(57)【要約】  化合物、医薬組成物、および改良されたＭｙｃインヒビター化合物での癌の治療方法を開示する。より詳細には、改善した溶解性、改善した結合特性ならびにより良好な有効性および治療活性を有する、ｃ−ＭＹＣを阻害する改良された化合物を開示し、ここで、該改良化合物は、先行開示三置換ピリジン構造属と比較してＲ１位にチアゾリル部分を有する三置換ピリジンを含む。【選択図】図１
2021531253.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2021531253.tif 000015
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
を含む化合物。
【請求項２】
Ｒ１がチアゾリルである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）
【化２】
2021531253.tif 000016
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
の化合物の有効量を含む医薬組成物。
【請求項４】
Ｒ１がチアゾリルである、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
式（Ｉ）
【化３】
2021531253.tif 000017
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
を含む組成物の有効量を投与することを含む、癌適応症の治療方法。
【請求項６】
Ｒ１がチアゾリルである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
請求項１記載の化合物の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む、ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化の抑制方法。
【請求項８】
請求項１記載の化合物の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む、ＭＹＣによる転写活性化の抑制方法。
【請求項９】
請求項１記載の化合物の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む、ＭＹＣ誘導性細胞増殖の抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本特許出願は、米国仮特許出願第６２／６９５，４９６号（２０１８年７月９日付け出願）に基づく優先権の利益を主張するものである。該優先権出願の全開示の全体をあらゆる目的で参照により本明細書に組み入れることとする。
【０００２】
技術分野
本開示は、改良されたＭｙｃインヒビター化合物、医薬組成物、および改良されたＭｙｃインヒビター医薬組成物を使用する、がん（以下、癌と表記される）の治療方法を提供する。本開示は、化合物の開示［２０１４年１２月１０日付け出願の米国特許出願第１５／０３５，８４２号（その開示を参照により本明細書に組み入れることとする）］と比較して驚くほど改善した結果を示した改良された活性小属化合物を提供する。該先行特許出願におけるリード例示化合物は本明細書においてはＫＪ−Ｐｙｒ−９と称される。ＫＪ−Ｐｙｒ−９はニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）における発癌性ＡＴＧ−ＭＹＣウイルスのトランスフォーム能の阻害を示し、それらのデータは、本明細書に開示されている改良された化合物との比較に使用される。しかし、ＫＪ−Ｐｙｒ−９（または化合物５ａ）および既に記載されている関連化合物も中程度の溶解度（〜８μＭ）を示したに過ぎない。したがって、既に開示されている化合物の化学的特性を改善することが当技術分野において必要とされている。
【背景技術】
【０００３】
ｖ−ｍｙｃ骨髄細胞腫症ウイルス発癌遺伝子ホモログ（ＭＹＣ）タンパク質は細胞周期進行占有およびトランスクリプトームにおける頂端部空間の必須調節因子である（Ａｄｈｉｋａｒｙら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００５，６（８），６３５−６４５）。癌原遺伝子ｃ−ｍｙｃは、細胞増殖を制御する転写因子（Ｍｙｃ）をコードする。Ｍｙｃは細胞周期、細胞増殖、血管新生、アポトーシスおよび発癌の調節においても役割を果たす。ＭＹＣはほぼ全ての癌に関与しており、ほぼ全てのヒト癌においてＭＹＣにおける機能獲得が見られる。突然変異、染色体再編、発現増強または遺伝子増幅の結果として、腫瘍においてＭｙｃの活性が増強しうる。ｃ−Ｍｙｃの発現の上昇または調節解除は広範囲のヒト癌において検出されており、しばしば、侵襲性低分化腫瘍に関連している。そのような癌には、結腸癌、乳癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、骨肉腫、神経膠芽腫、黒色腫および骨髄性白血病が含まれる。
【０００４】
ＭＹＣの研究の難しさの一部はその複雑な作用機序である。それは短寿命であるが、局所的様態および全体的様態の両方で転写に影響を及ぼしうるようである。更に、ＭＹＣは不定形タンパク質（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＩＤＰ）として存在して、ＭＡＸネットワークの他の塩基性ヘリックスループヘリックスロイシンジッパー（ｂＨＬＨ−ＬＺ）転写因子の存在下でのみ、構造を形成する（Ｃｏｎａｃｃｉ−Ｓｏｒｒｅｌｌら，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｍｅｄ．２０１４，４（１），ａ０１４３５７−ａ０１４３５７；ならびにＭｃＫｅｏｗｎおよびＢｒａｄｎｅｒ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｍｅｄ，２０１４，４（１０），ａ０１４２６６）。この構造欠如および不安定性は、ＭＹＣ相互作用を構造的または生物物理学的に特徴づける可能性を著しく損なう。全体として、これらの特性のため、ＭＹＣは、魅力的ではあるが創薬におけるとらえどころのない標的となっている。
【発明の概要】
【０００５】
概要
本開示は、式（Ｉ）
【化１】
2021531253.tif 000003
【０００６】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
を含む医薬化合物を提供する。好ましくは、Ｒ１はチアゾリルである。
【０００７】
本開示は更に、式（Ｉ）
【化２】
2021531253.tif 000004
【０００８】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
の化合物の有効量を含む医薬組成物を提供する。好ましくは、Ｒ１はチアゾリルである。
【０００９】
本開示は更に、式（Ｉ）
【化３】
2021531253.tif 000005
【００１０】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
を含む組成物の有効量を投与することを含む、癌適応症の治療方法を提供する。好ましくは、Ｒ１はチアゾリルである。
【００１１】
あるいは、本開示は、式（Ｉ）
【化４】
2021531253.tif 000006
【００１２】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む、ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体化の抑制方法を含む。
【００１３】
更に、該開示方法はＭＹＣによる転写活性化を抑制し、これは、式（Ｉ）
【化５】
2021531253.tif 000007
【００１４】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
の化合物の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む。
【００１５】
本発明は更に、種々の実施形態において、式（Ｉ）
【化６】
2021531253.tif 000008
【００１６】
（式中、
ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はシアノまたはチアゾリルである；
Ｒ２は２−フラニルである；
Ｒ３はｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２である）
の化合物の有効量または有効濃度とＭＹＣを接触させることを含む、ＭＹＣ誘導性細胞増殖の抑制方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は試験化合物の活性スクリーニングを示す。（Ａ）５ａと比較した場合のＭＹＣへの相対的結合。（Ｂ）ＳＰＲによって測定された、ＤＮＡへのＭＹＣ−ＭＡＸ結合の抑制。（Ｃ）ＣＥＦアッセイにおける最適化化合物のＩＣ５０。
【図２】図２は、質量分析による、ラット肝ミクロソームによる酸化感受性を示す。化合物を、示されている時間にわたって、ミクロソームと共に３７℃でインキュベートした。抽出イオンのＡＵＣから計算された回収率。
【００１８】
詳細な説明
２つの経路（スキーム１ａ、１ｂ）を用いて、α，β不飽和ケトン２のファミリーを合成するために、クレーンケ（Ｋｒｏｈｎｋｅ）ピリジン合成により一連の化合物を製造した。スキーム（１ａ）は、例えばチアゾール、イミダゾールおよびトリアゾールのような種々の異なる５員ヘテロ環を含有するメチルケトンの反応であり、スキーム（１ｂ）は、対応する塩化アシルとのオキサゾール反応であり、これはオキサゾール部分の導入を可能にした。１００℃で酢酸アンモニウムを使用するα，β不飽和ケトン２とピリジン塩１（対応する臭化フェナシル誘導体から得られる）との間の第２反応は、対応する２，４，６−三置換ピリジン３を与えた。この時点で化合物５ｉ〜ｋが得られ、他の化合物はＲ３位にｐ−メチルエステル基を含有していた。３のメチルエステル基を加水分解してカルボン酸４を得た。該カルボン酸を塩化オキサリルおよびＮ，Ａ−ジメチルホルムアミドと反応させて、対応する塩化アシルを得、ついでこれを種々の求核試薬と反応させて化合物５を得た。トランケート化ピリジンスカフォールド、例えば７ａおよび７ｂを得るために、スキーム１ｂに示されているとおりに、パラジウム触媒鈴木クロスカップリング法を用いた。
【００１９】
これらの化合物の製造の後、次の工程は、先行技術の化合物５ａと比較して、それらの活性を調べることであった。
【００２０】
スキーム１ａにおけるＲ１、Ｒ２およびＲ３基が何であるかは以下のとおりである。
【００２１】
５ａ：Ｒ１＝ＮＯ２；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｂ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｃ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−チアゾリル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｄ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−オキサゾリル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｅ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝Ｎ−メチル−２−イミダゾリル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｆ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝１−メチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｇ：Ｒ１＝２−チアゾリル；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｈ：Ｒ１＝５−オキサゾリル；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２；
５ｉ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝Ｃ６Ｈ５；
５ｊ：Ｒ１＝２−チアゾリル；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝２−チアゾリル；
５ｋ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＮ４Ｈ；
５ｌ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨＭｅ；
５ｍ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨＳＯ２Ｍｅ；
５ｎ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝２−フラニル；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨＮＨ２；
５ｏ：Ｒ１＝ＣＮ；Ｒ２＝ｍ−Ｃ６Ｈ４Ｆ；Ｒ３＝ｐ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＮＨ２。
【００２２】
スキーム１ａ：
【化７】
2021531253.tif 000009
【００２３】
スキーム１ｂ：
【化８】
2021531253.tif 000010
【００２４】
化合物の溶解度を動的光散乱法によって測定した（表１）。電界効果トランジスタ（Ｂｉｏ−ＦＥＴ）を使用し、これは、ＳＰＲまたは等温熱量測定と比較して低い検出限界をもたらした。２．検出をグラフェン表面で行った。３．Ｈｉｓタグ付きｂＨＬＨ構築物を部位特異的機能化のためにチップ上に固定化した。驚くべきことに、バッファー中の３％  ＤＭＳＯの存在下の１０μＭの先行技術リード化合物５ａにおいて、おおよその最大半量曲線が認められた。これを、スクリーニングされる各チップにおける対照として使用し、該タンパク質の溶解度とアフィニティとの両方に関する基準にした（図１−パネルＡ、表１）。化合物をＭＡＸの単量体形態（ｍＭＡＸ）ならびにＭＹＣ−ＭＡＸおよびＭＡＸ−ＭＡＸ二量体に対してもスクリーニングした。ｍＭＡＸ、ＭＡＸ−ＭＡＸおよび非結合対照表面への観察された結合の欠如、ならびにチップ表面が一般的に再生されうることは、観察された結合相互作用に特異性が存在していたことを示している。
【００２５】
ＭＹＣ−ＭＡＸ相互作用のアフィニティは比較的弱かった（Ｋｄ＝１７６ｎＭ）。しかし、先行技術リード化合物５ａ（ＵＳ２０１６／０２６４５６０）と共に安定化ＭＹＣ−ＭＡＸ複合体を使用してＤＮＡに対する結合アフィニティを測定したところ、陽性結果が得られた。本発明者らは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて、チップ表面上の固定化Ｅ−ＢＯＸオリゴヌクレオチドに対する安定化ＭＹＣ−ＭＡＸ二量体の特徴的な結合応答を確立した。チップ表面上の流動の前の処理化合物との二量体のインキュベーションは、ビヒクル対照と比較して、センソグラムにおける摂動を示した。化合物を１０μＭで二量体と共にインキュベートし、ＤＮＡとの相互作用を妨げるそれらの能力を測定した（図１−パネルＢ）。ＭＹＣとの相互作用を有さないことが観察された化合物は、ＤＮＡへの二量体の結合を妨げる効果をも有さないことが判明し、ＤＮＡと化合物のみとの間の相互作用は観察されなかった。
【表１】
2021531253.tif 000011
【００２６】
抗ＭＹＣ活性の最終的な評価を、ＣＥＦにおいて微小腫瘍を確立するＡＴＧ−ＭＹＣ発現ベクターの能力を調べるフォーカスアッセイによって行った（Ｂｏｓら，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９０，４（１０），１６７７−１６８７）。このアッセイにおいては、結合研究からの活性化合物を微小腫瘍形成の抑制に関して調べた（図１−パネルＣ）。幾つかの新規化合物が、５ａと同様の効果で、微小腫瘍形成を抑制することが判明した（表１）。
【００２７】
エタノール中、過剰のナトリウムメトキシドの存在下、α，β不飽和ケトン２ｉをフランカルボキシイミジン８と共に還流して、カルボン酸９を得、これを、塩化アシルを形成させＮＨ４ＯＨとそれを反応させる方法により、対応アミドに変換して、ピリミジン１０を得た（スキーム２）。１０ａは５ａと同等の活性プロファイルを有する。
【化９】
2021531253.tif 000012
【００２８】
全体として、５ｇは、容易に入手可能であり、著しく増加した溶解度を有し、不安定なニトロ基を欠いており、５ａと同様の結合および有効性を示す点で、理想的である。濃度曲線を使用するバイオ−ＦＥＴによると、５ｇのアフィニティは１２．５±４．１ｎＭである。これらの好ましい特性がＰＫの改善につながるかどうかを判定するために、マウスにおいて１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．ＰＫ研究を行った。マウスＰＫの非コンパートメント分析およびそれに続くラットへの相対成長スケーリングは、５ａに関して以前行われたラットＰＫ研究との比較をもたらし、それを表２に示す。この比較的簡単な置換は平均滞留時間を１時間から４．８へと有意に増加させて、曝露（ＡＵＣ）における３０倍の改善をもたらした。これは、５ａによって見出された化学的空間に十分な柔軟性が存在して、有効性を損なうことなく物理化学的特性を改善することを示している。
【表２】
2021531253.tif 000013
【００２９】
本開示は、先行技術化合物５ａの効力を保有する、そして改善されたインビボ安定性および溶解性を有する一連の新規化合物を提供する。これは、驚くべき「ゴルディロックス効果改善」であり、スカフォールドの結合によってもたらされる疎水性はＭＹＣへの結合に本質的に必要であるが、この疎水性はそのような分子の薬物動態特性に悪影響を及ぼす。したがって、溶解性のための５ｇのわずかな活性の妥協は、ＭＹＣを標的化するための、より薬物に類似したリード化合物を提供する。
【００３０】
治療用途
本明細書に記載されているｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物は、種々の治療的または予防的（例えば、抗腫瘍）用途、例えばｃ−Ｍｙｃ媒介性細胞活性の抑制または阻害および癌の治療または腫瘍（特にＭＹＣ依存性腫瘍）の発生の予防において有用でありうる。幾つかの実施形態においては、治療用途は対象における腫瘍の発生の予防または癌の治療に向けられている。典型的には、治療方法は、本明細書に記載されているｃ−Ｍｙｃインヒビターの有効量を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
【００３１】
組成物および方法での治療に適した癌および腫瘍は、種々の組織および器官に存在するものでありうる。それらはまた、これらの組織および／または器官の構成細胞に見られる癌細胞、腫瘍細胞（悪性腫瘍細胞を含む）などを含む。具体例には、脳腫瘍（多形性神経膠芽細胞腫など）、脊髄腫瘍、上顎洞癌、膵臓腺癌、歯肉癌、舌癌、唇癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肺癌、胸膜腫瘍、癌性腹膜炎、癌性胸膜炎、食道癌、胃癌、結腸癌、胆管癌、胆嚢癌、膵臓癌、肝癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣腫瘍、副腎癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、膣癌、外陰癌、卵巣癌、線毛上皮癌、悪性骨腫瘍、軟部組織肉腫、乳癌、皮膚癌、悪性黒色腫、基底細胞腫瘍、白血病、原因不明性骨髄様化生、悪性リンパ腫腫瘍、ホジキン病、形質細胞腫および神経膠腫が含まれる。
【００３２】
一般に、治療は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得るために、対象、組織または細胞に影響を及ぼすべきである。該効果は、疾患またはその徴候もしくは症状を完全または部分的に予防するという点で予防的でありうる。それはまた、異常なｃ−Ｍｙｃ発現もしくは生化学的活性に関連する又はそれらによってもたらされる疾患または障害（例えば、腫瘍増殖）の部分的または完全治癒の点で、あるいは該障害に起因する有害作用の改善の点で、治療的でありうる。適切な対象には、無脊椎動物、脊椎動物、哺乳動物、特にヒトが含まれる。記載されているｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物は単独で使用可能であり、あるいは公知抗腫瘍薬（抗腫瘍薬）、腫瘍転移インヒビター、血栓形成インヒビター、関節破壊治療薬、鎮痛薬、抗炎症薬、免疫調節物質（または免疫修飾物質）および／または免疫抑制物質を含む種々の薬物のいずれかと組合せて使用可能であり、これらは、有効または有利に機能する限り、特定の種に限定されずに使用されうる。
【００３３】
該化合物は、治療を要する対象に単独で投与されうる。より好ましくは、それらは、薬理学的に許容される種々の添加物のいずれかと混合された医薬組成物または製剤の形態で投与される。例えば、該化合物は、経口、局所、非経口適用などに適した簡便な医薬組成物または製剤の形態で投与されうる。本発明の医薬組成物は、当技術分野でよく知られた常套的に実施されている方法に従い製造されうる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，２０００；およびＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。非経口投与用の製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水または生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物由来の油または硬化ナフタレンを含有しうる。該化合物の放出を制御するために、生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーが使用されうる。開示されている化合物のための他の潜在的に有用な非経口送達系には、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入系およびリポソームが含まれる。吸入用製剤は、賦形剤、例えばラクトースを含有することが可能であり、あるいは例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココラートおよびデオキシコラートを含有する水溶液であることが可能であり、あるいは点鼻剤の形態で又はゲルとして投与するための油性溶液であることが可能である。
【００３４】
ｃ−Ｍｙｃ阻害化合物を含有する医薬組成物は、治療的に有効な量または用量で局所的または全身的に投与されうる。それらは、非経口的に、腸内に、注射により、急速注入により、鼻咽頭吸収により、皮膚吸収により、直腸内に、および経口的に投与されうる。使用されるｃ−Ｍｙｃインヒビターは、それを要する対象において所望の治療効果（例えば、腫瘍の発生および成長に関連した症状の排除または改善）を達成するのに十分な量で対象に投与される。医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、対象に毒性を及ぼすことなく所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分の量が得られるように変動可能である。
【００３５】
選択される投与量レベルは、使用される個々の組成物の活性、投与経路、投与の時間および使用される個々の化合物の排泄速度を含む種々の薬物動態学的要因に左右される。それはまた、治療期間、使用される個々の組成物と組合せて使用される他の薬物、化合物および／または物質、治療される対象の年齢、性別、体重、状態、全身健康状態および過去の病歴のような要因にも左右される。最適な投与量を決定するための方法は当技術分野において記載されており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，２０００に記載されている。所与のｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物に関して、当業者は、常套的に行われている薬学的方法を用いることにより、ｃ−Ｍｙｃを阻害する物質の有効量を特定することが可能である。インビトロまたはインサイチュ研究で使用される投与量は、医薬組成物のインビボ投与に有用な量における有用な指針をもたらすことが可能であり、個々の障害の治療のための有効投与量を決定するために、動物モデルが使用されうる。典型的には、薬学的に有効な投与量は、治療される対象の体重１ｋｇ当たり約０．００１〜１００ｍｇであろう。
【００３６】
本明細書に記載されているｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物および他の治療レジメンは、通常、複数の機会に対象に適用される。単回投与の間の間隔は毎日、毎週、毎月または毎年でありうる。対象において使用されるｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物およびその他の治療用物質の血中レベルを測定することにより示されるとおり、間隔は不規則であることも可能である。幾つかの方法においては、１〜１０００ｐｇ／ｍｌ、幾つかの方法においては、２５〜３００ｐｇ／ｍｌまたは１０〜１００ｐｇ／ｍｌの血漿中化合物濃度が得られるように、投与量が調節される。あるいは、治療用物質は徐放製剤として投与可能であり、その場合、より低い頻度の投与で済む。投与量および頻度は対象におけるｃ−Ｍｙｃインヒビター化合物およびその他の薬物の半減期によって異なる。投与量および投与頻度は、治療が予防用であるか治療用であるかによって異なりうる。予防用途においては、比較的低い投与量が、比較的低い頻度の間隔で、長期間にわたって投与される。一部の対象は生涯にわたって治療を受け続けうる。治療用途においては、疾患の進行が低減または終了するまで、好ましくは、対象が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的高い投与量が比較的短い間隔で時には必要とされる。その後、対象に予防レジメンが適用されうる。
【００３７】
実施例
特に示されていない限り、全ての溶媒および化学物質はＴｈｅｒｍｏ−ＦｉｓｈｅｒまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａから入手した。特に示されていない限り、溶媒は無水であった。化合物の精製は、１ｍｍ  ＰＬＣシリカゲル６０Ｆ２５４プレート上の分取ＴＬＣにより、およびＴｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｒｆ＋  Ｌｕｍｅｎでのフラッシュクロマトグラフィーにより行った。化合物および中間体は、示されている溶媒におけるＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００またはＮＥＯ−５００装置でのＮＭＲおよびＡｇｉｌｅｎｔ  ＥＳＩ−ＴＯＦでの高分解能質量分析により特徴づけした。９５％を超える純度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＩｎｆｉｎｉｔｙでのＨＰＬＣ分析により決定した（補遺を参照されたい）。化合物は、２つのデータベース検索（ＺＩＮＣ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ、ＦＡＦ−Ｄｒｕｇｓ４）により公知ＰＡＩＮＳ化合物に関してスクリーニングした。
【００３８】
合成方法：
ＨＰＬＣ分析。生物学的に試験した全ての化合物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ装置で精製した。溶媒ＡはＨ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡであり、溶媒ＢはＭｅＣＮ＋０．１％  ＴＦＡである。該方法は以下のとおりであった。ＶＹＤＡＣ  Ｃ１８カラム、５ｐｍ、１０ｍｍ×２５０ｍｍで１０ｍＬ／分の流速を用い、４５分間で１％から９５％までの勾配を用い、画分を７０分間収集した。化合物は、２５０、２５４、２１０および２８０ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。典型的には、化合物は約５５分で溶出する。全ての化合物は９５％以上の純度を有すると評価された。
【００３９】
ＬＣ−ＭＳ分析。生物学的に試験した全ての化合物は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＩｎｆｉｎｉｔｙＬａｂ  ＬＣ／ＭＳＤと共にＡｇｉｌｅｎｔ１２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ２装置を使用して精製した。溶媒ＡはＨ２Ｏ＋０．１％  ＴＦＡであり、溶媒ＢはＭｅＣＮ＋０．１％  ＴＦＡ（Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ）である。該方法は以下のとおりであった。ＺＯＲＢＡＸ  ３００ＳＢ−Ｃ８、５ｐｍ、４．６×５０ｍｍカラムで０．５ｍＬ／分の流速を用いて、６．５分間で１０％から９５％までの勾配を用い、合計実施時間は１０分であった。化合物は、２１０、２５４、２３０および２８０ｎｍでのＵＶ吸収により検出した。
【００４０】
フラッシュクロマトグラフィー。化合物および中間体は、ＤＣＭおよびメタノールを使用するＲｅｄｉＳｅｐ  １２  ｇシリカカラムを使用して、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｒｆ＋Ｌｕｍｅｎ装置で精製した。カラムを１００．８ｍＬの溶媒で平衡化した。カラムを０％から２５％までのＭｅＯＨで２５分かけて実施に付した。
【００４１】
フェナシルピリジニウム塩（１ａ〜ｃ）の合成の一般的手順
１ａ：４’−シアノ−２−ブロモアセトフェノン（１０ｇ，４５ｍｍｏｌ）を室温でＴＨＦ（１５０ｍＬ）中に溶解した。ついでピリジン（７ｍＬ，９０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混濁溶液を一晩撹拌した。生じた黄色沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、１３ｇのピリジニウム塩１ａを得る。
【００４２】
スキーム３：
【化１０】
2021531253.tif 000014
【００４３】
１ｂ：４−アセチルベンズアルデヒド（５００ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルメチルイソシアナート（８００ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）を乾燥メタノール（５０ｍＬ）に溶解した。ついでＫ２ＣＯ３（５６０ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を酢酸エチルおよび水で抽出し、溶媒を減圧下で除去して、１１（６３０ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．０１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ）。
【００４４】
オキサゾール１１固体を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、ブロモトリメチルシラン（０．９ｍＬ，６．８ｍｍｏｌ）を加え、ついでトリエチルアミン（１．４ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を水およびブラインで洗浄し、有機相を減圧下で蒸発させた。得られた暗褐色油を乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）に再溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６０５ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌した後、酢酸エチルおよび水で抽出した。得られた褐色油をＤＣＭに溶解し、シリカゲルのパッドを通して濾過し、蒸発乾固させて、１２を黄色油として得た（４４０ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．０４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｓ，１Ｈ），４．４３（ｓ，２Ｈ）。
【００４５】
ブロモ誘導体１２をＴＨＦ（６ｍＬ）およびピリジン（０．３ｍＬ，３．３ｍｍｏｌ）に溶解し、得られた混濁溶液を一晩撹拌した。生じた黄色沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、５６５ｍｇのピリジニウム塩１ｂを得る。
【００４６】
１ｃ：チアゾール（２．３ｍＬ，３２．５２ｍｍｏｌ）、４−ヨードアセトフェノン（４ｇ、１６．２６ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（６．２ｇ，３２．５２ｍｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（１８３ｍｇ，０．８１３ｍｍｏｌ）を密封チューブ内の乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を１５０℃で４８時間加熱する。ついで溶媒反応混合物を蒸発乾固させ、シリカゲルに吸着させた。生成物を、溶離液としてＨｅｘ／ＡｃＯＥｔ（７：３）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、１３を黄色固体として得た（２ｇ，９．８５ｍｍｏｌ）。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．０７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ）。
【００４７】
固体１３（１ｇ，５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、ブロモトリメチルシラン（１．３ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を加え、ついでトリエチルアミン（２ｍＬ，１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を水およびブラインで洗浄し、有機相を減圧下で蒸発させた。得られた暗褐色油を乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）に再溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（８９０ｍｇ，５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌した後、酢酸エチルおよび水で抽出した。得られた褐色油をジクロロメタンに溶解し、シリカゲルのパッドで濾過し、蒸発乾固させて、１４を黄色油として得た（１．２５ｇ，４．４ｍｍｏｌ）。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．１７−８．０５（ｍ，４Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ）。
【００４８】
ブロモ誘導体１４（１．２５ｇ，４．４４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、ピリジン（０．８５ｍＬ，９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混濁溶液を一晩撹拌した。生じた黄色沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥させて、１．８ｇのピリジニウム塩１ｃを得る。
【００４９】
化合物２ａ〜２ｈの合成
２ａ：２−アセチルフラン（１．５ｇ，１３．６４ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３２７ｍｇ，１３．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で撹拌した後、４−ホルミル安息香酸メチル（２．２ｇ，１３．６４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、濃厚無色沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ａを無色固体（７０％）として得た。
【００５０】
２ｂ：２−アセチルチアゾール（２ｇ，１５．７２ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３７６ｍｇ，１５．７２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で撹拌した後、４−ホルミル安息香酸メチル（２．６ｇ，１５．７２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、濃厚な黄色がかった沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｂを黄色がかった固体（７３％）として得た。
【００５１】
２ｃ：１−メチル−２−アセチルイミダゾール（１．８ｇ，１６．３６ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３９２ｍｇ，１６．３６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で撹拌した後、４−ホルミル安息香酸メチル（２．６ｇ，１６．３６ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、濃厚黄色沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｃを黄色固体（６３％）として得た。
【００５２】
２ｄ：１−（１−メチル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−イル）−エタノン（１．９ｇ，１５．２０ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（３６４ｍｇ，１５．２０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中で撹拌した後、４−ホルミル安息香酸メチル（２．５ｇ，１５．２０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、濃厚な褐色がかった沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｄを淡オレンジ色固体（３５％）として得た。
【００５３】
２ｅ：窒素雰囲気下、−７８℃のＴＨＦ（１０ｍＬ）中のオキサゾール（０．１ｍＬ，１．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、１．１当量のｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中の２．５Ｍ）（０．８５ｍＬ，２．１４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を−７８℃で２０分間撹拌し、２当量のＺｎＣｈの（エーテル中の１．０Ｍ溶液）（４ｍＬ，３．５７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃まで加温し、１時間攪拌し、１当量のＣｕＩ（３４０ｍｇ，１．７９ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、２当量の安息香酸、４−（３−クロロ−３−オキソ−１−プロペン−１−イル）−メチルエステル（８００ｍｇ，３．５７ｍｍｏｌ）を加える。ＴＬＣが完全な変換を示すまで、反応を０℃で維持した。該有機溶液を酢酸エチルで希釈し、ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）、水およびブラインで順次洗浄した。生成物を、ｎ−Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ（７：３）を使用するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、２ｅを白色固体（５７％）として得た。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．１１（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１７５．６２，１６５．８７，１５８．４８，１４４．２５，１４１．５７，１３７．９４，１３１．６４，１２９．７１，１２８．８５，１２８．２６，１２２．７４，５１．８９。
【００５４】
２ｆ：２−アセチルフラン（２ｇ，１８．２ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（１．８５ｍＬ，１８．２ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍＬ）に溶解した。それに１０％  ＮａＯＨ（５０ｍＬ）の水溶液を加え、反応物を室温で一晩撹拌した。ついで、それを酢酸で酸性化し、酢酸エチルで抽出した。得られた油を、溶離液としてｎ−Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ（８：２から７：３へ）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、２ｆを白色固体として得た。（６９％）。
【００５５】
２ｇ：２−アセチルフラン（１ｇ，９ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（２２０ｍｇ，９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中で撹拌した後、２−チアゾールカルボキサルデヒド（０．８ｍＬ，９ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、暗褐色沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｇを褐色固体（５０％）として得た。
【００５６】
２ｈ：２−アセチルフラン（３１６ｍｇ，２．９ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（７０ｍｇ，２．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中で撹拌した後、４−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ベンズアルデヒド（５００ｍｇ，２．９ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、黄色沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｈを黄色固体（７１％）としてた。
【００５７】
２ｉ：４−アセチルベンゾニトリル（４３５ｍｇ，３ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ（７２ｍｇ，３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で撹拌した後、４−ホルミル安息香酸メチル（５００ｍｇ，３ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、黄色沈殿物が生じた。沈殿物を濾過し、真空下で乾燥させて、２ｉを黄色固体（５６％）として得た。
【００５８】
化合物５ａ〜ｏに関する一般的手順。カルコン２（１ｇ，４ｍｍｏｌ）およびＮＨ４ＯＡｃ（９．２ｇ，１２０ｍｍｏｌ）を酢酸（２０ｍＬ）とＤＭＦ（３０ｍＬ）との混合物に溶解した。それにピリジニウム塩１（１．２ｇ，４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で一晩加熱した。溶媒を真空下で蒸発させ、残留褐色油をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、ガスの放出が止まるまで固体ＮａＨＣＯ３を加えた。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。生成物３を、褐色固体として、Ｅｔ２Ｏ−ＭｅＯＨを使用して破砕する。この物質を、更に精製することなく次に進めた。ＬｉＯＨ（２．５ｇ，１０４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（９：１）中の３の溶液に加え、一晩撹拌した。反応混合物をシリカゲルのパッドで濾過し、蒸発乾固させて、カルボン酸４を得た。４（３ｇ，８．２ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）および塩化オキサリル（０．７ｍＬ，８．２ｍｍｏｌ）に溶解し、ついで１滴のＤＭＦを加えた。反応物を室温で一晩撹拌し、ついで溶媒を真空中で除去し、残留固体を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に再溶解した。溶液をＮＨ４ＯＨ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、反応混合物を３０分間撹拌した。有機層を分離し、乾燥させ、真空下で蒸発させて褐色油を得、これを精製してピリジン５を得た。
【００５９】
５ｂ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｍ，３Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．２３，１５４．８１，１５２．７８，１４９．３９，１４８．７４，１４４．６６，１４２．４８，１３９．５０，１３４．９９，１３２．７０，１２８．２５，１２７．７７，１２７．１９，１１８．８３，１１７．２８，１１５．５９，１１２．４８，１１１．７７，１１０．１４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ１７Ｎ３Ｏ２としての計算値：３６６．１２３７（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３６６．１２３８。
【００６０】
５ｃ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５４（ｍ，３Ｈ），８．４７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．１０−８．０７（ｍ，５Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｂｒｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．９８，１６７．２０，１５５．０１，１５１．４３，１４９．３５，１４４．４７，１４１．７８，１３９．１２，１３５．２１，１３２．８７，１２８．３５，１２７．７５，１２７．２７，１２３．３７，１１９．９４，１１８．７６，１１６．２１，１１２．０８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１４Ｎ４ｕＯＳとしての計算値：３８３．０９６１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８３．０９６０。
【００６１】
５ｄ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５８（ｓ，１Ｈ），８．５６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．４４（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．１９，１５９．８７，１５５．３２，１４９．１１，１４６．４１，１４２．０４，１４１．５０，１３８．９４，１３５．２３，１３２．８０，１２８．９９，１２８．３５，１２７．９０，１２７．２８，１２０．０１，１１９．００，１１８．７５，１１２．０３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１４Ｎ４Ｏ２としての計算値：３６７．１１８９（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３６７．１１８３。
【００６２】
５ｅ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５１（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，４Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．５０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．２５，１５４．２５，１５１．１８，１４８．５３，１４３．６０，１４２．７３，１３９．５４，１３５．０２，１３２．８３，１３２．３８，１２８．３６，１２８．００，１２７．０９，１２５．７９，１１９．０９，１１８．８１，１１７．６４，１１１．７５，３６．４７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２３Ｈ１７Ｎ５Ｏとしての計算値：３８０．１５０６（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８０．１５０４。
【００６３】
５ｆ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．６０（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．５０（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），４．５０（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．１８，１５５．０５，１４９．１８，１４７．６１，１４２．３６，１３９．００，１３５．６２，１３５．１７，１３４．４８，１３２．８５，１２８．２０，１２７．９１，１２７．３９，１２０．２０，１１９．５０，１１８．７５，１１８．４５，１１２．０，３７．９６；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１６Ｎ６Ｏとしての計算値：３８１．１４５８（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８１．１４５７。
【００６４】
５ｇ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．４６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１２（ｍ，３Ｈ），８．０８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．２９，１６６．５８，１５５．８０，１５３．００，１４９．２６，１４８．５５，１４４．５０，１４４．０８，１３９．７８，１３９．６７，１３４．９０，１３３．７８，１２８．７７，１２７．７７，１２７．１３，１２６．４８，１２０．８８，１１６．６２，１１４．９２，１１２．４３，１０９．８９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２５Ｈ１７Ｎ３Ｏ２Ｓとしての計算値：４２４．１１１４（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２４．１１１６。
【００６５】
５ｈ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５２（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１２（ｍ，３Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｍ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６７．２８，１５５．８９，１５３．０３，１５２．１４，１５０．２１，１４９．２１，１４８．５１，１４４．４８，１３９．８１，１３８．１８，１３４．８８，１２８．２５，１２８．１７，１２７．６８，１２７．１３，１２４．３５，１２２．８１，１１６．４５，１１４．７６，１１２．４２，１０９．８４；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２５Ｈ１７Ｎ３Ｏ３としての計算値：４０８．１３４３（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４０８．１３５０。
【００６６】
５ｉ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．２８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５８−７．５２（ｍ，３Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１５４．９４，１５３．２０，１５０．０２，１４９．６２，１４３．１２，１４２．９８，１３７．７６，１３２．０７，１２８．９２，１２８．７５，１２７．１８，１２６．６３，１１８．４３，１１６．７７，１１５．６７，１１２．０７，１１１．７６，１０９．０１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１４Ｎ２Ｏとしての計算値：３２３．１１７９（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３２３．１１８２。
【００６７】
５ｊ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．３７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６６．４８，１６４．３７，１５６．１８，１５２．５５，１４９．４７，１４４．８３，１４４．５１，１４４．０９，１４１．８９，１３９．０４，１３３．９９，１２７．６７，１２６．５８，１２３．０５，１２０．９５，１１４．９６，１１３．２８，１１２．５３，１１０．２０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２１Ｈ１３Ｎ３ＯＳ２としての計算値：３８８．０５７３（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８８．０５７４。
【００６８】
５ｋ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝８．５４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ＝１６０．１１，１５４．６９，１５２．９４，１４９．４５，１４９．３１，１４４．５３，１４２．６８，１３５．００，１３４．００，１３２．６８，１２７．７４，１２７．２６，１２６．２８，１１８．８６，１１６．７９，１１５．０５，１１２．４２，１１１．６４，１０９．９０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２３Ｈ１４Ｎ６Ｏとしての計算値：３９１．１３０２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３９１．１３１５。
【００６９】
化合物５ｍ〜５ｏの合成スキーム
カルボン酸４ａ（１ｇ，２．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、塩化オキサリル（０．５ｍＬ，５ｍｍｏｌ）を加え、ついでＤＭＦ（１滴）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。ついで溶媒を真空中で除去し、残留固体を乾燥ＤＣＭ（１００ｍＬ）に再溶解した。この溶液を（ａ）メチルアミンおよびＤＩＰＥＡ（１：１）（２５ｍＬ）、（ｂ）メタンスルホンアミド（３００ｍｇ，３．１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１０ｍＬ）、または（ｃ）ヒドラジンおよびＤＩＰＥＡ（１：１）（２５ｍＬ）の溶液に注ぎ、反応混合物を３０分間撹拌した。ついで有機層を水で洗浄し、分離し、乾燥させ、真空下で蒸発させて、それぞれ５ｌ、５ｍおよび５ｎを得た。生成物を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８５：１５）を使用する分取ＴＬＣにより精製した。
【００７０】
５ｌ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．６３（ｍ，２Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｍ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝１６５．９２，１５４．８２，１５２．７８，１４９．３９，１４８．７０，１４４．６６，１４２．４８，１３９．２９，１３５．１９，１３２．７０，１２７．８３，１２７．７７，１２７．２４，１１８．８３，１１７．２５，１１５．５５，１１２．４８，１１１．７７，１１０．１３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ１７Ｎ３Ｏ２としての計算値：３８０．１３９３（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８０．１３９４。
【００７１】
５ｍ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．５４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｍ，４Ｈ），７．９４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），２．８９（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝１６９．７５，１５４．７３，１５２．８６，１４９．３２，１４４．５７，１４２．５８，１４０．７５，１３７．９３，１３２．６８，１２９．７４，１２９．００，１２７．７６，１２６．３４，１１８．８５，１１７．１０，１１５．４０，１１２．４３，１１１．６８，１０９．９８，４３．１３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２４Ｈ１７Ｎ３Ｏ４Ｓとしての計算値：４４４．１０１２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４４４．１０１７。
【００７２】
５ｎ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝９．９６（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｓ，２Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝１６５．１１，１５４．８１，１５２．７７，１４９．３９，１４８．６９，１４４．６６，１４２．４８，１３９．３４，１３４．０１，１３２．７０，１２７．７６，１２７．２７，１１８．８２，１１７．２４，１１５．５５，１１２．４７，１１１．７７，１１０．１３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２３Ｈ１６Ｎ４Ｏ２としての計算値：３８１．１３４６（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８１．１３５８。
【００７３】
７ａの合成
乾燥ＤＭＥ（３ｍＬ）中の４−ブロモ−２−（４−シアノフェニル）ピリジン（２００ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）の溶液に４−アミノカルボニルフェニルボロン酸（１５２ｍｇ，０．８０ｍｍｏｌ）および水（１ｍＬ）を加えた。ついで、Ｋ２ＣＯ３（３２０ｍｇ，２．３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（３６ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８５℃で一晩加熱した。反応混合物を蒸発させ、シリカゲルに吸着させ、溶離液としてＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、７ａを白色固体（１６０ｍｇ）として得た。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．８２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｍ，３Ｈ），８．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０６（ｍ，４Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｂｒｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝１６７．２５，１５４．９８，１５０．５４，１４７．６１，１４２．８４，１３９．５４，１３４．８９，１３２．６９，１２８．２５，１２７．６６，１２７．０９，１２１．２８，１１８．８３，１１１．６０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ１９Ｈ１３Ｎ３Ｏとしての計算値：３００．１１３１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３００．１１３２。
【００７４】
７ｂの合成
乾燥ＤＭＥ（３ｍＬ）中の２−ブロモ−６−（フラン−２−イル）ピリジン（２８０ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に４−シアノフェニルボロン酸（２２０ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）および水（１ｍＬ）を加えた。ついでＫ２ＣＯ３（５２０ｍｇ，３．７５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（６０ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を８５℃で一晩加熱した。反応混合物を蒸発させ、シリカゲルに吸着させ、溶離液としてＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（８：２）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製して、７ｂを白色固体（１８０ｍｇ）として得た。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：ｄ＝８．２３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），７．８６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｍ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：ｄ＝１５４．２４，１５３．１０，１４９．１５，１４３．１１，１４２．８４，１３７．２６，１３２．０５，１２７．０４，１１８．４２，１１７．５２，１１１．６９，１０８．７８；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ１６Ｈ１０Ｎ２Ｏとしての計算値：２４７．０８６６（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：２４７．０８６６。
【００７５】
化合物１０ａ〜ｃに関する一般的手順。ＩＰＡ（２０ｍＬ）中のフランカルボキシミジン８（２５０ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ）の溶液にＮａ（４５ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２時間還流した。ついで２（５００ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩還流した。ついでそれを真空下で蒸発乾固させ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（８：２）に溶解し、シリカゲルのパッドで濾過した。濾液を蒸発乾固させて、赤色油を得た。ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ（１：１）を使用してカルボン酸９を黄色固体（５５％）として沈殿させた。この物質を、更に精製することなく次へ進めた。９（２００ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）および塩化オキサリル（０．２ｍＬ，３６ｍｍｏｌ）に溶解し、ついで１滴のＤＭＦを加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留固体をＤＣＭ（５０ｍＬ）に再溶解した。溶液をＮＨ４ＯＨ溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、反応混合物を３０分間撹拌した。有機層を分離し、乾燥させ、真空下で蒸発させて褐色油を得、これを精製してピリミジン１０を得た。
【００７６】
１０ａ：１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．６６（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｍ，４Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝１６７．２４，１６３．９１，１６２．６０，１５７．３３，１５１．７２，１４６．１２，１４０．４１，１３８．３９，１３６．６５，１３２．８９，１２８．２０，１２８．０４，１２７．３５，１１８．５５，１１４．３５，１１３．４９，１１２．６１，１１１．３０；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１４Ｎ４Ｏ２としての計算値：３６７．１１８９（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３６７．１２０２。
【００７７】
１０ｂ：１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．３５（ｄ，２Ｈ），８．２２（ｍ，１Ｈ），８．１０（ｄ，２Ｈ），７．８２（ｂｓ，２Ｈ），７．９０（ｍ，４Ｈ），７．８０（ｄ，２Ｈ），７．５０（ｍ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１６Ｎ４Ｏとしての計算値：３７７．１４０２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３７７．１４８２。
【００７８】
１０ｃ：１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ＝８．６６（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，２Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｍ，４Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ１６Ｎ４Ｏとしての計算値：３８２．１５５５（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３８２．１４８２。
【００７９】
生物学的方法：
タンパク質発現および精製。Ｈｉｓタグ付きＭＹＣ、ｍＭＡＸ、ＭＹＣ−ＭＡＸおよびＭＡＸ−ＭＡＸ構築物をＢＬ２１大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞内で発現させ、既に記載されているとおりに精製した１０。
【００８０】
ＦＥＴ機能化および再生。Ａｇｉｌｅ  Ｒ１００（Ｎａｎｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で周囲温度でＦＥＴ実験を行った。製造業者のプロトコルに従い、チップをＮｉ−ＮＴＡで機能化した。ついで表面結合Ｎｉ−ＮＴＡ部位を、５０ｍＭ  ＭＥＳ（ｐＨ６．０）中の約１００ｎＭのタンパク質と共に１５分間インキュベートすることにより、Ｈｉｓタグ付きタンパク質に結合させた。２５０ｍＭ  イミダゾールで３０分間処理し、ついでＭＥＳ中で十分に洗浄し、Ｈｉｓタグ付きタンパク質を再導入することにより、Ｎｉ−ＮＴＡ機能化チップを再生させた。
【００８１】
相対結合研究。試験化合物を、３％  ＤＭＳＯを含有するＭＥＳ（ｐＨ６．０）バッファー中に、所望の濃度となるように溶解した。タンパク質結合チップを初期化し、３％  ＤＭＳＯを含有するＭＥＳバッファーですすいだ。相対結合研究のために、６〜８個の試験化合物（５ａを含む）を１０μＭで１回の実施で分析し、Ｒｅｑを決定し、５ａの場合と比較した。化合物は、異なるチップ間で最低３回試験した。
【００８２】
ＭＹＣアフィニティ評価。濃度曲線で１／２Ｒｍａｘを見出すことにより、５ｇのアフィニティを決定した。種々の濃度の５ｇをＭＹＣと平衡化させ、Ｒｅｑ値を濃度に対してプロットした。このデータの対数線フィットをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにより決定し、１／２Ｒｍａｘに関する５ｇの濃度をその線形の方程式から計算した。これを３つのチップで繰り返し、それらの３回の実施でアフィニティを平均した。
【００８３】
表面プラズモン共鳴。全ての実験は、研究等級のＳＡセンサーチップ（ＢＲ１００００３２，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えたＢｉａｃｏｒｅ  ３０００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して行った。ビオチン標識ＥＢＯＸ  ＤＮＡ（ビオチン−ＧＴＡＧＧＣＣＡＣＧＴＧＡＣＣＧＧＧ，Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｏｐｅｒｏｎ）および非標識相補鎖（１０ｐＭ）を混合し、９５℃で５分間加熱し、ついで室温までゆっくりと２０分間冷却してアニーリングさせた。アニーリングしたＥＢＯＸ  ｄｓＤＮＡをランニングバッファー（１：１０  ＨＢＳ＋ＥＰ，ＢＲ−１００６−６９，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中で１００倍希釈し、捕捉のためにＳＡチップ上に注入した。ブランクＳＡチップフローセルを結合アッセイにおける参照フローセルとして使用した。化合物を、１％  ＤＭＳＯを含有するランニングバッファー中の１０ｐＭのＭＹＣ−ＭＡＸ二量体に加えた。タンパク質および化合物を室温で１５分間インキュベートした。サンプルを３０μＬ／分で５分間注入した。ＥＢＯＸへの結合を２．５分にわたってモニターした。チップを１０ｍＭ  グリシンＨＣｌ（ｐＨ２．２）中で０．５分間再生させた。
【００８４】
ＣＥＦアッセイ。ＣＥＦ細胞のＡＴＧ−ＭＹＣトランスフェクションを、既に記載されているとおりに行った１０。化合物を、培地内の最終ＤＭＳＯ濃度が．１％未満となるように、１０００倍ＤＭＳＯストックから加えた。
【００８５】
フラン分析。化合物５ａ、５ｇおよび７ａを、１．０％未満のＤＭＳＯを使用して、５ｐＭの最終濃度となるように、ＰＢＳ中の０．５ｍｇ／ｍＬ  ラット肝臓ミクロソーム（プールされたもの；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に加えた。化合物を３７℃でインキュベートした。１０ｐＬのアリコートを、示されている時点で取り出し、１ｐＭ  ＴＡＰを含有するアセトニトリル中で１：１０００で希釈した。サンプルを、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＺＯＲＢＡＸＳＢ−Ｃ８カラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ６１００四重極（Ｑｕａｄｒｕｐｌｅ）ＬＣ−ＭＳ系で分析した。サンプルを、移動相としてＨ２Ｏ＋０．１％  ギ酸およびＭｅＣＮ＋０．１％  ギ酸を使用して分析した。Ｈ２Ｏ＋０．１％  ギ酸の割合を１０％から９５％まで直線的に増加させ、ＭｅＣＮ＋０．１％  ギ酸の割合を７分間の実施で９０％から５％まで直線的に減少させた（５００ｐＬ／ｍＬ）。親化合物の質量のイオン抽出および積分を、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して行った。実施の正規化および平均化を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌを使用して行った。分析の結果を図２に示す。
【００８６】
溶解度分析。ＤｙｎａＰｒｏ  ＮａｎｏＳｔａｒ検出器（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）での動的光散乱により、化合物を溶解度に関して分析した。化合物を、１０００×ＤＭＳＯストックから、種々の濃度でＭＥＳ（ｐＨ６．０）に溶解した。サンプルを凝集に関して分析し、凝集が観察されなかった最大濃度を溶解度の尺度として用いて。
【００８７】
ＰＫ分析。５ｇの薬物動態分析はＥｘｐｌｏｒａ  Ｂｉｏｌａｂｓにより実施された。１２匹のＣ５７ＢＬ／６（６匹の雄、６匹の雌）マウスに５ｇを１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射により投与した。注射後の２分ならびに０．０８、０．２５、０．５、１、２、８および２４時間の時点で血液サンプルを採取した。生物分析はＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓにより実施され、島津ＶＰシリーズ１０システムＬＣによる処理およびそれに続くＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／ＭＤＳ  ＳＣＩＥＸ  ＡＰＩ３０００トリプル四重極質量分析計での質量分析により行われた。動物の管理および使用を含む全ての手順は、Ｅｘｐｌｏｒａ  ＢｉｏＬａｂｓにおいて、ＩＡＣＵＣにより承認された。
【図１】
2021531253.tif 000018
【図２】
2021531253.tif 000019
【国際調査報告】
2021531253.tif 000020