(57)【要約】  開示される本発明は、一般に、ペプチド合成の分野に関する。新規の基支援精製保護基を利用して、ペプチドを合成的に製造するための効率的でスケーラブルな化学を容易にする、液相ペプチド合成の新規の方法が開示される。開示される本発明は、廃棄物を大幅に低減させること、スケーラビリティを増大させること、および高い粗純度を生じさせて合成後の精製を大部分回避することによって、当技術分野における欠点に対処する。
2021531326.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液相ペプチド合成のための保護基であって、保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有し；
化学式１が、
【化１】
2021531326.tif 000060
であり；
化学式２が、
【化２】
2021531326.tif 000061
であり；
化学式３が、
【化３】
2021531326.tif 000062
であり；
化学式４が、
【化４】
2021531326.tif 000063
であり；
化学式５が、
【化５】
2021531326.tif 000064
であり；
化学式６が、
【化６】
2021531326.tif 000065
であり；
化学式７が、
【化７】
2021531326.tif 000066
であり；
化学式８が、
【化８】
2021531326.tif 000067
であることを特徴とする保護基。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、メチル基（−Ｍｅ）およびメトキシ基（−ＯＭｅ）からなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシアセチル（「ＨＭＰＡ」）、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシブタノイル（「ＨＭＰＢ」）、４−（ヒドロキシメチル）ベンゾイル（「ＨＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）ベンゾイル（「ＭＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）フェノキシアセチル（「ＭＭＰＡ」）、４−（アミノメチル）フェノキシアセチル（「ＡＭＰＡ」）、４−（３，３−ジメチル−３−ヒドロキシプロピル）フェノキシアセチル（「ＤＭＰＰＡ」）、２−（４−（アミノ（２，４−ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）アセチル（「Ｒｉｎｋ  アミド」）、４−（（９−アミノ−９Ｈ−キサンテン−３−イル）オキシ）ブタノイル（「キサンテニル」）、５−（５−アミノ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−３−イル）ペンタノイル（「ＴＣＡ」）および３−（４−（クロロ（２−クロロフェニル）（フェニル）メチル）フェニル）プロパノイル（「２−クロロトリチル」）からなる群から選択される］
【請求項２】
請求項１に記載の保護基であって、前記保護基が、化学式１、化学式４、化学式５および化学式７からなる群から選択され；Ｒが、アミノ酸の側鎖であることを特徴とする保護基。
【請求項３】
請求項１に記載の保護基であって、Ｒが、−Ｈ、メチル、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、ベンジル、４−（１Ｈ−イミダゾリル）メチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、イソブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、プロピル基［前記プロピル基の１位は、前記Ｒ基と同じ位置に結合しており、前記プロピル基の３位は、窒素に結合している］、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）２、−ＣＨ２ＯＨ、１−ヒドロキシエチル、イソプロピル、４−ヒドロキシベンジルおよび３−（１Ｈ−インドリル）メチルからなる群から選択されることを特徴とする保護基。
【請求項４】
液相ペプチド合成を実施する方法であって、
第１の保護基を第１のアミノ酸に結合させて、第１の保護アミノ酸を提供するステップであり、前記第１の保護基が請求項１に記載の保護基である、ステップと、
前記第１の保護アミノ酸、または前記第１のアミノ酸を別の分子と連結することによって形成されたペプチド上で、カップリング反応を実施するステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、前記第１の保護基が、前記第１のアミノ酸のＣ末端に結合していることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項４に記載の方法であって、前記第１の保護基が、前記第１のアミノ酸の側鎖に結合していることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項４に記載の方法であって、前記第１の保護基が、前記第１のアミノ酸のＮ末端に結合していることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項４に記載の方法であって、第２の保護アミノ酸を前記第１の保護アミノ酸とカップリングさせるステップを含み、前記第２の保護アミノ酸が第２の保護基および第２のアミノ酸を含み、前記第２のアミノ酸が側鎖を含み、前記第２の保護基が前記第２のアミノ酸の側鎖に結合しており、前記第２の保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有することを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記第１の保護基を結合させるステップが、前記第１の保護基を、前記第１のアミノ酸の前記Ｃ末端、前記第１のアミノ酸の前記Ｎ末端、または前記第１のアミノ酸の前記側鎖に結合させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項１０】
液相ペプチド合成のための保護基を形成する方法であって、
ベンジルジフェニルホスフィンオキシド（ＨＯＢｎＤｐｐ）、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（ＮＨ２ＰｈＤｐｐ）またはその誘導体を、（ｉ）直接、リンカー分子と、（ｉｉ）アミノ酸を介してリンカー分子とまたは（ｉｉｉ）アミノ酸誘導体を介してリンカー分子とカップリングさせるステップ
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記カップリングステップが、
【化９】
2021531326.tif 000068
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式１：
【化１０】
2021531326.tif 000069
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、前記カップリングステップが、
【化１１】
2021531326.tif 000070
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式２：
【化１２】
2021531326.tif 000071
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法であって、前記カップリングステップが、
【化１３】
2021531326.tif 000072
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式３：
【化１４】
2021531326.tif 000073
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法であって、前記カップリングステップが、
【化１５】
2021531326.tif 000074
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式４：
【化１６】
2021531326.tif 000075
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１５】
請求項１０に記載の方法であって、前記カップリングステップが、
【化１７】
2021531326.tif 000076
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式５：
【化１８】
2021531326.tif 000077
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法において、前記カップリングステップが、
【化１９】
2021531326.tif 000078
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式６：
【化２０】
2021531326.tif 000079
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法において、前記カップリングステップが、
【化２１】
2021531326.tif 000080
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式７：
【化２２】
2021531326.tif 000081
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【請求項１８】
請求項１０に記載の方法において、前記カップリングステップが、
【化２３】
2021531326.tif 000082
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、前記保護基を形成することを含み、前記保護基が、化学式８：
【化２４】
2021531326.tif 000083
によって定義されることを特徴とする方法。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、ｉ）２０１６年１２月２１日に出願された、ＷＯ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８１１２号およびＷＯ公開第ＷＯ２０１７１１２８０９Ａ１号、「Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ  ＧＡＰ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」；ｉｉ）２０１９年４月２９日に出願され、  日にＷＯ  号として公開された、ＷＯ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／２９５６９号、「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」；ならびに、ｉｉｉ）２０１８年５月３１日に出願された、米国仮出願第６２／６７８，５６４号、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ＧＡＰ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」を相互参照し、これらの出願および公報は、例として参照することにより本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究または開発の記載
【０００２】
なし。
配列リスト、表、またはコンピューターリストコンパクトディスク付録の参照
【０００３】
なし。
【背景技術】
【０００４】
最近の研究努力によって、カラムクロマトグラフィーおよび再結晶を回避することに特に焦点を合わせた精製化学の領域において、大幅な進歩を遂げてきた。この研究は、伝統的な精製方法を回避する有機合成のための化学としての基支援精製（ＧＡＰ）化学／技術と定義されてきた。伝統的な精製方法とは、例えば、十分に官能化された基を、出発材料にまたは新たに生成された生成物に意図的に導入することによるクロマトグラフィーおよび／または再結晶等である。これらのＧＡＰ基は、多くの場合、標的分子の合成中に望ましくない副反応を防止するための保護基としても使用され得る。そのような研究には、有機合成化学の全分野を網羅する可能性がある。
【０００５】
保護基は、複数の官能基が存在するほぼすべての複雑な合成において見られる。ＧＡＰ化学に関して、理想的な例は、半永久的保護基が、ＧＡＰに要求される必要な溶解度特性を導入したものであろう。しかしながら、ほとんどの伝統的な保護基は非極性であり、したがって、ほとんどの基質に要求されるＧＡＰ溶解度を生み出さない。妥当な溶解度制御を生み出す保護基が開発されれば、ＧＡＰ化学は、その保護基の使用を必要とするすべての合成に潜在的に拡張され得る。いくつかのアプローチが利用されてきた。公開された特許出願ＷＯ２０１４０９３７２３Ａ２は、ＧＡＰを装備したキラル補助剤によるイミンの保護、次いで、不斉ホウ素付加反応においてこれらのキラルなＮ−ホスホニルイミンを求電子試薬として使用することを教示している。精製は、ＧＡＰプロセスを介して行われた。この研究は、新規のアミノ酸誘導体を合成するために潜在的に使用され得る、キラルなα−ボロン酸アミンへの簡易なアクセスを提供するという点で価値がある。新規のアミノ酸誘導体については新規のペプチド標的に潜在的に組み込まれ得る。
【０００６】
有効な保護基は、多種多様な条件に対して頑強である必要があり、高収率で添加および除去されなくてはならない。保護基は、ペプチド合成において、固相または液相アプローチのいずれかで、広範に使用される。伝統的なペプチド合成保護戦略で、最も一般的に使用される戦略の１つは、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕである。米国特許第８，３８３，７７０Ｂ２号は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）におけるフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）Ｎ末端保護基の使用を教示している。この技術は、周知であり、業界で広く適用されている。Ｆｍｏｃ基は、成長中のペプチドに添加されるアミノ酸のＮ末端を保護し、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）ベースの基は、同じアミノ酸の側鎖を保護する。Ｆｍｏｃ基は、適正な脱保護塩基により除去することができ、一方、ｔＢｕ基は、合成の終わりにおける酸ベースの全体的な脱保護まで留まっている。ＢｏｃおよびＦｍｏｃ基は、ペプチド化学のすべての領域で数十年にわたって使用されてきており、好ましいＦｍｏｃ基は、ほぼ完全にＳＰＰＳに制限されている。
【０００７】
ＳＰＰＳは、１９６０年代にＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄによって開発され、研究および製造のために複数の科学的専門分野によって使用される標準プロトコールとなった（図１Ａを参照）。ポリマー支持体または樹脂の利点は、各カップリング／脱保護ステップ後に成長中のペプチドの簡易な精製を可能にするその能力にあり、これにより、カラムクロマトグラフィーの使用を回避する。ＳＰＰＳの主な不利点は、スケールアップの難しさにある：多くのポリマー支持体は高価であり、扱う材料の質量の大部分を占める。ＳＰＰＳにおけるカップリング反応も、該反応は固液界面で起こることから非効率である。加えて、各脱保護およびカップリング反応後、樹脂を溶媒で洗浄して、前の反応から生成されたあらゆる不純物を除去しなくてはならず、これは、大規模スケールでは非常に問題となり得る重大な溶媒廃棄物を生み出す。
【０００８】
しかしながら、液相ペプチド合成（ＳｏｌＰＰＳ）の経済的に実現可能なＦｍｏｃ保護スキームの例は稀であり、文献にもほとんど例がない。米国特許第５，５１６，８９１Ａ号は、ＦｍｏｃベースのＳｏｌＰＰＳのわずかな例の１つを提供している。ここでも、Ｆｍｏｃペプチド合成は、ほぼ完全にＳＰＰＳに制限されている。これは、ポリマー支持体なしでは除去することが難しいＮ−フルオレニルメチルピペリジン（ＮＦＭＰ）が、脱保護中の副生成物として形成されるためである。Ｆｍｏｃ脱保護のための標準プロトコールは、Ｆｍｏｃペプチドを、過剰のピペリジンを加えたジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはジクロロメタン（ＤＣＭ）の溶液中で撹拌し、そのプロセスでＦｍｏｃ基を脱保護し、ＮＦＭＰを形成することである。‘８９１号特許は、ピペリジンの代わりに４−アミノメチルピペリジン（４ＡＭＰ）で脱保護することによる、この不純物の除去を教示している。これは、ＮＦＭＰの代わりに、余分なアミノ基の存在により水中に抽出され得るＮＦＭＰ−ＣＨ２ＮＨ２を形成する。この方法の問題は、４ＡＭＰの高い使用コストにある。この方法に法外なコストがかかり、業界によって受け入れられてこなかった理由はこれである。
【０００９】
ＦｍｏｃベースのＳｏｌＰＰＳの別の例は、公開された特許出願ＷＯ２０１７１１２８０９Ａ１において見ることができる。この公報は、標的ペプチドの溶解度を制御して、各連続するカップリング反応後の選択的沈殿を可能にするための、Ｃ末端ＧＡＰ保護基、ベンジルジフェニルホスフィンオキシド（ＨＯＢｎＤｐｐ）の使用を教示している（図１Ｂを参照）。溶解度は、成長中のペプチドが酢酸エチルまたはＤＣＭ等の有機溶媒中に留まるように制御され、不純物を除去するために水性洗浄が実施される；次の有機溶媒の濃縮とそれに続くアルカン溶媒中における混合により、ペプチド生成物を選択的に沈殿させる。この技術は、‘８９１号特許よりもはるかに経済的に実現可能な方式でＦｍｏｃ／ｔＢｕ化学を液相に適合させたが、方法に固有の潜在的な制限がある。第一に、ＧＡＰ基は酸に不安定ではなく、一般的に使用されるトリフルオロ酢酸ベース（ＴＦＡベース）または他の酸性カクテルにより便利なワンステップの全体的な脱保護を防止する；ペプチドのＣ末端からＨＯＢｎＤｐｐを除去するために、水素化または加水分解が必要とされる。加えて、ペプチドが成長および配列変化し続けることから、ＨＯＢｎＤｐｐは、長くなるにつれて、または配列が異なる溶解度特性をペプチドに与えるにつれて、鎖に対する溶解度制御を次第に維持できなくなる。ＨＯＢｎＤｐｐは、合成中に加水分解または偶発的な切断をする傾向もある。例えば、ペプチド配列における第２のアミノ酸のＦｍｏｃ脱保護中、ジケトピペラジン（ＤＫＰ）形成は、Ｃ末端からのＨＯＢｎＤｐｐの損失を容易にする。この切断されたＨＯＢｎＤｐｐは、反応溶液中に留まり、活性化されたアミノ酸とカップリング反応中に反応して、除去することが難しいまたは不可能である不純物を生み出し得る。その上、保護ペプチドが合成された後のＣ末端の脱保護のための現在の切断技術（加水分解または水素化のいずれか）により、最終ペプチド生成物のＣ末端はカルボン酸である。多くの治療用ペプチドはＣ末端が修飾されて、このカルボン酸の代わりに、アミド、環状ペプチド、チオエステル等とされる必要があり、ＧＡＰペプチド合成方法の適用をさらに限定している。加えて、Ｃ末端からＨＯＢｎＤｐｐを除去するためのこれらの切断反応は、全体的な脱保護とは完全に別個の反応である；該反応は、特異的な条件および後処理を必要とし、これは、時間とお金の両方がかかる不都合である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＳＰＰＳにおけるスケールアップに関するこれらおよび他の課題、ならびに現存するＧＡＰペプチド合成保護戦略における制限のため、スケールアップに適しているＳｏｌＰＰＳ方法だけではなく、（ｉ）種々の切断条件、（ｉｉ）より長いまたはより難しい（溶解度の観点から）配列、（ｉｉｉ）およびＣ末端修飾に、より適したＳｏｌＰＰＳ方法が、業界で必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一の態様において、本明細書に開示される本発明は、液相ペプチド合成のための保護基を含み、保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有する。
化学式１は、
【化１】
2021531326.tif 000003
であり；
化学式２は、
【化２】
2021531326.tif 000004
であり；
化学式３は、
【化３】
2021531326.tif 000005
であり；
化学式４は、
【化４】
2021531326.tif 000006
であり；
化学式５は、
【化５】
2021531326.tif 000007
であり；
化学式６は、
【化６】
2021531326.tif 000008
であり；
化学式７は、
【化７】
2021531326.tif 000009
であり；
化学式８は、
【化８】
2021531326.tif 000010
である。
Ｚは、−Ｈ、メチル基（−Ｍｅ）およびメトキシ基（−ＯＭｅ）からなる群から選択される。Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択される。Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択される。Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択される。Ｌは、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシアセチル（「ＨＭＰＡ」）、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシブタノイル（「ＨＭＰＢ」）、４−（ヒドロキシメチル）ベンゾイル（「ＨＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）ベンゾイル（「ＭＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）フェノキシアセチル（「ＭＭＰＡ」）、４−（アミノメチル）フェノキシアセチル（「ＡＭＰＡ」）、４−（３，３−ジメチル−３−ヒドロキシプロピル）フェノキシアセチル（「ＤＭＰＰＡ」）、２−（４−（アミノ（２，４−ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）アセチル（「Ｒｉｎｋ  アミド」）、４−（（９−アミノ−９Ｈ−キサンテン−３−イル）オキシ）ブタノイル（「キサンテニル」）、５−（５−アミノ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−３−イル）ペンタノイル（「ＴＣＡ」）および３−（４−（クロロ（２−クロロフェニル）（フェニル）メチル）フェニル）プロパノイル（「２−クロロトリチル」）からなる群から選択される。
【００１２】
第２の態様において、開示される本発明は、液相ペプチド合成を実施する方法を含み、この方法はいくつかのステップを含む。最初のステップは、第１の保護基を、第１のアミノ酸に結合させて、第１の保護アミノ酸を提供することを含む。次のステップは、第１の保護アミノ酸、または第１のアミノ酸を別の分子と連結することによって形成されたペプチド上で、カップリング反応を実施することを含む。第１の保護基は、請求項１の保護基である。
【００１３】
第３の態様において、開示される本発明は、液相ペプチド合成のための保護基を形成する方法を含む。この方法は、ベンジルジフェニルホスフィンオキシド（ＨＯＢｎＤｐｐ）、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（ＮＨ２ＰｈＤｐｐ）またはその誘導体を、（ｉ）直接、リンカー分子と、（ｉｉ）アミノ酸を介してリンカー分子とまたは（ｉｉｉ）アミノ酸誘導体を介してリンカー分子とカップリングさせるステップを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
本開示の、前述および他の目的、特徴および利点は、添付図面において例証される下記の実施形態の記述から明らかになるであろうし、この中で、参照文字は種々の図の全体を通して同じ部分を指す。図面は必ずしも一定の縮尺とは限らず、代わりに本開示の原理を説明することに強調が置かれる。図は非限定的な例として使用され、本開示の範囲を限定することなく、好ましい実施形態を表現することのみを意図している。
【図１Ａ】先行技術の固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）方法を示す図である。
【図１Ｂ】ＧＡＰペプチド合成（ＧＡＰ−ＰＳ）方法のステップ、具体的にはＣ末端保護のためのＨＯＢｎＤｐｐの使用を示す図である。
【図２】図１Ｂの保護基を、アミノ酸残基の側鎖、この非限定的な実施形態において具体的にはセリンに結合させるための方法とそれに続くＧＡＰ−ＰＳを示す図である。
【図３】例として、新規のＧＡＰ分子を合成し、それをペプチドに結合させるための概略を示す図である。ここで、ＨＯＢｎＤｐｐを、保護されたＲｉｎｋ  アミド−ＯＨと反応させ、得られた新たな化学物質Ｒｉｎｋ  アミド−ＧＡＰ（ＲＡＧ）はアミノ酸のＣ末端に結合している。
【図４】新規のＧＡＰ分子の、アミノ酸の側鎖への結合を示す図である。この非限定的な例において、ＧＡＰ分子ＲＡＧは、アスパラギン酸の側鎖を保護するために使用され、ＲＡＧ保護アスパラギンの合成をもたらす。具体的には、ＲＡＧ分子上の遊離アミンとアスパラギンのカルボニル炭素との間にアミド結合を形成するために、カップリング反応が実施される。
【図５】新規のＧＡＰ分子の合成の非限定的な例を示す図である。この非限定的な例において、ＨＯＢｎＤｐｐは、保護ＨＭＰＡ−ＯＨと直接接続されて、ＨＭＰＡ−ＧＡＰ（ＨＧ）を形成し、かつ中間物（一実施形態においてフェニルアラニン）を経由して、ＧＡＰ分子、ＨＭＰＡ−フェニルアラニン−ＧＡＰ（ＨＰＧ）を形成する。具体的には、ＨＯＢｎＤｐｐは、保護ＨＭＰＡ−ＯＨのカルボン酸部分とカップリングされ得るか、またはＨＯＢｎＤｐｐは、最初にアミノ酸とカップリングされ、続いてＨＭＰＡとカップリングされて、ＧＡＰ分子ＨＰＧを生成させることができる。
【図６】図５からのＨＰＧの、汎用アミノ酸のＣ末端への、および、本開示の好ましい実施形態における、アスパラギン酸の側鎖への結合を示す図である。具体的には、この反応は、複数の異なるカップリング試薬の使用を経由して遂行され得るカップリング反応であり、ここで、ＨＰＧの遊離アルコールは、活性化されたカルボン酸のカルボニル基とカップリングする。
【図７】新規のＧＡＰ分子、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（「ＮＨ２ＰｈＤｐｐ」）の合成の非限定的な例を示す図である。
【図８】新規のＧＡＰ分子の合成の非限定的な例を示す図である。ここで、ＮＨ２ＰｈＤｐｐを、保護Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨと反応させて、標的物質を得る。具体的には、ＮＨ２ＰｈＤｐｐを、多数のカップリング試薬を介して、保護Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨのカルボン酸部分とカップリングさせることができる。
【図９】新規のＧＡＰ分子の合成の非限定的な例を示す図である。ここで、ＮＨ２ＰｈＤｐｐを、直接または中間物を経由してのいずれかで、保護ＨＭＰＡ−ＯＨと反応させて、標的分子を形成する。複数の異なるカップリング試薬を使用して、これらの反応を容易にすることができる。
【図１０】非限定的な例として、ＨＰＧ  ＧＡＰ分子の、Ｆｍｏｃ保護ロイシンのＣ末端への結合で得られた化合物を示す図である。
【図１１】非限定的な例として、ＨＰＧによるグルタミン酸の側鎖保護により生じる化合物を示す図である。ここで、グルタミン酸のＣ末端は、可能なＣ末端保護戦略の非限定的な例として、アリル基で保護される。
【図１２】非限定的な例として、本明細書に開示される新規のＳｏｌＰＰＳ方法により生じるテトラ−ペプチド、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＨＰＧ）−Ｇｌｕ（ＨＰＧ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｌｅｕ−ＨＰＧを示す図である。
【図１３】ＲＡＧの、アミノ酸の側鎖、この非限定的な例において具体的にはアスパラギン酸への結合により生じる化合物を示す図である。ここで、アスパラギン酸のＣ末端は、Ｃ末端保護戦略の非限定的な例として、アリル基で保護される。
【図１４】非限定的な例として、本明細書に開示されるＳｏｌＰＰＳ方法により生じる保護ペプチドを示す図である。
【図１５】非限定的な例として、新規のＧＡＰ分子で完全に保護されたペプチドビバリルジンを示す図である。
【図１６】Ｆｍｏｃ脱保護の後にすべての側鎖およびＣ末端保護基を除去するワンステップの全体的な脱保護を経由して達成された、完全に脱保護されたビバリルジンを示す図である。
【図１７】アミンを新規のＧＡＰ分子で保護するための一般的な方法論を示す図である。この特定の非限定的な実施形態において、ＨＰＧが使用される。
【図１８】非限定的な例として、本明細書に開示される新規のＧＡＰ分子の合成のための試薬としての役割を果たすことができる無数の分子を示す図である。
【図１９】本明細書に開示される新規のＧＡＰ分子を合成するための無数の代表的なカップリング反応を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
上記の発明の概要において、ならびに以下の発明を実施するための形態および特許請求の範囲において、ならびに添付図面において、本発明の特定の特徴を参照する。本明細書における本発明の開示は、そのような特定の特徴のすべての可能な組合せを含むことを理解されたい。例えば、特定の特徴が、本発明の特定の態様もしくは実施形態、または特定の請求項との関連で開示される場合、その特徴は、可能な限り、本発明の他の特定の態様および実施形態と組み合わせておよび／またはそれらとの関連で、ならびに本発明において一般に、使用することもできる。
【００１６】
本明細書に開示され、特許請求される組成物および／または方法のすべては、本開示に照らして、必要以上の実験をすることなく、製造および実行することができる。本発明の組成物および方法を、好ましい実施形態の観点から記述してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱しなければ、組成物および／または方法に対し、本明細書において記述されている方法のステップまたは一連のステップにおいて、変形形態が適用され得ることが、当業者には明らかであろう。当業者に明らかであるすべてのそのような同様の代替形態および修正形態は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念内であると考える。
【００１７】
用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」およびその文法上の同等物は、本明細書において、他の成分、原料、ステップ等が場合により存在することを意味するように使用される。例えば、成分Ａ、ＢおよびＣ「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（または「を含む（ｗｈｉｃｈ  ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」）物品は、成分Ａ、ＢおよびＣからなる（すなわち、それらのみを含有する）こともできるし、成分Ａ、ＢおよびＣのみでなく１つまたは複数の他の成分も含有することもできる。
【００１８】
本明細書において、２つ以上の定義されたステップを含む方法を参照する場合、定義されたステップは、任意の順序でまたは同時に行うことができ（文脈がその可能性を除外する場合を除く）、その方法は、定義されたステップのいずれかの前に、定義されたステップの２つの間に、またはすべての定義されたステップの後に行われる、１つまたは複数の他のステップを含むことができる（文脈がその可能性を除外する場合を除く）。
【００１９】
後に数字が続く用語「少なくとも」は、本明細書において、その数字から始まる範囲（定義されている変数に応じて、上限を有するまたは上限を有さない範囲であってよい）の開始を表示するために使用される。例えば、「少なくとも１」は、１または１超を意味する。後に数字が続く用語「最大で」は、本明細書において、その数字で終わる範囲（定義されている変数に応じて、その下限として１もしくは０を有する範囲、または下限を有さない範囲であってよい）の終了を表示するために使用される。例えば、「最大で４」は４または４未満を意味し、「最大で４０％」は４０％または４０％未満を意味する。本明細書において、範囲が「（最初の数字）から（後の数字）」または「（最初の数字）〜（後の数字）」として示される場合、これは、その下限が最初の数字であり、かつその上限が後の数字である範囲を意味する。例えば、２５から１００ｍｍは、その下限が２５ｍｍであり、かつその上限が１００ｍｍである範囲を意味する。
【００２０】
用語「第１の」は、１つの要素を別の要素から区別するために使用され、ある要素が要素の任意の所与の配列において１番目のまたは最初の要素であることを表示するようになっていない。例えば、「第１のアミノ酸」は、該アミノ酸がアミノ酸の配列において１番目であることまたは反応される１番初めのアミノ酸であることを意味するものではない。代わりに、「第１のアミノ酸」は、該アミノ酸が、「第２のアミノ酸」等の別のアミノ酸と別個かつ区別可能であることのみを指し示す。
【００２１】
用語「カップリング反応」は、一般に「カップリング試薬」によって容易にされる２個の構成分子間の結合の形成を指すために使用される。ペプチド化学において、これらのカップリング反応は、使用されるカップリング試薬に完全に依存し得る多くの異なる反応条件下で、多くの異なる機構を介して起こることができる。例えば、カップリング試薬は、構成分子のカルボン酸を「活性化する」ことができ、そのため、カルボニル炭素は、求核攻撃する傾向が高くなり得る。カップリング反応は、２個の構成分子間の結合の形成中に、水分子の損失をもたらし得る（Ｃｈａｎｄｒｕｄｕ  ２０１３、Ｍｏｌｌｉｃａ  ２０１３、Ｓｈｅｌｔｏｎ  ２０１３、Ａｍｂｌａｒｄ  ２００６、Ｂａｃｈｅｍ  ２０１６を参照）。
【００２２】
ペプチド合成のための多くの種類の保護スキームにおいて、ペプチド鎖を成長させるために、同様の反応の繰り返しが起こる。一般に、鎖に添加された各アミノ酸のＮまたはＣ末端のいずれかが最初に保護され、アミノ酸の他方の末端は、カップリング反応に自由に関与する。初期遊離末端を介する鎖への添加の後、脱保護反応が実行され、保護されたＮまたはＣ末端を解放して、それに続くカップリング反応に関与させて、隣のアミノ酸とのペプチド結合を生成させる。例えば、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕベースのペプチド合成において、Ｆｍｏｃ基は、アミノ酸のＮ末端を保護し、アミノ酸の側鎖は、ブチル、トリチル（トリフェニルメチル）、Ｂｏｃ（ブチルオキシカルボニル）、Ｐｂｆ（２，２，４，６，７−ペンタメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル）、Ｐｍｃ（２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル）およびＡｃｍ（アセトアミドメチル）を含むがこれらに限定されないｔＢｕベースの保護基で保護される（側鎖はカップリングおよび脱保護条件に対して自然に不活性であるため、一部のアミノ酸は側鎖保護を必要としない）。ペプチド配列における１番目のアミノ酸のＣ末端は、ＳＰＰＳにおいて樹脂またはポリマーと、およびＳｏｌＰＰＳにおいて保護基と接続され、かつそれらによって保護される。Ｆｍｏｃ／ｔＢｕペプチド合成スキームは、アミノ酸のＮ末端のＦｍｏｃ基が塩基に不安定であり、適正な脱保護塩基で処理すると、Ｃ末端接続や側鎖保護に干渉することなくＮ末端からＦｍｏｃ基を除去するように設計されている。脱保護反応が実施されると、１番目のアミノ酸のＮ末端は遊離し、一方、Ｃ末端および側鎖は保護されているか、そうでなければ不活性である。次いで、２番目のアミノ酸はＮ末端がＦｍｏｃで保護され、側鎖が保護されるか、自然に不活性であるが、遊離Ｃ末端においてカップリング試薬によって活性化され、そのような活性化により、活性化されたカルボニルにおける１番目のアミノ酸の遊離Ｎ末端による求核攻撃を容易にして、１番目のおよび隣のアミノ酸間にペプチド結合を形成する。このプロセスを、適正なペプチド配列が実現されるまで繰り返す。最終アミノ酸のＦｍｏｃ脱保護後、ペプチドは、Ｃ末端においておよび側鎖において依然として保護されている。次いで、ＴＦＡベースのカクテル等の強酸カクテルを用いる全体的な脱保護を実施して、すべての側鎖保護基を除去する；一部の事例では、Ｃ末端樹脂または保護基も切断することができる。
【００２３】
本開示は、液相ペプチド合成のための方法を提供することによって、当技術分野における欠点に対処する。その方法は、標的ペプチドの溶解度制御および全体的な合成プロセスを維持しながら、種々の全体的な脱保護戦略、より長いまたはより難しい（溶解度の点で）ペプチド配列の合成、および標的ペプチドにおけるＣ末端修飾を可能にする。成長中のペプチドのＣ末端および側鎖において新規の保護戦略を利用することにより、経済的に実現可能かつペプチドの商業生産に有用なＳｏｌＰＰＳ戦略が提示される。
【００２４】
したがって、本開示の非限定的な目的は、ＳｏｌＰＰＳの新規の方法を可能にすることである。一態様において、ＨＯＢｎＤｐｐ、伝統的にＣ末端ＧＡＰ保護基は、ペプチド鎖のＣ末端の代わりにまたはそれに加えて、セリン、トレオニン、チロシンまたはシステインを含むがこれらに限定されないアミノ酸残基の側鎖を直接保護するために使用される。所望のペプチドの他のアミノ酸残基は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ、Ｂｏｃ／ベンジル、Ｃｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）／ｔＢｕ、Ｃｂｚ／ベンジル等を含むがこれらに限定されない若干数の異なる保護戦略を使用して保護され得る。この強化された保護戦略は、ペプチド鎖の溶解度制御を維持しながら、より長いおよび／またはより難しい配列の合成を可能にする。この戦略は、溶解度、脱保護または合成後のＣ末端修飾目的のための、異なるＣ末端保護基の使用も可能にする。別の態様において、以下で論じる新規のＧＡＰ分子は、ある特定のアミノ酸のＣ末端および／または側鎖を保護して、ＣからＮ方向での溶液中におけるペプチド合成を可能にするために使用される。
【００２５】
別の態様において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、特別に設計されたＣ末端保護戦略を経由して遂行される。ここで、新規のＧＡＰ分子保護基は、より広範な切断条件、より長いペプチドの合成、意図しないまたは偶発的な脱保護の最小化、および切断時のＣ末端修飾を可能にしながら、元のＧＡＰペプチド合成（ＧＡＰ−ＰＳ）の利益を維持する。使用されるＧＡＰ分子に応じて、Ｃ末端脱保護は、以下のいずれかの条件の下で遂行することができる。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、フッ化水素酸（ＨＦ）、トルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）、メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）またはその他による処理を含むがこれらに限定されない酸性条件、水性もしくはアルコール性系のいずれかまたは相間移動触媒を加えた二相系中の金属水酸化物を含むがこれらに限定されない塩基性加水分解条件、そしてＰｄ０もしくはＰｔ０もしくはＲｕ等の遷移金属触媒上の分子水素、移動水素化、またはホウ化水素、水素化アルミニウム、シラン、ギ酸アンモニウム等の他の水素源を含むがこれらに限定されない還元条件である。また、特異的なＧＡＰ分子に応じて、Ｃ末端ＧＡＰ分子の切断中にＣ末端アミド形成または他の合成後の修飾を遂行し、余分な合成後のプロセシングステップを回避しながら所望のペプチド生成物を生成することもできる。これらの新規のＧＡＰ分子は、酸触媒脱保護反応、ならびに水素化ベースおよび加水分解の反応に対して安定なままであることができ、ＧＡＰ保護基のペプチド合成後の回収の増大を可能にする。加えて、Ｃ末端保護合成中の損失も、これらの新規のＧＡＰ分子によって最小化される。
【００２６】
別の態様において、上述した新規のＧＡＰ分子のいずれかは、ペプチドのＣ末端の代わりにまたはそれに加えて、アスパラギン酸、システイン、セリン、トレオニン、リジン、グルタミン酸、アスパラギンおよびグルタミンを含むがこれらに限定されない種々のアミノ酸の側鎖を保護するために使用される。この戦略は、標的ペプチドの溶解度を同時に制御しながら、反応性側鎖の保護を可能にする。
【００２７】
別の態様において、これらの新規のＧＡＰ分子およびそれらの誘導体を合成する方法が提示される。非限定的な例として、ＨＯＢｎＤｐｐは、直接または中間物を経由してのいずれかで、リンカー分子のカルボン酸部分に結合し、その例は、図１８において見ることができ、次いで、得られた新規のＧＡＰ保護基は、ペプチドのＣ末端に結合する。別の非限定的な例として、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（すなわち、ＮＨ２ＰｈＤｐｐ）は、異なるリンカーと同様の方式でカップリングされて、同様の方式で使用され得る新規のＧＡＰ保護基を実現する。
【００２８】
別の態様において、上記で論じたこれらの異なる戦略のいずれかが、異なる組合せで利用されて、所与のペプチドのための最良の可能な合成戦略を可能にする。非限定的な例として、適切に使用される場合、これらの戦略は、より長いペプチドの合成を完全に溶液中で可能にし、Ｃ末端脱保護およびＣ末端アミド形成は、側鎖脱保護とともにワンステップ反応で遂行される。
【００２９】
したがって、本開示の非限定的な目的は、ＳｏｌＰＰＳのための方法を提供することである。この方法を設計する際、該方法が、大規模生産を妨害する困難な蒸留および精製戦略を回避する等、ＧＡＰ−ＰＳのような他の液相方法の利点を維持しようと努めるべきことが明らかであった。強化された保護戦略は、当技術分野における難点にも対処しながら、生成されたアミノ酸および脱保護プロトコール不純物からの生成物の分離を可能にするために、標的ペプチドの溶解度制御を維持するように設計される必要があるであろう。
【００３０】
本開示の非限定的な例示的な実施形態において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、ＨＯＢｎＤｐｐの、所与の配列における１番目のアミノ酸のＣ末端への直接の結合から始まることができる（図１Ｂを参照）。１番目のアミノ酸のＣ末端をＨＯＢｎＤｐｐで保護することの代替としてまたはそれに加えて、ＨＯＢｎＤｐｐの、セリン、トレオニン、チロシンおよび／またはシステイン等であるがこれらに限定されないアミノ酸残基の側鎖への結合を、成長中のペプチドへのその後の組み込みとともに実行して、溶解度をより良好に制御し、かつある特定のアミノ酸の側鎖を保護することもできる（図２を参照）。ＨＯＢｎＤｐｐによる側鎖保護を遂行するために、ＨＯＢｎＤｐｐを最初に、ハロゲン化剤（例えば、ＰＢｒ３、ＰＯＢｒ３、（ＣＯＣｌ）２、ＳＯＣｌ２等）と、塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、重炭酸ナトリウム等）の存在下で反応させて、使用されるハロゲン化試薬に応じて、ＩＢｎＤｐｐ、ＣｌＢｎＤｐｐまたはＢｒＢｎＤｐｐのいずれかを提供する。反応は、反応に使用されるハロゲン化剤および塩基に応じて、様々な条件で起こることができる。例として、反応は、１から１００バールの圧力、−７８℃から１００℃の温度で、および単相または二相反応媒体中で行うことができる。次いで、このハロゲン化した化合物を、Ｎ末端に一次保護基（Ｐｇ）およびＣ末端に二次保護基（Ｐｇ’）を持つアミノ酸と反応させて、アミノ酸の側鎖を有効に保護することができる。次いで、ＧＡＰ分子が、ペプチド配列に統合される１つまたは複数のアミノ酸の側鎖のＧＡＰ保護の代わりにまたはそれに加えてペプチドのＣ末端を保護するならば、ペプチド合成はＣからＮ方向に実行され得る；代替として、ＨＯＢｎＤｐｐまたは他のＧＡＰ分子が、アミノ酸側鎖のみを保護するならば、ペプチド合成は実行されるか、またはＮからＣの方向で実行される。Ｎ末端および側鎖保護のための無数の保護戦略が可能であり得る。潜在的なＮ末端またはＣ末端保護基は、Ｃｂｚ、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、メチル、Ｂｎ（ベンジル）、または本明細書において論じられているＧＡＰ分子のいずれかを含むことができるがこれらに限定されず、側鎖保護基は、ｔＢｕ、Ａｃｍ、トリチル、Ｂｏｃ、Ｐｂｆ、Ｐｍｃ、Ｆｍ（フルオレニルメチル）、および本明細書において論じられているＧＡＰ分子のいずれかを含むことができるがこれらに限定されない。
【００３１】
別の非限定的な例示的な実施形態において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、図３に見られる通り、Ｃ末端保護に使用される新規のＧＡＰ分子（ここでは、ＲＡＧ）から始まることができ、ペプチドからのＲＡＧの切断時に、ペプチドの酸に不安定なＣ末端保護およびＣ末端アミド形成の両方を可能にする。ＲＡＧによるＣ末端保護が遂行されると、ペプチド合成は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略等であるがこれに限定されない無数のＮ末端および側鎖保護戦略を利用して、ＣからＮ方向に実行され得る。
ＲＡＧを合成するために、ＨＯＢｎＤｐｐは、保護Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨと、以下のような、しかし、これらに限定されない多数のカップリング試薬を介してカップリングされて、ＧＡＰ分子ＲＡＧを提供することができる。ＴＦＦＨ（「Ｎ−（（ジメチルアミノ）フルオロメチレン）−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェート」）、ＴＢＴＵ（「１−（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミノ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３−オキシドテトラフルオロボレート」）、ＨＢＴＵ（「１−（（ジメチルアミノ）（ジメチルイミノ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール３−オキシドヘキサフルオロホスフェート」）、ＥＤＣＩ（「３−（（（エチルイミノ）メチレン）アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１−アミン」）またはＣＯＭＵ（「（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロホスフェート」）等である。カップリング反応は、使用される具体的なカップリング試薬に応じて、様々な条件で起こることができる。例として、反応は、大気圧、室温で、ＴＢＴＵとともに軽く撹拌しながら、行うことができる。保護ＲＡＧ分子が合成されると、脱保護反応（例えば、Ｆｍｏｃ脱保護反応）が起こり、Ｒｉｎｋ  アミド上のアミンを解放して、アミノ酸のＣ末端において見られ得るもの等のカルボン酸に対するカップリング反応に関与させることができる。ＲＡＧは、アミノ酸残基（アスパラギン酸およびグルタミン酸を含むがこれらに限定されない）の側鎖に代替としてまたは追加的に結合して（図４を参照）、それらのアミノ酸の成長中の配列への添加時に、強化された保護または溶解度制御を可能にすることができる。アミノ酸の側鎖からのＲＡＧの切断時に、それらの側鎖のアミド形態（ここでは、それぞれアスパラギンおよびグルタミン）が生成され得る（図４を参照）。
【００３２】
別の非限定的な例示的な実施形態において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、Ｃ末端保護に使用される新規のＧＡＰ分子（ここでは、（Ｒｉｎｋ  アミド）−フェニルアラニン−ＧＡＰ、すなわちＲＰＧ）から始まることができる。ＲＰＧは、図５と同様に合成することができる。具体的には、ＨＯＢｎＤｐｐをＦｍｏｃ保護フェニルアラニンとカップリングさせて、Ｆｍｏｃ−フェニルアラニン−ＧＡＰ（すなわち、Ｆｍｏｃ−Ｆ−ＧＡＰ）を形成してよく、Ｆｍｏｃ脱保護後、ＧＡＰ保護フェニルアラニンの現遊離Ｎ末端を保護Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨのカルボン酸部分（保護Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨの分子構造は、図３に見られ得る）とカップリングさせてよい。得られた構造は、Ｒｉｎｋ  アミド分子のＮ末端で脱保護することができ、次いで、遊離Ｎ末端は、カップリング反応に関与して、所与のペプチド配列における１番目のアミノ酸とのペプチド結合を形成することができる。次いで、ペプチド合成は、ＣからＮ方向に進むことができ、ＲＰＧは、成長中のペプチドのＣ末端保護を提供する。Ｃ末端保護基としてのＲＰＧは、側鎖保護を提供する開示のＧＡＰ分子のいずれかと、またはＮ末端および側鎖保護に利用可能な任意の他の保護戦略と、組み合わせて使用することができる。ＲＰＧを、Ｃ末端保護に加えてまたはそれの代わりに、ＲＡＧが使用されるのと同じように、アミノ酸の側鎖を保護するために使用することもできる。
【００３３】
別の非限定的な例において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、ＨＧまたはＨＰＧ等の異なる新規のＧＡＰ分子を、Ｃ末端保護に利用することができる。これらのＧＡＰ分子の合成は、図５において見ることができ、これらの分子は、ペプチドのＣ末端に結合して、切断時にＣ末端アミドを形成することなく、酸に不安定なＣ末端保護を可能にすることができる（図６を参照）。アミノ酸のＣ末端を保護することの代わりにまたはそれに加えて、ＨＧおよび／またはＨＰＧは、アスパラギン酸、システイン、セリン、トレオニン、チロシンおよびグルタミン酸を含むがこれらに限定されないアミノ酸残基の側鎖に結合して、溶解度制御を支援することもできる（図６を参照）。次いで、ペプチド合成は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略等の、しかし、これに限定されない無数の保護戦略を利用して、ＣからＮ方向に進むことができる。
【００３４】
別の非限定的な例示的な実施形態において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、図７に見られる通り、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（すなわちＮＨ２ＰｈＤｐｐ）の合成から始まることができる。具体的には、ＮＨ２ＰｈＤｐｐの合成は、４−ブロモニトロベンゼンから始まり、エーテル系溶媒中のＮ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）を用いて超低温（−１００から−３０℃）および室圧で活性化され、有機リチウム試薬を形成することができる。次いで、この試薬を、クロロジフェニルホスフィンをゆっくりと添加してインサイチュで反応させることができ、これが、過酸化水素によるホスフィン酸化ならびにＨ２および１０％Ｐｄ／Ｃによるニトロ基還元後、ＮＨ２ＰｈＤｐｐを生じさせることになる。次いで、この分子は、非限定的な例において、Ｒｉｎｋ  アミド−ＯＨに結合することができ（図８、１８を参照）、得られたＧＡＰ分子は、図３と同様にペプチドのＣ末端に、および／または図４と同様にアスパラギン酸またはグルタミン酸の側鎖に結合することができる。アスパラギン酸またはグルタミン酸については、それぞれ保護アスパラギンまたはグルタミンを生成させる。別の非限定的な例において、別の新規のＧＡＰ分子は、図９に見られる通り、直接またはアミンベースの中間物を経由してのいずれかで、ＮＨ２ＰｈＤｐｐの、リンカーのカルボン酸部分（ここでは、ＨＭＰＡ）との反応を介して合成することができる。次いで、得られたＧＡＰ分子は、図６に見られる通り、ペプチドのＣ末端ならびに／またはアスパラギン酸、システイン、セリン、トレオニンおよびグルタミン酸の側鎖に結合することができる。次いで、ペプチド合成は、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ戦略等の、しかし、これに限定されない無数の保護戦略を利用して、ＣからＮ方向に進むことができる。
【００３５】
上記の非限定的な例のすべてについて、ＨＯＢｎＤｐｐ、ＮＨ２ＰｈＤｐｐ、または任意の他のＧＡＰ分子は、ジクロロメタン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフランおよび炭酸プロピレンを含むがこれらに限定されない若干数の異なる溶媒中で、アミノ酸残基のＣ末端にまたは側鎖に結合することができる。本明細書において記述されているカップリング反応のいずれについても、ＧＡＰ分子合成であるか、ＧＡＰ分子の合成されるペプチドの最初のアミノ酸への結合であるかにかかわらず、ＴＦＦＨ、ＴＢＴＵ、ＨＢＴＵ、ＣＯＭＵまたはＥＤＣＩを含むがこれらに限定されない無数の異なるカップリング試薬を使用することができる。
【００３６】
次いで、非限定的な例示的な実施形態として、および上記で論じた例のいずれかまたはそれらの任意の組合せを用いて、ＳｏｌＰＰＳを、Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ化学等によって、ＣからＮ方向に遂行することができる。１番目のおよびそれに続くアミノ酸のためのＦｍｏｃ基の脱保護は、ジエチルアミン、ＤＢＵ（ジアザビシクロウンデセン）、ピペリジン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンおよび他のアルキルアミンを含む無数の脱保護試薬を用いて行うことができ、追加のカップリング反応を実施して、ペプチド鎖を成長させることができる。各カップリング反応後、異なるクエンチング剤を使用して、過剰な活性化アミノ酸を無効化し、得られた分子に所望の溶解度特性を与えることができる。非限定的な例において、デシルアミンを使用して、活性化されたアミノ酸をクエンチし、得られた分子のアルカン溶媒への溶解度を増大させることができる。続いて、反応溶媒に応じて、液液抽出技術または選択的沈殿を実施して、反応混合物を精製することができる。本明細書に開示される新規のＧＡＰ分子は、溶解度制御を可能にし、かつ、新規のＳｏｌＰＰＳ方法を可能にする。ここで、選択的沈殿または抽出がアミノ酸およびフルベン不純物（すなわちＮＦＭＰ）を有効に除去する。所望のペプチド配列の最後のアミノ酸がカップリングされた後、非限定的な例において、適切なＴＦＡカクテルによる全体的な脱保護を実施して、Ｃ末端および適切な側鎖から酸に不安定なＧＡＰ分子を除去することができる；そのような脱保護は、ｔＢｕベースの側鎖保護基等の、他の酸に不安定な側鎖保護基を除去することもできる。この新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、ワンステップの全体的な脱保護を可能にして、天然ペプチド配列を生成し、Ｃ末端保護基を除去するための水素化または加水分解のような追加の反応を回避する。加えて、ＲＡＧ等のＧＡＰ分子が使用される場合、ＴＦＡ切断中にＣ末端アミドが形成され得、そのような修飾に通常は必要とされるであろう合成後反応を首尾よく回避する。加えて、本明細書に開示されるこれらの新規のＧＡＰ分子は、ペプチド合成中に安定なままであり、ＤＫＰ形成による偶発的な加水分解も除去もない。
【００３７】
１つの非限定的な実施形態において、これらの新規のＧＡＰ分子を使用して、任意の所与のペプチドのＮ末端およびリジンを含むがこれに限定されないある特定のアミノ酸残基のアミンベースの側鎖を保護することができる。非限定的な例において、ＨＰＧおよびジイミダゾールカルボニルを、ＤＣＭ等の適切な反応溶媒に溶解し、室温および室圧で１時間以上にわたって軽く撹拌する。次いで、アミンを反応混合物に室温および室圧で添加して、ＨＰＧ保護カルバメート生成物を生成する（図１７を参照）。
【００３８】
別の非限定的な実施形態において、新規のＳｏｌＰＰＳ方法は、新規のＧＡＰ分子保護基の合成から始まることができる。ここで、ＨＯＢｎＤｐｐ、ＮＨ２ＰｈＤｐｐまたはその誘導体は、任意の所与のリンカー分子のカルボン酸部分と直接反応することができる。その例は、図１８においておよび以下の表において見ることができる。
【表１】
2021531326.tif 000011
【００３９】
そのような反応の例は、図３、８、９において見ることができる。次いで、これらの得られたＧＡＰ分子を、任意の所与のアミノ酸に結合して、Ｃ末端保護（図３のように）、側鎖保護（図４のように）またはＮ末端保護（図１７において見られるものと同様の反応）を容易にすることができる。別の非限定的な例において、新規のＧＡＰ分子は、ＨＯＢｎＤｐｐまたはその誘導体を任意の所与のアミノ酸と反応させることによって、合成することができ、続いて、図５および９において見ることができるように、カルボン酸部分における任意の所与のリンカー分子と反応する。得られたＧＡＰ分子は、Ｃ末端保護（図３のように）、側鎖保護（図４のように）またはＮ末端保護（図１７と同様に）に使用することができる。
【００４０】
薬理学的に興味深い、生物学的に活性なペプチドビバリルジンの合成戦略は、本明細書に開示されるＳｏｌＰＰＳの新規の方法の非限定的な好ましい実施形態として示される。図６は、新規のＧＡＰ分子ＨＰＧを、不特定のアミノ酸のＣ末端に結合するための概略を描写するものであり、この概略に準拠して、Ｆｍｏｃ−ロイシン−ＯＨのＣ末端保護は図１０に示す化合物を形成する。この特定の実施形態において、ＨＰＧは、Ｃ末端アミド形成を容易にすることなく、合成後の酸に不安定なＣ末端脱保護を可能にするためのＣ末端保護基として選択される。この最初のステップに続いて、標準的なＦｍｏｃ／ｔＢｕ化学を実行してＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨをカップリングさせ、Ｆｍｏｃ保護ジペプチドを形成する。続いて、アミノ酸側鎖保護について図６に示す概略に準拠して、成長中のペプチドに組み込む前にＨＰＧによりＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−Ｏアリルの側鎖を保護し、図１１に示す化合物をもたらす。Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＨＰＧ）−ＯアリルのＣ末端のアリル脱保護は、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４およびトリイソプロピルまたはフェニルシランによる処理（Ｉｓｉｄｒｏ−Ｌｌｏｂｅｔ  ２００９を参照）によって実施され、得られた分子の活性化およびペプチドとのカップリングが続いて実施される。このプロセスをもう一度繰り返して、次のＨＰＧ保護グルタミン酸残基を結合させて、図１２に示すＦｍｏｃ保護テトラ−ペプチドを生成する。標準的なＦｍｏｃ／ｔＢｕペプチド合成を実施して、プロリンおよびイソロイシンを添加し、上記で論じた手順を実施して、次の２個のグルタミン酸残基を添加し、続いて、フェニルアラニンを添加する。アスパラギン酸残基をＨＰＧで保護し、グルタミン酸と同じように図６に示す概略に準拠して添加し、その後にグリシン残基を添加する。
【００４１】
別の好ましい実施形態において、新規のＧＡＰ分子ＲＡＧをＦｍｏｃ−Ａｓｐ−Ｏアリルと反応させて、図１３に示す化合物Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＲＡＧ）−Ｏアリルを生成する。その化合物のアリル脱保護を実施し、続いて、それを活性化し、ペプチド鎖とカップリングさせて、図１４に示すＦｍｏｃ保護ペプチドを生成する。続いて、標準的なＦｍｏｃ／ｔＢｕペプチド合成を行って、４個のグリシン、プロリン、アルギニン、別のプロリン、およびＤ−フェニルアラニンを添加し、図１５に示されるように、完全に保護されたビバリルジンペプチドを生成する。
【００４２】
この特定の実施形態において、完全に保護されたビバリルジンのＦｍｏｃ脱保護後、ＴＦＡカクテル（すなわち９０％ＴＦＡ、５％Ｈ２Ｏ、５％トリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ））によるワンステップの全体的な脱保護を実施して、側鎖保護基（新規のＧＡＰ分子を含む）およびＨＰＧＣ末端保護基のすべてを切断することができる（図１６を参照）。この全体的な脱保護中に、ＲＡＧ保護アスパラギン酸も、脱保護されたアスパラギンに変換される。ＴＦＡカクテルによる全体的な脱保護により生じる分子は、天然のビバリルジンである。
【００４３】
Ｆｍｏｃ脱保護およびカップリングのための一般的な手順：炭酸プロピレン（ＰＣ）中で実行される新規のＳｏｌＰＰＳ方法について：炭酸プロピレン（２００ｍＭ）に予め溶解した、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＯＢｎＤｐｐ、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＨＰＧ、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＲＡＧ、または任意のＧＡＰ保護基によりＣ末端が保護された任意のアミノ酸に、脱保護塩基およびオクタンチオールを添加し、続いて、アルカン二重層とともに室温で１５分間にわたって撹拌する。次いで、反応混合物を、新鮮なアルカン溶媒で２回（×２）、次いで飽和塩化アンモニウム水溶液で３回洗浄し、次いで乾燥させる。別個の炭酸プロピレン溶液中、３．０当量（ｅｑ．）のＴＢＴＵまたはＴＦＦＨ、３．０ｅｑのＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨおよび３．０ｅｑ．のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、反応物を７分間にわたって撹拌する。次いで、この溶液を、Ｈ−（ＡＡ）ｎ−（ＧＡＰ分子）を含有する予め乾燥させたＰＣ溶液に添加し、１０〜６０分間にわたって撹拌しながらカップリングさせる。次いで、長鎖（線形に連結した１０から１８個の炭素を有する、すなわち、Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族チオール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アルコール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アミン、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族セレノール、脂肪族ポリアミンまたは脂肪族ポリアルコール等の過剰のクエンチング剤を添加する。次いで、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で３回洗浄し、次いで乾燥させて、ＰＣ溶液中の伸長されたペプチドを生じさせる。このプロセスを必要に応じて繰り返して、所望の配列および長さを持つペプチドを生成する。ジクロロメタンまたは酢酸エチル中で実行される新規のＳｏｌＰＰＳ方法について：ＤＣＭまたは酢酸エチル（１００ｍＭ）に予め溶解した、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＯＢｎＤｐｐ、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＨＰＧ、Ｆｍｏｃ−（ＡＡ）ｎ−ＲＡＧ、または任意のＧＡＰ保護基によりＣ末端が保護された任意のアミノ酸に、脱保護塩基を添加し、続いて、室温で１０分間にわたって撹拌する。次いで、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液で３回、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で３回洗浄し、次いで乾燥させる。別個のＤＣＭまたは酢酸エチル溶液中、２．０ｅｑのＴＢＴＵまたはＴＦＦＨ、２．０ｅｑのＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨおよび５．０ｅｑ．のＤＩＰＥＡを添加し、反応物を７分間にわたって撹拌する。次いで、この溶液を、Ｈ−（ＡＡ）ｎ−（ＧＡＰ分子）を含有する予め乾燥させたＤＣＭまたは酢酸エチル溶液に添加し、１０〜６０分間にわたって撹拌しながらカップリングさせる。次いで、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族チオール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アルコール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アミン、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族セレノール、脂肪族ポリアミンまたは脂肪族ポリアルコール等の過剰のクエンチング剤を添加する。次いで、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で３回洗浄し、次いで乾燥させて、ＤＣＭまたは酢酸エチル溶液中の伸長されたペプチドを生じさせる。このプロセスを必要に応じて繰り返して、所望の配列および長さを持つペプチドを生成する。
【００４４】
ＥＤＣＩカップリングのための一般的な手順：アミノ酸またはペプチドの脱保護されたＮ末端を含有する反応混合物を、氷浴中で冷却する。続いて、そのような遊離Ｎ末端とカップリングされる２ｅｑのアミノ酸を、反応混合物に添加し、続いて、２ｅｑのＥＤＣＩを添加する。得られた混合物を氷浴から取り出し、１時間にわたって撹拌し、次いで、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族チオール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アルコール、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族アミン、長鎖（Ｃ１０〜Ｃ１８）脂肪族セレノール、脂肪族ポリアミンまたは脂肪族ポリアルコール等の過剰のクエンチング剤を添加する。次いで、反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液で３回、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で３回洗浄し、次いで乾燥させる。
【００４５】
機能性は、全体または一部において、現在公知のまたは公知になる方式で、複数の成分間で分配されてもよい。故に、本明細書において記述されている機能、特徴および優先事項を実現する際に、無数の組合せが可能である。その上、本開示の範囲は、現在および今後当業者によって理解されるように、記述されている特徴を行うための従来公知の方式、ならびに本明細書に記載されている方法、組成物または化合物に行い得る変形および修正を網羅する。
【００４６】
さらに、本開示において図表、概略またはフローチャートとして提示および記述されている方法の実施形態（図等）は、技術のより完全な理解を提供するために、例として提供される。開示される方法は、本明細書で提示される動作および論理フローに限定されない。代替的な実施形態が企図されており、そこでは種々の動作の順序が変更されたり、より大きい動作の一部であるとして記述されているサブ動作が独立して実施される。種々の実施形態を本開示の目的のために記述してきたが、そのような実施形態は、本開示の教示をそれらの実施形態に限定するとみなされるべきではない。本開示において記述されているシステムおよび方法の範囲内に留まる結果を取得するために、種々の変更および修正を、上述した要素および動作に行い得る。
追加の実施形態
【００４７】
特許請求される発明の追加の実施形態は、以下を含む：
【００４８】
１．液相ペプチド合成のための保護基であって、保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有し；
化学式１が、
【化９】
2021531326.tif 000012
であり；
化学式２が、
【化１０】
2021531326.tif 000013
であり；
化学式３が、
【化１１】
2021531326.tif 000014
であり；
化学式４が、
【化１２】
2021531326.tif 000015
であり；
化学式５が、
【化１３】
2021531326.tif 000016
であり；
化学式６が、
【化１４】
2021531326.tif 000017
であり；
化学式７が、
【化１５】
2021531326.tif 000018
であり；
化学式８が、
【化１６】
2021531326.tif 000019
である。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、メチル基（−Ｍｅ）およびメトキシ基（−ＯＭｅ）からなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシアセチル（「ＨＭＰＡ」）、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシブタノイル（「ＨＭＰＢ」）、４−（ヒドロキシメチル）ベンゾイル（「ＨＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）ベンゾイル（「ＭＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）フェノキシアセチル（「ＭＭＰＡ」）、４−（アミノメチル）フェノキシアセチル（「ＡＭＰＡ」）、４−（３，３−ジメチル−３−ヒドロキシプロピル）フェノキシアセチル（「ＤＭＰＰＡ」）、２−（４−（アミノ（２，４−ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）アセチル（「Ｒｉｎｋ  アミド」）、４−（（９−アミノ−９Ｈ−キサンテン−３−イル）オキシ）ブタノイル（「キサンテニル」）、５−（５−アミノ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−３−イル）ペンタノイル（「ＴＣＡ」）および３−（４−（クロロ（２−クロロフェニル）（フェニル）メチル）フェニル）プロパノイル（「２−クロロトリチル」）からなる群から選択される］
【００４９】
２．項目１の保護基であって、保護基が、化学式１、化学式４、化学式５および化学式７からなる群から選択され；Ｒが、アミノ酸の側鎖である。
【００５０】
３．項目１の保護基であって、Ｒが、−Ｈ、メチル、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、ベンジル、４−（１Ｈ−イミダゾリル）メチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、イソブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、プロピル基［プロピル基の１位は、Ｒ基と同じ位置に結合しており、プロピル基の３位は、窒素に結合している］、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）２、−ＣＨ２ＯＨ、１−ヒドロキシエチル、イソプロピル、４−ヒドロキシベンジルおよび３−（１Ｈ−インドリル）メチルからなる群から選択される。
【００５１】
４．液相ペプチド合成を実施する方法であって、
第１の保護基を、第１のアミノ酸に結合させて、第１の保護アミノ酸を提供するステップであり、第１の保護基が、項目１の保護基である、ステップと；
第１の保護アミノ酸、または第１のアミノ酸を別の分子と連結することによって形成されたペプチド上で、カップリング反応を実施するステップと
を含む。
【００５２】
５．項目４の方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸のＣ末端に結合している。
【００５３】
６．項目４の方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸の側鎖に結合している。
【００５４】
７．項目４の方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸のＮ末端に結合している。
【００５５】
８．項目４の方法であって、第２の保護アミノ酸を第１の保護アミノ酸とカップリングさせるステップを含み、第２の保護アミノ酸が第２の保護基および第２のアミノ酸を含み、第２のアミノ酸が側鎖を含み、第２の保護基が第２のアミノ酸の側鎖に結合しており、第２の保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有する。
【００５６】
９．項目８の方法であって、第１の保護基を結合させるステップが、第１の保護基を、第１のアミノ酸のＣ末端、第１のアミノ酸のＮ末端、または第１のアミノ酸の側鎖に結合させることを含む。
【００５７】
１０．液相ペプチド合成のための保護基を形成する方法であって、
ベンジルジフェニルホスフィンオキシド（ＨＯＢｎＤｐｐ）、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（ＮＨ２ＰｈＤｐｐ）またはその誘導体を、（ｉ）直接、リンカー分子と、（ｉｉ）アミノ酸を介してリンカー分子とまたは（ｉｉｉ）アミノ酸誘導体を介してリンカー分子とカップリングさせるステップ
を含む。
【００５８】
１１．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化１７】
2021531326.tif 000020
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式１：
【化１８】
2021531326.tif 000021
によって定義される。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００５９】
１２．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化１９】
2021531326.tif 000022
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式２：
【化２０】
2021531326.tif 000023
によって定義される。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６０】
１３．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化２１】
2021531326.tif 000024
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式３：
【化２２】
2021531326.tif 000025
によって定義される。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６１】
１４．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化２３】
2021531326.tif 000026
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、ここで、保護基が、化学式４：
【化２４】
2021531326.tif 000027
によって定義される。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６２】
１５．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化２５】
2021531326.tif 000028
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式５：
【化２６】
2021531326.tif 000029
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６３】
１６．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化２７】
2021531326.tif 000030
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式６：
【化２８】
2021531326.tif 000031
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６４】
１７．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化２９】
2021531326.tif 000032
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式７：
【化３０】
2021531326.tif 000033
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６５】
１８．項目１０の方法であって、カップリングステップが、
【化３１】
2021531326.tif 000034
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式８：
【化３２】
2021531326.tif 000035
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００６６】
１９．液相ペプチド合成のための保護基であって、保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有し；
化学式１が、
【化３３】
2021531326.tif 000036
であり；
化学式２が、
【化３４】
2021531326.tif 000037
であり；
化学式３が、
【化３５】
2021531326.tif 000038
であり；
化学式４が、
【化３６】
2021531326.tif 000039
であり；
化学式５が、
【化３７】
2021531326.tif 000040
であり；
化学式６が、
【化３８】
2021531326.tif 000041
であり；
化学式７が、
【化３９】
2021531326.tif 000042
であり；
化学式８が、
【化４０】
2021531326.tif 000043
である。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、メチル基（−Ｍｅ）およびメトキシ基（−ＯＭｅ）からなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシアセチル（「ＨＭＰＡ」）、４−（ヒドロキシメチル）フェノキシブタノイル（「ＨＭＰＢ」）、４−（ヒドロキシメチル）ベンゾイル（「ＨＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）ベンゾイル（「ＭＭＢ」）、４−（メルカプトメチル）フェノキシアセチル（「ＭＭＰＡ」）、４−（アミノメチル）フェノキシアセチル（「ＡＭＰＡ」）、４−（３，３−ジメチル−３−ヒドロキシプロピル）フェノキシアセチル（「ＤＭＰＰＡ」）、２−（４−（アミノ（２，４−ジメトキシフェニル）メチル）フェノキシ）アセチル（「Ｒｉｎｋ  アミド」）、４−（（９−アミノ−９Ｈ−キサンテン−３−イル）オキシ）ブタノイル（「キサンテニル」）、５−（５−アミノ−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−３−イル）ペンタノイル（「ＴＣＡ」）および３−（４−（クロロ（２−クロロフェニル）（フェニル）メチル）フェニル）プロパノイル（「２−クロロトリチル」）からなる群から選択される］
【００６７】
２０．項目１９の保護基であって、保護基が、化学式１、化学式４、化学式５および化学式７からなる群から選択され；Ｒが、アミノ酸の側鎖である。
【００６８】
２１．項目１９および２０のいずれかの保護基であって、Ｒが、−Ｈ、メチル、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、ベンジル、４−（１Ｈ−イミダゾリル）メチル、−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、イソブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、プロピル基［プロピル基の１位は、Ｒ基と同じ位置に結合しており、プロピル基の３位は、窒素に結合している］、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）２、−ＣＨ２ＯＨ、１−ヒドロキシエチル、イソプロピル、４−ヒドロキシベンジルおよび３−（１Ｈ−インドリル）メチルからなる群から選択される。
【００６９】
２２．液相ペプチド合成を実施する方法であって、
第１の保護基を、第１のアミノ酸に結合させて、第１の保護アミノ酸を提供するステップであり、第１の保護基が、請求項１の保護基である、ステップと；
第１の保護アミノ酸、または第１のアミノ酸を別の分子と連結することによって形成されたペプチド上で、カップリング反応を実施するステップと
を含む。
【００７０】
２３．項目２２の方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸のＣ末端に結合している。
【００７１】
２４．項目２２および２３のいずれかの方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸の側鎖に結合している。
【００７２】
２５．項目２２、２３および２４のいずれか一項の方法であって、第１の保護基が、第１のアミノ酸のＮ末端に結合している。
【００７３】
２６．項目２２、２３、２４および２５のいずれか一項の方法であって、第２の保護アミノ酸を第１の保護アミノ酸とカップリングさせるステップを含み；
第２の保護アミノ酸が第２の保護基および第２のアミノ酸を含み、第２のアミノ酸が側鎖を含み、第２の保護基が第２のアミノ酸の側鎖に結合しており、第２の保護基が、化学式１、化学式２、化学式３、化学式４、化学式５、化学式６、化学式７および化学式８からなる群から選択される化学式を有する。
【００７４】
２７．項目２２、２３、２４、２５および２６のいずれか一項の方法であって、第１の保護基を結合させるステップが、第１の保護基を、第１のアミノ酸のＣ末端、第１のアミノ酸のＮ末端、または第１のアミノ酸の側鎖に結合させることを含む。
【００７５】
２８．液相ペプチド合成のための保護基を形成する方法であって、
ベンジルジフェニルホスフィンオキシド（ＨＯＢｎＤｐｐ）、アニリンジフェニルホスフィンオキシド（ＮＨ２ＰｈＤｐｐ）またはその誘導体を、（ｉ）直接リンカー分子と、（ｉｉ）アミノ酸を介してリンカー分子とまたは（ｉｉｉ）アミノ酸誘導体を介してリンカー分子とカップリングさせるステップ
を含む。
【００７６】
２９．項目２８の方法であって、カップリングステップが、
【化４１】
2021531326.tif 000044
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式１：
【化４２】
2021531326.tif 000045
によって定義される。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００７７】
３０．項目２８および２９のいずれかの方法であって、カップリングステップが、
【化４３】
2021531326.tif 000046
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式２：
【化４４】
2021531326.tif 000047
によって定義される。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００７８】
３１．項目２８、２９および３０のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化４５】
2021531326.tif 000048
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式３：
【化４６】
2021531326.tif 000049
によって定義される。
［式中、
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００７９】
３２．項目２８、２９、３０および３１のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化４７】
2021531326.tif 000050
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式４：
【化４８】
2021531326.tif 000051
によって定義される。
［式中、
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００８０】
３３．項目２８、２９、３０、３１および３２のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化４９】
2021531326.tif 000052
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式５：
【化５０】
2021531326.tif 000053
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００８１】
３４．項目２８、２９、３０、３１、３２および３３のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化５１】
2021531326.tif 000054
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式６：
【化５２】
2021531326.tif 000055
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００８２】
３５．項目２８、２９、３０、３１、３２、３３および３４のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化５３】
2021531326.tif 000056
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式７：
【化５４】
2021531326.tif 000057
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒは、保護アミノ酸の既知の側鎖および非保護アミノ酸の既知の側鎖からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
【００８３】
３６．項目２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４および３５のいずれか一項の方法であって、カップリングステップが、
【化５５】
2021531326.tif 000058
をＬ−ＯＨとカップリングさせて、保護基を形成することを含み、保護基が、化学式８：
【化５６】
2021531326.tif 000059
によって定義される。
［式中、
Ｚは、−Ｈ、−Ｍｅおよび−ＯＭｅからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択され；
Ｌは、ＨＭＰＡ、ＨＭＰＢ、ＨＭＢ、ＭＭＢ、ＭＭＰＡ、ＡＭＰＡ、ＤＭＰＰＡ、Ｒｉｎｋ  アミド、キサンテニル、ＴＣＡおよび２−クロロトリチルからなる群から選択される］
関連参考文献
【００８４】
以下の参考文献は、例として参照することにより、本明細書に組み込まれる。
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【図１Ａ】
2021531326.tif 000084
【図１Ｂ】
2021531326.tif 000085
【図２】
2021531326.tif 000086
【図３】
2021531326.tif 000087
【図４】
2021531326.tif 000088
【図５】
2021531326.tif 000089
【図６】
2021531326.tif 000090
【図７】
2021531326.tif 000091
【図８】
2021531326.tif 000092
【図９】
2021531326.tif 000093
【図１０】
2021531326.tif 000094
【図１１】
2021531326.tif 000095
【図１２】
2021531326.tif 000096
【図１３】
2021531326.tif 000097
【図１４】
2021531326.tif 000098
【図１５】
2021531326.tif 000099
【図１６】
2021531326.tif 000100
【図１７】
2021531326.tif 000101
【図１８】
2021531326.tif 000102
【図１９】
2021531326.tif 000103
【国際調査報告】
2021531326.tif 000104