(57)【要約】  本発明は新規なｐ６２リガンドとターゲット結合リガンドがリンカーで連結されたオートタックキメラ化合物、その立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ、これを有効性分として含む標的タンパク質を分解することによって疾患の予防または治療用薬学的または食品組成物に関するものであって、特定タンパク質を標的として濃度を調節することができるだけでなく、薬物およびその他低分子化合物をリソソームに伝達することができる。本発明によるオートタックキメラ化合物は特定タンパク質を選択的に除去することによって多様な疾患の予防、改善または治療用薬学的組成物として有用に使用できる。
2021532132.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ６２リガンド、ターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ、ＴＢＬ）およびリンカーを含むキメラ化合物。
【請求項２】
前記キメラ化合物は、下記化学式１の構造を有するものである、請求項１に記載の化合物。
【化１】
2021532132.tif 000028
上記式中、
Ａはターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ）、Ｂはｐ６２リガンドを示し、ＡとＢはリンカー（Ｌｉｎｋｅｒ）で連結されているキメラ化合物。
【請求項３】
前記ターゲット結合リガンドは、次の表に示した化合物からなる群より選択される１種以上またはこれら構造に由来した誘導体構造を有するものである、請求項１に記載のキメラ化合物。
2021532132.tif 000029
2021532132.tif 000030
2021532132.tif 000031
2021532132.tif 000032
【請求項４】
前記ｐ６２リガンドは、下記化学式２の構造またはその誘導体構造を有するものである、請求項１に記載のキメラ化合物。
【化２】
2021532132.tif 000033
Ｗは、Ｃ６−Ｃ１０アリールであり；
Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合され、この時、ｎ１は０〜１の整数であり；
ｎ２は、１〜４の整数であり；
ｍは、０〜２の整数であり；
ＲａはＲ１または−ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ３は、１〜６の整数であり；
Ｒｂは、−ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ４は、１〜６の整数であり；
Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ（Ｒ３）−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ（ＣＯＯ−Ｒ４）−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であり、
ｎ５は、２〜４の整数であり、
ｎ６は、１〜４の整数であり、
Ｒ３は、水素、またはＣ１−４アルキルであり、
Ｒ４は、Ｃ１−４アルキルであり、
Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルである。
【請求項５】
前記リンカーは、−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−の構造を有し、
この時、Ｑは、ターゲット結合リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−０−、＝Ｎ−−Ｎ（ＣＨ３）−を含み；
Ｐは、ｐ６２リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−０−、−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−を含み；
ｘは、０〜４の整数であり；
ｙは、０〜３の整数である、請求項１に記載のキメラ化合物。
【請求項６】
Ｗは、フェニルであり；
Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合され、この時、ｎ１は０〜１の整数であり；
ｎ２は、１〜２の整数であり；
ｍは、０〜２の整数であり；
Ｒａは、水素または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であり、
Ｒ’１は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、
ｎ３は、１〜４の整数であり；
Ｒｂは、ヒドロキシまたは−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であり、
Ｒ’２は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、
ｎ４は、１〜４の整数であり；
Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であり、
ｎ５は、２〜３の整数であり、
ｎ６は、１〜２の整数であり、
Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−２アルコキシまたはＣ１−２アルキルである、請求項４に記載のキメラ化合物。
【請求項７】
前記Ｐとｐ６２リガンドとの結合は、−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、または−ＣＯＯ−である、請求項５に記載のキメラ化合物。
【請求項８】
下記化合物１〜１３からなる群より選択される化合物で表される、請求項１に記載のキメラ化合物。
１）（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド；
２）（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド；
３）（Ｒ）−Ｎ−（１５−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１４−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデシル）−４−フェニルブタンアミド；
４）Ｎ−（１−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェニル）−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−４−フェニルブタンアミド；
５）３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アニリン；
６）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−メトキシ−４−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−メチル−３−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）オキシラン−２−イル）−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イル（１３Ｅ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ）−１−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−１２−オキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザヘニコサ−１３，１５，１７，１９−テトラエン−２１−オエート；
７）３−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（（Ｒ）−１５−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−１４−ヒドロキシ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデシル）−５−メチルオキサゾリジン−２，４−ジオン；
８）（Ｒ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール；
９）（Ｒ，Ｚ）−４−（（２−（２−（２−（（３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール；
１０）（Ｅ）−５−（４−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）スチリル）ベンゼン−１，３−ジオール；
１１）（Ｒ）−２−（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）−１４−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザテトラデカン−１３−オール；
１２）（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３−（ベンジルオキシ）−４−フェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン；および、
１３）（Ｒ）−１−（３−フェネトキシフェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール。
【請求項９】
請求項１〜８のうちのいずれか一項による化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、疾患の予防、改善または治療用薬学的組成物。
【請求項１０】
前記疾患は、癌、タンパク質異常疾患（ｐｒｏｔｅｉｎｏｐｈａｇｙ）、希少難治性疾患または遺伝的疾病である、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記疾患を誘発する原因タンパク質を直接除去することを特徴とする、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記タンパク質異常疾患は、神経変性疾患、α１−アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜炎、２型糖尿病または嚢胞性線維症である、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ  ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ  Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）、脊髄小脳変性症、その他、ポリ−Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身性アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、注射−局所化アミロイド症、ベータ−２ミクログロブリンアミロイド症、遺伝性非−神経病アミロイド症、アレキサンダー病およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群より選択される１種以上である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１〜８のうちのいずれか一項による化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、疾病を誘発する病因タンパク質および変性タンパク質のオートファジー伝達または分解用薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、標的タンパク質の分解を増大させる方法。
【請求項１６】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、小器官および構造物の分解を増大させる方法。
【請求項１７】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、細胞内に侵入したウイルスおよびバクテリアの分解を増大させる方法。
【請求項１８】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、薬物や低分子化合物をオートファジーおよびリソソームに伝達する方法。
【請求項１９】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、ｐ６２の自己オリゴマー化およびオートファジー活性化方法。
【請求項２０】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、細胞内特定タンパク質をｐ６２に連結させてオートファジーに伝達することによってリソソームによる分解を増大させる方法。
【請求項２１】
請求項１〜８のうちのいずれか一項のキメラ化合物を細胞膜に露出されたタンパク質に特異的に結合する治療用抗体に連結した薬物を用いて、薬物をエンドソーム（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）を通じてリソソームに伝達する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規なキメラ化合物に関するものであって、より詳しくは、ｐ６２リガンドとターゲット結合リガンドがリンカーで連結されたキメラ化合物、これを含む標的タンパク質分解による疾病の予防または治療用薬学的または食品組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−末端則（Ｎ−ｅｎｄ  ｒｕｌｅ）経路は、特定タンパク質Ｎ−末端を分解信号として使用するタンパク質分解システムである。Ｎ−末端則分解信号としては、タイプ１であるＮ−末端アルギニン（Ｎｔ−Ａｒｇ）、リシン（Ｎｔ−Ｌｙｓ）およびヒスチジン（Ｎｔ−Ｈｉｓ）を有する塩基残基と、タイプ２であるフェニルアラニン（Ｎｔ−Ｐｈｅ）、ロイシン（Ｎｔ−Ｌｅｕ）、トリプトファン（Ｎｔ−Ｔｒｐ）、タイロシン（Ｎｔ−Ｔｙｒ）およびイソロイシン（Ｎｔ−Ｉｌｅ）の疎水性残基がある。これらＮ−末端残基は特定認識要素（Ｎ−ｒｅｃｏｇｎｉｎｓ；Ｎ−レコグニン）のリガンド（Ｎ−リガンドという）で結合される。本発明者らは、既存に知られたＮ−レコグニン、即ち、ＵＢＲ１、ＵＢＲ２、ＵＢＲ４、およびＵＢＲ５を最初に発見するかクローニングし、これらが基質認識ドメインとしてＵＢＲ  ｂｏｘを有しているのを明らかにしたことがある（Ｔａｓａｋｉ、Ｔ．ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２５、７１２０−３６（２００５）：非特許文献１）。また、ＵＢＲ  ｂｏｘがＮ−末端Ａｒｇ残基などｔｙｐｅ−１  Ｎ−末端則リガンド（Ｎｔ−Ａｒｇ、Ｎｔ−Ｌｙｓ、Ｎｔ−Ｈｉｓ）を結合して基質を認識し、基質にユビキチン鎖を付けるのを明らかにしたことがある。ＵＢＲ１とＵＢＲ２がまたＮ−ドメインを有しており、Ｎ−ドメインはｔｙｐｅ−２  Ｎ−末端則リガンド（Ｎｔ−Ｔｒｐ、Ｎｔ−Ｐｈｅ、Ｎｔ−Ｔｙｒ、Ｎｔ−Ｌｅｕ、Ｎｔ−Ｉｌｅ）と結合するのに重要な役割を果たすという事実も明らかにした（Ｓｒｉｒａｍ、Ｓ．Ｍ．、Ｋｉｍ、Ｂ．Ｙ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２、７３５−４７（２０１１）：非特許文献２）。Ｎ−レコグニンがＮ−末端則リガンドと結合することによって作られたユビキチン化された基質は、プロテアソームに伝達されて短いペプチドに分解される。このような過程で、特定Ｎ−末端残基（Ｎｔ−Ａｒｇ、Ｎｔ−Ｈｉｓ、Ｎｔ−Ｌｙｓ、Ｎｔ−Ｔｒｐ、Ｎｔ−Ｐｈｅ、Ｎｔ−Ｔｙｒ、Ｎｔ−Ｌｅｕ、Ｎｔ−Ｌｅｕ）は、Ｎ−レコグニンがＮ−末端則基質をターゲッティングする時に必要な水素結合（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄ）を大部分提供するため、結合に必ず必要な決定因子である（Ｓｒｉｒａｍ、Ｓ．Ｍ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １７、１１６４−５（２０１０）：非特許文献３）。
【０００３】
細胞内のタンパク質分解は、主にユビキチン−プロテアソームシステム（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｓｙｓｔｅｍ、ＵＰＳ）とオートファジー−リソソームシステム（ａｕｔｏｐｈａｇｙ−ｌｙｓｏｓｏｍｅ  ｓｙｓｔｅｍ）によって行われる。一般に、ＵＰＳは正常的なフォールディングを有する調節因子の細胞内濃度を調節するか変性されて機能を失ったタンパク質を分解させる。この時、基質は約５００−１，０００余種と推算されるＥ３リガーゼ（Ｅ３ｌｉｇａｓｅ）によって直間接的に認識されてユビキチン化（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ）され、その後、ポリペプチド螺旋にほどけてプロテアソーム（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）によって分解される（Ｊｉ  ａｎｄ  Ｋｗｏｎ、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ  ４０、４４１−４４９（２０１７）：非特許文献４）。正常的な細胞ではユビキチン−プロテアソームシステム過程が円滑であるが、疾病関連タンパク質は正しくフォールディングしない変性（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ）タンパク質になるか、変性タンパク質の蓄積によってできた凝集体（ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）がプロテアソームを防ぐか、プロテアソーム機能が老化（ａｇｉｎｇ）によって低下するか、タンパク質転写と翻訳のリプログラミングなどによって疾病関連タンパク質の分解が円滑に行われない（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ、Ａ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｅｘｐ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ４７、ｅ１４７（２０１５）：非特許文献５）。代表的な例として、タンパク質異常疾患（アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、人間狂牛病、ルーゲーリック病／筋萎縮性側索硬化症、α１−アンチトリプシン欠乏症、角膜症、２型糖尿病、など）のそれぞれ主要病因タンパク質は変性化、ユビキチン化および累積され、これら余剰タンパク質ゴミは再び凝固体に転換される（Ａｇｕｚｚｉ  ａｎｄ  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９、２３７−４８（２０１０）：非特許文献６）。このような特定突然変異タンパク質は凝固体に変形される性質が強くて前記説明したプロテアソームに分解されない。なぜなら、プロテアソームは内径が１３オングストローム（ａｎｇｓｔｒｏｍ）程度に狭いため変性タンパク質がほどけ（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）なければならず、タンパク質が凝固すればほどけないためである。他の代表的な例として、癌細胞は細胞内転写と翻訳のリプログラミングによって発癌タンパク質（ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）の転写と翻訳を増加させると同時に分解を抑制させると知られている（Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２３４、１４０３１−１４０３９（２０１９）：非特許文献７）。追加的に、コンプレックス（ｃｏｍｐｌｅｘ）を成しているサブユニット（ｓｕｂｕｎｉｔ）タンパク質や膜透過（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）タンパク質もユビキチン−プロテアソームシステムによる分解が制約的である。
【０００４】
オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ＵＰＳと共に細胞内主要タンパク質分解システムである。オートファジーは老化するか本来の機能を果たすことができなくなった細胞小器官および損傷されるか正しくフォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）されなかったタンパク質およびこれらの凝集体を分解することによって細胞の恒常性と遺伝的な安定性を維持するために必須のタンパク質分解過程である（Ｊｉ  ａｎｄ  Ｋｗｏｎ、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ  ４０、４４１−４４９（２０１７）：非特許文献４）。特に細胞質に病因タンパク質およびこれらの凝固体が累積される場合、細胞毒性物質になるため、これらをオートファジーが受けて分解しなければならない。オートファジーの機構は大きく、マクロオートファジー（ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）、マイクロオートファジー（ｍｉｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）とシャペロン介在性オートファジー（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられ、何の目的のために細胞内基質を分解するかによって非選択的オートファジー（ｂｕｌｋ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ）と選択的オートファジー（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられる（Ｄｉｋｉｃ、Ｉ．＆  Ｅｌａｚａｒ、Ｚ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９、３４９−３６４（２０１８）：非特許文献８）。このうち、選択的オートファジーとシャペロン介在性オートファジーは、細胞内機能異常小器官や不必要なタンパク質の選択的分解を起こす。選択的オートファジーを誘導することによって悪性病因タンパク質蓄積および機能不能小器官を基盤とする疾患に対する新規治療法開発が現在新たなパラダイムを構築している状況である。ｐ６２／ＳＱＳＴＭ１／Ｓｅｑｕｅｓｔｏｓｏｍｅ−１タンパク質は、選択的オートファジー機構において媒介物であるオートファゴソーム形成開始と内容物伝達に重要である。この時、ｐ６２タンパク質が病因タンパク質およびその凝固体と結合してこれらをオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）に伝達する。病因タンパク質をオートファゴソームに伝達する時、核心的な過程としてｐ６２が自己オリゴマー化（ｓｅｌｆ−ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を経る（Ｄｉｋｉｃ、Ｉ．＆  Ｅｌａｚａｒ、Ｚ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９、３４９−３６４（２０１８）：非特許文献８）。この時、病因タンパク質は共に濃縮されて体積が減り、オートファジーによる分解が容易になる。ｐ６２が自己オリゴマー化を媒介するものはＰＢ１ドメインであるが、その調節機構はよく知られていない。オートファゴソームに伝達された変性タンパク質−ｐ６２結合体は、オートファゴソームがリソソーム過結合することによってリソソームの酵素によって分解される。
前述の機構によってオートファジーは損傷されたタンパク質および細胞小器官の細胞内変動による細胞恒常性の維持のために重要であり、オートファジーが低下する場合、変性タンパク質（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の蓄積と凝固がもたらされて、これによってタンパク質異常疾患や癌が発生することもある。このような疾病を治療するために非選択的オートファジーを活性化する研究が活発に行われている（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ、Ａ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｅｘｐ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ４７、ｅ１４７（２０１５）：非特許文献５）。非選択的オートファジーを通常抑制する調節因子がｍＴＯＲであり、ｍＴＯＲ阻害剤を使用してオートファジーを活性化する方法が最も広範囲に使用される（Ｊｕｎｇ、Ｃ．Ｈ．、Ｒｏ、Ｓ．Ｈ．、Ｃａｏ、Ｊ．、Ｏｔｔｏ、Ｎ．Ｍ．＆  Ｋｉｍ、Ｄ．Ｈ．、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８４、１２８７−９５（２０１０）：非特許文献９）。具体的に、ラパマイシンを用いてＡＰＰを過発現するＡＤ動物モデルでアミロイドベータ（Ａｂ）およびタウ（ｔａｕ）を除去すると同時に認知力を増進させ（Ｃａｃｃａｍｏ、Ａ．、Ｍａｊｕｍｄｅｒ、Ｓ．、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ａ．、Ｓｔｒｏｎｇ、Ｒ．＆  Ｏｄｄｏ、Ｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８５、１３１０７−２０（２０１０）：非特許文献１０）、ｔａｕを過発現するＡＤ動物モデルでｔａｕを除去し（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｎａｖａｒｒｏ、Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ  ３９、４２３−３８（２０１０）：非特許文献１１）、ＰＤマウスモデルで過発現された突然変異アルファシヌクレイン（α−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）タンパク質凝固体を除去した（Ｗｅｂｂ、Ｊ．Ｌ．、Ｒａｖｉｋｕｍａｒ、Ｂ．、Ａｔｋｉｎｓ、Ｊ．、Ｓｋｅｐｐｅｒ、Ｊ．Ｎ．＆  Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ、Ｄ．Ｃ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８、２５００９−１３：非特許文献１２）。ラパマイシン類似物質であるＣＣＩ−７７９を用いて前記ＨＤマウスでハンチンチン凝固体を効果的に除去し動物行動や認知力も改善させるのを確認した（Ｒａｖｉｋｕｍａｒ、Ｂ．、Ｄｕｄｅｎ、Ｒ．＆  Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ、Ｄ．Ｃ．、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  １１、１１０７−１７（２００２）：非特許文献１３）。しかし、ｍＴＯＲがＮＦ−ｋＢなど非常に多様な細胞内経路において非常に重要な役割を果たし、したがってタンパク質異常疾患の変性タンパク質凝固体を除去する優れた活性を示すにもかかわらずｍＴＯＲを薬物ターゲットにすると知られたこれら非選択的オートファジー活性剤を治療剤として使用するのに限界がある。また、疾病誘発タンパク質を標的としてオートファゴソームでターゲッティングする技術および治療剤は皆無である。
【０００５】
セントラルドグマ（ｃｅｎｔｒａｌ  ｄｏｇｍａ）で、ＤＮＡに保存されている遺伝的情報はＲＮＡに転写（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）され、タンパク質に翻訳（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）されて細胞機能を調節する。ＤＮＡの場合、ＣＲＩＳＰＲなど遺伝子編集（ＤＮＡ  ｅｄｉｔｉｎｇ）技術を用いて標的切断が可能であり、ＲＮＡの場合、ｓｉＲＮＡを用いて標的分解が可能である。しかし、タンパク質の場合、標的分解（ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）技術が相対的に制限されている。もし、疾病誘発タンパク質を標的として分解させることができれば、製薬産業で新薬開発プラットフォーム技術（ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）として用いることができるはずである。プロタック（ＰＲＯＴＡＣ−ＰＲＯｔｅｏｌｙｓｉｓ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｃｈｉｍｅｒａ）は細胞内タンパク質を標的として分解するために開発された技術である。プロタックは標的タンパク質を認識するリガンドとＥ３ユビキチン酵素を認識するリガンドのキメラ化合物を用いる。（Ａｎ  ａｎｄ  Ｆｕ、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ  ３６、５５３−５６２（２０１８）：非特許文献１４）。ターゲットバインダーが疾病誘発タンパク質と結合してＥ３の近接距離に連れてくれば、Ｅ３は基質と認識してユビキチン化を実行してプロテアソームによる分解を誘導する。現存する疾患治療剤パラダイムはタンパク質酵素抑制であるので、治療剤のターゲットが不可能なタンパク質に対する新規治療剤開発が非常に重要な状況である。そのような観点から、プロタックは、既存酵素抑制方式でターゲッティングが不可能なタンパク質のユビキチン−プロテアソームシステム下の選択的な分解を可能にすることにより魅力的な新規治療剤開発方法である。しかし、プロタックがＥ３ユビキチン酵素を認識するリガンドのみを活用してプロテアソームによる分解を誘導するため標的タンパク質が変成されて凝固体を形成するか、複合体を形成するか、膜構造に結合する場合、分解するのが難しい（Ｂｏｎｄｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ２５、７８−８７．ｅ５（２０１９）：非特許文献１５）。また、プロタックは、小胞体、ミトコンドリアなど細胞内小器官やウイルス、バクテリアなど病原菌を分解することは不可能である。したがって、病因タンパク質、小器官および凝集体を標的として選択的オートファジーに伝達して除去する方法の開発が必要である。
【０００６】
細胞機能を調節するためにＤＮＡを編集するかＲＮＡを分解してタンパク質の活性および濃度を間接的に調節する方法が広く使用される。特に、ＲＮＡはｓｉＲＮＡを用いて標的分解が可能であるが、ｓｉＲＮＡの細胞透過性が低くてｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔｓなどを用いて細胞内に伝達し、したがって過程が複雑で費用が多くかかる。また、ターゲットタンパク質が安定する場合、ＲＮＡを分解してもタンパク質の濃度を低めるのが難しい。したがって、特定タンパク質を標的として直接分解させる方法や物質、即ち、タンパク質分解子（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｇｒａｄｅｒ）の開発が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｔａｓａｋｉ、Ｔ．ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２５、７１２０−３６（２００５）
【非特許文献２】Ｓｒｉｒａｍ、Ｓ．Ｍ．、Ｋｉｍ、Ｂ．Ｙ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２、７３５−４７（２０１１）
【非特許文献３】Ｓｒｉｒａｍ、Ｓ．Ｍ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １７、１１６４−５（２０１０）
【非特許文献４】Ｊｉ  ａｎｄ  Ｋｗｏｎ、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ  ４０、４４１−４４９（２０１７）
【非特許文献５】Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ、Ａ．＆  Ｋｗｏｎ、Ｙ．Ｔ．、Ｅｘｐ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ４７、ｅ１４７（２０１５）
【非特許文献６】Ａｇｕｚｚｉ  ａｎｄ  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９、２３７−４８（２０１０）
【非特許文献７】Ｘｉｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２３４、１４０３１−１４０３９（２０１９）
【非特許文献８】Ｄｉｋｉｃ、Ｉ．＆  Ｅｌａｚａｒ、Ｚ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １９、３４９−３６４（２０１８）
【非特許文献９】Ｊｕｎｇ、Ｃ．Ｈ．、Ｒｏ、Ｓ．Ｈ．、Ｃａｏ、Ｊ．、Ｏｔｔｏ、Ｎ．Ｍ．＆  Ｋｉｍ、Ｄ．Ｈ．、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８４、１２８７−９５（２０１０）
【非特許文献１０】Ｃａｃｃａｍｏ、Ａ．、Ｍａｊｕｍｄｅｒ、Ｓ．、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ａ．、Ｓｔｒｏｎｇ、Ｒ．＆  Ｏｄｄｏ、Ｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８５、１３１０７−２０（２０１０）
【非特許文献１１】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｎａｖａｒｒｏ、Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ  ３９、４２３−３８（２０１０）
【非特許文献１２】Ｗｅｂｂ、Ｊ．Ｌ．、Ｒａｖｉｋｕｍａｒ、Ｂ．、Ａｔｋｉｎｓ、Ｊ．、Ｓｋｅｐｐｅｒ、Ｊ．Ｎ．＆  Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ、Ｄ．Ｃ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８、２５００９−１３
【非特許文献１３】Ｒａｖｉｋｕｍａｒ、Ｂ．、Ｄｕｄｅｎ、Ｒ．＆  Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ、Ｄ．Ｃ．、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  １１、１１０７−１７（２００２）
【非特許文献１４】Ａｎ  ａｎｄ  Ｆｕ、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ  ３６、５５３−５６２（２０１８）
【非特許文献１５】Ｂｏｎｄｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ２５、７８−８７．ｅ５（２０１９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
伝統的な薬物（ｔｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇ）は小分子合成化合物、抗体、タンパク質、ペプチドなど多様であるが、基本的な原理は特定タンパク質の活性部位（ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｔｅ）に結合することによって疾病を起こすタンパク質の活性を抑制することによって薬効を示すことである。このような伝統的な薬物開発方法はいくつかの限界を持っている。第一に、高濃度の薬物が必要であり、これによる薬物副作用が生じることがある。薬物とタンパク質の結合は安定した共有結合ではないため分離されることがある。即ち、薬物がターゲットタンパク質に結合した時に薬効を示すが、ターゲットタンパク質から脱離するようになれば薬効を示さない。したがって、薬効を維持するためには体全体に高い薬物濃度を維持しなければならない。しかし、薬物効能のために薬物濃度を高めるようになれば、薬物が予期せぬ他のタンパク質と結合することがあり、このような状況は薬物副作用として示されることがある。第二に、薬物標的タンパク質が制限的である。今まで米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の承認を受けた薬物標的タンパク質は約４００種余りに達する。このうちの９０％超えるものが酵素、伝達物質タンパク質、チャネル／膜タンパク質などであって、このような薬物標的タンパク質は活性部位および結合部位を有しているため比較的に伝統的な薬物開発方法で比較的に容易に見つけることができた。しかし、疾病に関連するタンパク質は約３，０００個と推定され、現在承認された薬物はこのうちの約１３％程度のみを標的として用いている。したがって、新たな新薬開発のパラダイム変化が必要であり、標的タンパク質分解技術を用いる時、既存治療剤と比較して次のような長所を持っている。第一に、転写因子、タンパク質結合による信号伝達に関与するタンパク質、タウのように凝集されて蓄積されるタンパク質を分解することができるため、既存薬物でターゲッティングし難いｕｎｄｒｕｇｇａｂｌｅタンパク質の調節が可能である。第二に、薬物によって標的タンパク質が過発現、過活性化されるか耐性が起こるか他の信号伝達体系の活性化によって薬物効能が低下される現象を克服することができる。第三に、標的タンパク質分解物質は標的タンパク質を分解した後に再使用されるため低容量投与が可能であり、これによる副作用も減少する。第四に、標的タンパク質が分解され再生産されるのに一定時間が要求されるため投与周期が増えて経済性が高い。
【０００９】
前記のような既存治療剤の問題点を解決するために、本発明の目的は、ｐ６２タンパク質の活性化およびオリゴマー化を誘発する新規なｐ６２リガンド化合物とターゲット結合リガンドがリンカーで連結された新規なオートタック（ＡＵＴＯＴＡＣ、Ａｕｔｏｐｈａｇｙ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｃｈｉｍｅｒａ）化合物を提供することである（図１）。
【００１０】
また、本発明の目的は、前記オートタック化合物を有効性分として含む疾病誘発タンパク質を除去する薬学的または食品組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の他の目的は、細胞内タンパク質を標的にして分解する生化学的なスクリーニング方法および技術を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記のような目的を解決するために、本発明は、ｐ６２のＺＺドメインと結合するリガンドとターゲット結合リガンドがリンカーで連結した新規なオートタックキメラ化合物を提供する。
【００１３】
また、本発明は、前記オートタックキメラ化合物を用いて（１）ｐ６２自己オリゴマー化および構造的活性化を誘導する方法、（２）ｐ６２のＬＣ３との結合を増大させる方法、（３）ｐ６２およびターゲットタンパク質をオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）に伝達する方法、（４）オートファゴソーム生合成（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）を活性化する方法、（５）ターゲットタンパク質を標的としてオートファジーに伝達する方法、（６）ターゲットタンパク質を標的として非活性化する方法、および（７）ターゲットタンパク質をリソソームによって分解する方法を提供する。
【００１４】
また、本発明は、前記オートタックキメラ化合物を有効性分として含有する、疾患の予防または治療用薬学的組成物または健康機能食品を提供する。好ましくは、前記疾患は癌または退行性脳疾患だけでなく、希少難治性疾患など特定タンパク質を標的分解した時に治療効果を期待することができる他の疾病も含む。
【００１５】
本発明で核心的な技術は、（１）オートタック物質を用いてターゲットタンパク質をｐ６２と連結させて、（２）ｐ６２の自己オリゴマー化（ｓｅｌｆ−ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を誘導し、（３）ターゲットタンパク質がｐ６２と共に複合体を形成することによってターゲットタンパク質を生物学的に非活性化し、（４）その後、ターゲットタンパク質−ｐ６２複合体をファゴフォアー（ｐｈａｇｏｐｈｏｒｅ）などオートファジー膜（ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）に伝達して、（５）ターゲットタンパク質−ｐ６２複合体をリソソームで分解させることである。
【００１６】
本発明の薬物作用機構および核心的な技術は、［図１］に要約されている。
【００１７】
具体的に、図１に示されているように、オートタックキメラ化合物はターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｌｉｇａｎｄ；ＴＢＬ）とｐ６２ＺＺドメインリガンド、即ち、オートファジーターゲッティングリガンド（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｌｉｇａｎｄ；ＡＴＬ）がリンカーによって連結されている。ターゲットリガンドによって標的タンパク質に結合し、オートファジーターゲッティングリガンドはオートファジーレセプターであるｐ６２ＺＺドメインに結合した後にオリゴマー化される。その後、ｐ６２がオートファゴソーム膜に突出しているＬＣ３と結合によってオートファジーターゲッティングされてリソソームで標的タンパク質が分解される。本発明ではｐ６２ＺＺドメインに結合する低分子リガンドを用いてｐ６２を活性化して標的タンパク質を効果的に除去しようとした。今まで標的タンパク質分解のためにユビキチン−プロテアソームシステム（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｓｙｓｔｅｍ、ＵＰＳ）を用いたプロタック（Ｐｒｏｔａｃ）化合物は存在するが、オートファジーを用いて標的タンパク質を分解する低分子化合物が報告された例は皆無である。プロタックとは異なり、オートファジーを用いる場合、変性タンパク質凝固体、膜と結合したタンパク質、複合体のサブユニット（ｓｕｂｕｎｉｔ）などプロタックが分解させることができないタンパク質を分解できるだけでなく、細胞内構造物（ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ、ｓｔｒｅｓｓ  ｇｒａｎｕｌｅなど）、小器官（小胞体、ミトコンドリア、ペルオキシソームなど）および細胞内に侵入した病原菌（ウイルス、バクテリアなど）も分解することができる。このような標的分解によって各種疾患で予防および治療効果を期待することができる。
【００１８】
ｐ６２タンパク質は、選択的オートファジー機構で媒介物であるオートファゴソーム形成開始と内容物即ち、ターゲットタンパク質の伝達に重要である。本発明による新規オートタックキメラ化合物は、ｐ６２活性化によってｐ６２の自己オリゴマー化を誘発することが観察された。また、このような自己オリゴマー化によって標的タンパク質をオートファゴソームに伝達してリソソームで標的タンパク質の分解を確認した。
【００１９】
本発明によるオートタックキメラ化合物は、細胞内オートファジーを誘発することができるだけでなく、ターゲットタンパク質のオートファゴソーム標的化を誘導して、既存酵素抑制方式で標的化が不可能なタンパク質のオートファジー機構下の選択的な分解を可能にするため新規治療剤を提供することができる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によるオートタックキメラ化合物は、ターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｌｉｇａｎｄ；ＴＢＬ）とｐ６２タンパク質のＺＺドメインと結合するリガンド、即ち、オートファジーターゲッティングリガンド（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｌｉｇａｎｄ；ＡＴＬ）がリンカーによって連結されている。オートファジーターゲッティングリガンドによってオートファジーを活性化させて標的タンパク質をオートファゴソームに連れて行ってリソソームで分解させる。
【００２１】
本発明は、オートファジーターゲッティングリガンド−リンカーに分解させようとするタンパク質のリガンドを連結する場合、所望の標的タンパク質を分解させることができるプラットホーム技術であるため多様な疾患の予防、改善および治療剤として適用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明による新規オートタックキメラ化合物の構成およびｐ６２タンパク質と結合すると同時に標的タンパク質、小器官および凝集体に結合し、ｐ６２タンパク質を通じてこれらがマクロオートファジーの媒介物であるオートファゴソームに伝達され最終的にリソソームによって分解されることを示す模式図である。
【図２ａ】免疫ブロッティング法を用いてオートタック化合物が該当するｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集効能を示す結果である。化合物を処理することによってｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集が増加するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図２ｂ】免疫ブロッティング法を用いてオートタック化合物が該当するｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集効能を示す結果である。化合物を処理することによってｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集が増加するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図２ｃ】免疫ブロッティング法を用いてオートタック化合物が該当するｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集効能を示す結果である。化合物を処理することによってｐ６２タンパク質のオリゴマー化および高分子量凝集が増加するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図３】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物が該当する標的タンパク質の分解効能を示す結果である。化合物の処理することによって標的タンパク質量が減少するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図４ａ】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物が該当する標的タンパク質の分解効能機構がオートファジー−リソソーム経路に媒介されるのを示す結果である。化合物を処理することによって標的タンパク質量が減少するのを示し、オートファジー−リソソーム経路抑制剤であるヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ、ＨＣＱ）を処理した時、標的タンパク質量が再び増加するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図４ｂ】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物が該当する標的タンパク質の分解効能機構がオートファジー−リソソーム経路に媒介されるのを示す結果である。化合物を処理することによって標的タンパク質量が減少するのを示し、オートファジー−リソソーム経路抑制剤であるヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ、ＨＣＱ）を処理した時、標的タンパク質量が再び増加するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図５ａ】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物のターゲットタンパク質分解効能がそれぞれｐ６２リガンド単独やターゲット結合リガンドのターゲットタンパク質分解効能に比べて優れるのを示す結果である。オートタックキメラ化合物処理後、ｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンド処理後より標的タンパク質量がさらに減少するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図５ｂ】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物のターゲットタンパク質分解効能がそれぞれｐ６２リガンド単独やターゲット結合リガンドのターゲットタンパク質分解効能に比べて優れるのを示す結果である。オートタックキメラ化合物処理後、ｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンド処理後より標的タンパク質量がさらに減少するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図５ｃ】免疫ブロッティング法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物のターゲットタンパク質分解効能がそれぞれｐ６２リガンド単独やターゲット結合リガンドのターゲットタンパク質分解効能に比べて優れるのを示す結果である。オートタックキメラ化合物処理後、ｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンド処理後より標的タンパク質量がさらに減少するのを示している。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【図６ａ】免疫蛍光染色法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物の標的タンパク質とｐ６２タンパク質を共にオートファジーに伝達する効能を示す結果である。化合物を処理した後、漸増的にオートタック化合物のターゲットタンパク質とｐ６２タンパク質の細胞内斑点と共存性が増加するのを確認することができる。
【図６ｂ】免疫蛍光染色法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物の標的タンパク質とｐ６２タンパク質を共にオートファジーに伝達する効能を示す結果である。化合物を処理した後、漸増的にオートタック化合物のターゲットタンパク質とｐ６２タンパク質の細胞内斑点と共存性が増加するのを確認することができる。
【図６ｃ】免疫蛍光染色法を用いて本発明によるオートタックキメラ化合物の標的タンパク質とｐ６２タンパク質を共にオートファジーに伝達する効能を示す結果である。化合物を処理した後、漸増的にオートタック化合物のターゲットタンパク質とｐ６２タンパク質の細胞内斑点と共存性が増加するのを確認することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
本発明は、ｐ６２リガンド（Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｌｉｇａｎｄ、ＡＴＬ）、ターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ、ＴＢＬ）およびリンカーを含むキメラ化合物およびこれを用いて標的タンパク質、小器官および凝集体をｐ６２と共にマクロオートファジー（ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）媒介物であるオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）伝達およびリソソーム（ｌｙｓｏｓｏｍｅ）で分解させる方法である。このような方法によって疾病発因タンパク質、小器官および凝集体をオートファジーに伝達および分解させる方法による予防、改善または治療する方法および前記複合体（以下、“キメラ化合物”という）を含む疾患に関連する病因タンパク質、小器官および凝集体のオートファジー活性化用または前記疾患の予防、改善または治療用組成物に関するものである。
【００２５】
本発明者らは、ｐ６２リガンドを用いることによって、このようなｐ６２リガンドがオートファジーを活性化させて効果的に標的タンパク質、小器官および凝集体をオートファゴソームに伝達して除去することができるのを確認し、これを前記病因タンパク質と結合が可能なリガンドを組み合わせる場合、優れた病因タンパク質および凝集体除去能があり、従来のプロタック化合物とは異なり、病因タンパク質のフォールディング、Ｅ３リガーゼ選択性および効果的な分解のための三重複合体（標的タンパク質−リンカー−Ｅ３リガーゼリガンド）形成のためのリンカー長さ最適化の必要性がないのを確認した。本発明者によって開発されたｐ６２のリガンドと標的タンパク質に結合するターゲット結合リガンドがリンカーによって連結された新規なキメラ化合物をオートタック（ＡＵＴＯＴＡＣ−ＡＵＴＯｐｈａｇｙ  ＴＡｒｇｅｔｉｎｇ  Ｃｈｉｍｅｒａ）と命名した。
【００２６】
本発明の特徴は、分解させようとするタンパク質のリガンドをｐ６２リガンドと連結されたリンカーに連結させれば所望のタンパク質を分解させることができる技術である。即ち、このようなｐ６２リガンドとターゲット結合リガンドがリンカーで連結されたキメラ化合物は二重機能有機低分子（ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）であって、タンパク質のオートファジーに関連するｐ６２近いところに分解対象とした標的タンパク質がこれらをターゲットとするリガンドに結合させるようにすることによって標的タンパク質が容易に分解できる構造を形成させるようになる。これは、予防または治療を所望する多様な疾病関連タンパク質をｐ６２と連結させることによって問題の標的タンパク質を分解させて所望の治療効能を期待することを発明の要旨とするものである。
【００２７】
好ましい様態として、前記本発明によるｐ６２リガンド、ターゲット結合リガンドおよびリンカーを含むキメラ化合物は、ｐ６２リガンドとターゲット結合リガンドがリンカーによって連結されたキメラ化合物形態であり、さらに好ましくは下記化学式１の構造を有することができる。
【化１】
2021532132.tif 000003
【００２８】
上記式中、Ａはターゲット結合リガンド（Ｔａｒｇｅｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄ）、Ｂはｐ６２リガンドを示す。前記化学式１中、ＡおよびＢはリンカーにそれぞれ１種以上連結できる。
【００２９】
本発明において、ターゲット結合リガンドは体内特定標的タンパク質、より詳しくは標的にしようとする疾病を誘発する病因タンパク質や、小器官または凝集体と結合するリガンドであって、このような標的タンパク質には制限がないが、好ましくは、癌に関連するタンパク質および多様なタンパク質異常疾患に関連するタンパク質を含む。このようなターゲット結合リガンドは、予防、改善および治療しようとする疾患に関連するタンパク質、好ましくは病因タンパク質による疾患、癌、タンパク質異常疾患、希少難治性疾患または遺伝的疾病に関連する標的タンパク質、小器官、または変異タンパク質凝集体と結合するものであれば制限なく使用することができる。具体的な様態として、これに限定されるのではないが、下記表１に示す化合物からなる群より選択される１種以上またはこれら構造に由来した誘導体構造であってもよい。
【００３０】
前記“誘導体”構造とは、ターゲット結合リガンドの一部構造がリンカーとの結合によって変更されたこと（例えば、置換基中のカルボキシル基がアミン基を有するリンカーとの結合によってターゲット結合リガンドとリンカーの連結部分がアミド基に変更された構造）を意味する。
【００３１】
【表１】
2021532132.tif 000004
2021532132.tif 000005
2021532132.tif 000006
2021532132.tif 000007
2021532132.tif 000008
【００３２】
前記化学式１でＡおよびＢを連結するリンカーは、構造的にＡ、Ｂと全て連結されている構造を有するものであれば制限なく使用することができる。例えば、このようなリンカーは、−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−（この時、Ｑは、ターゲット結合リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−０−、＝Ｎ−−Ｎ（ＣＨ３）−を含み；Ｐは、ｐ６２リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−０−、−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−を含み；ｘは、０〜４の整数であり；ｙは、０〜３の整数である）であってもよいが、これに制限されるのではない。好ましく、前記Ｐとｐ６２リガンドとの結合は−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、または−ＣＯＯ−であってもよく、このような結合を形成するためにｐ６２リガンドの一部分、例えばＲｃ部分とターゲット結合リガンドの一部分の構造が変更されてもよく、このような変更方法は当業界によく知られている。
【００３３】
本発明において、前記ｐ６２リガンドはｐ６２、より詳しくはｐ６２のＺＺドメインに結合する物質を意味するものであって、このようなｐ６２リガンドはｐ６２ＺＺドメインに結合することによってｐ６２のオリゴマー化を増加させ、オートファジー、具体的にはマクロオートファジーを活性化させるようにする。好ましい様態で、前記ｐ６２リガンドは下記化学式２の構造を有することができる。
【化２】
2021532132.tif 000009
Ｗは、Ｃ６−Ｃ１０アリールであり；
Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合され、この時、ｎ１は０〜１の整数であり；
ｎ２は、１〜４の整数であり；
ｍは、０〜２の整数であり；
ＲａはＲ１または−ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ３は、１〜６の整数であり；
Ｒｂは、−ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ４は、１〜６の整数であり；
Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ（Ｒ３）−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ（ＣＯＯ−Ｒ４）−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であり、
ｎ５は、２〜４の整数であり、
ｎ６は、１〜４の整数であり、
Ｒ３は、水素、またはＣ１−４アルキルであり、
Ｒ４は、Ｃ１−４アルキルであり、
Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルである。
好ましく、前記Ｗは、フェニルであってもよい。
好ましく、前記Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合される。
【００３４】
好ましく、ｎ１は、０〜１の整数であってもよい。
【００３５】
好ましく、ｎ２は、１〜２の整数であってもよい。
【００３６】
好ましく、Ｒａは、水素または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であってもよい。
【００３７】
好ましく、Ｒ’１は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであってもよい。
【００３８】
好ましく、ｎ３は、１〜４の整数であってもよい。
【００３９】
好ましく、Ｒｂは、ヒドロキシまたは−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であってもよい。
【００４０】
好ましく、Ｒ’２は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであってもよい。
【００４１】
好ましく、ｎ４は、１〜４の整数であってもよい。
【００４２】
好ましく、Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、または−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であってもよい。
【００４３】
好ましく、ｎ５は、２〜３の整数であってもよい。
【００４４】
好ましく、ｎ６は、１〜２の整数であってもよい。
【００４５】
好ましく、Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−２アルコキシまたはＣ１−２アルキルであってもよい。
【００４６】
このようなｐ６２リガンドは、前記リンカーとの結合のために、一部基がリンカーとの結合が容易な形態に変更された誘導体形態でリンカーと結合できる。これはｐ６２リガンドの種類、リンカーの種類、これらの結合形態によって当業者が適切に公知の技術によって変更可能であり、このような変更された誘導体形態も本発明のｐ６２リガンドに含まれる。
【００４７】
具体的な様態で、本発明によるオートタックキメラ化合物は、下記表２に示す化合物であり得るが、これに制限されるわけではない。
【００４８】
【表２】
2021532132.tif 000010
2021532132.tif 000011
2021532132.tif 000012
【００４９】
一方、本発明の化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態で存在し得る。前記塩としては、薬学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ  ａｃｉｄ）によって形成された酸付加塩が有用である。本発明の用語“薬学的に許容可能な塩”とは、患者に比較的に非毒性であり無害な有効作用を有する濃度であってこの塩に起因した副作用が化学式１〜３で表される化合物の利する効能を低下させない前記化合物の任意の全ての有機または無機付加塩を意味する。
【００５０】
酸付加塩は、通常の方法、例えば、化合物を過量の酸水溶液に溶解させ、この塩を水混和性有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、アセトンまたはアセトニトリルを使用して沈殿させて製造する。同モル量の化合物および水中の酸またはアルコール（例えば、グリコールモノメチルエーテル）を加熱し、次いで、前記混合物を蒸発させて乾燥させるか、または析出された塩を吸引ろ過させることができる。
【００５１】
この時、遊離酸としては有機酸と無機酸を使用することができ、無機酸としては塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、酒石酸などを使用することができ、有機酸としてはメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、琥珀酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、マンデル酸、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）、乳酸（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）、グルコン酸（ｇｌｕｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸（ｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、グルクロン酸（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸（ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｃ  ａｃｉｄ）などを使用することができ、これらに制限されない。
【００５２】
また、塩基を使用して薬学的に許容可能な金属塩を製造することができる。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、例えば、化合物を過量のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解させ、非溶解化合物塩をろ過した後、濾液を蒸発、乾燥させて得る。この時、金属塩としては、特に、ナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩を製造することが製薬上適するが、これらに制限されるわけではない。また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例、硝酸銀）と反応させて得ることができる。
【００５３】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、ほかに指示されない限り、前記化学式１の化合物に存在し得る酸性または塩基性基の塩を含む。例えば、薬学的に許容可能な塩としてはヒドロキシ基のナトリウム、カルシウムおよびカリウム塩などが含まれてもよく、アミノ基のその他薬学的に許容可能な塩としてはヒドロブロム化物、硫酸塩、水素硫酸塩、リン酸塩、水素リン酸塩、二水素リン酸塩、アセテート、スクシネート、シトレート、タルトレート、ラクテート、マンデレート、メタンスルホネート（メシレート）およびｐ−トルエンスルホネート（トシレート）塩などがあり、当業界に知られた塩の製造方法によって製造できる。
【００５４】
本発明の化学式１の化合物の塩としては、薬学的に許容可能な塩であって、化学式１の化合物と同等な薬理活性を示す塩であれば制限なく全て使用可能である。
【００５５】
また、本発明による前記化学式１で表される化合物は、その薬学的に許容可能な塩だけでなく、これから製造できる可能な水和物などの溶媒和物および可能な全ての立体異性体を制限なく含む。鏡像異性体形態および部分立体異性体形態を含む、本発明の全ての立体異性体（例えば、多様な置換体で非対称炭素に起因して存在し得るもの）が本発明の範囲に含まれる。本発明の化合物の個別的な立体異性体は、例えば、実質的に異なる異性体がないか（例えば、特定の活性を有する純粋なまたは実質的に純粋な光学異性体として）、または例えば、ラセミ体としてまたは全ての異なる、または異なる選択された立体異性体と混合できる。本発明の化合物のキラル中心はＩＵＰＡＣ１９７４勧告によって定義されたＳまたはＲ構造を有することができる。ラセミ形態は、キラルカラムクロマトグラフィーによる分離または部分立体異性体誘導体の分離または結晶化、分別形状結晶化のような物理的方法によって分析できる。個別的な光学異性体は、これに限定されるのではないが、光学的に活性である酸との塩形成に続き、結晶化を含む任意の適した方法によってラセミ体から得ることができる。
【００５６】
前記化学式１で表される化合物の溶媒和物および立体異性体は、当業界に公知された方法を使用して化学式１で表される化合物から製造することができる。
【００５７】
さらに、本発明による前記化学式１で表される化合物は結晶形態または非結晶形態に製造でき、結晶形態に製造される場合、任意に水和されるか溶媒和され得る。本発明では、前記化学式１で表される化合物の化学量論的水和物だけでなく多様な量の水を含有する化合物が含まれ得る。本発明による前記化学式１で表される化合物の溶媒和物は化学量論的溶媒和物および非化学量論的溶媒和物皆を含む。
【００５８】
本発明による化学式１の化合物は下記例示的な方法で製造でき、具体的な一例は以下の実施例に記載された反応式のとおりである。
【００５９】
本発明の製造方法は、前記反応式に使用される反応物として、市販される化合物を購入してそのまま使用するか、当業界に公知された一つ以上の反応をそのまま、または、適切に変更して行うことによって合成して使用することができる。例えば、骨格構造に含まれている反応性官能基および／またはヘテロ元素の存在、種類および／または位置を考慮して一つ以上の反応を一連の順序で行って合成することができるが、これに制限されない。
【００６０】
本発明による化学式１の化合物は、ｐ６２のＺＺドメインと結合すると同時に標的タンパク質、小器官および凝集体に結合するキメラリガンドとして作用して、ｐ６２の機能を活性化させ、標的タンパク質、小器官（小胞体、ミトコンドリア、ペルオキシソームなど）、細胞内構造物（ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ、ｓｔｒｅｓｓ  ｇｒａｎｕｌｅなど）、細胞内に侵入した病原菌（ウイルスおよびバクテリアなど）および凝集体をｐ６２と共にオートファジーに伝達し、分解することを特徴とする。
【００６１】
したがって、また他の様態として、本発明は、化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含むオートファジー活性用薬学的組成物を提供する。
【００６２】
本発明による化学式１の化合物は、標的タンパク質、小器官および凝集体をオートファジーに伝達し分解する作用によって病因タンパク質関連疾患の病因タンパク質、小器官および凝集体を除去することができる。同時に、前記化学式１の化合物はｐ６２リガンドとしてｐ６２ＺＺドメインに結合して、ｐ６２タンパク質のＰＢ１ドメインおよびＬＩＲドメインを活性化させてｐ６２のオリゴ化および凝集体を誘導すると同時に、標的タンパク質、小器官および凝集体をｐ６２タンパク質と共にオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）に伝達するのを増大させることを特徴とする。前記過程を通じて標的タンパク質、小器官および凝集体が円滑に除去される（図１参照）。このような標的タンパク質は病因タンパク質関連疾患の主要タンパク質であってもよく、より好ましくは、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、α−シヌクレイン（ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ  １）、タウ（ｔａｕ）、免疫グロブリン、アミロイド−Ａ、トランスサイレチン、β２−マイクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポタンパク質（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅ）Ａ１、ＴＤＰ−４３、膵島アミロイドポリペプチド（ｉｓｌｅｔ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ＡＮＦ、ゲルゾリン（ｇｅｌｓｏｌｉｎ）、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン（ｈｕｎｔｉｎｇｔｉｎ）、α−１−アンチトリプシンＺ、クリスタリン（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）、ｃ９オープンリーディングフレーム７２（ｃ９ｏｒｆ７２）、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ｇｌｉａｌ  ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ａｃｉｄｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、嚢胞性繊維症膜透管コンダクタンス調節タンパク質（ｃｙｓｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ）、ロドプシン（ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ）およびアタキシンと、Ｐｏｌｙ−Ｑ延伸を有するその他タンパク質からなる群より選択される１種以上のものであってもよい。
【００６３】
したがって、また他の様態として、本発明は、下記化学式１のオートタックキメラ化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含む薬学的組成物を提供する。前記薬学的組成物はターゲット結合リガンドが標的とする疾患を予防または治療するものであり、このような疾患はターゲット結合リガンドと結合できる疾患であれば制限なく対象になり得、好ましくは癌またはタンパク質異常疾患であり、さらに好ましくは希少難治性疾患、または遺伝的疾病のように特定タンパク質を標的として分解する場合に治療効果を期待することができる多様な疾患を含む。本発明による薬学的組成物は、前記疾患を誘発する原因タンパク質を直接除去することを特徴とする。
【００６４】
また他の様態として本発明は、前記化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、疾病を誘発する病因タンパク質および変性タンパク質のオートファジー伝達または分解用薬学的組成物を提供する。
【００６５】
ここで使用された用語“タンパク質異常疾患”は、変性タンパク質凝固体を特徴とする疾患を含み、例えば神経変性疾患、α１−アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜塩、２型糖尿病、嚢胞性繊維症などを意味するが、これに制限されるわけではない。
【００６６】
本発明によって、用語“凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）”は、複合体内に炭水化物、核酸および脂質のような追加的な生体分子の統合と伴われる、典型的に一つ以上のタンパク質のオリゴマーまたは多量体複合体の形成を示す。そのような凝集されたタンパク質は特定組織、より好ましくは神経組織または脳組織に沈着物を形成することができる。凝集の程度は該当疾患に依存する。
【００６７】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ  ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ  Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）、脊髄小脳変性症、その他ポリ−Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身性アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、注射−局所化アミロイド症、β−２ミクログロブリンアミロイド症、遺伝性非−神経病アミロイド症、アレキサンダー病およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群より選択されるのが好ましい。本発明の薬学的組成物の投与量は患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによってその範囲が多様であり得るが、有効投与量は通常、成人（６０ｋｇ）の場合、約１ｎｇ〜１０ｍｇ／日、特に約１ｇ〜１ｍｇ／日である。投与量は様々な条件によって変動可能であるため、前記投与量に加減があり得るという事実は当業者に自明であり、したがって、前記投与量はいかなる面でも本発明の範囲を限定するのではない。投与回数は所望の範囲内で一日に１回、または数回に分けて投与することができ、投与期間も特に限定されない。
【００６８】
本発明の用語“治療”とは、本発明の薬学的組成物の投与でタンパク質凝固に関連する多様な疾患および標的タンパク質分解によって疾患が好転するか有利に変更される全ての行為を意味する。
【００６９】
前述のように、本発明の化合物は、（１）ｐ６２オリゴマー化および構造的活性化を誘導して、（２）ｐ６２のＬＣ３との結合を増大させ、（３）ｐ６２のオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）への伝達を増大させて、（４）オートファジーを活性化して最終的に（５）標的タンパク質を除去する効果を示すので、これを有効性分として含む薬学的組成物は多様な目的とする疾患、好ましくは癌またはタンパク質異常疾患の予防、改善または治療に使用できる。
【００７０】
例えば、本発明の組成物は薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を追加的に含むことができ、それぞれの使用目的に合うように通常の方法によって散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアゾールなどの経口剤形、滅菌注射溶液の注射剤など多様な形態に剤形化して使用することができ、経口投与するか静脈内、腹腔内、皮下、直腸、局所投与などを含む多様な経路を通じて投与できる。このような組成物に含まれ得る、適した担体、賦形剤または希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油などが挙げられる。また、本発明の組成物は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などを追加的に含むことができる。
【００７１】
経口投与のための固形製剤には錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は前記組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えばデンプン、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混合して剤形化する。また、単純な賦形剤以外にマグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤が使用できる。
経口用液状製剤としては懸濁剤、内用液剤、油剤、シロップ剤などが例示でき、よく使用される単純希釈剤である水、液体パラフィン以外に様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてもよい。
【００７２】
非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、油剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが使用できる。坐剤の基剤としてはウィテップゾール、マクロゴール、ツイン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。一方、注射剤には溶解剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤などのような従来の添加剤が含まれてもよい。
【００７３】
前記剤形は通常の混合、顆粒化またはコーティング方法によって製造でき、活性成分を医学的治療、具体的にタンパク質凝集に関連する疾患の予防、改善または治療に有効な量で含む。
【００７４】
この時、本発明の組成物は薬学的に有効な量で投与する。本発明の用語“薬学的に有効な量”は医学的治療に適用可能な合理的な利益／危険比率で疾患を治療するのに十分であり副作用を起こさない程度の量を意味し、有効容量水準は患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与方法、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、配合または同時使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られた要素によって決定できる。本発明の組成物は個別治療剤として投与するか他の治療剤と併用して投与することができ、従来の治療剤と順次にまたは同時に投与することができ、単一または多重投与することができる。前記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定できる。
【００７５】
例えば、投与経路、疾病の重症度、性別、体重、年齢などによって増減できるので、前記投与量がいかなる方法でも本発明の範囲を限定するのではない。
【００７６】
本発明の化合物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路および期間によって異なるが、当業者によって適切に選択できる。
【００７７】
また他の様態として、本発明は、前記本発明の薬学的組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、目的とする疾患、好ましくは癌、病因タンパク質関連疾患、タンパク質凝集に関連する疾患を予防、改善または治療する方法を提供する。
【００７８】
また他の様態として、本発明は、前記化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、（ｉ）標的タンパク質の分解を増大させる方法、（ｉｉ）小器官および構造物の分解を増大させる方法、（ｉｉｉ）細胞内に侵入したウイルスおよびバクテリアの分解を増大させる方法、（ｉｖ）薬物や低分子化合物をオートファジーおよびリソソームに伝達する方法、（ｖ）ｐ６２の自己オリゴマー化およびオートファジー活性化方法、（ｖｉ）細胞内特定タンパク質をｐ６２に連結させてオートファジーに伝達することによってリソソームによる分解を増大させる方法を提供する。
【００７９】
また他の様態として、本発明は、発明によるキメラ化合物を細胞膜に露出されたタンパク質に特異的に結合する治療用抗体に連結した薬物を用いて、このような薬物をエンドソーム（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）を通じてリソソームに伝達する方法を提供する。前記治療用抗体は治療を要する疾患に対する薬理活性を示すものであれば制限なく使用できる。
【００８０】
本発明の用語“個体”とは、予防、改善または治療するために標的とする疾患が発病した人間を含む猿、牛、馬、羊、豚、鶏、七面鳥、ウズラ、猫、犬、マウス、ネズミ、ウサギまたはギニアピッグを含む全ての動物を意味し、本発明の薬学的組成物を個体に投与することによって標的とする疾患、好ましくは癌、病因タンパク質関連疾患、または変性タンパク質の凝集に関連する疾患を効果的に予防、改善または治療することができる。また、本発明の薬学的組成物はｐ６２リガンドに作用してオートファジーを活性化させ、このようなオートファジー活性化によって変性タンパク質の凝集体を除去してこのような凝集タンパク質に関連する疾患の予防または治療効果を示すものであるので、既存の治療剤と並行して投与することによってシナジー的な効果を示すことができる。
【００８１】
本発明の用語“投与”とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を提供することを意味し、本発明の組成物の投与経路は目的組織に到達できる限りいずれの一般的な経路を通じても投与できる。腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与できるが、これに制限されない。また、本発明の薬学的組成物は、活性物質が標的細胞に移動し得る任意の装置によって投与できる。好ましい投与方式および製剤は、静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などである。注射剤は、生理食塩液、リンゲル液などの水性溶剤、植物油、高級脂肪酸エステル（例、オレイン酸エチルなど）、アルコール類（例、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）などの非水性溶剤などを用いて製造することができ、変質防止のための安定化剤（例、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＢＨＡ、トコフェロール、ＥＤＴＡなど）、乳化剤、ｐＨ調節のための緩衝剤、微生物発育を阻止するための保存剤（例、硝酸フェニル水銀、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール、ベンジルアルコールなど）などの薬学的担体を含むことができる。
【００８２】
また他の様態として、本発明は、化学式１のオートタックキメラ化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含むタンパク質異常疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。前記食品用組成物は、健康機能食品としてそれ自体で剤形化を経て使用されるか、健康機能食品の添加物として他の健康機能食品に含まれてもよい。健康機能食品とは、疾病の予防または改善、生体防御、免疫、病後の回復、老化抑制など生体調節機能を有する食品をいうものであって、長期的に服用した時、人体に無害でなければならない。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康または治療的処置）によって適するように決定できる。
【００８３】
前記食品の種類には特別な制限はない。前記物質を添加することができる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディ類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、茶、ドリンク剤、アルコール飲料およびビタミン複合剤などがあり、通常の意味での健康機能食品を全て含む。
【００８４】
本発明の食品用組成物は、食品または食品添加物の製造に使用される通常の成分、具体的に、香味剤；天然炭水化物としてブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド、マルトース、スクロースのようなジサッカライド、およびデキストリン、シクロデキストリンのような天然甘味剤や、サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤；栄養剤；ビタミン；電解質；着色剤；有機酸；保護性コロイド増粘剤；ｐＨ調節剤；安定化剤；防腐剤；グリセリン；アルコール；炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。
【００８５】
本発明の具体的な実施例では、化学式１で表される新規なオートタックキメラ化合物１〜１３を新しく合成した。また、本発明による新規なオートタックキメラ化合物が培養された細胞で自食現象を増加させることができるかを評価するために免疫ブロッティング法によってターゲットタンパク質が本来発現される細胞株（ＭＣＦ７、ＮＴＥＲＡ−２、ＡＣＨＮ、Ｕ８７−ＭＧ、ＬＮＣａＰ、ＨＥＫ２９３Ｔ）や遺伝子組換え細胞株（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ−ｔａｕ、ＨｅＬａ−ＨｔｔＱ９７、ＰＣ１２−ａ−ｓｙｎＡ３０Ｐ）に本発明によるオートタックキメラ化合物を処理して培養した後、培養細胞内でのターゲットタンパク質分解活性を確認した。その結果、本発明によるオートタック化合物を処理した濃度によって漸増的にそれぞれのターゲットタンパク質のオートファジーで媒介される分解効果を確認しただけでなく、キメラ化合物構成のｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンドより優れた分解効能を確認したところ、本発明によるオートタック化合物はｐ６２タンパク質を活性化およびオリゴマー化させてオートファゴソームに伝達させると同時に標的化する多様な疾患、例えば癌関連タンパク質またはタンパク質異常疾患に関連するタンパク質とこれらの凝集体を選択的で効果的に除去することを確認した。
【実施例】
【００８６】
以下の実施例を通じて本発明をより詳しく説明しようとする。これら実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に限定されるのではない。
【００８７】
本発明による化学式１〜１３の化合物を以下の実施例１〜実施例１３にて製造した。
【００８８】
【表３】
2021532132.tif 000013
2021532132.tif 000014
【００８９】
本発明の化合物を合成するための出発物質の場合、多様な合成法が知られており、前記出発物質が市販されている場合は供給先から購入して使用することができる。試薬供給先としてはＡｌｄｒｉｃｈ、Ｓｉｇｍａ、ＴＣＩ、Ｗａｋｏ、Ｋａｎｔｏ、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ、Ａｃｒｏｓ、Ａｌｆａ、Ｆｌｕｋａなどの会社があるが、これに限定されるのではない。
【００９０】
本発明の化合物は、下記の一般的な方法および過程を使用して容易に利用可能な出発物質から製造できる。典型的なまたは好ましい工程条件（即ち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力）などとしては、ほかに言及しない限り、他の工程条件も使用できる。最適の反応状態は使用された特定反応物または溶媒によって変わり得るが、そのような状態は通常の最適化過程により本技術分野の熟練者によって決定できる。
【００９１】
以下、前記実施例１〜実施例１３の製造方法について記述する。
【００９２】
実施例１．（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド（ＲＴＥＧ−１１０４）の製造
【００９３】
【化３】
2021532132.tif 000015
【００９４】
（段階１）３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１）の製造
３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（０．５０ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解後、ポタシウムカーボネート（Ｋ２ＣＯ３、１．５０ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ）を入れ、次いで、ベンジルブロミド（０．９２ｍＬ、７．９６ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加し、６０℃で４時間攪拌する。反応が終了すれば、反応物を室温に冷却した後、精製水に希釈してジエチルエーテル（５０ｍｌ）で２回抽出する。有機層を精製水（５０ｍｌ）で２回洗浄した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）でもう一度洗浄する。次いで、有機層に無水硫酸ナトリウムを入れて攪拌した後、減圧ろ過する。ろ過した溶液を濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製して３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、１．０４ｇ、収率９０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ９．８１（ｓ、１Ｈ）、７．４９−７．３１（ｍ、１２Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）；ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：３１９．３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９５】
（段階２）段階１）３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノール（１１０２）の製造
ジクロロメタン（１５ｍｌ）を３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、１．００ｇ、３．０ｍｍｏｌ、１当量）に入れて溶解した後、ｍＣＰＢＡ（０．７８ｇ、４．５ｍｍｏｌ、１．５当量）を反応物に入れて室温で４時間攪拌する。反応物にエチルアセテートを入れて希釈した後、炭酸ナトリウム飽和水溶液を入れて洗浄した後、有機層を分液する。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水して減圧ろ過する。ろ過された溶液を濃縮した後、再びメタノール（１０ｍｌ）に溶解した後、６Ｎ  ＮａＯＨを入れて３０分間室温で攪拌する。反応物に４Ｎ  ＨＣｌ溶液を入れた後、３０分間さらに攪拌する。反応物にエチルアセテート（５０ｍｌ）を入れて希釈した後、塩水で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムを入れて脱水および減圧ろ過する。ろ過された溶液を濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／エチルアセテート比率＝７／３）で精製して３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノール（１１０２、０．８７ｇ、収率９０％）を得た。
【００９６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ７．２５−７．４２（ｍ、１０Ｈ）、６．８０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、６．４８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０Ｈｚ）、６．２９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０  ａｎｄ  ９．０Ｈｚ）、５．０８（ｄ、４Ｈ、Ｊ＝１５Ｈｚ）、４．５５（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：３０７．２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９７】
（段階３）Ｒ−２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（１１０３）の製造
３，４−ジベンジルオキシフェノール（１１０２、３０６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍｌ）に希釈した後、ＫＯＨ水溶液（ＫＯＨ  ６６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１ｍｌ）と（Ｒ）−２−（クロロメチル）オキシラン（４１０ｕｌ、５．０ｍｍｏｌ）を順次に添加する。反応物を室温で５時間攪拌した後、有機溶媒を減圧して除去する。濃縮された反応物を再びエチルアセテートで希釈した後、水で洗浄し、次いで塩水で洗浄した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過する。ろ過された有機層を濃縮しカラムクロマトグラフィーで精製して純粋なＲ−２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（１１０３、２９７ｍｇ、収率８２％）を得た。ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：３６３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９８】
（段階４）（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−１）の製造
Ｒ−２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（１１０３、２７０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を無水エタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ビス（エタン−１−アミン）（８８０ｍｇ、５．９ｍｍｏｌ）を添加して８時間室温で攪拌する。ＴＬＣで反応確認した後、反応溶媒を減圧濃縮し、濃縮された反応物に水を入れジクロロメタン（３×５ｍＬ）で抽出する。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過する。ろ過された有機層を濃縮してカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１９：１）で精製して（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−１、２６７ｍｇ、収率７０％）を得た。ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：５１１．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９９】
（段階５）（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−１、１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍｌ）に溶解した後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、４４ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、３８．５ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）とレチノイン酸（６０ｍｇ、０．２ｍｏｌ）を順次に添加した後、次いで、Ｎ−Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、０．６ｍｌ）を添加して室温で１２時間攪拌する。反応物に水を入れエチルアセテートで２回抽出した後、有機層を塩水で１回洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した後、ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して白色固体の（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド（ＲＴＥＧ−１１０４、６０ｍｇ、収率４１％）を製造した。
【０１００】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１．０１（ｓ、６Ｈ）、１．５３（ｍ、２Ｈ）、１．７４−１．７９（ｍ、５Ｈ）、１．９６（ｍ、２Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．５６−２．８１（ｍ、４Ｈ）、３．０４（ｍ、２Ｈ）、３．５２−３．５４（ｍ、６Ｈ）、３．６７（ｍ、２Ｈ）、３．９５−４．０５（ｍ、３Ｈ）、５．１６（ｓ、４Ｈ）、５．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、５．９１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、６．２２（ｓ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、４Ｈ）、６．５７−６．６１（ｍ、２Ｈ）、６．９８（ｄ、１Ｈ）、７．３２−７．４８（ｍ、１０Ｈ）、８．５１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４９Ｈ６４Ｎ２Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋  ７９４．３５  Ｆｏｕｎｄ  ７９３．０６。
【０１０１】
実施例２．（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド（ＲＴＥＧ−１１０５）の製造
【０１０２】
【化４】
2021532132.tif 000016
【０１０３】
（段階１）２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−Ｎ−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）エタン−１−アミン（ＡＬ−２）の製造
３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、０．５ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＣＡＮ、１０ｍｌ）に溶解した後、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（４６８ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を入れて６０〜７０℃で５時間攪拌する。室温に冷却した後、反応物に水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４、１０６ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を徐々に添加した後、室温で５時間ほど攪拌する。水を添加して反応を終了させ、エチルアセテート（５０ｍＬ×３）で化合物を抽出する。抽出された有機溶媒層を塩水で洗浄し硫酸ナトリウムを用いて脱水する。ろ過した溶媒を濃縮させた後、再びジクロロメタン（６ｍｌ）に溶解した後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、２ｍｌ）を入れて室温で２時間攪拌した後、溶媒を減圧濃縮する。カラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１５：１）で精製して薄い黄色液体の２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−Ｎ−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）エタン−１−アミン（ＡＬ−２、５９０ｍｇ、収率８４％）を得た。
【０１０４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．５９（ｔ、２Ｈ）、３．３２−３．６１（ｍ、１２Ｈ）、４．６２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、５．１０（ｓ、４Ｈ）、６．８２（ｄ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、１Ｈ）、７．０６（ｓ、１Ｈ）、７．３０−７．４６（ｍ、１０Ｈ）。
【０１０５】
（段階２）実施例１の段階５と類似の方法で合成して（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド（ＲＴＥＧ−１１０５）を製造した。
【０１０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１．０１（ｓ、６Ｈ）、１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．７５−１．８０（ｍ、５Ｈ）、１．９８（ｍ、２Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．７２（ｔ、２Ｈ）、３．０４（ｔ、２Ｈ）、３．５１−３．５４（ｍ、６Ｈ）、３．６７（ｔ、２Ｈ）、３．７６（ｓ、２Ｈ）、５．１４（ｓ、４Ｈ）、６．２２（ｍ、２Ｈ）、６．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、６．５１（ｓ、４Ｈ）、６．８０（ｄ、１Ｈ）、６．８７（ｄ、１Ｈ）、６．９９（ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．４６（ｍ、１０Ｈ）、８．４１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４７Ｈ６０Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋  ７３４．３  Ｆｏｕｎｄ  ７３３．０１。
【０１０７】
実施例３．（Ｒ）−Ｎ−（１５−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１４−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデシル）−４−フェニルブタンアミド（ＰＢＡ−１１０４）の製造
【０１０８】
【化５】
2021532132.tif 000017
【０１０９】
（段階１）２，２’−（２，２’−オキシビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ジエタンアミン（２１ｇ、７３．１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４００ｍｌ）に溶解した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、１２．３ｇ、９１．５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、１７．６ｇ、９１．５ｍｍｏｌ）を順次に添加した後、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、１８．５ｇ、１８０ｍｍｏｌ）を入れて０℃に冷却する。４−フェニル酪酸（１５ｇ、９１．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶解した後、反応物に添加した後、室温で１２時間攪拌する。反応物に水を入れて希釈した後、ジクロロメタン（５０ｍｌ＊３回）で抽出した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水およびろ過する。ろ過された液を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して黄色液体のＮ−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−４−フェニルブタンアミド（ＴＬ−１、１２ｇ）を製造した。ＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：３３９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１０】
（段階２）Ｎ−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−４−フェニルブタンアミド（ＴＬ−１、１００ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）をメタノール（６ｍｌ）に溶解した後、Ｒ−２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（１１０３、１２８ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）を入れて５０℃で１０時間攪拌する。反応物を減圧濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して白色固体の（Ｒ）−Ｎ−（１５−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１４−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデシル）−４−フェニルブタンアミド（ＰＢＡ−１１０４、１０３ｍｇ、収率５０％）を製造した。
【０１１１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）１．２５（ｓ、１Ｈ）、１．９２（ｍ、２Ｈ）、２．３１（ｔ、２Ｈ）、２．５６−２．８１（ｍ、４Ｈ）、３．２８（ｍ、２Ｈ）、３．５１−３．５３（ｍ、１０Ｈ）、３．６７（ｔ、２Ｈ）、３．９５−４．２０（ｍ、３Ｈ）、５．１４（ｓ、４Ｈ）、５．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、５．９０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、６．５７（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｄ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、１Ｈ）、７．１６（ｍ、３Ｈ）、７．３０（ｍｋ  ８Ｈ）、７．４５（ｍ、４Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４１Ｈ５２Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋Ｈ］＋  ７０１．５  Ｆｏｕｎｄ  ７００．８７。
【０１１２】
実施例４．Ｎ−（１−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェニル）−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−４−フェニルブタンアミド（ＰＢＡ−１１０５）の製造
【０１１３】
【化６】
2021532132.tif 000018
【０１１４】
（段階１）Ｎ−（１−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェニル）−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−４−フェニルブタンアミド（ＰＢＡ−１１０５）の製造
Ｎ−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−４−フェニルブタンアミド（ＴＬ−１）（１０ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、１５０ｍＬ）に溶かした後、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１０．３ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、６５℃で５時間ほど攪拌した。室温に冷却した後、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４、２．２ｇ、５７．９ｍｍｏｌ）を添加して室温で５時間ほど攪拌した。水を添加して反応を終了させ、エチルアセテート（５０ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて水を除去した。ろ過した溶媒を濃縮させた後、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１５：１）で精製した。その後、黄色液体のＮ−（１−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェニル）−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−４−フェニルブタンアミド（ＰＢＡ−１１０５）（１０．３ｇ）を得た。
【０１１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．４５−７．４２（ｍ、４Ｈ）、７．３６−７．２９（ｍ、７Ｈ）、７．２７−７．２６（ｍ、１Ｈ）、７．１８−７．１５（ｍ、３Ｈ）、６．９９（ｄ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、１Ｈ）、６．４１（ｂｒｓ、１Ｈ）、５．１５（ｄ、４Ｈ）、３．７１（ｓ、２Ｈ）、３．６０−３．５５（ｍ、１０Ｈ）、３．５５−３．４９（ｍ、２Ｈ）、３．４２−３．３９（ｍ、２Ｈ）、２．７５−２．７３（ｍ、２Ｈ）、２．６５−２．６１（ｍ、２Ｈ）、２．１８−２．１５（ｍ、２Ｈ）、１．９７−１．９３（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｂｒｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ３９Ｈ４８Ｎ２Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋  ６４１．００  Ｆｏｕｎｄ  ６４０．８２。
【０１１６】
実施例５．３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アニリン（Ａｎｌｅ１３８ｂ−Ｆ１０５）の製造
【０１１７】
【化７】
2021532132.tif 000019
【０１１８】
（段階１）３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（ＹＴ−１０２）の製造
アセトニトリル（ＡＣＮ、５００ｍＬ）に溶かした３−ヒドロキシベンズアルデヒド（５０ｇ、０．４１ｍｏｌ）にポタシウムカーボネート（Ｋ２ＣＯ３、１１２．５ｇ、０．８１ｍｏｌ）と１−（ブロモメチル）−４−フルオロベンゼン（９５ｇ、０．５０ｍｏｌ）を添加した。６０℃で１０時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過した後、溶液を濃縮した。ここに石油エーテル／エチルアセテート（ＰＥ／ＥＡ、２０：１、２０ｍＬ）を添加して１時間ほどさらに攪拌した後、ろ過を経て濃縮した。その後、灰色を帯びた白色固体の３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（ＹＴ−１０２、２５ｇ）を得た。
【０１１９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．９８（ｓ、１Ｈ）、７．５４−７．５０（ｍ、５Ｈ）、７．３６（ｍ、１Ｈ）、７．２３（ｍ、２Ｈ）、５．１８（ｓ、２Ｈ）。
【０１２０】
（段階２）ｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−ブロモフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（Ｔ−１）の製造
３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−ブロモフェニル）−１Ｈ−ピラゾール（２００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、４ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、８８ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ、１５３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間ほど攪拌した。反応が終了した後、ろ過した溶液を濃縮させた後、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：５）で精製した。その後、白色固体のｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−ブロモフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（Ｔ−１、２００ｍｇ）を得た。
【０１２１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）８．０９−７．４３（ｍ、５Ｈ）、７．１１−６．９４（ｍ、３Ｈ）、６．０８（ｓ、２Ｈ）、１．３４（ｄ、Ｊ＝２０Ｈｚ、９Ｈ）。
【０１２２】
（段階３）ｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−（２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）アミノ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（ＴＬ−２）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−ブロモフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（Ｔ−１、２００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、４ｍＬ）に溶かした後、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−１、１６８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）とポタシウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（ｔ−ＢｕＯＫ、１０１ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を添加した。１２０℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了した化合物は、ろ過して濃縮させた後、分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、薄い黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）アミノ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（ＴＬ−２、１８０ｍｇ）を得た。
【０１２３】
（段階４）Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アニリン（ＴＬ−３）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−５−（３−（（２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）アミノ）フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシレート（ＴＬ−２、１８０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸／エチルアセテート（１ｍＬ、３Ｎ）溶液を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終了した化合物はろ過して濃縮した。その後、白色固体のＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アニリン（ＴＬ−３、１００ｍｇ）を得た。
【０１２４】
（段階５）３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アニリン（Ａｎｌｅ１３８ｂ−Ｆ１０５）の製造
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アニリン（ＴＬ−３、９０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（ＹＴ−１０２、５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加して６５℃で攪拌した。その後、５℃で水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４、１６ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加して１時間ほど追加的に攪拌した。反応が終了した化合物は濃縮させて分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、無色液体の３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アニリン（Ａｎｌｅ１３８ｂ−Ｆ１０５、１５ｍｇ）を得た。
【０１２５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）１３．０８（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．４７（ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、７．３７−７．３１（ｍ、２Ｈ）、７．２１−７．１７（ｍ、３Ｈ）、７．１１（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．００−６．９６（ｍ、５Ｈ）、６．８８−６．８２（ｍ、２Ｈ）、６．５６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｓ、２Ｈ）、５．５９（ｂｒｓ、１Ｈ）、５．０４（ｓ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、２Ｈ）、３．６０−３．５２（ｍ、６Ｈ）、３．４７（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．２６−３．２２（ｍ、２Ｈ）、２．６１（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ３６Ｈ３７ＦＮ４Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋  ６２５．１０  Ｆｏｕｎｄ  ６２４．７１。
【０１２６】
実施例６．（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−メトキシ−４−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−メチル−３−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）オキシラン−２−イル）−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イル（１３Ｅ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ）−１−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−１２−オキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザヘニコサ−１３，１５，１７，１９−テトラエン−２１−オエート（Ｆｕｍａｇｉｌｌｉｎ−１０５）の製造
【０１２７】
【化８】
2021532132.tif 000020
【０１２８】
（段階１）３−（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（２０１）の製造
アセトニトリル（ＡＣＮ、５００ｍＬ）に溶かした３−ヒドロキシベンズアルデヒド（５０ｇ、０．４１ｍｏｌ）にポタシウムカーボネート（Ｋ２ＣＯ３、１１２．５ｇ、０．８１ｍｏｌ）とブロモメチルベンゼン（８５ｇ、０．５０ｍｏｌ）を添加した。６０℃で１０時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過した後、溶液を濃縮した。その後、石油エーテル／エチルアセテート（ＰＥ／ＥＡ、２０：１、２０ｍＬ）を添加して追加的に１時間ほどさらに攪拌した後、ろ過を経て濃縮した。その後、灰色を帯びた白色固体の３−（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（２０１、２５ｇ）を得た。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．９７（ｓ、１Ｈ）、７．５４−７．５１（ｍ、３Ｈ）、７．４７（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２−７．３４（ｍ、４Ｈ）、５．１９（ｓ、２Ｈ）。
【０１３０】
（段階２）２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−Ｎ−（３−（ベンジルオキシ）ベンジル）エタン−１−アミン（ＡＬ−３）の製造
３−（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（２０１、５０ｇ、２３５．８ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、５００ｍＬ）に溶かした後、２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタンアミン（Ｌ−２、３４．９ｇ、２３５．８ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で６時間ほど攪拌した。室温に冷却した後、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４、８．９５ｇ、２３５．８ｍｍｏｌ）を添加して５０℃で一晩中攪拌した。水を添加して反応を終了し、エチルアセテート（ＥｔＯＡｃ、５０ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）を添加して水を除去した。溶液を濃縮した後、シリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１２：１）で精製した。その後、黄色液体の２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−Ｎ−（３−（ベンジルオキシ）ベンジル）エタン−１−アミン（ＡＬ−３、２０ｇ）を得た。
【０１３１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ＋Ｄ２Ｏ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．４１−７．２９（ｍ、５Ｈ）、７．１８（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９４（ｓ、１Ｈ）、６．８６−６．８１（ｍ、２Ｈ）、５．０３（ｓ、２Ｈ）、３．６０（ｓ、２Ｈ）、３．４５−３．４２（ｍ、６Ｈ）、３．３３（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．５７−２．５２（ｍ、４Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２０Ｈ２８Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋  ３４５．１０  Ｆｏｕｎｄ  ３４４．４６。
【０１３２】
（段階３）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−メトキシ−４−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−メチル−３−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）オキシラン−２−イル）−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イル（１３Ｅ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ）−１−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−１２−オキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザヘニコサ−１３，１５，１７，１９−テトラエン−２１−オエート（Ｆｕｍａｇｉｌｌｉｎ−１０５）の製造
メチレンクロライド（ＤＣＭ、２ｍＬ）に２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−Ｎ−（３（ベンジルオキシ）ベンジル）エタン−１−アミン（ＡＬ−３、７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を溶かし、フマギリン（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、３４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、４８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、４４ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。３０℃で１０時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、メチレンクロライド（ＤＣＭ、５０ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて水を除去した。ろ過した溶媒を濃縮した後、分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製する。その後、黄色固体の（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−メトキシ−４−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−メチル−３−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）オキシラン−２−イル）−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イル（１３Ｅ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ）−１−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−１２−オキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザヘニコサ−１３，１５，１７，１９−テトラエン−２１−オエート（Ｆｕｍａｇｉｌｌｉｎ−１０５、３ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４６Ｈ６０Ｎ２Ｏ９［Ｍ］＋  ７８４．９０  Ｆｏｕｎｄ  ７８４．９９。
【０１３３】
実施例７．３−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（（Ｒ）−１５−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−１４−ヒドロキシ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデシル）−５−メチルオキサゾリジン−２，４−ジオン（Ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ−２２０４）の製造
【０１３４】
【化９】
2021532132.tif 000021
【０１３５】
（段階１）３−ヒドロキシ−４−フェネトキシベンズアルデヒド（Ａ−１）の製造
３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（２００ｇ、１．４ｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、２Ｌ）に溶かした後、ポタシウムカーボネート（Ｋ２ＣＯ３、２６０ｇ、１．９ｍｏｌ）と１−（２−ブロモエチル）ベンゼン（２６７ｇ、１．４ｍｏｌ）を添加した。８０℃で１６時間ほど攪拌した。塩酸（１．５Ｌ、１Ｎ）で反応を終了した後、エチルアセテート（ＥＡ、１Ｌ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで水を除去してろ過した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝２０：１〜１０：１）で精製した。その後、白色固体の３−ヒドロキシ−４−フェネトキシベンズアルデヒド（Ａ−１、３２０ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ１５Ｈ１４Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋  ２４３．０  Ｆｏｕｎｄ  ２４２．２７。
【０１３６】
（段階２）３，４−ジフェネトキシベンズアルデヒド（２２０１）の製造
３−ヒドロキシ−４−フェネトキシベンズアルデヒド（Ａ−１、３２０ｇ、１．３２ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５Ｌ）に溶かした後、２−フェニルエタノール（１９３．５ｇ、１．５９ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、５２０ｇ、１．９８ｍｏｌ）とジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、４００ｇ、１．９８ｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応溶液に水（１００ｍＬ）を入れて反応を終了し、エチルアセテート（１００ｍＬ×２）で抽出した。抽出された有機溶媒層に硫酸ナトリウムを添加して水を除去しろ過した後、濃縮した。濃縮された化合物は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）を経て精製した。その後、白色固体の３，４−ジフェネトキシベンズアルデヒド（２２０１、１６０ｇ）を得た。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．８１（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  １．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０−７．１７（ｍ、１２Ｈ）、４．２７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．２２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．０６（ｑ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、４Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２３Ｈ２２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋  ３４６．９０  Ｆｏｕｎｄ  ３４６．４３。
【０１３８】
（段階３）３，４−ジフェネトキシフェノール（２２０２）の製造
３，４−ジフェネトキシベンズアルデヒド（２２０１、１６０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、２Ｌ）に溶かした後、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ、１１９ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、溶液をろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：５）で精製した。その後、灰色を帯びる白色固体の３，４−ジフェネトキシフェノール（２２０２、１００ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２２Ｈ２２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋  ３３５．００  Ｆｏｕｎｄ  ３３４．４２。
【０１３９】
（段階４）（Ｒ）−２−（（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−２）の製造
３，４−ジフェネトキシフェノール（２２０２）（５ｇ、１５ｍｍｏｌ）をエタノール（ＥｔＯＨ、５０ｍＬ）に溶かした後、水（２．５ｍＬ）とポタシウムヒドロキシド（ＫＯＨ、１．９３ｇ、３４．５ｍｍｏｌ）を添加した。そして、（Ｒ）−２−（クロロメチル）オキシラン（８ｇ、８７ｍｍｏｌ）を添加して室温で１６時間ほど攪拌した。水（５０ｍＬ）を入れて反応を終了させ、エチルアセテート（ＥＡ、２０ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒は、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで水を除去してろ過し、濃縮した。濃縮された化合物は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、白色固体の（Ｒ）−２−（（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−２、２．５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ２６Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋  ３９１．００  Ｆｏｕｎｄ  ３９０．４８。
【０１４０】
（段階５）（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−４）の製造
（Ｒ）−２−（（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−２、２０ｇ、５１．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、２００ｍＬ）に溶かした後、２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エタンアミン（Ｌ−２、１５．２ｇ、１０２．５ｍｍｏｌ）を添加した。７０℃で４０時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１００：１〜３０：１）で精製した。その後、黄色液体の（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−４、１２ｇ）を得た。
【０１４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）８．５２（ｓ、３Ｈ）、７．３０−７．２０（ｍ、１０Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．６０（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．４７（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  ２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）、４．０８（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．９６（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．７９（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．７０（ｍ、７Ｈ）、３．３２−３．２５（ｍ、３Ｈ）、３．１７−２．９８（ｍ、８Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ３１Ｈ４２Ｎ２Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋  ５３９．２０  Ｆｏｕｎｄ  ５３８．６９。
【０１４２】
（段階６）液体の３−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（（Ｒ）−１５−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−１４−ヒドロキシ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデシル）−５−メチルオキサゾリジン−２，４−ジオン（Ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ−２２０４）の製造
（Ｒ）−１−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）−３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）プロパン−２−オール（ＡＬ−４、１２０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、ビンクロゾリン（ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ、１１７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、溶液をろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液は、分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、無色液体の３−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（（Ｒ）−１５−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−１４−ヒドロキシ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデシル）−５−メチルオキサゾリジン−２，４−ジオン（Ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ−２２０４、１５ｍｇ）を得た。
【０１４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）１．６５（ｍ、３Ｈ）、２．６５（ｍ、４Ｈ）、２．９７（ｍ、４Ｈ）、３．１７（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｍ、８Ｈ）、３．５７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０（ｍ、３Ｈ）、４．０２（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、４．９０（ｂ、１Ｈ）、５．３３（ｍ、２Ｈ）、６．２０（ｍ、１Ｈ）、６．３８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．５４（ｍ、１Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５（ｍ、１１Ｈ）、７．４９（ｄ、Ｊ＝１Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６（ｓ、１Ｈ）、９．７０（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４３Ｈ５１Ｃｌ２Ｎ３Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋  ８２５．００  Ｆｏｕｎｄ  ８２４．７９。
【０１４４】
実施例８．（Ｒ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（ＰＨＴＰＰ−１３０４）の製造
【０１４５】
【化１０】
2021532132.tif 000022
【０１４６】
（段階１）４−（ベンジルオキシ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ａ−３）の製造
３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（５００ｇ、３．６２ｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、７Ｌ）に溶かした後、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３、３９５ｇ、４．７１ｍｏｌ）とベンジルブロミド（ＢｎＢｒ、６１９ｇ、３．６２ｍｏｌ）を添加した。８０℃で１６時間ほど攪拌した。塩酸（３Ｌ、１Ｎ）で反応を終了し、エチルアセテート（３Ｌ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層を塩水で洗浄し、残っている水は硫酸ナトリウムで除去した。ろ過して不純物を除去し、濃縮した。濃縮された溶液は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝２０：１〜１０：１）で精製した。その後、白色固体の４−（ベンジルオキシ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ａ−３、２５０ｇ）を得た。
【０１４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．７６（ｓ、１Ｈ）、９．６５（ｓ、１Ｈ）、７．４９（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．４２−７．３４（ｍ、４Ｈ）、７．２９（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２３（ｓ、２Ｈ）。
【０１４８】
（段階２）４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）ベンズアルデヒド（１３０１）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ａ−３、１２０ｇ、５２６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２Ｌ）に溶かした後、３−フェニルプロパン−１−オール（８５．９ｇ、６３１ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、２０６．９ｇ、７８９ｍｍｏｌ）、そしてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、１５９．５ｇ、７８９ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、フィルターして濃縮した。濃縮された溶液は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、白色固体の４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）ベンズアルデヒド（１３０１、１００ｇ）を得た。
【０１４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．８２（ｓ、１Ｈ）、７．５５−７．５０（ｍ、３Ｈ）、７．３８（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、７．３６−７．３４（ｍ、１Ｈ）、７．２９−７．２５（ｍ、３Ｈ）、７．２１−７．１６（ｍ、３Ｈ）、５．２６（ｓ、２Ｈ）、４．０４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．７６（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．０４（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１５０】
（段階３）４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノール（１３０２）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）ベンズアルデヒド（１３０１、１００ｇ、２８９ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、９００ｍＬ）に溶かした後、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ、７４．７ｇ、４３３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液は、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：５）で精製した。その後、灰色を帯びた白色固体の４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノール（１３０２、６６ｇ）を得た。
【０１５１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．００（ｓ、１Ｈ）、７．４４−７．１８（ｍ、１０Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．３９（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．２２（ｄｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９６（ｓ、２Ｈ）、３．９０（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、２．７４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．０１（ｑ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１５２】
（段階４）（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−４）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノール（１３０２、４０ｇ、６０ｍｍｏｌ）をエタノール（ＥｔＯＨ、８００ｍＬ）に溶かした後、水（４０ｍＬ）とポタシウムヒドロキシド（ＫＯＨ、８．０ｇ、１４３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、（Ｒ）−２−（クロロメチル）オキシラン（３３．２ｇ、３５９ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、水（１６００ｍＬ）を添加して反応を終了し、エチルアセテート（１６００ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄した後、残った水を硫酸ナトリウムで除去した。ろ過で不純物を除去した後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、白色固体の（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−４、３０ｇ）を得た。
【０１５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．４６−７．１７（ｍ、１０Ｈ）、６．９３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．６１（ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０２（ｓ、２Ｈ）、４．２３（ｄｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．９７（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．７５（ｄｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ  ａｎｄ  １．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２８（ｍ、１Ｈ）、２．８２（ｄｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ  ａｎｄ  ４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．７３−２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．０１（ｍ、２Ｈ）。
【０１５４】
（段階５）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−４）の製造
２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（Ｌ−３、５ｇ、３３ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、１００ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、４．１ｇ、４０ｍｍｏｌ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ、８．１ｇ、３７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝１：３〜１：１）で精製した。その後、無色液体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−４、４．２ｇ）を得た。
【０１５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）６．７４（ｍ、１Ｈ）、４．５６（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．５１−３．４６（ｍ、６Ｈ）、３．４２−３．３７（ｍ、４Ｈ）、３．０７−３．０３（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｓ、９Ｈ）。
【０１５６】
段階６）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−４）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−４、３００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５ｍＬ）に溶かした後、４−［２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル］フェノール（ＰＨＴＰＰ、５０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、３７７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）、そしてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、２９１ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終わった後、反応を終了しろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００：１〜５０：１）で精製した。その後、黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−４、２００ｍｇ）を得た。
【０１５７】
（段階７）２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（ＴＬ−５）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−４、２００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート（１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終わった後、反応を終了し溶液をろ過した後、濃縮した。濃縮された溶液は精製過程を経て、その後、黄色固体の２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（ＴＬ−５、１２０ｍｇ）を得た。
【０１５８】
（段階８）（Ｒ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（ＰＨＴＰＰ−１３０４）の製造
２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−アミン（ＴＬ−５、１２０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−４、１１７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終わった後、終了しろ過して濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色固体の（Ｒ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（ＰＨＴＰＰ−１３０４、１５ｍｇ）を得た。
【０１５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）１．９９（ｍ、２Ｈ）、２．７３（ｍ、６Ｈ）、３．５５（ｍ、８Ｈ）、３．８０（ｍ、５Ｈ）、３．９４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、４．９９（ｓ、２Ｈ）、６．４０（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．５５（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１８（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、３Ｈ）、７．２７（ｄｄ、Ｊ＝４Ｈｚ  ａｎｄ  ４Ｈｚ、３Ｈ）、７．３５（ｍ、４Ｈ）、７．４４（ｍ、５Ｈ）７．６１（ｍ、２Ｈ）、８．０７（ｓ、１Ｈ）、８．４２（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ５１Ｈ５０Ｆ６Ｎ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋  ９４５．１０  Ｆｏｕｎｄ  ９４４．９７。
【０１６０】
実施例９．（Ｒ，Ｚ）−４−（（２−（２−（２−（（３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ−２２０４）の製造
【０１６１】
【化１１】
2021532132.tif 000023
【０１６２】
（段階１）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−１）の製造
２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタンアミン（Ｌ−２、５ｇ、３３．７ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、１００ｍＬ）に溶かした後、ジ−ｔｅｒｔ―ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ、７．３６ｇ、３３．７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：３〜１：１）で精製した。その後、無色液体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−２、２．２ｇ）を得た。
【０１６３】
（段階２）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−（２−（２−（２−（５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−４−イリデン）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−６）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−６、３００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、５ｍＬ）に溶かした後、５，６，７−トリヒドロキシフラボン（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ、３２６ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−（２−（２−（２−（（５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−４−イリデン）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−６、１２０ｍｇ）を得た。
【０１６４】
（段階３）（Ｚ）−４−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（ＴＬ−７）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−（２−（２−（２−（（５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−４−イリデン）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−６、１２０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、２ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート（１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、エチルアセテートで抽出した後、ろ過して濃縮した。その後、黄色固体の（Ｚ）−４−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（ＴＬ−７、９０ｍｇ）を得た。
【０１６５】
（段階４）（Ｒ，Ｚ）−４−（２−（２−（２−（（３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ−２２０４）の製造
（Ｚ）−４−（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（ＴＬ−７、９０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、（Ｒ）−２−（（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−２、８７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色固体の（Ｒ，Ｚ）−４−（（２−（２−（２−（（３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ−２２０４、１２ｍｇ）を得た。
【０１６６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）２．９１（ｍ、７Ｈ）、３．３５（ｍ、１１Ｈ）、３．８０（ｍ、３Ｈ）、３．９６（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、４．０８（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、６．３２（ｄｄ、Ｊ＝４Ｈｚ  ａｎｄ  ４Ｈｚ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、６．７６（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｍ、１０Ｈ）、７．５８（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、３Ｈ）、７．９９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、８．４２（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４６Ｈ５０Ｎ２Ｏ１０［Ｍ＋Ｈ］＋  ７９１．２０  Ｆｏｕｎｄ  ７９０．９１
【０１６７】
実施例１０．（Ｅ）−５−（４−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）スチリル）ベンゼン−１，３−ジオール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ−１１０５）の製造
【０１６８】
【化１２】
2021532132.tif 000024
【０１６９】
（段階１）２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（ＡＬ−５）の製造
３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、２５ｇ、７８．６ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２５０ｍＬ）に溶かした後、２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エタノール（Ｌ−３、１１．７ｇ、７８．６ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で６時間ほど攪拌した。室温に冷却した後、追加的に水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４、３ｇ、７８．６ｍｍｏｌ）を添加した後、５０℃で一晩中攪拌した。水を添加して反応を終了し、エチルアセテート（ＥｔＯＡｃ、５０ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された化合物は塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで残っている水を除去した。ろ過後、溶液を濃縮し、濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝２０：１）で精製した。その後、黄色液体の２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（ＡＬ−５、１３ｇ）を得た。
【０１７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．４６−７．３０（ｍ、１０Ｈ）、７．０６（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．１０（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、４Ｈ）、３．６１（ｓ、２Ｈ）、３．５０−３．３９（ｍ、１１Ｈ）、２．５８（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ２７Ｈ３３Ｎ５Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋  ４５２．１０  Ｆｏｕｎｄ  ４５１．５６
【０１７１】
（段階２）ｔｅｒｔ−ブチル（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＬ−６）の製造
２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エタン−１−オール（ＡＬ−５、５００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、６ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、１６８ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ２Ｏ、２９０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：５〜１：１）で精製した。その後、無色のｔｅｒｔ−ブチル（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＬ−６、５２０ｍｇ）を得た。
【０１７２】
（段階３）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｅ）−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−（４−（３，５−ジヒドロキシスチリル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＴＬ−１）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＬ−６、３００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５ｍＬ）に溶かした後、レスベラトロール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ、１４９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、２１４ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、そしてジイソプロピルアゾジカルボキシレートＤＩＡＤ（１６５ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１００：１〜５０：１）で精製した。その後、黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル（Ｅ）−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−（４−（３，５−ジヒドロキシスチリル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＴＬ−１、２００ｍｇ）を得た。
【０１７３】
（段階４）（Ｅ）−５−（４−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）スチリル）ベンゼン−１，３−ジオール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ−１１０５）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｅ）−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）（２−（２−（２−（４−（３，５−ジヒドロキシスチリル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＡＴＬ−１、２００ｍｇ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート（１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液は高分解能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、白色固体の（Ｅ）−５−（４−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）スチリル）ベンゼン−１，３−ジオール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ−１１０５、１５ｍｇ）を得た。
【０１７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）２．５８（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４５（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、２Ｈ）、３．５７（ｍ、４Ｈ）、３．７３（ｍ、２Ｈ）、４．０６（ｍ、２Ｈ）、５．０７（ｍ、４Ｈ）、６．１２（ｍ、１Ｈ）、６．４０（ｍ、２Ｈ）、６．９０（ｍ、７Ｈ）、７．３９（ｍ、１２Ｈ）、９．２０（ｓ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４１Ｈ４３ＮＯ７［Ｍ＋Ｈ］＋  ６６２．１０  Ｆｏｕｎｄ  ６６１．８０。
【０１７５】
実施例１１．（Ｒ）−２−（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）−１４−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザテトラデカン−１３−オール（ＢＴＡ−１−１１０４）の製造
【０１７６】
【化１３】
2021532132.tif 000025
【０１７７】
（段階１）２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル−メタンスルホネート（Ｌ−５）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−４、１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、１５ｍＬ）に溶かした後、トリエチルアミン（ＴＥＡ、０．４８６ｇ、４．８ｍｍｏｌ）とメタンスルホニルクロライド（ＭｓＣｌ、０．５０４ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：５〜１：１）で精製した。その後、無色液体の２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル−メタンスルホネート（Ｌ−５、１ｇ）を得た。
【０１７８】
（段階２）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）（メチル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−８）の製造
２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル−メタンスルホネート（Ｌ−５、３００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、５ｍＬ）に溶かした後、２−（４’−メチルアミノフェニル）ベンゾチアゾール（ＢＴＡ−１、２２０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）とポタシウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ｔ−ＢｕＯＫ、１５４ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を添加した。１２０℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、ろ過後、濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色液体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）（メチル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−８、１８０ｍｇ）を得た。
【０１７９】
（段階３）Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアニリン（ＴＬ−９）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）（メチル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−８、１８０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート（１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出してろ過後、濃縮した。その後、黄色固体のＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアニリン（ＴＬ−９、１２０ｍｇ）を得た。
【０１８０】
（段階４）（Ｒ）−２−（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）−１４−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザテトラデカン−１３−オール（ＢＴＡ−１−１１０４）の製造
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−Ｎ−メチルアニリン（ＴＬ−９、１２０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、（Ｒ）−２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）メチル）オキシラン（１１０３、１１７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出してろ過後、濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色固体の（Ｒ）−２−（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）−１４−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザテトラデカン−１３−オール（ＢＴＡ−１−１１０４、８ｍｇ）を得た。
【０１８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）１．１５（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、３Ｈ）、１．２３（ｓ、１Ｈ）、２．６７（ｍ、４Ｈ）、３．５０（ｍ、１１Ｈ）、３．８１（ｍ、４Ｈ）、５．０１（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｓ、２Ｈ）、６．２７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．４１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．６９（ｍ、３Ｈ）、６．９１（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３８（ｍ、１２Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．８９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、８．４０（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ４３Ｈ４７Ｎ３Ｏ６Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋  ７３４．１０  Ｆｏｕｎｄ  ７３３．９２。
【０１８２】
実施例１２．（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３−（ベンジルオキシ）−４−フェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ−１２０４）の製造
【０１８３】
【化１４】
2021532132.tif 000026
【０１８４】
（段階１）４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（Ａ−３、５０ｇ、２１９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１Ｌ）に溶かした後、２−フェニルエタノール（３２．１ｇ、２６３ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、８６．２ｇ、３２９ｍｍｏｌ）、そしてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、６６．４ｇ、３２９ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、白色固体の４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１、２５ｇ）を得た。
【０１８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．８２（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  ２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４３−７．４０（ｍ、５Ｈ）、７．３７−７．３２（ｍ、３Ｈ）、７．２８−７．２１（ｍ、４Ｈ）、５．２１（ｓ、２Ｈ）、４．２６（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．０５（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）
【０１８６】
（段階２）４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノール（１２０２）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１、５０ｇ、１５０ｍｍｏｌ）をメチレンクロライド（ＤＣＭ、５００ｍＬ）に溶かした後、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ、３９ｇ、２２５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：５）で精製した。その後、灰色を帯びた白色固体の４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノール（１２０２、３２ｇ）を得た。
【０１８７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．００（ｓ、１Ｈ）、７．３６−７．２０（ｍ、１０Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．２２（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．８６（ｓ、２Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．０２（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）
【０１８８】
（段階３）（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（１２０３）の製造
４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノール（１２０３，４０ｇ、６４ｍｍｏｌ）をエタノール（ＥｔＯＨ、８００ｍＬ）に溶かした後、水（４０ｍＬ）とポタシウムヒドロキシド（ＫＯＨ、８．２ｇ、１４６ｍｍｏｌ）を添加した。その後、（Ｒ）−２−（クロロメチル）オキシラン（３４．６ｇ、３７４ｍｍｏｌ）を添加して室温で１６時間ほど追加的に攪拌した。水（１６００ｍＬ）を添加して反応を終了させ、エチルアセテート（１６００ｍＬ×３）で抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄し、残った水は硫酸ナトリウムで除去した。ろ過して不純物を濾し、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、白色固体の（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（１２０３、３４ｇ）を得た。
【０１８９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．３８−７．２０（ｍ、１０Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、６．４１（ｄｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｓ、２Ｈ）、４．２５−４．１７（ｍ、３Ｈ）、３．７５（ｄｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ  ａｎｄ  ６．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．２８（ｍ、１Ｈ）、３．０３（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８１（ｔ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．６７（ｄｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）
【０１９０】
（段階４）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（（１Ｅ，６Ｅ）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３，５−ジオキソヘプタ−１，６−ジエン−１−イル）−２−メトキシフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１０）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（Ｌ−４、３００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５ｍＬ）に溶かした後、クルクミン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ、４４２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、３７７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）、そしてジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、２９１ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終わった後、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（メチレンクロライド／メタノール＝１００：１〜５０：１）で精製した。その後、黄色固体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（（１Ｅ，６Ｅ）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３，５−ジオキソヘプタ−１，６−ジエン−１−イル）−２−メトキシフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１０、２００ｍｇ）を得た。
【０１９１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）９．８７（ｂｒｓ、１Ｈ）、７．５７（ｄｄ、Ｊ＝１６Ｈｚ  ａｎｄ  ４Ｈｚ、２Ｈ）、３．３４（ｄｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ  ａｎｄ  １．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  １．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１６（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  １．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５−６．７４（ｍ、４Ｈ）、６．０８（ｓ、１Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．８３（ｍ、６Ｈ）、３．７５（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５２（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４０−３．３８（ｍ、４Ｈ）、３．０６（ｑＪ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）
【０１９２】
（段階５）（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（ＴＬ−１１）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（４−（（１Ｅ，６Ｅ）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３，５−ジオキソヘプタ−１，６−ジエン−１−イル）−２−メトキシフェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１０、２００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終わった後、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。その後、黄色固体の（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（ＴＬ−１１、１２０ｍｇ）を得た。
【０１９３】
（段階６）（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３−（ベンジルオキシ）−４−フェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ−１２０４）の製造
（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（ＴＬ−１１、１２０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、（Ｒ）−２−（（４−（ベンジルオキシ）−３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（１２０３、９０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、黄色固体の（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３−（ベンジルオキシ）−４−フェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン（Ｃｕｒｃｕｍｉｎ−１２０４、１２ｍｇ）を得た。
【０１９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６＋Ｄ２Ｏ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）２．８１（ｍ、１Ｈ）、２．９２（ｍ、３Ｈ）、３．００（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、９Ｈ）、３．８０（ｍ、９Ｈ）、３．９７（ｂ、２Ｈ）、４．０９（ｍ、２Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．８８（ｓ、２Ｈ）、６．３６（ｄｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ  ａｎｄ  ２．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．５６（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．７９（ｍ、４Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｍ、１４Ｈ）、７．５３（ｄ、Ｊ＝１６Ｈｚ、２Ｈ）、８．３３（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ５１Ｈ５７ＮＯ１２［Ｍ］＋  ８７６．１０  Ｆｏｕｎｄ  ８７６．０１
【０１９５】
実施例１３．（Ｒ）−１−（３−フェネトキシフェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ−２０４）の製造
【０１９６】
【化１５】
2021532132.tif 000027
【０１９７】
（段階１）３−フェネトキシフェノール（Ａ−５）の製造
レゾルシノール（５０ｇ、０．４５ｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、５００ｍＬ）に溶かした後、ポタシウムカーボネート（Ｋ２ＣＯ３、１１２．５ｇ、０．８１ｍｏｌ）と（２−ブロモエチル）ベンゼン（８３．２ｇ、０．４５ｍｏｌ）を添加した。６０℃で１０時間ほど攪拌した。反応が終わった後、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／エチルアセテート＝５：１）で精製した。その後、黄色液体の３−フェネトキシフェノール（Ａ−５、２５ｇ）を得た。
【０１９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．３１−７．２３（ｍ、５Ｈ）、７．１１（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．５０−６．３９（ｍ、３Ｈ）、４．７４（ｓ、１Ｈ）、４．１４（ｍ、２Ｈ）、３．０８（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）
【０１９９】
（段階２）（Ｒ）−２−（（３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−６）の製造
３−フェネトキシフェノール（Ａ−５、２５ｇ、１１６．８ｍｍｏｌ）をエタノール（ＥｔＯＨ、５００ｍＬ）に溶かした後、水（２５ｍＬ）とポタシウムヒドロキシド（ＫＯＨ、１１．１ｇ、２７８．３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、（Ｒ）−２−（クロロメチル）オキシラン（６４．６ｇ、６９８．８ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で１６時間ほど攪拌した。水（１０００ｍＬ）を入れて反応を終了し、エチルアセテート（５００ｍＬ×３）で化合物を抽出した。抽出された有機溶媒層は塩水で洗浄し、残った水は硫酸ナトリウムで除去した。ろ過して不純物を濾し、濃縮した。濃縮された溶液はシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィー（エチルアセテート／石油エーテル＝１：１５〜１：１０）で精製した。その後、黄色液体の（Ｒ）−２−（（３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−６、１８ｇ）を得た。
【０２００】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）７．３２−７．２８（ｍ、４Ｈ）、７．２４−７．１４（ｍ、２Ｈ）、６．５２（ｍ、３Ｈ）、４．２９（ｄｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ  ａｎｄ  ２Ｈｚ、１Ｈ）、４．１６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７９（ｍ、１Ｈ）、３．３４（ｓ、１Ｈ）、３．０１（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、２．８２（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９−２．６７（ｍ、１Ｈ）
【０２０１】
（段階３）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１２）の製造
２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル−メタンスルホネート（Ｌ−５、３００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、５ｍＬ）に溶かした後、リルゾール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ、２１４ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）とポタシウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ｔ−ＢｕＯＫ、１５４ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を添加した。１２０℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終わった後、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、薄い黄色液体のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１２、１８０ｍｇ）を得た。
【０２０２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）８．２７−８．２５（ｍ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ  ａｎｄ  １．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７４（ｍ、１Ｈ）、３．６３−３．５１（ｍ、１２Ｈ）、３．０５（ｑ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、１．３６（ｓ、１１Ｈ）。
【０２０３】
（段階４）Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（ＴＬ−１３）の製造
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（ＴＬ−１２、１８０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）をエチルアセテート（ＥＡ、４ｍＬ）に溶かした後、塩酸（ｇ）／エチルアセテート１ｍＬ）を添加した。室温で２時間ほど攪拌した。反応が終了すれば、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。その後、黄色固体のＮ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（ＴＬ−１３、１２０ｍｇ）を得た。
【０２０４】
（段階５）（Ｒ）−１−（３−フェネトキシフェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ−２０４）の製造
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（ＴＬ−１３、１２０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ、２ｍＬ）に溶かした後、（Ｒ）−２−（（３−フェネトキシフェノキシ）メチル）オキシラン（Ａ−６、８９ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。６５℃で１６時間ほど攪拌した。反応が終わった後、化合物を抽出した後、ろ過して濃縮した。濃縮された溶液は分取高性能液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ）で精製した。その後、無色液体の（Ｒ）−１−（３−フェネトキシフェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール（Ｒｉｌｕｚｏｌｅ−２０４、１５ｍｇ）を得た。
【０２０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．６０（ｍ、４Ｈ）、３．００（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５２（ｍ、１０Ｈ）、３．８５（ｍ、３Ｈ）、４．１５（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、６．４８（ｄｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ  ａｎｄ  ８Ｈｚ、３Ｈ）、７．１８（ｍ、３Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、４Ｈ）、７．４３（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、７．７５（ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  Ｃａｌｃｄ  ｍ／ｚ  ｆｏｒ  Ｃ３１Ｈ３６Ｆ３Ｎ３Ｏ６Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋  ６３６．１０  Ｆｏｕｎｄ  ６３５．７０
【０２０６】
実験例１．免疫ブロッティングによる培養細胞内ｐ６２タンパク質オリゴマーと活性評価
前記化合物１−１３（実施例１−１３）のｐ６２タンパク質オリゴマー化活性効能を評価するためにヒト胎児腎由来細胞のＨＥＫ２９３細胞株を取り合わせた。本化合物のうちの実施例の化合物とｐ６２リガンド化合物であるＹＴＫ−１１０５化合物を処理し、対照群としてはＤＭＳＯを処理した。
【０２０７】
これら化合物の処理による細胞内ｐ６２タンパク質活性化およびオリゴマー化を測定するために、１００パイディッシュにそれぞれの細胞を分注した。細胞がプレートの表面に完全に付着されるように２４時間の追加的な培養後、細胞を取り合わせ、各サンプルに１００ｕｌの溶解バッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭ  ＮａＦ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５ｍＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ａｐｒｏｔｅｉｎｉｎ）を注入し、細胞を溶解させた。測定された総タンパク質の濃度を基盤にして各サンプルに常温で２時間試験化合物を処理した後、サンプルバッファーを追加して９５℃で１０分間反応させた。反応を終了したサンプルから２５ｕｌを取ってアクリルアミドゲルの各ウェルに分注した後、免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。結果は、図２ａ−２ｃに示した。
【０２０８】
図２ａ〜２ｃから確認できるように、本発明によるオートタックキメラ化合物を処理した場合、ｐ６２リガンド化合物ＹＴＫ−１１０５と同様に、対照群のＤＭＳＯ処理を行った場合とは異なり、ｐ６２タンパク質の単位体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の減少と同時にオリゴマー（ｏｌｉｇｏｍｅｒ）と高分子量凝集体（ｈｉｇｈ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）の増加を確認することができた。
【０２０９】
実験例２．免疫ブロッティングによる培養細胞内標的タンパク質分解評価
前記化合物（実施例１−１３）の標的タンパク質分解効能を評価するためにターゲットタンパク質が本来発現される細胞株（ＭＣＦ７、ＮＴＥＲＡ−２、ＡＣＨＮ、Ｕ８７−ＭＧ、ＬＮＣａＰ、ＨＥＫ２９３Ｔ）や遺伝子組換え細胞株（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ−ｔａｕ、ＨｅＬａ−ＨｔｔＱ９７、ＰＣ１２−ａ−ｓｙｎＡ３０Ｐ）を１２−ウェルプレートに培養し、該当するオートタックキメラ化合物を濃度別に処理した後、実験例１のように免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。結果は、図３ａ、３ｂおよび３ｃに示した。
【０２１０】
図３ａ、３ｂおよび３ｃから確認できるように、本発明によるオートタックキメラ化合物を処理した場合、化合物の濃度によって標的タンパク質量が漸増的に減少するのを確認することができた。
【０２１１】
実験例３．免疫ブロッティングによる培養細胞内標的タンパク質分解機構評価
前記化合物（実施例１−１３）の標的タンパク質分解機構がオートファジーで媒介されるかを評価するためにターゲットタンパク質が本来発現される細胞株や遺伝子組換え細胞株を１２−ウェルプレートに培養し、該当するオートタックキメラ化合物２．５ｕＭを単独的に、でなければオートファジー−リソソーム経路の抑制剤であるｈｙｄｒｘｈｏｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ（ＨＣＱ）１０ｕＭと共に、処理した後、実験例１のように免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。結果は、図４ａおよび４ｂに示した。
【０２１２】
図４ａおよび４ｂから確認できるように、本発明によるオートタックキメラ化合物を単独的に処理した場合、標的タンパク質量が減少し、オートファジー−リソソーム経路抑制剤であるＨＣＱと同時に処理した場合、減少した標的タンパク質量が再び増加するのを確認することができた。
【０２１３】
実験例４．免疫ブロッティングによる培養細胞内標的タンパク質分解効能比較評価
前記化合物（実施例１−１３）の標的タンパク質分解効能がキメラ構成部分のｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンドの標的タンパク質分解効能より優れるかを評価するためにターゲットタンパク質が本来発現される細胞株や遺伝子組換え細胞株を１２−ウェルプレートに培養し、該当するオートタックキメラ化合物、ｐ６２リガンド、または標的タンパク質リガンドを処理した後、実験例１のように免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。結果は、図５ａ〜ｃに示した。
【０２１４】
図５ａ〜ｃから確認できるように、本発明によるオートタックキメラ化合物処理した後、標的タンパク質量がｐ６２リガンドや標的タンパク質リガンド処理した後より非常に減少するのを確認することができた。
【０２１５】
実験例５．免疫蛍光染色法および共焦点顕微鏡による培養細胞内標的タンパク質をｐ６２で媒介されるオートファジー伝達評価
前記化合物（実施例１−１３）の標的タンパク質がｐ６２で媒介されるオートファジーに伝達される効能を評価するためにｐ６２とそれぞれ標的タンパク質をマーカとして使用して免疫蛍光染色法を行った。免疫蛍光染色のために２４−ウェルプレートにカバーグラスを位置させてターゲットタンパク質が本来発現される細胞株や遺伝子組換え細胞株を培養し、細胞を分注して２４時間培養した後、２．５ｕＭの本発明による新規オートタックキメラリガンドを処理した。化合物の作用のために、２４時間追加的に培養した後、培地を除去し、常温でホルムアルデヒドを用いて細胞を固定した。非特異的染色を防止するために、細胞を遮断溶液に常温で１時間反応させた後、遮断溶液を用いて一定比率に希釈されたｐ６２抗体と標的タンパク質抗体を処理した後、常温で１時間反応させた。抗体処理が完了された細胞はＰＢＳで３回洗浄し、遮断溶液を用いて塩素由来二次抗体を一定比率で希釈した後、常温で３０分反応させた。再びＰＢＳで３回洗浄し、細胞内核染色のためにＤＡＰＩ染色後、共焦点顕微鏡によってｐ６２もＬＣ３の発現程度、細胞内斑点形成および細胞内共存する程度を観察した。結果は、図６ａ〜ｃに示した。免疫蛍光染色法は３回以上の独立的な実験から代表的なものを図式化した。
【０２１６】
図６ａ〜ｃから確認できるように、本発明によるオートタックキメラ化合物処理した後、ｐ６２タンパク質の細胞内斑点形成、標的タンパク質の細胞内斑点形成およびこれらの位置共存性増加するのを確認することができた。
【図１】
2021532132.tif 000034
【図２ａ】
2021532132.tif 000035
【図２ｂ】
2021532132.tif 000036
【図２ｃ】
2021532132.tif 000037
【図３ａ】
2021532132.tif 000038
【図３ｂ】
2021532132.tif 000039
【図３ｃ】
2021532132.tif 000040
【図４ａ】
2021532132.tif 000041
【図４ｂ】
2021532132.tif 000042
【図５ａ】
2021532132.tif 000043
【図５ｂ】
2021532132.tif 000044
【図５ｃ】
2021532132.tif 000045
【図６ａ】
2021532132.tif 000046
【図６ｂ】
2021532132.tif 000047
【図６ｃ】
2021532132.tif 000048
【手続補正書】
【提出日】令和3年8月30日(2021.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ６２リガンドを含む化合物であって、
前記ｐ６２リガンドは、ターゲット結合リガンド（ＴＢＬ）にリンカーを介して結合している、化合物。
【請求項２】
前記ｐ６２リガンドは、下記化学式２の構造またはその誘導体構造を有するものである、請求項１に記載の化合物。
【化２】
2021532132.tif 000049
Ｗは、Ｃ６−Ｃ１０アリールであり；
Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合され、この時、ｎ１は０〜１の整数であり；
ｎ２は、１〜４の整数であり；
ｍは、０〜２の整数であり；
ＲａはＲ１または−ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ３は、１〜６の整数であり；
Ｒｂは、−ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換されるか；またはヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ニトロ、アミノ、（Ｃ１−４アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１−４アルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ４は、１〜６の整数であり；
Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−ＣＨ（Ｒ３）−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ（ＣＯＯ−Ｒ４）−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であり、
ｎ５は、２〜４の整数であり、
ｎ６は、１〜４の整数であり、
Ｒ３は、水素、またはＣ１−４アルキルであり、
Ｒ４は、Ｃ１−４アルキルであり、
Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシまたはＣ１−４アルキルである。
【請求項３】
前記リンカーは、−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−、または−Ｑ−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−Ｐ−の構造を有し、
この時、Ｑは、ターゲット結合リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−Ｏ−、＝Ｎ−−Ｎ（ＣＨ３）−を含み；
Ｐは、ｐ６２リガンドとの結合によって変更された部分である−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−を含み；
ｘは、０〜４の整数であり；
ｙは、０〜３の整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｗは、フェニルであり；
Ｌは、−（ＣＨ２）ｎ１−または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−であり、但し、前記−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ２−ＣＨ（ＯＨ）−中のＯがベンゼン環に結合され、この時、ｎ１は０〜１の整数であり；
ｎ２は、１〜２の整数であり；
ｍは、０〜２の整数であり；
Ｒａは、水素または−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｒ’１であり、
Ｒ’１は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、
ｎ３は、１〜４の整数であり；
Ｒｂは、ヒドロキシまたは−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ４−Ｒ’２であり、
Ｒ’２は、非置換されるか；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、
ｎ４は、１〜４の整数であり；
Ｒｃは、−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ５−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｎ５−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ５−ＯＨ、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ６−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ６−ＣＯＮＨ２であり、
ｎ５は、２〜３の整数であり、
ｎ６は、１〜２の整数であり、
Ｒｄは、水素、ハロゲン、Ｃ１−２アルコキシまたはＣ１−２アルキルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｐとｐ６２リガンドとの結合は、−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、または−ＣＯＯ−である、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
前記ターゲット結合リガンドは、ターゲット疾病誘発タンパク質、ミスフォールドしたタンパク質、小器官、または、それらの凝集体に選択的に結合する請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
下記化合物１〜１３からなる群より選択される化合物で表される、請求項１に記載の化合物。
１）（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド；
２）（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチルシクロヘキス−１−エン−１−イル）ノナ−２，４，６，８−テトラエンアミド；
３）（Ｒ）−Ｎ−（１５−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−１４−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサ−１２−アザペンタデシル）−４−フェニルブタンアミド；
４）Ｎ−（１−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェニル）−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−４−フェニルブタンアミド；
５）３−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（２−（２−（２−（（３−（（４−フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アニリン；
６）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−メトキシ−４−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−メチル−３−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）オキシラン−２−イル）−１−オキサスピロ［２．５］オクタン−６−イル（１３Ｅ，１５Ｅ，１７Ｅ，１９Ｅ）−１−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−１２−オキソ−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザヘニコサ−１３，１５，１７，１９−テトラエン−２１−オエート；
７）３−（３，５−ジクロロフェニル）−５−（（Ｒ）−１５−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−１４−ヒドロキシ−６，９−ジオキサ−３，１２−ジアザペンタデシル）−５−メチルオキサゾリジン−２，４−ジオン；
８）（Ｒ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−３−（３−フェニルプロポキシ）フェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（４−（２−フェニル−５，７−ビス（トリフルオロメチル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール；
９）（Ｒ，Ｚ）−４−（（２−（２−（２−（（３−（３，４−ジフェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）イミノ）−２−フェニル−４Ｈ−クロメン−５，６，７−トリオール；
１０）（Ｅ）−５−（４−（２−（２−（２−（（３，４−ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）スチリル）ベンゼン−１，３−ジオール；
１１）（Ｒ）−２−（４−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）フェニル）−１４−（３，４−ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）−５，８−ジオキサ−２，１１−ジアザテトラデカン−１３−オール；
１２）（１Ｅ，６Ｅ）−１−（４−（２−（２−（２−（（（Ｒ）−３−（３−（ベンジルオキシ）−４−フェネトキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）−３−メトキシフェニル）−７−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）ヘプタ−１，６−ジエン−３，５−ジオン；および、
１３）（Ｒ）−１−（３−フェネトキシフェノキシ）−３−（（２−（２−（２−（（６−（トリフルオロメトキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エチル）アミノ）プロパン−２−オール。
【請求項８】
請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、疾患の予防、改善または治療用の薬学的組成物。
【請求項９】
前記疾患は、癌、タンパク質異常疾患（ｐｒｏｔｅｉｎｏｐｈａｇｙ）、希少難治性疾患または遺伝的疾病である、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記疾患を誘発する原因タンパク質を直接除去することを特徴とする、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記タンパク質異常疾患は、神経変性疾患、α１−アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜炎、２型糖尿病または嚢胞性線維症である、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ  ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト−ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ  Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）、脊髄小脳変性症、その他、ポリ−Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身性アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、注射−局所化アミロイド症、ベータ−２ミクログロブリンアミロイド症、遺伝性非−神経病アミロイド症、アレキサンダー病およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群より選択される１種以上である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、疾病誘発病因タンパク質およびミスフォールドしたタンパク質のオートファジー伝達または分解用の薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、標的タンパク質の分解を増大させるための薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、小器官および構造物の分解を増大させるための薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、細胞内に侵入したウイルスおよびバクテリアの分解を増大させるための薬学的組成物。
【請求項１７】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、薬物や低分子化合物をオートファジーおよびリソソームに伝達するための薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、ｐ６２の自己オリゴマー化およびオートファジー活性化のための薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、細胞内特定タンパク質をｐ６２に連結させてオートファジーに伝達することによってリソソームによる分解を増大させるための薬学的組成物。
【請求項２０】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、前記化合物が、細胞膜に露出されたタンパク質に特異的に結合する治療用抗体に連結した薬物を用いて、前記薬物をエンドソーム（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）を通じてリソソームに伝達するための薬学的組成物。
【国際調査報告】
2021532132.tif 000050
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