(57)【要約】  本明細書には、構造式Ｉの化合物が開示される。構造式Ｉの化合物は、アルデヒドデヒドロゲナーゼアイソフォームＩａ３（ＡＬＤＨＩａ３）を阻害し、そして癌、例えば、化学療法抵抗性の転移性癌などの転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療に有用である。また、本明細書には、構造式Ｉの化合物を含む組成物、および癌、例えば、転移性癌または化学抵抗性癌を治療するための構造式Ｉの化合物の使用が開示される。2021532158.tif 000033【選択図】なし
2021532158.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（１）で表される化合物：
【化１】
2021532158.tif 000023
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ，  （Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｒ３は、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２  ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
各Ｒ９は、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；および
ｎは、０、１、２、３、４または５である）。
【請求項２】
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、水素である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５が、水素である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、ハロである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、フルオロである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｌが、−ＣＨ２−である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
各Ｒ９が、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
各Ｒ９が、独立してハロまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
各Ｒ９が独立して（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
ｎが、０、１または２である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
下記構造式（２）で表される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物：
【化２】
2021532158.tif 000024
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、
Ｒ８が、水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである）。
【請求項１５】
Ｒ８が、水素、ハロまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
下記構造式（３）で表される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物：
【化３】
2021532158.tif 000025
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、
Ｒ８およびＲ８’は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである）。
【請求項１７】
Ｒ８が、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；およびＲ８’が、水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
下記構造式（４）〜（８）のいずれかで表される化合物：
【化４】
2021532158.tif 000026
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
下記構造式（９）〜（１１）のいずれかで表される化合物：
【化５】
2021532158.tif 000027
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む組成物。
【請求項２１】
それを必要とする対象における転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療方法であって、有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
転移性癌細胞または化学療法抵抗性癌細胞の増殖の阻害方法であって、有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を細胞に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法であって、有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
有効量の下記構造式（１２）で表される化合物：
【化６】
2021532158.tif 000028
またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療方法
（式中、
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２  ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４  およびＸ５  は、それぞれ独立して−Ｃ（Ｒ８）−または−Ｎ−であり；  および
各Ｒ８は、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである）。
【請求項２５】
Ｒ２およびＲ４が、それぞれ水素である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１が、水素である、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ５が、水素である、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ３が、水素またはハロである、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ３が、フルオロである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−である、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
Ｌが、−ＣＨ２−である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
各Ｒ８が、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
各Ｒ８が、独立して水素、ハロまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が、下記構造式（１３）で表される化合物：
【化７】
2021532158.tif 000029
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２４〜３２のいずれか１項に記載の方法
（式中、
各Ｒ９は、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；および
ｍは０、１、２、３または４である）。
【請求項３６】
Ｘ３が、−Ｃ（Ｒ８）−である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
Ｘ３が、−Ｎ−である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
各Ｒ９が、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである、請求項３５、３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
各Ｒ９が、独立してハロまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項３５、３６または３７に記載の方法。
【請求項４０】
ｍが、０、１または２である、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記化合物が、下記構造式（１４）で表される化合物：
【化８】
2021532158.tif 000030
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項２４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記化合物が、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．２、ＭＢＥ１．３、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．６、ＭＢＥ２、ＭＢＥ３．１、ＭＢＥ３．２、ＭＢＥ３．３、ＭＢＥ３．４、ＭＢＥ３．５もしくはＭＢＥ３．６で表される化合物、またはそれらのいずれかの薬学的に許容可能な塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項４３】
前記癌が、転移性癌である、請求項２４〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記転移性癌が、転移性乳癌、転移性結腸癌、転移性肺癌、転移性膵臓癌、転移性前立腺癌、転移性骨癌、転移性血液癌、転移性脳癌、および転移性肝臓癌からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
対象が骨転移を有する、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌が化学療法抵抗性癌である、請求項２４〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
有効量の下記構造式（１５）で表される化合物：
【化９】
2021532158.tif 000031
またはその薬学的に許容可能な塩を細胞に投与することを含む、転移性癌細胞または化学療法抵抗性癌細胞の増殖の阻害方法
（式中、
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２  ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４  およびＸ５  は、それぞれ独立して−Ｃ（Ｒ８）−または−Ｎ−であり；および
各Ｒ８は、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである）。
【請求項４８】
有効量の下記構造式（１６）で表される化合物：
【化１０】
2021532158.tif 000032
またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法
（式中、
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２  ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立して−Ｃ（Ｒ８）−または−Ｎ−であり；および
各Ｒ８は、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年７月３１日付けで出願された米国仮特許出願第６２／７１２，４３４号の利益を主張するものである。上記出願（複数の場合もある）の全ての教示は、参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
侵襲性および／または化学療法抵抗性の転移性癌を治療するための現在の治療法は、有効性が限られている。したがって、これらの癌の治療のための改善された有効性を有する治療薬が必要とされている。
【０００３】
概要
それを必要とする対象における癌、例えば、転移性癌（例えば、基底様乳癌、ＨＥＲ−２陽性乳癌などの転移性乳癌）、化学療法抵抗性癌（例えば、パクリタキセルおよび／またはドキソルビシン抵抗性癌）を治療するための化合物、組成物および方法が本明細書中で提供される。
【０００４】
一実施形態は、構造式ＩＩの化合物：
【化１】
2021532158.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、可変値（例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｌ、ｎ）は本明細書中に記載される通りである。
【０００５】
別の実施形態は、構造式Ｉの化合物：
【化２】
2021532158.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療方法であって、式中、可変値（例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｌ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５）は本明細書中に記載される通りである。転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療に使用するための化合物であって、構造式Ｉで表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩も提供される。転移性癌または化学療法抵抗性癌の治療のための医薬の製造のための、構造式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用も提供される。
【０００６】
さらに別の実施形態は、転移性癌細胞または化学療法抵抗性癌細胞の増殖の阻害方法であって、有効量の構造式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を該細胞に投与することを含む方法である。転移性癌細胞または化学療法抵抗性癌細胞の増殖を阻害するための化合物であって、構造式Ｉで表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩も提供される。転移性癌細胞または化学療法抵抗性癌細胞の増殖を阻害するための医薬の製造のための、構造式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用も提供される。
【０００７】
別の実施形態は、構造式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法である。２型糖尿病の治療に使用するための化合物であって、構造式Ｉで表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩も提供される。２型糖尿病の治療のための医薬の製造のための、構造式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用も提供される。
【０００８】
本明細書中に記載される化合物、組成物および方法は、転移および／または化学療法に対する抵抗性に重要であり、そして多くの腫瘍型において広く発現される酵素標的（ＡＬＤＨ１ａ３）を阻害するために使用され得る。本明細書に記載される化合物の多くは、ＡＬＤＨ１ａ３に対して低いナノモル親和性を有し、そして化合物ＭＢＥ１は、マウスにおいて毒性なしに転移巣を縮小させることが示されている。
【０００９】
図面の簡単な説明
本特許又は出願書類は、  色彩を付して作成された少なくとも１の図面を含む。本特許又は特許出願公開の写しでカラー図面を付したものは、請求および必要な手数料の納付がされたときに米国特許商標庁により提供される。
【００１０】
前述の事項は、例示的な実施形態の以下のより具体的な説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１Ａは、本明細書中に記載される種々の化合物の存在下でのＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞のパーセンテージの棒グラフであり、そして１００ナノモル濃度の化合物と共に本明細書中に記載される標準的なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用したインキュベーション後のフローサイトメトリーにより検出される、バックグラウンド蛍光レベルを超えるＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。バックグラウンド蛍光のゲーティングは、陰性対照として１ミリモル濃度のＮ，Ｎ−ジエチルアミノベンズアルデヒド（ＤＥＡＢ）を使用して行われた。
【図１Ｂ】図１Ｂは、様々な濃度のＭＢＥ１またはＭＢＥ１．５の存在下でのＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞のパーセンテージの折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１またはＭＢＥ１．５の用量滴定と組み合わせた、本明細書に記載の標準的なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールに従ったインキュベーション後のフローサイトメトリーにより検出される、バックグラウンド蛍光レベルを上回るＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。［ｉｎｈ−ｍｉｎ］閾値は、対照試料の２つの標準偏差の下限に設定され、一方、ＩＣ５０閾値は、対照試料の平均の５０％に設定された。
【図１Ｃ】図１Ｃは、様々な濃度のＭＢＥ１およびＭＢＥ１．５の存在下での高ＡＬＤＨパーセンテージの折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１またはＭＢＥ１．５の用量滴定と組み合わせた、本明細書に記載の標準的なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールに従ったインキュベーション後のフローサイトメトリーにより検出される、高蛍光レベルであるＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。高い活性は、１０ナノモル濃度のＭＢＥ１．５濃度で９９パーセンタイルの細胞でゲーティングされた。［ｉｎｈ−ｍｉｎ］閾値は、対照試料の２つの標準偏差の下限に設定された。
【図２Ａ】図２Ａは、ヒトＡｌｄｈ１ａ１、Ａｌｄｈ１ａ３またはＡｌｄｈ３ａ１が安定的に形質導入され、そして列挙された濃度のＤＭＳＯまたはＭＢＥ１と組み合わせたフローサイトメトリーによりＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用して分析されたＭＣＦ７細胞のヒストグラムであり、そして各酵素により誘導されたＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性に対するＤＭＳＯまたはＭＢＥ１の効果を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ヒトＡｌｄｈ１ａ２またはＡｌｄｈ１ａ３が一過性にトランスフェクトされ、そして列挙された濃度のＤＭＳＯまたはＭＢＥ１．５と組み合わせたフローサイトメトリーによりＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用して分析された２９３Ｔ細胞のヒストグラムであり、そして各酵素により誘導されたＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性に対するＤＭＳＯまたはＭＢＥ１．５のいずれかの効果を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、ＤＥＡＢまたはＭＢＥ１の存在下での種々の癌型におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞の棒グラフであり、そしてＡＬＤＨ１ａ３活性がＭｌ  ａ（乳癌）およびＭＤＡ−４６８（乳癌）に加えて多くの癌型において観察され、そして多くの癌型においてＭＢＥ１により阻害されることを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、１  ｍＭ  ＤＥＡＢ（ｐａｎ−ＡＬＤＨ阻害剤）または１００  ｎＭ  ＭＢＥ１．５（特異的ＡＬＤＨ１ａ３阻害剤）の存在下での種々の癌型におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性の棒グラフであり、そしてヒト癌細胞株の大部分がＡｌｄｈ１ａ３活性を示すことを示す。
【図４Ａ】図４Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＣＤ４５陽性骨髄細胞がＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性であるが、ＭＢＥ１．５により影響を受けないことを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＣＤ１１ｃ陽性骨髄細胞がＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性であるが、ＭＢＥ１．５により影響を受けないことを示す。
【図５Ａ】図５Ａは、静脈内尾静脈注射（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｔａｉｌ−ｖｅｉｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）を介してＭ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞を注射されたマウスにＭＢＥ１およびパクリタキセルを投与するために使用される投薬戦略の線図であり、そして転移性癌の治療におけるＭＢＥ１の有効性を試験するために設計されたインビボ実験の設計を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を使用して測定された、肺転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして図５Ａに概説される実験からのマウスにおけるＭＢＥ１の存在下および非存在下での肺転移を比較するものである。スチューデントｔ検定、両側、仮定不等分散。
【図６Ａ】図６Ａは、心臓内注射を介してＭ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞を注射されたマウスにＭＢＥ１およびパクリタキセルを投与するために使用される投薬戦略の線図であり、そして転移性癌の治療におけるＭＢＥ１の有効性を試験するために設計されたインビボ実験の設計を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＢＬＩを使用して測定された、骨転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして図６Ａに概説される実験からのマウスにおけるＭＢＥ１の存在下および非存在下での骨転移を比較するものである。スチューデントｔ検定、片側、仮定不等分散。
【図７Ａ】図７Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウト（中央および右端スペクトル）が対照ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（左端スペクトル）と比較してＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性を実質的に減少させることを示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、腫瘍体積（ｍｍ３）対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが原発腫瘍増殖を遅らせ、そしてパクリタキセルに対して腫瘍を感作させることを示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは、腫瘍質量（ｇ）対遺伝子ノックアウトの棒グラフであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが原発腫瘍増殖を遅らせ、そしてパクリタキセルに対して腫瘍を感作させることを示す。
【図８Ａ】図８Ａは、生物発光（ｐｈ／ｓ）対時間（日）の折れ線グラフであり、そして３つのＡＬＤＨ酵素、ＡＬＤＨ１ａ１、ＡＬＤＨ１ａ３およびＡＬＤＨ３ａ１をコードするベクターを形質導入されたＳＵＭ１５９−Ｍｌｂ細胞を注入されたマウスにおける肺転移の発生を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、図８Ａに記載される実験の終了点でエクスビボでカウントされた肺結節（ｌｕｎｇ  ｎｏｄｅｓ）のプロットである。スチューデントｔ検定、両側、仮定不等分散。
【図９Ａ】図９Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが細胞におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性をほぼ消失させること、およびＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性が細胞にレスキューベクターを形質導入することによりレスキューされ得ることを示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、生物発光（ｐｈ／ｓ）により測定された、骨転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３のノックアウトが骨転移増殖を遅らせることを示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、経時的な骨転移のない生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３のノックアウトが生存時間を有意に増加させることを示す。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として腎明細胞癌患者の遠隔転移のない生存を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数としてトリプルネガティブ乳癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として胃癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として膀胱癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として卵巣癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｆ】図１０Ｆは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（黒）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として肺扁平上皮癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｇ】図１０Ｇは、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓからの生存時系列データおよび患者レベルのＲＮＡ発現データに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（青）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として結腸直腸癌患者の全生存を示す。
【図１０Ｈ】図１０Ｈは、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓからの生存時系列データおよび患者レベルのＲＮＡ発現データに基づくＡｌｄｈ１ａ３の高発現（赤）および低発現（青）により層別化された患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として低悪性度神経膠腫患者の全生存を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＭＥＴＡＢＲＩＣ臨床乳癌データセットからのＡｌｄｈ１ａ３のｍＲＮＡ発現のグラフであり、そして乳癌サブタイプ別および化学療法歴によるＡｌｄｈ１ａ３の発現を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、Ｅｒａｓｍｕｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ−Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ（ＥＭＣ−ＭＳＫ）データセットに基づく一連の生存曲線であり、そしてサブタイプ別および中央値ＡＬＤＨ１ａ３発現レベルによる層別化により乳癌患者の生存期間を示す。
【図１２】図１２は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性対濃度のグラフであり、そして１０  ｎＭおよび１００  ｎＭの濃度での本明細書に記載されるいくつかの化合物のＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性を示す。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ウェスタンブロットであり、そしてＭＣＦ７細胞およびＳＥＩＭ  １５９細胞における１ａ１、１ａ２、１ａ３および３ａ１を含む種々のＡＬＤＨアイソフォームの発現を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、示されたＡＬＤＨアイソフォームを発現するＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性ＭＣＦ７細胞のパーセンテージ対ＭＢＥ  １．５濃度の対数の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ  １．５が１０  μＭ未満の濃度でＡＬＤＨ１ａ３を特異的に阻害することを示す。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、示されたＡＬＤＨアイソフォームを発現するＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性ＳＥＩＭ１５９細胞のパーセンテージ対ＭＢＥ  １．５濃度の対数の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ  １．５が１０  ｐＭ未満の濃度でＡＬＤＨ１ａ３を特異的に阻害することを示す。
【図１４】図１４は、生物発光イメージング（ＢＬＩ）により測定された肺転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして１７、１９および２１日目に投与された２５  ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルと組み合わせた５０  ｍｇ／ｋｇのＭＢＥ１．５の３つの用量が、マウス異種移植モデルにおいて樹立された転移性疾患の退行を引き起こしたことを示す。スチューデントｔ検定、両側、仮定不等分散。
【図１５Ａ】図１５Ａは、体重（ｇ）対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてこの実験においてＭＢＥ１．５処理に関連する著しい毒性がなかったことを示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、腫瘍体積（ｍｍ３）対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５での１２日間の処理がＭＤＡ−ＭＢ−４６８原発性乳腺腫瘍の退行を引き起こしたことを示す。スチューデントｔ検定による統計。＊ｐ  ＜  ０．０５。
【図１６Ａ】図１６Ａは、肺転移生物発光対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５または溶媒での処理の前後の肺転移の進行を示す。スチューデントｔ検定による統計。＊ｐ  ＜  ０．０５。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、処理群の関数としての経時的なマウス生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットであり、そしてＭＢＥ１．５による１２日間の処理が後期樹立乳癌肺転移を有するマウスにおける生存を延長したことを示す。コックス比例ハザードモデルによる統計。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
詳細な説明
化合物、組成物および方法は、部分的にはアルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ａｌｄｈ、ＡＬＤＨ）、および特にＡＬＤＨアイソフォーム１ａ３（ＡＬＤＨ１ａ３）が多くの癌型および他のＡＬＤＨ１ａ３媒介疾患および障害（例えば、２型糖尿病）に関与するという発見に基づく。
したがって、本明細書中で提供される化合物、組成物および方法は、ＡＬＤＨ、例えばＡＬＤＨ１ａ３を調節する（例えば、阻害する）ことに関する。
【００１３】
例示的な実施形態の説明は、以下の通りである。
【００１４】
定義
本明細書に記載される化合物は、一般的に記載されるものを含み、そして本明細書に開示されるクラス、サブクラス、および種によりさらに例示される。本明細書で使用される場合、以下の定義は、別段の指示がない限り適用されるものとする。本発明のために、化学元素は、元素の周期表、ＣＡＳ版、化学と物理のハンドブック第７５版（ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，  ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，  ７５ｔｈ  Ｅｄ）、に従い同定される。さらに、有機化学の一般原理は、“Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，  Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ＳｃｉｅｎｃｅＢｏｏｋｓ，  Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：  １９９９、および“Ｍａｒｃｈ’ｓ  ＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，  ５ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｅｄ．：  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．Ｂ．  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，  Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  ２００１に記載されており、これらの全内容は、参照により本明細書に援用される。
【００１５】
本明細書中で特に明記しない限り、本明細書中で使用される命名法は、一般に、有機化学の命名法、セクションＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＨ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、１９７９（Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｓｅｃｔｉｏｎｓ  Ａ，  Ｂ，  Ｃ，  Ｄ，  Ｅ，  Ｆ，  ａｎｄ  Ｈ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  １９７９）に記載された例および規則に従い、その化学構造名および命名化学構造に関する規則について参照により本明細書に援用される。任意選択的に、化合物の名前は、化学命名プログラム（例えば、ＣＨＥＭＤＲＡＷ（登録商標）、ｖｅｒｓｉｏｎ１７．０．０．２０６、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）を使用して生成されてもよい。
【００１６】
本発明の化合物は、キラル中心、キラル軸、およびキラル面（例えば、Ｅ．  Ｌ．  Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｈ．  Ｗｉｌｅｎ，  Ｓｔｅｒｅｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９４，  ｐａｇｅｓ  １１１９−１１９０に記載されるもの）を有してもよく、そしてラセミ体、ラセミ混合物、および個々のジアステレオマーもしくはエナンチオマーとして生じ、全ての可能な異性体およびそれらの混合物（光学異性体を含む）が本発明に含まれる。
【００１７】
「アルキル」とは、特定の数の炭素原子を有する飽和脂肪族分枝鎖又は直鎖一価炭化水素基をいう。したがって、「（Ｃ１−Ｃ３）アルキル」とは、１〜３個の炭素原子を直鎖又は分枝鎖配列で有する基を意味する。アルキルには、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが含まれる。「（Ｃ１−Ｃ３）アルキル」には、メチル、エチル、プロピル及びイソプロピルが含まれる。
【００１８】
「アミノ」とは、−ＮＨ２を意味する。
【００１９】
「アルキルアミノ」とは、（アルキル）（Ｈ）−Ｎ−を意味し、ここで該アルキル基は、本明細書中に記載される通りである。一態様では、アルキルアミノは、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノである。特定のアルキルアミノ基には、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノおよびイソプロピルアミノが含まれる。
【００２０】
「ジアルキルアミノ」とは、（アルキル）２−Ｎ−を意味し、ここで該アルキル基は、同じであっても異なってもよいが、本明細書中に記載される通りである。特定のジアルキルアミノ基は、（（Ｃ１−Ｃ３）アルキル）２−Ｎ−であり、ここで該アルキル基は、同じであっても異なってもよい。ジアルキルアミノ基には、ジメチルアミノ、ジエチルアミノおよびメチルエチルアミノが含まれる。
【００２１】
「ハロゲン」および「ハロ」は、本明細書において互換的に使用され、そしてそれぞれフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。いくつかの実施形態では、ハロゲンは、フルオロまたはクロロから選択される。
【００２２】
「クロロ」とは、−Ｃｌを意味する。
【００２３】
「フルオロ」とは、−Ｆを意味する。
【００２４】
「シアノ」とは、−ＣＮを意味する。
【００２５】
「ニトロ」とは、−ＮＯ２を意味する。
【００２６】
「ヒドロキシ」とは、−ＯＨを意味する。
【００２７】
「スルフヒドリル」とは、−ＳＨを意味する。
【００２８】
「アルコキシ」とは、酸素結合原子を介して結合したアルキルラジカルをいい、ここで「アルキル」は、本明細書中に記載される通りである。「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ」には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシが含まれる。
【００２９】
「チオアルコキシ」とは、イオウ結合原子を介して結合されたアルキルラジカルをいい、ここで「アルキル」は、本明細書中に記載される通りである。
【００３０】
「ハロアルキル」には、モノ、ポリ、およびペルハロアルキル基が含まれ、ここで各ハロゲンは、独立してフッ素、塩素、および臭素から選択され、そしてアルキルは、本明細書中に記載される通りである。一態様では、ハロアルキルは、ペルハロアルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）である。ハロアルキル基には、トリフルオロメチルおよびペンタフルオロエチルが含まれる。
【００３１】
「ハロアルコキシ」とは、酸素結合原子を介して結合されたハロアルキルラジカルをいい、ここで「ハロアルキル」は、本明細書中に記載される通りである。
【００３２】
本発明の化合物上の置換基は、化学的に安定であり、かつ当該技術分野で公知の技術および以下に記載される方法により容易に合成され得る化合物を提供するために、当業者により選択され得ることが理解される。本発明により想定される置換基の組み合わせ（例えば、Ｒ１−Ｒ９、ｍ、ｎ、Ｌ、Ｘ１−Ｘ５）は、好ましくは安定なまたは化学的に実現可能な化合物の生成をもたらすものである。本明細書中で使用される用語「安定」とは、それらの製造、検出、および、特定の実施形態では、それらの回収、精製、および本明細書で開示される１つ以上の目的のための使用を可能にする状態に供された場合に実質的に変化しない化合物を指す。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に許容可能な塩」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などなしに、ヒトおよび下等動物の組織との接触用途に適し、そして妥当な利益／危険比に相応する塩をいう。薬学的に許容可能な塩は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９に薬学的に許容可能な塩を詳細に記載し、その関連する教示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書中に記載される化合物の薬学的に許容可能な塩は、対象の治療に適合する適切な無機酸および有機酸および無機塩基および有機塩基から誘導される塩を含む。
【００３４】
薬学的に許容可能な非毒性の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸により、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸により、またはイオン交換などの当該技術分野で使用される他の方法を使用することにより形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容可能な酸付加塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、適切な塩を形成する例示的な無機酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびに酸金属塩（例えば、オルトリン酸一水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムなど）が含まれるが、これらに限定されない。好適な塩を形成する例示的な有機酸には、モノカルボン酸、ジカルボン酸およびトリカルボン酸が含まれる。このような酸の例は、例えば、酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ならびにメタンスルホン酸および２−ヒドロキシエタンスルホン酸などの他のスルホン酸である。一酸塩または二酸塩のいずれかが形成され得、そしてこのような塩は、水和物、溶媒和物または実質的に無水物の形態のいずれかで存在し得る。一般に、これらの化合物の酸付加塩は、水および種々の親水性有機溶媒においてより溶解しやすく、そして一般に、それらの遊離塩基形態と比較してより高い融点を示す。
【００３６】
いくつかの実施形態では、酸付加塩は、薬学的に許容可能な酸から最も適切に形成され、そして例えば、無機酸（例えば、塩酸、硫酸またはリン酸）および有機酸（例えば、コハク酸、マレイン酸、酢酸またはフマル酸）により形成されるものを含む。
【００３７】
好適な塩を形成する例示的な無機塩基には、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムまたは水酸化バリウムが含まれるが、これらに限定されない。好適な塩を形成する例示的な有機塩基には、脂肪族アミン、脂環式アミンまたは芳香族有機アミン（例えばメチルアミン、トリメチルアミンおよびピコリンなど）、またはアンモニアが含まれる。適切な塩の選択基準は、当業者に公知であろう。
【００３８】
適切な塩基から誘導される塩には、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１−Ｃ４）アルキル）４塩が含まれる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。さらに薬学的に許容可能な塩には、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボキシル、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンが含まれる。
【００３９】
さらに、特に明記しない限り、本明細書中で図示される構造は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在下においてのみ異なる化合物を含むことも意図される。例えば、水素を重水素もしくはトリチウムで置換することにより、または炭素を１３Ｃ−もしくは１４Ｃ−濃縮炭素で置換することにより製造される化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または本発明による治療剤として有用である。
【００４０】
本明細書に開示される要素を導入する場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ｓａｉｄ」は、１つ以上の要素が存在することを意味することが意図される。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｈａｖｉｎｇ」、および「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」は、開放形式（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）であることが意図され、そして列挙された要素以外の追加の要素が存在してもよいことを意味する。
【００４１】
化合物
第１の実施形態は、構造式Ｉで表される化合物：
【化３】
2021532158.tif 000005
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中：
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立して−Ｃ（Ｒ８）−または−Ｎ−であり；および
各Ｒ８は、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである。
【００４２】
第１の実施形態の第１の態様では、化合物は、ＭＢＥ１、ＭＢＥ２、ＭＢＥ３．１、ＭＢＥ３．２、ＭＢＥ３．３、ＭＢＥ３．４、ＭＢＥ３．５もしくはＭＢＥ３．６、または前述のもののいずれかの薬学的に許容可能な塩ではない。変数の値は、第１の実施形態で説明した通りである。
【００４３】
第１の実施形態の第２の態様では、Ｒ２およびＲ４は、それぞれ水素である。残りの変数の値は、第１の実施形態またはその第１の態様で説明した通りである。
【００４４】
第１の実施形態の第３の態様では、Ｒ１は、水素である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１もしくは第２の態様で説明した通りである。
【００４５】
第１の実施形態の第４の態様では、Ｒ５は、水素である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第３の態様で説明した通りである。
【００４６】
第１の実施形態の第５の態様では、Ｒ３は、水素またはハロ（例えば、ハロ）である。
残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第４の態様で説明した通りである。
【００４７】
第１の実施形態の第６の態様では、Ｒ３は、ハロ（例えば、フルオロ）である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様で説明した通りである。
【００４８】
第１の実施形態の第７の態様では、Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第６の態様で説明した通りである。
【００４９】
第１の実施形態の第８の態様では、Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第７の態様で説明した通りである。
【００５０】
第１の実施形態の第９の態様では、Ｌは、−ＣＨ２−である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第８の態様で説明した通りである。
【００５１】
第１の実施形態の第１０の態様では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５の１つは、−Ｎ−である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第９の態様で説明した通りである。
【００５２】
第１の実施形態の第１１の態様では、Ｘ３は、−Ｎ−であり；ならびにＸ１、Ｘ２、Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立して−Ｃ（Ｒ８）−である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第１０の態様で説明した通りである。
【００５３】
第１の実施形態の第１２の態様では、各Ｒ８は、独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第１１の態様で説明した通りである。
【００５４】
第１の実施形態の第１３の態様では、各Ｒ８は、独立して水素、ハロまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第１２の態様で説明した通りである。
【００５５】
第１の実施形態の第１４の態様では、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり、例えば、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシまたはハロであり、例えば、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ水素である。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第１３の態様で説明した通りである。
【００５６】
構造式Ｉの化合物には、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．２、ＭＢＥ１．３、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．６、ＭＢＥ２、ＭＢＥ３．１、ＭＢＥ３．２、ＭＢＥ３．３、ＭＢＥ３．４、ＭＢＥ３．５およびＭＢＥ３．６、または前述のもののいずれかの薬学的に許容可能な塩が含まれる。構造式Ｉの化合物には、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５ＣおよびＭＢＥ１．５Ｄ、または前述のものの薬学的に許容可能な塩も含まれる。
【００５７】
第２の実施形態では、化合物は、構造式ＩＩで表される化合物：
【化４】
2021532158.tif 000006
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中：
Ｒ１およびＲ５は、それぞれ独立して水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｒ３は、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ６）（Ｒ７）−、−Ｃ（ＣＨ２ＣＨ２）−、−Ｃ（ＯＣＨ２）−または−Ｃ（Ｎ（Ｈ）ＣＨ２）−であり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ独立して水素、ヒドロキシ、スルフヒドリル、ハロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシまたはハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシであり；
各Ｒ９は、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；および
ｎは、０、１、２、３、４、または５である。変数の代替値は、第１の実施形態、またはそのいずれかの態様で説明した通りである。
【００５８】
第２の実施形態の第１の態様では、各Ｒ９は、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、もしくはそのいずれかの態様、または第２の実施形態で説明した通りである。
【００５９】
第２の実施形態の第２の態様では、各Ｒ９は、独立してハロまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、ハロまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキル）である。残りの変数の値は、第１の実施形態、もしくはそのいずれかの態様、または第２の実施形態、もしくはその第１の態様で説明した通りである。
【００６０】
第２の実施形態の第３の態様では、ｎは、０、１または２である（例えば、ｎは０、ｎは１またはｎは２である）。残りの変数の値は、第１の実施形態、もしくはそのいずれかの態様、または第２の実施形態、もしくはその第１もしくは第２の態様で説明した通りである。
【００６１】
第２の実施形態の第４の態様では、各Ｒ９は、独立して（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、もしくはそのいずれかの態様、または第２の実施形態、もしくはその第１〜第３の態様で説明した通りである。
【００６２】
第２の実施形態の第５の態様では、ｎは、１または２（例えば、１）である。残りの変数の値は、第１の実施形態、もしくはそのいずれかの態様、または第２の実施形態、もしくはその第１〜第４の態様で説明した通りである。
【００６３】
構造式ＩＩの化合物には、ＭＢＥ１．５、またはその薬学的に許容可能な塩が含まれる。構造式ＩＩの化合物には、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５ＣおよびＭＢＥ１．５Ｄ、または前述のものの薬学的に許容可能な塩も含まれる。
【００６４】
第３の実施形態は、構造式ＩＩＩで表される化合物：
【化５】
2021532158.tif 000007
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、変数の値は、第１または第２の実施形態、または前述のいずれかの態様で説明した通りである。
【００６５】
第４の実施形態は、構造式ＩＶで表される化合物：
【化６】
2021532158.tif 000008
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中：
各Ｒ９は、独立してハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルであり；および
ｍは、０、１、２、３または４である。変数Ｒ９の代替値および残りの変数の値は、第１または第２の実施形態、または前述のいずれかの態様で説明した通りである。
【００６６】
第４の実施形態の第１の態様では、Ｘ３は、−Ｃ（Ｒ８）−である。残りの変数の値は、第１または第２の実施形態または前述のいずれかの態様、または第４の実施形態で説明した通りである。
【００６７】
第４の実施形態の第２の態様では、Ｘ３は、−Ｎ−である。残りの変数の値は、第１または第２の実施形態または前述のいずれかの態様、または第４の実施形態、またはその第１の態様で説明した通りである。
【００６８】
第４の実施形態の第３の態様では、ｍは、０、１または２である。残りの変数の値は、第１または第２の実施形態、または前述のいずれかの態様、または第４の実施形態、またはその第１もしくは第２の態様で説明した通りである。
【００６９】
第４の実施形態の第４の態様では、Ｒ３は、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ３）チオアルキルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ３）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリルである。残りの変数の値は、第１または第２の実施形態、または前述のいずれかの態様、または第４の実施形態、またはその第１〜第３の態様で説明した通りである。
【００７０】
第４の実施形態の第５の態様では、化合物は、ＭＢＥ１またはＭＢＥ３．６、または前述のものの薬学的に許容可能な塩ではない。残りの変数の値は、第１または第２の実施形態、または前述のいずれかの態様、または第４の実施形態、またはその第１〜第４の態様で説明した通りである。
【００７１】
第５の実施形態は、構造式Ｖで表される化合物：
【化７】
2021532158.tif 000009
またはその薬学的に許容可能な塩である。変数の値は、第１、第２または第４の実施形態、または前述のいずれかの態様で説明した通りである。
【００７２】
構造式Ｖの化合物には、ＭＢＥ１．２、ＭＢＥ１．３およびＭＢＥ１．６、または前述のものの薬学的に許容可能な塩が含まれる。
【００７３】
第６の実施形態は、構造式ＶＩで表される化合物：
【化８】
2021532158.tif 000010
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、Ｒ８’は、水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ又はスルフヒドリル（例えば、水素又は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）である。残りの変数の値は、第１、第２または第４の実施形態、または前述のいずれかの態様で説明した通りである。
【００７４】
第６の実施形態の第１の態様では、Ｒ８は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。残りの変数の値は、第１、第２または第４の実施形態、または前述のいずれかの態様、または第６の実施形態で説明した通りである。
【００７５】
第７の実施形態は、構造式ＶＩＩで表される化合物：
【化９】
2021532158.tif 000011
またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、Ｒ８’は、水素、ハロ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）チオアルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６）ジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシまたはスルフヒドリル（例えば、水素または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）である。残りの変数の値は、第１、第２、第４または第６の実施形態、または前述のいずれかの態様で説明した通りである。
【００７６】
組成物およびキット
ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜Ｖのいずれかの化合物、または前述のものの薬学的に許容可能な塩）、および薬学的に許容可能な担体もしくは賦形剤を含む組成物（例えば、薬学的に許容可能な組成物）が、本明細書中で提供される。特定の実施形態では、本発明の組成物は、該組成物を必要とする対象（例えば、患者）に投与するために配合される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、それを必要とする対象への経口投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与または皮膚科学的投与のために配合される。
【００７７】
「薬学的に許容可能な担体または賦形剤」という語句は、ともに処方される薬剤の薬理学的活性を破壊せず、かつ治療量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与された場合に非毒性である、非毒性の担体または非毒性の賦形剤をいう。本明細書中に記載される組成物において使用されてもよい薬学的に許容可能な担体または賦形剤には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩類、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書に記載の組成物は、経口的、非経口的（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）、吸入スプレーにより、局所的、直腸的、経鼻的、口腔的、経膣的にまたは埋め込まれたリザーバを介して、投与されてもよい。いくつかの実施形態では、提供される化合物または組成物は、静脈内および／または腹腔内に投与可能である。
【００７９】
本明細書中で使用される用語「非経口」には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、眼内、硝子体内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内（ｉｎｔｒａｌｅｓｉｏｎａｌ）、肝臓内、腹腔内、病変内および頭蓋内注射もしくは注入技術が含まれる。好ましくは、組成物は、経口、皮下、腹腔内または静脈内に投与される。
【００８０】
本明細書中で提供される組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液、分散液および溶液を含むがこれらに限定されない、任意の経口的に許容可能な剤形で経口投与され得る。経口使用のための錠剤の場合、一般に使用される担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も典型的に添加される。カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液および／または乳剤が経口使用のために必要とされる場合、活性成分は、油相中に懸濁または溶解され得、そして乳化剤および／または懸濁剤と組み合わされ得る。所望であれば、ある種の甘味料、香味料または着色剤が添加されてもよい。
【００８１】
いくつかの実施形態では、経口製剤は、即放性または徐放性／遅延放出のために配合される。
【００８２】
経口投与のための固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤および顆粒剤が含まれる。このような固体剤形において、活性化合物は、少なくとも１つの不活性な、薬学的に許容可能な賦形剤または担体（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）および／または（ａ）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸）、（ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシア）、（ｃ）保湿剤（例えば、グリセロール）、  （ｄ）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、（ｅ）溶解抑制剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）（例えば、パラフィン）、（ｆ）吸収促進剤（例えば、第４級アンモニウム塩）、（ｇ）湿潤剤（例えば、アセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート）、（ｈ）吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）、ならびに（ｉ）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物）と混合される。カプセル、錠剤および丸剤の場合、剤形は、緩衝剤も含んでもよい。
【００８３】
口腔または舌下投与に適した組成物には、錠剤、トローチ（ｌｏｚｅｎｇｅｓ）およびトローチ（ｐａｓｔｉｌｌｅｓ）が含まれ、ここで活性成分は、糖およびアカシア、トラガント、またはゼラチンおよびグリセリンなどの担体と共に配合される。
【００８４】
同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖などの賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用した軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤としても使用されてもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤および顆粒剤の固体剤型は、腸溶性コーティングおよび医薬処方分野において周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルと共に調製され得る。それらは、任意選択的に不透明化剤を含有してもよく、そして任意選択的に、遅延される様式で、腸管の特定の部分においてのみ、または優先的に、活性成分（複数の場合もある）を放出する組成物でもあり得る。使用され得る包埋組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。
【００８５】
薬剤は、上記のように、１つ以上の賦形剤と共にマイクロカプセル化された形態でもあり得る。このような固体剤形では、薬剤は、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合され得る。このような剤形は、通常の実施のように、不活性希釈剤以外の追加の物質（例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースなどの錠剤化滑沢剤（ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  ｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ）および他の錠剤化助剤（ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  ａｉｄｓ））も含み得る。
【００８６】
経口投与のための組成物は、例えば、錠剤またはカプセル上の製剤の外側のコーティングにより、消化管を通過する際の分解に対して活性成分を保護するように設計されてもよい。
【００８７】
別の実施形態では、薬剤は、長期（ｅｘｔｅｎｄｅｄ）（または「遅延」または「持続」）放出組成物で提供され得る。この遅延放出組成物は、遅延放出成分と組み合わせた薬剤を含む。このような組成物は、下部胃腸管、例えば、小腸、大腸、結腸および／または直腸への提供される薬剤の標的化された放出を可能にする。特定の実施形態では、遅延放出組成物は、酢酸フタル酸セルロースおよび他のフタル酸（例えば、ポリ酢酸ビニルフタレート、メタクリレート（Ｅｕｄｒａｇｉｔｓ））などの腸溶性またはｐＨ依存性コーティングをさらに含む。代替的に、遅延放出組成物は、ｐＨ感受性メタクリレートコーティング、ｐＨ感受性ポリマー微小球、または加水分解による分解を受けるポリマーの提供により小腸および／または結腸への徐放性を提供する。遅延放出組成物は、疎水性賦形剤もしくは疎水性コーティングまたはゲル化賦形剤もしくはゲル化コーティングで配合され得る。結腸送達は、アミロースまたはペクチンなどの細菌酵素により消化されるコーティングによって、ｐＨ依存性ポリマーによって、時間とともに膨潤するヒドロゲルプラグ（Ｐｕｌｓｉｎｃａｐ）によって、時間依存性ヒドロゲルコーティングによって、および／またはアゾ芳香族結合コーティングに結合されたアクリル酸によってさらに提供され得る。
【００８８】
本明細書中に記載される組成物は、直腸投与のための坐剤の形態でも投与され得る。これらは、薬剤を、室温では固体であるが直腸温度では液体であるため、直腸内で溶解して薬剤を放出する、適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。このような物質には、カカオ脂、密蝋およびポリエチレングリコールが含まれる。
【００８９】
本明細書中に記載される組成物は、特に治療の標的が、眼、皮膚、または下部腸管の疾患を含む、局所適用により容易に到達可能な領域または器官を含む場合、局所的にも投与され得る。適切な局所製剤は、これらの領域または器官の各々について容易に調製される。
【００９０】
下部腸管の局所適用は、直腸坐薬製剤（上記を参照されたい）または適切な注腸製剤において行われ得る。局所経皮パッチも使用され得る。
【００９１】
他の局所適用のために、組成物は、１つ以上の担体に懸濁または溶解された活性成分を含む適切な軟膏中に配合され得る。薬剤の局所投与のための担体には、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水および浸透促進剤が含まれるが、これらに限定されない。代替的に、組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体に懸濁または溶解された活性成分を含む適切なローションまたはクリーム中に配合され得る。代替的に、組成物は、適切な乳化剤で担体中に懸濁または溶解された活性化合物を含む適切なローションまたはクリームを配合され得る。いくつかの実施形態では、適切な担体には、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が含まれるが、これらに限定されない。他の実施形態では、適切な担体には、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水ならびに浸透促進剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００９２】
眼科用途のために、組成物は、塩化ベンジルアルコニウムなどの防腐剤の有無にかかわらず、等張性の、ｐＨ調整された滅菌生理食塩水中の微粉化懸濁液として、または、好ましくは、等張性の、ｐＨ調整された滅菌生理食塩水中の溶液として配合され得る。代替的に、眼科用途のために、組成物は、ワセリンなどの軟膏中に配合され得る。
【００９３】
組成物は、経鼻エアロゾルまたは吸入によっても投与され得る。このような組成物は、医薬製剤の技術分野で周知の技術に従って調製され、そしてベンジルアルコールまたは他の適切な防腐剤、生物学的利用能を増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤または分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製され得る。
【００９４】
単一投与形態の組成物を製造するために担体材料と組み合わせ得る薬剤の量は、治療されるホスト、特定の投与様式および使用される薬剤の活性に依存して変化するであろう。好ましくは、組成物は、約０．０１  ｍｇ／ｋｇ〜約１００  ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量の薬剤が組成物を受ける対象に投与され得るように配合されるべきである。
【００９５】
任意の特定の患者に対する特定の投与レジメンおよび治療レジメンは、使用される特定の薬剤の活性、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組合せ、治療する医師の判断および治療される特定の疾患の重症度を含む、様々な因子に依存するであろうことも理解されるべきである。組成物中の薬剤の量は、組成物中の特定の薬剤にも依存するであろう。
【００９６】
本発明の組成物において使用され得る他の薬学的に許容可能な担体、アジュバントおよび溶媒には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、例えばｄ−ａ−トコフェロールポリエチレングリコール１０００コハク酸塩、医薬剤形において使用される界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎまたは他の類似のポリマー送達マトリックス、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。α−、β−、およびγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン、または２−および３−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリンなどの化学修飾誘導体、または他の可溶化誘導体も、本明細書中に記載される薬剤の送達を増強するために有利に使用され得る。
【００９７】
組成物は、例えば、無菌で注射可能な水性または油性懸濁液として、無菌で注射可能な調製物の形態であり得る。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０など）および懸濁剤を使用して、当該技術分野で公知の技術に従って配合され得る。無菌で注射可能な調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌で注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用され得る許容可能な溶媒および溶剤の中には、マンニトール、水、リンゲル溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の、不揮発性油は、溶剤または懸濁媒体として常用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の無菌の（ｂｌａｎｄ）不揮発性油が使用され得る。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはひまし油などの天然の薬学的に許容可能な油、特にそれらのポリオキシエチル化型と同様に、注射剤の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤もしくは長鎖アルコール分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは類似の分散剤も含むことができ、これらは乳剤および／または懸濁液などの薬学的に許容可能な剤形の配合において一般的に使用されるものである。他の一般に使用される界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎまたはＳｐａｎおよび／または他の類似の乳化剤または生物学的利用能増強剤（これらは、薬学的に許容可能な固体、液体、または他の剤形の製造において一般に使用される）なども配合の目的のために使用され得る。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、または前述のものの薬学的に許容可能な塩）を含む組成物は、１つ以上の他の治療剤（例えば、化学療法剤、例えば、パクリタキセル、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、オクトレオチド）を含むこともできる。本発明の組成物がＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤と１つ以上の他の治療剤との組み合わせを含む場合、該薬剤は、単独療法レジメンにおいて通常投与される用量の約１〜１００％、そしてより好ましくは約５％〜約９５％の用量レベルで存在すべきである。追加の薬剤（複数の場合もある）は、複数回投与レジメンの一部として、ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤とは別々に投与され得る。代替的に、追加の薬剤（複数の場合もある）は、単一の組成物中のＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤と一緒に混合される、単一の剤形の一部であり得る。
【００９９】
本明細書中に記載の組成物は、例えば、注射により、静脈内、動脈内、眼内、硝子体内、皮下、経口的、口腔、経鼻的、経粘膜的、局所的に、眼科用剤中に、または吸入によって、約０．５  ｍｇ／ｋｇ〜約１００  ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で、または、代替的に、約１  ｍｇ／用量〜約１０００  ｍｇ／用量の範囲の用量で、４〜１２０時間ごとに、または特定の薬物の要件に従って、投与され得る。典型的には、組成物は、１日当たり約１〜約６回、または、代替的に、連続注入として投与されるであろう。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与様式に応じて変化するであろう。典型的な調製物は、約５％〜約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有するであろう。代替的に、調製物は、約２０％〜約８０％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有することができる。
【０１００】
上記の用量よりも低いまたは高い用量が必要とされてもよい。任意の特定の患者に対する特定の投与レジメンおよび治療レジメンは、使用される特定の薬剤の活性、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の組合せ、疾患の重症度および経過、病状もしくは症状、疾患、病状もしくは症状に対する患者の素因、ならびに治療する医師の判断を含む、様々な要因に依存するであろう。
【０１０１】
対象の病状が改善されると、本発明の薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、または前述のものの薬学的に許容可能な塩）、組成物または組み合わせの維持用量が、必要に応じて投与され得る。その後、投与の用量もしくは頻度、またはその両方は、症状が所望のレベルに緩和された場合に改善された状態が保持されるレベルまで、症状の関数として、低減され得る。しかしながら、対象は、疾患症状の再発に際し、長期間にわたる間欠的な治療を必要とし得る。
【０１０２】
本明細書中に記載の薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、または前述のものの薬学的に許容可能な塩）および追加の薬剤（複数の場合もある）を含むキットも本明細書中で提供される。一実施形態では、キットは、本明細書中に記載の疾患、障害もしくは病状（例えば、癌、２型糖尿病）を治療するための有効量の本明細書中に記載の薬剤、および該疾患、障害もしくは病状を治療するための有効量の追加の薬剤（複数の場合もある）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書中に記載の疾患、障害もしくは病状（例えば、癌、２型糖尿病）を治療するために、薬剤および追加の薬剤（複数の場合もある）を対象に投与するための説明書をさらに含む。
【０１０３】
方法
アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨｓ）は、内因性および外因性の両方で生成されたアルデヒドのそれぞれのカルボン酸への酸化を不可逆的に触媒することによりアルデヒドの代謝において役割を果たす、ＮＡＤ（Ｐ＋）依存性酵素のスーパーファミリーに属する。ＡＬＤＨは、レチノイン酸（ＲＡ）の生合成およびアルコール代謝などを含む広範囲の生物学的活性を有する。
【０１０４】
酵素のＡＬＤＨファミリーは、多様な機能を有する１９のメンバーを含む。このファミリー内の酵素は、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＰ＋をＮＡＤＨ／ＮＡＤＰＨに還元しながら、対応するカルボン酸へのアルデヒドの酸化を不可逆的に触媒する。これらの酵素は、いくつかの細胞区画にみられるが、ほとんどは細胞質ゾルまたはミトコンドリアに局在している。いくつかのＡＬＤＨ酵素は、肝臓における発現を介して全体的な代謝に関与し、そこでそれらは、アルコールデヒドロゲナーゼから形成されるアセチルアルデヒドを解毒し、レチナール立体異性体からビタミンＡを生合成し、または他の反応性アルデヒドを解毒するように機能する。対照的に、ほとんどのＡＬＤＨ酵素は、細胞特異的または疾患特異的に発現し、そして細胞生化学を調節するが、作用メカニズムは不明であることが多い。
【０１０５】
アルデヒドデヒドロゲナーゼアイソフォーム１ａ３（ＡＬＤＨ１ａ３）は、ＲＡの生合成およびＲＡシグナル伝達の制御において極めて重要であり、そして細胞特異的かつ疾患特異的である、ＡＬＤＨ１ａサブファミリーのアイソフォーム／アイソザイムである。ＡＬＤＨ１ａ３は、２０００年以前はＡＬＤＨ６として、そして２０００年〜２００７年はＲａｌｄｈ３として知られていた。正常な状態では、ＡＬＤＨ１ａ３は、胚発生の間にのみ必要であり、そして健康な成体マウスには不要である。通常の生理学におけるその小さな役割とは対照的に、ＡＬＤＨ１ａ３は、最近、ほとんどの癌型にわたるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）反応性の主要な決定因子であることが示されている。ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性が腫瘍の進行に影響するかどうか／どのように影響するかについては過度に無知であるにもかかわらず、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性は、長い間、侵襲性（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）癌細胞をバルク腫瘍と区別するマーカーとして使用されてきた。
【０１０６】
ＡＬＤＨ１ａ３によってドライブされるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性は、癌侵襲性の機能的ドライバーであり、そして腫瘍進行、転移、および化学療法に対する抵抗性に極めて重要であることが発見されている。したがって、ヒトＡＬＤＨ１ａ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢアクセッション番号：Ｐ４７８９５）は、乳癌を含む、癌における化学療法抵抗性および転移性表現型の機能的ドライバーである。したがって、ＡＬＤＨ１ａ３は、複数の病態における治療標的となる可能性を示し、そしてＡＬＤＨ１ａ３を標的とすることで、腫瘍が従来の治療法に抵抗性を示すステージ３／４の患者の治療における現在の障壁を克服し得る。
【０１０７】
したがって、有効量のＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物）を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における癌（例えば、転移性癌、化学療法抵抗性癌）の治療方法が本明細書中で提供される。したがって、いくつかの実施形態では、それを必要とする対象における癌（例えば、転移性癌、化学療法抵抗性癌）の治療方法であって、有効量の構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物を対象に投与することを含む方法が提供される。さらなる実施形態では、有効量の表１の化合物（例えば、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５Ｃ、ＭＢＥ１．５Ｄ）、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または表１の化合物（例えば、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５Ｃ、ＭＢＥ１．５Ｄ）もしくはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における癌（例えば、転移性癌、化学療法抵抗性癌）の治療方法が提供される。
【０１０８】
有効量のＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物）を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法も本明細書中で提供される。したがって、いくつかの実施形態では、有効量の構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物を、対象に投与することを含む、それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法が提供される。さらなる実施形態では、有効量の表１の化合物（例えば、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５Ｃ、ＭＢＥ１．５Ｄ）、もしくはその薬学的に許容可能な塩、または表１の化合物（例えば、ＭＢＥ１、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．５Ａ、ＭＢＥ１．５Ｂ、ＭＢＥ１．５Ｃ、ＭＢＥ１．５Ｄ）もしくはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における２型糖尿病の治療方法が提供される。
【０１０９】
本明細書中で使用される場合、用語「治療（処理）する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（処理）すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「治療（処理）（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、医学的状態（例えば、癌に関連する病状）が臨床的に許容される基準（例えば、対象における癌転移数の減少）に従って改善される程度まで医学的状態を軽減することを意味する。
【０１１０】
一実施形態では、対象（例えば、患者）は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他のウシ属、ヒツジ属（ｏｖｉｎｅ）、ウマ科、イヌ科、ネコ科、またはげっ歯類の生物）である。特定の実施態様では、対象は、ヒトである。「それを必要とする対象」とは、本明細書中に記載される疾患もしくは病状（例えば、癌、転移性癌）を有するか、または発症するリスクがある対象をいう。熟練した医療専門家（例えば、医師）は、対象が本明細書中に記載される疾患もしくは病状（例えば、癌）を有するか、または発症するリスクがあるかを容易に決定することができる。
【０１１１】
一実施形態では、それを必要とする対象は、癌（例えば、転移性癌、化学療法抵抗性癌）を有する。癌は、固形腫瘍、白血病、リンパ腫または骨髄腫であり得る。特定の実施形態では、それを必要とする対象は、乳癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、骨癌、血液癌、脳癌、または肝臓癌を有する。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）、腎明細胞癌、胃癌、膀胱癌、卵巣癌、扁平上皮肺癌、結腸直腸癌または神経膠腫（例えば、低悪性度神経膠腫）である。
【０１１２】
癌には以下のものが含まれる：急性リンパ芽球性白血病、成人期；急性リンパ芽球性白血病、小児期；急性骨髄性白血病、成人期；副腎皮質癌；副腎皮質癌、小児期；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍；肛門癌；星状細胞腫、小児期小脳（Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  Ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ）；星状細胞腫、小児期大脳（Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ）；胆管癌、肝外；膀胱癌；膀胱癌、小児期；骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳幹神経膠腫、小児期；脳腫瘍、成人期；脳腫瘍、脳幹神経膠腫、小児期；脳腫瘍、小脳星状細胞腫、小児期；脳腫瘍、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、小児期；脳腫瘍、上衣腫、小児期；脳腫瘍、髄芽腫、小児期；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（Ｓｕｐｒａｔｅｎｔｏｒｉａｌ  Ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ  Ｔｕｍｏｒｓ）、小児期；脳腫瘍、視覚路グリオーマおよび視床下部神経膠腫、小児期；脳腫瘍、小児期（その他）；乳癌；乳癌および妊娠；乳癌、小児期；乳癌、男性；気管支腺腫／カルチノイド、小児期；カルチノイド腫瘍、小児期；カルチノイド腫瘍、胃腸部；癌腫、副腎皮質；癌腫、膵島細胞；原発不明癌、中枢神経系リンパ腫、原発性；小脳星状細胞腫、小児期；大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、小児期；子宮頸癌；小児癌；慢性リンパ性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性疾患；腱鞘の明細胞肉腫；結腸癌；結腸直腸癌、小児期；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；子宮内膜癌；上衣腫、小児期；上皮癌、卵巣；食道癌；食道癌、小児期；ユーイング腫瘍；頭蓋外胚細胞腫瘍、小児期；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管癌；眼癌、眼球内黒色腫；眼癌、網膜芽細胞腫；胆のう癌；胃（胃）癌（Ｇａｓｔｒｉｃ  （Ｓｔｏｍａｃｈ）  Ｃａｎｃｅｒ）；胃（胃）癌、小児期；消化管カルチノイド；胚細胞腫瘍、頭蓋外、小児期；胚細胞腫瘍、性腺外；胚細胞腫瘍、卵巣；妊娠性絨毛腫瘍；神経膠腫、小児期脳幹；神経膠腫、小児期視覚路および視床下部性；有毛細胞白血病；頭頸部癌；肝細胞（肝）癌、成人期（原発性）；肝細胞（肝）癌、小児期（原発性）；ホジキンリンパ腫、成人期；ホジキンリンパ腫、小児期；妊娠中のホジキンリンパ腫；下咽頭癌；視床下部神経膠腫および視覚路グリオーマ、小児期；眼球内黒色腫；膵島細胞癌（膵臓内分泌部）；カポジ肉腫；腎癌；喉頭癌；喉頭癌、小児期；白血病、急性リンパ芽球性、成人期；白血病、急性リンパ芽球性、小児期；白血病、急性骨髄性、成人期；白血病、急性骨髄性、小児期；白血病、慢性リンパ性；白血病、慢性骨髄性；白血病、有毛細胞；口唇および口腔癌；肝癌、成人期（原発性）；肝癌、小児期（原発性）；肺癌、非小細胞；肺癌、小細胞；リンパ芽球性白血病、成人期急性；リンパ芽球性白血病、小児期急性；リンパ芽球性白血病、慢性；リンパ腫、ＡＩＤＳ関連；リンパ腫、中枢神経系（原発性）；リンパ腫、皮膚Ｔ細胞；リンパ腫、ホジキン、成人期；リンパ腫、ホジキン、小児期；リンパ腫、妊娠中のホジキン；リンパ腫、非ホジキン、成人期；リンパ腫、非ホジキン、小児期；リンパ腫、妊娠中の非ホジキン；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム型；男性乳癌；悪性中皮腫、成人期；悪性中皮腫、小児期；悪���胸腺腫；マントル細胞リンパ腫；髄芽腫、小児期；黒色腫；黒色腫、眼球内；メルケル細胞癌；中皮腫、悪性；潜在性原発転移性扁平上皮頸部癌；多発性内分泌腫瘍症候群、小児期；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉症；骨髄異形成症候群；骨髄性白血病、慢性；骨髄性白血病、小児期急性；骨髄腫、多発性；骨髄増殖性疾患、慢性；鼻腔癌および副鼻腔癌；上咽頭癌；上咽頭癌、小児期；神経芽細胞腫；非ホジキンリンパ腫、成人期；非ホジキンリンパ腫、小児期；妊娠中の非ホジキンリンパ腫；非小細胞肺癌；口腔癌、小児期；口腔および口唇癌；中咽頭癌；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣癌、小児期；卵巣上皮癌；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵癌；膵癌、小児期；膵癌、膵島細胞；副鼻腔癌および鼻腔癌；副甲状腺癌；陰茎癌；褐色細胞腫；松果体腫瘍およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児期；下垂体腫瘍；形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；妊娠および乳癌；妊娠およびホジキンリンパ腫；妊娠および非ホジキンリンパ腫；原発性中枢神経系リンパ腫；原発性肝癌、成人期；原発性肝癌、小児期；前立腺癌；直腸癌；腎細胞（腎臓）癌；腎細胞癌、小児期；腎盂および尿管、移行上皮癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児期；唾液腺癌；唾液腺癌、小児期；肉腫、ユーイング腫瘍；肉腫、カポジ；肉腫（骨肉腫）／骨の悪性線維性組織球腫；肉腫、横紋筋肉腫、小児期；肉腫、軟部組織、成人期；肉腫、軟部組織、小児期；セザリー症候群；皮膚癌；皮膚癌、小児期；皮膚癌（黒色腫）；皮膚癌、メルケル細胞；小細胞肺癌；小腸癌；軟部肉腫、成人期；軟部肉腫、小児期；潜在性原発扁平上皮頸部癌、転移性；胃（胃）癌；胃（胃）癌、小児期；テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児期；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚性；精巣癌；胸腺腫、小児期；胸腺腫、悪性；甲状腺癌；甲状腺癌、小児期；腎盂および尿管の移行上皮癌；トロホブラスト腫瘍、妊娠性；原発不明部位、癌の、小児期；小児期の稀な癌；尿管および腎盂、移行上皮癌；尿道癌；子宮肉腫；膣癌；視覚路グリオーマおよび視床下部神経膠腫、小児期；外陰癌；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍。
【０１１３】
上記の癌の転移はまた、本明細書中に記載される方法に従って治療され得る。したがって、いくつかの実施形態では、癌は転移性癌である。
【０１１４】
「転移性癌」とは、本明細書で使用される場合、その起源の原発部位または最初に形成された箇所から対象の身体の他の領域に広がった癌をいう。転移性癌の例には、転移性乳癌、転移性結腸癌、転移性肺癌、転移性膵臓癌、転移性前立腺癌、転移性骨癌、転移性血液癌、転移性脳癌、および転移性肝臓癌が含まれる。一実施形態では、対象は、乳癌の骨転移（例えば、自然骨転移）を有する。別の実施形態では、対象は、乳癌の肺転移を有する。さらに別の実施形態では、対象は、骨転移を有する。
【０１１５】
特定の実施形態では、それを必要とする対象は、乳癌（例えば、転移性乳癌）を有する。本明細書中に記載される方法を使用する治療に特に適切である乳癌サブタイプには、基底様乳癌およびＨＥＲ２陽性乳癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１６】
「抵抗性癌」とは、本明細書で使用される場合、治療に反応しない癌である。「抵抗性癌」には、治療開始時に治療に反応しない癌、および治療中に治療に反応しなくなる癌が含まれる。一実施形態では、癌は抵抗性癌である。
【０１１７】
一実施形態では、それを必要とする対象は、１つ以上の化学療法剤による治療に抵抗性がある癌、または化学療法抵抗性癌を有する。
「化学療法抵抗性癌」とは、本明細書中で使用される場合、１つ以上の化学療法剤による治療に反応しない癌をいう。「化学療法抵抗性癌」には、治療の開始時に１つ以上の治療剤による治療に反応しない癌、および治療の間に１つ以上の治療剤による治療に反応しなくなる癌が含まれる。本明細書中に記載される方法を使用する治療に特に適切である化学療法抵抗性癌には、パクリタキセルおよび／またはドキソルビシンによる治療に抵抗性がある癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１８】
一実施形態では、それを必要とする対象は、侵襲性癌を有する。本明細書中で使用される場合、「侵襲性癌」とは、急速に進行する（例えば、形成する、増殖する、および／または転移する）癌、または同じ型の癌のための典型的な癌治療よりも重度のまたは強力な治療を必要とする癌をいう。侵襲性癌には、従来の治療、例えば、化学療法（タキサン、アントラサイクリン、アルキル化剤などを含む）、放射線療法（例えば、陽子線照射）または標的生物学的治療（例えば、ハーセプチン、キイトルーダなど）に反応しない、または任意の容認された治療法による治療中に進行する、または診断時に転移した（段階ＩＩＩ／ＩＶの癌）、肺、乳房、膵臓、腎臓、結腸、直腸、脳、肝臓、および前立腺または血液系の癌が含まれるが、これらに限定されない。具体例として、前立腺の侵襲性癌は、抗アンドロゲン療法または放射線に対する反応を失い、そしてしばしば骨に転移する一方、侵襲性黒色腫は、真皮を越えて拡がっている任意の腫瘍である。多形性膠芽腫の全ての診断は、侵襲性とみなされる。侵襲性癌は、しばしば遠隔部位に拡がり、そして標的治療の欠如ために重大な病的状態を引き起こす。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、進行した（例えば、段階ＩＩＩ／ＩＶ）癌を有する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、癌は、原発性癌（例えば、原発性固形腫瘍）である。本明細書中で使用される場合、「原発性癌」とは、対象の体内の癌（例えば、腫瘍）の起源の部位をいう。
【０１２１】
本明細書中で使用される場合、「有効量」とは、対象に投与される場合、投与の条件下で対象において所望の治療効果を達成するのに十分である薬剤の量（例えば、癌を有する対象（例えば、患者）における腫瘍形成、腫瘍増殖（例えば、増殖、サイズ）、腫瘍血管新生、腫瘍進行（例えば、浸潤、転移）および／または化学療法耐性を阻害する（例えば、減少させる（ｒｅｄｕｃｅ）、減少させる（ｄｅｃｒｅａｓｅ）、予防する）のに十分な量など）である。治療の有効性（例えば、腫瘍転移の低減および／または予防）は、当業者に公知の任意の好適な方法（例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕ免疫組織化学、イメージング（例えば、超音波、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、ＮＭＲ）、３Ｈ−チミジン取り込み）により決定され得る。
【０１２２】
投与される薬剤の有効量は、本明細書中で提供されるガイダンスおよび当該分野で公知の他の方法を使用して、通常の技術を有する臨床医により決定され得、そして例えば、選択される特定の薬剤、対象の年齢、感受性、薬物に対する耐性および全体的な健康状態を含むいくつかの因子に依存する。例えば、適切な用量は、治療当たり約０．００１  ｍｇ／ｋｇ〜約１００  ｍｇ／ｋｇ、約０．０１  ｍｇ／ｋｇ〜約１００  ｍｇ／ｋｇ、約０．０１  ｍｇ／ｋｇ〜約１０  ｍｇ／ｋｇ、約０．０１  ｍｇ／ｋｇ〜約１  ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。特定の薬剤、対象、および癌のための用量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。好ましくは、用量は、有害な副作用（例えば、免疫原性応答、悪心、めまい、異常亢進、過粘稠度症候群、うっ血性心不全、脳卒中、肺水腫）を引き起こさないか、または最小限に抑える。
【０１２３】
ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤は、例えば、所望の治療効果（例えば、癌転移の阻害）を達成するのに適した順序およびスケジュールで、単回用量または複数回用量で投与され得る。投与の適切な用量およびレジメンは、通常の技術を有する臨床医により決定され得る。
【０１２４】
ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤は、１つ以上の他の治療法または治療と組み合わせても投与され得る。１つ以上の他の治療法または治療（アジュバント、標的化、癌治療関連など）と組み合わせた薬剤の投与に関して、薬剤は、典型的には単回用量（例えば、注射、点滴、経口）として投与され、その後、所望または指示される場合、特定の間隔（例えば、１時間以上）で反復投与される。
【０１２５】
一実施形態では、薬剤は、メトロノミック投与レジメンで投与され得、それにより最大耐量と比較して、より低用量がより頻繁に投与される。多くの前臨床研究は、最大耐量（ＭＴＤ）カウンターパートと比較して、メトロノミックレジメンの優れた抗腫瘍活性、強力な抗血管新生作用、ならびに毒性および副作用（例えば、骨髄抑制）の減少を示している（Ｂｏｃｃｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６２：６９３８−６９４３，（２００２）；  Ｂｏｃｃｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｅｔ，  １００（２２）：  １２９１７−１２９２２，（２００３）；  ａｎｄ  Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，  ６３（１５）：４３４２−４３４６，  （２００３））。メトロノミック化学療法は、化学療法に伴ういくつかの欠点を克服するのに有効であると思われる。
【０１２６】
ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤は、一次治療として（例えば、治療法または治療レジメンにおける主要な治療剤として）；補助療法として（例えば、治療法または治療レジメンにおいて別の治療剤と一緒に使用される治療剤として、ここで治療剤の組合せが所望の治療を提供し；「ａｄｊｕｎｃｔ  ｔｈｅｒａｐｙ」（補助療法）は「ａｄｊｕｎｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ」（補助療法）とも呼ばれる）；補助療法との組合せで；アジュバント療法として（例えば、治療法または治療レジメンにおいて主要な治療剤が与えられた後に、それを必要とする対象に与えられる治療剤として）；またはアジュバント療法との組合せで、それを必要とする対象に投与され得る。アジュバント療法には、例えば、化学療法（例えば、パクリタキセル、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、マイトマイシン、５−フルオロウラシル、ソラフェニブ、オクトレオチド、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、シスプラチン、シメチジン、シクロホスファミド）、放射線療法（例えば、陽子線治療）、ホルモン療法（例えば、抗エストロゲン療法、アンドロゲン除去療法（ＡＤＴ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）アゴニスト、アロマターゼ阻害剤（ＡＩｓ、例えばアナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール）、エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン）、または生物学的療法が含まれる。疼痛（麻薬、鍼）、胃部不快感（制酸剤）、めまい（抗めまい薬療法（ａｎｔｉ−ｖｅｒｔｉｇｏ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ））、悪心（制吐薬療法）、感染（例えば、赤血球／白血球数を増加させるための薬物療法）などを管理する治療法を含む、疾患の影響および／または癌治療の副作用を軽減するために、多くの他の治療法は、癌治療レジーム中にも投与され得、これらの全ては当業者により容易に認識される。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、当該方法は、１つ以上の追加の治療法（例えば、化学療法、放射線および／または腫瘍（複数の場合もある）の外科的除去）と組み合わせて、有効量のＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤を投与することを含む。併用療法で投与される場合、薬剤は、他の治療法（例えば、パクリタキセルまたはドキソルビシンなどの化学療法剤の投与）の前、後、または同時に投与され得る。同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）（例えば、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ））同時投与される場合、薬剤および他の治療法は、別々の配合または同じ配合であり得る。代替的に、薬剤および他の治療法は、熟練した臨床医によって決定される（例えば、治療の薬学的効果の重複を可能にするのに十分な時間）適切な時間枠（例えば、約１．５〜約５時間などの癌治療セッション／間隔）内に、別々の組成物として、連続的に投与され得る。
【０１２８】
ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤は、薬剤および治療される特定の癌に応じて、例えば、経口、食事、局所、経皮、直腸、非経口（例えば、動脈内、静脈内、筋肉内、皮下注射、皮内注射）、静脈内点滴および吸入（例えば、気管支内、鼻腔内または経口吸入、鼻腔内点滴）投与経路を含む、様々な投与経路を介して投与され得る。投与は、示されるように、局所的または全身的であり得る。好ましい投与様式は、選択される特定の薬剤に依存して変化し得る。
【０１２９】
治療剤および治療レジメンの実際の用量は、例えば、癌の性質（原発性または転移性）、腫瘍の数およびサイズ、与えられている他の治療法、および対象の特徴を考慮して、医師によって決定され得る。
【０１３０】
癌細胞（例えば、転移性癌細胞、化学療法抵抗性癌細胞）の増殖の阻害方法も本明細書中で提供される。当該方法は、（例えば、有効量の）ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物）を細胞に投与することを含む。特定の実施形態において、癌細胞は、乳癌細胞（例えば、基底細胞様（ｂａｓａｌ−ｌｉｋｅ）乳癌細胞またはＨＥＲ−２陽性乳癌細胞）である。細胞は、培養細胞（例えば、株化細胞）または対象中の細胞であり得る。特定の実施形態では、細胞は、ヒト対象（例えば、癌を有するヒト対象）中に存在する。
【０１３１】
それを必要とする対象においてＡＬＤＨ１ａ３を阻害する方法も本明細書中で提供される。当該方法は、（例えば、有効量の）ＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物）を対象に投与することを含む。
【０１３２】
それを必要とする対象における、ＡＬＤＨ１ａ３により介在される疾患または障害（例えば、本明細書中に記載される癌型など）の治療方法も本明細書中で提供される。当該方法は、有効量のＡＬＤＨ１ａ３を阻害する薬剤（例えば、構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物、もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩、または構造式Ｉ〜ＶＩＩのいずれかの化合物もしくは前述のものの薬学的に許容可能な塩を含む組成物）を対象に投与することを含む。ＡＬＤＨ１ａ３は、２型糖尿病にも関与している。したがって、２型糖尿病は、ＡＬＤＨ１ａ３を介在した疾患または障害の別の例である。
【実施例】
【０１３３】
Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミドの合成
【化１０】
2021532158.tif 000012
【０１３４】
３−クロロ−Ｎ−（３−フルオロフェニル）プロペンアミド：２−Ｌ丸底フラスコに、３−フルオロアニリン（４８．０  ｇ、０．４３２モル、１．００当量）およびジクロロメタン（４４０  ｍＬ）の混合物が入れられた。ピリジン（８５．８  ｍＬ、１．０８モル、２．５０当量）および３−クロロプロピオニルクロリド（４９．５  ｍＬ、０．５１８モル、１．２０当量）が順に滴下された。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで室温で３時間撹拌された。次に、反応混合物は、水（４４０  ｍＬ）で希釈され、そして酢酸エチル（２．２  Ｌ  ×  ３）で抽出された。合わせた有機層は、ブライン（１．０  Ｌ  ×  ２）で洗浄され、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、そして真空中で濃縮されて、淡褐色固体として６４．０  ｇ（７５％）の３−クロロ−Ｎ−（３−フルオロフェニル）プロパンアミドが得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）  ［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：  ２０２．１。
【０１３５】
７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン：１−Ｌ丸底フラスコに、３−クロロ−Ｎ−（３−フルオロフェニル）プロパンアミド（６４．０  ｇ、０．３１７モル、１．００当量）と三塩化アルミニウム（１４８  ｇ、１．１１モル、３．５０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで１２０℃〜１２５℃で２時間撹拌された。反応混合物は、氷水（１．２  Ｌ）に注がれ、そして濾過された。濾過ケーキは、回収され、そして水（６０  ｍＬ×３）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６０  ｍＬ×３）で洗浄された。これにより、４７．８  ｇ（９１％）の７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンが淡褐色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：  １６６．１。
【０１３６】
７−フルオロ−６−ニトロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（ｌＨ）−オン：２−Ｌ丸底フラスコに、７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（ｌＨ）−オン（４７．８  ｇ、０．２８９モル、１．００当量）および濃硫酸（２９０  ｍｌ）の混合物が入れられた。硝酸（２０．８  ｍＬ、０．３０４モル、１．０５当量）が滴下された。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで０℃で２時間撹拌された。反応混合物は、氷／水（６００  ｍＬ）に注がれ、そして濾過された。フィルターが回収され、そして水（６０  ｍＬ  ×  ３）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６０  ｍＬ  ×  ３）で洗浄された。これにより、３７．０  ｇ（粗製）の７−フルオロ−６−ニトロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンが淡褐色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：  ２１１．１。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ポンド３／４、３００ＭＨｚ）は、７−フルオロ−６−ニトロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンの構造を有する化合物と一致した。
【０１３７】
６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン：３−Ｌ丸底フラスコに、７−フルオロ−６−ニトロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（３７．０  （粗製）、０．１７６モル、１．００当量）、メタノール（１８００  ｍｌ）およびＰｄ／Ｃ（３．７０  ｇ）の混合物が入れられた。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで水素雰囲気下で室温で４時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液は濃縮された。残渣は、カラムクロマトグラフィーシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ＝  ２００／１）により精製された。これにより、１２．１  ｇ（２工程２４％）の６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンが橙色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｒ．  ２１１．１。
【０１３８】
Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミド
（ＭＢＥ１．２）：４０−ｍＬバイアルに、６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（ｌＨ）−オン（１８０  ｍｇ、１．００ミリモル、１．００当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５  ｍＬ）、イソニコチン酸（１３５  ｍｇ、１．１０ミリモル、１．１０当量）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（３８７  ｍｇ、３．００ミリモル、３．００当量）および１−（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（５７０  ｍｇ、１．５０ミリモル、１．５０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、室温で２時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液はｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製された。これにより、１７５  ｍｇ（６１％）のＮ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミドが灰白色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ  ２８６．０。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｒ／＾、３００  ＭＨｚ）は、Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミドの構造を有する化合物と一致した。
【０１３９】
６−（（３−エチルピリジン−４−イル）メチルアミノ）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（ｌＨ）−オン（ＭＢＥ  １．３）の合成
【化１１】
2021532158.tif 000013
【０１４０】
６−アミノ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン：１００−ｍＬ丸底フラスコに、６−ニトロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（１．９２  ｇ、１０．０ミリモル、１．００当量）、メタノール（５０  ｍＬ）およびＰｄ／Ｃ（２００  ｍｇ）の混合物が入れられた。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで水素雰囲気下で室温で４時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液は濃縮された。これにより、１．６０  ｇ（９９％）の６−アミノ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンが淡緑色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：１６３．１。
【０１４１】
３−エチルイソニコチン酸メチル：１−Ｌ三つ口丸底フラスコに、３−ブロモイソニコチン酸メチル（２１．６  ｇ、１００ミリモル、１．００当量）、ジオキサン（３００  ｍＬ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３．６６  ｇ、５．００ミリモル、０．０５当量）の混合物が入れられた。ジエチル亜鉛のトルエン溶液（１００  ｍＬ、１００ミリモル、１．００当量）が室温で滴下された。反応混合物は、窒素雰囲気下で７０℃で４時間撹拌された。反応混合物は、水（１００  ｍＬ）に注がれ、酢酸エチル（２００  ｍＬ  ×  ３）で抽出された。有機層は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、濾過され、そして真空下で濃縮された。残渣は、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０／１）により溶離されるシリカゲルフラッシュにより精製されて、１２．０  ｇ（７３％）の３−エチルイソニコチン酸メチルが淡黄色液体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：１６６．０。
【０１４２】
（３−エチルピリジン−４−イル）メタノール：１００−ｍＬ丸底フラスコに、３−エチルイソニコチン酸メチル（３．７５  ｇ、２２．７ミリモル、１．００当量）、メタノール（５０  ｍＬ）および塩化カルシウム（２．５２  ｇ、２２．７ミリモル、１．００当量）の混合物が入れられた。水素化ホウ素ナトリウム（１．７２  ｇ、４５．５モル、２．００当量）は、０℃で少しずつ添加された。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで室温で２時間撹拌された。反応混合物は、水（５０  ｍＬ）に注がれ、酢酸エチル（１００  ｍＬ×３）で抽出された。有機層は、無水硫酸ナトリウムで乾燥され、濾過され、そして濃縮された。これにより、１．８０  ｇの（３−エチルピリジン−４−イル）メタノールが白色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ）［Ｍ＋１］＋ｍ／ｚ：１３８．１。
【０１４３】
３−エチルイソニコチンアルデヒド：１００−ｍＬ丸底フラスコに、（３−エチルピリジン−４−イル）メタノール（８２３  ｍｇ、６．００モル、１．００当量）、ジクロロメタン（２５  ｍｌ）およびＤＭＰ（５１０  ｍｇ、７．２０モル、１．２０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、ＴＬＣ分析によって示されるように、出発物質が消失するまで室温で４時間撹拌された。反応混合物は、ジクロロメタン（２５  ｍｌ）で希釈され、そして重炭酸ナトリウム飽和溶液（２５  ｍｌ×３）で洗浄された。有機層は、含水硫酸ナトリウムにより乾燥され、濾過され、そして濃縮された。残渣は、カラムクロマトグラフィーシリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝３／１）により精製された。これにより、３５０  ｍｇ（４３％）の３−エチルイソニコチンアルデヒドが橙色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：１３６．１。
【０１４４】
６−（（３−エチルピリジン−４−イル）メチルアミノ）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン：４０−ｍＬバイアルに、６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（２５２  ｍｇ、１．４０ミリモル、１．００当量）、メタノール（５  ｍｌ）、３−エチルイソニコチンアルデヒド（１８９  ｍｇ、１．００ミリモル、１．００当量）、塩化カルシウム（７７６  ｍｇ、６．９９ミリモル、５．００当量）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３２  ｍｇ、１．５０ミリモル、２．１０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、７０℃で２時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液はｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製された。これにより、６９．９  ｍｇ（１７％）の６−（（３−エチルピリジン−４−イル）メチルアミノ）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンが灰白色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：  ３００．１。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ‐ｒ３／４、３００  ＭＨｚ）は、６‐（（３‐エチルピリジン‐４‐イル）メチルアミノ）‐７‐フルオロ‐３，４‐ジヒドロキノリン‐２（１Ｈ）‐オンの構造を有する化合物と一致した。
【０１４５】
２−エチル−Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）ベンズアミド（ＭＢＥ１．５）の合成
【化１２】
2021532158.tif 000014
【０１４６】
２−エチル−Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）ベンズアミド：４０−ｍＬバイアルに、６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（１８０  ｍｇ、１．００ミリモル、１．００当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５  ｍＬ）、２−エチル安息香酸（１３５  ｍｇ、１．１０ミリモル、１．１０当量）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（３８７  ｍｇ、３．００ミリモル、３．００当量）および１−（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（５７０  ｍｇ、１．５０ミリモル、１．５０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、室温で２時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液はｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製された。これにより、１８１  ｍｇ（５８％）の２−エチル−Ｎ−（７−フルオロ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）ベンズアミドが灰白色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ  （ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｒ．  ３１３．１。
１  Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ポンド３／４、３００  ＭＨｚ）は、２‐エチル‐Ｎ‐（７‐フルオロ‐２‐オキソ‐１，２，３，４‐テトラヒドロキノリン‐６‐イル）ベンズアミドの構造を有する化合物と一致した。
【０１４７】
３‐エチル‐Ｎ‐（２‐オキソ‐１，２，３，４‐テトラヒドロキノリン‐６‐イル）イソニコチンアミド（ＭＢＥ１．６）の合成
【化１３】
2021532158.tif 000015
【０１４８】
３−イソニコチン酸エチル：１００−ｍＬ丸底フラスコに、３−エチルイソニコチン酸メチル（３．３０  ｇ、２０．０ミリモル、１．００当量）、メタノール（２０  ｍＬ）、水（４  ｍＬ）および水酸化ナトリウム（１．６０  ｇ、４０．０ミリモル、２．００当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、室温で６時間撹拌された。ｐＨは、２  Ｍ塩酸溶液で約４のｐＨに調整された。混合物は濾過され、そして濾過ケーキが回収された。これにより、２．６０  ｇ（８６％）の３−エチルイソニコチン酸が白色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：１５２．０。
【０１４９】
３−エチル−Ｎ−（２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミド：４０−ｍＬバイアルに、６−アミノ−７−フルオロ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（１８０  ｍｇ、１．００ミリモル、１．００当量）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５  ｍＬ）、３−イソニコチン酸エチル（１６６  ｍｇ、１．１０ミリモル、１．１０当量）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（３８７  ｍｇ、３．００ミリモル、３．００当量）および１−（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミニオ）メチル）−１Ｈ−［ｌ，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（５７０  ｍｇ、１．５０ミリモル、１．５０当量）の混合物が入れられた。反応混合物は、室温で２時間撹拌された。反応混合物は濾過され、そして濾液はｐｒｅｐ−ＨＰＬＣにより精製された。これにより、２６０  ｍｇ（８８％）の３−エチル−Ｎ−（２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミドが得られた。ＬＣ−ＭＳ（ＥＳ）［Ｍ＋１］＋  ｍ／ｚ：２９６．１。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｉ３／４、３００  ＭＨｚ）は、３−エチル−Ｎ−（２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル）イソニコチンアミドの構造を有する化合物と一致した。
【０１５０】
細胞株と細胞培養
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＭＣＦ７、２９３Ｔ、Ｂ１６Ｆ１０、ＨＣＴ１１６、ＨｅｐＧ２、ＬＮ２２９、ＨＴＢ１４０およびＳＷ４８０細胞は、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中で培養され、ＤＥＴ１４５細胞およびその誘導体、ＰＣ３、ＡｓＰＣ−１、ＮＣＩ−Ｈ３５８は、ＲＰＭＩ−１６４０＋１０％ＦＢＳ中で培養され、そしてＳＵＭ１５９細胞およびその誘導体は、１０％ＦＢＳ、１０  ｐｇ／ｍＬインスリンおよび２０  ｎｇ／ｍＬ  ＥＧＦが補充されたＦ１２培地中で培養された。細胞株は、イメージングおよびフローサイトメトリー実験を容易にするため、ＧＦＰ／ホタルルシフェラーゼのバイシストロニック発現を有するレトロウイルスベクターで標識された。全ての細胞株は、月１回のＰＣＲ解析によりマイコプラズマ汚染が陰性であることが確認された。ここで使用される細胞株は、一般的に誤認細胞株（ＩＣＬＡＣ）のデータベースには現れない。全ての細胞株は、ＳＴＲ分析で検証され、そしてＮＣＢＩリポジトリデータと比較された。
【０１５１】
クローニング、ウイルス産生、および形質導入
Ａｌｄｈ１ａ１、Ａｌｄｈ１ａ２、Ａｌｄｈ１ａ３およびＡｌｄｈ３ａ１のコード配列は、プールされたヒト参照ＲＮＡ試料から作製されたｃＤＮＡからクローニングされた。ＡｇｅＩおよびＸｈｏＩ制限酵素部位に隣接するクローン化配列は、ｐＬｅｘレンチウイルスプラスミドに挿入された。クローンは配列決定され、そしてＮＣＢＩ発現配列タグ（ＥＳＴｓ）と正確性について比較された。各酵素のウイルス産生は、ＰｓＰａｘ２およびＶＳＶＧパッケージングベクターと共にＰＥＩを用いて２９３Ｔパッケージング細胞株にトランスフェクションすることによって行われた。ウイルスは回収され、そして０．４５  μｍで濾過され、次いで細胞はポリブレン（８  ｐｇ／ｍＬ）を用いて１２時間形質導入され、続いて実験期間中に１  ｐｇ／ｍＬのピューロマイシンで培養された。すべてのウイルス形質導入および選抜は、細胞集団全体ベースで実施された。
【０１５２】
発生および成体の生理学におけるＡＬＤＨ１ａ３；作用機序
ＡＬＤＨファミリー内の特定の酵素は、十分に特徴付けられた基質選択性、調節、および機能を有するが、このファミリーのほとんどのメンバーは、十分に研究されていないか、または主要な作用機序が理解されていない。例えば、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸（１０−ｆｏｒｍｙｌ−ＴＨＦ）を酸化することによって、葉酸塩の代謝におけるＡＬＤＨ１Ｌ１およびＡＬＤＨ１Ｌ２がどのように機能するかが示されている。
十分に特徴付けられたＡｌｄｈ酵素の別の主要な例はＡＬＤＨ３ａ１であり、これは可溶性角膜タンパク質の５０％を構成し、そして４−ヒドロキシノネナールを酸化することによって網膜および角膜の紫外線誘発酸化的損傷から保護するように機能する。おそらく最も研究されているＡＬＤＨ酵素は、肝臓ミトコンドリアにおけるアセチルアルデヒドの酢酸への酸化の主要な触媒であるＡＬＤＨ２である。ＡＬＤＨ２は、物質乱用を防ぐためにアルコール中毒者に行われる治療法であるＡＮＴＡＢＵＳＥ（登録商標）（ジスルフィラム）によって阻害される。一方、ＡＬＤＨ１ａサブファミリーは、発生生物学および様々な病理学にわたって広範な意義を示しているが、その作用機序および主要な調節因子は未だ解明されていない。
【０１５３】
ＡＬＤＨ１ａサブファミリーは、ＡＬＤＨファミリーの中で最も生物学的に重要なグループであり、そして発生生物学に対するその重要性、および特に癌における幹細胞を同定するためのＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイ（幹細胞技術）の注目に値する能力を考慮して、最近、かなりの研究の焦点となっている。本明細書中に記載されるように、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイは、主にＡＬＤＨ１ａ３からの活性を測定する。
【０１５４】
ＡＬＤＨ１ａ３の全体のノックアウトは、鼻閉欠損による出生後のマウス死亡をもたらす。重要なことに、この表現型は、妊娠の短い期間（ｗｉｎｄｏｗ）にオールトランスレチノイン酸を補充することによってレスキューされ得、正常な成体をもたらし得る。ヒトでは、ＡＬＤＨ１ａ３におけるホモ接合型変異は小眼症と関連するが、この表現型は完全な浸透性ではなく、そしてさらなる病理学については言及されていない。ＡＬＤＨ１ａ３が発生的に制限されているという考えをさらに支持する最近の研究は、ＡＬＤＨ１ａ３が特定の発生組織中で特異的に抑制されてビタミンＡシグナル伝達を妨げることを示している。追加の解析は、ＡＬＤＨ１ａ３が発生中の卵巣には不要であり、そして成体の前立腺および唾液腺においてのみ発現されることを示している。結腸、肝臓、肺、膀胱、前立腺および卵巣のうち、卵巣のみが有意なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性集団を有し、そしてこの小集団はＡＬＤＨ１ａ３阻害剤によって部分的にのみ阻害される。
【０１５５】
代謝性疾患において、ＡＬＤＨ１ａ３は不全膵島細胞のマーカーである。さらなる研究は、ＡＬＤＨ１ａ３発現が膵島細胞クローンによるインシュリン分泌を直接低下させる一方、グルカゴン分泌を増加させることを示す。このことは、ＡＬＤＨ１ａ３が２型糖尿病の病状をドライブすることもできることを示唆する。
【０１５６】
総合すると、これらの結果は、ＡＬＤＨ１ａ３が有意なオンターゲット毒性なく潜在的に除去され得ることを示唆する。データは、ＡＬＤＨ１ａ３が成体哺乳類には不要であることを示す。妊娠中のＡＬＤＨ１ａ３の阻害は、禁忌である可能性がある。
【０１５７】
公表された研究は、ＡＬＤＨ１ａ３のがん促進作用について主に２つの機序を主張している。これらは、活性酸素種の解毒またはレチナールの生理活性レチノイン酸への酸化の間で分けられる。その作用機序と比較したＡＬＤＨ１ａ３発現の機能的帰結を詳述する論文の数の間の不一致には、複数の理由が存在する。第一に、活性酸素種は一過性であり、そして検出が困難である。現在の方法は、ＤＣＦＤＡおよびＤＨＥなどの蛍光レポーターを使用し、これらはいずれも非感受性である。さらに、インビトロ条件における酸化ストレスは、インビボ条件を反映していない。パクリタキセルを用いてインビトロで酸化ストレスを誘導し、そしてＤＣＦＤＡを介して検出する試みがなされてきたが、このアッセイの検出範囲は、データ内に固有の偏差よりも小さい。しかし、追加の文献の証拠は、ＲＯＳ関連の機序を支持する：ＡＬＤＨ１ａ３は、雄馬の精子試料中の４−ＨＮＥを解毒し、それが運動性の改善をもたらすことが見出された。ＡＬＤＨ１ａ３は、頭頚部扁平上皮癌（ＳＣＣ）において放射線療法によっても誘導され、細胞傷害に反応する可能性を示している。
【０１５８】
興味深いことに、黒色腫における注目を集める研究は、酸化ストレスが転移性播種の主要な決定因子であることを実証している。この研究では、酸化ストレスは原発腫瘍には存在しないが、劇的に誘導され、そして転移細胞の適応度に影響することが示された。全身抗酸化剤送達は、その後通常非転移性細胞における肺転移を促進することができた。ＡＬＤＨ１ａ３発現の操作は、化学療法などの酸化ストレッサーで攻撃されるまでは原発腫瘍増殖に強く影響しない。一方、ＡＬＤＨ１ａ３阻害の最大の影響は、高レベルの酸化ストレスを有する部位である肺転移または骨転移に及ぼすことが観察されている（図５Ａ〜６Ｂ）。
【０１５９】
ＡＬＤＨ１ａ３に依存するレチノイン酸（ＲＡ）シグナル伝達の研究は、組織培養条件におけるレチナールによる外因性の補給を必要とし、そして腫瘍の微小環境条件からかけ離れているため、同様に困難である。乳癌患者由来の腫瘍における各ＡＬＤＨ１ａ酵素およびＲＡシグナル伝達経路の各成分の間の遺伝子相関を示すデータが開発されており、そしてＡＬＤＨ１ａ１、ＡＬＤＨ１ａ２およびＡＬＤＨ１ａ３のうち、ＡＬＤＨ１ａ３は乳癌におけるＲＡシグナル伝達経路の構成要素と最も低い相関を示すことを実証している。さらに、ＡＬＤＨ１ａ３がＲＡシグナル伝達経路に影響を及ぼしていれば、組織培養増殖または原発腫瘍増殖が影響を受けることが期待されるであろう。乳癌細胞に関する研究では、原発腫瘍またはインビトロでの増殖において差は観察されていない。
【０１６０】
治療抵抗性、腫瘍の進行およびほとんどの固形腫瘍タイプにわたる転移に対するＡＬＤＨ１ａ３の機能的重要性は、創薬のための魅力的な標的となる。オンターゲット毒性の可能性が低いことと相まって、ＡＬＤＨ１ａ３単独または他の治療薬（例えば承認された治療薬）との併用の全身性薬理学的阻害は、原発癌、ならびに緩慢性および顕性の転移性疾患の治療に有用であることが期待される。
【０１６１】
ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイ
ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイは、ｂｏｄｉｐｙ−アミノアセトアルデヒド（ＢＡＡＡ）を、自発的にエステル化して非細胞膜透過性産物を形成するｂｏｄｉｐｙ−アミノ酢酸（ＢＡＡ）に酸化する細胞の能力を評価する。この活性は、生細胞を選別し、そしてそれによって異種性の集団内のＡＬＤＨ活性レベルを識別するために使用され得る。ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性癌細胞はより腫瘍形成性であり、そしてより悪い臨床転帰が予測されることが２００７年に初めて発見された際、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性は腫瘍の侵襲性を促進するより広い転写プログラムのマーカーであると推定された。これらの初期の研究以来、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性は、腫瘍細胞集団の「悪性度（ｓｔｅｒｎｎｅｓｓ）」または侵襲性を評価するための最も引用された方法となっている。
【０１６２】
この将来性のある発見の後、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性は、しばしばＡＬＤＨ１酵素の機能をほとんど考慮せずに評価された。むしろ、刊行物は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイが原発腫瘍の部位にかかわらず、侵襲性または転移性癌細胞を単離したことを示した。以来、数百の論文が、ほとんど全ての癌型にわたって癌細胞形質を評価する際にＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイを使用してきた。２０１１年にＭａｒｃａｔｏらから始まって初めて、ＡＬＤＨ１ａ３がほとんどの乳癌細胞株においてＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性の原因であることが示された。
【０１６３】
Ｍａｒｃａｔｏらの発表以来、加速度的な新興の研究は、ＡＬＤＨ１ａ３はほとんどの癌型にわたるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性の原因であるだけでなく、癌の増殖、治療抵抗性、および転移を機能的に促進することも立証している。様々な質の研究が、ＡＬＤＨ１ａ３が発現し、そして黒色腫患者由来異種移植片または細胞株における増殖、間葉様神経膠腫または神経膠芽腫における代謝、化学療法抵抗性および放射線抵抗性、肺癌における造腫瘍性およびシスプラチン抵抗性、膵臓癌における増殖および放射線抵抗性、結腸および甲状腺細胞におけるＦＡＲ阻害剤抵抗性、中皮腫におけるシスプラチン抵抗性、前立腺癌におけるグリソンスコアおよび増殖、乳癌におけるアポトーシス抵抗性および転移、および胆管癌における予後に重要であることを立証している。ＡＬＤＨ１ａ３が、ほとんどの固形腫瘍型にわたる優性ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）誘導酵素であることが、本明細書において示される（図３Ａおよび３Ｂを参照されたい）。
【０１６４】
発現および予後の研究は、ＡＬＤＨ１ａ３が癌の種類を超えて予後不良を強く予測することをさらに示している。ＡＬＤＨ１ａ３発現の低下につながるＡＬＤＨ１ａ３プロモーターの高メチル化は、一連の原発性膠芽腫患者における良好な予後の最も強力な予測因子であった。高ＡＬＤＨ１ａ３は、胆管癌患者におけるリンパ節転移を予測した。ＡＬＤＨ１ａ３の発現は、アンドロゲンが前立腺癌細胞の主要なマイトジェンである前立腺癌においてアンドロゲンによってドライブされるが、ｍｉｒｌ８７は前立腺癌におけるＡＬＤＨ１ａ３を標的とし、そして高ｍｉｒｌ８７は良好な予後と相関した。
【０１６５】
本明細書中で使用されるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイにおいて、細胞は、５０〜８０％コンフルエンスに達するまで増殖され、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ）で回収され、そして遠心分離／再懸濁（４℃で５分間１９０ｇ）によってＰＢＳで１回洗浄された。細胞はカウントされ、遠心分離され、そしてＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）緩衝液（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に１，０００，０００細胞／ｍＬで再懸濁された。ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）基質（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１：２００）および試験化合物または１ｍＭ  ＤＥＡＢは、細胞懸濁液に添加され、そして１５分毎にボルテックスされながら３７℃で４５分間インキュベートされた。細胞は遠心分離され、そして５  ｐｇ／ｍＬのＤＡＰＩを含むＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）緩衝液中で再懸濁された。試料は、ＢＤ  ＬＳＲ２フローサイトメトリープラットフォームで分析された。ゲーティングは、陰性対照としてＤＥＡＢを用いて行われた。
【０１６６】
図１Ａは、本明細書中に記載される種々の化合物の存在下でのＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞のパーセンテージの棒グラフであり、そして１００  ｎＭの濃度の化合物で本明細書中に記載される標準的なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用したインキュベーション後のフローサイトメトリーにより検出される、バックグラウンド蛍光レベルを上回るＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。バックグラウンド蛍光についてのゲーティングは、陰性対照として１ミリモルのＤＥＡＢを用いて行われた。図１Ａは、ＭＢＥ１−５、ＭＢＥ１およびＭＢＥ１−６がＡＬＤＨ１ａ３活性の阻害に対する高親和性化合物であることを実証するものである。
【０１６７】
図１Ｂは、様々な濃度のＭＢＥ１またはＭＢＥ１．５の存在下でのＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞のパーセンテージの折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１またはＭＢＥ１−５の用量滴定と組み合わせた本明細書に記載の標準的なＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールに従ったインキュベーション後にフローサイトメトリーにより検出される、バックグラウンド蛍光レベルを上回るＳＥｒＭｌ５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。［ｉｎｈ−ｍｉｎ］閾値は、対照試料の２つの標準偏差の下限に設定され、一方ＩＣ５０閾値は、対照試料の平均値の５０％に設定された。図１Ｂは、ＭＢＥ１およびＭＢＥ１−５が８〜１０ナノモル範囲のＩＣ５０値を示し、２ナノモル程度の低濃度で阻害活性が検出されることを実証する。
【０１６８】
図１Ｃは、様々な濃度のＭＢＥ１およびＭＢＥ１．５の存在下での高いＡＬＤＨパーセンテージの折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１またはＭＢＥ１．５の用量滴定と組み合わせた本明細書に記載のＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールに従ったインキュベーション後にフローサイトメトリーにより検出される、高い蛍光レベルであるＳＥＩＭｌ５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞のパーセンテージを示す。高活性は、１０ナノモルのＭＢＥ１．５濃度で９９パーセンタイルの細胞でゲーティングされた。［ｉｎｈ−ｍｉｎ］閾値は、対照試料の２つの標準偏差の下限に設定された。図１Ｃは、ＭＢＥ１．５がＭＢＥ１よりも高度にＡＬＤＨ１ａ３活性細胞を阻害することに優れていることを実証する。
【０１６９】
図２Ａは、ヒトＡｌｄｈ１ａ１、Ａｌｄｈ１ａ３またはＡｌｄｈ３ａ１で安定的に形質導入され、そして列挙された濃度でＤＭＳＯまたはＭＢＥ１と組み合わせたフローサイトメトリーによりＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用して分析されたＭＣＦ７細胞のヒストグラムであり、そして各酵素によって誘導されたＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性に対するＤＭＳＯまたはＭＢＥ１の効果を示す。図２Ａは、ＭＢＥ１が１０  μＭ未満の濃度でＡｌｄｈ１ａ１またはＡｌｄｈ３ａ１活性を阻害しないが、別の癌細胞株であるＭＣＦ７においてＡｌｄｈ１ａ３活性を阻害することに有効であることを実証する。
【０１７０】
図２Ｂは、ヒトＡｌｄｈ１ａ２またはＡｌｄｈ１ａ３で一過性にトランスフェクトされ、そして列挙された濃度でＤＭＳＯまたはＭＢＥ１．５と組み合わせたフローサイトメトリーによりＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）プロトコールを使用して分析された２９３Ｔ細胞のヒストグラムであり、そして各酵素により誘導されたＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性に対するＤＭＳＯまたはＭＢＥ１．５のいずれかの効果を示す。図２Ｂは、ＭＢＥ１．５が１０  ｐＭ未満の濃度でＡｌｄｈ１ａ２活性を阻害しないが、ヒトＡｌｄｈ１ａ３でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞においてＡｌｄｈ１ａ３活性を阻害することに有効であることを実証する。
【０１７１】
図３Ａは、ＤＥＡＢまたはＭＢＥ１の存在下での種々の癌型におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞の棒グラフであり、そしてＡＬＤＨ１ａ３活性が、Ｓｕｍｌ５９−Ｍ１ａ（乳癌）およびＭＤＡ−４６８（乳癌）に加えて多くの癌型において観察され、そして多くの癌型においてＭＢＥ１により阻害されることを示す。図３Ｂは、１  ｍＭ  ＤＥＡＢ（ｐａｎ−ＡＬＤＨ阻害剤）または１００  ｎＭ  ＭＢＥ１．５（特異的ＡＬＤＨ１ａ３阻害剤）の存在下での種々の癌型におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性細胞の棒グラフであり、そしてヒト癌細胞株の大部分がＡＬＤＨ１ａ３活性を示すことを示す。注目すべき例外は肝臓癌であり、大きなＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性集団が存在することが予想され、そしてＡＬＤＨ１ａ１によりドライブされる。
【０１７２】
ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイは、ＳＥＩＭｌ５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞に対する本明細書に記載されるいくつかの化合物の相対活性を評価するためにも使用された。１００  ｎＭの濃度でのアッセイにおけるいくつかの化合物の活性は、各化合物に関連する化学構造および化合物名と共に、表１において報告される。
【０１７３】
【表１−１】
2021532158.tif 000016
【０１７４】
【表１−２】
2021532158.tif 000017
【０１７５】
【表１−３】
2021532158.tif 000018
【０１７６】
図１２は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性対濃度のグラフであり、そして１０  ｎＭおよび１００  ｎＭの濃度でのＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞に対する本明細書に記載のいくつかの化合物のＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性を示す。対照（ＤＭＳＯ）またはＤＥＡＢ処理細胞と比較して、ＭＢＥ１．５Ｃは、１０  ｎＭの濃度で、ＭＢＥ１．５、ＭＢＥ１．５ＡまたはＭＢＥ１．５Ｄのほぼ２倍の効力を有する。
【０１７７】
ＡＬＤＨアイソフォーム１ａ１、１ａ２、１ａ３および３ａ１は、ＭＣＦ７またはＳＥＩＭ１５９細胞中で発現され、続いてＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイにおいて使用された。図１３Ａは、ウェスタンブロットであり、そして示された細胞における各ＡＬＤＨアイソフォームの発現を示す。図１３Ｂは、示されたＡＬＤＨアイソフォームを発現するＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性ＭＣＦ７細胞のパーセンテージ対ＭＢＥ１．５濃度の対数の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５が１０  ｍＭ未満の濃度でＡＬＤＨ１ａ３を特異的に阻害することを示す。図１３Ｃは、示されたＡＬＤＨアイソフォームを発現するＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性ＳＥＴＭ１５９細胞のパーセンテージ対ＭＢＥ１．５濃度の対数の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５が１０  μＭ未満の濃度でＡＬＤＨ１ａ３を特異的に阻害することを示す。
【０１７８】
マウスリンパ球におけるＡＬＤＨ活性のエクスビボ解析
骨髄細胞は、ＰＢＳでフラッシュした脛骨および大腿骨を介して、１２週齢のＣ５６ＢＬ６マウスから採取され、そして１００−ｐｍ細胞ふるいに通された。胸腺細胞および脾細胞は対応する組織から単離され、そして１００  ｐｍ細胞ふるいに対する物理的破壊により単離された。細胞は遠心分離／再懸濁により洗浄され、次いで１０７細胞／ｍＬで懸濁された。その後、抗ＣＤ３ε（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  ＃１００３０８）、抗ＣＤ１１ｃ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ  ＃５６１１１９）、抗ＣＤ４５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３０−Ｆ１１）、または抗ＣＤ３１７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  １２９ｃ１）のいずれかを１：２００のインキュベーション期間中に添加することを除き記載された通りに、これらの細胞に対してＭＢＥ１有りまたは無しでＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイが実施された。
【０１７９】
図４Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＣＤ４５陽性骨髄細胞がＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性であるが、ＭＢＥ１．５により影響を受けないことを示す。図４Ｂは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＣＤ１１ｃ陽性骨髄細胞がＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性であるが、ＭＢＥ１．５により影響を受けないことを示す。ＣＤ４５陽性およびＣＤ３ｅ陽性（ＣＤ４５＋ＣＤ３ｅ＋）ならびにＣＤ１１ｃ陽性およびＣＤ３１７陽性（ＣＤ１１＋ＣＤ３１７＋）を含む、検査された他の集団において同様の結果（図示せず）が得られた。したがって、試験された全ての集団は、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）陽性であったが、ＭＢＥ１．５により影響を受けず、毒性の可能性はほとんどなかった。
【０１８０】
マウスモデルおよび異種移植片
全てのマウスは、初めにＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から注文され、そして繁殖は特定の病原体を含まない（ＳＰＦ）バリア施設において行われた。毒性実験は、８〜１２週齢の雄及び雌のＣ５７Ｂ１６マウスで行われた。ＭＢＥ１は、ＤＭＳＯ中に５０  ｍｇ／ｍＬで溶解され、続いてＫｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＥＬに１：２希釈され、続いてＰＢＳに１：５希釈され、５  ｍｇ／ｍＬのＭＢＥ１溶液（１０％  ＤＭＳＯ、１０％  Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＥＬ、８０％  ＰＢＳ）が得られた。これは、２４時間隔で３匹のマウスのセットにおいて、１２．５〜２００  ｍｇ／ｋｇ体重の漸増用量でＩＰ注射により投与された。身体状態スコア、食物摂取、糞便／尿産生、行動および体重が毒性のリードアウトとして測定された。次いで、５匹のマウスが２５  ｍｇ／ｋｇのＭＢＥ１で３日毎に１８日間処理された。いずれの実験も、急性毒性または慢性毒性のどちらの徴候も示さなかった。
【０１８１】
全ての異種移植実験は、８週齢の雌マウス（胸腺欠損Ｎｕ／Ｎｕ、またはＮＯＤ／ＳＣＩＤ  Ｇａｍｍａ）で行われた。尾静脈または心臓内注射のために１００  μＬ  ＰＢＳ中の１２５，０００個のＳＵＭ１５９−Ｍ１ａ細胞を用いて異種移植実験が行われた。マウスは、注射後に無作為化された。生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、ＩＶＩＳ  ２００システムおよび後眼窩ルシフェリン注射を用いて行われた。薬物処理のために、（上記のように調製された）ＭＢＥ１は、図５Ａ（尾静脈注射）および図６Ａ（心臓内注射）に示す時間間隔および用量で、パクリタキセル（１０％エタノール中５  ｍｇ／ｍＬ、１０％  Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＥＬ、８０％ＰＢＳ）と併せてＩＰ注射によりマウスに投与された。
【０１８２】
図５Ｂは、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を用いて測定された肺転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして図５Ａに概説された実験からのマウスにおけるＭＢＥ１の存在下および非存在下における肺転移を比較するものである。図６Ｂは、ＢＬＩを用いて測定された骨転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして図６Ａに概説された実験からのマウスにおけるＭＢＥ１の存在下および非存在下での骨転移を比較するものである。図５Ｂおよび図６Ｂは、ＭＢＥ１が樹立された転移性疾患を治療するための有効な治療薬であることを実証し、そしてＭＢＥ１および本明細書中に開示される化合物がＡＬＤＨ１ａ３およびその下流効果をインビボで効果的に阻害するために使用され得ることを立証するものである。
【０１８３】
別の異種移植実験では、マウスは上記のように尾静脈注射によりＳＵＭ１５９−Ｍｌ−ｐ４４細胞を注射され、そして注射後に無作為化された。転移負荷は、生体内イメージングを介して１６日目に画像化された。マウスは、次いで１７、１９および２１日目に、パクリタキセル（２５  ｍｇ／ｋｇ）および溶媒もしくはＭＢＥ１．５（５０  ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで処理された。次いで、肺転移負荷が２２日目に画像化された。シグナルは１６日目に標準化された。
【０１８４】
図１４は、生物発光イメージング（ＢＬＩ）により測定された肺転移対時間（日）の折れ線グラフであり、そして１７、１９および２１日目に投与された２５  ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルと組み合わせた５０  ｍｇ／ｋｇのＭＢＥ１．５の３つの用量が、マウス異種移植モデルにおいて樹立された転移性疾患の退縮を引き起こしたことを示す。
【０１８５】
さらに別の異種移植実験では、マウスは乳腺脂肪パッドを介してＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を注射され、そして注射後に無作為化された。マウスは、ＭＢＥ１．５（１日２５  ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝６）または溶媒（ｎ＝１２）、及びパクリタキセル（隔日１２．５  ｍｇ／ｋｇ）を１２日間投与された。原発腫瘍の測定は、各処理群間でキャリパーにより行われた。
【０１８６】
図１５Ａは、体重（ｇ）対時間（日）の折れ線グラフであり、そして本実験においてＭＢＥ１．５処理に関連する肉眼的な毒性がなかったことを示す。図１５Ｂは、腫瘍体積（ｍｍ３）対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５での１２日間の処理が原発性乳腺腫瘍の退縮を引き起こしたことを示す。ＭＢＥ１．５処理群の２匹のマウスの腫瘍は、該処理により完全に排除された。
【０１８７】
別の異種移植実験では、マウスは尾静脈注射によりＳｕｍ−ｌ５９−Ｍ１ａ−Ａｌｄｈ１ａ３細胞を注射され、そして注射後に無作為化された。マウスは、ＭＢＥ１．５（１日２５  ｍｇ／ｋｇ）もしくは溶媒、およびパクリタキセル（隔日１２．５  ｍｇ／ｋｇ）で１２日間処理された。肺転移の進行は、生体内生物発光により追跡された。
【０１８８】
図１６Ａは、肺転移生物発光対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＢＥ１．５または溶媒での処理前後の肺転移の進行を示すものである。図１６Ｂは、処理群の関数としての経時的なマウス生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットであり、そしてＭＢＥ１．５による１２日間の処理が、後期樹立乳癌肺転移を有するマウスの生存を延長したことを示す。
【０１８９】
薬物動態評価
薬物動態実験は、１６週齢のＣ５７ＢＬ６雄マウスに対して行われた。マウスは、ＭＢＥ１．５（１５％  ＤＭＳＯ、５％  Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ  ＥＬ、８０％  ＰＢＳ）をＩＰ注射により投与された。血液は、注射後１５分、３０分、１時間、３時間、および２４時間に、末期心臓穿刺によって採取された。血清は、１６２００  ＲＣＦで１分間の遠心分離による血液分離により得られた。次いで、組織が全採血後に採取された。血清および組織は、液体窒素中で急速凍結され、そして薬物動態評価に供された。
【０１９０】
マウスＰＫ研究のためのＬＣ／ＭＳ／ＭＳによるＭＢＥ１．５の血漿濃度定量
血漿ＭＢＥ１．５濃度は、マウスＰＫ研究においてＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイで測定された。
【０１９１】
化学物質：ＭＢＥ１．５およびＭＢＥ２．０は、１％ＤＭＳＯを含むＭｅＯＨ中のストック（１  ｍｇ／ｍＬ）として供給された。ＭＢＥ２．０は、内部標準として使用された。ＨＰＬＣグレードのアセトニトリルおよび水は、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ、ＰＡ）から購入された。マウス血漿は、血漿較正標準の調製のためにＩｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｎｏｖｉ、ＭＩ）から購入された。
【０１９２】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイ：
【０１９３】
標準溶液の調製：ＭＢＥ１．５ストックは、対照マウス血漿中で希釈されて、８．２  ｎｇ／ｍＬ〜１８  ｐｇ／ｍＬの較正範囲が得られた。メタノール中の１  ｐｇ／ｍＬのＭＢＥ２．０がワーキング内部標準（ＩＳ）として使用された。
【０１９４】
試料調製：血漿標準およびマウス血漿試料（２０  ｐＬ）は、５  μＬ  ＩＳをスパイクされ、そして１２０  μＬアセトニトリルおよびメタノール（ｖ／ｖ  ５：１）で除タンパクされた。１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離後、２５  μＬの上清がＬＣ−ＭＳにより分析された。
【０１９５】
液体クロマトグラフィー／質量分析：ＭＢＥ１．５の定量は、Ｘｃａｌｉｂｕｒデータ取得ソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＥＴＳＡ）を備えた、ＡＰＩエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＭＳポンプ、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  オートサンプラーを装備したＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  トリプル四重極質量分析計（ｔｒｉｐｌｅ  ｑｕａｄｒｕｐｌｅ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて行われた。
【０１９６】
ＬＣ条件は以下の通りであった：移動相Ａ：水溶液（０．１％ギ酸）；移動相Ｂ：アセトニトリル（０．１％ギ酸）；流速５００  ｐＬ／分；勾配溶出０〜１分、６０％  Ａ；１〜２．５分、６０％〜２０％  Ａ；２．５〜７．０分、０％  Ａ、７．０〜９．０分、０％  Ａ、９．０〜１１．０分、０％〜６０％  Ａ；およびカラム：Ｌｕｎａ（登録商標）Ｃ１８、１５０Ｘ４．６  ｍｍ、５  ｐｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）。ＭＢＥ１．５及びＩＳの保持時間は、それぞれ６．３分及び６．６分であった。
【０１９７】
ＭＳ／ＭＳ条件は、以下の通りであった：単一反応モニタリングモードにおいて、ｍ／ｚ  ３１３．２／１７８．２（ＭＢＥ１．５）、ｍ／ｚ  ２８１．２／１１９．１（ＭＢＥ２．０、ＩＳ）；イオンスプレー電圧、４５００ｖ；キャピラリー温度３５０℃；シースガス圧２０任意単位；Ａｕｘガス圧５０任意単位；衝突圧１．５任意単位。衝突エネルギーおよびチューブレンズは、各化合物について最適化された。
【０１９８】
計算：血漿較正標準は、血漿サンプル中のＭＢＥの定量のために使用された。対数線形回帰が較正曲線に使用されて血漿サンプル中の濃度を決定された。
【０１９９】
結果：
【０２００】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイ：ＭＢＥ１．５の血漿較正曲線は、８．２  ｎｇ／ｍＬ〜１８  ｐｇ／ｍＬの範囲の濃度を用いてプロットされた。定量の限界は、８．２  ｎｇ／ｍＬ（ＬＯＤ）であった。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイは、校正範囲において良好な直線性であった（Ｒ２＞０．９９）。表２は、アッセイ内の正確性および精度を要約する。本アッセイにおいてマトリックス効果は観察されなかった。
【０２０１】
【表２】
2021532158.tif 000019
【０２０２】
マウスにおけるＭＢＥ１．５の血漿中ＰＫ：マウスＰＫ研究におけるＭＢＥ１．５の血漿濃度は表３に示される。予備的なＰＫデータは、Ｗｉｎｎｏｌｉｎ  ２．０による非コンパートメントモデルを用いて解析された。ＰＫパラメータは、表４に要約される。
【０２０３】
【表３】
2021532158.tif 000020
【０２０４】
【表４】
2021532158.tif 000021
【０２０５】
ＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウト
ゲノムＡｌｄｈ１ａ３に対する相同配列を含むＣａｓ９遺伝子およびｇＲＮＡ配列の両方を含むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ベクターは、レンチウイルス感染によりＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に形質導入され、続いてウイルス組み込みのためピューロマイシン選抜され、そしてその結果得られた細胞はＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイにより分析された。２つのＡＬＤＨ１ａ３標的ｇＲＮＡベクターが２つの派生細胞株を作製するために使用され、そしてスクランブル配列を有する１つのｇＲＮＡが対照派生細胞株を生成するために使用された。
【０２０６】
図７Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウト（中央および右端のスペクトル）が、対照ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（左端のスペクトル）と比較して、ＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性を実質的に減少させることを示すものである。図７Ｂは、腫瘍体積（ｍｍ３）対時間（日）の折れ線グラフであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが原発腫瘍増殖を遅らせ、そしてパクリタキセルに対して腫瘍を感作させることを示す。図７Ｃは、腫瘍質量（ｇ）対遺伝子ノックアウトの棒グラフであり、そしてＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが、原発腫瘍増殖を遅らせ、そしてパクリタキセルに対して腫瘍を感作させることを示すものである。
【０２０７】
Ｃａｓ９遺伝子およびゲノムＡｌｄｈ１ａ３に対する相同配列を含むｇＲＮＡ配列の両方を含むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ベクターは、Ｓｕｍｌ５９−Ｍ１ａ細胞にトランスフェクトされ、続いてフローサイトメトリーにより陽性トランスフェクト細胞に対する選抜が行われた。陽性トランスフェクト細胞は、次いでベクター骨格または全長ヒトＡｌｄｈ１ａ３のいずれかを含むレンチウイルスベクターでウイルス形質導入された。陽性形質導入体はピューロマイシンにより選抜され、そしてその結果得られた細胞はＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）アッセイにより分析された。異種移植実験では、ノックアウトベクターまたはノックアウトＡｌｄｈ１ａ３または野生型ベクターまたは野生型Ａｌｄｈ１ａ３細胞がマウスに心臓内注射され、そして生体内生物発光イメージングにより骨転移増殖が追跡された。骨転移のない生存は、生物発光により追跡され、そしてＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒモデルを用いてプロットされた。
【０２０８】
図９Ａは、フローサイトメトリースペクトルであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子ノックアウトが細胞におけるＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性をほぼ消失させること、およびＡＬＤＥＦＬＵＯＲ（商標）活性がレスキューベクターで細胞を形質導入することによりレスキューされ得ることを示す。図９Ｂは、生物発光（ｐｈ／ｓ）対時間（日）により測定された骨転移の折れ線グラフであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３のノックアウトが骨転移成長を遅らせることを示す。図９Ｃは、経時的な骨転移のない生存のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロットであり、そしてＳｕｍｌ５９−Ｍ１ａ乳癌細胞におけるＡＬＤＨ１ａ３のノックアウトが、生存時間を有意に増加させることを示す。
【０２０９】
ＡＬＤＨ１ａ３の遺伝子発現
３つのヒトＡＬＤＨ遺伝子、ＡＬＤＨ１ａ１、ＡＬＤＨ１ａ３またはＡＬＤＨ３ａ１の１つをコードするレンチウイルスベクターは、ルシフェラーゼ標識Ｓｕｍｌ５９−Ｍｌｂ細胞にウイルス形質導入により導入され、続いてピューロマイシンにより陽性選抜され、そして導入細胞はマウスへの尾静脈注射により注入された。肺転移の増殖は、週１回の生体内生物発光イメージングにより追跡された。肺結節は、エクスビボでカウントされた。
【０２１０】
図８Ａは、生物発光（ｐｈ／ｓ）対時間（日）の折れ線グラフであり、そして３つのＡＬＤＨ酵素、ＡＬＤＨ１ａ１、ＡＬＤＨ１ａ３およびＡＬＤＨ３ａ１をコードするベクターをトランスフェクトされたＳＵＭ１５９−Ｍｌｂ細胞を注射されたマウスにおける肺転移の発生を示すものである。図８Ｂは、図８Ａに記載された実験の端点でエクスビボでカウントされた肺結節のプロットである。
【０２１１】
生存予測
ＴＣＧＡおよびＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  ｐｌｏｔｔｅｒ（ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍ）データは、ＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として種々の癌に対する発現データおよび生存曲線を生成するために使用された。各データセットからの癌患者は、中央発現値または最適層別化値のいずれかに従って、高Ａｌｄｈ１ａ３発現または低Ａｌｄｈ１ａ３発現により層別化された。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析は、次いで遠隔転移のない生存または全生存のどちらを測定するかにかかわらず、患者の生存をプロットし、患者間のＡｌｄｈ１ａ３の相対レベルと対応する生存指標との関係を評価するために使用された。
【０２１２】
図１０Ａ〜１０Ｈは、ｋｍｐｌｏｔ．ｃｏｍで提供されるデータ解析ツールに基づき、高Ａｌｄｈ１ａ３発現（赤）および低Ａｌｄｈ１ａ３発現（黒）により層別化された予後患者生存曲線であり、そしてＡＬＤＨ１ａ３発現レベルの関数として、トリプルネガティブ乳癌患者の遠隔転移なしの生存（図１０Ａ）、および腎明細胞癌、胃癌、膀胱癌、卵巣癌、肺扁平上皮癌、結腸直腸癌および低悪性度神経膠腫癌患者の全生存（それぞれ図１０Ｂ〜１０Ｈ）を示す。
【０２１３】
別の予測セットでは、ＭＥＴＡＢＲＩＣ臨床乳癌データセットからのＡｌｄｈ１ａ３のｍＲＮＡ発現が腫瘍型および化学療法による前処理によって分離された。ＥＭＣ−ＭＳＫデータセットの生存曲線は、患者をサブタイプに応じて分割し、中央値Ａｌｄｈ１ａ３発現により層別化することにより作成された。
【０２１４】
図１１Ａは、ＭＥＴＡＢＲＩＣ臨床乳癌データセットからのＡＬＤＨ１ａ３のｍＲＮＡ発現のグラフであり、そして乳癌サブタイプおよび化学療法歴によるＡＬＤＨ１ａ３の発現を示す。図１１Ｂは、ＥＭＣ−ＭＳＫデータセットに基づく予測生存曲線であり、そしてサブタイプおよび中央値ＡＬＤＨ１ａ３発現レベルによる乳癌患者の予測生存期間を示す。
【０２１５】
表５は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  ｐｌｏｔｔｅｒデータベースに由来するエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性乳癌におけるＡＬＤＨ１ａ１またはＡＬＤＨ１ａ３が高発現している患者のハザード比（ｐ値）を報告するものであり、そして転移発生リスクの高いＨｅｒ２およびトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）集団を含む。ＡＬＤＨ１ａ３は、転移を発生する可能性が最も高い集団であるＥＲ陰性乳癌患者における予後不良予測因子である。
【０２１６】
【表５】
2021532158.tif 000022
【０２１７】
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65 Moreb, J. S. et al. The enzymatic activity of human aldehyde dehydrogenases 1A2 and 2 (ALDH1 A2 and ALDH2) is detected by Aldefluor, inhibited by diethylaminobenzaldehyde and has significant effects on cell proliferation and drug resistance. Chem Biol Interact 195, 52-60, doi:10. 1016/j.cbi.2011.10.007S0009-2797(11)00311-5[pii](2012).
66 Liu, Y. et al. ALDH1 Al mRNA expression in association with prognosis of triple-negative breast cancer. Oncotarget 6, 41360-41369, doi:10. 18632/oncotarget.6023 6023 [pii] (2015).
67 Tomita, H., Tanaka, K., Tanaka, T. & Hara, A. Aldehyde dehydrogenase 1Al in stem cells and cancer. Oncotarget 7, 11018-11032, doi:10.18632/Oncotarget.6920 6920 [pii] (2016).
68 Koppaka, V. et al. Aldehyde dehydrogenase inhibitors: a comprehensive review of the pharmacology, mechanism of action, substrate specificity, and clinical application. Pharmacol Rev 64, 520-539, doi:10. H24/pr.111.005538 pr.111.005538 [pii] (2012).
69 Yasgar, A. et al. A High-Content Assay Enables Automated Screening and Identification of Small Molecules with Specific ALDH1A1-Inhibitory Activity. PLoS One 12, e0170937, doi:10.1371/journal.pone.0170937 PONE-D-16-39942[pii](2017).
70 Gibb, Z., Lambourne, S. R., Curry, B. T, Hall, S. E. & Aitken, R. J. Aldehyde Dehydrogenase Plays a Pivotal Role in Maintenance of Stallion Sperm Motility. Biol Reprod 94, 133, doi:10.1095/biolreprod.116.140509 biolreprod.116.140509 [pii] (2016).
71 Kurth, I. et al. Cancer stem cell related markers of radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma. Oncotarget 6, 34494-34509, doi:10.18632/oncotarget.5417 5417 [pii] (2015).
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【０２１８】
本明細書に引用される全ての特許、公開された出願および参考文献の教示は、その全体が参照により援用される。
【０２１９】
例示的な実施形態が特に示され、そして説明されたが、添付の特許請求の範囲によって包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態および詳細において様々な変更を行うことができることが当業者によって理解されよう。
【符号の説明】
【０２２０】
図1A
Cells  細胞
Lead name  リード名
図1B
Drug Concentration  薬物濃度
Control  対照
Poly.   ポリ
Linear  線状
図1C
High  高
Drug Concentration  薬物濃度
Control  対照
Poly.  ポリ
Linear  線状
図2A
Count  カウント
Specimen  標本
stable expression  安定発現
図2B
Specimen  標本
contour  輪郭
transfectants  トランスフェクタント
図3A
positive  陽性
Pancreatic  膵臓
Mouse Melanoma  マウス黒色腫
Prostate  前立腺
Lung  肺
Colon  結腸
Liver  肝臓
Melanoma  黒色腫
Glioblastoma  膠芽腫
Prostate  前立腺
図3B
Activity  活性
Breast  乳
Colon  結腸
Liver  肝臓
Lung  肺
Melanoma  黒色腫
Pancreatic  膵臓
Prostate  前立腺
Control  対照
Cancer cellline  癌細胞株
図4A
specimen-boneMarrow  標本-骨髄
contour  輪郭
図4B
specimen-BoneMarrow  標本-骨髄
図5A
Day 18, 22, 25, 28, 32  18、22、25、28、32日目
intravenous  静脈内
Day 1  1日目
Tail-vein injection  尾静脈注射
cells  細胞
Day 16  16日目
normalized  正規化
Day 18.5, 22.5, 25.5, 28.5, 32.5  18.5、22.5、25.5、28.5、32.5日目
Paclitaxel intraperitoneal  パクリタキセル腹腔内
Day 36  36日目
Final BLI measurement  最終BLI測定
図5B
Lung Metastasis  肺転移
Vehicle  溶媒
Days  日
図6A
Day 9, 11, 13, 16  9、11、13、16日目
MBE1 or vehicle intraperitoneal  MBE1または溶媒腹腔内
Day 1  1日目
Intra-cardiac injection  心臓内注射
cells  細胞
Day 8  8日目
normalized  正規化
Paclitaxel intraperitoneal  パクリタキセル腹腔内
Day 27  27日目
measurement  測定
図6B
Bone Metastasis  骨転移
Days  日
Vehicle  溶媒
One-tailed  片側
図7B
Tumor Volume  腫瘍体積
Days  日
図7C
Tumor mass  腫瘍量
図8A
Bioluminescence  生物発光
Days  日
Vector  ベクター
図8B
Lung nodes  肺結節
図9A
Wild-typeCell  野生型細胞
Vector  ベクター
Knockout  ノックアウト
図9B
Bone Metastasis  骨転移
Days  日
Vector  ベクター
Knockout  ノックアウト
Rescue  レスキュー
図9C
Bone metastasis-free Survival  骨転移のない生存
Days  日
Knockout  ノックアウト
Rescue  レスキュー
Vector ベクター
図10A
Probability  確率
Time (months)  期間（月）
logrank  ログランク
Expression  発現
low  低
high  高
図10B
Probability  確率
Time (months)  期間（月）
logrank  ログランク
Expression  発現
low  低
high  高
図10C
Probability  確率
Time (months)  期間（月）
logrank  ログランク
Expression  発現
low  低
high  高
図10D
Probability  確率
logrank  ログランク
Expression  発現
low  低
high  高
図10E
Probability  確率
Time (months)  期間（月）
logrank  ログランク
Expression   発現
low  低
high  高
図10F
Probability  確率
Time (months)  期間（月）
logrank  ログランク
Expression  発現
low  低
high  高
図10G
Survival probability  生存確率
Time in days  日単位の時間
Expression Level  発現レベル
High expression  高発現
Low/Medium-expression  低/中発現
low/medium  低/中
high  高
図10H
Survival probability  生存確率
Time in days  日単位の時間
Expression Level  発現レベル
High expression  高発現
Low/Medium-expression  低/中発現
low/medium   低/中
high  高
図11A
Expression  発現
Chemotherapy  化学療法
Normal  正常
Basal  基底
図11B
Basal  基底
Suvival  生存
Months  月
Low expression  低発現
High expression  高発現
Normal  正常
Suvival  生存
Months  月
High expression  高発現
Low expression  低発現
図12
Activity  活性
median  中央値
Inhibitor  阻害剤
Control  対照
図13A
β-actin  βアクチン
図13B
positive  陽性
Vector  ベクター
図13C
positive  陽性
Vector  ベクター
図14
Lung Metastasis  肺転移
3 Doses vehicle or MBE1.5 Day 17, 19, 21 And Paclitaxel  3つの用量の溶媒またはMBE1.5 17、19、21日目およびパクリタキセル
Vehicle  溶媒
図15A
Treatment period  処理期間
Body Mass  体重
Days  日
Vehicle  溶媒
図15B
Tumor volume  腫瘍体積
Days  日
Vehicle  溶媒
図16A
Treatment period   処理期間
Lung Metastasis Bioluminescence  肺転移生物発光
Days  日
Vehicle  溶媒
図16B
Survival  生存率
Days  日
Hazard ratio  ハザード比
p-value  p値
Untreated  非処理
Paclitaxel  パクリタキセル
Vehicle  溶媒
【図１Ａ】
2021532158.tif 000034
【図１Ｂ】
2021532158.tif 000035
【図１Ｃ】
2021532158.tif 000036
【図２Ａ】
2021532158.tif 000037
【図２Ｂ】
2021532158.tif 000038
【図３Ａ】
2021532158.tif 000039
【図３Ｂ】
2021532158.tif 000040
【図４Ａ】
2021532158.tif 000041
【図４Ｂ】
2021532158.tif 000042
【図５Ａ】
2021532158.tif 000043
【図５Ｂ】
2021532158.tif 000044
【図６Ａ】
2021532158.tif 000045
【図６Ｂ】
2021532158.tif 000046
【図７Ａ】
2021532158.tif 000047
【図７Ｂ】
2021532158.tif 000048
【図７Ｃ】
2021532158.tif 000049
【図８Ａ】
2021532158.tif 000050
【図８Ｂ】
2021532158.tif 000051
【図９Ａ】
2021532158.tif 000052
【図９Ｂ】
2021532158.tif 000053
【図９Ｃ】
2021532158.tif 000054
【図１０Ａ】
2021532158.tif 000055
【図１０Ｂ】
2021532158.tif 000056
【図１０Ｃ】
2021532158.tif 000057
【図１０Ｄ】
2021532158.tif 000058
【図１０Ｅ】
2021532158.tif 000059
【図１０Ｆ】
2021532158.tif 000060
【図１０Ｇ】
2021532158.tif 000061
【図１０Ｈ】
2021532158.tif 000062
【図１１Ａ】
2021532158.tif 000063
【図１１Ｂ】
2021532158.tif 000064
【図１２】
2021532158.tif 000065
【図１３Ａ】
2021532158.tif 000066
【図１３Ｂ】
2021532158.tif 000067
【図１３Ｃ】
2021532158.tif 000068
【図１４】
2021532158.tif 000069
【図１５Ａ】
2021532158.tif 000070
【図１５Ｂ】
2021532158.tif 000071
【図１６Ａ】
2021532158.tif 000072
【図１６Ｂ】
2021532158.tif 000073
【国際調査報告】
2021532158.tif 000074
2021532158.tif 000075
2021532158.tif 000076
2021532158.tif 000077
2021532158.tif 000078