(57)【要約】本開示は、概して、ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド、例えば哺乳動物ＴＭＥＭ１０６ＢまたはヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合する抗体、例えばモノクローナル抗体、抗体断片などを含む、組成物、ならびに、予防すること、リスクを減少させること、または、それを必要とする個体を治療することにおける、それらの組成物の使用に関する。【選択図】図２
2021508498.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞表面レベルを減少させる、またはＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞内レベルを減少させる、前記抗体。
【請求項２】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列
2021508498.tif 000038
の内の１つ以上のアミノ酸に対して結合する、前記抗体。
【請求項３】
単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体であって、前記抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、
ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３
からなる群から選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む、前記抗体。
【請求項４】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３〜３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６〜７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９〜１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３
を含み；ならびに、前記軽鎖可変領域が、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１〜１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１〜１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６〜２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、前記抗体。
【請求項５】
前記重鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５〜２６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９〜３１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体の１つ以上と競合する、前記抗体。
【請求項８】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する単離された抗体であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体と本質的に同じであるかまたは重複するＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに対して結合する、前記抗体。
【請求項９】
ＴＭＥＭ１０６Ｂと少なくとも１つのＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーとの相互作用または結合を減少させるまたは阻害する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１０】
前記ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーが、プログラニュリン、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＴＭ１０６Ｃ、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１からなる群から選択される、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を減少させるまたは阻害する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１２】
ＴＧＦベータ発現を増加させる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
ＴＤＰ−４３封入体を減少させる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
認知機能及び行動機能の低下を減少させ、かつ、認知機能及び行動機能を改善する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
モノクローナル抗体である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１７】
ＩｇＧクラスの抗体であり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、または、ＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
抗体断片である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１９】
前記断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
（ａ）血液脳関門を通る輸送を促進する抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプチド、及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される、血液脳関門を通る輸送を促進する抗原；
（ｃ）疾患の原因となるペプチドもしくはタンパク質または疾患の原因となる核酸からなる群から選択される、疾患の原因となる作用物質であって、疾患の原因となる前記核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復増幅ＲＮＡであり、疾患の原因となる前記タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質またはそれらの断片、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｐｅａｔ：ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、前記作用物質；
（ｄ）免疫細胞で発現されるリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される、前記リガンド及び／またはタンパク質；ならびに
（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞上で発現されるタンパク質、脂質、多糖、または、糖脂質
をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２１】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項２３】
請求項２２に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項２４】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体を生産する方法であって、前記抗体が生産されるように請求項２３に記載の細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項２５】
前記細胞により生産された抗体を回収することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体、及び医薬として許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項２７】
神経変性障害、ＴＤＰ−４３封入体の存在を特徴とする障害、ＴＤＰ−４３タンパク質症、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性症、プログラニュリン変異を伴う前頭側頭型認知症、Ｃ９０ｒｆ７２変異を伴う前頭側頭型認知症、海馬硬化症、加齢に伴う海馬硬化症、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、認知機能障害、筋萎縮性側索硬化症に関連した認知機能障害、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）における認知機能障害、及びがんからなる群から選択される疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少をさせる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項２８】
炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性脳萎縮、加齢関連形質、加齢性炎症、加齢性ニューロン喪失、加齢性認知障害、低髄鞘形成障害（ｈｙｐｏｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、及び転移に関連した障害からなる群から選択される疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【請求項２９】
ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現または増大した活性により引き起こされる、またはそれらに関連する疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に対して、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月２９日に出願した米国仮特許出願第６１／６１２，０９８号の利益を主張するものであり、同出願の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出物の内容は、その全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する：コンピューターで読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：７３５０２２００２０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１８年１２月１９日、サイズ：１６９ＫＢ）。
【０００３】
本開示の分野
本開示は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、それら抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
本開示の背景
膜貫通タンパク質１０６Ｂ（ＴＭＥＭ１０６Ｂ）とは、主に、後期エンドソーム、及び、リソソームの膜内に存在するタイプ２の１回膜貫通糖タンパク質である。（例えば、Ｌａｎｇ  ｅｌ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２８７：１９３５５−１９３６５（非特許文献１）；Ｃｈｅｎ−Ｐｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  ３２：１１２１３−１１２２７（非特許文献２）；Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３，  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  ２２：６８５−６９５（非特許文献３）を参照されたい）ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ヒトの組織で広く発現しており、そして、特に興味深いことに、ニューロン、グリア細胞、それに、脳の内皮細胞、及び、血管周囲細胞で発現している。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、哺乳動物で高度に保存されており、ヒトのタンパク質は、カニクイザル変異体とは９９％の配列同一性を、また、マウスのオルソログとは９７％の配列同一性を共有している。
【０００５】
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、アミノ酸残基１〜９２（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）の範囲にあると予測されている細胞質ドメイン、アミノ酸残基９６〜１１７の範囲にあると予測されている膜貫通ドメイン、及び、アミノ酸残基１１８〜２７４の範囲にあると予測されている内腔ドメインを有する。翻訳後のＮ−グリコシル化部位（Ｎ−Ｘ−Ｔ／Ｓ）の５つの配列モチーフは、その内腔ドメインに及んでいる。単純なグリカンが、３つのアスパラギン残基（Ｎ１４５、Ｎ１５１、及び、Ｎ１６４）に加えられているが、ＴＭＥＭ１０６Ｂの局在性に関しては重要ではない。複雑なグリカンが、Ｎ１８３、及び、Ｎ２５６の大部分のＣ末端モチーフに加えられており；Ｎ１８３に関する複雑なグリカンを損失すると、エンドソーム／リソソームに向かうＴＭＥＭ１０６Ｂ前方輸送が機能しなくなり、小胞体が保持される。加えて、複雑なＮ２５６グリコシル化は、適切なＴＭＥＭ１０６Ｂの選別のために必要である。（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ，  ２０１６，  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，  １３２：６３９−６５１（非特許文献４）を参照されたい。）
【０００６】
ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能は、完全には特徴決定されていない。最近の報告は、樹状突起に沿ったリソソームの輸送を阻害することで、樹状突起の分岐、形態形成、及び、維持における、ＴＭＥＭ１０６Ｂの役割を示している。（例えば、Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３，  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  １２６：６９６−６９８（非特許文献５）；Ｓｃｈｗｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４，  ＥＭＢＯ  Ｊ，  ３３：４５０−４６７（非特許文献６）；Ｃｌａｙｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１８，  Ｂｒａｉｎ  １４１（１２）：３４２８−３４４２（非特許文献７）を参照されたい。）
【０００７】
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々なタンパク質と相互作用することが示されており、同タンパク質として、プログラニュリンタンパク質（ＧＲＮ）、ＴＭＥＭ１０６ＡやＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、荷電多胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１（ｖ−ＡＴＰａｓｅＡｐ１）などがあるが、これらに限定されない。
【０００８】
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々な障害、及び、疾患、特に、神経変性障害に遺伝的に関連している。そのような障害として、病的ＴＤＰ−４３封入体（すなわち、ＴＤＰ−４３タンパク質症；相互作用反応ＤＮＡ結合タンパク質４３）の存在を特徴とする状態、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）、プログラニュリン（ＧＲＮ）、または、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与するＦＴＬＤ−ＴＤＰなどのＴＤＰ−４３封入体が関与するＦＴＬＤ（ＦＴＬＤ−ＴＤＰ）、ＴＤＰ−４３プロテイノパチー、アルツハイマー病、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、老化の海馬硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）、低髄鞘形成大脳白質萎縮症、及び、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの様々な障害における認知機能障害があるが、これらに限定されない。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、非小細胞肺癌の転移にも関連している（Ｋｕｎｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６；Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１８；９：  ２７３１，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  １０７ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｏ．６８８（非特許文献８））。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＡＴ８タウ沈着、ＣＤ６８細胞密度、及び、ＰＳＤ−９５濃度の変化など、ＣＴＥ患者の慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）関連の神経病理学、及び、認知症とも関連している（Ｃｈｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１８，  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ６：１１５（非特許文献９））。
【０００９】
したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂ活性に関連する様々な疾患、障害、及び、状態を治療するには、ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合する治療用抗体など、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的とする治療法、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質レベルまたは機能を低下させて、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンドまたは結合パートナーの１つ以上との結合をブロックまたは減少させるか、さもなければ、そのリガンドまたは結合パートナーの１つ以上の有効濃度を調節して、ＴＭＥＭ１０６Ｂの活性を阻害することができる治療法が必要である。
【００１０】
特許出願、及び、刊行物を含む、本明細書で引用するすべての文献を、本明細書の一部を構成するものとして、それらの全内容を援用する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｌａｎｇ  ｅｌ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２８７：１９３５５−１９３６５
【非特許文献２】Ｃｈｅｎ−Ｐｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  ３２：１１２１３−１１２２７
【非特許文献３】Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３，  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  ２２：６８５−６９５
【非特許文献４】Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ，  ２０１６，  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，  １３２：６３９−６５１
【非特許文献５】Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３，  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  １２６：６９６−６９８
【非特許文献６】Ｓｃｈｗｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４，  ＥＭＢＯ  Ｊ，  ３３：４５０−４６７
【非特許文献７】Ｃｌａｙｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１８，  Ｂｒａｉｎ  １４１（１２）：３４２８−３４４２
【非特許文献８】Ｋｕｎｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６；Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１８；９：  ２７３１，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  １０７ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｏ．６８８
【非特許文献９】Ｃｈｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１８，  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ６：１１５
【発明の概要】
【００１２】
本開示の概要
本開示は、一般的に、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、そのような抗体を使用する方法に関する。本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、もしくは状態を予防すること、リスクを減少させること、または、前記神経変性疾患、障害、もしくは状態を有する個体を治療することにおいて使用される。一部の実施形態では、本発明は、神経変性障害、ＴＤＰ−４３封入体の存在を特徴とする障害、ＴＤＰ−４３タンパク質症、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭葉認知症（ＦＴＤ）、プログラニュリン変異が関与するＦＴＤ、Ｃ９０ｒｆ７２変異が関与するＦＴＤ、ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢に伴う海馬硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）、アルツハイマー病、レビー小体型認知症、認知機能障害、加齢性認知機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、筋萎縮性側索硬化症における認知機能障害、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）における認知機能障害、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現、または、活性の増大に関連した疾患、傷害、及び、状態、低髄鞘形成不全、がん、及び、転移からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療する方法を提供するものであって、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【００１３】
したがって、本開示の特定の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関するものであり、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は；ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞内レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンドまたは結合タンパク質の１つ以上との間の相互作用を阻害するまたは減少させる、及び、それらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される特性を有する。
【００１４】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞表面レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞内レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂの総レベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂのエンドソームレベルを減少させる、ＴＭＥＭ１０６Ｂのリソソームレベルを減少させる、または、それらの任意の組み合わせである。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ分解、ＴＭＷＭ１０６Ｂ開裂、ＴＭＥＭ１０６Ｂ内在化、ＴＭＥＭ１０６Ｂダウンレギュレーション、または、それらの任意の組み合わせを誘発する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、インビボでのＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳内のＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、１つ以上の末梢器官におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳、１つ以上の末梢器官、または、それらの任意の組み合わせにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ミクログリアにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ニューロンにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞レベルを減少させる。
【００１５】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンタンパク質との間、ＴＭＥＭ１０６Ｂ及びＴＭＥＭ１０６Ｃ、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能を調節する任意のタンパク質またはポリペプチドなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー間での１つ以上の相互作用を阻害するまたは減少させる。
【００１６】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、不連続のＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該不連続のＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープは、２つ以上のペプチド、３つ以上のペプチド、４つ以上のペプチド、５つ以上のペプチド、６つ以上のペプチド、７つ以上のペプチド、８つ以上のペプチド、９つ以上のペプチド、または、１０個以上のペプチドを含む。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該ペプチドのそれぞれは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列の、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列の、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１５のアミノ酸配列の５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含み；または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列の、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列の、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１５のアミノ酸配列に対応する哺乳動物ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に関する５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０個以上、１１個以上、１２個以上、１３個以上、１４個以上、１５個以上、１６個以上、１７個以上、１８個以上、１９個以上、２０個以上、２１個以上、２２個以上、２３個以上、２４個以上、２５個以上、２６個以上、２７個以上、２８個以上、２９個以上、または、３０個以上のアミノ酸残基を含む。
【００１７】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの立体配座エピトープに結合する。
【００１８】
前述の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−１７、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２６、及び、ＴＭ−２７、ならびに、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合に関するそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と競合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−５、ＴＭ−７、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２１、ＴＭ−２５、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３２、ＴＭ−３５、ＴＭ−３７、ＴＭ−３９、ＴＭ−４２、ＴＭ−４５、ＴＭ−４８、及び、ＴＭ−５３、ならびに、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合に関するするそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と競合する。前述の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−４、ＴＭ−６、ＴＭ−８、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−２０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３６、ＴＭ−４１、ＴＭ−４４、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合に関するする任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と競合する。一部の実施形態では、当該リファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−４、ＴＭ−６、ＴＭ−８、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−２０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３６、ＴＭ−４１、ＴＭ−４４、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗体のＶＨ及びＶＬを含む。
【００１９】
本開示のその他の態様は、単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関するものであり、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３からなる群から選択される抗体の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３からなる群から選択される抗体の６つのＨＶＲ（例えば、以下の表４Ａに示したような）を含む。
【００２０】
本開示のその他の態様は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３からなる群から選択される抗体の６つのＨＶＲを含むリファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と本質的に同じＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに結合する単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。一部の実施形態では、当該リファレンス抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３からなる群から選択される抗体のＶＨ及びＶＬ（例えば、以下の表４Ｂに示したような）を含む。
【００２１】
本開示のその他の態様は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５９〜７３、８０〜９０、５〜１９、５９〜６９、５２〜６２、６４〜７４、１５１〜１６５、１８５〜１９５、１３９〜１４９、２４８〜２５８、１５６〜１６１、２０２〜２０７、２１９〜２３３、１２６〜１４０、１８５〜１９５、２６０〜２７４、２０２〜２１２、１５１〜１６１、２２３〜２３３、１４３〜１５３、２２３〜２２８、１３３〜１４５、及び／または、１９８〜２１２の内の１つ以上のアミノ酸に結合する単離された（例えば、モノクローナル）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。
【００２２】
本開示の一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、アミノ酸残基１５１〜１６５、及び／または、１８５〜１９５の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。本開示の一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５９〜７３、８０〜９０、１３９〜１４９、及び／または、２４８〜２５８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５〜１９、１５６〜１６１、２０２〜２０７、及び／または、２１９〜２３３内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基１２６〜１４０、１８５〜１９５、及び／または、２６０〜２７４の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基２０２〜２１２の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基１５１〜１６１、及び／または、２２３〜２３３の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５９〜６９、１４３〜１５３、及び／または、２２３〜２２８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基１３３〜１４５、及び／または、１９８〜２１２の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５２〜６２、６４〜７５、及び／または、２２３〜２２８の内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【００２３】
本開示のその他の態様は、アミノ酸配列
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の内の１つ以上のアミノ酸に結合する単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。
【００２４】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のそのリガンド、シグナル伝達タンパク質、または、結合タンパク質との間の相互作用を、ａ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用に利用可能なＴＭＥＭ１０６Ｂの有効レベルを減少させる；ｂ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の部位をブロックする；ｃ）１つ以上の当該リガンドまたは結合タンパク質との相互作用、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの適切な処理、及び／または、細胞内局在化に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の翻訳後事象を予防する；ｄ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの分解を誘導する；ｅ）ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、両方の配座を変更して、さらに阻害する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、それらの組み合わせに対して特異的に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂであり、そして、当該第２の抗原は、血液脳関門を通る輸送を促進する抗原である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原を、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１、及び、２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質変換ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、及び、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択する。
【００２５】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＧＦベータの発現を高める。
【００２６】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、モノクローナル抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラスの抗体であり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、または、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、哺乳動物ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に関するアミノ酸残基を含むエピトープに対して結合する抗体断片である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体、または、キメラ抗体である。
【００２７】
本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの核酸を含むベクターに関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかのベクターを含む単離された宿主細胞に関する。本開示のその他の態様は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を生産する方法に関するものであり、同方法は、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を生産するように、前出の実施形態のいずれかの宿主細胞を培養することを含む。特定の実施形態では、当該方法は、当該宿主細胞が生産した当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を回収することをさらに含む。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの方法で生産した、単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前出の実施形態のいずれかの当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体及び医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物に関する。
【００２８】
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認知機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療する方法に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認知機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防すること、リスクを減少させること、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療することにおける使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、転移を予防するまたは減少させることにおける使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、がんを予防すること、リスクを減少させること、または、がんを有する個体を治療することにおいて使用するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。
【００２９】
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、炎症性細胞の破片またはタンパク質凝集体、異常な循環骨髄細胞、不健康な老化、加齢性認知機能障害、加齢性脳萎縮、炎症やニューロン脱落など、これらに限定されない加齢関連形質、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害など、公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療するための医薬を製造するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療する方法に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療することにおける使用のための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関する。本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、脊髄損傷、認知症、脳卒中、パーキンソン病、急性播種性脳脊髄炎、網膜変性、加齢性黄斑変性症、緑内障、多発性硬化症、敗血症性ショック、細菌感染、関節炎、及び、変形性関節症からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療するための医薬を製造するための前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用に関する。
【００３０】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、２つ以上の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を含む。
【００３１】
本明細書に記載の様々な実施形態の１つ、一部、または、全部の特性を組み合わせて、本発明のその他の実施形態を形成し得ることを理解されたい。本発明のこれらの態様、及び、その他の態様は、当業者には自明である。本発明のこれらの実施形態、及び、その他の実施形態を、以下にさらに詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１には、本開示の様々な抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を添加した後のＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１０６Ｂのパーセントダウンレギュレーション（ＤＲ）を示すデータを記載している。
【図２】図２には、本開示の様々な抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を添加した後のＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１０６Ｂのパーセントダウンレギュレーションを示すデータを記載している。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本開示の詳細な説明
本開示は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；それら抗体を作り出す、及び、使用する方法；それら抗体を含む医薬組成物；それら抗体をコードする核酸；及び、それら抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
【００３４】
本明細書で説明または参照した技術や手順は、一般的に、よく理解がされており、そして、当業者であれば、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｌ  ａｌ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （２００１）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  （２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｐ．  Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｄｅａｎ，  ｅｄｓ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０００）に記載されている方法論など、広く利用がされている方法論である従来の方法論を進んで使用している。
【００３５】
Ｉ．定義
本明細書では、用語「ＴＭＥＭ１０６Ｂ」または「ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド」を、互換的に使用しており、特に断りがない限り、霊長類（例えば、ヒト、及び、カニクイザル）、及び、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）などの哺乳類を含む、任意の脊椎動物起源の任意の天然のＴＭＥＭ１０６Ｂのことを指す。一部の実施形態では、この用語は、野生型配列、及び、天然に存在する変異配列、例えば、スプライス変異、または、対立遺伝子変異の両方を含む。一部の実施形態では、この用語は、「全長」の未処理ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ならびに、細胞内での処理が関与する任意の形態のＴＭＥＭ１０６Ｂを含む。一部の実施形態では、当該ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂである。一部の実施形態では、例示的なＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、２００６年６月２７日現在でのＵｎｉｐｒｏｔ受託番号：Ｑ９ＮＵＭ４である。一部の実施形態では、例示的なヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１である。
【００３６】
用語「抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体」、「ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体」、及び、「ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合する抗体」は、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的にする診断薬、及び／または、治療薬として有用な抗体であり、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して十分な親和性で結合することができる抗体のことを指す。ある実施形態では、無関係の非ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドに対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で決定したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、異なる種に由来するＴＭＥＭ１０６Ｂの間で保存されているＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープに対して結合する。
【００３７】
標的分子に対する抗体の結合に関して、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、非特異的相互作用とは異なる測定可能な結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定して測定することができる。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰の非標識標的に類似するコントロール分子と競合させて決定することができる。この事例では、プローブに対する標識した標的の結合を、過剰な非標識標的が競合的に阻害するのであれば、特異的結合を示す。本明細書で使用する用語「特異的結合」または「特異的に結合する」、または、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチド標的に関するエピトープに「特異的」であるとは、例えば、概ね、１０−４Ｍ以下、１０−５Ｍ以下、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下のいずれかの標的に関するＫＤ、または、１０−４Ｍ〜１０−６Ｍ、または、１０−６Ｍ〜１０−１０Ｍ、または、１０−７Ｍ〜１０−９Ｍの範囲のＫＤを有する分子として示すことができる。当業者であれば、親和性とＫＤ値は反比例することを理解する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値として表れる。ある実施形態では、用語「特異的結合」とは、分子が、任意のその他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対して実質的に結合せずに、特定のポリペプチド、または、特定のポリペプチドに関するエピトープに対して結合する結合のことを指す。
【００３８】
本明細書において、用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、「抗体」と互換的に使用する。本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味で使用しており、特に、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限りは、抗体断片を含む。
【００３９】
「ネイティブ抗体」は、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖、及び、２つの同一の重（「Ｈ」）鎖から構成されている約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合で重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。それぞれの重鎖、及び、それぞれの軽鎖は、規則的な間隔を開けた鎖内ジスルフィド架橋も有する。それぞれの重鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＨ）を有しており、これに、幾つかの定常ドメインが続く。それぞれの軽鎖は、一端に、可変ドメイン（ＶＬ）を有しており、他端に、定常ドメインを有しており；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列しており、そして、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。
【００４０】
異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ  ７１  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照されたい。
【００４１】
任意の脊椎動物種に由来する軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）、及び、ラムダ（「λ」）と称する２つの明確に異なる種類の内の１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには；ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及び、ＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及び、ミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトでは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及び、ＩｇＡ２を発現する。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造、及び、三次元構成は公知であり、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＣｅＬ１ｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，２０００）で概説されている。
【００４２】
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインのことを指す。当該重鎖及び軽鎖の可変ドメインを、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称し得る。これらのドメインは、一般的に、（同じクラスのその他の抗体と比較して）最も変化しやすい抗体の部分であり、そして、抗原結合部位を含む。
【００４３】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の間で配列が大きく異なるという事実のことを指す。当該可変ドメインは、抗原結合を媒介し、そして、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、当該可変性は、当該可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている３つのセグメントに集中している。可変ドメインにおいて高度に保存されている部分を、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、３つのＨＶＲで接続した、ベータシート立体配置を主体とする４つのＦＲ領域を含み、それらは、当該ベータシート構造に接続するループ、及び、一部の事例では、当該ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。それぞれの鎖でのＨＶＲは、ＦＲ領域に非常に近接して一緒に保持され、他方の鎖に由来するＨＶＲと共に、それらの抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい）。当該定常ドメインは、抗原に対する抗体の結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
【００４４】
本明細書で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体集団から得た抗体、例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体のことを指し、すなわち、当該集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る自然発生の変異、及び／または、翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つ以上の抗原部位を指向する。一般的には異なる決定基（エピトープ）を指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、当該抗原の単一の決定基を指向する。それらの特異性に加えて、当該モノクローナル抗体は、その他の免疫グロブリンによる汚染を受けていないハイブリドーマ培養で合成するという点で有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特徴を示すものであって、任意の特定の方法で抗体の生産を必要とするものと解釈すべきではない。例えば、本発明にしたがって使用するモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、または、ヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部またはすべてを有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を生産する技術などの様々な技術によって生産し得る。
【００４５】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または、「全抗体」とは、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体を指すために、互換的に使用している。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。当該定常ドメインは、ネイティブ配列の定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列の定常ドメイン）、または、そのアミノ酸配列変異体とし得る。一部の事例では、当該インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【００４６】
「抗体断片」とは、インタクト抗体が結合する抗原に対して結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子のことを指す。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及び、Ｆｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）を参照されたい）；一本鎖抗体分子、及び、抗体断片から形成した多重特異性抗体がある。
【００４７】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」断片と称する２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した名称を有する残留「Ｆｃ」断片とを生成する。当該Ｆａｂ断片は、軽鎖全体に加えて、重鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と、１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とからなる。それぞれのＦａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体をペプシン処理すると、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られ、このものは、異なる抗原結合活性を有するジスルフィド結合した２つのＦａｂ断片に概ね対応しており、また、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含んだ幾つかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’に関する本明細書での表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、本来は、その断片間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生産した。抗体断片のその他の化学的カップリングも公知である。
【００４８】
当該Ｆｃ断片は、ジスルフィドと共に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域は、特定の細胞型で認められるＦｃ受容体（ＦｃＲ）でも認識される。
【００４９】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体の「機能性断片」は、インタクト抗体の一部分を含み、一般的には、インタクト抗体の抗原結合領域または可変領域、または、ＦｃＲ結合能力を保持する、または、改変したＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例として、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び、抗体断片から形成した多重特異性抗体がある。
【００５０】
用語「ダイアボディ」とは、可変ドメインの鎖内ではなく、鎖間のペアリングを達成し、それにより、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０個）の残基）を用いてｓＦｖ断片（前出の段落を参照されたい）を構築して調製した小さな抗体断片のことを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが、異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。
【００５１】
本明細書で使用する「キメラ抗体」とは、本開示のキメラ抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体（免疫グロブリン）であって、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体、または、特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同であり、かつ、その鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する抗体、または、別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体での対応する配列と同一または相同である抗体、ならびに、所望の生物活性を奏する限りは、それら抗体の断片のことを指す。本明細書で対象とするキメラ抗体として、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体があり、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫処置して産生した抗体に由来する。本明細書で使用する、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用する。
【００５２】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のヒト化など、非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及び、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び、一般的には、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべて、または、実質的にすべてが、非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、そして、ＦＲのすべて、または、実質的にすべてが、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体とは、ヒト化を受けた抗体のことを指す。
【００５３】
「ヒト抗体」は、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のように、ヒトで産生した抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を含む抗体、及び／または、本明細書に開示したヒト抗体を作り出す技術のいずれかを使用して生産した抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、かかる抗体を抗原接種に応答して生産するように修飾しているが、例えば、免疫処置したゼノマウス、ならびに、ヒトＢ細胞ハイブリドーマを介して生成させて、その内因性遺伝子座を無効化したトランスジェニック動物に対して当該抗原を投与して、調製することができる。
【００５４】
本明細書で使用する用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」とは、配列が超可変性であり、及び／または、構造的に定義されたループを形成する、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の抗体可変ドメインの領域などの抗体可変ドメインの領域のことを指す。一般的に、抗体には、６つのＨＶＲがあり；３つが、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、そして、３つが、ＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ネイティブ抗体において、Ｈ３及びＬ３が、６つのＨＶＲの内で最も多様性に富んでおり、そして、特に、Ｈ３が、抗体に対して優れた特異性を与える上で独特の役割を果たすものと考えられている。重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖がなくとも機能的で、かつ、安定している。
【００５５】
数多くのＨＶＲの記載を、本明細書で使用しており、かつ、本明細書に含んでいる。一部の実施形態では、これらのＨＶＲは、配列変動性に基づいたＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）とし得る、そして、最も一般的に使用している（Ｋａｂａｔ  ｅｔａ  ｌ．，上掲）。一部の実施形態では、それらのＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲとし得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、どちらかと言えば、構造的ループの位置を指すものである（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７））。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、ＡｂＭ  ＨＶＲとし得る。これらのＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと、Ｃｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の折衷案を示しており、そして、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。一部の実施形態では、これらのＨＶＲを、「接触」ＨＶＲとし得る。当該「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれの残基を、以下に示す。
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【００５６】
ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬでの２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、及び、８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、及び、ＶＨでの２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び、９３〜１０２、９４〜１０２または９５〜１０２（Ｈ３）。当該可変ドメイン残基を、これらの伸長ＨＶＲ定義のそれぞれに対して、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，上掲に従って付番する。
【００５７】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５８】
本明細書で使用する「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、または、ヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含み得る、または、既存のアミノ酸配列変化を含み得る。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０個以下、９つ以下、８つ以下、７つ以下、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、または、２つ以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨ中に存在する場合、好ましいアミノ酸変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び、７８Ｈの内の３つ、２つ、または、１つのみに生じ；例えば、当該位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または、７８Ａとし得る。ある実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列、または、ヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００５９】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免役グロブリンのＶＬ配列またはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行う。一般的には、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、ＶＬに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，上掲などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、または、カッパＩＶとし得る。さらに、ＶＨに関するものとして、サブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，上掲などのサブグループＩ、サブグループＩＩ、または、サブグループＩＩＩとし得る。
【００６０】
例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のアミノ酸修飾など、指定した位置での「アミノ酸修飾」とは、指定した残基の置換もしくは欠失、または、少なくとも１つのアミノ酸残基を、指定した残基に隣接するように挿入することを指す。指定した残基に「隣接する」挿入とは、そこから１個〜２個の残基までに挿入することを意味する。当該挿入は、指定した残基のＮ末端側またはＣ末端側で行い得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【００６１】
例えば、本開示の親和性成熟抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの「親和性成熟」抗体とは、当該抗体の１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変を有し、その結果、抗原に対する抗体の親和性が、当該改変（複数可）を有しない親抗体と比較して改善した抗体である。ある実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル、または、ひいてはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で公知の手法で生産する。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨ−及びＶＬ−ドメインのシャッフリングを用いた親和性成熟について記載している。ＨＶＲ、及び／または、フレームワーク残基のランダム変異導入については、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０〜９（１９９５）；及び、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されている。
【００６２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位、及び、抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと、１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供して、この抗体に抗原結合特異性を与える、６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００６３】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略称される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態で接続したＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、当該ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成する、ことを可能にする。
【００６４】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、アミノ酸配列変異Ｆｃ領域）が関与する生物活性のことを指し、そして、抗体のアイソタイプに応じて異なる。
【００６５】
本明細書で使用する用語「Ｆｃ領域」とは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び、変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６、または、Ｐｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端にまで及ぶものと定義される。当該Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムでの残基４４７）は、例えば、抗体の生産もしくは精製の間に、または、抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することで除去し得る。したがって、インタクト抗体の組成は、すべてのＫ４４７残基を除去した抗体集団、Ｋ４４７残基を除去していない抗体集団、及び、Ｋ４４７残基を持つ抗体と持たない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体における使用に好適なネイティブ配列Ｆｃ領域として、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び、ＩｇＧ４がある。
【００６６】
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、自然界で認められるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域として、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ、及び、Ａアロタイプ）、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびに、それらの天然変異がある。
【００６７】
「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって、ネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、当該変異Ｆｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有しており、例えば、ネイティブ配列Ｆｃ領域、または、親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書での変異Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域、及び／または、親ポリペプチドのＦｃ領域に対して、少なくとも約８０％の相同性、及び、最も好ましくは、それらに対して少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらに対して少なくとも約９５％の相同性を有する。
【００６８】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体のことを表す。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合する抗体であり、そして、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び、ＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体があり、これらの受容体の対立遺伝子変異体、及び、選択的スプライシング形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体として、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なるＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）と、ＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）とを含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害性モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含む。その他のＦｃＲは、今後同定されるものを含めて、本明細書での用語「ＦｃＲ」に含まれる。また、ＦｃＲは、抗体の血清での半減期を長くすることができる。
【００６９】
ペプチド、ポリペプチド、または、抗体配列に関して本明細書で使用する、「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「アミノ酸配列相同性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて、最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない、指定のペプチド、または、ポリペプチド配列でのアミノ酸残基と同一である、候補配列でのアミノ酸残基のパーセンテージのことを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲に属する様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、または、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において公知の任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを評価するための適切なパラメーターを決定することができる。
【００７０】
同じエピトープに関して競合する抗体（例えば、中和抗体）の文脈で使用する用語「競合する」とは、試験する抗体が、共通の抗原（例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、その断片）に対するリファレンス分子（例えば、リガンド、または、リファレンス抗体）の特異的結合を予防または阻害する（例えば、減少させる）アッセイによって決定する抗体間の競合のことを意味する。無数のタイプの競合結合アッセイを使用して、抗体が、別の抗体と競合するか否かを判断でき、例えば；固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２−２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９）固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ−１２５ラベルを使用した固相直接ラベルＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６−５５２を参照されたい）；及び、直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）がある。一般的には、そのようなアッセイは、非標識試験抗体、及び、標識参照抗体のいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定して測定する。通常、当該試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイ（競合抗体）で同定した抗体として、リファレンス抗体と同じエピトープに対して結合する抗体と、立体障害を招くリファレンス抗体が結合するエピトープに対して十分近位の隣接エピトープに対して結合する抗体がある。競合結合を決定するための方法に関するさらなる詳細を、本明細書の以下の記載と実施例で説明する。通常、競合する抗体が過剰に存在すると、共通抗原に対するリファレンス抗体の特異的結合は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％を阻害する（例えば、減少させる）。
【００７１】
本明細書で使用するＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質と第２のタンパク質との間の「相互作用」として、タンパク質−タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及び、イオン結合があるが、これらに限定されない。本明細書において、抗体が、２つのタンパク質の間の相互作用を、攪乱する、減少させる、または、完全に解消する場合、当該抗体は、２つのタンパク質の間の「相互作用を阻害する」。その抗体が、２つのタンパク質の内の一方に結合する場合、本開示の抗体は、２つのタンパク質の間の「相互作用を阻害する」。一部の実施形態では、当該相互作用は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または、ほぼ１００％のいずれかで阻害することができる。
【００７２】
用語「エピトープ」として、抗体が結合することができる、任意の決定基がある。エピトープは、その抗原を標的とする抗体が結合する抗原の領域であり、また、抗原がポリペプチドである場合、当該抗体と直接に接触する特定のアミノ酸を含む。大抵の場合、エピトープは、ポリペプチドに存在するが、一部の事例では、核酸などのその他の種類の分子に存在することができる。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子に属する化学的に活性な表面を含み、そして、特定の三次元構造特性、及び／または、特定の電荷特性を有することができる。一般的に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド、及び／または、高分子の複雑な混合物での標的抗原に関するエピトープを優先的に認識する。
【００７３】
「アゴニスト」抗体、または、「活性化」抗体は、抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、高める）抗体である。
【００７４】
「アンタゴニスト」抗体、または、「ブロッキング」抗体、または、「阻害」抗体とは、当該抗体が、抗原と結合した後に、１つ以上のリガンドに対する抗原結合を減少させる、阻害する、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体、及び／または、当該抗体が抗原と結合した後に、当該抗原の１つ以上の活性または機能を減少させる、阻害する、及び／または、解消する（例えば、弱める）抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体、または、ブロッキング抗体、または、阻害抗体は、１つ以上のリガンドへの抗原結合、及び／または、当該抗原の１つ以上の活性または機能を、実質的または完全に阻害する。
【００７５】
本開示の単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの「単離された」抗体は、その生産環境の成分から（例えば、自然に、または、組換えて）同定、分離、及び／または、回収したものである。好ましくは、当該単離された抗体は、その生産環境に由来するその他のすべての汚染成分とは関連がない。組換えトランスフェクト細胞から得られるものなど、その生産環境に由来する汚染成分は、一般的には、抗体の研究、診断、または、治療への使用を妨げる物質であり、そして、酵素、ホルモン、及び、その他のタンパク質性、または、非タンパク質性溶質を含み得る。好ましい実施形態では、抗体を：（１）例えば、ローリー法で決定した抗体の９５重量％を超えるまで、そして、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで；（２）スピニングカップシーケンサーを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または、（３）クマシーブルー、または、好ましくは、銀染色を使用する非還元または還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥで均一になるまで精製する。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換えＴ細胞内の元の位置に抗体を含む。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程で調製する。
【００７６】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体などの抗体をコードする「単離された」核酸分子とは、それが生産された環境において通常会合している少なくとも１つの汚染核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、当該単離された核酸は、その生産環境に関連するすべての構成成分とは会合しない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、自然界で認められる形態または状況とは異なる形態で存在する。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド、及び、抗体をコードする核酸とは区別される。
【００７７】
本明細書で使用する用語「ベクター」とは、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子のことを指す。「プラスミド」は、ベクターの一種であり、さらなるＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡのことを指す。ファージベクターは、別の種類のベクターである。別の種類のベクターとして、ウイルスベクターがあり、さらなるＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムに対してライゲーションすることができる。特定のベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、及び、エピソーム哺乳動物ベクター）は、導入をした宿主細胞で自己複製が可能である。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結した遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書では、「組み換え発現ベクター」、または、簡略して「発現ベクター」と称する。一般的に、組換えＤＮＡ技法で利用する発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが、ベクターの内で最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用し得る。
【００７８】
本明細書で互換的に使用する「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの重合体のことを指すものであり、そして、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。当該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、及び／または、それらの類似体、または、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、または、合成反応により重合体に組み込まれ得る任意の基質とすることができる。
【００７９】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになることができる、または、レシピエントになっている個々の細胞、または、細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、そして、その子孫は、自然発生的、偶発的、または、意図的な変異により、元の親細胞と必ずしも完全に（形態学的に、または、ゲノムＤＮＡ相補鎖において）同一でなくともよい。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）をインビボでトランスフェクションした細胞を含む。
【００８０】
本明細書で使用する「担体」は、使用する用量及び濃度で、そこに曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である医薬として許容される担体、賦形剤、または、安定剤を含む。
【００８１】
本細書で使用する用語「予防する」とは、個体における特定の疾患、障害、または状態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害、もしくは状態の素因がある、影響を受けやすい、または、そのような疾患、障害、もしくは状態を発症するリスクがあるが、未だに、当該疾患、障害、または状態であると診断されていない。
【００８２】
本明細書で使用する、特定の疾患、障害、または状態を発症する「リスクのある」個体とは、検出可能な疾患または疾患の症状を有し得る、または、有し得ず、そして、本明細書に記載した治療法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示し得る、または、示し得ない。「リスクがある」とは、個体が、特定の疾患、障害、または状態の発症と相関する測定可能なパラメーターである、当該技術分野で公知の１つ以上のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子の１つ以上を持たない個体よりも、特定の疾患、障害、または状態を発症する可能性が高くなる。
【００８３】
本明細書で使用する用語「治療」とは、臨床病理の経過期間で治療を受けている個体の自然な経過を変えるように設計した臨床介入のことを指す。治療の望ましい効果として、進行速度の低下、病的状態の改善または緩和、及び、特定の疾患、障害、または状態の寛解または予後の改善がある。例えば、特定の疾患、障害、または状態に関連する１つ以上の症状が緩和または解消した場合、個体の「治療」は成功している。
【００８４】
「有効量」とは、所望の治療的、または、予防的結果を達成するために必要な投薬量、及び、期間で、少なくとも有効な量のことを指す。有効量は、１回以上の投与で提供することができる。本明細書に記載の有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び、体重、ならびに、個体において所望の応答を誘発する治療の能力などの要因によって変化し得る。有効量は、治療でのあらゆる毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が勝る量でもある。予防的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患の生化学的、組織学的、及び／または、行動的症状、その合併症、及び、疾患の進行過程での中間的病理学的表現型など、疾患のリスクの排除または軽減、重症度の軽減、または、発症の遅延などの結果がある。治療的使用の場合、有益または望ましい結果として、疾患が関与する１つ以上の症状の減少、疾患を煩った方々の生活の質の向上、疾患の治療に必要なその他の薬物の投与量の減少、標的化などを介した別の薬物の効果の改善、疾患の進行の遅延、及び／または、生存期間の延長などがある。薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床の文脈で理解すると、薬物、化合物、または、医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または、医薬組成物と組み合わせて達成し得る、または、達成し得ない。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬を投与する状況で考慮し得るものであり、そして、単一の薬剤が、１つ以上のその他の薬剤と組み合わせて、所望の結果を達成し得る、または、達成するのであれば、有効量で与えられると考え得る。
【００８５】
治療、予防、または、リスクの軽減を目的とする「個体」とは、ヒト、飼育動物、及び、家畜、ならびに、動物園用動物、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類される任意の動物のことを指す。好ましくは、個体は、ヒトである。
【００８６】
本明細書で使用する、別の化合物または組成物との「併用」投与とは、同時投与、及び／または、異なる時点での投与を含む。また、併用投与は、合剤としての投与、または、別個の組成物としての投与を含み、異なる投与頻度または間隔で、かつ同じ投与経路または異なる投与経路を使用することを含む。一部の実施形態では、併用投与は、同じ治療レジメンの一部としての投与である。
【００８７】
本明細書で使用する用語「約」とは、それぞれの数値の通常の誤差範囲のことを指しており、当該技術分野の当業者であれば、容易に理解する。本明細書において「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その数値、または、パラメーターそれ自体を対象にした実施形態を含む（及び、説明する）。
【００８８】
本明細書、及び、添付した特許請求の範囲で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、及び、「ｔｈｅ」は、特に断りのない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、１つの抗体から、モル量の数多くの抗体までを指すものであり、そして、当業者に公知のそれらの等価物なども含む。
【００８９】
本明細書で使用する本開示の「ＴＭＥＭ１０６Ｂ」タンパク質として、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、霊長類のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、カニクイザルのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、ラットのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質があるが、これらに限定されない。加えて、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、霊長類のＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザルのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、ラットのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質の１つ以上の中にあるエピトープに結合し得る。
【００９０】
本明細書で説明する本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」、及び、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」を含む、ことを理解されたい。
【００９１】
ＩＩ．抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体
本明細書では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。提供する抗体は、例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ関連障害の診断または治療に有用である。
【００９２】
ある態様では、本開示は、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質内のエピトープに対して結合する単離された（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質として、哺乳動物のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、ヒトのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質、及び、カニクイザルのＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質があるが、これらに限定されない。
【００９３】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂは、２型膜糖タンパク質をコードする２７４個のアミノ酸のタンパク質である。ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの当該アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１：
2021508498.tif 000005
に記載している。
【００９４】
加えて、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２：
2021508498.tif 000006
に記載している。
【００９５】
加えて、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１５：
2021508498.tif 000007
に記載している。
【００９６】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞で発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、エンドソーム、及び／または、リソソームで発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドソーム、及び／または、後期リソソームで発現する。一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞表面で発現する。
【００９７】
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質として、Ｎ末端内腔ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１１〜２７４の範囲であると考えられる；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を参照されたい）、膜貫通ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基９６〜１１７の範囲であると考えられる）、及び、Ｃ末端ドメイン（ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１〜９２の範囲であると考えられる）など、これらに限定されない、幾つかのドメインを含む。加えて、本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、脳、ニューロン、グリア細胞、内皮細胞、血管周囲細胞、周皮細胞など、これらに限定されないが、数多くの組織、及び、細胞で発現する。
【００９８】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ結合パートナー
本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、プログラニュリンタンパク質（ＧＲＮ）、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、荷電多小胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）、微細管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質など、これらに限定されない１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質と相互作用（例えば、結合）することができる。本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その様々なリガンド、及び、結合パートナーとの相互作用に影響を与える。
【００９９】
プログラニュリン
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ニューロン後期エンドリソソームで、プログラニュリンと共局在することが示されており、また、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、プログラニュリンの細胞内レベルを高める（Ｃｈｅｎ−Ｐｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３２：１１２１３−１１２２７）。
【０１００】
プログラニュリンには、ＰＧＲＮ、プロエピセリン、グラニュリン−エピセリン前駆体、ＰＣ（前立腺癌）細胞由来成長因子（ＰＣＤＧＦ）、及び、アクログラニンなどの様々な別名がある。プログラニュリンは、５９３個のアミノ酸のタンパク質であり、同タンパク質は、前駆体ＰＧＲＮからタンパク質分解的に開裂することができる６〜２５ｋＤａの範囲の小さなグラニュリン（エピセリン）モチーフの７．５反復を有する６８．５ｋＤの分泌型糖タンパク質をコードする。プログラニュリン開裂産物の例として、グラニュリンＡ／エピテリン１、グラニュリンＢエピテリン２、グラニュリンＣ、グラニュリンＤ、グラニュリンＥ、グラニュリンＦ、グラニュリンＧ、及び、プログラニュリンに由来するその他の公知のペプチド産物があるが、これらに限定されない。
【０１０１】
プログラニュリンは、広範に発現しており、そして、非ニューロン細胞では、細胞周期の調節や細胞の運動性、創傷の修復、炎症、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの増殖因子の誘導、腫瘍形成などの様々な事象に関連している。また、プログラニュリンは、初期の神経発生でも広範に発現するが、その後の発生では、大脳皮質ニューロン、海馬錐体ニューロン、プルキンエ細胞などの定義したニューロン集団に限定される。
【０１０２】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂとプログラニュリンとの間の相互作用を、強化または増強する。
【０１０３】
その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー
ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーのメンバーと相互作用することが示されている。例えば、ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、そのファミリーメンバーであるＴＭＥＭ１０６Ｃと相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６−２４０を参照されたい。）本開示のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに結合し、そして、ＴＭＥＭ１０６Ｂの機能、及び、活性を改変する。加えて、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質は、ＴＭＥＭ１０６Ｃに結合し、そして、ＴＭＥＭ１０６Ｃの機能、及び、活性を改変する。
【０１０４】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバーとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、別のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｃとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）または減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、その他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーのメンバーとの間の相互作用を強化する、または、高める。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、別のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドとの間の相互作用を強化する、または、高める。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｃとの間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１０５】
クラスリン重鎖
ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、エンドサイトーシスアダプタータンパク質クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）と相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６−２４０を参照されたい。）ＴＭＥＭ１０６Ｂのエンドリソソーム局在を伴うタンパク質の相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ細胞質ドメインが、リソソームへのエンドサイトーシス捕捉物の送達に関与し得ることを意味する。
【０１０６】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＬＴＣとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＬＴＣとの間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１０７】
脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット
ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端は、脂肪細胞タンパク質２のエンドサイトーシスアダプタータンパク質μ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）と相互作用することが示されている。（Ｓｔａｇｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６−２４０を参照されたい）ＴＭＥＭ１０６のエンドリソソーム局在を伴うタンパク質の相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ細胞質ドメインが、リソソームへのエンドサイトーシス捕捉物の送達に関与し得ることを意味する。
【０１０８】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）との間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１０９】
荷電多小胞体タンパク質２ｂ
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、エンドリソソームタンパク質輸送とオートファジー構造形成とを調節するトランスポートＩＩＩ（ＥＳＣＲＴ−ＩＩＩ）複合体に必要なエンドソーム分別複合体のメンバーである荷電多胞体タンパク質２ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）に対して直接に結合することが示されている（Ｊｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５、Ｍｏｌ  Ｂｒａｉｎ、８：８５）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＨＭＰ２Ｂとの間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＣＨＭＰ２Ｂとの間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１１０】
微小管関連タンパク質６
微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）のＣ末端は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＮ末端に対して直接に結合する（Ｓｃｈｗｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＥＭＢＯ  Ｊ，３３：４５０−４６７）。ＭＡＰ６の過剰発現は、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックダウンと同様に、樹状突起の分岐を阻害する。ＭＡＰ６ノックダウンは、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の機能的な相互作用を支持する、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックダウンの樹状表現型を完全に救済する。ＴＭＥＭ１０６Ｂ／ＭＡＰ６相互作用は、おそらくは、逆行性輸送の分子破壊として作用することで、リソソームの樹状輸送を調節する上で重要であることを示した。リソソームの誤経路は、ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク変異を有する患者の神経変性を促し得る。ＭＡＰ６のニューロンが豊富なスプライス変異体のＣ末端反復領域は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞質Ｎ末端に対して優先的に結合する。
【０１１１】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の相互作用を阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＭＡＰ６との間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１１２】
リソソーム関連膜タンパク質１
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、細胞体の後期エンドソーム／リソソーム小胞、及び、樹状突起においてＬＡＭＰ１と共局在するが、シナプス小胞、または、初期、または、リサイクルエンドソームとは共局在しない。（Ｓｔａｇｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，６１：２２６−２４０。）ＬＡＭＰ１（リソソーム関連膜タンパク質１）は、後期エンドソーム／リソソームマーカーである。ＴＭＥＭ１０６Ｂの増大は、そのような輸送を阻害して、リソソームを大量にもたらす一方で、ＴＭＥＭ１０６Ｂの減少は、軸索輸送リソソームを増加させる（運動性を高める）。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＬＡＭＰ１との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、軸索輸送リソソームを増加させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、軸索輸送したリソソームの運動性を高める。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢとＬＡＭＰ１との間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１１３】
液胞−ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１
ＴＭＥＭ１０６Ｂが、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１（ｖ−ＡＴＰａｓｅ  ＡＰ１）に、その内腔（Ｃ末端）ドメインを介して結合することも示されている（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ，９５：２８１−２９６）。Ｖ−ＡＴＰａｓｅは、リソソームの酸性化に関与し；マルチユニットタンパク質複合体の安定化などによる、その機能の調節は、リソソームの機能に影響を及ぼす。したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、液胞−ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１との間の相互作用を、阻害（例えば、ブロック）する、または、減少させる。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、液胞−ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１との間の相互作用を強化する、または、高める。
【０１１４】
本明細書では、ＴＭＥＭ１０６Ｂに結合し、かつ、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＴＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用をブロックする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。一部の実施形態では、ペプチドライブラリーを合成することができ、そこでは、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質を、１つのアミノ酸残基で分離した連続する１５−マー、及び、２５−マーのペプチドに切断し、次いで、フィルター上にスポットする。次いで、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーの結合が、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下で、ＴＭＥＭ１０６Ｂペプチド、または、ペプチド類と相互作用する能力を、ＳＰＯＴ結合分析で試験をすることができる（例えば、Ｆｒａｎｋ，  Ｒ  ａｎｄ  Ｏｖｅｒｗｉｎ，  Ｈ  （１９９６）  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ６６，  １４９−１６９；Ｒｅｉｎｅｋｅ，  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２６７，  １３−２６；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ，  ＯＳ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｊ，  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ２８５，  １２２１０−１２２２２）。一部の実施形態では、セルロース支持体は、Ｎ−修飾セルロース−アミノヒドロキシルプロピルエーテル膜として調製することができ、そして、合成の全ラウンドを、ペプチドと膜との間にアラニンリンカーをもたらす９−フルオレニルメトキシカル−ボニルアラニン−ペンタフルフェニルエステルでスポット形成することから始める。例えば、異なるアミノ酸を段階的に加える自動線形合成は、９−フルオレニル−メトキシカルボニルと、成長するペプチド鎖に対する適切な側鎖保護とでＮ末端を保護している。一部の実施形態では、脱保護、活性化、及び、カップリングのパターンを、１６−マーのペプチドを生成するまで継続し、その結果、共有結合で固定化したペプチドのアレイを、Ｎ末端遊離端を有する、それらのＣ末端に、セルロース支持体に均等に分散する。（Ｓｃｈａｍ、Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２，３６１−３６９）。一部の実施形態では、サイド保護基の除去を、２つのステップで行うことができる。まず、膜を、９０％トリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％  Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタンにて）で処理し；次いで、例えば、６０％のトリフルオロ酢酸（３％トリイソブチルシランと、２％  Ｈ２Ｏとを含むジクロロメタン）で処理することができる。トリフルオロ酢酸塩を除去するために、Ｈ２Ｏ、エタノール、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水、及び、エタノールで、膜を数回洗浄し、そして、乾燥させる。最後に、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ｐＨ８．０）で拡張し、そして、５％ショ糖を、２時間かけて加えたブロッキングバッファーでブロックしてから、所定のペプチドライブラリーを、リガンド結合分析に供する。一部の実施形態では、セルロース結合ペプチドの結合を研究するために、膜結合ライブラリーを、例えば、４℃で、一晩、ブロッキングバッファーで、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下で、Ｓ−ペプチド、及び、ポリヒスチジンをタグ付けしたリガンドと組み合わせてインキュベートし、続いて、ブロッキングバッファーで、室温で、３時間、１ｍｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質を用いて、２度目のインキュベーションを行うことができる。その後、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、例えば、３回洗浄することができ、その後、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、Ｌｕｍｉｌｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行うと、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポット信号強度を提供し得る。あるいは、結合したリガンドの検出は、由来のヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイで行うことができる。標準的なウエスタンブロッティング手順と、スポット検出とを利用して、インキュベートすることができる。
【０１１５】
本明細書では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＴＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用（例えば、結合）をブロックする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をスクリーニングする方法をさらに提供する。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、表面プラズモン共鳴分析（例えば、Ｓｋｅｌｄａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２８７：４３７９８；及び、Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０−１２２２２）を使用して特徴決定し得る。ブロッキング抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下において、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂに対する、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーの直接的な結合の測定を、例えば、ＣａＨＢＳを標準的な移動緩衝剤（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、及び、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ２０）として使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）で実行することができる。一部の実施形態では、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＣＭ５）のバイオセンサーチップは、ＮＨＳ／ＥＤＣ法を使用して活性化することができ、続いて、７９ｆｍｏｌ／ｍｍ２のタンパク質の密度にまでＴＭＥＭ１０６Ｂでコーティングすることで、結合パートナーの親和性測定に使用することができる。ｐｒｏ−ＴＭＥＭ１０６Ｂを用いたバイオセンサー表面の調製は、同じ手順に従う。リガンド結合実験のそれぞれのサイクルの後のフローセルの再生は、再生緩衝剤（１０ｍＭ  グリシン−ＨＣｌ、ｐＨ４．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、及び、０．００５％  Ｔｗｅｅｎ２０）の２度の１０−μｌパルスと、０．００１％  ＳＤＳの単回の注入とによって行うことができる。親和性推定のためのセンサーグラムの調整は、例えば、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．１を使用して行うことができる。同様のプロトコールに従って、ＨｉｓＳ−ＮＧＦｐｒｏ、または、ＨｉｓＳ−ＢＤＮＦｐｒｏの固定化も、ＮＨＳ／ＥＤＣカップリングキットを使用して、ＣＭ５バイオセンサーチップで行うことができ、それにより、固定化したタンパク質の同様の表面密度（約３００ｆｍｏｌ／ｍｍ２）が得られる。ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーで固定化したバイオセンサーチップを使用して、競合するＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下または存在下において、ＴＭＥＭ１０６Ｂの結合を調べることもできる。
【０１１７】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、プルダウンアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０−１２２２２）。例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂの発現した細胞内または細胞外ドメインは、ＴＭＥＭ１０６Ｂブロッキング抗体の非存在下または存在下において、タグ付けしたＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーとインキュベートすることができ、そして、１００μｌのグルタチオン（ＧＳＨ）−セファロースビーズを使用して沈殿させる（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１７−０７５６−０１）。使用した受容体ドメインの量は、コントロールとしてＴａｌｏｎビーズを使用した沈殿によって決定することができる。結合したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析で分離し、そして、標準的なウェスタンブロット分析で、抗ヒスチジン抗体を使用して視覚化することができる。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、セルロース結合タンパク質を使用して特徴決定することができる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８５，１２２１０−１２２２２）。例えば、膜結合タンパク質を、Ｓ−ペプチド、及び、ポリヒスチジンをタグ付けしたプログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１、または、別のＴＭＥＭ１０６Ｂリガンドまたは結合パートナーとインキュベートすることができ；ブロッキング緩衝剤にて、４℃で、一晩、続いて、ブロッキング緩衝剤にて、２回目のインキュベーションを、１μｇ／ｍｌのＨＲＰ結合Ｓタンパク質と共に、室温で、３時間行う。その後、当該膜を、Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で、１０分間、３回洗浄してから、ＵｐｔｉＬｉｇｈｔ化学発光基質と、ＬｕｍｉＩｍａｇｅｒ装置とを使用して、結合リガンドの定量的特性評価を行って、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒライトユニットで、スポット信号強度を提供する。あるいは、結合したリガンドの検出は、ヒスチジンタグに対する抗体、及び、二次ＨＲＰ結合抗マウス抗体を用いた免疫化学的アッセイによって行うことができる。インキュベーションに続いて、標準的なウエスタンブロッティング分析、及び、スポット検出を行うことができる。
【０１１９】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、近接ライゲーションアッセイを使用して特徴決定することができる（例えば、Ｇｕｓｔａｆｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，３３：６４−７１）。例えば、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、そのリガンドまたは結合パートナーを発現する、または、それらに曝露する細胞に対する近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）（ＤｕｏｌｉｎｋＩＩ）は、一次抗体抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、当該結合パートナーに対する抗体を用いて実行することができ、続いて、その後に加える環形成オリゴヌクレオチドにハイブリダイズし、かつ、４０ｎｍ以内に抗原が近接するとローリングサークル増幅を開始する、オリゴヌクレオチドと共役した二次抗体とインキュベーションする。増幅した当該ＤＮＡは、相補的な蛍光標識オリゴヌクレオチドを加えることで、視覚化することができる。
【０１２０】
一部の実施形態では、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、ＴＭＥＭ１０６Ｂリガンド、及び、結合パートナー（例えば、プログラニュリン、その他のＴＭＥＭ１０６ファミリーメンバー（すなわち、ＴＭＥＭ１０６Ａ、ＴＭＥＭ１０６Ｃ）、クラスリン重鎖、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６、リソソーム関連膜タンパク質１、及び液胞ＡＴＰアーゼアクセサリータンパク質１）との間の相互作用を、細胞結合アッセイでのアルカリホスファターゼをタグ付けしたリガンドを使用して、特徴決定することができる（例えば、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５２９８−５３０４；Ｆｏｕｒｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔｕｒｅ  ４０９，３４１−３４６；Ｌａｕｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｎａｔｕｒｅ  ４５７，１１２８−１１３２；及び、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎｅｕｒｏｎ  ６８，６５４−６６７）。例えば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）をタグ付けしたリガンドを作成して、トランスフェクトした細胞、または、初代ニューロンに関するＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を評価することができる。ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に対するＡＰをタグ付けしたリガンド結合を検出するために、培養物を、例えば、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳナトリウム、ｐＨ７．０５、及び、１ｍｇ／ｍｌ  ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＨ）で洗浄することができる。次に、それらのプレートを、ＡＰをタグ付けしたリガンドと共に、ＴＭＥＭ１０６Ｂブロッキング抗体の存在下または非存在下において、例えば、ＨＢＨにおいて、２３℃で、２時間インキュベートできる。ＡＰ結合リガンドを、当該技術分野で周知の方法で、検出、及び、定量することができる。
【０１２１】
前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では：ａ）１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用のために利用可能なＴＭＥＭ１０６Ｂの有効レベルを減少させる；ｂ）；１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用に必要なＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上の部位をブロックする；ｃ）１つ以上のリガンド、または、結合タンパク質との相互作用、及び／または、ＴＭＥＭ１０６Ｂの適切な処理、及び／または、細胞内局在化に必要であるＴＭＥＭ１０６Ｂに関する１つ以上の翻訳後事象を予防する；ｄ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの分解を招く；ｅ）ＴＭＥＭ１０６Ｂの配座を変更する、または、両方を行うことで、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂと、そのリガンド、シグナル伝達タンパク質、または、結合タンパク質の１つ以上との間の相互作用をさらに阻害する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、カニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、それらの組み合わせに対して特異的に結合する。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、または、キメラ抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、第１の抗原、及び、第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第１の抗原は、ＴＭＥＭ１０６Ｂであり、かつ、当該第２の抗原は、血液脳関門を通る輸送を促進する抗原である。前出の実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、当該第２の抗原を、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質変換ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、ａｎｇｉｏｐｅｐペプチド、ベイシジン、Ｇｌｕｔ１、ＣＤ９８ｈｃ、及び、ＡＮＧ１００５からなる群から選択する。
【０１２２】
ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質分解
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、膜内タンパク質分解を受け、そして、膜貫通ドメインと細胞内ドメインとを含むＮ末端断片（ＮＴＦ）へと処理される；この処理は、リソソームプロテアーゼ依存的である。（Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２８９：１９６７０−１９６８０）当該ＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ａ（そして、小規模のＳＰＰＬ２Ｂ）が、この膜内開裂事象の原因であることが示されている。しかしながら、特徴決定されていないリソソームプロテアーゼ（複数可）、及び、ＳＰＰＬ２Ａは、Ｎ末端から、それぞれ、約１２７番目、及び、１０６番目のアミノ酸でＴＭＥＭ１０６Ｂを開裂して、ＴＭＥＭ１０６Ｂの２つのＮＴＦを生成することが報告されている（Ｂｒａｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，上掲）；しかしながら、正確な開裂部位は、未だ特定されていない。ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、おそらくは、カスパーゼ活性が媒介するＮＴＦ１７（１〜１２７）、及び、ＮＴＦ１３（１〜１０６）の出現をもたらした。
【０１２３】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの膜内タンパク質分解を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのタンパク質分解を阻害し、それにより、Ｎ末端断片へのＴＭＥＭ１０６Ｂの開裂を予防する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ａ開裂を阻害する。その他の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＧｘＧＤアスパルチルプロテアーゼＳＰＰＬ２Ｂ開裂を阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂのカスパーゼ媒介的開裂を阻害する。
【０１２４】
疾患標的としてのＴＭＥＭ１０６Ｂ
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々な疾患、障害、及び状態と関連している。前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）（または、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））は、アルツハイマー病、及び、パーキンソン病に次いで３番目に多い神経変性疾患であり、そして、老人性認知症の２０％を占めている。（例えば、Ｒａｄｅｍａｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ，８：４２３−４３４を参照されたい）。この状態は、脳の前頭葉の進行性の悪化に起因している。時間の経過とともに、当該変性は、側頭葉で進行し得る。臨床症状は多様で、そして、症状として、認知症、行動の変化、ならびに、発話や言語の障害がある。（例えば、Ｃｒｕｔｓ  ＆  Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，２００８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６−１９４；Ｎｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：１５４６−１５５４；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１６１５−１６２１を参照されたい。）上部または下部運動ニューロン疾患のさらなる症状が一般的であり、そして、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）との部分的な重複を示す。ＦＴＬＤ症例の大部分は、核ＤＮＡ／ＲＮＡ結合タンパク質ＴＤＰ−４３のニューロン細胞質凝集体（Ｎｅｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１４：１３０−１３３）と、ＴＡＲＤＢＰでの病原性変異を示しており、ＴＤＰ−４３をコードする遺伝子は稀であり、そして、主にＡＬＳを引き起こす（Ｓｒｅｅｄｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１９：１６６８−１６７２）。ＴＤＰ−４３病理を伴う家族型のＦＴＬＤは、主に、Ｃ９ｏｒｆ７２のヘキサヌクレオチド反復拡張（ＤｅＪｅｓｕｓ−Ｈｅｍａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｒｅｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、及び、成長因子プログラニュリン（ＧＲＮ）の主要な機能喪失型変異に起因している（Ｃｒｕｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ、３：４８５−４９１）。当該疾患の稀な家族性形態に関連する変異を同定したところ、ＦＴＬＤ病因への洞察が得られたが、より一般的な散発性症例の病因は、捉えどころがほとんどなく、臨床、及び、神経病理学的提示における多様性を、さらに複雑にしている。
【０１２５】
ＦＴＤ症例の相当な部分は、常染色体優性遺伝様式で受け継がれているが、１つの家族でさえ、症状は、行動障害を伴うＦＴＤから原発性進行性失語症、大脳皮質基底神経節変性にまで及ぶことがある。ＦＴＤは、大部分の神経変性疾患と同様に、罹患した脳における特定のタンパク質凝集体の病的存在をもってして特徴決定することができる。歴史的に、ＦＴＤの最初の報告では、神経原線維の絡み、または、ピック小体における高リン酸化タウタンパク質のニューロン内蓄積の存在を認識していた。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、幾つかの家族でのタウタンパク質をコードする遺伝子の変異の同定によって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０２−７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、過リン酸化タウの蓄積を示さないが、ユビキチン（Ｕｂ）、及び、ＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ−４３）に対する免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８−１３９４）。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ−Ｕ）を有するこれらのＦＴＤ事例の大部分では、プログラニュリン遺伝子に変異があることを示した。
【０１２６】
７番染色体で同定した一塩基多型（ＳＮＰ）が、ＴＭＥＭ１０６Ｂをコードするゲノム領域のＳＮＰとして、ＦＴＬＤ−ＴＤＰの第１の遺伝的リスク因子を突き止めた。（Ｖａｎ  Ｄｅｅｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、４２：２３４−２３９。）
【０１２７】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰを、ＦＴＬＤ−ＴＤＰの疾患リスク因子として評価する最初の研究は、２０１２年に、Ｃ９ｏｒｆ７２反復拡張を発見する前に行われた。この発見以来、２つの独立したグループが、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、Ｃ９ｏｒｆ７２変異に起因するＦＴＬＤ、及び／または、ＡＬＳを発症するリスクにも関連していることを突き止めた。（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２７：４０７−４１８；ｖａｎ  Ｂｌｉｔｔｅｒｓｗｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ，１２７：３９７−４０６を参照されたい。）これらのＣ９ｏｒｆ７２変異コホートでは、ＴＭＮ１０６Ｂ  ＳＮＰのマイナー対立遺伝子［ｒｓ］１９９０６２２、及び／または、ｒｓ３１７３６１５を、ＬＤにて、ｒｓ１９９０６２２と一緒に保有する個体の頻度は大幅に減少したが、ＧＲＮ変異キャリアのコホートほどではなかった。ＦＴＬＤ、ＦＴＬＤ−ＡＬＳ、または、ＡＬＳのいずれかの主要な疾患提示に基づいたグループでのＣ９ｏｒｆ７２反復拡張保有者のさらなる分析では、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、ＡＬＳではなく、ＦＴＬＤの発生に対して特異的に保護をするが、リスク対立遺伝子保有者と比較して、保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂ対立遺伝子に関してホモ接合性であるＣ９ｏｒｆ７２拡張保有者の脳では、ＴＤＰ−４３の負担が少ないことを示した。これらの知見は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰ  ｒｓ１９９０６２２、及び、ｒｓ１０２０００４が、疾患リスクと関連していなかったが、ＡＬＳ患者の認知機能と有意に関連していたＡＬＳ患者の臨床コホートにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰの以前の検査と一致しており、ｒｓ１９９０６２２マイナー対立遺伝子についてホモ接合性である個体は、主要なリスク対立遺伝子についてヘテロ接合性またはホモ接合性である個体よりも認知能力が優れている（Ｖａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２１：３７３−３８０）。
【０１２８】
ＴＤＰ−４３凝集体などの神経変性疾患の特徴は、ＦＴＬＤに固有のものではなく、アルツハイマー病（ＡＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、及び、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）などのその他の神経変性疾患で認めらており（Ａｍａｄｏｒ−Ｏｒｔｉｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ，６１：４３５−４４５；Ｚａｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｐ，８：３６３−３７０）、また、限定的ではあるが、明らかに健康な個体でも認められる（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８４：９２７−９３４を参照されたい）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク変異は、臨床神経学的診断が無い場合には、ＴＤＰ−４３神経病理学と関連している。同様に、ＡＤ患者の間でＴＤＰ−４３病変の小ささと関連する保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプが、ＡＤの病理学的提示に影響を与えることが認められた（Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：７１７−７１８）。海馬硬化症は、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ、及び、ＡＤなどの認知症の高齢患者における一般的な病理学的特徴でもあり、ＴＤＰ−４３病理と共存することが多い。ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子型は、原発性海馬硬化症（Ａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２９：５３−６４）、ならびに、ＡＤ患者の間での海馬硬化症に関連していることが認められており、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、これまでに公知であったＡＤ−ＨｐＳｃｌ、及び、ＨｐＳｃｌの強力な遺伝的指標となった（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２８：４１１−４２１）。これらの研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、ＡＤ、及び、ＨｐＳｃｌなどの非ＦＴＬＤ障害におけるＴＤＰ−４３タンパク質症の発症、及び、重症度のリスク因子であることを総合的に示唆している。
【０１２９】
１５００個を超えるヒトの脳の剖検試料を対象としたゲノミクス研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの一般的な変異を、ヒトの脳の生物学的老化率の主要なゲノム全体の決定因子として同定した：ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子座での２つのリスク対立遺伝子の存在が、その遺伝子発現プロファイルに基づいて、約１２歳に見える個体を、実年齢よりも老けたように見せる（Ｒｈｉｎｎ  ａｎｄ  Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔ，４：４０４−４１５）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク対立遺伝子のこの効果は、公知の神経疾患を持たない個体、ならびに、アルツハイマー病などの神経変性プロセスを持つ個体でも認められる。加齢におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの役割は、脳と寿命（小脳ではなく大脳皮質、特に、６５歳超）の観点から、非常に選択的であるように考えられる。この効果は、保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプの保有者が、加齢に伴う認知機能低下を示すさらなるコホートにおいて、独立して確認された（Ｒｈｉｎｎ  ａｎｄ  Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，上掲）。ＴＭＥＭ１０６Ｂ保護的ハプロタイプは、特定の量の脳病変の認知能力の向上に関連することが示されているので、認知能力への影響が確認された（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ、１４：ｅｌ００２２８７）。これらの結果は、神経変性疾患を超えた老化におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの多面的な役割を補強する。
【０１３０】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ変異体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ｍＲＮＡ、及び、タンパク質発現レベルを高めることで、ＦＴＬＤ−ＴＤＰを発症するリスクを高めるという証拠を示唆している。ＴＭＥＭ１０６Ｂが増えると、細胞あたりの後期エンドソーム／リソソームの平均数が減少し、リソソームが酸性化されなくなり、そして、リソソームの分解も行われなくなる。
【０１３１】
ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ−ＴＤＰ）は、利用可能な治療法が無い致命的な神経発生疾患である。プログラニュリンの生産または分泌障害を招くプログラニュリン遺伝子（ＧＲＮ）の変異は、ＦＴＬＤ−ＴＤＰの一般的な原因である。上述したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ゲノム全体の関連付けによって、ＧＲＮ変異を有する、または、持たないＦＴＬＤ−ＴＤＰに対して結合している。ＴＭＥＭ１０６Ｂの発現を高めて、疾患をモデル化すると、エンドリソソームの肥大、及び、不十分な酸性化、ならびに、マンノース−６−リン酸受容体輸送の障害を招いた。内因性ニューロンＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドリソソームでのプログラニュリンと共局在し、そして、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、プログラニュリンの細胞内レベルを高める。（Ｃｈｅｎ−Ｐｌｏｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，３２：１１２１３−１１２２７。）一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の本開示の抗ＴＭＥＭ−１６０Ｂ抗体を投与することで、ＦＴＬＤ−ＴＤＰを予防する、リスクを減少させる、または、治療する方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、方法を提供する。
【０１３２】
ＦＴＬＤは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）と共通の病理学的背景を有する疾患として認識されている。ＡＬＳは、上方と下方の両方の運動ニューロンの喪失を特徴とする、不治の運動ニューロン変性疾患である。ＦＴＬＤ患者の約１５％が、運動ニューロン疾患を発症しており、そして、ＡＬＳ患者の１５％以上が認知障害と行動障害とを有する。ＦＴＬＤとＡＬＳの重要な病理学的特徴は、細胞質相互作用性反応ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ−４３）封入体である。ＴＤＰ−４３は、ＦＴＬＤ患者（サブタイプＦＴＬＤ−ＴＤＰ）の約５０∧％で、かつ、大部分のＡＬＳ患者が保有している主要成分である。ゲノム規模での研究、及び、コホート研究は、ＦＴＬＤ−ＴＤＰの遺伝的リスク修飾因子として、ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子領域の３つのＳＮＰ（ｒｅ１９９０６２２、ｒｓ６９６６９１５、及び、ｒｓ１０２０００４）を同定した。当該リスク関連性は、ＧＲＮ、及び、Ｃ９０ＲＦ７２変異を有するＦＴＬＤ−ＴＤＰ症例において、より顕著である。ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、細胞死を誘発し、酸化ストレス誘発性細胞毒性を高め、そして、細胞をベースとしたモデルを使用して、ＴＤＰ−４３の開裂を引き起こしており、これらのことは、ＴＭＥＭ１０６Ｂのアップレギュレーションが、神経毒性を直接に引き起こすことでＦＴＬＤのリスクを高めることを示唆している。（Ｓｕｚｕｋｉ  ａｎｄ  Ｍａｔｓｕｏｋａ，２０１６，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２９１：２１４４８−２１４６０。）加えて、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＡＬＳの認知機能障害の発症に関与している（Ｖａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２１：３７３−３８０）。
【０１３３】
海馬の老化硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）は、高齢者によく認められる罹病率の高い神経変性疾患であり、海馬の形成において、ニューロンの喪失と星状細胞症が認められた場合に神経病理学的に診断され、そして、アルツハイマー病型のプラークと絡みに寄与するとは考えられていない。アルツハイマー病と同様の臨床経過をたどる。ＨＳ−Ａｇｉｎｇは、ＴＤＰ−４３病理の存在、及び、前頭側頭型認知症の重篤な症状または臨床的兆候の欠如によって、その他の海馬硬化症と区別する。ＨＳ−Ａｇｉｎｇは、ＳＮＰ  ｒｓ１９９０６２２（ＴＭＥＭ１０６ｂ）、及び、その他のＳＮＰ、ならびに、ＴＭＥＭ１０６ｂ、ＡＢＣＣ９（ＦＴＬＤと関連しない）、及び、ＧＲＮにおける多型と関連している。（Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ，７４：７５−８４。）一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の本開示の抗ＴＭＥＭ−１６０Ｂ抗体を投与することで、海馬の老化による硬化を予防する、リスクを減少させる、または、治療する方法を提供する。
【０１３４】
最近、ＴＭＥＭ１０６Ｂのマウス遺伝的ノックアウト（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ  ９５，２８１−２９６）が、グラニュリン経路におけるＴＭＥＭ１０６Ｂに対する効果を示した。具体的には、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質の遺伝的ノックアウトにより、リソソームタンパク質のレベルの部分的救済、ならびに、過敏性及び脱抑制などの行動変化の救済など、マウスモデルのＧＲＮノックアウトに関連する一部の病原性表現型を救済することができた。その他の研究が報告しているように、当該ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウト自体は、マウスでは十分に耐性がある。加えて、この研究は、ｖ−ＡＴＰアーゼサブユニットＡＰ１との直接的な相互作用（免疫共沈降を介した）を示すことで、ＴＭＥＭ１０６Ｂの考え得る作用メカニズムを示唆した。当該ｖ−ＡＴＰアーゼ複合体は、リソソームのｐＨを低下させ、そして、タンパク質の分解と再利用を開始する上で重要な役割を果たす。したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂとの相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現に関連するリソソーム表現型の一部を招くものであり、そして、この相互作用を逆にブロックする（または、単にＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルを減少させる）と、この表現型を改善し得る。
【０１３５】
慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）は、頭部への反復衝撃の病歴を持つ個体で病理学的に診断されている進行性神経変性疾患である。ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ＣＴＥの進行、特に、ＣＴＥ関連の神経病理学、及び、認知症の重要な因子であることが示されている。具体的には、ＳＮＰ  ｒｓ３１７３６１５（Ｔ１８５Ｓコード変異）のマイナー（Ｇ）対立遺伝子の保有者は、ＡＴ８ポジティブのｐ−タウレベルの低下、ＣＤ６８ポジティブ細胞の密度の低下、及び、シナプス喪失の検査によく使用しているシナプス後マーカーであるＰＳＤ−９５のレベルの上昇など、神経病理学のレベルが低下していることが示された。また、Ｇ−対立遺伝子は、死亡前の認知症におけるオッズの６０％の減少と関連していた。いずれの事例でも、Ｇ対立遺伝子の硬化は相加的であり、ＧＧ遺伝子型が最も防御的であった。ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子型は、疾患のリスクに関する効果を奏しておらず；むしろ、疾患の重症化について効果が認められた。
【０１３６】
ミクログリアは、中枢神経系（ＣＮＳ）の一次自然免疫細胞である。ミクログリアは、健康なＣＮＳや、様々な病状で異なる炎症環境に応じて、休止状態または活性化状態で存在する。ＴＧＦベータは、ミクログリアの発達と機能における重要な要素であり、また、ミクログリア特異的な恒常性遺伝子シグネチャーの維持に必要である。ＴＧＦベータシグナル伝達、及び、ＴＧＦベータ経路の抑制は、神経変性疾患モデルから単離されたミクログリアの一般的な機能である。加えて、ＴＧＦベータは、ミクログリア／マクロファージが媒介したＣＮＳの病状と神経変性の予防において重要な機能を有する、と説明されている（Ｂｕｔｏｖｓｋｙ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ，１９：６２２−６３５，Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９：４２５−４４１）。したがって、ＴＧＦベータの発現、シグナル伝達、及び／または、機能を、直接的または間接的に高める療法は、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、自閉症スペクトラム障害、認知症などの神経変性疾患、及び、障害の治療に利益をもたらす。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、細胞におけるＴＧＦベータレベルを高める上で有効である。
【０１３７】
認知症は、非特異的症候群（すなわち、徴候と症状とのセット）であり、通常の加齢から予想し得る範囲を超えて、前々から健常でなかった方々の全般的な認知能力の深刻な喪失として出現する。認知症は、脳全体の独特な損傷の結果として静的であり得る。あるいは、認知症は、進行性であり、その結果、身体の損傷や疾患が関与する長期的な機能低下を招き得る。認知症は、高齢者の集団でごく一般的であるが、６５歳になる前に発症することもある。認知症の影響を受ける認知領域として、記憶、注意持続時間、言語、及び、問題解決があるが、これらに限定されない。一般的に、認知症と診断するまで少なくとも６か月間、症状が存在しなくてはならない。
【０１３８】
認知症の例示的な形態として、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味認知症、及び、レビー小体型認知症があるが、これらに限定されない。
【０１３９】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することで、認知症を予防する、リスクを減少させる、及び／または、治療することができると考えられる。
【０１４０】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る疾患であり、治療法は無い。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳以上の方で診断される。しかしながら、あまり一般的でない早期発症型アルツハイマー病は、はるかに早期に発症することがある。
【０１４１】
アルツハイマー病の一般的な症状として、最近の出来事を思い出せないなどの行動症状；認知症状、錯乱、興奮性と攻撃性、気分のむら、言語の問題、及び、長期記憶喪失がある。この疾患が進行すると、身体の機能が失われ、最終的には死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになる前は、様々な未知の期間にわたって発症し、診断がされることもなく何年も進行することがある。
【０１４２】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または、運動ニューロン疾患、または、ルーゲーリッグ病は、互換的に使用しており、急速に進行する脱力、筋萎縮、及び、束縛、筋痙縮、会話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、及び、呼吸の困難さ（呼吸困難）を特徴とする多様な病因を伴う衰弱性疾患のことを指す。
【０１４３】
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーにも関与している。（Ｓｉｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｂｒａｉｎ．）低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーは、早期発症の眼振、運動失調、及び、痙性などの臨床症状を呈する不均一な疾患群である。低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーを有する４名の患者での脳低髄鞘形成は、ＴＭＥＭ１０６Ｂにおいて、同じ優性変異（Ａｐｓ２５２Ａｓｎ）を示しており、このことは、おそらくは、リソソーム機能においてＴＭＥＭ１０６Ｂが果たす役割に起因する、低髄鞘形成障害におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの関連を示唆している。したがって、一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする個体での低髄鞘形成障害を治療する方法を提供するものであって、当該方法は、個体に対して、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする個体での低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーを治療する方法を提供するものであって、当該方法は、個体に対して、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を投与することを含む。
【０１４４】
本明細書で提供する方法は、神経変性疾患、障害、もしくは状態を予防すること、リスクを減少させること、または、前記神経変性疾患、障害、もしくは状態を有する個体を治療することにおける用途を見出す。一部の実施形態では、本発明は、神経変性障害を予防する、リスクを減少させる、または、神経変性障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１４５】
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ−４３封入体の存在を特徴とする疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１４６】
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ−４３タンパク質症を予防する、リスクを減少させる、または、ＴＤＰ−４３タンパク質症を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、本発明は、炎症細胞の破片、または、タンパク質凝集体の存在を特徴とする疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、本発明は、異常な循環骨髄細胞の存在を特徴とする疾患、障害、状態、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、状態、もしくは傷害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１４９】
一部の実施形態では、本発明は、不健康な老化を予防する、リスクを減少させる、または、不健康な老化を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５０】
一部の実施形態では、本発明は、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）を予防する、リスクを減少させる、または、前頭側頭葉型変性症（ＦＴＬＤ）を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５１】
一部の実施形態では、本発明は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を予防する、リスクを減少させる、または、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５２】
一部の実施形態では、本発明は、プログラニュリン変異を持った前頭側頭型認知症を予防する、リスクを減少させる、または、前記前頭側頭型認知症を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、本発明は、Ｃ９０ｒｆ７２変異を持った前頭側頭型認知症を予防する、リスクを減少させる、または、前記前頭側頭型認知症を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５４】
一部の実施形態では、本発明は、ＴＤＰ−４３封入体を持った前頭側頭葉変性を予防する、リスクを減少させる、または、前記前頭側頭葉変性を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５５】
一部の実施形態では、本発明は、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）を予防する、リスクを減少させる、または、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５６】
一部の実施形態では、本発明は、海馬の老化硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）を予防する、リスクを減少させる、または、海馬の老化硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５７】
一部の実施形態では、本発明は、アルツハイマー病を予防する、リスクを減少させる、または、アルツハイマー病を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５８】
一部の実施形態では、本発明は、レビー小体型認知症を予防する、リスクを減少させる、または、レビー小体型認知症を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、本発明は、認知機能障害を予防する、リスクを減少させる、または、認知機能障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６０】
一部の実施形態では、本発明は、加齢性認知機能障害を予防する、リスクを減少させる、または、加齢性認知機能障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、本発明は、ＣＴＥ関連認知機能障害を予防する、リスクを減少させる、または、ＣＴＥ関連認知機能障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、本発明は、加齢性脳萎縮を予防する、リスクを減少させる、または、加齢性脳萎縮を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６３】
一部の実施形態では、本発明は、炎症、ニューロン脱落、及び、高齢者の前頭大脳皮質の認知障害を含む公知の脳疾患が認められない認知障害などの認知障害を含むがこれらに限定されない加齢関連形質を予防する、リスクを減少させる、または、前記加齢関連形質を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、本発明は、筋萎縮性側索硬化症に関連する認知機能障害を予防する、リスクを減少させる、または、前記認知機能障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６５】
一部の実施形態では、本発明は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現、または、増大した活性に関連する疾患、障害、もしくは状態を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは状態を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６６】
一部の実施形態では、本発明は、低髄鞘形成障害を予防する、リスクを減少させる、または、低髄鞘形成障害を有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６７】
一部の実施形態では、本発明は、それを必要とする個体における転移を減少させるまたは阻害する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６８】
一部の実施形態では、本発明は、がんを予防する、リスクを減少させる、または、がんを有する個体を治療する方法を提供しており、当該方法は、それを必要とする個体に対して、治療有効量の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与することを含む。
【０１６９】
Ａ．例示的な抗体、及び、特定のその他の抗体の実施形態
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４��、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択した少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７０】
一部の実施形態では、本明細書では：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＨ���Ｒ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２��（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２のアミノ酸配列を含むＨ
ＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２のアミノ酸配列を���むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１８の��ミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；及び、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択した少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または、６つのＨＶＲを含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７１】
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７２】
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶL  ＨＶＲ配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７３】
一部の実施形態では、本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶＨドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、��３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または、３つすべてのＶLドメインを含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７４】
一部の実施形態では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４��、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶLドメインを含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。
【０１７５】
別の態様では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、及び、２６８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または、１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、及び、２６８からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または、９９％の配列同一性を有するＶＨ配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する能力を保持している。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、または、２６８において、合計で１〜１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、または、２６８において、合計で１〜５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２��０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、または、２６８のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、ＶＨは；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択した１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。
【０１７６】
別の態様では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、及び、３１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または、１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶL）配列を含む。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、及び、３１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または、９９％の配列同一性を有するＶL配列は、リファレンス配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または、欠失を含むが、その配列を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する能力を保持している。一部の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、及び、３１４において、合計で１〜１０個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、及び、３１４において、合計で１〜５個のアミノ酸を、置換、挿入、及び／または、欠失する。特定の実施形態では、置換、挿入、または、欠失が、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で発生する。任意に、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、及び、３１４のＶL配列を、その配列の翻訳後修飾と共に含む。特定の実施形態では、当該ＶＬは、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択した１つ、２つ、または、３つのＨＶＲを含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶＨ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶＬを含む。一部の実施形態では、本明細書では抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該抗体は、前出のいずれかの実施形態でのＶＨ、及び、前出のいずれかの実施形態でのＶＬを含む。ある実施形態では、当該抗体は、その配列の翻訳後修飾と共に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５〜２６８、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９〜３１４である、ＶＨ、及び、ＶＬ配列をそれぞれ含む。
【０１７８】
一部の実施形態では、本明細書では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供しており、当該ＶＨ、及び、ＶＬを：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７０のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７１のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７２のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７３のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７４のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７５のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７６のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７７のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７８のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７９のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８０のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８１のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８２のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８３のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８４のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８５のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８６のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８７のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８８のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８９のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９０のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９１のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９２のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥ��� ＩＤ ＮＯ：２９３のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９４のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９５のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９６のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９７のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９８のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９９のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３００のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０１のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０２のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０３のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０４のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０５のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６０のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０６のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６１のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０７のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６２のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０８のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６３のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０９のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１０のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１１のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１２のアミノ酸配列を含むＶＬ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１３のアミノ酸配列を含むＶＬ；及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６８のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１４のアミノ酸配列を含むＶＬからなる群から選択する。
【０１７９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３から選択した少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体のＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下でのＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合と比較して、約５０％〜１００％の範囲の量で減少させる場合に、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。一部の実施形態では、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体のＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下でのＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合と比較して、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または、１００％減少させる場合に、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。一部の実施形態では、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体のＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を１００％減少させる本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体のＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合を本質的に完全にブロックすることを示す。一部の実施形態では、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体が、１０：１比率、９：１比率、８：１比率、７：１比率、６：１比率、５：１比率、４：１比率、３：１比率、２：１比率、１：１比率、０．７５：１比率、０．５：１比率、０．２５：１比率、０．１：１比率、０．０７５：１比率、０．０５０：１比率、０．０２５：１比率、０．０１：１比率、０．００７５：比率、０．００５０：１比率、０．００２５：１比率、０．００１：比率、０．０００７５：１比率、０．０００５０：１比率、０．０００２５：１比率、０．０００１：比率、１：１０比率、１：９比率、１：８比率、１：７比率、１：６比率、１：５比率、１：４比率、１：３比率、１：２比率、１：０．７５比率、１：０．５比率、１：０．２５比率、１：０．１比率、１：０．０７５比率、１：０．０５０比率、１：０．０２５比率、１：０．０１比率、１：０．００７５比率、１：０．００５０比率、１：０．００２５比率、１：０．００１比率、１：０．０００７５比率、１：０．０００５０比率、１：０．０００２５比率、または、１：０．０００１比率に対応する量で存在する。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体の量と比較して、約１．５倍〜１００倍、または、１００倍超の範囲の量で過剰に存在している。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体の量と比較して、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、または、１００倍超の範囲の量で過剰に存在する。
【０１８０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３から選択した少なくとも１つの抗体が結合するＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープと同じである、または、重複しているヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３から選択した少なくとも１つの抗体が結合するＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープと本質的に同じＴＭＥＭ１０６Ｂエピトープに対して結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための例示的な方法の詳細は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に示されている。
【０１８１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−１７、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２６、及び、ＴＭ−２７、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−５、ＴＭ−７、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２１、ＴＭ−２５、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３２、ＴＭ−３５、ＴＭ−３７、ＴＭ−３９、ＴＭ−４２、ＴＭ−４５、ＴＭ−４８、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−４、ＴＭ−６、ＴＭ−８、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−２０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３６、ＴＭ−４１、ＴＭ−４４、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−７、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−５１、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する。
【０１８２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−１７、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２６、及び、ＴＭ−２７、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−５、ＴＭ−７、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２１、ＴＭ−２５、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３２、ＴＭ−３５、ＴＭ−３７、ＴＭ−３９、ＴＭ−４２、ＴＭ−４５、ＴＭ−４８、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−４、ＴＭ−６、ＴＭ−８、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−２０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３６、ＴＭ−４１、ＴＭ−４４、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−７、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−５１、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。
【０１８３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−１７、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２６、及び、ＴＭ−２７、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体と同じである、または、重複するＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−５、ＴＭ−７、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２１、ＴＭ−２５、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３２、ＴＭ−３５、ＴＭ−３７、ＴＭ−３９、ＴＭ−４２、ＴＭ−４５、ＴＭ−４８、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体と同じである、または、重複するＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−４、ＴＭ−６、ＴＭ−８、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−２０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３６、ＴＭ−４１、ＴＭ−４４、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体と同じである、または、重複するＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープを有する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−７、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−５１、及び、それらの任意の組み合わせから選択した少なくとも１つの抗体と同じである、または、重複するＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープを有する。
【０１８４】
ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、または、フローサイトメトリーなどの当該技術分野で公知の任意の適切な競合アッセイ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂ結合アッセイを利用して、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、ＴＭ−１、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−４、ＴＭ−５、ＴＭ−６、ＴＭ−７、ＴＭ−８、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１２、ＴＭ−１３、ＴＭ−１４、ＴＭ−１５、ＴＭ−１６、ＴＭ−１７、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９、ＴＭ−２０、ＴＭ−２１、ＴＭ−２２、ＴＭ−２３、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２６、ＴＭ−２７、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３１、ＴＭ−３２、ＴＭ−３３、ＴＭ−３４、ＴＭ−３５、ＴＭ−３６、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４０、ＴＭ−４１、ＴＭ−４２、ＴＭ−４３、ＴＭ−４４、ＴＭ−４５、ＴＭ−４６、ＴＭ−４７、ＴＭ−４８、ＴＭ−４９、ＴＭ−５０、ＴＭ−５１、ＴＭ−５２、及び、ＴＭ−５３、及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上の抗体と競合する（または、結合を競合的に阻害する）か否かを決定し得る。例示的な競合アッセイでは、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、細胞表面にＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞を、ＴＭＥＭ１０６Ｂ（例えば、ヒト、または、非ヒト霊長類）に対して結合する第１の標識抗体、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する当該第１の抗体と競合する能力に関する試験に供する第２の非標識抗体を含む溶液でインキュベートする。当該第２の抗体は、ハイブリドーマ上清に存在し得る。コントロールとして、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞を、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液でインキュベートする。ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する第１の抗体の結合を許容可能な条件下でインキュベートした後に、未結合の過剰な抗体を除去し、そして、固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に関連する標識の量を測定する。固定化したＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞に関連する標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料で大幅に減少しておれば、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合について、第２の抗体が、第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０１８５】
本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択されるＶLドメインを含む、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合を競合的に阻害する、及び／または、同抗体に対する結合と競合する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をさらに提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５〜２６８、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９〜３１４である、ＶＨ、及び、ＶＬ配列をそれぞれ含む。
【０１８６】
本明細書では、（ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、及び、３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、及び、７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、及び、１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、及び、１６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び、１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、及び、２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択されるＶLドメインを含む、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が結合したエピトープと同じである、または、重複しているヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープに対して結合する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を提供する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２５〜２６８、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６９〜３１４である、ＶＨ、及び、ＶＬ配列をそれぞれ含む。一部の実施形態では、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのエピトープは、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が結合するエピトープと同じである。
【０１８７】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの様々な領域など、ＴＭＥＭ１０６Ｂの様々な領域に結合し得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂのそのような領域として、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞質ドメイン、または、内腔ドメインＴＭＥＭ１０６Ｂがある。
【０１８８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの１つ以上の領域またはドメインに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの１つ以上の領域またはドメインに対して結合する。
【０１８９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞質、及び／または、内腔ドメインに対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基５９〜７３、８０〜９０、１５〜２４、３３〜４０、５〜１９、３０〜４０、３４〜４０、５９〜６９、５２〜６２、６４〜７４、１５１〜１６５、１８５〜１９５、１３９〜１４９、２４８〜２５８、１５６〜１６１、２０２〜２０７、２１９〜２３３、１２６〜１４０、１８５〜１９５、２６０〜２７４、２０２〜２１２、１５１〜１６１、２２３〜２３３、１４３〜１５３、２２３〜２２８、１３３〜１４５、及び／または、１９８〜２１２での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９０】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５１〜１６５、及び／または、１８５〜１９５での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、アミノ酸残基１５１〜１６５（ＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２４）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、Ｔ＞Ｓが、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのリスク対立遺伝子１８５〜１９５（ＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２５）であるアミノ酸残基での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５１〜１６５（ＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２４）での１つ以上のアミノ酸が形成した不連続エピトープ、及び、アミノ酸残基１８５〜１９５（ＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜７３、８０〜９０細胞質、１３９〜１４９、及び／または、２４８〜２５８での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜７３（ＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２６）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基８０〜９０（ＡＬＩＰＹＳＤＱＲＬＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２７）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１３９〜１４９（ＫＲＴＩＹＬＮＩＴＮＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２４８〜２５８（ＹＱＹＶＤＣＧＲＮＴＴ：３２９）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜７３（ＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２６）での１つ以上のアミノ酸、アミノ酸残基８０〜９０（ＡＬＩＰＹＳＤＱＲＬＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２７）での１つ以上のアミノ酸、アミノ酸残基１３９〜１４９（ＫＲＴＩＹＬＮＩＴＮＴ：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２８）での１つ以上のアミノ酸、及び、アミノ酸残基２４８〜２５８（ＹＱＹＶＤＣＧＲＮＴＴ：３２９）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５〜２４、及び／または、３３〜４０での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５〜２４（ＥＤＡＹＤＧＶＴＳＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３０）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基３３〜４０（ＳＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３１）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５〜２４（ＥＤＡＹＤＧＶＴＳＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３０）での１つ以上のアミノ酸、及び、アミノ酸残基３３〜４０（ＳＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３１）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５〜１９、３０〜４０、１５６〜１６１、２０２〜２０７、及び／または、２１９〜２３３での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５〜１９（ＬＳＨＬＰＬＨＳＳＫＥＤＡＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３２）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基３０〜４０（ＳＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３３）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５６〜１６１（ＮＹＹＳＶＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２０２〜２０７（ＶＩＡＥＥＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２１９〜２３３（ＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３６）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５〜１９（ＬＳＨＬＰＬＨＳＳＫＥＤＡＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３２）、３０〜４０（ＳＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３３）、１５６〜１６１（ＮＹＹＳＶＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３４）、２０２〜２０７（ＶＩＡＥＥＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３５）、及び、２１９〜２３３（ＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３６）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１２６〜１４０、１８５〜９５５、及び／または、２６０〜２７４での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１２６〜１４０（ＩＧＶＫＳＡＹＶＳＹＤＶＱＫＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３７）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基Ｔ１８５Ｓリスク対立遺伝子１８５〜１９５（ＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２６０〜２７４（ＱＬＧＱＳＥＹＬＮＶＬＱＰＱＱ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３８）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１２６〜１４０（ＩＧＶＫＳＡＹＶＳＹＤＶＱＫＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３７）、１８５〜１９５（ＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２５）、及び、２６０〜２７４（ＱＬＧＱＳＥＹＬＮＶＬＱＰＱＱ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３８）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基３４〜４０、及び／または、２０２〜２１２での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの粘着性アミノ酸残基３４〜４０（ＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３９）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２０２〜２１２（ＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基３４〜４０（ＥＶＨＮＥＤＧ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３９）、及び、２０２〜２１２（ＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４０）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５１〜１６１、及び／または、２２３〜２３３での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５１〜１６１（ＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４１）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２２３〜２３３（ＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４２）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１５１〜１６１（ＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４１）、及び、２２３〜２３３（ＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４２）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜６９、１４３〜１５３、及び／または、２２３〜２２８での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜６９（ＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４３）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１４３〜１５３（ＹＬＮＩＴＮＴＬＮＩＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４４）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２２３〜２２８（ＮＩＶＬＭＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５９〜６９（ＶＴＣＰＴＣＱＧＴＧＲ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４３）、１４３〜１５３（ＹＬＮＩＴＮＴＬＮＩＴ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４４）、及び、２２３〜２２８（ＮＩＶＬＭＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１３３〜１４５、及び／または、１９８〜２１２での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１３３〜１４５（ＶＳＹＤＶＱＫＲＴＩＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１９８〜２１２（ＴＶＰＴＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４７）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基１３３〜１４５（ＶＳＹＤＶＱＫＲＴＩＹＬＮ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４６）、及び、１９８〜２１２（ＴＶＰＴＶＩＡＥＥＭＳＹＭＹＤ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４７）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０１９９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５２〜６２、６４〜７５、及び／または、２２３〜２２８での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５２〜６２（ＥＦＴＧＲＤＳＶＴＣＰ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４８）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基６４〜７５（ＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧＱＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４９）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基２２３〜２２８（ＮＩＶＬＭＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基５２〜６２（ＥＦＴＧＲＤＳＶＴＣＰ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４８）、６４〜７５（ＣＱＧＴＧＲＩＰＲＧＱＥ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４９）、及び、２２３〜２２８（ＮＩＶＬＭＭ；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４５）での１つ以上のアミノ酸に対して結合する。
【０２００】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸残基
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からなる群から選択されるヒトＴＭＥＭ１０６Ｂでの１つ以上のエピトープに対して結合する。
【０２０１】
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト化、及び／または、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、または、Ｆ（ａｂ’）２断片である。一部の実施形態では、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、実質的な全長抗体、例えば、本明細書で定義するＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または、その他の抗体クラス、または、アイソタイプである。
【０２０２】
一部の実施形態では、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、以下の第１〜７節に記載したように、いずれかの特徴を、単独で、または、組み合わせて取り込み得る。
【０２０３】
（１）抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体結合親和性
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または、＜０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏのＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定カロリメトリー（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップト−フロー分析、及び、比色分析、または、蛍光タンパク質融解分析などの任意の生化学的または生物物理学的技法など、任意の解析技法で決定することができる。一部の実施形態では、Ｋｄを、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定する。一部の実施形態では、ＲＩＡを、例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９））に記載された、目的の抗体のＦａｂバージョン、または、その抗原を用いて実施する。一部の実施形態では、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ−２０００、または、ＢＩＡＣＯＲＥ−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを使って、約１０反応単位（ＲＵ）の固定化した抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で、Ｋｄの測定を行う。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）、または、完全長抗体を使用して決定する。一部の実施形態では、当該ＫＤを、一価形態の全長抗体を使用して決定する。
【０２０４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して、ナノモルまたはピコモルの親和性を有し得る。一部の実施形態では、当該抗体の解離定数（Ｋｄ）は、約０．１ｎＭ〜約５００ｎＭである。例えば、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合に関する当該抗体のＫｄは、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約７５ｎＭ、約５０ｎＭ、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約９ｎＭ、約８ｎＭ、約７ｎＭ、約６ｎＭ、約５ｎＭ、約４ｎＭ、約３ｎＭ、約２ｎＭ、約１ｎＭ、または、約１ｎＭ〜約０．１ｎＭである。
【０２０５】
（２）抗体断片
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、１つ以上の当該抗体は、抗体断片である。抗体断片として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び、ｓｃＦｖ断片、及び、後述するその他の断片があるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；及び、米国特許第５５７１８９４号、及び、第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつ、インビボでの半減期が延びたＦａｂ、及び、Ｆ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
【０２０６】
ダイアボディは、２価、または、二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ、及び、テトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部または一部、または、軽鎖可変ドメインの全部または一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。
【０２０７】
抗体断片は、本明細書に記載した通り、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに、組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、または、ファージ）による生産など、これらに限定されない様々な技術で生産することができる。
【０２０８】
（３）キメラ、及び、ヒト化抗体
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。ある例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または、サルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）、及び、ヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを、親抗体のものから変更した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０２０９】
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、ヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性と親和性とを保持しながら、ヒトに対する免疫原性を減少させるためにヒト化する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、標的に対して、ヒト化抗体が由来する別の種に由来する抗体と実質的に同じ親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、第５６９３７６１号；第５６９３７６２号；及び、第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施形態では、免疫原性を低下させながら、抗原結合ドメインの本来の親和性を減らさずに修飾することができる抗体可変ドメインのアミノ酸を同定する。例えば、米国特許第５７６６８８６号、及び、第５８６９６１９号を参照されたい。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（またはその一部）が、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体での一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換する。
【０２１０】
ヒト化抗体、及び、それらを生産する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、また、例えば、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び、第７０８７４０９号に記載されている。ヒト化に使用し得るヒトフレームワーク領域として、「ベストフィット」法を使用して選択したフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）；及び、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒトの成熟した（体細胞変異）フレームワーク領域、または、ヒトの生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ  Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、及び、ＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）、及び、Ｒｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
【０２１１】
（４）ヒト抗体
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、一般的には、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、及び、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）で説明されている。
【０２１２】
ヒト抗体は、抗原接種に応答して、ヒト可変領域を有する、インタクトなヒト抗体、または、インタクトな抗体を生産するように修飾したトランスジェニック動物に対して免疫原を投与して調製することができる。そのようなマウスが、マウス抗体の非存在下でヒト抗体を生産するものとして予想して、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片にてマウス抗体生産を欠損しているマウス系統を遺伝子操作することができる。大きなヒトＩｇ断片は、大きな可変遺伝子の多様性、ならびに、抗体の生産と発現の適切な調節を続けることができる。抗体の多様化と選択、及び、ヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如のためのマウス機構を利用することで、これらのマウス系統において再現したヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原などの目的の抗原に対する高親和性完全ヒト抗体を生み出すことができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を、生産及び選択することができる。特定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及び、ＥＰ５４６０７３で説明されている。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６０７５１８１号、及び、第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許番号７０４１８７０号、及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号を参照されたい。そのような動物が生成したインタクトな抗体に由来するヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせて、さらに改変し得る。
【０２１３】
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づいた方法で生産することができる。ヒトモノクローナル抗体の生産のためのヒト骨髄腫、及び、マウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）、及び、Ｂｏｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１））。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成したヒト抗体は、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１  ０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法として、例えば、（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生産を説明している）米国特許第７１８９８２６号に記載されている方法がある。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２０（３）：９２７−９３７（２００５）、及び、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載さいている。また、ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択したＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで生成し得る。次に、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を、以下に説明する。
【０２１４】
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、インビトロ法、及び／または、所望の１つ以上の活性を有する抗体に関するコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングして単離されたヒト抗体である。適切な例として、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（かつてのＰｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などがあるが、これらに限定されない。特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ、及び、ＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で別々にクローニングし、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているファージライブラリーでランダムに再結合する。例えば、当該技術分野では、ファージディスプレイライブラリーを生成し、そして、所望の結合特性を保有する抗体に関する当該ライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が公知である。Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０、２００４；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及び、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（−２）：１１９−１３２（２００４）も参照されたい。一般的に、ファージは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、または、Ｆａｂ断片のいずれかで抗体断片を表す。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要がなく、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、未処理のレパートリーを、（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されているようにして、免疫化処置をせずに、広範囲の非自己抗原、それに、自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞から再配置していないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、そして、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して可変性に富んだＨＶＲ３領域をコードし、そして、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８、１９９２に記載されているようにして、インビトロでの再配置を達成した。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献として、例えば：米国特許第５７５０３７３号、ならびに、米国特許公開第２００７／０２９２９３６号、及び、第２００９／０００２３６０号がある。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体は、本明細書では、ヒト抗体またはヒト抗体断片と見なす。
【０２１５】
（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、Ｆｃを含む。一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／または、ＩｇＧ４アイソタイプである。一部の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、または、ＩｇＡクラスの抗体である。
【０２１６】
本明細書で提供するいずれかの抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂ活性を誘導し、または、Ｆｃ受容体に対する結合とは無関係に誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
【０２１７】
本明細書で提供するいずれかの抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
【０２１８】
本明細書で提供するいずれかの抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。一部の実施形態では、当該ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、当該抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に対して結合する。特定の実施形態では、当該阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
【０２１９】
本明細書で提供するいずれかの抗体の特定の実施形態では、当該抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０、及び、ＥＵ付番法で定めたヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含む、アミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
【０２２０】
一部の実施形態では、当該Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、クラスタリングを増加させる。一部の実施形態では、当該抗体は、当該抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。一部の実施形態では、当該抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する。
【０２２１】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を修飾して、エフェクター機能を修飾すること、及び／または、抗体の血清半減期を長くすることも望ましい。例えば、当該定常領域のＦｃ受容体結合部位を修飾または変異させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／または、ＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去または減少させて、抗体依存性細胞性細胞毒性を減少させ得る。一部の実施形態では、当該抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインにおける）Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を除去すると、当該エフェクター機能は低下する。一部の実施形態では、ＷＯ９９／５８５７２、及び、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５−５９３（２００３）；Ｒａｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６４：１９２５−１９３３（２０００）に記載されているようなヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／または、３２７〜３３１などの領域を修飾すると、当該エフェクター機能は低下する。その他の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を修飾してエフェクター機能を修飾すると、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を高めて、抗体依存性細胞媒介細胞毒性、及び、抗体依存性細胞食作用などの体液性応答を活性化せずに、隣接細胞でのＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のクラスタリングを増加させることも望ましい。
【０２２２】
当該抗体の血清半減期を長くするために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されているようにして、サルベージ受容体結合エピトープを、当該抗体（特に、抗体断片）に組み込み得る。本明細書で使用する用語「サルベージ受容体結合エピトープ」とは、インビボでのＩｇＧ分子の血清中半減期の延長に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、または、ＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープのことを指す。その他のアミノ酸配列の修飾。
【０２２３】
（６）多重特異性抗体
多重特異性抗体とは、同じ、または、別のポリペプチド（例えば、本開示の１つ以上のＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド）のエピトープなど、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体のことである。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、二重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、三重特異性抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体を、四重特異性抗体とすることができる。そのような抗体を、完全長抗体、または、抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）に由来する抗体とすることができる。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの第１の部位に対して結合する第１の抗原結合領域を含み、かつ、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの第２の部位に対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該多重特異性抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する第１の抗原結合領域、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。
【０２２４】
本明細書では、第１の抗原結合領域を含む多重特異性抗体を提供しており、当該第１の抗原結合領域は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する本明細書に記載の抗体の６つのＨＶＲ、及び、第２のポリペプチドに対して結合する第２の抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、当該第１の抗原結合領域は、本明細書に記載している抗体のＶＨまたはＶＬを含む。
【０２２５】
当該多重特異性抗体のいずれかの一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、ａ）血液脳関門を通る輸送を促進する抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマシングルドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及び、ＡＮＧ１００５から選択される、血液脳関門を通る輸送を促進する抗原；（ｃ）アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質、または、その断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤｉＰｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｐｅａｔ：ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドから選択される疾患原因タンパク質；（ｄ）免疫細胞で発現されるリガンド及び／またはタンパク質であって、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから選択される、前記リガンド及び／またはタンパク質；及び／または、（ｅ）１つ以上の腫瘍細胞、及び、それらの任意の組み合わせで発現するタンパク質、脂質、多糖、または糖脂質である。
【０２２６】
血液脳関門を通る輸送を促進する多数の抗原は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ  Ｒ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７：４８−５７（２０１０））。そのような第２の抗原として、トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性変異体）などのジフテリア毒素、ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、または、ペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン、ポリアルギニン、または、一般的に正電荷を有するペプチド、ＡＮＧ１００５などのアンジオペプペプチド（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照されたい）、及び、血液脳関門内皮細胞で濃縮を受けるその他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５（１０）：ｅ１３７４１（２０１０）を参照されたい）があるが、これらに限定されない。
【０２２７】
当該多価抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗原、ならびに、さらなる抗原Ａβペプチド、抗原またはα−シヌクレインタンパク質抗原、または、Ｔａｕ−タンパク質抗原、または、ＴＤＰ−４３タンパク質抗原、または、プリオンタンパク質抗原、または、ハンチンチンタンパク質抗原、または、ＲＡＮ、グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、または、プロリン−アルギニン（ＰＲ）、からなるジペプチドリピート（ＤＰＲペプチド）を含む翻訳産物抗原、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体などを認識し得るが、これらに限定されない。トランスフェリン受容体、または、抗体の移動を促進するその他の抗原は、血液脳関門を通る。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、トランスフェリンである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、タウである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、Ａβである。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２である。一部の実施形態では、当該第２のポリペプチドは、α−シヌクレインである。
【０２２８】
当該多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び、好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含み、１つ以上の当該ポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得るものであり、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、そして、ｎは、０または１である。同様に、１つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＨ−ＣＨ１可撓性リンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；または、ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含む。本明細書の多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つ（及び、好ましくは４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２〜約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本明細書で企図する軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、また、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。
【０２２９】
多重特異性抗体を作り出す技術として、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組換え共発現があるが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ  Ｎａｔｕｒｅ３  ０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及び、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１））、及び、「ノブ−イン−ホール」遺伝子操作（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）を参照されたい）。また、ＷＯ２０１３／０２６８３３（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。また、多特異性抗体は、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作り出す静電ステアリング効果を操作して（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体を架橋して（例えば、米国特許第４６７６９８０号を参照されたい）；ロイシンを使用して；二重特異性抗体断片を作り出す「ダイアボディ」技術を使用して（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）；そして、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用して（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているようにして三重特異性抗体を調製して作り出し得る。
【０２３０】
本明細書は、「オクトパス抗体」などの３つ以上の機能的な抗原結合部位を有する遺伝子操作した抗体も含む（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６を参照されたい）。また、本明細書の抗体は、複数のＴＭＥＭ１０６Ｂに対して結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０２３１】
（７）抗体変異体
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体のアミノ酸配列の変異を企図している。例えば、抗体の結合親和性、及び／または、その他の生物学的特性を改善することが望ましい。
【０２３２】
（ｉ）置換、挿入、及び、欠失変異
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体を提供する。抗体のアミノ酸配列変異は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入すること、または、ペプチド合成により調製し得る。そのような修飾として、例えば、当該抗体のアミノ酸配列での残基の欠失、及び／または、挿入、及び／または、残基の置換がある。
【０２３３】
（表Ａ）アミノ酸置換
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【０２３４】
これらの抗体の生物特性の実質的な修飾は、（ａ）置換領域内のポリペプチド主鎖の構造、例えば、シートまたはヘリックス構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩を維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することで達成される。天然に存在する残基は、共通する側鎖特性に基づいて、
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
に分けられる。
【０２３５】
例えば、非保存的置換は、これらのクラスの内の１つのメンバーを、別のクラスのものと交換することを伴う。そのような置換した残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、または、当該分子の非相同領域に導入することができる。
【０２３６】
本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変更を加える場合、特定の実施形態では、アミノ酸の疎水性指標を考慮することができる。それぞれのアミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいて、疎水性指標を割り当てている。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸塩（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸塩（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；及び、アルギニン（−４．５）である。
【０２３７】
タンパク質に対して相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。特定のアミノ酸では、類似の疎水性指標、または、スコアを有するその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、かつ、なおも類似の生物活性を保持することができる、ことは公知である。疎水性指標に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換を含む。特定の実施形態では、±１以内の事例を含み、そして、特定の実施形態では、±０．５以内の事例を含む。
【０２３８】
同様に、類似のアミノ酸の置換を、親水性に基づいて効果的に行うことができ、特に、そうして生成した生物学的機能性タンパク質またはペプチドは、本事例のように免疫学的実施形態での使用を意図している、ことも理解されたい。特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性が支配するタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性、及び、抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。
【０２３９】
これらのアミノ酸残基には：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸塩（＋３．０±１）；グルタミン酸塩（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）、及び、トリプトファン（−３．４）の親水性値を割り当てている。類似の親水性値に基づいて変更を加える場合、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±１以内のアミノ酸の置換を含み、特定の実施形態では、±０．５以内のアミノ酸の置換を含む。親水性に基づいて、一次アミノ酸配列からエピトープを同定することもできる。これらの領域を、「エピトープコア領域」とも称する。
【０２４０】
特定の実施形態において、置換、挿入、または、欠失は、そのような改変が、抗体が抗原に対して結合する能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲで起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲで行い得る。そのような改変は、例えば、ＨＶＲの抗原接触残基の外側で行い得る。前出の変異ＶＨ、及び、ＶＬ配列の特定の実施形態では、それぞれのＨＶＲは改変されておらず、または、１つ、２つ、または、３つ以下のアミノ酸置換を含む。
【０２４１】
アミノ酸配列挿入として、１残基〜１００以上の残基の長さのポリペプチドまでの範囲のアミノ末端、及び／または、カルボキシル末端融合、ならびに、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入がある。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体がある。抗体分子のその他の挿入変異体として、（例えば、ＡＤＥＰＴに関しては）抗体のＮ−またはＣ−末端への融合、または、当該抗体の血清半減期を長くするポリペプチドがある。
【０２４２】
抗体の適切な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基も、一般的に、セリンで置換することができ、分子の酸化安定性を改善し、そして、異常な架橋を阻止することができる。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（特に、当該抗体が、Ｆｖ断片などの抗体断片である場合）。
【０２４３】
（ｉｉ）グリコシル化変異
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体を改変して、当該抗体がグリコシル化する程度を増大または低下させる。抗体に対するグリコシル化部位の追加または削除は、１つ以上のグリコシル化部位を、生成または除去するように当該アミノ酸配列を改変することで好都合に達成し得る。
【０２４４】
抗体のグリコシル化は、一般的に、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ−結合とは、アスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の付着のことを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン、及び、アスパラギン−Ｘ−スレオニンであり、式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸であり、これらの配列は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、または、キシロースの１つが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリン、または、スレオニンに対して付着することを指すが、５−ヒドロキシプロリン、または、５−ヒドロキシリジンも使用し得る。
【０２４５】
抗体に対するグリコシル化部位の付加は、（Ｎ−結合グリコシル化部位に関する）上記したトリペプチド配列の１つ以上を含むようにアミノ酸配列を改変することで、好都合に達成する。また、当該改変は、（Ｏ−結合型グリコシル化部位に関しては）当初の抗体の配列に対して、１つ以上のセリン、または、スレオニン残基を追加または置換しても達成し得る。
【０２４６】
当該抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、そこに付着した炭水化物を改変し得る。哺乳動物細胞が生成するネイティブ抗体は、一般的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ付番法でのＡｓｎ２９７に対するＮ結合で一般的に付着している分岐した二分岐オリゴ糖を含む。このオリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及び、シアル酸、ならびに、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含み得る。一部の実施形態では、本発明の抗体でのオリゴ糖の修飾を、特定の改善した特性を有する抗体変異体を作り出すために行い得る。
【０２４７】
ある実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的に、または、間接的に）付着したフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体変異体を提供する。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、及び、第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フチコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）がある。脱フコシル化抗体を生産することができる細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｄ  ３  ＣＨＯ細胞がある（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及び、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、及び、Ｋａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０−６８８（２００６）を参照されたい）がある。
【０２４８】
（ｉｉｉ）修飾した定常領域
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃとは、抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾である。一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃアイソタイプ、及び／または、修飾は、Ｆｃガンマ受容体に対して結合することができる。
【０２４９】
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該修飾した抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換を、そのアミノ酸位置をＥＵ付番法で定めている、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１−６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２：１１９８０−１１９８４；Ａｌｅｇｒｅｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．３１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５−１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ２００８，１０５：２０１６７−２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。
【０２５０】
いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＮ２９７Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ番号法でのＤ２６５Ａ、及び、Ｎ２９７Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＤ２７０Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｇ２３７Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異の（すべてを含む）１つ以上を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での１つ以上のＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及び、Ａ３３０Ｒ変異を含む。一部では  ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかの実施形態、Ｆｃは、ＥＵ付番法によるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及び、Ｌ２３５Ａ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び、Ｐ３３１Ｓ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅ変異を含む。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重鎖１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を、ＣＨ１で置換すること、及び、ＩｇＧ２のヒンジ領域（ＥＵ付番法によるＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２３０）を、カッパ軽鎖で置換することを含む。
【０２５１】
いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化せずに、抗体クラスター化を高める２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、当該抗体は、位置Ｅ４３０Ｇでのアミノ酸置換、及び、ＥＵ付番法でのＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び、これらの任意の組み合わせから選択した残基位置でのＦｃ領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ａ３３０Ｓにアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。
【０２５２】
いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、本明細書では、補体の活性化を回避するために、ＥＵ付番規定でのＡ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０３：４００５−４０１０（２００６））、または、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓ変異の１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０５：２０１６７−２０１７２（２００８））をさらに含んでもよく、これと組み合わせられてもよい。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／または、Ｐ３３１Ｓの１つ以上をさらに含み得る。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。いずれかのＩｇＧ１修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番でのＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／または、Ｓ４４０Ｗの１つ以上をさらに含み得る。
【０２５３】
本開示のその他の態様は、修飾した定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。ＦｃｇＲ受容体に対する結合に依存して標的化受容体を活性化させる抗体を、ＦｃｇＲ結合を解消するように遺伝子操作すると、そのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９：１０１−１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５−５９３（２００３）；及び、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７：１３８−１４８（２０１５）を参照されたい）。したがって、当該抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１、及び、ヒンジ領域）由来のＦｃドメイン、または、阻害性ＦｃｇＲＩＩＢｒ受容体、または、その変異体を優先的に結合することができる別のタイプのＦｃドメインを有しておれば、適正なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、最小限の副作用で、標的抗原を活性化できると考えられる。
【０２５４】
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換を、ＥＵ付番規定でのＶ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３（１９９４）；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６−２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３−５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：２６１３−２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）；Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｈｅａｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／または、Ｃ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，１３８−１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６−３９３３（２００８））；及び、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｖ２３４Ａ、及び、Ｇ２３７Ａでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ２１９Ｓ、または、Ｃ２２０Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。
【０２５５】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７、１３８−１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉ．１９：７５３−７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７：１３８−１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１９：７５３−７６２（２０１０）；及び、ＷＯ２００８／０７９２４６）。
【０２５６】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
【０２５７】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。いずれかのＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体は、ＥＵ付番規定でのＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを持ったＩｇＧ２アイソタイプを有する。
【０２５８】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）と、ヒンジ領域とを含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７：１３８−１４８（２０１５））。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの特定の実施形態では、当該ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１、及び、ヒンジ領域は、ＥＵ付番法での１１８〜２３０のアミノ酸配列を含む。いずれかのＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ付番法でのＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、または、その両方、及び／または、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。
【０２５９】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び、Ｓ４４０Ｗに１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。いずれかのＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓをさらに含み得る。
【０２６０】
いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２アミノ酸１１８〜２６０、及び、ＩｇＧ４アミノ酸２６１〜４４７を含む。任意のＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓに１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【０２６１】
いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、または、Ｐ３３１Ｓ；及び、それらの任意の組み合わせから選択した１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。
【０２６２】
いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらの任意の組み合わせから選択する残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１、及び／または、いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１、及び／または、いずれかの当該ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ａ３３０Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ１、及び／または、ＩｇＧ２修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。
【０２６３】
本明細書で提供するいずれかの抗体の一部の実施形態では、当該修飾抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４修飾Ｆｃである。一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に関連して）１つ以上のアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、１つ以上の当該アミノ酸置換は、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：１９２５−１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／または、Ｔ２５６Ｅから選択する。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及び、Ｅ３１８Ａをさらに含み得る。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ、及び、Ｌ２３５Ｅをさらに含み得る。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆをさらに含み得る。
【０２６４】
いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規定でのＳ２２８Ｐ（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−１０８（１９９３））、及び／または、（Ｐｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８７（２９）：２４５２５−３３（２０１２））に記載されている１つ以上の変異と組み合わせて、抗体安定性を高め得る。
【０２６５】
いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ヒト血清での抗体半減期を長くする１つ以上の変異（例えば、ＥＵ付番規定でのＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び、Ｔ２５６Ｅ変異の（すべてを含む）１つ以上）をさらに含み得る。
【０２６６】
いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＬ２３５Ｅを含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法でのＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及び、それらの任意の組み合わせから選択した残基位置に１つ以上のアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｐ３３１Ｓにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０にアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｋ３２２Ａにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｓ２６７Ｅ、及び、Ｌ３２８Ｆにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｃ１２７Ｓにアミノ酸置換を含む。いずれかの当該ＩｇＧ４修飾Ｆｃの一部の実施形態では、当該Ｆｃは、ＥＵ付番法での位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及び、Ｓ４４０Ｙにアミノ酸置換を含む。
【０２６７】
（８）その他の抗体修飾
いずれかの抗体の一部の実施形態では、当該抗体は、誘導体である。用語「誘導体」とは、アミノ酸（または、核酸）の挿入、欠失、または、置換以外の化学修飾を含む分子のことを指す。特定の実施形態では、誘導体は、ポリマー、脂質、または、その他の有機もしくは無機部分を有する化学結合など、これらに限定されない共有結合修飾を含む。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、化学修飾を受けていない抗原結合タンパク質よりも循環半減期を長くすることができる。特定の実施形態では、化学修飾した抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または、臓器に対する標的化能力を改善することができる。一部の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、または、ポリプロピレングリコールなど、これらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に修飾する。例えば、米国特許第４６４０８３５号、第４４９６６８９号、第４３０１１４４号、第４６７０４１７号、第４７９１１９２号、及び、第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施形態では、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー、または、ランダムコポリマーのいずれか）、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリドン）−ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、及び、ポリビニルアルコール、ならびに、そのようなポリマーの混合物など、これらに限定されない１つ以上のポリマーを含む。
【０２６８】
特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーを、誘導体の１つ以上の特定の位置、例えば、アミノ末端に対して結合する。特定の実施形態では、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖に対してランダムに結合する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、抗原結合タンパク質の治療能力を改善するために使用する。特定の実施形態では、ＰＥＧを、ヒト化抗体の治療能力を改善するために使用する。このような特定の方法は、例えば、米国特許第６１３３４２６号で論じられており、本明細書の一部を構成するものとして、同文献を、あらゆる目的のために援用する。
【０２６９】
ペプチド類似体は、製薬業界では、テンプレートペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬として一般的に使用されている。これらのタイプの非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と称されている。本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する、Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＲｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及び、Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）。このような化合物は、コンピューター化した分子モデリングを利用して、開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、類似の治療効果、または、予防効果を得ることができる。一般的に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性、または、薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に似ているが、当該技術分野で周知の方法で：−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ−ＣＨ−（シス、及び、トランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、及び、−ＣＨ２ＳＯから選択する結合で任意に置換した１つ以上のペプチド結合を有する。特定の実施形態では、コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸を、同じタイプのＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）で体系的に置換すると、安定性が高まったペプチドを生成することができる。加えて、コンセンサス配列、または、実質的に同一のコンセンサス配列変異を含む固定化したペプチドは、当該技術分野で公知の方法（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２）、本明細書の一部を構成するものとして、あらゆる目的のために援用する）、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を加えることで、生成することができる。
【０２７０】
薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞毒性（抗がん）ペイロード、または、特定の腫瘍マーカーを特異的に標的とする抗体（例えば、理想的には、腫瘍細胞内、または、腫瘍細胞上にだけ認められるポリペプチド）に対する薬物のカップリングに関与する。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、そして、がん細胞の表面に付着する。当該抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、当該腫瘍細胞においてシグナルを発生させ、次いで、当該抗体を、細胞毒素と共に、吸収し、または、内部に取り込む。ＡＤＣを内部に取り込んだ後に、細胞毒性薬を放出して、がんを死滅させる。この標的作用により、理想的には、当該薬物の副作用が小さくなり、かつ、その他の化学療法剤よりも治療ウィンドウが広くなる。抗体をコンジュゲートする技術は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｊａｎｅ  ｄｅ  Ｌａｒｔｉｇｕｅ  ＯｎｃＬｉｖｅ  Ｊｕｌｙ  ５，２０１２；ＡＤＣ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及び、Ｄｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１（１）：５−１３（２０１０）を参照されたい。
【０２７１】
ＩＩＩ．核酸、ベクター、及び、宿主細胞
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載の組み換え方法、及び、組成物を使用して生産し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸を提供する。かかる核酸は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／または、ＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、当該抗体の軽鎖、及び／または、重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一部の実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、（１）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または、（２）当該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び、当該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、形質導入している）。一部の実施形態では、当該宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、リンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。また、本開示の宿主細胞として、単離した細胞、インビトロで培養した細胞、及び、エクスビボで培養した細胞があるが、これらに限定されない。
【０２７２】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を作り出す方法を提供する。一部の実施形態では、当該方法は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を、当該抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。一部の実施形態では、当該抗体を、その後に、宿主細胞（または、宿主細胞培養培地）から回収する。
【０２７３】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を組換え生産するために、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体をコードする核酸を単離し、そして、宿主細胞でのさらなるクローニング、及び／または、発現のために、１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、当該抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離を行い、そして、配列決定し得る。
【０２７４】
本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、または、細胞表面で発現したその断片、または、ポリペプチド、本明細書に記載したポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターとして、クローニングベクター、及び、発現ベクターがあるが、これらに限定されない。好適なクローニングベクターは、標準的技法に従って構築することができ、または、当該技術分野において入手可能な数多くのクローニングベクターから選択し得る。選択するクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に、自己複製能を有しており、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有することができ、及び／または、当該ベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例として、プラスミド、及び、細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣｌ８、ｐＵＣｌ９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）、及び、その誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびに、ｐＳＡ３、及び、ｐＡＴ２８などのシャトルベクターがある。これらのクローニングベクター、及び、数多くのその他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及び、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市販業者から入手可能である。
【０２７５】
抗体コーディングベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞として、原核細胞または真核細胞がある。例えば、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、特に、グリコシル化、及び、Ｆｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌において生産し得る。細菌での抗体断片、及び、ポリペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号、及び、第５８４０５２３号。発現の後に、当該抗体を、可溶性画分での細菌細胞ペーストから単離し、そして、さらに精製することができる。
【０２７６】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体コーディングベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらとして、グリコシル化経路を「ヒト化」して、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を生産する真菌株及び酵母株がある（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）；及び、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６））。
【０２７７】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物、及び、脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例として、植物細胞、及び、昆虫細胞がある。昆虫細胞とともに、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用することができる、数多くのバキュロウイルス株が同定されている。また、植物細胞培養物も、宿主として利用することができる（例えば、トランスジェニック植物で抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び、第６４１７４２９号）。
【０２７８】
また、脊椎動物細胞も、宿主として使用し得る。例えば、懸濁液で成長するように適合させた哺乳動物細胞株が有用である。有用な宿主哺乳動物細胞株のその他の例として、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞、または、例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されたＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及び、ＦＳ４細胞がある。その他の有用な宿主哺乳動物細胞株として、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））などのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびに、Ｙ０，ＮＳ０、及び、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株がある。抗体生産に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２７９】
ＩＶ．医薬組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体及び医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物及び／または医薬製剤を提供する。
【０２８０】
一部の実施形態では、医薬として許容可能な担体は、好ましくは、使用する用量、及び、濃度でレシピエントに対して無毒である。本明細書に記載の抗体は、固体、半固体、液体、または、気体の形態の調製物に製剤し得る。このような製剤の例として、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及び、エアロゾル剤があるが、これらに限定されない。医薬として許容可能な担体は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤するために一般的に使用するビヒクルである、医薬として許容可能な非毒性の希釈剤の担体を含み得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、吸着または浸透を改変、維持、または、保存するための製剤材料を含むことができる。
【０２８１】
特定の実施形態では、医薬として許容可能な担体として、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、または、リジンなど）；抗菌剤；酸化防止剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または、亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または、その他の有機酸など）；増量剤（マンニトール、または、グリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、または、ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンなど）；増量剤；単糖類；二糖類；及び、その他の炭水化物（グルコース、マンノース、または、デキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または、免疫グロブリンなど）；着色剤、矯味矯臭剤、及び、希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩を形成する対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または、過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、または、ポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトール、または、ソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤、または、湿潤剤（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパルなど）；安定性増強剤（スクロース、または、ソルビトールなど）；等張化増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトールなど）；送達媒体；希釈剤；賦形剤、及び／または、医薬用アジュバントがあるが、これらに限定されない。様々な種類の投与に適した製剤のさらななる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ２２ｎｄ  ｅｄ．（２０１３）に認められる。薬物送達法の簡潔な総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）を参照されたい。
【０２８２】
非経口投与に好適な製剤として、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を対象のレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張性無菌注射液剤と、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び、防腐剤を含むことができる水性及び非水性の無菌懸濁剤とがある。
【０２８３】
製剤を、脳または中枢神経系で保持し、そして、安定化するように最適化し得る。作用物質を頭蓋区画に投与すると、その作用物質が、その区画内に保持され、拡散せず、または、拡散しても血液脳関門を通過しないことが望ましい。安定化技法として、分子量の増大を達成するために、架橋、多量体化、または、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への結合などがある。
【０２８４】
保持を確実ならしめるためのその他の方策として、生分解性または生体侵食性インプラントへの本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の封じ込めがある。治療的活性物質の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送速度、及び、インプラントの生分解速度によって制御される。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどとし得るものであり、また、選択した挿入部位に適合する任意のサイズまたは形状とし得る。使用し得る生分解性ポリマー組成物は、分解したときにモノマーなど、生理学的に許容可能な分解生成物を生成する有機エステルまたはエーテルとし得る。無水物、アミド、オルトエステルなどを、単独で、または、その他のモノマーと組み合わせて使用し得る。これらのポリマーを、縮合ポリマーとし得る。これらのポリマーは、架橋したもの、または、未架橋のものとし得る。特に対象となるものは、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれかであるヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、それに、多糖である。対象となるポリエステルとして、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及び、これらの組み合わせのポリマーがある。対象となる多糖として、アルギン酸カルシウム、及び、官能化セルロース、特に、非水溶性であり、分子量が約５ｋＤ〜５００ｋＤであることを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルなどがある。生分解性ヒドロゲルも、本開示のインプラントに採用し得る。ヒドロゲルとは、一般的に、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。
【０２８５】
Ｖ．治療用途
本明細書で開示したように、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、様々な疾患、障害、及び状態を、予防する、リスクを減少させる、または、治療するために使用し得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異を伴う前頭側頭型認知症、Ｃ９０ｒｆ７２変異を伴う前頭側頭型認知症、ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性症、ＴＤＰ−４３タンパク質症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢性海馬硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）、様々な障害に関連する認知機能障害（筋萎縮性側索硬化症における認知機能障害などがあるが、これに限定されない）、慢性外傷性脳症に関連する認知機能障害、及び、脱髄障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）を、予防する、リスクを減少させる、または、治療する上で効果的である。
【０２８６】
本開示のその他の態様は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、発作、網膜ジストロフィー、外傷性脳損傷、脊髄損傷、長期鬱病、動脈硬化性血管疾患、正常な老化の望ましくない症状、認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウパチー病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、マラリア、本態性振戦、中枢神経系ループス、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、変性椎間板疾患、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、加齢性黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、気道感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、炎症性障害、関節炎、多発性硬化症、代謝障害、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、組織または血管の傷害、外傷、及び、正常な老化の１つ以上の望ましくない症状からなる群から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療する方法であって、前出の実施形態のいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療有効量を、個体に対して投与することを含む。
【０２８７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、脳内のＴＤＰ−４３封入体を減少させ、認知機能及び行動機能の低下を減少させ、認知機能及び行動機能を改善し得る。
【０２８８】
一部の実施形態では、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物として、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及び、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、そして、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯類（例えば、マウス、及び、ラット）があるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、当該対象または個体は、ヒトである。
【０２８９】
本明細書で提供する抗体（及び、任意のさらなる治療薬）を、非経口、肺内、鼻腔内、病巣内投与、脳脊髄内、頭蓋内、髄腔内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、または、吸入経路などの任意の適切な手段で投与することができる。非経口注入として、ボーラスとしての筋肉内、静脈内投与、または、一定期間にわたる持続注入、動脈内、関節内、腹腔内、または、皮下投与がある。一部の実施形態では、当該投与は、静脈内投与である。一部の実施形態では、当該投与を、皮下にする。投与時間の長短をも加味して、投与は、適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射で実施できる。本明細書では、単回投与、または、様々な時点に及ぶ複数回投与、ボーラス投与、及び、パルス注入など、これらに限定されない様々な投薬スケジュールを企図している。
【０２９０】
本明細書で提供する抗体は、優れた医療行為と一致する方法で、製剤、投薬、及び、投与する。この文脈で考慮すべき要素として、治療する特定の障害、治療を受ける特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び、開業医に公知のその他の要素がある。当該抗体は、必須ではないが、問題の障害の予防または治療のために現在利用されている１つ以上の作用物質を用いて、任意に製剤する。そのようなその他の作用物質の有効量は、製剤に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び、先述した考察でのその他の要素によって定まる。これらは、一般的には、本明細書に記載したのと同じ用量、及び、投与経路で、または、本明細書に記載した用量の約１〜９９％、または、任意の用量で、かつ、経験的／臨床的に適切であると決定した任意の経路で使用する。
【０２９１】
疾患の予防または治療のための（単独で、または、１つ以上のその他のさらなる治療剤と組み合わせて使用する場合の）本発明の抗体の適切な用量は、治療する疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度と経過、当該抗体を予防または治療のいずれの目的で投与するのかの区別、従前の治療、患者の病歴と抗体に対する反応、及び、主治医の裁量によって定まる。当該抗体を、一度に、または、一連の治療において、適切に患者に対して投与する。
【０２９２】
疾患の種類、及び、重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体を、例えば、１回以上の別々の投与、または、持続注入のいずれかで、当該患者に対して投与する最初の候補用量とすることができる。上記した要素に応じて、ある一般的な１日用量を、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲とし得る。状態に応じて、数日以上の反復投与に関しては、一般的に、治療は、疾患症状に所望の抑制が認められるまで続ける。当該抗体のある例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または、１０ｍｇ／ｋｇ（または、それらの任意の組み合わせ）の１つ以上の用量を、患者に対して投与し得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週、または、３週間ごと（例えば、当該患者が、約２〜約２０、または、例えば、約６用量の抗体の投与を受けるよう）に投与し得る。特定の実施形態では、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日１回、週１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、または、月１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、または、それ以上である。最初に高負荷用量を、続いて、１回以上の低用量を投与し得る。しかしながら、その他の投与計画も有用であり得る。この治療法の進行状況は、従来の技術とアッセイで容易にモニターできる。
【０２９３】
ＶＩ．診断用途
いずれかの抗体の一部の実施形態では、本明細書で提供するいずれかの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、試料または個体でのＴＭＥＭ１０６Ｂの存在を検出する上で有用である。本明細書で使用する用語「検出」とは、定量的または定性的検出を含む。本明細書では、個体、または、個体に由来する組織試料でのＴＭＥＭ１０６Ｂの検出など、診断目的で本開示の抗体を使用する方法を提供する。一部の実施形態では、当該個体は、ヒトである。一部の実施形態では、当該組織試料は、血液、脳、髄液などである。
【０２９４】
当該検出方法は、抗原に結合した抗体の定量が関与し得る。生物学的試料での抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、または、マイクロ陽電子放射断層撮影など、当該技術分野で公知の任意の方法で行い得る。特定の実施形態では、当該抗体を、例えば、１８Ｆで放射性標識し、次いで、マイクロ陽電子放出断層撮影分析を利用して検出する。また、抗体結合も、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピューター断層撮影、単一光子放出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及び、コンピューター断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的手法で、患者において定量し得る。
【０２９５】
ＶＩＩ．製造物
本明細書では、本明細書で説明した抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を含む製造物（例えば、キット）を提供する。製造物は、本明細書に記載した抗体を含む１つ以上の容器を含み得る。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封したＭｙｌａｒ、または、プラスチックバッグ）など、これらに限定されない、任意の適切な包装とし得る。これらの容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、または、サブユニット用量とし得る。
【０２９６】
一部の実施形態では、これらのキットは、第２の作用物質をさらに含み得る。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及び、デキストロース溶液など、これらに限定されない、医薬として許容可能な緩衝剤または希釈剤である。一部の実施形態では、当該第２の作用物質は、医薬として活性な作用物質である。
【０２９７】
いずれかの製造物の一部の実施形態では、当該製造物は、本開示の方法に従って使用するための指示書をさらに含む。一般的に、当該指示書は、意図した治療のための用量、投薬スケジュール、及び、投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの指示書は、本開示の任意の方法に従って、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異を伴う前頭側頭型認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を伴う前頭側頭型認知症、ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性、ＴＤＰ−４３タンパク質症、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）、加齢性海馬硬化症（ＨＳ−Ａｇｉｎｇ）、様々な障害に関連する認知機能障害（筋萎縮性側索硬化症における認知機能障害などがあるが、これに限定されない）、及び、低髄鞘形成障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）から選択される疾患、障害、もしくは傷害を予防する、リスクを減少させる、または、前記疾患、障害、もしくは傷害を有する個体を治療するために、本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体）の投与の説明を含む。一部の実施形態では、当該指示書は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体、及び、第２の作用物質（例えば、医薬として活性な第２の作用物質）の使用に関する説明を含む。
【０２９８】
以下の実施例を参照することで、本開示の理解は十分に深まる。しかしながら、それらを、本開示の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。本開示全体でのすべての引用を、本明細書の一部を構成するものとして、明示的に援用する。
【実施例】
【０２９９】
実施例１：ＴＭＥＭ１０６Ｂは、様々な神経変性障害における危険因子である
ＦＴＬＤの遺伝的危険因子を突き止めるために、２５０９名のコントロール対象と、一部にＧＲＮ変異を含む、病理学的に確認したＦＴＬＤ−ＴＤＰの５１５名の対象とで全ゲノム関連研究（ＧＷＡＳ）を行った、（ｖａｎ  Ｄｅｅｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４２：２３４−２３９）。このＧＷＡＳでは、染色体７ｐ２１．３の６８ｋｂ領域内に３つのＳＮＰが発見されており、これらは、ゲノム全体で有意なＦＴＬＤ−ＴＤＰの発生に関連している（ｒｓ６９６６９１５、ｒｓ１０２００４、及び、トップマーカーＳＮＰ  ｒｓ１９９０６２２；ｐ値範囲＝５．００×１０−１１〜１．０８×１０−１１）。有意に関連する３つのＳＮＰは、名目関連の９つのその他のＳＮＰと同じ連鎖不平衡（ＬＤ）ブロック内にあり、そして、そのすべてが、ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子座に関係していた。この事例でのコントロールコホートでは、それぞれの有意なＳＮＰのマイナー対立遺伝子が、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ患者で過小評価されており（ｒｓ１９９０６２２マイナーＣ対立遺伝子のコントロールについては、３２．１対４３．６％；ｐ値＝１．０８×１０−１１）、このことは、マイナーＴＭＥＭ１０６Ｂ対立遺伝子を発現する個体では、疾患を発症する可能性が小さいことを示唆している［ｒｓ１９９０６２２マイナー対立遺伝子のオッズ比（ＯＲ）＝０．６１］。ＧＲＮ変異ステータスで当初のＧＷＡＳコホートを層別化すると、上位３つのＳＮＰの関連は、両方のグループで有意なままであったが、非ＧＲＮ保有者（ｒｓ１９９０６２２  ｐ値＝６．９０×１０−７；ＯＲ  ０．６８）に対して、ＧＲＮ保有者でのＧＲＮ関連ＦＴＬＤ−ＴＤＰ（ｒｓ１９９０６２２  ｐ値＝１．３４×１０−９；ＯＲ  ０．３４）を有する人々で最大であった。これらのＳＮＰは、ＴＭＥＭ１０６ＢとＧＲＮとの間の機能的相互作用を示唆するＧＲＮ変異も保有する患者に最も強いリスクを与えた。ＦＴＬＤ−ＴＤＰを有するＴＭＥＭ１０６Ｂ変異体の遺伝的関連性を、高い信頼性で再現した（Ｃｒｕｃｈａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｖａｎｄｅｒ  Ｚｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＦＴＬＤのリスクを高めることに加えて、ｒｓ１９９０６２２での主要な対立遺伝子は、ＦＴＬＤ発症の年齢も若年化する。（例えば、Ｆｉｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７６：４６７−４７４；Ｃｒｕｃｈａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌを参照されたい。）
【０３００】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰを、ＦＴＬＤ−ＴＤＰの疾患リスク因子として評価する最初の研究は、２０１２年に、Ｃ９ｏｒｆ７２反復拡張が発見される前に行われた。２つの独立したグループは、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、Ｃ９ｏｒｆ７２変異が関与するＦＴＬＤ、及び／または、ＡＬＳを発症するリスクにも関連していることを発見した。（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２７：４０７−４１８；ｖａｎ  Ｂｌｉｔｔｅｒｓｗｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ，１２７：３９７−４０６を参照されたい。）これらのＣ９ｏｒｆ７２変異体コホートでは、ＴＭＮ１０６Ｂ  ＳＮＰのマイナー対立遺伝子［ｒｓ１９９０６２２を有するＬＤでのｒｓ１９９０６２２、及び／または、ｒｓ３１７３６１５を保有する個体の頻度は、ＧＲＮ変異保有者のコホートほどではないが、有意に減少した。興味深いことに、ＦＴＬＤ、ＦＴＬＤ−ＡＬＳ、または、ＡＬＳのいずれかの主要疾患の提示に基づいたグループでのＣ９ｏｒｆ７２反復拡張保有者の分析では、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、ＡＬＳではなく、ＦＴＬＤの発生を特異的に保護しており、リスク対立遺伝子保有者と比較して、保護ＴＭＥＭ１０６Ｂ対立遺伝子に関してホモ接合性であるＣ９ｏｒｆ７２拡張保有者の脳でのＴＤＰ−４３負担が軽いことを示した。これらの知見は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰ  ｒｓ１９９０６２２、及び、ｒｓ１０２０００４が、疾患リスクに関連してはいないが、ＡＬＳ患者の認知機能と有意に関連しており、ｒｓ１９９０６２２マイナー対立遺伝子に関してホモ接合性の個体は、主要なリスク対立遺伝子に関してヘテロ接合性またはホモ接合性の個体よりも認知能力が優れていることを示した、ＡＬＭ患者の臨床コホートにおけるＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰの以前の試験と一致している（Ｖａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２１：３７３−３８０）。
【０３０１】
ＴＤＰ−４３凝集体などの神経変性疾患の特徴は、ＦＴＬＤに固有のものではなく、また、アルツハイマー病（ＡＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、及び、海馬硬化症（ＨｐＳｃｌ）（Ａｍａｄｏｒ−Ｏｒｔｉｚｅｔａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ，６１：４３５−４４５；Ｚａｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｐ，８：３６３−３７０）などのその他の神経変性疾患でも認められており、限定的ではあるが、明らかに健康な個体でも認められている（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８４：９２７−９３４を参照されたい）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク変異体は、臨床神経学的診断の非存在下では、ＴＤＰ−４３神経病理学と関連している。同様に、ＡＤ患者間での小さなＴＤＰ−４３病変と関連する保護ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプが、ＡＤの病理学的提示に影響を与えることが認められた（Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，７９：７１７−７１８）。海馬硬化症は、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ、及び、ＡＤなどの認知症を患った高齢患者での一般的な病理学的特徴でもあり、大抵の場合、ＴＤＰ−４３病理が共存する。ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子型は、原発性海馬硬化症（Ａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２９：５３−６４）、及び、ＡＤ患者間での海馬硬化症に関連していることが認められており、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、今日までに、ＡＤ−ＨｐＳｃｌ、及び、ＨｐＳｃｌの最も有力な公知の遺伝的指標となっている（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ，１２８：４１１−４２１）。これらの研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＳＮＰが、ＡＤやＨｐＳｃｌなどの非ＦＴＬＤ障害におけるＴＤＰ−４３タンパク質症の発症、及び、重症度の危険因子であることを総合的に示唆している。
【０３０２】
１５００個を超えるヒトの脳の剖検試料を対象としたゲノミクス研究は、ＴＭＥＭ１０６Ｂでの一般的な変異を、ヒトの脳の生物学的老化率の主要なゲノム全体の決定因子として同定した：ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子座での２つのリスク対立遺伝子の存在が、その遺伝子発現プロファイルに基づいて、約１２歳に見える個体を、実年齢よりも老けたように見せる（Ｒｈｉｎｎ  ａｎｄ  Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔ，４：４０４−４１５）。ＴＭＥＭ１０６Ｂリスク対立遺伝子のこの効果は、公知の神経疾患を持たない個体、ならびに、アルツハイマー病などの神経変性プロセスを持つ個体でも認められる。加齢におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの役割は、脳と寿命（小脳ではなく大脳皮質、特に、６５歳超）の観点から、非常に選択的であるように考えられる。この効果は、保護的ＴＭＥＭ１０６Ｂハプロタイプの保有者が、加齢に伴う認知機能低下を示すさらなるコホートにおいて、独立して確認された（Ｒｈｉｎｎ  ａｎｄ  Ａｂｅｌｉｏｖｉｃｈ，２０１７，上掲）。ＴＭＥＭ１０６Ｂ保護的ハプロタイプは、特定の量の脳病変の認知能力の向上に関連することが示されているので、認知能力への影響が確認された（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ，１４：ｅ１００２２８７）。これらの結果は、神経変性疾患を超えた老化におけるＴＭＥＭ１０６Ｂの多面的な役割を補強する。
【０３０３】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ変異体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ｍＲＮＡ、及び、タンパク質発現レベルを高めて、ＦＴＬＤ−ＴＤＰを発症するリスクを高め得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂが増えると、細胞あたりの後期エンドソーム／リソソームの平均数が減少し、リソソームが酸性化されなくなり、そして、リソソームの分解も妨げられる。
【０３０４】
ＴＭＥＭ１０６Ｂのマウス遺伝的ノックアウト（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ  ９５，２８１−２９６）は、グラニュリン経路でのＴＭＥＭ１０６ｂに関する効果を示した。具体的には、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質の遺伝的ノックアウトは、リソソームタンパク質のレベルの一部救済、ならびに、過反応性や脱抑制の除去などの行動変化の救済など、マウスモデルのＧＲＮノックアウトに関連する一部の病原性表現型を救済することができた。当該ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウト自体は、マウスで十分に許容されており、そして、ＴＭＥＭ１０６Ｂは、ｖ−ＡＴＰアーゼサブユニットＡＰ１との（共免疫沈降で証明された）直接的な相互作用を介して機能し得る。当該ｖ−ＡＴＰアーゼ複合体は、リソソームのｐＨを低下させ、そして、タンパク質の分解と再利用を開始する上で重要な役割を果たし得る。したがって、ＴＭＥＭ１０６Ｂとの相互作用は、ＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現に関連したリソソーム表現型の一部をもたらし、また、逆に、この相互作用をブロックする（または、単に、存在するＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルを減少させる）と、この表現型を改善し得る。
【０３０５】
上記した分析、及び、さらなる分析は、関連ＴＭＥＭ１０６Ｂと、前頭側頭葉型変性症、前頭側頭型認知症、プログラニュリン変異を伴う前頭側頭型認知症、Ｃ９ｏｒｆ７２変異を伴う前頭側頭型認知症、ＴＤＰ−４３封入体を伴う前頭側頭葉型変性、ＴＤＰ−４３タンパク質症、海馬硬化症、加齢性海馬硬化症、様々な障害に関連する認知機能障害（筋萎縮性側索硬化症、及び、慢性外傷性脳症における認知機能障害などがあるが、これらに限定されない）、及び、低髄鞘形成障害（低髄鞘形成大脳白質ジストロフィーなどがあるが、これに限定されない）など、これらに限定されない様々な疾患、障害、及び、状態を同定する。したがって、本開示は、ＴＭＥＭ１０６Ｂに特異的に結合して、その機能に影響を与える抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体など、ＴＭＥＭ１０６Ｂを標的とする治療法を提供する。
【０３０６】
実施例２：ＧＳＴ、及び、マウス−Ｆｃ−コンジュゲートヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの生産
様々なヒトＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド、及び、ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチド融合タンパク質を、以下のように生成した。様々なＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドの哺乳動物組換え発現は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ｃＤＮＡに基づいた合成遺伝子を、哺乳動物発現ベクターにクローニングした後に、一過性のトランスフェクションと、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞で発現して行った。それぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物は、異種シグナルペプチドと、Ｈｉｓタグ、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、または、融合構築物のためのマウスＩｇＧ１Ｆｃのいずれかと含んでいた。一部のＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物は、ＴＭＥＭ１０６ＢのＣ末端領域（推定細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基１２２〜２７４））を含んでいた。その他のＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物は、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質内の（おおよそアミノ酸残基２１０〜２４０にある）疎水性パッチの発現を回避するために、ＥＣＤの欠失バージョン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸残基１２２〜２１０）を含んでおり、可溶性ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質産物のフォールディングを損ないかねないと考えられる。
【０３０７】
当該発現構築物で使用するそれぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドのアミノ酸配列を、以下に提供する：
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失ＥＣＤポリＨｉｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６）
2021508498.tif 000010
ヒトＩｇＧ１Ｆｃ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＥＣＤ欠失融合（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１７）
2021508498.tif 000011
マウスＩｇＧ１−ＴＭＥＭ１０６ＢヒトＥＣＤ融合（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１８）
2021508498.tif 000012
マウスＩｇＧ１−ＴＭＥＭ１０６Ｂヒト欠失ＥＣＤ融合（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１９）
2021508498.tif 000013
ＧＳＴ融合ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＥＣＤ（欠失）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２０）
2021508498.tif 000014
ＧＳＴ融合ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２１）
2021508498.tif 000015
【０３０８】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物のトランスフェクションを、製造業者のプロトコール（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号Ａ１４５２４）に従って、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ−２９３システムを使用して実行した。すなわち、Ｅｘｐｉ２９３細胞のそれぞれの３０ｍＬに関して、３０μｇのプラスミドＤＮＡを、８０μＬのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を加えた１．５ｍＬ  ＯｐｔｉＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号３１９８５０７０）で希釈した。得られた溶液を混合し、そして、室温で、３０分間インキュベートした後に、１２５ｍＬフラスコ（Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＦＩＳ＃ＰＢＶ１２−５）内のＥｘｐｉ２９３発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号Ａ１４３５１０１）で培養した３０ｍＬのＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡ１４５２７）を加えて、トランスフェクション前に、約３×１０∧６細胞／ｍｌにする。培養Ｅｘｐｉ２９３細胞を、１２５ｒｐｍでオービタル震盪しながら、３７ｏＣ、８％ＣＯ２で培養した。トランスフェクションの１６〜２４時間後に、１５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１、及び、１．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２を、それぞれのフラスコに加えて、タンパク質収量を高めた。ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質発現実験の一部では、さらに大量の培養を行っており、すべての試薬を、それらの量に応じた規模にした（すなわち、１２０ｍＬ培養の場合、すべての試薬を４倍にする、など）。トランスフェクションの５〜７日後に細胞培養上清を回収し、濾過し（０．２ミクロン）、そして、ＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドを、プロテインＡ、Ｎｉ−ＮＴＡ、または、グルタチオンクロマトグラフィーで精製した。
【０３０９】
上記したそれぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１６〜３２１）の一過性発現に由来するタンパク質収量を決定した。ＧＳＴ融合ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２０）は、十分な収率で発現しており、ＥＬＩＳＡや表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合アッセイ、ＳＰＲをベースとしたビニングアッセイなど、以下の実験で使用するのに十分な純度を提供した。
【０３１０】
上記したその他のＴＭＥＭ１０６Ｂ発現構築物を使用して得たＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドの量は、抗体生成のための免疫処置での使用には十分ではなかった。したがって、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体生成のための最初の免疫処置は、本明細書に記載したようなプラスミドＤＮＡ構築物を使用して行った。
【０３１１】
実施例３：ＤＮＡ免疫処置のためのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドの構築
ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体を開発するために、ＤＮＡ免疫処置手法を使用した。ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、カニクイザルＴＭＥＭ１０６ＢをコードするｃＤＮＡ配列（それぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、及び、３１５）を、ＤＮＡ免疫処置のために、ｐＣＡＧＧＳ哺乳動物発現ベクター（ＫｅｒａＦＡＳＴ  ＥＨ１０１７）にクローニングした。それぞれのＴＭＥＭ１０６Ｂポリペプチドの発現を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への発現構築物の一過性トランスフェクションに続いて、市販の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体（ＥＭＤ  ＭｉＬ１ｉｐｏｒｅ  ＭＡＢ−Ｎ４７３、Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＰＡ５−６３３８、Ａｂｃａｍ  ａｂｌ４０１８５、Ａｂｃａｍ  ａｂｌ１６０２３、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈ  ２０９９５−１−ＡＰ、ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＬＳ−Ｃ１４５６０１、Ａｂｇｅｎｔ  Ａ１１２７９６、ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ  ＭＢＳ９４１２９８２、Ｓｉｇｍａ  ＳＡＢ２１０６７７３、Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｓ  Ａ３０３−４３９Ａ）を用いたウェスタンブロットと、細胞内及び細胞外ＦＡＣＳ分析とを行って確認した。次いで、当該発現構築物を、以下に記載したようにして、マウスでのＤＮＡ免疫処置に使用した。
【０３１２】
実施例４：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ抗体の生成
ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する抗体を得るために、以下の手順を用いて、ハイブリドーマを生成した。ＮＺＢ／Ｗマウス（ＪＡＸ１００００８，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｕｒ，ＭＥ）、ＳＪＬマウス（ＪＡＸ０００６８６，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｒｅｎｓｓｅｌａｅｒ，ＮＹ）を、乳酸リンゲル液で希釈したｍＦｌｔ３リガンド（ＤＮＡ）、及び、ｍＧＭ−ＣＳＦ（ＤＮＡ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の有無に関係なく、ヒト、カニクイザル、または、マウスの全長ＴＭＥＭ１０６Ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、及び、３１５）をコードする５０μｇのプラスミドＤＮＡで、それぞれを、毎週、同時に免疫処置した。ＤＮＡ免疫処置のために、ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドの注射を、合計で５〜７回、マウスごとに実施した。最後のＤＮＡ免疫処置の３日後に、マウスから脾臓を採取した。マウスから得た血清は、ヒト、カニクイザル、及び／または、マウスのＴＭＥＭ１０６Ｂを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞を使用して、ＦＡＣＳ分析で、ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する反応性について分析した。ヒト、カニクイザル、及び／または、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂを過剰発現しているＨＥＫ２９３細胞に対して強力に結合した血清を持つマウスの脾細胞を、電気融合（ＥＣＭ２００１，ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を介して、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞（ＣＲＬ−１５８０，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合させ、そして、３７℃／５％  ＣＯ２で、一晩、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）でインキュベートした。３ラウンドの融合を行った：融合Ａ、免疫処置したＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウスから得た脾細胞を使用する；融合Ｂ、免疫処置したＳＪＬマウスから得た脾細胞を使用する；及び、融合Ｃ、免疫処置したＮＺＢ／Ｗマウスから得た脾細胞を使用する。
【０３１３】
翌日、融合細胞を遠心分離し、そして、抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ−ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含む１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ培地Ｃに再懸濁し、次いで、メチルセルロースを主成分とし、ＨＡＴコンポーネントを含む、９０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｄ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と穏やかに混合した。これらの細胞を、Ｎｕｎｃ  Ｏｍｎｉ  Ｔｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に置き、３７℃／５％  ＣＯ２で、７日間増殖させた。蛍光コロニーを選択し、そして、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ  ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む９６ウェルプレートに移し、次いで、５日後に、ＴＭＥＭ１０６Ｂ反応性をスクリーニングした。１２０５個のハイブリドーマを得た。
【０３１４】
実施例５：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマの一次スクリーニング
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマの最初のスクリーニングを、以下のように行った。最初に、得られた１２０５個のハイブリドーマ由来の組織培養上清を、トランスフェクト細胞と比較して、親（非トランスフェクト）ＨＥＫ２９３細胞に対する結合の程度を比較することで、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ一過性トランスフェクトＨＥＫ２９３細胞に対して特異的に結合する能力をスクリーニングした。前出の実施例１に記載のものに変更を加えた製造業者のプロトコールに従って、リポフェクタミンシステムを使用して、ＴＭＥＭ１０６Ｂ過剰発現細胞を、ＨＥＫ２９３細胞の一過性トランスフェクションを介して生産した。スクリーニング実験全体の再現性を確保するために、トランスフェクションした細胞の大きなバンク（約１×１０９）を、一過性のトランスフェクションの単一のラウンドで準備し、そして、以降のすべてのスクリーニング実験のために等分して凍結した。
【０３１５】
ハイブリドーマ細胞培養上清のスクリーニングのために、ヒトＴＭＥＭ１０６ＢトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェル丸底プレート（２×１０５細胞／ウェル）に等分し、そして、氷上で、５０μＬのハイブリドーマ細胞培養上清と、３０分間インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離して上清を除去し、これらの細胞を、１７５μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ  ＥＤＴＡ）で２回洗浄し；さらに、氷上で、抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ−ＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ，カタログ番号１１５−１３６−０７１）（１：５００に希釈した）と、２０分間、インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積３０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５６４６３）に再懸濁した。セルソーティングを、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、または、ｉＱｕｅ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で行い、ソートゲートは、死滅した（すなわち、ヨウ化プロピジウムポジティブ）細胞を排除するように描画する。ＴＭＥＭ１０６Ｂ＋ＨＥＫ２９３細胞の抗マウスＡＰＣ  ＭＦＩの中央蛍光強度（ＭＦＩ）を、それぞれのクローンについて計算し、そして、二次抗体だけと十分な比較を行って、バックグラウンドで少なくとも２倍のシグナルを示すものを、さらなる分析と特徴決定のために使用した。
【０３１６】
上記で同定した１２０５個のハイブリドーマクローンを、３ラウンドの融合で試験した。（例えば、非特異的上清、培地のみ、二次抗体のみを使用する）ネガティブコントロールと比較して、ＴＭＥＭ１０６Ｂ−一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対する結合で、２倍を超える差異を示した、合計で５３個のクローンを同定した。これらの５３個のハイブリドーマクローンの内、３２個は融合Ａで、１８個は融合Ｂで、そして、３個は融合Ｃで得た。これらのクローンを、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ＴＭ−１〜ＴＭ−５３と命名して、以下のように、さらに特徴決定をした。
【０３１７】
実施例６：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体交差反応性スクリーニング
上記した選別の最初のラウンドで得た抗ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ポジティブクローンを、最初のスクリーニングで使用したのと同様の方法を使用して、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、及び、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する交差反応性についてスクリーニングしたが、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、カニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂのいずれかを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞、ならびに、ネガティブコントロールとして親ＨＥＫ２９３細胞を使用した。このスクリーニングの結果に基づいて、ハイブリドーマクローン由来の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ヒト／マウス／カニクイザル交差反応性、ヒトのみ、ヒト／マウス交差反応性、及び、ヒト／カニクイザル交差反応性としてビニングした。この交差反応性スクリーニングの結果を、以下の表１に示しており；このデータは、親ＨＥＫ２９３細胞に対する結合を介して、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ（ｈｕ）、カニクイザルＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ（ｍｏ）のいずれかで一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対する結合の変化倍率を示している。
【０３１８】
（表１）
2021508498.tif 000016
2021508498.tif 000017
2021508498.tif 000018
【０３１９】
これらの結果は、得られた単離された抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対して特異的であり、そして、一般的に、ヒト、マウス、及び、カニクイザル起源のＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質と交差反応することを示した。一般的に、これらのタンパク質の非常に高い相同性に基づいて予測した通り、これらの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ヒト、及び、カニクイザルに高い交差反応性を示した。マウスＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対する交差反応性も、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウスの免疫処置に使用した融合Ａ（ＴＭ１〜ＴＭ３２）から得たクローン由来で高かった（２４／３１クローン）。野生型（ＴＭＥＭ１０６Ｂ＋／＋）マウスの免疫処置に使用した融合Ｂ（ＴＭ３３〜ＴＭ４９）、及び、融合Ｃ（ＴＭ５０〜ＴＭ５２）のクローンは、クローンの割合が非常に小さく（８／２０）、強いマウス交差反応性を示した。
【０３２０】
実施例７：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＥＬＩＳＡスクリーニング
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、組換え生産したＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２１）タンパク質に対する、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ上清の結合について試験をした。要するに、９６ウェルポリスチレンプレートを、１〜１０μｇ／ｍｌの組換えＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失タンパク質、または、ＧＳＴ（Ｐｉｅｒｃｅ）を含むＰＢＳで、３７ｏＣで、１〜４時間、または、４ｏＣで、一晩、コーティングした。次いで、コーティングしたプレートを、５％ＢＳＡで、１時間ブロックし、ＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水＋０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０）で、３×１５０μＬで洗浄し、次いで、それらの抗体を、様々な希釈率（１００〜１０００倍）のＰＢＳに加えた。１時間のインキュベーション（室温で、震盪しながら）の後に、それらのプレートを、３×１５０μＬのＴＢＳＴで洗浄した。二次抗マウスＨＲＰ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  カタログ番号１１５−０３５−００３）を、１：１０００に希釈したＴＢＳＴ（１００μｌ／ウェル）に加え、そして、震盪しながら、室温で、３０分間、インキュベートした。最終セットの（３×１５０μＬのＴＢＳＴでの）洗浄の後に、１００μＬのペルオキシダーゼ基質を、１分間かけて加えた；次いで、この反応を、２Ｎ硫酸（１００μＬ）で反応停止した。反応停止した反応ウェルを、ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒで、６５０ｎｍの吸光度を検出した。
【０３２１】
同定した５３個の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂポジティブハイブリドーマクローンの内、２９個のハイブリドーマクローン由来の上清は、ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失タンパク質に対して強力な結合を示した（すなわち、結合の程度は、１００倍希釈と１０００倍希釈の上清で同じであった）；２つのハイブリドーマクローンの上清は低結合を示した；及び、１８個のハイブリドーマクローンの上清は、ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失タンパク質に結合しなかった。４つのハイブリドーマクローン由来の上清の結合データは、決定しなかった。このスクリーニングで使用したＴＭＥＭ１０６Ｂの欠失バージョンでは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質のＣ末端部分の最後の６４個のアミノ酸残基を含んでおらず、これらの結合結果は予想の範囲内であった；したがって、１８個の非バインダーの結合部位は、この特定のＴＭＥＭ１０６Ｂ欠失タンパク質には存在し得ない。試験した抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ上清はいずれも、いかなる濃度のＧＳＴにも結合しなかった。ＥＬＩＳＡ結合実験の結果を、以下の表２に示す。
【０３２２】
（表２）
2021508498.tif 000019
【０３２３】
実施例８：ＴＭＥＭ１０６Ｂのネイティブ発現細胞株に関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂスクリーニング
最初の選別ラウンドで同定した抗ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ハイブリドーマクローンも、ヒト由来細胞株でネイティブ発現したＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合能力に関してスクリーニングをした。これらの研究では、以下のヒト由来細胞株を使用した：ヒト腺がん株ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ  ＣＴＬ−２）、ヒト神経膠芽腫細胞株Ｕ２５１（Ｓｉｇｍａ  ０９０６３００１）、マウス神経芽細胞腫細胞株Ｎｅｕｒｏ２ａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１３１）、及び、Ａ５４９ヒト肺癌株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１８５）。
【０３２４】
ＨｅＬａ細胞、Ｕ２５１細胞、及び、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞を、Ｅａｇｌｅ’ｓ最小必須培地（ＥＭＥＭ、ＡＴＣＣ＃３０−２００３）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）で培養した；Ａ５４９細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳで培養した。すべての細胞を、Ｔ７５またはＴ１５０フラスコのいずれかで培養した。細胞が、８０％超のコンフルエンスに達したら、トリプシン−ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  カタログ番号２５２０００５６）を使用して、３７℃で、１０分間、フラスコから細胞を分離させた。新しい培地を加えて酵素を失活させ、次いで、これらの細胞を、ＦＡＣＳ分析用の９６ウェルプレートに分配した。
【０３２５】
ＦＡＣＳ分析を、以下のように行った。それぞれの細胞タイプを、９６ウェルの丸底プレート（２×１０５細胞／ウェル）に等分し、ＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ  ＥＤＴＡ）で１回洗浄し、そして、５０μＬのハイブリドーマ上清、または、精製抗体（１０μｇ／ｍｌ  ＦＡＣＳ緩衝剤）を用いて、氷上で、１時間、インキュベートした。この一次インキュベーションの後に、遠心分離で上清を除去し、これらの細胞を、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、次いで、１：２００に希釈した抗マウスＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ  ＃１１５−１３６−０７１）と共に、氷上で、３０分間インキュベートした。この二次インキュベーションの後に、これらの細胞を、再び、氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で２回洗浄し、そして、最終体積５０μＬのＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃ＢＤＢ５５６４６３）に再懸濁した。分析を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏシステム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、または、ｉＱｕｅ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で行い、ソートゲートは、死滅した（すなわち、ヨウ化プロピジウムポジティブ）細胞を排除するように描画する。
【０３２６】
ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂを自然に発現するＨｅＬａ細胞、Ｕ２５１細胞、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞、及び、Ａ５４９細胞に対して結合する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のＦＡＣＳ分析の結果を以下の表３に示す。データは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す。
【０３２７】
（表３）
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2021508498.tif 000021
【０３２８】
ＴＭＥＭ１０６Ｂをネイティブ発現するこれらの細胞株を使用した結合データは、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合特異性を確認した。すべてのＴＭＥＭ１０６Ｂ特異的抗体は、一貫して低い結合を示したネガティブコントロール抗体を使用して認められた結合と比較して、上記した細胞株の少なくとも１つで結合の強化を示した。Ｕ２５１細胞（ヒト）、及び、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞（マウス）に対する結合は、脳のＴＭＥＭ１０６Ｂに対する結合の代理としても使用しており、これらの細胞株は、両方ともに脳に由来しており；Ｕ２５１細胞は、ヒト星状細胞腫に由来しており、そして、Ｎｅｕｒｏ２Ａ細胞は、ニューロン系に由来していた。
【０３２９】
実施例９：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂハイブリドーマ抗体の分子クローニング
当該ハイブリドーマから得た抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、以下のようにしてサブクローニングした。５×１０５個のハイブリドーマ細胞を、０．５ｍｌ  Ｔｒｉｚｏｌ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号１５５９６０２６）に再懸濁した。クロロホルム抽出、及び、エタノール沈殿で、全ＲＮＡを、細胞から抽出した。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ（登録商標）ＲＡＣＥ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ  Ｂｉｏ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ，カタログ番号６３４８５９）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ｃＤＮＡを、細胞から抽出した。ＲＡＣＥキットに提供した５’ＵＰＭプライマー、及び、重鎖定常領域プライマー（５’−ＡＧＣＴＧＧＧＡＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡ−３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２２］と、軽定常領域プライマー（５’−ＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡ−３’）［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２３］とを使用するタッチダウンＰＣＲによって、可変重免疫グロブリン領域と、軽免疫グロブリン領域とを個別にクローニングした。ＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ，カタログ番号２８１０６）で精製し、そして、ｐＣＲ２．１（登録商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングベクター（ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に結合し、そして、ＯＮＥＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯΜ１０コンピテント細胞を形質転換した。形質転換したＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）コロニーを単離し、そして、対応するハイブリドーマ細胞株ごとに、可変重鎖（ＶＨ）、及び、可変軽鎖（ＶＬ）の核酸の配列決定を行った。配列決定に続いて、可変重鎖領域、及び、可変軽鎖領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位（ＨＶに関してはＢｓｒＧＩとＢｓｔＥＩＩ、ＬＶに関してはＢｓｓＨＩＩとＢｓｉＷＩ）を含むプライマーを使用して、ＰＣＲで増幅を行い、そして、ヒトＩｇＧ１、及び、ＩｇＧＫを、それぞれコードするｐＪＧ哺乳動物発現ベクター（Ａｌｅｃｔｏｒ  Ｉｎｃ．）にサブクローニングした。
【０３３０】
実施例１０：組換え抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の生産
精製したハイブリドーマ由来の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、それらのハイブリドーマを低ＩｇＧ培地、または、化学的に定義した培地で培養した後に、ハイブリドーマ上清由来のプロテインＡを使用して精製した。ヒトＦｃドメイン（ヒトＩｇＧ１）を含有するキメラ抗体の生産のための組換え発現プラスミドに、それらのハイブリドーマから得た可変遺伝子領域を直接的にクローニングすることで、一部の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体も生産した。当該発現プラスミドを、一時的にＥｘｐｉ２９３細胞にトランスフェクトし、そして、得られた抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、プロテインＡを介して精製した。
【０３３１】
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の組換え生産は、以下のようにして行った。当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ＶＨ及びＶＬ鎖をコードする核酸を含む発現プラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３細胞での組換え抗体発現に使用した。発現プラスミドのトランスフェクションは、製造業者のプロトコールに従って、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ−２９３システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ１４５２４）を使用して実行した。要するに、それぞれの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に関して、１２μｇの軽鎖プラスミドＤＮＡ、及び、１８μｇの重鎖プラスミドＤＮＡを、８０μＬのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬を加えた、１．５ｍＬ  ＯｐｔｉＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３１９８５０７０）で希釈した。得られた溶液を混合し、そして、室温で、３０分間、インキュベートした後に、１２５ｍＬのフラスコ（ＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＦＩＳ＃ＰＢＶ１２−５）内にある３０ｍＬのＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡ１４５２７）を含むＥｘｐｉ２９３発現培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ１４３５１０１）を加えた。トランスフェクションの前に、これらの細胞を、約３×１０∧６細胞／ｍｌにまで培養した。Ｅｘｐｉ２９３細胞の培養条件は、３７ｏＣ／８％  ＣＯ２にて、１２５ｒｐｍでオービタル震盪した。トランスフェクションの１６〜２４時間後に、１５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１、及び、１．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２を、それぞれのフラスコに加えて、組換え抗体の収量を高めた。トランスフェクションの５〜７日後に、培養上清を回収し、濾過（０．２ミクロン）し、そして、プロテインＡクロマトグラフィーで精製した。
【０３３２】
実施例１１：抗体重鎖、及び、軽鎖可変ドメイン配列
一次スクリーニングで同定したポジティブハイブリドーマ抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の４８／５３の配列を決定した。標準的な技術を使用して、生成した抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を決定した。これらの抗体のＫａｂａｔ軽鎖ＣＤＲ配列、及び、重鎖ＣＤＲ配列を、以下の表４Ａに示す。これらの抗体の軽鎖可変領域、及び、重鎖可変領域の配列を、以下の表４Ｂに示す。
【０３３３】
（表４Ａ）抗体ＣＤＲ配列
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【０３３４】
（表４Ｂ）ＶＨ及びＶＬ配列
2021508498.tif 000026
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【０３３５】
実施例１２：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の動力学的特徴決定
精製した抗体の結合動力学的特徴を、以下のようにして、独自のアレイＳＰＲ装置（ＭＸ−９６）を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａで決定した。すなわち、１５０μ１／ウェルにて、１０ｍＭ酢酸、ｐＨ４．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）で、５μｇ／ｍｌにまで希釈して抗体を調製し、次いで、１１μＬを１００μＬにまで滴定して、さらに１：１０に希釈した。ＣＦＭを使用して、これらの抗体を、ＣＭＤ５０Ｍチップ（Ｘａｎｔｅｃ  ＃ＳＰＭＸＣＭＤ５０Ｍ  ロット番号ＳＣＣＭＤ５０Ｍ０４１６．ａ  ｅｘｐ３１．０３．１８）に印刷した。このチップを、１００ｍＭ  ＭＥＳ、ｐＨ５．５で希釈した、１８ｍＭ  ＥＤＣ（Ｓｉｇｍａ  Ｂｉｏｘｔｒａ）、及び、４．５ｍＭ  Ｓ−ＮＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて、７分間かけて活性化し、次いで、これらの抗体を、４５μＬ／分で、１０分間かけてカップリングさせた。カップリングした後に、このチップを、ＭＸ−９６に戻し、そして、１Ｍエタノールアミン  ｐＨ８．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を使用して、７分間かけて、反応停止した。
【０３３６】
印刷した抗体を、ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ（欠失した）タンパク質（上掲）に対して結合する能力についてプロファイルした。すなわち、２．０ｍｇ／ｍｌ抗原の２．７μＬを、２９８μＬのランニング緩衝剤（１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａを含むＨＢＳ−ＥＰ＋、Ｔｅｋｎｏｖａ）に混合して、ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ（欠失した）抗原を、１８μｇ／ｍｌ（５００ｎＭの３６ｋＤａ融合タンパク質）に希釈し、次いで、５０μＬを２００μＬにまで滴定して、５倍連続希釈した。加えて、ＧＳＴ（Ｐｉｅｒｃｅ）に対する結合を、同じ条件下でアッセイして、ＴＭＥＭ１０６Ｂ−ＧＳＴ融合タンパク質のＧＳＴ部分に対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の任意の非特異的結合の程度を決定した。再現性を確保するために、それぞれの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の重複測定を行った。
【０３３７】
４８個の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の内の３０個が、欠失したＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に結合した。当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の内の１８個は、上記したＥＬＩＳＡ結合分析で認められた結合と一致して、欠失したＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に結合しなかった。試験した４８個の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のいずれもが、ＧＳＴタンパク質に対する結合を示さなかった。
【０３３８】
欠失したＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質に対する結合を示す３０個の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のそれぞれについて、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ、及び、ＫＤを算出し、その結果を、以下の表５に示す。
【０３３９】
（表５）
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2021508498.tif 000033
【０３４０】
これらの結果は、当該抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、大部分のクローンに関して、１〜１００ｎＭの範囲内で、ある範囲の親和性があることを示した。ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ＴＭ−２は、約１ｎＭで最も強力な結合を示した；これらの実験に基づいた（平均で）最弱の結合剤は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体ＴＭ−２０であり、約２２５ｎＭで親和性を示した。
【０３４１】
実施例１３：一時的、かつ、ネイティブに発現する細胞株に対して結合する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体
精製した抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ヒト／カニクイザル／マウスＴＭＥＭ１０６Ｂで一時的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３などの様々なＴＭＥＭ１０６Ｂ発現細胞株、ならびに、ＨｅＬａ細胞、及び、Ａ５４９細胞に対する、それら抗体の結合親和性について評価をした。この実験で試験した抗体は、ハイブリドーマ上清から精製したマウスＩｇＧであった。細胞に対する親和性結合は、以下のように決定した。要するに、１×１０∧５個の細胞を、９６ウェル丸底プレートのウェルに等分して入れ、そして、様々な濃度（１０μｇ／ｍｌから始める１０倍希釈）の５０μＬの精製した抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を含むＦＡＣＳ緩衝剤（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋ｌｍＭ  ＥＤＴＡ）で、インキュベートした。一次インキュベーション後に、遠心分離で過剰の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を除去し、１５０μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で細胞を２回洗浄し、そして、１：２００に希釈した抗マウスＡＰＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ＃１１５−１３６−０７１）と、氷上で、３０分間、インキュベートした。二次インキュベーション後に、再び氷冷ＦＡＣＳ緩衝剤で細胞を２回洗浄し、そして、生細胞／死滅細胞のゲーティングのために、最終体積が５０μＬであるＦＡＣＳ緩衝剤＋０．２５μＬ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号５５６４６３）に再懸濁した。ｉＱｕｅ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で選別を行い、ソートゲートは、死滅した（すなわち、ヨウ化プロピジウムポジティブ）細胞を排除するように描画する。結合データを、蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）を使用して分析し、そして、Ｐｒｉｓｍでグラフ化した。これらの実験のデータを以下の表６に示す。提示した数値は、ＭＦＩである。
【０３４２】
（表６）
2021508498.tif 000034
2021508498.tif 000035
【０３４３】
これらのデータから、細胞性ＴＭＥＭ１０６Ｂに対する平衡結合定数を、数多くの抗ＴＭＥＭ１０６Ｂクローンについて計算した。細胞に対する平衡親和性は、最大の細胞結合の全体的レベルとの相関はあまり認められず、一部の低結合クローン（例えば、ＴＭ−１）と、数多くの高結合クローン（例えば、ＴＭ−１８、または、ＴＭ−１９）の親和性は、おおよそ１ｎＭであった。Ａ５４９、及び、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対する結合は、非線形的ではあるが、高度に相関していた。これらのデータから、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂクローンを、親和性ではなく、最大結合シグナルに基づいて、「高」、及び、「低」バインダーに分けた。高結合クローンとして、ＴＭ−２、ＴＭ−３、ＴＭ−５、ＴＭ−７、ＴＭ−９、ＴＭ−１０、ＴＭ−１１、ＴＭ−１１２、ＴＭ−１２、ＴＭ−１５、ＴＭ−１８、ＴＭ−１９。ＴＭ−２１、ＴＭ−２４、ＴＭ−２５、ＴＭ−２８、ＴＭ−２９、ＴＭ−３０、ＴＭ−３２、ＴＭ−３５、ＴＭ−３７、ＴＭ−３８、ＴＭ−３９、ＴＭ−４２、ＴＭ−４５、ＴＭ−４８があり、そして、大半が、（ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウスを使用する）融合Ａに由来していた。
【０３４４】
実施例１４：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープビニング
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープビニングを、プレミックスエピトープビニング手法を使用して、Ｃａｒｔｅｒｒａ（Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，Ｎｅｖａｄａ，ＵＳＡ）で行った。モノクローナル抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ＣＭＤ  ５０Ｍチップ（Ｘａｎｔｅｃ  ＃  ＳＰＭＸＣＭＤ５０Ｍ  ロット＃  ＳＣＣＭＤ５０Ｍ０４１６．ａ  ｅｘｐ３１．０３．１８．に固定化した。ランニング緩衝剤は、１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡを含むＨＢＳ−ＥＰ＋であった。ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ（欠失）抗原を、５５ｎＭ（２μｇ／ｍｌに対応する）の最終濃度で調製し、そして、３３３ｎＭ（５０μｇ／ｍｌに対応する）の最終濃度で競合する分析物抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と混合し、または、緩衝剤コントロールと比較した。試料をアレイ全体に５分間かけて注入し、そして、サイクルごとに、２部のＰｉｅｒｃｅ  ＩｇＧ溶出緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカタログ番号２１００４）と、１部の１０ｍＭグリシン、ｐＨ２．０（Ｃａｒｔｅｒｒａ）とを用いて再生した。
【０３４５】
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、競合する様々なビンに選別したが、一般的に、その他のコミュニティの抗体をブロックする能力を示さない２つの「コミュニティ」の抗体に選別されていた。これらの実験のこのような結果を、以下の表７に示す。コミュニティ３とは、これらのビニング実験で使用した欠失ＧＳＴ−ＴＭＥＭ１０６Ｂ融合タンパク質に結合できないため、その他のあらゆる抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に対する結合をブロックする能力を示さない抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のことを指す。すべてのコミュニティ１抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウスの免疫処置に由来しており、ヒト／カニクイザル／マウス交差反応性があり、そして、ビン（ビン１）としてまとめた。コミュニティ２では、大部分の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、共通のビン（ビン２）に属し、両方の免疫処置セットから得た抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の混合物を含み、及び、ヒト／カニクイザル／マウス交差反応性と、ヒト／カニクイザル交差反応性抗体の両方を有する。コミュニティ２には、ＴＭ−７、ＴＭ−１０、及び、ＴＭ−２８（ビン３）、または、ＴＭ−５、及び、ＴＭ−２９（ビン４）のいずれかを含む幾つかの注目すべきサブグループがある。コミュニティ１でのすべての抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウス免疫処置に由来していた。ビン３、及び、ビン４でのすべての抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＴＭＥＭ１０６Ｂノックアウトマウス免疫処置に由来しており、かつ、ヒト／カニクイザル／マウスＴＭＥＭ１０６Ｂ交差反応性である。
【０３４６】
（表７）
2021508498.tif 000036
【０３４７】
実施例１５：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープマッピング
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体のエピトープマッピングを、Ｐｅｐｓｃａｎ（Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）で行った。Ｐｅｐｓｃａｎは、独自のＣＬＩＰＳ技術を使用して、線形ペプチドのライブラリー（＞２５００）と、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質のループ状の不連続なエピトープ模倣物を作成した。これらのペプチドは、Ｐｅｐｓｃａｎミニアレイの独自仕様のハイドロゲルにてインサイチュで作成しており、また、それぞれのペプチドに対する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合は、ＥＬＩＳＡをベースとした方法を使用して測定した。
【０３４８】
線形、及び、ＣＬＩＰＳペプチドを、標準的なＦｍｏｃ化学を使用して、標的タンパク質のアミノ酸配列に基づいて合成し、そして、スカベンジャーを含む三フッ化酸を使用して脱保護した。Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｌｉｎｋｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｎ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ）技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）を使用して、拘束したペプチドを化学的足場に関する合成を施して、立体構造エピトープを再構築した。例えば、単一の環状ペプチドを、ジシステインを含むように合成して、アルファ、アルファ’−ジブロモキシレンで処理して環化し、そして、当該環の大きさを、可変間隔でシステイン残基を導入して変化させた。新たに導入したシステインとは別のシステインが存在する場合、それらを、システイン−アセトアミドメチルで置換した。当該ペプチドでの複数のシステインの側鎖は、クレジットカード形状のポリプロピレンＰＥＰＳＣＡＮカード（４５５ペプチド形式／カード）に、１，３−ビス（ブロモメチル）ベンゼンを含む重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．９）／アセトニトリル（１：１（ｖ／ｖ））などのＣＬＩＰＳテンプレートの０．５ｍＭ溶液と反応させることで、ＣＬＩＰＳテンプレートに結合した。これらのカードを、溶液で完全に覆った状態で、溶液内で、３０〜６０分間、穏やかに震盪した。最後に、これらのカードを、過剰のＨ２Ｏで徹底的に洗浄し、そして、１％ＳＤＳ／０．１％ベータ−メルカプトエタノールを含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）を含有する撹乱緩衝剤で、７０℃で、３０分間、超音波処理した後に、Ｈ２Ｏで、さらに４５分間、超音波処理した。それぞれのペプチドに対する抗体の結合を、ＰＥＰＳＣＡＮをベースとしたＥＬＩＳＡで試験した。共有結合したペプチドを含有する４５５ウェルのクレジットカード形状のポリプロピレンカードを、例えば、１μｇ／ｍｌに希釈したブロッキング溶液、例えば、４％ウマ血清、５％オボアルブミン（ｗ／ｖ）を含むＰＢＳ／１％  Ｔｗｅｅｎからなる１次抗体溶液とインキュベートした。洗浄をした後に、これらのペプチドを、１／１０００希釈の抗体ペルオキシダーゼコンジュゲートと、２５℃で、１時間、インキュベートした。洗浄をした後に、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）と、２μｌの３％  Ｈ２Ｏ２を加えた。１時間後に、発色を測定した。この発色を、電荷結合素子（ＣＣＤ）−カメラと、画像処理システムとで（Ｓｌｏｏｔｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６で初めて説明されたようにして）定量した。
【０３４９】
合成したペプチドの６つのセットを、以下のようにして調製した。セット１：１５個のアミノ酸残基長の線形ペプチドを、オフセットの１アミノ酸残基を有するヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列から合成した。セット２：１５個のアミノ酸残基長の線形ペプチドを、１０位及び１１位の残基を、Ａｌａで置換して合成した；ネイティブのＡｌａ残基が、１０位または１１位のいずれかの位置で発生すると、それをＧｌｙで置換した。セット３：ネイティブのＣｙｓ残基を、Ｃｙｓ−アセトアミドメチル（Ｃｙｓ−ａｃｍ）で置換した、１５個のアミノ酸残基長の線形ペプチドを合成した。セット４：１７個のアミノ酸残基長の拘束したペプチドを合成しており、２〜１６位は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列に由来する１５マーのペプチドである；Ｃｙｓ残基を、１位と１７位の位置に挿入し、そして、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳで結合してループ構造を生成させた。１５マーでのネイティブＣｙｓを、Ｃｙｓ−ａｃｍで置換した。セット５：２２個のアミノ酸長の拘束したペプチドを構築しており、２〜２１位は、オフセットの１アミノ酸残基を有するヒトＴＭＥＭ１０６Ｂのアミノ酸配列に由来する２０マーのペプチドである；１１位及び１２位の残基を、β−ターン形成を誘導する「ＰＧ」モチーフで置換した。Ｃｙｓ残基を、１位と２２位の位置に挿入し、ｍＰ２  ＣＬＩＰＳで結合して、β−鎖様構造を生成した。これらのペプチドでのネイティブＣｙｓを、Ｃｙｓ−ａｃｍと置換した。セット６：３３個のアミノ酸長のコンビナトリアルペプチドであって、２〜１６位、及び、１８〜３２位は、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂ配列に由来する１５マーペプチドである。Ｃｙｓ残基を、１位、１７位、及び、３３位の位置に挿入し、Ｔ３  ＣＬＩＰＳで結合して、二重ループ構造を生成した。これらのペプチドでのネイティブＣｙｓを、Ｃｙｓ−ａｃｍと置換した。合成したペプチドは、ヒトＴＭＥＭ１０６Ｂの内腔領域と細胞質領域の両方に対応した。
【０３５０】
Ｐｅｐｓｃａｎ分析の結果を、以下の表８に示す。ＴＭＥＭ１０６Ｂの内腔ドメイン内の同一のエピトープを認識したＴＭ−１、及び、ＴＭ−２３を除いて、大部分の抗ＴＭＥＭ１０６ｂ抗体は、重複するエピトープを認識した。
【０３５１】
（表８）
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【０３５２】
表８のデータは、特定の配列を、試験した様々な抗ＴＭＥＭ１０６ｂ抗体が認識することを、幾度も同定したことを示す。例えば、アミノ酸残基２１９〜２３３に及ぶ領域を、ＴＭ−７（２１９ＩＫＶＨＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴ２３３）、ＴＭ−２４（２２３ＮＩＶＬＭＭＱＶＴＶＴ２３３）、ＴＭ−２９（２２３ＮＩＶＬＭＭ２２８）、及び、ＴＭ−５１（２２３ＮＩＶＬＭＭ２２８）で例示している。
【０３５３】
ＴＭ−１、及び、ＴＭ−２３（いずれもエピトープビニングでコミュニティ１に属している）の結合データと、構造ホモロジーモデリングとを組み合わせると、これらの２つの抗ＴＭＥＭ１０６ｂ抗体が、１５１ＮＩＴＮＮＮＹＹＳＶＥＶＥＮＩ１６５と、１８５ＴＩＩＧＰＬＤＭＫＱＩ１９５とを含む、ＴＭＥＭ１０６ｂの不連続エピトープに対して結合することを示唆した。
【０３５４】
実施例１６：細胞株での抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体による細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂのダウンレギュレーション
様々な細胞株でのＴＭＥＭ１０６Ｂの細胞表面、及び、総細胞タンパク質レベルを減少させるまたはダウンレギュレートする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の能力を、以下のように評価する。そのようなダウンレギュレーション実験に有用な細胞株とは、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現することが文献で確認されており、かつ、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に対する有意な結合を示すものとして上記した実験で確認されたものである。実験は、例えば、以下の細胞株を使用して行う：腺がんＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＴＬ−２）、神経膠芽腫細胞株Ｕ２５１（Ｓｉｇｍａカタログ番号０９０６３００１）、Ａ５４９ヒト肺癌株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１８５）、及び、マウス神経芽細胞腫細胞株Ｎｅｕｒｏ２ａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１３１）。好ましくは、実験は、上記したように、ＴＭＥＭ１０６Ｂの高発現を示すＡ５４９細胞を使用して行う。これらの細胞株を、様々な濃度または量の本発明の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と共に様々な期間でインキュベートし、次いで、それらの細胞と関連を保つＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルを、ＦＡＣＳ（細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルの変化を測定する）、または、ウェスタンブロット（全細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）のいずれかを使用して測定する。
【０３５５】
ＨｅＬａ細胞、Ｕ２５１細胞、及び、Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞を、Ｅａｇｌｅ’ｓ最小必須培地（ＥＭＥＭ）＋１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）で培養し、そして、Ａ５４９細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳで培養し、それぞれの細胞は、Ｔ７５またはＴ１５０フラスコのいずれかで培養した。細胞が、８０％超のコンフルエンスに達したら、３７Ｃで、トリプシン−ＥＤＴＡを使用して細胞を分離させ、培地（ＦＢＳを含む）で酵素を失活させ、新鮮な培地で洗浄し、そして、これらの細胞を、ＦＡＣＳ分析用の９６ウェルプレート（１０μＬで１×１０∧５個の細胞／ウェル）、または、ウェスタンブロット読取用の２４ウェルプレート（１ｍＬで４×１０∧５個の細胞／ウェル）に分配した。プレートに置いて２４時間後に、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ウェルに加え（例えば、０．１〜１０μｇ／ｍｌの最終抗体濃度を使用する）、そして、３７ｏＣで、標的細胞と一晩インキュベートする。ＦＡＣＳアッセイの場合、残存ＴＭＥＭ１０６Ｂの検出は、先に同定した直接−色素光−６５０コンジュゲート非競合抗体を使用して行う。ウェスタンブロット検出の場合、Ａ５４９細胞を、培地の除去の際に分離し、ＰＢＳで洗浄し、続いて、トリプシン−ＥＤＴＡを加える（３７０Ｃで、１０分）。次いで、トリプシン−ＥＤＴＡを、培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）で反応停止させ、そして、細胞をプレートから除去して９６ウェルの丸底プレートに入れ、ＰＢＳで洗浄し、次いで、５０μＬの溶解緩衝剤（ＲＩＰＡ溶解緩衝剤（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８９９００）＋１：１００  ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号８７７８６）を加えて溶解する。溶解物での総タンパク質レベルを、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，カタログ番号２３２２５）で決定することができ、そして、同等レベルのタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにロードし、次いで、ウェスタンブロット分析（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのｉＢｒｉｇｈｔシステムを使用する化学発光）のためのニトロセルロース膜に移す。
【０３５６】
ＦＡＣＳ実験の場合、ＴＭＥＭ１０６Ｂのダウンレギュレーションは、第２の非競合色素光−コンジュゲート抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の結合の減少に関連している。パーセントダウンレギュレーションを、一晩のインキュベーションの間に、抗ＴＭＥＭ１０６ｂ抗体の存在下、及び、非存在下でのＡ５４９細胞に対する結合のＭＦＩの差異から計算する。ウェスタンブロット実験の場合、化学発光シグナルのレベルに基づいて総タンパク質レベルを直接にアッセイし、そして、パーセントダウンレギュレーションを、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体で処理した細胞と、未処理の細胞でのシグナルの比率で決定する。
【０３５７】
図１及び図２に示すように、本開示の様々な抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、Ａ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１０６Ｂレベルを減少させたまたはダウンレギュレートした。
【０３５８】
実施例１７：初代細胞培養物でのＴＭＥＭ１０６ｂのダウンレギュレーション
本発明の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、初代細胞培養物における細胞表面／細胞発現を減少させるまたはダウンレギュレートする能力は、以下のように評価する。マウス初代大脳皮質ニューロンを、生後の早い段階（０〜３日目）で採取し、当該技術分野で標準的な方法に従って培養する（Ｍａｘｉｍｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｎｅｕ．Ｍｅｔｈ．，１６１  ７５−８７）。次いで、培養したニューロンを、様々な条件（１〜２０μｇ／ｍｌ、２〜４８時間）で抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体とインキュベートし、回収し、そして、ＦＡＣＳ（細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）、または、ウェスタンブロット（全細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルの変化を測定する）のいずれかを使用して、総ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルを定量する。
【０３５９】
初代大脳皮質ニューロンを、次のようにして分離する。すなわち、Ｐ０マウスの子の大脳皮質、海馬、または、線条体の細胞を、６ｍｇ／ｍｌトリプシン（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｔ１００５−１Ｇ）、０．５ｍｇ／ｍｌ  ＤＮＡｓｅ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｄ５０２５）、及び、１３７ｎＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、７ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、及び、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．２を含有する消化溶液で、７分間、３７ｏＣでインキュベートして解離させる。次いで、ニューロンを含有する解離した細胞を、２０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で１回洗浄した後に、無血清ＨＢＳで２回洗浄し、そして、さらに、１２ｍＭ  ＭｇＳＯ４と０．５ｍｇ／ｍｌ  ＤＮＡｓｅとを含むＨＢＳで穏やかにピペッティングして解離させる。当該細胞懸濁液を、１６０ｇで、１０分間遠心分離し、そして、Ｂ２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号１７５０４−０４４）、グルコース、トランスフェリン、及び、５％ウシ胎児血清を補充したＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でのＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，カタログ番号８７１−２７５−０００４）でコーティングした円形ガラスカバースリップ（φ１２ｍｍ）に置いた。大脳皮質培養では、単一の脳の大脳皮質から得た細胞懸濁液を使用して、２４ウェルプレートの１２ウェルに播種する。すべての培養で、播種時の初期細胞密度（グリアを含む）は、１５００〜２５００個の細胞／平方ミリメートルの間で変化する。培養物でのグリア細胞のコンフルエンシーが、約４０〜５０％（通常は、播種から２日後）に達すると、馴化培地の５０％を、４ｍＭ  Ａｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ）を含有する新鮮な培地と交換する。これらの培養物は、実験まで（１３〜１８ＤＩＶ）、２ｍＭ  Ａｒａ−Ｃを含有する培地で、３７Ｃ、及び、５％ＣＯ２で維持する。
【０３６０】
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を用いた治療は、１〜７日間で、かつ、０．００１〜１０μｇ／ｍｌの濃度範囲で実施し得る。要するに、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、培地で希釈し、そして、細胞培養物に加え、続いて、標準培養条件で、１〜７日間のインキュベーション／培養を行う。次いで、当該神経培養物を、トリプシン−ＥＤＴＡで分離し、そして、先述したＦＡＣＳ、または、ウェスタンブロット分析のいずれかに向けて準備する。
【０３６１】
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体が、ＴＭＥＭ１０６Ｂのレベルをダウンレギュレートする能力は、非ブロッキングＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を使用したＦＡＣＳ分析で決定した低度の細胞表面ＴＭＥＭ１０６Ｂレベル、または、ウェスタンブロット分析を使用して検出した低度の全体的な細胞ＴＭＥＭ１０６Ｂレベルのいずれかを示す、ことによって決定する。
【０３６２】
実施例１８：ＴＭＥＭ１０６Ｂ過剰発現からのＨＥＫ２９３細胞の救済
特定の細胞株でのＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現は、細胞毒性を招きかねない。この毒性が、これらの細胞でのＴＭＥＭ１０６Ｂの過剰発現に関連するＴＭＥＭ１０６Ｂの機能を高めると仮定すると、細胞毒性の規模と程度は、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体活性を調べる上で有用な機能的読出を提供することができる。したがって、細胞毒性を促すことが公知の条件下で、ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドでトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用して、アッセイを開発する。細胞毒性は、細胞毒性の影響を受けることが公知である様々なパラメーター：Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−ＧＬＯシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）で測定する細胞数、細胞の健康具合、培養中に認められる細胞破片、及び、細胞代謝全体の変化で測定される。トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を、様々な濃度の抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の非存在下または存在下で、様々な時間（例えば、２４時間、４８時間、７２時間）かけて培養し、その後に、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−ＧＬＯシステムを使用して、細胞数と細胞生存率を評価する。
【０３６３】
トランスフェクションの２４時間前に、ＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  カタログ番号０８７７２２Ｃ）に、２．５×１０∧４個の細胞／１００μｌのＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳを含むウェルで播種する；潜在的な周辺効果を減少させるために、外側のウェルは、培地だけで満たす。トランスフェクションは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ３０００システムを使用して実行する。要するに、それぞれのプレート（細胞を含有する６０のウェル）に対して、１〜１２μｇのＴＭＥＭ１０６Ｂ発現プラスミドＤＮＡを、６００μＬのＯｐｔｉｍｅｍ培地に希釈し、次いで、２５μＬのＰ３０００試薬を加える。これとは別に、２５μＬのリポフェクタミン試薬を、６００μＬのＯｐｔｉｍｅｍ培地に加える。室温で、５分後に、Ｏｐｔｉｍｅｍの２つのアリコートを混合し、そして、室温で、３０分間静置して、リポフェクタミン−ＤＮＡ複合体を形成し、次いで、ウェルあたり１５μＬのリポフェクタミン−ＤＮＡを加える。次いで、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、トランスフェクションの前に、または、トランスフェクションの最大６時間後までのいずれかで、１〜１０μｇ／ｍｌで、細胞培養液に加える。次いで、トランスフェクションをして２４、４８、及び、７２時間後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧＬＯシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ  カタログ番号Ｇ７５７０）を使用して、トランスフェクションした細胞の生存率をアッセイする。要するに、９６ウェルプレートを、１５００ｒｐｍで、３分間遠沈させ、そして、上清を除去し、次いで、５０μＬのＰＢＳと、５０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧＬＯ試薬をウェルごとに加え、続いて、室温で、１０分間震盪する。得られた溶解物の７５ｕＬを、白色の不透明な９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  カタログ番号３９２２）に移し、そして、ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒで発光を読み取る。
【０３６４】
ＴＭＥＭ１０６Ｂ機能をブロックする抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧＬＯ発光の高まりによって検出された細胞の数と生存率で測定した細胞毒性を、予防または減少させるものと予測される。
【０３６５】
実施例１９：抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体によるＴＭＥＭ１０６Ｂのインビボダウンレギュレーション
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂダウンレギュレーション抗体の活性を、２つのインビボマウスモデルシステムを使用して、さらに研究する。ヒト／マウス交差反応性抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体は、野生型マウスで試験するが、その天然エンハンサー下でヒトＴＭＥＭ１０６Ｂを発現するＢＡＣトランスジェニック系統は、ヒトのみ、及び、ヒト／カニクイザル交差反応性抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の試験に使用する。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を腹腔内注射してマウスに投与し、その後、ＦＡＣＳを介して、ウェスタンブロット、及び、分離細胞（肝細胞）によって、様々な組織タイプ（肝臓、及び、前頭大脳皮質分離株）から総ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質レベルの変化を評価する。
【０３６６】
実施例２０：ＴＭＥＭ１０６ＢとＴＭＥＭ１０６Ｂ結合パートナーとの間の相互作用の特徴決定
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドソーム／リソソーム区画に関連する様々なタンパク質など、様々なタンパク質と相互作用することが示されている。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体と、プログラニュリンタンパク質、ＴＭＥＭ１０６ＢやＴＭＥＭ１０６Ｃなどのその他のＴＭＥＭ１０６タンパク質ファミリーメンバー、クラスリン重鎖（ＣＬＴＣ）、脂肪細胞タンパク質２のμ１サブユニット（ＡＰ２Ｍ１）、ＣＨＭＰ２Ｂ、微小管関連タンパク質６（ＭＡＰ６）、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭΜ１）、及び、液胞ＡＴＰアーゼサブユニットアクセサリータンパク質１など、これらに限定されない様々な結合パートナーのいずれかとの相互作用を、ブロックまたは阻害する、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の使用を試験し得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂと、いずれかのその結合パートナーとの結合を、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体がブロックする規模または程度を、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の存在下または非存在下にてＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質を共免疫沈降させ、続いて、当該結合パートナーを、ウェスタンブロットで検出して測定する。あるいは、ＴＭＥＭ１０６Ｂを発現する細胞株に抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与し、次いで、共局在や蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）などの読み出しを使用して、ＴＭＥＭ１０６Ｂと結合パートナーのタンパク質レベルの両方を染色する。
【０３６７】
実施例２１：ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現細胞株におけるリソソーム発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
ＴＭＥＭ１０６Ｂは、後期エンドソーム／リソソーム細胞区画にある。Ｓｔｒｉｔｔｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ，９５：２８１−２９６）の最近の研究は、リソソームタンパク質レベルに関する広範な効果が、ＴＭＥＭ１０６Ｂ遺伝子ノックアウトが関与することを示唆している。ＴＭＥＭ１０６Ｂタンパク質を発現する細胞株における様々なリソソームタンパク質発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果を調べるために、以下の実験を行う。抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体に対する効果は、ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、ＴＭＥＭ１０６Ｂ発現細胞株に投与した後に、公知のリソソームタンパク質のＲＮＡまたはタンパク質レベルをプローブすることで測定し得る。様々なリソソームタンパク質のｍＲＮＡのレベルを、ＲＮＡ−ｓｅｑによって分析し；リソソームタンパク質レベルは、前出の無標識定量液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＦＱ−ＬＣＭＳ）（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ，９５：２８１−２９６）、または、その他の同等の手法で決定する。
【０３６８】
実施例２２：マウスモデルにおけるリソソーム発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
様々なリソソームタンパク質発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果も、野生型ＴＭＥＭ１０６Ｂ＋、または、ＴＭＥＭ１０６Ｂ  ＢＡＣトランスジェニックマウスのいずれかに対して抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を投与した後に、公知のリソソームタンパク質のＲＮＡまたはタンパク質レベルをプローブして測定し得る。ＴＭＥＭ１０６Ｂ、または、その他のリソソームタンパク質ｍＲＮＡのレベルは、ＲＮＡ−ｓｅｑで分析し得る；リソソームタンパク質レベルは、前出の無標識定量液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＦＱ−ＬＣＭＳ）（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１７，Ｎｅｕｒｏｎ，９５：２８１−２９６）、または、その他の同等の手法で決定し得る。
【０３６９】
実施例２３：レポーター細胞株におけるリソソーム発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
様々なリソソーム発現パターンに関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果も、ルシフェラーゼレポーター細胞アッセイで測定し得る。最近の報告（Ｋｕｎｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８；９：２７３１）は、肺癌細胞、及び、患者の試料での連携したリソソーム発現、及び、調節（ＣＬＥＡＲ）経路におけるリソソーム遺伝子のＴＭＥＭ１０６Ｂ誘発発現のレベルの増加を報告している。ＴＦＥＢは、ＣＬＥＡＲ経路のマスター転写調節遺伝子であるので、おそらくは、この発現は、ＴＦＥＢ−ＣＬＥＡＲ軸を介して作用する。４Ｘ  ＣＬＥＡＲルシフェラーゼレポーター細胞株は、すでに生成されている（Ｃｏｒｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔ  Ｎｃｕｒｏｓｃｉ．２０１４  Ｓｅｐ；１７（９）：１１８０−９）。同様の方法を使用して、レポーター細胞株を生成し、ＴＭＥＭ１０６ｂノックダウン、過剰発現、または、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体処理によるＣＬＥＡＲ経路活性化の変化を測定する。
【０３７０】
実施例２４：ＦＴＬＤマウスモデルにおけるプログラニュリンノックアウトが関与する病理に関する抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
プログラニュリン（ＧＲＮ）ノックアウトマウスは、ヒトＧＲＮ依存型ＦＴＬＤで利用可能な最も身近な動物モデルである。このマウスモデルは、この障害の表現型の幾つかを備えている。当該マウスは、リソソーム異常、リポフスチン蓄積、網膜変性、前頭側頭型痴呆様行動、及び、神経病理学の進行性の発達を示す。また、当該マウスは、ミクログリアと星状細胞の活性化を促し、そして、海馬と視床ニューロンにおけるリン酸化トランス活性化応答要素ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ−４３）のユビキチン化と細胞質蓄積を示す。１８ヶ月齢までに、当該マウスは、空間学習と記憶の障害を示す。これらのマウスを抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体で処置すると、この障害の様々な表現型、及び、態様を改善するものと期待されている。
【０３７１】
ＧＲＮ−／−マウスを、６〜１２ヶ月まで成長させ、そして、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、毎週、ＩＶ経由で、１４週間、注射する。様々な時点で、当該マウスを、グラニュリンノックアウトが関与することが公知である行動異常、及び、表現型異常についてアッセイを行い、そこでは、Ｏｐｅｎ  Ｆｉｅｌｄ  Ｔｅｓｔ、または、Ｅｌｅｖａｔｅｄ  Ｗａｔｅｒ  Ｍａｚｅなどを使用して測定をする。治療の成功は、行動アッセイでのパフォーマンスの改善、または、低下速度の抑制に関連している。加えて、これらのマウスが死亡した後の脳を、ミクログリオーシス、リソソームタンパク質レベル、一般的なリソソーム活性、ＴＤＰ−４３凝集体、及び、ニューロンにおけるリポフスチン蓄積について検査を行い、ＰＧＲＮホモ接合型マウスも同様の方法で試験して、ノックアウトマウスで認められたものよりも重症度が低いリソソーム表現型と、その行動に関するＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果の特徴を決定する。
【０３７２】
実施例２５：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病の動物モデルにおける抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の効果
抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体の治療上の有用性も、様々な障害の動物モデル、例えば、前出の老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及び、アルツハイマー病などの動物モデルにおいて試験する（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，３７５−３８６；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２６，７７５６−７７６６；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．１５，４９−５７；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８，２１０−２２０；Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１４，１５５２−１５５４；Ｙｕｎｅ，Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１１８３，３２−４２；Ｗｅｉ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．４２９，１６９−１７４；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １１８，８７−９３；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，８４３−８４８；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＡＷ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，６２２６−６２３０；Ｔｅｎｇ，ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２５，５４５５−５４６３；Ｊａｎｓｅｎ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０，１４４９−１４５７；Ｖｏｌｏｓｉｎ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８，９８７０−９８７９；Ｆａｎ，ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２３８０−２３９０；Ａｌ−Ｓｈａｗｉ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７，２１０３−２１１４；及び、Ｙａｎｏ，Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，１４７９０−１４８０２）。
【０３７３】
これらの動物モデルのいずれかを使用して、抗ＴＭＥＭ１０６Ｂ抗体を、様々な量で、様々な期間にわたって動物に対して投与する。その後の様々な時点で、これらの動物を、ヒトの疾患のそれぞれの特定の動物モデルに関連する行動異常、及び、表現型異常の改善についてアッセイする。治療の成功は、行動アッセイのパフォーマンスの向上、または、低下速度の抑制に関連している。
【０３７４】
実施例２６：抗体のヒト化
抗体のヒト化は、ヒト投与での免疫原性を予防するために、異なる種で生成した抗体を、配列と構造の関係を介してヒト抗体に酷似させる変換のために使用する。異なる種の抗体は、非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）を、ヒト抗体フレームワークに移植できる特徴的な配列と構造的特徴とを共有している。これにより、非ヒト抗体の特異性を維持する。当該ヒト化プロセスは、フレームワーク領域やＳＤＲなど、非ヒト抗体の配列と機能の同定を含む。次の基準を、抗体をヒト化するために使用する：１）非ヒト抗体と公知のヒト抗体と間のフレームワーク領域の類似性パーセント、２）非ヒト抗体と公知のヒト抗体と間のＳＤＲの長さ類似性、３）当該ヒト抗体のフレームワーク領域の生成に使用した遺伝子、及び、４）ヒト化、及び、ヒト抗体フレームワークの治療での従前の使用。同様に、フレームワーク領域とＳＤＲの長さは、それらの差異が、抗体の特異性を改変することができる抗体の構造的な相違をもたらすので、重要である。ヒト抗体のフレームワークを生成するために使用する特定の遺伝子は、抗体の安定性または特異性に対して有益または有害であることが公知であり、そして、それに応じて選択的に使用または回避する。最後に、ヒトの治療に使用するものを含めて、すでに成功しているヒト化フレームワークは、良好な半減期で十分に許容されており、将来的に成功するヒト化の候補となり得る。
【０３７５】
様々な方法を使用して、抗体のヒト化をすることができる。例えば、本開示の抗ＴＭＷＭ１０６Ｂ抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）、及び、軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を、ＮＣＢＩウェブサイト（Ｙｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２０１３，４１：Ｗ３４−Ｗ４０）でのＩｇＢＬＡＳＴプログラムへ入力して使用する。ＩｇＢＬＡＳＴは、マウスのＶＨまたはＶＬ配列を取得し、そして、公知のヒト生殖系列配列のライブラリーと比較する。使用するデータベースは、ＩＭＧＴヒトＶＨ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、２７３生殖系列配列）、及び、ＩＭＧＴヒトＬＶカッパ遺伝子（Ｆ＋ＯＲＦ、７４生殖系列配列）である。適切なＶＨ生殖細胞系列と結合領域（Ｊ遺伝子）、及び、適切なＶＬ生殖細胞系列と結合領域（Ｊ遺伝子）を、良好なアクセプター配列として選択する。抗体ＶＨ、及び、ＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、ＡｂＭ定義（ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア）に従って定義する。親マウス配列に対応する位置にあるヒト生殖系列フレームワーク（すなわち、ＶＨ、及び、ＶＬでの非ＣＤＲ残基）の改変は、当該ヒト化抗体に対する結合を最適化するために必要となり得る。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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