(57)【要約】  本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物に関する。具体的に、本発明のジテルペン系化合物は、Ｎｕｒｒ１タンパク質を活性化させ、炎症反応を抑制することで、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性抑制により誘発される神経変性疾患を予防又は治療することができる。
2021502968.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物であって、
前記ジテルペン系化合物が、下記式（１）〜（１６）を含む群から選択されるいずれか一つ以上である神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
2021502968.tif 000027
2021502968.tif 000028
2021502968.tif 000029
【請求項２】
前記ジテルペン系化合物が、式（２）、（８）、（１３）、（１４）又は（１６）の化合物である請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項３】
前記ジテルペン系化合物が、式（２）の化合物である請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項４】
前記ジテルペン系化合物が、式（１４）の化合物である請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項５】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、前頭側頭葉認知症（Fronto-Temporal Dementia）、大脳皮質基底核変性症（Cortico Basal Degeneration）、及び進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）からなる群から選択されるいずれか一つである請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項６】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）である請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項７】
前記ジテルペン系化合物が、フジモドキの花の抽出物から分離された化合物である請求項１に記載の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項８】
ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品であって、
前記ジテルペン系化合物が、  下記式（１）〜（１６）を含む群から選択されるいずれか一つ以上の、神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品。
2021502968.tif 000030
2021502968.tif 000031
2021502968.tif 000032
【請求項９】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、前頭側頭葉認知症（Fronto-Temporal Dementia）、大脳皮質基底核変性症（Cortico Basal Degeneration）、及び進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）からなる群から選択されるいずれか一つである請求項８に記載の神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品。
【請求項１０】
前記神経変性疾患が、パーキンソン病（ＰＤ）である請求項８に記載の神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物に関する。
また、本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患予防又は改善用健康機能食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然物から分離される天然生理活性物質の様々な生体調節機能が知られており、天然生理活性物質を利用した新薬開発、健康機能食品などの分野での研究が活発に行われている。しかし、天然物には非常に様々な種類の生理活性物質が含まれているが、それぞれの物質ごとに物理的、化学的性質が異なり、同じ天然物を対象に抽出しても抽出溶媒の種類に応じて分離される生理活性物質の種類が異なる。また、同じ天然物から分離された生理活性物質といっても種類に応じて示される活性及びその効果が異なる特性があることが報告されている。従って、最近では、同じ天然物を対象に異なる抽出溶媒を用いて、知られていない新規な生理活性物質を分離する研究が活発に行われてきている。
【０００３】
神経変性疾患（neurodegenerative diseases）は、神経細胞が退化し、機能を喪失し、そして、時々死滅する場合の症状と関連する。神経変性疾患を有する患者は、認知（cognitive）又は運動（motor）能力において深刻な退化を体験しており、これらの疾患は、主に進行性であることから、結果的に患者の生活の質及び人生に対する期待が大幅に低下してしまう。
【０００４】
これら疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、前頭側頭型認知症（Frontotemporal  Dementia）、大脳皮質基底核変性症（Cortico  Basal  Degeneration）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）及び他の疾患を含む。
【０００５】
一方、相当数の神経変性疾患は、Ｎｕｒｒ１タンパク質とかなり関連性がある。具体的に、特許文献１では、神経変性疾患の一種類であるパーキンソン病は、ドーパミン神経細胞と関連する疾患であることを開示しつつ、Ｎｕｒｒ１が活性化された場合、パーキンソン病の治療効果を示すことを開示している。また、特許文献２では、Ｎｕｒｒ１がドーパミンを活性化させるのに必須の役割を果たし、Ｎｕｒｒ１を活性化してドーパミンを活性化する神経伝達を調節し、パーキンソン病を治療する方法を開示している。
【０００６】
前記Ｎｕｒｒ１の機能障害によって誘発される代表的な神経変性疾患は、パーキンソン病である。パーキンソン病は、振戦、硬直、運動緩慢及び歩行異常症などを主な症状とする現代高齢化社会において重大な疾患の一つであり、脳の黒質と線条体部位でドーパミンという神経伝達物質が不足することにより生じる慢性疾患である。
【０００７】
このパーキンソン病の治療のための薬物としては、Ｌ−ドーパ（L-dopa）製剤、ドーパミン受容体アゴニスト、抗コリン薬剤、エルデプリル（Eldepryl）等が知られており、これら薬物のほとんどは原因的な治療ではなく、症状を調節する役割を果たすものであるので、持続的な薬物の服用を必要とする。今まで、パーキンソン病治療剤として多くの薬が調剤され商用化されているが、パーキンソン病を完全に治療するための本質的な治療剤はまだ開発されていないのが実状である。
【０００８】
そこで、本発明者らは、フジモドキ（Daphne genkwa）の花、幹及び根から様々な抽出及び分画溶媒を用いて得られた化合物が、Ｎｕｒｒ１を活性化させ、炎症反応を抑制する効果を確認し、Ｎｕｒｒ１機能障害によって誘発されるパーキンソン病をはじめとする様々な神経変性疾患に対する治療効果に優れることを確認して、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国  公開特許公報  第２００９−０２２６４０１号
【特許文献２】ＷＯ２０１０−０４２２１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患予防又は改善用健康機能食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の一つの様態として、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物であって、前記ジテルペン系化合物が、式（１）〜（１６）を含む群から選択されるいずれか一つ以上の神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明は、下記式（Ａ）で示される化合物を含む群から選択されるいずれか一つ以上を有効成分とする神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
本発明のジテルペン系化合物は、下記式（１）〜（１６）
2021502968.tif 000003
2021502968.tif 000004
2021502968.tif 000005
で示される化合物、具体的に、ｙｕａｎｈｕａｆｉｎｅ（式（１））、ｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎｅ（式（２））、ｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｈ（式（３））、ｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｍ（式（４））、ｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ｋ（式（５））、ｙｕａｎｈｕａｐｉｎｅ（式（６））、ｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ａ（式（７））、オルトベンゾエート２（式（８））、１，２α−ジヒドロダフネトキシン（式（９））又はｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ｉ（式（１０））、ａｃｕｔｉｌｏｎｉｎｅ  Ｆ（式（１１））、ｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ  ｆａｃｔｏｒ  Ｍ１（式（１２））、プロストラチンＱ（式（１３））、ｙｕａｎｈｕａｄｉｎｅ（式（１４））、ｙｕａｎｈｕａｔｉｎｅ（式（１５））又は１２−Ｏ−ｎ−デカ−２，４，６−トリエノイル−ホルボール−（１３）−アセテート（式（１６））であってもよい。
【００１３】
前記式（１）の化合物であるｙｕａｎｈｕａｆｉｎｅは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，８ｂＲ，９Ｒ,１０Ｒ,１０ａＳ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−６−オキソ−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）−３ａ，３ｂ，３ｃ，４ａ，５，５ａ，８ａ，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６’，７’］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イルアセテート、
式（２）の化合物であるｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎｅは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，８ｂＲ，９Ｒ，１０Ｒ，１０ａＳ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−６−オキソ−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）−３ａ，３ｂ，３ｃ，４ａ，５，５ａ，８ａ，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’,３’’：６',７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イルベンゾエート、
式（３）の化合物であるｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｈは、（（２Ｓ，３ａＲ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ，６ａＲ，７Ｓ，８Ｓ，９ｂＲ，１０Ｒ，１１ａＲ）−４，５，６，６ａ，７−pペンタヒドロキシ −８，１０−ジメチル−２−フェニル−１１ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−５Ｈ−２，９ｂ−エポキシアズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）メチルベンゾエート、
式（４）の化合物であるｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｍは、（（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０ａＲ）−５，５ａ，６−トリヒドロキシ−７，９−ジメチル−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−４ａＨ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４ａ−イル）メチルベンゾエート、
式（５）の化合物であるｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ｋは、（（２Ｓ，３Ｓ，３ａＲ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ，１０ａＲ）−７−（ベンゾイルオキシ）−３、３ａ，４，５，６，８，１０ａ−ヘプタヒドロキシ−２，１０−ジメチル−８−（プロパ−１−エン−２−イル）テトラデカヒドロベンゾ［ｅ］アズレン−５−イル）メチルベンゾエート、
式（６）の化合物であるｙｕａｎｈｕａｐｉｎｅは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０Ｒ，１０ａＳ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−６−オキソ−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イルアセテート、
式（７）の化合物であるｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ａは、（２Ｓ，３ａＲ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ，６ａＲ，７Ｓ，９ｂＲ，１０Ｒ，１１ａＲ）−５−（ヒドロキシメチル）−８，１０−ジメチル−２−フェニル−１１ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）−３ａ，３ｂ，４，５，６，７，９ａ，１０，１１，１１ａ−デカヒドロ−６ａＨ−２，９ｂ−エポキシアズレノ［５’，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−４，５，６，６ａ，７−ペンタノール、
式（８）の化合物であるオルトベンゾエート２は、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０ａＲ）−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−５ａＨ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−５，５ａ，６−トリオール及び
式（９）の化合物である１，２α−ジヒドロダフネトキシンは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０ａＲ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−６−オンのＩＵＰＡＣ  ｎａｍｅと命名される。
【００１４】
前記式（１１）の化合物であるａｃｕｔｉｌｏｎｉｎｅ  Ｆは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｓ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０ａＲ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−６−イル（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−デカ−２，４，６−トリエノアート、
式（１２）の化合物であるｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ  ｆａｃｔｏｒ  Ｍ１は、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｓ，７Ｓ，８ｂＲ，９Ｒ，１０ａＲ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−６−イル（２Ｅ，４Ｅ）−デカ−２，４−ジエノアート、
式（１３）の化合物であるプロストラチンＱは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｂＳ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，８ａＲ，８ｂＲ，９Ｒ，１０Ｒ，１０ａＳ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−２−（（１Ｅ，３Ｅ）−ノナ−１，３−ジエン−１−イル）−６−オキソ−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）−３ａ，３ｂ，３ｃ，４ａ，５，５ａ，８ａ，９，１０，１０ａ−デカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イルアセテート、
式（１４）の化合物であるｙｕａｎｈｕａｄｉｎｅは、（２Ｓ，３ａＲ，３ｃＳ，４ａＲ，５Ｓ，５ａＳ，８ｂＲ，９Ｒ，１０Ｒ，１０ａＳ）−５，５ａ−ジヒドロキシ−４ａ−（ヒドロキシメチル）−７，９−ジメチル−６−オキソ−２−フェニル−１０ａ−（プロパ−１−エン−２−イル）ドデカヒドロ−６Ｈ−２，８ｂ−エポキシオキシレノ［２’’，３’’：６'，７'］アズレノ［５'，４'：３，４］ベンゾ［１，２−ｄ］［１，３］ジオキソール−１０−イルベンゾエート、
式（１５）の化合物であるｙｕａｎｈｕａｔｉｎｅは、（１ａＲ，１ｂＳ，４ａＲ，７ａＳ，７ｂＳ，８Ｒ，９Ｒ，９ａＳ）−９ａ−アセトキシ−４ａ，７ｂ−ジヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）−１，１，６，８−テトラメチル−５−オキソ−１ａ，１ｂ，４，４ａ，５，７ａ，７ｂ，８，９，９ａ−デカヒドロ−１Ｈ−シクロプロパ［３，４］ベンゾ［１，２−ｅ］アズレン−９−イル（２Ｅ，４Ｅ）−デカ−２，４−ジエノアート及び
式（１６）の化合物である１２−Ｏ−ｎ−デカ−２，４，６−トリエノイル−ホルボール−（１３）−アセテートは（４ａＲ，７ｂＳ，８Ｒ，９Ｒ，９ａＳ）−９ａ−アセトキシ−４ａ，７ｂ−ジヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）−１，１，６，８−テトラメチル−５−オキソ−１ａ，１ｂ，４，４ａ，５，７ａ，７ｂ，８，９，９ａ−デカヒドロ−１Ｈ−シクロプロパ［３，４］ベンゾ［１，２−ｅ］アズレン−９−イル（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−デカ−２，４，６−トリエノアートのＩＵＰＡＣ  ｎａｍｅと命名される。
【００１５】
前記ジテルペン系化合物は、当業者に公知の方法で製造することができ、商業的に市販される化合物を購入するか合成して製造することができ、当業界で公知の植物から極性又は無極性溶媒を用いて分離精製することができる。具体的に、前記化合物は、フジモドキから抽出及び分離することができる。より具体的に、前記化合物は、フジモドキの花、幹、根の抽出物から分離することができる。
【００１６】
本発明で使用される用語「フジモドキ（Daphne genkwa）」は、双子葉植物フトモモ目ジンチョウゲ科の落葉低木を意味する。サツマフジ、チョウジザクラとも言われ、主に海辺近くで成長する特性を有する。
【００１７】
本発明のフジモドキ抽出物は、フジモドキの花、幹及び根から得られた抽出物を意味する。具体的に、前記抽出物は、フジモドキの花、幹及び／又は根を水又は有機溶媒で抽出して得られた抽出物であってもよく、より具体的に、水、Ｃ１〜Ｃ５の低級アルキルアルコール又はこれらの混合溶媒で抽出して得られた抽出物であってもよい。前記アルキルアルコールは、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％のアルキルアルコールであってもよい。
【００１８】
本発明の一実施例によるフジモドキ抽出物は、好ましくは８０％エタノールで抽出した抽出物である。
【００１９】
前記フジモドキ抽出物は、抽出物の分画物であってもよく、前記分画物は、特定溶媒を用いて前記フジモドキ抽出物から本発明の化合物を分画して得られた活性分画物を意味する。
【００２０】
本発明の一実施例によれば、前記得られたフジモドキ抽出物をヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール又は蒸留水などの有機溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて各溶媒の分画層を分離し、クロマトグラフィーなどの当業界で公知の分離方法で本発明の化合物を高純度に分離精製して、分画物を製造することができる。
【００２１】
本発明の薬学的組成物は、前記式（１）〜（１６）の化合物を含む群から選択されるいずれか一つ以上の化合物又はその薬学的に許容される塩の形態で使用してもよい。
【００２２】
本発明で使用される用語「薬学的に許容される塩」は、前記化合物の所望の生物学的及び／又は生理学的活性を保有し、所望しない毒物学的効果が最小限に示される全ての塩を意味する。塩には、薬学的に許容可能な遊離酸により形成された酸付加塩が有用である。酸付加塩は、通常の方法、例えば、化合物を過量の酸水溶液に溶解させ、この塩を水混和性有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、アセトン又はアセトニトリルを用いて沈殿させて製造する。同モル量の化合物及び水中の酸又はアルコール（例えば、グリコールモノメチルエーテル）を加熱し、次いで、前記混合物を蒸発して乾燥するか、又は析出した塩を吸引濾過することができる。このとき、遊離酸としては無機酸と有機酸を用いてもよく、無機酸としては塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、酒石酸などを用いてもよく、有機酸としてはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、プロピオン酸、クエン酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸などを用いてもよいが、これらに制限されない。
【００２３】
また、塩基を用いて薬学的に許容可能な金属塩を製造することができる。アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩は、例えば、化合物を過量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解し、非溶解化合物塩をろ過した後、ろ液を蒸発、乾燥して得る。このとき、金属塩としては、特にナトリウム、カリウム又はカルシウム塩を製造することが製薬上適しているが、これらに制限されない。また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例えば、硝酸銀）と反応させて得ることができる。
【００２４】
前記式（１）〜（１６）の化合物の薬学的に許容される塩は、特に言及しない限り、前記化合物に存在しうる酸性又は塩基性基の塩をほとんど含む。例えば、薬学的に許容される塩には、ヒドロキシ基のナトリウム、カルシウム及びカリウム塩などが含まれてもよく、アミノ基の他の薬学的に許容される塩には、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、アセテート、スクシネート、シトレート、タルトレート、ラクテート、マンデレラート、メタンスルホネート（メシレート）及びｐ−トルエンスルホネート（トシレート）塩などがあり、当業界で知られた塩の製造方法により製造することができる。
【００２５】
本発明のジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物は、神経変性疾患の予防又は治療使用に提供される。具体的に、前記神経変性疾患は、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、前頭側頭葉認知症（Fronto-Temporal Dementia）、大脳皮質基底核変性症（Cortico Basal Degeneration）、及び進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）からなる群から選択されるいずれか一つであってもよい。
【００２６】
本発明の一実施例によれば、式（１）〜（１６）の化合物は、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性度を増加させ（表２及び図２）、神経細胞での酸化窒素の生成を抑制することを確認した（表４）。具体的に、式（２）及び（８）の化合物は、より優れたＮｕｒｒ１タンパク質の活性増加効果を示し、より具体的に、式（２）は、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性増加効果だけでなく、より優れた酸化窒素生成抑制活性を示す。
【００２７】
また、式（１１）〜（１６）の化合物は、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性度を増加させ（表３）、神経細胞での酸化窒素の生成を抑制し（表５）、神経細胞での前炎症性サイトカインの生成を抑制することを確認した（図１）。具体的に、式（１３）、（１４）及び（１６）の化合物は、より優れたＮｕｒｒ１タンパク質の活性増加効果を示し、より具体的に、式（１４）は、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性増加効果だけでなく、より優れた酸化窒素生成抑制活性を示す。
【００２８】
従って、本発明の式（１）〜（１６）の化合物を含む群から選択されるいずれか一つ以上の化合物、又はこれの塩を含む薬学的組成物は、神経変性疾患の予防又は治療に便利に使用することができ、前記薬学的組成物に含まれる化合物は、式（１）〜（１６）の化合物のいずれか一つ以上の化合物であってもよい。
【００２９】
本発明で使用される用語「治療」は、治療しようとする個々人又は細胞の自然経過を変更させるために臨床的に介入することを指しており、これは、臨床病理状態が進行する間又はこれを予防するために行うことができる。目的とする治療効果には、疾患の発生又は再発を予防し、症状を緩和させ、疾患による全ての直接又は間接的な病理学的結果を低下させ、疾患進行速度を減少させ、疾病状態を軽減又は一時的緩和させ、予後を改善させることが含まれる。好ましくは、本発明では、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む組成物の投与により、神経変性疾患の経過を好転させる全ての行為を含む。また、「予防」は、本発明によるジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む組成物の投与により、前記神経変性疾患の発病を抑制又は遅延させる全ての行為をいう。
【００３０】
本発明の薬学的組成物は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む以外に、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。
【００３１】
本発明で用いられる担体の種類は特に制限されなく、当該技術分野で通常的に使用される担体であればいずれも使用することができる。前記担体の非制限的な例には、生理食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、マルトデキストリン、グリセロール、エタノールなどが挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を混合して使用することができる。
【００３２】
また、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、緩衝液又は静菌剤などその他の薬学的に許容される添加剤を添加することができ、充填剤、増量剤、湿潤剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、結合剤又は潤滑剤などを付加的に添加することができる。
【００３３】
本発明の薬学的組成物において、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩は、薬学的組成物の全重量に対して０．０１重量％〜９０．００重量％含まれてもよく、好ましくは０．０１重量％〜９０．００重量％、より好ましくは０．１重量％〜７０重量％、さらに好ましくは０．１重量％〜５０重量％含まれてもよいが、これらに限定されず、投与対象の状態、具体的な疾患の種類、進行程度などにより多様に変更することができる。必要に応じて、薬学的組成物の全含量であってもよい。
【００３４】
本発明の薬学的組成物は、経口投与又は非経口投与のための適合し、様々な製剤に製剤化することができる。
【００３５】
本発明の薬学的組成物を用いた経口投与用製剤の非制限的な例には、トローチ剤（troches）、薬用キャンディ（lozenge）、錠剤、水溶性懸濁液、油性懸濁液、調剤粉末、顆粒、エマルション、ハードカプセル、ソフトカプセル、シロップ又はエリキシル剤などが挙げられる。
【００３６】
本発明の薬学的組成物を経口投与用に製剤化するために、ラクトース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース又はゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン又はサツマイモデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウム又はポリエチレングリコールワックスなどの潤滑油などを使用することができ、甘味剤、芳香剤、シロップ剤等も使用することができる。さらに、カプセル剤の場合には、前記言及した物質の他にも脂肪油のような液体担体などをさらに使用することができる。
【００３７】
本発明の薬学的組成物を用いた非経口用製剤の非制限的な例には、注射液、坐剤、呼吸器吸入用粉末、スプレー用エアゾール剤、軟膏、塗布用パウダー、オイル、クリームなどが挙げられる。
【００３８】
本発明の薬学的組成物を非経口投与用に製剤化するために、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、外用剤などを使用でき、前記非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。
【００３９】
本発明の薬学的組成物を注射液に製剤化するとき、本発明の薬学的組成物を安定剤又は緩衝剤と共に水で混合して、溶液又は懸濁液に製造し、これをアンプル又はバイアルの単位投与用に製剤化することができる。
【００４０】
本発明の薬学的組成物をエアゾール剤に製剤化するとき、水分散された濃縮物又は湿潤粉末が分散されるように推進剤などを添加剤と共に配合することができる。
【００４１】
本発明の薬学的組成物を軟膏、クリーム、塗布用パウダー、オイル、皮膚外用剤等に製剤化するときには、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、シリカ、タルク、酸化亜鉛などを担体として用いて製剤化することができる。
【００４２】
本発明の薬学的組成物の薬学的有効量、有効投与量は、薬学的組成物の製剤化方法、投与方式、投与時間及び／又は投与経路などによって多様であり、医薬組成物の投与により達成しようとする反応の種類と程度、投与対象となる個体の種類、年齢、体重、一般的な健康状態、疾患の病状や程度、性別、食餌、排泄、該当個体に同時又は異時に共に使用される薬物、その他の組成物の成分などをはじめとする様々な因子及び医薬分野で良く知られた類似因子により多様であり、当該技術分野で通常の知識を有する者であれば目的とする治療に効果的な投与量を容易に決めて処方することができる。
【００４３】
本発明の薬学的組成物の投与は、１日に１回投与してもよく、数回に分けて投与してもよい。本発明の薬学的組成物は、個別治療剤で投与するか、他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤とは順次又は同時に投与することができる。前記の要素を全て考慮して副作用のない最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することができ、これは当業者により容易に決定される。
【００４４】
治療のための「薬学的に有効な量」は、医学的使用に適用可能な合理的な割合で疾患を抑制又は緩和するのに十分な量を意味する。有効用量水準は、個体の種類及び重症度、年齢、性別、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出割合、治療期間、同時使用される薬物を含む要素及びその他の医学分野でよく知られている要素により決定される。本発明の組成物は、個別治療剤で投与するか、他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤とは順次又は同時に投与してもよい。そして、単一又は多重投与してもよい。
【００４５】
前記の要素を全て考慮して副作用のない最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することが重要であり、当業者により容易に決定される。例えば、薬学的に有効な量は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩に対して、０．０１ｍｇ／日／体重ｋｇ〜１００ｍｇ／日／体重ｋｇ、具体的に、０．１ｍｇ／日／体重ｋｇ〜１０ｍｇ／日／体重ｋｇである。
【００４６】
本発明の薬学的組成物の投与経路及び投与方式は、それぞれ独立していてもよく、目的とする該当部位に前記薬学的組成物が到達できる限り、特に制限なく任意の投与経路及び投与方式に従ってもよい。前記薬学的組成物は、経口投与又は非経口投与方式で投与することができる。
【００４７】
本発明の薬学的組成物の非経口投与方法には、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、経皮投与又は皮下投与などであってもよく、前記組成物を疾患部位に塗布するか、噴霧、吸入する方法を使用することができるが、これらに制限されない。
【００４８】
本発明の薬学的組成物は、単独で使用しても優れた効果を発揮することができるが、治療効率を増加させるために、追加的に放射線療法、化学療法などの様々な癌治療方法と併用して使用することができる。
【００４９】
本発明の他の一つの様態として、本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含むＮｕｒｒ１機能障害により誘発される疾患の予防又は治療用薬学的組成物であって、前記ジテルペン系化合物は、前記式（１）〜（１６）を含む群から選択されるいずれか一つ以上の、神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
【００５０】
本発明において、「Ｎｕｒｒ１（nuclear receptor related 1）」は、ＮＲ４Ａ２（nuclear receptor subfamily [0037] 4, group A、member 2）とも知られている核受容体関連１タンパク質を意味する。これは、ヒトのＮＲ４Ａ２遺伝子により暗号化されていることが知られている。また、相当数の神経変性疾患に関連することが知られている。前記Ｎｕｒｒ１タンパク質は、オーファン核受容体（orphan nuclear receptor）であり、今のところは前記タンパク質に対するリガンドは明らかにされていないが、前記Ｎｕｒｒ１は、細胞内転写因子の核受容体ファミリーに属するタンパク質であり、脳でドーパミンシステム（dopaminergic system）を維持する核心的な役割を果たすことが明らかになった。前記Ｎｕｒｒ１機能障害により誘発される疾患は、これに制限されないが、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（ＡＬＳ）、ハンチントン病（ＨＤ）、前頭側頭葉認知症（Fronto-Temporal Dementia）、大脳皮質基底核変性症（Cortico Basal Degeneration）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）等の神経変性疾患とドーパミン機能障害により誘発されるリウマチ関節炎、統合失調症、躁鬱症などの広範囲な炎症性疾患を含む。
【００５１】
本発明のさらに別の様態として、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品であって、前記ジテルペン系化合物は、前記式（１）〜（１６）を含む群から選択されるいずれか一つ以上の神経変性疾患の予防又は改善用健康機能食品を提供する。
【００５２】
前記健康機能食品は、食品の生体調節機能を強調した食品であり、物理的、生化学的、生物工学的な方法を利用して特定目的に作用及び発現するように付加価値を付与した食品である。このような健康機能食品の成分は、生体防御と体のリズムの調節、疾患の防止及び回復に関係する身体調節機能を生体に対して十分に発揮できるように設計して、加工する。食品に許容可能な食品補助添加剤、甘味料又は機能性原料を含有してもよい。
【００５３】
本発明のジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を健康機能食品（又は健康機能飲料添加物）として使用するとき、前記化合物をそのまま添加するか、他の食品又は食品成分と共に使用し、通常の方法により適切に使用することができる。前記化合物の混合量は、その使用目的（予防、健康又は改善、治癒的処置）に応じて適合するように決定される。
【００５４】
前記健康機能食品は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド粘増剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、保存剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有することができる。また、本発明の健康機能食品は、果物及び野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、単独で又は組み合わせて使用してもよく、このような添加剤の割合は、組成物の全重量に対して、０．００１〜５０重量部の範囲で使用することが一般的である。
【００５５】
前記健康機能食品の種類には特に制限はない。前記化合物を添加し得る食品は、ソーセージ、肉類、パン、チョコレート類、スナック類、キャンディ類、菓子類、ラーメン、ピザ、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などがある。飲料水に製剤化する場合に、新規の乳酸菌以外に添加される液体成分としては、これに制限されないが、通常の飲料と共に様々な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。前述した天然炭水化物は、単糖類（例えば、ブドウ糖、果糖など）、二糖類（例えば、マルトース、スクロースなど）及び多糖類（例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどの通常の糖）、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールであってもよい。
【００５６】
本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む医薬組成物を個体に投与するステップを含む神経変性疾患の治療方法を提供する。
【００５７】
本発明において、個体は、神経変性疾患を有するか、又は発病した、ヒトを含むすべての動物を意味し、ヒトを除いた個体であってもよい。本発明の医薬組成物を個体に投与することによって、神経変性疾患の治療に優れた効果を示す。
【００５８】
本発明は、神経変性疾患の治療のための薬剤の製造において、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む組成物の使用を提供する。
【００５９】
本発明は、神経変性疾患の治療に使用するためのジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【発明の効果】
【００６０】
本発明のジテルペン化合物は、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性を向上させ、神経細胞での炎症反応を抑制する効果を示すことで、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性抑制により誘発されるパーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の予防又は治療に効率的に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】神経細胞であるＢＶ−２細胞において、本発明の化合物（１１）〜（１６）が炎症関連因子の発現を抑制することを確認した図であり、図１ＡはＩＬ−１ｂの発現を抑制することをウエスタンブロット法で確認した図であり、図１ＢはＩＬ−１ｂのｍＲＮＡ発現を抑制することをＰＣＲで確認したグラフであり、図１ＣはＩＬ−６のｍＲＮＡ発現を抑制することをＰＣＲで確認したグラフであり、図１ＤはＴＮＦ−ａのｍＲＮＡ発現を抑制することをＰＣＲで確認したグラフである。
【図２】本発明の化合物（１）〜（１０）のＮｕｒｒ−１活性化効果を確認したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
以下、本発明は実施例を参照して詳細に説明する。しかし、これら実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されない。
【００６３】
実施例１−a：フジモドキ抽出物の製造
フジモドキ（Daphne genkwa）の乾燥した花４．４７ｋｇを４０Ｌの８０％エタノールに７２時間浸漬し、ろ過して液状成分を得た。前記得られた液状成分を減圧下に濃縮した後、４３５ｇのフジモドキの花の抽出物を製造した。
【００６４】
実施例１−ｂ
フジモドキ（Daphne genkwa）の幹と根の４．４７ｋｇを細切りした後、１２Ｌの８０％エタノールに４時間浸漬し、ろ過して固形分と１次液状成分を分離した。前記分離された固形分を再び１２Ｌの８０％エタノールに４時間浸漬し、ろ過して２次液状成分を得た。前記得られた１次液状成分と２次液状成分を混合し、前記混合物を減圧下に濃縮した後、残渣を凍結乾燥して、２５５．１ｇのフジモドキ抽出物を製造した。
【００６５】
実施例２：フジモドキ抽出物から様々な溶媒による有効成分の分離
前記実施例１−ａで得られたフジモドキの花抽出物を２Ｌの蒸留水と２Ｌのヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル及びブタノールでそれぞれ順に溶媒分画した。この中で、クロロホルム層を減圧下濃縮し、クロロホルム分画物（１７．６ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーでクロロホルムとメタノール勾配混合溶媒（１００：０、５０：１、２０：１、１０：１、５：１、２：１、１：１）で溶離させ、計３個の分画（Ｆｒ．Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３）を得た。この中で、Ｆｒ．Ｃ２（４．５ｇ）をメタノールと水勾配混合溶媒（６０：４０、８０：２０、１００：０）条件で逆相カラムクロマトグラフィーを行い、５個のサブ分画物（Ｆｒ．Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、Ｃ２５）を得た。Ｆｒ．Ｃ２３（３００ｍｇ）を再びクロロホルムとアセトンの勾配混合溶媒（９９：１−９５：５）条件でシリカゲル（４０−６３μｍ；４ｇ  フラッシュカラム）ＭＰＬＣを行い、３個のサブ分画物（Ｆｒ．Ｃ２３１、Ｃ２３２、Ｃ２３３）を得た。Ｆｒ．Ｃ２３３（１４０ｍｇ）を最終的に流速５ｍＬ／分の５５％アセトニトリル溶出液でＯＤＳ  ＨＰＬＣを行い、ｙｕａｎｈｕａｆｉｎｅ（２５．５ｍｇ、式（１）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００６６】
2021502968.tif 000006
[α]20D +29.3 (c 0.5, CHCl3);
ESI-MS, m/z 573.9 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.68 (dd, J = 7.3, 1.8, 2H, H-3', H-7'), 7.57 (s, 1H, H-1'), 7.41 - 7.37 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.08 (br, 1H, H-12), 5.05 (s, 1H, H-16a), 5.02 (d, J = 2.4, 1H, H-16b), 4.98 (br, 1H, H-14), 4.14 (s, 1H, H-5), 4.05 (d, J = 12.3, 1H, H-20a), 3.96 (m, 1H, H-10), 3.65 (dd, J = 7.3, 4.9, 1H, H-20b), 3.59 (s, 1H, H-8), 2.54 (q, J = 7.3, 1H, H-11), 2.00 (s, 3H, H-2''), 1.86 (s, 3H, H-17), 1.76 (d, J = 1.1, 3H, H-19), 1.32 (d, J = 7.3, 3H, H-18);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 209.8 (C-3), 171.6 (C-1''), 160.0 (C-1), 145.0 (C-15), 138.3 (C-2), 137.2 (C-2'), 130.5 (C-5'), 128.9 (C-4', C-6'), 127.2 (C-3', C-7'), 119.1 (C-1'), 113.9 (C-16), 85.4 (C-13), 82.1 (C-14), 80.3 (C-9), 79.8 (C-12), 74.5 (C-4), 71.3 (C-5), 65.1 (C-20), 64.7 (C-7), 63.2 (C-6), 48.9 (C-10), 45.1 (C-11), 36.6 (C-8), 21.0 (C-2''), 19.1 (C-18), 18.7 (C-17), 10.0 (C-19).
【００６７】
Ｆｒ．Ｃ２４（２１０ｍｇ）を再びクロロホルムとメタノール（１：１）混合溶媒でＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを行い、最終的に流速５ｍＬ／分の６５％アセトニトリル溶出液でＯＤ  ＳＨＰＬＣを行い、ｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎｅ（２５．０ｍｇ、式（２）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００６８】
2021502968.tif 000007
[α]20D +56.7 (c 0.1, CHCl3);
ESI-MS, m/z 625.5 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz); δH 7.98 (d, J = 7.5, 2H, H-3'', H-7''),7.72 (m, 2H, H-3', H-7'), 7.61 (m, 1H, H-5''), 7.59 (s, 1H, H-1), 7.48 (t, J = 7.7, 2H, H-4'', H-6''), 7.40 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.26 (br, 1H, H-12), 5.21 (d, J = 2.4, 1H, H-14), 5.13 (s, 1H, H-16a), 5.02 (s, 1H, H-16b), 4.13 (s, 1H, H-5), 4.06 (d, J = 12.3, 1H, H-20a), 3.99 (m, 1H, H-10), 3.76 (d, J = 2.3, 1H, H-8), 3.68 (s, 1H, H-7), 3.66 (d, J = 12.5, 1H, H-20b), 2.69 (q, J = 7.3, 1H, H-11), 1.90 (s, 3H, H-17), 1.75 (s, 3H, H-19), 1.42 (d, J = 7.3, 3H, H-18);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 209.8 (C-3), 166.9 (C-1''), 160.0 (C-1), 144.9 (C-15), 138.2 (C-2), 137.2 (C-2'), 134.5 (C-5''), 131.1 (C-2''), 130.7 (C-3'', C-7''), 130.5 (C-5'), 129.7 (C-4'', C-6''), 128.9 (C-4', C-6'), 127.2 (C-3', C-7'), 119.1 (C-1'), 114.1 (C-16), 85.7 (C-13), 82.0 (C-14), 80.4 (C-9), 80.2 (C-12), 74.4 (C-4), 71.4 (C-5), 65.2 (C-20), 64.8 (C-7), 63.2 (C-6), 49.9 (C-10), 45.3 (C-11), 37.0 (C-8), 19.1 (C-17), 18.9 (C-18), 10.0 (C-19).
【００６９】
Ｆｒ．Ｃ２５（１３０ｍｇ）を再びクロロホルムとメタノール（１：１）混合溶媒でＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを行い、最終的に流速５ｍＬ／分の７０％アセトニトリル溶出液でＯＤ  ＳＨＰＬＣを行い、ｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｈ（４．０ｍｇ、式（３）の化合物）及びｇｅｎｋｗａｎｉｎｅ  Ｍ（４．０ｍｇ、式（４）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００７０】
2021502968.tif 000008
[α]20D +46.2 (c 1.5, CHCl3);
ESI-MS, m/z 631.6 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 8.09 (d, J = 7.4, 2H, H-3'', H-7''),7.67 (d, J = 9.5, 2H, H-3', H-7'), 7.60 (t, J = 7.4, 1H, H-5''), 7.49 (t, J = 7.6, 2H, H-4'', H-6''), 7.36 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.07 (s, 1H, H-16a), 4.91 (s, 1H, H-16b), 4.78 (d, J = 11.0, 1H, H-20a), 4.62 (d, J = 2.5, 1H, H-14), 4.61 (s, 1H, H-7), 4.51 (d, J = 11.1, 1H, H-20b), 4.16 (d, J = 4.1, 1H, H-2), 3.41 (s, 1H, H-5), 2.74 (m, 2H, H-10, H-11), 2.67 (d, J = 2.3, 1H, H-8), 2.34 (dd, J = 14.1, 8.0, 1H, H-12a), 1.84 (s, 3H, H-17), 1.81 - 1.65 (m, 4H, H-1, H-2, H-12b), 1.31 (d, J = 6.9, 3H, H-18), 1.06 (d, J = 6.0, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 176 Hz): δC 168.4 (C-1''), 148.3 (C-15), 137.9 (C-2'), 134.4 (C-5''), 131.8 (C-2''), 130.8 (C-3'', C-7''), 130.5 (C-5'), 129.7 (C-3', C-7'), 129.1 (C-4'', C-6''), 127.2 (C-4', C-6'), 118.6 (C-1'), 111.5 (C-16), 86.9 (C-13), 86.6 (C-14), 85.6 (C-9), 82.7 (C-4), 78.9 (C-3), 77.6 (C-6), 77.2 (C-7), 74.8 (C-5), 68.9 (C-20), 52.9 (C-10), 38.4 (C-8), 37.5 (C-12), 37.4 (C-2), 36.5 (C-11), 36.1 (C-1), 21.5 (C-18), 19.6 (C-17), 13.8 (C-19).
【００７１】
2021502968.tif 000009
[α]20D -8.4 (c 0.05, MeOH);
ESI-MS, m/z 613.5 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 8.07 (d, J = 7.3, 2H, H-3'', H-7''), 7.69 (d, J = 9.5, 2H, H-3', H-7'), 7.61 (t, J = 7.4, 1H, H-5''), 7.49 (t, J = 7.7, 2H, H-4'', H-6''), 7.35 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.07 (s, 1H, H-16a), 5.06 (d, J = 12.0, 1H, H-20a), 4.91 (s, 1H, H-16b), 4.63 (d, J = 2.6, 1H, H-14), 4.05 (d, J = 11.8, 1H, H-20b), 3.83 (s, 1H, H-3), 3.78 (s, 1H, H-5), 3.53 (s, 1H, H-7), 3.18 (d, J = 2.6, 1H, H-8), 2.67 (t, J = 9.0, 1H, H-10), 2.48 (m, 1H, H-11), 2.31 (dd, J = 14.1, 8.0, 1H, H-12a), 1.84 (s, 3H, H-17), 1.79 - 1.55 (m, 4H, H-1, H-2, H-12b), 1.27 (d, J = 6.8, 3H, H-18), 1.04 (d, J = 5.2, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 176 Hz): δC 168.0 (C-1''), 148.5 (C-15), 138.2 (C-2'), 134.4 (C-5''), 131.6 (C-2''), 130.8 (C-3'', C-7''), 130.3 (C-5'), 129.74 (C-4'', C-6''), 128.9 (C-3', C-7'), 127.4 (C-4', C-6'), 118.8 (C-1'), 111.4 (C-16), 86.1 (C-13), 84.0 (C-14), 82.2 (C-4), 81.1 (C-9), 78.8 (C-3), 73.4 (C-5), 69.3 (C-20), 65.8 (C-7), 62.0 (C-6), 50.3 (C-10), 38.4 (C-2), 38.0 (C-8), 37.2 (C-12), 36.6 (C-11), 36.1 (C-1), 21.6 (C-18), 19.6 (C-17), 13.7 (C-19).
【００７２】
Ｆｒ．Ｃ３（４．０ｇ）をメタノールと水勾配混合溶媒（６０：４０、８０：２０、１００：０）条件で逆相カラムクロマトグラフィーを行い、４個のサブ分画物（Ｆｒ．Ｃ３１、Ｃ３２、Ｃ３３、Ｃ３４）を得た。Ｆｒ．Ｃ３４（１．０６ｇ）をメタノールを溶出溶媒としてＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを行い、３個のサブ分画物（Ｆｒ．Ｃ３４１、Ｃ３４２、Ｃ３４３）を得た。Ｆｒ．Ｃ３４１（１２０ｍｇ）、Ｃ３４２（１８０ｍｇ）、Ｃ３４３（１１９ｍｇ）を最終的に流速４．５ｍＬ／分の５０％アセトニトリル溶出液でＯＤ  ＳＨＰＬＣをそれぞれ行い、Ｆｒ．Ｃ３４１からｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ｋ（９．６ｍｇ、式（５）の化合物）を、Ｆｒ．Ｃ３４２からｙｕａｎｈｕａｐｉｎｅ（７９．５ｍｇ、式（６）の化合物）を得ており、Ｆｒ．Ｃ３４３からｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ａ（４．７ｍｇ、式（７）の化合物）、オルトベンゾエート２（８５．６ｍｇ、式（８）の化合物）、１，２α−ジヒドロダフネトキシン（２．９ｍｇ、式（９）の化合物）及びｇｅｎｋｗａｎｉｎ  Ｉ（２．４ｍｇ、式（１０）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００７３】
2021502968.tif 000010
[α]20D +38.5 (c 0.1, CHCl3);
ESI-MS, m/z 627.6 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.98 (d, J = 7.5, 2H, H-3', H-7'), 7.90 (d, J = 7.5, 2H, H-3'', H-7''), 7.57 (m, 2H, H-5', H-5''), 7.44 (d, J = 7.7, 2H, H-4'', H-6''), 7.42 (d, J = 7.6, 2H, H-4', H-6'), 5.72 (d, J = 6.2, 1H, H-14), 5.06 (s, 1H, H-16a), 4.84 (s, 1H, H-16b), 4.62 (d, J = 13.4, 1H, H-20a), 4.42 (d, J = 3.0, 1H, H-3), 4.24 (d, J = 5.15, 1H, H-20b), 4.19, (d, J= 2.4, H-7), 3.33 (s, 1H, H-5), 3.15 (d, J = 6.2, 1H, H-8), 2.34 (m, 2H, H-10, H-11), 2.01 (m, 3H, H-2, H-1a, H-12a), 1.81 (s, 3H, H-17), 1.60 (m, 2H, H-1b, H-12b), 1.24 (d, J = 7.1, 3H, H-18), 1.08 (d, J = 6.5, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CDCl3, 101 Hz): δC 168.3 (C-1''), 166.7 (C-1'), 148.1 (C-15), 133.6 (C-5''), 133.5 (C-5''), 130.2 (C-3'', C-7''), 130.1 (C-3', C-7'), 129.9 (C-2''), 129.4 (C-2'), 128.7 (C-4'', C-6''), 128.6 (C-4', C-6'), 111.6 (C-16), 83.8 (C-4), 77.9 (C-9), 77.4 (C-6), 77.3 (C-14), 76.0 (C-7), 75.5 (C-3), 74.5 (C-13), 73.2 (C-5), 67.4 (C-20), 54.6 (C-10), 40.6 (C-8), 37.9 (C-12), 36.6 (C-2), 34.9 (C-1), 34.4 (C-11), 19.5 (C-18), 19.0 (C-17), 13.5 (C-19).
【００７４】
2021502968.tif 000011
[α]20D +28.5 (c 0.05, CHCl3);
ESI-MS, m/z 565.5 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.67 (m, 2H, H-3', H-7'), 7.37 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.07 (s, 1H, H-16a), 5.07 (d, J = 2.9, 1H, H-12), 5.04 (s, 1H, H-16b), 4.95 (d, J = 2.7, 1H, H-14), 4.02 (s, 1H, H-5), 4.02 (d, J = 12.1, 1H, H-20a), 3.61 (d, J = 2.9, 1H, H-8), 3.60 (d, J = 10.6, 1H, H-20b), 3.54 (s, 1H, H-7), 3.18 (dd, J = 13.3, 5.8, 1H, H-10), 2.47 (q, J = 6.9, 1H, H-11), 2.38 (dt, J = 13.3, 6.8, 1H, H-1a), 2.25 (dt, J = 13.0, 6.6, 1H, H-1b), 2.01 (s, 3H, H-2''), 1.86 (s, 3H, H-17), 1.46 (d, J = 13.1, 1H, H-2), 1.37 (d, J = 7.0, 3H, H-18), 1.07 (d, J = 6.5, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 218.9 (C-3), 171.6 (C-1''), 145.0 (C-15), 137.4 (C-2'), 130.4 (C-5'), 128.8 (C-4', C-6'), 127.1 (C-3', C-5'), 119.3 (C-1'), 113.7 (C-16), 84.8 (C-13), 82.3 (C-14), 80.6 (C-9), 79.2 (C-12), 77.0 (C-4), 70.5 (C-5), 65.3 (C-20), 64.6 (C-7), 63.3 (C-6), 44.9 (C-11), 44.8 (C-10), 43.7 (C-1), 36.8 (C-8), 34.5 (C-2), 21.1 (C-2''), 19.1 (C-18), 19.0 (C-17), 12.8 (C-19).
【００７５】
2021502968.tif 000012
[α]20D +47.7 (c 0.1, CHCl3);
ESI-MS, m/z 505.6 [M+H]+ and m/z 527.4 [M+Na]+;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.66 (dd, J = 6.6, 3.0, 2H, H-3', H-7'), 7.38 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.07 (d, J = 6.5, 1H, H-16a), 4.91 (s, 1H, H-16b), 4.60 (d, J = 2.5, 1H, H-14), 4.42 (s, 1H, H-7), 4.13 (d, J = 4.6, 1H, H-3), 3.82 (q, J = 11.0, 2H, H-20), 3.38 (s, 1H, H-5), 2.71 (m, 2H, H-10, H-11), 2.62 (d, J = 2.4, 1H, H-8), 2.32 (dd, J = 14.1, 8.0, 1H, H-12a), 1.87 (m, 2H, H-1a, H-2), 1.83 (s, 3H, H-17), 1.69 (m, 1H, H-1b), 1.62 (m, 2H, H-12b), 1.30 (d, J = 6.9, 3H, H-18), 1.05 (d, J = 6.2, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 148.3 (C-15), 137.9 (C-15), 130.6 (C-5'), 129.1 (C-4', C-6'), 127.3 (C-3', C-5'), 118.6 (C-1'), 111.5 (C-16), 86.8 (C-13), 86.5 (C-14), 85.4 (C-9), 82.8 (C-4), 78.5 (C-7), 78.3 (C-6), 77.5 (C-3), 75.0 (C-5), 67.6 (C-20), 52.9 (C-10), 38.5 (C-2), 37.5 (C-8), 37.4 (C-12), 36.5 (C-11), 36.0 (C-1), 21.5 (C-17), 19.8 (C-18), 13.8 (C-19).
【００７６】
2021502968.tif 000013
[α]20D  -16.6 (c 0.05, MeOH);
ESI-MS, m/z 509.2 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.69 (dd, J = 6.6, 2.9, 2H, H-3', H-7'), 7.35 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.06 (s, 1H, H-16a), 4.90 (s, 1H, H-16b), 4.56 (d, J = 2.6, 1H, H-14), 4.02 (d, J = 12.2, 1H, H-20a), 3.76 (d, J = 2.6, 1H, H-3), 3.70 (s, 1H, H-5), 3.59 (d, J = 12.3, 1H, H-20b), 3.42 (m, 1H, H-7), 3.07 (d, J = 2.6, 1H, H-8), 2.67 (dd, J = 12.6, 5.9, 1H, H-10), 2.47 (p, J = 6.9, 1H, H-11), 2.28 (dd, J = 13.9, 7.9, 1H, H-12a), 1.82 (s, 3H, H-17), 1.69 (d, J = 14.0, 1H, H-1a), 1.64 (dd, J = 9.5, 4.8, 1H, H-2), 1.58 (m, 2H, H-1b, H-12b), 1.27 (d, J = 6.8, 3H, H-18), 1.03 (d, J = 5.3, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 148.3 (C-15), 138.1 (C-2'), 130.1 (C-5'), 128.7 (C-4', C-6'), 127.2 (C-3', C-7'), 118.5 (C-1'), 111.2 (C-16), 85.8 (C-13), 84.0 (C-14), 82.1 (C-9), 81.0 (C-2), 78.6 (C-4), 73.7 (C-5), 65.7 (C-20), 64.9 (C-7), 63.2 (C-6), 50.0 (C-10), 38.2 (C-2), 37.8 (C-8), 37.0 (C-12), 36.5 (C-11), 35.9 (C-1), 21.4 (C-17), 19.5 (C-18), 13.6 (C-19).
【００７７】
2021502968.tif 000014
[α]20D +6.2 (c 0.001, MeOH);
ESI-MS, m/z 507.3 [M+Na]+ ;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.72 (m, 2H, H-3', H-7'), 7.36 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.07 (s, 1H, H-16a), 4.91 (s, 1H, H-16b), 4.60 (d, J = 2.8, 1H, H-14), 4.01 (s, 1H, H-5), 3.99 (d, J = 12.2, 1H, H-20a), 3.57 (d, J = 12.2, 1H, H-20b), 3.44 (s, 1H, H-7), 3.16 (dd, J = 13.3, 5.8, 1H, H-10), 3.01 (d, J = 2.7, 1H, H-8), 2.55 (m, 1H, H-11), 2.38 (m, 1H, H-12a), 2.29 (m, 2H, H-1), 1.83 (s, 3H, H-17), 1.73 (d, J = 14.0, 1H, H-2), 1.53 (m, 1H, H-12b), 1.30 (d, J = 6.8, 3H, H-18), 1.08 (d, J = 6.6, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 219.3 (C-3), 148.3 (C-15), 138.1 (C-2'), 130.4 (C-5'), 128.9 (C-4', C-6'), 127.4 (C-3', C-5'), 118.8 (C-1'), 111.5 (C-16), 86.0 (C-13), 84.1 (C-14), 82.0 (C-9), 77.2 (C-4), 70.9 (C-5), 65.5 (C-20), 64.9 (C-7), 63.3 (C-6), 45.8 (C-10), 43.9 (C-8), 37.9 (C-1), 37.2 (C-2), 36.7 (C-12), 34.7 (C-11), 21.6 (C-17), 19.6 (C-18), 12.9 (C-19).
【００７８】
2021502968.tif 000015
[α]20D -22.8 (c 0.005, MeOH);
ESI-MS, m/z 513.3 [M+H]+ and m/z 535.3 [M+Na]+;
1H NMR values in ppm (CD3OD, 400 MHz): δH 7.69 (dd, J = 7.5, 1.9, 2H, H-3', H-7'), 7.36 (m, 3H, H-4', H-5', H-6'), 5.09 (s, 1H, H-16a), 4.93 (s, 1H, H-16b), 4.72 (d, J = 4.5, 1H, H-3), 4.64 (d, J = 2.8, 1H, H-14), 4.10 (s, 1H, H-5), 4.09 (d, J = 12.3, 1H, H-20a), 3.53 (d, J = 12.4, 1H, H-20b), 3.49 (s, 1H, H-7), 2.93 (dd, J = 13.3, 6.1, 1H, H-10), 2.78 (d, J = 2.8, 1H, H-8), 2.35 (dd, J = 14.1, 7.8, 1H, H-12a), 2.12 (m, 1H, H-11), 2.04 (dd, J = 11.7, 6.0, 1H, H-1a), 1.95 (dd, J = 12.0, 6.6, 1H, H-2), 1.84 (s, 3H, H-17), 1.82 (d, J = 14.9, 1H, H-12b), 1.58 (d, J = 12.6, 1H, H-1b), 1.31 (d, J = 6.7, 3H, H-18), 1.13 (d, J = 6.7, 3H, H-19);
13C NMR values in ppm (CD3OD, 101 Hz): δC 156.7 (C-21), 148.0 (C-15), 137.8 (C-2'), 130.5 (C-5'), 128.9 (C-4', C-6'), 127.4 (C-3', C-7'), 118.8 (C-1'), 111.8 (C-16), 94.1 (C-4), 90.4 (C-3), 85.8 (C-13), 84.2 (C-14), 81.4 (C-9), 71.1 (C-5), 65.0 (C-20), 64.7 (C-7), 62.8 (C-6), 50.7 (C-10), 37.9 (C-2), 37.4 (C-11), 37.3 (C-12), 37.1 (C-8), 36.2 (C-1), 21.6 (C-18), 19.5 (C-17), 12.9 (C-19).
【００７９】
実施例２−ｂ：フジモドキ抽出物から様々な溶媒による有効成分の分離
前記実施例１で得られたフジモドキ抽出物を２００ｍＬの蒸留水とヘキサンの１：１混合溶媒に溶解し、分画してヘキサン層を得た。同じ方法で２回さらに実施して得られたヘキサン層を減圧下濃縮して、ヘキサン分画物を得た。このようにして得られたヘキサン分画物（２０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりヘキサンと酢酸エチルの勾配混合溶媒（１０：１、５：１、２：１、１：１、１：２）で溶離し、計３個の分画（Ｆｒ．I、ＩＩ、III）を得た。
【００８０】
この中で、Ｆｒ．I（５７７ｍｇ）を７５％アセトニトリル条件で逆相シリカゲルｐｒｅｐＴＬＣを実施して活性バンドを得た。この活性バンドを流速３ｍＬ／分の８３％アセトニトリル溶出液でＯＤＳ  ＨＰＬＣを行い、保持時間（retention time）１５．２分と１８．５分でそれぞれａｃｕｔｉｌｏｎｉｎｅ  Ｆ（１４．０ｍｇ、式（１１）の化合物）とｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ  ｆａｃｔｏｒ  Ｍ１（７．０ｍｇ、式（１２）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００８１】
2021502968.tif 000016
[α]20D -32.1(c 1.3, MeOH);
ESI-MS, m/z 635.6 [M+H]+, 657.7 [M+Na]+;
1HNMR(CD3OD,500MHz): δH, 7.70(2H, dd, J=7.35, 2.22Hz, H-3', H-7'), 7.37(1H, m, H-5'), 7.36(2H, m, H-4', H-6'), 7.35(1H, m, H-3''), 6.64(1H, dd, J=14.82, 10.75Hz, H-5''), 6.34(1H, dd, J=14.79, 11.40Hz, H-4''), 6.22(1H, dd, J=15.16, 10.69Hz, H-6''), 6.01(1H, m, H-7''), 6.00(1H, m, H-2''), 5.06(1H, brs, H-16a), 5.03(1H, d, J=4.52Hz, H-3), 4.90(1H, brs, H-16b), 4.56(1H, d, J=2.66Hz, H-14), 3.98(1H, d, J=12.19Hz, H-20a), 3.92(1H, s, H-5), 3.59(1H, d, J=12.20Hz, H-20b), 3.41(1H, brs, H-7), 3.07(1H, d, J=2.69Hz, H-8), 2.83(1H, dd, J=13.03, 5.32Hz, H-10), 2.59(1H, m, H-11), 2.29(2H, m, H-12), 2.15(2H, m, H-8''), 1.82(3H, s, H-17), 1.78(1H, m, H-2), 1.71(2H, m, H-1), 1.47(2H, m, H-9''), 1.31(3H, d, J=6.89Hz, H-18), 0.99(3H, d, J=5.77Hz, H-19), 0.94(3H, t, J=7.39Hz, H-10'');
13CNMR values in ppm (CD3OD, 126Hz): δC169.4(C, C-1''), 148.5(C, C-15), 147.2(CH, C-3''), 143.3(CH, C-5''), 141.9(CH, C-7''), 138.2(C, C-2'), 131.6(CH, C-6''), 130.3(CH, C-5'), 129.2(CH, C-4''), 128.9(CH, C-4', C-6'), 127.4(CH, C-3', C-7'), 120.7(CH, C-2''), 118.7(C, C-1'), 111.4(CH2, C-16), 86.1(C, C-13), 84.0(CH, C-14), 82.9(C, C-4), 82.3(CH, C-3), 82.1(C, C-9), 74.1(CH, C-5), 66.1(CH2, C-20), 65.1(CH, C-7), 63.0(C, C-6), 37.9(CH, C-8), 37.7(CH, C-2), 37.3(CH2, C-1), 37.1(CH2, C-12), 36.5(CH, C-11), 36.2(CH2, C-8''), 23.4(CH2, C-9''), 21.6(CH3, C-18), 19.6(CH3, C-17), 14.1(CH3, C-10''), 13.8(CH3, C-19).
【００８２】
2021502968.tif 000017
[α]20D +18.9 (c 1.0, MeOH);
ESI-MS, m/z 637.6 [M+H]+, 659.4 [M+Na]+, 635.2 [M-H]-;
1HNMR(CDCl3, 500MHz): δH7.75(2H, m, H-3', H-7'), 7.36(3H, m, H-4', H-5', H-6'), 7.34(1H, dd, J=15.4 and 10.2, H-3''), 6.21(1H, dd, J=14.8 and 10.4, H-4''), 5.90(1H, d, J=15.2, H-2''), 5.05(1H, brs, H-16a), 4.92(1H, brs, H-16b), 4.69(1H, d, J=5.19, H-3), 4.51(1H, d, J=2.76, H-14), 4.06(1H, s, H-5), 3.88(1H, d, J=12.2, H-20a), 3.77(1H, d, J=12.2, H-20b), 3.44(1H, s, H-7), 2.96(1H, d, J=2.8, H-8), 2.82(1H, dd, J=13.2, 5.5, H-10), 2.48(1H, m, H-11), 2.20(2H, overlapped, H-6''), 2.20(1H, overlapped, H-12a), 1.93(1H, m, H-1a), 1.83(3H, s, H-17), 1.78(1H, m, H-12b), 1.73(1H, m, H-1b), 1.71(1H, m, H-2), 1.45(2H, m, H-7''), 1.33(3H, d, J=6.9, H-18), 1.32(2H, overlapped, H-9''), 1.31(2H, overlapped, H-8''), 1.06(3H, d, J=6.5, H-19), 0.91(3H, t, J=6.9, H-10'');
13CNMR(CDCl3, 126Hz): δC169.6(C, C-1''), 147.4(CH, C-3''), 146.8(CH, C-5''), 146.7(C, C-15), 136.4(C, C-2'), 129.4(CH, C-5'), 128.4(CH, C-4''), 128.2(CH, C-4', C-6'), 126.3(CH, C-3', C-7'), 118.0(CH, C-2''), 117.6(C, C-1'), 111.4(CH2, C-16), 84.5(C, C-13), 82.7(CH, C-14), 82.2(CH, C-3), 81.7(C, C-4), 80.5(C, C-9), 75.0(CH, C-5), 66.3(CH2, C-20), 64.2(CH, C-7), 60.6(C, C-6), 48.9(CH, C-10), 36.6(CH, C-8), 36.4(CH, C-2), 36.3(CH2, C-12), 36.0(CH2, C-1), 35.5(CH, C-11), 33.3(CH2, C-6''), 31.6(CH2, C-8''), 28.5(CH2, C-7''), 22.7(CH2, C-9''), 21.1(CH3, C-18), 19.4(CH3, C-17), 14.2(CH3, C-10''), 13.3(CH3, C-19).
【００８３】
また、Ｆｒ．III（４００ｍｇ）を７５％アセトニトリル条件で逆相シリカゲルｐｒｅｐＴＬＣを実施して活性バンドを得た。この活性バンドをＣＨＣｌ３−ＭＥＯＨ（５０：１）条件で順相シリカゲルｐｒｅｐＴＬＣを実施してＲｆ０．４と０．２５で二つのサブ分画物としてそれぞれＦｒ．III−１とＦｒ．III−２を得た。Ｆｒ．III−１を流速３ｍＬ／分の６５％アセトニトリル溶出液でＯＤＳ  ＨＰＬＣを行い、保持時間（retention time）１７．２分と２３．４分でそれぞれプロストラチンＱ（２．１ｍｇ、式（１３）の化合物）とｙｕａｎｈｕａｄｉｎｅ（４．０ｍｇ、式（１４）の化合物）を白色粉末として得た。Ｆｒ．III−２は、Ｆｒ．III−１と同じ方法でＯＤＳ  ＨＰＬＣを行い、保持時間（retention time）１９．０分と２１．４分でそれぞれｙｕａｎｈｕａｔｉｎｅ（４．４ｍｇ、式（１５）の化合物）と１２−O−ｎ−デカ−２，４，６−トリエノイル−ホルボール−（１３）−アセテート（１．８ｍｇ、式（１６）の化合物）を白色粉末として得た。前記化合物の構造は、以下のＮＭＲ、ＭＳ、［α］２０Ｄデータに基づいて構造を同定した。
【００８４】
2021502968.tif 000018
[α]20D +14.1 (c 0.03, MeOH);
ESI-MS, m/z 579.5 [M+Na]+ ;
1HNM(CDCl3, 500MHz): δH7.60(1H, s, H-1), 7.24(1H, m, H-3''), 6.19(1H, m, H-4''), 6.15(1H, m, H-5''), 5.79(1H, d, J=15.41Hz, H-2''), 5.70(1H, d, J=4.71Hz, H-7), 5.47(1H, d, J=10.27Hz, H-12), 4.03(2H, q, J=13.04Hz, H-20), 3.26(2H, overlapped, H-8, H-10), 2.53(2H, m, H-5), 2.17(2H, overlapped, H-6''), 2.17(1H, overlapped, H-11), 2.11(3H, s, H-2'), 1.78(3H, s, H-19), 1.44(2H, m, H-7''), 1.32(2H, m, H-9''), 1.31(2H, m, H-8''), 1.27(3H, s, H-16), 1.22(3H, s, H-17), 1.10(1H, d, J=5.20Hz, H-14), 0.91(3H, d, J=6.93Hz, H-18), 0.90(3H, t, J=7.06Hz, H-10'');
13CNMR values in ppm(CDCl3, 126Hz):δC209.1(C, C-3), 174.1(C, C-1'), 167.3(C, C-1''), 161.0(CH, C-1), 145.8(CH, C-3''), 145.5(CH, C-5''), 140.7(C, C-6), 133.1(C, C-2), 129.5(CH, C-7), 128.5(CH, C-4''), 119.1(CH, C-2''), 78.4(C, C-9), 74.0(C, C-4), 68.2(CH2, C-20), 65.9(C, C-13), 56.4(CH, C-10), 43.4(CH, C-11), 39.3(CH, C-8), 38.9(CH2, C-5), 36.6(CH, C-14), 33.2(CH2, C-6''), 31.6(CH2, C-8''), 28.6(CH2, C-7''), 25.9(C, C-15), 24.0(CH3, C-17), 22.7(CH2, C-9''), 21.3(CH3, C-2'), 17.0(CH3, C-16), 14.2(CH3, C-10''), 10.3(CH3, C-19).
【００８５】
2021502968.tif 000019
[α]20D +7.5 (c 1.3, CH2Cl2);
ESI-MS, m/z 587.6 [M+H]+ and 609.5 [M+Na]+ ;
1H NMR (CDCl3, 500MHz): δH7.58(1H, s, H-1), 6.67(1H, dd, J=15.45, 10.66Hz, H-3'), 6.05(1H, dd ,J=15.14, 10.71Hz, H-4'), 5.86(1H, m, H-5'), 5.65(1H, d, J=15.46Hz, H-2'), 5.02(1H, brs, H-16a), 4.99(1H, brs, H-12), 4.96(1H, brs, H-16b), 4.76(1H, d, J=2.47Hz, H-14), 4.26(1H, brs, H-7), 3.94(1H, dd, J=12.34, 5.86Hz, H-20a), 3.82(1H, m, H-10), 3.80(1H, m, H-20b), 3.56(1H, s, H-5), 3.52(1H, d, J=2.45Hz, H-8), 2.38(1H, q, J=7.22Hz, H-11), 2.10(2H, q, J=7.20Hz, H-6'), 2.00(3H, s, H-2''), 1.84(3H, s, H-17), 1.80(3H, d, J=1.31Hz, H-19), 1.39(2H, dt, J=14.26, 7.28Hz, H-7'), 1.30(2H, m, H-9'), 1.27(2H, m, H-8'), 0.89(3H, t, J=6.93Hz, H-10');
13CNMR values in ppm(CDCl3, 126Hz): δC209.7(C, C-3), 169.9(C, C-1''), 160.6(CH, C-1), 143.3(C, C-15), 139.6(CH, C-5'), 137.1(C, C-2), 135.3(CH, C-3'), 128.8(CH, C-4'), 122.5(CH, C-2'), 117.2(C, C-1'), 113.5(CH2, C-16), 83.9(C, C-13), 80.7(CH, C-14), 78.5(CH, C-12), 78.3(C, C-9), 72.5(C, C-4), 72.2(CH, C-5), 65.3(CH2, C-20), 64.5(C-7), 60.7(C-6), 47.7(CH, C-10), 44.3(CH, C-11), 35.6(CH, C-8), 32.9(CH2, C-6'), 31.5(CH2, C-8'), 28.9(CH2, C-7'), 22.7(CH2, C-9'), 21.4(CH3, C-2''), 18.9(CH3, C-17), 18.5(CH3, C-18), 14.2(CH3, C-10'), 10.1(CH3, C-19).
【００８６】
2021502968.tif 000020
[α]20D +52.8 (c 0.5, MeOH);
ESI-MS, m/z 605.5 [M+H]+, 627.4 [M+Na]+, 603.3 [M-H]-;
1HNMR(CDCl3, 500MHz): δH7.94(2H, m, H-3'', H-7''), 7.75(2H, m, H-3', H-7'), 7.60(1H, t, J=7.4, H-5''), 7.48(2H, m, H-4'', H-6''), 7.40(3H, m, H-4', H-5', H-6'), 5.42(1H, brs, H-12), 5.07(1H, brs, H-16a), 5.03(1H, brs, H-16b), 4.99(1H, d, J=2.8, H-14), 4.10(1H, s, H-5), 3.90(1H, d, J=12.4, H-20a), 3.85(1H, d, J=12.3, H-20b), 3.69(1H, d, J=2.8, H-8), 3.67(1H, brs, H-7), 3.06(1H, dd, J=13.3 and 5.9, H-10), 2.59(1H, q, J=6.9, H-11), 2.40(1H, m, H-1a), 2.28(1H, m, H-2), 1.92(3H, s, H-17), 1.63(1H, m, H-1b), 1.51(3H, d, J=6.9, H-18), 1.12(3H, d, J=6.6, H-19);
13CNMR(CDCl3, 126Hz): δC220.4(C, C-3), 165.8(C, C-1''), 143.2(C, C-15), 135.7(C, C-2'), 133.5(CH, C-5''), 130.0(CH, C-5'), 129.8(C, C-2''), 129.7(CH, C-3'', C-7''), 128.9(CH, C-4'', C-6''), 128.3(CH, C-4', C-6'), 126.2(CH, C-3', C-7'), 118.4(C, C-1'), 113.8(CH2, C-16), 83.9(C, C-13), 81.4(CH, C-14), 79.3(C, C-9), 78.7(CH, C-12), 75.2(C, C-4), 71.5(CH, C-5), 65.3(CH2, C-20), 64.5(CH, C-7), 61.0(C, C-6), 44.3(CH, C-11), 44.2(CH, C-10), 43.1(CH, C-2), 36.3(CH, C-8), 33.6(CH2, C-1), 19.0(CH3, C-17, C-18), 12.6(CH3, C-19).
【００８７】
2021502968.tif 000021
[α]20D -15.1 (c 0.2, CHCl3);
ESI-MS, m/z 577.5 [M+Na]+, 553.4 [M-H]-;
1HNMR (CDCl3, 500MHz): δH7.61(1H, s, H-1), 7.28(1H, dd, J=15.3 and 11.22, H-3''), 6.54(1H, dd, J=14.9 and 10.7, H-5''), 6.23(1H, dd, J=14.8 and 11.4, H-4''), 6.15(1H, dd, J=15.1 and 10.8, H-6''), 5.95(1H, m, H-7''), 5.84(1H, d, J=15.3, H-2''), 5.70(1H, d, J=4.8, H-7), 5.47(1H, d, J=10.3, H-12), 4.05(1H, d, J=12.9, H-20a), 4.00(1H, d, J=12.9, H-20b), 3.26(1H, overlapped, H-10), 3.26(1H, overlapped, H-8), 2.52(2H, m, H-5), 2.17(1H, m, H-11), 2.13(2H, overlapped, H-8''), 2.11(3H, s, H-2'), 1.78(3H, d, J=1.5, H-19), 1.45(2H, dq, J=14.6 and 7.3, H-9''), 1.27(3H, s, H-16), 1.22(3H, s, H-17), 1.10(1H, d, J=5.1, H-14), 0.93(3H, t, J=7.3, H-10''), 0.91(3H, d, J=6.4, H-18);
13CNMR(CDCl3, 126Hz): δC209.2(C, C-3), 174.1(C, C-1'), 167.2(C, C-1''), 161.0(CH, C-1), 145.6(CH, C-3''), 141.8(CH, C-5''), 141.0(CH, C-7''), 140.7(C, C-6), 133.1(C, C-2), 130.2(CH, C-6''), 129.5(CH, C-7), 127.9(CH, C-4''), 119.9(CH, C-2''), 78.5(C, C-9), 76.9(CH, C-12), 74.0(C, C-4), 68.2(CH2, C-20), 65.9(C, C-13), 56.4(CH, C-10), 43.4(CH, C-11), 39.3(CH, C-8), 38.8(CH2, C-5), 36.6(CH, C-14), 35.5(CH2, C-8''), 26.0(C, C-15), 24.0(CH3, C-17), 22.4(CH2, C-9''), 21.3(CH3, C-2'), 17.0(CH3, C-16), 14.6(CH3, C-18), 13.9(CH3, C-10''), 10.3(CH3, C-19).
【００８８】
実施例３：Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性に対する化合物の効果
前記実施例２のようにフジモドキ抽出物から分離したジテルペン系化合物の濃度によるＮｕｒｒ１タンパク質の活性度をルシフェラーゼ分析で確認した。
【００８９】
具体的に、ＧＬＡ４遺伝子が結合し得る塩基配列（５'−ＣＴＣＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＡＣＴＣＣＧ−３’、配列番号１）が８回繰り返された遺伝子をリポーター遺伝子であるルシフェラーゼに結合させたベクトルを合成した後、Ｎｕｒｒ１−ＬＢＤを含むＤＮＡとβ−ガラクトシダーゼを有するＤＮＡなど３種のプラスミドＤＮＡをＢＥ（２）Ｃ細胞に注入した。６時間後、前記実施例２から分離した化合物１〜１０を下記表１の濃度で処理した。このように処理した細胞を２０時間３７℃、５％二酸化炭素培養器で培養した後、ルシフェラーゼ分析を行った。対照群として０．１％ＤＭＳＯを使用した。このときの活性は倍数で活性度の増加を示しており、陽性対照群としてアモジアキンを使用した。
【００９０】
2021502968.tif 000022
【００９１】
分析の結果、下記表２及び図１に示すように、式（１）〜（１０）の全ての化合物がＮｕｒｒ１を活性化させた。具体的に、全ての式（１）〜（１０）の化合物は、１μＭの濃度で処理する場合、Ｎｕｒｒ１を活性化させ、特に式（２）の化合物は、０．０１μＭの低濃度でもＮｕｒｒ１の活性化効果に優れることを確認した。これにより、フジモドキの花の抽出物から分離された化合物が、Ｎｕｒｒ１を活性化させると共に、化合物の構造に応じて活性が異なっていることが分かった。
【００９２】
2021502968.tif 000023
【００９３】
分析の結果、下記表３に示すように、化合物１３及び１４のプロストラチンＱ及びｙｕａｎｈｕａｄｉｎｅは、０．００３μＭの低濃度でもＮｕｒｒ１を活性化させ、前記化合物１３及び１４は、いずれも化合物１６の１２−Ｏ−ｎ−デカ−２，４，６−トリエノイル−ホルボール−（１３）−アセテートは、０．０３μＭで有意にＮｕｒｒ１を活性化することを確認した。また、化合物１１のａｃｕｔｉｌｏｎｉｎｅ  Ｆ、化合物１２のｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ  ｆａｃｔｏｒ  Ｍ１及び化合物１５のｙｕａｎｈｕａｔｉｎｅは、それぞれ１、０．２及び０．３μＭで有意にＮｕｒｒ１を活性化させることを確認した。これにより、フジモドキ抽出物から分離された化合物がＮｕｒｒ１を活性化させると共に、化合物の構造に応じて活性が異なっていることが分かった。
【００９４】
2021502968.tif 000024
【００９５】
実施例４：ミクログリアＢＶ−２細胞で酸化窒素生成の抑制活性
ミクログリア細胞における炎症反応による脳神経細胞の死滅は、認知症、パーキンソン病のような退行性脳疾患の主要な原因の一つとして報告されている（Sarkar S et al., Neurotoxicology, 44, 250-262 (2014); Bower JH et al., Neurology, 67, 494-496 (2006)）。従って、ミクログリアで前記実施例２で分離した化合物を対象に、代表的な炎症因子である酸化窒素（ＮＯ）の生成抑制活性を調査した。具体的に、ミクログリアＢＶ−２細胞を９６ウェルプレートに５×１０４細胞／ウェルで添加し、２日間培養した後、ＬＰＳ（１ｍｇ／ｍＬ）を前記実施例２で分離した化合物と共に、２４時間培養した。培養上清をＧｒｉｅｓｓ試薬を用いて５４０ｎｍで吸光度を測定し、亜硝酸塩を定量することで、酸化窒素の生成量を調査した。陽性対照群としてはミノサイクリンを使用した。
【００９６】
調査の結果、下記表４に示すように、全ての化合物が低濃度で酸化窒素の生成を阻害することを確認した。特に、化合物２のｇｅｎｋｗａｄａｐｈｎｉｎｅは、０．０６±０．０２の非常に低濃度で酸化窒素生成の阻害活性を示すことを確認し、化合物１４のｙｕａｎｈｕａｄｉｎｅは、１．０３μＭの非常に低濃度で酸化窒素生成の阻害活性を示すことを確認した。
【００９７】
2021502968.tif 000025
【００９８】
2021502968.tif 000026
【００９９】
実施例５：ミクログリアＢＶ−２細胞で伝染性サイトカイン生成の抑制活性
ミクログリアでの代表的な炎症因子であるＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６及びＴＮＦａに対する化合物の生成の抑制活性を調査した。ミクログリアＢＶ−２細胞を９６ウェルプレートに１×１０５細胞／ウェルで添加し、ＬＰＳ（１ｍｇ／ｍＬ）を化合物と共に５時間培養した。各ウェルで細胞を回収して、ウエスタン・ブロッティングとリアルタイムＰＣＲを行った。
【０１００】
具体的に、ＩＬ−１ｂタンパク質の発現量をウエスタン・ブロッティングで調査した。１次抗体としてウサギａｎｔｉ−ＩＬ−１ｂ［Cell Signaling (Danvers, MA, USA); 1:1000］を使用し、コントロールとしてマウスａｎｔｉ−ａｃｔｉｎ（Sigma、１：５０００）を使用した。２次抗体としてｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ又はａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ（ＩｇＧ）抗体（Amersham, Piscataway, NY, USA）を使用し、ｅｎｈａｎｃｅｄ−cｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Amersham）で発色して観察した。
【０１０１】
また、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−ａのｍＲＮＡ発現量をリアルタイム定量的ＰＣＲで分析した。全てのラットのサイトカインとＧＡＰＤＨのプライマーはInvitrogen社からで購入し、サイトカインｍＲＮＡ発現量をＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現量で正規化（normalized）して求めた。
【０１０２】
ウエスタン・ブロッティング及びＰＣＲを実施した結果、図１Ａ及び１Ｂに示すように、全ての化合物の投与群でＩＬ−１ｂの発現量が減少することを確認した。また、ＰＣＲを実施した結果、図１Ｃ及び１Ｄに示すように、全ての化合物の投与群でＩＬ−６及びＴＮＦ−ａの発現量が減少することを確認した。
【０１０３】
本明細書は、本発明の技術分野において通常の知識を有する者であれば十分に認識して類推し得る内容は、その詳細な記載を省略した。本明細書に記載された具体的な例示以外に本発明の技術的思想や必須構成を変更しない範囲内で多様に変形が可能である。従って、本発明は、本明細書で具体的に説明し、例示したものと異なる方式でも実施することができ、これは本発明の技術分野に通常の知識を有する者であれば理解することができる事項である。
＜産業上利用の可能性＞
【０１０４】
前述したように、本発明は、ジテルペン系化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経変性疾患の予防又は治療用薬学的組成物に関し、神経細胞での炎症反応を抑制する効果を示すことで、Ｎｕｒｒ１タンパク質の活性抑制により誘発されるパーキンソン病をはじめとする神経変性疾患の予防及び治療に有用に利用できる。
＜フリーテキスト＞
配列番号１
DNA
Artificial Sequence
GLA4 binding gene
ctcggaggac agtactccg
【図１】
2021502968.tif 000033
【図２】
2021502968.tif 000034
【配列表】
2021502968000001.app
【国際調査報告】
2021502968.tif 000035
2021502968.tif 000036
2021502968.tif 000037
2021502968.tif 000038
2021502968.tif 000039
2021502968.tif 000040
2021502968.tif 000041
2021502968.tif 000042
2021502968.tif 000043
2021502968.tif 000044
2021502968.tif 000045
2021502968.tif 000046