(57)【要約】  配列番号２〜４、６〜８、１０〜１２、１４〜１６、または１８〜２０の配列を有する３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号２２〜２４、２６〜２８、３０〜３２、３４〜３６、または３８〜４０の配列を有する３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み、抗体がキメラ、ヒト化、複合体、またはヒト抗体である、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
2021531263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２〜４、または６〜８、または１０〜１２、または１４〜１６、または１８〜２０の配列を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３の３つの重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域と、
配列番号２２〜２４、または２６〜２８、または３０〜３２、または３４〜３６、または３８〜４０の配列を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の３つの軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と
を含む
抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
前記ＨＣＤＲ１は配列番号２の配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は配列番号３の配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は配列番号４の配列を有し、前記ＬＣＤＲ１は配列番号２２の配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号２３の配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号２４の配列を有する、または
前記ＨＣＤＲ１は配列番号６の配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は配列番号７の配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は配列番号８の配列を有し、前記ＬＣＤＲ１は配列番号２６の配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号２７の配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号２８の配列を有する、または
前記ＨＣＤＲ１は配列番号１０の配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は配列番号１１の配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は配列番号１２の配列を有し、前記ＬＣＤＲ１は配列番号３０の配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号３１の配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号３２の配列を有する、または
前記ＨＣＤＲ１は配列番号１４の配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は配列番号１５の配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は配列番号１６の配列を有し、前記ＬＣＤＲ１は配列番号３４の配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号３５の配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号３６の配列を有する、または
前記ＨＣＤＲ１は配列番号１８の配列を有し、前記ＨＣＤＲ２は配列番号１９の配列を有し、前記ＨＣＤＲ３は配列番号２０の配列を有し、前記ＬＣＤＲ１は配列番号３８の配列を有し、前記ＬＣＤＲ２は配列番号３９の配列を有し、前記ＬＣＤＲ３は配列番号４０の配列を有する
請求項１に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
ａ．前記重鎖可変領域は、配列番号１、５、９、１３、もしくは１７の配列、または配列番号１、５、９、１３、もしくは１７の配列と少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む、および／または
ｂ．前記軽鎖可変領域は、配列番号２１、２５、２９、３３、もしくは３７の配列、または配列番号２１、２５、２９、３３、もしくは３７の配列と少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む
請求項１に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
ａ．前記重鎖可変領域は、配列番号１の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２１の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む、または
ｂ．前記重鎖可変領域は、配列番号５の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２５の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む、または
ｃ．前記重鎖可変領域は、配列番号９の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２９の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む、または
ｄ．前記重鎖可変領域は、配列番号１３の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３３の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む、または
ｅ．前記重鎖可変領域は、配列番号１７の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３７の配列、またはそれに対して少なくとも約９５％の相同性を有する配列を含む
請求項３に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントがＰＤ−Ｌ１媒介シグナルを阻害する
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６】
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために前記抗体またはその抗原結合フラグメントに共有結合した薬物コンジュゲートをさらに含む
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７】
二重特異性抗体を形成するために前記抗体またはその抗原結合フラグメントが第２の抗体結合フラグメントに結合する
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項８】
ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１によって媒介される疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントと、製薬上許容される担体とを含む
医薬組成物。
【請求項９】
前記疾患が癌である
請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記癌が肺癌、乳癌、前立腺癌、または結腸直腸癌である
請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントにサンプルを接触させることを含む
ＰＤ−Ｌ１の発現を検出する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のヒト配列モノクローナル抗体、特にＰＤ−Ｌ１に高い親和性で特異的に結合するヒトモノクローナル抗体に関する。特に、本発明は、ヒトの疾患の治療および診断におけるそのような分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）は、受容体のＣＤ２８ファミリーの抑制性メンバーであり、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、およびＢＴＬＡも含む。ＰＤ−１は、活性化されたＢ細胞、Ｔ細胞、および骨髄性細胞に発現する（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．２００３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（２）：７１１−７１８）。そのリガンドであるプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、一部の腫瘍細胞や、活性化されたＢ細胞およびＴ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ならびに線維芽細胞によって発現する（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００９、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（３）：４５７−４７２）。ＰＤ−Ｌ１はＰＤ−１に結合し、Ｔ細胞のアポトーシスまたは枯渇を誘発することによって細胞の免疫応答を弱める。（ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に対する）モノクローナル抗体によるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の遮断は、多くの種類のヒトの癌の研究で検討されている有望な治療アプローチである（Ｓａｎｍａｍｅｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ  ２０１４、Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．２０（４）：２５６−２６１）。これらの研究の結果は、ＰＤ−Ｌ１がＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の活性化を促進することにより、腫瘍が免疫系から逃れるのを助ける上で重要な役割を果たすことを示唆している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＰＤ−Ｌ１の発現は、乳癌、肺癌、胃癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、腎細胞癌、精巣癌、甲状腺乳頭癌など、様々な固形腫瘍で観察されている。さらに、いくつかのメタアナリシスは、ＰＤ−Ｌ１の過剰発現が多くの種類の癌の予後不良を意味することを示している。したがって、ＰＤ−Ｌ１によって媒介される疾患または状態の治療または診断のために、ＰＤ−Ｌ１に対するより優れた抗体が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、本発明は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体に関する。本発明の抗体は、配列番号２〜４、または６〜８、または１０〜１２、または１４〜１６、または１８〜２０の配列を有する、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３の３つの重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域と、配列番号２２〜２４、または２６〜２８、または３０〜３２、または３４〜３６、または３８〜４０の配列を有する、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の３つの軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０００５】
いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１配列はＧＹＩＦＩＳＦＷＩＨ（配列番号２）、ＨＣＤＲ２配列はＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号３）、ＨＣＤＲ３配列はＬＤＧＤＹＧＲＡＹ（配列番号４）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＩＦＩＳＦＷＩＨ（配列番号６）、ＨＣＤＲ２配列はＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＥＫＦＲＤ（配列番号７）、ＨＣＤＲ３配列はＬＤＧＤＹＧＲＡＹ（配列番号８）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＡＦＳＴＳＷＩＮ（配列番号１０）、ＨＣＤＲ２配列はＲＩＹＰＧＤＧＤＩＮＹＮＧＫＦＫＤ（配列番号１１）、ＨＣＤＲ３配列はＳＮＨＹＹＦＤＦ（配列番号１２）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＡＦＳＴＳＷＭＮ（配列番号１４）、ＨＣＤＲ２配列はＲＩＹＰＧＤＥＤＴＮＹＮＧＮＦＫＧ（配列番号１５）、ＨＣＤＲ３配列はＳＤＮＹＹＦＤＹ（配列番号１６）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＦＴＦＳＤＳＧＭＨ（配列番号１８）、ＨＣＤＲ２配列はＹＩＳＡＧＳＹＴＩＹＹＡＤＩＶＫＧ（配列番号１９）、ＨＣＤＲ３配列はＧＤＷＹＦＡＶ（配列番号２０）であり、ここで、ＨＣＤＲ配列はＣｈｏｔｈｉａの方法に従って定義される。
【０００６】
本発明の実施形態によれば、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列は、図１Ａ〜図１Ｅに示される配列番号１、５、９、１３、または１７の配列を有する。
【０００７】
別の態様において、本出願は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体に関し、ここで、ＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＳＶＤＳＦＧＮＳＦＭＨ（配列番号２２）、ＬＣＤＲ２配列はＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号２３）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＮＮＥＤＰＬＴ（配列番号２４）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＳＶＤＳＮＧＮＳＦＭＨ（配列番号２６）、ＬＣＤＲ２配列はＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号２７）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＮＮＤＤＰＷＴ（配列番号２８）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＤＩＲＴＹＬＮ（配列番号３０）、ＬＣＤＲ２配列はＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号３１）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＶＨＴＬＰＰＷＴ（配列番号３２）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＤＤＩＲＴＹＬＮ（配列番号３４）、ＬＣＤＲ２配列はＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号３５）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＶＨＴＬＰＰＷＴ（配列番号３６）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＳＳＱＳＬＶＨＩＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号３８）、ＬＣＤＲ２配列はＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号３９）、ＬＣＤＲ３配列はＳＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号４０）であり、ここで、ＬＣＤＲ配列はＣｈｏｔｈｉａの方法に従って定義される。
【０００８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域は、図２Ａ〜図２Ｅに示される配列番号２１、２５、２９、３３、または３７の配列を有する。
【０００９】
別の態様において、本発明は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域とＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含む、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体に関し、ここで、ＨＣＤＲ１配列はＧＹＩＦＩＳＦＷＩＨ（配列番号２）、ＨＣＤＲ２配列はＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号３）、ＨＣＤＲ３配列はＬＤＧＤＹＧＲＡＹ（配列番号４）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＩＦＩＳＦＷＩＨ（配列番号６）、ＨＣＤＲ２配列はＮＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＥＫＦＲＤ（配列番号７）、ＨＣＤＲ３配列はＬＤＧＤＹＧＲＡＹ（配列番号８）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＡＦＳＴＳＷＩＮ（配列番号１０）、ＨＣＤＲ２配列はＲＩＹＰＧＤＧＤＩＮＹＮＧＫＦＫＤ（配列番号１１）、ＨＣＤＲ３配列はＳＮＨＹＹＦＤＦ（配列番号１２）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＹＡＦＳＴＳＷＭＮ（配列番号１４）、ＨＣＤＲ２配列はＲＩＹＰＧＤＥＤＴＮＹＮＧＮＦＫＧ（配列番号１５）、ＨＣＤＲ３配列はＳＤＮＹＹＦＤＹ（配列番号１６）である、またはＨＣＤＲ１配列はＧＦＴＦＳＤＳＧＭＨ（配列番号１８）、ＨＣＤＲ２配列はＹＩＳＡＧＳＹＴＩＹＹＡＤＩＶＫＧ（配列番号１９）、ＨＣＤＲ３配列はＧＤＷＹＦＡＶ（配列番号２０）、ＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＳＶＤＳＦＧＮＳＦＭＨ（配列番号２２）、ＬＣＤＲ２配列はＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号２３）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＮＮＥＤＰＬＴ（配列番号２４）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＳＶＤＳＮＧＮＳＦＭＨ（配列番号２６）、ＬＣＤＲ２配列はＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号２７）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＮＮＤＤＰＷＴ（配列番号２８）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＥＤＩＲＴＹＬＮ（配列番号３０）、ＬＣＤＲ２配列はＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号３１）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＶＨＴＬＰＰＷＴ（配列番号３２）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＡＳＤＤＩＲＴＹＬＮ（配列番号３４）、ＬＣＤＲ２配列はＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号３５）、ＬＣＤＲ３配列はＱＱＶＨＴＬＰＰＷＴ（配列番号３６）である、またはＬＣＤＲ１配列はＲＳＳＱＳＬＶＨＩＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号３８）、ＬＣＤＲ２配列はＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号３９）、ＬＣＤＲ３配列はＳＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号４０）であり、ここで、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａの方法に従って定義される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号１、５、９、１３、または１７の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号２１、２５、２９、３３、または３７の配列を有する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号１の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号２１の配列を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号５の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号２５の配列を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号９の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号２９の配列を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号１３の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号３３の配列を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の重鎖可変領域配列は、配列番号１７の配列を有し、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体の軽鎖可変領域配列は、配列番号３７の配列を有する。
【００１２】
本発明のいくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体は、完全な抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、またはＳｃＦｖフラグメントである。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体は、完全にヒトの抗体である。いくつかの実施形態において、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソフォームから選択される重鎖定常領域と、κサブタイプまたはλアイソフォームから選択される軽鎖定常領域とを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体（またはその結合フラグメント）は、第２の標的のための別の特異的結合ドメインとコンジュゲートすることによって、二重特異性または多重特異性抗体の一部を形成する。第２の標的に対する他の特異的結合ドメインは、例えば、抗ＣＤ３、抗ＩＣＯＳまたは抗ＴＩＭ３などであり得る。いくつかの実施形態において、本発明の抗体（またはその結合フラグメント）は、薬物（ペイロード）とコンジュゲートすることにより、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の一部を形成する。薬物またはペイロードは、ＰＤ−Ｌ１発現細胞またはＰＤ−１発現細胞の機能を調節する能力のために選択され得る。そのような薬物またはペイロードは、例えば、ＤＭ１、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦを含み得る。
【００１４】
本発明の別の態様は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１シグナル伝達に関連する疾患の治療および／または予防に使用するための医薬組成物に関し、ここで、医薬組成物は、上記の抗体またはその結合フラグメントを含み、これはヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。ＰＤ−Ｌ１を介した疾患は癌であり得る。癌には、黒色腫、非小細胞肺癌、腎癌、乳癌、白血病、癌および他の進行性固形腫瘍が含まれ得るが、これらに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】図１Ａは、マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト重鎖（１Ｅ１２）可変領域配列を示す図である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト重鎖（３Ｆ１１）可変領域配列を示す図である。
【図１Ｃ】図１Ｃは、マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト重鎖（３Ｅ１０）可変領域配列を示す図である。
【図１Ｄ】図１Ｄは、マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト重鎖（８Ｈ３）可変領域配列を示す図である。
【図１Ｅ】図１Ｅは、マウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト重鎖（５Ｅ６）可変領域配列を示す図である。
【００１６】
【図２Ａ】図２Ａは、マウス抗ヒトＰＤ−１抗体の軽鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト軽鎖（１Ｅ１２）可変領域配列を示す図である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、マウス抗ヒトＰＤ−１抗体の軽鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト軽鎖（３Ｆ１１）可変領域配列を示す図である。
【図２Ｃ】図２Ｃは、マウス抗ヒトＰＤ−１抗体の軽鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト軽鎖（３Ｅ１０）可変領域配列を示す図である。
【図２Ｄ】図２Ｄは、マウス抗ヒトＰＤ−１抗体の軽鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト軽鎖（８Ｈ３）可変領域配列を示す図である。
【図２Ｅ】図２Ｅは、マウス抗ヒトＰＤ−１抗体の軽鎖可変領域配列に対応するように設計された複合ヒト軽鎖（５Ｅ６）可変領域配列を示す図である。
【００１７】
【図３Ａ】図３Ａは、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体の結合を示し、ＥＬＩＳＡを使用したＰＤ−Ｌ１に対するヒト抗ＰＤ−Ｌ１の結合を示す図である。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体の結合を示し、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００（ＧＥヘルスケア）を使用したＰＤ−Ｌ１に対するヒト抗ＰＤ−Ｌ１の結果を示す図である。
【００１８】
【図４Ａ】図４Ａは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を遮断する抗体の能力を示し、抗体１Ｅ１２および３Ｆ１１を示す図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を遮断する抗体の能力を示し、抗体３Ｅ１０、８Ｈ３および５Ｅ６を示す図である。
【００１９】
【図５】図５は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断を誘導する様々な抗体の能力を示す図である。
【００２０】
【図６】図６は、フローサイトメトリーでアッセイされたＨＣＣ８２７細胞に結合する抗ＰＤＬ−１抗体を示す図である。
【００２１】
【図７Ａ】図７Ａは、フローサイトメトリーを使用したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における抗ＰＤＬ−１抗体の結合および内部移行アッセイを示す図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、フローサイトメトリーを使用したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における抗ＰＤＬ−１抗体の結合および内部移行アッセイを示す図である。
【００２２】
【図８】図８は、ヒト組織標本における抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ  ３Ｆ１１免疫組織化学を示す図である。
【００２３】
【図９】図９は、マウス同系ＭＣ３８結腸癌モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ治療のインビボ有効性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−Ｌ１に対して高い親和性を有し、対象に治療上の利益をもたらすことができる新規の抗体に関する。ヒトであり得るかまたはヒト化され得る本発明の抗体は、ＰＤ−Ｌ１によって媒介される様々な障害を治療および／または診断するための治療薬として使用することができ、これらは本明細書により完全に記載されている。
【００２５】
特に、本発明の実施形態による抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＤ−Ｌ１またはそのフラグメントのエピトープに特異的に結合し、ここで、ヒトＰＤ−Ｌ１は配列番号５１のアミノ酸配列を有し、エピトープは１７８位のリジン残基、および１７９位のスレオニン残基を含む。
【００２６】
本発明の実施形態による抗体は、全長であり得るか（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）、または抗原結合部分のみを含み得（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖフラグメント）、必要に応じて機能に影響を与えるように改変され得る。
【００２７】
本発明の実施形態による抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。ＣＤ２７４またはＢ７ホモログ１としても知られるＰＤ−Ｌ１は、４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質であり、例えば、妊娠、組織同種移植、自己免疫疾患、およびその他の病態などの特定のイベントで免疫系を抑制するのに主要な役割を果たすと推測されている。通常、免疫系は、外因性または内因性の危険信号に関連する外来抗原に反応し、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ヘルパー細胞の増殖を引き起こす。ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１またはＢ７．１への結合は、これらのＴ細胞の増殖を減少させる阻害シグナルを伝達し、アポトーシスを誘発できることもあり、これは、遺伝子Ｂｃｌ−２のより低い調節によってさらに媒介される。
【００２８】
「抗体」という用語は、その通常の意味を有し、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（Ｈ）と２つの軽鎖（Ｌ）とを含む。各重鎖は、３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と４つのフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）を含む。各軽鎖は、３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と４つのＦＲとを含む軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）を含む。本発明の異なる実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であり得るか、または天然または人工的に改変され得る。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの比較分析に基づいて規定され得る。
【００２９】
本明細書で使用される抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成することができる抗体の任意のフラグメントを含む。抗原結合フラグメントの非限定的な例には、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、単離されたＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ３ペプチド）、または拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基で構成される最小認識ユニットが含まれる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」である。
【００３０】
抗体の抗原結合フラグメントは、通常、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であり得、一般に、少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインに関連するＶＨドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で互いに対して位置し得る。例えば、可変領域は二量体であり得、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、単量体のＶＨまたはＶＬドメインを含み得る。
【００３１】
完全な抗体分子と同様に、抗原結合フラグメントは、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原に、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能な日常的な技術を使用して、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの状況での使用に適合され得る。
【００３２】
本発明の抗体は、ＰＤ−Ｌ１を特異的に標的とすることができる抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）として使用され得る。ＡＤＣ上のコンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１を発現する免疫細胞、またはＰＤ−Ｌ１を発現する細胞と相互作用する細胞（ＰＤ−１発現細胞など）を調節する可能性がある。これらのＡＤＣは、本発明の任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを使用することができる。抗体（または結合フラグメント）にコンジュゲートする薬物（ペイロード）は、ＡＤＣで一般的に使用されているものであればどれでもかまわない。コンジュゲートの方法は、当技術分野で知られている方法であり得る。
【００３３】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的類似性」または「実質的に類似」という用語は、デフォルトのギャップ重みを使用するプログラムＧＡＰもしくはＢＥＳＴＦＩＴ、またはＢＬＡＳＴなどによって最適に整列させた場合に、２つのペプチド配列が少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。本発明の実施形態によれば、ＧＣＧソフトウェアのＧａｐおよびＢｅｓｔ  ｆｉｔプログラムをデフォルトのパラメーターとともに使用して、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定した。
【００３４】
本発明の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、ＣＤＲＨ１（またはＨＣＤＲ１）、ＣＤＲＨ２（またはＨＣＤＲ２）およびＣＤＲＨ３（またはＨＣＤＲ３）領域の３つのＣＤＲ領域を含み、軽鎖可変領域は、ＣＤＲＬ１（またはＬＣＤＲ１）、ＣＤＲＬ２（またはＬＣＤＲ２）およびＣＤＲＬ３（またはＬＣＤＲ３）領域の３つのＣＤＲ領域を含む。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１によって媒介される疾患」という用語は、免疫抑制または消耗につながるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達に関連する疾患を指す。このような疾患には、自己免疫、神経障害、脳卒中、および癌に関連する疾患が含まれる。（Ｎ．Ｋｕｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１８，１０（２）：１４９−１６０）。本明細書で使用される場合、「治療すること」は、疾患または状態の症状の緩和を指し、完全な治癒である必要はない。
【００３６】
図１Ａ〜図１Ｅおよび図２Ａ〜図２Ｅを参照すると、本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１領域は配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２領域は配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３領域は配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１領域は配列番号２２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２領域は配列番号２３のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３領域は配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
【００３７】
本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１領域は配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２領域は配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３領域は配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１領域は配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２領域は配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３領域は配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２領域は配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３領域は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１領域は配列番号３０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２領域は配列番号３１のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３領域は配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１領域は配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２領域は配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３領域は配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１領域は配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２領域は配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３領域は配列番号３６のアミノ酸配列を含む。
【００４０】
本発明のいくつかの実施形態において、ＣＤＲＨ１領域は配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ２領域は配列番号１９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＨ３領域は配列番号２０のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ１領域は配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ２領域は配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲＬ３領域は配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。好ましくは、重鎖可変領域は配列番号４１の核酸配列によってコードされ、軽鎖可変領域は配列番号４６の核酸配列によってコードされる。
【００４２】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。好ましくは、重鎖可変領域は配列番号４５の核酸配列によってコードされ、軽鎖可変領域は配列番号４７の核酸配列によってコードされる。
【００４３】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。好ましくは、重鎖可変領域は配列番号４９の核酸配列によってコードされ、軽鎖可変領域は配列番号４８の核酸配列によってコードされる。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。好ましくは、重鎖可変領域は配列番号４４の核酸配列によってコードされ、軽鎖可変領域は配列番号４３の核酸配列によってコードされる。
【００４５】
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。好ましくは、重鎖可変領域は配列番号４２の核酸配列によってコードされ、軽鎖可変領域は配列番号５０の核酸配列によってコードされる。
【００４６】
本発明の抗体は、ＥＬＩＳＡを介してＰＤ−Ｌ１と特異的に結合することが確認された。簡単に説明すると、ＰＤ−Ｌ１を９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（０．１μｇ／ウェル）にコーティングした。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の結合後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧを二次抗体として使用し、３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を基質として使用して、抗体−ＰＤ−Ｌ１結合を評価した。活性を計算するためにＯＤ４０５を読み取った。
【００４７】
図３Ａに示されるように、いくつかのマウスハイブリドーマ抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体（ｍＡｂ  １Ｅ１２、３Ｆ１１、８Ｈ３、３Ｅ１０、および５Ｅ６）はすべて、ＰＤ−Ｌ１との特異的かつ緊密な結合を示す。図３Ｂは、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥヘルスケア）によって決定されたこれらの抗体の結合パラメーターおよび親和性を示している。簡単に説明すると、ＣＭ５  ＢＩＡｃｏｒｅチップを、アクティブチャネル上でヒトＰＤ−Ｌ１でコーティングした。アクティブチャネルには、マウスハイブリドーマ抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体（ｍＡｂｓ  １Ｅ１２、３Ｆ１１、８Ｈ３、３Ｅ１０、および５Ｅ６）またはその変異体を様々な濃度で順次注入し、バッファーのみを注入したチャネルをブランク対照として使用した。親和性は、単一サイクル反応速度論の方法で決定した。データを、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して１：１結合モデルに適合させ、反応速度定数（Ｋａ：結合定数；Ｋｄ：解離定数；ＫＤ＝Ｋａ／Ｋｄ）を取得した。
【００４８】
本発明の抗体がヒトＰＤ−Ｌ１に強固に、かつ特異的に結合できることは、これらの抗体がＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の結合を妨害できるはずであることを示唆している。ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を遮断する本発明の様々な抗体の能力を、ＥＬＩＳＡを使用して確認した。簡単に説明すると、１００ｎｇ／ウェルのＰＤ−Ｌ１−Ｆｃを９６ウェルプレートにコーティングした。次に、５ｕｇ／ウェルのＰＤ−１−ビオチンと様々な濃度の抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体を添加した。結合を３７℃で１時間進行させた。ＰＢＳで洗浄した後、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲートを添加し、続いてＴＭＢ（３，３’、５，５’−テトラメチルベンジジン）を添加した。ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃに結合するビオチン化ＰＤ−１の量を、ＯＤ４０５の読み取り値で定量化した。
【００４９】
図４Ａに示されるように、本発明のｍＡｂ（例えば、１Ｅ１２および３Ｆ１１）は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の結合を効果的に遮断したが、対照のマウスＩｇＧは遮断しなかった。同様に、図４Ｂは、ｍＡｂ  ３Ｅ１０、８Ｈ３、および５Ｅ６がＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を妨害する可能性があるのに対し、対照のマウスＩｇＧは妨害できないことを示している。
【００５０】
上記の実験は、インビトロでＰＤ−Ｌ１分子に対する本発明の抗体の結合を試験するが、そのような結合を、相互作用細胞上にそれぞれ発現したＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１でも試験した。例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断アッセイには、Ｐｒｏｍｅｇａ（米国、ウィスコンシン州、マディソン）のキットなど、任意の市販のキットを使用してもよい。Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  Ｂｉｏａｓｓａｙは、生物発光細胞ベースのアッセイである。アッセイキットは、ＰＤ−１エフェクター細胞（ヒトＰＤ−１を発現するジャーカットＴ細胞とＮＦＡＴ応答エレメント（ＮＦＡＴ−ＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーター）と、ＰＤ−Ｌ１  ａＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞であり、抗原に依存しない方法で同族のＴＣＲを活性化するように設計された操作された細胞表面タンパク質）の２つの遺伝子操作された細胞株で構成されている。
【００５１】
２つの細胞タイプを共培養すると、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用がＴＣＲシグナル伝達とＮＦＡＴ−ＲＥを介した発光を阻害する。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断する本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を添加すると、阻害シグナルを放出し、ＴＣＲの活性化とＮＦＡＴ−ＲＥを介した発光をもたらすことができる。生物発光シグナルは、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍと標準的なルミノメーター、例えばＰｒｏｍｅｇａ（米国、ウィスコンシン州、マディソン）のＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍなどを使用して検出および定量化できる。
【００５２】
図５に示されるように、本発明のｍＡｂ  １Ｅ１２、３Ｆ１１、３Ｅ１０、および８Ｈ３はすべて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断する特異的かつ強力な活性を示す。本発明の他の抗体も同様の活性を示す。これらの結果は、本発明の抗体が、相互作用する細胞上のＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１相互作用によって媒介される免疫抑制を緩和するのに有効であることを確認している。したがって、本発明の抗体は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１シグナル伝達による免疫抑制または消耗から生じる疾患の治療薬として有用であるはずである。そのような疾患には様々な癌が含まれる。
【００５３】
癌治療における本発明の抗体の有用性をさらに検証するために、癌細胞上に発現したＰＤ−Ｌ１に結合するこれらの抗体の能力を評価した。例えば、ＰＤ−Ｌ１発現細胞への抗ＰＤ−Ｌ１抗体の結合を、高レベルのＰＤ−Ｌ１を発現するＨＣＣ８２７細胞（肺腺癌）を使用したフローサイトメトリーによってアッセイした。簡単に説明すると、ＨＣＣ８２７細胞（ＰＤ−Ｌ１高）を抗ＰＤ−Ｌ１抗体と１時間インキュベートし、その後フローサイトメトリーを使用して分析した。図６に示されるように、本発明のｍＡｂ  １Ｅ１２、３Ｅ１０、３Ｆ１１、および８Ｈ３はすべて、ＨＣＣ８２７細胞に結合することができ、これらの抗体が癌細胞表面上のＰＤ−Ｌ１を認識できることを示している。本発明の他の抗体も同様の活性を示す。したがって、本発明の抗体は、癌細胞上に発現したＰＤ−Ｌ１に結合し、それによってＰＤ−Ｌ１を介した免疫抑制または消耗を阻害することによって、癌を治療するために使用することができる。
【００５４】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断に加えて、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体も受容体の内部移行／リサイクルを引き起こす可能性がある。また、受容体の内部移行またはリサイクルにより、ＰＤ−Ｌ１はＰＤ−１との相互作用に利用できなくなる。したがって、ＰＤ−Ｌ１内部移行を引き起こす本発明の抗ＰＤＬ−１抗体の能力を調査した。簡単に説明すると、ＰＤ−Ｌ１のこれらの遮断／リサイクルプロセスを調査するために、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（上皮性のヒト乳癌細胞株）を１μｇ／ｍＬの抗ＰＤ−Ｌ１抗体で４℃および３７℃で処理し、２４時間にわたって監視した。次に、様々な時点で、細胞をフローサイトメトリーで分析した。
【００５５】
図７Ａおよび図７Ｂに示すように、ｍＡｂ  １Ｅ１２および３Ｆ１１はＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に結合し、内部移行することができた。内部移行は、時間依存的様式で、３７℃で発生したが、４℃では発生しなかった。これらの結果は、本発明の抗体が、ＰＤ−Ｌ１に結合することによって、およびＰＤ−Ｌ１の内部移行を引き起こすことによって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断できることを示している。内部移行によりＰＤ−Ｌ１が利用できなくなり、ＰＤ−Ｌ１を介したシグナル伝達経路の遮断に（単純な盲検化よりも）効果的であろう。したがって、本発明の抗体は、ＰＤ−Ｌ１によって媒介される癌または疾患の治療においてより効果的であるはずである。
【００５６】
本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＰＤ−Ｌ１に特異的かつ強固に結合できるため、いくつかの癌細胞で高度に発現しているＰＤ−Ｌ１の検出にも有用である。図８に示すように、ヒト組織標本の抗ＰＤ−Ｌ１抗体３Ｆ１１の免疫組織化学染色では、正常組織（例えば、扁桃腺や平滑筋）のみで染色が弱いのに対し、肺癌組織の染色は非常に強いことがわかった。これらの結果は、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、癌細胞など、ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞または組織の検出に有用であることを示している。したがって、これらの抗体は、癌の検出ならびに治療中および／または治療後の癌の予後／モニタリングのための診断薬として有用であるはずである。
【００５７】
上記の例は、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体がヒトＰＤ−Ｌ１に特異的かつ強固に結合できることを明確に示している。これらの抗体は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を妨害してＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の結合を遮断することもできる。さらに、これらの抗体は、ＰＤ−Ｌ１の内部移行を引き起こし、ＰＤ−Ｌ１をＰＤ−１との結合に利用できなくすることができる。結果として、本発明の抗体は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用によって媒介される疾患を治療するための効果的な治療法であるはずである。そのような疾患には、例えば、癌が含まれる。癌の例には、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌などが含まれるが、これらに限定されない。さらに、本発明の抗体は、ＰＤ−Ｌ１を検出するための試薬として使用されてもよく、ＰＤ−Ｌ１発現の診断または治療中の予後において有用である。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１シグナル伝達によって媒介される疾患の状態／症状を治療または緩和するための方法に関し、そのような疾患には癌が含まれ得る。癌の治療における本発明の抗体の有用性を実証するために、マウス同系モデルを使用した。簡単に説明すると、０日目に、ＭＣ３８細胞（結腸腺癌細胞）をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。６、９、および１３日目に、マウスを、毎回５ｍｐｋ（ｍｇ／ｋｇ）で本発明の抗体（例えば、１Ｅ１２、３Ｆ１１、３Ｅ１０、および８Ｈ３）で処理した。ＩｇＧ（抗ＰＤ−Ｌ１ではない）を対照として使用した。１６日目まで、様々な治療群の腫瘍増殖をモニターした。
【００５９】
図９に示されるように、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂ（例えば、１Ｅ１２、３Ｆ１１、３Ｅ１０、および８Ｈ３）は、このインビボ結腸直腸癌モデルにおいて腫瘍増殖を抑制するのに有効であった。本発明の他の抗体も同様の効果を有する。これらの結果は、本発明の抗体が、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌などの癌を治療するための臨床使用に有用であることを明確に実証している。
【００６０】
さらに、本発明の抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１に非常に特異的である。本発明の抗体は、高い特異性と親和性で特有のエピトープを認識する。これらの特性により、治療薬としてより有用になる。実際、ＭＤＡ−ＭＢ２３１乳癌細胞のマウス異種移植モデルでは、本発明の抗体（３Ｆ１１および１Ｅ１２）は、時間の経過とともに腫瘍に帰巣し、すなわち、結合強度は、１２０時間まで時間とともに増加する。対照的に、ＦＤＡ承認の抗体であるアテゾリズマブは、十分な結合力がなく、動物全体に分布しているように見えた。その結果、アテゾリズマブは身体によって比較的速く除去され、１２０時間までに多くの結合を示さなかった。本発明の抗体は癌細胞に強固に結合するため、循環中の抗体のごくわずかが身体によって除去されるように見える。結果として、本発明の抗体は、はるかに長いインビボ半減期を有する。したがって、本発明の抗体は、より少ない用量で、より少ない投与頻度で使用することができ、治療費を実質的に削減し、潜在的な副作用を最小限に抑える。
【００６１】
従来技術の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、本発明の抗体は、より好ましい薬物動態特性（例えば、より高い結合力およびより長い半減期）を有し、これは、ヒトＰＤ−Ｌ１上の異なるエピトープに結合するためと思われる。エピトープマッピングは、本発明の抗体が、残基１７１−１８０と２０６−２１０とを含む領域にあるエピトープでヒトＰＤ−Ｌ１に結合することを示している。これらのエピトープ領域は、既知の抗体のものとは異なる。例えば、従来技術の抗体（例えば、アテゾリズマブおよびデュルバルマブ）のＰＤ−Ｌ１への結合に関与する重要な残基は、ＰＤ−Ｌ１上のＥ５８およびＲ１２５を含む。（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、（２０１７）、７：５５３２）。
【００６２】
次の表に示すように、アラニンスキャニングを使用した本発明の抗体の結合についてのエピトープのさらなる分析は、残基１７８および１７９が結合にとって特に重要であることを明らかにした。
部位特異的変異誘発によるヒトＰＤ−Ｌ１への抗ＰＤ−Ｌ１抗体結合のマッピング
【表１】
2021531263.tif 000003
【００６３】
要約すると、本発明の抗体は、細胞表面上のＰＤ−Ｌ１を含めて、ＰＤ−Ｌ１に特異的かつ強固に結合することができる。ＰＤ−Ｌ１発現細胞には、肺癌細胞、結腸直腸癌細胞（例えば、ＭＣ３８細胞）、乳癌細胞（例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞）などの癌細胞が含まれる。これらの抗体は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の結合を妨害し、ＰＤ−１および／またはＤ−Ｌ１シグナル伝達経路の遮断をもたらすことができる。さらに、本発明の抗体による結合はまた、ＰＤ−Ｌ１の内部移行を引き起こし、ＰＤ−１との相互作用に利用できなくする。結果として、本発明の抗体は、ＰＤ−１および／またはＤ−Ｌ１シグナル伝達によって引き起こされる免疫抑制または消耗を軽減または逆転させることができる。したがって、本発明の抗体は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１相互作用によって引き起こされる免疫抑制または消耗に関連する疾患の状態を治療または緩和するための有用な治療薬である。
【００６４】
本発明の抗体によるＰＤ−Ｌ１の結合は、ヒトＰＤ−Ｌ１上のこれまで未知のエピトープを含み、これらの新しいエピトープへの結合は、予想外の高い特異性および結合力をもたらし、より好ましい薬物動態特性（例えば、腫瘍細胞へのより集中した結合、循環中の遊離抗体が少ない、半減期が長い）につながる。結果として、本発明の抗体は、より低い用量で、より少ない投与頻度で使用することができ、それにより、コストおよび副作用を低減し、患者のコンプライアンスを高める。
【００６５】
本発明の実施形態は、限られた数の例で示されているが、当業者は、他の改変および変形が可能であることを理解するであろう。したがって、本発明の保護の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるべきである。
【図１Ａ】
2021531263.tif 000004
【図１Ｂ】
2021531263.tif 000005
【図１Ｃ】
2021531263.tif 000006
【図１Ｄ】
2021531263.tif 000007
【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2021531263.tif 000010
【図２Ｃ】
2021531263.tif 000011
【図２Ｄ】
2021531263.tif 000012
【図２Ｅ】
2021531263.tif 000013
【図３Ａ】
2021531263.tif 000014
【図３Ｂ】
2021531263.tif 000015
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2021531263.tif 000021
【図８】
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【図９】
2021531263.tif 000023
【配列表】
2021531263000001.app
【国際調査報告】
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