(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−２３受容体に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、およびこれをコードする核酸に関する。さらに本発明は、上記ＣＡＲを発現するＴ細胞および自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を処置するためのその使用に関する。【選択図】図１
2021520820.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）に対して特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）前記ＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択でタグおよび／またはリーダー配列と、
を含む、キメラ抗原受容体。
【請求項２】
前記細胞外結合ドメインが、前記ＩＬ−２３Ｒに向けられたｓｃＦｖフラグメントを含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
前記細胞外結合ドメインが、前記ＩＬ−２３Ｒに向けられたｓｃＦｖフラグメントを含み、前記ｓｃＦｖフラグメントが、
配列番号３７の配列または配列番号３７と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
配列番号３８、４６および５６ならびに配列番号３８、４６または５６と少なくとも約７０％の同一性を有する配列からなる群から選択される配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、
任意選択でＶＨとＶＬの間のリンカーと、
を含み、
好ましくは前記ｓｃＦｖが、配列番号５５の配列または配列番号５５と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、
請求項１または２に記載のＣＡＲ。
配列番号
【請求項４】
前記ヒンジドメインが、好ましくは配列番号１３の配列または配列番号１３と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ８のヒンジ領域である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記膜貫通ドメインが、好ましくは配列番号２１の配列または配列番号２１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ８α由来の膜貫通ドメインである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記細胞内シグナリングドメインが、好ましくは配列番号２９の配列または配列番号２９と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒト４−１ＢＢの共刺激シグナリングドメインと好ましくは配列番号２６の配列または配列番号２６と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、Ｔ細胞プライマリーシグナリングヒトＣＤ３ζとを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
（ｉ）好ましくは配列番号３７の配列を有するＶＨおよび配列番号３８の配列を有するＶＬを含み、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号３）により連結されている、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖと、
（ｉｉ）好ましくは配列番号１３である、ＣＤ８α由来のヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）好ましくは配列番号２１である、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）好ましくは配列番号２９である、ヒト４−１ＢＢシグナリングドメインと好ましくは配列番号２６である、ヒトＣＤ３ζドメインとを含む細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択でタグおよび／またはリーダー配列と、
を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列。
【請求項９】
請求項８に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作されている、Ｔ細胞集団。
【請求項１１】
前記Ｔ細胞集団が、制御性Ｔ細胞集団であり、好ましくは前記制御性Ｔ細胞集団が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ−β分泌Ｔｈ３細胞、制御性ＮＫＴ細胞、制御性γδＴ細胞、制御性ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびダブルネガティブ制御性Ｔ細胞からなる群から選択される、請求項１０に記載のＴ細胞集団。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作されている少なくとも１つのＴ細胞集団を含む組成物であって、前記組成物が好ましくは、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤または担体をさらに含む医薬組成物である、組成物。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作されている少なくとも１つのＴ細胞集団を入手するためのｅｘ  ｖｉｖｏの方法であって、前記ｅｘ  ｖｉｖｏの方法が、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲをコードする核酸での少なくとも１つのＴ細胞の、遺伝子修飾、好ましくは形質導入、および任意選択で前記形質導入された細胞の増殖ステップを含む、方法。
【請求項１４】
それを必要とする対象においてＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を処置することにおける使用のための、請求項１０もしくは１１に記載のＴ細胞集団、または請求項１２に記載の組成物であって、前記ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害が、好ましくは自己免疫性および／または炎症性疾患および／または障害である、Ｔ細胞集団または組成物。
【請求項１５】
前記自己免疫性および／または炎症性疾患および／または障害が、炎症性腸疾患（たとえば、クローン病および潰瘍性大腸炎など）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺障害、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、乾癬性関節炎およびぶどう膜炎からなる群から選択され、好ましくは前記自己免疫性および／または炎症性疾患および／または障害が、クローン病である、請求項１４に記載の使用のためのＴ細胞集団または組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法の分野に関する。特に本発明は、インターロイキン２３受容体に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、上記ＣＡＲを発現するＴ細胞、および自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を処置するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン２３（ＩＬ−２３）は、ＩＬ−１２サイトカインファミリーのメンバーであり、２つのサブユニットｐ１９およびｐ４０から構成される。ＩＬ−２３に対する受容体（ＩＬ−２３Ｒ）は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットと複合体形成するＩＬ−２３Ｒαサブユニットからなり、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットはＩＬ１２受容体に共通するサブユニットでありチロシンキナーゼ２（Ｔｙｋ２）と相互作用する。ＩＬ−２３Ｒは、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）と恒常的に結合しており、ＩＬ−２３による活性化を受けてＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ４と結合する。
【０００３】
ＩＬ−２３Ｒは、主に、免疫細胞、特にＴ細胞（たとえばＴｈ１７およびγδＴ細胞）、マクロファージ、樹状細胞、およびＮＫ細胞上で発現される（Ｄｕｖａｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。近年、活性化されていない好中球が基本量のＩＬ−２３Ｒを発現すること、およびＩＬ−２３Ｒの発現が細胞活性化時に増大されることが示されている（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６）。
【０００４】
ＩＬ−２３によるＩＬ−２３Ｒの活性化は、ＩＬ−２３Ｒのリン酸化、ならびにホモ二量体を形成するＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ４の動員を誘導し、ホモ二量体はリン酸化されると核酸に転位し、その結果転写因子ＲＯＲγｔの発現を誘導する。次にＲＯＲγｔは、免疫応答の活性化に関与しているＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２２、ＩＬ−６、およびＩＦＮ−γなどの下流の炎症性サイトカインの転写を活性化する（Ｒａｚａｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１８，  Ｓｉｖａｎｅｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６およびＤｕｖａｌｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。特に、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒシグナリング経路は、ＩＬ−１７分泌免疫細胞、特にＣＤ４＋Ｔｈ１７細胞およびγδＴ細胞の増殖および分化の促進に重要であると説明されている。
【０００５】
この分野において、ＩＬ−２３Ｒの発現は、自己免疫性疾患および慢性炎症の出現および維持に関与する病原性炎症性細胞に共通する性質として説明されている。表面でのＩＬ２３Ｒの発現は、ＩＬ２３の曝露により誘導され、炎症のレベルに依存している。ヒト細胞では、ＲＮＡレベルでのＩＬ２３Ｒの発現は十分に論述されているが、細胞表面上のタンパク質の存在、ひいては標的因子としてのその利用可能性についてはほとんど示されていない。
【０００６】
ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒシグナルング経路の阻害は、自己免疫性および炎症性疾患または障害に対する見込みのある治療上のアプローチとして研究されている。特に、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットに向けられる抗体であるウステキヌマブは、クローン病を有する非応答の患者および感染を有する患者で試験され好結果を得ている（Ｆｅｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６，  Ｍｅａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。ウステキヌマブは、米国で乾癬の治療として承認されている。しかしながら、症例報告は、乾癬性関節炎が、ウステキヌマブを用いた処置の後に４名の患者で悪化したことを明らかにした（Ｓｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６）。
【０００７】
さらに、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害の長期間の処置のために、寛容の導入が必要であり、これはサイトカインを標的化する場合には達成され得ない。
【０００８】
結果的に、従来技術の方法の欠点を提示しない、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒシグナリング経路を阻害し、それにより自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を処置するための方法が、依然として必要とされている。
【０００９】
本明細書において本出願人は、ＩＬ−２３Ｒに向けられるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および上記ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞集団を提供する。上記Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞に関連する疾患または障害、特に自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を処置するために使用され得る。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）に対して特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）上記ＩＬ−２３Ｒに結合する細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列と、
を含む、キメラ抗原受容体に関する。
【００１１】
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、上記ＩＬ−２３Ｒに向けられるｓｃＦｖフラグメントを含む。
【００１２】
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられるｓｃＦｖフラグメントを含み、上記ｓｃＦｖフラグメントは、
配列番号３７の配列または配列番号３７と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
配列番号３８、４６、および５６、ならびに配列番号３８、４６、または５６と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を含むかまたはからなる群から選択される配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、
任意選択で、ＶＨとＶＬの間のリンカーと
を含む。
【００１３】
一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられるｓｃＦｖフラグメントを含み、ｓｃＦｖは、配列番号５５の配列または配列番号５５と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する。
【００１４】
一実施形態では、ヒンジドメインは、好ましくは配列番号１３の配列または配列番号１３と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＤ８のヒンジ領域である。
【００１５】
一実施形態では、膜貫通ドメインは、好ましくは配列番号２１の配列または配列番号２１と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒトＣＨ８α由来の膜貫通ドメインである。
【００１６】
一実施形態では、細胞内シグナリングドメインは、好ましくは配列番号２９の配列または配列番号２９と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、ヒト４−１ＢＢの共刺激シグナリングドメインと、好ましくは配列番号２６の配列または配列番号２６と少なくとも約７０％の同一性を有する配列を有する、Ｔ細胞プライマリーシグナリングヒトＣＤ３ζとを含む。
【００１７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、
（ｉ）好ましくは配列番号３７の配列を有するＶＨおよび配列番号３８の配列を有するＶＬを含み；（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号３）により結合されている、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖと、
（ｉｉ）好ましくは配列番号１３である、ＣＤ８α由来のヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）好ましくは配列番号２１である、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）好ましくは配列番号２９である、ヒト４−１ＢＢシグナリングドメインと、好ましくは配列番号２６である、ヒトＣＤ３ζドメインとを含む細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列
を含む。
【００１８】
さらに本発明は、本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸配列に関する。
【００１９】
さらに本発明は、本明細書で上述される核酸配列を含むベクターに関する。
【００２０】
さらに本発明は、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作されたＴ細胞集団であって、上記ＣＡＲが、
（ｉ）ＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列
を含む、
Ｔ細胞集団に関する。
【００２１】
一実施形態では、上記Ｔ細胞集団は、制御性Ｔ細胞集団である。
【００２２】
一実施形態では、上記Ｔ細胞集団は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ−β分泌Ｔｈ３細胞、制御性ＮＫＴ細胞、制御性γδＴ細胞、制御性ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびダブルネガティブ制御性Ｔ細胞を含むかまたはそれらからなる群から選択されるＴｒｅｇ細胞集団である。
【００２３】
さらに本発明は、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作された少なくとも１つのＴ細胞集団を含む組成物であって、上記ＣＡＲが、
（ｉ）ＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列
を含む、組成物に関する。
【００２４】
一実施形態では、上記組成物は、医薬組成物であり、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【００２５】
さらに本発明は、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体に特異的なＣＡＲを細胞表面上に発現するように操作された少なくとも１つのＴ細胞集団を入手するためのｅｘ  ｖｉｖｏでの方法であって、上記ＣＡＲが、
（ｉ）上記少なくとも１つのＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列
を含み、
上記方法が、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲをコードする核酸による少なくとも１つのＴ細胞の遺伝子修飾、好ましくは形質導入、および任意選択で形質導入した細胞の増殖ステップを含む、
方法に関する。
【００２６】
さらに本発明は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を処置するための方法であって、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作された少なくとも１つのＴ細胞集団を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、上記ＣＡＲが、
（ｉ）上記少なくとも１つのＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメインと、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列と
を含む、方法に関する。
【００２７】
さらに本発明は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を処置するための、または当該処置で使用するための、本明細書で記載されるＴ細胞集団または本明細書で記載される組成物に関する。
【００２８】
一実施形態では、上記ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害は、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害である。
【００２９】
一実施形態では、上記ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害は、炎症性腸疾患（たとえばクローン病および潰瘍性大腸炎など）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺障害、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、乾癬性関節炎、またはぶどう膜炎を含むかまたはそれらからなる群から選択される。一実施形態では、上記ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患は、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害、好ましくはクローン病である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
定義
本発明において、以下の用語は以下の意味を有する。
【００３１】
用語「ａ」および「ａｎ」は、１つまたは１超（すなわち少なくとも１つ）の物品の文法上の物体を指す。例として、「ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」は、１つの要素または１超の要素を意味する。
【００３２】
用語「約」は、たとえば量、時間的な期間などの測定可能な値に言及する場合、特記した値から約±２０％、場合により±１０％、または場合により±５％、または場合により±１％、または場合により±０．１％の変分を、開示される方法を行うためにこのような変分が適切である場合、包有することを意味する。
【００３３】
用語「活性化」は、本明細書で使用される場合、検出可能な細胞の応答を誘導するように十分に刺激されているＴ細胞（たとえば制御性Ｔ細胞）の状態を指す。活性化はまた、サイトカインの産生または抑制的な活動などの検出可能なエフェクター機能にも関連し得る。用語「活性化した」制御性Ｔ細胞は、特に、免疫応答を抑制できる制御性Ｔ細胞を指す。
【００３４】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子由来のタンパク質またはポリペプチドの配列を指す。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルの、複数のまたは単一の鎖の、またはインタクトな免疫グロブリンであり得、天然の供給源由来または組み換え型の供給源由来であり得る。用語「抗体」はまた、多重特異性抗体（たとえば二重特異性抗体、）および、それらが望ましい生物学的活性を呈する限りは抗体フラグメントを含む。抗体は、免疫グロブリン分子の多量体、たとえば免疫グロブリン分子の四量体であり得る。基本的な四本鎖抗体の単位は、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）から構成されるヘテロ四量体の糖タンパク質である。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメイン（ＣＬ）のアミノ酸配列に基づき、カッパ（［κ］）およびラムダ（［λ］）と呼ばれる２つの明らかに異なる型の１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に基づき、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てられ得る。それぞれアルファ（［α］）、デルタ（［δ］）、イプシロン（［ε］）、ガンマ（［γ］）、およびミュー（［μ］）と表記される重鎖を有する、５つのクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在する。［γ］および［α］のクラスは、ＣＨの配列および機能の比較的小さな差異に基づきサブクラスにさらに分けられ、たとえばヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。各Ｌ鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によりＨ鎖に結合され、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合により互いに結合される。各Ｈ鎖およびＬ鎖はまた、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）、続いて［α］および「γ」鎖のそれぞれについて３つの定常ドメイン、「μ」および「ε」のアイソタイプについて４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＬ）、続いてその他方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨと並べられ、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と並べられる。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの間に境界面を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬをまとめた組み合わせは、単一の抗原結合部位を形成する。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖とよばれるさらなるポリペプチドと共に５つの基本的なヘテロ四量体単位からなり、よって、１０の抗原結合部位を含み、対して分泌性ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と共に２〜５つの基本的な４鎖単位を含む多価集合体を形成するように重合し得る。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般的に、約１５０，０００ダルトンである。異なるクラスの抗体の構造および性質に関しては、たとえばＢａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．  Ｓｔｉｔｅｓ，  Ａｂｂａ  Ｉ．  Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．  Ｐａｒｓｌｏｗ  （ｅｄｓ．），  Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，  Ｎｏｒｗａｌｋ，  Ｃｏｎｎ．，  １９９４，  ｐａｇｅ  ７１，  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【００３５】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集合から得られる抗体を指し、すなわち、その集合に含まれる個別の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する起こり得る変異を除き同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に向けられ、著しく特異的である。さらに、異なる決定因子（エピトープ）に向けられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子に向けられる。それらの特異性に加え、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入しないように合成され得る点で好適である。修飾語句「モノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）」は、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。たとえば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５（１９７５）が最初に記載したハイブリドーマ法により調製されてよく、または細菌細胞、真核細胞、動物細胞、もしくは植物細胞における組み換えＤＮＡ法を使用して作製され得る（たとえば米国特許第４，８１６，５６７号参照）。「モノクローナル抗体」はまた、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７  （１９９１）に記載される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離され得る。本明細書中のモノクローナル抗体は、「キメラ」抗体を含む。
【００３６】
用語「抗体フラグメント」は、好ましくは抗原のエピトープと特異的に相互作用する（たとえば結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）特性を保持する、インタクトな抗体の少なくとも一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、限定するものではないが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメインおよびＣＨＩドメインからなるＦｄフラグメント、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体、たとえばｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダ類のＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体、および単離されたＣＤＲまたは抗体の他のエピトープ結合フラグメントが挙げられる。抗原結合フラグメントはまた、シングルドメイン抗体、ｍａｘｉｂｏｄｙ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ジアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖ（たとえばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，  ２００５参照）に組み込まれ得る。抗原結合フラグメントはまた、フィブロネクチンＩＩＩ型などのポリペプチドに基づくスキャフォールドに移植され得る（たとえばフィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号参照）。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、および残りの「Ｆｃ」フラグメントを産生する。Ｆｃフラグメントの名称は、容易に結晶化する性質を反映している。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と併せたＬ鎖全体、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわち、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦａｂフラグメントに大まかに対応しかつ依然として抗原を架橋できる、単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントをもたらす。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端でさらなる数個の残基を有することにより、Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有する、Ｆａｂ’に対する本明細書中での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは本来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。他の抗体フラグメントの化学的なカップリングもまた知られている。
【００３７】
抗体の「Ｆｃ」フラグメント」は、ジスルフィドによりまとめて保持される両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列により決定され、この領域はまた、特定の種類の細胞上で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される部分でもある。
【００３８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小抗体フラグメントである。このフラグメントは、堅い非共有結合による１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合に関するアミノ酸残基に寄与し抗体に対する抗原結合特異性を提供する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖由来の３つのループおよびＬ鎖由来の３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体より親和性が低いが、抗原を認識および結合する特性を有する。
【００３９】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントおよび重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含む融合タンパク質を指し、ここで軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、たとえば合成リンカー、たとえば短い可動性ポリペプチドリンカーにより近接して連結され、単鎖ポリペプチドとして発現され得、ここでｓｃＦｖは、それが由来するインタクトな抗体の特異性を保持する。特段記載されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、いずれかの順序で、たとえばポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、ＶＬ可変領域およびＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得、またはＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【００４０】
「インタクトな」抗体は、抗原結合部位、ならびにＣＬおよび少なくとも１つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む抗体である。定常ドメインは、ネイティブな配列の定常ドメイン（たとえばヒトのネイティブな配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列のバリアントであり得る。「ネイティブな配列」のポリヌクレオチドは、天然由来のポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドである。「ネイティブな配列」のポリペプチドは、天然由来（たとえな任意の種由来）のポリペプチド（たとえば抗体）と同じアミノ酸配列を有するポリペプチドである。このようなネイティブな配列のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、天然から単離でき、または、組み換えもしくは合成的な手段により産生できる。
【００４１】
用語「抗体の重鎖」は、それらの天然に存在する立体構造で抗体分子中に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きな方のポリペプチド鎖であり、通常、抗体が属するクラスを決定する、ポリペプチド鎖を指す。
【００４２】
用語「抗体の軽鎖」は、それらの天然に存在する立体構造で抗体分子中に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さな方の鎖を指す。カッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖のアイソタイプを指す。
【００４３】
用語「抗原」または「Ａｇ」は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、および／または特定の免疫学上のコンピテントセルの活性化のうちのいずれか、またはその両方に関与し得る。当業者は、全てのタンパク質またはペプチドを含むいずれかのマクロ分子が抗原として作用し得ることを理解している。さらに抗原は、組み換えＤＮＡまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。よって当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分的なヌクレオチド配列を含む全てのＤＮＡが、「抗原」を、この用語が本明細書で使用される場合、コードすることを理解する。さらに当業者は、必ずしも抗原が、遺伝子の完全長のヌクレオチド配列によってのみコードされる必要がないことを理解している。本発明が、限定するものではないが１超の遺伝子の部分的なヌクレオチド配列の使用を含むこと、およびこれらヌクレオチド配列が所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配置されることは、容易に明らかである。さらに当業者は、抗原が必ずしも、「遺伝子」によりコードされる必要が全くないことを理解する。抗原は合成されてよく、または生体サンプル由来であってよく、またはポリペプチド以外のマクロ分子であり得ることは容易に明らかである。このような生体サンプルは、限定するものではないが、組織サンプル、細胞、または他の生体成分を含む流体を含み得る。
【００４４】
モノボディとしても知られる用語「アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）」は、当該分野でよく知られており、抗原に対して高い親和性および特異性で結合するように設計されたタンパク質を指す。これらは、「抗体ミメティック」と集合的に呼ばれる分子のクラスに属する。
【００４５】
用語「アルファボディ（αｂｏｄｙ）」は、本明細書で使用される場合、細胞浸透アルファボディ（Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Αｂｏｄｙ）とも称され得、様々な抗原に結合するように操作された小さな１０ｋＤａのタンパク質からなる抗体ミメティックの種類を指す。アルファボディは、細胞内タンパク質標的に達し、かつ結合できる。
【００４６】
用語「アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）」は、当該分野でよく知られており、ブドウ球菌のプロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する、５８個のアミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づくアフィニティタンパク質を指す。
【００４７】
用語「アフィリン」は、当該分野でよく知られており、抗原を選択的に結合するように設計された人工タンパク質を指す。これらは、抗原に対する親和性および特異性において抗体に類似しているが、これらを抗体ミメティックの１種にする構造においては抗体と類似していない。
【００４８】
用語「アンチカリン」は、当該分野でよく知られており、結合特異性がリポカリンに由来する、抗体ミメティック技術を指す。アンチカリンはまた、デュオカリン（ｄｕｏｃａｌｉｎ）と呼ばれる二重の標的化タンパク質として形式化され得る。
【００４９】
用語「アルマジロリピートタンパク質ベースのスキャフォールド」は、本明細書で使用される場合、アルマジロリピートタンパク質に基づく人工的なペプチド結合スキャフォールドに対応する抗体ミメティックの種類を指す。アルマジロスキャフォールドタンパク質は、ペプチドまたはタンパク質との相互作用を媒介する、約４２アミノ酸のタンデムなアルマジロリピートから構成されるアルマジロドメインを特徴とする。
【００５０】
用語「アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）」は、当該分野でよく知られており、生体活性の前提条件として（ｐｅｒｑｕｉｓｉｔｅ）三量体形成する標的タンパク質に対する結合分子を指す。これらは、他の抗体ミメティックのスキャフォールドと比較して相対的に大きい。
【００５１】
用語「アビマー」は、当該分野でよく知られており、抗体ミメティック技術を指す。
【００５２】
用語「ＤＡＲＰｉｎ」（Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ａｎｋｙｒｉｎ  Ｒｅｐｅａｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）は、当該分野でよく知られており、非抗体ポリペプチドの結合の性質を利用するために開発された抗体ミメティックＤＲＰ（ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）技術を指す。
【００５３】
用語「ジアボディ」は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間の対形成が達成され、それにより二価のフラグメント、すなわち２つの抗原結合部位を有するフラグメントをもたらすように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓｃＦｖフラグメントを構築することにより調製される小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性のジアボディは、２つの「クロスオーバー」ｓｃＦｖフラグメントのヘテロ二量体であり、その中で２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインは異なるポリペプチド鎖に存在する。ジアボディは、たとえば欧州特許公開公報第０４０４０９７号；国際特許公開公報第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：６４４４−６４４８  （１９９３）により完全に記載されている。
【００５４】
用語「エヴァシン（ｅｖａｓｉｎ）」は、当該分野でよく知られており、ケモカイン結合タンパク質のクラスを指す。
【００５５】
用語「ファイノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）」は、当該分野でよく知られており、抗体ミメティックのクラスに属するタンパク質を指す。これらは、高い熱安定性および低減された免疫原性のため魅力的な結合分子である。
【００５６】
用語「ノッチン」（阻害剤シスチンノット（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｙｓｔｉｎｅ  ｎｏｔ）とも呼ばれ得る）は、本明細書で使用される場合、３つのジスルフィド架橋を含むタンパク質の構造的モチーフを含む抗体ミメティックを指す。
【００５７】
用語「ドメインｋｕｎｉｔｚペプチド」は、抗体ミメティックの一種を指し、プロテアーゼの機能を阻害するタンパク質の活性ドメインに基づく。
【００５８】
用語「ナノボディ」は、当該分野でよく知られており、天然に存在する重鎖抗体の固有の構造上および機能的な性質を含む抗体由来の治療用タンパク質を指す。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。
【００５９】
用語「ユニボディ（ｕｎｉｂｏｄｙ）」は、当該分野でよく知られており、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠く抗体フラグメントを指す。このヒンジ領域の欠失は、原則的に従来のＩｇＧ４抗体の半分の大きさでありＩｇＧ４抗体の二価の結合領域よりはむしろ一価の結合領域を有する分子をもたらす。
【００６０】
用語「ヴァーサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）」は、当該分野でよく知られており、別の抗体ミメティック技術を指す。これらは、１５％超のシステインを有する３〜５ｋＤａの小さなタンパク質であり、従来のタンパク質が有する疎水性コアにとって代わる高いジスルフィド密度のスキャフォールドを形成する。
【００６１】
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体形成した外来の抗原を提示する、アクセサリー細胞などの免疫系細胞（たとえばＢ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこれらの複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原を処理し、それらをＴ細胞に提示する。
【００６２】
用語「同種の（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）」は、物質が導入される個体と同じ種の異なる個体に由来するいずれかの物質を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座にある遺伝子が同一ではない場合、互いに同種であると言われる。いくつかの態様では、同じ種の個体由来の同種の物質は、抗原的に相互作用するように十分に遺伝的に異なり得る。
【００６３】
用語「自家性」は、後に再導入される同じ個体に由来するいずれかの物質を指す。
【００６４】
用語「キメラ受容体またはキメラ抗原受容体またはＣＲまたはＣＡＲ」は、免疫細胞において、標的リガンドに対する特異性および細胞内シグナルの産生を細胞に提供する、１つのポリペプチド、または最も単純な実施形態では通常２つの、ポリペプチドのセットを指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、互いに近接している。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、ポリペプチドのセットを含むキメラ性融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのセットは、二量体形成分子の存在の際に、ポリペプチドを互いに結合し得る、たとえばリガンド結合ドメインを細胞内シグナリングドメインに結合し得る、二量体形成スイッチを含む。一実施形態では、キメラ受容体は、キメラ受容体融合タンパク質のアミノＮ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択的なリーダー配列を含む。一実施形態では、キメラ受容体は、細胞外リガンド結合ドメインのＮ末端にリーダー配列をさらに含み、ここでリーダー配列は、任意選択で、細胞処理の間、および細胞膜へのキメラ受容体の局在化の間にリガンド結合ドメインから切断される。
【００６５】
用語「保存的配列修飾」は、アミノ酸配列を含むタンパク質の生体機能に顕著に影響を与えないかまたは生体機能を変えないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾は、アミノ酸の置換、付加、および欠失を含む。修飾は、部位特異的変異導入およびＰＣＲが媒介する変異導入などの、当該分野で知られている標準的な技術により、タンパク質に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、ペプチド化学の当業者がポリペプチドの二次構造およびヒドロパシーの性質が実質的に変更されないと予想し得るような、類似する性質を有するアミノ酸残基と置換される置換である。よって、アミノ酸の置換は通常、アミノ酸の側鎖の置換基の相対的な類似性、たとえばそれらの疎水性、親水性、電荷、大きさなどに基づく。様々な上記の特徴を考慮する例示的な置換は、当業者によく知られており、アルギニンおよびリジン；グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩；セリンおよびスレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシンおよびイソロイシンを含む。アミノ酸の置換は、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性の性質の類似性に基づきさらに行われ得る。たとえば、負に荷電したアミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含み；正に荷電したアミノ酸は、リジンおよびアルギニンを含み；類似の親水性値を有する荷電されない極性頭部基を有するアミノ酸は、ロイシン、イソロイシンおよびバリン；グリシンおよびアラニン；アスパラギンおよびグルタミン；ならびにセリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンを含む。保存的変化を表し得る他のアミノ酸のグループとしては、（１）ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；（２）ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；（３）ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；（４）ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；および（５）ｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓが挙げられる。他の類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（たとえばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（たとえばアスパラギン酸、グルタミン酸）、荷電されない極性側鎖を有するアミノ酸（たとえばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（たとえばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐した側鎖を有するアミノ酸（たとえばスレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族の側鎖を有するアミノ酸（たとえばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。よって、本発明のキメラ受容体内の１つ以上のアミノ酸残渣は、同じ側鎖のファミリー由来の他のアミノ酸残基と置換され得、変更されたキメラ受容体は、本明細書中記載される機能的なアッセイを使用して試験され得る。
【００６６】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結される際に、細胞のほとんどまたは全ての生理的条件の下細胞で産生される遺伝子産物をもたらす、ヌクレオチド配列を指す。
【００６７】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、限定するものではないが増殖などの、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同種の結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する抗原受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激シグナリングドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリー：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、ＳＬＡＭタンパク質（ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、および活性化ＮＫ細胞受容体、において提示され得る。
【００６８】
用語「〜に由来する」は、本明細書で使用される場合、第１の分子と第２の分子の間の関係を指す。これは一般に、第１の分子と第２の分子の間の構造的な類似性を指し、第２の分子に由来する第１の分子に関するプロセスまたは供給源の限定を暗示せずまたは含まない。たとえば、ＣＤ３ζ分子に由来する細胞内シグナリングドメインの場合、細胞内シグナリングドメインは、必要とされる機能、すなわち適切な条件下でシグナルをもたらす性質、を有するように十分なＣＤ３ζの構造を保持する。これは、細胞内シグナリングドメインを産生する特定のプロセスへの限定を暗示せずまたは含まず、たとえば、細胞内シグナリングドメインを提供するために、ＣＤ３ζ分子の配列で開始しかつ望ましくない配列を欠失するかかまたは変異を強要して、細胞内シグナリングドメインに到達しなければならないことを意味しない。
【００６９】
用語「〜をコードする（ｃｏｄｉｎｇ）」は、定義された配列のヌクレオチド（たとえばｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、およびｍＲＮＡ）または定義された配列のアミノ酸のいずれかならびにそれらからもたらされる生物学的な性質を有する、生体プロセスにおける他のポリマーおよびマクロ分子の合成のためのテンプレートとして作用するための、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどの、ポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特異的配列の固有の性質を指す。よって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡは、当該遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が、細胞または他の生体系においてあるタンパク質を産生する場合、当該タンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり通常配列リストに提供される、コード鎖、および遺伝子またはｃＤＮＡの転写のためのテンプレートとして使用される、非コード鎖の両方は、当該遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードするとみなされ得る。特段他の意味が記載されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンでありかつ同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。文言「タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」はまた、当該タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンにおいてイントロンを含み得るという程度にイントロンを含み得る。
【００７０】
用語「内在性の」は、生物、細胞、組織、または系に由来するかまたはこの中で産生されるいずれかの物質を指す。
【００７１】
用語「操作された」または「修飾された」は、トランスフェクトされているか、形質転換されているか、または形質導入されている細胞を指す。
【００７２】
用語「外因性の」は、生物、細胞、組織、または系から導入されるかこの外で産生されるいずれかの物質を指す。
【００７３】
用語「発現」は、プロモーターにより駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳を指す。
【００７４】
用語「発現ベクター」は、発現されるヌクレオチド配列に作動的に連結される発現制御配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のために十分なシスエレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏの発現系により供給され得る。発現ベクターは、組み換えポリヌクレオチドを組み込む、コスミド、プラスミド（たとえば、裸のまたはリポソームに含まれる）、ならびにウイルス（たとえばレンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含む、当該分野で知られている全ての発現ベクターを含む。
【００７５】
用語「相同性」または「同一性」は、たとえば２つのＤＮＡ分子もしくは２つのＲＮＡ分子などの、２つの核酸分子の間、または２つのポリペプチド分子の間の、２つの重合分子の間のサブユニットの配列同一性を指す。この２つの分子の両方においてサブユニットの位置が同じ単量体のサブユニットにより占められる場合、すなわち、２つのＤＮＡ分子のそれぞれにおけるある位置がアデニンにより占められる場合、これらはその位置において相同的または同一である。２つの配列の間の相同性は、マッチングの数または相同的な位置の一次関数であり；たとえば、２つの配列における位置の半分（たとえば長さ１０のサブユニットのポリマーにおける５つの位置）が相同的である場合、これらの２つの配列は、５０％相同的であり；位置の９０％（たとえば１０のうち９）が一致しているかまたは相同的である場合、これらの２つの配列は９０％相同的である。よって、用語「相同的」または「同一の」は、２つ以上のポリペプチドまたは２つ以上の核酸分子の配列間の関係に使用される場合、２つ以上のアミノ酸またはヌクレオチド残基の鎖間の一致の数により決定される、ポリペプチド間または核酸分子間の配列の関連性の度合いを指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）により提示される、ギャップアライメント（存在する場合）を伴うより小さな２つ以上の配列間で同一な一致のパーセントを測定する。関連するポリペプチドの同一性は、既知の方法により容易に計算され得る。このような方法としては、限定するものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  １，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．，  ｅｄｓ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，  １９９４；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｄｓ．，  Ｍ．  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＳＩＡＭ  Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．  ４８，  １０７３  （１９８８）に記載される方法が挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間に最大の一致を提供するように設計される。同一性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムで記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄ．  Ｒｅｓ．  ＼２，  ３８７  （１９８４）；  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ＭｏＩ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５，  ４０３−４１０  （１９９０））を含む、ＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、アメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  ２０８９４；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  上記参照）から公開されている。よく知られているＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用され得る。
【００７６】
用語「ヒト化された」形態の非ヒト（たとえばマウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含む、キメラ性の免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖またはフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗体の抗原結合配列）を指す。大部分では、ヒト化抗体およびその抗体フラグメントは、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）が、所望の特異性、親和性、および特質を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ由来の残基（ドナー抗体）により置き換えられているヒトの免疫グロブリン（レシピエント抗体または抗体フラグメント）である。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レシピエント抗体に存在せず、かつ移入されるＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体または抗体フラグメントの性能をさらに洗練しかつ最適化し得る。一般的に、ヒト化抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応しかつＦＲ領域の全てまたは重要な部分がヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体または抗体フラグメントはまた、通常はヒトの免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：  ５２２−５２５，  １９８６；  Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３２：  ３２３−３２９，  １９８８；  Ｐｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．，  ２：  ５９３−５９６，  １９９２を参照されたい。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されるＲＮＡ」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。一般に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されるＲＮＡは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写ベクターから産生される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写ベクターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されるＲＮＡを産生するために使用されるテンプレートを含む。
【００７８】
用語「誘導可能な」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結される際に、プロモーターに対応するインデューサーが細胞中に存在する場合のみに実質的に細胞で産生される遺伝子産物をもたらす、ヌクレオチド配列を指す。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「５’キャップ」（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ  ７−メチルグアノシンキャップ、またはＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、転写開始直後に真核生物のメッセンジャーＲＮＡの「前」または５’末端に付加されている、修飾されたグアニンヌクレオチドである。よって、５’キャップは、最初に転写されたヌクレオチドに結合される末端の基からなる。その存在は、リボソームによる認識およびリボヌクレアーゼからの保護に重要である。キャップの付加は、転写と連動し、それぞれが他に影響を与えるように、転写と同時に起こる。転写開始の直後に、合成されつつあるｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと結合したキャップ合成複合体により結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡのキャップングに必要である化学反応を触媒する。合成は、複数のステップの生化学反応として進む。キャッピング部分は、その安定性または翻訳の効率などのｍＲＮＡの機能性を調節するように修飾され得る。
【００８０】
本発明の文脈では、一般に存在する核酸塩基に関して以下の略語が使用される。「Ａ」はアデニンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」はグアニンを指し、「Ｔ」はチミンを指し、「Ｕ」はウラシルを指す。
【００８１】
用語「教材」は、本発明の組成物および方法の有用性を伝えるために使用され得る出版物、記録、図表、または他のいずれかの表現媒体を含む。たとえば、本発明のキットの教材は、本発明の細胞を含む容器に固定されていてもよく、または本発明の細胞を含む容器と共に発送されてもよい。あるいは、教材は、教材のセルがレシピエントにより協同的に使用される意図で容器とは別々に発送され得る。
【００８２】
用語「細胞内シグナリングドメイン」は、本明細書で使用される場合、ある分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナリングドメインは、キメラ受容体を含む細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルをもたらす。キメラ受容体−Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例は、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性、抑制的な活動、制御活性、およびヘルパー活性を含み得る。
【００８３】
用語「単離された」は、天然の状態から変更されたまたは取り出されたことを意味する。たとえば、生きた動物に天然の状態で存在する核酸またはペプチドは「単離されて」いないが、その天然の状態の共存物質から部分的にまたは完全に分離された同核酸またはペプチドは「単離されて」いる。単離された核酸またはペプチドは、実質的に精製された形態で存在してよく、またはたとえば、宿主細胞などの非天然の環境で存在してよい。通常、単離された核酸またはペプチドの調製物は、少なくとも約８０％純粋な、少なくとも約８５％純粋な、少なくとも約９０％純粋な、少なくとも約９５％純粋な、９５％超純粋な、約９６％超純粋な、約９７％超純粋な、約９８％超純粋な、または約９９％超純粋な、核酸またはペプチドを含む。「単離された核酸」は、天然の配列に必然的に付随する、他のゲノムＤＮＡ配列およびタンパク質または複合体、たとえばリボソームおよびポリメラーゼから実質的に分離されている核酸である。この用語は、その天然に存在する環境から取り出されている核酸配列を包含し、組み換えＤＮＡまたはクローニングされたＤＮＡの単離物、および化学的に合成された類縁体または異種系により生物学的に合成される類縁体を含む。「単離されたポリペプチド」は、天然の環境の構成要素から同定されており、かつ分離および／または除去されているポリペプチドである。
【００８４】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染できる点で、レトロウイルスの中でも固有であり；これらは、かなりの量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡ中に送達でき、よって、それらは遺伝子送達ベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、およびＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【００８５】
用語「レンチウイルスベクター」は、特にＭｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １７（８）：  １４５３−１４６４  （２００９）に提供される自己不活性化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターを指す。クリニックで使用され得るレンチウイルスの他の例としては、限定するものではないが、Ｏｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａ製のＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術、Ｌｅｎｔｉｇｅｎ製のＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクター系などが挙げられる。非臨床的な種類のレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に知られている。
【００８６】
用語「リガンド」は、リガンド／受容体の対のメンバーを指し、この対の他のメンバーに結合する。
【００８７】
用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態の、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）または（ＲＮＡ）などのホスホジエステル結合により共有結合したヌクレオチドのポリマーを指す。特段に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合の性質を有しかつ天然に存在するヌクレオチドと同様の様式で代謝される、天然のヌクレオチドの既知の類縁体を含む核酸を包有する。特段に記載されない限り、特定の核酸はまた、その保存的に修飾されたバリアント（たとえば縮重コドン置換）、アレル、オルトログ、ＳＮＰ、および相補配列、ならびに明記された配列を包有する。特に、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合された塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換される配列を作製することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．  １９：５０８１  （１９９１）；  Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６０：２６０５−２６０８  （１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８  （１９９４））。
【００８８】
用語「作動的に連結された」または「転写制御」は、異種性核酸配列の発現をもたらす、制御配列と異種性核酸配列の間の機能的な連結を指す。たとえば、第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的な関係に置かれる際に、第２の核酸配列と作動可能に連結される。たとえば、プロモーターは、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、コード配列に作動可能に連結される。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、互いに近接し得、たとえば、２つのタンパク質コード領域を結合させる必要がある場合、同じリーディングフレームにある。
【００８９】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、互換可能に使用され、ペプチド結合により共有結合した複数のアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、タンパク質またはペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数に関して限定は課されない。ポリペプチドは、ペプチド結合により互いに結合した２つ以上のアミノ酸を含むいずれかのペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、通常当該分野においてたとえばペプチド、オリゴペプチド、およびオリゴマーと呼ばれる短い鎖、ならびに全般的に当該分野でタンパク質と呼ばれ、多くの種類が存在するより長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」は、特に、たとえば生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同的なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾されたポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然のペプチド、組み換えペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。
【００９０】
用語「薬学的に許容される賦形剤」または「薬学的に許容される担体」は、動物、好ましくはヒトに投与される際に、有害な反応、アレルギー反応、または他の望ましくない反応をもたらすことのない賦形剤を指す。これは、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。ヒトへの投与では、調製物は、たとえばＦＤＡ局またはＥＭＡなどの規制局が要求する無菌性、発熱性、一般的な安全性、および純度の基準を満たさなければならない。
【００９１】
用語「ポリ（Ａ）」は、ｍＲＮＡに結合されたアデノシン一リン酸のシリーズを指す。一過的発現のコンストラクトの一実施形態では、ポリＡは、５０〜５０００のアデノシン一リン酸、好ましくは６４以上、より好ましくは１００以上、最も好ましくは３００または４００以上のアデノシン一リン酸である。ポリ（Ａ）配列は、局在化、安定性、または翻訳の効率などのｍＲＮＡの機能性を調節するために、化学的または酵素的に修飾され得る。
【００９２】
用語「ポリアデニル化」は、ポリアデニル（ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌｙｌ）部分またはその修飾されたバリアントのメッセンジャーＲＮＡへの共有結合を指す。真核生物では、大部分のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）尾部は、酵素ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用を介してｐｒｅ−ｍＲＮＡに付加されるアデニンヌクレオチド（多くの場合数百）の長い配列である。より高次の真核生物では、ポリ（Ａ）尾部は、特定の配列である、ポリアデニル化シグナルを含む転写物上へと付加される。ポリ（Ａ）尾部およびそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに有用である。ポリアデニル化はまた、転写終結、核からのｍＲＮＡの排出、および翻訳に重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへの転写の直後に核で起こり得るが、後に細胞質でもさらに起こり得る。転写が終結した後に、ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼと結合したエンドヌクレアーゼ複合体の作用を介して切断される。この切断部位は通常、切断部位の近くの塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在を特徴とする。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が、切断部位の遊離３’末端に付加される。
【００９３】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特定の転写を開始するために必要とされる、細胞の合成機構または導入される合成機構により認識されるＤＮＡ配列を指す。
【００９４】
用語「プロモーター／制御配列」は、プロモーター／制御配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を指す。場合により、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列はまた、エンハーサー配列および遺伝子産物の発現に必要とされる他の制御エレメントを含み得る。プロモーター／制御配列は、たとえば、組織に特異的な様式で遺伝子産物を発現するものであり得る。
【００９５】
用語「組み換え型タンパク質またはペプチド」は、組み換えＤＮＡ技術を使用して作製されるタンパク質またはペプチド（たとえば抗体）、たとえばバクテリオファージまたは酵母の発現系により発現されるタンパク質またはペプチド（たとえば抗体）などを指す。この用語はまた、タンパク質もしくはペプチド（たとえば抗体）をコードするＤＮＡ分子の合成により作製され、かつＤＮＡ分子がタンパク質もしくはペプチド（たとえば抗体）を発現する、タンパク質もしくはペプチド（たとえば抗体）、またはタンパク質もしくはペプチド（たとえば抗体）を特定するアミノ酸配列（ここでＤＮＡもしくはアミノ酸配列は当該分野で利用可能でありよく知られている組み換え型のＤＮＡまたはアミノ酸配列の技術を使用して得られている）を意味すると解釈されるべきである。
【００９６】
用語「シグナリングドメイン」は、第２のメッセンジャーを産生するかまたは当該メッセンジャーに応答することによりエフェクターとして機能することにより、定義されたシグナリング経路を介して細胞活性を制御するために細胞内の情報を伝達することにより作用する、タンパク質の機能的な部分を指す。
【００９７】
用語「シグナル変換経路」は、細胞の一部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達においてある役割を果たす様々なシグナル変換分子間の生化学的な関係を指す。
【００９８】
用語「特異的に結合する」は、サンプルに存在する結合パートナーを認識しこれと結合するが、サンプル中の他の分子を実質的に認識せずまたはこれと結合しない、抗体またはリガンドを指す。
【００９９】
用語「刺激」は、刺激性分子（たとえばＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはキメラ受容体）のその同種のリガンドとの結合により、限定するものではないがＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル変換またはキメラ受容体のシグナリングドメインを介したシグナル変換などの、シグナル変換イベントを媒介することにより誘導される、一次的な応答を指す。刺激は、特定の分子の発現の変更を媒介し得る。
【０１００】
用語「刺激性分子」は、免疫細胞シグナリング経路の少なくとも一部の態様に関し刺激的な方法で免疫細胞の活性化を制御する細胞質シグナリング配列を提供する免疫細胞（たとえばＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）により発現される分子を指す。一態様では、シグナルは、たとえばペプチドが充填されたＭＨＣ分子とＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合により惹起され、限定するものではないが増殖、活性化、分化などを含む、Ｔ細胞の応答の媒介をもたらす一次的なシグナルを指す。刺激的様式で作用する一次的な細胞質シグナリング配列（「一次的シグナリングドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体のチロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られているシグナリングモチーフを含み得る。
【０１０１】
用語「対象」は、その中で免疫応答が誘発され得る生きた生物（たとえば哺乳類、ヒト）を含むと意図される。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち医療の受診を待機しているか、または医療を受診しているか、または過去／現在／将来に医療の対象であった／ある／となり得るか、または目的の疾患または病態、たとえば炎症性もしくは自己免疫性病態の発症に関してモニタリングされている、温血動物、より好ましくはヒトであり得る。一実施形態では、対象は、成年（たとえば１８歳超の対象）であり得る。別の実施形態では、対象は、小児（たとえば１８歳未満の対象）であり得る。一実施形態では、対象は、雄性である。別の実施形態では、対象は、雌性である。一実施形態では、対象は、たとえば自己抗体介在性自己免疫性疾患などの、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を罹患しているか、または好ましくは当該疾患または障害と診断されている。一実施形態では、対象は、たとえば自己抗体介在性自己免疫性疾患などの自己免疫性および／または炎症性疾患または障害を発症するリスクがある。リスク因子の例としては、限定するものではないが、遺伝的素因、または自己免疫性および／もしくは炎症性疾患もしくは障害の家族歴が挙げられる。
【０１０２】
用語「実質的に精製された細胞」は、他の細胞種を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞はまた、通常天然に存在する状態で結合される他の細胞種から分離されている細胞を指す。一実施形態では、実質的に精製された細胞は、通常天然に存在する状態で結合される他の細胞種が、少なくとも約７５％ない、８０％ない、または８５％ない、および好ましくは約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％ない細胞を指す。場合により、実質的に精製された細胞の集団は、同種の細胞の集団を指す。一実施形態では、実質的に精製された細胞の集団は、少なくとも約７５％同種、８０％同種、または８５％同種、および好ましくは約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同種の細胞の集団を指す。他の例では、この用語は単に、それらの天然の状態で通常結合される細胞から分離されている細胞を指す。いくつかの態様では、この細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養される。他の態様では、この細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養されない。
【０１０３】
用語「治療的有効量」は、特定の生物学的な結果を達成するために有効な、本明細書で記載されるＣＡＲを発現する細胞の量を指す。よって、用語「治療的有効量」は、標的に対して顕著な負のまたは有害な副作用をもたらすことなく、（１）目的の疾患もしくは病態の発症を遅延もしくは予防するか；（２）目的の疾患もしくは病態の１つ以上の症状の進行、憎悪、もしくは悪化を遅延もしくは停止させるか；（３）目的の疾患もしくは病態の症状の寛解をもたらすか；（４）目的の疾患もしくは病態の重症度もしくは頻度を低減させるか；または（５）目的の疾患もしくは病態を治癒すること、を目的とする作用物質のレベルまたは量を意味する。治療的有効量は、防止的または予防的作用のために、目的の疾患または病態の発症より前に投与され得る。あるいはまたはさらに、治療的有効量は、治療的作用のために、目的の疾患または病態の発症の後に投与され得る。
【０１０４】
用語「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」は、それにより外来性の核酸が宿主細胞内に伝達または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外来性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入されている細胞を指す。この細胞は、プライマリーな対象の細胞およびその後代を含む。
【０１０５】
用語「トランスファーベクター」は、単離した核酸を含み、かつ細胞の内部に単離した核酸を送達するために使用され得る、組成物を指す。限定するものではないが、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性の化合物と結合したポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスを含む多くのベクターが、当該分野で知られている。よって用語「トランスファーベクター」は、プラスミドまたはウイルスを自発的に複製することを含む。またこの用語は、細胞内への核酸の伝達を促進する非プラスミド性および非ウイルス性の化合物、たとえばポリリジン化合物、リポソームなどをさらに含むと解釈されるべきである。ウイルス性トランスファーベクターの例としては、限定するものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「一過的な」は、数時間、数日間、または数週間の期間の間の組み込まれていない導入遺伝子の発現を指し、ここで発現の期間は、宿主細胞においてゲノムの中に組み込まれているかまたは安定なプラスミドのレプリコン内に含まれる場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、用語「〜を処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「〜を処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、目的の疾患もしくは病態、たとえば自己免疫性病態の進行、重症度、および／もしくは期間の低減もしくは寛解、または目的の疾患もしくは病態、たとえば自己免疫性病態の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の識別可能な症状）の寛解（ここで上記寛解は、１つ以上の治療（たとえば本発明のＴｒｅｇ細胞などの１つ以上の治療上作用物質）の投与からもたらされる）を指す。特定の実施形態では、用語「〜を処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「〜を処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、目的の疾患または病態、たとえば自己免疫性および／または炎症性疾患または障害の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの回復を指す。他の実施形態では、用語「〜を処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「〜を処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、たとえば識別可能な症状の安定化により物理的に、たとえば物理的パラメータの安定化により生理的に、またはその両方を伴い、目的の疾患または病態、たとえば自己免疫性および／または炎症性疾患または障害の進行を阻害することを指す。他の実施形態では、用語「〜を処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「〜を処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、目的の疾患もしくは病態、たとえば自己免疫性および／もしくは炎症性疾患もしくは障害の進行、重症度、および／もしくは期間の低減もしくは寛解、または目的の疾患もしくは病態、たとえば自己免疫性および／もしくは炎症性疾患もしくは障害の１つ以上の症状の寛解を指す。「〜を処置している」または「処置」は、治療的な処置または防止的もしくは予防的な手段の両方を指し；ここで目的は、目的の疾患または病態を予防または遅延させる（弱める）ことである。処置を必要とするものは、すでに病態を有するもの、および病態を有する傾向のあるもの、または病態を予防すべきものを含む。対象は、本発明に係るキメラ受容体を含む細胞の集団の治療量を投与された後に、対象が以下の：病原性細胞の数の低下；病原性である細胞の総数のパーセントの低下；特定の病態に関連する症状の１つ以上のある程度までの緩和；罹患率および死亡率の低下、ならびに／またはクオリティオブライフの問題の改善、の１つ以上の観察可能なおよび／または測定可能な改善を示す場合、当該疾患または病態に対しうまく「処置され」ている。病態における治療の成功および改善を評価するための上記パラメータは、医師によく知られている規定の手段によって容易に測定可能である。
【０１０８】
用語「Ｔｒｅｇ細胞」は、たとえば自己免疫応答またはアレルギー応答などの、過度なまたは望ましくない炎症性応答を抑制、阻害、または予防できる細胞を指す。一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、抑制的な活性が可能である。一実施形態では、上記抑制的な活性は、接触とは無関係である。別の実施形態では、上記抑制的な活性は、接触に依存している。一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、エフェクターＴ細胞に抑制的な作用を提示し、好ましくは上記抑制的な作用は、ＴＣＲの発現および／または活性化に依存している。
【０１０９】
用語ポリヌクレオチドの「バリアント」は、本明細書で使用される場合、通常、１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入において本明細書で特に開示されるポリヌクレオチドと異なるポリヌクレオチドを指す。このようなバリアントは、天然に存在してよく、または、たとえば本発明の１つ以上のポリヌクレオチド配列を修飾し、本明細書で記載のコードされたポリペプチドの１つ以上の生体活性を評価し、および／もしくは当該分野でよく知られている多くの技術のいずれか１つを使用することにより合成的に作製され得る。よって、用語「ポリペプチドバリアント」は、本明細書で使用される場合、通常１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入において本明細書で特に開示されるポリペプチドと異なるポリペプチドである。このようなバリアントは、天然に存在してよく、または、たとえば上記ポリペプチド配列の１つ以上を修飾し、本明細書で記載のポリペプチドの１つ以上の生体活性を評価し、および／もしくは当該分野でよく知られている多くの技術のいずれかを使用することにより、合成的に作製され得る。修飾は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造においてなされ得、さらに、望ましい特徴を有するバリアントまたは誘導体のポリペプチドをコードする機能的な分子を入手し得る。同等のまたはさらには改善された本発明のポリペプチドのバリアントまたはその部分を作製するためにポリペプチドのアミノ酸配列を変えることが望ましい場合、当業者は通常、コードしているＤＮＡ配列の１つ以上のコドンを変更する。たとえば、特定のアミノ酸が、他のポリペプチド（たとえば抗原）または細胞に結合するその特性の著しい損失を伴うことなく、タンパク質構造において他のアミノ酸と置換され得る。当該タンパク質の生物学的な機能の活性を定義するのはタンパク質の結合能力および性質であるため、特定のアミノ酸配列の置換が、タンパク質の配列、および当然ながらその根底にあるＤＮＡコード配列においてなされ得、それにも関わらず、同様の性質を有するタンパク質を入手し得る。よって本発明のペプチド配列、または上記ペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列において、それらの生物学的有用性または活性を著しく損失することなく、様々な変更がなされ得ることが企図される。多くの例において、ポリペプチドバリアントは、１つ以上の保存的置換を含む。バリアントはまた、もしくは代わりに、非保存的な変更を含み得る。好ましい実施形態では、バリアントポリペプチドは、５つ以下のアミノ酸の置換、欠失、または付加により、ネイティブな配列と異なる。バリアントはまた（もしくは代わりに）、たとえばポリペプチドの免疫原性、二次構造、およびヒドロパシーの性質への影響が最小限であるアミノ酸の欠失または付加により、修飾され得る。
【０１１０】
用語「ζ」またはあるいは「ζ鎖」、「ＣＤ３ζ」、または「ＴＣＲ−ζ」は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．  ＢＡＧ３６６６４．１に提供されるタンパク質、または非ヒト種、たとえばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などに由来する同等の残基として定義され、「ζ刺激性ドメイン」またはあるいは「ＣＤ３ζ刺激性ドメイン」または「ＴＣＲ−ζ刺激性ドメイン」は、ζ鎖の細胞質内ドメイン由来のアミノ酸残基、またはＴ細胞の活性化に必要な最初のシグナルを機能的に伝達するために十分であるその機能的な誘導体として定義される。一実施形態では、ζの細胞質内ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．  Ｎｏ．  ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４、またはその機能的なオルトログである、たとえばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種に由来する同等の残基を含む。
【０１１１】
詳細な説明
本発明の第１の目的は、少なくとも１つのＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）に特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
（ｉ）上記ＩＬ−２３Ｒに結合する、細胞外結合ドメイン（細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインと呼ばれ得る）と、
（ｉｉ）任意選択で、細胞外ヒンジドメインと、
（ｉｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインと、
（ｖ）任意選択で、タグおよび／またはリーダー配列
を含む、キメラ抗原受容体である。
【０１１２】
一実施系形態では、ＣＡＲは、１つ以上のポリペプチドを含む。
【０１１３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、細胞表面上で発現されるＩＬ−２３Ｒを認識し、これに結合できる。
【０１１４】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、可溶性ＩＬ−２３Ｒ（すなわち膜に結合していない）を認識し、これに結合できる。
【０１１５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ヒトＩＬ−２３Ｒを認識し、これに結合する。ヒトＩＬ−２３Ｒは、１１のエクソンを含む２．８ｋｂの長いｍＲＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号：ＮＭ＿１４４７０１）によりコードされたタンパク質である。
【０１１６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒのバリアント、好ましくはヒトＩＬ−２３Ｒのバリアントを認識し、かつこれに結合できる。
【０１１７】
一実施形態では、ＩＬ−２３Ｒのバリアントペプチドは、元のペプチドと比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸が欠失、付加、または置換されている、修飾されたＩＬ−２３Ｒペプチドを指す。
【０１１８】
ヒトＩＬ−２３Ｒのスプライスバリアントは、以前に同定されている（Ｋａｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００８）。特に、ＩＬ−２３Ｒの２４つの異なるアイソフォーム：アイソフォーム＿ｖ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１３を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ２（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１４を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ３（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１５を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ４（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１６を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ５（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１７を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ６（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１８を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ７（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３１９を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ８（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２０を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ９（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２１を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１０（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２２を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１１（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２３を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１２（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２４を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１３（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２５を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１４（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２６を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１５（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２７を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１６（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２８を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１７（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３２９を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１８（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３０を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ１９（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３１を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ２０（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３２を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ２１（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３３を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ２２（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３４を有するｍＲＮＡによりコード）、アイソフォーム＿ｖ２３（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３５を有するｍＲＮＡによりコード）およびアイソフォーム＿ｖ２４（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＭ９９０３３６を有するｍＲＮＡによりコード）が、記載された。
【０１１９】
よって、一実施形態では、本発明のＣＡＲは、アイソフォーム＿ｖ１、アイソフォーム＿ｖ２、アイソフォーム＿ｖ３、アイソフォーム＿ｖ４、アイソフォーム＿ｖ５、アイソフォーム＿ｖ６、アイソフォーム＿ｖ７、アイソフォーム＿ｖ８、アイソフォーム＿ｖ９、アイソフォーム＿ｖ１０、アイソフォーム＿ｖ１１、アイソフォーム＿ｖ１２、アイソフォーム＿ｖ１３、アイソフォーム＿ｖ１４、アイソフォーム＿ｖ１５、アイソフォーム＿ｖ１６、アイソフォーム＿ｖ１７、アイソフォーム＿ｖ１８、アイソフォーム＿ｖ１９、アイソフォーム＿ｖ２０、アイソフォーム＿ｖ２１、アイソフォーム＿ｖ２２、アイソフォーム＿ｖ２３、およびアイソフォーム＿ｖ２４を含む群から選択されるヒトＩＬ−２３Ｒのスプライスバリアントを認識し、これに結合できる。
【０１２０】
さらに、ヒトＩＬ−２３Ｒのアルファサブユニットにおける一塩基多型が、以前に記載されている（Ｋａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８およびＳｉｖａｎｅｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１６）。
【０１２１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、アルファサブユニットに一塩基多型（ＳＮＰ）を含むＩＬ−２３Ｒのバリアントを認識し、これに結合できる。ここで上記ＳＮＰは、Ｒ３８１Ｑ、Ｇ１４９Ｒ、Ｖ３６２Ｉ、およびそれらの組み合わせを含む群から選択される。
【０１２２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、マウスのＩＬ−２３Ｒを認識し、これに結合できる。
【０１２３】
一実施形態では、細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒに向けられる抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１２４】
抗体またはその抗原結合フラグメントを含む本発明のＣＡＲの一部は、たとえば一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、ヒト化抗体、または二重特異性抗体を含む近接ポリペプチド鎖の一部として抗原結合ドメインが発現される、様々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｉｎ：  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ；  Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｉｎ：  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；  Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。
【０１２５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、全抗体、一本鎖抗体、二量体の一本鎖抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化された抗体、二重特異性抗体、ジアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ユニボディ、ドメイン抗体、ナノボディ、またはそれらの抗原結合フラグメントを含む。
【０１２６】
一実施形態では、細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインは、抗体ミメティックである。抗体ミメティックの例としては、限定するものではないが、アフィボディ、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質ベースのスキャフォールド、ノッチン、ｋｕｎｉｔｚドメインペプチド、アフィリン、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）、アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒ）、エヴァシン（ｅｖａｓｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、ファイノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、ヴァーサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）、またはデュオカリン（ｄｕｏｃａｌｉｎ）が挙げられる。
【０１２７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞外結合ドメインは、たとえばｓｃＦｖなどの抗体フラグメントを含むかまたはこれより構成される。
【０１２８】
所定のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１），  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ  （「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）が記載するもの、またはそれらの組み合わせを含む、多くのよく知られているスキームのいずれかを使用して決定され得る。
【０１２９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲに含まれている抗体は、多重特異的な抗体分子であり、たとえばこれは、複数の免疫グロブリン可変ドメインを含み、ここで複数の第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数の第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２超の抗原に対する特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対し結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン、および第２のエピトープに対し結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメインを特徴とする。
【０１３０】
一実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３７、または配列番号３７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を有する重鎖ＶＨを含むｓｃＦｖを含むかまたはそれからなる。
【０１３１】
一実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３８、４６、および５６、または配列番号３８、４６、および５６と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を含む群から選択される軽鎖ＶＬを含むｓｃＦｖを含むかまたはそれからなり、好ましくは、配列番号３８の配列、または配列番号３８と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を有する軽鎖ＶＬを含む。
【０１３２】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３７（または配列番号３７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する重鎖ＶＨと、配列番号３８、４６、および５６、ならびに配列番号３８、４６、および５６と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を含む群から選択される軽鎖ＶＬ、好ましくは配列番号３８（または配列番号３８と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する軽鎖ＶＬとを含む。
【０１３３】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３７（または配列番号３７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する重鎖ＶＨと、配列番号３８（または配列番号３８と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する軽鎖ＶＬとを含む。
【０１３４】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３７（または配列番号３７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する重鎖ＶＨと、配列番号４６（または配列番号４６と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する軽鎖ＶＬとを含む。
【０１３５】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３７（または配列番号３７と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する重鎖ＶＨと、配列番号５６（または配列番号５６と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列）を有する軽鎖ＶＬとを含む。
【０１３６】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ鎖とＶＬ鎖を連結するリンカーを含む。
【０１３７】
一実施形態では、リンカーは、好ましくは２〜１０アミノ酸の範囲の長さを有する、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドである。
【０１３８】
たとえば、グリシン―セリンの二重配列は、特に適切なヒンジドメイン（ＧＳリンカー）を提供する。一実施形態では、ヒンジドメインは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーの例としては、限定するものではないが、ＧＳリンカー、Ｇ２Ｓリンカー、Ｇ３Ｓリンカー、Ｇ４Ｓリンカーが挙げられる。
【０１３９】
Ｇ２Ｓリンカーの非限定的な例は、ＧＧＳである。
【０１４０】
Ｇ３Ｓリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｎまたは（配列番号１）ｎとも呼ばれるアミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（式中ｎは、１以上の正の整数（たとえばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、またはｎ＝１０など）である）を含む。Ｇ３Ｓリンカーの例としては、限定するものではないが、ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号６）が挙げられる。
【０１４１】
Ｇ４Ｓリンカーの例としては、限定するものではないが、ＧＧＧＧＳ（配列番号５）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３；およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２）に対応する（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４が挙げられる。
【０１４２】
一実施形態では、リンカーは、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号３）である。
【０１４３】
一実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号５５、配列番号３６、またはもしくは配列番号５７の配列、または配列番号５５、配列番号３６、もしくは配列番号５７の配列と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超える同一性を有する配列を含むか、またはこれより構成される。一実施形態では、ｓｃＦｖは、は配列番号５５の配列、または上記配列番号５５と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超える同一性を有する配列を含むかまたはこれより構成される。
【０１４４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインと、少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメインとを含む。よって、この実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒおよび少なくとも１つの他の抗原を結合できる。
【０１４５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ、および明確に異なる抗原またはリガンドを結合できる。別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ上の第１のエピトープ、および同じＩＬ−２３Ｒ上の明確に異なるエピトープを結合できる。別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ、および明確に異なるＩＬ−２３Ｒ（たとえばＩＬ−２３Ｒのバリアントなど）を結合できる。
【０１４６】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメインは、特定の抗原に向けられる抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１４７】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメインは、例えばｓｃＦｖなどの抗体フラグメントを含むかまたはこれより構成される。
【０１４８】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、一般的なヒトの食事由来の食物抗原に結合できる。
【０１４９】
用語「一般的なヒトの食事由来の食物抗原」は、以下の非限定的な列挙：ウシ抗原、たとえばリポカリン、Ｃａ結合Ｓ１００、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリンなどのラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、カゼインの食物抗原などの、ヒトにとって一般的な食品由来の免疫原性ペプチドを指す。食物抗原はまた、タイセイヨウサケ抗原、たとえばパルブアルブミン；ニワロリ抗原、たとえばオボムコイド、卵白アルブミン、Ａｇ２２、コンアルブミン、リゾチーム、ニワトリ血清アルブミン；ピーナッツ抗原；エビ抗原、たとえばトロポミオシン；コムギ抗原、たとえばアグルチニンまたはグリアジン；セロリ抗原、たとえばセロリプロフィリン；ニンジン抗原、たとえばニンジンのプロフィリン；リンゴ抗原、たとえばタウマチン、リンゴの脂質輸送タンパク質、またはリンゴのプロフィリン；ナシ抗原、たとえばナシプロフィリン、またはイソフラボンレダクターゼ；アボカド抗原、たとえばエンドキチナーゼ；アンズ抗原、たとえばアンズの脂質輸送タンパク質；モモ抗原、たとえばモモの脂質輸送タンパク質またはモモプロフィリン；ダイズ抗原、たとえばＨＰＳ、ダイズプロフィリン、または（ＳＡＭ２２）ＰＲ−Ｉ０  ｐｒｏｔ；それらのフラグメント、バリアント、および混合物であり得る。
【０１５０】
別の実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、たとえば多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、または移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原などの、自己抗原に結合できる。
【０１５１】
一実施形態では、用語「多発性硬化症関連抗原」は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ／クローディン１（Ｃｌａｕｄｉｎｌ  １））、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド  ３’−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を指す。
【０１５２】
一実施形態では、用語「関節関連抗原」は、シトルリンが置換された環状および直鎖状のフィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、Ｉ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース  ６  リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチル−カルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性カルジオリピン、およびホスファチジルセリン、中性に荷電されたホスファチジルエタノールアミン、およびホスファチジルホスファチジルコリンを含むリン脂質抗原、マトリックスメタロプロテアーゼ、フィブリリン、アグリカン（ａｇｇｒｅｃｃａｎ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を指す。関節関連抗原の他の例としては、限定するものではないが、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲンが挙げられる。
【０１５３】
一実施形態では、用語「眼関連抗原」は、ＩＩ型コラーゲン、網膜のアレスチン、Ｓ−アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、βクリスタリンＢ１、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質、ならびにそれらのフラグメント、バリアント、および混合物を指す。眼関連抗原の他の例としては、限定するものではないが、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲンが挙げられる。
【０１５４】
一実施形態では、用語「ヒトＨＳＰ抗原」は、ヒトのＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を指す。
【０１５５】
一実施形態では、抗原は、炎症性神経系病態関連抗原、好ましくは多発性硬化症関連抗原である。炎症性神経系病態関連抗原、好ましくは多発性硬化症関連抗原の例としては、限定するものではないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ／クローディン１（Ｃｌａｕｄｉｎｌ  １））、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド  ３’−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０１５６】
一実施形態では、抗原は、皮膚関連抗原である。皮膚関連抗原の例としては、限定するものではないが、ケラチノサイト抗原、真皮または表皮に存在する抗原、メラノサイト抗原（たとえばメラニンまたはチロシナーゼなど）、デスモグレイン（たとえばデスモグレイン１または３、Ｄｓｇ１／３とも呼ばれ得る）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、プレクチン、インテグリン（たとえばインテグリンα４β６）、コラーゲン（たとえばコラーゲンＶＩＩ型）、ラミニン（たとえばラミニン３３２またはラミニンγ１）、プランキン（たとえばエンボプラキン、ペリプランキン、またはデスモプラキン）、ケラチン（たとえばＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１７、およびＫＲＴ３１）、ケラチンフィラメント関連タンパク質、フィラグリン、ｃｏｒｎｅｏｄｅｓｍｏｓｉｎ、ならびにエラスチンが挙げられる。
【０１５７】
一実施形態では、抗原は、移植片拒絶またはＧＶＨＤに関与する抗原である。このような抗原の例としては、限定するものではないが、移植した組織または宿主に特異的なＭＨＣ、β２−ミクログロブリン、ＡＢＯ式由来の抗原、アカゲザル式由来の抗原（特にＣ、ｃ、Ｅおよびｅ、およびＤの形式由来の抗原）、ならびに同種赤血球凝集素（ｉｓｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）が挙げられる。移植片拒絶またはＧＶＨＤに関与し得る抗原の他の例としては、ＨＬＡ−ＤＲ（特に移植後最初の６カ月間）、ＨＬＡ−Ｂ（特に移植後最初の２年間）、ＨＬＡ−Ａ、マイナー組織適合抗原（ｍｉＨＡ、たとえばＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、およびＨＬＡ−Ｇ）、ＭＨＣクラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）に対応するＨＬＡ、ＭＨＣクラスＩＩ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯＡ、ＤＯＢ、ＤＱおよびＤＲ）に対応するＨＬＡならびにＭＨＣクラスＩＩＩ（たとえば補体系の成分）に対応するＨＬＡが挙げられる。
【０１５８】
一実施形態では、抗原は、ＨＬＡ−Ａ２細胞表面タンパク質である。一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられる抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【０１５９】
用語「ＨＬＡ−Ａ２」は、本明細書で使用される場合、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ−Ａの遺伝子座でＨＬＡ−Ａ＊０２アレルファミリーによりコードされる細胞表面タンパク質を含むヒト白血球抗原（ＨＬＡ）を指す。用語「ＨＬＡ−Ａ２」により包有されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験またはジェノタイピングによりＨＬＡ−Ａ＊０２抗原の種類に属すると同定されたＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ−Ａ＊０２抗原の種類に関するさらなる名称は、「ＨＬＡ−Ａ２」、ＨＬＡ−Ａ０２」、および「ＨＬＡ−Ａ＊２」を含む。ＨＬＡ系の因子に関してＷＨＯの委員会が２０１０年に開発したＨＬＡの名称付けシステムを含む、このアレルのファミリーによりコードされるＨＬＡタンパク質を同定する異なる名称付けのシステムが、開発されている。用語「ＨＬＡ−Ａ２」は、限定するものではないが、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」で開始する表記を含む、「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で開始するこの名称付けのシステムに係る表記を有するアレルによりコードされるＨＬＡタンパク質を指す。このアレルの表記は、イタリック体であり得る。「ＨＬＡ−Ａ＊０２：」で始まり、２つまたは３つのさらなる数字が続くアレルの表記は、完全な表記または表記の開始部分を構成し得る。用語「ＨＬＡ−Ａ２」はまた、限定するものではないが、表記「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」を含む、この名称付けのシステムに係る「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で始まる表記で同定されるＨＬＡタンパク質を指す。
【０１６０】
自己抗原の他の例としては、限定するものではないが、アクアポリン水チャネル（たとえばアクアポリン−４−水チャネル（ＡＯＰ４）、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン反応媒介タンパク質５（ＣＲＭＰ５）、およびアンフィファイシン、電位開口型カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５メチル４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、抗Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリン、ニコチン性シナプス後受容体、チロトロピン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（たとえばコラーゲンα−３（ＩＶ）鎖など）、リウマトイド因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、α−βクリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５−ｋＤａ抗原、ホスファチジルセリン、リボソームのリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ−７０、Ｕ１−ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、好中球細胞質抗体（ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ−１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１−７０ｋｄｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂガングリオシド、ＧＭ１、アシアロＧＭ１、ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗ＬＫＭ（抗ｌｉｖｅｒ−ｋｉｄｎｅｙ  ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ）−１抗体（ＡＬＫＭ−１）、抗肝臓サイトゾル抗体−１（ＡＬＣ−１）、ＩｇＡ  抗筋内膜抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌細胞壁抗原、胃壁細胞の内因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）、ならびにタンパク質チロシンホスファターゼ（たとえばＩＡ２またはＩＣＡ５１２）、ＰＬＡ２Ｒ１、およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。
【０１６１】
一実施形態では、抗原は、がん抗原である。
【０１６２】
本明細書で使用される場合、用語「がん抗原」は、がん細胞により差次的に発現され、よってがん細胞を標的とするために利用され得る抗原を指す。がん抗原は、明らかに腫瘍に特異的な免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これら抗原のいくつかは、必ずしも発現されるわけではないが、正常な細胞によりコードされている。これらの抗原は、正常な細胞において通常サイレントである（発現しない）抗原、特定の分化段階でのみ発現される抗原、ならびに胚性および胎生期の抗原などの一時的に発現される抗原として特徴づけることができる。他のがん抗原は、変異細胞の遺伝子、たとえばがん遺伝子（たとえば活性化されたｒａｓがん遺伝子）、サプレッサー遺伝子（たとえば変異型ｐ５３）によりコードされ、内部欠失または染色体転座からもたらされる融合タンパク質であり得る。さらなる他のがん抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に担持されている遺伝子などのウイルス性の遺伝子によりコードされ得る。多くの腫瘍抗原が、複数の固形腫瘍の観点から定義されている：免疫により定義されたＭＡＧＥ１、２、および３；ＭＡＲＴ−ｌ／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐｌ００、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＨＥＲ２、ムチン（すなわちＭＵＣ−１）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）。さらに、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、およびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によりコードされるタンパク質などのウイルスのタンパク質が、肝細胞癌、リンパ腫、および子宮頸がんのそれぞれの発達に重要であることが示されている。
【０１６３】
他のがん抗原としては、限定するものではないが、７０７−ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（α（ａ）−フェトプロテイン）、ＡＲＴ−４（Ｔ４細胞により認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原；ｂ−カテニン／ｍ，ｂ−カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ−ａｂｌ（ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｒｅｇｉｏｎ−Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（ＣＤ分類１９）、ＣＤ２０（ＣＤ分類２０）、ＣＤ２２（ＣＤ分類２２）、ＣＤ３０（ＣＤ分類３０）、ＣＤ３３（ＣＤ分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（ＣＤ分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（メラノーマ上にてＣＴＬにより認識される抗原）、ＣＡＰ−１（癌胎児抗原ペプチド−１）、ＣＡＳＰ−８（カスパーゼ−８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、Ｃｙｐ−Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原メラノーマ）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖｌｌｌ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ−２（上皮系糖タンパク質２）、ＥＧＰ−４０（上皮系糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス性がん遺伝子ホモログ−２、−３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２変異型）、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児性アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、ＧｎＴ−Ｖ（Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質  １００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ（ｈｅｌｉｃｏｓｅ）抗原）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体−２／神経性；ＥＧＦＲ２としても知られている）、ＨＬＡ−Ａ（ヒト白血球抗原−Ａ）ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０−２Ｍ（ヒートショックタンパク質７０−２変異型）、ＨＳＴ−２（ヒト印環腫瘍−２）、ｈＴＥＲＴまたはｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管内カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２（インターロイキン１３受容体サブユニット  α−２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（ＬＤＬ受容体／ＧＤＰ−Ｌ−フコース：ｂ−Ｄ−ガラクトシダーゼ２−ａ−Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗体）、Ｌ１  ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（メラノーマ抗原）、ＭＡＧＥ−Ａ１（メラノーマ関連抗原１）、メソテリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ（Ｔ細胞により認識されるメラノーマ抗原−Ｉ／メラノーマ抗原Ａ）、ＭＣ１  Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ−１、−２、−３（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ  変異型１、２、３）、ＮＡ８８−Ａ（ＮＡ  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔ  Ｍ８８）、ＮＫＧ２Ｄ（Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｇｒｏｕｐ  ２，  ｍｅｍｂｅｒ  Ｄ）リガンド、ＮＹ−ＢＲ−１（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｂｒｅａｓｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ１）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ−１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（ｐｒｏｔｅｉｎ  １５）、ｐ１９０  ｍｉｎｏｒ  ｂｃｒ−ａｂｌ（１９０ＫＤのタンパク質のｂｃｒ−ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺に特異的な膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、ＲＵ１またはＲＵ２（ｒｅｎａｌ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ１または２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ−１またはＳＡＲＴ−３（扁平上皮抗原拒絶腫瘍１または３）、ＳＳＸ１、−２、−３、４（滑膜肉腫Ｘ１、−２、−３、−４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ変異型）、ＴＲＰ−１（チロシナーゼ関連タンパク質１またはｇｐ７５）、ＴＲＰ−２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ−２／イントロン２）、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、またはＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）が挙げられる。
【０１６４】
自己抗原の他の例としては、限定するものではないが、アクアポリン水チャネル（たとえば、アクアポリン−４水チャネル（ＡＱＰ４）など）、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン反応媒介タンパク質５（ＣＲＭＰ５）、およびアンフィファイシン、電位開口型カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、抗Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリン、ニコチン性シナプス後受容体、チロトロピン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（たとえばコラーゲンα−３（ＩＶ）鎖など）、リウマトイド因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、α−βクリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５−ｋＤａ抗原、ホスファチジルセリン、リボソームのリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ−７０、Ｕ１−ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、好中球細胞質抗体（ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ−１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１−７０  ｋｄ  ｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂ  ガングリオシド、ＧＭ１、アシアロＧＭ１、ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗ＬＫＭ（抗ｌｉｖｅｒ−ｋｉｄｎｅｙ  ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ）−１抗体（ＡＬＫＭ−１）、抗肝臓サイトゾル抗体−１（ＡＬＣ−１）、ＩｇＡ  抗筋内膜抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌細胞壁抗原、胃壁細胞の内因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）およびタンパク質チロシンホスファターゼ（たとえば、ＩＡ２またはＩＣＡ５１２など）、ＰＬＡ２Ｒ１、およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。
【０１６５】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、感染した細胞に関連する抗原に結合できる。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、用語「感染した細胞」は、細胞の質、特徴、または状態に不利な影響を与える何らかのものが混入した細胞を指す。
【０１６７】
一実施形態では、抗原は、ウイルスに感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、細菌に感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、真菌に感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、寄生虫に感染した細胞に関連している。
【０１６８】
別の実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、吸入されるアレルゲン、摂取されるアレルゲン、または接触アレルゲンに結合できる。
【０１６９】
吸入されるアレルゲンの例としては、限定するものではないが、Ａｓｔｉｇｍａｔａ（たとえばＡｃａｒｕｓ  ｓｉｒｏ（Ｓｔｏｒａｇｅ  ｍｉｔｅ，  Ａｃａ  ｓ  １３）、Ｂｌｏｍｉａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ（Ｍｉｔｅ，  Ｂｌｏ  ｔ）、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ，  Ｄｅｒ  ｆ）、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｍｉｃｒｏｃｅｒａｓ（Ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ，  Ｄｅｒ  ｍ）、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ，  Ｄｅｒ  ｐ）、Ｅｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｍａｙｎｅｉ（Ｈｏｕｓｅ  ｄｕｓｔ  ｍｉｔｅ，  Ｅｕｒ  ｍ）、Ｇｌｙｃｙｐｈａｇｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ（Ｓｔｏｒａｇｅ  ｍｉｔｅ，  Ｇｌｙ  ｄ  ２）、Ｌｅｐｉｄｏｇｌｙｐｈｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ（Ｓｔｏｒａｇｅ  ｍｉｔｅ，  Ｌｅｐ  ｄ）、Ｔｙｒｏｐｈａｇｕｓ  ｐｕｔｒｅｓｃｅｎｔｉａｅ（Ｓｔｏｒａｇｅ  ｍｉｔｅ，  Ｔｙｒ  ｐ））；Ｂｌａｔｔａｒｉａ（たとえばＢｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（Ｇｅｒｍａｎ  ｃｏｃｋｒｏａｃｈ，  Ｂｌａ  ｇ）、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｃｏｃｋｒｏａｃｈ，  Ｐｅｒ  ａ））；Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ（たとえばＨａｒｍｏｎｉａ  ａｘｙｒｉｄｉｓ（Ａｓｉａｎ  ｌａｄｙｂｅｅｔｌｅ，  Ｈａｒ  ａ））、Ｄｉｐｔｅｒａ（たとえばＡｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｍｏｓｑｕｉｔｏ，  Ａｅｄ  ａ）、Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｋｉｉｅｎｓｉｓ（Ｍｉｄｇｅ，  Ｃｈｉ  ｋ）、Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｈｕｍｍｉ  ｔｈｕｍｍｉ（Ｍｉｄｇｅ，  Ｃｈｉ  ｔ）、Ｆｏｒｃｉｐｏｍｙｉａ  ｔａｉｗａｎａ（Ｂｉｔｉｎｇ  ｍｉｄｇｅ，  Ｆｏｒ  ｔ）、Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｍｏｒｓｉｔａｎｓ（Ｓａｖａｎｎａｈ  Ｔｓｅｔｓｅ  ｆｌｙ，  Ｇｌｏ  ｍ）、Ｈｅｍｉｄｉｐｔｅｒａ：Ｔｒｉａｔｏｍａ  ｐｒｏｔｒａｃｔａ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ｋｉｓｓｉｎｇ  ｂｕｇ，  Ｔｒｉａ  ｐ））、Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ（たとえばＡｐｉｓ  ｃｅｒａｎａ（Ｅａｓｔｅｒｎ  ｈｉｖｅ  ｂｅｅ，  Ａｐｉ  ｃ）、Ａｐｉｓ  ｄｏｒｓａｔａ（Ｇｉａｎｔ  ｈｏｎｅｙｂｅｅ，  Ａｐｉ  ｄ）、Ａｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ（Ｈｏｎｅｙ  ｂｅｅ，  Ａｐｉ  ｍ）、Ｂｏｍｂｕｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃｕｓ（Ｂｕｍｂｌｅ  ｂｅｅ，  Ｂｏｍ  ｐ）、Ｂｏｍｂｕｓ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ（Ｂｕｍｂｌｅ  ｂｅｅ，  Ｂｏｍ  ｔ）、Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ａｒｅｎａｒｉａ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｈｏｒｎｅｔ，  Ｄｏｌ  ａ）、Ｄｏｌｉｃｈｏｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌａｔａ（Ｗｈｉｔｅ  ｆａｃｅ  ｈｏｒｎｅｔ，  Ｄｏｌ  ｍ）、Ｍｙｒｍｅｃｉａ  ｐｉｌｏｓｕｌａ（Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  ｊｕｍｐｅｒ  ａｎｔ，  Ｍｙｒ  ｐ）、Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ａｎｎｕｌａｒｉｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ａ）、Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｄｏｍｉｎｕｌｕｓ（Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ  ｐａｐｅｒ  ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｄ）、Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｅｘｃｌａｍａｎｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｅ）、Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｆｕｓｃａｔｕｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｆ）、Ｐｏ���ｉｓｔｅｓ  ｇａｌｌｉｃｕｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｇ）、Ｐｏｌｉｓｔｅｓ  ｍｅｔｒｉｃｕｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｍ）、Ｐｏｌｙｂｉａ  ｐａｕｌｉｓｔａ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｐ）、Ｐｏｌｙｂｉａ  ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉｓ（Ｗａｓｐ，  Ｐｏｌ  ｓ）、Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｇｅｍｉｎａｔａ（Ｔｒｏｐｉｃａｌ  ｆｉｒｅ  ａｎｔ，  Ｓｏｌ  ｇ）、Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ（Ｒｅｄ  ｉｍｐｏｒｔｅｄ  ｆｉｒｅ  ａｎｔ，  Ｓｏｌ  ｉ）、Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｒｉｃｈｔｅｒｉ（Ｂｌａｃｋ  ｆｉｒｅ  ａｎｔ，  Ｓｏｌ  ｒ）、Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｓａｅｖｉｓｓｉｍａ（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  ｆｉｒｅ  ａｎｔ，  Ｓｏｌ  ｓ）、Ｖｅｓｐａ  ｃｒａｂｒｏ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｈｏｒｎｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｃ）、Ｖｅｓｐａ  ｍａｎｄａｒｉｎｉａ（Ｇｉａｎｔ  ａｓｉａｎ  ｈｏｒｎｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｍ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｆｉａｖｏｐｉｌｏｓａ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｆ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｇ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｍａｃｕｌｉｆｒｏｎｓ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｍ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｐｅｎｓｙｌｖａｎｉｃａ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｐ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｓｑｕａｍｏｓａ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｓ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｉｄｕａ（Ｗａｓｐ，  Ｖｅｓｐ  ｖｉ）、Ｖｅｓｐｕｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（Ｙｅｌｌｏｗ  ｊａｃｋｅｔ，  Ｖｅｓｐ  ｖ））、Ｉｘｏｄｉｄａ（たとえばＡｒｇａｓ  ｒｅｆｌｅｘｕｓ（Ｐｉｇｅｏｎ  ｔｉｃｋ，  Ａｒｇ  ｒ））、Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ（たとえばＢｏｍｂｙｘ  ｎｉｏｒｉ  （Ｓｉｌｋ  ｍｏｔｈ，  Ｂｏｍｂ  ｎ）、Ｐｌｏｄｉａ  ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ（Ｉｎｄｉａｎｍｅａｌ  ｍｏｔｈ，  Ｐｌｏ  ｉ）、Ｔｈａｕｍｅｔｏｐｏｅａ  ｐｉｔｙｏｃａｍｐａ（Ｐｉｎｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｏｎａｒｙ  ｍｏｔｈ，  Ｔｈａ  ｐ））、Ｔｈｙｓａｎｕｒａ（たとえばＬｅｐｉｓｍａ  ｓａｃｃｈａｒｉｎａ（Ｓｉｌｖｅｒｆｉｓｈ，  Ｌｅｐ  ｓ））、Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ（たとえばＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｆｅｌｉｓ  ｆｅｌｉｓ（Ｃａｔ  ｆｌｅａ，  Ｃｔｅ  ｆ））、Ｃａｒｎｉｖｏｒａ（たとえばイヌ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）（ｄｏｇ，  Ｃａｎ  ｆ）、Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ  （ｃａｔ，  Ｆｅｌ  ｄ））；  Ｌａｇｏｍｏｒｐｈａ（たとえばＯｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ（ｒａｂｂｉｔ，  Ｏｒｙ  ｃ）、Ｐｅｒｉｓｓｏｄａｃｔｌｙｌａ：Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ｈｏｒｓｅ，  Ｅｑｕ  ｃ））、Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ（たとえばＬｅｐｉｄｏｒｈｏｍｂｕｓ  ｗｈｉｆｆｉａｇｏｎｉｓ（Ｍｅｇｒｉｍ，  Ｗｈｉｆｆ，  Ｇａｌｌｏ，  Ｌｅｐ  ｗ））、Ｒｏｄｅｎｔｉａ（たとえば（Ｃａｖｉａ  ｐｏｒｃｅｌｌｕｓ）（ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ，  Ｃａｖ  ｐ）、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ｍｏｕｓｅ，  Ｍｕｓ  ｍ）、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｕｓ（ｒａｔ，  Ｒａｔ  ｎ））；Ｃｏｎｉｆｅｒａｌｅｓ：Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ  （Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｙｐｒｅｓｓ，  Ｃｈａ  ｏ）、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａ（Ｃｙｐｒｅｓｓ，  Ｃｕｐ  ａ）、Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｓｕｇｉ，  Ｃｒｙ  ｊ）、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ（Ｃｏｍｍｏｎ  ｃｙｐｒｅｓｓ，  Ｃｕｐ  ｓ）、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  ｃｅｄａｒ，  Ｊｕｎ  ａ）、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｏｘｙｃｅｄｒｕｓ（Ｐｒｉｃｋｌｙ  ｊｕｎｉｐｅｒ，  Ｊｕｎ  ｏ）、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ  ｃｅｄａｒ，  Ｊｕｎ  ｓ）、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ（Ｅａｓｔｅｒｎ  ｒｅｄ  ｃｅｄａｒ，  Ｊｕｎ  ｖ））；Ｇｅｎｔｉａｎａｌｅｓ（たとえばＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ  ｒｏｓｅｕｓ（Ｒｏｓｙ  ｐｅｒｉｗｉｎｋｌｅ，  Ｃａｔ  ｒ））；Ｐｏａｌｅｓ（たとえばＡｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ（Ｓｗｅｅｔ  ｖｅｒｎａｌ  ｇｒａｓｓ，  Ａｎｔ  ｏ  １）、Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ（Ｂｅｒｍｕｄａ  ｇｒａｓｓ，  Ｃｙｎ  ｄ  １、Ｃｙｎ  ｄ  ７、Ｃｙｎ  ｄ  １２、Ｃｙｎ  ｄ  １５、Ｃｙｎ  ｄ  ２２ｗ、Ｃｙｎ  ｄ  ２３、Ｃｙｎ  ｄ  ２４）、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ（Ｏｒｃｈａｒｄ  ｇｒａｓｓ、Ｄａｅ  ｇ  １、Ｄａｅ  ｇ  ２、Ｄａｅ  ｇ  ３、Ｄａｅ  ｇ  ４、Ｄａｅ  ｇ  ５）、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｅａｄｏｗ  ｆｅｓｃｕｅ，  Ｆｅｓ  ｐ  ４））、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ（Ｖｅｌｖｅｔ  ｇｒａｓｓ，  Ｈｏｌ  ｌ  １，  Ｈｏｌ  ｌ  ５）、Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ（Ｂａｒｌｅｙ，  Ｈｏｒ  ｖ  １、Ｈｏｒ  ｖ  ５、Ｈｏｒ  ｖ  １２、Ｈｏｒ  ｖ  １５、Ｈｏｒ  ｖ  １６、Ｈｏｒ  ｖ  １７、Ｈｏｒ  ｖ  ２１）、Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ（Ｒｙｅ  ｇｒａｓｓ，  Ｌｏｌ  ｐ  １，  Ｌｏｌ  ｐ  ２，  Ｌｏｌ  ｐ  ３，  Ｌｏｌ  ｐ  ４，  Ｌｏｌ  ｐ  ５，  Ｌｏｌ  ｐ  １１）、Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ（Ｒｉｃｅ，  Ｏｒｙ  ｓ  １，  Ｏｒｙ  ｓ  １２）、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｒｕｍ（Ｂａｈｉａ  ｇｒａｓｓ，  Ｐａｓ  ｎ  １）、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｑｕａｔｉｃａ（Ｃａｎａｒｙ  ｇｒａｓｓ，  Ｐｈａ  ａ  １，  Ｐｈａ  ａ  ５）、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ（Ｔｉｍｏｔｈｙ，  Ｐｈｌ  ｐ  １，  Ｐｈｌ  ｐ  ２、Ｐｈｌ  ｐ  ４、Ｐｈｌ  ｐ  ５、Ｐｈｌ  ｐ  ６、Ｐｈｌ  ｐ  ７、Ｐｈｌ  ｐ  １１、Ｐｈｌ  ｐ  １２、Ｐｈｌ  ｐ  １３）、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ（Ｋｅｎｔｕｃｋｙ  ｂｌｕｅ  ｇｒａｓｓ、Ｐｏａ  ｐ  １，  Ｐｏａ  ｐ  ５）、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ（Ｒｙｅ，  Ｓｅｃ  ｃ  １，  Ｓｅｃ  ｃ  ２０）、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｅ（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｇｒａｓｓ，  Ｓｏｒ  ｈ  １）、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ（Ｗｈｅａｔ，  Ｔｒｉ  ａ  １２、Ｔｒｉ  ａ  １４、Ｔｒｉ  ａ  １８５、Ｔｒｉ  ａ  １９、Ｔｒｉ  ａ  ２５、Ｔｒｉ  ａ  ２６、Ｔｒｉ  ａ  ２７、Ｔｒｉ  ａ  ２８、Ｔｒｉ  ａ  ２９、Ｔｒｉ  ａ  ３０）、Ｚｅａ  ｍａｙｓ（Ｍａｉｚｅ，  Ｚｅａ  ｍ  １、Ｚｅａ  ｍ  １２、Ｚｅａ  ｍ  １４、Ｚｅａ  ｍ  ２５）、Ｆａｇａｌｅｓ：Ａｌｎｕｓ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ（Ａｌｄｅｒ、Ａｌｎ  ｇ  １、Ａｌｎ  ｇ  ４）、Ｂｅｔｕｌ��  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ（Ｂｉｒｃｈ、Ｂｅｔ  ｖ  １、Ｂｅｔ  ｖ  ２、Ｂｅｔ  ｖ  ３、Ｂｅｔ  ｖ  ４、Ｂｅｔ  ｖ  ５、Ｂｅｔ  ｖ  ６、Ｂｅｔ  ｖ  ７）、Ｃａｒｐｉｎｕｓ  ｂｅｔｕｈｘｓ（Ｈｏｒｎｂｅａｍ、Ｃａｒ  ｂ  １））；Ｌａｍｉａｌｅｓ（たとえばＦｒａｘｉｎｕｓ  ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ（Ａｓｈ、Ｆｒａ  ｅ  ｌ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ（Ｐｒｉｖｅｔ，  Ｌｉｇ  ｖ）、Ｓｙｒｉｎｇａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（Ｌｉｌａｃ，  Ｓｙｒ  ｖ））；Ｍａｌｐｉｇｈｉａｌｅｓ（たとえばＨｅｖｅａ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ｐａｒａ  ｒｕｂｂｅｒ  ｔｒｅｅ（ラテックス）、Ｈｅｖ  ｂ  １、Ｈｅｖ  ｂ  ２、Ｈｅｖ  ｂ  ３、Ｈｅｖ  ｂ  ４、Ｈｅｖ  ｂ  ５、Ｈｅｖ  ｂ  ６、Ｈｅｖ  ｂ  ７、Ｈｅｖ  ｂ  ８、Ｈｅｖ  ｂ  ９、Ｈｅｖ  ｂ  １０、Ｈｅｖ  ｂ  １１、Ｈｅｖ  ｂ  １２、Ｈｅｖ  ｂ  １３））；Ｐｒｏｔｅａｌｅｓ（たとえばＰｌａｔａｎｕｓ  ａｃｅｒｉｆｏｌｉａ（Ｌｏｎｄｏｎ  ｐｌａｎｅ  ｔｒｅｅ、Ｐｌａ  ａ  １、Ｐｌａ  ａ  ２、Ｐｌａ  ａ  ３）、Ｐｌａｔａｎｕｓ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ（Ｏｒｉｅｎｔａｌ  ｐｌａｎｅ、Ｐｌａ  ｏｒ  １、Ｐｌａ  ｏｒ  ２、Ｐｌａ  ｏｒ  ３））が挙げられる。
【０１７０】
摂取されるアレルゲンの例としては、限定するものではないが、真菌の子嚢菌、たとえばＤｏｔｈｉｄｅａｌｅｓ（たとえばＡｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｒｏｔ  ｆｕｎｇｕｓ，  Ａｌｔ  ａ）、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ（Ｃｌａ  ｃ）、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｈｅｒｂａｒｕｍ  （Ｃｌａ  ｈ）、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ  ｌｕｎａｔａ（Ｃｕｒ  ｌ）、−Ｅｕｒｏｔｉａｌｅｓ：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ  （Ａｓｐ  ｆｌ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ（Ａｓｐ  ｆ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ（Ａｓｐ  ｎ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（Ａｓｐ  ｏ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｂｒｅｖｉｃｏｍｐａｃｔｕｍ（Ｐｅｎ  ｂ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ（Ｐｅｎ  ｃｈ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｉｔｒｉｎｕｍ（Ｐｅｎ  ｃ）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｏｘａｌｉｃｕｍ（Ｐｅｎ  ｏ））、Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ（たとえばＦｕｓａｒｉｕｍ  ｃｕｌｍｏｒｕｍ（Ｆｕｓ  ｃ））；Ｏｎｙｇｅｎａｌｅｓ（たとえばＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ（Ｔｒｉ  ｒ）、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｔｏｎｓｕｒａｎｓ（Ｔｒｉ  ｔ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ：Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（Ｙｅａｓｔ，  Ｃａｎｄ  ａ）、Ｃａｎｄｉｄａ  ｂｏｉｄｉｎｉｉ（Ｙｅａｓｔ，  Ｃａｎｄ  ｂ））；Ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｉａｌｅｓ（たとえばＥｐｉｃｏｃｃｕｍ  ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓ（Ｅｐｉ  ｐ））、真菌の担子菌由来のアレルゲン、たとえばＨｙｍｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ（たとえばＣｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ（Ｓｈａｇｇｙ  ｍａｎｅ，  Ｃｏｐ  ｃ）、Ｐｓｉｌｏｃｙｂｅ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ（Ｍａｇｉｃ  ｍｕｓｈｒｏｏｍ，  Ｐｓｉ  ｃ）、Ｕｒｅｄｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ（たとえばＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ（Ｙｅａｓｔ，  Ｒｈｏ  ｍ））；Ｕｓｔｉｌａｇｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ（たとえばＭａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ（Ｐｉｔｙｒｉａｓｉｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ  ｉｎｆｅｃｔ．  Ａｇｅｎｔ，  Ｍａｌａ  ｆ）、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ（Ｍａｌａ  ｓ））；抗生剤（たとえばペニシリン、セファロスポリン、Ａｍｉｎｏｓｉｄｅｓ、キノロン、マクロライド系、テトラサイクリン、スルファミドなど）；薬物（たとえば、アセチルサリチル酸、ワクチン、モルヒネ、および誘導体など）；ビタミン、たとえばビタミンＫ１；ならびに食物アレルギー（たとえば、乳、タマゴ、ピーナッツ、木の実（クルミ、カシューナッツなど）、魚、甲殻類、ダイズ、コムギ、およびニンジン、リンゴ、ナシ、アボカド、アンズ、モモに由来するアレルゲンなど）が挙げられる。
【０１７１】
接触アレルゲンの例としては、限定するものではないが、重金属（たとえばニッケル、クロム、金など）、ラテックス、ハプテン、たとえばハロタン、ヒドララジンなどが挙げられる。
【０１７２】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を含む群から選択される抗原に結合できる。一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、それらのバリアントおよび混合物を含む群から選択される抗原に結合できる。
【０１７３】
一実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、卵白アルブミン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に結合できる。
【０１７４】
別の実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、ＭＯＧ、そのフラグメント、バリアント、および混合物に結合できる。
【０１７５】
別の実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、ＩＩ型コラーゲン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に結合できる。
【０１７６】
別の実施形態では、上記少なくとも１つの他の細胞外抗原結合ドメイン（好ましくはｓｃＦｖ）は、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物に結合できる。
【０１７７】
一実施形態では、細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインは、ヒンジドメインにより膜貫通ドメインに結合されている。
【０１７８】
一実施形態では、ヒンジドメインは、本明細書で上述されるように、好ましくは２〜１０アミノ酸の範囲の長さを有する、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドのリンカーである。
【０１７９】
本発明で使用され得るヒンジドメインの別の例は、参照により本明細書中に組み込まれる国際特許公開公報第２０１２／１３８４７５号に記載されている。
【０１８０】
一実施形態では、ヒンジドメインは、アミノ酸配列  ＡＧＳＳＳＳＧＧＳＴＴＧＧＳＴＴ  （配列番号：７）、アミノ酸配列  ＧＴＴＡＡＳＧＳＳＧＧＳＳＳＧＡ（配列番号８）、アミノ酸配列  ＳＳＡＴＡＴＡＧＴＧＳＳＴＧＳＴ（配列番号９）、およびアミノ酸配列  ＴＳＧＳＴＧＴＡＡＳＳＴＳＴＳＴ（配列番号１０）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１８１】
一実施形態では、ヒンジドメインは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣ（配列番号１１）のヌクレオチド配列によりコードされている。
【０１８２】
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＫＩＲＲＤＳＳ（配列番号１２）に対応するＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジである。
【０１８３】
一実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジ（配列番号１３）のアミノ酸配列または配列番号１３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１４の核酸配列または配列番号１４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされるＣＤ８ヒンジである。
【０１８４】
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号１５）のアミノ酸配列または配列番号１５と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１６の核酸配列または配列番号１６と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされるＩｇＧ４ヒンジである。
【０１８５】
別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＤヒンジ（配列番号１７）のアミノ酸配列または配列番号１７と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号１８の核酸配列または配列番号１８と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされるＩｇＤヒンジである。
【０１８６】
別の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジ（配列番号１９）のアミノ酸配列または配列番号１９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。一実施形態では、ヒンジドメインは、配列番号２０の核酸または配列番号２０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされるＣＤ２８ヒンジである。
【０１８７】
本発明のキメラ受容体で使用され得る膜貫通ドメインの例としては、限定するものではないが、Ｔ細胞受容体のα鎖、β鎖、もしくはζ鎖、またはＣＤ２８、ＣＤ３  γ、ＣＤ３  δ、ＣＤ３  ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤｌ  ｌａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒ  β、ＩＬ２Ｒ  γ、ＩＬ７Ｒ  ａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ１、ＩＴＧＡＸ、ＣＤｌ１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインが挙げられる。
【０１８８】
一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（配列番号２１）のアミノ酸配列、または配列番号２１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。別の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列、または配列番号２１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列の、少なくとも１つ、２つ、または３つではあるが２０以下、１０以下、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０１８９】
別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン（配列番号２２）のヌクレオチド配列、または配列番号２２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によりコードされる。
【０１９０】
別の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（配列番号２３）のアミノ酸配列、または配列番号２３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。一実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号２４の核酸配列、または配列番号２４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列によりコードされるＣＤ２８膜貫通ドメインである。
【０１９１】
一実施形態では、膜貫通ドメインは、組み換え型であり得、この場合、膜貫通ドメインは、バリンまたはロイシンなどの疎水性アミノ酸を優先的に含む。
【０１９２】
一実施形態では、細胞内シグナリングドメインは、細胞内部分全体、または由来する分子のネイティブな細胞内シグナリングドメイン全体、またはそれらの機能的なフラグメントもしくは誘導体を含み得る。
【０１９３】
一実施形態では、細胞内シグナリングドメインは、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメイン（またはそれに由来する配列）、および任意選択でＴ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメイン（またはそれに由来する配列）を含む。
【０１９４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、プライマリーシグナリングドメインから構成される。
【０１９５】
一実施形態では、細胞内シグナリングドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメインを含む。一実施形態では、細胞内シグナリングドメインは、Ｔ細胞共刺激分子の１つ以上の細胞内ドメインから構成される。
【０１９６】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、少なくとも１つの共刺激ドメインおよびプライマリーシグナリングドメインを含む。
【０１９７】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、少なくとも２つの共刺激ドメインおよびプライマリーシグナリングドメインを含む。
【０１９８】
本発明の一実施形態では、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ｃｏｍｍｏｎ  ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲ  β（Ｆｃ  Ε  Ｒｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、Ｆｃγ  ＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２、およびそれらに由来する配列の群で選択されるタンパク質のシグナリングドメインを含む。
【０１９９】
一実施形態では、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメインは、ＣＤ３ζの機能的シグナリングドメインを含むかまたはこれより構成される。
【０２００】
一実施形態では、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメインは、配列番号２５、２６、６１、もしくは６２のＣＤ３ζのアミノ酸配列、または配列番号２５、２６、６１、もしくは６２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２０１】
別の実施形態では、ＣＤ３ζプライマリーシグナリングドメインは、配列番号２５、２６、６１、もしくは６２のアミノ酸配列、または配列番号２５、２６、６１、もしくは６２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列の、少なくとも１つ、２つ、または３つではあるが２０以下、１０以下、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２０２】
よって、一実施形態では、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメインをコードする核酸配列は、配列番号２７もしくは配列番号２８のＣＤ３ζドメインの核酸配列、または配列番号２７もしくは配列番号２８と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２０３】
刺激性の形式で作用するＴ細胞プライマリーシグナリングドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として知られるシグナリングモチーフを含み得る。
【０２０４】
本発明で特に使用されるＴ細胞プライマリー細胞内シグナリングドメインを含むＩＴＡＭの例としては、限定するものではないが、ＣＤ３ζ、ｃｏｍｍｏｎ  ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、Ｆｃ  γ  ＲＩＩａ、ＦｃＲ  β（Ｆｃ  Ε  Ｒ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２の（またはこれらに由来する）ドメインが挙げられる。
【０２０５】
一実施形態では、Ｔ細胞プライマリー細胞内シグナリングドメインは、修飾されたＩＴＡＭドメイン、たとえばネイティブなＩＴＡＭドメインと比較して変化された（たとえば増大または減少された）活性を有する変異型ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、プライマリーシグナリングドメインは、修飾されたＩＴＡＭを含むプライマリー細胞内シグナリングドメイン、たとえば最適化および／またはトランケートされたＩＴＡＭを含むプライマリー細胞内シグナリングドメインを含む。一実施形態では、プライマリーシグナリングドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれより多いＩＴＡＭモチーフを含む。
【０２０６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、１つ以上の共刺激シグナリングドメインと組み合わせて、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメイン（たとえばＣＤ３ζシグナリングドメインなど）を含む。
【０２０７】
Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインの例としては、限定するものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＡＲＨＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２ｒａ、ＩＬ６Ｒａ、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＬ−１３ＲＡ１／ＲＡ２、ＩＬ−３３Ｒ（ＩＬ１ＲＬ１）、ＩＬ−１０ＲＡ／ＲＢ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒ（ＣＳＦ２ＲＢ）、ＩＬ−２１Ｒ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）、ＣＤ９５、ＴＮＦＲ１（ＣＤ１２０ａ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ）、ＴＮＦＲ２（ＣＤ１２０ｂ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）、ＴＧＦｂＲ１／２／３、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、共通γ鎖、ＣＤ８３、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、またはＮＫＧ２Ｄと特異的に結合するリガンド、およびそれらのいずれかの組み合わせの群で選択されるタンパク質のシグナリングドメインが挙げられる。
【０２０８】
本発明の一実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、およびＰＤ−１を含む群から選択されるＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。
【０２０９】
一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（配列番号２９）のアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列の、少なくとも１つ、２つ、または３つではあるが２０以下、１０以下、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２１０】
一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、ＣＤ２７細胞内ドメイン（配列番号３０）のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列の、少なくとも１つ、２つ、または３つではあるが２０以下、１０以下、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２１１】
一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、ＣＤ２８細胞内ドメイン（配列番号３１）のアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。別の実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列の、少なくとも１つ、２つ、または３つではあるが２０以下、１０以下、または５以下の修飾を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０２１２】
本発明の一実施形態では、キメラ受容体は、好ましくはＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、および４−１ＢＢの細胞内ドメインから選択される、Ｔ細胞共刺激分子の少なくとも２つの細胞内ドメインの組み合わせを含む。
【０２１３】
一実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（配列番号２９）のアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２７細胞内ドメイン（配列番号３０）のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１４】
別の実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（配列番号２９）のアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（配列番号３１）のアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１５】
さらなる別の実施形態では、キメラ受容体は、ＣＤ２７細胞内ドメイン（配列番号３０）のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列、およびＣＤ２８細胞内ドメイン（配列番号３１）のアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
一実施形態では、キメラ受容体は、４−１ＢＢ細胞内ドメイン（配列番号２９）のアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列と、ＣＤ２７細胞内ドメイン（配列番号３０）のアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列と、ＣＤ２８細胞内ドメイン（配列番号３１）のアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列とを含む。
【０２１７】
よって、一実施形態では、Ｔ細胞共刺激シグナリングドメインをコードする核酸配列は、４−１ＢＢ細胞内ドメインの核酸配列（配列番号３２）、または配列番号３２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列、および／またはＣＤ２７細胞内ドメインの核酸配列（配列番号３３）、または配列番号３３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列、および／またはＣＤ２８細胞内ドメインの核酸配列（配列番号３４）、または配列番号３４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列を含む。
【０２１８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、
配列番号２９の４−１ＢＢ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号２９と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号３０のＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号３０と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および／または配列番号３１のＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号３１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列；ならびに
配列番号２５、２６、６１、もしくは６２のＣＤ３ζ細胞内ドメインのアミノ酸配列、または配列番号２５、２６、６１、もしくは６２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
細胞内ドメインに含まれる配列は、同じフレームにおいて単一のポリペプチド鎖として発現される。
【０２１９】
よって、一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインをコードする核酸配列は、
配列番号３２の４−１ＢＢ細胞内ドメインの核酸配列、または配列番号３２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列、および／または配列番号３３のＣＤ２７細胞内ドメインの核酸配列、または配列番号３３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列、および／または配列番号３４のＣＤ２８細胞内ドメインの核酸配列、または配列番号３４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する核酸配列；ならびに
配列番号２７もしくは配列番号２８のＣＤ３ζ細胞内ドメインの核酸配列、または配列番号２７もしくは配列番号２８と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列
を含む。
【０２２０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、無作為または特定の順序で互いに連結され得る少なくとも２つの異なるドメイン（たとえば、プライマリーシグナリングドメインおよびＴ細胞共刺激分子の少なくとも１つの細胞内ドメイン）を含む。
【０２２１】
任意選択で、たとえば２〜２０アミノ酸（たとえば２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）長の短いオリゴペプチドまたはポリペプチドのリンカーは、明確に異なるシグナリングドメインの間に結合を形成し得る。一実施形態では、グリシン−セリンの二重構造（ＧＳ）が、適切なリンカーとして使用される。一実施形態では、単一のアミノ酸、たとえばアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）が、適切なリンカーとして使用される。他のリンカーの例は、本明細書に記載されている。
【０２２２】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲの細胞内シグナリングドメインは、２つ以上の、たとえば、２、３、４、５、またはそれより多い共刺激シグナリングドメインを含む。別の実施形態では、２つ以上の、たとえば、２、３、４、５、またはそれより多い共刺激シグナリングドメインは、リンカー分子、たとえば本明細書中上述されるリンカー分子により、分けられている。
【０２２３】
一実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）およびＣＤ２８の共刺激シグナリングドメイン（好ましくは配列番号３１）を含む。
【０２２４】
別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）および４−１ＢＢの共刺激シグナリングドメイン（好ましくは配列番号２９）を含む。
【０２２５】
別の実施形態では、本発明のキメラ受容体の細胞内シグナリングドメインは、ＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）およびＣＤ２７のシグナリングドメイン（好ましくは配列番号３０）を含む。
【０２２６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒに特異的な細胞外結合ドメインからＮ末端に位置するリーダー配列をさらに含む。リーダー配列の非限定的な例は、配列番号３９の配列を含み得るかまたはこれより構成され得るＣＨ８のリーダー配列である。
【０２２７】
一実施形態では、ＣＡＲは、たとえばクオリティコントロール、濃縮、ｉｎ  ｖｉｖｏでのトラッキングなどのためのタグなどの、タグをさらに含む。上記タグは、Ｎ末端、Ｃ末端、および／または内部に位置し得る。本発明のＣＡＲで使用され得るタグの例は、当業者によく知られている。たとえば、限定するものではないが、本発明で使用されるタグは、ヘマグルチニンＴａｇ、ポリアルギニン  Ｔａｇ、ポリヒスチジン  Ｔａｇ、Ｍｙｃ  Ｔａｇ、Ｓｔｒｅｐ  Ｔａｇ、Ｓ−Ｔａｇ、ＨＡＴ  Ｔａｇ、３ｘ  Ｆｌａｇ  Ｔａｇ、カルモジュリン結合ペプチドＴａｇ、ＳＢＰ  Ｔａｇ、キチン結合ドメイン  Ｔａｇ、ＧＳＴ  Ｔａｇ、マルトース結合タンパク質Ｔａｇ、蛍光タンパク質Ｔａｇ、Ｔ７  Ｔａｇ、Ｖ５  Ｔａｇ、およびＸｐｒｅｓｓ  Ｔａｇを含むかまたはそれらからなる群から選択されるタグであり得る。タグの他の例としては、限定するものではないが、ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号５９）またはＳＡＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号６０）が挙げられる。
【０２２８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｐ２Ａ（配列番号４４）、およびＧＦＰ（配列番号４５）の配列をさらに含む。
【０２２９】
第１の実施形態では、本発明のＣＡＲは、細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、任意選択で細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナリングドメインを含む。
【０２３０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；およびＣＤ８−ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３２】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３４】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３６】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３８】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２３９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４０】
第２の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、任意選択でＴ細胞共刺激分子の細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、単一の細胞内ドメイン、およびＴ細胞プライマリーシグナリングドメインを含む。
【０２４１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４７】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２４９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５３】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２５９】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６５】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２６９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７１】
第３の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、任意選択で、Ｔ細胞共刺激分子の細胞外ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、２つの細胞内ドメイン、およびＴ細胞プライマリーシグナリングドメインを含む。
【０２７２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７８】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２７９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１３）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８６】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２８９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＧ４のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１５）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９０】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；好ましくは配列番号１７のアミノ酸配列を含む、ＩｇＤのヒンジドメイン；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９５】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＩｇＤのヒンジドメイン（好ましくは配列番号１７）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９６】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２１）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０２９９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０３００】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；４−１ＢＢの細胞内ドメイン（好ましくは配列番号２９）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０３０１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン；ＣＤ２８のヒンジドメイン（好ましくは配列番号１９）；ＣＤ２８の膜貫通ドメイン（好ましくは配列番号２３）；ＣＤ２７の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３０）；ＣＤ２８の細胞内ドメイン（好ましくは配列番号３１）；およびＣＤ３ζのプライマリーシグナリングドメイン（好ましくは配列番号２５、２６、６１、または６２）を含む。
【０３０２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、（ｉ）ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ２８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含む。
【０３０３】
一実施形態では、ヒトＣＤ２８のヒンジ領域、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζ鎖の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部は、配列番号３５もしくは６３のアミノ酸配列、または配列番号３５もしくは６３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列に対応する。
【０３０４】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号３５もしくは６３のアミノ酸配列、または配列番号３５もしくは６３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列に連結されたＩＬ−２３Ｒ結合ドメインを含む。
【０３０５】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、（ｉ）ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒト４−１ＢＢの細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒト４−１ＢＢの細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部は、配列番号４９、５０、７０、もしくは７１のアミノ酸配列、または配列番号４９、５０、７０、もしくは７１と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するいずれかのアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３０６】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、（ｉ）ＩＬ−２３Ｒ結合ドメイン、（ｉｉ）ヒトＣＤ８のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、（ｉｖ）ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、および（ｖ）ヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、ヒトＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部は、配列番号５１もしくは７２のアミノ酸配列、または配列番号５１もしくは７２と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３０７】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ（たとえば、配列番号５５、３６、または５７、好ましくは配列番号５５の配列を含むかまたはこれよりなる）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒト４−１ＢＢの細胞内ドメインおよびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、上記ＣＡＲは、配列番号４１、４３、６５、もしくは６７、または配列番号４１、４３、６５、もしくは６７と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３０８】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ８のリーダー配列、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ（たとえば、配列番号５５、３６、または５７、好ましくは配列番号５５の配列を含むかまたはこれよりなる）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒト４−１ＢＢの細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、上記ＣＡＲは、配列番号４０、４２、６４、もしくは６６、または配列番号４０、４２、６４、もしくは６６と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３０９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ（たとえば、配列番号５５、３６、または５７、好ましくは配列番号５５の配列を含むかまたはこれよりなる）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、上記ＣＡＲは、配列番号４８、５３、６９、もしくは７４、または配列番号４８、５３、６９、もしくは７４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３１０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ８のリーダー配列、抗ＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ（たとえば、配列番号５５、３６、または５７、好ましくは配列番号５５の配列を含むかまたはこれよりなる）、ＣＤ８のヒンジ領域、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメイン、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン、およびヒトＣＤ３ζの細胞内ドメインを含む。一実施形態では、上記ＣＡＲは、配列番号４７、５２、６８、もしくは７３、または配列番号４７、５２、６８、もしくは７３と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはこれより構成される。
【０３１１】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号３９を有するＣＤ８リーダー配列、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号３）により連結された配列番号３７の配列を有するＶＨおよび配列番号３８を有するＶＬを含む抗ヒトＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ、配列番号１３の配列を有するＣＤ８α由来のヒンジドメイン、配列番号２１を有するヒトＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２９を有するヒト４−１ＢＢシグナリングドメインおよび配列番号２６を有するヒトＣＤ３ζドメインを含む細胞内シグナリングドメインを含む。
【０３１２】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号３）により連結された配列番号３７の配列を有するＶＨおよび配列番号３８を有するＶＬを含む抗ヒトＩＬ−２３ＲｓｃＦｖ、配列番号１３の配列を有するＣＤ８α由来のヒンジドメイン、配列番号２１を有するヒトＣＤ８α膜貫通ドメイン、ならびに配列番号２９を有するヒト４−１ＢＢシグナリングドメインおよび配列番号２６を有するヒトＣＤ３ζドメインを含む細胞内シグナリングドメインを含む。
【０３１３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、配列番号５４の配列、または配列番号５４と少なくとも約９５、好ましくは約９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を有する。
【０３１４】
本発明はさらに、本明細書で上述されるＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作された、Ｔ細胞、好ましくは単離されたＴ細胞に関する。
【０３１５】
本発明はまた、本明細書で上述されるＣＡＲを細胞表面上で発現するように操作された、単離されかつ／または実質的に精製されたＴ細胞集団に関する。
【０３１６】
一実施形態では、本発明のＴ細胞は、ＣＡＲにより認識されるＩＬ−２３Ｒをそれらの表面で発現する細胞を抑制する。
【０３１７】
一実施形態では、本発明のＴ細胞は、ＣＡＲにより認識されるＩＬ−２３Ｒをそれらの表面で発現する細胞に対して細胞傷害性である。
【０３１８】
一実施形態では、本発明のＴ細胞集団は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ  Ｔ細胞を含むかまたはこれらより構成される。
【０３１９】
一実施形態では、本発明のＴ細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。
【０３２０】
一実施形態では、Ｔ細胞は、たとえば細胞療法での使用に適したいずれかの制御性免疫細胞などの、制御性免疫細胞である。
【０３２１】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は全て、本明細書で定義されるキメラ受容体（ＣＡＲ）を発現し、よって、ＣＡＲに単一特異性であると定義され得る（すなわち全てのＴｒｅｇ細胞は、これらが発現するＣＡＲにて同じ抗原（ＩＬ−２３Ｒ）を認識する。一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的である（すなわち全てのＴｒｅｇ細胞集団は、それらのＴＣＲで同じ抗原を認識する）。別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−多重特異的である（すなわちＴｒｅｇ細胞は、それらのＴＣＲで異なる抗原を認識し得る）。
【０３２２】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、抗原、抗原のフラグメント、抗原のバリアント、またはそれらの混合物を認識する。
【０３２３】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、一般的なヒトの食事由来の食物抗原に特異的である。
【０３２４】
別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、自己抗原、たとえば多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、または移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原などに特異的である。自己抗原、特に多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、および移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原の例は、本明細書に提供される。
【０３２５】
別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、吸入されるアレルゲン、摂取されるアレルゲン、または接触アレルゲンに特異的である。
【０３２６】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を含む群から選択される抗原に特異的である。
【０３２７】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、卵白アルブミン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３２８】
別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、ＭＯＧ、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３２９】
別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ＴＣＲ−単一特異的であり、ＴＣＲは、ＩＩ型コラーゲン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３３０】
一実施形態では、本発明のＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞は、ＣＡＲにより認識されるＩＬ−２３Ｒを発現する細胞に対して抑制的である。
【０３３１】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞により発現される際の本発明のＣＡＲはＴｒｅｇ細胞に、Ｔ細胞が特異的であるかそれにより活性化されるまたはされるであろう抗原とは異なって、それらの細胞表面上でＩＬ−２３Ｒを発現する細胞に結合しかつＩＬ−２３Ｒにより活性化される特質を与える。
【０３３２】
よって、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、リダイレクトされた（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ）Ｔｒｅｇ細胞集団と定義され得る。本明細書で使用される場合、「リダイレクトされた」は、Ｔ細胞が特異的であるかそれにより活性化されるまたはされるであろう抗原とは異なるリガンドに結合しこれにより活性化される特質をＴｒｅｇ細胞に提供する、本明細書で記載のキメラ受容体を担持するＴｒｅｇ細胞を指す。
【０３３３】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、細胞傷害性ではない。別の実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、細胞傷害性である。
【０３３４】
ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞の例としては、限定するものではないが、Ｔｈ１７、αβ  Ｔ細胞、好中球、γδＴ細胞、ＮＫ、ＮＫＴ、樹状細胞、およびマクロファージが挙げられる。
【０３３５】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ、Ｔｒ１細胞、ＴＧＦ−β分泌Ｔｈ３細胞、制御性ＮＫＴ細胞、制御性γδＴ細胞、制御性ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびダブルネガティブ制御性Ｔ細胞を含む群から選択され得る。
【０３３６】
一実施形態では、制御性細胞は、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。一実施形態では、Ｔｒｅｇは、胸腺由来のＴｒｅｇまたは適応性もしくは誘導されるＴｒｅｇである。一実施形態では、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３−制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、好ましくはＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞である。
【０３３７】
一実施形態では、制御性細胞は、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。一実施形態では、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、ＣＤ８＋ＣＤ２８−制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１０３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ１２２＋制御性Ｔ細胞、およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、制御性細胞は、ＩＮＦγ＋ＩＬ１０＋ＩＬ３４＋ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＣｌｏｗ制御性Ｔ細胞である。
【０３３８】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、哺乳類細胞、好ましくはヒトのＴｒｅｇ細胞である。
【０３３９】
一実施形態では、Ｔｒｅｇは、幹細胞、たとえば限定するものではないが人工多能性幹細胞（ｉＰＳまたはｉＰＳＣ）を含む、人工幹細胞に由来する。
【０３４０】
本明細書で使用される場合、「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳ」または「ｉＰＳＣ」は、脱分化またはリプログラミングによる、非多能性細胞、特に成年の体細胞に由来する人工的な多能性幹細胞を指す。特に、ｉＰＳＣは、たとえば転写因子Ｏｃｔ４（Ｐｏｕ５ｆ１）、Ｓｏｘ２、ｃＭｙｃ、およびＫｌｆ４などの多能性関連遺伝子の特定のセットを細胞に導入することにより入手され得る。これらの胚性幹細胞のものと同様の形態、自己再生の性質および多能性に加え、ｉＰＳＣはまた、胚性幹細胞のものと非常に近いヒストンメチル化および遺伝子発現の全般的なプロファイルを伴うエピジェネティックなリプログラミングを呈する。ＩＰＳＣは特に、たとえばＮａｎｏｇ、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４、およびＳｓｅａ３／４タンパク質などの、多能性マーカーを発現する。
【０３４１】
一実施形態では、制御性細胞は、以下の表現型：ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、たとえばＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−、たとえばＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−ＣＤ４５ＲＡ＋などを有する。好ましくは、制御性免疫細胞は、以下の表現型：ＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、たとえばＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−、たとえばＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−ＣＤ４５ＲＡ＋などを有する。
【０３４２】
一実施形態では、制御性細胞は、以下の表現型：ＣＤ４＋ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋、ＣＤ１２７ｌｏ／−、ＣＴＬＡ−４＋、ＣＤ３９＋、Ｈｅｌｉｏｓ＋、ＣＤ６２Ｌ＋／ｈｉ、ＶＬＡ４＋、ＬＦＡ１＋、ＣＤ４９ｂｉｎｔ、ＩＴＧｂ７ｉｎｔ、ＰＳＧＬ−１＋、ＩＣＯＳ＋、ＧＩＴＲ＋、ＰＤ−１ｉｎｔ、Ｐｅｒｆｌｏ／−、ＣＣＲ７＋の少なくとも１つを提示する。一実施形態では、免疫制御性細胞は、グランザイムＡおよび／またはグランザイムＢを発現しない。
【０３４３】
一実施形態では、分子の発現レベルの決定は、フローサイトメトリー、免疫蛍光、または画像分析、たとえばハイコンテント分析により行われる。好ましくは、分子の発現レベルの決定は、フローサイトメトリーにより行われる。一実施形態では、フローサイトメトリー解析を行う前に、細胞を固定および透過処理し、それにより、細胞内タンパク質の検出を可能にする。
【０３４４】
一実施形態では、細胞集団における分子の発現レベルの決定は、当該分子を発現する細胞集団の細胞（すなわち当該分子に対して「＋」の細胞）のパーセンテージを決定することを含む。好ましくは、上記分子を発現する細胞のパーセンテージは、ＦＡＣＳにより測定される。
【０３４５】
用語「発現する（または＋）」および「発現しない（または−）」は、当該分野でよく知られており、「＋」に対応する細胞マーカーの発現レベルは高くまたは「±」とも呼ばれる、中程度であり、「−」に対応する細胞マーカーの発現レベルが０に相当するような、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。
【０３４６】
用語「ｌｏｗ」または「ｌｏ」または「ｌｏ／−」は、当該分野でよく知られており、細胞マーカーの発現レベルが、全体として分析される細胞集団における細胞マーカーの発現レベルと比較して低いような、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。より具体的には、用語「ｌｏ」は、１つ以上の他の別個の細胞集団よりも低いレベルで細胞マーカーを発現する別個の細胞集団を指す。
【０３４７】
用語「ｈｉｇｈ」または「ｈｉ」または「ｂｒｉｇｈｔ」は、当該分野でよく知られており、細胞マーカーの発現レベルが、全体として分析される細胞集団における細胞マーカーの発現レベルと比較して高いような、目的の細胞マーカーの発現レベルを指す。
【０３４８】
一般的に、染色強度の上位２、３、４、または５％の細胞が、「ｈｉ」と表記され、ここで集団の上位半分に収まる細胞は、「＋」と分類される。蛍光強度の５０％未満に収まる細胞は、「ｌｏ」細胞と規定され、５％未満は「−」細胞と規定される。
【０３４９】
目的の細胞マーカーの発現レベルは、このマーカーに特異的な蛍光標識した抗体で染色した細胞集団由来の細胞の蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を、無関係な特異性を有するが同じアイソタイプ、同じ蛍光プローブを有し、同じ種を起源とする蛍光標識した抗体で染色した同じ細胞集団由来の細胞（アイソタイプ対照と呼ばれる）の蛍光強度と比較することにより決定される。このマーカーに特異的な蛍光標識した抗体で染色し、アイソタイプ対照で染色した細胞と同等のＭＦＩまたはそれよりも低いＭＦＩを示す集団由来の細胞は、このマーカーを発現せず、よって（−）またはネガティブ（陰性）と規定される。このマーカーに特異的な蛍光標識した抗体で染色し、アイソタイプ対照で染色した細胞を上回るＭＦＩ値を示す集団由来の細胞は、このマーカーを発現しており、（＋）またはポジティブ（陽性）と規定される。
【０３５０】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、本発明のＣＡＲ、および本発明のＣＡＲにより認識されるＩＬ−２４Ｒ以外の別のリガンドに結合する別の受容体（本明細書で「第２の受容体」と呼ばれる）を、それらの細胞表面で発現する。本発明では、この他の受容体は、上述されるような、細胞外リガンド結合ドメイン、任意選択でヒンジ、任意選択で膜貫通ドメイン、および細胞内シグナリングドメインを含む。
【０３５１】
一実施形態では、第２の受容体は、内在性（たとえば内在性ＲＣＲなど）である。別の実施形態では、第２の受容体は外来性であり、その発現は、それをコードする核酸での形質転換または形質導入により本発明のＴｒｅｇ細胞集団の細胞に誘導される。上記外来性受容体は、外来性ＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。よって一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、第１のＣＡＲがＩＬ−２３Ｒを認識し第２のＣＡＲが明確に異なるリガンドを認識する、２つのＣＡＲを発現する。別の実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、第１のＣＡＲがＩＬ−２３Ｒ上の第１のエピトープを発現し第２のＣＡＲが同じＩＬ−２３Ｒ上の明確に異なるエピトープを認識する、２つのＣＡＲを発現する。別の実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞は、第１のＣＡＲがＩＬ−２３Ｒを認識し第２のＣＡＲが明確に異なるＩＬ−２３Ｒ（たとえばＩＬ−２３Ｒのバリアント）を認識する、２つのＣＡＲを発現する。
【０３５２】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＣＡＲおよび第２の受容体（好ましくは第２のＣＡＲ）は、誘導可能であり、すなわち、細胞表面上でのその発現が誘導され得る。
【０３５３】
一実施形態では、本発明のＣＡＲおよび第２の受容体（好ましくは第２のＣＡＲ）の１つの発現が、他の受容体の活性化により誘導される。第１の実施形態では、本発明のＣＡＲの発現が、第２の受容体の活性化により誘導される。第２の実施形態では、第２の受容体の発現が、本発明のＣＡＲの活性化により誘導される。誘導可能なＣＡＲが、たとえばＲｏｙｂａｌ  ｅｔ  ａｌ  （Ｃｅｌｌ，  ２００６）によるものなど、当該分野で以前に説明されている。
【０３５４】
一実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、抗原、抗原のフラグメント、抗原のバリアント、またはそれらの混合物に特異的である。
【０３５５】
一実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、一般的なヒトの食事由来の食物抗原に特異的である。
【０３５６】
「一般的なヒトの食事由来の食物抗原」は、以下の非限定的な列挙：ウシ抗原、たとえばリポカリン、Ｃａ結合Ｓ１００、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリンなどのラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、カゼインの食物抗原などの、ヒトにとって一般的な食品由来の免疫原性ペプチドを指す。食物抗原はまた、タイセイヨウサケ抗原、たとえばパルブアルブミン；ニワロリ抗原、たとえばオボムコイド、卵白アルブミン、Ａｇ２２、コンアルブミン、リゾチーム、またはニワトリ血清アルブミン；ピーナッツ抗原；エビ抗原、たとえばトロポミオシン；コムギ抗原、たとえばアグルチニンまたはグリアジン；セロリ抗原、たとえばセロリプロフィリン；ニンジン抗原、たとえばニンジンプロフィリン；リンゴ抗原、たとえばタウマチン、リンゴの脂質輸送タンパク質、またはリンゴプロフィリン；ナシ抗原、たとえばナシプロフィリン、またはイソフラボンレダクターゼ；アボカド抗原、たとえばエンドキチナーゼ；アンズ抗原、たとえばアンズの脂質輸送タンパク質；モモ抗原、たとえばモモの脂質輸送タンパク質またはモモプロフィリン；ダイズ抗原、たとえばＨＰＳ、ダイズプロフィリン、または（ＳＡＭ２２）ＰＲ−Ｉ０  ｐｒｏｔ；それらのフラグメント、バリアント、および混合物であり得る。
【０３５７】
別の実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、たとえば多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、または移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原などの、自己抗原に特異的である。
【０３５８】
多発性硬化症関連抗原の例としては、限定するものではないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ／クローディン１（Ｃｌａｕｄｉｎｌ  １））、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド  ３’−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０３５９】
関節関連抗原の例としては、限定するものではないが、シトルリンが置換された環状および直鎖状のフィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、ＨＳＰ、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、およびＨＳＰ９０、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、Ｉ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース  ６  リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチル−カルパスタチン、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性カルジオリピン、およびホスファチジルセリン、中性に荷電されたホスファチジルエタノールアミン、およびホスファチジルホスファチジルコリンを含むリン脂質抗原、マトリックスメタロプロテアーゼ、フィブリリン、アグリカン（ａｇｇｒｅｃｃａｎ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。関節関連抗原の他の例としては、限定するものではないが、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、シトルリン化フィブリノーゲンが挙げられる。
【０３６０】
眼関連抗原の例としては、限定するものではないが、ＩＩ型コラーゲン、網膜のアレスチン、Ｓ−アレスチン、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ１）、βクリスタリン  Ｂ１、網膜タンパク質、脈絡膜タンパク質、およびそれらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０３６１】
ヒトＨＳＰ抗原の例としては、限定するものではないが、ヒトＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、それらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０３６２】
一実施形態では、抗原は、炎症性神経系病態関連抗原、好ましくは多発性硬化症関連抗原である。炎症性神経系病態関連抗原、好ましくは多発性硬化症関連抗原の例としては、限定するものではないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質（ＯＭＧＰ）、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ／クローディン１（Ｃｌａｕｄｉｎｌ  １））、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイトに特異的なタンパク質（ＯＳＰ）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質Ｐｏ、末梢ミエリンタンパク質２２（ＰＭＰ２２）、２’３’−環状ヌクレオチド  ３’−ホスホジエステラーゼ（ＣＮＰａｓｅ）、それらのフラグメント、バリアント、および混合物が挙げられる。
【０３６３】
一実施形態では、抗原は、皮膚関連抗原である。皮膚関連抗原の例としては、限定するものではないが、ケラチノサイト抗原、真皮または表皮に存在する抗原、メラノサイト抗原（たとえばメラニンまたはチロシナーゼなど）、デスモグレイン（たとえばデスモグレイン１または３、Ｄｓｇ１／３とも呼ばれ得る）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、プレクチン、インテグリン（たとえばインテグリンα４β６）、コラーゲン（たとえばコラーゲンＶＩＩ型）、ラミニン（たとえばラミニン３３２またはラミニンγ１）、プランキン（たとえばエンボプラキン、ペリプランキン、またはデスモプラキン）、ケラチン（たとえばＫＲＴ５、ＫＲＴ８、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１７、およびＫＲＴ３１）、ケラチンフィラメント関連タンパク質、フィラグリン、ｃｏｒｎｅｏｄｅｓｍｏｓｉｎ、ならびにエラスチンが挙げられる。
【０３６４】
一実施形態では、抗原は、移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原である。このような抗原の例としては、限定するものではないが、移植した組織または宿主に特異的なＭＨＣ、β２−ミクログロブリン、ＡＢＯ式由来の抗原、アカゲザル式由来の抗原（特にＣ、ｃ、Ｅおよびｅ、およびＤの形式由来の抗原）、ならびに同種赤血球凝集素（ｉｓｏｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）が挙げられる。移植片拒絶またはＧＶＨＤに関与し得る抗原の他の例としては、ＨＬＡ−ＤＲ（特に移植後最初の６カ月間）、ＨＬＡ−Ｂ（特に移植後最初の２年間）、ＨＬＡ−Ａ、マイナー組織適合抗原（ｍｉＨＡ、たとえばＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、およびＨＬＡ−Ｇ）、ＭＨＣクラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）に対応するＨＬＡ、ＭＨＣクラスＩＩ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯＡ、ＤＯＢ、ＤＱおよびＤＲ）に対応するＨＬＡ、ならびにＭＨＣクラスＩＩＩ（たとえば補体系の成分）に対応するＨＬＡが挙げられる。
【０３６５】
一実施形態では、抗原は、ＨＬＡ−Ａ２細胞表面タンパク質である。一実施形態では、細胞外結合ドメインは、ＨＬＡ−Ａ２に向けられる抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【０３６６】
用語「ＨＬＡ−Ａ２」は、本明細書中使用される場合、ＨＬＡ遺伝子複合体のＨＬＡ−Ａの遺伝子座でＨＬＡ−Ａ＊０２アレルファミリーによりコードされる、細胞表面タンパク質を含むヒト白血球抗原（ＨＬＡ）を指す。用語「ＨＬＡ−Ａ２」により包有されるＨＬＡタンパク質は、血清学的試験またはジェノタイピングによりＨＬＡ−Ａ＊０２抗原の種類に属すると同定されるＨＬＡタンパク質を含む。ＨＬＡ−Ａ＊０２抗原の種類に関するさらなる名称は、「ＨＬＡ−Ａ２」、ＨＬＡ−Ａ０２」、および「ＨＬＡ−Ａ＊２」を含む。ＨＬＡ系の因子に関してＷＨＯの委員会が２０１０年に開発したＨＬＡの名称付けシステムを含む、このアレルのファミリーによりコードされるＨＬＡタンパク質を同定する異なる名称付けのシステムが、開発されている。用語「ＨＬＡ−Ａ２」は、限定するものではないが、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」で始まる表記を含む、「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で始まるこの名称付けのシステムに係る表記を有するアレルによりコードされるＨＬＡタンパク質を指す。このアレルの表記は、イタリック体であり得る。「ＨＬＡ−Ａ＊０２：」で始まり、２つまたは３つのさらなる数字が続くアレルの表記は、完全な表記または表記の開始部分を構成し得る。用語「ＨＬＡ−Ａ２」はまた、限定するものではないが、表記「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０２」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０３」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０４」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０５」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０７」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０８」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０９」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１０」、および「ＨＬＡ−Ａ＊０２：１１」を含む、この名称付けのシステムに係る「ＨＬＡ−Ａ＊０２」で開始する表記で同定されるＨＬＡタンパク質を指す。
【０３６７】
自己抗原の他の例としては、限定するものではないが、アクアポリン水チャネル（たとえばアクアポリン−４−水チャネル（ＡＯＰ４）、Ｈｕ、Ｍａ２、コラプシン反応媒介タンパク質５（ＣＲＭＰ５）、およびアンフィファイシン、電位開口型カリウムチャネル（ＶＧＫＣ）、Ｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５メチル−４−イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡＲ）、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、抗Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＲ１サブユニット）、Ｒｈ血液型抗原、Ｉ抗原、デスモグレイン１または３（Ｄｓｇ１／３）、ＢＰ１８０、ＢＰ２３０、アセチルコリン、ニコチン性シナプス後受容体、チロトロピン受容体、血小板インテグリン、ＧｐＩＩｂ：ＩＩＩａ、コラーゲン（たとえばコラーゲンα−３（ＩＶ）鎖など）、リウマトイド因子、カルパスタチン、シトルリン化タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド、α−βクリスタリン、ＤＮＡ、ヒストン、リボソーム、ＲＮＰ、組織トランスグルタミナーゼ（ＴＧ２）、内因子、６５−ｋＤａ抗原、ホスファチジルセリン、リボソームのリンタンパク質、抗好中球細胞質抗体、Ｓｃｌ−７０、Ｕ１−ＲＮＰ、ＡＮＡ、ＳＳＡ、抗ＳＳＢ、抗核抗体（ＡＮＡ）、好中球細胞質抗体（ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）（ＡＮＣＡ）、Ｊｏ−１、抗ミトコンドリア抗体、ｇｐ２１０、ｐ６２、ｓｐ１００、抗リン脂質抗体、Ｕ１−７０ｋｄｓｎＲＮＰ、ＧＱ１ｂガングリオシド、ＧＭ１、アシアロＧＭ１、ＧＤ１ｂ、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）、抗ＬＫＭ（抗ｌｉｖｅｒ−ｋｉｄｎｅｙ  ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ）−１抗体（ＡＬＫＭ−１）、抗肝臓サイトゾル抗体−１（ＡＬＣ−１）、ＩｇＡ  抗筋内膜抗体、好中球顆粒タンパク質、連鎖球菌細胞壁抗原、胃壁細胞の内因子、インスリン（ＩＡＡ）、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＡまたはＧＡＤ）、ならびにタンパク質チロシンホスファターゼ（たとえばＩＡ２またはＩＣＡ５１２など）、ＰＬＡ２Ｒ１、およびＴＨＳＤ７Ａ１が挙げられる。
【０３６８】
一実施形態では、抗原は、がん抗原である。
【０３６９】
本明細書で使用される場合、用語「がん抗原」は、癌細胞により差次的に発現され、よってがん細胞を標的とするために利用され得る抗原を指す。がん抗原は、明らかに腫瘍に特異的な免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これら抗原のいくつかは、必ずしも発現されるわけではないが、正常な細胞によりコードされる。これらの抗原は、正常な細胞において通常サイレントである（発現しない）抗原、特定の分化段階でのみ発現される抗原、胚性および胎生期の抗原などの一時的に発現される抗原として特徴づけることができる。他のがん抗原は、変異細胞の遺伝子、たとえばがん遺伝子（たとえば活性化したｒａｓがん遺伝子）、サプレッサー遺伝子（たとえば変異型ｐ５３）によりコードされ、かつ内部欠失または染色体転座からもたらされる融合タンパク質であり得る。さらなる他のがん抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に担持される遺伝子などのウイルス性の遺伝子によりコードされ得る。多くの腫瘍抗原が、複数の固形腫瘍の観点から定義されている：免疫により定義されたＭＡＧＥ１、２、および３；ＭＡＲＴ−ｌ／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐｌ００、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＨＥＲ２、ムチン（すなわちＭＵＣ−１）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、および前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）。さらに、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、およびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によりコードされているものなどのウイルスのタンパク質が、肝細胞癌、リンパ腫、および子宮頸がんのそれぞれの発達に重要であることが示されている。
【０３７０】
他のがん抗原としては、限定するものではないが、７０７−ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（α（ａ）−フェトプロテイン）、ＡＲＴ−４（Ｔ４細胞により認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原；ｂ−カテニン／ｍ，ｂ−カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ−ａｂｌ（ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｒｅｇｉｏｎ−Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（ＣＤ分類１９）、ＣＤ２０（ＣＤ分類２０）、ＣＤ２２（ＣＤ分類２２）、ＣＤ３０（ＣＤ分類３０）、ＣＤ３３（ＣＤ分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（ＣＤ分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（メラノーマ上にてＣＴＬにより認識される抗原）、ＣＡＰ−１（癌胎児抗原ペプチド−１）、ＣＡＳＰ−８（カスパーゼ−８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＣＴ（がん／精巣（抗原））、Ｃｙｐ−Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原メラノーマ）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖｌｌｌ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ−２（上皮系糖タンパク質２）、ＥＧＰ−４０（上皮系糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス性がん遺伝子ホモログ−２、−３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２変異型）、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児性アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、ＧｎＴ−Ｖ（Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質  １００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ（ｈｅｌｉｃｏｓｅ）抗原）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体−２／神経性；ＥＧＦＲ２としても知られている）、ＨＬＡ−Ａ（ヒト白血球抗原−Ａ）ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０−２Ｍ（ヒートショックタンパク質７０−２変異型）、ＨＳＴ−２（ヒト印環腫瘍−２）、ｈＴＥＲＴまたはｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管内カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２（インターロイキン１３受容体サブユニット  α−２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（ＬＤＬ受容体／ＧＤＰ−Ｌ−フコース：ｂ−Ｄ−ガラクトシダーゼ２−ａ−Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗体）、Ｌ１  ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（メラノーマ抗原）、ＭＡＧＥ−Ａ１（メラノーマ関連抗原１）、メソテリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ（Ｔ細胞により認識されるメラノーマ抗原−Ｉ／メラノーマ抗原Ａ）、ＭＣ１  Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ミオシン／ｍ（ミオシン変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ−１、−２、−３（ｍｅｌａｎｏｍａ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ  ｍｕｔａｔｅｄ１、２、３）、ＮＡ８８−Ａ（ＮＡ  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔ  Ｍ８８）、ＮＫＧ２Ｄ（Ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌ��ｒ  ｇｒｏｕｐ  ２，  ｍｅｍｂｅｒ  Ｄ）リガンド、ＮＹ−ＢＲ−１（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｂｒｅａｓｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ１）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ−１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（ｐｒｏｔｅｉｎ  １５）、ｐ１９０  ｍｉｎｏｒ  ｂｃｒ−ａｂｌ（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  １９０ＫＤ  ｂｃｒ−ａｂｌ）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺に特異的な膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎臓抗原）、ＲＵ１またはＲＵ２（ｒｅｎａｌ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ１または２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ−１またはＳＡＲＴ−３（扁平上皮抗原拒絶腫瘍１または３）、ＳＳＸ１、−２、−３、４（滑膜肉腫Ｘ１、−２、−３、−４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ−７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリリン酸イソメラーゼ変異型）、ＴＲＰ−１（チロシナーゼ関連タンパク質１またはｇｐ７５）、ＴＲＰ−２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ−２／イントロン２）、ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、またはＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）が挙げられる。
【０３７１】
一実施形態では、抗原は、感染した細胞に関連している。
【０３７２】
本明細書で使用される場合、用語「感染した細胞」は、細胞の質、特徴、または状態に不利に影響を与える何らかのものが混入した細胞を指す。
【０３７３】
一実施形態では、抗原は、ウイルスに感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、細菌に感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、真菌に感染した細胞に関連している。別の実施形態では、抗原は、寄生虫に感染した細胞に関連している。
【０３７４】
別の実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、吸入されるアレルゲン、摂取されるアレルゲン、または接触アレルゲンに特異的である。
【０３７５】
一実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を含む群から選択される抗原に特異的である。
【０３７６】
一実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、卵白アルブミン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３７７】
別の実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、ＭＯＧ、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３７８】
別の実施形態では、第２の受容体、好ましくは第２のＣＡＲは、ＩＩ型コラーゲン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的である。
【０３７９】
一実施形態では、本発明のＣＡＲは、第１の細胞内シグナリングドメインを含み、第２の受容体は、明確に異なる第２の細胞内シグナリングドメインを含む。第１の実施形態では、本発明のＣＡＲは、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメイン（たとえばＣＤ３ζなど）を含み、第２の受容体は、共刺激シグナリングドメイン（たとえば４−１ＢＢ、ＣＤ２８の共刺激シグナリングドメイン、または４−１ＢＢおよびＣＤ２８の共刺激シグナリングドメインの組み合わせなど）を含む。第２の実施形態では、本発明のＣＡＲは、共刺激シグナリングドメイン（たとえば４−１ＢＢ、ＣＤ２８の共刺激シグナリングドメイン、または４−１ＢＢおよびＣＤ２８の共刺激シグナリングドメインの組み合わせなど）を含み、第２の受容体は、Ｔ細胞プライマリーシグナリングドメイン（たとえばＣＤ３ζなど）を含む。
【０３８０】
結果として、これらの実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団の完全な活性化は、ＩＬ−２３Ｒへの本発明のＣＡＲの結合、およびこれに向けられるリガンドへの第２の受容体の結合の両方を必要とする。
【０３８１】
一実施形態では、第２の受容体により認識されるリガンドは、疾患状態の組織もしくは臓器、または自己免疫応答部位で発現されるかまたは存在する。結果として、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞に対する抑制的な活性が、上記リガンドがＴｒｅｇ細胞集団の細胞に存在し第２の受容体により認識される際に、疾患状態の組織もしくは臓器、または自己免疫応答部位でのみ誘導される。
【０３８２】
一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、キメラ受容体により認識されるＩＬ−２３Ｒとは明確に異なるリガンドを認識する細胞外リガンド結合ドメインをさらに含む。一実施形態では、上記リガンド結合ドメインは、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０３８３】
一実施形態では、本発明のキメラ受容体は、ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインを含む細胞外リガンド結合ドメイン、および上記ＩＬ−２３Ｒとは明確に異なるリガンドを認識する別のリガンド結合ドメインを含む。一実施形態では、上記リガンド結合ドメインは、ＩＬ−２３Ｒおよび明確に異なるリガンドの両方を認識する二機能性抗体である。
【０３８４】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞集団は、ネイティブなＴ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化により得られる。
【０３８５】
また本発明は、本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸配列であって、（ｉ）細胞外ＩＬ−２３Ｒ結合ドメインの核酸配列、（ｉｉ）任意選択で細胞外ヒンジドメインの核酸配列、（ｉｉｉ）任意選択で膜貫通ドメインの核酸配列、（ｉｖ）細胞内シグナリングドメインの１つ以上の核酸配列、および（ｖ）任意選択でＴａｇおよび／またはリーダー配列の核酸配列、を含む、核酸配列に関する。
【０３８６】
本発明の別の目的は、本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターである。
【０３８７】
本発明で使用され得るベクターの例としては、限定するものではないが、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、およびコスミドが挙げられる。
【０３８８】
ウイルスベクターの技術は、当該分野でよく知られており、たとえばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスとしては、限定するものではないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが挙げられる。
【０３８９】
一般的に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択可能なマーカー（たとえば参照により本明細書中に組み込まれる、国際特許公開公報第０１／９６５８４号；同第０１／２９０５８号；および米国特許第６，３２６，１９３号）を含む。
【０３９０】
多くのウイルスベースの系が、哺乳類細胞の中へ遺伝子を伝達するために開発されている。たとえば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムの簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該分野で知られる技術を使用して、ベクター中に挿入でき、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次に、組み換えウイルスを単離し、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかにおいて対象の細胞へと送達できる。多くのレトロウイルス系が当該分野で知られている。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。多くのアデノウイルスベクターが、当該分野で既知である。一実施形態では、レンチウイルスが使用される。
【０３９１】
さらなる転写的に活性なエレメント、たとえばプロモーターおよびエンハーサーが、転写の開始の頻度を調節し得る。通常、コアプロモート（ｃｏｒｅ  ｐｒｏｍｏｔｅ）に関しては、これらは、多くのプロモーターが開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが近年示されているが、開始部位から３０〜１１０ｂｐ上流の領域に位置しており、エンハーサーエレメントは通常、開始部位の５００〜２０００ｂｐ上流に位置している。プロモーターエレメント間の間隔はしばしば柔軟であり、これによりプロモーターの機能は、エレメントが互いに対し反転または移動する際に保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が減少し始める前に、５０ｂｐの距離に増大し得る。プロモーターに応じて、個々のエレメントが協同的にまたは独立して機能して転写を活性化し得ると思われる。
【０３９２】
他の適切なプロモーターの例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作動的に連結されたいずれかのポリヌクレオチド配列の高いレベルの発現を駆動できる強力な構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、ＥＦ−ｌａ（伸長増殖因子１ａ：Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−ｌａ）である。適切なプロモーターの別の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。しかしながら、限定するものではないが、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルスウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター、たとえば限定するものではないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターなどを含む、他の構成的なプロモーター配列もまた使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導可能なプロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導可能なプロモーターの使用は、当該発現が望ましい場合に作動的に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにし、または発現が望ましくない場合にこの発現をオフにできる。誘導可能なプロモーターの例としては、限定するものではないが、メタロチオネイン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。さらに、２つ以上の遺伝子の効率的かつ協調的な発現を可能にする二方向性のプロモーターもまた、本発明の対象であり得る。二方向性プロモーターの例としては、限定するものではないが、ｉ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）のゲノムに由来する第１の最小プロモーター配列、およびｉｉ）動物の遺伝子に由来する全長の効率的なプロモーター配列を含む二方向性プロモーターを開示する、参照により本明細書中に組み込まれる米国特許公開公報第２００６２００８６９号においてＬｕｉｇｉ  Ｎａｌｄｉｎｉが記載するプロモーターが挙げられる。
【０３９３】
ＣＡＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、Ｔ細胞に導入される発現ベクターはまた、ＣＤ３４もしくはレポーター遺伝子またはその両方などのいずれかの選択可能なマーカー遺伝子も含んで、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されると考えられる細胞集団由来の細胞の発現の同定および選択を容易にすることができる。他の態様では、選択可能なマーカーは、ＤＮＡの別々の断片上に担持され、共トランスフェクションの手法で使用されてよい。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方は、宿主細胞での発現を可能にするように、適切な制御配列に隣接され得る。有用な選択可能なマーカーとしては、たとえば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
【０３９４】
本発明のいくつかの実施形態では、自殺遺伝子技術が使用され得る。作用機構に応じて異なる自殺遺伝子技術が、当該分野で記載されている（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ２０１４  （５）：  ２５４）。非毒性薬物を毒性薬物に変換する遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）の例としては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ）およびシトシンデアミナーゼ（ＣＤ）が挙げられる。他の例は、たとえば誘導可能なＦａｓ（ｉＦａｓ）または誘導可能なカスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）の系などのアポトーシス性成分に連結された薬物結合ドメインから構成されるキメラタンパク質である。他の例としては、たとえば抗ｃ−ｍｙｃ抗体の投与によりそれらの欠失を誘導するように操作された細胞の表面でｃ−ｍｙｃの過剰発現を誘導するなどの、治療用抗体により媒介される系が挙げられる。ＥＧＦＲの使用は、ｃ−ｍｙｃ系と比較して類似の系として記載されている。一実施形態では、使用される自殺遺伝子技術は、国際特許公開公報第２０１３１５３３９１号または同第２０１６１２０２１６号（参照により本明細書中に組み込まれる）に記載される技術である。国際特許公開公報第２０１３１５３３９１号は、マーカー部分（たとえばＣＤ３４の最小エピトープなど）、および自殺部分を含むポリペプチドを記載し、ここで自殺部分は、上記ポリペプチドを発現する抗体がたとえばリツキシマブなどの溶解性抗体を使用して選択的に殺滅され得るような、ＣＤ２０由来のエピトープに基づく最小エピトープを含む。より具体的には、上記ペプチドは、式Ｓｔ−Ｒ１−Ｓ１−Ｑ−Ｓ２−Ｒ２（式中、Ｓｔは、ポリペプチドが標的細胞の表面で発現される際に、細胞表面からＲエピトープおよびＱエピトープを突出させる軸配列（ｓｔａｌｋ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）であり；Ｒ１およびＲ２は、リツキシマブ結合エピトープであり；Ｓ１およびＳ２は、同じかまたは異なり得る任意選択なスペーサー配列であり；ならびにＱは、ＱＢＥＮＤ−１０結合エピトープである）を有し得る。このようなペプチドの例は、配列番号：７６：ＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰ  ＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＷである。国際特許公開公報第２０１６１２０２１６号は、細胞の選別および細胞の欠失を可能にするように修飾された細胞外結合ドメイン（ｓｃＦｖ）を含むＣＡＲを記載しており、ここで上記修飾は、ｓｃＦｖ内に１つ以上の選択されたエピトープを挿入することからなり、上記エピトープは、１つ以上の特異的な抗体により認識される特異性を有する。特に、上記選択されたエピトープは、上記ＣＡＲを発現する細胞がたとえばリツキシマブなどの溶解性抗体を使用して殺滅され得るような、ＣＤ２０由来のエピトープであり得る。
【０３９５】
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するためおよび制御配列の機能性を評価するために使用される。一般的に、レポーター遺伝子は、レシピエントの生物または組織に存在せずまたはこれにより発現されず、かつ、その発現がいくつかの容易に検出できる性質、たとえば酵素の活性により提示されるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の適切な時間にアッセイされる。適切なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌性アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子（たとえばＵｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：  ７９−８２）をコードする遺伝子を含み得る。適切な発現系は、よく知られており、既知の技術を使用して調製されてよく、または商業的に入手され得る。一般的に、レポーター遺伝子の最も高いレベルの発現を示す最小５’隣接領域を有するコンストラクトが、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーターにより駆動される転写を調節する性質に関して作用物質を評価するために使用され得る。
【０３９６】
遺伝子を細胞中に導入および発現する方法は、当該分野でよく知られている。発現ベクターの文脈では、ベクターは、当該分野のいずれかの方法により、宿主細胞、たとえば哺乳類細胞、細菌細胞、酵母細胞、または昆虫細胞に容易に導入され得る。たとえば発現ベクターは、物理的手段、化学的手段、または生物学的手段により宿主の中に移動され得る。
【０３９７】
ポリヌクレオチドを宿主細胞へ導入するための物理的な方法としては、リン酸塩沈殿、リポフェクション、パーティクル・ガン、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクターおよび／または外来性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該分野でよく知られている。たとえばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００１，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照されたい。ポリヌクレオチドを宿主の中へ導入するための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
【０３９８】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞の中へ導入するための生物学的な方法としては、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、遺伝子を哺乳類、たとえばヒトの細胞へ挿入することに関して最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。たとえば、米国特許第５，３５０，６７４号および同第５，５８５，３６２号を参照されたい。
【０３９９】
ポリヌクレオチドを宿主細胞の中へ導入するための化学的な方法としては、コロイド分散系、たとえばマクロ分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフィア、ビーズ、ならびに水中油型のエマルジョン、ミセル、混合型ミセル、およびリポソームを含む脂質ベースの系が挙げられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおける送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド状の系は、リポソーム（たとえば人工膜ビヒクル）である。
【０４００】
非ウイルス性送達システムが利用される場合、例示的な送達ビヒクルはリポソームである。脂質製剤の使用が、核酸の宿主細胞中への導入（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｖｏで）に関して考慮される。別の態様では、核酸は、脂質と結合し得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの中の水に封入されてよく、リポソームの脂質二重層内に散在されてよく、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と結合している連結分子を介してリポソームに結合されてよく、リポソーム中に捕捉されてよく、リポソームと複合体形成してよく、脂質を含む溶液に分散されてよく、脂質と混合されてよく、脂質と組み合わせられてよく、脂質中に懸濁物として含まれてよく、ミセルと共に含まれるかもしくはミセルと複合体形成されてよく、または他の形式で脂質と結合されてよい。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクターに関連する組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。たとえば、これらは、ミセルとして二層構造中に存在してよく、または「崩壊した」構造で存在してよい。これらはまた単に、溶液中に散在されてよく、おそらくは大きさまたは形状において均一でない凝集物を形成し得る。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る、脂肪の物質である。たとえば、脂質は、細胞質で自然に生じる脂肪小滴、および長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体を含む化合物のクラス、たとえば脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドを含む。
【０４０１】
使用に適切な脂質は、商業的な供給源から入手できる。たとえば、ジミリステルホスファチジルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯから入手でき、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ  ＆  Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，  ＮＹ）から入手でき；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから入手でき、ジミリステルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，  ＡＬ）から入手できる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、約−２０℃で保存され得る。クロロホルムは、メタノールよりも容易に蒸発するため、最適の溶媒として使用される。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集物の作製により形成される様々な単層および多重層の脂質ビヒクルを包有する一般的な用語である。リポソームは、リン脂質二重層の膜および内部の水性媒体を伴う小胞構造を有することを特徴とし得る。多重層リポソームは、水性媒体により分けられる複数の脂質層を有する。これらはリン脂質が過剰な水溶液に懸濁される際に、自然に形成する。この脂質成分は、閉鎖した構造の形成前に自身で再配列し、脂質二重層間に水および溶解した溶質を捕捉する（Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５：  ５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造よりも溶液中で異なる構造を有する組成物もまた包有される。たとえば脂質は、ミセル構造を想定してよく、または単に脂質分子の不均一な凝集物として存在してよい。リポフェクタミン―核酸の複合体もまた企図される。
【０４０２】
外来性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法に関わらず、宿主細胞中の組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが行われ得る。このようなアッセイとしては、たとえば、サザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲなどの当業者によく知られている「分子生物学的な」アッセイ；たとえば免疫学的な手段（ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロット）によりもしくは本発明の範囲内にある作用物質を同定するための本明細書に記載されるアッセイにより、特定のペプチドの存在の有無を検出するなどの「生化学的なアッセイ」が挙げられる。
【０４０３】
一実施形態では、本発明のＴ細胞は、ＲＮＡの導入を介して修飾される。一実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されたＲＮＡ  ＣＡＲは、一時的なトランスフェクションの形態として細胞に導入され得る。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により作製されるテンプレートを使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写により産生される。いずれかの供給源由来の目的のＤＮＡは、適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｍＲＮＡ合成のために、ＰＣＲによりテンプレートに直接変換され得る。ＤＮＡの供給源は、たとえば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列、または他のいずれかのＤＮＡの適切な供給源であり得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写に望ましいテンプレートは、本発明のＣＡＲである。
【０４０４】
一実施形態では、ＰＣＲで使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノム由来の天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。一実施形態では、ＤＮＡは、完全長の目的の遺伝子または遺伝子の一部である。遺伝子は、５’および／または３’の非翻訳領域（ＵＴＲ）の一部または全てを含み得る。遺伝子は、エクソンおよびイントロンを含み得る。一実施形態では、ＰＣＲで使用されるＤＮＡは、ヒトの遺伝子である。別の実施形態では、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、５’および３’のＵＴＲを含むヒトの遺伝子である。あるいは、ＤＮＡは、天然に存在する生物では通常発現されない人工的なＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工的なＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために共にライゲートされる遺伝子部分を含む配列である。共にライゲートされる遺伝子部分は、単一の生物由来または１超の生物由来であり得る。
【０４０５】
ＰＣＲは、トランスフェクションに使用されるｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のためのテンプレートを作製するために使用される。ＰＣＲを行うための方法は、当該分野でよく知られている。ＰＣＲで使用されるプライマーは、ＰＣＲでテンプレートとして使用されるＤＮＡ領域と実質的に相補的である領域を有するように設計される。「実質的に相補的な」は、本明細書で使用される場合、プライマー配列における塩基の大部分もしくは全てが相補的であるか、または１つ以上の塩基が非相補的もしくは一致していないヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲで使用されるアニーリング条件下で意図したＤＮＡ標的とアニールまたはハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡテンプレートのいずれかの部分と実質的に相補的であるように設計され得る。たとえば、プライマーは、５’および３’ＵＴＲを含む、細胞において通常転写される遺伝子の部分（オープンリーディングフレーム）を増幅するように設計され得る。プライマーはまた、目的の特定のドメインをコードする遺伝子の部分を増幅するように設計され得る。一実施形態では、プライマーは、５’および３’ＵＴＲの全てまたは一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコード領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当該分野でよく知られている合成方法により作製される。
【０４０６】
「フォワードプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流にあるＤＮＡテンプレート上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列に対し、５’側の位置を指す。「リバースプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡテンプレートと実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に対して増幅されるＤＮＡ配列に対し、３’側の位置を指す。
【０４０７】
ＰＣＲに有用なＤＮＡポリメラーゼは、本明細書で開示される方法において使用され得る。試薬およびポリメラーゼは、多くの供給源から市販されている。
【０４０８】
安定性および／または翻訳の効率を促進する性質を有する化学構造もまた使用され得る。ＲＮＡは、好ましくは、５’および３’ＵＴＲを有する。一実施形態では、５’ＵＴＲは、０〜３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加される５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、限定するものではないが、ＵＴＲの異なる領域にアニールするＰＣＲ用のプライマーを設計することを含む、異なる方法によって変更され得る。この手法を使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクションの後に最適な翻訳効率を達成するために必要な５’および３’ＵＴＲの長さを改変し得る。５’および３’ＵＴＲは、目的の遺伝子に関し天然に存在する内在性の５’および３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の遺伝子に対し内在性でないＵＴＲ配列が、ＵＴＲ配列をフォワードプライマーおよびリバースプライマーに組み込むことにより、または他のいずれかのテンプレートの修飾により、付加され得る。目的の遺伝子に対し内在性でないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率の改変に有用であり得る。たとえば、３’ＵＴＲ配列中のＡＵリッチエレメントは、ｍＲＮＡの安定性を減少させ得ることが知られている。よって、３’ＵＴＲは、当該分野でよく知られているＵＴＲの性質に基づき、転写されたＲＮＡの安定性を増大させるように選択または設計され得る。
【０４０９】
一実施形態では、５’ＵＴＲは、内在性遺伝子のコザック配列を含み得る。あるいは、目的の遺伝子に対して内在性でない５’ＵＴＲが上述ＰＣＲにより付加されている場合、コンセンサスなコザック配列が、５’ＵＴＲ配列を付加することにより再設計され得る。コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写物の翻訳の効率を増大させ得るが、効率的な翻訳を可能にするために全てのＲＮＡにとっては必要ではないようである。多くのＲＮＡに関するコザック配列の必要要件は、当該分野で知られている。他の実施形態では、５’ＵＴＲは、そのＲＮＡゲノムが細胞中で安定な、ＲＮＡウイルス由来であり得る。他の実施形態では、様々なヌクレオチド類縁体が、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために３’または５’ＵＴＲで使用され得る。
【０４１０】
遺伝子クローニングを必要とすることなくＤＮＡテンプレートからのＲＮＡの合成を可能にするために、転写のプロモーターは、転写される配列の上流でＤＮＡテンプレートに結合されるべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に付加される際に、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物へと組み込まれるようになる。１つの好ましい実施形態では、プロモーターは、本明細書中の他で記載されるＴ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターとしては、限定するものではないが、Ｔ３およびＳＰ６のＲＮＡポリメラーゼプロモーターが挙げられる。Ｔ７、Ｔ３、およびＳＰ６のプロモーターにとってコンセンサスなヌクレオチド配列は、当該分野で知られている。
【０４１１】
一実施形態では、ｍＲＮＡは、細胞中のリボソーム結合、翻訳の開始、およびｍＲＮＡの安定性を決定する５’末端上のキャップおよび３’ポリ（Ａ）尾部の両方を有する。環状ＤＮＡテンプレート、たとえばプラスミドＤＮＡにて、ＲＮＡポリメラーゼ産物は、真核細胞中の発現に適切でない長い鎖状体の産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線状にされたプラスミドＤＮＡの転写は、それが転写後にポリアデニル化される場合であっても、真核生物のトランスフェクションにおいて有効でない通常の大きさのｍＲＮＡをもたらす。
【０４１２】
線形のＤＮＡテンプレートで、ファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼは、テンプレートの最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長し得る（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ  ａｎｄ  Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １３：６２２３−３６  （１９８５）；  Ｎａｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２７０：  １４８５−６５  （２００３）。
【０４１３】
ＤＮＡテンプレート中でのポリＡ／Ｔストレッチ（Ｔ  ｓｔｒｅｔｃｈ）の統合の従来の方法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定性をもたらし、これが、細菌細胞から得られるプラスミドＤＮＡテンプレートに多くの場合欠失および他の異常が多く入り込む理由である。これは、クローニングの手法を難しく時間がかかるものにするだけでなく、多くの場合信頼できなくする。よって、クローニングを用いることなくポリＡ／Ｔ３’ストレッチとのＤＮＡテンプレートの構築を可能にする方法が非常に望まれている。
【０４１４】
転写ＤＮＡテンプレートのポリＡ／Ｔセグメントは、１００ＴテールなどのポリＡ尾部（サイズは、５０〜５０００Ｔであり得る）を含むリバースプライマーを使用することによりＰＣＲの間に、または限定するものではないがＤＮＡのライゲーションもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏ組み換えを含む他のいずれかの方法によりＰＣＲの後に、作製され得る。ポリ（Ａ）尾部はまた、ＲＮＡに安定性を提供し、それらの分解を低減する。一般的に、ポリ（Ａ）尾部の長さは、転写されるＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態では、ポリ（Ａ）尾部は、１００〜５０００アデノシンである。
【０４１５】
ＲＮＡのポリ（Ａ）尾部は、大腸菌のポリＡポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）などのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写の後にさらに伸長され得る。一実施形態では、１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチドへとポリ（Ａ）尾部の長さを増大させることは、ＲＮＡの翻訳効率の約２倍の増加をもたらす。さらに、３’末端への異なる化学基の’付着は、ｍＲＮＡの安定性を増大し得る。このような付着は、修飾された／人工的なヌクレオチド、アプタマー、および他の化合物を含み得る。たとえばＡＴＰアナログが、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）尾部に組み込まれ得る。ＡＴＰアナログは、ＲＮＡの安定性をさらに増大し得る。
【０４１６】
ＲＮＡ上の５’キャップもまた、ＲＮＡ分子に安定性を提供する。好ましい実施形態では、本明細書で開示される方法により産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当該分野で知られており、本明細書中記載される技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．，  ２９：４３６−４４４  （２００１）；  Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＲＮＡ，  ７：  １４６８−９５  （２００１）；  Ｅｌａｎｇｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  ３３０：９５８−９６６  （２００５））。
【０４１７】
本明細書で開示される方法により産生されるＲＮＡはまた、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始しかつ翻訳の開始を促進する、いずれかのウイルス配列、染色体配列、または人工的に設計された配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤、および界面活性剤などの細胞の透過性およびバイアビリティを促進する因子を含み得る、細胞のエレクトロポレーションに適したいずれかの溶質が含まれ得る。
【０４１８】
ＲＮＡは、多くの異なる方法のいずれか、たとえば限定するものではないがエレクトロポレーション（Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｃｏｌｏｇｎｅ，  Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ  ８３０  （ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  Ｍａｓｓ．）、またはＧｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ  ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，  Ｄｅｎｖｅｒ，  Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，  Ｈａｍｂｕｒｇ  Ｇｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用する陽イオン性リポソーム介在性トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド介在性トランスフェクション、または微粒子銃による粒子送達システム、たとえば「遺伝子銃」（たとえばＮｉｓｈｉｋａｗａ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，  １２（８）：８６１−７０  （２００１）を参照）を含む市販の方法、を使用して、標的細胞に導入され得る。
【０４１９】
一実施形態では、ＣＡＲ配列は、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターを使用して細胞に送達される。ＣＡＲを発現するレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターは、担体として形質導入された細胞、または封入されるか、結合されるか、もしくは裸のベクターの無細胞の局所的送達もしくは全身的送達を使用して、異なる種類の真核細胞中にならびに組織および生物全体の中に送達され得る。使用される方法は、安定な発現が必要とされるかまたは十分である、いずれかの目的のためであり得る。
【０４２０】
別の実施形態では、ＣＡＲ配列は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡを使用して細胞に送達される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写されたｍＲＮＡ  ＣＡＲは、担体としてトランスフェクトされた細胞、または封入されるか、結合されるか、もしくは裸のｍＲＮＡの、無細胞の局所的送達もしくは全身的送達を使用して、異なる種類の真核細胞中にならびに組織および生物全体の中に送達され得る。使用される方法は、一過的発現が必要とされるかまたは十分である、いずれかの目的のためであり得る。
【０４２１】
別の実施形態では、望ましいＣＡＲは、トランスポゾンにより細胞で発現され得る。
【０４２２】
本発明のＴｒｅｇ細胞の増殖および遺伝子修飾の前に、Ｔ細胞の供給源が、対象から入手される。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染症の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、多くの供給源から入手され得る。本発明の特定の実施形態では、当該分野で入手可能な任意の数のＴ細胞株が使用され得る。本発明の特定の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に知られる任意の数の技術を使用して対象から収集される血液の単位から得ることができる。一実施形態では、個体の循環血液由来の細胞が、アフェレーシスにより得られる。アフェレーシス産物は通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核の白血球細胞、赤血球細胞、および血小板を含むリンパ球を含む。一実施形態では、個体の循環血液由来の細胞は、白血球アフェレーシスにより得られる。
【０４２３】
一実施形態では、白血球アフェレーシスにより収集された細胞を、洗浄して血漿フラクションを除去し、その後の処理ステップのための適切なバッファーまたは培地中に載置し得る。本発明の一実施形態では、細胞を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠き、かつマグネシウムを欠いてよく、または全てではないが多くの二価の陽イオンを欠いてもよい。洗浄の後、細胞は、たとえばＣａ２＋フリー、Ｍｇ２＋フリーのＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、またはバッファーを伴うかもしくは伴わない他の生理食塩水などの、様々な生体適合性のバッファーに再懸濁され得る。あるいは、白血球アフェレーシスサンプルの望ましくない成分が、除去されてよく、細胞が、培養培地に直接再懸濁されてもよい。
【０４２４】
別の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球細胞を溶解することおよび、たとえばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離により、または対向流遠心溶出法（Ｃｏｕｎｔｅｒｆｌｏｗ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｅｌｕｔｒｉａｔｉｏｎ；ＣＣＥ）により、単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離される。Ｔ細胞の特定の下位集団が、ポジティブまたはネガティブな選択技術によりさらに単離され得る。たとえば、一実施形態では、Ｔ細胞は、望ましいＴ細胞のポジティブな選択にとって十分な期間の間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち３ｘ２８）にコンジュゲートしたビーズとのインキュベーションにより単離される。一実施形態では、期間は、約３０分間である。さらなる実施形態では、この期間は、３０分〜３６時間またはそれより長い範囲およびそれらの間の全ての整数の値の範囲である。さらなる実施形態では、この期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらなる別の好ましい実施形態では、この期間は、１０〜２４時間である。１つの好ましい実施形態では、インキュベーション時間は２４時間である。より長いインキュベーション時間が、他の細胞種と比較して少ないＴ細胞が存在するいずれかの状況においてＴ細胞を単離するために使用され得る。よって、この時間を単純に短縮または長くすることにより、Ｔ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させることができ、および／または、Ｔ細胞に対するビーズの比率を増加または減少させること（本明細書でさらに記載されるように）により、Ｔ細胞の下位集団が、培養開始時またはプロセスの間の他の時点でポジティブまたはネガティブに（ｆｏｒ  ｏｒ  ａｇａｉｎｓｔ）優先的に選択され得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることにより、Ｔ細胞の下位集団が、培養開始時または他の望ましい時点でポジティブまたはネガティブに優先的に選択され得る。当業者は、複数回のラウンドの選択もまた本発明の観点で使用され得ることを理解するであろう。
【０４２５】
別の実施形態では、活性化および増殖のプロセスにおいて選択手法を行い「選択されない」細胞を使用することが望ましいかもしれない。「選択されない」細胞はまた、さらなるラウンドの選択に供され得る。ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブ選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられる抗体の組み合わせを用いて達成され得る。１つの方法は、ネガティブ選択される細胞に存在する細胞表面マーカーに向けられるモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブな磁性イムノ接着またはフローサイトメトリーを介したセルソーティングおよび／または選択である。たとえば、ネガティブ選択によりＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは通常、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態では、Ｔ制御性細胞は、抗ＣＤ２５がコンジュゲートしたビーズまたは他の同様の選択方法により、枯渇される。
【０４２６】
ポジティブまたはネガティブ選択による細胞の望ましい集団の単離のために、細胞および表面（たとえばビーズなどの粒子）の濃度は、多様であり得る。特定の実施形態では、細胞およびビーズの最大接触を確保するために、ビーズおよび細胞が共に混合される体積を著しく減少させる（すなわち細胞の濃度を増大させる）ことが望ましいかもしれない。たとえば、一実施形態では、２０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。一実施形態では、１０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億個の細胞／ｍｌ超が使用される。さらなる実施形態では、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１．２５億または１．５億個の細胞／ｍｌの濃度が使用され得る。高い濃度を使用することは、細胞収率、細胞の活性化、および細胞の増大をもたらし得る。さらに、高濃度の細胞の使用は、ＣＤ２８ネガティブＴ細胞などの目的の抗原を弱く発現し得る細胞、または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（たとえは白血病の血液、腫瘍組織など）由来の細胞をより効率的に捕捉することを可能にする。このような細胞の集団は、治療上の値を有し得、入手することが望ましい。
【０４２７】
刺激に関するＴ細胞はまた、洗浄ステップの後に凍結され得る。理論により拘束されるものではないが、凍結しその後解凍するステップは、細胞集団において顆粒球を除去しかつ単球をある程度まで除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄ステップの後に、細胞は、凍結溶液に懸濁され得る。多くの凍結溶液およびパラメータが当該分野で知られており、この文脈で有用であり、１つの方法は、２０％のＤＭＳＯおよび８％のヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または１０％のデキストラン４０および５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミン、および７．５％のＤＭＳＯ、もしくは３１．２５％のＰｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％のデキストロース  ５％、０．４５％のＮａＣｌ、１０％のデキストラン４０、および５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミン、および７．５％のＤＭＳＯを含む培養培地、または、たとえばＨｅｓｐａｎおよびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適切な細胞凍結培地を使用することを含み、次に細胞は、毎分１℃の速度で−８０℃に凍結され、液体窒素保存タンクの蒸気相中で保存される。制御された凍結の他の方法、および−２０℃または液体窒素での即座の制御されていない凍結が使用され得る。
【０４２８】
特定の実施形態では、凍結保存された細胞は、本明細書中記載されるように解凍および洗浄され、活性化の前に室温で１時間置かれる。
【０４２９】
本明細書で記載される増殖した細胞が必要とされ得る場合より前の時点での、対象由来の血液サンプルまたは白血球アフェレーシス産物の収集もまた、本発明の文脈において企図される。同様に、増殖される細胞の供給源は、必要な任意の時点で収集されてよく、Ｔ細胞などの望ましい細胞を、本明細書で記載されるものなどのＴ細胞療法から利点を得るであろういずれかの数の疾患または病態のＴ細胞療法で後に使用するために、単離および凍結できる。一実施形態では、血液サンプルまたは白血球アフェレーシスは、全般的に健常な対象から採取される。特定の実施形態では、血液サンプルまたは白血球アフェレーシスは、疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない全般的に健康な対象から採取され、目的の細胞が単離され、後での使用のために凍結される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、増殖され、凍結され、または後に使用され得る。
【０４３０】
望ましいＣＡＲを発現するためのＴｒｅｇ細胞の遺伝子修飾の前または後にかかわらず、Ｔ細胞は、一般的に、たとえば参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第６，３５２，６９４号；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号；および米国特許公開公報第２００６０１２１００５号に記載される方法を使用して、活性化および増殖され得る。
【０４３１】
一般的に、本発明のＴｒｅｇ細胞は、そこに結合されたＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する作用物質およびＴｒｅｇ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを有する表面との接触により、増殖される。特に、Ｔｒｅｇ細胞は、たとえば抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または表面上に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によるか、またはカルシウムイオノフォアと結合したプロテインキナーゼＣアクチベーター（たとえばブリオスタチン）との接触により、本明細書で記載されるように刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激では、アクセサリー分子を結合するリガンドが使用される。たとえば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖の刺激に適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触され得る。いずれかのＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が使用され得る。抗ＣＤ２８抗体の例としては、限定するものではないが、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，  Ｂｅｓａｎｃｏｎ，  Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられる。他の当該分野で一般的に知られている増殖方法が使用され得る（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．  ３０（８）：３９７５−３９７７，  １９９８；  Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９０（９）：  １３１９１３２８，  １９９９；  Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．  ２２７（ｌ−２）：５３−６３，  １９９９）。
【０４３２】
特定の実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞に対するプライマリー刺激性シグナルおよび共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。たとえば、各シグナルを提供する作用物質は、溶液中であってもよく、表面に結合されていてもよい。表面に結合される場合、作用物質は、同じ表面に結合されてよく（すなわち「シス」形態で）または別の表面に結合されてもよい（すなわち「トランス」形態で）。あるいは、１つの作用物質は表面に結合され、および他方の作用物質は溶液中にあり得る。一実施形態では、共刺激シグナルを提供する作用物質は、細胞表面に結合され、プライマリー活性化シグナルを提供する作用物質は、溶液中であるか表面に結合される。特定の実施形態では、両作用物質は、溶液中であり得る。別の実施形態では、作用物質は、可溶性の形態であり得、次に、作用物質に結合するであろうＦｃ受容体を発現する細胞または抗体または他の結合性作用物質などの表面に架橋され得る。これに関しては、本発明においてＴ細胞を活性化および増殖させる際の使用で企図される人工的な抗原提示細胞（ａＡＰＣ）に関して参照により本明細書中に組み込まれる米国特許公開公報第２００４０１０１５１９号および同第２００６００３４８１０号を参照されたい。
【０４３３】
一実施形態では、２つの作用物質が、同じビーズ上に、すなわち「シス」または別のビーズ上に、「すなわちトランス」のいずれかにおいて、ビーズに固定される。たとえば、プライマリー活性化シグナルを提供する作用物質は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する作用物質は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、両作用物質は、同等の分子量で同じビーズに共固定される。一実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）およびＴ細胞の成長（ｇｒｏｗｔｈ）のために１：１の比率のビーズに結合された各抗体が使用される。本発明の特定の態様では、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１：１の比率を使用して観察される増殖と比較してＴ細胞の増殖の増大が観察されるように使用される。１つの特定の実施形態では、約１〜約３倍の増大が、１：１の比率を使用して観察される増殖と比較して観察される。一実施形態では、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比率は、１００：１〜１：１００およびそれらの間の全ての整数の値の範囲である。本発明の一態様では、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合し、すなわちＣＤ３：ＣＤ２８の比率は、１未満である。本発明の特定の実施形態では、ビーズに結合される抗ＣＤ３抗体に対する抗ＣＤ２８抗体の比率は、２：１超である。１つの特定の実施形態では、１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。別の実施形態では、１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。さらなる実施形態では、１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。別の実施形態では、１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。１つの好ましい実施形態では、ＣＤ３：ＣＤ２８の比率が１：１０であるビーズに結合する抗体が使用される。別の実施形態では、１：３のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。さらなる別の実施形態では、３：１のＣＤ３：ＣＤ２８比率のビーズに結合する抗体が使用される。
【０４３４】
１：５００〜５００：１およびそれらの間のいずれかの整数の間の細胞に対する粒子の比率が、Ｔ細胞または他の標的細胞を刺激するために使用され得る。当業者が容易に理解し得るように、細胞に対する粒子の比率は、標的細胞と比較した粒子の大きさに応じて変化し得る。たとえば、小さな大きさのビーズは数個の細胞のみを結合し、大きなビーズは多くの細胞を結合し得る。特定の実施形態では、粒子に対する細胞の比率は、１：１００〜１００：１およびそれらの間のいずれかの整数の値の範囲であり、さらなる実施形態では、この比率は、１：９〜９：１およびそれらの間のいずれかの整数の値の範囲を含み、同様にＴ細胞を刺激するために使用され得る。Ｔ細胞の刺激をもたらす、Ｔ細胞に対する抗ＣＤ８および抗ＣＤ２８が結合した粒子の比率は、上述のように変動し得るが、特定の好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１を含み、ここで好ましい比率の１つは、Ｔ細胞あたり少なくとも１：１の粒子である。一実施形態では、１：１以下の細胞に対する粒子の比率が使用される。１つの特定の実施形態では、好ましい粒子：細胞の比率は１：５である。さらなる実施形態では、粒子の細胞に対する比率は、刺激の日に応じて変動し得る。たとえば、一実施形態では、粒子の細胞に対する比率は、初日に１：１〜１０：１であり、さらなる粒子が毎日または１日おきに、その後１：１〜１：１０の最終的な比率で、最大１０日間の間細胞に添加される（添加の日の細胞計数に基づく）。１つの特定の実施形態では、粒子の細胞に対する比率は、刺激の初日に１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調節される。別の実施形態では、粒子は毎日または１日おきベースで、初日に１：１、刺激の３日目および５日目に１：５の最終比率にて添加される。別の実施形態では、粒子の細胞に対する比率は、刺激の初日に２：１であり、刺激の３日目および５日目に１：１０に調節される。別の実施形態では、粒子は毎日または１日おきベースで、初日に１：１、刺激の３日目および５日目に１：１０の最終比率にて添加される。当業者は、様々な他の比率が本発明での使用に適切であり得ることを理解する。特に比率は、粒子の大きさならびに細胞の大きさおよび種類に応じて変動するであろう。
【０４３５】
本発明のさらなる実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、作用物質でコーティングされたビーズと組み合わせられ、その後ビーズおよび細胞が分離され、次に細胞が培養される。代替的な実施形態では、培養の前に、作用物質でコーティングされたビーズおよび細胞は分離されないが、共に培養される。さらなる実施形態では、ビーズおよび細胞は、磁力などの、ある力の印加によりまず濃縮され、細胞表面マーカーの増大されたライゲーションをもたらし、それにより、細胞刺激を誘導する。
【０４３６】
例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が付着される常磁性ビーズ（３×２８個のビーズ）を本発明のＴｒｅｇ細胞に接触させることにより、ライゲートされ得る。一実施形態では、細胞（たとえば１０４〜１０９個のＴ細胞）およびビーズ（たとえば１：１の比率のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズ）が、バッファー、好ましくはＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムなどの二価の陽イオンを含まない）中で組み合わせられる。繰り返しになるが、当業者は、任意の細胞濃度が使用され得ることを容易に理解し得る。たとえば、標的細胞は、サンプル中で著しく希少であり得、サンプルの０．０１％のみを構成し得るか、またはサンプル全体（すなわち１００％）が目的の標的細胞を構成し得る。よって、任意の細胞数が、本発明の文脈の範囲内である。特定の実施形態では、細胞と粒子の最大接触を確保するために、粒子と細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させること（すなわち細胞の濃度を増大させること）が望ましいかもしれない。たとえば、一実施形態では、約２０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。別の実施形態では、１億個の細胞／ｍｌ超が使用される。さらなる実施形態では、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１．２５億または１．５億個の細胞／ｍｌの濃度が使用され得る。高い濃度を使用することは、増大された細胞収率、細胞の活性化、および細胞の拡張をもたらし得る。さらに、高濃度の細胞の使用は、ＣＤ２８ネガティブＴ細胞などの、目的の抗原を弱く発現し得る細胞をより効率的に捕捉することを可能にする。このような細胞の集団は、治療上の値を有し得、特定の実施形態において入手することが望ましい。
【０４３７】
本発明の一実施形態では、混合物は、数時間（約３時間）〜約１４日間またはそれらの間のいずれかの整数の時間の値の間、培養され得る。別の実施形態では、混合物は、２１日間培養され得る。本発明の一実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、約８日間共に培養される。別の実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、２〜３日間共に培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上であり得るような、数サイクルの刺激もまた望ましいであろう。Ｔ細胞培養に適切な条件は、血清（たとえばウシ胎児またはヒトの血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ、およびＴＮＦ−α、または当業者に知られている細胞増殖のための他のいずれかの添加剤を含む、増殖およびバイアビリティに必要な因子を含み得る適切な培地（たとえば最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０、またはＸ−ｖｉｖｏ  １５，  （Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の成長に必要な他の添加剤としては、限定するものではないが、界面活性剤、プラスマネート、および還元剤、たとえばＮ−アセチル−システインおよび２−メルカプトエタノールが挙げられる。培地は、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加されており、血清フリーであるか、または適切な量の血清（もしくは血漿）もしくは規定のホルモンのセット、および／もしくはＴ細胞の成長および増殖に十分な量のサイトカインが補充された、ＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ−ＭＥＭ、Ｆ−  １２、Ｘ−Ｖｉｖｏ  １５、およびＸ−Ｖｉｖｏ  ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗菌剤、たとえばペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験的な培養物にのみ含まれ、対象中へと融合される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長の支援に必要な条件下、たとえば適切な温度（たとえば３７℃）および大気（たとえば空気＋５％のＣＯ２）下で維持される。
【０４３８】
様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を呈し得る。たとえば、典型的な血液またはアフェレーシスした（ａｐｈｅｒｅｓｅｄ）末梢血単核細胞産物は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（Ｔｃ，  ＣＤ８＋）より多いヘルパーＴ細胞集団（Ｔｈ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３およびＣＤ２８の受容体を刺激することによるＴ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ増殖は、およそ８〜９日目前に主としてＴｈ細胞からなるＴ細胞の集団をもたらし、約８〜９日後には、Ｔ細胞の集団は、次第に多くのＴｃ細胞集団を含む。よって、処置の目的に応じて、主にＴｈ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが好適であり得る。同様に、抗原特異的なサブセットのＴｃ細胞が単離されている場合、このサブセットをより大きな度合いに拡大することが好適であり得る。さらに、ＣＤ４マーカーおよびＣＤ８マーカーに加え、他の表現型のマーカーは、顕著に変化するが、大部分において細胞増殖プロセスの過程の間再現的に変化する。よって、このような再現性は、特定の目的のため活性化されたＴ細胞産物を目的に合わせて調節する能力を可能にする。
【０４３９】
本発明の一実施形態では、Ｔ細胞は、参照により本明細書中に組み込まれる国際特許公開公報第２００７１１０７８５号に記載されるように、制御性Ｔ細胞を得るためにラパマイシンの存在下で培養され得る。制御性Ｔ細胞を産生するための別の方法は、参照により本明細書中に組み込まれる米国特許公開公報第２０１６０２４４７０号に記載されており、ここでＴ細胞は、たとえばＴＣＲ／ＣＤ３抗体などのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３アクチベーター、たとえばＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１  ＢＢ）、ＧＩＴＲ、Ｂ７−１／２、ＣＤ５、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、またはＣＤ１３７抗体などのＴＣＲ共刺激因子アクチベーター、およびラパマイシンと共に培養される。
【０４４０】
本発明の一実施形態では、ＣＡＲの発現により遺伝子修飾されたＴ細胞はまた、ＲＯＲ−Ｃ、Ｆｏｘｐ３、Ｆｏｘｏ１、Ｔ−ｂｅｔ、またはＧａｔａ  ３、ｃ−Ｍａｆ、ＡｈＲなどの少なくとも１つの細胞内因子の発現により遺伝子修飾され得る。一実施形態では、本発明の遺伝子修飾された免疫細胞は、Ｆｏｘｐ３を発現する。一実施形態では、本発明の遺伝子修飾された免疫細胞は、Ｆｏｘｏ１を発現する。
【０４４１】
一実施形態では、本発明の遺伝子修飾されたＴｒｅｇ細胞は、同種のＴｒｅｇ細胞であり得る。たとえば同種のＴｒｅｇ細胞は、機能的なヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、たとえばＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩの発現を欠くＴ細胞、および／または内在性ＨＬＡの発現を欠くＴ細胞であり得る。
【０４４２】
一実施形態では、本明細書で記載されるＴｒｅｇ細胞は、その表面で機能的なＨＬＡを発現しないように操作され得る。たとえば本明細書で記載されるＴｒｅｇ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、たとえばＨＬＡクラス１（特にＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ）、および／またはＨＬＡクラスＩＩまたは非古典的ＨＬＡ分子がダウンレギュレートされるように操作され得る。
【０４４３】
別の実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞は、機能的なＴＣＲおよび機能的なＨＬＡ、たとえばＨＬＡクラスＩ（特にＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ）および／またはＨＬＡクラスＩＩを欠く。
【０４４４】
別の実施形態では、本明細書で記載されるＴｒｅｇ細胞は、その表面で内在性ＨＬＡを発現しないように操作され得る。
【０４４５】
機能的なＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を欠く修飾されたＴｒｅｇ細胞は、ＴＣＲまたはＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウトおよびノックダウンを含むいずれかの適切な手段により入手され得る。たとえばＴｒｅｇ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ）ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても知られている）、またはｍｅｇａＴＡＬ（ｍｎ切断ドメインと組み合わせたＴＡＬエフェクター）を使用する、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０４４６】
一実施形態では、本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸は、Ｔｒｅｇのゲノム中の特定の遺伝子座で、たとえば欠失される遺伝子の座などで挿入される。一実施形態では、本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸を、ＨＬＡ座内に挿入し、それにより、ＨＬＡ発現の阻害をもたらす。
【０４４７】
一実施形態では、ＴＣＲ発現および／またはＨＬＡ発現は、Ｔ細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡをコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを使用して阻害され得る。Ｔ細胞中のｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの発現は、たとえばレンチウイルス発現系などのいずれかの従来の発現系を使用して達成され得る。ＴＣＲの成分の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｈＲＮＡは、たとえば米国特許公開公報第２０１２／０３２１６６７号に記載されている。ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスＩＩの遺伝子の発現をダウンレギュレートする例示的なｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは、たとえば米国特許公開公報第２００７／００３６７７３号に記載されている。
【０４４８】
「ＣＲＩＳＰＲ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」、または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、本明細書で使用される場合、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ）のセット、またはこのような反復のセットを含む系を指す。「Ｃａｓ」は、本明細書で使用される場合、ＣＲＩＳＰＲに関連するタンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子をサイレンシングするかまたは変異させるために使用され得るＣＲＩＳＰＲまたはＣａｓに由来する系を指す。
【０４４９】
天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、配列決定された真正細菌のゲノムの約４０％および配列決定された古細菌の９０％で見出されている（Ｇｒｉｓｓａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８：  １７２）。この系は、プラスミドおよびファージなどの外来性の遺伝子性エレメントに対する耐性を与え、獲得免疫の形態を提供する、原核生物の免疫系の一種である（Ｂａｒｒａｎｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１５：  １７０９−１７１２；  Ｍａｒｒａｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２：  １８４３−１８４５）。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、マウスまたは霊長類などの真核生物における遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、増強、または変更）での使用のために改変されている（Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｎａｔｕｒｅ  ４８２：  ３３１−８）。これは、特異的に設計されたＣＲＩＳＰＲおよび１つ以上の適切なＣａｓを含むプラスミドを真核細胞中に導入することにより達成される。ＣＲＩＳＰＲ配列は、場合によりＣＲＩＳＰＲ座と呼ばれ、反復およびスペーサーを交互に含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲでは、スペーサーは通常、プラスミドまたはファージの配列などの細菌に対して外来性の配列を含み；ＴＣＲおよびＨＬＡのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系においては、スペーサーは、ＴＣＲまたはＨＬＡの遺伝子配列に由来する。ＣＲＩＳＰＲ座由来のＲＮＡは、構成的に発現され、Ｃａｓタンパク質により小さなＲＮＡへと処理される。これらは、反復配列が隣接したスペーサーを含む。このＲＮＡは、他のＣａｓタンパク質を、ＲＮＡレベルまたはＤＮＡレベルで外来性遺伝子エレメントをサイレンシングするようにガイドする（Ｈｏｒｖａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：  １６７−１７０；  Ｍａｋａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｄｉｒｅｃｔ  １：  ７）。よってスペーサーは、ｓｉＲＮＡと同様に、ＲＮＡ分子のテンプレートとして機能する（Ｐｅｎｎｉｓｉ  （２０１３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：  ８３３−８３）。よって、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子を編集でき、またはＴＣＲおよび／もしくはＨＬＲの発現をこれにより減少させる未成熟なストップ（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｓｔｏｐ）を導入できる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系はあるいは、ＲＮＡ干渉のように使用でき、可逆的な様式でＨＬＡ遺伝子をオフにする。哺乳類細胞では、たとえば、ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質を、ＴＣＲおよびＨＬＡプロモーターにガイドし、ＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断し得る。
【０４５０】
たとえば米国特許公開公報第２０１４００６８７９７号およびＣｏｎｇ  （２０１３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：  ８１９−８２３に記載される、当該分野で知られている技術を使用して、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する人工的なＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系が作製され得る。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害する、当該分野で知られている他の人工的なＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、たとえば、Ｔｓａｉ  （２０１４）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ３２：６  ５６９−５７６、米国特許第８，８７１，４４５号；同第８，８６５，４０６号；同第８，７９５，９６５号；同第８，７７１，９４５号；および同第８，６９７，３５９号に記載されるもの、もまた作製され得る。
【０４５１】
「ＴＡＬＥＮ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＴＡＬＥＮ」、または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子を編集するために使用され得る人工的なヌクレアーゼである、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮは、ＤＮＡ切断ドメインにＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインを融合することにより人工的に作製される。ＴＡＬエフェクター（ＴＡＬＥＮ）は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子の一部を含む、いずれかの望ましいＤＮＡ配列に結合するように操作され得る。操作されたＴＡＬＥをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの配列を含むいずれかの望ましいＤＮＡ配列に特異的な制限酵素が、作製され得る。これらは次いで細胞に導入でき、それらはゲノム編集に使用され得る（Ｂｏｃｈ  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １３５−６；  ａｎｄ  Ｂｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：  １５０９−１２；  Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：  ３５０１）。
【０４５２】
ＴＡＬＥは、ザントモナス細菌により分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目および１３番目のアミノ酸を除き、反復され、著しく保存された３３〜３４アミノ酸配列を含む。これらの２つの位置は著しく多様であり、特異的なヌクレオチド認識との強力な相関を示す。よって、これらは、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作され得る。ＴＡＬＥＮを作製するために、ＴＡＬＥタンパク質を、野生型または変異型のＦｏｋｌエンドヌクレアーゼである、ヌクレアーゼ（Ｎ）に融合する。Ｆｏｋｌに対するいくつかの変異が、ＴＡＬＥＮでのその使用のためになされており：これらはたとえば、切断の特異性または活性を改善する（Ｃｅｒｍａｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３９：  ｅ８２；  Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４３−８；  Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  ７３１−７３４；  Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：  ３０７；  Ｄｏｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：  ７４−７９；  Ｓｚｃｚｅｐｅｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２５：  ７８６−７９３；  ａｎｄ  Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  ／．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２００：  ９６）。Ｆｏｋｌドメインは、二量体として機能し、適切な配向および間隔で標的ゲノム中の部位に対する固有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つのコンストラクトを必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋｌ切断ドメインの間のアミノ酸残基の数、および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基の数はいずれも、高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであると思われる（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４３−８）。ＨＬＡ  ＴＡＬＥＮは、二本鎖切断（ＤＳＢ）をもたらすために細胞の内部で使用され得る。修復機構が非相同的な末端の結合を介してこの切断を不適切に修復する場合、変異が切断部位で導入され得る。たとえば、不適切な修復は、フレームシフト変異を導入し得る。あるいは、外来性ＤＮＡが、ＴＡＬＥＮと共に細胞に導入され得；外来性ＤＮＡの配列および染色体配列に応じて、このプロセスを使用して、ＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの遺伝子中の欠失を訂正でき、またはｗｔＴＣＲおよび／もしくはＨＬＡの遺伝子中に当該欠失を導入でき、したがってＨＬＡの発現を減少させることができる。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュール式構成要素を使用する様々なスキームを含む、当該分野で知られているいずれかの方法を使用して構築され得る（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４９−５３；  Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：  ｅｌ９５０９）。
【０４５３】
「ＺＦＮ」または「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＺＦＮ」、または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＺＦＮ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子を編集するために使用され得る人工的なヌクレアーゼである、ジンクフィンガーヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合されたＦｏｋｌヌクレアーゼドメイン（またはその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上のジンクフィンガーを含む（Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １８８：  ７７３−７８２；  ａｎｄ  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：  １１５６−１１６０）。ジンクフィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンにより安定化される小タンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは、たとえばＣｙｓ２Ｈｉｓ２（配列番号７５）を含み得、約３ｂｐの配列を認識し得る。既知の特異性の様々なジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５、または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを作製できる。ファージディスプレイ、酵母のワン−ハイブリッドシステム、細菌のワンハイブリッドシステムおよびツーハイブリッドシステム、ならびに哺乳類細胞を含む、様々な選択およびモジュールの組み立ての技術が、特定の配列を認識するジンクフィンガー（およびそれらの組み合わせ）を作製するために利用可能である。
【０４５４】
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡを切断するために二量体でなければならない。よって一対のＺＦＮが、非パリンドロームのＤＮＡ部位を標的化するために必要とされる。２つの個別のＺＦＮは、それらのヌクレアーゼが適切に離間されて、ＤＮＡの反対側の鎖を結合しなければならない（Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：  １０５７０−５）。またＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ中に二本鎖切断を生じ得、これは、不適切に修復される場合フレームシフト変異を生じ得、細胞中のＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらす。ＺＦＮはまた、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子を変異するために相同的組み換えで使用され得る。ＴＣＲおよび／またはＨＬＡ中の配列に特異的なＺＦＮは、当該分野で知られているいずれかの方法を使用して構築され得る。たとえばＰｒｏｖａｓｉ  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １８：  ８０７−８１５；  Ｔｏｒｉｋａｉ  （２０１３）  Ｂｌｏｏｄ  １２２：  １３４１−１３４９；  Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １６：  １２００−７；  Ｑｕｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  ／．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４００：  ９６；  ＵＳ２０１１／０１５８９５７；および米国特許公開公報第２０１２／００６０２３０号を参照されたい。
【０４５５】
「メガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するメガヌクレアーゼ」または「ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するためのメガヌクレアーゼ」は、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの遺伝子を編集するために使用され得る、大きな（１４超の塩基対）認識部位を有する単量体のエンドヌクレアーゼを指す。メガヌクレアーゼ（ｍｎ）は、細菌性ホーミングエンドヌクレアーゼに由来し固有の標的部位に関して操作された生得的なヌクレアーゼ活性を有する単量体タンパク質である。ホーミングエンドヌクレアーゼは、それらの宿主のゲノム中の個々の座で二本鎖の切断を生じることができ、それにより部位特異的な遺伝子変換イベントを推進できる、ＤＮＡ切断酵素である（Ｓｔｏｄｄａｒｄ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  ２０１１  Ｊａｎ  １２；１９（１）：７−１５）。それらの小さなサイズにも関わらず、ホーミングエンドヌクレアーゼは、長いＤＮＡ配列（通常２０〜３０塩基対）を認識する。ホーミングエンドヌクレアーゼは、非常に広く存在しており、微生物、ならびにファージおよびウイルスで見出されている。ＬＡＧＬＩＤＡＤＧおよびＨｉｓ−Ｃｙｓ  ｂｏｘ酵素（これら酵素に最も配列特異的である）は、それらのＤＮＡ標的部位の主溝に結合する逆平行βシートに依存する（Ｆｌｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；  Ｊｕｒｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。そこでこれらは、複数の連続する塩基対に渡り不均一に分布される、配列特異的な接触および配列非特異的な接触の集合を確立する（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３；  Ｓｃａｌｌｅｙ−Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。
【０４５６】
ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ  ホーミングエンドヌクレアーゼ（ＬＨＥ）ファミリーは、遺伝子標的化増幅のために使用される、操作された酵素の主な供給源である。ＬＨＥファミリーは主に、古細菌内ならびに藻類および真菌の葉緑体およびミトコンドリアのゲノム中でコードされる（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５；  Ｄａｌｇａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７；  Ｓｅｔｈｕｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。タンパク質鎖あたり単一の保存されたＬＡＧＬＩＤＡＤＧモチーフ（配列番号５８）を有するメガヌクレアーゼは、パリンドロームＤＮＡ配列およびほぼパリンドロームなＤＮＡ配列を切断するホモ二量体タンパク質を形成し、一方でタンパク質鎖あたり２つの当該モチーフを含むメガヌクレアーゼは、完全に非対称性のＤＮＡ配列を標的とし得る、より大きな疑似対称性モノマーを形成する。
【０４５７】
メガヌクレアーゼは、ＴＣＡおよび／またはＨＬＡを標的とし、よってＤＮＡの二本鎖切断をもたらすように操作でき、これは不適切に修復される場合フレームシフト変異を生じ得、細胞中のＴＣＡおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらすことができる。
【０４５８】
「ＭｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＡおよび／またはＨＬＡに対するＭｅｇａＴＡＬ」または「ＴＣＡおよび／またはＨＬＡを阻害するためのＭｅｇａＴＡＬ」は、ＴＣＡおよび／またはＨＬＡの遺伝子を編集するために使用され得る、人工的なヌクレアーゼを指す。ＭｅｇａＴＡＬは、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ  ホーミングエンドヌクレアーゼファミリー由来のメガヌクレアーゼのＮ末端への最小ＴＡＬ（転写活性化様）エフェクタードメインの融合を介して得られる、ハイブリッドの単量体ヌクレアーゼである（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０１４  Ｆｅｂ；４２（４）：２５９１−６０１；  Ｔａｋｅｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１５；１２３９：１０５−３２．  ｄｏｉ：  １０．１００７／９７８−１−４９３９−１８６２−１＿６）。よってＭｅｇａＴＡＬは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインにより提供される追加的な親和性および特異性を有する部位特異的なメガヌクレアーゼ切断頭部からなる。
【０４５９】
ＭｅｇａＴＡＬは、ＴＣＡおよび／またはＨＬＡを標的化し、よってＤＮＡ中で二本鎖切断を生じるように操作でき、これにより、不適切に修復される場合フレームシフト変異を生じ得、細胞中のＴＣＡおよび／またはＨＬＡの発現および量の減少をもたらすことができる。
【０４６０】
いずれかの特定の理論により拘束されることを望まないが、いくつかの実施形態では、治療用Ｔ細胞は、Ｔ細胞中の短縮されたテロメアのため、患者における短期間の残留性を有し；よってテロメラーゼ遺伝子でのトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを長くし得、かつ患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅ，  “Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，  １１７：  １４６６−１４７６  （２００７）を参照されたい。よって一実施形態では、遺伝子修飾されたＴｒｅｇ細胞は、テロメラーゼサブユニット、たとえばテロメラーゼの触媒サブユニット、たとえばＴＥＲＴ、たとえばｈＴＥＲＴ、を異所的に発現する。いくつかの態様では、この開示は、ＣＲを発現する細胞を作製する方法であって、テロメラーゼサブユニット、たとえばテロメラーゼの触媒サブユニット、たとえばＴＥＲＴ、たとえばｈＴＥＲＴ、をコードする核酸と細胞を接触させるステップを含む、方法を提供する。この細胞は、ＣＲをコードするコンストラクトと接触される前に、接触と同時に、または後に、核酸と接触され得る。
【０４６１】
さらに本発明は、本発明のＴｒｅｇ細胞を入手するための方法であって、本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸で少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞を形質導入すること、および任意選択で形質導入した細胞を増殖させることを含む、方法に関する。
【０４６２】
一実施形態では、この方法は、ｅｘ  ｖｉｖｏの方法である。
【０４６３】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞を入手するための方法は、
ＰＢＭＣ集団由来のＴｒｅｇ細胞（たとえば白血球アフェレーシスにより回収される）の単離ステップと、
本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸配列がＴｒｅｇ細胞内に導入または伝達される遺伝子修飾ステップと、
任意選択で増殖ステップと、
任意選択で洗浄ステップと、
任意選択で凍結ステップ
を含む。
【０４６４】
一実施形態では、遺伝子修飾ステップは、遺伝子破壊ステップ、遺伝子訂正ステップ、または遺伝子付加ステップ、好ましくは遺伝子付加ステップに対応する。一実施形態では、遺伝子修飾ステップは、限定するものではないが、トランスフェクション、形質導入、または遺伝子編集を含む群から選択される方法により行われる。
【０４６５】
本発明で使用され得る遺伝子編集の方法の例としては、限定するものではないが、操作されたヌクレアーゼに基づく方法、組み換え型アデノ随伴ウイルス（またはＡＡＶ）に基づく方法、トランスポゾンに基づく方法（たとえばＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンシステム）、相同組み換えに基づく方法、部位特異的リコンビナーゼを使用する条件付け標的化（たとえばＣｒｅ−ＬｏｘＰおよびＦｌｐ−ＦＲＴシステム）、およびＭＡＧＥ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）が挙げられる。
【０４６６】
操作されたヌクレアーゼの非限定的な例としては、限定するものではないが、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ（ｍｎ、ホーミングエンドヌクレアーゼとしても知られる）、またはｍｅｇａＴＡＬ（ｍｎ切断ドメインと組み合わせたＴＡＬエフェクター）が挙げられる。
【０４６７】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞を入手するための方法は、
ＰＢＭＣ集団由来のＴｒｅｇ細胞（たとえば白血球アフェレーシスにより回収される）の単離ステップと、
本明細書で上述されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを用いた形質導入またはトランスフェクションのステップと、
任意選択で増殖ステップと、
任意選択で洗浄ステップと、
任意選択で凍結ステップ
を含む。
【０４６８】
本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる組成物である。
【０４６９】
一実施形態では、上記組成物は、本明細書で上述される少なくとも１つのＩＬ−２３Ｒに特異的なＣＡＲを細胞表面上に発現するように操作された少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、上記ＣＡＲは、（ｉ）本明細書で上述されるＩＬ−２３Ｒに特異的な細胞外結合ドメインと、（ｉｉ）任意選択で、本明細書で上述される細胞外ヒンジドメインと、（ｉｉｉ）任意選択で本明細書で上述される膜貫通ドメインと、（ｉｖ）本明細書で上述される細胞内シグナリングドメインと、（ｖ）任意選択で、本明細書で上述されるタグおよび／またはリーダー配列とを含む。
【０４７０】
一実施形態では、上記組成物は、凍結および解凍されている。
【０４７１】
本発明の別の目的は、本明細書で上述される少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団および少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる医薬組成物である。
【０４７２】
本発明の別の目的は、本明細書で上述される少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる医薬である。
【０４７３】
一実施形態では、本医薬組成物または医薬は、本発明の少なくとも１つの単離されたおよび／または実質的に精製された本発明のＴｒｅｇ細胞集団を含む。
【０４７４】
一実施形態では、本医薬組成物または医薬は、本明細書で上述されるＴｒｅｇ細胞集団の組み合わせ（すなわち少なくとも２つの明確に異なる本発明のＴｒｅｇ細胞集団）を含む。
【０４７５】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または医薬は、少なくとも１つの他のＴｒｅｇ細胞集団をさらに含み、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、抗原、抗原のフラグメント、抗原のバリアント、またはそれらの混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４７６】
一実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、一般的なヒトの食事由来の食物抗原に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４７７】
別の実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、たとえば多発性硬化症関連抗原、関節関連抗原、眼関連抗原、ヒトＨＳＰ抗原、皮膚関連抗原、または移植片拒絶もしくはＧＶＨＤに関与する抗原などの、自己抗原に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４７８】
別の実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、吸入されるアレルゲン、摂取されるアレルゲン、または接触アレルゲンゲンに特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４７９】
一実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、卵白アルブミン、ＭＯＧ、ＩＩ型コラーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物を含む群から選択される抗原に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８０】
一実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、卵白アルブミン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８１】
別の実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、ＭＯＧ、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８２】
別の実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、ＩＩ型コラーゲン、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８３】
別の実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、シトルリン化ビメンチン、シトルリン化ＩＩ型コラーゲン、またはシトルリン化フィブリノーゲン、それらのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８４】
別の実施形態では、上記他の免疫細胞集団の細胞は、ＨＬＡ−Ａ２、そのフラグメント、バリアント、および混合物に特異的なＣＡＲを細胞表面上で発現する。
【０４８５】
一実施形態では、上記他のＴｒｅｇ細胞集団の細胞は、ＣＡＲを細胞表面上で発現し、上記ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、タンパク質、またはそのフラグメントもしくはバリアント、たとえば自己抗原またはそのフラグメントもしくはバリアントである。
【０４８６】
医薬組成物または医薬に関連して本明細書で使用される場合、用語「〜から本質的になる」は、本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団が、上記医薬組成物または医薬の中の唯一の治療的作用物質または生体活性を有する作用物質であることを意味する。
【０４８７】
このような組成物および医薬は、中性に緩衝された生理食塩水、リン酸緩衝食塩水などのバッファー；グルコース、マンノース、スクロース、またはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはアミノ酸、たとえばグリシン；抗酸化剤；キレート剤、たとえばＥＤＴＡまたはグルタチオン；アジュバント（たとえば水酸化アルミニウム）；および保存剤を含み得る。
【０４８８】
本組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、注入、埋め込み、または移植によるものを含む、いずれかの簡便な方法で行われ得る。本明細書で記載される組成物は、経動脈投与、皮下投与、皮内投与、腫瘍内投与、リンパ節内投与、髄内投与、筋肉内投与、静脈内（ｉ．ｖ．）注射による投与、または腹腔内投与で患者に投与され得る。一態様では、本発明のＴ細胞組成物は、皮内注射または皮下注射により患者に投与される。
【０４８９】
一実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、ｉ．ｖ．注射により投与される。
【０４９０】
本発明の組成物は、一実施形態において、静脈内投与用に製剤化されている。
【０４９１】
別の実施形態では、本発明のＴｒｅｇ細胞集団は、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害の部位に直接注射され得る。
【０４９２】
さらに本発明は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害の処置で使用するための、本発明のＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞、当該細胞の集団、本明細書中記載される組成物、医薬組成物または医薬に関する。
【０４９３】
よって本発明の別の目的は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を、それを必要とする対象において処置するための方法であって、本明細書中上述される少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞またはＴｒｅｇ細胞集団を上記対象に投与することを含む、方法である。
【０４９４】
一実施形態では、本方法は、細胞療法の方法である。
【０４９５】
一実施形態では、対象は、自家細胞を用いて投与される（または投与されるべきである）。言い換えると、本細胞療法は、自家性である。
【０４９６】
一実施形態では、本細胞療法は、異種性である。
【０４９７】
別の実施形態では、対象は、同種異系細胞を用いて投与される（または投与されるべきである）。言い換えると、本細胞療法は、同種異系である。
【０４９８】
本発明の別の目的は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を、それを必要とする対象において処置するための方法であって、本明細書中記載される少なくとも１つのＣＡＲ、または本明細書中記載されるＣＡＲをコードする核酸、または本明細書で記載されるＣＡＲを含むベクターを上記対象に投与することを含む、方法である。一実施形態では、本発明の方法は、遺伝子療法の方法である。
【０４９９】
一実施形態では、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害は、炎症促進性細胞が媒介する疾患または障害、Ｔｈ１７が媒介する疾患または障害、またはγδＴが媒介する疾患または障害である。
【０５００】
一実施形態では、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患は、自己免疫性疾患もしくは障害および／または炎症性疾患もしくは障害である。
【０５０１】
ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害の例としては、限定するものではないが、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、水疱性類天疱瘡、ループス（全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎（ＬＮ）、円板状ループス、深在性エリテマトーデス、凍瘡状エリテマトーデス（Ｃｈｉｌｂｒａｉｎ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、ＬＥＴ（Ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｔｕｍｉｄｕｓ：ｔｕｍｉｄｕｓ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、重篤な全身性エリテマトーデス、急性皮膚エリテマトーデス、慢性皮膚エリテマトーデスを含む）、多発性硬化症、関節炎（たとえば、関節リウマチ、反応性関節炎（ライター症候群）、若年性特発性関節炎、強直性脊椎炎および乾癬性関節炎など）、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、自己免疫性辺縁系脳炎（ＬＥ）、橋本病、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡＲ）脳炎、自己免疫性溶血性貧血、尋常性天疱瘡、重症筋無力症、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病、グッドパスチャー症候群、セリアック病、悪性貧血、白斑、強皮症、乾癬、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、多発性筋炎、皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、抗リン脂質抗体症候群、混合性結合組織病、ミラー・フィッシャー症候群、ギラン・バレー症候群、急性運動性軸索型ニューロパチー、自己免疫性肝炎、疱疹状皮膚炎、チャーグ・ストラウス病、顕微鏡的多発血管炎、ＩｇＡ腎症、ＡＮＣＡおよび他のＡＮＣＡに関連する疾患により引き起こされる血管炎、急性リウマチ熱、悪性貧血、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、膜性腎症、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、血栓性血小板減少性紫斑病、単クローン性免疫グロブリン血症における過粘稠、溶血性尿毒症症候群（非典型、Ｈ因子に対する抗体による）、ウィルソン病、劇症性、ランバート・イートン筋無力症候群、妊娠におけるＲＢＣ同種免疫、キノコ中毒、急性散在性脳脊髄炎、溶血性尿毒症症候群（非典型、補体因子変異による）、自己免疫性溶血性貧血（命に関わる寒冷凝集素症）、ＭＣＮ（ｍｙｅｌｏｍａ  ｃａｓｔ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、輸血後紫斑病、自己免疫性溶血性貧血（温式自己免疫性溶血性貧血）、高トリグリセリド血症膵炎、甲状腺クリーゼ、全身硬直症候群、溶血性尿毒症症候群（典型的な下痢関連の）、免疫性血小板減少症、ＡＢＯ−不適合性固形臓器移植（ＳＯＴ）、クリオグロブリン血症、ヘパリン起因性血小板減少症、甲状腺クリーゼ、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、巣状分節性糸球体硬化症、ならびに劇症肝不全が挙げられる。
【０５０２】
一実施形態では、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害は、炎症性腸疾患（たとえばクローン病および潰瘍性大腸炎など）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺障害、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、乾癬性関節炎、またはぶどう膜炎から選択される。
【０５０３】
一実施形態では、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害は、クローン病である。
【０５０４】
用語「炎症性障害」または「炎症性疾患」は、本明細書中互換可能に使用され、本明細書で使用される場合、炎症に関連するいずれかの異常を指す。
【０５０５】
一実施形態では、炎症性病態は、がんに関連する炎症性疾患または障害を含む。
【０５０６】
一実施形態では、炎症性病態は、自己免疫性疾患に関連する炎症性疾患または障害を含む。
【０５０７】
炎症性疾患または障害の例としては、限定するものではないが、関節炎、関節リウマチ、強直性脊椎炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、若年性特発性関節炎、若年性関節リウマチ、尿酸性関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｕｒａｔｉｃａ）、痛風、慢性多発性関節炎、関節周囲炎、肩関節周囲炎、頸部関節炎、腰仙部関節炎、腸炎性関節炎および強直性脊椎炎、喘息、皮膚炎、乾癬、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、線維症、嚢胞性線維症、肺線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、縦隔線維症（ｄｅｄｉａｓｔｉｎａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、骨髄線維症、後腹膜線維症、腎性線維症、ケロイド、強皮症、関節線維症、移植後後期（ｐｏｓｔ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｌａｔｅ）および慢性固形臓器拒絶、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、天疱瘡、尋常性天疱瘡、疱疹状皮膚炎（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ  ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ）、増殖性天疱瘡、ＩｇＡ天疱瘡、紅斑性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、妊娠性類天疱瘡、粘膜皮膚症、結節性類天疱瘡（Ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ  Ｎｏｄｕｌａｒｉｓ）、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、水疱性扁平苔癬、後天性表皮水疱症、自己免疫性糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性脈管障害、眼炎症、ぶどう膜炎、鼻炎、虚血再灌流障害、血管形成術後再狭窄、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、糸球体腎炎、グレーブス病、消化器アレルギー、結膜炎、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、狭心症、小動脈疾患、急性散在性脳脊髄炎、特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、全身性硬化症、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、自己免疫性溶血性貧血、大腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、塞栓症、肺塞栓症、動脈塞栓症、静脈塞栓症、アレルギー性炎症、循環器疾患、移植片関連疾患、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片移植拒絶、慢性拒絶、および組織または細胞の同種移植片または異種移植片に関連する障害、自己免疫疾患、外傷後の変性、脳卒中、移植片拒絶、アレルギー性病態および過敏症、たとえばアレルギー性鼻炎、アレルギー性湿疹など、皮膚疾患、真皮炎症性障害、またはそれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。
【０５０８】
皮膚疾患の例としては、限定するものではないが、にきび；日光角化症；アトピー性皮膚炎；接触性皮膚炎；褥瘡（褥瘡（ｂｅｄｓｏｒｅｓ））；湿疹；紅皮症；血管腫、たとえば小児の血管腫など；肥厚性瘢痕；扁平苔癬；苔癬状障害；リンパ脈管新生；乾癬；化膿性肉芽腫；伝染性軟属腫（ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ  ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓ）；神経線維腫症；酒さ；劣性栄養障害性表皮水泡症；瘢痕（ケロイド）；強皮症；脂漏性角化症；皮膚がん、たとえば血管肉腫、基底細胞癌、血管内皮腫、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、メラノーマ、扁平上皮癌など；皮膚潰瘍；自家移植および同種移植などの皮膚移植後の皮膚損傷；スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症；スタージウェーバー症候群；結節性硬化症；静脈性潰瘍；尋常性疣贅；いぼ、たとえばウイルス性のいぼなど；創傷などが挙げられる。
【０５０９】
真皮の炎症性障害の例としては、限定するものではないが、乾癬、滴状乾癬、逆乾癬（ｉｎｖｅｒｓｅ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、膿疱性乾癬、紅皮症乾癬、急性熱性好中球性皮膚症、湿疹、皮脂欠乏性湿疹、異汗性湿疹、汗疱（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｐａｌｍｏｐｌａｎａｒ  ｅｃｚｅｍａ）尋常性ざ瘡、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、皮膚筋炎、剥離性皮膚炎、手湿疹、汗疱、酒さ、サルコイドーシスにより引き起こされる酒さ、強皮症により引き起こされる酒さ、スイート症候群により引き起こされる酒さ、全身性エリテマトーデスにより引き起こされる酒さ、蕁麻疹により引き起こされる酒さ、帯状疱疹に関連する疼痛により引き起こされる酒さ、スイート疾患、好中球汗腺炎（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｈｉｄｒａｄｅｎｉｔｉｓ）、不稔性膿疱症（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｐｕｓｔｕｌｏｓｉｓ）、薬疹、脂漏性皮膚炎、ばら色粃糠疹、皮膚性ＫＦＤ（ｋｉｋｕｃｈｉ  ｄｉｓｅａｓｅ）、妊娠時のそう痒性じん麻疹様丘疹、スティーブンス・ジョンソン症候群および中毒性表皮壊死症、タトゥーの反応、Ｗｅｌｌｓ症候群（好酸球性蜂巣炎）、反応性関節炎（ライター症候群）、腸関連皮膚症−関節炎症候群、ＲＮＤ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ）、ＮＥＨ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｅｃｃｒｉｎｅ  ｈｉｄｒａｄｅｎｉｔｉｓ）、ＮＤＤＨ（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｅｒｍａｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｏｒｓａｌ  ｈａｎｄｓ）、形質細胞性限局性亀頭包皮炎、亀頭包皮炎、ベーチェット病、遠心性環状紅斑、色素異常性固定紅斑、多形性紅斑、環状肉芽腫、手皮膚炎、光沢苔癬、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬（ｌｉｃｈｅｎ  ｓｃｌｅｒｏｓｕｓ  ｅｔ  ａｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、慢性単純性苔癬、棘状苔癬、貨幣状皮膚炎、壊疽性膿皮症、サルコイドーシス、角層下膿疱性皮膚症、蕁麻疹、ならびに一過性棘細胞離開性皮膚病が挙げられる。
【０５１０】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、自己免疫性疾患または障害を、それを必要とする対象において処置するために使用され得、ここで上記方法は、本明細書で記載される少なくとも１つのＣＡＲ、または本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸、または本明細書で記載されるＣＡＲを含むベクターを上記対象に投与することを含む。
【０５１１】
自己免疫性疾患の例としては、限定するものではないが、ループス（たとえばエリテマトーデス、ループス腎炎）、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、グレーブス病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アジソン病、糖尿病（たとえばインスリン依存性糖尿病、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病）、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、クローン病、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎（ａｃｔｉｏｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患（たとえば関節リウマチ）、多発性筋炎、強皮症、乾癬、および混合性結合組織病が挙げられる。
【０５１２】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、アレルギー性疾患または障害を、それを必要とする対象において処置するために使用され得、ここで上記方法は、本明細書で記載される少なくとも１つのＣＡＲ、または本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸、または本明細書で記載されるＣＡＲを含むベクターを上記対象に投与することを含む。
【０５１３】
アレルギー性疾患の例としては、限定するものではないが、吸入されるアレルゲン、摂取されるアレルゲン、または接触アレルゲンに対するアレルギー性疾患が挙げられる。アレルギー性疾患の他の例としては、限定するものではないが、アレルギー性喘息、過敏性肺疾患、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性鼻炎結膜炎、慢性蕁麻疹、遅延型過敏症障害、および全身性（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ）アナフィラキシーが挙げられる。
【０５１４】
別の実施形態では、本発明のＣＡＲは、がんを、それを必要とする対象において処置するために使用され得、ここで上記方法は、本明細書で記載される少なくとも１つのＣＡＲ、または本明細書で記載されるＣＡＲをコードする核酸、または本明細書で記載されるＣＡＲを含むベクターを上記対象に投与することを含む。
【０５１５】
本明細書で使用される場合、「がん」は、表面抗原またはがんマーカーに関連するいずれかのがんであり得る。
【０５１６】
がんの例としては、限定するものではないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、腺様嚢胞癌、副腎皮質性、細胞腫、ＡＩＤＳ−関連がん、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系、Ｂ細胞白血病、リンパ腫、または他のＢ細胞悪性腫瘍、基底細胞癌、胆管がん、膀胱がん、骨がん、骨肉腫および悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系がん、子宮頸がん、脊索腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性障害、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、胚芽腫、中枢神経系、子宮内膜癌、上衣芽腫、上衣腫、食道がん、感覚神経芽腫、ユーイング肉腫ファミリーの腫瘍、頭蓋外胚細胞性腫瘍、性腺外胚細胞性腫瘍、肝臓外胆管がん、眼がん、骨の線維性組織球腫、悪性、および骨肉腫、胆嚢がん、胃がん、消化器系カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、軟部肉腫、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛性腫瘍、グリオーマ、ヘアリーセル白血病、頭頚部がん、心臓がん、肝細胞性（肝臓）がん、組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼球内黒色腫、膵島腫瘍（膵島）、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、白血病、唇および口腔がん、肝臓がん（原発性）、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺がん、リンパ腫、マクログロブリン血症、男性乳がん、骨の悪性線維性組織球腫および骨肉腫、髄芽腫、髄上皮腫、メラノーマ、メルケル細胞癌、中皮腫、ＮＵＴ遺伝子に関連する潜在性原発性正中線（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ）細胞癌を伴う転移性頚部扁平上皮癌、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性（ＣＭＬ）、骨髄性白血病、（急性）（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ｍｙｅｌｏｍａ，  ｍｕｌｔｉｐｌｅ）、骨髄増殖性障害、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、口腔（ｏｒａｌ  ｃａｖｉｔｙ）がん、中咽頭がん、骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、膵がん、乳頭腫、パラガングリオーマ、副鼻腔および鼻腔がん、上皮小体がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、中間型松果体実質腫瘍、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、妊娠および乳がん、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞（腎臓）がん、腎盂および尿管、移行細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、セザリー症候群、小細胞肺がん、小腸がん、軟部肉腫、扁平上皮癌、扁平上皮頸部癌、胃がん、テント上原始神経外胚葉腫瘍、ｔ細胞リンパ腫、皮膚性、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、絨毛性腫瘍、尿管および腎盂のがん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、腟がん、外陰がん、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、ウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０５１７】
いくつかの態様では、がんは、Ｂ細胞の悪性腫瘍である。Ｂ細胞の悪性腫瘍の例としては、限定するものではないが、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ／ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、節外性（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性（単球様Ｂ細胞リンパ腫）、脾臓、びまん性大細胞型リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびリンパ芽球性リンパ腫が挙げられる。
【０５１８】
一実施形態では、対象（たとえばヒト）は、本発明のＴｒｅｇ細胞集団の初回投与、および１つ以上のその後の投与を受け、ここで１つ以上のその後の投与は、以前の投与から１５日以内、たとえば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２日以内に投与される。
【０５１９】
一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞の治療上有効量が対象に投与されるかまたは投与されるべきである。
【０５２０】
一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つの免疫細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９個の細胞である。
【０５２１】
一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、約１０２〜約１０９、約１０３〜約１０８、約１０４〜約１０７、または約１０５〜約１０６個の範囲である。
【０５２２】
別の実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、約１０６〜約１０９、約１０６〜１０７、約１０６〜１０８、約１０７〜１０９、約１０７〜１０８、約１０８〜１０９の範囲である。別の実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、約１０６、約１０７、約１０８、または約１０９である。
【０５２３】
一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、少なくとも１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９個の細胞／ｋｇ体重である。
【０５２４】
一実施形態では、対象に投与される本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団のＴｒｅｇ細胞の量は、約１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重または１０５〜１０８細胞／ｋｇ体重、
またはこれら範囲内の全ての整数の値の範囲である。
【０５２５】
一実施形態では、対象は、１週間あたり１回超の本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団の投与を受け、たとえば本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団の２、３、または４回の投与が、対象へ１週間ごとに行われる。
【０５２６】
一実施形態では、少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団は、有効な作用物質と組み合わせてそれを必要とする対象へ投与される。一実施形態では、少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団は、有効な作用成分の投与の前に、または投与と同時に、または投与の後に投与される。
【０５２７】
本発明の別の目的は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害の処置に有用な物質を含む製造物品である。
【０５２８】
製造物品は、容器、および容器の上にあるかまたは容器に関連づけられたラベルまたは添付文書を含み得る。適切な容器としては、たとえばビン、バイアル、シリンジ、パウチなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な物質から形成され得る。容器は、自己免疫性および／または炎症性疾患または障害などのＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害の処置に有効な組成物を保持し、かつ無菌性のアクセスポートを有し得る（たとえば容器は、静脈内液剤バッグまたは皮下注射針により穴をあけることができるストッパーを有するバイアルであり得る）。本組成物における少なくとも１つの有効な作用物質は、本発明のＴｒｅｇ細胞集団である。
【０５２９】
ラベルまたは添付文書は、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害の処置に本組成物が使用されることを示し得る。
【０５３０】
製造物品、ラベル、または添付文書は、本発明のＴｒｅｇ細胞集団を患者に投与するための説明書をさらに含み得る。さらに、製造物品は、たとえば注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液などの、薬学的に許容されるバッファーを含む第２の容器をさらに含み得る。これはさらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、市販の観点およびユーザーの観点から望ましい他の物質を含み得る。
【０５３１】
本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含むキットである。「キット」は、本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含むいずれかの製造物（たとえばパッケージまたは容器）を意図する。本キットは、本発明の方法を行うための単位として宣伝、分布、または販売され得る。さらに、あらゆるキットの試薬が、外部環境からこれらを保護する容器、たとえば密閉された容器内に提供され得る。
【０５３２】
また本キットは、本キットおよびその使用方法を記載する添付文書を含み得る。様々な目的のために（たとえばＩＬ−２３Ｒを発現する細胞が媒介する疾患または障害を処置するために）有用なキットもまた提供される。本発明のＴｒｅｇ細胞集団を含むキットが提供され得る。製造物品と同様に、本キットは、容器、および容器の上にあるかまたは容器に関連づけられたラベルまたは添付文書を含み得る。この容器は、本発明の少なくとも１つのＴｒｅｇ細胞集団を含む組成物を保持する。たとえば希釈剤およびバッファーを含むさらなる容器が含まれ得る。ラベルまたは添付文書は、本組成物および意図する使用の説明の記載を提供し得る。
【図面の簡単な説明】
【０５３３】
【図１】図１は、本発明の抗ＩＬ−２３Ｒキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクト（たとえは配列番号５４の配列を有するＣＡＲなど）の概略図を表す。抗ＩＬ２３Ｒ  ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、ヒトＩＬ２３Ｒに向けられるｓｃＦｖ（αＩＬ２３Ｒ）、ＣＤ８ヒンジ（ＣＤ８リンカー）、ヒトＣＤ８α由来の膜貫通ドメイン（ＣＤ８  ＴＭ）、ヒト４−１ＢＢの活性化ドメイン（４−ＩＢＢ）、およびＣＤ３ζ（ＣＤ３Ｚ）を含む。ＣＡＲコンストラクトは、Ｐ２Ａ−ＧＦＰコード配列とフレームが合っている。
【図２】図２は、Ｔｒｅｇの形質導入の有効性およびＣＡＲの膜発現を示すフローサイトメトリーのドットプロットの組み合わせである。２つのＴｒｅｇクローンで得られた結果が示されている（代表的な結果）。形質導入の有効性を、フローサイトメトリーにおけるＧＦＰの発現により評価した。ＣＡＲの膜発現を、フローサイトメトリーにおけるプロテイン−Ｌ染色により評価した。２つのＴｒｅｇクローンで得られた結果（クローン１：Ａ〜Ｂ；クローン２：Ｃ〜Ｄ）が示されている（代表的な結果）。（Ａ、Ｃ）ＧＦＰを形質導入したＴｒｅｇ（ＭＯＣＫ）、（Ｂ、Ｄ）：本発明のＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲで形質導入したＴｒｅｇ。
【図３】図３は、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲが媒介するＴｒｅｇの活性化を示すヒストグラムである。Ｔｒｅｇ細胞の活性化を、コーティングされた組み換えヒトＩＬ−２３Ｒ（ｒｈｕＩＬ−２３Ｒ）（５μｇ／ｍｌ）またはＣＤ３／ＣＤ２８でコーティングしたビーズ（１：１のビーズ：細胞の比率）を用いて、形質導入されていないＴｒｅｇ（ＭＯＣＫ）またはＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲを形質導入したＴｒｅｇ（ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ）を活性化してから２４時間後の、フローサイトメトリーによるＣＤ６９発現により評価した。結果を、２名の異なるドナー±ＳＥＭの平均値として表した。
【図４】図４は、本発明の抗マウスＩＬ−２３Ｒキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトの概略図である。抗ＩＬ２３Ｒ  ＣＡＲは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、ヒト／マウスＩＬ２３Ｒに向けられる交差反応性ｓｃＦｖ（αＩＬ２３Ｒ）、マウスＣＤ２８由来のヒンジおよび膜貫通ドメイン（ｍＣＤ２８リンカーおよびｍＣＤ２８  ＴＭ）、マウスＣＤ２８の活性化ドメイン（ｍＣＤ２８）、ならびにマウスＣＤζ（ｍＣＤ３Ｚ）を含む。
【図５】図５は、マウスのＴｒｅｇ形質導入の有効性を示すフローサイトメトリーのドットプロットの組み合わせである。形質導入の有効性を、フローサイトメトリーにおけるＮＧＦＲ染色により評価した。
【図６】図６は、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲが媒介するマウスＴｒｅｇ（ｍＴｒｅｇ）の活性化を示すヒストグラムである。ｍＴｒｅｇ細胞の活性化を、ＣＤ３／ＣＤ２８でコーティングしたビーズ、またはプレートにコーティングした組み換え型マウスＩＬ−２３Ｒ（ｍＩＬ２３Ｒ  ｐｌａｔｅ−ｃｏａｔｅｄ  １μｇ／ｍｌ）、またはヒトもしくはマウスＩＬ−２３Ｒでコーティングしたビーズを用いて、形質導入されていないｍＴｒｅｇ（Ｐｏｌｙ  Ｔｒｅｇ）、またはＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲを形質導入されたｍＴｒｅｇ（ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ  ｍＴｒｅｇ）を活性化してから２４時間後の、フローサイトメトリーによるＣＤ６９発現により評価した。
【図７】図７は、ｍＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲ  ｍＴｒｅｇがｉｎ  ｖｉｔｒｏで効率的なＣＡＲ媒介性の抑制活性を示すことを示すグラフである。ｍＩＬ−２３Ｒでコーティングしたビーズ（比率  １：１または２：１）、ＣＤ３／ＣＤ２８でコーティングしたビーズを用いてそれらのＣＡＲを介して刺激されたまたは刺激されていない（ＮＳ）、形質導入されていないＴｒｅｇ（Ａ）またはＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ  Ｔｒｅｇ（Ｂ）により媒介される接触に依存する抑制を、フローサイトメトリーにおいて典型的なＴ細胞（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ：Ｔｃｏｎｖ）の増殖を測定することにより評価した。
【図８】図８は、（Ａ）ｉｎ  ｖｉｖｏでの実験設計の概略図および（Ｂ）マウスの異なるグループ：未処置（生理食塩水）のグループ、抗ＩＬ−２３を用いてｉ．ｐ．処置したグループ、ｐｏｌｙ−ｍＴｒｅｇ（８×１０６）を用いてｉ．ｐ．処置したグループ、またはＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ  ｍＴｒｅｇ（８×１０６）を用いてｉ．ｐ．処置したグループ、のイミキモド誘導性皮膚炎症モデルのＰＡＳＩスコアを示すグラフの組み合わせである。
【実施例】
【０５３４】
本発明を、以下の実施例によりさらに示す。
【０５３５】
実施例１：抗ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲヒトＴｒｅｇ
材料および方法
細胞および試薬
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＬｅｎｔｉＸ，  Ｏｚｙｍｅ，  Ｆｒａｎｃｅ）を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＤＭＥＭ培地中で培養した。
【０５３６】
ＦｏｘＰ３  Ｔｒｅｇの単離
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｌｏｗＴｒｅｇ細胞を、ＳｔｅｍＣｅｌｌ製のＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５＋Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用して、バフィーコートからすばやく単離した。単離の後、純度をＦｏｘＰ３染色により評価した。単離したＴｒｅｇ細胞を、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）においてウェルあたり５×１０５個の細胞で、Ｘ−ＶＩＶＯ  １５培地（Ｌｏｎｚａ）中にプレーティングし、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたマイクロビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を用いて、１：１のビーズ：細胞の比率で活性化した。活性化と同時にＴｒｅｇ細胞に、ラパマイシン（１００ｎｇ／ｍｌ）を添加した。２、５、７、および９日目に、ＩＬ−２（１０００ユニット／ｍｌ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を添加した。
【０５３７】
ＣＡＲコンストラクト
抗ＩＬ２３Ｒ  ＣＡＲコンストラクトは、ヒトＣＤ８リーダー配列（ａａ１−２２）（たとえば配列番号３９の配列を有する）、ヒトＩＬ２３Ｒに対するｓｃＦｖ（たとえば配列番号５５の配列を有する）、ＣＤ８ヒンジ（たとえば配列番号１３の配列を有する）、およびヒトＣＤ８α由来の膜貫通ドメイン（ａａ１３８−２０６）（たとえば配列番号２１の配列を有する）、ヒト４−１ＢＢの活性化ドメイン（ａａ２１４−２５５）（たとえば配列番号２９の配列を有する）、およびＣＤ３ζ（ａａ５２−１６４）（配列番号２６の配列を有する）を含む。ＣＡＲコンストラクトは、Ｐ２Ａ−ＧＦＰコード配列とフレームが合っている。
【０５３８】
ベクターおよびタイトレーション
ＣＡＲコンストラクトを、古典的な４−プラスミドレンチウイルス系を使用して産生した。簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、第３世代のレンチウイルスの移入ベクター（ｐＴＸ２６６）、ＨＩＶ−１  ｇａｇｐｏｌを発現するプラスミド（ｐＭＤＬｇｐＲＲＥ）、ＨＩＶ−１  ｒｅｖを発現するプラスミド（ｐＲＳＶ．Ｒｅｖ）およびＶＳＶ−Ｇを発現するプラスミド（ｐＲＳＶ．Ｒｅｖ）、水疱性口内炎ウイルスのエンベロープ糖タンパク質（ｐＭＤ２．Ｇ）を用いてトランスフェクトした。トランスフェクションから１日後に、ウイルスの上清を回収し、遠心により濃縮し、分割し、長期保存のため−８０℃で保存した。ｍｌあたりの形質導入単位（ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ  ｐｅｒ  ｍｉｌｌｉｌｉｔｅｒ）の数（ＴＵ／ｍｌ）により表される感染の力価を、ウイルス上清の段階希釈を用いるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の形質導入の後に入手し、形質導入の効率を、フローサイトメトリーを使用して緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現をモニタリングすることにより、３日後に評価した。
【０５３９】
レンチウイルスの形質導入
Ｔｒｅｇを、ＣＤ８の配列リーダー、次いでｓｃＦｖ抗ＩＬ−２３Ｒから構成されるキメラ受容体によるそれらの活性化から２日後に形質導入した。この細胞外ドメインは、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通領域を介してシグナリング配列に連結される。シグナリング配列は、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、次いで細胞内ヒトＣＤ３ζ鎖から構成される。簡潔に述べると、形質導入を、各ウェルに対してｍｌあたり０．５×１０７の形質導入単位（ＴＵ）をローディングすることにより行った。３７℃にて６時間後に、ウイルス粒子を、洗い流しにより除去した。次にプレートを、５％のＣＯ２、３７℃でインキュベートした。形質導入の効率（ＧＦＰ発現により評価）および細胞表面でのキメラ受容体のレベル（プロテインＬ染色により評価される）を、形質導入から５日後に確認した。
【０５４０】
プロテインＬ染色
細胞表面ＣＡＲ発現の定量化を、ＡＰＣがコンジュゲートされたプロテインＬでＣＡＲを標識することにより行い、フローサイトメトリーを使用して分析した。簡潔に述べると、洗浄後に、細胞を、氷冷したウォッシュバッファー（ＰＢＳ  ４％  ＢＳＡ）０．２ｍｌに再懸濁し、４℃で２０分間、５μｇのプロテインＬと共にインキュベートした。細胞を、０．２ｍｌの氷冷したウォッシュバッファーで３回洗浄し、次に、０．２ｍｌのウォッシュバッファー中１μｌのＡＰＣがコンジュゲートされたストレプトアビジンと共にインキュベートした（暗室で）。免疫蛍光染色を、ＭａｃｓＱｕａｎｔｉｆｙ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用してＭＡＣＱＵＡＮＴ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で行った。
【０５４１】
結果
ヒトのＴｒｅｇ細胞を、ＣＤ４＋ＣＤ１２７ｌｏｗＣＤ２５＋プロファイルに基づきＳｔｅｍ  Ｃｅｌｌ製のキットを使用して選別し、ウイルス形質導入を行う前に２日間、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたビーズおよびＩＬ−２で前刺激した。Ｔｒｅｇを、抗−ＩＬ−２３Ｒの単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）から構成されるキメラ抗原受容体（ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ）で形質導入し、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通領域を介してシグナリング配列に連結し、ヒト４−１ＢＢの細胞内部分に連結し、これを次に細胞内ヒトＣＤ３ζ鎖に融合した（図１参照）。
【０５４２】
ウイルスの上清を、２５０μｌのＸｖｉｖｏ培地中の５×１０５個の刺激されたＴｒｅｇに添加した。細胞を、２日ごとにＩＬ−２を添加しながら７日間培養した。ＦｏｘＰ３陽性細胞中のＧＦＰ発現により評価した遺伝子導入の効率は、約８０％のＧＦＰ＋を示し、これらの全てが、細胞表面でＣＡＲを発現した（図２）。
【０５４３】
次に、本発明者らは、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲを介して活性化される形質導入されたＴｒｅｇの特質を試験した。Ｔｒｅｇを、プレートにコーティングした組み換え型ヒトＩＬ−２３ＲまたはビーズにコーティングしたＩＬ−２３Ｒで刺激した。刺激から２４時間後に、活性化の状態を、フローサイトメトリーにおけるＣＤ６９発現を介して分析した。
【０５４４】
プレートまたはビーズにコーティングした組み換え型ヒトＩＬ−２３Ｒの存在下でのＣＤ６９のアップレギュレーションは、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲを形質導入されたＴｒｅｇが、ＣＡＲ誘発を介して活性化され得ることを示している（図３）。
【０５４５】
実施例２：抗ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲマウスＴｒｅｇ
材料および方法
ＦｏｘＰ３  Ｔｒｅｇの単離
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋マウスＴｒｅｇ細胞を、ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＲｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用してＣ５７Ｂｌ６マウスの脾臓からすばやく単離した。単離した後に、純度を、ＦｏｘＰ３染色により評価した。単離したＴｒｅｇ細胞を、２４ウェルプレートにおいてウェルあたり５×１０５個の細胞で、ＲＰＭＩ  １０％  ＳＶＦ中に置き、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたマイクロビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、２：１のビーズ：細胞の比率で活性化した。活性化と同時および４日目に、Ｔｒｅｇ細胞にラパマイシン（５０ｎｇ／ｍｌ）を加えた。最後に、０、２、４日目に、ＩＬ−２を添加した（１０００ユニット／ｍｌ）。
【０５４６】
ＣＡＲコンストラクト
この実験で使用される抗マウスＩＬ２３Ｒ  ＣＡＲコンストラクト（たとえば配列番号７７の核酸配列および配列番号７８のアミノ酸配列を有する）は、ヒトＣＤ８リーダー配列（ＣＤ８）、ヒト／マウスＩＬ２３Ｒに向けられる交差反応性ｓｃＦｖ（αＩＬ２３Ｒ）、マウスＣＤ２８由来のヒンジおよび膜貫通ドメイン（ｍＣＤ２８リンカーおよびｍＣＤ２８  ＴＭ）、マウスＣＤ２８の活性化ドメイン（ｍＣＤ２８）、ならびにマウスＣＤζ（ｍＣＤ３Ｚ）を含む。
【０５４７】
ベクターおよびタイトレーション
ＣＡＲコンストラクトを、古典的な４−プラスミドレンチウイルス系を使用して産生した。簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、第３世代のレンチウイルスの移入ベクター、ＨＩＶ−１  ｇａｇｐｏｌを発現するプラスミド（ｐＭＤＬｇｐＲＲＥ）、ＨＩＶ−１  ｒｅｖを発現するプラスミド（ｐＲＳＶ．Ｒｅｖ）、およびＥｃｏ−ＭＬＶを発現するプラスミド、エコトロピックマウス白血病ウイルスのエンベロープ糖タンパク質（ｐＣＭＶ−Ｅｃｏ）でトランスフェクトした。トランスフェクションしてから１日後に、ウイルスの上清を回収し、遠心により濃縮し、分割し、長期間保存のために−８０℃で保存した。ＴＵ／ｍｌの数により表される感染の力価を、ウイルス上清の段階希釈を用いるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の形質導入の後に入手し、形質導入の効率を、フローサイトメトリーを使用して緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現をモニタリングすることにより３日後に評価した。
【０５４８】
レンチウイルスの形質導入
Ｔｒｅｇを、ＣＤ８の配列リーダー、続いてｓｃＦｖ抗ＩＬ−２３Ｒから構成されるキメラ受容体によるそれらの活性化から２日後に形質導入した。この細胞外ドメインは、ヒトＣＤ８のヒンジおよび膜貫通領域を介してシグナリング配列に連結される。シグナリング配列は、４−１ＢＢの細胞内ドメイン、続いて細胞内ヒトＣＤ３ζ鎖に対し構成されている。簡潔に述べると、形質導入を、各ウェルに対して０．５×１０７ＴＵ／ｍｌをローディングすることにより行った。３７℃にて６時間後に、ウイルス粒子を、洗い流しにより除去した。次にプレートを、５％のＣＯ２、３７℃でインキュベートした。形質導入の効率（ＧＦＰ発現により評価される）および細胞表面でのキメラ受容体のレベル（プロテインＬにより評価される）を、形質導入から５日後に確認した。
【０５４９】
ＣＡＲ−Ｔｒｅｇの活性化アッセイ
活性化アッセイを、培養の７日目に行った。簡潔に述べると、０．０５×１０６個のＴｒｅｇを、２００μｌの最終容量にて単独でまたは抗ＣＤ２８／抗ＣＤ２でコーティングされたビーズ（２：１のＴｒｅｇ：ビーズの比率）の存在下、またはプレートにコーティングされたマウスＩＬ−２３Ｒ（１μｇ／ｍｌ）の存在下、または用量が増加するビーズにコーティングされたヒトおよびマウスのＩＬ−２３Ｒの存在下にて、Ｕ底９６ウェルプレートに播種した。３７℃、５％のＣＯ２にて２４時間後、細胞を、ＣＤ４およびＣＤ６９について染色し、次にフローサイトメトリーを使用して分析した。
【０５５０】
Ｔ細胞増殖の抑制アッセイ
抑制アッセイを、培養の７日目に行った。ＯＴＩＩマウス由来の脾細胞（ＯＶＡに特異的なＴＣＲのＴｇ）を、マウスのＩＬ−２３Ｒでコーティングされたビーズまたは抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを伴うかまたは伴わずに、卵白アルブミン（１００μｇ／ｍｌ）の存在下で、形質導入されていないＴｒｅｇ（Ｐｏｌｙ  Ｔｒｅｇ）またはＩＬ−２３ＲｍＣＡＲ  Ｔｒｅｇの存在下で４日間共培養した。４日目に、細胞を回収し、脾細胞由来のＣＤ４の増殖を、ｄｙｅ  ４５０の希釈の決定を介してフローサイトメトリーにより評価した。Ｔｃｏｎｖ増殖の阻害のパーセンテージを、以下のように計算した。
【数１】
2021520820.tif 000003
【０５５１】
イミキモド誘導性乾癬様皮膚炎症
８〜１０週齢のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）に、連続して７日間、剪毛した背中に市販のＩＭＱ  ｃｒｅａｍ（５％）（Ａｌｄａｒａ；３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）の一日の局所用量の６２．５ｍｇを投与した。対照のマウスを、対照のビヒクルクリーム（Ｖａｓｅｌｉｎｅ  Ｌａｎｅｔｔｅ  ｃｒｅａｍ；Ｆａｇｒｏｎ）で同様に処置した。２日目に、抗ＩＬ−２３（１００μｇ）を腹腔内注射し、マウスあたり８×１０６個のＴｒｅｇ（ＰｏｌｙまたはａＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ）を静脈内注射した。７日目に、全てのマウスを屠殺した。背中の皮膚の炎症の重症度をスコア付けするために、客観的なスコアリングシステムを、臨床的なＰＡＳＩ（Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）に基づき開発した。発赤、スケーリング、および厚さを独立に、０〜４：（０、なし；１、わずか；２、中程度；３、顕著；４、著しく顕著）の尺度でスコア付けした。発赤のレベルを、赤い痕跡を伴うスコア付け表を使用してスコア付けした。累積スコア（発赤＋スケーリング＋厚さ）は、炎症の重症度の測定値として機能した（尺度０〜１２）。全ての実験は、動物実験に関するフランスの法律によって動物倫理委員会により承認された。
【０５５２】
結果
単離の後に、マウスＴｒｅｇ（ｍＴｒｅｇ）細胞を、ウイルス形質導入を行う前に２日間、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８でコーティングしたビーズおよびＩＬ−２で前刺激した。ｍＴｒｅｇを、交差反応性ｈｕ／ｍｓ抗ＩＬ−２３Ｒの一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）から構成されるキメラ抗原受容体（ＩＬ−２３Ｒ−ｍＣＡＲ）で形質導入し、マウスＣＤ８のヒンジおよび膜貫通領域を介してシグナリング配列に、およびマウスＣＤ２８の細胞内部分に連結し、次に、これを細胞内マウスＣＤ３ζ鎖に融合した（図４）。
【０５５３】
ウイルスの上清を、２５０μｌのＸｖｉｖｏ培地中の５×１０５個の刺激されたＴｒｅｇに添加した。細胞を、２日ごとにＩＬ−２を添加しながら７日間培養した。形質導入効率および細胞表面でのＣＡＲ発現を、ＮＧＦＲ染色により評価し、約７０％の形質導入された細胞が細胞表面でＣＡＲを発現することを示した（図５）。
【０５５４】
次に、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲを介して活性化される形質導入されたｍＴｒｅｇの特質を試験した。ｍＴｒｅｇを、プレートにコーティングした組み換え型マウスＩＬ−２３ＲまたはビーズにコーティングしたヒトおよびマウスＩＬ−２３Ｒで刺激した。刺激から２４時間後に、活性化の状態を、フローサイトメトリーにおいてＣＤ６９発現を介して分析した。プレートまたはビーズにコーティングした組み換え型ヒト／マウスＩＬ−２３Ｒの存在下でのＣＤ６９のアップレギュレーションは、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲを形質導入したｍＴｒｅｇが、ＣＡＲ誘発を介して活性化され得ることを示している（図６）。
【０５５５】
最後に、重要な性質は、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲで形質導入されたＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞が、ＣＡＲ誘発を介してそれらの抑制的な接触に依存的な機能を維持することである（図７およびＢ）。
【０５５６】
最後に、図８ＡおよびＢに示されるように、ＩＬ−２３Ｒ  ＣＡＲ  Ｔｒｅｇを、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ軸により駆動されることが記載されているモデルである、イミキモド誘導性皮膚炎症モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏでのその活性について試験した。抗ＩＬ−２３抗体（白色の四角）は、ＩＬ−２３Ｒの遮断が、臨床スコアの低下を誘導することを確認した。興味深いことに、ＩＬ−２３Ｒ−ＣＡＲ  ｍＴｒｅｇ（白色の丸）もまた、ｉ．ｖ．注入から２日後に臨床スコアの低下を誘導でき、それに対しポリクローナルなＴｒｅｇは、臨床経過に影響を与えなかった。
【図１】
2021520820.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2021520820.tif 000009
【図７】
2021520820.tif 000010
【図８】
2021520820.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】令和2年12月15日(2020.12.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021520820000001.app
【国際調査報告】
2021520820.tif 000012
2021520820.tif 000013
2021520820.tif 000014