(57)【要約】  本明細書において、アゴニスト性レプチン受容体（ＬＥＰＲ）抗体、その抗原結合断片、または当該ＬＥＰＲ抗体もしくはその抗原結合断片を含む組成物を使用した処置のための治療的方法が提供される。そうした治療的方法には、例えばリポジストロフィー、脂肪症または肥満、体重減少、非アルコール性脂肪肝疾患、過食症、高血糖症、インスリン抵抗性、脂質異常症、肝臓脂肪症、および不妊症を含む、代謝機能不全に関連する状態の処置が含まれる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
代謝機能不全もしくは低レプチン血症、または代謝機能不全もしくは低レプチン血症と関連する疾患もしくは状態、または前記疾患もしくは状態の一つもしくは複数の症状を治療または予防するための方法であって、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記状態は、非アルコール性脂肪肝疾患、ＮＡＳＨ、女性の不妊症、無月経、ホルモンサイクル異常、免疫機能障害、甲状腺機能低下症、肥満、単一遺伝子型肥満、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、リポジストロフィー、先天性リポジストロフィー、全身型リポジストロフィー、後天性リポジストロフィー、部分型リポジストロフィー、先天性部分型リポジストロフィー、先天性全身型リポジストロフィー、後天性部分型リポジストロフィー、および後天性全身型リポジストロフィーからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非アルコール性脂肪肝疾患を治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項４】
先天性リポジストロフィーを治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項５】
全身型リポジストロフィーを治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項６】
後天性リポジストロフィーを治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項７】
部分型リポジストロフィーを治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項８】
単一遺伝子型肥満を治療または予防するための請求項２に記載の方法。
【請求項９】
代謝機能不全または低レプチン血症と関連する前記状態が、先天性リポジストロフィーであり、
先天性リポジストロフィーと関連する前記症状が、ヒトＬＥＰＲに結合する前記抗体またはその抗原結合断片の投与の後、予防され、または改善され、または重症度低下および／もしくは期間短縮され、または低下される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
ヒトＬＥＰＲに結合する前記抗体またはその抗原結合断片の投与の後、前記対象の血中グルコースが減少し、前記対象の体重が減少し、前記対象が食物摂取量の減少を呈し、前記対象の脂肪量が減少し、前記対象の除脂肪量が増加し、および／または前記対象の骨量が増加する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記状態が非アルコール性脂肪肝疾患であり、治療後に前記対象の肝重量が減少し、前記対象のアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の血漿レベルが減少し、および／または前記対象のアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の血漿レベルが減少する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記状態が女性の不妊症である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記状態が女性の不妊症であり、前記対象のホルモンサイクルが回復され、および／または前記対象が妊娠する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記状態が無月経である、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記状態が無月経であり、前記対象が、正常なホルモンサイクルを有し始める、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記状態が免疫機能障害である、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記状態が免疫機能障害であり、前記対象のＣＤ４＋Ｔ細胞数が増加する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
脂肪症、肥満、過食症、高血糖症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、インスリン抵抗性、脂質異常症、成長遅延、思春期成長スパートの遅延、成長ホルモン分泌異常、ＨｂＡ１ｃ上昇、低い骨ミネラル密度（または低骨量）、低い骨ミネラル含量、および低い除脂肪体重からなる群から選択される一つまたは複数である、代謝機能不全もしくは低レプチン血症のまたは代謝機能不全もしくは低レプチン血症と関連した疾患もしくは状態の、一つまたは複数の症状
を治療または予防するための、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
対象が罹患している代謝機能不全または低レプチン血症の症状である低骨量を有する前記対象において、骨量を増加させる方法であって、その必要のある前記対象に、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項２０】
その必要のある前記対象が、レプチン欠損症である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
その必要のある前記対象が、レプチン欠損症ではない、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記症状が肥満であり、前記肥満は、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異と関連しておらず、かつそれらにより引き起こされない、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記治療が、脂肪量を減少させるが、除脂肪量を減少させない、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する前記抗体またはその抗原結合断片を用いた前記治療は、視床下部のＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激し、またはレプチン誘導型もしくはレプチン非依存性のＳＴＡＴ３シグナル伝達を強化する、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療が、循環血漿トリグリセリドを低下させる、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記治療が、循環血漿総コレステロールを低下させる、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
患者において、
（ｉ）リポジストロフィーおよび／もしくは単一遺伝子型肥満、
（ｉｉ）リポジストロフィーおよび／もしくは単一遺伝子型肥満と関連する状態、または
（ｉｉｉ）（ｉ）もしくは（ｉｉ）の症状
を治療、予防または改善する方法であって、ＬＥＰＲに特異的に結合するアゴニスト性抗体を、その必要のある前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項２８】
リポジストロフィーおよび／または単一遺伝子型肥満と関連する前記状態は、超早期発症型肥満；過食症および満腹感の障害；免疫機能障害（ＣＤ４＋数）；インスリン抵抗性；非アルコール性脂肪肝疾患；ＮＡＳＨ、脂質異常症；糖尿病；生殖機能障害；性腺機能低下症；思春期成長スパートの欠落；甲状腺機能低下症；甲状腺機能障害；低い骨ミネラル密度または低骨量である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記症状は、肥大肝、肝臓酵素の上昇、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血中レベルの上昇、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血中レベルの上昇、高度な脂肪症；年齢および性別に対する肥満度指数８５パーセンタイル超；食物探索行動異常；食物攻撃性行動異常；再発性のおよび潜在的致死性の感染症；高インスリン血症；肝臓脂肪症；ＮＡＳＨへの進行（リポジストロフィー）；高トリグリセリド血症；ＨｂＡ１ｃの上昇；高血糖値；耐糖能の障害；思春期発育の遅延；第二次性徴の発現の低下；無月経もしくは月経不順；不妊症；小人症；成長ホルモン分泌異常；Ｔ３の変化；ＴＳＨの変化；または遊離チロキシンレベルの変化である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、メトレレプチン治療に失敗した、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体が、以下のとおり投与される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法：
（ｉ）約５ｍｇ／ｋｇ体重の１回または複数回の静脈内投与；次いで
（ｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を週に１回；次いで
（ｉｉｉ）任意で、約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を月に１回または約２８日に１回。
【請求項３２】
前記抗体が、以下のとおり投与される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法：
（ｉ）約５ｍｇ／ｋｇ体重の１回または複数回の静脈内投与；次いで
（ｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を週に１回。
【請求項３３】
前記抗体が、以下のとおり投与される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法：
（ｉ）５ｍｇ／ｋｇ体重の１回の静脈内投与；次いで
（ｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの４回の皮下投与を週に１回；次いで
（ｉｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を月に１回または２８日に１回。
【請求項３４】
最初の皮下投与が、前記静脈内投与の３日後に行われる、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号２６、配列番号３４、配列番号４２、配列番号５０、配列番号５８、配列番号７４、または配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および
（ｂ）配列番号１０または配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲ
を含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２６／１０、３４／１０、４２／１０、５０／１０、５８／６６、７４／６６および８２／６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２６／１０、３４／１０、４２／１０、５０／１０、５８／６６、７４／６６および８２／６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２６／１０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２８／３０／３２／１２／１４／１６のＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列の組み合わせを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記対象に第二の治療剤を投与することをさらに含み、前記第二の治療剤は、組み換えヒトレプチン、ＰＣＳＫ９阻害剤、スタチン、エゼチミブ、インスリン、インスリンバリアント、インスリン分泌促進剤、メトホルミン、スルホニルウレア、ナトリウム・グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト／アナログ、グルカゴン（ＧＣＧ）阻害剤、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）阻害剤、アンジオポエチン様タンパク質（ＡＮＧＰＴＬ）阻害剤、フェンテルミン、オルリスタット、トピラマート、ブプロピオン、トピラマート／フェンテルミン、ブプロピオン／ナルトレキソン、ブプロピオン／ゾニサミド、プラムリンチド／メトレレプチン、ロルカセリン、セチリスタット、テソフェンシン、ベルネペリト、抗けいれん薬、ジゴキシン、クマディン、ビタミンＤ、チロキシン、甲状腺サプリメント、ビタミンサプリメント、カルシウムサプリメント、カルニチン、コエンザイムＱ１０、便秘防止薬、抗アレルギー薬、ガバペンチン、麻酔薬、ケタミン、リドカイン、およびベンラファキシン塩酸塩からなる群から選択される、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ：ｈｕｍａｎ  ｌｅｐｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）に結合するアゴニスト性抗体およびアゴニスト性抗体の抗原結合断片を使用して、代謝機能不全を治療する治療法、ならびにレプチン欠損症およびリポジストロフィーにおいてインスリン感受性を回復させる治療法に関する。
【０００２】
配列表
配列表の公的な写しは、ＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に本明細書と同時に提出され、当該写しのファイル名は「１０４３６ＷＯ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５」であり、２０１９年４月５日が作成日であり、サイズはおよそ１０５キロバイトである。このＡＳＣＩＩフォーマット書面に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
レプチンは主に脂肪組織によって発現され、代謝、神経内分泌機能、免疫、エネルギーバランス、食物摂取量の調節に関与するポリペプチドホルモンである。レプチン活性は、レプチン受容体との相互作用およびシグナル伝達によって媒介される。レプチン受容体（「ＬＥＰＲ」、「ＷＳＸ」、「ＯＢ受容体」、「ＯＢ−Ｒ」、および「ＣＤ２９５」としても知られる）は、大きな（８１８アミノ酸）細胞外ドメインを有するクラスＩサイトカイン受容体ファミリーの単回膜貫通型受容体である。レプチン欠損症、レプチン抵抗性、および特定のＬＥＰＲシグナル伝達欠損性／シグナル伝達障害性の変異は、肥満、２型糖尿病、脂質異常症、リポジストロフィー、肝臓脂肪症、非アルコール性およびアルコール性の脂肪肝疾患、重度のインスリン抵抗性、妖精症／ドナヒュー症候群、ラブソン・メンデンホール症候群、および関連合併症と関連する。レプチン抵抗性、レプチン欠損症、および低レプチン血症（例えば、リポジストロフィー）に対処する治療アプローチは、罹患した個人への補足的なレプチンまたはレプチンアナログの送達が主な焦点であった。しかしながら、このようなアプローチは、一般的に限定的な有効性、特にレプチン抵抗性の個体において示されており、有害な副作用に頻繁に関連している。したがって、レプチン抵抗性、およびレプチン欠損症または低レプチン血症に関連するその他の状態を治療するための代替的アプローチのための当技術分野における必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合する抗体およびその抗原結合断片を提供する。本発明の抗体は、アゴニスト性抗体である。すなわち本発明の抗ＬＥＰＲ抗体がＬＥＰＲに結合することで、特に細胞においてレプチン受容体シグナル伝達の活性化が生じる。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＬＥＰＲへの結合に関してレプチンと競合しない。本発明の抗体は、例えば、対象における通常のレプチンの生物活性の模倣、代用、または補完に有用である。したがって本発明の抗体および抗原結合断片は、レプチン抵抗性およびレプチン欠損症に関連する疾患および障害の治療的処置に有用である。
【０００５】
本発明の抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体）であってもよく、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでもよく、および例えば残存するエフェクター機能が排除されるなど、機能に影響を及ぼすように改変されてもよい（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。
【０００６】
本発明の例示的な抗ＬＥＰＲ抗体は、本明細書の表１および表２に列記されている。表１には、例示的な抗ＬＥＰＲ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子が記載されている。表２には、例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２  ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子が記載されている。
【０００７】
本発明は、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０００８】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【０００９】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかとペア形成される、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＶＲとＬＣＶＲとのアミノ酸配列ペア（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態によれば、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかの中に含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアは、配列番号２／１０、１８／１０、２６／１０、３４／１０、４２／１０、５０／１０、５８／６６、７４／６６、および８２／６６からなる群から選択される。
【００１０】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１１】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１２】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１３】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１４】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１５】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それの実質的に類似の配列を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
【００１６】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかとペアリングされた表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３とのアミノ酸配列ペア（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態によれば、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかの中に含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアは、配列番号８／１６、２４／１６、３２／１６、４０／１６、４８／１６、５６／１６、６４／７２、８０／７２および８８／７２からなる群から選択される。
【００１７】
本発明はまた、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかの中に含有される六個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、配列番号４、６、８、１２、１４、１６；２０、２２、２４、１２、１４、１６；２８、３０、３２、１２、１４、１６；３６、３８、４０、１２、１４、１６；４４、４６、４８、１２、１４、１６；５２、５４、５６、１２、１４、１６；６０、６２、６４、６８、７０、７２；７６、７８、８０、６８、７０、７２；および８４、８６、８８、６８、７０、７２からなる群から選択される。
【００１８】
関連の実施形態では、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかにより規定される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアの中に含有される六個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。例えば本発明は、配列番号２／１０、１８／１０、２６／１０、３４／１０、４２／１０、５０／１０、５８／６６、７４／６６および８２／６６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアの中に含有されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列セットを含む、ＬＥＰＲに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は当該技術分野で周知であり、本明細書に開示の特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用することができる例示的な慣習としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般的な条件では、Ｋａｂａｔ定義は配列変動性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａ手法との間の折衷物である。例えば、Ｋａｂａｔ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９２６８−９２７２（１９８９）を参照されたい。パブリックデータベースもまた、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
【００１９】
本発明は、抗ＬＥＰＲ抗体またはその一部をコードする核酸分子も提供する。例えば、本発明は、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２０】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２１】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２２】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２３】
本発明はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２４】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２５】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２６】
本発明はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列を含む。
【００２７】
本発明はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここにおいて、ＨＣＶＲは、三つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）のセットを含み、ここにおいて、当該ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかによって規定されるとおりである。
【００２８】
本発明はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子も提供し、ここにおいて、ＬＣＶＲは、三つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）のセットを含み、ここにおいて、当該ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、表１に列挙された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかによって規定されるとおりである。
【００２９】
本発明はまた、ＨＣＶＲとＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子も提供し、ここにおいて、ＨＣＶＲは、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、かつここにおいて、ＬＣＶＲは、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列と、表２に列挙されるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似の配列とを含む。本発明のこの態様による特定の実施形態では、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、当該ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも、表１に列挙される、同じ抗ＬＥＰＲ抗体から誘導される。
【００３０】
本発明はまた、抗ＬＥＰＲ抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することができる組み換え型発現ベクターも提供する。例えば、本発明は、上述の核酸分子、すなわち、表１に記載されるようなＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む、組換え発現ベクターを含む。また、本発明の範囲内に含まれるのは、そのようなベクターが導入されている宿主細胞、ならびに抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することによって抗体またはその一部分を生産する方法ならびにそうして生産された抗体および抗体断片を回収する方法である。
【００３１】
別の態様では、本発明は、ＬＥＰＲに特異的に結合する組換えヒト抗体またはその断片および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物を提供する。関連の態様では、本発明は、抗ＬＥＰＲ抗体および第二の治療剤の組み合わせである組成物を特徴とする。一つの実施形態では、第二の治療剤は、抗ＬＥＰＲ抗体と有利に組み合わされる任意の剤である。
【００３２】
本開示全体を通して使用される場合、「対象」という用語は、「患者」という用語と相互交換可能である。対象または患者は、成人であってもよい。小児患者も、本明細書に提供される方法および組成物から利益を得ると予期される。
【００３３】
さらに別の態様では、本発明は、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体、または本発明抗体の抗原結合部分を使用して、ＬＥＰＲシグナル伝達を強化または刺激するための治療方法を提供する。本発明の態様による治療方法は、それを必要とする対象に、本発明の抗体または本発明抗体の抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量を投与することを含む。治療される障害は、ＬＥＰＲシグナル伝達を刺激もしくは活性化することにより、または別手段によってレプチンの本来の活性をインビトロもしくはインビボで模倣することにより、改善される、向上される、阻害される、または予防される、任意の疾患または状態である。
【００３４】
一部の態様では、本明細書において、代謝機能不全または低レプチン血症を治療または予防するための治療方法が提供される。方法は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００３５】
一部の態様では、本明細書において、代謝機能不全もしくは低レプチン血症、または代謝機能不全もしくは低レプチン血症と関連する疾患もしくは状態、または当該疾患もしくは状態の一つまたは複数の症状を治療または予防するための治療法が提供される。方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００３６】
一部の実施形態では、状態は、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、女性の不妊症、無月経、ホルモンサイクル異常、免疫機能障害、甲状腺機能低下症、肥満、単一遺伝子型肥満、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、リポジストロフィー、先天性リポジストロフィー、全身型リポジストロフィー、後天性リポジストロフィー、部分型リポジストロフィー、先天性部分型リポジストロフィー、先天性全身型リポジストロフィー、後天性部分型リポジストロフィー、および後天性全身型リポジストロフィーからなる群から選択される。
【００３７】
一部の実施形態では、代謝機能不全または低レプチン血症と関連した疾患または状態の一つまたは複数の症状は、脂肪症、肥満、過食症、高血糖症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、インスリン抵抗性、脂質異常症、成長遅延、思春期成長スパートの遅延、成長ホルモン分泌異常、ＨｂＡ１ｃ上昇、低い骨ミネラル密度（または低骨量）、低い骨ミネラル含量、および低い除脂肪体重からなる群から選択される。代謝機能不全または低レプチン血症と関連した疾患または状態の症状は、ヒトＬＥＰＲに結合する抗体またはその抗原結合断片の投与の後、予防され、改善され、または重症度低下および／もしくは期間短縮され、または低減され得る。
【００３８】
さらに他の態様では、本明細書においてリポジストロフィーの代謝合併症を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、治療によって、対象において、高血糖症を緩和し、インスリン抵抗性を低下させ、高トリグリセリド血症を低下させ、循環コレステロール値を降下させ、および／またはＨｂＡ１ｃ値を降下させる。リポジストロフィーは、後天性部分型リポジストロフィー、後天性全身型リポジストロフィー、先天性部分型リポジストロフィー、および先天性全身型リポジストロフィーを含み得る。
【００３９】
先天性レプチン欠損症は、ＬＥＰＲまたはレプチンの病原性バリアントを特徴とする稀な疾患である。一部の対象は循環レプチンを有しているが、当該タンパク質は遺伝子突然変異、例えばｐ．Ｎ１０３Ｋが原因で非機能性であり、これは、レプチンの生物不活性型をコードする。一部の対象は、循環レプチンをほとんどまたは全く有さない。例えばＬＭＮＡ、ＰＰＡＲＧ、ＰＬＩＮ１、ＡＫＴ２、ＣＩＤＥＣ、ＬＩＰＥおよびＡＤＲＡ２Ａをはじめとする他の遺伝子がレプチンシグナル伝達の障害に関与する場合もあり、本明細書において提供される抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片は、レプチンシグナル伝達に対する当該変異の影響の軽減に有用である。
【００４０】
一部の態様では、本明細書において、先天性レプチン欠損症を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、対象はリポジストロフィーを有し、メトレレプチン治療に失敗している。一部の実施形態では、先天性リポジストロフィーと関連した症状は、ヒトＬＥＰＲに結合する抗体またはその抗原結合断片の投与の後、予防され、改善され、または重症度低下および／もしくは期間短縮され、または低減される。一部の実施形態では、治療は、対象において、過食症、肥満、高インスリン血症、脂質異常症、および脂肪肝のうちの一つまたは複数を逆転させ、または軽減する。一部の実施形態では、対象の血中グルコースが減少し、対象の体重が減少し、対象が食物摂取量の低下を呈し、対象の脂肪量（ｆａｔ  ｍａｓｓ）が減少し、対象の除脂肪量（ｌｅａｎ  ｍａｓｓ）が増加し、および／または対象の骨量（ｂｏｎｅ  ｍａｓｓ）が増加する。
【００４１】
一部の態様では、本明細書において、非アルコール性脂肪肝疾患または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療のための治療方法が提供される。一部の態様では、対象は、低レプチン血症、リポジストロフィー、またはレプチン欠損症である。この態様によると、方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、対象の肝重量は、治療後に減少する。一部の実施形態では、非アルコール性肝臓脂肪症を含む非アルコール性脂肪肝疾患の症状は、治療後に対象において減退される。一部の実施形態では、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の血漿レベル、および／またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の血漿レベルは、対象において減少される。
【００４２】
さらに他の態様では、本明細書において、代謝機能不全もしくは低レプチン血症と関連した、女性の不妊症、無月経を治療する方法、または正常なホルモンサイクルを回復させる方法が提供される。当該方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の態様では、ヒトＬＥＰＲに結合する抗体またはその抗原結合断片の投与は、生殖能力を増加させ、および／または妊娠の機会を増加させ得る。一部の態様では、対象は妊娠する。一部の態様では、治療は、正常な月経サイクルを回復または開始させ得る。
【００４３】
一部の態様では、本明細書において、代謝機能不全または低レプチン血症と関連した免疫機能障害を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、ヒトＬＥＰＲに結合する抗体またはその抗原結合断片の投与後、ＣＤ４＋Ｔ細胞数が増加する。
【００４４】
他の態様では、本明細書において、代謝機能不全または低レプチン血症を有する対象において骨量を増加させる方法が提供される。方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００４５】
他の態様では、本明細書において、脂肪症または肥満を治療する方法、または体重を減少させる方法が提供される。この態様によると、方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、治療は、脂肪量を減少させるが、除脂肪量を減少させない。
【００４６】
一部の実施形態では、その必要のある対象は、低レプチン血症、リポジストロフィー、またはレプチン欠損症である。一部の実施形態では、その必要のある対象は、低レプチン血症またはレプチン欠損症ではない。一部の実施形態では、代謝機能不全、脂肪症または肥満は、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異と関連しておらず、かつそれらにより引き起こされない。
【００４７】
一部の実施形態では、本明細書に提供される方法に従う、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体または抗原結合断片の投与は、視床下部のＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激し、またはレプチン誘導型もしくはレプチン非依存性のＳＴＡＴ３シグナル伝達を強化する。
【００４８】
一部の実施形態では、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片の投与は、循環血漿トリグリセリドを低下させ、および／または循環血漿総コレステロールを低下させる。
【００４９】
他の態様では、本明細書において、視床下部ＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激することにより、過食症、高血糖症、インスリン抵抗性、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または非アルコール性脂肪肝疾患を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。一部の実施形態では、治療は、循環血漿トリグリセリドを低下させる。一部の実施形態では、治療は、循環血漿総コレステロールを低下させる。
【００５０】
さらに他の態様では、本明細書において、先天性レプチン欠損症と関連した成長遅延、思春期成長スパートの欠落、および／または成長ホルモン分泌異常を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００５１】
さらに他の態様では、本明細書において、先天性レプチン欠損症と関連した甲状腺機能低下症を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００５２】
さらに他の態様では、本明細書において、低レプチン血症および／またはレプチン欠損症と関連した、低い骨ミネラル密度および／または低い骨ミネラル含量を治療するための方法が提供される。当該方法は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【００５３】
一つまたは複数のさらなる治療剤を、ヒトＬＥＰＲに結合する抗体またはその抗原結合断片とともに本明細書に記載される対象に投与してもよい。第二の治療剤は、組み換えヒトレプチン、ＰＣＳＫ９阻害剤、スタチン、エゼチミブ、インスリン、インスリンバリアント、インスリン分泌促進剤、メトホルミン、スルホニルウレア、ナトリウム・グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト／アナログ、グルカゴン（ＧＣＧ）阻害剤、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）阻害剤、アンジオポエチン様タンパク質（ＡＮＧＰＴＬ）阻害剤、フェンテルミン（Ｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）、オルリスタット（ｏｒｌｉｓｔａｔ）、トピラマート（Ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ）、ブプロピオン（Ｂｕｐｒｏｐｉｏｎ）、トピラマート／フェンテルミン、ブプロピオン／ナルトレキソン（Ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ）、ブプロピオン／ゾニサミド（Ｚｏｎｉｓａｍｉｄｅ）、プラムリンチド（Ｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅ）／メトレレプチン、ロルカセリン（Ｌｏｒｃａｓｅｒｉｎ）、セチリスタット（Ｃｅｔｉｌｉｓｔａｔ）、テソフェンシン（Ｔｅｓｏｆｅｎｓｉｎｅ）、ベルネペリト（Ｖｅｌｎｅｐｅｒｉｔ）、抗けいれん薬、ジゴキシン、クマディン、ビタミンＤ、チロキシン、甲状腺サプリメント、ビタミンサプリメント、カルシウムサプリメント、カルニチン、コエンザイムＱ１０、便秘防止薬、抗アレルギー薬、ガバペンチン、麻酔薬、ケタミン、リドカイン、またはベンラファキシン塩酸塩からなる群から選択されてもよい。
【００５４】
本発明はまた、患者において、（ｉ）リポジストロフィー（任意のタイプ）および／もしくは単一遺伝子型肥満；（ｉｉ）リポジストロフィーおよび／もしくは単一遺伝子型肥満と関連した状態；または（ｉｉｉ）（ｉ）もしくは（ｉｉ）の症状を治療、予防、または改善する方法を提供するものであり、当該方法は、その必要のある患者に、ＬＥＰＲに特異的に結合するアゴニスト性抗体（例えば、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２）またはその抗原結合断片を投与することを含む。例えば、本発明の実施形態において、リポジストロフィーおよび／または単一遺伝子型肥満と関連した状態は、超早期発症型肥満；過食症および満腹感の障害；免疫機能障害（ＣＤ４＋数）；インスリン抵抗性；非アルコール性脂肪肝疾患；ＮＡＳＨ、脂質異常症；糖尿病；生殖機能障害；性腺機能低下症；思春期成長スパートの欠落；甲状腺機能低下症；甲状腺機能障害；低い骨ミネラル密度および／または低骨量である。本発明の実施形態において、当該症状は、肥大肝、肝臓酵素の上昇、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血中レベルの上昇、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血中レベルの上昇、高度な脂肪症；年齢および性別に対する肥満度指数８５パーセンタイル超；食物探索行動異常；食物攻撃性行動異常；再発性のおよび潜在的致死性の感染症；高インスリン血症；肝臓脂肪症；ＮＡＳＨへの進行（リポジストロフィー）；高トリグリセリド血症；ＨｂＡ１ｃの上昇；高血糖値；耐糖能の障害；思春期発育の遅延；第二次性徴の発現の低下；無月経もしくは月経不順；不妊症；小人症；成長ホルモン分泌異常；Ｔ３の変化；ＴＳＨの変化；ならびに／または遊離チロキシンレベルの変化である。
【００５５】
本発明の実施形態では、アゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２；ＷＯ２０１７／６６２０４を参照のこと）は、以下のように投与される：（ｉ）約５ｍｇ／体重ｋｇの１回または複数回の静脈内投与；次いで（ｉｉ）約２５０〜３００ｍｇ、例えば２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を週に１回；次いで（ｉｉｉ）任意で、約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を１カ月に１回または約２８日に１回。例えば、（ｉ）約５ｍｇ／体重ｋｇの１回または複数回の静脈内投与；次いで（ｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を週に１回。本発明の実施形態では、抗体は、以下のように投与される：（ｉ）５ｍｇ／体重ｋｇを（１日目に）１回静脈内投与；次いで（ｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの４回の皮下投与を週に１回（例えば、４、１１、１８および２５日目）；次いで（ｉｉｉ）約２５０ｍｇまたは約３００ｍｇの１回または複数回の皮下投与を１カ月に１回または２８日に１回（例えば、５３、８１、１０９、１３７、１６５、および１９３日目）。例えば、本発明の実施形態では、最初の皮下投与は約４日目に行われ、これは１日目に行われる静脈内投与の約３日後である。
【００５６】
他の実施形態は、次の発明を実施するための形態の検討から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は、ＥＬＩＳＡにより測定された、被験抗ＬＥＰＲ抗体または対照分子の濃度を上昇させた中での、ヒトレプチンに対する二量体ヒトＬＥＰＲの結合を示す（吸光度は４５０ｎｍ）。
【００５８】
【図２】図２Ａ〜２Ｃは、野生型ＬＥＰＲ（丸）、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体（Ａ４０９Ｅ、四角）、またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体（Ｐ３１６Ｔ、三角）のいずれかを発現するＨＥＫ２９３細胞におけるＬＥＰＲシグナル伝達の程度を示す。ＬＥＰＲシグナル伝達は、ｐＳＴＡＴ３−Ｙ７０５／ＳＴＡＴ３の比率として表されており、レプチン（図２Ａ）、Ｈ４Ｈ１６６５０（図２Ｂ）、またはＨ４Ｈ１６６７９（図２Ｃ）の濃度を上昇させて処置された細胞から調製されたウェスタンブロッティングの濃度測定により測定された。
【００５９】
【図３】図３は、３ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体、または３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２もしくはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２から選択されるＬＥＰＲ抗体のいずれかを投与されたレプチン欠損マウスの平均１日食物摂取量を示す。
【００６０】
【図４】図４は、３ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体、または３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２もしくはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２から選択されるＬＥＰＲ抗体のいずれかを投与されたマウスの体重における平均変化率を示す。
【００６１】
【図５】図５は、平均±ＳＥＭとして表される、抗体処置の１日前（斜線無しのバー）および６日後（斜線付きのバー）のμＣＴにより定量された各抗体処置群における動物の平均脂肪量を示す。
【００６２】
【図６】図６は、Ｈ４Ｈ１８４８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４８７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４９２Ｐ２またはアイソタイプ対照から選択される３０ｍｇ／ｋｇの抗体を与えられたマウスの体重の変化率を示す。
【００６３】
【図７】図７Ａ〜７Ｂ。図７Ａは、抗ＬＥＰＲ抗体のＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４８７Ｐ２またはＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２を投与する前のマウスの脂肪量を示す。図７Ｂは、３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４８７Ｐ２、またはＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２で処置されたマウスの脂肪量を示す。
【００６４】
【図８】図８。図８は、検証された抗ＬＥＰＲ抗体がＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−ｌｕｃ／Ｍｆ  ＬＥＰＲ細胞株においてサル（Ｍｆ）ＬＥＰＲを活性化させたことを示す。
【００６５】
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｃ。レプチン欠損症は、１８週齢のオスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて、ｍＬｅｐｒ．ＥＣＤのＨＤＤにより０日目に誘導された。ＨＤＤの７日後、体重における相対的変化率に基づきマウスを２群に階層化し、対照モノクローナル抗体（灰色の丸またはバー）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒色の丸またはバー）の単回１０ｍｇ／ｋｇをＳＣ投与した。データは、平均±ＳＥＭである。＊、指定される時点のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２と対照モノクローナル抗体の比較に関して、Ｐ＜０．０５。＄、同じ各投与群内でのＨＤＤ前（−１日目）およびＨＤＤ後のいずれかの日（６日目または１３日目）の間で、Ｐ＜０．０５。＆、同じ各投与群内でのモノクローナル抗体前（６日目）とモノクローナル抗体後（１３日目）の間で、Ｐ＜０．０５。表示された日において各文字色により示された群に関し、０日目の基準から有意差はない（ｎｓ）。図９Ａは、実験経過中のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスの体重（左）と１日食物摂取量（右）を示しており、レプチン欠損の誘導によって急速な体重増加と過食症が生じることを示す。一群当たりＮ＝１４。図９Ｂは、ＨＤＤの１日前に行われた（−１日目）、モノクローナル抗体投与の１日前に行われた（ＨＤＤの６日後）、および投与の６日後に行われた（ＨＤＤの１３日後）、マイクロ−ＣＴイメージングによる身体組成解析を示す。脂肪量（左）と除脂肪量（右）の定量は、対照モノクローナル抗体投与群（Ｎ＝１４）およびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（Ｎ＝１４）投与群に対して示されている（それぞれ灰色と黒色のバー）。図９Ｃ。対照モノクローナル抗体（灰色のバー、Ｎ＝１４）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒色のバー、Ｎ＝１４）の単回投与で処置された誘導型レプチン欠損Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスから処置の６日後（１３日目）に取得された血漿の解析。
【図９Ｂ】図９Ａの説明を参照されたい。
【図９Ｃ】図９Ａの説明を参照されたい。
【００６６】
【図１０Ａ】レプチン受容体細胞外ドメインのヒト化Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスを作成するための遺伝子ターゲティングを示す。
【図１０Ｂ】オス野生型（Ｌｅｐｒ＋／＋、灰色のバー）およびＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（黒色のバー）マウスの体重（９週齢）と、体組成のマイクロ−ＣＴ定量（９〜１２週齢）。データは、平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝６〜１０匹。
【図１０Ｃ】８〜１１週齢のオスのＬｅｐｒ＋／＋（灰色の丸）マウス、およびＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（黒色の丸）マウスに対するインスリン耐性試験（０．７５Ｕ／ｋｇ、ＩＰ）。データは、平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝８〜９匹。
【図１０Ｄ】９〜１３週齢のオスのＬｅｐｒ＋／＋（灰色のバー）マウス、およびＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（黒色のバー）マウスにおける血清レプチン値。データは、平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝８〜９匹。
【００６７】
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｂ。図１１Ａ。マウスレプチン受容体細胞外ドメインをコードするプラスミド（ｍＬｅｐｒＥＣＤ．ｈＦｃ、黒色の丸）または対照プラスミド（対照ｈＦｃ、灰色の丸）の０日目の流体力学的ＤＮＡ送達（ＨＤＤ：ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ＤＮＡ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）を行った後の、８週齢のオスＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスにおける、体重（左）、０日目の基準からの体重の変化率（中央）および累積食物摂取量（右）。データは、平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝６。図１１Ｂ。マウスレプチン受容体細胞外ドメインをコードするプラスミド（ｍＬｅｐｒＥＣＤ．ｈＦｃ、黒色のバー）または対照プラスミド（対照ｈＦｃ、灰色のバー）のＨＤＤを行った７日後の体組成のマイクロ−ＣＴ定量。データは、脂肪量、除脂肪量、骨量、骨ミネラル含量、および骨密度（左から右）の平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝６。
【００６８】
【図１２Ａ】図１２Ａ〜図１２Ｃ。レプチン欠損症は、１７〜２０週齢のメス、または１８週齢のオスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて、ｍＬｅｐｒ．ＥＣＤのＨＤＤにより０日目に誘導された。ＨＤＤの７日後、体重における相対的変化率に基づきマウスをそれぞれ２つの動物群に階層化し、次いで対照モノクローナル抗体（灰色の丸またはバー）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒色の丸またはバー）の単回１０ｍｇ／ｋｇをＳＣ投与した。データは、平均±ＳＥＭである。＊、指定される時点のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２と対照モノクローナル抗体の比較に関して、Ｐ＜０．０５。＄、同じ各投与群内でのＨＤＤ前（−１日目）およびＨＤＤ後のいずれかの日（６日目または１３日目）の間で、Ｐ＜０．０５。＆、同じ各投与群内でのモノクローナル抗体前（６日目）とモノクローナル抗体後（１３日目）の間で、Ｐ＜０．０５。表示された日において各文字色により示された群に関し、０日目の基準から有意差はない（ｎｓ）。図１２Ａ。実験経過中のメスマウスの体重（左）と食物摂取量（右）から、レプチン欠損の誘導によって急速な体重増加と過食症が生じることが示される。体重の増加は、対照モノクローナル抗体の投与の後も継続する（Ｎ＝１４）。一群当たりＮ＝１０〜１１匹。図１２Ｂ。メスマウスに対するマイクロ−ＣＴイメージングによる体組成解析は、ＨＤＤの１日前に行われた（−１日目）、モノクローナル抗体投与の１日前に行われた（ＨＤＤの６日後）、および投与の６日後に行われた（ＨＤＤの１３日後）。データは、脂肪量、除脂肪量、骨量、骨ミネラル含量、および骨密度（左から右）の平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝１０〜１１匹。図１２Ｃ。オスマウスに対するマイクロ−ＣＴイメージングによる身体組成解析は、ＨＤＤの１日前に行われた（−１日目）、モノクローナル抗体投与の１日前に行われた（ＨＤＤの６日後）、および投与の６日後に行われた（ＨＤＤの１３日後）。データは、骨量、骨ミネラル含量、および骨密度（左から右）の平均±ＳＥＭである。一群当たりＮ＝１４。
【図１２Ｂ】図１２Ａの説明を参照されたい。
【図１２Ｃ】図１２Ａの説明を参照されたい。
【００６９】
【図１３Ａ】図１３Ａ〜図１３Ｄ。レプチン欠損症は、１７〜２０週齢のメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて、ｍＬｅｐｒ．ＥＣＤのＨＤＤにより０日目に誘導された。比較を目的として、マウス群に、対照ベクターを用いたＨＤＤを行った。ＨＤＤの７日後、ｍＬｅｐｒ．ＥＣＤを投与されたマウスを、体重に基づき３群に階層化して、対照モノクローナル抗体（灰色の丸またはバー）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒灰色の丸またはバー）の３ｍｇ／ｋｇを、２回（７日目および１３日目）ＳＣ投与した。またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置された誘導型レプチン欠損マウスにより消費される食物量を用いてペア飼育（ｐａｉｒ−ｆｅｄ）（明灰色の丸またはバー）を行った。データは、平均±ＳＥＭである。＊、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与されたＨＤＤ  ｍＬｅｐｒＥＣＤと比較された、シンボルカラーまたはバーで示された各群に関し、Ｐ＜０．０５。＃は、ＨＤＤ  ｍＬｅｐｒＥＣＤと比較された、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたＨＤＤ  ｍＬｅｐｒ  ＥＣＤのペア飼育動物の統計的有意性を示す。＄、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与されたＨＤＤ対照マウスと比較された、シンボルカラーまたはバーにより示される各群に関し、Ｐ＜０．０５。図１３Ａは、マウスのＨＤＤ前からの体重変化（左）および累積食物摂取量（右）を示す。一群当たりＮ＝６〜１１匹。図１３Ｂは、ＨＤＤ後、１３日目（処置の７日後）の前のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスに対する体組成のマイクロ−ＣＴ定量を示す。脂肪量、除脂肪量、骨量、骨ミネラル含量、および骨密度（左から右）。一群当たりＮ＝５〜１０匹。図１３Ｃは、ＨＤＤ後、１０日目（処置の３日後）のインスリン耐性試験を示す。マウスを４時間絶食させ、その後０分でインスリン処置した（１．０Ｕ／ｋｇ、ＩＰ）。インスリン耐性試験の血糖値およびグルコースの曲線下面積（ＡＵＣ）を示す（それぞれ左および右）。一群当たりＮ＝６〜１１匹。図１３Ｄは、１６日目または１７日目に取得された血漿脂質の化学的分析を示す。一群当たりＮ＝６〜１１匹。
【図１３Ｂ】図１３Ａの説明を参照されたい。
【図１３Ｃ】図１３Ａの説明を参照されたい。
【図１３Ｄ】図１３Ａの説明を参照されたい。
【００７０】
【図１４Ａ】図１４Ａ〜図１４Ｇ。オスのリポジストロフィーのａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（Ｔｇ）は、２７〜３０週齢で、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（灰色の丸またはバー）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒色の丸またはバー）を投与された。参照として、２７〜３０週齢のオスの非トランスジェニックＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（非Ｔｇ）も、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（白色の菱形および白色のバー）を投与された。すべてのデータは、平均±ＳＥＭである。＊、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスと比較された、シンボルカラーまたはバーにより示される各群に関し、Ｐ＜０．０５。＃、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスと比較された、シンボルカラーまたはバーにより示される各群に関し、Ｐ＜０．０５。＄、Ｐ＜０．０５、各群の−５日目と比較した２７日目。図１４Ａ、左および右はそれぞれ体重および累積食物摂取量を示す。一群当たりＮ＝８〜９匹。図１４Ｂ、左および右はそれぞれ、−５日目に投与される前、および２７日目の処置の後、マイクロ−ＣＴイメージングにより定量された除脂肪量と脂肪量を示す。一群当たりＮ＝９。図１４Ｃは、試験中の血糖値（左）、および２８日目のヘモグロビンＡ１ｃレベルのパーセント（右）を示す。一群当たりＮ＝９。図１４Ｄは、２３日目のインスリン耐性試験（０．５Ｕ／ｋｇ  ＩＰ）から得た血糖値と、グルコースの曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。一群当たりＮ＝９。図１４Ｅおよび１４Ｆは、循環脂質（Ｅ）と肝酵素レベル（Ｆ）が、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２−処置リポジストロフィーＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（Ｔｇ）マウスにおいて低下したことを示す。脂質（トリグリセリド、コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、およびＨＤＬ−Ｃ）および肝酵素レベル（アラニントランスミアナーゼのＡＬＴ、およびアスパラギン酸トランスアミナーゼのＡＳＴ）に関して２８日目に得られた血漿の化学的解析。一群当たりＮ＝９。図１４Ｇは、３０日目に採取された肝臓重量、肝トリグリセリド含量、および代表的ヘマトキシリンエオジン染色された肝切片（それぞれ左、中央および右）を示す。一群当たりＮ＝５。
【図１４Ｂ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【図１４Ｃ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【図１４Ｄ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【図１４Ｅ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【図１４Ｆ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【図１４Ｇ】図１４Ａの説明を参照されたい。
【００７１】
【図１５Ａ】図１５Ａ〜図１５Ｃ。指定される週齢でのオスの非Ｔｇ  Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ（黒色の丸または黒色のバー）およびａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋  Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（黒色の丸および黒色のバー）の表現型解析。データは平均±ＳＥＭである。＊指定される時点でのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較し、ｐ＜０．０５。図１５Ａ。左は、１２〜２４週齢の体重。中央は、およそ１５〜２０週齢でマイクロ−ＣＴイメージングにより定量された脂肪量。右は、１９〜２１週齢で測定された血漿レプチン値。一群当たりＮ＝１７〜２８匹。図１５Ｂ。１８〜２０週齢でのインスリン耐性試験（０．７５Ｕ／ｋｇのインスリン、ＩＰ）中の血糖値。一群当たりＮ＝１２〜１３匹。図１５Ｃ。左から右に、１５〜１７週齢でのトリグリセリド、コレステロール、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃの血漿レベル。一群当たりＮ＝２０〜２８匹。
【図１５Ｂ】図１５Ａの説明を参照されたい。
【図１５Ｃ】図１５Ａの説明を参照されたい。
【００７２】
【図１６Ａ】図１６Ａ。オスのリポジストロフィーのａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（Ｔｇ）は、２７〜３０週齢で、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（灰色のバー）またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（黒色のバー）を投与された。参照として、２７〜３０週齢のオスの非トランスジェニックＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（非Ｔｇ）も、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（白色のバー）を投与された。すべてのデータは、平均±ＳＥＭである。＊、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスと比較された各群に関し、Ｐ＜０．０５。＃、指定された時点で対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスと比較された各群に関し、Ｐ＜０．０５。＄、Ｐ＜０．０５。各群の−５日目と比較した２７日目。図１６Ａ。−５日目の投与前、および２７日目の処置後に定量された、骨量、骨ミネラル含量および骨密度（左から右）を示すマイクロ−ＣＴイメージングによる体組成。一群当たりＮ＝９。
【００７３】
【図１７−１】図１７Ａ〜図１７Ｅ。図１７Ａのデータは、対照（灰色のバー）もしくはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（暗灰色のバー）の単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ）を与えられた、またはレプチン点滴（３０μｇ／日  ＳＣ；黒色のバー）を与えられた３２〜３８週齢のリポジストロフィー（Ｔｇ）マウスである、オスのリポジストロフィーａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（Ｔｇ）のデータである。図１７Ｂ〜１７Ｅのデータについて、２７〜３０週齢のオスのＴｇマウスに、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（灰色の丸またはバー）もしくはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（暗灰色の丸またはバー）またはレプチン点滴（３０μｇ／日ＳＣ、黒色のバー）を投与した。示される場合、２７〜３０週齢のオスの非トランスジェニックＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（非Ｔｇ）も、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体（白色の菱形および白色のバー）を投与された。すべてのデータは、平均±ＳＥＭである。＊、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスと比較された、シンボルカラーまたはバーにより示される各群に関し、Ｐ＜０．０５。＃、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたＴｇマウスと比較された、シンボルカラーまたはバーにより示される各群に関し、Ｐ＜０．０５。図１７Ａは、前項からおよそ−１．５２ｍｍでの弓状核（Ａｒｃ）と視床下部腹内側部（Ｖｍｈ）における、ｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５の免疫組織化学染色であり、オスの３２〜３８週齢のリポジストロフィー（Ｔｇ）マウスにおいて、ｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５＋細胞の数が増加していることを示す。脳切片は、対照もしくはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ）の単回投与またはレプチン点滴（３０μｇ／日  ＳＣ）を処置された３日後に採取された脳からの切片である。ＡｒｃおよびＶｍｈにおけるｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５＋細胞数の代表的な顕微鏡写真および定量（それぞれ左、中央、および右）を示している。一群当たりＮ＝４〜５匹。図１７Ｂの左は、実験中の血糖値を示す。中央と右は、９日目のインスリン耐性試験中の血糖値、およびグルコースレベルの曲線下面積である。一群当たりＮ＝８〜９匹。図１７Ｃは、体重（左）、体重における変化（中央）、および累積食物摂取量（右）を示す。一群当たり、Ｎ＝８〜９匹のＴｇマウス。非Ｔｇマウスについては、Ｎ＝５。図１７Ｄは、トリグリセリド、コレステロール、ＬＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃに関する、１３日目に取得された血漿の化学的分析であり、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置で血漿トリグリセリドおよびコレステロールが低下したことを示す。一群当たり、Ｎ＝８〜９匹のＴｇマウス。非Ｔｇマウスについては、Ｎ＝５。図１７Ｅは、１４日目に取得された肝臓の肝重量（左）および肝トリグリセリド含量（右）を示す。一群当たり、Ｎ＝６〜９匹のＴｇマウス。非Ｔｇマウスについては、Ｎ＝５。
【図１７−２】図１７−１の説明を参照されたい。
【図１７−３】図１７−１の説明を参照されたい。
【００７４】
【図１８Ａ】図１８Ａ〜図１８Ｄ。図１８Ａおよび１８Ｂに示されるデータは、対照モノクローナル抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ；灰色の丸）、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ；白色の丸）、またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇ；黒色の丸）の単回投与を与えられた３２週齢のメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスのデータである。図１８Ｃに示されるデータは、対照（ＳＣ；灰色の丸）、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ；白色の丸）、またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇ；黒色の丸）の単回投与を与えられた痩せたオスとメスのカニクイザルのデータである。図１８Ｄに示されるデータは、対照（ＩＶ；灰色の丸）、またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ；黒色の丸）の２回投与量を与えられた高体重（約６．０ｋｇ）のオスとメスのカニクイザルのデータである。データは、平均±ＳＥＭである。＊、指定された時点での各対照と比較されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇ）に対し、Ｐ＜０．０５。＃、指定された時点での各対照と比較されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３ｍｇ／ｋｇ）に対し、Ｐ＜０．０５。＄、指定された時点でのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇ）と比較されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３ｍｇ／ｋｇ）に対し、Ｐ＜０．０５。＆、各対照と比較されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（３０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）に対し、Ｐ＜０．０５。図１８Ａは、痩せたメスマウスにおける実験の間の、０日目の投与前からの体重における変化率（左）および食物摂取量（右）を示す。一群当たりＮ＝６〜７匹。図１８Ｂは、定量的ＮＭＲ解析であり、痩せたメスマウスにおける実験の間の、０日目の投与前からの脂肪量（左）および除脂肪量（右）における変化率を示す。一群当たりＮ＝６〜７匹。図１８Ｃは、痩せたマウスにおける実験の間の、−１日目の投与前からの体重における変化率を示す。一群当たりＮ＝１２。図１８Ｄは、−１４日目、−７日目および−１日目の投与前平均からの体重における変化割合（左）、ならびに脂肪量における変化率（中央）、および除脂肪量における変化率（右）を示しており、高体重の太ったサルにおいて、実験中にＤＥＸＡ（体組成測定用の二重エネルギーＸ線吸収測定法（Ｄｕａｌ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｘ−Ｒａｙ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｍｅｔｒｙ））により定量された。対照群およびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与群のそれぞれに対し、Ｎ＝４および８。
【図１８Ｂ】図１８Ａの説明を参照されたい。
【図１８Ｃ】図１８Ａの説明を参照されたい。
【図１８Ｄ】図１８Ａの説明を参照されたい。
【００７５】
【図１９】図１９は、例外的使用の臨床試験において利用された単一患者プロトコールを示す。
【００７６】
【図２０Ａ−１】図２０Ａは、治療期間１においてＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療を受けた患者の評価スケジュールを示す表である。
【図２０Ａ−２】図２０Ａ−１の説明を参照されたい。
【図２０Ｂ−１】図２０Ｂは、治療期間２および延長治療期間においてＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療を受けた患者の評価スケジュールを示す表である。
【図２０Ｂ−２】図２０Ｂ−１の説明を参照されたい。
【００７７】
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｃは、先天性レプチン欠損症のマウスモデルにおける、血中グルコース、体重および食物摂取量に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果を示す。図２１Ａは、ｍｇ／ｄＬを単位とした血中グルコースを示し、図２１Ｂは、グラム単位での体重、および図２１Ｃは、グラム単位での累積食物摂取量を示す。灰色の丸は、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（Ｎ＝５）。黒色の四角は、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−（Ｎ＝７）。白色の四角は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−（Ｎ＝８）。データは、平均＋ＳＥＭとして表された。＊、二元配置ＡＮＯＶＡとテューキーの事後検定による、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ，Ｌｅｐ−／−  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照と比較されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−  ＋  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２群に対し、Ｐ＜０．０５。食物摂取量評価に関し、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照群から２匹のマウスが除外され、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−  ＋  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２群から１匹のマウスが除外された。原因は、それらマウスのケージ中に過度に細かく刻まれた食物があったためである。
【００７８】
【図２２】図２２Ａ〜２２Ｃは、先天性レプチン欠損症のマウスモデルにおける、μＣＴ体組成解析による脂肪量、骨量および除脂肪量を示す。図２２Ａは、脂肪量、図２２Ｂは、骨量、および図２２Ｃは、除脂肪量をグラム単位で示す。マウスには、試験開始前の−５日目に基準スキャンを行った。ｍＡｂ投与後のスキャンは、試験の３５日目に行われた。灰色のバーは、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（Ｎ＝５）。黒色のバーは、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−（Ｎ＝７）。白色のバーは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕＬｅｐ−／−（Ｎ＝８）。マウスには、１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはアイソタイプ対照抗体のいずれかを毎週皮下注射した。データは、平均＋ＳＥＭとして表された。＊、基準と比較して、Ｐ＜０．０５。＃、各時点でのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照と比較して、Ｐ＜０．０５。＋、各時点でのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２群と比較して、Ｐ＜０．０５。統計解析は、二元配置ＡＮＯＶＡとテューキーの事後検定により実施された。
【００７９】
【図２３】図２３Ａ〜２３Ｃは、先天性レプチン受容体欠損症のマウスモデルにおける、血中グルコース、体重および食物摂取量に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果を示す。図２３Ａは、ｍｇ／ｄＬを単位とした血中グルコースを示し、図２３Ｂは、グラム単位での体重、および図２３Ｃは、グラム単位での累積食物摂取量を示す。灰色の丸は、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（Ｎ＝７〜８）。黒色の四角は、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ（Ｎ＝９〜１０）。白色の四角は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ（Ｎ＝１０）。データは、平均＋ＳＥＭとして表された。＊、シダックの事後検定を用いた混合効果モデルによる、ＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照と比較した、ＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ  ＋  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２群に関し、Ｐ  ＜．０５。食物摂取量評価に関し、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照群から１匹のマウスが除外され、ＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照群から１匹のマウスが除外された。原因は、試験中の死亡によるものであった。食物摂取量評価に関し、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照群から１匹のマウスが除外され、ＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照群から３匹のマウスが除外された。原因は、試験中、過度に細かく刻まれた食物があったためである。
【００８０】
【図２４】図２４Ａ〜２４Ｃは、先天性レプチン受容体欠損症のマウスモデルにおける、μＣＴ体組成解析による脂肪量、骨量および除脂肪量を示す。図２４Ａは、脂肪量、図２４Ｂは、骨量、および図２４Ｃは、除脂肪量をグラム単位で示す。マウスには、試験開始前の−１日目に基準スキャンを行った。ｍＡｂ投与後のスキャンは、試験の４１日目に行われた。灰色のバーは、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ（Ｎ＝７〜８）。黒色のバーは、ＩｇＧ４Ｐ対照を投与されたＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ（Ｎ＝９〜１０）。白色のバーは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ（Ｎ＝１０）。マウスには、１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体のいずれかを毎週皮下注射した。データは、平均＋ＳＥＭとして表された。＊、基準と比較して、Ｐ＜０．０５。＃、各時点でのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  ＋  ＩｇＧ４Ｐ対照と比較して、Ｐ＜０．０５。＋、各時点でのＬｅｐｒＡ４０９Ｅ／Ａ４０９Ｅ  ＋  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２と比較して、Ｐ＜０．０５。すべての統計解析は、シダック事後検定を用いた混合効果モデルを使用して実施された。
【００８１】
【図２５−１】図２５は、ヒト初回投与臨床試験のパートＡコホートのイベントスケジュールを示しており、スクリーニング、治療および追跡ビジットのための各ビジットで実施される手順を含む。
【図２５−２】図２５−１の説明を参照されたい。
【００８２】
【図２６−１】図２６は、ヒト初回投与臨床試験のパートＢコホートのイベントスケジュールを示しており、前スクリーニング、スクリーニング、および基準決定のための各ビジットで実施される手順を含む。
【図２６−２】図２６−１の説明を参照されたい。
【図２６−３】図２６−１の説明を参照されたい。
【００８３】
【図２７−１】図２７は、ヒト初回投与臨床試験のパートＢコホートの第二のイベントスケジュールを示しており、治療および追跡のための各ビジットで実施される手順を含む。
【図２７−２】図２７−１の説明を参照されたい。
【発明を実施するための形態】
【００８４】
レプチンは脂肪組織ホルモンであり、エネルギーバランスならびに代謝機能と神経内分泌機能を支配する（Ｆｌａｋ  ａｎｄ  Ｍｙｅｒｓ，Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１６；３０：３−１２；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９４；３７２：４２５−４３２）。エネルギー欠乏の状態では、低い循環レプチン値が適応反応を誘発し、そうした反応には、神経内分泌経路の調節を介した空腹感の上昇とエネルギー保存が含まれる。クラスＩサイトカイン受容体ファミリーの１種であるレプチン受容体（ＬＥＰＲ）を会合させることにより、レプチンはエネルギーバランスと代謝バランスを調節する（Ｔａｒｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。ＬＥＰＲは単一遺伝子によりコードされており、代替的スプライシングによってＬＥＰＲの複数のスプライスアイソフォームが生じる。それらアイソフォームは、Ｃ末端配列が異なっている（Ｂａｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。これらのスプライスアイソフォームのうち、ＬＥＰＲ−ｂは、レプチンの効果を介在する基本的なアイソフォームであり、そしてＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達を刺激する唯一のアイソフォームである（Ｂａｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｔａｒｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｗｈｉｔｅ  ａｎｄ  Ｔａｒｔａｇｌｉａ，１９９６）。脳中のＬＥＰＲ−ｂ発現ニューロンが、エネルギー、代謝、および神経内分泌のホメオスタシスに対するレプチンの作用の基本的な標的でありかつメディエーターである。これは、Ｌｅｐｒｄｂ／ｄｂマウスにおけるＬｅｐｒ−ｂの選択的ニューロン発現によって肥満、糖尿病および繁殖能力の表現型が回復するという実験結果により支持される（ｄｅ  Ｌｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。さらにニューロンからＬｅｐｒ遺伝子を欠失させることで、Ｌｅｐｒｄｂ／ｄｂ動物の肥満と高血糖の表現型が模写された（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。レプチン欠損症の原因は、Ｌｅｐ遺伝子における機能喪失性の遺伝子変異であり、これにより過食、肥満、インスリン抵抗性、脂質異常症および神経内分泌機能障害がマウスで生じ、これらはレプチン治療で反転される（Ｂａｒａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｃａｍｐｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｃｈｅｈａｂ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｈａｌａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。臨床的には、レプチンアナログであるメトレレプチンが、レプチン欠損症による単一遺伝子型肥満を有する患者において、肥満ならびに代謝機能不全および生殖機能障害を反転させる（Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。原発性のレプチン欠損症と同じく、二次的な低レプチン血症の疾患状態も、グルコースと脂質の代謝機能不全に関連しており、これらはレプチン治療で逆転させることができる。先天性および後天性の全身型リポジストロフィーは稀で重度な疾患であり、脂肪組織の貯蔵のほぼ完全な消失を特徴とする（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｐａｔｎｉ  ａｎｄ  Ｇａｒｇ，２０１５）。これら患者における、非常に低い循環レプチン値によって、過食症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、��臓脂肪症、インスリン抵抗性および糖尿病の状態が生じる（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｐａｔｎｉ  ａｎｄ  Ｇａｒｇ，２０１５）。特にＴＧレベルが５００ｍｇ／ｄＬ〜１０００ｍｇ／ｄＬを超えた場合、高トリグリセリド血症の重度な合併症は、急性で再発性の膵炎（Ｙａｄａｖ  ａｎｄ  Ｐｉｔｃｈｕｍｏｎｉ  ２００３）であり、感染または臓器不全のような合併症を伴う場合には４０％を超える死亡率で生死を脅かす可能性がある（ＵＫ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ２００５）。肝臓における異所性の脂質蓄積（肝臓脂肪症）は、脂肪性肝炎を生じる場合がある。脂肪性肝炎は、脂肪の蓄積、細胞損傷、および肝臓の炎症が特徴であり、肝硬変の最も普遍的な原因の一つである（Ｅｌ−Ｚａｙａｄｉ  ２００８，Ｆｅｄｅｒｉｃｏ  ２００６，ａｎｄ  Ｆｅｓｔｉ  ２００４）。
【００８５】
全身型リポジストロフィーによるほぼ完全な脂肪蓄積消失の特性を発現させるＴｇ−ａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃマウスにおいて、レプチン治療によって過食は低減され、脂質異常症、肝臓脂肪症および血糖管理が改善された（Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。メトレレプチンは、全身型リポジストロフィーの患者において代謝機能不全を軽減する（Ｏｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。しかし、部分型リポジストロフィーの患者の治療には承認されていない（Ａｊｌｕｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【００８６】
リポジストロフィーの患者はしばしば、例えば慢性腎疾患、心血管系の合併症、自己免疫疾患、ならびに末梢Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病およびホジキンリンパ腫などの他の重篤な共存症を経験している。
【００８７】
先天性レプチン欠損症の患者は、誕生後の最初の数カ月で急速な体重増加と免疫異常を呈し、生後１０〜２０年以内の死亡リスクが著しく上昇する（Ｆｕｎｃｋｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｅｐｔｉｎ  ｇｅｎｅ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｅｄｉａｔｒ．２０１４；１（１）：３）；（Ｄｕｂｅｒｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｐｔｉｎ  ａｎｄ  ｌｅｐｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ．２０１２；９４（１０）：２１１１−５）；（Ｐａｚ−Ｆｉｌｈｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｎ  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｌｅｐｔｉｎ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｒｅｖｉｅｗｓ．２０１１；１２：ｅ３１５−ｅ３２３．）。先天性レプチン欠損症に承認された治療法は存在しないが、レプチンの機能喪失性変異が原因の単一遺伝子型肥満の患者のいくつかの小規模な非盲検試験において、レプチン治療によって、食欲、体重、脂肪症、代謝異常、骨年齢と実年齢の間のギャップ、ホルモン異常、および免疫異常が大幅に低減した（Ｗａｂｉｔｓｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｖｅｒｅ  Ｅａｒｌｙ−Ｏｎｓｅｔ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ｄｕｅ  ｔｏ  Ｂｉｏｉｎａｃｔｉｖｅ  Ｌｅｐｔｉｎ  Ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ａ  ｐ．Ｎ１０３Ｋ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｌｅｐｔｉｎ  Ｇｅｎｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１５；１００（９）：３２２７−３２３０）；（Ｆａｒｏｏｑｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｌｅｐｔｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａ  ｃｈｉｌｄ  ｗｉｔｈ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｌｅｐｔｉｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．１９９９；３４１（１２）：８７９−８４）；（Ｌｉｃｉｎｉｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｅｐｔｉｎ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｏｎ  ｍｏｒｂｉｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ，ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ｈｙｐｏｇｏｎａｄｉｓｍ，ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｉｎ  ｌｅｐｔｉｎ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ａｄｕｌｔｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００４；１０１（１３）：４５３１−６）；（Ｇｉｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  Ｌｅｐｔｉｎ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｄｕｅ  ｔｏ  Ｈｏｍｏｚｙｇｏｓｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｌｔａ１３３Ｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎ：ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｃａｓｅ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｆｏｕｒ  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｌｅｐｔｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．＆  Ｍｅｔａｂ．２００４；８９（１０）：４８２１−４８２６）。他の報告されているレプチン療法では、血漿甲状腺ホルモンレベルの急速で持続的な増加が生じ、そして適切なタイミングの思春期発育が促進され、循環ＣＤ４（＋）Ｔ細胞数およびＴ細胞増殖およびサイトカイン放出が改善された（Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｅｐｔｉｎ  ｏｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ，Ｔ  ｃｅｌｌ  ｈｙｐｏｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ，ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ／ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｌｅｐｔｉｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００２；１１０（８）：１０９３−１１０３）。しかしながら一部の症例では、中和活性を有する抗メトレレプチン抗体が発生し、患者は標的治療の選択肢が無い状態となってしまう（Ｏｚｓｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅａｒｌｙ−ｏｎｓｅｔ  ｓｅｖｅｒｅ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｅｐｔｉｎ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ａ  ｂｏｙ．Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１７；３０（１１）：１２２７−１２３０）。本明細書において、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２（ＷＯ２０１７／６６２０４を参照）などのレプチン受容体アゴニストを使用して、先天性レプチン欠損症の患者を治療する方法が提供される。
【００８８】
本明細書において、レプチンと似た効能を有する、ヒトＬＥＰＲを活性化するアゴニスト性モノクローナル抗体が提供される。ＬＥＰＲのモノクローナル抗体介在性の活性化は、原発性および二次性のレプチン欠損障害のマウスモデルにおいて、重度な体重増加と代謝機能不全の逆転に有効である。さらにＬＥＰＲアゴニスト性モノクローナル抗体は、正常な重量のマウス、ならびに正常な体脂肪と高体脂肪の非ヒト霊長類において、脂肪症と体重を減少させ、そして循環レプチンの存在下でＬＥＰＲを刺激する。
【００８９】
本開示が、記述される特定の方法および実験条件に限定されず、それはこのような方法および条件が変化する場合があるからであることが理解されるべきである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって制限されるため、本明細書に使用される用語は、特定の実施形態のみを記述する目的で使用されており、制限することを意図しないことも理解されるべきである。
【００９０】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書にて使用される場合、用語「約」とは、特定の言及される数値に関して使用される場合、値が言及された値から１％以下まで変動し得ることを意味する。例えば、本明細書にて使用される場合、「約１００」という表現には、９９および１０１、ならびに間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、など）が含まれる。
【００９１】
本明細書に記述したものと類似または同等な任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をこれから記述する。
【００９２】
定義
本明細書で使用される場合、「レプチン受容体」、「ＬＥＰＲ」、およびこれに類する表現は、配列番号１１３で表されるアミノ酸配列を含むヒトレプチン受容体を意味する（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ登録番号Ｐ４８３５７も参照）。科学的文献で使用されるＬＥＰＲの代替名は、「ＯＢ受容体」、「ＯＢ−Ｒ」、および「ＣＤ２９５」を含む。ＬＥＰＲは、「ＷＳＸ」とも称される（例えば、米国特許第７，５２４，９３７号を参照）。「ＬＥＰＲ」という表現には、単量体および多量体（例えば、二量体）ＬＥＰＲ分子の両方が含まれる。本明細書において使用される場合、「単量体ヒトＬＥＰＲ」という表現は、多量体形成ドメインを全く含有も包含もせず、かつ、別のＬＥＰＲ分子への直接の物理的接続なしに単一のＬＥＰＲ分子として通常の条件下で存在する、ＬＥＰＲタンパク質またはその部分を意味する。例示的な単量体ＬＥＰＲ分子は、本明細書において、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む「ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ」と呼称される分子である（例えば、本明細書の実施例３を参照）。本明細書で使用される場合、「二量体ヒトＬＥＰＲ」という表現は、リンカー、共有結合、非共有結合を介してまたは抗体Ｆｃドメインなどの多量体形成ドメインを介して互いに接続された二個のＬＥＰＲ分子を含む構築物を意味する。例示的な二量体ＬＥＰＲ分子は、本明細書において、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む「ｈＬＥＰＲ．ｍＦｃ」（例えば、本明細書の実施例３を参照のこと）、または配列番号１１６のアミノ酸配列を含む「ｈＬＥＰＲ．ｈＦｃ」と呼称される分子である。本明細書において使用される場合、具体的な別段の示唆が無い限り、「抗ＬＥＰＲ抗体」、「ＬＥＰＲに特異的に結合する抗体」、「ＬＥＰＲ特異的結合タンパク質」といった表現は、全長ヒトＬＥＰＲ、単量体ヒトＬＥＰＲ、二量体ヒトＬＥＰＲ、またはＬＥＰＲ細胞外ドメインを含む、もしくはＬＥＰＲ細胞外ドメインからなる他の構築体に結合する分子を指す。
【００９３】
本明細書における、タンパク質、ポリペプチド、およびタンパク質断片への全ての言及は、非ヒト種からと明示的に指定されていない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、またはタンパク質断片のヒトバージョンを指すことが意図されている。したがって、「ＬＥＰＲ」という表現は、例えば、「マウスＬＥＰＲ」、「サルＬＥＰＲ」など、非ヒト種からであると特定されていない限り、ヒトＬＥＰＲを意味する。
【００９４】
本明細書において使用される場合、「細胞表面発現ＬＥＰＲ」という表現は、ＬＥＰＲタンパク質の少なくとも一部が細胞膜の細胞外側に曝露されて抗体の抗原結合部分にアクセス可能であるように、インビトロまたはインビボで細胞の表面上に発現される、一つ以上のＬＥＰＲタンパク質またはその細胞外ドメインを意味する。「細胞表面発現ＬＥＰＲ」は、ＬＥＰＲタンパク質を正常に（例えば天然の状態で、または野生型の状態で）発現する細胞の表面上で発現されるＬＥＰＲタンパク質を含むか、またはそれからなり得る。あるいは、「細胞表面発現ＬＥＰＲ」は、通常はその表面上にヒトＬＥＰＲを発現しないがその表面上にＬＥＰＲを発現するように人為的に操作されている細胞の表面上で発現されるＬＥＰＲタンパク質を含むか、またはそれからなりうる。
【００９５】
本明細書で使用される場合、例えば「抗ＬＥＰＲ抗体」または「ヒトレプチン受容体に結合する抗体」などの表現は、単一特異性を有する一価抗体、ならびにＬＥＰＲに結合する第一のアームと第二（標的）抗原に結合する第二のアームを含む二重特異性抗体の両方を含み、この場合において当該抗ＬＥＰＲアームは、本明細書の表１に記載されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列またはＣＤＲ配列のいずれかを含む。
【００９６】
「抗体」という用語は、本明細書にて使用される場合、特定の抗原（例えば、ＬＥＰＲ）と特異的に結合するまたは相互作用する少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、あらゆる抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」には、四つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合によって相互接続した二つの重（Ｈ）鎖および二つの軽（Ｌ）鎖、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む、イムノグロブリン分子が包含される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと省略される）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の三つのドメインを含む。軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、一つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施形態において、抗ＬＥＰＲ抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒトの生殖系列配列と同一であってもよく、または自然にもしくは人為的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、二つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義されうる。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、または遺伝子的に操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、抗体可変ドメインおよび任意で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を要するタンパク質分解または組み換え遺伝子工学技術といった任意の好適な標準的方法を用いて、完全抗体分子から導いてもよい。このようなＤＮＡは公知であり、かつ／または例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成されうる。ＤＮＡを配列決定しかつ化学的にまたは分子生物学技法の使用によって操作して、例えば、一つまたは複数の可変ドメインおよび／または定常ドメインを好適な構成に配置する、またはコドンを導入する、システイン残基を作成する、アミノ酸を修飾する、付加する、もしくは欠失させることなどが可能である。
【００９８】
抗原結合断片の非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束ＦＲ３‐ＣＤＲ３‐ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という表現に包含される。
【００９９】
抗体の抗原結合断片は、典型的に、少なくとも一つの可変ドメインを含む。可変ドメインは任意の大きさでもアミノ酸組成でもよく、かつ、一つ以上のフレームワーク配列に隣接するまたはフレーム内にある少なくとも一つのＣＤＲを一般的に含み得る。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗原結合断片において、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して配置されうる。例えば、可変領域は二量体であり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬの二量体を含有し得る。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶＨまたはＶＬドメインを含有し得る。
【０１００】
特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも一つの定常ドメインに共有結合された少なくとも一つの可変ドメインを含有しうる。本発明の抗体の抗原結合断片内に見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な構成には、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが含まれる。上に列挙される例示的な構成のうちのいずれかを含む可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結され得るか、または完全もしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって連結されうる。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子における隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可動性または半可動性連鎖をもたらす、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなってもよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いにおよび／または一つまたは複数の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインとの（例えば、ジスルフィド結合による）非共有会合で上に列挙される可変ドメイン構成および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含みうる。
【０１０１】
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は単一特異性または多重特異性（例えば二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合断片は、典型的に、少なくとも二つの異なる可変ドメインを含み、各々の可変ドメインは、別個の抗原、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能な常套的な技術を使用して、本発明の抗体の抗原結合断片に関する使用のために適合されうる。
【０１０２】
本発明の特定の実施形態では、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、ヒト抗体である。用語「ヒト抗体」は、本明細書にて使用される場合、ヒト生殖系列イムノグロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲにおいて、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでの無作為または部位特異的な突然変異誘導により、またはインビボでの体細胞変異により変異が導入される）。しかしながら、用語「ヒト抗体」とは、本明細書にて使用される場合、マウスなどの別の哺乳類種の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植されている抗体を含むようには意図されていない。
【０１０３】
本発明の抗体は、一部の実施形態では、組換えヒト抗体であってもよい。用語「遺伝子組換えヒト抗体」とは、本明細書にて使用される場合、遺伝子組換え手段によって、調製される、発現する、作成される、または単離される全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞（以下で詳述する）中に形質導入された組換え発現ベクターを用いて発現した抗体、組換え体から単離された抗体、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリ（以下で詳述する）、ヒトイムノグロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照のこと）、または抗体ヒトイムノグロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へスプライスすることを含むあらゆるその他の手段によって調製される、発現する、作成される、または単離される抗体などを含むように意図される。その様な遺伝子組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列イムノグロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する。特定の実施形態において、しかしながら、その様な遺伝子組換えヒト抗体はインビトロでの突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列にトランスジェニックな動物を使用する場合、インビボでの体細胞の突然変異誘発）に供されるため、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、関連する配列である一方で、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー中には自然に存在し得ない。
【０１０４】
本発明は、ヒンジ、ＣＨ２領域またはＣＨ３領域において一つまたは複数の変異を有する抗体を包含し、それら変異は、例えば製造において、所望の抗体型の収率を改善するためなどに望ましい可能性がある。
【０１０５】
本発明の抗体は、単離抗体であってもよい。本明細書において使用される場合、「単離抗体」とは、その天然環境の少なくとも一つの構成要素から特定され、および分離され、および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物体の少なくとも一つの構成要素から、または当該抗体が自然に存在する、もしくは自然に産生される組織または細胞から、分離され、または取り出された抗体は、本発明の目的に関して「単離抗体」である。単離抗体は、組み換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕな抗体を含む。単離抗体は、少なくとも一つの精製工程または単離工程を受けた抗体である。特定の実施形態によれば、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【０１０６】
本発明は、抗体が誘導された対応する生殖細胞系列配列と比較して、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワークならびに／またはＣＤＲ領域に一つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を含む、本明細書に開示される抗ＬＥＰＲ抗体のバリアントを含む。そのような変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認されうる。本発明は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびこれらの抗原結合断片を含み、一つまたは複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の一つまたは複数のアミノ酸は、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換へと変異する（そのような配列変化は、本明細書において集合的に「生殖細胞系変異」と称される）。当業者であれば、本明細書に開示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から開始して、一つまたは複数の個々の生殖系列変異またはそれらの組合わせを含む、多くの抗体および抗原結合断片を容易に産生することができる。特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のすべてが、抗体が由来する元の生殖系列配列に見られる残基に再び変異する。他の実施形態では、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に見られる変異残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見られる変異残基のみが、元の生殖系列配列に変異する。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちの一つまたは複数は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基に変異する。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に二つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基が、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なる他の残りの残基が維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、一つ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合断片は、結合特異性の改善、結合アフィニティの増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または亢進（場合により得る）、免疫原性の低下などの一つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合断片は、本発明に包含される。
【０１０７】
本発明は、本明細書に開示される例示的抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかに存在する、一つもしくは複数の可変ドメインまたはＣＤＲのアミノ酸配列に対し、実質的に類似した、または実質的に同一であるアミノ酸配列を含む抗ＬＥＰＲ抗体および抗原結合断片を含む。
【０１０８】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似の」という用語は、二つのペプチド配列が、既定のギャップ重みを用いてプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換の点で異なっている。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能性特性を実質的に変化させない。二つ以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合、配列同一性の百分率または相同性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）含硫側鎖はシステインおよびメチオニンである、が挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０  ｌｏｇ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｍａｔｒｉｘにおける正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負以外の値を有する何らかの変化である。
【０１０９】
ポリペプチドに関する配列類似性は、配列同一性とも呼称され、典型的には配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似性の測定値を用いて、類似の配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間のまたは野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を判定するための既定パラメータとともに使用することができるＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複の領域の整列および配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【０１１０】
本明細書において使用する場合、「対象」という用語は、レプチン欠損症と関連した疾患または障害の改善、予防、および／または治療を必要とする動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。対象は、成人または幼児であり得る。対象は、例えば全身型リポジストロフィーまたは部分型リポジストロフィーなどの代謝機能不全を有し得る。対象は、先天性レプチン欠損症または後天性レプチン欠損症を有し得る。先天性レプチン欠損症を有する対象には、循環レベルのレプチンをほとんどもしくは全く生じさせない、または循環するが生物活性が無いレプチンを生じさせる遺伝子変異を有する対象が含まれる。対象は、レプチン欠損症に関連する一つまたは複数の症状を有し得る。本明細書において使用される場合、「対象」という用語は、「患者」という用語と相互交換可能である。一部の態様では、対象は、メトレレプチンに対する中和抗体を有する。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」という用語は、本発明の抗体などの治療剤を、それを必要とする対象に投与することによって、レプチン欠損症の少なくとも一つの症状の重症度の低下または改善を指す。当該用語は、関連疾患の進行の阻害、または疾患に関連した状態もしくは症状の悪化の阻害を含む。当該用語は、疾患の肯定的な予後も含む。すなわち、本発明抗体などの治療剤の投与によって、対象は、症状が無くなり得る。肯定的な予後には、以下の状態のいずれかの軽減が含まれ得る：過食症、高血糖症、インスリン抵抗性、脂質異常症、または肝臓脂肪症。
【０１１２】
「予防する」、「予防すること」または「予防」という用語は、レプチン欠損症と関連した任意の症状、状態または兆候の発現の阻害を指す。
【０１１３】
治療剤は、治療用量で対象に投与されてもよい。「治療有効量」という句によって意味されるのは、所望の効果のために投与されて所望の効果を生じる量である。正確な量は、治療の目的に依存し、公知の技術を使用して当業者によって確認可能であり（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）、そして本明細書において詳細に検討される。
【０１１４】
Ｆｃバリアントを含む抗ＬＥＰＲ抗体
本発明の特定の実施形態によると、例えば中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＦｃＲｎ受容体への抗体結合を強化するまたは減少させる一つまたは複数の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に変異を含む抗ＬＥＰＲ抗体を含み、この場合において当該変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲のエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインのアフィニティを増加させる。そのような突然変異は、動物に投与されたときに抗体の血清半減期の増加をもたらしうる。このようなＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における修飾、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ｈ／ＦまたはＹ）における修飾、あるいは２５０位および／もしくは４２８位における修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における修飾が含まれる。一実施形態では、修飾は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、ならびに３０７および／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆおよび／または３０８Ｐ）を含む。
【０１１５】
例えば、本発明は、以下からなる群から選択される変異の一つ以上のペアまたは群を含むＦｃドメインを含む抗ＬＥＰＲ抗体を含む：２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；および４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３Ｋ  およびＮ４３４Ｆ）。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせが、本発明の範囲内であることが企図される。
【０１１６】
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、エフェクター機能が低下した改変型Ｆｃドメインを含んでもよい。本明細書において使用される場合、「エフェクター機能が低下した改変型Ｆｃドメイン」とは、当該改変Ｆｃを含む分子が、天然の野生型のＦｃ部分を含むコンパレータ分子と比較して、細胞殺傷（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ）、補体活性化、食作用およびオプソニン化からなる群から選択される少なくとも一つの作用の重大性または程度において低下を呈するように野生型の天然Ｆｃドメインと比較して改変され、変異し、切断されている、免疫グロブリンの任意のＦｃ部分を意味する。特定の実施形態では、「エフェクター機能が低下した改変型Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体（例えばＦｃγＲ）への結合が低下した、または減弱したＦｃドメインである。
【０１１７】
本発明の特定の実施形態では、改変型Ｆｃドメインは、ヒンジ領域に置換を含むバリアントＩｇＧ１  ＦｃまたはバリアントＩｇＧ４  Ｆｃである。例えば本発明の文脈で使用するための改変型Ｆｃは、ＩｇＧ１  Ｆｃヒンジ領域の少なくとも一つのアミノ酸がＩｇＧ２  Ｆｃヒンジ領域の対応するアミノ酸と置換されている、バリアントＩｇＧ１  Ｆｃを含んでもよい。あるいは本発明の文脈で使用するための改変型Ｆｃは、ＩｇＧ４  Ｆｃヒンジ領域の少なくとも一つのアミノ酸がＩｇＧ２  Ｆｃヒンジ領域の対応するアミノ酸と置換されている、バリアントＩｇＧ４  Ｆｃを含んでもよい。本発明の文脈において使用され得る例示的な改変型Ｆｃ領域は、米国特許出願公開２０１４／０２４３５０４に記載される。
【０１１８】
本発明の文脈において使用され得る他の改変型ＦｃドメインおよびＦｃ改変は、ＵＳ  ２０１４／０１７１６２３、ＵＳ  ８，６９７，３９６、ＵＳ  ２０１４／０１３４１６２、ＷＯ  ２０１４／０４３３６１に記載される改変のいずれかを含む。本明細書に記載される改変型Ｆｃドメインを含む抗体または他の抗原結合融合タンパク質を構築する方法は当分野で公知である。
【０１１９】
抗体の生物学的特徴
本発明は、ヒトＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体およびその抗原結合断片を含む。そうした抗体は、本明細書では「アゴニスト性抗体」と呼称され得る。本発明の文脈において、「ＬＥＰＲシグナル伝達の活性化」は、ＬＥＰＲを発現する細胞において通常はＬＥＰＲとレプチンの相互作用から生じる細胞内作用の刺激を意味する。特定の実施形態では、「ＬＥＰＲシグナル伝達の活性化」とは、ＳＴＡＴ３の転写活性化を意味し、転写活性化は、例えば、レポーター細胞株で発現された標識型のＳＴＡＴ３を使用して、ＳＴＡＴ３の活性を直接または間接的に測定または特定することができる任意の方法を使用して、検出され得る。例えば本発明は、例えば本明細書の実施例７に規定される細胞ベースのアッセイフォーマットを使用した細胞ベースのレポーターアッセイまたは実質的に類似したアッセイにおいて、ＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する、抗体および抗原結合断片を含む。本明細書の実施例７に記載されるアッセイなどのＬＥＰＲ活性化を検出する細胞ベースのレポーターアッセイは、ＥＣ５０値（すなわち、最大シグナル伝達の５０％を生じさせるために必要な抗体濃度）を単位として、および／またはレプチンの存在下で観察される最大シグナル伝達の割合を単位として、表され得る検出可能なシグナルを生成することができる。本発明の特定の例示的実施形態では、例えば本明細書の実施例７に規定されるアッセイフォーマットを使用した細胞ベースのレポーターアッセイまたは実質的に類似したアッセイにおいて、約１２．０ｎＭ未満のＥＣ５０値でＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。本発明の特定の例示的実施形態では、例えば本明細書の実施例７に規定されるアッセイフォーマットを使用した細胞ベースのレポーターアッセイまたは実質的に類似したアッセイにおいて、約６５％を超えるレプチンシグナル伝達に対して、最大割合の活性化でＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。
【０１２０】
本発明は、高いアフィニティで単量体型ヒトＬＥＰＲに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。例えば本発明は、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した２５℃もしくは３７℃の表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１５０ｎＭ未満のＫＤで単量体型ヒトＬＥＰＲ（例えば、ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ、配列番号１１４）に結合する、抗ＬＥＰＲ抗体を含む。特定の実施形態によれば、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１５０ｎＭ未満、約１４０ｎＭ未満、約１３０ｎＭ未満、約１２０ｎＭ未満、約１１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約９ｎＭ未満、約８ｎＭ未満、約７ｎＭ未満、約６ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、または約３００ｐＭ未満のＫＤで、２５℃で単量体型ヒトＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。
【０１２１】
本発明はさらに、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した２５℃もしくは３７℃の表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約５０分を超える解離半減期（ｔ１／２）で単量体型ヒトＬＥＰＲ（例えば、ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ、配列番号１１４）に結合する、抗体およびその抗原結合断片も含む。特定の実施形態によると、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約５０分を超える、約５５分を超える、約６０分を超える、約６５分を超える、またはそれ以上のｔ１／２で、２５℃で単量体型ヒトＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。
【０１２２】
本発明はさらに、二量体型ヒトＬＥＰＲ（例えば、ｈＬＥＰＲ．ｍＦｃ、配列番号１１５）に高いアフィニティで結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。例えば本発明は、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した２５℃もしくは３７℃の表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１．５ｎＭ未満のＫＤで二量体型ヒトＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体を含む。特定の実施形態によると、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１５０ｎＭ未満、約１３０ｎＭ未満、約１１０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、または約１０ｎＭ未満のＫＤで、２５℃で二量体型ヒトＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。
【０１２３】
本発明はさらに、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した２５℃もしくは３７℃の表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１０分を超える解離半減期（ｔ１／２）で二量体型ヒトＬＥＰＲ（例えば、ｈＬＥＰＲ．ｍＦｃ、配列番号１１５）に結合する、抗体およびその抗原結合断片も含む。特定の実施形態によると、例えば本明細書の実施例３に規定されるアッセイフォーマットを使用した表面プラズモン共鳴または実質的に類似したアッセイにより測定されたときに約１０分を超える、約１５分を超える、約２０分を超える、約２５分を超える、約３０分を超える、約４０分を超える、約５０分を超える、約６０分を超える、約７０分を超える、またはそれ以上のｔ１／２で、２５℃で二量体型ヒトＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。
【０１２４】
本発明はさらに、ヒトレプチンと複合体化したＬＥＰＲ（「ヒトレプチンと複合体化したＬＥＰＲ」は、「レプチン：ＬＥＰＲ」という表現で表される場合もある）に結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。例えば本発明は、ｈＬＥＰＲとヒトレプチンを含む、前もって形成された複合体に結合する能力を有する抗体およびその抗原結合断片を含む。すなわち特定の実施形態によれば、抗ＬＥＰＲ抗体とＬＥＰＲの間の相互作用は、ＬＥＰＲと複合体化されたレプチンの存在により阻害されない。同様に、本発明のこの態様によると、レプチンとＬＥＰＲの間の相互作用は、抗ＬＥＰＲ抗体の存在により阻害されない。抗体またはその抗原結合断片が、ヒトレプチンと複合体化したＬＥＰＲに結合するかを決定するための例示的なアッセイフォーマットは、本明細書の実施例４に記載される。
【０１２５】
同様に、本発明はさらに、ＬＥＰＲに結合しかつＬＥＰＲ：レプチン相互作用を遮断しない抗体およびその抗原結合断片も含む。例えば本発明は、ＬＥＰＲに結合し、それにより抗体：ＬＥＰＲ複合体を産生させる能力を有する抗体およびその抗原結合断片を含み、この場合において、得られた抗体：ＬＥＰＲ複合体は、レプチンと相互作用して、抗体、ＬＥＰＲおよびレプチンを含む３員の複合体を産生させる能力を有する。抗体またはその抗原結合断片が、ＬＥＰＲとレプチンの間の相互作用を遮断しない、または干渉しない様式でＬＥＰＲに結合する能力を有するかを決定するための例示的なアッセイフォーマットは、本明細書の実施例５に記載される。
【０１２６】
本発明はさらに、細胞表面に発現されたＬＥＰＲにヒトレプチンの存在下および／または非存在下で結合する抗体およびその抗原結合断片も含む。細胞表面に発現されたＬＥＰＲとは、天然細胞株または操作細胞株のいずれかの細胞の表面上に発現され、それにより抗体またはその抗原結合断片が当該ＬＥＰＲ分子に結合することができる、ＬＥＰＲまたはその一部（例えば、ＬＥＰＲの細胞外部分）を意味する。特定の実施形態では、細胞表面に発現されたＬＥＰＲは、タグまたはアンカー（例えば、本明細書の実施例６に例示されるＧＰＩアンカー）を介して細胞に連結されたＬＥＰＲの細胞外ドメインを含む組み換え複合体を含む。本発明のこの態様によると、細胞表面に発現されたＬＥＰＲにレプチンの非存在下で結合することができかつ細胞表面に発現されたＬＥＰＲにレプチンの存在下でも（すなわち、レプチンが細胞表面に発現されたレプチンに結合することができる状況下でも）結合することができる、抗体が提供される。すなわち特定の実施形態によると、抗ＬＥＰＲ抗体と細胞表面に発現されたＬＥＰＲの間の相互作用は、細胞表面に発現されたＬＥＰＲと複合体化されたレプチンの存在によって阻害されない。本発明のこの態様による抗体は、抗体、細胞表面に発現されたＬＥＰＲ、およびレプチンを含む３員の複合体を細胞表面上に形成する能力を有する。抗体またはその抗原結合断片が、細胞表面に発現されたＬＥＰＲにヒトレプチンの存在下および非存在下で結合する能力を有するかを決定するための例示的なアッセイフォーマットは、本明細書の実施例６に記載される。
【０１２７】
本発明の抗体は、前述の生物学的特徴、またはそれらの任意の組み合わせのうちの一つまたは複数を保有し得る。本発明の抗体の生物学的特徴の前述のリストは、包括的であることは意図されない。本発明の抗体のその他の生物学的特徴は、本明細書の作業実施例を含む本開示の検討から当業者に明らかであろう。
【０１２８】
エピトープマッピングおよび関連技術
また本発明はさらに、一つまたは複数の保存的置換を有する、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含有する抗ＬＥＰＲ抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書の表１に記載されるＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに関して、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＬＥＰＲ抗体を含む。特定の実施形態では、本発明は、本明細書の表１に記載される配列に関して、バリアントＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列（例えば、保存的アミノ酸置換を含む）を含む抗ＬＥＰＲ抗体を提供するものであり、この場合において当該バリアント抗体はそれでも、本明細書に開示される例示的抗ＬＥＰＲ抗体の一つもしくは複数の機能および／または特性を呈している。
【０１２９】
ヒトＬＥＰＲの細胞外ドメインは、レプチン結合ドメイン（ＬＢＤ：ｌｅｐｔｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ）と呼ばれる、Ｎ末端のサイトカイン受容体相同ドメイン（ＣＲＨ−１：ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｄｏｍａｉｎ）、免疫グロブリン様（Ｉｇ）ドメイン、および第二のＣＲＨドメイン（ＣＲＨ−２）を含む。（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２０：４８７−９７）。さらにＬＥＰＲは、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）および糖タンパク質１３０（ｇｐ１３）と最も高い相同性、ならびに類似した細胞外ドメインサイズおよび機構を共有する。（Ｈａｎｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７３（４４）：２８６９１−６９９）。
【０１３０】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域中の特定の抗原結合部位と相互作用する抗原性決定基を指す。単一の抗原は二つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域へ結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。エピトープは、立体構造的または直線状のいずれであってもよい。立体構造的エピトープは、直線状ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸によって生成される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接するアミノ酸残基によって生成されるエピトープである。特定の状況では、エピトープは、抗原上の糖、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
【０１３１】
本発明は、ヒトＬＥＰＲ（配列番号１１３）のアミノ酸Ｍ１〜Ｄ８３９内に存在する一つまたは複数のエピトープと相互作用する抗ＬＥＰＲ抗体を含む。実施例１１に記載されるように、ヒトＬＥＰＲからの２０１ペプチドは、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体に結合したとき、重水素化取り込みが有意に減少した。Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２に結合したとき、アミノ酸１６２〜１６９（ヒトＬＥＰＲ、配列番号１１３のアミノ酸ＬＹＶＬＰＥＶＬ）およびアミノ酸１７０〜１９１（ヒトＬＥＰＲ、配列番号１１３のアミノ酸ＥＤＳＰＬＶＰＱＫＧＳＦ）に相当するペプチドは、重水素化速度がより遅くなり、このことは、配列ＬＹＶＬＰＥＶＬまたはＥＤＳＰＬＶＰＱＫＧＳＦ（それぞれ配列番号１１３のアミノ酸１６２〜１６９またはアミノ酸１７０〜１９１）を有する少なくとも二つのヒトＬＥＰＲエピトープにこの抗体が結合することを示唆する。
【０１３２】
本発明の抗体が結合するエピトープは、ＬＥＰＲタンパク質の３個以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上）のアミノ酸の単一連続配列からなる場合もある。あるいは、エピトープは、ＬＥＰＲの複数の非連続的アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなる場合もある。一部の実施形態では、エピトープは、ＬＥＰＲのレプチン結合ドメイン上またはその付近に位置する。他の実施形態では、エピトープは、ＬＥＰＲのレプチン結合ドメインとは別個の領域に、例えば、当該エピトープが結合されたときにＬＥＰＲへのレプチンの結合に抗体が干渉しない、ＬＥＰＲの表面上の位置に、位置する。
【０１３３】
当分野の当業者に公知の様々な技術を使用して、特定の抗体に認識されるエピトープ内のアミノ酸を特定することができる。例示的な技術としては例えば、アラニンスキャニング突然変異解析、ペプチドブロット解析およびペプチド切断解析が挙げられる。さらに、抗原のエピトープ切り出し、エピトープ抽出、および化学修飾などの方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般的な用語において、水素／重水素交換方法は、対象タンパク質を重水素で標識すること、続いて重水素で標識したタンパク質に抗体を結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は水に移され、抗体によって保護された残基（重水素標識のまま残る）を除く全ての残基で、水素−重水素交換を生じさせる。抗体の解離後、標的タンパク質はプロテアーゼ切断および質量分析解析を受け、それと抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２−２５９；Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ〜２６５Ａを参照されたい。抗原と複合体化された抗体のＸ線結晶構造解析を使用して、抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を特定することもできる。
【０１３４】
本発明は、本明細書に記載される特定の例示的な抗体（例えば、本明細書の表１に記載されるアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）と同じエピトープに結合する抗ＬＥＰＲ抗体をさらに含む。同様に、本発明はまた、本明細書に記載される特定の例示的な抗体（例えば、本明細書の表１に記載されるアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）のいずれかと、ＬＥＰＲへの結合に関して競合する抗ＬＥＰＲ抗体も含む。
【０１３５】
当分野で公知であり、本明細書に例証される日常的な方法を使用することにより、抗体が参照抗ＬＥＰＲ抗体と同じエピトープに結合するか、または参照抗ＬＥＰＲ抗体と結合に関して競合するかを決定することができる。例えば、被験抗体が本発明の参照抗ＬＥＰＲ抗体と同じエピトープに結合するかを決定するために、参照抗体を、ＬＥＰＲタンパク質に結合させる。次に、ＬＥＰＲ分子に結合する被験抗体の能力が評価される。参照抗ＬＥＰＲ抗体との飽和結合後に被験抗体がＬＥＰＲに結合することができる場合、当該被験抗体は参照抗ＬＥＰＲ抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方で、参照抗ＬＥＰＲ抗体との飽和結合後に被験抗体がＬＥＰＲ分子に結合できない場合、当該被験抗体は、本発明の参照抗ＬＥＰＲ抗体により結合されるエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。その後に追加の日常的な実験（例えば、ペプチド突然変異および結合分析）を実施して、被験抗体の結合の欠落が観察されたのは実際のところ、参照抗体と同じエピトープへの結合が原因なのか、または、結合の欠落が観察されたのは立体遮断（または別の現象）が原因であるのかを、確認することができる。この種類の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的または定性的抗体結合アッセイを使用して実施することができる。本発明の特定の実施形態によると、競合結合アッセイにおいて測定したとき、例えば１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰量のある抗体が、他の抗体の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％、またはさらには９９％まで阻害する場合、二つの抗体は同じ（または重複する）エピトープに結合する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５−１５０２を参照のこと）。あるいは、一個の抗体の結合を減少または消失させる抗原中の本質的に全てのアミノ酸突然変異が他方の抗体の結合を減少または消失させる場合、二個の抗体は同一エピトープに結合するとみなされる。一個の抗体の結合を減少または消失させるアミノ酸突然変異のサブセットのみが他方の抗体の結合を減少または消失させる場合、二個の抗体は「重複エピトープ」を有すると見なされる。
【０１３６】
抗体が、参照抗ＬＥＰＲ抗体と結合に関して競合する（または結合に関して交差競合する）かどうかを判定するために、以下の二つの方向性で上述の結合技法が実施される：第一の方向性では、参照抗体は、飽和条件下でＬＥＰＲタンパク質に結合され、その後、ＬＥＰＲ分子への被験抗体の結合が評価される。第二の方向性では、被験抗体は、飽和条件下でＬＥＰＲ分子に結合され、その後、ＬＥＰＲ分子への参照抗体の結合が評価される。両方の方向性で、第一の（飽和）抗体のみがＬＥＰＲ分子に結合することができた場合、被験抗体と参照抗体は、ＬＥＰＲへの結合に関して競合すると結論付けられる。当分野の当業者によって理解されるように、参照抗体への結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合しなくてよく、重複したエピトープまたは隣接するエピトープを結合することによって参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
【０１３７】
ヒト抗体の調製
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、完全ヒト抗体であり得る。完全ヒトモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体を生成する方法は当該技術分野で既知である。ヒトＬＥＰＲに特異的に結合するヒト抗体を作製するために、任意のそうした公知の方法が、本発明の文脈において使用され得る。
【０１３８】
例えばＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）法、または完全ヒトモノクローナル抗体を作製するための任意の他の類似の公知の方法を使用して、ヒト可変領域とマウス定常領域を有する、ＬＥＰＲに対する高アフィニティキメラ抗体が最初に単離される。以下の実験セクションと同様に、抗体を、アフィニティ、リガンド遮断活性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付け、選択する。必要であれば、マウス定常領域を、所望のヒト定常領域、例えば野生型もしくは改変型のＩｇＧ１またはＩｇＧ４と置換して、完全ヒト抗ＬＥＰＲ抗体が作製される。選択される定常領域は特定の用途に応じて異なりうるが、高アフィニティ抗原結合特徴および標的特異性特徴は可変領域に存在する。特定の例において、完全ヒト抗ＬＥＰＲ抗体は、抗原陽性Ｂ細胞から直接単離される。
【０１３９】
生物学的等価物
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体および抗体断片は、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるがヒトＬＥＰＲへの結合能力は保持しているアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の一つまたは複数の付加、欠失、または置換を含むが、説明された抗体の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。同様に、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示される配列と比較してヌクレオチドの一つまたは複数の付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体または抗体断片と本質的に生物学的に等価である、抗ＬＥＰＲ抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。そうしたバリアントアミノ酸配列およびＤＮＡ配列の例は、上記に検討される。
【０１４０】
二つの抗原結合タンパク質、または抗体が、例えば類似の実験条件下で同じモル用量で、単一用量または複数回用量のいずれかで投与されたとき吸収の速度および程度が有意差を示さない薬学的等価物または薬学的代替物である場合、これらは、生物学的等価物であるとみなされる。いくつかの抗体が、その吸収の程度は同等であるが吸収速度は同等ではない場合、等価物または薬学的代替物とみなされ、かつさらに、吸収速度のこのような差異が意図的であり標識に反映されており、例えば慢性使用において有効身体薬物濃度の獲得に不可欠ではなく、かつ、研究される特定の薬剤製品にとって医学的に有意ではないとみなされるため、これらは生物学的等価物であるとみなされる。
【０１４１】
一実施形態では、二つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、または有効性において臨床的に有意な差がない場合、生物学的に等価である。
【０１４２】
一実施形態では、二つの抗原結合タンパク質は、参照製品と生物学的製品の間での一回または複数回の切り替えを行わない持続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化を含む有害作用のリスクの予想される上昇または有効性の減退が生じずに患者がその様な切り替えを行うことができる場合、生物学的に等価である。
【０１４３】
一実施形態では、二つの抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、一つまたは複数の使用条件について一つまたは複数の共通の作用機序によって、このような機序が公知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。
【０１４４】
生物学的等価性は、インビボおよびインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定法には、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボでの試験、（ｂ）ヒトのインビボでの生物学的利用能データと相関し、このデータを合理的に予測しているインビトロ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験、および（ｄ）抗体の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験が含まれる。
【０１４５】
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の生物学的に等価なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築されうる。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の状況では、生物学的に等価の抗体には、抗体のグリコシル化特性を改変するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む、抗ＬＥＰＲ抗体バリアントを含んでもよい。
【０１４６】
種選択性および種交差反応
特定の実施形態によると、本発明は、ヒトＬＥＰＲに結合するが他種由来のＬＥＰＲには結合しない抗ＬＥＰＲ抗体を提供する。本発明はさらに、ヒトＬＥＰＲに、および一つまたは複数の非ヒト種に由来するＬＥＰＲに結合する、抗ＬＥＰＲ抗体も提供する。例えば、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、ヒトＬＥＰＲに結合してもよく、そして場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザルまたはチンパンジーのＬＥＰＲのうちの一つまたは複数にも結合してもよく、または結合しなくてもよい。本発明の特定の例示的実施形態によると、ヒトＬＥＰＲとカニクイザル（例えば、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＬＥＰＲに特異的に結合する抗ＬＥＰＲ抗体が提供される。本発明の他の抗ＬＥＰＲ抗体は、ヒトＬＥＰＲには結合するが、カニクイザルＬＥＰＲには結合しないか、または弱くしか結合しない。
【０１４７】
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。多重特異性抗体は、一つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、または複数の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有してもよい。例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照のこと。本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質と連結されることができ、または共発現されることができる。例えば、抗体またはその断片は、例えば別の抗体または抗体断片などの一つ以上の他の分子実体に（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、または非共有会合、またはその逆により）機能的に連結して、第二の結合特異性を有する二重特異性、または多重特異性の抗体を産生することができる。
【０１４８】
本発明は、免疫グロブリンの一つのアームがヒトＬＥＰＲに結合し免疫グロブリンの他方のアームが第二の抗原に特異的である、二重特異性抗体を含む。ＬＥＰＲ結合アームは、本明細書の表１に記載されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲのアミノ酸配列のいずれかを含み得る。
【０１４９】
本発明の文脈において使用され得る例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第一の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインと第二のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用を含み、この場合において当該第一および第二のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも一つのアミノ酸によって互いに異なり、そしてこの場合において、少なくとも一つのアミノ酸の差異は、アミノ酸の差異を欠く二重特異性抗体と比較して、二重特異性抗体のタンパク質Ａへの結合を低下させる。一つの実施形態では、第一のＩｇＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第二のＩｇＣＨ３ドメインは、例えばＨ９５Ｒ（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングではＨ４３５Ｒ）修飾などのプロテインＡ結合を減少または消失させる突然変異を含有する。第二のＣＨ３はさらに、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＹ４３６Ｆ）を含んでもよい。第二のＣＨ３に見出されうるさらなる改変としては、以下が挙げられる：ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）。上述の二重特異性抗体フォーマットの変形は、本発明の範囲内で予期される。
【０１５０】
本発明の文脈において使用され得る他の例示的な二重特異性のフォーマットとしては、非限定的に、例えば、ｓｃＦｖベースのまたはダイアボディ二重特異性のフォーマット（ｄｉａｂｏｄｙ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒｍａｔ）、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性フォーマットが挙げられる（例えば、前述のフォーマットの概要に関し、Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ  ４：６，１−１１および当該文献中に引用される参照文献）。二重特異性抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築されてもよい。例えば直交的な化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体−オリゴヌクレオチド結合体を作製し、次いでこれを規定の組成、結合価および構造を有する多量体性複合体へと自己アセンブリさせる。（例えば、Ｋａｚａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［オンライン公開、２０１２年１２月４日］を参照のこと）。
【０１５１】
治療用の製剤および投与
本発明は、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤、および輸送、送達、忍容性などの改善をもたらす他の剤とともに製剤化される。数多くの適切な製剤が、すべての薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出されうる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、小胞を含有する脂質（カチオン性またはアニオン性）（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、カリフォルニア州カールスバッド）、ＤＮＡ共役体、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”  ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照のこと。
【０１５２】
患者に投与される抗体の投与量は、患者の年齢および大きさ、標的の疾患、状態、投与経路などに応じて変化し得る。好ましい投与量は、典型的には体重または体表面積に従い計算される。成人患者では、本発明抗体を、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、または約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重で、通常は単回投与で静脈内投与することが有益であり得る。状態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調節できる。抗ＬＥＰＲ抗体を投与するための効果的な用量およびスケジュールは経験的に決定されうるが、例えば、患者の進行は定期的な評価によってモニタリングすることができ、それに応じて投与量が調整される。さらに用量の種間拡張は、当分野で公知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。
【０１５３】
例えば小児患者などの患者の場合、約５ｍｇ／ｋｇ体重、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ体重、または約５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の治療有効用量で、抗体を例えば静脈内投与することが有益であり得る。例えば約５ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）負荷投与量を選択して、１００ｍｇ／Ｌ以上の抗体血清濃度を達成することができる。約２５０ｍｇの用量で、または約３００ｍｇの用量で、または約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの用量で、または約２００ｍｇ〜約３００ｍｇの用量で、抗体を皮下投与することが有益でもあり得る。例えば、２５０ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２、または３００ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の週に１回の皮下（ＳＣ）維持投与によって、１００ｍｇ／Ｌ以上の血清中のトラフ濃度が維持される。一部の態様では、ＳＣ投与レジメンは、血清中の標的トラフ濃度を最良に維持するために、ＩＶ負荷投与量を投与した数日後に開始される。一部の態様では、第一のＳＣ投与は、負荷投与の２日〜７日後、例えば負荷投与の２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に投与される。一部の態様では、ＳＣ投与は、３〜１４日に１回、例えば３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、週に１回、１０日に１回、または２週間に１回、投与され、例えば、最初のＳＣ投与後、週に１回のＳＣ投与を３回、次いで月に１回（約２８日ごと）、投与される。本発明の実施形態では、抗体（Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２）の治療有効投与量は、本明細書において図１９に記載されているが、任意で図１９に示される最後の月１回の投与後にも継続される。
【０１５４】
一部の態様では、約５０ｍｇ／Ｌ〜約２００ｍｇ／Ｌ、または約１００ｍｇ／Ｌ、または約１５０ｍｇ／Ｌ、または５０ｍｇ／Ｌ以上、または１００ｍｇ／Ｌ以上、または１５０ｍｇ／Ｌ以上の血清中のトラフ濃度を維持することが望ましい。
【０１５５】
さまざまな送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用されうる。例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、突然変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体介在性エンドサイトーシスなど（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）。導入方法としては限定されないが、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が挙げられる。組成物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮もしくは粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇ）（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収によって投与することができ、かつ他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身性または局所性であってもよい。
【０１５６】
本発明の医薬組成物は、標準的な針およびシリンジを用いて、皮下または静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達において、容易に用途を見出す。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であるか、または使い捨てでありうる。再利用可能なペン型送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内部の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換されうる。次に、ペン型送達デバイスは再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、医薬組成物がデバイス内部のリザーバ内に保持された事前に充填された状態で販売される。いったんリザーバの医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
【０１５７】
多数の再利用可能なペン型および自動注入装置送達デバイスは、本発明の医薬組成物の皮下送達において用途を見出す。例としては限定されないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、英国、ウッドストック）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、スイス、バーグドーフ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、インディアナ州インディアナポリス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社、デンマーク、コペンハーゲン）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社、デンマーク、コペンハーゲン）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社、ニュージャージー州フランクリンレイク）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社、ドイツ、フランクフルト）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有するディスポーザブルペン送達デバイスの例としては限定されないが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ社、カリフォルニア州サウザンドオークス）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ社、ドイツ、シュトゥットガルド）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ社、イリノイ州アボットパーク）が挙げられる。
【０１５８】
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出系で送達されうる。一つの実施形態では、ポンプを使用してもよい（上記のＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと）。別の実施形態では、多量体性材料を使用することができる。Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａを参照のこと。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に配置することができる。したがって全身投与量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８を参照のこと）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３によるレビューにおいて検討されている。
【０１５９】
注入可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、および筋肉内注射、点滴などの投与形態を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製されてもよい。例えば、注入可能な調製物は、例えば、注入に従来使用される無菌水性媒体または油性媒体に、上述される抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製されうる。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースを含有する等張液、および他の助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などの適切な可溶化剤と併用されうる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが採用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と併用されうる。このようにして調製した注射液は、好ましくは、適切なアンプル中に充填される。
【０１６０】
有利なことに、上述の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量で剤形に調製される。単位用量におけるこのような剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが含まれる。含有される前述の抗体の量は一般的に単位用量で剤形あたり約５〜約５００  ｍｇであり、特に注射の形態では上記の抗体は約５〜約１００  ｍｇで含有されることが好ましく、およびその他の剤形に関しては約１０〜約２５０  ｍｇで含有されることが好ましい。
【０１６１】
抗体の治療用途
本発明は、その必要のある対象に、抗ＬＥＰＲ抗体（例えば、本明細書の表１に記載されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列またはＣＤＲ配列のいずれかを含む抗ＬＥＰＲ抗体）を含む治療用組成物を投与することを含む。治療用組成物は、本明細書に開示される抗ＬＥＰＲ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含んでもよい。
【０１６２】
本明細書に提供される抗体および抗原結合断片は、特に、代謝機能不全または低レプチン血症と関連する、またはそれらに介在される任意の疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪肝疾患、ＮＡＳＨ、女性の不妊症、無月経、ホルモンサイクル異常、免疫機能障害、甲状腺機能低下症、肥満、単一遺伝子型肥満、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、リポジストロフィー、先天性リポジストロフィー、全身型リポジストロフィー、後天性リポジストロフィー、部分型リポジストロフィー、先天性部分型リポジストロフィー、先天性全身型リポジストロフィー、後天性部分型リポジストロフィー、および後天性全身型リポジストロフィー、またはＬＥＰＲシグナル伝達を刺激もしくは活性化することにより治療可能なもの、またはインビトロもしくはインビボでレプチンの天然活性を模倣することにより治療可能なもの、の治療、予防および／または改善に有用である。例えば、抗体およびその抗原結合断片は、リポジストロフィー状態の治療に有用である。本発明の抗体および抗原結合断片により治療可能である例示的なリポジストロフィー状態には、例えば、先天性全身型リポジストロフィー、先天性部分型リポジストロフィー、後天性全身型リポジストロフィー、家族性部分型リポジストロフィー、後天性部分型リポジストロフィー、遠心性腹部リポジストロフィー、環状脂肪組織萎縮（ｌｉｐｏａｔｒｏｐｈｉａ  ａｎｎｕｌａｒｉｓ）、局所性リポジストロフィー、およびＨＩＶ関連リポジストロフィー、ならびに当該状態と関連した症状が含まれる。
【０１６３】
本明細書に提供される抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片は、単一遺伝子型肥満および／またはリポジストロフィーの治療、予防および／または改善に有用である。単一遺伝子型肥満およびリポジストロフィーは、多くの病的状態と関連付けられ得る。例えば：超早期発症型肥満で、対象は年齢および性別に対するＢＭＩが８５パーセンタイル超である；過食症および満腹感の障害で、対象は食物探索行動および食物攻撃性行動を呈する；免疫機能の障害で、ＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少し、再発性（そして潜在的致死性）の感染症を伴う；インスリン抵抗性および高インスリン血症；非アルコール性脂肪肝疾患、肝臓脂肪症、およびリポジストロフィーへの進行；高トリグリセリド血症へとつながる脂質異常症；ＨｂＡ１ｃ値の上昇および／または高血糖値、および耐糖能の障害を伴う糖尿病；性腺機能低下症、思春期発育の遅延につながる生殖機能障害；第二次性徴の発現の低下；無月経もしくは月経不順、および不妊；小人症、成長ホルモン分泌異常を生じさせる思春期成長スパートの欠落；甲状腺機能低下症または甲状腺機能障害；Ｔ３の変化、ＴＳＨの変化、または遊離チロキシンレベルの変化；ならびに骨密度および骨ミネラル含量を含む可変性の骨の変化と関連付けられ得る。単一遺伝子型肥満および／またはリポジストロフィーと関連する状態および症状のスペクトラムは、根底にある原因遺伝子、例えばＡＧＰＡＴ２、ＬＭＮＡ、ＢＳＣＬ２またはその他を前提として異なり得る。所与の変異は、レプチンまたはＬＥＰＲの機能消失を生じさせる可能性があり、それらは例えば月経不順に対する完全無月経など、内分泌性の重症度に対して変動がある。
【０１６４】
本明細書に提供される抗体および抗原結合断片は、代謝機能不全または低レプチン血症と関連する疾患もしくは状態の一つまたは複数の症状の治療、軽減、または予防に有用でもある。そうした症状としては、脂肪症、肥満、過食症、高血糖症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、インスリン抵抗性、脂質異常症、成長遅延、思春期成長スパートの遅延、成長ホルモン分泌異常、ＨｂＡ１ｃ上昇、低い骨ミネラル密度（または低骨量）、低い骨ミネラル含量、および低い除脂肪体重が挙げられる。
【０１６５】
本発明はまた、一つまたは複数のＬＥＰＲの変異を発現する細胞、組織および器官へのレプチンシグナル伝達の回復に有用な抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片も含む。そうした変異は、代謝機能不全または低レプチン血症、および代謝機能不全または低レプチン血症に付随する疾患または状態、例えば肥満、先天性リポジストロフィー、不妊症、および非アルコール性脂肪肝疾患と関連し得る。例えば、レプチンの存在下でのシグナル伝達を呈さない、またはシグナル伝達の低下を呈し、肥満および関連障害と関連する特定のＬＥＰＲ変異体が同定されている。本明細書において使用される場合、レプチンの存在下でシグナル伝達を呈さないＬＥＰＲ変異体は、「シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体」と呼称される。例示的なシグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異は、ＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅである（Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５６（３）：２３７−２４７）。本明細書において使用される場合、レプチンの存在下で（野生型ＬＥＰＲと比較して）シグナル伝達の低下を呈するＬＥＰＲ変異体は、「シグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体」と呼称される。例示的なシグナル伝達障害性のＬＥＰＲ変異は、ＬＥＰＲ−Ｐ３１６Ｔである（Ｍａｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ  １０２：４６１−４６４）。したがって本発明は、一つもしくは複数のシグナル伝達欠損（例えばＡ４０９Ｅ）ＬＥＰＲ変異体、および／または一つもしくは複数のシグナル伝達障害（例えばＰ３１６Ｔ）ＬＥＰＲ変異体を原因とするまたはそれらと関連する疾患および障害の治療、予防および／または改善に有用である抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片を含む。
【０１６６】
本発明はまた、レプチン遺伝子中の変異を軽減することによりレプチンシグナル伝達の回復に有用である、抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片も含む。一部の対象は循環レプチンを有しているが、例えば、レプチン遺伝子中のｐ．Ｎ１０３Ｋ変異など、レプチンの生物不活性型をコードする遺伝子変異が原因で、当該タンパク質は非機能性である。一部の対象は、循環レプチンがほとんど無いか、または全くない。ＬＭＮＡ、ＰＰＡＲＧ、ＡＧＰＡＴ２、ＢＳＣＬ２、ＰＬＩＮ１、ＡＫＴ２、ＣＩＤＥＣ、ＬＩＰＥ、およびＡＤＲＡ２Ａをはじめとする他の遺伝子がレプチンシグナル伝達の障害に関与する場合もあり、本明細書において提供される抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片は、レプチンシグナル伝達に対する当該変異の影響の軽減に有用である。
【０１６７】
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体およびその抗原結合断片はまた、肥満、単一遺伝子型肥満、メタボリックシンドローム、食事誘発性大食症、機能性視床下部性無月経、１型糖尿病、２型糖尿病、女性の不妊症、無月経、免疫機能障害、甲状腺機能低下症、インスリン抵抗性、インスリン受容体の変異による重度のインスリン抵抗性を含む重度のインスリン抵抗性、インスリン受容体の変異が原因ではない重度のインスリン抵抗性、下流シグナル伝達経路における変異により生じる、または他の原因によって誘発される重度のインスリン抵抗性、非アルコール性およびアルコール性の脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルツハイマー病、レプチン欠損症、レプチン抵抗性、リポジストロフィー、妖精症／ドナヒュー症候群、ラブソン・メンデンホール症候群からなる群から選択される一つもしくは複数の状態、疾患または障害の治療または予防にも有用である。
【０１６８】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、代謝機能不全の治療に有用である。方法は、ヒトレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合しかつＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する抗体またはその抗原結合断片および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物を、その必要のある対象に投与することを含む。
【０１６９】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、脂肪症もしくは肥満、または体重の減少に有用である。一部の実施形態では、治療は、治療された対象において脂肪量を減少させるが、除脂肪量を減少させない。一部の態様では、治療は、対象により少ないカロリーを摂取させる、または食物摂取量を低下させる。
【０１７０】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、レプチン欠損症と関連する女性の不妊症の治療、または正常なホルモンサイクルの回復に有用である。一部の態様では、治療は、生殖能力を増加させ、および／または妊娠機会を増加させることができる。一部の態様では、治療は、正常な月経サイクルを回復させることができる。レプチン欠損症に少なくとも部分的に起因して破壊された正常な月経サイクルを回復させる方法も本発明の一部である。
【０１７１】
本明細書において示されるように、方法は、その必要のある対象が低レプチン血症もしくはレプチン欠損症であるとき、または低レプチン血症もしくはレプチン欠損症ではないときに、有用である。方法は、代謝機能不全、脂肪症または肥満が、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異と関連するもしくは関連しないとき、またはそれらにより引き起こされるもしくは引き起こされないときに、有用である。
【０１７２】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、低レプチン血症、リポジストロフィー、またはレプチン欠損症の患者における、非アルコール性脂肪肝疾患または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療に有用である。治療は、例えば肝臓脂肪症など、対象における非アルコール性脂肪肝疾患の症状を減少させることができる。一部の例では、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の血漿レベル、および／またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の血漿レベルは、治療を受けた後、対象において減少される。
【０１７３】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、視床下部ＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激することによる、過食症、高血糖症、インスリン抵抗性、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または非アルコール性脂肪肝疾患の治療に有用である。治療は、循環血漿トリグリセリド、および／または循環血漿総コレステロールを低下させることができる。
【０１７４】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、リポジストロフィーの治療に有用である。治療は、治療を受ける対象において、高血糖症を軽減し、インスリン抵抗性を減少させ、および／またはＨｂＡ１ｃレベルを低下させる。
【０１７５】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、代謝疾患または低レプチン血症と関連する不妊および／または無月経の治療に有用である。治療はホルモンサイクルを調節し、治療を受ける女性対象において、妊娠率を改善させることができる。治療は、正常な月経サイクルを回復させることができる。
【０１７６】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、低レプチン血症および／またはレプチン欠損症に関連する例えばＣＤ４＋Ｔ細胞数の減少などの免疫機能障害の治療に有用である。治療は免疫機能を改善することができる。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞数を増加させることができる。
【０１７７】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、先天性レプチン欠損症と関連した成長遅延、思春期成長スパートの欠落、および／または成長ホルモン分泌異常の治療に有用である。治療は成長を改善することができ、思春期成長スパートを促進することができ、および／または成長ホルモン分泌を改善することができる。
【０１７８】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、先天性レプチン欠損症に関連する甲状腺機能低下症の治療に有用である。治療は、甲状腺機能低下症に関連する症状を改善することができる。
【０１７９】
本明細書に提供されるＬＥＰＲアゴニスト性抗体は、低レプチン血症および／またはレプチン欠損症に関連する低い骨ミネラル密度および／または低い骨ミネラル含量の治療に有用である。治療は、骨ミネラル密度を改善することができ、および／または骨ミネラル含量を改善することができる。
【０１８０】
本明細書に記載される治療方法の背景において、抗ＬＥＰＲ抗体は、単剤療法として（すなわち唯一の治療剤として）投与されてもよく、または一つもしくは複数の追加の治療剤（その実施例は本明細書において別に記載される）と併用されて投与されてもよい。
【０１８１】
併用療法および製剤
本発明は、一つまたは複数の追加の治療活性成分と併用された、本明細書に記載される抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかを含む組成物および治療用製剤を含み、および当該組成物を、その必要のある対象に投与することを含む治療方法を含む。
【０１８２】
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、一つまたは複数の追加の治療活性成分と共製剤化されてもよく、および／または、併用されて投与されてもよく、そうした治療活性成分としては例えば、肥満、高コレステロール血症、高脂血症、２型糖尿病、１型糖尿病、食欲管理、無月経、不妊などの治療に対して処方される医薬品などが挙げられる。そうした追加の治療活性成分の例としては、例えば、組み換えヒトレプチン（例えば、メトレレプチン［ＭＹＡＬＥＰＴ］）、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体［アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ロデルシズマブ、ラルパンシズマブなど］）、スタチン（アトルバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン、フルバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンなど）、エゼチミブ、インスリン、インスリンバリアント、インスリン分泌促進剤、メトホルミン、スルホニルウレア、ナトリウム・グルコース共輸送体２（ＳＧＬＴ２）阻害剤（例えば、ダパグリホジン（ｄａｐａｇｌｉｆｏｚｉｎ）、カナグリホジン（ｃａｎａｇｌｉｆｏｚｉｎ）、エンパグリフロジンなど）、ＧＬＰ−１アゴニスト／アナログ（例えば、エクステンジン（ｅｘｔｅｎｄｉｎ）−４、エキセナチド、リラグルチド、リキシセナチド、アルビグルチド、デュラグルチド、など）、グルカゴン（ＧＣＧ）阻害剤（例えば、抗ＧＣＧ抗体）、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）阻害剤（例えば、抗ＧＣＧＲ抗体、低分子ＧＣＧＲアンタゴニスト、ＧＣＧＲ特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ＧＣＧＲアプタマー［例えば、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ］、など）、アンジオポエチン様タンパク質（ＡＮＧＰＴＬ）阻害剤（例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、抗ＡＮＧＰＴＬ４抗体、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体など）、フェンテルミン、オルリスタット、トピラマート、ブプロピオン、トピラマート／フェンテルミン、ブプロピオン／ナルトレキソン、ブプロピオン／ゾニサミド、プラムリンチド／メトレレプチン、ロルカセリン、セチリスタット、テソフェンシン、ベルネペリトなど、が挙げられる。さらなる例としては例えば、魚油、ピオグリタゾン、セトメラノチド（ｓｅｔｍｅｌａｎｏｔｉｄｅ）、フィブラート（例えば、フェノフィブラート）、プレドニゾン、ナイアシン、抗けいれん剤、ジゴキシン、クマディン、ビタミンＤ、チロキシン、甲状腺サプリメント、ビタミンサプリメント、カルシウムサプリメント、カルニチン、コエンザイムＱ１０、便秘防止薬、抗アレルギー薬、ガバペンチン、麻酔薬、ケタミン、リドカイン、およびベンラファキシン塩酸塩が挙げられる。本発明の実施形態において、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、食欲抑制剤とともに製剤化されることも投与されることもない。
【０１８３】
追加の治療活性成分、例えば上記に列記される剤またはその誘導体のいずれかは、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の投与の直前に、投与と同時に、または投与の直後に投与されてもよい（本開示の目的に関し、そうした投与レジメンは、追加の治療活性成分と「併用された」抗ＬＥＰＲ抗体の投与とみなされる）。本発明は、本明細書の別段に記載される追加の治療活性成分の一つまたは複数と本発明の抗ＬＥＰＲ抗体が共製剤化される、医薬組成物を含む。
【０１８４】
本発明はまた、例えば血漿交換法などの治療手段と組み合わされた、本明細書に記載される抗ＬＥＰＲ抗体のいずれかを含む組成物および治療用製剤を使用した方法も含む。
【０１８５】
投与レジメン
本発明の特定の実施形態によると、抗ＬＥＰＲ抗体（または抗ＬＥＰＲ抗体と本明細書に言及される追加の治療活性剤のいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物）の複数回投与量を、規定の時間経過にわたり対象に投与してもよい。本発明の本態様による方法は、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の複数回投与量を対象に逐次的に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「逐次的に投与する」とは、抗ＬＥＰＲ抗体の各用量が、例えば所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）をあけた異なる日などの異なる時点で対象に投与されることを意味する。本発明は、抗ＬＥＰＲ抗体の単一の初回投与量、次いで抗ＬＥＰＲ抗体の一回または複数回の第二の投与量、および任意で続いて、抗ＬＥＰＲ抗体の一回または複数回の第三の投与量を逐次的に患者に投与することを含む方法を含む。
【０１８６】
「初回投与量」、「第二の投与量」、および「第三の投与量」という用語は、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の投与の時間的な順序を指す。したがって、「初回投与量」は、治療レジメンの開始時に投与される投与量であり（また「基準投与量」、「負荷投与量」、「開始投与量」などとも呼称される）、「第二の投与量」は初回投与量の後に投与される投与量であり、「第三の投与量」は第二の投与量の後に投与される投与量である。初回投与量、第二の投与量、および第三の投与量はすべて、同じ量の抗ＬＥＰＲ抗体を含有するが、投与頻度に関しては通常、互いに異なっていてもよい。しかしながら、特定の実施形態では、初回投与量、第二の投与量、および／または第三の投与量に含有される抗ＬＥＰＲ抗体の量は、治療経過の間に（例えば適宜調整されて加減され）、互いに異なっている。特定の実施形態では、二つ以上（例えば、２、３、４、または５）の投与量が、治療レジメンの開始時に負荷投与量」として投与され、その後に続く投与量が、より低い頻度ベースで投与される（例えば、「維持投与量」）。
【０１８７】
抗体の診断用途および解析用途
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体はさらに、例えば、診断目的など、サンプル中のＬＥＰＲもしくはＬＥＰＲ発現細胞を検出および／または測定するためにも使用され得る。例えば、抗ＬＥＰＲ抗体またはその断片を使用して、ＬＥＰＲの異常発現（例えば過剰発現、過小発現、発現の欠如など）を特徴とする状態または疾患を診断してもよい。ＬＥＰＲに対する例示的な診断アッセイは、例えば患者から取得されたサンプルを本発明の抗ＬＥＰＲ抗体と接触させることなどを含み、この場合において、当該抗ＬＥＰＲ抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。あるいは、標識されていない抗ＬＥＰＲ抗体が、それ自体が検出可能に標識されている２次抗体と組み合わされて、診断応用に使用され得る。検出可能な標識またはレポーター分子は、例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、または１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素でありうる。サンプル中のＬＥＰＲを検出または測定するために使用され得る具体的な例示的アッセイとしては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）、およびポジトロン放出断層（ＰＥＴ）撮影法が挙げられる。
【０１８８】
本発明によるＬＥＰＲ診断アッセイで使用できるサンプルとしては、正常な状態または病理学的状態下で、検出可能な量のＬＥＰＲタンパク質またはその断片を含有する、患者から取得可能な任意の組織または液体サンプルが挙げられる。一般に、基準のまたは標準的なＬＥＰＲレベルを最初に確立するために、健常な患者（例えばＬＥＰＲのレベル異常または活性と関連した疾患または状態に罹患していない患者）から取得された特定のサンプル中のＬＥＰＲレベルが測定される。次に、ＬＥＰＲのこの基準レベルを、ＬＥＰＲ関連の疾患または状態を有すると疑われる個体から得られたサンプルにおいて測定されたＬＥＰＲレベルと比較してもよい。
【実施例】
【０１８９】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作成し使用するかを当業者へ完全に開示するために提供されており、発明者がその発明として見なすものの範囲を限定することを意図していない。使用した数字（例えば、量、温度等）に対する正確さを確保するために努力がなされているが、一部の実験誤差および偏差を考慮に入れるべきである。別途示さない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は大気圧でまたは大気圧付近での℃（摂氏）である。
【０１９０】
実施例１：レプチン受容体（ＬＥＰＲ）に特異的に結合する抗原結合タンパク質の作製
抗ＬＥＰＲ抗体は、ＬＥＰＲの細胞外ドメインを含む免疫原を用いて、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを含む操作マウス）を免疫化することにより取得された。抗体の免疫反応は、ＬＥＰＲ特異的免疫アッセイによりモニタリングされた。過去に報告された技術を使用して、完全ヒト抗ＬＥＰＲ抗体を単離し、精製した。
【０１９１】
本実施例の方法にしたがって作製された例示的な抗ＬＥＰＲ抗体の特定の生物学的特性を、以下に記載される実施例において詳細に説明する。
【０１９２】
実施例２：重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列および核酸配列
表１は、本発明の選択された抗ＬＥＰＲ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に記載する。
【０１９３】
（表１）アミノ酸配列識別子
2021532057.tif 000002
【０１９４】
（表２）核酸配列識別子
2021532057.tif 000003
【０１９５】
抗体は通常、以下の命名法にしたがって本明細書で言及される：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」など）、その後に数値の識別子（例えば「１６６５０」、「１６６７９」など）、その後に「Ｐ」または「Ｎ」の接尾辞。したがって、この命名法によると、抗体は、本明細書において、例えば「Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２」、「Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２」などと呼称される場合もある。本明細書で使用される抗体の名称に対するＦｃ接頭辞（Ｈ４Ｈ、Ｈ１ＭおよびＨ２Ｍ）は、抗体の特定のＦｃ領域のアイソタイプを示す。例えば、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４のＦｃを有し、一方で、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１のＦｃを有する（すべての可変領域は、抗体の名称において最初に「Ｈ」が表示される場合、完全ヒトである）。当業者によって理解されるように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができる、など）が、いずれの場合でも、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）−これは、表１および２に示される数値識別子によって示されている−は変わらず、結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず同一または実質的に類似していると予想される。
【０１９６】
本明細書の実施例において使用される場合、「コンパレータｍＡｂ」とは、Ｆａｚｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３１２：１９０−２００、およびＣａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２０（３）：４８７−９７に記載されるＦａｂ９Ｆ８を指す。
【０１９７】
国際特許出願公開  ＷＯ２０１７／６６２０４を参照のこと。
【０１９８】
実施例３：ヒトモノクローナル抗ＬＥＰＲ抗体の表面プラズモン共鳴から導かれた結合アフィニティおよび速度定数
精製された抗ＬＥＰＲ抗体へのＬＥＰＲの結合に対する平衡解離定数（ＫＤ値）が、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００装置を使用したリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定された。全ての結合試験は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０５％  ｖ／ｖ  界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ−ＥＴ）のランニング緩衝液中、２５℃および３７℃で実施した。Ｂｉａｃｏｒｅ  センサーの表面を、まずモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ，＃  ＢＲ−１００８−３９）を用いたアミンカップリングによって誘導体化し、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体を捕捉した。以下のＬＥＰＲ試薬に対して結合試験が行われた：Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ；配列番号１１４）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグとともに発現されたカニクイザルＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｍｆＬＥＰＲ．ｍｍＨ；配列番号１１７）、Ｃ末端マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｈＬＥＰＲ．ｍＦｃ；配列番号１１５）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグとともに発現されたマウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｍＬＥＰＲ．ｍｍｈ；配列番号１１８）、およびＣ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグとともに発現されたラットＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｒＬＥＰＲ．ｍｍｈ；配列番号１１９）。異なる濃度のＬＥＰＲ試薬を最初にＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中で調製し（１００ｎＭ〜３．７ｎＭ；３倍連続希釈）、そして抗ヒトＦｃ捕捉抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体表面上に３０μＬ／分の流速で４分間注入しながら、モノクローナル抗体結合ＬＥＰＲ試薬の解離を１０分間、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中でモニタリングした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃカーブフィッティングソフトウェアを使用して、質量輸送限界（ｍａｓｓ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）を用いてリアルタイム結合センサーグラムを１：１結合モデルにフィッティングさせることによって、動態速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）定数を決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動力学的速度定数から以下のように計算した：
【０１９９】
【数１】
2021532057.tif 000004
【０２００】
２５℃および３７℃での本発明の各種抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ、ｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨまたはｈＬＥＰＲ．ｍＦｃの結合速度パラメータを、表３から表８に示す。
【０２０１】
（表３）２５℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｈＬＥＰＲ−ＭＭＨの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000005
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
【０２０２】
（表４）３７℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｈＬＥＰＲ−ＭＭＨの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000006
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
【０２０３】
（表５）２５℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000007
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
＊ＩＣは、観察された結合が包括的であること、およびリアルタイムの結合データに適合することができなかったことを示す。
【０２０４】
（表６）３７℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000008
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
＊ＩＣは、現行の実験条件下では、観察された結合が包括的であること、およびリアルタイムの結合データに適合することができなかったことを示す。
【０２０５】
（表７）２５℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｈＬＥＰＲ．ｍＦｃの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000009
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
【０２０６】
（表８）３７℃でのＬＥＰＲモノクローナル抗体に結合するｈＬＥＰＲ．ｍＦｃの結合速度パラメータ。
2021532057.tif 000010
＊ＮＢは、現在の実験条件下で結合が観察されなかったことを示す。
【０２０７】
２５℃では、表５に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、７．９３ｎＭ〜１４８ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＥＰＲ−ＭＭＨに結合した。３７℃では、表４に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、１４．８ｎＭ〜３２６ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＥＰＲ−ＭＭＨに結合した。
【０２０８】
本発明の１２個の抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体のうち１０個が、ｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨに結合した。２５℃では、表７に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、２．２７ｎＭ〜１３９ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨに結合した。３７℃では、表８に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、５．１８ｎＭ〜２６４ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｍｆＬＥＰＲ．ＭＭＨに結合した。
【０２０９】
２５℃では、表７に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、６１３ｐＭ〜５．７ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＥＰＲ−ｍＦｃに結合した。３７℃では、表８に示されるように、抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体は、１．１６ｎＭ〜１２．８ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＥＰＲ−ｍＦｃに結合した。
【０２１０】
本発明の抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体はいずれも、２５℃または３７℃でもｍＬＥＰＲ．ＭＭＨまたはｒＬＥＰＲ．ＭＭＨには結合しなかった（データは示さず）。
【０２１１】
実施例４：本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、レプチン：ＬＥＰＲ結合の存在下で、ＬＥＰＲに結合する。
ヒトレプチンによる、抗ＬＥＰＲ抗体のＬＥＰＲへの結合の遮断は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００装置でリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して評価された。実験全体が、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳのｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０（ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液）中で、２５℃で実施された。Ｂｉａｃｏｒｅ  ＣＭ５センサー表面は、標準的なＥＤＣ／ＮＨＳ表面化学法を使用してヒトレプチンをアミンカップリングすることにより最初に誘導体化された（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃３９８−ＬＰ）。ヒトＬＥＰＲとヒトレプチンの複合体は、２０ｎＭのＣ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴い発現されたヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ｈＬＥＰＲ−ＭＭＨ；配列番号：ｘｘ）を、１０μＬ／分または２５μＬ／分の流速でヒトレプチン固定Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面上に４分間注入し、およそ２００ＲＵの結合反応を実現することにより形成された。ｈＬＥＰＲ−ＭＭＨへの抗体結合が、ヒトレプチンにより遮断されるかを評価するために、２００ｎＭの抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体を、前もって形成されたｈＬＥＰＲ−ＭＭＨ：ヒトレプチン複合体上に５０μＬ／分または２５μＬ／分の流速で４〜５分間注入した。本発明の抗ＬＥＰＲ抗体のすべてが、ほぼ同じシグナル強度でｈＬＥＰＲ−ＭＭＨとヒトレプチンの複合体（レプチン：ＬＥＰＲ）に結合した。観察された結合はＲＵで表され、表９に報告される。この結果は、ヒトレプチンは、試験された抗ＬＥＰＲ抗体に対するｈＬＥＰＲ−ＭＭＨの結合を遮断しないことを示す。
【０２１２】
（表９）ｈＬＥＰＲ−ＭＭＨとヒトレプチンの前もって形成された複合体に対する抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体の結合。
2021532057.tif 000011
【０２１３】
実施例５：ヒトレプチン受容体遮断ＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡについて、ヒトレプチン（ｈＬｅｐｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃３９８−ＬＰ−０１Ｍ）は、ＰＢＳ中、４℃で一晩、９６ウェルマイクロタイタープレート上で５μｇ／ｍＬの濃度でコーティングされた。その後、非特異結合部位が、０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡのＰＢＳ溶液を使用してブロッキングされた。Ｃ末端ヒトＦｃタグとともに発現されたＬＥＰＲタンパク質（ｈＬＥＰＲ．ｈＦｃ、配列番号１１６）の細胞外ドメインの一定量の１０ｎＭを、連続希釈で８．５ｐＭ〜５００ｎＭの範囲にある抗ＬＥＰＲ抗体、ヒトレプチンタンパク質、またはアイソタイプ対照抗体を用いて力価測定した。次いでこれらの抗体−タンパク質複合体またはタンパク質−タンパク質複合体を、室温（ＲＴ）で１．５時間インキュベートした。続いて、複合体を、ヒトレプチンでコートされたマイクロタイタープレートに移し、２時間、室温でインキュベートした。ウェルを洗浄し、プレートに結合したｈＬＥＰＲ．ｈＦｃを、西洋ワサビペルオキシダーゼが結合した抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ，＃１０９−０３５−０９８）を用いて検出した。サンプルをＴＭＢ溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、＃５５５２１４；基材ＡおよびＢを、メーカーの指示に従って１：１の比で混合）で発色させ、比色反応を生じさせ、次にＶｉｃｔｏｒ  Ｘ５プレートリーダー上で４５０ｎｍで吸光度を測定する前に、１Ｍ硫酸で中和した。
【０２１４】
プリズム（商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社）内でのシグモイド用量反応モデルを使用してデータ解析を実施した。試験された抗体の最大濃度での遮断率は、プレート上のヒトレプチンに対する、１０ｎＭのｈＬＥＰＲ．ｈＦｃの結合を遮断する抗体の能力の指標として算出された。算出において、抗体の非存在下での１０ｎＭのｈＬＥＰＲ．ｈＦｃの結合シグナルは、１００％結合または０％遮断と呼称された。そしてｈＬＥＰＲ．ｈＦｃの非存在下、緩衝液単独の基準シグナルは、０％結合または１００％遮断と呼称された。５００ｎＭの抗体濃度での遮断データを、表１０に要約する。
【０２１５】
表１０に示されるように、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体はいずれも、ヒトレプチンがコートされた表面に対するｈＬＥＰＲ．ｈＦｃの結合を、２８％を超えて遮断しなかった。しかしながら、陽性対照としてのコンパレータ抗体およびヒトレプチンは、ヒトレプチンコート表面に対するｈＬＥＰＲ．ｈＦｃ結合の９９％を遮断することができた。アイソタイプ対照抗体は、最大５００ｎＭの濃度で、計測可能な遮断を示さなかった。
【０２１６】
（表１０）抗ＬＥＰＲ抗体による、ヒトレプチンへのｈＬＥＰＲ．ｈＦｃ結合の遮断ＥＬＩＳＡ
2021532057.tif 000012
【０２１７】
実施例６：ＨＥＫ２９３／Ｍｙｃｘ２−ｈＬｅｐＲ（ｅｃｔｏ）−ＧＰＩ固定細胞を用いたＦＡＣＳ分析による細胞結合
レプチン受容体のＬＥＰＲは、クラスＩサイトカイン受容体ファミリーの単回膜貫通型受容体である（Ｔａｒｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ７：２７２（１０）：６０９３−６）。ＬＥＰＲはレプチンに結合することができ、レプチンは主に、食物の摂取と代謝の調節に関与する脂肪組織により発現されている（Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２２３（１）：Ｔ１−８）。
【０２１８】
抗ＬＥＰＲ抗体による細胞結合を評価するために、ＨＥＫ２９３安定細胞株が作製された。本明細書において以降、ＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩとされる一つの細胞株は、タンパク質が膜にＧＰＩで繋留されるように、Ｎ末端ｍｙｃ−ｍｙｃタグと、ＧＰＩ（グリコシルホスファチジルイノシトール）の付加を誘導するヒトカルボキシペプチダーゼＭに由来するＣ末端ペプチド配列とともにヒトＬＥＰＲの細胞外ドメイン（アクセッション番号Ｐ４８３５７（配列番号１１３）のアミノ酸２２〜８３９、アイソフォームＢ）を安定的に発現した（Ｄｅｄｄｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６５：２５：１５０８３−８９）。別のＨＥＫ２９３細胞株は、ルシフェラーゼレポーター（Ｓｔａｔ３−ルシフェラーゼ、Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ、ＳＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、＃ＣＬＳ−６０２８Ｌ）とともに全長ヒトＬＥＰＲ（アクセッション番号Ｐ４８３５７（配列番号１１３）のアミノ酸１〜１１６５、アイソフォームＢ）を安定的に発現するように作製され、本明細書において以降、ＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ−ＦＬとされた。Ｓｔａｔ３−ルシフェラーゼレポーターのみを含むＨＥＫ２９３細胞も対照細胞株として作製された（ＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ）。
【０２１９】
ＦＡＣＳ分析については、ＨＥＫ２９３親細胞と、ＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ細胞が分離され、２％ＦＢＳを含有するＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）中、９６−ウェルのｖ底プレート上に、５ｘ１０５細胞／ウェルで播種された。抗ｈＬＥＰＲ抗体が細胞に結合する能力が、レプチンの存在により影響を受けるかを試験するため、１μＭのヒトレプチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃  ３９８−ＬＰ）を含む、または含まないＦＡＣＳ緩衝液を、４℃で細胞とともに３０分間インキュベートし、次いで抗ＬＥＰＲ抗体または対照抗体を、ＦＡＣＳ緩衝液中、１０ｎＭで添加した。次いで細胞を４℃で３０分間インキュベートし、その後洗浄し、１６μｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）−６４７結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、＃  １０９−５４７−００３）とともに４℃で３０分間、インキュベートした。次いで細胞を、ＢＤ  ＣｙｔｏＦｉｘ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社、＃  ５５４６５５）を使用して固定し、ろ過して、ＨｙｐｅｒＣｙｔ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ社）で解析した。未染色および二次抗体単独の対照もまた、すべての細胞株に対して試験された。生細胞に対する蛍光の幾何平均（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｍｅａｎｓ）を決定するために、ＦｏｒｅＣｙｔ（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ）およびＦｌｏｗＪｏのバージョン１０のソフトウェアを使用して結果を分析した。次いで各サンプルに対する蛍光の幾何平均を、非染色細胞の幾何平均に対して標準化し、「結合比」と呼称される、１条件当たりの相対的結合を得た。これら結合比は、検証された各抗体に対して記録された。
【０２２０】
表１１に示されるように、１０ｎＭで試験された本発明の９個の抗ＬＥＰＲ抗体は、レプチンの非存在下で、８２４〜３３７４倍の範囲の結合比で、ＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ細胞への結合を示した。抗ＬＥＰＲ抗体は、１μＭのレプチンの存在下でも、３９８および４１８４倍の結合比で結合した。表１１に示すように、１０ｎＭで試験されたコンパレータ抗体は、レプチンの非存在下では２３４９倍の結合比でＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ細胞への結合を示したが、１μＭのレプチンの存在下では、１１２の結合比であり、細胞への結合は有意な低下を示した。抗ＬＥＰＲ抗体は、ＨＥＫ２９３親細胞にはほとんど結合を示さず、１μＭのレプチンの存在下、または非存在下で、結合比は、１〜９倍の範囲であった。アイソタイプ対照抗体および二次抗体の単独サンプルも、レプチンの存在下、または非存在下で、いずれの細胞株にもほとんど結合を示さず、結合比は、１〜６倍の範囲であった。
【０２２１】
表１２に示されるように、レプチンの非存在下で、７０ｎＭで試験された本発明の４個の抗体は、７０７〜１１３１倍の範囲の結合比でＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ細胞に結合を示し、そして４２〜５１倍の範囲の結合比で、ＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ−ＦＬ  細胞への結合を示した。抗ＬＥＰＲ抗体は、ＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ細胞にはほとんど結合を示さず、結合比は、１〜８倍の範囲であった。アイソタイプ対照抗体および二次抗体の単独サンプルも、試験された細胞株のいずれにもほとんど結合を示さず、結合比は、１〜２倍の範囲であった。
【０２２２】
（表１１）ＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ細胞およびＨＥＫ２９３親細胞  ＋／−  １μＭヒトレプチンに対する、１０ｎＭの抗ＬＥＰＲ抗体の結合
2021532057.tif 000013
＊「アゴニスト」または「強化性物質」としての抗体の分類は、本明細書の実施例７および８で観察された結果に一部基づいている。
【０２２３】
（表１２）ＨＥＫ２９３／ｈＬＥＰＲ−ＧＰＩ、ＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｈＬＥＰＲ−ＦＬ、およびＨＥＫ２９３／Ｓｔａｔ３−ｌｕｃ親細胞に対する、７０ｎＭの抗ＬＥＰＲ抗体の結合
2021532057.tif 000014
【０２２４】
実施例７：本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、レプチンの存在下または非存在下で、ＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する
完全長ヒトＬＥＰＲ（ｈＬＥＰＲ；アクセッション番号ＮＰ＿００２２９４．２のアミノ酸１〜１１６５）を、ルシフェラーゼレポーター（ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ、Ｑｉａｇｅｎ社、＃  ＣＬＳ−６０２８Ｌ）とともにヒト神経芽細胞腫細胞株であるＩＭＲ−３２細胞株において安定的に発現するレポーター細胞株を使用して、ＬＥＰＲ活性化を介した、ＳＴＡＴ３の転写活性化を検出するバイオアッセイを開発した。得られた安定細胞株はＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲと呼称され、単離されて、１０％  ＦＢＳ、ＮＥＡＡ、１ｕｇ／ｍＬのピューロマイシン、１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢおよびペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ−グルタミンを補充されたＭＥＭ−Ｅａｒｌ培地中で維持された（完全培地）。
【０２２５】
得られたバイオアッセイを使用して、レプチンの存在下または非存在下でのＬＥＰＲシグナル伝達に対する本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の効果を測定した。バイオアッセイについては、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞を、完全培地中、９６ウェルフォーマットに対し、２０，０００細胞／１００ｕｌ／ウェルの密度で播種し、翌日、１％  ＢＳＡおよび０．１％  ＦＢＳ（アッセイ緩衝液）を補充した適切な量のＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地で３０分間、置き換えた。レプチンの非存在下での本発明抗体の効果を測定するために、抗ＬＥＰＲ抗体またはアイソタイプ対照抗体と、ヒトレプチン（ｈＬｅｐｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、＃３９８−ＬＰ）をアッセイ緩衝液中で半対数連続希釈して、１００ｎＭ〜３００ｆＭの範囲の最終濃度とした。これを細胞に添加し、次いで５％  ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。
【０２２６】
レプチンの存在下での本発明抗体の効果を測定するために、アッセイ緩衝液中、２００ｐＭの固定濃度のヒトレプチンを細胞に添加し、その直後に、１００ｎＭ〜３００ｆＭの範囲の最終濃度に半対数連続希釈された抗ＬＥＰＲ抗体またはアイソタイプ対照抗体を添加した。次いでサンプルを、５％  ＣＯ２中、３７℃で一晩インキュベートした。次いで、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社、＃Ｅ６０５１）をサンプルに加え、発光モードで  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）上でルシフェラーゼ活性を測定した。相対光単位（ＲＬＵ）値を得て、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社）で非線形回帰を用いて結果を分析した。ヒトレプチン用量反応から得られた最大ＲＬＵ値は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲアッセイにおいて１００％の活性化として定義された。
【０２２７】
表１３に示されるように、試験１において、ヒトレプチンの非存在下で、試験されたすべての抗ＬＥＰＲ抗体は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞の弱い刺激を示した。ＥＣ５０値は１３４ｐＭ〜１１．９ｎＭの範囲で、最大活性化はそれぞれ、ヒトレプチン用量反応から得られた最大活性化の５％〜１３％の範囲であった。試験２において、ヒトレプチンの非存在下で、試験された４つの抗ＬＥＰＲ抗体は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞の刺激を示した。ＥＣ５０値は６１．９ｐＭ〜２０６．９ｐＭの範囲で、最大活性化はそれぞれ、ヒトレプチン用量反応から得られた最大活性化に対して６５％〜６８％の範囲であった。試験１において、２００ｐＭのヒトレプチンの存在下で、試験されたすべての抗ＬＥＰＲ抗体は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞の刺激を示した。ＥＣ５０値は２０．２ｐＭ〜５２３ｐＭの範囲で、最大活性化はそれぞれ、ヒトレプチン用量反応から得られた最大活性化の６６％〜１０７％の範囲であった。これら抗体がレプチン誘導型ＬＥＰＲシグナル伝達を強化したことから、これらの抗体を、本明細書に規定されるように「強化性物質」と分類した。試験２において、２００ｐＭのヒトレプチンの存在下で、試験された４個の抗ＬＥＰＲ抗体は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞の刺激を示した。ＥＣ５０値は５１．９ｐＭ〜２５７．３ｐＭの範囲で、最大活性化は、ヒトレプチン用量反応から得られた最大活性化の７６％〜８８％の範囲であった。ＬＥＰＲシグナル伝達は、レプチンの存在下ではこれらの抗体により感知できるほどには増強されなかった。アイソタイプ対照抗体は、アッセイのいずれにおいても、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｈＬＥＰＲ細胞の測定可能な刺激を示さなかった。
【０２２８】
（表１３）抗ＬＥＰＲ抗体によるｈＬＥＰＲの活性化
2021532057.tif 000015
【０２２９】
実施例８：本発明の抗ＬＥＰＲ抗体は、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体を発現する細胞においてシグナル伝達を活性化する
ＬＥＰＲ変異体は、レプチン介在性シグナル伝達の欠損または障害を呈すると特定されており、早期発症型の肥満と関連付けられている。例えばＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅは、シグナル伝達欠損変異体ＬＥＰＲタンパク質であり、レプチンシグナルをＳＴＡＴ３に伝達しない。Ａ４０９Ｅ変異体は元々、早期発症型の肥満の単一遺伝子性の原因として特定された。（Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５６（３）：２３７−２４７）。ＬＥＰＲ−Ｐ３１６Ｔは、シグナル伝達障害変異体ＬＥＰＲタンパク質であり、早期発症型肥満と関連することも示されている。（Ｍａｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ  １０２：４６１−４６４）。
【０２３０】
本実施例では、シグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体を発現する細胞株において、本発明の抗ＬＥＰＲ抗体が、ＬＥＰＲシグナル伝達を刺激する能力を評価した。特に、野生型ＬＥＰＲ、ＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅ（シグナル伝達欠損）またはＬＥＰＲ−Ｐ３１６Ｔ（シグナル伝達障害）のいずれかを発現するレポーター細胞株（ＨＥＫ２９３）が構築された。ビヒクルのみ、組み換えヒトレプチン、対照ＩｇＧ、または本発明のアゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体（Ｈ４Ｈ１６６５０またはＨ４Ｈ１６６７９）のいずれかで細胞を処理し、ＬＥＰＲシグナル伝達の程度（ＳＴＡＴ３発現と比較した、ｐＳＴＡＴ３−Ｙ７０５発現のウェスタンブロッティング検出により測定される）が決定された。
【０２３１】
本発明のアゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体（Ｈ４Ｈ１６６５０およびＨ４Ｈ１６６７９）は、これらの実験において、ＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅ変異体またはＬＥＰＲ−Ｐ３１６Ｔ突然変異体を発現する細胞において、用量依存性の様式でＬＥＰＲシグナル伝達を刺激することが示された（ＳＴＡＴ３発現により測定される）（図２、パネルＢおよびＣ）。対照的に、レプチン処置は、ＬＥＰＲ−Ｐ３１６Ｔ変異体を発現する細胞において中程度のシグナル伝達のみを誘導し、ＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅ変異体を発現する細胞のシグナル伝達は誘導しなかった。（図２、パネルＡ）。さらに、ビヒクルまたはＩｇＧ対照抗体で処理された細胞株ではいずれもＬＥＰＲシグナル伝達は検出されなかった（データは示さず）。他のシグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体をこのアッセイで試験したが、抗ＬＥＰＲ変異体では活性化されなかった（データは示さず）。このことから、この回復効果は、変異体依存性であることが示唆される。
【０２３２】
本実施例の結果は、本発明のアゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体が、特定のシグナル伝達欠損ＬＥＰＲ変異体またはシグナル伝達障害ＬＥＰＲ変異体（例えば、ＬＥＰＲ−Ｐ３１６ＴまたはＬＥＰＲ−Ａ４０９Ｅ）を原因とする、または関連する疾患および障害（例えば、早期発症型肥満）の治療に有用であり得ることを示している。
【０２３３】
実施例９：各種抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体間での八重（Ｏｃｔｅｔ）交差競合。
各種抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体のパネル間の結合競合は、Ｏｃｔｅｔ  ＨＴＸバイオセンサープラットフォーム（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｃｏｒｐ．）上で、リアルタイムの標識非含有バイオレイヤー干渉分光アッセイを使用して決定された。実験全体は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、および０．０５％  ｖ／ｖ  界面活性剤のＴｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、ｐＨ７．４（ＨＢＳ−ＥＢＴ）を含有する緩衝液中、２５℃で、１０００ｒｐｍの速度でプレートを振とうさせながら実施された。Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグとともに発現された組み換えヒトＬＥＰＲ（ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ；配列番号１１４）上の各エピトープに対する結合に関して、二つの抗体が互いに競合し得るかを評価するために、約０．２５ｎｍまたは０．３４ｎｍのｈＬＥＰＲ−ＭＭＨは、抗−ペンタ−Ｈｉｓ抗体被覆Ｏｃｔｅｔバイオセンサーチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ，＃  １８−５１２２）上で、当該バイオセンサーチップを、２０μｇ／ｍＬのｈＬＥＰＲ−ＭＭＨを含有するウェル中に５分間、浸漬することにより最初に捕捉された。次いで、抗原を捕捉したバイオセンサーチップを、５０μｇ／ｍＬのｍＡｂ−１溶液を含有するウェルへと２１０秒間浸漬することによって、第一の抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体（以降、ｍＡｂ−１と呼称される）で飽和した。次いで、バイオセンサーチップを、５０μｇ／ｍＬの第二の抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体（以降、ｍＡｂ−２と呼称される）を含有するウェル内に１５０秒間浸漬させた。バイオセンサーチップは、実験の全行程の間で、ＨＢＳ−ＥＢＴ緩衝液で洗浄した。実験の過程全体の間にリアルタイム結合応答をモニタリングし、各ステップの終了時に結合応答を記録した。ｍＡｂ−１と予め複合体化されたｈＬＥＰＲ−ＭＭＨへのｍＡｂ−２結合の反応を比較し、表１４および表１５に示すとおり、各種抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体の競合／非競合の挙動を判定した。
【０２３４】
（表１４）抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体間の交差競合
2021532057.tif 000016
【０２３５】
（表１５）抗ＬＥＰＲモノクローナル抗体間の交差競合
2021532057.tif 000017
【０２３６】
実施例１０：レプチン欠損症の誘導性マウスモデルにおける、ＬＥＰＲアゴニスト性抗体のＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２のインビボ有効性。
本発明の４種の特異的アゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２の、食物摂取量、体重および脂肪症に対する効果を、遺伝子操作されたＬＥＰＲＨｕ／Ｈｕマウスにおけるレプチン欠損症の誘導性モデルにおいて判定した。当該マウスは、マウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列の代わりにヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列から構成されるレプチン受容体を発現する。ｈＦｃタグ付マウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン（本明細書において、ｍＬＥＰＲ．ｈＦｃまたは「レプチントラップ（Ｌｅｐｔｉｎ  ｔｒａｐ）」と呼称される、配列番号１２０）をコードするプラスミドの水力学的ＤＮＡ送達（ＨＤＤ）により、レプチン欠損症モデルが誘導された。発現されたときにレプチントラップが分泌され、循環レプチンに結合する。レプチントラップをコードする５０μｇのＤＮＡ構築体のＨＤＤを行った後、マウスは、食物消費量の増大、ならびに脂肪症および体重の増加を呈した。
【０２３７】
基準の１日食物摂取量は、レプチントラップの投与前の７〜４日の間に測定された（−７日目〜−４日目）。０日目、３５匹の１３週〜１７週齢のオスＬＥＰＲＨｕ／Ｈｕマウスは、レプチントラップを用いたＨＤＤに成功した。ＨＤＤ後の６日目および１３日目に、眼窩後方から採血し、脂肪症を含む体組成がμＣＴにより定量された。ＨＤＤ後の７日目に、０日目からの体重の変化率に基づいて、マウスを、一群当たり７匹で５群に無作為化した。皮下注射を介して、３ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体の単回投与、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６７９Ｐ２、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２、または３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３２１の単回投与のいずれかを各群に投与した。アイソタイプ対照抗体は、公知のマウスタンパク質のいずれにも結合しなかった。試験期間中、各動物に対し、食物摂取量と体重が測定された。図３は、各処置群に対する１日平均の食物摂取量をまとめたものである。図３では、点線は、ＨＤＤ注射前の平均基準食物摂取量を表している。０日目からの体重の変化率は、各時点での各動物に対して計算された。図４は、各抗体処置群における動物の体重の平均変化率をまとめたものである。図５は、抗体処置の１日前、および６日後のμＣＴにより定量された各抗体処置群における動物の平均脂肪量をまとめたものである。すべての結果は、平均±ＳＥＭとして表される。
【０２３８】
図３および４に示すように、レプチントラップを用いたＨＤＤの後、抗体処置前のマウス群間では、類似した食物摂取量の増加および体重の変化率が観察された。図３に示されるように、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体またはＨ４Ｈ１６６７９Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、抗体処置後の１日目（ＨＤＤ後の８日目）からその後の測定時点での食物摂取量の有意な減少を呈した。３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体またはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、抗体処置後の２日目（ＨＤＤ後の９日目）、およびその後の他の測定時点での食物摂取量の有意な減少を呈した。図４に示されるように、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、抗体処置後の１日目（ＨＤＤ後の８日目）、およびその後の他の測定時点での体重変化率の有意な減少を呈した。抗体処置の１日後、８日目に、アイソタイプ対照抗体で処置されたマウスは、０日目から２１．１６  ±  １．２７％の体重増加を示した。一方で、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２で処置されたマウスは、０日目から１５．５７  ±  ０．９％の体重増加であった。３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６７９Ｐ２抗体、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体、またはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、抗体処置後の２日目（ＨＤＤ後の９日目）、およびその後の他の測定時点での体重変化率の有意な減少を呈した。９日目で、０日目からの体重変化率は、アイソタイプ対照、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２、またはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２を処置されたマウスに対し、それぞれ２３．１８  ±  １．２２％、１３．１７  ±  １．０５％、１２．９５  ±  １．２６％、１５．９８  ±  １．７８％、および１５．８３  ±  ２．０１％であった。図５に示されるように、３ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体で処置されたマウスは、抗体処置の１日前（ＨＤＤ後、６日目）と比較して、抗体処置の６日後（ＨＤＤ後、１３日目）、脂肪量の有意な増加を示した。３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２抗体、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体、またはＨ４Ｈ１７３２１Ｐ２抗体で処置されたマウスは、抗体処置前と比較して、抗体処置後、脂肪量は増加しなかった。処置の６日後（ＨＤＤ後、１３日目）、３ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体、Ｈ４Ｈ１６６７９Ｐ２抗体またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体で処置されたマウスは、３ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体で処置されたマウスと比較して、脂肪量の有意な減少を示した。
【０２３９】
実施例１１：水素重水素交換による、ヒトレプチン受容体（ｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ）へのＨ４Ｈ１６６５０Ｐ２結合に関するエピトープマッピング。
Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２が相互作用するｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ（配列番号１１４のアミノ酸Ｍ１−Ｄ８３９）のアミノ酸残基を決定するための実験が実施された。この目的に対し、質量分析を含むＨ／Ｄ交換エピトープマッピングが実施された。Ｈ／Ｄ交換方法の概要説明は、例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２−２５９；およびＥｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ〜２６５Ａに記載されている。
【０２４０】
実験手順  ＨＤＸ−ＭＳ実験は、統合型Ｗａｔｅｒｓ  ＨＤＸ／ＭＳプラットフォーム上で実施された。当該プラットフォームは、重水素標識用のＬｅａｐｔｅｃ  ＨＤＸ  ＰＡＬシステム、サンプル消化とローディング用のＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｍ−Ｃｌａｓｓ（Ａｕｘｉｌｉａｒｙ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍａｎａｇｅｒ）、分析的カラム勾配用のＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｍ−Ｃｌａｓｓ（μＢｉｎａｒｙ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｍａｎａｇｅｒ）、および消化ペプチド質量測定用のＳｙｎａｐｔ  Ｇ２−Ｓｉ質量分析器からなる。
【０２４１】
標識溶液は、ｐＤ７．０（ｐＨ６．６と同等）で、Ｄ２Ｏ中、１０ｍＭのＰＢＳ緩衝液中で調製された。重水素ラベル標識のために、３．８μＬのｈＬＥＰＲ．ｍｍｈ（８ｐｍｏｌ／μＬ）、または２：１モル比で抗体と前混合されたｈＬＥＰＲ．ｍｍｈを、５６．２μＬのＤ２Ｏ標識溶液とともに様々な時間でインキュベートした（例えば、非重水素化対照＝０秒、標識は１分および２０分）。５０μＬのサンプルを５０μＬの前冷却クエンチ緩衝液（１００ｍＭ  リン酸緩衝液中、０．２Ｍ  ＴＣＥＰ、６Ｍ  塩化グアニジン、ｐＨ２．５）に移すことによりクエンチし、混合サンプル液を２分間、１．０℃でインキュベートした。次いで、クエンチされたサンプルを、オンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化用のＷａｔｅｒｓ  ＨＤＸ  Ｍａｎａｇｅｒに注入した。消化されたペプチドを、０℃で、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７−μｍ、２．１×５ｍｍ  ＶａｎＧｕａｒｄプレカラム上にトラップし、分析カラムのＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７−μｍ、１．０×５０ｍｍに溶出し、９分間、５％〜４０％  Ｂ（移動相Ａ：０．１％ギ酸水溶液、移動相Ｂ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液）の勾配分離を行った。質量分析計は、３７Ｖのコーン電圧、０．５秒のスキャン時間、および５０〜１７００Ｔｈの質量／電荷範囲で設定された。
【０２４２】
ヒトＬＥＰＲ由来のペプチドの識別については、非重水素化サンプルからのＬＣ−ＭＳＥデータを処理し、Ｗａｔｅｒｓ  ＰｒｏｔｅｉｎＬｙｎｘ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｓｅｒｖｅｒ（ＰＬＧＳ）ソフトウェアを介して、ヒトＬＥＰＲ、ペプシン、およびそれらの無作為化配列を含むデータベースに対して検索を行った。識別されたペプチドをＤｙｎａｍＸソフトウェアにインポートし、以下の二つの基準によりフィルタリングした：１）１アミノ酸当たりの最小生成物；０．２、および２）複製ファイル閾値：３．次に、ＤｙｎａｍＸソフトウェアによって、各時点で３回の反復を含む複数時点から、保持時間および高質量精度（＜１０ｐｐｍ）に基づいて各ペプチドの重水素取り込みを自動的に決定した。
【０２４３】
結果．ＭＳＥデータ取得と連結されたオンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムを使用することで、ヒトＬＥＰＲから合計で２０１個のペプチドが、抗体の存在下または非存在下で再現可能に識別された。これは７０％の配列カバレッジを表している。表１６に示されるように、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２に結合したときに、５つのペプチドは重水素化取り込みが有意に低下した（セントロイドデルタ値＞０．４ダルトンで、ｐ値は＜０．０５）。記録されたペプチド質量は、３回の反復からのセントロイドＭＨ＋質量の平均値に相当する。アミノ酸１６２〜１６９（ヒトＬＥＰＲ；配列番号１１３のアミノ酸ＬＹＶＬＰＥＶＬ）およびアミノ酸１７０〜１８１（ヒトＬＥＰＲ；配列番号１１３のアミノ酸ＥＤＳＰＬＶＰＱＫＧＳＦ）に相当するこれらのペプチドは、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２に結合したとき、重水素化速度が減速した。これらの識別された残基は、ＵｎｉｐｒｏｔエントリーＰ４８３５７（配列番号１１３；ヒトレプチン受容体）により規定されるヒトＬＥＰＲのアミノ酸残基１６２−１６９および１７０〜１８１にも対応する。
【０２４４】
（表１６）Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ２抗体へ結合することで、大幅な防御を受けるヒトレプチン受容体ペプチド
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【０２４５】
実施例１２：ヒト化ＬＥＰＲマウスにおける、ＬＥＰＲ増強性抗体のインビボ有効性の検証
本発明の３種の特異的増強性抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４８７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２の、体重および脂肪症に対する効果を、１匹で飼育された遺伝子操作ＬＥＰＲＨｕ／Ｈｕマウスにおいて判定した。当該マウスは、マウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列の代わりにヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列から構成されるレプチン受容体（ｍＬＥＰＲ．ｈＦｃ、配列番号１２０）を発現する。
【０２４６】
−１９日目、脂肪症を含む体組成は、μＣＴにより定量された。０日目、４８匹の１４〜１６週齢のメスＬＥＰＲＨｕ／Ｈｕ  マウスを、体重に基づき、一群当たり１２匹マウスの４群に無作為化した。０日目および１１日目に、各群のマウスは、皮下注射を介して、３０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照抗体、３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２、３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８７Ｐ２、または３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２の単回投与が投与された。アイソタイプ対照抗体は、公知のマウスタンパク質のいずれにも結合しない。試験期間中、各動物に対し、体重が測定された。０日目からの体重の変化率は、各時点での各動物に対して計算された。図６は、各処置群における動物の体重の平均変化率をまとめたものである。図６は、抗体処置の１９日前、および１１日後のμＣＴにより定量された各抗体処置群における動物の平均脂肪量をまとめたものである。すべての結果は、平均±ＳＥＭとして表される。
【０２４７】
図６に示されるように、ＬＥＰＲ強化性抗体を投与された後、体重の変化率の減少が観察されたが、アイソタイプ対照抗体では観察されなかった。図６に示されるように、３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、処置の２日後（２日目）から他の時点での体重変化率の有意な減少を呈した。３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８７Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、２日目から他の時点での体重変化率の有意な減少を呈した。３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体を注射されたマウスと比較して、４日目、５日目および１７日目で体重変化率の有意な低下を呈したが、他の時点では呈さなかった。３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８２Ｐ２抗体で処置されたマウスは、Ｈ４Ｈ１８４９２Ｐ２抗体を注射されたマウスと比較して、６日目で体重変化率の有意な減少を呈したが、７日目、１４日目、および１７日目では呈さなかった。３０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１８４８７Ｐ２抗体で処置されたマウスは、Ｈ４Ｈ１８４９２Ｐ２抗体を注射されたマウスと比較して、３日目から他の時点での体重変化率の有意な減少を呈したが、４日目および５日目では呈さなかった。
【０２４８】
図７Ａに示すように、処置前の群間において、脂肪量の差はなかった（−１９日目）。図７Ｂに示すように、３０ｍｇ／ｋｇで、Ｈ４Ｈ１８４８２抗体およびＨ４Ｈ１８４８７抗体で処置されたマウスは、アイソタイプ対照抗体と比較して、処置の１７日後（１２日目）、脂肪量において統計的に有意な減少を示したが、Ｈ４Ｈ１８４９２抗体ではなかった。
【０２４９】
実施例１３：サルＬＥＰＲシグナル伝達に対する本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の効果
サルレプチン受容体の転写活性化を評価するために、安定細胞株が開発された。ルシフェラーゼレポーター（ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ；ＳＡＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、＃  ＣＬＳ−６０２８Ｌ）とともにヒトＬＥＰＲ（ｈＬＥＰＲ：アクセッション番号ＮＰ＿００２２９４．２のアミノ酸８４０〜１１６５）の膜貫通ドメインと細胞質ドメインに融合されたカニクイザルＬＥＰＲの細胞外ドメイン（ＭｆＬＥＰＲ；アクセッション番号ＸＰ＿００５５４３１９４．１のアミノ酸２２〜８３７で、８２７位のスレオニンがアラニンに変化している）を安定的に発現するＩＭＲ−３２細胞（ヒト神経芽細胞腫  ＡＴＣＣ）が作製された。得られた細胞株は本明細書において以降、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ＭｆＬＥＰＲと呼称され、単離されて、１０％  ＦＢＳ、ＮＥＡＡ、１ｕｇ／ｍＬのピューロマイシン、１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢおよびペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ−グルタミンを補充されたＭＥＭ−Ｅａｒｌ培地中で維持された。
【０２５０】
バイオアッセイを実施して、レプチンの非存在下でのサルＬＥＰＲシグナル伝達に対する本発明の抗ＬＥＰＲ抗体の効果を測定した。バイオアッセイについては、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ＭｆＬＥＰＲ細胞を、ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＯｐｔｉｍｅｍ中、０．１％ＦＢＳ（アッセイ緩衝液）で、９６ウェルプレートに１０，０００細胞／ウェルで播種し、５％  ＣＯ２、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、ヒトレプチン（ｈＬｅｐｔｉｎ）、抗ＬＥＰＲ抗体またはアイソタイプ対照を、アッセイ緩衝液中、（試験分子を含まない緩衝液単独を含有するサンプルを加えて）５０ｎＭ〜０．８ｐＭに連続希釈し、細胞に添加した。５％ＣＯ２中、３７℃で５．５時間後、ルシフェラーゼ活性を、ＯｎｅＧｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ社、＃  Ｅ６０３１）およびＶｉｃｔｏｒ（商標）Ｘ  ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  ｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）を用いて測定した。結果を、Ｐｒｉｓｍ（商標）６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ社）を用いて非線形回帰（４パラメータロジスティック）を使用して解析し、ＥＣ５０値を得た。抗体活性化率は、ヒトレプチンにより達成されるＲＬＵの最大範囲と比較した、抗体により達成されるＲＬＵの最大範囲として算出された。
【０２５１】
表１７に示されるように、ヒトレプチンの非存在下では、試験されたすべての抗ＬＥＰＲ抗体が、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｍｆＬＥＰＲ細胞におけるサルＬＥＰＲシグナル伝達の活性化を示した。ＥＣ５０値は、２６６ｐＭ〜３６８ｐＭの範囲にあり、最大活性化範囲は、７６％〜８２％であった。１００％の活性化は、ヒトレプチンで取得されたものである。ヒトレプチンは、３３３ｐＭのＥＣ５０値で活性化した。アイソタイプ対照抗体は、ＩＭＲ−３２／ＳＴＡＴ３−Ｌｕｃ／ｍｆＬＥＰＲ細胞の測定可能な刺激を示さなかった。
【０２５２】
（表１７）抗ＬＥＰＲ抗体によるカニクイザルＬＥＰＲの活性化
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【０２５３】
実施例１４：Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＭＦＩシグナルを使用したヒトＬＥＰＲの全長細胞外ドメインへのエピトープ結合
本発明の抗ＬＥＰＲ抗体が結合するヒトＬＥＰＲ上のエピトープを決定するために、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＦＬＥＸＭＡＰ（ＦＭ３ＤＤ、ＬｕｍｉｎｅｘＣｏｒｐ）フローサイトメトリーベースの分析を利用して、組み換えヒトＬＥＰＲタンパク質ドメインと抗ＬＥＰＲ抗体の相互作用を特徴解析した。アッセイについては、約３００万個のカルボキシル化されたＭｉｃｒｏｐｌｅｘＲマイクロスフェア（Ｌｕｍｉｎｅｘ社、Ｃａｔ＃  ＬＣ１０００Ａ）を洗浄し、ボルテックスし、０．１  Ｍ  ＮａＰＯ４、ｐＨ  ６．２（活性化緩衝液）で超音波破砕し、次に遠心分離して上清を除去した。マイクロスフェアを１２０μＬの活性化緩衝液に再懸濁し、５０ｍｇ／ｍＬのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｃａｔ＃  ２４５００）を１５μＬを加えることによって、カルボキシレート基（−ＣＯＯＨ）が活性化された、次に２５℃で、５０ｍｇ／ｍＬの１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド（ＥＤＣ、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃  ２２９８０）を１５μＬ加えた。１０分後に５０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ５（カップリング緩衝液）を６００μＬ加えることによって、反応液のｐＨを５．０に低下させた。マイクロスフェアをボルテックスし、遠心分離で上清を除去した。活性化されたビーズを、カップリング緩衝液中で、マウスＩｇＧまたはヒトＩｇＧのいずれかを含む２０μｇ／ｍＬの抗ｍｙｃモノクローナル抗体の５００μＬと直ちに混合し、２５℃で二時間インキュベートした。１Ｍ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ、ｐＨ  ８．０を５０μＬ加えることによりカップリング反応をクエンチし、マイクロスフェアを急速にボルテックスして、遠心分離し、そして１ｍＬのＤＰＢＳを用いて４回洗浄して、非カップリングタンパク質と他の反応成分を取り除いた。
【０２５４】
Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン（ヒトＬＥＰＲ−ＭＭＨ、配列番号１１３）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１（Ｄ１）（ヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１（Ｄ１）−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜２０８で、アミノ酸２０９〜２３６にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１（Ｄ１、Ｄ２）ドメイン（ヒトＬＥＰＲ−ＣＲＨ１（Ｄ１、Ｄ２）−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜３１８で、アミノ酸３１９〜３４６にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１−Ｉｇ（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３）ドメイン（ヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３）−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜２７８で、アミノ酸２７９〜３０６にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１−Ｉｇ（Ｄ２、Ｄ３）ドメイン（ヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ１−Ｉｇ（Ｄ２、Ｄ３）−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜１９８で、アミノ酸１９９〜２２６にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  Ｉｇ（Ｄ３）ドメイン（ヒトＬＥＰＲ  Ｉｇ（Ｄ３）−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜８８で、アミノ酸８９〜１１６にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ２ドメイン（ヒトＬＥＰＲ  ＣＲＨ２−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜２０７で、アミノ酸２０８〜２３５にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現されたヒトＬＥＰＲ  ＦＮＩＩＩドメイン（ヒトＬＥＰＲ  ＦＮＩＩＩ−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜２０４で、アミノ酸２０５〜２３２にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグとともに発現ヒトＬＥＰＲ  Ｉｇ−ＣＲＨ２−ＦＮＩＩＩドメイン（ヒトＬＥＰＲ  Ｉｇ−ＣＲＨ２−ＦＮＩＩＩ−ＭＭＨ、配列番号１１３のアミノ酸１〜５１０で、アミノ酸５１１〜５３８にｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグを有する）を含む、一過性発現されたＬＥＰＲタンパク質を、無血清ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ  ＩＩ培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ社、Ｃａｔ  ＃  ３１０３３０２０）に懸濁させ、次いで遠心分離により清浄化させた。上述のように調製された固定化抗ｍｙｃモノクローナル抗体を有するマイクロスフェアのアリコートを、これらのタンパク質上清の各１ｍＬに、個別に添加した。マイクロスフェアを穏やかに混合し、２５℃で２時間インキュベートし、１ｍＬのＤＢＰＳで二回洗浄し、遠心分離して上清を除去し、最終的に１ｍＬのＤＰＢＳ緩衝液中に再懸濁した。完全長ヒトＬＥＰＲと、各ヒトＬＥＰＲドメインタンパク質との個々の反応からの抗ｍｙｃ  ＩｇＧカップリング化マイクロスフ��アを４８μＬ引き出し、３．６ｍＬのＰＢＳ＋２０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ  ＋０．０５％のアジ化ナトリウム（ブロッキング緩衝液）中で一緒に混合した。
【０２５５】
この混合プールから、マイクロスフィアを、９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、Ｃａｔ．Ｎｏ：ＭＳＢＶＮ１２５０）の１ウェル当たり７５μＬで播種され、２５μＬの個々の抗ヒトＬＥＰＲモノクローナル抗体（０．５、または５μｇ／ｍＬ）と混合され、２５℃で二時間インキュベートされ、次に０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＤＰＢＳ（洗浄緩衝液）２００μＬで二回洗浄された。個々のマイクロスフィアに結合した抗ＬＥＰＲ抗体の量を検出および定量するために、１００μＬのブロッキング緩衝液中、２．５μｇ／ｍＬ  Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトカッパ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社、Ｃａｔ＃  ２０６３−０９）、または１００μＬのブロッキング緩衝液中、１．２５μｇ／ｍＬのＲ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２断片特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ社、Ｃａｔ．Ｎｏ：１１５−１１６−０７２）のいずれかを添加し、２５℃で３０分間インキュベートした。３０分後、サンプルを２００μＬの洗浄緩衝液で二回洗浄し、１５０μＬの洗浄緩衝液に再懸濁した。マイクロスフェアの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＬｕｍｉｎｅｘ分析器で測定した。
【０２５６】
（表１８）ｍｙｃタグに捕捉されたヒトＬＥＰＲ全長細胞外ドメインおよび単離ヒトＬＥＰＲドメインに結合する抗ＬＥＰＲ抗体のＬｕｍｉｎｅｘ  ＭＦＩシグナル
2021532057.tif 000020
【０２５７】
Ｌｕｍｉｎｅｘ系解析の結果を表１８に一覧にする。Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＭＦＩシグナル強度は、本発明の１２種の抗ＬＥＰＲ抗体が完全ヒトＬＥＰＲ細胞外ドメインに結合したことを示す。抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１８４１７Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４３８Ｐ２、およびＨ４Ｈ１８４９２Ｐ２は、ヒトＬＥＰＲのＣＲＨ１  Ｄ２ドメイン内のエピトープに結合した。抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１８４４９Ｐ２、Ｈ４Ｈ１６６５０Ｐ、およびＨ４Ｈ１６６７９Ｐは、ヒトＬＥＰＲのＣＲＨ１（Ｄ１−Ｄ２）ドメイン内のエピトープに結合した。抗ＬＥＰＲ抗体のコンパレータモノクローナル抗体は、ヒトＬＥＰＲのＣＲＨ２ドメイン内のエピトープに結合した。抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１８４４５Ｐ２は、ヒトＬＥＰＲのＦＮＩＩＩドメイン内のエピトープに結合した。抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１８４４６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１８４８２Ｐ２、およびＨ４Ｈ１８４８７Ｐ２は、ヒトＬＥＰＲのＩｇ−ＣＲＨ２−ＦＮＩＩＩドメイン内のエピトープに結合した。
【０２５８】
実施例１５〜１９：動物実験のプロトコール
すべての動物試験は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によるガイドラインを準拠し、承認を受けて実施された。サル実験も、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社のＩＡＣＵＣによるガイドラインを準拠し、承認を受けて実施された。
【０２５９】
マウス実験
水力学的ＤＮＡ送達
水力学的ＤＮＡ送達（ＨＤＤ：Ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ＤＮＡ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）をベースとしたインビボでのトランスフェクションは、生きた動物中で外来性タンパク質を発現させるためのネイキッドプラスミドＤＮＡを含む大量溶液の急速注入を含むプロトコールである（Ｓｕｄａ、２００７）。マウスの体重を測定し、体重の１０分の１（ｖ／ｗ）に等しい生理食塩水の最終量に懸濁することにより発現ベクターを新しく調製して、これを尾部側面静脈を通して注入することにより送達した。レプチン減衰モデルの実証実験（図１１）について、８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ社）に、マウス１匹当たり、５０μｇ  ＤＮＡのｍＬｅｐｒＥＣＤ発現ベクター（ｐＲＧ９７７．ｍＲＯＲ．ｍＬｅｐＲ．ｅｃｔｏ．ｈＦｃ）または対照ベクター（ｐＲＧ９７７．ｈＦｃ）を投与した。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２評価実験（図９）については、１７〜２０週齢のオスおよびメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  マウスに、マウス１匹当たり５０μｇ  ＤＮＡのｍＬｅｐｒＥＣＤ発現ベクター（ｐＲＧ９７７．ｍＲＯＲ．ｍＬｅｐＲ．ｅｃｔｏ．ｈＦｃ）を投与した。
【０２６０】
体重および食物摂取量の測定
体重は、風袋されたデジタル実験室用はかり上の容器にマウスを置くことにより測定された。３秒間の動的計量間の平均体重が使用された。食物摂取量は、デジタル実験室用はかりを使用して、食品ホッパー内の食物量を測定することにより決定された。食物摂取量は、ホッパー内に入れられた食物の重量と、ホッパー内に残留した食物の重量との差異として算出された。
【０２６１】
体組成
マイクロコンピュータ断層撮影（ｍｉｃｒｏ−ＣＴ）イメージング法は、メーカーの説明書にしがたい、イソフルランガスで麻酔された生きたマウスに対し、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｍｉｃｒｏ−ＣＴイメージングシステム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）を用いて実施された。メーカーの説明書に従い、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｍｉｃｒｏ−ＣＴイメージングシステム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）を使用して、体組成（脂肪量、除脂肪量、骨量、骨ミネラル含量、および密度）を測定した。その後、ＡｎａｌｙｚｅＤｉｒｅｃｔイメージングソフトウェアを使用してスキャンを解析した。脂肪量、除脂肪量、および骨量は、記録された組織体積を以下のそれぞれの質量密度で乗算することによって計算された：０．９２、１．０５、および１．７ｇ／ｃｍ３。脂肪、除脂肪量、自由水および総水量を測定するために、ＥｃｈｏＭＲＩ  １００装置（ＥｃｈｏＭＲＩ）を用いた定量的核磁気共鳴（ｑＮＭＲ）を、意識のある生きたマウスに対して実施した。
【０２６２】
血中グルコース測定
食後の血糖値は、血糖計（ＡｌｐｈａＴｒａｋ２、Ｚｏｅｔｉｓ社）およびグルコース試験ストリップ（Ｚｏｅｔｉｓ社）を使用し、意識のあるマウスに対し、尾静脈の切り傷から測定された。
【０２６３】
インスリン耐性試験
４時間の絶食後、示されるように、動物は、０．５、０．７５または１．０Ｕ／ｋｇのインスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｒ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）投与量で、腹腔内（ＩＰ）注射された。インスリン注射の０、１５、３０、６０、および１２０分後で、ＡｌｐｈａＴＲＡＫ２血糖計および試験ストリップ（Ｚｏｅｔｉｓ社）を使用してグルコース測定が実施された。Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  の特徴解析実験では、Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（登録商標）Ｃｏｍｐａｃｔ  Ｐｌｕｓ血糖計および試験ストリップ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用した。
【０２６４】
化学分析およびホルモンアッセイ
別段の指定が無い限り、マウスを４時間絶食させ、その後、眼窩後方採血から血液を採取した。血清単離のために、血液は血清分離管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ＡＧ  ＆  Ｃｏ．）に移され、湿った氷上で少なくとも３０分間、凝血され、その後、１０，０００ｇで５分間遠心分離された。血清が取り出され、レプチン定量用に処理されるまで、−８０℃で保存された。血漿測定については、血液はＫ３ＥＤＴＡコーティング管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ＡＧ  ＆  Ｃｏ．）に移された。ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）阻害剤とプロテアーゼ阻害剤のカクテルを血液サンプルに添加し、処理されるまで氷上で保存され、２０００ｘｇで１０分間の遠心分離によって血漿が取得された。血漿は分注され、血漿脂質、肝酵素、およびレプチン値の定量に使用されるまで−８０℃に保存された。Ｋ３ＥＤＴＡコーティング管に収集された新鮮全血中でＨｂＡ１ｃが測定された。ＨｂＡ１ｃ、血漿脂質、および肝酵素は、化学分析器（Ａｄｖｉａ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＸＰＴ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社）を使用して定量された。血清または血漿のレプチン値は、免疫アッセイキット（Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘ  ＭＡＰ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用し、メーカー推奨のプロトコールに従い測定された。
【０２６５】
肝トリグリセリド定量
肝トリグリセリド含量は、１００〜２００ｍｇの肝臓から定量された。液体窒素で冷却された乳鉢と乳棒により粉末に粉砕した。粉末化した肝組織の重量を測定し、ビーズホモジナイゼーション（ＦａｓｔＰｒｅｐ  ２４−５Ｇ、ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社）によりＰＢＳ中でホモジナイズされた。ホモジネートを、５ｍＬのＦｏｌｃｈ溶液（２：１のクロロホルム：メタノール）を含有するガラス管に移し、ボルテックスして、２０分間、１５００ｘｇで遠心分離した。下の層を集め、５ｍＬまで引き出し、ボルテックスした。特定量（２５〜５０μＬ）のサンプルおよびトリオレイン標準（Ｖｅｒｉｃｈｅｍ社）を、９６ウェルポリプロピレンプレートに移し、１：１のクロロホルム：Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００混合液、１０μｌと混合し、自然乾燥させた。乾燥したサンプルおよび標準に、３００μＬのトリグリセリド試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を添加し、プレートを５分間振とうさせ、次いで３７℃で２０分間インキュベートした。各反応液２００μＬを新しい透明なポリプロピレン９６ウェルプレートに移し、５００ｎｍの吸光度を、プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して測定した。
【０２６６】
固定かん流および免疫組織化学法
マウスは、ペントバルビタールナトリウム（１１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）で麻酔され、２ｍＬの生理食塩水で経心臓かん流され、次いで４％パラホルムアルデヒドの０．１Ｍホウ酸緩衝液、ｐＨ９．５の１５０ｍＬで経心臓かん流された。肝臓は２時間、後固定（ｐｏｓｔ−ｆｉｘ）され、７０％エタノールに移され、パラフィン包埋されて切片作製され、Ｈｉｓｔｓｅｒｖでヘマトキシリン＆エオジン染色された。脳は４℃で２時間後固定され、その後、４℃で一晩、リン酸カリウム緩衝生理食塩水中、１５％スクロースに浸漬された。全脳は、凍結滑走式ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ社）上で標本化され、３０μｍの厚さに切片作製され、等間隔のシリーズで集められ、そして抗凍結剤（０．１Ｍリン酸緩衝液中、２０％グリセロールおよび３０％エチレングリコール）中に保存され、そして抗凍結剤（０．１Ｍリン酸緩衝液中、２０％グリセロールおよび３０％エチレングリコール）中に−２０℃で保存された。
【０２６７】
各実験群から１５０μｍ離れて置かれた一連の脳切片は同時に処理されて、動物群と処置群の間で、同等の染色であるようにした。全ての免疫染色について、脳切片はブロッキングされ、一次抗体／二次抗体は、１％ロバ血清（Ｅｑｕｉｔｅｃｈ社）、０．０３％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および０．０５  Ｍリン酸塩緩衝生理食塩水を含む溶液中で希釈された。メーカー（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ社）のプロトコールに従い、アビジンおよびビオチンのブロッキングが実施された。ｐＳｔａｔ３（Ｙ７０５）の免疫組織化学染色（＃９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、１：１０００、４℃で１６時間）は、等間隔の一連の脳切片に対し、色素源であるジアミン−ベンジジン（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ社）を用いたアビジン−ビオチン複合体法を使用して実施された。Ｐ−ＳＴＡＴ３（Ｙ７０５）免疫組織化学法（ＩＨＣ）については、切片は、１％  ＮａＯＨ中、１％Ｈ２Ｏ２で１０分間、Ｋ−ＰＢＳ中、０．３％グリシンで１０分間、Ｋ−ＰＢＳ中、０．０３％ＳＤＳで１０分間、前処理された。
【０２６８】
明視野画像は、Ｓｃａｎｓｃｏｐｅ  ＸＴ（Ａｐｅｒｉｏ社）上で４０ｘの対物レンズを用いた全スライドスキャニングにより取得された。切片は、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  ａｎｄ  Ｐａｘｉｎｏｓのマウス脳アトラスを用いた組織比較によりマッチングされた。神経解剖学的領域および前項からの距離は、このアトラスに基づいて見積もられた。ｐＳＴＡＴ３（Ｙ７０５）免疫反応性細胞の数は、Ｈａｌｏソフトウェア（Ｉｎｄｉｃａ  Ｌａｂｓ社）を使用して示された吻側−尾側レベルでの所与の領域に対し、両側性に定量された。
【０２６９】
サル実験
カニクイザルの全ての実験は、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．で実施された。サルは、Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｄｉｅｔ  ＃５０４８（ＰＭＩ，Ｉｎｃ．）を毎日２回与えられ、新鮮な水への自由なアクセスが与えられた。
【０２７０】
体重
サルは、投与の日に、投与前に体重測定され、そして該当する場合は実験の残り期間にわたり、少なくとも週に１回、体重測定された。
【０２７１】
二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）
獣医の決定で、ケタミンとデクスメデトミジンで麻酔された絶食サルに対し、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ａ  ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ（Ｈｏｌｏｇｉｃ社）を使用して全身のスキャンが実施された。
【０２７２】
実施例１５：抗ＬＥＰＲ抗体は、レプチン欠損症により誘発された肥満を回復させる
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２がインビボにおいて有効であるかを決定するための実験が実施された。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２はマウスＬＥＰＲには結合しないため、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）法（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）を使用して遺伝子改変マウスが作製された。当該マウスは、ＬＥＰＲ細胞外ドメインをコードするマウスＬｅｐｒ遺伝子の一部が、対応するヒトＬＥＰＲゲノム配列で置き換えられた（Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ；図１０Ａ）。Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスは、体重、体組成、インスリン感受性、および血清レプチン値において、Ｌｅｐｒ＋／＋マウスとの差異を示さなかった（図１０Ｂ、ＣおよびＤ）。
【０２７３】
レプチン欠損症のマウスモデルは、ｈＦｃタグ付マウスＬｅｐｒ細胞外ドメイン（ｍＬｅｐｒＥＣＤ）をコードするプラスミドを水力学的ＤＮＡ送達（ＨＤＤ）して、内因性循環マウスレプチンを隠退させることでレプチンが減衰したように作用し、レプチンシグナル伝達を防止することにより開発された。ｍＬｅｐｒＥＣＤのＨＤＤを行った後、食べ物を与えられたＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスは急速に体重を増加させ、対象ｈＦｃのＨＤＤを受けたマウスと比較して、ＨＤＤ後、３日目から有意に増加した（図１１Ａ）。試験終了時（ＨＤＤ後、１０日目）、体重は、ｍＬｅｐｒＥＣＤのＨＤＤ後に２４％増加した。一方で対照群では、３％という僅かな増加のみが観察された（図１１Ａ）。体重データとアライメントすると、ｍＬｅｐｒＥＣＤのＨＤＤ後の累積食物摂取量は、対照群と比較し、ＨＤＤ後の３日目から有意に増加した（図１１Ａ）。体重増加が脂肪症の増加を反映したものであるかを確認するために、マイクロ−ＣＴイメージングをＨＤＤ後の７日目に実施したところ、対照群と比較して、ｍＬｅｐｒＥＣＤのＨＤＤ後、脂肪量の顕著な２倍の増加が示された（図１１Ｂ）。他のすべての体組成パラメータは、群間で類似していた（図１１Ｂ）。
【０２７４】
インビボでのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の有効性を評価するために、食物を与えられたオスおよびメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  マウスにおいて、ｍＬｅｐｒＥＣＤのＨＤＤによりレプチン欠損症が誘導された。予測されたように、ｍＬｅｐｒＥＣＤの発現により、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスのオスメスの両方において、急速な体重増加が促進された（図９Ａおよび１２Ａ）。ＨＤＤの７日後、体重における相対的変化率に基づき、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスを階層化し、対照またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回１０ｍｇ／ｋｇをＳＣ投与した。対照モノクローナル抗体（本明細書において以降、対照ｍＡｂ）を投与されたオスとメスのマウスの両方とも体重が増加し続け、ＨＤＤの１４日後、それぞれ体重は４０．５±２．７％および４４．１±４．７％増加した（図９Ａおよび１１Ａ）。対照的に、ＬＥＰＲアゴニスト性モノクローナル抗体の単回投与で処置されたマウスは、体重が減少し、ＨＤＤ前の初期体重に戻った（図９Ａおよび１１Ａ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２はヒトＬＥＰＲには結合するが、マウスＬＥＰＲには結合しないため、体重における改善が、レプチンを隠退させるｍＬｅｐｒＥＣＤの能力にＬＥＰＲ  ｍＡｂが干渉したことに対する二次的なものである可能性を排除することができる。体重の減少は、食物摂取量の減少と関連していた（図９Ａおよび１１Ａ）。投与前には二つの群間で、１日食物摂取量は違いが無かった。一方で、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたマウスは、対照モノクローナル抗体群と比較し、食物摂取量の有意な低下を示した（図９Ａおよび１１Ａ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与で観察された体重および食物摂取量を低下させる効果は、最終的には弱まった。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたオスマウスおよびメスマウスにおいて、それぞれ処置の１２日後および９日後（１９日目および１６日目）まで対照モノクローナルを投与されたマウスよりも食物摂取量は有意に低いままであった（図９Ａおよび１１Ａ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたオスマウスおよびメスマウスの体重は、それぞれ処置の１６日後および１３日後（２３日目および２０日目）まで基準体重とほぼ同じで維持され、その後に体重増加が発生した（図９Ａおよび１１Ａ）。
【０２７５】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置により誘導された体重低下は、脂肪症および除脂肪量の低下を反映していた。マイクロＣＴ解析により、−１日目のＨＤＤ前、および６日目の処置前、オスマウスまたはメスマウスの両方の処置群は、類似した体組成を示したことが明らかとなった（図９Ｂ、１２Ｂおよび１２Ｃ）。レプチン欠損症の誘導と一致して、６日目に両方の群は、−１日目のＨＤＤ前と比較して、脂肪量および除脂肪量の有意な増加を示したが、骨量は増加しなかった（図９Ｂ、１２Ｂおよび１２Ｃ）。処置の６日後（１３日目）、対照モノクローナル抗体投与マウスは、６日目と比較し、脂肪量のさらなる増加を示した。一方で、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置後には、脂肪症のさらなる増加は検出されなかった。体重の変化と一致して、処置の７日後、対照モノクローナル抗体投与マウスと比較して、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置されたマウスにおいて脂肪量と除脂肪量の両方が減少した。骨量、骨ミネラル含量または骨密度に対する処置関連効果は観察されなかった（図１２Ｂおよび１２３Ｃ）。
【０２７６】
次に、誘導レプチン欠損症マウスにおいて、循環脂質を変化させる能力に関してＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を評価した。血漿化学解析により、処置の６日後、対照モノクローナル抗体を投与されたオスマウスと比較して、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、循環血漿トリグリセリド、ならびにＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）およびＬＤＬ−コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）を含む総コレステロールを低下させたことが明らかとなった（図９Ｃ）。
【０２７７】
レプチンは、レプチン欠損症のｏｂ／ｏｂマウスにおいてエネルギー消費を促進させる（Ｈａｌａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）ことを踏まえると、誘導レプチン欠損症におけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の体重低下効果が食物摂取量の減少により完全に説明されるのかを明確化させるために、ペア飼育（ｐａｉｒ−ｆｅｅｄｉｎｇ）効果を評価した。誘導レプチン欠損症Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスは、ＨＤＤにより対照ベクターを投与されたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して、急速に体重を増加させ、そして過食であった（図１３Ａ）。７日目および１３日目に投与した後、対照モノクローナル抗体が投与されたマウスは、多くの食物を消費し、体重が増え続けたが、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置されたマウスは、食物摂取量が減少し、体重が減少した（図１３Ａ）。ペア飼育でも、ｍＬｅｐｒＥＣＤを発現するＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて、体重減少が促進された。注目すべきは、ペア飼育（ｐａｉｒ−ｆｅｄ）されたマウスは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置マウスと同じ量の食物を消費していたが、同程度の体重減少は示さなかったことである（図１３Ａ）。これらのデータと一致して、対照モノクローナル抗体を投与されたマウスと比較し、ペア飼育されたマウスは脂肪症を減少させたが、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたマウスの脂肪症よりは有意に高かった（図１３Ｂ）。対照的に、ペア飼育とＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の間では、対照モノクローナル抗体が投与されたレプチン欠損症マウスと比較して、除脂肪量の減少に対し類似の効果が観察された（図１３Ｂ）。骨量、骨密度またはミネラル含量には効果は観察されなかった（図１３Ｂ）。
【０２７８】
レプチンは、レプチン欠損症のｏｂ／ｏｂマウスにおいてインスリン感受性も改善する（Ｍｕｚｚｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｐｅｌｌｅｙｍｏｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。ゆえにインスリン感受性に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置とペア飼育の相対的効果を、レプチン欠損症の誘導後に決定した。インスリン耐性試験は、モノクローナル抗体投与、またはペア飼育の３日後に実施された。図１３Ｃに示されるように、対照モノクローナル抗体を投与されたｍＬｅｐｒＥＣＤ発現Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスは、対照ベクターでＨＤＤが行われたＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して、インスリン感受性の低下を示した。特に、誘導型レプチン欠損症Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた処置はインスリン感受性を回復させたが、ペア飼育は効果がなかった（図１３Ｃ）。
【０２７９】
最後に、循環脂質を低下させるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果は主に、食物摂取量の減少によることが確認された。ペア飼育ではなく、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が、レプチン欠損症において血漿トリグリセリドを有意に低下させたが、総血漿コレステロールとＨＤＬ−Ｃは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２とペア飼育の両方で低下した（図１３Ｄ）。
【０２８０】
まとめると、データにより、誘導型レプチン欠損症モデルにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は過食症と肥満を回復させるだけではなく、インスリン抵抗性も改善したことが示された。注目すべきは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で観察された体重減少と脂肪症の減少は、食物摂取量の減少に起因する一方で、食物摂取量の減少は、インスリン感受性の改善または血漿トリグリセリド値の低下には不十分であることである。
【０２８１】
実施例１６：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、リポジストロフィーマウスにおいて、高血糖症、インスリン抵抗性、脂質異常症および肝臓脂肪症を回復させる
次に、全身型リポジストロフィーを原因とする二次性の低レプチン血症を有するマウスにおいて、過食症、代謝機能不全および肝臓脂肪症を軽減するかを判定するために、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を試験した。この仮説を検証するために、全身型リポジストロフィーを特徴とする表現型を発現するａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃ  Ｔｇ／＋  マウス（Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）を、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと交配させた。ａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋マウスは、ａＰ２プロモーターを介して脂肪組織において核Ｓｒｅｂｐ１ｃを発現する。このマウスを、全身型リポジストロフィーにおいて、低レプチン値に起因する代謝合併症をレプチンが解消するという最初の証拠を提供した古典的な実験（Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）において使用した。オスのａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス（Ｔｇ）マウスは、ａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃ＋／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ（非Ｔｇ）動物よりも重症である（図１５Ａ）。ただし過去の報告と同じように、Ｔｇマウスは、非Ｔｇマウスと比較して、減少した脂肪症と低いレプチン値を呈する（図１５Ａ）。ａＰ２−ｎＳｒｅｂｐ１ｃＴｇ／＋；Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスも、著しいインスリン抵抗性と軽度の脂質異常症を呈し、トリグリセリド、総コレステロール、およびＬＤＬ−Ｃの血漿レベルは非Ｔｇマウスと比較して高い（図１５Ｂおよび１５Ｃ）。
【０２８２】
オスのリポジストロフィーＴｇマウスに、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）で、対照モノクローナル抗体またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与を行った。さらにオスの非Ｔｇマウスにも、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）で、対照モノクローナル抗体を投与して、野生型の代謝パラメータの参照とした。０日目の処置前、Ｔｇマウスは、非Ｔｇマウスと比較して有意に高い体重を示していた（図１４Ａ）。治療開始から３日後、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたリポジストロフィーマウスの体重は、対照モノクローナル抗体を投与されたリポジストロフィーマウスよりも有意に低かった（図１４Ａ）。対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスは過食状態であり、対照モノクローナル抗体を投与された非リポジストロフィー非Ｔｇマウスよりも多くの食物を消費した（図１４Ａ）。しかしＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたＴｇマウスは、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスよりも少ない食物を消費した（図１４Ａ）。
【０２８３】
観察された体重変化の根底にあるものを判定するために、体組成をマイクロ−ＣＴにより定量した。これらの解析から、遺伝子型と処置の間での体重の変化が、主に除脂肪量の差異により説明されることが明らかとなった。治療前（−５日目）、非Ｔｇマウスと比較して、リポジストロフィーＴｇマウスにおいて除脂肪量は有意に上昇した（図１４Ｂ）。逆に、投与前（−５日目）、Ｔｇマウスは、非Ｔｇマウスと比較して、脂肪量は低下していた（図１４Ｂ）。１週間に１回で４週間の投与を行った後、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスの脂肪量と除脂肪量と比較して、Ｔｇマウスにおいて有意に脂肪量と除脂肪量を低下させた（図１４Ｂ）。骨量および骨ミネラル含量は、野生型マウスと比較してＴｇマウスで上昇したが、投与前の処置群の中では有意な上昇はなかった（図１６Ａ）。さらに、対照モノクローナル抗体またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されたリポジストロフィーマウスの間で、骨量および骨ミネラル含量における差異は観察されなかった（図１６Ａ）。同様に、骨密度に対し、遺伝子型関連効果または処置関連効果は検出されなかった（図１６Ａ）。これらのデータは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が、リポジストロフィーマウスにおいて、除脂肪量と脂肪量を減少させること、しかし骨量、骨ミネラル含量または骨密度には影響を与えないことを示す。
【０２８４】
過去の報告と一致して、リポジストロフィーＴｇマウスは、０日目の処置前、非Ｔｇマウスと比較して、突出した高血糖症を呈していた（図１４Ｃ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた処置の３日後、自由摂取時の血糖値が、Ｔｇマウスにおいて正常化され、非Ｔｇマウスの血糖値との差異が無かった。注目すべきは、週に１回のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置を行うことで、Ｔｇマウスは実験終了まで正常血糖値を維持したこと。一方で、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスは、実験中、高血糖症のままであったことである（図１４Ｃ）。それに一致して、２８日目、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）率のレベルは、リポジストロフィーマウスにおいて、処置前または対照モノクローナル抗体の投与と比較して、低下した（図１４Ｃ）。さらに、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置による血糖値の低下は、インスリン感受性の改善と関連していた。２３日目のインスリン耐性試験では、対照モノクローナル抗体を投与されたリポジストロフィーマウスがインスリン抵抗性であったのに対して、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたリポジストロフィーマウスは、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスと同じ程度のインスリン感受性であった（図１４Ｄ）。全体として、これらの結果からは、全身型リポジストロフィーのマウスモデルにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が高血糖症、インスリン抵抗性を軽減し、ＨｂＡ１ｃレベルを低下させることが示される。
【０２８５】
試験終了時に実施された血漿化学分析（２８日目）は、全身型リポジストロフィーのマウスにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が高トリグリセリド血症および高コレステロール血症を低下させたことがさらに明らかにされた。試験終了時、トリグリセリドの血漿レベル、総コレステロール、およびＬＤＬ−Ｃレベルは、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスと比較して、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスにおいて有意に上昇していた（図１Ｅ）。注目すべきは、血漿トリグリセリドおよびコレステロールレベルは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を処置されたＴｇマウスにおいて有意に低下したことである。ゆえにＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、全身型リポジストロフィーのマウスにおいて、脂質異常症を改善する。
【０２８６】
糖尿病に加えて、全身型および部分型リポジストロフィーの患者において、インスリン抵抗性および異常脂質症、非アルコール性脂肪肝疾患（肝臓脂肪症を含む）が発症する場合がある。ゆえに肝臓酵素レベル、肝重量および肝臓脂肪症に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果が検証された。２８日目、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置を受けたＴｇマウス、または対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスと比較して、ＡＬＴおよびＡＳＴの循環レベルの有意な増加を示した（図１４Ｆ）。重要なことは、肝臓酵素プロファイルの改善は、肝重量および肝臓脂肪症に対する有益な効果と関連したことである（図１４Ｇ）。具体的には、対照モノクローナル抗体を投与されたリポジストロフィーマウスの肝臓は、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスの肝臓よりも有意に重く、３．６±０．７ｇの重量があった（図１４Ｇ）。対照モノクローナル抗体投与を受けたＴｇマウスの肝臓は、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウス、およびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置を受けたリポジストロフィーマウスの両方と比較して、トリグリセリド含量も高かった（図１４Ｇ）。注目すべきは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置を受けたＴｇマウスの肝臓は、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスの肝臓と比較して、わずか０．６±０．１ｇだけ重く、肝トリグリセリド含量の増加は呈さなかったことである（図１４Ｇ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた肝臓脂肪症の改善は、ヘマトキシリンおよびエオジン染色された肝切片からも明白であった（図１４Ｇ）。
【０２８７】
実施例１７：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、視床下部ＳＴＡＴ３シグナル伝達を活性化する
視床下部のＡｒｃにおけるＬＥＰＲ活性化は、エネルギーと代謝のバランスの管理において中心的な役割を果たしている（Ｃｏｐｐａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｃｏｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が、リポジストロフィーＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスにおいて過食と代謝合併症を軽減したことから、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２がレプチンのようにＡｒｃにおいてＳＴＡＴ３活性化を誘導するかをさらに探索した。１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与、または３０μｇ／日（ＳＣ）のヒトレプチンの連続点滴を３日間受けたオスのリポジストロフィーＴｇマウスから取得された合致脳切片に対し、ｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５の免疫染色を行った。過去の研究から、５μｇ／日（ＳＣ）が、リポジストロフィーマウスにおいて有効であること（Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、およびマウスにおいて最大効果は、１０〜４２μｇ／日（ＳＣ）で観察されたこと（Ｄｅｎｒｏｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｈａｌａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）から、レプチン投与量が選択された。これらの解析から、対照モノクローナル抗体を投与されたリポジストロフィーマウスにおいて、Ａｒｃの細胞がｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５染色をほとんど示さなかったことが明らかとなった。対照的に、レプチンとＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２は両方とも、ＡｒｃにおいてｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５を誘導し、検出されたｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５＋細胞数はほぼ同じであった（図１７Ａ）。Ａｒｃはレプチン作用の介在における役割が確立されていたこと、および血液脳関門を欠く脳室周辺の器官である正中隆起に近い位置にあることから、当初は焦点が当てられていたが、ＶｍｈにおいてレプチンおよびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の両方がｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５を誘導したことは注目すべきことであった。ただし、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、レプチン処置で検出されたよりも多い数のＶｍｈ細胞において、ｐＳＴＡＴ３染色を誘導した（図１７Ａ）。まとめると、これらのデータからは、レプチンおよびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、Ａｒｃではほぼ同じ数の細胞においてｐＳＴＡＴ３  Ｙ７０５を誘導したが、ＶｍｈではＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のほうが顕著な効果を有していたことが示された。
【０２８８】
ＣＮＳ治療剤としてのモノクローナル抗体の欠点は、血液脳関門を通過する能力が限定的であることであり、循環濃度の約０．１％がＣＳＦ中に検出される（Ｚｕｃｈｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。この限定があるにもかかわらず、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、視床下部ＡｒｃにおいてＳＴＡＴ３のリン酸化を誘導するのみならず、ＶｍｈでもＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激することが本明細書で判明した。Ａｒｃは有窓血管による流入があることが報告されているが、隣接する正中隆起よりは程度は低い（Ｃｉｏｆｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｎｏｒｓｔｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。現在のところ、Ｖｍｈが血液媒介性の分子への直接的な曝露という特権を有するという文献的な証拠はない。理論に拘束されることは望まないが、可能性のある説明は、モノクローナル抗体が、Ａｒｃからの拡散によりＶｍｈに到達するというものである。あるいは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体は、レプチンとは異なるシグナル伝達性能を呈する可能性である。機能性ＬＥＰＲ−ｂはＶｍｈで発現されているが、別の可能性としては、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２モノクローナル抗体がＶｍｈのＳＴＡＴ３シグナル伝達を間接的に刺激することである。それでもなお、ＶｍｈにおいてＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２がレプチンよりも多くのニューロンのＳＴＡＴ３シグナル伝達を誘導したということは予想外であった。
【０２８９】
実施例１８：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、リポジストロフィーマウスの代謝機能不全と肝機能不全の軽減において、少なくともレプチンと同程度に有効である。
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、ＡｒｃおよびＶｍｈの細胞において、レプチンと同程度、またはレプチンよりも良好にＳＴＡＴ３シグナル伝達を発生させることから、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置とレプチン処置の有効性を、リポジストロフィーマウスにおいて比較した。オスのＴｇマウスに週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体またはＬＥＰＲアゴニストを投与し、または３０μｇ／日（ＳＣ）のレプチンの連続点滴を１４日間投与した。参照として、オスの非Ｔｇマウスにも、週に１回、１０ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の対照モノクローナル抗体を投与した。０日目の処置前、Ｔｇマウスは顕著な高血糖状態であった（図１７Ｂ）。対照モノクローナル抗体投与と比較すると、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２、またはレプチン点滴により、同程度まで血糖値が低下した（図１７Ｂ）。血糖値は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置またはレプチン処置を開始してから２日後に低下し、試験終了まで低いままであった（図１７Ｂ）。インスリン感受性の改善が、グルコース低下効果に寄与したかを検証するために、インスリン耐性試験を９日目に行った。実際に、インスリン耐性試験によって、対照モノクローナル抗体を投与されたＴｇマウスは抵抗性であった一方で、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置およびレプチン処置Ｔｇマウスはインスリン感受性であったことが明らかとなった（図１７Ｂ）。血中グルコース低下、またはインスリン感受性に対し、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置とレプチン処置の間に差異は観察されなかった。
【０２９０】
過去のデータと一致して、リポジストロフィーマウスにおいて、対照モノクローナル抗体投与と比較し、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は処置の４日後から有意に体重減少を促進した（図１７Ｃ）。Ｔｇマウスでは、対照モノクローナル抗体と比較して、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は累積食物摂取量を減少させた（図１７Ｃ）。興味深いことに、レプチンはＴｇマウスにおいて体重と食物摂取量を減少させているが、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置で観察された体重減少よりも小さな体重減少であった（図１７Ｃ）。
【０２９１】
リポジストロフィーマウスにおける血漿脂質の低下および肝腫脹の回復において、レプチンと比較し、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２はより良好な利益を提供した。１３日目の血漿化学分析によって、Ｔｇマウスにおいて、対照モノクローナル抗体と比較し、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は血漿トリグリセリドとコレステロール値を低下させたが、レプチンは低下させなかったことが示された（図１７Ｄ）。Ｔｇマウスにおいて、対照モノクローナル抗体と比較したＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置による他の脂質の有意な変化は明白ではなかった。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、Ｔｇマウスにおいて対照抗体処置と比較し、肝量（ｌｉｖｅｒ  ｍａｓｓ）も低下させ、そして肝臓脂肪症も解消させた（図１７Ｅ）。これらの効果はレプチン処置マウスにおいて類似していたが、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２で、より大きな肝量の低下が観察された（図１７Ｅ）。肝量は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２により正常化されたが、レプチン処置では正常化されず、対照モノクローナル抗体を投与された非Ｔｇマウスにおける肝量と同程度であった（図１７Ｅ）。
【０２９２】
実施例１９：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、痩せたマウス、ならびに正常体脂肪サルおよび高体脂肪サルにおいて、体重と脂肪症を減少させる
インビトロでの結合および機能性アッセイ実験から、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が、レプチン結合に関し競合しないこと、およびレプチンの存在下でも、レプチン単独よりも大きなＬＥＰＲ活性化を誘導することが示された。そこでＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２が正常な体重ホメオスタシスの状態でも体重低下を惹起し得るかを判定した。食物を与えられたオスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスに、０日目、対照モノクローナル抗体（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）または３もしくは１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与量を投与した。両方の投与量レベルでのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の後、１〜２日後に対照モノクローナル抗体と比較して有意な体重減少が観察された（図１８Ａ）。それに伴い、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の両方の投与量レベルが、対照モノクローナル抗体投与と比較して、食物摂取量も減少させた（図１８Ａ）。体重変化は脂肪量の低下と関連していたが、除脂肪量とは関連しなかった（図１８Ｂ）。両方の投与量レベルで、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置は、脂肪量の−３２％の減少を誘導した。一方で、対照モノクローナル抗体投与は、最小限の−２％の脂肪量変化をもたらした（図１８Ｂ）。注目すべきは、対照モノクローナル抗体処置とＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の間に除脂肪量に対する有意差は観察されなかったことである（図１８Ｂ）。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の両方の投与量レベルが、同程度の体重変化と脂肪量変化をもたらしたが、効果の持続時間は異なり、これは薬物動態における差異を反映している可能性がある（図１８Ａおよび１８Ｂ）。
【０２９３】
次に、非ヒト霊長類における体重減少の促進に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の効果を評価した。最初に、痩せたカニクイザルの体重に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果を判定した。サルに、週に１回で１３週間、対照溶液、または３ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のいずれかを投与した。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置によって、対照溶液を投与されたサルと比較し、用量依存性に体重減少が生じた（図１８Ｃ）。１３週間の試験後、対照溶液を投与されたサルは、初期体重の９．７±０．９％の増加があった。一方で、３および１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置では、それぞれ、最小限の０．３±１．６％の体重変化と、−６．０±１．６％体重減少が生じた（図１８Ｃ）。
【０２９４】
痩せたサルにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は用量依存性に体重を減少させたことから、体重および体組成に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の効果を、高体脂肪のカニクイザルにおいて検証した。対照溶液、または３０ｍｇ／ｋｇのＬＥＰＲアゴニスト性抗体を２週間、週に１回、動物に投与した。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、対照溶液注射と比較して、体重を減少させた。試験終了時（５６日目）、二つの投与量のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を与えられたサルは、基準から３．６±１．９％の体重減少を示し、一方で対照溶液を与えられたサルは、６．４±１．５％の体重増加があった。並行して二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ：Ｄｕａｌ−Ｅｎｅｒｇｙ  Ｘ−ｒａｙ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｍｅｔｒｙ）により定量したところ、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置によって、対照溶液投与と比較して脂肪量が減少したが、除脂肪量は減少しなかった（図１８Ｄ）。対照溶液を与えられたサルは、試験終了時までに２８．０±１．５％の脂肪症の増加を呈した。対照的に、ＬＥＰＲアゴニスト性のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたサルは、１３．７±６．４％の顕著な脂肪症の減少を示した（図１８Ｄ）。まとめると、これらのデータから、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体は、正常な体重のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕマウス、および痩せ〜高体脂肪の非ヒト霊長類の両方において、選択的な脂肪症の減少を通じて体重低下を促進することが示された。
【０２９５】
実施例２０：ヒトにおける抗ＬＥＰＲ抗体を使用した二重盲検試験
肥満は世界中で１３％の人々が罹患し、２型糖尿病、心血管疾患、様々なタイプの癌、および整形外科的な障害を発症するリスク因子である。西欧の国々では、２０％を超える人々が肥満であり（Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．２０１４；３８４：７６６−７８１）、そして米国では現在、肥満の罹患率は３５％を超えている（Ｆｌｅｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．２０１６；３１５（２１）：２２８４−２２９１）。食事および運動による改善は一部の人々では有効であるが、多くの場合、体重が若干減少するだけであり、大部分の人々は肥満（≧３０ｋｇ／ｍ２の肥満度指数［ＢＭＩ］として定義される）または過体重（２５〜＜３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩと定義される）のままである。
【０２９６】
現在の体重減量薬は、体重に対して僅かな効果しかなく、および／または安全性／忍容性が乏しい。そのため、保険者、医師および患者による、これら介入手段の採用が限定的となっている（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｂｅｓ  Ｓｃｉ  Ｐｒａｃｔ．２０１６；２（２）：１０４−１１４）。例えばリラグルチド、オルリスタット、ナルトレキソンＨＣｌ／ブプロピオンＨＣｌ、フェンテルミン／トピラマート、およびロルカセリンＨＣｌといった現在の標準的な薬物療法は、平均で基準からおよそ３〜１０％の体重を減少させる。典型的には、体重減少は頭打ちとなり、１年以内に治療は中止される（Ｓｊｏｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．１９９８；３５２（９１２３）：１６７−７２）（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１０；３６３（３）：２４５−５６）。肥満手術は最も重度の肥満患者（ＢＭＩ≧４０ｋｇ／ｍ２  または併存疾患を伴いＢＭＩ≧３５ｋｇ／ｍ２）に対してのみ、留保されており、米国では１年で２００，０００件を超える症例（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｂａｒｉａｔｒｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ）、および欧州全土では１年で１５０，０００よりは少ない症例がある（Ａｎｇｒｉｓａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｂｅｓ  Ｓｕｒｇ．２０１７，２７：２２７９−２２８９）。肥満、および肥満関連の代謝合併症の治療および予防に対する、安全で効果的な治療法に対する大きな医療上のアンメットニーズがある。
【０２９７】
レプチンは循環脂肪由来ホルモンであり、視床下部のレプチン受容体（ＬＥＰＲ）に結合して、食物摂取、エネルギー消費、およびグルコース／脂質代謝の制御を調節している（Ａｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２０１４，２２３（１）：Ｔ２５−３５）。レプチン（ＬＥＰ）遺伝子の機能性変異による非常に稀なホモ接合性の喪失を原因とする原発性レプチン欠損症の個体、またはＬＥＰＲのホモ接合性の変異を原因とするレプチンシグナル伝達の不全を伴う個体は、重度の肥満、糖尿病、易感染性、および不妊を発症する（Ｍｏｎｔａｇｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９７，３８７（６６３６）：９０３−９０８）（Ｃｌｅｍｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９８，３９２（６６７４）：３９８−４０１）。機能性変異によるレプチン喪失を原因とする単一遺伝子型肥満の小児および成人の患者に、組み換えヒトレプチン投与を行うことで、体重の安定的な減少と、代謝合併症の改善がもたらされる（Ｆａｒｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊｏ  Ｍｅｄ  １９９９，３４１（１２）：８７９−８８４）（Ｌｉｃｉｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２００４，１０１（１３）：４５３１−４５３６）。
【０２９８】
二次的なレプチン欠損症は、稀な障害のリポジストロフィーでも発生し、これは身体の様々な領域からレプチン産生脂肪組織が遺伝子的または後天的に喪失することにより生じる。
【０２９９】
全身型リポジストロフィーおよび部分型リポジストロフィーの患者は、様々な程度の糖尿病、重度のインスリン抵抗性、高トリグリセリド血症、および脂肪肝を発症する（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１６；１０１（１２）：４５００−４５１１）。組み換えヒトレプチンを１日１回皮下送達することで、全身型リポジストロフィーの患者において、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）、グルコース、トリグリセリド、および肝臓脂肪症が低下することが示されている（Ｏｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００２；３４６（８）：５７０−５７８）（Ｅｂｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２００７，９２（２）：５３２−５４１）。全身型リポジストロフィーの患者の大部分は、血清レプチン値が４ｎｇ／ｍＬ未満であり、亜群解析から、レプチン治療でのＨｂＡ１ｃおよびトリグリセリド（ＴＧ）の低下は、レプチン値が４ｎｇ／ｍＬ未満の全身型リポジストロフィーおよび部分型リポジストロフィーの患者において大きいことが示唆されている（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１６；１０１（１２）：４５００−４５１１）（ＦＤＡ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ２０１３）。
【０３００】
メトレレプチン（組み換えメチオニルレプチン；Ｎｏｖｅｌｉｏｎ（登録商標））は、全身型の先天性および後天性のリポジストロフィー患者のレプチン欠損症の合併症治療に対し、Ｒｉｓｋ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｉｔｉｇａｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ（ＲＥＭＳ）プログラムの元で米国において現在承認されており、日本でもリポジストロフィーのすべてのサブタイプに対して承認されている。メトレレプチンを毎日投与することが必要であり、有害な作用としては、約８５％の患者に結合抗体を発生させる免疫原性のリスク、および約９％に、内因性レプチンと交差反応する中和抗体を発生させるリスクが挙げられる（Ｃｈａｎ，Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１６；８５（１）：１３７−１４９）。
【０３０１】
低レプチン障害またはレプチン欠損障害とは対照的に、ＢＭＩが３０〜３５ｋｇ／ｍ２の範囲の対象において、過体重または肥満の個体は、典型的には、男性において１０ｎｇ／ｍＬ、および女性では２４ｎｇ／ｍＬのメジアン値の高レベルのレプチンを有している（Ｒｕｈｌ  ａｎｄ  Ｅｖｅｒｈａｒｔ，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．２００１；７４（３）：２９５−３０１）。２０〜２５ｋｇ／ｍ２の正常なＢＭＩを有する男性および女性の成人の循環レプチン値は、それぞれメジアン値が３および９ｎｇ／ｍＬであり（Ｒｕｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ２００１；７４（３）：２９５−３０１）、男性では正常範囲は１．２〜９．５ｎｇ／ｍＬ、女性では４．１〜２５ｎｇ／ｍＬと言われる（Ｑｕｅｓｔ  Ｌａｂ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒａｎｇｅ）。多くの研究から、循環レプチン値、およびＢＭＩ、および体脂肪率の間の相関が示されている（Ｒｕｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．２００１，７４（３）：２９５−３０１）（Ｃｏｎｓｉｄｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．１９９６，３３４（５）：２９２−２９５）が、同程度のＢＭＩを有する個体間のレプチン値は、高度に変動的であるい（Ｂｕｅｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００２；１７５（３）：７４５−７５６）．レプチン値は日周変動し（Ｇａｖｒｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００３，８８（６）：２８３８−４３）（Ｓｃｈｏｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１９９７，１００（７）：１８８２−８７）、そして栄養状態に応じて変動する。正常な体重および肥満の個体において、２４時間の絶食後、レプチン値は３５〜６０％まで急速に低下し、絶食期間が延びた後も低下し続ける（Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００３；１１１（９）：１４０９−１４２１）（Ｓｃｈｕｒｇｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，８９（１１）：５４０２−５４０９）（Ｂｏｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．１９９６；８１（９）：３４１９−３４２３）。体重減少中もレプチン値は低下し（Ｃｏｎｓｉｄｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，１９９６；３３４（５）：２９２−２９５）（Ｈｅｒｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｏｂｅｓ．Ｈｉｎｄａｗｉ．２０１６；２０１６（２）：８３７５８２８−５）（ｖａｎ  Ｄｉｅｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２００２；８７（４）：１７０８−１７１６）、そして体重増加中には上昇し（Ｒａｖｕｓｓｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２０１４；２０（４）：５６５−５７２）、脂肪量の変化と一致する。肥満対象に組み換えヒトレプチンを投与しても、最小限の体重減少しか生じない（３％のＰＢＯを差し引きした体重の減少）（Ｈｅｙｍｓｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＭＡ．１９９９；２８２（１６）：１５６８−１５７５）（Ｈｕｋｓｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．２０００；１１（１２）：１１６３−１１７２）（Ｒａｖｕｓｓｉｎ  ��ｔ  ａｌ．，Ｏｂｅｓｉｔｙ．２００９；１７（９）：１７３６−１７４３）。これは、高レベルの内因性レプチンによる、レプチン受容体シグナル伝達の飽和が原因の可能性が高い。いくつかの集団研究により、レプチン値が比較的低く（Ｒｕｈｌ  ａｎｄ  Ｅｖｅｒｈａｒｔ，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．２００１；７４（３）：２９５−３０１）（Ｂｕｅｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００２；１７５（３）：７４５−７５６）、およびレプチン受容体が飽和していない可能性がある肥満患者のサブセットの存在が示唆されている。対処すべき重要な問題は、基準レプチン値が比較的低い肥満対象において、レプチンシグナル伝達の回復が、食欲、食物摂取量および体重を減少するか、である。
【０３０２】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、ＬＥＰＲアゴニストとして作用し、ナノモルのアフィニティでヒトＬＥＰＲに結合するヒト抗ＬＥＰＲ抗体である。前臨床研究では、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、レプチンの存在下、または非存在下でもＬＥＰＲシグナル伝達を活性化する。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２（１０ｍｇ／ｋｇの皮下［ＳＣ］）を１週間に１回投与することで、リポジストロフィーのヒト化ＬＥＰＲマウスにおいて、血糖管理、インスリン感受性、脂質異常症、食物摂取量、体重、肝量、および肝臓脂肪症が改善された。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、誘導性レプチン欠損症のヒト化ＬＥＰＲマウスでは体重と脂肪症も減少させたが、食事誘導性の肥満ヒト化ＬＥＰＲマウスでは体重を減少させなかった。痩せたカニクイザルが、皮下注射（３、１０、３０ｍｇ／ｋｇ）または静脈内注射（１００ｍｇ／ｋｇ）により週に１回、１３週間、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置された医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）毒性試験では、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２暴露によって、体重増加抑制または体重減少誘導が生じた。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が投与されたサルは、最大で８．７％の体重が減少した（投与前体重と比較した群平均）が、プラセボを投与された並行対照動物は、同期間で、平均で８．３％の体重増加があった。観察された体重減少の程度は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置動物において、明確な用量反応または曝露反応を有するとは見られなかった。体重変化は、無投与回復期間中の暴露停止で、戻ることが観察された。
【０３０３】
上述のように、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与は、すべての投与量レベルおよび両投与経路で忍容性良好であり、有害な臨床的作用はなかった。インスリンおよび循環絶対リンパ球数の一過性の減少（Ｔ細胞数の減少）が、治療期間のおよそ３０日で観察されたが、これらの所見は、投与期間の終了時には観察されず、その作用は用量反応性ではなかった。胸腺重量の低下、および胸腺皮質の細胞充実度の低下が、治療期間中、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置群で観察され、回復期間中に完全に、または部分的に元に戻ることができた。胸腺の変化、およびＴ細胞数の一過性の減少は、栄養摂取量の減少と、成長期にあるサルの体重減少に関連する可能性が高く、正常な栄養状態にある成人のヒトでは観察されない可能性が高い。
【０３０４】
本試験は、ヒト初回投与試験（ＦＩＨ：ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｈｕｍａｎ）であり、健康な参加者におけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の静脈内（ＩＶ）投与およびＳＣ投与される投与量の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）および薬理（ＰＤ）を評価するために設計された無作為化二重盲検プラセボ対照の二部試験である。パートＡの目的は、健康な男性および女性の対象における単回漸増ＩＶ投与量およびＳＣ投与量の安全性、忍容性、ＰＫおよびＰＤを評価することである。パートＡにおけるＰＫ／ＰＤ、安全性、および忍容性の中間解析を使用して、パートＢにおける評価のための投与レジメンを選択する。パートＡに登録された対象は、パートＢの登録には適格とされない。パートＢに関しては、過体重または肥満の新たな対象が登録され、１２週間のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２（単回投与レベル）またはプラセボの反復投与に関する安全性、忍容性、ＰＫおよびＰＤが評価される。例えば食物摂取量、食欲、体組成、および体重などのバイオマーカーに対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果は、基準レプチン値により規定される４つの異なるコホートにおいて評価される。
【０３０５】
目的
本試験の主要目的は、健康な対象におけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の安全性および忍容性を評価することである。本試験の副次的な目的は、以下である：
・  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与および反復投与の薬物動態（ＰＫ）プロファイルの特徴解析；
・  体重に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与効果の推定；
・  過体重および肥満の対象における、エネルギー自由摂取量に対する、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与効果の評価；
・  経時的な可溶型の脂質制御性タンパク質（ｓＬＥＰＲおよびＡＮＧＰＴＬ３）値に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与および反復投与の効果の評価；
・  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与と反復投与の免疫原性の評価。
【０３０６】
本試験のその他の探索的な目的は、以下である：
１．体重ならびに血清／血漿の血糖パラメータおよび脂質パラメータに対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与の効果の推定。
２．以下に対する、１２週にわたるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与の効果の推定：
・  血清／血漿の血糖パラメータおよび脂質パラメータ。
・  患者は、摂食行動に影響を与え得る食欲評価（例えば、空腹感、膨満感、および満腹感）を報告した。
・  二重Ｘ線吸収測定（ＤＸＡ）イメージングによる、脂肪量および除脂肪体重の合計と分布。
・  磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）によるＳＣ脂肪および内臓脂肪（肝脂肪を含む）の定量。
・  レプチン、甲状腺ホルモン（Ｔ３、Ｔ４、甲状腺刺激ホルモン［ＴＳＨ］）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、テストステロン、エストラジオール、コルチゾール、およびアディポネクチンを含む、他の探索的バイオマーカー。
【０３０７】
理由：
パートＡは、単回漸増投与ＦＩＨ設計であり、最大８８人の健常対象が、最大で７つの漸増単回投与コホート（最大で５つがＩＶ、二つがＳＣ）において、３：１でＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２とプラセボに無作為化され、１１２日間の追跡期間で、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回漸増投与の安全性、忍容性および薬物動態が評価される。７つの漸増単回投与コホートは、８人の対象が無作為化され、各用量レベルで、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボ（６人が活性：２人がプラセボ）を投与される。試験設計には、二つの追加の任意コホートも含まれる（１６人の対象が無作為化され、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボを投与される（各コホートで１２人が活性：４人がプラセボ））。漸増用量コホートからの中間解析が、ＰＫプロファイルに共変性の効果（例えば、年齢、体重または性別）の可能性を示唆した場合、任意コホートを登録して、一つまたは複数の用量に対する追加データを収集し（最大で本試験における３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの最大用量まで）、ＰＫに対する共変効果のさらなる推定を取得する。
【０３０８】
本試験のパートＡは、スクリーニング期間（−２１日目〜−２日目）、基準前ビジット（−１日目）、試験ビジットの終了日（１１３日目）を含む追跡期間（３日目〜１１３日目）からなり、基準前ビジットでは、対象は２日のクリニック滞在が承認される（ＩＶ投与を受ける対象、および安全性監視ブロックにいるＳＣ投与を受ける対象）か、または１日のクリニック滞在が承認される（ＳＣ投与を受ける対象）。
【０３０９】
安全性および忍容性の評価が、パートＡの主要目的であり、安全性は試験全体を通して慎重に評価される。本試験で投与された開始用量および最大投与量は、毒性試験で観察された曝露量よりもそれぞれ約１０，０００倍および約２０倍低いと予想される。臨床試験全体において、安全性評価には、バイタルサイン、身体検査、心電図（ＥＣＧ）、血液／差分を含む臨床検査、および有害事象（ＡＥ）の監視が含まれる。体重も評価される。薬理学的な測定値も本試験において収集されるが、ＰＤマーカーの有意義な変化は、痩せた個体においてメトレレプチンで観察された体重の最小限の効果（１ｋｇ未満）（Ｈｅｙｍｓｆｉｅｌｄ，１９９９）に基づき、痩せた／過体重の対象の群において観察されることは予測されない。
【０３１０】
薬理学的な測定値には、体重、代謝パラメータ（グルコース、脂質）、およびＡＮＧＰＴＬ３が含まれる。ＡＮＧＰＴＬ３は、レプチンおよび／またはインスリンにより制御され得る潜在的マーカーである（Ｍｕｎｉｙａｐｐａ，２０１７）（Ｎｉｄｈｉｎａ  Ｈａｒｉｄａｓ，２０１５）。体重は各ビジット時に慎重に評価される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の単回投与量が、痩せた／過体重の対象において体重に臨床的に有意義な効果を有した場合には、安全性／用量漸増決定のタイミングを修正してもよく、用量漸増決定を行う前に追加の安全性データが収集されてもよい（例えば、１５日目の安全性評価を待つ）。
【０３１１】
パートＢは、過体重／肥満の対象の体重に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の安全性、ＰＫ、および効果を評価するための１２週間の治療期間を有する単回用量レベルでの反復投与試験である。いくつかの集団研究からは、レプチン値が比較的低く（Ｒｕｈｌ，２００１）（Ｂｕｅｔｔｎｅｒ，２００２）、レプチン受容体が飽和していない可能性がある肥満患者サブセットがあることが示唆されている。パートＢにおいて対処される重要な問題は、基準レプチン値が比較的低い過体重または肥満の対象において、レプチンシグナル伝達の回復が、食欲、食物摂取量および体重を減少させるか、である。
【０３１２】
したがって、パートＢは、体重が変化し、基準レプチン値が比較的低い対象における、体重、食物摂取量、代謝パラメータおよび体組成に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果を評価する。過体重または肥満の健康な対象（ＢＭＩ範囲は２５〜４０ｋｇ／ｍ２）が、前スクリーニングされたレプチン値に規定される４つの別個のコホートに登録される。４つの別個のコホートへの登録は、適切な数の対象が、比較的低い基準レプチン値の範囲およびＢＭＩ範囲で試験されるように実施される。コホートによる階層化は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２とプラセボへの無作為化のときに行われる。以下に定義されるように、最大でおよそ２０名の対象が４つの各コホートに登録され、パートＢの合計サンプルサイズは最大で８１名の対象である：レプチン値およびＢＭＩは、前スクリーニングビジット時に測定され、試験適格性、および４コホートのうちの一つへの適格性に関して最初に評価される。試験への登録は、適格性を満たす対象のスクリーニング時に行われる。特定のコホートへの登録が、許容される最大数に達した場合、対象は登録適格ではなくなる。いくつかのコホートは、低レプチン値で肥満率が低いという前提での登録が困難である可能性があるため、スポンサーは特定コホート内での登録を停止することを選択してもよい。
【０３１３】
パートＢの４つのコホートは以下の通り定義される：
・  コホート１：前スクリーニング時での空腹時レプチン値が５ｎｇ／ｍＬ未満で、前スクリーニング時に２８．０から４０．０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する男性および女性の対象。
・  コホート２：前スクリーニング時での空腹時レプチン値が５ｎｇ／ｍＬ未満で、前スクリーニング時に２５．０〜＜２８ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する男性および女性の対象。
・  コホート３：前スクリーニング時での空腹時レプチン値が５．０ｎｇ／ｍＬ以上、８．０ｎｇ／ｍＬ以下で、前スクリーニング時に２８．０から４０．０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する男性対象。
・  コホート４：前スクリーニング時での空腹時レプチン値が５．０ｎｇ／ｍＬ以上、２４．０ｎｇ／ｍＬ以下で、前スクリーニング時に２８．０から４０．０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する女性対象。
【０３１４】
注記：上記のコホートのうちの一つに対する適格性は、前スクリーニングビジット時のＢＭＩおよびレプチン値に基づく。ＢＭＩおよび／またはレプチン値がコホートに規定される範囲に無い場合、対象は登録適格ではない。前スクリーニング時のＢＭＩまたはレプチン値が、一つ以上のコホート内への登録に関して境界にある場合、ＢＭＩおよびレプチンの測定を、前スクリーニングウィンドウの間に１回繰り返してもよい。反復測定については、最低レプチン値をコホートのうちの一つへの登録に使用する。特定のコホートへの登録が、許容される最大数に達した場合、対象は登録適格ではなくなる。
【０３１５】
パートＢの開始は、パートＡの利用可能な安全性、ＰＫ、およびＰＤのデータの中間解析により導かれ、パートＢに対する適切な用量、投与頻度、および投与様式（ＩＶまたはＳＣ）が選択される。パートＡに登録された対象は、パートＢの参加に適格ではない。パートＢの試験設計は、ＢＭＩおよび空腹時レプチン値を評価し、４コホートのうちの一つに対する適格性を評価するための前スクリーニング期間（−６０〜−１４日目）、スクリーニング期間（−３２〜−１４日目）、基準期間（−２９〜−１日目）、治療期間（１〜８５日目）、そして無治療追跡期間（１０７〜１９１日目）からなる。対象は、基準期間中（−１４〜−１日目が予定される）、および治療期間中の二つの時点（２９〜３０日および８４〜８５日）での正確な食欲摂取評価と、食物自由摂取量評価のために２日のクリニック滞在が認められる。クリニック滞在は、管理された状況下での食物自由摂取量評価における正確なカロリー摂取の評価のために必要であり、標準的な食事が用意され、食欲以外に食物摂取量に影響を与え得るきっかけ（例えば、時刻、他者の食事行動、一人前の分量など）が最小化されている。対象は、−１日目に、２日間のクリニック滞在も承認される。治療期間中の１日目に、対象は、治験薬またはプラセボの第一の投与を受け、一連のＰＫおよび他の臨床検査測定用に血液サンプルが取られ、一晩滞在して、２日目の２４時間のＰＫ評価が完了される。
【０３１６】
血液サンプリングのための治療期間中のビジットは、週に１回行われる。治験薬の用量および頻度は、パートＡからのＰＫデータの中間解析によって決定され、４週間ごとまたは２週間ごとに決定される（最大頻度は週に１回以下である）。
【０３１７】
ＤＸＡによる体組成、ならびにＭＲＩによる肝臓、腹部および大腿部の脂肪の定量は、基準期間、治療期間の終了間際、および追跡期間中に実施される。治療期間後、対象は１６週間の休薬期間中に追跡され、安全性およびＰＤ効果が評価される。単回用量レベルでの反復投与の安全性および忍容性の評価（パートＡからの安全性および忍容性に基づく）は、試験のパートＢの主要目的である。試験全体を通じて、安全性評価は、バイタルサイン、身体検査、ＥＣＧ、臨床検査、ＡＥの監視が含まれる。抗薬剤抗体も評価される。さらに、体重、食物自由摂取量、および例えばグルコースと脂質などの代謝パラメータを評価する副次的な目的は、試験全体を通じて注意深く評価される。
【０３１８】
パートＢの薬理学的な測定には、レプチン受容体シグナル伝達の増加によって影響を受ける可能性のあるパラメータに関する基準時、および治療時の評価が含まれる。これらのＰＤ評価には、患者が報告した食欲の測定値、管理された入院患者設定での食物摂食に関する定量的測定値、ＤＸＡによる正確な体組成および脂肪量の測定値、ならびに目盛り付きスケールを使用した正確な体重測定値が含まれる。さらに、例えばレプチン、グルコース、インスリン、ホメオスタシスモデル評価により推定されるインスリン抵抗性（ＨＯＭＡ−ＩＲ：ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−ｅｓｔｉｍａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）、ＨｂＡ１ｃ、脂質などの代謝パラメータは、基準時、治療期間中、および治療期間終了時に測定され、インスリン感受性および脂質代謝に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果が評価される。肝臓のＭＲＩは、基準時、および治療後にも実施され、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が肝臓脂肪症に影響を及ぼすかどうかが決定される。
【０３１９】
薬理学的変数およびバイオマーカー変数の根拠
食物自由摂取量の評価（パートＢのみ）
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療は、視床下部レプチン受容体シグナル伝達を増加させ、摂食行動に影響を及ぼすニューロンにおける下流効果を有すると仮定される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置により、誘導性レプチン欠損マウスにおいて、食物摂取量および体重の著しい減少がもたらされた。カニクイザル試験において定量的な食物摂取量評価は実施されなかったが、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２治療は体重および脂肪量に対して有意な効果をもたらした。本試験において、比較的低いレプチン値を有する過体重／肥満対象における食物摂取量に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果は、基準時、および治療期間中の２時点で、過去に報告されたように（Ｋｒｉｓｈｎａ，２００９）（Ａｄｄｙ，２００８）、厳密な定量的入院患者の食物自由摂取量評価を使用して、評価される。簡潔に述べると、対象は、絶食後、臨床試験ユニットに入院し、標準化された朝食、昼食および夕食が提供され、標準化された基準エネルギー摂取が確立される。一晩の絶食の後、対象は、自由摂取の朝食、昼食、および夕食が提供され、食物／エネルギー摂取量が定量される。対象は、時間／時刻および社会的きっかけの知覚が隠された専門的な部屋ですべての試験食を消費する。
【０３２０】
カロリー密度が判明している食事が、４〜５倍の過剰量で提供され、消費される総カロリー数が隠されるように提供される。対象は、好きなだけ食べるように求められる。食物摂取量を定量化するために、食物摂取量評価の前後に食事を計量し、摂取カロリーが計算される。
【０３２１】
食欲評価（パートＢのみ）
レプチンの食欲への影響はその作用機序の中心であり、ゆえにＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の予測される作用機序の直接的評価である。ＬＥＰの変異、または全身型リポジストロフィーのいずれかに由来する低レプチン血症の個体は、とどまることを知らない食欲を現し、食物摂取と肥満が導かれる。これら個体にメトレレプチン治療を行うことで、満腹感が増し、食物摂取量が減少する（Ｆａｒｏｏｑｉ，１９９９）（Ｆａｒｏｏｑｉ，２００７）（ＭｃＤｕｆｆｉｅ，２００４）。食欲の様々な構成要素（例えば空腹感、満腹感）を測定する質問票（Ｆｌｉｎｔ，２０００）（Ｄａｌｔｏｎ，２０１５）を使用した食欲に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果は基準時、および追跡期間中に実施される。
【０３２２】
食欲は、クリニックビジットの間の標準的なカロリー負荷の前後に評価され、追加の食欲質問票は、基準期間、治療期間および追跡期間の間、毎日完了される。
【０３２３】
ＡＮＧＰＴＬ３
アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３：Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３）は、例えばＴＧ、低密度リポタンパク質Ｃ（ＬＤＬ−Ｃ）などのリポタンパク質レベルを、リポタンパク質リパーゼの阻害を介して調節する（Ｔｉｋｋａ，２０１６によるレビュー）。ＡＮＧＰＴＬ３のレベルは、摂食、レプチンおよび／またはインスリンによって調節され得る（Ｍｉｎｉｃｏｃｃｉ，２０１２）（Ｎｉｄｈｉｎａ，２０１５）。ＡＮＧＰＴＬ３のレベルは、リポジストロフィーの患者で上昇し、メトレレプチンを用いた治療後に低下する（Ｍｕｎｉｙａｐｐａ，２０１７）。ＡＮＧＰＴＬ３の低下は、ＴＧリッチなリポタンパク質のリパーゼクリアランスの強化を介在し得る。ＡＮＧＰＴＬ３およびＴＧのレベルは、リポジストロフィーのマウスモデルでも増加しており、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた処置後に正常化される。したがって、ＡＮＧＰＴＬ３は、レプチン受容体シグナル伝達が強化された状況下で減少し得る薬理学的マーカーであり得る。ＡＮＧＰＴＬ３は、パートＡおよびＢの基準時、およびいくつかの時点での治療後に測定される。
【０３２４】
可溶性ＬＥＰＲ
レプチンは、遊離体として血流中を循環し、およびＬＥＰＲ細胞外ドメインの脱落を介して生成されるｓＬＥＰＲにも結合し得る（Ｓｉｎｈａ，１９９６）（Ｌａｍｍｅｒｔ，２００１）。可溶性ＬＥＰＲは、レプチンの生体利用効率および／またはクリアランスを調節し得る（Ｌｏｕ，２０１０）。標的飽和度は、ｓＬＥＰＲの飽和に依存し得る可能性があり、そのため、線形および非線形の標的介在性の動態における変動は、ｓＬＥＰＲ値に影響を受ける場合がある。したがって、パートＡおよびＢでは、基準時、および治療期間中の様々な時点（抗体薬物動態に関するサンプリングに相当）でｓＬＥＰＲが測定される。
【０３２５】
イメージング（パートＢのみ）
ＤＸＡイメージングおよびＭＲＩイメージングは、基準時、治療終了間際、および試験終了時に実施され、総脂肪分布および局所的脂肪分布、大腿部／腹部領域のＳＣ脂肪および内臓脂肪、ならびに肝臓脂肪含量における、基準からの変化が推定される。カニクイザルのパイロット試験では、前臨床データから、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、総脂肪量を減少させることによって、除脂肪量に影響を与えることなく、体重を減少させることが示された（ＤＸＡによる評価）。ＤＸＡは、臨床試験において総脂肪量および局所的脂肪分布の有用な定量的バイオマーカーであることが示されている。例えば、ＤＸＡを使用した局所的脂肪分布における有意差（足の脂肪％に対する胴体の脂肪％（脂肪量比率［ＦＭＲ］）が１．７８±０．５３）が、正常な対象と比較して、部分型リポジストロフィーの患者において観察された（Ａｉｊｌｕｎｉ，２０１７）。またＤＸＡを使用して、例えばＧＬＰ−１アゴニストなどの体重減量剤の試験（Ｊｅｎｄｌｅ，２００９）および認知療法（Ｐｏｎｔｉ，２０１８）における総脂肪量および局所脂肪量の変化が定量されている。
【０３２６】
磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）は、専用パルスシーケンスを使用した全器官のイメージング、または限定的な組織量での分光法による、肝臓（Ａｉｊｌｕｎｉ，２０１７）および筋肉（Ｂｕｒａｋｉｅｗｉｃｚ，２０１７）を含む様々な組織中の脂肪含量の測定に有効な手段であることが示されている。また、ＭＲＩは、腹部の脂肪量と分布の測定に対する、ハイコントラストな画像も示しており（Ｋｌｏｐｆｅｎｓｔｅｉｎ，２０１２）、その画像において、家族性リポジストロフィー２型の患者は、対照患者よりも２．５倍高い内臓脂肪率を示していた（Ａｌ−Ａｔｔａｒ，２００７）。筋肉の脂肪分画も、定量的ＭＲＩにより評価することができ、複数の筋ジストロフィー研究で示されているように、分光法およびパルスシーケンスによって解剖学的なイメージングと脂肪分画推定が可能であり、疾患進行の評価で効果を発揮することが示されている（Ｂｕｒａｋｉｅｗｉｃｚ，２０１７）。
【０３２７】
本試験では、腹部および大腿部のＭＲＩを実施して、基準時、およびＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療後のＳＣ脂肪、内臓脂肪、および肝臓脂肪における局所的変化が定量される。
【０３２８】
投与量選択の根拠
リポジストロフィーおよび単一遺伝子型肥満のマウスモデルにおける前臨床試験、およびサルの毒性試験からの有効性、安全性、および薬物動態データに基づき、パートＡの静脈内投与量およびＳＣ投与量が選択された。このＦＩＨ試験で最も高い投与量は、３０ｍｇ／ｋｇ以下であり、開始投与量は、およそ０．３ｍｇ／ｋｇである。カニクイザルのＧＬＰ毒性試験では、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、１００ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの週１回で１２週間の投与まで忍容性良好であり、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は１００ｍｇ／ｋｇであった。ヒトにおけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の予測血清曝露量に基づき、このＦＩＨ試験における予定最大投与量の３０ｍｇ／ｋｇは、ＮＯＡＥＬの２０倍未満の暴露倍数を有している。初期開始投与量の０．３ｍｇ／ｋｇは、ＧＬＰ毒性試験で試験された最高用量よりも低い１０，０００を超える安全域を有し、また定量限界を超えるヒトにおけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２濃度を提供すると予測され、ゆえに有用なＰＫ情報を提供すると予測される。
【０３２９】
パートＢの投与選択の目的は、忍容性を評価するための広範な曝露範囲を確保すること、および暴露−反応の関係性の特徴解析を促進すること、ならびに線形および非線形の両方の薬物動態の特徴解析を可能にする薬物動態プロファイルの解明を含む。さらに、投与量選択は、対象となりうる推定ＰＤマーカー閾値の上下の暴露を確保しなければならない（例えば、ｓＬＥＰＲ飽和）。パートＢの投与量は、パートＡからの暫定的な安全性、ＰＫおよびＰＫ／ＰＤデータに基づく。投与量レベル、投与間隔、投与経路（ＩＶまたはＳＣ）の選択は、安全性、薬物動態、および可能な場合には、パートＡならびに動物前臨床試験からのＰＫ／ＰＤデータに基づく。パートＢの投与量は、パートＡで評価された投与量を超えず、投与は４週ごとまたは２週間ごとである可能性が高いが、週に１回より頻繁には投与されない。
【０３３０】
投与レジメンは、毒性試験で観察された曝露量を超えない。
【０３３１】
基準
最大１６９人の対象（パートＡに対し最大８８人、パートＢに対し最大８１人）が、登録標的集団である。標的集団は、パートＡに対しては健康で痩せた、または過体重の男性および女性であり、パートＢに対しては、様々な基準レプチン値を有する健康な過体重または肥満の男性および女性である。
【０３３２】
重要な登録基準
対象は、本試験のパートＡの登録に適格であるためには、スクリーニング時に以下の基準を満たす必要がある。
１．１８歳以上５０歳以下の男性および女性。
２．１８．５〜＜３０．０ｋｇ／ｍ２の肥満度指数（ＢＭＩ）。
３．対象は、治験責任医師により、良好な健康状態であり、スクリーニング時および／または治験薬の初回投与前に実施される既往歴、身体検査、臨床検査安全性試験に基づき主要な併存症を有していないと判断される。
４．クリニックビジット、試験関連手順、および食事指示の順守について、順守する意思があり、可能であること。
５．試験全体を通じて、通常の食事および運動レジメンを維持する意思があること。
６．署名されたインフォームドコンセントを提供することが可能であり、意思があること。
【０３３３】
対象は、本試験のパートＢの登録に関し適格であるためには、スクリーニング時に以下の基準をすべて満たす必要がある（前スクリーニング時に決定されるＢＭＩおよびレプチンの適格性を除く）。
１．１８歳以上６５歳以下の男性および女性。
２．コホートのうちの一つにより以下に定義される、前スクリーニング時の肥満度指数（ＢＭＩ）および空腹時レプチン値を有すること。特定のコホートへの登録が、許容される最大数に達した場合、対象は登録適格ではなくなる。
３．対象は、治験責任医師により、スクリーニング時および／または治験薬の初回投与前に実施される既往歴、身体検査、臨床検査安全性試験に基づき主要な併存症を有していないと判断される。対象は、軽度の高脂血症および／または軽度の高血圧の既往を有してもよいが、スクリーニング前の少なくとも２か月間、脂質降下剤または血圧降下薬について、安定した投与をうけていなくてはいけない。
４．クリニックビジット、試験関連手順、および食事指示の順守について、順守する意思があり、可能であること。
５．試験全体を通じて、通常の食事および運動レジメンを維持する意思があること。
６．署名されたインフォームドコンセントを提供することが可能であり、意思があること。
【０３３４】
除外基準
スクリーニング時に以下の基準のいずれかを満たす対象は、本試験のパートＡから除外される：
１．臨床的に意義のある心血管系疾患（例えば、高血圧、心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患、心不全、難治性不整脈の既往）、呼吸器系疾患、肝臓疾患、腎疾患、消化管疾患、内分泌疾患（例えば、高脂血症）、血液疾患または神経疾患の既往。
２．１型糖尿病もしくは２型糖尿病もしくは前糖尿病段階の既往、またはスクリーニング時の空腹時血糖値（ＦＢＧ）が＞１００ｍｇ／ｄＬ、またはスクリーニング時のＨｂＡ１ｃが＞５．７％。
３．空腹時のＬＤＬ−Ｃが≧１３０ｍｇ／ｄＬ、ＴＧが＞２５０ｍｇ／ｄＬ。
４．スクリーニング時に、臨床的に意義のある完全血球数異常、臨床化学、尿分析、または尿薬物スクリーニング検査。臨床検査結果における些細な逸脱は許容される。注記：なんらかの臨床検査結果異常（例えば、正常上限（ＵＬＮ）から３ｘ以内のクレアチニンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）で、激しい肉体活動が推定原因であるもの）は、スクリーニング期間中に１回反復されてもよい。
【０３３５】
スクリーニング時に以下の基準のいずれかを満たす対象は、本試験のパートＢから除外される：
１．臨床的に意義のある心血管系疾患（例えば、中〜高度な高血圧、心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患、心不全、難治性不整脈の既往）、呼吸器系疾患、肝臓疾患、腎疾患、消化管疾患、内分泌疾患、血液疾患または神経疾患の既往。
２．１型糖尿病もしくは２型糖尿病の既往、またはスクリーニング時のＦＢＧが＞１２６ｍｇ／ｄＬ、またはスクリーニング時のＨｂＡ１ｃが＞６．５％。「前糖尿病段階」の診断は許容される。
３．空腹時のＬＤＬ−Ｃが＞１６０ｍｇ／ｄＬ、またはＴＧが＞５００ｍｇ／ｄＬ。
４．スクリーニング時に、臨床的に意義のある完全血球数異常、臨床化学、尿分析、または尿薬物スクリーニング検査。上述のように軽度の脂質異常および血糖異常は除外される。臨床検査結果における些細な逸脱は許容される。注記：なんらかの臨床検査結果異常（例えば、ＵＬＮから３ｘ以内のＣＰＫで、激しい肉体活動が推定原因であるもの）は、スクリーニング期間中に１回反復されてもよい。
５．食物摂取量評価で使用される特定の食品カテゴリーに対する制限的な食習慣（例えば、ベジタリアンまたはビーガン）、嫌悪、または食物摂取量、食欲、食物管理の評価の解釈に干渉する、または混乱させる摂食行動。
【０３３６】
スクリーニング時に以下の基準のいずれかを満たす対象は、本試験のパートＡおよびパートＢから除外される：
１．スクリーニングビジットから６０日以内の何らかの理由による入院（すなわち、２４時間超）。
２．対象が、治験責任医師の意見において、本試験に参加することにより、試験結果を混乱させる、または対象に追加的なリスクを負わせる何らかの身体検査所見、および／または何らかの既往歴を有する。
３．視床下部性の無月経またはリポジストロフィーの既往。
４．スクリーニング前の過去３か月間にわたり、５％を超える体重の変化。
５．肥満に対する肥満症治療術の既往歴（例えば、スリーブ胃切除術、胃バイパス、バンディングなど）。
６．過去６ヶ月間における体重減少術（例えば脂肪吸引）または体型矯正術。
７．過去３ヶ月間における体重減少のための（店頭販売の［ＯＴＣ］または処方の）医薬品を用いた治療（例えば、ロルカセリン、フェンテルミン／トピラマート、ナルトレキソンＨＣｌ／ブプロピオンＨＣｌ、リラグルチド）。
８．主要な精神障害、摂食障害（例えば、過食症、拒食症）の既往。
９．現喫煙者、またはスクリーニング前の３か月以内に禁煙した旧喫煙者（紙巻たばこ、または電子たばこ）。
１０．スクリーニングビジット前の１年以内に、レクリエーション薬剤（マリファナを含む）またはアルコール依存症（１日につき２回を超える飲酒）の既往。
１１．スクリーニング時に、Ｂ型肝炎感染症またはＢ型肝炎表面抗原陽性（ＨｂｓＡｇ＋）の既往。
１２．スクリーニングビジット時に、ＨＩＶ感染症またはＨＩＶ血清陽性の既往。
１３．スクリーニング時に、Ｃ型肝炎感染症またはＣ型肝炎抗体検査結果が陽性の既往。
１４．過去１０年以内に何らかの悪性腫瘍。ただし、切除され、３年間、転移性疾患の証拠がない皮膚の基底細胞癌もしくは扁平上皮癌、または子宮頚もしくは肛門の上皮内癌は除く。
１５．活動性結核（ＴＢ）または潜伏性結核の既往。注記：潜伏性ＴＢの既往は、ツベルクリン皮膚テストが陽性（ＴＳＴ；Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）または他のワクチン歴にかかわらず、皮膚硬結が＞５ｍｍと規定される）またはＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ（登録商標）ＴＢ  Ｇｏｌｄテストが陽性（不明瞭ではない）のいずれかとして規定される。
１６．パートＡについて：スクリーニングビジット時、および基準ビジット時に、座位血圧または仰臥位血圧の少なくとも２回の測定値（＞１４０／９０または＜９０／６０）、および安静時脈拍（＜４５または＞１２５）または起立時変化（収縮期に＞２０ｍｍ  Ｈｇの低下、および／または拡張期に＞１０ｍｍ  Ｈｇの低下）。パートＢについて：スクリーニングビジット時に、座位血圧または仰臥位血圧の少なくとも２回の測定値（＞１５０／９０または＜９０／５０）、および安静時脈拍（＜４５または＞１２５）または起立時変化（収縮期に＞２０ｍｍ  Ｈｇの低下、および／または拡張期に＞１０ｍｍ  Ｈｇの低下）。血圧値が高い場合、血圧測定を繰り返してもよく、または対象を１回、再スクリーニングしてもよい。
１７．対象が、スクリーニング時に、＜６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２の推定糸球体濾過率（ＭＤＲＤ式を使用）を有する。
１８．少なくとも２回の測定で、臨床的に意義のあるＥＣＧ異常または異常間隔が確認される（男性に対してはＱＴｃＦ＞４５０ミリ秒、女性に対しては、＞４７０ミリ秒；ＰＲ＜１２０ミリ秒または＞２２０ミリ秒、ＱＲＳ  ＞１００ミリ秒）。
１９．ドキシサイクリン（またはテトラサイクリン類の薬剤）または製剤の他の成分に対する過敏症。
２０．タンパク質治療薬に対する急性過敏症および／またはアナフィラキシーの既往。
２１．治験責任医師の意見において、対象に対する実質的なリスクを呈し得る重度なアレルギーの既往（ラテックスを含む、またはアナフィラキシー性反応またはアレルギー）。
２２．スクリーニングビジット時に、９０日以内または治験生物製剤の少なくとも５半減期以内（いずれか長い方）、または他の治験製品に関しては少なくとも４週間以内、または免疫療法に関しては少なくとも６カ月間以内に、別の治験薬（生物製剤を含む）または治験療法を評価するなんらかの臨床試験の参加。
２３．妊娠中または授乳中の女性。
２４．初回投与前／最初の治療の開始前、本試験期間中、および最後の投与後少なくとも４か月間、高度に有効な避妊法を実施する意思のない、妊娠可能性のある女性＊。高度に有効な避妊手段としては以下が挙げられる：
ａ．スクリーニング前に２回以上の月経サイクルで開始された排卵の阻害に関連する、混合（エストロゲンおよびプロゲステロン含有）ホルモン避妊薬（経口、膣内、経皮）またはプロゲステロンのみのホルモン避妊薬（経口、注射、移植）の安定的な使用。
ｂ．子宮内デバイス（ＩＵＤ）；子宮内ホルモン放出システム（ＩＵＳ）。
ｃ．卵管結紮術。
ｄ．精管切除術を受けたパートナー。
ｅ．および／または性的禁欲†、‡
＊閉経後の女性は、妊娠可能であると見なされないように、少なくとも１２カ月間、無月経でなければならない。子宮摘出術または卵管結紮術が書面で証明できる女性に対しては、妊娠検査と避妊は要求されない。
†性的禁欲とは、試験治療薬と関連するリスクのある全期間中に、異性間性交を慎むこととして規定される場合にのみ、高度に有効な方法とみなされる。
‡定期的な禁欲（カレンダー法、症状体温法、排卵後法）、引き抜き（膣外射精）、殺精子剤のみ、および授乳性無月経法（ＬＡＭ）は、許容可能な避妊法ではない。女性用コンドームと男性用コンドームは、一緒には使用されないものとする。
２５．治験薬の治療期間中および治験薬の最終投与後の４ヵ月間に、以下の医学的に許容可能な避妊形態の使用を望まない性的に活動的な男性：医学的な外科手術成功に関する評価を伴う精管切除術またはコンドームの一貫した使用。試験期間中および試験薬の最終投与後の４ヵ月間、精子提供は禁止される。
２６．許容される医薬品または栄養補助食品に記載されているものを除く、併用薬の使用。
【０３３７】
試験コホートおよび用量漸増に関する説明
７つの逐次的な漸増用量コホートは、０．３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの最大用量までの用量を含むように計画されている。各用量コホートは、８人の対象からなる：６人は無作為化されてＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与され、２人は無作為化されてプラセボを投与される。安全性を最適化するために、コホート１（０．３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、コホート２（１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、コホート３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）、コホート４（３００ｍｇ  ＳＣ）、およびコホート５（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）の各々の８名の対象（６名活性、２名プラセボ）を２ブロックに分割する。２名の対象（１名は活性：１名はプラセボ）がブロック１に安全性監視群として登録され、残りの６名の対象は、ブロック２に登録される（５名が活性：１名がプラセボ）。ブロック１の対象が最初に登録され、同日に投与される。ブロック１の対象の両名が少なくとも２４時間の安全性評価を安全に完了し、安全性データが治験責任医師とスポンサーの医療モニターによってレビューされ、そしてブロック２の対象の登録を開始できることが、治験責任医師とスポンサーの医療モニターによって合意された後でのみ、ブロック２の対象の登録が開始される。ブロック２の全対象者は、同日に投与されてもよい。
【０３３８】
コホート６（６００ｍｇ  ＳＣ）およびコホート７（３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）の各々８名の対象（６名が活性：２名がプラセボ）は、４名の対象（３名が活性：１名がプラセボ）の二つのブロックに分割される。各ブロックの投与は、異なる日に実施される。漸増用量コホートは以下のように登録される：
□  コホート１：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  ０．３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
□  コホート２：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  １ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
□  コホート３：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  ３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
□  コホート４：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  ３００ｍｇ  ＳＣ、単回投与
□  コホート５：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  １０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
□  コホート６：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  ６００ｍｇ  ＳＣ、単回投与
□  コホート７：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  公称用量の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
【０３３９】
ＰＫ変動が予想よりも大きい場合、任意のコホートが登録され、例えば年齢、体重、性別などの特定の共変成分の役割を検証するための追加の対象が必要となる。
□  コホート８：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  公称用量の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与
□  コホート９：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２  公称用量の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、単回投与。３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶまでの最大用量がコホート８および９に割り当てられているが、新たに得られたＰＫデータに応じてさらに低い用量が投与されてもよい。
【０３４０】
用量漸増：安全性／用量漸増チームには、治験責任医師、医療／研究ディレクター、生物統計研究者、およびリスク管理リーダーが含まれる。治験責任医師、および他の治験施設担当者、医療モニターを含むスポンサーの治験チームも、投与される治療薬に関して盲検化される。スポンサーに非盲検の個人がいてもよいが、そうした非盲検の個人は、スポンサーの治験チームの一員とはならない。
【０３４１】
前のコホートのすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた時点で、コホート２（１ｍｇ／ｋｇ）に対する用量漸増を進行させてもよい。
【０３４２】
前のコホートのすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた時点で、コホート３（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）およびコホート４（３００ｍｇ  ＳＣ）に対する用量漸増を進行させてもよい。コホート４の投与は、コホート３の投与と並行して行うことができる。
【０３４３】
コホート３のすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた時点で、コホート５（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）に対する用量漸増を進行させてもよい。
【０３４４】
コホート４のすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた時点でのみ、コホート５と並行して、コホート６（６００ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ）に対する用量漸増を進行させてもよい。
【０３４５】
公称用量の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶがコホート７に割り当てられているが、新たに得られたＰＫデータに応じてさらに低い用量が投与されてもよい。３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶへの用量漸増の前に、コホート５のすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた。体重に対する薬理効果が予想よりも高い場合、安全／用量漸増の決定のタイミングが修正され、追加的な安全データが収集されてもよい。例えば、８日で６名の対象のうち少なくとも３名において、体重が３％を超えて減少した場合、観察期間を１５日目まで延長し、その後、何らかの用量漸増の決定が為される。２週間にわたり、６名の対象のうち少なくとも３名において、体重が５％を超えてさらに減少した場合、観察期間を４週間まで延長し、その後に用量漸増に対する決定が為される。
【０３４６】
（表１９）試験のパートＡおよびパートＢにおける投与コホート
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【０３４７】
試験設計
これは、健康な参加者におけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与および反復投与の安全性、忍容性、ＰＫおよび薬理（ＰＤ）に関する第Ｉ相無作為化二重盲検プラセボ対照二部試験である。パートＡにおいて、健康で痩せた、または過体重の対象が登録され、単回漸増静脈内（ＩＶ）投与および皮下（ＳＣ）投与に関する安全性、忍容性、ＰＫ、およびＰＤが評価される。パートＡのＰＫおよび安全性の中間情報を使用して、パートＢの投与の用量レベル、投与頻度、および投与様式（ＩＶまたはＳＣ）が選択される。パートＢでは、肥満度指数（ＢＭＩ）が２５〜４０ｋｇ／ｍ２の過体重／肥満の対象が登録され、基準レプチン値により規定される４つの個別のコホートにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与に関する安全性、忍容性、ＰＫ、およびＰＤが評価される。
【０３４８】
パートＡでは、最大で８８名の対象が、最大で７つの逐次的漸増単回投与（最大で５つのＩＶおよび二つのＳＣ）コホート（コホート１、２、３、４、５、６、７）および二つの任意の単回投与コホート（コホート８および９）に無作為化される。７つの逐次的単回投与コホートは、８人の対象が無作為化され、各用量レベルで、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボ（６人が活性：２人がプラセボ）を投与される。二つの追加的な任意の単回投与コホートは、最大で１６人の対象が無作為化され、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボ（１２人が活性：４人がプラセボ）を投与される。最大で５つの単回ＩＶ用量レベル（０．３、１．０、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ）および二つのＳＣ用量レベル（３００および６００ｍｇ）が、単回漸増様式で評価される。用量を漸増するかどうかの決定は、安全性パラメータおよびＡＥの分析に基づく。経時的な抗体濃度の中間解析、探索的ＰＤ測定、および該当する場合には、用量コホート間のＰＫ／ＰＤの関連性も、用量漸増決定に情報を与えうる。最大３０ｍｇ／ｋｇまでの用量レベルでの二つの任意コホートの登録に関する決定は、ＰＫプロファイルの変動に関する中間解析に基づく。
【０３４９】
任意コホート：コホート８と９は、対象の中で予想よりも高いＰＫの変動が観察されたとき、およびＰＫプロファイルに対する特定の共変量の影響を理解するために追加の対象が必要とされる場合に、登録される。例えば前もって指定された数の男性、女性、年齢範囲、体重または特定のＢＭＩカットポイントなど、登録／除外基準により規定される集団内の特定の部分集団中の対象が、登録される。公称用量の３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶがコホート８と９に割り当てられているが、新たに得られたＰＫデータに応じてさらに低い用量が投与されてもよい。コホート８および９の各々が、１６人の対象を登録する（４人がプラセボ投与に割り当てられ、１２人がＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与に割り当てられる）。３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶへの用量漸増の前に、コホート５のすべての対象が８日目の安全性評価を完了させ、盲検化安全性データが安全性／用量漸増チームのミーティングにおいてレビューされた。パートＡの試験設計は、スクリーニング期間（−２１日目〜−２日目）、基準前ビジット（−１日目）、追跡期間（３日目〜１１３日目）、および試験ビジットの終了日（１１３日目）からなり、基準前ビジットでは、対象は２泊の滞在を伴うクリニック滞在が承認される（ＩＶ投与を受ける対象、および安全性監視ブロックにいるＳＣ投与を受ける対象）か、または１日のクリニック滞在が承認される（ＳＣ投与を受ける他の対象）。試験全体を通じて、安全性評価は、バイタルサイン、体重、身体検査、ＥＣＧ、臨床検査、およびＡＥの監視、ＰＫ測定、ならびに様々なＰＤ評価が含まれる。
【０３５０】
パートＢでは、ＢＭＩが２５〜４０ｋｇ／ｍ２の最大で８１人の対象が、基準レプチン値により規定される４つのコホートに登録され（最大で１コホート当たりおよそ２０人）、プラセボ対照二重盲検の１２週間の反復投与試験に無作為化される（コホート割り当てに応じて、３：１または６：１のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２：プラセボ）。用量、投与間隔、および投与様式（ＩＶとＳＣ）の選択は、パートＡからの安全性、ＰＫ、および該当する場合にはＰＫ／ＰＤのデータに基づく。パートＡのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のＰＫプロファイルを使用して、反復投与後の血清中の濃度が予測される。
【０３５１】
本試験は、前スクリーニング期間（−６０〜−１４日目）、スクリーニング期間（−３２〜−１４日目）、体重、ＤＸＡとＭＲＩによる体組成の基準測定値を取得するための基準期間（−２９日目〜−１日目）、空腹時レプチン、体重、食欲評価および食物自由摂取量評価の基準測定値の収集のためのクリニック滞在からなる。対象は、−１日目に、２日間のクリニック滞在が承認される。１日目に、対象は治験薬剤またはプラセボの第一の投与を受け、薬物動態測定のための一連の血液サンプリングが行われ、一晩滞在して２４時間のＰＫサンプリングが行われ、２日目に退院する。治験薬は４週間ごとまたは２週間ごとに投与され得るが、治療期間中、週に１回よりも多い頻度で投与はされない（投与頻度は、パートＡのＰＫデータの中間解析により決定される）。
【０３５２】
治療期間中のビジットは最大で週に１回行われ、体重と血清代謝パラメータ（グルコース、インスリン、ＨＯＭＡ−ＩＲ、脂質）の正確で反復的な測定値が収集される。食欲と食物自由摂取量に関する追跡期間の評価は、４週目と治療期間（１２週間）の終了時に、クリニック滞在中に行われる。対象は、基準期間、治療期間、および追跡期間中、毎日の食欲質問票も完了させる。ＤＸＡおよびＭＲＩのイメージングに関する追跡評価も実施される。治療期間後、対象は１６週間の休薬期間の間、追跡される。試験全体を通じて、安全性評価は、バイタルサイン、身体検査、ＥＣＧ、臨床検査、およびＡＥの監視が含まれる。試験全体を通じて、薬剤濃度、標的エンゲージメントマーカー（ｓＬＥＰＲ）、および探索的バイオマーカーも測定される。
【０３５３】
試験期間
対象に対する、本試験のパートＡの期間は約１９週間であり、スクリーニング期間を含む。対象に対する、本試験のパートＢの期間は約３５週間であり、前スクリーニング／スクリーニング／基準期間を含む。試験終了時は、パートＢにおける最後の対象の最後のビジット時として定義される。
【０３５４】
治療薬の用量／経路／スケジュール
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、滅菌済みの単回使用での２０ｍＬのガラスバイアル中、ＩＶ投与用またはＳＣ投与用のいずれかで凍結乾燥粉末として供給される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２に対応するプラセボは、タンパク質添加を伴わない同じ処方で調製される。パートＡについては、単回投与は、ＩＶ投与およびＳＣ投与される。パートＢについては、用量、投与間隔、および投与様式（ＩＶとＳＣ）の選択は、パートＡからの安全性、ＰＫ、および該当する場合にはＰＫ／ＰＤのデータに基づく。
【０３５５】
手順および評価
安全性は、ＴＥＡＥ、バイタルサイン、身体検査、心電図検査（ＥＣＧ）、および臨床検査のモニタリング／査定によって評価される。薬物動態を評価するために、予め指定された時点での血清中のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２濃度の測定のために、高密度で少量のサンプルが収集される。薬理は、体重および胴囲、食物摂取量および食欲評価、ならびにＤＸＡとＭＲＩを使用した体組成を測定することにより評価される。
【０３５６】
主要転帰の測定：
１．治療下で発生した有害事象（ＴＥＡＥ）の数［時間枠：１２週目（治療期間終了）］
【０３５７】
副次的転帰の測定：
１．経時的な血清中のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の濃度［時間枠：２７週目まで（試験終了）］
２．過体重または肥満の対象における体重の変化率［時間枠：基準時から１２週目まで］
３．過体重または肥満の対象における体重の絶対的変化［時間枠：基準時から１２週目まで］
４．過体重または肥満の対象における標準的な食事に反応したカロリー摂取における基準からの変化［時間枠：基準時から１２週目まで］
５．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与後の経時的な脂質制御性タンパク質レベルの変化［時間枠：１６週目まで］
６．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与後の経時的な脂質制御性タンパク質レベルの変化［時間枠：２７週目まで］
７．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与後の経時的なＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２に対する抗薬剤抗体の発生率［時間枠：１６週目まで］
８．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の反復投与後の経時的なＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２に対する抗薬剤抗体の発生率［時間枠：２７週目まで］
【０３５８】
薬物動態変数
時間に加えて、総Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の濃度が測定される。薬物動態パラメータには以下が含まれるが、これらに限定されない。
・  ＡＵＣｌａｓｔ  −  ゼロ時から、最終の正の濃度の時間までの、コンピューター計算された曲線下面積（ＡＵＣ）
・  ＡＵＣ０−τ  −  長さτの投与間隔の間のコンピューター計算されたＡＵＣ
・  Ｃｍａｘ  −  ピーク濃度
・  ｔｍａｘ  −  Ｃｍａｘまでの時間
・  ＣＬ  −  クリアランス
・  Ｃｔｒｏｕｇｈ  −  トラフ濃度
【０３５９】
パートＢの場合、これら（および他の）のパラメータの選択は、選択された最終サンプリングスケジュールならびに得られた結果のデータに基づくことに注意されたい。
【０３６０】
抗薬剤抗体変数
抗薬剤抗体（ＡＤＡ：Ａｎｔｉ−ｄｒｕｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）変数には、以下のようなＡＤＡ反応および力価が含まれる：
・  治療下で発生した反応は、基準の結果が負であったとき、任意の投与後の正のＡＤＡアッセイ反応と規定される
・  治療により強化されたＡＤＡ反応は、ＡＤＡアッセイにおいて基準が正であったとき、基準力価の９倍以上である、任意の投与後の正のＡＤＡアッセイ反応と規定される
・  力価の値
・  力価のカテゴリー
−  低（力価＜１，０００）
−  中（１，０００≦力価≦１０，０００）
−  高（力価＞１０，０００）
【０３６１】
薬理学的変数および他のバイオマーカー変数
薬理学的変数およびバイオマーカー変数は、以下である。体重、食物自由摂取量評価、食欲評価、血清／血漿の糖パラメータ（例えば空腹時のグルコース、インスリン、ＨｂＡ１ｃ）および脂質パラメータ（例えば、総コレステロール、ＴＧ、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ）、全体および身体の位置での脂肪量ならびに除脂肪量のＤＸＡ測定値、局所的なＳＣ脂肪および内臓脂肪のＭＲＩ定量、ＡＮＧＰＴＬ３、レプチンならびにｓＬＥＰＲ。追加的な探索的バイオマーカーには、甲状腺ホルモン（Ｔ３、Ｔ４、ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、テストステロン、エストラジオール、コルチゾール、およびアディポネクチンに対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果が含まれる。
【０３６２】
有効性手順
体重は、スクリーニング中および試験全体を通じて指定された試験ビジット時に評価される。体重は、他の試験評価が実施される前に、高精度較正されたデジタルスケールを使用して三重に評価される。体重評価を行う前に、対象は排尿しなければならない（膀胱は空に）。対象は下着のみを着用し、体重評価中は靴を履いてはならない。体重は、最も近い０．１ｋｇ単位まで記録されます。
【０３６３】
すべての人体測定は三重で行われなければならず、最終の報告値は、平均値である。三頭筋、肩甲骨下筋、腸骨棘上（ｓｕｐｒａｉｌｉａｃ）、および大腿部の皮下脂肪厚は、乾燥した傷の無い表皮の領域において、身体の右側から採取されなければならないが、ただし奇形または手足を失っている場合には、別手段を要する。胴囲を測定するために、対象は、直立してリラックスし、腕は両脇に、足はまとめて前を向くように指示される。腸骨稜および最も低い肋骨縁は、触診により特定され、これらの領域の上にある皮膚はペンで印をつけられる。次に、印が付いたこれらの皮膚の間の中点を、巻き尺を使用して特定し、ペンで印をつける。次に、穏やかに息を吐き切ったときに、巻き尺を使用して中点での胴囲を測定する。身長は、較正されたスタジオメーターを使用して息を吸いきったときに完全に直立した立位で測定され、最も近い０．１ｃｍ単位まで記録される。パートＢ、およびパートＡの任意コホートについて、身長は、それぞれ前スクリーニングビジットまたはスクリーニングビジットで、単回測定として測定される。肥満度指数は、体重（キログラム）の平均を、身長（メートル）の二乗で割ることで計算される。パートＡ（任意コホートを除く）では、平均身長は、計算に使用されるものとする。パートＢ、およびパートＡの任意コホートでは、各ビジットでの身長（それぞれ前スクリーニングまたはスクリーニングでの単回測定）および体重（３回の測定値の平均）の値は、ＢＭＩの計算に使用される。
【０３６４】
食物自由摂取量が評価される。食物摂取量評価で使用される食品に対して摂食行動異常または嫌悪がある場合、その対象はスクリーニング時に除外される。食物自由摂取量評価を使用したエネルギー摂取量（朝食＋昼食＋夕食）は、パートＢにおいて基準時、治療の４週間後、および治療期間終了時（１２週）に定量される。食物評価が評価されるクリニックビジットの１日前に、対象は、活発な活動およびアルコール消費を回避するように求められる。
【０３６５】
対象は空腹状態で入院し、午前中にクリニックに到着する。４週間の治療中の入院患者の食物摂取量評価において、対象は、割り当てられた治療を受ける（治験薬またはプラセボ）。次に、対象は、標準化され、固定されたカロリーと主要栄養素含量の朝食、昼食および夕食が提供され、その後、一晩絶食する。翌日、対象は、自由摂取の朝食、自由摂取の昼食、および自由摂取の夕食が与えられる。自由摂取試験の食事中、対象は、典型的な一人前をはるかに超える（４〜５倍）、大量の食物を与えられる。食事は、標準化された主要栄養素含量とカロリー密度が判明している食事となるように栄養士により設計される。すべての食事と給仕品は、食事試験の前後に専用の較正済みスケールを使用してひそかに計量され、０．１ｇ以内まで、摂取された食物量が正確に評価される。対象は、食物摂取量に影響を与える可能性のある時間的および社会的なきっかけを排除するために、時計、ラジオ、携帯電話、およびテレビがない専用の個室ですべての食事を摂取する。摂取される食物の量を隠すようにして食事が提示される。そのため食物摂取量は、例えば入手可能な食物量などの過食の視覚的／社会的なきっかけに影響を受けない。対象は好きなだけ食べることを求められ、食事試験の期間中、対象は邪魔をされず、例えば読書、音楽鑑賞、電話での会話、またはビデオ鑑賞などのレジャー活動に従事することを禁止される。対象は充分に満腹になったときに、食事試験の部屋からの退室が許可される。もし１時間後でも満腹にならない場合、研究担当者によって食事が終了される。
【０３６６】
クリニック内での食欲評価、および毎日の食欲質問票（パートＢのみ）
クリニック内での食欲は、調査質問票により評価され（Ｆｌｉｎｔ，２０００）、対象は、視覚的アナログ尺度に答えを記録するよう指示される。対象は、クリニック滞在の１日目の間に、標準化された夕食の前後のおよそ３０分以内にクリニック内の食欲評価を完了させ、ならびに基準期間、治療期間および追跡期間の間に毎日の食欲評価票を完了させる。調査対象が他の試験参加者と検査結果を共有しないよう、注意を払う。本試験のパートＢに関して、クリニック内食欲評価と毎日の食欲評価票に使用される質問の詳細は、験マニュアルに記載され、（最終稿となったときに）質問は倫理委員会に提出され、パートＢの開始前にレビューされる。
【０３６７】
ＤＸＡによる体組成（パートＢのみ）
ＤＸＡは、臨床での全身骨密度測定に広く使用されている。合計の検査時間は短く（約６〜７分）、電離放射線量は、約０．１ｍＧｙで最小である。二重Ｘ線吸収測定法は除脂肪体重（ＬＢＭ）および体組成の推定値を提供する性能を有し、臨床研究の設計でＬＢＭ測定に使用された。ＬＢＭ測定用のＤＸＡに関する臨床的信頼性は、ＬＢＭの変化と身体機能の低下の間に有意な関連性を示す縦断的研究によって支持される（Ｇｏｏｄｐａｓｔｅｒ，２００６）。二重Ｘ線吸収測定法は、基準期間中に２回、治療ビジット終了時、および試験終了時に実施される。ＤＸＡスキャンのための対象の個人的な準備に関しては、試験全体を通じて、一定の水分補給を維持すること、食事を一定して摂取すること、カフェインを一定して摂取すること、一定した運動（スキャン前の２４時間、激しい運動をしない）、一定した被服、およびスキャン用のＤＸＡテーブル上に対象を一定して位置取りすること、を行う努力をしなければならない。またＤＸＡスキャンは、試験全体を通じて任意の所与の対象に対し、大まかに同じ時刻で取得されなければならない。
【０３６８】
ＭＲＩによる体組成（パートＢのみ）
磁気共鳴イメージングは、肝脂肪分画の測定において使用される。肝臓全体をカバーする軸位画像を取得するマルチエコー勾配−リコールエコーシーケンスが推奨される。エコー時間は、連続的なエコー時間（ＴＥ）で、脂肪と水がｏｕｔ−ｏｆ−ｐｈａｓｅとｉｎ−ｐｈａｓｅの間で交互となるようなものでなければならない。動きによるアーチファクトを最小化するために、これらは短時間の息止めで取得されなければならない。すべての取得には、３〜５分かかる。大腿部の脂肪分画のスキャンには、対象を注意深く位置取りすることが必要であり、そして成形発泡支持体とローカライザーを使用した固定が必要である。完全な大腿部のＭＲＩ取得は、最大で１０分かかる場合がある。対象は、午前中のスキャン前、１０〜１２時間の絶食が要求される場合がある。
【０３６９】
イベントの試験スケジュールおよび脚注
試験評価および手順は、以下の脚注とともに図２５、２６、および２７において、期間およびビジットごとに提示される。
１．非監視ＳＣ投与群の退院。しかし施設側は、対象を一晩滞在させ、翌日退院させる選択肢を有している。
２．ＩＶ投与群および安全性監視ＳＣ投与群の退院。
３．パートＡのＩＶコホートに関し、１日目にバイタルサインも測定されるものとし、ＡＥは、投与前、３０分の時点、治験薬点滴終了時点、ならびに点滴後１時間、２時間、４時間および８時間の時点でモニタリングされるものとする。パートＡのＳＣコホートに関し、１日目にバイタルサインも測定されるものとし、ＡＥは、投与前、注射後３０分、ならびに注射後１時間、２時間、４時間および８時間の時点でモニタリングされるものとする。パートＢの用量投与に関し、１日目にバイタルサインも測定されるものとし、ＡＥは、投与前、３０分の時点、ＩＶ投与に関しては治験薬点滴の終了時点、ならびにＩＶ投与とＳＣ投与に関してはそれぞれ点滴または注射後の１時間、２時間、４時間および８時間の時点でモニタリングされるものとする。投与の翌日、バイタルサインも測定されるものとし、ＡＥは、投与前、３０分の時点、ＩＶ投与に関しては治験薬点滴の終了時点、ならびにＩＶ投与とＳＣ投与に関してはそれぞれ点滴または注射後の１時間、２時間、および４時間の時点でモニタリングされるものとする。バイタルサインは、スクリーニングビジット時（パートＡおよびＢ）および１日目（パートＡのみ）で、起立性血圧の評価も含む。起立性血圧評価に関し、血圧および脈拍は、およそ１０分間の仰臥位、およそ１分間の起立状態、およびおよそ３分間の起立状態の後の対象で測定される。
４．少なくとも８時間空腹状態であった後に、採血される。投与日では、投与前サンプルのみが、空腹状態である必要がある。
５．体重は、排尿後（膀胱は空）、空腹状態で、靴を脱ぎ、下着のみを着用して、専用の較正済みスケールを使用して三重で測定されなければならない。
６．皮膚のひだの厚みは、以下の領域から三重で計測され、体脂肪分布の適切な説明を提供しなければならない：三頭筋、肩甲骨下、腸骨棘上、および大腿部。
７．１日目の薬剤濃度、ｓＬＥＰＲＲ濃度、およびＡＮＧＰＴＬ３濃度のためのサンプルの採取は、点滴前／注射前、点滴後／注射後±１５分、ならびに点滴後／注射後１時間±１５分、２時間±１５分、４時間±１５分、８時間±１５分、１２時間±１５分、および２４時間±１５分である。ｓＬＥＰＲおよびＡＮＧＰＴＬ３は、薬剤濃度が測定される時点のサブセットでのみ解析されてもよい。
８．ＤＮＡは、任意のビジットで収集できる。
９．一晩滞在させ、翌日に退院させる選択肢。パートＢについて、対象はさらに、１日目の１日前（−１日目）に入院し、一晩滞在する。１日目の手順（一晩の絶食、ＥＣＧ、ＰＫ測定および治験薬の投与の後に実施されなければならない評価を除く）、例えば薬剤スクリーニング、尿検査および尿妊娠検査は、−１日目に実施されてもよい。
１０．３０日目のビジットは、２９日目のビジットの正確に１日後に行わなければならない。
１１．８５日目のビジットは、８４日目のビジットの１日後に行わなければならない。
１２．パートＢでの治験薬の投与頻度は、パートＡで得られた結果に基づく。
１３．二つの基準画像（ＤＸＡおよびＭＲＩ）は、−２９日目〜−１４日目に取得される。ＤＸＡとＭＲＩの両方とも、同日または別の日に実施することができる。しかし１回目と２回目のＤＸＡ、および１回目と２回目のＭＲＩは、別の日に実施されなければならない。
１４．ビジット１８のＤＸＡとＭＲＩの手順は、ビジット１８の５日前まで、または５日後までに実施されてもよいが、ＤＸＡとＭＲＩは、治験薬投与後の２４時間の内に実施されてはならない。ビジット２４のＤＸＡとＭＲＩの手順は、ビジット２４の７日前までに実施されてもよい。
１５．パートＢに関し、実際のサンプル収集スケジュールは、パートＡからのＰＫデータの中間レビューに基づく。しかし反復投与であるため、最初の投与の後に高密度サンプリングが実施され、他の時点でトラフサンプリングが行われる。
１６．クリニック内での食欲評価は、標準化された夕食の前後に実施される。
１７．施設は、指定された各ビジット時に、毎日の食欲評価票の完了を対象が順守しているかチェックする。
１８．ＥＣＧは、投与前に実施される。
【０３７０】
安全性
図２５〜２７に従う時点で、対象が少なくとも１０分間座って休んだ後または仰臥位となった後に、体温、血圧、脈拍、および呼吸数を含むバイタルサインが収集される。
【０３７１】
完全な身体検査は、図２５〜２７に従う時点で実施される。対象の既往歴により示唆される、存在する可能性のある異常をすべて検討し、評価するために注意を払わなければならない。
【０３７２】
採血を必要とするビジット中、採血される前に心電図を実施しなければならない。標準的な１２誘導ＥＣＧが、図２５〜２７に従う時点で実施される。１２誘導ＥＣＧは、対象が少なくとも１０分間休んだ後、仰臥位で実施されなければならない。ＥＣＧは、治験責任医師により施設で解釈される。心拍数は、心室の拍数から記録され、ＰＲ、ＱＲＳ、ＲＲ、ＱＴｃＢおよびＱＴｃＦ間隔が記録される。臨床的に意義のある異常は、該当する場合はＡＥ／ＳＡＥとして文書化されなければならない。各ＥＣＧの出力図は、スクリーニング記録の出力図と比較して分析される。ＥＣＧストリップまたはレポートはソースとともに保持される。
【０３７３】
血液検査、化学検査、尿検査、薬物スクリーニング、および妊娠検査のサンプル（血清または尿）が分析される。血液サンプル収集の詳細な説明は、治験施設サイトに提供される検査室マニュアルにある。臨床検査のサンプルは、図２５〜２７に従ってビジット時に収集される。検査には以下が含まれる。血液化学検査：ナトリウム、カリウム、塩化物、重炭酸塩、カルシウム、グルコース、アルブミン、総血清タンパク質、クレアチニン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アルカリホスファターゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、総ビリルビン、総コレステロール（低密度リポタンパク質［ＬＤＬ］および高密度リポタンパク質［ＨＤＬ］）、トリグリセリド、尿酸、クレアチニンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ；血液検査：ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球（ＲＢＣ）、白血球（ＷＢＣ）、赤細胞指数（平均赤血球容積［ＭＣＶ］、平均赤血球ヘモグロビン量［ＭＣＨ］、平均赤血球ヘモグロビン濃度［ＭＣＨＣ］、赤血球分布幅［ＲＤＷ：ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｗｉｄｔｈ］、血小板数、好中球、リンパ球、単球、好塩基球、および好酸球を含む差分（＊フローサイトメトリーによる追加検査は、臨床的に意義のある異常が観察された場合に細胞亜群を評価するために実施されてもよい）；尿検査：色、糖、ＲＢＣ、透明性、血液ガラス質および他の円柱、ｐＨ、ビリルビン、細菌、比重、白血球エステラーゼ、上皮細胞、ケトン、亜硝酸塩、結晶、タンパク質、ＷＢＣ、酵母；他の臨床検査：レプチン、インスリン、および例えば甲状腺ホルモン（Ｔ３、Ｔ４、ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、テストステロン、エストラジオールなどの内分泌性ホルモン、ならびにＨｂＡ１ｃが、パートＡおよびパートＢにおいて評価される。パートＢについては、血清レプチンが、前スクリーニングビジットで測定され、４コホートのうちの一つに対する対象適格性が決定される。またレプチンは、図２５〜２７に記載されるように、試験全体を通じて測定される。測定される他のタンパク質には、アディポネクチンおよびコルチゾールが含まれる。
【０３７４】
臨床検査値異常、および臨床検査有害事象
臨床検査の値はすべて、治験責任医師または権限を有する被指名者によってレビューされなければならない。治療の開始後に発生した重大な異常検査結果は、その異常の性質および程度を確認するために反復されなければならない。必要に応じて、適切な補佐的調査を開始させなければならない。異常が解消されない場合、または異常が治験薬または治験薬投与と無関係な事象または状態により説明できない場合、医療／ディレクターに相談しなければならない。
【０３７５】
検査値異常の臨床上の重大性は、試験下の疾患の背景内において、治験責任医師により決定されなければならない。
【０３７６】
薬物濃度の測定およびサンプル
パートＡの間の血清中のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２濃度の測定用サンプルは、図２５に列記される時点で収集される。パートＢの間の血清中のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２濃度の測定用サンプルは、名目上、図２７に列記される時点で収集される。しかしながら、パートＡのデータの中間解析に基づいてパートＢのイベントスケジュールが確認された時点で、パートＢの間のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の測定用サンプルは、（場合により）改訂された時点の組み合わせで収集される。任意の未使用のサンプルが、探索的バイオマーカー研究に使用されてもよい。
【０３７７】
抗薬剤抗体の測定およびサンプル
パートＡおよびＢの抗薬剤抗体評価用のサンプルは、図２５および２７に列記される時点で収集される。任意の未使用のサンプルが、探索的バイオマーカー研究に使用されてもよい。
【０３７８】
薬理バイオマーカーおよび探索的バイオマーカーの手順
本試験において、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２がどのように食欲、食物摂取量、体重、および例えば可溶性ＬＥＰＲおよびＡＮＧＰＴＬ３などの循環マーカーならびに探索的バイオマーカーを調節し得るかを探索するための研究評価が実施される。
【０３７９】
可溶性ＬＥＰＲは、健康対象および疾患対象の循環中に存在する。可溶性ＬＥＰＲは、レプチン受容体の非シグナル伝達形態であり、レプチンに結合することができ、その生体利用効率を制御し得る。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、用量依存性、および時間依存性に、循環中のｓＬＥＰＲに結合し得る。可溶性ＬＥＰＲは、１日目のビジット、および図２５と２７に記載されるその後のビジットで投与前に測定される。ｓＬＥＰＲの変化は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与後の標的会合と飽和を反映し得る。
【０３８０】
ＡＮＧＰＴＬ３は、リポタンパク質リパーゼの内因性阻害剤であり、循環トリグリセリドを調節する。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、ＡＮＧＰＴＬ３を介してトリグリセリドを調節している可能性がある。そこで、ＡＮＧＰＴＬ３の循環濃度を、投与前血清、および投与後の様々な時点の治療後血清において測定し、食後変化を捕捉する。ＡＮＧＰＴＬ３に対するＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の用量依存性の効果は、図２５〜２７に概説されるように、パートＡおよびＢの両方で探索される。
【０３８１】
血清または血漿中で測定され得る他の探索的バイオマーカーとしては、体重減少中に調節されると考えられるレプチン、アディポネクチンおよび内分泌性ホルモンが挙げられる。マーカーは、図２５〜２７のバイオマーカー評価コレクションに従い測定される。
【０３８２】
有害反応および有害事象
注入反応の治療のための緊急時の機器および薬剤は、即時使用できるようにしなければならない。注入反応はすべてＡＥとして報告され、適切なグレード化スケールを使用して等級分けしなければならない。以下のＡＥのいずれかが観察された場合、注入を中断しなければならない：咳嗽、硬直／悪寒、発疹、掻痒症（痒み）、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ）、ミミズばれ、膨疹）、発汗（汗が出る）、低血圧、呼吸困難（息切れ）、嘔吐および顔面紅潮。
【０３８３】
反応は対症療法的に治療されなければならず、注入を再開してはならない。治験責任医師が、治療の医学的必要がある、または上述以外の注入中断の医学的必要があると感じた場合、臨床的判断を行い、典型的な臨床業務に従い適切な応答を提供しなければならない。
【０３８４】
注入は終了されなければならず、そして以下のＡＥのいずれかが発生した場合、再開してはならない：アナフィラキシー、喉頭／咽頭の浮腫、重度の気管支けいれん、胸痛、けいれん、重度の低血圧、他の神経症状（錯乱、意識喪失、知覚障害、麻痺、など）、治験責任医師の意見において、ＩＶ注入の終了を正当化する任意の他の症状または兆候。以下が観察された場合、アナフィラキシーを考慮する（Ｓａｍｐｓｏｎ，２００６）：皮膚、粘膜組織、またはその両方を含む病気の急性の発生（数分から数時間）（例えば、全身性の蕁麻疹、掻痒、または顔面紅潮、唇−舌−口蓋垂の膨張）および以下の少なくとも一つ：呼吸困難（例えば、呼吸困難（ｄｙｓｐｎｅａ）、苦しそうな呼吸−気管支けいれん、喘鳴、最大呼気流量の低下、低酸素血症）および血圧低下または末端器官の機能障害の関連症状（例えば低血圧［虚脱］、失神、失禁）。
【０３８５】
全身性反応の治療のための緊急時の機器および薬剤は、即時使用できるようにしなければならない。注入反応はすべてＡＥとして報告され、指示されるようにグレード化スケールを使用して等級分けしなければならない。治験薬注射（ＳＣ）後の急性全身反応は、臨床判断を行い、典型的な臨床診療に従って適切な応答を決定して治療されなければならない。
【０３８６】
局所注射部位反応は、ＡＥとして報告されなければならず、および食品医薬品局（ＦＤＡ）の２００７年９月のＧｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｇｒａｄｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ａｄｕｌｔ  ａｎｄ  Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ  Ｅｎｒｏｌｌｅｄ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ（試験規制バインダー中に提供される）に従い等級分けされなければならない。
【０３８７】
ＡＥは、治験薬を投与された対象における任意の有害な医学的事件であり、治験薬と因果関係を有している場合といない場合がある。したがって、ＡＥは、治験薬と関連するとみなされるかどうかに関わらず、治験薬の使用と時間的に関連する、任意の好ましくない、意図せざる兆候（臨床検査所見異常を含む）、症状、疾患である。また、ＡＥには、治験薬の使用と時間的に関連する、既存の状態の任意の悪化も含む（すなわち、頻度および／または強度における任意の臨床上の意義のある変化）。
【０３８８】
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、任意の用量でのあらゆる有害な医学的事件である：
・  例えば治験薬とは完全に無関係であるように見える場合であっても（例えば、対象が乗客の自動車事故）、すべての死亡を含む死亡の結果。
・  治験責任医師の観点から、対象が当該事象の時点で、ただちに死亡するリスクがある、生死にかかわる事象。これには、より重篤な形態で発生し、死をもたらした可能性のあるＡＥは含まれない。
・  入院またはすでに入院している期間の延長を必要とする。入院は、２４時間を超えて病院または救急室へ入ることと規定される。すでに入院している期間の延長は、当該事象に対して元々見込まれていた期間よりも長い病院滞在として規定され、または治験責任医師もしくは治療している医師により決定される新たなＡＥの発現を原因として延長された病院滞在として規定される。
・  持続的または重大な障害／不能が生じる（通常の生命機能を実施する能力の実質的な破壊）。
・  先天異常／出生異常である。
・  重要な医学的事象である−重要な医学的事象は、直ちに生命を脅かしたり、死亡や入院をもたらすことは無いが、対象を危険に曝す可能性があり、または上記の他の重篤な転帰の一つを予防するための介入を必要とする可能性がある（例えば、アレルギー性気管支けいれんのために、緊急治療室または自宅での集中治療；入院をもたらさない造血機能障害もしくは発作；または薬物依存症もしくは薬物乱用の発症）。
【０３８９】
これらの事象については、ＳＡＥ報告基準に従う必要がある。
【０３９０】
特に注目すべき有害事象（ＡＥＳＩ、重篤または非重篤）は、スポンサー製品またはプログラムに固有の科学的および医学的な懸念の一つであり、継続的なモニタリングと、治験責任医師による、スポンサーとの迅速なコミュニケーションが適切であり得る。そのような事象は、特徴解析を行い、理解するためのさらなる調査を正当化し得る。事象の性質に応じて、試験スポンサーと第三者（例えば規制当局）による迅速なコミュニケーションも正当化され得る。
【０３９１】
注入反応は、注入中または注入が完了した後の２時間以内に発生する任意の関連ＡＥとして規定される。注入反応はすべてＡＥとして報告され、等級分けされなければならない。
【０３９２】
治験責任医師（または被指名人）は、インフォームドコンセントに署名されたときから、試験終了までに発生したすべてのＡＥを記録する。臨床検査、バイタルサイン、またはＥＣＧの異常は、ＡＥとして記録されるものとする。治験薬との因果関係の評価に関わらず、すべてのＳＡＥが２４時間以内にスポンサー（または被指名人）に報告されなければならない。
【０３９３】
初回レポートの時点で入手できない情報は、フォローアップレポート中に記録されなければならない。例えば関連病院または医療記録、および診断検査レポートなどの証拠データも、要求される場合がある。対象が試験を完了させた後にＳＡＥについて治験責任医師が通知を受けた場合、以下が適用される：
【０３９４】
パートＡ：試験終了後の３０日以内に発生した、または対象が初期に試験終了した場合に最後の治験薬投与の１１２日以内に発生したＳＡＥは、スポンサーに報告される。治験責任医師は、当該事象が慢性的および／または安定したとみなされるまで、転帰に関する追跡情報を得るために、いかなる努力も行わなければならない。
【０３９５】
パートＢ：試験終了後の３０日以内に発生した、または対象が初期に試験終了した場合に最後の治験薬投与の１１２日以内に発生したＳＡＥは、スポンサーに報告される。治験責任医師は、当該事象が慢性的および／または安定したとみなされるまで、転帰に関する追跡情報を得るために、いかなる努力も行わなければならない。
【０３９６】
パートＡおよびＢ：試験／早期終了ビジットの終了から３０日を超える日に発生したＳＡＥは、致死性で、および治験責任医師により治験薬関連のＳＡＥであるとみなされるＳＡＥのみ、スポンサーに報告される。治験責任医師は、当該事象が慢性的および／または安定したとみなされるまで、治験薬関連ＳＡＥの転帰に関する追跡情報を得るために、いかなる努力も行わなければならない。
【０３９７】
結果
本試験の最初（パートＡ）の単回漸増投与の部分では、患者は、７つのコホートのうちの一つにおいて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２とプラセボに３：１で無作為化され、０．３ｍｇ／Ｋｇの静脈内（ＩＶ）〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶまでの投与を受け、および３００ｍｇの皮下（ＳＣ）〜６００ｍｇ  ＳＣの投与を受ける。５６人の患者が、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボを投与され、最短で用量投与の８５日後に、薬物動態（ＰＫ）データおよび安全性データが利用可能となる。盲検化データのレビューにより、投与された用量のいずれでも重篤または重大な有害事象は明らかにならず、死亡も報告されなかった。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２またはプラセボを用いた治療は、ＩＶ経路またはＳＣ経路を介して投与されたとき、全体的に忍容性良好であった。治療の中断または中止はなかった。頭痛は最も多く報告された治療下で発生した有害事象（ＴＥＡＥ）であった。安全性臨床検査パラメータ、バイタルサインまたはＥＣＧの基準から、臨床的に意義のある異常または用量依存性のシフトはなかった。
【０３９８】
実施例２１：小児患者における、先天性レプチン欠損症の治療のための抗ＬＥＰＲ抗体の臨床使用
簡潔に述べると、患者は、６カ月齢で過度な肥満、過食症、高インスリン血症、脂質異常症、グレード２の肝臓脂肪症、および低レプチン値（０．５５ｎｇ／ｍＬ）を呈した。患者は、ポリメラーゼ連鎖反応によりレプチン遺伝子欠失（ＬＥＰ−／−）と診断され、当該診断は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｓｔａｎｄａｒｄｓのもと、マルチプレックスライゲーション依存性プローブ増幅法により確認された。患者は、２４ヵ月齢でメトレレプチン治療を開始し、その後の６ヶ月間にわたり、１０ｋｇの体重減少（３７ｋｇから２７ｋｇ）で反応した。次いで、患者はすぐに体重増加が始まった。最近では、患者は入院を必要とする呼吸困難があるが、過度な肥満と、頻繁な感染の結果と推定される。医師は、メトレレプチン投与の１時間後のレプチン値を測定することにより、中和抗体を試験した。臨床検査から、レプチン値が０．１ｎｇ／ｍＬ未満であることが示され、患者はメトレレプチンに対する中和抗体を発生させたことが確認された。これらの所見は、患者の体重増加を説明し、メトレレプチンがもはやこの患者の状態の治療には有効な治療法ではないことを示す。
【０３９９】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２治療を使用して、先天性レプチン欠損症におけるＬＥＰＲシグナル伝達を回復させ、この状態の過食症、体重増加および代謝合併症を改善する。
【０４００】
追加的な小児患者の登録／除外基準
患者は、この例外的使用プログラムにおける登録適格となるためには、以下の基準を満たさなければならない：
１．ＬＥＰの機能喪失性バリアントおよび／または遺伝子欠失の遺伝子診断が確定した先天性レプチン欠損症。
２．成人に対しては４０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩ、および子供に対しては年齢および性別に対する９７パーセンタイルを超える体重として規定される重度の肥満。
３．レプチン値＜１．０ｎｇ／ｍＬ
４．以下に規定される、メトレレプチンに対する中和抗体の証拠：
・  治療担当医の判断において、メトレレプチンの有効性の消失であって、レプチン治療での体重増加に関する書面化された証拠を伴うもの。および
・  レプチン注射後１時間で、レプチン値＜１．０ｎｇ／ｍＬ、またはメトレレプチンのメーカーであるＡｅｇｅｒｉｏｎ社により実施される中和抗体活性アッセイがポジティブ。
【０４０１】
先天性レプチン欠損症の治療に関する進行中の臨床試験に適格である患者は除外される。
【０４０２】
用量選択
本明細書に記載される投与レジメンは、全体として忍容性良好であると予想される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶおよび３００と６００ｍｇ  ＳＣの単回投与として投与されたとき、健康な成人ボランティアで忍容性良好であった。３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ投与で、１０３５ｍｇ／Ｌの最大血清濃度が観察された。これは治療過程で小児患者において観察されることが予測される最大値のほぼ２倍である。さらに、定常状態での１週間の投与間隔で予測される濃度−時間の曲線下面積（ＡＵＣ）は、カニクイザルにおける３回の前臨床毒性試験から導かれた薬物動態モデルから推定される、定常状態で同じ投与間隔（無毒性量［ＮＯＡＥＬ］）でのＡＵＣよりも少なくとも８倍低いことが予測される。
【０４０３】
１００ｍｇ／Ｌ以上のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２血清濃度を迅速に達成するために、５ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）負荷投与量を選択した。このＩＶ負荷投与量を含めることにより、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の最大血清濃度（Ｃｍａｘ）の即時の評価が可能となる。２５０ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の週に１回の皮下（ＳＣ）維持投与によって、１００ｍｇ／Ｌ以上の血清中のトラフ濃度が維持される。このＳＣ投与レジメンは、血清中の標的トラフ濃度を最良に維持するために、ＩＶ負荷投与量を投与した３日後に開始される。
【０４０４】
治療および評価スケジュール
小児患者に対する初期治療および評価計画を表２０に概説する。治療および評価の推奨は、ＰＫデータおよびＰＤデータが利用可能になったときに、更新され、医師に伝達される。計画は可能な限り厳密に遵守し、逸脱はすべて記載されなければならない。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与前、または以下の評価のいずれかを実施する前に、記入済みのインフォームドコンセントを取得しなければならない。１日目に５ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ負荷投与が行われ、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、２５０ｍｇのＱ７日（週に１回）のＳＣとして投与される。最初のＳＣ投与は、４日目に投与される。
【０４０５】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、１時間にわたる点滴で、１日目にＩＶで１回投与される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の静脈内投与は、特定タイプのＩＶ点滴ポンプ（Ａｌａｒｉｓ社、Ｇｅｍｉｎｉ、ＰＣ−１、または類似物；Ｂａｘｔｅｒ社、Ｆｌｏ−Ｇａｒｄ  ６２０１または類似物；Ｈｏｓｐｉｒａ社、Ｌｉｆｅｃａｒｅ  ５０００または類似物）およびＩＶ点滴セット（Ｂａｘｔｅｒ社、製品コード２Ｃ６５７１または類似物；Ａｌａｒｉｓ社、製品番号２４３０−０５００または類似物；Ａｌａｒｉｓ社、製品番号１１５３２２６９または類似物；Ｈｏｓｐｉｒａ社、製品番号１４２５５−２８または類似物；Ｂａｘｔｅｒ社、製品コード２Ｈ６４８０または類似物；Ｈｏｓｐｉｒａ社、製品番号１２３３６−０５または類似物）を介して行わなければならない。インラインフィルターおよびＩＶ点滴ポンプは、正確にわずか１ｍＬ／分で送達できるようにしなければならない。
【０４０６】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２薬物濃度および抗Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体の測定、体重評価、代謝パラメータ評価、および試験スポンサーへのサンプル輸送のタイミングも、表２０に提示される。患者のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２値および体重測定値を使用して、２５日目の用量レベルと投与頻度の推奨を更新し、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与がこの患者において利益の兆候を示すかを確立する。抗体濃度の測定により、選択された用量および投与レジメンが最適であるか、および調整が必要かの評価が可能になる。薬剤濃度評価および抗薬剤抗体（ＡＤＡ）評価のために収集された、未使用の血清サンプルを使用して、予想外の有害事象の調査を行ってもよく、および研究目的に使用してもよく、最大で１５年間保存してもよい。
【０４０７】
患者の日常的および標準的な治療の一環として医師により取得される任意の他の疾患関連臨床パラメータは、安全性モニタリングの目的のために治験スポンサーに伝達されなければならない。これには、限定されないが、バイタルサインおよび臨床検査値（すなわち、肝臓酵素、血液、代謝パラメータを用いた血液化学検査など）が含まれる。そうした情報は、患者に対する次の投与に情報を与える可能性があり、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与が利益または損害の兆候を示しているかの決定にも役立ち得る。
【０４０８】
アナフィラキシーまたは過敏症の事象がある場合、可能な限り、当該事象からすぐに追加の血清サンプルを収集しなければならない。予定外のサンプル収集の場合、追加のラベルが提供される。
【０４０９】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２のＩＶ点滴後の注入反応、またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の注射後の全身反応の治療のための緊急用設備および医薬品を、施設で利用可能な状態にしなければならない。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与後の急性のＩＶ注入反応または全身性注射反応は、臨床判断を行い、典型的な臨床診療に従って適切な応答を決定して治療されなければならない。治療担当医が認識する全ての安全性関連所見および有害事象は、可能な限り早く治験スポンサーに報告されなければならず、および例外的使用の基準上、本治験製品の使用に関与する任意の当局要件に厳密に従わなければならない。そうした有害事象としては、死亡をもたらす、生命を脅かす、患者の入院を必要とする、もしくは既存の入院期間を延長させる、持続的もしくは重大な身体障害／不能を生じさせる、先天性異常／出生異常である、または重要な医学的事象（例えば、アレルギー性気管支けいれんのために緊急治療室または自宅での集中的な治療；入院は必要がない造血機能障害もしくはけいれん；または薬物依存症もしくは薬物乱用の発症）である、任意の有害な医学的事件が挙げられる。
【０４１０】
（表２０）治療、評価およびサンプル収集のスケジュール
2021532057.tif 000022
2021532057.tif 000023
†  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与、および投与前血清の収集は、ＰＫおよび体重のデータに関するスポンサーのレビューに基づく修正が推奨されない限り、週に１回継続する。
【０４１１】
ＩＶ点滴バッグにより投与される５ｍｇ／ｋｇ用量のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の調製
５ｍｇ／ｋｇ用量に対し、ＩＶバッグに添加される再構成済みＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の量を、以下の表２１に列記する。
【０４１２】
（表２１）５ｍｇ／ｋｇ用量に対し、１００ｍＬの生理食塩水含有ＩＶバッグに添加される５０ｍｇ／ｍＬのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の量
2021532057.tif 000024
ＩＰ＝治験製品
【０４１３】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の各バイアルは、注射用の４．９ｍＬの滅菌水で再構成される。
【０４１４】
再構成された時点で、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の各バイアルは、４．８ｍＬの引き出し体積を含有する。ＩＶ投与用に再構成された場合、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２のバイアル中の濃度は、５０ｍｇ／ｍＬである。再構成の工程は以下の通りである。
１．必要とされる数の凍結乾燥Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２のバイアルを、０．９％塩化ナトリウムの１００ｍＬ点滴バッグと共に取得する
２．硬く清浄な表面で作業しながら、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を調製する
３．キャップをバイアルから取り外し、アルコール綿でバイアルのトップ面を拭き取る。
４．投与に使用される各バイアルに対し、２１ゲージ針と１０．０ｍＬのポリプロピレンシリンジを取得する。針からキャップを取り外すことなく、２１ゲージの針を１０．０ｍＬのポリプロピレンシリンジに取り付ける。カバーをかぶせて、１０．０ｍＬのシリンジのプランジャーを５．５ｍＬの印まで引き戻す。これは、シリンジ内に空気を引き込むためである。
５．２１ゲージ針からキャップを取り外す。注射用滅菌水が入ったバイアルの上部ゴムに針を挿入する。プランジャーを押し下げて、すべての空気をバイアルに注入する。バイアルを一方の手で上下逆にして、針の先端が水に入っていることを確認する。注射用滅菌水を少なくとも５．５ｍＬ、シリンジ内に引き抜く。汚れた表面上に針を置かないこと。指で針に触れないこと。直接針に息を吹きかけないこと。
６．シリンジを反転させることにより、シリンジを上向かせ（針が上）、空気がシリンジから排出されるまでプランジャーを押し込む。少量の液体が出て、プランジャーが４．９ｍＬに達するまで、プランジャーを押し込み続ける。
７．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２バイアルを硬い表面に置き、針を上部に挿入する。注射用の４．９ｍＬの滅菌水を薬剤バイアルに加え、水の流れをバイアルの側面および粉末薬剤内に向けさせる。
８．シリンジからバイアル内にすべての水を押し出した後に、バイアルから針を取り外す。針とシリンジを、鋭利品用容器に捨てる。
９．すべての粉末が溶解するまで、まっすぐ立った状態でバイアルを穏やかに攪拌させる。
１０．バイアルを振らない。振ると、泡が生じる場合がある。
【０４１５】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２のＩＶ投与
抗体投与の工程は以下の通りである：
１．適切なサイズポリプロピレンシリンジおよび２１ゲージ針を使用して、表２１に従い適切な量のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を引き出すための標準的な無菌技術を使用する。汚れた表面上に針を置かないこと。指で針に触れないこと。直接針に息を吹きかけないこと。
２．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２溶液を１００ｍＬのＩＶバッグに添加する前に、ＩＶバッグに添加されるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の体積と等しい体積の０．９％塩化ナトリウムをＩＶバッグから引き抜く。
３．適切な量のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２をＩＶバッグに添加し、次いでＩＶバッグを１０回反転させ、薬剤と０．９％塩化ナトリウムをしっかりと混合させる。
４．調製されたＩＶバッグは、施設により承認されたラベリング要件に従い、ラベリングされる。ラベルには以下が含まれなければならない：患者のイニシャル、調製日／時間、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の０．９％塩化ナトリウム溶液バッグ中のｍｇ  １ｘ１、点滴バッグの全内容物を静脈内点滴し、１プロトコール当たり１時間かけて流すことの指示書、日付／時刻、および治療担当医の名前。
５．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、再構成から４時間以内に点滴されなければならない。
【０４１６】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の皮下用調製と投与
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の各バイアルは、注射用の１．４ｍＬの滅菌水で再構成される。再構成された時点で、各バイアルは、１．２ｍＬの引き出し体積を含有する。ＳＣ投与用に再構成された場合、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の濃度は、１５０ｍｇ／ｍＬである。投与には、二つのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のバイアルが必要となる。
１．硬く清浄な表面で作業しながら、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を調製する
２．キャップをバイアルから取り外し、アルコール綿でバイアルのトップ面を拭き取る。
３．針からキャップを取り外すことなく、２１ゲージの針を３．０ｍＬのポリプロピレンシリンジに取り付ける。カバーをかぶせて、シリンジのプランジャーを２．０ｍＬの印まで引き戻し、シリンジ内に空気を引き込む。２１ゲージ針からキャップを取り外す。注射用滅菌水が入ったバイアルの上部ゴムに針を挿入する。プランジャーを押し下げて、すべての空気をバイアルに注入する。バイアルを一方の手で上下逆にして、針の先端が水に入っていることを確認する。注射用滅菌水を最低で２．０ｍＬ、シリンジ内に引き抜く。汚れた表面上に針を置かないこと。指で針に触れないこと。直接針に息を吹きかけないこと。
４．シリンジを反転させることにより、シリンジを上向かせ（針が上）、空気がシリンジから排出されるまでプランジャーを押し込む。少量の液体が出て、プランジャーが１．４ｍＬの印に達するまで、プランジャーを押し込み続ける。
５．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２バイアルを硬い表面に置き、針を上部に挿入する。注射用の１．４ｍＬの滅菌水をＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２バイアルに加え、水の流れをバイアルの側面および粉末薬剤内に向けさせる。
６．シリンジからバイアル内にすべての水を押し出した後に、バイアルから針を取り外す。針とシリンジを、鋭利品用容器に捨てる。
７．すべての粉末が溶解するまで、まっすぐ立った状態でバイアルを穏やかに攪拌させる。
８．バイアルを振らない。振ると、泡が生じる場合がある。
【０４１７】
２５０ｍｇ用量のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のＳＣ投与
この用量は、２回のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の注射を必要とする。１回の注射は、０．６７ｍＬのＳＣ注射で、もう１回は、１．０ｍＬのＳＣ注射である。
１．１．０ｍＬのポリプロピレンプラスチックシリンジと３．０ｍＬのポリプロピレンシリンジを取得し、各シリンジに２１ゲージ針を取り付ける。
２．凍結乾燥されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を２バイアル取得する。
３．上述のように、凍結乾燥されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の各バイアルを、注射用滅菌水１．４ｍＬを用いて再構成する。
４．針カバーをかぶせて、１．０ｍＬのポリプロピレンシリンジのプランジャーを１．０ｍＬの印まで引き戻し、シリンジ内に空気を引き込む。
５．針キャップを取り外し、針をバイアルの上部ゴムに挿入する。
６．プランジャーを押し下げて、すべての空気をバイアルに注入する。
７．針をバイアル内に維持しながら、バイアルを一方の手で上下逆にして、針の先端が液体に入っていることを確認する。もう一方の手を使用してプランジャーを引き、最小で１．０ｍＬの薬剤をシリンジ内に引き抜く。キャップを針の上に戻す。キャップがされた針を取り外し、鋭利品用容器に入れる。
８．針のカバーを外さずに、最小で１．０ｍＬの薬剤が入った１．０ｍＬのポリプロピレンシリンジに、２７ゲージ、０．５インチの針を取り付ける。
９．針のキャップを取り外し、薬剤とともに２７ゲージ、０．５インチの針を上向かせる。キャップを針の上に戻す。
１０．準備されたＳＣシリンジは、０．６７ｍＬ＝１００ｍｇ／０．６７ｍＬである。
１１．準備されたＳＣシリンジは、施設の標準的な操作手順による要件に従いラベリングされる。
１２．針カバーをかぶせて、３．０ｍＬのポリプロピレンシリンジのプランジャーを１．５ｍＬの印まで引き戻し、シリンジ内に空気を引き込む。
１３．針キャップを取り外し、針をバイアルの上部ゴムに挿入する。
１４．プランジャーを押し下げて、すべての空気をバイアルに注入する。
１５．針をバイアル内に維持しながら、バイアルを一方の手で上下逆にして、針の先端が液体に入っていることを確認する。もう一方の手を使用してプランジャーを引き、最小で１．２ｍＬの薬剤をシリンジ内に引き抜く。キャップを針の上に戻す。キャップがされた針を取り外し、鋭利品用容器に入れる。
１６．針のカバーを外さずに、最小で１．２ｍＬの薬剤が入った１．０ｍＬのポリプロピレンシリンジに、２７ゲージ、０．５インチの針を取り付ける。
１７．針のキャップを取り外し、薬剤とともに２７ゲージ、０．５インチの針を上向かせる。キャップを針の上に戻す。
１８．準備されたＳＣシリンジは、１．０ｍＬ＝１５０ｍｇ／１．０ｍＬである。
１９．準備されたＳＣシリンジは、施設の標準的な操作手順による要件に従いラベリングされる。
２０．Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、再構成から４時間以内に送達されなければならない。
【０４１８】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の永続的な中断
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与は、以下の事象があったときに永続的に中止されることが推奨される。
・  Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２に関連したとみなされる重篤または重度のアレルギー反応
・  特定のタイプの肝臓機能障害（例えば、Ｈｙ’ｓ  ｌａｗを満たす（［Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｊｕｒｙ：Ｐｒｅｍａｒｋｅｔｉｎｇ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ＦＤＡ  ２００９］）。
・  妊娠の証拠
・  患者／法的代表者が、同意を撤回する
・  スポンサーによりＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の最適な用量および最適な投与レジメンとみなされる期間（治療担当医とスポンサーにより検討される）の後に患者が臨床的利益（すなわち体重減少）を示さない。
【０４１９】
一時的なＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の中断
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与は、以下の事象の場合に一時的に中断することが推奨される。
・  好中球数が、１．０×１０３／μＬ以下
・  長期的に、ＡＬＴ／ＡＳＴ値が正常上限（ＵＬＮ）の３倍よりも高く、そして総ビリルビンが、ＵＬＮの２倍を超える、または単離ＡＳＴ／ＡＬＴがＵＬＮの５倍を超える。
・  外科手術
・  入院
【０４２０】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の一時的中断につながる状態が解消された後、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与を再開してもよい。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の一時的な中断、および／またはＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与再開の決定は、スポンサー代表者と検討しなければならない。
治療担当医はいつでもＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与を一時的に中断してもよく、状況の切迫性が即時の行動を必要とする場合、および患者の最善の利益であると決定される場合には、スポンサー代表者との協議さえなく、一時的に中断してもよい。ただし、スポンサー代表者に、可能な限り早く連絡を取らなければならない。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与の再開は、治療担当医とスポンサー代表者の間で検討し、合意されなければならない。
【０４２１】
要約すると、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、先天性レプチン欠損症を有する患者においてＬＥＰＲシグナル伝達を回復させ、当該患者において、この状態の過食症、体重増加および／もしくは代謝合併症を改善または逆転させる。
【０４２２】
実施例２２：小児患者における部分型リポジストロフィーの治療に対する抗ＬＥＰＲ抗体の臨床使用
１１歳で、女性患者は、肝脾腫大症と高トリグリセリド（＞５００ｍｇ／ｄＬ）ならびに四肢に脂肪の欠如を呈した。彼女は抗ＧＡＤ（グルタミン酸デカルボキシラーゼ）抗体を有していることが判明し、市販のＬＭＮＡ遺伝子解析が陰性であった。リポジストロフィーに関連した肝疾患の治療におけるメトレレプチンの有効性を評価する試験のための評価を行う際にさらなる特徴が特定され、手の拘縮、脊柱側彎症および副腎皮質兆候発現の欠落といった非定型の特徴が含まれた。彼女の基準時のレプチン値は、３．２ｎｇ／ｄＬであった。
【０４２３】
メトレレプチン治療は臨床研究プロトコール（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１６７９１９７）の一環として１３歳で開始され、高トリグリセリドおよび重度の肝臓脂肪症が治療された。彼女は重篤な有害事象が発生することなく、１２カ月間、メトレレプチンを継続させた。彼女の代謝パラメータはメトレレプチン後にわずかな改善を示したが、彼女の肝生検は改善を示していた。彼女は別の治験プロトコール（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２６５４９７７）の一環としてメトレレプチンを継続した。しかし治療の１７か月目の間に、患者は倦怠感、喉の渇き、目のかすみ、そして多飲症を報告し、１カ月で５ポンド（約２．３キロ）減少した。臨床検査結果は、アニオンギャップ陽性およびケトン陽性を伴い、著しい高血糖症と高脂血症を示した。抗ＧＡＤ６５（グルタミン酸デカルボキシラーゼの６５ｋＤａアイソフォーム）値は、５．３９ｎｍｏｌ／Ｌ（２カ月後に反復したところ、抗ＧＡＤ６５：８．３８ｎｍｏｌ／Ｌ）であり、レプチン値は注射後１時間で下降し、検出不可能となった。中和活性を有するメトレレプチン抗体の存在が最終的に確認された。このレプチン値の低さは、継続中のメトレレプチン治療に対する抗メトレレプチン抗体形成を伴う免疫原性の交差反応、脂肪組織の継続的な消失の可能性、またはレプチン産生を抑制する機序の結果である可能性が高かった。
【０４２４】
メトレレプチンならびに内因性レプチンに対する中和活性は、約６カ月後に陽性と確認された。この間に、グルコースおよび脂質の制御は大幅に悪化し、トリグリセリドは一貫して＞２，０００ｍｇ／ｄＬであった。彼女は、基礎＋ボーラスレジメンを含む高用量のインスリン療法を維持しており、インスリンポンプに移行した。彼女は、メトホルミンも開始させた。糖尿病性ケトアシドーシス、膵炎、または膵炎の予防のために複数回の入院を必要とした。
【０４２５】
次いで患者はフェノフィブラートを開始し、その後、脂質管理の悪化（トリグリセリド＞２，０００ｍｇ／ｄＬ）によってピオグリタゾンを開始させた。メトレレプチンの使用中止の１カ月後、ＬＦＴは、正常よりも１０倍高くまで大幅に上昇した。肝生検は、門脈と門脈周辺の斑状炎症を示し、プラズマ細胞と境界面の損傷が含まれ、自己免疫性の肝炎と一致していた。自己免疫性肝炎を管理するために、彼女は、３カ月間プレドニゾンで治療され、肝機能の異常が解消された。プレドニゾンの中断中、および中断後の両方で、糖尿病性ケトアシドーシスと関連付けられた高トリグリセリド血症（８，０００ｍｇ／ｄＬに達する）が原因で、患者は複数回の急性膵炎の症状を患った。上記の代謝合併症または膵炎によって、患者は定期的に入院した。
【０４２６】
患者は、１ｍｇ／日でセトメラノチド（ｓｅｔｍｅｌａｎｏｔｉｄｅ）（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０３２６２６１０）を開始し、用量は、トリグリセリドが５００ｍｇ／ｄｌ未満に低下するまで漸増された。セトメラノチドはこの患者に体重減少をもたらさなかった。空腹スケールにわずかな減少があったが、効果は安定的ではなかった。治療は、糖制御と高トリグリセリド血症を改善できなかった。１日の総インスリン用量のわずかな減少は、ＨｂＡ１ｃ値が高いままであったため、臨床的に意義があるとはみなされなかった。セトメラノチドは、内臓脂肪をわずかに減少させたが、肝臓脂肪含量に対する効果は示さなかった。
【０４２７】
この患者の高いトリグリセリド値（＞５００ｍｇ／ｄＬ、および＞２，０００ｍｇ／ｄＬに達する）は、膵炎再発を予防するために血漿交換療法を必要とする。彼女は、インスリンアスパルト、インスリングラルギンおよびメトホルミンに加えて、１日１０ｍｇのエンパグリフロジンでも治療される。
【０４２８】
理由：
この臨床試験プロトコールの目的は、治験薬（ＩＰ）のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を、必要な適格性基準を満たし、および以下に概要される以下の基準を満たしている患者に提供することである。
・  患者は、重篤または生命を脅かす疾患を有しており、そのために拡張アクセスプロトコールが許可される。
・  提唱される薬剤の作用機序に基づいて、臨床的に意義のある利益が予想され得る有効性の充分な証拠。
・  当該疾患または状態を治療するための同等の、または充分な代替療法がない。
・  この患者にＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与することによって生じる不合理なリスクがあることを示唆する、この特定の患者に固有のものはない。
【０４２９】
中和活性を有する抗メトレレプチン抗体が、メトレレプチンで治療された全身型リポジストロフィーの患者において特定されている。これらの中和抗体の因果関係はあまり解析されていないが、内因性レプチン作用の阻害および／またはメタリプチンの有効性消失を含み得る（Ｃｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔｒｅｌｅｐｔｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ｏｒ  ｌｉｐｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ．Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１６；８５（１）：１３７−１４９）。重度の感染症および／または代謝管理の悪化が報告されている。進行性の代謝の悪化、ならびに１型糖尿病の発症が、抗メトレレプチン中和抗体の発生と同時にこの患者に記録され、これらは持続している。疾患が自然に進行したのか、または抗体の出現がなんらかの役割を果たしたのかは不明である。いずれにしても、患者のリポジストロフィーは適切に治療することができない。
【０４３０】
この個別患者の拡張アクセスプロトコールの目的は、再発性の膵炎発作をもたらす難治性高トリグリセリド血症を含む、この患者のリポジストロフィーに起因する重度の代謝合併症の治療に使える可能性があるとしてＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を提供することである。さらに、この患者におけるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の安全性および有効性が評価される。治療期間はこの１人の患者における反応性の程度に基づく。この患者は、高トリグリセリド血症と再発性膵炎を伴う重篤な悪性のリポジストロフィー患者であり、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２が治療利益をもたらし、この重度の代謝異常を改善し得るかを評価する目的がある。
【０４３１】
主要エンドポイント：
・  空腹時トリグリセリドにおける、基準時から２４週目までの変化率
・  ２４週目で継続的な血漿交換を必要とすることなく、＜５００ｍｇ／ｄＬの空腹時トリグリセリドを実現。
・  治療下で発生した有害事象
【０４３２】
副次的エンドポイント：
・  空腹時トリグリセリドにおける、基準時から１２週目までの変化率
・  １２週目で継続的な血漿交換を必要とすることなく、＜５００ｍｇ／ｄＬの空腹時トリグリセリドを実現。
・  経時的な空腹スコアにおける基準からの変化
・  経時的な空腹時グルコースおよび糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）における基準からの変化
・  経時的な膵炎による入院の発生
・  経時的な平均インスリン要求用量における基準からの変化
・  経時的な空腹時総コレステロール、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−ＣおよびＶＬＤＬ−Ｃを含む、他の空腹時の脂質パラメータにおける基準からの変化
・  可能であれば、この患者における経時的なＤＥＸＡおよび肝脂肪パラメータにおける基準からの変化率
・  経時的な血清中の総Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２濃度
・  経時的なＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２に対する抗薬剤抗体（ＡＤＡ）の存在
【０４３３】
プロトコール設計
プロトコールは、２週間のスクリーニング期間と、３つの非盲検治療期間を含む：治療期間１（第１〜１２週目）、治療期間２（第１３−２４週目）、および治療延長期間（第２５〜５２週目）。スクリーニング期間中、患者は、適格性に関して評価され、少なくとも３つの別の日に空腹質問票を完了させて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療を行う前にリポジストロフィーに関連する、および脂肪組織の不存在または欠落に起因する内因性レプチンの不存在または欠損に関連する空腹症状の理解を強化することを指示される。この状態が稀である場合、スクリーニング中に空腹スコアを獲得することで、重要な患者固有の詳細の収集が可能となり、この障害における空腹症状のより良い理解が可能となる。
【０４３４】
治療期間１の間、患者は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の初期投与レジメンを受ける。治療期間１の終了時（１２週目）、有効性の評価（ＴＧ低下）とＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２薬物レベル（ＰＫ）の評価が実施され、治療期間２のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与レジメンが決定される。治療期間２の用量レベルおよび投与頻度は、治療期間１の値を超えない。２４週目で、有効性（ＴＧ  低下）とＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２薬物レベル（ＰＫ）の評価が実施され、治療延長期間に継続させる患者の適格性が決定される。
【０４３５】
したがって、この患者は、図１９に示されるように逐次プロトコールを経て進行する。
【０４３６】
空腹時トリグリセリド（ＴＧ）値および血漿交換の要求は、治療効果が達成されたかを評価するために使用される主要基準である。この患者が、２４週目まで＜５００ｍｇ／ｄＬの空腹時ＴＧ値という必要とされる治療標的反応を呈さない場合、彼女はこのプロトコールから脱落する。
【０４３７】
高トリグリセリド血症の同時管理については、この患者は、治療担当医の判断において必要に応じて血漿交換治療を継続する資格を有する。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２治療に対する治療応答が達成されたかを判断する空腹時ＴＧ値は、最も直近の血漿交換治療の少なくとも１週間後の時点で測定されなければならない。
【０４３８】
用量選択
実施例１５〜１９に記載された前臨床試験において、ＰＤ効果は広範な範囲のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２暴露と関連しており、一方で、効果の持続性は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の標的介在クリアランス（ＴＭＣ：ｔａｒｇｅｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）が飽和した投与条件下で観察された。リポジストロフィーのマウスモデル（上述）において、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の単回投与によって、グルコース濃度の正常化と体重の減少がもたらされた。これらの効果は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の血清中濃度が４ｍｇ／Ｌを超えるときに明らかであったが、特にＴＭＣ経路を飽和させた濃度で、さらに持続的であった。上述のサルの試験において、３０ｍｇ／Ｌを超える定常状態濃度で、持続的体重の効果（体重減少、または対照動物と比較した体重増加の低下）が観察された。しかしＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の濃度が、サルにおいてＴＭＣを飽和させるために必要とされる濃度である１００ｍｇ／Ｌを超えたときに、全体的にさらに高い効果がみられた。レプチン結合受容体は広く発現されているが、標的（シグナル伝達）受容体は、中枢神経系に限定されていることを考慮すると、前臨床ＰＫ／ＰＤデータは、末梢ＬＥＰＲへの結合に関連するＴＭＣを飽和させて、脳において適切な暴露を実現させることの必要性を反映していると予測される。さらに、ＴＭＣを飽和させるために必要な濃度、および持続的なＰＤ効果をもたらすために必要な濃度における種間の差異は、末梢標的量における差異の結果であり得る。
【０４３９】
実施例２０に記載されるヒト臨床研究では、ＴＭＣ経路の飽和は、濃度対時間プロファイルに基づき、１００ｍｇ／Ｌを超える血清濃度で明白であった。このＦＩＨ試験のデータを利用して集団ＰＫモデルを確立した。このモデルは健康なボランティアに単回投与として投与したときのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の関連薬物動態特性を捕捉するものである。このモデルを採用して、異なる投与レジメンの下で予想される濃度プロファイルをシミュレートした。健康なボランティアにおいて観察されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のＰＫ特性が、この患者に適するという仮定を用いた。
【０４４０】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、滅菌済みの単回使用での２０ｍＬのガラスバイアル中、ＩＶ投与用またはＳＣ投与用のいずれかで凍結乾燥粉末として供給される。各バイアルは２６５ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を含有し、ＩＶ投与およびＳＣ投与のために、注射用滅菌水で再構成される。
【０４４１】
１００ｍｇ／Ｌ以上のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２血清濃度を迅速に達成するために、５ｍｇ／ｋｇの静脈内（ＩＶ）負荷投与量を選択した。このＩＶ負荷投与量を含めることにより、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の最大血清濃度（Ｃｍａｘ）の即時の評価も可能となる。３００ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の週に１回の皮下（ＳＣ）維持投与によって、１００ｍｇ／Ｌ以上の血清中のトラフ濃度が維持されることが予測される。このＳＣ投与レジメンはＩＶ負荷投与量を投与した４日後に開始され、血清中の標的トラフ濃度を最良に維持することが予測される。患者が臨床的に必要な血漿交換法を受けた日は、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与は、血漿交換が完了した後に行わなければならない。
【０４４２】
健康な対象５６人における、進行中の二部試験の一部のデータに基づき（実施例２０）、記載される投与レジメンは、全体的に忍容性良好であることが予想される。Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶならびに３００および６００ｍｇ  ＳＣの単回投与として投与された実施例２０において、健康な成人ボランティアで忍容性良好であった。１０３５ｍｇ／Ｌの血清最大濃度が、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ投与で観察された。これは、治験の過程でこの患者において達成されると予測される最大暴露の６倍超である。さらに、定常状態での１週間の投与間隔で予測される濃度−時間の曲線下面積（ＡＵＣ）は、カニクイザルにおける３回の前臨床毒性試験から導かれた薬物動態モデルから推定される、定常状態で同じ投与間隔（無毒性量［ＮＯＡＥＬ］）でのＡＵＣよりもほぼ２７倍低いことが予測される。
【０４４３】
５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ負荷量の初回投与と、３００ｍｇ  ＳＣで週１回の維持投与は、忍容性であることが予測され、末梢受容体を飽和させるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の血清濃度を迅速に達成し、持続的な薬物動態効果を提供するために選択された。より低い用量レベル、またはより少ない頻度の投与が、同じくらい有効である可能性もある。したがって、用量レベルと投与頻度は、予定された有効性および薬剤レベルの中間評価後に下向きに調整されてもよい。加えて、血漿交換によって循環中からＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を含む抗体が取り除かれ得るため、血漿交換の後に投与量を調整し、有効なＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２レベルを確保することが必要となる場合がある。患者が血漿交換を受けた日は、追加の３００ｍｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の投与が、標的薬剤濃度の達成に必要となる場合がある。通常の最大用量（血漿交換により変化する可能性は考慮しない）は、週に１回、３００ｍｇ  ＳＣを超えてはならない。
【０４４４】
有効性および薬剤レベルの評価
有効性と薬剤レベルの中間評価は、プロトコールの１２週後および２４週後に実施され、選択された投薬レジメンが、予測した薬剤レベル、ＰＫプロファイル、および脂質パラメータに対する効果を達成したかを評価する。用量レベルと投与頻度は、有効性および薬剤レベルの評価後に必要に応じて調整されてもよい。
【０４４５】
データレビュー委員会は、（１）経験豊富なリポジストロフィーの専門家、（２）患者の小児集中治療室の医師、（３）彼女の治療に関与する超専門医の１人（小児ＧＩまたは肝臓病学のいずれか）、および（４）前臨床試験および臨床試験における、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の暴露−反応の関連性に精通したスポンサーの代表者、を含む。
【０４４６】
患者の参加期間
合計プロトコール期間は、スクリーニング期間を含めて、およそ５４週間と予想される。このプロトコールにおける患者の参加は、以下の期間からなる：スクリーニング期間、治療期間１［１２週間となる予定］、治療期間２［１２週間となる予定］、次いで患者が的確であれば、長期の治療延長期間［２８週間］。安全性と忍容性が良好で実質的な代謝改善が治療延長期間に実証された場合、患者には、継続治療を可能とするための将来的な別個の延長プロトコールに登録する機会が与えられることが見込まれる。この将来的な延長プロトコールは、このプロトコールの期間を超えて患者を行う前に、適用される規制当局に提出され、承認される。
【０４４７】
治験の終了は、最後の患者の最後に来院したときと規定される。患者は、いつでも理由を問わず、影響を受けることなく、このプロトコールから離脱する権利を有する。治験責任医師も、臨床上の安全性に関する懸念または有効性の欠如により、いつでも当該患者を離脱させることができる。
【０４４８】
プロトコールの中断
第一治験責任医師またはスポンサーの意見において、充分に合理的な原因がある場合には、時期を早めて本プロトコールの実施が終了する場合がある。終了させる当事者は、治験責任医師またはスポンサーのいずれかに対し、プロトコールの終了の理由を書面化して通知する。
【０４４９】
終了の正当な理由となる状況としては以下が挙げられるが、これらに限定されない。
・  患者に対する予想外、重大、または許容できないリスクの判定
・  プロトコール要件の遵守が不充分
・  完了データおよび／または評価可能なデータが不充分
・  妊娠の証拠
・  薬剤に関連したとみなされる重篤または重度のアレルギー反応
・  例えばウイルス性のＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎；既存または急性の肝疾患；または観察された損傷をもたらし得る別の薬剤など、説明できる他の理由が見つからない重度の肝損傷または機能障害  この患者の肝臓の損傷は、平均基準値の３倍を超えるＡＬＴまたはＡＳＴ、および基準値の２倍を超える総ビリルビン（または国際標準比（ＩＮＲ：ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ  ｒａｔｉｏ）＞１．５）と規定される。
・  患者が、同意を取り下げる
・  薬剤開発を修正、延期、または中止する計画
・  １２週目のデータレビューで、充分な利益が観察されないというデータレビュー委員会の意見
・  ２４週目のデータレビューで、血漿交換管理を伴うことなく、一定して＜５００ｍｇ／ｄＬの空腹時ＴＧ値を患者が維持することができないというデータレビュー委員会の意見
【０４５０】
データレビュー委員会の全会一致の意見が、血漿交換管理を伴うことなく、一定して＜５００ｍｇ／ｄＬのＴＧ値を患者が維持することはできないが、顕著な臨床上の利益を受けている、という意見の場合には、治療ビジットの５２週目の終了まで投与を継続してもよい。
【０４５１】
治療コンプライアンスの評価
薬剤の安全性、忍容性、および薬物動態を評価するために、患者が指示したとおりにＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を投与されることが重要である。全ての使用されたＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、プロトコール順守を評価するために収集される。
【０４５２】
最初の２つのプロトコール期間（初回投与期間、および非盲検積極的治療期間）の間、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、経験豊富な医療提供者によって患者に投与される。非盲検延長期間の間、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、臨床施設で投与されてもよく、またはそれぞれ患者により自己投与／指定人物により投与されてもよい。患者が、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の自己投与を選択するか、または指定人物によるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与を選択する場合、資格を有する臨床施設の人物によりＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与のトレーニングを実施しなければならず、および最初の自己投与は、同人物により観察されなければならない。さらに、自己投与の開始前、または例えば親もしくは介護者などの指定人物による投与の開始前に、患者／指定人物に対し、薬剤投与日誌が提供される。日誌は、薬剤を投与するごとに完了させなければならない。患者および／または彼女の介護者は、コンプライアンスを監視するために日誌を維持することが要求される。さらに投与時間が患者日誌に記録される。患者が薬剤の全投与量を投与されていない場合、投与された量が記録される。投与量を調整した理由を、原本およびＣＲＦに記録しなければならない。
【０４５３】
さらに、ＳＯＡに従い血液サンプルを収集して、血清中のＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２のトラフ濃度および抗Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２抗体を測定する。
【０４５４】
過去の、および併用される治療ならびに手順／許可される医薬品
併用薬が潜在的で強力な安全性上の懸念をもたらす可能性が高い場合を除き、このプロトコールの全体的な目的は、この希少な状態にある患者が、本プロトコールに参加できるようにすることである。したがって患者は、慢性的な併用薬（例えば以下に記載される）の使用を許可されながら、本プロトコールに参加することができる。併用薬としては以下が挙げられる：
・  １型糖尿病を治療するためのインスリン製剤；
・  インスリン抵抗性を治療するためのメトホルミン；
・  欠損症を治療するためのビタミンＤ；
・  チロキシンまたは他の甲状腺サプリメント；
・  ＬＤ患者に普遍的に使用される他の医薬品としては以下が挙げられる：内分泌治療（例えばビタミンおよびカルシウムサプリメント）；および他の医薬品（例えばカルニチン、コエンザイムＱ１０、ビタミン、便秘防止薬、抗アレルギー薬）；
・  疼痛コントロールに対し、必要とされる麻酔薬もしくはケタミン／リドカインの点滴、パッチまたは錠剤を併用するニューロンチン；
・  気分高揚のためのイフェクサー；
・  低閾値薬剤（すなわち、抗痙攣剤、ジゴキシン、クマディンなど）を除き、継続投与されており、治療担当医により必須であると見なされる場合には、他の医薬品が許可される場合がある
・  患者の治療担当医の決定により、血漿交換を継続してもよい
【０４５５】
上述の治療と、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の相互作用に関するデータは現在のところ存在しない。患者と彼女の介護者は、患者が受けるいずれか医薬品で発生する可能性がある、薬剤相互作用による副作用の可能性について警告を受けなければならない。
【０４５６】
この患者は、プロトコール期間中に任意の他の医薬品を摂取しなければならなくなった場合には、スクリーニングビジットから最後のプロトコールビジットの間の各ビジット時に彼女は直ちにプロトコール担当者に情報を与えなければならないこと、およびその特定医薬品と適応症について、治験責任医師と検討しなければならないことを再認識される。本プロトコールの過程で摂取されるすべての併用薬は、原本に記録されなければならない。
【０４５７】
禁忌の医薬品および物質および併用手順
治療担当医により必須であるとみなされない限り、プロトコール期間の有効性評価に影響を与え得る医薬品は禁止される。例えば、新たな脂質降下治療の追加、または新たな糖尿病薬の任意の追加などが禁止される。
【０４５８】
食欲抑制剤、または非常に稀な副作用として食欲不振を伴う剤は、本プロトコールの期間、禁止される。
【０４５９】
血漿交換および有害事象を治療するために使用される他の治療をはじめとする、本プロトコールの期間中に実施される併用手順は、ＣＲＦに記録されるものとする。
【０４６０】
評価とスケジュール
本プロトコール中に実施される評価スケジュール（ＳＯＡ：Ｓｃｈｅｄｕｌｅ  ｏｆ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）を図２０（Ａ−Ｂ）に示す。
【０４６１】
この１人の患者のプロトコールで必要な手順および評価は、１８歳未満の子供の参加者における疼痛と不安の軽減に対する配慮が含まれる２００８年の指針書「Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ」に準拠する「リスク無しまたは最小リスク」（「最小リスクを上回るわずかなリスク増加」に分類され得るＤＥＸＡを除く）に分類される。
【０４６２】
インフォームドコンセントを提供することで、患者はスクリーニング期間に入る。スクリーニング期間中、患者は、適格性に関して評価され、少なくとも３つの別の日に空腹質問票を完了させて、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた治療を行う前に、リポジストロフィーに関連する空腹感の理解を強化することを指示される。スクリーニング中、必要に応じて、新たな医療チャートレビューを含む、任意の追加的な既往歴を取得することも重要である。
【０４６３】
この患者に関するデモグラフィックデータを含む、追加の既往歴は、スクリーニング期間中に取得される。原本およびＣＲＦに記録されるデータには、患者の性別、人種、誕生日、および併用薬の使用が含まれる。
【０４６４】
最近の既往歴は、１日目の薬剤の最初の投与の前に取得され、継続されたプロトコールの適格性と、最終の登録／除外基準の順守が評価される。この最近の既往歴には、スクリーニング時からの変化に関するレビュー、ならびに患者の最近の医薬品の使用に関するレビューが含まれ、過去のビジットから何等かの変化が発生しているか、否かが評価される。
【０４６５】
末梢リンパ節、頭部、眼（結膜を含む）、耳、鼻、口および中咽頭、首、心臓、肺、腹部、背部を含む骨格筋、四肢および神経系を含む完全な身体検査が実施される。この患者はＴａｎｎｅｒのステージＶに到達していないため、Ｔａｎｎｅｒ病期診断でも評価される。この評価は、ＳＯＡに従い実施される。
【０４６６】
治験責任医師により臨床的に重大と特定されたすべての身体検査所見における基準からの変化は、適切なＣＲＦにＡＥとして記録されなければならない。
【０４６７】
身長（ｃｍ）は、壁に取り付けられたスタジオメーターを使用して、ＳＯＡに従い、靴を脱いで測定される。
【０４６８】
併用薬のレビューは、スクリーニング期間中、および各プロトコールビジット時に行われる。患者により摂取された薬剤はすべて原本に記録される。
【０４６９】
治験責任医師は、併用される抗糖尿病薬および脂質医薬品の用量は、インスリン抵抗性および高トリグリセリド血症が改善されるにつれ、治療開始時に調整の必要があり得ることを認識する。患者は、併用薬の調整期間中、注意深くモニタリングされる。低血糖症を回避するために、週に１回の頻度でインスリン用量が下方修正される必要が（高用量インスリンで治療されている患者については特に）あり得るため、治療の最初の数週間、インスリン治療中の患者は緊密にモニタリングされなければならない。同様に、高トリグリセリド血症のために脂質治療中であり、血漿交換の必要があるとみなされる患者の治療中、各追跡ビジットで、治験責任医師は、脂質医薬品の用量調整の必要性について評価しなければならない。何らかの理由で薬剤治療が中断された場合、併用薬のさらなる調整が必要とされる場合がある。例えば、膵炎の潜在的リスクを軽減させるための脂質降下薬が必要とされ得る。
【０４７０】
バイタルサインは、ＳＯＡに従い、測定される度に少なくとも５分間の休息の後に座位で取得される。血圧（ＢＰ；ｍｍＨｇ）および心拍数（ＨＲ；ｂｐｍ）は、プロトコール全体を通じて、同じ技法を使用して実施される（手動または自動）。すべてのＢＰおよびＨＲの測定値は、少なくとも５分間の休息の後に座位で取得されるものとする。すべての測定値は、およそ２分間おいて、三重で取得される。可能であれば、プロトコール全体を通じて同じ技法（自動または手動）を使用して、利き手ではない腕でＢＰが取得される。ＢＰまたはＨＲの大幅な増加に対しては、反復測定およびより頻繁なモニタリングを実施することができる。
【０４７１】
トラフ血圧測定を行うために、患者は、クリニックでバイタルサインが測定されるプロトコール日にはプロトコール医薬品を摂取しないように指示されるものとするが、クリニックで当該医薬品を摂取する。これは、治療期間１のビジット中には特に重要である。治療期間１のビジットでは、ＳＯＡに従い、クリニックでの投与後期間の経過中、より集中的に血圧が測定される。
【０４７２】
体温（℃）と呼吸数（呼吸／分）は、少なくとも５分間の休息後に座位で取得される。
【０４７３】
仰臥位で少なくとも１０分間の休息期間の後に、単一１２誘導心電図が実施される。
【０４７４】
臨床安全性に関する臨床検査は、現地の検査室で実施されるものとし、患者は、８時間、絶食するものとする。安全性に関する臨床検査は、投与前に結果が出るものとする。
【０４７５】
臨床的に重大な臨床検査の全ての異常は、反復検査により追跡され、治験責任医師の判断に従ってさらに調査される。
【０４７６】
肝機能試験の異常は、ＦＤＡガイダンス（２００９）に従って評価される。血液および臨床化学サンプルは、空腹状態で採取される。血小板数を含む完全血球数および標準的指標が取得される。
・  化学的検査：ナトリウム、カリウム、塩化物、ＣＯ２、アルブミン、総タンパク質、グルコース、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、尿酸、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン、直接ビリルビン、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、カルシウムおよびリン。
・  尿検査：尿試験紙検査または尿検査機械による、ｐＨ、グルコース、タンパク質、ケトン、ビリルビン、血液、ウロビリノーゲン、比重、亜硝酸塩、および白血球。尿の顕微鏡検査は、尿試験紙で陽性の所見により、さらなる検査が必要とされる場合に実施される。
・  凝固プロファイル：プロトロンビン時間（ＰＴ）または国際標準比（ＩＮＲ）、および活性部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）とも呼称される部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）。
【０４７７】
プロトコール期間中、注射部位は注意深く検査され、評価され、およびスコア化される。注射部位の評価には、紅斑、浮腫および硬結の領域の特定ならびに測定、ならびに局所的な疼痛、圧痛、および痒みの存在の特定ならびに測定が含まれる。
【０４７８】
予定外の評価も、臨床状態により必要な場合には記録され得る。
【０４７９】
抗薬剤抗体（ＡＤＡ）測定
抗薬剤抗体の測定用の血液サンプルは、投与前、およびその後にＳＯＡで特定される時点で採取される。この患者がＡＤＡ陽性を示す場合、解消されるまで追跡される。
【０４８０】
患者質問票
患者質問票は、慎重な訓練を行った後に、患者および／または介護者により回答される。
【０４８１】
空腹スコア
空腹は、ＳＯＡに従う特定のプロトコールビジット時に依頼される、３パートの質問票、ならびに２つの包括的質問のセットを使用して評価される。空腹は、０〜１０の範囲の数値評定スコアを使用して評価される；０  ＝  全く空腹ではない、１０  ＝  起こり得る限り最も空腹。すべての毎日の空腹質問票のスコアは、Ｌｉｋｅｒｔ様スケールに基づき、患者に自身の空腹をスコア化するよう依頼することにより評価される。当該スケールでは、０は全く空腹ではなく、１０は、起こり得る限り最も空腹である。空腹質問票のスコアは、患者の朝食前に毎日記録される。空腹質問票は、スクリーニング中の３つの別個の日に、およびクリニックビジットで午前中の投与前に、完了されなければならない。患者は、朝食前（空腹時）に空腹スコアを記録する。包括的空腹質問票：二つの包括的質問は、評価スケジュールに従って、特定のプロトコールビジット時に尋ねられる。
【０４８２】
ＳＦ−３６  健康質問票
ＳＦ−３６は、３６個の質問のみを含む、多目的の略式健康調査である。これは、機能的健康と満足できる生活状態のスコアならびに心理学を基にした肉体的および精神的な健康に関する集約尺度の８スケールプロファイルと、選択を基にした健康効用指数を生じさせる。特定の年齢、疾患、または治療群を標的とする尺度とは対照的な、包括的尺度である。したがって、ＳＦ−３６は、疾患の相対的負荷量を比較する、一般集団と特定集団の調査に有用であることが証明されており、および広範な様々な治療によりもたらされる健康利益の識別に有用であることが証明されている。
【０４８３】
患者の健康質問票−９（ＰＨＱ−９）
ＰＨＱ−９は、患者の健康質問票の９項目の鬱病スケールである。ＰＨＱ−９は、鬱病の診断ならびに治療選択および治療モニタリングにおいて臨床医を補助するツールである。患者がＰＨＱ−９質問票を完了した後、プロトコール担当者によりスコア化される。
【０４８４】
プロトコール中、個別患者のＰＨＱ−９スコアが１０以上となったときはいつでも、患者はＭＨＰに紹介されなければならない。ＰＨＱ−９は、ＳＯＡに従って実施される。
【０４８５】
コロンビア自殺重症度評価尺度（Ｃ−ＳＳＲＳ：Ｃｏｌｕｍｂｉａ−Ｓｕｉｃｉｄｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）
Ｃ−ＳＳＲＳは、自殺試行を予測するだけでなく、証拠ベースの念慮および行動項目の全範囲の評価にも使用されるツールであり、次のステップ（例えば、メンタルヘルス専門家（ＭＨＰ）への紹介など）への基準も含む。ＳＯＡに従い本プロトコールに利用されるＣ−ＳＳＲＳには二つのバージョンがある。（１）尺度の基準／スクリーニングバージョンは、患者の生涯および所定期間中の自殺傾向を評価する基準フォームとスクリーニングフォームを組み合わせる。このバージョンは、データ収集目的の患者生涯の自殺傾向、ならびに登録／除外基準に基づく適格性を評価することができる。（２）最終ビジット以降の尺度は、患者の最終ビジット以降の自殺傾向を評価する。このバージョンは、少なくとも一つの初回Ｃ−ＳＳＲＳ評価を完了した患者を評価することが意図され、その後のビジットごとに使用されなければならない。Ｃ−ＳＳＲＳの「最終ビジット以降」バージョンは、Ｃ−ＳＳＲＳが行われた最後のときから、患者／参加者が有し得る何らかの自殺思考や行動について尋ねるものである。
【０４８６】
患者がタイプ４または５の自殺念慮を有するとき、またはなんらかの自殺行動を有するときはプロトコール中いつでも、患者はＭＨＰに紹介されなければならない。
【０４８７】
患者の適格性確認が判定されたスクリーニング期間の後、患者は治療期間１に入る。この段階では、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２の第一の用量は、プロトコールの１日目にＩＶ投与される。第一の皮下（ＳＣ）用量の投与は、プロトコールの５日目に行われる。患者は、用量投与のために、毎週クリニックに戻る。臨床検査および検査の評価は、図２０に記載されるとおりである。
【０４８８】
このプロトコール中に実施される安全性、臨床検査、ＰＫおよびＡＤＡの評価に関する詳細な説明は、以下のセクションで提供される。
【０４８９】
患者は、スクリーニングビジットから始まるすべてのビジットの前日に一晩絶食する必要がある。彼女は、各クリニックビジットの午前中に一口の水とともに通常の医薬品を摂取することが許可される。
【０４９０】
評価は、スクリーニング期間中の複数の日にわたり行われ得る。３つの異なる日に収集された空腹症状に対する充分な基準データを取得するために、スクリーニング期間は、最低３日間、最大２週間とするべきである。
【０４９１】
この患者およびプロトコール担当者に、クリニックビジット数の柔軟性を提供するため、クリニックビジットの実際のスケジュールは、ビジットのタイミングに柔軟性をもたせてもよい。治療期間１および治療期間２の間、目的は、±３日以内にビジットを発生させることである。収集されたデータは、ビジットウィンドウ外であっても、エンドポイント解析に含められる。
【０４９２】
有害事象のモニタリングは、プロトコール全体を通して実施される。有害事象は、スクリーニングから最終プロトコールのビジットまでＣＲＦに記録される。薬物投与開始後に発生する有害事象は、治験薬投与後に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）とみなされる。ＳＡＥは、最終プロトコールのビジットまで記録される。すべての有害事象が、解消されるまで、または患者の安定状態もしくは慢性状態もしくは併発疾患に起因すると明白に判定されるまで、モニタリングされなければならない。
【０４９３】
有害事象：定義、文書および報告
有害事象（ＡＥ）は、薬剤が関連したとみなされるか否かにかかわらず、ヒトにおいて薬剤の使用と関連したすべての有害な医学的事件である。有害事象（有害な体験とも呼ばれる）は、因果関係に関する判断を行うことなく、時間的に薬剤の使用に関連したすべての好ましくない、および意図されない兆候（例えば、臨床検査所見異常）、症状または疾患であり得る。ＡＥは、薬剤の任意の使用（例えば、適応外使用、別の薬剤との併用使用）から生じ得る、および任意の投与経路、製剤、またはオーバードーズを含む用量から生じ得る。
【０４９４】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、ヒト初回投与試験において、忍容性良好であった。薬剤関連ＴＥＡＥ（有害事象が、治験責任医師によって薬剤に関連している可能性がある、またはおそらく関連していると評価された）が報告された。今までにＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を用いた臨床経験が非常に限定されているため、他の知られていない副作用が存在する可能性がある。臨床上の緊急時にはいつでも、プロトコール参加者はＰＩ（または援護臨床医（ｃｏｖｅｒｉｎｇ  ｃｌｉｎｉｃｉａｎ））を利用することができる。この利用可能性と、治験責任医師が緊急時にどのように到達するかの両方が、プロトコール参加者に、口頭および書面で明白に伝達される。すべてのプロトコール介入が、無料で提供される。
【０４９５】
ＡＥまたは疑わしい有害反応は、治験責任医師またはスポンサーのいずれかの所見において以下の転帰のいずれかを生じさせる場合、重篤（ＳＡＥ）とみなされる。
・  死亡。
・  生命を脅かす。生命を脅かすとは、反応が発生したとき、その反応により患者がただちに死亡するリスクがあったことを意味する。すなわち、より重篤な形態で発生した場合に、仮定として死をもたらし得る反応は含まれない。
・  入院またはすでに入院している期間の延長。プロトコール期間中に発生することが予定されているが、プロトコールに入る前に計画された入院および／または外科手術は、当該病気または疾患が、当該患者が本プロトコールに登録される前から存在した場合にはＡＥとはみなされないが、ただし、プロトコール中に予期せぬ様式で悪化しないものとする（例えば、計画よりも早く手術が実施された）。
・  通常の生命機能を実施する能力の持続的もしくは重大な無能または実質的な破壊。
・  重要な医学的事象。重要な医学的事象は、死をもたらす、生命に脅やかす、または入院を必要とすることは無いが、適切な医学的判断に基づき、患者を危機に曝し、およびＳＡＥの定義に列記される転帰のうちの一つを予防するために医学的介入または外科的介入を必要とし得る場合には、ＳＡＥとみなされ得る事象である。そうした医学的事象の例としては、救急治療室または自宅での集中的な治療を必要とするアレルギー性気管支けいれん、入院をもたらさない造血機能障害もしくはけいれん；または薬物依存もしくは薬物乱用の発現が挙げられる。
【０４９６】
有害事象のモニタリングおよび観察期間
各患者は、ＡＥの発現に対し、注意深くモニタリングされなければならない。この情報は、誘導的ではない質問の形態（例えば、「あなたはどのように感じているか？」など）で取得されなければならず、および各検査中に検出された兆候および症状、プロトコール担当者による観察、ならびに患者からの自発的な報告から取得されなければならない。
【０４９７】
ＡＥは、スクリーニングから、最後のプロトコールビジットまで、原本に記録される。ＳＡＥおよび死亡は、ＩＣＦが署名されたときから、最後のプロトコールビジットまで継続して、ＳＡＥ  ＣＲＦに記録される。すべてのＡＥが、解消されるまで、または患者の安定状態もしくは慢性状態もしくは併発疾患に起因すると明白に判定されるまで、モニタリングされなければならない。
【０４９８】
患者により自発的に報告された、および／またはプロトコール担当者からの自由回答式の質問に対する反応において自発的に報告された、または観察、身体検査もしくは他の診断手順により明らかとなったすべてのＡＥ（重篤および非重篤）は、適切なＣＲＦに記録される。臨床検査評価における、または他の臨床所見における臨床的に関連のある悪化はすべて、ＡＥとみなされ、適切なＣＲＦに記録されなければならない。可能であれば、共通して根底にある病的状態を示唆する兆候および症状は、一つの包括的事象として記録されるものとする。
【０４９９】
プロトコール完了後のいずれかのときに発生する、治験責任医師が薬剤と関連するとみなすＳＡＥはすべて、スポンサーに報告されなければならない。
【０５００】
プロトコールの仮定で発生するすべてのＳＡＥは、治験責任医師が当該ＳＡＥに気が付いた時点から２４時間以内に、治験責任医師により医療モニターに報告されなければならない。すべてのＳＡＥは、薬剤に因果的に関連するとみなされるか否かを報告されなければならない。ＳＡＥフォームは完了され、収集された情報は、患者番号、当該事象の物語的な説明（関連既往歴、併用薬、および関連臨床検査結果および診断検査結果を含み得る）、ならびに当該事象の重症性および薬剤との関連性に関する治験責任医師の評価を含む。ＳＡＥに関する追跡情報は、スポンサーまたはその指定者によりリクエストされる場合がある。
【０５０１】
すべてのＳＡＥ文書が、スポンサーに伝達されるものとする。
【０５０２】
患者は、施設クリニックビジットの間の治療期間中、ならびにプロトコール担当者により患者に対して為される定期的な電話の間、注意深くモニタリングされる。ＡＥにより患者が治療から離脱した場合、患者は、解消まで当該事象をモニタリングするために、および追加のプロトコールに規定された安全性評価を取得するために、最終プロトコールビジット／早期終了ビジットを完了させるよう推奨される。
【０５０３】
上述のように、患者が１０よりも高いＰＨＱ−９スコアを有する場合、なんらかの自殺行動がある場合、またはＣ−ＳＳＲＳのタイプ４もしくは５のなんらかの自殺念慮がある場合、ＭＨＰを紹介されるものとする。ＭＨＰへの紹介は、治験責任医師の意見において、患者の安全に必要である場合にも行われるものとする。患者の精神障害が精神療法および／または薬剤療法で適切に治療され得る場合、ＭＨＰの裁量で、患者は試験において継続されるものとする。
【０５０４】
薬剤の使用に関連した、重篤で予想外の有害な薬剤反応がある場合、適切な規制当局、倫理委員会（ＥＣ）、およびすべての参加治験責任医師に、速達ベースで通知される。ヒト患者に対するリスクを伴うすべての予想外の重篤で有害な薬剤反応について施設内治験審査委員会（ＩＲＢ）／独立倫理委員会（ＩＥＣ）に要求された場合、ＩＲＢ／ＩＥＣへの迅速な通知は治験責任医師の責任である。予想外の事象とは、ＩＢに報告されていない事象である。
【０５０５】
重篤なＡＥと非重篤なＡＥの両方について、治験責任医師は、当該事象の強度と、当該事象とＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与の関連性の両方を判定しなければならない。治験責任医師により臨床的に重大であるとみなされる注射部位反応のみが、ＡＥとして記録される。
【０５０６】
臨床的に重大な治療下で発生した臨床検査の異常、注射部位反応、および潜在的な全身反応を含むすべてのＡＥの強度が、ＣＴＣＡＥバージョン４．０３に従い等級分けされる。ＣＴＣＡＥグレードは、ＡＥの重症度と呼称され、グレード１（軽度ＡＥ）、グレード２（中程度ＡＥ）、グレード３（重篤なＡＥ）およびグレード４（生命を脅かすＡＥまたは障害をもたらすＡＥ）、そしてグレード５（ＡＥに関連する死亡）にわたる。
【０５０７】
ＣＴＣＡＥによってリスト化されない有害事象は、以下のように等級分けされる：
・  軽度：不快感が認められたが、通常の日常活動の乱れはない。
・  中程度：日常活動を低下させる、または影響を与えるには充分な不快感。
・  重度：働くことができない、または通常の日常業務を行うことができない。
・  生命を脅かす：生命に対する即時的な脅威を表す。
【０５０８】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与に対する関連性は、以下の基準に従い治験責任医師によって判定される：
・  なし：事象と、薬剤投与の間には関連性がない。事象は、例えば併用薬または患者の臨床状態などの他の病因に関連する。
・  可能性は低い：現在の既存知識では、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２と関連性がある可能性は低い、または観察された事象とのなんらかの合理的な関連をＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２が有さないような時間的な関連性である。
・  可能性がある：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与からの妥当な時間的シーケンスに続く反応、および疑わしい薬剤に対する公知の反応パターンに続く反応。反応は、患者の臨床状態または患者に投与された他の治療方法によって生じた可能性がある。
・  推定される：Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２投与からの妥当な時間的シーケンスに続く反応、および薬剤に対する公知の反応パターンに続く反応。反応は、患者の臨床状態または患者に投与された他の治療方法の公知の特徴により合理的に説明することができない。
【０５０９】
安全性解析の目的に対し、可能性がある、または推定されると分類されるすべてのＡＥは、治療に関連した事象とみなされる。
【０５１０】
管理要件
臨床試験実施基準（Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）
プロトコールは、臨床試験実施基準（ＧＣＰ）に対する国際調和会議（ＩＣＨ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ）、および適切な規制当局の要件に従って実施される。治験責任医師は、プロトコールおよびＩＢに記載される薬剤の適切な使用について充分に熟知している。必須臨床文書（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ）は、プロトコールの妥当性、および収集されたデータの完全性を実証するために維持される。マスターファイルは、プロトコールの開始時に確立され、プロトコール期間中、維持され、適切な規制に従い保持されるものとする。
【０５１１】
倫理規定
プロトコールは、ヘルシンキ宣言に基づく倫理原則に従い実施される。ＩＲＢ／ＩＥＣは、患者の権利、安全性、および福祉を保護するために、すべての適切なプロトコール文書をレビューする。プロトコールは、ＩＲＢ／ＩＥＣの承認が取得された施設でのみ実施される。プロトコール、ＩＢ、インフォームドコンセント、広告（該当する場合）、患者に与えられる書面化された情報（日誌カードを含む）、安全性のアップデート、年次進捗報告書、およびこれら文書の任意の改訂は、治験責任医師によってＩＲＢ／ＩＥＣに提供される。
【０５１２】
Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２は、患者において部分型リポジストロフィー（ＰＬＤ）を治療し、ならびにＰＬＤと関連する肝脾腫大症、高トリグリセリド血症、および患者の四肢の脂肪の欠落を改善する。
【０５１３】
実施例２３および２４：先天性レプチン欠損症および先天性ＬＥＰＲ欠損症のマウスモデルにおけるアゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体の効果
血糖値、体重、食物摂取量、および体組成（脂肪量、除脂肪量、および骨量）に対する本発明の特異的アゴニスト性抗ＬＥＰＲ抗体であるＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２の効果が、機能喪失性変異による先天性レプチン欠損症および先天性レプチン受容体欠損症のマウスモデルにおいて判定された。マウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列の代わりにヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列から構成されるレプチン受容体を発現し、レプチンを発現しない遺伝子操作Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスが、先天性レプチン欠損症のマウスモデルとして利用された。先天性ＬＥＰＲ欠損症のモデルは、マウスＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列の代わりに、Ａ４０９Ｅミスセンス変異を伴うヒトＬＥＰＲ細胞外ドメイン配列から構成されるレプチン受容体を発現する遺伝子操作ＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスである。
【０５１４】
実施例２３：先天性レプチン欠損症のマウスモデルにおけるＨ４Ｈ１７４３１９Ｐ２の効果
０日目に、１６匹の２７週〜３２週齢のメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスが体重に基づいて２群に階層化された。各群に１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体、または１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２が、週に１回、０、７、１４、２１、２８および３５日目に皮下注射を介して投与された。７匹の２７〜３２週齢のメスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ対照マウスに、１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体が、週に１回、０、７、１４、２１、２８および３５日目に皮下注射を介して投与された。−５日目および３５日目に、体組成がμＣＴにより定量された。試験期間中、各動物に対し、食物摂取量、体重および血糖値が測定された。図２１は、各処置群に対する血糖値、体重および累積食物摂取量をまとめたものである。図２２は、抗体処置の５日前、および３５日後のμＣＴにより定量された各抗体処置群における動物の脂肪量、除脂肪量および骨量をまとめたものである。すべての結果は、平均±ＳＥＭとして表される。
【０５１５】
図２１Ａに示されるように、０日目の抗体投与前は、レプチン欠損症のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、対照Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して高血糖症であった。１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたレプチン欠損症マウスは、抗体処置の２日後から、測定されたその後の他の時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン欠損症マウスと比較して血糖値の有意な低下を呈した。１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を投与されたレプチン欠損症Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、計測されたすべての時点で高血糖症を維持した。
【０５１６】
図２１Ｂに示されるように、０日目の抗体投与前は、レプチン欠損症のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、対照Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して有意に重かった。１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたレプチン欠損症マウスは、抗体処置の１５日後から、その後の他の測定時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン欠損症マウスと比較して体重の有意な減少を呈した。１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を投与されたレプチン欠損症マウスＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−は、すべての計測時点で、基準時からの体重の減少を示さなかった。
【０５１７】
図２１Ｃに示されるように、レプチン欠損症のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の２日後、およびその後の他の測定時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン欠損症マウスと比較して、有意な累積食物摂取量の減少を呈した。
【０５１８】
図２２に示されるように、−５日目の抗体投与前、レプチン欠損症のＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して、有意な脂肪量の増加、除脂肪量の低下、および骨量の低下を示した。３５日目、１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたレプチン欠損症Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕ  Ｌｅｐ−／−マウスは、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン欠損症マウスと比較して有意な脂肪量の低下、ならびに除脂肪量の増加、および骨量の増加を呈した。
【０５１９】
実施例２４
０日目に、２０匹の２４週〜２８週齢のオスのＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスを、体重に基づいて２群に階層化した。各群に、５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体、または５ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２を、週に１回、０、７、１４、２１、２８、３５日目および４２日目に皮下注射を介して投与した。８匹の２４〜２８週齢のオスのＬｅｐｒｈｕ／ｈｕ対照マウスに、５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体が、週に１回、０、７、１４、２１、２８、３５および４２日目に皮下注射を介して投与された。−１日目および４１日目に、体組成がμＣＴにより定量された。試験期間中、各動物に対し、食物摂取量、体重および血糖値が測定された。図２３は、各処置群に対する血糖値、体重および累積食物摂取量をまとめたものである。図２４は、抗体処置の−１日前、および４１日後のμＣＴにより定量された各抗体処置群における動物の脂肪量、除脂肪量および骨量をまとめたものである。すべての結果は、平均±ＳＥＭとして表される。
【０５２０】
図２３Ａに示されるように、０日目の抗体投与前は、レプチン受容体欠損症のＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、対照Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して高血糖症であった。５ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、抗体処置の７日後から、その後の他の測定時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスと比較して血糖値の有意な低下を呈した。５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を投与されたレプチン受容体欠損症マウスのＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、すべての計測時点で高血糖症を維持した。
【０５２１】
図２３Ｂに示されるように、０日目の抗体投与前は、レプチン受容体欠損症のＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、対照Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して有意に重かった。５ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、抗体処置の１３日後から、その後の他の測定時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン受容体欠損症マウスと比較して体重の有意な減少を呈した。５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を投与されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅは、すべての計測時点で、基準時からの体重の減少を示さなかった。
【０５２２】
図２３Ｃに示されるように、ＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅは、Ｈ４Ｈ１７３１９Ｐ２処置の７日後、およびその後の他の測定時点で、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたレプチン欠損症マウスと比較して、累積食物摂取量の有意な減少を呈した。
【０５２３】
図２４に示されるように、−１日目の抗体投与前、ＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、Ｌｅｐｒｈｕ／ｈｕマウスと比較して、有意な脂肪症の増加、除脂肪量の低下、および骨量の低下を示した。４１日目、５ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１７３１９Ｐ２で処置されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスは、アイソタイプ対照（ＩｇＧ４Ｐ）抗体を注射されたＬｅｐｒｈｕＡ４０９Ｅ／ｈｕＡ４０９Ｅマウスと比較して有意な脂肪量の低下、ならびに除脂肪量の増加、および骨量の増加を呈した。
【０５２４】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態による範囲に限定されるものではない。実際に、本発明の種々の修飾は、本発明に記載されるものに加えて、上記の記述および関連する図から、当業者に明らかとなるであろう。そのような変更は、添付される特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【図１】
2021532057.tif 000025
【図２】
2021532057.tif 000026
【図３】
2021532057.tif 000027
【図４】
2021532057.tif 000028
【図５】
2021532057.tif 000029
【図６】
2021532057.tif 000030
【図７】
2021532057.tif 000031
【図８】
2021532057.tif 000032
【図９Ａ】
2021532057.tif 000033
【図９Ｂ】
2021532057.tif 000034
【図９Ｃ】
2021532057.tif 000035
【図１０Ａ】
2021532057.tif 000036
【図１０Ｂ】
2021532057.tif 000037
【図１０Ｃ】
2021532057.tif 000038
【図１０Ｄ】
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【図１１】
2021532057.tif 000040
【図１２Ａ】
2021532057.tif 000041
【図１２Ｂ】
2021532057.tif 000042
【図１２Ｃ】
2021532057.tif 000043
【図１３Ａ】
2021532057.tif 000044
【図１３Ｂ】
2021532057.tif 000045
【図１３Ｃ】
2021532057.tif 000046
【図１３Ｄ】
2021532057.tif 000047
【図１４Ａ】
2021532057.tif 000048
【図１４Ｂ】
2021532057.tif 000049
【図１４Ｃ】
2021532057.tif 000050
【図１４Ｄ】
2021532057.tif 000051
【図１４Ｅ】
2021532057.tif 000052
【図１４Ｆ】
2021532057.tif 000053
【図１４Ｇ】
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【図１５Ａ】
2021532057.tif 000055
【図１５Ｂ】
2021532057.tif 000056
【図１５Ｃ】
2021532057.tif 000057
【図１６Ａ】
2021532057.tif 000058
【図１７−１】
2021532057.tif 000059
【図１７−２】
2021532057.tif 000060
【図１７−３】
2021532057.tif 000061
【図１８Ａ】
2021532057.tif 000062
【図１８Ｂ】
2021532057.tif 000063
【図１８Ｃ】
2021532057.tif 000064
【図１８Ｄ】
2021532057.tif 000065
【図１９】
2021532057.tif 000066
【図２０Ａ−１】
2021532057.tif 000067
【図２０Ａ−２】
2021532057.tif 000068
【図２０Ｂ−１】
2021532057.tif 000069
【図２０Ｂ−２】
2021532057.tif 000070
【図２１】
2021532057.tif 000071
【図２２】
2021532057.tif 000072
【図２３】
2021532057.tif 000073
【図２４】
2021532057.tif 000074
【図２５−１】
2021532057.tif 000075
【図２５−２】
2021532057.tif 000076
【図２６−１】
2021532057.tif 000077
【図２６−２】
2021532057.tif 000078
【図２６−３】
2021532057.tif 000079
【図２７−１】
2021532057.tif 000080
【図２７−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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