(57)【要約】  自己反応性免疫細胞の標的化において使用するための主要組織適合複合体ベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）。多発性硬化症などの自己免疫疾患の治療において使用するためのＭＨＣ−ＣＡＲを発現する遺伝子操作された免疫細胞もまた本明細書において提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ベースのキメラ受容体であって、
（ｉ）自己免疫疾患に関与する抗原からの抗原ペプチドに共役したＭＨＣ分子の細胞外ドメイン、および
（ｉｉ）細胞質シグナル伝達ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、またはその組合せ
を含む、ＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項２】
前記少なくとも１つの共刺激ドメインを含む、請求項１に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項３】
前記少なくとも１つの共刺激ドメインが、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からの共刺激ドメイン、ＣＤ２８からの共刺激ドメイン、またはその組合せである、請求項２に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項４】
前記ＭＨＣベースのキメラ受容体が、細胞質シグナル伝達ドメインを含まない、請求項２または請求項３に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項５】
（ｉ）と（ｉｉ）との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項６】
ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項７】
前記抗原ペプチドが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、または表１に記載されるものからの抗原ペプチドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項８】
前記ＭＨＣ分子がクラスＩ  ＭＨＣである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項９】
前記クラスＩ  ＭＨＣがヒトクラスＩ  ＭＨＣである、請求項８に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１０】
前記キメラ受容体の前記細胞外ドメインが、前記抗原ペプチドに融合した前記クラスＩ  ＭＨＣのアルファ鎖の細胞外ドメインを含む、請求項８または請求項９に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１１】
前記キメラ受容体が、（ｉ）前記クラスＩ  ＭＨＣ分子の前記細胞外ドメイン、および（ｉｉ）前記細胞質ドメイン、前記少なくとも１つの共刺激ドメイン、または前記その組合せを含む融合ポリペプチドである、請求項１０に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１２】
前記キメラ受容体が融合ポリペプチドであり、前記融合ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端へ、シグナルペプチド、第１のペプチドリンカー、前記抗原ペプチド、第２のペプチドリンカー、マクログロブリンの細胞外ドメイン、第３のペプチドリンカー、前記クラスＩ  ＭＨＣ分子、膜貫通ドメイン、前記少なくとも１つの共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζを含む、請求項１１に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１３】
前記ＭＨＣ分子がクラスＩＩ  ＭＨＣである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１４】
前記クラスＩＩ  ＭＨＣがヒトＭＨＣ  ＩＩである、請求項１３に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１５】
前記キメラ受容体が、第１のＭＨＣクラスＩＩの細胞外ドメインを含む第１のポリペプチド、および第２のＭＨＣクラスＩＩのベータ鎖の細胞外ドメインを含む第２のポリペプチドを含み、かつ、前記抗原ペプチドが、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドのいずれかに融合しており、かつ、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドのいずれかが、前記細胞質シグナル伝達ドメイン、前記少なくとも１つの共刺激ドメイン、または前記その組合せをさらに含む、請求項１３または請求項１４に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１６】
前記キメラ受容体が、（ｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩ分子のアルファ鎖の細胞外ドメイン、（ｉｉ）第２のＭＨＣクラスＩＩ分子のベータ鎖の細胞外ドメイン、（ｉｉｉ）前記抗原ペプチド、および（ｉｖ）前記細胞質シグナル伝達ドメイン、前記少なくとも１つの共刺激ドメイン、または前記その組合せを含む融合ポリペプチドである、請求項１３または請求項１４に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１７】
前記第１のＭＨＣクラスＩＩがＨＬＡ−ＤＲＡ＊１０１０である、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１８】
前記第２のＭＨＣクラスＩＩがＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１である、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体。
【請求項１９】
全体として請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体をコードする、核酸または核酸セット。
【請求項２０】
前記核酸または核酸セットがウイルスベクター中に位置する、請求項１９に記載の核酸または核酸セット。
【請求項２１】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＭＨＣベースのキメラ受容体を発現する、遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２２】
Ｔ細胞である、請求項２１に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２３】
内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の活性が抑制される、請求項２２に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２４】
前記内因性ＴＣＲのアルファ鎖、前記内因性ＴＣＲのベータ鎖、または両方が、前記内因性ＴＣＲの表面発現を阻害するように突然変異または欠失している、請求項２３に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２５】
内因性ＣＤ５２の発現が阻害される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２６】
自殺遺伝子、マーカー遺伝子、または両方をさらに発現する、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２７】
前記自殺遺伝子がＲＱＲ８である、請求項２６に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２８】
前記マーカー遺伝子が蛍光タンパク質遺伝子である、請求項２６に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項２９】
前記免疫細胞が、リンパ節への送達および保持のためにさらに改変されている、請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３０】
前記免疫細胞が、ＶＡＰ−１、Ｌ−セレクチン、ＣＣＲ７、またはその組合せを過剰発現するようにさらに操作されている、請求項２９に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３１】
内因性スフィンゴシン−１−リン酸受容体１の発現が前記免疫細胞において阻害されている、請求項２９または請求項３０に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３２】
前記免疫細胞が、三次リンパ節または異所性リンパ節への送達および保持のための１つまたは複数の表面分子を発現するようにさらに改変されている、請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３３】
前記免疫細胞が、ＩＬ６ＳＴノックアウト、ＩＬ６Ｒノックアウト、または両方を用いて改変されている、請求項２１〜３２のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３４】
前記免疫細胞が、ケモカイン受容体を発現または過剰発現するようにさらに改変されている、請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３５】
前記ケモカイン受容体が、炎症組織への病的細胞の遊走に関与する、請求項３４に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３６】
前記ケモカイン受容体が、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ３、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、またはその組合せを含む、請求項３５に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３７】
前記免疫細胞が、接着受容体を発現または過剰発現するようにさらに改変されている、請求項２１〜３６のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３８】
前記接着受容体が、炎症領域への病的な免疫細胞のトラフィッキングに関与する、請求項３７に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項３９】
前記接着受容体が、ＶＬＡ−４、α４β１、α４β７、αＬβ２、またはその組合せを含む、請求項３８に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４０】
ＰＤ−１シグナル伝達の遮断を結果としてもたらす遺伝子改変をさらに含む、請求項２１〜３９のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４１】
前記改変が、ＰＤ−１ノックアウト、ＰＤ−Ｌ１ノックアウト、またはその組合せである、請求項４０に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４２】
制御性Ｔ細胞であり、前記制御性Ｔ細胞がＣＤ２５＋である、請求項２１〜４１のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４３】
前記制御性Ｔ細胞が、末梢血単核細胞から単離されたＣＤ２５＋＋ＣＤ４５Ｒ＋  Ｔ細胞に由来する、請求項４２に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４４】
前記制御性Ｔ細胞が、ＣＤ２５をコードする導入遺伝子を含む、請求項４２に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４５】
前記制御性Ｔ細胞が、ＦｏｘＰ３をコードする導入遺伝子を含む、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４６】
前記制御性Ｔ細胞が、ＣＤ１９に特異的なキメラ受容体、ＣＳ−１に特異的なキメラ受容体、または両方をさらに発現する、請求項４２〜４５のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４７】
前記制御性Ｔ細胞が、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＰＤ−１、またはその組合せをさらに発現する、請求項４２〜４６のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４８】
前記制御性Ｔ細胞がＣＤ４＋である、請求項４２〜４７のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項４９】
前記制御性Ｔ細胞が、自己抗原に特異的な抗体を提示する、請求項４２〜４８のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５０】
前記自己抗原が、表１に列記される自己抗原である、請求項４９に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５１】
前記自己抗原がＭＯＧである、請求項５０に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５２】
前記細胞が抗炎症性サイトカインを分泌する、請求項４２〜５１のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５３】
前記抗炎症性サイトカインが、Ｉｌ−３５、ＩＬ−１０、および／またはＴＧＦ−ベータを含む、５２に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５４】
細胞傷害性リンパ球であり、前記細胞傷害性Ｔ細胞がＣＤ８＋である、請求項２２〜４１のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５５】
前記細胞傷害性Ｔ細胞が、末梢血単核細胞から単離されたＣＤ８＋  Ｔ細胞に由来する、請求項５４に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５６】
前記細胞傷害性Ｔ細胞が、ＣＤ１９に特異的なキメラ受容体、ＣＳ−１に特異的なキメラ受容体、または両方をさらに発現する、請求項５４または請求項５５に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５７】
前記細胞傷害性Ｔ細胞が、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＰＤ−１、またはその組合せをさらに発現する、請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
【請求項５８】
自己免疫疾患を有する対象において自己反応性免疫細胞を抑制する方法であって、前記対象に有効量の請求項２１〜５７のいずれか１項に記載の遺伝子改変免疫細胞を投与することを含む、方法。
【請求項５９】
前記遺伝子改変免疫細胞がＴ細胞である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項５８または請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記遺伝子改変免疫細胞が自己細胞である、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記遺伝子改変免疫細胞が同種細胞である、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記遺伝子改変免疫細胞が前記対象のリンパ節に投与される、請求項５８〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記対象が、ＣＤ５２に特異的な抗体を含む療法を受けている、請求項５８〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記対象が、多発性硬化症を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、前記改変Ｔ細胞が、請求項３３〜４３のいずれか１項に記載のＴｒｅｇ細胞である、請求項５８〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ヒト患者が早期ステージＭＳ患者であり、かつ、前記Ｔｒｅｇ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の遺伝子改変：
（ｉ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１ノックアウト、
（ｉｉ）ＣＣＲ６および／またはＣＸＣＲ５の表面発現、
（ｉｉｉ）ＭＯＧに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに
（ｉｖ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ヒト患者が、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記Ｔｒｅｇ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：
（ｉ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現、および
（ｉｉ）ＣＸＣＲ５の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ヒト患者が、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記Ｔｒｅｇ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：
（ｉ）ＭＯＧに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、および
（ｉｉ）ＣＣＲ６の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ヒト患者が、慢性進行性形態のＭＳを有し、かつ、前記Ｔｒｅｇ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：
（ｉ）ＣＳ−１を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに
（ｉｉ）ＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＲ３を標的化する作用物質の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記ヒト患者が早期ステージＭＳ患者であり、かつ、前記細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の遺伝子改変：
（ｉ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１ノックアウト、
（ｉｉ）ＣＣＲ６および／またはＣＸＣＲ５の表面発現、
（ｉｉｉ）ＭＯＧに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに
（ｉｖ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記対象が、多発性硬化症を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、前記遺伝子改変Ｔ細胞が、請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の細胞傷害性ＣＤ８＋  Ｔ細胞である、請求項５８〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ヒト患者が、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ、以下の改変：
（ｉ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現、および
（ｉｉ）ＣＸＣＲ５の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ヒト患者が、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：
（ｉ）ＭＯＧに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、および
（ｉｉ）ＣＣＲ６の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記ヒト患者が、慢性進行性形態のＭＳを有し、かつ、前記細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞が、前記ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：
（ｉ）ＣＳ−１を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに
（ｉｉ）ＣＸＣＲ４および／またはＣＸＣＲ３を標的化する作用物質の表面発現
の１つまたは複数を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７５】
前記ヒト患者が、請求項３３〜４３のいずれか１項に記載のＴｒｅｇ細胞、および請求項５４〜５７のいずれか１項に記載の細胞傷害性細胞の両方を投与される、請求項５８〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記Ｔｒｅｇ細胞および前記細胞傷害性細胞が、同時または逐次的に投与される、請求項７５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年１１月１０日に出願された米国仮出願第６２／５８４，４４９号の出願日の利益を主張する。この参照出願の内容全体は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患は、自己抗原に対する異常な免疫応答により特徴付けられ、組織の損傷または破壊に繋がる。多発性硬化症（multiple sclerosis；ＭＳ）は、中枢神経系の自己免疫疾患であり、活性化された自己反応性Ｔ細胞が血液脳関門に侵入し、ミエリン破壊および軸索喪失に繋がる炎症応答を開始させる。ＭＳの病因、その発症および進行と関連付けられる機序、ならびにそのアウトカムの決定は解明されないままであるが、全ての利用可能な証拠は、ＭＳに関与する病的な免疫細胞を特異的に標的化する療法は、利用可能な療法に対して向上した治療アウトカムを有することを示唆する。Reinhard et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 101(suppl 2):14599-14606; 2004。この戦略は、関節リウマチを含む類似の機序を有する他の免疫障害に拡張され得る。Carol et al., Nature Reviews Immunology, 2(2):85-95, 2002。
【０００３】
ヒトにおいてヒト白血球（ＨＬＡ）として公知の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）は、外来作用物質を認識するために免疫系にとって必須の細胞表面タンパク質のセットである。ＭＨＣ複合体は病原体に由来する抗原に結合し、それをＴ細胞に提示し、次にＴ細胞が活性化され、外来抗原を提示する細胞の除去に繋がる。ＭＨＣ複合体はまた、インタクトな、および一部の場合にはミスフォールディングした、宿主由来タンパク質をＢ細胞に提示し、それにより、自己免疫障害に特徴的な自己抗体応答を誘導することがある。Jiang et al., International immunology, 25(4):235-246 (2013)、およびBusch et al., The EMBO journal, 15(2):418, (1996)。
【発明の概要】
【０００４】
態様では、本開示は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ベースのキメラ受容体（ＣＡＲ）であって、（ｉ）自己免疫疾患に関与する抗原からの抗原ペプチドに共役したＭＨＣ分子の細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞質シグナル伝達ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、またはその組合せを含む、ＭＨＣベースのＣＡＲを特徴とする。ＭＨＣベースのＣＡＲは、（ｉ）と（ｉｉ）との間に位置するヒンジドメインをさらに含んでもよい。抗原ペプチドは自己免疫障害に依存し、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、または表１に記載されるような追加の例示的な自己抗原からのものであってもよい。
【０００５】
一部の例では、ＭＨＣベースのキメラ受容体は、少なくとも１つの共刺激ドメインを含み、少なくとも１つの共刺激ドメインは、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）からの共刺激ドメイン、ＣＤ２８からの共刺激ドメイン、またはその組合せであってもよい。他の例では、本明細書に記載されるようなＭＨＣベースのキメラ受容体は、細胞質シグナル伝達ドメインを含まなくてもよい。代替的または追加的に、ＭＨＣ−ＣＡＲは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含む。
【０００６】
一部の実施形態では、ＭＨＣ−ＣＡＲ中のＭＨＣ分子は、クラスＩ  ＭＨＣ、例えば、ヒトクラスＩ  ＭＨＣである。一部の事例では、キメラ受容体の細胞外ドメインは、抗原ペプチドに融合したクラスＩ  ＭＨＣのアルファ鎖の細胞外ドメインを含む。例えば、キメラ受容体は、（ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ分子の細胞外ドメイン、および（ｉｉ）細胞質ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、またはその組合せを含む融合ポリペプチドであってもよい。一例では、キメラ受容体は融合ポリペプチドであり、融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、シグナルペプチド、第１のペプチドリンカー、抗原ペプチド、第２のペプチドリンカー、マクログロブリンの細胞外ドメイン、第３のペプチドリンカー、クラスＩ  ＭＨＣ分子、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζを含む。
【０００７】
他の実施形態では、本明細書に記載されるようなＭＨＣベースのキメラ受容体は、クラスＩＩ  ＭＨＣ（例えば、ヒトＭＨＣ  ＩＩ）またはその部分を含む。そのようなキメラ受容体は、第１のＭＨＣクラスＩＩの細胞外ドメインを含む第１のポリペプチド、および第２のＭＨＣクラスＩＩのベータ鎖の細胞外ドメインを含む第２のポリペプチドを含んでもよく、かつ、抗原ペプチドは、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドのいずれかに融合しており、かつ、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドのいずれかは、細胞質シグナル伝達ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、またはその組合せをさらに含む。一部の例では、キメラ受容体は、（ｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩ分子のアルファ鎖の細胞外ドメイン、（ｉｉ）第２のＭＨＣクラスＩＩ分子のベータ鎖の細胞外ドメイン、（ｉｉｉ）抗原ペプチド、および（ｉｖ）細胞質シグナル伝達ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、またはその組合せを含む融合ポリペプチドであり得る。一部の例では、抗原タンパク質は、ＭＨＣクラスＩＩに連結されていなくてもよく、かつ、代わりに、代替的なシグナルペプチド（例えば、ＣＤ１５０からのもの、すなわち、ＭＤＰＫＧＬＬＳＬＴＦＶＬＦＬＳＬＡＦＧ（配列番号：３８８））を有する別々の融合ポリペプチドとして発現されてもよい。一部の例では、第１のＭＨＣクラスＩＩはＨＬＡ−ＤＲＡ＊１０１０である。代替的または追加的に、第２のＭＨＣクラスＩＩはＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１である。
【０００８】
別の態様では、本開示は、核酸または核酸セットであって、全体として本明細書に記載されるＭＨＣベースのキメラ受容体のいずれかをコードする、核酸または核酸セットを特徴とする。一部の事例では、核酸または核酸セットは、１つまたは複数のベクター、例えば、ウイルスベクター中に位置し得る。
【０００９】
さらに、本開示は、遺伝子改変免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、本明細書に記載されるＭＨＣベースのキメラ受容体のいずれかを発現する、遺伝子改変免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供する。一部の事例では、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の活性は抑制され得、該抑制は、内因性ＴＣＲのアルファ鎖、内因性ＴＣＲのベータ鎖、または両方を突然変異または欠失させて内因性ＴＣＲの表面発現を阻害することにより達成されてもよい。代替的または追加的に、内因性ＣＤ５２の発現は阻害され得る。
【００１０】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるような遺伝子改変免疫細胞は、自殺遺伝子（例えば、ＲＱＲ８）、マーカー遺伝子（例えば、ＧＦＰ）、または両方をさらに発現してもよい。必要な場合、免疫細胞は、リンパ節または三次リンパ臓器への送達および保持のためにさらに改変され得る。例えば、免疫細胞は、ＶＡＰ−１、Ｌ−セレクチン、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ５、またはその組合せを過剰発現するようにさらに操作され得る。一部の事例では、内因性スフィンゴシン−１−リン酸受容体１の発現は、遺伝子改変免疫細胞中で阻害され得る。
【００１１】
一部の実施形態では、免疫細胞は、例えば、ＣＣＲ６（例えば、Ｔｈ１７細胞の部位へ）、ＣＸＣＲ３もしくはＣＸＣＲ４（例えば、血漿細胞の部位へ）などのケモカイン受容体を使用して、または膜連結型抗原標的化抗体を通じて、炎症の部位に移行するように操作され得る。代替的または追加的に、遺伝子改変免疫細胞は、ＰＤ−１シグナル伝達の遮断を結果としてもたらす遺伝子改変をさらに含んでもよい。必要があり、かつ障害が特に重篤な場合、ＭＨＣ−ＣＡＲ細胞はまた、バイスタンダーＢ細胞（ＣＤ１９もしくはＣＤ２０−ＣＡＲを用いる）または血漿細胞（ＣＳ１−ＣＡＲおよび／もしくはＣＳ１ノックアウトを用いる）を除去または不活性化する（inactive）ように設計され得る。
【００１２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるような遺伝子改変免疫細胞は制御性Ｔ細胞であってもよく、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ２５＋、および任意選択的にＣＤ４＋であり得る。一部の事例では、制御性Ｔ細胞は、末梢血単核細胞または臍帯血から単離されたＣＤ２５＋＋ＣＤ４５Ｒ＋  Ｔ細胞に由来し得る。他の事例では、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ２５をコードする導入遺伝子を含んでもよい。本明細書に開示される任意のＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ１９に特異的なキメラ受容体、ＣＳ−１に特異的なキメラ受容体、または両方をさらに発現してもよい。代替的または追加的に、制御性Ｔ細胞は、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＰＤ−１、またはその組合せをさらに発現してもよい。一部の例では、制御性Ｔ細胞は、ＭＯＧに特異的な抗体を提示してもよい。
【００１３】
さらに別の態様では、本開示は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）を有する対象において自己反応性免疫細胞を抑制する方法を提供する。方法は、対象に有効量の本明細書に記載されるような遺伝子改変免疫細胞を投与することを含んでもよく、該遺伝子改変免疫細胞はＴ細胞であり得る。
【００１４】
一部の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は自己細胞である。他の実施形態では、遺伝子改変免疫細胞は同種細胞である。任意の遺伝子改変免疫細胞が対象のリンパ節に投与されてもよい。一部の事例では、対象は、ＣＤ５２に特異的な抗体を含む療法を受けている。
【００１５】
一部の実施形態では、対象は、多発性硬化症を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、遺伝子改変Ｔ細胞は、本明細書に記載されるようなＴｒｅｇ細胞または細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）である。
【００１６】
一部の例では、ヒト患者は早期ステージＭＳ患者であり、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の遺伝子改変：（ｉ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１ノックアウト、（ｉｉ）ＣＣＲ６および／またはＣＸＣＲ５の表面発現、（ｉｉｉ）ＭＯＧに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに（ｉｖ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ種類の改変を有する細胞傷害性ＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００１７】
一部の例では、ヒト患者は、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性ＭＳを有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）ＭＯＧに特異的な抗体または抗原結合断片の表面提示、および（ｉｉ）ＣＣＲ６の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ種類の改変を有する細胞傷害性ＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００１８】
一部の例では、ヒト患者は、再発寛解性ＭＳまたは早期ステージ進行性ＭＳを有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現、および（ｉｉ）ＣＸＣＲ５の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００１９】
一部の例では、ヒト患者は、慢性進行性形態のＭＳを有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）ＣＳ−１を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに（ｉｉ）作用物質ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ６、および／またはＣＸＣＲ５の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００２０】
一部の実施形態では、対象は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性特発性関節炎（若年性特発性関節炎としても公知）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺疾患（グレーブス病および橋本病）、多発性硬化症  重症筋無力症、炎症性腸疾患（クローン病または潰瘍性大腸炎）、乾癬、または表１に記載される疾患を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、遺伝子改変Ｔ細胞は、本明細書に記載されるようなＴｒｅｇ細胞および／またはＣＴＬである。
【００２１】
一部の例では、ヒト患者は、本明細書に記載される任意の自己免疫障害（例えば、表１に列記されるもの）の早期ステージ患者であり、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の遺伝子改変：（ｉ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−１ノックアウト、（ｉｉ）ＣＣＲ６および／またはＣＸＣＲ５の表面発現、（ｉｉｉ）その自己免疫障害について表１において自己抗原として記載される関連するタンパク質に特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに（ｉｖ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００２２】
一部の例では、ヒト患者は、本明細書に記載されるような任意の自己免疫障害（例えば、表１に列記されるもの）の中等度に重篤な病態を有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）その自己免疫障害について表１において自己抗原として記載される関連するタンパク質に特異的な抗体または抗原結合断片の表面提示、および（ｉｉ）ＣＣＲ６の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００２３】
一部の例では、ヒト患者は、本明細書に記載されるような任意の自己免疫障害（例えば、表１に列記されるもの）の中等度に重篤な病態を有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）ＣＤ１９を標的化するキメラ受容体の表面発現、および（ｉｉ）ＣＸＣＲ５の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００２４】
一部の例では、ヒト患者は、本明細書に記載される任意の自己免疫障害（例えば、表１に列記されるもの）の重篤な病態を有し、かつ、Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現し、かつ以下の改変：（ｉ）ＣＳ−１を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ６、および／またはＣＸＣＲ５を標的化する作用物質の表面発現の１つまたは複数を有する。一部の例では、患者は、同じ改変を有するＣＴＬを用いて最初に、同時に、または交互に治療されてもよい。
【００２５】
自己免疫疾患の治療において使用するための医薬組成物、Ｔｒｅｇ細胞などの本明細書に記載されるような遺伝子改変免疫細胞発現ＭＨＣ−ＣＡＲおよび薬学的に許容される担体を含む組成物、ならびに標的自己免疫疾患の治療において使用するための医薬の製造のためのそのような遺伝子改変免疫細胞の使用もまた本開示の範囲内である。
【００２６】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細は、以下の記載に示される。本発明の他の特徴または利点は、以下の図面およびいくつかの実施形態の詳細な説明、そしてまた添付の特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現のためのレンチウイルス発現ベクターの例示的な設計の概略図である。ｍＲＮＡおよびマルチシストロン性ｍＲＮＡの設計は類似である。
【図２】図２は、多発性硬化症（ＭＳ）に関与する病的なＴ細胞を標的化するためのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）ペプチドとの共役として指し示されるようなＭＨＣ−ＣＡＲの様々な設計を発現するＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞の概略図である。任意選択的に、ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、内因性ＴＣＲおよび／またはＣＤ５２がノックアウトされていてもよい。ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、細胞表面上にＲＱＲ８をさらに発現してもよい。
【図３】図３は、様々なＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトのための例示的な設計の概略図である。例示的なＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、２つのサブユニット：リーダー配列、ＤＲＡ＊１０１０ドメイン、および細胞質ドメインを含有するα鎖、ならびにＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１からのリーダー配列、ＭＢＰからのペプチド、およびＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１からのドメインを含むβ鎖を有してもよい。ｍＲＮＡを作製するために使用されるＤＮＡは、単鎖を含有するか、またはマルチシストロン性でありかつオルソゴナル２Ａ配列により分離されている。ＲＱＲ８およびｅＢＦＰ（またはＧＦＰ）は、細胞対照および標識化の両方のために使用される。
【図４】図４は、ｅＢＦＰ（もしくはＧＦＰ）またはＲＱＲ８をさらに含んでもよい、ＭＢＰペプチドを含有する様々なＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトのための発現カセットの例示的な設計の概略図である。
【図５】図５は、ＭＨＣ−ＣＡＲならびに任意選択的にｅＢＦＰおよび／またはＲＱＲ８などの標識タンパク質のためのレンチウイルス発現コンストラクトの例示的な設計の概略図である。そのような発現カセットは、１つのレンチウイルスパッケージ中に含めるために充分に小さい。
【図６】図６は、タグ付加のための多数の部位を含んでもよい、ＭＨＣ−ＣＡＲの例示的な設計の概略図である。部位１は、ナイーブＨＬＡ−ＤＲが発現されないか、またはＣＩＩＴＡ編集に起因する場合のためのＨＬＡ−ＤＲ抗体結合部位である。部位２および３は、ポリヒスチジンタグモチーフのための潜在的な挿入部位である。部位４および５はそれぞれＲＱＲおよびＲＱＲ８を表す。
【図７】図７は、抗原ペプチドに連結されたＭＨＣクラスＩＩ部分の例示的な設計の概略図である。「Ｎ」はポリペプチドのＮ末端を指す。黒丸のドットは抗原ペプチドを指す。
【図８Ａ】図８Ａおよび図８Ｂは、ＭＨＣクラスＩの例示的なコンストラクトの概略図である。図８Ａは、抗原ペプチドに連結されたＭＨＣクラスＩ部分の例示的な設計を示す。「Ｎ」はポリペプチドのＮ末端を指す。黒丸のドットは抗原ペプチドを指す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲコンストラクトのための例示的な発現カセットを示す。
【図９】図９は、ＭＨＣ−ＣＡＲを構築するためおよびサイトカインの共発現の考慮のための例示的な共刺激ドメインおよびその組合せを示す。
【図１０−１】図１０は、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩの両方の成分を含有する複数鎖ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを含む、例示的な一本鎖および複数鎖ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを示す。
【図１０−２】同上。
【図１１】図１１は、Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡ（「Ｃａｓ９単独」）またはＣａｓ９をコードするｍＲＮＡ（「Ｃａｓ９単独」）およびＴ細胞受容体アルファドメイン（ＴＲＡＣ）をコードする遺伝子を標的化するｓｇＲＮＡ（「Ｃａｓ９＋ＴＲＡＣ  ｇＲＮＡ」）をトランスフェクトした初代ヒト刺激ＣＤ３＋  Ｔ細胞（ＴＣＥＬＬ−００２８）上のＣＤ３発現を示すプロットである。
【図１２】図１２は、殺傷アッセイにおける相対的な細胞生存を示すプロットである。コンストラクト１、コンストラクト２、またはコンストラクト１および２の両方をトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３細胞を培地単独、リツキシマブ、補体、またはリツキシマブおよび補体の両方とインキュベートした。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
自己反応性Ｔ細胞（例えば、多発性硬化症に関与するミエリン成分についてのもの）は、正常な個体中に存在する。疾患誘導の決定因子の大部分は、これらの自己反応性Ｔ細胞が自己免疫患者（例えば、ＭＳ患者）において誘発された場合に起こる免疫応答のクラスにある。病的な自己反応性Ｔ細胞の生成は、特定の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）および非ＭＨＣ遺伝子の両方に好都合であり、個体が反応するタンパク質配列および免疫応答のクラスを決定する。
【００２９】
免疫攻撃が開始自己抗原（例えば、ＭＳにおけるミエリン抗原）に対して始まると、他の自己抗原への反応性の拡大が起こり、すなわち、Ｔ細胞が１つの自己抗原（例えば、ＭＳにおける脳タンパク質）を攻撃する場合、他の構造物が損傷し、それらは、「エピトープ拡大」と呼ばれるプロセスにおいて、追加のＴ細胞を増感して他の標的を攻撃することがあり、これは、全ての自己免疫障害に共有され、かつ一般に疾患応答に共通するプロセスである。
【００３０】
Ｂ細胞は、初期の自己反応性の攻撃により引き起こされる早期疾患病変、例えば、活性ＭＳ病変における免疫反応の通常成分である。Ｂ細胞の蓄積は、詰め込まれた凝集物または異所性のＢ細胞濾胞として起こる。Serafini et al., Brain Pathol. 14: 164-144 (2004)；Wekerle, Autoimmunity, 50:1, 57-60 (2017)；およびProbstel, et al., International journal of molecular sciences, 16(7), pp.16576-16592 (2015)。ＭＳにおいて、Ｂ細胞は、ＲＲ、ＳＰ、およびＰステージのＭＳ患者の脳および脊髄において見出されることが報告された。直接的または間接的のいずれかでＢ細胞を標的化する治療処置は、ＭＳなどの自己免疫疾患の治療において有益であることが証明されている。Wekerle, 2017。
【００３１】
ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の両方がＭＳ病変において存在し、疾患発症において中心的役割を果たすと考えられている。ミエリン反応性（ＭＢＰ、ＰＬＰ、およびＭＯＧ）ＣＤ４およびＣＤ８細胞の頻度の増加が健常対照と比較してＭＳ患者において見出される。Cao, et al., Sci. Transl. Med. 7 (287), 287ra74 (2014)；Martin, et al., J. Exp. Med. 173 (Jan 1, 1991)；Ota, et al., Nature 346, 183 (Jul 12, 1990)；Pette, et al., Neurology 40, 1770 (1990)；およびRaddassi, et al., J. Immunol. 187, 1039 (2011)。
【００３２】
ＩＦＮ−ガンマを産生するＴｈ１細胞およびＴｈ１７細胞は独特に病原性である。Ｔｈ１細胞の発生に有利に働く因子がＭＳ患者において上昇しており、そしてまたウイルス感染により誘発される：ガンマインターフェロン；ＩＬ−１２。免疫系に影響しかつＭＳを助けるほぼ全ての治療において、ほぼ全てがＴｈ１応答を減少させ、Ｔｈ２およびＴＨ３応答を増加させる。Ｔｈ１７細胞は組織炎症の部位に存在し、自己免疫／慢性炎症状態に関与する。Ｔｈ１７産生ＣＤ４およびＣＤ８細胞は、患者の病変、血液、およびＣＳＦにおいて増加している。［Tzartos 2008；Matusevicius 1999；Bruchlacher-Waldert 2009］。Ｔｈ１７細胞上のＣＣＲ６およびＣＤ１６１は、炎症組織へのホーミング分子であると推定されている［Cosmi, 2008］。
【００３３】
Ｔｈ１７細胞はまた、全身性エリテマトーデス（sytemic lupus erythematosus）、関節リウマチ、若年性特発性関節炎（若年性特発性関節炎としても公知）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺疾患（グレーブス病および橋本病）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（クローン病または潰瘍性大腸炎）、および乾癬などの多数の他の自己免疫疾患に関与する。Tabarkiewicz et al., Archivum immunologiae et therapiae experimentalis, 63(6):435-449 (2015)。
【００３４】
自己免疫疾患に対するあらゆる治療の究極的目標は、病理の完全な抑制である。多発性硬化症および他の自己免疫障害の場合、病的なリンパ球（Ｂ細胞およびＴ細胞の両方、ならびに必要な場合、非常に重篤な症例について血漿細胞）は、疾患経過を停止させるために除去または制御されることが期待され、疾患進行の異なるステージにおける介入は異なる細胞標的、およびしたがって治療用細胞を必要とする。
【００３５】
自己反応性Ｔ細胞などの自己反応性免疫細胞を標的化するための主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）が本明細書に開示される。本明細書に記載されるようなＭＨＣ−ＣＡＲは、１つまたは複数のＭＨＣポリペプチドまたはその細胞外ドメインおよび１つまたは複数の細胞シグナル伝達ドメイン、例えば、細胞質シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζからのもの）、少なくとも１つの共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢもしくはＣＤ２８からのもの）、または両方を含む。ＭＨＣ−ＣＡＲは、自己抗原または自己免疫応答の誘発において自己抗原を模倣する外来抗原からの抗原ペプチドをさらに含んでもよい。ＭＨＣ−ＣＡＲをコードする核酸、それを有するベクター、ならびにＭＨＣ−ＣＡＲを発現するＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの遺伝子操作された免疫細胞もまた本明細書にある。そのような遺伝子操作された免疫細胞は、自己反応性免疫細胞を標的化し、それにより、自己反応性免疫細胞を伴う自己免疫疾患の治療において利益を得るために使用され得る。
【００３６】
本明細書に開示されるようなＭＨＣベースのキメラ受容体を発現する遺伝子改変制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞もまた本明細書に開示される。そのようなＴｒｅｇ細胞は、Ｔ細胞および／またはＢ細胞表面マーカーを標的化するキメラ受容体（複数可）の他に、例えば、特定の組織部位（例えば、リンパ節もしくは炎症部位）を標的化するためまたは免疫応答をモジュレ―ト（例えば、チェックポイントモジュレーション）するための追加の遺伝子操作を用いてさらに改変されてもよい。遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、標的疾患の早期ステージにおいて病原性を阻害するため、疾患の中期ステージ（例えば、再発性もしくは寛解性ＭＳ）において疾患進行を制御するため、または、疾患の後期ステージ（例えば、慢性進行性ＭＳ）において、例えば病的なＣＤ８＋  Ｔ細胞の細胞傷害性の誘導を介して、病理を抑制するために使用されてもよい。
【００３７】
Ｉ．主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）
本明細書に記載されるＭＨＣベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）は、抗原ペプチド（例えば、ミスフォールディングしたもの）に共役したＭＨＣ部分、および細胞質シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζのもの）、１つもしくは複数の共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢもしくはＣＤ２８のもの）、またはその組合せであり得る少なくとも１つの細胞シグナル伝達部分を含む。一部の事例では、抗原ペプチドは、ＭＨＣ−ＣＡＲの融合ポリペプチドの部分であり得る。他の事例では、抗原ペプチドは、ＭＨＣ−ＣＡＲと融合ポリペプチドを形成せずにＭＨＣ−ＣＡＲと複合体を形成する。本明細書において使用される場合、「共役した」という用語は、少なくとも２つの成分が、共有結合を介してまたは非共有結合性相互作用を介して、物理的に会合していることを意味する。
【００３８】
一部の例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、ＭＨＣ部分、抗原ペプチド、および少なくとも１つの細胞シグナル伝達部分を含有する単一の融合ポリペプチドであり得る。そのような単一の融合ポリペプチドは、好適な免疫細胞中で発現された場合に内因性細胞膜タンパク質（例えば、β−ミクログロブリン）と複合体を形成してもよい。
【００３９】
他の例では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲは、抗原ペプチドを含む１つのポリペプチドを含む、複数鎖タンパク質複合体、例えば、ヘテロ二量体であってもよい。一部の事例では、抗原ペプチドまたはポリペプチドは、別々のポリペプチドとして発現されてもよく、該別々のポリペプチドは、ＭＨＣ成分と複合体（例えば、三量体）を形成してもよい。抗原ポリペプチドは、ＭＨＣに結合するミスフォールディングした抗原タンパク質であり得る。任意選択的に、ＭＨＣ−ＣＡＲはヒンジドメインをさらに含んでもよく、ヒンジドメインは、抗原ペプチドおよび／もしくはＭＨＣ部分、Ｎ末端のシグナルペプチド、ならびに／または１つもしくは複数のタグ付加部位、例えば、ヒスチジンタンパク質タグおよび／もしくは殺傷スイッチ部位として追加的に作用するＲＱＲドメインに隣接してもよい。
【００４０】
（ｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲの成分
（ａ）ＭＨＣ部分
本明細書に開示されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトはＭＨＣ部分を含み、ＭＨＣ部分は、１つまたは複数のＭＨＣポリペプチドまたはその細胞外ドメインを含んでもよい。ＭＨＣ部分は、好適な供給源、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えば、サル、マウス、ラット、ウサギ、ブタなど）に由来してもよい。一部の事例では、ＭＨＣ部分は、ヒトＭＨＣ分子（ＨＬＡとしても公知）からのものである。一部の事例では、他の細胞からの分子（ＴＣＲまたはＢＣＲ）と相互作用するドメインは、ヒトＭＨＣ分子からのものである。主に２つのクラスのＭＨＣ分子、ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子があり、これらの両方は、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲを構築するために使用され得る。様々な種（例えば、ヒト、非ヒト霊長動物、イヌ科動物、魚、オビッド（ovids）、ウシ科動物、ウマ科動物、イノシシ科動物、ネズミ科動物、およびガルス属動物）のＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子の配列が公的な遺伝子データセット、例えば、ＥＭＢＬ−ＥＢＩにより提供されるＩＰＤ−ＭＨＣデータベースおよびＩＭＧＴ／ＨＬＡデータベースならびに米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）により提供されるｄｂＭＨＣデータベースから入手可能である。
【００４１】
ＭＨＣクラスＩ分子は、アルファ鎖およびβ−ミクログロブリンを含有するヘテロ二量体である。アルファ鎖の細胞外ドメインは、３つのサブドメイン、α１、α２、およびα３を含む。一部の実施形態では、ＭＨＣ部分は、ＭＨＣクラスＩ分子のアルファ鎖、またはその細胞外ドメイン、例えば、α１ドメイン、α２ドメイン、α３ドメイン、もしくはその組合せを含んでもよい。ＭＨＣクラスＩ分子は、ヒトＨＬＡ−Ａ分子、ヒトＨＬＡ−Ｂ分子、またはヒトＨＬＡ−Ｃ分子であってもよい。一部の事例では、ＭＨＣクラスＩ分子のアルファ鎖は、β−ミクログロブリンと融合して、単鎖融合タンパク質を生じてもよい。一部の例では、ＭＨＣクラスＩ部分はＨＬＡ  Ａ３からのものであり、これはＰＬＰペプチドと併用され得る。Honma et al., J. Neuroimmunol. 73:7-14 (1997)。他の例では、ＭＨＣクラスＩはＨＬＡ  Ａ２からのものであり、これは同じＰＬＰペプチドおよびＴＡＸなどのウイルスペプチドの提示と共に使用され得る。ＴＡＸは、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（system lupus erythematosus）、およびシェーグレン症候群などの疾患に関与する、ヒト神経タンパク質の分子模倣物であるタンパク質ｔａｘまたはｐ４０（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＡＢ２０１３０．１）およびＨＴＬＶ−１ウイルスからのものである。Garboczi, et al. The Journal of Immunology, 157(12):5403-5410, 1996. Quaresma, et al., 2015. Viruses, 8(1):5 2015。クラスＩタンパク質およびペプチドは、重鎖の位置８４における不変チロシンのアラニンによる置換など、よりロバストなペプチドローディングを可能とするための改変を追加的に含有してもよく、または代替的に、ジスルフィドトラップを作製するためにペプチド−β２ｍリンカーの第２の位置が置換され得るように位置８４のチロシンはシステインにより置換され得る。Hansen et al. Trends in immunology, 31(10):363 (2010)。
【００４２】
ＭＨＣクラスＩ分子と同様、ＭＨＣクラスＩＩ分子もまた、２つの相同ペプチド、α鎖およびβ鎖からなるヘテロ二量体である。α鎖およびβ鎖のそれぞれの細胞外ドメインは、２つのサブドメインα１／α２、およびβ１／β２を含有する。ＭＨＣクラスＩＩ分子がＭＨＣ−ＣＡＲを構築するために使用される場合、ＭＨＣ部分は、２つのサブユニットを含んでもよく、１つはα鎖またはその部分、例えば、その細胞外ドメイン（例えば、α１、α２、または両方）を含み、他方はｂ鎖またはその部分、例えば、その細胞外ドメイン（例えば、β１、β２、または両方）を含む。他の細胞種と相互作用する領域のみが使用される場合（すなわち、α１およびβ１）、ミニＭＨＣのフォールディングを増進するために特定のアミノ酸改変が必要とされることがある；シェード領域を有するミニ配列およびBirnbaum et al.を参照。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、ヒトＨＬＡ  ＤＰ分子、ヒトＨＬＡ  ＤＭ分子、ヒトＨＬＡ  ＤＯＡ分子、ヒトＨＬＡ  ＤＯＢ分子、ヒトＨＬＡ  ＤＱ分子、またはヒトＨＬＡ  ＤＲ分子であってもよい。一部の例では、ＭＨＣクラスＩＩ分子はヒトＨＬＡ  ＤＲ分子、例えば、ＨＬＡ  ＤＲ＊１５０１である。
【００４３】
（ｂ）抗原ペプチド
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲの抗原ペプチドは、自己免疫疾患に関与する病原性免疫細胞（例えば、自己反応性Ｔ細胞またはＢ細胞）により認識可能な抗原ペプチドである。好適なＭＨＣ分子により提示される場合、そのような抗原ペプチドは、病原性Ｔ細胞の抗原特異的Ｔ細胞受容体と相互作用して、下流の免疫応答に繋がる。
【００４４】
一部の事例では、特定の抗原ペプチドは、当該技術分野において公知の方法を使用して、ＭＳ患者などの特定の自己免疫疾患患者のために設計され得る。ＮｅｔＭＨＣのようなプログラムは、患者ＭＨＣに特異的な抗原ペプチドの個別化された設計を可能とし、個別化されたがんワクチンを開発するために使用されている。Hacohen et al., Cancer immunology research, 1(1):11-15 (2013)。自己免疫障害のための個別化されたＣＡＲ  ＴおよびＴｒｅｇ療法もまた本開示の範囲内である。非常に強いＭＨＣ関連性を有する障害（例えば、ＭＳ）について、個別化された療法を利用して、疾患の異なるステージにある大きい患者クラスを治療することができる。最近の研究はまた、自己免疫障害に関与するクラスＩＩ  ＭＨＣおよび特にＨＬＡは、プロセシングされたペプチドだけでなく抗原タンパク質全体を提示し得ることを実証している。Jiang et al., International immunology, 25(4):235-246, (2013)。これらのＭＨＣ−タンパク質複合体は、適切にフォールディングしたタンパク質に結合しない抗体の他に、特定の自己免疫障害を有する者に特異的な自己抗体を含む、自己免疫障害における自己抗体産生を誘導するようである。本発明者らは、ＭＨＣ−ＣＡＲ中の抗原タンパク質の提示は、多くの激しい試みにもかかわらずタンパク質へのその特異性が解明されていないオリゴクローナルバンドを生じさせるＭＳにおけるものなどの、自己免疫特異的Ｂ細胞を除去しまたは不活性化させる特定の経路を提供できるものと考える。Owens et al., Annals of neurology, 65(60):639-649, 2009；Chastre et al., New England Journal of Medicine, 374(15):1495-1496, 2016；Housley et al., Clinical Immunology, 161(1):51-58, 2015；Larman et al., 2013. Journal of autoimmunity, 43:1-9, 2013。抗原タンパク質がＭＨＣに結合しない場合、その特定のＭＨＣ−ＣＡＲは発現されないが、ＴｒｅｇまたはＣＴＬとしてそれは依然としてその他の特徴に依存しておよび異なる特異性を有するＭＨＣ−ＣＡＲ  ＴおよびＴｒｅｇ細胞の患者特異的集団の部分として免疫応答の調節におけるバイスタンダーの役割を果たすことができる。
【００４５】
本発明において使用される抗原ペプチドは、自己免疫疾患に関与する自己抗原、例えば、多発性硬化症に関与するミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、およびプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、Ｉ型糖尿病に関与するインスリンおよびグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）に関与するトリプターゼ、ならびに以下の表１に含まれるタンパク質の断片であってもよい。代替的に、抗原ペプチドは、自己免疫疾患に関与する自己抗原に高度に相同的なウイルスまたは細菌タンパク質などの病原体タンパク質の断片であり得る。そのような抗原ペプチドはまた、病原性Ｔ細胞を標的化し得る。必要な場合、抗原ペプチドは、別々に発現されて本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲのＭＨＣ部分に直接的に結合し得る（典型的にミスフォールディングした）抗原タンパク質またはタンパク質断片であり得る。天然の状態（ＭＨＣ−ＣＡＲのＭＨＣ部分ではなくＭＨＣに結合している）において、そのような抗原タンパク質／ＭＨＣ複合体は、病原性Ｂ細胞を刺激して自己抗体を産生させる。関節リウマチにおけるＩｇＧＨまたはリウマトイド因子（Jin et al.,  Proceedings of the National Academy of Sciences, 111(10):3787-3792, 2014）、抗リン脂質症候群（Tanimura et al., Blood, 125(18):2835-2844, 2015）および再発性流産（Tanimura et al., Placenta, 46:108, 2016）におけるβ２−糖タンパク質Ｉ、自己免疫性肺胞蛋白症におけるＧＭ−ＣＳＦ（Hamano et al., ALVEOLAR MACROPHAGE BIOLOGY B32:A3147-A3147, 2016）、白斑におけるチロシナーゼ（Arase et al. Journal of Dermatological Science, 84(1):e87, 2016）、ならびに顕微鏡的多発血管炎におけるミエロペルオキシダーゼ（Hiwa et al., Arthritis & Rheumatology,  69(10):2069-2080, 2017）などのタンパク質について、ミスフォールディングしたバリアント／ＨＬＡ複合体のＨＬＡ媒介性の表面提示、および一部の場合には自己抗体結合が起こり得る。
【００４６】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用するための抗原ペプチドは、２０個までのアミノ酸残基、抗原タンパク質の細胞外ドメイン、または全長抗原タンパク質を含有してもよい。ＭＨＣクラスＩ部分と併用される場合、抗原ペプチドは、８〜１０アミノ酸の長さであってもよい。そのような抗原ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ分子のペプチド結合部位に良好にフィットする。ＭＨＣクラスＩＩ部分と併用される抗原ペプチドはより長くてもよく、例えば、抗原タンパク質の１５〜２４アミノ酸残基または全長までを含有し、その理由は、ＭＨＣクラスＩＩ分子の抗原結合溝は両方の末端において開いているが、クラスＩ分子上の対応する抗原結合溝は各末端において通常閉じているからである。自己免疫障害に関与するＭＨＣクラスＩＩ分子の開いた抗原結合溝はまた、インタクトな（但し、例えば、ミスフォールディングした）抗原タンパク質またはスプライスバリアントを頻繁に提示し得る。Jiang et al., International immunology, 25(4):235-246, 2013。
【００４７】
一部の例では、ヒトＭＢＰの断片は、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲを構築するために使用される。ヒトＭＢＰの例示的なアミノ酸配列を以下に提供する：
ＭＡＳＱＫＲＰＳＱＲＨＧＳＫＹＬＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨＲＤＴＧＩＬＤＳＩＧＲＦＦＧＧＤＲＧＡＰＫＲＧＳＧＫＶＰＷＬＫＰＧＲＳＰＬＰＳＨＡＲＳＱＰＧＬＣＮＭＹＫＤＳＨＨＰＡＲＴＡＨＹＧＳＬＰＱＫＳＨＧＲＴＱＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰＳＱＧＫＧＲＧＬＳＬＳＲＦＳＷＧＡＥＧＱＲＰＧＦＧＹＧＧＲＡＳＤＹＫＳＡＨＫＧＦＫＧＶＤＡＱＧＴＬＳＫＩＦＫＬＧＧＲＤＳＲＳＧＳＰＭＡＲＲＨＨＨＨＨＨ（配列番号：１）
【００４８】
例示的なＭＢＰ抗原ペプチドとしては以下が挙げられるがこれらに限定されない：
ＧＳＫＹＬＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨＲＤＴＧＩＬＤＳＩＧＲＦＦＧＧＤＲＧ（配列番号：２）、ＫＹＬＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨ（配列番号：３）、ＡＴＡＳＴＭＤＨＡＲＨＧＦＬＰＲＨＲＤＴＧＩＬ（配列番号：４）、ＲＤＴＧＩＬＤＳＩＧＲＦＦＧＧＤＲＧＡＰ（配列番号：５）、ＩＧＲＦＦＧＧＤＲＧＡＰＫＲＧＳＧＫＤＳＨＨＰＡＲＴＡＨＹ（配列番号：６）、ＡＰＫＲＧＳＧＫＤＳＨＨＡＡＲＴＡＨＹ（配列番号：７）、ＧＳＧＫＤＳＨＨＰＡＲＴＡＨＹＧＳＬＰＱ（配列番号：８）、ＨＨＰＡＲＴＡＨＹＧＳＬＰＱＫＳＨＧＲ（配列番号：９）、ＨＡＡＲＴＡＨＹＧＳＬＰＱＫＳＱＧＨＲ（配列番号：１０）、ＳＬＰＱＫＳＨＧＲＴＱＤＥＮＰＶＶＨＦ（配列番号：１１）、ＰＱＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰ（配列番号：１２）、ＴＱＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰ（配列番号：１３）、ＱＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰ（配列番号：１４）、ＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰ（配列番号：１５）、ＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲ（配列番号：１６）、ＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰ（配列番号：１７）、ＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰ（配列番号：１８）、ＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰＳＱ（配列番号：１９）、ＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴ（配列番号：２０）、ＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰＳＱＧＫ（配列番号：２１）、ＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＰＳＱＧＫＧＲＧＬ（配列番号：２２）、ＰＳＱＧＫＧＲＧＬＳＬＳＲＦＳＷＧＡＥ（配列番号：２３）、ＧＫＧＲＧＬＳＬＳＲＦＳＷＧＡＥＧＱＲＰ（配列番号：２４）、ＬＳＲＦＳＷＧＡＥＧＱＲＰＧＦＧＹＧＧ（配列番号：２５）、ＱＲＰＧＦＧＹＧＧＲＡＳＤＹＫＳＡＨＫ（配列番号：２６）、ＡＳＤＹＫＳＡＨＫＧＦＫＧＶＤＡＱＧＴ（配列番号：２７）、ＦＫＧＶＤＡＱＧＴＬＳＫＩＦＫＬＧＧＲ（配列番号：２８）、ＶＤＡＱＧＴＬＳＫＩＦＫＬＧＧＲＤＳＲＳ（配列番号：２９）、およびＳＫＩＦＫＬＧＧＲＤＳＲＳＧＳＰＭＡＲＲ（配列番号：３０）。
【００４９】
配列番号：１５のＭＢＰ抗原ペプチドをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＧＡＴＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＡＡＣＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＣＧＣＧＣＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧ（配列番号：４１１）
【００５０】
特定の例としては、ＭＢＰ１３−３２、ＭＢＰ８９−１０１、ＭＢＰ８３−９９、ＭＢＰ１１１−１２９、またはＭＢＰ１４６−１７０が挙げられる。
【００５１】
ヒトミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、プロテオリピドタンパク質、およびミエリン結合糖タンパク質の例示的なアミノ酸配列を以下に提供する：
＞ＣＡＡ５２６１７．１ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質［ホモサピエンス］
ＭＡＳＬＳＲＰＳＬＰＳＣＬＣＳＦＬＬＬＬＬＬＱＶＳＳＳＹＡＧＱＦＲＶＩＧＰＲＨＰＩＲＡＬＶＧＤＥＶＥＬＰＣＲＩＳＰＧＫＮＡＴＧＭＥＶＧＷＹＲＰＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫＤＱＤＧＤＱＡＰＥＹＲＧＲＴＥＬＬＫＤＡＩＧＥＧＫＶＴＬＲＩＲＮＶＲＦＳＤＥＧＧＦＴＣＦＦＲＤＨＳＹＱＥＥＡＡＭＥＬＫＶＥＤＰＦＹＷＶＳＰＧＶＬＶＬＬＡＶＬＰＶＬＬＬＱＩＴＶＧＬＶＦＬＣＬＱＹＲＬＲＧＫＬＲＡＥＩＥＮＬＨＲＴＦＤＰＨＦＬＲＶＰＣＷＫＩＴＬＦＶＩＶＰＶＬＧＰＬＶＡＬＩＩＣＹＮＷＬＨＲＲＬＡＧＱＦＬＥＥＬＲＮＰＦ（配列番号：３１）
【００５２】
例示的なＭＯＧ抗原ペプチドとしては、ＭＯＧ１−２０またはＭＯＧ３５−５５が挙げられる。
＞ＡＡＡ６０１１７．１プロテオリピドタンパク質［ホモサピエンス］
【化１】
2021502122.tif 000003
【００５３】
ＰＬＰの例示的な抗原断片を下線および太字としている。他の例としては、ＰＬＰ１３９−１５１（４）またはＰＬＰ１７８−１９１が挙げられる。
＞ＡＡＨ９３０４５．１ミエリン結合糖タンパク質［ホモサピエンス］
ＭＩＦＬＴＡＬＰＬＦＷＩＭＩＳＡＳＲＧＧＨＷＧＡＷＭＰＳＳＩＳＡＦＥＧＴＣＶＳＩＰＣＲＦＤＦＰＤＥＬＲＰＡＶＶＨＧＶＷＹＦＮＳＰＹＰＫＮＹＰＰＶＶＦＫＳＲＴＱＶＶＨＥＳＦＱＧＲＳＲＬＬＧＤＬＧＬＲＮＣＴＬＬＬＳＮＶＳＰＥＬＧＧＫＹＹＦＲＧＤＬＧＧＹＮＱＹＴＦＳＥＨＳＶＬＤＩＶＮＴＰＮＩＶＶＰＰＥＶＶＡＧＴＥＶＥＶＳＣＭＶＰＤＮＣＰＥＬＲＰＥＬＳＷＬＧＨＥＧＬＧＥＰＡＶＬＧＲＬＲＥＤＥＧＴＷＶＱＶＳＬＬＨＦＶＰＴＲＥＡＮＧＨＲＬＧＣＱＡＳＦＰＮＴＴＬＱＦＥＧＹＡＳＭＤＶＫＹＰＰＶＩＶＥＭＮＳＳＶＥＡＩＥＧＳＨＶＳＬＬＣＧＡＤＳＮＰＰＰＬＬＴＷＭＲＤＧＴＶＬＲＥＡＶＡＥＳＬＬＬＥＬＥＥＶＴＰＡＥＤＧＶＹＡＣＬＡＥＮＡＹＧＱＤＮＲＴＶＧＬＳＶＭＹＡＰＷＫＰＴＶＮＧＴＭＶＡＶＥＧＥＴＶＳＩＬＣＳＴＱＳＮＰＤＰＩＬＴＩＦＫＥＫＱＩＬＳＴＶＩＹＥＳＥＬＱＬＥＬＰＡＶＳＰＥＤＤＧＥＹＷＣＶＡＥＮＱＹＧＱＲＡＴＡＦＮＬＳＶＥＦＡＰＶＬＬＬＥＳＨＣＡＡＡＲＤＴＶＱＣＬＣＶＶＫＳＮＰＥＰＳＶＡＦＥＬＰＳＲＮＶＴＶＮＥＳＥＲＥＦＶＹＳＥＲＳＧＬＶＬＴＳＩＬＴＬＲＧＱＡＱＡＰＰＲＶＩＣＴＡＲＮＬＹＧＡＫＳＬＥＬＰＦＱＧＡＨＲＬＭＷＡＫＩＧＰＶＧＡＶＶＡＦＡＩＬＩＡＩＶＣＹＩＴＱＴＲＲＫＫＮＶＴＥＳＰＳＦＳＡＧＤＮＰＰＶＬＦＳＳＤＦＲＩＳＧＡＰＥＫＹＥＳＫＥＶＳＴＬＥＳＨ（配列番号：３３）
【００５４】
以下の表１は、他の自己免疫疾患と関連付けられる追加の例示的な自己抗原を提供する。
表１．様々な自己免疫障害の自己抗原
【表１】
2021502122.tif 000004
2021502122.tif 000005
2021502122.tif 000006
2021502122.tif 000007
2021502122.tif 000008
2021502122.tif 000009
2021502122.tif 000010
2021502122.tif 000011
【００５５】
以下の表２は、一般的に自己免疫障害と関連付けられるＨＬＡおよびクラスを提供するが、例示的な場合において、ＨＬＡまたはＨＬＡの部分は患者特異的であり、障害を患う患者の高分解能配列または血清学的同等物に由来する。
【００５６】
表２．一般的に自己免疫疾患と関連付けられるＨＬＡの種類およびクラス
【表２】
2021502122.tif 000012
2021502122.tif 000013
2021502122.tif 000014
2021502122.tif 000015
2021502122.tif 000016
【００５７】
一部の実施形態では、本発明において使用される抗原ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＲ＊１５０１、例えば、ＧＡＤペプチドＴＹＥＩＡＰＶＦＶＬＬＦＹＶＴＬＫＫＭＲ（配列番号：３４）（Ｉ型糖尿病に関与する）、上記に列記されるＭＢＰペプチド、以下のＭＰＰペプチド（ＭＳに関与する）ＬＬＥＣＣＡＲＣＬＶＧＡＰＦＡＳＬＶＡＴＧＬＣＦＦＧＶＡＬＦＣ（配列番号：３５）、ＬＶＧＡＰＦＡＳＬＶＡＴＧＬＣＦＦＧＶＡ（配列番号：３６）、ＦＧＶＡＬＦＣＧＣＥＶＥＡＬＴＧＴＥＫＬＩＥＴＹＦＳＫＮＹＱＤ（配列番号：３７）、ＬＦＣＧＣＧＨＥＡＬＴＧＴＥＫＬＩＥＴＹ（配列番号：３８）、ＴＧＴＥＫＬＩＥＴＹＦＳＫＮＹＱＤＹＥＹ（配列番号：３９）、ＴＧＴＥＫＬＩＥＴＹＦＳＫＮＹＱＤＹＥＹＬ（配列番号：４０）、ＹＦＳＫＮＹＱＤＹＥＹＬＩＮＶＩＨＡＦＱＹＶＩＹＧＴＡＳＦＦＦＬ（配列番号：４１）、ＧＴＡＳＦＦＦＬＹＧＡＬＬＬＡＹＧＦＹＴＴＧＡＶＲＱＩＦＧＤＹＫ（配列番号：４２）、ＬＹＧＡＬＬＬＡＥＧＦＹＴＴＧＡＶＲＱＩ（配列番号：４３）、ＦＹＹＴＴＧＡＶＲＱＩＦＧＤＹＫＴＴＩＣＧ（配列番号：４４）、ＡＶＲＱＩＦＧＤＹＫＴＴＩＣＧＫＧＬＳＡＴＶ（配列番号：４５）、ＲＱＩＦＧＤＹＫＴＴＣＧＫＧＬＳＡＴＶＴＧＧＱＫＧＲＧＳＲＧＱ（配列番号：４６）、ＫＧＬＳＡＴＶＴＧＧＱＫＧＲＧＹＲＧＱＨ（配列番号：４７）、ＱＫＧＲＧＳＲＧＱＨＱＡＨＳＬＥＲＶＣＨ（配列番号：４８）、ＫＧＲＧＳＲＧＱＨＱＡＨＳＬＥＲＶＣＨＣＬＧＣＷＬＧＨＰＤＫＦＶ（配列番号：４９）、ＬＧＨＰＤＫＦＶＧＩＴＹＡＬＴＶＶＷＬＬＶＦＡＣＳＡＶＰＶＹＩＹ（配列番号：５０）、ＳＡＶＰＶＹＩＹＦＮＴＷＴＴＣＱＳＩＡＡＰＣＫＴＳＡＳＩＧＴＬＣ（配列番号：５１）、ＡＶＰＶＹＩＹＦＮＴＷＴＴＣＱＳＩＡＦＰ（配列番号：５２）、ＷＴＴＣＱＳＩＡＦＰＳＫＴＳＡＳＩＧＳＬ（配列番号：５３）、ＳＡＳＩＧＴＬＣＡＤＡＲＭＹＧＶＬＰＷＮＡＦＦＧＫＶＣＧＳＮＬＬ（配列番号：５４）、ＫＶＣＧＳＮＬＬＳＩＣＫＴＡＥＦＱＭＴＦＨＬＦＩＡＡＦＶＧＡＡＡ（配列番号：５５）、ＡＡＦＶＧＡＡＡＴＬＶＳＬＬＴＦＭＩＡＡＴＹＮＦＡＶＬＫＬＭＧＲ（配列番号：５６）、ＭＩＡＡＴＹＮＦＡＶＬＫＬＭＧＲＧＴＫＦ（配列番号：５７）、およびＭＡＡＴＹＮＦＡＶＬＫＬＭＧＲＦＴＫＦ（配列番号：５８）と関連付けられる。
【００５８】
一部の実施形態では、抗原ペプチドまたは抗原ポリペプチドは患者特異的であり、患者のＭＨＣについて設計される。例えば、医師は、自己免疫障害を有する患者を診断し、疾患の重篤度を決定することができる。患者のクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、およびＣ）およびＩＩ（ＨＬＡ−ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ）領域を型別することができ、型別は現在では、ＤＮＡシークエンシングを使用し、参照データベース（https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/）との比較を用いて高分解能で行うことができる。自己免疫関与の最も強い証拠を有する患者のクラスＩおよびＩＩ  ＭＨＣは、障害について同定され得る。特定の自己免疫障害と関連付けられることが既知のものを参照として使用することができる。例えば、表１および表２を参照。最も強い証拠ベースの抗原が障害（iedb.org/）および表１について同定される。患者自己免疫関与ＭＨＣに結合することが期待される個別化されたペプチド（cbs.dtu.dk/services/NetMHC/またはcbs.dtu.dk/services/NetMHCII/）およびタンパク質標的（クラスＩＩについて）のセットが同定され得る。
【００５９】
病原性免疫細胞の標的化を可能とするために、個別化されたＭＨＣ−ＣＡＲレンチウイルスまたはｍＲＮＡが患者のために調製され得る。個別化されたレンチウイルスは、追加の治療法、病原性細胞との所望の相互作用、所望の位置への経路制御（病原性の炎症性もしくは炎症生成細胞との相互作用のため）、またはサイトカインの分泌（炎症を低減するため）との併用治療を可能とするために受容体または細胞改変と組み合わせることができる自己または同種Ｔ細胞（ＣＴＬおよび／またはＴｒｅｇ）を調製するために使用される。
【００６０】
（ｃ）共刺激シグナル伝達ドメイン
多くの免疫細胞は、細胞増殖、分化および生存を促進する他に、細胞のエフェクター機能を活性化させるために、抗原特異的シグナルの刺激に加えて共刺激を必要とする。本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲは、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含んでもよい。「共刺激シグナル伝達ドメイン」という用語は、本明細書において使用される場合、細胞内のシグナル伝達を媒介してエフェクター機能などの免疫応答を誘導するタンパク質の少なくとも一部分を指す。本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインは、シグナルを伝達し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球などの免疫細胞により媒介される応答をモジュレ―トする共刺激タンパク質からの細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。
【００６１】
宿主細胞（例えば、免疫細胞）中の共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、サイトカインの産生および分泌、貪食特性、増殖、分化、生存、ならびに／または細胞傷害性を増加または減少させるように細胞を誘導してもよい。任意の共刺激分子の共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用するために適合性であってもよい。キメラ受容体において使用するための共刺激シグナル伝達ドメインの例は、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、またはＰＤ−１）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４−１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、またはＴＮＦ−アルファ）；ならびに、特定の薬物分子の存在下でのみ共刺激が誘導されることを可能とするＦＲＢ、およびＦＫＢＦなどの他の分子（但し、ここでは、特有のヘテロ二量体ＭＨＣ−ＣＡＲとの関連）が挙げられるがこれらに限定されない共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。Wu et al., Science, 350(6258):aab4077, 2015。一部の実施形態では、共刺激タンパク質の任意の細胞質シグナル伝達ドメインが、不活性バイスタンダーＢ細胞（例えば、ＣＤ１９もしくはＣＤ２０−ＣＡＲを用いる）または血漿細胞（例えば、ＣＳ１−ＣＡＲおよび／もしくはＣＳ１ノックアウトを用いる）を標的化する受容体において使用されてもよい。
【００６２】
一部の事例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、組合せ（例えば、２つまたは３つ）の共刺激ドメインを含んでもよく、これらの共刺激ドメインは、同じ共刺激受容体からのものまたは異なる共刺激受容体からのものであってもよい。例としては、ＣＤ２８＋４−１ＢＢ、ＣＤ２８＋ＦＲＢ、ＣＤ２８＋ＦＫＢＦ、または４−１ＢＢ＋ＦＲＢが挙げられる。図９も参照。一部の例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、ＣＤ２８からの共刺激ドメイン、４−１ＢＢからの共刺激ドメイン、または両方を含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、短いリンカーにより先行される。例えば、クラスＩＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲについて短いリンカーはＴＳ（すなわち、ＭＨＣ内部リンカー）であってもよく、クラスＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲについて短いリンカーは短いリンカーはＰＧであってもよい。
【００６３】
一部の事例では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、共刺激ドメインを含まなくてもよい。代替的に、それは非伝統的エレメントを含有してもよく、該エレメントは、ＴＡＬＥＮヌクレアーゼ、活性化因子、またはリプレッサーなどであり、これらは現在では、再コードまたは非反復含有ＴＡＬドメインを使用して臨床応用可能なレンチウイルス形態で実施されてもよく、Ｎｏｔｃｈに由来する膜ドメインを通じて単鎖ＭＨＣ−ＣＡＲに連結される。
【００６４】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用するための例示的な共刺激ドメインとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：
４１ＢＢ細胞内ドメイン：ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号：５９）
４１ＢＢｅ細胞内ドメイン：ｐｇＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬａｈａ（配列番号：６０）
ＣＤ２８細胞内ドメイン：ＲＳＫＲＳＲＧＧＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号；６１）
ＣＤ２８ｅ細胞内ドメイン：ｐｇＲＳＫＲＳＲＧＧＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳａｈａ（配列番号：６２）
ＦＲＢ：ＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩ（配列番号：６３）
リンカーを有するＦＢＰ
（ＧＳＳＳ）４−ＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩ−（ＧＳＳＳ）３（配列番号：６４）
ＦＫＲＢ
ＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ（配列番号：６５）
リンカーを有するＦＫＢＰ
（ＧＳＳＳ）４−ＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ−（ＧＳＳＳ）３（配列番号：６６）
【００６５】
（ｄ）細胞質シグナル伝達ドメイン
本明細書に記載されるキメラ受容体を構築するために、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む任意の細胞質シグナル伝達ドメインが使用され得る。「ＩＴＡＭ」は、本明細書において使用される場合、多くの免疫細胞中で発現されるシグナル伝達分子のテイル部分に一般に存在する保存されたタンパク質モチーフである。モチーフは、６〜８アミノ酸により分離されたアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの２つのリピートを含んでもよく、各ｘは独立して、保存されたモチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６〜８）ＹｘｘＬ／Ｉを生成する任意のアミノ酸である。一部の例では、ＩＴＡＭを含む細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのものである。一部の例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、共刺激ドメインを含まず、かつ、細胞質シグナル伝達ドメインは短いリンカーにより先行されている。例えば、クラスＩＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲについて、短いリンカーはＴＳ（すなわち、ＭＨＣ内部リンカー）であってもよい。例えば、クラスＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲについて、短いリンカーはＰＧであってもよい。一部の場合には、リンカーは、ＡＨＡであるか、または存在しなくてもよく、これは共刺激ドメインがシグナル伝達ドメインの前に存在するある特定の事例などである。
【００６６】
一部の実施形態では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、細胞質シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζのものを含まなくてもよい。そのようなＣＤ３ζ非含有ＭＨＣ−ＣＡＲは、標的細胞に対する抑制効果を有し、または標的細胞の死を誘導する。Moisini, et al., The Journal of Immunology, 180(5), pp.3601-3611。
【００６７】
ＣＤ３ζからの例示的な細胞質シグナル伝達ドメインを以下に提供する：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：６７）
【００６８】
ＣＤ３ζからの細胞質シグナル伝達ドメインをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＧＡＧＴＡＡＡＧＴＴＴＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＣＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＴＧＧＧＡＣＧＡＣＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＣＴＴＧＡＴＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＧＡＴＣＣＣＧＡＡＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＴＡＴＴＣＣＧＡＡＡＴＡＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＴＧＡＡＣＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＴＧＡＣＧＧＡＣＴＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＣＴＡＣＣＧＣＡＡＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＴＡＴＧＡＣＧＣＧＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＧＡＧＡ（配列番号：４１０）
ＣＧＧＧＴＣＡＡＡＴＴＴＡＧＣＡＧＡＴＣＣＧＣＴＧＡＣＧＣＡＣＣＧＧＣＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＡＣＧＧＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧＡＣＧＴＡＣＴＣＧＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＡＧＡＧＧＧＴＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＡＴＴＣＴＧＡＧＡＴＡＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＧＴＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＣＣＡＡＡＧＡＴＡＣＴＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＧＣＣＡＣＧＣ（配列番号：４２２）
【００６９】
（ｅ）追加の成分
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲは、以下の成分：ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、シグナル（リーダー）ペプチド、およびペプチドリンカーの１つまたは複数を任意選択的にさらに含んでもよい。
【００７０】
一部の事例では、抗原ペプチドは、結果として得られるＭＨＣ−ＣＡＲの免疫標的化活性を増進するためおよび／またはＭＨＣ−ＴＣＲ複合体への標的細胞による抗体応答を低減するためにヒンジペプチドに連結されてもよい。一部の例では、ヒンジペプチドを含有するＭＨＣ−ＣＡＲは、細胞質ドメインを含まなくてもよい（例えば、ＣＤ３ζドメインを含まない）。ヒンジペプチドを含有するＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトはまた、ＭＨＣクラスＩ部分を含んでもよい。ヒンジドメインは、約１０〜１００アミノ酸、例えば、１５〜７５アミノ酸、２０〜５０アミノ酸、または３０〜６０アミノ酸を含有してもよい。一部の実施形態では、ヒンジドメインは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、または７５アミノ酸の長さであってもよい。
【００７１】
一部の例では、以下のペプチドリンカーがクラスＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用され得る：
ＭＨＣＩリンカー１：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：６８）
ＭＨＣＩリンカー２：ＧＧＧＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号：６９）
ＭＨＣＩリンカー３：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：７０）
ＭＨＣＩリンカー４：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：６８）
【００７２】
クラスＩＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲのための例示的なペプチドリンカーは、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（ＭＨＣＩＩリンカー１；配列番号：７２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（ＭＨＣ  ＩＩリンカーＩＩ；配列番号：６８）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号：４００）、またはＭＨＣＩリンカーとして本明細書に記載されるもの（すなわち、ＭＨＣＩリンカー１〜４）であり得る。クラスＩＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲのための例示的なプレペプチドリンカーは、ＡＳもしくはＧＳまたはＡＳもしくはＧＳのいずれかの１もしくは２コピーであり得る。
【００７３】
配列番号：４００により提供されるペプチドリンカーをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する。
ＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＡ（配列番号：４０１）
【００７４】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用するためのヒンジペプチドは、天然に存在する受容体に由来してもよい。ヒンジドメインを含むことが当該技術分野において公知の任意のタンパク質のヒンジドメインは、本明細書に記載されるキメラ受容体において使用するために適合性である。一部の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジドメインの部分、例えば、ＣＤ８αのヒンジドメインの少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、３５、または４０）個の連続するアミノ酸を含有する断片である。代替的に、それは合成ペプチドであってもよい。
【００７５】
例示的なヒンジドメインとしては、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号：７３）、およびＩＷＡＰＬＡＧＩＣＶＡＬＬＬＳＬＩＩＴＬＩ（配列番号：７４）が挙げられる。追加の例を以下に提供する：
ＦＫＢＰ／ＦＲＢ−ＣＤ８ヒンジ：
【化２】
2021502122.tif 000017
ＧＳ短ヒンジ：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：６８）
ＧＳ長ヒンジ：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：７６）
Ｈ２−Ｋｂヒンジ：ＬＲＷＥＰＰＰＳＴＶＳＮＭ（配列番号：７７）
ＨＬＡ−Ａ２ヒンジ：ＬＲＷＥＰＳＳＱＰＴＩＰＩ（配列番号：７８）
ＨＬＡ−Ａ３ヒンジ：ＬＲＷＥＬＳＳＱＰＴＩＰＩ（配列番号：７９）
ＤＡＰ１０ヒンジ：ＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰ（配列番号：８０）
リンカーを有するＤＡＰ１０ヒンジ：（ＧＳＳＳ）４ＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰ（配列番号：８１）
ＤＡＰ１２ヒンジ：ＬＲＰＶＱＡＱＡＱＳＤＣＳＣＳＴＶＳＰ（配列番号：８２）
リンカーを有するＤＡＰ１２ヒンジ：（ＧＳＳＳ）４ＬＲＰＶＱＡＱＡＱＳＤＣＳＣＳＴＶＳＰ（配列番号：８３）
ＦｃＩｇＧＩＩＩａヒンジ：ＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱ（配列番号：８４）
ＣＤ８αヒンジ：ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号：８５）
ＩｇＧｌヒンジ：
ＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号：８６）
ＤＲＡ＊０１０１ヒンジ：ＥＦＤＡＰＳＰＬＰＥＴＴＥ（配列番号：８７）
ＤＲＢ１＊１５０１ヒンジ：ＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号：８８）
【００７６】
ＤＲＡ＊０１０１ヒンジをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する。
ＧＡＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＡＡＡＣＧＡＣＴＧＡＡ（配列番号：４１７）
【００７７】
ＤＲＢ１＊１５０１ヒンジをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する。
ＧＴＴＧＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＡＴＣＴＡＡＡ（配列番号：４０４）
【００７８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、膜貫通ドメインをさらに含む。ＭＨＣ−ＣＡＲにおいて使用するための任意の膜貫通ドメインは、当該技術分野において公知の任意の形態であり得る。本明細書において使用される場合、「膜貫通ドメイン」は、細胞膜、好ましくは真核細胞膜中で熱力学的に安定な任意のタンパク質構造を指す。本発明において使用されるキメラ受容体において使用するために適合性の膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得られたものであってもよい。代替的に、それは、合成の、天然に存在しないタンパク質セグメント、例えば、細胞膜中で熱力学的に安定な疎水性のタンパク質セグメントであり得る。
【００７９】
膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインの三次元構造に基づいて分類される。例えば、膜貫通ドメインは、アルファヘリックス、１つより多くのアルファヘリックスの複合体、ベータバレル、または細胞のリン脂質二重層を貫通することができる任意の他の安定な構造を形成してもよい。さらには、膜貫通ドメインは、追加的または代替的に、膜貫通ドメインが膜を貫通する回数およびタンパク質の配向を含む、膜貫通ドメインのトポロジーに基づいて分類されてもよい。例えば、１回膜貫通タンパク質は細胞膜を１回貫通し、複数回貫通膜タンパク質は細胞膜を少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７またはより多くの回数）貫通する。
【００８０】
膜タンパク質は、細胞の内側および外側に対するそれらの末端および膜貫通セグメント（複数可）のトポロジーに依存してＩ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型として定義され得る。Ｉ型膜タンパク質は単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、かつタンパク質のＣ末端が細胞質側に存在するように配向している。ＩＩ型膜タンパク質もまた単一の膜貫通領域を有するが、タンパク質のＣ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、かつタンパク質のＮ末端が細胞質側に存在するように配向している。ＩＩＩ型膜タンパク質は複数の膜貫通セグメントを有し、膜貫通セグメントの数ならびにＮ末端およびＣ末端の位置に基づいてさらに下位分類されることがある。
【００８１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｉ型１回膜貫通タンパク質、例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、またはＣＤ２８に由来する。複数回貫通膜タンパク質からの膜貫通ドメインもまた、本明細書に記載されるキメラ受容体において使用するために適合性のことがある。複数回貫通膜タンパク質は、複合体（少なくとも２、３、４、５、６、７もしくはより多くの）アルファヘリックスまたはベータシート構造を含んでもよい。好ましくは、複数回貫通膜タンパク質のＮ末端およびＣ末端は、脂質二重層の対向する側に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は脂質二重層の細胞質側に存在し、かつタンパク質のＣ末端は細胞外側に存在する。複数回貫通膜タンパク質からの１または複数のヘリックス通過を本明細書に記載されるキメラ受容体バリアントを構築するために使用することができる。
【００８２】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの構築において使用するための例示的な膜貫通ドメインを以下に提供する：
ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン：ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ（配列番号：８９）
ＨＬＡ−Ａ２膜貫通ドメイン：ＶＧＩＩＡＧＬＶＬＦＧＡＶＩＴＧＡＶＶＡＡＶＭＷ（配列番号：９０）
ＨＬＡ−Ａ３膜貫通ドメイン：ＶＧＩＩＡＧＬＶＬＬＧＡＶＩＴＧＡＶＶＡＡＶＭＷ（配列番号：９１）
ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメイン：ＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬ（配列番号：９２）
ＤＲ＊１５０１膜貫通ドメイン：ＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩ（配列番号：９３）
ＤＲ＊１５０１ｅ膜貫通ドメイン：ＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩＹＦＲＮＱ（配列番号：９４）
ＤＲＡ＊０１０１膜貫通ドメイン：ＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩ（配列番号：４１６）
ＤＲＡ＊０１０１ｅ膜貫通ドメイン：ＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩＫＧＬ（配列番号：４１８）
【００８３】
ＤＲ＊１５０１ｅ膜貫通ドメインをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＧＡＧＴＡＧＧＣＧＧＡＴＴＴＧＴＡＣＴＣＧＧＡＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＴＧＧＧＣＧＣＴＧＧＧＴＴＧＴＴＴＡＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＡＡＡＣＣＡＡ（配列番号：４０６）
【００８４】
ＤＲＡ＊０１０１ｅ膜貫通ドメインをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＡＣＧＴＴＧＴＣＴＧＣＧＣＴＣＴＴＧＧＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＧＣＣＴＧＧＴＡＧＧＣＡＴＴＡＴＴＡＴＣＧＧＧＡＣＣＡＴＣＴＴＴＡＴＣＡＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＧ（配列番号：４１９）
Ｎｏｔｃｈ膜貫通ドメイン：
ＩＬＤＹＳＦＴＧＧＡＧＲＤＩＰＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣＡＥＨＶＰＥＲＬＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳＲＫＲＲＲ（配列番号：９５）
Ｎｏｔｃｈ  ２膜貫通ドメイン：
ＰＣＶＧＳＮＰＣＹＮＱＧＴＣＥＰＴＳＥＮＰＦＹＲＣＬＣＰＡＫＦＮＧＬＬＣＨＩＬＤＹＳＦＴＧＧＡＧＲＤＩＰＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣＡＥＨＶＰＥＲＬＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳＲＫＲＲＲ（配列番号：９６）
【００８５】
一部の実施形態では、ＭＨＣ−ＣＡＲはまた、ポリペプチドのＮ末端においてシグナルペプチド（シグナル配列またはリーダーペプチドとしても公知）を含んでもよい。一般に、シグナル配列は、細胞中の所望の部位にポリペプチドを標的化するペプチド配列である。一部の実施形態では、シグナル配列は、ＭＨＣ−ＣＡＲを細胞の分泌経路に標的化し、脂質二重層へのＭＨＣ−ＣＡＲの組込みおよびアンカリングを可能とする。本明細書に記載されるキメラ受容体において使用するために適合性の、天然に存在するタンパク質のシグナル配列または合成の天然に存在しないシグナル配列を含むシグナル配列は当業者に明らかであろう。一部の実施形態では、ＣＤ８αからのシグナル配列である。一部の実施形態では、シグナル配列はＣＤ２８からのものである（例えば、ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧ（配列番号：９７））。
【００８６】
例示的なシグナルペプチドとしては、ベータ−２−ミクログロブリンシグナルペプチド（例えば、ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号：９８））、ＨＬＡ  Ａ３シグナルペプチド（例えば、ＭＡＶＭＡＰＲＴＬＬＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＱＴＷＡ（配列番号：９９）、または）、ＤＲＡ＊０１０１シグナルペプチド（例えば、ＭＡＩＳＧＶＰＶＬＧＦＦＩＩＡＶＬＭＳＡＱＥＳＷＡ（配列番号：１００））、ＤＲＢ１＊１５０１シグナルペプチド（例えば、ＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＴＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬ（配列番号：１０１））、およびＤＲＢ５シグナルペプチド（例えば、ＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＹＭＡＫＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬＡ（配列番号：１０２））が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なシグナルペプチドには、ＡＳ、ＧＳ、ＡＳＡＳ、ＧＳＧＳなどの柔軟なプレペプチドリンカーが後続してもよい。一部の実施形態では、柔軟なプレペプチドリンカーは、シグナルペプチドがクラスＩＩであり、かつ導入されるペプチドが後続する場合に使用される。本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲをコードする任意のコンストラクトは、上記のプレペプチドリンカーのいずれかをコードする核酸配列を含んでもよく、例えば、ＡＳは核酸配列ＧＣＡＴＣＴによりコードされてもよく、ＴＳは核酸配列ＡＣＡＡＧＴによりコードされてもよい。
【００８７】
ベータ−２−ミクログロブリンシグナルペプチドをコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＴＧＧＴＡＴＧＣＴＴＧＡＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧＣＧＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＧＣＴＣＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＣＴＴＡＴＧＧＴＣＣＴＴＡＧＴＴＣＡＣＣＧＣＴＴＧＣＣＣＴＧ（配列番号：３９７）
ＡＴＧＧＣＡＡＴＡＴＣＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＣＣＴＣＧＧＧＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＴＡＧＣＣＧＴＡＣＴＧＡＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＧＧＧＣＧ（配列番号：４１４）
【００８８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲは、本明細書に記載されるような他の成分の間の１つまたは複数のペプチドリンカーを含んでもよい。例としては、（ＧｌｙｘＳｅｒ）ｎリンカー（ｘおよびｎは独立して、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはより大きいものを含む、３〜１２の整数であり得る）が挙げられる。一部の例では、ペプチドリンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号：１０３）（ｎは３〜２０の整数であり得る）であり得る。特定の例としては、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号：６８）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）６（配列番号：６９）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）９（配列番号：７６）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１２（配列番号：１０５）、および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１５（配列番号：１０６）が挙げられる。
【００８９】
（ｉｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲの構成
本明細書に記載される１つまたは複数の成分を含む本明細書に開示されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、任意の好適なフォーマットで構成されていてもよい。例示的なＭＨＣクラスＩコンストラクトおよびＭＨＣクラスＩＩコンストラクトを図７および図８に提供する。
【００９０】
本明細書に記載されるようなＭＨＣクラスＩ部分を含有するＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、ＭＨＣクラスＩ部分、抗原ペプチド、およびシグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン、細胞質シグナル伝達ドメイン、またはその組合せ）、ならびに任意選択的に本明細書に記載される追加の成分の１つまたは複数を含む単一の融合ポリペプチドであってもよい。例えば、図８を参照。一部の例では、ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲコンストラクトは、抗原ペプチドに隣接するヒンジドメインを含有する。ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲは、β２−ミクログロブリン（ｂ２ｍ）を含有しなくてもよい。細胞表面上に発現される場合、そのようなＭＨＣ−ＣＡＲは、内因性のｂ２ｍとヘテロ二量体を形成してもよい。代替的に、ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲはまた、ｂ２ｍを含んでもよく、ｂ２ｍは、アルファ鎖と融合して単一のポリペプチドを生じてもよい。一部の事例では、ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲは、２つのサブユニットを含有してもよく、１つはアルファ鎖またはその部分（例えば、細胞外ドメイン）を含んでもよく、かつ、他方はｂ２ｍまたはその部分（例えば、細胞外ドメイン）を含んでもよい。一部の例では、抗原ペプチドはアルファ鎖に融合していてもよい。他の例では、抗原ペプチドはｂ２ｍに融合していてもよい。任意選択的に、ＭＨＣクラスＩ  ＣＡＲは、２つの成分の間にペプチドリンカーを含有してもよい。一例を図８Ｂに提供する。
【００９１】
一部の例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、クラスＩ分子またはその部分、例えば、ＨＬＡ  Ａ３またはＨＬＡ  Ａ２、およびクラスＩ分子による提示のために好適な抗原ペプチド（例えば、ＰＬＰ断片ＫＬＩＥＴＹＦＳＫ（配列番号：１０７）またはＴＡＸ断片ＬＬＦＧＹＰＶＹＶ（配列番号：１０８））を含む。任意選択的に、ＭＨＣ−ＣＡＲはｂ２ｍをさらに含んでもよい。代替的に、ｂ２ｍ分子は、クラスＩ  ＭＨＣ−ＣＡＲとは別々に発現されてもよい。クラスＩ分子およびｂ２ｍ配列の例を以下に提供する：
ＨＬＡ  Ａ２：
ＧＳＨＳＭＲＹＦＦＴＳＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＡＳＱＲＭＥＰＲＡＰＷＩＥＱＥＧＰＥＹＷＤＧＥＴＲＫＶＫＡＨＳＱＴＨＲＶＤＬＧＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＧＳＨＴＶＱＲＭＹＧＣＤＶＧＳＤＷＲＦＬＲＧＹＨＱＹＡＹＤＧＫＤＹＩＡＬＫＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＭＡＡＱＴＴＫＨＫＷＥＡＡＨＶＡＥＱＬＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＮＧＫＥＴＬＱＲＴＤＡＰＫＴＨＭＴＨＨＡＶＳＤＨＥＡＴＬＲＣＷＡＬＳＦＹＰＡＥＩＴＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＴＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＱＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬＴ（配列番号：１０９）
ＨＬＡ  Ａ３：
ＧＳＨＳＭＲＹＦＦＴＳＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＡＳＱＲＭＥＰＲＡＰＷＩＥＱＥＧＰＥＹＷＤＱＥＴＲＮＶＫＡＱＳＱＴＤＲＶＤＬＧＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＧＳＨＴＩＱＩＭＹＧＣＤＶＧＳＤＧＲＦＬＲＧＹＲＱＤＡＹＤＧＫＤＹＩＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＭＡＡＱＩＴＫＲＫＷＥＡＡＨＥＡＥＱＬＲＡＹＬＤＧＴＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＮＧＫＥＴＬＱＲＴＤＰＰＫＴＨＭＴＨＨＰＩＳＤＨＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＴＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＴＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬＴ（配列番号：１１０）
上記についての微小拡張：ＬＲＷＥ（配列番号：１１１）
Ｈ−２Ｋｂアルファ３ドメイン（下線／斜体）を有するＨＬＡ  Ａ２
【化３】
2021502122.tif 000018
Ｈ−２Ｋｂアルファ３ドメイン（下線／斜体）を有するＨＬＡ  Ａ３
【化４】
2021502122.tif 000019
上記についての微小拡張：ＬＲＷＥ（配列番号：１１１）
ベータ−２−ミクログロブリン（ヒト）：
ＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹＳＲＨＰＡＥＮＧＫＳＮＦＬＮＣＹＶＳＧＦＨＰＳＤＩＥＶＤＬＬＫＮＧＥＲＩＥＫＶＥＨＳＤＬＳＦＳＫＤＷＳＦＹＬＬＹＹＴＥＦＴＰＴＥＫＤＥＹＡＣＲＶＮＨＶＴＬＳＱＰＫＩＶＫＷＤＲＤＭ（配列番号：１１４）
ベータ−２−ミクログロブリン（マウス）：
ＩＱＫＴＰＱＩＱＶＹＳＲＨＰＰＥＮＧＫＰＮＩＬＮＣＹＶＴＱＦＨＰＰＨＩＥＩＱＭＬＫＮＧＫＫＩＰＫＶＥＭＳＤＭＳＦＳＫＤＷＳＦＹＩＬＡＨＴＥＦＴＰＴＥＴＤＴＹＡＣＲＶＫＨＡＳＭＡＥＰＫＴＶＹＷＤＲＤＭ（配列番号：１１５）
【００９２】
図７は、ＭＨＣクラスＩＩ  ＣＡＲコンストラクトの多数の例示的な設計を提供する。典型的に、ＭＨＣクラスＩＩ  ＣＡＲコンストラクトは２つのサブユニットを含有し、１つはアルファ鎖またはその部分（例えば、細胞外ドメイン）を含み、かつ他方はベータ鎖またはその部分（例えば、細胞外ドメイン）を含む。抗原ペプチドは、アルファ鎖またはベータ鎖のいずれかに融合され得る。一部の事例では、ＭＨＣクラスＩＩ  ＣＡＲはまた、単一の融合ポリペプチドのフォーマットであり得、該フォーマットでは、アルファ鎖およびベータ鎖は融合して単一のポリペプチドを形成する。ＭＨＣクラスＩＩ  ＣＡＲのアルファ鎖およびベータ鎖は同じＭＨＣクラスＩＩ分子に由来してもよい。代替的に、それらは異なるＭＨＣクラスＩＩ分子からのものであってもよい。例えば、ＭＨＣクラスＩＩ  ＣＡＲは、ＨＬＡ  ＤＲＡ＊１０１０からのアルファ鎖およびＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１からのベータ鎖を含有してもよく、それはＭＢＰペプチドなどの抗原ペプチドと融合していてもよい。
【００９３】
一部の例では、ＭＨＣ−ＣＡＲは、クラスＩＩ分子またはその部分、例えば、ＤＲＢ１＊１５０１またはＤＲＡ＊０１０１、およびクラスＩＩ分子による提示のために好適な抗原ペプチド（例えば、ＭＢＰ断片ＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰ（配列番号：１５））を含む。クラスＩＩ分子配列の例を以下に提供する；
ＤＲＢ１＊１５０１：
ＧＤＴＲＰＲＦＬＷＱＰＫＲＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＩＬＥＱＡＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶＱＲＲＶＱＰＫＶＴＶＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＬＮＧＱＥＥＫＡＧＭＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴＳＰＬＴ（配列番号：１１７）
ＤＲＡ＊０１０１
ＩＫＥＥＨＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬＫＨＷ（配列番号：１１８）
ＤＲＢ１＊１５０１ヒト／ＩＡ−Ｄベータマウス（突然変異残基を太字および下線としている）
【化５】
2021502122.tif 000020
ＤＲＡ＊０１０１ヒト／ＩＡ−Ｄアルファマウス（突然変異残基を太字および下線としている）
【化６】
2021502122.tif 000021
ＤＲ−２ベータミニ（突然変異残基を太字および下線としている）
【化７】
2021502122.tif 000022
ＤＲ−２アルファミニ
【化８】
2021502122.tif 000023
ＤＲＢ１＊１５０１をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＧＧＡＧＡＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＡＧＣＣＣＡＡＡＡＧＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＴＴＴＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＣＧＧＡＡＣＧＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＣＴＴＧＡＴＣＧＧＴＡＣＴＴＴＴＡＣＡＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＴＧＴＡＣＧＧＴＴＣＧＡＣＴＣＡＧＡＴＧＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＡＧＣＧＧＴＴＡＣＧＧＡＡＴＴＧＧＧＧＣＧＡＣＣＴＧＡＣＧＣＧＧＡＧＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＣＡＡＡＡＧＧＡＴＡＴＴＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＴＡＴＴＧＴＣＧＡＣＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＴＧＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＣＴＴＴＡＣＡＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＴＧＣＡＡＣＣＴＡＡＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＡＡＡＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＧＴＧＴＧＴＴＣＣＧＴＡＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＡＴＴＧＡＧＧＴＣＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＴＣＡＡＣＧＧＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＴＡＣＴＧＧＴＣＴＴＡＴＣＣＡＧＡＡＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＣＡＡＡＣＴＴＴＧＧＴＡＡＴＧＴＴＧＧＡＡＡＣＧＧＴＧＣＣＧＣＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＡＴＧＣＣＡＡＧＴＴＧＡＡＣＡＣＣＣＧＡＧＴＧＴＴＡＣＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＣＧ（配列番号：４０２）
ＤＲＡ＊０１０１をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＴＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＣＧＧＡＧＴＴＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＣＣＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＧＧＴＧＡＧＴＴＣＡＴＧＴＴＣＧＡＴＴＴＴＧＡＴＧＧＣＧＡＣＧＡＧＡＴＡＴＴＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＡＴＧＧＣＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＡＣＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＴＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＴＣＡＴＴＴＧＡＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＧＣＣＡＡＴＡＴＣＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＴＧＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＡＡＴＴＡＴＡＣＧＣＣＴＡＴＣＡＣＴＡＡＴＧＴＧＣＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＣＡＡＡＴＴＣＴＣＣＣＧＴＡＧＡＡＣＴＴＡＧＧＧＡＡＣＣＴＡＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＣＧＡＣＡＡＧＴＴＣＡＣＴＣＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＣＡＡＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＣＴＴＣＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＣＣＧＧＴＣＡＣＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＴＣＡＧＡＧＡＣＣＧＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＡＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＣＡＡＣＧＧＡＡＧＡＣＧＴＴＴＡＣＧＡＣＴＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＣＡＴＴＧＧＧＧＧＣＴＴＧＡＣＧＡＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＡＡＧＣＡＴＴＧＧ（配列番号：４１５）
【００９４】
本明細書に記載される任意のＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩコンストラクトは、１つまたは複数のシグナル伝達ドメインおよび任意選択的に追加の成分の１つまたは複数にさらに融合され得る。一部の事例では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトはシグナル伝達ドメインを含まない。
【００９５】
好ましくは、本明細書に記載されるようなＭＨＣ−ＣＡＲは、マッチしたＭＨＣ部分および抗原ペプチド、例えば、天然の状態において抗原ペプチドまたは相同アナログを提示するＭＨＣ分子を含有する。一部の事例では、本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲは、ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１からのアルファ鎖またはベータ鎖およびこのＨＬＡアレルと関連付けられる抗原ペプチド、例えば、本明細書に記載されるＭＢＰペプチドおよび他のものを含有してもよい。自己免疫疾患に関与する抗原ペプチドと特定のＨＬＡアレルとの間の関連は当該技術分野において周知であり、または常用の実施、例えば、ライブラリースクリーニングを介して同定され得る。
【００９６】
１つの例示的なＭＨＣ−ＣＡＲは、以下のフォーミュラを有してもよい（＋／−は、特定の成分は任意選択的であることを意味する）：
【００９７】
単鎖（ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ＋ペプチド）（＋／−ヒンジ）＋単鎖ＣＤ２８／４−１ＢＢ（＋／−ジロイシンモチーフ）（＋／−ＣＤ３ゼータ））。（以前に記載されたように追加の短いペプチドリンカーを成分間に付加することができる。）
【００９８】
他の例示的なＭＨＣ−ＣＡＲ設計（単鎖および複数鎖）を図１０に示す。複数鎖コンストラクトの場合、１つまたは複数の短ヒンジを使用してＭＨＣ−ＣＡＲの発現の成功を増進してもよい。さらに、構造の部分をマウスドメインからの保存されたドメインと置換して交差反応性を予防することが望ましいことがある。なお、一部の場合には、内部ドメインは鎖の１つにのみ取り付けられてもよい。
【００９９】
ＭＨＣ−ＣＡＲ結合（ＭＢＰを提示する）ＴＣＲのアミノ酸配列を以下に提供する：
ＴＣＲアルファＭＢＰ：
ＭＥＴＬＬＧＶＳＬＶＩＬＷＬＱＬＡＲＶＮＳＱＱＧＥＥＤＰＱＡＬＳＩＱＥＧＥＮＡＴＭＮＣＳＹＫＴＳＩＮＮＬＱＷＹＲＱＮＳＧＲＧＬＶＨＬＩＬＩＲＳＮＥＲＥＫＨＳＧＲＬＲＶＴＬＤＴＳＫＫＳＳＳＬＬＩＴＡＳＲＡＡＤＴＡＳＹＦＣＡＴＡＡＶＧＧＦＫＴＩＦＧＡＧＴＲＬＦＶＫＡＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳＣＤＶＫＬＶＥＫＳＦＥＴＤＴＮＬＮＦＱＮＬＳＶＩＧＦＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ（配列番号：１２３）
ＴＣＲベータＭＢＰ
ＭＬＬＬＬＬＬＬＧＬＡＧＳＧＬＧＡＶＶＳＱＨＰＳＷＶＩＳＫＳＧＴＳＶＫＩＥＣＲＳＬＤＦＱＡＴＴＭＦＷＹＲＱＦＰＫＱＳＬＭＬＭＡＴＳＮＥＧＳＫＡＴＹＥＱＧＶＥＫＤＫＦＬＩＮＨＡＳＬＴＬＳＴＬＴＶＴＳＡＨＰＥＤＳＳＦＹＩＣＳＡＲＤＬＴＳＧＡＮＮＥＱＦＦＧＰＧＴＲＬＴＶＬＥＤＬＫＮＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＹＰＤＨＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＳＬＳＳＲＬＲＶＳＡＴＦＷＱＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＦＴＳＥＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡＶＬＶＳＡＬＶＬＭＡＭＶＫＲＫＤＳＲＧ（配列番号；１２４）
ＴＣＲアルファクラスＩ
ｍａｍｌｌｇａｓｖｌ  ｉｌｗｌｑｐｄｗｖｎ  ｓｑｑｋｎｄｄ
ＱＱＶＫＱＮＳＰＳＬＳＶＱＥＧＲＩＳＩＬＮＣＤＹＴＮＳＭＦＤＹＦＬＷＹＫＫＹＰＡＥＧＰＴＦＬＩＳＩＳＳＩＫＤＫＮＡＤＧＲＦＴＶＦＬＮＫＳＡＫＨＬＳＬＨＩＶＰＳＱＰＧＤＳＡＶＹＦＣＡＡＭＥＧＡＱＫＬＶＦＧＱＧＴＲＬＴＩＮＰＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤＳＤＶＹＩＴＤＫＴＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳ
Ｃｄｖｋｌｖｅ  ｋｓｆｅｔｄｔｎｌｎ  ｆｑｎｌｓｖｉｇｆｒ  ｉｌｌｌｋｖａｇｆｎ  ｌｌｍｔｌｒｌｗｓｓ（配列番号：１２５）
ＴＣＲベータクラスＩ：
ｍｓｉｇｌｌｃｃａａ  ｌｓｌｌｗａｇｐｖ
ＮＡＧＶＴＱＴＰＫＦＱＶＬＫＴＧＱＳＭＴＬＱＣＡＱＤＭＮＨＥＹＭＳＷＹＲＱＤＰＧＭＧＬＲＬＩＨＹＳＶＧＡＧＩＴＤＱＧＥＶＰＮＧＹＮＶＳＲＳＴＴＥＤＦＰＬＲＬＬＳＡＡＰＳＱＴＳＶＹＦＣＡＳＳＹＰＧＧＧＦＹＥＱＹＦＧＰＧＴＲＬＴＶＴＥＤＬＫＮＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＹＰＤＨＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＡＬＳＳＲＬＲＶＳＡＴＦＷＱＤＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤ
ｃｇｆｔｓｅ  ｓｙｑｑｇｖｌｓａｔ  ｉｌｙｅｉｌｌｇｋａ  ｔｌｙａｖｌｖｓａｌ  ｖｌｍａｍｖｋｒｋｄ  ｓｒｇ（配列番号：１２６）
【０１００】
例示的なＣＤ１９標的化ＣＡＲコンストラクトのアミノ酸配列を以下に提供する（なお、これらの設計は、ｃｄ２８ドメインにより置換されてもよい４−１ＢＢドメインを含有する）：
４Ｇ７−ＣＡＲバージョン１：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＩＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＳＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＩＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧＮＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＦＴＡＧＴＫＬＥＬＫＲＳＤＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１２７）
４Ｇ７−ＣＡＲバージョン２：
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶ  ＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ  ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥ  ＬＩＫＰＧＡＳＶＫＭ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  ＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫ  ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹ  ＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹ  ＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬ  ＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹ  ＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤ  ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＴ  ＹＹＹＧＳＲＶＦＤＹ  ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳ  ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭ  ＴＱＡＡＰＳＩＰＶＴ  ＰＧＥＳＶＳＩＳＣＲ  ＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧ  ＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲ  ＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹ  ＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰ  ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴ  ＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥ  ＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭ  ＱＨＬＥＹＰＦＴＦＧ  ＡＧＴＫＬＥＬＫＲＳ  ＤＰＴＴＴＰＡＰＲＰ  ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱ  ＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲ  ＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲ  ＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩ  ＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶ  ＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹ  ＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹ  ＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶ  ＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳ  ＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧ  ＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳ  ＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱ  ＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧ  ＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫ
ＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧ  ＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧ  ＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭ  ＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫ  ＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤ  ＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴ  ＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱ  ＡＬＰＰＲ（配列番号：１２８）
【０１０１】
例示的なＣＤ１９標的化ＣＡＲコンストラクトの核酸配列を以下に提供する。
４Ｇ７−ＣＡＲバージョン２
ａｔｇｇａｇａｃａｇａｃａｃｔｃｔｔｃｔｃｃｔｔｔｇｇｇｔｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｇｔｔｃｃｃｇｇａａｇｃａｃａｇｇａｇａａｇｔａｃａｇｔｔｇｃａａｃａｇｔｃｔｇｇｇｃｃａｇａａｃｔｃａｔｃａａａｃｃｃｇｇａｇｃｔｔｃｔｇｔａａａａａｔｇｔｃａｔｇｃａａａｇｃｔａｇｔｇｇａｔａｔａｃａｔｔｔａｃｔｔｃｔｔａｃｇｔｇａｔｇｃａｃｔｇｇｇｔａａａａｃａｇａａａｃｃｔｇｇｔｃａｇｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｃｇｇｇｔａｃａｔｔａａｃｃｃａｔａｔａａｔｇａｃｇｇｃａｃｃａａａｔａｔａａｃｇａｇａａａｔｔｃａａｇｇｇａａａｇｇｃｔａｃｇｃｔｔａｃａｔｃａｇａｔａａｇｔｃｃａｇｔａｇｃａｃｃｇｃｔｔａｔａｔｇｇａａｃｔｔａｇｃａｇｃｃｔｔａｃｔｔｃｃｇａａｇａｔｔｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃｇａｇａｇｇｇａｃｔｔａｃｔａｃｔａｃｇｇｇａｇｔｃｇａｇｔａｔｔｃｇａｔｔａｔｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｇａｃｇｃｔｃａｃｇｇｔｇａｇｃｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｇｇｇｇｇｔｇｇｃｇｇｃａｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｇｇｃｔｃａｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｇｃａｇｃａｃｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｔａａｃｃｃｃａｇｇｃｇａｇｔｃｔｇｔａｔｃｔａｔｃａｇｔｔｇｔｃｇｇｔｃｃａｇｃａａｇｔｃｔｃｔｔｃｔｃａａｃａｇｔａａｔｇｇｃａａｔａｃａｔａｔｃｔｔｔａｃｔｇｇｔｔｃｃｔｃｃａａａｇｇｃｃｔｇｇｇｃａａａｇｔｃｃｔｃａａｃｔｔｃｔｔａｔａｔａｔｃｇｇａｔｇｔｃｃａａｔｃｔｔｇｃｇａｇｔｇｇｃｇｔａｃｃｃｇａｃａｇｇｔｔｔｔｃａｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｇｃｇｇａａｃａｇｃｔｔｔｔａｃｇｔｔｇａｇａａｔａｔｃｃａｇｇｇｔａｇａａｇｃｔｇａｇｇａｃｇｔｃｇｇｔｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｃａｔｇｃａａｃａｔｃｔｃｇａａｔａｃｃｃｃｔｔｔａｃｃｔｔｃｇｇｃｇｃｔｇｇｔａｃａａａｇｃｔｃｇａａｔｔｇａａａｃｇｃａｇｃｇａｔｃｃａａｃｃａｃｇａｃｇｃｃａｇｃｇｃｃａｃｇａｃｃａｃｃｔａｃｇｃｃｃｇｃｔｃｃａａｃｔａｔｔｇｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｔｇａｇｔｃｔｔｃｇｇｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔａｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｇｇｃｇｇｇｇｃｃｇｔｔｃａｔａｃｇｃｇｇｇｇｃｃｔｔｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｔｇａｔａｔｃｔａｔａｔａｔｇｇｇｃｔｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｇａａｃｔｔｇｃｇｇａｇｔｇｃｔｔｃｔｔｔｔｇｔｃａｃｔｃｇｔｇａｔａａｃｇｔｔｇｔａｔｔｇｔａａａａｇｇｇｇｔｃｇａａａｇａａａｃｔｃｃｔｃｔａｔａｔａｔｔｔａａｇｃａｇｃｃｃｔｔｔａｔｇａｇｇｃｃｃｇｔｇｃａａａｃａａｃａｃａａｇａａｇａｇｇａｃｇｇａｔｇｃｔｃｔｔｇｔｃｇａｔｔｃｃｃｇｇａａｇａｇｇａｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｔｇｔｇａｇｃｔｔａｇｇｇｔｃａａｇｔｔｔｔｃｔｃｇｃｔｃｔｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｃａｇｃｃｔａｔｃａａｃａｇｇｇｃｃａａａａｃｃａｇｃｔｇｔａｔａａｃｇａａｃｔｃａａｃｃｔｃｇｇｇｃｇｃｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔｃｃｔｔｇａｃａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｃｃｃｔｇａａａｔｇｇｇｔｇｇａａａａｃｃｇａｇｇｃｇａａａｇａａｃｃｃｃｃａｇｇａｇｇｇａｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｔｔｇｃａａａａａｇａｃａａｇａｔｇｇｃｃｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｃｇａａａｔｔｇｇａａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇａｇａｃｇａｇｇｔａａｇｇｇｇｃａｔｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｔｃａａｇｇｇｃｔｃｔｃｔａｃｇｇｃｃａｃｇａａｇｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｔａｔｇｃａａｇｃｔｃｔｔｃｃａｃｃａｃｇｇ（配列番号：３９０）
【０１０２】
ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ（ＭＨＣ−ＤＲＢ  ＣＡＲ）−ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１（シグナルペプチド）、ＭＢＰペプチド、ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１（外側、ヒンジ、膜貫通）ＣＤ３ζ（細胞質シグナル伝達ドメイン）を含有するＭＨＣ−ＣＡＲ１を以下に提供する：
ＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＴＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬＡＳＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＳＧＤＴＲＰＲＦＬＷＱＰＫＲＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＩＬＥＱＡＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶＱＲＲＶＱＰＫＶＴＶＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＬＮＧＱＥＥＫＡＧＭＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩＹＦＲＮＱＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：４１２）
【０１０３】
ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ（ＭＨＣ−ＤＲＢ  ＣＡＲ）−ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１（シグナルペプチド）、ＭＢＰペプチド、ＨＬＡ  ＤＲＢ１＊１５０１（外側、ヒンジ、膜貫通）ＣＤ３ζ（細胞質シグナル伝達ドメイン）を含有するＭＨＣ＿ＣＡＲ１をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＴＧＧＴＡＴＧＣＴＴＧＡＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧＣＧＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＧＡＣＣＧＣＴＣＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＣＴＴＡＴＧＧＴＣＣＴＴＡＧＴＴＣＡＣＣＧＣＴＴＧＣＣＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＴＡＡＧＡＡＣＡＴＣＧＴＣＡＣＡＣＣＧＣＧＣＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＣＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＡＧＣＣＣＡＡＡＡＧＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＴＴＴＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＣＧＧＡＡＣＧＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＣＴＴＧＡＴＣＧＧＴＡＣＴＴＴＴＡＣＡＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＴＧＴＡＣＧＧＴＴＣＧＡＣＴＣＡＧＡＴＧＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＣＧＡＧＣＧＧＴＴＡＣＧＧＡＡＴＴＧＧＧＧＣＧＡＣＣＴＧＡＣＧＣＧＧＡＧＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＣＡＡＡＡＧＧＡＴＡＴＴＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＴＡＴＴＧＴＣＧＡＣＡＴＡＡＴＴＡＴＧＧＴＧＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＣＴＴＴＡＣＡＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＴＧＣＡＡＣＣＴＡＡＡＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＡＡＡＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＧＴＧＴＧＴＴＣＣＧＴＡＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＡＴＴＧＡＧＧＴＣＡＧＧＴＧＧＴＴＣＣＴＣＡＡＣＧＧＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＴＡＣＴＧＧＴＣＴＴＡＴＣＣＡＧＡＡＣＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＣＣＴＴＣＣＡＡＡＣＴＴＴＧＧＴＡＡＴＧＴＴＧＧＡＡＡＣＧＧＴＧＣＣＧＣＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＡＴＡＣＡＴＧＣＣＡＡＧＴＴＧＡＡＣＡＣＣＣＧＡＧＴＧＴＴＡＣＧＡＧＣＣＣＣＣＴＧＡＣＧＧＴＴＧＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＡＴＣＴＡＡＡＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＧＡＧＴＡＧＧＣＧＧＡＴＴＴＧＴＡＣＴＣＧＧＡＣＴＣＣＴＣＴＴＴＴＴＧＧＧＣＧＣＴＧＧＧＴＴＧＴＴＴＡＴＣＴＡＣＴＴＴＡＧＡＡＡＣＣＡＡＡＣＡＡＧＴＡＧＡＧＴＡＡＡＧＴＴＴＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＣＧＧＡＣＧＣＴＣＣＣＧＣＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＡＡＣＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＣＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＴＧＧＧＡＣＧＡＣＧＣＧＡＡＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＣＴＴＧＡＴＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＧＡＴＣＣＣＧＡＡＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＴＡＴＴＣＣＧＡＡＡＴＡＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＴＧＡＡＣＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＴＧＡＣＧＧＡＣＴＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＣＴＡＣＣＧＣＡＡＣＴＡＡＡＧＡＣＡＣＣＴＡＴＧＡＣＧＣＧＴＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＧＡＧＡ（配列番号：４１３）
【０１０４】
ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ（ＭＨＣ−ＤＲＡ  ＣＡＲ）ＨＬＡ−ＤＲＡ＊１０１０（シグナルペプチド、外側、ヒンジ、膜貫通）、ＣＤ３ζ（細胞質シグナル伝達ドメイン）を含有するＭＨＣ−ＣＡＲを以下に提供する：
ＭＡＩＳＧＶＰＶＬＧＦＦＩＩＡＶＬＭＳＡＱＥＳＷＡＩＫＥＥＨＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬＫＨＷＥＦＤＡＰＳＰＬＰＥＴＴＥＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩＫＧＬＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：４２３）
【０１０５】
ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ（ＭＨＣ−ＤＲＡ  ＣＡＲ）ＨＬＡ−ＤＲＡ＊１０１０（シグナルペプチド、外側、ヒンジ、膜貫通）、ＣＤ３ζ（細胞質シグナル伝達ドメイン）をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ＡＴＧＧＣＡＡＴＡＴＣＴＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＣＣＴＣＧＧＧＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＴＡＧＣＣＧＴＡＣＴＧＡＴＧＴＣＡＧＣＡＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＧＧＧＣＧＡＴＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＣＧＴＧＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＣＧＧＡＧＴＴＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＣＣＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＧＧＴＧＡＧＴＴＣＡＴＧＴＴＣＧＡＴＴＴＴＧＡＴＧＧＣＧＡＣＧＡＧＡＴＡＴＴＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＡＴＧＧＣＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＡＣＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＴＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＧＡＴＴＣＧＣＡＴＣＡＴＴＴＧＡＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＧＣＣＡＡＴＡＴＣＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＴＧＡＣＡＡＡＡＣＧＣＴＣＣＡＡＴＴＡＴＡＣＧＣＣＴＡＴＣＡＣＴＡＡＴＧＴＧＣＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＣＡＡＡＴＴＣＴＣＣＣＧＴＡＧＡＡＣＴＴＡＧＧＧＡＡＣＣＴＡＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＡＴＧＴＴＴＣＡＴＣＧＡＣＡＡＧＴＴＣＡＣＴＣＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＣＡＡＴＧＴＡＡＣＧＴＧＧＣＴＴＣＧＧＡＡＴＧＧＴＡＡＧＣＣＧＧＴＣＡＣＣＡＣＧＧＧＴＧＴＣＴＣＡＧＡＧＡＣＣＧＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＡＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＣＡＡＣＧＧＡＡＧＡＣＧＴＴＴＡＣＧＡＣＴＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＣＡＴＴＧＧＧＧＧＣＴＴＧＡＣＧＡＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＡＡＧＣＡＴＴＧＧＧＡＧＴＴＣＧＡＣＧＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＴＴＣＣＡＧＡＡＡＣＧＡＣＴＧＡＡＡＡＣＧＴＴＧＴＣＴＧＣＧＣＴＣＴＴＧＧＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＧＣＣＴＧＧＴＡＧＧＣＡＴＴＡＴＴＡＴＣＧＧＧＡＣＣＡＴＣＴＴＴＡＴＣＡＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＧＡＣＴＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＡＡＴＴＴＡＧＣＡＧＡＴＣＣＧＣＴＧＡＣＧＣＡＣＣＧＧＣＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＡＣＴＣＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＣＧＧＣＣＧＡＣＧＧＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧＡＣＧＴＡＣＴＣＧＡＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＧＧＡＡＡＡＡＴＣＣＣＣＡＡＧＡＧＧＧＴＣＴＴＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＡＴＴＣＴＧＡＧＡＴＡＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＧＴＡＡＧＧＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＡＣＴＣＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＣＣＡＡＡＧＡＴＡＣＴＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＧＣＣＡＣＧＣ（配列番号：４２４）
【０１０６】
コンストラクト１（ＣＤ１９  ＣＡＲおよびＣＣＲ６領域）を以下に提供する：
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＩＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＳＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＩＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＦＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＳＤＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＳＧＥＳＭＮＦＳＤＶＦＤＳＳＥＤＹＦＶＳＶＮＴＳＹＹＳＶＤＳＥＭＬＬＣＳＬＱＥＶＲＱＦＳＲＬＦＶＰＩＡＹＳＬＩＣＶＦＧＬＬＧＮＩＬＶＶＩＴＦＡＦＹＫＫＡＲＳＭＴＤＶＹＬＬＮＭＡＩＡＤＩＬＦＶＬＴＬＰＦＷＡＶＳＨＡＴＧＡＷＶＦＳＮＡＴＣＫＬＬＫＧＩＹＡＩＮＦＮＣＧＭＬＬＬＴＣＩＳＭＤＲＹＩＡＩＶＱＡＴＫＳＦＲＬＲＳＲＴＬＰＲＳＫＩＩＣＬＶＶＷＧＬＳＶＩＩＳＳＳＴＦＶＦＮＱＫＹＮＴＱＧＳＤＶＣＥＰＫＹＱＴＶＳＥＰＩＲＷＫＬＬＭＬＧＬＥＬＬＦＧＦＦＩＰＬＭＦＭＩＦＣＹＴＦＩＶＫＴＬＶＱＡＱＮＳＫＲＨＫＡＩＲＶＩＩＡＶＶＬＶＦＬＡＣＱＩＰＨＮＭＶＬＬＶＴＡＡＮＬＧＫＭＮＲＳＣＱＳＥＫＬＩＧＹＴＫＴＶＴＥＶＬＡＦＬＨＣＣＬＮＰＶＬＹＡＦＩＧＱＫＦＲＮＹＦＬＫＩＬＫＤＬＷＣＶＲＲＫＹＫＳＳＧＦＳＣＡＧＲＹＳＥＮＩＳＲＱＴＳＥＴＡＤＮＤＮＡＳＳＦＴＭ（配列番号：４２５）
【０１０７】
コンストラクト１（ＣＤ１９  ＣＡＲ、ＣＣＲ６、ＧＦＰ領域）を以下に提供する：
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＩＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＴＹＹＹＧＳＲＶＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＡＡＰＳＩＰＶＴＰＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＬＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＡＦＴＬＲＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＦＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＳＤＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＳＧＥＳＭＮＦＳＤＶＦＤＳＳＥＤＹＦＶＳＶＮＴＳＹＹＳＶＤＳＥＭＬＬＣＳＬＱＥＶＲＱＦＳＲＬＦＶＰＩＡＹＳＬＩＣＶＦＧＬＬＧＮＩＬＶＶＩＴＦＡＦＹＫＫＡＲＳＭＴＤＶＹＬＬＮＭＡＩＡＤＩＬＦＶＬＴＬＰＦＷＡＶＳＨＡＴＧＡＷＶＦＳＮＡＴＣＫＬＬＫＧＩＹＡＩＮＦＮＣＧＭＬＬＬＴＣＩＳＭＤＲＹＩＡＩＶＱＡＴＫＳＦＲＬＲＳＲＴＬＰＲＳＫＩＩＣＬＶＶＷＧＬＳＶＩＩＳＳＳＴＦＶＦＮＱＫＹＮＴＱＧＳＤＶＣＥＰＫＹＱＴＶＳＥＰＩＲＷＫＬＬＭＬＧＬＥＬＬＦＧＦＦＩＰＬＭＦＭＩＦＣＹＴＦＩＶＫＴＬＶＱＡＱＮＳＫＲＨＫＡＩＲＶＩＩＡＶＶＬＶＦＬＡＣＱＩＰＨＮＭＶＬＬＶＴＡＡＮＬＧＫＭＮＲＳＣＱＳＥＫＬＩＧＹＴＫＴＶＴＥＶＬＡＦＬＨＣＣＬＮＰＶＬＹＡＦＩＧＱＫＦＲＮＹＦＬＫＩＬＫＤＬＷＣＶＲＲＫＹＫＳＳＧＦＳＣＡＧＲＹＳＥＮＩＳＲＱＴＳＥＴＡＤＮＤＮＡＳＳＦＴＭＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＡＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ（配列番号：４２９）
【０１０８】
コンストラクト１（ＣＤ１９  ＣＡＲ、ＣＣＲ６、ＧＦＰ領域）をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ａｔｇｇａｇａｃａｇａｃａｃｔｃｔｔｃｔｃｃｔｔｔｇｇｇｔｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｇｔｔｃｃｃｇｇａａｇｃａｃａｇｇａｇａａｇｔａｃａｇｔｔｇｃａａｃａｇｔｃｔｇｇｇｃｃａｇａａｃｔｃａｔｃａａａｃｃｃｇｇａｇｃｔｔｃｔｇｔａａａａａｔｇｔｃａｔｇｃａａａｇｃｔａｇｔｇｇａｔａｔａｃａｔｔｔａｃｔｔｃｔｔａｃｇｔｇａｔｇｃａｃｔｇｇｇｔａａａａｃａｇａａａｃｃｔｇｇｔｃａｇｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｃｇｇｇｔａｃａｔｔａａｃｃｃａｔａｔａａｔｇａｃｇｇｃａｃｃａａａｔａｔａａｃｇａｇａａａｔｔｃａａｇｇｇａａａｇｇｃｔａｃｇｃｔｔａｃａｔｃａｇａｔａａｇｔｃｃａｇｔａｇｃａｃｃｇｃｔｔａｔａｔｇｇａａｃｔｔａｇｃａｇｃｃｔｔａｃｔｔｃｃｇａａｇａｔｔｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃｇａｇａｇｇｇａｃｔｔａｃｔａｃｔａｃｇｇｇａｇｔｃｇａｇｔａｔｔｃｇａｔｔａｔｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｇａｃｇｃｔｃａｃｇｇｔｇａｇｃｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｇｇｇｇｇｔｇｇｃｇｇｃａｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｇｇｃｔｃａｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｇｃａｇｃａｃｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｔａａｃｃｃｃａｇｇｃｇａｇｔｃｔｇｔａｔｃｔａｔｃａｇｔｔｇｔｃｇｇｔｃｃａｇｃａａｇｔｃｔｃｔｔｃｔｃａａｃａｇｔａａｔｇｇｃａａｔａｃａｔａｔｃｔｔｔａｃｔｇｇｔｔｃｃｔｃｃａａａｇｇｃｃｔｇｇｇｃａａａｇｔｃｃｔｃａａｃｔｔｃｔｔａｔａｔａｔｃｇｇａｔｇｔｃｃａａｔｃｔｔｇｃｇａｇｔｇｇｃｇｔａｃｃｃｇａｃａｇｇｔｔｔｔｃａｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｇｃｇｇａａｃａｇｃｔｔｔｔａｃｇｔｔｇａｇａａｔａｔｃｃａｇｇｇｔａｇａａｇｃｔｇａｇｇａｃｇｔｃｇｇｔｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｃａｔｇｃａａｃａｔｃｔｃｇａａｔａｃｃｃｃｔｔｔａｃｃｔｔｃｇｇｃｇｃｔｇｇｔａｃａａａｇｃｔｃｇａａｔｔｇａａａｃｇｃａｇｃｇａｔｃｃａａｃｃａｃｇａｃｇｃｃａｇｃｇｃｃａｃｇａｃｃａｃｃｔａｃｇｃｃｃｇｃｔｃｃａａｃｔａｔｔｇｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｔｇａｇｔｃｔｔｃｇｇｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔａｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｇｇｃｇｇｇｇｃｃｇｔｔｃａｔａｃｇｃｇｇｇｇｃｃｔｔｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｔｇａｔａｔｃｔａｔａｔａｔｇｇｇｃｔｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｇａａｃｔｔｇｃｇｇａｇｔｇｃｔｔｃｔｔｔｔｇｔｃａｃｔｃｇｔｇａｔａａｃｇｔｔｇｔａｔｔｇｔａａａａｇｇｇｇｔｃｇａａａｇａａａｃｔｃｃｔｃｔａｔａｔａｔｔｔａａｇｃａｇｃｃｃｔｔｔａｔｇａｇｇｃｃｃｇｔｇｃａａａｃａａｃａｃａａｇａａｇａｇｇａｃｇｇａｔｇｃｔｃｔｔｇｔｃｇａｔｔｃｃｃｇｇａａｇａｇｇａｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｔｇｔｇａｇｃｔｔａｇｇｇｔｃａａｇｔｔｔｔｃｔｃｇｃｔｃｔｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｃａｇｃｃｔａｔｃａａｃａｇｇｇｃｃａａａａｃｃａｇｃｔｇｔａｔａａｃｇａａｃｔｃａａｃｃｔｃｇｇｇｃｇｃｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔｃｃｔｔｇａｃａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｃｃｃｔｇａａａｔｇｇｇｔｇｇａａａａｃｃｇａｇｇｃｇａａａｇａａｃｃｃｃｃａｇｇａｇｇｇａｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｔｔｇｃａａａａａｇａｃａａｇａｔｇｇｃｃｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｃｇａａａｔｔｇｇａａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇａｇａｃｇａｇｇｔａａｇｇｇｇｃａｔｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｔｃａａｇｇｇｃｔｃｔｃｔａｃｇｇｃｃａｃｇａａｇｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｔａｔｇｃａａｇｃｔｃｔｔｃｃａｃｃａｃｇｇｇｇｔｔｃｇａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｇａｇｇｇｃａｇａｇｇａａｇｔｃｔｇｃｔａａｃａｔｇｃｇｇｔｇａｃｇｔｃｇａｇｇａｇａａｔｃｃｔｇｇｃｃｃａａｔｇａｇｔｇｇｇｇａａａｇｔａｔｇａａｃｔｔｃａｇｃｇａｔｇｔａｔｔｔｇａｃｔｃｃｔｃｃｇａａｇａｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｃｔｇｔｇａａｔａｃｇａｇｃｔａｔｔａｃｔｃｃｇｔｃｇａｔａｇｔｇａａａｔｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔａｇｔｃｔｃｃａａｇａａｇｔｃｃｇｃｃａａｔｔｃａｇｔｃｇｃｃｔｃｔｔｃｇｔｔｃｃｃａｔｃｇｃｇｔａｃｔｃｃｃｔｔａｔｔｔｇｔｇｔｔｔｔｔｇｇｃｃｔｔｃｔｇｇｇｔａａｃａｔｃｃｔｇｇｔｔｇｔａａｔｃａｃａｔｔｃｇｃｔｔｔｃｔａｔａａａａａａｇｃｔｃｇｇａｇｔａｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｔａｃｃｔｔｃｔｔａａｃａｔｇｇｃｔａｔａｇｃｇｇａｃａｔｔｃｔｔｔｔｔｇｔｇｃｔｔａｃｔｃｔｃｃｃａｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇｔｇａｇｃｃａｔｇｃａａｃａｇｇｇｇｃｇｔｇｇｇｔｔｔｔｔｔｃａａａｔｇｃｃａｃａｔｇｔａａｇｃｔｇｃｔｔａａａｇｇｇａｔｃｔａｔｇｃａａｔａａａｃｔｔｃａａｔｔｇｃｇｇｇａｔｇｃｔｃｃｔｇｃｔｇａｃａｔｇｃａｔｃａｇｔａｔｇｇａｔｃｇａｔａｃａｔａｇｃｔａｔａｇｔａｃａｇｇｃｇａｃｔａａｇｔｃｃｔｔｃｃｇｃｃｔｇｃｇａｔｃｃｃｇｃａｃａｃｔｇｃｃｔａｇｇａｇｃａａａａｔｔａｔｔｔｇｃｃｔｃｇｔｃｇｔａｔｇｇｇｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｇａｔｃａｔｃｔｃｃｔｃｃａｇｔａｃｇｔｔｔｇｔｃｔｔｔａａｃｃａｇａａａｔａｔａａｃａｃａｃａｇｇｇｔｔｃｔｇａｔｇｔａｔｇｔｇａａｃｃａａａｇｔａｔｃａｇａｃａｇｔｇａｇｔｇａａｃｃａａｔａｃｇｇｔｇｇａａｇｔｔｇｃｔｔａｔｇｔｔｇｇｇｃｔｔｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｇｇｇｔｔｔｔｔｃａｔｃｃｃａｃｔｇａｔｇｔｔｃａｔｇａｔｔｔｔｃｔｇｔｔａｔａｃａｔｔｔａｔｔｇｔｔａａｇａｃｃｔｔｇｇｔｔｃａｇｇｃｇｃａａａａｔａｇｃａａｇａｇａｃａｔａａｇｇｃａａｔｔｃｇａｇｔｃａｔｃａｔｔｇｃｃｇｔｇｇｔｇｔｔｇｇｔｃｔｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇｔｃａｇａｔｃｃｃｃｃａｔａａｔａｔｇｇｔｔｃｔｇｃｔｃｇｔｃａｃｃｇｃｃｇｃｔａａｃｔｔｇｇｇｔａａｇａｔｇａａｔｃｇａｔｃｔｔｇｔｃａｇｔｃｃｇａｇａａｇｔｔｇａｔｃｇｇａｔａｃａｃｃａａａａｃｔｇｔｇａｃａｇａａｇｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｃｔｔｃａｃｔｇｔｔｇｔｃｔｇａａｃｃｃａｇｔｔｔｔｇｔａｔｇｃｔｔｔｔａｔａｇｇａｃａｇａａｇｔｔｔｃｇａａａｔｔａｃｔｔｃｔｔｇａａａａｔｃｃｔｃａａｇｇａｃｃｔｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｇａａｇｇａａｇｔａｃａａｇａｇｃｔｃｔｇｇｃｔｔｔａｇｔｔｇｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔａｃａｇｔｇａｇａａｔａｔａｔｃｃｃｇｇｃａｇａｃｃｔｃｃｇａｇａｃｔｇｃｔｇａｔａａｔｇａｃａａｃｇｃａａｇｔｔｃｃｔｔｃａｃｔａｔｇｇｇａｔｃｃｇｇｃｇｃａａｃａａａｃｔｔｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇａａａｃａａｇｃｃｇｇａｇａｔｇｔｃｇａａｇａｇａａｔｃｃｔｇｇａｃｃｇｇｔｇａｇｃａａｇｇｇｃｇａｇｇａｇｃｔｇｔｔｃａｃｃｇｇｇｇｔｇｇｔｇｃｃｃａｔｃｃｔｇｇｔｃｇａｇｃｔｇｇａｃｇｇｃｇａｃｇｔａａａｃｇｇｃｃａｃａａｇｔｔｃａｇｃｇｔｇｔｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｔｇｃｃａｃｃｔａｃｇｇｃａａｇｃｔｇａｃｃｃｔｇａａｇｔｔｃａｔｃｔｇｃａｃｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｔｇｃｃｃｇｔｇｃｃｃｔｇｇｃｃｃａｃｃｃｔｃｇｔｇａｃｃａｃｃｃｔｇａｃｃｔａｃｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃｔｔｃａｇｃｃｇｃｔａｃｃｃｃｇａｃｃａｃａｔｇａａｇｃａｇｃａｃｇａｃｔｔｃｔｔｃａａｇｔｃｃｇｃｃａｔｇｃｃｃｇａａｇｇｃｔａｃｇｔｃｃａｇｇａｇｃｇｃａｃｃａｔｃｔｔｃｔｔｃａａｇｇａｃｇａｃｇｇｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃｃｇｃｇｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｃｇａｇｇｇｃｇａｃａｃｃｃｔｇｇｔｇａａｃｃｇｃａｔｃｇａｇｃｔｇａａｇｇｇｃａｔｃｇａｃｔｔｃａａｇｇａｇｇａｃｇｇｃａａｃａｔｃｃｔｇｇｇｇｃａｃａａｇｃｔｇｇａｇｔａｃａａｃｔａｃａａｃａｇｃｃａｃａａｃｇｔｃｔａｔａｔｃａｔｇｇｃｃｇａｃａａｇｃａｇａａｇａａｃｇｇｃａｔｃａａｇｇｃｇａａｃｔｔｃａａｇａｔｃｃｇｃｃａｃａａｃａｔｃｇａｇｇａｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃａｇｃｔｃｇｃｃｇａｃｃａｃｔａｃｃａｇｃａｇａａｃａｃｃｃｃｃａｔｃｇｇｃｇａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃｃｇａｃａａｃｃａｃｔａｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃａｇｔｃｃｇｃｃｃｔｇａｇｃａａａｇａｃｃｃｃａａｃｇａｇａａｇｃｇｃｇａｔｃａｃａｔｇｇｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｃｃｇｃｃｇｇｇａｔｃａｃｔｃｔｃｇｇｃａｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔａｃａａｇｔａａ（配列番号：４３０）
【０１０９】
コンストラクト２  ＭＨＣ  ＣＡＲ領域（ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ領域）を以下に提供する：
ＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＴＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬＡＳＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＳＧＤＴＲＰＲＦＬＷＱＰＫＲＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＩＬＥＱＡＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶＱＲＲＶＱＰＫＶＴＶＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＬＮＧＱＥＥＫＡＧＭＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩＹＦＲＮＱＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＩＳＧＶＰＶＬＧＦＦＩＩＡＶＬＭＳＡＱＥＳＷＡＩＫＥＥＨＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬＫＨＷＥＦＤＡＰＳＰＬＰＥＴＴＥＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩＫＧＬＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：４３１）
【０１１０】
コンストラクト２  ＭＨＣ  ＣＡＲ領域（ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ）をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ａｔｇｇｔａｔｇｃｔｔｇａａｇｃｔｃｃｃｇｇｇｃｇｇｇｔｃｃｔｇｃａｔｇａｃｃｇｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｔａｃｔｃｔｔａｔｇｇｔｃｃｔｔａｇｔｔｃａｃｃｇｃｔｔｇｃｃｃｔｇｇｃａｔｃｔｇａｔｇａｇａａｔｃｃｃｇｔｇｇｔｔｃａｔｔｔｔｔｔｔａａｇａａｃａｔｃｇｔｃａｃａｃｃｇｃｇｃａｃｃｃｃａｃｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｃａｇｇａｇａｃａｃａａｇａｃｃｃｃｇａｔｔｃｔｔｇｔｇｇｃａｇｃｃｃａａａａｇｇｇａｇｔｇｃｃａｔｔｔｔｔｔｃａａｔｇｇｇａｃｇｇａａｃｇａｇｔｔｃｇｃｔｔｃｃｔｔｇａｔｃｇｇｔａｃｔｔｔｔａｃａａｃｃａａｇａａｇａｇａｇｔｇｔａｃｇｇｔｔｃｇａｃｔｃａｇａｔｇｔｃｇｇｃｇａｇｔｔｃｃｇａｇｃｇｇｔｔａｃｇｇａａｔｔｇｇｇｇｃｇａｃｃｔｇａｃｇｃｇｇａｇｔａｃｔｇｇａａｃｔｃｃｃａａａａｇｇａｔａｔｔｔｔｇｇａｇｃａｇｇｃａｃｇａｇｃａｇｃｔｇｔｇｇａｃａｃｃｔａｔｔｇｔｃｇａｃａｔａａｔｔａｔｇｇｔｇｔｇｇｔｇｇａａｔｃｃｔｔｔａｃａｇｔｔｃａｇｃｇｇｃｇｇｇｔｇｃａａｃｃｔａａａｇｔｇａｃｃｇｔｇｔａｔｃｃａｔｃｔａａａａｃｇｃａａｃｃｃｃｔｃｃａａｃａｃｃａｔａａｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｃｇｔａａｇｃｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａｔｔｇａｇｇｔｃａｇｇｔｇｇｔｔｃｃｔｃａａｃｇｇｔｃａｇｇａｇｇａｇａａｇｇｃｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｔａｃｔｇｇｔｃｔｔａｔｃｃａｇａａｃｇｇａｇａｃｔｇｇａｃｃｔｔｃｃａａａｃｔｔｔｇｇｔａａｔｇｔｔｇｇａａａｃｇｇｔｇｃｃｇｃｇａｔｃｃｇｇｇｇａｇｇｔｇｔａｔａｃａｔｇｃｃａａｇｔｔｇａａｃａｃｃｃｇａｇｔｇｔｔａｃｇａｇｃｃｃｃｃｔｇａｃｇｇｔｔｇａｇｔｇｇａｇｇｇｃｇｃｇｇｔｃａｇａｇａｇｃｇｃａｃａａｔｃｔａａａａｔｇｃｔｇｔｃａｇｇａｇｔａｇｇｃｇｇａｔｔｔｇｔａｃｔｃｇｇａｃｔｃｃｔｃｔｔｔｔｔｇｇｇｃｇｃｔｇｇｇｔｔｇｔｔｔａｔｃｔａｃｔｔｔａｇａａａｃｃａａａｃａａｇｔａｇａｇｔａａａｇｔｔｔｔｃｃｃｇａａｇｔｇｃｇｇａｃｇｃｔｃｃｃｇｃｇｔａｔｃａｇｃａａｇｇｔｃａａａａｃｃａｇｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｃｔｇａａｃｔｔｇｇｇａｃｇａｃｇｃｇａａｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｃｔｔｇａｔａａｇｃｇｇａｇａｇｇｇｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｔｃｇｇａｇｇａａｇａａｃｃｃａｃａａｇａａｇｇｃｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａｇｇａｃａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｔａｔｔｃｃｇａａａｔａｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｔｇａａｃｇｇａｇｇａｇａｇｇａａａｇｇｇａｃａｔｇａｃｇｇａｃｔｔｔａｔｃａａｇｇａｔｔｇｔｃｔａｃｃｇｃａａｃｔａａａｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｇｔｔｇｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃｇａｇａｇｇｔｔｃｇａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｇａｇｇｇｃａｇａｇｇａａｇｔｃｔｇｃｔａａｃａｔｇｃｇｇｔｇａｃｇｔｃｇａｇｇａｇａａｔｃｃｔｇｇｃｃｃａａｔｇｇｃａａｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｃｃｔｃｇｇｇｔｔｔｔｔｔａｔｃａｔａｇｃｃｇｔａｃｔｇａｔｇｔｃａｇｃａｃａｇｇａａｔｃａｔｇｇｇｃｇａｔａａａａｇａａｇａｇｃａｃｇｔｇａｔａａｔａｃａｇｇｃｇｇａｇｔｔｔｔａｔｔｔｇａａｃｃｃｇｇａｃｃａｇａｇｃｇｇｔｇａｇｔｔｃａｔｇｔｔｃｇａｔｔｔｔｇａｔｇｇｃｇａｃｇａｇａｔａｔｔｔｃａｃｇｔｔｇａｃａｔｇｇｃａａａａａａｇｇａａａｃｇｇｔｇｔｇｇａｇａｃｔｔｇａｇｇａｇｔｔｔｇｇａｃｇａｔｔｃｇｃａｔｃａｔｔｔｇａｇｇｃａｃａａｇｇａｇｃａｃｔｃｇｃｃａａｔａｔｃｇｃｇｇｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａｃｃｔｇｇａｇａｔｃａｔｇａｃａａａａｃｇｃｔｃｃａａｔｔａｔａｃｇｃｃｔａｔｃａｃｔａａｔｇｔｇｃｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｔａｃｔｇｔｇｃｔｃａｃａａａｔｔｃｔｃｃｃｇｔａｇａａｃｔｔａｇｇｇａａｃｃｔａａｃｇｔｃｃｔｃａｔａｔｇｔｔｔｃａｔｃｇａｃａａｇｔｔｃａｃｔｃｃｔｃｃｇｇｔｇｇｔｃａａｔｇｔａａｃｇｔｇｇｃｔｔｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｃｃｇｇｔｃａｃｃａｃｇｇｇｔｇｔｃｔｃａｇａｇａｃｃｇｔａｔｔｔｃｔｇｃｃｃａｇａｇａａｇａｃｃａｃｃｔｃｔｔｃｃｇｃａａａｔｔｔｃａｔｔａｃｃｔｔｃｃｃｔｔｔｃｔｔｃｃｔｔｃａａｃｇｇａａｇａｃｇｔｔｔａｃｇａｃｔｇｃａｇｇｇｔｃｇａａｃａｔｔｇｇｇｇｇｃｔｔｇａｃｇａｇｃｃａｃｔｔｃｔｃａａｇｃａｔｔｇｇｇａｇｔｔｃｇａｃｇｃｃｃｃａｔｃａｃｃｇｃｔｔｃｃａｇａａａｃｇａｃｔｇａａａａｃｇｔｔｇｔｃｔｇｃｇｃｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｇｇｔａｇｇｃａｔｔａｔｔａｔｃｇｇｇａｃｃａｔｃｔｔｔａｔｃａｔｃａａａｇｇｔｔｔｇａｃｔｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａａｔｔｔａｇｃａｇａｔｃｃｇｃｔｇａｃｇｃａｃｃｇｇｃｃｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａａｃｔｃｔａｃａａｃｇａｇｃｔｇａａｔｃｔｃｇｇｃｃｇａｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔａｃｔｃｇａｃａａｇｃｇｇａｇａｇｇｔｃｇａｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｃｇｇｔａａａｃｃｇａｇａｃｇｇａａａａａｔｃｃｃｃａａｇａｇｇｇｔｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｃｃａｇａａｇｇａｔａａｇａｔｇｇｃｔｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａｇａｔａｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｇｇｔａａｇｇｇｃｃａｔｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇａｃｔｃｔｃｃａｃｇｇｃａａｃｃａａａｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｃｃｃｇｃｃａｃｇｃ（配列番号：７１）
【０１１１】
コンストラクト２殺傷スイッチおよびＭＨＣ  ＣＡＲ領域（ＲＱＲ８、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ領域）を以下に提供する：
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＲＳＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＰＴＧＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＴＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬＡＳＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＳＧＤＴＲＰＲＦＬＷＱＰＫＲＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＩＬＥＱＡＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶＱＲＲＶＱＰＫＶＴＶＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＬＮＧＱＥＥＫＡＧＭＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩＹＦＲＮＱＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＩＳＧＶＰＶＬＧＦＦＩＩＡＶＬＭＳＡＱＥＳＷＡＩＫＥＥＨＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬＫＨＷＥＦＤＡＰＳＰＬＰＥＴＴＥＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩＫＧＬＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：２１１）
【０１１２】
コンストラクト２殺傷スイッチおよびＭＨＣ  ＣＡＲ領域（ＲＱＲ８、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ領域）をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ａｔｇｇｇｔａｃｔｔｃａｃｔｇｔｔｇｔｇｃｔｇｇａｔｇｇｃａｃｔｔｔｇｔｃｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｃｇａｔｃａｔｇｃｔｇａｔｇｃａｔｇｔｃｃｇｔａｃｔｃｃａａｔｃｃｔａｇｃｃｔｇｔｇｃｔｃｃｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｇｇａｇｔｇａａｃｔｃｃｃｔａｃａｃａｇｇｇａａｃｃｔｔｃｔｃｔａａｔｇｔｃｔｃｃａｃｃａａｃｇｔｃｔｃｃｃｃｔｇｃａａａａｃｃｇａｃｃａｃａａｃａｇｃｔｔｇｃｃｃｃｔａｔａｇｔａａｃｃｃｔｔｃｃｃｔｃｔｇｔａｇｔｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｇｔｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｃａｃｇｃｃｃｔｃｃｔａｃｃｃｃｃｇｃｇｃｃａａｃｇａｔｃｇｃｇｔｃａｃａａｃｃｇｃｔｃａｇｔｃｔｔａｇｇｃｃｇｇａａｇｃｃｔｇｔａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃｇｇｔｔｃａｔａｃｇｃｇｇｇｇａｔｔｇｇａｔｔｔｔｇｃｃｔｇｃｇａｃａｔｔｔａｃａｔｔｔｇｇｇｃｔｃｃｇｃｔｇｇｃｃｇｇｔａｃｔｔｇｔｇｇｇｇｔａｔｔｇｃｔｇｔｔｇｔｃｔｃｔｔｇｔｔａｔｔａｃｇｃｔｔｔａｔｔｇｃａａｔｃａｃａｇｇａａｃａｇｇｃｇａｃｇａｇｔａｔｇｃａａａｔｇｃｃｃｇｃｇｇｃｃｃｇｔｃｇｔｇａｇａｔｃｔｇｇｇｔｃｃｇｇｃｃａａｔｇｔａｃｔａａｃｔａｃｇｃｔｔｔｇｔｔｇａａａｃｔｃｇｃｔｇｇｃｇａｔｇｔｔｇａａａｇｔａａｃｃｃｃｇｇｔｃｃｔｃｃａａｃａｇｇｔａｔｇｇｔａｔｇｃｔｔｇａａｇｃｔｃｃｃｇｇｇｃｇｇｇｔｃｃｔｇｃａｔｇａｃｃｇｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｔａｃｔｃｔｔａｔｇｇｔｃｃｔｔａｇｔｔｃａｃｃｇｃｔｔｇｃｃｃｔｇｇｃａｔｃｔｇａｔｇａｇａａｔｃｃｃｇｔｇｇｔｔｃａｔｔｔｔｔｔｔａａｇａａｃａｔｃｇｔｃａｃａｃｃｇｃｇｃａｃｃｃｃａｃｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｃａｇｇａｇａｃａｃａａｇａｃｃｃｃｇａｔｔｃｔｔｇｔｇｇｃａｇｃｃｃａａａａｇｇｇａｇｔｇｃｃａｔｔｔｔｔｔｃａａｔｇｇｇａｃｇｇａａｃｇａｇｔｔｃｇｃｔｔｃｃｔｔｇａｔｃｇｇｔａｃｔｔｔｔａｃａａｃｃａａｇａａｇａｇａｇｔｇｔａｃｇｇｔｔｃｇａｃｔｃａｇａｔｇｔｃｇｇｃｇａｇｔｔｃｃｇａｇｃｇｇｔｔａｃｇｇａａｔｔｇｇｇｇｃｇａｃｃｔｇａｃｇｃｇｇａｇｔａｃｔｇｇａａｃｔｃｃｃａａａａｇｇａｔａｔｔｔｔｇｇａｇｃａｇｇｃａｃｇａｇｃａｇｃｔｇｔｇｇａｃａｃｃｔａｔｔｇｔｃｇａｃａｔａａｔｔａｔｇｇｔｇｔｇｇｔｇｇａａｔｃｃｔｔｔａｃａｇｔｔｃａｇｃｇｇｃｇｇｇｔｇｃａａｃｃｔａａａｇｔｇａｃｃｇｔｇｔａｔｃｃａｔｃｔａａａａｃｇｃａａｃｃｃｃｔｃｃａａｃａｃｃａｔａａｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｃｇｔａａｇｃｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａｔｔｇａｇｇｔｃａｇｇｔｇｇｔｔｃｃｔｃａａｃｇｇｔｃａｇｇａｇｇａｇａａｇｇｃｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｔａｃｔｇｇｔｃｔｔａｔｃｃａｇａａｃｇｇａｇａｃｔｇｇａｃｃｔｔｃｃａａａｃｔｔｔｇｇｔａａｔｇｔｔｇｇａａａｃｇｇｔｇｃｃｇｃｇａｔｃｃｇｇｇｇａｇｇｔｇｔａｔａｃａｔｇｃｃａａｇｔｔｇａａｃａｃｃｃｇａｇｔｇｔｔａｃｇａｇｃｃｃｃｃｔｇａｃｇｇｔｔｇａｇｔｇｇａｇｇｇｃｇｃｇｇｔｃａｇａｇａｇｃｇｃａｃａａｔｃｔａａａａｔｇｃｔｇｔｃａｇｇａｇｔａｇｇｃｇｇａｔｔｔｇｔａｃｔｃｇｇａｃｔｃｃｔｃｔｔｔｔｔｇｇｇｃｇｃｔｇｇｇｔｔｇｔｔｔａｔｃｔａｃｔｔｔａｇａａａｃｃａａａｃａａｇｔａｇａｇｔａａａｇｔｔｔｔｃｃｃｇａａｇｔｇｃｇｇａｃｇｃｔｃｃｃｇｃｇｔａｔｃａｇｃａａｇｇｔｃａａａａｃｃａｇｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｃｔｇａａｃｔｔｇｇｇａｃｇａｃｇｃｇａａｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｃｔｔｇａｔａａｇｃｇｇａｇａｇｇｇｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｔｃｇｇａｇｇａａｇａａｃｃｃａｃａａｇａａｇｇｃｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａｇｇａｃａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｔａｔｔｃｃｇａａａｔａｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｔｇａａｃｇｇａｇｇａｇａｇｇａａａｇｇｇａｃａｔｇａｃｇｇａｃｔｔｔａｔｃａａｇｇａｔｔｇｔｃｔａｃｃｇｃａａｃｔａａａｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｇｔｔｇｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃｇａｇａｇｇｔｔｃｇａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｇａｇｇｇｃａｇａｇｇａａｇｔｃｔｇｃｔａａｃａｔｇｃｇｇｔｇａｃｇｔｃｇａｇｇａｇａａｔｃｃｔｇｇｃｃｃａａｔｇｇｃａａｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｃｃｔｃｇｇｇｔｔｔｔｔｔａｔｃａｔａｇｃｃｇｔａｃｔｇａｔｇｔｃａｇｃａｃａｇｇａａｔｃａｔｇｇｇｃｇａｔａａａａｇａａｇａｇｃａｃｇｔｇａｔａａｔａｃａｇｇｃｇｇａｇｔｔｔｔａｔｔｔｇａａｃｃｃｇｇａｃｃａｇａｇｃｇｇｔｇａｇｔｔｃａｔｇｔｔｃｇａｔｔｔｔｇａｔｇｇｃｇａｃｇａｇａｔａｔｔｔｃａｃｇｔｔｇａｃａｔｇｇｃａａａａａａｇｇａａａｃｇｇｔｇｔｇｇａｇａｃｔｔｇａｇｇａｇｔｔｔｇｇａｃｇａｔｔｃｇｃａｔｃａｔｔｔｇａｇｇｃａｃａａｇｇａｇｃａｃｔｃｇｃｃａａｔａｔｃｇｃｇｇｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａｃｃｔｇｇａｇａｔｃａｔｇａｃａａａａｃｇｃｔｃｃａａｔｔａｔａｃｇｃｃｔａｔｃａｃｔａａｔｇｔｇｃｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｔａｃｔｇｔｇｃｔｃａｃａａａｔｔｃｔｃｃｃｇｔａｇａａｃｔｔａｇｇｇａａｃｃｔａａｃｇｔｃｃｔｃａｔａｔｇｔｔｔｃａｔｃｇａｃａａｇｔｔｃａｃｔｃｃｔｃｃｇｇｔｇｇｔｃａａｔｇｔａａｃｇｔｇｇｃｔｔｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｃｃｇｇｔｃａｃｃａｃｇｇｇｔｇｔｃｔｃａｇａｇａｃｃｇｔａｔｔｔｃｔｇｃｃｃａｇａｇａａｇａｃｃａｃｃｔｃｔｔｃｃｇｃａａａｔｔｔｃａｔｔａｃｃｔｔｃｃｃｔｔｔｃｔｔｃｃｔｔｃａａｃｇｇａａｇａｃｇｔｔｔａｃｇａｃｔｇｃａｇｇｇｔｃｇａａｃａｔｔｇｇｇｇｇｃｔｔｇａｃｇａｇｃｃａｃｔｔｃｔｃａａｇｃａｔｔｇｇｇａｇｔｔｃｇａｃｇｃｃｃｃａｔｃａｃｃｇｃｔｔｃｃａｇａａａｃｇａｃｔｇａａａａｃｇｔｔｇｔｃｔｇｃｇｃｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｇｇｔａｇｇｃａｔｔａｔｔａｔｃｇｇｇａｃｃａｔｃｔｔｔａｔｃａｔｃａａａｇｇｔｔｔｇａｃｔｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａａｔｔｔａｇｃａｇａｔｃｃｇｃｔｇａｃｇｃａｃｃｇｇｃｃｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａａｃｔｃｔａｃａａｃｇａｇｃｔｇａａｔｃｔｃｇｇｃｃｇａｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔａｃｔｃｇａｃａａｇｃｇｇａｇａｇｇｔｃｇａｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｃｇｇｔａａａｃｃｇａｇａｃｇｇａａａａａｔｃｃｃｃａａｇａｇｇｇｔｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｃｃａｇａａｇｇａｔａａｇａｔｇｇｃｔｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａｇａｔａｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｇｇｔａａｇｇｇｃｃａｔｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇａｃｔｃｔｃｃａｃｇｇｃａａｃｃａａａｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｃｃｃｇｃｃａｃｇｃ（配列番号：４０３）
【０１１３】
コンストラクト２（ＲＱＲ８、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ、ＧＦＰ領域）を以下に提供する。
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＲＳＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＰＴＧＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＴＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＰＬＡＬＡＳＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＳＧＤＴＲＰＲＦＬＷＱＰＫＲＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＩＬＥＱＡＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶＱＲＲＶＱＰＫＶＴＶＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＬＮＧＱＥＥＫＡＧＭＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭＬＳＧＶＧＧＦＶＬＧＬＬＦＬＧＡＧＬＦＩＹＦＲＮＱＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＩＳＧＶＰＶＬＧＦＦＩＩＡＶＬＭＳＡＱＥＳＷＡＩＫＥＥＨＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬＫＨＷＥＦＤＡＰＳＰＬＰＥＴＴＥＮＶＶＣＡＬＧＬＴＶＧＬＶＧＩＩＩＧＴＩＦＩＩＫＧＬＴＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＡＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ＊（配列番号：４０５）
【０１１４】
コンストラクト２（ＲＱＲ８、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ、ＧＦＰ領域）をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する：
ａｔｇｇｇｔａｃｔｔｃａｃｔｇｔｔｇｔｇｃｔｇｇａｔｇｇｃａｃｔｔｔｇｔｃｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｃｇａｔｃａｔｇｃｔｇａｔｇｃａｔｇｔｃｃｇｔａｃｔｃｃａａｔｃｃｔａｇｃｃｔｇｔｇｃｔｃｃｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｇｇａｇｔｇａａｃｔｃｃｃｔａｃａｃａｇｇｇａａｃｃｔｔｃｔｃｔａａｔｇｔｃｔｃｃａｃｃａａｃｇｔｃｔｃｃｃｃｔｇｃａａａａｃｃｇａｃｃａｃａａｃａｇｃｔｔｇｃｃｃｃｔａｔａｇｔａａｃｃｃｔｔｃｃｃｔｃｔｇｔａｇｔｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｇｔｔｃａｃｃｔｇｃｔｃｃａｃｇｃｃｃｔｃｃｔａｃｃｃｃｃｇｃｇｃｃａａｃｇａｔｃｇｃｇｔｃａｃａａｃｃｇｃｔｃａｇｔｃｔｔａｇｇｃｃｇｇａａｇｃｃｔｇｔａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃｇｇｔｔｃａｔａｃｇｃｇｇｇｇａｔｔｇｇａｔｔｔｔｇｃｃｔｇｃｇａｃａｔｔｔａｃａｔｔｔｇｇｇｃｔｃｃｇｃｔｇｇｃｃｇｇｔａｃｔｔｇｔｇｇｇｇｔａｔｔｇｃｔｇｔｔｇｔｃｔｃｔｔｇｔｔａｔｔａｃｇｃｔｔｔａｔｔｇｃａａｔｃａｃａｇｇａａｃａｇｇｃｇａｃｇａｇｔａｔｇｃａａａｔｇｃｃｃｇｃｇｇｃｃｃｇｔｃｇｔｇａｇａｔｃｔｇｇｇｔｃｃｇｇｃｃａａｔｇｔａｃｔａａｃｔａｃｇｃｔｔｔｇｔｔｇａａａｃｔｃｇｃｔｇｇｃｇａｔｇｔｔｇａａａｇｔａａｃｃｃｃｇｇｔｃｃｔｃｃａａｃａｇｇｔａｔｇｇｔａｔｇｃｔｔｇａａｇｃｔｃｃｃｇｇｇｃｇｇｇｔｃｃｔｇｃａｔｇａｃｃｇｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｔａｃｔｃｔｔａｔｇｇｔｃｃｔｔａｇｔｔｃａｃｃｇｃｔｔｇｃｃｃｔｇｇｃａｔｃｔｇａｔｇａｇａａｔｃｃｃｇｔｇｇｔｔｃａｔｔｔｔｔｔｔａａｇａａｃａｔｃｇｔｃａｃａｃｃｇｃｇｃａｃｃｃｃａｃｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｇａｇｔｇｇａｇｇｃｔｃａｇｇａｇａｃａｃａａｇａｃｃｃｃｇａｔｔｃｔｔｇｔｇｇｃａｇｃｃｃａａａａｇｇｇａｇｔｇｃｃａｔｔｔｔｔｔｃａａｔｇｇｇａｃｇｇａａｃｇａｇｔｔｃｇｃｔｔｃｃｔｔｇａｔｃｇｇｔａｃｔｔｔｔａｃａａｃｃａａｇａａｇａｇａｇｔｇｔａｃｇｇｔｔｃｇａｃｔｃａｇａｔｇｔｃｇｇｃｇａｇｔｔｃｃｇａｇｃｇｇｔｔａｃｇｇａａｔｔｇｇｇｇｃｇａｃｃｔｇａｃｇｃｇｇａｇｔａｃｔｇｇａａｃｔｃｃｃａａａａｇｇａｔａｔｔｔｔｇｇａｇｃａｇｇｃａｃｇａｇｃａｇｃｔｇｔｇｇａｃａｃｃｔａｔｔｇｔｃｇａｃａｔａａｔｔａｔｇｇｔｇｔｇｇｔｇｇａａｔｃｃｔｔｔａｃａｇｔｔｃａｇｃｇｇｃｇｇｇｔｇｃａａｃｃｔａａａｇｔｇａｃｃｇｔｇｔａｔｃｃａｔｃｔａａａａｃｇｃａａｃｃｃｃｔｃｃａａｃａｃｃａｔａａｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｃｇｔａａｇｃｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａｔｔｇａｇｇｔｃａｇｇｔｇｇｔｔｃｃｔｃａａｃｇｇｔｃａｇｇａｇｇａｇａａｇｇｃｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｔａｃｔｇｇｔｃｔｔａｔｃｃａｇａａｃｇｇａｇａｃｔｇｇａｃｃｔｔｃｃａａａｃｔｔｔｇｇｔａａｔｇｔｔｇｇａａａｃｇｇｔｇｃｃｇｃｇａｔｃｃｇｇｇｇａｇｇｔｇｔａｔａｃａｔｇｃｃａａｇｔｔｇａａｃａｃｃｃｇａｇｔｇｔｔａｃｇａｇｃｃｃｃｃｔｇａｃｇｇｔｔｇａｇｔｇｇａｇｇｇｃｇｃｇｇｔｃａｇａｇａｇｃｇｃａｃａａｔｃｔａａａａｔｇｃｔｇｔｃａｇｇａｇｔａｇｇｃｇｇａｔｔｔｇｔａｃｔｃｇｇａｃｔｃｃｔｃｔｔｔｔｔｇｇｇｃｇｃｔｇｇｇｔｔｇｔｔｔａｔｃｔａｃｔｔｔａｇａａａｃｃａａａｃａａｇｔａｇａｇｔａａａｇｔｔｔｔｃｃｃｇａａｇｔｇｃｇｇａｃｇｃｔｃｃｃｇｃｇｔａｔｃａｇｃａａｇｇｔｃａａａａｃｃａｇｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｃｔｇａａｃｔｔｇｇｇａｃｇａｃｇｃｇａａｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｃｔｔｇａｔａａｇｃｇｇａｇａｇｇｇｃｇｃｇａｔｃｃｃｇａａａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｔｃｇｇａｇｇａａｇａａｃｃｃａｃａａｇａａｇｇｃｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａｇｇａｃａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｔａｔｔｃｃｇａａａｔａｇｇｃａｔｇａａｇｇｇｔｇａａｃｇｇａｇｇａｇａｇｇａａａｇｇｇａｃａｔｇａｃｇｇａｃｔｔｔａｔｃａａｇｇａｔｔｇｔｃｔａｃｃｇｃａａｃｔａａａｇａｃａｃｃｔａｔｇａｃｇｃｇｔｔｇｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃｇａｇａｇｇｔｔｃｇａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｇａｇｇｇｃａｇａｇｇａａｇｔｃｔｇｃｔａａｃａｔｇｃｇｇｔｇａｃｇｔｃｇａｇｇａｇａａｔｃｃｔｇｇｃｃｃａａｔｇｇｃａａｔａｔｃｔｇｇｔｇｔｔｃｃｔｇｔｃｃｔｃｇｇｇｔｔｔｔｔｔａｔｃａｔａｇｃｃｇｔａｃｔｇａｔｇｔｃａｇｃａｃａｇｇａａｔｃａｔｇｇｇｃｇａｔａａａａｇａａｇａｇｃａｃｇｔｇａｔａａｔａｃａｇｇｃｇｇａｇｔｔｔｔａｔｔｔｇａａｃｃｃｇｇａｃｃａｇａｇｃｇｇｔｇａｇｔｔｃａｔｇｔｔｃｇａｔｔｔｔｇａｔｇｇｃｇａｃｇａｇａｔａｔｔｔｃａｃｇｔｔｇａｃａｔｇｇｃａａａａａａｇｇａａａｃｇｇｔｇｔｇｇａｇａｃｔｔｇａｇｇａｇｔｔｔｇｇａｃｇａｔｔｃｇｃａｔｃａｔｔｔｇａｇｇｃａｃａａｇｇａｇｃａｃｔｃｇｃｃａａｔａｔｃｇｃｇｇｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａｃｃｔｇｇａｇａｔｃａｔｇａｃａａａａｃｇｃｔｃｃａａｔｔａｔａｃｇｃｃｔａｔｃａｃｔａａｔｇｔｇｃｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｔａｃｔｇｔｇｃｔｃａｃａａａｔｔｃｔｃｃｃｇｔａｇａａｃｔｔａｇｇｇａａｃｃｔａａｃｇｔｃｃｔｃａｔａｔｇｔｔｔｃａｔｃｇａｃａａｇｔｔｃａｃｔｃｃｔｃｃｇｇｔｇｇｔｃａａｔｇｔａａｃｇｔｇｇｃｔｔｃｇｇａａｔｇｇｔａａｇｃｃｇｇｔｃａｃｃａｃｇｇｇｔｇｔｃｔｃａｇａｇａｃｃｇｔａｔｔｔｃｔｇｃｃｃａｇａｇａａｇａｃｃａｃｃｔｃｔｔｃｃｇｃａａａｔｔｔｃａｔｔａｃｃｔｔｃｃｃｔｔｔｃｔｔｃｃｔｔｃａａｃｇｇａａｇａｃｇｔｔｔａｃｇａｃｔｇｃａｇｇｇｔｃｇａａｃａｔｔｇｇｇｇｇｃｔｔｇａｃｇａｇｃｃａｃｔｔｃｔｃａａｇｃａｔｔｇｇｇａｇｔｔｃｇａｃｇｃｃｃｃａｔｃａｃｃｇｃｔｔｃｃａｇａａａｃｇａｃｔｇａａａａｃｇｔｔｇｔｃｔｇｃｇｃｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｇｇｔａｇｇｃａｔｔａｔｔａｔｃｇｇｇａｃｃａｔｃｔｔｔａｔｃａｔｃａａａｇｇｔｔｔｇａｃｔｔｃｃｃｇｇｇｔｃａａａｔｔｔａｇｃａｇａｔｃｃｇｃｔｇａｃｇｃａｃｃｇｇｃｃｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａａｃｔｃｔａｃａａｃｇａｇｃｔｇａａｔｃｔｃｇｇｃｃｇａｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔａｃｔｃｇａｃａａｇｃｇｇａｇａｇｇｔｃｇａｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｃｇｇｔａａａｃｃｇａｇａｃｇｇａａａａａｔｃｃｃｃａａｇａｇｇｇｔｃｔｔｔａｔａａｔｇａａｃｔｃｃａｇａａｇｇａｔａａｇａｔｇｇｃｔｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｔｇａｇａｔａｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｇｇｔａａｇｇｇｃｃａｔｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇａｃｔｃｔｃｃａｃｇｇｃａａｃｃａａａｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａａｇｃｃｃｔｃｃｃｇｃｃａｃｇｃｇｇａｔｃｃｇｇｃｇｃａａｃａａａｃｔｔｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇａａａｃａａｇｃｃｇｇａｇａｔｇｔｃｇａａｇａｇａａｔｃｃｔｇｇａｃｃｇｇｔｇａｇｃａａｇｇｇｃｇａｇｇａｇｃｔｇｔｔｃａｃｃｇｇｇｇｔｇｇｔｇｃｃｃａｔｃｃｔｇｇｔｃｇａｇｃｔｇｇａｃｇｇｃｇａｃｇｔａａａｃｇｇｃｃａｃａａｇｔｔｃａｇｃｇｔｇｔｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｔｇｃｃａｃｃｔａｃｇｇｃａａｇｃｔｇａｃｃｃｔｇａａｇｔｔｃａｔｃｔｇｃａｃｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｔｇｃｃｃｇｔｇｃｃｃｔｇｇｃｃｃａｃｃｃｔｃｇｔｇａｃｃａｃｃｃｔｇａｃｃｔａｃｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃｔｔｃａｇｃｃｇｃｔａｃｃｃｃｇａｃｃａｃａｔｇａａｇｃａｇｃａｃｇａｃｔｔｃｔｔｃａａｇｔｃｃｇｃｃａｔｇｃｃｃｇａａｇｇｃｔａｃｇｔｃｃａｇｇａｇｃｇｃａｃｃａｔｃｔｔｃｔｔｃａａｇｇａｃｇａｃｇｇｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃｃｇｃｇｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｃｇａｇｇｇｃｇａｃａｃｃｃｔｇｇｔｇａａｃｃｇｃａｔｃｇａｇｃｔｇａａｇｇｇｃａｔｃｇａｃｔｔｃａａｇｇａｇｇａｃｇｇｃａａｃａｔｃｃｔｇｇｇｇｃａｃａａｇｃｔｇｇａｇｔａｃａａｃｔａｃａａｃａｇｃｃａｃａａｃｇｔｃｔａｔａｔｃａｔｇｇｃｃｇａｃａａｇｃａｇａａｇａａｃｇｇｃａｔｃａａｇｇｃｇａａｃｔｔｃａａｇａｔｃｃｇｃｃａｃａａｃａｔｃｇａｇｇａｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃａｇｃｔｃｇｃｃｇａｃｃａｃｔａｃｃａｇｃａｇａａｃａｃｃｃｃｃａｔｃｇｇｃｇａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃｃｇａｃａａｃｃａｃｔａｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃａｇｔｃｃｇｃｃｃｔｇａｇｃａａａｇａｃｃｃｃａａｃｇａｇａａｇｃｇｃｇａｔｃａｃａｔｇｇｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｃｃｇｃｃｇｇｇａｔｃａｃｔｃｔｃｇｇｃａｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔａｃａａｇｔａａ｀（配列番号：４０９）
【０１１５】
例示的なＣＳ−１標的化ＣＡＲコンストラクトのアミノ酸配列を以下に提供する（なお、これらの設計は、ＣＤ２８ドメインにより置換されてもよい４−１ＢＢを含有する）：
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１（Ｌｕｃ６３−Ｖ１  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＰＤＧＮＹＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１２９）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ２（Ｌｕｃ６３−Ｖ２  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＰＤＧＮＹＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３０）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ３（Ｌｕｃ６３−Ｖ３  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＰＤＧＮＹＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３１）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ４（Ｌｕｃ９０−Ｖ１  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＴＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＴＭＩＡＴＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＱＫＳＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＩＴＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３２）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ５（Ｌｕｃ９０−Ｖ２  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＴＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＴＭＩＡＴＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＱＫＳＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＩＴＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３３）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ６（Ｌｕｃ９０−Ｖ３  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＴＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＨＰＳＤＳＥＴＲＬＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＴＭＩＡＴＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＱＫＳＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＩＴＧＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＮＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３４）
抗ＣＡ１−ＣＡＲ−ｖ７（Ｌｕｃ３４−Ｖ１  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＤＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＫＶＹＹＧＳＮＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３５）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ８（Ｌｕｃ３４−Ｖ２  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＤＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＫＶＹＹＧＳＮＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３６）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ９（Ｌｕｃ３４−Ｖ３  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＤＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＫＶＹＹＧＳＮＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３７）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１０（ＬｕｃＸ１−Ｖ１  ＣＡＲ）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＴＭＩＡＴＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＴＴＶＴＱＳＰＡＳＬＳＭＡＩＧＥＫＶＴＩＲＣＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮＷＹＱＱＫＰＧＥＰＰＫＬＬＩＳＥＧＮＴＬＲＰＧＶＰＳＲＦＳＳＳＧＹＧＴＤＦＶＦＴＩＥＮＭＬＳＥＤＶＡＤＹＹＣＬＱＳＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３８）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１１（ＬｕｃＸ１−Ｖ２  ＣＡＲ）
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＱＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＤＧＤＴＲＹＴＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＫＶＹＹＧＳＮＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＳＳＹＬＳＶＳＬＧＧＲＶＴＩＴＣＫＡＳＤＨＩＮＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＮＡＰＲＬＬＩＳＧＡＴＳＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＫＤＹＴＬＳＩＴＳＬＱＴＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＹＷＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１３９）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１２（ＬｕｃＸ１−Ｖ３  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＴＭＩＡＴＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＴＴＶＴＱＳＰＡＳＬＳＭＡＩＧＥＫＶＴＩＲＣＩＴＳＴＤＩＤＤＤＭＮＷＹＱＱＫＰＧＥＰＰＫＬＬＩＳＥＧＮＴＬＲＰＧＶＰＳＲＦＳＳＳＧＹＧＴＤＦＶＦＴＩＥＮＭＬＳＥＤＶＡＤＹＹＣＬＱＳＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１４０）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１３（ＬｕｃＸ２−Ｖ１  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＴＭＩＡＴＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＬＡＶＳＴＩＳＳＦＦＰＰＧＹＱＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１４１）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１４（ＬｕｃＸ２−Ｖ２  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＴＭＩＡＴＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１４２）
抗ＣＳ１−ＣＡＲ−ｖ１５（ＬｕｃＸ２−Ｖ３  ＣＡＲ）：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＳＳＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＫＹＮＧＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＶＤＳＡＶＹＦＣＡＲＳＴＭＩＡＴＧＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号：１４３）
【０１１６】
（ｉｉｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲの調製
本明細書に記載される任意のＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトは、組換え技術などの常用の方法により調製され得る。本発明におけるキメラ受容体を調製する方法は、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクト（単一のポリペプチドまたは２つのサブユニットを含む）をコードするまたは全体としてコードする核酸または核酸セットの生成を伴う。一部の実施形態では、核酸はまた、ＭＨＣ−ＣＡＲの２つのサブユニットのためのコーディング配列の間、またはＭＨＣ−ＣＡＲのためのコーディング配列と宿主細胞中でＭＨＣ−ＣＡＲと共発現される他の遺伝子のためのコーディング配列との間において自己切断性ペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、またはＥ２Ａペプチド）をコードする（以下の議論を参照）。
【０１１７】
ＭＨＣ−ＣＡＲの各成分の配列は、常用の技術、例えば、当該技術分野において公知の様々な供給源のいずれか１つからのＰＣＲ増幅を介して得られてもよい。一部の実施形態では、ＭＨＣ−ＣＡＲの成分の１つまたは複数の配列は、ヒト細胞から得られる。代替的に、ＭＨＣ−ＣＡＲの１つまたは複数の成分の配列は合成され得る。各成分（例えば、ドメイン）の配列は、ＰＣＲ増幅またはライゲーションなどの方法を使用して、直接的または間接的に（例えば、ペプチドリンカーをコードする核酸配列を使用して）連結されて、ＭＨＣ−ＣＡＲをコードする核酸配列を形成し得る。代替的に、ＭＨＣ−ＣＡＲをコードする核酸は合成されてもよい。一部の実施形態では、核酸はＤＮＡである。他の実施形態では、核酸はＲＮＡである。
【０１１８】
任意のＭＨＣ−ＣＡＲタンパク質、それをコードする核酸、およびその核酸を有する発現ベクターは全て本開示の範囲内であり、薬学的に許容される担体と混合されて医薬組成物を形成することができ、これもまた本開示の範囲内である。「許容される」は、担体が、組成物の活性成分（例えば、核酸、ベクター、細胞、または治療的抗体）と適合性であり、かつ組成物（複数可）が投与される対象に負の影響を与えないことを意味する。本発明の方法において使用される任意の医薬組成物は、凍結乾燥形態または水溶液の形態で薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤を含み得る。
【０１１９】
緩衝液を含む薬学的に許容される担体は当該技術分野において周知であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；アミノ酸；疎水性ポリマー；単糖；二糖；および他の炭水化物；金属錯体；ならびに／または非イオン性界面活性剤を含んでもよい。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hooverを参照。
【０１２０】
ＩＩ．ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する遺伝子操作された免疫細胞
（ｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞は、ＭＨＣ／ペプチド−ＴＣＲのエンゲージメントを介して自己免疫疾患に関与する病原性細胞（例えば、自己反応性Ｔ細胞）を認識できる細胞の特定の集団を提供する。ＭＨＣ−ＣＡＲのＭＨＣペプチド部分と病原性細胞上のコグネイトＴＣＲとの間の相互作用は、ＭＨＣ−ＣＡＲのシグナル伝達ドメイン（複数可）を介してＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞を活性化させて（任意選択的に免疫細胞の細胞膜シグナル伝達分子を局在化させることによる）、ＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞の増殖および／またはエフェクター機能に繋がり、次にそれが病原性細胞を除去する。免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、またはその任意の組合せであり得る。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞である。特定の例は以下の実施例において提供される。
【０１２１】
免疫細胞の集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、組織、例えば、脾臓、リンパ節、胸腺、腫瘍組織、または確立された細胞株などの任意の供給源から得られ得る。所望の免疫細胞の種類を得るために好適な供給源は当業者に明らかである。一部の実施形態では、免疫細胞の集団はＰＢＭＣに由来する。所望の免疫細胞の種類（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、またはその任意の組合せ）は、細胞を刺激分子と共にインキュベートすることにより得られる細胞の集団内で拡大増殖されてもよく、例えば、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体がＴ細胞の拡大増殖のために使用されてもよい。
【０１２２】
本明細書に記載される任意のＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを発現する免疫細胞を構築するために、キメラ受容体コンストラクトの安定または一過性発現用の発現ベクターは、本明細書に記載されるような従来法を介して構築されて、免疫宿主細胞に導入されてもよい。例えば、ＭＨＣ−ＣＡＲをコードする核酸は、好適なプロモーターに作動可能に連結されたウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）などの好適な発現ベクター中にクローニングされてもよい。核酸およびベクターを制限酵素と好適な条件下で接触させて、互いにペア形成することができ、かつリガーゼを用いて連結され得る各分子上の相補的な末端を作製してもよい。代替的に、合成核酸リンカーは、キメラ受容体をコードする核酸の末端にライゲートされ得る。合成リンカーは、ベクター中の特定の制限部位に対応する核酸配列を含有してもよい。発現ベクター／プラスミド／ウイルスベクターの選択は、キメラ受容体の発現のための宿主細胞の種類に依存するが、真核細胞中での組込みおよび複製のために好適であるべきである。
【０１２３】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの発現のために様々なプロモーターを使用することができ、該プロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中初期プロモーター、ウイルスＬＴＲ、例えば、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ−ＬＴＲ、ＨＴＬＶ−１  ＬＴＲ、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。キメラ受容体の発現のための追加のプロモーターとしては、免疫細胞中で構成的に活性な任意のプロモーターが挙げられる。代替的に、発現が免疫細胞内でモジュレ―トされ得るように、任意の調節可能なプロモーターが使用されてもよい。
【０１２４】
さらに、ベクターは、例えば、以下の一部または全てを含有してもよい：選択マーカー遺伝子、例えば、宿主細胞中での安定または一過性トランスフェクタントの選択のためのネオマイシン遺伝子；高レベルの転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子からのエンハンサー／プロモーター配列；ｍＲＮＡの安定性のためのＳＶ４０からの転写終結およびＲＮＡプロセシングシグナル；適切なエピソーム複製のためのＳＶ４０ポリオーマ複製起点およびＣｏｌＥ１；内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、汎用マルチクローニングサイト；センスおよびアンチセンスＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のためのＴ７およびＳＰ６  ＲＮＡプロモーター；誘発された時に、ベクターを有する細胞の死を引き起こす「自殺スイッチ」または「自殺遺伝子」（例えば、ＨＳＶチミジンキナーゼ、ｉＣａｓｐ９などの誘導性カスパーゼ）、ならびにＭＨＣ−ＣＡＲの発現を評価するためのレポーター遺伝子。
【０１２５】
一部の実施形態では、本開示において使用するためのマーカー／選別／自殺分子は、リツキシマブを用いる殺傷のためおよび／またはＱＢＥＮＤを用いる選別のために使用され得る。Philip et al., Blood 124(8):1277-87; 2014)。一例はＲＱＲ８であり、これはリツキシマブミモトープおよびＱＢＥＮＤ−１０エピトープを含有する。例示的な配列を以下に提供する：
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ（配列番号：１４４）
ＭＧＴＳＬＬＣＷＭＡＬＣＬＬＧＡＤＨＡＤＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＰＡＫＰＴＴＴＡＣＰＹＳＮＰＳＬＣＳＧＧＧＧＳＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ（配列番号：３９４）
【０１２６】
ＲＱＲ８をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する。
ＡＴＧＧＧＴＡＣＴＴＣＡＣＴＧＴＴＧＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＣＡＣＴＴＴＧＴＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＣＧＡＴＣＡＴＧＣＴＧＡＴＧＣＡＴＧＴＣＣＧＴＡＣＴＣＣＡＡＴＣＣＴＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＣＣＧＧＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＡＧＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＡＣＡＣＡＧＧＧＡＡＣＣＴＴＣＴＣＴＡＡＴＧＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＣＧＴＣＴＣＣＣＣＴＧＣＡＡＡＡＣＣＧＡＣＣＡＣＡＡＣＡＧＣＴＴＧＣＣＣＣＴＡＴＡＧＴＡＡＣＣＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＴＡＧＴＧＧＡＧＧＧＧＧＧＧＧＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＡＣＧＣＣＣＴＣＣＴＡＣＣＣＣＣＧＣＧＣＣＡＡＣＧＡＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡＡＣＣＧＣＴＣＡＧＴＣＴＴＡＧＧＣＣＧＧＡＡＧＣＣＴＧＴＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＧＧＣＧＧＴＧＣＧＧＴＴＣＡＴＡＣＧＣＧＧＧＧＡＴＴＧＧＡＴＴＴＴＧＣＣＴＧＣＧＡＣＡＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧＧＧＣＴＣＣＧＣＴＧＧＣＣＧＧＴＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＴＣＴＣＴＴＧＴＴＡＴＴＡＣＧＣＴＴＴＡＴＴＧＣＡＡＴＣＡＣＡＧＧＡＡＣＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＣＣＣＧＣＧＧＣＣＣＧＴＣＧＴＧ（配列番号：３９５）
【０１２７】
別の例では、以下の例示的なＲＱＲ配列タグを本明細書に開示されるようなＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトに取り付けることができる：
【化９】
2021502122.tif 000024
太字の断片はリツキシマブミモトープ（rituximab minotope）であり、下線／斜体の断片はＱＢＥＮＤ−１０エピトープである。
【０１２８】
導入遺伝子を含有するベクターを製造するための好適なベクターおよび方法は、当該技術分野において周知かつ利用可能である。本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトをコードする核酸配列を含む任意のベクターもまた本開示の範囲内である。そのようなベクターは、好適な方法により宿主免疫細胞に送達されてもよい。免疫細胞にベクターを送達する方法は当該技術分野において周知であり、ＤＮＡエレクトロポレーション、ＲＮＡエレクトロポレーション、トランスフェクション試薬、例えば、リポソーム、またはウイルス形質導入を含んでもよい。一部の実施形態では、ＭＨＣ−ＣＡＲの発現のためのベクターは、ウイルス形質導入により宿主細胞に送達される。送達のための例示的なウイルス法としては、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９０／０７９３６号パンフレット、同第ＷＯ９４／０３６２２号パンフレット、同第ＷＯ９３／２５６９８号パンフレット、同第ＷＯ９３／２５２３４号パンフレット、同第ＷＯ９３／１１２３０号パンフレット、同第ＷＯ９３／１０２１８号パンフレット、同第ＷＯ９１／０２８０５号パンフレット、米国特許第５，２１９，７４０号明細書および同第４，７７７，１２７号明細書、ＧＢ特許第２，２００，６５１号明細書、およびＥＰ特許第０３４５２４２号明細書を参照）、アルファウイルスベースのベクター、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９４／１２６４９号パンフレット、同第ＷＯ９３／０３７６９号パンフレット、同第ＷＯ９３／１９１９１号パンフレット、同第ＷＯ９４／２８９３８号パンフレット、同第ＷＯ９５／１１９８４号パンフレットおよび同第ＷＯ９５／００６５５号パンフレットを参照）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、キメラ受容体の発現のためのベクターはレトロウイルスである。一部の実施形態では、キメラ受容体の発現のためのベクターはレンチウイルスである。
【０１２９】
キメラ受容体をコードするベクターがウイルスベクターを使用して宿主細胞に導入される例では、免疫細胞に感染することができかつベクターを有するウイルス粒子は、当該技術分野において公知の任意の方法により製造されてもよく、例えば、ＰＣＴ出願第ＷＯ１９９１／００２８０５Ａ２号パンフレット、同第ＷＯ１９９８／００９２７１Ａ１号パンフレット、および米国特許第６，１９４，１９１号明細書において見出すことができる。ウイルス粒子は細胞培養上清から回収され、ウイルス粒子を免疫細胞と接触させる前に単離および／または精製されてもよい。
【０１３０】
宿主細胞への本明細書において提供される任意のＭＨＣ−ＣＡＲをコードするベクターの導入後に、細胞は、キメラ受容体の発現を可能とする条件下で培養される。ＭＨＣ−ＣＡＲをコードする核酸が調節可能なプロモーターにより調節される例では、宿主細胞は、調節可能なプロモーターが活性化される条件において培養される。一部の実施形態では、プロモーターは誘導性プロモーターであり、かつ、免疫細胞は、誘導分子の存在下または誘導分子が産生される条件において培養される。ＭＨＣ−ＣＡＲが発現されるかどうかの決定は当業者に明らかであり、任意の公知の方法、例えば、定量的逆転写酵素ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によるキメラ受容体コーディングｍＲＮＡの検出またはウエスタンブロッティング、蛍光顕微鏡法、およびフローサイトメトリーを含む方法によるキメラ受容体タンパク質の検出により評価されてもよい。以下の実施例も参照。代替的に、ＭＨＣ−ＣＡＲの発現は、免疫細胞が対象に投与された後にｉｎ  ｖｉｖｏで起こってもよい。
【０１３１】
代替的に、本明細書に開示される任意の免疫細胞中でのＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの発現は、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトをコードするＲＮＡ分子を導入することにより達成され得る。そのようなＲＮＡ分子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写または化学合成により調製され得る。ＲＮＡ分子は次に、例えばエレクトロポレーションにより、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、またはその任意の組合せ）などの好適な宿主細胞に導入され得る。例えば、ＲＮＡ分子は、Rabinovich et al., Human Gene Therapy, 17:1027-1035およびＷＯ  ＷＯ２０１３／０４０５５７号パンフレットに記載される方法にしたがって合成され、宿主免疫細胞に導入され得る。
【０１３２】
本明細書に記載される任意のＭＨＣ−ＣＡＲを発現する宿主免疫細胞を調製する方法は、宿主免疫細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖することを含んでもよい。宿主免疫細胞を拡大増殖することは、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する細胞の数の増加を結果としてもたらす任意の方法、例えば、宿主細胞が増幅することを可能とすることまたは宿主細胞を刺激して増幅させることを伴ってもよい。宿主細胞の拡大増殖を刺激する方法は、キメラ受容体の発現のために使用される宿主細胞の種類に依存し、当業者に明らかである。一部の実施形態では、本明細書に記載される任意のＭＨＣ−ＣＡＲを発現する宿主免疫細胞は、対象への投与の前にｅｘ  ｖｉｖｏで拡大増殖され得る。
【０１３３】
（ｉｉ）追加の遺伝子改変
１つまたは複数の追加の遺伝子改変は、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクション（MHC-CAR construction）のトランスフェクションの前、同時、または後に宿主免疫細胞に導入され得る。例えば、１つまたは複数のマーカーおよび／または自殺遺伝子が宿主免疫細胞に導入されてもよい。例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、強化型青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）、およびＲＱＲ８（ＣＤ３４およびＣＤ２０からの標的エピトープを組み合わせたＴ細胞用の小型マーカー／自殺遺伝子。Philip et al., Blood 124(8):1277-87; 2014）などのＲＱＲ遺伝子が挙げられる。そのようなマーカー／自殺遺伝子は、ＭＨＣ−ＣＡＲ成分を用いて１つの発現カセット中で構築されてもよい。
【０１３４】
ＧＦＰのアミノ酸配列の例を以下に提供する：
ＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＡＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ（配列番号：４２７）
【０１３５】
ＧＦＰをコードする核酸配列の例を以下に提供する：
ｇｔｇａｇｃａａｇｇｇｃｇａｇｇａｇｃｔｇｔｔｃａｃｃｇｇｇｇｔｇｇｔｇｃｃｃａｔｃｃｔｇｇｔｃｇａｇｃｔｇｇａｃｇｇｃｇａｃｇｔａａａｃｇｇｃｃａｃａａｇｔｔｃａｇｃｇｔｇｔｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｇｇｇｃｇａｔｇｃｃａｃｃｔａｃｇｇｃａａｇｃｔｇａｃｃｃｔｇａａｇｔｔｃａｔｃｔｇｃａｃｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｔｇｃｃｃｇｔｇｃｃｃｔｇｇｃｃｃａｃｃｃｔｃｇｔｇａｃｃａｃｃｃｔｇａｃｃｔａｃｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃｔｔｃａｇｃｃｇｃｔａｃｃｃｃｇａｃｃａｃａｔｇａａｇｃａｇｃａｃｇａｃｔｔｃｔｔｃａａｇｔｃｃｇｃｃａｔｇｃｃｃｇａａｇｇｃｔａｃｇｔｃｃａｇｇａｇｃｇｃａｃｃａｔｃｔｔｃｔｔｃａａｇｇａｃｇａｃｇｇｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃｃｇｃｇｃｃｇａｇｇｔｇａａｇｔｔｃｇａｇｇｇｃｇａｃａｃｃｃｔｇｇｔｇａａｃｃｇｃａｔｃｇａｇｃｔｇａａｇｇｇｃａｔｃｇａｃｔｔｃａａｇｇａｇｇａｃｇｇｃａａｃａｔｃｃｔｇｇｇｇｃａｃａａｇｃｔｇｇａｇｔａｃａａｃｔａｃａａｃａｇｃｃａｃａａｃｇｔｃｔａｔａｔｃａｔｇｇｃｃｇａｃａａｇｃａｇａａｇａａｃｇｇｃａｔｃａａｇｇｃｇａａｃｔｔｃａａｇａｔｃｃｇｃｃａｃａａｃａｔｃｇａｇｇａｃｇｇｃａｇｃｇｔｇｃａｇｃｔｃｇｃｃｇａｃｃａｃｔａｃｃａｇｃａｇａａｃａｃｃｃｃｃａｔｃｇｇｃｇａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃｃｇａｃａａｃｃａｃｔａｃｃｔｇａｇｃａｃｃｃａｇｔｃｃｇｃｃｃｔｇａｇｃａａａｇａｃｃｃｃａａｃｇａｇａａｇｃｇｃｇａｔｃａｃａｔｇｇｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｃｃｇｃｃｇｇｇａｔｃａｃｔｃｔｃｇｇｃａｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔａｃａａｇｔａａ（配列番号：４２８）
【０１３６】
一部の事例では、内因性ＴＣＲ（アルファ鎖、ベータ鎖、または両方）は、宿主免疫細胞が内因性ＴＣＲを発現しないように破壊され得る。内因性ＴＣＲの欠損は、望ましくないＴ細胞活性化を回避し得る。代替的または追加的に、ある特定の細胞表面受容体はノックアウトされ得る。そのような表面受容体は、疾患治療用の標的受容体、例えば、ＭＳ治療のための標的であるＣＤ５２であってもよい。ＭＨＣ−ＣＡＲ免疫細胞からのそのような標的受容体のノックアウトは、標的受容体に特異的な治療剤（例えば、アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２抗体）とのＭＨＣ−ＣＡＲ免疫細胞の併用を可能とする。
【０１３７】
一部の実施形態では、宿主免疫細胞は、特定の臓器または組織、例えば、リンパ節、三次リンパ臓器、または炎症の部位における保持を増進するために合成の表面タンパク質を用いて改変されてもよい。そうすることは、血液脳関門の通過または末梢血を通じた免疫細胞の自由な移行に起因する致死的なオフターゲット効果を最小化しながら、改変された免疫細胞が標的病原性細胞に接近することを可能とする。Ｔ細胞分化経路の早期の細胞（例えば、ナイーブ、幹細胞メモリー、およびセントラルメモリーＴ細胞）は、自由にリンパ節に移行する。分化が進むにつれて、ほとんどのエフェクターＴ細胞はリンパ節を離れる。病的な免疫細胞もまた、炎症の部位に移行して蓄積し得る。活性化ＣＡＲ−Ｔ細胞による治療は、それらが望ましくない標的と反応する場合に多数の望ましくない効果を有する。心臓組織との相互作用は心臓タンパク質に対して致死的であり得、脳の通過は致死的な脳浮腫に繋がり得る。最近、ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ療法を使用するがんのための全身性治療におけるよりも低用量のＣＡＲ  Ｔ療法を使用する脳のがん膠芽腫（gliobastoma）の治療において進展が為された。Brown et al., New England Journal of Medicine, 375(26):2561-2569, 2016。炎症の解消は、病的な環境を保護的な環境に変える可能性を有する。Gagliani et al., Nature, 523(7559):221-225, 2015。
【０１３８】
免疫細胞へのリンパ節保持タンパク質の１つまたは複数の導入は、リンパ節中での免疫細胞の保持を増進することができ、免疫細胞は依然として標的病原性細胞へのアクセスを有するが、上述の望ましくない効果は有意に低減され得る。ナイーブリンパ球は高内皮小静脈（ＨＥＶ）を介してリンパ節に入る。したがって、ＨＥＶアンカリングおよび／またはエントリーに関与するタンパク質の発現または過剰発現は、免疫細胞がリンパ節に入ることを促進し得る。例示的なリンパ節保持タンパク質としては、ＣＣＲ７（ケモカイン受容体）、ＭＥＣＡ７９（末梢リンパ節アドレシン）、血管接着タンパク質−１（ＶＡＰ−１）およびＣＤ６２（セレクチン、細胞接着分子のファミリー）が挙げられるがこれらに限定されない。Azzi et al., Blood 124(4):476-477, 2016；Streeter et al., J. Cell. Biol. 107:1853-186; 1988；Michie et al., Amer, J. Path. 143:1688-1698; 1993；Berg et al., J. Cell. Biol. 114:343-349; 1991；Berg et al., Nature 366:695-698; 1993；およびHemmerich et al., J. Exp. Med. 180:2219-2226; 1994。代替的に、胸腺およびリンパ臓器からのリンパ球排出に関与するタンパク質（例えば、スフィンゴシン−１−リン酸受容体−１またはＳ１Ｐ）をコードする遺伝子は免疫細胞からノックアウトされ得る。
【０１３９】
炎症の部位へのトラフィッキングを促進するケモカイン受容体および接着受容体はまた、免疫疾患を拡大させる病原性細胞とＭＨＣ−ＣＡＲ免疫細胞を接触させ得る。［Barreiro et al., Cardiovascular research, 86(2):174-182, 2010］表３および表４を参照。炎症を拡大させる免疫細胞の局在化に関与する受容体としては、三次リンパ臓器（ＣＸＣＬ１３、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１が発現される）に局在化される受容体（すなわち、ＣＸＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＣＲ６）が挙げられる。
【０１４０】
他の臓器／組織、例えば、脳／ＣＮＳ、骨髄、膵臓、腸、肝臓、肺、脾臓、および／または胸腺の標的化に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子は、免疫細胞に導入または免疫細胞からノックアウトされてもよい。
【０１４１】
治療用細胞中でのウイルス誘導性または一過性ＲＮＡ媒介性発現（場合により内因性遺伝子のノックアウトと組み合わせられる）により、遺伝子（表３および表４における遺伝子）は、ＴｒｅｇもしくはＣＴＬ細胞のいずれかを所望の位置に経路制御するためまたは所望の細胞を処置／除去するために使用されてもよい。Barreiro, et al. Cardiovascular research, 86(2):174-182, 2010。ｍＲＮＡトランスフェクションが利用される場合、それは１週間のケモカインまたは接着受容体の発現を可能とし得る。Wang and Riviere. Molecular Therapy-Oncolytics, 3:16015 2016。
【０１４２】
表３．ケモカイン受容体および天然の状況
【表３】
2021502122.tif 000025
2021502122.tif 000026
【０１４３】
ＡＡＣ５１１２４．１により提供されるＣＣＲ６のアミノ酸配列を以下に示す：
ＭＳＧＥＳＭＮＦＳＤＶＦＤＳＳＥＤＹＦＶＳＶＮＴＳＹＹＳＶＤＳＥＭＬＬＣＳＬＱＥＶＲＱＦＳＲＬＦＶＰＩＡＹＳＬＩＣＶＦＧＬＬＧＮＩＬＶＶＩＴＦＡＦＹＫＫＡＲＳＭＴＤＶＹＬＬＮＭＡＩＡＤＩＬＦＶＬＴＬＰＦＷＡＶＳＨＡＴＧＡＷＶＦＳＮＡＴＣＫＬＬＫＧＩＹＡＩＮＦＮＣＧＭＬＬＬＴＣＩＳＭＤＲＹＩＡＩＶＱＡＴＫＳＦＲＬＲＳＲＴＬＰＲＳＫＩＩＣＬＶＶＷＧＬＳＶＩＩＳＳＳＴＦＶＦＮＱＫＹＮＴＱＧＳＤＶＣＥＰＫＹＱＴＶＳＥＰＩＲＷＫＬＬＭＬＧＬＥＬＬＦＧＦＦＩＰＬＭＦＭＩＦＣＹＴＦＩＶＫＴＬＶＱＡＱＮＳＫＲＨＫＡＩＲＶＩＩＡＶＶＬＶＦＬＡＣＱＩＰＨＮＭＶＬＬＶＴＡＡＮＬＧＫＭＮＲＳＣＱＳＥＫＬＩＧＹＴＫＴＶＴＥＶＬＡＦＬＨＣＣＬＮＰＶＬＹＡＦＩＧＱＫＦＲＮＹＦＬＫＩＬＫＤＬＷＣＶＲＲＫＹＫＳＳＧＦＳＣＡＧＲＹＳＥＮＩＳＲＱＴＳＥＴＡＤＮＤＮＡＳＳＦＴＭ（配列番号：３９１）
【０１４４】
ＣＣＲ６の例示的な核酸配列を以下に示す。
ａｔｇａｇｔｇｇｇｇａａａｇｔａｔｇａａｃｔｔｃａｇｃｇａｔｇｔａｔｔｔｇａｃｔｃｃｔｃｃｇａａｇａｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｃｔｇｔｇａａｔａｃｇａｇｃｔａｔｔａｃｔｃｃｇｔｃｇａｔａｇｔｇａａａｔｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔａｇｔｃｔｃｃａａｇａａｇｔｃｃｇｃｃａａｔｔｃａｇｔｃｇｃｃｔｃｔｔｃｇｔｔｃｃｃａｔｃｇｃｇｔａｃｔｃｃｃｔｔａｔｔｔｇｔｇｔｔｔｔｔｇｇｃｃｔｔｃｔｇｇｇｔａａｃａｔｃｃｔｇｇｔｔｇｔａａｔｃａｃａｔｔｃｇｃｔｔｔｃｔａｔａａａａａａｇｃｔｃｇｇａｇｔａｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｔａｃｃｔｔｃｔｔａａｃａｔｇｇｃｔａｔａｇｃｇｇａｃａｔｔｃｔｔｔｔｔｇｔｇｃｔｔａｃｔｃｔｃｃｃａｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇｔｇａｇｃｃａｔｇｃａａｃａｇｇｇｇｃｇｔｇｇｇｔｔｔｔｔｔｃａａａｔｇｃｃａｃａｔｇｔａａｇｃｔｇｃｔｔａａａｇｇｇａｔｃｔａｔｇｃａａｔａａａｃｔｔｃａａｔｔｇｃｇｇｇａｔｇｃｔｃｃｔｇｃｔｇａｃａｔｇｃａｔｃａｇｔａｔｇｇａｔｃｇａｔａｃａｔａｇｃｔａｔａｇｔａｃａｇｇｃｇａｃｔａａｇｔｃｃｔｔｃｃｇｃｃｔｇｃｇａｔｃｃｃｇｃａｃａｃｔｇｃｃｔａｇｇａｇｃａａａａｔｔａｔｔｔｇｃｃｔｃｇｔｃｇｔａｔｇｇｇｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｇａｔｃａｔｃｔｃｃｔｃｃａｇｔａｃｇｔｔｔｇｔｃｔｔｔａａｃｃａｇａａａｔａｔａａｃａｃａｃａｇｇｇｔｔｃｔｇａｔｇｔａｔｇｔｇａａｃｃａａａｇｔａｔｃａｇａｃａｇｔｇａｇｔｇａａｃｃａａｔａｃｇｇｔｇｇａａｇｔｔｇｃｔｔａｔｇｔｔｇｇｇｃｔｔｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｇｇｇｔｔｔｔｔｃａｔｃｃｃａｃｔｇａｔｇｔｔｃａｔｇａｔｔｔｔｃｔｇｔｔａｔａｃａｔｔｔａｔｔｇｔｔａａｇａｃｃｔｔｇｇｔｔｃａｇｇｃｇｃａａａａｔａｇｃａａｇａｇａｃａｔａａｇｇｃａａｔｔｃｇａｇｔｃａｔｃａｔｔｇｃｃｇｔｇｇｔｇｔｔｇｇｔｃｔｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇｔｃａｇａｔｃｃｃｃｃａｔａａｔａｔｇｇｔｔｃｔｇｃｔｃｇｔｃａｃｃｇｃｃｇｃｔａａｃｔｔｇｇｇｔａａｇａｔｇａａｔｃｇａｔｃｔｔｇｔｃａｇｔｃｃｇａｇａａｇｔｔｇａｔｃｇｇａｔａｃａｃｃａａａａｃｔｇｔｇａｃａｇａａｇｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｃｔｔｃａｃｔｇｔｔｇｔｃｔｇａａｃｃｃａｇｔｔｔｔｇｔａｔｇｃｔｔｔｔａｔａｇｇａｃａｇａａｇｔｔｔｃｇａａａｔｔａｃｔｔｃｔｔｇａａａａｔｃｃｔｃａａｇｇａｃｃｔｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｇａａｇｇａａｇｔａｃａａｇａｇｃｔｃｔｇｇｃｔｔｔａｇｔｔｇｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔａｃａｇｔｇａｇａａｔａｔａｔｃｃｃｇｇｃａｇａｃｃｔｃｃｇａｇａｃｔｇｃｔｇａｔａａｔｇａｃａａｃｇｃａａｇｔｔｃｃｔｔｃａｃｔａｔｇ（配列番号：３９２）
ＡＴＧＡＧＣＧＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＧＡＡＴＴＴＣＡＧＣＧＡＴＧＴＴＴＴＣＧＡＣＴＣＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＴＣＡＧＴＣＡＡＴＡＣＴＴＣＡＴＡＴＴＡＣＴＣＡＧＴＴＧＡＴＴＣＴＧＡＧＡＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＣＴＴＧＣＡＧＧＡＧＧＴＣＡＧＧＣＡＧＴＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＡＴＴＴＧＴＡＣＣＧＡＴＴＧＣＣＴＡＣＴＣＣＴＴＧＡＴＣＴＧＴＧＴＣＴＴＴＧＧＣＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＡＴＡＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＡＴＣＡＣＣＴＴＴＧＣＴＴＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＧＧＣＣＡＧＧＴＣＴＡＴＧＡＣＡＧＡＣＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＧＡＡＣＡＴＧＧＣＣＡＴＴＧＣＡＧＡＣＡＴＣＣＴＣＴＴＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＣＴＣＣＣＡＴＴＣＴＧＧＧＣＡＧＴＧＡＧＴＣＡＴＧＣＣＡＣＴＧＧＴＧＣＧＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＴＴＧＣＴＡＡＡＡＧＧＣＡＴＣＴＡＴＧＣＣＡＴＣＡＡＣＴＴＴＡＡＣＴＧＣＧＧＧＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＡＴＴＡＧＣＡＴＧＧＡＣＣＧＧＴＡＣＡＴＣＧＣＣＡＴＴＧＴＡＣＡＧＧＣＧＡＣＴＡＡＧＴＣＡＴＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＡＴＣＣＡＧＡＡＣＡＣＴＡＣＣＧＣＧＣＡＣＧＡＡＡＡＴＣＡＴＣＴＧＣＣＴＴＧＴＴＧＴＧＴＧＧＧＧＧＣＴＧＴＣＡＧＴＣＡＴＣＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＣＡＡＣＴＴＴＴＧＴＣＴＴＣＡＡＣＣＡＡＡＡＡＴＡＣＡＡＣＡＣＣＣＡＡＧＧＣＡＧＣＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧＡＡＣＣＣＡＡＧＴＡＣＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＣＧＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＣＴＴＧＡＧＣＴＡＣＴＣＴＴＴＧＧＴＴＴＣＴＴＴＡＴＣＣＣＴＴＴＧＡＴＧＴＴＣＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＧＴＴＡＣＡＣＧＴＴＣＡＴＴＧＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＧＧＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡＧＡＡＴＴＣＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＡＡＴＣＡＴＡＧＣＴＧＴＧＧＴＧＣＴＴＧＴＧＴＴＴＣＴＧＧＣＴＴＧＴＣＡＧＡＴＴＣＣＴＣＡＴＡＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＴＴＴＧＧＧＴＡＡＡＡＴＧＡＡＣＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＡＧＡＧＣＧＡＡＡＡＧＣＴＡＡＴＴＧＧＣＴＡＴＡＣＧＡＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＡＡＣＣＣＴＧＴＧＣＴＣＴＡＣＧＣＴＴＴＴＡＴＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＡＡＡＣＴＡＣＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＧＡＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＴＧＴＧＴＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＴＡＣＡＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＡＧＧＴＡＣＴＣＡＧＡＡＡＡＣＡＴＴＴＣＴＣＧＧＣＡＧＡＣＣＡＧＴＧＡＧＡＣＣＧＣＡＧＡＴＡＡＣＧＡＣＡＡＴＧＣＧＴＣＧＴＣＣＴＴＣＡＣＴＡＴＧ（配列番号：３９３）
【０１４５】
表４．接着受容体および天然の状況
【表４】
2021502122.tif 000027
2021502122.tif 000028
【０１４６】
代替的または追加的に、免疫細胞機能、例えば、増殖、細胞傷害性などを増進し得る遺伝子もまた、免疫細胞に導入または免疫細胞からノックアウトされ得る。例としては、ＴＮＦ／ＴＮＦＲ２過剰発現（短い寿命であるがより効果的なＣＤ８  Ｔ細胞のため）、ｇｌｄ（ＦａｓＬ突然変異体；リンパ球増殖のため；ＣＴＬはＦａｓ−ＦａｓＬ経路を介して殺傷しない）；ｌｐｒ（Ｆａｓ突然変異体；ＦａｓＬの上方調節のため  −  ＦａｓＬ媒介性アポトーシスに耐性の標的細胞）；グランザイムＢ＊の欠損（標的細胞における核内アポトーシス変化の遅延）；グランザイムＡおよびＢ＊の欠損（標的細胞における核内アポトーシス変化の遅延）；パーフォリンの欠損（顆粒媒介性アポトーシスの完全な非存在）；パーフォリンおよびＦａｓＬの欠損（欠陥のある顆粒媒介性およびＦａｓ媒介性アポトーシス）；カテプシンＣ（ジペプチジル−ペプチダーゼＩ）の欠損（活性グランザイムおよび一部の造血セリンプロテアーゼを産生しない）；ＦＡＳ（ＣＤ９５）の過小発現；ならびに／またはＦＡＳＬの過剰発現が挙げられる。
【０１４７】
以下の表５は、ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞の追加の遺伝子改変または本明細書に記載される併用治療およびそれから生じる付随する利点を列記する。
【０１４８】
表５．遺伝子改変または併用治療およびその利益
【表５】
2021502122.tif 000029
2021502122.tif 000030
【０１４９】
一部の実施形態では、ＰＤ遮断に繋がる遺伝子改変は、本明細書に記載されるようなＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞に導入され得る。そのような改変としては、ＰＤ−１ノックアウト、ＰＤ−Ｌ１もしくはＬ２過剰発現、またはＰＤ−Ｌ１ノックアウトの１つまたは複数が挙げられる。ＰＤ遮断は、免疫阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＩＤＯ、もしくはアルギナーゼ、もしくはＣＴＬＡ−４Ｉｇ分泌物のノックアウト）、免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ１３７、ＩＬ−２、ＴＬＲリガンド、もしくはＳＴＩＮＧ）、および／またはキナーゼ阻害剤（例えば、Ｂｒａｆ阻害剤もしくはＭＥＫ阻害剤）と組み合わせられてもよい。
【０１５０】
以下の表６は、ＰＤ遮断、免疫阻害剤、細胞死受容体、免疫刺激剤、ｔｏｌｌ様受容体、キナーゼ阻害、マスター調節因子、サイトカインシグナリング、細胞相互作用の低減、および薬物相互作用関連の編集のための例示的な遺伝子改変を提供する。表はまた、Ｔ細胞におけるＣａｓ９を使用するガイドＲＮＡ用の標的配列の他に、発現／過剰発現のために使用され得る配列のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号を提供する。ｇＲＮＡを使用するゲノム編集は、所望のｇＲＮＡを含有するレンチウイルス（ｌｅｎｔｉＣＲＩＳＰＲｖ２）およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９ヌクレアーゼの形質導入を通じて行われる。これは、プロトコールにおけるＴＡＬＥＮ  ＲＮＡの送達に対する代替として行われ得る。Sanjana, et al. Nature methods, 11(8):783-784, 2014。
【０１５１】
表６．遺伝子改変のための例示的な遺伝子および対応するＣａｓ９媒介性編集
【表６】
2021502122.tif 000031
2021502122.tif 000032
2021502122.tif 000033
2021502122.tif 000034
2021502122.tif 000035
2021502122.tif 000036
2021502122.tif 000037
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2021502122.tif 000039
2021502122.tif 000040
2021502122.tif 000041
2021502122.tif 000042
【０１５２】
以下の表は、ＴＡＬＥＮ編集用の標的配列の他にタンパク質配列を提供する。
表７．主にＴＡＬＥＮ媒介性の編集
【表７】
2021502122.tif 000043
2021502122.tif 000044
2021502122.tif 000045
2021502122.tif 000046
2021502122.tif 000047
2021502122.tif 000048
2021502122.tif 000049
2021502122.tif 000050
2021502122.tif 000051
【０１５３】
（ｉｉｉ）例示的な遺伝子改変アプローチ
任意の従来の遺伝子改変アプローチを使用して、本明細書に記載されるような方式で免疫細胞を遺伝子改変することができる。一部の実施形態では、遺伝子改変は、ゲノム編集を使用して行われる。「ゲノム編集」は、生物の任意のタンパク質コーディングまたは非コーディングヌクレオチド配列を含むゲノムを改変して標的遺伝子の発現をノックアウトする方法を指す。一般に、ゲノム編集方法は、例えば標的化されるヌクレオチド配列において、ゲノムの核酸を切断することができるエンドヌクレアーゼの使用を伴う。ゲノム中の二本鎖切断の修復が修復されて突然変異が導入されてもよく、かつ／または外因性核酸が標的化される部位に挿入されてもよい。
【０１５４】
ゲノム編集方法は、一般に、標的核酸中の二本鎖切断の生成に関与するエンドヌクレアーゼの種類に基づいて分類される。これらの方法としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、およびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの使用が挙げられる。
【０１５５】
一部の事例では、本明細書に記載されるような免疫細胞の遺伝子改変は、当該技術分野において公知のＴＡＬＥＮ技術を使用して行われる。ＴＡＬＥＮは、操作された制限酵素であり、所望の標的ＤＮＡ分子に特異的に結合して切断することができる。ＴＡＬＥＮは、典型的に、ＤＮＡ切断ドメインに融合した転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ＤＮＡ結合ドメインを含有する。ＤＮＡ結合ドメインは、位置１２および１３において異なる２アミノ酸ＲＶＤ（リピート可変ジペプチドモチーフ）を有する高度に保存された３３〜３４アミノ酸配列を含有してもよい。ＲＶＤモチーフは核酸配列への結合特異性を決定し、所望のＤＮＡ配列に特異的に結合するように当業者に公知の方法にしたがって操作され得る（例えば、Juillerat, et al. (January 2015). Scientific reports, 5；Miller et.al.  (February 2011).  Nature Biotechnology 29 (2): 143-8；Zhang et.al.  (February 2011).  Nature Biotechnology 29 (2): 149-53；Geiβler, et al., Boch,   (2011), PLoS ONE 6 (5): e19509; Boch (February 2011).  Nature Biotechnology 29 (2): 135-6；Boch, et.al.  (December 2009). Science 326 (5959): 1509-12；およびMoscou et al, (December 2009).  Science 326 (5959): 1501を参照。ＤＮＡ切断ドメインは、多くの異なる細胞種において活性のＦｏｋＩエンドヌクレアーゼに由来してもよい。ＦｏｋＩドメインは二量体として機能し、適切な配向および間隔で標的ゲノム中の部位のための特有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つのコンストラクトを必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩ切断ドメインとの間のアミノ酸残基の数および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基数の両方が、高レベルの活性を達成するための重要なパラメーターのようである。Miller et al. (2011) Nature Biotech. 29: 143-8。
【０１５６】
目的の標的遺伝子（例えば、ＴＣＲ、ＣＤ５２、ＭＨＣ、および本明細書に記載される他のもの）中の配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュール成分を使用する様々なスキームを含む当該技術分野において公知の任意の方法を使用して構築され得る。Zhang et al. (2011) Nature Biotech. 29: 149-53；Geibler et al. (2011) PLoS ONE 6: e19509。
【０１５７】
目的の標的遺伝子に特異的なＴＡＬＥＮは、二本鎖切断（ＤＳＢ）を生成するために細胞内で使用され得る。修復機構が非相同末端結合を介して切断を不適切に修復する場合、突然変異が切断部位において導入され得る。例えば、不適切な修復はフレームシフト突然変異を導入することがある。代替的に、所望の配列を有する外来ＤＮＡ分子は、ＴＡＬＥＮと共に細胞に導入され得る。外来ＤＮＡの配列および染色体配列に依存して、このプロセスは、欠陥を訂正するためまたはＤＮＡ断片を目的の標的遺伝子に導入するため、またはそのような欠陥を内因性遺伝子に導入し、したがって標的遺伝子の発現を減少させるために使用され得る。
【０１５８】
一部の事例では、本明細書に（herin）記載されるような免疫細胞の遺伝子改変は、当該技術分野において公知のようなＣＲＩＳＰＲ技術（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）を使用して行われる。そのような改変は欠失を含んでもよく、または、目的の標的遺伝子中の配列の突然変異は、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムを使用して構築され得、Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）−Ｃａｓシステムは、操作された、天然に存在しないＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムである。本開示は、目的の標的遺伝子中の標的配列とハイブリダイズするＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを利用し、ＣＲＩＳＰＲ  Ｃａｓシステムは、Ｃａｓエンドヌクレアーゼおよび操作されたｃｒＲＮＡ／ｔｒａｃｒＲＮＡ（またはシングルガイドＲＮＡ（「ｓｇＲＮＡ」）を含む。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ｃｒＲＮＡを含み、かつｔｒａｃｒＲＮＡ配列を含まない。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ複合体は、系列特異的なタンパク質ポリヌクレオチドに結合してタンパク質ポリヌクレオチドの切断を可能とし、それにより、ポリヌクレオチドを改変することができる。
【０１５９】
本開示のＣＲＩＳＰＲ  Ｃａｓシステムは、目的の標的遺伝子内の目的の領域、該遺伝子内もしくは該遺伝子に隣接する目的の領域、例えば、リーダー配列、トレイラー配列もしくはイントロンなど、またはコーディング領域の上流もしくは下流のいずれかの非転写領域内の目的の領域に結合しかつ／または該領域を切断してもよい。本開示において使用されるガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）は、ｇＲＮＡがゲノム中の予め決定された切断部位（標的部位）にＣａｓ酵素−ｇＲＮＡ複合体の結合を方向付けるように設計されてもよい。切断部位は、未知の配列の領域、またはＳＮＰ、ヌクレオチド挿入、ヌクレオチド欠失、組換えなどを含有する領域を含有する断片を放出するように選択されてもよい。遺伝子領域の切断は、Ｃａｓ酵素により標的配列の位置において１つまたは２つの鎖を切断することを含んでもよい。一実施形態では、そのような切断は、標的遺伝子の転写の減少を結果としてもたらし得る。別の実施形態では、切断は、外因性鋳型ポリヌクレオチドを用いる相同組換えにより切断された標的ポリヌクレオチドを修復することをさらに含み得、修復は、標的ポリヌクレオチドの１つまたは複数のヌクレオチドの挿入、欠失、または置換を結果としてもたらす。
【０１６０】
「ｇＲＮＡ」、「ガイドＲＮＡ」および「ＣＲＩＳＰＲガイド配列」という用語は全体を通じて交換可能に使用されることがあり、ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓシステムのＣａｓ  ＤＮＡ結合タンパク質の特異性を決定する配列を含む核酸を指す。ｇＲＮＡは、宿主細胞のゲノム中の標的核酸配列にハイブリダイズする（部分的または完全に相補的である）。標的核酸にハイブリダイズするｇＲＮＡまたはその部分は、１５〜２５ヌクレオチド、１８〜２２ヌクレオチド、または１９〜２１ヌクレオチドの長さであってもよい。一部の実施形態では、標的核酸にハイブリダイズするｇＲＮＡ配列は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、標的核酸にハイブリダイズするｇＲＮＡ配列は、１０〜３０、または１５〜２５ヌクレオチドの長さである。
【０１６１】
標的核酸に結合する配列に加えて、一部の実施形態では、ｇＲＮＡはまた、スキャフォールド配列を含む。標的核酸に相補的な配列およびスキャフォールド配列の両方をコードするｇＲＮＡの発現は、標的核酸への結合（ハイブリダイズ）および標的核酸へのエンドヌクレアーゼの局在化の両方という二重の機能を有し、部位特異的なＣＲＩＳＰＲ活性を結果としてもたらすことがある。一部の実施形態では、そのようなキメラｇＲＮＡは、シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と称されることがある。
【０１６２】
本明細書において使用される場合、ｔｒａｃｒＲＮＡとも称される「スキャフォールド配列」は、相補的なｇＲＮＡ配列に結合（ハイブリダイズ）した標的核酸にＣａｓエンドヌクレアーゼを局在化させる核酸配列を指す。少なくとも１つのステムループ構造を含み、かつエンドヌクレアーゼを局在化させる任意のスキャフォールド配列が、本明細書に記載される遺伝子エレメントおよびベクターにおいて使用されてもよい。例示的なスキャフォールド配列は当業者に明らかであり、例えば、Jinek, et al. Science (2012) 337(6096):816-821、Ran, et al. Nature Protocols (2013) 8:2281-2308、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１４／０９３６９４号パンフレット、およびＰＣＴ出願第ＷＯ２０１３／１７６７７２号パンフレットに見出すことができる。一部の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−ＣａｓシステムはｔｒａｃｒＲＮＡ配列を含まない。
【０１６３】
一部の実施形態では、ｇＲＮＡ配列はスキャフォールド配列を含まず、かつ、スキャフォールド配列は別々の転写物として発現される。そのような実施形態では、ｇＲＮＡ配列は、スキャフォールド配列の部分に相補的であり、かつスキャフォールド配列に結合（ハイブリダイズ）してエンドヌクレアーゼを標的核酸に局在化させる追加の配列をさらに含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、ｇＲＮＡ配列は、標的核酸に少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または少なくとも１００％相補的である（米国特許第８，６９７，３５９号明細書も参照；該文献は、標的ポリヌクレオチド配列とのｇＲＮＡ配列の相補性の教示について参照することにより組み込まれる）。ＣＲＩＳＰＲガイド配列と標的核酸の３’末端付近の標的核酸との間のミスマッチはヌクレアーゼ切断活性を無効にする場合があることが実証されている（Upadhyay, et al. Genes Genome Genetics (2013) 3(12):2233-2238）。一部の実施形態では、ｇＲＮＡ配列は、標的核酸の３’末端（例えば、標的核酸の３’末端の最後の５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチド）に少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または少なくとも１００％相補的である。
【０１６５】
Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）遺伝子を標的化する、修飾ｓｇＲＮＡおよび非修飾ｓｇＲＮＡの両方を含む、例示的なｓｇＲＮＡ配列が本明細書において提供される。当業者に明らかなように、ｓｇＲＮＡ配列の選択は、予測されるオンターゲットおよび／またはオフターゲット結合部位の数などの要因に依存することがある。一部の実施形態では、ｓｇＲＮＡ配列は、潜在的なオンターゲット部位を最大化しかつ潜在的なオフターゲット部位を最小化するように選択される。
【０１６６】
一部の実施形態では、Ｃａｓエンドヌクレアーゼは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ（もしくはそのバリアント）またはＣｐｆｌヌクレアーゼ（もしくはそのバリアント）である。Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼは、標的核酸の二本鎖ＤＮＡを切断して平滑末端を結果としてもたらす一方、Ｃｐｆ１ヌクレアーゼを用いた切断は、核酸の付着末端を結果としてもたらす。
【０１６７】
一般に、標的核酸は、３’側または５’側においてプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）により隣接されており、ＰＡＭは、エンドヌクレアーゼと相互作用し、標的核酸に対するエンドヌクレアーゼ活性の標的化にさらに関与することがある。標的核酸に隣接するＰＡＭ配列は、エンドヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼの由来となる供給源に依存すると一般に考えられている。例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来するＣａｓ９エンドヌクレアーゼについてＰＡＭ配列はＮＧＧであるが、ＰＡＭ配列ＮＡＧおよびＮＧＡはより低い効率で認識されることがある。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓに由来するＣａｓ９エンドヌクレアーゼについてＰＡＭ配列はＮＮＧＲＲＴである。Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに由来するＣａｓ９エンドヌクレアーゼについてＰＡＭ配列はＮＮＮＮＧＡＴＴである。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓに由来するＣａｓ９エンドヌクレアーゼ、ＳｔｌＣａｓ９  ｄＳｔ３Ｃａｓ９、ＰＡＭ配列はそれぞれＮＮＡＧＡＡＷおよびＮＧＧＮＧである。Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａに由来するＣａｓ９エンドヌクレアーゼについてＰＡＭ配列はＮＡＡＡＡＣである。一部の実施形態では、ＣａｓエンドヌクレアーゼはＣｐｆｌヌクレアーゼである。Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼとは対照的に、Ｃｐｆｌエンドヌクレアーゼは、一般に、ｔｒａｃｒＲＮＡ配列を必要とせず、標的核酸の５’末端に位置するＰＡＭ配列を認識する。ＣｐｆｌヌクレアーゼについてＰＡＭ配列はＴＴＴＮである。一部の実施形態では、ＣａｓエンドヌクレアーゼはＭＡＤ７（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｅｃｔａｌｅからのＣｐｆｌヌクレアーゼとも称される）であり、かつ、ＰＡＭ配列はＹＴＴＴＮである。
【０１６８】
一部の実施形態では、細胞を遺伝子操作することはまた、Ｃａｓエンドヌクレアーゼ、またはそれをコードする核酸配列（例えば、ＣａｓエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡ）を細胞に導入することを含む。一部の実施形態では、ＣａｓエンドヌクレアーゼおよびｇＲＮＡをコードする核酸は、同じ核酸（例えば、ベクター）上で提供される。一部の実施形態では、ＣａｓエンドヌクレアーゼおよびｇＲＮＡをコードする核酸は、異なる核酸（例えば、異なるベクター）上で提供される。一部の実施形態では、Ｃａｓエンドヌクレアーゼは、ＣａｓエンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡとして提供され、かつ、ｇＲＮＡは修飾ｇＲＮＡ分子として提供される。代替的または追加的に、Ｃａｓエンドヌクレアーゼは、タンパク質の形態で提供または細胞に導入されてもよい。
【０１６９】
一部の実施形態では、ＣａｓエンドヌクレアーゼはＣａｓ９酵素またはそのバリアントである。一部の実施形態では、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、またはＴｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａに由来する。一部の実施形態では、Ｃａｓエンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列は、宿主細胞中での発現のために最適化されたコドンであってもよい。一部の実施形態では、エンドヌクレアーゼはＣａｓ９ホモログまたはオルソログである。
【０１７０】
一部の実施形態では、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列は、タンパク質の活性を変化させるためにさらに改変されている。一部の実施形態では、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼは、エンドヌクレアーゼの１つまたは複数の触媒性残基（resides）を不活化するように改変されている。一部の実施形態では、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼは、エンドヌクレアーゼの触媒性残基の１つを不活化するように改変されており、「ニッカーゼ」または「Ｃａｓ９ｎ」と称される。Ｃａｓ９ニッカーゼエンドヌクレアーゼは、標的核酸の１つのＤＮＡ鎖を切断する。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、２つの別個の切断反応を伴い、１つのＣａｓ９ニッカーゼは、標的核酸の１つのＤＮＡ鎖を切断するように方向付けられ、かつ、Ｃａｓ９ニッカーゼは、標的核酸の第２のＤＮＡ鎖を切断するように方向付けられる。
【０１７１】
（ｉｖ）ＭＨＣ−ＣＡＲ制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）
本明細書に開示される任意のＭＨＣ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）であり得、Ｔｒｅｇは、濾胞性制御性細胞の免疫モジュレーション活性を模倣するものであってもよい。本明細書において使用される場合、サプレッサーＴ細胞としても公知である制御性Ｔ細胞またはＴｒｅｇ細胞は、免疫系をモジュレ―トし、自己抗原への寛容を維持し、かつ／または自己免疫疾患を予防するＴ細胞の亜集団を指す。Ｔｒｅｇ細胞は免疫抑制因子として機能して、自己免疫疾患に関与する病的なＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞などのエフェクターＴ細胞の誘導および／または増殖を抑制または下方調節する。
【０１７２】
本明細書に開示される遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、天然にＴｒｅｇ細胞と関連付けられるバイオマーカーの１つまたは複数、例えば、ＣＤ４、ＦＯＸＰ３、ＣＤ２５、ＣＤ４５Ｒ（例えば、ＣＤ４５ＲＡもしくはＣＤ４５ＲＯ）、またはその組合せを発現する。Ｔｒｅｇ細胞は、好適なドナー（例えば、治療に供されるヒト患者）から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用して調製されてもよい（該ＰＢＭＣに由来してもよい）。ＰＢＭＣからＴｒｅｇ細胞の亜集団を単離する方法は当該技術分野において周知であり、例えば、細胞選別である。好適なＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの他に、他の遺伝子改変（例えば、本明細書に記載されるもの）のための発現ベクターは、本明細書に記載されるような方法、または当該技術分野において公知の他の方法を介してＴｒｅｇ亜集団に導入され得る。代替的に、遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＤ２５をコードする導入遺伝子および／または他のＴｒｅｇ細胞マーカーを好適なＴ細胞に導入することにより調製されてもよく、該Ｔ細胞は、ＭＨＣ−ＣＡＲおよび任意選択的に本明細書に記載されるような他の遺伝子改変のための発現カセットを導入するようにさらに改変され得る。
【０１７３】
一部の実施形態では、遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、特定の種類の病的細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞もしくはＣＤ８＋細胞）を標的化する（例えば、表面発現もしくは表面結合）分子を提示するようにかつ／または特定の組織部位（例えば、リンパ節もしくは炎症部位）を標的化する分子を提示するようにさらに改変されてもよい。
【０１７４】
一部の例では、遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、Ｂ細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ１９に特異的な単鎖抗体（ｓｃＦｖ）などの細胞外ドメインを含むキメラ受容体（ＣＡＲ）をさらに発現する。代替的または追加的に、Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔ細胞表面マーカー、例えば、ＣＳ−１に特異的な細胞外ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含むキメラ受容体をさらに発現してもよい。そのようなキメラ受容体は、単一のタンパク質上に一緒には天然に見出されない組合せで細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメイン（例えば、共刺激ドメイン、細胞質シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζ、またはその組合せ）を含む細胞表面受容体であり得る。
【０１７５】
Ｔｒｅｇ細胞はさらに、リンパ節および／もしくは胚中心を標的化する分子、例えば、ＣＸＣＲ５を提示してもよく、かつ／または、炎症部位を標的化する分子、例えば、ＣＣＲ６を提示してもよい。胚中心Ｂ細胞（ＧＣ  Ｂ細胞）を標的化することは、専門家されたヘルパーＴ細胞サブセット、ＣＸＣＲ５ｈｉｇｈＰＤ−１ｈｉｇｈ  Ｔ濾胞性ヘルパー（ＴＦＨ）細胞により、少なくとも部分的に、媒介されてもよい。Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇは、Ｂｃｌ６の発現およびＢ細胞とのＳＡＰ媒介性相互作用を介してＴＦＨリプレッサーとなるように転向され得る。結果として生じる濾胞性制御性Ｔ細胞（ＴＦＲ）は、ＴＦＨ細胞およびＴｒｅｇ細胞の両方の特徴を共有し、胚中心に局在化し、かつＴＦＨ細胞集団および胚中心のサイズをｉｎ  ｖｉｖｏにおいて調節することが期待される。
【０１７６】
さらに、本明細書に開示されるＴｒｅｇ細胞は、本明細書に記載されるような追加の遺伝子改変の１つまたは複数、例えば、チェックポイント分子ノックアウトを含んでもよい。
【０１７７】
Ｂ細胞またはＴ細胞特異的ＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞は、自己免疫疾患に関与する病的なＢ細胞および／またはＴ細胞を標的化してもよい。例えば、本明細書に記載されるような遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、濾胞性制御性細胞に類似の機能を呈することが期待され、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、および／または樹状細胞を標的化し、それにより、例えば、Ｂ細胞刺激を下方調節し、胚中心の活性化を阻害し得る抑制性サイトカインを分泌し（ＧＣＢ細胞（例えば、Ｉｌ−１０およびＴＧＦ−ベータ）、Ｔｆｈ（ＭＨＣ  ＣＡＲを通じて）およびＧＣ）Ｂ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲを通じて）の細胞溶解を誘導し、かつ／または、ＧＣ  Ｂ細胞もしくはＴ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞へのシグナル伝達を機械的に妨害する（例えば、ＧＣ  ＢおよびＭＨＣペプチドＴｆｈへの結合を通じて）。代替的または追加的に、Ｔｒｅｇ細胞は、ヘルパーＴ細胞、Ｂ細胞、および／もしくは抗原提示細胞の両方へのエンゲージメント、または一部の事例では、エンゲージメントを物理的に遮断することが可能であってもよい。
【０１７８】
ＩＩＩ．免疫療法におけるＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞の応用
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲ（それを含むコーディング核酸またはベクター）を発現する宿主免疫細胞は、ＭＳ、Ｉ型糖尿病、ループス、関節リウマチなどの自己免疫疾患に関与する病原性細胞の標的化および除去のために有用である。一部の実施形態では、対象は哺乳動物、例えば、ヒト、サル、マウス、ウサギ、または家畜哺乳動物である。一部の実施形態では、対象はヒト、例えば、自己免疫疾患（例えば、ＭＳ）を有する、有することが疑われる、またはそのリスクがあるヒト患者である。
【０１７９】
ＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞は、薬学的に許容される担体と混合されて医薬組成物を形成することができ、該医薬組成物もまた本開示の範囲内である。本明細書に記載される方法を行うために、本明細書に記載される任意のＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを発現する有効量の免疫細胞は、治療を必要とする対象に投与され得る。免疫細胞は、対象にとって自己のものであってもよく、すなわち、免疫細胞は、治療を必要とする対象から得られ、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの発現のために遺伝子操作されかつ任意選択的に本明細書に記載されるような追加の遺伝子改変の１つまたは複数を含有し、そして次に同じ対象に投与される。対象への自己細胞の投与は、非自己細胞の投与と比較して免疫細胞の拒絶の低減を結果としてもたらすことがある。代替的に、免疫細胞は同種細胞であり、すなわち、細胞は、第１の対象から得られ、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの発現のために遺伝子操作され、第１の対象とは異なるが同じ種の第２の対象に投与される。例えば、同種免疫細胞は、ヒトドナーに由来して、ドナーとは異なるヒトレシピエントに投与されてもよい。
【０１８０】
一部の実施形態では、免疫細胞は、標的免疫疾患のための治療剤、例えば、ＭＳを治療するためのアレムツズマブと併用される。そのような免疫療法は、免疫療法が対象において有用と考えられる標的免疫疾患の症状を治療し、軽減し、または低減するために使用される。
【０１８１】
ＭＨＣ−ＣＡＲ免疫療法の有効性は、当該技術分野において公知の任意の方法により評価されてもよく、熟練した医療専門家に明らかである。例えば、免疫療法の有効性は、対象の生存および／または対象における疾患症状の低減により評価されてもよい。
【０１８２】
一部の実施形態では、本明細書に開示される任意のＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞は、自己免疫疾患のための治療剤を用いて治療されたまたは治療されている対象に投与される。本明細書に開示されるＭＨＣ−ＣＡＲのいずれか１つを発現する免疫細胞は、治療剤と併用投与されてもよい。例えば、免疫細胞は、治療剤と同時にヒト対象に投与されてもよい。代替的に、免疫細胞は、治療剤を伴う治療の過程の間にヒト対象に投与されてもよい。一部の例では、免疫細胞および治療剤は、少なくとも４時間の間隔、例えば、少なくとも１２時間の間隔、少なくとも１日の間隔、少なくとも３日の間隔、少なくとも１週間の間隔、少なくとも２週間の間隔、または少なくとも１ヶ月の間隔でヒト対象に投与され得る。
【０１８３】
本明細書に開示される方法を実施するために、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する有効量の免疫細胞またはその組成物は、静脈内投与などの好適な経路を介して治療を必要とする対象（例えば、ヒトＭＳ患者）に投与され得る。ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する任意の免疫細胞またはその組成物は、有効量で対象に投与されてもよい。本明細書において使用される場合、有効量は、投与により対象に治療効果を付与する各々の剤（例えば、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞またはその組成物）の量を指す。本明細書に記載される細胞または組成物の量が治療効果を達成したかどうかの決定は当業者に明らかである。当業者により認識されるように、有効量は、治療されている特定の状態、状態の重篤度、年齢、身体条件、身長、性別および体重を含む個々の患者のパラメーター、治療の継続時間、同時的な療法（存在する場合）の性質、特定の投与経路ならびに医療従事者の知識および専門技術内の同様の要因に依存して変動する。一部の実施形態では、有効量は、対象における任意の疾患または障害の症状を軽減し、緩和し、寛解させ、改善し、低減し、または進行を遅延させる。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象はヒトがん患者である。
【０１８４】
一部の実施形態では、対象は、自己免疫疾患を患うヒト患者であり、自己免疫疾患は、正常な身体部分を攻撃する異常な免疫応答により特徴付けられる。自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性特発性関節炎（若年性特発性関節炎としても公知）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、強直性脊椎炎、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺疾患（グレーブス病および橋本病）、多発性硬化症  重症筋無力症、炎症性腸疾患（クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）、乾癬、または表１に記載される疾患が挙げられる。
【０１８５】
一般に、自己免疫疾患が影響され得る、免疫カスケードにおける多数のステージがある。本明細書に開示される方法が含む編集の組合せにより可能となる介入の連続体がある。例えば、ＭＨＣ−ＣＡＲに加えて、表面分子の別個のセットを提示するＴｒｅｇ細胞は、異なるステージの自己免疫疾患を治療するために使用され得る。
【０１８６】
ＭＳを含む多くの免疫障害の早期ステージにおいて、調節機構における解明されていない障害が存在しかつ／または寛容誘導がＭＳにおいて存在し、Ｔ細胞による神経系に対する繰返しの攻撃が始まる。好適なＭＨＣ−ＣＡＲおよび抗ＣＤ１９  ＣＡＲ（任意選択的に本明細書に記載されるような他の遺伝子改変を伴う）を発現するＴｒｅｇ細胞は、介入のために使用されてもよい。
【０１８７】
自己反応性Ｔｒｅｇ細胞の利点は、「バイスタンダー」抑制因子として作用して、罹患した組織により局所的に発現されるコグネイト抗原に応答して部位特異的な方式で炎症を減弱させる能力である。制御性Ｔ細胞の誘導（自己抗原による）は、様々な自己抗原がある場合であっても（または開始／一次）自己抗原が未知の場合でも、疾患進行を抑制し得る。Ｔｒｅｇは、比較的自由に移行して、Ｔ細胞およびＢ細胞を阻害し、かつ炎症性環境に戻ることを予防し得る。これらの自己反応性Ｔｒｅｇは、バイスタンダー抑制因子として作用して、罹患した組織により局所的に発現されるコグネイト抗原に応答して部位特異的な方式で炎症を減弱させる能力において有利である。
【０１８８】
したがって、遺伝子改変Ｔｒｅｇ細胞は、自己反応性Ｔｒｅｇ細胞の抑制機能を模倣するように設計されてもよい。そのようなＴｒｅｇ細胞は、例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１をノックアウトし、ＣＣＲ６および／またはＭＯＧを標的化するｓｃＦｖを提示して炎症の部位への経路制御を行い、好適なＭＨＣ−ＣＡＲおよび／または抗ＣＤ１９−ＣＡＲを発現する
ように改変されてもよい。代替的に、Ｔｒｅｇ細胞は、例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１をノックアウトし、ＣＸＣＲ５を提示して胚中心および／または異所性リンパ節への経路制御を行い、好適なＭＨＣ−ＣＡＲおよび／または抗ＣＤ１９−ＣＡＲを発現するように改変されてもよい。Ｔｒｅｇ細胞のこれらの種類は、炎症の部位において病原性細胞と相互作用
し、病原性相互作用を遮断し、かつ／または炎症性環境を緩和してもよい。それらは、早期疾患ステージにおいて（病原性を阻害するため）または細胞傷害性療法の後（炎症性環境に戻ることを予防するため）に使用され得る。
【０１８９】
再発寛解性ＭＳ（中期ステージ）は天然に自己調節され、これらの天然の調節機構を増大させる治療は、疾患プロセスの制御を助ける。疾患治療の成功において、Ｔｈ１細胞からＴｈ２およびＴｈ３細胞へのシフト、ならびに他の制御性細胞の出現がある。このステージにおいて、治療標的は、病原性Ｂ細胞および病原性Ｔ細胞の両方を含む。そのような中期ステージ疾患を治療するためのＴｒｅｇ細胞は、本明細書に記載されるような好適なＭＨＣ−ＣＡＲ、およびＢ細胞を標的化する（例えば、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ）またはＣＤ８＋細胞などのＴ細胞を標的化する追加のＣＡＲを発現してもよい。Ｔｒｅｇ細胞は、ＣＸＣＲ５をさらに提示してもよく、またはＣＸＣＲ５標的化を含まなくてもよい。抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＴｒｅｇ細胞は、胚中心においてＢ細胞を除去するために使用されてもよい。
【０１９０】
ＭＳが再発寛解性形態から慢性進行性形態（後期ステージ）に変化する場合、Ｔ細胞は慢性活性化の状態に入り、変性プロセスが起こる。細胞傷害性ＣＤ８＋  Ｔ細胞に対する積極的治療は、充分に細胞傷害性であるＣＡＲ増強（CAR augmentation）を必要とする。この時点において、治療は、主にＴｒｅｇ細胞により推進されるものからＭＨＣ−ＣＡＲ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞およびさらにはＭＨＣ−ＣＡＲ  ＣＳ−１細胞により推進されるものにシフトしてもよい。究極的目標は同じままであり、バイスタンダー効果により増進される細胞傷害性を通じて病理を抑制することである。この疾患ステージにおける使用のための遺伝子操作されたＴ細胞は、好適なＭＨＣ−ＣＡＲ、および疾患の後期ステージに関与する病的なＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞を標的化する追加のＣＡＲを発現してもよい。一部の例では、追加のＣＡＲは、ＣＳ−１（ＳＬＡＭＦ７としても公知）を標的化してもよく、ＣＳ−１は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞上に発現される糖タンパク質である。ＣＳ１は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞および血漿細胞を標的化および殺傷するために使用され得る有望な抗原である。ＣＳ１−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、より多くのＩＦＮ−ガンマの他にＩＬ−２を分泌し、より高レベルの活性化マーカーＣＤ６９を発現し、脱顆粒のためのより高い能力を有し、かつ増進された細胞傷害性を示す。抗ＣＳ１  ＣＡＲはＣＤ８＋  Ｔ細胞を標的化する。遺伝子改変Ｔ細胞は、ＣＸＣＲ４などの血漿細胞の骨髄標的化、およびＣＸＣＲ３を用いた炎症組織への標的化のための分子をさらに提示してもよい。
【０１９１】
Hiepe et al., Nature Reviews Rheumatology, 7(3):170-178, 2011。例としては、ループスにおける血漿細胞の標的化が挙げられる。
【０１９２】
ＩＶ．治療的使用のためのキット
本開示はまた、自己免疫における自己反応性Ｔ細胞などの病原性免疫細胞の抑制において使用するためのＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞の使用のためのキットを提供する。そのようなキットは、本明細書に記載されるものなど）のＭＡＲ−ＣＡＲを発現する免疫細胞、および薬学的に許容される担体を含む組成物を含む１つまたは複数の容器を含んでもよい。
【０１９３】
一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載される任意の方法において使用するための指示を含み得る。含まれる指示は、治療を必要とする対象、例えば、ＭＳ患者へのＭＨＣ−ＣＡＲ発現免疫細胞の投与の説明を含み得る。キットは、対象が治療を必要としているかどうかの同定に基づく治療のための好適な対象の選択の説明をさらに含んでもよい。一部の実施形態では、指示は、治療を必要としている対象への免疫細胞の投与の説明を含む。
【０１９４】
本明細書に記載されるＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞の使用に関する指示は、一般に、意図する治療のための投与量、投与スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）または単位用量未満であってもよい。本開示のキット中に供給される指示は、典型的に、ラベルまたはパッケージ挿入物上の書面による指示である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、医薬組成物は、対象における発症を治療し、遅延させ、かつ／または疾患もしくは障害を軽減するために使用されることを指し示す。
【０１９５】
本明細書において提供されるキットは、好適な包装中にある。好適な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、および柔軟性包装などが挙げられるがこれらに限定されない。特定のデバイスと組み合わせた使用のための包装もまた想定される。キットは無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器もまた、無菌アクセスポートを有してもよい。医薬組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載されるようなＭＨＣ−ＣＡＲを発現する免疫細胞である。
【０１９６】
キットは、任意選択的に、緩衝液および判断情報などの追加の成分を提供してもよい。通常、キットは、容器および容器上または容器に付随したラベルまたはパッケージ挿入物（複数可）を含む。一部の実施形態では、本開示は、上記されるキットの内容物を含む製造物を提供する。
【０１９７】
さらなる説明なしに、当業者は、上記の記載に基づいて、本発明をその最も完全な程度まで利用できると考えられる。以下の特定の実施形態は、したがって、単に説明的なものであると解されるべきであり、いかなる意味でも本開示の残りの部分の限定として解されるべきではない。本明細書において参照される全ての刊行物は、本明細書において参照される目的または主題のために参照することにより組み込まれる。
【実施例】
【０１９８】
以下の実施例は、治療的Ｔ細胞をＭＳに関与するミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）特異的Ｔリンパ球に対して選択的に向け直すためにキメラ受容体を利用する細胞性免疫療法の開発に焦点を当てる［１６］。このプログラムの結果は、病的な自己特異的Ｔリンパ球に対抗できる向け直された治療的Ｔ細胞のさらなる開発をサポートすることができ、かつ、ＭＳにおける治療標的としてのヒト化されたＭＢＰ−ＤＲ２キメラ受容体を詳細に検証する［２９］。
【０１９９】
実施例１：ミエリン塩基性タンパク質に特異的な改変Ｔ細胞の構築
ＭＢＰロード主要組織適合複合体−キメラ抗原受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）を標的化する抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のためのコンストラクトをアッセイ用のＴＣＲノックアウトを有する細胞への再導入のために設計する。ＴＣＲコンストラクトの設計は、刊行された構造を有する抗原特異的ＴＣＲおよびヒト細胞株において検証されたＴＣＲ発現コンストラクトに基づく［１７、４６、５１、５２］。標識化のために緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）またはルシフェラーゼを遺伝学的にコードさせる［２８］。ＴＣＲコンストラクトおよびレポーティング遺伝子を含む例示的なレンチウイルス発現ベクターを図１に提供する。
【０２００】
いくつかの細胞株をＴＣＲ発現および活性を試験するために選択し、該細胞株には、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１（ＴＣＲを発現する対照株）、Ｊｕｒｋａｔ  Ｊ．ＲＴ３−Ｔ３．５（ＴＣＲｂを欠いた株）、ＳｕｐＴ１（損傷したＴＣＲａを有する株）、および初代ヒトＴ細胞（ＴＣＲクロノタイプの多様な集団を含有する）が含まれる。
【０２０１】
Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１細胞は、末梢血からの確立されたヒトＴリンパ球細胞株である。それは、ＴＣＲを発現する対照細胞株として使用される［１５、１８］。
【０２０２】
Ｊｕｒｋａｔ  ＲＴ３−Ｔ３．５は、ＴＣＲ  β鎖の発現を不可能にする突然変異に起因してＴＣＲβを欠いている。それはまた、表面ＣＤ３を発現せずかつＴ細胞受容体α，βヘテロ二量体を産生しない。それは、したがって、Ｔ細胞受容体遺伝子移入を検証するために使用される［１、６、２１、４９］。
【０２０３】
ＳｕｐＴ１は、複数のＴ系列マーカーを発現するヒトリンパ芽球株であり、非機能的な受容体をコードし、ＴＣＲαを発現しないため使用される［４９］。
【０２０４】
ＰＭＢＣ由来初代ヒトＴ細胞は、ＴＣＲクロノタイプの多様なレパートリーを含有する。
【０２０５】
図１に示されるような抗原特異的ＴＣＲを含有するレンチウイルスベクターを使用して、少なくとも１つのＴＣＲ鎖を欠いたがん細胞株への形質導入を行った後、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣｓ）を使用して発現について評価する。抗原特異的ＴＣＲを含有するがん細胞株において、マウス研究におけるその使用を可能とする安定発現の成功にしたがってルシフェラーゼを細胞株に加える。
【０２０６】
ｍＲＮＡ、マルチシストロン性ｍＲＮＡ、およびレンチウイルス形質導入のためのＴＣＲコンストラクトは、遺伝学的にコードされたｅＧＦＰおよび抗ＴＣＲまたは抗ＣＤ３抗体を用いる標識化に基づくスクリーニングを介して直接的に進行する［３、１９］。
【０２０７】
実施例２：ＭＨＣベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）の構築およびそれを発現するＴ細胞
（ｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの設計
ＭＢＰ  ８４−１０２エピトープをヒト白血球抗原ＨＬＡＤＲ２に遺伝学的に関連付ける養子細胞療法用の受容体を生成し、これはキメラ細胞内シグナル伝達ドメインを組み込んでいるかまたは欠いている［２９］。抗原−主要組織適合複合体（Ａｇ−ＭＨＣ）ドメインは受容体として働き、ＭＢＰ特異的標的細胞のＴＣＲに結合する。Ａｇ−ＭＨＣ−ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ（すなわち、第一世代シグナル伝達ドメイン）を有する前臨床マウスモデルにおいて検証されており、［９、２５］において提供される方法論にしたがって、ヒトにおける有効性のために追加の共刺激シグナル伝達ドメイン（すなわち、第二または第三世代シグナル伝達ドメイン）と任意選択的に組み合わせてもよい。ＭＨＣ−ＣＡＲの様々な設計の概略図を図２に提供する。
【０２０８】
ＭＨＣ−ＣＡＲをＨＬＡ−ＤＲの構造に基づいて設計し、様々な内部細胞質共刺激ドメインと組み合わせる。ＭＨＣ−ＣＡＲは、２つのサブユニット：（ｉ）リーダー配列、ＤＲＡ＊１０１０ドメイン、および細胞質ドメインを含有するα鎖、ならびに（ｉｉ）リーダー配列（ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１から）、ペプチド（ミエリン塩基性タンパク質からのＤＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲＴＰＰ（配列番号：１５））、ドメイン（ＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５０１から）、および細胞質シグナルドメイン、例えば、ＣＤ３ｚを含有するβ鎖を有する［２９］。図３。ｍＲＮＡを作製するために使用されるＤＮＡは、単鎖（図４において一実施形態として示される）を含有するか、またはマルチシストロン性でありかつ図５に示されるようにオルソゴナル２Ａ配列により分離されているかのいずれかである。遺伝学的にコードされるｅＢＦＰまたはＲＱＲ８を細胞標識化のためまたは枯渇のための機構を提供するために細胞に導入する［４、５、３７、４０］。図３および図５。
【０２０９】
図６に示されるように、設計されたＭＨＣ−ＣＡＲは、タグ付加のための多数の部位を有する。部位１は、天然のＨＬＡ−ＤＲがＣＩＩＴＡ編集に起因して発現されない場合のためのＨＬＡ−ＤＲ抗体結合部位である［２６、３８］。部位２および３は、ポリヒスチジンタグモチーフのための潜在的な挿入部位である［２４］。部位４および５は、それぞれＲＱＲおよびＲＱＲ８を表す［３７］。多発性硬化症は血液脳関門透過性に影響することが示されているため、治療的ＭＨＣ−ＣＡＲの安全性を増進するために、遺伝学的にコードされるＲＱＲは、重篤なＭＳの治療において適応外使用されるキメラモノクローナル抗体治療であるリツキシマブの投与によりＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞の急速な枯渇を可能とする［４２］。
【０２１０】
（ｉｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲを発現するＴ細胞株の構築
以下において議論する多数の細胞株は、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを試験するために選択される。臨床転換可能なプロトコールを確立するためにアッセイを次にヒトＴ細胞において継続する。
【０２１１】
Ｋ５６細胞はクラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣを欠いており、抗体を使用するＨＬＡ−ＤＲ発現のタグなし検証を可能とする（ＨＬＡ−ＤＲはＭＨＣ−ＣＡＲの成分である）［４５］。発現アッセイは、フローサイトメトリーを使用するＲＱＲ８発現と比べたＭＨＣ−ＣＡＲ発現の評価を可能とし、同じレンチウイルスコンストラクトは次にＰＭＢＣ由来Ｔ細胞において使用される［２３］。
【０２１２】
ＫＭ−Ｈ２は、ＨＬＡ−ＤＲ陽性対照株として使用され得るヒトホジキンリンパ腫株である［３４、４４］。上記のように、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６−１は、ＣＩＩＴＡの送達によりＨＬＡ−ＤＲを条件付きで発現し、ＣＩＩＴＡノックアウトが使用される場合にＣＩＩＴＡ  ＴＡＬＥＮを評価するために使用され得る［３３］。
【０２１３】
加えて、初代ヒトＴ細胞が使用され得る。ＰＭＢＣ由来初代ヒトＴ細胞を全血から精製および濃縮した後、活性化させる。形質導入を濃縮の後に行う。細胞を組換えヒトインターロイキン−２（および／またはＩＬ−７および／またはＩＬ−１５）とインキュベートする［７、１２、４３］。前臨床研究および予期される治療的過程に基づいて、所望の細胞種は、幹細胞メモリーＴＳＣＭ、セントラルメモリーＴＣＭ、およびナイーブ細胞ＴＮの分子的および機能的特徴を有するＣＤ８＋  Ｔ細胞である［１１、２２、３２、３５］。抗体染色は、細胞のイムノタイピングを可能とする［２７］。
【０２１４】
シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ｚ、４１ＢＢ、ＣＤ２８）の並べ替えを含む初期コンストラクトをＫ５６２細胞においてｍＲＮＡ、マルチシストロン性ｍＲＮＡ、およびレンチウイルス戦略を使用して発現させる。細胞株がＭＨＣクラスＩおよびＩＩを欠くことにより、成功裡に用いられた戦略［２９］にしたがって、ＨＬＡ−ＤＲ抗体を使用するＭＨＣ−ＣＡＲ発現のタグなしの検証が可能となる。治療的Ｔ細胞を含むより臨床的に関連する細胞株における発現効率の定量化はコンストラクトに依存し、遺伝学的にコードされる蛍光レポーター（ＢＦＰ）またはＲＱＲ部位、ポリヒスチジン−（ＨＩＳ）−タグ、もしくはＭＨＣＣＡＲ（ＴＡＬＥＮを使用してＣＩＩＴＡが不活性化される場合、ＨＬＡ−ＤＲ抗体を用いる）の抗体染色を使用して測定される。標識化部位を図６に指し示す。潜在的な治療ベクターとしてのＭＨＣ−ＣＡＲ送達率を試験するために、ＢＦＰをコンストラクトから除去し、枯渇制御を提供するためにＲＱＲを保持する。臨床的に関連するコンストラクトの発現率を編集後の抗体染色を使用して測定する。
【０２１５】
転写活性化因子様エフェクター技術（ＴＡＬＥＮ）もまた、ＭＨＣ−ＣＡＲを発現するＴ細胞を調製するために使用することができる。ヒトＴ細胞株を活性化させ、ＴＡＬＥＮをトランスフェクトし、ＭＨＣ−ＣＡＲをトランスフェクトまたは形質導入する。それらを次に染色し、フローサイトメトリーにより解析してＴＡＬＥＮ遺伝子不活性化およびＭＨＣ−ＣＡＲ発現を評価する。
【０２１６】
所望の細胞株におけるコンストラクトの発現が検証されたら、ヒトＴ細胞株へのＴＡＬＥＮ形質導入（上記のようにＴＣＲａおよびＣＤ５２またはＣＩＩＴＡ）を行う。ＴＡＬＥＮを活性化ヒトＴ細胞株に導入した後、評価のためにＭＨＣ−ＣＡＲを同じＴ細胞株に導入する。ヒトＴ細胞の改変をこの順序で行うことで、天然のＴＣＲに起因するＭＨＣ改変細胞の偶然の同胞殺傷を予防することができる［１０］。ＴＡＬＥＮ編集ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性が確認される。
【０２１７】
（ｉｉｉ）転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥＮ）を介するＭＨＣ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞の改変
ヒトＴ細胞を選択して、ＴＡＬＥＮによるＴＣＲａ、およびＣＤ５２またはＣＩＩＴＡ遺伝子の不活性化を確認した後、ＴＡＬＥＮを使用して、ＭＨＣ−ＣＡＲと組み合わせて評価を行う。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥＮ）は、配列特異的な方式でＤＮＡに結合する。ＤＮＡ結合ドメインは、特異的なヌクレオチド認識を付与する異なる２アミノ酸ＲＶＤ（リピート可変ジペプチドモチーフ）を有する高度に保存された３３〜３４アミノ酸配列を含有する［２３、３１］。
【０２１８】
ＴＣＲのα鎖およびβ鎖のいずれかの突然変異は、表面ＴＣＲ発現の阻害のために充分である［１５、３６］。ＴＡＬＥＮを使用して、望ましくない転座を通じた増殖上の利点を導入することなく治療用細胞における２つの遺伝子の発現を阻害する［３９］［４７］。移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を予防し、かつ同種療法の生成を可能とするために、ＴＣＲ発現はＴＲＡＣ標的化ＴＡＬＥＮを通じて阻害される［１５、３９、４７］。
【０２１９】
アレムツズマブ適合性のためにＣＤ５２の欠失を行うことができる。アレムツズマブは、ヒト化された抗ＣＤ５２  ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、循環性ＴおよびＢリンパ球を標的化して枯渇させる［４１］。アレムツズマブは、重篤発症ＭＳにおけるレスキュー療法またはファーストライン薬物として使用することができ［５０］、ヒト患者集団において併用投与される。ＴＡＬＥＮノックアウトは、ＭＨＣ−ＣＡＲを患者における同時治療と適合性にする［１４、３９］。さらに、ＭＨＣ−ＣＡＲにおけるＨＬＡ−ＤＲの特徴付けのためにＣＩＩＴＡの欠失を行うことができる。ＣＩＩＴＡは、ＨＬＡクラスＩＩプロモーターの転写活性のために必須のタンパク質コーディング遺伝子である［２６］。ノックアウトは、ＭＨＣ−ＣＡＲ発現の特徴付けのために抗体を使用するＨＬＡ−ＤＲの直接的な測定を可能とする［３８、５３］。ＣＤ５２発現の阻害は、多発性硬化症のためにＦＤＡに承認された治療であるレムトラダＲ（アレムツズマブ）との同時治療を可能とする［４２］。アレムツズマブはまた、ＣＡＲ  Ｔ療法の生着を補助するリンパ枯渇／リンパ抑制剤として使用される［３９］。ＴＲＡＣおよびＣＤ５２標的化ＴＡＬＥＮを用いて改変されたＣＡＲ  Ｔ細胞療法は現在、臨床試験において試験されている［３８、４０、４３］。
【０２２０】
ＣＤ５２の代わりにＭＨＣクラスＩＩトランスアクチベーター（ＣＩＩＴＡ）を不活化するＴＡＬＥＮは、ＣＩＩＴＡの不活性化として、ＨＬＡ−ＤＲ発現を阻害することが期待され［２６］［３８］、したがって、ＨＬＡ−ＤＲ抗体染色によるＭＨＣ−ＣＡＲ含有細胞の直接的な同定を可能とする。
【０２２１】
検証されるＴＡＬＥＮ（ＴＲＡＣ：ＴＴＧＴＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＴＣＣａｇａａｃｃｃｔｇａｃｃｃｔｇＣＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＴＧＡＧＡ（配列番号：３７６）、ＣＤ５２：ＴＴＣＣＴＣＣＴＡＣＴＣＡＣＣＡＴｃａｇｃｃｔｃｃｔｇｇｔｔａｔＧＧＴＡＣＡＧＧＴＡＡＧＡＧＣＡＡ（配列番号：３７１）、ＣＩＩＴＡ：ＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣａｃａｇｔｇｔｇｃｃａｃｃａＴＧＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＣＴＡ（配列番号：３６６））はＣｅｌｌｅｃｔｉｓから得られ、または以前に検証された部位を標的化するために設計される［３８、４３］。
【０２２２】
ヒトＴ細胞を活性化させ、３つの異なるＴＡＬＥＮのバリアントをコードするｍＲＮＡをエレクトロポレートする：ＴＣＲ−アルファ定常鎖、ＣＤ５２、およびＣＩＩＴＡ。細胞を抗ＣＤ３または抗ＴＣＲ（ＴＣＲ−アルファ定常鎖）、抗ＣＤ５２（ＣＤ５２）、または抗ＨＬＡ−ＤＲ（ＣＩＩＴＡ）を用いて表面染色した後、フローサイトメトリーにより解析する。
【０２２３】
ＴＡＬＥＮ発現アッセイにおいて、不活性標的遺伝子に対する以前に検証されたＴＡＬＥＮの能力を再検証する［３９］。転座研究およびオフターゲット研究を再び行い、いくつかの全ゲノム配列により結果を確認する。ＧＵＩＤＥ−ｓｅｑを全ゲノムシークエンシングの代替として使用してオンおよびオフターゲット編集を確認することができる［８］。
【０２２４】
以下の内因性遺伝子の１つまたは複数（one of more）を編集して他の細胞との相互作用を低減する：ＴＣＲ（ＴＣＲアルファまたはベータ鎖を通じて；望まない細胞への標的化を低減するため）、ＣＩＩＴＡ（ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子の発現を調節する；欠失を試験する（taster）ための標的細胞）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）および／またはＢ７−２（ＣＤ８６）ノックアウト、ならびにＮＫＧ２ＤリガンドまたはＵＬ１８と共にｂ２ｍ（ＭＨＣクラスＩ遺伝子の発現を調節する）。
【０２２５】
さらに、以下の遺伝子の１つまたは複数を編集して、相互作用する細胞の機能を改変することができる：ＰＤ−Ｌ１＋／−ＣＴＬＡ４−Ｉｇ過剰発現；ＰＤ−Ｌ１／２過剰発現＋／−ＰＤ−１ノックアウト；ＦａｓＬ過剰発現＋／−Ｆａｓノックアウト；ガレクチン９過剰発現＋／−ＴＩＭ３ノックアウト；および／またはＰＶＴ／ＣＤ１５５過剰発現＋／−ＴＩＧＩＴノックアウト。ＰＤ−１、Ｆａｓ、ＴＩｍ３、ＴＩＧＩＴにおける欠陥は、患者に自己免疫の素因を与える。一部の薬物は機能を回復させ得る（例えば、Ｔｉｍ３、グラチラマー酢酸塩およびＩＦＮ−ベータ）。自己免疫疾患を患う患者からの自己細胞が利用される場合、それらは、ＣＴＬおよびＴｒｅｇ機能に影響を及ぼす欠陥性遺伝子の患者特異的な補正を必要とすることがある。それらの個人的な突然変異セットはまた、ＣＴＬまたはＴｒｅｇ細胞が最も治療的に関連するかどうか、および自己細胞または同種細胞のいずれかが使用される場合に何らかの細胞改変が効果的であるかどうかを決定することがある。
【０２２６】
さらに、以下の編集は、細胞の位置および／または機能を改変することがある（例えば、より濾胞性制御性細胞様とするため）：
−  ＭＨＣ−ＣＡＲ−（ＦＯＸ３Ｐ）−（ＣＳ１またはＣＤ１９  ＣＡＲ）／（ＣＳ−１  ＣＡＲのために必要とされるＣＳ−１ノックアウト）
−  ＭＨＣ−ＣＡＲ−（ＦＯＸ３Ｐ）−（ＣＣＲ７またはＣＸＣＲ５）
【０２２７】
さらに、以下の編集は、自己免疫疾患のための併用療法（例えば、ＭＳ特異的治療法）を可能とし得る。
−  ＲＱＲタグ：操作されたＴ細胞は、リツキシマブ（殺傷スイッチ）を用いて除去され得る。新たに承認された抗ＣＤ２０抗体Ｏｃｒｅｖｕｓのためのタグが生成され得る。
−  ラパマイシンスイッチ：患者がラパマイシン（タクロリムス）を用いて治療される場合にのみ不活性／活性のＣＡＲ
−  ＣＤ５２ノックアウト：存在する免疫細胞の数を減少させるためのレムトラダ（アレムツズマブ）を用いる事前治療を可能とする
−  ＶＬＡ−４ノックアウト：病原性免疫細胞を末梢に移動させるためにタイサブリを用いて治療し得るが、操作された細胞はそこに留まることを強いられる（脳脊髄にスタックした細胞として確立されたＭＳを有する患者にとって理想的でないことがあるが、ＶＬＡ−４の同時のｍＲＮＡ発現はそれらの位置への一時的な接近を提供し得る）
−  操作されたＴ細胞からのＩＬ−６抗体（トシリズマブ（Toclizumab））の分泌：操作されたＴ細胞が脳および脊髄に接近しないとならないが、ＢＢＢに起因してこの薬物は該位置に接近できない場合に役立つ
【０２２８】
実施例３：ＭＨＣ−ＣＡＲ活性の調査
（ｉ）ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する初代Ｔ細胞の調製
初代Ｔ細胞は、以下のように調製され得る。Ｔ細胞を末梢血単核細胞から単離し（ＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、（Ｘ−ＶＩＶＯ  １５培地、Ｌｏｎｚａ；２０ｍｇ／ｍｌのＩｌ−２、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ；５％のヒトＡＢ血清、Ｓｅｒａｌａｂ）を用いて活性化させる（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。ＭＢＰ抗原ペプチドを含有する好適なＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを従来の方法を使用して初代Ｔ細胞に導入する。ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトの表面発現をＦＡＣＳおよび抗体染色により検証する。
【０２２９】
（ｉｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＨＣ−ＣＡＲ活性試験
コンストラクトのトラフィッキングおよび発現（ｍＲＮＡ、マルチシストロン性ｍＲＮＡ、レンチウイルスを用いる）が検証されたら、活性試験をｉｎ  ｖｉｔｒｏで実行する。全ての試験を異なるエフェクター：標的（Ｅ：Ｆ）細胞濃度において実行する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、ＭＨＣ−ＣＡＲシグナル伝達ドメインおよびＴ細胞サブセットの初期評価を提供する。
【０２３０】
（ｉｉｉ）ＩＬ−２産生によるシグナル伝達ドメインの評価
エレクトロポレーションの２４時間後に、ＭＨＣ−ＣＡＲを用いて一過的に操作されたヒトＴ細胞をプレート結合ＨＬＡ−ＤＲ抗体を用いて刺激して、ＭＨＣ−ＣＡＲ（様々なシグナル伝達ドメインを含有する）が機能的かどうかを決定する。Ｉｌ−２産生をＳｔｅｍＣｅｌｌ  ＩＬ−２  ＥＬＩＳＡキットを使用して２４時間後に測定する。この試験は、バリアントを再操作または放棄すべきかどうかに関する迅速なアッセイを提供する［２９］。
【０２３１】
（ｉｖ）増殖アッセイを通じたＭＨＣ−ＣＡＲ細胞および病原性ＴＣＲ細胞の相互作用
ＴＣＲを一過的に発現する標的細胞株をエレクトロポレーションの２４時間後にＴＣＲ発現について磁気的に選別し、照射を行って、抗原特異的ＴＣＲとのＭＨＣ−ＣＡＲのエンゲージメントがＴ細胞を含有するＭＨＣ−ＣＡＲの増殖を刺激するかどうかを試験する。代替的に、ＴＣＲを安定に発現する標的細胞株に照射を行う。（＋／−抗原特異的）ＴＣＲを提示する照射された細胞をＣＦＳＥ標識ＭＨＣＣＡＲ細胞とインキュベートし、異なるＴ：Ｅ比での培養後に増殖を測定する［３０］。
【０２３２】
（ｖ）脱顆粒アッセイ
ＣＡＲ  Ｔ細胞をＲＱＲ上のエピトープ（使用される標的細胞上で発現されていない）またはＴ細胞マーカーの代わりにｅＢＦＰを通じて標識する。一過性または安定発現（一過性発現の例を記載する）を有する細胞株についてアッセイを行う。エレクトロポレーションの２４時間後に、ＲＱＲ８またはＢＦＰのいずれかを有するＭＨＣ−ＣＡＲヒトＴ細胞を標的（抗原特異的ＴＣＲ  ＳｕｐＴ１もしくはＪｕｒｋａｔ）または対照（＋／−ＴＣＲ  ＪｕｒｋａｔもしくはＴＣＲ−  ＳｕｐＴ１）細胞と６時間共培養する。一過性発現（および後に安定発現）の標的細胞に抗原特異的ＴＣＲをエレクトロポレートし、エレクトロポレーション後にＣＤ３磁気ビーズを用いて選別する。ＲＱＲ＋またはＢＦＰ＋  ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞（抗リツキシマブ抗体、ＱＢＥｎｄ１０抗体を用いて同定される）をフローサイトメトリーにより解析して、表面上の脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａの発現を検出する［２］。
【０２３３】
（ｖｉ）サイトカイン分泌アッセイ
一過性または安定発現（一過性発現を記載する）を有する細胞株についてアッセイを行う。ＭＨＣ−ＣＡＲを一過的に発現するヒトＴ細胞をエレクトロポレーションの２４時間後に標的細胞との共培養後のサイトカイン分泌について評価する。ＭＨＣ−ＣＡＲを一過的に発現するヒトＴ細胞を標的（抗原特異的ＴＣＲ含有ＪｕｒｋａｔもしくはＳｕｐＴ１細胞）または対照（＋／−非抗原特異的ＪｕｒｋａｔもしくはＳｕｐＴ１）細胞と２４時間共培養する。抗原特異的ＴＣＲを次にアッセイ前の照射により殺傷する。上清を回収し、ＴＨ１／ＴＨ２  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｂｅａｄ  ａｒｒａｙ  ｋｉｔを使用して解析してＴ細胞により産生されるサイトカインを定量化する［１３］。ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗原特異的ＴＣＲ発現標的細胞との共培養でＩＦＮおよび他のサイトカインを産生するが、対照細胞との共培養では産生しない。
【０２３４】
（ｖｉｉ）ＩＦＮγ放出アッセイ
様々なレベルのＭＨＣ−ＣＡＲ発現細胞を、トランスフェクションの２４時間後に照射したＴＣＲ  Ｔ細胞とインキュベートする。共培養物を２４時間維持する。インキュベーションおよび遠心分離後、上清をＥＬＩＳＡによるＩＦＮγ検出を用いて試験する。
【０２３５】
（ｖｉｉｉ）細胞傷害性アッセイ
ＴＣＲ  Ｔ細胞を治療的ＭＨＣ−ＣＡＲの他に対照細胞とインキュベートする。ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞との共培養の前に標的および対照細胞を蛍光細胞内色素（ＣＦＳＥまたはＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ）を用いて標識する。共培養物を４時間インキュベートする。このインキュベーション期間後、細胞を固定可能生存色素（fixable viability dye）を用いて標識し、フローサイトメトリーにより解析する。各細胞集団（標的または陰性対照）の生存を決定し、特異的細胞溶解のパーセンテージを算出する。細胞傷害性アッセイを形質導入の４８時間後に実行する。
【０２３６】
（ｉｘ）阻害アッセイ
ＰＢＭＣを、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを発現する照射またはミトマイシン処理した操作されたＴ細胞と共培養する。対照として、ＰＢＭＣを、ＭＨＣ−ＣＡＲコンストラクトを発現しない照射またはミトマイシン処理した操作されたＴ細胞と共培養する。７日後、ヒト患者ドナーＡからの細胞増殖をＸＴＴ比色アッセイまたはＣＦＳＥ希釈（ＦＡＣＳ分析）により測定する。細胞増殖が対照において観察されるが、操作されたＴ細胞が、分泌されるＦＰを発現する場合、細胞増殖は期待されないか、または限られた細胞増殖が期待される。この実験からの結果は、ＭＨＣ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞がＦＰを発現する場合にアロ反応性Ｔ細胞の増殖は阻害されることを示すことを目的とする。
【０２３７】
（ｘ）増殖
抗原特異的ＴＣＲとのＭＨＣ−ＣＡＲのエンゲージメントがＭＨＣ−ＣＡＲ含有Ｔ細胞の増殖を刺激するかどうかを試験するために、ＴＣＲを一過的に発現する標的細胞株をエレクトロポレーションの２４時間後にＴＣＲ発現について磁気的に選別し、照射を行う。代替的に、ＴＣＲを安定に発現する標的細胞株に照射を行う。（＋／−抗原特異的）ＴＣＲを提示する照射された細胞をＣＦＳＥ標識ＭＨＣ−ＣＡＲ細胞とインキュベートし、異なるＴ：Ｅ比での培養後に増殖を測定する。
【０２３８】
（ｘｉ）ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
マウスＴ細胞中のＭＨＣ−ＣＡＲ（マウスおよびヒトＭＨＣを有する）は、多発性硬化症についてのマウスモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎において治療効果を以前に示している［２５、２９］。ここで我々は、ヒト細胞中のＭＨＣ−ＣＡＲがヒトＴ細胞株中のヒトＴＣＲを標的化できるかどうかを、以前のＣＡＲ  Ｔ前臨床研究におけるものと類似のｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルを使用して試験する［３９］。ｉｎ  ｖｉｖｏ試験は、ＭＨＣ−ＣＡＲシグナル伝達ドメインおよびＴ細胞サブセットのさらなる評価を可能とする。
【０２３９】
図７に示されるように、ＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ活性をマウス異種移植モデルにおいて検証することができる。
【０２４０】
免疫不全（Immunodefficient）ＮＯＧマウスの静脈内にＭＳ異種移植マウスモデルとして抗原特異的ＴＣＲ−ルシフェラーゼ発現Ｔ細胞を注射する。マウスに次に、腫瘍細胞株を用いる注射の２または７日後に、異なる用量において試験される静脈内用量のＭＨＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞を与える。ＣＡＲレンチウイルスベクターを形質導入されないＴ細胞を用いる静脈注射は、対照として働く。異なる動物におけるＴＣＲ−ルシフェラーゼ発現細胞の拡大増殖を追跡するために、Ｔ細胞注射の日（Ｄ０）、Ｔ細胞注射後のＤ７、１４、２１、２８および４０において生物発光シグナルを決定する［３９］。
【０２４１】
ここに示すものと類似のバックグラウンド改変（天然のＴＣＲを不活化しかつ移植片対宿主を最小化するためのＴＡＬＥＮ、ＣＤ５２を不活化しかつアレムツズマブとの同時の治療を可能とするためのＴＡＬＥＮ、および枯渇を可能とするためのＲＱＲ８）を有するＣＡＲ  Ｔ細胞はマウスモデルにおいて以前に検証されており、今回ＵＣＡＲＴ１９臨床試験において使用される［３９］。
【０２４２】
（ｘｉｉ）殺傷スイッチの検証
形質導入Ｔ細胞を２５％の乳仔ウサギ補体（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）に４時間、医薬的補体（リツキシマブ、タイサブリ、またはアレムツズマブ）を含めてまたは含めずに曝露して、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）媒介性感受性を調べる。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＣＤ３４磁気ビーズ選択形質導入ＲＱＲ８  Ｔ細胞を同様に処理されたＱ８形質導入Ｔ細胞の集団に対して比較してＣＤＣ媒介性欠失の特異性を実証する。ＣＤＣアッセイパラメーターのさらなる調査は、１２．５、２５、５０、および１００ｍｇ／ｍＬの医薬的補体とインキュベートされたＲＱＲ８形質導入Ｔ細胞を使用する経時／用量滴定アッセイおよび１〜１２０分の範囲内の時点評価を通じて達成された。
【０２４３】
実施例４：ＭＨＣ−ＣＡＲを発現する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）
多発性硬化症および他の自己免疫疾患に関与する病的なＴリンパ球を抗原特異的に標的化する療法は、抗原非特異的な療法と比較して向上した治療指数を有することが期待される。この実施例は、治療的Ｔ細胞をＭＳに関与するミエリン塩基性タンパク質特異的Ｔリンパ球に対して選択的に向け直すためにキメラ抗原受容体を使用する例示的な細胞性免疫療法を提供する。
【０２４４】
Ｔｒｅｇ細胞の選別、形質導入、および拡大増殖
ＣＤ４＋  Ｔ細胞をＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を介してＰＭＢＣから単離し、ＣＤ２５＋細胞について濃縮した後（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、ＦＡＣＳにより生ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５＋  ＴｒｅｇおよびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５−対照Ｔ細胞に選別する。選別したＴ細胞を、Ｔｒｅｇまたは非ｒｅｇ対照Ｔについてそれぞれ１，０００Ｕ／ｍｌまたは１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２中のαＣＤ３  ｍＡｂをロードした人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）を用いて刺激する。１日後、細胞にレンチウイルスを用いて形質導入する。７日目に、ΔＮＧＦＲ＋細胞を磁気選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて精製した後、上記のようなａＡＰＣを用いて再刺激し、６〜７日間拡大増殖させた。
【０２４５】
フローサイトメトリー：
表現型解析のために、細胞を固定可能生存色素（ＦＶＤ）（６５−０８６５−１４および６５−０８６６−１４、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて染色し、表面マーカーについて固定／透過処理の前にＦＯＸＰ３／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｅｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて染色した後、細胞内タンパク質について染色を行った。サイトカイン産生の解析のために、細胞をブレフェルジンＡ（１０μｇ／ｍｌ）の存在下で１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび５００ｎｇ／ｍｌのイオノマイシン（全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて４時間刺激した。試料をフローサイトメトリーにより解析した。
【０２４６】
顕微鏡法：
ＰＢＭＣをＰＫＨ２６またはＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＰＫＨ２６ＧＬ−１ＫＴおよびＰＫＨ６７ＧＬ−１ＫＴ）を用いて標識し、Ｔｒｅｇを細胞増殖色素（ＣＰＤ）ｅＦｌｕｏｒ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、６５−０８４２−８５）を用いて標識した後、製造者の一般的３Ｄゲルプロトコールにしたがって１×ＤＭＥＭおよび１０％のＦＣＳから構成される１．５％のラットテイルコラーゲンＩ型の３Ｄゲル（Ｉｂｉｄｉ）中に懸濁する。細胞懸濁液をピペットで採ってμ−Ｓｌｉｄｅ  Ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ３Ｄに入れ、Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰ８共焦点顕微鏡上で３５℃および５％のＣＯ２の加湿インキュベーター（Ｔｏｋａｉ  Ｈｉｔ）中で３０分間重合させる。外チャンバーを１×ＤＭＥＭで満たし、×１０／０．３０対物レンズを使用して２分毎に３時間画像を記録する。ｅＦｌｕｏｒ４５０、ＰＫＨ６７、およびＰＫＨ２６を４０５ｎｍ、４８８ｎｍ、および５６１ｎｍにおいて励起し、蛍光発光をそれぞれ４１５〜４７０ｎｍ、４９５〜５２５ｎｍ、および５７０〜６５０ｎｍにおいて収集する。ＣＡＲ−Ｔｒｅｇと標的または対照細胞のいずれかとの間の相互作用の数を２０分毎に定量化する。動かない細胞は解析から除外した。視野当たりの各標識細胞種の総数は、ＩｍａｇｅＪ（imagej.nih.gov/ij/）におけるａｎａｌｙｚｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ機能を使用して計数することができる。
【０２４７】
Ｔｒｅｇ特異的脱メチル化領域（ＴＳＤＲ）の解析
安定なＦｏｘｐ３のＴｒｅｇ安定発現は、Ｆｏｘｐ３遺伝子座内のＴＳＤＲの選択的な脱メチル化と関連付けられる。安定発現について試験するために、凍結Ｔ細胞ペレットからのＤＮＡをＤＮｅａｓｙ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて単離し、ＥＺ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｋｉｔ（Ｚｙｍｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いてバイサルファイト変換した。ＢｉｓＤＮＡのＰＣＲをＨｕｍａｎ  ＦＯＸＰ３  Ｋｉｔ（Ｅｐｉｇｅｎ  ＤＸ）を用いて行い、ＰｙｒｏＭａｒｋ  ｂｕｆｆｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用するパイロシークエンシングのために調製した後、Ｂｉｏｔａｇｅ  ＰｙｒｏＭａｒｋ  Ｑ９６  ＭＤ  ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ）でアッセイした。結果をＰｙｒｏ  Ｑ−ＣｐＧ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ）を用いて算出した。
【０２４８】
サイトカイン産生
サイトカイン産生を測定するために、Ｔ細胞株をＫ５６２細胞（１のＫ５６２：２のＴ細胞）を用いて４８時間刺激する。上清を回収し、サイトカイン濃度をＨｕｍａｎ  Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｋｉｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により決定し、解析した。
【０２４９】
ＭＨＣ  ＣＡＲ特異的増殖の抑制
標的に特異的なＴｒｅｇはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖を抑制することもできたかどうかを試験するために、ＭＨＣ  ＣＡＲ特異的ＣＤ４＋  Ｔクローンを単離する。エプスタインバーウイルス形質転換Ｂリンパ芽球様（B lymphablastoid）細胞株にレンチウイルスを使用してＭＨＣ−ＣＡＲを形質導入した。ＥＢＶ細胞株を終夜生育し、１５０Ｇｙで照射し、ＣＡＲ発現Ｔｒｅｇまたは従来のＴ細胞の非存在下または存在下でＣＰＤ標識ＭＨＣ  ＣＡＲ特異的ＣＤ４＋  Ｔクローンと共培養した。増殖を４日後に決定し、ＭＨＣ  ＣＡＲ特異的クローンの抑制のパーセンテージを以下のように増殖のパーセンテージを使用して算出する：（１００−［（増殖ＭＨＣ  ＣＡＲ＋試験の％）／（増殖ＭＨＣ  ＣＡＲ単独の％）］×１００）。
【０２５０】
コンストラクトのトラフィッキングおよび発現（ｍＲＮＡ、マルチシストロン性ｍＲＮＡ、および／またはレンチウイルスを用いる）が検証されたら、活性試験をｉｎ  ｖｉｔｒｏで始める。全ての試験を異なるエフェクター：標的（Ｅ：Ｆ）細胞濃度において実行する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験は、ＭＨＣ−ＣＡＲシグナル伝達ドメインおよびＴ細胞サブセットの初期評価を提供することが期待される。
【０２５１】
Ｔ細胞におけるケモカインおよび接着受容体の一過性またはレンチウイルス発現
モノ／ポリシストロン性ｍＲＮＡのエレクトロポレーションまたはレンチウイルス形質導入後に受容体をヒトＴ細胞において発現させる。受容体の発現をフローサイトメトリーを使用して解析する。要約すると、抗ＣＤ３／ＣＤ２８コートビーズおよびＩＬ２を用いて数日（３〜５）予備活性化させた５×１０６個のＴ細胞をｃｙｔｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ  Ｔ中に再懸濁し、４５μｇのｍＲＮＡをエレクトロポレートした。エレクトロポレーションの２４時間後、複数鎖ＣＡＲをコードするポリシストロン性ｍＲＮＡを使用して操作されたヒトＴ細胞を固定可能生存色素ｅＦｌｕｏｒ−７８０およびＰＥ共役ヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆ（ａｂ’）２断片特異的を用いて標識し、フローサイトメトリーにより解析した。代替的に、受容体をレンチウイルス中にベクター化し、発現させ、同様に解析した。
【０２５２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ走化性アッセイ
形質導入Ｔ細胞を以前に記載された通りに走化性アッセイにおいて使用した［Burkle et al., Blood, 110(9):3316-3325, 2007；Wu and Hwang, Journal of immunology, 168(10):5096, 2002.；Singh et al., Journal of immunology, 180(1):214-221, 2008.；Ryu et al., Molecules and Cells, 39.12:898-908, 2016.］。細胞（培地中の約２０，０００細胞、１００万細胞、５×１０６／ｍＬ）を５μｍ孔径フィルターの上部に２連で置いた一方、ケモカインありおよびなしの培地を下チャンバーに入れた。３７℃での３０分、１ｈ、３ｈ、５ｈｒ、２４ｈｒ後、プレートの底に落ちた移動細胞を以下の通りに処理した：
【０２５３】
Ａ．４×対物レンズを使用して撮影した。２つのウェルのそれぞれからの３つのランダムな視野をＩｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を使用して計数した。３つの独立した実験を行ったところ類似の結果であった。
【０２５４】
Ｂ．４００μＬの細胞懸濁液をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の４×１０−７ＭのＦＩＴＣ標識ファロイジン、０．５ｍｇ／ｍＬの１−アルファ−リゾホスファチジルコリン（共にＳｉｇｍａ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、および７％のホルムアルデヒドを含有する１００μＬの溶液に加えた。固定した細胞をＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒでフローサイトメトリーにより解析し、ケモカインの添加前の試料の平均相対傾向に対して全ての時点をプロットする。
【０２５５】
Ｃ．下チャンバー中の細胞をＣｏｕｎｔｅｓｓ  ＩＩ  ＦＬ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用して計数し、または４５０ｎｍにおけるＯ．Ｄ．値をＶｅｒｓａｍａｘ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して測定した。
【０２５６】
実施例５：ＨＥＫ２９３細胞中でのＭＨＣベースのキメラ受容体（ＭＨＣ−ＣＡＲ）の発現
ＭＨＣ−ＣＡＲをコードするコンストラクトを実施例２に議論したように構築し、ＨＥＫ２９３細胞中での発現について評価した。簡潔に述べれば、コンストラクト１は、ＥＦ１アルファ短プロモーター、ＣＤ１９  ＣＡＲ（４Ｇ７−ＣＡＲ）、ＣＣＲ６、およびＧＦＰを含み（配列番号：４２６により提供される）；コンストラクト２は、ＥＦ１アルファ短プロモーター、ＲＱＲ８、ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ｂ  ＭＨＣ−ＣＡＲ１部分Ａ、およびＧＦＰを含む（配列番号：４０９により提供される）。
【０２５７】
コンストラクト１、２、または培地対照（非トランスフェクト）をＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、培養した。細胞をＧＦＰ発現に基づいて顕微鏡法により発現について評価した。ＧＦ陽性細胞の集団が、コンストラクト１またはコンストラクト２をトランスフェクトし群において観察された。細胞をフローサイトメトリーによりコンストラクトによりコードされる成分の発現についても評価した。表８および表９。
【０２５８】
コンストラクト１の発現
ＣＣＲ６の検出のために、細胞をＡＰＣ（１７−１９６９−４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に共役した抗ＣＣＲ６モノクローナル抗体とインキュベートし、ＣＤ１９の検出のために、細胞をビオチン化ＣＤ１９（Ａｃｒｏ  ＣＤ９−Ｈ８２５９、Ａｃｒｏ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の後にストレプトアビジン−ＰＥ（４０５２０３、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標））とインキュベートした。
【０２５９】
表８：コンストラクト１の発現
【表８】
2021502122.tif 000052
【０２６０】
コンストラクト２の発現
ＲＱＲ８中に含まれるエピトープからのＣＤ３４発現の検出のために、細胞を抗ＣＤ３４  ＡＰＣ共役モノクローナル抗体とインキュベートし、ＭＨＣ−ＣＡＲ発現の検出のために、細胞を抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体とインキュベートした。
【０２６１】
表９：コンストラクト２の発現
【表９】
2021502122.tif 000053
【０２６２】
コンストラクト１の核酸配列（配列番号：４２６）
ａｔｇｇａｇａｃａｇａｃａｃｔｃｔｔｃｔｃｃｔｔｔｇｇｇｔｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｇｔｔｃｃｃｇｇａａｇｃａｃａｇｇａｇａａｇｔａｃａｇｔｔｇｃａａｃａｇｔｃｔｇｇｇｃｃａｇａａｃｔｃａｔｃａａａｃｃｃｇｇａｇｃｔｔｃｔｇｔａａａａａｔｇｔｃａｔｇｃａａａｇｃｔａｇｔｇｇａｔａｔａｃａｔｔｔａｃｔｔｃｔｔａｃｇｔｇａｔｇｃａｃｔｇｇｇｔａａａａｃａｇａａａｃｃｔｇｇｔｃａｇｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｃｇｇｇｔａｃａｔｔａａｃｃｃａｔａｔａａｔｇａｃｇｇｃａｃｃａａａｔａｔａａｃｇａｇａａａｔｔｃａａｇｇｇａａａｇｇｃｔａｃｇｃｔｔａｃａｔｃａｇａｔａａｇｔｃｃａｇｔａｇｃａｃｃｇｃｔｔａｔａｔｇｇａａｃｔｔａｇｃａｇｃｃｔｔａｃｔｔｃｃｇａａｇａｔｔｃｃｇｃｇｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃｇａｇａｇｇｇａｃｔｔａｃｔａｃｔａｃｇｇｇａｇｔｃｇａｇｔａｔｔｃｇａｔｔａｔｔｇｇｇｇｔｃａａｇｇｃａｃｇａｃｇｃｔｃａｃｇｇｔｇａｇｃｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｇｇｇｇｇｔｇｇｃｇｇｃａｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｇｇｃｔｃａｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇｇｃａｇｃａｃｃｔｔｃｔａｔｃｃｃｇｇｔａａｃｃｃｃａｇｇｃｇａｇｔｃｔｇｔａｔｃｔａｔｃａｇｔｔｇｔｃｇｇｔｃｃａｇｃａａｇｔｃｔｃｔｔｃｔｃａａｃａｇｔａａｔｇｇｃａａｔａｃａｔａｔｃｔｔｔａｃｔｇｇｔｔｃｃｔｃｃａａａｇｇｃｃｔｇｇｇｃａａａｇｔｃｃｔｃａａｃｔｔｃｔｔａｔａｔａｔｃｇｇａｔｇｔｃｃａａｔｃｔｔｇｃｇａｇｔｇｇｃｇｔａｃｃｃｇａｃａｇｇｔｔｔｔｃａｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｇｃｇｇａａｃａｇｃｔｔｔｔａｃｇｔｔｇａｇａａｔａｔｃｃａｇｇｇｔａｇａａｇｃｔｇａｇｇａｃｇｔｃｇｇｔｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｃａｔｇｃａａｃａｔｃｔｃｇａａｔａｃｃｃｃｔｔｔａｃｃｔｔｃｇｇｃｇｃｔｇｇｔａｃａａａｇｃｔｃｇａａｔｔｇａａａｃｇｃａｇｃｇａｔｃｃａａｃｃａｃｇａｃｇｃｃａｇｃｇｃｃａｃｇａｃｃａｃｃｔａｃｇｃｃｃｇｃｔｃｃａａｃｔａｔｔｇｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｔｇａｇｔｃｔｔｃｇｇｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔａｇａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｇｇｃｇｇｇｇｃｃｇｔｔｃａｔａｃｇｃｇｇｇｇｃｃｔｔｇａｃｔｔｔｇｃａｔｇｔｇａｔａｔｃｔａｔａｔａｔｇｇｇｃｔｃｃｔｔｔｇｇｃｇｇｇａａｃｔｔｇｃｇｇａｇｔｇｃｔｔｃｔｔｔｔｇｔｃａｃｔｃｇｔｇａｔａａｃｇｔｔｇｔａｔｔｇｔａａａａｇｇｇｇｔｃｇａａａｇａａａｃｔｃｃｔｃｔａｔａｔａｔｔｔａａｇｃａｇｃｃｃｔｔｔａｔｇａｇｇｃｃｃｇｔｇｃａａａｃａａｃａｃａａｇａａｇａｇｇａｃｇｇａｔｇｃｔｃｔｔｇｔｃｇａｔｔｃｃｃｇｇａａｇａｇｇａｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｔｇｔｇａｇｃｔｔａｇｇｇｔｃａａｇｔｔｔｔｃｔｃｇｃｔｃｔｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｃａｇｃｃｔａｔｃａａｃａｇｇｇｃｃａａａａｃｃａｇｃｔｇｔａｔａａｃｇａａｃｔｃａａｃｃｔｃｇｇｇｃｇｃｃｇｇｇａａｇａｇｔａｔｇａｃｇｔｃｃｔｔｇａｃａａａｃｇｇｃｇｃｇｇｔｃｇｃｇａｃｃｃｔｇａａａｔｇｇｇｔｇｇａａａａｃｃｇａｇｇｃｇａａａｇａａｃｃｃｃｃａｇｇａｇｇｇａｃｔｔｔａｃａａｃｇａａｔｔｇｃａａａａａｇａｃａａｇａｔｇｇｃｃｇａａｇｃｃｔａｔｔｃｃｇａａａｔｔｇｇａａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｇａｇａｃｇａｇｇｔａａｇｇｇｇｃａｔｇａｃｇｇｃｃｔｇｔａｔｃａａｇｇｇｃｔｃｔｃｔａｃｇｇｃｃａｃｇａａｇｇａｔａｃｔｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｔａｔｇｃａａｇｃｔｃｔｔｃｃａｃｃａｃｇｇｇｇｔｔｃｇａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇａｇａｇｇｇｃａｇａｇｇａａｇｔｃｔｇｃｔａａｃａｔｇｃｇｇｔｇａｃｇｔｃｇａｇｇａｇａａｔｃｃｔｇｇｃｃｃａａｔｇａｇｔｇｇｇｇａａａｇｔａｔｇａａｃｔｔｃａｇｃｇａｔｇｔａｔｔｔｇａｃｔｃｃｔｃｃｇａａｇａｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｃｔｇｔｇａａｔａｃｇａｇｃｔａｔｔａｃｔｃｃｇｔｃｇａｔａｇｔｇａａａｔｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔａｇｔｃｔｃｃａａｇａａｇｔｃｃｇｃｃａａｔｔｃａｇｔｃｇｃｃｔｃｔｔｃｇｔｔｃｃｃａｔｃｇｃｇｔａｃｔｃｃｃｔｔａｔｔｔｇｔｇｔｔｔｔｔｇｇｃｃｔｔｃｔｇｇｇｔａａｃａｔｃｃｔｇｇｔｔｇｔａａｔｃａｃａｔｔｃｇｃｔｔｔｃｔａｔａａａａａａｇｃｔｃｇｇａｇｔａｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｔａｃｃｔｔｃｔｔａａｃａｔｇｇｃｔａｔａｇｃｇｇａｃａｔｔｃｔｔｔｔｔｇｔｇｃｔｔａｃｔｃｔｃｃｃａｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇｔｇａｇｃｃａｔｇｃａａｃａｇｇｇｇｃｇｔｇｇｇｔｔｔｔｔｔｃａａａｔｇｃｃａｃａｔｇｔａａｇｃｔｇｃｔｔａａａｇｇｇａｔｃｔａｔｇｃａａｔａａａｃｔｔｃａａｔｔｇｃｇｇｇａｔｇｃｔｃｃｔｇｃｔｇａｃａｔｇｃａｔｃａｇｔａｔｇｇａｔｃｇａｔａｃａｔａｇｃｔａｔａｇｔａｃａｇｇｃｇａｃｔａａｇｔｃｃｔｔｃｃｇｃｃｔｇｃｇａｔｃｃｃｇｃａｃａｃｔｇｃｃｔａｇｇａｇｃａａａａｔｔａｔｔｔｇｃｃｔｃｇｔｃｇｔａｔｇｇｇｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｇａｔｃａｔｃｔｃｃｔｃｃａｇｔａｃｇｔｔｔｇｔｃｔｔｔａａｃｃａｇａａａｔａｔａａｃａｃａｃａｇｇｇｔｔｃｔｇａｔｇｔａｔｇｔｇａａｃｃａａａｇｔａｔｃａｇａｃａｇｔｇａｇｔｇａａｃｃａａｔａｃｇｇｔｇｇａａｇｔｔｇｃｔｔａｔｇｔｔｇｇｇｃｔｔｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｇｇｇｔｔｔｔｔｃａｔｃｃｃａｃｔｇａｔｇｔｔｃａｔｇａｔｔｔｔｃｔｇｔｔａｔａｃａｔｔｔａｔｔｇｔｔａａｇａｃｃｔｔｇｇｔｔｃａｇｇｃｇｃａａａａｔａｇｃａａｇａｇａｃａｔａａｇｇｃａａｔｔｃｇａｇｔｃａｔｃａｔｔｇｃｃｇｔｇｇｔｇｔｔｇｇｔｃｔｔｃｔｔｇｇｃｃｔｇｔｃａｇａｔｃｃｃｃｃａｔａａｔａｔｇｇｔｔｃｔｇｃｔｃｇｔｃａｃｃｇｃｃｇｃｔａａｃｔｔｇｇｇｔａａｇａｔｇａａｔｃｇａｔｃｔｔｇｔｃａｇｔｃｃｇａｇａａｇｔｔｇａｔｃｇｇａｔａｃａｃｃａａａａｃｔｇｔｇａｃａｇａａｇｔｇｃｔｇｇｃｃｔｔｃｃｔｔｃａｃｔｇｔｔｇｔｃｔｇａａｃｃｃａｇｔｔｔｔｇｔａｔｇｃｔｔｔｔａｔａｇｇａｃａｇａａｇｔｔｔｃｇａａａｔｔａｃｔｔｃｔｔｇａａａａｔｃｃｔｃａａｇｇａｃｃｔｃｔｇｇｔｇｔｇｔｔｃｇａａｇｇａａｇｔａｃａａｇａｇｃｔｃｔｇｇｃｔｔｔａｇｔｔｇｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔａｃａｇｔｇａｇａａｔａｔａｔｃｃｃｇｇｃａｇａｃｃｔｃｃｇａｇａｃｔｇｃｔｇａｔａａｔｇａｃａａｃｇｃａａｇｔｔｃｃｔｔｃａｃｔａｔｇ（配列番号：４２６）
コンストラクト２の核酸配列（配列番号：４０９）
【化１０】
2021502122.tif 000054
【０２６３】
実施例６：ＣＤ３の発現
ＣＤ３の発現を評価して、Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）遺伝子を標的化するＣＲＩＳＰＲ法の有効性を決定した。簡潔に述べれば、ＴＲＡＣ遺伝子を標的化するｓｇＲＮＡを、フォワードプライマー（５’−ＡＧＣＧＣＴＣＴＣＧＴＡＣＡＧＡＧＴＴＧＧ−３’（配列番号：３８５））およびリバースプライマー（５’−ＡＡＡＡＡＡＡＧＣＡＣＣＧＡＣＴＣＧＧＴＧＣＣ−３’（配列番号：３８６）を使用して標的部位を増幅することにより生成した。
【０２６４】
非修飾ｓｇＲＮＡは、核酸配列：
５’−  ＧＡＧ  ＡＡＵ  ＣＡＡ  ＡＡＵ  ＣＧＧ  ＵＧＡ  ＡＵＧ  ＵＵＵ  ＵＡＧ  ＡＧＣ  ＵＡＧ  ＡＡＡ  ＵＡＧ  ＣＡＡ  ＧＵＵ  ＡＡＡ  ＡＵＡ  ＡＧＧ  ＣＵＡ  ＧＵＣ  ＣＧＵ  ＵＡＵ  ＣＡＡ  ＣＵＵ  ＧＡＡ  ＡＡＡ  ＧＵＧ  ＧＣＡ  ＣＣＧ  ＡＧＵ  ＣＧＧ  ＵＧＣ  ＵＵＵ  Ｕ  −３（配列番号：３８４）
により提供される。
【０２６５】
修飾ｓｇＲＮＡは、核酸配列：
５’−  ２’ＯＭｅ（Ｇ（ｐｓ）Ａ（ｐｓ）Ｇ（ｐｓ））ＡＡＵ  ＣＡＡ  ＡＡＵ  ＣＧＧ  ＵＧＡ  ＡＵＧ  ＵＵＵ  ＵＡＧ  ＡＧＣ  ＵＡＧ  ＡＡＡ  ＵＡＧ  ＣＡＡ  ＧＵＵ  ＡＡＡ  ＡＵＡ  ＡＧＧ  ＣＵＡ  ＧＵＣ  ＣＧＵ  ＵＡＵ  ＣＡＡ  ＣＵＵ  ＧＡＡ  ＡＡＡ  ＧＵＧ  ＧＣＡ  ＣＣＧ  ＡＧＵ  ＣＧＧ  ＵＧＣ  ２’ＯＭｅ（Ｕ（ｐｓ）Ｕ（ｐｓ）Ｕ（ｐｓ）Ｕ  −３’（配列番号：３８７）
により提供される。２’ＯＭｅ＝２’Ｏ）−メチルＲＮＡおよびｐｓ＝ホスホロチオエート。
【０２６６】
初代ヒト刺激ＣＤ３＋  Ｔ細胞にＣａｓ９をコードするｍＲＮＡ（Ｃａｓ９単独）またはＣａｓ９をコードするｍＲＮＡおよびＴＲＡＣ遺伝子を標的化するｓｇＲＮＡの両方をトランスフェクトした。トランスフェクションの７日後、ＣＤ３の発現をフローサイトメトリーにより評価した。細胞を１：１００の希釈の抗ＣＤ３−ＡＰＣ抗体（クローンＯＫＴ３；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）商品番号３１７３１８）とインキュベートした。図１１に示すように、Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡおよびＴＲＡＣ遺伝子を標的化するｓｇＲＮＡのトランスフェクションは、ＣＤ３発現の大幅な低減を結果としてもたらした。
【０２６７】
実施例７：殺傷スイッチの検証
例示的なコンストラクト２においてコードされるＲＱＲ８殺傷スイッチの有効性を細胞生存アッセイを使用して評価した。簡潔に述べれば、ＨＥＫ細胞に培地単独、コンストラクト１（配列番号：Ｘ）、コンストラクト２（リツキシマブ媒介性ＲＱＲ８殺傷スイッチをコードする；配列番号：Ｘ）、またはコンストラクト１およびコンストラクト２の両方をトランスフェクトした。トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を回収し、計数し、１×１０＾６細胞／ｍＬで再懸濁した。３００ｕＬの細胞懸濁液を４８ウェル組織培養プレートの４つのウェルのそれぞれに移した。１００ｕＬの完全培地および４ｕＬのリツキシマブを第２のウェルに加え、１００ｕＬの新たに調製した乳仔ウサギ補体および４ｕＬのリツキシマブを第４のウェルに加えた。プレートを２、４、または２４時間インキュベートした。１ｕＬの冷却したアネキシンＶ緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＣａＣｌ）を加えることによりアッセイを終了させた後、試料を３ｍＬのアネキシンＶ緩衝液を含有する事前調製したフローサイトメトリーチューブに移した。
【０２６８】
試料を遠心分離により回収し、任意の残留緩衝液をペーパータオルで吸い取った。試料を次に１ｕＬのアネキシンＶ  ＡＰＣを用いて染色し、ボルテックスし、やわらかな光下に１５分間置いた。試料を次にアネキシンＶ緩衝液を用いて洗浄し、緩衝液１ｍＬ当たり５ｕＬのヨウ化プロピジウム（propridium iodide）を添加し、最終懸濁の直後にフローサイトメトリーを行うまで氷上に置いた。
【０２６９】
ＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージを定量化して、ＲＱＲ８殺傷スイッチにより誘導される殺傷を定量化した。図１２に示すように、補体単独とのインキュベーションは、一部の細胞死を結果としてもたらしたが、生存のこの低減は全ての細胞群において観察された。細胞死は、リツキシマブと補体との組合せの存在でコンストラクト２またはコンストラクト１および２の両方を発現する細胞中で観察され、特異的ＲＱＲ８媒介性細胞死を指し示した。
【０２７０】
参考文献
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【０２７１】
他の実施形態
本明細書に開示される特徴の全てを任意の組合せで組み合わせてもよい。本明細書に開示される各特徴は、同じ、同等の、または類似の目的を果たす代替的な特徴により置換されてもよい。したがって、別段の明示的な記載がなければ、開示される各特徴は、同等または類似の特徴の包括的シリーズの例に過ぎない。
【０２７２】
上記の記載から、当業者は、本発明の必須の特徴を容易に把握することができ、その精神および範囲から離れることなく、本発明の様々な変更および改良を行って、それを様々な用法および条件に適合させることができる。したがって、他の実施形態もまた特許請求の範囲内である。
【図１】
2021502122.tif 000055
【図２】
2021502122.tif 000056
【図３】
2021502122.tif 000057
【図４】
2021502122.tif 000058
【図５】
2021502122.tif 000059
【図６】
2021502122.tif 000060
【図７】
2021502122.tif 000061
【図８Ａ】
2021502122.tif 000062
【図８Ｂ】
2021502122.tif 000063
【図９】
2021502122.tif 000064
【図１０−１】
2021502122.tif 000065
【図１０−２】
2021502122.tif 000066
【図１１】
2021502122.tif 000067
【図１２】
2021502122.tif 000068
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月21日(2020.7.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021502122000001.app
【国際調査報告】
2021502122.tif 000069
2021502122.tif 000070