(57)【要約】  式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ、並びにＡＳＫ１関連疾患を治療する医薬品における前記結晶形の利用。【化１】2021531343.tif 000014  【選択図】図１
2021531343.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折ＸＲＰＤパターンにおいて、２θ角が８．４０±０．２°、１３．４６±０．２°、及び１４．１３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ。
【化１】
2021531343.tif 000010
【請求項２】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．４０±０．２°、１０．５６±０．２°、１３．４６±０．２°、１４．１３±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．７９±０．２°、２４．０９±０．２°及び２４．９７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
ＸＲＰＤパターンが図１に示される如きである、請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
示差走査熱量測定曲線ＤＳＣにおいて、２１０．７８℃及び２３７．７４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、２１５．７０℃に１つの放熱ピークを有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
ＤＳＣパターンが図２に示される如きである、請求項４に記載の結晶形Ａ。
【請求項６】
熱重量分析曲線ＴＧＡにおいて、１２０℃にて１．７９９％の重量損失に達する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶形Ａ。
【請求項７】
ＴＧＡパターンが図３に示される如きである、請求項６に記載の結晶形Ａ。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１７．０７±０．２°及び１７．７０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂ。
【化２】
2021531343.tif 000011
【請求項９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１０．２０±０．２°、１４．６２±０．２°、１７．０７±０．２°、１７．７０±０．２°、２１．５７±０．２°、２３．３４±０．２°及び２４．３７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項８に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１０】
ＸＲＰＤパターンが図４に示される如きである、請求項９に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１１】
示差走査熱量測定曲線において、１４９．１７℃、１７０．２５℃及び２３７．８４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．３４℃に１つの放熱ピークを有する、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１２】
ＤＳＣパターンが図５に示される如きである、請求項１１に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１３】
熱重量分析曲線において、６０℃にて０．３５９３％の重量損失に達し、１２０℃にて１．５７０３％の重量損失に達する、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１４】
ＴＧＡパターンが図６に示される如きである、請求項１３に記載の結晶形Ｂ。
【請求項１５】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が９．４７±０．２°、１６．４５±０．２°及び１７．３２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃ。
【化３】
2021531343.tif 000012
【請求項１６】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．７２±０．２°、９．４７±０．２°、１０．４４±０．２°、１３．７５±０．２°、１６．４５±０．２°、１７．３２±０．２°、１９．４１±０．２°及び２６．８２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１５に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１７】
ＸＲＰＤパターンが図７に示される如きである、請求項１６に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１８】
示差走査熱量測定曲線において、１０５．７６℃、１７１．５４℃及び２３７．４８℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．６４℃に１つの放熱ピークを有する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１９】
ＤＳＣパターンが図８に示される如きである、請求項１８に記載の結晶形Ｃ。
【請求項２０】
熱重量分析曲線において、７５．８９℃にて１．１１５％の重量損失に達し、１６４．９３℃にて２．９５８％の重量損失に達する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の結晶形Ｃ。
【請求項２１】
ＴＧＡパターンが図９に示される如きである、請求項２０に記載の結晶形Ｃ。
【請求項２２】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１２．７３±０．２°及び２０．６０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄ。
【化４】
2021531343.tif 000013
【請求項２３】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１１．８４±０．２°、１２．７３±０．２°、１４．７０±０．２°、１６．３９±０．２°、２０．６０±０．２°、２１．２２±０．２°及び２２．２６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項２２に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２４】
ＸＲＰＤパターンが図１０に示される如きである、請求項２３に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２５】
示差走査熱量測定曲線において、１０１．９２℃、１７１．０１℃及び２３７．２９℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７９．９６℃に１つの放熱ピークを有する、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２６】
ＤＳＣパターンが図１１に示される如きである、請求項２５に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２７】
熱重量分析曲線において、７５．６２℃にて０．４８７６％の重量損失に達し、１３２．３６℃にて２．５８３６％の重量損失に達する、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２８】
ＴＧＡパターンが図１２に示される如きである、請求項２７に記載の結晶形Ｄ。
【請求項２９】
ＡＳＫ１関連疾患を治療する医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の結晶形Ａ、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の結晶形Ｃ、又は請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の結晶形Ｄの利用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１８年７月２０日出願の中国特許出願第ＣＮ２０１８１０８０６１９０．４号の優先権を主張する。この中国特許出願の全文を本願に引用している。
【０００２】
技術分野
本発明は、式（Ｉ）化合物の結晶形、及びＡＳＫ１関連疾患を治療する医薬品の製造におけるその結晶形の利用に関する。
【背景技術】
【０００３】
アポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ａｐｏｔｏｓｉｓ ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｋｉｎａｓｅ １、ＡＳＫ１）は細胞分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼキナーゼキナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ、ＭＡＰ３Ｋ）ファミリーの一つのメンバーである。ＡＳＫ１は、酸化ストレス、活性酸素クラスター（ＲＯＳ）、ＬＰＳ、ＴＮＦ−α、ＦａｓＬ、小胞体ストレスや細胞内カルシウムイオン濃度の増加などの一連の刺激によって活性化される。ＡＳＫ１はＪＮＫ（ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ）とｐ３８ ＭＡＰＫ（ｐ３８ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ）を活性化することでこの一連の刺激に対応し、そして、ミトコンドリア細胞死経路に関連するシグナルにより、多種のアポトーシスを誘導する。ＡＳＫ１の活性化及びシグナル伝達は、神経変性疾患、心血管疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患や代謝障害疾患など、多くの疾患において重要な役割を果たしている。したがって、神経変性疾患、心血管疾患、炎症、自己免疫疾患や代謝疾患に罹患する患者では、治療薬としてＡＳＫ１阻害剤を用いることにより、患者の生活を改善することができる。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ角８．４０±０．２°、１３．４６±０．２°及び１４．１３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａを提供する。
【化１】
2021531343.tif 000003
【０００５】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ａは、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．４０±０．２°、１０．５６±０．２°、１３．４６±０．２°、１４．１３±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．７９±０．２°、２４．０９±０．２°及び２４．９７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。
【０００６】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＸＲＰＤパターンが図１に示される如きである。
【０００７】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＸＲＰＤパターンの分析データが表１に示される如きである。
【表１】
2021531343.tif 000004
【０００８】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ａの示差走査熱量測定曲線（ＤＳＣ）において、２１０．７８℃及び２３７．７４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、２１５．７０℃に１つの放熱ピークを有する。
【０００９】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＤＳＣパターンが図２に示される如きである。
【００１０】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ａの熱重量分析曲線（ＴＧＡ）において、１２０℃にて１．７９９％の重量損失に達する。
【００１１】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＡのＴＧＡパターンが図３に示される如きである。
【００１２】
本発明は、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１７．０７±０．２°及び１７．７０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを提供する。
【００１３】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂは、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１０．２０±０．２°、１４．６２±０．２°、１７．０７±０．２°、１７．７０±０．２°、２１．５７±０．２°、２３．３４±０．２°及び２４．３７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。
【００１４】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＸＲＰＤパターンが図４に示される如きである。
【００１５】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＸＲＰＤパターンの分析データが表２に示される如きである。
【表２】
2021531343.tif 000005
【００１６】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂの示差走査熱量測定曲線において、１４９．１７℃、１７０．２５℃及び２３７．８４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．３４℃に１つの放熱ピークを有する。
【００１７】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＤＳＣパターンが図５に示される如きである。
【００１８】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｂの熱重量分析曲線において、６０℃にて０．３５９３％の重量損失に達し、１２０℃にて１．５７０３％の重量損失に達する。
【００１９】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＢのＴＧＡパターンが図６に示される如きである。
【００２０】
本発明は、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が９．４７±０．２°、１６．４５±０．２°及び１７．３２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃを提供する。
【００２１】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｃは、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．７２±０．２°、９．４７±０．２°、１０．４４±０．２°、１３．７５±０．２°、１６．４５±０．２°、１７．３２±０．２°、１９．４１±０．２°及び２６．８２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。
【００２２】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＣのＸＲＰＤパターンが図７に示される如きである。
【００２３】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＣのＸＲＰＤパターンの分析データが表３に示される如きである。
【表３】
2021531343.tif 000006
【００２４】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｃの示差走査熱量測定曲線において、１０５．７６℃、１７１．５４℃及び２３７．４８℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．６４℃に１つの放熱ピークを有する。
【００２５】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＣのＤＳＣパターンが図８に示される如きである。
【００２６】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｃの熱重量分析曲線において、７５．８９℃にて１．１１５％の重量損失に達し、１６４．９３℃にて２．９５８％の重量損失に達する。
【００２７】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＣのＴＧＡパターンが図９に示される如きである。
【００２８】
本発明は、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１２．７３±０．２°及び２０．６０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄを提供する。
【００２９】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｄは、粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１１．８４±０．２°、１２．７３±０．２°、１４．７０±０．２°、１６．３９±０．２°、２０．６０±０．２°、２１．２２±０．２°及び２２．２６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する。
【００３０】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＤのＸＲＰＤパターンが図１０に示される如きである。
【００３１】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＤのＸＲＰＤパターンの分析データが表４に示される如きである。
【表４】
2021531343.tif 000007
【００３２】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｄの示差走査熱量測定曲線において、１０１．９２℃、１７１．０１℃及び２３７．２９℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７９．９６℃に１つの放熱ピークを有する。
【００３３】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＤのＤＳＣパターンが図１１に示される如きである。
【００３４】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形Ｄの熱重量分析曲線において、７５．６２℃にて０．４８７６％の重量損失に達し、１３２．３６℃にて２．５８３６％の重量損失に達する。
【００３５】
本発明のいくつかの形態では、上記結晶形ＤのＴＧＡパターンが図１２に示される如きである。
【００３６】
本発明は、ＡＳＫ１関連疾患を治療する医薬品の製造における、上記結晶形Ａ、結晶形Ｂ、結晶形Ｃ又は結晶形Ｄの利用をさらに提供する。
【発明の効果】
【００３７】
本発明の化合物の結晶形Ａ、結晶形Ｂ、結晶形Ｃ及結晶形Ｄは、安定的であり、光、熱、湿度による影響が小さく、溶解性が非常に高く、製薬分野において将来性が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図２】（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＤＳＣパターンである。
【図３】（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＴＧＡパターンである。
【図４】（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図５】（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＤＳＣパターンである。
【図６】（Ｉ）化合物の結晶形ＢのＴＧＡパターンである。
【図７】（Ｉ）化合物の結晶形ＣのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図８】（Ｉ）化合物の結晶形ＣのＤＳＣパターンである。
【図９】（Ｉ）化合物の結晶形ＣのＴＧＡパターンである。
【図１０】（Ｉ）化合物の結晶形ＤのＣｕ−Ｋα放射のＸＲＰＤパターンである。
【図１１】（Ｉ）化合物の結晶形ＤのＤＳＣパターンである。
【図１２】（Ｉ）化合物の結晶形ＤのＴＧＡパターンである。
【図１３】式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＭＣＤ誘導マウスＮＡＳＨモデルでのインビボ有効性実験結果であり、注：＊＊＊はｐ＜０．００１ｖｓ．正常対照群を示し、＃＃はｐ＜０．０１ｖｓ．モデル群を示す。
【図１４】式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＣＣｌ4誘導マウス肝線維症モデルでのインビボ有効性実験結果であり、注：＊＊＊はｐ＜０．００１ｖｓ．正常対照群を示し、＃はｐ＜０．０５ｖｓ．モデル群を示し、＃＃はｐ＜０．０１ｖｓ．モデル群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
定義及び説明
特に断らない限り、本明細書で使用される下記用語及び句は下記定義を含むことを意図する。１つの特定の句又は用語は、特に定義されない場合、不明確又は不明瞭であると理解できず、一般的な定義として理解すべきである。本明細書に商品名が記載されている場合、該商品名に対応する商品又はその活性成分を意味する。
【００４０】
本発明の中間体化合物は当業者に公知の複数の合成方法により製造することができ、以下で挙げられる特定実施形態、それらの実施形態と他の化学合成方法とを組み合わせた実施形態、及び当業者に公知の同等の置換形態が含まれ、好ましい実施形態は、本発明の実施例を含むが、本発明の実施例には制限されない。
【００４１】
本発明の特定実施形態の化学反応は適切な溶剤にて行われ、前記溶剤は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬や材料に適していなければならない。本発明の化合物を得るために、当業者が既存の実施形態に基づいて合成ステップ又は反応手順を修正又は選択することも必要とされる場合はある。
【００４２】
以下、実施例にて本発明を詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を何ら制限するものではない。
【００４３】
本発明で使用されるすべての溶剤は市販品であり、さらなる精製を必要とせずに使用することができる。
【００４４】
本発明で使用されるすべての溶剤は市販品として入手可能である。本発明では、下記略語が使用される。ＤＣＭはジクロロメタンを表し、ＤＭＦはＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドを表し、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し、ＥｔＯＨはエタノールを表し、ＭｅＯＨはメタノールを表し、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸を表し、ＴｓＯＨはｐ−トルエンスルホン酸を表し、ｍｐは融点を表し、ＥｔＳＯ3Ｈはエタンスルホン酸を表し、ＭｅＳＯ3Ｈはメタンスルホン酸を表し、ＡＴＰはアデノシン三リン酸を表し、ＨＥＰＥＳは４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニルエタンスルホン酸を表し、ＥＧＴＡはエチレングリコールビス（２−アミノエチルエーテル）四酢酸を表し、ＭｇＣｌ2は塩化マグネシウムを表し、ＭｎＣｌ2は二塩化マンガンを表し、ＤＴＴはジチオスレイトールを表し、ＤＣＣはジシクロヘキシルカルボジイミドを表し、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンを表し、ＤＩＥＡはＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを表し、ｗｔ％は質量百分率である。
【００４５】
本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ−ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
器具型番：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ａｄｖａｎｃｅ 粉末Ｘ線回折計
テスト方法：ＸＲＰＤ検出に約１０〜２０ｍｇのサンプルが使用される。
【００４６】
詳細なＸＲＰＤパラメータは以下のとおりである。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα（λ＝１．５４０５６オングストローム）、
Ｘ線管電圧：４０ｋＶ、Ｘ線管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
検出器スリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：３又は４〜４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ長：０．１２秒
サンプルトレイの回転数：１５ｒｐｍ
【００４７】
本発明の示差走査熱量分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
器具型番号：ＴＡＤＳＣＱ２０００示差走査熱量計
テスト方法：サンプル（０．５〜１ｍｇ）をＤＳＣ用アルミ鍋に入れてテストし、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを２５℃（室温）から３００℃（又は３５０℃）に加熱する。
【００４８】
本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
器具型番：ＴＡＱ５０００熱重量分析計
テスト方法：サンプル（２〜５ｍｇ）をＴＧＡ用プラチナ鍋に入れてテストし、２５ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ2条件下、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、サンプルを室温から３５０℃又は重量が２０％損失されるまで加熱する。
【００４９】
本発明の内容をよりよく理解するために、以下、特定の実施例を参照しながらさらに説明するが、特定の実施形態は本発明の内容に対する制限ではない。
【００５０】
実施例１：式（Ｉ）化合物の製造
【化２】
2021531343.tif 000008
【００５１】
ステップ１：
化合物１（３７０ｇ、１．８１ｍｏＬ、１ｅｑ）及び化合物２（５１３ｇ、１．９９ｍｏＬ、１．１ｅｑ、純度９８．７１％）を乾燥している５Ｌ三口フラスコに加え、反応フラスコにトルエン（１．８５Ｌ）及びＤＩＥＡ（６６５．００ｍＬ、３．８１ｍｏＬ、２．１ｅｑ）を順次加え、反応系を１００℃に緩やかに昇温して１０時間撹拌した。反応系の液体を室温に冷却して、水を加えて撹拌し、静置して分液し、有機相を収集し、収集した有機相をＮＨ4Ｃｌ（２７ｗｔ％、１Ｌ）、ＮａＨＣＯ3（９ｗｔ％、１Ｌ）及びＮａＣｌ（１５ｗｔ％、５００ｍＬ）で順次洗浄し、次に、無水硫酸ナトリウム（１５０ｇ）で乾燥させ、ろ過して、ろ液を減圧下回転乾燥させ（オイルポンプ、５０℃）、灰色固体（４９８ｇ）を得た。灰色固体をｎ−ヘキサン（１Ｌ）で、室温下２時間ビーティング（叩解）し、ろ過して、ろ過ケーキを減圧下回転乾燥させ（オイルポンプ、５０℃）、化合物３を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.86-0.90(m,2H)0.91-0.96(m,2H)2.09(s,3H)2.14-2.21(m,1H)4.16(d,J=5.52Hz,2H)5.27(d,J=5.52Hz,1H)6.50(d,J=6.02Hz,1H)7.05(d,J=9.29Hz,1H)。
【００５２】
ステップ２：
無水酢酸（５４０．００ｍＬ、５．７７ｍｏＬ、４ｅｑ）及びギ酸（１．８４Ｌ）を乾燥している５Ｌ三口フラスコに加え、次に、系の温度を０℃に下げた。化合物３（４６０．００ｇ、１．４４ｍｏＬ、１ｅｑ、純度８９．３７％）を無水ジクロロメタン（１．８４Ｌ）に溶解した後、反応系に加え、反応系を０℃で１時間撹拌した。反応系の液体に水（１Ｌ）を加え、次に、ＮａＯＨ（５０％）でＰＨ＝８〜９に調整し、系の温度を０〜１５℃に維持しながら、有機相を収集し、収集した有機相をジクロロメタン（１．５Ｌ）及び飽和塩化ナトリウム（１Ｌ）で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２００ｇ）で乾燥させ、ろ過して、ろ液を減圧下回転乾燥させ（水ポンプ、５０℃）、化合物４を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.86-0.90(m,2H)0.93-0.96(m,2H)2.06-2.10(m,1H)2.25(s,3H)4.68(s,2H)7.41(d,J=9.54Hz,1H)7.61(d,J=6.78Hz,1H)8.17(s,1H)。
【００５３】
ステップ３：
化合物４（４４０ｇ、１．３３ｍｏＬ、１ｅｑ、純度９４．７７％）を乾燥している５Ｌ三口フラスコに加え、反応フラスコに酢酸（２．２Ｌ）及び酢酸アンモニウム（３９９．０３ｇ、５．１８ｍｏＬ、３．９ｅｑ）を順次加え、反応系を１１５℃に緩やかに昇温して４３ｈ撹拌した。反応系の液体１滴をメタノール１ｍＬに溶解してＬＣＭＳに送ったところ、ＬＣＭＳによれば、原料化合物４が２４．５０％残されており、７０．６７％の産物が生成されたことが示されていたため、酢酸アンモニウム（１０２．００ｇ、１．３２ｍｏＬ、１ｅｑ）を補充して、反応系を２０時間撹拌した。反応系の液体１滴をメタノール１ｍＬに溶解してＬＣＭＳに送ったところ、ＬＣＭＳによれば、原料化合物４が１２．６６％残されており、７６．０３％の産物が生成されたことが示されていたため、酢酸アンモニウム（５１．００ｇ、６６１．６３ｍｍｏＬ、０．５ｅｑ）を補充して、反応系を１５時間撹拌し続けた。反応系の液体１滴をメタノール１ｍＬに溶解してＬＣＭＳに送ったところ、ＬＣＭＳによれば、原料化合物４が７．３２％残されており、８９．３６％の産物が生成されたことが示されていたため、反応系の液体に水（１Ｌ）を加え、次に、酢酸イソプロピル（１Ｌ）を加えて撹拌し、静置して分液し、有機相を収集し、収集した有機相を５０％のＮａＯＨでＰＨ＝８〜９に調整し、次に、静置して分液し、有機相を収集し、上記有機相を飽和ＮａＣｌ（８００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２００ｇ）で乾燥させ、ろ過して、ろ液を減圧下回転乾燥させ（水ポンプ、５０℃）、茶褐色油状液体（４２０ｇ）を得た。茶褐色油状液体をメチルｔ−ブチルエーテル（６００ｍＬ）に溶解し、次に沈殿が生成されず、溶液の上層が黄色で澄明となるまでｎ−ヘキサン（６００ｍＬ）を溶液に緩やかに加え、ろ過して、ろ液を減圧下回転乾燥させ（水ポンプ、５０℃）、化合物５を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.66-0.71(m,2H)0.76-0.81(m,2H)1.78-1.86(m,1H)2.13(s,3H)7.13(d,J=1.25Hz,1H)7.47(d,J=9.54Hz,1H)7.64(d,J=1.25Hz,1H)7.69(d,J=6.53Hz,1H)。
【００５４】
ステップ４：
化合物５（８０ｇ、２３８．６３ｍｍｏＬ、１ｅｑ、純度８８．０４％）を乾燥している３Ｌ三口フラスコに加え、反応フラスコに無水テトラヒドロフラン（１．２０Ｌ）を加えて、窒素バルーンを用いて系内の空気を置換する操作を２回繰り返した。また、系の温度を０℃に下げた後、ｉＰｒＭｇＣｌ（１４３．００ｍＬ、２８６．３６ｍｍｏＬ、１．２ｅｑ、２Ｍ）を緩やかに加えて２時間撹拌し、反応系へＣＯ2（１５Ｐｓｉ）を３０分間導入し、次に、氷浴を取り外して、室温でＣＯ2（１５ｐｓｉ）を６０分間導入して、反応系を停止した。反応系の液体に水（１Ｌ）を加え、次に、濃縮させて（水ポンプ、５０℃）黄色液体（１．２Ｌ）を得て、反応系の液体にメチルｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）を加えて、撹拌して静置し、分液して水相を収集し、収集した水相を６ＭのＨＣｌでＰＨ＝４〜５に調整し、メチルｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）を加えて抽出し、水相を収集して、水相を水ポンプ（７０℃）で溶液の体積が４００ｍＬとなるまで濃縮させ、冷却して静置し、固体を析出し、混合液を別のバッチ（材料投入量１３０ｇ）の混合液と合わせてろ過した。ろ過ケーキを減圧下回転乾燥させ（水ポンプ、５０℃）、化合物６を得た。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.86-0.91(m,2H)1.00-1.06(m,2H)2.00-2.07(m,1H)2.25(s,3H)7.54(d,J=11.29Hz,1H)7.75(d,J=1.00Hz,1H)8.00(d,J=6.78Hz,1H)9.31(d,J=1.51Hz,1H)。
【００５５】
ステップ５：
化合物６（７０ｇ、２６０．５７ｍｍｏｌ、１．１当量）をＤＣＭ（７００Ｌ）に入れて、ＤＭＦ（２ｍＬ、２５．９９ｍｍｏｌ、０．１当量）を加え、撹拌しながら反応系の液体に（ＣＯＣｌ）2（３５．５ｍＬ、４０５．５５ｍｍｏｌ、１．７当量）を滴下して、系を３０℃で１ｈ撹拌し、反応系の液体が完全に澄明となると、反応系の液体を約２００ｍＬまで減圧下回転蒸発させた。無水ＤＣＭ ５００ｍＬを加え、さらに約２００ｍＬまで減圧下回転蒸発させ、この操作を２回繰り返した。反応系の液体に無水ＤＣＭ ７００ｍＬ、化合物７（５１ｇ、２３６．９３ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＩＥＡ（４１．５ｍＬ、２３７．６１ｍｍｏｌ、１当量）を加え、系を３０℃で１ｈ撹拌した。反応系の液体を別のバッチ（同じ材料投入量）の反応系の液体とともに水２Ｌに注入し、ＤＣＭ（１Ｌ＊３）で抽出し、有機相を併せて水（２Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3（２Ｌ）、及び水（２Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過してろ液を減圧下回転乾燥させ、粗生成物を得て、粗生成物にアセトニトリル（１７０ｍＬ）を加えて十分に振とうさせ、大量の固体を析出させ、さらにアセトニトリル（１７０ｍＬ）を加えて、常温で３０ｍｉｎ撹拌し、ろ過して、アセトニトリル５００ｍＬでろ過ケーキを洗浄し、ろ過ケーキを収集して乾燥させ、白色固体生成物１１５．５ｇを得た。固体１１５．５ｇを別のバッチの生成物７６．５ｇと合わせて、ＨＣｌ溶液（１２０ｍＬ、０．７ｍｏｌ／Ｌ）に溶解し、次に、撹拌しながら６ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ水溶液を加え、大量の固体を析出させ、ろ過してろ過ケーキを収集し、ろ過ケーキを水１Ｌに入れて、激しく３０ｍｉｎ撹拌し、ろ過して、ろ過ケーキを水５００ｍＬで洗浄し、７０℃で乾燥させ、式（Ｉ）化合物を得た。1H NMR(400MHz,重水素化クロロホルム)δppm 0.81-0.84(m,2H)0.87-0.92(m,2H)1.87-1.93(m,1H)1.97−1.98(m,2H)2.03-2.06(m,2H)2.29(s,3H)3.07−3.10(m,2H)4.47−4.50(m,2H)6.79(d,J=0.75Hz,1H)7.19(d,J=12.30Hz,1H)7.44(d,J=1.00Hz,1H)7.89(t,J=8.03Hz,1H)8.06(t,J=7.53Hz,2H)8.35(d,J=8.28Hz,1H)9.04(d,J=14.81Hz,1H)。
【００５６】
実施例２：式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物をサンプル瓶に秤量し、アセトン（又はアセトニトリル）４００μＬを加えて懸濁液とした。上記懸濁液を４０℃で連続して３日間振とうさせた後、遠心分離して、残留固体を真空乾燥箱に入れ、３０℃の条件で一晩真空乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａを得た。
【００５７】
実施例３：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂの製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物をサンプル瓶に秤量し、メタノール２１０μＬを加えて懸濁液とした。上記懸濁液を４０℃の条件で連続して３日間振とうさせた後、遠心分離して、残留固体を真空乾燥箱に入れ、３０℃の条件で一晩真空乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂを得た。
【００５８】
実施例４：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃの製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物をサンプル瓶に秤量し、エタノール２００μＬを加えて懸濁液とした。上記懸濁液を４０℃の条件で連続して３日間振とうさせた後、遠心分離して、残留固体を真空乾燥箱に入れ、３０℃の条件で一晩真空乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃを得た。
【００５９】
実施例５：式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄの製造
約５０ｍｇの式（Ｉ）化合物をサンプル瓶に秤量し、エタノール／水混合液（エタノール：水＝３：１）２００μＬを加えて懸濁液とした。上記懸濁液を４０℃の条件で連続して３日間振とうさせた後、遠心分離して、残留固体を真空乾燥箱に入れ、３０℃の条件で一晩真空乾燥させ、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄを得た。
【００６０】
実施例６：式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの固体安定性試験
『原薬及び製剤安定性試験の指導原則』（中国薬局方２０１５版四部通則９００１）に準じて、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａの、高温（６０℃、開放）、高湿（室温／相対湿度９２．５％、開放）及び強い光照射（５０００ｌｘ、密閉）の条件での安定性を調べた。
【００６１】
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａを約１ｇ秤量して、開放した清浄な秤量瓶に敷き均し、それぞれ高温、高湿及び強い光照射の貯蔵容器に入れた。放置して５日目、１０日目にサンプリングして検出し、検出結果を０日目の初期検出結果と比較し、試験結果を下記表５に示す。
【表５】
2021531343.tif 000009
【００６２】
結論：式（Ｉ）化合物の結晶形Ａは、高温、高湿、強い光照射の条件で優れた安定性を有する。
【００６３】
効果実施例１ 式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＭＣＤ誘導マウスＮＡＳＨモデルでのインビボ有効性研究
【００６４】
実験材料
ＳＰＦグレードのＣ５７ＢＬ／６雄マウス、体重２２〜２５ｇ
ＭＣＤ：メチオニン／コリン欠乏飼料
肝プロピレン分析試薬：ヘマトキシリン染色液、エオシン染色液、シリウスレッド染色液
【００６５】
実験方法
動物を施設で１週間適応させた後、正常対照群は正常飼料で飼育し、残りの動物に対しては飼料をＭＣＤ飼料に変更し、飲水を交換せず、４８時間おきに飼料を１回交換し、５週目から、正常対照群及びモデル群を除き、残りの群には試験化合物を投与して治療し、実験は合計８週間持続された。実験終了後、動物の肝臓サンプルを収集して組織病理学的分析を行った。モデル群と正常対照群を比較することにより、モデリングに成功したか否かを判定し、投与群とモデル群を比較することにより、医薬品が有効性を示すか否かを判定した。実験結果を図１３に示す。
【００６６】
実験結論
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ（６ｍｇ／Ｋｇ ＢＩＤ（２回／日）及び６０ｍｇ／Ｋｇ ＢＩＤ）は、肝線維症に対して顕著な改善作用を有する。
【００６７】
効果実施例２ 式（Ｉ）化合物の結晶形ＡのＣＣｌ4誘導マウス肝線維症モデルでのインビボ有効性研究
【００６８】
実験材料
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス、体重２２〜２７ｇ、上海霊暢生物科技有限公司。
【００６９】
実験方法：
マウスを、１週間の検疫・適応期間後に実験エリアに移した。動物を体重に応じてランダムに群分け、マウス５匹を１つのケージに入れて別々に飼育した。ＣＣｌ4を０．５μｌ／ｇのマウス投与量でオリーブオイルに溶解し、ＣＣｌ4：オリーブオイル＝１：４の２０％のＣＣｌ4溶液を調製した。１週間あたり３回経口投与してモデリングし、４週間持続し、一方、正常対照群は同体積のオリーブオイルを経口投与した。試験化合物は、経口胃内投与方式で投与され、動物１匹あたり体積１０ｍｌ／ｋｇで投与された。ＣＣｌ4モデリングの開始初日に投与を開始させ、２８日目まで投与した。実験終了後、動物の肝臓サンプルを収集して組織病理学的分析を行った。モデル群と正常対照群とを比較することにより、モデリングに成功したか否かを判定し、投与群とモデル群とを比較することにより、医薬品が有効性を示すか否かを判定した。実験結果を図１４に示す。
【００７０】
実験結論
式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ（３ｍｇ／Ｋｇ ＢＩＤ、３０ｍｇ／Ｋｇ ＢＩＤ）は、肝線維症に対して優れた改善作用を有する。
【００７１】
以上は本発明の特定実施形態を説明したが、当業者が理解できるように、これらは例示的な説明に過ぎず、本発明の原理及び主旨を逸脱せずに、これらの実施形態について多数の変更や修正を行うことができる。したがって、本発明の特許範囲は添付の特許請求の範囲により制限される。
【図１】
2021531343.tif 000015
【図２】
2021531343.tif 000016
【図３】
2021531343.tif 000017
【図４】
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【図５】
2021531343.tif 000019
【図６】
2021531343.tif 000020
【図７】
2021531343.tif 000021
【図８】
2021531343.tif 000022
【図９】
2021531343.tif 000023
【図１０】
2021531343.tif 000024
【図１１】
2021531343.tif 000025
【図１２】
2021531343.tif 000026
【図１３】
2021531343.tif 000027
【図１４】
2021531343.tif 000028
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月28日(2021.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折ＸＲＰＤパターンにおいて、２θ角が８．４０±０．２°、１３．４６±０．２°、及び１４．１３±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ａ。
【化１】
2021531343.tif 000029
【請求項２】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．４０±０．２°、１０．５６±０．２°、１３．４６±０．２°、１４．１３±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．７９±０．２°、２４．０９±０．２°及び２４．９７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項３】
ＸＲＰＤパターンが図１に示される如きであり、
及び／又はＤＳＣパターンが図２に示される如きであり、
及び／又はＴＧＡパターンが図３に示される如きである、請求項２に記載の結晶形Ａ。
【請求項４】
示差走査熱量測定曲線ＤＳＣにおいて、２１０．７８℃及び２３７．７４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、２１５．７０℃に１つの放熱ピークを有し、
及び／又は熱重量分析曲線ＴＧＡにおいて、１２０℃にて１．７９９％の重量損失に達する、請求項１に記載の結晶形Ａ。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１７．０７±０．２°及び１７．７０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｂ。
【化２】
2021531343.tif 000030
【請求項６】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．８５±０．２°、１０．２０±０．２°、１４．６２±０．２°、１７．０７±０．２°、１７．７０±０．２°、２１．５７±０．２°、２３．３４±０．２°及び２４．３７±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項５に記載の結晶形Ｂ。
【請求項７】
ＸＲＰＤパターンが図４に示される如きであり、
及び／又はＤＳＣパターンが図５に示される如きであり、
及び／又はＴＧＡパターンが図６に示される如きである、請求項６に記載の結晶形Ｂ。
【請求項８】
示差走査熱量測定曲線において、１４９．１７℃、１７０．２５℃及び２３７．８４℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．３４℃に１つの放熱ピークを有し、
及び／又は熱重量分析曲線において、６０℃にて０．３５９３％の重量損失に達し、１２０℃にて１．５７０３％の重量損失に達する、請求項５に記載の結晶形Ｂ。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が９．４７±０．２°、１６．４５±０．２°及び１７．３２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｃ。
【化３】
2021531343.tif 000031
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が８．７２±０．２°、９．４７±０．２°、１０．４４±０．２°、１３．７５±０．２°、１６．４５±０．２°、１７．３２±０．２°、１９．４１±０．２°及び２６．８２±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項９に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１１】
ＸＲＰＤパターンが図７に示される如きであり、
及び／又はＤＳＣパターンが図８に示される如きであり、
及び／又はＴＧＡパターンが図９に示される如きである、請求項１０に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１２】
示差走査熱量測定曲線において、１０５．７６℃、１７１．５４℃及び２３７．４８℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７７．６４℃に１つの放熱ピークを有し、
及び／又は熱重量分析曲線において、７５．８９℃にて１．１１５％の重量損失に達し、１６４．９３℃にて２．９５８％の重量損失に達する、請求項９に記載の結晶形Ｃ。
【請求項１３】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１２．７３±０．２°及び２０．６０±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）化合物の結晶形Ｄ。
【化４】
2021531343.tif 000032
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折パターンにおいて、２θ角が１０．２６±０．２°、１１．８４±０．２°、１２．７３±０．２°、１４．７０±０．２°、１６．３９±０．２°、２０．６０±０．２°、２１．２２±０．２°及び２２．２６±０．２°に特徴的な回折ピークを有する、請求項１３に記載の結晶形Ｄ。
【請求項１５】
ＸＲＰＤパターンが図１０に示される如きであり、
及び／又はＤＳＣパターンが図１１に示される如きであり、
及び／又はＴＧＡパターンが図１２に示される如きである、請求項１４に記載の結晶形Ｄ。
【請求項１６】
示差走査熱量測定曲線において、１０１．９２℃、１７１．０１℃及び２３７．２９℃のそれぞれに１つの吸熱ピークの開始点を有し、１７９．９６℃に１つの放熱ピークを有し、
及び／又は熱重量分析曲線において、７５．６２℃にて０．４８７６％の重量損失に達し、１３２．３６℃にて２．５８３６％の重量損失に達する、請求項１３に記載の結晶形Ｄ。
【請求項１７】
ＡＳＫ１関連疾患を治療する医薬品の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の結晶形Ａ、請求項５〜８のいずれか一項に記載の結晶形Ｂ、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の結晶形Ｃ、又は請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の結晶形Ｄの利用。
【国際調査報告】
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