(57)【要約】本開示は、マスクされた抗原結合タンパク質を含む、低ｐＨ医薬組成物及び／又は製剤に関する。一態様において、（ａ）（ｉ）抗原に結合する、抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）；及び（ｉｉ）ＡＢ１に結合したマスキングドメイン（ＭＤ１）；を含むマスクされた抗原結合タンパク質であって、前記マスキングドメインが、ａ．前記抗原へのＡＢ１の結合を阻害若しくは低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ１）；ｂ．タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ１への結合又はＰＲ１の切断が、前記抗原へのＡＢ１結合を増加する、タンパク質認識部位（ＰＲ１）；を含む、マスクされた抗原結合タンパク質；（ｂ）少なくとも１種類の緩衝剤；並びに（ｃ）少なくとも１種類のポリオール；を含む医薬組成物が提供される。
2021532156.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（ｉ）抗原に結合する、抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）；及び
（ｉｉ）ＡＢ１に結合したマスキングドメイン（ＭＤ１）；を含むマスクされた抗原結合タンパク質であって、前記マスキングドメインが、
ａ．前記抗原へのＡＢ１の結合を阻害若しくは低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ１）；
ｂ．タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ１への結合又はＰＲ１の切断が、前記抗原へのＡＢ１結合を増加する、タンパク質認識部位（ＰＲ１）；を含む、マスクされた抗原結合タンパク質；
（ｂ）少なくとも１種類の緩衝剤；並びに
（ｃ）少なくとも１種類のポリオール；
を含む医薬組成物であって、
前記医薬組成物のｐＨが、前記マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１及びＭＤ１領域の等電点（ｐＩ）未満である、医薬組成物。
【請求項２】
前記マスクされた抗原結合タンパク質がさらに；
（ｉｉｉ）第２抗原に結合する第２抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ２）；並びに
（ｉｖ）ＡＢ２に結合された第２マスキングドメイン（ＭＤ２）であって、前記第２マスキングドメインが、
ａ．前記抗原へのＡＢ２の結合を阻害又は低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ２）；及び
ｂ．タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ２への結合又はＰＲ２の切断が、前記第２抗原へのＡＢ２結合を増加する、タンパク質認識部位（ＰＲ２）：を含む、第２マスキングドメイン（ＭＤ２）；を含み、
前記医薬組成物のｐＨが、前記マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２領域の等電点（ｐＩ）未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記マスクされた抗原結合タンパク質が、Ｐｒｏｂｏｄｙ又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＡＢ１及び／又はＡＢ２がｓｃＦｖ又はＦａｂである、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＡＢ１及び／又はＡＢ２が、細胞の表面に発現された抗原に結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１種の緩衝剤が、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、及び２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸塩又はその組合せからなる群から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記少なくとも１種の緩衝剤が、約５〜約２００ｍＭの濃度範囲で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１種の緩衝剤が、約１０〜約５０ｍＭの濃度範囲で存在する、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記少なくとも１種のポリオールが、サッカリド、環状多糖、糖アルコール、線状分岐デキストラン、及び線状非分岐デキストラン、又はその組合せからなる群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記サッカリドが単糖又は二糖である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ポリオールが、ショ糖、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリトリトール、イソマルト、グリセロール、シクロデキストリン、カプチゾール又はその組合せからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１種のポリオールが、約１〜約２０％（ｗ／Ｖ）の範囲の濃度で存在する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１種のポリオールが、約９〜約１２％（ｗ／Ｖ）の範囲の濃度で存在する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
少なくとも１種類の界面活性剤をさらに含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８、プルロニック（登録商標）Ｆ６８、トリトンＸ−１００、ポリオキシエチレン３、及びＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、及びＰＥＧ８０００又はその組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
１６を参照されたい。
【請求項１６】
前記少なくとも１種の界面活性剤が、約０．００１〜約０．５％（ｗ／Ｖ）の範囲の濃度で存在する、請求１４又は１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１種の界面活性剤が、約０．００１〜約０．０１％（ｗ／Ｖ）の範囲の濃度で存在する、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物のｐＨが、ＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１、及び／又はＭＤ２のｐＩよりも約２ｐＨ単位低い、請求項１から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物のｐＨが、約３．５を超える、請求項１から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記組成物のｐＨが、７．０〜３．６の範囲である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記組成物のｐＨが、４．０〜５．０の範囲である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記組成物のｐＨが、３．５〜５．５の範囲である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記組成物のｐＨが、約４．２又は３．６である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
１５０〜５００ｍＯｓｍの範囲のモル浸透圧濃度を有する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
アミノ酸賦形剤をさらに含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記アミノ酸賦形剤が、約０．１〜約２０ｍＭの濃度範囲で存在する、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、１０ｍＭグルタミン酸塩、９％（ｗ／Ｖ）スクロース及び０．０１％（ｗ／Ｖ）ポリソルベート８０を含み、且つ前記医薬組成物のｐＨが４．２又は３．６である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記マスクされた抗原結合タンパク質が、約０．１〜約３０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で存在する、請求項１から２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記マスクされた抗原結合タンパク質が、約５０μｇ〜約２００ｍｇの範囲の量で存在する、請求項１から２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
凍結乾燥組成物である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
液体組成物である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
再構成凍結乾燥組成物である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記組成物が液体組成物であり、且つ２〜８℃、４℃及び／又は２５℃にて０週間、１週間、２週間、４週間、２か月間、６か月間、１年間及び／又は２年間貯蔵した後に安定である；或いは、前記組成物が凍結乾燥組成物であり、且つ２〜８℃、４℃及び／又は２５℃にて０週間、１週間、２週間、４週間、２か月間、６か月間、１年間、２年間、３年間、４年間及び／又は５年間貯蔵した後に安定である、請求項１から３２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
抗体凝集の量が低減される、請求項１から３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）によって測定される、高分子量抗体種の量が低減される、請求項１から３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
抗体凝集及び／又は高分子量抗体種の量が、参照医薬組成物と比較して、前記医薬組成物よりも高いｐＨにて約１分の１、約２分の１、約３分の１、約４分の１、約５分の１、約６分の１、約７分の１、約８分の１、約９分の１又は約１０分の１に低減される、請求項１から３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記ｐＩが、Ｂｊｅｌｌｑｖｉｓｔアルゴリズムを用いて測定又は決定される、請求項１から３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
その必要がある対象において癌を治療する方法であって、請求項１から３７のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、参照により本明細書に組み込まれる２０１８年７月３１日出願の米国仮特許出願第６２／７１２，９０６号明細書の利益を主張するものである。
【０００２】
本開示は、マスク抗体結合タンパク質を含む、低ｐＨ医薬組成物及び／又は製剤に関する。
【０００３】
参照により組み込まれる材料の相互参照
本明細書と同時に提出されたコンピュータで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列リストは、その全体が参照によって援用され、当該リストは、以下のとおりである：ＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル名「５２８１１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、サイズ：１２，００７バイト；２０１８年７月３０日作製。
【背景技術】
【０００４】
タンパク質性医薬品は、（前）臨床開発において及び市販製品として最も成長著しい治療薬に含まれる。低分子化学薬剤と比較して、タンパク質医薬品は、比較的低い濃度で高い特異性及び活性を有し、通常、種々の癌、自己免疫疾患及び代謝障害などの大きな影響のある疾患の療法を提供する（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４  Ｊｕｌ；３２（７）：３７２−８０、Ｗａｎｇ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．１９９９  Ａｕｇ  ２０；１８５（２）：１２９−８８）。
【０００５】
工業規模精製プロセスの進歩により、現在、組換えタンパク及び抗体などのタンパク質性医薬品は、製造時に高い純度で得ることができる。しかしながら、抗体などの組換えタンパク質の安定性はわずかであり、化学的及び物理的劣化の両方を非常に受けやすい。化学的劣化は、脱アミド、酸化、新たなジスルフィド架橋の切断若しくは形成、加水分解、異性化又は脱グリコシルなどの共有結合を伴う修飾を指す。物理的劣化には、タンパク質のアンフォールディング、表面への望ましくない吸着及び凝集が含まれる。これらの物理的及び化学的な不安定性への対処は、タンパク質医薬品の開発において最も難しい課題の１つである（Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔ  ２００３，ｐｐ．１３２５−１３３６、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４  Ｊｕｌ；３２（７）：３７２−８０）。
【０００６】
タンパク質凝集は、タンパク質の物理的不安定性の主要な現象であり、溶媒と疎水性タンパク質残基との間の熱力学的に不利な相互作用を最小限に抑える固有の傾向に起因して生じる。タンパク質凝集は、製造、リフォールディング、精製、滅菌、輸送及び保管プロセス中に日常的に起こるため、特に問題がある。凝集は、タンパク質又は抗体の天然状態が熱力学的に極めて有利な（例えば、中性ｐＨ及び３７℃）溶液条件下であっても、ストレスの非在下であっても生じる場合がある（Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔ  ２００３，ｐｐ．１３２５−１３３６、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４  Ｊｕｌ；３２（７）：３７２−８０、Ｗａｎｇ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．１９９９  Ａｕｇ  ２０；１８５（２）：１２９−８８、Ｍａｈｌｅｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．２００９  Ｓｅｐ；９８（９）：２９０９−３４）。
【０００７】
抗体凝集は、生物学的活性を損なうことから、問題がある。さらに、抗体の凝集は、薬物製品の望ましくない外観をもたらし、また最終産物から凝集体を除去するために必要とされる綿密な精製工程のために、産物収率が低下する。より最近では、凝集したタンパク質の存在により（ヒト化タンパク質又は完全なヒトタンパク質であっても）、患者は、活性タンパク質／タンパク質単量体に対する免疫反応を起こすことになり、その結果、中和抗体及び薬物耐性の形成又は他の有害な副作用がもたらされるというリスクが顕著に増大する可能性があるといった懸念も増加している（Ｍａｈｌｅｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．２００９  Ｓｅｐ；９８（９）：２９０９−３４）。
【０００８】
概して、様々なメカニズムによってタンパク質凝集を最小限に抑えるいくつかの試みが報告されている。抗体などのタンパク質を、それらの一次構造を改変して、それにより内部の疎水性を増大させ、且つ外部の疎水性を低減することによって安定化し、こうして凝集体形成及び他の化学的変化から保護することができる。しかしながら、タンパク質又は抗体の遺伝子操作は、機能性を損ない、且つ／又は免疫原性を増大し得る。別の手法では、凝集体の解離（「脱凝集」と呼ばれる）に着目し、温度、圧力、ｐＨ及び塩などの様々なメカニズムを使用することによって機能性天然単量体を回収する。現時点では、タンパク質及び抗体凝集体は、主に下流処理の研磨（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ）工程において不純物として除去される。しかしながら、高分子量（ＨＭＷ）抗体種のレベルが高い場合には、顕著な量のＨＭＷ除去により、かなりの収率損失が生じるだけでなく、堅牢な下流プロセスの設計が困難なものとなる（Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．９，Ｓｅｐｔ  ２００３，ｐｐ．１３２５−１３３６）。
【０００９】
生物学及びバイオテクノロジー用途におけるタンパク質の安定性及び活性の維持は、深刻な課題を提起する。抗体又は治療用タンパク質の安定化を増強し、配合、充填、輸送、保管及び投与中の凝集並びに変性又は劣化を低減することにより、機能欠損及び有害な免疫原性反応を防止する最適化された医薬組成物が当技術分野において必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本開示は、マスクされた抗原結合タンパク質の凝集及び／又は高分子量種を最小限にする、又は低減するのに有用な、医薬組成物並びに／或いは医薬製剤を提供する。一部の実施形態において、本開示内容は、（Ａ）（ｉ）抗原に結合する、抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）；及び（ｉｉ）ＡＢ１に結合したマスキングドメイン（ＭＤ１）；を含むマスクされた抗原結合タンパク質（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグなど）であって、マスキングドメインが、（ａ）抗原へのＡＢ１の結合を阻害若しくは低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ１）；（ｂ）タンパク質認識部位（ＰＲ１）；を含み、タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ１への結合又はＰＲ１の切断が、抗原へのＡＢ１結合性を増加する、マスクされた抗原結合タンパク質と、（Ｂ）少なくとも１種類の緩衝剤と、（Ｃ）少なくとも１種類のポリオールと、を含む医薬組成物又は製剤を提供し、その医薬組成物又は製剤のｐＨは、マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１及びＭＤ１領域の等電点（ｐＩ）未満である。
【００１１】
一部の他の実施形態において、本開示内容は、（Ａ）（ｉ）抗原に結合する、第１抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）；及び（ｉｉ）（ａ）抗原へのＡＢ１の結合を阻害若しくは低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ１）；（ｂ）タンパク質認識部位（ＰＲ１）；を含む、ＡＢ１に結合した第１マスキングドメイン（ＭＤ１）であって、タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ１への結合又はＰＲ１の切断が、抗原へのＡＢ１結合性を増加する、第１マスキングドメイン（ＭＤ１）；（ｉｉｉ）第２抗原に結合する、第２抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ２）；並びに（ｖｉ）ＡＢ２に結合した第２マスキングドメイン（ＭＤ２）であって、（ａ）抗原へのＡＢ２の結合を阻害若しくは低減するマスキングペプチド又はマスキングポリペプチド（ＭＰ２）；（ｂ）第２タンパク質認識部位（ＰＲ２）；を含み、タンパク質又はプロテアーゼによるＰＲ２への結合又はＰＲ１の切断が、第２抗原へのＡＢ１２合性を増加する、第２マスキングドメイン（ＭＤ２）；を含む、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグなど）と、（Ｂ）少なくとも１種類の緩衝剤と、（Ｃ）少なくとも１種類のポリオールと、を含む医薬組成物又は製剤も提供し、その医薬組成物又は製剤のｐＨは、マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２領域の等電点（ｐＩ）未満である。
【００１２】
一部の態様において、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグなど）のＡＢ１及び／又はＡＢ２領域は、ｓｃＦｖ若しくはＦａｂであり、且つ／又は細胞表面に発現する抗原に結合する（例えば、ＣＤ３など）。
【００１３】
本開示の医薬組成物又は製剤は、少なくとも１種の緩衝剤を含む。一部の実施形態では、緩衝剤は、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、及び２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸塩又はその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態において、その少なくとも１種類の緩衝剤は、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ（例えば、５ｍＭ〜２００ｍＭ）又は約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ（例えば、１０ｍＭ〜５０ｍＭ）の範囲の濃度で組成物又は製剤中に存在する。
【００１４】
本開示の医薬組成物又は製剤は、少なくとも１種類のポリオールも含む。一部の実施形態において、ポリオールは糖類である。一部の実施形態では、糖類は、単糖、二糖、環状多糖、糖アルコール、線状分岐デキストラン、及び線状非分岐デキストラン又はその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、ポリオールは、糖アルコール（例えば、ソルビトール）である。一部の実施形態において、ポリオールはショ糖、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリトリトール、イソマルト、グリセロール、シクロデキストリン又はカプチゾール（ｃａｐｔｉｓｏｌ）である。一部の実施形態において、少なくとも１種類のポリオールは、約１〜約２０％（ｗ／Ｖ）（又は約９〜約１２％（ｗ／Ｖ））の範囲の濃度で組成物又は製剤中に存在する。
【００１５】
一部の場合では、開示の医薬組成物又は製剤はさらに任意選択的に、少なくとも１種類の界面活性剤を含み得る。一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８、プルロニック（登録商標）Ｆ６８、トリトンＸ−１００、ポリオキシエチレン３、及びＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、又はＰＥＧ８０００又はその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態において、その少なくとも１種類の界面活性剤は、０．００４〜約０．５％（ｗ／Ｖ）（又は約０．００１〜約０．０１％（ｗ／Ｖ））の範囲の濃度で組成物中に存在する。
【００１６】
一部の実施形態において、組成物又は製剤のｐＨは３．５を超え、且つ／又はそのｐＨは、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグなど）のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１、及び／又はＭＤ２領域のｐＩ（以下にさらに記述される）よりも約２ｐＨ単位低い。一部の実施形態において、組成物又は製剤のｐＨは７．０〜３．６である。一部の実施形態において、組成物又は製剤のｐＨは、約３．５〜約５．５の範囲又は４．０〜５．０の範囲である。一部の実施形態において、組成物又は製剤のｐＨは約４．２又は約３．６である。一部の実施形態において、組成物又は製剤のｐＨは４．２又は３．６である。
【００１７】
開示の医薬組成物又は製剤は任意にさらに、アミノ酸賦形剤を含み得る。一部の実施形態では、アミノ酸賦形剤は、約０．１〜約２０％（ｍＭ）の範囲の濃度で存在する。
【００１８】
一部の実施形態における開示の医薬組成物又は製剤は、１０ｍＭグルタミン酸塩、９％（ｗ／Ｖ）スクロース及び０．０１％（ｗ／Ｖ）ポリソルベート８０を含み、且つ液体医薬組成物のｐＨは、４．２又は３．６である。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１７ｍｇ／ｍＬ又は約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で組成物中に存在する。一部の実施形態では、マスクされた抗原結合タンパク質は、約５０μｇ〜約２００ｍｇの範囲の量で組成物中に存在する。
【００１９】
本開示の医薬組成物は、凍結乾燥組成物又は液体組成物であり得る。一部の実施形態において、医薬組成物は、再構成された凍結乾燥組成物である。
【００２０】
一部の実施形態において、医薬組成物は、２〜８℃、４℃及び／又は２５℃で０、１、２及び／又は４週間貯蔵した後に安定である液体組成物である。一部の実施形態において、医薬組成物又は製剤では、マスクされた抗原結合タンパク質１ｍｇ／ｍｌ、１００ｍＭグリシン（ｐＨ４．９）からなる参照医薬組成物と比較して、超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）により測定される、抗体凝集及び／又は高分子量抗体種が、約１分の１、約２分の１、約３分の１、約４分の１、約５分の１、約６分の１、約７分の１、約８分の１、約９分の１又は約１０分の１に低減される。
【００２１】
別の態様では、本明細書において、本開示の組成物又は製剤を、必要とする対象に投与することを含む、対象において癌を治療する方法が記載される。
【００２２】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特に指定がない限り、開放型用語として解釈されるべきである（すなわち、「包含するが、これに限定されない」を意味し、１つ以上の特徴又は構成要素の存在を許容する）。本明細書中の様々な実施形態は、様々な状況下で「含む」という語を使用して提示される一方、関連する実施形態はまた、「〜からなる」又は「本質的に〜からなる」という語を使用して記載され得ると理解されるべきである。用語「ａ」又は「ａｎ」は、１つ又は複数を指し、例えば、「免疫グロブリン分子」は、別段の指定がない限り、１つ又は複数の免疫グロブリン分子を表すと理解されることに留意されたい。そのため、用語「ａ」（又は「ａｎ」）、「１つ又は複数」、及び「少なくとも１つ」は、本明細書で区別なく使用され得る。さらに、「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、２つの特定の特徴又は構成要素のそれぞれの特定の開示として（他の特徴又は構成要素の有無にかかわらず）解釈されるべきである。したがって、本明細書で「Ａ及び／又はＢ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を包含するものとする。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の態様のそれぞれを包含するものとする：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）。
【００２３】
値の範囲を記載するとき、記載されている特徴は、その範囲内に見出される個々の値であり得ることもまた理解されるべきである。例えば、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、限定されないが、ｐＨ４、４．２、４．６、５．１、５．５など、及びかかる値の間にある任意の値であり得る。さらに、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、目的の製剤のｐＨが、保管中にｐＨ４〜ｐＨ６の範囲において２ｐＨ単位で変動するという意味で解釈されるべきではなく、むしろ、溶液のｐＨについてその範囲内で値を選んでもよく、ｐＨはそのｐＨ付近で緩衝されたままであることを意味する。一部の実施形態では、用語「約」が使用される場合、その列挙された数の±１０％の数を意味する。
【００２４】
本明細書に記載される範囲のいずれかにおいて、範囲の端点は、その範囲に含まれる。しかしながら、この説明はまた、小さい方の端点及び／又は大きい方の端点が除外された同じ範囲も意図する。本発明の追加の特徴及び変形形態は、図面及び詳細な説明を含む本出願の全体から当業者には明らかであろうが、そのような特徴は全て本発明の態様として意図される。同様に、本明細書に記載される本発明の特徴を組み換えて、特徴の組合せが本発明の態様又は実施形態として上記に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、本発明の態様としても意図される追加の実施形態にすることができる。また、本発明にとって不可欠なものとして本明細書に記載されるそのような限定のみが、そのように見なされるべきであり；本明細書に不可欠なものとして記載されていない限定を欠く本発明の変形形態は、本発明の態様として意図される。
【００２５】
他に定義されていない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般辞書を当業者に提供する。
【００２６】
単位、接頭辞及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められた形式で示される。数値範囲は、範囲を規定する数値を含む。別段の指示がない限り、アミノ酸配列は、左から右に、アミノからカルボキシへの向きで書かれている。本明細書で示される見出しは、本開示の様々な１つ又は複数の態様を限定するものではなく、それは本明細書全体を参照することによって有することができる。
【００２７】
本明細書に記載の全ての参考文献はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃で０、２週間及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ｂ中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図２】ＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃で０、１、２週間及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ｃ中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図３】ＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃で０、２週間及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ｄ中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図４】ＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃で０、２週間及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ｅ中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図５】ＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃で０、２週間及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ｆ中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図６】ＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃で０週（下のパネル）及び４週間（上のパネル）貯蔵した場合に、製剤Ａ（「出発原料」）、製剤Ｆ（「ｐＨ７．０」）、製剤Ｅ（「ｐＨ６．３」）、製剤Ｄ（「ｐＨ５．２」）、製剤Ｃ（「ｐＨ４．２」）又は製剤Ｂ（「ｐＨ３．６」）中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質の高分子量種％を示す。
【図７】出発原料（製剤Ａ）と比べられた、低ｐＨ製剤（製剤Ｃ）中に透析した後の凝集の減少を示すグラフである。
【図８】サイズ排除分析によって決定される、４℃又は２５℃にて０、１週間又は２週間貯蔵した場合の、低ｐＨ製剤（製剤Ｃ）中のマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質（１ｍｇ／ｍＬ）の安定性を示すグラフである。図８Ａにおいて、クロマトグラムはオフセットされる。
【図９】サイズ排除（ＳＥＣ）分析によって決定される、高濃度（例えば、１７ｍｇ／ｍＬ）での低ｐＨ製剤中のマスクされた二重特異性の抗原結合タンパク質の安定性を示すグラフである。タンパク質濃度１７ｍｇ／ｍＬでの製剤Ｃは、タンパク質１１ｍｇ／ｍＬの製剤Ａ（「出発原料」）と比較して著しく低い凝集／高分子量種％を有した（左パネル）。タンパク質濃度１７ｍｇ／ｍＬの製剤Ｃもまた、４℃で０、２又は４週間貯蔵した後に安定であった（右パネル）。
【図１０】サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）の結果を示す棒グラフであり、２〜８℃又は２５℃にて０、２及び４週間貯蔵した場合の、製剤Ａ中のマスクされた二重特異性抗体のメインピーク％（左パネル）及び高分子量種％（右パネル）を示す。
【図１１】「Ｐｒｏｂｏｄｙ」としても知られる、例示的なマスクされた抗原結合タンパク質の説明図である。
【図１２】「ＰｒｏＴＩＡプロドラッグ」としても知られる、例示的なマスクされた抗原結合タンパク質の説明図である。「ＥＣＢＭ」は抗原結合性ドメイン（つまり、抗原結合性ドメイン（ＡＢ１））であり；「ＴＡＢＭ」は第２抗原結合性ドメイン（つまり、第２抗原結合性ドメイン（ＡＢ２））であり；「ＲＳ」は、プロテアーゼ（つまり、タンパク質認識ドメイン（ＰＲ））によって切断することができるペプチド又はポリペチド配列であり；「バルキング（Ｂｕｌｋｉｎｇ）部位」は、抗原に結合するＥＣＭＢ及び／又はＴＡＢＭの能力を阻害又は低減するペプチド又はポリペプチドである（例えば、マスキングドメイン（ＭＤ））。Ｐｒｏ形態のＰｒｏＴＩＡがＲＳ部位で切断されると、抗原へのＥＣＢＭ及び／又はＴＡＢＭ結合性が増加する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
抗体などの特異的なタンパク質性医薬品は一般に、長期間にわたって液体製剤中で安定ではなく、特に促進温度、例えば２５℃以上の温度で安定ではない。本開示には、１つ、２つ以上の抗原に結合するマスクされた抗原結合タンパク質を含む低ｐＨ製剤が記述される。一部の実施形態において、マスクされた二重特異性又は多重特異性原結合タンパク質は、活性化Ｔ細胞の近傍に悪性細胞を一過的に運ぶように、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３のε鎖など）及び細胞表面抗原（例えば、ＥＧＦＲなど）に特異的に結合し、その結果、抗体が結合した悪性細胞のＴ細胞仲介致死が誘発される。
【００３０】
本発明の根底にある一般的な概念は、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）を含む液体医薬組成物のコロイド安定性が、（１）マスクされた抗原結合タンパク質の抗体又は抗原結合性ドメイン（例えば、ＶＨ／ＶＬ領域又はその抗原結合性断片又は以下に記載のＡＢ１及び／又はＡＢ２領域）の等電点（ｐＩ）よりも低い、且つ（２）マスクされた抗原結合タンパク質のマスキングドメイン（以下にさらに記載のＭＤ１及びＭＤ２領域）のｐＩよりも低いｐＨの両方で有意に向上するという発見である。マスクされた抗原結合タンパク質の重鎖及び軽鎖は通常、異なる等電点（ｐＩ）を有し、完全な重鎖は一般に、完全な軽鎖よりも高いｐＩを有する。マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質など）及び／又はマスクされた抗原結合タンパク質内の領域若しくはドメインのｐＩは、多くの手段のいずれかによって決定することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｅｒｅｚ−Ｒｉｖｅｒｏｌ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｐｏｉｎｔ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｖｅｃｔｏｒ  ｍａｃｈｉｎｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ７５，２２６９−２２７４（２０１２）に記載のＢｊｅｌｌｑｖｉｓｔアルゴリズムを用いて）。ｈｔｔｐ：／／ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ．ｏｖｈ．ｏｒｇにてオンラインで入手可能なＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｐｏｉｎｔ  Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ（ＩＰＣ）の詳細が記述されている、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ  ＬＰ，ＩＰＣ  −  Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｄｉｒｅｃｔ．２０１６；１１：５５も参照されたい。
【００３１】
マスクされた抗原結合タンパク質の領域（以下にさらに記載されるＭＤ１及び／又はＭＤ２領域）のｐＩは、マスクされた抗原結合タンパク質の抗原結合性部分（例えば、以下に記載の重鎖／軽鎖若しくはその抗原結合性、又はＡＢ１及び／又はＡＢ２領域など）のｐＩと異なる場合が多い。
【００３２】
理論上のマスクされた抗原結合タンパク質の他の代表的な理論上のＡＢ及びＭＤ領域を表１に示す。これらの代表的な理論上のマスクされた抗原結合タンパク質、マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質及びマスクされた多重特異性抗原結合タンパク質に関して凝集を低減し、且つ安定性を高める推奨されるｐＨも表１に示す。
【００３３】
【表１】
2021532156.tif 000003
【００３４】
したがって、本明細書において本発明者らは、マスクされた抗原結合タンパク質組成物のｐＨが、（１）マスクされた抗原結合タンパク質のマスキングドメイン（例えば、以下にさらに記述される、ＶＨ／ＶＬ領域若しくはその抗原結合性断片又はＡＢ１及び／又はＡＢ２領域）の等電点（ｐＩ）よりも低い、且つ／又は（２）マスクされた抗原結合タンパク質のマスキングドメイン（以下にさらに記述されるＭＤ１及びＭＤ２領域）のｐＩよりも低い、医薬組成物について記述する。特定の理論に束縛されないが、医薬組成物の低ｐＨによって、マスクされた抗原結合タンパク質のサブ領域（例えば、以下にさらに記述される、抗原結合性領域及びマスキング領域又はＡＢ１及び／若しくはＡＢ２領域など）が正味の正電荷を有し、その結果、抗体凝集が減少し、安定性を高める内部及び外部ドメイン相反が生じることが確保される。ドメイン（例えば、マスキングドメイン）が酸性ｐＩを有し、もう１つのドメイン（例えば、抗体又は抗原結合性ドメイン）が塩基性ｐＩを有する場合には、医薬組成物のｐＨがドメインそれぞれのｐＩの間にある（例えば、ｐＨ７）ならば、双極子が生じ得て、抗体凝集を増加し、安定性を低下させる、分子内及び分子間静電引力が引き起こされる。特定の理論に束縛されないが、静電引力が凝集を引き起こす可能性があり、したがって、望ましくない高分子量種が形成する可能性がある。ＨＭＷ種は、溶液の安定性又は分散体のコロイド安定性に重大な影響を及ぼす。これは、多数の抗原結合性ドメイン及び／又は多数のマスキングポリペプチドを有し得る、マスクされた抗原結合タンパク質（マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）の特別な問題点であり、それぞれのマスキングポリペプチドが周囲のアミノ酸と局所的に相互作用し、その結果として更なる厄介な問題が起こる。本開示の組成物の低ｐＨによって、種々のドメインのプロトン付加及び静電反発力が可能となり、それによって、意外なことにマスクされた抗原結合タンパク質（例えば、二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質を含む）のＨＭＷ種の発生率が減少する。一部の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、３．５〜５．５の範囲である。ｐＨ値４．０〜５．５、例えばｐＨ値４．２〜４．８が好ましい。一部の実施形態において、好ましいｐＨ値は、ｐＨ値３．６〜４．２である。一部の実施形態において、組成物のｐＨは、マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１、及び／又はＭＤ２領域（以下にさらに記述される）のｐＩよりも約２ｐＨ単位低い。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、約７．０〜約３．６である。一部の実施形態において、組成物のｐＨは約３．５を超える。
【００３５】
製剤の様々な態様は、以下に記載される。節見出しの使用は単に読み物の便宜のためであり、それ自体を限定することは意図されない。本明細書全体は、統一された開示として見なされることが意図されており、本明細書に記載される特徴の全ての組合せが企図されることを理解すべきである。
【００３６】
緩衝剤
本開示の医薬組成物は緩衝剤を含み、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸塩、リン酸カリウム、カリウム塩、二価カチオン、カルシウム、マグネシウム、マンガン、亜鉛、酢酸／酢酸ナトリウム、クエン酸／クエン酸ナトリウム、コハク酸／コハク酸ナトリウム、酒石酸／酒石酸ナトリウム、ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、グリシン、トリス、グルタミン酸塩、アミノ酸、リジン、アルギニン、プロリン、及びその組合せからなる群から任意に選択され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸塩及びこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種の緩衝剤を含む。
【００３７】
緩衝剤は、製剤においてｐＨを制御するために利用される場合が多い。一部の実施形態において、緩衝剤は、約３．５〜約５又は約４．０〜約５．５、又は約４．０〜約５．０、又は約４．２〜約４．８、又は４．２、又は３．６、又は３．５を超える値で製剤のｐＨを維持する濃度で添加される。製剤のｐＨの作用は、促進された安定性の研究など、いくつかのアプローチの１つ又は複数を用いて特徴付けられ得る。
【００３８】
有機酸、リン酸塩及びトリスは、タンパク質製剤中の好適な緩衝剤である（表２）。緩衝種の緩衝能はｐＫａと等しいｐＨで最大になり、ｐＨがこの値から増加又減少すると、緩衝能は低下する。緩衝能の９０パーセントはそのｐＫａの１ｐＨ単位内に存在する。緩衝能はまた、緩衝剤濃度の増加とともに比例して増加する。
【００３９】
緩衝剤を選択する際、通常、いくつかの要因が検討される。例えば、緩衝剤種及びその濃度は、そのｐＫａ及び所望の製剤ｐＨに基づいて定義されるべきである。緩衝剤が、タンパク質薬物、他の製剤賦形剤と相溶性であり、且ついずれかの分解反応を触媒しないことを保証することもまた重要である。近年、クエン酸塩及びコハク酸塩などのポリアニオンのカルボン酸塩緩衝剤が、タンパク質の側鎖残基と共有結合性の付加体を形成することが示されている。検討されることになる第３の態様は、緩衝剤が誘導し得る刺痛及び刺激の感覚である。
【００４０】
【表２】
2021532156.tif 000004
【００４１】
製剤中に存在する緩衝系は、生理的に適合性であり且つ所望のｐＨを維持するものから選択される。
【００４２】
緩衝剤は、既定のレベルで製剤のｐＨを維持するのに好適な任意の量で存在し得る。緩衝剤は、約０．１ｍＭ〜約１０００ｍＭ（１Ｍ）、又は約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、又は約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、又は約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度で存在し得る。好適な緩衝剤濃度は、約２００ｍＭ以下の濃度を包含する。一部の実施形態では、製剤中の緩衝剤は、約１９０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１００ｍＭ、約８０ｍＭ、約７０ｍＭ、約６０ｍＭ、約５０ｍＭ、約４０ｍＭ、約３０ｍＭ、約２０ｍＭ、約１０ｍＭ又は約５ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、緩衝剤の濃度は、少なくとも約０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、又は９００ｍＭである。一部の実施形態では、緩衝剤の濃度は、約１、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０ｍＭ〜１００ｍＭである。一部の実施形態では、緩衝剤の濃度は、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、又は４０ｍＭ〜５０ｍＭである。一部の実施形態では、緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである。
【００４３】
本明細書で述べられるとおりの製剤を緩衝するために使用される他の例示的なｐＨ緩衝剤としては、グリシン、グルタミン酸塩、コハク酸塩、リン酸塩、酢酸塩、及びアスパラギン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。ヒスチジン、アルギニン、プロリン及びグルタミン酸などのアミノ酸もまた、緩衝剤として使用され得る。
【００４４】
ポリオール
本明細書に記載される医薬組成物は、少なくとも１種のポリオールも含む。ポリオールは、糖（例えば、マンニトール、スクロース、又はソルビトール）、及び他の多価アルコール（例えば、グリセロール及びプロピレングリコール）を含む賦形剤の一部類を包含する。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーはこのカテゴリに含まれる。ポリオールは、液状及び凍結乾燥非経口タンパク質製剤の両方において、安定化賦形剤及び／又は等張化剤として一般的に使用される。ポリオールは、タンパク質を物理的分解経路及び化学的分解経路の両方から保護することができる。
【００４５】
本明細書に開示される医薬組成物に適した例示的なポリオールとしては、スクロース、トレハロース、マンノース、マルトース、ラクトース、グルコース、ラフィノース、セロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、アラビノース、グルコサミン、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、グリシン、アルギニンＨＣＬ、ポリヒドロキシ化合物（例えば、デキストラン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、シクロデキストリン、カプチゾール、Ｎ−メチルピロリデン、セルロース及びヒアルロン酸などの多糖類を含む）、並びに塩化ナトリウムが挙げられるがこれらに限定されない（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ  ７４：２２５，（１９９１））。
【００４６】
本明細書に開示される医薬組成物に適した、その他のポリオールとしては、プロピレングリコール、グリセロール（グリセロール）、トレオース、トレイトール、エリトロース、エリトリトール、リボース、アラビノース、アラビトール、リキソース、マルチトール、ソルビトール、ソルボース、グルコース、マンノース、マンニトール、レブロース、デキストロース、マルトース、トレハロース、フルクトース、キシリトール、イノシトール、ガラクトース、キシロース、フルクトース、スクロース、１，２，６−ヘキサントリオールなどが挙げられるが、これらに限定されない。高次糖としては、デキストラン、プロピレングリコール、又はポリエチレングリコールが挙げられる。フルクトース、マルトース又はガラクトースなどの還元糖は、非還元糖より容易に酸化する。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール又はイソ−マルツロースである。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソ−マルツロース及びラクツロースが挙げられる。非還元糖の例としては、糖アルコール及び他の直鎖ポリアルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。モノグリコシドとしては、ラクトース、マルトース、ラクツロース及びマルツロースなどの二糖類の還元によって得られる化合物が挙げられる。
【００４７】
一部の実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、単糖、二糖、環状多糖、糖アルコール、線状分岐デキストラン、及び線状非分岐デキストラン、又はその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びソルビトール又はその組合せからなる群から選択される二糖である。
【００４８】
一部の実施形態では、医薬組成物は、約０％〜約４０％（ｗ／ｖ）、又は約０％〜約２０％（ｗ／ｖ）、又は約１％〜約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも０．５、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも３０、又は少なくとも４０％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４％〜約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１％〜約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。さらなる実施形態では、医薬組成物は、約９％、約９．５％、約１０％、約１０．５％、約１１％、約１１．５％、又は約１２％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約９％〜約１２％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。一部の実施形態では、その少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）は、約９％（ｗ／ｖ）の濃度で組成物中にある。一部の実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びソルビトール又はその組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、そのポリオールはスクロースであり、且つ約９％〜約１２％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で組成物中に存在する。
【００４９】
必要があれば、製剤はまた、凍結乾燥「ケーキ」を形成するのに好適な糖類などの、適切な量の充填剤及びモル浸透圧濃度調節剤を含み得る。
【００５０】
好ましい実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質医薬組成物又は製剤は、１０ｍＭグルタミン酸塩又は１０ｍＭ酢酸塩、９％（ｗ／Ｖ）ショ糖及び０．０１％（ｗ／Ｖ）ポリソルベート８０を含み、医薬組成物又は製剤のｐＨは４．２又は３．６である。
【００５１】
界面活性剤
本明細書に開示される医薬組成物はさらに任意に、少なくとも１種類の界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、表面誘発分解を防ぐために、タンパク質製剤中で一般的に使用される。界面活性剤は、界面位置に関してタンパク質に打ち勝つ能力を有する両親媒性の分子である。界面活性剤分子の疎水性部分は界面位置（例えば、空気／液体）を占めるのに対し、分子の親水性部分はバルク溶媒の方向に配向された状態を保つ。十分な濃度（典型的には、洗剤の臨界ミセル濃度付近）において、界面活性剤分子の表面層は、タンパク質分子が界面において吸着するのを防ぐ役割を果たす。それによって、表面誘発分解が最小限に抑えられる。界面活性剤としては、例えば、ソルビタンポリエトキシレートの脂肪酸エステル、例えばポリソルベート２０及びポリソルベート８０（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）を参照のこと）などが挙げられる。２つは、分子Ｃ−１２及びＣ−１８にそれぞれ疎水性特性を付与する脂肪族鎖の長さのみが異なる。したがって、ポリソルベート８０は、ポリソルベート２０よりも界面活性が高く、且つより低い臨界ミセル濃度を有する。界面活性剤ポロクサマー１８８も、Ｇｏｎａｌ−Ｆ（登録商標）、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、及びＯｖｉｄｒｅｌ（登録商標）などのいくつかの市販液体製品中に使用されてきた。
【００５２】
洗剤はまた、タンパク質の熱力学的配座安定性にも影響を及ぼし得る。洗剤のタンパク質不安定化は、部分的又は全体的にアンフォールドしたタンパク質状態との特異的な結合に関与し得る洗剤分子の疎水性尾部の点で理にかなっている。これらの種類の相互作用は、より拡張したタンパク質状態への配座平衡の移行を引き起こし得る（すなわち、結合するポリソルベートを補完してタンパク質分子の疎水性部分の露出を増加させる）。或いは、タンパク質の天然状態がいくつかの疎水性表面を示す場合、天然状態に結合する洗剤はその立体配座を安定化させ得る。
【００５３】
ポリソルベートの別の態様は、これらが本質的に酸化分解を起こしやすい点である。これらは、タンパク質残基側鎖、特にメチオニンの酸化を引き起こすのに十分な量の過酸化物を原材料として含有する場合が多い。安定剤の添加から酸化的損傷が生じる可能性があるため、最低有効濃度の賦形剤が製剤中に使用されるべきであるという点が強調される。界面活性剤の場合、所定のタンパク質の有効濃度は、安定化機構によって決まる。界面活性剤の安定化機構が表面変性の防止に関連する場合、有効濃度は洗剤の臨界ミセル濃度付近になることが想定されている。反対に、安定化機構が特定のタンパク質−洗剤相互作用と関連する場合、有効な界面活性剤濃度は、タンパク質濃度及び相互作用の化学量論に関連付けられることになる（Ｒａｎｄｏｌｐｈ  Ｔ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３：１５９−７５（２００２））。
【００５４】
また、凍結及び乾燥中の表面関連凝集現象を防止するために、界面活性剤を適量で添加してもよい（Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：１３２５，（１９９６））。例示的な界面活性剤としては、天然に存在するアミノ酸に由来する界面活性剤を含む、アニオン性、カチオン性、非イオン性、双性イオン性、及び両性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。アニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム及びスルホン酸ジオクチルナトリウム、ケノデオキシコール酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、ドデシル硫酸リチウム、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、コール酸ナトリウム水和物、デオキシコール酸ナトリウム、並びにグリコデオキシコール酸ナトリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。カチオン性界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウム又は塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム一水和物、及び臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムが挙げられるがこれらに限定されない。双性イオン性界面活性剤としては、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、ＳＢ３−１０、及びＳＢ３−１２が挙げられるが、これらに限定されない。非イオン性界面活性剤としては、ジギトニン、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、及びＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０が挙げられるが、これらに限定されない。別の実施形態では、界面活性剤としては、ラウロマクロゴール４００；ステアリン酸ポリオキシル４０；ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、４０、５０、及び６０；モノステアリン酸グリセロール；ポリソルベート４０、６０、６５、及び８０；大豆レシチン及び他のリン脂質、例えば、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ、及びＤＯＰＧ；スクロース脂肪酸エステル；メチルセルロース、並びにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。
【００５５】
本明細書に記載される医薬組成物はさらに任意に、様々な比率で個別に又は混合物のいずれかとして、少なくとも１種の界面活性剤を含み得る。一部の実施形態では、組成物は、約０．００１％〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度で界面活性剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも０．００１、少なくとも０．００２、少なくとも０．００３、少なくとも０．００４、少なくとも０．００５、少なくとも０．００７、少なくとも０．０１、少なくとも０．０５、少なくとも０．１、少なくとも０．２、少なくとも０．３、少なくとも０．４、少なくとも０．５、少なくとも０．６、少なくとも０．７、少なくとも０．８、少なくとも０．９、少なくとも１．０、少なくとも１．５、少なくとも２．０、少なくとも２．５、少なくとも３．０、少なくとも３．５、少なくとも４．０、又は少なくとも４．５％（ｗ／ｖ）の濃度で界面活性剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、約０．００４％〜約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で界面活性剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、約０．００４、約０．００５、約０．００７、約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、又は約０．４％〜約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で界面活性剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、約０．００１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で組み入れられた界面活性剤を含む。一部の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０であり、且つポリソルベート８０は濃度約０．０１％（ｗ／ｖ）で存在する。
【００５６】
他の考慮事項
本明細書で使用する場合、用語「医薬組成物」は、それを必要とする対象への投与に好適な組成物に関する。用語「対象」、又は「個体」、又は「動物」、又は「患者」は、本明細書では区別なく使用され、本発明の医薬組成物の投与が望ましい任意の対象、特に哺乳動物対象を指す。哺乳動物対象には、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、乳牛などが含まれ、ヒトが好ましい。本発明の医薬組成物は、安定であり、且つ薬学的に許容されるものであり、すなわち医薬組成物が投与される対象においていかなる望ましくない局所的又は全身的な作用も引き起こすことなく所望の治療効果を発揮することができる。本発明の薬学的に許容される組成物は、特に無菌であり、且つ／又は薬学的に不活性であり得る。具体的には、用語「薬学的に許容される」は、動物における使用及びより特定するとヒトにおける使用のための、規制当局又は他の一般に認識されている薬局方によって承認されていることを意味し得る。
【００５７】
本開示によって提供される医薬組成物は、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）を含む。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、治療有効量で提供される。「治療有効量」とは、目的の治療効果を発揮する前記マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）の量を意味する。治療効果及び毒性は、細胞培養又は実験動物における標準的な医薬的手順、例えばＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）及びＬＤ５０（集団の５０％において致死的な用量）によって決定することができる。治療効果と毒性作用との間の用量比は、治療指数であり、ＥＤ５０／ＬＤ５０の比として表現することができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が一般に好ましい。
【００５８】
本明細書に開示される医薬組成物を含む、タンパク質及び抗体製剤は非経口的に投与され得る。非経口で与えられる場合、それらは無菌でなければならない。無菌希釈剤は、薬学的に許容され（ヒトへの投与に安全且つ非毒性）、且つ凍結乾燥後に再構成される医薬組成物などの液体製剤の調製に有用である液体を含む。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液又はデキストロース溶液が挙げられる。希釈剤は、塩及び／又は緩衝剤の水溶液を含み得る。
【００５９】
賦形剤は、それらが薬物製品の安定性、送達及び製造性を与える、又は高めるために、医薬組成物又は製剤中に含まれる添加剤である。それが包含される理由に関わらず、賦形剤は安全であり、患者によって許容されなければならない。タンパク質薬物及び抗体に関して、賦形剤の選択は、それらが薬物の有効性及び免疫原性に影響を及ぼす可能性があるため特に重要である。したがって、タンパク質製剤は、好適な安定性、安全性、及び市場性を与える賦形剤の適切な選択とともに開発される必要がある。
【００６０】
本明細書に記載される賦形剤は、医薬組成物／製剤におけるその化学種又はその機能的役割のいずれかによって構築される。本明細書で提供される教示及び手引きがあれば、当業者は、粘度を望ましくないレベルまで増大させることなく、賦形剤の量又は範囲を容易に変動させることができるであろう。賦形剤は、最終溶液の所望の重量オスモル濃度（すなわち、等張性、低張性又は高張性）、ｐＨ、所望の安定性、凝集若しくは分解若しくは沈殿に対する耐性、凍結、凍結乾燥若しくは高温条件下での保護、又は他の特性を実現するために選択され得る。様々な種類の賦形剤が当技術分野で知られている。例示的な賦形剤としては、塩、アミノ酸、他の等張化剤、界面活性剤、安定剤、充填剤、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、抗酸化剤、金属イオン、キレート剤及び／又は保存剤が挙げられる。
【００６１】
さらに、医薬組成物又は製剤中に特定の賦形剤が、例えばパーセント（％）ｗ／ｖで報告される場合、当業者は、その賦形剤の等モル濃度も意図されることを認識するであろう。
【００６２】
他の安定剤及び充填剤
本明細書に記載の医薬組成物はさらに任意選択的に、少なくとも１種類の安定剤（糖、ポリマー及び／又はポリオールなど）を含み得る。安定剤としては、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、及びガラス形成剤としての役割を果たし得る化合物の一部類が挙げられる。凍結保護剤は、低温での凍結中又は凍結状態においてタンパク質を安定化するために作用する。凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥の脱水段階中にタンパク質の天然様コンフォメーション性を保つことによって、タンパク質又は抗体を凍結乾燥された固形剤形で安定化させる。ガラス状態特性は、温度の関数としてのその緩和特性に応じて、「頑丈」又は「脆弱」に分類されている。安定性を与えるためには、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、及びガラス形成剤が、タンパク質又は抗体と同じ相に留まることが重要である。例示的な凍結乾燥保護剤としては、限定されないが、グリセリン及びゼラチン、及び糖類、メリビオース、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオース及びスタキオースが挙げられる。
【００６３】
アミノ酸
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物はさらに、１種又は複数種のアミノ酸を含む。アミノ酸は、緩衝剤、充填剤、安定剤及び酸化防止剤として、タンパク質及び抗体製剤又は医薬組成物における多目的な用途が見出されている。ヒスチジン及びグルタミン酸は、５．５〜６．５及び４．０〜５．５のｐＨ範囲それぞれにおいてタンパク質又は抗体製剤を緩衝するために利用される。ヒスチジンのイミダゾール基は、ｐＫａ＝６．０を有し、グルタミン酸側鎖のカルボキシル基は、４．３のｐＫａを有し、そのため、そのそれぞれのｐＨ範囲で緩衝するのに好適である。グルタミン酸は、一部の製剤（例えば、Ｓｔｅｍｇｅｎ（登録商標））において見出される。ヒスチジンは一般に、市販タンパク質／抗体製剤（例えば、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｅ（登録商標））において見出される。それは、注射時に痛むことで知られる緩衝剤であるクエン酸塩に代わる良好な選択肢を提供する。興味深いことに、ヒスチジンはまた、液体及び凍結乾燥された体裁の両方において高濃度で使用されるとき、安定化効果を有することが報告されている（Ｃｈｅｎ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２０（１２）：１９５２−６０（２００３））。ヒスチジン（６０ｍＭまで）はまた、抗体の高濃度製剤の粘度を低減することが観察された。しかしながら、同じ試験において、ステンレス鋼容器中での抗体の凍結融解試験の間、ヒスチジンを含有する製剤において凝集の増加及び変色が著者によって確認された。その著者らは、これを鋼容器の腐蝕から浸出した鉄イオンの影響が原因であるとした。ヒスチジンを用いる際のもう１つの注意事項は、金属イオンの存在下で光酸化を受けることである（Ｔｏｍｉｔａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８（１２）：５１４９−６０（１９６９））。製剤中の抗酸化剤としてのメチオニンの使用は、有望であると思われ；いくつかの酸化ストレスに対して有効であることが確認されている（Ｌａｍ  ＸＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．，８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。
【００６４】
アミノ酸のグリシン、プロリン、セリン及びアラニンは、タンパク質又は抗体を安定化する。グリシンはまた、凍結乾燥製剤（例えば、Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ（登録商標））における充填剤でもある。アルギニンは、凝集を阻害する際に有効な薬剤であることが示されており、液体及び凍結乾燥製剤（例えば、Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）液体））の両方で使用されてきた。本明細書に記載の医薬組成物はさらに任意に、上記のアミノ酸の１種又は複数種のいずれかを含み得る。
【００６５】
抗酸化剤
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物はさらに、１種又は複数種の抗酸化剤を含む。タンパク質残基の酸化は、いくつかの異なる原因から生じる。特定の抗酸化剤の添加の他に、酸化的なタンパク質の損傷の防止には、大気中の酸素、温度、光への曝露、及び化学的汚染などの製品の製造工程及び保管中のいくつかの要因を慎重に制御する必要がある。最も一般的に使用される医薬用抗酸化剤は、還元剤、酸素／フリーラジカルスカベンジャー、又はキレート剤である。治療用タンパク質又は抗体製剤中の抗酸化剤は水溶性でなければならず、且つ生成物の貯蔵寿命全体を通して活性を維持しなければならない。還元剤及び酸素／フリーラジカルスカベンジャーは、溶液中の活性酸素種を切断することによって機能する。ＥＤＴＡなどのキレート剤は、フリーラジカル形成を促進する微量金属夾雑物を結合することによって効果を発揮し得る。例えば、ＥＤＴＡを、酸性線維芽細胞増殖因子の液体製剤中で利用して、金属イオンに触媒されるシステイン残基の酸化を阻害した。ＥＤＴＡは、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）及びＯｎｔａｋ（登録商標）などの市販製品に使用されている。したがって、本明細書に記載の医薬組成物はさらに任意に、これらの還元剤、酸化／フリーラジカルスカベンジャー、及び／又はキレート剤のうちのいずれか１つ又は複数を含み得る。
【００６６】
しかしながら、抗酸化剤それら自体は、タンパク質に対して他の共有結合性変化又は物理的変化を誘導する場合がある。いくつかのこのような事例が、文献において報告されている。還元剤（グルタチオンのような）は、ジスルフィドシャッフリングを引き起こす可能性がある分子内ジスルフィド結合の破壊をもたらし得る。遷移金属イオンの存在下で、アスコルビン酸及びＥＤＴＡは、いくつかのタンパク質及びペプチドにおいてメチオニン酸化を促進することが示されている（Ａｋｅｒｓ  ＭＪ，ａｎｄ  Ｄｅｆｅｌｉｐｐｉｓ  ＭＲ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｖｅｎ  Ｆｒｏｋｊａｅｒ，Ｌａｒｓ  Ｈｏｖｇａａｒｄ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ，ＵＫ（１９９９））；Ｆｒａｎｓｓｏｎ  Ｊ．Ｒ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６（９）：４０４６−１０５０（１９９７）；Ｙｉｎ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，２１（１２）：２３７７−８３（２００４））。チオ硫酸ナトリウムは、ｒｈｕＭａｂ  ＨＥＲ２において光と温度によって誘導されるメチオニン酸化のレベルを低下させることが報告されているが；チオ硫酸塩−タンパク質付加体の形成もまた、この研究において報告された（Ｌａｍ  ＸＭ，Ｙａｎｇ  ＪＹ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。適切な抗酸化剤の選択は、マスクされた抗原結合タンパク質の特定のストレス及び感受性に応じてなされる。
【００６７】
金属イオン
一部の実施形態では、医薬組成物はさらに、１種又は複数種の金属イオンを含む。一般に、遷移金属イオンは、タンパク質中で物理的及び化学的分解反応を触媒し得るため、タンパク質若しくは抗体医薬組成物又は製剤中の遷移金属イオンは望ましくない。しかしながら、特定の金属イオンは、それがタンパク質に対する補因子である場合には製剤中に含まれ、錯化合物（例えば、インスリンの亜鉛懸濁液）が形成される。近年、マグネシウムイオン（１０〜１２０ｍＭ）の使用によって、アスパラギン酸のイソアスパラギン酸への異性化が阻害されることが提案されている（例えば、国際公開第２００４／０３９３３７号パンフレット参照）。例示的な金属イオンとしては、限定されないが、Ｃａ＋２イオン、Ｍｇ＋２、Ｍｎ＋２、Ｚｎ＋２、Ｃｕ＋２及びＦｅ＋２が挙げられる。
【００６８】
保存剤
一部の実施形態では、医薬組成物はさらに、１種又は複数種の保存剤を含む。保存剤は、同じ容器からの２回以上の取り出しを伴う複数回使用非経口製剤を開発する際に必要となる。その主な機能は、薬物製品の貯蔵寿命又は使用期間にわたって微生物の増殖を阻害し、製品の無菌性を確保することである。一般的に使用される保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、及び塩化ベンゼトニウムが挙げられる。抗菌保存剤活性を有する化合物の他の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、及びヘキサメトニウムクロリドが挙げられる。他の種類の保存剤としては、ブチルアルコール、フェノール、ベンジルアルコール、アテコール（ａｔｅｃｈｏｌ）、レゾルシノール、シクロヘキサノール、及び３−ペンタノールなどの芳香族アルコールが挙げられる。
【００６９】
複数回使用の注射ペンの体裁は任意に、保存製剤を含む。例えば、ｈＧＨの保存製剤は現在、市場で入手可能である。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（液体、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、Ｎｕｔｒｏｐｉｎ  ＡＱ（登録商標）（液体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）及びＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（凍結乾燥−デュアルチャンバーカートリッジ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）は、フェノールを含有する一方、Ｓｏｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、ｍ−クレゾールにより製剤化される。
【００７０】
保存処理された剤形の製剤開発中に、いくつかの態様が検討される。保存剤濃度の最適化は、タンパク質安定性を損なうことなく抗微生物有効性を付与する濃度範囲を有する剤形において所与の保存剤を試験することを含む。例えば、３つの保存剤が、インターロイキン−１受容体（Ｉ型）に対する液体製剤の開発において、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて成功裏にスクリーニングされた。保存剤は、市販されている製品中で一般に使用されている濃度での安定性に対する影響に基づいて、順位付けされた（Ｒｅｍｍｅｌｅ  ＲＬ  Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．，１５（２）：２００−８（１９９８））。
【００７１】
一部の保存剤は、注射部位反応を引き起こす場合があり、これは、保存剤を選択する際の考慮事項についての別の要素である。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ中の保存剤及び緩衝剤の評価に焦点を当てた臨床試験において、ｍ−クレゾールを含有する製剤と比べて、フェノール及びベンジルアルコールを含有する製剤中では、疼痛の知覚がより低いことが観察された（Ｋａｐｐｅｌｇａａｒｄ  Ａ．Ｍ．，Ｈｏｒｍ  Ｒｅｓ．６２  Ｓｕｐｐｌ  ３：９８−１０３（２００４））。興味深いことに、一般的に使用される保存剤のうち、ベンジルアルコールは麻酔特性を有する（Ｍｉｎｏｇｕｅ  ＳＣ，ａｎｄ  Ｓｕｎ  ＤＡ．，Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ．，１００（３）：６８３−６（２００５））。
【００７２】
本開示はまた、いずれの保存剤も含まない医薬組成物を企図する。
【００７３】
マスクされた抗体結合タンパク質
本明細書に記載の医薬組成物又は製剤は、マスクされた抗原結合タンパク質を含む。「マスクされた抗原結合タンパク質」とは、ＭＤの結合が、その抗原に対するＡＢの結合を阻害又は低減するように、抗原結合性ドメイン（ＡＢ）に結合されたマスキングドメイン（ＭＤ）（例えば、共有結合又はリンカーを介して）を含むタンパク質である。ＭＤはさらに、タンパク質又はプロテアーゼがタンパク質認識部位に結合し、且つ／又はタンパク質認識部位を切断する場合に、ＡＢドメインが抗原に結合するか、或いはＡＢドメインによる抗原への結合が増加又は誘発されるような、タンパク質若しくはプロテアーゼに対する基質又は結合部位を含むタンパク質認識部位（ＰＲ）を含む。マスクされた抗原結合タンパク質は、以前に例えば、国際公開第２０１７／０４０３４４号パンフレット、米国特許第９５４０４４０号明細書、米国特許出願公開第２０１５０１１８２５４号明細書、米国特許第９１２７０５３号明細書、米国特許第９５１７２７６号明細書、及び米国特許第８５６３２６９号明細書に記述されており、それぞれの全体が参照により本明細に組み込まれる。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質はＰｒｏｂｏｄｙ（例えば、図１１；又はＰｏｌｕ  ＫＲ  ａｎｄ  Ｌｏｗｍａｎ  ＨＢ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１４  Ａｕｇ；１４（８）：１０４９−５３；又はＤｅｓｎｏｙｅｒｓ  ＬＲ  ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｏｃｔ  １６；５（２０７）に記載されている）又はＰｒｏＴＩＡプロドラッグ（例えば、図１２；又はＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｖ．Ａｍｕｎｉｘ  ｕｎｖｅｉｌｓ  ｎｅｘｔ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｍｍｕｎｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ．ｈｔｔｐｓ：／／ｂｉｏｐｈａｒｍａｄｅａｌｍａｋｅｒｓ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ．Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２０１６  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂ２０に記載されており；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｍｕｎｉｘ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／ｐｒｏ−ｔｉａ／も参照）である。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、以下の：ＭＤ−ＡＢ又はＡＢ−ＭＤのようなＮ末端からＣ末端までの構造配置を有する。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、リンキングペプチド（ＬＰ）を含み、且つマスクされた抗原結合タンパク質は、以下の：ＭＤ−ＬＰ−ＡＢ又はＡＢ−ＬＰ−ＭＤのようなＮ末端からＣ末端までの構造配置を有する。
【００７４】
上述のように、「マスクされた抗原結合タンパク質」という用語は、その未処理状態と、タンパク質又はプロテアーゼが、マスクされた抗原結合タンパク質のタンパク質認識部位（ＰＲ）内の結合性部位若しくは基質に結合し、その結果、ＰＲの切断又は構造的コンフォメーションの変化が誘発され得る場合の状態（つまり、活性状態）と、の両方のマスクされた抗原結合タンパク質を意味する。したがって、一部の実施形態において、プロテアーゼによりＰＲが切断し、その結果、少なくともＭＤが放出されるため（例えば、ＭＤが共有結合（例えば、システイン残基間のジスルフィド結合）によってマスクされた抗原結合タンパク質に結合しない場合）、マスクされた抗原結合タンパク質がＭＤを欠き得ることは当業者には明らかであるだろう。
【００７５】
マスクされた抗原結合タンパク質が未処理状態で抗原の存在下にある場合、抗原へのＡＢの結合は、マスクされた抗原結合タンパク質が活性状態にある場合（つまり、タンパク質若しくはプロテアーゼがＰＲに結合し、且つ／又はＭＤを除去若しくは移行させる場合）の抗原へのＡＢの結合と比較して、低減又は抑制される。ＭＤと会合していないＡＢの結合（つまり、マスクされた抗原結合タンパク質が活性状態にある場合）と比較した場合、天然状態でのマスクされた抗原結合タンパク質が抗原に結合する能力は、生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）及び／又は生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）結合アッセイで測定した場合に、例えば、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％低下する。
【００７６】
一部の実施形態において、タンパク質認識部位（ＰＲ）は、プロテアーゼ、好ましくは細胞外プロテアーゼの基質として機能する。ＰＲは、抗原を発現する細胞付近の細胞（例えば、腫瘍細胞など）によって産生され、且つ／又はマスクされた抗原結合タンパク質のＡＢの目的の抗原と組織において共存する細胞（例えば、腫瘍細胞など）によって産生される、タンパク質又はプロテアーゼをベースに選択され得る。一部の実施形態において、プロテアーゼはｕ型プラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも呼ばれる）、レグマイン、及び／又はマトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１又はＭＴＳＰ１とも呼ばれる）である。一部の実施形態において、プロテアーゼはマトリックス金属プロテアーゼ（ＭＭＰ）である。一部の実施形態において、プロテアーゼは、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｎ．ａｎｄ  Ｓａｌｖｅｓｅｎ，Ｇ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１３．ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２１９−２に記載のプロテアーゼの１つである。
【００７７】
本明細書に記載の医薬組成物は、酸性（ｐＨ７．０未満）、中性（約ｐＨ７．０）又は塩基性（ｐＨ７．０を超える）であるｐＩを有するＡＢ又はＭＤを有するマスクされた抗原結合タンパク質を含有し得る。一部の実施形態において、二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質におけるＡＢドメインは酸性、中性及び／又は塩基性ｐＩを有し得るが、ＭＤも酸性、中性及び／又は塩基性ｐＩを有し得る。一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、酸性、中性又は塩基性であるｐＩを有するＡＢ又はＭＤを有するマスクされた抗原結合タンパク質を含有するか、或いは酸性ｐＩを有するＡＢ及び中性若しくは塩基性ｐＩを有するＭＤを有する。他の実施形態において、ＡＢは中性若しくは塩基性ｐＩを有し、ＭＤは酸性ｐＩを有する。
【００７８】
一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ）を含む。一部の実施形態において、抗原に結合する抗体又はその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、メイン抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、又は単一ドメイン軽鎖抗体である。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合性断片は、マウス、キメラ、ヒト化又は完全ヒトモノクローナル抗体である。一部の好ましい実施形態において、抗原結合性断片はＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、又はｓｃＡｂである。
【００７９】
一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合性断片は、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＣＤＨ３、ＣＤ３又はその組合せからなる群から選択される抗原に結合する。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合性断片は、ホルモン、成長因子、サイトカイン、細胞表面受容体、又はそのいずれかのリガンドからなる群から選択される抗原に結合する。一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合性断片は、かかるサイトカイン、リンホカイン、成長因子からなる群から選択される抗原に結合し、或いは造血因子としては、限定されないが：Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＦＮ、ＴＮＦα、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポエチン、幹細胞因子、及びエリスロポエチンが挙げられる。本明細書において使用される、さらなる増殖因子としては、アンジオゲニン、骨形態形成タンパク質−１、骨形態形成タンパク質−２、骨形態形成タンパク質−３、骨形態形成タンパク質−４、骨形態形成タンパク質−５、骨形態形成タンパク質−６、骨形態形成タンパク質−７、骨形態形成タンパク質−８、骨形態形成タンパク質−９、骨形態形成タンパク質−１０、骨形態形成タンパク質−１１、骨形態形成タンパク質−１２、骨形態形成タンパク質−１３、骨形態形成タンパク質−１４、骨形態形成タンパク質−１５、骨形態形成タンパク質受容体ＩＡ、骨形態形成タンパク質受容体ＩＢ、脳由来神経栄養因子、毛様体ニュートロフィック（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃ）因子、毛様体ニュートロフィック（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃ）因子受容体α、サイトカイン誘導性好中球走化性因子１、サイトカイン誘導性好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導性好中球走化性因子２β、β内皮細胞増殖因子、エンドセリン１、上皮由来好中球誘因物質、グリア細胞由来ニュートロフィック（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃ）因子受容体α１、グリア細胞由来ニュートロフィック（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃ）因子受容体α２、増殖関連タンパク質、増殖関連タンパク質α、増殖関連タンパク質β、増殖関連タンパク質γ、ヘパリン結合性上皮増殖因子、肝細胞増殖因子、肝細胞増殖因子受容体、インスリン様増殖因子Ｉ、インスリン様増殖因子受容体、インスリン様増殖因子ＩＩ、インスリン様増殖因子結合タンパク質、ケラチノサイト増殖因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経成長因子、神経成長因子受容体、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、プレＢ細胞増殖刺激因子、幹細胞因子、幹細胞因子受容体、トランスフォーミング増殖因子α、トランスフォーミング増殖因子β、トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β１．２、トランスフォーミング増殖因子β２、トランスフォーミング増殖因子β３、トランスフォーミング増殖因子β５、潜在型トランスフォーミング増殖因子β１、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質Ｉ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング増殖因子β結合タンパク���ＩＩＩ、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、腫瘍壊死因子受容体ＩＩ型、ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性化因子受容体、並びにキメラタンパク質及びその生物学的若しくは免疫学的に活性な断片が挙げられる。
【００８０】
一部の実施形態において、抗体又はその抗原結合性断片は、ｐ５３、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢ、ＭＡＧＥＣ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＬＡＧＥ／ＮＹ−ＥＳＯ１、ＳＳＸ、チロシナーゼ、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＲＡＧＥ−１、ＨＥＲ２／ＮＥＵ、ＷＴ１からなる群から選択される抗原に結合する。
【００８１】
例示的な態様において、抗体又はその抗原結合性断片は、免疫細胞の表面に発現する抗原に結合する。一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、以下の：ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１１Ｃ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１，ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ６６ｆ、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤｗ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤｗ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤｗ１３６、ＣＤｗ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６、及びＣＤ１８２からなる群から選択される分化分子のクラスターに結合する。
【００８２】
一部の実施形態において、抗体又は抗原結合性断片は、ムロモナブ−ＣＤ３（商品名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  Ｏｋｔ３（登録商標）で市販される製品）、アブシキシマブ（商品名Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）で市販される製品）、リツキシマブ（商品名ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）で市販される製品）（米国特許第５，８４３，４３９号明細書）、バシリキシマブ（商品名Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）で市販される製品）、ダクリズマブ（商品名Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）で市販される製品）、パリビズマブ（商品名Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）で市販される製品）、インフリキシマブ（商品名Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）で市販される製品）、トラスツズマブ（商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で市販される製品）、アレムツズマブ（商品名ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（登録商標）で市販される製品）、アダリムマブ（商品名Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）で市販される製品）、トシツモマブ−Ｉ１３１（商品名Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）で市販される製品）、エファリズマブ（商品名Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）で市販される製品）、セツキシマブ（商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）で市販される製品）、イブリツモマブ・チウキセタン（商品名Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）で市販される製品）、オマリズマブ（商品名Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）で市販される製品）、ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）で市販される製品）、ナタリズマブ（商品名Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）で市販される製品）、ラニビズマブ（商品名Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）で市販される製品）、パニツムマブ（商品名Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）で市販される製品）、エクリズマブ（商品名Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）で市販される製品）、セルトリズマブ・ペゴル（商品名Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）で市販される製品）、ゴリムマブ（商品名Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標）で市販される製品）、カナキヌマブ（商品名Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）で市販される製品）、カツマキソマブ（商品名Ｒｅｍｏｖａｂ（登録商標）で市販される製品）、ウステキヌマブ（商品名Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標）で市販される製品）、トシリズマブ（商品名ＲｏＡｃｔｅｍｒａ（登録商標）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）で市販される製品）、オファツムマブ（商品名Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）で市販される製品）、デノスマブ（商品名Ｐｒｏｌｉａ（登録商標）で市販される製品）、ベリムマブ（商品名Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）で市販される製品）、ラキシバクマブ、イピリムマブ（商品名Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）で市販される製品）及びペルツズマブ（商品名Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）で市販される製品）からなる群から選択される。例示的な実施形態において、抗体は、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、及びセルトリズマブ・ペゴルなどの抗ＴＮＦアルファ抗体；カナキヌマブなどの抗ＩＬ１β抗体；ウステキヌマブ及びブリアキヌマブなどの抗ＩＬ１２／２３（ｐ４０）抗体；並びにダクリズマブなどの抗ＩＬ２Ｒ抗体のうちの１つである。適切な抗癌抗体の例としては、ベリムマブなどの抗ＢＡＦＦ抗体；リツキシマ��などの抗ＣＤ２０抗体；エプラツズマブなどの抗ＣＤ２２抗体；ダクリズマブなどの抗ＣＤ２５抗体；イラツムマブなどの抗ＣＤ３０抗体、ゲムツズマブなどの抗ＣＤ３３抗体、アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２抗体；イピリムマブなどの抗ＣＤ１５２抗体；セツキシマブなどの抗ＥＧＦＲ抗体；トラスツズマブ及びペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；シルツキシマブなどの抗ＩＬ６抗体；ベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；並びにトシリズマブなどの抗ＩＬ６受容体抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
一部の実施形態において、医薬組成物は、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質を含む。マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は以前に記述されている。例えば、国際公開第２０１７／０４０３４４号パンフレット；米国特許出願公開第２０１５／００７９０８８号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。「マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質」は、２つの異なる抗原又はエピトープに結合するマスクされた抗原結合タンパク質であり、「マスクされた多重特異性抗原結合タンパク質」は、３つ以上の異なる抗原又はエピトープを認識するマスクされた抗原結合タンパク質である。
【００８４】
一部の実施形態において、二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質の１つの抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）ドメインは、標的抗原に対する特異性を有し、且つもう１つの抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ２）ドメインはもう１つの標的抗原に対する特異性を有する。一部の実施形態において、二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質の１つの抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ１）ドメインは、標的抗原のエピトープに対する特異性を有し、且つもう１つの抗体又はその抗原結合性断片（ＡＢ２）ドメインは、同じ標的抗原のもう１つのエピトープに対する特異性を有する。
【００８５】
マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、タンパク質認識部位（ＰＲ）を含む少なくとも１種類のマスキングドメイン（ＭＤ）を含み、ＭＤは抗原に対するＡＢの結合を阻害又は抑制する。その少なくとも１種類のＭＤは、タンパク質又はプロテアーゼに対する基質又は結合部位を含むタンパク質認識部位（ＰＲ）を含み、そのためタンパク質又はプロテアーゼがプロテアーゼ認識部位に結合し、且つ／又はプロテアーゼ認識部位を切断した場合に、ＡＢドメインが抗原に結合するか、又は結合が増加する。マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質に関して、マスクされた抗原結合タンパク質は好ましくは、そのそれぞれの抗原若しくはエピトープに各抗原結合性ドメイン（ＡＢ１及びＡＢ２）が結合する能力を低減する、２つのＭＤ（例えば、ＭＤ１及びＭＤ２）を含む。
【００８６】
本明細書において提供されるマスクされた抗原結合タンパク質及び／又はマスクされた二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質は、循環において安定であり、治療及び／又は診断の意図する部位にて活性化されるが、正常な（つまり、健康な）組織においてはそうではない。活性状態にある場合、マスクされた抗原結合タンパク質及び／又はマスクされた二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質は、相当する未修飾の抗体又は二重特異性若しくは多重特異性抗原結合タンパク質（つまり、マスキングドメインを含まない抗体相当物）と少なくとも同等である抗原への結合を示す。
【００８７】
「抗体」という用語は、重及び軽鎖を含み、且つ可変及び定常領域を含む、従来の免疫グロブリン構成を有するタンパク質を指す。例えば、抗体は、２つの同一ペアのポリペプチド鎖の「Ｙ字形」構造であり、各ペアは１本の「軽」鎖（通常、分子量約２５ｋＤａを有する）及び１本の「重」鎖（通常、分子量約５０〜７０ｋＤａを有する）を有する、ＩｇＧであり得る。抗体は、可変領域及び定常領域を有する。ＩｇＧ形式において、可変領域は一般に、約１００〜１１０以上のアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、抗原認識に主に関与し、且つ異なる抗原に結合する他の抗体間で実質的に変動する。例えば、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇｅｎｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，４ｔｈｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（１９９９）を参照されたい。抗体はさらに任意に、その抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のうちのいずれか１つなど、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭ抗体であり得るような正常ドメインを含み得る。可変領域は通常、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖ＣＤＲを含み（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）、それらはフレームワーク領域（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１によってフレームワーク領域１〜４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４と呼ばれている；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７、前掲も参照のこと）の中にある。定常領域は、抗体が免疫系の細胞及び分子を動員することを可能にする。
【００８８】
「抗体断片」、「その抗体断片」、又は「抗原結合性抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を意味する。「抗原結合性断片」又は「その抗原結合性断片」は、抗原に結合するインタクトな抗体の一部を指す。抗原結合性断片は、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を含み得る。抗体断片の抗原結合性断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線形抗体、ｓｃＦｖ、並びに一本鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
様々な態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。ある種の態様では、抗体はヒト抗体である。特定の態様において、抗体はキメラ又はヒト化抗体である。用語「キメラ」は、２つ以上の異なる抗体に由来するドメインを含有する抗体を指す。キメラ抗体は、例えば、１つの種に由来する定常ドメイン及び第２の種に由来する可変ドメインを含有することができるか、又はより一般的には、少なくとも２つの種に由来する一続きのアミノ酸配列を含有することができる。「キメラ」及び「ヒト化」の両方が、２つ以上の種に由来する領域を組み合わせる抗原結合タンパク質を指す場合が多い。キメラ抗体は、同じ種内の２つ以上の異なる抗体のドメインも含有し得る。一実施形態では、キメラ抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。
【００９０】
「ヒト化」という用語は、抗原結合タンパク質に関して使用される場合、元の供給源の抗体よりも真のヒト抗体に類似した構造及び免疫機能を有するように操作された、非ヒト供給源に由来するＣＤＲ領域を少なくとも有する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）を指す。例えば、ヒト化は、マウス抗体などの非ヒト抗体に由来するＣＤＲをヒトフレームワーク領域に移植することを伴い得る。一般的に、ヒト化抗体において、ＣＤＲを除く抗体の全体は、ヒト起源のポリヌクレオチドによってコードされるか、又はそのＣＤＲの範囲内を除いてそのような抗体と同一である。一部又は全てが非ヒト生物に起源をもつ核酸によってコードされるＣＤＲがヒト抗体可変領域のベータシートフレームワークに移植されて抗体を生成し、その特異性は、移植されたＣＤＲによって決定される。そのような抗体の作製は、例えば、国際公開第９２／１１０１８号パンフレット；Ｊｏｎｅｓ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６において記載されており、これらは全て、全体として参照により援用される。対応するドナー残基に対して選択されたアクセプターフレームワーク残基の「復帰変異」が、初期移植コンストラクトにおいて失われる親和性を回復するために利用されることが多い（例えば、全てが全体として参照により援用される、米国特許第５５３０１０１号明細書；同第５５８５０８９号明細書；同第５６９３７６１号明細書；同第５６９３７６２号明細書；同第６１８０３７０号明細書；同第５８５９２０５号明細書；同第５８２１３３７号明細書；同第６０５４２９７号明細書；及び同第６４０７２１３号明細書を参照のこと）。ヒト化抗体は、免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も最適に含み、これは通常、ヒト免疫グロブリンのものであり、したがって、通常ヒトＦｃ領域を含むことになる。
【００９１】
多重特異性抗体の非制限的な例としては、三重特異性抗体、四重特異性抗体等が挙げられる。マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質などのマスクされた抗原結合タンパク質は任意に多価であり；多価とは、結合部位が同一若しくは異なる抗原又はエピトープを認識するか否かに関わらず、抗体上の結合部位の総数を意味する。
【００９２】
種々の実施形態における本明細書に記載のマスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、ヒトＣＤ３（配列番号３）に結合する。例えば、種々の態様において、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞上でＣＤ３εの会合によってＴ細胞を活性化する。つまり、抗体は、ＣＤ３仲介Ｔ細胞活性化をアゴナイズし、刺激し、活性化し、且つ／又は増強する。ＣＤ３の生物活性としては、例えば、Ｔ細胞活性化、並びにＣＤ３とＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の抗原結合性サブユニットとの相互作用を介した他のシグナル伝達が挙げられる。
【００９３】
本明細書に開示されるマスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は任意に、結合定数（Ｋｄ）≦１μＭ、例えば、一部の実施形態において、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦１ｎＭを有するＣＤ３εに結合する。
【００９４】
種々の態様において、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に結合する。ヒトＥＧＦＲの配列が配列番号４として提供される。本明細書に開示されるマスクされた多重特異性抗原結合タンパク質は任意に、結合定数（Ｋｄ）≦１μＭ、例えば、一部の実施形態において、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦１ｎＭを有するヒトＥＧＦＲに結合する。
【００９５】
好ましい実施形態において、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、ＣＤ３とＥＧＦＲの両方に結合する。
【００９６】
一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、Ｆａｂ（例えば、ＩｇＧ  Ｆａｂ）である抗原結合性ドメイン及びｓｃＦｖである抗原結合性ドメインを含むようなヘテロ二量体である。例えば、例示的な実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質は、１つの標的（例えば、ＥＧＦＲ）に結合する重鎖及び軽鎖（例えば、ＩｇＧ重鎖及び軽鎖）と、第２の標的（例えば、ＣＤ３などのＴ細胞表面抗原）に結合するｓｃＦｖドメインと、を含む。一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬ及びＶＨ領域がリンカーによって結合されて（例えば、長さが通常約１５〜約２０アミノ酸のアミノ酸残基の合成配列）、連続したタンパク質鎖が形成される抗原結合タンパク質であり、そのリンカーは、タンパク質鎖がそれ自体で折り畳み、且つ一価抗原結合部位を形成するのに十分に長い（例えば、Ｂｉｒｄｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３参照）。ｓｃＦｖにおいて使用するのに適したリンカーの一例はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１）である。他の例示的なリンカーは、残基約４個〜約２０個の範囲の少なくとも４個〜５個のアミノ酸を含有する。
【００９７】
マスクされた抗原結合タンパク質の例示的なフォーマットは、（ｉ）１つ若しくは両方の重鎖のＮ末端付近で作動可能に連結されたｓｃＦｖを含む２本の重鎖と、（ｉｉ）重鎖と会合して抗原結合性ドメインを形成する２本の軽鎖と、を含み、ｓｃＦｖがＣＤ３に結合し、Ｆａｂ部分がＥＧＦＲに結合する。この実施例において、２つ以上の異なる抗原（又はエピトープ）に通常結合する、抗原結合タンパク質は３つ（又は４つの）抗原結合性ドメインを含む。重鎖可変領域へのｓｃＦｖの連鎖に適したリンカーの一例はＧＧＧＧＳ（配列番号２）である。例示的なリンカーは、４個〜５個のアミノ酸を有する少なくとも１つの適切なリンカーを含有する。
【００９８】
マスクされた抗原結合タンパク質は、抗体（ＡＢ）に結合された（例えば、共有結合又は他の形態の結合によって）マスキングドメイン（ＭＤ）を含む。マスキングドメイン（ＭＤ）は、マスキングペプチド（又はマスキングポリペプチド）（ＭＰ）及びタンパク質認識部位（ＰＲ）を含む。マスキングペプチド（又はマスキングポリペプチド）は、その抗原への抗原結合性ドメインの結合を妨害するアミノ酸のストレッチであり得る。一般に、マスキングペプチド、長さ５〜１５アミノ酸の短い配列が用いられるが、それより短い配列、及び長い配列（つまり、マスキングポリペプチド）も企図される。マスキングドメインはさらに、例えば国際公開第２０１７／０４０３４４号パンフレット；米国特許出願公開第２０１５／００７９０８８号明細書（その全体が、特に、ＥＧＦＲに結合する抗体と共に使用されるマスキングドメインの開示に関して、参照により本明細書に組み込まれる）及び米国特許出願公開第２０１６／０１９４３９９号明細書（その全体が、特に、ＣＤ３に結合する抗体と共に使用されるマスキングドメインの開示に関して、参照により本明細書に組み込まれる）に記述されている。
【００９９】
一部の実施形態において、マスキングペプチド（又はマスキングポリペプチド）（ＭＰ）は、任意に、より大きなリンカー配列の一部（つまり、抗原結合タンパク質にＭＰを連結するアミノ酸のストレッチ）である、タンパク質認識部位（ＰＲ）を介して抗原結合性ドメイン（ＡＢ）に結合される。ＰＲは、タンパク質又はプロテアーゼ、好ましくは細胞外プロテアーゼに対する基質（又は結合部位）として機能する。ＰＲは、標的を発現する細胞付近の細胞（例えば、腫瘍細胞など）によって産生され、且つ／又はマスクされた抗原結合タンパク質の少なくとも１つのＡＢの目的の標的と組織において共存する細胞（例えば、腫瘍細胞など）によって産生される、タンパク質又はプロテアーゼに基づいて選択され得る。一部の実施形態において、プロテアーゼはｕ型プラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも呼ばれる）、レグマイン、及び／又はマトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１又はＭＴＳＰ１とも呼ばれる）である。一部の実施形態において、プロテアーゼはマトリックス金属プロテアーゼ（ＭＭＰ）である。一部の実施形態において、プロテアーゼは、Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｎ．ａｎｄ  Ｓａｌｖｅｓｅｎ，Ｇ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１３．ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２１９−２に記載のプロテアーゼの１つである。  その代わりとして、ＭＰは、非切断型タンパク質結合性ドメインを介して抗原結合性タンパク質に結合される。これに関して、ＰＲは任意に、例えばタンパク質又はプロテアーゼと相互作用すると、ＭＰの位置が調節され、ＡＢが標的に自由に結合するようにコンフォメーション変化するアミノ酸配列である。
【０１００】
本開示の種々の態様において、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、構築物のそれぞれの抗原結合部分（例えば、ＡＢ１、ＡＢ２、ＡＢ３等）に対するＭＤを含む。例えば、２つのＦａｂ部分及び２つのｓｃＦｖを含む、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、独立して同一又は異なり得る、２セットのＭＤを含み得る。例証するために、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質は、（ｉ）それぞれのｓｃＦｖに結合されたＣＤ３及びＭＤ１に結合する２つのｓｃＦｖ（任意に、各ｓｃＦｖに同じＭＤ）と、（ｉｉ）それぞれのＦａｂに結合されたＥＧＦＲ及びＭＤ２に結合する２つのＦａｂ部分（任意に、各Ｆａｂに同じＭＤ）と、を含む。種々の態様において、ＭＤ１及びＭＤ２のＰＲは、同じタンパク質認識配列を含み、プロテアーゼと会合した後に同じ環境においてそれぞれの結合領域に対してＭＤが放出されることが可能となる。ＭＤが標的への抗原結合性ドメインの結合を妨害することができ、且つＭＤが放出された後にリンカーが結合を妨げない限り、ＭＤは、抗原結合性ドメインのＮ末端又はＣ末端にて結合され得る。抗原結合性ドメインがＦａｂである場合、ＭＤは、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に作動可能に連結され得る。マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質が、Ｆａｂ抗原結合性ドメインと重鎖に融合されたｓｃＦｖの両方（つまり、「スタック」コンフォメーション）を有するインタクトな抗体を含む場合に、Ｆａｂ抗原結合性ドメインと会合したＭＤは好ましくは、軽鎖可変領域に融合される。
【０１０１】
一部の実施形態において、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質における１つのＡＢドメイン（例えば、ＡＢ１）は、ＣＤ３などのＴ細胞表面リガンドに会合し、任意にｓｃＦｖの形態をとる。ＣＤ３に会合する例示的なマスクされた抗原結合タンパク質としては、限定されないが、国際公開第２０１７／０４０３４４号パンフレット、米国特許出願公開第２０１６０１９４３９９号明細書（その全体が参照により組み込まれる）に開示のタンパク質が挙げられる。
【０１０２】
一部の実施形態において、抗原結合タンパク質における１つのＡＢドメイン（例えば、ＡＢ２）は、ＥＧＦＲなどの腫瘍抗原に会合する。ＥＧＦＲに会合する例示的なマスクされた抗原結合タンパク質は、限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１５００７９０８８号明細書に開示の抗体が挙げられる。
【０１０３】
一部の実施形態において、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）は、抗体の等電点を変化させるために修飾される。例えば、一部の実施形態において、１つ又は両方のマスキングドメインにおける、１つ又は複数の負に荷電した、ｐＨ感受性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）が、正に荷電したアミノ酸（例えば、リジン又はアルギニン）で置換される。一部の実施形態において、抗体の１つ又は複数のマスキング部位におけるアスパラギン酸の置換によってｐＩが増加し得る。一部の実施形態において、１つ又は両方のマスキングドメインにおける、その１つ又は複数の負に荷電した、ｐＨ感受性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）は、除去されるか、又は天然アミノ酸で置換される。
【０１０４】
本開示のマスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）は、インタクトな抗体構造を含むと本明細書に記載される場合が多いが、本開示内容は、従来の重鎖２本／軽鎖２本の構造の少なくとも一部を欠く抗原結合性抗体断片の使用も企図する。マスクされた抗原結合タンパク質として用いられる断片は、上述の、マスキングドメイン（ＭＤ）に作動可能に連結されている抗原結合性ドメイン（ＡＢ）を含む。例えば、一部の実施形態において、抗原結合タンパク質は、適切なリンカー（例えば、その標的にそれぞれのｓｃＦｖが結合することを可能にするのに十分な長さのアミノ酸のストレッチ）によって連結された２つのｓｃＦｖを含む。１つ又は両方のｓｃＦｖがＭＤに結合され；両方のｓｃＦｖがＭＤに結合される場合、ＭＤは同一又は異なり得る（つまり、種々の態様において、ＭＰ及び／又はＰＲは異なるが、ＰＲは同一であることが好ましい）。
【０１０５】
一部の実施形態では、医薬組成物又は製剤は、約５０μｇ〜約２００ｍｇ（又は約５００μｇ〜約１５０ｍｇ、又は約５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、又は約５０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、又は約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、又は約５０ｍｇ〜約７５ｍｇ）の範囲の量で、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約５０μｇ、約１００μｇ、約１５０μｇ、約２００μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、約３５０μｇ、約４００μｇ、約４５０μｇ、約５００μｇ、約５５０μｇ、約６００μｇ、約６５０μｇ、約７００μｇ、約７５０μｇ、約８００μｇ、約８５０μｇ、約９００μｇ、約９５０μｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５、ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ又は約２００ｍｇの量で、マスクされた抗原結合タンパク質（マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）を含む。
【０１０６】
一部の実施形態において、医薬組成物は、約０．１〜約５０ｍｇ／ｍＬ（或いは、約１〜約１０ｍｇ／ｍＬ又は約１０〜約２０ｍｇ／ｍＬ、又は２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、又は約１〜約１７ｍｇ／ｍＬ、又は約０．５〜約５ｍｇ／ｍＬ又は約１〜約５ｍｇ／ｍＬ、又は約３〜約６ｍｇ／ｍＬ）の範囲の濃度で、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）を含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３１ｍｇ／ｍＬ、約３２ｍｇ／ｍＬ、約３３ｍｇ／ｍＬ、約３４ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約３６ｍｇ／ｍＬ、約３７ｍｇ／ｍＬ、約３８ｍｇ／ｍＬ、約３９ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４１ｍｇ／ｍＬ、約４２ｍｇ／ｍＬ、約４３ｍｇ／ｍＬ、約４４ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約４６ｍｇ／ｍＬ、約４７ｍｇ／ｍＬ、約４８ｍｇ／ｍＬ、約４９ｍｇ／ｍＬ又は約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で、マスクされた抗原結合タンパク質を含む。
【０１０７】
製剤の投薬及び治療的使用
用語「有効用量」又は「有効投与量」は、所望の効果を達成するか又は少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、疾患にすでに罹患している患者の疾患及びその合併症を治癒するか又は少なくとも部分的に抑止するのに十分な量と定義される。この用途に効果的な量又は用量は、治療される病態（適応症）、送達される抗体コンストラクト、治療の内容及び目的、疾患の重症度、前治療、患者の病歴及び治療薬に対する反応性、投与経路、体格（体重、体表面積又は臓器サイズ）及び／又は患者の状態（年齢及び全身健康状態）並びに患者自身の免疫系の全身状態に依存することになる。適当な用量は、１回の投与又は複数回にわたる投与で患者に投与できるように、また最適な治療効果を得るために主治医の判断に従って調整することができる。
【０１０８】
治療有効量のマスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）は好ましくは、疾患症状の重症度を低下させるか、疾患症状がない期間の頻度若しくは期間を増加させるか、又は疾患の苦痛に起因する機能障害若しくは能力障害の予防をもたらす。本明細書に記載のマスクされた抗原結合タンパク質（マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）によって認識される抗原を発現する、癌、腫瘍、又は悪性細胞の治療では、治療有効量のマスクされた抗原結合タンパク質、例えば、抗腫瘍細胞抗原（例えば、ＥＧＦＲ）／抗ＣＤ３マスク二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質が好ましくは、未治療患者と比べて、その細胞分裂又は腫瘍成長を少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％抑制する。腫瘍増殖を阻害する分子の能力は、例えば、有効性を予測する動物モデルにおいて評価され得る。
【０１０９】
本明細書に記載の医薬組成物及び製剤は、その必要がある患者における、本明細書に記載の病理学的な病状の治療、改善及び／又は予防に有用である。用語「治療」は、治療的処置及び予防的又は防御的手段の両方を指す。治療は、疾患、疾患の症状又は疾患の素因を治癒する、治す、軽減する、緩和する、変化させる、矯正する、改善する、好転させる又は影響を与えることを目的とした、疾患／障害、疾患／障害の症状又は疾患／障害の素因を有する患者の身体、単離された組織又は細胞に対する製剤の適用又は投与を含む。用語「疾患」は、本明細書に記載される医薬組成物による治療から利益を得ることになる任意の状態を指す。これには、哺乳類において問題の疾患の素因になる病理学的状態を含めた慢性及び急性障害又は疾患が含まれる。本明細書で使用される、「改善」という用語は、その必要がある対象に、マスクされた抗原結合タンパク質を投与することによる疾患状態の（例えば、腫瘍又は癌又は転移性の癌を有する患者の）いずれかの改善を意味する。癌の文脈において、かかる改善は、例えば、患者の腫瘍又は癌又は転移性癌の進行遅らせること、又は止めることと見なされ得る。本明細書で使用される用語「予防」とは、その疾患又は障害又は症状の発生又は再発の回避を意味する。例えば、癌の文脈において、「予防」とは、対象における腫瘍又は癌又は転移性癌の発生又は再発の回避を包含する。
【０１１０】
一部の実施形態において、本開示は、本明細書に記載のマスクされた抗原結合タンパク質によって認識される抗原（１つ又は複数）と関連する障害又は疾患を治療する方法を提供する。
【０１１１】
一実施形態において、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物を、その必要がある対象に投与する工程を含む、増殖性疾患、例えば癌又は腫瘍性疾患を治療する方法を提供する。悪性新生物（一般に癌と呼ばれる）は通常、周囲組織に浸潤してそれを破壊し、且つ転移を形成することもあり、すなわち体の他の部分、組織又は臓器に広がる。したがって、用語「転移性癌」は、原発腫瘍のもの以外の他の組織又は臓器への転移を包含する。「必要とする対象」又は「治療を必要とする」対象という用語は、すでにその障害を有する対象及びその障害を予防しようとする対象を含む。必要とする対象又は「患者」は、予防的治療又は治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。
【０１１２】
投与経路
例示的な投与経路としては、局所経路（例えば、皮膚上、吸入、鼻、点眼、耳介／耳、膣、粘膜）；経腸経路（例えば、経口、胃腸、舌下、唇下、頬側、直腸）；及び非経口経路（例えば、静脈内、動脈内、骨内、筋肉内、脳内、脳室内、硬膜外、髄腔内、皮下、腹腔内、羊膜外、関節内、心臓内、皮内、病巣内、子宮内、膀胱内、硝子体内、経皮、鼻腔内、経粘膜、滑液嚢内、管腔内）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、医薬組成物は、非経口的に、例えば、静脈内、皮下、又は筋肉内投与される。非経口投与は、ボーラス注射などの注射、又は持続注入などの注入によって実現され得る。投与は、長期間放出のためのデポーを介して実現され得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、初回のボーラス後に持続注入によって静脈内投与されて、薬物製品の治療上の循環レベルを維持する。一部の実施形態では、医薬組成物は、１回用量として投与される。医薬組成物は、医療装置を使用して投与され得る。医薬組成物の投与用医療装置の例については、米国特許第４，４７５，１９６号明細書；同第４，４３９，１９６号明細書；同第４，４４７，２２４号明細書；同第４，４４７，２３３号明細書；同第４，４８６，１９４号明細書；同第４，４８７，６０３号明細書；同第４，５９６，５５６号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；及び同第５，３９９，１６３号明細書に記載されている。
【０１１３】
本開示は、本明細書に記載の特徴を有する凍結乾燥組成物を企図する。医薬組成物が凍結乾燥されている場合、凍結乾燥された材料は最初に、投与前に適切な液体で再構成される。凍結乾燥された材料は、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）又はタンパク質が凍結乾燥前にあったのと同じ製剤で再構成され得る。本開示は、本明細書に記載の特徴を有する、予め凍結乾燥された組成物の再構成組成物を企図する。医薬組成物は、単独療法で投与するか、又は必要に応じて抗癌療法などの追加の療法、例えば他のタンパク質性及び非タンパク質性薬物と併用して投与することができる。これらの薬物は、本明細書で定義される本開示の組成物と同時に投与され得るか、又は前記製剤の投与前若しくは投与後に既定の時間間隔及び用量で別々に投与され得る。
【０１１４】
キット
さらなる態様として、対象への投与のためのそれらの使用を容易にする様式でパッケージされた本明細書に記載される１つ又は複数の医薬組成物を含むキットが提供される。一実施形態では、かかるキットは、任意選択により容器に貼付されたラベルを伴って密封ボトル、容器、単回使用若しくは複数回使用用バイアル、プレフィルドシリンジ、又はプレフィルド注射デバイスなどの容器にパッケージされるか、又は方法を実践する際の化合物若しくは組成物の使用を記載するパッケージに含まれる、本明細書に記載される医薬組成物（例えば、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質）を含む組成物）を含む。一態様では、組成物は、単位剤形にパッケージされる。キットはさらに、特定の投与経路に従って、組成物を投与するのに好適なデバイスを含んでもよい。好ましくは、そのキットは、本明細書に記載のマスクされた抗原結合タンパク質又は本明細書に記載の医薬組成物の使用について述べたラベルを含有する。
【０１１５】
一般に、本発明の医薬組成物に関して、様々な保管形態及び／又は剤形が、すなわち、意図される投与経路、送達形式及び所望の投与量に応じて考えられる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（２０１２）を参照されたい）。当業者であれば、このような特定の剤形の選択は、例えば、抗体の物理的状態、安定性、インビボでの放出速度及びインビボでのクリアランス速度に影響を及ぼし得ることを認識するであろう。
【実施例】
【０１１６】
実施例１
マスクされた抗原結合タンパク質組成物の凝集に対するサッカリド安定剤（例えば、ショ糖）及び低ｐＨの影響
１００ｍＭグリシン（ｐＨ４．９）中にマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質（１ｍｇ／ｍＬ）を含む組成物が生成された（製剤Ａ）。高分子量（ＨＭＷ）種を約２７〜２８％有する、この液体組成物は、２〜８℃で貯蔵した直後、又は２〜８℃で４週間貯蔵した後に、著しい凝集を示した（図６、７及び１０参照）。
【０１１７】
安定性を向上させ、且つ凝集及びＨＭＷ種の量を低減することによって、組成物の臨床的有用性を向上させるために、ｐＨ３．６〜ｐＨ７．０の範囲のいくつかの製剤（製剤Ｂ〜Ｆ）中に以下の：
製剤Ｂ：１０ｍＭグルタミン酸塩、９％ショ糖、ｐＨ３．６；
製剤Ｃ：１０ｍＭグルタミン酸塩、９％ショ糖、ｐＨ４．２；
製剤Ｄ：１０ｍＭ酢酸塩、９％ショ糖、ｐＨ５．２；
製剤Ｅ：１０ｍＭリン酸塩、９％ショ糖、ｐＨ６．３；及び
製剤Ｆ：１０ｍＭリン酸塩、９％ショ糖、ｐＨ７．０；の通りに、組成物をバッファー交換した。
【０１１８】
３回のバッファー交換を用いて、カットオフ７０００ｋＤａカセット中で出発組成物を４℃にて一晩透析することによって、バッファー交換は行われた。０．０１％ポリソルベート８０を添加した後に、透析物質をバイアルに入れ、試料の安定性を２〜８℃及び２５℃にて１か月間モニターした。バイアルに入れられた、各製剤中のマスクされた抗原結合タンパク質の最終濃度は１ｍｇ／ｍＬであった。それぞれ２〜８℃及び２５℃にて２週間及び４週間で、サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）によって、全ての試料を分析した。製剤Ｂ〜ＦのＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果をそれぞれ、図１〜６に示す。製剤ＡのＳＥ−ＵＨＰＬＣ分析の結果を図１０に示す。
【０１１９】
図６Ａに示すように、高分子量（ＨＭＷ）種％は、出発組成物（つまり、製剤Ａ）と比較して、２〜８℃で４週間貯蔵した後に、低ｐＨの製剤において有意に減少した。例えば、確認された凝集が最も多い量から最も少ない量でランク付けされた、本明細書に記載のマスクされた抗原結合タンパク質製剤は、製剤Ａ＞製剤Ｆ＞製剤Ｅ＞製剤Ｄ＞製剤Ｃ＞製剤Ｂである。
【０１２０】
このデータから、マスクされた抗原結合タンパク質を含有する医薬組成物の安定性、凝集性及び臨床的有用性が：（１）サッカリド又は安定剤（例えば、ショ糖）の包含によって、凝集／ＨＭＷ種％が約３分の１に低減される、サッカリド又は安定剤（例えば、ショ糖）の添加；及び（２）低ｐＨでの医薬組成物の製剤化であって、そのｐＨが、マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２領域の等電点（ｐＩ）未満であり、それによって、凝集／ＨＭＷ種％がさらに約３分の１に低減される、製剤化；によって有意に向上することが強く示唆されている。マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２領域のｐＩが、Ｂｊｅｌｌｑｖｉｓｔアルゴリズムを用いて決定され、表１に示すマスクされた二重特異性抗原結合タンパク質２と同等なパターンを有した。４．５４を超えるｐＨで製剤化した場合には、負に荷電したＭＤ１が、別の正に荷電したタンパク質をキャップし、その結果、溶液不安定性となる可能性がある。それより低いｐＨ４では、全ての成分（例えば、ＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２）が様々な程度で正に荷電し、それによって斥力が生じる。サッカリド又は安定剤（例えば、ショ糖）と低ｐＨ（ｐＨが、マスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及び／又はＭＤ２領域の等電点（ｐＩ）未満である）との組合せが相乗的又は劇的に、マスクされた抗原結合タンパク質（例えば、マスクされた二重特異性又は多重特異性抗原結合タンパク質など）を含む医薬組成物の凝集／ＨＭＷ種％を低減することが、このデータによって強く裏付けられている。
【０１２１】
実施例２
マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質組成物の凝集が、サッカリド又は安定剤（例えば、ショ糖）の添加と低ｐＨによってリバースされる
凝集の開始レベルが高い、マスクされた二重特異性抗原結合タンパク質の試料を、実施例１に記載のように低ｐＨ製剤バッファー（製剤Ｃ）中にバッファー交換した。簡潔には、カットオフ７０００ｋＤａカセット中で出発原料を４℃にて一晩透析することによって、３回バッファーを交換して、バッファー交換を行った。透析プロセスによって、凝集レベルが有意に低減し、このことから、低ｐＨ製剤は初期の凝集をリバースすることができることが示唆されている。製剤ＡのＨＭＷ種２８．４９％を報告する図１０Ｂに対して、製剤ＣにおけるＨＭＷ種３．９１％を報告する図２Ｂのゼロ時点を比較する。この比較は、図７Ｂにも示されている。その流体力学的体積に基づいて、溶解状態のタンパク質を分離する技術、サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＨＰＬＣ）によって、サイズ排除超高性能分析カラムを用いて、試料を分析した。
【０１２２】
図８Ａ〜Ｂに示すように、１ｍｇ／ｍＬで透析された物質は、４℃及び２５℃で０、１及び２週間貯蔵した後に安定であった。貯蔵後の凝集レベルの増加は確認されなかった。２５℃で貯蔵された試料は、ＳＥＣによる高分子量種のわずかな低減を示し、このことから、凝集が疎水性相互作用によって誘導され得たことが示唆されている。
【０１２３】
低ｐＨ製剤（製剤Ｃ）は、より高い濃度のマスク二重特異性抗原結合タンパク質の安定化にも有効であった。低ｐＨ製剤バッファー（製剤Ｃ）中で１７ｍｇ／ｍＬのタンパク質は、１１ｍｇ／ｍＬの出発原料（製剤Ａ）と比較して、凝集が有意に低かった（図９）。物質１７ｍｇ／ｍＬは、４℃で０、２及び４週間貯蔵した後に安定であった（図９）。製剤Ｃは、製剤Ａ（図１０）と比較して、２〜８℃又は２５℃で０、２及び４週間にて凝集／ＨＭＷ種％の有意な減少を示し、安定性が向上したが（図２）、ｐＨ３．６の製剤Ｂは、製剤Ｃと比較して凝集／ＨＭＷ種％の更なる減少を示した（例えば、図６参照；図１も参照し、図２と比較されたい）。このデータから、既にマスクされた抗原結合タンパク質のＡＢ１、ＡＢ２、ＭＤ１及びＭＤ２領域の等電点（ｐＩ）未満である、医薬組成物のｐＨをさらに低減することによって、マスクされた抗原結合タンパク質の凝集がさらに低減されることが分かる。
【０１２４】
実施例３
マスクされた抗原結合タンパク質組成物の凝集に対するポリオール（例えば、ショ糖）及び低ｐＨの影響
国際公開第２０１７／０４０３４４号パンフレットの表５、１０及び／又は１２且つ／又は図３６若しくは３７に記載のアミノ酸配列を含むＰｒｏＴＩＡプロドラッグの抗体ドメイン（ＡＢ１及び／又はＡＢ２）及び充填剤／マスキングドメイン（ＭＤ１及び／又はＭＤ２）のｐＩが決定される。次に、ＰｒｏＴＩＡプロドラッグが、適切なポリオール（９％ショ糖など）と共に、任意に界面活性剤（０．０１％ポリソルベート８０など）と共に、適切な緩衝液（１０ｍＭグルタミン酸塩又は１０ｍＭ酢酸塩など）中で製剤化され、組成物のｐＨが、抗体ドメイン（ＡＢ１及び／又はＡＢ２）及び充填剤／マスキングドメイン（ＭＤ１及び／又はＭＤ２）のｐＩ未満となるように、約７．０〜３．５に下げられる。ＰｒｏＴＩＡプロドラッグ低ｐＨの凝集に対するポリオール及び低ｐＨの影響は、実施例１及び２に記載のように評価される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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