(57)【要約】がん治療のための組み合わせ方法及び組成物が本明細書に提供される。この組み合わせは、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を含む免疫系の複数のアームを修飾して、がんを治療する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを有する対象の治療方法であって、前記対象に先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を投与することを含む、前記治療方法。
【請求項２】
前記先天性免疫修飾剤は、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタット、その類似体、プロドラッグ、及び立体異性体、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、水和物、及び溶媒からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、メシル酸タラボスタットである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ−４アンタゴニストのいずれかである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２アンタゴニストから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＡＮＡ０１１、ＡＵＮＰ−１２、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＫＤ０３３、ペンブロリズマブ、ＭＣＬＡ−１３４、ｍＤＸ４００、ＭＥＤＩ００６８０、ｍｕＤＸ４００、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、ＰＦ−０６８０１５９１、ＲＥＧＮ−２８１０、ＳＨＲ−１２１０、ＳＴＩ−Ａ１１１０、ＴＳＲ−０４２、ＡＮＢ０１１、２４４Ｃ８、３８８Ｄ４、ＴＳＲ０４２、ＢＣＤ１００、カムレリズマブ、ＪＮＪ６３７２３２８３、ＪＳ００１、スパルタリズマブ、セミプリマブ、ティスレリズマブ、ＸＣＥ８５３、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるＰＤ−１アンタゴニストである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＰＤ−１軸アンタゴニストは、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＣＡ−１７０、デュルバルマブ、ＭＣＬＡ−１４５、ＳＰ１４２、ＳＴＩ−Ａ１０１１、ＳＴＩ−Ａ１０１２、ＳＴＩ−Ａ１０１０、ＳＴＩ−Ａ１０１４、Ａ１１０、ＫＹ１００３、及びアテゾリズマブからなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞刺激剤は、インターロイキン２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ）選択的アゴニストである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記インターロイキン２受容体β選択的アゴニストは、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされたインターロイキン２タンパク質を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記インターロイキン２受容体β選択的アゴニストは、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象にメシル酸タラボスタット、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記メシル酸タラボスタット、前記ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート６ａｖインターロイキン−２は、単一剤形に含まれ、一緒に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記メシル酸タラボスタット、前記ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２は、各々、別々の個々の剤形として投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんは、膵癌、結腸直腸癌、線維肉腫、結腸癌、結腸腺癌または肉腫、非小細胞肺癌、前立腺癌、ホルモン不応性前立腺癌、治療誘発性神経内分泌前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、悪性黒色腫、頭頸部癌、肝臓癌、小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、及び副腎皮質癌からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんは膵癌である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
がんを有する対象の治療に使用するための薬学的組み合わせであって、
ａ）治療有効量の先天性免疫修飾剤、
ｂ）治療有効量の免疫チェックポイント阻害剤、及び
ｃ）治療有効量のＴ細胞刺激剤を含む、前記薬学的組み合わせ。
【請求項１９】
（ａ）前記先天性免疫修飾剤は、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤であり、（ｂ）前記免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ−４アンタゴニストのいずれかであり、（ｃ）前記Ｔ細胞刺激剤は、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされたインターロイキン２タンパク質を含む、請求項１８に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２０】
（ａ）前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩であり、（ｂ）前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び抗ＰＤ−２抗体から選択されるＰＤ−１軸アンタゴニストであり、（ｃ）ポリエチレングリコールにコンジュゲートされた前記インターロイキン２タンパク質は、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２である、請求項１９に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２１】
（ａ）治療有効量のタラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、（ｂ）治療有効量のニボルマブまたはペンブロリズマブ、及び（ｃ）治療有効量の（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２を含む、請求項２０に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２２】
（ａ）治療有効量のメシル酸タラボスタット、（ｂ）治療有効量のニボルマブまたはペンブロリズマブ、及び（ｃ）治療有効量の（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２を含む、請求項２１に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２３】
キットに含まれる、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２４】
膵癌、結腸直腸癌、線維肉腫、結腸癌、結腸腺癌または肉腫、非小細胞肺癌、前立腺癌、ホルモン不応性前立腺癌、治療誘発性神経内分泌前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、悪性黒色腫、頭頸部癌、肝臓癌、小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、及び副腎皮質癌からなる群から選択されるがんを有する対象の治療に使用するための、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２５】
膵癌を有する対象の治療に使用するための、請求項２４に記載の薬学的組み合わせ。
【請求項２６】
腫瘍は、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％のマクロファージ密度を有する、請求項２４に記載の薬学的組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づいて、２０１７年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／５８４，９９９号、２０１８年２月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／６２９，４７３号、２０１８年６月１日に出願された米国仮特許出願第６２／６７９，５７６号、及び２０１８年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／７１２，４５７号に対する優先権の利益を主張し、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。配列リストのコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：ＢＸＴＩ−００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０１８年１１月１２日；ファイルサイズ：４キロバイト）。
【０００３】
本開示は、とりわけ、がんを有する対象を治療するための先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤、ならびに関連する組成物及び方法を含む併用療法に関する。
【背景技術】
【０００４】
国立がん研究所は、アメリカだけで、生涯に３人に１人はがんになると推定している。さらに、がんに罹患している個体の約５０％〜６０％が最終的にこの病気に屈することになる。がん治療が進歩したにもかかわらず、既存の治療モダリティは、依然として特定のがんを適切に制御または治癒することができない。しばしば、最初に抗腫瘍治療に反応する患者が後に再発することがあり、例えば、用いられた治療モダリティの治療上の有用性を排除する様式で腫瘍が突然変異したことが示唆される。突然変異の結果としてのタンパク質の異常変異体の産生に起因して免疫系によって本質的に「異物」として認識されるがん細胞に対する免疫応答を生成するための治療薬の使用は、最近、がん治療レジメンにおいて有望性を示している。
【０００５】
免疫チェックポイント阻害剤は、がん患者、特に非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性黒色腫またはホジキンリンパ腫を有する患者の治療に成功している。チェックポイント阻害剤は、他の種類のがんを有する患者を対象とした臨床試験においても有望性を示している（Ｏ’ｒｅｉｌｌｙ  Ａ  ｅｔ．ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２０１７  Ｊｕｌ；１７（７）：６４７−６５５）。残念ながら、免疫チェックポイント阻害剤の使用は、いくつかの限界を抱えている。例えば、免疫チェックポイント阻害剤で治療された少数の患者のみが強い抗腫瘍応答示し、ほとんどの反応は部分的かつ一時的である。多くの患者は、最初は免疫チェックポイント阻害剤に基づく治療に反応するが、その後、抵抗性経路の出現により再発する。そのような抵抗性経路は、多くの理由によって生じ得るが、主要な理由は、（いわゆる「非炎症性」）腫瘍細胞による非免疫許容性微小環境の生成に起因し得る（Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ＴＦ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１５  Ａｕｇ；４２（４）：６６３−７１；Ｇｉｄｅ  ＴＮ  ｅｔ．ａｌ  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１８  Ｍａｒ  １５；２４（６）：１２６０−１２７０）。報告により、特定の免疫チェックポイント阻害剤の使用が、それらの心毒性副作用に関連する死亡をもたらしたことが示されている（Ｍｏｓｌｅｈｉ  ＪＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．２０１８  Ｍａｒ  １０；３９１（１０１２４）：９３；Ｈｅｉｎｚｅｒｌｉｎｇ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１６  Ａｕｇ  １６；４：５０）。
【０００６】
最近、２つの免疫チェックポイント阻害剤、イピリムマブ及びニボルマブの組み合わせにより、黒色腫患者の奏効率が、それぞれの単剤療法で見られた１１％及び３２％からこの組み合わせでは６０％まで増加することが示された（Ｐｏｓｔｏｗ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０１５  Ｍａｙ  ２１；３７２（２１）：２００６−１７）。
【０００７】
これらの進歩にもかかわらず、新しく効果的な抗がん治療レジメンを特定し、提供する必要性が残っている。本開示は、この及び他の必要性に対応しようとするものである。
【発明の概要】
【０００８】
本開示は、がんを治療するための改善された免疫療法モダリティを提供する。より具体的には、免疫系の適応アーム及び免疫系の先天性アームの両方を利用する治療的組み合わせ、組成物及び方法が記載され、例示的な動物モデルにおいて顕著な抗腫瘍効果を提供するのに有効であることが示される。したがって、本開示は、がんを有する対象を治療するための特有の組み合わせを提供し、その組み合わせは、（前述のように）免疫系の複数のアームを修飾し、それによってがん性腫瘍に対する免疫系に基づく強化された攻撃を容易にするのに有効であり、堅牢な抗腫瘍効果を提供する。理論に拘束されることなく、Ｔ細胞経路の活性化はＴ細胞腫瘍浸潤を促進し、それが免疫チェックポイント阻害剤活性の阻害と組み合わさって、向上した全身抗腫瘍活性を促進すると考えられる。したがって、これら３つの別個の治療軸を単一の治療レジメンに集合的に組み合わせることによって、免疫系の広範かつ多様な刺激をもたらし、有意な抗腫瘍応答を誘発できることが出願人によって認識されている。
【０００９】
より具体的には、第１の態様において、がんを有する対象を治療するための治療方法が本明細書に提供され、該方法は、対象に先天性免疫修飾剤（すなわち、主に先天性免疫系を刺激する薬剤）、免疫チェックポイント阻害剤（すなわち、がん進行性腫瘍微小環境によって利用される免疫回避に関与する免疫チェックポイントを阻害する薬剤）、及びＴ細胞刺激剤（すなわち、主にエフェクターＴ細胞からなる免疫系の適応アームを活性化するのに有効な薬剤）を投与することを含む。
【００１０】
本方法のいくつかの実施形態において、有効量の先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤の各々が、任意選択的に１つ以上の追加の抗がん剤、例えば１つ以上の先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤及び／またはＴ細胞刺激剤とともに投与される。
【００１１】
本方法のいくつかの具体的な実施形態において、先天性免疫修飾剤は、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤であり、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ−４アンタゴニストであり、Ｔ細胞刺激剤は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）であるか、またはその修飾形態であり、例えば、インターロイキン−２が複数のポリエチレングリコール部分の放出可能な共有結合によって修飾されたインターロイキン−２（例えば、アルデスロイキン）のプロドラッグである。さらに１つ以上の追加の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、インターロイキン−２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ）選択的アゴニストである。
【００１２】
第２の態様において、対象における免疫応答を増強する方法であって、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を含む有効量の治療剤の組み合わせを投与することを含み、対象はがんと診断されている、方法が本明細書に提供される。
【００１３】
さらに第３の態様において、例えば、がんを有する患者を治療するための（ａ）治療有効量の先天性免疫修飾剤、（ｂ）治療有効量の免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）治療有効量のＴ細胞刺激剤を含む薬学的組み合わせ（本明細書において３剤併用とも称される）が提供される。
【００１４】
さらに第４の態様において、本開示は、（ａ）有効量の先天性免疫修飾剤、（ｂ）有効量の免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）有効量のＴ細胞刺激剤を、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤とともに含む、医薬組成物を提供する。
【００１５】
前述の方法または組み合わせの使用に関連する１つ以上の実施形態において、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤は、それぞれ、免疫調節量で、同時に（別々にまたは単一医薬製剤の一部として一緒に）、連続的にかつ任意の適切な順序で対象に投与されるか、または同じ及び／もしくは異なる投与経路を介して別々に（例えば断続的に）投与される。
【００１６】
さらにいくつかのさらなる実施形態において、別々に投与される場合、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤の各々は、例えば、適切な投与経路を介した投与に好適な形態で、医薬組成物中に含まれる。
【００１７】
さらにいくつかの追加の実施形態において、治療は、単一の治療サイクルを含んでもよいか、または複数の（すなわち、２つ以上の）治療サイクルを含んでもよく、複数の治療サイクルは、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤の各々の投与を含んでもよいか、または最初に投与された免疫調節剤の各々よりも少ない投与を含んでもよい。
【００１８】
いくつかの好ましい実施形態において、対象はヒト対象である。
【００１９】
いくつかの追加の実施形態において、対象は、免疫チェックポイント阻害剤療法に対して以前に非応答性であったヒト対象である。
【００２０】
さらにいくつかのさらなる実施形態において、好ましい組み合わせ、組成物、または方法は、（ａ）メシル酸タラボスタット、（ｂ）ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及び（ｃ）インターロイキン−２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ）選択的アゴニスト、例えば、ＰＥＧ化インターロイキン−２（すなわち、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされたインターロイキン−２タンパク質）を含む。
【００２１】
追加の薬剤及び／または療法は、本明細書に記載の３剤併用療法と組み合わせて投与または提供され得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の治療剤は、細胞毒素及び／または化学療法剤を含む。
【００２２】
さらにいくつかのさらなる実施形態において、がんは、乳癌、造血器癌（ＡＭＬ及びＣＬＬ等）、頭頸部癌、肉腫、線維肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、膵癌、皮膚癌、及び肺癌から選択される。１つ以上の具体的な実施形態において、がんは膵癌である。さらにいくつかのさらなる実施形態において、がんは結腸直腸癌である。さらにいくつかの他の実施形態において、がんは肉腫である。１つ以上の関連する実施形態において、がんは線維肉腫である。いくつかの追加の実施形態において、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【００２３】
さらに別の態様において、対象におけるがんを治療するためのキットが提供され、該キットは、（ａ）単回用量または複数回用量の先天性免疫修飾剤、（ｂ）単回用量または複数回用量の免疫チェックポイント阻害剤、（ｂ）単回用量または複数回用量のＴ細胞刺激剤、ならびに（ｄ）本明細書に記載の方法に従って、前記先天性免疫修飾剤、前記免疫チェックポイント阻害剤、及び前記Ｔ細胞刺激剤を使用するための指示書を含む。
【００２４】
キットのいくつかの実施形態において、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、連続投与、別個の投与、及び／または同時投与に好適な形態（単数または複数）で提供される。
【００２５】
方法、組み合わせ、組成物、キット等の追加の実施形態は、以下の説明、実施例、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。前述及び以下の説明から理解され得るように、本明細書に記載されるあらゆる特徴、及びそのような特徴の２つ以上のあらゆる組み合わせは、そのような組み合わせに含まれる特徴が互いに矛盾しないことを条件として、本開示の範囲内に含まれる。加えて、任意の特徴または特徴の組み合わせは、任意の実施形態から具体的に除外され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例１に記載される膵癌のＰａｎ０２シンジェニックマウスモデルにおいて２８日目まで評価した、メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１アンタゴニスト（抗ＰＤ−１抗体）、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（本明細書において「ＲＳＬＡＩＬ−２」とも称される）の様々な組み合わせ、ならびに単剤の各々で処理したマウスにおける、処理後の時間に対する平均腫瘍体積のプロットである。群１＝ビヒクル対照、群２＝メシル酸タラボスタット（２０ｍｃｇ  ｑｄ）、群３＝ＲＳＬＡＩＬ−２（０．８ｍｇ／ｋｇ；ｑ９ｄ））、群４＝ＰＤ−１アンタゴニスト（１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｗ）、群５＝メシル酸タラボスタット（２０ｍｃｇ  ｑｄ）及びＲＳＬＡＩＬ−２（０．８ｍｇ／ｋｇ；ｑ９ｄ）、群６＝メシル酸タラボスタット（２０ｍｃｇ  ｑｄ）及びＰＤ−１アンタゴニスト（１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｗ）、群７＝ＲＳＬＡＩＬ−２（０．８ｍｇ／ｋｇ；ｑ９ｄ）及びＰＤ−１アンタゴニスト（１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｗ）、及び群８＝メシル酸タラボスタット（２０ｍｃｇ  ｑｄ）、ＲＳＬＡＩＬ−２（０．８ｍｇ／ｋｇ；ｑ９ｄ）、及びＰＤ−１アンタゴニスト（１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｗ）。これらのデータは、様々な例示的組み合わせの顕著な抗腫瘍効果、特に、移植した腫瘍の完全退縮を示した３つ全ての成分の組み合わせの重大な効果を示している（群８）。接種後２９日目までの腫瘍サイズを測定した。３剤併用（群８）は、メシル酸タラボスタット及びＰＤ−１アンタゴニスト（群６）ならびに単剤（群２及び群４）と比較して、ｐ＊値＜０．００１を示す。３剤併用（群８）は、ＰＤ−１アンタゴニスト（群６）及びＲＳＬＡＩＬ−２（群５）とタラボスタットとの組み合わせ、ならびにＰＤ−１アンタゴニスト（群７）及び単剤ＲＳＬＡＩＬ−２（群３）とＲＳＬＡＩＬ−２との組み合わせと比較して、ｐ＃値＜０．０５を示す。メシル酸タラボスタットとＰＤ−１アンタゴニスト（群６）の組み合わせは、ＰＤ−１アンタゴニスト単独と比較してｐ＋値＜０．０５を示す（群４）。
【図２Ａ】膵癌のＰａｎ０２シンジェニックマウスモデルにおいて評価した、メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（「ＲＳＬＡＩＬ−２」）の様々な組み合わせ、ならびに単剤の各々で処理したマウスにおける、処理後の日数に対する平均腫瘍体積のプロットである（第Ｉ相、実施例１、図１にも示される）。腫瘍接種後２８日目に投与を中止した。この組み合わせで処理した群８の全てのマウスが無腫瘍のままであった。また、プロットには、実施例２に記載される処理ナイーブマウスの対照群（群９）と同様に、群８のマウスをＰａｎ０２腫瘍細胞の２回目の接種（３×１０６）で再チャレンジした第２相試験の結果も示されている。マウスの対照群は顕著な腫瘍増殖を示したが、群８の再チャレンジマウスの６匹のうち５匹は、少なくとも２８５日目まで無腫瘍のままであり、第１相での処理が抗腫瘍免疫を刺激したことが示唆された。
【図２Ｂ】第Ｉ相試験（実施例１）の様々な処理群におけるマウスの処理後の日数に対する体重（グラム）のプロットである。
【図２Ｃ】処理群８及び群９の治療後の日数に対する平均腫瘍体積のプロットである。三角は、腫瘍で処理したナイーブマウスを示す。アスタリスクは、腫瘍を増殖させた唯一のマウスを含む、群８の再チャレンジマウスを示す。
【図３Ａ】実施例３（群１、群５、群６、群８）に記載される免疫療法治療を行った３日後（すなわち、腫瘍接種後８日目）に屠殺した動物から得られた腫瘍試料中のＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）発現の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像を含む。画像は、例示的な治療用３剤併用（すなわち、メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理した腫瘍におけるＦＡＰ発現の低下を示す。
【図３Ｂ】前述の、実施例３に記載されるＦＡＰ発現について光学密度（ＯＤ）によって分析した、腫瘍試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像の定量分析（群１〜８）を提供する棒グラフである。グラフは、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）による治療に起因するＦＡＰ＋細胞の減少を示す。
【図４Ａ】実施例３に記載されるように、処理を行った３日後に屠殺した動物（群１、群２、群４、群８）由来の腫瘍試料の好中球（Ｌｙ６Ｇ＋細胞）の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像を提供する。画像は、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）による治療によってもたらされたＬｙ６Ｇ＋細胞の増加を示す。
【図４Ｂ】実施例３に記載される好中球（Ｌｙ６Ｇ＋細胞）の割合について分析した、前述の腫瘍試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像（群１〜８）の定量分析を提供する棒グラフである。グラフは、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理した腫瘍におけるＬｙ６Ｇ＋細胞の増加を示す。
【図４Ｃ】３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）による処理を行った３日後に、マウスの腫瘍への好中球（Ｌｙ６Ｇ＋細胞）流入を裏付けるＩＨＣ画像（図４Ａ、８群）の拡大図である。
【図４Ｄ】実施例３に記載される処理を行った３日後に屠殺した動物（群１、群５、群６、群８）から得られた腫瘍試料中のＣＤ８＋リンパ球浸潤の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像を提供する。画像は、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１ンタゴニスト）で処理したマウス由来の腫瘍におけるＣＤ８＋リンパ球浸潤の増加を示す。
【図５】実施例３に記載されるように、処理を行った３日後に屠殺した動物（群１、群４、群６、群８）由来の腫瘍試料の免疫組織化学（ＩＨＣ）画像を提供する。画像は、例示的な３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理した動物から得られた腫瘍試料中の腫瘍細胞の数の減少を示す（Ｈ＆Ｅ染色）。
【図６Ａ】実施例４に記載されるＰａｎ０２腫瘍を有するマウスへの３剤併用投与の前（処理前）及び７日後（処理後）に採取した血漿に対するサイトカイン／ケモカインの多重アッセイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の結果を提供する。３剤併用投与（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）は、炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ４０、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、及びランテス）の増加をもたらした。
【図６Ｂ】実施例４に記載されるＰａｎ０２腫瘍を有するマウスへの３剤併用投与の前（処理前）及び７日後（処理後）に採取した血漿に対するサイトカイン／ケモカインの多重アッセイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の結果を提供する。３剤併用投与（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）は、血漿中のＧＭ−ＣＳＦ（免疫刺激サイトカイン）の有意な増加をもたらした。
【図６Ｃ】実施例４に記載されるＰａｎ０２腫瘍を有するマウスへの３剤併用投与の前（処理前）及び７日後（処理後）に採取した血漿に対するサイトカイン／ケモカインの多重アッセイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の結果を提供する。データは、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）により、増殖、遊走及び浸潤に関与するタンパク質であるＣＸＣＬ５（ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド）が減少したことを示す。
【図６Ｄ】実施例４に記載されるＰａｎ０２腫瘍を有するマウスへの３剤併用投与の前（処理前）及び７日後（処理後）に採取した血漿に対するサイトカイン／ケモカインの多重アッセイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の結果を提供する。このデータは、３剤併用投与（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）により、Ｔ細胞遊走を誘導するサイトカイン（γインターフェロンによって誘導されるモノカイン（ＭＩＧ）及びマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ１−β））が増加したことを示す。
【図６Ｅ】実施例４に記載されるＰａｎ０２腫瘍を有するマウスへの３剤併用投与の前（処理前）及び７日後（処理後）に採取した血漿に対するサイトカイン／ケモカインの多重アッセイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の結果を提供する。このデータは、３剤併用投与（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）により、記憶Ｔ細胞を誘導するサイトカイン（ＩＬ−７及びＩＬ−１５）が増加したことを示す。
【図７】Ｐａｎ０２腫瘍細胞による２回目の再チャレンジ後、２８９日目に屠殺したマウス（実施例２に記載の３剤併用で処理）由来の脾細胞についてＦＡＣＳ分析データの結果を示す棒グラフである。群ＡのＣＤ６２Ｌ−／ＣＤ４４ｈｉ応答は、実施例５に記載されるＣＤ８＋エフェクター記憶Ｔ細胞応答の発達を裏付けるものである。対照的に、Ｐａｎ０２腫瘍細胞を接種したマウス及び接種を行わなかったナイーブなマウスのセットは、記憶マーカーの有意な生成を示さなかった。
【図８Ａ】実施例６に記載されるＷＥＨＩ  １６４マウス肉腫モデルにおける３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理したマウスの腫瘍接種後の日数に対する平均腫瘍体積のプロットであり、処理マウスにおける完全な腫瘍消失を示す。（＊１３７日目の再チャレンジを示す）。
【図８Ｂ】実施例６に記載されるＷＥＨＩ  １６４マウス肉腫モデルにおける３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理したマウスの腫瘍再チャレンジ後日数に対する平均腫瘍体積のプロットである。記憶抗腫瘍応答の形成を評価するために、群をＷＥＨＩ  １６４腫瘍細胞（１×１０６）で再チャレンジした。図８Ａ＊は、１３７日目の再チャレンジを示す。処理マウスは、腫瘍増殖に対する抵抗性を示したが、ＷＥＨＩ  １６４腫瘍細胞を接種した処理ナイーブマウス群は、腫瘍増殖を経験した。
【図９Ａ】ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおける３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理したマウスの腫瘍接種後の日数に対する平均腫瘍体積のプロットである。このプロットは、実施例７に詳細に記載される３剤併用による処理後の完全な腫瘍退縮（消失）を示す。
【図９Ｂ】実施例７に記載されるＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおける３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＲＳＬＡＩＬ−２、及びＰＤ−１アンタゴニスト）で処理したマウスの腫瘍再チャレンジ後日数に対する平均腫瘍体積のプロットである。処理した全ての再チャレンジマウスは、ＭＣ３８腫瘍細胞を接種され、腫瘍増殖が観察されたナイーブなマウスのセットとは対照的に、腫瘍増殖に対する抵抗性を示した。これらの結果は、３剤併用処理マウスにおいて記憶免疫応答が誘導されたことを示唆するものである。図９Ａ＊は、１３６日目の再チャレンジを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
略称：
ＡＭＬ：急性骨髄性白血病
Ｂ．Ｉ．Ｄ：ビス・イン・ダイ（すなわち、１日２回）
ＢＴＬＡ：Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ
ＢＩＷ：週２回
ＣＴＬＡ４：細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４
ＣＤ：分化クラスター
ＣＸＣＬ：ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド
ＣＬＬ：慢性リンパ球性白血病
ＤＰＰ：ジペプチジルペプチダーゼ
ＤＭＥＭ：ダルベッコ変法イーグル培地
ＦＡＰ：線維芽細胞活性化タンパク質
ＧＭ−ＣＳＦ：  顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）
ＨＢＳＳ：ハンクス平衡塩溶液
ＩＬ：インターロイキン
ＩＨＣ：免疫組織化学
ＰＤ−１：プログラム細胞死１
ＰＤＬ−１：プログラム死リガンド１
ＰＤＬ−２：プログラム死リガンド２
ＭＩＧ：  γインターフェロンによって誘導されるモノカイン
ＭＩＰ：マクロファージ炎症性タンパク質
ＮＫ：ナチュラルキラー
ＯＤ：光学密度
Ｑ．Ｄ：クォーク・ダイ（すなわち、１日１回）
Ｑ３Ｗ：３週ごと
Ｑ２Ｗ：２週ごと
Ｑ９Ｄ：９日ごと
ＴＮＦ：腫瘍壊死因子
【００２８】
定義：
本開示の特定の特徴を説明及び請求する際に、以下の専門用語は、別途示されない限り、以下に提供される定義に従って使用される。
【００２９】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上別途明記されない限り、複数の指示対象を含む。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、がん等の、本明細書に提供される組成物または組み合わせの投与によって予防または治療することができる状態に罹患しているかまたはかかりやすい生体を指し、ヒト及び動物の両方を含む。対象としては、哺乳動物（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ等）が挙げられるが、これらに限定されない。典型的には、対象はヒトである。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、「腫瘍」と互換的に使用され得る（すなわち、本明細書で使用される腫瘍への言及は、がん性腫瘍への言及である）。「がん」という用語は、固形腫瘍ならびに白血病及びリンパ腫等の非固形腫瘍の両方を含む、多種多様ながんを指す。がんは、細胞腫、肉腫、骨髄腫、リンパ腫、及び白血病を含み、混合型を有するがんを含む各々が、本明細書に提供される組み合わせ及び方法に従って治療することができる。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」等の用語は、抗がん応答をもたらすための治療と、がんの退縮後の抗がん免疫を維持するための治療の両方を含む。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「有効量」という語句は、本開示の方法で使用されるときに、妥当な利益／リスク比に見合った不当な副作用（例えば、毒性、刺激性、またはアレルギー反応等）を伴わずに、所望の治療反応、例えば、腫瘍増殖または腫瘍サイズの減少をもたらすのに十分な成分または組み合わせの量を指す。具体的な治療有効量は、治療される特定の状態、患者の身体的状態、治療される哺乳動物または動物の種類、治療期間、同時治療の性質（あれば）、ならびに使用される具体的な製剤、ならびに投与される化合物の構造及び種類等の要因によって変化する。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「先天性免疫修飾剤」という用語は、好ましくは抗がん効果を提供するために、先天性免疫細胞、例えばマクロファージ、樹状細胞、好中球、ナチュラルキラー細胞等に存在する同族結合パートナーと特異的に結合したときに、先天性免疫系（例えば、炎症性サイトカイン）の活性化をもたらす小分子または抗体を指す。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」または「チェックポイント阻害剤」という用語は、がんが進行する腫瘍微小環境によって利用される免疫回避に関与する免疫チェックポイントを阻害する化合物を指す。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞刺激剤」は、Ｔ細胞上で同族結合パートナーと特異的に結合したときに、活性化、免疫応答の開始、腫瘍増殖の阻害、サイトカイン産生等を含むがこれらに限定されないＴ細胞による応答を媒介する、抗体、小分子、サイトカイン（任意選択的にポリマー修飾形態）及び／またはリガンドを指す。
【００３７】
本明細書で使用される「ＰＥＧ」または「ポリエチレングリコール」は、任意の水溶性ポリ（酸化エチレン）を包含することを意味する。別途示されない限り、「ＰＥＧポリマー」またはポリエチレングリコールは、実質的に全ての（好ましくは全ての）モノマーサブユニットが酸化エチレンサブユニットであるが、ポリマーは、例えば、コンジュゲーションのために、異なる末端キャッピング部分または官能基を含有し得る。本発明に使用するためのＰＥＧポリマーは、以下の２つの構造のうちの１つを含む：末端酸素（複数可）が、例えば、合成変換中に置き換えられたかどうかに応じて、「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−」または「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２Ｃ２−」。ＰＥＧポリマーについては、変数（ｎ）は約３〜４０００の範囲であり、全体的なＰＥＧの末端基及びアーキテクチャは変化し得る。
【００３８】
「ＰＥＧ化ＩＬ−２」または「ＰＥＧ−ＩＬ−２」は、典型的にはリンカーを介して、ＩＬ−２タンパク質の１つより多くのアミノ酸残基に共有結合した１つ以上のポリエチレングリコール分子を有するＩＬ−２分子（例えば、組換えヒトＩＬ−２）である。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、任意の種類の非毒性、不活性固体、半固体もしくは液体充填剤、希釈剤、封入材、または製剤助剤を指す。薬学的に許容される賦形剤は、賦形剤に起因する任意の副作用が活性成分の有益な効果を損なわないように、活性成分の有効活性と一致する濃度で比較的無毒であり、患者にとって無害である、任意の賦形剤である。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、担体、希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、充填剤、可塑剤、界面活性剤及び湿潤剤、膜形成剤及びコーティング材、ならびに着色剤、例えば顔料である。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「同時投与（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、「同時投与（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、または「同時に投与される」という表現は、化合物が同じ時点で、または互いの直後に投与されることを意味する。後者の場合、化合物は十分に近い時間に投与され、観察される結果は、化合物が同じ時点で投与されたときに達成される結果と本質的に区別できない。
【００４１】
「ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）」は、ＤＰＰ遺伝子によってコードされる酵素のクラスを指す（ＥＣ  ３．４．１４に分類される）。現在までに９種類のＤＰＰ遺伝子が分かっている。これらは、カテプシンＣ（ＤＰＰ−１）、ＤＰＰ−２、ＤＰＰ−３、ＤＰＰ−４、ＤＰＰ−６、ＤＰＰ−７、ＤＰＰ−８、ＤＰＰ−９及びＤＰＰ−１０を含む。ＤＰＰはまた、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を含む。
【００４２】
用語「選択的ジペプチジルペプチダーゼ」及び「ＤＰＰ−８／ＤＰＰ−９／ＦＡＰ」は、ＤＰＰ−８、ＤＰＰ−９及びＦＡＰのうちの１つ以上を含有するＤＰＰ酵素または遺伝子のサブセットを指す。「選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤」という用語は、本明細書において互換的に「ＤＰＰ８／ＤＰＰ９／ＦＡＰ阻害剤」とも称され、酵素のＤＰＰクラスの他のメンバーよりも優先的に、ＤＰＰ８及び／またはＤＰＰ９、ＦＡＰまたはＤＰＰ８、ＤＰＰ９及びＦＡＰを選択的に阻害する化合物である。
【００４３】
本明細書で使用される場合、用語「プログラム死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ−１」、「ＰＤ−１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ−１」、及び「ｈＰＤ−Ｉ」は互換的に使用され、ヒトＰＤ−１と少なくとも１つの共通エピトープを有する変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤ−１の種相同体、及び類似体を含む。
【００４４】
本明細書で使用される場合、用語「プログラム細胞死１リガンド１」、「ＰＤＬ−１」、「ＰＤＬ１」、「ＰＤＣＤ１Ｌ１」、「ＰＤＣＤ１ＬＧ１」、「ＣＤ２７４」、「Ｂ７相同体１」、「Ｂ７−Ｈ１」、「Ｂ７−Ｈ」、及び「Ｂ７Ｈ１」は互換的に使用され、ヒトＰＤＬ−１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤＬ−１の種相同体、及び類似体を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、当該技術分野で周知の様々な有機及び無機対イオンに由来する塩を指す。本明細書における化合物への言及は、適宜、薬学的に許容される塩形態を包含することを意味する。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸で形成され得る。好適な塩の考察については、例えば、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９（１９７７）及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．，ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００を参照されたい。好適な酸塩の非限定的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、乳酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等が挙げられる。好適な塩基塩の非限定的な例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム、一級、二級、及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂等、具体的にはイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、及びエタノールアミン等が挙げられる。
【００４５】
本明細書に記載の化合物は、１つ以上のキラル中心を含有する場合、エナンチオマー、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、１つのエナンチオマーがエナンチオマー過剰に存在するエナンチオマーの混合物等を含む、全ての立体異性体形態及びそれらの混合物を包含することを意味する。
【００４６】
本明細書において、「組み合わせ」の投与への言及は、組み合わせの成分の同時投与、別個の投与、または連続投与を指す。例えば、組み合わせの成分の投与は、同時投与（別々にまたは単一医薬製剤の一部として一緒に）を指し得る。さらに別の場合には、「組み合わせ」の様々な成分の投与は、成分のそれぞれの別個の投与を指し得るが、別個に投与される場合、成分のそれぞれは、適切な投与経路を介した投与に好適な別個の医薬組成物として調製される。さらにさらなる例では、「組み合わせ」の投与は、組み合わせの成分のそれぞれを任意の順序で連続的に投与することを指し得る。投与が連続的または別個である場合、第２または第３、または例えば第４の成分の投与の遅延は、薬剤が組み合わせの有益な効果または相乗効果を生じるように体内に存在するようにすべきである。
【００４７】
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ完全または完全に、例えば、９５％以上、より好ましくは９７％以上、さらにより好ましくは９８％以上、さらにより好ましくは９９％以上、さらにより好ましくは９９．９％以上を意味し、９９．９９％以上が、いくつかの所与の量の中で最も好ましい。
【００４８】
「任意選択的」または「任意選択的に」は、その後に記載される状況が必ずしも発生しなくてもよいことを意味し、この記述は、状況が発生する場合及び発生しない場合を含む。
【００４９】
本明細書で使用される「小分子」は、典型的には約１０００未満の分子量を有する有機化合物を指す。
【００５０】
組み合わせ成分
概要
現在の抗がん免疫療法に関連する欠点の少なくともいくつかに対応するために、本開示は、がんを治療するために免疫系の適応アーム及び免疫系の先天性アームの両方を利用する、改善された免疫療法モダリティ、組み合わせ及び方法を提供する。先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を含む本明細書に記載の例示的な組み合わせは、がん性腫瘍に対する特に強化された免疫系ベースの攻撃を容易にし、代表的な動物モデルにおいて驚くほど堅牢な抗腫瘍効果（例えば、完全な腫瘍退縮等）及び長期抗腫瘍免疫を提供することが示されている。例えば、裏付けとなる本明細書に記載の実施例１〜７を参照されたい。本発明の薬剤の組み合わせは、非冗長かつ相補的な様式で機能する単剤成分のそれぞれの結果として生じると考えられる有意な免疫活性化をもたらすのに有効である。
【００５１】
次に、主題の免疫療法の組み合わせのこれらの及び関連する特徴について、さらに詳細に説明する。
【００５２】
先天性免疫修飾剤
前述のように、本発明の組み合わせは、１つの成分として、先天性免疫修飾剤を含む。先天性免疫修飾剤の１つの好ましいクラスは、ＤＰＰ  ８／９及びＦＡＰのうちの１つ以上を阻害し、本明細書において「選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤」と称される。
【００５３】
先天性免疫修飾剤は、例えば、小分子、抗体、ナノボディ、操作ペプチド、操作タンパク質、ワクチン、またはｓｉＲＮＡであり得、好ましくは小分子である。
【００５４】
１つの好ましい小分子選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタット（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＩＤ：６９１８５７２）、またはその薬学的に許容される塩、例えば、メシル酸タラボスタット（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：１１５２２４８）である。ＰＴ−１００（Ｖａｌ−ｂｏｒｏ−ｐｒｏ；Ｌ−バリニル−Ｌ−ボロプロリン）としても知られるタラボスタットは、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ１９８９００３２２３号に開示されている（ＣＡＳ登録番号１４９６８２−７７−９）。タラボスタットのＩＵＰＡＣ名は［（２Ｒ）−１−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル］ボロン酸である。タラボスタットは、２つのキラル中心を有し、遊離塩基または薬学的に許容される塩として、それらの混合物を含む、そのエナンチオマー形態またはジアステレオマー形態のいずれかで使用され得る。タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩は、その非環状形態及び環状形態の両方で存在することもできる（ＲＪ  Ｓｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９４，１１６（２４），ｐｐ１０８６０−１０８６９）。他の薬学的に許容される塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、次リン酸等の典型的な無機酸から調製される塩、ならびに例えば、脂肪族のモノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸及びヒドロキシアルカン二酸、芳香族酸、脂肪酸（メシル酸塩）及び芳香族スルホン酸等の有機酸から調製される塩が挙げられ、タラボスタットの任意の好適な形態が本明細書に提供される組み合わせにおいて使用されてもよく、本開示はこの点に限定されない。タラボスタットの好ましい塩形態は、メシル酸塩である。メシル酸タラボスタットは、ＣＡＳ登録番号１５００８０−０９−４及び以下のＩＵＰＡＣ名を有する：［（２Ｒ）−１−［（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル］ピロリジン−２−イル］ボロン酸；メタンスルホン酸。
【００５５】
他の様々な小分子、例えば、タラボスタットの類似体及びプロドラッグ、ならびにタラボスタット様化合物等も、本開示の範囲に包含される。例示的な化合物は、少なくとも以下の文書に記載されるものを包含する。欧州特許第２，７８２，９９４号は、例えば、ＡＲＩ−４１７５及び関連化合物等のタラボスタット類似体を開示している。ＰＣＴ出願公開第２００３０９２６０５号は、例えば、シクロヘキシル（グリシニル）−プロリニル−バリニル−Ｌ−ボロプロリン等のタラボスタットのプロドラッグを開示している。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８０４９０１４号及び同第ＷＯ２０１８０４９００８号は、ｂｏｒｏ−ｐｒｏクラスの種々の化合物、及び他のジペプチドを開示し、本明細書においてタラボスタット様ｂｏｒｏ−ｐｒｏ化合物と称される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、先天性免疫修飾剤は、ＦＡＰを阻害する抗体等の抗体である。ＦＡＰ阻害剤は、いくつかの場合において、例えば、シブロツズマブ等のＦＡＰモノクローナル抗体であり得る。他のＦＡＰ阻害剤としては、Ｓａｒａｈ  Ｅ．Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｖｏｌ．５６（９）ｐｐ．３４６７−３４７７に開示されるようなＡＲＩ−３０９９（Ｎ−（ピリジン−４−カルボニル）−ｄ−Ａｌａ−ＢｏｒｏＰｒｏ）；米国特許出願第２０１４／０２５５３００号に開示されるようなＡＲＩ−３９９６；米国特許出願第２０１０／００９８６３３号に開示されるようなＭＩＰ−１２３１（ＭＩＰ−１２３２またはＭＩＰ−１２３３）；Ｋｏｅｎ  Ｊａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｖｏｌ．４（５），Ｐａｇｅ  ｎｏ．４９１−４９６に開示されるような（４−キノリノイル）−グリシル−２−シアノピロリジン；米国特許第．８，１８３，２８０号に開示されるような（２Ｓ）−１−（２−（１−ナプトイルアミノ）アセチル）ピロリン−２−カルボニトリル；ＰＣＴ出願公開第２０１３／１０７８２０号に開示されるような（Ｓ）−Ａ−（２−（２−シアノ−４，４−ジフルオロピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−１−ナフトアミド及び他の関連誘導体；米国特許出願第２０１２／００５３２２２号に開示されるような（２Ｓ）−１−（（２Ｓ）−２−（２−メトキシベンゾイルアミノ）−３−メチルペンタノイル）ピロリジン−２−カルボニトリル及び他の関連誘導体；Ｃｏｎｒａｄ  Ｙａｐ  Ｅｄｏｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．２００６，Ｖｏ．２８１（１１）ｐａｇｅ  ｎｏ．７４３７−７４４４に開示されるようなＡｃ−Ｇｌｙ−ＢｏｒｏＰｒｏ；Ｔｉｎｇ−ｙｕｅｈ  Ｔｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｖｏｌ．５３（１８），６５７２−６５８３に開示されるような置換４−カルボキシルメチルピログルタミン酸ジアミド；Ｐ．Ｉｖｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｖｏｌ．４１（７），６２０に開示されるようなＧＥＨ  ２００２００、米国特許第９，３４６，８１４号に開示されるようなＵＡＭＣ−１１１０、ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００２０３８５９０号、米国特許第７，３９９，８６９号、及び米国特許第７，９９８，９９７号にも開示されるＦＡＰ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
追加のＦＡＰ阻害剤としては、米国特許第８，５６８，７２７号、欧州特許第．１，２６８，５５０号、米国特許第８，９９９，３４２号及び米国特許第９，０１１，８４７号に記載されるようなＦＡＰ−α抗体が挙げられる。追加の例示的阻害剤としては、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１９号及び同第２０１２／０１８４７１８号に開示されるようなＤＲ−５を有するＦＡＰの二重特異性抗体が挙げられる。また、使用に好適なのは、米国特許出願公開第２０１４／００９９３４０号に開示されるようなキメラ抗原受容体及びＦＡＰの組み合わせである。
【００５８】
他の態様において、抗ＦＡＰ抗体は、ナノボディであり得る。ナノボディ技術は、ラクダ及びラマ（ラクダ科、ラクダ類）由来の抗体に重鎖があるが軽鎖がないという発見から開発された。そのような抗体の抗原結合部位は、１つの単一ドメインであり、Ｖｈｈと称され得る。例えば、米国特許第５，８００，９８８号及び同第６，００５，０７９号、ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、ならびに欧州公開第２６７３２９７号を参照されたい。
【００５９】
免疫チェックポイント阻害剤
１つ以上の具体的な態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体または小分子である。例えば、抗体は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、またはＣＴＬＡ４に対するものであり得る。例えば、抗体は、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペンブロリズマブ）、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ）、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）のうちの１つ以上から選択され得る。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ４アンタゴニストである。
【００６０】
ＰＤ−１軸アンタゴニスト：
本明細書に提供される組み合わせに使用するのに好適なのは、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体）、ＰＤＬ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＬ−１抗体）、及びＰＤＬ−２アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＬ−２抗体）を含むＰＤ−１軸アンタゴニストである。
【００６１】
完全なヒトＰＤ−１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３に見出すことができる。具体的な態様において、ＰＤ−１アンタゴニストは、配列番号１のＰＤ−１タンパク質（ｕｎｉｐｒｏｔ  ＩＤ  Ｑ  １５１１６）に結合する。
【００６２】
タンパク質プログラム死１（ＰＤ−１）は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害メンバーである。ＰＤ−１に対する２つのリガンド、ＰＤＬ−１及びＰＤＬ−２が同定されており、これらは、ＰＤ−１に結合するとＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤＬ−１及びＰＤＬ−２の両方は、ＰＤ−１に結合するが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーには結合しないＢ７相同体である。
【００６３】
本明細書に記載の併用療法に使用するためのＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤ−１のリガンドに結合し、ＰＤ−１受容体への１つ以上のリガンドの結合を妨害、低減、もしくは阻害するか、またはＰＤ−１受容体を介したシグナル伝達に関与することなく、ＰＤ−１受容体に直接結合する。ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤ−１の１つ以上のリガンド（例えば、ＰＤＬ−１及びＰＤＬ−２）に結合し、リガンド（複数可）がＰＤ−１を介して阻害シグナル伝達を誘発するのを低減または阻害する。１つ以上の実施形態において、ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤＬ−１に直接結合し、ＰＤＬ−１がＰＤ−１に結合することを阻害または防止し、それによってＰＤ−１阻害シグナル伝達を遮断する。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１に干渉する抗体は、以下に記載されるような抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。例えば、本明細書に開示される組み合わせに使用するのに好適なのは、ニボルマブ（別名、Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、またはＢＭＳ−９３６５５８）である。ニボルマブは、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に防止し、それによって抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する完全ヒト化ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１抗体である（米国特許第８，００８，４４９号；ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００６／１２１１６８；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２：８４６−５６（２０１４）；Ｔｏｐａｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６６．２４４３−２４５４（２０１２）；Ｔｏｐａｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２４：２０７−２１２（２０１２）；Ｔｏｐａｌｉａｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ３１（ｓｕｐｐｌ）：３００２（２０１３））。ニボルマブは、切除不能または転移性黒色腫、転移性扁平上皮非小細胞肺癌、進行性腎細胞癌、及び古典的ホジキンリンパ腫を有する患者の治療のために米国ＦＤＡによって承認されている。
【００６５】
いくつかの他の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ペンブロリズマブ（商品名ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）；以前はランブロリズマブ、ＳＣＨ−９００４７５及びＭＫ−３４７５としても知られていた）は、ＰＤ−１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４κ抗体である。Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６９：１３４−１４４（２０１３）。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号及び同第８，９００，５８７号ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００９／１１４３３５号に記載されている。ペンブロリズマブは、進行性黒色腫、非小細胞肺癌、及び頭頸部扁平上皮癌の患者の治療のために米国ＦＤＡによって承認されている。例えば、Ｐｏｏｌｅ，Ｒ．Ｍ．，Ｄｒｕｇｓ  ７４：１９７３−１９８１（２０１４）を参照されたい。好ましい実施形態において、本明細書に記載の方法（及びキット）に使用される抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブまたはニボルマブである。
本明細書に記載の治療的組み合わせにおいて用いられ得る他のＰＤ−１アンタゴニストは、米国特許第８，６０９，０８９号、米国特許出願公開第２０１０／００２８３３０号、及び／または米国特許出願公表第２０１２／０１１４６４９号に開示されている。
【００６６】
使用され得る追加のＰＤ−１軸アンタゴニストとしては、例えば、米国特許第８，２１７，１４９号に記載されるＰＤＬ−１アンタゴニストであるアテゾリズマブ（ＭＤＰＬ３２８０ＡまたはＹＷ２４３．５５．Ｓ７０）、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００７／００５８７４号に記載されるＰＤＬ−１アンタゴニストであるＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９としても知られる）、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１１／０６６３８９号及びＵＳ２０１３／００３４５５９号に記載されるＰＤＬ−１アンタゴニストであるデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、米国特許出願公開第２０１４／０３４１９１７号に記載されるＰＤＬ−１アンタゴニストであるアベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１５０３３３０１号及び同第ＷＯ２０１５０３３２９９号に記載されるＰＤＬ−１アンタゴニストであるＣＡ−１７０が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１を標的とする抗体を使用するのではなく、ＰＤ−Ｌ１を標的とする小分子もまた、本発明の方法及びキットに使用することができる。例えば、Ｃｕｒｉｓ，Ｉｎｃ．によって開発中のＣＡ−１７０は、免疫活性化のＴ細胞活性化（ＶＩＳＴＡ）チェックポイント制御因子のＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、及びＶドメイン免疫グロブリン抑制因子を選択的に標的化して阻害する経口利用可能な小分子である。Ｃｕｒｉｓは現在、進行性固形腫瘍及びリンパ腫を有する患者における第１相試験でＣＡ−１７０を調査している。ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ（ＮＣＴ０２８１２８７５）を参照されたい。
【００６７】
使用され得る追加のチェックポイント阻害剤は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／０２７８２７号及びＷＯ２０１１／０６６３４２号に記載されるＰＤＬ−２−Ｆｃ融合可溶性受容体であるＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇとしても知られる）である。
【００６８】
他のＰＤ−１アンタゴニストとしては、ＢＣＤ１００、ＩＢＩ３０８、カムレリズマブ、ＪＮＪ６３７２３２８３、ＪＳ００１、スパルタリズマブ、セミプリマブ及びティスレリズマブ、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。
【００６９】
１つ以上の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＡＮＡ  ０１１、ＡＵＮＰ−１２、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＫＤ０３３、ペンブロリズマブ、ＭＣＬＡ−１３４、ｍＤＸ４００、ＭＥＤＩ００６８０、ｍｕＤＸ４００、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、ＰＦ−０６８０１５９１、ＲＥＧＮ−２８１０、ＳＨＲ−１２１０、ＳＴＩ−Ａ１１１０、ＴＳＲ−０４２、ＡＮＢ０１１、２４４Ｃ８、３８８Ｄ４、ＴＳＲ０４２、ＢＣＤ１００、カムレリズマブ、ＪＮＪ６３７２３２８３、ＪＳ００１、スパルタリズマブ、セミプリマブ、ティスレリズマブ、及びＸＣＥ８５３、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される。ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、例えば、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、または他の商業的供給源から調達され得る。
【００７０】
１つ以上の実施形態において、ＰＤＬ−１アンタゴニストは、アベルマブ、ｂｍｓ  −９３６５５９、ＣＡ−１７０、デュルバルマブ、ＭＣＬＡ−１４５、ＳＰ１４２、ＳＴＩ−Ａ１０１１、ＳＴＩＡ１０１２、ＳＴＩ−Ａ１０１０、ＳＴＩ−Ａ１０１４、Ａ１１０、ＫＹ１００３、及びアテゾリズマブならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましくは、ＰＤＬ−１アンタゴニストは、アベルマブ、デュルバルマブまたはアテゾリズマブである。
【００７１】
いくつかの追加の実施形態において、ＰＤＬ−２アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４及びｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００７２】
抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野で既知の方法を使用して、例えば、前述のＰＤ−１、ＰＤＬ−１、またはＰＤＬ−２抗体もしくは抗原結合断片のいずれかをコードする核酸を含有する宿主Ｔ細胞を、そのような抗体または断片を産生するのに好適な条件下で、発現に好適な形態で培養することと、抗体または断片を回収することとを含むプロセスによって作製され得る。
【００７３】
ＣＴＬＡ４アンタゴニスト
本明細書に記載の組み合わせ生成物に使用するのに好適なＣＴＬＡ４アンタゴニスト剤としては、ＣＴＬＡ４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ４抗体、哺乳動物抗ＣＴＬＡ４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ４ドメイン抗体、一本鎖抗ＣＴＬＡ４断片、重鎖抗ＣＴＬＡ４断片、軽鎖抗ＣＴＬＡ４断片、共刺激経路を苦痛化するＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００１／０１４４２４号に開示される抗体、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００４／０３５６０７号に開示される抗体、米国特許出願公開第２００５／０２０１９９４号に開示される抗体、及び例えば、欧州特許第１２１２４２２Ｂ号に開示される抗体が挙げられるが、これらに限定されない。追加の例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、及び同第６，９８４，７２０号、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び同第ＷＯ００／３７５０４号、ならびに米国特許出願公開第２００２／００３９５８１号及び同第２００２／０８６０１４号に開示されている。本明細書に記載の方法または組み合わせで使用することができる他の抗ＣＴＬＡ−４抗体としては、例えば、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ９８／４２７５２号；米国特許第６，６８２，７３６号及び６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５（１７）：１００６７−１００７１（１９９８）；Ｃａｍａｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．２５０５（２００４）（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＰ−６７５２０６）；Ｍｏｋｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８：５３０１−５３０４（１９９８）、及び米国特許第５，９７７，３１８号、同第６，６８２，７３６号、同第７，１０９，００３号、及び同第７，１３２，２８１号が挙げられる。
【００７４】
好ましい臨床抗ＣＴＬＡ−４抗体は、出願公開第ＷＯ０１／１４４２４号に開示されるヒトモノクローナル抗体１０Ｄｌ（ＭＤＸ−０１０またはイピリムマブとも称される、Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｂｌｏｏｍｓｂｕｒｙ，ＮＪから入手可能）である。他の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブである。他のＣＴＬＡ４アンタゴニスト（抗ＣＴＬＡ−４抗体）は、ＫＡＨＲ−１０２、ＡＧＥＮ１８８４、ＡＢＲ００２、及びＫＮ０４４、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【００７５】
Ｔ細胞刺激剤
本明細書に提供される組み合わせ、組成物、方法等は、Ｔ細胞刺激剤を含む。本明細書に提供される組み合わせ及び方法のある特定の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、ＩＬ−２受容体を介して活性を刺激する。したがって、例えば、Ｔ細胞刺激剤は、ＩＬ−２受容体アゴニストであり得る。いくつかの実施形態において、ＩＬ−２受容体アゴニストは、インターロイキン−２である。いくつかの他の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、ＣＤ１２２バイアスアゴニスト（ＩＬ−２Ｒβバイアスアゴニスト）である。例えば、ＩＬ−２受容体アゴニストは、ＰＥＧ化、より具体的には、放出可能なＰＥＧ化等によって化学修飾されるインターロイキン−２であり得る。インターロイキン−２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ）選択的アゴニスト（すなわち、ＣＤ１２２バイアスアゴニスト）は、ＩＬ−２Ｒαβに対するよりもＩＬ−２Ｒβに対する結合により高い親和性を有するアゴニストである。例として、表面プラズモン共鳴を用いて（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）Ｔ１００等のシステムを用いて）標準としてＩＬ−２に対する結合親和性を測定することが可能である。一般に、ＣＤ１２２バイアスアゴニストは、同じインビトロモデルにおけるＩＬ−２Ｒαβに対する結合親和性の少なくとも５倍（より好ましくは少なくとも１０倍）であるＩＬ−２Ｒβに対するインビトロ結合親和性を有する。この点において、そのアミノ残基で組換えヒトインターロイキン−２（デ−１−アラニン、１２５−セリン）が、平均６個の［（２，７−ビス｛［メチルポリ（オキシエチレン）１０ｋＤ］カルバモイル｝−９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル部分でＮ置換されたＣＤ−１２２バイアスサイトカインアゴニストである、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（ＣＡＳ  Ｎｏ．１９３９１２６−７４−５）は、ＩＬ−２Ｒαβに対する親和性にＩＬ−２と比較して約６０倍の低下を示すが、ＩＬ−２Ｒβに対する親和性にはＩＬ−２と比較して約５倍の低下を示すに過ぎない。
【００７６】
１つ以上の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２等のＩＬ−２Ｒβ選択的アゴニストであり、以下の式（Ｉ）によって包含される：
（Ｉ）
式中、ＩＬ−２はインターロイキン２（例えば、アルデスロイキン等）であり、各「ｎ」は独立して、約３〜約１０００の整数であるか、またはその薬学的に許容される塩である。各「ｎ」の代表的な範囲は、例えば、約４０〜約５５０の整数、または約６０〜約５００の整数、または約１１３〜約４００の整数、または２００〜３００を含む。ある特定の実施形態において、ポリエチレングリコール鎖の各々における「ｎ」は約２２７であり（すなわち、中央のフルオレニルコアから延在する各ポリエチレングリコール鎖は、全体の分岐ＰＥＧ部分の重量平均分子量が約２０，０００ダルトンであるように、約１０，０００ダルトンの重量平均分子量を有する）、すなわち、本明細書において（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）４−６インターロイキン−２と称される。１つ以上の実施形態において、ポリエチレングリコール鎖の各々における「ｎ」の値は、実質的に同じである。他の実施形態において、中央のフルオレニルコアから延在する２本のペグ鎖は、実質的に同じ重量平均分子量を有する。
【００７７】
ある特定の実施形態において、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、以下の構造を有する： 。
【００７８】
他のより具体的な実施形態において、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、以下の構造を有し、
、
本明細書において、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２、またはＲＳＬＡＩＬ−２と称される。
【００７９】
含まれる放出可能なＰＥＧ部分は、アミド結合（フルオレン−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ〜）を介してフルオレン環の２位及び７位から延在するポリ（エチレングリコール）鎖を有する２，７，９−置換フルオレンに基づいて、分岐ＰＥＧを提供する。フルオレニル系分岐ＰＥＧ部分は、インターロイキン−２部分のアミノ基に放出可能に共有結合される。インターロイキン−２アミノ基とフルオレニル系分岐ＰＥＧ部分との結合は、メチレン基（−ＣＨ２−）を介してフルオレン環の９位に結合したカルバメート結合である。この一般構造を有する放出可能なＰＥＧは、典型的には、生理学的条件下でβ脱離反応を起こし、ＩＬ−２に共有結合しているＰＥＧ部分を緩徐に放出する。ＰＥＧ部分は投与後にインビボで連続的に放出されると考えられる。
【００８０】
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）の長時間作用性ＩＬ−２Ｒβバイアスアゴニストは、以下の式によって包含される化合物の１０％以下（モル量に基づく）、及びいくつかの実施形態において５％以下（モル量に基づく）を含有する組成物中に含まれる。
式中、ＩＬ−２は、アルデスロイキン等のインターロイキン−２であり、「ｍ」（ＩＬ−２に結合したポリエチレングリコール部分の数を指す）は、１、２、３、７及び＞７からなる群から選択される整数であるか、またはその薬学的に許容される塩である。
【００８１】
いくつかの実施形態において、例えば式（Ｉ）に関して、長時間作用性ＩＬ−２Ｒβバイアスアゴニストは、ＩＬ−２に放出可能に結合した分岐ポリエチレングリコール部分を平均して約６個有する。いくつかのさらなる実施形態において、例えば式（Ｉ）に関して、長時間作用性ＩＬ−２Ｒβバイアスアゴニストは、一般に、非活性プロドラッグ、すなわち、投与時に非活性であると考えられ、投与後のインビボでのポリエチレングリコール部分の緩徐な放出により、最初に投与されるコンジュゲートよりも少ないＰＥＧ部分が結合したインターロイキン−２の活性コンジュゲート形態を提供する。マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、ＩＬ−２受容体αよりもＩＬ−２受容体β及びγ単位を優先的に活性化し、それによって、ＩＬ−２受容体、具体的にはＩＬ−２  Ｒαも含有／発現する免疫抑制性の制御性Ｔ細胞よりも、適応免疫系に関連するＴエフェクター細胞及びナチュラルキラー細胞集団の特異的活性化を提供する。
【００８２】
マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、例えば、実施例１に記載の、ＰＣＴ出願公開第２０１５／１２５１５９号に記載されるように、インターロイキン−２（例えば、アルデスロイキン）とＰＥＧ試薬Ｃ２−ＰＥＧ２−ＦＭＯＣ−ＮＨＳ−２０Ｋ（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００６／１３８５７２号に記載されるような）との反応によって、調製することができる。
【００８３】
マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の追加の例示的な組成物は、式（Ｉ）による化合物を含み、各フルオレニル系ＰＥＧ部分は、約２５０ダルトン〜約９０，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を有する。追加の好適な範囲としては、約１，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトン、約５，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約５５，０００ダルトンの範囲、約１５，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトンの範囲、及び約２０，０００ダルトン〜約５０，０００ダルトンの範囲から選択される範囲の各フルオレニル系ＰＥＧ部分の重量平均分子量が挙げられる。
【００８４】
フルオレニル系ポリエチレングリコール部分の追加の例示的な重量平均分子量としては、約２００ダルトン、約３００ダルトン、約４００ダルトン、約５００ダルトン、約６００ダルトン、約７００ダルトン、約７５０ダルトン、約８００ダルトン、約９００ダルトン、約１，０００ダルトン、約１，５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、及び約７５，０００ダルトンが挙げられる。いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールポリマー部分の重量平均分子量は、約２０，０００ダルトンである。
【００８５】
ＰＥＧ等の水溶性ポリマーの文脈における分子量は、数平均分子量または重量平均分子量のいずれかとして表現することができる。別途示されない限り、本明細書における分子量への全ての言及は、重量平均分子量を指す。数平均及び重量平均の両方の分子量決定は、ゲル透過クロマトグラフィーまたは他の液体クロマトグラフィー技術を使用して測定することができる。数平均分子量を決定するための末端基分析の使用もしくは束一的性質の測定（例えば、凝固点降下、沸点上昇、もしくは浸透圧）、または重量平均分子量を決定するための光散乱技術、超遠心分離、または粘度測定の使用等の、分子量値を測定するための他の方法も使用することができる。ＰＥＧポリマーは、典型的には多分散系（すなわち、ポリマーの数平均分子量及び重量平均分子量が等しくない）であり、好ましくは約１．２未満、より好ましくは約１．１５未満、さらにより好ましくは約１．１０未満、さらにより好ましくは約１．０５未満、及び最も好ましくは約１．０３未満の低い多分散性値を有する。
【００８６】
本明細書で使用される「インターロイキン−２」または「ＩＬ−２」という用語は、例えば、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２に関して、ヒトＩＬ−２活性を有する部分を指す。好適なタンパク質としては、米国特許第９，８６１，７０５号に記載される配列番号１〜４のいずれか１つに対応するアミノ酸配列を含有するタンパク質が挙げられる。実質的に相同という用語は、特定の対象配列、例えば変異体配列が、１つ以上の置換、欠失、または付加によって参照配列と異なり、その正味の効果が参照配列と対象配列との間に有害な機能的相違をもたらさないことを意味する。本明細書の目的のために、９５パーセントを超える相同性（配列同一性とも称される）、同等の生物活性（但し、必ずしも同等の強度の生物活性とは限らない）、及び同等の発現特性を有する配列は、実質的に相同性であるとみなされる。相同性を決定するために、成熟配列の切断は無視すべきである。本明細書で使用される場合、用語「ＩＬ−２」は、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、または突然変異を介して偶発的に修飾されたそのようなタンパク質を含む。これらの用語は、１〜６個の追加のグリコシル化部位を有する類似体、タンパク質のカルボキシ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸を有する類似体であって、追加のアミノ酸（複数可）が少なくとも１つのグリコシル化部位を含む類似体、及び少なくとも１つのグリコシル化部位を含むアミノ酸配列を有する類似体も含む。該用語は、天然部分及び組換え産生部分の両方を含む。加えて、ＩＬ−２は、ヒト源、動物源、及び植物源に由来し得る。１つの例示的なＩＬ−２は、アルデスロイキンと称される組換えＩＬ−２である。
【００８７】
ＩＶ．治療方法、用量及び投与：
本明細書に提供される裏付けとなる動物モデルデータによって例示されるように、例示的な先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を含む組み合わせを用いたインビボでの腫瘍の治療は、腫瘍の増殖能を無効にし、１００％抗腫瘍効果を生じるのに有効であった。したがって、本開示は、膵癌等のがんに見られる免疫耐性を克服する成分の独自の組み合わせによって提供される（単独で、すなわち、単剤療法として投与された場合のその成分のそれぞれと比較して）強化された免疫原性効果を有する薬学的組み合わせを提供する。
【００８８】
一態様において、本開示は、対象におけるがんの治療方法であって、対象に先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤を投与することを含む方法を提供する。先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤はそれぞれ、併用療法ががんを治療するのに有効であるような量で投与される。
【００８９】
一実施形態において、先天性免疫修飾剤は、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤、好ましくは小分子である。
【００９０】
別の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストである。
【００９１】
さらなる実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４アンタゴニストである。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、ＩＬ２Ｒβ選択的アゴニストである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、ＰＥＧ化ＩＬ−２である。いくつかの態様において、Ｔ細胞刺激剤は、ＩＬ２Ｒβ選択的アゴニストであるＰＥＧ化ＩＬ−２である。好ましい実施形態において、本開示は、対象におけるがんの治療方法であって、対象に治療有効量の選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＩＬ２Ｒβ選択的アゴニストを投与することを含み、
（ｉ）選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩であり、
（ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ４アンタゴニストであり、
（ｉｉｉ）ＩＬ２Ｒβ選択的アゴニストはＲＳＬＡＩＬ−２を含む、方法を提供する。
【００９２】
別の好ましい実施形態において、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、例えば、メシル酸タラボスタットである。
【００９３】
さらに好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体）、またはＰＤＬ−１アンタゴニスト、例えば、抗体である。
【００９４】
本開示はまた、（ａ）先天性免疫修飾剤、（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）Ｔ細胞刺激剤を含む組み合わせを投与することを含む、それを必要とする対象における抗腫瘍記憶応答の生成方法を対象とする。
【００９５】
一実施形態において、上記の（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、抗腫瘍記憶応答を生成するための治療として、同時に（別々にまたは単一医薬製剤の一部として一緒に）、任意の適切な順序で連続的に、または別々に（例えば、断続的に）対象に投与される。別々に投与される場合、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のそれぞれは、適切な投与経路を介した投与に好適な別個の医薬組成物として調製される。
【００９６】
本開示はまた、（ａ）先天性免疫修飾剤、（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）Ｔ細胞刺激剤を含む組み合わせを投与することを含む、それを必要とする対象における抗腫瘍免疫応答の生成方法を対象とする。
【００９７】
一実施形態において、上記の（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、抗腫瘍免疫応答を生成するための治療として、同時に（別々にまたは単一医薬製剤の一部として一緒に）、任意の適切な順序で連続的に、または別々に（例えば、断続的に）対象に投与される。別々に投与される場合、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）のそれぞれは、適切な投与経路を介した投与に好適な別個の医薬組成物として調製される。
【００９８】
本開示はまた、がんに罹患している患者の治療方法であって、（ａ）先天性免疫修飾剤、（ｂ）免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）Ｔ細胞刺激剤を対象に投与するステップを含む、方法を対象とする。投与ステップ（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、任意の順序で（また同時に）行われてもよい。１つ以上の実施形態において、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）及び（ｃ）の前に実行される。１つ以上の実施形態において、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）及び（ｃ）の前に実行される。１つ以上の実施形態において、ステップ（ｃ）は、ステップ（ａ）（ｂ）の前に実行される。１つ以上の実施形態において、ステップ（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は同時に実行される。さらに、１つ以上の実施形態において、ステップ（ａ）及び／または（ｂ）及び／または（ｃ）は、繰り返し施される。加えて、１つ以上の実施形態、ステップ（ａ）及び（ｂ）及び（ｃ）は、１回のみ実行される。
【００９９】
先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤は、好適な投与量及び経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内または皮下）に応じて投与され得る。例えば、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤は、単一製剤で同時に投与され得る。代替として、修飾剤、阻害剤、及び刺激剤は、別個の投与のために製剤化されてもよく、これらは、同時にまたは連続的に投与される。
【０１００】
一実施形態において、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩は、ＰＤ−１軸アンタゴニスト及びＴ細胞刺激剤（例えば、ＩＬ２Ｒβバイアスアゴニスト）と同時投与される。別の実施形態において、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩は、ＰＤ−１軸アンタゴニスト及びＴ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト）の投与から独立して投与される。一実施形態において、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩を最初に投与し、次いでＴ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト）及びＰＤ−１軸アンタゴニストを投与する。別の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト）及びＰＤ−１軸アンタゴニストを最初に投与し、次いで、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩を投与する。
【０１０１】
本明細書に開示される特定の方法は、３つ全ての治療剤を投与することを伴うが、先天性免疫修飾剤（例えば、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩）及びＴ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト）は、治療の一部として免疫チェックポイント阻害剤を含まずに投与され得る。任意選択的に、治療は、治療レジメンの開始時に３つ全ての薬剤を最初に投与することと、その後、治療の後期サイクル（複数可）において、先天性免疫修飾剤及びＴ細胞刺激剤のみの投与に切り替えることと、を含んでもよい。他の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤が、既に先天性免疫修飾剤及びＴ細胞刺激剤を含む治療レジメンに加えられてもよい。
【０１０２】
本明細書に記載の方法による治療の経過に関連する例示的な時間の長さとしては、約３日、約４日、約５日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１６ヶ月、約１７ヶ月、約１８ヶ月、約１９ヶ月、約２０ヶ月、約２１ヶ月、約２２ヶ月、約２３ヶ月、約２４ヶ月、約３０ヶ月、約３年、約４年、及び約５年が挙げられる。
【０１０３】
先天性免疫修飾剤（例えば、メシル酸タラボスタット）の投与頻度に関して、当業者は、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、（１日に１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、月に１回）メシル酸タラボスタットを投与すると決定することができる。ある特定の実施形態において、先天性免疫修飾剤（例えば、メシル酸タラボスタット）は、１日３用量、１日２用量、１日１用量、２日ごとに１用量、３日ごとに１用量、４日ごとに１用量、５日ごとに１用量、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または４週間ごとに１回、好ましくは１日１回投与される。
【０１０４】
免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−１に対する抗体）の投与頻度に関して、当業者は、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、（例えば、３週間ごとに１回、２週間ごとに１回、または１週間に１回）ＰＤ−１軸アンタゴニストを投与すると決定することができる。ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、１日１用量、または２日ごとに１用量、または３日ごとに１用量、または４日ごとに１用量、または５日ごとに１用量、または１週間に１回（Ｑ１Ｗ）、２週間ごとに１回（Ｑ２Ｗ）、または３週間ごとに１回（Ｑ３Ｗ）、または４週間ごとに１回（Ｑ４Ｗ）、１週間に２回、または２週間ごとに２回、または３週間ごとに２回、または４週間ごとに２回、好ましくは４週間ごとに２回投与される。ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、単回用量、２回用量、３回用量、４回用量、５回用量、または６回以上用量で投与される。投与スケジュールは、例えば、１週間に１回から２、３、４週間ごとに１回、または１週間に２回から２、３、または４週間ごとに２回まで変化し得る。
【０１０５】
Ｔ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト）の投与頻度に関して、当業者は、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、適切と判断される場合、Ｔ細胞刺激剤を比較的頻繁に（例えば、８週間ごとに１回（Ｑ８Ｗ）、または７週間ごとに１回（Ｑ７Ｗ）、または６週間ごとに１回（Ｑ６Ｗ）、または５週間ごとに１回（Ｑ５Ｗ）、または４週間ごとに１回（Ｑ４Ｗ）、または３週間ごとに１回（Ｑ３Ｗ）、または２週間ごとに１回（Ｑ２Ｗ）、または９日ごとに１回（Ｑ９Ｄ））投与すると決定することができる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、３週間ごとに１回投与される（Ｑ３Ｗ）。さらに、いくつかの先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤は、最新の臨床試験中であるかまたは市販されているため、適切な投与頻度を得るために文献を参照することも可能である（治療レジメンの併用効果を考慮して、ある程度の調整が必要である可能性に留意すること）。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、先天性免疫修飾剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＴ細胞刺激剤（例えば、ＲＳＬＡＩＬ−２等のＰＥＧ化ＩＬ−２）を、がんを有する対象に投与する前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間または２週間前）、投与と同時に、または投与の後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間または２週間前）に投与され得る。ある特定の実施形態において、１つの薬剤の複数の用量が、他の薬剤（複数可）の各用量に対して投与されるように、１つの薬剤が他の薬剤（複数可）よりも頻繁に投与されてもよい。
【０１０７】
他の実施形態において、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＰＥＧ化ＩＬ−２等のＩＬ２Ｒβ選択的アゴニストの投与は、同時投与、連続投与（任意の順序で）、またはその両方であろうと、当業者によって決定及び特定され得るように、任意の数の所望の分数（例えば、０〜６０分）、時間（例えば、０〜２４時間）、日（例えば、０〜７日）、及び／または週（例えば、０〜５２週間）の間隔に従って行うことができる。例示的な投与量及び投与間隔はまた、経時的に（例えば、患者の臨床応答、副作用等に応じて）、または治療の異なる段階（誘導、治療、または維持）の間に変化し得る。
【０１０８】
所与の化合物が先天性免疫修飾剤として作用し得るかどうかを決定するためのアッセイは、当業者による日常的な実験を通じて判断することができる。
【０１０９】
本明細書に記載の方法によれば、先天性免疫修飾剤、好ましくは選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤が、ジペプチジルペプチダーゼ阻害量で患者に投与される。当業者は、ＤＰＰ８／９／ＦＡＰで臨床的に関連する阻害活性を提供するためには、どのくらいの量の所与の選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤で十分であるかを決定することができる。
【０１１０】
別の実施形態において、患者におけるＦＡＰまたはＤＰＰ  ８／９のレベルの増加に関連するがんを予防及び／または治療するために投与される選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０３５ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．０３５ｍｇ／ｋｇ、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．００４ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００６ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００７ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００８ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００９ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１０ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１２ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１３ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇを含む。選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の用量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇと変化し得る。選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の１日の総用量は、約１００ｍｃｇ〜２００ｍｇ、好ましくは約１００ｍｃｇ〜５０ｍｇ、最も好ましくは約１００ｍｃｇ〜１０ｍｇと変化し得る。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、先天性免疫修飾剤（例えば、メシル酸タラボスタット）は、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００２ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．００４ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．００６ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ、０．００８ｍｇ／ｋｇ、０．００９ｍｇ／ｋｇ、０．０１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１１ｍｇ／ｋｇ、０．０１２ｍｇ／ｋｇ、０．０１３ｍｇ／ｋｇ、０．０１４ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇ、０．０１６ｍｇ／ｋｇ、０．０１７ｍｇ／ｋｇ、０．０１８ｍｇ／ｋｇ、０．０１９ｍｇ／ｋｇ、０．０２０ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０３０ｍｇ／ｋｇ、０．０３５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、及び０．０８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。好ましい実施形態において、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の各用量は、０．００２ｍｇ／ｋｇ、０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．００４ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．００６ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ、０．００９ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０１３ｍｇ／ｋｇ、及び０．０１４ｍｇ／ｋｇで投与される。タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩の用量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０．０２４ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１７ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１４ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．００９ｍｇ／ｋｇと変化し得る。メシル酸タラボスタットの１日の総用量は、約５０マイクログラム〜２ｍｇ、好ましくは約１００マイクログラム〜１．２ｍｇ、より好ましくは約１００マイクログラム〜１．２ｍｇ、最も好ましくは１００マイクログラム〜６００マイクログラムと変化し得る。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、メシル酸タラボスタットは、必要に応じて、治療段階中に約１００マイクログラム〜約６００マイクログラムの１日用量で用量漸増様式で投与される。いくつかの実施形態において、メシル酸タラボスタットは、経口投与用に製剤化される。
【０１１３】
本明細書に記載の方法によれば、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト及びこれらの組み合わせを含む。本明細書に記載の方法によれば、ＣＴＬＡ−４経路阻害量の抗ＣＴＬＡ−４抗体が投与されるか、またはＰＤ−１経路阻害量の抗ＰＤ−１抗体が投与される。当業者は、それぞれ、ＣＴＬＡ−４経路またはＰＤ−１経路の臨床的に関連する阻害を提供するためには、どのくらいの量の所与の抗ＣＴＬＡ−４抗体または抗ＰＤ−１抗体で十分であるかを決定することができる。例えば、当業者は、文献を参照し、及び／または一連の増加量の抗ＣＴＬＡ−４抗体または抗ＰＤ−１抗体を投与し、どの量（単数または複数）がＣＴＬＡ−４経路またはＰＤ−１経路の臨床的に関連する阻害を提供するかを決定することができる。１つ以上の場合において、ＰＤ−１軸アンタゴニスト量は、以下の範囲（ヒト用量を包含する）のうちの１つ以上によって包含される：約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約９ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ。
【０１１４】
１つ以上の場合において、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト量は、以下の範囲（ヒト用量を包含する）のうちの１つ以上によって包含される：約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ。
【０１１５】
確認のために、それぞれＣＴＬＡ−４アンタゴニスト及びＰＤ−１軸アンタゴニストのＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１軸アンタゴニスト量に関して本明細書で使用される場合、阻害の量及び程度は広範囲に変化し得、これらのうちのいずれかと先天性免疫修飾剤及びＲＳＬＡＩＬ−２）等のＩＬ−２Ｒβ選択性アゴニストとの組み合わせは依然として有効であり得る。例えば、それぞれＣＴＬＡ−４経路またはＰＤ−１経路を最小限のみ阻害するＣＴＬＡ−４アンタゴニストまたはＰＤ−１アンタゴニストの量は、本方法が臨床的に有意義な応答をもたらす限り、本明細書で使用される阻害量であり得る。
【０１１６】
１つ以上の好ましい実施形態において、併用療法におけるＰＤ−１軸アンタゴニストは、ニボルマブ等のＰＤ−１アンタゴニストであり、これは、０．５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、２４０ｍｇ  Ｑ２Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、及び１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗならびにこれらの用量のいずれかの固定用量当量、例えば２４０ｍｇ  Ｑ２Ｗから選択される用量で静脈内投与される。好ましい用量は、約５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、約１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、約２４０ｍｇ  Ｑ２Ｗ、約２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ及び約３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗである。
【０１１７】
別の好ましい実施形態において、併用療法におけるＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＭＫ−３４７５等のＰＤ−１アンタゴニストであり、これは、１ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、１  ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、１０ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗ、及びこれらの用量のいずれかの固定用量当量、例えば、２００ｍｇ  Ｑ３Ｗ、好ましくは約２ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗ、約２００ｍｇ  Ｑ３Ｗ、及びこれらの組み合わせから選択される用量で、液剤中で投与される。いくつかの特に好ましい実施形態において、ＭＫ−３４７５は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液ｐＨ５．５中２５ｍｇ／ｍｌのＭＫ−３４７５、７％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０を含む液剤として投与され、選択された用量の薬物は、約３０分の期間にわたってＩＶ注入によって投与される。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストとして抗ＰＤ−１抗体を含む医薬組成物は、液体製剤として提供されてもよいか、または使用前に注射のために凍結乾燥粉末を滅菌水で再構成することによって調製されてもよい。ＰＣＴ公開出願第ＷＯ２０１２／１３５４０８号は、使用に適したペンブロリズマブを含む液剤及び凍結乾燥材の調製を記載している。いくつかの実施形態において、ペンブロリズマブを含む薬物は、４ｍｌの溶液中に約１００ｍｇのペンブロリズマブを含有するガラスバイアルに提供される。各１ｍＬの溶液は、２５ｍｇのペンブロリズマブを含有し、以下に製剤化される：Ｌ−ヒスチジン（１．５５ｍｇ）、ポリソルベート８０（０．２ｍｇ）、スクロース（７０ｍｇ）、及び注射用水、ＵＳＰ。この溶液は、ＩＶ注入のために希釈が必要である。
【０１１９】
１つ以上の好ましい実施形態において、併用療法におけるＣＴＬＡ４アンタゴニストは、イピリムマブ等のＣＴＬＡ４アンタゴニストであり、これは、３ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗを４用量、次いで、１２週間ごとに１０ｍｇ／ｋｇを最大３週間から選択される用量で、または記録された疾患の再発または許容されない毒性まで、静脈内投与される。
【０１２０】
本明細書に記載の方法によれば、ＩＬ−２受容体アゴニストは、ＩＬ−２活性化量で患者に投与される。当業者は、ＩＬ−２で臨床的に関連するアゴニスト活性を提供するためには、どのくらいの量の所与の長時間作用性ＩＬ−２選択性アゴニストで十分であるかを決定することができる。例えば、当業者は、文献を参照し、及び／または一連の増加量の長時間作用性ＩＬ−２アゴニストを投与し、どの量（単数または複数）がＩＬ−２の臨床的アゴニスト活性を提供するかを決定することができる。
【０１２１】
１つ以上の場合において、Ｔ細胞刺激剤、例えばＩＬ２Ｒβバイアスアゴニスト、例えばＲＳＬＡＩＬ−２）は、以下の範囲のうちの１つ以上によって包含される量で使用される：約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ；約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、または約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ。
【０１２２】
さらに他の特定の実施形態において、本明細書に提供される組成物及び方法において使用されるＴ細胞刺激剤、例えば、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の量は、約０．０００５〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．００８ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ、及び約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．００４ｍｇ／ｋｇである。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、０．００３ｍｇ／ｋｇ以下の用量で投与される。ある特定の実施形態において、投与範囲は、例えば、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０１ｍｇ／ｋｇ、または約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．００８ｍｇ／ｋｇ、または約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約０．００６ｍｇ／ｋｇ未満を含む。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される組成物及び方法で使用されるマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、３週間ごとに１回投与される。マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の投与量は、別途示されない限り、ＩＬ−２当量に基づく。
【０１２４】
３剤併用を対象とする特定の実施形態において、先天性免疫修飾剤（例えば、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩）は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの用量のＰＤ−１アンタゴニストの３週間ごと（Ｑ３Ｗ）の投与スケジュール、及び約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約０．００６ｍｇ／ｋｇの用量範囲のマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の３週間ごと（Ｑ３Ｗ）の投与スケジュールと同時に、２１日サイクルの間に約１００マイクログラム〜約６００マイクログラムの用量範囲で１日１回経口投与され、疾患の進行に従って適切な休止期間を伴って投与サイクルが繰り返され、理想的には、完全な疾患改善が達成されるまで、または任意の著しい毒性が観察されるまで繰り返される。
【０１２５】
メシル酸タラボスタット、ニボルマブ、及びマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の組み合わせの最適用量は、これらの薬剤のうちの１つ以上の用量漸増または用量漸減によって特定され得る。
【０１２６】
一実施形態において、併用療法は、メシル酸タラボスタットが約１００マイクログラム〜６００マイクログラムで１日１回経口投与され、ニボルマブが約０．５ｍｇ／ｋｇ〜１．５ｍｇ／ｋｇ  Ｑ２Ｗで非経口投与され、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２が約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜０．００６ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗの用量範囲で非経口投与される、２１日間の治療サイクルを含む。
【０１２７】
一実施形態において、併用療法は、メシル酸タラボスタットが約１００マイクログラム〜６００マイクログラムで経口投与され、ペンブロリズマブが２００ｍｇ  Ｑ３Ｗで非経口投与され、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２が０．００６ｍｇ／ｋｇ  Ｑ３Ｗで非経口投与される、２１日間の治療サイクルを含む。
【０１２８】
特定の態様において、メシル酸タラボスタット、ペンブロリズマブ、及びマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２の組み合わせの最適用量は、これらの薬剤のうちの１つ以上の用量漸増または用量漸減によって特定され得る。いくつかの特定の実施形態において、投与は、経口または非経口または両方である。
【０１２９】
本明細書に記載の治療方法は、患者の治療を監督する臨床医が、該治療方法が有効であると判断する限り、継続することができる。治療方法が有効であることを示す非限定的なパラメータとしては、以下が挙げられる：腫瘍収縮（重量及び／または体積の観点で）；個々の腫瘍コロニーの数の減少；腫瘍消失；及び／または無増悪生存期間。
【０１３０】
本明細書に提供される治療方法の有効性は、任意の好適な手段を使用して評価することができる。一実施形態において、治療は、腫瘍のサイズの減少、経時的な転移病変の数の減少、完全奏効、部分奏効、及び安定した疾患からなる群から選択される少なくとも１つの治療効果を生じる。別の実施形態において、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤の投与は、例えば、先天性免疫修飾剤もしくは免疫チェックポイント阻害剤もしくはＴ細胞刺激剤単独での治療と比較して、または治療開始前の腫瘍体積と比較して、少なくとも１倍、１．２５倍、１．５０倍、１．７５倍、２倍、２．２５倍、２．５０倍、２．７５倍、３倍、３．２５倍、３．５倍、３．７５倍、または４倍の腫瘍体積の減少をもたらす。
【０１３１】
特定の態様において、先天性免疫修飾剤、免疫チェックポイント阻害剤、及びＴ細胞刺激剤の投与は、例えば、先天性免疫修飾剤もしくは免疫チェックポイント阻害剤もしくはＴ細胞刺激剤単独での治療と比較して、または治療開始前の腫瘍体積と比較して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％の腫瘍増殖阻害をもたらす。ある特定の実施形態において、腫瘍体積は、例えば、治療開始前の腫瘍サイズと比較して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少する。
【０１３２】
Ｖ：治療の適応症：
いくつかの実施形態において、我々は、対象におけるがんの治療方法であって、対象に有効量の先天性免疫修飾剤（例えば、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤）、有効量の免疫チェックポイント阻害剤、及び有効量のＴ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２）を投与することを含む、治療方法を本明細書に提供する。
【０１３３】
本発明の組み合わせの個々の治療剤の１つによる治療に応答性の状態に離間している患者は、本発明の組み合わせで治療することができる。例えば、患者は、組み合わせだけでなく個々の薬剤に対しても応答性であり得るが、組み合わせに対してより大きな応答を示す。さらなる例として、患者は、個々の薬剤のうちの１つに非応答性であり得るが、２つの薬剤（例えば、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤及びＴ細胞刺激剤）の組み合わせに応答性であり、さらに３つ全ての薬剤（例えば、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤、Ｔ細胞刺激剤及び免疫チェックポイント阻害剤）に応答性である。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、我々は、がんの治療のために宿主における免疫応答を誘導または増強するための方法及び組成物を本明細書に提供する。これらの方法は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞上に存在する阻害性受容体を遮断することによって効果を発揮するため、非常に広範囲のがんに適用可能である。
【０１３５】
提供される方法のいずれかを使用して、固形腫瘍等の腫瘍であるがんを治療することができる。特定の態様において、腫瘍は、中程度〜高いジペプチジルペプチダーゼ発現、具体的にはＦＡＰ発現またはＤＰＰ  ８／９発現を有することを特徴とする。提供される方法によって治療することができる例示的ながんとしては、膵癌、結腸直腸癌、前立腺癌、卵巣癌、神経内分泌前立腺癌（ＮｅＰＣ）、（例えば、治療誘発性の神経内分泌前立腺癌（ｔｎｅｐｃ））、ホルモン不応性前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌（ＣｒＰＣ）、肺癌、乳癌、膠芽腫、胃癌、星状細胞癌、神経外胚葉性腫瘍、頭頸部癌、トリプルネガティブ乳癌、胃食道癌、及び非小細胞肺癌が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組み合わせ、組成物、及び関連する方法は、転移性がん、特にＰＤＬ−１またはＣＴＬＡ４を発現する転移性がんの治療にも有用である。
【０１３６】
選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤（例えば、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩）、免疫チェックポイント阻害剤、及びＩＬ２Ｒβバイアスアゴニスト（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ−２、例えば、ＲＳＬＡＩＬ−２）を含む併用療法を用いて成長を阻害し得る特定のがんは、典型的に免疫療法に応答性のがんを含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、がん／腫瘍は、泌尿生殖器癌（例えば、前立腺癌、治療誘発性の神経内分泌前立腺癌、ホルモン感受性またはホルモン不応性前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、腎臓細胞癌、膀胱癌）、腎癌（例えば、透明細胞癌）、甲状腺癌、睾丸癌、外陰部癌、ウィルムス腫瘍、婦人科癌（例えば、卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、子宮癌）、肺癌、非小細胞肺癌、消化管間質癌、消化管癌（例えば、非転移性または転移性結腸直腸癌）、膵癌、胃癌、食道癌、肝細胞癌、胆管細胞癌）、悪性膠芽腫、悪性中皮腫、非転移性または転移性乳癌（例えば、ホルモン不応性転移性乳癌、トリプルネガティブ乳癌）、肝臓癌、悪性黒色腫、黒色腫、転移性黒色腫、メルケル細胞癌または骨軟部肉腫、扁平上皮癌（例えば、口腔扁平上皮癌）、非扁平上皮肺癌、膠芽腫、脳癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、進行・転移性神経外胚葉性腫瘍、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍（ＩＭＴ）、胆管腺癌、嚢胞腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、骨髄異形成症候群、副腎癌、ぶどう膜黒色腫、ホジキン病、肝細胞癌、エナメル上皮腫、軟骨肉腫、皮膚線維肉腫、神経節膠腫、平滑筋肉腫、髄芽腫、骨芽細胞腫及び手術不能な非炎症性の局所進行性疾患、結腸癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、上皮癌、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫、網膜芽細胞腫、胃食道癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、造血器癌（白血病、リンパ腫、リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、退形成性星細胞腫、骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病）、Ｂ細胞リンパ腫等である。
【０１３８】
特定の実施形態において、がんは、固形腫瘍（膵癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌、乳癌、肝臓癌、線維肉腫、膠芽腫、前立腺癌、ホルモン不応性前立腺癌、治療誘発性の神経内分泌前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、悪性黒色腫、甲状腺癌、胃癌、星状細胞癌、神経外胚葉性腫瘍、頭頸部癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、副腎皮質癌、トリプルネガティブ乳癌、胃食道癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌等）または造血器癌（白血病、リンパ腫、リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病等）である。関心のある特定のがんは、膵癌及び結腸直腸癌を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤及び少なくとも１つのＴ細胞刺激剤（例えば、ＰＥＧ化ＩＬ  ２）を含む併用療法を用いて成長を阻害し得るがんは、ウイルス関連がんである。例示的なウイルス関連がんとしては、エプスタインバーウイルス（（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス２型（ＨＴＬＶ−２）及びヒトヘルペスウイルス、例えばヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ−８）に関連するがんが挙げられるが、これらに限定されない。特定のウイルスに関連するがんは、当業者に既知である。例えば、ＥＢＶ関連がんの例としては、リンパ腫、鼻咽喉科癌、胃癌、耳下腺癌、乳癌、及び平滑筋肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に関連するがんの例としては、肝臓癌が挙げられるが、これに限定されない。ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に関連するがんの例としては、口腔咽頭頭頸部癌、鼻咽頭頭頸部癌、及び子宮頸部癌、外陰部癌、膣癌、陰茎癌及び肛門癌が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）及び２型（ＨＴＬＶ−２）に関連するがんの例としては、それぞれ、成人Ｔ細胞白血病及び毛細胞白血病が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ−８）に関連するがんの例としては、カポジ肉腫が挙げられるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、ウイルス関連がんは、ＨＰＶに関連するがんである。他の実施形態において、ウイルス関連がんは、ＨＣＶに関連するがんである。いくつかの実施形態において、対象は、限定されないが、髄上皮腫、肺胞軟組織肉腫、胸膜中皮腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、胸腺癌、胸腺腫、未分化多形性肉腫、膣癌等を含む、希少な非免疫原性がんに罹患している。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、対象は、がんを有するか、またはがんと診断されている。いくつかの実施形態において、対象は、再発性がんまたは難治性がん（固形腫瘍等）に罹患している。いくつかの実施形態において、対象は、膵癌、結腸直腸癌、前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌に罹患している。
【０１４１】
本明細書に開示される方法は、がんの治療のために腫瘍免疫原性を増加させる等、免疫原性の向上が所望される状態の治療に有用性を見出し得る。限定されないが固形腫瘍であるがんを含む、様々ながんが治療され得るか、またはそれらの進行が遅延され得る。いくつかの実施形態において、がんは、難治性がんまたは転移性がんである。いくつかの実施形態において、がんは、リンパ腫または白血病である。いくつかの実施形態において、白血病は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態において、リンパ腫は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１４２】
特定の態様において、マクロファージ密度が高い腫瘍は、併用療法に特にふさわしい候補である。マクロファージ密度は、免疫組織化学またはフローサイトメトリーによって測定され得る。本明細書で使用される場合、フローサイトメトリーによって測定される高いマクロファージ密度は、ＣＤ４５陽性細胞と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％または少なくとも４０％のマクロファージである。
【０１４３】
ＶＩ：医薬組成物：
本明細書に提供される併用療法における各治療剤、すなわち、先天性免疫修飾剤（タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩等）、免疫チェックポイント阻害剤（ＰＤ−１軸アンタゴニスト等）及びＴ細胞刺激剤（ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト等、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えばＲＳＬＡＩＬ−２）は、標準的な製薬実務に従って、そのままで、または治療剤と、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤及び希釈剤とを含む医薬組成物中で投与され得る。
【０１４４】
各治療剤は、別々に製剤化されてもよく、全ての薬剤は、同時にまたは別々に投与されてもよい。さらに、３つの製剤を単一のパッケージに入れて、いわゆるキット製剤を提供してもよい。いくつかの構成において、全ての化合物は、単一の製剤に含有され得る。
【０１４５】
別の実施形態において、治療有効量の先天性免疫修飾剤（例えば、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩）、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１軸アンタゴニスト）、及びＴ細胞刺激剤（例えば、ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えば、ＲＳＬＡＩＬ−２）を含む、対象におけるがんを治療するための医薬組成物が本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、（ａ）第１の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤とともに、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩を含み、（ｂ）第２の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤とともに、ＰＤ−１軸アンタゴニストを含み、（ｃ）第３の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤とともに、ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えば、ＲＳＬＡＩＬ−２を含む。組成物は、併用療法が前記対象においてがんの有効な治療を提供するように、同時に、任意の適切な順序で連続的に、または別々に（断続的に等）対象に投与されてもよい。
【０１４６】
他の態様において、本開示は、２つの別個の医薬組成物、すなわち、（１）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、先天性免疫修飾剤及び免疫チェックポイント阻害剤を含む医薬組成物、ならびに（２）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、Ｔ細胞刺激剤を含む医薬組成物、または（１）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、先天性免疫修飾剤を含む医薬組成物、ならびに（２）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤を含む医薬組成物、または（１）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、先天性免疫修飾剤及びＴ細胞刺激剤を含む医薬組成物、ならびに（２）１つ以上の薬学的に許容される担体及び／もしくは賦形剤とともに、免疫チェックポイント阻害剤を含む医薬組成物を提供する。組成物は、併用療法が前記対象においてがんの有効な治療を提供するように、時に、任意の適切な順序で連続的に、または別々に（断続的に等）対象に投与されてもよい。
【０１４７】
一実施形態において、先天性免疫修飾剤は選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤であり、前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、好ましくは小分子である。
【０１４８】
別の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストである。
【０１４９】
さらなる実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４アンタゴニストである。
【０１５０】
さらに別の実施形態において、Ｔ細胞刺激剤は、ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えばＲＳＬＡＩＬ−２を含む。
【０１５１】
好ましい実施形態において、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、例えば、メシル酸タラボスタットである。
【０１５２】
さらに好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体）、ＰＤＬ−１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＬ−１抗体）、またはＰＤＬ−２アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＬ−２抗体）である。
【０１５３】
別の好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ４アンタゴニストである。
【０１５４】
好ましい実施形態において、全ての治療剤は、別個の医薬製剤を介して投与される。
【０１５５】
別の実施形態において、別個の医薬製剤を単一のパッケージに入れ、いわゆる「キット製剤」を提供する。
【０１５６】
特定の実施形態において、医薬組成物は、経口錠剤の形態でタラボスタットまたはその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸タラボスタット）を含む。
【０１５７】
別の特定の実施形態において、医薬組成物は、非経口製剤の形態でＰＤ−１軸アンタゴニストを含む。
【０１５８】
さらなる実施形態において、医薬組成物は、非経口製剤の形態でＰＥＧ化ＩＬ−２を含む。
【０１５９】
治療有効量の活性剤は、注射または経口により好都合に投与され得る。肺、鼻、頬、直腸、舌下、経腸及び経皮等の他の投与様式も企図される。本明細書で使用される場合、用語「非経口」は、皮下注射、静脈内注射、動脈内注射、腹腔内注射、心臓内注射、髄腔内注射、及び筋肉内注射、ならびに輸液注射を含む。各活性成分は、別々に投与することができる。代替として、２つの活性成分（例えば、Ｔ細胞刺激剤及び免疫チェックポイント阻害剤）の投与が同時であることが望ましく、かつ２つの活性成分が所与の製剤中でともに相溶性である場合、同時投与は、単一剤形／製剤の投与（例えば、薬理活性物質を含有する静脈内製剤の静脈内投与）を介して達成され得る。当業者は、所与の製剤中で２つの所与の薬理学的成分がともに相溶性であるかどうかを日常的な試験を通じて判断することができる。
【０１６０】
医薬組成物は、例えば、液体溶液（例えば、注射用溶液及び注入用溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム、及び座剤等の液体、半固体及び固体剤形を含む、様々な方法で製剤化され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、注射用溶液または注入用溶液として製剤化され得る。組成物は、経口投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、経粘膜投与、経皮投与、または局所投与に適した形態である。組成物は、即時、制御、延長または遅延放出組成物として製剤化され得る。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物（例えば、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩）は、経口投与されてもよい。他の実施形態において、本発明の組成物（例えば、ＰＤ−１軸アンタゴニスト）は、静脈内、筋肉内または皮下注射によって投与されてもよい。さらに他の実施形態において、本発明の組成物（例えば、Ｔ細胞刺激剤）は、非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）に投与され得る。
【０１６２】
本発明の医薬組成物はまた、１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を含有し得る。
【０１６３】
薬学的に許容される担体としては、水；生理食塩水；リン酸緩衝生理食塩水；デキストロース；グリセロール；エタノール及びイソプロパノール等のアルコール；リン酸、クエン酸及び他の有機酸；アスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ等の非イオン性界面活性剤；糖、多価アルコール（マンニトール及びソルビトール等の）等の等張剤、ならびに塩化ナトリウム；ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。抗菌剤及び抗真菌剤としては、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、及びチメロサールが挙げられる。
【０１６４】
非経口投与のための調製物としては、滅菌水溶液または非水溶液、懸濁液、及び乳剤が挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注射用有機エステルである。水性担体としては、生理食塩水及び緩衝培地を含む、水、アルコール溶液／水溶液、乳剤または懸濁液が挙げられる。他の一般的な非経口ビヒクルとしては、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体及び栄養補給剤、電解質補給剤、例えばリンゲルデキストロースに基づくものが挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガス等の防腐剤及び他の添加剤も存在し得る。
【０１６５】
より具体的には、注射用の使用に適した医薬組成物としては、滅菌注射用溶液または分散液の即時的調製のための滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液及び滅菌粉末が挙げられる。そのような場合、組成物は滅菌されていなければならず、容易な通針性が存在する程度に流動性を有するべきである。それは製造及び保管の条件下で安定しているべきであり、好ましくは、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対して保存される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散液の場合に必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。本明細書に開示される治療方法に使用するのに好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１６ｔｈ  ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、組成物は、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール等、または塩化ナトリウムを含む。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅らせる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含むことによってもたらすことができる。
【０１６７】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて、本明細書に列挙される成分の１つまたは組み合わせを有する適切な溶媒中に必要とされる量で、分子をそれ自体でまたは他の活性剤と組み合わせて組み込み、次いで、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒と、上記に列挙されるものから必要とされる他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末剤の場合、調製のための１つの方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより、以前に滅菌濾過された溶液から活性成分及び任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる。注射のための調製物は、処理され、アンプル、バッグ、ボトル、シリンジ、またはバイアル等の容器に充填され、当該技術分野で既知の方法に従って無菌条件下で密封される。そのような製品は、好ましくは、関連する組成物が自己免疫障害または腫瘍性障害に罹患しているまたはそれらにかかりやすい素因を有する対象の治療に有用であることを示す標識または添付文書を有する。
【０１６８】
経口用途の場合、本発明の医薬組成物は、例えば、錠剤もしくはカプセル剤、散剤、分散性顆粒剤、もしくはカシェ剤の形態で、または水溶液または懸濁液として投与され得る。経口組成物は、一般に、不活性担体（例えば、希釈剤）または可食担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入されるか、または錠剤に圧縮され得る。経口投与の場合、治療剤を担体と組み合わせて、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用することができる。薬学的に適合する結合剤及び／またはアジュバント材料が、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤等は、以下の成分のうちのいずれか、または類似の性質の化合物を含有し得る：微結晶性セルロース、トラガカントもしくはゼラチン等の結合剤、デンプンもしくはラクトース等の賦形剤、アルギン酸、プリモゲルもしくはトウモロコシデンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸塩等の滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素等の流動促進剤、スクロースもしくはサッカリン等の甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ等の香味剤。
【０１６９】
錠剤を製造するために様々な方法を使用することができる。より具体的には、プロセスは、（結合剤を含むまたは含まない）好適な溶媒中にメシル酸タラボスタットを溶解することを含んでもよく、この溶液を充填剤粒子（他の材料を含有し得る）全体に均一に分布させて凝集粒子／顆粒を形成する。湿式造粒またはコーティングまたは噴霧処理も使用することができる。得られた顆粒を適切にサイズ調整するか、または乾式造粒／スラグ化／ローラ圧縮法、それに続く粉砕ステップによって顆粒をさらに加工して、特定の粒径分布の適切な顆粒を得ることができる。サイズ調整された顆粒は、他の成分とさらにブレンドされ、かつ／または次いで、適切なブレンダーで滑沢化され、適切な用具を使用して特定の寸法の錠剤に圧縮される。コーティングは適切な機器を用いて行うことができる。
【０１７０】
治療有効量の先天性免疫修飾剤（メシル酸タラボスタット等）、免疫チェックポイント阻害剤（ＰＤ−１軸アンタゴニスト等）、及びＴ細胞刺激剤（ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト等、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えばＲＳＬＡＩＬ−２）を含むキットも本明細書に提供される。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、組み合わせは、先天性免疫修飾剤（例えば、選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤）、免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤（例えば、ＩＬ２Ｒβ特異的アゴニスト等、任意選択的にＰＥＧ化ＩＬ−２、例えば、ＲＳＬＡＩＬ−２）の製剤を、併用するためのまたは組み合わせ製品に対する指示書を伴ってまたは伴わずに含む。併用療法薬は、同じまたは異なる製造業者によって製造及び／または製剤化され得る。したがって、併用療法薬は、互いに独立して販売もされている完全に別個の医薬剤形または医薬組成物であり得る。いくつかの実施形態において、それらの併用のための指示書は、（ｉ）医師に公開される前に（例えば、第１の治療剤、第２の治療剤及び第３の治療剤を含む「キット」の場合）、（ｉｉ）投与の直前に医師自身によって（または医師の指導の下に）、（ｉｉｉ）医師または医療スタッフによって患者自身に、提供される。
【０１７２】
ある例では、単回ボーラス用量が投与され得る。別の例では、いくつかの分割用量が経時的に投与され得る。さらに別の例では、用量は、治療状況の緊急性によって示されるように、比例して減少または増加し得る。用量単位形態は、本明細書で使用される場合、哺乳動物対象を治療するための単位用量として適切な物理的に別個の単位を指す。各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有し得る。いくつかの実施形態において、本発明の投薬単位形態は、活性化合物の固有の特徴及び達成される特定の治療効果または予防効果によって規定され、またそれらに直接依存する。
【０１７３】
以下に列挙される例示的な特定の実施形態を含む本発明のこれら及び他の態様は、本明細書に含まれる教示から明らかになるであろう。
【０１７４】
ＶＩＩ：本発明の具体的な実施形態：
実施形態１．がん（例えば、固形腫瘍）の治療方法であって、対象に少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び少なくとも１つのＴ細胞刺激剤を投与することを含む、方法。
【０１７５】
実施形態２．がんは、膵癌、結腸直腸癌、前立腺癌、ホルモン不応性前立腺癌、治療誘発性神経内分泌前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、肺癌、乳癌、膠芽腫、胃癌、悪性黒色腫、肝臓癌、腎癌、胆管癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、星状細胞癌、神経外胚葉性腫瘍、副腎皮質癌、頭頸部癌、トリプルネガティブ乳癌、胃食道癌、非小細胞肺癌等である、実施形態１に記載の方法。
【０１７６】
実施形態３．がんは膵癌である、実施形態１に記載の方法。
【０１７７】
実施形態４．先天性免疫修飾剤は選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤である、実施形態１に記載の方法。
【０１７８】
実施形態５．前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはそのプロドラッグ、類似体、立体異性体もしくは関連化合物、または前述のいずれかの薬学的に許容される塩、またはそのような選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤の組み合わせである、実施形態５に記載の方法。
【０１７９】
実施形態６．前記選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤は、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩である、実施形態５に記載の方法。
【０１８０】
実施形態７．前記タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩は、メシル酸タラボスタットである、実施形態６に記載の方法。
【０１８１】
実施形態８．免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ４アンタゴニストである、実施形態１に記載の方法。
【０１８２】
実施形態９．ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、またはＰＤ−Ｌ２アンタゴニストである、実施形態８に記載の方法。
【０１８３】
実施形態１０．ＰＤ−１軸アンタゴニストは、ＰＤ−１アンタゴニストである、実施形態９に記載の方法。
【０１８４】
実施形態１１．Ｔ細胞刺激剤はＩＬ−２受容体アゴニストである、実施形態１に記載の方法。
【０１８５】
実施形態１２．ＩＬ−２受容体アゴニストは、インターロイキン−２またはその変異体もしくは誘導体（例えば、プロドラッグ）である、実施形態１１に記載の方法。
【０１８６】
実施形態１３．インターロイキン−２受容体アゴニストは、マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２を含む、実施形態１１に記載の方法。
【０１８７】
実施形態１４．マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖインターロイキン−２（「ＲＳＬＡＩＬ−２」）を含む、実施形態１３に記載の方法。
【０１８８】
実施形態１５．前記ＰＤ−１アンタゴニストは、ＡＮＡ０１１、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＫＤ０３３、ペンブロリズマブ、ＭＣＬＡ−１３４、ｍＤＸ４００、ＭＥＤＩ０６８０、ｍｕＤＸ４００、ニボルマブ、ＰＤＲ００１、ＰＦ−０６８０１５９１、ピディリズマブ、ＲＥＧＮ−２８１０、ＳＨＲ  １２１０、ＳＴＩ−Ａｌ１１０、ＴＳＲ−０４２、ＡＮＢ０ｌｌ、２４４Ｃ８、３８８Ｄ４、ＴＳＲ０４２、ＢＣＤ１００、カムレリズマブ、ＪＮＪ６３７２３２８３、ＪＳ００１、スパルタリズマブ、セミプリマブ、ティスレリズマブ、及びＸＣＥ８５３、好ましくはペンブロリズマブ、またはニボルマブからなる群から選択される、実施形態９に記載の方法。
【０１８９】
実施形態１６．前記ＰＤ−Ｌ１アンタゴニストは、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＣＡ−１７０、デュルバルマブ、ＭＣＬＡ−１４５、ＳＰ１４２、ＳＴＩ−Ａ１０１１、ＳＴＩ−Ａ１０１２、ＳＴＩ−Ａ１０１０、ＳＴＩ−Ａ１０１４、Ａ１１０、ＫＹ１００３、及びアテゾリズマブ、好ましくはアベルマブからなる群から選択される、実施形態９に記載の方法。
【０１９０】
実施形態１７．前記ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４及びｒＨＩｇＭ１２Ｂ７から選択される、実施形態９に記載の方法。
【０１９１】
実施形態１８．前記ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、ＫＡＨＲ−１０２、ＡＧＥＮ１８８４、ＡＢＲ００２、ＫＮ０４４、トレメリムマブ及びイピリムマブ、好ましくはトレメリムマブまたはイピリムマブからなる群から選択される、実施形態８に記載の方法。
【０１９２】
実施形態１９．対象におけるがんの治療方法であって、対象にメシル酸タラボスタット、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２を投与することを含む、方法。
【０１９３】
実施形態２０．前記がんは、膵癌、結腸直腸癌、線維肉腫、結腸癌、結腸腺腫または肉腫、非小細胞肺癌、前立腺癌、ホルモン不応性前立腺癌、治療誘発性神経内分泌前立腺癌、去勢抵抗性前立腺癌、乳癌、卵巣癌、胃癌、悪性黒色腫、頭頸部癌、肝臓癌、小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫及び副腎皮質癌である、実施形態１９に記載の方法。
【０１９４】
実施形態２１．メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、単一剤形の一部として一緒に投与される、実施形態１９に記載の方法。
【０１９５】
実施形態２２．メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１軸アンタゴニスト、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２は、別個の剤形として投与される、実施形態１９に記載の方法。
【０１９６】
実施形態２２：以下の組み合わせを含む、がんの治療のための薬学的組み合わせ：
ａ）治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、
ｂ）治療有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び
ｃ）治療有効量の少なくとも１つのＴ細胞刺激剤。
【０１９７】
実施形態２３：以下の組み合わせを含む、がんの治療のための薬学的組み合わせ：
ａ）治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤を含む第１の医薬組成物、
ｂ）治療有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を含む第２の医薬組成物、及び
ｃ）治療有効量の少なくとも１つのＴ細胞刺激剤を含む第３の医薬組成物。
【０１９８】
実施形態２４：以下の組み合わせを含む、がんの治療のための薬学的組み合わせ：
ａ）選択的ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤である、治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、
ｂ）ＰＤ−１軸アンタゴニストまたはＣＴＬＡ４アンタゴニストから選択される、治療有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び
ｃ）ＰＥＧ化ＩＬ−２である、治療有効量の少なくとも１つのＴ細胞刺激剤。
【０１９９】
実施形態２５：以下の組み合わせを含む、がんの治療のための薬学的組み合わせ：
ａ）タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩である、治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、
ｂ）抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及び抗ＰＤ−２抗体から選択される、治療有効量の少なくとも１つのＰＤ−１軸アンタゴニスト、及び
ｃ）治療有効量の少なくとも１つのＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト、任意選択的にマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２。
実施形態２６：以下の組み合わせを含む、がんの治療のための薬学的組み合わせ：
ａ）タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩である、治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、
ｂ）治療有効量のニボルマブ及びペンブロリズマブから選択される、治療有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び
ｃ）マルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２である、治療有効量の少なくともＩＬ２Ｒβ選択的アゴニスト。
【０２００】
実施形態２７：がんの治療のための組み合わせは、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、ニボルマブ及びマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２を含む。
【０２０１】
実施形態２８：がんの治療のための組み合わせは、タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、ペンブロリズマブ、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２を含む。
【０２０２】
実施形態２９：タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、ニボルマブ、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２からなるがんの治療のための３剤併用。
【０２０３】
実施形態３０：タラボスタットまたはその薬学的に許容される塩、ペンブロリズマブ、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２からなるがんの治療のための３剤併用。
【０２０４】
実施形態３１：メシル酸タラボスタット、ニボルマブ、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２からなるがんの治療のための３剤併用。
【０２０５】
実施形態３２：がんの治療のための３剤併用は、メシル酸タラボスタット、ペンブロリズマブ、及びＲＳＬＡＩＬ−２を含むマルチ（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）インターロイキン−２からなる。
【０２０６】
実施形態３３：以下の組み合わせを含む医薬組成物：（ａ）治療有効量の少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、（ｂ）治療有効量の少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｃ）治療有効量の少なくとも１つのＴ細胞刺激剤。
【０２０７】
実施形態３４：少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤及び／または担体をさらに含む、先行実施形態のいずれかに記載の組み合わせまたは組成物。
【０２０８】
実施形態３５：約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの用量範囲のＴ細胞刺激剤を含む、任意の先行実施形態に記載の組成物、組み合わせまたは方法。
【０２０９】
実施形態３６：約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇの用量範囲の先天性免疫修飾剤を含む、先行実施形態のいずれかに記載の組成物、組み合わせまたは方法。
【０２１０】
実施形態３７：約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約８ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇの用量範囲の免疫チェックポイント阻害剤を含む、任意の先行実施形態のいずれかに記載の組成物、組み合わせまたは方法。
【０２１１】
実施形態３６：００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０．０２４ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１７ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１４ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０１０ｍｇ／ｋｇ、及びより好ましくは約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．００９ｍｇ／ｋｇの用量範囲のメシル酸タラボスタットを含む、任意の先行実施形態に記載の組成物、組み合わせまたは方法。
【０２１２】
実施形態３８：対象における記憶抗腫瘍免疫応答の生成方法であって、対象に少なくとも１つの先天性免疫修飾剤、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び少なくとも１つのＴ細胞刺激剤を投与することを含む、方法。
【０２１３】
本明細書に開示される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的にかつ個々に示されるのと同じ程度に、参照により組み込まれる。
【実施例】
【０２１４】
実施例１
膵癌のマウスモデルにおける先天性免疫、Ｔ細胞応答及びチェックポイント阻害の調節による抗腫瘍応答の刺激
様々な組み合わせの免疫調節剤の抗腫瘍有効性を膵癌のマウスモデル（Ｐａｎ０２シンジェニックマウスモデル）で検討した。
【０２１５】
材料及び方法
動物：
Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から供給された６〜８週間齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスを試験に使用した。マウスには食餌及び水を自由に摂取させた。Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  （ＡＡＡＬＡＣ）の規制を確実に遵守するように、試験プロトコルならびに動物のケア及び使用に関する手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって審査及び承認された。
【０２１６】
試薬及び抗体：
ＲＰＭＩ−１６４０培地（カタログ番号：Ａ１０４９１０１）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（カタログ番号：３５０５００６１）、トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％）（カタログ番号：２５２００−０５６）、ペニシリン−ストレプトマイシン（カタログ番号：１５０７０−０６３）、ＨＢＳＳ（カタログ番号：１４１７５−０９５）をＧｉｂｃｏから調達し、一方、胎児ウシ血清（ＦＢＳ）カタログ番号：００４−００１−１Ａは、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから購入した。ＰＤ−１アンタゴニスト（カタログ番号：ＢＰ  ０１４６、マウス抗ＰＤ−１抗体）は、６．６１ｍｇ／ｍｌでＣｒｏｗｎｂｉｏによって供給された。ＰＤ−１アンタゴニストの原液を１ｍｇ／ｍｌ濃度に調製し、使用前に４℃で維持した。ＰＤ−１アンタゴニストの投与溶液は、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で新しく調製し、ｐＨ７．０に調整し、２０ｇのマウス当たり１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉ．ｐ）投与した。添付の図及び表中でＲＳＬＡＩＬ−２と称される、そのアミノ残基で組換えヒトインターロイキン−２（デ−１−アラニン、１２５−セリン）が、平均６個の［（２，７−ビス｛［メチルポリ（オキシエチレン）１０ｋＤ］カルバモイル｝−９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル部分でＮ置換されたＣＤ−１２２バイアスサイトカインアゴニストである、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（ＣＡＳ  Ｎｏ．１９３９１２６−７４−５）は、Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって提供され、０．０８ｍｇ／ｍｌ投与溶液の作用濃度で新しく調製し、４℃に維持し、０．８ｍｇ／ｋｇの総用量で静脈内投与した。メシル酸タラボスタットを商業的供給源から得、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．０）中に０．１ｍｇ／ｍｌの作動濃度で新しく調製し、４℃に維持し、２０ｇのマウス当たり２０μｇの総用量で経口投与（ｐ．ｏ．）した。
【０２１７】
腫瘍モデル：
空気中５％ＣＯ２の雰囲気中３７℃で、１０％胎児ウシ血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地において、Ｐａｎ０２腫瘍細胞を単層培養物としてインビトロで維持した。トリプシン−ＥＤＴＡ処理により週２回、腫瘍細胞を日常的に継代培養した。指数増殖期の細胞を採取し、腫瘍接種のためにカウントした。腫瘍発生のために、各マウスの正面右側腹部に０．１ｍｌのＰＢＳ中のＰａｎ０２腫瘍細胞（３×１０６）を皮下接種した。腫瘍細胞接種の日付を０日目と示した。腫瘍移植の５日後、マウスを平均腫瘍体積約１４０ｍｍ３の１２匹のマウス群に選別し、被験物質及び抗体を以下の表１Ａに記載の投与スケジュールに従って投与した。
【表１】
2021502423.tif 000003
凡例：Ｑ９ｄ＝９日目に投与、ＢＩＷ＝週２回、Ｑｄ＝１日１回。Ｎ＊：各群の１２匹のマウスのうち、それぞれから３匹を、第１の用量で処理（８日目）した３日後に屠殺した（ＩＨＣ−実施例３を参照）。０日目は腫瘍接種の日であり、最初の腫瘍接種の日から日数を計算した。
【０２１８】
薬剤の投与は、腫瘍接種後５日目に開始し、腫瘍接種後２８日目まで継続した。
【０２１９】
体重（グラム）及び腫瘍体積（ｍｍ３）を、５日目、８日目、１２日目、１５日目、１９日目、２２日目、２６日目及び２９日目に測定した。キャリパーを用いて週２回２次元で腫瘍体積を測定し、以下の式を用いてｍｍ３で表した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長さ及び幅である。投与ならびに腫瘍及び体重測定を含む全ての手順は、層流キャビネットで行われた。ｍｍ３で表される腫瘍体積をキャリパーで測定した。
【０２２０】
結果：
メシル酸タラボスタット（２０μｇ；Ｑｄ）、（２，７−（ビスメトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（０．８ｍｇ／ｋｇ；Ｑ９ｄ）、及びＰＤ−１アンタゴニスト（１０ｍｇ／ｋｇ；ＢＩＷ）としての抗ＰＤ−１抗体の３剤併用でマウスを処理したところ、群８が、１９日目以降及び２９日目までに観察された顕著な腫瘍減少を示し、群８が、メシル酸タラボスタット及びＰＤ−１アンタゴニスト（群６）、ＰＤ−１アンタゴニスト及びＲＳＬＡＩＬ−２（群７）、メシル酸タラボスタット及びＲＳＬＡＩＬ−２（群５）、メシル酸タラボスタット（群２）、ＲＳＬＡＩＬ−２（群３）、ＰＤ−１アンタゴニスト（群４）、及びビヒクル（群１）と比較して有意な腫瘍減少を示したことが注目された。図１及び図２Ａ〜２Ｂを参照されたい。２６日目以降、３剤併用は完全な腫瘍退縮をもたらし、単剤及びそれぞれのダブレットとは対照的に、２６日目までには９／９匹のマウスが無腫瘍となった。群８の９匹のマウスは全て６６日目まで無腫瘍のままであり、次いで６７日目に第１回目の再チャレンジを行った。メシル酸タラボスタット、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２、及び抗ＰＤ−１抗体を含む３剤併用は、腫瘍の完全退縮をもたらした。
【０２２１】
統計解析：
腫瘍体積に関連するデータは、平均及び平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示される。スチューデントｔ検定を用いて統計解析を行った。Ｐ＜０．０５及びＰ＜０．００１を、統計学的に有意であるとみなした。１９、２２、２６、２９日目に、以下の式を用いて、下の表１Ｂに示すように腫瘍減少率を評価した：
腫瘍減少％＝（平均腫瘍体積ビヒクル対照−平均腫瘍体積処理＿群）／平均腫瘍体積ビヒクル対照×１００
【表２】
2021502423.tif 000004
【０２２２】
実施例２
再チャレンジ試験：膵癌のマウスモデルにおける先天性免疫、Ｔ細胞応答及びチェックポイント阻害の調節の組み合わせによる抗腫瘍記憶応答の刺激
材料及び方法：
本試験は、実施例１に記載される試験の続きである。投与完了の３８日後（腫瘍接種後６７日目）、複合免疫療法に対して完全奏効を示す無腫瘍動物（群８）に、３×１０６のＰａｎ０２腫瘍細胞の再チャレンジを行った。この腫瘍再チャレンジ試験では、群８の６匹のマウスにＰａｎ０２膵臓腺癌細胞で皮下に再チャレンジした。腫瘍体積及び体重を週２回測定した。キャリパーを用いて週２回２次元で腫瘍体積を測定し、以下の式を用いて体積をｍｍ３で表した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長さ及び幅である。投与ならびに腫瘍及び体重測定は、層流キャビネット内で行われた。
【０２２３】
この再チャレンジ試験は、次の２つの段階で行われた。試験の最初の部分（「第Ｉ相」）は、実施例１に記載されている通りであり、群８の９／９匹のマウスは、２６日目までには無腫瘍となり、６６日目まで無腫瘍のままであった。腫瘍体積（ｍｍ３単位）及び体重（グラム）を週２回測定し、それぞれ図２Ｂ及び図２Ｃに示す。図２Ｂに示すように、群８のマウス及び他の処理群のマウスの体重は、いずれの劇的な変化も示さず、個々の薬剤のいかなる毒作用も示唆されなかった。
【０２２４】
第ＩＩ相は、６７日目に開始された。合計１１匹のマウス（５匹の年齢相応のナイーブ動物と、群８の６匹のマウス）を使用し、下の表２に要約されるように分布した。
【表３】
2021502423.tif 000005
＃−無腫瘍動物は、３剤併用（メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１アンタゴニスト及びＲＳＬＡＩＬ−２）に対して完全奏効を示した第Ｉ相からのＰａｎ０２腫瘍担持動物を指す。
【０２２５】
６７日目に、マウスにＰａｎ０２腫瘍細胞（３×１０６腫瘍細胞）を皮下注射した。
【０２２６】
接種後７日目（７４日目）から、動物に腫瘍の取り込み及び腫瘍増殖が観察された。全ての年齢相応のナイーブ動物が腫瘍を有しており、平均腫瘍体積は、チャレンジ後７日及び１８日で、それぞれ図２Ｃに示すように、１６４±２７ｍｍ３（平均±ＳＥＭ）及び２６３±４６ｍｍ３（平均±ＳＥＭ）であった。著しく対照的に、再チャレンジ群（群８、Ｐａｎ０２腫瘍細胞で再チャレンジした）の６匹のマウスのうちの５匹（８３％）は、そのような時点で無腫瘍であり（すなわち、Ｐａｎ０２腫瘍再チャレンジを完全に拒絶した）、注目すべきことに、ＩＩ相の終了（２８５日目）まで無腫瘍のままであった。
【０２２７】
結果：実施例１は、膵癌のマウスモデルにおけるメシル酸タラボスタット、ＰＤ−１アンタゴニスト、及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２（ＲＳＬＡＩＬ−２）の組み合わせの相乗効果を実証するものである。この実施例は、前述の組み合わせが抗腫瘍免疫を誘発するのに著しく有効であることを示し、さらに、先天性アーム修飾剤が免疫チェックポイント阻害剤及びＴ細胞刺激剤と組み合わされ、それによって処理マウスにおける長期的な腫瘍特異的記憶応答を提供する治療アプローチの有効性を示す。（図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ）
【０２２８】
実施例３
処理されたＰａｎ０２腫瘍担持マウスにおけるＦＡＰ発現及び免疫浸潤物のＩＨＣ（免疫組織化学）による評価
処理を行った３日後（８日目）に屠殺した動物由来の腫瘍試料に対するＩＨＣを行い、ＦＡＰ発現及び免疫細胞浸潤物の存在を評価した。本試験は、免疫浸潤に対する線維性障壁を除去することによって、例示的な先天性免疫修飾剤であるメシル酸タラボスタットが、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２及びＰＤ−１アンタゴニストの有効性を増強する能力を評価するために実施された。
【０２２９】
材料及び方法：
表１の試験群から腫瘍試料を採取した。ＩＨＣ分析のために、腫瘍接種後８日目に、合計１２匹のマウスのうち、各群から３匹のマウスを屠殺した。腫瘍試料中のＦＡＰ発現及び免疫細胞浸潤物の評価のために、ＯＣＴに包埋された新たに凍結した腫瘍組織のクライオスタット切片（厚さ８μｍ）を用いてＩＨＣを行った。−２０℃で１５分間、アセトンで断面を固定し、室温で１５分間空気乾燥した。内因性ペルオキシダーゼを０．３％の過酸化水素／ＰＢＳ洗浄でクエンチした。組織切片を正常なヤギ血清でブロックし、次いで、アビジン及びビオチンでブロックした。３％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン中の一次抗体またはアイソタイプマッチした対照を、室温で５０分間、１０μｇ／ｍｌの濃度で組織に適用した。次いで、切片を適切な二次抗体でインキュベートし、洗浄し、ジアミノベンジジンでインキュベートし、ヘマトキシリンで対比染色し、腫瘍組織の臨床的特徴を知らされていない当社の病理学者によって染色結果を評価した。ＩＨＣ分析で使用される抗体には、抗マウスＦＡＰ  Ａｂ（ａｂ５３０６６、Ａｂｃａｍ）、抗マウスＣＤ８  Ａｂ（１４−０８０８−８０、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗マウスＬｙ６Ｇ  Ａｂ（ＢＥ００７５−１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）、及びＨ＆Ｅ染色（６７６５００９、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）が含まれていた（製造業者のプロトコルに従う）。
【０２３０】
結果：
腫瘍試料からの代表的なＩＨＣ結果を図３〜図５のパネルに示す。間質細胞が抗ＦＡＰ  Ａｂによって強く染色されたため、腫瘍間質は容易に同定された。ＦＡＰは、間質細胞において豊富に発現した。図３Ａ及び図３Ｂを参照されたい。ＦＡＰは、腫瘍試料中の７０％超の間質細胞において豊富に発現した。ＦＡＰ（図３Ａ、図３Ｂ）、Ｌｙ６Ｇ染色（図４Ａ〜図４Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤（図４Ｄ）、ならびにＨ及びＥ染色による腫瘍細胞負荷（図５）について群を比較した。
【０２３１】
ＦＡＰの低下：
サテライト動物（投与の３日後（８日目）に屠殺）由来の腫瘍のＩＨＣにより、メシル酸タラボスタットがＦＡＰ発現を著しく低下させたことが明らかになったが、メシル酸タラボスタット及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２を含むダブレット（すなわち、２つの免疫療法剤を投与）及びトリプレット（すなわち、３つの免疫療法剤を投与）療法は、より強力なＦＡＰの低下を示した。ＩＨＣにより、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２及びＰＤ−１アンタゴニスト（３剤併用）とメシル酸タラボスタットとの組み合わせが、ＰＤ−１アンタゴニスト及び２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２の組み合わせで処理された腫瘍において観察されるＦＡＰの低下と比較して、ＦＡＰのより強い低下を示したことが明らかになった（図３Ａ、図３Ｂ）。
【０２３２】
免疫細胞浸潤増強：
試験群からの腫瘍試料を、免疫細胞の浸潤について分析した。図４Ａ〜図４Ｃ３剤併用で処理したマウスは、ビヒクル及びＰＤ−１アンタゴニスト単独と比較して、単剤療法としてメシル酸タラボスタットで処理したマウス由来の腫瘍試料にも反映されるＬｙ６Ｇ＋細胞（殺腫瘍性好中球）の有意な増加を示した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いてデータを解析した。ｐ＜０．０５は統計学的に有意であった（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【０２３３】
３剤併用で処理したマウス由来の腫瘍試料も、他の試験群と比較して、免疫応答の増加及び腫瘍負荷の減少と相関するＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤の増加（図４Ｄ）、及びＨ＆Ｅ染色の減少（図５）を示した。
【０２３４】
実施例４
３剤併用処理Ｐａｎ０２腫瘍担持マウスにおけるサイトカイン／ケモカインプロファイルの多重サイトカイン解析による評価
群８のマウス由来の血漿に対して多重サイトカイン解析を行った。
【０２３５】
材料及び方法：
血漿試料のサイトカイン／ケモカイン解析：マウスの群（ｎ＝５）にＰａｎ０２腫瘍細胞（３×１０６）を接種した。５日目以降に、腫瘍体積を前述したように測定した。３剤併用（メシル酸タラボスタット、（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２、及びＰＤ−１抗体アンタゴニスト）の免疫調節効果を、平均腫瘍体積が２５０ｍｍ３を超えたときに評価した（腫瘍接種後１８日目に見られた）。１００μｌの血液を採取し（処理前）、腫瘍接種後１８日目に、マウスに３剤併用で投与した。投与後７日目に、再びマウスから１００μｌの血液を採取した（処理後）。血漿を分離し、解析まで−８０℃で保管した。ルミネックス分析を用いて処理前及び処理後のマウスについて収集した血漿に対して多重血清サイトカイン／ケモカイン解析（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ、Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅを使用）を行い、データを正規化した。
【０２３６】
結果
サイトカイン／ケモカイン解析は、３剤併用で処理したマウスにおいて観察された抗腫瘍効果のさらなる確認及び解明を提供した。メシル酸タラボスタットの投与によって誘導される免疫調節は、ＰＤ−１アンタゴニスト及び（２，７−（ビス−メトキシＰＥＧ１０ｋＤ−カルボキシアミド）（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルＮ−カルバメート）６ａｖｇインターロイキン−２と組み合わせたときに、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ４０、ＲＡＮＴＥＳ及びＴＮＦ  αを含む炎症性サイトカインの上方制御（図６Ａ）、及びＧＭ−ＣＳＦを含む免疫抑制微小環境を抑制するケモカインのプロファイル（図６Ｂ）、ならびにＭＩＧ及びＭＩＰ１−βを含む細胞傷害性Ｔ細胞遊走を促進するサイトカインにおいて観察された。（ＦＩＧ．６Ｄ）。
【０２３７】
さらに、３剤併用は、それらの受容体に共通のγ鎖を有するＩＬ−１５及びＩＬ−７の生成における相乗効果も示した。（図６Ｅ）。免疫環境におけるＩＬ−１５及びＩＬ−７の存在は、それらの表現型をエフェクター分化ではなく記憶に偏らせる活性化ＣＤ８＋  Ｔ細胞における酸化的リン酸化の増強を伴う解糖の減少を示す。ＩＬ−１５及びＩＬ−７の増加（図６Ｅ）は、３剤併用が記憶Ｔ細胞応答を刺激または増強し得ることを示唆する。さらに、腫瘍細胞の浸潤、転移、及び増殖に関与するＬＩＸ／ＣＸＣＬ５（図６Ｃ）は、３剤併用による最初の投与後に減少した。ＬＩＸの減少は、腫瘍中の細胞傷害性ＮＫ細胞及びＭ１マクロファージの割合が増加し、免疫抑制性の制御性Ｔ細胞の減少が低減することを示唆する。
【０２３８】
要するに、例示的な３剤併用は、膵癌モデルでマウスに投与されるとき、免疫系の先天性及び適応アームを刺激するのに有効であり、それによって腫瘍退縮をもたらした。より具体的には、先天性免疫修飾剤、Ｔ細胞刺激剤、及び免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせは、以下によって示される有意な免疫刺激を提供するのに有効であった：
炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ４０、ランテス及びＴＮＦα）の増加；
免疫刺激ケモカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）の増加；
Ｔ細胞遊走を誘導するサイトカイン（ＭＩＧ、ＭＩＰ１−β）の増加；
記憶Ｔ細胞応答に関連するサイトカイン（ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の増加；
処理前に採取した血漿（または血液）の試料と比較したときの血漿（または血液）中の細胞増殖、浸潤及び遊走に関与するサイトカイン（ＬＩＸ／ＣＸＣＬ５）の減少。
【０２３９】
実施例５
再チャレンジ後の３剤併用処理Ｐａｎ０２腫瘍担持マウスにおける記憶エフェクターＴ細胞のフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）による評価
実施例１及び２に記載されるＰａｎ０２マウスモデルにおいて、エフェクター記憶ＣＤ８＋  Ｔ細胞の生成によって測定される抗腫瘍免疫の開発を探求した。
【０２４０】
材料及び方法
３剤併用療法（メシル酸タラボスタット＋ＰＤ１アンタゴニスト＋ＲＳＬＡＩＬ−２）による治療時に、膵臓腺肉腫のＰａｎ０２マウスモデルにおいて無腫瘍となり、腫瘍再チャレンジで腫瘍増殖を示さなかったマウス（実施例２）を、Ｐａｎ０２腫瘍細胞（３×１０６）で接種することにより２８５日目に再び再チャレンジした。群Ａ＝再チャレンジマウス（ｎ＝５）。対照として並行して、ナイーブマウス（ｎ＝３、群Ｂ）に同じ数のＰａｎ０２腫瘍細胞を接種したが、ナイーブマウス（ｎ＝２、群Ｃ）には腫瘍細胞接種を行わなかった。次いで、これらのマウスを再接種の４日後（２８９日目）に屠殺し、脾臓を採取した。単一細胞懸濁液を調製し、脾細胞を抗ＣＤ８  ＰｅｒＣＰ（カタログ番号５６１７９８、クローン番号１７Ａ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び抗ＣＤ３  ＦＩＴＣ（カタログ番号１００７３４、クローン番号５３〜６．７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。ＰＥ標識抗ＣＤ４４（カタログ番号１０３０２４、クローン番号ＩＭ７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＡＰＣ標識抗ＣＤ６２Ｌ（カタログ番号１０４４１２、クローン番ＭＥＬ−１４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて、ＣＤ４４及びＣＤ６２Ｌのさらなる染色も行った。脾細胞を固定し、ＦＡＣＳ  ＬＲＳｆｏｒｔｅｓｓａ  （ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）でフローサイトメトリー分析に供し、Ｋａｌｕｚａソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて定量化した。ＣＤ８＋エフェクター記憶細胞は、ＣＤ６２Ｌ−ｌｏ／ＣＤ４４ｈｉとして定義される。
【０２４１】
統計分析
バートレット検定を用いて、分散の均一性及び正規性を調べた。バートレット検定のｐ値が０．０５以上であった場合、ＡＮＯＶＡと２つの試料のｔ検定を用いて群平均を比較した。バートレット検定のｐ値が０．０５未満であった場合、クラスカル・ウォリス検定とウィルコクソンの順位和検定を用いて群平均を比較した。
【０２４２】
結果：
ＦＡＣ分析は、ＣＤ６２Ｌ−ｖｅＣＤ４４ｈｉエフェクター記憶細胞（ＣＤ８＋細胞）の発達を示した。エフェクター細胞数は、ナイーブ対照（群Ｂ及び群Ｃ）と比較して、再チャレンジ群（群Ａ）において有意に高かった。これらのデータは、３剤併用療法（すなわち、メシル酸タラボスタット＋ＰＤ１アンタゴニスト＋ＲＳＬＡＩＬ−２（図７））に起因してＰａｎ０２腫瘍細胞に対する免疫を発達させたマウスにおけるＣＤ８＋エフェクター記憶Ｔ細胞応答の生成を裏付けるものである。
【０２４３】
実施例６
マウスＷＥＨＩ−１６４肉腫モデルにおける抗腫瘍効果及び抗腫瘍記憶の評価
本試験の目的は、肉腫のマウスモデルにおける免疫調節剤の組み合わせ（すなわち、メシル酸タラボスタット、ＰＤ−１アンタゴニスト、及びＲＳＬＡＩＬ−２の例示的な３剤併用）の投与に起因する抗腫瘍効果及び抗腫瘍免疫の程度を調査することであった。
【０２４４】
材料及び方法：
動物：Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から供給された６〜８週間齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスを試験に使用した。マウスには食餌及び水を自由に摂取させた。Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）の規制を確実に遵守するように、試験プロトコルならびに動物のケア及び使用に関する手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって審査及び承認された。
【０２４５】
試薬及び抗体：ＲＰＭＩ−１６４０培地（カタログ番号：Ａ１０４９１０１）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（カタログ番号：３５０５００６１）、トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％）（カタログ番号：２５２００−０５６）、ペニシリン−ストレプトマイシン（カタログ番号：１５０７０−０６３）、ＨＢＳＳ（カタログ番号：１４１７５−０９５）をＧｉｂｃｏから調達し、一方、胎児ウシ血清（ＦＢＳ）カタログ番号：００４−００１−１Ａは、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから購入した。ＰＤ−１アンタゴニスト（抗ＰＤ−１抗体；カタログ番号：ＢＰ０１４６、ＢｉｏＸｃｅｌｌから調達）は、６．６１ｍｇ／ｍｌでＣｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．によって供給された。ＰＤ１アンタゴニストの原液を１ｍｇ／ｍｌ濃度に調製し、使用前に４℃で維持した。ＰＤ−１アンタゴニストの投与溶液は、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で新しく調製し（ｐＨ７．０）、２０ｇのマウス当たり１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉ．ｐ）投与した。メシル酸タラボスタットを商業的供給源から得、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．０）中に０．１ｍｇ／ｍｌの作動濃度で新しく調製し、４℃に維持し、２０ｇのマウス当たり２０μｇの総用量で経口投与（ｐ．ｏ．）した。ＲＳＬＡＩＬ−２はＮｅｋｔａｒによって提供され、０．０８ｍｇ／ｍｌの作用濃度で新しく調製し、４℃に維持し、２０ｇのマウス当たり０．８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
【０２４６】
腫瘍モデル：空気中５％ＣＯ２の雰囲気中３７℃で、１０％胎児ウシ血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地において、ＷＥＨＩ  １６４腫瘍細胞を単層培養物としてインビトロで維持した。トリプシン−ＥＤＴＡ処理により週２回、腫瘍細胞を日常的に継代培養した。指数成長期の細胞を採取し、腫瘍接種のためにカウントした。
【０２４７】
腫瘍発生のために、各マウスの正面右側腹部に０．１ｍｌのＰＢＳ中のそれぞれの腫瘍細胞（１×１０６）を皮下接種した。腫瘍細胞接種の日付を０日目と示した。腫瘍移植の５日後（５日目）、マウスを平均腫瘍体積約１１０ｍｍ３の６匹のマウス群に選別した。３剤併用のみの場合、以下のような投与スケジュールをマウスに適用した（表３）。
【表４】
2021502423.tif 000006
凡例：Ｑ９ｄ＝９日目に投与、ＢＩＷ＝週２回、Ｑｄ＝１日１回。
【０２４８】
被験物質の投与は、初回腫瘍接種後５日目に開始し、腫瘍接種後３５日目まで継続した。腫瘍体積を７日目、１１日目、１４日目、１７日目、２０日目、２４日目、２７日目、３１日目及び３４日目に測定した。
【０２４９】
腫瘍サイズ及び体重を週２回測定した。キャリパーを用いて週２回２次元で腫瘍体積を測定し、以下の式を用いて体積をｍｍ３で表した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長さ及び幅である。投与ならびに腫瘍及び体重測定は、層流キャビネット内で行われた。
【０２５０】
再チャレンジ：治療中止の１０２日後（すなわち、腫瘍接種後１３７日目）、動物（６匹中３匹）は無腫瘍のままであり、完全奏効を示していた。１３７日目に、これらの動物に１×１０６ＷＥＨＩ  １６４細胞の再チャレンジを行い、マウスを１５０日目まで及びそれ以降モニタリングした。３匹のＣ５７ＢＬ／６ナイーブマウスのセットを、対照として１×１０６ＷＥＨＩ  １６４と同時に接種した。
【０２５１】
結果：確立された腫瘍（約１１０ｍｍ３）を例示的な３剤併用で処理すると、３５日目までに６匹のマウスのうちの３匹に完全な腫瘍退縮がもたらされた（５０％無腫瘍）。これらの３匹のマウスは、腫瘍接種の日から１３７日まで無腫瘍のままであった。１３７日日目に、３匹のマウスを１×１０６のＷＥＨＩ  １６４で再チャレンジしたところ、１５０日目まで及びそれ以降全てのマウスが無腫瘍のままであった（１００％無腫瘍）：これはナイーブマウスとは対照的であった。このデータは、長期腫瘍特異的記憶応答の生成を示す（図８Ａ及び図８Ｂ）。
【０２５２】
実施例７：
マウスＭＣ−３８結腸癌モデルにおける抗腫瘍効果及び抗腫瘍記憶の評価
材料及び方法：
動物：Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から供給された６〜８週間齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスを試験に使用した。マウスには食餌及び水を自由に摂取させた。Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）の規制を確実に遵守するように、試験プロトコルならびに動物のケア及び使用に関する手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  （ＩＡＣＵＣ）によって審査及び承認された。
【０２５３】
試薬及び抗体：ＲＰＭＩ−１６４０培地（カタログ番号：Ａ１０４９１０１）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（カタログ番号：３５０５００６１）、トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％）（カタログ番号：２５２００−０５６）、ペニシリン−ストレプトマイシン（カタログ番号：１５０７０−０６３）、ＨＢＳＳ（カタログ番号：１４１７５−０９５）をＧｉｂｃｏから調達し、一方、胎児ウシ血清（ＦＢＳ）カタログ番号：００４−００１−１Ａは、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓから購入した。ＰＤ１アンタゴニスト（抗ＰＤ１抗体；カタログ番号：ＢＰ０１４６、ＢｉｏＸｃｅｌｌから調達）は、６．６１ｍｇ／ｍｌでＣｒｏｗｎｂｉｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．によって供給された。ＰＤ−１アンタゴニストの原液を１ｍｇ／ｍｌ濃度に調製し、使用前に４℃で維持した。ＰＤ１アンタゴニストの投与溶液は、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で新しく調製し（ｐＨ７．０）、２０ｇのマウス当たり１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉ．ｐ）投与した。被験物質であるメシル酸タラボスタットを商業的供給源から得、毎投与前に滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．０）中に０．１ｍｇ／ｍｌの作動濃度で新しく調製し、４℃に維持し、２０ｇのマウス当たり２０μｇの総用量で経口投与（ｐ．ｏ．）した。ＲＳＬＡＩＬ−２はＮｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって提供され、０．０８ｍｇ／ｍｌの作用濃度で新しく調製し、４℃に維持し、２０ｇのマウス当たり０．８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
【０２５４】
腫瘍モデル：空気中５％ＣＯ２の雰囲気中３７℃で、１０％胎児ウシ血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地において、ＭＣ３８結腸腺癌細胞を単層培養物としてインビトロで維持した。トリプシン−ＥＤＴＡ処理により週２回、腫瘍細胞を日常的に継代培養した。指数成長期の細胞を採取し、腫瘍接種のためにカウントした。
【０２５５】
腫瘍発生のために、各マウスの正面右側腹部に０．１ｍｌのＰＢＳ中のそれぞれの腫瘍細胞（１×１０６）を皮下接種した。腫瘍細胞接種の日付を０日目と示した。腫瘍移植の５日後、マウスを平均腫瘍体積約１２０ｍｍ３の６匹のマウス群に選別した。３剤併用の成分の場合、以下のような投与スケジュールをマウスに適用した（表４）。
【表５】
2021502423.tif 000007
凡例：Ｑ９ｄ＝９日目に投与、ＢＩＷ＝週２回、Ｑｄ＝１日１回。
【０２５６】
薬剤の投与は、腫瘍接種後５日目に開始し、腫瘍接種後３５日目まで継続した。腫瘍体積を１０日目、１３日目、１６日目、１８日目、２１日目、２５日目、２８日目、３２日目及び３５日目に測定した。
【０２５７】
キャリパーを用いて２次元で腫瘍体積を測定し、以下の式を用いて体積をｍｍ３で表した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長さ及び幅である。投与ならびに腫瘍及び体重測定は、層流キャビネット内で行われた。
再チャレンジ：治療中止の１０１日後（すなわち、腫瘍接種後１３６日目）、全ての動物は無腫瘍のままであった（すなわち、完全奏効を示していた）。１３６日目に、動物に１ｘ１０６ＭＣ３８細胞の再チャレンジを行い、次いで１５０日目まで及びそれ以降モニタリングした。３匹のＣ５７ＢＬ／６ナイーブマウスの群を、対照として１ｘ１０６ＭＣ−３８と同時に接種した。
【０２５８】
結果：
確立された腫瘍（約１２０ｍｍ３）を３剤併用で処理すると、３５日目までにＭＣ３８モデルにおいて１００％の無腫瘍のマウス（６／６匹）が得られた。しかしながら、これら６匹のマウスは、初回腫瘍接種の日から１３６日目まで無腫瘍のままであった（図９ａ）。１３６日目に、６匹のマウスを１×１０６のＭＣ−３８細胞で再チャレンジした。この群のうち、６／６匹の再チャレンジマウス（１匹のマウスのみが腫瘍体積のわずかな増加を示した）がナイーブマウスとは異なる腫瘍増殖を拒絶し、ＭＣ３８マウスモデルにおける長期腫瘍特異的記憶応答の生成が実証された（図９Ｂ）。
【０２５９】
様々な新ジェニックマウスモデルを評価したところ、３剤併用に応答する腫瘍モデルは腫瘍関連マクロファージの密度が高く、応答性が低いモデルはマクロファージ密度が低いことが分かった（データは図示せず）。したがって、メシル酸タラボスタット刺激マクロファージは、他の免疫エフェクター細胞について腫瘍微小環境を急速にプライミングすることができ、これらの細胞は、チェックポイント阻害及びインターロイキン刺激の組み合わせによって同様にプライミングされると考えられる。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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