(57)【要約】本開示は、コンジュゲーションリンカー、切断可能なリンカーおよび自己脱離性リンカーを含有する、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体）の切断可能なコンジュゲート（例えば、粒子をベースとするまたは抗体をベースとするコンジュゲート）に関する。本開示はまた、切断可能なコンジュゲートの調製方法、有効な免疫応答を刺激するためのその使用、およびがんの処置のためのその使用に関する。
2021503005.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ）
［式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、コンジュゲーション部分であり、
ＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である］
の化合物。
【請求項２】
Ｄが、式（Ｄ−１）：
【化１０２】
2021503005.tif 000124
［式中、
Ｒ１Ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルであり、
Ｒ２は、ＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ３５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｐおよびｑは、独立して、０、１、２、３または４であり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載化合物。
【請求項３】
Ｄが式（Ｄ−２）：
【化１０３】
2021503005.tif 000125
［式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載化合物。
【請求項４】
Ｄが式（Ｄ−２ａ）または（Ｄ−２ｂ）：
【化１０４】
2021503005.tif 000126
［式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが−ＮＨ−である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
ｎが４〜１５の整数である、請求項３から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ｎが、４、５、６または７である、請求項３から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項３に記載の化合物。
【請求項９】
ｎが、１１、１２、１３または１４である、請求項４または８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、Ｃ３〜Ｃ６アルキルである、請求項３から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１がｎ−ブチルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１が−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａである、請求項３から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１が、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂである、請求項３から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１が、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃである、請求項３から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
ｑが０である、請求項３から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
ｑが１であり、Ｒ３がＣ１〜Ｃ８アルキルである、請求項３から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ４ａおよびＲ４ｂがそれぞれ、Ｈである、請求項３から１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｄが式（Ｄ−３）：
【化１０５】
2021503005.tif 000127
［式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載化合物。
【請求項１９】
Ｄが、式（Ｄ−３ａ）または（Ｄ−３ｂ）：
【化１０６】
2021503005.tif 000128
［式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｘが、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｘが、−ＮＨ−である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ０が、１〜２個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ０が、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキル、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡまたは−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍが、０、１、２または３であり、ｚが、１または２であり、ＲＡが、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキレンおよびハロゲンからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである、請求項１８から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ０が、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルである、請求項１８から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ０が、−（ＣＨ２）ｍＲＡである、請求項１８から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
ｍが２である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
ｍが１である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ０が、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡである、請求項１８から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
ｚが１である、請求項２８に記載の化合物。
【請求項３０】
ＲＡが、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
ＲＡが、独立して、メチル、メチレンおよびハロゲンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
ＲＡが、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３３】
ＲＡが、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロプロピルである、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
ｍが０であり、ＲＡが、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロヘキシルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ０が、
【化１０７】
2021503005.tif 000129
からなる群から選択される、請求項１８または１９に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｄが式（Ｄ−４）：
【化１０８】
2021503005.tif 000130
［式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｌは、Ｘまたは−ＣＨ２−Ｘ−であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、または独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載化合物。
【請求項３７】
Ｄが、式（Ｄ−４ａ）または（Ｄ−４ｂ）：
【化１０９】
2021503005.tif 000131
［式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、または独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３８】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１０アリーレンである、請求項３６または３７に記載の化合物。
【請求項３９】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているフェニレンである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４１】
Ａが、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３およびメチルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである、請求項３６から４０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４２】
Ａが、２，６−ジメチル−１，４−フェニレン；２，３−ジメチル−１，４−フェニレン；２，６−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，３−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，３，５，６−テトラメチル−１，４−フェニレン；または２，３，５，６−テトラフルオロ−１，４−フェニレンである、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，３−フェニレンである、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４４】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１０員のヘテロアリーレンである、請求項３６または３７に記載の化合物。
【請求項４５】
Ａが、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているナフチレンである、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４６】
Ａが、１，４−ナフチレン、１，３−ナフチレン、２，６−ナフチレンまたは２，７−ナフチレンである、請求項４５に記載の化合物。
【請求項４７】
Ａが、１，４−ナフチレンである、請求項４６に記載の化合物。
【請求項４８】
Ａが、４，７−ベンゾ［ｂ］チオフェンである、請求項３６、３７または４４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４９】
Ａが、２，５−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾールである、請求項３６、３７または４４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｌが、−ＣＨ２−Ｘ−である、請求項３６、または３８から４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５１】
ＬがＸである、請求項３６、または３８から４９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５２】
Ｘが−ＮＨ−である、請求項５０または５１に記載の化合物。
【請求項５３】
Ｘが−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である、請求項５０または５１に記載の化合物。
【請求項５４】
Ｒ０が、（シクロプロピル）メチル、２−（シクロプロピル）エチル、２−（シクロブチル）エチル、２−（シクロペンチル）エチルまたは２−（シクロヘキシル）エチルである、請求項３６から５３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｄが、表１〜３に列挙された化合物から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５６】
Ｌ１が、式（Ｌ−１）：
【化１１０】
2021503005.tif 000132
［式中、Ｙ１は、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているアリーレンであり、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである］
を有する、請求項１から５５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５７】
Ａｒ１が、必要に応じて置換されている１，４−フェニレンまたは必要に応じて置換されている１，２−フェニレンである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
Ｒ１１およびＲ１２がそれぞれ、Ｈである、請求項５６または５７に記載の化合物。
【請求項５９】
Ｙ１がＮＨである、請求項５６から５８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６０】
Ｌ１が、
【化１１１】
2021503005.tif 000133
である、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｙ１がＳである、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｌ１が、
【化１１２】
2021503005.tif 000134
である、請求項６１に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｌ１が、結合である、請求項１から５５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６４】
Ｌ１−Ｄが、
【化１１３】
2021503005.tif 000135
【化１１４】
2021503005.tif 000136
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６５】
Ｌ１−Ｄが、
【化１１５】
2021503005.tif 000137
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｌ１−Ｄが、
【化１１６】
2021503005.tif 000138
【化１１７】
2021503005.tif 000139
である、請求項１、６４または６５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｌ２が、式（Ｌ−２）：
【化１１８】
2021503005.tif 000140
［式中、Ｙ２は、ＮＲ３０、ＯまたはＳであり、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである］
を有する、請求項１から６６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６８】
Ｌ２が、
【化１１９】
2021503005.tif 000141
である、請求項６７に記載の化合物。
【請求項６９】
Ｌ２が、ペプチドリンカーである、請求項１から６６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７０】
Ｌ２が、腫瘍微小環境において細胞により発現される、１つまたは複数のエンドソームまたはリソソームペプチダーゼまたはプロテアーゼ、あるいは１つまたは複数の細胞周囲ペプチダーゼまたはプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーである、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７１】
Ｌ２が、エンドソームカテプシンまたは細胞周囲プロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーである、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
前記エンドソームカテプシンまたは細胞周囲プロテアーゼが、カテプシンＢ、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、膜型セリンプロテアーゼ１（マトリプターゼ）、マトリプターゼ−２およびレグマインからなる群から選択される、請求項７１に記載の化合物。
【請求項７３】
カテプシンＢによって切断可能な前記ペプチドリンカーが、アミノ酸配列ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４を含み、ここで
ＡＡ１が、存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシン、バリンまたはグリシンであり、
ＡＡ２が、存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、
ＡＡ３が、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、
ＡＡ４が、アルギニン、セリン、アラニン、β−アラニン  ロイシン、オルニチンまたはシトルリンである、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７４】
Ｌ２が、
【化１２０】
2021503005.tif 000142
である、請求項７３に記載の化合物。
【請求項７５】
Ｌ２が、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、膜型セリンプロテアーゼ１（マトリプターゼ）、マトリプターゼ−２および／またはレグマインによって切断可能なペプチドリンカーである、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７６】
Ｌ２が、
【化１２１】
2021503005.tif 000143
【化１２２】
2021503005.tif 000144
である、請求項７５に記載の化合物。
【請求項７７】
Ｌ３が、−Ｌ３ａ−Ｙ３−Ｌ３ｂ−であり、Ｙ３、Ｌ３ａおよびＬ３ｂが、独立して、必要に応じたスペーサー断片である、請求項１から７６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７８】
Ｙ３が、
【化１２３】
2021503005.tif 000145
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項７９】
Ｙ３が、
【化１２４】
2021503005.tif 000146
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項８０】
Ｙ３が、
【化１２５】
2021503005.tif 000147
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項８１】
Ｙ３が、
【化１２６】
2021503005.tif 000148
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項８２】
Ｌ３ａが存在しない、請求項７７から８１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８３】
Ｌ３ａが、
【化１２７】
2021503005.tif 000149
である、請求項７７から８１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８４】
Ｌ３ａが、
【化１２８】
2021503005.tif 000150
である、請求項７７から８１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８５】
Ｌ３ａが、
【化１２９】
2021503005.tif 000151
である、請求項７７から８１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８６】
Ｌ３ｂが、式：
【化１３０】
2021503005.tif 000152
のアシルスペーサー断片、または式：
【化１３１】
2021503005.tif 000153
［式中、ｎは、０〜２００である］
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片である、請求項７７から８５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８７】
Ｌ３ｂが、式：
【化１３２】
2021503005.tif 000154
のアシルスペーサー断片または式：
【化１３３】
2021503005.tif 000155
［式中、ｎは、０〜２００である］
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片である、請求項８６に記載の化合物。
【請求項８８】
Ｌ３が、
【化１３４】
2021503005.tif 000156
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項８９】
Ｌ３が、
【化１３５】
2021503005.tif 000157
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項９０】
Ｌ３が、
【化１３６】
2021503005.tif 000158
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項９１】
Ｌ３が、
【化１３７】
2021503005.tif 000159
である、請求項７７に記載の化合物。
【請求項９２】
−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ部分が、
【化１３８】
2021503005.tif 000160
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９３】
−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ部分が、
【化１３９】
2021503005.tif 000161
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９４】
−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ部分が、
【化１４０】
2021503005.tif 000162
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９５】
−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ部分が、
【化１４１】
2021503005.tif 000163
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９６】
Ｆが、腫瘍標的剤である、請求項１から９５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９７】
前記腫瘍標的剤が、腫瘍細胞表面抗原、腫瘍微小環境細胞外基質の特有の構造要素または腫瘍血管の特有の構造要素に優先的に結合する、抗体または結合性リガンドである、請求項９６に記載の化合物。
【請求項９８】
Ｆが、腫瘍微小環境への優先的な分布および／または腫瘍微小環境での保持をもたらすよう設計されている物理特性または表面の化学修飾を有する、請求項９６または９７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９９】
Ｆが、ＩｇＧ１、２もしくは４のクラスの抗体、またはそれらの誘導体もしくは断片である、請求項９６から９８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１００】
Ｆが、二価一特異的抗体、二価二特異的抗体、または単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、タンデム二価ｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデム三価ｓｃＦｖ、トリアボディおよび二特異的タンデム二価ｓｃＦｖからなる群から選択されるＦｃ領域を含まない誘導体であり、式（Ｉ）中のｘが、１〜１０の間の整数である、請求項９９に記載の化合物。
【請求項１０１】
Ｆが、前記式（Ｉ）の化合物の局所保持を容易にする薬剤である、請求項１から９５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０２】
Ｆが、リポソーム、ウイルス様粒子、ナノ粒子、マイクロ粒子、マクロ分子もしくは超分子、デンドリマー、またはポリペプチドである、請求項１０１に記載の化合物。
【請求項１０３】
Ｆが、約１００，０００〜約７００，０００ダルトンの分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーである、請求項１０１または１０２に記載の化合物。
【請求項１０４】
前記分子量が、約３００，０００〜約５００，０００ダルトンである、請求項１０３に記載の化合物。
【請求項１０５】
式（Ｉ）中、ＷがＯであり、ｘが３〜５００の整数である、請求項１０３または１０４に記載の化合物。
【請求項１０６】
ｘが、約３０〜１５０の整数である、請求項１０５に記載の化合物。
【請求項１０７】
（ｉ）請求項１から１０６のいずれか一項に記載の化合物、および（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０８】
前記化合物が、哺乳動物の白血球によるサイトカイン産生を刺激することができる、医薬組成物であって、以下：
ヒト末梢血単核細胞によるＩＦＮαの産生を刺激すること
ヒト単球によるＩＬ−６およびＴＮＦαの産生を刺激すること、および
マウス脾臓細胞によるＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−６の一方または両方の産生を刺激すること
からなる群のうちの１つまたは複数を含む、請求項１０７に記載の医薬組成物。
【請求項１０９】
免疫応答を刺激することを必要とする哺乳動物対象における、免疫応答を刺激する方法であって、前記哺乳動物対象に、前記哺乳動物対象において免疫応答を刺激するのに十分な量の請求項１０７または１０８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１０】
抗原特異的抗体または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発することを必要とする哺乳動物対象における、抗原特異的抗体または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発する方法であって、前記哺乳動物対象に、前記哺乳動物対象において抗原特異的抗体応答および／または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発するのに十分な量の請求項１０７または１０８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１１】
がんを処置することを必要とする哺乳動物対象における、がんを処置する方法であって、前記哺乳動物対象に、前記哺乳動物対象においてがんを処置するのに十分な量で、請求項１０７または１０８に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１２】
式（Ａ）の化合物：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３ａ−Ｙ３ａ］ｙ      （Ａ）
を、式（Ｂ）の化合物：
Ｙ３ｂ−Ｌ３ｂ−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ      （Ｂ）
［式中、ｙは、１〜５００の整数であり、Ｗ、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、請求項１に定義されている通りであり、Ｆは、粒子をベースとするコンジュゲーション部分であり、Ｌ３ａおよびＬ３ｂは、必要に応じたスペーサー断片であり、Ｙ３ａおよびＹ３ｂは、互いに反応して、スペーサー断片Ｙ３を形成する前駆体部分であり、Ｌ３ａ、Ｙ３およびＬ３ｂは、一緒になって、Ｌ３を形成する］と反応させて、
前記式（Ｉ）の化合物を形成するステップ
を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１１３】
Ｙ３ａが、アルキン基であり、Ｙ３ｂが、アジド基であり、Ｙ３が、１，４−［１，２，３］トリアゾリレン部分である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
Ｌ３ａが、アミドスペーサー断片であり、Ｌ３ｂが、アシルスペーサー断片またはＰＥＧ−アシルスペーサー断片である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１５】
式（Ｃ）の化合物：
Ｆ−［Ｗ’］ｘ      （Ｃ）
を、式（Ｄ）の化合物：
Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ      （Ｄ）
［式中、ｘは、１〜５０の整数であり、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、前記式（Ｉ）の化合物に関して定義されている通りであり、Ｆは、抗体をベースとするコンジュゲーション部分であり、Ｗ’は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｎ３またはアルキンである］と反応させて、
前記式（Ｉ）の化合物を形成するステップ
を含む、請求項１に記載の化合物を調製する方法。
【請求項１１６】
式（Ｉ−ａ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ−ａ）
［式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、コンジュゲーション部分であり、
前記ＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である］
の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１７年１１月１４日に出願の米国仮特許出願第６２／５８６，１１０号への優先権および利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本開示は、切断可能なリンカー部分を介して、薬剤、例えば、腫瘍特異的標的剤またはポリマーナノ粒子剤に共有結合によりコンジュゲートされているＴｏｌｌ様受容体７／８アゴニスト化合物であって、ＴＬＲ７／８アゴニストの生体活性形態の局所放出および／または局所保持を容易にする、ならびに望ましくない全身性炎症誘発性サイトカイン応答を低減する、Ｔｏｌｌ様受容体７／８アゴニスト化合物に関する。本開示はまた、切断可能なコンジュゲートの調製方法、有効な免疫応答を刺激するためのその使用、およびがんの処置のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、病原体関連分子パターンと呼ばれる、病原体に由来する構造的に保存された分子を認識する、膜貫通タンパク質のファミリーである。したがって、ＴＬＲは、哺乳動物免疫系において、病原体関連分子パターンの最前線センサーとして機能し、侵入する病原体の存在を検出する（Takeuchi  and  Akira  2010,  Cell  140:805-820）。ヒトゲノムは、１０の公知のＴＬＲを含有する。これらのうち、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８は、一本鎖ＲＮＡリガンドおよびその（オリゴ）ヌクレオチド分解生成物を感知する。ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の分布は、エンドリソソームコンパートメントに制限されており、これらの受容体は、免疫系の活性化をモジュレートする重要な細胞タイプである抗原提示細胞（ＡＰＣ）において優先的に発現する。
【０００４】
前哨免疫細胞におけるＴＬＲの関わりにより、自然および適応免疫応答を活性化する重要な分子機構である、選択されたサイトカイン（例えば、インターフェロンＩ型）の生合成、共刺激性分子の誘発、およびＡＰＣによる抗原提示能の増大が引き起こされる。形質細胞様樹状細胞におけるＴＬＲ７の関わりにより、適応免疫の制御における必須機能を果たす、ＩＦＮ−α／βの誘発に至る。ＴＬＲ８は、骨髄樹状細胞、単球および単球誘発性樹状細胞において発現し、ＴＬＲ８のアゴニストの関わりにより、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）およびＩＬ−１８の産生の増大を特徴とする、顕著な炎症誘発性サイトカインプロファイルを誘発する。したがって、単球性細胞および樹状細胞の主要なタイプの事実上すべてが、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８のどちらか一方のアゴニストによって活性化されて、非常に有効な抗原提示細胞になることができる。大部分の抗原提示細胞タイプは、これら２つの受容体の１つしか発現しないので、両方の受容体を刺激することができるアゴニストは、これらのＴＬＲの一方にのみ特異的なアゴニストよりも潜在的に有効性が高いアジュバントとなる（Wille-Reece,  et  al.  Proc.  Nat'l  Acad.  Sci.  2005,  102:15190-15194）。さらに、ＴＬＲ７およびＴＬＲ７／８アゴニストはまた、動物モデルにおける検討に基づくと、がんにおいて抗腫瘍免疫応答を刺激するのに有効となり得る（Singh,  et  al.  J  Immunol  2014,  193:4722-4731）。したがって、ＴＬＲアゴニストは、がん治療剤およびワクチンアジュバントとしての使用目的を含めた、自然および適応免疫応答の刺激体として広範に検討されてきた（Sabado  et  al.  2015,  Ca  Immunol  Res  3:278-287;  Vasilakos  and  Tomai  2013,  Exp  Rev  Vaccines  12:809-819）。
【０００５】
いくつかの低分子構造クラスが、グアノシン／ウリジンリガンド結合部位において相互作用し、様々なレベルのＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニスト生物活性を有することが知られているが、このようなアゴニストの多くは、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンに恵まれた化学鋳型の誘導体である。早期の一例は、光線性角化症、表在性基底細胞癌および性器疣贅のための局所製剤として、１９９７年に承認された、中度の有効性のあるＴＬＲ７アゴニストである、１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（イミキモド）である。その後の医薬品化学の努力により、デュアルＴＬＲ７／８アゴニスト活性の顕著な改善を伴ういくつかの誘導体が生み出され、最も着目すべきものは、１−（４−アミノ−２−（エトキシメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（Ｒ８４８、レシキモド（Resiquimod））、ならびに１−（４−アミノメチルベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（ＩＭＤＱ、図１）および１−（３−（アミノメチル）ベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（メタ−ＩＭＤＱ、図１；例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Beesu,  M.  et  al.  2015,  J  Med  Chem  50:7833-7849；米国特許第８，７２８，４８６号および同第９，４４１，００５号を参照されたい）である。しかし、これらの低分子化合物の、薬理学的に関連する用量を局所投与した後（例えば、皮下［ＳＣ］、腫瘍内［ＩＴ］または筋肉内［ＩＭ］）の迅速な全身拡散により、ヒトにおいて、炎症誘発性サイトカイン応答の全身性誘発、有害事象（例えば、発熱、不快感、リンパ球減少など）のリスクの上昇がもたらされる。例えば、Vasilakos  and  Tomai  2013,  Exp  Rev  Vaccines  12:809-819;  Smirnov,  D.  et  al.  2011,  Vaccine  29:5434-5442を参照されたい。
したがって、１）ＴＬＲ７／８アゴニストの両方の受容体に対して強力な生物活性を有しており、かつもっぱらＴＬＲ７またはＴＬＲ８アゴニスト単独よりも大きなＡＰＣのサブセットを活性化する強力な免疫刺激活性を有する、ＴＬＲ７／８アゴニスト活性を有する、２）腫瘍微小環境に対して、ＴＬＲ７／８アゴニストの安定なプロドラッグ形態を優先的に標的とする、またはＳＣもしくは静脈内投与後、腫瘍微小環境におけるＴＬＲ７／８アゴニストの安定なプロドラッグ形態を局所的に維持し、続いて、腫瘍微小環境内に活性形態を放出する、および３）腫瘍微小環境からのＴＬＲ７／８アゴニストの放出された活性形態（すなわち、非コンジュゲートされているもの）のその後の分布を制限する物理化学的性質を有する免疫療法剤が依然として必要とされている。
本発明は、切断可能なリンカー、および投与後に組織特異的標的化のためまたは局所保持するための薬剤を含有する、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物のコンジュゲート、その調製方法、局所免疫応答を刺激するためおよび望ましくない全身性免疫活性化を低減するためのその使用、ならびにがんを処置するためのその使用を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第８，７２８，４８６号明細書
【特許文献２】米国特許第９，４４１，００５号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Takeuchi  and  Akira  2010,  Cell  140:805-820
【非特許文献２】Wille-Reece,  et  al.  Proc.  Nat'l  Acad.  Sci.  2005,  102:15190-15194
【非特許文献３】Singh,  et  al.  J  Immunol  2014,  193:4722-4731
【非特許文献４】Sabado  et  al.  2015,  Ca  Immunol  Res  3:278-287
【非特許文献５】Vasilakos  and  Tomai  2013,  Exp  Rev  Vaccines  12:809-819
【非特許文献６】Beesu,  M.  et  al.  2015,  J  Med  Chem  50:7833-7849
【非特許文献７】Smirnov,  D.  et  al.  2011,  Vaccine  29:5434-5442
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要旨
本開示は、自己脱離性リンカー、切断可能なリンカーおよびコンジュゲーションリンカーの組合せにより、投与後の腫瘍特異的標的化のためまたは局所保持のための薬剤に共有結合によりコンジュゲートされている強力なＴＬＲ７／８アゴニストである、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体を提供する。これらの切断可能なコンジュゲートは、ＴＬＲ７／８アゴニストの生体活性形態の局所放出および／または局所保持を容易にし、望ましくない全身性炎症誘発性サイトカイン応答を低減する。本開示はまた、切断可能なコンジュゲートの調製方法、有効な免疫応答を刺激するためのその使用、およびがんの処置のためのその使用に関する。
【０００９】
一態様では、式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、コンジュゲーション部分であり、
ＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である）
の化合物が提供される。
【００１０】
一態様では、Ｄが式（Ｄ−１）：
【化１】
2021503005.tif 000003
（式中、
Ｒ１Ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルであり、
Ｒ２は、ＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ３５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｐおよびｑは、独立して、０、１、２、３または４であり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１１】
一態様では、Ｄが式（Ｄ−２）：
【化２】
2021503005.tif 000004
（式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１２】
別の態様では、Ｄが、式（Ｄ−２ａ）または（Ｄ−２ｂ）：
【化３】
2021503005.tif 000005
（式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１３】
別の態様では、Ｄが、式（Ｄ−３）：
【化４】
2021503005.tif 000006
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１４】
さらなる態様では、Ｄが、式（Ｄ−３ａ）または（Ｄ−３ｂ）：
【化５】
2021503005.tif 000007
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１５】
さらに別の態様では、Ｄが、式（Ｄ−４）：
【化６】
2021503005.tif 000008
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｌは、Ｘまたは−ＣＨ２−Ｘ−であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、または独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１６】
別の態様では、Ｄが、式（Ｄ−４ａ）または（Ｄ−４ｂ）：
【化７】
2021503005.tif 000009
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、またはハロゲン、および独立して、１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１７】
一態様では、Ｌ１が、式（Ｌ−１）：
【化８】
2021503005.tif 000010
（式中、Ｙ１は、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているアリーレンであり、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１８】
別の態様では、Ｌ２が、式（Ｌ−２）：
【化９】
2021503005.tif 000011
（式中、Ｙ２は、ＮＲ３０、ＯまたはＳであり、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである）
を有する、式（Ｉ）の化合物が提供される。一部の実施形態では、Ｌ２は、腫瘍微小環境において、細胞により発現される、１つまたは複数のエンドソームまたはリソソームペプチダーゼまたはプロテアーゼ、あるいは１つまたは複数の細胞周囲ペプチダーゼまたはプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーである。一部の実施形態では、Ｌ２は、エンドソームカテプシンまたは細胞周囲ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーである。
【００１９】
別の態様では、Ｌ３が、−Ｌ３ａ−Ｙ３−Ｌ３ｂ−であり、Ｙ３、Ｌ３ａおよびＬ３ｂが、独立して必要に応じたスペーサー断片である、式（Ｉ）の化合物が提供される。一部の実施形態では、Ｙ３は、
【化１０】
2021503005.tif 000012
である。一部の実施形態では、Ｌ３ａは、
【化１１】
2021503005.tif 000013
である。一部の実施形態では、Ｌ３ｂは、式：
【化１２】
2021503005.tif 000014
のアシルスペーサー断片、または式：
【化１３】
2021503005.tif 000015
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片であり、ｎは、０〜２００である。一部の実施形態では、Ｌ３ｂは、式：
【化１４】
2021503005.tif 000016
のアシルスペーサー断片、または式：
【化１５】
2021503005.tif 000017
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片であり、ｎは、０〜２００である。一部の実施形態では、Ｌ３は、以下：
【化１６】
2021503005.tif 000018
である。
【００２０】
別の態様では、−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ部分が、以下：
【化１７】
2021503005.tif 000019
である、式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００２１】
一態様では、Ｆが、腫瘍標的剤である、式（Ｉ）の化合物が本明細書において提供される。一部の実施形態では、腫瘍標的剤は、腫瘍細胞表面抗原、腫瘍微小環境細胞外基質の特有の構造要素または腫瘍血管の特有の構造要素に優先的に結合する、抗体または結合性リガンドである。一部の実施形態では、Ｆは、腫瘍微小環境への優先的な分布をもたらすよう設計されている物理特性または表面の化学修飾を有する。
【００２２】
別の態様では、Ｆが、式（Ｉ）の化合物の局所保持を容易にする薬剤である、式（Ｉ）の化合物が本明細書において提供される。一部の実施形態では、Ｆは、リポソーム、ウイルス様粒子、ナノ粒子、マイクロ粒子、マクロ分子もしくは超分子、デンドリマーまたはポリペプチドである。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物がさらに提供される。本医薬組成物の一部の実施形態では、賦形剤は、溶媒、充填剤、乳化剤／界面活性剤、緩衝化剤、等張化剤および／または保存剤である。本医薬組成物の一部の実施形態では、形態は、溶液または凍結乾燥固体である。
【００２４】
別の態様では、免疫応答を刺激することを必要とする哺乳動物対象における、免疫応答を刺激する方法であって、哺乳動物対象に、哺乳動物対象において免疫応答を刺激するのに十分な量の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。
【００２５】
抗原特異的抗体応答および／または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発することを必要とする哺乳動物対象における、抗原特異的抗体応答および／または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発する方法であって、哺乳動物対象に、哺乳動物対象において抗原特異的抗体応答および／または抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発するのに十分な量および投薬スケジュールで、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法も提供される。
【００２６】
がんを処置することを必要とする哺乳動物対象において、がんを処置する複数の方法であって、単剤として、またはがんを処置するための他の薬剤（例えば、化学療法、標的治療および／または免疫療法）と組み合わせてのどちらか一方で、非経口投与経路によって有効量の医薬組成物を投与するステップを含む、方法も提供される。本発明の医薬組成物およびがんの処置における使用説明書を含むキットも本発明において提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、１−（４−アミノメチルベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（ＩＭＤＱ）および１−（３−アミノメチルベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（メタ−ＩＭＤＱ）の化学構造の表示を示す。原子の番号付けも、イミダゾキノリンコア構造についてＩＭＤＱ上に示されている。
【００２８】
【図２】図２は、バリン−シトルリンジペプチド切断可能なリンカーを含有する、式（Ｉ）の例示的な化合物からのＩＭＤＱの放出の機構を示す。
【００２９】
【図３】図３は、ジメチルジスルフィド切断可能なリンカーを含有する、式（Ｉ）の例示的な化合物からのＩＭＤＱの放出の機構を示す。
【００３０】
【図４】図４は、それぞれ、グルタチオンまたは５μＭのカテプシンＢと共にインキュベートした後の、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５３ａ、化合物番号６４−５４および化合物番号６４−５４ａ、または切断可能なリンカーを含まないバリアントからの、経時的なＩＭＤＱのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出（全ＩＭＤＱのパーセンテージとして）を示す。
【００３１】
【図４Ａ】図４Ａは、３０ｎＭのカテプシンＢと共にインキュベートした後の、化合物番号６４−５３ａ、６４−５３ｂおよび６４−５４ｃからの、経時的なＩＭＤＱのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出（全ＩＭＤＱのパーセンテージとして）を示す。
【００３２】
【図５】図５は、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４、または等モル量の非コンジュゲートＩＭＤＱを単回で皮下足蹠注射して２４時間後の、ＢＡＬＢ／ｃマウスの膝窩リンパ節における、インターフェロン関連遺伝子の誘発を示す。
【００３３】
【図５Ａ】図５Ａは、化合物番号６４−５４ａ、化合物番号６４−５４ｂまたはＩＭＤＱ等価質量の非コンジュゲートＩＭＤＱを単回でボーラス腫瘍内注射した後の、ＢＡＬＢ／ｃマウスでの皮下に埋め込まれたＣＴ２６腫瘍における、経時的なインターフェロン関連遺伝子の誘発を示す。データ点は、ＰＢＳ注射された対照に対する、遺伝子発現の倍率として表され、Ｎ＝５匹マウスである。
【００３４】
【図５Ｂ】図５Ｂは、化合物番号６４−５４ａ、化合物番号６４−５４ｂまたはＩＭＤＱ等価質量の非コンジュゲートＩＭＤＱを単回でボーラス腫瘍内注射した後の、ＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に埋め込まれたＣＴ２６腫瘍における経時的な炎症誘発性遺伝子の誘発を示す。データ点は、ＰＢＳ注射された対照に対する、遺伝子発現の倍率として表され、Ｎ＝５匹マウスである。
【００３５】
【図６】図６は、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４、等モル濃度の非コンジュゲートＩＭＤＱまたはＰＢＳビヒクル対照を単回で皮下に足蹠注射して２時間後の、ＢＡＬＢ／ｃマウスの血清中のサイトカインＩＬｓ−１２ｐ４０、ＩＬ−６およびＴＮＦαの濃度を示す。
【００３６】
【図７】図７は、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４、等モル量の非コンジュゲートＩＭＤＱまたはＰＢＳビヒクル対照を単回で皮下に足蹠注射して２４時間後の、膝窩リンパ節および脾臓における様々な抗原提示細胞に対する、成熟マーカーＣＤ８６の誘発を示す。
【００３７】
【図８】図８は、単一の皮下腫瘍を有する、同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスへの、化合物番号６４−５３ａ、化合物番号６４−５４ａ、化合物番号６４−１０ａまたはＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の、腫瘍成長に及ぼす効果を示す。パネルＡは、腫瘍埋め込み後、２７日間にわたる腫瘍容積に及ぼす効果を示している。パネルＢは、２７日目（毎週３回の用量で化合物を最後に投与して３日後）の、処置に対する腫瘍成長の散布プロットを示している。データ点は、８匹のマウスの群に関する平均値の平均＋／−標準誤差である。
【００３８】
【図９】図９は、単一の皮下腫瘍を有する、同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスへの、ＩＭＤＱ等価質量の非コンジュゲートＩＭＤＱ、化合物番号６４−５３ａ、化合物番号６４−５４ａ、化合物番号６４−７０またはＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の、腫瘍成長に及ぼす効果を示す。時間は、腫瘍埋め込み後の日数であり、データ点は、８匹のマウスの群に関する平均値の平均＋／−標準誤差である。
【００３９】
【図１０】図１０は、単一の皮下腫瘍を有する、同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスへの、３０、１２５または５００ｎｇのＩＭＤＱ等価質量の化合物番号６４−５４ａ（パネルＡ）または化合物番号６４−５４ｂ（パネルＢ）、およびＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の、腫瘍成長に及ぼす効果を示す。時間は、腫瘍埋め込み後の日数であり、データ点は、１０匹のマウスの群に関する平均値の平均＋／−標準誤差である。
【００４０】
【図１１】図１１は、対側に２つの皮下腫瘍を有する、同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスへの、毎週２回の免疫チェックポイント阻害剤（inhibitior）投与あり、またはなしに、５００ｎｇのＩＭＤＱ、５００ｎｇのＩＭＤＱ等価質量の化合物番号６４−５４ａまたはＰＢＳビヒクル対照の、毎週の腫瘍内投与の腫瘍成長に及ぼす効果を示す。時間は、腫瘍埋め込み後の日数であり、データ点は、１０匹のマウスの群に関する平均値の平均＋／−標準誤差である。
【００４１】
【図１２】図１２は、化合物番号６４−５７を調製する合成スキームを示す。
【００４２】
【図１３】図１３は、化合物番号６４−７５を調製する合成スキームを示す。
【００４３】
【図１４】図１４は、化合物番号６４−７６を調製する合成スキームを示す。
【００４４】
【図１５】図１５は、化合物番号６４−７７を調製する合成スキームを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
発明の詳細な説明
本開示は、ＴＬＲ７／８アゴニストの両方の受容体に対して、強力な生物活性を示すＴＬＲ７／８アゴニスト化合物であって、ＴＬＲ７／８アゴニストの生体活性形態の局所放出を容易にし、望ましくない全身性炎症誘発性サイトカイン応答を低減する、切断可能なリンカーにより、投与後に腫瘍特異的標的化または局所保持を可能にするコンジュゲーション部分に共有結合によりコンジュゲートされている、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物に関する。ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物は、アルキル基もしくはヒドロカルビル基、アリール基、ヘテロアリール基またはそれらの組合せにより修飾されている、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体を含む。コンジュゲーション部分は、腫瘍特異的標的剤、または投与後に局所保持を容易にする薬剤である。コンジュゲーション部分は、抗体、リガンド、リポソーム、ウイルス様粒子、ナノ粒子、マイクロ粒子、マクロ分子もしくは超分子、デンドリマーまたはポリペプチドとすることができる。切断可能なリンカー部分により、腫瘍微小環境内へのＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の放出が可能となる。本開示はまた、免疫応答（例えば、抗原特異的ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答）を刺激するための切断可能なコンジュゲートの使用、がんを処置するためのその使用、および切断可能なコンジュゲートを調製するための方法に関する。
Ｉ．一般方法および定義
【００４６】
本開示の実施は、特に示さない限り、有機化学、分析化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技法を使用し、これらは、当分野の技量の範囲内にある。このような技法は、文献中に十分に記載されており、例えば、以下を参照されたい：Fiesers'  Reagents  for  Organic  Synthesis,  25th  edition  (Ho,  ed.,  Wiley,  2016);  Comprehensive  Organic  Functional  Group  Transformations,  2nd  edition  (Katritsky  and  Taylor,  eds.,  Elsevier,  2004);  Comprehensive  Organic  Synthesis,  version  1-  8  (Trost  and  Flemming,  eds.,  Permagon  Press,  1991);  Beilsteins  Handbuch  der  Organischen  Chemie,  4  (Auflage,  ed.,  Springer-Verlag,  1934);  Animal  Cell  Culture,  sixth  edition  (Freshney,  Wiley-Blackwell,  2010);  Current  Protocols  in  Cell  Biology  (Bonifacino  et  al.,  ed.,  John  Wiley  and  Sons,  Inc.,  1996,  including  supplements  through  2014);  Current  Protocols  in  Immunology  (Coligan  et  al.,  eds.,  John  Wiley  &  Sons,  Inc.,  1991  including  supplements  through  2014);  Current  Protocols  in  Molecular  Biology  (Ausubel  et  al.,  eds.,  John  Wiley  and  Sons,  Inc.,  1987,  including  supplements  through  2014);  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  third  edition  (Sambrook  and  Russell,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  2001);およびMolecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  fourth  edition  (Green  and  Sambrook,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  2012)。
【００４７】
用語「個体」および「対象」とは、哺乳動物を指す。「哺乳動物」には、以下に限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル）、家畜、競技用動物（例えば、ウマ）、げっ歯類（例えば、マウスおよびラット）、およびペット（例えば、イヌおよびネコ）が含まれる。
【００４８】
用語「抗原」とは、抗体またはＴ細胞抗原受容体によって特異的に認識されて結合する物質を指す。抗原は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、グリコタンパク質、多糖、複雑な炭水化物、糖、ガングリオシド、脂質およびリン脂質、それらの部分、ならびにそれらの組合せを含むことができる。
【００４９】
抗原は、本開示の組成物中に存在する場合、合成することができるか、または天然から単離することができる。本開示の方法において投与するのに好適な抗原は、抗原特異的Ｂ細胞またはＴ細胞応答を惹起することが可能な任意の分子を含む。ハプテンは、「抗原」の範囲内に含まれる。「ハプテン」は、それ自体、免疫原性がないが、一般により大きな免疫原性分子とコンジュゲートされると、免疫原性にされる、低分子量化合物である。
【００５０】
「ポリペプチド抗原」は、精製された天然ペプチド、合成ペプチド、操作されたペプチド、組換えペプチド、粗製ペプチド抽出物、または部分精製された活性状態もしくは未精製の活性状態にあるペプチド（弱化または不活性化ウイルス、微生物または細胞の部分であるペプチドなど）、またはこのようなペプチドの断片を含むことができる。ポリペプチド抗原は、好ましくは長さが少なくとも６アミノ酸残基、好ましくは長さが８〜１８００アミノ酸、より好ましくは長さが９〜１０００アミノ酸、または長さが１０〜１００アミノ酸である。同様に、一部の実施形態では、ポリペプチドは、長さが、約９〜約２０００、約９〜約１０００、約９〜約１００または約９〜約６０アミノ酸である。一部の実施形態では、ポリペプチドは、長さが、少なくとも（下限値）９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０または９０アミノ酸である。一部の実施形態では、ポリペプチドは、長さが最大でも（上限値）１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２５０、２００、１５０、１００、５０または２５アミノ酸である。一部の実施形態では、ポリペプチド抗原は、長さが９〜３５アミノ酸である。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「免疫原性」とは、好適な条件下で哺乳動物対象に投与されると、適応免疫応答を惹起する薬剤（例えば、内因性または外部から投与されたポリペプチド抗原）を指す。免疫応答は、Ｂ細胞（体液性）および／またはＴ細胞（細胞性）媒介性応答とすることができる。
【００５２】
「アジュバント」とは、抗原などの免疫原性剤と混合した場合、この混合物への曝露時に、レシピエントにおいて、免疫原性剤への免疫応答を非特異的に増強または賦活化する物質を指す。
【００５３】
用語「アゴニスト」とは、最も広い意味で使用され、受容体を介してシグナル伝達を活性化する任意の分子を含む。例えば、ＴＬＲ７アゴニストは、ｔｏｌｌ様受容体７タンパク質に結合して、ＴＬＲ７シグナル伝達経路を活性化する；ＴＬＲ８アゴニストは、ｔｏｌｌ様受容体８タンパク質に結合して、ＴＬＲ８シグナル伝達経路を活性化する；デュアルＴＬＲ７／８アゴニストは、ｔｏｌｌ様受容体７およびｔｏｌｌ様受容体８タンパク質の両方に結合し、ＴＬＲ７とＴＬＲ８シグナル伝達経路の両方を活性化する。
【００５４】
応答またはパラメーターの「刺激」は、薬剤もしくは分子を除いて他は同じ条件と比べた場合、または代替として、別の条件と比べた場合、そのような応答またはパラメーターを惹起することおよび／または増強することを含む（例えば、ＴＬＲアゴニストの非存在と比べて、ＴＬＲアゴニストの存在下で、ＴＬＲシグナル伝達を増大する）。例えば、免疫応答の「刺激」は、その応答の増大を意味する。
【００５５】
本明細書において開示されている薬剤の「有効量」とは、具体的に明記されている目的を行うための十分な量のことである。「有効量」は、明記した目的と関連させて、経験的および慣用的な様式で決定することができる。薬剤の「有効量」または「十分な量」は、有益な臨床的結果を含む、有益な結果などの所望の生物学的作用を生じるのに適切な量である。用語「治療有効量」とは、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）における、疾患または障害を「処置する」のに有効な薬剤（例えば、ＴＬＲモジュレーター）の量を指す。
【００５６】
疾患を「処置する」またはその「処置」という用語は、個体（ヒトまたはその他）に、疾患の兆候または症状を軽減するため、１つまたは複数の薬物を投与することを含むことができる、プロトコールを実行することを指す。したがって、「処置すること」または「処置」は、兆候または症状の完全な緩和を必要とはせず、治癒を必要とはせず、具体的には、個体に対する緩和効果しか有していないプロトコールを含む。本明細書で使用される場合、および当分野において十分に理解されている通り、「処置」は、臨床的な結果を含む、有益な結果または所望の結果を得るための手法である。有益な結果または所望の臨床結果には、以下に限定されないが、検出可能かまたは検出不能かに関わらず、１つまたは複数の症状の軽減または改善、疾患程度の縮小、疾患の安定化（すなわち悪化がない）状態、疾患の拡大の予防、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的であるかまたは総合的かどうか）が含まれる。「処置」はまた、処置を受けていない個体の予期される生存と比べて、生存の延長を意味することができる。疾患または障害を「緩和すること」は、疾患または障害の程度および／もしくは望ましくない臨床症状が減少する、ならびに／または疾患もしくは障害の進行の経過が、予期される未処置転帰の場合と比べて、減速していることを意味する。とりわけ、がんの文脈では、緩和は、全生存率の増大をもたらす、安定疾患または疾患の寛解が引き起こされた際に起こり得る。さらに、緩和は、１回の用量の投与によって起こる必要はなく、多くの場合、一連の用量の投与時に起こる。したがって、応答または障害を緩和するのに十分な量は、１つまたは複数の用量で投与され得る。
【００５７】
「アルキル」とは、本明細書で使用される場合、一価の直鎖状（すなわち非分岐状）もしくは分岐状飽和炭化水素鎖、またはそれらの組合せを指す。具体的なアルキル基は、指定数の炭素原子を有するもの、例えば、１〜２０個の炭素原子を有する（「Ｃ１〜Ｃ２０アルキル」）、１〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ１〜Ｃ１０」アルキル）、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」）、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」）、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ６アルキル」）、または１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」）、アルキル基である。アルキル基の例には、以下に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルなどのホモログおよび異性体などの基が含まれる。
【００５８】
「アルケニル」とは、本明細書で使用される場合、オレフィン性不飽和部位を少なくとも１つ有する（すなわち、式Ｃ＝Ｃの部分を少なくとも１つ有する）、一価の直鎖状（すなわち非分岐状）もしくは分岐状不飽和炭化水素鎖またはそれらの組合せを指す。具体的なアルケニル基は、指定数の炭素原子を有するもの、例えば、２〜２０個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル」）、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ１０」アルケニル）、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ８」アルケニル）、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」）、または２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ４アルケニル」）、アルケニル基である。アルケニル基は、「ｃｉｓ」もしくは「ｔｒａｎｓ」立体配置、または代替的に、「Ｅ」もしくは「Ｚ」立体配置にあり得る。アルケニル基の例には、以下に限定されないが、エテニル（またはビニル）、プロパ−１−エニル、プロパ−２−エニル（またはアリル）、２−メチルプロパ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、ブタ−１，３−ジエニル、２−メチルブタ−１，３−ジエニル、それらのホモログおよび異性体などの基が含まれる。
【００５９】
「アルキニル」とは、本明細書で使用される場合、アセチレン性不飽和部位を少なくとも１つ有する（すなわち、式Ｃ≡Ｃの部分を少なくとも１つ有する）、一価の直鎖状（すなわち非分岐状）もしくは分岐状不飽和炭化水素鎖またはそれらの組合せを指す。具体的なアルキニル基は、指定数の炭素原子を有するもの、例えば、２〜２０個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル」）、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ１０アルキニル」）、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」）、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」）、または２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ２〜Ｃ４アルキニル」）、アルキニル基である。アルキニル基の例には、以下に限定されないが、エチニル（またはアセチレニル）、プロパ−１−イニル、プロパ−２−イニル（またはプロパルギル）、ブタ−１−イニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニル、それらのホモログおよび異性体などの基が含まれる。
【００６０】
「アルキレン」とは、明細書で使用される場合、アルキルと同じ残基であるが、二原子価を有する残基を指す。具体的なアルキレン基は、１〜６個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ６アルキレン」）、１〜５個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ５アルキレン」）、１〜４個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ４アルキレン」）または１〜３個の炭素原子（「Ｃ１〜Ｃ３アルキレン」）を有するものである。アルキレン基の例には、以下に限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−または＝ＣＨ２）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−または＝ＣＨＣＨ３）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−または＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、ブチレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−または＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）などの基が含まれる。
【００６１】
「シクロアルキル」とは、本明細書で使用される場合、一価の非芳香族の、飽和または不飽和環式炭化水素構造を指す。具体的なシクロアルキル基は、指定数の環（ａｎｎｕｌａｒ）（すなわち、環（ｒｉｎｇ））炭素原子を有するものであり、例えば、３〜１２個の環炭素原子を有するシクロアルキル基（「Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル」）である。好ましいシクロアルキルは、３〜８個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル」）を有する、または３〜６個の環炭素原子（「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」）を有する環式炭化水素である。シクロアルキルは、シクロヘキシルなど１つの環、またはアダマンチルなど多環からなることができるが、アリール基を除外する。１つより多くの環を含むシクロアルキルは、縮合、スピロもしくは架橋され得、またはそれらの組合せとすることができる。シクロアルキル基の例には、以下に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチル、ノルボルニルなどが含まれる。
【００６２】
「シクロアルキレン」とは、本明細書で使用される場合、シクロアルキルと同じであるが二価原子を有する残基を指す。具体的なシクロアルキレン基は、３〜１２個の環炭素原子を有する（「Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキレン」）、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキレン」）または３〜６個の環炭素原子を有するもの（「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキレン」）である。シクロアルキレン基の例には、以下に限定されないが、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、１，２−シクロヘキセニレン、１，３−シクロヘキセニレン、１，４−シクロヘキセニレン、シクロヘプチル、ノルボルニルなどが含まれる。
【００６３】
「ヒドロカルビル」とは、本明細書で使用される場合、指定した炭素原子数を有する（すなわち、Ｃ１〜Ｃ２０は、１〜２０個の炭素原子を意味する）、完全に飽和、一不飽和もしくは多不飽和であり得る、非芳香族炭化水素から水素原子を除去することにより形成される一価の基を指し、これを含む。ヒドロカルビル基は、１つまたは複数の直鎖状、分岐状もしくは環式部分、またはそれらの組合せを含有することができる。アルキル、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキル基は、ヒドロカルビル基の特定のサブセットである。ヒドロカルビル基は、１つまたは複数のシクロアルキル基によりさらに置換されている、アルキル基、アルケニル基もしくはアルキニル基、ならびに／またはさらなるアルキル基、アルケニル基および／もしくはアルキニル基のうちの１つによりさらに置換されているシクロアルキル基を含有することができる。ヒドロカルビル基の例は、以下に限定されないが、以下：
【化１８】
2021503005.tif 000020
などの基を含む。ヒドロカルビル基は、ハロゲン原子、例えば塩素またはフッ素などの１つまたは複数の置換基によって、１つまたは複数の位置で置換され得る。置換ヒドロカルビル基の例には、以下に限定されないが、以下：
【化１９】
2021503005.tif 000021
などの基が含まれる。
【００６４】
「アリール」とは、本明細書で使用される場合、単環（例えば、フェニル）または多重縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有し、縮合環のうちの１つまたは複数は、芳香族ではあり得ない、不飽和芳香族炭素環式基を指す。具体的なアリール基は６〜１４個の環（ａｎｎｕｌａｒ）（すなわち、環（ｒｉｎｇ））炭素原子を有するもの（「Ｃ６〜Ｃ１４アリール」）である。少なくとも１つの環が非芳香族である１つより多くの環を有するアリール基は、芳香環位または非芳香環位のどちらかにおいて、親構造に結合することができる。一変形形態では、少なくとも１つの環が非芳香族である、１つより多くの環を有するアリール基は、芳香環位において親構造に結合している。アリールの例には、以下に限定されないが、フェニル、ナフチル、１−ナフチル、２−ナフチルなどの基が含まれる。
【００６５】
「アリーレン」とは、本明細書で使用される場合、アリールと同じであるが二原子価を有する残基を指す。具合的なアリーレン基は、６〜１４個の環炭素原子を有するもの（「Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン」）である。アリーレンの例には、以下に限定されないが、フェニレン、ｏ−フェニレン（すなわち、１，２−フェニレン）、ｍ−フェニレン（すなわち、１，３−フェニレン）、ｐ−フェニレン（すなわち、１，４−フェニレン）、ナフチレン、１，２−ナフチレン、１，３−ナフチレン、１，４−ナフチレン、２，７−ナフチレン、２，６−ナフチレンなどの基が含まれる。
【００６６】
「ヘテロアリール」とは、本明細書で使用される場合、１〜１４個の環炭素原子、ならびに以下に限定されないが、窒素、酸素および硫黄などのヘテロ原子を含む、少なくとも１つの環ヘテロ原子を有する不飽和芳香環式基を指す。ヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルまたはイミダゾリル）または多重縮合環（例えば、インドリジニルまたはピラゾロ−ピリダジニル）を有することができ、縮合環の少なくとも１つは、芳香族である。具体的なヘテロアリール基は、１〜１２個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜６個の環ヘテロ原子を有する５〜１４員の環（「５〜１４員のヘテロアリール」）、１〜８個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の環（「５〜１０員のヘテロアリール」）、または１〜５個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する５員、６員もしくは７員の環（「５〜１７員のヘテロアリール」）である。一変形形態では、ヘテロアリールは、１〜６個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する５員、６員または７員の単環式芳香環を含む。別の変形形態では、ヘテロアリールは、１〜１２個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜６個の環ヘテロ原子を有する多環式芳香環を含む。少なくとも１つの環が非芳香族である環を１つより多く有するヘテロアリール基は、芳香環位または非芳香環位のどちらかにおいて、親構造に結合することができる。一変形形態では、少なくとも１つの環が非芳香族である環を１つより多く有するヘテロアリール基は、芳香環位において、親構造に結合している。ヘテロアリールの例には、以下に限定されないが、ピリジル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、キノリニル、インドリル、ベンゾチアゾリルなどの基が含まれる。
【００６７】
「ヘテロアリーレン」とは、本明細書で使用される場合、ヘテロアリールと同じであるが二原子価を有する残基を指す。具体的なヘテロアリーレン基は、１〜１２個の環炭素原子、および窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜６個の環ヘテロ原子を有する５〜１４員の環（「５〜１４員のヘテロアリーレン」）、１〜８個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の環（「５〜１０員のヘテロアリーレン」）、または１〜５個の環炭素原子、ならびに窒素、酸素および硫黄からなる群から独立して選択される１〜４個の環ヘテロ原子を有する５員、６員もしくは７員の環（「５〜７員のヘテロアリーレン」）である。ヘテロアリーレンの例には、以下に限定されないが、ピリジレン、ベンゾイミダゾリレン、ベンゾトリアゾリレン、ベンゾ［ｂ］チエニレン、キノリニレン、インドリレン、ベンゾチアゾリレンなどの基が含まれる。
【００６８】
「ハロ」または「ハロゲン」は、原子番号９〜８５を有する１７族のシリーズの元素を指す。好ましいハロ基には、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが含まれる。残基が、２個以上のハロゲンにより置換されている場合、結合しているハロゲン部分の数に対応する接頭語を使用して言及され得る。例えば、ジハロアリール、ジハロアルキルおよびトリハロアリールなどは、２つ（「ジ」）または３つ（「トリ」）のハロ基により置換されているアリールおよびアルキルを指し、必ずしもそうである必要はないが、これらは同じハロとすることができる。したがって、４−クロロ−３−フルオロフェニルは、ジハロアリールの範囲内にある。水素がそれぞれハロ基と置き換えられているアルキル基は、「ペルハロアルキル」と称される。好ましいペルハロアルキル基は、トリフルオロアルキル（−ＣＦ３）である。同様に、「ペルハロアルコキシ」は、ハロゲンが、アルコキシ基のアルキル部分を構成する炭化水素中の各Ｈを置き換えている、アルコキシ基を指す。ペルハロアルコキシ基の一例は、トリフルオロメトキシ（−ＯＣＦ３）である。
【００６９】
「アミノ」とは、−ＮＨ２基を指す。
【００７０】
「置換アミノ」とは、−ＮＲ’Ｒ”基を指し、Ｒ’およびＲ”は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルからなる群から選択され、ただし、Ｒ’およびＲ”のうちの少なくとも１つは、水素ではないことを条件とする。
【００７１】
「必要に応じて置換されている」とは、別段の指定がない限り、ある基が、無置換とすることができるか、またはその基に関して列挙されている置換基のうちの１つもしくは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つ）によって置換され得、この置換基は同一とすることができるか、または異なることができることを意味する。一実施形態では、必要に応じて置換されている基は、１つの置換基を有する。別の実施形態では、必要に応じて置換されている基は、２つの置換基を有する。別の実施形態では、必要に応じて置換されている基は、３つの置換基を有する。別の実施形態では、必要に応じて置換されている基は、４つの置換基を有する。一部の実施形態では、必要に応じて置換されている基は、１〜２つ、１〜３つ、１〜４つまたは１〜５つの置換基を有する。
【００７２】
「置換アルキル」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、アシル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するアルキル基を指す。
【００７３】
「置換アルケニル」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、アシル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するアルケニル基を指す。
【００７４】
「置換アルキニル」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、メルカプト、アシル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するアルキニル基を指す。
【００７５】
「置換シクロアルキル」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するシクロアルキル基を指す。
【００７６】
「置換アリール」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するアリール基を指す。
【００７７】
「置換ヘテロアリール」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するヘテロアリール基を指す。
【００７８】
「置換ヘテロシクリル」とは、別段の指定がない限り、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリールおよびトリハロメチルから選択される１つまたは複数の置換基（例えば、１〜５つの置換基または１〜３つの置換基）を有するヘテロシクリル基を指す。
【００７９】
本明細書において個々の用語に関して開示されている基に加えて、指定した基またはラジカルにおける飽和炭素原子上の１個または複数の水素（単一炭素上の任意の２個の水素は、＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２または＝Ｓにより置き換えられ得る）を置換するための置換基は、別段の指定がない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２ＯＲ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０は、必要に応じて置換されているアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、Ｒ７０はそれぞれ、独立して水素またはＲ６０であり、Ｒ８０はそれぞれ、独立して、Ｒ７０であるか、または代替的に、２つのＲ８０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３員、４員、５員、６員または７員のヘテロシクロアルキルを形成し、このヘテロシクロアルキルは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される、同じまたは異なる追加のヘテロ原子を１〜４個、必要に応じて含むことができ、これらのうちのＮは、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜４アルキル、−ＣＯ２Ｃ１〜４アルキルまたは−ＳＯ２Ｃ１〜４アルキル置換を有することができ、Ｍ＋はそれぞれ、正味１の正電荷を有する対イオンである。Ｍ＋はそれぞれ、独立して、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋などのアルカリイオン；＋Ｎ（Ｒ６０）４などのアンモニウムイオン；または［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５または［Ｂａ２＋］０．５などのアルカリ土類イオンとすることができる（「下付き文字０．５」は、このような二価のアルカリ土類イオンに対する対イオンの１つが、実施形態の化合物のイオン化形態であり得、他方が、塩化物などの典型的な対イオンであり得ること、または本明細書に開示されている２つのイオン化化合物は、このような二価のアルカリ土類イオンに対する対イオンとして働くことができること、またはこの実施形態の二重イオン化化合物が、このような二価アルカリ土類イオンに対する対イオンとして働くことができることを意味する）。
【００８０】
本明細書における開示に加えて、「置換されている」アルケン、アルキン、アリールおよびヘテロアリール基中の不飽和炭素原子上の水素に対する置換基は、別段の指定がない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３−２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２−Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２−Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０およびＭ＋は、これまでに定義されている通りであり、ただし、置換アルケンまたはアルキンの場合、置換基は、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０または−Ｓ−Ｍ＋ではないことを条件とする。
【００８１】
本明細書における個々の用語に関して開示されている置換基に加え、「置換されている」ヘテロシクロアルキル基およびシクロアルキル基中の窒素原子上の水素に対する置換基は、別段の指定がない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０および−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０およびＭ＋は、これまでに定義されている通りである。
【００８２】
上に定義されている置換されている基のすべてにおいて、それ自体にさらなる置換基を有する置換基を定義することによって到達されるポリマー（例えば、置換アリール基などによってさらに置換されている置換アリール基によってそれ自体置換されている置換基として、置換アリール基を有する置換アリール）は、本明細書において含まれることは意図されていないことが理解される。このような場合、このような置換の最大数は３である。例えば、本明細書において具体的に企図されている置換アリール基の連続置換は、置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限定される。
【００８３】
特に示さない限り、本明細書において明示的に定義されていない置換基の命名は、その官能基の末端部分、次いで、隣接官能基に結合点の方向へ名前を付けることにより達成される。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」とは、（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
【００８４】
１つまたは複数の置換基を含有する、本明細書において開示されている基のいずれかに関すると、このような基は、立体的に実現が困難な、および／または合成的に現実不可能ないずれの置換も置換パターンも含有しないことが理解される。さらに、対象化合物は、これらの化合物の置換から生じる立体化学異性体のすべてを含む。
【００８５】
「ポリアルキレングリコール」とは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」またはポリエチレンオキシド）、ポリプロピレングリコール（「ＰＰＧ」またはポリプロピレンオキシド）およびポリブチレングリコールなどの直線状または分岐状ポリアルキレングリコールポリマーを指す。ポリアルキレングリコールサブユニットは、単一ポリアルキレングリコール単位である。例えばポリエチレングリコールサブユニットの例は、エチレングリコール、−［ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ］−；またはプロピレングリコール、−［ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ］−であり、末端鎖の点において水素でキャップされている。ポリ（アルキレングリコール）の他の例には、以下に限定されないが、ＰＥＧ；メトキシポリ（エチレングリコール）（ｍＰＥＧ）などのＰＥＧ誘導体；ポリ（エチレンオキシド）；ＰＰＧ；ポリ（テトラメチレンチレングリコール）（ポリ（テトラヒドロフラン）またはポリＴＨＦとしても知られている）；ポリ（エチレンオキシド−ｃｏ−プロピレンオキシド）；またはこれらのコポリマーおよび組合せが含まれる。
【００８６】
「有機改質剤」は、別段の指定がない限り、有機化学化合物を溶解させるために、通常、使用される溶媒の群の１つを意味する。この群は、以下に限定されないが、酢酸、アセトン、アニソール、１−ブタノール、２−ブタノール、酢酸ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、クメン、ジメチルスルホキシド、エタノール、酢酸エチル、エチルエーテル、ギ酸エチル、ギ酸、ヘプタン、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル、酢酸メチル、３−メチル−１−ブタノール、メチルエチルケトン（methylenthylketone）、メチルイソブチルケトン、２−メチル−１−プロパノール、ペンタン、１−ペンタノール、１−プロパノール、２−プロパノール（イソプロパノール）、酢酸プロピルおよびそれらの組合せを含むことができる。
【００８７】
本明細書における開示に加えて、用語「置換されている」は、指定した基またはラジカルを修飾するために使用される場合、指定した基またはラジカルの１個または複数の水素原子が、それぞれ、互いに独立して、本明細書において定義されている同一または異なる置換基により置き換えられていることをやはり意味することができる。一部の実施形態では、置換されている基は、１つ、２つ、３つもしくは４つの置換基、１つ、２つもしくは３つの置換基、１つもしくは２つの置換基、または１つの置換基を有する。
【００８８】
本明細書における開示に加えて、ある特定の実施形態では、置換されている基は、１つ、２つ、３つもしくは４つの置換基、１つ、２つもしくは３つの置換基、１つもしくは２つの置換基、または１つの置換基を有する。
【００８９】
元素の特定の同位体が式中に表示されていない限り、本発明は、例えば、本化合物の重水素化誘導体（Ｈは、２Ｈ、すなわちＤとすることができる）などの、本明細書において開示されている化合物の同位体置換体（isotopologue）のすべてを含む。同位体置換体は、構造中のいずれかの位置またはすべての位置において同位体の置き換えを有することができるか、あるいは構造中のいずれかの位置またはすべての位置において天然の存在量で存在する原子を有することができる。
【００９０】
「溶媒和物」とは、溶媒分子と溶質の分子またはイオンとの組合せにより形成される複合体を指す。溶媒は、有機化合物、無機化合物、または両方の混合物とすることができる。溶媒のいくつかの例には、以下に限定されないが、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシドおよび水が含まれる。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は、水和物である。
【００９１】
「立体異性体（単数）および「立体異性体（複数）」は、同じ原子接続性を有するが、原子の空間配列が異なる化合物を指す。立体異性体は、ｃｉｓ−ｔｒａｎｓ異性体、ＥおよびＺ異性体、鏡像異性体、およびジアステレオマーを含む。
【００９２】
用語「またはその塩もしくは溶媒和物もしくは立体異性体」は、対象化合物の立体異性体の薬学的に許容される塩の溶媒和物などの、塩、溶媒和物および立体異性体のすべての順列を含むことが意図されていることが理解されよう。
【００９３】
明確にするため、個々の実施形態の文脈において記載される本発明のある特定の特徴はまた、単一の実施形態において、組み合わせて提供され得ることが理解される。反対に、簡潔にするために、単一実施形態の文脈において記載される、本発明の様々な特徴はまた、個別に、または任意の好適な部分組合せで提供され得る。可変基により表されている化学基に関する実施形態のすべての組合せが、本発明によって具体的に包含されており、ありとあらゆる組合せが、まさにあたかも、安定な化合物（すなわち、単離、特徴付けおよび生物活性の試験を行うことができる化合物）となる化合物をこのような組合せが包含する程度に、個々におよび明示的に開示されているかのごとく、本明細書において開示されている。さらに、このような可変基を記載する実施形態に列挙されている化学基のすべての部分組合せはまた、本発明によって具体的にやはり包含されており、化学基のありとあらゆるこのような部分組合せが、まさにあたかも、個々に明示的に、本明細書において開示されているかのごとく、本明細書において開示されている。
【００９４】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」として本明細書に記載される態様および実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」実施形態および「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」実施形態を含むことが理解される。
【００９５】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、特に示さない限り、または文脈から明瞭ではない限り、複数の指示物を含む。
【００９６】
用語「約」は、特に明確に示されていない限り、値が、この値を決定するために用いられる装置または方法に対する誤差の標準偏差を含むことを示すために使用されている。本明細書における「約」値またはパラメーターを言う場合、その値またはパラメーターそれ自体を対象とする実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」と言及している記載は、「Ｘ」の記載を含む。
ＩＩ．ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の腫瘍標的化切断可能コンジュゲート
【００９７】
本開示は、自己脱離性リンカー、切断可能なリンカーおよびコンジュゲーションリンカーの組合せにより、投与後の腫瘍特異的標的化または局所保持のための薬剤に共有結合によりコンジュゲートされて、ＴＬＲ７／８アゴニストの生体活性形態の局所放出を容易にする、強力なＴＬＲ７／８アゴニストである、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体を提供する。腫瘍微小環境内では、本開示の共有結合によりコンジュゲートされているＴＬＲ７／８アゴニスト化合物は、化学的に切断され、これにより、最大に生体活性な形態（すなわち、非コンジュゲート形態）のＴＬＲ７／８アゴニストの放出を容易にする。したがって、これらの局所的に放出されるＴＬＲ７／８アゴニストは、有効な免疫応答を誘発することができる。さらに、本開示の共有結合によりコンジュゲートされているＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の全身分布は、その化学的性質のために制限され得、これにより、望ましくない全身性炎症誘発性サイトカイン応答を低減することができる。本開示はまた、ＴＬＲ７／８アゴニストの共有結合性コンジュゲートを含む治療剤またはワクチンのアジュバントを調製する方法、全身性炎症誘発性サイトカイン応答を低減させて免疫応答を刺激するためのその使用、およびがんを処置するための治療剤としてのその使用に関する。
【００９８】
一態様では、式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］Ｘ      （Ｉ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、コンジュゲーション部分である）
の化合物が提供される。
【００９９】
別の態様では、式（Ｉ−ａ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］Ｘ      （Ｉ−ａ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、コンジュゲーション部分である）
の化合物が提供される。
Ａ．ＴＬＲ７／８アゴニスト
【０１００】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中のＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である。一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン誘導体である。
【０１０１】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中のＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−１）：
【化２０】
2021503005.tif 000022
（式中、
Ｒ１Ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルであり、
Ｒ２は、ＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ３５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｐおよびｑは、独立して、０、１、２、３または４であり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１０２】
一部の実施形態では、Ｒ１Ａは、必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルまたは必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。一変形形態では、Ｒ１Ａは、ヒドロキシによって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである。特定の変形形態では、Ｒ１Ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキル（例えば、ｎ−ブチルまたはイソブチル）である。別の特定の変形形態では、Ｒ１Ａは、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルである。一変形形態において、Ｒ１Ａは、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである。
【０１０３】
一部の実施形態では、Ｒ２は、ＮＨ２またはＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、必要に応じて置換されているアルキルである。一変形形態では、Ｒ２は、ＮＨ２である。別の変形形態では、Ｒ２は、ＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである。特定の変形形態では、Ｒ２は、ＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａは、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１０４】
一部の実施形態では、ｑは０である（すなわち、Ｒ３５は存在しない）。一部の実施形態では、ｑは１であり、Ｒ３５は、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアの６位、７位、８位または９位に結合している。一部の実施形態では、ｑは１であり、Ｒ３５は、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアの７位または８位に結合しているアミノまたは置換アミノである。一部の実施形態では、ｑは２であり、２つのＲ３５基は、イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアの７位および８位に結合しており、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態では、ｑは、１または２であり、Ｒ３５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１０５】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それぞれＨである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それらが結合している炭素と一緒になって、必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキル（例えば、シクロプロピル）を形成する。
一部の実施形態では、ｐは０である（すなわち、Ｒ５は存在しない）。一部の実施形態では、ｐは、１または２であり、Ｒ５はそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。
式（Ｄ−１）に関して本明細書において詳述されているＲ１Ａ、Ｒ２、Ｒ３５、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、Ｒ５、ｐおよびｑのありとあらゆる変形体は、ありとあらゆる組合せが個別に記載されるかのように、式（Ｄ−１）に関して本明細書において詳述されているＲ１Ａ、Ｒ２、Ｒ３５、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、Ｒ５、ｐおよびｑの別のありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図され、理解される。例えば、一部の実施形態では、Ｄは、Ｒ１Ａが、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８ヒドロキシアルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルであり、Ｒ２が、ＮＨ２またはＮＨＲ２ａであり、Ｒ２ａが、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｒ３５がそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、Ｒ５がそれぞれ、独立して、ハロゲンまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、ｐおよびｑが、独立して、０、１、２、３または４である、式（Ｄ−１）を有する。
一部の実施形態では、式（Ｄ−１）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−１ａ）のｐ−アミノメチルベンジル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン部分、または式（Ｄ−１ｂ）のｍ−アミノメチルベンジル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン部分である：
【化２１】
2021503005.tif 000023
（式中、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）。
一部の実施形態では、Ｄは、式（Ｄ−１ａ）または（Ｄ−１ｂ）を有し、Ｒ１Ａは、ブチルであり、Ｒ２は、ＮＨ２であり、ｑは０である。一変形形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、それぞれＨである。
【０１０６】
一部の実施形態では、Ｄは、式（Ｄ−１ａ−１）または（Ｄ−１ｂ−１）：
【化２２】
2021503005.tif 000024
（式中、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１０７】
当分野で公知の他のＴＬＲ７／８アゴニストもまた、本開示によって包含される。一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニストは、その全体が参照により本明細書に組み込まれているBeesu  et  al.  2015,  J  Med  Chem  58:7833-7849に記載される、アミノキノリンＴＬＲ８アゴニスト化合物である。例えば、Beesu  et  al.  J.  Med.  Chem.  2015,  58:7833-7849における表１に列挙された、反応性アミノ基を含有する化合物を、本明細書に記載される、式（Ｄ−１）のコンジュゲートまたはその任意の変形体に変換することができる。
【０１０８】
一部の実施形態では、Ｄは、式（Ｄ−１ｃ）または（Ｄ−１ｄ）：
【化２３】
2021503005.tif 000025
（式中、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）のアミノキノリン部分である。
【０１０９】
一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニストは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、Shukla  et  al.  J.  Med.  Chem.  2010,  53:4450-4465；およびＷＯ２０１５／０２３９５８に記載される、イミダゾキノリン化合物またはそのアミノメチル誘導体である。例えば、Shukla  et  al.  J.  Med.  Chem.  2010,  53:4450-4465中の表１に列挙された化合物、またはそれらの誘導体は、ベンジル基から誘導されたアミノ基または分子の他の適用可能な任意の部分を介して、コンジュゲーション部分（すなわち、式（Ｉ）中の部分Ｆ）に共有結合により連結（またはコンジュゲート）され得る。同様に、ＷＯ２０１５／０２３９５８に記載される式１１もしくは式１１Ａの化合物、またはそれらの誘導体は、ベンジル基から誘導されたアミノ基を介して、コンジュゲーション部分（すなわち、式（Ｉ）中の部分Ｆ）に共有結合により連結（またはコンジュゲート）され得る。
【化２４】
2021503005.tif 000026
式１１および式１１Ａ（式中、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はＷＯ２０１５／０２３９５８に記載される通りである）。
【０１１０】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２）：
【化２５】
2021503005.tif 000027
（式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１１１】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−である。一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である。
【０１１２】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−である。一部の実施形態では、ｎは、４〜１５の整数である。一部の実施形態では、ｎは、４、５、６または７である。一部の実施形態では、ｎは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５である。一部の実施形態では、ｎは、１６、１７、１８、１９、２０または２１である。
【０１１３】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である。一部の実施形態では、ｎは、１１、１２、１３または１４である。一部の実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９または１０である。一部の実施形態では、ｎは、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１である。
【０１１４】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。
【０１１５】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａであり、ｐは、１または２であり、Ｒ１ａは、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３である。
【０１１６】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂであり、Ｒ１ｂは、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３である。
【０１１７】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、ｐは、１または２であり、Ｒ１ｃは、シクロプロピルまたはシクロブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２−シクロプロピルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−シクロプロピルである。
【０１１８】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１１９】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０１２０】
式（Ｄ−２）に関して記載されるＸおよびｎのありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−２）に関して記載されるＲ１、ｑ、ｐ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、ｑは、０であり、Ｘは、−ＮＨ−であり、ｎは、４、５、６または７である。一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、ｑは、０であり、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、ｎは、１１、１２、１３または１４である。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ａ）または（Ｄ−２ｂ）：
【化２６】
2021503005.tif 000028
（式中、
ｎは、４〜２１の整数であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１２２】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ａ）を有する。他の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ｂ）を有する。
【０１２３】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ａ）を有し、ｎは、４〜１５の整数である。一部の変形形態では、ｎは、４、５、６または７である。一部の変形形態では、ｎは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５である。一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ａ）を有し、ｎは、１６、１７、１８、１９、２０または２１である。
【０１２４】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ｂ）を有し、ｎは、１１、１２、１３または１４である。一部の変形形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９または１０である。一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−２ｂ）を有し、ｎは、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１である。
【０１２５】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。
【０１２６】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａであり、ｐは、１または２であり、Ｒ１ａは、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３である。
【０１２７】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂであり、Ｒ１ｂは、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３である。
【０１２８】
一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、ｐは、１または２であり、Ｒ１ｃは、シクロプロピルまたはシクロブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−ＣＨ２−シクロプロピルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−シクロプロピルである。
【０１２９】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１３０】
一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＯＨ、ＮＨＮＨ２またはＮＨＣＨ３である。
【０１３１】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０１３２】
式（Ｄ−２ａ）に関して記載されるｎのありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−２ａ）に関して記載されるＲ１、Ｒ２０、ｑ、ｐ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。同様に、式（Ｄ−２ｂ）に関して記載されるｎのありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−２ｂ）に関して記載されるＲ１、Ｒ２０、ｑ、ｐ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。例えば、式（Ｄ−２ａ）の一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、Ｒ２０は、ＮＨ２であり、ｑは、０であり、ｎは、４、５、６または７である。式（Ｄ−２ｂ）の一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、Ｒ２０は、ＮＨ２であり、ｑは、０であり、ｎは、１１、１２、１３または１４である。
【０１３３】
式（Ｄ−２）、（Ｄ−２ａ）および（Ｄ−２ｂ）の代表的な化合物は、表１に列挙されており、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す。
【表１−１】
2021503005.tif 000029
【表１−２】
2021503005.tif 000030
【表１−３】
2021503005.tif 000031
【表１−４】
2021503005.tif 000032
【表１−５】
2021503005.tif 000033
【表１−６】
2021503005.tif 000034
【表１−７】
2021503005.tif 000035
【表１−８】
2021503005.tif 000036
1列挙された化学名は、波線によって表示されている位置に水素原子を有する対応する非コンジュゲート化合物(すなわち、第一級または第二級アミン)の化学名である。
【０１３４】
式（Ｄ−２）、（Ｄ−２ａ）および（Ｄ−２ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、対応する非コンジュゲート化合物から生成され、この非コンジュゲート化合物は、スキームＤ−２に準拠して、および／または当分野において公知の方法を使用して合成することができる。
スキームＤ−２
【化２７】
2021503005.tif 000037
（式中、Ｒ１、ｑおよびＲ３は、式（Ｄ−２）、（Ｄ−２ａ）および（Ｄ−２ｂ）に関して定義されている通りであり、Ｒ２０は、ＮＨ２であるか、または式（Ｄ−２ａ）および（Ｄ−２ｂ）に関して定義されている通りであり、ＲおよびＲ”は、直鎖状アルキル基である）。
【０１３５】
一部の実施形態では、Ｒ１が、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、０が、ＮＨ２であり、ｑが０である場合、この化合物は、スキームＤ−２−ａに準拠して合成される。スキームＤ−２−ａ中の出発化合物（ＩＭＤＱ）を調製するために有用な個々の反応工程の一層詳細な説明に関しては、例えば、米国特許第８，７２８，４８６号および同第９，４４１，００５号を参照されたい。
スキームＤ−２−ａ
【化２８】
2021503005.tif 000038
（式中、ＲおよびＲ”は、直鎖状アルキル基である）。
【０１３６】
当業者は、様々な溶媒、触媒、還元剤、温度、反応時間および大気条件を含めた、他の合成経路を用いて、本明細書に記載される式（Ｄ−２）、（Ｄ−２ａ）または（Ｄ−２ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分を合成することができることを認識しているであろう。
【０１３７】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３）：
【化２９】
2021503005.tif 000039
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１３８】
一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。
【０１３９】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である。他の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−である。
【０１４０】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルまたは−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０、１、２または３であり、ＲＡは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルキレンからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。
【０１４１】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１０〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１５〜Ｃ２１アルキルである。
【０１４２】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡである。一変形形態では、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１４３】
一部の実施形態では、ＲＡは、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである。
【０１４４】
一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２である。別の変形形態では、ｍは、０であり、ＲＡは、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０１４５】
一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロプロピルであり、ｍは、１または２である。
【０１４６】
一部の実施形態では、ｍは、０または１であり、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロヘキシルある。
【０１４７】
一部の実施形態では、ＲＡは、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜３個の塩素原子またはフッ素原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜２個の塩素原子またはフッ素原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜２個のフッ素原子によって必要に応じて置換されているシクロブチルである。一変形形態では、ｍは１である。
【０１４８】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡである。一変形形態では、ｚは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。一変形形態では、ｚは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１４９】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３０】
2021503005.tif 000040
からなる群から選択される。
【０１５０】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３１】
2021503005.tif 000041
【化３２】
2021503005.tif 000042
からなる群から選択される。
【０１５１】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３３】
2021503005.tif 000043
からなる群から選択される。
【０１５２】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−であり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１５３】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−であり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡであり、ｚは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１５４】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−であり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０であり、ＲＡは、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０１５５】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１５６】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ（例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂ（例えば、ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃである。一変形形態では、Ｒ１ｃは、シクロプロピルである。
【０１５７】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１５８】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０１５９】
式（Ｄ−３）に関して記載されるＸおよびＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−３）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、ｐ、ｑ、ｍ、ＲＡ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。
【０１６０】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ａ）または（Ｄ−３ｂ）：
【化３４】
2021503005.tif 000044
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ａ）を有する。他の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ｂ）を有する。
【０１６２】
一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。
【０１６３】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルまたは−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０、１、２または３であり、ＲＡは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルキレンからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。
【０１６４】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１０〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１５〜Ｃ２１アルキルである。
【０１６５】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡである。一変形形態では、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。別の変形形態では、ｍは、０であり、ＲＡは、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０１６６】
一部の実施形態では、ＲＡは、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルである。
【０１６７】
一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２である。
【０１６８】
一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロプロピルであり、ｍは、１または２である。
【０１６９】
一部の実施形態では、ｍは、０または１であり、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロヘキシルある。
【０１７０】
一部の実施形態では、ＲＡは、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜３個の塩素原子またはフッ素原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜２個の塩素原子またはフッ素原子によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＲＡは、１〜２個のフッ素原子によって必要に応じて置換されているシクロブチルである。一変形形態では、ｍは１である。
【０１７１】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡである。一変形形態では、ｚは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。一変形形態では、ｚは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１７２】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３５】
2021503005.tif 000045
からなる群から選択される。
【０１７３】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３６】
2021503005.tif 000046
からなる群から選択される。
【０１７４】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化３７】
2021503005.tif 000047
からなる群から選択される。
【０１７５】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ａ）を有し、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１７６】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ａ）を有し、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｚ（Ｃ（ＣＨ３）２）ＲＡであり、ｚは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１７７】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ａ）を有し、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０であり、ＲＡは、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０１７８】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−３ｂ）を有し、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、１であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。
【０１７９】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ（例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂ（例えば、ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃである。一変形形態では、Ｒ１ｃは、シクロプロピルである。
【０１８０】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０１８１】
一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＯＨ、ＮＨＮＨ２またはＮＨＣＨ３である。
【０１８２】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０１８３】
式（Ｄ−３ａ）に関して記載されるＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−３ａ）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ２０、ｐ、ｑ、ｍ、ｚ、ＲＡ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。同様に、式（Ｄ−３ｂ）に関して記載されるＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−３ｂ）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ２０、ｐ、ｑ、ｍ、ｚ、ＲＡ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。
【０１８４】
式（Ｄ−３）、（Ｄ−３ａ）および（Ｄ−３ｂ）の代表的な化合物が、表２に列挙されており、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す。
【表２−１】
2021503005.tif 000048
【表２−２】
2021503005.tif 000049
【表２−３】
2021503005.tif 000050
【表２−４】
2021503005.tif 000051
【表２−５】
2021503005.tif 000052
1列挙された化学名は、波線によって表示されている位置に水素原子を有する対応する非コンジュゲート化合物(すなわち、第一級および第二級アミン)の化学名である。
【０１８５】
式（Ｄ−３）、（Ｄ−３ａ）および（Ｄ−３ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、対応する非コンジュゲート化合物から生成され、この非コンジュゲート化合物は、スキームＤ−３に準拠して、および／または当分野において公知の方法を使用して合成することができる。
スキームＤ−３
【化３８】
2021503005.tif 000053
（式中、Ｒ１、ｑおよびＲ３は、式（Ｄ−３）、（Ｄ−３ａ）および（Ｄ−３ｂ）に関して定義されている通りであり、Ｒ２０は、ＮＨ２であるか、または式（Ｄ−３ａ）および（Ｄ−３ｂ）について定義されている通りであり、ＲおよびＲ０は、必要に応じて置換されているヒドロカルビル基である）。
【０１８６】
Ｒ１がＣ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、Ｒ２０がＮＨ２であり、ｑが０である、一部の実施形態では、本化合物は、スキームＤ−３−ａに準拠して合成される。スキームＤ−３−ａにおける出発化合物（ＩＭＤＱ）を調製するのに有用な個々の反応工程の一層詳細な説明に関しては、例えば、米国特許第８，７２８，４８６号および同第９，４４１，００５号を参照されたい。
スキームＤ−３−ａ
【化３９】
2021503005.tif 000054
（式中、ＲおよびＲ０は、必要に応じて置換されているヒドロカルビル基である）。
【０１８７】
Ｘが−ＮＨ−である、式（Ｄ−３）の一部の実施形態、またはＲ１がＣ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）であり、Ｒ０が−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍが０であり、ＲＡがシクロアルキルである、式（Ｄ−３ａ）の一部の実施形態では、本化合物は、スキームＤ−３−ｂに準拠して合成される。
スキームＤ−３−ｂ
【化４０】
2021503005.tif 000055
（式中、Ｒ１、ｑおよびＲ３は、式（Ｄ−３）および（Ｄ−３ａ）に関して定義されている通りであり、Ｒは、シクロアルキル基である）。
【０１８８】
当業者は、様々な溶媒、触媒、還元剤、温度、反応時間および大気条件を含めた、他の合成経路を用いて、本明細書に記載される式（Ｄ−３）、（Ｄ−３ａ）および（Ｄ−３ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分を合成することができることを認識している。
【０１８９】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４）：
【化４１】
2021503005.tif 000056
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ｌは、Ｘまたは−ＣＨ２−Ｘ−であり、
Ｘは、−ＮＨ−または−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、または独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０１９０】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１０アリーレンである。
【０１９１】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているフェニレンである。一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである。一部の実施形態では、Ａは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３およびメチルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである。
【０１９２】
一部の実施形態では、Ａは、２，６−ジメチル−１，４−フェニレン；２，３−ジメチル−１，４−フェニレン；２，６−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，３−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，３，５，６−テトラメチル−１，４−フェニレン；または２，３，５，６−テトラフルオロ−１，４−フェニレンである。
【０１９３】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，３−フェニレンである。
【０１９４】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１０員のヘテロアリーレンである。
【０１９５】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているナフチレンである。一部の実施形態では、Ａは、１，４−ナフチレン、１，３−ナフチレンまたは２，７−ナフチレンである。一部の実施形態では、Ａは、２，６−ナフチレンである。
【０１９６】
一部の実施形態では、Ａは、４，７−ベンゾ［ｂ］チオフェンである。一部の実施形態では、Ａは、２，５−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾールである。
【０１９７】
一部の実施形態では、Ｌは、Ｘである。他の実施形態では、Ｌは、−ＣＨ２−Ｘ−である。
【０１９８】
一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ−である。一部の実施形態では、Ｘは、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−である。
【０１９９】
一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。
【０２００】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０、１、２または３であり、ＲＡは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルキレンからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２である。一部の実施形態では、独立して、ＲＡは、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロプロピルであり、ｍは、１または２である。一部の実施形態では、ｍは、０または１であり、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロヘキシルある。
【０２０１】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化４２】
2021503005.tif 000057
からなる群から選択される。
【０２０２】
一部の実施形態では、Ｒ０は、（シクロプロピル）メチル、２−（シクロプロピル）エチル、２−（シクロブチル）エチル、２−（シクロペンチル）エチルまたは２−（シクロヘキシル）エチルである。
【０２０３】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１０〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１５〜Ｃ２１アルキルである。
【０２０４】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ（例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂ（例えば、ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃである。一変形形態では、Ｒ１ｃは、シクロプロピルである。
【０２０５】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０２０６】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０２０７】
式（Ｄ−４）に関して記載されるＡ、ＬおよびＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−４）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、ｐ、Ｘ、ＲＡ、ｍ、ｑ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルであり、ｑは、０であり、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈであり、Ａは、１，４−ナフチレンであり、Ｌは、−ＣＨ２−Ｘ−であり、Ｘは、−ＮＨ−であり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０２０８】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４ａ）または（Ｄ−４ｂ）：
【化４３】
2021503005.tif 000058
（式中、
Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルであり、
Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１４アリーレンであるか、または独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から独立して選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１４員のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂまたは−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃであり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ１ｃは、Ｃ３〜Ｃ４シクロアルキルであり、ｐは、１または２であり、
Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルであり、
Ｒ３はそれぞれ、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２または−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２であり、
ｑは、０、１、２、３または４であり、
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す）
を有する。
【０２０９】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４ａ）を有する。一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４ｂ）を有する。
【０２１０】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ６〜Ｃ１０アリーレンである。
【０２１１】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているフェニレンである。一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである。一部の実施形態では、Ａは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＣＦ３およびメチルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである。
【０２１２】
一部の実施形態では、Ａは、２，６−ジメチル−１，４−フェニレン；２，３−ジメチル−１，４−フェニレン；２，６−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，３−ジフルオロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，６−ジクロロ−１，４−フェニレン；２，３，５，６−テトラメチル−１，４−フェニレン；または２，３，５，６−テトラフルオロ−１，４−フェニレンである。
【０２１３】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている１，３−フェニレンである。
【０２１４】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されている５〜１０員のヘテロアリーレンである。
【０２１５】
一部の実施形態では、Ａは、独立して、ハロゲン、および１〜８個のハロゲン原子によって必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているナフチレンである。一部の実施形態では、Ａは、１，４−ナフチレン、１，３−ナフチレンまたは２，７−ナフチレンである。一部の実施形態では、Ａは、２，６−ナフチレンである。
【０２１６】
一部の実施形態では、Ａは、４，７−ベンゾ［ｂ］チオフェンである。一部の実施形態では、Ａは、２，５−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾールである。
【０２１７】
一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４ａ）を有する。一部の実施形態では、ＤのＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、式（Ｄ−４ｂ）を有する。
【０２１８】
一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ５〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、Ｃ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ１０ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ１０〜Ｃ１４ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜２個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１個のハロゲン原子により置換されているＣ４〜Ｃ７ヒドロカルビルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、１〜４個のハロゲン原子により置換されているＣ１５〜Ｃ２１ヒドロカルビルである。
【０２１９】
一部の実施形態では、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、０、１、２または３であり、ＲＡは、独立して、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルキレンからなる群から選択される１〜４つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ６シクロアルキルである。一変形形態では、ｍは、１または２である。一部の実施形態では、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロプロピルであり、ｍは、１または２である。一部の実施形態では、ｍは、０または１であり、ＲＡは、独立して、メチルおよびメチレンからなる群から選択される１〜３つの基によって必要に応じて置換されているシクロヘキシルある。
【０２２０】
一部の実施形態では、Ｒ０は、以下：
【化４４】
2021503005.tif 000059
からなる群から選択される。
【０２２１】
一部の実施形態では、Ｒ０は、（シクロプロピル）メチル、２−（シクロプロピル）エチル、２−（シクロブチル）エチル、２−（シクロペンチル）エチルまたは２−（シクロヘキシル）エチルである。
【０２２２】
一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ４〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１０〜Ｃ１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ５〜Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ０は、分岐状Ｃ１５〜Ｃ２１アルキルである。
【０２２３】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、ｎ−ブチル）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＯＲ１ａ（例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＮＨＲ１ｂ（例えば、ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ３）である。一部の実施形態では、Ｒ１は、−（ＣＨ２）ｐＲ１ｃである。一変形形態では、Ｒ１ｃは、シクロプロピルである。
【０２２４】
一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＲ２０ａであり、Ｒ２０ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２またはメチルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ＮＨＯＨ、ＮＨＮＨ２またはＮＨＣＨ３である。
【０２２５】
一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈである。
【０２２６】
一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、無置換である（すなわち、ｑは０である）。一部の実施形態では、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンコアのフェニル部分は、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ７アルキレン）−ＮＨ２および−ＣＨ２−フェニレン−ＣＨ２ＮＨ２からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つまたは４つの置換基により置換されている。一部の実施形態では、ｑは、１であり、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。
【０２２７】
式（Ｄ−４ａ）に関して記載されるＡおよびＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−４ａ）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ２０、ｐ、ＲＡ、ｍ、ｑ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。同様に、式（Ｄ−４ｂ）に関して記載されるＡおよびＲ０のありとあらゆる変形体は、存在する場合、ありとあらゆる組合せが具体的および個別に記載される場合と同じように、式（Ｄ−４ｂ）に関して記載されるＲ１、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ２０、ｐ、ＲＡ、ｍ、ｑ、Ｒ３、Ｒ４ａおよびＲ４ｂのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。例えば、式（Ｄ−４ａ）の一部の実施形態では、Ｒ１は、ｎ−ブチルであり、Ｒ２０は、ＮＨ２であり、ｑは、０であり、Ｒ４ａおよびＲ４ｂはそれぞれ、Ｈであり、Ａは、１，４−ナフチレンであり、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｍＲＡであり、ｍは、１または２であり、ＲＡは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０２２８】
式（Ｄ−４）、（Ｄ−４ａ）および（Ｄ−４ｂ）の代表的な化合物は、表３に列挙されており、波線は、式（Ｉ）中のＤの結合点を表す。
【表３−１】
2021503005.tif 000060
【表３−２】
2021503005.tif 000061
【表３−３】
2021503005.tif 000062
1列挙された化学名は、波線によって表示されている位置に水素原子を有する対応する非コンジュゲート化合物(すなわち、第一級および第二級アミン)の化学名である。
【０２２９】
式（Ｄ−４）、（Ｄ−４ａ）および（Ｄ−４ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分は、対応する非コンジュゲート化合物から生成され、この非コンジュゲート化合物は、スキームＤ−４に準拠して、および／または当分野において公知の方法を使用して合成することができる。
スキームＤ−４
【化４５】
2021503005.tif 000063
（式中、Ｒ１、ｑ、Ｒ３およびＡは、式（Ｄ−４）、（Ｄ−４ａ）および（Ｄ−４ｂ）に関して定義されている通りであり、Ｒ２０は、ＮＨ２であるか、または式（Ｄ−４ａ）および（Ｄ−４ｂ）に関して定義されている通りであり、ＲおよびＲ０は、必要に応じて置換されているヒドロカルビル基である）。
【０２３０】
当業者は、様々な溶媒、触媒、還元剤、温度、反応時間および大気条件を含め、他の合成経路を用いて、本明細書に記載される式（Ｄ−４）、（Ｄ−４ａ）および（Ｄ−４ｂ）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分を合成することができることを認識している。
Ｂ．自己脱離性リンカー
【０２３１】
当業者は、ＡＤＣに関すると、本明細書に記載される式（Ｉ）のものなどのＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートは、安定的にコンジュゲートされている場合、より低い生物活性を有すること、およびＴＬＲ７／８アゴニストの元の（すなわち、非コンジュゲート）化学形態を放出するように、腫瘍微小環境中で切断が起こると、より大きなＴＬＲ７／８アゴニストの生物活性を有することを認識している（Beck  et  al.  2017,  Nature  Reviews  16:315-337;  Dubowchik  et  al.  2002,  Bioconj  Chem  13:855-869）。本開示では、自己脱離性リンカー部分（式（Ｉ）の中Ｌ１）は、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物（式（Ｉ）中のＤ）と切断可能なリンカー部分（式（Ｉ）中のＬ２）とを共有結合により連結するために使用される。式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１の存在により、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄが、比較的不活性な状態で維持される。腫瘍微小環境中で切断可能なリンカーＬ２の加水分解後、この自己脱離性リンカーＬ１は、上記の部分をＴＬＲ７／８アゴニストコンジュゲートから脱離させて、ＴＬＲ７／８アゴニストの非コンジュゲート化学形態を放出する自発的な化学転位を受ける。
【０２３２】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニスト部分（Ｄ）中のアミノ基は、化学コンジュゲートを自己脱離性リンカーにすることが可能な反応性化学基として働くことができる。一部の実施形態では、１−（アミノメチルベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（例えば、式（Ｄ−１ａ−１）または（Ｄ−１ｂ−１）の化合物を参照されたい）のＮ１−ベンジル基上の第一級アミンを、Ｌ１を式（Ｉ）中のＤにコンジュゲートするために使用することができる。一部の実施形態では、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン誘導体（例えば、表１〜３の化合物番号６４−０１〜６４−５０および６４−５８〜６４−６９を参照されたい）のキノリン環上の第一級アミンは、Ｌ１を式（Ｉ）中のＤにコンジュゲートするために使用することができる。一部の実施形態では、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン誘導体（例えば、表１〜３の化合物番号６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａを参照されたい）の第二級アミン（すなわち、式（Ｄ−２）、（Ｄ−３）および（Ｄ−４）中の置換基Ｘ）は、Ｌ１を式（Ｉ）中のＤにコンジュゲートするために使用することができる。しかし、これらのアミノ基の誘導体化は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニスト活性の低下をもたらす恐れがある。したがって、コンジュゲートが一旦、切断されると、その元の形態（すなわち、非コンジュゲート形態；すなわち、遊離第一級アミン基を有する化合物として）のＴＬＲ７／８アゴニスト部分を放出するリンカーを有することが望ましい。本開示の自己脱離性リンカーは、特定の結合の切断が、リンカーの自己破壊および元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＬＲ７／８アゴニスト部分の再生成をもたらす、一連の１，６−および／または１，４−脱離反応の引き金となる系を実現する。
【０２３３】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１は、１つまたは複数の１，６−および／または１，４−脱離反応によって特定の結合が切断されると、式（Ｉ）の化合物から脱離することができる部分である。
【０２３４】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物中の自己脱離性リンカーＬ１は、式（Ｌ−１）：
【化４６】
2021503005.tif 000064
（Ｙ１は、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているアリーレンであり、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されているアルキルである）
を有する。
【０２３５】
一部の実施形態では、Ｙ１は、ＳまたはＮＨである。一部の実施形態では、Ｙ１は、Ｓである。一部の実施形態では、Ｙ１は、ＮＨである。
【０２３６】
一部の実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれＨである。
【０２３７】
一部の実施形態では、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているフェニレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、必要に応じて置換されている１，４−フェニレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、必要に応じて置換されている１，２−フェニレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているナフチレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、必要に応じて置換されている１，４−ナフチレン、必要に応じて置換されている１，２−ナフチレンまたは必要に応じて置換されている２，６−ナフチレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、１，４−フェニレンである。一部の実施形態では、Ａｒ１は、１，２−フェニレンである。
【０２３８】
一部の実施形態では、Ａｒ１は、１，４−フェニレンであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、Ｈであり、Ｌ１は、式（Ｌ−１ａ）：
【化４７】
2021503005.tif 000065
を有する。
【０２３９】
一部の実施形態では、Ａｒ１は、１，２−フェニレンであり、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、Ｈであり、Ｌ１は、式（Ｌ−１ｂ）：
【化４８】
2021503005.tif 000066
を有する。
【０２４０】
一部の実施形態では、Ｙ１は、ＮＨであり、Ｌ１は、以下：
【化４９】
2021503005.tif 000067
である。
【０２４１】
一部の実施形態では、Ｙ１は、Ｓであり、Ｌ１は、以下：
【化５０】
2021503005.tif 000068
である。
【０２４２】
薬物コンジュゲートに有用な他の自己脱離性リンカー、例えば、それらの開示が参照により本明細書に組み込まれている、Blencowe  et  al.  2011,  Polymer  Chem  2:773-790；および米国特許第６，１８０，０９５号に記載される自己脱離性リンカーは、当分野で公知である。当業者は、他の自己脱離性リンカーが機能的に等価となり得ることを認識しているので、本明細書において提供されている自己脱離性リンカーの説明は、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０２４３】
本発明の自己脱離性リンカー部分は、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートに２つの重要な性質を付与する。第１に、自己脱離性リンカー部分が、ＴＬＲ７／８アゴニストに接続されると、それらのリンカー部分は、ＴＬＲ７／８アゴニストを比較的不活性な状態に維持する。第２に、脱離性リンカー部分は、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２の加水分解時に、自己脱離して、その元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＬＲ７／８アゴニスト部分を生じる。したがって、一部の実施形態では、式（Ｉ）におけるＬ１−Ｄは、式（Ｌ１−Ｄ−１）、（Ｌ１−Ｄ−２）、（Ｌ１−Ｄ−３）または（Ｌ１−Ｄ−４）：
【化５１】
2021503005.tif 000069
【化５２】
2021503005.tif 000070
を有する。
【０２４４】
一部の実施形態では、式（Ｉ）におけるＬ１−Ｄは、式（Ｌ１−Ｄ−２ａ）、（Ｌ１−Ｄ−２ｂ）、（Ｌ１−Ｄ−３ａ）、（Ｌ１−Ｄ−３ｂ）、（Ｌ１−Ｄ−４ａ）または（Ｌ１−Ｄ−４ｂ）：
【化５３】
2021503005.tif 000071
を有する。
【０２４５】
一部の実施形態では、式（Ｉ）におけるＬ１−Ｄは、以下：
【化５４】
2021503005.tif 000072
である。
【０２４６】
一部の実施形態では、式（Ｉ）におけるＬ１−Ｄは、以下：
【化５５】
2021503005.tif 000073
【化５６】
2021503005.tif 000074
である。
【０２４７】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物におけるＬ１は、結合であり、式（Ｉ）の化合物は、Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｄ］ｘである。一部の実施形態では、式（Ｉ）におけるＬ１−Ｄは、以下：
【化５７】
2021503005.tif 000075
（Ｌ１は、結合である）である。
Ｃ．切断可能なリンカー
【０２４８】
式（Ｉ）における切断可能なリンカー部分Ｌ２は、腫瘍微小環境への式（Ｉ）の化合物の局在化または保持の際に、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄの元（すなわち、非コンジュゲート）の形態のその後の放出を可能にする。一部の実施形態では、Ｌ１は、自己脱離性リンカーであり、コンジュゲーション部分Ｆおよびコンジュゲーションリンカー部分Ｗ−Ｌ３（すなわち、式（Ｉ）中のＦ−Ｗ−Ｌ３）は、切断可能なリンカー部分Ｌ２を介して、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄおよび自己脱離性リンカーＬ１（すなわち、式（Ｉ）中の−Ｌ１−Ｄ）に共有結合によりコンジュゲートされている。一部の実施形態では、Ｌ１は、結合であり、コンジュゲーション部分Ｆおよびコンジュゲーションリンカー部分Ｗ−Ｌ３（すなわち、式（Ｉ）中のＦ−Ｗ−Ｌ３）は、切断可能なリンカー部分Ｌ２を介して、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄに共有結合によりコンジュゲートされており、式（Ｉ）の化合物は、Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｄ］ｘである。
【０２４９】
当業者は、ＡＤＣの開発において、切断可能なリンカー系を非常に強力な化学治療薬の抗体標的化に利用して（例えば、Beck  et  al.  2017,  Nature  Reviews  16:315-337を参照されたい）、がん治療剤として次第に強力な細胞傷害剤を使用した場合に観察される狭い治療域に対処することを認識しているであろう。ＡＤＣの構築に使用される切断可能なリンカーは、一般に、以下の３つのクラス：１）酵素に不安定なペプチドをベースとするリンカー、２）グルチオン還元により切断可能なジスルフィドリンカー、および３）酸性条件下で加水分解を受け易いリンカーに収まる（Nolting,  B.  2013,  Methods  Mol  Biol  1045:71-100）。
【０２５０】
一部の実施形態では、式（Ｉ）における切断可能なリンカー部分Ｌ２は、ペプチドをベースとする切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、本開示の切断可能なリンカーＬ２はカテプシンＢなどのタンパク質分解性酵素によって切断され得るアミノ酸モチーフを含んで、元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄを生じるような方法で自己脱離する不安定な中間体を生じる（例えば、図２を参照されたい）。このような実施形態では、Ｌ２は、タンパク質分解性酵素（例えば、カテプシンＢ）により切断可能なペプチドなどのペプチドである。一部の実施形態では、Ｌ２は、２〜１０個、２〜８個、２〜６個または２〜４個のアミノ酸残基のペプチドリンカーである。一部の実施形態では、Ｌ２は、ジペプチドである。一部の実施形態では、Ｌ２は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のアミノ酸残基のペプチドである。
【０２５１】
本開示のアミノ酸残基には、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、ＴｒｐおよびＴｙｒなどのタンパク質構成アミノ酸；およびホモセリン、ホモアルギニン、シトルリン（「Ｃｉｔ」）、フェニルグリシン、タウリン、ヨードチロシン、セレノ−システイン、ノルロイシン（「Ｎｌｅ」）、ノルバリン（「Ｎｖａ」）、ベータ−アラニン、Ｌ−またはＤ−ナフトアラニン、オルニチン（「Ｏｒｎ」）などの、タンパク質中に見出されないものが含まれる。
【０２５２】
ペプチドをベースとする切断可能なリンカーは、腫瘍微小環境におけるある種の重要な酵素の差次的発現、および／または腫瘍細胞のエンドリソソームコンパートメントへの標的化治療剤の特異的取込みに依存する（例えば、Mason,  S.D.  and  Joyce,  J.A.  2011,  Trends  Cell  Biol  21:228-237;  Weidle,  U.H.  et  al.  2014,  Cancer  Genomics  Proteomics  11:67-79;  Doronina,  S.O.  et  al.  2003,  Nature  Biotechol  21:778-784を参照されたい）。一部の実施形態では、Ｌ２は、腫瘍微小環境において細胞により発現される、１つまたは複数のエンドソームまたはリソソームペプチダーゼまたはプロテアーゼ、あるいは１つまたは複数の細胞周囲ペプチダーゼまたはプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーである（例えば、Tanabe,  L.M.  and  List,  K.  2017,  FEBS  J  284:1421-1436;  Ulisse,  S.  et  al.  2009,  Curr  Cancer  Drug  Targets  9:32-71;  Uhland,  K.  2006,  Cell  Mol  Life  Sci  63:2968-2978;  LeBeau,  A.M.  et  al.  2013,  Proc  Nat  Acad  Sci  USA  110:93-98;  Liu,  C.  et  al.  2003,  Cancer  Res  63:2957-2964を参照されたい）。
【０２５３】
一部の実施形態では、Ｌ２は、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、Ｌ、Ｚおよび／またはＳを含む、エンドソームカテプシンにより切断可能なペプチドリンカーである。一部の実施形態では、Ｌ２は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、膜型セリンプロテアーゼ１（マトリプターゼ）、マトリプターゼ−２および／またはレグマインを含む、細胞周囲プロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーである。
【０２５４】
一部の実施形態では、Ｌ２は、カテプシンＢによって切断されるペプチドリンカーである。一部の実施形態では、Ｌ２は、アミノ酸配列ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４により記載されるカテプシンＢにより切断されるペプチドリンカーであり、ＡＡ１は存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシン、バリンまたはグリシンであり、ＡＡ２は存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、ＡＡ３は、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、ＡＡ４は、アルギニン、セリン、アラニン、β−アラニン  ロイシン、オルニチンまたはシトルリンである。
【０２５５】
一部の実施形態では、Ｌ２は、以下：
【化５８】
2021503005.tif 000076
【化５９】
2021503005.tif 000077
である。
【０２５６】
一部の実施形態では、Ｌ２は、１）マトリプターゼ、２）ヘプシン／膜貫通プロテアーゼ／セリン、３）ヒト気道トリプシン様／扁平上皮癌において示差的に発現するもの、および４）コリンを含む、酵素のＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼファミリーのメンバーにより特異的に切断可能なペプチドリンカーである。一部の実施形態では、Ｌ２は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、マトリプターゼ（膜型セリンプロテアーゼ１／ＳＴ１４およびマトリプターゼ−２／ＴＭＰＲＳＳ６および／またはレグマイン／ＬＧＭＮを含む）によって特異的に切断可能なペプチドリンカーである。
【０２５７】
一部の実施形態では、Ｌ２は、以下：
【化６０】
2021503005.tif 000078
である。
【０２５８】
一部の実施形態では、式（Ｉ）における切断可能なリンカー部分Ｌ２は、式（Ｉ）における自己脱離性リンカーＬ１とジスルフィドリンカー（−Ｓ−Ｓ−）を形成し、これは、腫瘍微小環境内で高レベルの還元剤による還元的チオリシスを受けて、元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄを生じるような方法で自己脱離する、不安定な中間体を生じ得る（例えば、図３を参照されたい）。腫瘍中の優先的なジスルフィドリンカー切断は、血漿中のより低いレベルの遊離システインに比べて、腫瘍微小環境および腫瘍細胞のサイトゾルにおいて見出される、比較的高いレベルの還元型グルタチオンに依存する（例えば、Brulisauer,  L.  et  al.  2014,  J  Controlled  Release  195:147-154;  Flygare  et  al.  2013,  Chem  Biol  Drug  Des  81:113-121;  Yang  et  al.  2006,  PNAS  103:13872-13877を参照されたい）。ジスルフィド結合の血漿中安定性と腫瘍切断との間でのバランス（相対的に還元性のチオリシス）は、隣接アルキル基の非存在、または存在によって調節され得ることが当業者によって理解される（例えば、Hamann,  P.R.  et  al.  2002,  Bioconjugate  Chem  13:40-46;  Lambert,  J.M.  2013,  Br  J  Clin  Pharmacol  76:248-262を参照されたい）。
【０２５９】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２は、式（Ｌ−２）：
【化６１】
2021503005.tif 000079
（式中、Ｙ２は、ＮＲ３０、ＯまたはＳであり、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、独立して、Ｈ、必要に応じて置換されているアルキルもしくは必要に応じて置換されているシクロアルキルであるか、またはＲ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４のうちの２つがそれらが結合している原子（単数または複数）と一緒になって、必要に応じて置換されているシクロアルキルまたは必要に応じて置換されているヘテロシクリルを形成する）
を有する。式（Ｌ−２）の硫黄原子は、式（Ｉ）のＬ１部分の硫黄原子とジスルフィド結合を形成し、（Ｌ−２）のＹ２は、コンジュゲーションリンカーＬ３に結合する。
【０２６０】
一部の実施形態では、Ｙ２は、ＮＲ３０、ＯまたはＳであり、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたはＣ３〜Ｃ８シクロアルキルである。一部の実施形態では、Ｙ２は、ＮＨであり、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｙ２は、ＮＨであり、Ｒ３３およびＲ３４は、それぞれ、Ｈであり、Ｒ３１およびＲ３２は、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキル（例えば、メチル）である。一部の実施形態では、Ｙ２は、ＮＲ３０であり、Ｒ３０は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル（例えば、メチル）である。一部の実施形態では、Ｒ３１およびＲ３２は、それぞれ、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ３１は、Ｈであり、Ｒ３２は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル（例えば、メチル）である。一部の実施形態では、Ｒ３１およびＲ３２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ８アルキル（例えば、メチル）である。一部の実施形態では、Ｙ２は、ＮＨであり、Ｒ３３およびＲ３４は、それぞれ、Ｈであり、Ｒ３１およびＲ３２は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルまたは３〜８員のヘテロシクリルを形成する。一部の実施形態では、Ｒ３１およびＲ３２は、一緒になって、Ｃ２〜Ｃ６アルキレンまたはＣ２〜Ｃ６アルキレンを形成し、その炭素原子のうちの１個または複数は、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子により置き換えられている（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−）。
【０２６１】
一部の実施形態では、Ｌ２は、式（Ｌ−２ａ）、（Ｌ−２ｂ）、（Ｌ−２ｃ）または（Ｌ−２ｄ）：
【化６２】
2021503005.tif 000080
【化６３】
2021503005.tif 000081
を有する。
【０２６２】
薬物コンジュゲートに有用な他のジスルフィドリンカー、例えば、それらの開示が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第７，２７６，２４８号および同第７，５９２，３０７号に記載されるジスルフィドリンカーは、当分野で公知である。
【０２６３】
切断可能なリンカーＬ２は、式（Ｉ）における自己脱離性リンカーＬ１に共有結合によりコンジュゲートされている（すなわち、式（Ｉ）中の−Ｌ２−Ｌ１−）。一部の実施形態では、Ｌ２は、自己脱離性リンカーＬ１に共有結合によりコンジュゲートされており、Ｌ１は、式（Ｌ−１）：
【化６４】
2021503005.tif 000082
（式中、Ｙ１は、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、Ａｒ１は、必要に応じて置換されているアリーレンであり、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１〜Ｃ８アルキルである）
を有する。
【０２６４】
一部の実施形態では、Ｌ２は、ペプチドリンカーであり、Ｙ１は、ＮＨであり、−Ｌ２−Ｌ１−部分は、式（Ｌ−２−Ｌ−１）：
【化６５】
2021503005.tif 000083
（式中、Ａｒ１、Ｒ１１およびＲ１２は、式（Ｌ−１）について定義されている通りであるか、または本明細書に記載される任意の変形体であり、ＡＡ１およびＡＡ２は、独立して、アミノ酸残基である）
を有する。一部の実施形態では、ＡＡ１は、リシン、アセチルまたはホルミルにより保護されているリシン、アルギニン、トシル基またはニトロ基により保護されているアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、アセチルまたはホルミルにより保護されているオルニチン、およびシトルリン（例えば、リシンまたはシトルリン）からなる群から選択されるアミノ酸の残基を含み、ＡＡ２は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびプロリン（例えば、フェニルアラニン、ロイシンまたはバリン）からなる群から選択されるアミノ酸の残基を含む。一部の実施形態では、ＡＡ１は、シトルリン残基（Ｃｉｔ）であり、ＡＡ２は、バリン残基（Ｖａｌ）である。
【０２６５】
一部の実施形態では、Ｌ２は、式（Ｉ）の自己脱離性リンカーＬ１とジスルフィド結合を形成する。一部の実施形態では、Ｙ１は、Ｓであり、−Ｌ２−Ｌ１−は、式（Ｌ−２ａ−Ｌ−１ａ）：
【化６６】
2021503005.tif 000084
（式中、Ａｒ１、Ｒ１１およびＲ１２は、式（Ｌ−１）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に記載される任意の変形体であり、Ｙ２、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ３３およびＲ３４は、式（Ｌ−２）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に記載される任意の変形体である）
を有する。
【０２６６】
当業者が、他の切断可能なリンカーが機能的に等価となり得ることを認識しているので、本明細書において提供される切断可能なリンカーの説明は、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０２６７】
一部の実施形態では、Ｌ１は、結合であり、切断可能なリンカーＬ２は、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄに直接、結合している。
Ｄ．コンジュゲーション部分およびコンジュゲーションリンカー
【０２６８】
当業者は、腫瘍微小環境内における式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積を容易にするため、または局所投与の部位における式（Ｉ）の化合物の保持を容易にするためのどちらかに用いられ得る、いくつかのコンジュゲーション部分／リンカー（すなわち、式（Ｉ）中のＦ−Ｗ−Ｌ３−）が存在することを認識している。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、治療剤である。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ワクチンアジュバントである。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のコンジュゲーション部分／リンカーは、腫瘍内注射によって腫瘍に直接投与されるか、または局所腫瘍周辺保持のための皮下もしくは筋肉内注射による腫瘍病変に隣接する組織に投与される、ナノ／マイクロ粒子をベースとするコンジュゲーション部分で構成される。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のコンジュゲーション部分／リンカーは、腫瘍標的抗体コンジュゲーション部分で構成される（これは、腫瘍微小環境内における式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積のために、静脈内、腹腔内または皮下注射によって投与される）。ナノ／マイクロ粒子をベースとするまたは抗体をベースとするコンジュゲーション部分（式（Ｉ）中のＦ−Ｗ−Ｌ３−）は、腫瘍微小環境内、または局所投与の部位において、式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積および／または保持を容易にすることができ、これにより、式（Ｉ）中の切断可能なリンカー部分Ｌ２の切断時および自己脱離性リンカーＬ１の自己脱離時に、標的組織中で式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄの元の（すなわち、非コンジュゲート）形態を放出することが可能となる。
粒子をベースとするコンジュゲーション部分
【０２６９】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中のコンジュゲーション部分Ｆは、１）腫瘍微小環境への式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積、または２）局所投与の部位における式（Ｉ）の化合物の保持を容易にすることができる、マイクロ／ナノ粒子をベースとするコンジュゲーション部分である。一部の実施形態では、式（Ｉ）のコンジュゲーション部分Ｆは、１）腫瘍微小環境への式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積、または２）局所投与の部位における式（Ｉ）の化合物の保持を容易にすることができる、物理特性（例えば、電荷、サイズ、形状、疎水性など）または表面の化学修飾（例えば、腫瘍細胞特異的結合性リガンド）を有する。続いて、コンジュゲーション部分Ｆにより容易にされる、標的組織における式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積または保持により、切断可能なリンカーＬ２のその後の切断時、および自己脱離性リンカーＬ１の自己脱離時に、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄの標的組織での放出が起こることが可能となる。
【０２７０】
一部の実施形態では、粒子をベースとするコンジュゲーション部分は、ナノ粒子ポリマー（例えば、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー、より具体的には、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標））である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は、高分子量多糖（例えば、デキストラン）である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は、合成ポリマー［例えば、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド）］である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は、デンドリマー（例えば、トリス（２−アミノエチル）アミン由来デンドリマー）である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は、ポリペプチド（例えば、がん抗原）である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分はタンパク質である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は、ウイルス様粒子である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分は一価であり、すなわち、コンジュゲーション部分はそれぞれ、１つのＴＬＲ７／８アゴニスト部分に結合している（例えば、ｘが１である、式（Ｉ）の化合物）。一部の実施形態では、コンジュゲート部分は多価である、すなわち、コンジュゲーション部分はそれぞれ、複数のＴＬＲ７／８アゴニスト部分式（Ｉ）の化合物に結合することができ、例えば、ｘが１より大きい（例えば、最大５００）。
マクロ分子、超分子、ナノ粒子、マイクロ粒子
【０２７１】
ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物を腫瘍微小環境に優先的に標的とさせる、または所望の解剖学的部位における局所保持を増強するマクロ分子および超分子、特に、約５，０００ダルトン〜約２，０００，０００ダルトンの分子量を有するマクロ分子および超分子、例えば、ナノ粒子ポリマー（例えば、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー、より具体的には、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標））、高分子量多糖（例えば、デキストラン）および合成ポリマー（例えば、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド））が、本開示の切断可能なコンジュゲートのためのコンジュゲーション部分として有用である。
【０２７２】
一部の実施形態では、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分は、直径が≧１０ｎｍのナノ粒子ポリマーである。一部の実施形態では、ナノ粒子ポリマーは、直径が１０〜１５０ｎｍである。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子は、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー、またはエピクロロヒドリン−架橋化スクロース、例えば、ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅによるＦＩＣＯＬＬ（登録商標）として商標販売されているスクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーである。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分は、高分子量多糖である。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分は、合成ポリマー（例えば、ポリ（ヒドロキシプロピルメタクリルアミド））である。
【０２７３】
ＴＬＲ７／８アゴニスト部分に連結することが可能となるように誘導体化された多糖は、本開示の切断可能なコンジュゲートのためのコンジュゲーション部分として使用することができる。好適な多糖は、天然に存在する多糖または合成多糖とすることができる。例示的な多糖には、例えば、デキストラン、マンニン（ｍａｎｎｉｎ）、キトサン、アガロースおよびデンプンが含まれる。一部の実施形態では、多糖は架橋されている。
【０２７４】
一部の実施形態では、本開示は、コンジュゲーション部分Ｆがマクロ分子または超分子である、式（Ｉ）の切断可能なコンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子は、約５０，０００〜約１，０００，０００ダルトンの分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーであり、これは、エーテル連結を介して、Ｌ３に結合している。エーテル連結は、コポリマー中のスクロースのヒドロキシル基から誘導される。一部の実施形態では、Ｆのマクロ分子または超分子コンジュゲーション部分は、（下限値）約５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、１００，０００、２００，０００、３００，０００、４００，０００または５００，０００ダルトンより大きな分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーである。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分Ｆは、（上限値）約１，０００，０００、９００，０００、８００，０００、７００，０００、６００，０００、５００，０００、４００，０００、３００，０００または２００，０００ダルトン未満の分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーである。すなわち、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分Ｆの分子量は、約５０，０００〜約１，０００，０００ダルトンのサイズの範囲のいずれかとすることができ、この場合、下限値は上限値より小さい。一部の実施形態では、Ｆのマクロ分子または超分子コンジュゲーション部分は、約３００，０００〜１，０００，０００ダルトンの分子量を有する（例えば、ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＦＩＣＯＬＬ（登録商標）ＰＭ４００）。一部の実施形態では、マクロ分子または超分子コンジュゲーション部分Ｆは、約２０，０００〜１００，０００ダルトンの分子量を有する（例えば、ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＦＩＣＯＬＬ（登録商標）ＰＭ７０）。
【０２７５】
一部の実施形態では、コンジュゲーション部分Ｆは、多糖中のヒドロキシル基に由来するエーテル連結を介して、Ｌ３に結合している、約５，０００〜約２，０００，０００ダルトンの分子量を有する多糖（例えば、デキストラン）である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分Ｆは、（下限値）約５，０００、１０，０００、２５，０００、５０，０００、１００，０００、２００，０００、５００，０００または１，０００，０００ダルトンより大きな分子量を有する多糖（例えば、デキストラン）である。一部の実施形態では、コンジュゲーション部分Ｆは、（上限値）約２，０００，０００、１，０００，０００、５００，０００、２００，０００、１００，０００、５０，０００、２０，０００または１０，０００ダルトン未満の分子量を有する多糖である。すなわち、多糖の分子量は、約５，０００〜約２，０００，０００ダルトンのサイズの範囲のいずれかとすることができ、この場合、下限値は上限値より小さい。
【０２７６】
コンジュゲーション部分Ｆが多糖（例えば、デキストラン）またはスクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標））であるコンジュゲートの場合、式（Ｉ）の化合物中のＴＬＲ７／８アゴニストＤの数は、３〜約５００の範囲とすることができる。すなわち、ｘは、３〜５００の整数である。一部の実施形態では、ｘは、（下限値）３、６、９、１２、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１８０、２００、２５０または３００より大きな整数である。一部の実施形態では、ｘは、（上限値）５００、４００、３００、２７５、２５０、２２５、２００、１９０、１８０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０または３０未満の整数である。すなわち、ｘは、約３〜５００の範囲の整数とすることができ、この場合、下限値は上限値より小さい。例えば、一部の実施形態では、ｘは、２０〜５００、２０〜２００、３０〜１８０、３０〜１５０、５０〜１００、６０〜１８０、９０〜１５０、１００〜１４０または１１０〜１３０である。一部の実施形態では、ｘは、約１２０±３０または約７０±２０である。
【０２７７】
式（Ｉ）の化合物中のＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄのローディングレベルはまた、式（Ｉ）の化合物の分子量に対する、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄの数、例えば、式（Ｉ）の化合物１００，０００ダルトン（すなわち１００ｋＤａ）あたりのＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄの数（「相対ローディング比」）として表すことができる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、コンジュゲーション部分Ｆの分子量１００ｋＤａあたり約１〜約２００の間のＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄを含有し、すなわち、１００ｋＤａのＦあたり約１〜約２００のＤの間となる相対ローディング比となる。一部の実施形態では、相対ローディング比は、１００ｋＤａのＦあたり、約５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または２００のＤである。一部の実施形態では、相対ローディング比は、１００ｋＤａのＦあたり、（下限値）３、６、９、１２、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０または１８０より大きなＤである。一部の実施形態では、相対ローディング比は、１００ｋＤａのＦあたり、（上限値）２００、１９０、１８０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０または３０未満のＤである。相対ローディング比は、１００ｋＤａのＦあたり、約１〜２００のＤの範囲にあることができ、この場合、下限値は上限値より小さい。例えば、一部の実施形態では、相対ローディング比は、１００ｋＤａのＦあたり約５〜約２００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１０〜約１８０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１０〜約５０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１０〜約２０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約２０〜約２００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約２０〜約１００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約２０〜約５０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約３０〜約１５０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約４０〜約１００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約５０〜約１５０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約５０〜約１００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約８０〜約２００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約８０〜約１６０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約８０〜約１２０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１００〜約２００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１００〜約１５０の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１２０〜約２００の間のＤ、１００ｋＤａのＦあたり約１２０〜約１５０の間のＤ、または１００ｋＤａのＦあたり約１５０〜約２００の間のＤである。
デンドリマー
【０２７８】
デンドリマーもまた、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物を腫瘍微小環境に優先的に標的化させるため、または所望の解剖学的部位で局所保持を増強するために使用することができる。一部の実施形態では、本開示は、コンジュゲーション部分Ｆがデンドリマーであり、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄが、切断可能なリンカーを介して、デンドリマーの末端官能基に共有結合により連結されている、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【０２７９】
一部の実施形態では、デンドリマーは、トリス（２−アミノエチル）アミン由来のデンドリマーであり、このデンドリマーは、末端アミノ基を介して、コンジュゲーションリンカーＬ３に結合している。一部の実施形態では、式（ＩＩ）：
｛Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｎ）３｝［−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］６      （ＩＩ）
（式中、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に詳述されているその任意の変形体である）
の化合物が提供される。
【０２８０】
他のデンドリマー、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれている、Carlmark  et  al.  2013  Chem.  Soc.  Rev.,  42:5858-5879に記載される２，２−ビスメチロールプロピオン酸（ビス−ＭＰＡ）をベースとするデンドリマーもまた、本開示の切断可能なコンジュゲートのためのコンジュゲーション部分Ｆとして使用することができる。
【０２８１】
一部の実施形態では、式（Ｉ）のコンジュゲーション部分Ｆは、ヒドロキシル基に由来するエーテル連結を介して、ＴＬＲ７／８アゴニストＤに結合している、式（Ｆ−１）のビス−ＭＰＡデンドリマー：
【化６７】
2021503005.tif 000085
（式中、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に詳述されているその任意の変形体であり、ｘは、１６〜６４である）である。
【０２８２】
一部の実施形態では、式（Ｉ）のコンジュゲーション部分Ｆは、ヒドロキシル基に由来するエーテル連結を介して、ＴＬＲ７／８アゴニストＤに結合している、式（Ｆ−２）：
【化６８】
2021503005.tif 000086
（式中、ｎは、１００〜１０００であり、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に詳述されているその任意の変形体であり、ｘは、４〜３２である）
のポリ（エチレングリコール）をベースとするビス−ＭＰＡデンドリマーである。一部の実施形態では、ポリ（エチレングリコール）をベースとするビス−ＭＰＡデンドリマーは、約５，０００〜約５０，０００ダルトンの分子量を有する（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）から入手可能なＰＥＧ−コアデンドリマー）。
【０２８３】
一部の実施形態では、コンジュゲーション部分Ｆは、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）をベースとするデンドリマー、例えば、スキームＦ−３：
【化６９】
2021503005.tif 000087
（式中、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）に関して定義されている通りであるか、または本明細書に詳述されているその任意の変形体であり、ｘは、１６である（または、コア構造がさらに拡張されている場合、より大きく、最大で４０００まで））に示されているコア構造であり、このデンドリマーは、例えば、ＰＡＭＡＭ分子中の表面ヒドロキシル基に由来するエーテル連結を介して、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄに結合し得る。コンジュゲーション部分Ｆがデンドリマーである、式（Ｉ）の化合物は、当分野において公知の方法および本明細書に記載される方法を使用して作製することができる。例えば、本明細書に記載されるデンドリマー上の表面ヒドロキシル基は、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）の表面のヒドロキシル基にＩＭＤＱを連結させるための本明細書に記載される方法に類似のクリック化学を使用して、アジド連結ＩＭＤＱ化合物との反応のためのプロパルギルアミン−カルボキシメチル（ＰＡＣＭ）基に変換することができる（例えば、Kolb,  H.C.  et  al.  2001,  Angew  Chem  Int  Ed  Engl  40:2004-2021;  Kolb,  H.C.  and  Sharpless,  K.B.  2003,  Drug  Discov  Today  8:1128-1137を参照されたい）。
ポリペプチド
【０２８４】
一部の実施形態では、本開示は、コンジュゲーション部分Ｆが、例えば、少なくとも９個のアミノ酸残基を含むポリペプチドである、式（Ｉ）の化合物を提供する。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドコンジュゲーション部分は、ポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドは、がん抗原である。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドは、ウイルス抗原、細菌抗原またはアレルゲン抗原である。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドは、ポリアラニンを含む。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドは、ポリグルタミン酸を含む。一部の実施形態では、Ｆのポリペプチドは、抗原ではない。
【０２８５】
抗原にコンジュゲートされているＴＬＲ７／８アゴニストＤは、抗原（例えば、がん抗原）の免疫学的応答を増強する働きをすることができる。抗原コンジュゲートの場合、通常、１〜３０までのＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄが、ポリペプチド分子Ｆのそれぞれに連結し得る（本明細書において詳述されている適用可能な−Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−リンカーのいずれかを介して）（すなわち、ｘは、１〜３０の整数である）。一部の実施形態では、ｘは、１〜２０、１〜１０、１〜５、２〜３０、２〜２０、２〜１０、２〜５、３〜３０、３〜２０、３〜１５、３〜１０、５〜３０、５〜２０、５〜１５または５〜１０である。腫瘍抗原は、少なくとも１つの完全長タンパク質のアミノ酸配列またはその断片を含む。好適な腫瘍抗原は、当分野において記述されている（例えば、Cheever  et  al.,  2009,  Clinical  Cancer  Research,  15:5323-5337;およびCaballero  and  Chen,  2009,  Cancer  Science,  100:2014-2021を参照されたい）。例えば、好適な腫瘍抗原には、以下に限定されないが、ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、イディオタイプ、ＭＡＧＥ  Ａ３、ｐ５３、ＮＹ−ＥＳＯ−１（ＣＴＡＧ１Ｂ）、ＰＳＭＡ、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＭｅｌａｎＡ／Ｍａｒｔ１、Ｒａｓ、ｇｐ１００、プロテイナーゼ３、ｂｃｒ−ａｂｌｅ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント（ｓａｒｃｏｍａ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ）、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＰ−ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ、ＮＡ１７−Ａ、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＰｈｏＣ、ＴＲＰ−２、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＢＯＲＩＳ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７−Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ２、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＰＡＰ、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＣＥＡ、ＴＲＰ−１（ｇｐ７５）、ＢＡＧＥ１、ＢＡＧＥ２、ＢＡＧＥ３、ＢＡＧＥ４、ＢＡＧＥ５、ＣＡＭＥＬ、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２およびＦｏｓ関連抗原１が含まれる。代表的な腫瘍抗原のアミノ酸配列は、表４に列挙された受託番号でＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベースに掲載されており、参照により本明細書に組み込まれている。
【表４−１】
2021503005.tif 000088
【表４−２】
2021503005.tif 000089
【表４−３】
2021503005.tif 000090
【０２８６】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ｇｐ１００、ｈＴＥＲＴ、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＭＡＧＥ  Ａ３、ＭＡＧＥ  Ａ１０、ＭｅｌａｎＡ／Ｍａｒｔ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１（ＣＴＡＧ１Ｂ）、ＰＳＡ、Ｒａｓ、サバイビン、ＴＲＰ１（ｇｐ７５）、ＴＲＰ２およびチロシナーゼからなる群のうちの１つまたは複数に由来する、アミノ酸配列またはその断片を含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍により発現される、哺乳動物抗原（例えば、トリプルペプチド）またはウイルス抗原（例えば、ＨＰＶ１  Ｅ６および／またはＨＰＶ  Ｅ７）を含む。一部の実施形態では、哺乳動物抗原は、ネオ抗原であるか、または哺乳動物対象に由来する正常細胞に存在する遺伝子に対する突然変異を含む遺伝子によりコードされる。ネオ抗原は、Ｔ細胞ががん細胞と非がん細胞とを区別するのを可能にするのに特に有用と考えられている（例えば、Schumacher  and  Schreiber,  2015,  Science  348:69-74;  Desrichard  et  al.,  2016,  Clinical  Cancer  Res,  22:8-7-812;  Wang  and  Wang,  2017,  Cell  Research  27:11-37を参照されたい）。
【０２８７】
Ｆのポリペプチドは、システイン、Ｎ末端アミン、リシン、チロシン、メチオニン、アルギニン、グルタミン酸またはアスパラギン酸残基を介して、式（Ｉ）の化合物のＴＬＲ７／８アゴニスト含有部分に結合され得る（−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）。一部の実施形態では、Ｗは、Ｓであり、Ｆは、ポリペプチド部分（システインチオールを介してＬ３に結合している）である。一部の実施形態では、Ｗは、ＮＨであり、Ｆは、ポリペプチド部分（例えば、Ｎ末端アミンまたはリシン残基のアミノ酸を介して、Ｌ３に結合している）である。
【０２８８】
一部の実施形態では、式（Ｉ）のコンジュゲーション部分Ｆは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）である。
【０２８９】
コンジュゲーション部分ＦがポリペプチドまたはＶＬＰである式（Ｉ）の化合物は、当分野において公知の方法および本明細書に記載される方法を使用して合成することができる。ポリペプチドまたはＶＬＰは、ポリペプチドまたはＶＬＰのアミノ酸残基に存在するヒドロキシル基、チオール基、アミノ基またはカルボキシ基を使用することにより、式（Ｉ）の化合物のＴＬＲ７／８アゴニスト含有部分に結合され得る（−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）。例えば、ヒドロキシル基は、ヒドロキシル基を介してＦｉｃｏｌｌ（登録商標）をコンジュゲートすることについて本明細書に記載される方法を使用して、エーテル連結に変換することができる。チオール基は、マレイミド化合物との反応によって、チオエーテル連結またはスクシンイミド（succimide）スペーサーに変換することができる。
【０２９０】
式（Ｉ）の化合物に関して本明細書に詳述されているＦのありとあらゆる変形体は、ありとあらゆる組合せが個別に記載されるかのように、式（Ｉ）の化合物に関して本明細書において詳述されているＤのありとあらゆる変形体と組み合わせることができることが意図されており、理解される。例えば、一部の実施形態では、式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、３〜３００の整数であり、
Ｆは、約５０，０００〜約７００，０００ダルトンの分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー（例えば、ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＦＩＣＯＬＬ（登録商標）ＰＭ４００）であり、
Ｄは、１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン誘導体である）
の化合物が提供される。
【０２９１】
一部の実施形態では、Ｗは、Ｏである（すなわち、Ｆは、エーテル連結を介して、Ｌ３に接続している）。
【０２９２】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、切断可能なリンカーＬ２、自己脱離性リンカーＬ１、コンジュゲーションリンカーＬ３、および連結部Ｗを介して（−Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−として）、コンジュゲーション部分Ｆに連結されているＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄを含むポリマープロドラッグであり、Ｌ１は、自己脱離性リンカーであり、Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。Ｌ１が結合である一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、切断可能なリンカーＬ２、コンジュゲーションリンカーＬ３、および連結部Ｗを介して（−Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−として）、コンジュゲーション部分Ｆに連結されているＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄを含むポリマープロドラッグであり、Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルである。
抗体をベースとするコンジュゲーション部分
【０２９３】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中のコンジュゲーション部分Ｆは、抗体が、腫瘍細胞表面抗原、腫瘍微小環境細胞外基質の特有の構造要素、または腫瘍血管の特有の構造要素に優先的に結合する能力によって、腫瘍微小環境への式（Ｉ）の化合物の優先的な蓄積を引き起こす、腫瘍標的抗体コンジュゲーション部分である。これによって、切断可能なリンカーＬ２のその後の加水分解時に、およびＬ１が、自己脱離性リンカーである場合、自己脱離性リンカーＬ１の自己脱離時に、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分の局所放出が可能となる。一部の実施形態では、Ｌ１は、結合であり、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分の局所放出は、切断可能なリンカーＬ２のその後の加水分解時に起こる。
【０２９４】
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、３つの主な構造単位：腫瘍微小環境におけるタンパク質標的に特異的に結合する組換え抗体、非常に強力な細胞傷害剤、および共有結合性コンジュゲートにより、組換え抗体を細胞傷害剤に接続させる安定な合成リンカーからなる（例えば、Beck,  A.  et  al.  2017,  Nature  Rev  Drug  Discovery  16:315-337;  Sau,  S.  et  al.  2017,  Drug  Discov  Today  22:1547-1556を参照されたい）。腫瘍標的化抗体へのコンジュゲートにより、腫瘍微小環境（microenviroment）においてＡＤＣを優先的に蓄積することにより、これらの非常に強力な細胞傷害剤の治療域が改善され、次に、この腫瘍微小環境において、元の（すなわち、非コンジュゲート）細胞傷害剤（cytoxic  agent）が、切断可能なリンカーの優先的切断により放出される。現在、６０を超えるＡＤＣ治療薬が、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されているか、または現在、臨床試験中のどちらかにある。ＡＤＣの抗腫瘍効力に寄与する重要な性質は、腫瘍標的抗体であり、当分野の調査により、幅広い抗体標的が現在、検討中にあることが示されている（例えば、Beck,  A.  et  al.  2017,  Nature  Rev  Drug  Discovery  16:315-337;  Sau,  S.  et  al.  2017,  Drug  Discov  Today  22:1547-1556;およびWagh,  A.  et  al.  2018,  MABS  10:222-243を参照されたい）。
【０２９５】
ＡＤＣの別の重要な性質は、抗体：薬物比と一般に称される、抗体への切断可能なリンカー／細胞傷害剤のローディング量の範囲および均質性である。制御された均質な化学量論を有するＡＤＣ（一般に、抗体：薬物比は、非常に疎水性の細胞傷害剤の場合、２と６〜８との間となる）は、ｉｎ  ｖｉｖｏ効力の増強と解釈される優れた血漿中半減期を示すことが検討により示されている（Sun,  X.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:1371-1381;  Lyon,  R.P.  et  al.  2015,  Nat  Biotechnol  33:733-735）。抗体への切断可能なリンカー／細胞傷害剤のローディング量の程度および均質性の制御は、合成リンカーおよび抗体に対する反応性部分の選択を含めた、用いられる具体的なコンジュゲート化学によりもたらされる。最初のＡＤＣ構築物は、抗体の一次配列内の天然リシンおよびシステインアミノ酸への切断可能なリンカー−細胞傷害剤のコンジュゲートを含んだ（例えば、Lu,  J.  et  al.  2016,  Int  J  Mol  Sci  14:561;  Jain  N.  et  al.  2015,  Pharma  Res  32:3526-3540を参照されたい）。しかし、切断可能なリンカー−細胞傷害剤コンジュゲート化学のより最近の開発により、血漿中のより安定なリンカーの化学的性質と共に、抗体に一層高度に規定された数の反応部位を作製することにより、抗体：薬物比を一層正確に制御することが可能となる（例えば、Agarwal,  P.  et  al.  2013,  Bioconjug  Chem  24:846-851;  Kato,  A.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:2099-2108;  Sadowsky,  J.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:2086-2098;  Grunewald,  J.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:1906-1915;  Tang,  F.  et  al.  2017,  Nature  Protocols  12:1702-1721を参照されたい）。
【０２９６】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中のコンジュゲーション部分Ｆは、抗体または抗体誘導体である。一部の実施形態では、Ｆは、ネズミ配列、「ヒト化」ネズミ配列または完全ヒト配列を有する抗体である。一部の実施形態では、Ｆは、以下に限定されないが、二価一特異的抗体、二価二特異的抗体などを含む、ＩｇＧ１、２もしくは４のクラスの抗体、またはそれらの誘導体もしくは断片、あるいは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むＦｃ領域を有さない誘導体、およびタンデム二価ｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデム三価ｓｃＦｖ、トリアボディ、二特異的タンデム二価ｓｃＦｖなどの誘導体である（例えば、Weidle,  U.H.  et  al.  2014,  Seminars  in  Oncology  41:653-660などを参照されたい）。一部の実施形態では、ＩｇＧ足場は、分子のエフェクター機能をモジュレートするよう操作されている（例えば、Warncke,  M.  et  al.  2012,  J  Immunol  188:4405-4411;  Jacobsen,  F.W.  et  al.  2017,  J  Biol  Chem  292:1865-1875などを参照されたい）。
【０２９７】
本明細書において提供されているＡＤＣの記載は、他のＡＤＣが機能的に等価となり得ることを当業者が認識しているので、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０２９８】
一部の実施形態では、抗体、またはその誘導体もしくは断片は、腫瘍微小環境特異的抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体またはその誘導体もしくは断片は、腫瘍細胞表面マーカーに結合する。一部の実施形態では、抗体またはその誘導体もしくは断片は、ＨＥＲ２、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ（ｇｐＮＭＢ）、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ／ＰＳＭＡ）、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７１（トランスフェリン）、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ１１７（ＫＩＴ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１７４（Ｌｅｗｉｓ  Ｙ  ａｇ）、ＣＤ２２７（ＭＵＣ１）、ＣＤ３０３、ＣＤ３５２、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３（ＥＮＰＰ３）、ＴＩＭ３、ＬＹ６Ｅ、ＬＩＶ１、ネクチン４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＨＧＦＲ（ｃＭｅｔ）、ＳＬＡＭ７、ＢＣＭＡ、ＡＸＬ、ＮａＰｉ２Ｂ、ＧＣＣ、ＳＴＥＡＰ１、メソテリン、ＥＴＢＲ、ＥｐｈＡ２、５Ｔ４、ＦＯＬＲ１、ＣＥＡＣＡＭ５（ＣＤ６６ｅ）、ＬＡＭＰ１、カドヘリン、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＡ６、ＭＵＣ１６、インテグリンαＶ、ｃｒｉｐｔｏ１（ＴＤＧＦ１）、ＤＬＬ３、ＴＲＯＰ２、メソテリン、ＰＴＫ７、ＮＯＴＣＨ３、Ｃ４．４Ａ、ＦＬＴ３、ＬＩＶ−１、ＳＬＣ４４Ａ４、ＣＡ−ＩＸ、ＣａｎＡｇ、グアニリルシクラーゼＣ、Ｂ７Ｈ３、ＲＯＲ−１などに結合する。一部の実施形態では、抗体は、二特異的抗体、またはその誘導体もしくはその断片であり、ＥｐＣＡＭｘＣＤ３、ＨＥＲ２ｘＣＤ３、ＨＥＲ２ｘＣＤ６３、ＣＤ１９ｘＣＤ３、ＣＥＡｘＣＤ３、ＰＳＭＡｘＣＤ３、ＣＤ１２３ｘＣＤ３、ＣＤ３０ｘＣＤ１６Ａ、ＣＤ２０ｘＣＤ３、ＣＤ２２ｘＣＤ１９、ＣＥＡＣＡＭ５ｘＣＤ３０３、ＣＥＡＣＡＭ５ｘＣＤ１０３、ＣＥＡＣＡＭ５ｘＣＤ１１ｂ、ＨＥＲ２ｘＣＤ３０３、ＨＥＲ２ｘＣＤ１０３、ＨＥＲ２ｘＣＤ１１ｂなどに結合する。
【０２９９】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ（pyridyldthio））ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−ブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、マレイミドメチルシクロヘキサン−Ｉ−カルボキシレート（ＭＣＣ）、４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（ＡｃＢｕｔ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、それらの誘導体などを含む、当業者に周知のコンジュゲーションリンカーＬ３を使用して、天然リシン残基を介して、切断可能なリンカー／自己脱離性リンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）とコンジュゲートされている。一部の実施形態では、Ｌ１は結合であり、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−ブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、マレイミドメチルシクロヘキサン−Ｉ−カルボキシレート（ＭＣＣ）、４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（ＡｃＢｕｔ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、それらの誘導体などを含む、当業者に周知のコンジュゲーションリンカーＬ３を使用して、天然リシン残基を介して、切断可能なリンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｄ）とコンジュゲートされている。
【０３００】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドメチルシクロヘキサン−Ｉ−カルボキシレート（ＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、その誘導体などを含む、当業者に周知のコンジュゲーションリンカーＬ３を使用して、天然または操作されたシステイン残基を介して、切断可能なリンカー／自己脱離性リンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ−）とコンジュゲートされている。一部の実施形態では、Ｌ１は結合であり、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドメチルシクロヘキサン−Ｉ−カルボキシレート（ＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、その誘導体などを含む、当業者に周知のコンジュゲーションリンカーＬ３を使用して、天然または操作されたシステイン残基を介して、切断可能なリンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｄ−）とコンジュゲートされている。ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）により抗体を軽度に還元する方法は、当業者に周知である。抗体のジスルフィド結合の部分的還元により、タンパク質の二次構造および三次構造を撹乱することなく、ならびに凝集を引き起こすことなく、ある特定のシステイン残基にコンジュゲートすることが可能となる（例えば、Sun,  M.C.  et  al.  2005,  Bioconjug  Chem  16:1282-1290;  Doronina,  S.O.  et  al.  2003,  Nature  Biotechnology  21:778-784などを参照されたい）。
【０３０１】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、コンジュゲートに利用可能な抗体上の位置の数を制御することが可能なタンパク質工学技術を用いることにより、切断可能なリンカー／自己脱離性リンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、Ｌ１は結合であり、式（Ｉ）中の腫瘍標的化抗体Ｆは、コンジュゲートに利用可能な抗体上の位置の数を制御することが可能なタンパク質工学技術を用いることにより、切断可能なリンカー／ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（−Ｌ２−Ｄ）にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、式（Ｉ）中の抗体Ｆは、コンジュゲーションリンカーＬ３としてのマレイミドをベースとする試薬とコンジュゲートするために利用可能なシステイン残基数を制御するよう操作されている（例えば、Junutula,  J.R.  et  al.  2008,  Nat  Biotechnol  26:925-932;  Kung-Sutherland,  M.S.  et  al.  2013,  Blood  122:1455-1463;  Puthenveetil,  S.  et  al.  2017,  PlosOne  12:e0178452など）。一部の実施形態では、式（Ｉ）中の抗体Ｆは、直交コンジュゲーションリンカー（式（Ｉ）中のＬ３）を使用した化学コンジュゲートを可能にするよう一次配列に操作された１つまたは複数の非天然アミノ酸を有する。例えば、Tian.  F.  et  al.  2014,  Proc  Nat  Acad  Sci  USA  111:1766-1771;  Kato,  A.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:2099-2108などを参照されたい。一部の実施形態では、式（Ｉ）中の抗体Ｆは、コンジュゲーションリンカー（式（Ｉ）中のＬ３）の酵素支援ライゲーションを可能にするよう一次配列に操作された非天然アミノ酸配列を有する。例えば、Agarwal,  P.  et  al.  2013,  Bioconjug  Chem  24:846-851;  Dorywalska,  M.  et  al.  2015,  Bioconjug  Chem  26:650-659;  Grunewald,  J.  et  al.  2017,  Bioconjug  Chem  28:1906-1915などを参照されたい。一部の実施形態では、式（Ｉ）中の抗体Ｆは、コンジュゲーションリンカー（式（Ｉ）中のＬ３）の修飾グリカン残基へのライゲーションを可能にするよう、Ｎ−グリカン残基の代謝工学、化学的酸化または糖工学を施されている。例えば、Okeley,  N.M.  et  al.  2013,  Bioconjug  Chem  24:1650-1655;  Zhou,  Q.  et  al.  2013,  Bioconjug  Chem  25:510-520;  Tang,  F.  et  al.  2017,  Nature  Protocols  12:1702-1721などを参照されたい。
【０３０２】
一部の実施形態では、式（Ｉ）中の抗体Ｆの、式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄに対する比（式（Ｉ）中のｘ）は整数であり、ＦにコンジュゲートされているＤの集団分布平均の幾何平均は、１〜１０の間であることを示す。一部の実施形態では、ｘは整数であり、ＦにコンジュゲートされているＤの集団分布平均の幾何平均は、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４または２〜３の間であることを示す。一部の実施形態では、ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。
ＩＩＩ．ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートの調製方法
【０３０３】
本開示は、本明細書において詳述されているＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲート（すなわち、本明細書に詳述されている式（Ｉ）の化合物またはその任意の変形体）の調製方法、ならびに組成物、およびそれに有用な中間体をさらに提供する。本開示の化合物は、本明細書において詳述されている方法、および当業者に周知の方法を使用して調製することができ、例えば、Dubowchik,  G.M.  et  al.  2002,  Bioconjug.  Chem.  13,855-869;  Lyon,  R.P.  et  al.  2014,  Nat  Biotechnol  32:1059-1062を参照されたい。
【０３０４】
一態様では、本開示は、粒子をベースとする（すなわち、ナノ粒子またはマイクロ粒子）コンジュゲーション部分Ｆを含む式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５００の整数であり、
Ｆは、粒子をベースとするコンジュゲーション部分である）
のＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートを調製する方法であって、
式（Ａ）の化合物：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３ａ−Ｙ３ａ］ｙ      （Ａ）
を式（Ｂ）の化合物：
Ｙ３ｂ−Ｌ３ｂ−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ      （Ｂ）
（式中、ｙは、１〜５００の整数であり、Ｆ、Ｗ、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）の化合物に関して定義されている通りであり、Ｌ３ａおよびＬ３ｂは、独立して必要に応じたスペーサー断片であり、Ｙ３ａおよびＹ３ｂは、互いに反応して、スペーサー断片Ｙ３を形成する前駆体部分であり、Ｌ３ａ、Ｙ３およびＬ３ｂは、一緒になって、リンカーＬ３を形成する）と反応させて、
式（Ｉ）の化合物を形成するステップ
を含む方法を提供する。
【０３０５】
一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄは、ＩＭＤＱもしくはメタ−ＩＭＤＱ、または化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれか１つから選択される化合物である。一部の実施形態では、粒子をベースとするコンジュゲーション部分は、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマー（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）ＰＭ４００またはＦｉｃｏｌｌ（登録商標）ＰＭ７０）であり、ｘは、３〜５００、３〜４００、３〜３００または３〜２００の整数である。一部の好ましい実施形態では、ｘは、３〜１５０、３〜１００または３〜７５の整数である。
【０３０６】
一部の実施形態では、コンジュゲーションリンカーは、アルキンとアジドとの反応により、［１，２，３］トリアゾール部分を形成する、「クリック」化学を使用して作製される。一部の実施形態では、Ｙ３ａは、アルキン基（−Ｃ≡ＣＨ）であり、Ｙ３ｂは、アジド基（−Ｎ３）であり、Ｙ３は、１，４−［１，２，３］トリアゾリレン部分である。
【０３０７】
一部の実施形態では、Ｌ３ａは、アミドスペーサー断片（例えば、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ２−）であり、Ｌ３ｂは、アシルスペーサー断片（例えば、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）またはＰＥＧ−アシルスペーサー断片（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）１２Ｃ（Ｏ）−）である。
【０３０８】
一部の実施形態では、Ｌ３ａは、
【化７０】
2021503005.tif 000091
である。
【０３０９】
一部の実施形態では、Ｌ３ｂは、式：
【化７１】
2021503005.tif 000092
のアシルスペーサー断片または式：
【化７２】
2021503005.tif 000093
（式中、ｎは、０〜２００である）
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片である。一部の実施形態では、Ｌ３ｂは、式：
【化７３】
2021503005.tif 000094
のアシルスペーサー断片、または式：
【化７４】
2021503005.tif 000095
（式中、ｎは、０〜２００である）
のＰＥＧ−アシルスペーサー断片である。
【０３１０】
一部の実施形態では、Ｙ３は、
【化７５】
2021503005.tif 000096
である。
【０３１１】
一部の実施形態では、Ｌ３は、以下：
【化７６】
2021503005.tif 000097
である。
【０３１２】
一部の実施形態では、Ｗは、Ｏであり、Ｆは、約５０，０００〜約７００，０００ダルトン、約５０，０００〜約８０，０００ダルトン、約２００，０００〜約６００，０００ダルトンまたは約３００，０００〜約５００，０００ダルトンの平均分子量を有する、スクロースおよびエピクロロヒドリンの分岐状コポリマーである。
【０３１３】
一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニストは、１−ベンジル−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（例えば、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ）の誘導体である。一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニストは、化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａからなる群から選択される化合物である。
【０３１４】
一部の実施形態では、Ｌ１は結合である。
【０３１５】
別の態様では、本開示は、抗体をベースとするコンジュゲーション部分Ｆを含む式（Ｉ）：
Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘ      （Ｉ）
（式中、
Ｄは、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であり、
Ｌ１は、結合または自己脱離性リンカーであり、
Ｌ２は、切断可能なリンカーであり、
Ｌ３は、コンジュゲーションリンカーであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲ１０であり、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
ｘは、１〜５０の整数であり、
Ｆは、抗体をベースとするコンジュゲーション部分である）
のＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートを調製する方法であって、
式（Ｃ）の化合物：
Ｆ−［Ｗ’］ｘ      （Ｃ）
を式（Ｄ）の化合物：
Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ      （Ｄ）
（式中、ｘは、１〜５０の整数であり、Ｆ、Ｌ３、Ｌ２、Ｌ１およびＤは、式（Ｉ）の化合物に関して定義されている通りであり、Ｗ’は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｎ３またはアルキンである）と反応させて、
式（Ｉ）の化合物を形成するステップ
を含む方法を提供する。
【０３１６】
一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物は、抗体をベースとするコンジュゲーション部分（Ｆ−［Ｗ’］ｘ）中の天然システイン残基の限定的な還元により作製され、Ｗ’はＳであり、Ｆは、腫瘍微小環境に化合物を標的化させる組換え抗体であって、システイン残基を付加および／または欠失するよう必要に応じて操作された、組換え抗体である。一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物は、抗体をベースとするコンジュゲーション部分（Ｆ−［Ｗ’］ｘ）であり、Ｗ’は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｎ３またはアルキンであり、Ｆは、式（Ｉ）の化合物を腫瘍微小環境に標的化させる組換え抗体であって、非天然アミノ酸または翻訳後化学酵素修飾が施されている新規アミノ酸配列により操作された組換え抗体である。一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物は、操作された抗体をベースとするコンジュゲーション部分（Ｆ−［Ｗ’］ｘ）であり、Ｗ’は、天然リシン残基上のＮであり、Ｆは、式（Ｉ）の化合物を腫瘍微小環境に標的化させる組換え抗体である。一部の実施形態では、ｘは、１〜５０、１〜２５、１〜２０、１〜１５、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３または１〜２の整数である。
【０３１７】
一部の実施形態では、式（Ｄ）の化合物は、（ｉ）Ｌ１にＬ２を共有結合により結合させること、（ｉｉ）Ｄに−Ｌ２−Ｌ１を共有結合により結合させること、および（ｉｉｉ）Ｌ３に−Ｌ２−Ｌ１−Ｄを共有結合により結合させて、式（Ｄ）の化合物の例であるＬ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄを合成することによって作製される。一部の実施形態では、Ｌ１は、結合であり、式（Ｄ）の化合物は、（ｉ）ＤにＬ２を共有結合により結合させること、および（ｉｉ）Ｌ３に−Ｌ２−Ｄを共有結合により結合させて、式（Ｄ）の化合物の例であるＬ３−Ｌ２−Ｄを合成することによって作製される。一部の実施形態では、リンカーＬ３は、マレイミドカプロイルコンジュゲーションリンカー、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレートリンカー、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエートリンカー、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエートリンカー、ヒドラゾンリンカーなどである。一部の実施形態では、切断可能なペプチドリンカーＬ２は、アミノ酸配列ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４であり、ＡＡ１は、存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシン、バリンまたはグリシンであり、ＡＡ２は、存在しないか、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、ＡＡ３は、アラニン、β−アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンであり、ＡＡ４は、アルギニン、セリン、アラニン、β−アラニン  ロイシン、オルニチンまたはシトルリンなどである。一部の実施形態では、リンカーＬ１は、ｐ−アミノベンジルカルバメート自己脱離性リンカーなどである。一部の実施形態では、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分Ｄは、ＩＭＤＱ、メタ−ＩＭＤＱ、または化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれか１つである。
ＩＶ．ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の切断可能なコンジュゲートの使用
Ａ．医薬組成物
【０３１８】
本開示のＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の、腫瘍標的化された切断可能なコンジュゲート、または局部的に保持される切断可能なコンジュゲートを含む医薬組成物も提供される。本医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を慣用通り含有する。本開示の医薬組成物は、溶液または凍結乾燥した固体の形態とすることができる。本開示の医薬組成物は、好ましくは滅菌であり、好ましくは実質的に内毒素不含である。
【０３１９】
本開示の薬学的に許容される賦形剤には、例えば、溶媒、充填剤、乳化剤／界面活性剤、緩衝化剤、等張化剤および保存剤が含まれる（例えば、Pramanick  et  al.  Pharma  Times,  45:65-77,  2013を参照されたい）。一部の実施形態では、本医薬組成物は、溶媒、充填剤、緩衝化剤および等張化剤のうちの１つまたは複数として機能する賦形剤を含む（例えば、生理食塩水中の塩化ナトリウムは、水性ビヒクルと等張化剤との両方として働くことができる）。本開示の医薬組成物は、非経口投与に好適である。一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、腸内投与が意図されていない。
【０３２０】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、溶媒として水性ビヒクルを含む。好適なビヒクルには、例えば、滅菌水、生理食塩水溶液、リン酸緩衝生理食塩水およびリンゲル液が含まれる。一部の実施形態では、本組成物は等張性または高等張性である。一部の実施形態では、本組成物は滅菌である。
【０３２１】
本医薬組成物は、充填剤を含むことができる。充填剤は、本医薬組成物が投与前に凍結乾燥される場合、特に有用である。一部の実施形態では、充填剤は、凍結乾燥の間および／または保管の間、活性剤の安定化、およびその分解の予防の一助となる凍結保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）である。好適な充填剤は、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール（sorbital）、グルコースおよびラフィノースなどの糖（単糖、二糖および多糖）である。
【０３２２】
本医薬組成物は、緩衝化剤を含むことができる。緩衝化剤は、ｐＨを制御して、処理、保管および必要に応じて再構成の間に、活性剤の分解を阻害する。好適な緩衝液には、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩または硫酸塩を含む塩が含まれる。他の好適な緩衝液には、例えば、アルギニン、グリシン、ヒスチジンおよびリシンなどのアミノ酸が含まれる。緩衝化剤は、塩酸または水酸化ナトリウムをさらに含むことができる。一部の実施形態では、緩衝化剤は、組成物のｐＨを４〜９の範囲内に維持する。一部の実施形態では、ｐＨは、（下限値）４、５、６、７または８より高い。一部の実施形態では、ｐＨは、（上限値）９、８、７、６または５未満である。すなわち、ｐＨは、約４〜９の範囲にあり、この場合、下限値は上限値より小さい。
【０３２３】
本医薬組成物は、等張化剤を含むことができる。好適な等張化剤には、例えば、デキストロース、グリセロール、塩化ナトリウム、グリセリンおよびマンニトールが含まれる。
【０３２４】
本医薬組成物は、界面活性剤または乳化剤を含むことができる。好適な界面活性剤には、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤および双性イオン性界面活性剤が含まれる。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）またはＭｏｎｔａｎｏｘ８０（登録商標））またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）またはＭｏｎｔａｎｏｘ２０（登録商標））である。
【０３２５】
本医薬組成物は、保存剤を含むことができる。好適な保存剤には、例えば、抗酸化剤および抗微生物剤が含まれる。一部の実施形態では、本医薬組成物は、滅菌条件下で調製され、単回使用用容器中にあり、したがって、保存剤を含めることを必要としない。
【０３２６】
本開示の医薬組成物は、免疫応答を刺激することを必要とする哺乳動物対象において、免疫応答を刺激することを含む、複数の使用に好適である。哺乳動物対象には、以下に限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類、ペットおよび家畜が含まれる。一部の実施形態では、本医薬組成物は、特定の転帰を実現するのに有効な量で対象に投与される。
Ｂ．投与量および投与様式
【０３２７】
すべての医薬組成物と同様に、有効量および投与様式は、当業者に明白ないくつかの要因に基づいて変更が可能である。考慮すべき要因には、修飾１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリンＴＬＲ７／８アゴニスト化合物（すなわち、式（Ｉ）の化合物）の効能、本化合物および医薬組成物が投与部位においてアゴニスト化合物を保持するのを容易にする能力、投与経路、および本医薬組成物が、抗原またはがんの処置のための他の治療剤と組み合わせて投与されるかどうかが含まれる。考慮すべき他の要因には、実現すべき疾患改変の転帰、および治療レジメン中に投与される用量の数／頻度が含まれる。
【０３２８】
好適な投与量範囲は、所望の臨床的な効果を実現するものである。投与量は、最小限の有害事象で所望の治療的応答を生じるために、対象に投与することが必要な医薬組成物中のＴＬＲ７／８アゴニスト化合物（すなわち、式（Ｉ）の化合物）の量によって決定され得る。対象の体重ごとに送達される量で投与されるＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の例示的な投与量範囲は、約０．０００１〜７５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜８ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜６ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜４ｍｇ／ｋｇ、約０．００１０〜３ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、約１〜１００ｍｇ／ｋｇ、約２〜１００ｍｇ／ｋｇ、約３〜１００ｍｇ／ｋｇ、約４〜１００ｍｇ／ｋｇ、約５〜１００ｍｇ／ｋｇ、約６〜１００ｍｇ／ｋｇ、約８〜１００ｍｇ／ｋｇ、約１０〜１００ｍｇ／ｋｇ、約２５〜１００ｍｇ／ｋｇ、約５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、約７５〜１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５〜９ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜８ｍｇ／ｋｇ、約０．２〜７ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜６ｍｇ／ｋｇ、約０．４〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜４ｍｇ／ｋｇ、約０．６〜３ｍｇ／ｋｇ、約０．７〜２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．８〜２．２ｍｇ／ｋｇ、約０．９〜２．１ｍｇ／ｋｇまたは約１〜２ｍｇ／ｋｇなどの約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇとなる。一部の実施形態では、投与量は、（下限値）約０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、０．５、１、１．５、２、５、１０、２５、５０、７５または９０ｍｇ／ｋｇより多い。一部の実施形態では、投与量は、（上限値）約１００、７５、５０、２５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．１、０．０１または０．００１ｍｇ／ｋｇより少ない。すなわち、投与量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲のいずれかであり、この場合、下限値は上限値よりも少ない。対象に送達される量で投与されるＴＬＲ７／８アゴニストの例示的な投与量範囲は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇである。
【０３２９】
一部の実施形態では、本医薬組成物が、抗原と組み合わせてさらに投与される場合、対象に送達される量で投与される抗原投与量範囲は、約１μｇ〜５００μｇである。一部の実施形態では、抗原投与量は、約１μｇ〜５０μｇである。一部の実施形態では、抗原投与量は、（下限値）約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、２００または４００μｇより多い。一部の実施形態では、抗原投与量は、（上限値）約５００、４００、３００、２００、１００、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５または１０μｇより少ない。すなわち、抗原投与量は、約１〜５００μｇの範囲のいずれかであり、この場合、下限値は上限値よりも少ない。最適抗原投与量は、個々の抗原それぞれに関する実験手段によって決定することができる。
【０３３０】
同様に、好適な投与経路は、所望の効果をもたらすものである。一般に、本開示の医薬組成物は、非経口投与（例えば、経口投与でも直腸投与でもない）向けに意図されている。好適な投与経路には、注射、局所および吸入が含まれる。特に、本開示の医薬組成物は、腫瘍内、筋肉内、皮下、経皮および吸入などの経路によって投与され得る。吸入により投与するのに好適なデバイスには、例えば、噴霧器、気化器、ネブライザーおよび乾燥粉末吸入送達用デバイスが含まれる。一部の実施形態では、本医薬組成物が、固形腫瘍を処置することが意図されている場合、本組成物は、腫瘍内および／または腫瘍周辺に（例えば、腫瘍病変内およびその周り）に投与される。一部の実施形態では、本医薬組成物は静脈内に投与される。
【０３３１】
本医薬組成物中で製剤化されるＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の好適な投与レジメンは、最小限の有害事象で、予防的状況または治療的状況で所望の効果をもたらすものである。選択された経路によって投与される用量数は、１または１より多くすることができる。投与頻度は、毎週、２週間ごと、毎月、２か月ごと、または投薬間を３〜１２か月の範囲とすることができる。ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の例示的な用量頻度は、１週間あたりほぼ１回〜８週間ごとに１回である。一部の実施形態では、用量頻度は、（上限値）８週間、６週間、５週間、４週間、３週間、２週間または１週間ごとにほぼ１回より少ない。一部の実施形態では、用量頻度は、（下限値）７日間、１０日間または１４日間ごとにほぼ１回より多い。一部の実施形態では、用量頻度は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間ごとに１回である。一部の実施形態では、用量頻度は、１週間、２週間、３週間または４週間ごとに１回である。一部の実施形態では、用量頻度は、２週間、３週間または４週間ごとに１回である。対象に送達されるＴＬＲ７／８アゴニスト化合物の例示的な用量頻度範囲は、１週間ごとにほぼ１回〜４週間ごとに１回である。一部の実施形態では、２用量が投与され、２回目の用量は、最初の投薬の後１〜２か月後に投与される。一部の実施形態では、３用量が投与され、２回目の用量は、最初の投薬の１〜２か月後に投与され、３回目の用量は、２回目の投薬の１〜５か月後に投与される。他の実施形態では、一連の用量が、３〜１２か月間の処置スケジュールにわたり投与され得、この場合、用量頻度は、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または毎月１回である。他の実施形態では、より短い期間またはより長い期間が、投薬間に経過することができる。ある特定の実施形態では、連続投与量間の間隔は、週数または月数に関して様々となり得る。一実施形態では、一連の２、３、４、５または６週ごとの用量が投与され得、次いで、後の時間点において、第２の一連の週ごとの用量がそれに続くことができる。当業者は、抗原特異的抗体応答、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答または腫瘍退縮などの生物学的転帰を測定することにより、投薬量レジメンを調節することができよう。
【０３３２】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、注入ごとに、約５〜１２０分間かけて、対象に静脈内投与される。一部の実施形態では、注入時間は、約５〜１２０分間、約５〜９０分間、約５〜６０分間、約５〜４５分間、約５〜３０分間、約５〜１５分間、約５〜１０分間、約１０〜１２０分間、約１５〜１２０分間、約３０〜１２０分間、約４５〜１２０分間、約６０〜１２０分間、約９０〜１２０分間、約１０〜４５分間または約１５〜３０分間である。
Ｃ．免疫応答の刺激
【０３３３】
一態様では、本開示は、免疫応答を刺激することを必要とする哺乳動物対象における、免疫応答を刺激する方法であって、哺乳動物対象に、哺乳動物対象において免疫応答を刺激するのに十分な量および頻度で医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。免疫応答を「刺激する」とは、免疫応答を増大することを意味し、この増大は、ｄｅ  ｎｏｖｏで免疫応答を惹起することまたは既存の免疫応答を増強することから生じ得る。一部の実施形態では、免疫応答を刺激することは、ＩＦＮα産生を刺激すること、インターフェロン１型および／または２型の産生を刺激すること、ＩＬ−６産生を刺激すること、ＴＮＦα産生を刺激すること、Ｂリンパ球増殖を刺激すること、インターフェロン経路関連遺伝子発現を刺激すること、化学誘引物質関連性遺伝子発現を刺激すること、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）または骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）成熟および／もしくは抗原提示を刺激すること、ならびに／または腫瘍抗原特異的ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の産生を誘発することからなる群のうちの１つを含む。抗原特異的Ｔ細胞応答を「誘発すること」は、ヘルパーＴリンパ球および／または細胞傷害性Ｔリンパ球を刺激して、Ｔ細胞に抗体応答の手助けを実現すること、または抗腫瘍活性を有する細胞傷害性Ｔ細胞を生成することなどの、上記リンパ球の数および機能特性を増強することを意味する。医薬組成物が抗原と組み合わされてさらに投与される実施形態では、免疫応答を刺激することは、抗原特異的抗体応答を誘発させることを含む。抗原特異的抗体応答を「誘発すること」は、抗原特異的抗体の力価を、投与前のベースライン力価または血清防御的レベルなどの閾値レベルを超えて増大させることを意味する。
【０３３４】
免疫応答の分析（定性的および定量的の両方）は、以下に限定されないが、抗原特異的抗体産生の測定（特異的抗体サブクラスの測定を含む）、Ｂ細胞およびヘルパーＴ細胞などのリンパ球の特定の集団の活性化、特定の免疫細胞タイプに特異的な遺伝子のセットの発現の測定、ＩＦＮα、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＴＮＦαなどのサイトカインの産生、および／またはヒスタミンの放出を含む、当分野において公知の任意の方法によることができる。抗原特異的抗体応答を測定するための方法は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を含む。サイトカインの産生もまた、ＥＬＩＳＡによって測定することができる。遺伝子発現解析は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）またはｎＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標）遺伝子発現アッセイによって行うことができる。リンパ球の特定の集団の活性化は、増殖アッセイによって、および蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を用いて測定することができる。免疫応答の刺激を測定するための方法は、本開示の生物学的実施例に記載される。
Ｄ．がんの処置
【０３３５】
本開示は、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象におけるがんを処置する複数の方法であって、哺乳動物対象においてがんを処置するのに十分な量で、哺乳動物対象に医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象における、がんを処置する方法であって、腫瘍内および／または腫瘍周辺送達によって有効量の医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、腫瘍内送達は、少なくとも１つの腫瘍病変内に本医薬組成物を注射することを含む。一部の実施形態では、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象において、がんを処置することは、例えば、腫瘍外部位に本医薬組成物が投与されるよりも大きな数で、注入腫瘍における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の蓄積を誘発することを含む。一部の実施形態では、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象において、がんを処置することは、例えば、腫瘍外部位に免疫原性組成物が投与されるよりも、大きな大きさの全身性腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を含む、全身性腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を惹起することを含む。一部の実施形態では、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象においてがんを処置することは、全身性腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を惹起することを含む。一部の実施形態では、がんを処置することを必要とする哺乳動物対象においてがんを処置することは、注入腫瘍における、ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋調節性Ｔ細胞の数を低減させること含む。一部の実施形態では、対象は、注入腫瘍に加えて、１つまたは複数の非注入腫瘍（一次病変または転移性病変）を有しており、対象におけるがんの処置は、以下：（ａ）非注入腫瘍の数の低減、（ｂ）非注入腫瘍の容積の低減、および（ｃ）非注入腫瘍の成長のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、がんの処置を必要とする哺乳動物対象におけるがんの処置は、以下：（ｄ）対象の生存時間の増大、（ｅ）注入腫瘍の容積の低減、および（ｆ）注入腫瘍の成長の遅延のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、がんが固形腫瘍である場合、がんを「処置すること」は、固形腫瘍のサイズおよび任意の転移性病変を縮小すること、またはそうではない場合、生存可能ながん細胞数を低減することを含む。他の実施形態では、がんが固形腫瘍の場合、がんを「処置すること」は、固形腫瘍および任意の転移性病変の成長の遅延を含む。一部の態様では、がんを処置することは、無増悪生存期間の増大、または進行までの時間の増大を含む。他の実施形態では、本方法は、対象への有効量の第２のまたは追加の治療剤を投与するステップをさらに含む。がんを「処置すること」は、寛解を引き起こす、または他には処置のない場合に予期される生存と比べて生存が延長するなどの有益な臨床的結果を引き起こすことを意味する。一部の好ましい実施形態では、「がんを処置すること」は、記載される固形腫瘍における応答評価診断基準（ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１）に準拠して、免疫原性組成物に対する患者の応答をアセスメントすることを含む（例えば、Eisenhauer  et  al.  2009,  Eur  J  Cancer  45:228-247を参照されたい）。ＲＥＣＩＳＴによる客観的な抗腫瘍応答を決定する応答診断基準には、完全奏効、部分奏効、進行性疾患および安定疾患が含まれる。
【０３３６】
一部の実施形態では、腫瘍は、肉腫、癌腫または光線性角化症である。一部の実施形態では、腫瘍はリンパ腫である。一部の実施形態では、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、結腸直腸がん、子宮がん、膀胱がん、黒色腫、頭頚部がん、非ホジキンリンパ腫、腎臓がん、卵巣がん、膵臓がんおよび甲状腺がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは乳がんである。一部の実施形態では、がんは、卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは、結腸直腸がんである。一部の実施形態では、がんは、口腔、消化系、呼吸器系、皮膚、乳房、生殖系、尿路系、眼系、神経系、内分泌系からなる群から選択される部位の原発性がん、およびリンパ腫である。
【０３３７】
一部の実施形態では、本方法は、対象に、有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む。これらの実施形態の一部では、第２の治療剤は、アクチノマイシン、アファチニブ、アレクチニブ、アスパラギナーゼ、アザシチジン、アザチオプリン、ビカルタミド、ビニメチニブ、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、カルムスチン、セルチニブ、シスプラチン、クロラムブシル、コビメチニブ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エンコラフェニブ、エルロチニブ、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルダラビン、フルタミン、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イリノテカン、ラパチニブ、レトロゾール、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキセート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、ソラフェニブ、スニチニブ、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、トラメチニブ、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビンおよびそれらの組合せからなる群から選択される化学療法剤を含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＢＲＡＦ阻害剤およびＭＥＫ阻害剤の一方または両方を含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ボリノスタット（voronistat）［ＳＡＨＡ］、ロミデプシン、エンチノスタット、アベキシノスタット、エリノスタット［ＣＨＲ−３９９６］、パノビノスタット、クイジノスタット［ＪＮＪ−２６４８１５８５］、４ＳＣ−２０２、レスミノスタット［ＳＢ９３９］、プラシノスタット［ＣＩ−９９４０］およびバルプロエートを参照されたい）、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、アザシチジン、デシタビン、ゼブラリン、ＳＧＩ−１０２７、ＲＧ−１０８およびシネフンギン（sinfungin）を参照されたい）、およびそれらの組合せからなる群から選択されるエピジェネティックなモジュレーターを含む。
【０３３８】
これらの実施形態の一部では、第２の治療剤は、阻害性免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＩＬ−１０、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、Ｐ−セレクチングリコタンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）およびＴＧＦ−ベータからなる群から選択される阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。これらの実施形態の一部では、第２の治療剤は、免疫刺激性分子のアゴニストである。これらの実施形態の一部では、免疫刺激性分子は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＧＩＴＲ、４−１ＢＢ  ＣＤ１３７、ＣＤ２８およびＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）からなる群から選択される。これらの実施形態の一部では、第２の治療剤は、抗体、それらの断片または誘導体を含む。これらの実施形態の一部では、第２の治療剤は、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストであり、第２の治療剤は、抗体、それらの断片または誘導体を含む。
【０３３９】
一部の実施形態では、本方法は、対象に、放射線療法を行うステップ、および／または有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む。これらの実施形態の一部では、有効量の免疫原性組成物および有効量の第２の治療剤は共に、腫瘍に対する相加効果またはより良好な効果をもたらす。これらの実施形態の一部では、有効量の免疫原性組成物および有効量の第２の治療剤は共に、腫瘍に対する相乗効果をもたらす。
【０３４０】
本方法の一部の実施形態では、がんの処置は、免疫原性組成物の反復投与が禁忌となるほどの重症度のインフルエンザ様症状の発症をもたらすことはなく、インフルエンザ様症状は、発熱、頭痛、寒気、筋肉痛および倦怠感からなる群のうちの１つまたは複数を含む。
【０３４１】
一部の実施形態では、本開示は、医薬組成物（例えば、式（Ｉ）の化合物、賦形剤（単数または複数）、および必要に応じて抗原）、および本明細書に記載される方法のための組成物の使用に関連する一組の指示書を含むキットを提供する。キットの医薬組成物は、適切に包装されている。医薬組成物が液体である場合、凍結乾燥形態、またはナノ粒子の懸濁液、ゴム栓（例えば、Ｅｘｘｐｒｏハロブチルエラストマー）およびアルミニウム製クリンプトップを備える二酸化ケイ素製バイアル（例えば、ＳＣＨＯＴＴ  Ｔｙｐｅ  Ｉ  ｐｌｕｓ（登録商標））が容器密閉系として、通常、使用される。一部の実施形態では、本キットは、医薬組成物を投与のためのデバイス（例えば、シリンジおよびニードル）をさらに含む。他の実施形態では、本キットは、事前充填シリンジ／ニードルシステム、オートインジェクターまたは無針デバイスをさらに含む。本医薬組成物の使用に関連する指示書は、所期の使用方法のための、投与量、スケジュールおよび投与経路に関する情報を一般に含む。
【実施例】
【０３４２】
Ｖ．実施例
略称のリスト：
ＣＤＩ：１，１’−カルボニルジイミダゾール；
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＴＴ：ジチオトレイトール；
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸；
ＥＭＣＳ：Ｎ−ε−マレイミドカプロイル−オキシスクシンイミドエステル（N-ε-malemidocaproyl-oxysuccinimide  ester）；
Ｅｑ：当量
Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル；
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート；
ＨＣｌ：塩酸
Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム
ＬＣ−ＭＳ（ＬＣ／ＭＳ）：液体クロマトグラフィー−質量分析法；
ＭＡＬＳ：多角度レーザー−光散乱法；
ＭｅＯＨ：メタノール；
Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム；
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン；
ＮＭＲ：核磁気共鳴（分光法）；
ＰＡＢＣ：ｐ−アミノベンジルカルバメート；
ＰＢＳ：１０ｍＭのリン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４；
ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相−高速液体クロマトグラフィー；
ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィー；
ＴＥＡ：トリエチルアミン；
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
Ａ．合成実施例
（実施例Ｓ１）
化合物番号６４−５１および６４−５１ａの調製。
【０３４３】
実施例Ｓ１およびスキームＳ１−１に示されている手順およびスキームを使用して、ジメチルシステアミン塩酸塩を他のアミノ−アルキルチオール含有化合物により置き換えることによって、様々なアルキルジスルフィド基（以下に限定されないが、メチルのないジスルフィド（式（Ｌ−２ａ））、モノメチルジスルフィド（式（Ｌ−２ｂ））、ジメチルジスルフィド（式（Ｌ−２ｃ））およびシクロプロピルジスルフィド（式（Ｌ−２ｄ））を含む）を有するアジド−ジスルフィド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ化合物（式（Ｉ）中の−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）を調製することができる。この実施例は、一般的なアジド−ジスルフィド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ構造の一例である、化合物番号６４−５１を調製するための、ジメチルシステアミン塩酸塩の使用を示している。この実施例はまた、モノメチルジスルフィド誘導体化合物番号６４−５１ａの調製も記載している。さらに、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱは、米国特許第８，７２８，４８６号および同第９，４４１，００５号に記載される通り調製することができる。
スキームＳ１−１
【化７７】
2021503005.tif 000098
化合物番号１の調製の一般手順。
【０３４４】
Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ（２ｍＬ／２０ｍＬ）中の４−メルカプトベンジルアルコール（７００ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２’−ジチオジピリジン（１．６５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた黄色の澄明な溶液を４０℃まで加熱し、４時間、撹拌した。この反応溶液を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、次いで水（１５０ｍＬ）により洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４により乾燥させて、減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン、ｖ／ｖ、１／２〜１／１）によって精製して、化合物番号１（９９０ｍｇ、８０％収率）を無色油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ：２５０［Ｍ＋１］＋。
化合物番号２の調製の一般手順。
【０３４５】
アセトニトリル／水（６ｍＬ／６ｍＬ）中の化合物番号１（５０６ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）およびジメチルシステアミン塩酸塩（３７５ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１８時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより化合物番号１の消失が示された。この反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）により洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４により乾燥させて、減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ＭｅＯＨ／トリエチルアミン、ｖ／ｖ、１／０／０〜１００／１０／３）により精製して、化合物番号２（４６０ｍｇ、９３％収率）を薄黄色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：２４４［Ｍ＋１］＋。
化合物番号３の調製の一般手順。
【０３４６】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の２−アジド酢酸（２８５ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＨＡＴＵ（１．１４ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の化合物番号２（４５７ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．６６ｍＬ、３．７６ｍｍｏｌ）の溶液を上記の溶液に加えた。得られた溶液を室温まで温め、２時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、化合物番号２の消失が示された。この反応混合物を減圧下で濃縮して、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン、ｖ／ｖ、１／１〜１／０）によって精製して、５０５ｍｇの副生化合物３Ｂと一緒に、化合物３（２００ｍｇ）を無色油状物として得、この副生化合物をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ中の水酸化リチウムにより処理して、化合物番号３を得た。ＬＣ−ＭＳ：３２５［Ｍ−１］−。
化合物番号４の調製の一般手順。
【０３４７】
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物番号３（３１０ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の溶液に、５０℃でＴＨＦ（５ｍＬ）中のＣＤＩ（２３２ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下添加した。２時間後、この反応混合物を室温まで冷却して、減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン、ｖ／ｖ、１／１〜１／０）によって精製して、化合物番号４（２９０ｍｇ、７２％収率）を白色ワックス様固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：３２５［Ｍ−１］−。
化合物番号６４−５１の調製の一般手順。
【０３４８】
ＤＭＦ／ＴＨＦ（５ｍＬ／２ｍＬ）中の化合物番号４（１８３ｍｇ、０．４３５ｍｍｏｌ）および化合物番号５（ＩＭＤＱ；１４８ｍｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で１８時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、大部分の化合物番号５が消費されたことが示された。この反応混合物を冷却して、減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ、１５／１〜８／１）によって精製して、化合物番号６４−５１（２１０ｍｇ、６８％収率）を白色固体として得た。LC-MS:  712  [M+1]+.  1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.79  (d,  1H),  7.68  (d,  1H),  7.56  (d,  2H),  7.43  (td,  1H),  7.30  (d,  2H),  7.23  (d,  2H),  7.11  (td,  1H),  7.01  (d,  2H),  6.24  (t,  1H),  5.71  (s,  2H),  5.63  (bs,  2H),  5.14  (t,  1H),  5.08  (s,  2H),  4.34,  (d,  2H),  3.86  (s,  2H),  3.32  (d,  2H),  2.86  (dd,  2H),  1.79  (p,  2H),  1.43  (h,  2H),  1.25  (s,  6H),  0.92  (t,  3H).
化合物番号６４−５１ａの調製の一般手順。
【０３４９】
化合物番号６４−５１ａは、ジメチルシステアミン塩酸塩（すなわち、２−プロパンチオール，１−アミノ−２−メチル−，塩酸塩）の代わりにＨＳ（ＣＨ（ＣＨ３））ＣＨ２ＮＨ２塩酸塩（すなわち、２−プロパンチオール，１−アミノ，塩酸塩）を使用し、化合物番号６４−５１に関してスキームＳ１−１に示されている通り調製した。化合物番号６４−５１ａの化学構造は、スキームＳ４−１ａに示されている。
（実施例Ｓ１ａ）
化合物番号６４−７０の調製。
【０３５０】
実施例Ｓ１ａおよびスキームＳ１ａ−１に示されている手順およびスキームを使用して、切断可能ではないコンジュゲート対照としてアジド−チオール−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ化合物を調製することができる。この実施例は、一般的なアジド−チオール−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ構造の例である化合物番号６４−７０を調製するために、４−メルカプトベンジルアルコールを使用することを示している。ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。
スキームＳ１ａ−１
【化７８】
2021503005.tif 000099
化合物２１の調製手順。
【０３５１】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の臭化２−（Ｂｏｃ−アミノ）エチル（２．０ｇ、８．９ｍｍｏｌ）の溶液に、４−メルカプトベンジルアルコール（１．０４ｇ、７．４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２．２４ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた曇りのある溶液を４０℃で１８時間、撹拌した。この反応溶液を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、０．１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、次いで水（１００ｍＬ）により洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。この残留物を１／２〜１／１（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、１．７２ｇの化合物２１を無色油状物として得た。純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣによれば８２％であり、目的合成物の質量である５４９ダルトンをＬＣ−ＭＳにより確認した。
化合物２２の調製手順。
【０３５２】
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物２１（１．７２ｇ、６．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（８ｍＬ）を加えた。得られた薄黄色溶液を室温で２時間、撹拌した。減圧下で濃縮後、この混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）と共に３回、共蒸発させた。得られた残留物を１／０／０〜１００／１０／２（ｖ／ｖ）ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／トリメチルアミンにより溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、０．９４ｇの化合物２２を薄黄色油状物として得た。純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣによれば８５％であり、目的合成物の質量である１８３ダルトンをＬＣ−ＭＳにより確認した。
化合物２３の調製手順。
【０３５３】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２−アジド酢酸（６２５ｍｇ、６．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（６８０ｍｇ、６．６７ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物２２（９４５ｍｇ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液を加え、次いでトリエチルアミン（１．６ｍＬ、１１．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で２時間、撹拌した。次に、この反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、水（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。この残留物を１／１〜１／０（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンにより溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、０．５ｇの化合物２３を無色油状物として得た。純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣによれば３６％であり、目的合成物の質量である２４９ダルトンをＬＣ−ＭＳにより確認した。
化合物２４の調製手順。
【０３５４】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＣＤＩ（４５６ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の溶液に、５０℃でＴＨＦ（３ｍＬ）中の化合物２３（５００ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を滴下添加した。３時間後、この反応混合物を室温まで冷却して、減圧下で濃縮した。この残留物を１／１〜１／０（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンにより溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、３２５ｍｇの化合物２４を無色油状物として得た。純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣによれば４８％であり、目的合成物の質量である３６０ダルトンをＬＣ−ＭＳにより確認した。
化合物番号６４−７０の調製の一般手順。
【０３５５】
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の化合物２４（１９５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）およびＩＭＤＱ（化合物５、９７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（６滴）を加えた。得られた溶液を室温で一晩、撹拌し、この反応混合物を減圧下で濃縮した。この残留物を１０／１（ｖ／ｖ）ジクロロメタン／ＭｅＯＨにより溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、５２ｍｇの化合物番号６４−７０を白色固体として得た。純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣによれば９９％であり、目的合成物の質量である６５１．８ダルトンをＬＣ−ＭＳにより確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CD3OD+CDCl3)  δ  7.67  (td,  2H),  7.57  (s,  1H),  7.40  (td,  1H),  7.33-7.19  (m,  4H),  7.08  (td,  1H),  6.97-6.94  (m,  3H),  5.69  (s,  2H),  4.99  (s,  2H),  4.26  (s,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.40  (t,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.84  (t,  2H),  1.74  (m,  2H),  1.39  (m,  2H),  0.88  (t,  3H)によって確認した。
（実施例Ｓ２）
化合物番号６４−５２、６４−５２ａ、６４−５２ｂ、６４−５２ｃ、６４−５２ｄ、６４−５２ｅ、６４−５２ｆおよび６４−５２ｇの調製。
【０３５６】
実施例Ｓ２およびスキームＳ２−１〜Ｓ２ｇ−１に示されている手順およびスキームを使用して、式（Ｉ）中の様々なコンジュゲーションリンカーＬ３、式（Ｉ）中の切断可能なペプチド配列Ｌ２、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１を有する、様々な本発明の化合物である式（Ｉ）中の−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄを調製することができ、式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニスト化合物Ｄは、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。
化合物番号６４−５２。
【０３５７】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２を、スキームＳ２−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２−１
【化７９】
2021503005.tif 000100
化合物番号７の調製の一般手順。
【０３５８】
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物番号６（４６５ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）および化合物番号５（ＩＭＤＱ；１９０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．９４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた黄色の澄明な溶液を室温で１５時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、ほとんどが所望の生成物である化合物番号７であること、および化合物番号５のすべてが消費されたことが示された。この反応混合物を次の工程に直接使用した。ＬＣ−ＭＳ：９８７［Ｍ＋１］＋。
化合物番号８の調製の一般手順。
【０３５９】
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物番号７（約０．５２８ｍｍｏｌ）の粗製溶液に、ピペリジン（４６０ｍｇ、５．４１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で６時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、出発材料である化合物番号７の消失が示された。この反応混合物をジクロロメタン中の１０％ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）により希釈し、水（２００ｍＬ×２）により洗浄した。水層を酢酸エチル（１５０ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ、１００／１０〜１００／１５）により精製して、化合物番号８（３０４ｍｇ、２工程通算で６５％収率）を黄色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：７６５［Ｍ＋１］＋。
化合物番号６４−５２の調製の一般手順。
【０３６０】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物番号８（１７３ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）および化合物番号９（１８１ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．０８ｍＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１６時間、撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより、所望の生成物にほとんど変換されたことが示された。この反応混合物を減圧下で濃縮した。この残留物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ、１００／１０〜１００／１５）によって精製して、化合物番号６４−５２（１７０ｍｇ、５５％収率）を白色固体として得た。LC-MS:  1390  [M+1]+.  1H  NMR  (300  MHz,  CDCl3)  δ  7.68  (d,  1H),  6.62  (d,  1H),  7.52  (d,  2H),  7.38  (t,  1H),  7.20  (d,  2H),  7.18  (d,  2H),  7.07  (t,  1H),  6.92  (d,  2H),  5.66  (s,  2H),  4.95  (s,  2H),  4.46  (dd,  1H),  4.23  (s,  2H),  4.09  (d,  1H),  3.61-3.45  (m,  44H),  3.35-3.26  (m,  4H),  3.10  (t,  2H),  2.81  (t,  2H),  2.56-2.45  (m,  2H),  2.12-2.20  (1,  1H),  1.91-1.80  (m,  1H),  1.80-1.55  (m,  3H),  1.55-1.40  (m,  2H),  1.40-1.28  (m,  4H),  0.93-0.82  (m,  9H).
化合物番号６４−５２ａ。
【０３６１】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ａをスキームＳ２ａ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ａ−１
【化８０】
2021503005.tif 000101
化合物７の調製手順。
【０３６２】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＩＭＤＱ（化合物５；３６ｍｇ、１当量）の氷冷溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下、１０分間、撹拌した。化合物６（７７ｍｇ、１当量）を２回に分けて加え、得られた澄明な黄色溶液を０℃で２時間、撹拌し、この溶液を室温までゆっくりと温めて、次に、さらに１２時間、撹拌を継続した。１％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨで展開する薄層クロマトグラフィー分析により、ＩＭＱＤ出発材料はすべて消費されたことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、この固体黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加えて、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返した。オフホワイト色の固体生成物を、減圧下で乾燥させ、８４ｍｇの化合物７を得た。
化合物８の調製手順。
【０３６３】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物７（７１ｍｇ、１当量）の氷冷溶液にＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この混合物を一晩、アルゴン雰囲気下で撹拌し、次に、室温までゆっくりと温めて、さらに１２時間、撹拌した。反応の逆相ＨＰＬＣ分析により、反応が進行して完了したことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、酢酸エチル（３ｍＬ）を黄色残留物に加え、この混合物を粉砕して、淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、オフホワイト色の固体を減圧下で乾燥させて、５０ｍｇの化合物８を得た。
化合物番号６４−５２ａの調製手順。
【０３６４】
化合物８（５０ｍｇ、１．０当量）および化合物２５（２０．３ｍｇ、１．２当量）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（１００ｕＬ）を加え、この溶液を室温で１．５時間、撹拌した。この反応のＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、化合物１２は完全に消費されたことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、固体黄色残留物に０．５％（ｖ／ｖ）アンモニアを含有するＤＣＭ中の１〜８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨにより溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、３４ｍｇの化合物番号６４−５２ａを白色固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより９５％と判定され、ＬＣ−ＭＳにより目的合成物の質量である１，０３５．５ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CD3OD):  δ  7.83  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.68  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.58  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.46  (t,  J  =  7.5,15.0  Hz,  1H),  7.25-7.31  (m,  1H),  7.14  (t,  J  =  7.5,15.0  Hz,  1H),  7.03  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  5.88  (s,  2H),  5.03  (s,  2H),  4.48-4.55  (m,  1H),  4.20-4.26  (m,  3H),  3.73-3.76  (m,  2H),  3.55-3.68  (m,  14  H),  3.28,  3.38  (m,  4H),  3.0-3.28  (m,  2H),  2.97  (t,  J  =  7.5,  15.3  Hz,  2H),  2.55  (t,  J  =  6,  12  Hz,  2H),  1.72-2.18  (m,  5H),  1.58-1.70  (m,  2H),  1.43-1.55  (m,  2H),  0.88-1.01  (m,  9H)により確認した。
化合物番号６４−５２ｂ。
【０３６５】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｂを、スキームＳ２ｂ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｂ−１
【化８１】
2021503005.tif 000102
化合物番号６４−５２ｂの調製手順。
【０３６６】
化合物８は、スキームＳ２ａ−１に記載される通り調製した。ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の化合物８（１３５ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、化合物２６（１．７ｍＬ、０．２６５ｍｍｏｌ、１．５当量）を含有するＤＭＦ溶液を加えた。得られた溶液を室温で２時間、撹拌し、この時までに、ＬＣ−ＭＳ分析によって化合物８が消費されたことが示された。次に、この反応物をＭｅＯＨ（３ｍＬ）、さらに水（３ｍＬ）により希釈し、１Ｎ  ＮａＯＨ（０．５ｍＬ）を加えた。得られた溶液を室温で２４時間、撹拌し、次に、分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより直接、精製して、６２ｍｇの化合物番号６４−５２ｂを白色固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより９６％であることが判定され、ＬＣ−ＭＳにより目的合成物の質量である８４７．４ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (アセトン-d6):  δ  8.49  (s,  1H),  7.89  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.77  (d,  J  =  8.4  Hz,1H),  7.64-7.56  (m,  3H),  7.36-7.26  (m,  5H),  7.08  (d,  J  =  6.0  Hz,  2H),  5.88  (s,  2H),  5.05  (s,  2H),  4.50  (dd,  J  =  5.1  and  9.0  Hz,  1H),  4.29-4.25  (m,  3H),  4.05  (s,  2H),  3.19-3.13  (m,  1H),  3.01  (t,  J=7.8  Hz,  2H)により確認した。
化合物番号６４−５２ｃ。
【０３６７】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中のＬ１が結合であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ１２部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｃをスキームＳ２ｃ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｃ−１
【化８２】
2021503005.tif 000103
化合物２８の調製手順。
【０３６８】
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の化合物２７（１００ｍｇ、０．４０１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＩＭＤＱ（化合物５；９６ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（１５４ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、次に、ＤＩＰＥＡ（８９μＬ、０．８０ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。この反応物を室温で１５分間、撹拌し、次に、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ／アセトニトリル＋０．１％（ｖ／ｖ）酢酸、３０分間以内で９５／５〜０／１００のグラジエント）により精製した。予期した３２２ｎｍに吸光度を有する主要ピークを含有するフラクションを採集し、減圧下で乾燥させて、１４１ｍｇの化合物２８を白色固体として得た。
化合物２９の調製手順。
【０３６９】
ＤＣＭ（４ｍＬ）中の化合物２８（１４１ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を室温で１時間、ＴＦＡ（１ｍＬ）により処理した。この反応物を減圧下で濃縮乾固し、化合物２９を含有する残留物をさらに精製することなく使用した。
化合物番号６４−５２ｃの調製手順。
【０３７０】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物２９（７３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１．０当量）および化合物１３（７４ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液にＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この反応物を室温で３時間、撹拌した。この混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ／アセトニトリル＋０．１％（ｖ／ｖ）酢酸、３０分以内に９５／５〜０／１００のグラジエント）により精製した。３２２ｎｍの予期した吸光度を有する主要ピークを含有するフラクションを採集（colleact）し、減圧下で乾燥させて、７９ｍｇの化合物６４−５２ｃを白色固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより９７％であることが判定され、ＬＣ−ＭＳにより目的合成物の質量である１，２４１．５ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CDCl3):  δ  8.40  (t,  1H),  8.15  (d,  1H),  7.98  (d,  2H),  7.74  (d,  1H),  7.65  (t,  1H),  7.38  (t,  1H),  7.28  (d,  2H),  7.03  (d,  2H),  5.94  (s,  2H),  4.40-4.25  (m,  3H),  4.11  (t,  1H),  3.67-3.54  (m,  52H),  3.10-3.00  (m,  6H),  2.75-2.68  (m,  1H),  2.50-2.46  (m,  2H),  2.03-1.81  (m,  4H),  1.48-1.41  (m,  4H),  0.98-0.86  (m,  9H)により確認した。
化合物番号６４−５２ｄ。
【０３７１】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中のＬ１が結合であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｄをスキームＳ２ｄ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｄ−１
【化８３】
2021503005.tif 000104
化合物番号６４−５２ｄの調製手順。
【０３７２】
化合物２９（１．０ｇ、１．０当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物２５（１．１当量）の溶液に加え、この反応物を室温で撹拌した。反応の進行をＬＣ−ＭＳによりモニタリングし、１時間後、化合物２９が、完全に消費されたので、この溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をＤＣＭ中のＭｅＯＨ（０〜２５％）で溶出するＢｉｏｔａｇｅ  Ｓｅｌｅｋｔでのフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製して、６００ｍｇの化合物６４−５２ｄを白色固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより９５％であることが判定され、ＬＣ−ＭＳにより目的合成物の質量である８８９．１ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (DMSO-d6):  δ  9.10  (s,  1H),  8.36-8.30  (m,  1H),  7.95  (dd,  J  =  16.1,  8.0  Hz,  2H),  7.84  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.75  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.60  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.34  (t,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.16  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  6.97  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  5.91  (bs,  3H),  5.36  (bs,  1H),  4.24-4.11(m,  4H),  3.71-3.40  (m,  16H),  2.96-2.78  (m,  6H),  2.40-2.28  (m,  4H),  1.86-1.81  (m,  2H),  1.74-1.65  (m,  2H),  1.42-1.29  (m,  5H),  0.84  (t,  J  =  7.5  Hz,  3H),  0.71  (d,  J  =  6.8  Hz,  6H)により確認した。
化合物番号６４−５２ｅ。
【０３７３】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がフェニルアラニン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ１２部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｅをスキームＳ２ｅ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｅ−１
【化８４】
2021503005.tif 000105
化合物３０の調製手順。
【０３７４】
ＤＭＦ（１０．０ｍＬ）中の化合物３０（０．２７ｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、ＩＭＤＱ（化合物５；０．１０ｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＴＥＡ（５８ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。窒素下、室温でこの混合物を１６時間、撹拌し、この時点で、ＬＣ−ＭＳ分析により、ＩＭＤＱがすべて消費されたことが示された。この反応混合物をさらに精製することなく、次の工程の反応に直接使用した。
化合物３１の調製手順。
【０３７５】
上で調製した反応混合物（ＤＭＦ中の約０．２８ｍｍｏｌ）にピペリジン（０．２４ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。得られた混合物を室温で６時間、撹拌し、ジエチルエーテル（７５ｍＬ）に注ぎ入れて、撹拌した。黄色沈殿物をろ取し、エーテルで洗浄した。２％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含むＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨにより溶出する、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｓｅｌｅｋｔでのフラッシュクロマトグラフィーにより粗生成物を精製して、１４０ｍｇの化合物３１を黄色固体として得た。
化合物番号６４−５２ｅの調製手順。
【０３７６】
ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中の化合物３１（７３．４ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、ＤＭＦ（０．３ｍＬ）中の化合物１３（７３．６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＩＰＥＡ（２３．３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。窒素下、室温でこの混合物を１８時間、撹拌し、この時点で、ＬＣ−ＭＳ分析により、化合物３２のすべてが消費されたことが示された。この反応混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製して、５４ｍｇの化合物番号６４−５２ｅを白色固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより９８％であることが判定され、ＬＣ−ＭＳにより目的合成物の質量である１，４３８．７ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (DMSO-d6):  δ  10.05  (s,  1H),  8.25  (d,  1H),  8.06  (d,  1H),  7.81-7.85  (m,  2H),  7.59-7.56  (m,  4H),  7.40-7.34  (m,  1H),  7.30-7.04  (m,  14H),  6.98-6.95  (m,  3H),  5.98  (t,  1H),  5.84  (s,  2H),  5.43  (s,  2H),  4.92  (s,  2H),  4.57  (bs,  1H),  4.40  (bs,  1H),  4.11  (d,  2H),  3.60-3.30  (m,  46  H),  3.08-2.8  (m,  8H),  2.78-2.70  (m,  1H),  2.28  (t,  2H),  1.75-1.65  (m,  4H),  1.50-1.30  (m,  4H),  0.84  (t,  3H)により確認した。
化合物番号６４−５２ｆ。
【０３７７】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がグリシン−イソロイシン−バリン−アルギニンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｆをスキームＳ２ｆ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｆ−１
【化８５】
2021503005.tif 000106
化合物３３の調製の一般手順。
【０３７８】
ＤＭＦ中のＩＭＤＱ（化合物５；１当量）の氷冷溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下で１０分間、撹拌する。化合物３３（１当量）を２回に分けて加え、得られた澄明な黄色溶液を０℃で２時間、撹拌する。この溶液を室温までゆっくりと温めて、次に、さらに１２時間、または１％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨで展開する薄層クロマトグラフィー分析によりＩＭＤＱ出発材料のすべてが消費されたことが示されるまで撹拌を継続する。ＤＭＦを減圧下で除去し、この固体黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返す。オフホワイト色の固体生成物を減圧下で乾燥させ、化合物３４を得る。
化合物３５の調製の一般手順。
【０３７９】
ＤＣＭ中の化合物３４（１．０当量）の溶液を、室温で１時間、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）により処理する。この反応物を減圧下で濃縮乾固し、化合物３５を含有する残留物をさらに精製することなく使用した。
化合物番号６４−５２ｆの調製の一般手順。
【０３８０】
化合物３５（１．０当量）および化合物２５（１．２当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この溶液を室温で１．５時間、撹拌する。この反応のＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、化合物３５が完全に消費されたことが示されると、ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色固体残留物に０．５％（ｖ／ｖ）アンモニアを含有するＤＣＭ中の１〜８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨにより溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、化合物番号６４−５２ｆを白色固体として得る。生成物純度を２５４ｎｍでのＲＰ−ＨＰＬＣにより判定し、目的合成物の質量をＬＣ−ＭＳにより確認し、目的合成物の構造を、１Ｈ  ＮＭＲにより確認する。
化合物番号６４−５２ｇ。
【０３８１】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がロイシン−セリン−グリシン−アルギニン−セリン−アスパラギン酸であり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｇをスキームＳ２ｇ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｇ−１
【化８６】
2021503005.tif 000107
化合物３７の調製の一般手順。
【０３８２】
ＤＭＦ中のＩＭＤＱ（化合物５；１当量）の氷冷溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下で１０分間、撹拌する。化合物３６（１当量）を２回に分けて加え、得られた澄明な黄色溶液を０℃で２時間、撹拌する。この溶液を室温までゆっくりと温めて、次に、さらに１２時間、または１％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨで展開する薄層クロマトグラフィー分析によりＩＭＤＱ出発材料のすべてが消費されることが示されるまで撹拌を継続する。ＤＭＦを減圧下で除去し、この固体黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返す。オフホワイト色の固体生成物を減圧下で乾燥させ、化合物３７を得る。
化合物３８の調製の一般手順。
【０３８３】
ＤＣＭ中の化合物３７（１．０当量）の溶液を、室温で１時間、ＴＦＡ（１，０ｍＬ）により処理する。この反応物を減圧下で濃縮乾固し、化合物３８を含有する残留物をさらに精製することなく使用した。
化合物番号６４−５２ｇの調製の一般手順。
【０３８４】
化合物３８（１．０当量）および化合物２５（１．２当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加え、この溶液を室温で１．５時間、撹拌する。この反応のＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、化合物３８が完全に消費されたことが示されると、ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色固体残留物に０．５％（ｖ／ｖ）アンモニアを含有するＤＣＭ中の１〜８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、化合物番号６４−５２ｇを白色固体として得る。生成物純度を２５４ｎｍでのＲＰ−ＨＰＬＣにより判定し、目的合成物の質量をＬＣ−ＭＳにより確認し、目的合成物の構造を１Ｈ  ＮＭＲにより確認する。
化合物番号６４−５２ｈ。
【０３８５】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、６４−３３であり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１が、ＴＬＲ７／８アゴニストのイミダゾキノリン環の４位の第一級アミンにコンジュゲートされているパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり（図１を参照されたい）、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｈをスキームＳ２ｈ−１に示されている通り調製した。
スキームＳ２ｈ−１
【化８７】
2021503005.tif 000108
化合物５２の調製手順。
【０３８６】
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の化合物６４−３３ｂ（９６ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ、１．０当量）の氷冷溶液に、ＴＥＡ（９１ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、次にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（５４ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。この溶液をゆっくりと室温まで温めて、一晩、撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、１％アンモニア水を含有する３〜５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残留物を精製して、９４ｍｇの化合物５２を得た。
化合物５３の調製手順。
【０３８７】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物５２（９４ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、１当量）の氷冷溶液にＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下で１０分間、撹拌した。ここに化合物６（１３５ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、１当量）を一度に加えた。得られた澄明な黄色溶液を０℃で１時間、撹拌し、次に、室温までゆっくりと温めて、１２時間、撹拌を継続した。１％ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨでの薄層クロマトグラフィー分析により、非常にわずかな反応しか起こっていないことが示された。次に、この混合物を７０℃まで温め、撹拌を継続し、反応の進行をＲＰ−ＨＰＬＣによりモニタリングした。３日後、ＤＭＦを減圧下で除去し、酢酸エチル（３ｍＬ）を黄色残留物に加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、オフホワイトの固体を減圧下で乾燥させて、８４ｍｇの化合物５３を得、これをさらに精製することなく次の反応に使用した。
化合物５４の調製手順。
【０３８８】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物５３（８４ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、ジイソプロピルアミン（０．１ｍＬ）を加えた。次に、得られた溶液を室温までゆっくりと温め、１２時間、撹拌を継続した。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、オフホワイト色の固体を減圧下で乾燥させて、５４ｍｇの粗製化合物５４を得た。
化合物５５の調製手順。
【０３８９】
化合物５４（５４ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）および化合物２５（２２ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を加えて、この溶液を２．５時間、撹拌した。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に０．５％アンモニアを含有するＤＣＭ中の１〜８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、１４ｍｇの化合物５５をオフホワイト色の固体として得た。
化合物番号６４−５２ｈの調製手順。
【０３９０】
アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物５５（１２ｍｇ、１．０当量）の氷冷溶液にジイソプロピルアミン（０．１ｍＬ）を加えた。次に、得られた溶液を室温までゆっくりと温め、１２時間、撹拌を継続した。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、オフホワイト色の固体を減圧下で乾燥させて、１０ｍｇの粗製化合物番号６４−５２ａをオフホワイト色の固体として得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおけるＲＰ−ＨＰＬＣにより３０〜４０％であることが判定され、ＬＣ−ＭＳにより１，１２０．４ダルトンの目的合成物の質量が提示された。
化合物番号６４−５２ｉ。
【０３９１】
式（Ｉ）中のＴＬＲ７／８アゴニストＤが、６４−１０ｂであり、式（Ｉ）中の自己脱離性リンカーＬ１が、ＴＬＲ７／８アゴニストのベンジルメチルアミンにおける第二級アミンにコンジュゲートされているパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり（図１を参照されたい）、式（Ｉ）中の切断可能なリンカーＬ２がバリン−シトルリンであり、式（Ｉ）中のコンジュゲーションリンカーＬ３がアジド−ＰＥＧ４部分である、本発明の実施形態を例示するため、化合物番号６４−５２ｉをスキームＳ２ｉ−１に示されている通り調製した。さらに、ＴＬＲ７／８アゴニスト（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。
スキームＳ２ｉ−１
【化８８】
2021503005.tif 000109
化合物番号５２の調製の一般手順。
【０３９２】
ＤＭＦ中の化合物番号６（１．１当量）および化合物番号６４−１０ｂ（１．０当量）の溶液にＴＥＡ（２．０当量）を加え、得られた溶液を室温で撹拌する。一旦、ＬＣ／ＭＳにより、大部分が所望の生成物である化合物番号５２であること、および化合物番号６４−１０ｂのすべてが消費されることが示されると、この反応混合物を直接、次の工程に使用する。
化合物番号５３の調製の一般手順。
【０３９３】
ＤＭＦ中の化合物番号５２（１．０当量）の粗製溶液に、ピペリジン（約１０当量）を加え、この溶液を室温で撹拌する。一旦、ＬＣ／ＭＳにより、出発材料である化合物番号５２の消失が示されると、この反応混合物をＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨにより希釈し、水で２回、洗浄する。この水層を酢酸エチルにより抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー（１００／１０〜１００／１５（ｖ／ｖ）ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物番号５３を黄色固体として得る。
化合物番号６４−５２ｉの調製の一般手順。
【０３９４】
ＤＭＦ中の化合物番号５３（１．０当量）および化合物番号２５（１．１当量）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を加え、得られた溶液を室温で撹拌する。一旦、ＬＣ／ＭＳにより、所望の生成物への大部分の変換が示されると、この反応混合物を減圧下で濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー（１００／１０〜１００／１５（ｖ／ｖ）ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）により精製して、化合物番号６４−５２ｉを白色固体として得る。
（実施例Ｓ３）
プロパルギルアミン−カルボキシメチル化Ｆｉｃｏｌｌの調製。
【０３９５】
カルボキシメチル化Ｆｉｃｏｌｌ（ＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌ）は、０．２Ｍ塩化ナトリウム中、３７．９ｍｇ／ｍＬで、他の場所に記載される通り調製した（例えば、Inman,  J.K.  1975,  J  Immunol  114:704-709を参照されたい）。プロパルギルアミン−カルボキシメチル化Ｆｉｃｏｌｌ（ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌ）は、スキームＳ３−１中に示されている通り調製した。手短に言えば、１．２ｇのプロパルギルアミン塩酸塩を１０ｍＬのＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌに溶解し、次に、この混合物に、１５０ｍｇのＥＤＣを２５ｍｇの増分で混合しながら１０分間かけて加えた。得られた溶液のｐＨを１Ｎ  ＨＣｌにより４．７に調整し、この反応物を混合しながら、周囲温度（２２〜２４℃）で３．５時間、進行させた。溶液のｐＨは、その時間中、定期的に確認し、必要な場合、１Ｎ  ＨＣｌにより４．７に調整した。得られた生成物を、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、１００ｋＤａの分子量カットオフ膜を使用するタンジェンシャルフローろ過によって精製した。最終ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌは、２２．２ｍｇ／ｍＬのＦｉｃｏｌｌを含有しており、−８０℃で保管した。ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌ中のプロパルギル基の含有量は、標準曲線と比べた、その後の蛍光の定量により、フルオロフォア（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）５９４アジド、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ、カタログ番号Ａ１０２７０）のコンジュゲートにより決定した。ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌの回分は、およそ２５０モルのプロパルギル基／モルＦｉｃｏｌｌを有することが示された。
スキームＳ３−１
【化８９】
2021503005.tif 000110
（実施例Ｓ４）
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、５４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃの調製。
【０３９６】
式（Ｉ）中の−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄに対応する、アジド−ジスルフィド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ（化合物番号６４−５１および６４−５１ａ）およびアジド−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ（化合物番号６４−５２、５４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５２ｃ）は、スキームＳ４−１、スキームＳ４−１ａ、スキームＳ４−２、スキームＳ４−２ａ、スキームＳ４−２ｂおよびスキームＳ４−２ｃに準拠して、ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌに共有結合によりコンジュゲートされて、Ｆｉｃｏｌｌ−アジド−ジスルフィド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ化合物（化合物番号６４−５３および６４−５３ａ）またはＦｉｃｏｌｌ−アジド−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＩＭＤＱ化合物（化合物番号６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃ）が得られた。化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃは、式（Ｉ）の化合物の代表例、すなわち、Ｆ−［Ｗ−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ］ｘである。
スキームＳ４−１
【化９０】
2021503005.tif 000111
化合物番号６４−５３の調製。
【０３９７】
化合物番号６４−５１を５ｍｇ／ｍＬでＤＭＦに溶解した。ＰＢＳ（ｐＨ７．５）緩衝液中、２２．２ｍｇ／ｍＬのＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌを調製した。硫酸銅（ＩＩ）五水和物（ＣｕＳＯ４）およびＬ−アスコルビン酸をそれぞれ、純水中、５ｍｇ／ｍＬで調製した。ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌ（０．７９ｍＬ、０．０４４μモル）を０．９７ｍＬのアスコルビン酸溶液、０．２７ｍＬのＣｕＳＯ４溶液、１．６５ｍＬの４００ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）緩衝液および０．９５ｍＬのＤＭＦと混合した。次に、化合物番号６４−５１（０．６２ｍＬ、４．４マイクロモル）を混合しながら、０．２ｍＬの増分で加えた。撹拌しながら、この反応を周囲温度（２２〜２４℃）で１８時間、進行させた。翌日、この反応混合物をＰＢＳ（ｐＨ７．５）８リットル中で１０，０００ダルトンの分子量カットオフ透析カセットにより透析した。精製した化合物番号６４−５３の一定分量をとり、−８０℃で保管した。
スキームＳ４−１ａ
【化９１】
2021503005.tif 000112
化合物番号６４−５３ａの調製。
【０３９８】
化合物番号６４−５３ａは、化合物番号６４−５１の代わりに化合物番号６４−５１ａを使用し、化合物番号６４−５３に関して上に記載された方法と類似の方法で調製した。化合物番号６４−５３ａの合成は、スキームＳ４−１ａで概説している。
スキームＳ４−２
【化９２】
2021503005.tif 000113
化合物番号６４−５４の調製。
【０３９９】
化合物番号６４−５２を５ｍｇ／ｍＬでＤＭＦに溶解した。ＰＡＣＭ−ＦｉｃｏｌｌをＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、２２．２ｍｇ／ｍＬで調製した。硫酸銅（ＩＩ）五水和物（ＣｕＳＯ４）およびＬ−アスコルビン酸をそれぞれ、純水中、５ｍｇ／ｍＬで調製した。ＰＡＣＭ−Ｆｉｃｏｌｌ（０．７９ｍＬ、０．０４４マイクロモル）を、０．９７ｍＬのアスコルビン酸溶液、０．２７ｍＬのＣｕＳＯ４溶液、２．６ｍＬの４００ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）緩衝液および０．２２ｍＬのＤＭＦと混合した。次に、混合しながら、化合物番号６４−５２（０．６１ｍＬ、４．４マイクロモル）を０．２ｍＬの増分で加えた。混合しながら、この反応を周囲温度（２２〜２４℃）で１８時間、進行させた。翌日、この反応混合物（約４．９ｍＬ）をＰＢＳ（ｐＨ７．５）８リットル中で１０，０００ダルトンの分子量カットオフ透析カセットにより透析した。精製した化合物番号６４−５４の一定分量をとり、−８０℃で保管した。
スキームＳ４−２ａ
【化９３】
2021503005.tif 000114
化合物番号６４−５４ａの調製。
【０４００】
化合物番号６４−５４ａは、化合物番号６４−５２の代わりに化合物番号６４−５２ａを使用し、化合物番号６４−５４に関して上に記載された方法と類似の方法で調製した。化合物番号６４−５４ａの合成は、スキームＳ４−２ａで概説している。
化合物番号６４−５４ｂの調製。
【０４０１】
化合物番号６４−５４ｂは、化合物番号６４−５２の代わりに化合物番号６４−５２ｃを使用し、化合物番号６４−５４に関して上に記載された方法と類似の方法で調製した。化合物番号６４−５４ｂの合成は、スキームＳ４−２ｂで概説している。
スキームＳ４−２ｂ
【化９４】
2021503005.tif 000115
化合物番号６４−５４ｃの調製。
【０４０２】
化合物番号６４−５４ｃは、化合物番号６４−５２の代わりに化合物番号６４−５２ｂを使用し、化合物番号６４−５４に関して上に記載された方法と類似の方法で調製した。化合物番号６４−５４ｃの合成は、スキームＳ４−２ｃで概説している。
スキームＳ４−２ｃ
【化９５】
2021503005.tif 000116
（実施例Ｓ４−ａ）
Ｎ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）テトラデカンアミド（化合物番号６４−１０ｂ）の調製。
【０４０３】
パートＡ。硝酸（１２５ｍＬ）を酢酸（５００ｍＬ）中のキノリン−２，４−ジオール（５０ｇ、０．３モル）のスラリーに加え、この反応混合物を３時間、６５℃まで加熱した。次に、この混合物を５〜１０℃まで冷却し、この固体物質をろ過により採集し、冷水で洗浄し、風乾させた。次に、得られた固体をメタノールから再結晶し、真空下で乾燥させて、５８ｇの３−ニトロ−２，４−キノリンジオールを黄色固体として得た。
【０４０４】
パートＢ。アルゴン雰囲気下、オキシ塩化リン（１５０ｍＬ）を３−ニトロ−２，４−キノリンジオール（５８ｇ）に加え、４時間、９５℃に加熱した。次に、この混合物を室温まで冷却し、絶えず撹拌しながら、砕いた氷に注ぎ入れた。沈殿した生成物をろ過により採集して水により洗浄し、真空下で乾燥させた。粗製固体を、ヘキサン／酢酸エチルを使用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３５ｇの２，４−ジクロロ−３−ニトロキノリンを得た。
【０４０５】
パートＣ。無水ジクロロメタン（４００ｍＬ）およびトリメチルアミン（１６．０ｇ、０．１６モル、１．１当量）中の２，４−ジクロロ−３−ニトロキノリン（３５ｇ、０．１５モル、１．０当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル（４−（アミノメチル）ベンジル）カルバメート（３７．３ｇ、０．１６モル、１．１当量）を加え、室温で一晩、撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をヘキサン／酢酸エチルを使用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、５２ｇのｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（２−クロロ−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメートを得た。
【０４０６】
パートＤ。Ｐａｒｒ水素化装置を使用し、５％炭素担持白金（２．０ｇ）および硫酸ナトリウム（５２ｇ）の存在下、６０ｐｓｉで１２時間、酢酸エチル（２５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（２−クロロ−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメート（５２ｇ、０．１２モル）の溶液を水素化した。白金触媒および硫酸ナトリウムをＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドによりろ過することにより除去し、ろ液を減圧下で濃縮した。生成物をヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、３２ｇのｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−アミノ−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメートを得た。
【０４０７】
パートＥ。無水テトラヒドロフラン（３５０ｍＬ）およびピリジン（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−アミノ−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメート（３２ｇ、７７．６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、０〜５℃で、塩化ペンタノイル（９．７ｍＬ、８１．５ｍｍｏｌ、１．０５当量）をゆっくりと加えた。次に、この反応混合物を室温まで温め、１２時間、撹拌した。この溶媒を減圧下で除去し、次に固体を酢酸エチル（４００ｍＬ）に再溶解し、水および飽和炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）で逐次、洗浄し、最後に無水硫酸マグネシウムにより乾燥させた。生成物をヘキサン／酢酸エチルにより溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、２２ｇのｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−ブチルアミド−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメートを得た。
【０４０８】
パートＦ。エタノール（３２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−ブチルアミド−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメート（２２ｇ、４４．２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に水（８０ｍＬ）を加え、次いで、炭酸カリウム（１２．２ｇ、８８．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を加え、この混合物を激しく撹拌しながら１６時間、５５℃に加熱した。この反応混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（２５０ｍＬ）との間で分配した。次に、酢酸エチル層を水（１００ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。生成物をヘキサン／酢酸エチルにより溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、１５．４ｇのｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−ブチル−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメートを得た。
【０４０９】
パートＧ。ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−ブチル−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメート（１５．４ｇ、３２．２ｍｍｏｌ、１当量）を無水ジメチルホルムアミド（１２５ｍＬ）に溶解し、次に、この溶液にアジ化ナトリウム（８．４ｇ、１２８．６ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。得られた懸濁液を脱気し、アルゴン雰囲気下、１１０〜１１５℃で撹拌し、反応の進行を逆相ＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。１８時間後、この反応混合物を室温まで冷却し、冷水（５００ｍＬ）に注ぎ入れて、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）により抽出した。合わせた抽出物を水（２×７５ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥させて、Ｃｅｌｉｔｅによりろ過し、減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。この固体を１：１エチル／ヘキサンを用いる再結晶により後処理して、１２．５ｇのｔｅｒｔ−ブチル（４−（（４−アジド−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメートを得た。
【０４１０】
パートＨ。濃塩酸（６５ｍＬ）にｔｅｒｔ−ブチル（４−（（４−アジド−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメート（１２．５ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）を加え、この懸濁液に１０％炭素担持白金（３．０ｇ）を加えた。この反応混合物に６５ｐｓｉで水素化を施し、反応の進行を逆相ＨＰＬＣ分析によりモニタリングした。６日後に、触媒をろ別して、ろ過ケーキを水（２×２５ｍＬ）により洗浄した。このケーキを氷浴中で冷却し、激しく撹拌しながら、ｐＨが８．５に到達するまで氷冷１Ｎ水酸化ナトリウムを滴下添加し、５％メタノールを含有するジクロロメタン（４×７５ｍＬ）によりこの物質を抽出した。合わせた抽出物を硫酸マグネシウムにより乾燥させ、ろ過して、減圧下で濃縮した。１％アンモニア水を含有する８％メタノール／ジクロロメタンを使用してシリカゲルカラムで残留物を精製して、５．３ｇの１−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンを得た。
【０４１１】
パートＩ。無水ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の１−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（３４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ミリスチン酸（２７．４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．２当量）およびトリメチルアミン（０．２ｍＬ）を加え、このスラリーを５分間、混合し、次いで、ＨＢＴＵ（４７．４ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１．２５当量）を加えた。この反応混合物をさらに２時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解して水（２×１０ｍＬ）により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮した。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、３５ｍｇのＮ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）テトラデカンアミド（化合物番号６４−１０ａ）を得た。生成物純度は、逆相ＨＰＬＣにより約９８％と判定され、ＬＣ／ＭＳにより、目的合成物の質量である５６９．８を確認し、目的合成物の構造を、３００  ＭＨｚプロトンNMR  (CDCl3):  δ  7.98  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.75  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.67  (t,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.40  (t,  J  =  7.5  Hz,  1H),  7.30  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.06  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  5.95  (s,  2H),  4.33  (s,  2H),  3.74  (s,  2H),  3.01  (t,  J  =  7.8  Hz,  2H),  2.20  (t,  J  =  7.5  Hz,  2H),  1.82-1.9  (m,  2H),  1.42-1.70  (m,4H),  1.26-1.48  (m,  20  H),  0.85-1.05  (m,  6H)により確認した。
（実施例Ｓ４−ｂ）
２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−３３ｂ）の調製。
【０４１２】
パートＡ〜Ｈは、実施例Ｓ４−ａと同じであった。
【０４１３】
パートＩ。無水ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の１−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、シクロプロピル酢酸（３３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．２当量）およびトリメチルアミン（１４０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、５．０当量）を加え、このスラリーを５分間、混合し、次いで、ＨＢＴＵ（１３１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．２５当量）を加えた。この反応混合物をさらに２時間、アルゴン雰囲気下で撹拌した。反応物を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈して水（３×３０ｍＬ）により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮した。粗製残留物を酢酸エチルおよびメタノールに溶解し、カラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、１４０ｍｇのＮ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）−２−シクロプロピルアセトアミドを得た。
【０４１４】
パートＪ。無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中のＮ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）−２−シクロプロピルアセトアミド（１２３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、室温でボラン−ジメチルスルフィド錯体の溶液（２．０Ｍ、１．５ｍＬ、過剰）を加え、この反応混合物を１２時間、加熱還流した。この混合物を周囲温度まで冷却し、３Ｎ  ＨＣｌ（１ｍＬ）でクエンチして、４時間、撹拌した。この反応混合物のｐＨを、２Ｎ水酸化ナトリウムを加えることによりアルカリ性にし、この生成物をジクロロメタン（２０ｍＬ×１０）により抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、溶離液として６％メタノール／ジクロロメタンを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製して、２８ｍｇの２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−３３ｂ）を得た。生成物純度は、逆相ＨＰＬＣにより９７％と判定され、ＬＣ／ＭＳにより、目的合成物の質量である４２７．６を確認し、目的合成物の構造を、400  MHz  1H  NMR  (CDCl3):  δ  7.80  (dd,  J  =  8.5,  1.0  Hz,  1H),  7.70  (dd,  J  =  8.3,  1.1  Hz,  1H),  7.42  (m,  J  =  8.4.  7.0,  1.4  Hz,  1H),  7.29  (as,  1H),  7.25  (as,  1H),  7.10  (m,  J  =  8.2,  7.1,  1.3  Hz,  1H),  7.00  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  5.92  (bs,  2H),  5.69  (s,  2H),  3.75  (s,  2H),  2.86  (dd,  J  =  8.0  Hz,  2H),  2.68  (dd,  J  =  8.0  Hz,  2H),  1.82-1.74  (m,  2H),  1.45-1.36  (m,  4H),  0.91  (t,  J  =  7.8  Hz,  3H),  0.91-0.85  (m,  1H),  0.68-0.60  (m,  1H),  0.42-0.37  (m,  2H),  0.04-0.00  (m,  2H)により確認した。
（実施例Ｓ４−ｃ）
２−ブチル−１−（４−（（（（１−メチルシクロブチル）メチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−６０ｂ）の調製。
【０４１５】
パートＡ。ジクロロメタン（３ｍＬ）中の１−メチルシクロブタンカルボン酸（５７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（９４ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６ｍｇ）の存在下、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（７６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩、撹拌した。次に、この混合物をエーテル（２０ｍＬ）により希釈し、沈殿した尿素をろ過により除去して、ろ液を濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を１％酢酸エチル／ヘキサンに懸濁させて、いかなる残留沈殿尿素も再度、ろ過により除去した。得られたろ液を減圧下で濃縮して、１２６ｍｇの所望の（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−１−メチルシクロブタンカルボキシレート生成物を得た。
【０４１６】
パートＢ。ジクロロメタン（３ｍＬ）中の（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−１−メチルシクロブタンカルボキシレート（７２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（４８ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の存在下、ＩＭＤＱ（８４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間、撹拌した。次に、この反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を５％酢酸エチル／ヘキサンにより洗浄した。この残留物をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌ、次いで水（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥させてろ過し、減圧下で濃縮して、８８ｍｇのＮ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）−１−メチルシクロブタン−１−カルボキサミドをオフホワイト色の固体として得た。
【０４１７】
パートＣ。Ｎ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）−１−メチルシクロブタン−１−カルボキサミド（８８ｍｇ）を、５５℃で１２時間、ボランジメチルスルフィド錯体（３．５当量）により還元した。次に、この反応物を室温まで冷却し、２Ｍ  ＨＣｌ（過剰）で注意深くクエンチして、５５℃でさらに３時間、撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、水（１０ｍＬ）により希釈し、次に、ジクロロメタン（１０ｍＬ）により抽出して不純物を除去した。氷冷１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を加えることにより、この反応混合物のｐＨを８．０に調整し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）により抽出してＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。９：１酢酸エチル／ヘキサンを用いて再結晶すると、この反応により、３２ｍｇの２−ブチル−１−（４−（（（（１−メチルシクロブチル）メチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−６０ｂ）を得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおける逆相ＨＰＬＣにより９６％純粋であることが判定され、ＬＣ／ＭＳにより目的合成物の質量である４４１．３ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CDCl3):  δ  7.80  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.71  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.43  (t,  J  =  7.5,  15.0  Hz,  1H),  7.31  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  7.14  (t,  J  =  7.5,  15.0  Hz,  1H),  7.01  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  5.71  (s,  2H),  5.52  (s,  2H),  3.78  (s,  2H),  2.89  (t,  J  =  7.5,  15.6  Hz,  2H),  2.52  (s,  2H),  1.6-1.88  (m,  8H),  1.35-1.60  (m,  2H),  1.12  (s,  3H),  0.94  (t,  J  =  7.5,  14.7  Hz,  3H)により確認した。
（実施例Ｓ４−ｄ）
２−ブチル−１−（４−（（（シクロブチルメチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−６６ｂ）の調製。
【０４１８】
パートＡ。ジクロロメタン（３ｍＬ）中のシクロブタンカルボン酸（１０６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）およびペンタフルオロフェノール（１７５ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ）の存在下、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（１２７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩、撹拌した。次に、この混合物をエーテル（２０ｍＬ）により希釈し、沈殿した尿素をろ過により除去して、ろ液を濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を１％酢酸エチル／ヘキサンに懸濁させて、いかなる残留沈殿尿素も再度、ろ過により除去した。得られたろ液を減圧下で濃縮して、１２６ｍｇの所望の（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）シクロブタンカルボキシレート生成物を得た。
【０４１９】
パートＢ。ジクロロメタン（３ｍＬ）中の（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）シクロブタンカルボキシレート（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（３５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の存在下、ＩＭＤＱ（６２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間、撹拌した。次に、この反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を５％酢酸エチル／ヘキサンにより洗浄した。この残留物をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌ、次いで水（２０ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥させてろ過し、減圧下で濃縮して、８５ｍｇのＮ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）シクロブタンカルボキサミドをオフホワイト色の固体として得た。
【０４２０】
パートＣ。Ｎ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）シクロブタンカルボキサミド（８５ｍｇ）を５５℃で１２時間、ボランジメチルスルフィド錯体（３．５当量）により還元した。次に、この反応物を室温まで冷却し、２Ｍ  ＨＣｌ（過剰）により注意深くクエンチし、５５℃でさらに３時間、撹拌した。この反応物を室温まで冷却し、水（１０ｍＬ）により希釈し、次に、ジクロロメタン（１０ｍＬ）により抽出して不純物を除去した。氷冷１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を加えることにより、この反応混合物のｐＨを８．０に調整し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）により抽出してＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。９：１酢酸エチル／ヘキサンを用いて再結晶すると、この反応により、２１ｍｇの２−ブチル−１−（４−（（（シクロブチルメチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（化合物番号６４−６６ｂ）を得た。生成物純度は、２５４ｎｍにおける逆相ＨＰＬＣにより９５％純粋であることが判定され、ＬＣ／ＭＳにより目的合成物の質量である４２７．３ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CDCl3):  δ  7.80  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.73  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.45  (t,  J  =  7.5,  15.0  Hz,  1H),  7.29  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  7.15  (t,  J  =  7.5,  15.0  Hz,  1H),  7.03  (d,  J  =  8.4  Hz,  2H),  5.72  (s,  2H),  5.51  (s,  2H),  3.74  (s,  2H),  2.89  (t,  J  =  7.5,  15.6  Hz,  2H),  2.62  (d,  J  =  7.2  Hz,  2H),  2.40-2.58  (m,  1H),  1.75-2.15  (m,  7H),  1.60-1.70  (m,  2H),  1.35-1.50  (m,  2H),  0.94  (t,  J  =  7.5,  14.7  Hz,  3H)により確認した。
（実施例Ｓ５）
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃにおけるパーセント遊離ＩＭＤＱの決定。
【０４２１】
遊離（すなわち、非コンジュゲート）ＩＭＤＱを検出するため、化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃをＲＰ−ＨＰＬＣにより分析した。化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂまたは６４−５４ｃの一定分量を、Ｚｏｂｒａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｃ１８カラム（カラムサイズ：１．４ｍＬ；温度：２３℃；検出波長：３２２ｎｍ）にロードし、水／アセトニトリルのグラジエント（５〜９５％アセトニトリル）により溶出する。定量のため、遊離ＩＭＤＱピーク（４．５分の保持時間）を積分し、応答面積をＩＭＤＱ標準曲線と比較した。パーセント遊離ＩＭＤＱは、以下の式：
％遊離ＩＭＤＱ＝（非コンジュゲートＩＭＤＱの濃度）×１００／（全ＩＭＤＱ濃度）
（式中、全ＩＭＤＱ濃度は、化合物番号６４−５３および５４−５３ａの場合、実施例Ｓ６に記載される通り、または化合物番号６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃの場合、実施例Ｓ８に記載される通りに決定する）を使用して計算した。
（実施例Ｓ６）
化合物番号６４−５３および６４−５３ａ中の全ＩＭＤＱ濃度の決定。
【０４２２】
化合物番号６４−５３および６４−５３ａにおける全ＩＭＤＱ濃度は、完全なチオリシス後に放出されたＩＭＤＱの定量により決定した。手短に言えば、化合物番号６４−５３または６４−５３ａを、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）／ＥＤＴＡ緩衝液中、室温で１８時間、１０ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）と共にインキュベートした。実施例Ｓ５に記載される通り、得られた試料をＲＰ−ＨＰＬＣにより分析し、放出されたＩＭＤＱピークの面積をＩＭＤＱ標準曲線に対して定量した。
（実施例Ｓ７）
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４ａおよび６４−５４におけるＦｉｃｏｌｌ濃度の決定。
【０４２３】
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂまたは６４−５４ｃにおけるＦｉｃｏｌｌ濃度は、Ｆｉｃｏｌｌ  ＰＭ４００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  ＰＡ、カタログ番号１７−０３００−５０）を使用して標準曲線を作成したこと以外は、製造業者により説明されている、過ヨウ素酸ナトリウム法（グリコタンパク質炭水化物推定キット、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ、カタログ番号２３２６０）を使用して決定した。
（実施例Ｓ８）
化合物番号６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃにおける全ＩＭＤＱ濃度の決定。
【０４２４】
化合物番号６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃにおける全ＩＭＤＱ濃度は、完全なタンパク質分解後に放出されたＩＭＤＱの定量により決定した。手短に言えば、化合物番号６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂまたは６４−５４ｃを、酢酸／ＥＤＴＡ（ｐＨ５．５）緩衝液中、３．９ｍＭ  ＤＴＴの存在下、３７℃で１８時間、３．７μＭのカテプシンＢと共にインキュベートした。実施例Ｓ５に記載される通り、得られた試料をＲＰ−ＨＰＬＣにより分析し、放出されたＩＭＤＱピークの面積をＩＭＤＱ標準曲線に対して定量した。
（実施例Ｓ９）
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂまたは６４−５４ｃの粒子サイズの決定。
【０４２５】
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５４ｂまたは６４−５４ｃの平均粒子サイズ（Ｚ平均）は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｍａｌｖｅｒｎ英国）を使用する、動的光散乱法により測定した。ＰＢＳ（ｐＨ７．５）緩衝液中、０．５ｍｇ／ｍＬのＦｉｃｏｌｌ濃度に試料を希釈し、規定した機器設定下で測定した。５０ｎｍのポリスチレンナノスフィア（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ、カタログ番号３０５０Ａ）は、参照標準対照としてこの分析に含まれ、４９±６ｎｍの画定された粒子サイズを有した。
（実施例Ｓ１０）
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４および６４−５４ａの合成に関する化学反応条件および特徴付けデータ
【０４２６】
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４および６４−５４ａの合成に使用した反応条件のまとめが、表Ｓ１０−１に提示されている。非コンジュゲートＩＭＤＱ、全ＩＭＤＱおよびＦｉｃｏｌｌ濃度を決定するためのアッセイは、実施例Ｓ５〜Ｓ９に記載される通りである。全ＩＭＤＱ量は、全ＩＭＤＱ濃度を溶液の体積と乗算することにより算出した。
【表Ｓ１０−１】
2021503005.tif 000117
（実施例Ｓ１１）
化合物番号６４−５５および６４−５６の調製。
【０４２７】
実施例Ｓ１１ならびにスキームＳ１１−１およびＳ１１−２に示されている手順および合成スキームを使用して、様々なＴＬＲ７／８アゴニスト部分を有するマレイミドカプロイル−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物（式（Ｉ）中の−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）を調製することができる。これらの実施例は、一般的なマレイミドカプロイル−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＴＬＲ７／８アゴニスト構造の例として、化合物番号６４−５５（スキームＳ１１−１）および６４−５６（スキームＳ１１−２）を調製するため、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物番号６４−１０ａおよび６４−３３ａを使用することを示している。さらに、ＴＬＲ７／８アゴニスト（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。
スキームＳ１１−１
【化９６】
2021503005.tif 000118
化合物番号１０の調製の一般手順。
【０４２８】
無水ジクロロメタン（４００ｍＬ）およびトリメチルアミン（１．１当量）中の２，４−ジクロロ−３−ニトロキノリン（１．０当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル（４−（アミノメチル）ベンジル）カルバメート（１．１当量）を加え、次いで、室温で一晩、撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、ヘキサン／酢酸エチルを使用するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、化合物番号１０（ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（２−クロロ−３−ニトロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメート）を得る。
化合物番号１１の調製の一般手順。
【０４２９】
Ｐａｒｒ水素化装置を使用し、５％炭素担持白金（２．０ｇ）および硫酸ナトリウム（５２ｇ）の存在下、６０ｐｓｉで１２時間、酢酸エチル（２５０ｍＬ）中の化合物番号１０（０．１２モル）の溶液を水素化する。白金触媒および硫酸ナトリウムをＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通してろ過することにより除去し、ろ液を減圧下で濃縮する。生成物をヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、化合物番号１１（ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−アミノ−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメート）を得る。
化合物番号１２の調製の一般手順。
【０４３０】
無水テトラヒドロフラン（３５０ｍＬ）およびピリジン（３０ｍＬ）中の化合物番号１１（１．０当量）の溶液に、０〜５℃で、塩化ペンタノイル（１．０５当量）をゆっくりと加える。次に、この反応混合物を、室温まで温め、１２時間、撹拌する。この溶媒を減圧下で除去し、次に、固体を酢酸エチル（４００ｍＬ）に再溶解し、水および飽和炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）により逐次、洗浄し、最後に無水硫酸マグネシウムにより乾燥させる。生成物をヘキサン／酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、中間体ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（（３−ブチルアミド−２−クロロキノリン−４−イル）アミノ）メチル）ベンジル）カルバメートを得る。４×体積のエタノール中の中間体（１．０当量）の溶液に水を加え、次いで、炭酸カリウム（２．０当量）を加え、この混合物を激しく撹拌しながら、１６時間、５５℃に加熱する。次に、この反応混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルと水との間で分配する。次に、酢酸エチル層を水により洗浄して、無水硫酸マグネシウムにより乾燥させて、減圧下で濃縮する。生成物をヘキサン／酢酸エチルにより溶出するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、化合物番号１２（ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−ブチル−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメート）を得る。
化合物番号１３の調製の一般手順。
【０４３１】
化合物番号１２（１．０当量）を無水ジメチルホルムアミドに溶解し、次に、この溶液にアジ化ナトリウム（４．０当量）を加える。得られた懸濁液を脱気して、アルゴン雰囲気下、１１０〜１１５℃で撹拌し、反応の進行を逆相ＨＰＬＣ分析によりモニタリングする。１８時間後、反応混合物を室温まで冷却し、冷水に注ぎ入れて、酢酸エチルにより抽出する。合わせた抽出物を水により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥させてＣｅｌｉｔｅを通してろ過し、減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得る。この固体を１：１エチル／ヘキサンにより再結晶することによりさらに後処理して、化合物番号１３（ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（４−アジド−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）カルバメート）を得る。
化合物番号５（ＩＭＤＱ）の調製の一般手順。
【０４３２】
化合物番号１３（２５．７ｍｍｏｌ）を濃塩酸に加える。１０％炭素担持白金（３．０ｇ）をこの懸濁液に加えた。この反応混合物に、６５ｐｓｉで水素化を施し、反応の進行を逆相ＨＰＬＣ分析によりモニタリングする。６日後、触媒をろ別し、ろ過ケーキを水により洗浄する。このケーキを氷浴中で冷却し、激しく撹拌しながら、ｐＨが８．５に到達するまで氷冷１Ｎ水酸化ナトリウムを滴下添加し、５％メタノールを含有するジクロロメタンにより、この物質を抽出する。合わせた抽出物を硫酸マグネシウムにより乾燥させてろ過し、減圧下で濃縮する。１％アンモニア水を含有する８％メタノール／ジクロロメタンを使用してシリカゲルカラムで残留物を精製して、化合物番号５（１−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）を得る。
化合物番号１５の調製の一般手順。
【０４３３】
無水ジメチルホルムアミド中の化合物番号５（１．０当量）の溶液に、ミリスチン酸（１．２当量）およびトリメチルアミンを加え、このスラリーを５分間、混合し、次いで、ＨＢＴＵ（１．２５当量）を添加する。アルゴン雰囲気下、この反応混合物を２時間、さらに撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号１５（Ｎ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）テトラデカンアミド）を得る。
化合物番号１６の調製の一般手順。
【０４３４】
無水ＤＭＦ中の化合物番号１５（１．０当量）の溶液に、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−バリル−シトルリル−（４−アミノベンジル）−（４−ニトロフェニル）カーボネート（１．２当量）およびトリメチルアミンを加え、このスラリーを５分間、混合し、次いでＨＢＴＵ（１．２５当量）を添加する。この反応混合物を室温で１５時間、さらに撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号１６（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（２−ブチル−１−（４−（テトラデカンアミドメチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート）を得る。
化合物番号６４−５５の調製の一般手順。
【０４３５】
化合物番号１６（１．２当量）をＮＭＰに溶解し、次にジエチルアミンにより室温で２時間、処理する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。中間体４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ｌ２−アザニル）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−ブチル−１−（４−（テトラデカンアミドメチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバメート（１．０当量）およびＮ−（ｅ−マレイミドカプロイルオキシ）スクシニド（succinide）エステル（１．１当量）をＮＭＰに溶解し、次に、室温で０．５時間、撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号６４−５５（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−ブチル−１−（４−（テトラデカンアミドメチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバメート）を得る。
スキームＳ１１−２
【化９７】
2021503005.tif 000119
化合物番号１７の調製の一般手順。
【０４３６】
無水ＤＭＦ中の化合物番号５（ＩＭＤＱ；１．０当量）の溶液に、シクロプロピル酢酸（１．２当量）およびトリメチルアミンを加え、このスラリーを５分間、混合して、その後にＨＢＴＵ（１．２５当量）を添加する。アルゴン雰囲気下、この反応混合物を２時間、さらに撹拌する。この反応物を酢酸エチルにより希釈して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。粗製残留物を酢酸エチルおよびＭｅＯＨに溶解し、カラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、中間体Ｎ−（４−（（４−アミノ−２−ブチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）メチル）ベンジル）−２−シクロプロピルアセトアミドを得る。無水テトラヒドロフラン中の中間体（１．０当量）の溶液に、室温で過剰のボラン−ジメチルスルフィド錯体の溶液を加え、この反応混合物を１２時間、加熱還流する。この混合物を周囲温度まで冷却し、３Ｎ  ＨＣｌでクエンチして、さらに４時間、撹拌する。２Ｎ水酸化ナトリウムを加えることにより、この反応混合物のｐＨをアルカリ性にし、生成物をジクロロメタンにより抽出する。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、溶離液として６％メタノール／ジクロロメタンを用いる残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、化合物番号１７（２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）を得る。
化合物番号１８の調製の一般手順。
【０４３７】
無水ＤＭＦ中の化合物番号１７（１．０当量）の溶液に、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−バリル−シトルリル−（４−アミノベンジル）−（４−ニトロフェニル）カーボネート（１．２当量）およびトリメチルアミンを加え、このスラリーを５分間、混合し、次いでＨＢＴＵ（１．２５当量）を添加する。この反応混合物を室温で１５時間、さらに撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。カラムクロマトグラフィー（６％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）を使用してこの生成物を精製して、化合物番号１８（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート）を得る。
化合物番号６４−５６の調製の一般手順。
【０４３８】
化合物番号１８（１．２当量）をＮＭＰに溶解し、次にジエチルアミンにより室温で２時間、処理する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。中間体４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバメート（１．０当量）およびＮ−（ｅ−マレイミドカプロイルオキシ）スクシニドエステル（１．１当量）をＤＭＦに溶解し、次に、室温で０．５時間、撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％メタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号６４−５６（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−ブチル−１−（４−（（（２−シクロプロピルエチル）アミノ）メチル）ベンジル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−イル）カルバメート）を得る。
（実施例Ｓ１１ａ）
化合物番号６４−７１、６４−７２、６４−７３および６４−７４の調製。
【０４３９】
実施例Ｓ１１ａならびにスキームＳ１１ａ−１、Ｓ１１ａ−２、Ｓ１１ａ−３およびＳ１１ａ−４に示されている手順および合成スキームを使用して、様々なＴＬＲ７／８アゴニスト部分を有するアジドＰＥＧ４−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物（式（Ｉ）中の−Ｌ３−Ｌ２−Ｌ１−Ｄ）を調製することができる。これらの実施例は、一般的なアジドＰＥＧ４−ジペプチド−ＰＡＢＣ−ＴＬＲ７／８アゴニスト構造の例として、化合物番号６４−７１（スキームＳ１１ａ−１）、６４−７２（スキームＳ１１ｂ−２）、６４−７３（スキームＳ１１ｃ−３）および６４−７４（スキームＳ１１ｄ−４）を調製するために、ＴＬＲ７／８アゴニスト化合物番号６４−３３ｂ、メタ−ＩＭＤＱ、６４−６０ｂおよび６４−６６ｂを使用することを示している。さらに、ＴＬＲ７／８アゴニスト（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。
スキームＳ１１ａ−１
【化９８】
2021503005.tif 000120
化合物２１の調製手順。
【０４４０】
ジクロロメタン（１４ｍＬ）中のシクロプロパンカルボン酸のペンタフルオロフェノールエステル（２８０ｍｇ；１．２当量）の溶液に、トリエチルアミン（１０５ｍｇ；０．３ｍｍｏｌ）の存在下で、ＩＭＤＱ（化合物５；３５０ｍｇ；１．０当量）を加え、室温で一晩、撹拌した。この溶液の１８時間の逆相ＨＰＬＣ分析後、この反応は完了した。この溶液を減圧下で濃縮し、１％アンモニア水を含有する５〜１０％メタノール／ジクロロメタンを用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、３５０ｍｇの化合物３９を得た。
化合物番号６４−３３ｂの調製手順
【０４４１】
ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の化合物３９（３００ｍｇ、１当量）を５５℃で１２時間、ボランジメチルスルフィド錯体（３．５当量）により還元した。この反応物を室温まで冷却し、２Ｍ塩酸（過剰）により注意深くクエンチして、５５℃でさらに６時間、撹拌した。次に、この反応物を室温まで冷却し、水（１５ｍＬ）により希釈してジクロロメタン（１５ｍＬ）により抽出し、不純物を除去した。冷１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を添加することによりｐＨを８．０に調整し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で再抽出して、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。酢酸エチルにより再結晶すると、この固体は、１１４ｍｇの化合物番号６４−３３ｂが白色固体として生じた。
化合物４０の調製手順。
【０４４２】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物番号６４−３３ｂ（３３ｍｇ、１．０当量）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下で１０分間、撹拌した。この溶液に化合物１０（５９ｍｇ、１当量）を２回に分けて添加し、得られた澄明な黄色溶液を３５℃で２時間、撹拌した。１％トリメチルアミンを含有するジクロロメタン中の１０％メタノールを用いる薄層クロマトグラフィー分析により、化合物番号６４−３３ｂのすべてが消費されたことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、７３ｍｇのオフホワイト色の固体を得た。オフホワイト色の固体（７０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を氷冷ＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアミン（０．１ｍＬ）を加えた。得られた溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌して、室温までゆっくりと温めて、１２時間、撹拌を継続した。反応混合物の逆相ＨＰＬＣ分析により、Ｆｍｏｃ部分の除去が完了したことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させ、４７ｍｇの化合物４０を得た。
化合物番号６４−７１の調製手順。
【０４４３】
化合物４０（４７ｍｇ、１．０当量）および化合物２５（２４ｍｇ、１．２当量）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ）を加え、この溶液を室温で２．５時間、撹拌した。逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に０．５％アンモニアを含有するジクロロメタン中の４〜１０％メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、２２．２ｍｇの化合物番号６４−７１を白色固体として得た。純度は、２５４ｎｍにおける逆相ＨＰＬＣにより７２％純粋であることが判定され、ＨＲＭＳにより目的合成物の質量である１，１０５．６ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CD3OD):  δ  7.83  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.68  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.50-7.65  (m,  3H),  6.95-7.50  (m,  7H),  5.89  (s,  2H),  5.05  (brs,  2H),  4.42-4.60  (m,  3H),  4.20  (d,  1H),  3.73-3.76  (m,  2H),  3.55-3.68  (m,  14  H),  3.28,  3.38  (m,  4H),  3.0-3.28  (m,  2H),  2.97  (t,  J  =  7.5,  15.3  Hz,  2H),  2.55  (t,  J  =  6,  12  Hz,  2H),  1.72-2.18  (m,  7H),  1.58-1.70  (m,  2H),  1.43-1.55  (m,  2H),  0.88-1.01  (m,  9H),  0.30-0.50  (m,  3H),  0.10-0.08  (m,  2H)により確認した。
スキームＳ１１ａ−２
【化９９】
2021503005.tif 000121
化合物４１の調製手順。
【０４４４】
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のメタ−ＩＭＤＱ（４６ｍｇ、１．０当量）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）を加え、この溶液をアルゴン雰囲気下で１０分間、撹拌した。この溶液に、化合物１０（９８ｍｇ、１．０当量）を２回に分けて添加した。得られた澄明な黄色溶液を０℃で２時間、撹拌し、次に、室温までゆっくりと温めて、１２時間、撹拌を継続した。１％トリメチルアミンを含有するジクロロメタン中の１０％メタノールを用いる薄層クロマトグラフィー分析により、メタ−ＩＭＤＱのすべてが消費されたことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、１０２ｍｇのオフホワイト色の固体を得た。オフホワイト色の固体（９９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を氷冷ＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアミン（０．１ｍＬ）を加えた。得られた溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌して、室温までゆっくりと温めて、１２時間、撹拌を継続した。反応混合物の逆相ＨＰＬＣ分析により、Ｆｍｏｃ部分の除去が完了したことが示された。ＤＭＦを減圧下で留去し、黄色残留物に酢酸エチル（３ｍＬ）を加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションした。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、６８ｍｇの化合物４１を得た。
化合物番号６４−７２の調製手順。
【０４４５】
化合物４１（６８ｍｇ、１．０当量）および化合物２５（３８ｍｇ、１．２当量）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。この溶液にジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ）を加え、これを室温で１．５時間、撹拌した。逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが示された。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に０．５％アンモニアを含有するジクロロメタン中の１〜８％メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、４７ｍｇの化合物番号６４−７２を白色固体として得た。純度は、２５４ｎｍにおける逆相ＨＰＬＣにより９６％純粋であることが判定され、ＨＲＭＳにより目的合成物の質量である１，０３７．８ダルトンを確認し、目的合成物の構造を、300  MHz  1H  NMR  (CD3OD):  δ  7.79  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.66  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.61  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.41  (t,  J  =  7.5,  15.0  Hz,  1H),  7.21-7.37  (m,  3H),  7.05-7.29  (m,  2H),  7.03  (s,  1H),  6.93  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  5.82  (s,  2H),  4.96  (s,  2H),  4.48-4.55  (m,  1H),  4.20-4.26  (m,  3H),  3.73-3.76  (m,  2H),  3.55-3.68  (m,  14  H),  3.28,  3.38  (m,  4H),  3.0-3.28  (m,  2H),  2.97  (t,  J  =  7.5,  15.3  Hz,  2H),  2.55  (t,  J  =  6,  12  Hz,  2H),  1.72-2.18  (m,  5H),  1.58-1.70  (m,  2H),  1.43-1.55  (m,  2H),  0.88-1.01  (m,  9H)により確認した。
スキームＳ１１ａ−３
【化１００】
2021503005.tif 000122
化合物４２の調製の一般手順。
【０４４６】
ＤＣＭ中の１−メチルシクロブタンカルボン酸のペンタフルオロフェノールエステル（１．２当量）の溶液に、ＴＥＡの存在下でＩＭＤＱ（化合物５；１．０当量）を加え、室温で一晩、撹拌する。１８時間後、この溶液の逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが実証される。この溶液を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ中の、１％（ｖ／ｖ）アンモニア水を含有する５〜１０％メタノールにより溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物４２を得る。
化合物番号６４−６０ｂの調製の一般手順。
【０４４７】
ＴＨＦ中の化合物４２（１当量）を５５℃で１２時間、ボラン−ジメチルスルフィド錯体（３．５当量）により還元する。この反応物を室温まで冷却し、２Ｍ塩酸（過剰）により注意深くクエンチし、５５℃でさらに６時間、撹拌する。次に、この反応物を室温まで冷却して水により希釈し、ＤＣＭで抽出して不純物を除去する。冷１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を添加することによりｐＨを８．０に調整し、ＤＣＭで再抽出し、この溶液をＭｇＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得る。酢酸エチルにより再結晶すると、この反応により、化合物番号６４−６０ｂを白色固体として得る。
化合物４３の調製の一般手順。
【０４４８】
ＤＭＦ中の化合物番号６４−６０ｂ（１．０当量）の溶液にＤＩＰＥＡを加え、この溶液をアルゴン雰囲気下、１０分間、撹拌する。この溶液に化合物１０（１．０当量）を２回に分けて添加し、得られた澄明な黄色溶液を３５℃で２時間、撹拌する。１％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）メタノールで展開する薄層クロマトグラフィー分析により、化合物番号６４−６０ｂはすべて消費されたことが示される。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、オフホワイト色の固体を得る。オフホワイト色の固体を氷冷ＤＭＦに溶解し、ジイソプロピルアミンを加える。得られた溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌し、撹拌を１２時間、継続しながら、室温までゆっくりと温める。反応混合物の逆相ＨＰＬＣ分析により、Ｆｍｏｃ部分の除去が完了したことが示される。次に、ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、化合物４３を得る。
化合物番号６４−７３の調製の一般手順。
【０４４９】
化合物４３（１．０当量）および化合物２５（１．２当量）をＤＭＦに溶解する。ＤＩＰＥＡを加え、この溶液を室温で２．５時間、撹拌する。逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが示される。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に０．５％（ｖ／ｖ）アンモニアを含有するジクロロメタン中の４〜１０％（ｖ／ｖ）メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、化合物番号６４−７３を白色固体として得る。生成物純度を２５４ｎｍでのＲＰ−ＨＰＬＣにより判定し、目的合成物の質量をＬＣ−ＭＳにより確認し、目的合成物の構造を１Ｈ  ＮＭＲにより確認する。
スキームＳ１１ａ−４
【化１０１】
2021503005.tif 000123
化合物４４の調製の一般手順。
【０４５０】
ＤＣＭ中のシクロブタンカルボン酸のペンタフルオロフェノールエステル（１．２当量）の溶液に、ＴＥＡの存在下でＩＭＤＱ（化合物５；１．０当量）を加え、室温で一晩、撹拌する。１８時間後、この溶液の逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが実証される。この溶液を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ中の１％（ｖ／ｖ）アンモニア水を含有する５〜１０％メタノールにより溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物４４を得る。
化合物番号６４−６６ｂの調製の一般手順。
【０４５１】
ＴＨＦ中の化合物４４（１当量）を５５℃で１２時間、ボラン−ジメチルスルフィド錯体（３．５当量）により還元する。この反応物を室温まで冷却し、２Ｍ塩酸（過剰）により注意深くクエンチし、５５℃でさらに６時間、撹拌する。次に、この反応物を室温まで冷却して水により希釈し、ＤＣＭで抽出して不純物を除去する。冷１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を添加することによりｐＨを８．０に調整し、ＤＣＭで再抽出し、この溶液をＭｇＳＯ４で乾燥させて減圧下で濃縮して、オフホワイト色の固体を得る。酢酸エチルにより再結晶すると、この反応により、化合物番号６４−６６ｂを白色固体として得る。
化合物４５の調製の一般手順。
【０４５２】
ＤＭＦ中の化合物番号６４−６６ｂ（１．０当量）の溶液に、ＤＩＰＥＡを加え、この溶液をアルゴン雰囲気下、１０分間、撹拌する。この溶液に化合物１０（１．０当量）を２回に分けて添加し、得られた澄明な黄色溶液を３５℃で２時間、撹拌する。１％（ｖ／ｖ）ＴＥＡを含有するＤＣＭ中の１０％（ｖ／ｖ）メタノールで展開する薄層クロマトグラフィー分析により、化合物番号６４−６６ｂはすべて消費されたことが示される。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、オフホワイト色の固体を得る。オフホワイト色の固体を氷冷ＤＭＦに溶解させ、ジイソプロピルアミンを加える。得られた溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌し、撹拌を１２時間、継続しながら、室温までゆっくりと温める。反応混合物の逆相ＨＰＬＣ分析により、Ｆｍｏｃ部分の除去が完了したことが示される。次に、ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に酢酸エチルを加え、この混合物を粉砕して、形成した淡黄色固体を沈殿させて、上澄み液をデカンテーションする。この過程をさらに２回、繰り返し、生成物を減圧下で乾燥させて、化合物４５を得る。
化合物番号６４−７４の調製の一般手順。
【０４５３】
化合物４５（１．０当量）および化合物２５（１．２当量）をＤＭＦに溶解する。ＤＩＰＥＡを加え、この溶液を室温で２．５時間、撹拌する。逆相ＨＰＬＣ分析により、この反応が完了したことが示される。ＤＭＦを減圧下で除去し、黄色残留物に０．５％（ｖ／ｖ）アンモニアを含有するジクロロメタン中の４〜１０％（ｖ／ｖ）メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーを施して、化合物番号６４−７４を白色固体として得る。生成物純度を２５４ｎｍでのＲＰ−ＨＰＬＣにより判定し、目的合成物の質量をＬＣ−ＭＳにより確認し、目的合成物の構造を１Ｈ  ＮＭＲにより確認する。
（実施例Ｓ１２）
化合物番号６４−５７、６４−７５、６４−７６および６４−７７の調製。
【０４５４】
実施例Ｓ１２、Ｓ１２ａ、Ｓ１２ｂおよびＳ１２ｃならびにスキームＳ１２−１、Ｓ１２ａ−１、Ｓ１２ｂ−１およびＳ１２ｃ−１に記載される一般手順およびスキームを使用して、式（Ｉ）の化合物を調製することができる。これらの実施例は、マレイミドカプロイルまたはＮＨＳ−ＰＥＧ４−トリアゾール（trizole）−ＰＥＧ４コンジュゲーションリンカー、バリン−シトルリン切断可能なリンカー、ＰＡＢＣ自己脱離性リンカー、ならびにＴＬＲ７／８アゴニスト部分として化合物番号６４−１０ａおよび６４−６６ａまたはＩＭＤＱと一緒に、抗ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブを使用し（アゴニスト：抗体比は、平均が４である（すなわち、抗体あたり、４つのＴＬＲ７／８アゴニスト化合物））、コンジュゲーション部分Ｆが抗体である式（Ｉ）の化合物の例として、化合物番号６４−５７、６４−７５、６４−７６および６４−７７を調製する。さらに、ＴＬＲ７／８アゴニスト部分（式（Ｉ）中のＤ）は、ＩＭＤＱまたはメタ−ＩＭＤＱ（ＩＭＤＱおよびメタ−ＩＭＤＱの化学構造の表示に関しては、図１を参照されたい）、ならびに化合物番号６４−０１〜６４−５０、６４−５８〜６４−６９、６４−０１ａ〜６４−５０ａおよび６４−５８ａ〜６４−６９ａのいずれかとすることができる。当業者は、トラスツズマブを使用する、本明細書に記載される一般手順が、他の組換え抗体、およびその誘導体にも適用されることを理解するであろう。
抗ＨＥＲ２抗体の限定的な還元、および化合物番号１９の調製の一般手順。
【０４５５】
トラスツズマブは、上皮細胞の細胞膜上に見出され、ある種の乳がん細胞において重度に過剰発現されるＨＥＲ２受容体（ＨＥＲ２／ｎｅｕとしても知られている、ヒト上皮成長因子受容体２）を標的とするヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ヒンジ領域に操作されたＳ２２８Ｐ突然変異を有する、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブのヒト化ＩｇＧ４バリアントは、市販源（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＳａｎＤｉｅｇｏ  ＣＡ、カタログ番号ｈｅｒ２ｔｒａ−ｍａｂ１４またはＭｅｄＣｈｅｍ  Ｅｘｐｒｅｓｓ、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ＮＪ、カタログ番号ＨＹ−Ｐ９９０７）から得る。この抗体は、組換えＤＮＡ技術によって生成し、当業者に周知の方法を使用するアフィニティークロマトグラフィーによって精製する（例えば、Kuner,  R.  and  Reinhart,  D.  2016,  Appl  Microbiol  Biotechnol  100:3451-3461を参照されたい）。トラスツズマブ抗体に、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭジエチレントリアミン五酢酸中、２．５モル当量のトリス−２−カルボキシエチルホスフィンを用いて、３７℃で２時間、限定的な還元を施し、化合物番号１９を生成する。
化合物番号２０の調製の一般手順。
【０４５６】
ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸中の化合物番号１９（１．０当量）を、１０％（ｖ／ｖ）ジメチルアセトアミドを含有するＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、０℃で化合物番号６４−５６（８〜１０当量）と０．５時間、反応させて、この反応を１ｍＭシステインによりクエンチする。次に、化合物番号２０を、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたＧ−２５サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｑｕａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用して、精製する／ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。
化合物番号６４−５７の調製の一般手順。
【０４５７】
スクシンイミド−チオエーテルの環加水分解は、一層大きな血漿中安定性を有する結合を生じ、したがって、タンジェンシャルフローろ過を使用して、化合物番号２０を５０ｍＭホウ酸塩（ｐＨ９．２）に緩衝液交換し、４８時間、４５℃に加熱し、次に、室温まで冷却して、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。化合物番号６４−５７に、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたサイズ排除クロマトグラフィーを施し、いかなる残留不純物、凝集物質を除去し、完全な緩衝液交換を確実にする。化合物番号６４−５７を調製するための合成スキームが、図１２に示されている。
化合物番号４６の調製の一般手順
【０４５８】
化合物番号４５（１．０当量）およびＮ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシニドエステル（１．１当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡを加え、この反応物を室温で２．５時間、撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４を使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％のメタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号４６を得る。
化合物番号４７の調製の一般手順。
【０４５９】
ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸中の化合物番号１９（１．０当量）を、１０％（ｖ／ｖ）ジメチルアセトアミドを含有するＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、０℃で０．５時間、化合物番号４６（８〜１０当量）と反応させて、この反応を１ｍＭシステインによりクエンチする。次に、化合物番号４７をＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたＧ−２５サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｑｕａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用して、精製する／ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。
化合物番号６４−７５の調製の一般手順。
【０４６０】
スクシンイミド−チオエーテルの環加水分解は、より大きな血漿中安定性を有する結合を生じ、したがって、タンジェンシャルフローろ過を使用して、化合物番号４７を５０ｍＭホウ酸塩（ｐＨ９．２）に緩衝液交換し、４８時間、４５℃に加熱し、次に、室温まで冷却して、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。化合物番号６４−７５に、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたサイズ排除クロマトグラフィーを施し、いかなる残留不純物、凝集物質も除去し、完全な緩衝液交換を確実にする。化合物番号６４−７５を調製するための合成スキームが、図１３に示されている。
化合物番号４８の調製の一般手順。
【０４６１】
化合物番号１２（１．０当量）およびＮ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシニドエステル（１．１当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡを加え、この反応物を室温で２．５時間、撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解して水により洗浄し、次に、硫酸マグネシウムを使用して乾燥させ、真空下で濃縮する。この生成物をカラムクロマトグラフィー（６％のメタノール／ジクロロメタン）を使用して精製して、化合物番号４８を得る。
化合物番号４９の調製の一般手順。
【０４６２】
ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのジエチレントリアミン五酢酸中の化合物番号１９（１．０当量）を、１０％（ｖ／ｖ）ジメチルアセトアミドを含有するＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、０℃で化合物番号４８（８〜１０当量）と０．５時間、反応させて、この反応を１ｍＭシステインによりクエンチする。次に、化合物番号４９をＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたＧ−２５サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｑｕａｔａｗａｙ  ＮＪ）を使用して、精製する／ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。
化合物番号６４−７６の調製の一般手順。
【０４６３】
スクシンイミド−チオエーテルの環加水分解は、より大きな血漿中安定性を有する結合を生じ、したがって、タンジェンシャルフローろ過を使用して、化合物番号４９を５０ｍＭホウ酸塩（ｐＨ９．２）に緩衝液交換し、４８時間、４５℃に加熱し、次に、室温まで冷却して、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）に緩衝液交換する。化合物番号６４−７６に、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡にしたサイズ排除クロマトグラフィーを施し、いかなる残留不純物、凝集物質も除去し、完全な緩衝液交換を確実にする。化合物番号６４−７６を調製するための合成スキームが、図１４に示されている。
化合物番号５１の調製手順。
【０４６４】
ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（１ｍＬ）中のトラスツズマブ抗体（化合物５０；１０ｍｇ、１当量）の溶液に、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）、１．５％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のジベンゾシクロオクチン−ＰＥＧ４−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（４．０ｍｇ、１０当量）を加え、この反応を室温で２時間、進行させた。得られた誘導体化抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．２）、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０で平衡にしたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを使用するサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。精製済み化合物５１のタンパク質濃度を、較正標準品として化合物５０を使用して、２８０ｎｍにおける分光測光法によって決定した。
化合物番号６４−７７の調製手順。
【０４６５】
ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（１．０ｍＬ）中の化合物５１（０．５ｍｇ、１当量）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、５％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）中の化合物６４−５２ａ（０．０１３ｍｇ、４当量）と反応させて、この反応を室温で２時間、次に４℃でさらに３時間、進行させた。化合物６４−７７をＰＢＳ（ｐＨ７．２）により平衡にしたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  Ｆｉｎｅカラムを使用するサイズ排除クロマトグラフィーにより精製した。化合物番号６４−７７の純度は、分析用ＳＥＣ分析によって９６％と求まり、薬物対抗体比は、ＵＶ／Ｖｉｓ吸光分光計を使用して３．７と算出された。化合物番号６４−７７を調製するための合成スキームが、図１５に示されている。
化合物番号６４−５７、６４−７５、６４−７６および６４−７７の特徴付けの一般手順。
【０４６６】
化合物番号６４−５７、６４−７５、６４−７６および６４−７７の濃度を、２８０ｎｍにおけるＵＶ吸光度および／またはアミノ酸分析によって決定する。ポリペプチド主鎖の完全性は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＮ末端配列決定により決定する。純度は、抗体およびＴＬＲ７／８アゴニストの両方の極大吸収における波長の個別のモニタリングによる分析的ＳＥＣにより決定する。凝集状態は、分析用ＳＥＣ−ＵＰＬＣ−ＭＡＬＳによって決定する。ＴＬＲ７／８アゴニスト対抗体比は、ＵＶ／Ｖｉｓ吸光分光計（例えば、実施例Ｓ５およびＳ８を参照されたい）および／またはＴＯＦ−ＬＣ−ＭＳ分析（タンパク質分解を含むまたは含まない）を使用して決定する。抗体薬物コンジュゲートの特徴付けに関するこれらの分析方法は、当業者に周知である（例えば、Doronina,  S.O.  et  al.  2003,  Nature  Biotechnol  21:778-784;  Kim,  M.T.,  et  al.  2014,  Bioconjugate  Chem  25:123-1232を参照されたい）。
Ｂ．生物学的実施例
【０４６７】
化合物番号６４−５３、６４−５３ａ、６４−５４、６４−５４ａ、６４−５３ｂおよび６４−５４ｃ中の切断可能なリンカーの官能基は、適宜、グルタチオンまたは精製済みヒトカテプシンＢと共にｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートすることにより確認し、次いで、経時的な上記の化合物からの元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＲＬ７／８アゴニスト部分ＩＭＤＱの放出をアセスメントした。流入リンパ節組織におけるＴＬＲ７により誘発された遺伝子発現および抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の成熟マーカー発現の誘発として測定される局所免疫応答の評価、ならびに脾臓組織におけるＴＬＲ７誘発性遺伝子発現として測定される全身性応答の評価と共に、野生型マウスにおいて、化合物番号６４−５３および６４−５４の単回皮下（足蹠）注射後のｉｎ  ｖｉｖｏでの生物活性（薬力学応答）をアセスメントした。ＴＬＲ７誘発性遺伝子発現として測定される局所免疫応答の評価と共に、化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂの単回腫瘍内注射後の、腫瘍におけるｉｎ  ｖｉｖｏ生物活性（薬力学応答）もアセスメントした。同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおける、反復用量の腫瘍内投与後の、経時的な腫瘍成長阻害を測定することにより、化合物番号６４−５３ａ、６４−５４ａおよび６４−５４ｂの抗腫瘍効力をアセスメントした。
（実施例Ｂ１）
カテプシンＢおよびグルタチオンによる化合物番号６４−５３、６４−５２ａ、６４−５４および６４−５４ａのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの切断。
方法
【０４６８】
化合物６４−５３および６４−５３ａ（８０μＭ）、ならびにジスルフィドの代わりに、単一Ｓ原子しか含有しない切断可能ではない対照化合物（化合物番号６４−７０）を、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中、３７℃で５ｍＭグルタチオンと共にインキュベートした。表示した時間に、反応から一定分量を採取し、放出されたＩＭＤＱの量を、実施例Ｓ６に記載される通りアセスメントした。
【０４６９】
１０ｍＭ酢酸（ｐＨ５）緩衝液中の精製カテプシンＢ（５μＭ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ、カタログ番号９５３−ＣＹ）を３７℃で１５分間、インキュベートすることにより、４ｍＭ  ＤＴＴ／ＥＤＴＡで活性化した。次に、化合物番号６４−５４および６４−５４ａにより、８０μＭの溶液を作製し、この反応を３７℃で進行させた。表示した時間に、反応物から一定分量を採取し、放出されたＩＭＤＱの量を、実施例Ｓ８に記載される通りアセスメントした。
結果
【０４７０】
切断可能ではない対照化合物は、２６時間のインキュベート期間にわたり、ＩＭＤＱ放出量は低いレベルとなることを実証した一方、ジメチルジスルフィド切断可能なリンカーを含有する化合物番号６４−５３は、過剰のグルタチオンの存在下で、同じ時間枠にわたり、最大で約６０％のＩＭＤＱ放出量となることを実証した（図４）。モノメチルジスルフィドバリアントを含有する化合物番号６４−５３ａは、類似処理条件下で、最大で約８０％のＩＭＤＱ放出量となることを実証した。化合物番号６４−５４および６４−５４ａは、６時間のインキュベート時間点までに、過剰のカテプシンＢの存在下で、最大で約８０％のＩＭＤＱ放出量となることを実証した。これらのデータは、これらの構築物におけるジペプチドおよびジスルフィドをベースとする切断可能なリンカー部分は、予測される様式で役割を果たす（例えば、非修飾ＩＭＤＱの放出）ことを実証している。
（実施例Ｂ１ａ）
カテプシンＢによる化合物番号６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃのｉｎ  ｖｉｔｒｏ切断。
方法
【０４７１】
１０ｍＭ酢酸（ｐＨ５）緩衝液中の精製カテプシンＢ（３０ｎＭ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ、カタログ番号９５３−ＣＹ）を３７℃で１５分間、インキュベートすることにより、４ｍＭ  ＤＴＴ／１ｍＭ  ＥＤＴＡで活性化した。次に、化合物番号６４−５４ａ、６４−５４ｂおよび６４−５４ｃで６μＭの溶液を作製し、この反応を３７℃で進行させた。表示した時間に、一定分量を採取し、放出されたＩＭＤＱの量を、実施例Ｓ５に記載される通りアセスメントした。
結果
【０４７２】
式（Ｉ）中、ＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、切断可能なリンカーＬ２が、バリン−シトルリンジペプチドであり、コンジュゲーションリンカーＬ３が、トリアゾール−ＰＥＧ４部分であり、Ｆが、アミン修飾Ｆｉｃｏｌｌナノ粒子である、本発明の一実施形態である化合物番号６４−５４ａは、カテプシンＢ酵素と共に２３時間、インキュベートすると、ＩＭＤＱの非修飾化学形態が最高の放出レベル（６３％）となることを実証した（図４Ａ）。式（Ｉ）中、ＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、Ｌ１が結合であり、切断可能なリンカーＬ２が、バリン−シトルリンジペプチドであり、コンジュゲーションリンカーＬ３が、トリアゾール−ＰＥＧ１２部分であり、Ｆが、アミン修飾Ｆｉｃｏｌｌナノ粒子である、本発明の一実施形態である化合物番号６４−５４ｂは、カテプシンＢ酵素と共に２３時間、インキュベートすると、ＩＭＤＱの非修飾化学形態が最低の放出レベル（１４％）となることを実証した。式（Ｉ）中、ＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、自己脱離性リンカーＬ１がパラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、切断可能なリンカーＬ２が、バリン−シトルリンジペプチドであり、コンジュゲーションリンカーＬ３が、トリアゾール部分であり、Ｆが、アミン修飾Ｆｉｃｏｌｌナノ粒子である、本発明の一実施形態である化合物番号６４−５４ｃは、カテプシンＢ酵素と共に２３時間、インキュベートすると、ＩＭＤＱの非修飾化学形態が中間の放出レベル（４８％）となることを実証した。これらのデータは、式（Ｉ）のＦｉｃｏｌｌコンジュゲート化合物中のＬ１またはＬ３の化学構造を変えると、ＩＭＤＱの非修飾化学形態（ＴＬＲ７／８アゴニストＤ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出の速度の変動をもたらすことができることを実証している。
（実施例Ｂ２）
野生型マウスへの単回皮下注射後の局所免疫活性化対全身性免疫活性化。
方法
【０４７３】
血清サイトカインおよび遺伝子発現アッセイについて、ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝３／群）を、ＩＭＤＱモル当量が０．０４、０．２、１または５μｇとなるＩＭＤＱ、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４、またはビヒクル対照としてのＰＢＳ（ｐＨ７．５）を右後肢の足蹠に皮下注射した。２時間後に血液を抜き取り、血清試料を調製し、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ４０およびＴＮＦαタンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。これらのアッセイの各々に関する定量の下限値（ＬＬＯＱ）は、３１．３ｐｇ／ｍＬであり、グラフ上の点線は、血清希釈ファクターを乗算したＬＬＯＱを表している。膝窩リンパ節（注射部位の流入節）を６時間後に取り除き、組織ホモジナイズ、およびＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲシステムを使用するＴａｑＭａｎ（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）による遺伝子発現解析のためのＲＮＡの単離前に、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ  ＤＥ）に保管した。遺伝子発現データは、ＰＢＳ対照（平均±標準誤差）に対する遺伝子誘発の増加倍率として表す。
【０４７４】
フローサイトメトリーアッセイに関すると、ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に、ＩＭＤＱモル当量が１．８μｇとなるＩＭＤＱ、化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４またはＰＢＳ対照（対照の場合、ｎ＝６／群）のいずれかを両後肢の足蹠に注射した。膝窩リンパ節および脾臓を２４時間後に採取し、単一細胞懸濁液を調製し、後に染色して細胞表面マーカーに対する抗体を使用するフローサイトメトリーによって分析して、異なるＡＰＣおよびリンパ球細胞集団を特定した。ＩＭＤＱ、化合物番号６４−５３および化合物番号６４−５４の生物学的効果を、ＡＰＣ成熟マーカーＣＤ８６に及ぼす効果を測定することにより評価した。
ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子発現結果
【０４７５】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠き、したがってＴＬＲ７媒介性遺伝子誘発しかこの読み出しによって測定されない。これらのｉｎ  ｖｉｖｏデータは、化合物番号６４−５３と化合物番号６４−５４とのどちらも、膝窩リンパ節において、インターフェロン関連遺伝子を誘発するために、ＩＭＤＱと比較的類似した効力を有するが（図５）、化合物番号６４−５３に対する応答は、最低用量（０．０４μｇ）では存在しない一方、ＩＭＤＱと化合物番号６４−５４とのどちらも、その用量では遺伝子発現を誘発することを実証した。
ｉｎ  ｖｉｖｏ血清サイトカインの結果
【０４７６】
ＩＭＤＱなどの低分子ＴＬＲ７／８アゴニストは、注射部位からの全身性コンパートメントに迅速に分布することが知られており、この場合、このアゴニストは、脾臓および肝細胞におけるＴＬＲ７依存性炎症誘発性サイトカイン応答を迅速に誘発し、ある種のサイトカインレベルが増加するにつれて、血清中で検出される。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、異なる用量の化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４またはＩＭＤＱを足蹠に注射して２時間後に、血漿を採取し、血清を調製して、循環サイトカインレベルに関して試料をアッセイした。予想通りに、５μｇのＩＭＤＱを注射すると、血清中のＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−６およびＴＮＦαのレベルの向上を急速に誘発した（図６）。この応答は、用量依存的であり、ＩＬ−１２ｐ４０のみが、１μｇのＩＭＤＱの注射後にバックグラウンドより高いレベルとなることを実証した。５ｕｇの用量の化合物番号６４−５４もまた、ＩＭＤＱと比べて、より低いレベルであるが、ＩＬ−１２ｐ４０を誘発した。しかし、ＩＭＤＱとは対照的に、化合物番号６４−５４は、いずれの用量でも、バックグラウンドレベルより高く、ＩＬ−６もＴＮＦαも誘発しなかった。化合物番号６４−５３は、いずれの用量でも、バックグラウンドを超える血清サイトカインの有意なレベルを誘発しなかった。これらのデータは、ナノ粒子コンジュゲーション部分であるＦｉｃｏｌｌへのＴＬＲ７／８アゴニスト部分ＩＭＤＱのコンジュゲートにより、等モル量のＩＭＤＱと比べて、ＩＭＤＱの迅速な全身性分布およびそれに関連する全身性サイトカインレベルの増加を阻止したことを示唆している。
ｉｎ  ｖｉｖｏ抗原提示細胞熟成マーカー発現レベル
【０４７７】
化合物番号６４−５３、化合物番号６４−５４およびＩＭＤＱはすべて、皮下の足蹠への注射後の２４時間に、ＡＰＣ成熟マーカーであるＣＤ８６の発現レベルの増大によって測定される、膝窩リンパ節における細胞の活性化／成熟化を誘発し、このことは、注射部位に近位のリンパ節において、同等なＴＬＲ７媒介性生物学的作用があることを示している（図７）。しかし、脾臓（すなわち、注射部位から遠位）では、ＣＤ８６の発現レベルは、ＩＭＤＱまたは化合物番号６４−５４を注射されたマウスでは同等であったが、化合物番号６４−５３を注射されたマウスのＡＰＣに対してかなり低いものであった。これらの知見は、注射後２時間で、２つの化合物間の血清サイトカイン応答の差異と一致しており、化合物番号６４−５４は、少なくとも一部が細胞外で切断し得、こうして、ＩＭＤＱ分子のいくらかの全身性分布を可能にすることを示唆する。同様の傾向が、ＣＤ８０発現の場合に観察された（データは示さず）。
（実施例Ｂ２ａ）
同系ＣＴ２６腫瘍を有する野生型マウスにおける、単回腫瘍内注射後の腫瘍における局所免疫活性化。
方法
【０４７８】
同系ＣＴ２６結腸癌を有する野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスへの、ＩＭＤＱまたは化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂの単回腫瘍内投与後の、皮下腫瘍におけるＴＬＲ７媒介性インターフェロン関連遺伝子発現および炎症誘発性遺伝子発現の変化を、ＲＴ−ＰＣＲによってアセスメントした。ｉｎ  ｖｉｖｏ手順はすべて、承認を受けた施設内動物管理委員会（ＩＡＣＵＣ）のプロトコールに従って行った。動物は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＬＡＣ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）よって認定された設備に収容した。野生型雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇｍ）は、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）から入手し、使用する前の２〜３日間、順応させた。
【０４７９】
医薬組成物を、ＰＢＳ  １ｍＬ中に表示されている化合物２００μｇを溶解することにより作製した。この医薬組成物を０．２μｍでろ過して滅菌し、リムルス変形細胞溶解物アッセイ（ＥｎｄｏＳａｆｅ  ＭＣＳ；Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ  ＭＡ）によって内毒素不含であることが実証された。０日目に、マウスを１％イソフルランで麻酔し、２００ｕＬのＲＭＰＩ−１６４０培養培地および２．５％ウシ胎児血清中の８０，０００個のＣＴ２６腫瘍細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍が１００〜２００ｍｍ３になるまで成長させて、この時点で、動物を群に割り当てて、処置を開始した（群あたりＮ＝５）。次に、マウスに、５，０００μｇのＩＭＤＱ、ＩＭＤＱ等価質量が５，０００μｇとなる化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂ、ならびにＰＢＳビヒクル対照を含有する各医薬組成物２５ｕＬの単回腫瘍内注射を投与した。表示時間において、腫瘍を取り出し、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、ＨｉｌｄｅｎＤＥ）に保管し、次に、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）を使用するＴａｑＭａｎ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイによる遺伝子発現解析のために、それらをホモジナイズして、ＲＮＡを単離した。遺伝子発現データは、ＰＢＳビヒクル対照に対する遺伝子誘発の増加倍率として表す（平均±標準誤差、Ｎ＝５）。
ｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子発現結果
【０４８０】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠いており、したがって、このアッセイでは、ＴＬＲ７媒介性遺伝子誘発しか測定しない。化合物番号６４−５４ａと６４−５４ｂとのどちらも、ＣＴ２６腫瘍における、インターフェロン関連遺伝子（図５Ａ）および炎症誘発性遺伝子（図５Ｂ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの誘発に関するＩＭＤＱと類似の効力および活性化の動力学となることを実証した。これらのデータは、ＩＭＤＱの非修飾化学形態は、腫瘍微小環境内で、カテプシンＢ感受性の、Ｆｉｃｏｌｌ−コンジュゲートされている切断可能なリンカーを含有する化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂから放出され、続いて、腫瘍内在免疫細胞におけるＴＬＲ７媒介性遺伝子応答を活性化するという解釈と一致する。
（実施例Ｂ３）
同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスへの化合物番号６４−５３ａ、６４−５４ａおよび６４−１０ａの反復用量の腫瘍内投与後の腫瘍成長阻害。
【０４８１】
腫瘍成長阻害に及ぼす、化合物番号６４−５３ａ、化合物番号６４−５４ａ、化合物番号６４−１０ａまたはＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の効果を、同系ＣＴ２６結腸癌を有するＢａｌｂ／ｃマウスでアセスメントした。化合物番号６４−５３ａは、ジスルフィドバリアントではなく、ジスルフィド切断可能なリンカーに隣接するモノメチル基を含有する点で、化合物番号６４−５３とは異なる。化合物番号６４−５４ａは、（ＰＥＧ）１２バリアントではなく、切断可能なペプチドリンカーのＮ末端に（ＰＥＧ）４を含有する点で化合物番号６４−５４とは異なる。化合物番号６４−１０ａは、同等のＴＬＲ７  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ効力を有するＩＭＤＱのアルキル鎖バリアントである（２ｎＭ対１ｎＭのＥＣ５０）。化合物番号６４−１０ａは、化合物番号６４−１０の遊離アミン（すなわち、非コンジュゲート）形態であり、この構造は表１に示されている。ｉｎ  ｖｉｖｏ手順はすべて、承認を受けた施設内動物管理委員会（ＩＡＣＵＣ）のプロトコールに従って行った。動物は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＬＡＣ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）よって認定された設備に収容した。野生型雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）は、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）から入手し、使用前の２〜３日間、順応させた。
方法
【０４８２】
０日目に、マウスを１％イソフルランで麻酔し、２００μＬのＲＭＰＩ−１６４０培養培地および２．５％ＦＢＳ中の８０，０００個のＣＴ２６腫瘍細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍が約５０ｍｍ３になるまで成長させて、この時点で、動物を群あたり８匹となる群に割り当てて、処置を開始した。８、１６および２３日目に、マウスに、ＰＢＳ中の化合物番号６４−５３ａおよび６４−５４ａの場合、ＩＭＤＱ１μｇモル当量、または９５％ゴマ油／５％エタノール（ｖ／ｖ）中に配合した、化合物番号６４−１０ａの場合、０．６３ｕｇのＩＭＤＱモル当量を含む医薬組成物２５μＬ、またはＰＢＳビヒクル対照を腫瘍内に注射した。腫瘍サイズを７日目から２７日目まで毎週２回、キャリパーで測定し、腫瘍容積を以下の式を使用して算出した：長さと幅を乗算し、幅を乗算し、２で除算する。
結果
【０４８３】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠いており、したがって、このアッセイでは、ＴＬＲ７媒介性抗腫瘍効力しか測定しない。化合物番号６４−５３ａ、６４−５４ａおよび６４−１０ａは、ビヒクル対照と比べて、有意なＣＴ２６腫瘍成長制御となることを実証した（図８、パネルＡ）。さらに、２７日目に、最後の用量の３日後に、３つの化合物は、腫瘍成長阻害のレベルが同等となることを実証した（図８、パネルＢ）。化合物番号６４−１０ａの用量は、他の２つの化合物よりも、わずかに少ないことに留意されたい。これらの腫瘍の有効性データは、式（Ｉ）の２つの例となる化合物の腫瘍内投与後に、腫瘍微小環境内での切断可能なリンカーの切断により、元の（すなわち、非コンジュゲート）ＴＬＲ７／８アゴニスト部分であるＩＭＤＱの放出をもたらすという解釈と一致する。化合物番号６４−５３ａおよび６４−５４ａによって実証された腫瘍成長制御のレベルは、ＩＭＤＱと等価なｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＬＲ７アゴニスト効力を有する、ＩＭＤＱのアルキル鎖修飾バリアントである化合物番号６４−１０ａに関して観察されたものと同等であった（データは示さず）。
（実施例Ｂ４）
同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスへのＩＭＤＱならびに化合物番号６４−５３ａ、６４−５４ａおよび６４−７０の反復用量の腫瘍内投与後の腫瘍成長阻害。
【０４８４】
腫瘍成長阻害に及ぼす、ＩＭＤＱ、化合物番号６４−５３ａ、化合物番号６４−５４ａもしくは化合物番号６４−７０、またはＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の効果を、片腹に腫瘍を有する同系ＣＴ２６結腸癌を有するＢａｌｂ／ｃマウスでアセスメントした。化合物番号６４−５３ａは、式１中のジスルフィド切断可能なリンカーＬ２に隣接するモノメチル基を含有し、化合物番号６４−５４ａは、式１中にＬ２として、バリン−シトルリン切断可能なリンカーを含有し、どちらの例でも、これらの化合物は、式（Ｉ）中のＤとしてＩＭＤＱ、式（Ｉ）中のＬ１としてパラ−アミノベンジルカルバメート部分を含有し、式（Ｉ）中の異なるコンジュゲーションリンカーＬ３を介して、Ｆｉｃｏｌｌにコンジュゲートされている。化合物番号６４−７０は切断可能ではないバリアントである。ｉｎ  ｖｉｖｏ手順はすべて、承認を受けた施設内動物管理委員会（ＩＡＣＵＣ）のプロトコールに従って行った。動物は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＬＡＣ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）よって認定された設備に収容した。野生型雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）は、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）から入手し、使用前の２〜３日間、順応させた。
方法
【０４８５】
実験の０日目に、マウスを１％イソフルランで麻酔し、２００μＬのＲＭＰＩ−１６４０培養培地および２．５％ＦＢＳ中の８０，０００個のＣＴ２６腫瘍細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍が約５０ｍｍ３になるまで成長させて、この時点で、動物を群あたり８匹となる群に割り当てて、処置を開始した。９、１６、２３および２８日目に、マウスに、ＰＢＳ中の５００ｎｇのＩＭＤＱ、ＰＢＳ中のＩＭＤＱ等価質量が５００ｎｇとなる化合物番号６４−５４ａ、６４−５３ａもしくは６４−７０を含む医薬組成物２５μＬ、またはＰＢＳビヒクル対照を腫瘍内に注射した。腫瘍サイズを７日目から３０日目まで毎週２回、キャリパーで測定し、腫瘍容積を以下の式を使用して算出した：長さと幅を乗算し、幅を乗算し、２で除算する。
結果
【０４８６】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠いており、したがって、このアッセイでは、ＴＬＲ７媒介性抗腫瘍効力しか測定しない。化合物番号６４−７０は、ビヒクル対照と比べて、ＣＴ２６腫瘍成長阻害がないことを実証した（図９）。このことは、この化合物からのＩＭＤＱの非修飾化学形態のインサイチュでの予期する放出がないことと一致する。化合物番号６４−５４ａおよび６４−５３ａは、等モル濃度量のＩＭＤＱの非修飾化学形態と同等の腫瘍成長阻害があることを実証した。これらのデータは、腫瘍微小環境内での切断可能なリンカー（ジスルフィドまたはバリン−シトルリン）の切断により、ＩＭＤＱの非修飾化学形態の放出がもたらされ、これにより、腫瘍内在免疫細胞におけるＴＬＲ７媒介性遺伝子応答が活性化され、抗腫瘍効力に至るという解釈と一致する（例えば、Singh  et  al.  2014,  J.  Immunol.193:4722-4731を参照されたい）。
（実施例Ｂ５）
同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスへの様々な用量の化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂの反復用量の腫瘍内投与後の腫瘍成長阻害。
【０４８７】
腫瘍成長阻害に及ぼす、様々な用量レベルの化合物番号６４−５４ａもしくは６４−５４ｂ、またはＰＢＳビヒクル対照の毎週の腫瘍内投与の効果を、片方の腹部に腫瘍を有する同系ＣＴ２６結腸癌を有するＢａｌｂ／ｃマウスでアセスメントした。化合物番号６４−５４ａは、式（Ｉ）において、ＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、自己脱離性リンカーＬ１が、パラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、切断可能なリンカーＬ２が、バリン−シトルリンジペプチドであり、コンジュゲーションリンカーＬ３が、トリアゾール−ＰＥＧ４部分であり、Ｆが、Ｆｉｃｏｌｌナノ粒子である本発明の実施形態である。化合物番号６４−５４ｂは、ＰＥＧ１２部分が存在すること、およびＬ１が結合であることを除いて同一である。実施例Ｂ１ａにおいて示されている通り、これらの化学修飾は、カテプシンＢ酵素とのインキュベート後のＩＭＤＱのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの放出速度に差異をもたらす。ｉｎ  ｖｉｖｏ手順はすべて、承認を受けた施設内動物管理委員会（ＩＡＣＵＣ）のプロトコールに従って行った。動物は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＬＡＣ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）よって認定された設備に収容した。野生型雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）は、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）から入手し、使用前の２〜３日間、順応させた。
方法
【０４８８】
実験０日目に、マウスを１％イソフルランで麻酔し、２００μＬのＲＭＰＩ−１６４０培養培地および２．５％ＦＢＳ中の８０，０００個のＣＴ２６腫瘍細胞を右脇腹に皮下注射した。腫瘍が約３５ｍｍ３になるまで成長させて、この時点で、動物を群あたり８匹となる群に割り当てて、処置を開始した。９、１６、２３および２８日目に、マウスに、ＰＢＳ１０μＬ中のＩＭＤＱ等価質量が３０、１２５または５００ｎｇとなる化合物番号６４−５４ａもしくは６４−５４ｂを含む医薬組成物、またはＰＢＳビヒクル対照１０μＬを腫瘍内に注射した。腫瘍サイズを７日目から３０日目まで毎週２回、キャリパーで測定し、腫瘍容積を以下の式を使用して算出した：長さと幅を乗算し、幅を乗算し、２で除算する。
結果
【０４８９】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠いており、したがって、このアッセイでは、ＴＬＲ７媒介性抗腫瘍効力しか測定しない。化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂは、用量依存的な、同等の腫瘍成長阻害となることを実証した（図１０）。これらのデータは、化合物番号６４−５４ａおよび６４−５４ｂの抗腫瘍効力は、腫瘍微小環境内での、バリン−シトルリン切断可能なリンカーのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの切断速度、およびその後のＩＭＤＱの非修飾化学形態の放出に無関係であるという解釈と一致する。
（実施例Ｂ６）
同系ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおける、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、ＩＭＤＱおよび化合物番号６４−５４ａの反復用量の腫瘍内投与後の腫瘍成長阻害。
【０４９０】
注射した腫瘍および遠位腫瘍の成長阻害に及ぼす、腹腔内に送達された抗マウスＰＤ−１（ＣＤ２７９）抗体（免疫チェックポイント阻害剤；Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、Ｌｅｂａｎｏｎ  ＮＨ）と組み合わせた、毎週のＩＭＤＱまたは化合物番号６４−５４ａの腫瘍内投与の効果を、両対側腹部に２つの腫瘍を有する同系ＣＴ２６結腸癌を有するＢａｌｂ／ｃマウスでアセスメントした。化合物番号６４−５４ａは、式（Ｉ）において、ＴＬＲ７／８アゴニストＤが、ＩＭＤＱであり、自己脱離性リンカーＬ１が、パラ−アミノベンジルカルバメート部分であり、切断可能なリンカーＬ２が、バリン−シトルリンジペプチドであり、コンジュゲーションリンカーＬ３が、トリアゾール−ＰＥＧ４部分であり、Ｆが、Ｆｉｃｏｌｌナノ粒子である本発明の実施形態である。ｉｎ  ｖｉｖｏ手順はすべて、承認を受けた施設内動物管理委員会（ＩＡＣＵＣ）のプロトコールに従って行った。動物は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＬＡＣ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）よって認定された設備に収容した。野生型雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（１５〜２０ｇ）は、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）から入手し、使用前の２〜３日間、順応させた。
方法
【０４９１】
実験０日目に、マウスを１％イソフルランで麻酔し、２００ｕＬのＲＭＰＩ−１６４０培養培地および２．５％ウシ胎児血清中の８０，０００個のＣＴ２６腫瘍細胞を右脇腹および左脇腹の両方に皮下注射した。両腫瘍（左および右）を、右脇腹および左脇腹の腫瘍サイズが、約３５ｍｍ３に到達する９日目まで成長させて、この時点で、マウスにＰＢＳ中で配合した抗ＰＤ−１抗体２５０μｇ、またはＰＢＳビヒクル対照を腹腔内に注射した。抗ＰＤ−１処置を、実験日１２目、１６日目、２０日目、２３日目および２８日目に繰り返した。実験１５日目に、右（注射したもの）および左（遠位）脇腹の腫瘍がおよそ１００ｍｍ３に到達すると、マウスを群あたり１０匹のマウスを含む処置群に無作為化した。１５、１８、２２および２７日目に、抗ＰＤ−１およびＰＢＳ処置群に、ＰＢＳ中の５００ｎｇのＩＭＤＱまたはＩＭＤＱ等価質量の化合物番号６４−５４ａを含む医薬組成物１０ｕＬを右脇腹の腫瘍のみにさらに腫瘍内注射した。腫瘍サイズを１５日目から３０日目まで毎週２回、キャリパーで測定し、腫瘍容積を以下の式を使用して算出した：長さと幅を乗算し、幅を乗算し、２で除算する。
結果
【０４９２】
野生型マウスは、当然ながら、機能性ＴＬＲ８を欠いており、したがって、このアッセイでは、ＴＬＲ７媒介性抗腫瘍効力しか測定しない。注射腫瘍では、抗ＰＤ−１処置と組み合わせて投与されたＩＭＤＱおよび化合物番号６４−５４ａは、個々に投与された薬剤のどちらか一方よりも腫瘍成長の制御に同等の改善があることを実証した（図１１の左手のパネル）。同様に、非注射腫瘍では、抗ＰＤ−１処置と組み合わせて投与されたＩＭＤＱおよび化合物番号６４−５４ａは、個々に投与された薬剤のどちらか一方よりも腫瘍成長の制御に同等の改善があることを実証した（図１１の右手のパネル）。これらのデータは、化合物番号６４−５４ａは、注射された腫瘍微小環境内でＩＭＤＱの非修飾化学形態を放出したこと、および免疫チェックポイント阻害の存在下で、活性なＴＬＲ７アゴニストは、腫瘍微小環境において、自然および適応免疫応答をモジュレートし、有効な全身性抗腫瘍効力をもたらしたという解釈と一致する（例えば、Wang  et  al.  2016,  Proc.  Nat.  Acad.  Sci.  USA  113:E7240-E7249を参照されたい）。
【０４９３】
本明細書において明記されている、特許、特許出願および科学論文を含めた刊行物はすべて、あたかも特許、特許出願または科学論文を含めた個々の刊行物のそれぞれが、具体的かつ個別に、参照により組み込まれて示されているかのごとく同じ程度に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０４９４】
前述の発明は、理解を明確にすることを目的とするため、例示および実施例によっていくらか詳細に記載されているが、上記の教示に照らし合わせて、ある種の変更および修正がなされることが当業者に明白であろう。したがって、以下の合成実施例および生物学的実施例は、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によって正確に記述される。
【図１】
2021503005.tif 000164
【図２】
2021503005.tif 000165
【図３】
2021503005.tif 000166
【図４】
2021503005.tif 000167
【図４Ａ】
2021503005.tif 000168
【図５】
2021503005.tif 000169
【図５Ａ】
2021503005.tif 000170
【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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