(57)【要約】  本発明は、バイオ医薬品に属し、結腸直腸がん診断又は予後試薬／キットの製造における免疫グロブリンのサブタイプであるＩｇＧ４の検出試薬の使用に関する。免疫グロブリンのサブタイプであるＩｇＧ４は、結腸直腸がんにおいて高発現し、大きな違いと信頼性がある。ＩｇＧ４を結腸直腸がん診断バイオマーカーとして使用することにより、特異性が高く、感度が高い利点を有し、結腸直腸がんの診断治療レベルの向上に有利であり、結腸直腸がんを効果的に予防、治療することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
結腸直腸がん診断試薬／キットの製造におけるＩｇＧ４の検出試薬の使用。
【請求項２】
前記ＩｇＧ４の検出試薬は、ＩｇＧ４のｍＲＮＡの発現量、ＩｇＧ４タンパク質の発現量、又はＩｇＧ４タンパク質の生理活性を検出するものであり、好ましくは、前記ＩｇＧ４タンパク質の発現量を検出するものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記検出試薬は、ＩｇＧ４を検出する抗体、抗体の機能性断片又は結合抗体であり、
好ましくは、前記結合抗体は、フルオレセイン結合抗体又は酵素結合抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記キットは、ＥＬＩＳＡキットである、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記検出試薬の検出方法は、ＥＬＩＳＡ法、プロテインチップ法、液体クロマトグラフィー法、免疫比濁法、フローサイトメトリー法のうちのいずれか１種又は複数種であり、好ましくは、プロテインチップ法又はＥＬＩＳＡ法である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記検出試薬の検出結果がＩｇＧ４タンパク質の発現量≧６０４．１μｇ／ｍｌである場合、結腸直腸がんのリスクが高く、
前記検出試薬の検出結果がＩｇＧ４タンパク質の発現量≦５９１．４μｇ／ｍｌである場合、結腸直腸がんのリスクが低い、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記検出試薬の検出サンプルは血液であり、好ましくは血漿である、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
結腸直腸がん診断試薬／キットであって、
前記試薬／キットは、ＩｇＧ４の検出試薬を含み、
好ましくは、前記試薬／キットは、ＩｇＧ４を検出する抗体、抗体の機能性断片又は結合抗体を含み、
より好ましくは、前記結合抗体は、フルオレセイン結合抗体又は酵素結合抗体である、結腸直腸がん診断試薬／キット。
【請求項９】
結腸直腸がん診断チップであって、
前記チップは、固相担体と、固相担体に固定されたバイオマーカーＩｇＧ４のプローブとを含み、
好ましくは、前記チップはプロテインチップである、結腸直腸がん診断チップ。
【請求項１０】
結腸直腸がん診断システムであって、
前記検出システムは、
診断対象のＩｇＧ４の発現量を検出するａ）検出機構と、
検出機構によって検出されたＩｇＧ４の発現量に基づいて結腸直腸がんに罹患する可能性又はリスク値を得るｂ）結果判断機構と、
を含み、
好ましくは、前記検出機構は、マイクロプレートリーダー、レーザースキャナー、フローサイトメーター、液体クロマトグラフィーのうちの１種又は複数種であり、
より好ましくは、前記検出機構は、レーザースキャナー、マイクロプレートリーダーのうちの１種又は２種であり、
好ましくは、前記結果判断機構は、入力モジュール、分析モジュール及び出力モジュールを含むソフトウェアであり、
前記入力モジュールは、ＩｇＧ４の発現量を入力するものであり、
前記分析モジュールは、ＩｇＧ４の発現量に基づいて結腸直腸がんに罹患する可能性又はリスク値を分析するものであり、
前記出力モジュールは、分析モジュールの分析結果を出力するものであり、
好ましくは、前記ＩｇＧ４の発現量はＩｇＧ４のｍＲＮＡの発現量、又はＩｇＧ４タンパク質の発現量であり、より好ましくはＩｇＧ４タンパク質の発現量であり、
好ましくは、前記診断システムの診断サンプルは血液サンプル、より好ましくは血漿サンプルであり、
好ましくは、前記結果判断機構において、ＩｇＧ４タンパク質の発現量≧６０４．１μｇ／ｍｌである場合、結腸直腸がんのリスクが高く、ＩｇＧ４タンパク質の発現量≦５９１．４μｇ／ｍｌである場合、結腸直腸がんのリスクが低い、結腸直腸がん診断システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオ医薬品に属し、結腸直腸がん診断試薬／キットの製造におけるＩｇＧ４の検出試薬の使用、及び結腸直腸がん診断用の試薬／キット。
【背景技術】
【０００２】
結腸直腸がん（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ，ＣＲＣ；大腸がん）は、消化管の最も一般的な悪性腫瘍であり、世界で２番目に多い癌であり、その高い罹患率と致死率は、それぞれ３位と４位となっている。近年、国民の生活水準の向上、ライフスタイルの変化、人口の高齢化に伴い、我が国の結腸直腸がんの発生率は徐々に増加しており、悪性腫瘍の発生率は３位、死亡率は５位となり、人々の健康と生命を深刻に脅かしている。早期発見、早期診断、早期治療は、結腸直腸がん治療の鍵である。しかし、結腸直腸がんのほとんどの患者は初期段階で明らかな症状がなく、疾患が進行するにつれて「大腸炎」で治療される場合が多い。これにより、結腸直腸がん患者のほとんどは診断時にすでに腫瘍の進行期にあり、最良の治療機会を失ってしまい、その結果、５年生存率は２０％未満であり、予後は不良である。したがって、結腸直腸がんの早期、迅速かつ大規模な診断方法を探索し、診断及び治療のレベルを改善することは、結腸直腸がんの予防及び治療において解決すべき緊急の問題である。
【０００３】
現在、結腸直腸がんの臨床的に広く使用されている診断方法は、主に便潜血検査（ＦＯＢＴ）、軟性Ｓ状結腸鏡検査、結腸鏡検査及びＣＴ結腸イメージング等である。しかし、これらの検出方法には制限がある。例えば、排泄物検査の分離過程が煩雑で、細菌、食物及び腸粘液等に影響されやすいとともに、特異性が比較的低く、偽陽性率が比較的高く、さらに、その不快な性質により、スクリーニングツールとしての有用性が制限されている。結腸内視鏡検査は現在のゴールドスタンダードであり、その特異性が高い。しかし、その侵襲性と合併症のリスク、及び検査機器と検査員に対する高い技術要求のため、結腸鏡検査のコンプライアンスは高くなく、誤診率は比較的高い。糞便、組織又は結腸内視鏡検査の侵襲と比較して、血液は採取されやすく、患者にとってより受け入れやすいため、早期スクリーニングの媒体として大きな価値を有する。血清腫瘍マーカーの検出は、その迅速なサンプリング、利便性、及び安全性により、腫瘍の早期診断、同定、病期分類のガイダンス、及び腫瘍の再発と転移を判断するための一般的な方法となっている。
【０００４】
ヒト血清には大量の免疫グロブリン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ）が含まれる。免疫グロブリンは、主に形質細胞から分泌され、免疫系が細菌、ウイルス、その他の病原体などの異物を識別して中和するために使用する大きなＹ字型のタンパク質であり、複数種の免疫グロブリンのサブタイプを有する。さらに重要なことに、免疫グロブリンのさまざまなサブタイプは、生体が感染すると変化することである。また、他のタンパク質分子と比較して、免疫グロブリンはより安定した特性とより長い半減期を有し、これらの特性により、血漿中の異なる免疫グロブリンサブタイプの発現レベルは、感染症や腫瘍疾患の診断に幅広い見通しを有する。
【０００５】
ＩｇＧ４は、ＩｇＧサブタイプであり、自己免疫性膵炎では濃度が高くなり、現在、自己免疫性膵炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ，ＡＩＰ）のマーカーの一つとして使用されている。一部の学者はＩｇＧ４が炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｅａｓｅ，ＩＢＤ）に関連していることを発見した。疾患の病因は様々あり、臓器、組織、及び疾患の種類が異なれば発生も異なる。多くの場合、同じマーカーが異なる組織に対して異なる又は反対の役割を果たす。証拠がなければ、異なる組織での異なる分子の役割を単純に推測することはできない。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、特異性が高く、感度が高い結腸直腸がんの分子マーカー、この分子マーカーを用いる診断試薬及びその使用を提供することを目的とする。
【０００７】
本発明の上記目的は、以下の技術手段により達成される。
【０００８】
本発明によれば、結腸直腸がん診断試薬／キットの製造におけるＩｇＧ４の検出試薬の使用が提供される。
【０００９】
本発明者らは、健常者の血液（好ましくは、血漿サンプル）を採取し、結腸直腸がん患者の血漿サンプルと共に検出し、データ処理分析した結果、標準化された異なる血漿炎症誘発性／抗炎症因子の存在度を取得し、免疫グロブリンのサブタイプ−ＩｇＧ４が示差的に発現するため、結腸直腸がん診断用のバイオマーカーとして使用できることを意外に発見した。
【００１０】
前記ＩｇＧ４の検出試薬は、ＩｇＧ４のｍＲＮＡの発現量、ＩｇＧ４タンパク質の発現量及びＩｇＧ４タンパク質の生理活性のうちの１種又は複数種を検出するものである。本発明の好ましい実施形態において、前記ＩｇＧ４の検出試薬は、ＩｇＧ４タンパク質の発現量を検出するものである。
【００１１】
好ましい実施形態において、ＩｇＧ４の発現量は、検出サンプル中のＩｇＧ４の濃度を示す。より好ましい実施形態において、血漿中のＩｇＧ４の濃度を示す。
【００１２】
好ましい実施形態において、前記検出試薬は抗体、抗体の機能性断片又は結合抗体である。
【００１３】
前記抗体は、可能是モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び／又はプロテアソームに結合された抗体断片であってよい。前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体又はヒト抗体であってもよい。抗体断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合を有するＦｖ（ｓｄＦｖ）又はＶＬ、ＶＨドメインであってもよい。抗体は、共役の形態であってもよく、例えば、ラベル、検出可能な標識、又は細胞毒性薬に結合される。
【００１４】
好ましい実施形態において、前記キットはＥＬＩＳＡキットであり、さらに、抗ヒトＩｇＧ４結合抗体に基づくＥＬＩＳＡキットである。この検出キットは、ＩｇＧ４タンパク質の発現量を検出するために用いられる。
【００１５】
前記検出試薬の検出方法は、ＥＬＩＳＡ法、プロテインチップ法、液体クロマトグラフィー法、免疫比濁法、フローサイトメトリー法のうちのいずれか１種又は複数種である。好ましい実施形態において、前記検出試薬の検出方法は、プロテインチップ法、ＥＬＩＳＡ法又は免疫比濁法のうちの１種又は複数種である。
【００１６】
ＩｇＧ４タンパク質の発現量が６０４．１μｇ／ｍｌ以上であることが検出された場合、結腸直腸がんのリスクが高い。ＩｇＧ４タンパク質の発現量が５９１．４μｇ／ｍｌ以下であることが検出された場合、結腸直腸がんのリスクが低い。ＩｇＧ４タンパク質の発現量が上記２つの値の間である場合、リスクは不確実であり、他の従来の診断方法又は新たに開発された診断方式と併用して疾患をスクリーニングすることが推奨される。
【００１７】
本発明の例示的な実施形態において、ＩｇＧ４の発現量の計算方法は、標準曲線法を使用することができる。
【００１８】
好ましい実施形態において、検出試薬により検出されるサンプルは血液である。好ましい実施形態において、前記検出サンプルは血漿である。
【００１９】
さらに、本発明によれば、直腸がんを診断する試薬／キットがさらに提供される。前記試薬／キットは、ＩｇＧ４の検出試薬を含む。ＩｇＧ４の検出試薬は上記のようである。
【００２０】
さらに、本発明によれば、結腸直腸がんを診断するチップがさらに提供される。前記チップは、固相担体及び固相担体に固定されたバイオマーカーＩｇＧ４のプローブを含む。好ましい実施形態において、前記チップは、プロテインチップである。
【００２１】
さらに、本発明によれば、結腸直腸がんの診断システムが提供される。前記検出システムは、
診断対象のＩｇＧ４の発現量を検出するａ）検出機構と、
検出機構によって検出されたＩｇＧ４の発現量に基づいて結腸直腸がんに罹患する可能性又はリスク値を得るｂ）結果判断機構と、を含む。
【００２２】
好ましい実施形態において、前記検出機構は、マイクロプレートリーダー、レーザースキャナー、フローサイトメーター、液体クロマトグラフィーのうちの１種又は複数種である。好ましい実施形態において、前記検出機構は、マイクロプレートリーダー、レーザースキャナーのうちの１種又は２種である。
【００２３】
好ましい実施形態において、前記結果判断機構は、ソフトウェアであり、入力モジュール、分析モジュール及び出力モジュールを含む。入力モジュールは、ＩｇＧ４の発現量を入力するものである。分析モジュールは、ＩｇＧ４の発現量に基づいて結腸直腸がんに罹患する可能性又はリスク値を分析するものである。出力モジュールは、分析モジュールの分析結果を出力するものである。
【００２４】
前記システムにおいて、ＩｇＧ４の発現量は、ＩｇＧ４のｍＲＮＡの発現量であり、又はＩｇＧ４タンパク質の発現量である。好ましい実施形態において、前記検出機構により検出されるのはＩｇＧ４タンパク質の発現量である。
【００２５】
好ましい実施形態において、前記結果判断機構において、ＩｇＧ４タンパク質の発現量が６０４．１μｇ／ｍｌである場合、結腸直腸がんのリスクが高く、ＩｇＧ４タンパク質の発現量が５９１．４μｇ／ｍｌ以下であることが検出された場合、結腸直腸がんのリスクが低い。
【００２６】
前記診断システムの診断サンプルは、血液であり、好ましくは血漿である。
【発明の効果】
【００２７】
（１）本発明では、数多くの免疫グロブリンのサブタイプにおいて、ＩｇＧ４は示差的に発現するため、結腸直腸がんのバイオマーカーとして使用することができ、優れた特異性及び感度を有する。
【００２８】
（２）本発明の検出試薬の検出対象は血液である。従来の便潜血検査（ＦＯＢＴ）、糞便検査は、分離過程が煩雑で、細菌、食物及び腸粘液等に干渉されやすく、特異性も比較的低く、偽陽性率が比較的高く、不快な性質を有する。これに対し、本発明では、血液は採取が容易で、患者に受け入れられやすく、早期スクリーニングの媒体として大きな価値がある。
【００２９】
（３）血漿中の他のタンパク質に比べ、免疫グロブリンは、半減期が長く、性質が安定し、疾患診断のマーカーとしてより適している。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】示差的に発現する免疫グロブリンサブタイプのボルケーノプロットである。
【図２】２５例の健常者と３５例の結腸直腸がん患者の血漿中のＩｇＧ４濃度の比較を示す。
【図３】免疫グロブリン標準品の段階希釈図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、具体的な実施例により本発明の技術的手段を説明する。これらの実施例は本発明の保護範囲を制限するものではない。当業者は本発明の趣旨に基づいて行われる一些本質的でない修正及び調整は本発明の保護の範囲に含まれる。
【００３２】
実施例１：示差的に発現する免疫グロブリンのサブタイプの発現分析
【００３３】
実験方法
【００３４】
まず、中山大学付属第六病院の２５例健常者及び３５例の結腸直腸がん患者から血漿を採取し、以下の手順に従って示差的に発現する免疫グロブリンのサブタイプを得る。
【００３５】
１、クエン酸ナトリウム抗凝固採血管により健常者又は結腸直腸がん患者の全血を３−５ｃｍ採取する。
２、５００ｇの回転速度下で１０分間遠心分離し、血液細胞が沈殿した後、血漿上清を吸い取る。
３、血漿上清を収集し、さらに２０００ｇの回転速度下で１５分間遠心分離し、沈殿を除去した後の血漿サンプルを得る。
４、小分けして−８０℃の冷蔵庫で冷凍保存する。
５、ＲａｙＢｉｏプロテインチップ（型番：ＱＡＨ−ＩＳＯ−１）により血漿サンプルを検出する。
【００３６】
（１）スライドチップ的完全干燥
スライドチップを箱から取り出し、室温で２０−３０分間平衡化した後、包装袋を開き、シーリングストリップを剥がし、そしてチップを真空乾燥機又は室温で１−２時間乾燥させた。
【００３７】
（２）標準品の調製
免疫グロブリンのサブタイプの標準品の段階希釈を図３に示す。
５００μＬのサンプル希釈液（ｓａｍｐｌｅ  ｄｉｌｕｅｎｔ）を免疫グロブリンのサブタイプの標準混合物のチューブに添加し、標準品を新たに溶解した。
チューブを開ける前に、すばやく遠心分離し、ゆっくりと上下にピペッティングして、粉末を溶解した。最後に、この小さなチューブをStd 1としてマークした。
【００３８】
６つの清潔な遠心チューブをそれぞれＳｔｄ２、Ｓｔｄ３からＳｔｄ７としてマークし、２００μＬのサンプル希釈液をそれぞれのチューブに添加した。
【００３９】
Ｓｔｄ１から１００μＬ吸い取り、Ｓｔｄ２に移して軽く混合し、さらにＳｔｄ２から１００μＬ吸い取り、Ｓｔｄ３に移し、このようにしてＳｔｄ７まで段階的に希釈した。
【００４０】
ネガティブコントロールとして、100μLのサンプル希釈液を、CNTRLとラベルされた別の新しい遠心チューブに取り出した。
【００４１】
注：それぞれの免疫グロブリンのサブタイプの初期濃度が異なるため、Ｓｔｄ１からＳｔｄ７まで段階的に希釈した後、それぞれのサイトカインの系列濃度は異なる。
【００４２】
（３）チップの操作手順
（ａ）各ウェルに１００μＬのサンプル希釈液を加え、室温でシェーカー上で１時間インキュベートし、抗体チップを密閉した定量する。
（ｂ）各ウェル中の干渉液を除去し、１００μＬの標準液及びサンプルをウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートする（サンプルを４万倍希釈する）。
【００４３】
（ｃ）Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｅｌｌｗａｓｈ  Ｖｅｒｓａチッププレートウォッシャーにより２段階でスライドを洗浄する。まず、１×洗液Ｉで洗浄し、各ウェルに対して２５０μＬの１×洗液Ｉで１０回洗浄し、毎回１０ｓ震盪し、震盪強度を「強」に設定し、脱イオン水で洗液Ｉを２０倍希釈する。そして、１×洗液ＩＩで洗浄し、各ウェルに対して２５０μＬの１×洗液ＩＩで６回洗浄し、毎回１０ｓ震盪し、震盪強度を「強」に設定し、脱イオン水で洗液ＩＩを２０倍希釈する。
【００４４】
（ｄ）検出抗体混合物のインキュベーション
検出抗体混合物チューブを遠心し、その後、１．４ｍｌのサンプル希釈液を加え、均一に混合した後、すぐに再度遠心分離する。８０μＬの検出抗体を各ウェルに加え、ＲＴシェーカーで２時間インキュベートした。
【００４５】
（ｅ）洗浄：ステップ（ｃ）と同様
【００４６】
（ｆ）Ｃｙ３−ストレプトアビジンのインキュベーション
Ｃｙ３−ストレプトアビジンチューブを遠心分離し、その後、１．４ｍｌのサンプル希釈液を加え、均一に混合した後、すぐに再度遠心分離した。８０μＬのＣｙ３−ストレプトアビジンを各ウェルに加え、アルミ箔でスライドを包み、暗所でインキュベートし、ＲＴシェーカーで１時間インキュベートした。
【００４７】
（ｇ）洗浄：ステップ（ｃ）と同様
【００４８】
（ｈ）蛍光検出
レーザースキャナー（Ｃｙ３又はグリーンチャンネル（励起周波数＝５３２ｎｍ）、機器型番：ＩｎｎｏＳｃａｎ  ３００Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ、製造業者：Ｉｎｎｏｐｓｙｓ、走査パラメータ：ＷａｖｅＬｅｎｇｈ：５３２ｎｍ；Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ：１０μｍ）、例えば、ＩｎｎｏＳｃａｎ  ３００により信号を走査する。ＱＡＨ−ＩＳＯ−１のデータ分析ソフトウェアによりデータを分析する。
【００４９】
６、検出データを標準化処理し、２群のサンプルにおける各免疫グロブリンのサブタイプの発現状況を比較して分析する。
【００５０】
データ分析
１、データ品質制御
異なる抗体の標準曲線を作成した後、各抗体サブタイプの信頼できる検出範囲（Ｂｅｓｔ  ｃｏｎｆｉｄｅｎｔ  ｒａｎｇｅ）を得た。最大値（％ａｂｏｖｅ  Ｍａｘ）を超えたサンプル又は検出限界（％Ｂｅｌｏｗ  ＬＯＤ）未満なサンプルは、信頼性（％ｉｎ  ｂｅｓｔ  ｃｏｆｉｄｅｎｃｅ）に影響を与える。同一の希釈倍数（４００００）での異なる抗体サブタイプの品質値を下表に示す。
【００５１】
【表１】
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【００５２】
表１から分かるように、全体の血漿検出において、ＩｇＥのレベルが比較的低く、約３８．３％のサンプル濃度が検出限界よりも低く、信頼性が低かった。他の抗体サブタイプの信頼性が高かった（９０％超え）。
【００５３】
２、健常者及び腸がん患者の血漿ＩｇＧ４濃度の比較
２５例の健常者と３５例の結腸直腸がん患者の血漿ＩｇＧ濃度を比較する（図２）。
健常者群の平均値＝５０３．６μｇ／ｍｌ、ＳＥＭ＝５１．２６、信頼区間（４０３．１−６０４．１）
結腸直腸がん群の平均値＝６８６．４μｇ／ｍｌ，ＳＥＭ＝４８．４８，信頼区間（５９１．４−７８１．４）
ＰはＴテストにより算出される。
【００５４】
３、示差的に発現する免疫グロブリンのボルケーノプロット分析
示差的に発現する免疫グロブリンのボルケーノプロット分析の結果を表２及び図１に示す。
示差発現タンパク質（ＤＥＰ）
示差発現タンパク質を検出するために、４００００倍希釈されたサンプルの異なる抗体サブタイプの濃度値を比較し、２群の各抗体サブタイプの変化倍数（ｌｏｇ２ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ，ｌｏｇ２ＦＣ）及びＴテスト後のＰ値（−ｌｏｇ１０Ｐ  ｖａｌｕｅ、ｐ  ｖａｌｕｅ）を得た。
【００５５】
示差発現タンパク質は、Ｐ値が０．０５未満（−ｌｏｇ１０Ｐ  ｖａｌｕｅ＞１．３）で、変化倍数が１．２倍よりも大きいか又は０．８３倍よりも小さいタンパク質を指す。
【００５６】
【表２】
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【００５７】
表２から分かるように、健常者群（Ｃ群）と比較して平均値＝１２５９０．７２ｐｇ／ｍｌであり、ＩｇＧ４免疫グロブリンのサブタイプが結腸直腸がん患者群（Ｅ群）において顕著に高く発現し、平均値＝１７１６０．８９ｐｇ／ｍｌであり、ｐ値が約０．０１２である。
【００５８】
図１から分かるように、各免疫グロブリンのサブタイプのうち、ＩｇＧ４（三角形）免疫グロブリンのサブタイプの血漿濃度は、健常者において大きな違いがある。他のＩｇＥ以外の免疫グロブリンのサブタイプは、信頼性が高いが、健常者群と結腸直腸がん患者群の間には差がない（図１のボルケーノプロット）ため、結腸直腸がんを診断するためのマーカーとして使用することができない。
【００５９】
４、感度と特異性
２における健常者及び腸がん患者の血漿ＩｇＧ４濃度の信頼区間から分かるように、ＩｇＧ４タンパク質の発現量が６０４．１μｇ／ｍｌ以上である場合、結腸直腸がんのリスクは高く、ＩｇＧ４タンパク質の発現量が５９１．４μｇ／ｍｌ以上である場合、結腸にがんが発生するリスクが低い。２５例の健常者及び３５例の結腸直腸がん患者のＩｇＧ４濃度と前記範囲とを比較したところ、ＩｇＧ４の感度：２３／３５＝６５．７％、特異性：１５／２５＝６０％を得た。
【００６０】
単一の血清学的因子の検出及び結腸直腸がんにおける一般的なＣＥＡ、ＣＡ５０に比べ、ＩｇＧ４は感度がより高く、より高い臨床的意義及び実用性を有する。
【００６１】
本発明では、ＩｇＧ４は血漿に存在するマーカーとして適用でき、血液採取により高い事前診断効果を達成できることが発見された。本発明は、診断すべき人に対するサンプリングによる痛みの軽減、及びより一般的な診断前スクリーニングの実現に対して、重大な意義を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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