(57)【要約】  本願は、ｐＨ感受性ポリマーソームに関する。該ポリマーソームは、エンドソームの弱酸性ｐＨで再吸収可能な材料に分解可能であり、また、細胞内に取り込まれた有効荷重のリポソームの早期分解を回避し得る。従って、該ポリマーソームを、疾患の治療または予防方法に使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）撥タンパク質ポリマー；および
（ｂ）４〜７のｐＫａを有するペンダント基を含むｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー
を含むポリマーソーム。
【請求項２】
撥タンパク質ポリマーが、アクリレートポリマー、ポリペプチド、ポリエステルまたはポリカーボネートである請求項１に記載のポリマーソーム。
【請求項３】
撥タンパク質ポリマーが、式（Ｉ）：
【化１】
2021531235.tif 000008
（式中、Ｒｐは、水素またはメチルであり、およびＡｐは、式（Ｉ’）：
【化２】
2021531235.tif 000009
（式中、Ｘｐは、Ｃ１−６アルキレン基である）
の基である。）
の単位を含む請求項２に記載のポリマーソーム。
【請求項４】
撥タンパク質ポリマーが、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）またはポリ（エチレンオキシド）である請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項５】
ペンダント基が、５．５〜７、好ましくは６．２〜７のｐＫａを有する請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項６】
ペンダント基が、イミダゾール部分を含む請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項７】
イミダゾール部分が、イミダゾール、メチルイミダゾールまたはジメチルイミダゾールである請求項６に記載のポリマーソーム。
【請求項８】
ｐＨ感受性の生分解性フマレートポリマーが、ポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］である請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項９】
ポリマーソーム中にカプセル化された薬物をさらに含む請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【請求項１０】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の複数のポリマーソームおよび一つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１１】
医薬として使用するための請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリマーソーム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、代謝可能なｐＨ感受性ポリマーソームに関する。ポリマーソームは、ＦＤＡおよびＭＨＲＡによって一般に安全（ＧＲＡＳ）であると認識されているものに分類される代謝可能な材料から製造される。両親媒性ブロックコポリマーの疎水性部分として、イミダゾール環を有する誘導体が使用されてきた。一つの例示的なクラスのポリマーである、ポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）およびその誘導体はｐＨ感受性であり、中性のｐＨでは疎水性であり、弱酸性ｐＨでは親水性であり、その加水分解生成物は、肝臓によって代謝されるか、またはクレブス回路の成分として再吸収される。従って、ポリマーソームを、糖尿病、癌、感染症、および自己免疫疾患の症状を、治療または軽減させる方法に使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
患者のコンプライアンスを促進するルートを使用して、薬理学的用量の薬物を標的部位に高い有効性で送達する必要性は、有効且つ安全な疾患管理のために、非常に重要である。
【０００３】
ポリマーナノキャリヤは、薬物送達の鍵となる問題（充分な用量の活性積荷の詰め込み、インビボでの周囲環境からの保護、および全身毒性を引き起こさない標的部位での着実な放出）に対処するために使用されている。
【０００４】
薬物の細胞内送達は、主としていくつかの疾患におけるそれらの重要な効果および機能のために、ますます研究の関心を集めている。細胞内標的は効率的で特定の治療に不可欠であり、そのため特有の障壁を克服しなければならない。癌、アルツハイマー病、糖尿病、感染症および自己免疫疾患などの疾患の症状を効率よく治療または軽減させる場合に、オルガネラ標的の重要性が高まる。具体的には、細胞内環境は、細胞成長、増殖、分化、および死の原因であり、それゆえ有望な薬物標的である化合物を含有する。従って、標的部位は、細胞質、核、ミトコンドリア、小胞体（ＥＲ）、およびゴルジ複合体全体に分布し得る。しかし、ｐＨが低く、酵素が豊富なエンドソームおよびリソソームは、薬物の分解または非特異的な分布を引き起こし得る。従って、ナノ材料のサイズ、電荷、および表面組成の調節は、内在化経路に影響することができ、ナノ材料が、リソソームを回避して、その標的のオルガネラと相互作用することを可能にする。確かに、そのような障壁を克服するナノ材料の可能性は、ポリ［プロピレン（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）およびその誘導体などのポリマーの開発につながり、そうして、それらのｐＨ感受性を使用して、薬物のバイオアベイラビリティおよび細胞内送達を改善することが可能になる。
【０００５】
ＰＰＩＴＳおよびその誘導体を使用して形成されたナノベシクルは、生理学的障壁を超えて、安全且つ持続的にそれらの標的部位に薬物を到達させることができるため、重要である。実際、それらは、薬物をカプセル化するための安定した生体適合性の環境を提供し、それらの細胞内放出および効率的な吸収を促進する。それらはまた、特定の方法で薬物を作用部位に運び、病態領域の薬物濃度を増加させることによって、治療効果の持続期間を改善し、副作用を最小化させる。
【０００６】
ｐＨ感受性のスマートポリマーは、局所的なｐＨに応じてプロトンを受け取るか、または失う弱酸性または弱塩基性の官能基を含有する。これは、エンドソームレベルでポリマーの分解を刺激し、細胞内放出を提供し、有効荷重のリソソーム分解を回避する。
【０００７】
そのようなポリマーの開発は、しばしば、アルキン−アジド付加環化、ディールス−アルダー反応、チオール−エン付加、およびマイケル付加などの他のカップリング戦略を含む「クリック」ケミストリーを採用し、アクセスできる高分子構造の多様性を向上させる。アルキン−アジド付加環化は、事前に形成された高分子の修飾およびその合成のために最も広く研究されているクリック反応の一つである。ディールス−アルダー付加環化は、一連の高分子を構築するために使用されており、その感熱可逆性は、薬物送達のための分解性ナノキャリヤを開発するためのプラットフォームを提供する。
【０００８】
ポリマーのイミダゾール基は、リソソーム分解を回避するためのｐＨの望ましい範囲内のｐＫａを示す。しかし、そのｐＫａ値は、その位置およびイミダゾール環の周りの異なる置換基の性質を変更することによって、さらに調整することもできる。このｐＨ感受性は、ポリ（プロピルフマレート）（ＰＰＦ）に存在する二重結合を、それが生じたとき、またはポリ（プロピルマレエート）（ＰＰＭ）の異性化後に利用することによって、および元のＰＰＭ上にチオール−エン付加でｔｅｒｔ−ブチルシステイナートを結合させることによって導入される。これは、ポリマー構造内の二重結合が関与する、可能な結合化学（ディールス−アルダー、アルドール反応など）の一例にすぎない。システインＮ−末端を、１Ｈ−イミダゾール−１−酢酸（ｐＫａ６．８）、４−イミダゾール酢酸、（ｐＫａ６．６）、ジメチルイミダゾール酢酸（ｐＫａ６．４）およびメチルイミダゾール酢酸（ｐＫａ６．２）などのイミダゾールまたはメチルイミダゾール含有酸に結合させることができる。この結合反応は、チオール−エン付加の前または後に、ＮＨＳ化学または当業者に周知の他の種類の結合反応によって行うことができる。同様に、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル部分で）アミノ基が保護され、且つ遊離カルボキシル基を有す得る同じシステイン誘導体も、同じイミダゾール部分（但し、ヒスタミン誘導体に由来）に結合させることができる。全ての場合で、全てのこれらの構造は、ヒスチジン代謝および／またはヒスタミン異化作用の代謝産物の部分であり、それらは、最終ポリマーのｐＫを６．２〜６．８に調整することができる。さらに官能数は、コハク酸（重縮合の場合）または無水コハク酸（開環共重合またはＲＯＣＯＰの場合）などの飽和モノマーを重合混合物に添加することによって調整でき、そうして飽和および不飽和ポリエステルの配列が作製される。
【０００９】
化学的性質の調整は、細胞内送達が高められ、早期リソソーム分解を回避し、特定の細胞内標的に到達する能力を有する機能化ポリマーソームの作製を可能にする。
【発明の概要】
【００１０】
発明の概要
本発明は、（ａ）撥タンパク質ポリマー（protein repellent polymer）；および（ｂ）４〜７のｐＫａを有するペンダント基を含むｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマーを含むポリマーソームを提供する。
【００１１】
ポリマーソーム（両親媒性ブロックコポリマーから形成されたベシクル）は、リポソームのポリマー同等物である。それらは、高分子の性質のために、脂質の対応物よりもはるかに強固且つ安定であることが知られている。さらに、それらの高分子の性質はまた、膜厚の非常に有効な調整を可能にする。ｐＨ感受性のポリマーソームは、以前に開発されており、或る種類の分子を細胞の細胞質ゾルに送達できることが示されている。
【００１２】
成分（ａ）および（ｂ）を含むポリマーソームは、生理学的ｐＨで強固なポリマーソームに自己組織化することができ、次いで弱酸性の細胞内ｐＨ（エンドソーム）で再吸収可能な材料に分解することができるコポリマーを提供することを見出した。
【００１３】
ポリマーソーム内の成分（ａ）および（ｂ）は相乗的に機能することを見出した。成分（ａ）は撥タンパク質性（protein repellent）であり、疾患細胞によって発現された受容体を選択的に標的にすることができる。成分（ｂ）は、インサイチュー加水分解および／または（例えばリパーゼまたはリパーゼによる）酵素分解によって、例えばフマレート、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールなどの分子を放出する生分解性ポリマーである。調整された固有のｐＨ感受性を組み込む本発明のポリマーソームの能力は、有効荷重のリソソーム分解を回避しながらも、細胞内の薬物送達を有意に高める。
【００１４】
本発明は、さらに、複数の本発明のポリマーソーム、および一つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、実施例欄でさらに説明されるように、ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳポリマーソーム（スケールバー５０ｎｍ）の透過型電子顕微鏡画像を示す。
【図２】図２は、実施例欄でさらに説明されるように、ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳのＮＭＲ特性評価を示す（８．７および７．４のピークはイミダゾール環のプロトンに対応する）。
【図３】図３は、実施例欄でさらに説明されるように、ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳのｐＨ滴定を示す。該ポリマーを、酸性ｐＨで、０．５ＮのＨＣｌで可溶化する。該溶液を、０．５ＮのＮａＯＨでゆっくりとｐＨ１２まで添加する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
ポリマーソーム
本発明のポリマーソームは、（ａ）撥タンパク質ポリマー、および（ｂ）４〜７のｐＫａを有するペンダント基を含むｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマーを含む。
【００１７】
ポリマーソームは、両親媒性ブロックコポリマーから形成された合成ベシクルである。それらは、過去１５年間、コロイド安定性、調整可能な膜特性および他の分子をカプセル化または統合する能力のために、用途の広い担体として、かなり研究の注目を集めてきた（一つの代表的な総説について、J Control Release 2012 161(2) 473-83 参照、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００１８】
本発明で使用されるポリマーソームは、典型的には、自己組織化構造物である。ポリマーソームは、典型的には、両親媒性ブロックコポリマーを含む。両親媒性ブロックコポリマーは、親水性ブロックおよび疎水性ブロックを含む。本発明のポリマーソームにおいて、典型的には、親水性ブロックは、典型的にはホスホリルコリンのペンダント基を含む撥タンパク質ポリマー（ａ）、および４〜７のｐＫａを有するペンダント基を含むｐＨ感受性の生分解性性スクシネートポリマー、例えばポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）ポリマーまたはその誘導体である疎水性ブロック（ｂ）を含む。
【００１９】
そのようなポリマーソームは、生物学的リン脂質を模倣することができる。これらのポリマーの分子量は、天然起源のリン脂質系の界面活性剤よりもはるかに高いため、それらは、より絡み合った膜に集合することができ（J. Am. Chem. Soc. 2005, 127, 8757、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、そうして改善された機械的特性およびコロイド安定性を備えた最終構造を提供する。さらに、コポリマー合成の柔軟な性質は、分子量、およびその結果の膜の厚さの広範囲にわたって、異なる組成および機能の適用を可能にする。従って、これらのブロックコポリマーを送達ビヒクルとして使用することは、有意な利点を提供する。
【００２０】
ポリマーソームは、しばしば実質的に球状である。ポリマーソームは、典型的には、二層膜を含む。二層は、一般的に、両親媒性分子の二つの層から形成され、両親媒性分子が整列して、コアおよびベシクルの外側に面する親水性の頭部基、並びに膜の内部を形成する親水性の尾部基を有する、封入されたコアを形成する。
【００２１】
ポリマーソームの典型的な（最大の）直径は、５０〜５０００ｎｍの範囲である。より典型には直径は、５０〜１０００ｎｍの範囲である。この範囲の直径を有するポリマーソームは、通常、「ナノポリマーソーム」または「ナノベシクル」と呼ばれる。ナノポリマーソームは、好ましくは実質的に球状である。典型的にはナノポリマーソームは、３００ｎｍ未満、好ましくは２５０ｎｍ未満、最も好ましくは２００ｎｍまたは１５０ｎｍ未満の数平均直径を有する。二層の厚さは、一般的に２〜５０ｎｍ、より典型的には５〜２０ｎｍである。これらの寸法は、例えば、透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）および／またはＸ線小角散乱（ＳＡＸＳ）を使用することによって、ごく普通に測定することができる（例えば、J. Am. Chem. Soc. 127 8757 2005 参照、その内容は、参照によりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【００２２】
水溶液中では、通常、異なる種類の構造物の間（例えば、ポリマーソームおよびミセルの間）に平衡が存在する。少なくとも８０重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％または９５重量％、最も好ましくは溶液中の全ての構造物が、ポリマーソームとして存在することが好ましい。これは、ここで概説した方法を使用して達成できる。
【００２３】
ポリマーソームは、典型的には、例えば、対象者への投与後にインビボで、フマレートおよびプロピルグリコール、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールを放出する。典型的には、ポリマーソームは、解離し、フマレート、プロピルグリコール、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体、およびイミダゾールは、ポリマー（ｂ）のインサイチュー加水分解および／または（例えばリパーゼまたはエステラーゼによる）酵素分解の結果として放出される。出発原料のフマレート主鎖が官能化（ペンダント基の結合）中に完全に飽和しない場合、解離時に、ポリマーソームは、フマレートを放出する。
【００２４】
好ましい態様では、ポリマー（ｂ）は、ポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネートまたはその誘導体であるか、またはこれを含む。より好ましくは、ポリマー（ｂ）は、ポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］であるか、またはこれを含む。
【００２５】
ポリ［プロピレン（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネートポリマーまたはその誘導体、例えばポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］は、その加水分解によってフマレート、プロピルグリコール、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールを放出し得るポリマーの例である。出発原料のフマレート主鎖が官能化（ペンダント基の結合）中に完全に飽和しない場合、解離およびその後の分解時に、ポリマーソームはフマレートを放出する。
【００２６】
ポリマーソームがポリマーソーム中にカプセル化された薬物を含む場合、ポリマーソームはまた、対象者への投与後にインビボで薬物を放出することができる。再び、典型的には、ポリマーソームが解離し、それによって薬物が放出される。
【００２７】
既に説明したように、ポリマーソームの成分（ａ）は、撥タンパク質ポリマーであり、注入されると、ナノ粒子の循環半減期の延長を可能にする。成分（ｂ）はｐＨ感受性であり、典型的には、例えば、フマレートおよびプロピルグリコール、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールを、インサイチュー加水分解および／または（例えばリパーゼまたはエステラーゼによる）酵素的分解によって放出する。それゆえ、カプセル化された薬物があれば、それは、ポリマーソームが細胞内に取り込まれた後に放出される。
【００２８】
ポリマーソームの解離は、様々なメカニズムによって促進され得るが、しばしば、疎水性ブロックコポリマーの加水分解によって促進される。典型的には、ポリマー主鎖のエステル結合は加水分解され、例えば、フマレート、プロピルグリコール（肝臓によって迅速に（半減期２時間）代謝されて、ラクテート、アセテート、およびピルベートを形成する代謝産物）、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールを、インサイチュー加水分解および／または（例えば、リパーゼまたはエステラーゼによる）酵素分解によって放出する。このプロセスは、エステラーゼとして知られている酵素によって、および酸性ｐＨによって触媒される。両方の条件は、エンドサイトーシス時にポリマーソームが移動するエンド−リソソーム区画の典型である。
【００２９】
典型的には、ポリマー（ｂ）は、典型的には６．４〜７の範囲のｐＫａを有するイミダゾール基を（典型的にはペンダント基として）含む。エンドサイトーシスのプロセスは、ポリマーソームが経験する局所ｐＨのｐＨ７．４付近からｐＨ５〜６付近までの低下を含む。このｐＨの低下は、典型的には、ポリマーソームの崩壊を引き起こすのに充分である。
【００３０】
ｐＫａは、ペンダント基の半分がイオン化されるｐＨを意味する。ｐＫａは、ｐＨ滴定、それに続く電位差滴定、ＵＶ分光法、動的光散乱（ＤＬＳ）を含む様々な方法で測定できる。分析されるコポリマーおよび試験媒体へのその溶解度に応じて、ｐＫａを測定するための適切な方法が、選択されるべきである。
【００３１】
ＤＬＳは、ｐＫａを測定するための特に好ましい方法である。J. Am. Chem. Soc 2005 127 17982-17983（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に示されているように、水中のＰＭＰＣ２５−ｂ−ＰＤＰＡ２０コポリマーなどのコポリマーからのＤＬＳ信号は、ｐＨによって変化する。或るｐＨでは、コポリマーが、分子的な脱会合から会合への転移を経験するにつれて、信号が急速に増加する。ｐＫａは、この急激な増加の中点のｐＨとみなされる。これらの実験は、Biomacromolecules 2006, 7, 817-828にさらに記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。この参考文献では、実験はブロックコポリマーのミセルで行われるが、相転移がポリマーソーム形成を伴う場合にも、この技術を適用できる。
【００３２】
ポリマーの基のｐＫａは、ポリマー系に基づいて決定される（非ポリマー系の同様の部分のｐＫａと同じであるとは推測されない）。
【００３３】
典型的には、ポリマーソームのポリマー（ｂ）のペンダント基は、カチオン化可能な部分を含む。カチオン化可能な部分は、例えば、１級、２級または３級アミンまたはイミダゾール基であり、３〜６．９の範囲の値より低いｐＨでプロトン化され得る。代わりに、その基はホスフィンであり得る。これらのカチオン化可能な部分は、モノマー単位内に本質的に存在するか、または代わりに適切な結合戦略（例えば、フマレート主鎖の二重結合へのチオール−エン付加）を利用することによって結合後重合することができる。好ましくは、カチオン化可能な部分はイミダゾールである。
【００３４】
好ましくは、ペンダント基のｐＫａは、４．０〜６．９、より好ましくは５．５〜６．９の範囲である。ポリマーソームは、そのようなｐＨ範囲で、それに応じて解離することができる。
【００３５】
ＰＰＩＴＳポリマーまたはその誘導体のイミダゾール基は、リソソーム分解を回避するためのｐＨの望ましい範囲内のｐＫａを示す。但し、ｐＫａ値は、イミダゾール環の周りの異なる置換基の位置および性質を変更することによって、さらに調整することもできる。このｐＨ感受性は、ポリ（プロピルフマレート）（ＰＰＦ）に存在する二重結合を、それが生じたとき、またはポリ（プロピルマレエート）（ＰＰＭ）の異性化後に利用することによって、および元のＰＰＭにチオール−エン付加でｔｅｒｔ−ブチルシステイナートを結合することによって導入される。これは、ポリマー構造内の二重結合が関与する可能な結合化学（例えばディールス−アルダー、アルドール反応）および結合モチーフ（例えばアミノ酸、ＤＮＡ、オリゴペプチド、総タンパク、薬物など）の一例にすぎない。ポリマー構造内の二重結合は、完全にまたは部分的に官能化され得る。ポリマー構造内の二重結合が部分的に官能化される場合、主鎖に飽和（例えば、スクシネート）および不飽和（例えば、フマレート）の両方のモノマー単位を含むポリマーが形成される。システインＮ末端を、１Ｈ−イミダゾール−１−酢酸（ｐＫａ ６．８）、４−イミダゾール酢酸、（ｐＫａ ６．６）、ジメチルイミダゾール酢酸（ｐＫａ ６．４）およびメチルイミダゾール酢酸（ｐＫａ ６．２）などのイミダゾールまたはメチルイミダゾール含有酸に結合させることができる。この結合反応は、チオール−エン付加の前または後に、ＮＨＳ化学または当業者に周知の他のタイプの結合反応によって行うことができる。同様に、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル部分を有する）アミノ基上で保護され、且つ遊離カルボキシル基を有する同じシステイン誘導体も、ヒスタミン誘導体に由来する同じイミダゾール部分に結合させることができる。全ての場合において、これらの構造は全て、ヒスチジン代謝および／またはヒスタミン異化作用の代謝産物の部分であり、それらは、最終ポリマーのｐＫａを６．２〜６．８に調整し得る。さらに、官能数は、コハク酸（重縮合の場合）または無水コハク酸（開環共重合またはＲＯＣＯＰの場合）などの飽和モノマーを重合混合物に添加することによって調整でき、そうして飽和および不飽和ポリエステルの配列を作製する。
【００３６】
好ましくは、ポリマー（ｂ）（ポリマーソームの疎水性ブロック）は、少なくとも５、より好ましくは少なくとも１０の重合度を有する。好ましくは、該重合度は、２５０以下、さらにより好ましくは２００以下である。撥タンパク質ポリマー（ａ）（親水性ブロック）対ポリマー（ｂ）（疎水性ブロック）の重合度の比は、１：２．５〜１：８の範囲であることが好ましい。これらの限定は全て、ミセル形成ではなく、ポリマーソームを促進する。
【００３７】
撥タンパク質ポリマー（ａ）は、ポリエステル、ポリアミド、ポリ無水物、ポリウレタン、ポリエーテル（ポリアルキレングリコール、特にＰＥＧを含む）、ポリイミン、ポリペプチド、ポリ尿素、ポリアセタールおよび多糖類などの縮合ポリマーに基づき得るが、好ましくはエチレン性不飽和モノマーの制御ラジカル重合に基づく。撥タンパク質ポリマーは、好ましくはホスホリルコリンをペンダント基として含み、その場合、ペンダント基は、モノマー中に存在し、重合プロセスにおいて未変化のままであり得る。代わりに、モノマーのペンダント基を誘導体化して、重合後にそれをホスホリルコリン基に転換することも可能である。
【００３８】
一つの現在の好ましい態様では、撥タンパク質ポリマー（ａ）はエチレン性不飽和モノマーから形成される。非限定の適切なエチレン性不飽和モノマーは、一般式（ＩＶ）を有する
ＹＢＸ      （ＩＶ）
（式中、
Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２−Ａ２−、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２−ＣＯ−Ｏ−、
【００３９】
【化１】
2021531235.tif 000002
【００４０】
から選択されるエチレン性不飽和基であり、
Ａは、−Ｏ−またはＮＲ１であり；
Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＬＡ２および（ＣＨ２）ＬＳＯ３−（式中、Ｌは、１〜１２である）から選択され；
Ａ２は、結合、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ、−ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−および−ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され；
Ｒは、水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキルまたはＢＸであり；
Ｒ２は、水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｂは、結合、或いは一つまたはそれ以上のフッ素置換基を有していてもよい直鎖または分枝鎖の、アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレンまたはアルキレン（オリゴオキサアルキレン）基であり；および
Ｘは、ホスホリルコリン基、即ち、一般式：
【００４１】
【化２】
2021531235.tif 000003
【００４２】
を有する基である。）。
一般式（ＩＶ）のモノマーでは、エチレン性不飽和基Ｙが、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−であることが好ましい。そのようなアクリル部分は、好ましくは、Ｒがメチルであるメタクリル系であるか、またはＲが水素であるアクリル系である。該化合物は、ＡがＮＲ１である（メタ）アクリルアミド化合物であってもよく、その場合、Ｒ１は、好ましくは水素であるか、または、あまり好ましくはないがメチルであり、最も好ましくは、該化合物は、ＡがＯであるエステルである。
【００４３】
一般式（ＩＶ）のモノマーにおいて、特にＹが好ましい（アルク）アクリル基（(alk)acrylic group）である場合、Ｂは、最も好ましくはアルカンジイル基である。そのような基の水素原子のいくつかは、フッ素原子で置換されていてもよく、好ましくはＢは、未置換アルカンジイル基であり、最も好ましくは２〜６個の炭素原子を有する直鎖基である。
【００４４】
一般式（ＩＶ）の特に好ましいモノマーは、２−メタクリロイルオキシエチル−ホスホリルコリン（ＭＰＣ）である。それぞれ上記一般式を有するモノマーの混合物を、他のモノマー（例えば、他の親水性モノマー）との混合物と同様に使用することができる。
【００４５】
好ましくは、撥タンパク質ポリマー（ａ）は、アクリレートポリマーである。アクリレートポリマーは、一つまたはそれ以上のアクリレートモノマーから形成されるポリマーである。アクリレートモノマーは、置換または未置換であり得るアクリレート基（即ち、ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯＯ−）を含むモノマーであり、それ自体、式（ＩＶ）によってカバーされるメタクリレートモノマーおよび他のそのようなモノマーを含む。好ましくは撥タンパク質ポリマー（ａ）は、ペンダントホスホリルコリン基を含むポリマーである。特に好ましくは撥タンパク質ポリマー（ａ）は、ペンダントホスホリルコリン基を含むアクリレートポリマーである。例えば撥タンパク質ポリマー（ａ）は、式（Ｉ）の単位を含み得る
【００４６】
【化３】
2021531235.tif 000004
【００４７】
（式中、Ｒｐは、水素またはメチルであり、およびＡｐは、式（Ｉ’）：
【００４８】
【化４】
2021531235.tif 000005
【００４９】
（式中、Ｘｐは、Ｃ１−６アルキレン基である。）
の基である。）。いくつかの場合、Ｘｐは、一つまたはそれ以上のアミノ酸、例えばペプチド、ジペプチドまたはオリゴペプチドであり得る。
【００５０】
好ましくはＸｐは、Ｃ２−６アルキレン基である。好ましくはＲｐは、メチルである。特に好ましい態様ではホスホリルコリンポリマーは、ポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンである。
【００５１】
代わりに、撥タンパク質ポリマー（ａ）は、ポリペプチド、例えば Yakovlev and Deming, J. Am. Chem. Soc., 2015, 137 (12), pp 4078-4081（その全体が参照により組み込まれる）に記載されたものであり得る。例えば、撥タンパク質ポリマー（ａ）は、ポリ（ｌ−ホスホリルコリンセリン）またはポリ（ｌ−ホスホリルコリンホモセリン）を含み得る。
【００５２】
代わりに、撥タンパク質ポリマー（ａ）を、エポキシド、無水物、ラクチドおよび／またはＣＯ２によって製造されたポリマーと結合させて、ポリエステルおよびポリカーボネートを製造し得る。例えば Shyeni and Williams, Chem. Commun., 2015, 51, 6459（その全体が参照により組み込まれる）に記載されているもの。
【００５３】
典型的には、ｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー（ｂ）のペンダント基は、５．５〜７、好ましくは６．２〜７のｐＫａを有する。
【００５４】
典型的には、ｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー（ｂ）は、ポリマー主鎖にスクシネートモノマー単位を含む。ｐＨ感受性の生分解性ポリマー（ｂ）は、ポリマー主鎖中にスクシネートおよびフマレートのモノマー単位の混合物を含み得る。当業者が容易に理解するように、そのような生分解性ポリマー（ｂ）は、例えばポリマー主鎖にフマレートモノマー単位を含むポリマーから出発する場合、および官能化して、これらのモノマー単位にペンダント基を付加する場合（フフマレートモノマー単位からペンダント基を有するスクシネートモノマー単位への転換をもたらす個々の場合）、部分的であり、完全でなくてもよい（即ち、試薬ポリマー中のフマレートモノマー単位の全てが、ペンダント基を有するスクシネートモノマー単位に転換されるわけではない）。疑いを避けるために、ここで定義される「４〜７のｐＫａを有するペンダント基を含むｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー」は、（ｉ）ペンダント基を含むスクシネートモノマー単位からなるポリマー；および（ｉｉ）ペンダント基を含むスクシネートモノマー単位およびフマレートモノマー単位の両方を含むポリマーを包含する。
【００５５】
好ましくはｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー（ｂ）は、さらにプロピレンモノマーをそのポリマー主鎖中に含む。
【００５６】
典型的には、ｐＨ感受性の生分解性スクシネートポリマー（ｂ）のペンダント基は、イミダゾール部分を含む。
【００５７】
イミダゾール部分は、イミダゾール、または置換されたイミダゾール、例えばアルキル置換されたイミダゾールであり得る。イミダゾールは、一置換または多置換であり得る。好ましくはアルキル置換基は、メチルまたはエチルである。
典型的には、イミダゾール部分は、イミダゾール、メチルイミダゾールまたは  ジメチルイミダゾールである。
【００５８】
好ましいｐＨ感受性の生分解性フマレートポリマー（ｂ）は、ポリ［プロピレン（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネートまたはその誘導体を含むものを包含する。最も好ましくはポリマー（ｂ）は、ポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］であるか、またはこれを含む。
【００５９】
ポリマー（ｂ）の分解（例えば加水分解）中に、フマレートおよびプロピルグリコール（肝臓によって迅速に（半減期２時間）代謝されて、ラクテート、アセテート、およびピルベートを形成する代謝産物）、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体、およびイミダゾールなどの分子が、ポリマーソームのインサイチュー加水分解および／または（例えば、リパーゼまたはエステラーゼによる）酵素分解によって放出され得る。
【００６０】
好ましいポリマー（ｂ）は、スクシネートおよびプロピレンモノマーを含む。このポリマーの利点は、その加水分解の二次生成物がプロピレングリコールであり、これは一般に安全な材料として認識され、既にいくつかの臨床用途で承認されている。プロピレングリコールは、肝臓で代謝されて、ラクテート、アセテート、およびピルベートを形成する。代謝されない薬物は、主にグルクロニド抱合体として尿中に排泄され、約１２〜４５パーセントは、変化せずに尿中に排泄される。
【００６１】
より一般的には、ポリマー（ａ）および（ｂ）のいずれかまたは両方は、例えば官能性、疎水性の制御、ｐＨ感受性の制御、ｐＫａまたは場合によってはｐＫｂ、温度感受性の制御を提供するために、または一般的な希釈剤として、コモノマーを含み得る。例えば、官能性を提供するコモノマーは、重合および／またはポリマーソーム形成に続くペンダント基の結合を提供するため、標的部位を提供するため、または生物学的に活性な分子とポリマーとの間の結合を提供するために有用であり得る。代わりに、官能基は、ポリマーソーム形成に続くポリマーの架橋を可能にして、ポリマーソーム構造に向上した安定性を与え得る。適切なコモノマーの例は、一般式（ＶＩ）の化合物である。
【００６２】
【化５】
2021531235.tif 000006
【００６３】
（式中、
Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１−４アルキルおよびＣＯＯＲ２２基（式中、Ｒ２２は、水素またはＣ１−４アルキルである）から選択され；
Ｒ１９は、水素、ハロゲンおよびＣ１−４アルキルから選択され；
Ｒ１８およびＲ２０が両方ともＣＯＯＲ２２ではないことを条件として、Ｒ２０は、水素、ハロゲン、Ｃ１−４アルキルおよびＣＯＯＲ２２基から選択され；並びに
Ｒ２１は、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−２０アルコキシカルボニル、モノ−またはジ−（Ｃ１−１０アルキル）アミノカルボニル、Ｃ６−２０アリール（アルカリルを含む）、Ｃ７−２０アラルキル、Ｃ６−２０アリールオキシカルボニル、Ｃ１−２０−アラルキルオキシカルボニル、Ｃ６−２０アリールアミノカルボニル、Ｃ７−２０アラルキル−アミノ、ヒドロキシルまたはＣ２−１０アシルオキシ基であり、これらのいずれも、ハロゲン原子、アルコキシ、オリゴ−アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アミン（アルキル基が置換されていてもよいモノおよびジ−アルキルアミノおよびｔｈアルキルアンモニウム（thalkylammonium）を含む）、カルボキシル、スルホニル、ホスホリル、ホスフィノ、（モノ−およびジ−アルキルホスフィンおよびトリアルキルホスホニウムを含む）、両性イオン性、ヒドロキシル基、ビニルオキシカルボニルおよび他のビニルまたはアリル置換基、並びにトリアルコキシシリル基などの活性シリルまたはシリルオキシ基から選択される一つまたはそれ以上の置換基を有していてもよく；または
Ｒ２１およびＲ２０またはＲ２１およびＲ１９は一緒になって、−ＣＯＮＲ２３ＣＯ（式中、Ｒ２３は、Ｃ１−２０アルキル基である）を形成し得る。）
【００６４】
Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１の少なくとも二つが、ハロゲン、またはより好ましくは水素原子であることが好ましい。好ましくはＲ１８およびＲ１９が、両方とも水素原子である。一般式Ｘの化合物が、スチレンまたはアクリル化合物であることが特に好ましい。スチレン化合物において、Ｒ２１は、アリール基、特に置換基がアミノアルキル基、カルボキシレートまたはスルホネート基である置換アリール基を表す。コモノマーがアクリル型化合物である場合、Ｒ２１は、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、またはアリールオキシカルボニル基である。最も好ましくは、そのような化合物において、Ｒ２１は、ヒドロキシ置換基を有していてもよいＣ１−２０アルコキシカルボニル基である。アクリル化合物は、一般的にメタクリル系であり、その場合、Ｒ２０はメチルである。
【００６５】
好ましくはコモノマーは、Ｃ１−２４アルキル（アルク）−アクリレートまたは−アクリルアミド、モノ−またはジ−ヒドロキシ−Ｃ１−６−アルキル（アルク）−アクリレート、またはアクリルアミド、オリゴ（Ｃ２−３アルコキシ）Ｃ２−１８−アルキル（アルク）−アクリレート、または−アクリルアミド、スチレン、酢酸ビニルまたはＮ−ビニルラクタムなどの非イオン性コモノマーである。
【００６６】
最適なナノベシクル形成のために、ブロックコポリマーは、制御された分子量を有するべきである。各ブロックは、狭い範囲内で制御された分子量を有すること、即ち、狭い多分散度を有することが好ましい。分子量の多分散度は、例えば、好ましくは２．０未満、より好ましくは１．５未満、例えば１．１〜１．４の範囲であるべきである。
【００６７】
本発明の一つの好ましい態様では、ポリマーソームは、ポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンおよびポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）またはその誘導体を含む。この好ましい態様では、ポリマーソームは、典型的には、一つのブロックがポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンを含み、および別のブロックがポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）またはその誘導体を含むブロックコポリマーを含む。例示的な態様では、ポリマーソームは、ポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンブロックおよびポリプロピレン（（（（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）またはその誘導体を含むブロックコポリマーを含む。
【００６８】
本発明の一つの特に好ましい態様では、ポリマーソームは、ポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンおよびポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］を含む。この特に好ましい態様では、ポリマーソームは、典型的には、一つのブロックがポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンを含み、および別のブロックがポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］を含むブロックコポリマーを含む。例示的な態様では、ポリマーソームは、ポリ（２−メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリンブロックおよびポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］ブロックを含むブロックコポリマーを含む。
【００６９】
ブロックコポリマーは、単純なＡ−Ｂブロックコポリマーでもよく、またはＡ−Ｂ−Ａ若しくはＢ−Ａ−Ｂブロック直鎖状トリブロックコポリマー、または（Ａ）２Ｂ若しくはＡ（Ｂ）２星型コポリマーでもよい（式中、Ａはブロックを含有するホスホリルコリンポリマーであり、およびＢはブロックを含有するフマレートポリマーである）。それはまた、Ａ−Ｂ−Ｃ、Ａ−Ｃ−ＢまたはＢ−Ａ−Ｃ直鎖状トリブロックコポリマーまたはＡＢＣ星型コポリマーでもよい（式中、Ｃは、異なる種類のブロックである）。Ｃブロックは、例えば、新規組成物中でのコポリマーの反応を可能にするための官能基（例えば架橋性基またはイオン性基）を含んでいてもよい。特にＡ−Ｃ−Ｂ型コポリマーの架橋反応は、ポリマーソームに有用な安定性を与え得る。架橋は共有結合でもよく、または時折、静電性質でもよい。架橋は、二つのアミノ基を連結するための２官能性アルキル化剤の使用などの、官能基を連結するための別の試薬の添加を含み得る。ブロックコポリマーは、代わりに、親水性または疎水性コアを有する星型分子でもよく、または親水性主鎖（ブロック）および疎水性ペンダントブロック（若しくはその逆）を有する、くし型ポリマーでもよい。そのようなポリマーは、例えば、モノ不飽和マクロマーおよびモノマーのランダム共重合によって形成され得る。
【００７０】
モノマーを重合するための適切なプロセスのさらなる詳細は、ＷＯ０３／０７４０９０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で見出すことができる。
【００７１】
モノマーの重合に使用される方法は、リビングラジカル重合プロセス、官能性ＮＣＡ（Ｎ−カルボキシ無水物）重合、重縮合、並びに開環重合（ＲＯＰ）および共重合（ＲＯＣＯＰ）である。全ての場合で、効率的な後重合修飾は、当業者に周知の重合プロセスとの適合性が低い場合に、適切なモチーフを有し、適切に保護された、適切なモノマーを利用して実施することができる。リビングラジカル重合は、ゲル浸透クロマトグラフィーによって判断されるように、（分子量の）多分散度が１．５未満であるモノマーのポリマーを提供することが見出された。その、または各ブロックに対して１．２〜１．４の範囲の多分散度が好ましい。ポリマーソームは、ｐＨ変化システム、エレクトロポレーションまたはフィルム水和を使用して、装填することができる。ｐＨ変化システムプロセスでは、ポリマーは、イオン化された形態で水性液体に分散され、ポリマーソームを形成することなく、比較的高濃度で可溶化する。続いて、イオン化された基の一部または全部が脱プロトン化されて、それらが非イオン形態となるように、ｐＨが変化する。２番目のｐＨでは、ブロックの疎水性が増加し、ポリマーソームが自発的に形成される。
【００７２】
コア中にカプセル化された薬物を有するポリマーソームを形成する方法は、以下の工程を含み得る：（ｉ）両親媒性コポリマーの有機媒体への分散；（ｉｉ）リン酸緩衝液を工程（ｉ）で形成された組成物にシリンジポンプで添加した；（ｉｉｉ）薬物の、親水性の場合は水相への、または疎水性の場合は有機相への添加；および（ｉｖ）添加の最後に、過剰のＰＢＳを調製物に添加し、透析チューブを使用する滅菌リン酸緩衝液に対する透析によって、残留有機溶媒を除去した。
【００７３】
この方法は、好ましくは、両親媒性コポリマーを反応容器内の有機溶媒に分散させ、次いでリン酸緩衝液をシリンジポンプで添加してポリマーソームを形成する予備工程を含む。
【００７４】
工程（ｉｉ）は、溶媒を変更し、ｐＨをポリ［プロピレン（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート（ＰＰＩＴＳ）基のｐＫａを超える値に増加させる。
【００７５】
コア中にカプセル化された薬物を有するポリマーソームを形成する別の方法は、以下の工程を含み得る：（ｉ）両親媒性コポリマー、および必要に応じて疎水性および／または両親媒性薬物を反応容器内の有機溶媒に分散させる；（ｉｉ）溶媒を留去して、反応容器の内側にフィルムを形成する；および（ｉｉｉ）フィルムを、可溶化された親水性薬物を含んでいてもよい水溶液で再水和する。
【００７６】
より詳細には、ポリマーソームは、典型的には、ガラス容器中の２：１のクロロホルム：メタノール混合物などの有機溶媒にコポリマーを溶解することによって調製される。疎水性または両親媒性の薬物をカプセル化する場合は、それを、コポリマーと共に加えることができる。溶媒を真空下で留去して、容器の壁にコポリマーフィルムを堆積させることができる。次いでフィルムを、例えばリン酸緩衝生理食塩水を使用して、水溶液で再水和させる。親水性薬物をカプセル化する場合は、それを、水溶液に含めることができる。得られた懸濁液のｐＨを約２のｐＨに低下させて、フィルムを可溶化し、次いで約６のｐＨまでゆっくりと上昇させる。中性ｐＨでのポリマーの水和は、薬物のカプセル化を可能にする。中性ｐＨでのポリマーの水和により、薬物のカプセル化が可能になる。次いで、分散液を、超音波処理し、例えばベンチトップ押出機を使用して押し出してもよい。ＵＶ分光法およびＨＰＬＣクロマトグラフィーを、該分野で周知の技術を使用して、カプセル化効率を計算するために使用し得る。カプセル化された薬物を有するポリマーソームを形成するための代替方法は、水中での薬物およびポリマーベシクルの単純なエレクトロポレーションを含み得る。例えば、薬物を、固体形態でポリマーベシクルの水性分散液、およびポリマーソーム膜上に細孔を形成させるために適用された電場と接触させてもよい。次いで可溶化された薬物分子は、細孔を通ってポリマーソームベシクルに入ることができる。ポリマーソーム内に活性分子が連続的に閉じ込められた膜の自己治癒プロセスが、これに続く。
【００７７】
代わりに、有機溶媒に溶解した薬物を、ポリマーベシクルの水性分散液に乳化させて、それによって溶媒および薬物をベシクルのコアに組み込み、続いて系から溶媒を留去し得る。
【００７８】
本発明で使用されるポリマーソームは、二つまたはそれ以上の異なるブロックコポリマーから形成され得る。この態様では、ポリマーソームを形成する方法において、二つまたはそれ以上のブロックコポリマーの混合物が使用される。
【００７９】
例えば、０．０１％〜１０％（ｗ／ｗ）の薬物が、上述の方法でコポリマーと混合される。
【００８０】
カプセル化された薬物
本発明のポリマーソームは、ポリマーソーム中にカプセル化された薬物を含み得る。
【００８１】
本発明のポリマーソームは、インサイチュー加水分解および／または（例えば、リパーゼまたはエステラーゼによる）酵素分解によってインビボで再吸収可能な材料、例えば、フマレート、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールに分解され得ることは理解されるであろう。ポリマーソームは、薬物のカプセル化も提供できる。疑いを避けるために、単一のポリマーソーム中に複数の異なる薬物をカプセル化すること、またはそれぞれが特定のカプセル化された薬物を含む複数のポリマーソームを提供することも可能である。
【００８２】
カプセル化され得る特定の薬物の非限定的な例には、カルノシン、アジア酸、フラボノイド類（例えばキサントフモール、ナリンゲニン、ガランギン、フィセチンおよびバイカリン）、カンナビノイド類（例えばＷＩＮ５５，２１２−２、ＪＷＨ−１３３およびＴＡＫ−９３７）、シチコリン、ミノサイクリン、セレブロリシン、ジンセノソイド−Ｒｄ（ginsenosoid-Rd）、顆粒球−コロニー刺激因子、Ｔａｔ−ＮＲ２Ｂ９ｃ、マグネシウム、アルブミン、パラセタモール、アスピリン、コリンおよびサリチル酸マグネシウム、セレコキシブ、ジクロフェナック（例えばジクロフェナックカリウム、ジクロフェナックナトリウム）、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン（ナプロキセンナトリウムを含む）、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サルサラート、サリチル酸ナトリウム、スリンダク、トルメチン、バルデコキシブ、コルチコステロイド、アレムツズマブ、インターフェロンベータ−１ｂ、フィンゴリモド、グラチラマー酢酸塩、ナタリズマブ、プレグリディ（plegridy）、ペグインターフェロンベータ１ａ、テリフルノミド、メソトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、アダリムマブ、エタナーセプト、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、アザチオプリン、シクロスポリン、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、ヒドロキシクロロキン、メソトレキセート、アザチオプリン、ミコフェノレート（mycophenolate）、アシトレチン、ハイドレア、イソトレチノイン、ミコフェノール酸モフェチル、スルファサラジン、６−チオグアニン、カルシポトリオール、カルシトリオール、タカルシトール、タクロリムス、ピメクロリムス、ジトラノール、エンダムスチン（endamustine）、ベンダムスチン、カルムスチン、クロラムブシル、サイクロフォスファミド、ダカルバジン、イフォスファミド、メルファラン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、カペシタビン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、メソトレキセート、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、エトポキシド、ドセタクセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、エリブリン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アファチニブ、アフリベルセプト、ＢＣＧ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トラスツズマブエムタンシン、テムシロリムス、トラスツズマブ、ベムラフェニブ、クロドロネート、イバンドロン酸、パミドロネート、ゾレンドロン酸（Zolendronic acid）、アナストロゾール、アビラテロン、ベキサロテン、ビカルタミド、ブセレリン、シプロテロン、デガレリクス、エキセメスタン、フルタミド、フォリン酸、フルベストラント、���セレリン、ランレオチド、レナリドミド、レトロゾール、リュープロレリン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メスナ、オクトレオチド、スチルベストロール、タモキシフェンおよびサリドマイドが包含される。疑いを避けるために、カプセル化された薬物はまた、ポリマーソームのインビボ分解によって生成されるフマレートの効果を補足するために、フマレートまたはフマレートエステルでもよい。
【００８３】
医薬組成物
本発明のポリマーソームは、該分野で知られている日常的な技術を使用して医薬組成物として配合することができる。例えば、医薬組成物は、ポリマーソームまたは薬物含有リポソームの配合のために、既に利用されている。
【００８４】
医薬組成物は、本発明の複数のポリマーソームを含む。それはまた、一つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含む。一つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤または希釈剤は、あらゆる適切な賦形剤または希釈剤であり得る。医薬組成物は、典型的には水性である、即ち、それは水（特に滅菌水）を含む。
【００８５】
水性医薬組成物の典型的なｐＨは、７．０〜７．６、好ましくは７．２〜７．４である。必要なｐＨを達成するために、薬学的に許容される緩衝剤を使用してもよい。医薬組成物は、無菌の等張食塩水溶液の形態でもよい。
【００８６】
典型的には医薬組成物は、注射可能な組成物であり、例えばそれは静脈送達に適しており、例えばそれは注入に適している。
【実施例】
【００８７】
実施例
合成ベシクルを疎水ブロックとしてのポリ［プロピレン２−（（２−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセトアミド）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−オキソプロピル）チオ）スクシネート］（ＰＰＩＴＳ誘導体；以下、単に「ＰＰＩＴＳ」と称する）および親水性ブロックとしてのポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）（ＰＭＰＣ）により作製された両親媒性コポリマーを使用して作製した。
。
【００８８】
ジブロックＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳコポリマーを製造するための新しい合成経路が開発され、ベシクルへのその集合が研究された。ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳコポリマーは、インサイチュー加水分解および／または（例えば、リパーゼまたはエステラーゼによる）酵素分解によって、フマレート（ポリフマレート出発原料の不完全な官能化の結果として）、およびプロピルグリコール（肝臓によって迅速に（半減期２時間）代謝されて、ラクテート、アセテート、およびピルベートを形成する代謝産物）、ｔｅｒｔ−ブチル基を有するか、または有さないチオスクシネート誘導体およびイミダゾールに分解することが示された。従って、ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳは、再吸収可能な材料に分解するポリマーソームを形成することが証明された。
【００８９】
ポリマーソームの製造
ＰＭＰＣ−ＰＰＦの合成
開環共重合処置（ＰＰＭの合成）の例
制御された乾燥雰囲気中で、０．０２０ｍｍｏｌのサレンＣｒＣｌ（または他の適切な触媒；例えばジフェニル亜鉛）および４．０ｍｍｏｌの無水マレイン酸を、攪拌バーを備えたバイアルに入れた。適切な溶媒（トルエン、０．５０ｍＬ）を加え、続いて４．０ｍｍｏｌのプロピレンオキシド（エポキシド）を添加した。密封したバイアルを、所望温度（４５℃）に予熱されたアルミニウムヒートブロックに置いた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトル分析を使用して、反応が粘性になった後、モノマー変換を測定した。次いで粘稠な反応混合物を最小量のジクロロメタンに溶解させ、過剰のヘキサン中に析出させた。このプロセスを、全ての残留モノマーが除去されるまで繰り返した（ＰＰＭの場合はジエチルエーテルを非溶媒として使用した）。ポリマーを洗浄した後、材料をＴＨＦに再溶解させ、イオン交換カラムに通して、金属触媒を除去した。このさらなる精製工程の後、材料を回収し、真空乾燥した。
【００９０】
（ＰＰＭからＰＰＦへの）異性化処置例
ワンポット処置では、重合の最後に０．１当量のジエチルアミンをポリマー混合物に直接添加し、ポリマーをＣＤＣｌ３に溶解させた。２段階処置のために、単離したポリマーサンプルをＣＤＣｌ３に溶解させ、０．１当量のジエチルアミンを添加した。両方の処置で、溶液を攪拌し、異性化の進行を１Ｈ−ＮＭＲ分光法でチェックした。反応が完了したら、全ての揮発性物質を真空下で除去した。続いて、ポリマーをＣＨ２Ｃｌ２に再溶解させ、ヘキサンに析出させた。次いで、ポリマーを真空乾燥し、異性化完了を１Ｈ  ＮＭＲ分光法によって確認した。
【００９１】
重縮合（ＰＰＦの直接合成）例
ポリ（プロピレン）フマレートを、触媒としてＺｎＣｌ２を、ラジカル抑制剤としてヒドロキノンを使用して、フマル酸ジエチルおよびプロピレングリコールのエステル交換重縮合によって合成した。典型的な２段階重合では、１４．９８ｍＬのフマル酸ジエチルおよび２０ｍＬのプロピレングリコールを二口丸底フラスコに添加し、試薬を窒素フロー下で３０分間撹拌した。次いで、２００ｍｇのＺｎＣｌ２および１２４ｍｇのヒドロキノンを反応混合物に添加し、試薬を窒素フロー下で１５０℃に一晩加熱した。次いで、窒素フローを停止し、１７０℃で６時間撹拌しながら真空を適用した。生成物を、ＣＨＣｌ３、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ、次いでＭｅＯＨ（各溶媒で少なくとも３回の変更）に対する徹底的な透析（カットオフ３．５ＫＤａ）によって精製した。
【００９２】
ＰＰＦ  ＡＴＲＰマクロ開始剤の合成例
無水ＴＨＦ中のＰＰＦ（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）の溶液を氷水浴でわずかに冷却した。次いで、最小量の無水ＴＨＦ中の２−ブロモイソブチリルブロミド（４当量）を反応混合物に滴下した。溶液を室温に温め、４８時間撹拌した。混合物を水に注ぎ、水に対して１０００ｋＤａ  ＭＷＣＯ膜で充分に透析し、次いで凍結乾燥した。
【００９３】
【化６】
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【００９４】
ＡＴＲＰ（原子移動ラジカル重合）によるＰＭＰＣ−ＰＰＦの合成例
ＰＰＦマクロ開始剤（１当量）およびＭＰＣモノマー（５当量）を丸底フラスコに秤量し、トルエン／イソプロパノール  ２：１（ｖ／ｖ）に溶解させた。次いで、２当量のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ペンタメチルジエチレントリアミンを添加し、撹拌下で１時間、反応混合物をＮ２でパージした。次いで、２当量のＣｕ（Ｉ）ＢｒをＮ２フロー下で秤量および添加し、反応を窒素雰囲気下で密封し、３５℃で４８時間撹拌し続けた。４８時間後、反応をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ２：１（ｖ／ｖ）で希釈し、シリカでろ過して、酸化触媒を除去した。生成物を、ロータリーエバポレーションで濃縮し、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ２：１  ｖ／ｖ混合物（２回の変更）、ＭｅＯＨ（３回の変更）、次いでＭｉｌｌｉ−Ｑ水（少なくとも４回の変更）に対する徹底的な透析（カットオフ３．５ＫＤａ）によってさらに精製した。生成物を、凍結乾燥によって回収した。次いで、生成物を凍結乾燥で単離し、１Ｈ−ＮＭＲで特性評価した。
【００９５】
ＡＴＲＰによるＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳの合成例
ＰＰＦ−ＰＭＰＣ（１当量）を２ｍＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ  ２：１（ｖ／ｖ）に溶解させ、２０ｍＬのＭｅＯＨ中に溶解させたｔｅｒｔ−ブチル（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）アセチル）−システイナート（３当量）を添加した。反応混合物を、撹拌下で６時間、λ＝３６５ｎｍのＵＶランプで照射した。次いで、生成物を、ＭｅＯＨ（３回の変更）、次いで酸性のＭｉｌｌｉ−Ｑ水（ｐＨ＝３、少なくとも２回の変更）、および最終的に中性のＭｉｌｌｉ−Ｑ水（少なくとも４回の変更）に対する徹底的な透析（カットオフ３．５ＫＤａ）によって精製した。生成物を、凍結乾燥によって回収した。次いで、生成物を凍結乾燥で単離し、１Ｈ−ＮＭＲおよびＧＰＣで特性評価した。
【００９６】
ポリマーソーム調製
ポリマーソームは、該分野で知られている技術である溶媒スイッチによって調製される。調製を、生物学的安全キャビネット（KS15-Thermo Fisher Scientific）内の無菌条件で行った。ポリマーストック溶液（０．５ｍＬ、ＤＭＦ／ＭｅＯＨ  ２：１  ｖ／ｖ中１０〜８０ｍｇ／ｍＬ）を、操作前に滅菌０．２２ｕｍ滅菌フィルターでろ過した。次いで、ＰＢＳ  ０．１Ｍ  ｐＨ７．４（１．１５ｍＬ）をシリンジポンプで、激しい攪拌下で、１〜１００ｕＬ／分の範囲の流速で添加し、ポリマーソームを形成した。添加の最後に、過剰のＰＢＳ（１．８５ｍＬ）を調製物に添加し、２５℃で透析チューブ（ＭＷＣＯ＝１０００）を使用して、４８時間（４〜６回の変更／日）にわたり、滅菌０．１Ｍ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４に対する透析によって、残留有機溶媒を除去した。その後、得られたポリマーソーム調製物を、０℃で１５分間の超音波処理および１０００ｇで２０分間の遠心分離によって、さらに精製した。この溶液の濃度は、重量測定で評価し、一方、ポリマーソームのサイズおよび形状を、ＤＬＳおよびＴＥＭ分析で特性評価した。
【００９７】
ポリマーソームを、基質としてセファロース４Ｂを使用するゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって凝集物およびミセルから精製した。動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、Ｈｅ−Ｎｅ  ４ｍＷ  ６３３ｎｍレーザーを備えたＭａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ  レーザー光散乱体によってポリマーソームのサイズ分布を評価した。ポリマーソームは、１ｍｌのディスポーザブルキュベット内で、ろ過されたＰＢＳで希釈され、実験は、１７３°の設定角度でのｎ＝３回の平均であった。ろ過されたＰＢＳ中のポリマーソームも、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を使用して、形態について評価した。グリッドをポリマーソーム溶液に６０秒間沈めることによって、グロー放電カーボンコーティンググリッドにサンプルを乗せ、続いて０．７５％（ｗ／ｗ）リンタングステン酸（ＰＴＡ）を使用して５秒間染色した。次いでグリッドを、ＰＢＳで洗浄し、真空下で乾燥させ、１００ｋＶの電圧テンションを使用してＪＥＯＬ顕微鏡で評価した。
【００９８】
ＰＭＰＣ−ＰＰＩＴＳ分解アッセイ
ポリマーソームを、定性的に、且つ酵素濃度の点でエンドソーム条件への曝露を模倣する適切な酵素カクテル（例えば、ブタおよび／またはヒト由来）でインキュベートすることによって、分解研究を行った。分解の特性評価は、フィールドフロー分画（ＦＦＦ）、およびベシクルからミセル構造への移行を追跡できる動的光散乱（ＤＬＳ）によって行われる。さらに、ＧＰＣおよびＨＰＬＣ分析も実行され、酵素消化から生じる分子量の変化が評価される。ＨＰＬＣ−ＭＳも、分解後に得られる代謝産物の同一性を確認するために利用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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