(57)【要約】  少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドの使用を含む、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患および状態を治療するための単剤療法および併用療法を含む療法が提供される。本開示の実施形態は、それを必要とする対象においてニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態を治療するための方法を含み、本方法は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することを含む。
2021531313.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象においてニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態を治療するための方法であって、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ＮＲＰ２に関連する疾患または状態が、癌および癌に関連する疾患または病態、例えば癌細胞の成長、癌の開始、癌の遊走、癌細胞の接着、癌細胞の浸潤、癌細胞の化学療法抵抗性、および癌細胞の転移など；炎症および自己免疫に関連する疾患であって任意選択的に炎症性肺疾患、例えば過敏性肺炎および肺炎症など、ならびに不適切な免疫細胞の活性化または遊走に関連する疾患であって任意選択的に移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）およびリウマチ性関節炎関連間質性肺疾患（ＲＡ−ＩＬＤ）；リンパ管の発生、リンパ管新生、およびリンパ管の損傷に関連する疾患であって任意選択的に浮腫、リンパ浮腫、二次リンパ浮腫、不適切な脂肪の吸収および沈着、過剰な脂肪の沈着、ならびに血管透過性；感染に関連する疾患、例えば潜伏感染など；アレルギー障害およびアレルギー応答に関連する疾患であって任意選択的に慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、インフラマソーム関連疾患、および皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症；肉芽腫性炎症性疾患に関連する疾患であって任意選択的にサルコイドーシス、肉芽腫性肺疾患、および非肺肉芽腫；線維性疾患、例えば子宮内膜症、線維症、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、および創傷治癒など；不適切な平滑筋の収縮性、血管平滑筋細胞の遊走および接着に関連する疾患；不適切なオートファジー、貪食作用、およびエフェロサイトーシスに関連する疾患；神経細胞疾患であって任意選択的に末梢神経系リモデリングおよび痛覚に関連する疾患；骨発生および／または骨リモデリングに関連する疾患；ならびに不適切な遊走性細胞の移動に関連する疾患のうち、１つまたは複数から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団のレベルに比べて、結合型または遊離型のどちらかの（任意選択的に表Ｎ１から選択される）可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液（循環または血清）中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルが、およそまたは少なくとも約１０、２０、３０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００ｐＭの前記可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドであるか、または約３０〜５０、５０〜１００、１００〜２０００、２００〜２０００、３００〜２０００、４００〜２０００、５００〜２０００、６００〜２０００、７００〜２０００、８００〜２０００、９００〜２０００、１０００〜２０００、２０００〜３０００、３０００〜４０００、４０００〜５０００ｐＭの前記可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、（任意選択的に表Ｎ１および表Ｎ２から選択される）ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液（循環または血清）中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルが、前記対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、（任意選択的に表Ｈ１および表Ｎ１から選択される）ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液（循環または血清）中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルが、前記対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が、前記対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドに一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、ＮＲＰ２ａおよび／もしくはＮＲＰ２ｂのレベルもしくは発現の増加、またはＮＲＰ２ａ：ＮＲＰ２ｂの発現の比率の変化に関連する疾患を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＮＲＰ２ｂのレベルが、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、およそまたは少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団が、その癌と同じタイプの癌性または非癌性の細胞または組織の年齢をマッチさせた試料について平均的な領域を含み、前記試料が、特異的な特徴、例えば薬剤耐性、転移能、侵襲性、遺伝的な特性（任意選択的にｐ５３変異、ＰＴＥＮ欠失、ＩＧＦＲ発現）、および／または発現パターンなどを含む、請求項３〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記それを必要とする対象が、感染を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的に前記方法が、少なくとも１つの抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）前記ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、同じ治療用組成物の一部分として合わせて投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）前記ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、別々の治療用組成物として投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤が、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
以下のうち１つまたは複数から選択される方法であって：
−  それを必要とする対象においてリンパ管の機能を向上または回復させるための方法；
−  それを必要とする対象においてリンパ管新生を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてセマフォリンシグナル伝達に関連する疾患または障害を治療するための方法；
−  それを必要とする対象において血管内皮成長因子Ｃ（ＶＥＧＦ−Ｃ）シグナル伝達を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてインテグリンシグナル伝達を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてＴＧＦ−βシグナル伝達を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてオートファジー、貪食作用、またはエフェロサイトーシスを調節する方法；
−  それを必要とする対象において神経発生を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてリンパ管内皮細胞の遊走または接着を低減するための方法；
−  それを必要とする対象において内皮間葉転換（ＥＭＴ）を調節するための方法；
−  それを必要とする対象において骨発生を調節するための方法；
−  それを必要とする対象において血管透過性を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてＮＲＰ２ポリペプチドとＮＲＰ２リガンドとの間の結合または機能的な相互作用を調節する方法；
−  それを必要とする対象において免疫細胞の活性、遊走、または接着を阻害するための方法；および
−  それを必要とする対象において腫瘍細胞の遊走または接着を低減するための方法、
ここで前記方法は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を、それを必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
前記リンパ管新生が、癌、角膜外傷、ドライアイ疾患、炎症、リンパ浮腫、移植片拒絶、またはそれらの組合せに続発する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記神経発生が、炎症性または自己免疫の状態に伴う末梢神経リモデリングである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＮＲＰ２リガンドが、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦＡ１６５、ＰＩＧＦ−２、セマフォリン３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、および３Ｆ、ヘパリン、インテグリン、およびＴＧＦ−ベータから選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＮＲＰ２リガンドが、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦＡ１６５、およびＰＩＧＦ−２から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＮＲＰ２リガンドが、セマフォリン３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｆ、および３Ｇから選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記免疫細胞は、骨髄由来細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、顆粒球、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｔ細胞が、ＴＲＥＧ細胞、ＴＨ１細胞、またはＴＨ２細胞である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記マクロファージが、Ｍ１またはＭ２マクロファージである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
リンパ系内で前記腫瘍細胞の遊走を低減することを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象が、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態を有し、任意選択的に前記対象が、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／または前記対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドもしくはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチド中の一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患が癌であり、任意選択的に前記癌が、ＮＲＰ２を発現するかまたは過剰発現し、任意選択的に前記癌が、ＮＲＰ２依存的な成長、ＮＲＰ２依存的な接着、ＮＲＰ２依存的な遊走、ＮＲＰ２依存的な化学療法抵抗性、および／またはＮＲＰ２依存的な浸潤を呈する、請求項２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記癌が原発性癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が転移性癌であり、任意選択的に、ＮＲＰ２ａおよび／またはＮＲＰ２ｂを発現する転移性癌である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌が、免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの癌治療に対して化学療法抵抗性であり、任意選択的に、前記方法が、前記ＨＲＳポリペプチドを投与する前に、化学療法抵抗性である癌を有する対象を選択することを含む、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＨＲＳポリペプチドが、癌細胞または癌関連マクロファージにおいてオートファジー、エフェロサイトーシス、または貪食細胞の成熟を調節し、任意選択的に、前記ＨＲＳポリペプチドが、前記癌細胞においてオートファジーを調節する、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、膵癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞腫（肝細胞癌）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頚癌、精巣癌、甲状腺癌、および胃癌のうち１つまたは複数から選択される、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記転移性癌が、
（ａ）骨、肝臓、および／または肺に転移している膀胱癌；
（ｂ）骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している乳癌；
（ｃ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している結腸直腸癌；
（ｄ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している腎臓癌；
（ｅ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または他の肺の部位に転移している肺癌；
（ｆ）骨、脳、肝臓、肺、および／または皮膚／筋肉に転移しているメラノーマ；
（ｇ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している卵巣癌；
（ｈ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している膵癌；
（ｉ）副腎、骨、肝臓、および／または肺に転移している前立腺癌；
（ｊ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している胃癌；
（ｌ）骨、肝臓、および／または肺に転移している甲状腺癌；ならびに
（ｍ）骨、肝臓、肺、腹膜、および／または膣に転移している子宮癌、のうち１つまたは複数から選択される、請求項２９または３０に記載の方法
【請求項３２】
癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤のうち１つまたは複数から選択される少なくとも１つの追加的な剤を前記対象に投与することを含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと前記少なくとも１つの剤とが、別々の組成物として別々に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと前記少なくとも１つの剤とが、同じ治療用組成物の一部分として共に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記癌免疫療法剤が、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベース免疫療法のうち１つまたは複数から選択される、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記免疫チェックポイント調節剤がポリペプチドであり、任意選択的に抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含み、
任意選択的に、前記免疫チェックポイント調節剤が前記免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記阻害性免疫チェックポイント分子が、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞毒性Ｔ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうち、１つまたは複数から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、前記癌が、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうち１つまたは複数から選択され；
前記アンタゴニストはＰＤ−１アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４ＰＤＲ００１、およびピディリズマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、前記ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、前記癌はホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、前記癌は、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、および尿路上皮癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記アンタゴニストはＣＴＬＡ−４アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ、トレメリブマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、前記癌はメラノーマ、前立腺癌、肺癌、および膀胱癌のうち１つまたは複数から選択され；
前記アンタゴニストはＩＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、前記癌は転移性の乳癌および脳癌、任意選択的に多形神経膠芽腫、神経膠腫、膠肉腫または悪性脳腫瘍のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記アンタゴニストはＴＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストはＴＩＭ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストはＬＡＧ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストはＶＩＳＴＡアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストはＴＩＧＩＴアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記刺激性免疫チェックポイント分子が、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）のうち１つまたは複数から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記アゴニストがＯＸ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０、８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ７／４、ＡＤＣ−１０１３、およびｒｈＣＤ４０Ｌのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり、前記癌がメラノーマ、膵癌、中皮腫、および血液癌、任意選択的に非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記アゴニストがＧＩＴＲアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ１３７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）、および４−１ＢＢリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２８アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；ならびに／または
前記アゴニストはＨＶＥＭアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記癌ワクチンが、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択的にガーダシルもしくはサーバリックス、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択的にエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、もしくはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）のうち１つまたは複数から選択されるか、またはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原を含み、任意選択的に、前記対象が、対応の癌抗原を含む癌に罹っているかまたは罹るリスクがある、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうち１つまたは複数から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
前記サイトカインが、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうち１つまたは複数から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
前記細胞ベースの免疫療法剤が、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的にｅｘ  ｖｉｖｏ由来のＴ細胞を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌抗原特異的Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうち１つまたは複数から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１つの化学療法剤が、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、および微小管阻害剤のうち１つまたは複数から選択される、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記アルキル化剤が、ナイトロジェンマスタード（任意選択的にメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（任意選択的にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（任意選択的にダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（任意選択的にチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（任意選択的にカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（任意選択的にプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）のうち１つもしくは複数から選択され；
前記代謝拮抗剤が、葉酸代謝拮抗剤（任意選択的にメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（任意選択的に５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（任意選択的にアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（任意選択的にチオグアニンおよびメルカプトプリン）のうち１つもしくは複数から選択され；
前記細胞傷害性抗生物質が、アントラサイクリン（任意選択的にドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンのうち１つまたは複数から選択され；
前記トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンのうち１つもしくは複数から選択され；ならびに／または
前記微小管阻害剤は、タキサン（任意選択的にパクリタキセルおよびドセタキセル）、ならびにビンカアルカロイド（任意選択的にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）のうち１つもしくは複数から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記少なくとも１つのホルモン治療剤が、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストである、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ホルモンアゴニストが、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（任意選択的にプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生およびリンパ管新生因子（任意選択的にＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチン類似体のうち１つまたは複数から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ホルモンアンタゴニストが、ホルモン合成阻害剤であって任意選択的にアロマターゼ阻害剤もしくは性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）もしくはそれらの類似体、ホルモン受容体アンタゴニストであって任意選択的に選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）もしくは抗アンドロゲン、またはホルモン受容体に対する抗体であって任意選択的にシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレゾリムマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）、セツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ、アプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）、べマリツズマブ、オララツマブ、もしくはトベツマブのうち１つまたは複数から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記キナーゼ阻害剤が、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つもしくは複数から選択されるか、または前記キナーゼ阻害剤が、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７のうち１つまたは複数から選択されるＰＩ３キナーゼ阻害剤である、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
それを必要とする対象において炎症性肺疾患を治療するための方法であって、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を前記対象に投与することを含み、任意選択的に前記炎症性肺疾患が、任意選択的にＲＡ−ＩＬＤ、慢性過敏性肺炎、肺炎症、肉芽腫性肺疾患、およびサルコイドーシスから選択されるニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態であり、任意選択的に前記対象が、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／もしくは前記対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドに一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、ならびに／または有することに基づいて治療が選択される、方法。
【請求項５４】
それを必要とする対象においてリンパ浮腫を治療するための方法であって、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項５５】
前記対象は、ステージ１、ステージ２、ステージ３、ステージ４、ステージ５、ステージ６、およびステージ７から選択されるステージのリンパ浮腫を有し、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象は、グレード１（軽度浮腫）、グレード２（中程度浮腫）、グレード３ａ（重度浮腫）、グレード３ｂ（広範性浮腫）、およびグレード４（巨大浮腫）から選択されるリンパ浮腫のグレードを有し、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項５４または５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象は、リンパ浮腫関連線維症を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象は、癌（任意で乳癌）、外科手術（任意で癌手術、任意で乳癌手術）、放射線治療、肥満、うっ血性心不全、高血圧、末梢血管／静脈疾患、またはこれらの任意の組み合わせに続発するリンパ浮腫を有し、および／または有することに基づいて治療が選択される、請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記対象のリンパ浮腫の少なくとも１つの症状における減少を測定することを含む、請求項５４〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記リンパ浮腫の少なくとも１つの症状は、腫脹、皮膚の厚み、皮膚の硬化、膨満感、痛み、不快感、可動域の制限、およびこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記リンパ浮腫が、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態であり、任意選択的に前記対象が、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／または前記対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドもしくはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチド中の一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療のために選択される、請求項５４〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
それを必要とする前記対象は、サルコイドーシス、またはリンパ浮腫関連感染症、任意選択的に丹毒、蜂窩織炎、リンパ管炎、および／または敗血症を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的に、前記方法は、少なくとも１つの抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項５４〜６１に記載の方法。
【請求項６３】
（ａ）前記ＨＲＳポリペプチドと、（ｂ）前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤が、同じ治療用組成物の一部分として合わせて投与される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
（ａ）前記ＨＲＳポリペプチドと、（ｂ）前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤が、別々の治療用組成物として投与される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤が、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される、請求項６２〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５６（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＨＲＳＦＣ１）に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸の長さであり、配列番号７（ＨＲＳ（１−５０６））または配列番号８（ＨＲＳ（２−５０６））に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号１の残基５０７〜残基５０９を欠く、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに融合される、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含んでＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意で前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記異種ポリペプチドは、軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、任意で前記ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド；および
（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、抗蠕虫剤、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤、任意でＰＩ３キナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの追加の剤、を含む、治療用組成物。
【請求項７３】
前記ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５６（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＨＲＳＦＣ１）に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項７２に記載の治療用組成物。
【請求項７４】
前記ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項７２に記載の治療用組成物。
【請求項７５】
前記ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸の長さであり、配列番号７（ＨＲＳ（１−５０６））または配列番号８（ＨＲＳ（２−５０６））に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号１の残基５０７〜残基５０９を欠く、請求項７４に記載の治療用組成物。
【請求項７６】
前記ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに融合される、請求項７２〜７５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項７７】
前記異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含んでＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、任意で前記ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項７６に記載の治療用組成物。
【請求項７８】
前記異種ポリペプチドは、軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、任意で前記ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、請求項７６に記載の治療用組成物。
【請求項７９】
前記抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤が、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項８０】
前記癌免疫療法剤が、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベース免疫療法のうち１つまたは複数から選択される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項８１】
前記免疫チェックポイント調節剤がポリペプチドであり、任意選択的に抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である、請求項８０に記載の治療用組成物。
【請求項８２】
前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト、を含み、
任意選択的に、前記免疫チェックポイント調節剤が前記免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項８０または８１に記載の治療用組成物。
【請求項８３】
前記阻害性免疫チェックポイント分子が、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞毒性Ｔ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうち、１つまたは複数から選択される、請求項８２に記載の治療用組成物。
【請求項８４】
前記アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＰＤ−１アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４、ＰＤＲ００１、およびピディリズマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＣＴＬＡ−４アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ、およびトレメリブマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＩＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＴＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＴＩＭ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＬＡＧ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＶＩＳＴＡアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストが、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；ならびに／または
前記アンタゴニストがＴＩＧＩＴアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストである、請求項８３に記載の治療用組成物。
【請求項８５】
前記刺激性免疫チェックポイント分子が、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）のうち１つまたは複数から選択される、請求項８２に記載の治療用組成物。
【請求項８６】
前記アゴニストがＯＸ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０、８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ７／４、ＡＤＣ−１０１３、ｒｈＣＤ４０Ｌのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＧＩＴＲアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ１３７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）、および４−１ＢＢリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２８アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；ならびに／または
前記アゴニストがＨＶＥＭアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストである、請求項８５に記載の治療用組成物。
【請求項８７】
前記癌ワクチンが、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択的にガーダシルもしくはサーバリックス、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択的にエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、もしくはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）のうち１つまたは複数から選択されるか、またはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原を含む、請求項８０に記載の治療用組成物。
【請求項８８】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうち１つまたは複数から選択される、請求項８０に記載の治療用組成物。
【請求項８９】
前記サイトカインが、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうち１つまたは複数から選択される、請求項８０に記載の治療用組成物。
【請求項９０】
前記細胞ベースの免疫療法剤が、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的にｅｘ  ｖｉｖｏ由来のＴ細胞を含む、請求項８０に記載の治療用組成物。
【請求項９１】
前記癌抗原特異的Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうち１つまたは複数から選択される、請求項９０に記載の治療用組成物。
【請求項９２】
前記少なくとも１つの化学療法剤が、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、および微小管阻害剤のうち１つまたは複数から選択される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項９３】
前記アルキル化剤が、ナイトロジェンマスタード（任意選択的にメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（任意選択的にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（任意選択的にダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（任意選択的にチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（任意選択的にカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（任意選択的にプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）のうち１つもしくは複数から選択され；
前記代謝拮抗剤が、葉酸代謝拮抗剤（任意選択的にメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（任意選択的に５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（任意選択的にアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（任意選択的にチオグアニンおよびメルカプトプリン）のうち１つもしくは複数から選択され；
前記細胞傷害性抗生物質が、アントラサイクリン（任意選択的にドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンのうち１つまたは複数から選択され；
前記トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンのうち１つもしくは複数から選択され；ならびに／または
前記微小管阻害剤が、タキサン（任意選択的にパクリタキセルおよびドセタキセル）、ならびにビンカアルカロイド（任意選択的にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）のうち１つもしくは複数から選択される、請求項９２に記載の治療用組成物。
【請求項９４】
前記少なくとも１つのホルモン治療剤が、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストである、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項９５】
前記ホルモンアゴニストが、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（任意選択的にプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生およびリンパ管新生因子（任意選択的にＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチン類似体のうち１つまたは複数から選択される、請求項９４に記載の治療用組成物。
【請求項９６】
前記ホルモンアンタゴニストが、ホルモン合成阻害剤であって任意選択的にアロマターゼ阻害剤もしくは性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）もしくはそれらの類似体、ホルモン受容体アンタゴニストであって任意選択的に選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）もしくは抗アンドロゲン、またはホルモン受容体に対する抗体であって任意選択的にシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレゾリムマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）、セツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ、アプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）、べマリツズマブ、オララツマブ、もしくはトベツマブのうち１つまたは複数から選択される、請求項９４に記載の治療用組成物。
【請求項９７】
前記キナーゼ阻害剤が、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つもしくは複数から選択されるか、または前記キナーゼ阻害剤が、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７のうち１つまたは複数から選択されるＰＩ３キナーゼ阻害剤である、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項９８】
前記治療用組成物は、前記ＨＲＳポリペプチドに関し、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の純度を有し、実質的に凝集体を含まない、請求項７２〜９７のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項９９】
前記治療用組成物が、実質的にエンドトキシンを含まない、請求項７２〜９８のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１００】
前記治療用組成物は、滅菌された注射溶液であり、任意で静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または腹腔内投与に適している、請求項７２〜９９のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１０１】
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド；および
（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、抗蠕虫剤、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤、任意でＰＩ３キナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの追加の剤、を含む、患者ケアキット。
【請求項１０２】
（ａ）および（ｂ）が、別個の治療用組成物中にある、請求項１０１に記載の患者ケアキット。
【請求項１０３】
（ａ）および（ｂ）が、同じ治療用組成物中にある、請求項１０１に記載の患者ケアキット。
【請求項１０４】
軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドに融合されたヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、任意で前記ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列からなり、または本質的に前記アミノ酸配列からなる、単離された融合タンパク質。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載のＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合タンパク質を含む、治療用組成物。
【請求項１０６】
前記治療用組成物は、前記ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドに関し、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の純度を有し、および実質的に凝集体を含まない、請求項１０５に記載の治療用組成物。
【請求項１０７】
前記治療用組成物が、実質的にエンドトキシンを含まない、請求項１０５または１０６に記載の治療用組成物。
【請求項１０８】
前記治療用組成物は、滅菌された注射溶液であり、任意で静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または腹腔内投与に適している、請求項１０５〜１０７のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、参照によりそれぞれがその全体を組み込まれる２０１８年７月２６日出願の米国仮特許出願第６２／７０３，７５７号、２０１８年１２月６日出願の米国仮特許出願第６２／７７６，２０８号、２０１９年２月１日出願の米国仮特許出願第６２／８００，０３５号、および２０１９年５月１７日出願の米国仮特許出願第６２／８４９，４４０号への優先権を米国特許法第１１９条（ｅ）の下で請求するものである。
【０００２】
本願に関連する配列表は、紙の写しに代えてテキストフォーマットにて提供され、ここで参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＡＴＹＲ＿１３５＿０４ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。このテキストファイルは約３９２ＫＢであり、２０１９年７月２６日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【０００３】
本開示の実施形態は、少なくとも１つのヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドの使用を含む、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患および状態を治療するための単独型療法および併用療法を含む療法に関する。
【背景技術】
【０００４】
近年の研究の発展により、ｔＲＮＡシンテターゼがタンパク質合成におけるよく特徴の明らかにされたその役割を越えて細胞応答に重要な役割を果たすことが示唆されている。具体的には、ｔＲＮＡシンテターゼが、細胞内環境と細胞外環境との両方の中での細胞ストレスへの応答および組織のホメオスタシスにおいて、以前は認識されていなかった様々な役割に加わり得るという認識が増しつつある。
【０００５】
レソカイン（Ｒｅｓｏｋｉｎｅ）タンパク質ファミリー（ＨＲＳポリペプチド）は、ヒスチジルｔＲＮＡシンテターゼ遺伝子（ＨＡＲＳ）からタンパク質分解または選択的スプライシングを介して得られ、細胞活性の重要な細胞外モジュレーターである。細胞外のＨＡＲＳは、健常人ボランティア内の循環中に容易に検出することができ、ＨＡＲＳに対する自己抗体（Ｊｏ−１抗体）は、一部の炎症性ミオパチー（ＩＭ）で、および炎症性肺疾患（ＩＬＤ）に罹った対象で、特徴が明らかにされている。疾患の進行におけるＪｏ−１抗体の役割が依然としてよく理解されていない一方で、Ｊｏ−１抗体を有する対象は、Ｊｏ−１抗体を持たない炎症性ミオパチーの対象に比べて、癌へ罹りにくい傾向がある（例えば、Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  ９（４）ｅ９４１２８，２０１４；Ｍｏｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３４（５）５６１−５６５，２００９；およびＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍ  ４４（７）ｄｏｉ  １０．３８９９／ｊｒｈｅｕｍ．１６１４８０を参照）。
【０００６】
最近、細胞外のＨＡＲＳ由来タンパク質の役割の解明に重要な進展が生じており、ここには、推定される細胞受容体であるニューロピリン−２（ＮＲＰ２またはＮＲＰ−２）の同定が含まれている。ＨＡＲＳとＮＲＰ２との相互作用は、ＨＡＲＳのＮ末端領域によって媒介され、ＮＲＰ２の細胞機能の重要な変化に繋がり得ることが明らかになっている。
したがって、現在のレソカイン／ニューロピリン−２軸の発見は、筋肉、血管、神経、骨、および免疫のホメオスタシスに直接的に関連性のある細胞過程の中心的なレギュレーターとして作用する、以前は未知であった機構を表す。これらの過程のいずれかの調節解除は様々な疾患に繋がることがあり、新しいＨＲＳポリペプチドベースの治療法が対処可能である可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  ９（４）ｅ９４１２８，２０１４
【非特許文献２】Ｍｏｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３４（５）５６１−５６５，２００９
【非特許文献３】Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍ  ４４（７）ｄｏｉ  １０．３８９９／ｊｒｈｅｕｍ．１６１４８０
【発明の概要】
【０００８】
本開示の実施形態は、それを必要とする対象においてニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態を治療するための方法を含み、本方法は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することを含む。
【０００９】
一部の実施形態では、ＮＲＰ２に関連する疾患または状態は、癌および癌に関連する疾患または病態、例えば癌細胞の成長、癌の開始、癌の遊走、癌細胞の接着、癌細胞の浸潤、癌細胞の化学療法抵抗性、および癌細胞の転移など；炎症および自己免疫に関連する疾患であって任意選択的に炎症性肺疾患、例えば過敏性肺炎および肺炎症など、ならびに不適切な免疫細胞の活性化または遊走に関連する疾患であって任意選択的に移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）およびリウマチ性関節炎関連間質性肺疾患（ＲＡ−ＩＬＤ）；リンパ管の発生、リンパ管新生、およびリンパ管の損傷に関連する疾患であって任意選択的に浮腫、リンパ浮腫、二次リンパ浮腫、不適切な脂肪の吸収および沈着、過剰な脂肪の沈着、ならびに血管透過性；感染に関連する疾患、例えば潜伏感染など；アレルギー障害およびアレルギー応答に関連する疾患であって任意選択的に慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、インフラマソーム関連疾患、および皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症；肉芽腫性炎症性疾患に関連する疾患であって任意選択的にサルコイドーシス、肉芽腫性肺疾患、および非肺肉芽腫；線維性疾患、例えば子宮内膜症、線維症、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、および創傷治癒など；不適切な平滑筋の収縮性、血管平滑筋細胞の遊走および接着に関連する疾患；不適切なオートファジー、貪食作用、およびエフェロサイトーシスに関連する疾患；神経細胞疾患であって任意選択的に末梢神経系リモデリングおよび痛覚に関連する疾患；骨発生および／または骨リモデリングに関連する疾患；ならびに不適切な遊走性細胞の移動に関連する疾患のうち、１つまたは複数から選択される。
【００１０】
一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団のレベルに比べて、結合型または遊離型のどちらかの（任意選択的に表Ｎ１から選択される）可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルは、およそまたは少なくとも約１０、２０、３０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドであるか、または約３０〜５０、５０〜１００、１００〜２０００、２００〜２０００、３００〜２０００、４００〜２０００、５００〜２０００、６００〜２０００、７００〜２０００、８００〜２０００、９００〜２０００、１０００〜２０００、２０００〜３０００、３０００〜４０００、４０００〜５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドである。
【００１１】
一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、（任意選択的に表Ｎ１および表Ｎ２から選択される）ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルは、対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える。
【００１２】
一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、（任意選択的に表Ｈ１および表Ｎ１から選択される）ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的にレベルは、対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える。
【００１３】
一部の実施形態では、対象は、対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドに一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【００１４】
一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、ＮＲＰ２ａおよび／もしくはＮＲＰ２ｂのレベルもしくは発現の増加、またはＮＲＰ２ａ：ＮＲＰ２ｂの発現の比率の変化に関連する疾患を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ｂのレベルは、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、およそまたは少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％増加する。
【００１５】
一部の実施形態では、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団は、その癌と同じタイプの癌性または非癌性の細胞または組織の年齢をマッチさせた試料について平均的な領域を含み、それらの試料は、特異的な特徴、例えば薬剤耐性、転移能、侵襲性、遺伝的な特性（任意選択的にｐ５３変異、ＰＴＥＮ欠失、ＩＧＦＲ発現）、および／または発現パターンなどを含む。
【００１６】
一部の実施形態では、それを必要とする対象は、感染を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的に本方法は、少なくとも１つの抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤を対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、（ａ）ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、同じ治療用組成物の一部分として合わせて投与される。一部の実施形態では、（ａ）ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、別々の治療用組成物として投与される。一部の実施形態では、抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤は、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される。
【００１７】
また含まれるのは、以下のうち１つまたは複数から選択される方法であって：
−  それを必要とする対象においてリンパ管の機能を向上または回復させるための方法；
−  それを必要とする対象においてリンパ管新生を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてセマフォリンシグナル伝達に関連する疾患または障害を治療するための方法；
−  それを必要とする対象において血管内皮成長因子Ｃ（ＶＥＧＦ−Ｃ）シグナル伝達を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてインテグリンシグナル伝達を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてＴＧＦ−βシグナル伝達を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてオートファジー、貪食作用、またはエフェロサイトーシスを調節する方法；
−  それを必要とする対象において神経発生を調節する方法；
−  それを必要とする対象においてリンパ管内皮細胞の遊走または接着を低減するための方法；
−  それを必要とする対象において内皮間葉転換（ＥＭＴ）を調節するための方法；
−  それを必要とする対象において骨発生を調節するための方法；
−  それを必要とする対象において血管透過性を調節するための方法；
−  それを必要とする対象においてＮＲＰ２ポリペプチドとＮＲＰ２リガンドとの間の結合または機能的な相互作用を調節する方法；
−  それを必要とする対象において免疫細胞の活性、遊走、または接着を阻害するための方法；および
−  それを必要とする対象において腫瘍細胞の遊走または接着を低減するための方法、
上記方法は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【００１８】
一部の実施形態では、リンパ管新生は、癌、角膜外傷、ドライアイ疾患、炎症、リンパ浮腫、移植片拒絶、またはそれらの組合せに続発する。一部の実施形態では、神経発生は、炎症性または自己免疫の状態に伴う末梢神経リモデリングである。一部の実施形態では、ＮＲＰ２リガンドは、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦＡ１６５、ＰＩＧＦ−２、セマフォリン３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、および３Ｆ、ヘパリン、インテグリン、およびＴＧＦ−ベータから選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２リガンドは、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦＡ１６５、およびＰＩＧＦ−２から選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２リガンドは、セマフォリン３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｆ、および３Ｇから選択される。一部の実施形態では、免疫細胞は、骨髄由来細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、顆粒球、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＴＲＥＧ細胞、ＴＨ１細胞、またはＴＨ２細胞である。一部の実施形態では、マクロファージは、Ｍ１またはＭ２マクロファージである。一部の実施形態では、本方法は、リンパ系内で腫瘍細胞の遊走を低減することを含む。
【００１９】
一部の実施形態では、対象は、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態を有し、任意選択的に対象は、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／または対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドもしくはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチド中の一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【００２０】
一部の実施形態では、疾患は癌であり、例えば、癌はＮＲＰ２を発現するかまたは過剰発現する。一部の場合では、癌は、ＮＲＰ２依存的な成長、ＮＲＰ２依存的な接着、ＮＲＰ２依存的な遊走、ＮＲＰ２依存的な化学療法抵抗性、および／またはＮＲＰ２依存的な浸潤を呈する。一部の実施形態では、癌は原発性癌である。一部の実施形態では、癌は転移性癌であり、任意選択的に、ＮＲＰ２ａおよび／またはＮＲＰ２ｂを発現する転移性癌である。
【００２１】
一部の実施形態では、癌は、少なくとも１つの癌治療に対して、例えば癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、および／またはキナーゼ阻害剤に対して、化学療法抵抗性である。一部の場合では、本方法は、ＨＲＳポリペプチドを投与する前に、少なくとも１つの癌療法に対して化学療法抵抗性である癌を有する対象を選択することを含む。
【００２２】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌細胞または癌関連マクロファージにおいてオートファジー、エフェロサイトーシス、または貪食細胞の成熟を調節する。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌細胞においてオートファジーを調節する。
【００２３】
一部の実施形態では、癌は、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、膵癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞腫（肝細胞癌）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頚癌、精巣癌、甲状腺癌、および胃癌のうち１つまたは複数から選択される。
【００２４】
一部の実施形態では、転移性の癌は、以下のうち１つまたは複数から選択される：
（ａ）骨、肝臓、および／または肺に転移している膀胱癌；
（ｂ）骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している乳癌；
（ｃ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している結腸直腸癌；
（ｄ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している腎臓癌；
（ｅ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または他の肺の部位に転移している肺癌；
（ｆ）骨、脳、肝臓、肺、および／または皮膚／筋肉に転移しているメラノーマ；
（ｇ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している卵巣癌；
（ｈ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している膵癌；
（ｉ）副腎、骨、肝臓、および／または肺に転移している前立腺癌；
（ｊ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している胃癌；
（ｌ）骨、肝臓、および／または肺に転移している甲状腺癌；ならびに
（ｍ）骨、肝臓、肺、腹膜、および／または膣に転移している子宮癌。
【００２５】
一部の実施形態は、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤のうち１つまたは複数から選択される少なくとも１つの追加的な剤を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと少なくとも１つの剤とが、別々の組成物として別々に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと少なくとも１つの剤とが、同じ治療用組成物の一部分として共に投与される。
【００２６】
一部の実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベース免疫療法のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤はポリペプチドであり、任意選択的に抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は以下を含む：
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストであって、例えば、この免疫チェックポイント調節剤が免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、アゴニスト。
【００２７】
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞毒性Ｔ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうち、１つまたは複数から選択される。
【００２８】
一部の実施形態では、上記アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、癌は、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうち１つまたは複数から選択され；
上記アンタゴニストはＰＤ−１アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４  ＰＤＲ００１、およびピディリズマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、癌はホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、癌はメラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、および尿路上皮癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記アンタゴニストはＣＴＬＡ−４アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ、トレメリブマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、癌はメラノーマ、前立腺癌、肺癌、および膀胱癌のうち１つまたは複数から選択され；
上記アンタゴニストはＩＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、癌は転移性の乳癌および脳癌、任意選択的に多形神経膠芽腫、神経膠腫、膠肉腫または悪性脳腫瘍のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記アンタゴニストはＴＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＴＩＭ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＬＡＧ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＶＩＳＴＡアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストである。
【００２９】
一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）のうち１つまたは複数から選択される。
【００３０】
一部の実施形態では、上記アゴニストはＯＸ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０、８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ７／４、ＡＤＣ−１０１３、およびｒｈＣＤ４０Ｌのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり、癌はメラノーマ、膵癌、中皮腫、および血液癌、任意選択的に非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記アゴニストはＧＩＴＲアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ１３７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）、および４−１ＢＢリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ２７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ２８アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；ならびに／または
上記アゴニストはＨＶＥＭアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド〜のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストである。
【００３１】
一部の実施形態では、癌ワクチンは、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択的にガーダシルもしくはサーバリックス、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択的にエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、もしくはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）のうち１つまたは複数から選択されるか、またはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原を含み、任意選択的に、対象は、対応の癌抗原を含む癌に罹っているかまたは罹るリスクがある。
【００３２】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうち１つまたは複数から選択される。
【００３３】
一部の実施形態では、サイトカインは、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうち１つまたは複数から選択される。
【００３４】
一部の実施形態では、細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的にｅｘ  ｖｉｖｏ由来のＴ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうち１つまたは複数から選択される。
【００３５】
一部の実施形態では、少なくとも１つの化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、および微小管阻害剤のうち１つまたは複数から選択される。
【００３６】
一部の実施形態では、上記アルキル化剤は、ナイトロジェンマスタード（任意選択的にメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（任意選択的にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（任意選択的にダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（任意選択的にチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（任意選択的にカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（任意選択的にプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記代謝拮抗剤は、葉酸代謝拮抗剤（任意選択的にメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（任意選択的に５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（任意選択的にアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（任意選択的にチオグアニンおよびメルカプトプリン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記細胞傷害性抗生物質は、アントラサイクリン（任意選択的にドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンのうち１つまたは複数から選択され；
前記トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンのうち１つもしくは複数から選択され；ならびに／または
前記微小管阻害剤が、タキサン（任意選択的にパクリタキセルおよびドセタキセル）、ならびにビンカアルカロイド（任意選択的にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）のうち１つもしくは複数から選択される。
【００３７】
一部の実施形態では、上記少なくとも１つのホルモン治療剤は、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストである。一部の実施形態では、上記ホルモンアゴニストは、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（任意選択的にプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生およびリンパ管新生因子（任意選択的にＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチン類似体のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、上記ホルモンアンタゴニストは、ホルモン合成阻害剤であって任意選択的にアロマターゼ阻害剤もしくは性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）もしくはそれらの類似体、ホルモン受容体アンタゴニストであって任意選択的に選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）もしくは抗アンドロゲン、またはホルモン受容体に対する抗体であって任意選択的にシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレゾリムマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）、セツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ、アプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）、べマリツズマブ、オララツマブ、もしくはトベツマブのうち１つまたは複数から選択される。
【００３８】
一部の実施形態では、上記キナーゼ阻害剤は、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７のうち１つまたは複数から選択されるＰＩ３キナーゼ阻害剤である。
【００３９】
また含まれるのは、それを必要とする対象において炎症性肺疾患を治療するための方法であって、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することを含む方法である。一部の実施形態では、炎症性肺疾患は、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）に関連する疾患または状態、例えば，ＲＡ−ＩＬＤ、慢性過敏性肺炎、肺炎症、肉芽腫性肺疾患、またはサルコイドーシスである。一部の実施形態では、対象は、本明細書に記載されるような可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／または対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドの一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【００４０】
一部の実施形態は、それを必要とする対象において、リンパ浮腫を治療するための方法を含み、当該方法は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、対象は、ステージ１、ステージ２、ステージ３、ステージ４、ステージ５、ステージ６、およびステージ７から選択されるステージのリンパ浮腫を有し、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、対象は、グレード１（軽度浮腫）、グレード２（中程度浮腫）、グレード３ａ（重度浮腫）、グレード３ｂ（広範性浮腫）、およびグレード４（巨大浮腫）から選択されるリンパ浮腫のグレードを有し、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、対象は、リンパ浮腫関連線維症を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、対象は、癌（任意で乳癌）、外科手術（任意で癌手術、任意で乳癌手術）、放射線治療、肥満、うっ血性心不全、高血圧、末梢血管／静脈疾患、またはこれらの任意の組み合わせに続発するリンパ浮腫を有し、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【００４１】
一部の実施形態は、対象のリンパ浮腫の少なくとも１つの症状の低減を測定することを含む。一部の実施形態では、リンパ浮腫の少なくとも１つの症状は、腫脹、皮膚の厚み、皮膚の硬化、膨満感、痛み、不快感、可動域の制限、およびこれらの任意の組み合わせから選択される。
【００４２】
一部の実施形態では、リンパ浮腫は、ニューロピリン−２（ＮＲＰ２）が関連した疾患または状態である。一部の実施形態では、対象は、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルの増加、ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加、および／または対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドの一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【００４３】
一部の実施形態では、それを必要とする対象は、リンパ浮腫関連感染、任意選択的に丹毒、蜂窩織炎、リンパ管炎、および／または敗血症を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、任意選択的に、この方法は、少なくとも１つの抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤を対象に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、（ａ）ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、同じ治療用組成物の一部分として合わせて投与される。一部の実施形態では、（ａ）ＨＲＳポリペプチドと（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤とが、別々の治療用組成物として投与される。一部の実施形態では、抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤は、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される。
【００４４】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５６（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＨＲＳＦＣ１）に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸の長さであり、配列番号７（ＨＲＳ（１−５０６））または配列番号８（ＨＲＳ（２−５０６））に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号１の残基５０７〜残基５０９を欠く。
【００４５】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに融合される。一部の実施形態では、異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含んでＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、この場合において任意で当該ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、異種ポリペプチドは、軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ：ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、この場合において任意で当該ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。
【００４６】
さらに、以下を含む治療用組成物も含まれる：
（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド；および
（ｂ）抗菌剤、抗真菌剤、抗蠕虫剤、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの追加の剤。
【００４７】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、配列番号１５６（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＨＲＳＦＣ１）に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１、表Ｈ２、および表Ｈ４から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、５００〜５０６アミノ酸の長さであり、配列番号７（ＨＲＳ（１−５０６））または配列番号８（ＨＲＳ（２−５０６））に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり、配列番号１の残基５０７〜残基５０９を欠く。
【００４８】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、異種ポリペプチドに融合される。一部の実施形態では、異種ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含んでＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドを形成し、この場合において任意で当該ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、表Ｈ８から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、異種ポリペプチドは、軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ：ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、この場合において任意で当該ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。
【００４９】
一部の実施形態では、抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤は、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される。
【００５０】
一部の実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベース免疫療法のうち１つまたは複数から選択される。
【００５１】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤はポリペプチドであり、任意選択的に抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は以下を含む：
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストであって、例えば、この免疫チェックポイント調節剤が免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、アゴニスト。
【００５２】
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞毒性Ｔ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうち、１つまたは複数から選択される。
【００５３】
一部の実施形態では、上記アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＰＤ−１アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４、ＰＤＲ００１、およびピディリズマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＣＴＬＡ−４アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ、およびトレメリブマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＩＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＴＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＴＩＭ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＬＡＧ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストはＶＩＳＴＡアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；ならびに／または
上記アンタゴニストは、ＴＩＧＩＴアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストである。
【００５４】
一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）のうち１つまたは複数から選択される。
【００５５】
一部の実施形態では、上記アゴニストはＯＸ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０、８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ７／４、ＡＤＣ−１０１３、ｒｈＣＤ４０Ｌのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＧＩＴＲアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ１３７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）、および４−１ＢＢリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ２７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
上記アゴニストはＣＤ２８アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；ならびに／または
上記アゴニストはＨＶＥＭアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド〜のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストである。
【００５６】
一部の実施形態では、癌ワクチンは、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択的にガーダシルもしくはサーバリックス、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択的にエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、もしくはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）のうち１つまたは複数から選択されるか、またはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原を含む。
【００５７】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうち１つまたは複数から選択される。
【００５８】
一部の実施形態では、サイトカインは、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうち１つまたは複数から選択される。
【００５９】
一部の実施形態では、細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的にｅｘ  ｖｉｖｏ由来のＴ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうち１つまたは複数から選択される。
【００６０】
一部の実施形態では、少なくとも１つの化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、および微小管阻害剤のうち１つまたは複数から選択される。
【００６１】
一部の実施形態では、上記アルキル化剤は、ナイトロジェンマスタード（任意選択的にメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（任意選択的にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（任意選択的にダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（任意選択的にチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（任意選択的にカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（任意選択的にプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記代謝拮抗剤は、葉酸代謝拮抗剤（任意選択的にメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（任意選択的に５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（任意選択的にアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（任意選択的にチオグアニンおよびメルカプトプリン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記細胞傷害性抗生物質は、アントラサイクリン（任意選択的にドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンのうち１つまたは複数から選択され；
上記トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンのうち１つもしくは複数から選択され；ならびに／または
上記微小管阻害剤は、タキサン（任意選択的にパクリタキセルおよびドセタキセル）、ならびにビンカアルカロイド（任意選択的にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）のうち１つもしくは複数から選択される。
【００６２】
一部の実施形態では、上記少なくとも１つのホルモン治療剤は、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストである。一部の実施形態では、上記ホルモンアゴニストは、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（任意選択的にプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生およびリンパ管新生因子（任意選択的にＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチン類似体のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、上記ホルモンアンタゴニストは、ホルモン合成阻害剤であって任意選択的にアロマターゼ阻害剤もしくは性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）もしくはそれらの類似体、ホルモン受容体アンタゴニストであって任意選択的に選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）もしくは抗アンドロゲン、またはホルモン受容体に対する抗体であって任意選択的にシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレゾリムマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）、セツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ、アプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）、べマリツズマブ、オララツマブ、もしくはトベツマブのうち１つまたは複数から選択される。
【００６３】
一部の実施形態では、上記キナーゼ阻害剤は、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７のうち１つまたは複数から選択されるＰＩ３キナーゼ阻害剤である。
【００６４】
一部の実施形態では、治療用組成物は、ＨＲＳポリペプチドに関し、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の純度を有し、実質的に凝集体を含まない。一部の実施形態では、治療用組成物は、実質的にエンドトキシンを含まない。一部の実施形態では、治療用組成物は、滅菌された注射溶液であり、任意で静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または腹腔内投与に適している。
【００６５】
さらに、以下を含む患者ケアキットが含まれる：
（ａ）本明細書に記載される、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド；および
（ｂ）本明細書に記載される、抗菌剤、抗真菌剤、抗蠕虫剤、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの追加の剤。
【００６６】
一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、別個の治療用組成物中にある。一部の実施形態では、（ａ）および（ｂ）は、同じ治療用組成物中にある。
【００６７】
特定の実施形態は、単離された融合タンパク質を含み、当該融合タンパク質は、軟骨オリゴマータンパク質（ＣＯＭＰ）ポリペプチド、任意でＣＯＭＰ五量体ドメインポリペプチドに融合されたヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチドを含んでＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドを形成し、この場合において当該ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドは、表Ｈ９から選択される配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含み、当該アミノ酸配列からなり、または本質的に当該アミノ酸配列からなる。
【００６８】
一部の実施形態は、治療用組成物を含み、当該治療用組成物は、本明細書に記載される、ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合タンパク質を含む。一部の実施形態では、治療用組成物は、ＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合ポリペプチドに関し、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の純度を有し、実質的に凝集体を含まない。特定の実施形態では、治療用組成物は、実質的にエンドトキシンを含まない。一部の実施形態では、治療用組成物は、滅菌された注射溶液であり、任意で静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または腹腔内投与に適している。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、ニューロピリンの全体的なドメイン構造（１Ａ）と、例示的なニューロピリンコレセプター機能（１Ｂ）を示す。
【図２】図２は、特定のＮＲＰ２アイソフォームのドメイン構造と、ＮＲＰ２リガンド結合ドメインを示す。
【図３】図３は、ＳＰＲチップ上でのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）へのヒトＮＲＰ２の結合を示す。５０ｎＭのＮＲＰ２（黒色の線）、ＮＲＰ１（灰色の線）、およびマウスプレキシン（Ｐｌｅｘｉｎ）Ａ１（点線）は、固定Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）でコーティングされたＳＰＲチップ上を分析物として流された。
【図４】図４Ａ〜４Ｂは、ヒト、マウスおよびラット由来のＮＲＰ２が、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に結合し、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１１）の短縮型には結合しなかったことを示す。５０ｎＭのヒトＮＲＰ２（黒い線）、マウスＮＲＰ２（破線）、ラットＮＲＰ２（灰色の線）、またはＮＲＰ１（点線）は、固定された全長Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（４Ａ）、またはＣ末端の４９アミノ酸が無い短縮型のＦｃ−ＨＲＳ（２−１１）でコーティングされたＳＰＲチップ上を分析物として流された。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）、およびＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）のＷＨＥＰドメインとの相同性を共有するドメインを含むｔ−ＲＮＡシンテターゼに対する、ヒトＮＲＰ２の結合を示す。２０ｎＭのＮＲＰ２が、固定Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（５Ａ）、ＧＡＲＳ  Ｆｃ−ＷＨＥＰ（５Ｂ）、ＭＡＲＳ  Ｆｃ−ＷＨＥＰ（５Ｃ）、またはＷＡＲＳ  ＷＨＥＰ（５Ｄ）でコーティングされたＳＰＲチップ表面上を分析物として流された。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、二価カチオンの存在下、および非存在下での、固定Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）でコーティングされたＳＰＲチップ上のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対するヒトＮＲＰ２の結合を示す。この実験のランニング緩衝液は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ７．４であった。各分析物に対し、ＣａＣｌ２、ＥＤＴＡ（６Ａ）またはＭｇＣｌ２、ＭｇＣｌ２＋ＣａＣｌ２またはＺｎＣｌ２（６Ｂ）のいずれか５ｍＭを補充したランニング緩衝液中で、２０ｎＭのＮＲＰ２を調製した。
【図７】図７Ａ〜７Ｂは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）とＮＲＰ２の予め形成された複合体が、４Ｄ４モノクローナル抗体には結合するが、１Ｃ８モノクローナル抗体には結合しないことを示す。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対するモノクローナル抗体（モノクローナル抗体クローンの１Ｃ８（７Ａ）および４Ｄ４（７Ｂ））が、ＳＰＲチップ上に固定された。分析物は、２００ｎＭのＮＲＰ２（点線）、１００ｎＭのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）（黒い線）、１００ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）と２００ｎＭ  ＮＲＰ２の混合物（灰色の線）、または１００ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）と２００ｎＭ  １Ｃ８  ｍＡｂの混合物（破線）からなる。
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）とＮＲＰ２の結合が、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対する数種のモノクローナル抗体には捕捉されたが、他のモノクローナル抗体には捕捉されなかったことを示す。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対するモノクローナル抗体（モノクローナル抗体クローンの１２Ｈ６（８Ａ）、１Ｃ８（８Ｂ）、４Ｄ４（８Ｃ）、および１３Ｅ９（８Ｄ））が、ＳＰＲチップ上に固定された。次いで一斉投入が行われ、１つの分析物が投入された後、直ちに第二の分析物が投入された。２つの投入のタイミングは、矢頭で示されている。上述のパネルの各々において、２０００ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）が、抗体表面を飽和するために第一の分析物として投入され、次いで追加のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）（灰色の線）または２００ｎＭ  ＮＲＰ２（黒い線）のいずれかが投入された。抗体表面にＮＲＰ２が非特異結合してしまうことを除外するために、緩衝液とその後の２００ｎＭ  ＮＲＰ２の一斉投入も実施された（点線）。
【図９】図９Ａ〜９Ｂは、ＮＲＰ２ａ−ＧＦＰ融合タンパク質を発現する細胞に対する、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の用量依存性の結合を示す。ＮＲＰ２ｖ２−ＧＦＰを過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞上のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）／抗Ｆｃ−ＰＥ複合体の染色強度の定量（９Ａ）と染色強度ＣＶ（９Ｂ）。強度は、高ＮＲＰ２発現でゲーティングされた細胞（ＧＦＰ  Ｂｒｉｇｈｔ）からの値である。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、２倍ステップで滴定され、次いで８７．５ｎＭの抗Ｆｃ−ＰＥと混合された。特異性の対照として、１７５ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１１）／抗Ｆｃ−ＰＥが含まれた。
【図１０】図１０は、坑ＨＲＳ抗体クローン１Ｃ８の存在下でのＮＲＰ２ａ−ＧＦＰ融合タンパク質を発現する細胞に対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合阻害を示す。ＮＲＰ２ｖ２−ＧＦＰを過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞上での、アイソタイプ抗体対照または抗ＨＲＳ（ＷＨＥＰ）クローン１Ｃ８のいずれかと予めインキュベートされたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）／抗Ｆｃ−ＰＥ複合体の染色強度の定量。強度は、高ＮＲＰ２発現でゲーティングされた細胞（ＧＦＰ  Ｂｒｉｇｈｔ）からの値である。１７５ｎＭのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）／抗Ｆｃ−ＰＥを使用した。特異性の対照として、１７５ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１１）／抗Ｆｃ−ＰＥが含まれた。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｂは、ＫＬ３１シリーズの抗ＨＲＳ抗体が、ＮＲＰ２へのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合を濃度依存性に阻害したこと、一方で、ＡＢ０４およびＡＢ１３シリーズの他の抗体は、このアッセイにおいて有意な阻害特性を示さなかったことを示す。様々な濃度の抗ＨＲＳ抗体の存在下で、フローサイトメトリーを使用し、ビオチニル化Ｆｃ−ＨＲＳ−ストレプトアビジン−ＰＥを用いた、Ｅｘｐｉ２９３−ＮＲＰ２を安定的に発現する細胞の染色の定量。データは、異なる抗体を使用した２つの実験に由来する。図１１Ａは、対照ヒトＩｇＧ１（黒丸）、ＫＬ３１−４６７（黒三角）、ＫＬ３１−３５６（部分的に黒い三角）、マウスクローン１３Ｃ８（十字）を示し、図１１Ｂは、対照ヒトＩｇＧ１（黒丸）、ＡＢ０４−４２５（白三角）、ＡＢ１３−２８８（部分的に黒い四角）、およびＫＬ３１−４７８（黒三角）を示す。それらは生きたシングルゲート中のストレプトアビジン−ＰＥ＋／ＮＲＰ２＋細胞の百分率として示されている。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂは、ＶＥＧＦ−Ｃの存在下での、ＮＲＰ２ｖ２−ＧＦＰ融合タンパク質を発現する細胞へのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合の阻害を示す。ＮＲＰ２ｖ２−ＧＦＰを過剰発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞上で異なる用量のＶＥＧＦ−Ｃで予めインキュベートされたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）／抗Ｆｃ−ＰＥ複合体の染色強度の定量。強度は、高ＮＲＰ２発現でゲーティングされた細胞（ＧＦＰ  Ｂｒｉｇｈｔ）からの値である。１７５ｎＭのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）／抗Ｆｃ−ＰＥを使用した。特異性の対照として、１７５ｎＭ  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１１）／抗Ｆｃ−ＰＥが含まれた。
【図１３】図１３は、正常な健常ドナーからの血清と血漿における、循環ＮＲＰ２レベルの定量を示す。正常な健常ボランティア（ｎ＝７２）の血清と血漿が単離され、ＮＲＰ−２の循環レベルに関して定量された。血清サンプル（黒丸）と血漿サンプル（白四角）は、ヒトＮＲＰ−２に特異的なＥＬＩＳＡで検証された。７２個すべてのサンプルに対する血清（１６．３ｐＭ）と血漿（１５．６ｐＭ）の平均値が示された。ＮＲＰ２  ＥＬＩＳＡの定量限界は、１．５ｐＭであった。
【図１４】図１４は、循環ＨＲＳとＮＲＰ２レベルの比較を示す。血清ＨＲＳ（黒丸）レベルは、検証された７２名の正常健常ボランティアにおける循環における広範な範囲を示している。同一ドナーに由来する血清ＮＲＰ２レベルをマッチングして、同軸上でオーバーレイした。ＨＲＳレベルが低いドナーは、可溶性ＮＲＰ２が低いか、または検出不可能レベルを示した（定量限界は１．５ｐＭ）。ＨＲＳレベルが高いドナーは概して、循環ＮＲＰ２も対応して高いレベルにあった。
【図１５】図１５はは、健常ドナーのヒト血清における、ＨＲＳ  Ｎ末端干渉を示す。健常ドナーの正常血清は、２つの別個のＨＡＲＳ  ＥＬＩＳＡにおいて分析された。全長ＨＡＲＳ（ＨＡＲＳ＿ＦＬ；黒丸）を検出するＥＬＩＳＡ、ならびにＮ末端に特異的に指向するＥＬＩＳＡ（ＨＡＲＳ＿ＮＴ；白四角）においてサンプルは分析された。全長ＨＡＲＳレベルが増加し、これら２つのＥＬＩＳＡの間に相関が無ければ、Ｎ末端干渉とされ、ＨＲＳに対する補因子、結合パートナーまたは可溶性受容体の存在を示している可能性がある。
【図１６】図１６は、ＨＡＲＳ  Ｎ−末端分析干渉と、可溶性ＮＲＰ２レベルの間の相関を示す。正常な健常者の血清を、２つのＨＡＲＳ  ＥＬＩＳＡでの検出における差異について分析し、循環ＮＲＰ２レベルと比較した。全長ＨＡＲＳ  ＥＬＩＳＡとＮ末端ＨＡＲＳ  ＥＬＩＳＡの間での検出レベルにおける差異を、ＨＡＲＳ  Ｎ末端干渉単位と名付けた。これら干渉単位を、可溶性ＮＲＰ２レベルに対してグラフ化した。結果から、正常血清におけるＮ末端干渉の増加と可溶性ＮＲＰ２の間の関連性が示される。
【図１７】図１７は、内因性ＨＲＳとＮＲＰ２の可溶性複合体の検出を示す。正常な健常ドナーの血清サンプルを、複合的なＨＲＳ＆ＮＲＰ−２複合体ＥＬＩＳＡにおいて分析した。これらの分析フォーマットは、循環ＨＲＳ（ＨＡＲＳ＿ＮＴまたはＨＡＲＳ＿ＣＴ）の捕捉と、ＮＲＰ２モノクローナル抗体を用いた検出を利用したものである。同様に、リバースフォーマットも使用して、これにより循環ＮＲＰ２が捕捉され、抗ＨＲＳ抗体を用いた検出が観察された。両方のフォーマットにおいて、低干渉血清サンプルと比較し、高干渉サンプルにおいてシグナルが上昇していた。
【図１８】図１８は、高干渉サンプル中の複合体化ＨＲＳおよびＮＲＰ２が、部位特異的ＨＲＳ抗体を用いた検出を妨害したことを示す。低ＨＲＳ  Ｎ末端干渉サンプルおよび高ＨＲＳ  Ｎ末端干渉サンプルからの血清を、ＨＲＳおよびＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡにおいて分析した。血清サンプルは、ＮＲＰ２モノクローナル抗体で補足され、２種の固有ＨＲＳ  Ｎ末端モノクローナル抗体のいずれかで検出された。ＨＲＳ＿ＮＴで検出されたとき（黒色のバー）、高干渉サンプルは複合体の形成を示したが、このシグナルは、Ｎ末端抗ＨＲＳ抗体で完全に妨害された（ＨＲＳブロッキング抗体、灰色のバー）。
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｃは、強皮症性慢性移植片対宿主病のマウスモデルにおける皮膚マーカーに対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性を示している。図１９Ａは、皮膚の厚さに対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。図１９Ｂは、皮膚切片中で計数される筋線維芽細胞の数に対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。図１９Ｃは、皮膚中のヒドロキシプロリン含量（コラーゲン含量の指標）に対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５  同種移植の８週間後に安楽死されたビヒクル動物（左から３番目の群）に対する、クラスカル−ワリスのノンパラメトリックＡＮＯＶＡ後に、ダンの多重比較検定。
【図２０】図２０Ａ〜２０Ｄは、強皮症性慢性移植片対宿主病のマウスモデルにおける肺マーカーに対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性を示している。図２０Ａは、アシュクロフトスコアに対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。図２０Ｂは、コラーゲン線維を特異的に染める染色であるピクロシリウスレッドで染まる組織に占有される各切片の割合に対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。図２０Ｃは、肺切片中で計数される筋線維芽細胞の数に対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。図２０Ｄは、皮膚中のヒドロキシプロリン含量（コラーゲン含量の指標）に対する、同種移植の７日後（７Ｄ）または２１日後（２１Ｄ）に開始したビヒクル、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはニンテダニブを用いた処置の影響を示している。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５  同種移植の８週間後に安楽死されたビヒクル動物（左から３番目の群）に対する、クラスカル−ワリスのノンパラメトリックＡＮＯＶＡ後にダンの多重比較検定。
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｃは、ＬＰＳ誘導性のマウス肺への白血球浸潤に対する、ＨＲＳ（２−６０）含有タンパク質の効果を示す。マウスは、示される投与量で、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰを用いて静脈内処置された。翌日、生理食塩水またはＬＰＳ（１０μｇ／マウス）を、口腔咽喉投与を介して気道内に滴下し、２４時間後、気管支肺胞洗浄液により浸潤細胞を収集し、フローサイトメトリーにより分析した。ＬＰＳを投与された群は、水平バーにより区切られている。平均値およびＳＥＭとともに、個々の動物のデータ（丸）が示されている。アスタリスクは、ＡＮＯＶＡと、次いでダネットの事後検定による、ＬＰＳ／ビヒクル群からの有意差（ｐ＜０．０５）を示している。
【図２２】図２２Ａ〜２２Ｂは、１００ｎＭまたは２００ｎＭのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）（Ｉｍｏｄ）のいずれかとともに、単球分化の５日間、骨髄由来マクロファージをインキュベートすることで、食細胞の成熟が大きく阻害されたが、Ｆｃ対照化合物のＮ１５ではなかったことを示す。これは劇的に減少したスペクトルのシフトにより明らかにされ、ｐＨ感受性蛍光色素のｐＨ  ｒｈｏｄｏ（商標）により示された。
【図２３】図２３Ａ〜２３Ｂは、１００ｎＭのＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰとともに、単球分化の５日間、骨髄由来マクロファージをインキュベートすることで、エフェロサイトーシスが大きく阻害されたが、対照化合物のＣＯＭＰではなかったことを示す。これは劇的に減少したスペクトルのシフトにより明らかにされ、ｐＨ感受性蛍光色素のｐＨ  ｒｈｏｄｏ（商標）により示された。
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｂは、Ｐ．ａｃｎｅｓを投与されていないマウス（２群）と比較した、Ｐ．ａｃｎｅｓを投与されたマウス（３群および４群）における、炎症（Ｈ＆Ｅ）と線維症（マッソントリクローム）の増加の存在による、モデル誘導の組織学的確認を示す。
【図２５】図２５Ａ〜２５Ｂは、試験終了時の肺の炎症（２５Ａ）と線維症（２５Ｂ）の測定結果を示す。
【図２６】図２６Ａ〜２６Ｈは、図に示されるように、肺における数種の線維症促進性のサイトカインが、３ｍｇ／ｋｇのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）処置に反応して低下したことを示している。
【図２７】図２７Ａは、対照群（３群および４群）において、好熱性放線菌（Ｓ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａ）に曝露されたマウスが、２群のＰＢＳに曝露されたマウスと比較して、強固で一貫性のある多巣性慢性肺炎を有していたことを示す。図２７Ｂは、獣医病理学者により判定された、組織学的スコアを示す。図２７Ｃは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）３ｍｇ／ｋｇ群における、個々のＢＡＬＴ領域の低下と、ＨＡＬＯプラットフォームを使用したＨ＆Ｅ染色肺組織切片の詳細分析を示す。
【図２８】図２８Ａ〜２８Ｇは、０．４ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの両方で、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の存在下で数種の炎症促進性サイトカインとケモカインが有意に低下したことを示す。
【図２９】図２９Ａ〜２９Ｅは、０．４ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの両方で、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の存在下でマトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）が有意に低下したことを示す。
【図３０】図３０Ａ〜３０Ｈは、５ｍｇのザイモサン（ｚｙｍｏｓａｎ）を投与したことで、ＳＫＧマウスの炎症性関節炎の誘導が成功したこと、およびＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）が、ＳＫＧマウスの肺において特定の免疫細胞、特にＢ細胞とＴ細胞の数を低下させ得たことを示す。
【図３１】図３１Ａ〜３１Ｄは、３５日目、４２日目、４９日目、および５６日目の全体的な臨床関節炎スコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
本発明の実施は、具体的に相反することが示唆されない限り、当分野の技術範囲内にある分子生物学および組み換えＤＮＡ技術の標準的な方法を採用するものであり、それら方法の多くが、解説を目的として以下に記載される。そうした技術は、文献内で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐ．Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，ｅｄ．，２００４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：Ｍｏｄｅｒｎ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｂｕｚｄｉｎ  ａｎｄ  Ｌｕｋｙａｎｏｖ，ｅｄｓ．，２００９）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．（２００５）Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ，ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｈｏｂｏｋｅｎ  ＮＪ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２０１０）；Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｒ．，ＲＮＡ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２００５）、Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ），Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＡＣＳ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９９７；Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｅｄｓ．，Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，５４（４）４５３−６０９（２００２）；Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｐｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌｓ）ｆｏｒ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ”ｉｎ  Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓを参照のこと。
定義
【００７１】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似した、または類似した均等の、または均等の任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞を、本開示対象の実施または検証に使用することができるが、好ましい方法および材料が記載されている。本明細書に引用される、限定されないが、特許および特許出願を含むすべての公表文献および参照文献は、個々の公表文献または参照文献のそれぞれが具体的および個々に、本明細書に参照により援用されると完全に記載されて示されたのと同様に、本明細書に参照により援用される。本出願が優先権を主張する特許出願もすべて、公表文献および参照文献について上述された様式で、その全体で本明細書に参照により援用される。
【００７２】
本開示の目的に対し、以下の用語を、以下に規定する。
【００７３】
「ａ」および「ａｎ」といった冠詞は、本明細書において、当該冠詞の文法上の対象の１つまたは複数（すなわち少なくとも１つ）を指すために使用される。例示として、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ」とは、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００７４】
「約」とは、基準の数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さに対し、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％まで変化する数量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、大きさ、量、重さ、または長さを意味する。
【００７５】
「アンタゴニスト」または「インヒビター」とは、別の剤または分子の生理学的作用と干渉する、または別手段により低下させる生物学的構造または化学的な剤を指す。一部の例では、アンタゴニストは、他の剤または分子に特異的に結合する。完全アンタゴニストと部分アンタゴニストが含まれる。
【００７６】
「アゴニスト」とは、別の剤または分子の生理学的作用を増加させる、または強化する生物学的構造または化学的な剤を指す。一部の例では、アゴニストは、他の剤または分子に特異的に結合する。完全アゴニストと部分アゴニストが含まれる。
【００７７】
「アネルギー」という用語は、抗原による再刺激に対するＴ細胞反応またはＢ細胞反応の機能的不活化を指す。
【００７８】
本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸、ならびにアミノ酸のアナログおよび模倣体のすべてを意味することが意図される。天然アミノ酸には、タンパク質生合成中に利用される２０種の（Ｌ）−アミノ酸、ならびに例えば４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、およびオルニチンなどの他のアミノ酸が含まれる。非天然アミノ酸には、例えば（Ｄ）−アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ−フルオロフェニルアラニン、エチオニンなどが含まれ、それらは当分野の当業者に公知である。アミノ酸アナログとしては、天然アミノ酸および非天然アミノ酸の改変型が挙げられる。そうした改変としては、例えばアミノ酸上の化学基および化学部分の置換または置き換え、またはアミノ酸の誘導体化が挙げられる。アミノ酸模倣体としては、例えば基準アミノ酸の電荷、および電荷間隔の特徴といった機能的に類似した特性を呈する有機構造物が挙げられる。例えばアルギニン（ＡｒｇまたはＲ）を模倣する有機構造物は、類似した分子空間中に正電荷部分が配置され、天然Ａｒｇアミノ酸の側鎖のｅ−アミノ基と同程度の可動度を有する。模倣体は拘束構造も含まれ、それによりアミノ酸またはアミノ酸官能基の最適な間隔および電荷相互作用が維持される。当業者であれば、どの構造が、機能的に均等なアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣体を構成するかを知っており、または決定することができる。
【００７９】
本明細書において使用される場合、疾患を発症する、または有害反応を発生させる「リスクがある」対象は、本明細書に記載の治療方法を行う前に、検出可能な疾患、または疾患症状を有していても、いなくてもよく、そして検出可能な疾患、または疾患症状を呈していても、いなくてもよい。「リスクがある」とは、対象が、本明細書に記載される、および当分野に公知の疾患の発症と相関する測定可能なパラメーターであるリスク因子を１つ以上有することを示す。これらリスク因子を１つ以上有する対象は、これらリスク因子を１つ以上有さない対象よりも、疾患または有害反応を発生させる確率が高い。
【００８０】
「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のコードに寄与する、任意の核酸配列を意味する。対照的に、「非コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物のコードに直接的には寄与しない、任意の核酸配列を指す。
【００８１】
「結合する」という用語は、例えば共有結合的相互作用、静電相互作用、疎水性相互作用ならびにイオンおよび／または水素結合相互作用などによる、例えば塩架橋および水架橋などの相互作用を含む、２分子間の直接的な会合を指す。
【００８２】
「クローン除去」という用語は、自己反応性Ｔ細胞の除去（消失または死）を指す。クローン除去は、胸腺に置いて中枢性に、または末梢性に、またはその両方で実現され得る。
【００８３】
「化学療法剤耐性」という用語は、癌治療に曝露された後、徐々に癌細胞群の治療感受性が変化することを指し、癌免疫治療剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、および／またはキナーゼ阻害剤のうちの少なくとも１つに対する耐性を含む。最終的に、化学療法剤耐性は、癌の再発および／または転移につながり、癌患者の臨床転帰改善の課題となっている。化学療法剤耐性は、長期的な癌治療の成功にとって、未だ主要な課題である。例えば早期ステージの乳癌と診断された女性のおよそ３０％が、化学療法剤耐性を発生させ、最終的に転移性乳癌へと進行してしまう。  化学療法剤耐性の分子メカニズムには、輸送ポンプの誘導、癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、ミトコンドリアの変化、ＤＮＡ修復、オートファジー、上皮−間葉転換（ＥＭＴ）、癌幹細胞的性質（ｃａｎｃｅｒ  ｓｔｅｍｎｅｓｓ）、およびエキソソーム産生が含まれる。これらのメカニズムは別のメカニズムにより操作され得るが、最終的には協働して、化学療法剤に応答した細胞死を妨害する。例えば癌遺伝子（ＥＧＦＲ−Ａｋｔ−ＮＦ−κＢ）のコードタンパク質は、アポトーシス関連遺伝子の発現を調節し、ＥＭＴ、細胞の幹細胞的性質、およびオートファジーに寄与し得る。オートファジー細胞は、化学療法剤耐性中の抗アポトーシス性を特徴とする。したがって化学療法剤耐性を低下させる剤には、オートファジー、エンドソーム成熟、ファゴサイトーシスおよび／またはエフェロサイトーシスを調節する剤も含まれ、化学療法剤耐性の癌の治療または減少に有用性を見出し得る。
【００８４】
本開示全体を通じて、別段であることが必須でない限り、「含む」および「含むこと」という文言は、記載される工程もしくは要素、または工程もしくは要素の群の含有を示唆するが、任意の他の工程もしくは要素、または工程もしくは要素の群の除外は示唆しないことを理解されたい。
【００８５】
「〜からなる」とは、「〜からなる」という文言に続くものを含むが、それらに限定されることを意味する。ゆえに、「〜からなる」という文言は、列記される要素が必要または義務であり、他の要素は存在し得ないことを示す。「本質的に〜からなる」とは、当該文言の後に列記される任意の要素、および列記される要素に関して本開示中に特定される活性もしくは作用に干渉しない、または寄与しない他の要素に限定される任意の要素を含むことを意味する。ゆえに、「本質的に〜からなる」という文言は、列記される要素が必須または義務であるが、他の要素も任意であり、列記される要素の活性または作用に実質的に影響を与えるか、与えないかに応じて、存在し、または存在し得ないことを示す。
【００８６】
「エンドトキシンフリー」または「実質的にエンドトキシンフリー」という用語は概して、最大でも微量の（例えば対象に対し、臨床的に有害な生理学的効果を有さない量）のエンドトキシンを含有し、好ましくは検出できない量のエンドトキシンを含有する組成物、溶媒、および／または容器に関する。エンドトキシンは、特定の微生物、例えば細菌、典型的にはグラム陰性細菌に関連する毒素であるが、例えばリステリア菌などのグラム陽性細菌でもエンドトキシンが存在する場合がある。最も蔓延しているエンドトキシンは、リポ多糖（ＬＰＳ）またはリポオリゴ糖（ＬＯＳ）であり、それらは様々なグラム陰性細菌の外膜に存在し、これら細菌が疾患を引き起こす能力の中心となる病原性を表す。ヒトにおいて、少量のエンドトキシンは、有害な生理学的効果の中でも特に発熱、血圧の低下、ならびに炎症および凝固の活性化を引き起こす場合がある。
【００８７】
たとえ少量であってもヒトにおいて有害な作用をもたらす場合があるため、医薬品の製造においては多くの場合、薬品および／または薬の容器から、大部分の、またはすべてのエンドトキシンの痕跡を除去することが望ましい。ほぼすべてのエンドトキシンを破壊するためには、典型的には３００℃を超える温度が必要であるため、脱ピロゲンオーブンをこの目的に対して使用してもよい。例えばシリンジまたはバイアルなどの主要なパッケージ材料に応じて、２５０℃のガラス温度と３０分間の維持時間の組み合わせが、３ｌｏｇのエンドトキシンレベルの低下の実現には充分であることが多い。エンドトキシンの他の除去方法も予期され、例えば本明細書に記載され、当分野に公知のクロマトグラフィー法および濾過法が挙げられる。
【００８８】
エンドトキシンは、当分野に公知の日常的な技術を使用して検出することができる。例えば、カブトガニの血液を利用したＬｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  ａｓｓａｙは、エンドトキシンの存在検出に対して非常に感度の高いアッセイである。この試験では、凝固反応を増幅させる強力な酵素カスケードによって、非常に低レベルのＬＰＳでもリムルス溶解物の検出可能な凝固を生じさせることができる。エンドトキシンは、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）でも定量することができる。実質的にエンドトキシンフリーであるために、エンドトキシンのレベルは、活性化合物の約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、または１０ＥＵ／ｍｇ未満であってもよい。典型的には、１ｎｇのリポ多糖（ＬＰＳ）は、約１〜１０ＥＵに相当する。
【００８９】
本明細書において使用される場合、「細胞に接触すること」、「導入すること」、または「送達すること」という用語は、本明細書に記載される剤（例えば、ポリペプチド剤、ポリヌクレオチド剤）を、当分野で普遍的な方法、例えばトランスフェクション法（例えば、リポソーム、リン酸カルシウム、ポリエチレンイミン）、エレクトロポレーション法（例えば、ヌクレオフェクション）、マイクロインジェクション法または対象への投与により細胞内に送達することを含む。
【００９０】
「細胞浸潤ペプチド」（ＣＰＰ）または「細胞取り込みを強化するペプチド部分」という用語は、相互交換可能に使用され、「輸送ペプチド」、「キャリアペプチド」、または「ペプチド形質導入ドメイン」とも呼ばれるカチオン性の細胞浸潤ペプチドを指す。一部の実施形態では、ペプチドは、所与の細胞培養群の細胞の約、または少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％内に、細胞（例えば筋細胞）浸潤を誘導する能力を有し、全身投与または他の投与形式で、インビボにおいて複数の組織内（例えば、筋組織内）で高分子を移動させる。一部の実施形態では、ＣＰＰは、式−［（Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ）ｍ］の物質であり、式中、Ｒ’は、天然アミノ酸またはその１炭素ホモログもしくは２炭素ホモログの側鎖であり、Ｒ”は、水素またはアシルから選択され、ｍは、最大で５０の整数である。追加的なＣＰＰも当分野に公知であり、例えば、米国特許出願２０１０／００１６２１５に開示されており、当該出願はその全体で参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、ｍは、１〜５０から選択される整数であり、ｍが１のとき、当該部分は単一アミノ酸またはその誘導体である。本明細書に記載されるポリヌクレオチド剤（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ剤）のいずれかをＣＰＰに結合させ、例えば筋細胞などの標的細胞への取り込みを改善してもよい。
【００９１】
「半数効果濃度」または「ＥＣ５０」という用語は、いくつかの特定の曝露時間後に、基準と最大の間の中間の反応を誘導する、本明細書に記載の剤（例えば、ＨＲＳポリペプチドまたは他の剤）の濃度を指す。ゆえに段階的な用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が観察される化合物濃度を表す。ＥＣ５０は、インビボで最大効果の５０％を得るために必要な血漿濃度でもある。同様に、「ＥＣ９０」とは、その最大効果の９０％が観察される剤または組成物の濃度を指す。「ＥＣ９０」は、「ＥＣ５０」とヒルスロープから計算することができ、または当分野に普遍的な知識を使用してデータから直接決定することができる。一部の実施形態では、剤のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、バイオ治療用組成物は、約１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
【００９２】
「相同性」とは、同一である、または保存的置換基を構成するアミノ酸の百分率の数を指す。相同性は、例えば、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２，３８７−３９５）などの配列比較プログラムを使用して決定され得る。この方法において、本明細書に引用される配列に対して類似した長さ、または実質的に異なる長さの配列は、アライメントにギャップを挿入することにより比較され得る。そうしたギャップは、例えばＧＡＰに使用される比較アルゴリズムなどにより決定される。
【００９３】
「自然免疫応答」という用語は、免疫細胞（例えばマクロファージ、好中球、好酸球、顆粒球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの骨髄由来細胞を含む）の応答、ならびにサイトカインの発現と放出の調節（例えば、インターフェロンおよびインターフェロンシグナル伝達）、細胞死の誘導、およびタンパク質合成の阻害のメカニズムを指し、それらは病原体による感染から宿主を防御する。
【００９４】
「単離された」とは、自然な状態では通常に付随する構成要素を実質的に、または原則的に含まない物質を意味する。例えば、本明細書において使用される場合、「単離されたポリヌクレオチド」、「単離されたオリゴヌクレオチド」、または「単離されたオリゴヌクレオチド」とは、天然の状態ではそれらと隣接する配列から精製された、または取り出されたポリヌクレオチドを指し、例えばゲノム中では当該断片に隣接する配列から取り出されたＤＮＡ断片を指す場合がある。「単離すること」という用語は、細胞に関する場合、対象（例えばポリヌクレオチドリピート秒を伴う対象）の源からの細胞（例えば、線維芽細胞、リンパ芽球など）の精製を指す。ｍＲＮＡまたはタンパク質の関連では、「単離すること」とは、例えば細胞などの源からのｍＲＮＡまたはタンパク質の回収を指す。
【００９５】
「遊走細胞」という用語は、刺激に反応して１つの場所から別の場所へと移動する能力を有する細胞を指す。例示的な遊走細胞としては、例えば、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞（未成熟または成熟）、骨髄系樹状細胞、形質細胞様樹状細胞（リンパ系樹状細胞とも呼ばれる）およびランゲルハンス細胞を含む樹状細胞サブセット、例えば大食細胞、例えばクッパ―細胞、ＣＮＳのミクログリア、肺胞マクロファージおよび末梢マクロファージなどの組織常在性マクロファージ、例えばＭ０、Ｍ１、Ｍｏｘ、Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、およびＭ２ｃマクロファージなどのマクロファージ亜型などのマクロファージ、好中球、好酸球、肥満細胞、好塩基球、形質Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、Ｂ−１細胞およびＢ−２細胞を含むＢ細胞、ＣＤ４５ＲＯ（ナイーブＴ）細胞、ＣＤ４５ＲＡ（メモリーＴ）細胞、Ｔｈ１、Ｔｈ２およびＴｒ１／Ｔｈ３細胞を含むＣＤ４ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ならびに胸腺細胞などの免疫細胞が挙げられる。遊走細胞の追加例としては、線維芽細胞、線維化関連細胞、腫瘍細胞および幹細胞が挙げられる。したがって「細胞遊走」という用語は、遊走細胞の移動を指し、「細胞遊走の調節」という用語は、任意のそうした遊走細胞の移動の調節を指す。
【００９６】
「調節する」という用語は、任意で既定量および／または統計的に有意な量まで、１つ以上の定量化可能なパラメーターが「増加する」または「減少する」ことを含む。「増加する」もしくは「増加すること」、「強化する」もしくは「強化すること」、または「刺激する」もしくは「刺激すること」とは概して、剤／化合物が無い状態または対照化合物のいずれかにより生じる応答と比較して、細胞または対象においてより大きな生理学的応答（すなわち下流効果）を生じさせる１つ以上の剤または化合物の能力を指す。関連する生理学的応答または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は、当業者に明白であり、その必要のある組織または対象における骨格筋の量の増加を含み得る。「増加した」または「強化された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、剤／化合物が無い状態（剤の非存在）または対照化合物により生じる量の、１．１、１．２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０またはそれ以上（例えば５００倍、１０００倍）である、その間および１を超えるすべての整数および小数点を含む（例えば１．５、１．６、１．７、１．８など）増加を含み得る。「低下する」または「阻害する」という用語は概して、診断分野における日常的な技術により測定されたとき、本明細書に記載される標的遺伝子の発現、または疾患または状態の症状などの関連する生理学的応答または細胞応答を「減少させる」、１つ以上の剤または組成物の能力を指し得る。関連する生理学的応答または細胞応答（インビボまたはインビトロ）は当業者には明白であり、本明細書に記載される肺の炎症もしくＩＬＤの症状または病態における低下または改善を含み得る。応答における「減少」は、剤もしくは組成物が無い状態、または対照の剤もしくは組成物により生じる応答と比較して「統計的に有意」であり得、その間の全ての整数を含む、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少を含み得る。
【００９７】
特定の実施形態では、組成物中の任意の所与の剤の「純度」が、具体的に規定され得る。例えば、特定の組成物は、その間のすべての少数を含む少なくとも８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％の純度である剤を含み得、例えば決して限定ではないが、化合物を分離、特定および定量するために生化学分野および分析化学分野において頻繁に使用されるカラムクロマトグラフィーの公知の形態である高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定される。
【００９８】
「脂質ナノ粒子」または「固体脂質ナノ粒子とは、１つ以上の球形ナノ粒子を指し、平均直径は約１０〜約１０００ナノメートルであり、脂溶性分子を可溶化することができる固体脂質コアマトリクスを含む。脂質コアは界面活性剤（例えば乳化剤）により安定化され、トリグリセリド（例えば、トリステアリン）、ジグリセリド（例えば、グリセロールバヘネート）、モノグリセリド（例えば、モノステアリン酸グリセロール）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）およびワックス（例えば、パルミチン酸セチル）、その組み合わせのうちの１つ以上を含んでもよい。脂質ナノ粒子は、例えば、Ｐｅｔｒｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：８４７−５５，２０１４、ならびに米国特許第６，２１７，９１２号、第６，８８１，４２１号、第７，４０２，５７３号、第７，４０４，９６９号、第７，５５０，４４１号、第７，７２７，９６９号、第８，００３，６２１号、第８，６９１，７５０号、第８，８７１，５０９号、第９，０１７，７２６号、第９，１７３，８５３号、第９，２２０，７７９号、第９，２２７，９１７号、および第９，２７８，１３０号に記載されており、それら文献はその全体で参照により組み込まれる。
【００９９】
用語または「ニューロピリン２関連疾患」または「ＮＲＰ２関連疾患」とは、ＮＲＰ２の活性、発現、および／または空間分布がその疾患または状態の病態生理学において役割を果たす、疾患および状態を指す。一部の場合では、ＮＲＰ２に関連する疾患は、本開示のＨＲＳポリペプチドによって、例えば、少なくとも１つのＮＲＰ２リガンドとのＮＲＰ２の相互作用を変えて、ＮＲＰ２の活性、シグナル伝達、発現、および／または空間分布に影響を及ぼすことによって調節される。例示的なＮＲＰ２に関連する疾患および状態としては、限定はないが、癌および癌に関連する疾患または病態が挙げられ、そのようなものとしては、癌細胞の成長、癌の開始、癌の遊走、癌細胞の接着、癌細胞の浸潤、癌細胞の化学療法抵抗性、および癌細胞の転移が挙げられる。また挙げられるのは、炎症および自己免疫に関連する疾患であって、そのようなものとしては、炎症性肺疾患、例えば過敏性肺炎および肺炎症、および関連の炎症性疾患などが挙げられる。また挙げられるのは、不適切な免疫細胞の活性化または遊走に関連する疾患、例えば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）およびリウマチ性関節炎関連間質性肺疾患（ＲＡ−ＩＬＤ）などである。追加的な例としては、リンパ管の発生、リンパ管新生、およびリンパ管の損傷に関連する疾患が挙げられ、そのようなものとしては、浮腫、リンパ浮腫、二次リンパ浮腫、不適切な脂肪の吸収および沈着、過剰な脂肪の沈着、ならびに血管透過性が挙げられる。また挙げられるのは、潜伏感染を含めた感染に関連する疾患、およびアレルギー障害／疾患およびアレルギー応答に関連する疾患であって、そのようなものとしては、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、インフラマソーム関連疾患、および皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症などが挙げられる。追加的な例としては、肉芽腫性炎症性疾患に関連する疾患が挙げられ、そのようなものとしては、サルコイドーシス、他の肉芽腫性肺疾患、および非肺肉芽腫が挙げられる。さらに挙げられるのは、線維性疾患、中でも例えば子宮内膜症、線維症、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、および創傷治癒などである。さらに挙げられるのは、不適切な平滑筋の収縮性ならびに血管平滑筋細胞の遊走および／または接着に関連する疾患、ならびに不適切なオートファジー、貪食作用、およびエフェロサイトーシスに関連する疾患である。追加的な例としては、末梢神経系リモデリングおよび痛覚に関連する疾患を含めた、神経細胞疾患が挙げられる。さらに挙げられるのは、骨発生および／または骨リモデリングに関連する疾患、ならびに不適切な遊走性細胞の移動に関連する疾患である。
【０１００】
本明細書において使用される場合、「核酸塩基（Ｎｕ）」、「塩基対部分」または「塩基」は相互交換可能に使用され、天然ＤＮＡまたは天然ＲＮＡ（ウラシル、チミン、アデニン、シトシンおよびグアニン）中に存在するプリン残基またはピリミジン残基、ならびに例えばオリゴヌクレオチドへの結合アフィニティなどの性能を改善する天然プリンおよび天然ピリミジンのアナログを指す。例示的なアナログとしてはヒポキサンチン（ヌクレオシドのイノシンの塩基成分）、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル−改変ピリミジン、９−（アミノエトキシ）フェノキサジン（Ｇ−クランプ）などが挙げられる。
【０１０１】
塩基対部分のさらなる例としては限定されないが、アシル保護基で保護されたアミノ基を有するウラシル、チミン、アデニン、シトシン、グアニンおよびヒポキサンチン、２−フルオロウラシル、２−フルオロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、２，６−ジアミノプリン、アザシトシン、ピリミジンアナログ、例えばシュードイソシトシンおよびシュードウラシル、ならびに他の改変核酸塩基、例えば８−置換プリン、キサンチンまたはヒポキサンチン（後者２つは天然分解産物）が挙げられる。Ｃｈｉｕ  ａｎｄ  Ｒａｎａ，ＲＮＡ，２００３，９，１０３４−１０４８，Ｌｉｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，２２，２１８３−２１９６  ａｎｄ  Ｒｅｖａｎｋａｒ  ａｎｄ  Ｒａｏ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７，３１３に開示されている改変核酸塩基も予期される。
【０１０２】
塩基対部分のさらなる例としては限定されないが、１つ以上のベンゼン環が加えられたサイズ拡張核酸塩基（ｅｘｐａｎｄｅｄ−ｓｉｚｅ  ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）が挙げられる。Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃａｔａｌｏｇ（ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ）；Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＡＴ  ｅｔ  ａｌ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００７，４０，１４１−１５０；Ｋｏｏｌ，ＥＴ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，２００２，３５，９３６−９４３；Ｂｅｎｎｅｒ  Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２００５，６，５５３−５４３；Ｒｏｍｅｓｂｅｒｇ，Ｆ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００３，７，７２３−７３３；Ｈｉｒａｏ，Ｉ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，１０，６２２−６２７に記載される核酸塩基置換も、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド合成に有用なものとして予期される。サイズ拡張核酸塩基の例は、以下に示される：
【化１】
2021531313.tif 000003
【０１０３】
リボース、糖アナログまたはモルホリノに共有結合された核酸塩基はヌクレオシドを含む。「ヌクレオチド」は、１つのリン酸基とヌクレオシドから構成される。リン酸基は隣接するヌクレオチドと互いに共有結合され、オリゴヌクレオチドを形成する。
【０１０４】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマー、ならびにそのバリアントおよび合成アナログを指す。ゆえにこれらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が合成非天然アミノ酸、例えば対応する天然アミノ酸の化学アナログであるアミノ酸ポリマーに適用され、ならびに天然アミノ酸ポリマーにも適用される。
【０１０５】
「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＤＮＡを含む。当該用語は典型的には、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチド、またはいずれかタイプのヌクレオチドの改変型の、少なくとも１０塩基の長さのヌクレオチドの多量体型を指す。当該用語は、一本鎖型および二本鎖型のＤＮＡを含む。「単離ＤＮＡ」および「単離ポリヌクレオチド」および「単離核酸」という用語は、特定の種の総ゲノムＤＮＡから単離された分子を指す。ゆえにポリペプチドをコードする単離ＤＮＡセグメントとは、１つ以上のコード配列を含有するが、当該ＤＮＡセグメントが取得された種の総ゲノムＤＮＡから実質的に単離されて離された、または精製されて遊離したＤＮＡセグメントを指す。さらに、ポリペプチドをコードしない非コードポリヌクレオチド（例えばプライマー、プローブ、オリゴヌクレオチド）も含まれる。さらに、例えば発現ベクター、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ファージミド、ファージ、ウイルスなどを含む組み換えベクターも含まれる。
【０１０６】
追加のコード配列または非コード配列は、必須ではないが、本明細書に記載のポリヌクレオチド内に存在してもよく、ポリヌクレオチドは、必須ではないが、他の分子および／またはサポート物質に連結されてもよい。ゆえにコード配列自身の長さに関わらず、ポリヌクレオチド、または発現可能なポリヌクレオチドは、例えば発現制御配列などの他の配列と組み合わされてもよい。
【０１０７】
「発現制御配列」には、例えばプロモーター、リーダー、エンハンサー、イントロン、ＲＮＡの認識モチーフ、またはＤＮＡ結合タンパク質、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、分泌シグナル、細胞内局在シグナルなどの核酸、または対応するアミノ酸の制御性配列が含まれ、それらは宿主細胞中のコード配列の転写もしくは翻訳、または細胞内もしくは細胞の位置に影響を与える能力を有する。発現制御配列の例は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載される。
【０１０８】
「プロモーター」は、細胞中でＲＮＡポリメラーゼが結合し、下流（３’方向の）コード配列の転写を開始させる能力を有するＤＮＡ制御領域である。本明細書において使用される場合、プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位に結合され、上流（５’方向）に伸長し、バックグラウンドを超えて検出可能なレベルの転写を開始するのに必要な塩基または要素の最小数を含む。転写開始部位（ヌクレアーゼＳ１を用いたマッピングにより簡便に規定される）は、プロモーター配列内、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合に寄与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）内に存在し得る。真核細胞のプロモーターは多くの場合、「ＴＡＴＡ」ボックスと「ＣＡＴ」ボックスを含有するが、常にではない。原核細胞のプロモーターは、−１０および−３５コンセンサス配列に加えて、Ｓｈｉｎｅ−  Ｄａｌｇａｒｎｏ配列を含有する。
【０１０９】
様々な別個の源に由来する、構造プロモーター、誘導性プロモーター、および抑制性プロモーターを含む、多くのプロモーターが、当分野に公知である。代表的な源としては、例えばウイルス、哺乳動物、昆虫、植物、酵母および細菌細胞が挙げられる。これら源に由来する適切なプロモーターが容易に利用可能であり、またはオンラインで公的に利用可能な配列に基づき、または例えばＡＴＣＣなどのデポジトリ、ならびに他の市販または個人の源などから合成で作製することができる。プロモーターは、単方向性（すなわち１つの方向で転写を開始する）または二方向性（すなわち３’または５’の方向のいずれかで転写を開始する）であり得る。プロモーターの非限定的な例としては例えば、Ｔ７細菌発現システム、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌発現システム、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターとしては、Ｔｅｔシステム（米国特許第５，４６４，７５８号および第５，８１４，６１８号）、Ｅｃｄｙｓｏｎｅ誘導性システム（Ｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６）９３（８）：３３４６−３３５１）；Ｔ−ＲＥｘＴＭシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カリフォルニア州カールスバッド）、ＬａｃＳｗｉｔｃｈ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社、カリフォルニア州サンディエゴ）、およびＣｒｅ−ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼシステム（Ｉｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（１９９９）２７（２２）：４３２４−４３２７；Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（２０００）２８（２３）：ｅ９９；米国特許第７，１１２，７１５号；およびＫｒａｍｅｒ  ＆  Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）３０８：１２３−１４４）、または所望の細胞での発現に適した当分野に公知の任意のプロモーターが挙げられる。
【０１１０】
「発現可能なポリヌクレオチド」には、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、または少なくとも１つのコード配列と、任意で少なくとも１つの発現制御配列、例えば転写制御因子および／または翻訳制御因子を含む他のポリヌクレオチドが含まれ、それらは例えば対象の細胞などの細胞内に導入されたときにコードされたポリペプチド（例えば、ＨＲＳポリペプチド）を発現することができる。
【０１１１】
一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、改変ＲＮＡまたは改変ｍＲＮＡポリヌクレオチド、例えば非天然型ＲＮＡアナログである。ある実施形態では、改変ＲＮＡまたはｍＲＮＡポリペプチドは、１つ以上の改変または非天然の塩基、例えばアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）および／またはウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を含む。一部の実施形態では、改変ｍＲＮＡは、１つ以上の改変ヌクレオチド間結合または非天然ヌクレオチド間結合を含む。コードされた治療用ポリペプチドを送達するための発現可能なＲＮＡポリヌクレオチドは、例えば、Ｋｏｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：１５４−７，２０１１；ならびに米国特許出願２０１５／０１１１２４８；２０１４／０２４３３９９；２０１４／０１４７４５４；および２０１３／０２４５１０４に記載されており、当該文献はその全体で参照により組み込まれる。
【０１１２】
一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドを送達するために利用することができる様々なウイルスベクターとして、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、およびレトロウイルスベクターが挙げられる。一部の例では、レトロウイルスベクターは、齧歯類または鳥類のレトロウイルスの誘導体であるか、またはレンチウイルスベクターである。単一の外来性遺伝子が挿入され得るレトロウイルスベクターの例としては限定されないが、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＨＩＶ、およびルイス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）が挙げられる。多くの追加のレトロウイルスベクターが、複数の遺伝子を組み込むことができる。これらベクターのすべてが、選択マーカー用の遺伝子を移送または組み込むことができ、それにより形質導入細胞を特定および生成することができる。対象のポリペプチド配列を、特定の標的細胞上の受容体に対するリガンドをコードする別の遺伝子とともにウイルスベクターに挿入することにより、ベクターは標的特異性となり得る。レトロウイルスベクターは、例えばタンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することにより、標的特異的となることができる。例示的な標的化は、レトロウイルスベクターを標的とする抗体を使用することにより実現され得る。当業者であれば、レトロウイルスゲノム内に挿入され、レトロウイルスベクターの標的特異的送達が可能な特定のポリヌクレオチド配列を知っており、または過度の実験を行うことなく容易に確認することができる。
【０１１３】
特定の例では、本明細書に記載される発現可能なポリヌクレオチドは、細胞内、潜在的には例えば核などの特定の細胞区画内に局在するよう操作され、または細胞から分泌されるように操作され、または細胞の細胞膜に転移するように操作される。例示的実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、核局在するように操作される。
【０１１４】
さらに本明細書に記載されるポリペプチドの生物学的に活性な「バリアント」および「断片」、ならびにそれをコードするポリヌクレオチドが含まれる。「バリアント」は、参照ポリペプチドまたは参照ポリヌクレオチドと比較して、１つまたは複数の置換、付加、欠失、および／または挿入を含有する（例えば表および配列表を参照のこと）。バリアントのポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、本明細書に記載される参照配列に対し、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性、または配列類似性、または配列相同性を有するアミノ酸またはポリヌクレオチドの配列を含み、当該参照配列の活性を実質的に保持している。さらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０，７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０個かそれ以上のアミノ酸またはヌクレオチドの付加、欠失、挿入または置換からなる、またはそれらにより参照配列とは異なる配列も含まれ、当該配列は実質的に参照配列の活性を保持している。特定の実施形態では、付加または欠失は、Ｃ末端および／もしくはＮ末端の付加ならびに／または欠失を含む。
【０１１５】
「配列同一性」、または例えば「〜に対して５０％同一の配列」を含む、という用語は、本明細書において使用される場合、比較ウィンドウ上で配列が、ヌクレオチドごとに同一である、またはアミノ酸ごとに同一である程度を指す。ゆえに「配列同一性の百分率」は、比較ウィンドウ上の２つの最適アライメント配列を比較する工程、同一核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一アミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が、両方の配列中に存在する位置の数を決定して、合致位置数を算出する工程、合致位置数を、比較ウィンドウ中の総位置数（すなわちウィンドウサイズ）で割る工程、および結果に１００を掛けて、配列同一性の百分率を算出する工程、により計算されてもよい。比較ウィンドウの整列のための配列の最適アライメントは、アルゴリズム（米国ウィスコンシン州マジソン、サイエンスドライブ５７５、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ＧｒｏｕｐのＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）をコンピューター実装することで実施されてもよく、または選択される様々な方法のいずれかにより行われる検査と最適アライメント（すなわち比較ウィンドウ上で最も高い相同性百分率を生じさせるアライメント）により実施されてもよい。参照も、例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９，１９９７により開示されるように、ＢＬＡＳＴファミリープログラムに対して作製されてもよい。
【０１１６】
「統計的に有意」とは、その結果が偶然に発生する可能性は低いことを意味する。統計的有意性は、当分野に公知の任意の方法により決定されることができる。普遍的に使用される有意性の測定尺度としては、ｐ値が挙げられる。ｐ値は、ヌル仮説が真であった場合に観察された事象が発生する頻度または確率である。得られたｐ値が、有意性レベルよりも小さい場合、ヌル仮説は棄却される。シンプルなケースでは、有意性レベルは、０．０５以下のｐ値で規定される。
【０１１７】
「可溶度」という用語は、本明細書に提供される剤が、液性溶媒中に溶解され、均一な溶液を形成する性質を指す。可溶度は通常、溶媒の単位体積当たりの溶質の質量（溶媒１ｋｇあたりの溶質ｇ、ｄＬ（１００ｍＬ）あたりのｇ、ｍｇ／ｍｌなど）、モル濃度、モル濃度、モル分率、または他の類似した濃度に関する記載のいずれかにより、濃度として表される。溶媒体積当たりで溶解され得る、溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨおよび溶媒の性質をはじめとする特定の条件下での当該溶媒における当該溶質の可溶度である。特定の実施形態では、可溶度は、生理学的なｐＨ、または例えばｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、またはｐＨ７．４などの他のｐＨで測定される。特定の実施形態では、可溶度は、水、または例えばＰＢＳまたはＮａＣｌ（ＮａＰを含む、または含まない）などの生理学的緩衝液中で測定される。個別の実施形態では、可溶度は、比較的低いｐＨ（例えばｐＨ６．０）、および比較的高い塩濃度（例えば５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１０ｍＭ  ＮａＰ）で測定される。特定の実施形態では、可溶度は、例えば血液または血清などの生物学的液体（溶媒）中で測定される。特定の実施形態では、温度は、およそ室温（例えば約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）またはおよそ体温（３７℃）であってもよい。特定の実施形態では、剤は、室温または３７℃で少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｍｌの可溶度を有する。
【０１１８】
「対象」または「その必要のある対象」には、例えばヒト対象などの哺乳動物対象が含まれる。
【０１１９】
「実質的に」または「本質的に」とは、全体的に、または完全に、いくつかの所与の量の例えば９５％、またはそれ以上に近いことを意味する。
【０１２０】
「治療反応」とは、投与の治療応答に基づく、症状の改善（持続性に関わらず）を指す。
【０１２１】
本明細書において使用される場合、「標的」という用語は、ＲＮＡ領域を指し、具体的には本明細書に記載される標的遺伝子のＲＮＡ領域を指す。標的には、コード配列および非コード配列、５’上流配列、３’下流配列、ならびに本明細書に記載される他のＲＮＡ配列が含まれ得る。
【０１２２】
「標的配列」という用語は、標的ＲＮＡの一部を指し、アンチセンスまたはＲＮＡｉ剤はそれを指向する。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、相補配列のワトソンクリック塩基対形成によりハイブリダイズする配列、またはＲＮＡｉ剤のセンス鎖に対応する配列を指す。
【０１２３】
本明細書において使用される場合、「定量すること」、「定量」という用語、または他の関連する文言は、核酸、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の単位体積での量、質量または濃度を決定することを指す。
【０１２４】
本明細書において使用される場合、「治療有効量」、「治療投与量」、「予防有効量」、または「診断有効量」という用語は、投与の後に所望の生物反応を惹起させるために必要とされる剤の量である。同様に、「アンチセンス療法」または「ＲＮＡｉ療法」という用語は、患者の血漿または他の組織分画（例えば、筋組織）において、最小有効治療レベルを超える、アンチセンスまたはＲＮＡｉ剤の平均定常濃度を維持する治療法を含む。
【０１２５】
本明細書において使用される場合、対象（例えばヒトなどの哺乳動物）または細胞の「治療」は、当該対象または細胞の本来の経過を変える試みにおいて使用される任意のタイプの介入である。治療としては限定されないが、医薬組成物の投与が挙げられ、予防的に実施されてもよく、または病理学的事象の始まりの後に実施されてもよく、または病原因子との接触の後に実施されてもよい。さらに「予防的」治療も含まれる。予防的治療は、治療される疾患もしくは状態の進行速度の低下、疾患もしくは状態の発生の遅延、またはその発病の重大度の低下を目的としてもよい。「治療」または「予防」は必ずしも疾患もしくは状態、またはその関連症状の完全な排除、治癒または予防を示すものではない。
【０１２６】
「野生型」という用語は、集団中で最も頻繁に観察され、ゆえに任意で遺伝子の「通常」または「野生型」が意図される遺伝子または遺伝子産物（例えばポリペプチド）を指す。
【０１２７】
ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）のポリペプチドおよびポリヌクレオチド
特定の実施形態は、結合体（例えば、融合タンパク質、Ｆｃ結合体、Ｆｃ融合タンパク質、ＣＯＭＰ結合体、ＣＯＭＰ融合タンパク質）、バリアントおよびその断片を含む、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼポリペプチド（「ＨＲＳ」または「ＨｉｓＲＳ」ポリペプチド）、およびＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチドを含む。ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼはクラスＩＩ  ｔＲＮＡシンテターゼファミリーに属し、高度に保存された配列モチーフを３つ有している。クラスＩとクラスＩＩのｔＲＮＡシンテターゼは、アミノ酸がその関連ｔＲＮＡに以下の２工程の反応で特異的に結合するのに関与していると広く認識されている：アミノ酸（ＡＡ）は最初にＡＴＰにより活性化され、ＡＡ−ＡＭＰを形成し、その後、ｔＲＮＡのアクセプター末端に移送される。全長ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼは典型的には細胞質ホモ二量体か、またはスプライシングされたミトコンドリア型のいずれかとして存在する。
【０１２８】
真核細胞のヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼの特定の生物学的断片またはスプライス型アイソフォーム、または一部の状況では完全な全長シンテターゼは、特定の治療関連性のある細胞シグナル伝達経路を調節し、１つ以上のニューロピリンポリペプチドに結合して（例えば、表Ｎ１を参照のこと）、および／または抗炎症性の特性を有している。これらの活性は、タンパク質合成における古典的なｔＲＮＡシンテターゼの役割とは異なり、本明細書において、「非正準的活性」と呼称される。例えば、本明細書において提示される場合、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのＮ末端領域などのＨＲＳポリペプチド（例えば、ＨＲＳ１−４８、ＨＲＳ１−６０）は特に、ニューロピリンポリペプチドに結合する能力を有しており、それに伴い、炎症性細胞または遊走細胞の移動、活性化および／または分化を調節して、ニューロピリン関連疾患を治療する。さらに全長ＨＲＳポリペプチド配列と比較して、特定の断片、スプライスバリアント、変異および／または欠失（例えば、ＨＲＳ１−６０）は、活性増加に寄与し、および／または薬理学的特性の改善に寄与する。特定の例示的ＨＲＳポリペプチドの配列を以下の表Ｈ１に提示する。
【表Ｈ１−１】
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【表Ｈ１−２】
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【表Ｈ１−３】
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【表Ｈ１−４】
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【表Ｈ１−５】
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【表Ｈ１−６】
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【表Ｈ１−７】
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【表Ｈ１−８】
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【表Ｈ１−９】
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【表Ｈ１−１０】
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【表Ｈ１−１１】
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【表Ｈ１−１２】
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【０１２９】
したがって特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１の哺乳動物のＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１６および１７２）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ１のヒトのＨＲＳアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１０８および１７２）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１〜１１６および１７２）、例えば、表Ｈ１のヒトＨＲＳ配列（配列番号１〜１０８および１７２）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１３０】
本明細書に記載されるように、ＨＲＳポリペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、切断、付加および挿入を含む、様々な方法で改変されてもよい。そうした操作の方法は、当分野において一般的に公知である。例えば、ＨＲＳ参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡ中の突然変異により作製され得る。突然変異誘導およびヌクレオチド配列改変の方法は、当分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８２：４８８−４９２）、Ｋｕｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１５４：３６７−３８２）、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．、（“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ”，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆ．，１９８７）、およびそれらにおいて引用される参照文献を参照のこと。対象タンパク質の生物活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルに見出され得る。
【０１３１】
生物学的に活性な短縮および／またはバリアントのＨＲＳペプチドは、参照アミノＨＲＳ酸残基と比較し、その配列に沿った様々な位置で保存的アミノ酸置換を含んでもよい。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野に規定されており、一般的に以下のように下位分類されることができる。
【０１３２】
酸性：この残基は生理学的なｐＨでＨイオンを失うために負電荷を有している。この残基は水溶液に引き付けられ、そのため当該ペプチドが生理学的ｐＨで水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造の表面側の位置を求める。酸性側鎖を有するアミノ酸としては、グルタミン酸およびアスパラギン酸が挙げられる。
【０１３３】
塩基性：この残基は生理学的なｐＨで、またはその１または２ｐＨ単位内（例えばヒスチジン）で、Ｈイオンと会合するために正電荷を有している。この残基は水溶液に引き付けられ、そのため当該ペプチドが生理学的ｐＨで水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造の表面側の位置を求める。塩基性側鎖を有するアミノ酸としては、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが挙げられる。
【０１３４】
荷電：この残基は生理学的ｐＨで荷電しており、そのため、酸性または塩基性の側鎖を有するアミノ酸が挙げられる（すなわちグルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リシンおよびヒスチジン）。
【０１３５】
疎水性：この残基は生理学的なｐＨで荷電していない。この残基は水溶液にはじかれるため、当該ペプチドが水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造の内部側の位置を求める。疎水性側鎖を有するアミノ酸としては、チロシン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、およびトリプトファンが挙げられる。
【０１３６】
中性／極性：この残基は生理学的なｐＨで荷電していない。しかしこの残基は水溶液にそれほどはじかれないため、当該ペプチドが水性媒体中にあるとき、自身が含有されるペプチドの立体構造の内部側の位置をおそらく求めるであろう。中性／極性の側鎖を有するアミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、システイン、ヒスチジン、セリンおよびスレオニンが挙げられる。
【０１３７】
本開示はさらに、特定のアミノ酸を「小さい」として特徴付けるものである。その理由は、その側鎖が充分には大きくなく、たとえ極性基が欠落していたとしても、疎水性を与えることができないためである。プロリンの例外を除き、「小さな」アミノ酸は、少なくとも１個の極性基が側鎖上にあるときには４個以下の炭素、極性基が側鎖上にないときには３個以下の炭素を有するアミノ酸である。小さな側鎖を有するアミノ酸としては、グリシン、セリン、アラニンおよびスレオニンが挙げられる。遺伝子にコードされる二級アミノ酸のプロリンは、ペプチド鎖の二次構造に与える効果が知られており、特殊なケースとされる。プロリンの構造は、その側鎖がα−アミノ基の窒素ならびにα−炭素に結合しているという点で、他のすべての天然アミノ酸とは異なっている。いくつかのアミノ酸の類似性マトリクスが当分野に知られている（例えば、タンパク質の進化的変化のモデルである、Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８に開示されるＰＡＭ１２０マトリクスおよびＰＡＭ２５０マトリクスを参照のこと）。しかし、Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ，（ｅｄ．），Ａｔｌａｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．５，ｐｐ．３４５−３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣにある距離関連性を決定するためのマトリクス、およびＧｏｎｎｅｔら（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１４４３０−１４４５，１９９２）は、プロリンを、グリシン、セリン、アラニンおよびスレオニンと同じグループに含めている。したがってプロリンは、「小さい」アミノ酸として分類される。
【０１３８】
極性または非極性として分類するために必要な引力または斥力の程度は恣意的なものであり、それゆえ、本発明により特異的に予期されるアミノ酸は、いずれかとして分類されている。特異的に命名されなかった大部分のアミノ酸は、公知の性質に基づき分類され得る。
【０１３９】
アミノ酸残基は、環状または非環状、および芳香族または非芳香族として、残基の側鎖置換基に関する自己説明的な分類として、小さいまたは大きいとしてさらに下位分類されることができる。残基は、追加の極性置換基が存在するのであればカルボキシル炭素を含み総数で４個以下の炭素原子を含有する場合、存在しないのであれば３個以下の炭素原子を含有する場合に小さいとみなされる。もちろん小さな残基は常に非芳香族である。その構造的性質に応じて、アミノ酸残基は、２つ以上の分類に分けられ得る。天然タンパク質のアミノ酸については、本スキームによる下位分類を表Ａに示す。
【表Ａ】
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【０１４０】
保存的アミノ酸置換も側鎖に基づくグループ化を含む。例えば脂肪族側鎖を有するアミノ酸グループは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンである。脂肪属−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸グループは、セリンおよびスレオニンである。アミド含有側鎖を有するアミノ酸グループは、アスパラギンおよびグルタミンである。芳香族側鎖を有するアミノ酸グループは、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンである。塩基性側鎖を有するアミノ酸グループは、リシン、アルギニンおよびヒスチジンである。そして硫黄含有側鎖を有するアミノ酸グループは、システインおよびメチオニンである。例えば、ロイシンとイソロイシンまたはバリンの置換、アスパラギン酸とグルタミン酸の置換、セリンとスレオニンの置換、またはあるアミノ酸と構造的に関連したアミノ酸の類似した置換は得られるバリアントポリペプチドの性質に大きな影響は与えず、これを除外することは妥当である。アミノ酸変化が、機能性の短縮化ＨＲＳポリペプチドおよび／またはバリアントＨＲＳポリペプチドを生じさせるか否かは、本明細書に記載されるように、その非基準的な活性を分析することで容易に決定することができる。保存的置換は、例示的置換の見出しで、表Ｂに示す。本発明範囲内にあるアミノ酸置換は、概して、（ａ）置換基領域中のペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位の分子の電荷または疎水性、（ｃ）側鎖の体積、または（ｄ）生物学的機能、の維持に対する効果において、大きな違いが無い置換基を選択することにより実現される。置換基が導入された後、バリアントは生物活性に対してスクリーニングされる。
【表Ｂ−１】
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【表Ｂ−２】
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【０１４１】
あるいは保存的置換を行うための類似アミノ酸は、その側鎖の同一性に基づき３つのカテゴリーにグループ化されることができる。Ｚｕｂａｙ，Ｇ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｍ．Ｃ．Ｂｒｏｗｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９３）に記載されるように、第一のグループは、グルタミン酸、アスパラギン酸、アルギニン、リシン、ヒスチジンを含み、それらはすべて荷電側鎖を有している。第二のグループは、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、グルタミン、アスパラギンを含む。第三のグループは、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンを含む。
【０１４２】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のシステインの挿入または置換を有し、例えば、１つ以上の非システイン残基が、（例えば安定性を変えるために、Ｆｃ断片のチオール系結合を促進するために、ＰＥＧまたは他の分子のチオール系付加を促進するために）システイン残基と置換される。一部の実施形態では、１つ以上のシステイン置換が、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端近傍および／またはＣ末端近傍にあり、またはＨＲＳポリペプチドの他の表面露出領域にある。ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個のアミノ酸以内の１つ以上の残基がシステイン残基と置換される特定の実施形態が含まれる。一部の実施形態では、システイン残基は、Ｎ末端またはＣ末端の融合タンパク質の生成を介してＨＲＳポリペプチドに付加されてもよい。そうした融合タンパク質は、任意の長さのタンパク質であってもよく、しかし典型的には、約１〜５、または約５〜１０、約１０〜２０、または約２０〜３０アミノ酸の長さである。
【０１４３】
システイン改変タンパク質の具体的な例を表Ｈ２に示している。当該表は、ＨＲＳポリペプチドのＨＲＳ（１−６０）に基づいている。この方法を表Ｈ１のＨＲＳポリペプチド、および本明細書に記載される他のＨＲＳポリペプチドにも適用することができる。
【表Ｈ２−１】
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【表Ｈ２−２】
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【０１４４】
したがって特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ２のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１７〜１１９）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ２のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１７〜１１９）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１４５】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、内因性または天然のシステイン残基が代替的アミノ酸に変異する、または欠失する変異を有する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドへのシステイン残基の挿入または置換は、他の表面に露出した反応性システイン残基の排除と組み合わされる。したがって一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５、Ｃｙｓ５０７、および／またはＣｙｓ５０９（配列番号１による規定）のうちの任意の１つ以上で１つ以上の置換および／または欠失を含み、例えばそれらの組み合わせを含む天然システイン残基を除去する。
【０１４６】
特定の実施形態は、Ｃｙｓ８３、Ｃｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ１９６、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ３７９、Ｃｙｓ４５５の任意の１つ以上の変異または欠失、またはＣ末端の３アミノ酸（Δ５０７−５０９）を欠失させることによるＣｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９の欠失を有する表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドを含む。これらの位置での変異の例としては例えば、システインからセリン、アラニン、ロイシン、バリンまたはグリシンへの変異が挙げられる。ある実施形態では、特定のシステイン置換に対するアミノ酸残基は、他の種または生物体に由来するＨＲＳオルソログに存在する天然型置換から選択され得る。このタイプの置換の例を、表Ｈ３に提示する。
【表Ｈ３−１】
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【表Ｈ３−２】
2021531313.tif 000022
【０１４７】
一部の実施形態では、突然変異誘導に選択される天然システインは、その表面露出に基づいて選択される。したがって１つの態様では、置換に選択されるシステイン残基は、Ｃｙｓ２２４、Ｃｙｓ２３５、Ｃｙｓ５０７およびＣｙｓ５０９から選択される。一部の実施形態では、配列番号１の最後の３個（Ｃ末端）の残基が欠失され、５０７−５０９残基が欠失される。一部の実施形態では、システインは、例えばＣｙｓ１７４とＣｙｓ１９１などの分子内システイン対を除外するための変異または欠失を目的として選択される。
【０１４８】
表面露出システイン残基を減少させるためのシステインの変異／置換の具体的な例（太字の下線で示される）としては、以下の表Ｈ４に列記されるものが挙げられる。
【表Ｈ４−１】
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【表Ｈ４−２】
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【０１４９】
したがって特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、表Ｈ４のアミノ酸配列（配列番号１２０〜１２６）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ４のアミノ酸配列（例えば、配列番号１２０〜１２６）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１５０】
一部の実施形態では、そうしたシステイン置換変異を改変して、既定の表面露出位置で新たな表面露出システイン残基を組み込む、挿入する、または別手段により導入する。この場合、導入された残基は、ＨＲＳポリペプチドの非正準活性にほとんど干渉しない。具体的な例としては例えば、上述のシステイン減少ＨＲＳポリペプチドのいずれかのＮ末端またはＣ末端に、追加のシステイン残基を挿入すること（または再挿入して戻すこと）が挙げられる。一部の実施形態では、そうしたＮ末端またはＣ末端の表面露出システインの挿入には、全長ヒトＨＲＳの最後の１つ、最後の２つ、または最後の３つの天然Ｃ末端アミノ酸を、ＨＲＳポリペプチドのシステイン減少バリアントに再挿入すること、例えば、配列ＣＩＣ（Ｃｙｓ  Ｉｌｅ  Ｃｙｓ）のすべて、または一部を再挿入することが含まれる。システイン減少変異の例としては例えば、表Ｈ１のＨＲＳポリペプチドのいずれかのＣｙｓ１７４、Ｃｙｓ１９１、Ｃｙｓ２２４、およびＣｙｓ２３５の残基での変異（または欠失）の任意の組み合わせ、またはＣｙｓ５０７とＣｙｓ５０９の欠失または置換が挙げられる（全長ヒト細胞質ＨＲＳ（配列番号１）の番号付けに基づく）。
【０１５１】
例えばＦｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的な結合または付加の一部のタイプに関し、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のグルタミン置換を有してもよく、この場合、１つ以上の天然（非グルタミン）残基がグルタミンで置換されて、例えばグルタミンのアミド基への分子のトランスグルタミナーゼ触媒性付加が促進される。一部の実施形態では、グルタミン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端近傍および／またはＣ末端近傍に導入される。ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個のアミノ酸以内の１つ以上の残基がグルタミン残基と置換される特定の実施形態が含まれる。これらＨＲＳポリペプチドおよび関連ＨＲＳポリペプチドも置換（例えば、保存的置換）を含んでもよく、それにより、望ましい場合には任意の天然グルタミン残基が除去されて、部位特異的な結合または付加の程度が制御される。
【０１５２】
例えばＦｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子への部位特異的な結合または付加の特定のタイプに関し、ＨＲＳポリペプチドは、１つ以上のリシン置換を有してもよく、この場合、１つ以上の天然（非リシン）残基がリシンで置換されて、例えばリシンのアミノ基への分子のアルキル化ベースの付加が促進される。典型的には、これらの方法によってＮ末端残基への分子の付加が生じる。一部の実施形態では、リシン置換は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端近傍および／またはＣ末端近傍である。ＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５個のアミノ酸以内の１つ以上の残基がリシン残基と置換される特定の実施形態が含まれる。これらＨＲＳポリペプチドおよび関連ＨＲＳポリペプチドも置換（例えば、保存的置換）を含んでもよく、それにより、望ましい場合には任意の天然リシン残基が除去されて、部位特異的な結合または付加の程度が制御される。
【０１５３】
ＨＲＳポリペプチドの１つ以上の近接性可溶性表面アミノ酸を置換することにより、ＨＲＳポリペプチドへの部位特異的な結合が実施されてもよい。例えば、好適な近接性可溶性アミノ酸は、公表されている例示的ＨＲＳポリペプチドの結晶構造（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０：１４７０−７，２０１２；および米国特許出願６１／６７４，６３９を参照）を使用して、ＳＰＩＤＤＥＲサーバー（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｐｉｄｅｒ．ｃｃｈｍｃ．ｏｒｇ／）を使用した溶媒近接性予測に基づき決定されてもよい。この分析に基づくと、表面上のいくつかのアミノ酸が潜在的に、結合または付加に適した官能基を導入するための変異部位として使用され得る。結晶構造に基づくアミノ酸の表面近接性スコアを計算することもでき、この場合においてスコアが高ければ近接性にも優れている。特定の実施形態では、高スコア（例えば、＞４０）が好ましい。一部の実施形態によると、４０を超える表面近接性スコアを有するアミノ酸の位置を使用して、システイン、リシン、グルタミンまたは他の非天然アミノ酸を導入してもよい。
【０１５４】
特定の実施形態では、溶媒近接性表面アミノ酸は、アラニン、グリシンおよびセリンからなる群から選択され、限定されないが、システイン、グルタミンまたはリシンを含む天然アミノ酸、または部位特異的な結合もしくは付加に最適化されている非天然アミノ酸と置換されてもよい。
【０１５５】
特定の実施形態は、例えばＦｃ領域またはＰＥＧまたは他の異種分子などの異種分子に付加された官能基と共有結合を形成する官能基を含む非天然アミノ酸を置換することにより、任意のアミノ酸の位置でＨＲＳポリペプチドに部位特異的に結合または付加することを含む。非天然アミノ酸は、例えば、本明細書に記載されるＨＲＳポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸以内の１つ以上の残基で、Ｎ末端および／もしくはＣ末端で、または溶媒近接性表面アミノ酸残基で、挿入または置換されてもよい。
【０１５６】
特定の実施形態では、非天然アミノ酸としては限定されないが、セレノシステインおよび以下の２０個の遺伝子コードされたアルファアミノ酸以外の任意のアミノ酸、改変アミノ酸またはアミノ酸アナログが挙げられる：アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン。アルファアミノ酸の包括的構造は、以下の式に示される：
【化２】
2021531313.tif 000025
【０１５７】
非天然アミノ酸は多くの場合、前述の式を有する任意の構造であり、式中、Ｒ基は、２０個の天然アミノ酸で使用されるもの以外の任意の置換基である。例えば、２０個の天然アミノ酸の構造に関しては、ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｔｅｘｔｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｂｙ  Ｌ．Ｓｔｒｙｅｒ，３ｒｄ  ｅｄ．１９８８，Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。本明細書に開示される非天然アミノ酸は、上述の２０個のアルファアミノ酸以外の天然化合物であり得ることに注意されたい。本明細書に開示される非天然アミノ酸は多くの場合、側鎖のみが天然アミノ酸とは異なっているため、非天然アミノ酸は、天然のタンパク質で形成される様式と同じ様式で、例えば天然または非天然の他のアミノ酸とアミド結合を形成する。しかし非天然アミノ酸は、天然アミノ酸とは識別される側鎖基を有している。例えば、前述の式中のＲは、任意で、アルキル、アリール、ハロゲン化アリール、ハロゲン化ビニル、ハロゲン化アルキル、アセチル、ケトン、アジリジン、ニトリル、ニトロ、ハロゲン化物、アシル、ケト、アジド、ヒドロキシル、ヒドラジン、シアノ、ハロ、ヒドラジド、アルケニル、アルキニル、エーテル、チオエーテル、エポキシド、スルホン、ボロン酸、ボロン酸エステル、ボラン、フェニルボロン酸、チオール、セレノ、スルホニル、ホウ酸塩、ボロン酸塩、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式、ピリジル、ナフチル、ベンゾフェノン、例えばシクロオクチンなどの拘束（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）環、チオエステル、エノン、イミン、アルデヒド、エステル、チオ酸、ヒドロキシルアミン、アミノ、カルボン酸、アルファケトカルボン酸、アルファまたはベータ不飽和酸およびアミド、グリオキシルアミド、またはオルガノシラン基など、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１５８】
非天然アミノ酸の具体的な例としては限定されないが、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、β−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｌ−セリン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧａｌＮＡｃ−α−スレオニン、α−ＧａｌＮＡｃ−Ｌ−スレオニン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、以下に列記されるもの、または本明細書に別段に記載されるものなどが挙げられる。
【０１５９】
したがって、望ましい分子（例えば、Ｆｃ領域、ＰＥＧ）の任意の好ましい官能基と共有結合を形成する官能基を含む非天然アミノ酸を選択してもよい。非天然アミノ酸を選択したら、ベンダーから購入、または化学的に合成することができる。任意の数の非天然アミノ酸を標的分子に組み込んでもよく、および任意の数の非天然アミノ酸を、付加される所望の分子の数に従い変化させてもよい。分子は、非天然アミノ酸のすべて、または一部のみに付加させてもよい。さらに同じ、または異なる非天然アミノ酸を、所望の結果に応じてＨＲＳポリペプチドに組み込んでもよい。特定の実施形態では、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の非天然アミノ酸を、ＨＲＳポリペプチドに組み込み、そのすべて、またはいずれかを所望の官能基を含む分子に結合させてもよい。
【０１６０】
特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変（例えば増加）させるために利用され、またはタンパク質のインビボまたはインビトロでの半減期を変えるために利用され得る。さらに非天然アミノ酸を使用して、本明細書に記載されるように、ＨＲＳポリペプチドの（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進することができる。例えば、特定の非天然アミノ酸は、Ｆｃ領域またはＰＥＧなどのポリマーを所与のタンパク質に選択的に付加することを可能にし、その結果、その薬物動態の特性が改善される。
【０１６１】
アミノ酸のアナログまたは模倣体の具体的な例は、例えば、Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄｓ．Ｇｒｏｓｓ  ａｎｄ  Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ，Ｖｏｌ．５，ｐ．３４１，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８３）に記載されているものが見いだされ得る。当該文献はその全体で参照により本明細書に組み込まれる。他の例としては、パーアルキル化アミノ酸、特にパーメチル化アミノ酸が挙げられる。例えば、Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｄｓ．Ｗｉｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｚａｒｎｉｋ，Ｃｈ．１１，ｐ．２３５，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９７）を参照のこと。当該書誌の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。さらに他の例としては、糖の環、ステロイド、ベンゾジアゼピンまたは炭化水素環により、そのアミド部分（それに伴い得られるペプチドのアミド主鎖）が置換されているアミノ酸が挙げられる。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｅｄ．Ｍａｎｆｒｅｄ  Ｅ．Ｗｏｌｆｆ，Ｃｈ．１５，ｐｐ．６１９−６２０，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９５）を参照のこと。当該書誌の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体およびタンパク質の合成方法も当分野に公知である（例えば、米国特許第５，４２０，１０９号；Ｍ．Ｂｏｄａｎｚｓｋｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１ｓｔ  ｅｄ．＆  ２ｄ  ｒｅｖ．ｅｄ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４  ＆  １９９３）のＣｈａｐｔｅｒ  ７；Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（２ｄ  ｅｄ．），Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）を参照のこと。それら各文献は参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、ＨＲＳポリペプチドは、天然アミノ酸および非天然アミノ酸、ならびにアミノ酸のアナログおよび模倣体から構成され得る。
【０１６２】
特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、インビボで抗炎症活性を調節する能力を有する、またはニューロピリンポリペプチド結合活性を有する全長ＨＲＳポリペプチドの最小活性断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、そうした最小活性断片は、ＷＨＥＰドメイン（例えば、配列番号１の約アミノ酸１〜４３）またはその活性バリアントもしくは活性断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
【０１６３】
特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、その間の全ての整数範囲を含む、約、少なくとも約、および／または最大で約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８または５０９アミノ酸の長さであり、表Ｈ１、表Ｈ２または表Ｈ４のアミノ酸配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
【０１６４】
特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、例えば抗炎症活性またはニューロピリンポリペプチドへの結合などの少なくとも１つの非正準活性を保有し、それらの例を本明細書に記載する。抗炎症活性を決定する分析、またはニューロピリンポリペプチド結合もしくは受容体結合を決定する分析は、日常的なインビトロ細胞系のサイトカイン放出測定および動物実験を含み、当分野に確立されている（例えば、Ｗｉｔｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｓ  Ｅｘｐ．（６５）：ｅ４２０３．ｄｏｉ：１０．３７９１／４２０３，２０１２；Ｆｅｌｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．４７：５８５−９５，２０１２；Ｃｌｕｔｔｅｒｂｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．７４：７０４−１５，２０１１，Ｇｉｄｄｉｎｇｓ  ａｎｄ  Ｍａｉｔｒａ，Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．１５：１２０４−１０，２０１０；Ｗｉｊｎｈｏｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ  Ｊ．２５：１７７−８５，２００８；およびＦｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ．２４：２７６−９８，２００４を参照のこと）。そしてそれら分析は、抗炎症活性を分析し、最適化するために容易に使用することができる。例示的なインビボ実験系も、付随の実施例に記載される。
【０１６５】
ＨＲＳポリペプチドのいずれにおいても、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端酸（例えば、Ｎ末端のＭｅｔ）は、欠失され、異なるアミノ酸で置換され得ることを認識されたい。
【０１６６】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドと他（非ＨＡＲＳ）のタンパク質（例えば、異種のタンパク質またはポリペプチド）の融合タンパク質も含まれ、これら融合タンパク質は、ＨＲＳポリペプチドの生物活性、分泌、抗原性、標的化、生物学的有用期間、細胞膜もしくは脳血液関門に浸潤する能力、または薬物動態の特性を調節し得る。薬物動態特性を改善する融合タンパク質（ＰＫ改変物質）としては限定されないが、ヒトアルブミン（Ｏｓｂｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４５６（１−３）：１４９−１５８，（２００２））、抗体のＦｃドメイン、ポリＧｌｕ配列またはポリＡｓｐ配列、およびトランスフェリンが挙げられる。さらにアミノ酸のＰｒｏ、ＡｌａおよびＳｅｒから構成される立体配座的に不規則なポリペプチド配列との融合（ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ）、またはヒドロキシエチルデンプン（商標名ＨＥＳＹＬＡＴＩＯＮ（登録商標）で販売）との融合によって、ＨＲＳポリペプチドの流体力学的容積を増加させるためのシンプルな方法が提供される。この追加的な伸長によって、大きな無作為構造が導入され、その結果、得られる融合タンパク質のサイズが著しく増大する。この手段により、典型的には腎ろ過を介した小さなＨＲＳポリペプチドの急速なクリアランスが、数桁まで遅延される。さらにＩｇＧ融合タンパク質を使用することで、いくつかの融合タンパク質が血液脳関門を通過し得ることが示されている（Ｆｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１３５２：２０８−１３）。
【０１６７】
抗原性を調節する融合タンパク質の例、またはＨＲＳポリペプチドの他の特性を調節する融合タンパク質の例としては、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩタンパク質を含むＴ細胞結合リガンド、ｂ−２マイクログロブリン、ＬＦＡ−３部分、重鎖のＦｃ領域部分、ならびにそれらの結合体および誘導体への融合が挙げられる。そうした融合タンパク質の例は、ＥＰ  １  ９６４  ８５４；米国特許第５，４６８，４８１号；第５，１３０，２９７号；第５，６３５，３６３号；および第６，４５１，３１４号；ならびに米国特許出願２００９／０２８０１３５に記載されている。
【０１６８】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、他の詳細に特徴解析されている分泌タンパク質に由来する、合成または天然の分泌シグナル配列を含むことができる。一部の実施形態では、そうしたタンパク質は、タンパク質分解性の切断により処理されて、原位置でＨＲＳポリペプチドを形成させる。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、異種のタンパク質分解性切断部位を含み、それによって原位置発現、そして細胞内または細胞外の位置のいずれかでのＨＲＳポリペプチドの産生が可能となる。他の融合タンパク質としては、例えば、ＨＲＳポリペプチドとユビキチンを融合させて、新たなＮ末端アミノ酸を生じさせること、または分泌シグナルを使用して、細胞外培地への大量のＨＲＳポリペプチド分泌を介在すること、またはＮ末端エピトープタグもしくはＣ末端エピトープタグを使用して、精製または検出を改善すること、そして細胞浸潤ペプチドへの融合が挙げられる。
【０１６９】
特定の態様では、非天然アミノ酸の使用は、ＨＲＳポリペプチドの選択された非正準活性を改変（例えば増加）させるために利用され、またはタンパク質のインビボまたはインビトロでの半減期を変えるために利用され得る。さらに非天然アミノ酸を使用して、本明細書で別段に記載されるように、ＨＲＳタンパク質の（選択的）化学的改変（例えば、ペグ化）を促進することができる。例えば、特定の非天然アミノ酸は、ＰＥＧなどのポリマーを所与のタンパク質に選択的に付加することを可能にし、その結果、その薬物動態の特性が改善される。
【０１７０】
特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体を含み、当該結合体は、１つ以上のＨＲＳポリペプチドに共有結合された少なくとも１つのＦｃ領域を含む。ＨＲＳ−Ｆｃ結合体の例としては、融合タンパク質、および化学的に架橋されたタンパク質の様々な形態が挙げられる。様々なＦｃ領域配列がＨＲＳ−Ｆｃ結合体に採用されてもよく、任意の数の種に由来する野生型配列、ならびにそのバリアント、断片、ハイブリッドおよび化学改変型が含まれる。ＨＲＳ−Ｆｃポリペプチドはさらに（任意で）１つ以上のリンカーを含んでもよく、リンカーは典型的にはＦｃ領域をＨＲＳポリペプチドから分離させるものであり、本明細書に記載される、および当分野に公知のペプチドリンカーおよび化学リンカーが含まれる。これらＨＲＳ−Ｆｃ結合体のいずれかにおいて、ＨＲＳポリペプチドの天然のＮ末端アミノ酸もしくはＣ末端アミノ酸、またはＦｃドメイン中の天然のＮ−アミノ酸もしくはＣ−アミノ酸は、欠失され、および／または非天然アミノ酸と置換されて、発現および／またはクローニングを促進してもよく、または２つのタンパク質間のリンカー配列としての機能を果たしてもよいことを認識されたい。
【０１７１】
ＨＲＳ−Ｆｃ結合体ポリペプチドは、例えばＦｃ領域が付加されていない同一配列または類似配列の対応ＨＲＳポリペプチドなどの非結合ＨＲＳポリペプチドまたは非改変ＨＲＳポリペプチドと比較して様々な利点を提供し得る。解説を目的として、１つ以上のＦｃ領域の共通結合は、ＨＲＳポリペプチドの可溶度、半減期（例えば、血清中、選択組織中、例えば室温または冷凍の保存条件下の試験管中での半減期）、二量体化または多量体化の特性、生物活性を、例えばＦｃ領域関連エフェクター機能（例えば、古典的補体カスケードの活性化、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を介した免疫エフェクター細胞との相互作用、免疫グロブリンの区分化）、細胞取り込み、細胞内輸送、組織分布および／または生体利用効率を提供することにより、同一配列または類似配列を有する非改変ＨＲＳポリペプチドと比較して変える（例えば、増加させる、減少させる）ことができる。特定の態様では、Ｆｃ領域は、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、および／または抗体依存性細胞介在性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）に関連するエフェクター機能に寄与することができ、例えば腫瘍細胞や感染細胞などの特定の標的細胞の除去において重要な役割を果たしていると考えられている。
【０１７２】
特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質を採用する。「融合タンパク質」は、本明細書において別段に規定され、および当分野に公知であり、融合タンパク質の作製方法も同様である（例えば、Ｆｃ融合タンパク質に関連した概説および方法について、米国特許第５，１１６，９６４号；第５，４２８，１３０号；第５，４５５，１６５号；第５，５１４，５８２号；第６，４０６，６９７号；第６，２９１，２１２号；および第６，３００，０９９号を参照のこと）。ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質において、Ｆｃ領域をＨＲＳポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、またはその両方に融合させてもよい。一部の実施形態では、１つ以上のＦｃ領域が、例えば第一のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）と第二のＨＲＳ配列（例えば、ドメイン）の間にＦｃ領域を配置することにより、ＨＲＳ配列に関して内部で融合されてもよく、この場合において第一のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＮ末端に融合され、第二のＨＲＳ配列は、Ｆｃ領域のＣ末端に融合される。特定の実施形態では、第一および第二のＨＲＳ配列は、同一である。一部の実施形態では、第一および第二のＨＲＳ配列は、異なっている（例えば、ＨＲＳポリペプチドの異なる機能性ドメインを含む）。特定のＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質はさらに、追加の異種タンパク質配列、すなわち、非Ｆｃ領域配列と非ＨＲＳポリペプチド配列を含んでもよい。
【０１７３】
「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドへＦｃ領域がＮ末端付加またはＣ末端付加されていることを示し得るが、必ずではない。例えば特定の例では、「Ｆｃ−ＨＲＳ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＮ末端にＦｃ領域が融合していることを示し、「ＨＲＳ−Ｆｃ」という用語は、ＨＲＳポリペプチドのＣ末端にＦｃ領域が融合していることを示す。しかしいずれの用語も、Ｆｃ領域とＨＲＳポリペプチドの任意の融合タンパク質または結合体を指すために、より概略的に使用することができる。
【０１７４】
一部の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質は、単一のＦｃドメインに連結されたＨＲＳポリペプチドのタンデム反復コピーを含んでもよく、任意でそれらはリンカーペプチドにより分離される。例示的なタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質を、表Ｈ５に提示する。特定のタンデム反復ＨＲＳ−Ｆｃ結合体の調製と配列は、実施例に解説される。
【表Ｈ５】
2021531313.tif 000026
【０１７５】
特定の実施形態は、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体に関するものであり、この場合において例えば、１つ以上のＦｃ領域が、ＨＲＳポリペプチドの化学的に結合され、または架橋される。これら、および関連の態様において、Ｆｃ領域は、Ｎ末端領域（例えば、最初の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個くらいのアミノ酸）、内部領域（Ｎ末端領域とＣ末端領域の間）、および／またはＣ末端領域（最後の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個くらいのアミノ酸）で、ＨＲＳポリペプチドに結合されてもよい。ポリペプチドは、当分野の様々な普遍的技術に従い、他のポリペプチドに結合または架橋されてもよい。例えば、特定の技術は、カルボキシル−反応性カルボジイミド架橋剤のＥＤＣ（またはＥＤＡＣ）を採用しており、当該技術は、Ｄ、ＥおよびＣ末端のカルボキシル基を介して共有結合させる。他の技術は活性化ＥＤＣを採用しており、当該技術は、ＫおよびＮ末端アミノ基を介して共有結合させる。さらに他の技術は、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）またはスルホ−ＭＢＳを採用しており、当該技術は、チオール基またはシステイン残基を介して共有結合させる（チオール結合に使用され得るシステイン操作Ｉｇ領域に関しては、米国特許出願２００７／００９２９４０も参照のこと）。そうした架橋タンパク質はさらに、切断可能リンカーまたは別手段により放出可能なリンカー（例えば、酵素切断可能なリンカー、加水分解可能なリンカー）、および非切断リンカー（すなわち生理学的に安定なリンカー）をはじめとするリンカーを含んでもよい。特定の実施形態は、Ｆｃ領域とＨＲＳポリペプチドの間の架橋剤として、例えば米国特許出願２００６／０２６９５５３に記載される非ペプチドポリマーを採用する場合もある（例えば、ＰＥＧポリマー；ＨＲＳ−Ｎ−ＰＥＧ−Ｎ−Ｆｃ結合体）。Ｆｃ領域結合部位に関する解説として米国特許出願２００７／０２６９３６９も参照のこと。
【０１７６】
特定の実施形態では、以下にさらに詳細に検討されるように、バリアントまたは別手段により改変されたＦｃ領域が採用されてもよく、野生型Ｆｃ領域と比較して、特性が変化し、または生物活性が変化しているＦｃ領域が挙げられる。改変Ｆｃ領域の例としては、例えば、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失または切断によって、野生型配列と比較し配列が変異したＦｃ領域、異なる免疫グロブリンクラス／サブクラス由来のドメインから構成されるハイブリッドＦｃポリペプチド、グリコシル化／シアル化のパターンが変化したＦｃポリペプチド、および例えばビオチニル化（例えば、米国特許出願２０１０／０２０９４２４を参照のこと）、リン酸化、硫酸化により改変または誘導体化されたＦｃポリペプチド、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。そうした改変を採用して、本明細書に記載される特性の中でも特に、１つ以上の特定のＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃＲｎ）に対するＦｃ領域の結合性能、その薬物動態性能（例えば、安定性または半減期、生体利用効率、組織分布、分布体積、濃度、消失速度定数、消失速度、曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、Ｃｍｉｎ、変動）、免疫原性、補体結合もしくは補体活性化、および／またはＦＣ領域のＣＤＣ／ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ関連活性を、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して変え（例えば、増加させ、減少させ）てもよい。
【０１７７】
本明細書に提示されるＨＲＳ−Ｆｃ結合体の「Ｆｃ領域」は通常、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の重鎖に由来する。典型的なＩｇ分子は、２つの重鎖と２つの軽鎖から構成される。重鎖は、以下の少なくとも３つの機能性領域に分けられる：Ｆｄ領域、Ｆｃ領域（結晶性断片領域）、およびヒンジ領域。後者は、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤの免疫グロブリンにのみ存在する。Ｆｄ領域は、重鎖の可変（ＶＨ）ドメインと定常（ＣＨ１）ドメインを含み、軽鎖の可変（ＶＬ）ドメインと定常（ＣＬ）ドメインとともに、Ｆａｂ領域の抗原結合断片を形成する。
【０１７８】
ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤの免疫グロブリンのＦｃ領域は、重鎖定常ドメインの２および３を含み、それぞれＣＨ２領域およびＣＨ３領域と指定される。ＩｇＥ免疫グロブリンとＩｇＭ免疫グロブリンのＦｃ領域は、重鎖定常ドメインの２、３および４を含み、それぞれＣＨ２領域、ＣＨ３領域およびＣＨ４領域と指定される。Ｆｃ領域は主に、免疫グロブリンのエフェクター機能を担い、エフェクター機能には例えば、補体結合、およびエフェクター細胞の同族Ｆｃ受容体への結合が含まれる。
【０１７９】
ヒンジ領域（ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤに存在する）は、フレキシブルなスペーサーとしての機能を果たし、Ｆｃ領域に対してＦａｂ部分を空間中で自由に移動させる。定常領域とは対照的に、ヒンジ領域は構造的に多様であり、免疫グロブリンのクラスとサブクラスの中で配列と長さの両方が変化する。ヒンジ領域はさらに、１つ以上のグリコシル化部位を含む場合があり、それらは炭水化物付加に関して多くの構造的に別個のタイプの部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７アミノ酸セグメント内に５個のグリコシル化部位を含有し、それによって、消化管プロテアーゼに対し、当該ヒンジ領域ポリペプチドは著しく耐性となる。ＣＨ２ドメインのヒンジ近接領域中の残基も、免疫グロブリンと、それらの各Ｆｃ受容体の間の相互作用の特異性に影響を及ぼし得る（例えば、Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１７７−１８６，１９９３）を参照のこと）。
【０１８０】
ゆえに本明細書において使用される場合、「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ」という用語は、その断片およびバリアントおよび組み合わせを含む、１つ以上の選択免疫グロブリンに由来するＣＨ２領域、ＣＨ３領域、および／またはＣＨ４領域のうちの１つ以上を含むタンパク質を指す。「Ｆｃ領域」にはさらに、免疫グロブリンの重鎖定常領域の１つ以上のヒンジ領域が含まれ得る。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンのＣＨ１、ＣＬ、ＶＬ、および／またはＶＨ領域のうちの１つ以上を含まない。
【０１８１】
Ｆｃ領域は、限定されないが、そのサブクラスおよび組み合わせを含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭを含む任意の１つ以上の免疫グロブリンクラスのＣＨ２領域、ＣＨ３領域、ＣＨ４領域、および／またはヒンジ領域に由来し得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＡ１および／またはＩｇＡ２サブクラスを含む、ＩｇＡ免疫グロブリンに由来する。ある実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＤ免疫グロブリンに由来する。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＥ免疫グロブリンに由来する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４サブクラスを含む、ＩｇＧ免疫グロブリンに由来する。ある実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ免疫グロブリンに由来する。
【０１８２】
特定のＦｃ領域は、１つ以上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対し特異的結合を示す。Ｆｃ受容体のクラスの例としては、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、および新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）が挙げられる。例えば、特定のＦｃ領域は、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、１つ以上のＦｃγＲに対する結合（またはアフィニティ）が増加している。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃεＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃαＲに対する結合が増加している。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃＲｎと比較して、ＦｃεＲ（例えば、ＦｃαＲＩ）に対する結合が増加している。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ、ＦｃαＲ、および／またはＦｃεＲと比較して、ＦｃＲｎに対する結合が増加している。ある実施形態では、１つ以上の選択ＦｃＲに対するＦｃ領域の結合（またはアフィニティ）は、１つ以上の異なるＦｃＲに対する結合（またはアフィニティ）と比較して、典型的には約１．５ｘ、２ｘ、２．５ｘ、３ｘ、３．５ｘ、４ｘ、４．５ｘ、５ｘ、６ｘ、７ｘ、８ｘ、９ｘ、１０ｘ、１５ｘ、２０ｘ、２５ｘ、３０ｘ、４０ｘ、５０ｘ、６０ｘ、７０ｘ、８０ｘ、９０ｘ、１００ｘ、２００ｘ、３００ｘ、４００ｘ、５００ｘ、６００ｘ、７００ｘ、８００ｘ、９００ｘ、１０００ｘまたはそれ以上（その間の全ての整数を含む）まで増加している。
【０１８３】
ＦｃγＲの例としては、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂが挙げられる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）は、マクロファージおよび樹状細胞上で発現されており、ファゴサイトーシス、呼吸バースト、サイトカイン刺激、および樹状細胞のエンドサイトーシス輸送において役割を果たしている。ＦｃγＲＩの発現は、ＧＭ−ＣＳＦとγ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）の両方でアップレギュレーションされ、インターロイキン−４（ＩＬ−４）でダウンレギュレーションされる。ＦｃγＲＩＩａは、多形核白血球（ＰＭＮ）、マクロファージ、樹状細胞および肥満細胞で発現されている。ＦｃγＲＩＩａは、ファゴサイトーシス、呼吸バースト、およびサイトカイン刺激において役割を果たしている。ＦｃγＲＩＩａの発現は、ＧＭ−ＣＳＦおよびγ−ＩＦＮでアップレギュレーションされ、ＩＬ−４で減少する。ＦｃγＩＩｂは、Ｂ細胞、ＰＭＮ、マクロファージ、および肥満細胞で発現されている。ＦｃγＩＩｂは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆ）介在性の反応を阻害し、ゆえに阻害性受容体である。ＦｃγＲＩＩｃの発現は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）とＩＬ−４によりアップレギュレーションされ、γ−ＩＦＮにより減少する。ＦｃγＲＩＩｃは、ＮＫ細胞で発現されている。ＦｃγＲＩＩＩａは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、肥満細胞および血小板で発現されている。この受容体は、ファゴサイトーシス、呼吸バースト、サイトカイン刺激、血小板凝集、および脱顆粒、ならびにＮＫ介在性ＡＤＣＣに関与している。ＦｃγＲＩＩＩの発現は、Ｃ５ａ、ＴＧＦ−β、およびγ−ＩＦＮによりアップレギュレーションされ、ＩＬ−４によりダウンレギュレーションされる。ＦｃγＲＩＩＩｂは、ＰＭＮ上に発現されるＧＰＩ結合型受容体である。
【０１８４】
あるＦｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩへの結合が増加している。一部の実施形態では、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩａへの結合が増加している。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が増加している。あるＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩｃへの結合が増加している。一部のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩｂと比較して、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が増加している。特定のＦｃ領域は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、および／またはＦｃγＲＩＩＩａと比較して、ＦｃγＲＩＩＩｂへの結合が増加している。
【０１８５】
ＦｃαＲは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）を含む。ＦｃαＲＩは、好中球、好酸球、単球、特定のマクロファージ（例えば、クッパ―細胞）および特定の樹状細胞の表面上に存在する。ＦｃαＲＩは、２つの細胞外Ｉｇ様ドメインから構成され、免疫グロブリンスーパーファミリーと、多鎖免疫認識受容体（ＭＩＲＲ：ｍｕｌｔｉ−ｃｈａｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の両方のメンバーであり、２つのＦｃＲγシグナル伝達鎖と関連することによりシグナルを送る。
【０１８６】
ＦｃεＲは、ＦｃいプリＲＩとＦｃεＲＩＩを含む。高アフィニティ受容体のＦｃεＲＩは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、表皮ランゲルハンス細胞、好酸球、肥満細胞および好塩基球上に発現され、アレルギー反応の制御に主要な役割を果たす。ＦｃεＲＩは抗原提示細胞上でも発現されており、炎症促進性サイトカインの産生も制御する。低アフィニティ受容体のＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）は、Ｃ型レクチンであり、膜結合型受容体または可溶性受容体として機能し得る。ＦｃεＲＩＩは、Ｂ細胞の増殖と分化を制御し、好酸球、単球および好塩基球のＩｇＥ結合を妨害する。あるＦｃ領域は、ＦｃεＲＩＩと比較して、ＦｃεＲＩへの結合が増加している。他のＦｃ領域は、ＦｃεＲＩと比較して、ＦｃεＲＩＩへの結合が増加している。
以下の表Ｈ６は、あるＦｃＲの特徴をまとめたものである。
【表Ｈ６−１】
2021531313.tif 000027
【表Ｈ６−２】
2021531313.tif 000028
【表Ｈ６−３】
2021531313.tif 000029
【０１８７】
Ｆｃ領域は、例えばウシ、ヤギ、ブタ、イヌ、マウス、ウサギ、ハムスター、ラット、モルモット、非ヒト霊長類およびヒトなどの哺乳動物といった脊椎動物を含む任意の動物の免疫グロブリン分子に由来してもよい。例示的な野生型ヒトＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭの免疫グロブリンに由来するＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、およびヒンジ領域のアミノ酸配列を、表Ｈ７に示す。
【表Ｈ７−１】
2021531313.tif 000030
【表Ｈ７−２】
2021531313.tif 000031
【０１８８】
ＨＲＳ−Ｆｃ結合体のＦｃ領域は、そのバリアント、断片、ホモログ、オルソログ、パラログ、および組み合わせを含む、表Ｈ７のヒトＦｃ領域アミノ酸配列のうちの１つ以上を含み得、またはそれからなり得、または本質的にそれからなり得る。特定の事例的な実施形態は、約２０−５０、２０−１００、２０−１５０、２０−２００、２０−２５０、２０−３００、２０−４００、５０−１００、５０−１５０、５０−２００、５０−２５０、５０−３００、５０−４００、１００−１５０、１００−２００、１００−２５０、１００−３００、１００−３５０、１００−４００、２００−２５０、２００−３００、２００−３５０、または２００−４００アミノ酸の長さの範囲であるＦｃ領域を含み、および任意で、表Ｈ７の配列のうちのいずれか１つ以上を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定の実施形態では、最大で約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、３５０、４００以上のアミノ酸のＦｃ領域を含み、それらは任意で、表Ｈ７のアミノ酸配列のうちのいずれか１つ以上を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
【０１８９】
特定のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにそのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトのＩｇＡ１配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ１配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
【０１９０】
一部のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにそのバリアントおよび断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で解釈される、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトのＩｇＡ２配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、表Ｈ７のヒトＩｇＡ２配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
【０１９１】
特定のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにこれら配列および組み合わせのバリアントならびに断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＤ配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにこれら配列および組み合わせのバリアントならびに断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＥ配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにこれら配列および組み合わせのバリアントならびに断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＧ１配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＧ２配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＧ３配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせを含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＧ４配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。特定のＦｃ領域は、その組み合わせ、ならびにこれら配列および組み合わせのバリアントならびに断片を含む、Ｎ末端からＣ末端に任意の順序で読まれる、表Ｈ７のヒトＩｇＭ配列を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。
例示的なＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質を下記表Ｈ８に示す。
【表Ｈ８−１】
2021531313.tif 000032
【表Ｈ８−２】
2021531313.tif 000033
【表Ｈ８−３】
2021531313.tif 000034
【０１９２】
したがって特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、Ｆｃ領域に融合され、または別手段により結合され、表Ｈ８のアミノ酸配列（配列番号１５６〜１７１）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ８のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５６〜１７１）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０１９３】
上述のように、特定の実施形態は、本明細書に記載される、および当分野に公知のＦｃ領域のバリアント、断片、ハイブリッドおよび／または別手段による改変型を採用する。表Ｈ７または表Ｈ８の参照配列のうちのいずれか１つ以上などの参照配列と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失および／または切断を有するバリアントも含まれる。ポリペプチドおよびポリヌクレオチドのバリアントは、本明細書において別段に記載される。
【０１９４】
例えば、異なる種、異なるＩｇクラス、および／または異なるＩｇサブクラスの免疫グロブリンに由来するＦｃドメイン（例えば、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）の組み合わせを含むＦｃ領域などのハイブリッドＦｃ領域も含まれる。一般例としては、以下のＣＨ２／ＣＨ３ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＡ１、ＩｇＥ／ＩｇＡ２、ＩｇＥ／ＩｇＤ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＧ１、ＩｇＥ／ＩｇＧ２、ＩｇＥ／ＩｇＧ３、ＩｇＥ／ＩｇＧ４、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＡ１、ＩｇＭ／ＩｇＡ２、ＩｇＭ／ＩｇＤ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＧ１、ＩｇＭ／ＩｇＧ２、ＩｇＭ／ＩｇＧ３、ＩｇＭ／ＩｇＧ４、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４のうちの１つ以上に由来するヒンジ、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭに由来するＣＨ４ドメイン。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇに由来する。
【０１９５】
追加例としては、以下のＣＨ２／ＣＨ４ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上に由来するヒンジ、ならびに／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ３ドメイン。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇに由来する。
【０１９６】
特定の例としては、以下のＣＨ３／ＣＨ４ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のうちの１つ以上に由来するヒンジ、ならびに／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ２ドメイン。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇに由来する。
【０１９７】
特定の例としては、以下のヒンジ／ＣＨ２ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ３ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭに由来するＣＨ４ドメイン。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇに由来する。
【０１９８】
特定の例としては、以下のヒンジ／ＣＨ３ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ２ドメイン、ならびに／またはＩｇＥおよび／もしくはＩｇＭに由来するＣＨ４ドメイン。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇに由来する。
【０１９９】
一部の例としては、以下のヒンジ／ＣＨ４ドメインの組み合わせを含む、またはそれからなる、または本質的にそれからなるハイブリッドＦｃ領域が挙げられる：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（またはその断片もしくはバリアント）、ならびに任意で、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ２ドメイン、ならびに／またはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４もしくはＩｇＭのうちの１つ以上に由来するＣＨ３ドメイン。
【０２００】
ハイブリッドＦｃ領域の特定の例は、例えば、ＷＯ２００８／１４７１４３に見出すことができ、当該例は、ＩｇＧサブクラスの組み合わせ、またはヒトＩｇＤとＩｇＧの組み合わせに由来する。
【０２０１】
また、誘導体化された、または別手段により改変されたＦｃ領域も含まれる。ある態様では、Ｆｃ領域は、リン酸化、硫酸化、アクリル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などにより、野生型または天然型のＦｃ領域と比較して改変されてもよい。ある実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型または天然型のグリコシル化パターンを含んでもよく、あるいは、天然型と比較してグリコシル化が増加してもよく、天然型と比較してグリコシル化が減少してもよく、または完全に脱グリコシル化してもよい。改変Ｆｃ糖型の１つの例として、Ｆｃ領域のグリコシル化の減少によって、第一の補体成分であるＣ１のＣ１ｑ領域への結合、ＡＤＣＣ関連活性の減少、および／またはＣＤＣ関連活性の減少が低下する。ゆえにある実施形態は、脱グリコシル化された、または非グリコシル化されたＦｃ領域を採用する。例えば、例示的な非グリコシル化Ｆｃ領域の産生については、２００５／０４７３３７を参照のこと。Ｆｃ領域の糖型の別の例は、Ｋａｂａｔらのナンバリングシステムに従い、システイン残基でＱ２９５位を置換することにより生成され得る（例えば、米国特許出願２０１０／００８０７９４を参照のこと）。ある実施形態は、Ｆｃ領域の糖タンパク質の約８０〜１００％が、フルクトースを欠いた成熟コア糖構造を含むＦｃ領域を含み得る（例えば、米国特許出願２０１０／０２５５０１３を参照のこと）。一部の実施形態は、置換または欠失によってフコシル化レベルを低下させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩａに対するアフィニティを増加させる、および／またはＦｃγＲＩＩａ発現細胞によるファゴサイトーシスを改善することにより最適化されたＦｃ領域を含み得る（米国特許出願２０１０／０２４９３８２および２００７／０１４８１７０を参照のこと）。
【０２０２】
改変Ｆｃ糖型の別の例として、Ｆｃ領域は、オリゴマンノース型Ｎグリカンを含んでもよく、および任意で、以下のうちの１つ以上を有してもよい：複合体型Ｎグリカンを含有する対応するＦｃ領域またはＨＲＳ−Ｆｃ結合体と比較して、ＡＤＣＣ活性の増加、ＦｃγＲＩＩＩＡ（および特定の他のＦｃＲ）に対する結合アフィニティの増加、ＨＲＳポリペプチドの標的に対し同等もしくは高い結合特異性、ＨＲＳポリペプチドの標的に対し、同等もしくは高い結合アフィニティ、および／またはマンノース受容体に対し、同等もしくは低い結合アフィニティ（例えば、米国特許出願２００７／００９２５２１および米国特許第７，７００，３２１号を参照のこと）。別の例として、ＦｃγＲに対するＦｃ領域のアフィニティ強化は、遺伝子操作細胞株またはバリアント細胞株において抗体を発現させることにより生成される遺伝子操作糖型を使用することにより実現されている（例えば、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０，１９９９；Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４，２００１；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０，２００２；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３，２００３；および米国特許出願２００７／０１１１２８１を参照のこと）。あるＦｃ領域糖型は、Ｎグリコシド結合型複合体の糖鎖の割合が増加している。当該糖鎖は、糖鎖の還元性末端でＮ−アセチルグルコサミンの６位に結合された１位のフコースを有さない（例えば、米国特許出願２０１０／００９２９９７を参照のこと）。特定の実施形態は、α−２，６−結合により、各末端シアル酸部分に接続された少なくとも１つのガラクトース部分でグリコシル化されているＩｇＧ  Ｆｃ領域を含み、任意でこの場合において当該Ｆｃ領域は、対応する野生型のＦｃ領域と比較して抗炎症活性が高い（米国特許出願２００８／０２０６２４６を参照のこと）。これら、および関連する改変グリコシル化方法の特定の方法は、本明細書に記載されるように、例えばＦｃγＲＩＩＩなどのＦｃＲに選択的に結合するＦｃ領域の能力を大幅に強化させて、ＡＤＣＣを介在し、およびＦｃ領域の他の特性を変化させている。
【０２０３】
特定のバリアント、断片、ハイブリッドまたは別手段で改変されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列（例えば、同種、同じＩｇクラス、同じＩｇサブクラス）と比較して、１つ以上のＦｃＲに対する結合が変化し得る。例えば、そうしたＦｃ領域は、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児型Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する結合が、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して増加し得る。一部の実施形態では、バリアント、断片、ハイブリッド、または改変されたＦｃ領域は、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および／または新生児型Ｆｃ受容体のうちの１つ以上に対する結合が、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して減少し得る。具体的なＦｃＲは、本明細書において別段に記載されている。
【０２０４】
ＦｃＲ結合が変化した（例えば、増加した、減少した）Ｆｃバリアントの具体的な例は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号および第７，４２５，６１９号；米国特許出願２００９／００１７０２３、２００９／００１０９２１、および２０１０／０２０３０４６；ならびにＷＯ２０００／４２０７２およびＷＯ２００４／０１６７５０に見出すことができる。特定の例としては、２９８位、３３３位、および／または３３４位に１つ以上の置換、例えばＳ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、および／またはＫ３３４Ａを有するヒトＦｃ領域が挙げられる（ＫａｂａｔらのＥＵインデックスの番号付けに基づく）。それらは、活性化受容体のＦｃγＲＩＩＩａに対する結合が増加し、阻害性受容体のＦｃγＲＩＩｂに対する結合が低下していることが示されている。これらの変異を組み合わせて、ＦｃＲに対する結合がさらに改善された二重変異バリアントおよび三重変異バリアントを取得することができる。特定の例としては、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ三重変異体が挙げられ、この変異体は、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合が増加し、ＦｃγＲＩＩｂに対する結合が低下し、ＡＤＣＣが増加している（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４，２００１；およびＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０，２００２を参照のこと）。また、上記のＵｍａｎａら；および米国特許第７，６６２，９２５号に開示される、ＦｃＲに対する結合が増加した遺伝子操作されたＦｃ糖型も参照のこと。一部の実施形態は、ＫａｂａｔらのＥＵインデックスに基づき、４３４Ｓ、２５２Ｙ／４２８Ｌ、２５２Ｙ／４３４Ｓ、および４２８Ｌ／４３４Ｓから選択される１つ以上の置換を含むＦｃ領域を含む（米国特許出願２００９／０１６３６９９および２００６０１７３１７０を参照のこと）。
【０２０５】
特定のバリアント、断片、ハイブリッドまたは改変Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、エフェクター機能が変化してもよい。例えばそうしたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、補体結合または補体活性化が増加し、ＣＩｑ結合アフィニティが増加し、ＣＤＣ関連活性が増加し、ＡＤＣＣ関連活性が増加し、および／またはＡＤＣＰ関連活性が増加し得る。一部の実施形態は、そうしたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、補体結合または補体活性化が減少し、ＣＩｑ結合アフィニティが減少し、ＣＤＣ関連活性が減少し、ＡＤＣＣ関連活性が減少し、および／またはＡＤＣＰ関連活性が減少し得る。１つの事例的な例示として、Ｆｃ領域は、例えばＣ１ｑ結合部位などの補体結合部位において欠失または置換を含み、および／またはＡＤＣＣ部位において欠失または置換を含み得る。そうした欠失／置換の例は、例えば、米国特許第７，０３０，２２６号に記載されている。例えばＡＤＣＣなどの多くのＦｃエフェクター機能が、当分野の普遍的な技術に従い分析することができる（例えば、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７：１−２６，１９７８を参照のこと）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、限定されないが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および他の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が挙げられる。あるいは、またはさらに、特定のＦｃエフェクター機能は、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ．９５：６５２−６５６，１９９８に記載される動物モデルを採用することによりインビボで分析され得る。
【０２０６】
特定のバリアント、ハイブリッドまたは改変Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、安定性または半減期が変化し得る。特定の実施形態では、そうしたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、半減期が延長され得る。一部の実施形態は、バリアント、ハイブリッドまたは改変Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列を比較して、半減期が短縮され得る。半減期は、例えば放射性標識法、ＥＬＩＳＡまたは他の方法など当分野に普遍的な技術に従いインビトロ（例えば、生理学的条件下）またはインビボで測定されることができる。安定性または半減期のインビボ測定は、血液、血清、血漿、尿もしくは脳脊髄液、または例えば肝臓、腎臓、筋肉、中枢神経系組織、骨などの所与の組織を含む１つ以上の体液において測定されることができる。１つの例として、ＦｃＲｎに結合する能力が変化したＦｃ領域に改変を行うことで、そのインビボ半減期を変化させることができる。インビボ薬物動態特性（例えば、インビボ平均排泄半減期）を測定するための分析法、およびＦｃＲｎに対する結合を変化させるＦｃ改変の非限定的な例は、例えば、米国特許第７，２１７，７９７号および第７，７３２，５７０号；ならびに米国特許出願ＵＳ２０１０／０１４３２５４および２０１０／０１４３２５４に記載されている。
【０２０７】
安定性または半減期を変化させる改変の別の非限定的な例としては、Ｋａｂａｔらのナンバリングシステムに従い、ＣＨ２ドメインの２５１−２５６、２８５−２９０、および３０８−３１４、ならびにＣＨ３ドメインの３８５−３８９および４２８−４３６から選択されるアミノ酸残基のうちの１つ以上での置換／欠失が挙げられる。米国特許出願２００３／０１９０３１１を参照のこと。具体的な例としては、２５１位でのロイシンとの置換、２５２位でのチロシン、トリプトファンまたはフェニルアラニンとの置換、２５４位でのスレオニンまたはセリンとの置換、２５５位でのアルギニンとの置換、２５６位でのグルタミン、アルギニン、セリン、スレオニンまたはグルタミン酸との置換、３０８位でのスレオニンとの置換、３０９位でのプロリンとの置換、３１１位でのセリンとの置換、３１２位でのアスパラギン酸との置換、３１４位でのロイシンとの置換、３８５位でのアルギニン、アスパラギン酸またはセリンとの置換、３８６位でのスレオニンまたはプロリンとの置換、３８７位でのアルギニンまたはプロリンとの置換、３８９位でのプロリン、アスパラギン、またはセリンとの置換、４２８位でのメチオニンまたはスレオニンとの置換、４３４位でのチロシンまたはフェニルアラニンとの置換、４３３位でのヒスチジン、アルギニン、リシン、またはセリンとの置換、および／または４３６位でのヒスチジン、チロシン、アルギニンまたはスレオニンとの置換が、それらの組み合わせを含み、挙げられる。そうした改変は任意で、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域のアフィニティを増加させ、それに伴い、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、半減期が延長される。
【０２０８】
特定のバリアント、ハイブリッドまたは改変Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、可溶度が変化し得る。特定の実施形態では、そうしたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比較して、可溶度が増加され得る。一部の実施形態は、バリアント、ハイブリッドまたは改変Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列を比較して、可溶度が減少され得る。可溶度は、例えば、当分野の普遍的な技術に従い、インビトロ（例えば、生理学的条件下）で測定されることができる。例示的な可溶度の測定について、本明細書において別段に記載されている。
【０２０９】
追加のバリアントの例としては、重鎖の２５０位、３１４位もしくは４２８位、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上、例えば２５０位と４２８位で、または２５０位と３１４位で、または３１４位と４２８位で、または２５０位、３１４位と４２８位で、保存的置換または非保存的置換を有するＩｇＧ  Ｆｃ領域が挙げられる（例えば、米国特許出願２０１１／０１８３４１２を参照のこと）。特定の実施形態では、２５０位の残基は、グルタミン酸またはグルタミンで置換され、および／または４２８位の残基はロイシンまたはフェニルアラニンで置換される。ＩｇＧ  Ｆｃバリアントの別の事例的な例示として、２１４〜２３８、２９７〜２９９、３１８〜３２２、および／または３２７〜３３１位のアミノ酸残基のうちの任意の１つ以上が、改変の適切な標的として使用されてもよい（例えば、保存的または非保存的な置換、欠失）。特定の実施形態では、ＩｇＧ  ＦｃバリアントのＣＨ２ドメインは、２２８、２３４、２３５および／または３３１位でアミノ酸置換を含有して（例えば、Ｓｅｒ２２８ＰｒｏとＬｅｕ２３５Ａｌａ変異を有するヒトＩｇＧ４）、Ｆｃ領域のエフェクター機能を減弱させる（例えば、米国特許第７，０３０，２２６号を参照のこと）。本明細書において、重鎖中の残基のナンバリングは、ＥＵインデックスのナンバリングである（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照のこと）。これら、および関連する実施形態の特定のものは、任意で例えばＡＤＣＣまたはＣＤＣに関連した活性などのエフェクター機能を低下させることなく、ＦｃＲｎ結合および／または血清半減期を変化（例えば、増加、減少）させている。
【０２１０】
追加例としては、野生型Ｆｃ領域の２７９、３４１、３４３もしくは３７３位、またはそれらの任意の組み合わせで、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が挙げられる（例えば、米国特許出願２００７／０２２４１８８を参照のこと）。ヒトＩｇＧに関し、これらの位置での野生型のアミノ酸残基は、バリン（２７９）、グリシン（３４１）、プロリン（３４３）、およびチロシン（３７３）である。置換は、保存的置換または非保存的置換であってもよく、または本明細書に記載される非天然アミノ酸または模倣体を含んでもよい。単独で、またはこれらの置換と組み合わされて、特定の実施形態は、以下から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域も採用し得る：２３５Ｇ、２３５Ｒ、２３６Ｆ、２３６Ｒ、２３６Ｙ、２３７Ｋ、２３７Ｎ、２３７Ｒ、２３８Ｅ、２３８Ｇ、２３８Ｈ、２３８Ｉ、２３８Ｌ、２３８Ｖ、２３８Ｗ、２３８Ｙ、２４４Ｌ、２４５Ｒ、２４７Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２４８Ｆ、２４８Ｐ、２４８Ｑ、２４８Ｗ、２４９Ｌ、２４９Ｍ、２４９Ｎ、２４９Ｐ、２４９Ｙ、２５１Ｈ、２５１Ｉ、２５１Ｗ、２５４Ｄ、２５４Ｅ、２５４Ｆ、２５４Ｇ、２５４Ｈ、２５４Ｉ、２５４Ｋ、２５４Ｌ、２５４Ｍ、２５４Ｎ、２５４Ｐ、２５４Ｑ、２５４Ｒ、２５４Ｖ、２５４Ｗ、２５４Ｙ、２５５Ｋ、２５５Ｎ、２５６Ｈ、２５６Ｉ、２５６Ｋ、２５６Ｌ、２５６Ｖ、２５６Ｗ、２５６Ｙ、２５７Ａ、２５７Ｉ、２５７Ｍ、２５７Ｎ、２５７Ｓ、２５８Ｄ、２６０Ｓ、２６２Ｌ、２６４Ｓ、２６５Ｋ、２６５Ｓ、２６７Ｈ、２６７Ｉ、２６７Ｋ、２６８Ｋ、２６９Ｎ、２６９Ｑ、２７１Ｔ、２７２Ｈ、２７２Ｋ、２７２Ｌ、２７２Ｒ、２７９Ａ、２７９Ｄ、２７９Ｆ、２７９Ｇ、２７９Ｈ、２７９Ｉ、２７９Ｋ、２７９Ｌ、２７９Ｍ、２７９Ｎ、２７９Ｑ、２７９Ｒ、２７９Ｓ、２７９Ｔ、２７９Ｗ、２７９Ｙ、２８０Ｔ、２８３Ｆ、２８３Ｇ、２８３Ｈ、２８３Ｉ、２８３Ｋ、２８３Ｌ、２８３Ｍ、２８３Ｐ、２８３Ｒ、２８３Ｔ、２８３Ｗ、２８３Ｙ、２８５Ｎ、２８６Ｆ、２８８Ｎ、２８８Ｐ、２９２Ｅ、２９２Ｆ、２９２Ｇ、２９２Ｉ、２９２Ｌ、２９３Ｓ、２９３Ｖ、３０１Ｗ、３０４Ｅ、３０７Ｅ、３０７Ｍ、３１２Ｐ、３１５Ｆ、３１５Ｋ、３１５Ｌ、３１５Ｐ、３１５Ｒ、３１６Ｆ、３１６Ｋ、３１７Ｐ、３１７Ｔ、３１８Ｎ、３１８Ｐ、３１８Ｔ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｓ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、３３９Ｄ、３３９Ｅ、３３９Ｆ、３３９Ｇ、３３９Ｈ、３３９Ｉ、３３９Ｋ、３３９Ｌ、３３９Ｍ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｒ、３３９Ｓ、３３９Ｗ、３３９Ｙ、３４１Ｄ、３４１Ｅ、３４１Ｆ、３４１Ｈ、３４１Ｉ、３４１Ｋ、３４１Ｌ、３４１Ｍ、３４１Ｎ、３４１Ｐ、３４１Ｑ、３４１Ｒ、３４１Ｓ、３４１Ｔ、３４１Ｖ、３４１Ｗ、３４１Ｙ、３４３Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｅ、３４３Ｆ、３４３Ｇ、３４３Ｈ、３４３Ｉ、３４３Ｋ、３４３Ｌ、３４３Ｍ、３４３Ｎ、３４３Ｑ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｔ、３４３Ｖ、３４３Ｗ、３４３Ｙ、３７３Ｄ、３７３Ｅ、３７３Ｆ、３７３Ｇ、３７３Ｈ、３７３Ｉ、３７３Ｋ、３７３Ｌ、３７３Ｍ、３７３Ｎ、３７３Ｑ、３７３Ｒ、３７３Ｓ、３７３Ｔ、３７３Ｖ、３７３Ｗ、３７５Ｒ、３７６Ｅ、３７６Ｆ、３７６Ｇ、３７６Ｈ、３７６Ｉ、３７６Ｌ、３７６Ｍ、３７６Ｎ、３７６Ｐ、３７６Ｑ、３７６Ｒ、３７６Ｓ、３７６Ｔ、３７６Ｖ、３７６Ｗ、３７６Ｙ、３７７Ｇ、３７７Ｋ、３７７Ｐ、３７８Ｎ、３７９Ｎ、３７９Ｑ、３７９Ｓ、３７９Ｔ、３８０Ｄ、３８０Ｎ、３８０Ｓ、３８０Ｔ、３８２Ｄ、３８２Ｆ、３８２Ｈ、３８２Ｉ、３８２Ｋ、３８２Ｌ、３８２Ｍ、３８２Ｎ、３８２Ｐ、３８２Ｑ、３８２Ｒ、３８２Ｓ、３８２Ｔ、３８２Ｖ、３８２Ｗ、３８２Ｙ、３８５Ｅ、３８５Ｐ、３８６Ｋ、４２３Ｎ、４２４Ｈ、４２４Ｍ、４２４Ｖ、４２６Ｄ、４２６Ｌ、４２７Ｎ、４２９Ａ、４２９Ｆ、４２９Ｍ、４３０Ａ、４３０Ｄ、４３０Ｆ、４３０Ｇ、４３０Ｈ、４３０Ｉ、４３０Ｋ、４３０Ｌ、４３０Ｍ、４３０Ｎ、４３０Ｐ、４３０Ｑ、４３０Ｒ、４３０Ｓ、４３０Ｔ、４３０Ｖ、４３０Ｗ、４３０Ｙ、４３１Ｈ、４３１Ｋ、４３１Ｐ、４３２Ｒ、４３２Ｓ、４３８Ｇ、４３８Ｋ、４３８Ｌ、４３８Ｔ、４３８Ｗ、４３９Ｅ、４３９Ｈ、４３９Ｑ、４４０Ｄ、４４０Ｅ、４４０Ｆ、４４０Ｇ、４４０Ｈ、４４０Ｉ、４４０Ｋ、４４０Ｌ、４４０Ｍ、４４０Ｑ、４４０Ｔ、４４０Ｖまたは４４２Ｋ。上述のように、重鎖中の残基のナンバリングは、ＥＵインデックスのナンバリングである（上記のＫａｂａｔらを参照のこと）。そうしたバリアントＦｃ領域は、当該バリアントＦｃ領域が動作可能に付加されるＨＲＳポリペプチドに対し、エフェクター機能の改変、または血清半減期の改変をもたらすことが多い。好ましくは、改変されたエフェクター機能は、そうしたアミノ酸置換を欠く対応するＦｃ領域と比較した、ＡＤＣＣの増加、ＡＤＣＣの減少、ＣＤＣの増加、ＣＤＣの減少、ＣＩｑ結合アフィニティの増加、ＣＩｑ結合アフィニティの減少、ＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合アフィニティの増加、またはＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合アフィニティの減少である。
【０２１１】
追加例としては、２２１、２２２、２２４、２２７、２２８、２３０、２３１、２２３、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４９、２５０、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７８、２８０、２８１、２８３、２８５、２８６、２８８、２９０、２９１、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３１３、３１７、３１８、３２０、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６および／または４２８位のうちの１つ以上でアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域が挙げられる（例えば、米国特許第７，６６２，９２５号を参照のこと）。具体的な実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５ＲおよびＴ３３５Ｙ。他の具体的な実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、およびＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔ。さらに具体的な実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される一連の置換を含む：Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４１Ｙ／Ｆ２４３Ｙ／Ｖ２６２Ｔ／Ｖ２６４Ｔ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｙ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｈ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｙ２９６Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｎ２９７Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｖ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｉ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、およびＮ２９７Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ。具体的な実施形態では、バリアントＦｃ領域は、３３２位でアミノ酸置換を含む（ＥＵインデックスのナンバリングを使用、上記のＫａｂａｔら）。置換の例としては、３３２Ａ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３２Ｋ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｎ、３３２Ｐ、３３２Ｑ、３３２Ｒ、３３２Ｓ、３３２Ｔ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、および３３２Ｙが挙げられる。Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、ＫａｂａｔらのＥＵインデックスのナンバリングである。本明細書に記載される特性の中で、そうしたバリアントＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲに対するアフィニティが増加し、安定性が増加し、および／または可溶度が増加してもよい。
【０２１２】
さらなる例としては、以下のアミノ酸置換のうちの１つ以上を含むバリアントＦｃ領域が挙げられる：２２４Ｎ／Ｙ、２２５Ａ、２２８Ｌ、２３０Ｓ、２３９Ｐ、２４０Ａ、２４１Ｌ、２４３Ｓ／Ｌ／Ｇ／Ｈ／Ｉ、２４４Ｌ、２４６Ｅ、２４７Ｌ／Ａ、２５２Ｔ、２５４Ｔ／Ｐ、２５８Ｋ、２６１Ｙ、２６５Ｖ、２６６Ａ、２６７Ｇ／Ｎ、２６８Ｎ、２６９Ｋ／Ｇ、２７３Ａ、２７６Ｄ、２７８Ｈ、２７９Ｍ、２８０Ｎ、２８３Ｇ、２８５Ｒ、２８８Ｒ、２８９Ａ、２９０Ｅ、２９１Ｌ、２９２Ｑ、２９７Ｄ、２９９Ａ、３００Ｈ、３０１Ｃ、３０４Ｇ、３０５Ａ、３０６Ｉ／Ｆ、３１１Ｒ、３１２Ｎ、３１５Ｄ／Ｋ／Ｓ、３２０Ｒ、３２２Ｅ、３２３Ａ、３２４Ｔ、３２５Ｓ、３２６Ｅ／Ｒ、３３２Ｔ、３３３Ｄ／Ｇ、３３５Ｉ、３３８Ｒ、３３９Ｔ、３４０Ｑ、３４１Ｅ、３４２Ｒ、３４４Ｑ、３４７Ｒ、３５１Ｓ、３５２Ａ、３５４Ａ、３５５Ｗ、３５６Ｇ、３５８Ｔ、３６１Ｄ／Ｙ、３６２Ｌ、３６４Ｃ、３６５Ｑ／Ｐ、３７０Ｒ、３７２Ｌ、３７７Ｖ、３７８Ｔ、３８３Ｎ、３８９Ｓ、３９０Ｄ、３９１Ｃ、３９３Ａ、３９４Ａ、３９９Ｇ、４０４Ｓ、４０８Ｇ、４０９Ｒ、４１１Ｉ、４１２Ａ、４１４Ｍ、４２１Ｓ、４２２Ｉ、４２６Ｆ／Ｐ、４２８Ｔ、４３０Ｋ、４３１Ｓ、４３２Ｐ、４３３Ｐ、４３８Ｌ、４３９Ｅ／Ｒ、４４０Ｇ、４４１Ｆ、４４２Ｔ、４４５Ｒ、４４６Ａ、４４７Ｅ。任意でこの場合において、当該バリアントは、親Ｆｃポリペプチドと比較して、変化したＦｃリガンド認識および／または変化したエフェクター機能を有し、残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔらのナンバリングである。これら、および関連実施形態の具体的な例としては、以下の置換セットを含む、またはそれからなるバリアントＦｃ領域が挙げられる：（１）Ｎ２７６Ｄ、Ｒ２９２Ｑ、Ｖ３０５Ａ、Ｉ３７７Ｖ、Ｔ３９４Ａ、Ｖ４１２ＡおよびＫ４３９Ｅ；（２）Ｐ２４４Ｌ、Ｋ２４６Ｅ、Ｄ３９９ＧおよびＫ４０９Ｒ；（３）Ｓ３０４Ｇ、Ｋ３２０Ｒ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６ＥおよびＭ３５８Ｔ；（４）Ｆ２４３Ｓ、Ｐ２４７Ｌ、Ｄ２６５Ｖ、Ｖ２６６Ａ、Ｓ３８３ＮおよびＴ４１１Ｉ；（５）Ｈ２２４Ｎ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ３９３ＡおよびＨ４３３Ｐ；（６）Ｖ２４０Ａ、Ｓ２６７Ｇ、Ｇ３４１ＥおよびＥ３５６Ｇ；（７）Ｍ２５２Ｔ、Ｐ２９１Ｌ、Ｐ３５２Ａ、Ｒ３５５Ｗ、Ｎ３９０Ｄ、Ｓ４０８Ｇ、Ｓ４２６ＦおよびＡ４３１Ｓ；（８）Ｐ２２８Ｌ、Ｔ２８９Ａ、Ｌ３６５Ｑ、Ｎ３８９Ｓおよび５４４０Ｇ；（９）Ｆ２４１Ｌ、Ｖ２７３Ａ、Ｋ３４０ＱおよびＬ４４１Ｆ；（１０）Ｆ２４１Ｌ、Ｔ２９９Ａ、Ｉ３３２ＴおよびＭ４２８Ｔ；（１１）Ｅ２６９Ｋ、Ｙ３００Ｈ、Ｑ３４２Ｒ、Ｖ４２２ＩおよびＧ４４６Ａ；（１２）Ｔ２２５Ａ、Ｒ３０１ｃ、Ｓ３０４Ｇ、Ｄ３１２Ｎ、Ｎ３１５Ｄ、Ｌ３５１ＳおよびＮ４２１Ｓ；（１３）Ｓ２５４Ｔ、Ｌ３０６Ｉ、Ｋ３２６ＲおよびＱ３６２Ｌ；（１４）Ｈ２２４Ｙ、Ｐ２３０Ｓ、Ｖ３２３Ａ、Ｅ３３３Ｄ、Ｋ３３８ＲおよびＳ３６４Ｃ；（１５）Ｔ３３５Ｉ、Ｋ４１４ＭおよびＰ４４５Ｒ；（１６）Ｔ３３５ＩおよびＫ４１４Ｍ；（１７）Ｐ２４７Ａ、Ｅ２５８Ｋ、Ｄ２８０Ｎ、Ｋ２８８Ｒ、Ｎ２９７Ｄ、Ｔ２９９Ａ、Ｋ３２２Ｅ、Ｑ３４２Ｒ、Ｓ３５４ＡおよびＬ３６５Ｐ；（１８）Ｈ２６８Ｎ、Ｖ２７９Ｍ、Ａ３３９Ｔ、Ｎ３６１ＤおよびＳ４２６Ｐ；（１９）Ｃ２６１Ｙ、Ｋ２９０Ｅ、Ｌ３０６Ｆ、Ｑ３１１Ｒ、Ｅ３３３ＧおよびＱ４３８Ｌ；（２０）Ｅ２８３Ｇ、Ｎ３１５Ｋ、Ｅ３３３Ｇ、Ｒ３４４Ｑ、Ｌ３６５ＰおよびＳ４４２Ｔ；（２１）Ｑ３４７Ｒ、Ｎ３６１ＹおよびＫ４３９Ｒ；（２２）Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２５４Ｐ、Ｓ２６７Ｎ、Ｈ２８５Ｒ、Ｎ３１５Ｓ、Ｆ３７２Ｌ、Ａ３７８Ｔ、Ｎ３９０Ｄ、Ｙ３９１Ｃ、Ｆ４０４Ｓ、Ｅ４３０Ｋ、Ｌ４３２ＰおよびＫ４４７Ｅ；ならびに（２３）Ｅ２６９Ｇ、Ｙ２７８Ｈ、Ｎ３２５ＳおよびＫ３７０Ｒ。ここで残基のナンバリングは、ＫａｂａｔらにあるＥＵインデックスのナンバリングである（例えば、米国特許出願２０１０／０１８４９５９を参照のこと）。
【０２１３】
Ｆｃバリアントの別の具体的な例は、表Ｈ７のＦｃ配列を含み、この場合において１位のＸａａは、Ａｌａまたは無しであり、１６位のＸａａは、ＰｒｏまたはＧｌｕであり、１７位のＸａａは、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、またはＡｌａであり、１８位のＸａａは、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、またはＡｌａであり、８０位のＸａａは、ＡｓｎまたはＡｌａであり、および／または２３０位のＸａａは、Ｌｙｓまたは無しである（例えば、米国特許出願２００７／０２５３９６６を参照のこと）。これらＦｃ領域の特定のもの、および関連ＨＲＳ−Ｆｃ結合体は、野生型Ｆｃ配列よりも半減期が延長され、エフェクター活性が低下し、および／または免疫原性が大幅に低い。
【０２１４】
バリアントＦｃ領域は、例えば、米国特許出願２００３／０１１８５９２に記載される１つ以上の変異ヒンジ領域を有してもよい。例えば、ヒンジ領域中の１つ以上のシステインが、欠失され、または異なるアミノ酸で置換されてもよい。変異ヒンジ領域は、システイン残基を含まなくてもよく、または対応する野生型ヒンジ領域よりも１、２もしくは３個少ないシステイン残基を含んでもよい。一部の実施形態では、この型の変異ヒンジ領域を有するＦｃ領域は、野生型Ｉｇヒンジ領域と比較して、二量体化する能力の低下を呈する。
【０２１５】
上述のように、例えば、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質などのＨＲＳ−Ｆｃ結合体は多くの場合、対応するＨＲＳポリペプチドと比較して、薬物動態特性が変化（例えば改善、増加、減少）している。薬物動態特性の例としては、安定性または半減期、生体利用効率（吸収される薬剤の割合）、組織分布、分布体積（静脈内注射の直後に薬剤が分布され、血漿と周辺組織の間で平衡化される見掛け容積）、濃度（血漿中の薬剤の初期濃度または定常状態濃度）、消失速度定数（薬剤が身体から排除される速度）、消失速度（消失と拮抗するために必要とされる点滴速度）、曲線下面積（ＡＵＣまたは曝露；単回投与後または定常状態中の濃度−時間曲線の積分）、クリアランス（単位時間あたりの薬剤が除去された血漿の量）、Ｃｍａｘ（経口投与後の薬剤のピーク血漿濃度）、ｔｍａｘ（Ｃｍａｘに到達するまでの時間）、Ｃｍｉｎ（次の投与が為される前に薬剤が到達する最低濃度）、および変動（定常状態での１回の投与間隔以内のピークトラフ変動）が挙げられる。一部の態様では、これらの改善された特性は、ＨＲＳポリペプチドの二次構造を大きく変えることなく、および／または非正準生物活性を低下させることなく実現される。実際に、いくつかのＨＲＳ−Ｆｃ結合体は、非正準生物活性を増加させている。
【０２１６】
したがって一部の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、同一条件下または同等条件下で哺乳動物に投与されたとき、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドまたは異なる改変が為されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、５０、１００、２００、３００、４００または５００倍高い血漿または血清の薬物動態ＡＵＣプロファイルを有する。ある実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、室温で、例えばＰＢＳ中、ｐＨ７．４で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間、または１、２、３、４週間ほど、類似条件下で比較したときに、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドまたは異なる改変が為されたＨＲＳポリペプチドよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％または５００％高い安定性（例えば、半減期により測定）を有する。
【０２１７】
特定の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、例えば生理学的ｐＨ、ヒト体温など、ｐＨ７．４、２５℃で（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中、例えばラット、マウス、サルまたはヒトなどの所与の種で）、約、または少なくとも約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間、または約１４４時間、またはそれ以上の生物学的半減期、または任意の中間半減期を有する。
【０２１８】
ある実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、皮下（ＳＣ）投与後、高い生体利用効率を有する。ある実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体またはＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドと比較して、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％以上の生体利用効率を有する。
【０２１９】
ある実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、ＵＶ円二色性分析法により決定された場合、対応する非改変のＨＲＳポリペプチドまたは異なる改変が為されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ二次構造を有する。ある実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは、抗炎症活性の分析において、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドまたは異なる改変が為されたＨＲＳポリペプチドと実質的に同じ活性を有する。一部の実施形態では、ＨＲＳ−Ｆｃ融合ポリペプチドは抗炎症活性の分析において、対応する非改変ＨＲＳポリペプチドまたは異なる改変が為されたＨＲＳポリペプチドよりも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０倍高い活性を有する。
【０２２０】
ＨＲＳポリペプチドのオリゴマー化を調節するＨＲＳ融合タンパク質の例としては、軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ：ｃａｒｔｉｌａｇｅ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ）とのＨＲＳの融合物が挙げられる。したがってある実施形態は、ＣＯＭＰに融合された本明細書に記載されるＨＲＳポリペプチドを含む融合タンパク質が含まれ、ＣＯＭＰは例えば、ＣＯＭＰ由来の五量体化ドメインであり、ＣＯＭＰのおよそ２８〜７３残基から構成される（例えばＰｒｏｄｅｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１７；２（１８）：ｅ９４３０８；ａｎｄ  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．２００９  Ｍａｙ；１７９３（５）：７７２−８０を参照のこと）。例示的なＨＲＳ−ＣＯＭＰ融合タンパク質を以下の表Ｈ９に提示する。
【表Ｈ９】
2021531313.tif 000035
【０２２１】
したがってある実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、ＣＯＭＰまたはＣＯＭＰ五量体化ドメインに融合され、または別手段により結合され、表Ｈ９のアミノ酸配列またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、表Ｈ９のアミノ酸配列（例えば、配列番号１７３〜１７５）またはその活性バリアントもしくは断片を含み、またはそれからなり、または本質的にそれからなるＨＲＳポリペプチドをコードする。
【０２２２】
ある実施形態では、ペプチドリンカー配列を採用して、ＨＲＳポリペプチドとＦｃ領域またはＰＥＧまたは他の融合パートナーを、望ましい二次構造および三次構造へと各ポリペプチドが確実にフォールディングするのに充分な距離まで分離させてもよい。そうしたペプチドリンカー配列は、当分野において標準的な技術を使用して結合体または融合ポリペプチドへと組み込まれることができる。
【０２２３】
特定のペプチドリンカー配列は、以下の例示的因子に基づき選択されてもよい：（１）柔軟な拡張立体構造をとる能力、（２）第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチド上の機能性エピトープと相互作用し得る二次構造とならない能力、（３）生理学的安定性、および（４）ポリペプチドの機能性エピトープと反応する可能性がある疎水性または荷電性の残基の欠落、または他の特性。例えば、Ｇｅｏｒｇｅ  ａｎｄ  Ｈｅｒｉｎｇａ，Ｊ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１５：８７１−８７９，２００２を参照のこと。
【０２２４】
リンカー配列は概して、１〜約２００アミノ酸の長さであり得る。特定のリンカーは、約１〜２００アミノ酸、１〜１５０アミノ酸、１〜１００アミノ酸、１〜９０アミノ酸、１〜８０アミノ酸、１〜７０アミノ酸、１〜６０アミノ酸、１〜５０アミノ酸、１〜４０アミノ酸、１〜３０アミノ酸、１〜２０アミノ酸、１〜１０アミノ酸、１〜５アミノ酸、１〜４アミノ酸、１〜３アミノ酸、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６  ，１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、１００もしくはそれ以上のアミノ酸の全アミノ酸長を有してもよい。
【０２２５】
ペプチドリンカーは、本明細書に別段に記載される、および当分野に公知の任意の１つ以上の天然アミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸アナログ、および／またはアミノ酸模倣体を採用してもよい。リンカーとして有用に採用され得る特定のアミノ酸配列は、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９−４６，１９８５；Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．８３：８２５８−８２６２，１９８６；米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示される配列が挙げられる。特定のペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ残基、Ｓｅｒ残基、および／またはＡｓｎ残基を含有する。他の近しい中性アミノ酸、例えばＴｈｒやＡｌａなども望ましい場合にはペプチドリンカー配列に採用され得る。
【０２２６】
特定の例示的なリンカーとしては、以下のようにＧｌｙ、Ｓｅｒおよび／またはＡｓｎを含有するリンカーが挙げられる：［Ｇ］ｘ、［Ｓ］ｘ、［Ｎ］ｘ、［ＧＳ］ｘ、［ＧＧＳ］ｘ、［ＧＳＳ］ｘ、［ＧＳＧＳ］ｘ（配列番号２０１）、［ＧＧＳＧ］ｘ（配列番号２０２）、［ＧＧＧＳ］ｘ（配列番号２０３）、［ＧＧＧＧＳ］ｘ（配列番号２０４）、［ＧＮ］ｘ、［ＧＧＮ］ｘ、［ＧＮＮ］ｘ、［ＧＮＧＮ］ｘ（配列番号２０５）、［ＧＧＮＧ］ｘ（配列番号２０６）、［ＧＧＧＮ］ｘ（配列番号２０７）、［ＧＧＧＧＮ］ｘ（配列番号２０８）のリンカーであって、式中、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０以上である。これらアミノ酸および関連アミノ酸の他の組み合わせも、当業者には明白であろう。
【０２２７】
リンカーペプチドの追加例としては限定されないが、以下のアミノ酸配列が挙げられる：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号２０９）；Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号２１０）；Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−（配列番号２１１）；Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−（配列番号２１２）；およびＡｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−（配列番号２１３）。
【０２２８】
リンカーペプチドのさらに非限定的な例としては、ＤＧＧＧＳ（配列番号２１４）；ＴＧＥＫＰ（配列番号２１５）（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．９４：５５２５−５５３０，１９９７を参照のこと）；ＧＧＲＲ（配列番号２１６）（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）；（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２０４）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．９３：１１５６−１１６０，１９９６）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号２１７）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ．８７：１０６６−１０７０，１９９０）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２１８）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３−４２６，１９８８）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号２１９）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号２２０）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号２２１）；ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）２  ＥＲＰ（配列番号２２２）が挙げられる。具体的な実施形態において、リンカー配列は、３つのグリシン残基を含むＧｌｙ３リンカー配列を含む。特定の実施形態では、ＤＮＡ結合部位とペプチド自体の両方をモデリングすることができるコンピュータープログラム（Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ  ＆  Ｂｅｒｇ，ＰＮＡＳ．９０：２２５６−２２６０，１９９３；ａｎｄ  ＰＮＡＳ．９１：１１０９９−１１１０３，１９９４）を使用して、またはファージディスプレイ法により、可塑性リンカーを合理的に設計することができる。
【０２２９】
ペプチドリンカーは、生理学的に安定であってもよく、または例えば生理学的に分解可能なリンカーまたは酵素的に切断可能なリンカー（例えば、タンパク分解性の切断リンカー）などの放出可能なリンカーを含んでもよい。ある実施形態では、１つ以上の放出可能なリンカーによって、短い半減期と、より急速な結合体のクリアランスがもたらされ得る。これら、および関連する実施形態を使用して、例えば、可溶度を強化し、および血流中のＨＲＳポリペプチドの血中循環半減期を強化しつつ、ＨＲＳポリペプチドを血流中に送達し、次いでリンカーが分解されて、Ｆｃ領域を実質的に遊離させることができる。これらの態様は特に、Ｆｃ領域が取り外せないように結合されると、ＨＲＳポリペプチドの活性が低下してしまう場合において有用である。本明細書に提示されるリンカーを使用することにより、そうしたＨＲＳポリペプチドは、結合型となったときにも治療活性を維持することができる。別の例として、大きく比較的不活性なＨＲＳ−Ｆｃ結合体ポリペプチドが投与されてもよく、当該ポリペプチドはその後インビボで（分解性リンカーを介して）分解されて、Ｆｃ領域部分を保有する、またはＦｃ領域全体を欠く生物活性ＨＲＳポリペプチドが生成される。これら、および他の方法において、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体ポリペプチドの特性がさらに効果的に適合されて、経時的なＨＲＳポリペプチドの生物活性と循環半減期の平衡が保たれ得る。
【０２３０】
特定の実施形態では、リンカーペプチドは、自己触媒的な、または自己切断性のペプチド切断部位を含む。特定の実施形態では、自己切断性のペプチドは、ポチウイルスおよびカルジオウイルス２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（手足口病ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、トセア・アシグナウイルス（Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａ  ｖｉｒｕｓ）、およびブタテッショウウイルスから取得されたポリペプチド配列を含む。ある実施形態では、自己切断性ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様の部位、配列またはドメインを含む（Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８２：１０２７−１０４１，２００１）。例示的な２Ａ部位としては、以下の配列が挙げられる：ＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２３）；ＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２４）；ＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２５）；ＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２６）；ＱＬＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２７）；ＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２２８）；ＶＴＥＬＬＹＲＭＫＲＡＥＴＹＣＰＲＰＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴ（配列番号２２９）；ＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２３０）；ＬＬＡＩＨＰＴＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２３１）；およびＥＡＲＨＫＱＫＩＶＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号２３２）。一部の実施形態では、自己触媒性ペプチドの切断部位は、翻訳２Ａシグナル配列、例えば、１８アミノ酸の配列であるアフトウイルス手足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）ポリタンパク質の２Ａ領域を含む。使用され得る２Ａ様配列の追加例としては、昆虫ウイルスのポリタンパク質、Ｃ型ロタウイルスのＮＳ３４タンパク質、および例えば、Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．８２：１０２７−１０４１，２００１に記載されるトリパノソーマ種の反復配列が挙げられる。
【０２３１】
適切なプロテアーゼ切断部位および自己切断性ペプチドが、当業者に公知である（例えば、Ｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎｅｒ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６９９−７２２，１９９７；およびＳｃｙｍｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：５８９−５９４，２００４を参照のこと）。プロテアーゼ切断部位の例としては限定されないが、ポチウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えばタバコエッチ病ウイルスプロテアーゼ）、ポチウイルスＨＣプロテアーゼ、ポチウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ−２−コードプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（ワイカウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘａ因子、およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられる。切断ストリンジェンシーが高いために、一部の実施形態ではＴＥＶ（タバコエッチ病ウイルス）のプロテアーゼ切断部位、例えばＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号２３３）、例えばＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号２３４）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号２３５）が挙げられ、式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表している（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧの間、またはＱとＳの間で発生する）。
【０２３２】
特定の実施形態における使用に好適な酵素分解性リンカーのさらなる例としては、限定されないが、例えばトロンビン、キモトリプシン、トリプシン、エラスターゼ、カリクレインまたはサブチリシンなどのセリンプロテアーゼにより切断されるアミノ酸配列。トロンビン切断性のアミノ酸配列の事例としては、限定されないが以下が挙げられる：−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（配列番号２３６）、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−、−Ｇｌｙ−  Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−（配列番号２３７）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−（配列番号２３８）、−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−（配列番号２３９）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−  Ａｒｇ−、−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−、および−Ｐｈｅ−  Ｖａｌ  −Ａｒｇ−。エラスターゼ切断性のアミノ酸配列の事例としては、限定されないが以下が挙げられる：−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−（配列番号２４０）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−（配列番号２４１）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−（配列番号２４２）、−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−（配列番号２４３）、および−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−（配列番号２４４）。
【０２３３】
酵素分解性のリンカーとしてはさらに、例えばコラゲナーゼ、ストロメリシン、およびゼラチナーゼなどのマトリクスメタロプロテアーゼにより切断され得るアミノ酸配列が挙げられる。マトリクスメタロプロテアーゼ切断性のアミノ酸配列の事例としては、限定されないが以下が挙げられる：−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２４５）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２４６）、−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−（配列番号２４７）、および−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｚ−（配列番号２４８）、式中、ＹおよびＺは、アミノ酸である。コラゲナーゼ切断性のアミノ酸配列の事例としては、限定されないが以下が挙げられる：−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｚ−（配列番号２４９）、−Ｐｒｏ−  Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｚ−（配列番号２５０）、−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−（配列番号２５１）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−（配列番号２５２）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−（配列番号２５３）、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２５４）、および−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ−（配列番号２５５）、式中、Ｚは、アミノ酸である。ストロメリシン切断性のアミノ酸配列の事例は、−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−（配列番号２５６）であり、ゼラチナーゼ切断性のアミノ酸配列の例は、−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−  Ｓｅｒ−Ａｒｇ−（配列番号２５７）である。
【０２３４】
特定の実施形態における使用に適した酵素分解性リンカーとしては、例えば、−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−、−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２５８）、および−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−（配列番号２５９）などのアンギオテンシン転換酵素により切断され得るアミノ酸配列が挙げられる。
【０２３５】
特定の実施形態における使用に適した酵素分解性リンカーとしては、例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−（配列番号２６０）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−（配列番号２６１）およびＰｈｅ−ＬｙｓなどのカテプシンＢにより分解され得るアミノ酸配列が挙げられる。
【０２３６】
特定の実施形態では、放出可能なリンカーは、例えば生理学的ｐＨ、体温などのｐＨ７．４、２５℃（例えば、インビボ、血清中、所与の組織中）で約３０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、または約９６時間以上の半減期、または任意の中間半減期を有する。当業者であれば、ＨＲＳ−Ｆｃ結合体ポリペプチドの半減期が、特定の放出可能リンカーを使用することにより細かく調整し得ることを認識するであろう。
【０２３７】
しかしある実施形態ではペプチドリンカーのうちの任意の１つ以上が任意選択的である。例えば、第一および第二のポリペプチドが、機能性ドメインを分離させ、および立体干渉を防ぐことができる非必須のＮ末端および／またはＣ末端のアミノ酸領域を有しているときには、リンカー配列は必要ではない場合もある。
【０２３８】
ＨＲＳポリペプチド、および例えば発現可能なポリヌクレオチドなとのポリヌクレオチドは、本明細書に記載される組成物、方法および／またはキットのいずれかにおいて使用することができる。
【０２３９】
ニューロピリン−２ポリペプチドおよびＮＲＰ２リガンド
本開示の実施形態は、ヒトヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチドが、広範な疾患および状態の治療に適しているという予想外の生物性能を有しており、その性能のうちの特定のものが、ＨＲＳとヒトニューロピリン２（ＮＲＰ２）の相互作用に関連しているという発見に関連している。したがってＨＲＳポリペプチドを、例えばＮＲＰ２関連疾患などの疾患の治療において、単独の治療法として使用することができ、および／またはニューロピリン−２の生物活性と関連した多くの疾患および状態に対処する他の剤との併用で使用することができる。
【０２４０】
ＮＲＰ２は、単回膜貫通型受容体であり、主な細胞外領域は２つのＣＵＢドメイン（ａ１／ａ２混合ドメイン）、２つの第Ｖ因子／第ＶＩＩＩ因子相同ドメイン（ｂ１／ｂ２混合ドメイン）およびＭＡＭドメイン（ｃドメイン）を含有する（図１Ａ〜１Ｂを参照のこと）。ａ１ａ２混合ドメインは、セマフォリンのセマ（ｓｅｍａ）領域と相互作用し、ｂ１ドメインは、セマフォリンＰＳＩおよびＩｇ様ドメインと相互作用する。ＮＲＰ２は、ＳＥＭＡの３Ｆおよび３Ｇに対して高いアフィニティを有している。対照的にＳＥＭＡの３Ａ、３Ｂおよび３Ｅは、ＮＲＰ１と優先的に相互作用する。ＳＥＭＡ３Ｃに対しては、ＮＲＰ１とＮＲＰ２の両方が同様のアフィニティを有している。ｂ１ｂ２混合ドメインは、ＶＥＧＦ  ＣおよびＤ、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）−２、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、および形質転換増殖因子（ＴＧＦ）−ベータを含む、ヘパリン結合ドメインを含有するいくつかの増殖因子と相互作用する（例えば、Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ３：９２１−９３９，２０１２を参照のこと）。ＮＲＰ２はさらに様々な増殖因子特異的な受容体とも相互作用し、そしてＳＥＭＡへの結合とは関係なく、これら受容体との相互作用が発生する。この状況下において、インテグリンと、ＶＥＧＦ受容体、ＴＧＦ−ベータ受容体、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲおよびＰＤＧＦＲのような増殖因子受容体は、ＮＲＰと相互作用することが示されており、概して、各リガンドとその受容体のアフィニティを増加させ、下流シグナル伝達を調節すると考えられている。ｃドメイン（Ｍａｍ）は、リガンド結合に必要であるとは想定されていないが、シグナル伝達には必須であると考えられている。
【０２４１】
ＮＲＰ２はホモ二量体、ならびに他の細胞表面受容体とのヘテロ二量体、およびコレセプターを形成することができ、多量のグリコシル化を受ける。さらに異なるスプライスバリアントの形態のＮＲＰ２も存在し、当該バリアントは約５５１〜９２６アミノ酸の長さである。ＮＲＰ２の２つの主要なバリアントは、ＮＲＰ２ａとＮＲＰ２ｂにカテゴライズされる。それらバリアントは細胞内Ｃ末端部分（図１Ａ〜１Ｂを参照のこと）で異なっており、ＮＲＰ２ａに関しては、ｃ末端ドメインは４２アミノ酸を含み、およびＣ末端ＳＥＡアミノ酸配列を伴うＰＤＺ−結合ドメインを含む。一方で、ＮＲＰ２ｂは、ＮＲＰ２ａの細胞内配列および膜貫通配列の約１１％を共有する４６アミノ酸のＣ末端ドメインを含む。ＭＡＭドメインと膜貫通ドメインの間に、追加的なスプライシングが発生して、追加で５アミノ酸（ＧＥＮＦＫ）が、ＮＲＰ２ａ型またはＮＲＰ２ｂ型のいずれかに付加される場合がある。これらバリアントは、代替的スプライシングを介して付加された追加アミノ酸の数に基づいて名付けられている。したがってＮＲＰ２の２つの追加バリアントは、ＮＲＰ２ａ（１７）とＮＲＰ２ａ（２２）と名付けられており、ＮＲＰ２ｂの２つの異なる膜貫通型バリアントは、ＮＲＰ２ｂ（０）とＮＲＰ２ｂ（５）と名付けられている。さらにｓＮＲＰ２ｂと呼ばれる可溶型が生成される場合もある（図２を参照のこと）。「ニューロピリン−２」または「ＮＲＰ２」または「ＮＲＰ２ポリペプチド」という用語は、異なる具体的な意味が文脈上明白になっていない限り、ＮＲＰ２のすべてのアイソフォーム、スプライスバリアントおよび天然型断片を指す。ＮＲＰ２ポリペプチド配列の例を、以下の表Ｎ１に提示する。
【表Ｎ１−１】
2021531313.tif 000036
【表Ｎ１−２】
2021531313.tif 000037
【表Ｎ１−３】
2021531313.tif 000038
【表Ｎ１−４】
2021531313.tif 000039
【表Ｎ１−５】
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【表Ｎ１−６】
2021531313.tif 000041
【表Ｎ１−７】
2021531313.tif 000042
【０２４２】
ニューロピリン−２は、多様なコレセプターのリクルートを介して複数のリガンドに反応し、基幹的な細胞表面受容体として、および様々なリガンドのコレセプターとしての両方の役割を介して、広範な細胞機能を調節することができる（例えば、Ｇｕｏ  ａｎｄ  Ｖａｎｄｅｒ  Ｋｏｏｉ，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９０  Ｎｏ  ４９：２９１２０−２９１２６．２０１５；Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ３：９２１−９３９，２０１２を参照のこと）。例えば、ＮＲＰ２  は、結腸直腸癌細胞および他の癌細胞においてＴＧＦ−β１介在性の上皮間葉転換（ＥＭＴ）を促進することにより（例えば、Ｇｒａｎｄｃｌｅｍｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６（７）ｅ２０４４４，２０１１を参照のこと）、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞および内皮細胞においてＥＭＴまたは内皮−ＥＭＴを介在して線維症形成を促進することにより、ＥＭＴ中に機能する（例えば、Ｐａｒｄａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１８  ２１５７  ２０１７を参照のこと）。
【０２４３】
ニューロピリン−２の発現はさらに、リンパ管形成を促進し、および血管透過性を調節し（例えば、Ｄｏｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７５（１４）２９３７−２９４８，２０１５；Ｍｕｃｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ  １８６（１１）２８０３−２８１２  ２０１６を参照のこと）、およびＮＲＰ２の一塩基変異多型（ＳＮＰ）は、リンパ浮腫と関連している（例えば、Ｍｉａｓｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（４）ｅ６０１６４，２０１３を参照のこと）。ＮＲＰ２は、平滑筋の収縮性も制御し（例えば、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１８１：５４８−５５９，２０１２を参照のこと）、発生中の骨格筋で高度に発現されている（例えば、Ｍｅｙｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  ＤＯＩ．１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１３９５２０  ２０１５を参照のこと）。
【０２４４】
ニューロピリンはさらに、腫瘍の開始、増殖、転移およびリンパ管形成、リンパ行性転移、ならびに腫瘍免疫サーベイランスに関与する多機能性のコレセプターであり、それに伴い、腫瘍の開始、生存および転移に直接の原因ともなる（例えば、Ｇｏｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５：４８８−５０８，２０１３；Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎ．Ｒｅｓ．７３（１４）４５７９−４５９０  ２０１３；Ｔｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．１２  ４２２４−４２３０，２０１６），Ｓａｍｕｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６（１０）ｅ２３２０８，２０１１を参照のこと）。
【０２４５】
ニューロピリン２は、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、樹状細胞、および例えば肺胞マクロファージを含むマクロファージなどの免疫系の様々な細胞で発現され、免疫細胞の活性化と遊走の制御に重要な役割を果たし（例えば、Ｍｅｎｄｅｓ−ｄａ−Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ９（７）ｅ１０３４０５，２０１４を参照のこと）、当該制御にはエンドソームの成熟、オートファジーの調節、およびエフェロサイトーシスが含まれる（例えば、Ｓｔａｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７３：１６０−１７１，２０１３，Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｕｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍ  ９０：２３９−２４４，２０１７，Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．４１８  １７６−１８４  ２０１８を参照のこと）。
【０２４６】
ＮＲＰ２はさらに肺の内皮細胞と上皮細胞、および破骨細胞と筋細胞を含む他の組織と細胞型でも発現されている（例えば、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１８１：５４８−５５９，２０１２；Ａｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  １１（２）ｅ０１４７３５８，２０１６；およびＷｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈ．９３：８１−１０３，２０１２を参照のこと）。
【０２４７】
ニューロピリン２は、神経系の発生での能動的な役割を果たし、成人ではＮＲＰ２は、末梢神経の増殖とリモデリングに積極的に関与している。また例えば関節炎、骨関節炎およびリウマチ性関節炎などの炎症性状態における疼痛知覚でも役割を果たしている（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｏｎｅ  ＆  Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．２０１６  ３１（５）９１１−９２４；Ｂａｎｎｅｒｍａｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．２００８  ８６（１４）３１６３−３１６９；Ｍａｌｙｋｈｉｎａ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２０１２，１２，１５を参照のこと）。
【０２４８】
ニューロピリン−２はエンドソームの発生に重要な役割を果たし、そして後期エンドソームの成熟を調節していることも徐々に明らかになっている。これらのプロセスは、ファゴサイトーシスとエフェロサイトーシスで重要であり、それぞれ、感染細胞とアポトーシス細胞のクリアランスにとって重要な役割を果たしている（例えば、Ｄｉａｚ−Ｖｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１３０，６９７−７１１  ２０１７；Ｄｕｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７６（２）４１８−４２８  ２０１６を参照のこと）。
【０２４９】
ニューロピリン−２は、多くの疾患（「ＮＲＰ２関連疾患」）の病態生理において重要なプレイヤーであることが知られており、例えばセマフォリン３Ｆ、ＶＥＧＦ−ＣおよびＤ、ならびにＴＧＦ−ベータなどをはじめとする広範な可溶性リガンド、および多くの細胞受容体と補因子と相互作用する（「ＮＲＰ２リガンド」）（例えば、以下の表Ｎ２、Ｎ３、および図１Ａ〜１Ｂを参照のこと）。
【表Ｎ２−１】
2021531313.tif 000043
【表Ｎ２−２】
2021531313.tif 000044
【表Ｎ３−１】
2021531313.tif 000045
【表Ｎ３−２】
2021531313.tif 000046
【０２５０】
またＮＲＰ２は、樹状細胞上でポリシアル化され、ケモカインＣＣＬ２１と積極的に相互作用して、ＣＣＲ７受容体を介した免疫細胞遊走を介在する。これに関し、ＮＲＰ２の一塩基変異多型は、ＩＬＤとＲＡに関連していることが報告されている（例えば、Ｒｅｙ−Ｇａｌｌａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２０：１１３９−１１４６，２０１０  ．，Ｓｔａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４２：５０８−５１４，２０１３．，Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６５：３２３９−３２４７を参照のこと）。したがって、ＮＲＰ２の可溶性循環型が公知であり（例えば、Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２３（４）６７７−６８７，２０１５を参照のこと）、発明者らの実験により、血清および他の流体中で、ＨＲＳポリペプチドとＮＲＰ２ポリペプチドの循環型複合体が存在することが確認されている。
【０２５１】
病態生理においてＮＲＰ２が中心的な役割を果たすことを考慮すると、ＮＲＰ２とＨＲＳポリペプチドの間の相互作用によって、ＮＲＰ２関連疾患を含む疾患の治療可能性が提供されることが明白である。したがって、表Ｎ２および表Ｎ３に列記されるリガンドのうちの１つ以上とＮＲＰ２の相互作用を選択的に調節することによって、本明細書に記載されるＨＲＳポリペプチドを使用して本明細書に記載される広範な疾患および状態を治療し得る。
【０２５２】
追加的な治療剤および組成物
免疫療法剤。ある実施形態は、１種以上の免疫療法剤を採用する。ある例では、免疫療法剤は、対象の免疫反応を調節して、例えば癌関連または癌特異的な免疫反応を増加させ、または維持し、その結果、癌細胞による免疫細胞阻害または免疫低下の上昇をもたらす。免疫療法剤の例としては、例えば抗体およびその抗原結合断片などのポリペプチド、リガンド、小さなペプチド、およびそれらの混合物が挙げられる。また低分子、細胞（例えばＴ細胞などの免疫細胞）、様々な癌ワクチン、遺伝子療法、または腫瘍溶解性ウイルスを含む他のポリヌクレオチド系の剤、および当分野に公知の他の物質も、免疫療法剤として含まれる。ゆえにある実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞系免疫療法のうちの１つ以上から選択される。
【０２５３】
ある実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤である。特定の例としては、１つ以上の阻害性免疫チェックポイント分子の「アンタゴニスト」、および１つ以上の刺激性免疫チェックポイント分子の「アゴニスト」が挙げられる。一般的に、免疫チェックポイント分子は、シグナルを上向かせる（共刺激性分子）、またはシグナル下向ける、免疫システムの構成要素である。癌細胞は免疫チェックポイント分子の本来の機能を乱し得るため、その標的化は癌治療の可能性を有している（Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８：５６−６１，２０１５；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２７：４５０−４６１，２０１５；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ．１２：２５２−２６４，２０１２）。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤（例えばアンタゴニスト、アゴニスト）は、本明細書に記載の１つ以上の免疫チェックポイント分子に「結合する」、または「特異的に結合する」。
【０２５４】
特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ポリペプチドまたはペプチドである。「ペプチド」と「ポリペプチド」という用語は本明細書に置いて相互交換可能に使用されるが、特定の実施形態では、「ペプチド」という用語は短いポリペプチド、例えばそれらの間のすべての整数および範囲を含む（例えば５〜１０、８〜１２、１０〜１５）、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸からなるポリペプチドを指す場合があり得る。ポリペプチドおよびペプチドは、本明細書に記載されるように、天然アミノ酸および／または非天然アミノ酸から構成され得る。
【０２５５】
抗体もポリペプチドとして含まれる。したがって一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節ポリペプチド剤は、抗体、または本明細書に別段に記載されるように「その抗原結合断片」である。
【０２５６】
一部の実施形態では、剤は、例えば免疫チェックポイント分子の本来のリガンドなどの「リガンド」であり、または含む。「リガンド」とは一般的に、標的分子（例えば生体分子）と複合体を形成して、生物学的な目的を果たす物質または分子を指し、一般的に標的分子または標的タンパク質上の部位に結合することでシグナルを生成する「タンパク質リガンド」が含まれる。ゆえに特定の剤は、自然界において免疫チェックポイント分子に結合してシグナルを生成するタンパク質リガンドである。また、例えば免疫グロブリンから誘導されたＦｃ領域などの薬物動態改変因子に融合されたタンパク質リガンドなどの「改変リガンド」も含まれる。
【０２５７】
ポリペプチドの結合性能は、当分野に公知の方法を使用して定量され得る（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３，１９９０を参照のこと）。一部の実施形態では、ポリペプチドは標的分子、例えば免疫チェックポイント分子またはそのエピトープに、約≦１０−７から約１０−８Ｍであるか、またはその範囲にある平衡解離定数で特異的に結合する。一部の実施形態では、平衡解離定数は、約≦１０−９Ｍから約１０−１０であるか、またはその範囲である。ある例示的実施形態では、ポリペプチドは、本明細書に記載の（特異的に結合する）標的に対し、約、もしくは少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、または５０ｎＭであるか、または未満のアフィニティ（ＫｄまたはＥＣ５０）を有する。
【０２５８】
一部の実施形態では、剤は、「低分子」であり、低分子とは、合成または生物起源（生体分子）である有機化合物を指すが、多くの場合、ポリマーではない。有機化合物とは、化合物の巨大なクラスを指し、その分子は炭素を含有し、典型的には、炭水化物のみ、炭素の単純酸化物、またはシアン化物を含有するものは除外される。「生体分子」とは一般的に、生きた生物体から生成される有機分子を指し、例えばペプチド、多糖および核酸などの巨大な高分子（バイオポリマー）、同様に例えば一次二次代謝物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミンおよびホルモンなどの低分子が含まれる。「ポリマー」とは一般的に、反復構造単位から構成される巨大分子または高分子を指し、それらは通常、共有結合的化学結合により接続される。
【０２５９】
特定の実施形態では、低分子は、約１０００〜２０００ダルトンであるか、または未満、典型的には約３００〜７００ダルトンの分子量を有し、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００または２０００ダルトンであるか、または未満が挙げられる。
【０２６０】
特定の低分子は、本明細書において例えば抗体などのポリペプチドに関し記載される「特異的結合」の特徴を有し得る。例えば一部の実施形態では、低分子は標的、例えば免疫チェックポイント分子に、約、少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０もしくは５０ｎＭであるか、または未満の結合アフィニティ（ＫｄまたはＥＣ５０）で特異的に結合する。
【０２６１】
一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１つまたは複数の阻害性免疫チェックポイント分子のうちのアンタゴニストまたは阻害剤である。例示的な阻害性免疫チェックポイント分子としては、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、プログラム死１（ＰＤ−１）、細胞毒性のＴ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）が挙げられる。
【０２６２】
特定の実施形態では、剤は、ＰＤ−１（受容体）のアンタゴニストまたは阻害剤であり、その標的化により、腫瘍環境中の免疫機能が回復することが示されている（例えばＰｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：３９−４６，２０１５を参照のこと）。ＰＤ−１はイムノグロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体であり、Ｔ細胞およびプロＢ細胞上に発現される。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の２つのリガンドと相互作用する。ＰＤ−１は、例えばＴ細胞活性化を低下させる、または妨害することにより阻害性免疫チェックポイント分子として機能し、これにより自己免疫性を低下させ、自己寛容を促進する。ＰＤ−１の阻害性効果は、少なくとも部分的には、リンパ節中の抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシスを促進しながら制御性Ｔ細胞（抑制性Ｔ細胞）のアポトーシスも低下させるという二重のメカニズムを介して達成される。ＰＤ−１のアンタゴニストまたは阻害剤のいくつかの例としては、ＰＤ−１に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えば下流シグナル伝達やＰＤ−Ｌ１との相互作用を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。ＰＤ−１のアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、抗体のニボルマブ（ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ペムブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ＰＤＲ００１、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４およびピディリズマブ（ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば米国特許第８，００８，４４９号、第８，９９３，７３１号、第９，０７３，９９４号、第９，０８４，７７６号、第９，１０２，７２７号、第９，１０２，７２８号、第９，１８１，３４２号、第９，２１７，０３４号、第９，３８７，２４７号、第９，４９２，５３９号、第９，４９２，５４０号、および米国特許出願２０１２／００３９９０６、２０１５／０２０３５７９を参照のこと）。
【０２６３】
一部の実施形態では、剤は、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１受容体の本来のリガンドの１つである。ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えばＰＤ−１受容体への結合を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニストの具体的な例としては、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば米国特許第９，１０２，７２５号、第９，３９３，３０１号、第９，４０２，８９９号、第９，４３９，９６２号）を参照のこと）。
【０２６４】
一部の実施形態では、剤は、ＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストまたは阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−１受容体の本来のリガンドの１つである。ＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＰＤ−Ｌ２に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数、例えばＰＤ−１受容体への結合を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２６５】
一部の実施形態では、剤は、ＣＴＬＡ−４のアンタゴニストまたは阻害剤である。ＣＴＬＡ４またはＣＴＬＡ−４（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４）は、ＣＤ１５２（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １５２）としても知られており、例えば抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した際に、Ｔ細胞に阻害性シグナルを伝達することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ−４のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。具体的な例としては、抗体のイピリムマブおよびトレメリムマブ、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。イピリムマブの活性の少なくとも一部は、ＣＴＬＡ−４を発現する抑制性Ｔｒｅｇの抗体依存性細胞介在性細胞障害（ＡＤＣＣ）殺傷により介在されると考えられている。
【０２６６】
一部の実施形態では、剤は、ＩＤＯのアンタゴニストもしくは阻害剤、またはＴＤＯのアンタゴニストもしくは阻害剤である。ＩＤＯおよびＴＤＯは免疫阻害性の性質を有するトリプトファン代謝酵素である。例えばＩＤＯは、Ｔ細胞とＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来抑制性細胞を生じさせ、活性化すること、ならびに腫瘍の血管新生を促進することが知られている。ＩＤＯおよびＴＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＩＤＯまたはＴＤＯに特異的に結合し、１つまたは複数の免疫抑制性活性を低下または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる（例えば、Ｐｌａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照のこと）。ＩＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットが挙げられる（例えばＳｈｅｒｉｄａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１−３２２，２０１５を参照のこと）。ＴＤＯのアンタゴニストまたは阻害剤の具体的な例としては、６８０Ｃ９１およびＬＭ１０が挙げられる（例えばＰｉｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０９：２４９７−２５０２，２０１２を参照のこと）。
【０２６７】
一部の実施形態では、剤は、ＴＩＭ−３のアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ３（ＴＩＭ−３）は、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ−細胞上で発現され、Ｔｈ１サイトカインおよびＴｈ１７サイトカインを制御する。ＴＩＭ−３は、そのリガンドであるガレクチン−９との相互作用で細胞死を誘発することにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の制御因子としても作用する。ＴＩＭ−３は、抑制性の腫瘍微小環境に寄与し、その過剰発現は様々な癌において予後不良と関連している（例えばＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ．５４：１７０６−１３，２０１５を参照のこと）。ＴＩＭ−３のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＴＩＭ−３に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させ、または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２６８】
一部の実施形態では、剤は、ＬＡＧ−３のアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｇｅｎｅ−３（ＬＡＧ−３）は、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞上で発現される。ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１に似た様式でＴ細胞の増殖、活性化およびホメオスタシスを負に制御し（例えばＷｏｒｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｖｉｇｎａｌｉ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．３３：９７０−９，２００３；およびＷｏｒｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．１７２：５４５０−５，２００４を参照のこと）、Ｔｒｅｇの抑制性機能において重要な役割を果たすことが報告されている（例えば、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２１：５０３−１３，２００４を参照のこと）。ＬＡＧ３はさらにＣＤ８＋Ｔ−細胞を寛容原性の状態に維持し、ＰＤ−１と結合してＣＤ８  Ｔ細胞の枯渇状態を維持する。ＬＡＧ−３のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＬＡＧ−３に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。具体的な例としては抗体のＢＭＳ−９８６０１６、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０２６９】
一部の実施形態では、剤は、ＶＩＳＴＡのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｖ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）は、造血細胞上で主に発現され、Ｔ細胞活性化を抑制し、Ｆｏｘｐ３発現を誘導し、そして抗腫瘍Ｔ細胞反応が抑制されている腫瘍微小環境内で高度に発現される阻害性免疫チェックポイント制御因子である（例えば、Ｌｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７４：１９２４−３２，２０１４を参照のこと）。ＶＩＳＴＡのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＶＩＳＴＡに特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２７０】
一部の実施形態では、剤は、ＢＴＬＡのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｂ−  ａｎｄ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）の発現はＴ細胞の活性化中に誘導され、細胞表面受容体の腫瘍壊死因子ファミリー受容体（ＴＮＦ−Ｒ）およびＢ７ファミリーとの相互作用を介してＴ細胞を阻害する。ＢＴＬＡは、ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）としても知られているｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳＦ１４）に対するリガンドである。ＢＴＬＡ−ＨＶＥＭ複合体は、例えばヒトＣＤ８＋癌特異的Ｔ−細胞の機能を阻害することによりＴ細胞の免疫反応を負に制御する（例えば、Ｄｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２０：１５７−６７，２００９を参照のこと）。ＢＴＬＡのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＢＴＬＡ−４に特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２７１】
一部の実施形態では、剤は、ＨＶＥＭのアンタゴニストまたは阻害剤であり、例えばＨＶＥＭに特異的に結合し、ＢＴＬＡまたはＣＤ１６０とのその相互作用に干渉するアンタゴニストまたは阻害剤である。ＨＶＥＭのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＨＶＥＭに特異的に結合し、任意でＨＶＥＭ／ＢＴＬＡおよび／またはＨＶＥＭ／ＣＤ１６０の相互作用を低下させ、それによりＨＶＥＭの免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２７２】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ１６０のアンタゴニストまたは阻害剤であり、例えばＣＤ１６０に特異的に結合し、ＨＶＥＭとのその相互作用に干渉するアンタゴニストまたは阻害剤である。ＣＤ１６０のアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＣＤ１６０に特異的に結合し、任意でＣＤ１６０／ＨＶＥＭの相互作用を低下させ、それによりその免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させ、または阻害する抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる。
【０２７３】
一部の実施形態では、剤は、ＴＩＧＩＴのアンタゴニストまたは阻害剤である。Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎ（ＴＩＧＩＴ）は、様々なリンパ系細胞の表面上に存在し、例えばＴｒｅｇを介して抗腫瘍免疫を抑制する共阻害性受容体である（Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５を参照のこと）。ＴＩＧＩＴのアンタゴニストまたは阻害剤の一般的な例としては、ＴＩＧＩＴに特異的に結合し、その免疫抑制性の活性のうちの１つまたは複数を低下させる抗体または抗原結合断片または低分子が挙げられる（例えば、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２６：９２３−３７，２０１４を参照のこと）。
【０２７４】
ある実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１種以上の刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。例示的な刺激性免疫チェックポイント分子としては、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）が挙げられる。
【０２７５】
一部の実施形態では、剤は、ＯＸ４０アゴニストである。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、エフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞の拡張を促進し、Ｔ制御性細胞の分化と活性を抑制する（例えば、Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２２９：１７３−９１，２００９を参照のこと）。そのリガンドは、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）である。ＯＸ４０のシグナル伝達はＴ細胞の活性化と生存の両方に影響を与えるため、リンパ節中の抗腫瘍免疫反応の開始と、腫瘍微小環境中の抗腫瘍免疫反応の維持に重要な役割を果たす。ＯＸ４０のアゴニストの一般的な例としては、ＯＸ４０に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＯＸ８６、ＯＸ−４０Ｌ、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＥＤＩ０５６２（ヒト化ＯＸ４０アゴニスト）、ＭＥＤＩ６４６９（マウスＯＸ４アゴニスト）、およびＭＥＤＩ６３８３（ＯＸ４０アゴニスト）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０２７６】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ４０アゴニストである。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）および一部の悪性腫瘍で発現される。そのリガンドは、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）である。ＡＰＣ上でのライゲーションにより共刺激性分子の上方制御が生じ、抗腫瘍免疫反応においてＴ細胞の支援の必要性を回避する可能性がある。ＣＤ４０アゴニスト療法は、ＡＰＣの成熟、および腫瘍からリンパ節へのＡＰＣの移動に重要な役割を果たし、抗原提示とＴ細胞活性化の上昇をもたらす。抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、動物モデルにおいて、少なくとも部分的には細胞障害性Ｔ細胞により介在される効果である充分な反応性と長期的な抗癌免疫をもたらす（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１：１３２１−１３２８，２０１５；およびＶｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ  ａｎｄ  Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：１０３５−４３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ４０のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ４０に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３、ＣＤ４０Ｌ、ｒｈＣＤ４０Ｌ、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０２７７】
一部の実施形態では、剤は、ＧＩＴＲアゴニストである。Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ  ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ（ＧＩＴＲ）は、Ｔ細胞の拡張を増加させ、Ｔｒｅｇの抑制性の活性を阻害し、そしてＴ−エフェクター細胞の生存期間を延長させる。ＧＩＴＲのアゴニストは、Ｔｒｅｇ系統の安定性の減少を通じて、抗腫瘍反応を促進することが示されている（例えば、Ｓｃｈａｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．１：３２０−３１，２０１３を参照のこと）。これら多様なメカニズムは、ＧＩＴＲがリンパ節での免疫反応の開始と、腫瘍組織での免疫反応の維持に重要な役割を果たしていることを示している。そのリガンドは、ＧＩＴＲＬである。ＧＩＴＲのアゴニストの一般的な例としては、ＧＩＴＲに特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＧＩＴＲＬ、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、ＭＥＤＩ１８７３、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０２７８】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ１３７アゴニストである。ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーの１種であり、ＣＤ１３７の交差結合によりＴ細胞の増殖、ＩＬ−２分泌、生存および細胞溶解活性が強化される。ＣＤ１３７介在シグナル伝達も、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞を活性化誘導性細胞死から保護する。ＣＤ１３７のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ１３７に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としては、ＣＤ１３７（または４−１ＢＢ）リガンド（例えばＳｈａｏ  ａｎｄ  Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．８９：２１−９，２０１１を参照のこと）およびその抗原結合断片を含む、抗体のウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）が挙げられる。
【０２７９】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２７アゴニストである。ＣＤ２７の刺激により、ナイーブＴ細胞の抗原特異的拡張が増加し、Ｔ細胞メモリーと、Ｔ細胞免疫の長期維持に寄与する。そのリガンドは、ＣＤ７０である。アゴニスト抗体を用いてヒトＣＤ２７を標的化することで、Ｔ細胞活性化と抗腫瘍免疫が刺激される（例えば、Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１４；３：ｅ２７２５５．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２７２５５；およびＨｅ  ｅｔ  ａｌ  ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４１７４−８３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ２７のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２７に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としてはＣＤ７０、ならびにその抗原結合断片を含む抗体のバルリルマブおよびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）が挙げられる。
【０２８０】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２８アゴニストである。ＣＤ２８は構造的にＣＤ４＋Ｔ細胞と一部のＣＤ８＋Ｔ細胞に発現される。そのリガンドとしてはＣＤ８０とＣＤ８６が挙げられ、その刺激によりＴ細胞拡張が増加する。ＣＤ２８のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２８に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。具体的な例としてはＣＤ８０、ＣＤ８６、抗体のＴＡＢ０８、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０２８１】
一部の実施形態では、剤は、ＣＤ２２６アゴニストである。ＣＤ２２６は、ＴＩＧＩＴとリガンドを共有する刺激性受容体である。ＴＩＧＩＴとは反対に、ＣＤ２２６との会合によってＴ細胞活性化が強化される（例えば、Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５；Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８４：５５７−５６７，２００３；およびＴａｈａｒａ−Ｈａｎａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５３３−５３８，２００４を参照のこと）。ＣＤ２２６のアゴニストの一般的な例としては、ＣＤ２２６に特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンド（例えばＣＤ１１２、ＣＤ１５５）が挙げられる。
【０２８２】
一部の実施形態では、剤は、ＨＶＥＭアゴニストである。Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ（ＨＶＥＭ）は、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  １４（ＴＮＦＲＳＦ１４）としても知られており、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのヒト細胞表面受容体である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞、ＡＰＣ、および他の免疫細胞を含む様々な細胞上に見出される。他の受容体とは異なり、ＨＶＥＭは高レベルで休息状態のＴ細胞上に発現され、活性化すると下方制御される。ＨＶＥＭシグナル伝達は、Ｔ細胞活性化の早期フェーズと、リンパ節での腫瘍特異的リンパ球集団の拡張中に重要な役割を果たすことが示されている。ＨＶＥＭのアゴニストの一般的な例としては、ＨＶＥＭに特異的に結合し、その免疫刺激性の活性のうちの１つまたは複数を増加させる抗体または抗原結合断片または低分子またはリガンドが挙げられる。
【０２８３】
ある特定の実施形態では、癌免疫療法剤は癌ワクチンである。例示的な癌ワクチンとしては、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、例えばガーダシルまたはサーバリックスなど、Ｂ型肝炎ワクチン、例えばエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、またはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）など、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）が挙げられる。一部の実施形態では、癌ワクチンは、１つまたは複数の癌抗原または癌関連抗原を含むかまたは利用する。例示的な癌抗原としては、限定はないが、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＲ−３、ＮＲＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原が挙げられる。
【０２８４】
ある特定の実施形態では、癌免疫療法剤は癌ワクチンである。腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞に選択的に感染し、殺傷するウイルスである。天然腫瘍溶解性ウイルス、および人工または遺伝子操作された腫瘍溶解性ウイルスが含まれる。ほとんどの腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍選択性に関して遺伝子操作されるが、例えばレオウイルスおよびＳＶＶ−００１セネカバレーウイルスなどの天然例も存在する。腫瘍溶解性ウイルスの一般的な例としては、ＶＳＶ、ポリオウイルス、レオウイルス、セネカウイルス、およびＲＩＧＶＩＲ、ならびにそれらの遺伝子操作型が挙げられる。腫瘍溶解性ウイルスの非限定的な例としては特に、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）およびその遺伝子改変型、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１が挙げられる。
【０２８５】
ある実施形態では、癌免疫療法剤は、サイトカインである。サイトカインの例としては、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が挙げられる。
【０２８６】
ある実施形態では、癌免疫療法剤は、例えばＴ細胞系の養子免疫療法などの細胞系免疫療法である。一部の実施形態では、細胞系免疫療法は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的に体外誘導されたＴ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される。具体的な実施形態では、ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ＣＤ−１９に対して標的化される（例えば、Ｍａｕｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１２５：４０１７−４０２３，２０１５を参照のこと）。
【０２８７】
ある特定の例では、治療される癌は、癌抗原に関連する、すなわち、癌抗原特異的Ｔ細胞は、治療される癌に関連することが知られている少なくとも１つの抗原に対して標的化されるか、または富化される。一部の実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１９、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される。
【０２８８】
追加的な例示的な癌抗原としては、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ  ＨＰＧ１、アルファ−５−ベータ−１−インテグリン、アルファ−５−ベータ−６−インテグリン、アルファ−アクチニン−４／ｍ、アルファ−メチルアシル−補酵素Ａラセマーゼ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ−カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ−４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ１５−３／ＣＡ２７−２９、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、コアクトシン様タンパク質、ｃｏｌｌａｇｅＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａｕ−１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１  ７Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１  １／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ，ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未熟ラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ−ＬＣ−１、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ−Ａ１、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−２／ｍ、マトリックスタンパク質２２、ＭＣＩＲ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ−抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシンクラスｌ／ｍ、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ−Ｖ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＦＡ���ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐｉ５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１キナーゼ、Ｐｉｎ−１、Ｐｍｌ／ＰＡＲアルファ、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４，ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ−１、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦ−ベータ、ＴＧＦベータＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１、およびＷＴ１が挙げられる。ある特定の好適な抗原としては、ｐ５３、ＣＡ１２５、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＰＡＰ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、メソテリン、ＭＵＣ−１、ＧＰ１００、ＭＡＲＴ−１、チロシナーゼ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ−１、Ｒａｓ、ＣＥＡおよびＷＴ１が、より好ましくはＰＡＰ、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＷＴ１、およびＭＵＣ−１が挙げられる。
【０２８９】
一部の実施形態では抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ１（例えば受入番号Ｍ７７４８１によるＭＡＧＥ−Ａ１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６（例えば受入番号ＮＭ＿００５３６３によるＭＡＧＥ−Ａ６）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、メラン−Ａ（例えば受入番号ＮＭ＿００５５１１によるメラン−Ａ）、ＧＰ１００（例えば受入番号Ｍ７７３４８によるＧＰ１００）、チロシナーゼ（例えば受入番号ＮＭ＿０００３７２によるチロシナーゼ）、サバイビン（例えば受入番号ＡＦ０７７３５０によるサバイビン）、ＣＥＡ（例えば受入番号ＮＭ＿００４３６３によるＣＥＡ）、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（例えば受入番号Ｍ１１７３０によるＨｅｒ−２／ｎｅｕ）、ＷＴ１（例えば受入番号ＮＭ＿０００３７８による）、ＰＲＡＭＥ（例えば受入番号ＮＭ＿００６１１５によるＰＲＡＭＥ）、ＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１）（例えば受入番号ＡＦ２８８７３８によるＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１））、ＭＵＣ１、ムチン−１（例えば受入番号ＮＭ＿００２４５６によるムチン−１）、ＳＥＣ６１Ｇ（例えば受入番号ＮＭ＿０１４３０２によるＳＥＣ６１Ｇ）、ｈＴＥＲＴ（例えば受入番号ＮＭ＿１９８２５３によるｈＴＥＲＴ）、５Ｔ４（例えば受入番号ＮＭ＿００６６７０による５Ｔ４）、ＴＲＰ−２（例えば受入番号ＮＭ＿００１９２２によるＴＲＰ−２）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮性抗原１）、ＰＳＣＡ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡなどから選択される。
【０２９０】
一部の実施形態では、癌抗原は、その断片、バリアント、および誘導体を含めてＰＣＡ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ、および任意選択的にＭＵＣ−１から選択される。一部の実施形態では、癌抗原は、その断片、バリアント、および誘導体を含めてＮＹ−ＥＳＯ−１，、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、サバイビン、５Ｔ４、および任意選択的にＭＵＣ−１から選択される。
【０２９１】
一部の場合では、癌抗原は、癌および腫瘍疾患、具体的にはリンパ腫またはリンパ腫関連疾患に関連するイディオタイプ抗原を包含し、例えば、このイディオタイプ抗原は、リンパ球系血液細胞の免疫グロブリンイディオタイプ、またはリンパ球系血液細胞のＴ細胞受容体イディオタイプである。
【０２９２】
一部の場合では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞（例えば癌抗原を標的とされた）およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうち１つまたは複数から選択される。
【０２９３】
当業者は、本明細書に記載の様々な癌免疫療法剤を、本明細書に記載の様々なＨＲＳポリペプチドのうち任意の１つまたは複数と併用し、本明細書に記載の方法または組成物のうち任意の１つまたは複数に従って使用できることを認識するものとなる。
【０２９４】
化学療法剤。ある特定の実施形態は、１つまたは複数の化学療法剤、例えば低分子化学療法剤を採用する。化学療法剤の非限定的な例としては、特にアルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、微小管阻害剤が挙げられる。
【０２９５】
アルキル化剤の例としては、ナイトロジェンマスタード（例えばメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（例えばＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（例えばダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（例えばチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（例えばカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（例えばプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）が挙げられる。
【０２９６】
葉酸代謝拮抗剤の例としては、（例えばメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（例えば５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（例えばアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（例えばチオグアニンおよびメルカプトプリン）が挙げられる。
細胞傷害性抗生物質の例としては、アントラサイクリン（例えばドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシン  Ｃ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンが挙げられる。トポイソメラーゼ阻害剤の例としては、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンが挙げられる。
【０２９７】
微小管阻害剤の例としては、タキサン（例えばパクリタキセルおよびドセタキセル）ならびにビンカアルカロイド（例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）が挙げられる。
【０２９８】
当業者は、本明細書に記載の様々な化学療法剤を、本明細書に記載の様々なＨＲＳポリペプチドのうち任意の１つまたは複数と併用し、本明細書に記載の方法または組成物のうち任意の１つまたは複数に従って使用できることを認識するものとなる。
【０２９９】
ホルモン治療剤。ある実施形態は、少なくとも１種のホルモン治療剤を採用する。ホルモン治療剤の一般的な例としては、ホルモン性アゴニストおよびホルモン性アンタゴニストが挙げられる。ホルモン性アゴニストの特定の例としては、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、またはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生因子およびリンパ管新生因子（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチンアナログが挙げられる。ホルモン性アンタゴニストの例としては、例えば、それらのアナログを含む、アロマターゼ阻害剤およびゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニスト（例えば、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）、ゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）、トリプトレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）、ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ））などのホルモン合成阻害剤が挙げられる。また例えば、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ；例えば、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ））および坑アンドロゲン剤（例えば、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ））などのホルモン受容体アンタゴニストも含まれる。
【０３００】
また例えば、ホルモン受容体を指向する抗体などのホルモン性経路阻害剤も含まれる。例としては、ＩＧＦ受容体（例えばＩＧＦ−ＩＲ１）の阻害剤、例えばシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、およびロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）など；血管内皮成長因子受容体１、２、もしくは３（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、もしくはＶＥＧＦＲ３）の阻害剤、例えばアラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブなど；ＴＧＦ−ベータ受容体Ｒ１、Ｒ２、もしくはＲ３の阻害剤、例えばフレゾリムマブおよびメテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）など；ｃ−Ｍｅｔの阻害剤、例えばナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）など；ＥＧＦ受容体の阻害剤、例えばセツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、およびザルツムマブなど；ＦＧＦ受容体の阻害剤、例えばアプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）およびべマリツズマブなど；ならぶにＰＤＧＦ受容体の阻害剤、例えばオララツマブおよびトベツマブが挙げられる。
【０３０１】
当業者は、本明細書に記載の様々なホルモン治療剤を、本明細書に記載の様々なＨＲＳポリペプチドのうち任意の１つまたは複数と併用し、本明細書に記載の方法または組成物のうち任意の１つまたは複数に従って使用できることを認識するものとなる。
【０３０２】
キナーゼ阻害剤。ある実施形態は、チロシンキナーゼ阻害剤およびホスホイノシタイド３（ＰＩ３）キナーゼ阻害剤を含む、少なくとも１種のキナーゼ阻害剤を採用する。キナーゼ阻害剤としては、限定はないが、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つまたは複数から選択される。例示的なＰＩ３キナーゼ阻害剤としては、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７が挙げられる。
【０３０３】
当業者であれば、本明細書に記載の様々なキナーゼ阻害剤が、本明細書に記載の様々なＨＲＳポリペプチドの任意の１つ以上と組み合わされ得ること、ならびに本明細書に記載の方法または組成物の任意の１つ以上に従い使用され得ることを認識するであろう。
【０３０４】
使用方法
ある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含む、その必要のある対象の疾患または状態を治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、ヒトニューロピリン−２（ＮＲＰ２）ポリペプチドに特異的に結合する（表Ｎ１を参照のこと）。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、ヒトＮＲＰ２ポリペプチドがＮＲＰ２リガンドに結合することに干渉する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、例えば、ＮＲＰ２リガンドのアゴニスト、部分アゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、逆アゴニストとして作用することにより、ＮＲＰ２ポリペプチドとＮＲＰ２リガンドの結合によるシグナル伝達活性の１つ以上を模倣する。ＮＲＰ２リガンドの例は、表Ｎ２および表Ｎ３に提示する。
【０３０５】
ある特定の実施形態では、それを必要とする対象は、ＮＲＰ２に関連する疾患または状態を有する。例示的なＮＲＰ２に関連する疾患および状態としては、限定はないが、癌および癌に関連する疾患または病態が挙げられ、そのようなものとしては、癌細胞の成長、癌の開始、癌の遊走、癌細胞の接着、癌細胞の浸潤、癌細胞の化学療法抵抗性、および癌細胞の転移が挙げられる。また挙げられるのは、炎症および自己免疫に関連する疾患であって、そのようなものとしては、炎症性肺疾患、例えば過敏性肺炎および肺炎症、および関連の炎症性疾患などが挙げられる。また挙げられるのは、不適切な免疫細胞の活性化または遊走に関連する疾患、例えば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）およびリウマチ性関節炎関連間質性肺疾患（ＲＡ−ＩＬＤ）などである。追加的な例としては、リンパ管の発生、リンパ管新生、およびリンパ管の損傷に関連する疾患が挙げられ、そのようなものとしては、浮腫、リンパ浮腫、二次リンパ浮腫、不適切な脂肪の吸収および沈着、過剰な脂肪の沈着、ならびに血管透過性が挙げられる。また挙げられるのは、潜伏感染を含めた感染に関連する疾患、およびアレルギー障害／疾患およびアレルギー応答に関連する疾患であって、そのようなものとしては、慢性閉塞性肺障害（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、インフラマソーム関連疾患、および皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症などが挙げられる。追加的な例としては、肉芽腫性炎症性疾患に関連する疾患が挙げられ、そのようなものとしては、サルコイドーシス、他の肉芽腫性肺疾患、および非肺肉芽腫が挙げられる。さらに挙げられるのは、線維性疾患、中でも例えば子宮内膜症、線維症、内皮間葉転換（ＥＭＴ）、および創傷治癒などである。さらに挙げられるのは、不適切な平滑筋の収縮性ならびに血管平滑筋細胞の遊走および／または接着に関連する疾患、ならびに不適切なオートファジー、貪食作用、およびエフェロサイトーシスに関連する疾患である。追加的な例としては、末梢神経系リモデリングおよび痛覚に関連する疾患を含めた、神経細胞疾患が挙げられる。さらに挙げられるのは、骨発生および／または骨リモデリングに関連する疾患、ならびに不適切な遊走性細胞の移動に関連する疾患である。
【０３０６】
一部の実施形態では、対象は、例えば健康なまたはマッチされた対照または参照の対象の集団のレベルに比べて、結合型もしくは遊離型のどちらかの（例えば表Ｎ１から選択される）可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドまたはそのコードするｍＲＮＡの細胞外液（例えば循環または血清）中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２の細胞外液中レベルは、血清、血漿、リンパ液、間質液に、および／またはＮＲＰ２関連疾患に関連する特定の組織コンパートメント、例えば気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）および滑液などに検出される。一部の実施形態では、可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドの細胞外液中レベルは、およそまたは少なくとも約１０、２０、３０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ポリペプチド、または約３０〜５０、５０〜１００、１００〜２０００、２００〜２０００、３００〜２０００、４００〜２０００、５００〜２０００、６００〜２０００、７００〜２０００、８００〜２０００、９００〜２０００、１０００〜２０００、２０００〜３０００、３０００〜４０００、４０００〜５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドである。
【０３０７】
一部の実施形態では、対象は、非疾患対照の細胞または組織、例としてＮＲＰ２関連疾患の細胞または組織と同じタイプの非疾患対照の細胞または組織と比べて、結合型もしくは遊離型のどちらかの（例えば表Ｎ１から選択される）可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドまたはそのコードするｍＲＮＡのレベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。例として、一部の実施形態では、ＮＲＰ２関連疾患の細胞または組織における可溶性ＮＲＰ２ポリペプチド（またはそのコードするｍＲＮＡ）のレベルは、非疾患対照の細胞または組織のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える。そのため、一部の実施形態は、治療のための対象を選択する方法を含み、この方法は、（ｉ）対照または参照と比べた対象における可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドおよび／またはそれをコードするｍＲＮＡの細胞外液中レベルを決定することと、（ｉｉ）対照または参照に対する可溶性ＮＲＰ２ポリペプチドおよび／またはそのコードするｍＲＮＡのレベルの増加を対象が有する場合に、本明細書に記載されるように少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドを治療用組成物を対象に投与することとを含む。
【０３０８】
一部の実施形態では、対象は、健康なまたはマッチさせた対照の標準または参照の対象の集団に比べて、ＮＲＰ２リガンドの細胞外液中レベルの増加、または（任意選択的に表Ｎ１および表Ｎ２から選択される）ＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、例えばレベルは、対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える。ある特定の実施形態は、それゆえに治療のための対象を選択する方法を含み、この方法は、（ｉ）対照または参照に対する対象におけるＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体の細胞外液中レベルを決定することと、（ｉｉ）対照または参照に対するＮＲＰ２：ＮＲＰ２リガンド複合体レベルの増加を対象が有する場合に、本明細書に記載されるように少なくとも１つのＨＲＳ−ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することとを含む。
【０３０９】
一部の実施形態では、対象は、健康なまたはマッチさせた対照の標準または参照の対象の集団に比べて、（任意選択的に表Ｈ１および表Ｎ１から選択される）ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルの増加を有する、および／または有することに基づいて治療が選択され、例えばレベルは、対照または参照のレベルのおよそまたは少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれを超える。ある特定の実施形態は、それゆえに治療のための対象を選択する方法を含み、この方法は、（ｉ）対照または参照に対する対象におけるＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の細胞外液中レベルを決定することと、（ｉｉ）対照または参照に対するＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体レベルの増加を対象が有する場合に、本明細書に記載されるように少なくとも１つのＨＲＳ−ポリペプチドを含む治療用組成物を対象に投与することとを含む。
【０３１０】
一部の実施形態では、対象は、対象由来のＮＲＰ２ポリペプチドまたはＮＲＰ２をコードするポリヌクレオチドに一塩基多型（ＳＮＰ）を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【０３１１】
一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、ＮＲＰ２ａおよび／もしくはＮＲＰ２ｂのレベルもしくは発現の増加、またはＮＲＰ２ａ：ＮＲＰ２ｂの発現の比率の変化に関連する疾患を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ｂのレベルは、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団に比べて、およそまたは少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％増加する。
【０３１２】
一部の実施形態では、健康な対照もしくはマッチさせた対照の標準または対象の集団は、その癌と同じタイプの癌性または非癌性の細胞または組織の年齢をマッチさせた試料について平均的な領域を含み、それらの試料は、特異的な特徴、例えば薬剤耐性、転移能、侵襲性、遺伝的な特性（任意選択的にｐ５３変異、ＰＴＥＮ欠失、ＩＧＦＲ発現）、および／または発現パターンなどを含む。
【０３１３】
一部の実施形態では、対象は、感染を有する、および／または有することに基づいて治療が選択される。一部の場合では、感染は、リンパ浮腫関連感染、例えば丹毒、蜂窩織炎、リンパ管炎、および／または敗血症である。
【０３１４】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、第２の剤、例えば抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤との併用で投与される。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドおよび第２の剤は、同じ治療用組成物の一部分として合わせて投与される。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドおよび第２の剤は、別々の治療用組成物として投与される。一部の実施形態では、第２の剤は、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される。
【０３１５】
リンパ浮腫のＨＲＳ  ポリペプチド介在治療
リンパ浮腫は、米国および西洋諸国において、癌外科手術、肥満、うっ血性心不全、高血圧、および／または末梢血管／静脈性疾患の結果として最も頻繁に発生する慢性消耗性疾患である。癌治療の状況下において、リンパ浮腫は、リンパ系に対する医原性損傷の結果として発生し、最も多くはリンパ節切開後に発生するが、広範な皮膚切除や放射線照射と伴うアジュバント療法の結果としても発生する。（例えば、Ｐｕｒｕｓｈｏｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：４３１２−４３２１，２００５；Ｓｚｕｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ９５：２２６０−２２６７，２００２；Ｔｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１６：１９５９−７２，２００９を参照のこと）。
【０３１６】
リンパ節切開を受けた患者の３人に１人がリンパ浮腫を発生させると推定されており、控えめに見積もっても毎年５０，０００人もの新たな患者が診断されていると示唆されている。（例えば、ＤｉＳｉｐｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．１４：５００−５１５，２０１３；Ｐｅｔｒｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ８３：２７７６−２７８１，１９９８を参照のこと）。リンパ浮腫は生涯にわたる疾患であるため、罹患者の数は毎年増加し、現在は５〜６００万人の米国人患者（Ｒｏｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１１３１：１４７−１５４，２００８）、および世界では２億人の患者がいると推定されている。リンパ浮腫の発症は、癌患者の生存とほぼ直線的に相関しており、患者数は将来にわたり増加し続ける可能性が高い。そして例えば肥満や放射線治療などのリンパ浮腫に対する公知のリスク因子の罹患率も上昇している（例えば、Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：９６−１１１，２００１を参照のこと）。
【０３１７】
二次性のリンパ浮腫は発症するまで数年かかる場合もある。このことから、その発症はリンパ損傷のみが原因ではなく、根底にある慢性炎症状態により引き起こされる場合もあることが示唆される。リンパ浮腫におけるＣＤ４＋細胞の応答は、他の繊維増殖性障害と同様に、Ｔｈ１／Ｔｈ２の混合細胞集団を特徴とする。（Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２７：１１１４−１１２６，２０１３）。ネイティブなＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔ−ヘルパー細胞またはＴｈ細胞としても知られており、二次リンパ構造を巡回し、活性化されると、多くの異なる／重複する細胞型（例えば、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔ制御性など）とともに分化する。Ｔｈ２細胞サブセットは、寄生体に対する応答と一部の自己免疫性応答の制御において重要な役割を果たす。これらの細胞も、心臓、肺、腎臓および皮膚を含む多数の器官系において繊維増殖性疾患の病態に関与している。近年の研究により、リンパ浮腫の患者から得た組織生検においてＴｈ２細胞の数が増加していること、およびＴｈ２分化を阻害することで、マウスモデルにおいてリンパ浮腫の病状が減少することが示されている。
【０３１８】
ＣＤ４＋細胞またはマクロファージ（ＣＤ８＋細胞を含む他の炎症性細胞型ではない）の枯渇、またはＴｈ２分化の阻害（全身性炎症ではなく、またはインターロイキン−６の阻害でもない）によって、前臨床マウスモデルにおいて、線維症の程度が著しく減少し、リンパ管形成とリンパ液の輸送が増加し、そして確立されたリンパ浮腫が効果的に治療された。（例えば、Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２７：１１１４−１１２６，２０１３；Ｚａｍｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ７：ｅ４９９４０，２０１２；Ｇｈａｎｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０８：Ｈ１０６５−１０７７，２０１５を参照のこと）。これらの研究結果は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン（ＩＬ）−４、ＩＬ−１３およびＴＧＦ−β１を含む、抗リンパ管形成サイトカイン／増殖因子を産生することにより、Ｔ細胞がリンパ管形成を強く阻害していることを示した近年の研究により支持される。（例えば、Ｋａｔａｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３４：９６−１０７，２０１１；Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．６：６１９６，２０１５；Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２６：５６８−５７４，２００６；Ｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１１：４５７１−４５７９，２００８，Ｃｏｒｌｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２３（２）９５−１２１，２０１６を参照のこと）。まとめると、これらの研究結果から、浸潤性ＣＤ４＋細胞とマクロファージは、リンパ浮腫組織において、組織線維症に続発するリンパ管の構造変化の誘導と、側副リンパ管形成の阻害を含む複数のメカニズムを介してリンパ機能を低下させていることが示唆される。
【０３１９】
リンパ浮腫は外観を損ない、衰弱させる；患者には慢性的な罹患四肢の膨張、再発性の感染、運動制限、および生活の質の低下がある。（例えば、Ｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  １１８：２２３７−２２４９，２０１２を参照のこと）。さらにいったんリンパ浮腫が発症すると、通常は進行性となる。現在のところ、リンパ浮腫の進行を止め、または消散を促進することができる薬理学的な治療法は知られていない。（例えば、Ｃｏｒｍｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１９：６４２−６５１，２０１２を参照のこと）。結果として、患者はタイトで不快な衣服を残りの生涯にわたって着用し、罹患四肢にリンパ液が蓄積しないよう努め、そしてハードで時間のかかる理学療法処置を受けることが求められる。（例えば、Ｋｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．，６７：８４１−８４６，２００７を参照のこと）。さらに、慢性的に続くケアを受けているにもかかわらず、一部の患者は疾患がかなり進行し、膨張が増加して、リンパ浮腫のある手足に頻繁に感染が発生する。ゆえにリンパ浮腫に対する標的化治療の開発は、重要な目的であり、生物医学的なアンメットニーズである。
【０３２０】
成人のリンパリモデリングの制御におけるＮＲＰ２の直接的な役割は、ＮＲＰ２  ＫＯマウスにおいて炎症チャレンジが行われた後、浮腫が強化されたことを示す動物ノックシステム（例えば、Ｍｕｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ  １８６（１１）２８０３−２８１２，２０１６を参照のこと）、ならびにニューロピリン−２にＳＮＰを有する対象において二次性リンパ浮腫に対する疾患感受性が増加していること、の両方が示されている。（例えば、Ｍｉａｓｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（４）ｅ６０１６４，２０１３を参照のこと）。さらに、免疫細胞上のＮＲＰ２の発現、およびＨＲＳポリペプチドによる当該活性の制御は、血管生態に対する潜在的なＮＲＰ２介在性作用の調整に加えて、ＨＲＳポリペプチドが、リンパ浮腫の治療に対する新規で有望な治療選択となることを強く示唆するものである。
【０３２１】
一部の実施形態では、対象は、以下に示されるように、ステージ１、ステージ２、ステージ３、ステージ４、ステージ５、ステージ６、およびステージ７から選択されるステージのリンパ浮腫を有し、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【０３２２】
ステージ１、１日の間に膨張が増加し、典型的には、患者がベッドで横になったときに一晩かけて消失する。罹患組織は、圧痕ステージにあり、指先で押したときに罹患領域はへこみ、そして上昇しながら元に戻る。
【０３２３】
ステージ２、膨張は一晩では戻らず、適切な管理をしなければ消失しない。罹患組織は、弾力のある硬さであり、非圧痕性とみなされる。指先で押されたときに罹患領域はへこまずに跳ね返る。線維症がステージ２において見いだされ、リンパ浮腫は手足の硬化とサイズ膨張の開始の合図となる。
【０３２４】
ステージ３、膨張は不可逆的で、罹患組織（例えば、手足）は多くの場合、ますます大きくなる。罹患組織は硬く（線維性）、無反応である。
【０３２５】
ステージ４、罹患組織（例えば、手足）のサイズと外周は著しく大きくなる。瘤、しこり、および／または突起（隆起とも呼ばれる）が皮膚上に現れ始める。
【０３２６】
ステージ５、罹患組織（例えば、手足）は極めて大きくなる。一部の症例では、１か所以上の深い皮膚のひだがこのステージで拡がる。
【０３２７】
ステージ６、小さな細長い隆起、または小さな丸みを帯びたサイズの隆起がクラスター化し、その結果、罹患組織（例えば、手足）上で苔状となる。対象の運動性は著しく低下する。
【０３２８】
ステージ７、対象は障害を負い、例えば歩行、入浴および料理などの日常的な日々の活動を一人で行うことができなくなる。家族またはヘルスケアシステムからの補助が必要となる。
【０３２９】
一部の実施形態では、以下に示されるように、対象は、グレード１（軽度浮腫）、グレード２（中程度浮腫）、グレード３ａ（重度浮腫）、グレード３ｂ（広範性浮腫）、およびグレード４（巨大浮腫）から選択されるリンパ浮腫のグレードを有し、および／または有することに基づいて治療が選択される。
【０３３０】
グレード１（軽度浮腫）は、例えば前腕および手、または下腿および足などの末端部を含む。外周の差異は、４ｃｍ未満であり、他の組織の変化は現れていない。
【０３３１】
グレード２（中程度浮腫）は、手足全体または対応する胴体部の四半分を含む。外周の差異は４〜６ｃｍである。例えば圧痕などの組織変化が現れる。対象は、真皮上層および表在性リンパ管の感染である単独を経験し、通常、この原因は、ベータ溶血性のＡ群連鎖球菌である。
【０３３２】
グレード３ａ（重度浮腫）リンパ浮腫が１つの手足と、その関連する胴体四半分に現れる。外周の差異は６センチメートルを超える。例えば角質化または角化症、嚢胞および／または瘻などの顕著な皮膚の変化が現れる。さらに対象は、丹毒による攻撃を繰り返し受ける。
【０３３３】
グレード３ｂ（広範性浮腫）は、２か所以上の四肢が罹患していることを除き、グレード３ａと同じ症状を含む。
【０３３４】
グレード４（巨大浮腫）、罹患四肢は巨大化し、その原因はほぼ完全なリンパ管の閉塞である。
【０３３５】
ゆえにある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象のリンパ浮腫を治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。
【０３３６】
線維症のＨＲＳポリペプチド介在性治療
線維症は広範な病型を包含しており、例えば全身性硬化症、強皮症性移植片対宿主病、腎性全身性線維症、リンパ浮腫関連線維症、およびＩｇＧ４関連硬化症などの全身性の線維症、ならびに放射線誘発性線維症ならびに心臓線維症、肺線維症、肝線維症および腎線維症を含む多くの器官特異的疾患が含まれる。その原因となるメカニズムは非常に多様であるが、これらの疾患は、罹患器官に線維性組織高分子が制御不能および進行性に蓄積して、機能障害および最終的には機能不全に繋がるという共通した特徴を有している。多くの研究により、線維形成プロセスの確立と進行の原因となる細胞として筋線維芽細胞が特定されている。線維症の組織筋線維芽細胞は、休止状態の組織線維芽細胞、循環ＣＤ３４＋線維芽細胞を含むいくつかの源、および上皮細胞や内皮細胞を含む様々な細胞型が活性化筋線維芽細胞へと表現型転換することが起源となっている。
【０３３７】
形質転換増殖因子ベータ−１（ＴＧＦ−β１）は、様々な器官系において線維症の重要な制御因子であり、直接的なメカニズムを介して線維芽細胞によるコラーゲン産生を増加させ、マトリクス産生物のターンオーバーを減少させるよう作用する。（例えば、Ｗｉｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６６：１３２１−１３３２，２００５；Ｓａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８４：２６１１−２６１７，２０１４；Ｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８８：Ｆ８００−Ｆ８０９，２００５；Ｂｏｎｎｉａｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２０９９−２１０８，２００４を参照のこと）。さらにＮＲＰ２は、直接的に線維症を生じさせるＴＧＦ−β１介在性ＥＭＴを制御すること（例えば、Ｇｒａｎｄｃｌｅｍｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６（７）ｅ２０４４４，２０１１を参照のこと）、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞および内皮細胞におけるＥＭＴまたは内皮−ＥＭＴを介在して、線維症の形成を促進すること（例えば、Ｐａｒｄａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１８  ２１５７  ２０１７を参照のこと）に直接的な役割を果たしている。さらにＴＧＦ−β１は、炎症反応の重要な制御因子であり、慢性炎症を調節することにより間接的に線維症を制御すると考えられている。（Ｐｅｓｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．５：ｅ１０００３７１，２００９）。
【０３３８】
さらに、ＴＧＦ−β１は、臨床において、およびリンパ浮腫の動物モデルの両方においてリンパ浮腫性組織を著しく増大させる。免疫療法を使用したＴＧＦ−β１の阻害によって、マウス尾モデルにおいてリンパ流の再生が著しく加速され、線維症が減少し、炎症が減少し、そしてリンパ機能が改善された。（例えば、Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．１２４：４３８−４５０，２００９；Ｃｌａｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９５：Ｈ２１１３−Ｈ２１２７，２００８；Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７７：３２０２−３２１４，２０１０を参照のこと）。線維症反応を阻害することによって、リンパ系が間質液と炎症細胞を輸送る能力が保護された。
【０３３９】
近年の研究により、ＣＤ４＋細胞とマクロファージが、臨床および浮腫動物モデルの両方において線維症の制御に重要な役割を果たしていることが示された。（例えば、Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．１３６  ７０６−７１４，２０１６，Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７７：３２０２−３２１４，２０１０；Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２７：１１１４−１１２６，２０１３；Ｚａｍｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０２：Ｃ３９２−Ｃ４０４，２０１２；Ｚａｍｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ７：ｅ４９９４０，２０１２を参照のこと）。例えば、臨床リンパ浮腫の生検標本と、リンパ浮腫の動物モデルでは、ＣＤ４＋細胞が浸潤していること、およびこれら細胞の数は、線維症の程度および疾患の臨床的な重大度と相関していることが判明している。（例えば、Ａｖｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２７：１１１４−１１２６，２０１３を参照のこと）。後期リンパ浮腫の患者は、概して浸潤Ｔ細胞が大幅に増加しており、特に、早期疾患ステージよりもＣＤ４＋細胞が多くなっている。閉塞したリンパ管を静脈循環にシャントする手術であるリンパ静脈バイパス術の後のリンパ浮腫の臨床症状の改善は、組織線維症の減少と、ＣＤ４＋細胞の細胞浸潤の減少と関連している。（Ｔｏｒｒｉｓｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｙｍｐｈａｔ．Ｒｅｓ．Ｂｉｏｌ．１３：４６−５３，２０１５）。
【０３４０】
線維症は、慢性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）をはじめとする多くの自己免疫性疾患の特徴でもある。例えば特に、多くの悪性血液疾患に対する腫瘍な治癒的治療法である同種造血幹細胞移植（アロＨＳＣＴ）と関連している。その抗腫瘍活性は大部分が、免疫介在性の移植片対腫瘍の効果（ＧｖＴ効果）に依存している。しかし移植片中に含有されるドナーの免疫細胞は、健康な宿主組織も抗原してしまう可能性があるため、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）も発症してしまう。ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤと慢性ＧＶＨＤの２つの症候群に分類される。急性ＧＶＨＤは、アロＳＣＴから最初の１００日以内に発生するＧＶＨＤと歴史的に規定され、慢性ＧＶＨＤ（ｃＧＶＨＤ）は一般的に、１００日を超えて発症する。ｃＧＶＨＤが、移植片対腫瘍の効果に関連しているが、長期的な移植レシピエントの疾病率／死亡率の主要原因でもある。
【０３４１】
強皮症ｃＧＶＨＤ（ｓｃｌ−ＧＶＨＤ）は、ｃＧＶＨＤの最も重篤な型の１つであり、ｃＧＶＨＤ患者のおよそ２０％が発症する。ｓｃｌ−ＧＶＨＤは、全身性線維症と共通の特徴を有しており、２つの症候群は、病態（ｓｃｌ−ＧＶＨＤは通常、皮膚表層から始まり、その後、皮膚の深層にまで拡がる。一方で全身性硬化症は逆である）と、臨床症状の点で異なっている。全身性硬化症の患者では例えばレイノー症候群、肺高血圧症および心機能障害などの臨床的な特徴が見られるが、ｓｃｌ−ＧＶＨＤの患者ではほとんど見られない。
【０３４２】
免疫細胞の活性化と遊走の両方を調節するというＮＲＰ２の役割、ＴＧＦ−β１介在性のＥＭＴが線維症形成を促進すること、ならびにＨＲＳポリペプチドがこれらのプロセスを調節する能力を有する点を考慮すると、ＨＲＳポリペプチドが、リンパ浮腫、および他の線維症の疾患および障害の状況下で、線維症治療の新規で有望な治療選択肢となり得ることが明白である。
【０３４３】
ゆえにある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象の線維症を治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。
【０３４４】
ＨＲＳポリペプチド介在性のリンパ管形成の制御
リンパ系は、相互に連結された毛細管、収集管およびリンパ節のネットワークからなり、血管系からろ過された液体やタンパク質を吸収、収集および輸送する。このシステムによって、ヒトにおいてリンパ管は１日当たり４リットルを超える液体と大量のタンパク質を首の大静脈へと戻している。
【０３４５】
リンパ管の機能障害（リンパ浮腫）によって、過剰量の液体が間質に蓄積する（浮腫）。リンパ浮腫は典型的には生命を脅かすものではないが、疼痛、不動、線維症、炎症、脂肪組織の蓄積および組織損傷をはじめとする重篤な健康上の影響をもたらす。リンパ系は免疫反応の重要な構成要素でもあるため、リンパ浮腫は感染リスクの増加と他の免疫系の問題が付随することが多い。
【０３４６】
リンパ管形成は、既存のリンパ管から新たなリンパ管が形成されることであり、転移性播種や移植拒絶（例えば、角膜、腎臓および心臓）、２型糖尿病、肥満、高血圧ならびにリンパ浮腫を含む多様な病態と関連する（例えば、Ａｌｉｔａｌｏ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３８：９４６−９５３，２００５；Ｋａｒａｍａｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２４：９２２−９２８，２０１４；Ｋｉｍ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２４：９３６−９４２，２０１４；Ｍａｂｙ−Ｅｌ  Ｈａｊｊａｍｉ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １３０：１０６３−１０７，２００８；Ｍａｃｈｎｉｋ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １５：５４５−５５２；Ｍｏｒｔｉｍｅｒ，Ｐ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．２０１４．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２４：９１５−９２１；Ｓｋｏｂｅ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．２００９．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １５：９９３−９９４を参照のこと）。
【０３４７】
血管の浸潤と比較して、原発腫瘍の中および周辺のリンパ管の浸潤は、様々な型の癌の進行性の予後マーカーである。リンパ管の増殖は、移植拒絶にも関与している（Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：５３５−５３９，２０１０，Ｈａｌｌ，Ｆ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ｈｅａｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇ  １２９：７１６−７１９，２００３．；Ｍａｕｌａ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６３：１９２０−１９２６，２００３；Ｍｉｙａｔａ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｕｒｏｌ  １７６：３４８−３５３，２００６；Ｓａａｄ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ  １９：１３１７−１３２３，２００６；Ｓｃｈｏｐｐｍａｎｎ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｓｕｒｇ  ２４０：３０６−３１２，２００４；Ｚｅｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ６５：２２２−２３０，２００５）。
【０３４８】
多くの疾患の病態において、リンパ系の重要性は良く確立されているにもかかわらず、臨床試験に入っている抗血管新生剤の豊富さと比較して、坑リンパ管形成剤の開発は殆ど進行していない。ゆえにさらなるリンパ管形成阻害剤の開発が、リンパ浮腫および癌転移を含む広範な疾患の治療に関して関心事となっている。
【０３４９】
抗リンパ管形成剤は、例えば眼の消耗性疾患の治療に有用であり、この疾患ではリンパ管の増殖が、角膜移植片拒絶の主要原因となっている。また加齢性黄斑変性と関連している心血管形成の主要原因でもある（例えば、Ｄｉｅｔｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：５３５−５３９，２０１０を参照のこと）。特に全層角膜移植術は、最も普遍的な固形組織移植術であり、米国では毎年およそ４０，０００件の角膜移植が実施されている。全層角膜移植術の成功率は、低リスクの無血管野で実施される合併症なしの最初の移植では９０％もの高さである。しかし高リスクの有血管野での角膜移植の拒絶率は非常に高い（７０％〜９０％）。したがって移植片の生着を促進し、新血管形成を低下または阻害する、リンパ管形成を阻害する安全で標的化された新たなレジメンの開発が必要とされている。
【０３５０】
抗リンパ管形成薬は、ドライアイ疾患の治療にも有用である。ドライアイ疾患の角膜において、リンパ管形成促進性因子（例えば、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−ＤおよびＶＥＧＦＲ−３）の顕著なアップレギュレーションと、血管増殖が併発することのないリンパ管の選択的増殖が示されている（Ｇｏｙａｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １２８：８１９−８２４，２０１０）。ドライアイ疾患は、約５００万人の米国人が罹患する免疫介在性の障害である。視覚に関連した生活に重大な影響を与え、症状は消耗性であり得る。ドライアイ疾患に対する現在の治療選択は限定されており、ほとんどが緩和的で高価である。ゆえにドライアイ疾患の治療に対するリンパ管形成阻害剤の開発は治療的価値がある。
【０３５１】
現在、転移が固形腫瘍による死亡の最も大きな原因であり、９０％にも上ると推定されている（Ｇｕｐｔａ  ａｎｄ  Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｃｅｌｌ  １２７，６７９−６９５，２００６）。転移の複雑なプロセスには、腫瘍細胞が原発腫瘍から離れること、腫瘍細胞がリンパ管または血管に脈管内侵入すること、および続発部位で腫瘍細胞が溢出し、増殖することを含む、一連の個別ステップが含まれる。多くの腫瘍型における、所属リンパ節の分析から、リンパ管系が、ヒトの癌の播種にとって重要な経路であることが示唆されている。さらにほとんどすべての癌腫において、リンパ節での腫瘍細胞の存在は、最も重要な予後不良因子である。そうした転移には、腫瘍近傍の既存のリンパ管にそった悪性細胞の移動がもっぱら関与していると過去には考えられていたが、近年行われた研究実験および臨床病理研究（例えば、Ａｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９４，１３５５−１３６０，２００６  ａｎｄ  Ｎａｔｈａｎｓｏｎ，Ｃａｎｃｅｒ  ９８，４１３−４２３，２００３を参照のこと）から、固形腫瘍がリンパ管形成を誘導し、腫瘍拡散を促進し得ることが示唆されている。これら、および他の近年の研究から、リンパ系およびリンパ管形成を標的とすることが、癌転移の発生を狭めるための有用な治療戦略であり、多くの患者に大きな利益をもたらし得ると提唱されている。
【０３５２】
したがって、リンパ管形成促進因子の活性を阻害する方法および組成物、ならびに移植拒絶、ドライアイ疾患、腫瘍転移、リンパ浮腫および他の炎症性状態を予防または治療するための方法に対するニーズが存在する。
【０３５３】
ＮＲＰ２と相互作用するＮＲＰ２リガンドの結合と活性を調節するというＨＲＳポリペプチドの役割を考慮すると、ＨＲＳポリペプチドは、リンパ管形成促進治療および坑リンパ管形成治療の両方の開発にとって、新規の強力なツールとなり得る可能性がある。そうした異なる効果は、例えば異なるＨＲＳポリペプチド組成物の使用、異なる投与量、異なる治療期間、または追加の補因子、例えばＶＥＧＦ−Ｃまたはセマフォリン３Ｆおよび／または３Ｇなどの適切な使用によって、調節され得る。
【０３５４】
ゆえにある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象のリンパ管形成を調節する（例えば、増加させる、減少させる）方法を含む。一部の実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象のリンパ浮腫および／または新血管形成を治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。一部の実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象のリンパ管形成を治療する、その症状を改善する、および／もしくはその進行を促進する、または回復させる方法を含む。
【０３５５】
平滑筋収縮のＨＲＳポリペプチド制御性調節
膀胱における平滑筋（ＳＭ）収縮の低下は、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、後部尿道弁、糖尿病、多発性硬化症、脊髄損傷または特発性の原因に続発する閉塞を含む、多くの病因に起因し得る。（例えば、Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｕｒｏｌ．１１（８）：４５４−４６４，２０１４を参照のこと）。例えばＢＰＨまたは後部尿道弁などの状況下で、膀胱は、閉塞した流出口に対して収縮する。初期反応は適応性であり、ＳＭ肥大の代償性のフェーズが関与し、流出口の抵抗増加に勝るための高い力を生じさせることができる。要求が、膀胱の適応能力を超えたとき、収縮性能は効率が低下し、残存量が多くなり、膀胱はリモデリングされ、膀胱が代償不全となるにつれて最終的には排尿筋の収縮が失われる。（例えば、Ｚｄｅｒｉｃ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．１６（２）：２０３−２１７，２０１２を参照のこと）。低活動性の排尿筋機能の有病率は、成人の４８％にも上ると報告されている（Ｏｓｍａｎ  ＮＩ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ；６５（２）：３８９−３９８，２０１４）。さらに、ＳＭ収縮性の回復のための既存の薬理学的治療法は、例えばムスカリン作動薬またはコリンエステラーゼ阻害薬であり、これらは効果が限定的で、有害な作用があることが示されている（Ｂａｒｅｎｄｒｅｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＪＵ  Ｉｎｔ．９９（４）：７４９−７５２，２００７）。
【０３５６】
近年の研究により、膀胱平滑筋が、Ｎｒｐ２発現の主要部位であることが特定されており、ＮＲＰ２リガンドのＳＥＭＡ３Ｆで処理された初代膀胱平滑筋細胞におけるＲｈｏＡの阻害と細胞骨格筋の剛性が示されている。そしてＮｒｐ２が損なわれていない同腹仔対照の組織と比較して、インビボでＮｒｐ２のユビキタスな、または平滑筋特異的な欠失を有するマウスから取り出された膀胱ＳＭストリップの収縮性の増加が観察されている。（例えば、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８１  ５４８−５５９，２０１２；Ｖａｓｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ  ２（３）ｅ９０６１７，２０１７を参照のこと）。
【０３５７】
まとめると、これらの発見から、Ｎｒｐ２のダウンレギュレーションは、閉塞がある実験動物およびヒトにおいて、閉塞に対する代償性反応の重要な構成要素であることが示唆され、そしてＮｒｐ２が、代償不全状態の膀胱における排尿筋収縮の維持と回復に対する新規の薬理学的標的となり得ることが示唆される。
【０３５８】
さらに近年の研究により、代償不全状態となりつつある膀胱においてＮｒｐ２を標的とすることで、閉塞進行中にもかかわらず収縮性を回復させる可能性があることが示されている。（Ｖａｓｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ  ２（３）ｅ９０６１７，２０１７）。これらの発見は、Ｎｐ２軸がＳＭ収縮性回復の新規の薬理学的標的となる可能性の根拠となり、ＨＲＳポリペプチドを基にしたＮｒｐ２機能の調節因子を開発するための重要なプラットフォームを提供する。
【０３５９】
今日のところ、排尿筋収縮性の減少に対する薬理学的マネージメントは、副交感神経活動を刺激して膀胱収縮を強化し、流出抵抗を低下させて膀胱を空にすることに焦点が置かれている（Ｃｈａｎｃｅｌｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕｒｏｌｏｇｙ  ７２（５）９６６−９６７，２００８）。しかし副交感神経作用薬に関する、膀胱収縮が低下した１０名の患者の無作為臨床試験の分析から、症状が悪化するか、または有意な改善が見られないかのいずれかであることが明らかとなった（Ｂａｒｅｎｄｒｅｃｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＪＵ  Ｉｎｔ．９９（４）７４９−７５２，２００７）。
【０３６０】
代償不全状態膀胱においてＮｒｐ２欠失後に収縮性が上昇したことから、Ｎｒｐ２が、慢性閉塞状態下での排尿筋収縮性低下を軽減するための新規の標的となり得ることが提唱される。ＮＲＰ２と相互作用するＮＲＰ２リガンドの結合と活性を調節するというＨＲＳポリペプチドの役割を考慮すると、そうしたＨＲＳポリペプチドは、例えば膀胱における平滑筋（ＳＭ）収縮性低下の治療を含む、平滑筋収縮性を調節する新規治療法開発の強力な新規ツールとなり得る可能性がある。
【０３６１】
ゆえにある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象の平滑筋収縮性を調節する（例えば、増加させる、減少させる）方法を含む。ある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象の低下した平滑筋収縮性を治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。
【０３６２】
サルコイドーシスおよび関連肉芽腫性炎症性疾患のＨＲＳポリペプチド制御性調節
サルコイドーシスは、多系統の肉芽腫性炎症性疾患であり、典型的には、様々な器官における小さな粒状の炎症性病変または肉芽腫（例えば、乾酪性肉芽腫）の形成、および／または罹患組織もしくは罹患器官における免疫反応の存在（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞リンパ球とマクロファージの存在）を特徴とする。肉芽腫性炎症は、単球、マクロファージ、強いＴｈ１反応、および活性化Ｔリンパ球の蓄積が原因である場合があり、ＴＮＦα、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＩＬ−１、ＩＬ−６またはＩＬ−１５の産生が上昇している。
【０３６３】
サルコイドーシスは全身性（例えば、全身性サルコイドーシス）または局所性（例えば局所性サルコイド様反応）であり得る。肉芽腫はほぼすべての器官で現れるが、肺またはリンパ節で最も多く現れ得る。他の普遍的な部位としては、肝臓、脾臓、皮膚および眼が挙げられる。特定器官の障害は、軽度または重度、自己限定的または慢性的、そして範囲限定または広範な程度であり得る。症状は通常、徐々に現れるが、稀に突然現れる場合もある。サルコイドーシス患者が経験する共通の症状には、倦怠感、息切れ、治らない咳、顔面もしくはすね上の皮膚病変または湿疹、眼の炎症、体重減少、寝汗、呼吸困難、咳、胸部不快感、クラックル、不快感、虚弱、食欲不振、体重減少または発熱が含まれる。他の症状としては例えば、リンパ腺肥大（腋窩の瘤）、肝臓肥大、脾臓肥大、ドライマウス、または鼻血が挙げられる。以下に異なるタイプのサルコイドーシスの症状を記載する。
【０３６４】
臨床経過は一般的に様々である。一部の実施形態では、サルコイドーシスは無症状性である場合もある。一部の実施形態では、組織または器官は、赤く腫れ、または瘢痕性となり、または当該組織もしくは器官中の１つ以上の肉芽腫が治癒しない場合には線維化し得る。一部の実施形態では、サルコイドーシスは、消耗性の慢性状態を生じさせ、死亡へとつながる場合もある（例えば不可逆性の肺線維症）。
【０３６５】
ある実施形態では、当該サルコイドーシスは、全身性サルコイドーシス、皮膚サルコイドーシス、ロフグレン症候群、神経サルコイドーシス、肺サルコイドーシス、心臓サルコイドーシス、眼サルコイドーシス、肝臓サルコイドーシス、骨格筋サルコイドーシス、腎臓サルコイドーシス、または他の器官もしくは組織の障害を伴うサルコイドーシスのうちの１つ以上である。
【０３６６】
全身性サルコイドーシスは、複数の器官障害を伴うサルコイドーシスである。一部の実施形態では、本明細書において、全身性サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該全身性サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。一部の実施形態では、全身性サルコイドーシスの当該１つ以上の症状は、例えば体重減少、倦怠感、食欲消失、発熱、悪寒、寝汗、肉芽腫の形成、倦怠感、痛み、疼痛または関節炎などの非特異的な全身性の症状を含む。
【０３６７】
一部の実施形態では、全身性サルコイドーシスは、罹患した特定の器官に関連した特異的な症状（例えば、ドライアイ、膝の腫れ、視界不良、息切れ、咳、例えば発疹などの皮膚病変）を呈し得る。具体的な実施形態では、当該特異的な症状は、肺、肺リンパ、骨格筋、肝臓、関節、血液、皮膚、眼、精神、神経、腎臓、脾臓、神経、副鼻腔、心臓、骨、口、胃、消化管、内分泌、強膜または生殖系の症状のうちの１つ以上である。
【０３６８】
皮膚サルコイドーシスは、皮膚障害を伴うサルコイドーシスの合併症である。一部の実施形態では、本明細書において、皮膚サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該皮膚サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３６９】
ある実施形態では、皮膚サルコイドーシスは、環状サルコイドーシス、紅皮性サルコイドーシス、魚鱗癬様サルコイドーシス、脱色性サルコイドーシス、モルフェア型（ｍｏｒｐｈｅａｆｏｒｍ）サルコイドーシス、粘膜サルコイドーシス、丘疹性サルコイド、瘢痕性サルコイド、皮下サルコイドーシス、および潰瘍性サルコイドーシスを含む。一部の実施形態では、皮膚サルコイドーシスの１つ以上の症状は、特異的または非特異的な様々な皮膚病変または皮膚状態を含む（例えば、数種の他の皮膚状態と類似している）。皮膚サルコイドーシスと関連する例示的な皮膚病変または皮膚状態としては、丘疹（例えば、肉芽腫性酒さ、ニキビまたは良性皮膚付属器腫瘍）、皮膚プラーク（例えば、乾癬、扁平苔癬、貨幣状湿疹、円盤状エリテマトーデス、環状肉芽腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、カポジ肉腫または第二期梅毒）、びまん型皮膚サルコイド（ｌｕｐｕｓ  ｐｅｒｎｉｏ）（例えば、瘢痕性または円盤状エリテマトーデス、結節性紅斑（例えば、隆起した赤い張りのある皮膚潰瘍、蜂巣炎、せつ腫症または他の炎症性脂肪織炎）、斑丘疹性発疹、皮膚深層の結節性病変、または古い瘢痕の浸潤を含む。他の皮膚症状としては例えば、皮膚発疹、古い瘢痕がさらに隆起した皮膚病変、脱毛などが挙げられる。
【０３７０】
ロフグレン症候群は、全身性サルコイドーシスの急性期の症状であり、典型的には、結節性紅斑、両側性肺門部リンパ節症（ｄｅｎｏｐａｔｈｙ）および関節炎または関節痛の三つ組を特徴とする。また、発熱が付随する場合もある。一部の実施形態では、本明細書において、ロフグレン症候群を有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該ロフグレン症候群の１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。具体的な実施系阿知では、１つ以上の症状は、結節性紅斑、両側性肺門部リンパ節症、関節炎、関節痛または発熱を含む。
【０３７１】
神経サルコイドーシスまたは神経サルコイドとは、炎症および異常な沈着が、脳、脊髄、および神経系の任意の他の領域で発生するサルコイドーシスを指す。一部の実施形態では、本明細書において、神経サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該神経サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。神経サルコイドーシスは、神経系の任意の部分に罹患し、例えば、顔面骨格筋への神経（第ＶＩＩ脳神経）に罹患する場合があり、この場合、顔面脱力（例えば、顔面麻痺）の症状が発生し、眼の神経、または味覚、臭覚もしくは聴覚を制御する神経に罹患する場合もある。
【０３７２】
一部の実施形態では、神経サルコイドーシスの症状は、月経期間の変化、極度の疲労感（例えば、倦怠感）、頭痛、視覚変化、網膜症、神経根痛、排便管理または排尿管理の消失、手根管症候群、および／または対麻痺、過度の口渇または多尿を含む。一部の実施形態では、神経サルコイドーシスの症状は、精神錯乱、見当識障害、聴力低下、認知症もしくせん妄、めまい（ｄｉｚｚｉｎｅｓｓまたはｖｅｒｔｉｇｏ）（例えば、動きに関する知覚異常）、複視もしくは他の視覚の問題、顔面麻痺（脆弱、下垂）、頭痛、臭覚もしくは味覚の消失、味覚異常、精神障害、けいれんもしくは発話障害、筋力低下もしくは知覚麻痺、または一部の場合では下垂体機能低下症を含む。具体的な実施形態では、神経サルコイドーシスの症状は、神経系における肉芽腫の形成（例えば、脳、脊髄または顔面神経および視神経）、頭痛、精神錯乱、不快感または顔面麻痺を含む。
【０３７３】
肺サルコイドーシスとは、肺の組織または器官（例えば肺）に影響を及ぼすサルコイドーシスを指す。一部の実施形態では、本明細書において、肺サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該肺サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。肺サルコイドーシスの症状は通常、肺および／または胸部の症状を含み、例えば肺ガリウム（Ｇａ．）スキャン、胸部Ｘ線検査、肺機能検査、運動パルスオキシメーター、胸部ＣＴスキャン、ＰＥＴスキャン、ＣＴ−誘導生検、縦隔鏡検査法、開胸的生検または生検を伴う気管支鏡検査法を含む。
【０３７４】
ある実施形態では、肺サルコイドーシスの症状は、肺胞中隔および気管支壁の肉芽腫、息切れ、咳、肺容積の消失および異常な肺の硬さ、異常な肺機能もしくは劣化した肺機能、肺容積の低下、コンプライアンスの低下、肺組織の瘢痕化、または肺組織からの出血を含む。他の症状としては例えば、肺に引き込まれる空気の量がわずかである、正常呼気流量よりも多い、肺活量の低下（大きく息を吸い込み、吐き出すまでの量）、ＦＥＶ１／ＦＶＣ比の上昇、吐き出され得る空気量が低下し得る閉塞性の肺変化、または気道を圧迫し得る胸部リンパ節肥大、または内部炎症もしくは瘤が気道を妨げる場合、肺高血圧、または肺不全が挙げられる。
【０３７５】
任意の学説に拘束されないが、Ｓｃａｄｄｉｎｇ基準が、肺サルコイドーシスの患者の疾患ステージ決定に最も普遍的に使用されている測定尺度である。簡潔に述べると、各ステージに対するＸ線像は、以下のように解説され得る：ステージＩ：両側性肺門部リンパ節腫脹および／または縦隔リンパ節腫脹（リンパ節肥大）；ステージＩＩ：両側性肺門部リンパ節腫脹および／または縦隔リンパ節腫脹；肺浸潤物の証拠；ステージＩＩＩ：実質組織の変化；リンパ節肥大はなし；およびステージＩＶ：肺線維症の証拠。したがって本明細書において、肺サルコイドーシスを有する対象、または肺サルコイドーシスにより生じる、もしくは肺サルコイドーシスに関連する障害または状態を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、Ｓｃａｄｄｉｎｇ基準により決定される当該肺サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３７６】
一部の実施形態では、肺サルコイドーシスは、肺線維症または気管支拡張症へと進行し得る（例えば、不可逆性の肺線維症）。肺線維症は肺の構造を変形させ、呼吸を妨げ得る。気管支拡張症は、太い気道の破壊と拡張を特徴とする肺疾患である。したがって特定の実施形態では、当該疾患または障害は、肺線維症または気管支拡張症である。さらに特定の実施形態では、本明細書において、肺サルコイドーシスにより生じた、または肺サルコイドーシスと関連する肺線維症（例えば、不可逆性の肺線維症）を有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該肺線維症（例えば、不可逆性の肺線維症）の１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。別の特定の実施形態では、本明細書において、サルコイドーシスにより生じた、またはサルコイドーシスに関連する気管支拡張症を有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該気管支拡張症の１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３７７】
一部の実施形態では、サルコイドーシスは、例えば胸部Ｘ線により決定される肺門または縦隔の障害などの肺リンパ系を含み、圧痛のない末梢性または頸部のリンパ節腫脹症を呈する。
【０３７８】
心臓サルコイドーシスとは、心筋障害を伴うサルコイドーシスを指す。一部の実施形態では、本明細書において、心臓サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該心臓サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３７９】
一部の実施形態では、心臓サルコイドーシスの１つ以上の症状は、例えば心筋梗塞、心筋ミオパチー、動脈瘤、狭心症、大動脈弁狭窄症、大動脈炎、不整脈、動脈硬化症、動脈炎、非対称性中隔肥大（ＡＳＨ）、アテローム性動脈硬化症、心房細動および粗動、細菌性心内膜炎、バーロー症候群（僧帽弁逸脱）、徐脈、バージャー病（閉塞性血栓性血管炎）、心肥大、心臓炎、頸動脈疾患、大動脈の狭窄、先天性心臓血管、うっ血性心不全、冠動脈疾患、アイゼンメンゲル症候群、塞栓症、心内膜炎、先端紅痛症、細動、線維筋性形成異常、心臓ブロック、心雑音、高血圧、低血圧、特発性小児動脈石灰化、川崎病（皮膚粘膜リンパ節症候群、皮膚粘膜リンパ節病、小児多発動脈炎）、メタボリック症候群、微小血管性狭心症、心筋炎、発作性心房頻拍（ＰＡＴ）、結節性動脈周囲炎（多発動脈炎、結節性多発動脈炎）、心膜炎、末梢血管疾患、重症肢虚血、静脈炎、肺動脈弁狭窄症（肺動脈狭窄症）、レイノー病、腎動脈狭窄症、腎血管性高血圧、リウマチ性心疾患、糖尿病性血管障害、中隔欠損、無症候性虚血、脆弱性Ｘ症候群、頻脈、高安動脈炎、ファロー四徴症、大血管転位症、三尖弁閉鎖症、総動脈幹、心臓弁膜症、静脈瘤性潰瘍、静脈瘤、血管炎、心室中隔欠損症、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、心内膜床欠損症、急性リウマチ熱、急性リウマチ性心外膜炎、急性リウマチ性心内膜炎、急性リウマチ性心筋炎、慢性リウマチ性心疾患、僧帽弁の疾患、僧帽弁狭窄症、リウマチ性僧帽弁閉鎖不全症、大動脈弁の疾患、他の心内膜構造の疾患、虚血性心疾患（急性および亜急性）、狭心症、急性肺心臓疾患、肺塞栓症、慢性肺心臓疾患、後彎症性心疾患、心筋炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、心内膜線維弾性症、房室ブロック、不整脈、心筋変性、脳血管疾患、動脈、細動脈および毛細血管の疾患、または静脈およびリンパ管の疾患などの循環系の疾患または障害の症状に類似している。ゆえにある実施形態では、サルコイドーシスを有する、またはサルコイドーシス関連の疾患もしくは障害を有する対象における改善は、当該対象が、ＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与された場合、当該サルコイドーシス、または当該サルコイドーシス関連の疾患もしくは障害の１つ以上の症状における検出可能な改善により分析または示され得る。
【０３８０】
ある実施形態では、治療方法は、心臓機能の１つ以上の兆候の検出可能な改善に充分な量および時間で、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、当該心臓機能の兆候は、当該ＨＲＳポリペプチドの投与前の対象と比較した、胸部心拍出量（ＣＯ：ｃｈｅｓｔ  ｃａｒｄｉａｃ  ｏｕｔｐｕｔ）、心係数（ＣＩ：ｃａｒｄｉａｃ  ｉｎｄｅｘ）、肺動脈楔入圧（ＰＡＷＰ：ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｗｅｄｇｅ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）、心係数（ＣＩ）、単縮率％（ＦＳ％）、駆出率（ＥＦ：ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）、左心室駆出率（ＬＶＥＦ）；左心室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ：ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ  ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）、左心室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ：ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｅｎｄ  ｓｙｓｔｏｌｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）、収縮性（ｄＰ／ｄｔ）、心房機能もしくは心室機能の低下、ポンプ効率の増加、ポンプ効率の消失率の低下、血行動態機能の消失の低下、または心臓ミオパチーと関連した合併症の低下である。
【０３８１】
眼サルコイドーシスは、眼に影響を及ぼすサルコイドーシスである。一部の実施形態では、本明細書において、眼サルコイドーシスを有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与すること、当該眼サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善を含む。ある実施形態では、眼サルコイドーシスの１つ以上の症状は、ブドウ膜炎（例えば、肉芽腫性ブドウ膜炎）、ブドウ膜耳下腺炎、網膜炎、視力の消失、色覚異常、涙目、光彩結節、脈絡網膜炎、結膜炎、涙腺の障害または眼球突出症を含む。
【０３８２】
免疫細胞の活性化および遊走の両方を調節することにおけるＮＲＰ２の役割、ならびにこれらプロセスを調節するＨＲＳポリペプチドの能力を考慮すると、ＨＲＳポリペプチドは、サルコイドーシス、および関連肉芽腫性炎症性疾患の治療に対する新規の治療選択肢となる。ゆえにある実施形態は、対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される治療用組成物を投与することを含む、その必要のある対象のサルコイドーシスを治療する、その症状を改善する、および／またはその進行を遅くする方法を含む。
【０３８３】
骨格筋、肝臓、血液、精神医学的、腎臓、脾臓、副鼻腔、口、胃もしくは消化管、内分泌、胸膜または生殖器の障害を伴うサルコイドーシス
ある実施形態では、サルコイドーシスは、筋肉、肝臓、関節、血液、精神医学的、腎臓、脾臓、副鼻腔、骨、口、胃もしくは消化管、内分泌、胸膜または生殖器系が関与し、各症状を呈し得る。一部の実施形態では、本明細書において、骨格筋、肝臓、関節、血液、精神医学的、腎臓、脾臓、副鼻腔、口、胃もしくは消化管、内分泌、胸膜または生殖器の障害を伴うサルコイドーシス有する対象を治療する方法が提供され、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドを投与することを含み、この場合において当該投与により、当該サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３８４】
一部の実施形態では、骨格筋障害を伴うサルコイドーシスは、酵素上昇を伴う、または伴わない無症候性であり得、または例えば、筋力低下、関節炎（例えば、足首、膝、手首および肘の関節炎）、ジャクー変形もしくは指炎、関節周囲炎、関節痛、溶骨性病変もしくは嚢胞性病変を伴う慢性関節炎、骨減少症、またはロフグレン症候群を伴う潜行性もしくは急性のミオパチーの症状を呈し得る。一部の実施形態では、肝臓障害を伴うサルコイドーシスは、無症候性であり得、または例えば肝機能検査結果の軽度の上昇、造影剤を用いたＣＴスキャンでの透過性病変、肝腫大、肝酵素値の変化、肝疾患、発熱、不快感、倦怠感、胆汁鬱滞、肝硬変などの１つ以上の症状を呈し、または肉芽腫性肝炎と類似した症状を呈し得る。
【０３８５】
一部の実施形態では、血液サルコイドーシスの患者は、リンパ球減少症、慢性疾患の貧血、骨髄の肉芽腫性浸潤による貧血、汎血球減少症、脾臓腐骨化、血小板減少症、または白血球減少症の１つ以上の症状を有する。一部の実施形態では、サルコイドーシスの患者は、精神医学的症状を呈し得る（例えば、鬱病）。一部の実施形態では、腎臓障害を伴うサルコイドーシスは、無症候性高カルシウム尿症、間質性腎炎、腎結石症または腎石灰沈着症が原因の慢性腎不全の症状を呈し得る。一部の実施形態では、脾臓障害を伴うサルコイドーシスは、無症候性であり得るか、または疼痛、血小板減少症の症状を呈し得るか、またはＸ線もしくはＣＴスキャンで決定され得る。一部の実施形態では、副鼻腔障害を伴うサルコイドーシスは、普遍的なアレルギー性副鼻腔炎および感染性副鼻腔炎、または凍傷状狼瘡に類似した症状を有する洞粘膜の症状を呈し得る。一部の実施形態では、口の障害を伴うサルコイドーシスは、無症候性の耳下腺腫脹、口腔乾燥症を伴う耳下腺炎、ヘールフォルト症候群、ブドウ膜炎、両側性耳下腺腫脹、顔面麻痺、慢性的な発熱、口の凍傷状狼瘡、または醜い硬口蓋、頬、舌および歯茎の症状を呈し得る。一部の実施形態では、胃もしくは消化管、内分泌、胸膜または生殖器の障害を伴うサルコイドーシスは、胃の肉芽腫、腸間膜リンパ節症、腹痛、汎下垂体機能低下症、甲状腺浸潤、続発性副甲状腺機能低下症、高カルシウム血症、またはリンパ球性滲出液を含む。
【０３８６】
さらに、肺の組織または器官以外の１つ以上の組織または器官の障害を伴うサルコイドーシスを有する対象を治療する方法も含まれ、当該方法は、当該対象にＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される組成物を投与することを含み、この場合において当該投与により、当該サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。さらに、肺以外の１つ以上の組織または器官の障害を伴うサルコイドーシスを有する対象を治療する方法も含まれ、当該方法は、ＨＲＳポリペプチドまたは本明細書に提示される組成物を投与することを含み、この場合において当該投与により、当該サルコイドーシスの１つ以上の症状の検出可能な進行の低下、検出可能な悪化の減少、および／または検出可能な改善がもたらされる。
【０３８７】
癌のＨＲＳポリペプチド介在性治療
一部の実施形態では、ＮＲＰ２関連疾患は癌であり、例えば、ＮＲＰ２を発現する、または過剰発現する癌である。一部の場合では、癌は、ＮＲＰ２依存的な成長、ＮＲＰ２依存的な接着、ＮＲＰ２依存的な遊走、ＮＲＰ２依存的な化学療法抵抗性、および／またはＮＲＰ２依存的な浸潤を呈する。一部の実施形態では、癌は、原発性癌である。一部の実施形態では、癌は、転移性癌であり、任意選択的に、ＮＲＰ２ａおよび／またはＮＲＰ２ｂを発現する転移性癌である。
【０３８８】
一部の実施形態では、癌は、癌治療、例えば癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、および／またはキナーゼ阻害剤に対して、化学療法抵抗性である。一部の実施形態では、本治療方法は、ＨＲＳポリペプチドを投与する前に少なくとも１つの癌治療に対して化学療法抵抗性である癌を有する対象を選択することを含む。例示的な癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ  阻害剤は、本明細書に記載されている。
【０３８９】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌細胞または癌関連マクロファージにおいてオートファジー、貪食細胞の成熟、またはエフェロサイトーシスを調節する。特定の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌細胞においてオートファジーを調節する。
【０３９０】
一部の実施形態では、癌は、メラノーマ（例えば転移性メラノーマ）、膵癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例えばリンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞腫（肝細胞癌）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例えば腎細胞癌）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頚癌、精巣癌、甲状腺癌、および胃癌のうち１つまたは複数から選択される。
一部の実施形態では、転移性の癌は、以下のうち１つまたは複数から選択される：
（ａ）骨、肝臓、および／または肺に転移している膀胱癌；
（ｂ）骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している乳癌；
（ｃ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している結腸直腸癌；
（ｄ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または肺に転移している腎臓癌；
（ｅ）副腎、骨、脳、肝臓、および／または他の肺の部位に転移している肺癌；
（ｆ）骨、脳、肝臓、肺、および／または皮膚／筋肉に転移しているメラノーマ；
（ｇ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している卵巣癌；
（ｈ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している膵癌；
（ｉ）副腎、骨、肝臓、および／または肺に転移している前立腺癌；
（ｊ）肝臓、肺、および／または腹膜に転移している胃癌；
（ｌ）骨、肝臓、および／または肺に転移している甲状腺癌；ならびに
（ｍ）骨、肝臓、肺、腹膜、および／または膣に転移している子宮癌。
【０３９１】
ある癌治療は、本明細書に記載されるような併用療法を含む。一例として、ある実施形態は、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤のうち１つまたは複数から選択される少なくとも１つの追加的な剤を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと少なくとも１つの剤とが、別々の組成物として別々に投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つのＨＲＳポリペプチドと少なくとも１つの剤とが、同じ治療用組成物の一部分として共に投与される。
【０３９２】
一部の実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベース免疫療法のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤はポリペプチドであり、任意選択的に抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または低分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は以下を含む：
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストであって、例えば、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、アゴニスト。
【０３９３】
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞毒性Ｔ−リンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうち、１つまたは複数から選択される。
【０３９４】
一部の実施形態では、上記アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、癌は、結腸直腸癌、メラノーマ、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうち１つまたは複数から選択され；
前記アンタゴニストはＰＤ−１アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４  ＰＤＲ００１、およびピディリズマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、ＰＤ−１アンタゴニストはニボルマブであり、癌はホジキンリンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記ＰＤ−１アンタゴニストはペムブロリズマブであり、癌は、メラノーマ、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、および尿路上皮癌のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
上記アンタゴニストはＣＴＬＡ−４アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、イピリムマブ、トレメリブマブのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、任意選択的に、癌はメラノーマ、前立腺癌、肺癌、および膀胱癌のうち１つまたは複数から選択され；
上記アンタゴニストはＩＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり、癌は転移性の乳癌および脳癌、任意選択的に多形神経膠芽腫、神経膠腫、膠肉腫または悪性脳腫瘍のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記アンタゴニストがＴＤＯアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＴＩＭ−３  アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＬＡＧ−３アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストがＶＩＳＴＡアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
上記アンタゴニストは、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭのアンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストであり；
前記アンタゴニストが  ＴＩＧＩＴ  アンタゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアンタゴニストである、請求項８３に記載の治療用組成物。
【０３９５】
一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）のうち１つまたは複数から選択される。
【０３９６】
一部の実施形態では、上記アゴニストはＯＸ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ４０アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＣＰ−８７０、８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ７／４、ＡＤＣ−１０１３、およびｒｈＣＤ４０Ｌのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり、前記癌がメラノーマ、膵癌、中皮腫、および血液癌、任意選択的に非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫のうち１つまたは複数から任意選択的に選択され；
前記アゴニストがＧＩＴＲアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ１３７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、ウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）、および４−１ＢＢリガンドのうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２７アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；
前記アゴニストがＣＤ２８アゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド、およびＴＡＢ０８のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストであり；ならびに／または
前記アゴニストがＨＶＥＭアゴニストであって、それに特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片または低分子またはリガンド〜のうち１つまたは複数から任意選択的に選択されるアゴニストである、請求項８５に記載の治療用組成物。
【０３９７】
一部の実施形態では、癌ワクチンは、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択的にガーダシルもしくはサーバリックス、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択的にエンゲリクス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）−Ｂ、リコンビバックス（Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ）ＨＢ、もしくはツインリックス（Ｔｗｉｎｒｉｘ）、およびシプリューセル−Ｔ（プロベンジ）のうち１つまたは複数から選択されるか、またはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えばＶＥＧＦ−Ａ）ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニル酸シクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（もしくはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢもしくはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０ｐａｎ癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうち１つまたは複数から選択される癌抗原を含み、任意選択的に、対象は、対応の癌抗原を含む癌に罹っているかまたは罹るリスクがある。
【０３９８】
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（カバタック（ＣＡＶＡＴＡＫ）（商標））、オンコリン（Ｏｎｃｏｒｉｎｅ）（Ｈ１０１）、ペラレオレップ（ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）（レオリジン（ＲＥＯＬＹＳＩＮ）（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうち１つまたは複数から選択される。
【０３９９】
一部の実施形態では、サイトカインは、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうち１つまたは複数から選択される。
【０４００】
一部の実施形態では、細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択的にｅｘ  ｖｉｖｏ由来のＴ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される。
【０４０１】
一部の実施形態では、少なくとも１つの化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型またはＩＩ型）、および微小管阻害剤のうち１つまたは複数から選択される。
【０４０２】
一部の実施形態では、上記アルキル化剤は、ナイトロジェンマスタード（任意選択的にメクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イフォスファミド、およびブスルファン）、ニトロソウレア（任意選択的にＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレア（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、およびストレプトゾトシン）、テトラジン（任意選択的にダカルバジン、ミトゾロミド、およびテモゾロミド）、アジリジン（任意選択的にチオテパ、マイトマイシン、およびジアジクオン（ＡＺＱ））、シスプラチン、ならびにそれらの誘導体（任意選択的にカルボプラチンおよびオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（任意選択的にプロカルバジンおよびヘキサメチルメラミン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記代謝拮抗剤は、葉酸代謝拮抗剤（任意選択的にメトトレキサートおよびペメトレキセド）、フルオロピリミジン（任意選択的に５−フルオロウラシルおよびカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（任意選択的にアンシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、およびペントスタチン）、ならびにチオプリン（任意選択的にチオグアニンおよびメルカプトプリン）のうち１つもしくは複数から選択され；
上記細胞傷害性抗生物質は、アントラサイクリン（任意選択的にドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、およびミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシン  Ｃ、ミトキサントロン、およびアクチノマイシンのうち１つまたは複数から選択され；
前記トポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、およびアクラルビシンのうち１つもしくは複数から選択され；ならびに／または
前記微小管阻害剤が、タキサン（任意選択的にパクリタキセルおよびドセタキセル）、ならびにビンカアルカロイド（任意選択的にビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）のうち１つもしくは複数から選択される、請求項９２に記載の治療用組成物。
【０４０３】
一部の実施形態では、上記少なくとも１つのホルモン治療剤は、ホルモンアゴニストまたはホルモンアンタゴニストである。一部の実施形態では、上記ホルモンアゴニストは、プロゲストーゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（任意選択的にプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生およびリンパ管新生因子（任意選択的にＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ１４５、ＶＥＧＦ−Ａ１６５、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＩＧＦ−２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、およびソマトスタチン類似体のうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、上記ホルモンアンタゴニストは、ホルモン合成阻害剤であって任意選択的にアロマターゼ阻害剤もしくは性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）もしくはそれらの類似体、ホルモン受容体アンタゴニストであって任意選択的に選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）もしくは抗アンドロゲン、またはホルモン受容体に対する抗体であって任意選択的にシクツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、アラシズマブ・ペゴール（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレゾリムマブ、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ナキシタマブ（ｎａｘｉｔａｍａｂ）、セツキシマブ、デパツキシマブ・マホドチン、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）・エムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ（ｍｏｄｏｔｕｘｉｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ザルツムマブ、アプルツマブ・イキサドチン（ｉｘａｄｏｔｉｎ）、べマリツズマブ、オララツマブ、もしくはトベツマブのうち１つまたは複数から選択される。
【０４０４】
一部の実施形態では、上記キナーゼ阻害剤は、アダボセルチブ、アファチニブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタマチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、およびベムラフェニブのうち１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ−９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ−４７７、イデラシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）、ＩＰＩ−５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ−４０１、ペリホシン、ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ（ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ）、ウォルトマンニン、およびＸＬ１４７のうち１つまたは複数から選択されるＰＩ３キナーゼ阻害剤である。
【０４０５】
癌治療に関し、一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、癌に対する免疫応答を強化する。例示的な免疫応答としては、固形腫瘍への免疫細胞浸潤の増加または強化、および癌に対する生物活性の増加が含まれる。ある実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対する適合免疫応答を強化し、一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対する自然免疫応答を強化する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対するＴ細胞介在性応答を直接、または間接的に強化する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対するＢ細胞介在性応答または抗体介在性応答を強化する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対するマクロファージ応答を調節する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、免疫細胞または癌のオートファジーを調節する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、免疫細胞のファゴサイトーシスを調節する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌細胞のアポトーシスを調節する。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、免疫細胞のエフェロサイトーシスおよび／または癌細胞のオートファジーを調節する。
【０４０６】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対するマクロファージ応答を強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌に対するマクロファージ応答を阻害する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、オートファジーを強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、オートファジーを阻害する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、ファゴサイトーシスを強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、ファゴサイトーシスを阻害する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、アポトーシスを強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、アポトーシスを阻害する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、エフェロサイトーシスを強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、エフェロサイトーシスを阻害する。
【０４０７】
一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌の開始、癌細胞の遊走、接着または癌細胞の転移を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、低下させる。一部の例では、ＨＲＳポリペプチドは、癌介在性のリンパ管形成を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、低下させる。
【０４０８】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌（例えば、インビトロで増殖された生検または他のサンプルから単離された癌細胞）のインビトロ増殖率を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、低下させる。
【０４０９】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌（例えば、インビトロで増殖された生検または他のサンプルから単離された癌細胞）の基質への接着を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、低下させる。一部の例では、基質は、ラミニンを含む。
【０４１０】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌（例えば、インビトロで増殖された生検または他のサンプルから単離された癌細胞）の浸潤を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、低下させる。
【０４１１】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌または遊走性細胞（例えば、インビトロで増殖された生検または他のサンプルから単離された癌細胞または免疫細胞）の遊走率または運動率を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、阻害する。
【０４１２】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌または関連免疫細胞のオートファジー率またはエンドソーム成熟率（例えば、エンドソーム酸性化）を、未治療対照と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、阻害する。
【０４１３】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、追加の剤（例えば、化学療法剤、ホルモン治療剤、および／またはキナーゼ阻害剤）に対する癌の感受性を、当該追加の剤単独と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌免疫療法剤の抗腫瘍活性および／または免疫刺激活性を、当該癌免疫療法剤単独と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、強化する。
【０４１４】
一部の実施形態では、本明細書に記載される方法および治療用組成物は、対象のメジアン生存期間を４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１５週間、２０週間、２５週間、３０週間、４０週間、またはそれ以上延長させる。ある実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、対象のメジアン生存期間を１年、２年、３年またはそれ以上延長させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、無憎悪生存期間を２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間またはそれ以上延長させる。ある実施形態では、本明細書に記載の方法または治療用組成物は、無憎悪生存期間を１年、２年、３年またはそれ以上延長させる。
【０４１５】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、生存能力のある腫瘍の量、例えば腫瘍質量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％またはそれ以上の減少などの統計的に有意な減少により示される、またはスキャン体積の変化（例えば統計的に有意な減少）により示される、腫瘍退縮を生じさせるのに充分である。ある実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、症状の安定をもたらすのに充分である。ある実施形態では、本明細書に記載の方法および治療用組成物は、熟練した医療従事者に公知の特定の疾患徴候の症状において臨床的に意義のある低下をもたらすのに充分である。
【０４１６】
一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌免疫療法剤単独と比較して、癌免疫療法剤の抗腫瘍活性および／または免疫刺激活性を増加させ、補完し、または別手段により強化する。一部の実施形態では、ＨＲＳポリペプチドは、癌免疫療法剤の抗腫瘍活性および／または免疫刺激活性を、当該癌免疫療法剤単独と比較して、約、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％以上、強化する。
【０４１７】
医薬組成物およびキット
ある実施形態は、本明細書に記載されるように、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドと、任意で１つ以上の第二の剤の治療用送達に適した医薬組成物、治療用組成物および製剤を含む。したがって一部の実施形態は、本明細書に記載されるように、１つ以上の薬学的に許容可能な担体および／または希釈剤とともに製剤化された、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドのうちの１つ以上と、任意で１つ以上の第二の剤の治療有効量を含む、薬学的に許容可能な組成物を含む。
【０４１８】
一部の実施形態では、上記に述べたように、組合せを含めて抗菌剤、抗真菌剤、および抗蠕虫剤から選択されるような第２の剤。一部の実施形態では、抗菌剤、抗真菌剤、および／または抗蠕虫剤は、アミノグリコシド類、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、およびスペクチノマイシン；カルバペネム類、例えばエルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、およびメロペネムなど；セファロスポリン類、例えばセファドロキシル、セファゾリン、セフラジン、セファピリン、セファロチン、セファレキシン、セファクロル、セフォキシチン、セフォテタン、セファマンドール、セフメタゾール、セフォニシド、ロラカルベフ、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、モキサラクタム、セフェピム、セフタロリンフォサミル、およびセフトビプロールなど；グリコペプチド類、例えばテイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシンなど；リンコサミン類、例えばクリンダマイシンおよびリンコマイシンなど；マクロライド類、例えばアジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンなど；ペニシリン類、例えばアモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、およびチカルシリンなど；ポリペプチド類、例えばバシトラシン、コリスチン、およびポリミキシンＢなど；キノロン類／フルオロキノロン類、例えばシプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、およびテマフロキサシンなど；スルホンアミド類、例えばマフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム・スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、およびスルホンアミドクリソイジンなど；テトラサイクリン類、例えばデメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン，およびテトラサイクリンなど；抗マイコバクテリア剤、例えばクロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン（リファンピン）、リファブチン、リファペンチン、およびストレプトマイシンなど；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；ムピロシン；チゲサイクリン；チニダゾール；ならびに抗蠕虫剤、例えばジエチルカルバマジンおよびアルベンダゾールなどのうち１つまたは複数から選択される。
【０４１９】
一部の実施形態では、第二の剤は、本明細書に記載される、免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、およびキナーゼ阻害剤から選択される。
【０４２０】
組成物は、以下に対して適合されたものを含む、固形または液状での投与用に特に製剤化されてもよい：（１）経口投与、例えば、飲薬（水性もしくは非水性の溶液または懸濁液）、錠剤、例えば口腔投与、舌下投与および全身吸収を標的としたもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌への適用のためのペースト；（２）非経口投与、例えば、滅菌溶液もしくは滅菌懸濁液、または徐放性製剤として、皮下投与による、筋肉内投与による、静脈内投与による、または硬膜外注射による非経口投与；（３）クリーム、軟膏または皮膚へ適用される徐放性のパッチもしくはスプレーとしての局所適用；（４）例えば、ペッサリー、クリームまたは発泡体としての膣内投与または直腸内投与；（５）舌下投与；（６）眼内投与；（７）経皮投与；（８）鼻内投与；または（９）膀胱内滴下。
【０４２１】
本明細書において、「薬学的に許容可能」という文言は、適切な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／リスク比に見合った、それら化合物、物質、組成物および／または剤型を指すために採用される。
【０４２２】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」という文言は、物質を封入する液状もしくは固形の充填剤、希釈剤、賦形剤、製造補助物質（例えば、潤滑剤、滑石マグネシウム、ステアリン酸カルシウムもしくはステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）、または溶媒などの薬学的に許容可能な物質、組成物またはビヒクルを意味し、対象化合物の、身体の１つの器官または一部から、身体の別の器官または一部への運搬または輸送に関与する。各担体は、製剤の他の成分との適合性があり、対象に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。
【０４２３】
薬学的に許容可能な担体として役立ち得る物質のいくつかの例としては、限定されないが、以下が挙げられる：（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）セルロース、ならびに例えばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；（４）粉末トラガカント；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）滑石；（８）例えば、ココアバターおよび座薬ろうなどの賦形剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブオイル、トウモロコシ油および大豆油などの油類；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；（１３）アガー；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質が含まれていない水；（１７）等張生理食塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；ならびに（２２）医薬製剤に採用されるその他の非毒性の適合性物質。
【０４２４】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドと他の剤との製剤に好適な剤に関する追加の非限定的な例としては、以下が挙げられる：ＰＥＧ結合核酸、リン脂質結合核酸、脂溶性部分を含有する核酸、ホスホロチオエート、様々な組織内への薬剤の浸透を強化することができるＰ−糖タンパク質阻害剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５）；例えば移植後の徐放性送達用のポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）マイクロスフィア（Ｅｍｅｒｉｃｈ，Ｄ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８）、マサチューセッツ州ケンブリッジ、Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．などの生分解性ポリマー；および例えば血液脳関門を超えて薬剤を送達することができ、神経系の取り込みメカニズムを変えることができるポリブチルシアノアクリレートから作製される粒子などの装荷ナノ粒子（Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２３，９４１−９４９，１９９９）。
【０４２５】
さらに、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面改変リポソーム（ＰＥＧ改変、分岐化、および非分岐化、もしくはそれらの組み合わせ、または長期循環型リポソームもしくはステルスリポソーム）を含む組成物も含まれる。ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、共有結合された、様々な分子量のＰＥＧ分子も含むことができる。これらの製剤によって、標的組織中の薬剤の蓄積を増加させる方法が提供される。長期循環型リポソームは、カチオン性リポソームと比較して、ヌクレアーゼ分解から薬剤を高度に保護する可能性もあり、これは例えば肝臓や脾臓などの代謝が活発なＭＰＳ組織中に蓄積することを回避する能力に起因する。
【０４２６】
また、米国特許第６，６９２，９１１号、第７，１６３，６９５号および第７，０７０，８０７号に記載されるような送達に対して調製された組成物も含まれる。この点に関し、ある実施形態は、米国特許第７，１６３，６９５号、第７，０７０，８０７号および第６，６９２，９１１号に記載されるようなリシンとヒスチジン（ＨＫ）のコポリマーを含む組成物を含み、それらは単独で、もしくはＰＥＧ（例えば、分岐型ＰＥＧもしくは非分岐型ＰＥＧ、またはその混合物）と組み合わされて、ＰＥＧと標的化部分もしくは架橋剤と組み合わされた前述のいずれかと組み合わされている。一部の実施形態は、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤を、グルコン酸改変ポリヒスチジンまたはグルコニル化ポリヒスチジン／トランスフェリンポリリシンを含有する組成物中で提供する。当業者であれば、当該組成物内で、ＨｉｓおよびＬｙｓと類似した性能を有するアミノ酸で置き換えてもよいことを認識するであろう。
【０４２７】
本明細書に記載される特定の剤は、例えばアミノまたはアルキルアミノなどの塩基性官能基を含有してもよく、それらは、薬学的に許容可能な酸と、薬学的に許容可能な塩を形成する能力を有する。この点に関し、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、剤の比較的非毒性の無機酸付加塩および有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクル中、または剤形製造プロセス中、原位置で調製することができ、または遊離塩基型の精製された剤と、適切な有機酸または無機酸を別個に反応させて、それに伴いその後の精製中に形成される塩を単離することにより調製することもできる。代表的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸炎、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレート、メシラート、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、およびラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。
【０４２８】
本明細書に記載される剤の薬学的に許容可能な塩としては、当該化合物の、例えば非毒性の有機酸または無機酸からの従来的な非毒性の塩、または四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、そうした従来的な非毒性の塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、スルファミン酸塩、リン酸塩、硝酸塩などの無機酸から誘導された塩；および例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、ステアリン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、パルミチン酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、フマル酸炎、トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンジスルホン酸塩、シュウ酸塩、イソチオン酸塩などの有機酸から調製される塩が挙げられる。
【０４２９】
ある実施形態では、本明細書に記載される剤は、１つ以上の酸性官能基を含有し、それに伴い、薬学的に許容可能な塩基と薬学的に許容可能な塩を形成する能力を有する。これらの例において、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、剤の比較的非毒性の無機塩基付加塩および有機塩基付加塩を指す。これらの塩も同様に、投与ビヒクル中、または剤形製造プロセス中、原位置で調製することができ、または遊離酸型の精製化合物と、例えば薬学的に許容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩などの適切な塩基、アンモニア、または薬学的に許容可能な有機一級アミン、二級アミンもしくは三級アミンとを別個に反応させることにより、調製することもできる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウムの塩などが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な代表的な有機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる。
【０４３０】
例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの湿潤剤、乳化剤および潤滑剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤ならびに抗酸化剤も、組成物中に存在することができる。
【０４３１】
薬学的に許容可能な抗酸化剤の例としては、（１）例えばアスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤、（２）例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなどの脂溶性抗酸化剤、および（３）例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤、が挙げられる。
【０４３２】
静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、経鼻投与、肺投与、局所（口腔投与および舌下投与を含む）投与、直腸投与、経腟投与、および／または非経口投与に適した製剤も含まれる。製剤は、単位剤形で簡便に提供されてもよく、および調剤分野において公知の任意の方法により調製されてもよい。単一剤形を作製するための担体物質と混合することができる活性成分の量は、治療される宿主に応じて、特に投与様式に応じて変化する。単一剤形を作製するための担体物質と混合することができる活性成分の量は概して、治療効果を生じさせる化合物の量である。概して、１００パーセントのうち、活性成分の量は、約０．１パーセント〜約９９パーセントの範囲であり、好ましくは約５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセント〜約３０パーセントである。
【０４３３】
ある実施形態では、組成物または製剤は、シクロデキストリン、セルロース、リポソーム、ミセル形成剤、例えば胆汁酸、およびポリマー担体、例えばポリエステルおよびポリ無水物から選択される賦形剤、ならびにＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドと、任意の他の剤を含む。
【０４３４】
経口投与に好適な製剤は、カプセル、カシェ、丸薬、錠剤、トローチ剤（通常、スクロースとアカシアまたはトラガカントなどの香味ベースを使用）、粉末、顆粒の形態であってもよく、または水性または非水性の液体の溶液または懸濁液であってもよく、または水中油もしくは油中水の液体エマルションであってもよく、またはエリキシルもしくはシロップであってもよく、または芳香錠（例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性ベースを使用）、および／または口内洗浄液であってもよく、各々、既定量のＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤を活性成分として含有する。組成物または剤は、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与されてもよい。
【０４３５】
経口投与用の固形の剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチなど）において、活性成分は、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、および／または以下のうちのいずれかなどの１つ以上の薬学的に許容可能な担体と混合されてもよい：（１）充填剤または増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア；（３）例えば、グリセロールなどの保湿剤；（４）例えば、アガー−アガー、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）例えば、パラフィンなどの溶液遅延剤；（６）例えば、四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ならびに例えばポロキサマーおよびラウリル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤；（７）例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤などの湿潤剤；（８）例えば、カオリンおよびベントナイトクレイなどの吸収剤；（９）例えば、滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、およびそれらの混合物などの潤滑剤；（１０）着色剤、ならびに；（１１）例えば、クロスポビドンまたはエチルセルロースなどの制御放出剤。カプセル、錠剤および丸薬の場合、組成物は、緩衝剤も含んでもよい。類似したタイプの固形組成物を、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールの様な賦形剤を使用した軟シェル型ゼラチンカプセルおよび硬シェル型ゼラチンカプセル中の充填剤として採用してもよい。
【０４３６】
錠剤は、任意で１つまたは複数のアクセサリー成分とともに圧縮または成形により作製されてもよい。圧縮錠は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、グリコール酸ナトリウムデンプンまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性化剤、または分散剤を使用して調製されてもよい。成形錠剤は、不活性液状希釈剤で湿らされた粉末化化合物の混合物を適切な機器中で成形することにより調製されてもよい。
【０４３７】
錠剤および他の固形剤形、例えば糖衣錠、カプセル、丸薬および顆粒は、任意で例えば腸溶コーティングおよび製剤分野で公知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて取得され、または調製されてもよい。また、本発明の医薬組成物は、所望の放出プロファイルを提供するための様々な割合の例えばヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマー基材、リポソームおよび／またはマイクロスフィアを使用して、その中に含まれる活性成分を遅延放出または制御放出するように製剤化されてもよい。迅速放出のために、例えば凍結乾燥などで製剤化されてもよい。例えば細菌保持フィルターを通じたろ過により、または使用直前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体中に溶解され得る滅菌固形組成物の形態で、滅菌剤を組み込むことにより、滅菌されてもよい。当該組成物は任意で乳白剤を含有してもよく、および活性成分のみを放出する組成物であってもよく、または好ましくは、任意で遅延様式で消化管の特定部分で活性成分のみを放出する組成物であってもよい。使用され得る封入組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。活性成分は、適切な場合には上述の賦形剤のうちの１つ以上を含む、マイクロカプセル封入型であってもよい。
【０４３８】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドと他の剤の経口投与用の液体剤型としては、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが挙げられる。活性成分に加えて、液体剤型は、当分野で普遍的に使用されている不活性希釈剤、例えば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油状物（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブオイル、ひまし油および胡麻油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含有してもよい。
【０４３９】
不活性希釈剤のほかに、経口組成物は、例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤、ならびに保存剤などのアジュバントを含んでもよい。
【０４４０】
活性化合物に加えて、懸濁液は、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、アガーーアガー、およびトラガカント、ならびにそれらの混合物などの懸濁化剤を含有してもよい。
【０４４１】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドと、他の剤の局所投与用および経皮投与用の製剤または剤形としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤が挙げられる。活性なＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、薬学的に許容可能な担体とともに、および必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤または推進剤とともに滅菌条件下で混合されてもよい。ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤に加えて、軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、例えば動物性脂肪および植物性脂肪、油類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、滑石、および酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含有してもよい。
【０４４２】
粉末およびスプレーは、例えば、ラクトース、滑石、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれら物質の混合物などの賦形剤を含有することができる。スプレーはさらに、例えばクロロフルオロ炭水化物および揮発性の非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンなどの慣習的な推進剤を含有することができる。
【０４４３】
経皮パッチは、身体に、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤を制御送達するというさらなる利益を有している。そうした剤形は、適切な媒体中に剤を溶解または分散させることにより作製することができる。吸収強化剤を使用して、皮膚を通過する剤の流れを増加させることもできる。そうした流れの速度は、当分野に公知の方法の中でも特に、速度制御膜を提供すること、またはポリマーマトリクスもしくはポリマーゲル中に剤を分散させることのいずれかにより制御することができる。
【０４４４】
非経口投与に適した医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な滅菌等張性の水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルション、または使用直前に滅菌注射溶液または滅菌注射分散液へと再構成され得る滅菌粉末と組み合わされた、１つ以上のＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または他の剤を含んでもよく、それらは糖類、アルコール類、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、意図されるレシピエントの血液と製剤を等張にさせる溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含有してもよい。医薬組成物に採用され得る適切な水性担体および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、例えばオリーブオイルなどの植物性油、ならびに例えばオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル類が挙げられる。例えばレシチンなどのコーティング物質の使用により、分散液の場合には必要な粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、適切な流動性が維持され得る。
【０４４５】
これらの組成物は、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有してもよい。対象に対する微生物の影響の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含有させることにより確保され得る。例えば、糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物内に含有させることが望ましい場合もある。さらに注射用医薬製剤の持続的吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの吸収を遅延させる剤を含有させることにより実現されてもよい。
【０４４６】
一部の例では、薬の作用を持続化させるためには、皮下注射または筋肉内注射からの薬剤の吸収を遅くさせることが望ましい。この遅延は、当分野に公知の方法の中でも特に、水溶性が乏しい結晶材料または非晶質材料の液状懸濁液を使用することにより実現される場合がある。その後の薬剤の吸収速度は、その溶解速度に依存しており、そして溶解速度は、結晶のサイズおよび結晶形態に依存し得る。あるいは非経口投与された剤形の吸収遅延は、薬剤を油性ビヒクルに溶解または懸濁することにより実現される。
【０４４７】
注射用デポ形態は例えば、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に対象のＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤のマイクロカプセル物質を形成させることにより作製されてもよい。剤とポリマーの比率、および採用される特定のポリマーの性質に応じて、放出速度を制御することができる。生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポ型注射用製剤は、身体組織との適合性があるリポソームまたはマイクロエマルション中に薬剤を封入することにより調製されてもよい。
【０４４８】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤が、医薬品としてヒトおよび動物に投与される場合、それ自体が、例えば薬学的に許容可能な担体と組み合わされて、０．１〜９９％（より好ましくは１０〜３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として投与され得る。
【０４４９】
本明細書において使用される場合、「非経口投与」および「非経口的に投与される」という文言は、腸内投与および局所投与以外の投与様式を意味し、通常、注射により行われ、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、脊髄内、関節包内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、および胸骨下の注射ならびに点滴が挙げられる。
【０４５０】
本明細書において使用される場合、「全身投与」、「全身投与される」、「末梢投与」、および「末梢投与される」という文言は、中枢神経系への直接投与以外で、化合物、薬剤または他の物質を投与することを意味し、その結果、それら物質は患者の身体に入り、例えば代謝や、皮下投与などの他の同様のプロセスに曝される。
【０４５１】
選択された投与経路に関わらず、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、当業者に公知の従来的な方法で薬学的に許容可能な剤形へと製剤化され得る。医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、患者に許容できない毒性をもたらすことなく、特定の患者、組成物および投与様式にとって望ましい治療応答を実現させるために有効な活性成分の量が得られるように変化し得る。
【０４５２】
選択された用量レベルは、採用された特定のＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤、またはそれらのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、採用された特定の剤の排出速度または代謝速度、吸収速度および吸収の程度、治療期間、採用された特定の剤と併用して使用される他の剤、化合物および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般健康状態および既往歴、ならびに医学分野で公知の類似因子をはじめとする様々な因子に依存する。
【０４５３】
当分野の通常の技能を有する医師であれば、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば医師は、医薬組成物中に採用されるＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤の投与を、望ましい治療効果を実現させるために必要とされるレベルよりも低いレベルで開始させ、望ましい効果が実現されるまで徐々に投与量を増加させることもできる。概して、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤の適切な１日投与量は、治療効果を生じさせるのに有効な最低投与量である化合物の量である。そうした有効投与量は概して、本明細書に記載される因子に依存する。概して、対象または患者に対する、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤の経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、脳室内投与および皮下投与の量は、指定される効果に対して使用される場合、１用量当たり約０．０００１〜約１００ｍｇ、または１用量当たり、体重１キログラム当たり、約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲である。
【０４５４】
望ましい場合には、活性剤の有効１日投与量は、日または週にわたり適切な間隔で別個に投与される１、２、３、４、５、６回、またはそれ以上の下位投与量として、単位剤形で投与されてもよい。ある状況下では、投与は、１日当たり１回の投与である。ある状況下では、投与は、１週当たり１、２または３回の投与である。ある実施形態では、投与は、所望の状態を治療するために必要に応じて２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日ごとに１回以上の投与、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週ごとに１回以上の投与、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２月ごとに１回以上の投与を行う。
【０４５５】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、当業者に公知の様々な方法により細胞に投与されることができ、限定されないが、本明細書に記載され、および当分野に公知の、リポソームへの封入、イオントフォレーシス、または例えばハイドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセルおよび生体接着性のマイクロスフィアなど他のビヒクル内への組み込みにより細胞に投与されることができる。ある実施形態では、マイクロエマルション化技術を利用して、親油性（水不溶性）薬剤の生体利用効率を改善してもよい。例としては、Ｔｒｉｍｅｔｒｉｎｅ（Ｄｏｒｄｕｎｏｏ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１７（１２），１６８５−１７１３，１９９１、およびＲＥＶ  ５９０１（Ｓｈｅｅｎ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８０（７），７１２−７１４，１９９１）が挙げられる。特に利益としては、マイクロエマルション化によって循環系ではなくリンパ系に選択的に吸収させ、その結果、肝臓がバイパスされて、肝胆道循環中で化合物が破壊されるのを防ぐことにより、生体利用効率が強化される。
【０４５６】
一部の実施形態では、組成物または製剤は、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤と、少なくとも１つの両親媒性担体から形成されるミセルを含有し、この場合、ミセルは約１００ｎｍ未満の平均直径を有する。例示的な実施形態では、約５０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルが提供され、さらにある実施形態では、約３０ｎｍ未満、またはさらには約２０ｎｍ未満の平均直径を有するミセルが提供される。すべての好適な両親媒性担体が予期されるが、提示される好ましい担体は概して、Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ−Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ−ａｓ−Ｓａｆｅ（ＧＲＡＳ）のステータスを有し、活性化成分を可溶化して、溶液が複合水層と接触する後期ステージ（例えば、ヒトの消化管にあるようなステージ）でマイクロエマルション化することができる。通常、これらの要件を満たす両親媒性成分は、２〜２０のＨＬＢ（親水性と親油性のバランス）値を有し、その構造中に、Ｃ−６〜Ｃ−２０の範囲で直鎖脂肪族ラジカルを含有する。例は、ポリエチレングリコール化された脂肪グリセリドとポリエチレングリコールである。
【０４５７】
両親媒性担体の例としては、例えば完全または部分的に水素化された様々な植物油から取得されるものなどの飽和および一不飽和のポリエチレングリコール化脂肪酸グリセリドが挙げられる。そうした油類は、三、二、および一脂肪酸グリセリド、ならびに対応する脂肪酸の二および一ポリエチレングリコールエステルからなるものが有利であり得、カプリン酸４−１０％、カプリン酸３−９％、ラウリル酸４０−５０％、ミリスチン酸１４−２４％、パルミチン酸４−１４％、およびステアリン酸５−１５％を含む脂肪酸組成物が特に好ましい。両親媒性担体の別の有用な種類としては、飽和または一不飽和脂肪酸（ＳＰＡＮ（登録商標）シリーズ）または対応するエトキシル化アナログ（ＴＷＥＥＮ（登録商標）シリーズ）とともに、部分エステル化されたソルビタンおよび／またはソルビトールが挙げられる。
【０４５８】
市販の両親媒性担体が特に有用であり、Ｇｅｌｕｃｉｒｅシリーズ、Ｌａｂｒａｆｉｌ、Ｌａｂｒａｓｏｌ、またはＬａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（すべてフランス、サン・プリエストのＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎで製造、販売されている）、ＰＥＧ−モノオレイン酸塩、ＰＥＧ−ジオレイン酸塩、ＰＥＧ−モノラウリル酸塩、およびジ−ラウリル酸塩、レシチン、ポリソルベート８０など（米国および世界の多数の企業で製造販売されている）が挙げられる。
【０４５９】
ある実施形態では、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、マイクロスフィア、脂質粒子、小胞などを使用することで、適切な宿主細胞へのＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤の送達が行われてもよい。特に組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフィア、ナノ粒子などの中に封入されて送達される目的で製剤化されてもよい。そうした送達ビヒクルの製剤化および使用は、公知の従来的な技術を使用して行うことができる。
【０４６０】
使用に適した親水性ポリマーは、容易に水に溶けて、小胞形成脂質に共有結合することができ、毒性作用無くインビボで忍容性である（すなわち生体適合性のある）親水性ポリマーである。好適なポリマーとしては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも名付けられている）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも名付けられている）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマー、およびポリビニルアルコールが挙げられる。ある実施形態では、ポリマーは、約１００または１２０ダルトンから、５，０００または１０，０００ダルトン以下の分子量、または約３００ダルトン〜約５，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ポリマーは、約１００〜約５，０００ダルトンの分子量を有する、または約３００〜約５，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。ある実施形態では、ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーは、その中のモノマーの数によって規定される場合もある。
【０４６１】
好適であり得る他の親水性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、および例えばヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロースが挙げられる。
【０４６２】
ある実施形態では、組成物または製剤は、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、アクリル酸エステルとメタクリル酸エステルのポリマー、ポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタン、およびそのコポリマー、セルロース、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、乳酸とグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（ブチ酸（ｂｕｔｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、多糖類、タンパク質、ポリヒアルロン酸、ポリシアノアクリル酸塩、およびそれらの融合物、混合物、またはコポリマーからなる群から選択される生体適合性ポリマーを含む。
【０４６３】
シクロデキストリンは、６、７または８個のグルコース単位からなる環状オリゴ糖であり、それぞれギリシャ語でα、βおよびγと指定される。グルコース単位は、α−１，４−グルコシド（ｇｌｕｃｏｓｉｄｉｃ）結合により結合される。糖単位の椅子型配置の結果として、すべての二級ヒドロキシル基（Ｃ−２、Ｃ−３）は、環の片方に配置され、Ｃ−６のすべての一級ヒドロキシル基は、他方に配置される。結果として、外側の面は親水性となり、そのためシクロデキストリンは水溶性となる。対照的にシクロデキストリンの空洞は疎水性であり、これはＣ−３原子およびＣ−５原子の水素と、エーテル様酸素により覆われているためである。これらのマトリクスによって、例えば１７α−エストラジオールなどのステロイド化合物を含む多様な比較的疎水性の化合物との錯体形成が可能となる（例えば、ｖａｎ  Ｕｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．３８：１−３−１１３（１９９４）を参照のこと）。錯体形成は、ファンデルワールス相互作用と、水素結合形成により生じる。シクロデキストリン誘導体の物理化学的性能は、置換の種類と程度に依存する。例えばその水溶性は、非水溶性（例えば、トリアセチル−ベータ−シクロデキストリン）から、１４７％水溶性（ｗ／ｖ）（Ｇ−２−ベータ−シクロデキストリン）までの範囲がある。それに加えて、シクロデキストリン誘導体は、多くの有機溶媒に溶解性である。その溶解度を増加、または減少させることにより、シクロデキストリンの性能は、様々な製剤構成要素の溶解度の制御を可能にする。
【０４６４】
多くのシクロデキストリン、およびその作製方法が報告されている。例えば、Ｐａｒｍｅｔｅｒ（Ｉ）らの（米国特許第３，４５３，２５９号）およびＧｒａｍｅｒａらの（米国特許第３，４５９，７３１号）は、電気的に中性なシクロデキストリンを報告している。他の誘導体としては、カチオン性の性能を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩ）、米国特許第３，４５３，２５７号］、不溶性架橋シクロデキストリン（Ｓｏｌｍｓ、米国特許第３，４２０，７８８号）、およびアニオン性の性能を有するシクロデキストリン［Ｐａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）、米国特許第３，４２６，０１１号］が挙げられる。アニオン性の性能を有するシクロデキストリン誘導体の中で、カルボン酸、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓ  ａｃｉｄ）、ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、チオホスホン酸、チオスルフィン酸、およびスルホン酸が、元のシクロデキストリンに加えられている［上記のＰａｒｍｅｔｅｒ（ＩＩＩ）を参照のこと］。さらにスルホアルキルエーテルシクロデキストリン誘導体が、Ｓｔｅｌｌａら（米国特許第５，１３４，１２７号）に報告されている。
【０４６５】
一部の実施形態は、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤を含有するリポソームを含む製剤に関連し、この場合においてリポソーム膜は、担持能力が増加したリポソームを提供するように製剤化される。あるいは、またはさらに、活性成分は、リポソームのリポソーム二重層内に含有されてもよく、またはリポソーム二重層上に吸着されてもよい。ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、脂質界面活性剤と凝集され、リポソームの内部空間内で担持されてもよい。これらの例では、リポソーム膜は、活性剤−界面活性剤凝集体の破壊的な作用に抵抗するように製剤化される。
【０４６６】
リポソームは、水性の内部区画を内包する少なくとも１つの脂質二重層膜からなる。リポソームは、膜のタイプとサイズにより特徴付けられる場合がある。小さな単層小胞（ＳＵＶ）は、単一の膜であり、典型的には０．０２〜０．０５μｍの直径範囲である。大きな単層小胞（ＬＵＶＳ）は、典型的には０．０５μｍよりも大きい。オリゴ層（ｏｌｉｇｏｌａｍｅｌｌａｒ）の大きな小胞と、多層（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ）の小胞は、複数の膜の層、通常は同心の膜の層を有し、典型的には０．１μｍよりも大きい。いくつかの非同心状の膜を有するリポソーム、すなわち大きな小胞内に含有されるいくつかの小さな小胞は、多小胞型小胞（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）と呼ばれる。
【０４６７】
一部の実施形態では、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化された脂質を含有し、その結果、ＰＥＧ鎖は脂質二重層の内表面からリポソームに封入された内部空間まで伸長し、そして脂質二重層の外表面から周辺環境にまで伸長する。
【０４６８】
リポソームは、当分野に公知の様々な技術のいずれかにより調製されてもよい。例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；公開ＰＣＴ出願ＷＯ９６／１４０５７；Ｎｅｗ  ＲＲＣ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９９０），ｐａｇｅｓ  ３３−１０４；Ｌａｓｉｃ  ＤＤ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｓｉｃｓ  ｔｏ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  ＢＶ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９９３を参照のこと。例えば、リポソームは、リポソーム中の所望の誘導体化脂質の最終モルパーセントに相当する脂質濃度で、例えば脂質移植ポリマーから構成されるミセルに予め形成されたリポソームを露出させるなど、親水性ポリマーで誘導体化された脂質を予め形成されたリポソーム内に拡散させることにより調製されてもよい。親水性ポリマーを含有するリポソームは、ホモジナイズにより、脂質−領域の水和により、または当分野に公知の押し出し技術により、形成されることもできる。
【０４６９】
別の例示的な製剤手順において、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、リソホスファチジルコリン、または疎水性分子を容易に可溶化させる他の低ＣＭＣ界面活性剤（ポリマー移植脂質を含む）中のソニケーションにより最初に分散される。次いで得られた活性剤のミセル状懸濁液を使用して、適切なモルパーセントのポリマー移植脂質、またはコレステロールを含有する乾燥脂質サンプルを再水和する。次いで脂質と活性剤の懸濁液を、当分野に公知の押し出し技術を使用してリポソームへと形成させ、得られたリポソームを、標準的なカラム分離法により未封入溶液から分離させる。
【０４７０】
１つの態様では、リポソームは、選択されたサイズ範囲で実質的に均質なサイズを有するように調製される。１つの効果的な定寸方法には、選択された均一な孔サイズを有する一連のポリカーボネート膜を通してリポソームの水性懸濁液を押し出すことを含む。膜の孔サイズは、当該膜を通して押し出すことにより生成されたリポソームの最大サイズにおおよそ相当する。例えば、米国特許第４，７３７，３２３号（１９８８年４月１２日）を参照のこと。ある実施形態では、例えば、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）などの試薬を利用して、細胞内にポリヌクレオチドまたはタンパク質を導入してもよい。
【０４７１】
製剤の放出特性は、封入材料、封入された薬剤の濃度、および放出改変因子の存在に依存する。例えば放出は、胃のような低ｐＨでのみ放出する、または腸管のような高ｐＨでのみ放出するｐＨ感受性コーティングを使用して、ｐＨ依存性となるように操作されることができる。腸溶コーティングを使用して、胃を通過するまで放出が起きないようにすることができる。異なるマトリクス中に封入されたシアナミドの複合コーティングまたは混合物を使用して、胃で初期放出され、その後、腸管で後期放出が行われるようにすることができる。さらに、塩または孔形成剤を封入することにより放出を操作することもでき、この場合、水の取り込みが増加し、またはカプセルからの拡散による薬剤の放出が増加し得る。薬剤の溶解度を改変する賦形剤を使用して放出速度を制御することもできる。マトリクスの分解を強化する、またはマトリクスからの放出を強化する剤を組み込むこともできる。化合物に応じて、そうした剤を薬剤に添加し、別個の層として（すなわち粒子として）添加し、またはポリマー層に共溶解させることもできる。殆どの場合、量は、０．１〜３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）でなければならない。分解強化物質のタイプとしては、例えば硫酸アンモニウムや塩化アンモニウムなどの無機塩、例えばクエン酸、安息香酸やアスコルビン酸などの有機酸、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛および水酸化亜鉛などの無機塩基、ならびに例えば、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンなどの有機塩基、ならびに例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（商標）などの界面活性剤が挙げられる。マトリクス（すなわち、例えば、無機塩や糖類などの水溶性化合物）に微小構造を与える孔形成剤は、粒子として添加される。その範囲は、典型的には１〜３０パーセント（ｗ／ｗポリマー）である。
【０４７２】
取り込みも、腸管中の粒子の滞留時間を変化させることにより操作することができる。この操作は例えば、粒子を、粘膜接着性ポリマーでコーティングすることにより、または粘膜接着性ポリマーを封入物質として選択することにより実現することができる。例としては、例えば、キトサン、セルロース、および特にポリアクリル酸塩（本明細書において使用される場合、ポリアクリル酸塩とは、アクリル酸基、および例えばシアノアクリル酸塩やメタアクリル酸塩などの改変アクリル酸基を含むポリマーを指す）などの遊離カルボキシル基を有する大部分のポリマーを含む。
【０４７３】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または他の剤は、外科的もしくは医療的なデバイスまたはインプラントの内に含有され、またはそれらによる放出に適合されるように製剤化されてもよい。ある態様では、インプラントは、剤でコーティングされてもよく、または別手段により剤で処理されてもよい。例えば、ハイドロゲルや、生体適合性および／または生分解性のポリマーなどの他のポリマーを使用して、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または他の剤を含むインプラントをコーティングしてもよい（すなわち、組成物は、ハイドロゲルまたは他のポリマーを使用することで、医療デバイスでの使用に適合されてもよい）。剤を含む医療デバイスをコーティングするためのポリマーおよびコポリマーは、当分野に公知である。インプラントの例としては限定されないが、ステント、薬剤溶出ステント、縫合糸、プロテーゼ、血管カテーテル、透析カテーテル、代用血管、人工心臓弁、心臓ペースメーカー、植込み型除細動器、ＩＶ針、接骨および骨形成のためのデバイス、例えばピン、ねじ、プレートおよび他のデバイス、ならびに創傷治癒のための人工組織マトリクスが挙げられる。一部の実施形態では、そうしたコーティングは、インプラント周辺の肉芽腫形成の予防に役立つ。
【０４７４】
ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチドおよび／または他の剤は、生理学的に許容可能な任意の便利なビヒクルで投与されてもよい。当該組成物は、当業者に採用される様々な標準的な薬学的に許容可能な担体のいずれかを含んでもよい。例としては限定されないが、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、水、エタノール溶液、エマルション、例えば油／水エマルション、またはトリグリセリドエマルション、錠剤、およびカプセルが挙げられる。好適な生理学的に許容可能な担体の選択は、選択された投与様式に依存して変化する。
【０４７５】
さらに、例えば、患者ケアキットなどのキットが含まれ、当該キットは、治療用組成物、ＨＲＳのポリペプチド／発現可能なポリヌクレオチド、および／または本明細書に記載される他の剤のうちの１つ以上で満たされた１つ以上の容器を含む。一部の実施形態では、キットは、例えば１つ以上の疾患の治療において当該組成物をどのように使用するかについての書面の説明書を含む。
【０４７６】
したがってある実施形態は、以下を含む患者ケアキットを含む：（ａ）ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）ポリペプチド、またはＨＲＳポリペプチドをコードする発現可能なポリヌクレオチド；および（ｂ）本明細書に記載される、例えば、抗菌剤、抗真菌剤、駆虫剤、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、および／またはキナーゼ阻害剤などの第二の剤。一部のキットにおいて、（ａ）および（ｂ）は、別個の組成物中にあり、そして任意で本明細書に記載されるように規定される。一部のキットにおいて、（ａ）および（ｂ）は、任意で、本明細書に記載される治療用組成物として、同じ組成物中にある。
【０４７７】
本明細書に記載されるキットおよび組成物は、１つ以上の追加の治療剤、または治療される適応症に適した、もしくは望ましい他の構成要素を含んでもよい。追加の治療剤は、望ましい場合には第二の容器中に含有されてもよい。追加の治療剤の例としては、限定されないが、抗炎症剤、抗癌剤、抗菌剤、抗ウイルス剤などが挙げられる。
【０４７８】
本明細書においてキットは、１つ以上のシリンジ（例えば、注射用シリンジ）、または意図される送達様式の促進に必要な、または望ましい他の構成要素も含み得る（例えば、ステント、移植可能なデポなど）。
【実施例】
【０４７９】
材料および方法
ＥＬＩＳＡアッセイ
ヒトおよびマウスの循環中の内因性ＨＲＳを測定するためのアッセイ。ＥＬＩＳＡ検出アッセイは、異なる捕捉抗体と検出抗体を使用して循環中のマウスまたはヒトのＨＲＳのレベルを定量し、全長ＨＲＳならびにＮ末端領域の選択的な測定が可能となるように開発された。
【０４８０】
ヒトのＮ末端ＥＬＩＳＡは、ヒトＨＲＳのＮ末端ドメイン（ＷＨＥＰドメイン）を検出するように設計されており、このドメイン（ＨＲＳのおよそ１〜６０アミノ酸）を標的とする捕捉抗体と検出抗体を利用している。
【０４８１】
ＥＬＩＳＡアッセイは、捕捉抗体でコーティングされた９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：ＡＴＹＲ１２Ｈ６、マウスモノクローナル抗体
●  捕捉抗体濃度：１μｇ／ｍＬ
●  タンパク質標準の範囲：１００〜０．０４６ｎｇ／ｍＬ
●  検出抗体：１Ｃ８−ｂ、ビオチニル化マウスモノクローナル抗体、
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃  Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４８２】
ヒト全長ＨＲＳ  ＥＬＩＳＡは、タンパク質（ＷＨＥＰ（ＨＲＳのアミノ酸１〜６０））と触媒ドメイン（ＨＲＳのおよそアミノ酸６０〜３９８）の別個のドメインを標的とする捕捉抗体と検出抗体を利用して、複数ドメインのヒトＨＡＲＳを検出するように設計されている。
【０４８３】
ＥＬＩＳＡアッセイは、捕捉抗体でコーティングされた９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：ＡＴＹＲ１２Ｈ６、マウスモノクローナル抗体
●  捕捉抗体濃度：１μｇ／ｍＬ
●  タンパク質標準の範囲：１００〜０．０４６ｎｇ／ｍＬ
●  検出抗体：ＡＴＹＲ１３Ｃ８−ｂ、ビオチニル化マウスモノクローナル抗体
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃  Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４８４】
マウスのＮ末端ＥＬＩＳＡは、マウスＨＲＳのＮ末端ドメイン（ＷＨＥＰ）を検出するように設計されており、このドメインを標的とする捕捉抗体と検出抗体を利用している。
【０４８５】
ＥＬＩＳＡアッセイは、捕捉抗体でコーティングされた９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：ＡＴＹＲ１３Ｅ９、マウスモノクローナル抗体
●  捕捉抗体濃度：１μｇ／ｍＬ
●  タンパク質標準の範囲：１００〜０．０４６ｎｇ／ｍＬ
●  検出抗体：１Ｃ８−ｂ、ビオチニル化マウスモノクローナル抗体、
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃  Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４８６】
マウス全長ＨＲＳ  ＥＬＩＳＡは、タンパク質（ＷＨＥＰ（ＨＲＳのおよそアミノ酸１〜６０））と触媒ドメイン（ＨＲＳのおよそアミノ酸６０〜３９８）の別個のドメインを標的とする捕捉抗体と検出抗体を利用して、複数ドメインのマウスＨＡＲＳを検出するように設計されている。
【０４８７】
ＥＬＩＳＡアッセイは、捕捉抗体でコーティングされた９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：ＡＴＹＲ１３Ｅ９、マウスモノクローナル
●  捕捉抗体濃度：１μｇ／ｍＬ
●  タンパク質標準の範囲：１００〜０．０４６ｎｇ／ｍＬ
●  検出抗体：ＡＴＹＲ１３Ｃ８−ｂ、マウスモノクローナル
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃  Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４８８】
循環中のヒト内因性ニューロピリン２（ＮＲＰ２またはＮＰ２）を測定するためのアッセイ。ＥＬＩＳＡ検出アッセイは、可溶性ＮＲＰ２の選択的測定を可能にする捕捉抗体と検出抗体を使用して、循環中のヒトＮＲＰ２レベルを定量するように開発された。ヒトＮＲＰ２  ＥＬＩＳＡは、ＮＲＰ２を標的とするモノクローナル捕捉抗体とポリクローナル検出抗体を利用して、可溶性ＮＲＰ２を検出するよう設計された。ＥＬＩＳＡアッセイは、９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：ＮＲＰ２  ｍＡｂ  カタログ番号ＭＡＢ２２１５、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社
●  捕捉抗体濃度：２μｇ／ｍＬ
●  タンパク質標準：ＮＲＰ２  Ｆｃ  カタログ番号２２１５−Ｎ２−０２５、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社
●  タンパク質標準の範囲：１００〜０．０４６ｎｇ／ｍＬ
●  検出抗体：ＮＲＰ２  ｐＡｂ  カタログ番号ＢＡＦ２２１５、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃  Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４８９】
循環中のヒト内因性ＨＲＳおよびＮＲＰ−２複合体を測定するためのアッセイ。ＥＬＩＳＡ検出アッセイは、各タンパク質パートナーに特異的な捕捉抗体と検出抗体を使用して、循環中のヒトＨＲＳとＮＲＰ２の複合体のレベルを測定するよう開発された。ヒトＨＲＳとＮＲＰ−２の複合体ＥＬＩＳＡは、可溶性ＮＲＰ２とＨＲＳの複合体を検出するよう設計され、これら２つのタンパク質に特異的なモノクローナル抗体とポリクローナル抗体を利用している。ＥＬＩＳＡアッセイは、９６ウェルのマルチアレイプレートを使用し、標準的なＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＥＬＩＳＡプロトコールに従い、以下の試薬を使用して行われた：
●  ブロック緩衝液：カゼイン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社  ＃３７５２８）
●  洗浄緩衝液：ＰＢＳＴ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０の１Ｘ  ＰＢＳ溶液；自作）
●  希釈液：１％  ＢＳＡ（ＰＢＳ中で希釈）およびカゼイン
●  捕捉抗体：
ＮＲＰ２  ｍＡｂ  カタログ番号ＭＡＢ２２１５１、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社
ＨＲＳ  Ｃ末端  ｍＡｂ  クローン番号ＡＴＹＲ１３Ｃ８
ＨＲＳ  Ｎ末端  ｍＡｂ  クローン番号ＡＴＹＲ１２Ｈ６
●  捕捉抗体濃度：１μｇ／ｍＬ
●  検出抗体：
ＮＲＰ２  ｐＡｂ  カタログ番号ＢＡＦ２２１５、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社
ＨＲＳ  Ｃ末端  ｍＡｂ  クローン番号１３Ｃ８
ＨＲＳ  Ｎ末端  ｍＡｂ  クローン番号１２Ｈ６
●  検出抗体濃度：０．５μｇ／ｍＬ
●  二次試薬：ストレプトアビジンＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ、＃Ｒ３２ＡＤ−１、５００μｇ／ｍＬ
●  二次試薬濃度：１μｇ／ｍＬ
●  基質：界面活性剤を含むＭＳＤリード緩衝液Ｔ（４Ｘ）＃Ｒ９２ＴＣ−１
【０４９０】
抗体の特徴解析実験。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）方法を使用して、ＨＲＳタンパク質に対する抗体の結合動態とアフィニティを特徴解析した。ＳＰＲ実験は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｒｒａｙ装置で実施された。ＨＲＳタンパク質を、アミンカップリングを介してＰｒｏｔｅＯｎ  ＧＬＣセンサーチップの様々なチャンネル上に固定した。一連の様々な濃度の各抗体を、固定されたタンパク質上に流した。センサーチップの表面を、各抗体のランの間に再生させて、結合抗体を取り除いた。得られたセンサグラムは、ＰｒｏｔｅＯｎ  Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアで分析され、二価分析モデルに広く適合させて、結合速度（ｋａ）と解離速度（ｋｄ）を得た。各抗体−タンパク質ペアの平衡解離定数（ｋＤ）は、ｋｄ／ｋａの比率である。
●  ランニング緩衝液：０．００５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０を含む１ＸＰＢＳ
●  アミンカップリング：ＰｒｏｔｅＯｎ  アミンカップリングキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社、＃１７６２４１０）
●  リガンドカップリング緩衝液：酢酸ナトリウム  ｐＨ５．５
●  再生緩衝液：１０ｍＭ  ＨＣｌ
【０４９１】
タンパク質−タンパク質の相互作用実験  表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法を使用して、タンパク質パートナー間の相互作用を示した。ＳＰＲ実験は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｒｒａｙ装置で実施された。タンパク質を、アミンカップリングを介してＰｒｏｔｅＯｎ  ＧＬＣセンサーチップの様々なチャンネル上に固定した。分析タンパク質を、固定されたタンパク質上に流した。センサーチップの表面は各分析ランの間に再生されて、相互作用しているタンパク質が取り除かれた。データは、インタースポット（未処理のチップ表面）とブランク表面（アミンカップリングに関して活性化、および不活化されている）に対して二重に参照された。
●  ランニング緩衝液：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０、ｐＨ７．４
●  アミンカップリング：ＰｒｏｔｅＯｎ  アミンカップリングキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社、＃１７６２４１０）
●  リガンドカップリング緩衝液：酢酸ナトリウム（タンパク質のｐＩに応じて、ｐＨ４．０、４．５、５．０、５．５）
●  再生緩衝液：１０ｍＭ  グリシン  ｐＨ２．０
市販のタンパク質試薬（タンパク質は、注記が無い限り、ヒト配列に由来する）：
●  ＮＲＰ２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃２２１５−Ｎ２）
●  ＮＲＰ１−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃３８７０−Ｎ１）
●  マウス  ＰＬＸＮＡ１−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃４３０９−ＰＡ）
●  ＳＥＭＡ３Ｃ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃５５７０−Ｓ３）
●  マウス  ＳＥＭＡ３Ｆ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃３２３７−Ｓ３）
●  マウス  ＮＲＰ２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃７９８８−Ｎ２）
●  ラット  ＮＲＰ２−Ｆｃ−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃５６７−Ｎ２）
●  ＶＥＧＦ−Ｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃９１９９−ＶＣ／ＣＦ）
●  ＶＥＧＦ−Ａ１６５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、＃１００−２０）
●  ＶＥＧＦ−Ａ１４５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃７６２６−ＶＥ−ＣＦ）
●  ＶＥＧＦ−Ａ１２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、＃１００−２０Ａ）
●  ＰｌＧＦ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社、＃１００−５６）
●  ヘパリン（ＳｔｅｍＣｅｌｌ社、＃０７９８０）
【０４９２】
培養細胞に対する免疫蛍光分析。
試薬：
・  ＰＥ  抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ  抗体、クローンＨＰ６０１７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号４０９３０４
・  マウス抗−ＨＲＳモノクローナル抗体（１−９６）クローン１Ｃ８、Ａｂｎｏｖａ社、カタログ番号  Ｈ００００３０３５−Ｍ０１
・  マウス  ＩｇＧ２ａ、アイソタイプ対照抗体（ＭＯＰＣ−１７３）、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社、カタログ番号  ４００２２３
・  組み換えヒトＶＥＧＦ−Ｃタンパク質、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、カタログ番号２１７９−ＶＣ−０２５／ＣＦ
・  ホルムアルデヒド、１６％、メタノールなし、超純粋、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社、カタログ番号  １８８１４−１０
・  ヘキスト３３３４２、三塩酸塩、三水和物、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号Ｈ１３９９
・  Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２９６９９に記載されるように調製された。
・  Ｇｉｂｃｏ  ＤＭＥＭ、高グルコース、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、カタログ番号  １１９６５０９２
・  ＰｏｌｙＪｅｔ（商標）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ＤＮＡ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ、ＳｉｇｎａＧｅｎ社、カタログ番号ＳＬ１００６８８
・  ニューロピリン  ２（ＮＲＰ２）（ＮＭ＿００３８７２）ヒトＯＲＦクローン、Ｏｒｉｇｅｎｅ社、カタログ番号ＲＧ２２０７０６
・  コラーゲンコーティング溶液、Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ社、カタログ番号  １２５−１００
・  １％ＢＳＡ、０．９ｍＭ  ＣａＣｌ２および２０ｍＭグルコースを含有する１Ｘ  ＰＢＳ
・  １％正常マウスＩｇＧ（ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｉ８７６５）および２．５％（ヒトＦｃ受容体結合阻害剤、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、１４−９１６１−７３）を含有する結合緩衝液。
【０４９３】
細胞培養およびトランスフェクション。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％ＦＢＳと１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ中で培養した。細胞を、トランスフェクションの前日の夜に６ウェルプレートに播種した。ＮＲＰ２ａ−ＧＦＰ融合タンパク質をコードするプラスミドＤＮＡを１μｇと、ＰｏｌｙＪｅｔトランスフェクション試薬とを、メーカーのプロトコールに従い予め複合体化し、次いで細胞に添加した。トランスフェクションの１６時間後に培地を交換し、トランスフェクトされた細胞を、９６ウェルプレートに移して染色した。
【０４９４】
培養細胞に対する免疫蛍光分析。細胞で発現されたＮＲＰ２に対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合と定量を、免疫蛍光顕微鏡法を使用して実施した。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、ＰＥ結合型抗Ｆｃと２：１の比率で、室温で１時間、予め複合体化された。前もってＮＲＰ２ｖ２−ＧＦＰがトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、染色を行う前日の夜に、コラーゲンコーティング溶液で前もってコーティングされた９６ウェルのＧｒｅｉｎｅｒ  Ｃｌｅａｒ平底マイクロプレートに移した。上清を取り除き、細胞を結合緩衝液で１回洗浄した。次いで細胞を、５０μＬの３．７％ホルムアルデヒド（メタノールを含まず）で２０分間、室温で固定した。細胞を結合緩衝液で２回洗浄し、次いで１００μＬのブロッキング緩衝液で１時間、室温でブロッキングした。次いで細胞を結合緩衝液で１回洗浄し、その後、４℃で一晩、５０μＬの染色複合体とともにインキュベートした。次いで細胞を結合緩衝液で３回洗浄し、その後、ＤＰＢＳで希釈された２μｇ／ｍＬのヘキストを用いて室温で１０分間、カウンター染色した。ヘキスト染色を１ＸＰＢＳで取り除き、次いでＩＮ  Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２２００で読み取りを行った。２０Ｘの画像を取得し、Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０００  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析した。細胞マスクのセグメント化は、ＧＦＰチャンネルを使用して実施され、閾値強度５０００を超えるこのマスク内の平均ＰＥシグナル強度が決定された（ＧＦＰ  Ｂｒｉｇｈｔ細胞と名付けられた）。
【０４９５】
安定的にＮＲＰ２を発現する細胞プールの作製  Ｍｙｃ−ＤＤＫタグに融合されたＮＲＰ２バリアント２転写物ＮＭ＿００３８７２をコードするプラスミド（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｃａｔ＃ＲＣ２２０７０６）が購入された。ベクターは、Ｑ５ポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社、カタログ番号Ｍ０４９１）を以下のプライマー対とともに使用してＰＣＲ増幅された。
５’−ＴＧＡＧＧＡＴＧＡＣＡＡＡＧＡＴＴＴＧＣＡＧＣＴ−３’（配列番号＊＊）
５’−ＡＣＣＧＣＧＧＣＣＧＧＣＣＧＴＴＴＡＴＧＣＣＴＣＧＧＡＧＣＡＧＣＡＣＴＴ−３’（配列番号＊＊）
５’−ＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＡＡＣＴＣＡＡＡ−３’（配列番号＊＊）
５’−ＡＡＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＧＧＣＡＴＡＡＡＣＧＧＣＣＧＧＣＣＧＣＧＧＴ−３’（配列番号＊＊）
【０４９６】
次いで得られたＰＣＲ産物を融合させ、ＭｆｅＩ／ＡｇｅＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ社、カタログ番号Ｒ３５８９、Ｒ３５５２）で切断し、同じ酵素で切断されたＲＣ２２０７０６のベクター断片へとライゲートした。このベクターは、非タグ化ＮＲＰ２ｖ２転写物を含有しており、これを線状化させて、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−０．１ｍＭ  ＥＤＴＡに再懸濁させた。懸濁Ｅｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、カタログ番号Ａ１４５２７）を発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、カタログ番号Ａ１４３５１０１）中、３７℃、８％ＣＯ２で増殖させた。上述の線状化プラスミドを、ＳＦ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  ４Ｄ−Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（登録商標）Ｘ  Ｋｉｔ  Ｌ（Ｌｏｎｚａ社、カタログ番号Ｖ４ＸＣ−２０１２）と、懸濁ＨＥＫ２９３細胞に対する標準的なプロトコールＴ−０３０を使用して、Ｅｘｐｉ２９３細胞へとトランスフェクトした。１７時間、細胞を静止培養中で回復させて、懸濁液に移し、さらに７２時間回復させ、その後、５０μｇの増分で２００〜３５０μｇ／ｍＬのＧ４１８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社、カタログ番号１０１３１０３５）で選択された。細胞の密度と生存率は、３週間監視され、２〜３日ごとに新たな培地／抗生物質に置き替えられた。９５％を超える生存率に回復した時点で、安定トランスフェクトされた細胞プールを、凍結培地中に再懸濁させ、保管した。
【０４９７】
ＮＲＰ２発現細胞へのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合に関する、フローサイトメトリー系分析
・  固定ＴＣＥＰジスルフィド還元ゲル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃７７７１２）
・  ＰＢＳ／ＥＤＴＡ（０．５Ｍ  ＥＤＴＡのＰＢＳ溶液）
・  ＥＺ−Ｌｉｎｋ（商標）マレイミド−ＰＥＧ１１−ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃  ２１９１１）
・  スピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃  ６９７０５）
・  Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム、４０Ｋ  ＭＷＣＯ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃  ８７７７０）
・  Ｐｉｅｒｃｅ  ビオチン定量キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃  ２８００５）
・  ストレプトアビジン−ＰＥ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、＃  １２−４３１７−８７）
・  抗−ＮＲＰ２−ＡＰＣクローン  ２５７１０３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃  ＦＡＢ２２１５１Ａ）
・  ヨウ化プロピジウム溶液（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ社、＃  １３０−０９３−２３３）
【０４９８】
Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のビオチニル化。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のＦｃジスルフィド結合は、ＰＢＳ／ＥＤＴＡで平衡化されたＴＣＥＰゲルを使用して還元され、サンプルはスピンカラムを使用して分離された。ビオチニル化は、マレイミド−ＰＥＧ１１−ビオチン試薬を使用して、室温での２時間の反応により実施され、結合しなかった試薬はＺｅｂａカラムを使用して取り除かれた。ビオチニル化の程度は、メーカーの説明書に従いＰｉｅｒｃｅビオチン定量キットを使用して、３．３５ビオチン／分子であると決定された。
【０４９９】
フローサイトメトリー法。ビオチニル化Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）を、ストレプトアビジン−ＰＥとともに１：２のモル比で氷上で１時間インキュベートされ、染色複合体が形成された。次いで染色複合体を、力価決定済みの抗−ＨＲＳ抗体とともに安定発現Ｅｘｐｉ２９３−ＮＲＰ２細胞に添加し、氷上で３０〜６０分間インキュベートした。最終濃度は、４３．７５ｎＭ（ビオチニル化Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０））および８７．５ｎＭ（ストレプトアビジン−ＰＥ）であった。細胞を沈殿させ、上述のように洗浄し、抗ＮＲＰ２−ＡＰＣ（１：２０）で染色して、１μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムとともにＦＷＢ緩衝液中に再懸濁させ、生存ゲーティングを行った。Ｃｙｔｏｆｌｅｘ  Ｓフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社）で細胞を取得し、生存一重ゲート中のストレプトアビジン−ＰＥ＋／ＮＲＰ２＋細胞の割合を決定した。
【０５００】
統計解析。データは、注記される点を除き平均±ＳＥＭとして表され、または個々のデータポイントとして表されている。腫瘍担持量または体重減少が原因で動物が安楽死された実験では、最終的な腫瘍体積が統計解析へと組み込まれた。動物が死亡しているのが発見されたが、大きな腫瘍ではなかった場合（死亡原因は不明）、当該動物のデータは、統計解析の前に取り除かれた。経時的な有意差は、二元配置反復測定ＡＮＯＶＡで検定され、次いでダネットの事後検定が行われた。群比較は、一元配置ＡＮＯＶＡを使用して実施された（図の説明に記載されるように、パラメトリックまたはクラスカルワリス）。ｐ値≦０．０５で、有意とみなした。
【０５０１】
実施例１
初回の受容体特定スクリーニング
ＨＲＳ、および関連ＨＲＳポリペプチドとの潜在的な相互作用パートナーを特定するために、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ細胞マイクロアレイスクリーニング技術（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ  Ｌｔｄ．，Ｈｉｇｈ  Ｐｅａｋ  Ｒｄ、英国）を使用して、ＨＥＫ２９３細胞に個々に発現されたおよそ４５００個の膜結合型ヒトタンパク質のライブラリーに対する、ＨＲＳ−Ｆｃ融合タンパク質構築体（［Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）］の結合を評価した。
【０５０２】
簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、別個の発現ベクターを塗布することで前処理されたガラスカバースライド上に播種し、リバーストランスフェクションと、４５００個の膜タンパク質の各々を発現させ、細胞マイクロアレイを実施した。トランスフェクション効率は、ＺｓＧｒｅｅｎ１発現を介して分析され、スクリーニングされるすべてのライブラリー種に関し、最小閾値を超えた。
【０５０３】
Ｆｃタグを含む小さなＨＲＳ断片を使用することで、検出試薬としてのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（ＡＦ６４７）の使用を介した高感度の検出が提供され、特異性を確認するための対照が容易に入手可能となった。検出抗体は、２、５および２０μｇ／ｍｌのスクリーニング濃度で使用され、以下にさらに詳述される。
【０５０４】
被験タンパク質は、連続染色法、または前インキュベーション染色法のいずれかの２つの異なるスクリーニングフォーマットを使用して２０μｇ／ｍｌの濃度でスクリーニングされた。連続染色法には、簡潔に述べると、被験細胞への被験タンパク質と検出試薬の連続添加が含まれ、前インキュベーション染色法には、被験タンパク質と検出試薬（被験タンパク質と検出抗体は２：１のモル比）の前インキュベーションを行い、被験細胞に添加する前に高アビディティの複合体を予め形成させることを含む。バックグラウンドのスクリーニングは、固定された非トランスフェクトＨＥＫ２９３細胞のスライドに添加された被験タンパク質で行われ、被験タンパク質が非トランスフェクト細胞には結合しなかったことが確認された。
【０５０５】
一次ヒット（二重スポット）は、標準的な蛍光技術に従い、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７およびＺｓＧｒｅｅｎ１発光チャンネルにおいて、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔシステムを使用して蛍光強度を分析することにより特定された。一次スクリーニングから特定されたすべてのスクリーニングヒットを評価するために、２０μｇ／ｍｌの被験タンパク質で処理された同一固定スライド、または陽性対照もしくは陰性対照を使用し、連続法または前インキュベーション法（１処理あたり、ｎ＝２枚のスライド）を使用して、確認スクリーニングを行った。さらに、全ヒットをコードする全ベクターに加えて、対照ベクターが新しいスライド上に二重でスポットされ、これを使用して、前述のようにヒトＨＥＫ２９３細胞に逆トランスフェクトした。最小閾値ヒットを超えたすべてのトランスフェクション効率を、特異的、または非特異的（すなわち、陽性対照または陰性対照のうちの少なくとも１つでも現れた）とカテゴライズし、特異的である場合には、当該ヒットが強い、中程度または弱い結合のいずれかであるかをカテゴライズした。
【０５０６】
連続染色法および前インキュベーション染色法の両方を使用した確認ヒットを、以下の表Ｅ１Ａおよび表Ｅ１Ｂに要約する。
【表Ｅ１Ａ】
2021531313.tif 000047
【表Ｅ１Ｂ−１】
2021531313.tif 000048
【表Ｅ１Ｂ−２】
2021531313.tif 000049
【０５０７】
要約／結論。ヒトＨＥＫ２９３細胞で発現された４５００＋個のヒト細胞膜タンパク質に対する結合に関し、被験タンパク質（Ｆｃ−ＨＲＳ）を、２つのインキュベーション法を使用してスクリーニングした後、２つのニューロピリン２（ＮＲＰ２）アイソフォーム（ニューロピリン２Ａと２Ｂ）が、信ぴょう性のある特異的結合パートナーとして特定された（両方のインキュベーション法を使用）。また連続法により、以下の３つの弱い強度のヒットが特定された：ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ４、およびＣＯＬＥＣ１２。これらは概してＨＲＳポリペプチドとも生物学的関連性があり得、特にＨＲＳのＮ末端ドメイン（１−６０）を含むものとの生物学的関連性があり得る。例えば免疫活性化、免疫細胞の遊走、癌の増殖、移動および転移、リンパ管形成、上皮間葉転換（ＥＭＴ）および神経線維増殖の誘導を含む広範な生物学的プロセスにおけるニューロピリン２の広範な関与を考慮すると、これらの結果から、ＨＲＳと関連ＨＲＳポリペプチドは、正常および病的な生理状態において重要な制御的役割を果たす可能性を有することが示唆される。
【０５０８】
実施例２
ＳＰＲ分析による結合特異性の確認と、特異的エピトープの特定と使用
大規模Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘスクリーニング（実施例１）において使用された方法と似た方法を使用して、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対するニューロピリン２（ＮＲＰ２）の結合特異性を確認する実験を行った。一連の実験において、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）と関連タンパク質はＳＰＲチップに固定され、ＮＲＰ２と関連タンパク質は分析物として流された。ＮＲＰ２：Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の相互作用が確認されたら、ＮＲＰ２はＣａ２＋結合部位を有していることが知られていることから、二価カチオンに対する依存性を検証した。前もって特徴解析されているＮＲＰ２上のＮＲＰ２リガンドの作用：Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の相互作用も検証して、これら公知のリガンドが、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の相互作用に対して競合的作用を有しているかを判定した。
【０５０９】
別の一連の実験において、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）を認識するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をＳＰＲチップ上に固定した。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）とＮＲＰ２を前インキュベーションし、ｍＡｂ表面に注入して、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のみか、またはより大きなＮＲＰ２：Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）複合体がｍＡｂに結合することができるかを判定した。さらに共注入実験を行い、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）と、次いでＮＲＰ２の連続分析物注入を行った。異なるｍＡｂが、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の異なるエピトープに結合するため、ＮＲＰ２：Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）複合体に結合するｍＡｂの能力は、遊離Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のみに結合する場合とは対照的に、この２つのタンパク質間の相互作用表面に関する指標を与えるものである。
【０５１０】
結果。近縁のＮＲＰ１タンパク質でもＰｒｅｘｉｎ  Ａ１コレセプターのマウス型でもなく、ＮＲＰ２が、固定されたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）に結合する（図３）。ヒトＮＲＰ２に加えて、マウスとラットの両方のＮＲＰ２が、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）に対する結合を示す。しかし、これらＮＲＰ２の型のいずれも、Ｃ末端で４９アミノ酸の欠失を有するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の短縮型で、ＷＨＥＰドメインの大部分を欠いた融合タンパク質（［Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１１）］）には結合しない（図４Ａ〜３Ｂ）。
【０５１１】
Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＨＲＳ）由来のＷＨＥＰドメインに融合されたヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域からなる。同種のＷＨＥＰドメインは、いくつかの他のｔＲＮＡシンテターゼでも発見されており、例えば、ＷＡＲＳ、ＧＡＲＳ、ＭＡＲＳおよびＥＰＲＳが挙げられる。ＮＲＰ２はＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）に結合するが、ＧＡＲＳまたはＭＡＲＳのいずれかのＷＨＥＰドメインに融合されたＦｃドメインからなる類似タンパク質には結合しない（図５Ａ〜４Ｄ）。さらにＮＲＰ２は、Ｖ５／Ｈｉｓタグを有するＷＡＲＳのＷＨＥＰドメインには結合せず、このことからＮＲＰ−２との相互作用は、ＨＲＳ  ＷＨＥＰドメインに特異的であり、検証された他のＷＨＥＰドメインに広く適用できるものではないことが示唆される。
【０５１２】
ＮＲＰ２は、その２つのＣＵＢ−ドメイン（ａ１およびａ２ドメイン）中にカルシウム結合部位を有していることが知られている。ＳＰＲ装置のランニング緩衝液を、カルシウムを含まない緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）  ２０、ｐＨ７．４）に変えて、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２またはＥＤＴＡを分析物に添加し、その後注入して、固定Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）上に流した（図６Ａ〜５Ｂ）。ランニング緩衝液単独でも若干の結合が観察されたが、ＣａＣｌ２を添加することで大幅に結合が強化された。逆に、ＺｎＣｌ２またはＥＤＴＡ（二価カチオンをキレートする）を添加すると、追加的な結合はほとんどなかった。さらに検証された最大濃度のＭｇＣｌ２でも、結合に対し何らかの有意な効果は認められなかった。この結果から、直接的、またはＮＲＰ−２分子の立体構造の維持を介してのいずれかの、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）との相互作用におけるＮＲＰ２のａ１ドメインまたはａ２ドメインの関与が示唆される。
【０５１３】
ＮＲＰ２の公知のリガンドのサブセットは、ＮＲＰ２へのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合に競合すると考えられる。ＮＲＰ２に結合するリガンドのＶＥＧＦファミリーは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合を阻害すると考えられるが、リガンドのＳＥＭＡファミリーは、検証された条件下では結合に競合しないと考えられた（表Ｅ２）。ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ａ１６５またはＰｌＧＦ−２／ヘパリンのいずれかの存在下で、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）へのＮＲＰ２の結合は低下または小さくなる。逆に、ＶＥＧＦ−Ａ１４５（ＮＲＰ２リガンドであることが報告されているが、本発明者らの系ではＮＲＰ２に結合しない）またはＶＥＧＦ−Ａ１２１（ＮＲＰ２に結合しない）の存在下では、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）へのＮＲＰ２の結合は影響を受けない。ＳＥＭＡ３ＣとマウスＳＥＭＡ３ＦはＮＲＰ２に結合せず、これらタンパク質のいずれかが存在しても、検証された条件下ではＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）へのＮＲＰ２の結合は影響を受けない。これらの結果から、ＮＲＰ２のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）結合部位は、ＮＲＰ２のＶＥＧＦ結合部位と重複しているが、ＮＲＰ２のＳＥＭＡ結合部位は重複していないことが示唆される。
【表Ｅ２−１】
2021531313.tif 000050
【表Ｅ２−２】
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【０５１４】
別の一連の実験において、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）を認識する異なるモノクローナル抗体をＳＰＲチップ上に固定した。図７Ａ〜６Ｂにおいて、ｍＡｂクローンの１Ｃ８と４Ｄ４をＳＰＲチップ上に固定し、次いで予め一緒にインキュベートされていたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）とＮＲＰ２の混合物をｍＡｂ表面上に注入した。
【０５１５】
得られたシグナル強度パターンに基づくと、複合体が検出表面上を通過するときにさらに大きな複合体の結合は検出されなかったことから、モノクローナル抗体クローンの１Ｃ８は、ＮＲＰ２結合に関与するエピトープでＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）に結合する可能性が高いと結論付けることができる。これらの条件下でさらなる結合が検出されなかったことから、１Ｃ８抗体は、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）：Ｎｒｐ−２複合体から、Ｎｒｐ−２を外す能力を有することが示唆される。
【０５１６】
対照的に、モノクローナル抗体クローンの４Ｄ４が検出表面に付加したとき、非常に大きなシグナル強度が観察された。このことから、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）：Ｎｒｐ−２からＮｒｐ−２を外すことなく、当該抗体はＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）部分に結合することができたことが示唆される。この結果から、ＮＲＰ２は、４Ｄ４  ｍＡｂの存在下でもＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）に結合することができること、そしてＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の非重複領域に結合することが示される。さらに共注入実験を行い、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）と、次いでＮＲＰ２の連続分析物注入が行われた（図８Ａ〜７Ｄ）。これらの実験において、抗体クローンのＡＴＹＲ４Ｄ４またはモノクローナル抗体クローンのＡＴＹＲ１３Ｅ９に結合されたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、さらにＮＲＰ２に結合することができた。
【０５１７】
モノクローナル抗体クローンのＡＴＹＲ１２Ｈ６に結合されたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、わずかなＮＲＰ２結合しか示さず、一方で抗体クローンのＡＴＹＲ１Ｃ８に結合されたＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、ＮＲＰ２に対する結合を示さなかった。これらのデータをまとめると、抗体クローンのＡＴＹＲ１Ｃ８の結合は、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）へのＮＲＰ２の結合を妨害でき、一方で抗体クローンのＡＴＹＲ１２Ｈ６の結合は、部分的にＮＲＰ２の結合を妨害できること、そして抗体クローンのＡＴＹＲ４Ｄ４とＡＴＹＲ１３Ｅ９は、ＨＲＳへのＮＲＰ２の結合を妨害できないことが示される。
【０５１８】
実施例３
ＨＥＫ２９３細胞で発現されたＮＲＰ２に対する結合の確認
組み換えニューロピリン２ａまたは２ｂを発現する細胞に対するＨＲＳの直接結合を直接確認するために、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）を、ニューロピリン２ａまたは２ｂのいずれか、またはＧＦＰを含む各融合タンパク質としてそれらをコードする発現ベクターがトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に添加し、材料と方法に記載されるように蛍光標識された抗Ｆｃ−ＰＥを使用して検出した。
【０５１９】
図９Ａ〜８Ｂに示されるように、細胞発現されたＮＲＰ２ａに対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の用量依存性結合は、これら条件下で容易に検出可能であった。
【０５２０】
図１０は、ブロッキング抗体クローンの１Ｃ８とＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）を予めインキュベートすることにより、ほぼ完全な結合の消滅がもたらされることを示しており、このことから、結合は、抗ＨＲＳ抗体に認識されるエピトープに特異的であることが示される。結合特異性を、検出対照タンパク質のＦｃ−ＨＲＳ（２−１１）を使用してさらに確認した。このタンパク質もわずかな特異的結合を示した。
【０５２１】
抗ＨＲＳ抗体が、ＮＲＰ２へのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合を妨害する能力を判定するために、ＨＥＫ２９３細胞に、ＮＲＰ２を安定的にトランスフェクトし、抗体の存在下または非存在下でのビオチニル化Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の結合を、材料と方法に記載されるようにフローサイトメトリーにより監視した。
【０５２２】
図１１Ａ〜１１Ｂは、ＫＬ３１シリーズの抗体が、ＮＲＰ２へのＦｃ−ＨＲＳの結合を濃度依存性に妨害したこと、一方で、検証された他の抗体は、このアッセイにおいて有意な妨害特性を示さなかったことを示す。
【０５２３】
他のニューロピリン２相互作用タンパク質との機能的相互作用は、細胞発現ＮＲＰ２と、ＶＥＧＦ−Ｃを予めインキュベートすることにより、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）を直接競合させることで示された（図１２Ａ〜１２Ｂ）。
【０５２４】
これらの結果は、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘスクリーニングを確認および拡張するものであり、例えば野生型ＨＲＳなどのＨＲＳタンパク質、およびＮ末端領域を含むＨＲＳポリペプチドの相互作用が、ＮＲＰ２に結合することにより、そしてＶＥＧＦ−Ｃを含む他の本来のリガンドと相互作用することにより、重要な生物学的に関連のある役割を果たしていることが示唆される。
【０５２５】
実施例４
ヒトの血清および血漿における、可溶性ニューロピリン２（ＮＲＰ２）の循環レベル
正常な健常ボランティア（ｎ＝７２）からの血清と血漿のサンプルを、可溶性ＮＲＰ２の循環レベルに関して検証した。ＮＲＰ２レベルは、発明者らが開発したヒトＮＲＰ２  ＥＬＩＳＡ（材料と方法に記載される）を用いて定量された。
【０５２６】
結果の要約。血清と血漿の両方における循環ＮＲＰ２の分析から、両マトリクスにおける補完的な結果が明らかとなった。ＮＲＰ２の血清レベルは、平均で１６．３ｐＭであった一方で、平均血漿レベルは１５．６ｐＭであった。定量実験により、血清サンプルの８６％、そして血漿サンプルの８３％が検出可能であり、そして本分析の定量下限値（１．５ｐＭ）を超えていたことが明らかとなった（表Ｅ３および図１３）。
【表Ｅ３】
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【０５２７】
実施例５
循環ＨＲＳとＮＲＰ２レベルの比較
７２名の正常な健常ドナーの循環血清ＨＲＳレベルを、最低から最高レベルまで、順位付けした。正確に同一のドナーに由来する血清ＮＲＰ２レベルをマッチングして、同軸上でオーバーレイさせた。
【０５２８】
結果の要約。正常な健常ドナー由来のヒトＨＲＳレベルは、ほぼ２ｌｏｇ（約１０ｐＭ〜１０００ｐＭ）の濃度にわたっている。同様に、可溶性ＮＲＰ２レベルも、大きな循環レベル分布を示している（約１ｐＭ〜１００ｐＭ）。正常な健常ボランティアからの血清サンプルを比較することで、低循環ＨＲＳレベルのヒトは、可溶性ＮＲＰ２レベルも低い傾向があること、逆に高ＨＲＳレベルのヒトは、高い可溶性ＮＲＰ２レベルを示す傾向が明らかとなった（図１４を参照のこと）。
【０５２９】
実施例６
Ｎ−末端ＨＲＳ分析干渉
正常な健常ボランティアの血清サンプルを、２つの別個のＥＬＩＳＡで分析して、ＨＲＳの循環レベルを検出した。ＨＡＲＳの全長型（ＨＡＲＳ＿ＦＬ）を検出するよう設計された分析では、Ｎ末端捕捉抗体とＣ末端検出抗体が利用された。２つ目の分析は、Ｎ末端に指向する捕捉抗体と検出抗体の両方を用いてＨＲＳのＮ末端部分（ＨＡＲＳ＿ＮＴ）を排他的に検出するよう設計された。したがってＦＬ−末端分析では、Ｃ末端検出抗体により認識されるＣ末端エピトープが欠落している、Ｎ末端短縮型ＨＲＳ断片を検出することはできない。逆にＮ末端分析は、抗体結合と競合する、ＨＲＳのＮ末端ドメインへの他の因子の結合を介した干渉に感受性である。
【０５３０】
結果の要約。個々の健常ドナー血清は、全長およびＮ末端のＥＬＩＳＡ形式の両方を使用してＨＲＳレベルに関して分析された。全長ＥＬＩＳＡを介して低レベルのＨＲＳが検出されたサンプルでは、ＨＲＳレベルは、Ｎ末端ＥＬＩＳＡの結果と良く相関する傾向があった（図１５）。しかしＦＬ−ＥＬＩＳＡを介して比較的高レベルのＨＲＳが検出された選択ドナーでは、Ｎ末端ＥＬＩＳＡを介して検出されたＨＲＳレベルはもはや密接な相関を示さず、しかし特定の対象においては有意に低かったことが観察された。任意のある特定の解説に拘束されないが、Ｎ末端分析における有意に低い見掛け上のＨＲＳレベルは、ＨＲＳのＮ末端ドメインに結合する干渉物質が存在し、その結果、Ｎ末端ＥＬＩＳＡ分析での検出が妨害されたことが原因であると考えられる。
【０５３１】
実施例７
ＨＲＳ  Ｎ末端干渉と可溶性ＮＲＰ２の相関
ＨＲＳ  Ｎ末端分析干渉と可溶性ＮＲＰ２の間の関連性をさらに検証するために、循環ＨＲＳとＮＲＰ−２レベルを正常な健常ボランティアの血清サンプルにおいて分析した。７２名の健常血清ドナーサンプルの各々に対して、全長ＥＬＩＳＡとＮ末端ＥＬＩＳＡの間で観察されるＨＲＳレベルにおける差異が計算された（Ｎ末端干渉単位）。これらの同じサンプルをさらに循環ヒトＮＲＰ２レベルに対しても検証した。
【０５３２】
結果の要約。２つのＨＲＳ分析フォーマット間で観察された干渉を、ＨＡＲＳ  Ｎ末端干渉単位（ＨＡＲＳ＿ＦＬマイナスＨＡＲＳ＿ＮＴ）と名付け、可溶性ＮＲＰ２レベルに対してグラフ化した（図１６）。得られたグラフから、Ｎ末端干渉の増加と、可溶性ＮＲＰ２レベルの増加の明白な傾向が示された。このことから、可溶性ＮＲＰ２が、ＨＲＳのＮ末端検出に干渉した可能性が示唆される。
【０５３３】
実施例８
正常血清中のＨＲＳ：ＮＲＰ２可溶性複合体の検出
血清中の内因性循環ＨＲＳ：ＮＲＰ２可溶性複合体を調べるために、いくつかの新規ＥＬＩＳＡフォーマットを利用して、この相互作用を捕捉した。正常な健康なヒト血清は、内部から単離（＃２１９４９、＃３２５６５、＃２２４４７、＃２４０９８、＃２３０２４）または市販のものから単離（Ｓｉｇｍａ社、ＣＥＬＬｅｃｔ）した。これら健常血清サンプルを、Ｎ末端干渉（データは示さず）に関して分析し、低Ｎ末端干渉、または高Ｎ末端干渉のいずれかとしてカテゴライズし、それに従って解析した。これら７個の血清サンプルは、ＨＲＳ：ＮＲＰ−２複合体ＥＬＩＳＡの複数フォーマットで分析された。これらの分析は、ＨＲＳ  Ｎ末端（ＨＡＲＳ＿ＮＴ）、ＨＡＲＳ  Ｃ末端（ＨＡＲＳ＿ＣＴ）、またはＮＲＰ２に対する捕捉抗体からなる。これら分析の検出抗体は、複合体中の別のタンパク質に対する抗体であった（例えば、ＮＲＰ２捕捉抗体とＨＲＳ検出抗体、およびＨＲＳ捕捉抗体とＮＲＰ２検出抗体）。
【０５３４】
結果の要約。ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡは、すでに低Ｎ末端干渉または高Ｎ末端干渉であると特定されていた正常血清サンプルを用いて検証された。低Ｎ末端ＨＲＳ干渉のすべてのサンプルは、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡの全てのフォーマットにおいて、低シグナルを示した（図１７、左の棒グラフ）。対照的に、高Ｎ末端分析干渉を含有すると特定された血清サンプルはすべて、ＨＲＳとＮＲＰ−２の複合体ＥＬＩＳＡにおいてシグナルの上昇を示した（図１７、右の棒グラフ）。これらの結果は、ＨＲＳの両末端に対する複数の抗体ペアを用いて観察されたものであり、このことから、この結果は、ＮＲＰ２とＨＲＳの間の予想外の抗体交差反応性の結果ではないことが示唆される。
【０５３５】
実施例９
正常血清中のＨＲＳ＆ＮＲＰ２可溶性複合体の確認
ＨＲＳ  Ｎ末端干渉と、内因性可溶性ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体の検出の間の関連性を確認するために、元々はヒト血清において観察されたＮ末端干渉を解析するために利用された抗体試薬を、ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡにおいて共に検証した。低干渉または高干渉として特定されたヒトに由来する健常で正常な血清サンプル（上述）を、ＮＲＰ２捕捉抗体、次いで非干渉ＨＲＳ  Ｎ末端抗体（ＨＡＲＳ＿ＮＴ）または相互作用を妨害するＮ末端ＨＲＳ抗体（ＨＲＳブロッキング抗体）のいずれかを用いた検出からなるＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡにおいて検証した。
【０５３６】
結果の要約。ＨＲＳ：ＮＲＰ２複合体ＥＬＩＳＡの結果は、可溶性ＮＲＰ２を捕捉し、ＨＡＲＳ＿ＮＴ抗体で検出したときに、低干渉サンプルおよび高干渉サンプルの間でシグナルの増加を示している。しかし、ＨＲＳに対する検出抗体が、ＮＲＰ２が結合すると考えられている部位に指向するものであった場合の分析フォーマットで、これら同じサンプルを検証したとき、当該複合体ＥＬＩＳＡのシグナルは、分析干渉が無いサンプルで観察されたレベルと同じレベルにまで戻った（図１８）。この結果から、当該ブロッキング抗体は、ＨＲＳのＮ末端上の推定ＮＲＰ２結合部位に指向するものであったことが示唆される。
【０５３７】
実施例１０
強皮症性慢性移植片対宿主病のマウスモデルにおけるＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、強皮症性慢性移植片対宿主病（ｓｃｌ  ｃＧｖＨＤ）のマウスモデルにおける被験化合物のインビボでの可能性を調べるよう設計された。Ｈ−２ｄ副組織適合抗原が不適合のモデルを採用した。当該モデルは、オスドナーのＢ１０．Ｄ２マウスの骨髄細胞と脾臓細胞を、移植前に７００ｃＧｙで６時間の全身放射線照射を受けた８週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウスに同種移植することにより作製された。
【０５３８】
処置レジメン。５６匹のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ社、Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ  Ｓｔ．Ｉｓｌｅ、フランス、メス８週齢）を、本実験のレシピエントとして使用して、Ｂ１０．Ｄ２マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、米国メーン州、オス）を安楽死させて、同種移植用のドナー細胞を作製した。動物を８匹の実験群に割り当て、特定病原体が除去された状態で飼育され、滅菌された食物と水を与えられた。処置レジメンを以下の表Ｅ４に示す。簡潔に述べると、動物は、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）ビヒクルの静脈内注射（２０ｍＭ  ヒスチジン／１２５ｍＭ  ＮａＣｌ／１０ｍＭ  メチオニン／３％  スクロース／０．０２％  ＰＳ２０、ｐＨ６．９）を、移植後７日目に開始して毎週投与され（２群および３群）、またはＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）（０．４ｍｇ／ｋｇ）の静脈内注射を移植後７日目（４群）および２１日目（６群）に開始して毎週投与された。公知の比較物質としてニンテダニブの毎日の経口投与が含まれ、移植後７日目（５群）または２１日目（７群）に開始された。同系移植は、非誘導対照として含まれた（１群）。皮膚および肺の採取に対する終了は、２１日目（２群）に実施され、移植後２１日目に処置開始した群の基準エンドポイントを提供した。残りの群は、ドナー細胞注入後８週で安楽死された。組織は、普遍的な染色技術を使用して組織学的に検証され、組織ホモジネートは、コラーゲン含量の指標としてのヒドロキシプロリン含量について分析された。ビヒクル処置（３群）に対するクラスカルウォリス・ノンパラメトリックＡＮＯＶＡ、次いでダンの多重比較検定がＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにおいて実施された。
【表Ｅ４】
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【０５３９】
結果の要約。５群および７群で各１匹で、２匹のマウスが、移植後２週目で死亡した。おそらくｃＧｖＨＤ炎症が原因と推測される。取得されたデータを図１９および２０にグラフで示す。予定された剖検まで生存した動物において、モデル誘導の成功が皮膚の組織学的検査で確認され、皮膚の厚みが増し、肺では線維症が増加していた（アシュクロフトスコアとコラーゲン染色面積の両方）。筋線維芽細胞の数とコラーゲン含量の測定値も、８週の終了時点での皮膚と肺の両方で同種移植と同系移植の比較で有意に増加しており、モデルに線維症の誘導が成功したことがさらに実証された。これら測定値は、移植後３週で終了した動物ですでに増加していたこと、移植後８週で終了した動物において全てのエンドポイントがさらに増加する傾向があったが、これら群間の比較では統計的有意差は示されなかったことに注意されたい。
【０５４０】
移植後７日目に開始したニンテダニブを用いた介入は、予測されたように皮膚と肺の両方において線維症の全ての測定値を有意に改善した。同様に、介入が移植後２１日目まで遅延されたときに測定されたエンドポイントの大部分をニンテダニブは有意に改善した。被験化合物のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、介入が移植後７日目で開始された場合の肺および皮膚の両方において、当該モデルに非常に有効であった。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の、早期介入時点での有効度は、特に肺で明白であり、検証された中程度の用量のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）で、検証された最大用量のニンテダニブよりも大きな効果であった（すなわち、低いｐ値）。ＦＣ−ＨＲＳ（２−６０）（０．４ｍｇ／ｋｇ）は、移植後２１日目に開始したときの線維症エンドポイントを改善する傾向があった。
【０５４１】
これらの結果から、例えばＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）などのＨＲＳポリペプチドは、当該マウスモデルの複数の器官において、線維症プロセスに対し明白な治療効果の可能性を有していることが示された。
【０５４２】
実施例１１
ＬＰＳ誘導性肺炎のマウスモデルにおける、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、リポ多糖（ＬＰＳ）の気道滴下により誘導された肺の好中球蓄積のマウスモデルにおける、被験化合物のインビボでの可能性を調べるために設計された。
【０５４３】
処置レジメン。６４匹のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、米国メーン州、８週齢のメス）を、８匹のマウスの実験群に割り当て、特定病原体が除去された状況下で飼育し、滅菌された食物と水を与えた。
【０５４４】
処置レジメンを以下の表Ｅ５に示す。簡潔に述べると、ＨＲＳ（２−６０）（２０ｍＭ  ヒスチジン／１２５ｍＭ  ＮａＣｌ／１０ｍＭ  メチオニン／３％  スクロース／０．０２％  ＰＳ２０、ｐＨ６．９）、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（１、３、または１０ｍｇ／ｋｇ）、またはＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ（３ｍｇ／ｋｇ）のビヒクルの単回静脈内注射を動物に投与した。翌日、マウスはイソフルラン吸入で麻酔され、シリンジを付けた経口投与用針を使用して、ＰＢＳ中で製剤化された５０μＬのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ社、Ｌ３０２４、大腸菌０１１１−Ｂ４、１０μｇ／マウス）、またはＰＢＳ単独を、軟口蓋の奥に送達させ、吸入させた。２４時間後、致死量のケタミン／キシラジン（それぞれ約３００および約３０ｍｇ／ｋｇ）を動物に投与し、気管に装着させたカニューレを通して０．８ｍＬのＰＢＳで肺を膨張させることにより気管支肺胞洗浄を実施し、シリンジ内に液体を引き出して、回収量を記録した。０．４ｍＬ以上の量で回収された気管支肺胞洗浄液のサンプルを分析に含めた（１群当たりの含有されたサンプル数について、表Ｅ５を参照のこと）。気管支肺胞洗浄液で取得された細胞を、３００ｇ、１０分間、４℃の遠心分離で収集して、ＰＢＳで１回洗浄し、前述のように再度遠心分離して、１００μＬの１ｘＲＢＣ溶解緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）中に再懸濁させて、赤血球を溶解させた。２〜３分間のインキュベーションの後、２ｍＬのＰＢＳを加えて溶解緩衝液を中和し、サンプルを再度前述のように遠心分離して、得られた細胞を収集した。
【表Ｅ５】
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【０５４５】
フローサイトメトリー分析。フロー洗浄緩衝液（ＦＷＢ、ＰＢＳ中、３％ウシ胎児血清）を、その後の全ての染色と洗浄の工程に使用した。生細胞／死細胞は、ＦＷＢ中で１：４００に希釈された１２０μＬのＺｏｍｂｉｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を用いて室温で暗所中、２０分間染色することにより識別された。その後、過剰量のＦＷＢを添加し、サンプルを前述のように遠心分離した。これらの工程は、以降、「洗浄」とまとめて呼称される。Ｆｃ受容体は、ＦＷＢ中、１：２５に希釈された２５μＬのＭｏｕｓｅ  ＢＤ  Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）を室温で暗所中、１０分間添加することによりブロッキングされた。ＮＲＰ２は、ＦＷＢ中、２５μＬの１０μｇ／ｍＬウサギ抗マウスＮＲＰ２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を氷上で１時間、暗所にて添加することにより検出され、その後、細胞を洗浄した（データは示さず）。その後細胞は、氷上で３０分間、暗所にて、すべてＦＷＢ中で１：２００に希釈された５０μＬのＡＦ６４７標識ヤギ抗ウサギ二次抗体とともに、表６に列記される抗体の５０μＬの混合物を使用して、特異的表面マーカーに対して染色された。次いで細胞を再度洗浄し、２００μＬのＦＷＢに再懸濁させ、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）でデータ取得された。
【表Ｅ６−１】
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【表Ｅ６−２】
2021531313.tif 000056
【０５４６】
ゲーティング戦略に関し、単一生細胞中のＣｄ４５＋ＣＤ１１ｂ＋群は、ＳｉｇＬｅｃ−Ｆ＋Ｃｄ１１ｃ＋細胞（肺胞マクロファージ）とＳｉｇｌｅｃ−Ｆ−Ｃｄ１１ｃ−細胞（その他）に分けられた。後者の群は、その後、ＣＸ３ＣＲ１＋（単球）とＣＸＣ３ＣＲ１−（その他）に分けられ、次いでＧＲ１＋Ｌｙ６Ｇ＋群（好中球）と少量のＧＲ１＋Ｌｙ６Ｇ−細胞へと分けられ、それ以上は規定されなかった。
【０５４７】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ７を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡ、次いでダンの多重比較検定により、比較としてＬＰＳ／ビヒクル群を使用して結果を分析した。ｐ値＜０．０５で、有意とみなした。
【０５４８】
ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ融合タンパク質の調製。Ｈｉａタグ化されたＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰタンパク質はコンピューター上で設計され、概略的には、ＳＰＡＲＣシグナルペプチドのアミノ酸１−１７がＨＡＲＳのアミノ酸２−６０に連結され、さらに２コピーの（ＧＧＧＧＳ）リンカー配列（配列番号２０４）に連結され、ＧＧＧＧＳリンカー（配列番号２０４）に融合されたＣＯＭＰのアミノ酸２８−７３からなる軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）五量体ドメインに融合され、その後、Ｍｙｃ−Ｈｉｓタグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮＭＨＴＧＨＨＨＨＨＨ）（配列番号２６２）に融合されたものを含有した。以下の参照配列は、ＳＰＡＲＣシグナルペプチド（ＮＰ＿００３１０９．１）、ＨＡＲＳ（Ｐ１２０８１．２）、ＣＯＭＰ（ＮＰ＿００００８６．２）である。
【０５４９】
アミノ酸配列は、哺乳動物の発現に対してコドン最適化され、Ｇｅｎｅｗｉｚ  ＬＬＣによってｐＵＣ５７ベクターへと合成され、その後、隣接酵素部位のＳａｌｌとＢｇＩＩＩを使用して、ＣＭＶ発現ベクターのｐＮＴＣ７４８５（Ｎａｔｕｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）へとサブクローニングされた。ＨＡＲＳ（ａａ２−６０）断片を欠いた陰性対照タンパク質は、ＰＣＲプライマーの５’−ＧＣＴＧＧＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡ−３’（配列番号２６３）と５’−ＴＣＣＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＣＣＡＧＣ−３’（配列番号２６４）を使用した、前述のプラスミドの部位指向性突然変異誘導により構築された。メーカーの説明書に従い、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクションシステムを使用して、Ｅｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社）においてタンパク質を一過性に産生させた。次いで過剰発現させた組み換えタンパク質を、ＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦカラム（ＧＥＨＣ社）で精製して、直線状イミダゾール勾配により溶出させて、１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．４に透析した。
【０５５０】
表Ｈ９は、ＳＰＡＲＣ−ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ−ＭｙｃＨＩＳ融合タンパク質；ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ−ＭｙｃＨＩＳ融合タンパク質の成熟プロセッシング型（Ｍｙｃ−ＨＩＳタグを含む）；およびＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ融合タンパク質の成熟プロセッシング型（Ｍｙｃ−ＨＩＳタグを含まない）の全長アミノ酸配列を提示している。ＳＰＡＲＣ−ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰ−ＭｙｃＨＩＳ構築体の最適化（ヒト用）核酸配列を、以下の表Ｅ７に示す。
【表Ｅ７】
2021531313.tif 000057
【０５５１】
結果の要約。充分な量の気管支肺胞洗浄液が収集されたサンプルから得られたデータを、図２１Ａ〜２１Ｃにグラフで示す。非処置、非チャレンジの動物では、気道では事実上、好中球や単球は検出されず、一方で肺胞マクロファージは予想通りに検出することができた。処置を受けた動物（ＬＰＳまたは被験剤）は、気管支肺胞洗浄液から回収された肺胞マクロファージの数を変化させた。しかしＬＰＳ吸入によって、好中球と単球の頑強な気道蓄積がもたらされた。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、３および１０ｍｇ／ｋｇ（２１Ａ）で投与されたときに、ＬＰＳ誘導性の好中球浸潤を有意に阻害し、一方で単球の浸潤は変化しなかった（２１Ｂ）。ＨＲＳ（２−６０）の五量体、ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰも、ＬＰＳ応答性の気道好中球蓄積の数を有意に減少させた（２１Ａ）。
【０５５２】
これらの結果から、例えば、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）およびＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰなどのＨＲＳポリペプチドは、気道の好中球炎症を低下させる明白な可能性があること、ならびに好中球および関連免疫細胞の遊走ならびに／または活性化に関連した広範な炎症状態における治療剤として、広範な可能性があることが示される。
【０５５３】
実施例１２
マクロファージにおけるファゴソーム成熟に対するＦＣ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、マウス骨髄由来マクロファージにおける、インビボでの被験化合物のファゴサイトーシス調節可能性を調べるために設計された。ファゴサイトーシスとは、細胞が固形粒子を飲み込み、ファゴソームとして知られる内部区画を形成させるプロセスを指す。当該プロセスは、単細胞生物レベルでの摂食に相当する。細胞プロセスの燃料摂取とは対照的に、多細胞動物では当該プロセスは残渣や病原体の排除に適合されている。
【０５５４】
免疫系において、ファゴサイトーシスは、病原体と細胞残渣の除去に使用される主要メカニズムである。例えば、マクロファージが病原性微生物を取り込んだとき、病原体はファゴソーム内にトラップされ、次いでリソソームと融合して、ファゴリソソームが形成される。ファゴサイトーシスの中核は、ファゴリソソームの成熟と酸性化であり、本明細書に記載されるようにｐＨ感受性色素で容易に追跡できるプロセスである。ファゴリソソーム内では、酵素が病原体を消化する。細菌、死んだ組織細胞、および小さなミネラル粒子はすべて、ファゴサイトーシスされ得る物体の例である。
【０５５５】
方法およびプロトコール。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８〜１２週齢）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、米国メーン州）を、１２時間の明暗サイクルで動物施設中で飼育し、標準的な食事と水を自由に摂らせた。骨髄由来マクロファージは、骨上に残存する組織を取り除いた後に解剖した脛骨と大腿骨から単離された。各骨の末端を切断し、骨髄を取り出した。骨髄からの細胞を、合計で７日間、５０ｎｇ／ｍｌのマクロファージコロニー刺激因子とともに培養し、その後共焦点分析を行った。Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）化合物、または対照化合物（欠失した非機能性ＷＨＥＰドメインを含むＮ１５−（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−１５）））を、１００ｎＭまたは２００ｎＭのいずれかの濃度で、細胞播種の１日後に添加した。１日おきに各濃度の被験化合物を含有する新たな培地で、培地交換した。培養から６日後、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、４０ｕｇ／ｍＬのｐＨｒｏｄｏ（商標）Ｒｅｄ  Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢｉｏＰａｒｔｉｃｌｅｓで１５分間パルス標識した。インキュベーション後、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、Ｍ−ＣＳＦと、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）またはＮ１５のいずれかとともに培地を再びそれぞれに添加した。０、４５、６０、および１２０分間の追跡後、追跡フェーズ中に細胞を収集した。次いで細胞をＰＢＳで洗浄し、その後、４％パラホルムアルデヒドで固定して、ヘキストでカウンター染色した。共焦点画像は、４つのレーザーを備えたＺｅｉｓｓ  ７１０  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影され、画像は、Ｚｅｉｓｓ  Ｚｅｎ  ２０１０を使用して撮影され、分析された。定量のために、各フィールド中の赤色蛍光の強度を測定し、算術平均を計算し、グラフで表した。
【０５５６】
結果の要約。１００ｎＭまたは２００ｎＭのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）のいずれかとともに、単球分化の５日間、骨髄由来マクロファージをインキュベートすることで、食細胞の成熟が大きく阻害されたが、Ｆｃ対照化合物のＮ１５では無かった。これは劇的に減少したスペクトルのシフトにより明白であり、ｐＨ感受性蛍光色素のｐＨ  ｒｈｏｄｏ（商標）により示された（図２２Ａおよび２２Ｂを参照のこと）。もっと短いインキュベーションと、異なる濃度での追加実験によって、食細胞成熟の時間および用量依存性の阻害が示された（データは示さず）。五量体ＣＯＭＰドメインを含むＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰタンパク質を用いても同様の結果が得られ（データは示さず）、このことから、ヒスチジル−ｔＲＮＡシンテターゼのＮ末端領域（ＨＲＳ２−６０）により介在される特異的な効果であったことが確認された。細菌の取り込みは、非ｐＨ感受性色素で標識された細菌粒子を使用することによる被験化合物のインキュベーションではそれほど影響を受けなかった（データは示さず）。食細胞酸性化の明白な阻害は、ＮＲＰ２がノックアウトされたマクロファージ（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１８）Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．７８（１９）：５６００−５６１７）、および癌細胞で観察された表現型と非常によく似ており、不完全なエンドソーム酸性化を生じさせるエンドサイトーシスプロセスの阻害も報告されている（Ｄｕｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．７６  ４１８−２８，Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−２  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅｎｄｏｓｏｍｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＥＧＦＲ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｔｏ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ）。エンドサイトーシス活性は転移表現型の維持の中核であるため、これらの結果は、癌治療において特に重大である（Ｌａｎｚｅｔｔｉ  ＆  Ｆｉｏｒｅ（２００８）Ｔｒａｆｆｉｃ  ９，２０１１−２１  Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ：ａｎ  “ｉｎｓｉｄｅｒ”ｎｅｔｗｏｒｋ  ｗｉｔｈ  ｄａｎｇｅｒｏｕｓ  ｌｉａｉｓｏｎｓ）。
【０５５７】
これらの結果から、例えばＨＲＳポリペプチドのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）およびＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰなどのＨＲＳのＮ末端断片が、特に、エンドソーム成熟を介在するＮＲＰ２の能力を機能的に妨害するよう作用し得ることが示される。ファゴサイトーシス、エフェロサイトーシス、オートファジー、および受容体リサイクルを含む様々な細胞活性にとって、エンドサイトーシス活性は重要であるため、これらの結果から、ＨＲＳポリペプチドは、ＮＲＰ２との相互作用によってこれら活性を調節する根源的に新規な薬理学的アプローチとなることを示唆している。したがって、当該ＨＲＳポリペプチドは、広範なＮＲＰ２関連疾患、特に、癌の治療、およびマクロファージ機能の調節において、潜在的な有用性がある。
【０５５８】
実施例１３
マクロファージにおけるエフェロサイトーシスに対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、マウス骨髄由来マクロファージにおける、インビボでの被験化合物のエフェロサイトーシス調節の可能性を調べるために設計された。エフェロサイトーシスとは、死にゆく細胞／死んだ細胞（例えば、アポトーシス細胞またはネクローシス細胞）が食細胞により取り除かれるプロセスを指す。エフェロサイトーシスの間、食細胞の細胞膜はアポトーシス細胞を飲み込み、大きな液体で満たされた死細胞を含む小胞を形成する。エフェロサイトーシスは、例えばマクロファージや樹状細胞などの「専門的な」食細胞だけではなく、上皮細胞、線維芽細胞や他の細胞を含む多くの他の細胞型でも行われ得る。生細胞との識別を行うために、アポトーシス細胞は、例えば細胞膜の外葉上のホスファチジルセリン（リン脂質のフリップ−フロップから生じる）やカルレチクリンの提示などの特異的な「食べて」シグナルを保有している。エフェロサイトーシスは、アポトーシス細胞の初期認識のための独特なシグナル伝達経路を使用しているが、細菌のファゴサイトーシス、エンドサイトーシスおよびオートファジーとの多くのメカニズム類似点も共有しており、さらに過去の研究により、ＮＲＰ２が、これらプロセスにおいて重要な制御的役割を果たしていることが確認されている（Ｄｕｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．７６  ４１８−２８  Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−２  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｅｎｄｏｓｏｍｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＥＧＦＲ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｔｏ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ）。ファゴサイトーシスのように、エンドソームの酸性化が、エンドソーム成熟の中核的な特徴であり、本明細書に記載されるように、ｐＨ感受性プローブを使用することで容易に監視することができる。
【０５５９】
方法およびプロトコール。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８〜１２週齢）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、米国メーン州）を、１２時間の明暗サイクルで動物施設中で飼育し、標準的な食事と水を自由に摂らせた。骨髄由来マクロファージは、骨上に残存する組織を取り除いた後に解剖した脛骨と大腿骨から単離された。各骨の末端を切断し、骨髄を取り出した。骨髄からの細胞を、合計で７日間、５０ｎｇ／ｍｌのマクロファージコロニー刺激因子とともに培養した。培地は、Ｍ−ＣＳＦを補充した新鮮な培地で１日おきに交換された。培養から５日目、培地は、Ｍ−ＣＳＦと、１００ｎＭの濃度のＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰまたは対照化合物（ＣＯＭＰ単独）を含有する新鮮な培地で２４時間交換した。培養から６日目、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、アポトーシス性のｊｕｒｋａｔ細胞（５０ｕＭのエトポシドで１２時間、ｊｕｒｋａｔ細胞を処置することにより調製され、その後、ｐＨｒｏｄｏ（商標）Ｒｅｄスクシンイミジルエステルとともに１時間、プレロードされた）でパルス標識した。インキュベーション後、マクロファージをＰＢＳで３回洗浄し、Ｍ−ＣＳＦと、ＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰまたは対照化合物のいずれかとともに培地を再びそれぞれに添加した。０、２、６、８、および１０時間の追跡後、追跡フェーズ中に細胞を収集した。次いでマクロファージをＰＢＳで洗浄し、その後、４％パラホルムアルデヒドで固定して、ヘキストでカウンター染色した。共焦点画像は、４つのレーザーを備えたＺｅｉｓｓ  ７１０  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｌａｓｅｒ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅで撮影され、画像は、Ｚｅｉｓｓ  Ｚｅｎ  ２０１０を使用して撮影され、分析された。定量のために、各フィールド中の赤色蛍光の強度を測定し、算術平均を計算し、グラフで表した。
【０５６０】
結果の要約。１００ｎＭのＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰとともに、単球分化の５日間、骨髄由来マクロファージをインキュベートすることで、エフェロサイトーシスが大きく阻害されたが、対照化合物のＣＯＭＰではなかった。これは劇的に減少したスペクトルのシフトにより明白であり、ｐＨ感受性蛍光色素のｐＨ  ｒｈｏｄｏ（商標）により示された（図２３Ａおよび２３Ｂ）。エフェロサイトーシスの明白な阻害は、ＮＲＰ２がノックアウトされたマクロファージにおいて観察された表現型と非常によく似ている（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１８）Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．７８（１９）：５６００−５６１７，Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−２  Ｅｘｈｉｂｉｔｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｕｍｏｒ−Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）。
【０５６１】
これらの結果から、例えばＨＲＳポリペプチドのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）およびＨＲＳ（２−６０）−ＣＯＭＰなどのＨＲＳのＮ末端断片が、特に、エフェロサイトーシスとファゴサイトーシスの両方に必要なエンドソーム成熟を介在するＮＲＰ２の能力を機能的に妨害する能力を有することが示される。広範な細胞活性、および疾患にとって、エンドサイトーシス活性は重要であるため、これらの結果から、ＨＲＳポリペプチドは、ＮＲＰ２活性を調節する根源的に新規な薬理学的アプローチとなることが示唆されている。したがって、当該ＨＲＳポリペプチドは、広範なＮＲＰ２関連疾患、特に、癌の治療、およびマクロファージ機能の調節において、潜在的な有用性がある。
【０５６２】
実施例１４
肺肉芽腫性疾患のＰ．ａｎｃｅｓ誘導モデルにおける、ＦＣ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、サルコイド様肉芽腫性疾患のマウスモデルにおける被験化合物のインビボでの可能性を調べるよう設計された。肉芽腫の形成、および肺線維症は、加熱殺菌されたＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ（プロピオニバクテリウム・アクネス）（Ｐ．ａｃｎｅｓ）を用いて４週間にわたりマウスを感作およびチャレンジすることにより誘導された。
【０５６３】
処置レジメン。６０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスを７群に分け、標準的な飼育条件下で飼育し、本実験に使用した。肺肉芽腫形成の誘導に必要なＰ．ａｃｎｅｓ懸濁液は、以下のように作製した：Ｐ．ａｃｎｅｓ（ＡＴＣＣ  ＃６９１９）は、コンフルエンシーになるまで３７℃、嫌気性条件下で５日間、強化クロストリジウム性の培地またはアガー中で増殖させた。Ｐ．ａｃｎｅｓ  コロニーをリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、ＰＢＳ中に再懸濁した。その後、得られたＰ．ａｃｎｅｓ懸濁液を、１２１℃で２０分間オートクレーブすることにより加熱殺菌した。懸濁液のタンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法により決定され、その後、使用するまで−８０℃で維持された。
【０５６４】
以下の表Ｅ８に、処置群と処置レジメンを示す。簡潔に述べると、１〜２群の動物は、実験期間中、未処置のままとした。３群および６〜７群の動物は、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（２０ｍＭ  ヒスチジン／１２５ｍＭ  ＮａＣｌ／１０ｍＭ  メチオニン／３％  スクロース／０．０２％  ＰＳ２０、ｐＨ６．９）（３群）、または０．４ｍｇ／ｋｇ（６群）もしくは３ｍｇ／ｋｇ（７群）のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）のビヒクルの静脈内注射を毎週投与された。４〜５群の動物は、陽性対照の抗マウスＴＮＦα（５群）またはそのビヒクル対照のＰＢＳ（４群）を、ＩＰ経路で投与された。０日目、３〜７群のマウスは最初に、ＩＰ注射によって０．５ｍｇのＰ．ａｃｎｅｓで感作され、次いで１４日目（０．１ｍｇ）および２８日目（０．０２５ｍｇ）に、Ｐ．ａｃｎｅｓの気管内（ＩＴ）滴下でチャレンジされた。
【表Ｅ８−１】
2021531313.tif 000058
【表Ｅ８−２】
2021531313.tif 000059
【０５６５】
サンプル分析。全てのマウスは、疾患誘導後４２日目に組織採取および分析のために殺処分された。肺の一部は組織学的分析に指定された。パラフィン包埋された切片を、標準的な組織学的手順を使用してＨ＆Ｅおよびマッソントリクロームで染色し、委員会により承認された獣医病理学者により炎症と線維症の程度に関してスコア化された。さらに採取された肺組織を、後のタンパク質分析のために瞬間凍結した。凍結肺組織を１５秒間、３５０μｌの氷冷溶解緩衝液（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）  Ｘ−１００、プロテアーゼ阻害剤カクテル）中で、携帯型ホモジナイザーを使用してホモジナイズした。ホモジナイズ手順の間、組織サンプルは氷上で維持された。２０分間の氷上でのインキュベーション後、溶解物は４℃、１０分間、１３０００ｒｐｍの遠心分離により清浄化された。次いでタンパク質溶解物を、以下のキットを使用して、ＭＡＧＰＩＸ  Ｌｕｍｉｎｅｘ装置システムにより分析した。ＭＣＹＴＯＭＡＧ−７０Ｋ。ビヒクル処置（３群）に対する一元配置ＡＮＯＶＡとダンの多重比較検定をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍで実施した。
【０５６６】
結果の要約。合計で１０匹のマウスが、実験期間中に死亡した。１匹のマウスは１０日目に死亡し、９匹のマウスは、１５日目の最初の気管内投与の後に死亡した。２匹の３群（ビヒクル）動物が、１９日目に死亡しているのが発見され、３匹の４群（ＰＢＳ）動物が、それぞれ１０日目、１７日目、および１９日目に死亡しているのが発見された。６群（Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）；０．４ｍｇ／ｋｇ）の別の５匹のマウスが、１９日目に死亡しているのが発見された。１４日目の最初のＩＴチャレンジの後に死亡したマウスの死因は、加熱殺菌されたＰ．ａｃｎｅｓ（０．１ｍｇ）の最初の気管内用量であった。これらの有害事象に基づき、２８日目の２回目のＩＴチャレンジの投与量を０．０２５ｍｇまで減少させたところ、さらに死亡したマウスはいなかった。
【０５６７】
Ｐ．ａｃｎｅｓを投与されていないマウス（２群）と比較した、Ｐ．ａｃｎｅｓを投与されたマウス（３群および４群）における炎症（Ｈ＆Ｅ）と線維症（マッソントリクローム）の増加の存在により、モデル誘導の成功が組織学的に確認された（図２４Ａ〜２４Ｂを参照のこと）。０．４または３ｍｇ／ｋｇでのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）が投与されても、実験終了時の肺の炎症または線維症に統計学的に有意な全体的な低下はもたらされなかったが（図２５Ａ〜２５Ｂを参照のこと）、肺においていくつかの線維症促進性サイトカインが、３ｍｇ／ｋｇのＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）処置に応答して低下していた（図２６Ａ〜２６Ｈを参照のこと）。抗ＴＮＦ抗体（陽性対照）も、本実験において有意性を示すことができなかった（データは示さず）。おそらく、本実験における動物モデルの変動が示唆されていると推測される。分析された８種のタンパク質のうち、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１／ＣＣＬ２およびＩＦＮ−γが、ビヒクル処置されたマウスの肺と比較して有意に低下した。図２６Ａ〜２６Ｈに示されるタンパク質レベルは、総肺タンパク質に対して正規化されている。
【０５６８】
これらの結果から、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）が、高度に炎症性の肺サルコイドーシスのモデルにおいて、いくつかの炎症促進性の肺タンパク質の強力な阻害剤であることが示される。サルコイドーシスにおいて炎症の制御は、症状突発の管理と、線維症への進行の阻害にとって重要であり、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）がサルコイドーシスや他の炎症性肺疾患において有望な治療的価値があり得ることを示唆している。
【０５６９】
実施例１５
Ｓ．ＲＥＣＴＩＶＩＲＧＵＬＡ誘導性慢性過敏性肺炎のマウスモデルにおける、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ  ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａ（Ｓ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａ、Ｓ．ｒｅｃ）（好熱性放線菌）誘導性の慢性過敏性肺炎（ＣＨＰ）のマウスモデルにおける、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のインビボにおける可能性を調べるよう設計された。
【０５７０】
処置レジメン。６０匹のＣ５７ＢＬ／６メスマウスが、５匹または１０匹のマウスの実験群に割り当てられ、標準的な飼育条件下で飼育された。疾患誘導に必要なＳ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａは、以下のように調製された：Ｓ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ  ＃１５３４７）から取得され、１ＬのＡＴＣＣ  Ｍｅｄｉｕｍ  ３  Ｂｒｏｔｈ中、約５２℃で振とうインキュベーターにおいて４日間培養され、遠心分離され、水で３回洗浄された。細菌の細胞壁は、ホモジナイザーまたはソニケーションで破壊され、次いで得られたＳ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａ抗原を１ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水中に再構成させ、使用するまで−８０℃で維持した。
【０５７１】
処置レジメンを以下の表Ｅ９に示す。簡潔に述べると、１〜２群の動物は、実験期間中、未処置のままとした。３群および６〜７群の動物は、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（２０ｍＭ  ヒスチジン／１２５ｍＭ  ＮａＣｌ／１０ｍＭ  メチオニン／３％  スクロース／０．０２％  ＰＳ２０、ｐＨ６．９）（３群）、または０．４ｍｇ／ｋｇ（６群）もしくは３ｍｇ／ｋｇ（７群）のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）のビヒクルの静脈内注射を毎週投与された。５群のマウスは、陽性対照のＣＴＬＡ−４−Ｆｃ（ＩＰ）を投与され、４群のマウスは、対応するビヒクル対照のＰＢＳ（ＩＰ）を投与された。疾患は、２５μｌのＳ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａ抗原（１ｍｇ／ｍＬ）またはＰＢＳを、１週あたり３連続日で３週間、鼻内滴下することで２〜７群に誘導された。
【表Ｅ９−１】
2021531313.tif 000060
【表Ｅ９−２】
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【０５７２】
サンプル分析。全てのマウスは、疾患誘導後２０日目に組織採取および分析のために殺処分された。肺の一部は組織学的分析に指定された。パラフィン包埋された切片をＨ＆Ｅで染色し、委員会承認された獣医病理学者により検証した。多巣性慢性肺炎の存在と重大度は、Ｍａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）‘Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ：Ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ’，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，４０（４＿ｓｕｐｐｌ），ｐｐ．７Ｓ−１３Ｓ．ｄｏｉ：１０．１１７７／０１９２６２３３１２４３８７３８）に記載される承認された産業スコアリングシステムを使用してスコア化された。Ｈ＆Ｅ染色された肺切片は、ＨＡＬＯプラットフォームを使用してさらに分析され、気管支関連リンパ組織（ＢＡＬＴ：ｂｒｏｎｃｈｕｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ）を定量した。さらに採取された肺組織の一部を、後のタンパク質分析のために瞬間凍結した。凍結肺組織を１５秒間、３５０μｌの氷冷溶解緩衝液（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）  Ｘ−１００、プロテアーゼ阻害剤カクテル）中で、携帯型ホモジナイザーを使用してホモジナイズした。ホモジナイズ手順の間、組織サンプルは氷上で維持された。２０分間の氷上でのインキュベーション後、溶解物は４℃、１０分間、１３０００ｒｐｍの遠心分離により清浄化された。次いでタンパク質溶解物を、以下のキットを使用して、ＭＡＧＰＩＸ  Ｌｕｍｉｎｅｘ装置システムにより分析した。ＭＣＹＴＯＭＡＧ−７０Ｋ、ＭＭＭＰ３ＭＡＧ−７９Ｋ。
【０５７３】
ビヒクル処置（３群）に対する一元配置ＡＮＯＶＡとダンの多重比較検定を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍで実施した。
【０５７４】
結果の要約。慢性過敏性肺炎は、１週当たり連続する３日間で３週間、２５μｇのＳ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａを鼻内投与することで誘導に成功した。対照群（３群および４群）のＳ．ｒｅｃｔｉｖｉｒｇｕｌａに曝露されたマウスにおいて、２群のＰＢＳに曝露されたマウスと比較して、強固で一貫性のある多巣性慢性肺炎があった（図２７Ａ）。獣医病理学者により決定された平均組織病理学的スコアは、３〜７群の中で類似していた（図２７Ｂ）。しかしＨＡＬＯプラットフォームを使用したＨ＆Ｅ染色肺組織切片のその後の徹底分析により、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の３ｍｇ／ｋｇ群において、個々のＢＡＬＴ領域の減少が示され（図２７Ｃ）、このことから当該モデルにおける抗炎症活性が示唆された。さらに、肺ホモジネートを、炎症促進性タンパク質および線維化促進性タンパク質のレベルに関して分析した。いくつかの炎症促進性サイトカインとケモカイン（図２８Ａ〜２８Ｇを参照のこと）ならびにマトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）（図２９Ａ〜２９Ｅを参照のこと）は、０．４および３ｍｇ／ｋｇの両方のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の存在下で有意に低下した。これらの結果から、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）は、線維症の発生に関与する肺タンパク質を負に制御することが示される。この広範な抗炎症性効果は、類似した高度に炎症性の間質性肺疾患に罹患するヒト患者にも応用し得る。
【０５７５】
実施例１６
ＲＡ−ＩＬＤのマウスモデルにおける、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の活性評価
本実験は、リウマチ性関節炎間質性肺炎（ＲＡ−ＩＬＤ）のトランスジェニックマウスモデル（ＳＫＧ）における、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）のインビボ活性を調べるよう設計された。ＳＫＧマウスは、遺伝的に自己免疫性の関節炎を発症する傾向があり、ザイモサン（ｚｙｍｏｓａｎ）の単回腹腔内注射の後、重度の慢性関節炎を発症し、そしてこれらＳＫＧマウスのおよそ２０％がＩＬＤも発症する。処置レジメン。７０匹のＳＫＧ／ｊｃｌメスマウスが７つの実験群に割り当てられ、標準的な飼育条件下で飼育された。実験群は、以下の表Ｅ１０に記載される。簡潔に述べると、１群の動物は、実験期間中、未処置のままとした。３群のマウスは陽性対照の抗ＧＭ−ＣＳＦ（ＢｉｏＸｃｅｌｌ社）を投与され、２群のマウスは対応するＩｇＧ対照を投与された。４〜７群のマウスは、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）（２０ｍＭ  ヒスチジン／１２５ｍＭ  ＮａＣｌ／１０ｍＭ  メチオニン／３％  スクロース／０．０２％  ＰＳ２０、ｐＨ６．９）（４群）、または０．３ｍｇ／ｋｇ（５群）、１ｍｇ／ｍＬ（６群）もしくは３ｍｇ／ｋｇ（７群）のＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）のビヒクルの静脈内注射を毎週投与された。関節炎は、５ｍｇのザイモサン（Ｓｉｇｍａ社、＃Ｚ４２５０）のＩＰ投与により０日目に２〜７群に誘導された。
【表Ｅ１０】
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【０５７６】
臨床スコア化およびサンプル分析。体重測定、および関節炎のスコア化は、週に１回実施された。関節炎の程度を評価するために、各手足を別個にスコア化し、臨床ポイントを以下のように割り当てた：０＝関節部の腫脹なし、０．１＝１か所の指関節の腫脹、０．５＝手首と足首の軽度の腫脹、０．７５＝手首と足首に中程度の腫脹、１＝手首と足首の重度の腫脹。５６日目の試験終了時、肺をＰＢＳでかん流し、切り出して、Ｍｉｌｔｅｎｙｉの肺分離キット（＃１３０−０９５−９２７）を使用して、フローサイトメトリー分析用に分離させた。
【０５７７】
フローサイトメトリー分析。フロー洗浄緩衝液（ＦＷＢ、ＰＢＳ中、３％ウシ胎児血清）を、その後の全ての染色と洗浄の工程に使用した。生細胞／死細胞は、ＦＷＢ中で１：４００に希釈された１２０μＬのＺｏｍｂｉｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を用いて室温で暗所中、２０分間染色することにより識別された。その後、過剰量のＦＷＢを添加し、サンプルを前述のように遠心分離した。これらの工程は、以降、「洗浄」とまとめて呼称される。Ｆｃ受容体は、ＦＷＢ中、１：２５に希釈された２５μＬのＭｏｕｓｅ  ＢＤ  Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）を室温で暗所中、１０分間添加することによりブロッキングされた。続いて細胞を、氷上で３０分間、暗所にて、すべてＦＷＢ中で表Ｅ１１に列記される抗体の５０μＬの混合物を使用して、特異的表面マーカーに対して染色した。次いで細胞を再度洗浄し、２００μＬのＦＷＢに再懸濁させ、ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）でデータ取得された。実験群のうち以下の３群のみが、フローサイトメトリーにより分析された：１群、４群および７群。
【表Ｅ１１】
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【０５７８】
結果の要約。５ｍｇのザイモサンを投与したことで、ＳＫＧマウスに炎症性関節炎の誘導が成功し、肺単一細胞懸濁液のフローサイトメトリー分析により、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）が、ＳＫＧマウスの肺において特定の免疫細胞、特にＢ細胞とＴ細胞の数を低下させ得たことが示された（図３０Ａ〜３０Ｈを参照のこと）。免疫細胞浸潤に対する顕著な効果にも関わらず、全体的な臨床関節炎スコアに対するＦｃ−ＨＲＳ（２−６０）の有意な効果は本実験では観察されなかった（図３１Ａ〜３１Ｄを参照のこと）。Ｂ細胞とＴ細胞の両方が、ＲＡ−ＩＬＤの病態に関与しており、疾患マウスの肺における、その数の低下という結果からは、ＲＡ−ＩＬＤ、または他のＴ細胞誘導性炎症疾患における、Ｆｃ−ＨＲＳ（２−６０）の単独、または他の剤と併用しての治療的用途の可能性の道が開かれ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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