」という用語は、本明細書において使用される場合、活性化されて、標的細胞の生存能力に影響を及ぼし得るヒト免疫系中の細胞の天然レパートリーの範囲内の細胞を指す。標的細胞の生存能力としては、細胞の生存、増殖、および／または他の細胞と相互作用する能力が挙げられる。
【００５１】
本発明の抗体は、当分野に公知の技術、例えば組み換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはそうした技術の組み合わせ、または当分野で容易に知り得る他の技術を使用して作製され得る（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ，Ｓ．Ｄ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，４５：１６２８−５０，１９９９  ａｎｄ  Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，３７３（４）：９２４−４０，２００７を参照のこと）。
【００５２】
当分野において知られるように、本明細書において相互交換可能に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」とは、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドもしくは改変塩基、および／またはそれらのアナログ、またはＤＮＡポリメラーゼもしくはＲＮＡポリメラーゼにより鎖に組み込まれ得る任意の基質であってもよい。ポリヌクレオチドは、例えばメチル化ヌクレオチドおよびそのアナログなどの改変ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造への改変は、鎖の組立の前または後に行われる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素により割り込まれてもよい。ポリヌクレオチドは、例えば標識構成要素との結合などにより、多量体化後にさらに改変されてもよい。他のタイプの改変としては例えば、アナログを用いた天然ヌクレオチドの一つまたは複数の「キャップ」置換、例えば非荷電結合（例えばホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバミン酸塩など）および荷電結合（例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）を用いるなどのヌクレオチド間の改変、例えばタンパク質（例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなど）のペンダント部分を含有するもの、挿入剤（例えば、アクリジン、ソラレンなど）を用いたもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、改変結合を用いたもの（例えば、アルファアノマー核酸など）ならびにポリヌクレオチドの非改変型が挙げられる。さらに糖に通常存在するヒドロキシル基のいずれかを、例えばホスホン酸基、リン酸基などにより置換してもよく、標準的な保護基により保護してもよく、または活性化させて、追加のヌクレオチドへの追加的な結合の準備をしてもよく、または固形支持体へ結合させてもよい。５’末端ＯＨおよび３’末端ＯＨは、リン酸化されてもよく、またはアミン、もしくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換されてもよい。他のヒドロキシルは、標準的な保護基に誘導体化されてもよい。ポリヌクレオチドはさらに、例えば２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖アナログ、アルファまたはベータ−アノマー糖、例えばアラビノース、キシロースもしくはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログ、および例えばメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシドアナログを含む、当分野に一般的に公知のリボース糖またはデオキシリボース糖のアナログ型を含有してもよい。一つまたは複数のホスホジエステル結合が、代替的な結合基により置き換えられてもよい。そうした代替的な結合基としては限定されないが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（チオエート）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（ジチオエート）、（Ｏ）ＮＲ２（アミデート）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（ホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ））によりリン酸塩が置換される実施形態が挙げられ、この場合、各ＲまたはＲ’は独立して、Ｈ、または置換アルキルもしくは非置換アルキル（１〜２０個のＣ）であり、任意で、エーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を含有する。ポリヌクレオチド中のすべての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含む、本明細書において言及されるすべてのポリヌクレオチドに適用される。
【００５３】
当分野において知られるように、抗体の「定常領域」とは、抗体軽鎖の定常領域、または抗体重鎖の定常領域を単独で、または組み合わせで指す。
【００５４】
本明細書において使用される場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物が無い）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、さらにより好ましくは、少なくとも９８％純粋、そして最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である物質を指す。
【００５５】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターに対するレシピエントであってもよく、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫物を含み、当該子孫物は、自然の、偶発的な、または意図的な変異により、元の親細胞と完全に同一であるとは限らない場合がある（形態において、またはゲノムＤＮＡの相補体において）。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【００５６】
当分野において知られるように、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に及ぶと規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスの番号である。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般的に、ＣＨ２とＣＨ３の二つの定常領域を含有する。
【００５７】
当分野で使用される場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するものである。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これら受容体のアレルバリアントおよび代替的スプライス型を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（活性化受容体）、およびＦｃγＲＩＩＢ（阻害性受容体）が含まれ、それらは類似したアミノ酸配列を有するが、その細胞質ドメインが主に異なっている。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２，１９９１；Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４，１９９４；およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１，１９９５に概要されている。「ＦｃＲ」はさらに新生児受容体であるＦｃＲｎを含み、これは胎児への母体ＩｇＧの移送に貢献している（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７，１９７６；ａｎｄ  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９，１９９４）。
【００５８】
抗体に関して本明細書において使用される場合、「競合する」という用語は、第一の抗体、またはその抗原結合断片（または部分）が、第二の抗体またはその抗原結合部分の結合と充分に類似した様式でエピトープに結合し、それにより、第二の抗体の非存在下での第一の抗体の結合と比較して、第二の抗体の存在下では、その同系エピトープとの第一の抗体の結合の結果が、検出可能に低下することを意味する。第二の抗体のそのエピトープへの結合も、第一の抗体の存在下で検出可能に低下する場合もあり得るが、必ずではない。すなわち第一の抗体は、そのエピトープへの第二の結合を阻害し得るが、第二の抗体による、その各エピトープへの第一の抗体の阻害は伴わない。しかしながら、各抗体がその同系のエピトープまたはリガンドとの他の抗体の結合を同程度に、より強く、またはより弱く検出可能に阻害する場合、当該抗体は、その各エピトープの結合に関し、互いに「交差競合する」といわれる。競合抗体および交差競合抗体の両方が本発明に包含される。そうした競合または交差競合が発生する機序に関わらず（すなわち立体障害、立体構造変化、または共通エピトープもしくはその一部への結合など）、当業者であれば、本明細書に示される教示に基づき、そうした競合抗体および／または交差競合抗体が包含されること、および本明細書に開示される方法に有用であり得ると認識するであろう。
【００５９】
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域のエフェクター機能を少なくとも一つ保有している。「エフェクター機能」の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞障害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞障害、貪食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方制御などが挙げられる。そうしたエフェクター機能は一般的に、結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と組み合わされるＦｃ領域を必要とし、そうした抗体エフェクター機能を評価するための当分野に公知の様々なアッセイを使用して評価され得る。
【００６０】
「天然配列のＦｃ領域」は、自然界に存在するＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも一つのアミノ酸改変によって天然配列のＦｃ領域とは異なるアミノ酸配列を含有しているが、天然配列のＦｃ領域のエフェクター機能を少なくとも一つ保持している。一部の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域と比較して、または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも一つのアミノ酸置換、例えば約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは約１〜約５個のアミノ酸置換を、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域中に有している。本明細書のバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性を持つことが好ましく、それらと少なくとも約９０％の配列同一性を持つことが最も好ましく、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性が持つことがより好ましい。
【００６１】
「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、限定されないが、抗体依存性細胞介在性細胞障害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体結合、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、貪食作用、Ｃ１ｑ結合、および細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御が挙げられる。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照のこと。そうしたエフェクター機能は一般的に、結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と組み合わされるＦｃ領域を必要とし、そうした抗体エフェクター機能を評価するための当分野に公知の様々なアッセイを使用して評価され得る。エフェクター機能の測定例は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑ結合を介したものである。
【００６２】
本明細書において使用される場合、「抗体依存性細胞介在性細胞障害」または「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、次いで当該標的細胞の溶解を引き起こす細胞介在性反応を指す。対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えば米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されるアッセイなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して評価され得る。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、対象分子のＡＤＣＣ活性は、たとえばＣｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６に開示されるものなどの動物モデルにおいてインビボで評価されてもよい。
【００６３】
「補体依存性細胞障害」または「ＣＤＣ」とは、補体存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、補体系の最初の構成要素（Ｃ１ｑ）が、同系抗原と複合体化した分子（例えば抗体）に結合することにより始まる。補体活性化の評価には、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるアッセイなどのＣＤＣアッセイを行ってもよい。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「治療」とは、有益または望ましい臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的に対し、有益または望ましい臨床結果には、以下のうちの一つまたは複数が含まれるが、これらに限定されない：腫瘍細胞または癌細胞の増殖の減少（または破壊）、腫瘍細胞の転移の阻害、ＣＤ７０を発現する腫瘍のサイズの縮小または減少、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）の寛解、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）から生じる症状の減少、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）を患う者の生活の質の向上、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）を治療するために必要な他の薬物の投与量の減少、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）の進行の遅延、ＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）の治癒、および／またはＣＤ７０関連疾患（例えば、癌）を有する患者の生存の延長。
【００６５】
「改善する」とは、ＣＤ７０抗体（一特異性または二特異性）を投与しない場合と比較して、一つまたは複数の症状の軽減または改善を意味する。「改善する」には、症状の持続期間の短縮または減少も含まれる。
【００６６】
本明細書で使用される場合、薬剤、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、任意の一つ以上の有益または所望の結果を効果するのに十分な量である。予防的使用のために、有益または望ましい結果には、疾患の発生中に提示される疾患、その合併症、およびの中間的な病理学的表現型の、生化学的、組織学的、および／または行動的症状を含む、リスクの除去または低減、重症度の低減、または疾患の発病を遅らせることが含まれる。治療用途に対し、有益または望ましい結果としては、例えば患者の様々なＣＤ７０関連の疾患もしくは状態（例えば多発性骨髄腫）の一つまたは複数の症状の発生率の低下または改善、当該疾患を治療するために必要とされる他の薬剤の投与量の減少、別の薬剤の効果の強化、および／またはＣＤ７０関連疾患の進行の遅延などの臨床結果が挙げられる。有効な投与量は、１回以上の投与で投与することができる。本発明の目的に対し、薬剤、化合物または医薬組成物の有効用量は、直接または間接的に予防的処置または治療的処置を実現するために充分な量である。臨床状況で理解されるように、薬剤、化合物、または医薬組成物の有効な投与量は、別の薬剤、化合物、または医薬組成物と併せて達成されてもよく、または達成されなくてもよい。したがって、「有効な投与量」は、一つ以上の治療薬を投与する状況で考慮される場合があり、一つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成される可能性がある場合、または達成される場合、単一剤は有効量で与えられると考えられうる。
【００６７】
「個体」または「対象」は、哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。さらに哺乳動物としては限定されないが、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが挙げられる。
【００６８】
本明細書において使用される場合、「ベクター」とは、対象の一つもしくは複数の遺伝子または配列を送達することができる、および好ましくは宿主細胞において対象の一つもしくは複数の遺伝子または配列を発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、およびプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「発現制御配列」は、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーター、またはエンハンサーなどのプロモーターであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に操作可能に連結される。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容可能な担体」または「医薬受容可能な賦形剤」という用語は、活性成分と組み合わせられたとき、生物活性を保持するための成分を有するとともに、対象の免疫系と非反応性である任意の材料を含む。例としては、限定されないが、リン酸緩衝食塩水溶液、水、油／水乳濁液などの乳濁液、および種々のタイプの湿潤剤などの標準的な医薬担体が挙げられる。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）または生理食塩水（０．９％）である。こうした担体を含む組成物は、公知の従来的方法により処方されている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ、ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２００５を参照）。
【００７１】
「アシルドナーグルタミン−含有タグ」または「グルタミンタグ」という用語は、本明細書において使用される場合、トランスグルタミナーゼアミンアクセプターとして作用するＧｌｎ残基を一つまたは複数含有するポリペプチドまたはタンパク質を指す。例えば、ＷＯ２０１２０５９８８２およびＷＯ２０１５０１５４４８を参照のこと。
【００７２】
本明細書において使用される場合、「ｋｏｎ」または「ｋａ」という用語は、抗原に抗体が会合する速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎ／ｋａおよびｋｏｆｆ／ｋｄ）および平衡解離定数は、全抗体（すなわち二価）および単量体ＣＤ７０タンパク質（例えばヒスチジンタグ化ＣＤ７０融合タンパク質）を使用して測定される。
【００７３】
本明細書において使用される場合、「ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」という用語は、抗体／抗原複合体から抗体が解離する速度定数を指す。
【００７４】
本明細書において使用される場合、「ＫＤ」という用語は、抗体−抗原の相互作用の平衡解離定数を指す。
【００７５】
本明細書の「約」の値またはパラメータは、当該値またはパラメータを本質的に指向する実施形態を含む（および記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含み、数値範囲は範囲を定義する数を含む。一般的に言えば、「約」という用語は、変数の指定された値、および当該指定された値の実験誤差の範囲内（例えば平均に対する９５％信頼区間の範囲内）または指定された値のどちらか大きい方の１０％以内にある変数のすべての値を指す。「約」という用語が、期間（年、月、週、日など）の文脈内で使用される場合、「約」という用語は、その期間プラスまたはマイナス次の下位期間の一つの量（例えば約１年は、１１〜１３ヶ月を意味し、約６ヶ月は、６ヶ月プラスマイナス１週間を意味し、約１週間は、６〜８日間を意味するなど）または指定された値のどちらか大きい方の１０％以内を意味する。
【００７６】
用語「含む」を用いて本明細書に記載されているいかなる実施形態においても、「からなる」および／または「から本質的になる」という用語で記載された他の類似の実施形態もまた提供されることが理解される。
【００７７】
本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または他の代替的な群で記載されている場合、本発明は、概して列挙される群全体のみならず、当該群の各メンバーを個々に、および当該主要群の可能性のあるすべての亜群、そして当該群メンバーの一つまたは複数を欠いた主要群も包含する。本発明はさらに、請求される本発明の群メンバーのいずれかの一つまたは複数の明白な除外を予期するものである。
【００７８】
本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、他に定義されない限り、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が制御する。本明細書および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの変形は、述べられた整数または整数の群の包含を意味するが、他の任意の整数または群の除外は意味しないことが理解される。文脈によって別途要求されない限り、単数の用語は複数の用語を含むものとし、複数の用語は単数形を含むものとする。
【００７９】
本明細書に記載の方法および材料と類似または同等の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用することもできるが、例示的な方法および材料が本明細書に記載される。材料、方法、および例は例示的のみであり、限定することを意図していない。
【００８０】
ＣＤ７０抗体、およびその作製方法
本発明は、ＣＤ７０［例えばヒトＣＤ７０（例えばアクセッション番号：ＮＰ＿００４１１０または配列番号２３５）］に結合し、以下の特徴のうちの任意の一つまたは複数により特徴付けられる抗体を提供する：（ａ）対象において、ＣＤ７０を発現する悪性細胞と関連した状態（例えばＡＭＬなどの癌）の一つまたは複数の症状を治療、予防、改善する；（ｂ）対象（ＣＤ７０を発現する悪性腫瘍を有する）において腫瘍の増殖または進行を阻害する；（ｃ）対象（ＣＤ７０を発現する悪性細胞を一つまたは複数有する）においてＣＤ７０を発現する癌（悪性）細胞の転移を阻害する；（ｄ）ＣＤ７０を発現する腫瘍の退縮を誘導する（例えば長期退縮）；（ｅ）ＣＤ７０を発現する悪性細胞において細胞障害活性を発揮する；（ｆ）ＣＤ７０と他のまだ特定されていない因子との相互作用を遮断する；および／または（ｇ）近傍の非ＣＤ７０発現悪性細胞を殺傷する、または増殖を阻害するバイスタンダー効果を誘導する。
【００８１】
一つの態様では、ＣＤ７０に特異的に結合する単離抗体が提供されるものであり、当該抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９、または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎｅ）；（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１、または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７、または４６３に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに／または（ｉ）配列番号１９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、４６４、４６７��４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４、または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５、または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６、または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む。
【００８２】
別の態様では、ＣＤ７０に特異的に結合する単離抗体が提供され、当該抗体は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、もしくは３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、もしくは３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、を含む。
【００８３】
一部の実施形態では、表１に列記される部分的軽鎖配列のいずれか一つ、および／または表１に列記される部分的重鎖配列のいずれか一つを有する抗体が提供される。表１において、下線の配列は、Ｋａｂａｔに従うＣＤＲ配列であり、太字は、Ｃｈｏｔｈｉａに従うＣＤＲ配列である。
【００８４】
表１
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【００８５】
また本明細書において、ＣＤ７０に対する抗体の抗原結合ドメインのＣＤＲ部分（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲおよびＣＤＲ接触領域を含む）も提供される。ＣＤＲ領域の決定は、当分野の技術範囲内にある。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせ（「混合ＣＲ」または「拡張ＣＤＲ」とも呼ばれる）であり得ることを理解されたい。一部の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。言い換えると、複数のＣＤＲを伴う実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、組み合わせＣＤＲ、またはそれらの組み合わせのいずれかであり得る。表２は、本明細書に提供されるＣＤＲ配列の例を提供する。
【００８６】
表２
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
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【００８７】
一部の実施形態では、本発明は、ＣＤ７０に結合し、３１Ｈ１、６３Ｂ２、４０Ｅ３、４２Ｃ３、４５Ｆ１１、６４Ｆ９、７２Ｃ２、２Ｆ１０、４Ｆ１１、１０Ｈ１０、１７Ｇ６、６５Ｅ１１、Ｐ０２Ｂ１０、Ｐ０７Ｄ０３、Ｐ０８Ａ０２、Ｐ０８Ｅ０２、Ｐ０８Ｆ０８、Ｐ０８Ｇ０２、Ｐ１２Ｂ０９、Ｐ１２Ｆ０２、Ｐ１２Ｇ０７、Ｐ１３Ｆ０４、Ｐ１５Ｄ０２、Ｐ１６Ｃ０５、１０Ａ１、１０Ｅ２、１１Ａ１、１１Ｃ１、１１Ｄ１、１１Ｅ１、１２Ａ２、１２Ｃ４、１２Ｃ５、１２Ｄ３、１２Ｄ６、１２Ｄ７、１２Ｆ５、１２Ｈ４、８Ｃ８、８Ｆ７、８Ｆ８、９Ｄ８、９Ｅ１０、９Ｅ５、９Ｆ４または９Ｆ８を含む、本明細書に記載の抗体と競合する抗体を提供する。
【００８８】
一部の実施形態では、本発明はさらに、ＣＤＲ接触領域に基づいた、ＣＤ７０抗体に対する抗体のＣＤＲ部分を提供する。ＣＤＲ接触領域は、抗原に対する特異性を抗体に与える抗体の領域である。一般的に、ＣＤＲ接触領域は、ＣＤＲ中の残基位置、および特定の抗原に結合する抗体の適切なループ構造を維持するために制約を受けるＶｅｒｎｉｅｒゾーンを含む。例えば、Ｍａｋａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８３：１１５６−１１６６，２００７を参照のこと。ＣＤＲ接触領域の決定は、当分野の技術範囲内にある。
【００８９】
ＣＤ７０（例えば、ヒトＣＤ７０（例えば、配列番号２７８））に対する本明細書に記載のＣＤ７０抗体の結合アフィニティ（ＫＤ）は、約０．００１〜約５０００ｎＭであってもよい。一部の実施形態では、結合アフィニティは、およそ５０００ｎＭ、４５００ｎＭ、４０００ｎＭ、３５００ｎＭ、３０００ｎＭ、２５００ｎＭ、２０００ｎＭ、１７８９ｎＭ、１５８３ｎＭ、１５４０ｎＭ、１５００ｎＭ、１４９０ｎＭ、１０６４ｎＭ、１０００ｎＭ、９３３ｎＭ、８９４ｎＭ、７５０ｎＭ、７０５ｎＭ、６７８ｎＭ、５３２ｎＭ、５００ｎＭ、４９４ｎＭ、４００ｎＭ、３４９ｎＭ、３４０ｎＭ、３５３ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、２４４ｎＭ、２３１ｎＭ、２２５ｎＭ、２０７ｎＭ、２００ｎＭ、１８６ｎＭ、１７２ｎＭ、１３６ｎＭ、１１３ｎＭ、１０４ｎＭ、１０１ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８３ｎＭ、７９ｎＭ、７４ｎＭ、５４ｎＭ、５０ｎＭ、４５ｎＭ、４２ｎＭ、４０ｎＭ、３５ｎＭ、３２ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２４ｎＭ、２２ｎＭ、２０ｎＭ、１９ｎＭ、１８ｎＭ、１７ｎＭ、１６ｎＭ、１５ｎＭ、１２ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５．５ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭのいずれかである。一部の実施形態では、結合アフィニティは、およそ５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、３０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、９００ｎＭ、８００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、７．５ｎＭ、７ｎＭ、６．５ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭのいずれかよりも小さい。
【００９０】
少なくとも二つの異なる抗原に対する結合特異性を有する二特異性抗体であるモノクローナル抗体は、本明細書に開示される抗体を使用して調製されてもよい。二特異性抗体を作製する方法は当分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０，１９８６を参照のこと）。従来、二特異性抗体の組み換え型産生は、二つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖のペアの共発現に基づいており、二つの重鎖は、異なる特異性を有していた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５，５３７−５３９，１９８３）。したがって一つの態様では、二特異性抗体が提供され、この場合において当該二特異性抗体は全長ヒト抗体であり、標的抗原（例えばＣＤ７０）に特異的に結合する二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原に特異的に結合することによりヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含む。
【００９１】
ヒト免疫エフェクター細胞は、当分野で公知の様々な免疫エフェクター細胞のいずれかであってもよい。例えば、免疫エフェクター細胞は、限定されないが、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、ヒトリンパ系細胞系統のものであってもよい。さらに免疫エフェクター細胞は、例えば限定されないが、単球、好中球性顆粒球および樹状細胞を含む、ヒト骨髄系統のものであってもよい。そうした免疫エフェクター細胞は、標的細胞に対する細胞傷害性効果もしくはアポトーシス効果を有し、またはエフェクター抗原の結合により活性化したときに望ましい他の効果を有し得る。
【００９２】
エフェクター抗原は、ヒト免疫エフェクター細胞上に発現される抗原（例えば、タンパク質またはポリペプチド）である。ヘテロ二量体タンパク質（例えば、ヘテロ二量体抗体または二特異性抗体）により結合され得るエフェクター抗原の例としては限定されないが、ヒトＣＤ３（またはＣＤ３（Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）複合体）、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ２５、ＣＤ６４およびＣＤ８９が挙げられる。
【００９３】
標的細胞は、ヒトに対して天然、または外来性の細胞であってもよい。天然の標的細胞では、細胞は、悪性細胞となるように形質転換されてもよく、または病理的に改変されてもよい（例えば、ウイルス、プラスモジウム（ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）または細菌に感染した天然標的細胞）。外来性の標的細胞では、細胞は、例えば細菌、プラスモジウムまたはウイルスなどの侵入性の病原体である。
【００９４】
標的抗原は、疾患状態（例えば、炎症性疾患、増殖性疾患（例えば、癌）、免疫学的障害、神経学的疾患、神経変性疾患、自己免疫性疾患、感染性疾患（例えばウイルス感染または寄生虫感染）、アレルギー反応、移植片対宿主病、または宿主体移植片病）の標的細胞上に発現される。標的抗原は、エフェクター抗原ではない。一部の実施形態では、標的抗原は、ＣＤ７０である。
【００９５】
一部の実施形態では、二特異性抗体が提供され、当該二特異性抗体は全長抗体であり、標的抗原に特異的に結合する二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原に特異的に結合することによりヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含み、当該第一の抗体可変ドメインは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、もしくは３３１に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、もしくは３３０に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００９６】
一部の実施形態では、二特異性抗体が提供され、当該二特異性抗体は全長抗体であり、標的抗原に特異的に結合する二特異性抗体の第一の抗体可変ドメインを含み、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原に特異的に結合することによりヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含み、当該第一の抗体可変ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号４９、５０、５１、５５、５６、５７、６１、６２、６３、６７、６８、６９、７３、７４、７５、７９、８０、８１、８５、８６、８７、９１、９２、９３、９７、９８、９９、１０３、１０４、１０５、１０９、１１０、１１１、１１５、１１６、１１７、１２１、１２２、１２３、１２７、１２８、１２９、１３３、１３４、１３５、１３９、１４０、１４１、１４５、１４６、１４７、１５１、１５２、１５３、１５７、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６９、１７０、１７１、１７５、１７６、１７７、１８１、１８２、１８３、１８７、１８８、１８９、３３２、３３３、３３４、３３８、３３９、３４０、３４４、３４５、３４６、３５０、３５１、３５２、３５６、３５７、３５８、３６２、３６３、３６４、３６８、３６９、３７０、３７４、３７５、３７６、３８０、３８１、３８２、３８６、３８７、３８８、３９２、３９３、３９４、３９８、３９９、４００、４０４、４０５、４０６、４１０、４１１、４１２、４１６、４３７、４１８、４２２、４２３、４２４、４２８、４２９、４３０、４３４、４３５、４３６、４４０、４４１、４４２、４４６、４４７、４４８、４５２、４５３、４５４、４５８、４５９、または４６０に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｎｅ）；（ｉｉ）配列番号５２、５３、５８、５９、６４、６５、７０、７１、７６、７７、８２、８３、８８、８９、９４、９５、１００、１０１、１０６、１０７、１１２、１１３、１１８、１１９、１２４、１２５、１３０、１３１、１３６、１３７、１４２、１４３、１４８、１４９、１５４、１５５、１６０、１６１、１６６、１６７、１７２、１７３、１７８、１７９、１８４、１８５、１９０、１９１、３３５、３３６、３４１、３４２、３４７、３４８、３５３、３５４、３５９、３６０、３６５、３６６、３７１、３７２、３７７、３７８、３８３、３８４、３８９、３９０、３９５、３９６、４０１、４０２、４０７、４０８、４１３、４１４、４１９、４２０、４２５、４２６、４３１、４３２、４３７、４３８、４４３、４４４、４４９、４５０、４５５、４５６、４６１、または４６２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、１０２、１０８、１１４、１２０、１２６、１３２、１３８、１４４、１５０、１５６、１６２、１６８、１７４、１８０、１８６、１９２、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１、３９７、４０３、４０９、４１５、４２１、４２７、４３３、４３９、４４５、４５１、４５７、または４６３に示される配列を含む���Ｈ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに／または（ｉ）配列番号１９３、１９６、１９９、２０２、２０５、２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、２４４、２４７、２５０、２５３、２５６、２５９、２６２、４６４、４６７、４７０、４７３、４７６、４７９、４８２、４８５、４８８、４９１、４９４、４９７、５００、５０３、５０６、５０９、５１２、５１５、５１８、５２１、５２４、または５２７に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）１９４、１９７、２００、２０３、２０６、２０９、２１２、２１５、２１８、２２１、２２４、２２７、２３０、２３３、２３６、２３９、２４２、２４５、２４８、２５１、２５４、２５７、２６０、２６３、４６５、４６８、４７１、４７４、４７７、４８０、４８３、４８６、４８９、４９２、４９５、４９８、５０１、５０４、５０７、５１０、５１３、５１６、５１９、５２２、５２５、または５２８に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号１９５、１９８、２０１、２０４、２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、２４３、２４６、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６４、４６６、４６９、４７２、４７５、４７８、４８１、４８４、４８７、４９０、４９３、４９６、４９９、５０２、５０５、５０８、５１１、５１４、５１７、５２０、５２３、５２６、または５２９に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含む。
【００９７】
一部の実施形態では、第二の抗体可変ドメインは、配列番号２６６に示されるＶＨ配列のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、および／または配列番号２６５に示されるＶＬ配列のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【００９８】
一部の実施形態では、第二の抗体可変ドメインは、（ａ）（ｉ）配列番号２６７、２６８または２６９に示される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号２７０または２７１に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２７２に示される配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに／または（ｂ）（ｉ）配列番号２７３に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２７４に示される配列を含む  ＶＬ  ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２７５に示される配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３、を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域、を含有する。
【００９９】
表３は、ＣＤ３に特異的な第二の抗体可変ドメインの具体的なアミノ酸配列および核酸配列を示す。表３において、下線の配列は、Ｋａｂａｔに従うＣＤＲ配列であり、太字は、Ｃｈｏｔｈｉａに従うＣＤＲ配列である。
【０１００】
表３
【表３】
2021511811.tif 000017
【０１０１】
表４は、ＣＤ３に特異的な第二の抗体可変ドメインの具体的なＣＤＲ配列の例を示す。
【０１０２】
表４
【表４】
2021511811.tif 000018
【０１０３】
一部の実施形態では、本明細書に提供される二特異性抗体は、米国特許出願公開２０１６０２９７８８５に提供される抗ＣＤ３配列を有するＣＤ３特異的可変ドメインを含有し、当該出願公開は、すべての目的に対し参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
二特異性抗体を作製する一つの方法に従い、望ましい結合特異性（抗体−抗原の結合部位）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常領域配列に融合させる。ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常領域との融合が好ましい。融合物の少なくとも一つにおいて、軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および望ましい場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物体中に共トランスフェクトされる。これにより、構築に使用される三つのポリペプチドの不均等な比率が最適な収率を提供する実施形態では、三つのポリペプチド断片の相互比率の調整において大きな柔軟性が提供される。しかし、等しい比率の少なくとも二つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生み出す場合、または比率が特に重要ではない場合、一つの発現ベクターに二つまたは三つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を挿入することも可能である。
【０１０５】
別の方法では、二特異性抗体は、一つのアームでの第一の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアームでの（第二の結合特異性を提供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖のペアから構成される。この非対称構造は、二特異性分子の半分のみが免疫グロブリン軽鎖を有しており、これによって、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二特異性化合物の分離が促進される。この方法は、ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６９０に記載されている。
【０１０６】
別の方法では、二特異性抗体は、一つのアームの第一のヒンジ領域におけるアミノ酸改変から構成され、当該第一のヒンジ領域中の置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ／ｒｅｐｌａｃｅｄ）アミノ酸は、別のアームの第二のヒンジ領域中の対応するアミノ酸とは反対の電荷を有する。この方法は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載されている。
【０１０７】
別の方法では、所望のヘテロ多量体タンパク質またはヘテロ二量体タンパク質（例えば、二特異性抗体）の形成は、第一および第二の免疫グロブリン様Ｆｃ領域（例えばヒンジ領域および／またはＣＨ３領域）の間のインターフェースを変える、または操作することにより強化される。この方法では、二特異性抗体はＣＨ３領域から構成されてもよく、当該ＣＨ３領域は、第一のＣＨ３ポリペプチドと第二のＣＨ３ポリペプチドを含有し、それらは互いに相互作用して、ＣＨ３インターフェースを形成し、この場合において当該ＣＨ３インターフェース内の一つまたは複数のアミノ酸は、ホモ二量体の形成を不安定化させ、ホモ二量体の形成に対して静電的には不都合ではない。この方法は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３６４１９（ＷＯ２０１１／１４３５４５）に記載されている。
【０１０８】
別の方法では、二特異性抗体は、一つのアームにおいてエピトープ（例えば、ＣＤ７０）に指向される抗体に対して操作されたグルタミン含有ペプチドタグ、およびトランスグルタミナーゼの存在下で別のアームにおいて第二のエピトープに指向される第二の抗体に対して操作された別のペプチドタグ（例えば、Ｌｙｓ含有ペプチドタグまたは反応性内因性Ｌｙｓ）を使用して作製されてもよい。この方法は、国際特許出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１１／０５４８９９（ＷＯ２０１２／０５９８８２）に記載されている。
【０１０９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のヘテロ二量体タンパク質（例えば、二特異性抗体）は全長ヒト抗体を含み、この場合において標的抗原（例えば、ＣＤ７０）に特異的に結合する当該二特異性抗体の第一の抗体可変ドメイン、およびヒト免疫エフェクター細胞上に局在するエフェクター抗原（例えば、ＣＤ３）に特異的に結合することによりヒト免疫エフェクター細胞の活性をリクルートすることができる二特異性抗体の第二の抗体可変ドメインを含み、この場合において当該ヘテロ二量体タンパク質の第一および第二の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ２（配列番号２７９）のヒンジ領域中の２２３位、２２５位および２２８位（例えば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５ＥまたはＥ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、ならびにＣＨ３領域中の４０９位または３６８位でアミノ酸改変（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵナンバリングスキーム））を含有する。
【０１１０】
一部の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の第一および第二の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ１（配列番号２８０）のヒンジ領域中の２２１位および２２８位（例えば、（Ｄ２２１ＲまたはＤ２２１Ｅ）および（Ｐ２２８ＲまたはＰ２２８Ｅ））、ならびにＣＨ３領域中の４０９位または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵナンバリングスキーム）でアミノ酸改変を含有する。
【０１１１】
一部の実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質の第一および第二の抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ４（配列番号２８１）のヒンジ領域中の２２８位（例えば、（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、およびＣＨ３領域中の４０９位または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵナンバリングスキーム）でアミノ酸改変を含有する。
【０１１２】
本発明において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二特異性抗体、ヘテロ結合抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質（例えば、ドメイン抗体）、ヒト化抗体、および必要とされる特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造物を包含してもよく、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合改変抗体を含む。抗体は、マウス、ラット、ヒトまたは任意の他の起源（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）であってもよい。
【０１１３】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ７０一特異性抗体、またはＣＤ７０二特異性抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３）は、モノクローナル抗体である。例えば、ＣＤ７０一特異性抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。別の例では、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体のＣＤ７０アームは、ヒトモノクローナル抗体であり、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体のＣＤ３アームはヒト化モノクローナル抗体である。
【０１１４】
一部の実施形態では、抗体は、例えば限定されないが、免疫応答を誘発する可能性を増加させた定常領域などの改変定常領域を含む。例えば定常領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、またはＦｃγＩＩＩなどのＦｃガンマ受容体に対するアフィニティを増加させるよう改変されてもよい。
【０１１５】
一部の実施形態では、抗体は、例えば免疫学的に不活性な、すなわち免疫応答を誘発する可能性が低下した定常領域などの改変定常領域を含む。一部の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９：２６１３−２６２４，１９９９；ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願９８０９９５１８に記載されるように改変される。Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４であってもよい。Ｆｃは、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（ＩｇＧ２Δａ）の変異を含有するヒトＩｇＧ２であってもよく、この抗体のアミノ酸残基は野生型ＩｇＧ２配列を参照して番号付けされている。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９：２６１３−２６２４，１９９９。一部の実施形態では、抗体は、以下の変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含有する（Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０  ５８５−５９３，２００３）：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）。番号は、野生型ＩｇＧ４を参照している。さらに別の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ４  Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５から、Ｇ２３６の欠失を伴うＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５である（ＩｇＧ４Δｂ）。別の実施形態では、Ｆｃは、ヒンジ安定化変異のＳ２２８からＰ２２８を含有する任意のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ΔｂまたはＩｇＧ４Δｃ）である（Ａａｌｂｅｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５，９−１９，２００２）。別の実施形態では、Ｆｃは、非グリコシル化Ｆｃであってもよい。
【０１１６】
一部の実施形態では、定常領域は、定常領域中のグリコシル化認識配列の一部であるオリゴ糖結合残基（例えば、Ａｓｎ２９７）および／または隣接残基を変異させることにより非グリコシル化される。一部の実施形態では、定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に対し、酵素的に非グリコシル化される。定常領域は、Ｎ結合型グリコシル化に対し酵素的に非グリコシル化されてもよく、またはグリコシル化欠損宿主細胞において発現させることにより非グリコシル化されてもよい。
【０１１７】
一部の実施形態では、定常領域は、Ｆｃガンマ受容体結合が取り除かれた、または低下した改変定常領域を有する。例えば、Ｆｃは、Ｄ２６５の変異を含有するヒトＩｇＧ２であってもよく、この抗体のアミノ酸残基は野生型ＩｇＧ２配列（配列番号２７９）を参照して番号付けされている。したがって一部の実施形態では、定常領域は、以下の配列番号２８２に示される配列を有する改変定常領域を有する：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＲＶＲＣＰＲＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。配列番号２８２に示される配列をコードする核酸は、配列番号２８３に示される。
【０１１８】
一部の実施形態では、定常領域は、以下の配列番号２８４に示される配列を有する改変定常領域を有する：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＥＶＥＣＰＥＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＥＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。配列番号２８４に示される配列をコードする核酸は、配列番号２８５に示される。
【０１１９】
ヒトカッパ定常領域のアミノ酸は、以下の配列番号２８６に示される：
ＧＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ。配列番号２８６の配列をコードする核酸は、配列番号２８７に示される。
【０１２０】
ＣＤ７０への抗体の結合アフィニティを決定する一つの方法は、単量体型ＣＤ７０タンパク質に対する二価抗体の結合アフィニティを測定することによる方法である。ＣＤ７０抗体のアフィニティは、前もって固定された抗マウスＦｃまたは抗ヒトＦｃを備えた、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標），ＩＮＣ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）により、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ  ７．４、０．１５  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％  ｖ／ｖ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）を使用して決定され得る。単量体型８−ヒスチジンタグ化ヒトＣＤ７０細胞外ドメイン（配列番号５３０）をＨＢＳ−ＥＰ緩衝液内で０．５μｇ／ｍＬ未満の濃度まで希釈し、可変の接触時間を使用して個々のチップチャンネルに注入して、詳細な速度論的研究のための５０〜２００反応単位（ＲＵ）、またはスクリーニングアッセイ用の８００〜１，０００ＲＵのいずれかの二つの抗体密度範囲を実現してもよい。再生実験は、２５ｍＭのＮａＯＨの２５％ｖ／ｖエタノール溶液が、２００回の注入にわたり結合ＣＤ７０タンパク質を効率的に取り除きながら、チップ上のＣＤ７０抗体の活性を維持していたことが示された。典型的には、精製された８−ヒスチジンタグ化ＣＤ７０サンプル（配列番号５３０）の連続希釈（０．１〜１０ｘの推定ＫＤの濃度に及ぶ）を、１００μＬ／分で１分間注入し、そして最大２時間の解離時間が許容される。ＣＤ７０タンパク質の濃度は、８−ヒスチジンタグ化ＣＤ７０タンパク質（配列番号５３０）の配列特異的減衰係数に基づき、２８０ｎｍでの吸光度によって決定される。動的な会合速度（ｋｏｎまたはｋａ）および解離速度（ｋｏｆｆまたはｋｄ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを使用してデータを１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６．９９−１１０）に全体的に適合させることにより同時に取得される。平衡解離定数（ＫＤ）の値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出される。このプロトコルは、ヒトＣＤ７０、別の哺乳動物のＣＤ７０（例えばマウスＣＤ７０、ラットＣＤ７０、または霊長類のＣＤ７０）ならびに別の型のＣＤ７０（例えばグリコシル化ＣＤ７０）を含む任意の単量体型ＣＤ７０に対する抗体の結合アフィニティの決定における使用に適している。抗体の結合アフィニティは概して２５℃で測定されるが、３７℃でも測定され得る。
【０１２１】
本明細書に記載される抗体は、当分野で公知の任意の方法によって作製されてもよい。ハイブリドーマ細胞株の作製について、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは概して、本明細書に詳述されるように抗体の刺激および産生に関する確立された従来的技術を順守する。ヒト抗体およびマウス抗体の作製に関する一般的な技術は当分野で公知であり、および／または本明細書に記載されている。
【０１２２】
ヒトを含む任意の哺乳動物対象、またはそれらに由来する抗体産生細胞を操作して、ヒトを含む哺乳動物およびハイブリドーマ細胞株の作製に関する基礎として供することができる。典型的には、宿主動物は、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、および／または皮内に、本明細書に記載のものを含む免疫原の量を接種される。
【０１２３】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７，１９７５の一般的体細胞ハイブリダイゼーション技術、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１，１９８２による改変版を使用して、リンパ球および不死化ミエローマ細胞から調製され得る。利用可能なミエローマ株としては、限定されないがＸ６３−Ａｇ８．６５３、およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、米国カリフォルニア州サンディエゴの株が挙げられ、それらをハイブリダイゼーションに使用してもよい。一般的に当該技術は、例えばポリエチレングリコールなどの融合剤（ｆｕｓｏｇｅｎ）を使用して、または当分野の当業者に公知の電気的手段によりミエローマ細胞とリンパ系細胞を融合することを含む。融合後、細胞は融合培地から分離され、例えばヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的増殖培地中で増殖し、ハイブリダイズされていない親細胞は取り除かれる。血清が補充された、または補充されていない本明細書に記載される培地のいずれかを、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマの培養用に使用することができる。細胞融合技術に関する別の代替手段としては、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、本発明のモノクローナル抗体を作製してもよい。ハイブリドーマは希望に応じて拡張およびサブクローニングされ、上清は、従来的な免疫アッセイ法（例えば放射免疫アッセイ、酵素免疫アッセイまたは蛍光免疫アッセイ）により抗免疫原活性に関して分析される。
【０１２４】
抗体の供給源として使用され得るハイブリドーマは、ＣＤ７０に特異的なモノクローナル抗体またはその一部を産生する親ハイブリドーマのすべての誘導物、子孫細胞を包含する。
【０１２５】
当該抗体を産生するハイブリドーマは、公知の方法を使用してインビトロまたはインビボで増殖させてもよい。モノクローナル抗体は、希望に応じて、例えば硫酸アンモニウム沈殿法、ゲル電気泳動法、透析、クロマトグラフィー、および限界ろ過などの従来的免疫グロブリン精製法により、培養培地または体液から単離されてもよい。もし望ましくない活性がある場合、例えば、固相に付着させた免疫原から作成された吸着剤の上に調製物を流し、所望の抗体を免疫原から溶出または放出させることにより取り除くことができる。免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたは大豆トリプシン阻害剤などに、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介した結合）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２もしくはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ、式中、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基、などの二官能性剤または誘導体化剤を使用して結合した、ヒトＣＤ７０を発現する細胞、ヒトＣＤ７０タンパク質、または標的アミノ酸配列を含有する断片を用いた宿主動物の免疫化によって抗体（例えばモノクローナル抗体）群が得られる。
【０１２６】
望ましい場合、対象の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列解析し、次いでポリヌクレオチド配列を発現用ベクターまたは増殖用ベクターにクローニングしてもよい。対象の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター内に維持されてもよく、次いで宿主細胞を増殖させ、将来的な使用のために凍結してもよい。細胞培養における組み換えモノクローナル抗体の産生は、当分野で公知の手段により、Ｂ細胞由来の抗体遺伝子のクローニングを介して行われてもよい。例えば、Ｔｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２９，１１２，２００８；米国特許第７，３１４，６２２号を参照のこと。
【０１２７】
あるいはポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に使用して、抗体を「ヒト化」してもよく、または抗体のアフィニティもしくは他の特性を改善してもよい。例えば定常領域をヒト定常領域にさらに近く似せて操作して、抗体がヒトでの臨床試験および治療に使用されたときの免疫反応を回避してもよい。ＣＤ７０に対するアフィニティを高くするために、およびＣＤ７０の阻害効果を大きくするために、抗体配列を遺伝子操作することが望ましい場合がある。
【０１２８】
モノクローナル抗体をヒト化するためには、一般的に四つの工程がある。その工程は、（１）開始抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列および予測アミノ酸配列を決定する工程、（２）ヒト化抗体を設計する工程、すなわちヒト化プロセスの間にどの抗体フレームワーク領域を使用するか決定する工程、（３）実際のヒト化方法／技術、および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現、である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、第５，８０７，７１５号、第５，８６６，６９２号、第６，３３１，４１５号、第５，５３０，１０１号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第５，５８５，０８９号、および第６，１８０，３７０号を参照のこと。
【０１２９】
ヒト定常領域に融合された、齧歯類Ｖ領域または改変齧歯類Ｖ領域およびその関連ＣＤＲを有するキメラ抗体を含む、非ヒト免疫グロブリン由来の抗原結合部位を含む多くの「ヒト化」抗体分子が報告されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９，１９９１、Ｌｏｂｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４，１９８９、Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８，１９８７、およびＢｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３，１９８７を参照のこと。他の参照文献には、適切なヒト抗体定常領域との融合前に、ヒト補助フレームワーク領域（ＦＲ）内に移植された齧歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８、およびＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，１９８６を参照のこと。別の参照文献には、組換え遺伝子操作された齧歯類フレームワーク領域によって補助された齧歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開０５１９５９６を参照のこと。これらの「ヒト化」分子は、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫反応を最小化するよう設計される。そうした免疫反応はヒトレシピエントにおける当該部分の治療アプリケーションの期間および有効性を限定してしまう。例えば抗体定常領域は、免疫学的に不活性となるよう操作されてもよい（例えば補体溶解を誘発しない）。例えば、ＰＣＴ公開ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１、英国特許出願９８０９９５１．８を参照のこと。利用され得る他の抗体ヒト化方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１−２４７６，１９９１、および米国特許第６，１８０，３７７号、第６，０５４，２９７号、第５，９９７，８６７号、第５，８６６，６９２号、第６，２１０，６７１号、および第６，３５０，８６１号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ０１／２７１６０に記載されている。
【０１３０】
上記に検討されるヒト化抗体に関連する一般的原理は、例えばイヌ、ネコ、霊長類、ウマおよびウシにおける使用に抗体をカスタマイズするためにも適用可能である。さらに本明細書に記載の抗体のヒト化に関する一つまたは複数の態様は、例えばＣＤＲ移植、フレームワーク変異、およびＣＤＲ変異などの組み合わせであってもよい。
【０１３１】
一つの変化形では、完全ヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するよう操作された市販のマウスを使用することにより取得されてもよい。より好ましい（例えば完全ヒト抗体）またはより安定的な免疫反応を生じさせるよう設計されたトランスジェニック動物を、ヒト化抗体の作製またはヒト抗体の作製に使用してもよい。そうした技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州フレモント）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）およびＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（ニュージャージー州プリンストン）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
【０１３２】
あるいは、抗体は、当分野に公知の任意の方法を使用して組み換えにより作製および発現されてもよい。別の方法では、抗体は、ファージディスプレイ技術により組み換え作製されてもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、第５，５８０，７１７号、第５，７３３，７４３号、および第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５，１９９４を参照のこと。あるいはファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３，１９９０）を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片をインビトロで作製してもよい。この技術に従い、抗体Ｖドメイン遺伝子は、フィラメント状バクテリオファージ、例えばＭ１３またはｆｄなどのメジャーまたはマイナーコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能性抗体断片として提示される。フィラメント状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するため、抗体の機能特性に基づく選択によって、その特性を示す抗体をコードする遺伝子も選択される。したがって、ファージは、Ｂ細胞の特性の一部を模倣するものである。ファージディスプレイ法は、様々な形式で実施することができる。概要に関しては例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１，１９９３を参照のこと。Ｖ−遺伝子セグメントのいくつかの源をファージディスプレイに使用してもよい。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８，１９９１は、免疫化マウスの脾臓から誘導されたＶ遺伝子の低無作為コンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様性アレイを単離した。非免疫化ヒトドナーのＶ遺伝子レパートリーが構築され、抗原（自己抗原を含む）の多様性アレイに対する抗体は、原則としてＭａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７，１９９１、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４，１９９３に記載される技術に従い単離され得る。天然の免疫応答において、抗体遺伝子は高率で変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入された変化の一部は高いアフィニティをもたらし、高アフィニティ表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞はその後の抗原チャレンジで優先的に複製され、分化される。この天然プロセスは、「鎖シャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）」として知られる技術を採用することにより模倣され得る。（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３，１９９２）。この方法では、ファージディスプレイにより取得された「プライマリー」なヒト抗体のアフィニティは、重鎖および軽鎖のＶ領域遺伝子を、非免疫化ドナーから取得されたＶドメイン遺伝子の天然バリアント（レパートリー）で連続的に置換することにより改善され得る。この技術により、ｐＭ〜ｎＭの範囲でアフィニティを有する抗体および抗体断片の作製が可能となる。非常に大きなファージ抗体レパートリー（「全ライブラリーの母（ｔｈｅ  ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」としても知られる）を作製するための戦略は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６，１９９３に記載されている。遺伝子シャッフリングを使用して、齧歯類抗体からヒト抗体を誘導することもできる。この場合、ヒト抗体は、開始げっ歯類抗体と類似したアフィニティと特異性を有している。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法によれば、ファージディスプレイ技術により取得されたげっ歯類抗体の重鎖および軽鎖のＶドメイン遺伝子は、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置換され、げっ歯類−ヒトのキメラが生成される。抗原に対する選択を行うことにより、機能性抗原結合部位を回復させることができるヒト可変領域が単離される。すなわちエピトープが、パートナーの選択を支配（インプリント）する。残りの齧歯類Ｖドメインを置換するためにプロセスが繰り返された場合には、ヒト抗体が取得される（ＰＣＴ公開ＷＯ９３／０６２１３を参照のこと）。従来的なＣＤＲ移植による齧歯類抗体のヒト化とは異なり、この技術は完全なヒト抗体を提供するものであり、当該抗体は齧歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基は有していない。
【０１３３】
抗体は、最初に宿主動物から抗体および抗体産生細胞を単離すること、遺伝子配列を取得すること、そして当該遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）において抗体を組み換え発現させることにより組み換え作製されてもよい。採用され得る別の方法は、植物（例えばタバコ）またはトランスジェニックミルクにおいて抗体配列を発現させる方法である。植物またはミルクで抗体を組み換え発現させる方法は報告されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６，２００１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５，１９９５；およびＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７，１９９９を参照のこと。抗体の誘導体を作製する方法、例えばヒト化、一本鎖を作製する方法なども当分野に公知である。
【０１３４】
免疫アッセイ、および例えば蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーソーティング技術を採用して、ＣＤ７０に特異的な、または対象の腫瘍抗原に特異的な抗体を単離することもできる。
【０１３５】
本明細書に記載の抗体は、多くの様々な担体に結合することができる。担体は活性であっても、および／または不活性であってもよい。公知の担体の例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然セルロースおよび修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、本発明の目的に対し、可溶性または不溶性のいずれであってもよい。当業者であれば、抗体結合のための他の適切な担体を知っており、または日常的な実験を使用してそうした担体を確認することができるであろう。一部の実施形態では、担体は、心筋を標的とする部分を含有する。
【０１３６】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは従来的な方法を使用することにより（例えばモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され、配列解析される。ハイブリドーマ細胞は、そうしたＤＮＡの好ましい供給源として機能する。単離された時点で、ＤＮＡを、発現ベクター（例えばＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２号に開示される発現ベクター）へと配置してもよい。その後、別手段により免疫グロブリンタンパク質を産生しない例えば大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはミエローマ細胞などの宿主細胞内に当該ベクターをトランスフェクトし、当該組み換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成が得られる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２を参照のこと。ＤＮＡは、例えばヒト重鎖およびヒト軽鎖の定常領域のコード配列を、相同なマウス配列の代わりに置換することにより改変されてもよい。Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１，１９８４。または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列のすべてまたは一部と、免疫グロブリンのコード配列を共有結合させることにより改変されてもよい。この方法では、本明細書のモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」抗体または「ハイブリッド」抗体が調製される。
【０１３７】
本明細書に記載されるＣＤ７０抗体は、当分野で公知の方法を使用して特定または特徴解析されることができ、それによりＣＤ７０の発現レベルの低下が検出および／または測定される。一部の実施形態では、ＣＤ７０抗体は、ＣＤ７０と候補物質をインキュベートし、そして結合および／または結合に伴うＣＤ７０の発現レベルの低下をモニタリングすることにより特定される。結合アッセイは、精製されたＣＤ７０ポリペプチドを用いて、またはＣＤ７０ポリペプチドを自然に発現する細胞を用いて、またはＣＤ７０ポリペプチドを発現するようトランスフェクトされた細胞を用いて実施されてもよい。一つの実施形態では、結合アッセイは、競合結合アッセイであり、このアッセイにおいて、ＣＤ７０結合に関し、公知のＣＤ７０抗体と競合する候補抗体の能力が評価される。このアッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含む様々な形式で実施されてもよい。
【０１３８】
初回の特定の後、候補ＣＤ７０抗体の活性は、標的となる生物活性を検証することが知られているバイオアッセイによりさらに確認され、および改善され得る。あるいは、バイオアッセイを使用して、候補抗体を直接スクリーニングすることもできる。抗体を特定および特徴解析するための方法のいくつかを、実施例に詳述する。
【０１３９】
ＣＤ７０抗体は、当分野に公知の方法を用いて特徴解析されてもよい。例えば一つの方法は、抗体が結合するエピトープを特定すること、または「エピトープマッピング」である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９の第１１章に記載されるように、抗体−抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチド系アッセイを含む、タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴解析するための多くの方法が当分野に公知である。追加的な例において、エピトープマッピングを使用して、抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、様々な供給者、例えばＰｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から市販されている。エピトープは直鎖状エピトープであってもよい。すなわち、アミノ酸の単一な列に含有されてもよい。またはアミノ酸の三次元相互作用により形成された立体構造的エピトープであってもよく、このエピトープは単一な列には必ずしも含有されない場合がある。様々な長さのペプチド（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸の長さ）を単離または合成して（例えば組み換えにより）、ＣＤ７０または他の腫瘍抗原の抗体を用いた結合アッセイに使用してもよい。別の例では、ＣＤ７０抗体が結合するエピトープは、ＣＤ７０配列から誘導された重複ペプチドを使用した系統的スクリーニングを行い、ＣＤ７０抗体による結合を決定することによって決定され得る。遺伝子断片発現アッセイによると、ＣＤ７０をコードするオープンリーディングフレームは、無作為または特定の遺伝子構造によって断片化され、ＣＤ７０の発現断片と検証抗体の反応性が決定される。遺伝子断片は、例えばＰＣＲによって生成され、次いで放射性アミノ酸の存在下でインビトロでタンパク質へと転写および翻訳されてもよい。次いで、放射標識されたＣＤ７０への抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。あるエピトープは、ファージ粒子（ファージライブラリー）の表面上に提示される無作為ペプチド配列の大きなライブラリーを使用することにより特定されてもよい。あるいは、重複したペプチド断片の規定のライブラリーを、単純な結合アッセイにおいて被験抗体への結合に関して検証してもよい。追加的な例では、抗原結合ドメインの突然変異誘導、ドメインスワッピング実験、およびアラニンスキャン突然変異誘導を実施して、エピトープ結合に必要とされる、充分な、および／または必須の残基を特定してもよい。例えばドメインスワッピング実験は、変異型ＣＤ７０を使用して実施されてもよく、この場合においてＣＤ７０タンパク質の様々な断片は、別の種（例えばマウス）由来のＣＤ７０の配列、または近縁であるが抗原的に別個のタンパク質の配列と置換（スワップ）される。変異型ＣＤ７０に対する抗体の結合を評価することにより、抗体結合に対する、特定のＣＤ７０断片の重��性が評価され得る。ＣＤ７０特異的抗体（すなわち、ＣＤ７０ｗｔ（野生型）または任意の他のタンパク質に結合しない抗体）の場合には、エピトープは、ＣＤ７０とＣＤ７０ｗｔの配列アライメントから推定され得る。
【０１４０】
ＣＤ７０抗体を特徴解析するために使用され得るさらに別の方法は、同じ抗原、すなわちＣＤ７０上の様々な断片に結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを使用して、ＣＤ７０抗体が、他の抗体と同じエピトープに結合するかを決定することである。競合アッセイは、当業者に公知である。
【０１４１】
発現ベクターを使用して、ＣＤ７０抗体の発現を誘導してもよい。当業者であれば、インビボでの外来性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与について理解している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、第６，４１３，９４２号、および第６，３７６，４７１号を参照のこと。発現ベクターの投与は、注射、経口投与、粒子銃またはカテーテル投与を含む局所（ｌｏｃａｌ）または全身の投与、および局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与を含む。別の実施形態では、発現ベクターは、交感神経幹もしくはガングリオンに直接投与され、または冠状動脈、心房、心室もしくは心膜内に直接投与される。
【０１４２】
発現ベクターまたはサブゲノム性ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物の標的化送達を使用してもよい。受容体介在ＤＮＡ送達法は、例えばＦｉｎｄｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９３，１１：２０２；Ｃｈｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．，１９９４；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３：６２１，１９８８；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：５４２，１９９４；Ｚｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：３６５５，１９９０；ａｎｄ  Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：３３８，１９９１に記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルでの局所投与に対し、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡの範囲で投与される。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの範囲の濃度を、遺伝子治療プロトコル中に使用してもよい。治療用のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達されてもよい。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源のものであってもよい（一般的に、Ｊｏｌｌｙ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１：５１，１９９４；Ｋｉｍｕｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，５：８４５，１９９４；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９５，１：１８５；およびＫａｐｌｉｔｔ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，６：１４８，１９９４を参照のこと）。そうしたコード配列の発現は、内因性の哺乳動物プロモーター、または異種プロモーターを使用して誘導されてもよい。コード配列の発現は、構造的または制御性のいずれかであってもよい。
【０１４３】
所望のポリヌクレオチドの送達用、および所望の細胞での発現用のウイルス系ベクターは当分野に公知である。ウイルス系ビヒクルの例としては限定されないが、組み換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０７９３６、ＷＯ９４／０３６２２、ＷＯ９３／２５６９８、ＷＯ９３／２５２３４、ＷＯ９３／１１２３０、ＷＯ９３／１０２１８、ＷＯ９１／０２８０５、米国特許第５，２１９，７４０号および第４，７７７，１２７号、英国特許第２，２００，６５１号、ならびに欧州特許第０３４５２４２号）、アルファウイルス系ベクター（例えばシンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９、ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４、およびＷＯ９５／００６５５）が挙げられる。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１９９２，３：１４７に記載される死滅アデノウイルスに結合したＤＮＡの投与を採用してもよい。
【０１４４】
非ウイルス系送達ビヒクル、および非ウイルス系送達方法を採用してもよく、限定されないが、死滅アデノウイルス単独に結合された、または結合されていないポリカチオン性濃縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，３：１４７，１９９２）、リガンド結合ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４：１６９８５，１９８９）、真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／０７９９４、ＷＯ９６／１７０７２、ＷＯ９５／３０７６３、およびＷＯ９７／４２３３８）および核電荷中和法または細胞膜融合法が挙げられる。ネイキッドＤＮＡを採用してもよい。ネイキッドＤＮＡ導入法の例は、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／１１０９２、および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号、ＰＣＴ公開ＷＯ９５／１３７９６、ＷＯ９４／２３６９７、ＷＯ９１／１４４４５、およびＥＰ  ０５２４９６８に記載されている。追加の方法は、Ｐｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１４：２４１１，１９９４、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：１５８１，１９９４に記載されている。
【０１４５】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体、本発明方法により作製された抗体、または本明細書に記載される特性を有する抗体を含む医薬組成物を含む組成物を包含する。本明細書において使用される場合、組成物は、ＣＤ７０に結合する一つまたは複数の抗体、および／またはこれらの抗体を一つまたは複数コードする配列を含む一つまたは複数のポリヌクレオチドを含む。これらの組成物は、当分野で公知の緩衝液を含む薬学的に許容可能な賦形剤などの適切な賦形剤をさらに含みうる。
【０１４６】
本発明はさらに、これらの抗体のいずれかを作製する方法も提供する。本発明の抗体は、当分野に公知の方法により作製され得る。ポリペプチドは、抗体のタンパク質分解もしくは他の分解により、上述の組み換え法により（すなわち単一ポリペプチドまたは融合ポリペプチド）、または化学合成により、作製され得る。抗体のポリペプチド、特に約５０アミノ酸以下の短いポリペプチドは、化学合成によって簡便に作製される。化学合成方法は当分野で公知であり、市販されている。例えば、抗体は、固相法を採用する自動ポリペプチド合成装置により作製され得る。米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、および第６，３３１，４１５号を参照のこと。
【０１４７】
別の代替的方法では、抗体は、当分野に公知の手順を使用して組み換えにより作製され得る。一つの実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗体３１Ｈ１、６３Ｂ２、４０Ｅ３、４２Ｃ３、４５Ｆ１１、６４Ｆ９、７２Ｃ２、２Ｆ１０、４Ｆ１１、１０Ｈ１０、１７Ｇ６、６５Ｅ１１、Ｐ０２Ｂ１０、Ｐ０７Ｄ０３、Ｐ０８Ａ０２、Ｐ０８Ｅ０２、Ｐ０８Ｆ０８、Ｐ０８Ｇ０２、Ｐ１２Ｂ０９、Ｐ１２Ｆ０２、Ｐ１２Ｇ０７、Ｐ１３Ｆ０４、Ｐ１５Ｄ０２、もしくはＰ１６Ｃ０５の重鎖および／または軽鎖の可変領域をコードする配列を含む。対象の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクター内に維持されてもよく、次いで宿主細胞を増殖させ、将来的な使用のために凍結してもよい。ベクター（発現ベクターを含む）および宿主細胞を、本明細書においてさらに記載する。
【０１４８】
二つの共有結合された抗体を含むヘテロ結合抗体（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）も、本発明の範囲内にある。そうした抗体を使用して、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的化させ（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染の治療に使用している（ＰＣＴ公開ＷＯ９１／００３６０およびＷＯ９２／２００３７３、ＥＰ  ０３０８９）。ヘテロ結合抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製され得る。適切な架橋剤および架橋方法は当分野に公知であり、米国特許第第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０１４９】
キメラ抗体またはハイブリッド抗体は、架橋剤を含む方法をはじめとする公知の合成タンパク質化学法を使用してインビトロで調製され得る。例えばジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成させることによりイムノトキシンが構築され得る。この目的に対し適切な試薬の例としては、イミノチオラートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミダート（ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）が挙げられる。
【０１５０】
組み換え型ヒト化抗体において、Ｆｃγ領域は、Ｆｃγ受容体ならびに補体系および免疫系との相互作用を回避するために改変されてもよい。そうした抗体の調製方法は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。例えば定常領域をヒト定常領域にさらに似せて操作して、抗体がヒトでの臨床試験および治療に使用されたときの免疫反応を回避してもよい。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および第５，８６６，６９２号を参照のこと。
【０１５１】
本発明は、表５に示されるバリアントを含む、本発明の抗体およびポリペプチドに対する改変を包含しており、その特性に大きな影響を受けていない機能的に同等の抗体、ならびに活性および／またはアフィニティを強化された、または減少されたバリアントが含まれる。例えばアミノ酸配列は、ＣＤ７０に対し所望の結合アフィニティを有する抗体が得られるように変異されてもよい。ポリペプチドの改変は当分野では日常的に実施されており、本明細書において詳細に記載する必要はない。改変ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換を有するポリペプチド、機能的活性を著しく悪化させて変化させない、またはそのリガンドに対するポリペプチドのアフィニティを成熟させる（強化する）アミノ酸の一つもしくは複数の欠失または付加を有するポリペプチド、または化学的アナログが使用されたポリペプチドが挙げられる。
【０１５２】
アミノ酸配列挿入には、１残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、またはエピトープタグに融合された抗体が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、酵素またはポリペプチドの、抗体Ｎ末端または抗体Ｃ末端への融合が挙げられ、それにより血液循環中の抗体の半減期が延長される。
【０１５３】
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも一つのアミノ酸残基が除去され、その位置に異なる残基が挿入されている。置換突然変異誘導に対し最も大きな関心が持たれる部位としては、超可変領域が挙げられるが、ＦＲの改変も予期される。保存的置換は、「保存的置換」の見出しで、表５に示されている。そのような置換により生物活性に変化が生じる場合、より大きな置換変化は、表５において「例示的置換」で表示され、またはアミノ酸のクラスに関して以下に詳述されるように、そうした置換が導入され、産物はスクリーニングされ得る。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体の置換バリアントは、基準の親抗体と比較してＶＨ領域またはＶＬ領域において、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個以下の保存的置換を有する。一部の実施形態では、置換は、ＶＨ領域またはＶＬ領域のＣＤＲ内ではない。
【０１５４】
表５：アミノ酸置換
【表５】
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【０１５５】
抗体の生物特性における置換改変は、（ａ）置換領域中のポリペプチド主鎖の例えばシート立体構造またはヘリカル立体構造としての構造、（ｂ）標的部位の分子の荷電もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の体積、の維持に対する効果において、大きく異なる置換を選択することにより実現される。天然のアミノ酸残基は、以下の共通の側鎖の特性に基づいてグループに分けられる：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）非荷電極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性（陰性荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性（陽性荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の方向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
【０１５６】
非保存的置換は、これらのクラスの一つを別のクラスのものに交換することによって行われる。
【０１５７】
抗体の適切な立体構造の維持に関与しないシステイン残基もすべて、一般的にはセリンと置換されてもよく、それにより分子の酸化安定性が改善され、異常な架橋が防止される。逆に、システイン結合を抗体に加えることにより、特に抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合には、その安定性が改善される。
【０１５８】
アミノ酸改変は、一つまたは複数のアミノ酸の変更または改変から、例えば可変領域などの領域の完全な再設計までの範囲であってもよい。可変領域の変更は、結合アフィニティおよび／または結合特異性を変化させる可能性がある。一部の実施形態では、ＣＤＲドメイン内では、１〜５個以下の保存的アミノ酸置換が行われる。他の実施形態では、ＣＤＲドメイン内では、１〜３個以下の保存的アミノ酸置換が行われる。さらに他の実施形態では、当該ＣＤＲドメインは、ＣＤＲ  Ｈ３および／またはＣＤＲ  Ｌ３である。
【０１５９】
改変は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾を有するポリペプチド、例えば異なる糖類でのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化を有するポリペプチドも含む。抗体は、自身の定常領域中の保存された位置でグリコシル化されている（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８，１９９７；Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２，１９９７）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能に影響を与え（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８，１９９６；Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０，１９９０）、糖タンパク質の立体構造および呈示される三次元表面に影響を与え得る糖タンパク質の部分間の分子内相互作用に影響を与える（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，ｓｕｐｒａ；Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６，１９９６）。オリゴ糖は、特定の認識構造に基づいて、所与の糖タンパク質を特定の分子に標的化させる役割も果たし得る。抗体のグリコシル化は、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすことも報告されている。特に、分岐ＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン制御性発現を有するＣＨＯ細胞は、ＡＤＣＣ活性が改善されたことが報告されている（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０，１９９９）。
【０１６０】
抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖に炭水化物部分が付加することを指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−スレオニン、およびアスパラギン−Ｘ−システインは、式中、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸であり、アスパラギン側鎖に炭水化物部分が酵素的に付加するための認識配列である。したがってこれらトリペプチド配列のいずれかがポリペプチド中に存在することで、潜在的にグリコシル化部位が生じる。Ｏ結合型のグリコシル化とは、糖のＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースのうちの一つがヒドロキシアミノ酸、最も普遍的にはセリンまたはスレオニンに付加することを指し、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンが使用されてもよい。
【０１６１】
抗体へのグリコシル化部位の追加は、上述の（Ｎ結合型グリコシル化部位に関する）トリペプチド配列のうちの一つまたは複数を含有するようにアミノ酸配列を変えることにより容易に達成される。（Ｏ結合型グリコシル化部位に関して）一つまたは複数のセリン残基またはスレオニン残基を、元の抗体の配列に付加、または置換することにより変更が行われてもよい。
【０１６２】
抗体のグリコシル化パターンは、基礎となるヌクレオチド配列を変えることなく変更されてもよい。グリコシル化は、抗体を発現するために使用される宿主細胞に大きく依存する。組み換え糖タンパク質、例えば潜在的に治療用としての抗体の発現に使用される細胞型が天然細胞であることは稀であるため、抗体のグリコシル化パターンの変動が予測され得る（例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０，１９９７を参照のこと）。
【０１６３】
宿主細胞の選択に加えて、抗体の組み換え型産生中のグリコシル化に影響を及ぼす因子としては、増殖様式、培地組成、培養密度、酸素化、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。オリゴ糖産生に関与する特定の酵素を導入または過剰発現させることを含む、特定の宿主生物で実現されるグリコシル化パターンを変えるための様々な方法が提唱されている（米国特許第５，０４７，３３５号、第５，５１０，２６１号、および第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、または特定のタイプのグリコシル化を、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、糖タンパク質から酵素的に除去してもよい。さらに組み換え宿主細胞を遺伝子操作して、特定のタイプの多糖類の処理を欠落するようにしてもよい。これら技術および類似の技術が当分野に公知である。
【０１６４】
その他の改変方法としては、限定されないが、酵素的手段、酸化的置換、およびキレートを含む、当分野に公知のカップリング技術の使用が挙げられる。例えば、免疫アッセイ用の標識の付加を目的とした改変が使用されてもよい。改変ポリペプチドは、当分野で確立された手順を使用して作製され、そして当分野で公知の標準的なアッセイを使用してスクリーニングされてもよく、その一部は、以下に、および実施例に記載される。
【０１６５】
他の抗体改変としては、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５８５７２号に記載されるように改変された抗体が挙げられる。これらの抗体は、標的分子に指向される結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域のすべて、または一部に対して実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、重大な標的の補体依存性溶解または細胞介在性の破壊を誘発することなく標的分子に結合することができる。一部の実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合することができる。これらドメインは、典型的には二つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づいている。このように改変された抗体は、長期的な抗体療法での使用に特に適しており、従来的な抗体療法に対する炎症および他の有害な反応を回避する。
【０１６６】
本発明は、アフィニティ成熟した実施形態を含む。例えばアフィニティ成熟抗体は、当分野に公知の方法（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３，１９９２；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３，１９９４；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５，１９９５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：１９９４−２００４，１９９５；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３３１０−９，１９９５，Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６，１９９２；およびＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０５８１８４）により作製されてもよい。
【０１６７】
以下の方法を使用して、抗体のアフィニティを調整し、ＣＤＲを特徴解析してもよい。抗体のＣＤＲを特徴解析し、および／または例えば抗体などのポリペプチドの結合アフィニティを変える（例えば改善する）一つの方法は、「ライブラリースキャニング突然変異誘導」と呼ばれている。概して、ライブラリースキャニング突然変異誘導は、以下のように作用する。ＣＤＲ中の一つまたは複数のアミノ酸の位置を、二つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）のアミノ酸と、当分野に認識されている方法を使用して置換する。これにより小さなクローンライブラリーが作製される（一部の実施形態では、分析される各アミノ酸位置につき一つ）。（二つ以上のアミノ酸が各位置で置換される場合）、各々が二つ以上のメンバーという複雑性を有している。概して、ライブラリーは、天然（非置換）アミノ酸を含むクローンも含有する。各ライブラリーから、（ライブラリーの複雑性に応じて）例えば約２０〜８０個のクローンなどの少数のクローンが標的ポリペプチド（または他の結合標的）に対する結合アフィニティに関してスクリーニングされ、結合が増加した、結合が同程度、結合が低下した、または結合しない候補物が特定される。結合アフィニティの決定方法は、当分野に公知である。結合アフィニティは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴解析法を使用して決定されてもよく、当該方法は、結合アフィニティにおける約２倍以上の差異を検出する。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）は、例えば約１０ｎＭ以下のＫＤなど、開始抗体がすでに比較的高いアフィニティで結合する場合に特に有用である。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴法を使用したスクリーニングは、本明細書において実施例に記載される。
【０１６８】
結合アフィニティは、Ｋｉｎｅｘａ  Ｂｉｏｃｅｎｓｏｒ、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＯＲＩＧＥＮ免疫アッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光クエンチング、蛍光トランスファー、および／または酵母ディスプレイを使用して決定されてもよい。結合アフィニティは、適切なバイオアッセイを使用してスクリーニングされてもよい。
【０１６９】
一部の実施形態では、ＣＤＲ中の各アミノ酸の位置は、当分野に認識される突然変異誘導法（その一部は本明細書に記載される）を使用して、２０個すべての天然アミノ酸と置換される（一部の実施形態では、一度に一つ）。これにより小さなクローンライブラリーが作製される（一部の実施形態では、分析される各アミノ酸位置につき一つ）。（２０個すべてのアミノ酸がそれぞれの位置で置換される場合）、各々が２０個のメンバーという複雑性を有している。
【０１７０】
一部の実施形態では、スクリーニングされるライブラリーは、二つ以上の位置で置換を含有しており、それらは同一のＣＤＲ中であってもよく、または二つ以上のＣＤＲ中であってもよい。ゆえにライブラリーは、一つのＣＤＲ中の二つ以上の位置で置換を含有してもよい。ライブラリーは、二つ以上のＣＤＲ中の二つ以上の位置で置換を含有してもよい。ライブラリーは、３、４、５、またはそれ以上の位置で置換を含有してもよく、当該位置は、２、３、４、５または６個のＣＤＲ中に存在する。置換は、低冗長性のコドンを使用して調製されてもよい。例えば、Ｂａｌｉｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １３７（１）：１０９−１８，１９９３の表２を参照のこと。
【０１７１】
ＣＤＲは、ＣＤＲＨ３および／またはＣＤＲＬ３であってもよい。ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、および／またはＣＤＲＨ３のうちの一つまたは複数であってもよい。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、または拡張ＣＤＲであってもよい。
【０１７２】
結合が改善された候補物は、配列解析されてもよく、それによりアフィニティの改善をもたらすＣＤＲ置換変異体が特定される（「改善された」置換とも名付けられる）。結合する候補物が配列解析されてもよく、それにより結合を保持するＣＤＲ置換が特定される。
【０１７３】
複数ラウンドのスクリーニングを実施してもよい。例えば、結合が改善した候補物（各々が、一つまたは複数のＣＤＲの一つまたは複数の位置で、アミノ酸置換を含有する）は、各改善されたＣＤＲ位置で、少なくともオリジナルのアミノ酸と置換アミノ酸を含有する第二のライブラリーの設計にも有用である。このライブラリーの調製およびスクリーニングまたは選択を、以下にさらに検討する。
【０１７４】
結合が改善した、結合が同じ、結合が低下した、または結合しないクローンの頻度が、抗体−抗原複合体の安定性に対する各アミノ酸位置の重要性に関する情報を提供する限りにおいて、ライブラリースキャニング突然変異誘導法は、ＣＤＲを特徴解析するための手段も提供する。例えば、２０個すべてのアミノ酸に変化したとき、ＣＤＲの位置が結合を保持していた場合、当該位置は、抗原結合に必要とされる可能性は無い位置として特定される。逆に、少数の置換のみでＣＤＲの位置が結合を保持していた場合、当該位置は、ＣＤＲ機能に重要な位置として特定される。したがってライブラリースキャニング突然変異誘導法は、多くの別のアミノ酸（２０個すべてのアミノ酸を含む）へと変化され得るＣＤＲ中の位置に関する情報、および変えられないＣＤＲ中の位置または少数のアミノ酸のみへ変えられるＣＤＲ中の位置に関する情報をもたらす。
【０１７５】
アフィニティが改善した候補物を第二のライブラリー中で組み合わせてもよい。当該ライブラリーは、当該位置で改善アミノ酸、元のアミノ酸を含み、所望されるライブラリーの複雑性に応じて、または所望されるスクリーニング法もしくは選択法の使用が許容されるライブラリーの複雑性に応じて、当該位置で追加の置換をさらに含んでもよい。さらに望ましい場合には、隣接するアミノ酸位置を、少なくとも二つ以上のアミノ酸に無作為化することもできる。隣接するアミノ酸の無作為化によって、変異ＣＤＲにおいて、追加的な構造的適応性が可能となる場合があり、これは同様に、多数の改善変異の導入を許容、または促進し得る。ライブラリーは、最初のスクリーニングのラウンドではアフィニティの改善を示さなかった位置で、置換を含んでもよい。
【０１７６】
第二のライブラリーは、当分野に公知の任意の方法を使用して、結合アフィニティが改善した、および／または変化したライブラリーのメンバーに対してスクリーニングまたは選択される。そうした方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴解析を使用したスクリーニング、ならびにファージディスプレイ、酵母ディスプレイおよびリボソームディスプレイを含む選択のための当分野に公知の任意の方法を使用した選択が挙げられる。
【０１７７】
本発明は、本発明の抗体の一つもしくは複数の断片または領域を含有する融合タンパク質も包含する。一つの実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５もしくは４７に示される可変軽鎖領域の少なくとも１０個の連続的なアミノ酸、および／または配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６もしくは４８に示される可変重鎖領域の少なくとも１０個のアミノ酸を含有する融合ポリペプチドが提供される。他の実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続したアミノ酸、および／または可変重鎖領域の少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、または少なくとも約３０個の連続したアミノ酸を含有する融合ポリペプチドが提供される。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、一つまたは複数のＣＤＲを含む。さらに他の実施形態では、融合ポリペプチドは、ＣＤＲ  Ｈ３（ＶＨ  ＣＤＲ３）および／またはＣＤＲ  Ｌ３（ＶＬ  ＣＤＲ３）を含む。本発明の目的に対し、融合タンパク質は、一つまたは複数の抗体と、例えば異種配列または別の領域由来の同種配列などの天然分子では付加されない別のアミノ酸配列を含む。異種配列の例としては限定されないが、例えばＦＬＡＧタグまたは６Ｈｉｓタグ（配列番号５３１）などの「タグ」が挙げられる。タグは、当分野において公知である。
【０１７８】
融合ポリペプチドは、例えば合成または組み換えなどの当分野に公知の方法により生成され得る。典型的には、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載される組み換え方法を使用して、それらをコードするポリヌクレオチドを調製および発現させることによって作製されるが、例えば、化学合成を含む、当分野で公知の他の手段により調製されてもよい。
【０１７９】
本発明は、固形支持体へのカップリングを促進する物質（例えば、ビオチンまたはアビジン）に結合された（例えば、連結された）抗体を含む組成物も提供する。簡略化を目的として、本明細書に記載のＣＤ７０抗体の実施形態のいずれかに、これら方法を適用するという理解で、抗体に対して概略的に参照が為される。結合とは概して、本明細書に記載のこれら構成要素を連結させることを指す。連結（概して、これらの構成要素を少なくとも投与のために近接した関連性で固定する）は、任意の数の方法で実現することができる。例えば、物質と抗体との間の直接反応は、各々が他方と反応する能力を有する置換基を保有する場合に可能である。例えば、アミノ基またはスルフヒドリル基などの求核基は、一方は例えば無水物または酸ハロゲン化物などのカルボニル含有基と反応することができ、または他方には充分な脱離基（例えばハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することができてもよい。
【０１８０】
本発明はまた、本発明の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド、ならびに当該ポリヌクレオチドを含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【０１８１】
従って本発明は、以下のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（または医薬組成物を含む組成物）を提供する：３１Ｈ１、６３Ｂ２、４０Ｅ３、４２Ｃ３、４５Ｆ１１、６４Ｆ９、７２Ｃ２、２Ｆ１０、４Ｆ１１、１０Ｈ１０、１７Ｇ６、６５Ｅ１１、Ｐ０２Ｂ１０、Ｐ０７Ｄ０３、Ｐ０８Ａ０２、Ｐ０８Ｅ０２、Ｐ０８Ｆ０８、Ｐ０８Ｇ０２、Ｐ１２Ｂ０９、Ｐ１２Ｆ０２、Ｐ１２Ｇ０７、Ｐ１３Ｆ０４、Ｐ１５Ｄ０２もしくはＰ１６Ｃ０５、またはＣＤ７０に結合する能力を有する任意のその断片または部分。
【０１８２】
別の態様では、本発明は、例えばエフェクター機能が損なわれた抗体およびポリペプチドなどの、本明細書に記載の抗体（抗体断片を含む）およびポリペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドは、当分野に公知の方法により作製および発現され得る。
【０１８３】
別の態様では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
【０１８４】
発現ベクター、およびポリヌクレオチド組成物の投与を、本明細書においてさらに記載する。
【０１８５】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。
【０１８６】
任意の当該配列に相補的なポリヌクレオチドも本発明に包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）または二本鎖であってもよく、ＤＮＡ分子（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子には、イントロンを含有し、１対１の方式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が含まれる。追加のコード配列または非コード配列は、必ずではないが、本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよく、ポリヌクレオチドは、必ずではないが、他の分子および／またはサポート物質に連結されてもよい。
【０１８７】
ポリヌクレオチドは天然配列（すなわち抗体またはその一部分をコードする内因性配列）を含んでもよく、またはそうした配列のバリアントを含んでもよい。ポリヌクレオチドバリアントは、天然免疫反応性分子と比較して、コードされるポリペプチドの免疫反応性が減少しないように一つまたは複数の置換、付加、欠失および／または挿入を含有する。コードされるポリペプチドの免疫反応性に対する効果は、概して本明細書に記載されるように評価されてもよい。バリアントは、天然抗体またはその一部分をコードするポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも約７０％の同一性を示すことが好ましく、少なくとも約８０％の同一性を示すことがより好ましく、少なくとも約９０％の同一性を示すことがよりさらに好ましく、少なくとも約９５％の同一性を示すことが最も好ましい。
【０１８８】
二つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載されるように最大対応に整列したときに同じである場合、二つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列は、「同一である」と言われる。二つの配列の間の比較は、典型的には、比較ウィンドウ上の配列を比較して、配列類似性の局所的な領域を特定し、比較することによって実施される。本明細書において使用される場合、「比較ウィンドウ」とは、少なくとも約２０個の連続する位置、通常は３０〜約７５個、または４０〜約５０個の連続する位置のセグメントを指し、そのセグメントにおいて、二つの配列が最適に整列された後、配列は同数の連続位置の参照配列と比較され得る。
【０１８９】
比較のための最適な配列の整列は、デフォルトパラメータを使用して、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，ウィスコンシン州マジソン）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ  ｓｕｉｔｅのＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して実施されてもよい。このプログラムは、以下の参考文献に記載されるいくつかの整列スキームを具現化するものである。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，１９７８，Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ。Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（ｅｄ．）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５，Ｓｕｐｐｌ．３，ｐｐ．３４５−３５８；Ｈｅｉｎ  Ｊ．，１９９０，Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ｐｐ．６２６−６４５  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．，１９８９，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ．，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．，１９７１，Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．，Ｎｅｓ，Ｍ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．，１９７３，Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０。
【０１９０】
好ましくは、「配列同一性の百分率」は、最適に並置された二つの配列を、少なくとも２０個の位置の比較ウィンドウ上で比較することにより決定され、この場合において比較ウィンドウ中のポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の一部は、二配列の最適アライメントのために、参照配列（付加または欠失を含まない）と比較して２０％以下、通常は５〜１５％、または１０〜１２％の付加または欠失（すなわちギャップ）を含む場合がある。百分率は、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、合致位置数を出し、その合致位置数を、参照配列中の位置の総数（すなわちウィンドウサイズ）で割り、その結果に１００を掛け、配列同一性の百分率を出すことにより算出される。
【０１９１】
バリアントはさらに、またはあるいは、天然遺伝子、またはその一部、またはその相補物に対して実質的に相同であってもよい。そうしたポリヌクレオチドバリアントは、中程度のストリンジェントな条件下で、天然抗体をコードする天然ＤＮＡ配列（または相補配列）にハイブリダイズする能力を有する。
【０１９２】
適切な「中程度のストリンジェントな条件」には、５  Ｘ  ＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ  ８．０）の溶液中で前洗浄すること；５０℃〜６５℃、５  Ｘ  ＳＳＣ、一晩でハイブリダイズすること；次いで６５℃、２０分間で２回、各々０．１％ＳＤＳを含有する２Ｘ、０．５Ｘ、および０．２Ｘ  ＳＳＣを用いて洗浄すること、を含む。
【０１９３】
本明細書において使用される場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェントな条件」は、（１）洗浄に関し、低イオン強度および高温を採用すること、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍ  塩化ナトリウム／０．００１５Ｍ  クエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムなど；（２）ハイブリダイゼーションの間に、例えばホルムアミドなどの変性剤、例えば０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％  Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％  ポリビニルピロリドン／ｐＨ６．５の５０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液を含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドとともに、７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを４２℃で採用する；または（３）５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍ  クエン酸ナトリウム）、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ  ６．８）、０．１％  ピロリン酸ナトリウム、５ｘＤｅｎｈａｒｄｔ溶液、ソニケート処理された鮭精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％  ＳＤＳ、および１０％硫酸デキストラン、４２℃を採用し、４２℃、０．２ｘＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で洗浄し、および５５℃、５０％ホルムアミドで洗浄し、次いで、５５℃、ＥＤＴＡ含有０．１  ｘ  ＳＳＣからなる高ストリンジェント洗浄を行う。当業者であれば、必要に応じて温度、イオン強度などをどのように調整して、例えばプローブの長さなどの因子に適応させるかを認識するであろう。
【０１９４】
当業者であれば、遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は多数存在することを認識するであろう。これらポリヌクレオチドの一部は、任意の天然遺伝子のヌクレオチド配列に対し、最小の相同性を担持する。それにもかかわらずコドン使用頻度の差異により変化するポリヌクレオチドが、本発明により具体的に予期される。さらに本明細書に提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のアレルは、本発明の範囲内にある。アレルは、例えばヌクレオチドの欠失、付加および／または置換などの一つまたは複数の変異の結果として変化する内因性の遺伝子である。得られるｍＲＮＡおよびタンパク質は、必ずではないが、構造が変化または機能が変化する場合がある。アレルは、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較など）を使用して特定されてもよい。
【０１９５】
本発明のポリヌクレオチドは、化学合成、組み換え法、またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的なポリヌクレオチド合成方法は当分野で公知であり、本明細書に詳細に記載する必要はない。当業者であれば、本明細書に提供される配列、および市販のＤＮＡ合成装置を使用して、所望のＤＮＡ配列を生成することができる。
【０１９６】
本明細書においてさらに検討されるように、組み換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なベクター内に挿入されてもよく、次いで当該ベクターが適切な宿主細胞内に導入され、複製および増幅されてもよい。ポリヌクレオチドは、当分野で公知の任意の手段によって宿主細胞内に挿入され得る。細胞は、直接的な取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配、またはエレクトロポレーション法により外来性ポリヌクレオチドを導入することにより形質転換される。導入された時点で、当該外因性ポリヌクレオチドは、非統合ベクター（例えばプラスミド）として細胞内で維持され、または宿主細胞ゲノム内に統合され得る。そのように増幅されたポリヌクレオチドは、当分野で公知の方法によって宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９を参照のこと。
【０１９７】
あるいは、ＰＣＲによるＤＮＡ配列の再生が可能である。ＰＣＲ技術は当分野で公知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、第４，８００，１５９号、第４，７５４，０６５号および第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９４に記載されている。
【０１９８】
ＲＮＡは、適切なベクター中で単離ＤＮＡを使用し、適切な宿主細胞内にそれを挿入することによって取得され得る。例えば上記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９に記載されるように、細胞が複製され、ＤＡＮがＲＮＡに転写される場合、当該ＲＮＡは、当業者に公知の方法を使用して単離され得る。
【０１９９】
標準的な技術に従い適切なクローニングベクターが構築されてもよく、または当分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択されてもよい。選択されたクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に応じて変化し得るが、有用なクローニングベクターは一般的に自己複製する能力を有するものであり、特定の制限エンドヌクレアーゼに対して単一の標的を保有していてもよく、および／またはベクターを含むクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を担持してもよい。適切な例としては、プラスミドおよび細菌ウイルスが挙げられる。例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびに例えばｐＳＡ３およびｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらベクター、および他の多くのクローニングベクターは、例えばＢｉｏＲａｄ社、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社などの業者から入手可能である。
【０２００】
発現ベクターは一般的に、本発明によるポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡと一体となっている部分として、宿主細胞中で複製可能でなければならないと示唆される。適切な発現ベクターとしては限定されないが、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２に開示される発現ベクターが挙げられる。ベクターの構成要素としては限定されないが、一般的に、以下の内の一つまたは複数が挙げられる：シグナル配列、複製起源、一つまたは複数のマーカー遺伝子、適切な転写制御因子（例えば、プロモーター、エンハンサーおよびターミネーター）。発現（すなわち翻訳）に対し、通常は一つまたは複数の翻訳制御因子も必要であり、例えばリボソーム結合部位、翻訳開始部位、および停止コドンなどがある。
【０２０１】
対象のポリヌクレオチドを含有するベクターは、エレクトロポレーション法、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション、マイクロプロジェクタイル照射、リポフェクション、および感染（ベクターが、例えばワクシニアウイルスなどの感染性の実体である場合）をはじめとする多くの適切な手段のいずれかにより宿主細胞内に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドの導入に関する選択は多くの場合、宿主細胞の特徴に依存する。
【０２０２】
本発明はまた、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現する能力を有する任意の宿主細胞を、対象の抗体、ポリペプチド、またはタンパク質をコードする遺伝子の単離を目的として使用してもよい。哺乳動物の宿主細胞の非限定的な例としては、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、およびＣＨＯ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２も参照のこと。適切な非哺乳動物の宿主細胞としては、原核生物（例えば、大腸菌または枯草菌）および酵母（例えば、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、分裂酵母（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）または乳糖発酵性酵母（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ））が挙げられる。宿主細胞は、存在する場合には宿主細胞中の対応する内因性の対象抗体または対象タンパク質よりも、約５倍高いレベルで、より好ましくは１０倍高いレベルで、さらにより好ましくは２０倍高いレベルで、ｃＤＮＡを発現する。ＣＤ７０に対する特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは、免疫アッセイまたはＦＡＣＳにより行われる。対象の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞が、特定され得る。
【０２０３】
ＣＤ７０抗体を使用する方法
本発明の抗体は、治療的処置法および診断的処置法を含むがこれに限定されない、様々な用途で有用である。
【０２０４】
上述の方法により取得される抗体（例えば、一特異性および二特異性）は、医薬品として使用され得る。一部の実施形態では、かかる医薬品は、癌の治療に使用され得る。一部の実施形態では、癌は、例えばリンパ腫または白血病などの造血系が起源の癌である。一部の実施形態では、癌は、腎細胞癌、グリア芽腫、例えば低グレードグリオーマなどのグリオーマ、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病（ＨＤ）、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、または非小細胞肺癌である。
【０２０５】
一部の実施形態では、ＣＤ７０を発現する悪性細胞を有する対象において、腫瘍の増殖または進行を阻害する方法が提供され、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載されるＣＤ７０抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）を含む組成物の有効量を投与することを含む。他の実施形態では、対象において、ＣＤ７０を発現する細胞の転移を阻害する方法が提供され、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載されるＣＤ７０抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）を含む組成物の有効量を投与することを含む。他の実施形態では、対象において、悪性細胞中の腫瘍の退縮を誘導する方法が提供され、当該方法は、その必要のある対象に対し、本明細書に記載されるＣＤ７０抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）を含む組成物の有効量を投与することを含む。
【０２０６】
一部の実施形態では、本発明による抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）は、その必要のある患者における癌の治療のための医薬品の製造において使用され得る。
【０２０７】
一部の実施形態では、治療は、抗体療法、化学療法、サイトカイン療法、標的化療法、ワクチン療法、樹状細胞療法、遺伝子治療、ホルモン療法、外科的切除、レーザ光治療および放射線療法の群から選択される、癌に対する一つまたは複数の治療と組み合わされ得る。
【０２０８】
たとえば、一部の実施形態では、本発明のＣＤ７０抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体を標的とする例えばスニチニブおよびパゾパニブなどの低分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、例えばベバシズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体、ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）の阻害剤であるテムシロリムス、ならびに高用量ＩＬ−２を用いた治療と併用されて（例えば、前に、同時に、または後に）、患者に投与される。一部の実施形態では、本発明のＣＤ７０抗体（例えば、ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性抗体）は、以下のうちの一つまたは複数と併用されて患者に投与される：抗ＰＤ−１抗体（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはＰＦ−０６８０１５９１）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブまたはデュルバルマブ）、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＰＦ−０４５１８６００）、抗４−１ＢＢ抗体（例えば、ＰＦ−０５０８２５６６）、抗ＭＣＳＦ抗体（例えば、ＰＤ−０３６０３２４）、抗ＧＩＴＲ抗体、および／または抗ＴＩＧＩＴ抗体。
【０２０９】
本発明による抗体（例えば、一特異性または二特異性）の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸液、移植（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎまたはｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）をはじめとする任意の簡便な方法で実行されてもよい。本明細書に記載される組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、頭蓋内、節内、髄内、筋肉内、静脈内注射もしくはリンパ管内注射、または腹腔内に患者に投与されてもよい。一つの実施形態では、本発明の抗体組成物は、静脈内注射により投与されることが好ましい。
【０２１０】
一部の実施形態では、抗体（例えば、一特異性または二特異性）の投与は、体重１ｋｇあたり例えば約０．０１〜約２０ｍｇの投与を含んでもよく、当該範囲内にある１ｋｇあたりのｍｇのすべての整数値を含む。一部の実施形態では、抗体の投与は、体重１ｋｇあたり約０．１〜１０ｍｇの投与を含んでもよく、当該範囲内にある１ｋｇあたりのｍｇのすべての整数値を含む。抗体は、一つまたは複数の投与量で投与されてもよい。一部の実施形態では、当該抗体の有効量は、単回投与で投与されてもよい。一部の実施形態では、当該抗体の有効量は、ある期間にわたる複数回の投与で投与されてもよい。投与のタイミングは、担当医師の判断内にあり、患者の臨床状態に依存する。個々のニーズは変化する一方で、特定の疾患または状態に対する所与の抗体（例えば、一特異性または二特異性）の有効量の最適範囲の決定は、当業者の技術範囲内にある。有効量とは、治療的または予防的な利益を提供する量を意味する。投与される用量は、レシピエントの年齢、健康状態および体重、もしあれば併用治療の種類、治療頻度、および望ましい効果の性質に依存する。一部の実施形態では、ヘテロ多量体抗体または当該抗体を含む組成物の有効量は、非経口投与される。一部の実施形態では、投与は、静脈内投与であってもよい。一部の実施形態では、投与は、腫瘍内注射により直接行われてもよい。
【０２１１】
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＣＤ７０抗体は、診断目的で使用されてもよく、そうしたアッセイにおいて、サンプル中（例えば免疫組織化学的アッセイ）、または患者中のＣＤ７０タンパク質が特定される。
【０２１２】
組成物
一つの態様では、薬学的に許容可能な担体中において、上述の本発明の抗体（一特異性または二特異性）またはその一部を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態では、本発明のポリペプチドは、中性型（両性イオン型を含む）で、または陽性荷電種もしくは陰性荷電種として存在してもよい。一部の実施形態では、ポリペプチドは対イオンと錯体化され、「薬学的に許容可能な塩」を形成してもよく、それらは、一つまたは複数のポリペプチドと、一つまたは複数の対イオンを含む錯体と呼称され、この場合において対イオンは、薬学的に許容可能な無機および有機の酸ならびに塩基から誘導される。
【０２１３】
抗体（例えば、一特異性または二特異性）またはその部分は、単独で投与されてもよく、または本発明の一つもしくは複数の他のポリペプチドと併用されて、または一つもしくは複数の他の薬剤と併用されて（またはそれらの任意の組み合わせとして）投与されてもよい。ゆえに本発明の医薬組成物、方法および使用は、以下に詳述されるように他の活性剤との組み合わせ（共投与）の実施形態も包含する。
【０２１４】
本明細書において使用される場合、本発明の抗体と一つまたは複数の他の治療剤に関して、「共投与」、「共投与される」および「併用される」という用語は、以下を意味することが意図され、および以下を指し、以下を含む：（ｉ）当該構成要素が、単一剤型中に一緒に製剤化され、当該構成要素が実質的に同時に当該患者に放出される場合、治療の必要のある患者への本明細書に開示される抗体および治療剤の当該組み合わせの同時投与；（ｉｉ）当該構成要素が互いに別個の剤型に別々に製剤化され、当該患者に実質的に同時に摂取され、そのとき当該構成要素が当該患者に、実質的に同時に放出される場合、治療の必要のある患者への本明細書に開示される抗体および治療剤の当該組み合わせの実質的な同時投与；（ｉｉｉ）当該構成要素が互いに別個の剤型に別々に製剤化され、各投与の間に意義のある間隔を置いて当該患者に連続するときに摂取され、そのとき当該構成要素が当該患者に、実質的に異なるときに放出される場合、治療の必要のある患者への本明細書に開示される抗体および治療剤の当該組み合わせの連続投与；および（ｉｖ）当該構成要素が、制御された様式で当該構成要素を放出する単一剤型中に一緒に製剤化され、当該患者に同じときに、および／もしくは異なるときに、同時に、連続して、ならびに／または重複して放出され、この場合において各部分は、同じ経路または異なる経路により投与され得る場合、治療の必要のある患者への本明細書に開示される抗体および治療剤の当該組み合わせの連続投与。
【０２１５】
概して、本明細書に開示される抗体（一特異性または二特異性）またはその部分は、一つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤と関連付けられた製剤としての投与に適している。本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を記載するために使用される。賦形剤の選択は、例えば特定の投与様式、可溶性および安定性に対する当該賦形剤の効果、および剤型の性質などの因子に大きく依存する。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な賦形剤」とは、生理学的に適合性のあるすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容可能な賦形剤のいくつかの例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、およびそれらに類するもの、ならびにそれらの組み合わせである。多くの場合において、例えば糖類、例えばメタノールなどのポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含むことが好ましいであろう。薬学的に許容可能な物質の追加的な例は、湿潤剤、または抗体の保存可能期間または有効性を高める例えば湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤または緩衝剤などの少量の補助物質である。
【０２１６】
本発明の医薬組成物、およびその調製方法は、当業者には容易に明白となるであろう。そのような組成物およびその調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見出され得る。医薬組成物は、ＧＭＰ条件下で製造されることが好ましい。
【０２１７】
本発明の医薬組成物は、単回単位用量として、または複数の単回単位用量として、大量に調製され、パッケージングされ、または販売されてもよい。本明細書で使用する「単位用量」とは、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別的な量のことである。活性成分の量は概して対象に投与されるであろう活性成分の用量と等しく、またはそうした用量の好都合な割合、例えばそうした用量の半分または３分の１などである。当分野に受容されるペプチド、タンパク質または抗体の任意の投与方法が、本明細書に開示されるヘテロ二量体タンパク質およびその部分に対して、適切に採用され得る。
【０２１８】
本発明の医薬組成物は、典型的には非経口投与に適している。本明細書において使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」は、対象の組織に身体的な穴を形成させることを特徴とする任意の投与経路、および組織中の当該穴を通じた医薬組成物の任意の投与経路を含み、したがって一般的に、血流、筋肉または内部臓器内への直接的な投与がもたらされる。ゆえに非経口投与としては限定されないが、組成物の注射による医薬組成物の投与、外科的切開を通じた組成物の適用による医薬組成物の投与、組織貫通性の非外科的創傷を通じた組成物の適用による医薬組成物の投与などが挙げられる。特に、非経口投与は、限定されないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、頭蓋内、滑液嚢内の注射または点滴、および腎臓透析点滴法を含むことが予期される。好ましい実施形態としては、静脈内経路および皮下経路が挙げられる。
【０２１９】
非経口投与に適した医薬組成物の製剤は、典型的には概して、例えば滅菌水または滅菌等張生理食塩水などの薬学的に許容可能な担体と組み合わせた活性成分を含む。そうした製剤は、ボーラス投与または連続投与に適した形態で調製され、パッケージされ、または販売されてもよい。注射用製剤は、例えばアンプル、または保存剤を含む複数投与量容器での単位剤型で調製され、パッケージされ、または販売されてもよい。非経口投与用製剤としては限定されないが、油状ビヒクルもしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、エマルション、ペーストなどが挙げられる。そうした製剤は、限定されないが、懸濁剤、安定剤、または分散剤をはじめとする一つまたは複数の追加の成分をさらに含んでもよい。非経口投与用製剤の一つの実施形態では、活性成分は、適切なビヒクル（例えば、滅菌された発熱物質を含まない水）を用いた再構成用の乾燥（すなわち粉末または顆粒）形態で提供され、その後、再構成された組成物が非経口投与される。非経口製剤は、例えば塩、炭水化物および緩衝剤（好ましくは３〜９のｐＨまで）などの賦形剤を含有し得る水性溶液も含むが、一部の応用に対しては、滅菌非水溶液として、または例えば滅菌された発熱物質を含まない水などの適切なビヒクルと併せて使用される乾燥型として、より適切に製剤化されてもよい。非経口投与の形態の例としては、例えば水性プロピレングリコールまたはデキストロース溶液などの滅菌水溶液での溶液または懸濁液が挙げられる。そうした剤形は、所望の場合、適切に緩衝されることができる。有用な他の非経口投与用製剤としては、微結晶形態の活性成分を含む製剤、またはリポソーム調製物が挙げられる。非経口投与用の製剤は、即時放出および／または調整放出であるように製剤化されてもよい。調整放出製剤には、制御放出製剤、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス型放出製剤、標的化放出製剤、およびプログラム化放出製剤が含まれる。例えば一つの例では、滅菌注射溶液は、必要に応じて上記に列挙される成分のうちの一つまたは組み合わせと、適切な溶媒中での必要な量の例えば二特異性抗体などのヘテロ二量体タンパク質を組み合わせ、その後、ろ過滅菌されることにより調製され得る。概して、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒を含有する滅菌ビヒクル、および上に列記される物質から必要とされる他の成分と組み合わせることにより調製される。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥法および凍結乾燥法であり、それら方法により、従前に滅菌ろ過されたその溶液から、活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末が得られる。例えばレシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要な粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、適切な溶液の流動性が維持され得る。注射用組成物の持続的吸収は、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンなどの吸収を遅延させる剤を組成物中に含有することによりもたらされ得る。
【０２２０】
投薬レジメンは、最適な望ましい応答をもたらすように調整されてもよい。例えば単回ボーラスを投与してもよく、数回に分けられた投与量を経時的に投与してもよく、または治療状況の要件に示されるように投与量を相対的に減少または増加させてもよい。投与の簡易性および用量の均一性のために、単位剤型で非経口組成物を製剤化することが特に有益である。本明細書において使用される場合、単位剤型とは、治療される患者／対象に対する単位形態の用量として適合された、物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要な薬学的担体と関連付けられて、望ましい治療効果を生じさせるよう算出された所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤型の仕様は概して、（ａ）化学療法剤の固有の特性および達成される特定の治療的効果または予防的効果、および（ｂ）個体の治療感受性に関し、当該活性化合物の調合分野に内在する制限により決定され、および直接的に依存する。
【０２２１】
ゆえに当業者であれば、本明細書に提供される開示内容に基づいて、投与量および投薬レジメンが、当該治療分野に公知の方法に従い調整されることを認識するであろう。すなわち、最大許容投与量は容易に確立されることができ、患者に検出可能な治療利益をもたらす有効量も、患者に検出可能な治療利益をもたらす各剤の投与に関する時間的要件と同様に決定され得る。したがって、特定の投与量および投薬レジメンが本明細書に例示されているが、これら例示は、本発明の実施において患者に提供され得る投与量および投薬レジメンを限定することはない。
【０２２２】
用量の値は、軽減される状態のタイプおよび重大度で変化する場合があり、単回投与または複数回投与を含む場合があることに注意されたい。任意の特定の対象について、個々の必要性、および組成物の投与を実施または監督する者の専門的判断に従って、特定の投薬レジメンを経時的に調整すべきであり、本明細書に記載の用量範囲は、単なる例示であって、特許請求される組成物の範囲または実施を限定するものではないことがさらに理解される。さらに、本発明の組成物を用いた投薬レジメンは、疾患のタイプ、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、状態の重大度、投与経路、および採用される特定の抗体を含む、様々な因子に基づくものであり得る。従って、投薬レジメンは大きく変化することができ、しかし標準的な方法を使用して日常的に決定することができる。例えば、薬物動態パラメータまたは薬力学的パラメータに基づいて投与量が調節されてもよく、そうしたパラメータは、例えば毒性作用および／または実験値などの臨床効果を含み得る。ゆえに本発明は、当業者によって決定される同一患者内での用量漸増を包含する。適切な用量およびレジメンの決定は関連分野において公知であり、本明細書に開示される教示を考慮することで当業者により包含されることが理解されるであろう。
【０２２３】
概して、本明細書に開示される抗体（一特異性または二特異性）の投与に関し、候補用量が毎日、毎週、隔週、３週毎、４週毎、５週毎、６週毎、７週毎、８週毎、１０週毎、１２週毎、または１２週毎以上で投与され得る。数日以上にわたる反復投与に関し、状態に応じて、症状の望ましい抑制が発生するまで、または充分な治療レベルが達成されて、例えば癌に関連した症状が減少するまで、治療が継続される。この治療法の進行は、従来的な技術およびアッセイにより簡単に監視される。投薬レジメン（使用される抗ＦＬＴ一特異性抗体または二特異性抗体を含む）は、経時的に変化することができる。
【０２２４】
一部の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ、〜１００ｍｇ／ｋｇ以上のおよそいずれかの範囲の用量で、毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの１日投与量が用いられてもよい。
【０２２５】
一部の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ、〜１００ｍｇ／ｋｇ以上のおよそいずれかの範囲の用量で、毎週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの毎週投与量が用いられてもよい。
【０２２６】
一部の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ、〜１００ｍｇ／ｋｇ以上のおよそいずれかの範囲の用量で、隔週投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの隔週投与量が用いられてもよい。
【０２２７】
一部の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ、〜１００ｍｇ／ｋｇ以上のおよそいずれかの範囲の用量で、３週間毎に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの３週間毎の投与量が用いられてもよい。
【０２２８】
一部の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ、〜１００ｍｇ／ｋｇ以上のおよそいずれかの範囲の用量で、毎月または４週間毎に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの毎月の投与量が用いられてもよい。
【０２２９】
他の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、約０．０１ｍｇ〜約１２００ｍｇ以上の範囲の用量で、毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの１日投与量が用いられてもよい。
【０２３０】
他の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、約０．０１ｍｇ〜約２０００ｍｇ以上の範囲の用量で、毎週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの毎週投与量が用いられてもよい。
【０２３１】
他の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、約０．０１ｍｇ〜約２０００ｍｇ以上の範囲の用量で、２週間毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの隔週投与量が用いられてもよい。
【０２３２】
他の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、約０．０１ｍｇ〜約２５００ｍｇ以上の範囲の用量で、３週間毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、または約２５００ｍｇの３週間毎の投与量が用いられてもよい。
【０２３３】
他の実施形態では、候補用量は、上述の因子に応じて、約０．０１ｍｇ〜約３０００ｍｇ以上の範囲の用量で、４週間毎または１か月毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、または約３０００ｍｇの毎月投与量が用いられてもよい。
【０２３４】
キット
本発明はまた、本方法における使用のためのキットを提供する。本発明のキットは、一つまたは複数の容器を含み、当該容器は、本明細書に記載の抗体（例えば、一特異性または二特異性）、および本明細書に記載の方法のいずれかに従う使用に関する説明書を含有する。概してこれらの説明書は、上述の治療的処置に関する抗体タンパク質の投与に関する説明を含む。
【０２３５】
本明細書に記載の抗体（例えば、一特異性または二特異性）の使用に関する説明書は概して、意図される処置に対する用量、投薬スケジュールおよび投与経路に関する情報を含む。容器は、単位投与量、バルクパッケージ（例えば複数投与量のパッケージ）またはサブ単位投与量であってもよい。本発明のキット中に供給される説明書は多くの場合、ラベルまたは添付文書（例えばキットに含まれる紙シート）上の書面の説明書であるが、機械読み取り可能な説明書（例えば、磁気記憶ディスクまたは光学式記憶ディスク上で実行される説明書）も受容可能である。
【０２３６】
本発明のキットは適切な梱包材料中にある。適切な梱包材料としては限定されないが、バイアル、ボトル、瓶、柔軟性のある梱包材料（例えば、密閉Ｍｙｌａｒバッグまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。さらに例えば吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）、または例えばミニポンプなどの輸液用器具などの特定のデバイスと組み合わせた使用のための梱包材料も予期される。キットは、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器も、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の活性剤の少なくとも一つは、二特異性抗体である。容器はさらに、第二の薬学的に活性な剤を含んでもよい。
【０２３７】
キットは任意で、例えば緩衝液および説明情報などの追加的な構成要素を提供してもよい。通常、キットは、容器と、当該容器上にある、もしくは当該容器と関連づけられたラベルまたは添付文書を含む。
【０２３８】
以下の実施例は、説明目的に対してのみ提供されており、本発明範囲を限定する意図は全くない。実際に、本明細書に示される、および本明細書に記載されるものに加えて本発明の様々な改変が前述の説明から当業者には明白であり、添付の請求の範囲内に含まれる。
【実施例】
【０２３９】
実施例１：ヒトＣＤ７０の動態およびアフィニティ／３７℃でのＣＤ７０抗体の相互作用の決定
本明細書に開示される抗ＣＤ７０抗体の動態およびアフィニティは、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００表面プラズモン共鳴バイオセンサー（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）上で計測され得る。
【０２４０】
実施例２：ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性ＩｇＧをインビトロで使用したＲＣＣ細胞株のＴ細胞介在性殺傷
ヒト抗ＣＤ７０抗体およびヒト抗ＣＤ３（ｈ２Ｂ４−ＶＨ−ｈｎｐｓ  ＶＬ−ＴＫ（Ｈ２Ｂ４））抗体は、ヒトＩｇＧ２（配列番号２７９）のヒンジ領域中の２２３位、２２５位および２２８位（例えば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５ＥまたはＥ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））で、およびＣＨ３領域中の４０９位または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵナンバリングスキーム））で、二特異性交換のために、一つのアーム上でＥＥＥＥで操作され、他方のアーム上でＲＲＲＲで操作されたヒトＩｇＧ２ｄＡ＿Ｄ２６５Ａとして発現される。ＣＤ７０／ＣＤ３二特異性抗体も、２６５位（ＥＵナンバリングスキーム）でＤからＡへの変異を有する。
【０２４１】
ヒトＰＢＭＣ由来のＣＤ３＋Ｔ細胞は、Ｐａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してネガティブ選択される。標的発現（７８６−Ｏ）細胞およびＣＤ３＋Ｔ細胞は、それぞれ２００００細胞および１０００００細胞／ウェルで透明なＵ底プレート上に播種される。細胞は、８倍連続希釈された二特異性抗体で処置される。ＲＣＣ細胞の枯渇は、処置の２４時間後のフローサイトメトリー解析により決定される。細胞枯渇は、対照処理細胞との対照により測定される。ＥＣ５０は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより算出される。
【０２４２】
実施例３：ＣＤ７０−ＣＤ３二特異性ＩｇＧは、ＲＣＣ皮下異種移植片モデルにおいて、腫瘍除去を誘導する
ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスに、７８６−Ｏ腫瘍を皮下移植し、腫瘍体積が２００ｍｍ３に達した時点で、マウスに２０００万個の拡張Ｔ細胞をそれぞれ腹腔内に投与する。２日後、抗ＣＤ７０二特異性抗体を３００、１００または３０ｕｇ／ｍＬで尾静脈注射を介して静脈内投与し、最適な二特異性抗体の投与量を決定する。
【０２４３】
材料および方法
ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスの毛を剃って準備して、右脇腹上に腫瘍を皮下移植する。ＣＤ７０を発現することが知られている７８６−Ｏ腫瘍細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ中で拡張させる。０日目に７８６−Ｏ細胞を無血清ＲＰＭＩ中に必要濃度で再懸濁し、動物１匹当たり５００万個の細胞を注射する。腫瘍細胞は、動物１匹当たり、１００ｕＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）と混合した１００ｕＬの無血清ＲＰＭＩ中で皮下注射する。腫瘍移植後、ただちにすべての動物に対し、０日目の基準体重が記録される。腫瘍は、Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ  Ｃａｌｉｐｅｒｓ（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ社）を使用して９日目に始まり週に２回測定され、体重が記録される。１４日目、腫瘍が２００ｍｍ３に達したとき（標準誤差８．３９）４０匹の腫瘍担持マウスを各群当たり１０匹の４群に無作為化する。Ｔ細胞を溶解し、拡張させて、その後、無血清ＲＰＭＩ中に必要濃度で再懸濁し、動物１匹当たり２０００万個のＴ細胞を注射する。Ｔ細胞は、動物１匹当たり、２００ｕＬの無血清ＲＰＭＩ中で腹腔内注射される。２日後、動物１匹当たり、３００、１００、または３０ｕｇ／ｍＬで尾静脈を介して二特異性抗体が静脈内投与される。非処置群が試験エンドポイント（１５００ｍｍ３の腫瘍体積）に達するまで、週に２回、腫瘍が測定され、体重が記録される。
【０２４４】
腫瘍体積（平均および誤差ＳＥＭ）をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ上にプロットし、一元配置分散分析を使用して反復測定結果を用いて統計が算出される。
【０２４５】
開示された教示は、様々な用途、方法、キットおよび組成物を参照して説明されてきたが、本明細書の教示および以下の特許請求される発明から逸脱することなく、様々な変更および修正を行うことができることが理解されよう。前述の実施例は、開示された教示をより良く図示するために提供されており、本明細書に提示される教示の範囲を制限することを意図していない。本教示はこれらの例示的実施形態の観点から説明されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数の変形および修正が、過度の実験を伴わずに可能であることを容易に理解するであろう。こうした変形および修正はすべて、現在の教示の範囲内である。
【０２４６】
本明細書に引用されたすべての参照文献であって、特許、特許出願、論文、教科書などを含む参照文献、およびそこに引用される参照文献は、それらがまだ参照されていない範囲で、その全体が参照により本明細書に援用される。組み込まれた文献および類似の資料のうちの一つ以上が、本出願とは異なるものであるか、またはこれに矛盾する場合、定義された用語、用語使用、記載された技術、またはこれに類するものを含むがこれに限定されないが、本出願が制御する。
【０２４７】
前述の説明および実施例は、本発明のある特定の実施形態を詳細に説明し、発明者によって意図される最良のモードを記述する。しかしながら、本文中の前述がどれだけ詳細に記載されようとも、本発明は多くの方法で実施されてもよく、本発明は添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈されるべきであることが理解される。
【配列表】
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【国際調査報告】
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