(57)【要約】【課題】前立腺がんの治療に特異的な髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）およびその使用の方法を提供する。【解決手段】本開示は、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球を含む化合物、および同化合物を作製し使用する方法を提供する。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
髄浸潤リンパ球で、前立腺がんを有する対象を治療する方法であって、
（ａ）前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルを、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と共に低酸素環境中で培養して、低酸素活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、
（ｂ）低酸素活性化髄浸潤リンパ球を正常酸素環境中で培養して、治療用活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、
（ｃ）治療用活性化髄浸潤リンパ球を、前立腺がんを有する対象に投与するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
低酸素環境が、約０％〜約５％の酸素の酸素含有率を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
リンパ球が、ＩＬ−２の存在下で培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球を正常酸素環境中で培養することが、ＩＬ−２の存在下で実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２４時間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
骨髄サンプルが、低酸素環境中で約３日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２日間〜約５日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
低酸素環境が、約１％〜約２％の酸素である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約２日間〜約１２日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約６日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約９日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ａ）の前に、骨髄サンプルを、がんを有する対象から取り出すステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が、ビーズ上に結合される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前立腺がんが、腺房腺がん、管状腺がん、去勢抵抗性、移行上皮がん、扁平上皮がんまたは小細胞前立腺がんのうちの１種または複数である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
治療用活性化髄浸潤リンパ球で、前立腺がんを有する対象を治療する方法であって、
（ａ）前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルを、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に約１％〜約２％の酸素の低酸素環境中で約２〜約５日間培養して、低酸素活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、
（ｂ）低酸素活性化髄浸潤リンパ球を、約２１％の酸素の正常酸素環境中、ＩＬ−２の存在下で約２日間〜約１２日間培養して、治療用活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、
（ｃ）治療用活性化髄浸潤リンパ球を、前立腺がんを有する対象に投与するステップと
を含む、方法。
【請求項１７】
対象における前立腺がんを治療する方法であって、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球を含む医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１８】
前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、前立腺がんを有する対象から得られる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、治療されている対象にとって自己由来である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、治療されている対象にとって同種異系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
髄浸潤リンパ球が低酸素活性化されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
髄浸潤リンパ球が低酸素活性化されかつ正常酸素活性化されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
医薬組成物が、非経口投与、腹腔内投与または筋肉内投与によって投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
医薬組成物が、対象の前立腺内へ直接投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約７５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約８０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約８５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約９０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
対象に投与される組成物またはＭＩＬ中に存在するＣＤ４+：ＣＤ８+Ｔ細胞の比が、約２：１である、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前立腺がんを有する患者から単離した低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団を含む組成物であって、低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約７５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、組成物。
【請求項３１】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約８０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約８５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約９０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
組成物中に存在するＣＤ４+：ＣＤ８+Ｔ細胞の比が、約２：１である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３５】
細胞集団が、
（ａ）骨髄サンプルを、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と共に約１％〜約３％の酸素の低酸素環境中で培養して、活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、
（ｂ）活性化髄浸潤リンパ球を、正常酸素環境中、ＩＬ−２の存在下で培養して、組成物を生成するステップと
によって、前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルから得ることが可能である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
ＭＩＬが、前立腺がん特異的である、請求項３０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下、２０１８年３月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／６４６６４９号に対する優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般に、前立腺がんの治療に特異的な髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）およびその使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺がんは、最も一般に診断されるがんの１種であり、がん関連死の主要な原因であり、新しい療法が臨床的に優先なままである。転移性前立腺がんは、自己由来細胞免疫療法に対して感受性であり得る。ｍＰＣａを有する患者のためのシプロイセルＴ、自己由来細胞療法は、第ＩＩＩ相治験において、総体的な生存率を高めた。ＰＳＭＡおよびＰＳＣＡにおいて対象とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法が、前立腺がんにおいて現在開発されている。前途有望ではあるが、これらの療法の総体的な効能および実現可能性は未知のままである。
髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）は、骨髄Ｔ細胞を活性化させ増殖させる製品である。骨髄は、抗原経験のセントラルメモリーＴ細胞のために富化されている免疫系における特殊化されたニッチである。ＭＩＬは、複数の骨髄腫を有する患者において、免疫的に測定可能な臨床的有益性を授けることが示されてきた（米国特許第９６８７５１０号を参照されたい）。骨髄微環境はまた、乳がん、膵臓がんおよび卵巣がんなどの固形腫瘍を有する患者において、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞を収集するとも示されてきた。したがって、必要なものは、がん療法における使用のための前立腺がん特異的ＭＩＬである。
【発明の概要】
【０００３】
本明細書で開示されるのは、髄浸潤リンパ球で、前立腺がんを有する対象を治療する方法であって、該方法は、（ａ）前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルを、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と共に低酸素環境中で培養して、低酸素活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｂ）低酸素活性化髄浸潤リンパ球を正常酸素環境中で培養して、治療用活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｃ）治療用活性化髄浸潤リンパ球を、前立腺がんを有する対象に投与するステップとを含む。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素環境が、約０％〜約５％の酸素の酸素含有率を有する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、リンパ球が、ＩＬ−２の存在下で培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球を正常酸素環境中で培養することが、ＩＬ−２の存在下で実施される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２４時間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、骨髄サンプルが、低酸素環境中で約３日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、骨髄サンプルが、低酸素環境中で約２日間〜約５日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素環境が、約１％〜約２％の酸素である、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約２日間〜約１２日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約６日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球が、正常酸素環境中で約９日間培養される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、ステップ（ａ）の前に、がんを有する対象から骨髄サンプルを取り出すステップを更に含む、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が、ビーズ上に結合されている、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、前立腺がんが、腺房腺がん、管状腺がん、去勢抵抗性、移行上皮がん、扁平上皮がんまたは小細胞前立腺がんのうちの１種または複数である、上に記載した方法の一実施形態である。
【０００４】
本明細書でまた開示されるのは、治療用活性化髄浸潤リンパ球で、前立腺がんを有する対象を治療する方法であって、（ａ）前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルを、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に約１％〜約２％酸素の低酸素環境中、約２日間〜約５日間培養して、低酸素活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｂ）低酸素活性化髄浸潤リンパ球を、約２１％の酸素の正常酸素環境中、ＩＬ−２の存在下で約２日間〜約１２日間培養して、治療用活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｃ）治療用活性化髄浸潤リンパ球を、前立腺がんを有する対象に投与するステップとを含む、方法である。
本明細書でまた開示されるのは、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球を含む医薬組成物を、対象に投与することを含む、対象における前立腺がんを治療する方法である。
本明細書でまた開示されるのは、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、前立腺がんを有する対象から得られる、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、治療されている対象にとって自己由来である、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、前立腺がん特異的髄浸潤リンパ球が、治療されている対象にとって同種異系である、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、髄浸潤リンパ球が低酸素活性化されている、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、髄浸潤リンパ球が低酸素活性化されかつ正常酸素活性化されている、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、医薬組成物が、非経口投与、腹腔内投与または筋肉内投与によって投与される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、医薬組成物が、対象の前立腺内へ直接投与される、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約７５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約８０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約８５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、対象に投与される髄浸潤リンパ球のうちの約９０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、対象に投与される、組成物中にまたはＭＩＬ中に存在するＣＤ４+：ＣＤ８+Ｔ細胞の比が、約２：１である、上に記載した方法の一実施形態である。
また開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約７５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、前立腺がんを有する患者から単離した低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団を含む組成物である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約８０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約８５％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、低酸素活性化髄浸潤リンパ球の集団のうちの約９０％〜約１００％が、ＣＤ３を発現する、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、組成物中に存在するＣＤ４+：ＣＤ８+Ｔ細胞の比が、約２：１である、上に記載した方法の一実施形態である。
【０００５】
本明細書でまた開示されるのは、細胞集団が、（ａ）抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を有する骨髄サンプルを、約１％〜約３％の酸素の低酸素環境中で培養して、活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｂ）活性化髄浸潤リンパ球を、正常酸素環境中で、ＩＬ−２の存在下で培養して、組成物を生成するステップとによって、前立腺がんを有する対象から得る骨髄サンプルから得ることが可能である、上に記載した方法の一実施形態である。
本明細書でまた開示されるのは、ＭＩＬが、前立腺がん特異的である、上に記載した方法の一実施形態である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】転移性前立腺がん患者の骨髄からのＭＩＬの首尾よい増殖を示すグラフである。各患者の骨髄標本についての、収集した細胞＃／出発細胞数として表される増殖倍率を示す。
【図２】増殖前および増殖後の、１０人の転移性前立腺がん患者の骨髄標本のそれぞれにおける、各Ｔ細胞マーカーについて陽性に着色する細胞の百分率のグラフを示す。
【図３】腫瘍特異的Ｔ細胞の定量化を示す。自己由来の抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）を、前立腺がん細胞株からのライセートでパルスし、ＣＦＳＥ標識ＭＩＬまたはＰＢＬと共培養した。
【図４】増殖したＭＩＬまたはＰＢＬにおける、腫瘍特異的Ｔ細胞の定量化の１人の患者についての代表的な結果を示す。
【図５】増殖したＭＩＬのそれぞれについての、腫瘍細胞ライセートの組み合わせのそれぞれに対して測定したＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏ  ＣＤ３+Ｔ細胞の百分率を示す。
【図６】増殖させたＰＢＬのそれぞれについての腫瘍細胞ライセートの組み合わせのそれぞれに対して測定したＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏ  ＣＤ３+Ｔ細胞の百分率を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本明細書で使用される場合、かつ別段の指定がない限り、用語「約」は、それが修飾する値の±５％を意味すると意図される。そのため、約１００は、９５〜１０５を意味する。加えて、用語「約」は、一連の用語、例えば「約１、２、３、４または５」における用語を修飾し、用語「約」が、列挙の構成要素のそれぞれを修飾し、例えば「約１、２、３、４または５」が、「約１、約２、約３、約４または約５」を意味すると理解され得ることが理解されるべきである。同じことが、用語「少なくとも」または他の定量化修飾語によって修飾される列挙にも該当し、例えば「未満」、「超」などであるがこれらに限定されない。
本明細書および添付の請求項の範囲中で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別のことを示していない限り、複数の参照物も含む。
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「構成する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに有する（ｈａｖｉｎｇ）の任意の形態、例えば「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」）、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の形態、例えば「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」）は、包括的であり、またはオープンエンドであり、追加の、引用されていない要素または方法ステップを排除しない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を引用する任意の組成物または方法はまた、引用された成分または要素を構成する、からなる、または本質的になる、といった組成物もまた説明するとも理解されるべきである。
【０００８】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療される」または「治療されている」は、目的が、望ましくない生理学的症状、障害または疾患の速度を落とす（低減する）ことである療法的治療と、または有益なもしくは所望の臨床的結果を得ることとの両方を意味する。本明細書に記載されている実施形態の目的のために、有益なまたは所望の臨床的結果としては、徴候の緩和；症状、障害または疾患の程度の減少；症状、障害または疾患の安定化された（すなわち悪化していない）状態；症状、障害または疾患の進行の開始を遅らせることまたは遅くすること；検出可能であれ検出不能であれ、症状、障害または疾患の状態の寛解または鎮静（部分的であれ全体的であれ）；必ずしも患者によって認識され得ない少なくとも１種の測定可能な物理的パラメータの寛解；または症状、障害または疾患の改良または改善が挙げられるがこれらに限定されない。そのため、「がんの治療」または「がんを治療する」は、がんに伴う一次的現象もしくは二次的徴候のうちの任意のもの、または本明細書に記載されている任意の他の症状を、緩和するまたは寛解する作用を意味する。いくつかの実施形態では、治療されているがんは、本明細書に引用されているがんの１種である。
【０００９】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、用語「患者」と互換的に使用され得る。対象は、哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、サル、ウマ、ウシなどであり得る。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、前立腺がんを診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、前立腺がんを有すると確信されている。いくつかの実施形態では、対象は、前立腺がんを有すると疑われている。
本明細書で使用される場合、用語「発現する」はまた、それが例えばＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８であるがこれらに限定されない細胞表面受容体を指す場合、細胞がそのマーカーに陽性であるとも称され得る。例えば、ＣＤ３を発現する細胞はまた、ＣＤ３陽性（ＣＤ３+）とも称され得る。
【００１０】
用語「がん」は、本明細書で使用される場合、異常型細胞の急速で制御不能な増殖によって特徴づけられる疾患と定義される。がん細胞は、局所的にまたは血流およびリンパ球系を通じて体の他の部分へ拡大し得る。用語「前立腺がん」は、本明細書で使用される場合、前立腺を起源とするがん、または前立腺における、もしくは前立腺内にあるがんと定義される。いくつかの実施形態では、前立腺がんは、腺房腺がん、管状腺がん、去勢抵抗性、移行上皮がん、扁平上皮がんまたは小細胞前立腺がんのうちの１種または複数である。
「有効量」または「治療有効量」は、本明細書では互換的に使用され、本明細書に記載されている化合物、配合物、材料または組成物の、特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。このような結果としては、当技術分野において好適な任意の手段により決定されるウイルス感染の阻害が挙げられるがこれらに限定されない場合がある。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「髄浸潤リンパ球」または「ＭＩＬ」は、免疫細胞の亜集団であり、例えば米国特許第９６８７５１０号に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＭＩＬは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）とは著しく異なる。例えば、ＭＩＬは、ＰＢＬよりも、より容易に増殖され、より大きい程度まで活性化マーカーを上昇制御し、より多くの非対称なＶβレパートリーを維持し、骨髄に輸送され、最も重要なことに、有意により大きい腫瘍特異性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、例えば、本明細書に記載されている通り、ＭＩＬを、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に、かつ低酸素環境下でインキュベートすることによって活性化され得る。いくつかの実施形態では、低酸素環境下で成長するＭＩＬはまた、米国特許第９６８７５１０号および国際公開第２０１６／０３７０５４号にも記載されており、その両方が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１２】
多発性骨髄腫などの非固形腫瘍タイプのがんにおいてＭＩＬを使用する従来の方法と比べて、固形腫瘍のがんを治療する上でのＭＩＬの使用は、異なった別個のパラダイムを要する。多くの腫瘍が、Ｔ細胞媒介腫瘍特異的免疫を逸脱させるために、腫瘍細胞および他の細胞におけるＰＤ−Ｌ１の上昇制御を通じてＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を利用することが知られる。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を阻害すると、この免疫抑制シグナルが減少し、腫瘍特異的細胞毒性Ｔ細胞が腫瘍細胞にアクセスして死滅させることを可能にする。
【００１３】
ＭＩＬ（商標）は、養子免疫細胞療法の他の２つの形態とは別個である。表１は、ＭＩＬ（商標）の重要な特性を、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）および遺伝子操作したＴ細胞受容体（ｅＴＣＲ）細胞療法と比較している。最も重要なのは、ＣＡＲ−ＴおよびｅＴＣＲ細胞療法の効能が、腫瘍細胞における同族の抗原の会合；腫瘍がＣＡＲ−ＴまたはｅＴＣＲ療法を無効にすることによるその抗原の選択的編集または削除に依存していることである。対照的に、ＭＩＬ（商標）のポリクローナル認識は、疾患再発の機序としての抗原逸脱損失腫瘍バリアントの産生のリスクを最小にすべきである。
【表１】
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【００１４】
いくつかの実施形態では、ＭＩＬを調製する方法は、対象からの、骨髄、リンパ球および／または髄浸潤リンパ球から細胞を取り出すことと、該細胞を低酸素環境中でインキュベートし、それによって活性化ＭＩＬを生成することとを含み得る。いくつかの実施形態では、対象は、前立腺がんを有する。細胞はまた、本明細書に記載されている抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体およびサイトカインの存在下で活性化され得る。
【００１５】
回収された骨髄は、凍結されてもよく、または例えば腫瘍特異的ＭＩＬを創製するために直ちに使用されてもよい。骨髄が凍結される場合、それは、好ましくはインキュベーション前に解凍される。骨髄は、当業者に既知の方法を通じてＭＩＬを精製するために処理されてもよい。ＭＩＬは、例えばビーズで、例えば抗ＣＤ４／ＣＤ２８ビーズで活性化され得る。溶液中の、ビーズの、細胞に対する比は多様であってもよく、いくつかの実施形態では、比は３：１である。同様に、ＭＩＬは、１種または複数の抗体、抗原および／またはサイトカインの存在下で、例えば抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの不在下で、増殖され得る。回収された骨髄の細胞カウント数は、例えば、ＭＩＬに添加されることになるビーズ、抗体、抗原および／またはサイトカインの量を調整するように決定され得る。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、細胞を回収するように特に設計されたビーズを使用して捕捉される。
【００１６】
回収されたＭＩＬは、最初の期間、低酸素環境中で成長され得る。低酸素環境は、約７％未満の酸素、例えば約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の酸素を含んでもよい。例えば、低酸素環境は、約０％の酸素〜約７％の酸素、０％の酸素〜約６％の酸素、例えば約０％の酸素〜約５％の酸素、約０％の酸素〜約４％の酸素、約０％の酸素〜約３％の酸素、約０％の酸素〜約２％の酸素、約０％の酸素〜約１％の酸素を含んでもよい。いくつかの実施形態では、低酸素環境は、約１％〜約５％の酸素を含む。いくつかの実施形態では、低酸素環境は、約１％〜約２％の酸素である。いくつかの実施形態では、低酸素環境は、約０．５％〜約１．５％の酸素である。いくつかの実施形態では、低酸素環境は、約０．５％〜約２％の酸素である。低酸素環境は、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％または約０％の酸素、およびこれらの量の間にあるこれらの任意の分数を含んでもよい。
【００１７】
ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることは、例えば、組織培養培地中で、少なくとも約１時間、例えば少なくとも約１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、６０時間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、または更には少なくとも約１４日間、ＭＩＬをインキュベートすることを含んでもよい。インキュベートすることは、約１時間〜約３０日間、例えば約１日〜約２０日間、約１日〜約１４日間、または約１日〜約１２日間、ＭＩＬをインキュベートすることを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることは、約２日〜約５日間、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることを含む。方法は、約１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間または１４日間、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることを含んでもよい。いくつかの実施形態では、方法は、約３日間、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２日間〜約４日間、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約３日間〜約４日間、ＭＩＬを低酸素環境中でインキュベートすることを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、低酸素活性化ＭＩＬは、次いで正常酸素環境中で培養されて、治療用活性化髄浸潤リンパ球を生成する。いくつかの実施形態では、正常酸素環境は、少なくとも約７％の酸素を含んでもよい。いくつかの実施形態では、正常酸素環境は、例えば約８％の酸素〜約３０％の酸素、１０％の酸素〜約３０％の酸素、約１５％の酸素〜約２５％の酸素、約１８％の酸素〜約２４％の酸素、約１９％の酸素〜約２３％の酸素、または約２０％の酸素〜約２２％の酸素を含んでもよい。いくつかの実施形態では、正常酸素環境は約２１％の酸素を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、ＩＬ−２または他のサイトカインの存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、正常酸素環境中、ＩＬ−２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、他のサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−９、ＩＬ−２１、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、１種または複数のサイトカイン、例えばＩＬ−２、ＩＬ−７および／もしくはＩＬ−１５、またはそれらの任意の好適な組み合わせを含む細胞培養培地中で培養され得る。各サイトカインの好適な濃度、またはサイトカインの総濃度の例示的な例としては、約２５ＩＵ／ｍＬ、約５０ＩＵ／ｍＬ、約７５ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬもしくは約５００ＩＵ／ｍＬ、またはそれらのサイトカインの任意の介入量が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−１および／もしくはＩＬ−１５、またはこれらの任意の組み合わせの、それぞれのまたは総てのうちの約１００ＩＵ／ｍＬ中で培養される。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ−２、ＩＬ−１および／もしくはＩＬ−１５、またはそれらの任意の組み合わせの、それぞれのまたは総てのうちの約２５０ＩＵ／ｍＬを含む。
【００２０】
正常酸素環境中でＭＩＬをインキュベートすることは、少なくとも約１時間、例えば少なくとも約１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、４８時間、６０時間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、または更には少なくとも１４日間、ＭＩＬをインキュベートすることを含んでもよい。インキュベートすることは、約１時間〜約３０日間、例えば約１日〜約２０日間、約１日〜約１４日間、約１日〜約１２日間、または約２日間〜約１２日間、ＭＩＬをインキュベートすることを含んでもよい。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、本明細書に記載されている通り、骨髄サンプルを対象から抽出して、細胞を培養する／インキュベートすることによって得られる。いくつかの実施形態では、骨髄サンプルは、赤血球細胞を取り出すために遠心分離される。いくつかの実施形態では、骨髄サンプルは、アフェレーシスに供されない。いくつかの実施形態では、骨髄サンプルは末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）を含まないか、または骨髄サンプルはＰＢＬを実質的に含まない。これらの方法は、ＴＩＬとして知られるようになったものと同一ではない細胞を選び出す。そのため、ＭＩＬはＴＩＬではない。ＴＩＬは、当業者に既知の方法によって選択され得、ＴＩＬが、本明細書に記載されているキメラ膜貫通型タンパク質を発現できるように、本明細書に記載されている核酸分子で形質移入され得るまたは感染され得る。いくつかの実施形態では、骨髄サンプルは、ＭＩＬの総計と比較して１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満のＰＢＬを含有する。いくつかの実施形態では、サンプルはＰＢＬを含まない。
【００２２】
いくつかの実施形態では、細胞はまた、ＣＤ３およびＣＤ２８に対する抗体と共に培養することによっても活性化される。これは、例えば、細胞を、市販されているまたは当業者によって作製され得る抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共にインキュベートすることによって実施され得る。次いで、細胞は、プレート、フラスコまたはバッグ中に載置され得る。低酸素条件は、低酸素チャンバまたは細胞培養バッグのいずれかを、９５％窒素と５％ＣＯ２ガスとの混合物で３分間フラッシングすることによって達成され得る。これは、例えば、レセプタクル中の１〜２％以下のＯ2ガスへと至らせ得る。このようなビーズおよび刺激方法の例は、例えば米国特許第６３５２６９４号、第６５３４０５５号、第６６９２９６４号、第６７９７５１４号、第６８６７０４１号、第６９０５８７４号において見出すことができ、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ビーズの代替物は、操作された細胞、例えばＭＩＬを刺激するために使用され得るＫ５６２細胞である。このような方法は、例えば米国特許第８６３７３０７号および第７６３８３２５号に見出すことができ、これらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。細胞はまた、他の方法を用いて刺激することもでき、例えば米国特許第８３８３０９９号に記載されている方法であり、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、活性化ＭＩＬおよび／または治療用活性化ＭＩＬは、前立腺がんを有するまたは有すると疑われる対象に投与される。いくつかの実施形態では、低酸素活性化ＭＩＬおよび／または治療用活性化ＭＩＬは、前立腺がんを有するまたは有すると疑われる対象からの骨髄から生成され、次いで前立腺がんを治療するために同一の対象に投与する。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、対象にとって同種異系である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、医薬調製物または医薬組成物において投与され得る。前立腺がん特異的ＭＩＬを含む医薬組成物は、更に、緩衝剤、例えば中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水など；炭水化物、例えばグルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドまたはアミノ酸、例えばグリセリン；抗酸化剤；キレート剤、例えばＥＤＴＡまたはグルタチオン；補助剤（例えば水酸化アルミニウム）；および保存料を含んでもよい。組成物は、非経口投与、例えば血管内（静脈内もしくは動脈内）、腹腔内投与または筋肉内投与用に配合され得る。いくつかの実施形態では、ＭＩＬおよび／または組成物は、非経口投与、例えば血管内（静脈内もしくは動脈内）、腹腔内投与または筋肉内投与によって投与される。組成物はまた、前立腺内に直接投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内に投与される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、組成物は、それらが溶液であれ懸濁液であれ他の同様の形態であれ、以下のうちの１種または複数を含んでもよい：ＤＭＳＯ、滅菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル溶液、等張性炭化ナトリウム、不揮発油、例えば溶媒もしくは懸濁用培地として役立ち得る合成モノグリセリドもしくはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗細菌剤、例えばベンジルアルコールもしくはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸もしくは重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸：緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩、ならびに張性調節用の作用剤、例えば塩化ナトリウムもしくはデキストロース。
【００２５】
いくつかの実施形態では、対象は、フルダラビンありでまたはなしで、シクロホスファミドで予備条件付けされ得る。１つのこのような例は、米国特許第９８５５２９８号において提供され、これは参照により本明細書に組み込まれる。別の非限定的例は、フルダラビン（静脈内に１日３０ｍｇ／ｍ2を４日間）およびシクロホスファミド（フルダラビンの最初の投与と共に静脈内に１日５００ｍｇ／ｍ2を２日間）を投与することである。投与後、フルダラビン完了後２日〜１４日にＭＩＬが投与され得る。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドが、約５００〜約６００ｍｇ／ｍ2の用量で２日間〜３日間投与される。
いくつかの実施形態では、投与される組成物は、本明細書で提供されている前立腺がん特異的ＭＩＬを含む。このようなＭＩＬの組成物もまた、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、前立腺がん特異的ＭＩＬは、低酸素活性化されている。いくつかの実施形態では、前立腺がん特異的ＭＩＬは、低酸素活性化／正常酸素活性化ＭＩＬである。前立腺がん特異的ＭＩＬは、対象において前立腺がんを特異的に標的とすることができるＭＩＬである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ３陽性である前立腺がん特異的ＭＩＬの集団を含む。いくつかの実施形態では、ＭＩＬのうちの少なくとも約または少なくとも４０％がＣＤ３陽性である。いくつかの実施形態では、ＭＩＬのうちの約または少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％または８９％がＣＤ３陽性である。いくつかの実施形態では、ＭＩＬのうちの少なくともまたは約８０％がＣＤ３陽性である。いくつかの実施形態では、ＭＩＬのうちの約４０％〜約１００％がＣＤ３陽性である。いくつかの実施形態では、ＭＩＬのうちの約４５％〜約１００％、約５０％〜約１００％、約５５％〜約１００％、約６０％〜約１００％、約６５％〜約１００％、約７０％〜約１００％、約７５％〜約１００％、約８０％〜約１００％、約８５％〜約１００％、約８６％〜約１００％、約８７％〜約１００％、約８８％〜約１００％、または約９０％〜約１００％がＣＤ３陽性である（ＣＤ３を発現する）。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ３を発現しないＭＩＬの集団か、または例えばＣＤ３を発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬの発現レベルに対して低いレベルのＣＤ３を発現するＭＩＬの集団かのいずれかを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、組成物は、インターフェロンガンマ（「ＩＦＮγ」）を発現するＭＩＬの集団を含み、すなわち、ＩＦＮγを発現するＭＩＬの集団中の各細胞は、例えばフローサイトメトリーで検出して、ＩＦＮγを発現する髄浸潤リンパ球である。例えば、組成物中の細胞のうちの少なくとも２％は、ＩＦＮγを発現するＭＩＬであってもよく、またはＩＦＮγを発現するＭＩＬのうちの少なくとも約２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、または更には少なくとも約１８％である。いくつかの実施形態では、ＩＦＮγを発現するＭＩＬのうちの約２％〜約１００％、例えばＭＩＬのうちの約２％〜約１００％、約３％〜約１００％、約４％〜約１００％、約５％〜約１００％、約６％〜約１００％、約７％〜約１００％、約８％〜約１００％、約９％〜約１００％、約１０％〜約１００％、約１１％〜約１００％、約１２％〜約１００％、約１３％〜約１００％、約１４％〜約１００％、約１５％〜約１００％、約１６％〜約１００％、約１７％〜約１００％、または更には約１８％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、組成物は、例えばフローサイトメトリーで検出して、ＩＦＮγを発現しないＭＩＬの集団か、または、すなわちＩＦＮγを発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬの発現レベルに対して低いレベルのＩＦＮγを発現するＭＩＬの集団かのいずれかを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＸＣＲ４を発現するＭＩＬの集団を含む。例えば、ＣＸＣＲ４を発現するＭＩＬのうちの少なくとも約９８％、例えばＭＩＬのうちの少なくとも約９８．１％、９８．２％、９８．３％、９８．４％、９８．５％、９８．６％、９８．７％、９８．８％、９８．９％、９９．０％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、または更には約９９．７％である。いくつかの実施形態では、約９８％〜約１００％が、ＣＸＣＲ４を発現するＭＩＬであってもよく、例えば組成物中のＭＩＬのうちの少なくとも約９８．１％〜約１００％、約９８．２％〜約１００％、約９８．３％〜約１００％、約９８．４％〜約１００％、約９８．５％〜約１００％、約９８．６％〜約１００％、約９８．７％〜約１００％、約９８．８％〜約１００％、約９８．９％〜約１００％、約９９．０％〜約１００％、約９９．１％〜約１００％、約９９．２％〜約１００％、約９９．３％〜約１００％、約９９．４％〜約１００％、約９９．５％〜約１００％、約９９．６％〜約１００％、または更には約９９．７％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、組成物は、例えばフローサイトメトリーで検出して、ＣＸＣＲ４を発現しないＭＩＬの集団か、または、すなわちＣＸＣＲ４を発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬの発現レベルに対して低いレベルのＣＸＣＲ４を発現するＭＩＬの集団かのいずれかを含む。
【００２９】
ＣＤ４を発現するＭＩＬの集団は、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬを含んでもよい。例えば、組成物中の細胞のうちの少なくとも約２１％が、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬからのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの少なくとも約２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、または更には少なくとも約４３％である。いくつかの実施形態では、組成物中の細胞のうちの約２１％〜約１００％が、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬからのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの約２２％〜約１００、約２３％〜約１００％、約２４％〜約１００％、約２５％〜約１００％、約２６％〜約１００％、約２７％〜約１００％、約２８％〜約１００％、約２９％〜約１００％、約３０％〜約１００％、約３１％〜約１００％、約３２％〜約１００％、約３３％〜約１００％、約３４％〜約１００％、約３５％〜約１００％、約３６％〜約１００％、約３７％〜約１００％、約３８％〜約１００％、約３９％〜約１００％、約４０％〜約１００％、約４１％〜約１００％、約４２％〜約１００％、または更には約４３％〜約１００％である。
組成物は、ＣＤ８を発現するＭＩＬの集団を含んでもよい。ＣＤ８を発現するＭＩＬの集団は、ＣＸＣＲ４を発現する複数のＭＩＬを含んでもよい。
【００３０】
ＣＤ８を発現するＭＩＬの集団は、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬを含んでもよい。例えば、組成物中の細胞のうちの少なくとも約２１％が、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬからのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの少なくとも約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、または更には少なくとも約２１％である。いくつかの実施形態では、組成物中の細胞のうちの約２％〜約１００％が、４−１ＢＢを発現する複数のＭＩＬからのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの約８％〜約１００％、約９％〜約１００％、約１０％〜約１００％、約１１％〜約１００％、約１２％〜約１００％、約１３％〜約１００％、約１４％〜約１００％、約１５％〜約１００％、約１６％〜約１００％、約１７％〜約１００％、約１８％〜約１００％、約１９％〜約１００％、約２０％〜約１００％、または更には約２１％〜約１００％である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、組成物は、４−１ＢＢを発現するＭＩＬの集団を含む。例えば、組成物中の細胞のうちの少なくとも約２１％が、４−１ＢＢを発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの少なくとも約２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、または更には少なくとも約４３％である。いくつかの実施形態では、組成物中の細胞のうちの約２１％〜１００％が、４−１ＢＢを発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬであってもよく、例えば組成物中の細胞のうちの約２２％〜約１００％、約２３％〜約１００％、約２４％〜約１００％、約２５％〜約１００％、約２６％〜約１００％、約２７％〜約１００％、約２８％〜約１００％、約２９％〜約１００％、約３０％〜約１００％、約３１％〜約１００％、約３２％〜約１００％、約３３％〜約１００％、約３４％〜約１００％、約３５％〜約１００％、約３６％〜約１００％、約３７％〜約１００％、約３８％〜約１００％、約３９％〜約１００％、約４０％〜約１００％、約４１％〜約１００％、約４２％〜約１００％、または更には約４３％〜約１００％である。いくつかの実施形態では、組成物は、例えばフローサイトメトリーで検出して、４−１ＢＢを発現しないＭＩＬの集団か、または、すなわち４−１ＢＢを発現するＭＩＬの集団からのＭＩＬの発現レベルに対して低いレベルの４−１ＢＢを発現するＭＩＬの集団かのいずれかを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ４を発現するＭＩＬを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ８を発現するＭＩＬを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ４を発現するＭＩＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ８を発現するＭＩＬを含む。いくつかの実施形態では、組成物中に存在するＣＤ４+：ＣＤ８+ＭＩＬの比は、約２：１である。
組成物は、ＣＤ８を発現するＭＩＬの集団を含んでもよい。ＣＤ８を発現するＭＩＬの集団は、ＣＸＣＲ４を発現する複数のＭＩＬを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＤ４を発現するＭＩＬの集団を含む。ＣＤ４を発現するＭＩＬの集団は、ＣＸＣＲ４を発現する複数のＭＩＬを含んでもよい。
【００３２】
ＭＩＬは、単独でまたは互いの組み合わせで、本明細書に記載されている異なる因子または表面受容体を発現することができる。そのため、例えば、ＭＩＬは、ＣＤ３+、ＣＤ４+およびＣＤ８+であり得る。このような細胞はまたＩＦＮγを発現することもできる。細胞はまた、本明細書で提供されている多様な因子または受容体について陽性でも陰性でもあり得る。
【００３３】
いくつかの実施形態では、対象における前立腺がんを予防するまたは治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、例えば本明細書で提供される前立腺がん特異的ＭＩＬであるがこれに限定されない、本明細書に記載されている組成物のうちの１種を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書で提供されている通り、投与される。いくつかの実施形態では、方法は、治療有効量の、本明細書に記載されている組成物のうちの任意の１種を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、治療有効量の前立腺がん特異的ＭＩＬを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは活性化されている。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、本明細書に記載されている通り、かつ本明細書に参照されている通り、低酸素活性化されている。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、本明細書に記載されている通り、かつ本明細書に参照されている通り、低酸素条件下で培養され、続いて正常酸素条件により培養される。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、前立腺がんを有する対象から得た骨髄サンプルから得られるまたは抽出される。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、治療されている対象にとって同種異系である。いくつかの実施形態では、方法は、対象からの骨髄サンプルを、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と共に約１％〜約３％の酸素の低酸素環境中で培養して、活性化髄浸潤リンパ球を生成するステップと、（ｂ）活性化髄浸潤リンパ球を、正常酸素環境中、ＩＬ−２の存在下で培養して、組成物を生成するステップとを含む。次いで、組成物は、前立腺がんを有する対象に投与され得る。
以下の実施例は、例示的であるが限定的ではない、本明細書に記載されている組成物および方法である。当業者に既知の他の好適な修正および適応は、以下の実施形態の範囲内である。
【実施例】
【００３４】
（実施例１）
前立腺がんを有する対象からのＭＩＬの生成
骨髄サンプルを、多様な量の骨髄を包含しているホルモン未経験および去勢抵抗性前立腺がん患者（ｎ＝１０）から回収した。患者のサブセット（ｎ＝４）について、骨髄穿刺時に、適合した末梢血もまた回収した。
ＭＩＬと末梢血リンパ球（ＰＢＬ）との両方を、それぞれ患者の骨髄および血液サンプルから、先に記載した方法を用いて、活性化させ増殖させた（それらの両方が参照により組み込まれる米国特許第９６８７５１０号および第１０１７２８８７号を参照されたい）。ＭＩＬは、１０人のｍＰＣａ患者から単離した骨髄から、平均３１５．１倍（範囲２９．１〜１６２５）の増殖倍率を伴って首尾よく増殖させた。各患者の骨髄標本の増殖倍率（収集した細胞＃／出発細胞数）を示している。図１を参照されたい。
【００３５】
（実施例２）
Ｔ細胞表現型マーカーの特性評価
Ｔ細胞表現型マーカーＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により、増殖前および増殖後に特性評価した。各Ｔ細胞マーカーについて陽性に着色した細胞の百分率を、増殖前に（前）および増殖に続いて（後）、１０人の転移性前立腺がん患者の骨髄標本のそれぞれについて示す。増殖前に、骨髄Ｔ細胞の組成は、２１．５％（７．８〜３８．０）のＣＤ３+、１４．１％（７．５〜２６．２）のＣＤ４+、および６．１％（２．３〜１１．８）のＣＤ８+であった。活性化および増殖の後、ＭＩＬは、平均して９１．５％（８８．６〜９５．１）のＣＤ３+であり、ＣＤ４+：ＣＤ８+Ｔ細胞の比は、約２．５：１であった［それぞれ６６．４％（３７．２〜８８．０）対２５．７％（１１．９〜５６．３）］。図２を参照されたい。
【００３６】
（実施例３）
増殖したＭＩＬおよびＰＢＬにおける腫瘍特異的Ｔ細胞の定量化
腫瘍特異的Ｔ細胞を、先に記載した機能的アッセイを用いて、増殖したＭＩＬおよびＰＢＬにおいて定量化した（Ｎｏｏｎａｎ  ＫＡ、Ｈｕｆｆ  ＣＡ、Ｄａｖｉｓ  Ｊら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１５；７（２８８）：２８８ｒａ７８）。簡潔に記すと、実施例１で説明した、得られたＭＩＬおよびＰＢＬを、製造業者の推奨に従って、カルボキシフルオレセインジアセテートサクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識し、３７℃で１０分間インキュベートし、洗浄した。自己由来の抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）を、前立腺がん細胞株からのライセートでパルスし、ＣＦＳＥ標識ＭＩＬまたはＰＢＬで共培養した。骨髄腫細胞株ライセートまたは培地単独でパルスしたＡＰＣｓを、負の対照として使用した。５日後、細胞を、抗ＣＤ３およびＩＦＮγ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で着色することによって、かつそれらをフローサイトメトリーで分析することによって、腫瘍特異性を決定した。Ｇａｌｌｉｏｓフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）においてデータを収集し、Ｋａｌｕｚａソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。腫瘍特異的Ｔ細胞を、ＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏｗ、ＣＤ３+集団として定義した。図３を参照されたい。
【００３７】
図４は、１人の患者の代表的な結果を示す。ＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏ  ＣＤ３+、ＣＤ８+およびＣＤ４+Ｔ細胞の百分率、続いて細胞ライセートなしで（培地単独）パルスした自己由来の骨髄ＡＰＣｓでの刺激を、負の対照としての多数の骨髄腫ライセートと共に、または試験した前立腺がん細胞株ライセートの４つの異なる組み合わせのうちの２つと共に、患者８人から増殖させた適合したＭＩＬおよびＰＢＬについて示す。
図５は、増殖したＭＩＬのそれぞれについての腫瘍細胞ライセートの組み合わせのそれぞれに対して測定したＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏ  ＣＤ３+Ｔ細胞の百分率を示す。前立腺腫瘍特異的Ｔ細胞を、増殖したＭＩＬの全て（ｎ＝９）において検出した。平均して、増殖したＭＩＬ中の総Ｔ細胞レパートリーのうちの１１．１％（１．２５〜４４）が腫瘍特異的であった。
図６は、増殖したＰＢＬのそれぞれについての腫瘍細胞ライセートの組み合わせのそれぞれに対して測定したＩＦＮγ生成ＣＦＳＥ−ｌｏ  ＣＤ３+Ｔ細胞の百分率を示す。対照的に、４人の患者からの増殖させて活性化させた適合したＰＢＬは、測定可能な腫瘍特異的Ｔ細胞を明示しなかった。
【００３８】
（実施例４）
前立腺がん患者へのＭＩＬの投与
ＭＩＬの投与前に、患者は、５日前から３日前までシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ2／日）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ2／日）で、非骨髄破壊的リンパ球欠乏を受けることになる。リンパ球欠乏は、養子免疫Ｔ細胞療法の総体的な効能を向上させることが示された。膀胱における任意の出血を最少にするために、２−メルカプトエタンスルホネートナトリウム（ＭＥＳＮＡ）を必要に応じて使用してもよい。
患者はまた、第１日に（ＭＩＬ（商標）投与後およそ２４時間）、かつ再び３週ごとに投与されるペンブロリズマブ（２００ｍｇ）を受けてもよい。
患者は、単独でＭＩＬ（商標）を投与されてもよい。これらの対象は、ＭＩＬ（商標）投与後７日間、安全性観察のために、緊密に追跡されることになる。
【００３９】
ＭＩＬ（商標）を、中心静脈カテーテルを介して投与することになり、これは、末梢挿入された中心静脈カテーテル（ＰＩＣＣ）株または中心静脈株のいずれかであり得る。活性化したＭＩＬ（商標）を投与する前に、対象は、水中５％デキストロースおよび５０％の正常な生理食塩水（Ｄ５Ｗ１／２ＮＳ）で、１時間当たりおよそ２００ｍＬの速度で少なくとも１時間、水分補給されることになる。ＭＩＬ（商標）は、ベッド脇で、３７℃（±２℃）の水浴中、１個のバッグ当たりおよそ９０秒（±３０秒）間、解凍され、その後、第０日（＋１日）に投与されることになる。各バッグは、蒸気相液体窒素シッパーから、一度に１個取り出し、水浴に入れ、いくらかの氷の小塊が存在するまで揉むことになる。ＭＩＬ（商標）の各バッグは、１分当たりおよそ１０ｍＬの速度で点滴し、生理食塩水で濯ぎ、その後、ＭＩＬ（商標）の次のバッグを投与することになる。
【００４０】
ＭＩＬ（商標）の点滴に続き、患者は、Ｄ５Ｗ１／２ＮＳで、１時間につきおよそ２００ｍＬの速度で２時間水分補給されることになる。各バッグごとに、解凍の日付および時間、投与の回数、および点滴時間が含まれるがこれらに限定されない投与情報が記録されることになる。全ＭＩＬ（商標）製品が少なくとも１日、第０日（＋１日）に投与されることになるため、用量の修正は適用不能である。
患者における腫瘍量を、既知のアッセイを用いて、前立腺特異的抗原（「ＰＳＡ」）を測定することによって評価することになる。
【００４１】
ＭＩＬは存在しており、試験した全ての前立腺がん骨髄サンプルから増殖させた。全ての患者からのＭＩＬが、機能的に活性な腫瘍特異的Ｔ細胞を含有していた。対照的に、対応するＰＢＬは、検出可能な腫瘍特異的免疫認識を一切示すことができなかった。そのため、ＭＩＬを用いる養子免疫Ｔ細胞療法が、本明細書で提供されている実施形態が養子免疫Ｔ細胞療法を用いて達成可能であると予期されるまで、前立腺を有するがん患者にとって、驚くべき、かつ実行可能な新規の治療アプローチである。前立腺特異的ＭＩＬからの結果は驚くべきものであり、予期しないものであった。
【００４２】
本記載は、記載されている特定のプロセス、組成物または方法論に限定されず、多様であり得る。本明細書中で用いる用語は、特定のバージョンまたは実施形態を説明する目的のみのためであり、本明細書に記載されている実施形態の範囲を限定することは意図していない。別段の定義がなされていない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。いくつかの事例では、通常理解されている意味を有する用語が、明解さのためにおよび／または即座の参照のために本明細書で定義されており、本明細書中でのこのような定義の包含は、当技術分野で一般に理解されているものを超えた実質的差異を表すものと必ずしも解釈されるべきでない。しかしながら、争議の事例では、定義を含む本特許明細書が優先される。
【００４３】
前述のことから、本開示の多様な実施形態が例示目的で本明細書に記載されてきたこと、および多様な修正が、本開示の範囲および趣旨から逸脱することなくなされ得ることが認識されることになる。したがって、本明細書に開示されている多様な実施形態は、限定することを意図していない。本明細書に引用されている全ての参照文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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