(57)【要約】  腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）またはＢ細胞を含む改変された免疫細胞、免疫細胞を含む組成物、および免疫細胞を対象に投与することを含む新生物性またはがん性の症状を処置する方法を提供する。
2021502114.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍抗原に特異的に結合する改変された免疫細胞であって、前記改変された免疫細胞がキメラ刺激分子を含み、前記キメラ刺激分子が
そのリガンドへの結合時に改変されていない免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、前記ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、
前記キメラ刺激分子のリガンドへの結合は、前記改変された免疫細胞中で前記免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらす、改変された免疫細胞。
【請求項２】
前記改変された免疫細胞が、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であり、ここで、任意には、前記ＴＩＬは、ＰＤ−１、ＣＤ１３７、およびＴＩＭ−３のうちの少なくとも一つを発現している請求項１記載の改変された免疫細胞。
【請求項３】
ネオアンチゲンに特異的に結合する改変されたＴ細胞であって、前記改変されたＴ細胞は、スイッチ分子を含み、ここで、前記スイッチ分子は、
そのリガンドへの結合時に改変されていないＴ細胞中で免疫細胞活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、ここで、前記ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、
前記スイッチ分子のリガンドへの結合が、前記改変された免疫細胞中で前記免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらす、改変された免疫細胞。
【請求項４】
前記Ｔ細胞が、前記ネオアンチゲンに対して特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含む請求項３記載の改変されたＴ細胞。
【請求項５】
前記ＴＣＲ複合体が、内在性ＴＣＲ複合体である請求項４記載の改変されたＴ細胞。
【請求項６】
前記ＴＣＲ複合体が、外因性ＴＣＲ複合体である請求項４記載の改変されたＴ細胞。
【請求項７】
前記ネオアンチゲンが、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含み、ここで、前記遺伝子が、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される請求項１〜６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項８】
前記ネオアンチゲンが、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択される請求項１〜６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項９】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質が、シグナリングレセプターである請求項１〜８のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１０】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質が、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターである請求項１〜９のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１１】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質が、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴからなる群より選択される請求項１〜１０のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１２】
前記共刺激分子が、インターロイキン−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１３】
前記免疫細胞活性シグナルが、活性化因子によって媒介される請求項１〜１２のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１４】
前記活性化因子が、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子である請求項１３記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１５】
前記活性化因子が、可溶性サイトカインであり、および、前記可溶性サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＩＦＮ、またはそれらの機能性フラグメントもしくはバリアントである請求項１４記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１６】
前記免疫細胞活性化シグナルが、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞のクローン性増殖拡大；改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞によるサイトカイン放出；改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の細胞毒性；改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の増殖、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の分化、脱分化、分化転換；改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の移動および／または輸送；改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の疲弊および／または再活性化；および改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含む請求項１〜１５のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１７】
前記リガンドへの前記スイッチ分子の結合時に、前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、増強されたネオアンチゲン結合を示す請求項１〜１６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１８】
前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が、前記スイッチ分子が前記リガンドに結合し、そして前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が標的細胞上に存在する前記ネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、標的細胞に対する増大された細胞毒性を示す請求項１〜１７のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項１９】
前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が、前記スイッチ分子が前記リガンドに結合し、そして前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が標的細胞上に存在する前記ネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、増大されたサイトカイン分泌を示す請求項１〜１８のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項２０】
前記サイトカインが、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である請求項１９記載の改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞。
【請求項２１】
ネオアンチゲンに対する特異的な結合を示すキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）およびＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含む改変された免疫細胞であって、前記ＣＡＲが、
（ａ）Ｂ細胞表面タンパク質を結合させることのできる抗原相互作用ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、および
（ｃ）細胞内シグナルドメイン
を含む改変された免疫細胞。
【請求項２２】
前記免疫細胞が、腫瘍湿潤リンパ球（ＴＩＬ）である請求項２１記載の改変された免疫細胞。
【請求項２３】
前記ＴＩＬが、ＰＤ−１、ＣＤ１３７およびＴＩＭ−３のうちの少なくとも一つを発現している請求項２２記載の改変された免疫細胞。
【請求項２４】
ネオアンチゲンに対して特異的結合を示すＴＣＲ複合体が、内在性ＴＣＲ複合体である請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項２５】
ネオアンチゲンに対して特異的結合を示すＴＣＲ複合体が、外因性ＴＣＲ複合体である請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項２６】
前記ネオアンチゲンが、変異遺伝子によってエンコードされているタンパク質のペプチドフラグメントを含み、ここで該遺伝子が、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、DＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、Ｔｇｆｂｒ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項２７】
前記ネオアンチゲンが、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択される請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項２８】
前記Ｂ細胞表面タンパク質が、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択される請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項２９】
前記細胞内シグナリングドメインが、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３０】
前記細胞内シグナリングドメインは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３１】
前記細胞内シグナリングドメインが、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含む請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３２】
前記細胞内シグナリングドメインが、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインを含む請求項２１〜３１のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３３】
前記ＣＤ３  ζの細胞内ドメインが、ＩＴＡＭを含む請求項３２記載の改変された免疫細胞。
【請求項３４】
前記ＣＡＲが、さらに、共刺激ドメインを含む請求項２１〜２９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３５】
前記共刺激ドメインが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、またはトールリガンドレセプターのシグナリングを含む請求項３４記載の改変された免疫細胞。
【請求項３６】
前記共刺激ドメインが、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ/ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含む請求項３４記載の改変された免疫細胞。
【請求項３７】
前記免疫細胞の前記Ｂ細胞表面タンパク質への接触によって、前記免疫細胞が、改変されていない免疫細胞と比較して、増強された増殖を示す請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項３８】
前記増強された増殖が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確認される請求項３７記載の改変された免疫細胞。
【請求項３９】
前記増強された増殖が、ｉｎ  ｖｉｖｏで確認される請求項３７記載の改変された免疫細胞。
【請求項４０】
前記免疫細胞が、改変されていない免疫細胞と比較して、前記接触から少なくとも約２４、４８、または９６時間後の増殖において、少なくとも２倍の増大を示す請求項２８〜３９のいずれか１項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項４１】
ネオアンチゲンに特異的に結合する、改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であって、前記改変されたＴＩＬが、
（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、および、リガンドへのスイッチ分子の結合が、改変されたＴＩＬにおいて免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、および
（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター
を含む改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）。
【請求項４２】
ネオアンチゲンに特異的に結合する、改変された免疫細胞であって、前記改変された免疫細胞が、
（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、および、リガンドへのスイッチ分子の結合が、改変された免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、
および（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター
を含む改変された免疫細胞。
【請求項４３】
前記免疫細胞が、ネオアンチゲンに対して特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含む請求項４２記載の改変された免疫細胞。
【請求項４４】
前記ＴＣＲ複合体が、内在性ＴＣＲ複合体である請求項４３記載の改変された免疫細胞。
【請求項４５】
前記ＴＣＲ複合体が、外因性ＴＣＲ複合体である請求項４３記載の改変された免疫細胞。
【請求項４６】
前記ネオアンチゲンが、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含み、前記遺伝子が、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項４７】
前記ネオアンチゲンが、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択される請求項４１〜４５のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項４８】
前記そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質が、シグナリングレセプターである請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項４９】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発する前記タンパク質が、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターである請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５０】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発する前記タンパク質が、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴから選択る請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５１】
前記共刺激分子は、インターロイキン−２レセプター）ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０である請求項４１〜５０のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５２】
前記免疫細胞活性シグナルが、活性化因子によって媒介される請求項４１〜５１のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５３】
前記活性化因子が、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子である請求項５２記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５４】
前記活性化因子が、可溶性サイトカインであり、および、前記可溶性サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＩＦＮ、またはそれらの機能性フラグメントもしくはバリアントである請求項５３記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５５】
前記免疫細胞活性化シグナルが、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞のクローン性増殖拡大；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞によるサイトカイン放出；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の細胞毒性；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の増殖；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の分化、脱分化、分化転換；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の移動および／または輸送；改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の疲弊および／または再活性化；および改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含む請求項４１〜５４のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５６】
前記Ｂ細胞表面タンパク質が、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択される請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５７】
前記細胞内シグナリングドメインが、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む請求項４１〜５６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５８】
前記細胞内シグナリングドメインが、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む請求項４１〜５６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項５９】
前記細胞内シグナリングドメインが、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ  （ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含む請求項４１〜５６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６０】
前記細胞内シグナリングドメインが、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインを含む請求項４１〜５９のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６１】
前記ＣＤ３  ζの細胞内ドメインが、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む請求項６０記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６２】
前記ＣＡＲが、さらに、共刺激ドメインを含む請求項４１〜６１のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６３】
前記共刺激ドメインが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、またはトールリガンドレセプターのシグナリングを含む請求項６２記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６４】
前記共刺激ドメインが、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ/ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含む請求項６２記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６５】
前記リガンドへのスイッチ分子の結合時に、前記改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞と比較して、増強されたネオアンチゲン結合を示す請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６６】
前記改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が、前記スイッチ分子が前記リガンドに結合し、そして前記改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が前記標的細胞上に存在する前記ネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、標的細胞に対する増大された細胞毒性を示す請求項４１〜６５のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６７】
前記改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が、前記スイッチ分子が前記リガンドに結合し、そして前記改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が前記標的細胞上に存在する前記ネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞と比較して、増大されたサイトカイン分泌を示す請求項４１〜６６のいずれか１項に記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６８】
前記サイトカインが、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２である請求項６７記載の改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞。
【請求項６９】
（ａ）被験体に、任意の請求項のいずれか一つに記載された、改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞を投与すること、
（ｂ）がんである標的細胞に対して前記改変されたＴＩＬ、前記改変されたＴ細胞、または前記改変された免疫細胞の細胞毒性を誘導し、それによってがんである標的細胞の死を誘導する条件下で、前記改変されたＴＩＬ、前記改変されたＴ細胞、または前記改変された免疫細胞に、ネオアンチゲンを発現しているがんである標的細胞を接触させること、
を含む被験体のがんを処置する方法。
【請求項７０】
（ａ）請求項２１〜４０のいずれか一項に記載の少なくとも一つの改変された免疫細胞を含むＴ細胞集団を提供すること、
（ｂ）前記Ｔ細胞の集団を、前記Ｔ細胞の集団の増加に効果を与えるように、前記Ｂ細胞表面タンパク質に暴露すること、
を含むＴ細胞集団を増やすための方法。
【請求項７１】
前記（ｂ）において、前記Ｔ細胞の集団が、前記Ｂ細胞表面タンパク質を含むＢ細胞に暴露される請求項７０記載の方法。
【請求項７２】
（ａ）Ｔ細胞集団にキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をエンコードする核酸を導入し、それによって第一ＣＡＲ発現細胞集団を作製する工程であって、ＣＡＲが（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む工程、
（ｂ）前記第一ＣＡＲ発現細胞集団をＢ細胞表面タンパク質に接触させ、それによって増加されたおよび／または活性化された免疫細胞集団を作製する工程、
を含むＴ細胞集団を増やすための方法。
【請求項７３】
（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、および
（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分
の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項７４】
（ａ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体またはそれらの一またはそれ以上の成分、および
（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター
の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項７５】
前記ネオアンチゲン特異的Ｔ細胞レセプター複合体が、ネオアンチゲンに結合する請求項７３または７４記載の組成物。
【請求項７６】
前記ネオアンチゲンが、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含み、前記遺伝子が、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される請求項７５記載の組成物。
【請求項７７】
そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質が、シグナリングレセプターである請求項７３記載の組成物。
【請求項７８】
前記タンパク質が、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターである請求項７７記載の組成物。
【請求項７９】
前記タンパク質が、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴからなる群より選択される請求項７８記載の組成物。
【請求項８０】
免疫細胞活性化シグナルを媒介する前記共刺激分子が、インターロイキン−２レセプター）ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０である請求項７３記載の組成物。
【請求項８１】
前記Ｂ細胞表面タンパク質が、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択される請求項７４記載の組成物。
【請求項８２】
前記細胞内シグナリングドメインが、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ  （ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含む請求項７４記載の組成物。
【請求項８３】
前記キメラ抗原レセプターが、さらに、共刺激ドメインを含む請求項７４記載の組成物。
【請求項８４】
前記共刺激ドメインが、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ/ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含む請求項８３記載の組成物。
【請求項８５】
（ａ）スイッチ分子であって、該スイッチ分子が、そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、該ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激タンパク質の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、
（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分、および
（ｃ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメイン、を含むキメラ抗原レセプター
の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項８６】
ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であって、キメラ刺激分子を含む改変されたＴＩＬであって、前記キメラ刺激分子が、
前記ネオアンチゲンに結合するポリペプチド細胞外ドメイン（ＰＥＤ）を含み、前記ＰＥＤが、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、
前記ネオアンチゲンへの前記キメラ刺激分子の結合が、前記改変されたＴＩＬにおいて前記免疫細胞活性化シグナルをもたらす、改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１７年１１月１０日に出願された中国特許出願第２０１７１１１０１４５０．Ｘ号明細書、２０１８年１月９日に出願された中国特許出願第２０１８１００１７７７０．５号明細書、２０１８年１月１６日に出願された中国特許出願第２０１８１００３７６８２．１号明細書、２０１８年６月１１日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９０６３８、２０１８年７月２日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９４１２６、および２０１８年１１月９日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／１１４８９７、の利益および優先権を主張するものであり、それらの全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法は、標的である細胞、例えばがん細胞へ細胞毒性を向け直すために患者自身の免疫細胞を改変することを含む。キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を発現している、改変された例えばＴ細胞などの免疫細胞は、免疫細胞毒性のために内在性免疫細胞シグナリングを利用することができる。
【０００３】
従来の免疫療法は、様々な欠陥に悩まされている。このような欠陥としては、治療効果のための持続的および／または適切な免疫応答のための共刺激性レセプターからの不十分なシグナリング、例えばがん細胞などの疾患細胞のための改変された免疫細胞の不十分な特異性（例えば、on-target off-tumor効果および毒性など）、および免疫抑制機構の活性化などが挙げられ、これらの全てが免疫応答の効果を最小にしてしまい得る。
【発明の概要】
【０００４】
上記に鑑みて、免疫療法を行うための代替的なシステムおよび方法に関する顕著な必要性が存在する。本開示の組成物および方法は、この必要性を扱うものであり、そして、追加の優位性をもまた提供する。特には、本開示の様々な態様は、通常、免疫細胞不活性化シグナルを誘発するであろうリガンドへの結合を通じたシグナリングによって免疫細胞活性化シグナルを誘発するための組成物および方法を提供する。組成物および方法はまた、Ｂ細胞表面タンパク質への結合を通じた免疫細胞活性化シグナルをもまた誘発し得る。
【０００５】
一態様において、本開示は、腫瘍抗原に特異的に結合する改変された免疫細胞を提供し、改変された免疫細胞はキメラ刺激分子を含み、ここで、キメラ刺激分子は、そのリガンドへの結合時に改変されていない免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、ここで、ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、キメラ刺激分子のリガンドへの結合は、改変された免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらす。
【０００６】
いくつかの実施形態において、改変された免疫細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であり、ここで、任意には、ＴＩＬは、ＰＤ−１、ＣＤ１３７、およびＴＩＭ−３の少なくとも一つを発現していてもよい。
【０００７】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変されたＴ細胞を提供し、ここで、改変されたＴ細胞は、スイッチ分子を含み、ここで、スイッチ分子は、そのリガンドへの結合時に改変されていないＴ細胞中で免疫細胞活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、ここで、ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、スイッチ分子のリガンドへの結合は、改変された免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらす。
【０００８】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ネオアンチゲンに対して特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、内在性ＴＣＲ複合体であってもよい。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、外因性ＴＣＲ複合体であってもよい。
【０００９】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含んでいてもよく、ここで、遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含んでいてもよく、ここで、遺伝子は、ＪＡＫ２、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＴＰ５３、ＰＩＫ３ＣＡ、ＥＧＦＲ、ＩＤＨ１、ＮＲＡＳ、ＣＴＮＮＢ１、ＮＰＭ１、ＣＡＬＲ、ＦＧＦＲ３、ＣＤＫＮ２Ａ、ＫＩＴ、ＭＹＤ８８、ＡＰＣ、ＨＲＡＳ、ＭＥＤ１２、ＤＮＭＴ３Ａ、ＧＮＡＳ、ＩＤＨ２、ＫＣＮＪ５、ＰＴＥＮ、ＮＯＴＣＨ１、ＳＦ３Ｂ１、ＦＬＴ３、ＡＳＸＬ１、ＳＲＳＦ２、ＦＯＸＬ２、ＰＴＰＮ１１、ＧＮＡＱ、ＲＥＴ、ＨＬＡ−Ａ、ＭＰＬ、ＩＫＺＦ１、ＫＭＴ２Ｃ、ＴＥＴ２、ＰＤＧＦＲＡ、ＦＢＸＷ７、Ｈ３Ｆ３Ａ、ＡＬＫ、ＣＥＢＰＡ、ＥＳＲ１、ＡＫＴ１、ＲＵＮＸ１、ＧＮＡ１１、ＶＨＬ、ＷＴ１、Ｕ２ＡＦ１、ＡＢＬ１、ＥＲＢＢ２、ＤＩＣＥＲ１、ＮＯＴＣＨ４、ＥＺＨ２、ＨＮＦ１Ａ、ＳＭＡＲＣＢ１、ＣＸＣＲ４、ＰＬＣＧ１、ＴＳＨＲ、ＰＲＫＡＣＡ、ＲＨＯＡ、ＳＴＡＴ３、ＰＯＬＥ、ＳＥＴＢＰ１、ＭＥＴ、ＡＲ、ＳＴＫ１１、ＮＦ２、ＣＢＬ、ＨＬＡ−Ｂ、ＰＲＫＣＢ、ＡＴＲ、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＣＡＳＣ５、ＣＤ７９Ｂ、ＰＢＲＭ１、ＰＴＫ２Ｂ、ＧＡＴＡ２、ＫＭＴ２Ｄ、ＳＵＬＴ１Ａ１、ＦＬＮＢ、ＰＲＰＦ８、ＲＮＦ４３、ＭＳＨ６、ＦＧＦＲ２、ＳＭＡＤ４、ＪＡＫ３、ＵＳＰ８、ＤＬＣ１、ＥＳＲＰ１、ＬＲＰ１Ｂ、ＭＹＨ１１、ＢＲＣＡ１、ＣＡＲＤ１１、ＨＳＰ９０ＡＢ１、ＭＡＰ３Ｋ９、ＡＤＡＭＴＳＬ３、ＰＤＧＦＲＢ、ＲＰＴＯＲ、ＲＯＳ１、ＮＦＫＢＩＥ、ＡＭＥＲ１、ＫＬＦ４、ＲＡＣ１、ＴＥＲＴ、ＭＹＯＤ１、ＡＴＰ１Ａ１、ＣＳＦ３Ｒ、ＮＯＴＣＨ２、ＣＣＲ４、ＰＡＸ５、ＳＰＴＡＮ１、ＭＬＨ１、ＣＵＢＮ、ＲＮ���２１３、ＳＭＯ、ＡＢＣＣ４、ＡＸＩＮ２、ＣＳＦ１Ｒ、ＰＥＲ１、ＰＫＨＤ１、ＩＬ７Ｒ、ＲＢ１、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＴＭ、ＦＥＳ、ＭＴＨＦＲ、ＰＴＣＨ２、ＦＡＮＣＩ、ＣＤＨ５、ＣＩＣ、ＩＬ６ＳＴ、ＭＹＨ９、ＮＦ１、ＴＧＦＢＲ２、ＩＮＳＲ、ＰＴＰＮ１２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＭＥＮ１、ＮＳＤ１、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＹＴ１、ＴＮＫＳ、ＣＣＮＤ３、ＰＳＭＤ１３、ＣＹＰ２Ｄ６、ＨＥＬＱ、ＬＰＨＮ３、ＰＲＡＭＥ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＢＣＬ６、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＤ１、ＦＬＣＮ、ＬＭＯ２、ＭＵＣ１、ＮＦＫＢＩＺ、ＮＲＰ２、ＣＴＣＦ、ＨＩＳＴ１Ｈ３Ｂ、ＫＥＡＰ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＡＢＣＣ２、ＥＥＤ、ＧＡＴＡ１、ＧＬＩ３、ＩＫＺＦ３、ＰＩＫ３ＣＧ、ＸＰＯ１、ＣＨＲＮＡ３、ＭＡＰ２Ｋ１、ＳＥＴＤ２、ＺＮＦ６６８、ＣＣＮＤ２、ＦＬＴ４、ＮＴ５Ｃ２、ＲＥＣＱＬ４、ＳＳＸ１、ＡＬＯＸ１２Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＥＬＦ３、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＭＡＲＶＥＬＤ３、ＭＬＬＴ４、ＭＬＰＨ、ＮＴＲＫ３、ＳＰＯＰ、ＢＣＬ２、ＥＰＨＢ１、ＥＲＣＣ４、ＥＲＣＣ６、ＥＴＮＫ１、ＪＡＫ１、ＬＲＰ２、ＭＵＴＹＨ、ＮＦＫＢＩＡ、ＡＲＮＴ、ＢＲＣＡ２およびＣＤＨ２から選択される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの遺伝子プロファイルをもとに選択され得る。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択され得る。
【００１１】
いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、シグナリングレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴからなる群より選択され得る。
【００１２】
いくつかの実施形態において、共刺激分子は、インターロイキン−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０であってもよい。
【００１３】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性シグナルは、活性化因子によって媒介され得る。いくつかの実施形態において、活性化因子は、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子である。いくつかの実施形態において、活性化因子は、可溶性サイトカインであり、およびここで、可溶性サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＩＦＮ、またはそれらの機能性フラグメントもしくはバリアントである。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性化シグナルは、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞のクローン性増殖拡大、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞によるサイトカイン放出、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の細胞毒性、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の増殖、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の分化、脱分化、分化転換、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の移動および／または輸送、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞の疲弊および／または再活性化、および改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出であり得る。
【００１４】
いくつかの実施形態において、リガンドへのスイッチ分子の結合時に、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞は、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、増強されたネオアンチゲン結合を示し得る。
【００１５】
いくつかの実施形態において、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞は、スイッチ分子がリガンドに結合し、そして改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、標的細胞に対する増大された細胞毒性を示し得る。
【００１６】
いくつかの実施形態において、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞は、スイッチ分子がリガンドに結合し、そして改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、増大されたサイトカイン分泌を示し得る。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２であり得る。
【００１７】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに対する特異的な結合を示すキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）およびＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、ＣＡＲは、（ａ）Ｂ細胞表面タンパク質を結合させることのできる抗原相互作用ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、および（ｃ）細胞内シグナルドメインを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍湿潤リンパ球（ＴＩＬ）であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＩＬは、ＰＤ−１、ＣＤ１３７およびＴＩＭ−３を発現しているトリプルポジティブＴ細胞であってもよい。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンに対して特異的結合を示すＴＣＲ複合体は、内在性ＴＣＲ複合体であってもよい。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンに対して特異的結合を示すＴＣＲ複合体は、外因性ＴＣＲ複合体であってもよい。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、変異遺伝子によってエンコードされているタンパク質のペプチドフラグメントを含み、ここで該遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、DＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、Ｔｇｆｂｒ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの遺伝子プロファイルをもとに選択され得る。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択され得る。
【００２１】
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞表面タンパク質は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫受容抑制性チロシンモチーフを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含んでいてもよい。
【００２３】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、さらに、共刺激ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、またはトールリガンドレセプターのシグナリングを含んでいてもよい。
【００２４】
いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含んでいてもよい。
【００２５】
いくつかの実施形態において、免疫細胞のＢ細胞表面タンパク質への接触によって、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞と比較して、増強された増殖を示し得る。いくつかの実施形態において、増強された増殖は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確認されてもよい。いくつかの実施形態において、増強された増殖は、ｉｎ  ｖｉｖｏで確認されてもよい。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、改変されていない免疫細胞と比較して、接触から少なくとも約２４、４８、または９６時間後の増殖において、少なくとも２倍の増大を示し得る。
【００２６】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する、改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を提供し、ここで、改変されたＴＩＬは、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、および、リガンドへのスイッチ分子の結合が、改変されたＴＩＬにおいて免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、および（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプターを含む。
【００２７】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する、改変された免疫細胞を提供し、ここで、改変された免疫細胞は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、および、リガンドへのスイッチ分子の結合が、改変された免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、および（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプターを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、ネオアンチゲンに対して特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、内在性ＴＣＲ複合体であってもよい。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、外因性ＴＣＲ複合体であってもよい。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含み、ここで、遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの遺伝子プロファイルをもとに選択され得る。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルをもとに選択され得る。
【００３１】
いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、シグナリングレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴから選択され得る。
【００３２】
いくつかの実施形態において、共刺激分子は、インターロイキン−２レセプター）ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０であってもよい。
【００３３】
免疫細胞活性シグナルは、活性化因子によって媒介され得る。いくつかの実施形態において、活性化因子は、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子であり得る。いくつかの実施形態において、活性化因子は、可溶性サイトカインであり、およびここで、可溶性サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＩＦＮ、またはそれらの機能性フラグメントもしくはバリアントであり得る。
【００３４】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性化シグナルは、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞のクローン性増殖拡大、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞によるサイトカイン放出、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の細胞毒性、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の増殖、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の分化、脱分化、分化転換、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の移動および／または輸送、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞の疲弊および／または再活性化、および改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含み得る。
【００３５】
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞表面タンパク質は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択され得る。
【００３６】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ  （ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含んでいてもよい。
【００３７】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含んでいてもよい。ＣＡＲは、さらに、共刺激ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、またはトールリガンドレセプターのシグナリングを含んでいてもよい。
【００３８】
いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含んでいてもよい。
【００３９】
いくつかの実施形態において、リガンドへのスイッチ分子の結合時に、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞は、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞と比較して、増強されたネオアンチゲン結合を示し得る。
【００４０】
いくつかの実施形態において、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞は、スイッチ分子がリガンドに結合し、そして改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞と比較して、標的細胞に対する増大された細胞毒性を示し得る。
【００４１】
いくつかの実施形態において、改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞は、スイッチ分子がリガンドに結合し、そして改変されたＴＩＬまたは改変された免疫細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていない免疫細胞と比較して、増大されたサイトカイン分泌を示し得る。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−２であり得る。
【００４２】
一態様において、本開示は、（ａ）被験体に、任意の請求項のいずれか一つに記載された改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞を投与すること、（ｂ）がんである標的細胞に対して改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞の細胞毒性を誘導し、それによってがんである標的細胞の死を誘導する条件下で、改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞に、ネオアンチゲンを発現しているがんである標的細胞を接触させること、を含む被験体のがんを処置する方法を提供する。
【００４３】
一態様において、本開示は、Ｔ細胞集団を増やすための方法を提供し、該方法は、（ａ）請求項２１〜４０のいずれか一項に記載の少なくとも一つの改変された免疫細胞を含むＴ細胞集団を提供すること、（ｂ）Ｔ細胞の集団を、Ｔ細胞の集団の増加に効果を与えるように、Ｂ細胞表面タンパク質に暴露すること、を含む。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の集団は、Ｂ細胞表面タンパク質を含むＢ細胞に暴露されてもよい。
【００４４】
一態様において、本開示は、（ａ）Ｔ細胞集団にキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をエンコードする核酸を導入し、それによって第一ＣＡＲ発現細胞集団を作製する工程であって、ＣＡＲが（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む工程、（ｂ）第一ＣＡＲ発現細胞集団をＢ細胞表面タンパク質に接触させ、それによって増加されたおよび／または活性化された免疫細胞集団を作製する工程、を含むＴ細胞集団を増やすための方法を提供する。
【００４５】
一態様において、本開示は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、および（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【００４６】
本開示の別の一態様は、（ａ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体またはそれらの一またはそれ以上の成分、および（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター、の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、変異遺伝子によってエンコードされたタンパク質のペプチドフラグメントを含んでいてもよく、ここで、遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＤＣＴ、ＤＫＫ４、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ、ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３、ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ、ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ  １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴから選択される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に、改変されていないＴＩＬまたは改変されていないＴ細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質は、シグナリングレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、該タンパク質は、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、該タンパク質は、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴからなる群より選択され得る。
【００４９】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子は、インターロイキン−２レセプター）ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０であってもよい。
【００５０】
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞表面タンパク質は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫受容抑制性チロシンモチーフを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ  （ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含んでいてもよい。
【００５１】
いくつかの実施形態において、キメラ抗原レセプターは、さらに、共刺激ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含��でいてもよい。
【００５２】
一態様において、本開示は、（ａ）スイッチ分子であって、該スイッチ分子が、そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み、該ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激タンパク質の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分、および（ｃ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメイン、を含むキメラ抗原レセプターの一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【００５３】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であって、キメラ刺激分子を含む改変されたＴＩＬを提供し、ここで、キメラ刺激分子は、ネオアンチゲンに結合するポリペプチド細胞外ドメイン（ＰＥＤ）を含み、ここで、ＰＥＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、ネオアンチゲンへのキメラ刺激分子の結合は、改変されたＴＩＬにおいて免疫細胞活性化シグナルをもたらす。
【００５４】
一態様において、本開示は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、該ＥＣＤが、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、スイッチ分子のリガンドへの結合が、改変された免疫細胞において、免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、および、（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメイン、を含むキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）を含む改変された免疫細胞を提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、改変された免疫細胞は、ＰＤ１、ＣＤ１３７、およびＴＩＭ−３の少なくとも一つを発現していてもよい。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍から得られ得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、単核細胞の末梢血から得られてもよい。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、外因性ＴＣＲ複合体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、腫瘍細胞に結合し得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、ネオアンチゲンに結合してもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に改変されていない免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質はシグナリングレセプターであり得る。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に改変されていない免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルを誘発する該タンパク質は、チェックポイントレセプター、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、成長因子レセプター、またはホルモンレセプターであってもよい。いくつかの実施形態において、そのリガンドへの結合時に改変されていない免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルを誘発する該タンパク質は、トランスフォーミング増殖因子−βレセプター（ＴＧＦ−β−Ｒ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）およびＴＩＧＩＴからなる群より選択され得る。いくつかの実施形態において、該共刺激分子は、インターロイキン−２レセプター（ＩＬ−２Ｒ）、インターロイキン−１２レセプター（ＩＬ−１２Ｒ）、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、またはＯＸ４０であってもよい。いくつかの実施形態において、該免疫細胞活性シグナルは、活性化因子によって媒介され得る。いくつかの実施形態において、該活性化因子は、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子であり得る。いくつかの実施形態において、該活性化因子は、可溶性サイトカインであり、およびここで、該可溶性サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＴＮＦ、ＴＧＦ、ＩＦＮ、またはそれらの機能性フラグメントもしくはバリアントであり得る。いくつかの実施形態において、該免疫細胞活性化シグナルは、改変された免疫細胞のクローン性増殖拡大、改変された免疫細胞によるサイトカイン放出、改変された免疫細胞の細胞毒性、改変された免疫細胞の増殖、改変された免疫細胞の分化、脱分化、分化転換、改変された免疫細胞の移動および／または輸送、改変された免疫細胞の疲弊および／または再活性化、および改変された免疫細胞による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含み得る。いくつかの実施形態において、該��細胞表面タンパク質は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２から選択され得る。いくつかの実施形態において、該細胞内シグナリングドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、該細胞内シグナリングドメインは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、該細胞内シグナリングドメインは、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ  （ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０から選択される分子の細胞内ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、該細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３  ζの細胞内ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、該ＣＤ３  ζの細胞内ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含んでいてもよい。該ＣＡＲは、さらに、共刺激ドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、またはトールリガンドレセプターのシグナリングを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰ��ＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、該免疫細胞の該Ｂ細胞表面タンパク質への接触によって、該免疫細胞は、改変されていない免疫細胞と比較して、増強された増殖を示し得る。いくつかの実施形態において、該増強された増殖は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確認されてもよい。いくつかの実施形態において、該増強された増殖は、ｉｎ  ｖｉｖｏで確認されてもよい。いくつかの実施形態において、該免疫細胞は、改変されていない免疫細胞と比較して、接触から少なくとも約２４、４８、または９６時間後の増殖において、少なくとも２倍の増大を示し得る。
【００５６】
［参照による組み入れ］
本明細書において参照されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的および個々に参照によって組み入れられることが示されているかのごとく、同じ程度に参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００５７】
本発明の新規な特徴は、添付のクレームにおいて具体的に示される。本発明の特徴および優位点のより良い理解が、発明の原則が利用される例示的な実施形態を記載している以下の詳細な説明、および、以下の添付の図面を参照することにより得られるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ遺伝子の形質導入のあるまたはないＴ細胞のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）発現を示す図である。
【図２】図２は、ネオアンチゲン反応性（または認識可能性の）Ｔ細胞の調製プロセスを示す図である。
【図３Ａ】図３Ａは、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子のレンチウイルタイトレーションを示す図であり、ＰＤ１発現のフローサイトメトリー検出を示している。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子のレンチウイルタイトレーションを示す図であり、タイトレーション曲線を示している。
【図４】図４は、ＴＤＲ−１、ＴＩＬおよびｎｅｏＴ細胞中でのＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子の発現を示す図である。
【図５】図５は、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＰＤＬ１膀胱がん細胞株のアッセイを示す図である。
【図６Ａ】図６Ａは、ＮＹ−ＥＳＯ−１を標的とするＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける、腫瘍細胞とともに培養されたＴ細胞中でのＣＤ１０７ａの発現を示す図である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＮＹ−ＥＳＯ−１を標的とするＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける、腫瘍細胞とともに培養されたＴ細胞中でのＩＦＮ−γの放出を示す図である。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ＮＹ−ＥＳＯ−１を標的とするＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおける、腫瘍細胞とともに培養されたＴ細胞中でのＩＬ−２の放出を示す図である。
【図７Ａ】図７Ａは、腫瘍細胞の存在下または非存在下で培養された場合の、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子あり、またはなしでの、ＴＩＬ細胞によるＩＦＮ−γの放出を示す図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、腫瘍細胞の存在下または非存在下で培養された場合の、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子あり、またはなしでの、ＴＩＬ細胞によるＩＬ−２の放出を示す図である。
【図８Ａ】図８Ａは、腫瘍細胞の存在下または非存在下で培養された場合の、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子あり、またはなしでの、ネオアンチゲン反応性Ｔ細胞（ｎｅｏＴ）中での、ＩＦＮ−γの放出を示す図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、腫瘍細胞の存在下または非存在下で培養された場合の、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子あり、またはなしでの、ネオアンチゲン反応性Ｔ細胞（ｎｅｏＴ）中での、ＩＬ−２の放出を示す図である。
【図９】図９は、ＴＣＲ−Ｔ、ＴＩＬ、およびｎｅｏＴ中でのＢ細胞表面タンパク質（ＢＣＡＲ）を標的とするキメラ抗原レセプターの発現を示す図である。
【図１０】図１０は、ＢＣＡＲを発現しているＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１１】図１１は、ＢＣＡＲを発現しているＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１２Ａ】図１２Ａは、ＢＣＡＲを発現しているＴＩＬ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、ＢＣＡＲを発現しているＴＩＬ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ＢＣＡＲを発現しているＮｅｏＴ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、ＢＣＡＲを発現しているＮｅｏＴ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果および増加を示す図である。
【図１４】図１４は、ＴＩＬ中でのＰＤ１ｓｗ−ＢＣＡＲ、ＴＩＭ３ｓｗ−ＢＣＡＲ、およびＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＢＣＡＲの発現を示す図である。
【図１５】図１５は、ｐＴＩＬ中でのＰＤ１ｓｗ−ＢＣＡＲ、ＴＩＭ３ｓｗ−ＢＣＡＲ、およびＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＢＣＡＲの発現を示す図である。
【図１６Ａ】図１６Ａは、Ｂ細胞なしでの種々のＴＩＬからのＩＦＮ−γの放出を示す図である。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、Ｂ細胞なしでの種々のＴＩＬからのＩＬ−２の放出を示す図である。
【図１７Ａ】図１７Ａは、Ｂ細胞の非存在下（グループＡ）または存在下（グループＢ）における、種々のＴＩＬの腫瘍キリング効果を示す図である。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、Ｂ細胞の非存在下（グループＡ）または存在下（グループＢ）における、種々のＴＩＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏ増加を示す図である。
【図１８Ａ】図１８Ａは、Ｂ細胞なしでの種々のＴＩＬからのＩＦＮ−γの放出を示す図である。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、Ｂ細胞なしでの種々のＴＩＬからのＩＬ−２の放出を示す図である。
【図１９Ａ】図１９Ａは、Ｂ細胞の非存在下（グループＡ）または存在下（グループＢ）における、種々のｐＴＩＬの腫瘍キリング効果を示す図である。
【図１９Ｂ】図１７Ｂは、Ｂ細胞の非存在下（グループＡ）または存在下（グループＢ）における、種々のｐＴＩＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏ増加を示す図である。
【図２０】図２０は、Ｂ細胞の非存在下または存在下における、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１腫瘍細胞に対するＢＣＡＲ−ＴＣＲＴのキリング効果を示す図である。
【図２１】図２１は、被験者１〜４の腫瘍イメージ分析を示す図である。
【図２２】図２２は、被験者１〜４の腫瘍イメージ分析を示す図である。
【図２３】図２３は、被験者１〜４の腫瘍イメージ分析を示す図である。
【図２４】図２４は、被験者１〜４の腫瘍イメージ分析を示す図である。
【図２５】図２５は、ＳＴＩＬまたはＳｐＴＩＬの注入後の末梢血中での循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）数の変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本明細書中に開示されている方法の実行は、他に示されない限り、当該技術分野における技術に範囲内である、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクス、組み換えＤＮＡを利用する。例えば、Sambrook and Green, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th Edition (2012)、the series Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al. eds.)、 the series Methods In Enzymology (Academic Press, Inc.), PCR 2、A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Culture of Animal Cells、A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, 6th Edition (R.I. Freshney, ed. (2010))等を参照のこと。
【００６０】
明細書およびクレームで使用されるように、単数形である「一つの（a）」、「一つの（an）」、および「その（the）」は、文脈が明らかにそうではないことを規定していないかぎり、複数系も含む。例えば、用語「一つのスイッチ分子（a switch molecule）」は、複数のスイッチ分子を含んでいる。
【００６１】
用語「約（about）」または「およそ（approximately）」は、当業者によって決められる特定の値のための許容され得る誤差範囲内を意味し、それは、部分的には、その値がどのように測定され、または決定さているか、すなわち測定システムの限界に依存するであろう。例えば、「約」は、当該技術における一回の実行あたりの標準偏差が１または１より大きいことを意味し得る。代替的には、「約」は、ある値の２０％まで、１０％まで、５％まで、または１％までの範囲を意味する。代替的には、とりわけ生物学的システムまたはプロセスに関して、該用語は、一つの桁内、好ましくは値の５倍内、およびさらに好ましくは値の２倍内であることを意味し得る。明細書およびクレーム中に具体的な値が記載されている場合、他に記載されていない限り、用語「約」は特定の値の許容され得る誤差範囲内にあることを意味していると推定されるべきである。
【００６２】
本明細書中で使用される、「細胞（cell）」は一般的には生物学的細胞を意味する。細胞は、生き物の基本的な構造的、機能的および／または生物学的ユニットであり得る。細胞は、一またはそれ以上の細胞をもつ任意の生物由来であり得る。いくつかの比限定的な例としては、原核細胞。真核細胞、バクテリア細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、プロトゾア細胞、植物由来の細胞（例えば、作物、フルーツ、野菜、穀物、ダイズ、コーン、トウモロコシ、小麦、種、トマト、コメ、キャッサバ、サトウキビ、カボチャ、干し草、ジャガイモ、綿、アサ、たばこ、花き植物、球果植物、裸子植物、シダ、ヒカゲノカズラ類、ツノゴケ類、苔類、コケなどの植物からの細胞など）、藻類細胞（例えばボツリオコッカス  ブラウニー、緑藻、ナンノクロロプシス  ガディタナ、クロレラ  ピレノイドサ、ヤツマタモクなど）、海藻（例えばケルプなど）、真菌細胞（例えば、酵母菌細胞、キノコ由来の細部など）、動物細胞、無脊椎動物由来（例えば、ミバエ、刺胞動物、棘皮動物、線虫など）の細胞、脊椎動物由来（例えば魚類、両生類、爬虫類、鳥類、ほ乳類）の細胞、ほ乳類由来（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非人類霊長類、ヒトなど）の細胞などが挙げられる。しばしば、細胞は、天然生物由来ではない（例えば、細胞は、合成的に作製されていてもよく、これは時に人工細胞と称される）。
【００６３】
本明細書中で使用される用語「抗原（antigen）」は、選択的な結合剤によって結合されることのできる分子またはそのフラグメントを意味する。例えば、抗原は、例えばレセプターなどの選択的な結合剤によって結合され得るリガンドであり得る。別の例としては、抗原は、例えば免疫学的タンパク質（例えば抗体など）などの選択的結合剤によって結合され得る抗原性分子であり得る。抗原はまた物において、その抗原に結合することのできる抗体を産生させるために使用されることのできる分子またはそのフラグメントを意味し得る。
【００６４】
本明細書中で使用される用語「ネオアンチゲン（neoantigen）」は、一般的に、遺伝子の変異から生じる腫瘍特異的抗原を意味する。結果として得られる変異タンパク質、またはそれらのフラグメントは、抗腫瘍性Ｔ細胞応答をトリガーすることができる。
【００６５】
本明細書中で使用される用語「遺伝子（gene）」はＲＮＡ転写物をエンコードすることにかかわる核酸（例えばゲノムＤＮＡなどのＤＮＡおよびｃＤＮＡなど）およびその対応するヌクレオチド配列を意味する。ゲノムＤＮＡに関連して本明細書中で使用される用語は、介在性の非翻訳領域と共に制御領域を含み、そして、５’および３’末端を含み得る。いくつかのケースでは、該用語は、５’および３’非翻訳領域（５’−ＵＴＲおよび３’−ＵＴＲ）、エクソンおよびイントロンを含む転写領域を含む。いくつかの遺伝子においては、転写領域は、ポリペプチドをエンコードする「オープンリーディングフレーム」を含むであろう。該用語のいくつかの使用では、「遺伝子」は、ポリペプチドをエンコードするために必要であるコード配列（例えば「オープンリーディングフレーム」または「コード領域」など）のみを含む。いくつかの場合において、遺伝子は、ポリペプチドをエンコードしておらず、例えば、リボソームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ）および転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）遺伝子などである。いくつかの場合において、用語「遺伝子」は、転写配列を含むだけでなく、追加で、上方および下方の制御配列、エンハンサーおよびプロモーターを含む非転写領域をも含む。遺伝子は、「内在性遺伝子」または生物のゲノム中の自然な位置にある天然の遺伝子を意味し得る。遺伝子は「外在性遺伝子」または非天然遺伝子を意味し得る。非天然遺伝子は、宿主生物中で通常は見られない遺伝子であるが、遺伝子導入によって宿主生物中に導入される遺伝子を意味し得る。非天然遺伝子はまた、生物のゲノム中の天然の位置にない遺伝子も意味し得る。非天然遺伝子はまた、自然起源の核酸、または、変異、挿入および／または欠失を含むポリペプチド（例えば非天然配列）を意味し得る。
【００６６】
本明細書中で使用される用語「抗体（antibody）」は、イムノグロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子を意味する。用語抗体は、複数の抗体（例えばモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体など）、および、それらの誘導体、バリアントおよびフラグメントを含む。抗体は、これらに限定されるわけではないが、例えば、種々のクラス（すなわちＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）およびサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）のイムノグロブリン（ＩＧ’ｓ）である。それらの誘導体、バリアントおよびフラグメントとは、対応する抗体の結合特異性（例えば完全なおよび／または部分的な）を保持している機能的誘導体またはフラグメントを意味し得る。抗原結合性フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、可変フラグメント（Ｆｖ）、単鎖可変フラグメ後エバント（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、二重特異性抗体、およびシングルドメイン抗体（「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」または「ｃａｍｅｌｉｄｓ」）を含む。用語抗体は、抗体、および、最適化された、操作されたまたは化学的に結合された抗体の抗原結合性フラグメントを含む。最適化された抗体の例としては、親和性成熟抗体が挙げられる。操作された抗体の例としては、Ｆｃ最適化抗体（例えば、結晶性断片領域において最適化された抗体など）および多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体など）が挙げられる。
【００６７】
本明細書中で使用される用語「ヌクレオチド（nucleotide）」は、一般的に、塩基−糖−リン酸の組み合わせを意味する。ヌクレオチドは、合成のヌクレオチドを含む、ヌクレオチドは、合成のヌクレオチドアナログを含む。ヌクレオチドは、核酸配列（例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）など）のモノマーユニットであり得る。用語ヌクレオチドは、リボヌクレオシド三リン酸、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）、シトシン三リン酸（ＣＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、および、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＩＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰなどのデオキシリボヌクレオシド三リン酸、ならびにそれらの誘導体を含み得る。このような誘導体としては、例えば、「αＳ」ｄＡＴＰ、７−デアサ−ｄＧＴＰおよぎ７−デアザ−ｄＡＴＰ、ヌクレアーゼ抵抗性をそれらを含む核酸分子に与えるヌクレオチド誘導体などを含む。本明細書中で使用される用語ヌクレオチドは、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄｄＮＴＰｓ）およびそれらの誘導体を意味し得る。ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸の例示的な例としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＩＴＰ、およびｄｄＴＴＰなどが挙げられる。ヌクレオチドは、ラベルされていなくてもよいし、または公知の方法により検出可能にラベルされていてもよい。ラベリングは、量子ドットを用いて行われてもよい。検出可能なラベルとしては、例えば、放射性同位体、蛍光ラベル、化学発光性ラベル、バイオ発光性ラベル、および酵素ラベルなどが挙げられる。
【００６８】
用語「ポリヌクレオチド（polynucleotide）」、「オリゴヌクレオチド（oligonucleotide）」および「核酸（nucleic acid）」は、交換可能に、任意の長さのヌクレオチドの重合した形態、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのどちらか、またはそれらのアナログ、一重鎖、二重鎖、または多重鎖の形態のどれか、を意味するように使用される。ポリヌクレオチドは、細胞に対し内因性または外因性であり得る。ポリヌクレオチドは、セルフリー環境に存在していてもよい。ポリヌクレオチドは、遺伝子またはそのフラグメントであってもよい。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡであってもよい。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡであってもよい。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造をもち得、および、公知のまたは公知ではない、任意の機能を果たし得る。ポリヌクレオチドは、一またはそれ以上のアナログ（例えば変化した骨格、糖、または塩基など）を含んでいてもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する改変は、ポリマーの会合の前または後に与えられ得る。アナログの非限定的ないくつかの例としては、５−ブロモウラシル、ペプチド核酸、異種核酸、モルフォリノ、架橋型核酸、グリコール核酸、トレオース核酸、ジデオキシヌクレオチド、コーディセピン、７−デアザ−ＧＴＰ、フルオロフォア（例えばローダミンまたはフルオレセイン結合糖など）、チオール含有ヌクレオチド、バイオチン結合ヌクレオチド、蛍光塩基アナログ、ＣｐＧアイランド、メチル−７−グアノシン、メチル化されたヌクレオチド、イノシン、チオウリジン、プソイドウリジン、ジヒドロウリジン、キューオシン、およびワイオシンなどが挙げられる。非限定なポリヌクレオチドの例としては、遺伝子または遺伝子フラグメントのコーディングまたは非コーディング領域、連鎖解析により規定される遺伝子座（loci、locus）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列をもつ単離されたＤＮＡ、任意の配列をもつ単離されたＲＮＡ、セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）およびセルフリーＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）などのセルフリーポリヌクレオチド、核酸プローブ、およびプライマーなどが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド化合物によって中断されていてもよい。
【００６９】
用語「発現（expression）」は、それによってポリヌクレオチドがＤＮＡテンプレートから（例えばｍＲＮＡまたはほかのＲＮＡ転写物に）転写される一またはそれ以上のプロセス、および／または、それによって転写されたｍＲＮＡが続いてペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質へと翻訳されるプロセスを意味する。転写物およびエンコードされたポリペプチドは、まとめて「遺伝子産物（gene product）」と称され得る。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡ由来である場合、発現は、真核細胞内でのｍＲＮＡのスプライシングを含み得る。発現に関して、「上方制御される（up-regulated）」とは、一般的に、野生型状態でのその発現レベルに対して、ポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡなど）および／またはポリペプチドの増大された発現レベルを意味し、一方、「下方制御される（down-regulated）」は、一般的に、野生型状態でのその発現レベルに対して、ポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡなどのＲＮＡなど）および／またはポリペプチドの低減された発現レベルを意味する。
【００７０】
本明細書中で使用される、発現または活性に関連する用語「制御（regulating）」は、発現または活性のレベルを変化させることを意味する。制御は、転写レベルおよび／または翻訳レベルで起こり得る。
【００７１】
用語「ペプチド（peptide）」、「ポリペプチド（polypeptide）」、および「タンパク質（protein）」は、ペプチド結合（複数のペプチド結合）によって結びつけられた少なくとも２つのアミノ酸慚愧のポリマーを意味するように本明細書において交換可能に使用される。この用語は、ポリマーの具体的な長さを暗示するものではなく、また、ペプチドが組換え技術、化学的もしくは酵素的合成を用いて作製されたかどうか、または自然起源であるかどうかを暗示するまたは区別することを意図するものでもない。用語は、自然起源のアミノ酸ポリマーに対して、同様に少なくとも一つの改変されたアミノ酸を含むアミノ酸ポリマーに対しても適用される。用語は、全長のタンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖、または二次構造および／または三次構造をもつ、またはもたないタンパク質（例えばドメインなど）を含む。用語はまた、例えばジスルフィド結合形成、糖鎖付加、脂質修飾、アセチル化、リン酸化、酸化、および、例えばラベル化成分との協約などの他の任意の操作によって改変されているアミノ酸ポリマーを含む。本明細書中で使用される、用語「アミノ酸（amino acid）」および「アミノ酸（amino acids）」は、一般的に、天然のまたは非天然のアミノ酸を意味し、例えばこれらに限定されるわけではないが、改変されたアミノ酸およびアミノ酸アナログなどを含む。改変されたアミノ酸は、天然のアミノ酸、および、アミノ酸に天然には存在しない基または化学的部位を含むように化学的に改変された非天然のアミノ酸を含み得る。アミノ酸アナログは、アミノ酸誘導体を意味し得る。用語「アミノ酸」は、Ｄ−アミノ酸およびＬ−アミノ酸の両方を含む。
【００７２】
ポリペプチドに関して本明細書中で使用される場合、用語「誘導体（derivative）」、「バリアント（variant）」および「フラグメント（fragment）」は、アミノ酸配列、構造（例えば二次および／または三次）、活性（例えば酵素活性）、および／または機能のどれかによって野生型ポリペプチドに関連するポリペプチドを意味する。ポリペプチドの誘導体、バリアントおよびフラグメントは、野生型ポリペプチドと比較して、一またはそれ以上の、差異（例えば変異、挿入、および欠失など）、トランケーション、修飾、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００７３】
本明細書中で使用される「融合（fusion）」は、一またはそれ以上の非天然配列（例えば部位など）を含むタンパク質および／または核酸を意味し得る。融合は、一またはそれ以上の同一の非天然配列を含んでいてもよい。融合は、一またはそれ以上の異なる非天然配列を含んでいてもよい。融合はキメラであり得る。融合は、核酸アフィニティータグを含み得る。融合はバーコードを含み得る。融合はペプチドアフィニティータグを含み得る。融合は、部位特異的なポリペプチドの細胞内局在（例えば、核を標的とする核移行シグナル（ＮＬＳ）、ミトコンドリアを標的とするミトコンドリア局在化シグナル、葉緑体を標的とする葉緑体局在化シグナル、小胞体（ＥＲ）保留シグナル、など）を提供する。融合は、追跡または精製に使用され得る非天然配列（例えばアフィニティータグなど）を提供し得る。融合は、バイオチン、または、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ（登録商標）色素、シアニン３色素、シアニン５色素などの色素などの低分子であり得る。
【００７４】
本明細書中で使用される「外因性Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体（exogenous T cell receptor (TCR) complex）」または「外因性ＴＣＲ複合体（exogenous TCR complex）」とのフレーズは、ＴＣＲの一またはそれ以上の鎖が、ＴＣＲを内因的に発現するかもしれないまたはしないかもしれない免疫細胞のゲノムに導入されているＴＣＲ複合体を意味する。いくつかの場合において、外因性ＴＣＲ複合体は、内因性ＴＣＲ複合体の一またはそれ以上の鎖が、例えば核酸レベルまたはアミノ酸レベルのどちらかで、一またはそれ以上の変異された配列を有するＴＣＲ複合体を意味し得る。免疫細胞での外因性ＴＣＲの発現は、エピトープまたは抗原（例えば、がん細胞または他の病因細胞または粒子の表面に優先的に存在しているエピトープまたは抗原など）に対する結合の特異性を与え得る。外因性ＴＣＲ複合体は、ゲノム中に導入されるＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β鎖、ＣＤ３−γ鎖、ＣＤ３−δ鎖、ＣＤ３−ζ鎖、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの場合において、ゲノム中に導入される鎖は、内因的に発生する鎖を置き換えてもよい。
【００７５】
用語「被験者（subject）」、「個体（individual）」および「患者（patient）」は、本明細書において、脊椎動物、好ましくは例えばヒトなどのほ乳類を意味するように使用される。ほ乳類としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、およびペットなどが挙げられる。組織、細胞、および、ｉｎ  ｖｉｖｏで得られたまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養された生物学的実体の子孫もまた含まれる。
【００７６】
本明細書中で使用される用語「処置（treatment）」および「処置すること（treating）」は、これらに限定されるわけではないが、治療的利益および／または予防的な利益を含む、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを意味する。例えば、処置は、本明細書中に開示されるシステムまたは細胞集団を投与することを含み得る。治療的な利益とは、処置下における、一またはそれ以上の疾患、健康状態、または症状における任意の治療に関連する改善または効果を意味する。予防的な利益のため、組成物は、特定の疾患、健康状態、または症状を発症する恐れのある被験者、または、疾患、健康状態、または症状がまだ健在化していないが疾患の一またはそれ以上の生理学的症状が報告されている被験者に投与され得る。
【００７７】
用語「効果的な量（effective amount）」または「治療的に有効な量（therapeutically effective amount）」は、例えば本開示のリンパ球（例えばＴリンパ球および／またはＮＫ細胞など）などの免疫細胞を含む組成物などの組成物の、それを必要とする被験者への投与に際し所望の活性を結果としてもたらすために十分な量である量を意味している。本開示の文脈内において、用語「治療的に有効（therapeutically effective）」は、徴候を遅延させる、憎悪を停止する、本開示の方法によって処置される疾患の少なくとも一つの症状を緩和するまたは軽減するために十分な量である組成物の量を意味している。
【００７８】
本明細書中で使用される用語「遺伝子プロファイル（genetic profile）」は、多様性および個体におけるまたはある種の組織における遺伝子発現を含む特定の遺伝子に関する情報を意味している。本明細書中で使用される用語「体細胞突然変異プロファイル（somatic mutation profile）」は、これらに限定されるわけではないが、例えば体細胞突然変異によってもたらされる特定の遺伝子などの体細胞突然変異に関連付けられる特定の遺伝子に関する情報を意味する。体細胞突然変異プロファイルは、ネオアンチゲン選択に使用され得る。
【００７９】
一態様において、本開示は、これらに限定されるわけではないが、例えばネオアンチゲンなどの腫瘍関連抗原に特異的に結合する、改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を提供する。改変されたＴＩＬは、キメラ刺激分子を含む。キメラ刺激分子は、ネオアンチゲンに結合するポリペプチド細胞外ドメイン（ＰＥＤ）を含む。ＰＥＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合し得る。ネオアンチゲンへのキメラ刺激分子の結合は、改変されたＴＩＬにおいて免疫細胞活性化シグナルをもたらし得る。いくつかの実施形態において、ＰＥＤは、改変されてないＴＩＬの表面タンパク質の細部外ドメインであり得る。いくつかの実施形態において、ＰＥＤの例として、抗体、ならびに、それらの誘導体、バリアントおよびフラグメントなどが挙げられる。
【００８０】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を提供し、ここで改変されたＴＩＬは、スイッチ分子を含む。スイッチ分子は、そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み得る。ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合し得る。スイッチ分子のリガンドへの結合は、改変された免疫細胞において、免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらし得る。
【００８１】
ＴＩＬは腫瘍から得られる任意の細胞であり得る。例えば、ＴＩＬは、腫瘍に遊走した細胞であってもよい。ＴＩＬは、腫瘍に湿潤した細胞であってもよい。いくつかの実施形態において、ＴＩＬは、被験体の血流から腫瘍へと遊走した白血球細胞である。ＴＩＬは、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。いくつかの場合において、改変されたＴＩＬは、ＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１およびＴｈ１７  ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはＭ１マクロファージを含む。ＴＩＬを含む免疫細胞集団は、細胞の混合集団であり得る。ＴＩＬの集団は、種々の表現型の細胞、分化の程度の異なる細胞、種々の細胞系譜を有する細胞、またはそれらの組み合わせを含み得る。ＴＩＬは、一般的に、細胞表面のマーカーを用いて生化学てきに、または、腫瘍に湿潤して処置に効果を及ぼすそれらの能力に応じて機能的に、のどちらかによって規定され得る。ＴＩＬは、一またはそれ以上の以下のバイオマーカーの発現をもとに分類され得る：ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲ  αβ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ−１、およびＴＩＭ−３。いくつかの実施形態において、改変されたＴＩＬは、ＰＤ−１、ＣＤ１３７、およびＴＩＭ−３のうちの少なくとも一つを発現する。いくつかの場合において、ＴＩＬは、患者への再導入に際して固形腫瘍に湿潤するその能力によって機能的に規定され得る。いくつかの場合において、改変されたＴＩＬは、患者の組織サンプルから得られたＴＩＬを意味する「初代ＴＩＬ（primary TIL）」を含む。いくつかの場合において、改変されたＴＩＬは、増やされたまたは増殖されたＴＩＬを意味する、「二次ＴＩＬ（secondary TILs）」を含む。ＴＩＬは、ネオアンチゲンへの特異的な結合を示し得る。いくつかの場合において、ＴＩＬのＴＣＲ複合体は、抗原結合特異性（例えばネオアンチゲン結合）を与える。
【００８２】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変されたＴ細胞を提供し、ここで、改変されたＴ細胞は、スイッチ分子を含む。スイッチ分子は、そのリガンドへの結合時に改変されていないＴ細胞中で免疫細胞活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み得る。ＥＣＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合していてもよい。スイッチ分子のリガンドへの結合は、改変された免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらし得る。
【００８３】
改変されたＴ細胞は、ネオアンチゲンに対して特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含み得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、内在性ＴＣＲ複合体である。いくつかの実施形態において、ＴＣＲ複合体は、外因性ＴＣＲ複合体である。改変された免疫細胞の例えば内在性または外因性のＴＣＲ複合体は、免疫細胞の抗原結合特異性（例えばネオアンチゲン結合）を与え得る。いくつかの実施形態において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する内因性ＴＣＲ複合体を含む改変されたＴ細胞を提供し、該改変されたＴ細胞は、キメラ刺激分子を含み、ここで、該キメラ刺激分子は、これに限定されるわけではないが、腫瘍細胞などを含む細胞の膜タンパク質に結合するポリペプチド細胞外ドメイン（ＰＥＤ）を含み、ここで、ＰＥＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、該キメラ刺激分子の該膜タンパク質への結合は、該改変されたＴ細胞において該免疫細胞活性化シグナルをもたらす。
【００８４】
本明細書中において提供される例えば改変されたＴ細胞または改変されたＴＩＬなどの改変された免疫細胞の、ネオアンチゲンへの結合は、免疫細胞を活性化し得る。改変された細胞のスイッチ分子は、例えばこれらに限定されるわけではないが免疫細胞活性化および増殖などの免疫細胞活性のさらなる制御を提供するために使用され得る。例えば改変されたＴ細胞または改変されたＴＩＬなどの改変された免疫細胞におけるスイッチ分子のリガンドへの結合は、改変された免疫細胞中で免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらし得る。免疫細胞不活性化シグナルの代わりに改変された免疫細胞中で免疫細胞活性化シグナルを誘発することは、免疫細胞中の免疫抑制効果を最小化し得る。免疫細胞中で免疫抑制効果を最小化することは、免疫応答における免疫細胞の効果を、例えば標的細胞、例えば腫瘍細胞などに対する免疫細胞毒性を増大させることによって、増加させ得る。
【００８５】
スイッチ分子は、そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含み得る。タンパク質は、シグナリングレセプターまたはその任意の機能的フラグメント、誘導体、またはバリアントであり得る。いくつかの場合において、シグナリングレセプターは、膜結合レセプターであり得る。シグナリングレセプターは、リガンドの結合に応答して、細胞中で一またはそれ以上のシグナリング経路を誘導し得る。いくつかの場合において、シグナリングレセプターは、非膜結合レセプターであり得る。スイッチ分子は、Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）；インテグリンレセプター；カドヘリンレセプター；触媒的レセプター（例えばキナーゼなど）；デスレセプター；チェックポイントレセプター；サイトカインレセプター；ケモカインレセプター；成長因子レセプター；ホルモンレセプター；および免疫レセプターから選択されるレセプターの例えば細胞外ドメインなどのフラグメントを含み得る。
【００８６】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、免疫システムの制御に関与し得る、免疫チェックポイントレセプターのフラグメントを含む。このようなレセプターの非限定的な例としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、Ｔ細胞の補助刺激受容体４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３（ＴＩＭ−３）、およびＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫レセプター（ＴＩＧＩＴ）などが挙げられる。
【００８７】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、少なくとも、標的細胞のネオアンチゲン（例えばがん細胞抗原または腫瘍抗原）を認識することに関与し得るＴＣＲの細胞外フラグメントを含む。いくつかの例において、スイッチ分子は、ＴＣＲ  αおよび／またはβ鎖の細胞外可変領域を含み得る。
【００８８】
免疫チェックポイントレセプター、または、その任意の誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含むスイッチ分子は、任意の適切な免疫チェックポイントレセプターリガンドまたはその誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む抗原に結合することができる。そのようなリガンドの非限定的な例としては、例えば、これらに限定されるわけではないが、Ｂ７−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ  （Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  Ｅｎｔｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ）、ＡＰ２Ｍ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＳＨＰ−２、ＰＰＰ２Ｒ５Ａ、ＭＨＣ（例えばクラス  Ｉ、クラス  II）、ＰＤ−Ｌ１、およびＰＤ−Ｌ２などが挙げられる。
【００８９】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、サイトカインレセプターのフラグメントを含む。サイトカインレセプターは、様々な機能を果たし得るが、非限定的な例としては例えば、免疫細胞調節および炎症媒介などが挙げられる。いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、サイトカインレセプター、例えばタイプＩサイトカインレセプターまたはタイプIIサイトカインレセプター、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、インターロイキンレセプター（例えば、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−９Ｒ、ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−２７Ｒ、ａｎｄ  ＩＬ−３１Ｒ）、コロニー刺激因子レセプター（例えばエリスロポエチン受容体、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＳＦ−２Ｒ、ＧＭ−ＣＳＦＲ、およびＧ−ＣＳＦＲ）、ホルモンレセプター／神経ペプチドレセプター（例えば成長ホルモンレセプター、タンパク質レセプター、およびレプチンレセプター）、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントなどを含む。いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、タイプIIサイトカインレセプター、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、インターフェロンレセプター（例えばおよびＩＦＮＧＲ）、インターロイキンレセプター（例えばＩＬ−１０Ｒ、ＩＬ−２０Ｒ、ＩＬ−２２Ｒ、およびＩＬ−２８Ｒ）、組織因子レセプター（血小板組織因子とも称される）、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。
【００９０】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のような触媒的レセプターの細胞外領域（例えばリガンド結合ドメインなど）、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを少なくとも含む。いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、クラスＩ  ＲＴＫ（例えば、ＥＧＦＲを含む上皮増殖因子（ＥＧＦ）レセプターファミリー；ＥｒｂＢ−２、ＥｒｂＢ−３、ａｎｄ  ＥｒｂＢ−４を含むＥｒｂＢファミリー）、クラスII  ＲＴＫ（例えば、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ａｎｄ  ＩＲＲを含むインシュリンレセプターファミリー、クラスIII  ＲＴＫ（例えば、ＤＧＦＲ−α、ＰＤＧＦＲ−β、ＣＳＦ−１Ｒ、ＫＩＴ／ＳＣＦＲ、およびＦＬＫ２／ＦＬＴ３を含む血小板由来因子（ＰＤＧＦ）レセプターファミリー、クラスIV  ＲＴＫ（例えば、ＦＧＦＲ−１、ＦＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−３、およびＦＧＦＲ−４を含む線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）レセプターファミリー）、クラスＶ  ＲＴＫ（例えば、を含むＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、およびＶＥＧＦＲ３を含む血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）レセプターファミリー）、クラスVI  ＲＴＫ（例えば、肝細胞増殖因子レセプター（ＨＧＦＲ／ＭＥＴ）およびＲＯＮを含む肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）レセプターファミリー）、クラスＶＩＩ  ＲＴＫ（例えば、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、およびＴＲＫＣを含むトロポミオシンレセプターキナーゼ（Ｔｒｋ）レセプターファミリー）、クラスVIII  ＲＴＫ（例えば、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、およびＥＰＨＢ６を含むエフリン（Ｅｐｈ）レセプターファミリー）、クラスIX  ＲＴＫ（例えば、ＡＸＬ、ＭＥＲ、およびＴＲＹＯ３などのＡＸＬレセプターファミリー）、クラスＸ ＲＴＫ（例えば、ＴＫおよびＡＬＫなどのＬＴＫレセプターファミリー）、クラスXI  ＲＴＫ（例えば、ＴＩＥおよびＴＥＫなどのＴＩＥレセプターファミリー）、クラスXII  ＲＴＫ（例えば、ＲＯＲレセプターファミリー  ＲＯＲ１およびＲＯＲ２）、クラスXIII  ＲＴＫ（例えば、ＤＤＲ１およびＤＤＲ２などのジスコイジンドメインレセプター（ＤＤＲ）ファミリー）、クラスXIV  ＲＴＫ（例えば、ＲＥＴなどのＲＥＴレセプターファミリー）、クラスXV  ＲＴＫ（例えば、ＰＴＫ７を含むＫＬＧレセプターファミリー）、クラスXVI  ＲＴＫ（例えば、Ｒｙｋを含むＲＹＫレセプターファミリー）、クラスXVII  ＲＴＫ（例えば、ＭｕＳＫなどのＭｕＳＫレセプターファミリー）、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。
【００９１】
ＲＴＫ、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含むスイッチ分子は、任意の適切なＲＴＫリガンド、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む抗原に結合し得る。ＲＴＫリガンドの非限定的な例としては、成長因子、サイトカイン、およびホルモンなどが挙げられる。成長因子は、例えば、上皮増殖因子ファミリーのメンバー（例えば、上皮増殖因子またはＥＧＦ、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子またはＨＢ−ＥＧＦ、トランスフォーミング増殖因子αまたはＴＧＦ−α、アンフィレグリンまたはＡＲ、エピレギュリンまたはＥＰＲ、エピジェン、ベータセルリンまたはＢＴＣ、ニューレグリン−１またはＮＲＧ１、ニューレグリン−２またはＮＲＧ２、ニューレグリン−３またはＮＲＧ３、およびニューレグリン−４またはＮＲＧ４）、線維芽細胞増殖因子（例えば、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１５／１９、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、およびＦＧＦ２３）、血管内皮増殖因子ファミリー（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、およびＰＩＧＦ）、および血小板由来増殖因子ファミリー（例えば、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＣ、およびＰＤＧＦＤ）を含む。ホルモンは、例えば、インシュリン／ＩＧＦ／リラキシンファミリーのメンバー（例えば、インシュリン、インシュリン様成長因子、リラキシン１、リラキシン２、リラキシン３を含むリラキシンファミリーペプチド、ライディッヒ細胞特異的インシュリン様ペプチド（遺伝子ＩＮＳＬ３）、初期胎盤インシュリン様ペプチド（ＥＬＩＰ）（遺伝子ＩＮＳＬ４）、インシュリン様ペプチド５（遺伝子ＩＮＳＬ５）、およびインシュリン様ペプチド６）を含む。
【００９２】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子は、受容体型スレオニン／セリンキナーゼ（ＲＴＳＫ）のような触媒的レセプターの細胞外領域（例えばリガンド結合ドメインなど）、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを少なくとも含む。スイッチ分子は、タイプＩ  ＲＴＳＫ、タイプII  ＲＴＳＫ、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含み得る。スイッチ分子は、ＡＬＫ１（ＡＣＶＲＬ１）、ＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１Ａ）、ＡＬＫ３（ＢＭＰＲ１Ａ）、ＡＬＫ４（ＡＣＶＲ１Ｂ）、ＡＬＫ５（ＴＧＦβＲ１）、ＡＬＫ６（ＢＭＰＲ１Ｂ）、およびＡＬＫ７（ＡＣＶＲ１Ｃ）からなる群より選択されるタイプＩレセプター、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。スイッチ分子は、ＴＧＦβＲ２、ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、およびＡＭＨＲ２（ＡＭＨＲ）からなる群より選択されるタイプIIレセプター、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。
【００９３】
ＲＴＳＫ、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントスイッチ分子は、任意の適切なＲＴＳＫリガンド、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む抗原に結合し得る。
【００９４】
スイッチ分子は、免疫細胞活性化シグナルを誘発する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を含み得る。共刺激分子は、リガンドに結合してもよい。いくつかの場合において、共刺激分子は、リガンド応答性タンパク質によって活性化され得る。いくつかの実施形態において、共刺激分子は、免疫細胞において、増殖シグナルおよび／または生存シグナルを調節するように作動され得る。いくつかの実施形態において、ＩＣＤは、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスIIタンパク質、ＴＮＦレセプタータンパク質、イムノグロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、ＢＴＬＡ、またはトールリガンドレセプターから選択される共刺激分子の細胞内ドメインである。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１  （ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、ＩＲ−１２Ｒ、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０  （ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬ���ＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含む。
【００９５】
共刺激分子のＥＣＤおよびＩＣＤは、膜貫通ドメインによって、例えば、膜貫通セグメントによって結合されていてもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通セグメントは、ポリペプチドを含む。膜貫通ポリペプチドは、任意の適切なポリペプチド配列を有し得る。いくつかの場合において、膜貫通ポリペプチドは、内因性または野生型膜貫通タンパク質の膜貫通部位のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ポリペプチドは、内因性または野生型膜貫通タンパク質の膜貫通部位と比較して、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはそれ以上）のアミノ酸置換、欠失、および挿入を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ポリペプチドは、例えばポリペプチドリンカーの配列などの、非天然のポリペプチド配列を含む。ポリペプチドリンカーは、可動性であってもよく、また硬性であってもよい。ポリペプチドリンカーは、構造化されていてもよく、また構造化されていなくてもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通ポリペプチドは、ＥＣＤからＩＣＤへのシグナル、例えばリガンド結合を示すシグナルなどを伝達する。
【００９６】
リガンドのスイッチ分子への結合は、改変された免疫細胞において免疫細胞活性化シグナルをもたらし得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性化シグナルは、活性化因子によって媒介される。活性化因子は、免疫調節性の分子であってもよい。活性化因子は、Ｔ細胞または他の免疫細胞を、それらの活性を調節するために結合、活性化、または刺激し得る。いくつかの実施形態において、活性化因子は、免疫細胞から分泌され得る。活性化因子は、例えば、可溶性サイトカイン、可溶性ケモカイン、または成長因子分子であり得る。免疫細胞活性化を媒介し得る活性化因子の非限定的な例としては、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）などの可溶性サイトカイン、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントが挙げられる。
【００９７】
免疫細胞活性化シグナルは、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）のクローン増殖、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）によるサイトカイン放出、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）の細胞毒性、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）の増殖、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）の分化、脱分化、または分化転換、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）の移動および／または輸送、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）の疲弊および／または再活性化、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）による他の細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含むまたはそれをもたらし得る。
【００９８】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞のクローン増殖を含む、または結果として生じる。クローン増殖は、免疫細胞から生じる娘細胞の生成を含む。クローン増殖から得られる娘細胞は、スイッチ分子を含んでいてもよい。改変された免疫細胞のクローン増殖は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞のものよりも大きいものであり得る。改変された免疫細胞のクローン増殖は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞の、約５倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約３０倍、約３０倍〜約４０倍、約４０倍〜約５０倍、約５０倍〜約６０倍、約６０倍〜約７０倍、約７０倍〜約８０倍、約８０倍〜約９０倍、約９０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約３００倍、約３００倍〜４００倍、約４００倍〜約５００倍、約５００倍〜約６００倍、約６００倍〜約７００倍であり得る。いくつかの実施形態において、クローン増殖の測定は、例えば、スイッチ分子を含むおよび含まない、ならびに、スイッチ分子へのリガンド結合の後に、免疫細胞の数を定量することを含み得る。免疫細胞の数の定量化は、様々な手法によって行われ得、例えばその非限定的な例としては、フローサイトメトリー、トリパンブルー色素排除試験法、および血球算定法などが挙げられる。
【００９９】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞によるサイトカイン放出を含む、または結果として生じる。いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、細胞間分子、代謝物、化合物、またはそれらの組み合わせの放出を含むまたはそれを結果として生じる。改変された免疫細胞によるサイトカイン放出は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＦＮγ、ＴＮＦアルファ、ＣＳＦ、ＴＧＦβ、グランザイムなどの放出を含み得る。いくつかの実施形態において、サイトカイン放出は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ウェスタンブロットなどを用いて定量化されてもよい。改変された免疫細胞によるサイトカイン放出は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞のものよりも多いものであり得る。本明細書おいて提供される改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または、３００倍以上多いサイトカイン放出を生じ得る。改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞（例えば改変されていない）と比較して、スイッチ分子がリガンドへと結合し、そして、改変された免疫細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する際に、増加されたサイトカイン分泌を示し得る。いくつかの実施形態において、分泌されたサイトカインは、ＩＦＮγまたはＩＬ−２である。いくつかの実施形態において、サイトカイン放出は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで定量化され得る。
【０１００】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性の細胞毒性を含む、または結果として生じる。いくつかの場合において、本明細書において提供される改変された免疫細胞の細胞毒性は、標的細胞を死滅させるために使用され得る。スイッチ分子を発現している免疫細胞または免疫細胞集団は、標的細胞に死を誘導し得る。標的細胞の死滅は、様々な応用に用いられ得、例えば、これらに限定されるわけではないが、細胞集団が除去されることが望ましい、または細胞の増殖が抑制されることが望ましい疾患または障害を処置することなどに用いられ得る。細胞毒性はまた、細胞障害性のサイトカイン、例えばＩＦＮγまたはグランザイムなどの免疫細胞による放出を意味し得る。いくつかの場合において、本明細書において提供される改変された免疫細胞は、変化された（ｉ）例えばパーフォリン、グランザイム、およびグラニュライシンなどの細胞毒の放出、および／または（ii）Ｔ細胞と標的細胞とのあいだのＦａｓ−Ｆａｓリガンド相互作用を介したアポトーシスの誘導、を有していてもよい。いくつかの実施形態において、細胞毒性は、共培養アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴ、クロム放出細胞特性アッセイなどを含む細胞毒性アッセイによって定量化され得る。本明細書において提供される改変された免疫細胞の毒性は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞のものよりも高いものであり得る。改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない（例えば改変されていない）免疫細胞と比較して、スイッチ分子がリガンドへと結合し、そして、改変された免疫細胞が標的細胞上に存在するネオアンチゲンに結合する際に、標的細胞に対する増大された細胞毒性を示し得る。本開示の改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して、標的細胞に対して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％以上、細胞障害性であり得る。本開示の改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞より、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％多い標的細胞の死を誘導し得る。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される免疫細胞は、それらの表面に標的エピトープ（例えばネオアンチゲンなど）を提示している標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。いくつかの実施形態において、細胞毒性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで測定され得る。いくつかの実施形態において、細胞毒性の測定は、本明細書において提供される改変された免疫細胞の投与後の疾患のレベルを投与前の疾患のレベルと比較して測定することを含み得る。いくつかの実施形態において、細胞毒性の測定は、本明細書において提供される改変された免疫細胞の投与後の疾患のレベルおよびスイッチ分子をもたない同等の免疫細胞の投与後の疾患のレベルを測定することを含み得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞の増殖を含む、または結果として生じる。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の増大を意味していてもよい。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の表現型の変化を意味していてもよい。本開示の改変された免疫細胞の増殖は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞のものよりも増加され得る。本開示の改変された免疫細胞の増殖は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞の増殖より、約５倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約３０倍、約３０倍〜約４０倍、約４０倍〜約５０倍、約５０倍〜約６０倍、約６０倍〜約７０倍、約７０倍〜約８０倍、約８０倍〜約９０倍、約９０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約３００倍、約３００倍〜４００倍、約４００倍〜約５００倍、約５００倍〜約６００倍、約６００倍〜約７００倍であり得る。いくつかの実施形態において、増殖は、免疫細胞の数を定量することによって測定され得る。免疫細胞の数の定量化することは、フローサイトメトリー、トリパンブルー色素排除試験法、および血球算定法を含み得る。増殖はまた、免疫細胞の表現型分析によって決定されてもよい。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、免疫細胞の活性は、免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換を含む、または結果として生じる。免疫細胞の分化、脱分化、または分化転換は、フローサイトメトリーによって、細胞表面上の分化、脱分化、または分化転換のマーカーの表現型発現を評価することによって決定され得る。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して亢進された分化能力を有している。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して亢進された脱分化能力を有している。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変された免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較してより高い分化転換能力を有している。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、免疫細胞の活性は、免疫細胞の移動および／または輸送を含む、または結果として生じる。いくつかの実施形態において、移動は、免疫細胞の標的サイトへの局在化を定量化することによって決定され得る。例えば、本明細書において提供される改変された免疫細胞は、投与後に標的サイトで、例えば、標的サイトではないサイトで定量化され得る。定量化は、病変を隔離することによって、およびスイッチ分子を含む免疫細胞、例えば腫瘍浸潤リンパ球などの数を定量することによって行われ得る。スイッチ分子を含む免疫細胞の移動および／または輸送は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞のそれよりも多い。いくつかの実施形態において、標的サイト、例えば病変領域などにおけるスイッチ分子を含む免疫細胞の数は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞の数×約５、×１０、×１５、×２０、×２５、×３０、×３５、または×４０であり得る。輸送もまた、トランスウェル移行アッセイを利用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定され得る。いくつかの実施形態において、例えばトランスウェル移行アッセイにおいて標的サイトにおけるスイッチ分子を含む免疫細胞の数は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞の数×約５、×１０、×１５、×２０、×２５、×３０、×３５、または×４０であり得る。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、免疫細胞活性は、免疫細胞の疲弊および／または再活性化を含む、または結果として生じる。免疫細胞の疲弊および／または再活性化は、フローサイトメトリーまたは顕微鏡的分析による表現型分析によって測定され得る。例えば、疲弊のマーカー、例えばプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、２Ｂ４、ＣＤ１６０、Ｔｉｍ３、およびイムノグロブリンおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫レセプター（ＴＩＧＩＴ）などの発現レベルは、定量的および／または定性的に測定され得る。いくつかの場合において、例えばＴ細胞などの免疫細胞は、階層的な様式でエフェクター機能を失い、疲弊状態となり得る。疲弊の結果として、例えばＩＬ−２産生およびサイトカイン発現など、および高い増殖能などの機能が失われ得る。疲弊はまた、ＩＦＮγ、ＴＮＦおよびケモカインの産生ならびに脱顆粒の欠損を伴い得る。本明細書において提供される改変された免疫細胞の疲弊または活性化は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞よりも大きい。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して、疲弊または活性化において、少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または、３００倍以上の増加を起こす。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される免疫細胞は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して、疲弊または活性化において、少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、または、３００倍以上の減少を起こす。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、スイッチ分子のリガンドへの結合によって、改変された免疫細胞（例えば改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞など）は、スイッチ分子をもたない同等の免疫細胞と比較して増強されたネオアンチゲン結合を示す。
【０１０６】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに対する特異的な結合を示すキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）およびＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体を含む改変された免疫細胞を提供する。ＣＡＲは、Ｂ細胞表面タンパク質を結合させることのできる抗原相互作用ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナルドメインを含み得る。
【０１０７】
ネオアンチゲンに対する特異的な結合を示すＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体は、内因性ＴＣＲ複合体または外因性ＴＣＲ複合体であり得る。改変された免疫細胞の例えば内因性または外因性などであるＴＣＲ複合体は、免疫細胞の抗原結合特異性（例えばネオアンチゲン結合）を与える。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。ＴＩＬは、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞であり得る。いくつかの場合において、ＴＩＬは、ＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１およびＴｈ１７  ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはＭ１マクロファージを含む。いくつかの実施形態において、ＴＩＬは、ＰＤ−１、ＣＤ１３７、およびＴＩＭ−３のうちの少なくとも一つを発現し得る。いくつかの場合において、改変されたＴＩＬは、増やされたまたは増殖されたＴＩＬを意味する、「二次ＴＩＬ」を含む。
【０１０９】
ＣＡＲは、Ｂ細胞表面タンパク質を結合させることのできる抗原相互作用ドメインを含む。Ｂ細胞表面タンパク質は、Ｂ細胞の表面上に見出され得る任意のタンパク質であってよい。非限定的な例としては、ＣＤ１ｄ、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ９３、ＣＤ９５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１８５、ＣＤ２７０、ＣＤ２８４、およびＣＤ３６０などが挙げられる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗原相互作用ドメインは、表面タンパク質への結合が宿主の健康全般または免疫システムに顕著に危うくさせない限り、非Ｂ細胞上の表面タンパク質を結合させることができる。いくつかの実施形態において、表面タンパク質は、免疫細胞上の表面タンパク質である。いくつかの実施形態において、免疫細胞以外の細胞上の表面タンパク質である。いくつかの実施形態において、表面タンパク質は、その表面タンパク質への結合が宿主の健康全般または免疫システムに顕著に危うくさせないという条件で、ＣＤ３１、ＣＤ３２、Ａ、Ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６１、ＣＤ６２（Ｅ、Ｌ、Ｐ）、ＣＤ６３、ＣＤ６４（Ａ、Ｂ、Ｃ）、ＣＤ６６  （ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７８、ＣＤ７９  （ａ、ｂ）、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５（ａ、ｄ、ｅ、ｈ、ｊ、ｋ）、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１（ａ−ｃ）、１Ａ、１Ｄ、１Ｅ、ＣＤ２、ＣＤ３（γ、δ、ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ａ、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１  （ａ、ｂ、ｃ、ｄ）、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、Ａ、Ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７  （ａ、ｂ）、ＣＤ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１０、ＣＤ１１１、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０  （ａ、ｂ）、ＣＤ１２１  （ａ、ｂ）、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１９１、ＣＤ１９２、ＣＤ１９３、ＣＤ１９４、ＣＤ１９５、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤｗ１９８、ＣＤｗ１９９、ＣＤ２００、ＣＤ２０１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２０４、ＣＤ２０５、ＣＤ２０６、ＣＤ２０７、ＣＤ２０８、ＣＤ２０９、ＣＤｗ２１０（ａ、ｂ）、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ（１、２）、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８、（ａ、ｂ）、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２２、ＣＤ２２３、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２８、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３３、ＣＤ２３４、ＣＤ２３５（ａ、ｂ）、ＣＤ２３６、ＣＤ２３８、ＣＤ２３９、ＣＤ２４０ＣＥ、ＣＤ２４０Ｄ、ＣＤ２４１、ＣＤ２４３、ＣＤ２４４、ＣＤ２４６、ＣＤ２４７、ＣＤ２４８、ＣＤ２４９、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５４、ＣＤ２５６、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６５、ＣＤ２６６、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７１、ＣＤ２７２、ＣＤ２７３、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７６、ＣＤ２７８、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ２８２、ＣＤ２８３、ＣＤ２８４、ＣＤ２８６、ＣＤ２８８、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９２、ＣＤｗ２９３、ＣＤ２９４、ＣＤ２９５、ＣＤ２９７、ＣＤ２９８、ＣＤ２９９、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３０１、ＣＤ３０２、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７、ＣＤ３０９、ＣＤ３１２、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１８、ＣＤ３２０、ＣＤ３２１、ＣＤ３２２、ＣＤ３２４、ＣＤ３２５、ＣＤ３２６、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤ３３５、ＣＤ３３６、ＣＤ３３７、ＣＤ３３８、ＣＤ３３９、ＣＤ３４０、ＣＤ３４４、ＣＤ３４９、ＣＤ３５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６  （ａ、ｂ、ｃ）、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８、（ａ、ｄ、ｅ、ｉ、ｋ）、ＣＤ１５９（ａ、ｃ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７  （ａ、ｂ）、ＣＤ１６８、ＣＤ１６９、ＣＤ１７０、ＣＤ１７１、ＣＤ１７２  （ａ、ｂ、ｇ）、ＣＤ１７４、ＣＤ１７７、ＣＤ１７８、ＣＤ１７９  （ａ、ｂ）、ＣＤ１８０、ＣＤ１８１、ＣＤ１８２、ＣＤ１８３、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、およびＣＤ１８６から選択されてもよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗原相互作用ドメインは、死Ｂ細胞上のＢ細胞表面タンパク質またはそのフラグメントを結合させることができ得る。Ｂ細胞アポトーシスは、免疫応答（例えば、腫瘍細胞に対する免疫応答など）の発生の前または後に起こり得る。したがって、死Ｂ細胞またはそのデブリは依然として、その表面上に提示されているＢ細胞表面タンパク質またはそのフラグメントを有し得る。生きたおよび死Ｂ細胞の両方を標的とするＣＡＲの能力は、ＣＡＲを含む免疫細胞の、（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質への結合および（ｉ）細胞内シグナルドメインのシグナル伝達の開始の機会を増大させ得る。いくつかの場合において、細胞内シグナルドメインのシグナル伝達は、ＣＡＲを含む免疫細胞の増大（増殖）を促進し得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲの抗原相互作用ドメインは、粒子（例えばナノ粒子）の表面に（例えば共役結合を介しておよび／または非共役結合を介して）結合しているＢ細胞表面タンパク質またはそのフラグメントを結合させることができ得る。粒子は、有機および／または無機の材料を含む任意の粒子状材料であり得る。粒子は、少なくとも一つの寸法において、約１ナノメートル（ｎｍ）〜約５０マイクロメートル（μｍ）であり得る。粒子は、少なくとも一つの寸法において、少なくとも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、５００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、５０μｍ、またはそれ以上であり得る。粒子は、少なくとも一つの寸法において、最大でも５０μｍ、１０μｍ、５μｍ、１μｍ、５００ｎｍ、１００ｎｍ、５０ｎｍ、１０ｎｍ、５ｎｍ、１ｎｍ、またはそれ以下であり得る。粒子は、例えば、ナノ粒子、マイクロ粒子、ナノ球体、マイクロ球体、ナノロッド、マイクロロッド、ナノファイバー、ナノリボンなどであってもよい。粒子の例としては、例えば、金属ナノ粒子（例えば、金ナノ粒子、銀ナノ粒子、および鉄ナノ粒子など）、金属間化合物ナノ半導体ナノ粒子、コアシェルナノ粒子、無機コアおよびポリマーシェルを有する粒子、有機コアおよびポリマーシェルを有する粒子、またはそれらの混合物が挙げられる。代替的には、粒子は、例えば、架橋したポリマー、ハイドロゲルポリマー、生分解性ポリマー、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、コポリマー、多糖、スターチ、セルロース、キトサン、ポリヒドロキシアルカン酸（ＰＨＡ）、ＰＨＢ、ＰＨＶ、脂質、ペプチド、ペプチド両親媒質、ポリペプチド（例えばタンパク質など）、またはそれらの組み合わせであり得る。その表面にＢ細胞表面タンパク質を提示している粒子は、Ｂ細胞表面タンパク質に結合するＣＡＲを含む免疫細胞へとｉｎ  ｖｉｔｒｏで導入されてもよい。代替的には、または、追加で、Ｂ細胞表面タンパク質を提示している粒子は、ＣＡＲを含む免疫細胞と共にｉｎ  ｖｉｖｏで（例えば局在的な注入または全身注入によって）導入されてもよい。このような粒子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、ＣＡＲを含む免疫細胞の集団を増大させるために使用され得る。
【０１１２】
抗原結合ドメインは、抗原、例えばＢ細胞表面タンパク質などに結合することのできる任意のタンパク質または分子を含み得る。抗原結合ドメインの非限定的な例としては、これらに限定されるわけではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、またはそれらの機能的誘導体、バリアント、またはフラグメント、が挙げられ、これらは限定されるわけではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、二重特異性抗体、およびシングルドメイン抗体、例えばラクダ由来ナノボディの重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、および可変領域（ＶＨＨ）などが挙げられる。いくつかの実施形態において、第一の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖの少なくとも一つを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、抗体模倣物を含む。抗体摸倣物は、抗体と同等の親和性で標的分子に結合することのできる分子を意味し、例えば、一本鎖結合性分子、シトクローム  ｂ５６２ベースの結合性分子、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン様タンパク質骨格（例えばアドネクチンなど）、リポカイン骨格、カリックスアレーン骨格、Ａ−ドメインおよび他の骨格などが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、膜貫通レセプター、または任意のその誘導体、バリアント、またはフラグメントを含む。例えば、抗原結合ドメインは、膜貫通レセプターのリガンド結合ドメインを少なくとも含み得る。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み得る。ｓｃＦＶは、可変領域の配列が公知である抗体由来であり得る。いくつかの実施形態において、ｓｃＦＶは、入手可能なマウスハイブリドーマから入手される抗体配列由来であり得る。ｓｃＦＶは、腫瘍細胞または初代細胞の全エクソームシーケンスから得られてもよい。いくつかの実施形態において、ｓｃＦＶは、変異され得、それによってｓｃＦＶは、その標的へのより高い親和性を有し得る。いくつかの場合において、その標的へのｓｃＦＶの親和性は、正常組織において低いレベルで発現されている標的に最適化され得る。この最適化は、例えば高サイトカイン血症などの潜在的な毒性を最小化するように行われ得る。他の場合において、細胞膜結合性の形態の標的のためのより高い親和性を有するｓｃＦＶのクローニングは、可溶性の形態であるその対応物よりも好ましいかもしれない。この改変は、いくつかの標的がまた、種々のレベルで可溶性の形態で検出され得、およびそれらの標的化が、例えば高サイトカイン血症などの意図しない毒性を引き起こし得る場合に、行われ得る。
【０１１４】
対象のシステムのＣＡＲの抗原結合ドメインは、細胞膜貫通ドメインを介して細胞内シグナリングドメインに結合され得る。細胞膜貫通ドメインは膜貫通セグメントであってもよい。対象のＣＡＲの膜貫通ドメインは、細胞、例えば免疫細胞の細胞膜へとＣＡＲを固定し得る。いくつかの実施形態において、膜貫通セグメントは、ポリペプチドを含む。ＣＡＲの抗原結合ドメインおよび細胞内シグナルドメインを結合している膜貫通ポリペプチドは、任意の適切なポリペプチド配列を有し得る。いくつかの場合において、膜貫通ポリペプチドは、内因性または野生型の細胞膜貫通タンパク質の膜貫通部位のポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、細胞膜貫通ポリペプチドは、内因性または野生型膜貫通タンパク質の膜貫通タンパク質と比較して、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、またはそれ以上）のアミノ酸置換、欠失、および挿入を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ポリペプチドは、例えばポリペプチドリンカーの配列などの、非天然のポリペプチド配列を含む。ポリペプチドリンカーは、可動性であってもよく、また硬性であってもよい。ポリペプチドリンカーは、構造化されていてもよく、また構造化されていなくてもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通ポリペプチドは、細胞の細胞外領域から細胞内領域へのシグナルを、例えば抗原結合ドメインを介して、伝達する。ＣＤ２８の天然の膜貫通部位がＣＡＲにおいて使用され得る。他の場合において、ＣＤ８  アルファの天然の膜貫通部位がＣＡＲにおいて使用され得る。
【０１１５】
本開示のＣＡＲは、免疫細胞シグナリングに関与するシグナリングドメイン、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含み得る。ＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、ＣＡＲを含む免疫細胞の活性を誘導し得る。細胞内シグナリングドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達し、そして、特定の機能を実行するように細胞に指示し得る。シグナリングドメインは、他の分子のシグナリングドメインを含んでいてもよい。いくつかの場合において、シグナリングドメインの切断された部位がＣＡＲにおいて使用される。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、免疫細胞シグナリングに関与される複数のシグナリングドメイン、またはそれらの誘導体、バリアント、もしくはフラグメントを含む。例えば、細胞内シグナリングドメインは、少なくとも２つの免疫細胞シグナリングドメイン、例えば、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個の免疫細胞シグナリングドメインなどを含む。免疫細胞シグナリングドメインは、刺激する方向で、または抑制する方向のいずれかで、ＴＣＲ複合体の初期活性化に関与し得る。細胞内シグナリングドメインは、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）複合体の細胞内シグナリングドメインであってもよい。対象のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、Ｆｃγレセプター（ＦｃγＲ）、Ｆｃεレセプター（ＦｃεＲ）、ＦＣαレセプター（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３  ζ、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとも称される）、ＣＤ２４７  ζ、ＣＤ２４７  η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ−κＢ、ＰＬＣ−γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、およびＺａｐ７０のシグナリングドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、シグナリングドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭを含んでいてもよい。ＩＴＡＭを含むシグナリングドメインは、６〜８個のアミノ酸で隔てられている、アミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの２つの繰り返しを含んでいてもよく、ここで、ｘは、独立して任意のアミノ酸であり、保存モチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６〜８）ＹｘｘＬ／Ｉを形成する。ＩＴＡＭ含むシグナリングドメインは、例えば抗原結合ドメインがエピトープへと結合したときにリン酸化反応によって、改変され得る。リン酸化されたＩＴＡＭは、他のタンパク質、例えば様々なシグナリング経路に関与するタンパク質などにとってのドッキングサイトとして機能し得る。いくつかの実施形態において、一次シグナリングドメインは、例えば、変異された、切断された、および／または、最適化されたＩＴＡＭドメインなどの改変されたＩＴＡＭドメインであって、天然のＩＴＡＭドメインと比較して変えられた（例えば増加されたまたは低減された）活性を有する改変されたＩＴＡＭドメインを含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、対象のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、ＦｃγＲシグナリングドメイン（例えばＩＴＡＭ）を含む。ＦｃγＲシグナリングドメインは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲIIＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲIIＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲIIIＡ（ＣＤ１６ａ）、およびＦｃγＲIIIＢ（ＣＤ１６ｂ）から選択されてもよい。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＦｃεＲシグナリングドメイン（例えばＩＴＡＭ）を含む。ＦｃεＲシグナリングドメインは、ＦｃεＲＩおよびＦｃεＲII（ＣＤ２３）から選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＦｃαＲシグナリングドメイン（例えばＩＴＡＭ）を含む。ＦｃαＲシグナリングドメインは、ＦｃεＲＩ（ＣＤ８９）およびＦｃα／μＲから選択され得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３  ζシグナリングドメインを含む。いくつかの実施形態において、一次シグナリングドメインは、ＣＤ３  ζのＩＴＡＭを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、対象のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭを含む。ＩＴＩＭを含むシグナリングドメインは、免疫システムのいくつかの抑制性レセプターの細胞質側末端に見られる保存されたアミノ酸配列（Ｓ／Ｉ／Ｖ／ＬｘＹｘｘＩ／Ｖ／Ｌ）を含む。ＩＴＩＭを含む一次シグナリングドメインは、例えばＳｒｃキナーゼファミリーメンバー（例えばＬｃｋなど）などの酵素によって、例えばリン酸化など改変され得る。リン酸化に続いて、酵素などを含む他のタンパク質がＩＴＩＭに補充され得る。これらの他のタンパク質としては、これらに限定されるわけではないが、リン酸化チロシンホスファターゼ  ＳＨＰ−１およびＳＨＰ−２、ＳＨＩＰと称されるイノシトール一リン酸分解酵素、および一またはそれ以上のＳＨ２ドメイン（例えばＺＡＰ７０など）を有するタンパク質などの酵素が挙げられる。細胞内シグナリングドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ５、ＣＤ３１、ＣＤ６６ａ、ＣＤ７２、ＣＭＲＦ３５Ｈ、ＤＣＩＲ、ＥＰＯ−Ｒ、ＦｃγＲIIＢ  （ＣＤ３２）、Ｆｃレセプター様タンパク質  ２（ＦＣＲＬ２）、Ｆｃレセプター様タンパク質  ３（ＦＣＲＬ３）、Ｆｃレセプター様タンパク質４（ＦＣＲＬ４）、Ｆｃレセプター様タンパク質  ５（ＦＣＲＬ５）、Ｆｃレセプター様タンパク質  ６（ＦＣＲＬ６）、タンパク質  Ｇ６ｂ（Ｇ６Ｂ）、インターロイキン  ４  レセプター（ＩＬ４Ｒ）、イムノグロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連  １（ＩＲＴＡ１）、イムノグロブリンスーパーファミリーレセプタートランスロケーション関連  ２（ＩＲＴＡ２）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ２ＤＬ１（ＫＩＲ２ＤＬ１）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ２ＤＬ２（ＫＩＲ２ＤＬ２）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ２ＤＬ３（ＫＩＲ２ＤＬ３）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ２ＤＬ５（ＫＩＲ２ＤＬ５）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ３ＤＬ１（ＫＩＲ３ＤＬ１）、キラー細胞  イムノグロブリン様レセプター  ３ＤＬ２（ＫＩＲ３ＤＬ２）、白血球  イムノグロブリン様レセプタースーパーファミリー  Ｂ  メンバー  １（ＬＩＲ１）、白血球  イムノグロブリン様レセプタースーパーファミリー  Ｂ  メンバー  ２（ＬＩＲ２）、白血球  イムノグロブリン様レセプタースーパーファミリー  Ｂ  メンバー  ３（ＬＩＲ３）、白血球  イムノグロブリン様レセプタースーパーファミリー  Ｂ  メンバー  ５（ＬＩＲ５）、白血球  イムノグロブリン様レセプタースーパーファミリー  Ｂ  メンバー  ８（ＬＩＲ８）、白血球関連  イムノグロブリン様レセプター  １（ＬＡＩＲ−１）、マスト細胞機能関連抗原（ＭＡＦＡ）、ＮＫＧ２Ａ、天然の細胞毒性トリガーレセプター  ２（ＮＫｐ４４）、ＮＴＢ−Ａ、  プログラム細胞死タンパク質  １（ＰＤ−１）、ＰＩＬＲ、ＳＩＧＬＥＣＬ１、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン  ２（ＳＩＧＬＥＣ２またはＣＤ２２）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチンｎ  ３（ＳＩＧＬＥＣ３またはＣＤ３３）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン  ５（ＳＩＧＬＥＣ５またはＣＤ１７０）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン  ６（ＳＩＧＬＥＣ６）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン  ７（ＳＩＧＬＥＣ７）、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン  １０（ＳＩＧＬＥＣ１０）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン  １１（ＳＩＧＬＥＣ１１）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン  ４（ＳＩＧＬＥＣ４）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン  ８（ＳＩＧＬＥＣ８）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン  ９（ＳＩＧＬＥＣ９）、血小板および内皮細胞接着分子  １（ＰＥＣＡＭ−１）、シグナル制御タンパク質（ＳＩＲＰ  ２）、およびシグナル閾値制御膜貫通型アダプター  １（ＳＩＴ）のシグナリングドメイン（例えばＩＴＩＭ）を含み得る。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、例えば、変異された、切断された、および／または、最適化されたＩＴＡＭドメインなどの改変されたＩＴＡＭドメインであって、天然のＩＴＡＭドメインと比較して変えられた（例えば増加されたまたは低減された）活性を有する改変されたＩＴＡＭドメインを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、少なくとも２つのＩＴＡＭドメイン、（例えば、少なくとも３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個のＩＴＡＭドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、少なくとも２つのＩＴＩＭドメイン、（例えば、少なくとも３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個のＩＴＩＭドメイン）（例えば少なくとも２つの一次シグナリングドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、ＩＴＡＭドメインおよびＩＴＩＭをドメインの両方を含む。
【０１２０】
いくつかの場合において、対象のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、共刺激ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、例えば共刺激分子からの共刺激ドメインは、例えばＩＴＡＭおよび／またはＩＴＩＭドメインからのシグナリングなどの免疫細胞シグナリングのための、例えば免疫細胞活性の活性化および／または不活性化のための、共刺激シグナルを提供し得る。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、免疫細胞中で増殖および／または生存シグナルを調節するように作動可能である。いくつかの実施形態において、共刺激シグナリングドメインは、ＭＨＣクラス  Ｉタンパク質、ＭＨＣクラス  IIタンパク質、ＴＮＦレセプタータンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカインレセプター、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞レセプター、ＢＴＬＡ、またはトールリガンドレセプターのシグナリングドメインを含む。いくつかの実施形態において、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００  （ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０  （ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７  リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０  リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８  α、ＣＤ８  β、ＣＤ８２／Ｋａｉ−１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ−４、ＤＡＰ１２、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５、ＧＩＴＲ  リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、Ｉｋａｒｏｓ、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  α、インテグリン  α４／ＣＤ４９ｄ、インテグリン  α４β１、インテグリン  α４β７／ＬＰＡＭ−１、ＩＰＯ−３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ−３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９  （ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ���Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ  （ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ  （ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４  （ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６  （ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＶＬＡ１、およびＶＬＡ−６からなる群より選択される分子のシグナリングドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞内シグナリングドメインは、複数の共刺激ドメイン、例えば少なくとも２つの、例えば、少なくとも３つ、４つ、または５つの共刺激ドメインを含む。共刺激シグナリング領域は、一次エフェクター活性化シグナルと相乗的なシグナルを提供し得、および、Ｔ細胞の活性化のための要件を満たし得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲへの共刺激ドメインの付加は、本明細書において提供される免疫細胞の効果および持続性を増強し得る。
【０１２１】
ＣＡＲのＢ細胞表面タンパク質への結合は、ＣＡＲをもたない免疫細胞と比較して免疫細胞の増殖を増強し得る。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の増大を意味し得る。免疫細胞の増殖は、免疫細胞の表現型の変化を意味していてもよい。本明細書において提供されるＣＡＲを含む免疫細胞の増殖は、Ｂ細胞表面タンパク質への結合性を示すＣＡＲをもたない同等の免疫細胞のものよりも、増加され得る。ＣＡＲを含む免疫細胞の増殖は、ＣＡＲをもたない同等の免疫細胞の増殖より、約５倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約３０倍、約３０倍〜約４０倍、約４０倍〜約５０倍、約５０倍〜約６０倍、約６０倍〜約７０倍、約７０倍〜約８０倍、約８０倍〜約９０倍、約９０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約３００倍、約３００倍〜４００倍、約４００倍〜約５００倍、約５００倍〜約６００倍、約６００倍〜約７００倍増大されたもの得る。ＣＡＲを含む免疫細胞の増殖は、ＣＡＲをもたない同等の免疫細胞の増殖より、約５倍〜約１０倍、約１０倍〜約２０倍、約２０倍〜約３０倍、約３０倍〜約４０倍、約４０倍〜約５０倍、約５０倍〜約６０倍、約６０倍〜約７０倍、約７０倍〜約８０倍、約８０倍〜約９０倍、約９０倍〜約１００倍、約１００倍〜約２００倍、約２００倍〜約３００倍、約３００倍〜４００倍、約４００倍〜約５００倍、約５００倍〜約６００倍、約６００倍〜約７００倍増大されたもの得、そして、増殖は、Ｂ細胞のＢ細胞表面タンパク質への接触の後、少なくとも約１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、または９６時間確認される。増大された増殖は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのどちらかで確認され得る。いくつかの実施形態において、増殖は免疫細胞の数を定量化することを含む。免疫細胞の数の定量化することは、フローサイトメトリー、トリパンブルー色素排除試験法、および血球算定法を含み得る。増殖はまた、免疫細胞の表現型分析によって決定されてもよい。
【０１２２】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された免疫細胞を提供し、ここで、該改変された免疫細胞は、（ａ）ネオアンチゲンに結合するポリペプチド細胞外ドメイン（ＰＥＤ）を含むキメラ刺激分子、ここで、ＰＥＤは、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、該キメラ刺激分子のネオアンチゲンへの結合は、該改変された免疫細胞において該免疫細胞活性化シグナルをもたらすキメラ刺激分子、および、（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプターを含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＤの例としては、抗体、ならびに、それらの誘導体、バリアントおよびフラグメントを含む。
【０１２３】
一態様において、本開示は、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された免疫細胞を提供し、ここで、該改変された免疫細胞は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、該ＥＣＤが、免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、スイッチ分子のリガンドへの結合が、改変された免疫細胞において、免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、ならびに、（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメイン、を含むキメラ抗原レセプターを含む。
【０１２４】
一態様において、本開示は、ネオアンチゲンに特異的に結合する改変された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を提供し、ここで、改変された免疫細胞は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫細胞不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しており、および、リガンドへのスイッチ分子の結合が、改変されたＴＩＬにおいて免疫細胞不活性化シグナルの代わりに免疫細胞活性化シグナルをもたらすスイッチ分子、ならびに、（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプターを含む。
【０１２５】
一態様において、本開示は、サイトカイン、例えばケモカインなどを過剰発現している改変された免疫細胞を提供し、ここで、免疫細胞は、（ｉ）腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）；（ii）間質腫瘍浸潤リンパ球（ｓＴＩＬ）；または（iii）抗原への特異的な結合を示すＴ細胞、である。ケモカインを過剰発現している改変された免疫細胞は、本明細書において提供される任意の改変された免疫細胞であり得る。
【０１２６】
サイトカインは、細胞によって放出され、細胞の挙動に影響を与え得るタンパク質（例えば、ケモカイン、インターフェロン、リンホカイン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子など）を意味する。サイトカインは、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、およびマスト細胞、ならびに、内皮細胞、線維芽細胞、および、種々の間質細胞などの免疫細胞を含む、広範な範囲の細胞によって産生される。サイトカインは、全身性または局在性の免疫調節効果に関与し得る。
【０１２７】
ある種のサイトカインは、炎症促進性のサイトカインとして機能し得る。炎症促進性サイトカインは、炎症反応を誘導するまたは増幅することに関与しているサイトカインを意味する。炎症促進性サイトカインは、免疫応答を発生させるために、免疫システムの様々な細胞、例えば好中球および白血球などを共に働き得る。ある種のサイトカインは、抗炎症性のサイトカインとして機能し得る。抗炎症性のサイトカインは、炎症反応を低下させることに関与するサイトカインを意味する。いくつかの場合において、抗炎症性のサイトカインは、炎症促進性のサイトカイン応答を調節し得る。いくつかのサイトカインは、炎症促進性および抗炎症性のサイトカインの両方として機能し得る。ある種のサイトカイン、例えばケモカインは、化学遊走において機能し得る。ケモカインは、近くの応答性細胞において定方向の化学遊走を誘導し得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、炎症促進性および／または化学遊走機能を有するサイトカインの発現は、免疫細胞において上方調節され得る。炎症促進性および／または化学遊走機能を有するサイトカインの発現の上方調節は、例えば、免疫療法において標的細胞に対する免疫応答を刺激するために有益であり得る。
【０１２９】
本明細書において提供される免疫細胞によって過剰発現され得るサイトカインの例としては、これらに限定されるわけではないが、リンホカイン、モノカイン、および通常のポリペプチドホルモンが挙げられる。含まれるサイトカインは、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−α；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−αなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、およびＴＧＦ−β３などのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦｓ）；インスリン様増殖因子−Ｉおよび−II；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；Ｆｌｔ−３Ｌ；幹細胞因子（ＳＣＦ）；骨誘導因子；ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γなどのインターフェロン（ＩＦＮｓ）；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；マクロファージ刺激因子（ＭＳＰ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−２０などのインターロイキン（ＩＬｓ）；ＣＤ１５４、ＬＴ−β、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、４−１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、ＧＩＴＲＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＡＬＬ−１、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、ＴＲＡＮＣＥなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦ、ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ  Ｍ（ＯＳＭ）およびＫｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。サイトカインレセプターは、サイトカインに結合するレセプタータンパク質を意味する。サイトカインレセプターは、膜結合型および可溶性の両方であり得る。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、過剰発現したサイトカインは、インターロイキン（ＩＬ−１）ファミリーメンバー（例えばリガンドなど）、ＩＬ−１レセプターファミリーメンバー、インターロイキン−６（ＩＬ−６）ファミリーメンバー（例えばリガンドなど）、ＩＬ−６レセプター、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）ファミリーメンバー（例えばリガンドなど）、ＩＬ−１０レセプター、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ファミリーメンバー（例えばリガンドなど）、ＩＬ−１２レセプター、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）ファミリーメンバー（例えばリガンドなど）、またはＩＬ−１７レセプターである。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、過剰発現したサイトカインは、インターロイキン（ＩＬ−１）ファミリーメンバーまたは関連タンパク質；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバーまたは関連タンパク質；インターフェロン（ＩＦＮ）ファミリーメンバーまたは関連タンパク質；インターロイキン−６（ＩＬ−６）ファミリーメンバーまたは関連タンパク質；またはケモカインまたは関連タンパク質である。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ３／ＩＬ１ＲＡ、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ３３、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３８、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１５３／ＣＤ３０Ｌ／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＤ７０、Ｆａｓ  Ｌｉｇａｎｄ／ＦＡＳＬＧ／ＣＤ９５Ｌ／ＣＤ１７８、ＥＤＡ−Ａ１、ＴＮＦＳＦ１４／ＬＩＧＨＴ／ＣＤ２５８、ＴＮＦＡ、ＬＴＡ／ＴＮＦＢ／ＴＮＦＳＦ１、ＬＴＢ／ＴＮＦＣ、ＣＤ７０／ＣＤ２７Ｌ／ＴＮＦＳＦ７、ＴＮＦＳＦ１０／ＴＲＡＩＬ／ＡＰＯ−２Ｌ（ＣＤ２５３）、ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧＬ／ＴＮＦＳＦ１１（ＣＤ２５４）、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦ−α／ＴＮＦＡ，ＴＮＦＳＦ１３、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＯＸ−４０Ｌ／ＴＮＦＳＦ４／ＣＤ２５２、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４／ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＺ、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡ５／ＩＦＮａＧ、ＩＦＮω／ＩＦＮＷ１、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＩＬ１１、ＩＬ３１、ＩＬ６、レプチン、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＣＬ１／ＴＣＡ３、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２／ＭＣＰ−５、ＣＣＬ１３／ＭＣＰ−４、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２／ＭＤＣ、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ１／ＬＡＧ−１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２／ＭＩＰ−２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７／Ｐｐｂｐ、ＣＸＣＬ９、ＩＬ８／ＣＸＣＬ８、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＦＡＭ１９Ａ１、ＦＡＭ１９Ａ２、ＦＡＭ１９Ａ３、ＦＡＭ１９Ａ４、および、ＦＡＭ１９Ａ５から選択される。
【０１３２】
サイトカイン発現は、様々な方法を用いて評価され得る。サイトカイン発現は、一またはそれ以上のサイトカインの存在に関して、改変された免疫細胞が増殖されている細胞培養液をアッセイする（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ産生）ことによって、または、改変された免疫細胞をもつ被験者から得られる血清をアッセイする（例えばｉｎ  ｖｉｖｏ産生）ことによって評価され得る。サイトカインレベルは、濃度などの様々な適切な単位で、任意の適切なアッセイを用いて、定量化され得る。いくつかの実施形態において、サイトカインタンパク質が検出される。いくつかの実施形態において、サイトカインのｍＲＮＡ転写物が検出される。サイトカインアッセイの例としては、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット、免疫蛍光法、ラジオイムノアッセイ、サンプル中の様々なサイトカインを同時に検出することを可能にする抗体アレイ、ビーズベースのアレイ、定量的ＰＣＲ、マイクロアレイ、などが挙げられる。他の適切な方法としては、プロテオミクスアプローチ（２−Ｄゲル、ＭＳ分析など）が挙げられる。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される改変された免疫細胞によって過剰発現されるサイトカインは、ケモカインである。ケモカインは、例えば、ＣＣケモカイン、ＣＸＣケモカイン、Ｃケモカイン、およびＣＸ３Ｃケモカインであり得る。いくつかの実施形態において、改変された免疫細胞によって過剰発現されるケモカインは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、およびＣＣＬ２８から選択されるＣＣケモカインである。該ケモカインは、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、およびＣＸＣＬ１７から選択されるＣＸＣケモカインである。いくつかの実施形態において、改変された免疫細胞によって過剰発現されるケモカインは、ＸＣＬ１およびＸＣＬ２から選択されるＣケモカインである。いくつかの実施形態において、免疫細胞によって過剰発現されるケモカインは、ＣＸ３Ｃケモカインであり、そして、該ＣＸ３Ｃケモカインは、ＣＸ３ＣＬ１である。
【０１３４】
一態様において、本開示は、（ａ）被験体に、本明細書中の態様の様々な実施形態の任意のひとつの改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞を投与すること、（ｂ）がんである標的細胞に対して改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞の細胞毒性を誘導し、それによってがんである標的細胞の死を誘導する条件下で、改変されたＴＩＬ、改変されたＴ細胞、または改変された免疫細胞に、ネオアンチゲンを発現しているがんである標的細胞を接触させること、を含む被験者のがんを処置する方法を提供する。
【０１３５】
一態様において、本開示は、Ｔ細胞集団を増やすための方法を提供し、該方法は、（ａ）少なくとも、本明細書中の態様の様々な実施形態の任意のひとつの改変された免疫細胞を含むＴ細胞集団を提供すること、（ｂ）Ｔ細胞の集団を、Ｔ細胞の集団の増加に効果を与えるように、Ｂ細胞表面タンパク質に暴露すること、を含む。いくつかの実施形態において、（ｂ）において、Ｔ細胞の集団は、Ｂ細胞表面タンパク質を含むＢ細胞に暴露される。
【０１３６】
一態様において、本開示は、（ａ）Ｔ細胞集団にキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をエンコードする核酸を導入し、それによって第一ＣＡＲ発現細胞集団を作製する工程であって、ＣＡＲが（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む工程、（ｂ）第一ＣＡＲ発現細胞集団をＢ細胞表面タンパク質に接触させ、それによって増加されたおよび／または活性化された免疫細胞集団を作製する工程、を含むＴ細胞集団を増やすための方法を提供する。
【０１３７】
一態様において、本開示は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、および（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分、の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【０１３８】
一態様において、本開示は、（ａ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体またはそれらの一またはそれ以上の成分、および（ｂ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター、の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【０１３９】
一態様において、本開示は、（ａ）そのリガンドへの結合時に、改変されていない免疫細胞において免疫不活性化シグナルを誘発するタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むスイッチ分子であって、ＥＣＤが免疫細胞活性化シグナルを媒介する共刺激分子の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）に融合しているスイッチ分子、（ｂ）抗原特異的Ｔ細胞レセプター複合体、またはそれらの一またはそれ以上の成分、および（ｃ）（ｉ）Ｂ細胞表面タンパク質に結合する能力のある抗原相互作用ドメイン；（ii）膜貫通ドメイン；および（iii）細胞内シグナリングドメインを含む、キメラ抗原レセプター、の一つまたはそれ以上をエンコードする一またはそれ以上ポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【０１４０】
本明細書中の態様の様々な実施形態において、プロモーターが本開示の組成物と共に用いられ得る。プロモーターの例としては、真核細胞、ほ乳類細胞、非ヒトほ乳類細胞、またはヒト細胞において活性であるものが挙げられる。プロモーターは、誘導性または構成的活性型のプロモーターであり得る。代替的に、または追加で、プロモーターは、組織または細胞特異的であってもよい。
【０１４１】
適切な真核細胞プロモーター（すなわち真核細胞中で機能性であるプロモーター）の非限定的な例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来末端反復配列（ＬＴＲｓ）、ヒト伸長因子１プロモーター（ＥＦ１）、トリβ−アクチンプロモーター（ＣＡＧ）に融合されたサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーを含むハイブリッド構成物、マウス幹細胞ウイルスプロモーター（ＭＳＣＶ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１遺伝子座プロモーター（ＰＧＫ）、およびマウスメタロチオネイン−Ｉ由来のものが挙げられる。プロモーターは、真菌のプロモーターであってもよい。プロモーターは、植物のプロモーターであってもよい。植物のプロモーターのデータベースは、例えばＰｌｌａｎｔＰｒｏｍなどで見つけられ得る。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写終結コドンを含んでいてもよい。発現ベクターはまた、発現を増幅するための適切な配列を含んでいてもよい。
【０１４２】
本明細書中の態様の様々な実施形態において、改変された免疫細胞は、特異的にはネオアンチゲンおよび／またはネオエピトープに結合し得る。ネオアンチゲンおよびネオエピトープは、一般的に、いくつかの場合において抗腫瘍性のＴ細胞応答をトリガーする腫瘍特異的変異を意味する。例えば、これらの内在性変異は、全エクソームシーケンスアプローチを用いて同定され得る。Tran Eら、“Cancer immunotherapy based on mutation-specific CD4+ T cells in a patient with epithelial cancer”、Science 344: 641-644 (2014)を参照のこと。スイッチ分子を含む改変された免疫細胞（例えば、改変されたＴＩＬまたは改変されたＴ細胞）は、腫瘍特異的ネオアンチゲンへの特異的な結合を示す。免疫細胞によって結合されたネオアンチゲンは、標的細胞上に発現され得、そして、例えば内在性遺伝子中に変異としてエンコードされる。いくつかの場合において、免疫細胞によって特異的に結合されているネオアンチゲンまたはネオエピトープは、突然変異遺伝子によってエンコードされ得る。遺伝子は、ＡＢＬ１、ＡＣＯｌ  １９９７、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＦＰ、ＡＫＴ１、ＡＬＫ、ＡＬＰＰＬ２、ＡＮＡＰＣ１、ＡＰＣ、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲ、ＡＲ−ｖ７、ＡＳＣＬ２、β２Ｍ、ＢＲＡＦ、ＢＴＫ、Ｃ１５ＯＲＦ４０、ＣＤＨ１、ＣＬＤＮ６、ＣＮＯＴ１、ＣＴ４５Ａ５、ＣＴＡＧ１Ｂ  （ＮＹ−ＥＳＯ−１をエンコードする）、ＤＣＴ、ＤＫＫ４，ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１ＤＰ３、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ２Ｂ３、ｅｎｖ、ＥＰＨＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲＰ１、ＦＡＭ１１  ＩＢ、ＦＧＦＲ３、ＦＲＧ１Ｂ，ＧＡＧＥ１、ＧＡＧＥ  １０、ＧＡＴＡ３、ＧＢＰ３、ＨＥＲ２、ＩＤＨ１、ＪＡＫ１、ＫＩＴ、ＫＲＡＳ、ＬＭＡＮ１、ＭＡＢＥＢ  １６、ＭＡＧＥＡ１，ＭＡＧＥＡ１０、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ８、ＭＡＧＥＢ  １７、ＭＡＧＥＢ４、ＭＡＧＥＣ１、ＭＥＫ、ＭＬＡＮＡ、ＭＬＬ２、ＭＭＰ１３，ＭＳＨ３、ＭＳＨ６、ＭＹＣ、ＮＤＵＦＣ２、ＮＲＡＳ、ＮＹ−ＥＳＯ、ＰＡＧＥ２、ＰＡＧＥ５、ＰＤＧＦＲａ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＭＥＬ、ｐｏｌタンパク質、ＰＯＬＥ，ＰＴＥＮ、ＲＡＣ１、ＲＢＭ２７、ＲＮＦ４３、ＲＰＬ２２、ＲＵＮＸ１、ＳＥＣ３１Ａ、ＳＥＣ６３、ＳＦ３Ｂ １、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＭＡＰ１、ＳＭＡＰ１、ＳＰＯＰ、ＴＦＡＭ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＨＡＰ５、ＴＰ５３、ＴＴＫ、ＴＹＲ、ＵＢＲ５、ＶＨＬ、およびＸＰＯＴからなる群より選択され得る。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの遺伝子プロファイルに基づいて選択され得る。いくつかの実施形態において、ネオアンチゲンは、個体からの腫瘍サンプルの体細胞突然変異プロファイルに基づいて選択され得る。
【０１４３】
本明細書中の態様の様々な実施形態において、改変された免疫細胞は、さらに、キルスイッチを含んでいてもよい。キルスイッチは、例えば、高サイトカイン血症などの深刻な毒性の場合に、免疫細胞を除去するために活性化され得る。これは、免疫システムが多くの炎症性サイトカインが放出される強力な応答をもっている場合に起こり得、発熱、頭痛、発疹、速い心拍、低血圧および呼吸障害などの軽度から重症の症状を引き起こす。キルスイッチは、薬剤誘導性キルスイッチであり得る。キルスイッチは、誘導性カスパーゼ９を含んでいてもよい。
【０１４４】
本明細書中の態様の様々な実施形態は、細胞、例えば改変された免疫細胞などを含む。細胞、例えば免疫細胞（例えばＴ細胞およびＮＫ細胞などのリンパ球など）などは、被験者から得られ得る。被験者の非限定的な例としては、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらの遺伝子導入種などが挙げられる。細胞の由来とされる被験者からのサンプルの例としては、これらに限定されるわけではないが、例えば、
皮膚、心臓、肺、腎臓、骨髄、乳房、膵臓、肝臓、筋肉、平滑筋、膀胱、胆嚢、結腸、腸、脳、前立腺、食道、甲状腺、血清、唾液、尿、胃液および消化液、涙、便、精液、膣液、腫瘍性組織由来の間質液、眼内液、汗、粘液、耳垢、オイル、腺分泌物、髄液、髪の毛、爪、血漿、鼻腔スワブまたは鼻咽頭洗浄、髄液、脳脊髄液、組織、咽喉スワブ、生検、胎盤液、羊水、臍帯血、ｅｍｐｈａｔｉｃ  ｆｌｕｉｄｓ、窩洞液、痰、膿、細菌叢、胎便、母乳、および／または、他の排出物または体組織などが挙げられ得る。
【０１４５】
いくつかの場合において、細胞は、被験者から得られる、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞などの集団であり得る。Ｔ細胞は、ＰＢＭＣｓ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、および、感染部位からの組織、復水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む多数の供給源から得られ得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、例えばＦｉｃｏｌｌ（登録商標）分離などの任意の多くの技術を用いて、被験者から採取される血液のユニットから得られ得る。ある実施形態において、個体の循環血からの細胞はアフェレーシスによって得られる。アフェレーシスによる産物は典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞などを含むリンパ球、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含む。アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿留分を除去するため、および、続く処理工程に適切な細胞を適切なバッファーまたは溶媒に配置するため、洗浄されてもよい。
【０１４６】
任意の様々な免疫細胞が本明細書中の態様において利用され得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、好塩基球、好酸球および好中球などの顆粒球；マスト細胞；マクロファージへと発達し得る単球；樹状細胞などの抗原提示細胞；およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、Ｂ細胞およびＴ細胞などのリンパ球を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、免疫エフェクター細胞である。免疫エフェクター細胞は、刺激に応答して特異的な機能を果たし得る免疫細胞を意味する。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、細胞死を誘導することのできる免疫エフェクター細胞である。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、活性化されたＴ細胞である。Ｔ細胞は、無感作の細胞および免疫記憶（例えばセントラルメモリーまたはＴＣＭ、エフェクターメモリーまたはＴＥＭおよびエフェクターメモリーＲＡまたはＴＥＭＲＡ）細胞の両方、エフェクター細胞（例えば細胞障害性Ｔ細胞またはＣＴＬｓまたはＴｃ細胞）、ヘルパー細胞（例えばＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ３、Ｔｈ９、Ｔｈ７、ＴＦＨ）、調節細胞（例えばＴｒｅｇ、およびＴｒｌ細胞）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫＴ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）、リンパ球活性化キラー細胞（ＬＡＫｓ）、αβＴ細胞、γδＴ細胞、および同様な特有のクラスのＴ細胞系統を含む。Ｔ細胞は、細胞表面にどのようなタンパク質が存在するかに基づいて、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の２つの大きなカテゴリーに分類され得る。対象のシステムを発現しているＴ細胞は、感染した細胞をキリングすることおよび他の免疫細胞を活性化するまたは補充することを含む複数の機能を果たし得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞障害性Ｔ細胞または細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬｓ）とも称される。対象のシステムを発現しているＣＴＬｓは、ウイルス感染した細胞およびがん細胞を認識し、そして除去することに関与し得る。ＣＴＬｓは、アポトーシス、例えばプログラムされた細胞死を引き起こす細胞毒を含む特定の区画または顆粒を備える。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、追加のサブセットもあるかもしれないが、４つのサブセット  Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７およびＴｒｅｇに細分され、ここで、ＴｈはヘルパーＴ細胞（T helper cell）を意味している。Ｔｈ１細胞は、細胞内微生物、特にはバクテリアに対する免疫応答をコーディネートし得る。それらは、バクテリアを貪食するマクロファージなどの他の免疫細胞に警告を送りおよびそれらを活性化する分子を産生および分泌する。Ｔｈ２細胞は、Ｂ細胞、顆粒、およびマスト細胞に警告することによって蠕虫類（寄生虫）などの細胞外病原体に対する免疫応答をコーディネートすることに関与する。Ｔｈ１７細胞は、免疫および非免疫細胞を活性化するシグナリング分子であるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）を産生することができる。Ｔｈ１７細胞は、好中球を補充するために重要である。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、本明細書中で提供される免疫細胞集団は、不均一であってもよい。いくつかの実施形態において、使用される細胞は、ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の不均一な混合物で構成されていてもよい。ＣＤ４およびＣＤ８細胞は、循環エフェクターＴ細胞の表現型特徴を有し得る。いくつかの実施形態において、細胞は、セントラルメモリー細胞であってもよい。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、末梢血リンパ球（ＰＢＬｓ）、および、他の血液細胞サブセットであって、これらに限定されるわけではないが、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、ナチュラルキラーＴ細胞、単球前駆細胞、造血幹細胞、または非多能性幹細胞などを含む。いくつかの場合において、細胞は、任意の免疫細胞であり得、例えば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）などの、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞、または任意のタイプのＴ細胞であり得る。Ｔ細胞はまた、メモリーＴ細胞、メモリー幹Ｔ細胞または他のエフェクターＴ細胞などを含む。Ｔ細胞はまた、例えば、全血からのＴ細胞の選択など、混合集団から選択され得る。Ｔ細胞はまた、混合集団から増殖されてもよい。Ｔ細胞はまた、特定の集団および表現型へと歪められ得る。例えば、Ｔ細胞は、表現型的に、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含むように歪められ得る。ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含むリストから選択される一またはそれ以上のマーカーを含む適切な細胞が選択され得る。細胞はまた、例えば例示として挙げられる、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、造血幹細胞、ニューロン幹細胞、および間葉系幹細胞のような幹細胞を含む。細胞は、例えばヒト細胞、非ヒト細胞、および／またはマウス細胞などの、任意の数の初代細胞を含み得る。細胞は、前駆細胞であってもよい。細胞は、処置される被験体（例えば患者）由来であってもよい。細胞は、ヒトドナー由来であり得る。宿主細胞は、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）から構成されＴＳＣＭメモリー幹細胞であってもよく、メモリー幹細胞はまた、ＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ−１を発現していてもよく、該メモリー幹細胞に特徴的な数々の機能的特徴を示していてもよい。宿主細胞は、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むセントラルメモリーＴＣＭ細胞であってもよく、該セントラルメモリー細胞は、例えばＩＬ−２を分泌し得るが、ＩＦＮαまたはＩＬ−４は分泌しない。細胞はまた、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むエフェクターメモリーＴＥＭ細胞であってよく、例えば、ＩＦＮγおよびＩＬ−４などのエフェクターサイトカインを産生し得る。
【０１４９】
本明細書中の態様の様々な実施形態において、免疫細胞は、リンパ球を含む。いくつかの実施形態において、リンパ球は、ナチュラルキラー細胞である。いくつかの実施形態において、リンパ球は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、末梢血単核球骨髄、リンパ節組織、脾臓組織、臍帯血、および腫瘍を含む多数の供給源から得られ得る。いくつかの実施形態において、入手可能な任意の数のＴ細胞株が使用され得る。リンパ球（例えば細胞障害性リンパ球など）などの免疫細胞は、好ましくは、自己細胞であり得、しかしながら、異種細胞もまた使用され得る。Ｔ細胞は、例えばＦｉｃｏｌｌ（登録商標）分離などの任意の多くの技術を用いて、被験者から採取される血液のユニットから得られ得る。個体の循環血からの細胞はアフェレーシスまたは白血球除去によって得られ得る。アフェレーシスによる産物は典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞などを含むリンパ球、他の有核の白血球、赤血球、および血小板を含む。アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿留分を除去するため、および、続く処理工程に適細胞を、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などの適切なバッファーまたは溶媒に配置するため、洗浄されてもよい。洗浄後、細胞は、例えばＣａを含まない、Ｍｇを含まないＰＢＳなどの様々な生体適合性のバッファーに再懸濁され得る。代替的には、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分は、除去され得、そして、細胞は、直接培養溶液中に再懸濁され得る。サンプルは、被験者によって直接的に、または、一またはそれ以上の中間者、例えばサンプル収集サービスプロバイダーまたは医療提供者（例えば医師または看護師）を介して間接的に提供され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞を末梢血白血球から分離することは、赤血球を溶解すること、および、末梢血白血球を単球から、例えばＰＥＲＣＯＬグラディエントなどを介して遠心分離によって分離することを含む。
【０１５０】
ＣＤ４またはＣＤ８などの特定のＴ細胞のサブ集団は、さらに、正または負の選択技術によって分離され得る。Ｔ細胞集団の負の選択は、例えば、負に選択される細胞に固有の表面マーカーに配向される抗体の組み合わせによって達成され得る。適切な技術の一つとしては、負に選択される細胞上の細胞表面マーカーへと配向されるモノクローナル抗体のカクテルを利用する、負の磁性的免疫付着反応を介する細胞ソーティングが挙げられる。例えば、ＣＤ４＋細胞を分離するためには、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１  ｌｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含み得る。負の選択のプロセスは、主として均一な所望のＴ細胞集団を作製するために使用され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、２またはそれ以上の（例えば、２、３、４、５またはそれ以上の）種々の種類のＴ細胞の混合物を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、富化された細胞集団のメンバーである。一またはそれ以上の所望の細胞タイプが任意の適切な方法によって富化され得、このような方法の非限定的な例としては、細胞集団を所望の細胞タイプへの増殖および／または分化をトリガーするように処置すること、所望しない細胞タイプの成長を停止するような処置、所望しない細胞タイプをキリングまたは溶解させるための処置、所望の細胞タイプの精製（例えば、一またはそれ以上の細胞表面マーカーに基づく、所望のまたは所望しない細胞タイプを保持するようなアフィニティーカラム上での精製など）が挙げられる。いくつかの実施形態において、細胞の富化された集団は、細胞障害性Ｔ細胞（細胞障害性リンパ球、ＣＴＬｓ、Ｔキラー細胞、細胞障害性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびキラーＴ細胞としても様々に知られている）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞から選択される細胞障害性リンパ球中で富化された細胞集団である。
【０１５２】
正または負の選択による所望の細胞集団の分離のために、細胞および表面（例えばビーズのような粒子など）の濃度が変化される。ある実施形態において、細胞とビーズの最大の接触を確かにするために、ビーズと細胞とが一緒に混合される体積を顕著に減らす（すなわち細胞の濃度を上昇させる）ことが好ましいかもしれない。例えば、２０億個の細胞／ｍＬの濃度が使用され得る。いくつかの実施形態において、１０億個の細胞／ｍＬの濃度が使用され得る。いくつかの実施形態において、１億個の細胞／ｍＬの濃度が使用され得る。１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞／ｍＬの濃度が使用されてもよい。さらに別の実施形態において、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細胞／ｍＬの濃度が使用されてもよい。さらなる実施形態において、１億２５００万、または１億５０００万個の細胞／ｍＬの濃度が使用されてもよい。高い濃度を使用することは、増大された細胞収率、細胞活性化、および細胞増殖を結果としてもたらし得る。
【０１５３】
様々な標的細胞が本開示の対象のシステムおよび方法を用いてキリングされ得る。この方法が適用され得る標的細胞は、様々な広範な細胞タイプを含み得る。標的細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏであってもよい。標的細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。標的細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏであってもよい。標的細胞は、分離された細胞であり得る。標的細胞は、器官内部の細胞であってもよい。標的細胞は、器官であってもよい。標的細胞は、ほ乳類細胞またはほ乳類細胞由来であってもよい。標的細胞は、ヒト細胞、またはヒト細胞由来であってもよい。標的細胞は、原核細胞であっても、原核細胞由来であってもよい。標的細胞は、バクテリア細胞であってもよく、バクテリア細胞由来であってもよい。標的細胞は、古細菌細胞であって、古細菌細胞由来であってもよい。標的細胞は、真核細胞であっても、真核細胞由来であってもよい。標的細胞は、多能性幹細胞であってもよい。標的細胞は、植物細胞であっても、植物細胞由来であってもよい。標的細胞は、動物細胞であっても、動物細胞由来であってもよい。標的細胞は、無脊椎動物細胞であっても、無脊椎動物細胞由来であってもよい。標的細胞は、脊椎動物細胞であっても、脊椎動物細胞由来であってもよい。標的細胞は、微生物細胞であっても、微生物細胞由来であってもよい。標的細胞は、真菌細胞であっても、真菌細胞由来であってもよい。標的細胞は、特定の器官または組織由来であってもよい。
【０１５４】
標的細胞は、幹細胞であっても、前駆細胞由来であってもよい。標的細胞は、幹細胞（例えば、成体幹細胞、胚性幹細胞、誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞など）、および前駆細胞（例えば、心筋前駆細胞、神経前駆細胞など）を含み得る。標的細胞は、例えばげっ歯類幹細胞、げっ歯類前駆細胞、ヒト幹細胞、ヒト前駆細胞、などのほ乳類幹細胞および前駆細胞を含み得る。クローン細胞は、後代の細胞を含み得る。標的細胞は、標的核酸を含み得る。標的細胞は、生物内であってもよい。標的細胞は、遺伝的に改変された細胞であり得る。標的細胞は、宿主細胞であってもよい。
【０１５５】
標的細胞は、初代細胞であってもよい。例えば、初代細胞の培養は、０回、１回、２回、４回、５回、１０回、１５回またはそれ以上継体され得る。細胞は、単細胞生物であってもよい。細胞は培養液中で増殖され得る。
【０１５６】
標的細胞は、疾患細胞であってもよい。疾患細胞は、代謝、遺伝子発現、および／または形態的特徴を変え得る。疾患細胞は、がん細胞、糖尿病性細胞、およびアポトーシス性細胞であり得る。疾患細胞は、疾患を患う被験者由来の細胞であり得る。例示的な疾患としては、血管障害、がん、代謝異常、眼疾患、器官障害、筋骨格障害、心臓病などが挙げられ得る。
【０１５７】
標的細胞が初代細胞である場合、それらは、任意の方法によって個体から得られ得る。例えば、白血球は、アフェレーシス、白血球アフェレーシス、密度勾配分離などによって得られ得る。例えば皮膚、筋肉、骨髄、脾臓、肝臓、腎臓、肺、腸、胃などの組織からの細胞は、生検によって得られ得る。得られた細胞の分散または懸濁のために適切な溶液が使用され得る。このような溶液としては、一般的には、低濃度の許容され得るバッファーと併せた、ウシ胎仔血清または他の天然の因子で適宜補充された、平衡塩類溶液、（例えば、通常の生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、Ｈａｎｋ’ｓ平衡塩類溶液など）、であり得る。バッファーとしては、ＨＥＰＥＳ、リン酸バッファー、乳酸バッファーなどが挙げられ得る。細胞は、直ちに使用されてもよく、または保管（例えば凍結によって）されてもよい。凍結された細胞は、融解され得、そして、再利用されることが可能であり得る。細胞は、ＤＭＳＯ、血清、溶媒バッファー（例えば、１０％ＤＭＳＯ、５０％血清、４０％緩衝溶媒など）中、および／または、凍結温度で細胞を保存するために使用される他の公知の溶液中で凍結され得る。
【０１５８】
標的細胞となり得る細胞の非限定的な例としては、これらに限定されるわけではないが、例えばＢ細胞、Ｔ細胞（細胞障害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞）、ナチュラルキラー細胞、サイトカイン誘導性キラー（ＣＩＫ）細胞（例えば米国特許第２００８０２４１１９４号明細書を参照のこと）などのリンパ球系細胞；例えば、顆粒球（好塩基性顆粒球、好酸性顆粒球、好中球顆粒球／過分葉の好中球）、単球／マクロファージ、赤血球（網状赤血球）、マスト細胞、血小板／巨核球、樹状細胞などの骨髄系細胞；甲状腺（甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞）、副甲状腺（上皮小体主細胞、好酸性細胞）、副腎性（クロム親和性細胞）、松果体（松果体細胞）の細胞を含む内分泌系システム由来の細胞；グリア細胞（アストロサイト、ミクログリア）、巨大細胞神経分泌細胞、星状細胞、ベッチェル細胞、および下垂体（性腺刺激ホルモン分泌細胞、副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン産生細胞、成長ホルモン産生細胞、乳腺刺激ホルモン分泌細胞）などの神経システムの細胞；肺細胞（タイプＩ肺細胞、タイプII肺細胞）、クララ細胞、杯細胞、塵埃細胞などの呼吸性システムの細胞；心筋細胞、周皮細胞などの呼吸性システムの細胞；胃（胃主細胞、壁細胞）、ゴブレット細胞、パネート細胞、Ｇ細胞、Ｄ細胞、ＥＣＬ細胞、Ｉ細胞、Ｋ細胞、Ｓ細胞などの消化システムの細胞；腸クロム親和細胞、ＡＰＵＤ細胞、肝臓（肝細胞、クッパー細胞）、軟骨／骨／筋肉などの腸内分泌細胞；骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞、歯（セメント芽細胞、エナメル芽細胞）などの骨細胞；軟骨芽細胞、軟骨細胞などの軟骨細胞；糸胞、ケラチノサイト、メラニン形成細胞（母斑細胞）などの皮膚細胞；筋細胞などの筋肉細胞；ポドサイト、傍糸球体細胞、糸球体内メサンギウム細胞／糸球体外メサンギウム細胞、腎臓近位尿細管刷子縁細胞、緻密斑細胞などの尿システムの細胞；精子、セルトリ細胞、ライディッヒ細胞、卵子などの生殖性システムの細胞；および、脂肪細胞、線維芽細胞、腱細胞、表皮角化細胞（分化上皮細胞）、上皮基底細胞（幹細胞）、爪および趾爪のケラチノサイト、爪床基底細胞（幹細胞）、髄様毛幹細胞、皮質毛幹細胞、角質毛幹細胞、角質毛根鞘細胞、ハクスリ層の毛根鞘細胞、ヘンレ層の毛根鞘細胞、外毛根鞘細胞、毛母細胞（幹細胞）、湿潤層状障壁上皮細胞、角膜、舌、口腔、食道、肛門菅、尿路および膣末端の重層扁平上皮の表皮細胞、角膜、舌、口腔、食道、肛門菅、尿路および膣末端の上皮の基底細胞（幹細胞）、尿路上皮細胞（膀胱および尿管内側）、外分泌性上皮細胞、唾液腺粘膜細胞（多糖類に富んだ分泌）、唾液腺漿液性細胞（糖タンパク質酵素に富んだ分泌）、舌のフォン・エブネル腺細胞（味蕾を洗い流す）、乳腺細胞（乳分泌）、涙腺細胞（涙分泌）、耳内の耳道腺（ワックス分泌）、エクリン汗腺暗細胞（糖タンパク質分泌）、エクリン汗腺明細胞（低分子分泌）、アポクリン汗腺細胞（芳香性分泌、性ホルモン感受性）、まぶたの腺の細胞（特殊な汗腺）、皮脂腺の細胞（脂質豊富な皮脂分泌）、鼻のボーマン腺細胞（嗅上皮を洗浄）、十二指腸のブルナー腺細胞（酵素とアルカリ性粘液）、精嚢細胞（遊泳精子の果糖を含む精液���分を分泌する）、前立腺細胞（精液成分を分泌する）、尿道腺細胞（粘液分泌）、バルトリン腺細胞（膣潤滑液分泌）、リトル細胞腺（粘液分泌）、子宮内膜細胞（炭水化物分泌）、呼吸器および消化管の分離杯細胞（粘液分泌）、胃の内側の粘膜細胞（粘液分泌）、胃腺酵素原細胞（ペプシノーゲン分泌）、胃腺酸分泌細胞（塩酸分泌）、膵腺房細胞（重炭酸塩と消化酵素分泌）、小腸のパネート細胞（リゾチーム分泌）、タイプII肺の肺細胞（サーファクタント分泌）、肺のクララ細胞、ホルモン分泌細胞、下垂体前葉細胞、成長ホルモン産生細胞、乳腺刺激ホルモン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン産生細胞、生殖腺刺激ホルモン産生細胞、副腎皮質刺激ホルモン産生細胞、下垂体中葉細胞、巨大細胞神経分泌細胞、腸管および気道細胞、甲状腺細胞 、甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞、副甲状腺細胞、副甲状腺主細胞、好酸球細胞、副腎細胞、クロム親和性細胞、精巣のレイディグ細胞、卵胞のテカ内細胞、破裂した卵胞の黄体細胞、顆粒膜ルテイン細胞、テカルテイン細胞、傍糸球体細胞（レニン分泌）、腎臓の黄斑部細胞、代謝および貯蔵細胞、バリア機能細胞（肺、腸、外分泌腺および泌尿生殖器）、腎臓、Ｉ型肺細胞（肺の気腔内側）、膵管細胞（中心腺房細胞）、非線条管細胞（汗腺、唾液腺、乳腺など）、管細胞（精嚢、前立腺など）、閉じた内部の体腔を覆う上皮細胞、推進機能を持つ繊毛細胞、細胞外マトリックス分泌細胞、収縮細胞；骨格筋細胞、幹細胞、心筋細胞、血液および免疫系細胞、赤血球（赤血球）、巨核球（血小板前駆細胞）、単球、結合組織マクロファージ（さまざまなタイプ）、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞（骨内）、樹状細胞（リンパ系組織中）、ミクログリア細胞（中枢神経系中）、好中球顆粒球、好酸球顆粒球、好塩基球顆粒球、マスト細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、網状赤血球、幹細胞および血液と免疫系（さまざまな種類）の前駆細胞、多能性幹細胞、全能性幹細胞、人工多能性幹細胞、成体幹細胞、感覚トランスデューサー細胞、自律神経細胞、感覚器および末梢神経支持細胞、中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞、水晶体細胞、色素細胞、メラノサイト、網膜色素上皮細胞、生殖細胞、卵原細胞／卵母細胞、精子細胞、精母細胞、精原細胞（精母細胞の幹細胞）、精子、ナース細胞、卵巣濾胞細胞、セルトリ細胞（精巣内）、胸腺上皮細胞、間質細胞、間質性腎細胞、などを含む他の細胞；が挙げられる。
【０１５９】
がん細胞は、具体的な興味の対象である。いくつかの実施形態において、標的細胞は、がん細胞である。がん細胞の非限定的な例としては、例えば、アカントーマ、腺房細胞癌、聴神経腫、先端部黒子黒色腫、先天性肺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、成熟単球性白血病、成熟を伴う急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病前骨髄球性白血病、アダマンチノーマ、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、進行性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肺胞軟部肉腫、エナメル芽腫肛門癌、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管免疫芽球性T細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂癌、星状細胞腫、異型奇形横紋筋腫、基底細胞癌、基底様癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ベリーニ管癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳がん、ブレンナー腫瘍、気管支腫瘍、気管支肺胞上皮癌、褐色腫瘍、バーキットリンパ腫、原発不明癌、カルチノイド腫瘍、癌、上皮内癌、陰茎癌、癌原発不明、癌肉腫、キャッスルマン病、中枢神経系胚性腫瘍、小脳星細胞腫、脳星細胞腫、子宮頸癌、胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、慢性リンパ性白血病、白血球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、慢性好中球性白血病、明細胞腫瘍、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、デゴス病、皮膚線維肉腫、結節性嚢胞、線維形成性小細胞B細胞大細胞腫瘍リンパ腫、赤芽球性神経上皮腫瘍、胚性癌、内胚葉性洞腫瘍、子宮内膜癌、子宮内膜子宮癌、類内膜腫瘍、腸疾患関連T細胞リンパ腫、上衣芽細胞腫、上衣腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道腫瘍、食道腫瘍、食道腫瘍ユーイング家族肉腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、乳房外パジェット病、卵管がん、胎児の胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺がん、胆嚢がん、胆嚢がん、神経節神経膠腫、神経節神経腫、胃がん、胃リンパ腫、消化管癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、胚芽腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性絨毛腫瘍、骨巨細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠腫、神経膠腫グルカゴノーマ、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫、有毛細胞白血病、有毛細胞白血病、頭頸部癌、頭頸部癌、心臓癌、血管芽腫、血管周皮腫、血管肉腫、血液腫瘍、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、遺伝性乳房卵巣癌症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部神経膠腫、炎症性乳癌、眼内黒色腫、膵島細胞癌、膵島細胞腫瘍、若年性骨髄単球性白血病、カポジ肉腫（Kaposi Sarcoma）、カポジ肉腫（Kaposi's sarcoma）、腎臓腫瘍、クラツキン腫瘍、クルケンベルグ腫瘍、喉頭がん（Laryngeal Cancer）、喉頭がん（Laryngeal cancer）、悪性黒子由来黒色腫、白血病、白血病、口唇がんおよび口腔がん、脂肪肉腫、肺癌、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨の悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性ラブドイド腫瘍、悪性ト���トン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、マスト細胞白血病、縦隔胚細胞腫瘍、縦隔腫瘍、甲状腺髄様癌、髄芽腫、髄芽腫、髄上皮腫、黒色腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、中皮腫、潜在性転移性頚部扁平がん、転移性尿路上皮がん、ミュラー管混合腫瘍、単球性白血病、口内がん、粘液性腫瘍、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉症、菌状息肉腫、骨髄異形成疾患、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病内科疾患、粘液腫、鼻腔がん、上咽頭がん、上咽頭がん、新生物、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚がん、非小細胞肺、眼腫瘍、オリゴ星細胞腫、乏突起神経膠腫、腫瘍細胞腫、視神経鞘髄膜腫、口腔癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣腫瘍乳房の病気、パンコースト腫瘍、膵臓がん、膵臓がん、甲状腺乳頭がん、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭がん、褐色細胞腫、中分化の松果体実質腫瘍、松果体芽腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍、プレウ肺芽腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、原発性肝細胞がん、原発性肝がん、原発性腹膜がん、原発性神経外胚葉性腫瘍、前立腺がん、腹膜偽粘液腫、直腸がん、腎細胞がん、１５番染色体上のＮＵＴ遺伝子が関与する呼吸器癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒター形質転換、仙尾骨奇形腫、唾液腺がん、肉腫、神経鞘腫、皮脂腺がん、続発性新生物、セミノーマ、漿液性腫瘍、セルトリライディッヒ細胞腫瘍、性索間質細胞腫瘍、セザリー症候群がん、皮膚がん、小青い円形細胞腫瘍、小細胞がん、小細胞肺がん、小細胞リンパ腫、小腸がん、軟部肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、すすいぼ、脊髄腫瘍、脊髄腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、表在拡大型黒色腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、表面上皮間質腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ性白血病、奇形腫、末期リンパ癌、精巣癌、昏睡、咽頭癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂と尿管の移行上皮がん、移行上皮がん、尿膜管がん、尿道がん、泌尿生殖器腫瘍、子宮肉腫、ブドウ膜黒色腫、膣がん、バーナーモリソン症候群、疣贅がん、視覚経路神経膠腫、外陰がん、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、およびそれらの組み合わせなどのがんの細胞挙げられる。いくつかの実施形態において、標的化されたがん細胞は、がん幹細胞などのがん細胞集団内の亜集団を表す。いくつかの実施形態において、がんは、リンパ腫などの造血系統のものである。抗原は、腫瘍関連抗原であってもよい。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、標的細胞は腫瘍を形成する。本明細書中の方法を用いて処置される腫瘍は、安定化された腫瘍増殖（例えば、一またはそれ以上の腫瘍は、サイズにおいて１％、５％、１０％、１５％、または２０％より大きくは増大せず、および／または、転移しない）をもたらし得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２，またはそれ以上の週にわたって安定化される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２，またはそれ以上の月にわたって安定化される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０，またはそれ以上の年にわたって安定化される。いくつかの実施形態において、腫瘍のサイズまたは腫瘍細胞の数は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上現象される。いくつかの実施形態において、腫瘍は、完全に排除、または検出レベル以下まで低下される。いくつかの実施形態において、被験者は、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上の週にわたって腫瘍がない状態を維持する（例えば寛解状態にある）。いくつかの実施形態において、被験者は、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上の月にわたって腫瘍がない状態を維持する。いくつかの実施形態において、被験者は、処置後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の年にわたって腫瘍がない状態を維持する。
【０１６１】
標的細胞の死は、任意の適切な方法によって、例えば、これらに限定されるわけではないが、処置の前後における細胞の計測、または、生細胞または死細胞（例えば、生または死標的細胞）に関連付けられるマーカーのレベルを測定することによって検出され得る。細胞死の程度は、任意の適切な方法によって測定され得る。いくつかの実施形態において、細胞死の程度は、初期条件に関連して測定される。例えば、個体は、公知のサイズの初期の細胞マスまたは公知の濃度の循環標的細胞などの、標的細胞の公知の初期量を有する。このような場合、細胞死の程度は、処置後の生存細胞の、初期の細胞集団に対する比として表され得る。いくつかの実施形態において、細胞死の程度は、適切な細胞死アッセイによって測定され得る。様々な細胞死アッセイが利用可能であり、そして、様々な検出方法論を利用できる。検出方法論の例としては、例えば、非限定的に、細胞染色、顕微鏡法、フローサイトメトリー、細胞ソーティング、およびこれらの組み合わせの使用が挙げられる。
【０１６２】
腫瘍が、治療期間の完了に続いて外科的切除に付される場合、腫瘍サイズを現象させる処置の効果は、壊死性である（すなわち死んでいる）切除された組織の割合を測定することによって測定され得る。いくつかの実施形態において、処置は、切除された組織の壊死割合が約２０％（例えば、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％）より大きい場合に治療的に効果的である。いくつかの実施形態において、切除された組織の壊死割合は１００％であり、これはすなわち、生きている腫瘍組織が存在しないまたは検出可能ではない。
【０１６３】
標的細胞を、本明細書中に開示されている免疫細胞または免疫細胞集団に暴露することは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのどちらかで行われ得る。標的細胞を、免疫細胞または免疫細胞集団に暴露することは、標的細胞の抗原（例えば細胞膜結合性または非結合性）が免疫細胞に発現されているスイッチ分子に結合できるように、標的細胞を免疫細胞に、および／または、その十分近傍に、接触させることを意味する。標的細胞を、免疫細胞または免疫細胞集団に暴露することはまた、一般的に、標的細胞の抗原（例えば細胞膜結合性または非結合性）が免疫細胞に発現されているＣＡＲに結合できるように、標的細胞を免疫細胞に、および／または、その十分近傍に、接触させることを意味する。標的細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫細胞または免疫細胞集団に暴露することは、標的細胞と免疫細胞とを共培養することによって達成され得る。標的細胞と免疫細胞とは、例えば、接着細胞として、または代替的には、懸濁液中で、共培養され得る。標的細胞および免疫細胞は、例えば補助剤、成長因子、イオンなどと共に、様々な適切な種類の細胞培養溶媒中で共培養され得る。標的細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫細胞または免疫細胞集団に暴露することは、いくつかの場合において、免疫細胞を被験体、例えばヒト被験者に投与し、免疫細胞が循環システムを介して標的細胞に局在化できるようにすることによって達成され得る。いくつかの場合において、免疫細胞は、標的細胞が局在化されている領域に即時、例えば直接注入などによって送達され得る。
【０１６４】
暴露は、任意の適切な時間のあいだ、例えば少なくとも１分間、少なくとも５分間、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、少なくとも１６時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１か月、またはそれ以上のあいだ行われ得る。
【０１６５】
本明細書中で提供されるスイッチ分子およびＣＡＲの様々なドメインは、例えばアミド結合またはジスルフィド結合などの化学的結合；低分子の有機分子（例えば炭化水素鎖）；ペプチドリンカーなどのアミノ酸配列（例えば約３〜２００アミノ酸の長さのアミノ酸配列）、または低分子の有機分子とペプチドリンカーとの組み合わせによって、結合され得る。ペプチドリンカーは、キメラのポリペプチドの所望の発現、活性および／または立体位置を可能にする所望の柔軟性を提供し得る。ペプチドリンカーは、少なくとも２つの対象のドメインを結合させるために適切な任意の長さのものであり得、そして、好ましくは、十分に柔軟であって、結合しているドメインの片方または両方の適切なフォールディングおよび／または機能および／または活性を可能とするようにデザインされる。ペプチドリンカーは、少なくとも３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００個のアミノ酸の長さを有し得る。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約０〜２００個のアミノ酸長、約１０〜１９０個のアミノ酸長、約２０〜１８０個のアミノ酸長、約３０〜１７０個のアミノ酸長、約４０〜１６０個のアミノ酸長、約５０〜１５０個のアミノ酸長、約６０〜１４０個のアミノ酸長、約７０〜１３０個のアミノ酸長、約８０〜１２０個のアミノ酸長、約９０〜１１０個のアミノ酸長を有する。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、内在性タンパク質配列を含み得る。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、グリシン、アラニン、および／またはセリンアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、例えば、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＳＧ、またはＳＧＧＧなどの複数のまたは反復のモチーフなどのモチーフを含んでいてもよい。リンカー配列は、任意の天然のアミノ酸、非天然のアミノ酸、またはそれらの組み合わせを含んでいてもよい。
【０１６６】
任意の適切な送達方法が、本開示の組成物および分子（例えばポリペプチドおよび／またはポリペプチドをエンコードしている核酸など）を、例えば免疫細胞などの宿主細胞に導入するために使用され得る。様々な成分が同時に、または一時的に別個に送達され得る。方法の選択は、形質転換されている細胞のタイプ、または、形質転換が起こる条件（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、または  ｉｎ  ｖｉｖｏ）に依存し得る。
【０１６７】
送達の方法は、本開示の組成物をエンコードしているヌクレオチド配列を含む一またはそれ以上の核酸を、標的のポリヌクレオチドに接触させる、または細胞（または、免疫細胞などの細胞集団）内に導入することを含む。本開示の組成物をエンコードしているヌクレオチド配列を含む適切な核酸は、発現ベクターを含んでいてもよく、ここで、本開示の一またはそれ以上の組成物をエンコードしているヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、組換え発現ベクターである。
【０１６８】
送達方法または形質転換の非限定的な例としては、例えば、ウイルスまたはバクテリオファージ感染、遺伝子導入、結合、原形質融合、リポフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）トランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、パーティクル・ガン法、リン酸カルシウム沈殿、直接的マイクロインジェクション、ナノ粒子媒介核酸送達などが挙げられる。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、本開示は、一またはそれ以上のポリヌクレオチド、または一またはそれ以上の本明細書中に記載されるベクター、または一またはそれ以上のそれらの転写物、および／またはそれらから翻訳されたタンパク質、を宿主細胞へと送達することを含む方法を提供する。いくつかの態様において、本開示はさらに、そのような方法によって製造された細胞、そのような細胞を含むまたはそれらから製造された生物（例えば動物、植物、真菌など）を提供する。
【０１７０】
慣用のウイルスおよび非ウイルスベースの遺伝子導入方法が、ほ乳類細胞または標的組織へと核酸を導入するために使用され得る。このような方法は、本開示の組成物をエンコードしている核酸を培養中の細胞または宿主生物に投与するために使用され得る。非ウイルスベクター送達システムは、ＤＮＡプラスミド、ＲＮＡ（例えば本明細書中で記載されるベクターの転写物）、ネイキッド核酸、および例えばリポソームなどの送達ビヒクルとの複合体である核酸を含み得る。ウイルスベクター送達システムは、ＤＮＡおよびＲＮＡウイルスを含み、これらは、細胞への送達後にエピソーム性かまたは組み込まれるどちらかのゲノムを有し得る。
【０１７１】
非ウイルス性の核酸送達方法は、リポフェクション、ヌクレオフェクション、マイクロインジェクション、微粒子銃、ビロソーム、リポソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン、または脂質：核酸複合体、ネイキッドＤＮＡ、人工ウイルス粒子、および、薬剤増強ＤＮＡ取り込みを含み得る。効果的なポリヌクレオチドのレセプター認識リポフェクションに適切であるカチオン性および中性の脂質が使用され得る。送達は、細胞へ（例えばiｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ投与）または標的組織へ（例えばｉｎ  ｖｉｖｏ投与）であり得る。例えば免疫脂質などの標的とされるリポソームを含む、脂質：核酸複合体の調製が使用され得る。
【０１７２】
ＲＮＡまたはＤＮＡウイルスベースのシステムが、身体の特定の細胞を標的とするために、および、細胞核へとウイルスのペイロードを輸送するために使用され得る。ウイルスベクターは、直接的に（ｉｎ  ｖｉｖｏで）投与されてもよく、または、それらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞を処置するために使用されてもよく、そして、改変された細胞が、任意には、投与されても（ｅｘ  ｖｉｖｏで）よい。ウイルスベースのシステムは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、遺伝子導入のためのアデノ関連および単純ヘルペスウイルスベクターなどを含み得る。宿主ゲノムへの組み込みは、レトロウイルス、レンチウイルス、およびアデノ関連ウイルス遺伝子導入法で起こり得、これは、インサートされた導入遺伝子の長期にわたる発現をもたらし得る。高い形質転換効率が多くの異なる細胞型および標的組織において観察され得る。
【０１７３】
レトロウイルスの親和性は、外来エンベロープタンパク質を組み入れることによって改変され、標的細胞の潜在的な標的集団を拡大する。レンチウイルスベクターは、非分裂細胞を形質転換させるまたは感染させることができ、および、高いウイルス力価を産生することのできるレトロウイルスベクターである。レトロウイルス遺伝子導入の選択は、標的組織に依存し得る。レトロウイルスベクターは、６〜１０ｋｂまでの外来性配列のパッケージング能力を有するシス作用性の末端反復配列を含み得る。最小シス作用性ＬＴＲがベクターの複製およびパッケージングに十分であり、これは、永続的な導入遺伝子発現を提供するための標的細胞への治療遺伝子の組み入れに使用され得る。レトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびそれらの組み合わせに基づくものを含み得る。
【０１７４】
アデノウイルスベースのシステムが使用され得る。アデノウイルスベースのシステムは、導入遺伝子の一過性の発現を導き得る。アデノウイルスベースのベクターは、細胞中で高い形質導入効率を有し得、そして、細胞分裂を必要としないかもしれない。発現の高い力価およびレベルがアデノウイルスベースのベクターにおいて得られ得る。アデノ関連ウイルス（「ＡＡＶ」）ベクターは、例えば核酸およびペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ産生において、および、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ遺伝子治療方法のために、標的核酸をもつ細胞を形質導入するために使用され得る。
【０１７５】
パッケージング細胞が、宿主細胞を感染させることのできるウイルス粒子を形成するために使用され得る。このような細胞としては、２９３細胞（例えば、アデノウイルスのパッケージングのため）、および、Ｐｓｉ２細胞またはＰＡ３１７細胞（例えば、レトロウイルスのパッケージングのため）などが挙げられる。ウイルスベクターは、核酸をウイルス粒子へとパッケージングする細胞株を製造することによって作成され得る。ベクターは、パッケージングおよびその後の宿主への組込みに必要な最小限のウイルス配列を含み得る。ベクターは、発現されるポリヌクレオチド（複数のポリヌクレオチド）のための発現かセットによって置き換えられ得る他のウイルス配列を含んでいてもよい。欠損しているウイルス機能は、パッケージング細胞株によってトランスで供給され得る。例えば、ＡＡＶベクターは、パッケージングおよび宿主ゲノムへの組込みに必要であるＡＡＶゲノムからのＩＴＲ配列を含み得る。ウイルスＤＮＡは、細胞株中にパッケージングされ得、これは、他のＡＡＶ遺伝子、すなわちｒｅｐおよびｃａｐをエンコードしているがＩＴＲ配列をもっていないヘルパープラスミドを含み得る。細胞株はまた、ヘルパーとしてアデノウイルスで感染され得る。ヘルパーウイルスはＡＡＶベクターの複製およびヘルパープラスミドからのＡＡＶ遺伝子の発現を促進し得る。アデノウイルスによる汚染は、例えばアデノウイルスがＡＡＶよりもより感受性である加熱処理などによって、低減され得る。例えば米国特許出願２００３００８７８１７明細書に記載のような細胞への核酸の送達のための追加の方法が用いられてもよく、これらは参照によって本明細書中に組み込まれる。
【０１７６】
宿主細胞は、本明細書中に記載の一またはそれ以上のベクターで一過性にまたは非一過性に遺伝子導入される。細胞は、対象において自然に起こるように遺伝子導入され得る。細胞は、対象から採取されまたは対象由来であり得、そして、遺伝子導入される。細胞は、対象から採取された細胞由来、すなわち細胞株であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書中で記載される一またはそれ以上のベクターで遺伝子導入された細胞は、一またはそれ以上のベクター由来の配列を含む新しい細胞株を確立させるために使用される。いくつかの実施形態において、本開示の組成物で一過性に遺伝子導入された細胞（例えば一またはそれ以上のベクターの一過性の遺伝子導入またはＲＮＡによる遺伝子導入）は、改変を含むが他の外来性配列を含まない細胞を含む新しい細胞株を確立するために使用される。
【０１７７】
宿主細胞に適合可能な任意の適切なベクターが本開示の方法に使用され得る。真核生物宿主細胞のためのベクターの非限定的な例としては、例えば、ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Stratagene（登録商標））、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬＳＶ４０（Pharmacia（登録商標））などが挙げられる。
【０１７８】
細胞の本開示の組成物との接触は、細胞の生存を促進する任意の培養液中および任意の培養条件下で行われ得る。例えば、細胞は、Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ  １６４０、ウシ胎仔血清で補充された、または熱失活されたヤギ血清（約５〜１９％）、Ｌ−グルタミン、チオール、特には２−メルカプトエタノール、および、例えばペニシリンおよびストレプトマイシンなどの抗生物質などの好都合な適切な栄養性溶媒中に懸濁され得る。培養液は、細胞がそれに対して応答性である成長因子を含んでいてもよい。本明細書中で規定される成長因子は、培養液中または無処置の組織中で、膜貫通レセプターへの特定の効果を介して、細胞の生存、成長、および／または分化を促進することのできる分子である。成長因子は、ポリヌクレオチド因子および非ポリヌクレオチド因子を含み得る。
【０１７９】
多くの実施形態において、選択されるシステムは、特定の組織または細胞種を標的としている。いくつかの場合において、送達システムの組織または細胞標的化は、送達システムの組織または細胞特異的マーカー、例えば細胞表面タンパク質への結合によって達成される。ウイルスまたは非ウイルス送達システムは、興味の対象である標的組織または細胞種に対してカスタマイズされ得る。
【０１８０】
本明細書中で記載される分子（例えばポリペプチドおよび／またはポリペプチドをエンコードしている核酸）または免疫細胞を含む医薬組成物は、予防的処置および／または治療的処置のために投与され得る。治療的適用において、組成物は、疾患または病状を既に患っている被験者に対して、疾患または病状の症状を治癒させるまたは少なくとも部分的に停止させるため、または病状を治癒（cure）、治癒（heal）、改善、寛解させるために十分な量で、投与され得る。この使用のために効果的な量は、疾患または病状の深刻度および経過、それ以前の治療法、被験者の健康状態、体重、および薬剤への応答性、ならびに、処置を行う意思の判断に基づいて変わり得る。
【０１８１】
複数の治療剤が任意の順番または同時に投与され得る。同時に行われる場合、複数の治療剤は、単一の、一体化された形状で、または、例えば複数の別個のピルなどの複数の形状で提供され得る。分子は、一緒に、または別個に、単一のパッケージ中に、または複数のパッケージ中に、充填され得る。同時ではない場合、複数の用量のタイミングは、長くて約月単位で変えられ得る。
【０１８２】
本明細書中で記載される分子は、疾患または病状の発生の前、あいだ、または後に投与され得、そして化合物を含む組成物を投与するタイミングは、変わり得る。例えば、医薬組成物は、予防薬として使用され得、そして、疾患または病状の発生を防ぐために、病状または疾患の傾向がある被験者へと継続的に投与され得る。分子および医薬組成物は、症状の発症のあいだまたはその後できるだけ速やかに、被験者に投与され得る。分子の投与は、症状の発生の最初の４８時間以内に、症状の発生の最初の２４時間以内に、症状の発生の最初の６時間以内に、症状の発生の最初の３時間以内に、開始され得る。最初の投与は、本明細書中で記載される任意の製剤を用いて、例えば本明細書中で記載される任意のルートによってなど、任意の実用的なルートを介し得る。分子は、疾患または病状の発生が検出された、または疑われた後、実用的にできるだけ速やかに、および、疾患の処置に必要な長さの時間のあいだ（例えば、約１か月〜約３か月）、投与され得る。処置の長さは、各被験者によって異なり得る。
【０１８３】
分子は、生物学的コンパートメント中にパッケージングされ得る。分子を含む生物学的コンパートメントが被験者へと投与され得る。生物学的コンパートメントとしては、これらに限定されるわけではないが、ウイルス（レンチウイルス、アデノウイルス）、ナノ球体、リポソーム、量子ドット、ナノ粒子、マイクロ粒子、ナノカプセル、ビヒクル、ポリエチレングリコール粒子、ハイドロゲル、およびミセルなどが挙げられ得る。
【０１８４】
例えば、生物学的コンパートメントはリポソームを含み得る。リポソームは、一またはそれ以上の脂質二重層を含む自己集合構造であり得、それぞれの層は、対向して配向されている両親媒性の脂質分子を含む２つの単層を含み得る。両親媒性の脂質は、２つまたはそれ以上の非極性（疎水性）のアシルまたはアルキル鎖に共役結合している極性（親水性）の頭部を含み得る。疎水性のアシル鎖と周囲の水性溶媒とのあいだのエネルギー的に好ましくない接触が、両親媒性脂質分子を、極性頭部が二重層の表面に向いて配向し得、およびアシル鎖が二重層の内部に向かって配向され、アシル鎖を水性環境との接触から効果的に遮蔽するように分子自身に配列させる。
【０１８５】
リポソーム内において使用される好ましい両親媒性化合物の例としては、ホスホグリセリドおよびスフィンゴ脂質が挙げられ、代表的な例としては、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジリノレオイルホスファチジルコリン、および卵黄スフィンゴミエリン、またはそれらの任意の組みあわせが挙げられる。
【０１８６】
生化学的コンパートメントは、ナノ粒子を含んでいてもよい。ナノ粒子は、約４０ｎｍ〜約１．５μｍ、約５０ｎｍ〜約１．２μｍ、約６０ｎｍ〜約１μｍ、約７０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約８０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約９０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を含み得る。
【０１８７】
いくつか場合において、ナノ粒子のサイズが大きくなるにつれて、放出速度は、低下また長くなり得、そして、ナノ粒子のサイズが小さくなるにつれて、放出速度は、増大し得る。
【０１８８】
ナノ粒子中のアルブミンの量は、約５％〜約８５％アルブミン（ｖ／ｖ）、約１０％〜約８０％、約１５％〜約８０％、約２０％〜約７０％アルブミン（ｖ／ｖ）、約２５％〜約６０％、約３０％〜約５０％、または約３５％〜約４０％の範囲であり得る。医薬組成物は、３０、４０、５０、６０、７０、８０％までまたはそれ以上のナノ粒子を含み得る。いくつかの場合において、本開示の核酸分子は、ナノ粒子の表面に結合され得る。
【０１８９】
生化学的コンパートメントは、ウイルスを含んでいてもよい。ウイルスは、本開示の医薬組成物のための送達システムであり得る。例示的なウイルスとしては、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスＩまたはII、パルボウイルス、細網内皮症ウイルス、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）などが挙げられる。本開示の医薬組成物は、ウイルスを使用して細胞へと送達され得る。ウイルスは、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで感染および形質導入させ得る。ｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ送達において、形質導入された細胞は、治療を必要とする被験者へと投与され得る。
【０１９０】
医薬組成物は、ウイルス送達システム中に封入されてもよい。例えば、組成物は、ＨＳＶ−１ヘルパーウイルス非含有パッケージングシステム中に封入されてもよい。
【０１９１】
ウイルス送達システム（例えば、本開示の医薬組成物を含むウイルスなど）は、直接的な注入、定位注入によって、脳室内、ミニポンプ注入システムによって、対流によって、カテーテル、静脈内、非経口的、腹腔内、および／または皮下注射によって、必要としている被験者の細胞、組織、器官へと投与され得る。いくつかの場合において、細胞は、ウイルス送達システムを用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで形質導入され得る。形質導入された細胞は、疾患を患っている被験者へと投与され得る。例えば、幹細胞が医薬組成物を含むウイルス送達システムを用いて形質導入され得、そして、幹細胞は、疾患を処置するために患者に移植され得る。いくつかの例において、被験者に与えられる形質導入された細胞の用量は、一回用量当たり、約１×１０5細胞／ｋｇ、約５×１０5細胞／ｋｇ、約１×１０6細胞／ｋｇ、約２×１０6細胞／ｋｇ、約３×１０6細胞／ｋｇ、約５×１０6細胞／ｋｇ、約５×１０6細胞／ｋｇ、約６×１０6細胞／ｋｇ、約７×１０6細胞／ｋｇ、約８×１０6細胞／ｋｇ、約９×１０6細胞／ｋｇ、約１×１０7細胞／ｋｇ、約５×１０6細胞／ｋｇ、および約１×１０8細胞／ｋｇ、またはそれ以上であり得る。
【０１９２】
生化学的コンパートメントの細胞への導入は、ウイルスまたはバクテリオファージ感染、遺伝子導入、結合、プロトプラスト融合、リポフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）トランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、パーティクル・ガン法、リン酸カルシウム沈殿、直接的マイクロインジェクション、ナノ粒子媒介核酸送達などによって起こり得る。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、対象のシステムを発現している免疫細胞が投与される。対象のシステムを発現している免疫細胞は、疾患または病状の発生の前、あいだ、または後に投与され得、そして化合物を含む組成物を投与するタイミングは、変わり得る。例えば、対象のシステムを発現している免疫細胞は、予防薬として使用され得、そして、疾患または病状の発生を防ぐために、病状または疾患の傾向がある被験者へと継続的に投与され得る。免疫細胞は、症状の発症のあいだまたはその後できるだけ速やかに、被験者に投与され得る。投与は、症状の発生の最初の４８時間以内に、症状の発生の最初の２４時間以内に、症状の発生の最初の６時間以内に、症状の発生の最初の３時間以内に、開始され得る。最初の投与は、本明細書中で記載される任意の製剤を用いて、例えば本明細書中で記載される任意のルートによってなど、任意の実用的なルートを介し得る。免疫細胞は、疾患または病状の発生が検出された、または疑われた後、実用的にできるだけ速やかに、および、疾患の処置に必要な長さの時間のあいだ（例えば、約１か月〜約３か月）、投与され得る。処置の長さは、各被験者によって異なり得る。
【０１９４】
本明細書中に記載の分子（例えばポリペプチドおよび／または核酸など）は、約１ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約２５ｍｇ〜５００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜約４００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇ、約４５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約５５０ｍｇ、約５５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍ〜約６５０ｍｇ、約６５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約７５０ｍｇ、約７５０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約８５０ｍｇ、約８５０ｍｇ〜約９００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約９５０ｍｇ、または約９５０ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲の組成物中に存在し得る。
【０１９５】
本明細書中に記載されている分子（例えばポリペプチドおよび／または核酸など）は、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１９００、ｍｇ、約１９５０、または約２０００ｍｇの量である組成物中に存在し得る。
【０１９６】
本明細書中に記載されている分子（例えばポリペプチドおよび／または核酸など）は、少なくとも０．１、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、５．６、６、６．５、１０、またはそれ以上の活性ユニット／ｍｇ分子を提供する組成物中に存在し得る。活性は、遺伝子発現の調節であり得る。いくつかの実施形態において、被験者に送達される分子の活性ユニットの総計は、少なくとも２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１１００００、１２００００、１３００００、１４００００、１５００００、１６００００、１７００００、１８００００、１９００００、２０００００、２１００００、２２００００、２３００００、または２５００００またはそれ以上のユニットである。いくつかの実施形態において、被験者に送達される分子の活性ユニットの総計は、多くとも、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１１００００、１２００００、１３００００、１４００００、１５００００、１６００００、１７００００、１８００００、１９００００、２０００００、２１００００、２２００００、２３００００、または２５００００またはそれ以上のユニットである。
【０１９７】
本開示の様々な様態が以下の非限定的な例によってさらに説明される。
【０１９８】
実施例１：ＮＹ−ＥＳＯ−１標的ＴＣＲ  Ｔ細胞
アフェレーシスからの腫瘍細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１陽性であり、そして、被験者はＨＬＡ−Ａ：０２０１白血球をもっている。末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）がフィコールリンパ球分離を用いて分離された。２時間の接着培養の後、Ｔ細胞が除去された。ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲレンチウイルスが、１の感染効率（ＭＯＩ）で加えられた。Ｔ細胞はその後、培養され、そして増殖された。ＴＣＲ発現がフローサイトメトリーによって測定された。図１において、左側のパネルは、Ｔ細胞中のＲＣＲ発現を示しており、右側パネルは、形質導入されたＴ細胞中での発現を示している。図１のヒストグラムプロットは、ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ遺伝で形質導入されたＴ細胞中でのより多くのＴＣＲ発現を示している。
【０１９９】
実施例２：トリプルポジティブＴ細胞の調製
１０ｇまたはそれ以上の量の腫瘍組織が患者より除去された。細胞が酵素消化により分離された。ＣＤ３陽性Ｔ細胞がＣＤ３マグネティックビーズを用いて分離された。他の細胞は、患者からの腫瘍細胞を提供するために接着培養で増殖された。Ｔ細胞は、その後、マグネティックビーズを用いて分離された。ＰＤ−１、ＣＤ１３７およびＴＩＭ−３のトリプルポジティブＴ細胞がフローサイトメトリーを介してソートされ、そして、さらに培養および増殖された。
【０２００】
実施例３：ネオアンチゲン活性Ｔ細胞
調製は図２に示されている。外科手術からのＰＢＭＣまたは腫瘍細胞が、全エクソームシーケンスまたはＲＮＡトランスクリプトームシーケンシングに付された。そして２０個の変異が、患者のＨＬＡタイピングの観点から親和性予想をもとに選択された。ネオアンチゲンをエンコードしている遺伝子が合成され、そして、ＲＮＡに転写された。ＰＢＭＣが分離され、そして、２時間接着培養に付された。接着性単球が回収された。サイトカインが樹状細胞分化および成熟を促進するために添加された。ＲＮＡがエレクトロポレーションによって樹状細胞に遺伝子導入された。懸濁細胞は主にＴ細胞として得られ、そして、樹状細胞と一緒に培養された。ＣＤ１３７＋の陽性細胞がその後、ネオアンチゲン反応性（例えば認識性）Ｔ細胞（「ｎｅｏＴ」）を提供するために分離された。ｎｅｏＴはその後、増やされた。
【０２０１】
実施例４：ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子（ＰＤ１ｓｗ、配列番号：２）のためのレンチウイルスの調製
第４世代のレンチウイルスベクターシステムが使用された。ＰＤ１／ＣＤ２８ベクター、パッケージングベクター  ｐＭＤＬ−ｇａｇ、Ｒｅｖ、およびエンベロープベクター  ｐＭＤ２．Ｇが、リン酸カルシウムまたはリポソーム−ＰＥＩを用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞中に同時導入された。上澄みが４８時間後に回収され、そして、レンチウイルスを濃縮するために遠心分離された。
【０２０２】
レンチウイルスのタイトレーションが、３倍段階希釈で行われた。４８〜７２時間、５０μＬのレンチウイルスで形質導入された後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞が回収され、そしてその後、ＰＤ−１で染色された。ＰＤ−１陽性率（ＰＤ−１＋％）がフローサイトメトリーによって分析され、そして、力価が以下に基づき算出された。
力価（ＴＵ／ｍＬ）＝４００００〜４５０００（これは開始時のＨＥＫ２９３Ｔ細胞数である）×ＰＤ１+％×希釈倍率×２０（初めのＰＤ１+％＜２０％）
【０２０３】
図３Ａおよび３Ｂは、ＰＤ１／ＣＤ２８レンチウイルス力価の算出を示している。３×１０7より大きい力価がさらなる使用ができる。
【０２０４】
実施例５：ＰＤ１／ＣＤ２８のネオアンチゲン活性Ｔ細胞への形質導入
３つのタイプのＴ細胞、Ｓｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ、Ｓｗｉｃｈ−ＴＩＬ、およびＳｗｉｔｃｈ−ｎｅｏＴが得られた。Ｓｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ細胞は、実施例１のＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ細胞中にスイッチ分子を発現させることによって得られた。Ｓｗｉｃｈ−ＴＩＬ細胞は、実施例２のトリプルポジティブＴ細胞にスイッチ分子を発現させることによって得られた。Ｓｗｉｔｃｈ−ｎｅｏＴ細胞は、実施例３のｎｅｏＴ細胞にスイッチ分子を発現させることによって得られた。フローサイトメトリーは、全ての３つのタイプのＴ細胞において、約６０％であるＳｗｉｔｃｈの発現率を示している。図４を参照のこと。
【０２０５】
実施例６：ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＮＹ−ＥＳＯ−１標的ＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ＨＬＡタイピングは、Ａ：０２０１である、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＰＤ−Ｌ１腫瘍細胞が構築された。レンチウイルスベクターが、ＰＤ−Ｌ１およびＮＹ−ＥＳＯ−１導入遺伝子を形質導入するために、Ｊ８２（膀胱、移行上皮がん）へと感染効率ＭＯＩ＝５で添加された。Ｇ４１８およびピューロマイシンが、陽性細胞をスクリーニングするために７２時間後に添加された。フローサイトメトリーが、約２週間後にＰＤ−Ｌ１およびＮＹ−ＥＳＯ−１の発現を測定するために行われた（図５）。図５に示されているように、形質導入されたＪ８２細胞の９５％より多くが、同時にＰＤＬ１およびＮＹ−ＥＳＯ−１を発現しており、これは細胞構築の成功を確証している。図６Ａ〜６Ｃは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞キリングアッセイからのデータを示しており、ここで、Ｊ８２またはＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＰＤ−Ｌ１膀胱がん細胞が、Ｔ細胞、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞、またはＳｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞と接触された。Ｔ細胞、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞、またはＳｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ８およびＣＤ１０７ａの発現によってゲートされた。脱顆粒マーカーであって、通常はＴ細胞の顆粒内部で見出されるＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ−１としても知られる）の表面局在性は、標的細胞をキリングするためにＴ細胞が顆粒からパーフォリンおよびグランザイムを放出する際の、細胞障害性活性のサインである。図６Ａに示されているように、データは、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞と比較した場合の、Ｓｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞のより大きな細胞キリング活性を示している。図６Ｂおよび６Ｃは、Ｊ８２膀胱がん細胞への暴露が、Ｔ細胞、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞、またはＳｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞内において、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌を誘導しないことを示している。一方、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＰＤＬ１膀胱がん細胞への暴露は、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞およびＳｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞の両方において、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌を誘導し、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌レベルは、Ｓｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞においてより高い。
【０２０６】
実施例７：ＰＤ１／ＣＤ２８分子を発現しているＴＩＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果アッセイ
図７Ａおよび７Ｂは、腫瘍細胞とともに培養された場合のＴＩＬ（およびＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＴＩＬ（Ｓｗｉｔｃｈ−ＴＩＬ））におけるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の放出を示している。データは、腫瘍細胞への暴露が、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子なしのＴＩＬ細胞によるものと比較して、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＳｗｉｔｃｈ−ＴＩＬ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の、より高い分泌を誘導することを示している。
【０２０７】
実施例８：ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているｎｅｏＴのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
図８Ａおよび８Ｂは、腫瘍細胞と共に培養された場合の、ネオアンチゲン活性Ｔ細胞（ｎｅｏＴ）およびＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているｎｅｏＴ細胞におけるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の放出を示している。データは、腫瘍細胞への暴露が、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子なしのｎｅｏＴ細胞によるものと比較して、ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＳｗｉｔｃｈ−ｎｅｏＴ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の、より高い分泌を誘導することを示している。
【０２０８】
実施例９：ＰＤ１／ＣＤ２８スイッチ分子を発現しているＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞の動物実験
１×１０6個の腫瘍細胞、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＰＤＬ１、がＮＳＧマウスの皮下に接種される。腫瘍が約２週間後に発達されることが予期される。腫瘍サイズは、２３週で測定され、および３０匹のマウスが使用される。
【０２０９】
対照群のマウスが、皮下注射のＰＢＳで処置される（Ａ０）。５つの処置群があり、それらは、未処置群ＰＢＳ（Ａ１）、Ｔ細胞（Ａ２）、ｓｗｉｔｃｈ−Ｔ細胞（Ａ３）、ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞群（Ａ４）、およびＳｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞群である。細胞は、尾静脈中への１×１０7個の細胞の静脈内注射によって与えられる。
【０２１０】
腫瘍サイズは、３０日間、２〜３日毎に測定され、そして、マウスの全身状態が観察される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される。
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２１１】
実験は、グループＡ１〜Ａ３と比較して、グループＡ５の腫瘍サイズが減少するか、またはほぼ一定に維持されるか、または少なくとも増加速度が減少することを示すことが予想される。
【０２１２】
処置後の腫瘍部位でのＴ細胞の量が分析される。マウスは投与後、１０日目に処置群Ａ３〜Ａ５のそれぞれからランダムに選択され、そして、ＴＩＬを得るために腫瘍細胞が分離される。フローサイトメトリーが腫瘍部位に存在する総計のＴ細胞の量を測定するために行われる。Ｓｗｉｔｃｈ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ  Ｔ細胞を用いた処置（Ａ５）が、腫瘍部位におけるＴ細胞のより大きな存在をもたらすことが期待される。
【０２１３】
実施例１０：Ｂ細胞表面タンパク質（ＢＣＡＲ）を標的とするレンチウイルスＣＡＲの調製
ＣＤ１９がＢ−ＣＡＲ標的として選択され、そして、配列番号：１で示される配列を有する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖが、Ｂ−ＣＡＲを構築するために使用された。第４世代のレンチウイルスベクターシステムが使用された。ＣＡ１９  ＣＡＲベクター、パッケージングベクターｐＭＤＬ−ｇａｇ、Ｒｅｖ、およびエンベロープベクターｐＭｄ２．Ｇが、リン酸カルシウムまたはリポソーム−ＰＥＩを用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞中に同時導入された。上澄みが４８時間後に回収され、そして、レンチウイルスを濃縮するために超遠心分離された。
【０２１４】
レンチウイルスのタイトレーションが、３倍段階希釈で行われた。４８〜７２時間、５０μＬのレンチウイルスで形質導入された後の２９３Ｔ細胞が回収され、そしてその後、ＣＡＲ発現のために染色された。
ＣＡＲ陽性率（ＣＡＲ％）がフローサイトメトリーによって分析され、そして、力価が以下に基づき算出された。
力価（ＴＵ／ｍＬ）＝開始時の２９３Ｔ細胞数×ＣＡＲ＋％×希釈倍率×２０（初めのＣＡＲ＋％＜２０％）
【０２１５】
レンチウイルス力価が算出された。３×１０7より大きい力価がさらなる使用に適当であると考えられた。
【０２１６】
実施例１１：ＢＣＡＲの腫瘍認識性Ｔ細胞への形質導入
３つのタイプのＴ細胞、ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ、ＴＩＬ、およびｎｅｏＴが、ＢＣＡＲレンチウイルスで形質導入することによって得られた（ＢＣＡＲ−ＮＹ−ＥＳＯ−１−ＴＣＲ−Ｔ、ＢＣＡＲ−ＴＩＬ、およびＢＣＡＲ−ｎｅｏＴ）。フローサイトメトリーは、全ての３つのタイプのＴ細胞において、約６０％であるＢ−ＣＡＲの発現率を示している。図９を参照のこと。３つのタイプのＴ細胞は、別個に増殖された。
【０２１７】
実施例１２：ＢＣＡＲを発現しているＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ＮＹ−ＥＳＯ−１標的ＴＣＲ−Ｔ細胞におけるＢＣＡＲの機能を確認するために、ＨＬＡタイピング  Ａ：０２０１をもつＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１−Ｌｕｃ腫瘍細胞株が構築された。ＢＣＡＲ−ＮＹ  ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞の二重標的機能を確認するために、１×１０5個のＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１−Ｌｕｃ細胞が２４ウェルプレートに播種され、そして接着させるために終夜培養された。細胞は、４つの群、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤに分けられ、そして、それぞれのウェルはまた、５×１０4個のＢ細胞を含んでいた。グループＡは、２×１０5個のＴ細胞と共培養された。グループＢは、２×１０5個のＢＣＡＲ−Ｔ細胞（ＣＡＲ陽性率６０％）と共培養された。グループＣは、２×１０5個のＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞と共培養された。グループＤは、２×１０5個のＢＣＡＲ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞と共培養された。以下のアッセイが行われた。
【０２１８】
Ｔ細胞の増加。Ｔ細胞数が、４８時間および９６時間の培養後に計測された。図１０に示されているように、培養４日後、グループＡのＴ細胞は、約３倍に増加され、グループＢのＢＣＡＲ−Ｔ細胞は１２倍に増加され、グループＣのＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞は約１０倍に増加され、そして、ＢＣＡＲ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞は約２７倍に増加されていた。
【０２１９】
腫瘍細胞の増殖。４８時間および９６時間後にグループＡ〜Ｄの培養物から上澄みが回収された。そして培養物はＰＢＳで３回洗浄された。接着性の腫瘍細胞が溶解され、そして、腫瘍細胞の生存割合の指標としてルシフェラーゼ活性が測定された。図１１を参照のこと。データは４８時間の培養後、腫瘍細胞からのタンパク質の平均量（したがって、存在する腫瘍細胞の数）は、他の処置と比較して、ＢＣＡＲ−ＮＹ−ＥＳＯ１−ＴＣＲ−Ｔ細胞での処置において最も低いことを示している。
【０２２０】
実施例１３：ＢＣＡＲを発現しているＴＩＬのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ＴＩＬにおけるＣＤ１９  ＣＡＲ（ＢＣＡＲ）の機能を確認するために、ヒト被験者の新しい腫瘍組織から腫瘍細胞が分離され、そして、２４ウェルプレートに播種された。細胞は、接着させるために終夜培養された。ウェル中に、ＴＩＬおよびＢＣＡＲ−ＴＩＬが添加された。同じ量のＢ細胞がウェルに添加され、そして以下のアッセイが行われた。
【０２２１】
Ｔ細胞の増加。腫瘍細胞との共培養９６時間後、図１２Ａに示されるように、ＴＩＬは、約１０倍に増加され、ＢＣＡＲ−ＴＩＬは約２５倍に増加された。結果は、Ｂ細胞および腫瘍細胞と共培養された場合、ＢＣＡＲを含まないＴＩＬと比較してＢＣＡＲ−ＴＩＬの増加が大きかったことを示す。
【０２２２】
腫瘍細胞の増殖。９６時間後に培養混合物から上澄みが回収された。そして培養物はＰＢＳで３回洗浄された。接着性の腫瘍細胞が溶解され、そして、腫瘍細胞の生存割合の指標としてルシフェラーゼ活性が測定された。ルシフェラーゼレベルが図１２Ｂに示されている。データは９６時間の培養後、腫瘍細胞からのタンパク質の平均量（したがって、存在する腫瘍細胞の数）は、ＢＣＡＲを含まないＴＩＬで処置した場合と比較して、ＢＣＡＲ−ＴＩＬ細胞での処置をした場合により低いことを示している。
【０２２３】
実施例１４：ＢＣＡＲを発現しているネオアンチゲン反応性Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ｎｅｏＴ細胞におけるＣＤ１９  ＣＡＲ（例えばＢＣＡＲ）の機能を確認するために、ヒト被験者の新しい腫瘍組織から腫瘍細胞が分離され、そして、２４ウェルプレートに播種された。細胞は、接着させるために終夜培養された。培養液中に、ｎｅｏＴおよびＢＣＡＲ−ｎｅｏＴ細胞が添加された。同じ量のＢ細胞がウェルに添加され、そして以下のアッセイが行われた。
【０２２４】
Ｔ細胞の増加。腫瘍細胞との共培養９６時間後、図１３Ａに示されるように、ｎｅｏＴは、約９倍に増加され、ＢＣＡＲ−ｎｅｏＴは約２３倍に増加された。結果は、Ｂ細胞および腫瘍細胞と共培養された場合、ＢＣＡＲを含まないｎｅｏＴと比較してＢＣＡＲ−ｎｅｏＴの増加が大きかったことを示す。
【０２２５】
腫瘍細胞の増殖。９６時間後に培養混合物から上澄みが回収された。そして培養物はＰＢＳで３回洗浄された。接着性の腫瘍細胞が溶解され、そして、腫瘍細胞の生存割合の指標としてルシフェラーゼ活性が測定された。ルシフェラーゼレベルが図１３Ｂに示されている。データは９６時間の培養後、腫瘍細胞からのタンパク質の平均量（したがって、存在する腫瘍細胞の数）は、ＢＣＡＲを含まないｎｅｏＴで処置した場合と比較して、ＢＣＡＲ−ｎｅｏＴ細胞での処置をした場合により低いことを示している。
【０２２６】
実施例１５：ＢＣＡＲを発現しているＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ−Ｔ細胞の動物実験
動物モデル：１×１０6個の腫瘍細胞（Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ−１）がＮＳＧマウスの皮下に接種される。ブランクコントロールとして、グループＡ０の動物が、ＰＢＳを皮下注射された。腫瘍細胞の注入後約２週間で腫瘍は動物に形成される。腫瘍サイズは、２３日後に測定される。３０匹のマウスが選択される。
【０２２７】
投与：ブランクコントロール（Ａ０）群の動物が、尾静脈からＰＢＳを注入される。腫瘍形成群は６つの群に分けられ、それらは、ＰＢＳ群（Ａ１）、Ｔ細胞群（Ａ２）、ＢＣＡＲ−Ｔ群（Ａ３）、ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲ−Ｔ群（Ａ４）、ＢＣＡＲ＆ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ−Ｔ二重標的Ｔ細胞群（Ａ５）、および、高い用量のＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ−Ｔ群（Ａ６）である。Ａ１〜Ａ５のグループの動物は、尾静脈を介して１×１０4個の細胞を注入され、グループＡ６は、１×１０7個の細胞を注入される。全ての群は、１×１０7個のＢ細胞を注入により与えられる。
【０２２８】
腫瘍サイズおよびマウスの全身状態は、投与後２８日間、２〜３日毎に測定される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２２９】
腫瘍量の変化
【０２３０】
本実験は、全てのグループの中でグループ５のマウスがもっとも小さい腫瘍サイズを示すことを示すことが予期される。
【０２３１】
注入されたＴ細胞の総量の変化
【０２３２】
末梢血が投与１０日後にグループＡ２〜Ａ５の動物から抽出される。ＣＤ３＋Ｔ細胞の総数がフローサイトメトリーを用いて計測され、ＢＣＡＲをもつグループＡ３〜Ａ５のＴ細胞数がグループＡ４の細胞数よりも多いことが示されることが予期される。ＢＣＡＲ  Ｔ細胞および二重標的Ｔ細胞の両方が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて増加することが予期される。
【０２３３】
実施例１６：ＢＣＡＲを発現しているＴＩＬの動物実験
動物モデル：新しい腫瘍組織から腫瘍細胞が分離され、そして、動物当たり１×１０6個の量でＮＳＧマウスの皮下に注入される。ブランクコントロールとして、グループＡ０の動物が、ＰＢＳを皮下注射された。腫瘍細胞の注入後約２週間で腫瘍は動物に形成される。腫瘍サイズは、２５日後に測定される。３０匹のマウスが選択される。
【０２３４】
投与：ブランクコントロール（Ａ０）群の動物が、尾静脈からＰＢＳを注入される。腫瘍形成群は５つの群に分けられ、それらは、ＰＢＳ群（Ａ１）、Ｔ細胞群（Ａ２）、ＢＣＡＲ−Ｔ群（Ａ３）、ＴＩＬ群（Ａ４）、ＢＣＡＲ  ＴＩＬ細胞群（Ａ５）である。Ａ１〜Ａ５のグループの動物は、尾静脈を介して１×１０4個のＴ細胞を注入され、そして、全ての群は、１×１０7個のＢ細胞を注入により与えられる。
【０２３５】
腫瘍サイズおよびマウスの全身状態は、投与後２８日間、２〜３日毎に測定される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２３６】
腫瘍量の変化
【０２３７】
本実験は、全てのグループの中でグループ５のマウスがもっとも小さい腫瘍サイズを示すことを示すことが予期される。
【０２３８】
注入されたＴ細胞の総量の変化
【０２３９】
末梢血が投与１０日後にグループＡ２〜Ａ５の動物から抽出される。ＣＤ３＋Ｔ細胞の総数がフローサイトメトリーを用いて計測され、ＢＣＡＲをもつグループＡ３〜Ａ５のＴ細胞数がグループＡ４の細胞数よりも多いことが示されることが予期される。ＢＣＡＲ  Ｔ細胞および二重標的Ｔ細胞の両方が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて増加することが予期される。
【０２４０】
実施例１７：ＢＣＡＲを発現しているｎｅｏＴの動物実験
動物モデル：新しい腫瘍組織から腫瘍細胞が分離され、そして、動物当たり１×１０6個の量でＮＳＧマウスの皮下に注入される。ブランクコントロールとして、グループＡ０の動物が、ＰＢＳを皮下注射された。腫瘍細胞の注入後約２週間で腫瘍は動物に形成される。腫瘍サイズは、２５日後に測定される。３０匹のマウスが選択される。
【０２４１】
投与：ブランクコントロール（Ａ０）群の動物が、尾静脈からＰＢＳを注入される。腫瘍形成群は６つの群に分けられ、それらは、ＰＢＳ群（Ａ１）、Ｔ細胞群（Ａ２）、ＢＣＡＲ−Ｔ群（Ａ３）、ノーマルｎｅｏＴ群（Ａ４）、ＢＣＡＲ  ｎｅｏＴ群（Ａ５）、および、高い用量のノーマルｎｅｏＴ細胞群（Ａ６）である。Ａ１〜Ａ５のグループの動物は、尾静脈を介して１×１０4個のＴ細胞を注入され、グループＡ６は、１×１０7個のＴ細胞を注入される。そして、全ての群は、１×１０7個のＢ細胞を注入により与えられる。
【０２４２】
腫瘍サイズおよびマウスの全身状態は、投与後２８日間、２〜３日毎に測定される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される。
【０２４３】
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２４４】
腫瘍量の変化
【０２４５】
本実験は、コントロールのＡ１、Ａ２および／またはＡ３グループの腫瘍サイズと比較して、Ａ４、Ａ５および／またはＡ６グループの腫瘍サイズがより小さいことがしめされることが予期される。
【０２４６】
注入されたＴ細胞の総量の変化
【０２４７】
末梢血が投与１０日後にグループＡ２〜Ａ５の動物から抽出される。ＣＤ３＋Ｔ細胞の総数がフローサイトメトリーを用いて計測され、ＢＣＡＲをもつグループＡ３〜Ａ５のＴ細胞数がグループＡ４のＴ細胞数よりも多いことが示されることが予期される。ＢＣＡＲ  Ｔ細胞および二重標的Ｔ細胞の両方が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて増加することを示している。
【０２４８】
実施例１８：３つのスイッチ分子のためのレンチウイルスの調製
３つのスイッチ分子ＰＤ１／ＣＤ２８（以下、ＰＤ１ｓｗと称される、配列番号：２）、ＴＩＭ３／ＣＤ２８（以下、ＰＤ１ｓｗと称される、配列番号：２）、およびＴＧＦＢＲ２／ＣＤ２８（以下、ＴＧＦＢＲ２ｓｗと称される、配列番号：４）が構築された。ＰＤ１、ＴＩＭ３およびＴＧＦＢＲ２の細胞外ドメインが、それぞれのスイッチ分子の免疫阻害タンパク質として使用され、ＣＤ２８が共刺激シグナリングタンパク質として使用された。
【０２４９】
ＰＤ１ｓｗを例として、第４世代のレンチウイルスベクターシステムが使用された。ＰＤ１／ＣＤ２８ベクター、パッケージングベクター  ｐＭＤＬ−ｇａｇ、Ｒｅｖ、およびエンベロープベクター  ｐＭＤ２．Ｇが、リン酸カルシウムまたはリポソーム−ＰＥＩを用いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞中に同時導入された。上澄みが４８時間後に回収され、そして、レンチウイルスを濃縮するために遠心分離された。
【０２５０】
ＰＤ１ｓｗレンチウイルスの力価が、３倍段階希釈で測定された。４８〜７２時間、５０μＬのレンチウイルスで形質導入された後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞が回収され、そしてその後、ＰＤ−１で染色された。ＰＤ−１＋（ＣＡＲ＋％）細胞がフローサイトメトリーによって分析され、そして、力価が以下に基づき算出された。
力価（ＴＵ／ｍＬ）＝開始時の２９３Ｔ細胞数×ＰＤ１＋％×希釈倍率×２０（初めのＰＤ１＋％＜２０％）。
【０２５１】
レンチウイルス力価が算出された。３×１０7より大きい力価がさらなる使用に適当であると考えられた。
【０２５２】
ＴＩＭ３ｓｗおよびＴＧＦＢＲ２ｓｗが同様の方法で調製された。
【０２５３】
実施例１９：Ｓｗｉｔｃｈ＋ＢＣＡＲとロードされたレンチウイルスの調製
ＰＤ１ｓｗ−２Ａ−ＣＤ１９  ＣＡＲ（以下、「ＰＤ１ｓｗ−ＢＣＡＲ」）、ＴＩＭ３ｓｗ−２Ａ−ＣＤ１９  ＣＡＲ（以下、「ＴＩＭ３ｓｗ−ＢＣＡＲ」）、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−２Ａ−ＣＤ１９  ＣＡＲ（以下、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＢＣＡＲ））のために、レンチウイルスが、それぞれ実施例１８の方法にしたがって構築された。
【０２５４】
実施例２０：ＴＩＬおよびｐＴＩＬへのＳｗｉｔｃｈおよびＢＣＡＲのベクターの形質導入
実施例１９のスイッチよびＢＣＡＲのためのレンチウイルスならびにそれらの組み合わせが、ＴＩＬおよび抹消ＴＩＬへと形質導入された。以下の細胞が作製された。
（１）ＴＩＬｓ
１．ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬ（ＴＩＬに形質導入されるＰＤ１ｓｗレンチウイルス）
２．ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ（ＴＩＬに形質導入されるＴＩＭ３ｓｗレンチウイルス）
３．ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ（ＴＩＬに形質導入されるＴＧＦＢＲ２ｓｗレンチウイルス）
４．ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（ＴＩＬに形質導入されるＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス）
５．ＰＤ１ｓｗ−ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（ＳｕｐｅｒＴＩＬを提供するためのＴＩＬに形質導入されるＰＤ１ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＰＤ１−ＳＴＩＬｓ」）
６．ＴＩＭ３ｓｗ−ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（ＳｕｐｅｒＴＩＬを提供するためのＴＩＬに形質導入されるＴＩＭ３ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ」）
７．ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（ＳｕｐｅｒＴＩＬを提供するためのＴＩＬに形質導入されるＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ」）
８．ＰＤ１−ＳＴＩＬ、ＴＩＭ３−ＳＴＩＬおよびＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬが、「ＸＳＴＩＬ」を提供するために一緒に混合された。
（２）ｐＴＩＬｓ
１．ＰＤ１ｓｗ−ｐＴＩＬ（ｐＴＩＬに形質導入されるＰＤ１ｓｗレンチウイルス）
２．ＴＩＭ３ｓｗ−ｐＴＩＬ（ｐＴＩＬに形質導入されるＴＩＭ３ｓｗレンチウイルス）
３．ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ｐＴＩＬ（ｐＴＩＬに形質導入されるＴＧＦＢＲ２ｓｗレンチウイルス）
４．ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（ｐＴＩＬに形質導入されるＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス）
５．ＰＤ１ｓｗ−ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬを提供するためのｐＴＩＬに形質導入されるＰＤ１ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＰＤ１−ＳｐＴＩＬｓ」）
６．ＴＩＭ３ｓｗ−ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬを提供するためのｐＴＩＬに形質導入されるＴＩＭ３ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＴＩＭ３−ＳｐＴＩＬ」）
７．ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬを提供するためのｐＴＩＬに形質導入されるＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルス、以下、「ＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬ」）
８．ＰＤ１−ＳｐＴＩＬ、ＴＩＭ３−ＳｐＴＩＬおよびＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬが、「ＸＳｐＴＩＬ」を提供するために一緒に混合された。
【０２５５】
Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬはまた、ＳｕｐｅｒＴＩＬであることが理解されるべきである。Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬは、異なる細胞起源を特定するために特に名付けられた。
【０２５６】
（１）ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬｓ／ｐＴＩＬｓの調製
【０２５７】
ＰＤ１ｓｗレンチウイルスの力価に基づき、レンチウイルスがＭＯＩ＝５でＴＩＬｓ／ｐＴＩＬｓへ添加された。フローサイトメトリーアッセイが、ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬｓ／ｐＴＩＬｓを約６０％のＰＤ１の発現割合をもつようにソートするために行われた。
【０２５８】
ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ／ｐＴＩＬ、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ／ｐＴＩＬ、およびＢＣＡＲ−ＴＩＬ／ｐＴＩＬが同様の方法で調製された。
【０２５９】
（２）ＰＤ１−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬｓの調製
【０２６０】
ＰＤ１ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲレンチウイルスの力価に基づき、レンチウイルスがＭＯＩ＝５でＴＩＬｓ／ｐＴＩＬｓへ添加された。フローサイトメトリーアッセイが、約３０％のＰＤ１およびＣＤ１９  ＣＡＲの発現割合をもつＰＤ１＋細胞をソートするために行われた。
【０２６１】
ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬ、およびＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬがＰＤ１−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬと同様の方法で調製された。
【０２６２】
（３）ＸＳＴＩＬ／ＸｓＴＩＬの調製
【０２６３】
ＰＤ１−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬ、ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬ、およびＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬが、それぞれが０〜１００％で含まれるように特定の割合にしたがって混合された。本実施例においては、割合は、１：１：１である。
【０２６４】
実施例２１：ＳｕｐｅｒＴＩＬ効果のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ＳｕｐｅｒＴＩＬの効果を確認するため、Ｂ細胞が添加されない場合とＢ細胞が添加された場合とで別々に効果が観察される。
【０２６５】
（１）Ｂ細胞が添加されない場合の細胞キリング効果の比較
【０２６６】
患者の新しい腫瘍組織から腫瘍細胞が分離され、そして、ルシフェラーゼマーカーと供に２４ウェルプレート中に播種される。細胞は、接着させるために終夜培養された。細胞は、１０個のグループに分けられ、そして、コントロールと、または以下のＴ細胞と共培養される：
Ｔ細胞−ＣＫの添加なしの、コントロールグループ（グループＡ１）；ノーマルＴＩＬ（グループＡ２）；ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（グループＡ３）；ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬ（グループＡ４）；ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ（グループＡ５）；ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ（グループＡ６）；ＰＤ１−ＳＴＩＬ（グループＡ７）；ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ（グループＡ８）；ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ（グループＡ９）；およびＸＳＴＩＬ（グループＡ１０）。以下のアッセイが行われる。
【０２６７】
１．Ｔ細胞によるサイトカイン分泌。ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌が、２４時間腫瘍細胞と共に共培養した後に、ＥＬＩＳＡを用いて、それぞれのグループに対して測定される。図１６Ａおよび１６Ｂに示されるように、コントロールのＡ１グループではＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌はみられず、他の全てのグループ（グループＡ２〜Ａ１０）においてはＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌がみられる。すべてのグループのなかで、Ｓｗｉｔｃｈをもつもの（グループＡ４〜Ａ１０）が、Ｓｗｉｔｃｈを有さないグループ（グループＡ２およびＡ３）よりも、より高いＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌を示す。
【０２６８】
２．腫瘍細胞の増殖。４８時間および９６時間後に培養物から上澄みが回収された。そして培養物はＰＢＳで３回洗浄された。接着性の腫瘍細胞が溶解され、そして、腫瘍細胞の生存割合の指標としてタンパク質の量を測定するためにルシフェラーゼ活性が測定された。図１７Ａに示されるように、それぞれのグループ（グループＡ２〜Ａ１０）における腫瘍細胞の数は、コントロールのグループ（グループＡ１）と比較して、減少しており、そして、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＡ４〜Ａ１０）は、腫瘍細胞の数において、Ｓｗｉｔｃｈをもたないグループ（グループＡ２およびＡ３）よりも、さらに顕著な減少を示す。
【０２６９】
３．Ｔ細胞の増加。４８時間の培養後、Ｔ細胞の数が計測される。図１７Ｂに示されるように、Ｓｗｉｔｃｈをもたないグループ（グループＡ２およびＡ３）のＴ細胞は、少しの増加を示し、一方、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＡ４〜Ａ１０）は顕著な増加を示す。
【０２７０】
（２）Ｂ細胞存在下の細胞キリングの比較
【０２７１】
腫瘍細胞およびＴＩＬが患者の新しい腫瘍組織から分離され、そして、接着させるために終夜培養される前に、ルシフェラーゼマーカーと供に２４ウェルプレート中に播種される。それぞれのウェルに、同じ量のＢ細胞が添加される。培養された細胞は、１０個のグループに分けられ、そして、コントロールと、または以下のＴ細胞と共培養される：
Ｔ細胞−ＣＫの添加なしの、コントロールグループ（グループＢ１）；ノーマルＴＩＬ（グループＢ２）；ＢＣＡＲ−ＴＩＬ（グループＢ３）；ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬ（グループＢ４）；ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ（グループＢ５）；ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ（グループＢ６）；ＰＤ１−ＳＴＩＬ（グループＢ７）；ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ（グループＢ８）；ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ（グループＢ９）；およびＸＳＴＩＬ（グループＢ１０）。以下のアッセイが行われる。
【０２７２】
１．腫瘍細胞の増殖。４８時間および９６時間後に培養物から上澄みが回収された。そして培養物はＰＢＳで３回洗浄された。接着性の腫瘍細胞が溶解され、そして、腫瘍細胞の生存割合の指標としてルシフェラーゼ活性が測定された。図１７Ａに示されるように、それぞれのグループ（グループＢ２〜Ｂ１０）における腫瘍細胞の数は、コントロールのグループ（グループＢ１）と比較して、減少しており、そして、ノーマルＴＩＬグループ（グループＢ２）は、他の全てのグループ（グループＢ３〜Ｂ１０）によって達成される顕著な減少と比較して、最も少ない腫瘍細胞減少を示す。
【０２７３】
２．Ｔ細胞の増加。４８時間の培養後、Ｔ細胞の数が計測される。図１７Ｂに示されるように、ノーマルＴＩＬグループ（グループＢ２）は、少しの増加を示し、一方、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＢ４〜Ｂ１０）は顕著な増加を示し、さらにＢＣＡＲを有するグループ（グループＢ３およびＢ７〜Ｂ１０）はさらにより多い増加を示す。
【０２７４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによって示されるように、ＴＩＬｓの腫瘍キリング効果は、スイッチ分子と共に形質導入された後に向上される。ＳｕｐｅｒＴＩＬを提供するためＳｗｉｔｃｈおよびＢＣＡＲ分子の両方で形質導入された場合、ＳｕｐｅｒＴＩＬは、さらに増強された増加およびＢ細胞の存在下での腫瘍細胞キリング効果を示す。
【０２７５】
実施例２２：Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬ効果のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬの効果を確認するため、Ｓｕｐｅｒ−ＴＩＬと同様な実験が行われる（実施例２１を参照のこと）。
【０２７６】
（１）Ｂ細胞が添加されない場合の細胞キリング効果の比較
【０２７７】
グループは：Ｔ細胞−ＣＫの添加なしの、コントロールグループ（グループＡ１）；ノーマルｐＴＩＬ（グループＡ２）；ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（グループＡ３）；ＰＤ１ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＡ４）；ＴＩＭ３ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＡ５）；ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＡ６）；ＰＤ１−ＳｐＴＩＬ（グループＡ７）；ＴＩＭ３−ＳｐＴＩＬ（グループＡ８）；ＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬ（グループＡ９）；およびＸＳｐＴＩＬ（グループＡ１０）である。以下のアッセイが行われる。
【０２７８】
１．Ｔ細胞によるサイトカイン分泌。図１８Ａおよび１８Ｂに示されるように、コントロールのＡ１グループではＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌はみられず、他の全てのグループ（グループＡ２〜Ａ１０）においてはＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌がみられる。すべてのグループのなかで、Ｓｗｉｔｃｈをもつもの（グループＡ４〜Ａ１０）が、Ｓｗｉｔｃｈを有さないグループ（グループＡ２およびＡ３）よりも、より高いＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の分泌を示す。
【０２７９】
２．腫瘍細胞の増殖。図１９Ａに示されるように、それぞれのグループ（グループＡ２〜Ａ１０）における腫瘍細胞の数は、コントロールのグループ（グループＡ１）と比較して、減少しており、そして、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＡ４〜Ａ１０）は、腫瘍細胞の数において、さらに顕著な減少を示す。
【０２８０】
３．Ｔ細胞の増加。４８時間の培養後、Ｔ細胞の数が計測される。図１９Ｂに示されるように、Ｓｗｉｔｃｈをもたないグループ（グループＡ２およびＡ３）のＴ細胞は、少しの増加を示し、一方、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＡ４〜Ａ１０）は顕著な増加を示す。
【０２８１】
（２）Ｂ細胞存在下の細胞キリングの比較
【０２８２】
グループは：Ｔ細胞−ＣＫの添加なしの、コントロールグループ（グループＢ１）；ノーマルｐＴＩＬ（グループＢ２）；ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ（グループＢ３）；ＰＤ１ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＢ４）；ＴＩＭ３ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＢ５）；ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＢ６）；ＰＤ１−ＳｐＴＩＬ（グループＢ７）；ＴＩＭ３−ＳｐＴＩＬ（グループＢ８）；ＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬ（グループＢ９）；およびＸｐＳＴＩＬ（グループＢ１０）。それぞれのウェルに同じ量のＢ細胞が添加される。以下のアッセイが行われる。
【０２８３】
１．腫瘍細胞の増殖。図１９Ａに示されるように、それぞれのグループ（グループＢ２〜Ｂ１０）における腫瘍細胞の数は、コントロールのグループ（グループＢ１）と比較して、減少しており、そして、ノーマルｐＴＩＬグループ（グループＢ２）は、他の全てのグループ（グループＢ３〜Ｂ１０）によって達成される顕著な減少と比較して、最も少ない腫瘍細胞減少を示す。
【０２８４】
２．Ｔ細胞の増加。図１９Ｂに示されるように、ノーマルｐＴＩＬグループ（グループＢ２）は、少しの増加を示し、一方、Ｓｗｉｔｃｈを有するグループ（グループＢ４〜Ｂ１０）は顕著な増加を示し、さらにＢＣＡＲを有するグループ（グループＢ３およびＢ７〜Ｂ１０）はさらにより多い増加を示す。
【０２８５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイによって示されるように、ｐＴＩＬｓの腫瘍キリング効果は、スイッチ分子と共に形質導入された後に向上される。ＳｕｐｅｒＴＩＬを提供するためＳｗｉｔｃｈおよびＢＣＡＲ分子の両方で形質導入された場合、ＳｕｐｅｒＴＩＬは、さらに増強された増加およびＢ細胞の存在下での腫瘍細胞キリング効果を示す。
【０２８６】
実施例２３：Ｓｕｐｅｒ−ＴＩＬの動物実験
動物モデル：新しい腫瘍細胞からの１×１０6個の腫瘍細胞がＮＳＧマウスの皮下に接種される。ブランクコントロールとして、グループＡ０の動物が、ＰＢＳを皮下注射された。腫瘍細胞の注入後約２週間で腫瘍は動物に形成される。腫瘍サイズは、２５日後に測定される。１３２匹のマウスが選択され、Ｂ細胞なしのグループＡ（１１サブグループ）およびＢ細胞ありのグループＢ（１１サブグループ）に（計２２グループ）、以下にしたがって分けられた。
【０２８７】
グループＡは、尾静脈からＰＢＳを注入されるブランクコントロール群（Ａ０）、および、腫瘍細胞が播種される１０グループのマウス：未処理−ＰＢＳ群（グループＡ１）、ノーマルＴＩＬ（グループＡ２）、ＢＣＡＲ−ＴＩＬ群（グループＡ３）、ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬ群（グループＡ４）、ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ（グループＡ５）、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ（グループＡ６）、ＰＤ１−ＳＴＩＬ群（グループＡ７）、ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ（グループＡ８）、ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ（グループＡ９）、およびＸＳＴＩＬ（グループＡ１０）からなる。グループＡ２〜Ａ１０は、尾静脈を介して１×１０４個のＴ細胞を与えられる。
【０２８８】
グループＢは、尾静脈からＰＢＳを注入されるブランクコントロール群（Ｂ０）、および、腫瘍細胞が播種される１０グループのマウス：未処理−ＰＢＳ群（グループＢ１）、ノーマルＴＩＬ（グループＢ２）、ＢＣＡＲ−ＴＩＬ群（グループＢ３）、ＰＤ１ｓｗ−ＴＩＬ群（グループＢ４）、ＴＩＭ３ｓｗ−ＴＩＬ（グループＢ５）、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ＴＩＬ（グループＢ６）、ＰＤ１−ＳＴＩＬ群（グループＢ７）、ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ（グループＢ８）、ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ（グループＢ９）、およびＸＳＴＩＬ（グループＢ１０）からなる。グループＢ２〜Ｂ１０は、尾静脈を介して１×１０4個のＴ細胞を与えられ、全てのグループは、１×１０7個のＢ細胞を注入により与えられる。
【０２８９】
腫瘍サイズおよびマウスの全身状態は、投与後２８日間、２〜３日毎に測定される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される。
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２９０】
（１）腫瘍量の変化
【０２９１】
本実験は、Ｓｗｉｔｃｈを有するＴＩＬを注入されたマウス（グループＡ４〜Ａ１０およびＢ４〜Ｂ６）が腫瘍成長の遅延を示すことが示されることが予期される。
【０２９２】
（３）腫瘍細胞におけるＰＤ１、ＴＩＭ３、およびＴＦＧＢＲ２の発現
【０２９３】
グループＢ７〜Ｂ９からの腫瘍組織が、腫瘍が再び増大し始める前および後にアッセイされる。結果は、（ｉ）グループＢ７（ＰＤ１−ＳＴＩＬ）腫瘍はＰＤ１を発現していないが、ＴＩＭ３およびＴＧＦＢＲ２を発現している；（ii）グループＢ８（ＴＩＭ３−ＳＴＩＬ）腫瘍はＴＩＭ３を発現していないが、ＰＤ１およびＴＧＦＢＲ２を発現している；および（iii）グループＢ９（ＴＧＦＢＲ２−ＳＴＩＬ）腫瘍はＴＧＦＢＲ２を発現していないが、ＰＤ１およびＴＩＭ３を発現している、ことを示すことが予期される。いくつかの場合において、腫瘍の微小環境マーカーがエスケープすることが可能であり、これは、対応するＳｗｉｔｃｈの無効性を結果としてもたらす。
【０２９４】
実施例２４：Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬの動物実験
Ｓｕｐｅｒ−ｐＴＩＬのｉｎ  ｖｉｖｏ効果を確認するため、ＳｕｐｅｒＴＩＬと同様の動物実験がデザインされる。動物はまた、グループＡ（Ｂ細胞の非存在下）およびグループＢ（Ｂ細胞の存在下）、合計で２２グループを含むグループに分けられた。
【０２９５】
グループＡは、尾静脈からＰＢＳを注入されるブランクコントロール群（Ａ０）、および、腫瘍細胞が播種されるマウスの１０グループ：未処理−ＰＢＳ群（グループＡ１）、ノーマルｐＴＩＬ（グループＡ２）、ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ群（グループＡ３）、ＰＤ１ｓｗ−ｐＴＩＬ群（グループＡ４）、ＴＩＭ３ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＡ５）、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＡ６）、ＰＤ１−ｐＳＴＩＬ群（グループＡ７）、ＴＩＭ３−ｐＳＴＩＬ（グループＡ８）、ＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬ（グループＡ９）、およびＸＳｐＴＩＬ（グループＡ１０）からなる。グループＡ２〜Ａ１０は、尾静脈を介して１×１０4個のＴ細胞を与えられる。
【０２９６】
グループＢは、尾静脈からＰＢＳを注入されるブランクコントロール群（Ｂ０）、および、腫瘍細胞が播種されるマウスの１０グループ：未処理−ＰＢＳ群（グループＢ１）、ノーマルＴＩＬ（グループＢ２）、ＢＣＡＲ−ｐＴＩＬ群（グループＢ３）、ＰＤ１ｓｗ−ｐＴＩＬ群（グループＢ４）、ＴＩＭ３ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＢ５）、ＴＧＦＢＲ２ｓｗ−ｐＴＩＬ（グループＢ６）、ＰＤ１−ｐＳＴＩＬ群（グループＢ７）、ＴＩＭ３−ＳｐＴＩＬ（グループＢ８）、ＴＧＦＢＲ２−ＳｐＴＩＬ（グループＢ９）、およびＸＳｐＴＩＬ（グループＢ１０）からなる。グループＢ２〜Ｂ１０は、尾静脈を介して１×１０4個のＴ細胞を与えられ、全てのグループは、１×１０7個のＢ細胞を注入により与えられる。
【０２９７】
腫瘍サイズおよびマウスの全身状態は、投与後２８日間、２〜３日毎に測定される。腫瘍サイズは、以下の式にしたがって測定される。
腫瘍サイズ＝１／２×長径×短径×短径
【０２９８】
実験は、本開示のＳｕｐｅｒＴＩＬ／ｐＴＩＬが特異的な腫瘍認識性および複数の標的を介するキリング効果（ＴＩＬまたはｐＴＩＬから）を有していることを示すことが予期される。ＳｕｐｅｒＴＩＬ／ｐＴＩＬはまた、キリングを向上させるために腫瘍環境を克服する（一またはそれ以上のＳｗｉｔｃｈから）能力およびＢＣＡＲの自己増大能力を示し得る。これらの改変された免疫細胞は、腫瘍免疫細胞治療法に含まれる様々な問題に対処する効果的な腫瘍治療のツールを提供する。
【０２９９】
実施例２５：ＮＹ  ＥＳＯ１腫瘍細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔのキリング効果
ＴＣＲ  Ｔ法的ＮＹ−ＥＳＯ−１におけるＢＣＡＲの機能を確認するため、Ａ：０２０１であるＨＬＡゲノタイピングのＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１腫瘍細胞株が、ＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔ細胞のキリング効果を測定するために標的として使用された。
【０３００】
１×１０5個のＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１腫瘍細胞が、ＲＴＣＡ（リアルタイム細胞分析（Real Time Cell Analysis））電極プレート上に播種され、そして接着させるために終夜培養された。細胞は、３つの群、Ａ、ＢおよびＣに分けられた。グループＡでは、１×１０5個、１×１０4個、１×１０3個、１×１０2個のＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔが、それぞれ、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１細胞と共培養された。グループＢでは、１×１０5個、１×１０4個、１×１０3個、１×１０2個のＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔと１×１０5個のＢ細胞とが、Ｊ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１細胞と共培養された。グループＣは、ブランクコントロールであった。ＲＴＣＡシステムは、２４時間のあいだ１０分毎に「Ｃｅｌｌ  Ｉｎｄｅｘ」を記録するために用いられた。
【０３０１】
図２０にしめされるように、Ｂ細胞が存在しないグループＡにおいては、最も高用量の１×１０5個ＢＣＡＲ−ＴＣＲ  ＴのみがＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１腫瘍細胞に対する顕著なキリング効果を示し、一方、グループＢでは、Ｂ細胞の存在下、１×１０2個ＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔである最も低用量ですら、グループＡの１×１０5個ＢＣＡＲ−ＴＣＲ  Ｔ用量に匹敵するＪ８２−ＮＹ−ＥＳＯ１腫瘍細胞に対する顕著なキリング効果を示しており、これは約１０００倍の効果の増大を示している。
【０３０２】
実施例２６：ＳＴＩＬおよびＳｐＴＩＬの臨床的抗腫瘍効果
（表１に示されるように）５人の被験者が臨床試験に登録し、そして、ＳＴＩＬまたはＳｐＴＩＬを注入された。
【０３０３】
【表１】
2021502114.tif 000003
【０３０４】
表１に示されるように、登録された被験者は、種々の固形腫瘍を患っているが、全者が後期で、抵抗性、３以上の遠隔転移病変をもつ高い進行性である。５名の被験者のうちの３名（６０％）が、標的治療に抵抗性であり、そして予後の悪いＴＰ５３変異を発症している。ＴＭＢ評価およびＨＬＡ多型は、これらの被験者の全てがＰＤ１／ＰＤＬ１モノクローナル抗体治療または従来のネオアンチゲン療法から利益を受けにくかったことを示していた。
【０３０５】
処置の前の細胞調製
（１）ＴＩＬ／ｐＴＩＬの分離
被験者３、４、５番のために、ＣＤ３陽性ＴＩＬが、新しく切り出された腫瘍組織から、酵素消化の後、ＣＤ３磁気ビーズを用いて分離された。被験者１および２番のために、ＰＢＭＣが患者から分離され、ここで、ＰＤ１+Ｔ細胞の量は、それぞれ、Ｔ細胞の総計の１９％および５％であった。このような高いＰＤ１+Ｔ細胞の割合は、腫瘍組織由来の末梢血中のＴＩＬ（ｐＴＩＬ）と考えられ、そして、ＰＤ１+Ｔ細胞、すなわちｐＴＩＬを提供するためにＰＲ１ビーズを用いてさらに濃縮された。
【０３０６】
ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬの調製
ＰＤ１ｓｗ−ＣＤ１９  ＣＡＲがロードされているレンチウイルスベクターが導入効率２〜１５％で、ＴＩＬ／ｐＴＩＬ中に遺伝子導入された。細胞は、増大させることなしに注入バッグに封入された。全てのプロセスは、（Ｔ細胞認識ネオアンチゲンの同定プロセスを除いて）３〜１０日間かかった。
【０３０７】
５名全ての被験者に対する、得られた細胞を用いた、１０8〜１０9個細胞／ｋｇという報告されている用量よりもはるかに低い用量である１０5〜１０6個細胞／ｋｇの大きさの用量での処置が、表２に示されている。
【０３０８】
【表２】
2021502114.tif 000004
【０３０９】
安全性評価
５名の被験者のうち、３名に、高熱によって証明されるグレード１のサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が見られた（発生率６０％、３／５）。３名全てが回復し、１名は介入なし、および他の２名は、トシリズマブによる処置であった。ＣＲＳの発生率およびグレードの両方ともに、ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ処置のものよりはるかに低かった。処置後の自己免疫疾患は見られなかった。
【０３１０】
効果の評価
細胞注入処置の効果が腫瘍イメージングによって確かめられた（被験者１〜４に関してそれぞれ、図２１〜２４）。結果が以下の表３に示されている。
【０３１１】
【表３】
2021502114.tif 000005
【０３１２】
ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬのｉｎ  ｖｉｖｏでの増加におけるＣＡＲの効果
被験者の末梢血中のＣＡＲ＋Ｔ細胞の割合がモニタリングされた。末梢血中で増加されたＳＴＩＬ（またはＳｐＴＩＬ）の倍率が、以下の式にしたがって算出された。
増加率＝リンパ球  数／Ｌ×循環末梢血の体積×リンパ球中のＴ細胞割合×Ｔ細胞中のＳＴＩＬ割合
ここで、リンパ球  数／Ｌは、既定の血液試験から得られ、リンパ球中のＴ細胞割合は、ＣＤ３＋細胞の割合としてフローサイトメトリーによって決定され、Ｔ細胞中のＳＴＩＬ割合は、ＣＤ３＋細胞中のＣＡＲ＋細胞の割合としてフローサイトメトリーによって決定された。
【０３１３】
第１４日に、ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬの増加が算出され、そして、Ｂ細胞減少が測定された。結果が表４に示されている。
【０３１４】
【表４】
2021502114.tif 000006
【０３１５】
外来性のイムノグロブリンは、観察中に投与されず、また、どの被験者においても免疫不全は見られなかった。
【０３１６】
ＳＴＩＬおよびＳｐＴＩＬの二重特異的認識
被験者１、２、４は、末梢血中での循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）を観察された。細胞注入の２か月後のＣＴＣ数が、注入日であるベースラインと比較された。結果は以下の表５および図２５に示されており、顕著なＣＴＣ数の低下を示している。
【０３１７】
【表５】
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【０３１８】
スイッチ分子によるキリング効果の向上
３名の被験者（１、２、および５番）が、第１４日〜第２８日のあいだ、減少された抹消血Ｔ細胞、および持続的な胸水または腹水を示していたことが観察された。胸膜転移を患う被験者４番は、胸水を発症し、腹膜転移を患う被験者１番および２番は、腹水を発症した。胸水および腹水の両方において、末梢血中よりも高濃度であるＩＬ６と共にＴ細胞が発見された。この観察は、表６にまとめられており、ＳＴＩＬ／ＳｐＴＩＬのキリング効果がスイッチ分子によって増強されたことを示している。
【０３１９】
【表６】
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【０３２０】
【表７】
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【０３２１】
本発明の好ましい実施形態は、本明細書中に示され、および記載されているが、当該技術分野における当業者にとって、このような実施形態は、例示のみを目的として提供されていることは明らかであろう。多くのバリエーション、変更、および置換が、本発明から逸脱することなく、当該技術分野における当業者は考えることができるであろう。本明細書中で記載されている本発明の実施形態の様々な代替が本発明を実施する場合に適用され得ることが理解されるべきである。以下のクレームは本発明の範囲を規定すること、および、これらのクレームおよびそれらの投下物の範囲内である方法および構造がそれによって保護されることが意図されている。
【図１】
2021502114.tif 000010
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2021502114.tif 000017
【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
2021502114.tif 000019
【図７Ｂ】
2021502114.tif 000020
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
2021502114.tif 000023
【図１０】
2021502114.tif 000024
【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
2021502114.tif 000030
【図１５】
2021502114.tif 000031
【図１６Ａ】
2021502114.tif 000032
【図１６Ｂ】
2021502114.tif 000033
【図１７Ａ】
2021502114.tif 000034
【図１７Ｂ】
2021502114.tif 000035
【図１８Ａ】
2021502114.tif 000036
【図１８Ｂ】
2021502114.tif 000037
【図１９Ａ】
2021502114.tif 000038
【図１９Ｂ】
2021502114.tif 000039
【図２０】
2021502114.tif 000040
【図２１Ａ】
2021502114.tif 000041
【図２１Ｂ】
2021502114.tif 000042
【図２１Ｃ】
2021502114.tif 000043
【図２１Ｄ】
2021502114.tif 000044
【図２２Ａ】
2021502114.tif 000045
【図２２Ｂ】
2021502114.tif 000046
【図２２Ｃ】
2021502114.tif 000047
【図２２Ｄ】
2021502114.tif 000048
【図２３Ａ】
2021502114.tif 000049
【図２３Ｂ】
2021502114.tif 000050
【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
2021502114.tif 000052
【図２４Ａ】
2021502114.tif 000053
【図２４Ｂ】
2021502114.tif 000054
【図２４Ｃ】
2021502114.tif 000055
【図２５】
2021502114.tif 000056
【配列表】
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【国際調査報告】
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2021502114.tif 000058
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