(57)【要約】  フコースに対する硫酸のモル比が約１．２以上、約１．８１以上及び／若しくは約１．９以上、並びに／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．１以上、約１．２以上及び／若しくは約１．３以上である組成物中の治療上有効量であり医学的に許容しうるフカンを含む高硫酸化改変フカン。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤と、フコースに対する硫酸（sulfate）のモル比が約１．２以上、及び／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．１以上である、治療上有効量の高度硫酸化フカンとを含む、医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２】
前記フコースに対する硫酸のモル比が約１．８１以上、及び／又は前記フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．２以上である、請求項１に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３】
前記フコースに対する硫酸のモル比が約１．９以上、及び／又は前記フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．３以上である、請求項１に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項４】
前記フコースに対する硫酸のモル比が１．８１〜２．８５である、請求項１に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項５】
前記フコースに対する硫酸のモル比が１．３０〜２．２０である、請求項１に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項６】
有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
約３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線に対する定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を前記フカンが有する、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項７】
前記フカンが１００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項６に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項８】
前記フカンは、分布の９０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を有する、請求項６に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項９】
前記フカンが２００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項６のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１０】
前記フカンが５００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項６のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１１】
前記フカンは、分布の９０％ｗ／ｗ以上が５００ｋＤａより大きい分子量分布を有する、請求項６に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１２】
前記フカンの硫酸化レベルが１４％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１３】
前記フカンの硫酸化レベルが３０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１４】
前記フカンの硫酸化レベルが３５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１５】
前記フカンの硫酸化レベルが４０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１６】
前記フカンの硫酸化レベルが４５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１７】
前記フカンの硫酸化レベルが４０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１８】
前記フカンの硫酸化レベルが４５％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項１９】
総炭水化物含有率が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２０】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ以上である、請求項１９に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２１】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約５０％ｗ／ｗ以上である、請求項１９に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２２】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約７０％ｗ／ｗ以上である、請求項１９に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２３】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約８０％ｗ／ｗ以上である、請求項１９に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２４】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約９０％ｗ／ｗ以上である、請求項１９１５に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２５】
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約９５％ｗ／ｗ以上である、請求項１９に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２６】
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約６０％ｗ／ｗ未満である、請求項１９１５に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２７】
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約２％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗである、請求項１９１５に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２８】
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約１０％ｗ／ｗ未満である、請求項１９１５に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項２９】
グルクロン酸、マンノース、ラムノース及びキシロースの含有率の総量が前記総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ未満である、請求項１９１５に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３０】
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約４ｃＰ〜５０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項２９のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３１】
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約１０ｃＰ〜４０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項２９のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３２】
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項２９のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３３】
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、透明無色なものである、請求項１〜請求項３２のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
【請求項３４】
動物における線維性癒着を処置する方法であって、前記線維性癒着を阻害するために請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法。
【請求項３５】
請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択することを含む、動物における線維性癒着の処置のための剤。
【請求項３６】
線維性癒着を阻害するために請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤。
【請求項３７】
線維性癒着のための治療薬の製造のための、請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物の使用。
【請求項３８】
動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法。
【請求項３９】
前記治療上有効量が約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記治療上有効量が約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記治療上有効量が約１．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療上有効量が約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記状態又は前記疾患が、前記動物における標的部位における線維性癒着であり、前記投与が、前記標的部位に前記治療上有効量を投与することを含む、請求項３７又は請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
請求項１〜請求項３３のいずれか一項に記載の高度硫酸化フカンを約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
【請求項４５】
前記高度硫酸化フカンを約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ含む請求項４４に記載の医療組成物。
【請求項４６】
前記高度硫酸化フカンを約２．５ｍｇ／ｍＬ含む請求項４４に記載の医療組成物。
【請求項４７】
前記医療組成物が医療機器である、請求項４４〜請求項４６のいずれか一項に記載の医療組成物。
【請求項４８】
前記医療組成物が液体医療機器である、請求項４４〜請求項４６のいずれか一項に記載の医療組成物。
【請求項４９】
前記医療組成物が医薬組成物である、請求項４４〜請求項４６のいずれか一項に記載の医療組成物。
【請求項５０】
前記医療組成物が液体医薬組成物である、請求項４４〜請求項４６のいずれか一項に記載の医療組成物。
【請求項５１】
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、請求項４４〜請求項５０のいずれか一項に記載の医療組成物。
【請求項５２】
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
【請求項５３】
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
【請求項５４】
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
【請求項５５】
動物における疾患又は状態を処置するための約２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
【請求項５６】
患者における標的部位に請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む、前記患者における線維性癒着を処置するための方法。
【請求項５７】
患者における選択された疾患又は状態を処置するための方法であって、前記選択された疾患もしくは状態を含むか又は前記選択された疾患もしくは状態に罹患しやすいといえる（reasonably susceptible）患者における選択された標的部位を同定すること、及びその後に、前記患者における前記選択された標的部位に請求項４４〜請求項５１のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む方法。
【請求項５８】
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記選択された標的部位が手術部位であり、前記投与がａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）前記手術創を閉じた後、のうち少なくとも１つにおいて行われる、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記投与が手術後且つ前記手術創を閉じる前に行われる、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記投与が３分間未満かかる、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記投与が２分間未満かかる、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記投与が１分間未満かかる、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
選択された前記標的部位が、病変、擦過傷及び傷害部位のうち少なくとも１つである、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６５】
選択された前記標的部位が、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つである、請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６６】
出発フカン組成物の硫酸レベルを低下させて改変フカンを得る方法であって、
前記出発フカン組成物に塩基を添加して反応混合物を生成すること；及び
前記反応混合物を反応抑制剤で処理して前記塩基を不活性化し、前記改変フカン及び脱硫酸化残余分子を生成すること、ここで前記改変フカンの数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量は前記出発フカン組成物の数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量それぞれの約５％変動幅以内である、
を含む方法。
【請求項６７】
前記出発フカン組成物が出発溶液において提供される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記塩基を前記出発フカン組成物に添加することが、前記溶液を加熱することをさらに含む、請求項６６〜請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記塩基がアルカリ金属、アルカリ土類金属及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含む、請求項６６〜請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記反応抑制剤が酸、塩及び水のうち少なくとも１つを含む、請求項６６〜請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記改変フカンが、前記出発フカン組成物より少ない硫酸を含む、請求項６６〜請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
出発フカン組成物の硫酸レベルを増加させて改変フカンを生成させる方法であって、
前記出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解させて非水溶液を生成すること；
硫酸化剤を前記非水溶液に添加して反応混合物を生成すること；及び
反応抑制剤を前記反応混合物に添加して、溶液中で改変フカン及び硫酸化残余分子を生成すること、
を含む方法。
【請求項７３】
前記出発フカン組成物中の硫酸基をプロトン化して、酸性化フカン組成物を生成した後、前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解することをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記硫酸基をプロトン化することが、前記出発フカン組成物を水溶液に溶解すること、前記出発フカン組成物を酸性陽イオン交換樹脂に接触させること、及び前記酸性化フカン組成物を固体として回収することを含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
酸性化フカン組成物を固体として回収することが、前記水溶液から固体の酸性化フカン組成物を凍結乾燥すること、噴霧乾燥すること、及び沈殿させることのうち少なくとも１つを含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記硫酸化剤が、ＳＯ３−Ｍｅ３Ｎ、ＳＯ３−Ｅｔ３Ｎ、ＳＯ３−ピリジン及びＳＯ３−ＤＭＦのうち少なくとも１つを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
前記非水溶媒が、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、クロロホルム、エタノール、メタノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、イソプロパノール及び１−プロパノールのうち少なくとも１つを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７８】
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、硫酸化助剤を前記溶媒に添加することをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７９】
前記硫酸化助剤が酸捕捉剤である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記酸捕捉剤が２−メチル−２−ブテンである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約５分〜約５０時間インキュベートすることをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８２】
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８３】
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートすることをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８４】
前記反応抑制剤が塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８５】
前記塩が重炭酸塩である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
反応抑制剤を前記反応混合物に添加することが、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御することをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８７】
前記改変フカンが、前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項８８】
出発フカン組成物の硫酸レベルを増加させて改変フカンを生成する方法であって、
出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を溶媒中に懸濁させること、ここで前記溶媒は前記フカンを溶解することができない溶媒である；
懸濁された前記出発フカン組成物を含有する前記溶媒に硫酸化剤を添加して、前記改変フカン及び前記溶媒を含む反応混合物を生成すること；
固体の前記改変フカンを前記溶媒から分離すること；並びに
前記固体の前記改変フカンを反応抑制剤により反応抑制すること、
を含む方法。
【請求項８９】
前記硫酸化剤がクロロスルホン酸である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記溶媒が、０．７６５未満の相対極性を有する溶媒を少なくとも１種含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記溶媒が、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１−プロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、エチルアセテート、ヘプタノール、オクタノール、デカノール及びジオキサンのうち少なくとも１つを含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約５分間〜約５０時間インキュベートすることをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９３】
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９４】
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートすることをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９５】
前記反応抑制剤が、塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９６】
固体の前記改変フカンを反応抑制することが、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御することをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９７】
固体の前記改変フカンを反応抑制することが、０．７６５未満の相対極性を有する溶媒を少なくとも１種含む有機溶媒を用いて固体の前記改変フカンを洗浄することをさらに含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項９８】
前記改変フカンが前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含む、請求項８８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３６４号；２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３７２号；２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３３５号；２０１８年８月１日に出願された米国仮出願第６２／７１３，３９９号；２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，１３５号；２０１８年１１月２日に出願された米国仮出願第６２／７５５，３１１号；２０１９年１月１７日に出願された米国仮出願第６２／７９３，５１４号；２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２２３号；２０１８年８月１日に出願された同時係属中の米国仮出願第６２／７１３，３９２号；２０１８年８月１日に出願された米国仮出願第６２／７１３，４１３号；２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，１３７号；２０１８年１１月２日に出願された米国仮出願第６２／７５５，３１８号；２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２２８号；２０１８年１１月２日に出願された同時係属中の米国仮出願第６２／７５５，３２８号；２０１９年１月１７日に出願された米国仮出願第６２／７９３，６５４号；及び２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２３５号の恩恵を主張し、その内容は参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
フカン（フコイダンを含む）は、硫酸化多糖である。一般的に言えば、このことは、それらが多くの糖類から構成される分子であり、前記糖類に付加した硫黄原子も有することを意味する。主要糖類は、６個の炭素原子を有し且つ化学式Ｃ６Ｈ１２Ｏ５を有する糖である「フコース」と呼ばれる。「フコイダン」（又はフコイジン）は、褐藻（海草）に由来するフカンを示す。フカンは、単独で存在することが可能であり、あるいは他の糖の混合物、例えば、キシロース、ガラクトース、グルコース、グルクロン酸及び／又はマンノースなどの糖との混合物の状態で存在することも可能である。これらの他の糖は、フカンを有する海草又は他の原料から抽出され得る。フカンは現在、褐藻（海草）、ナマコなどの天然原料に由来するが、本明細書に記載される「フカン」は、フカンの（１又は複数の）究極的原料にかかわらず、本明細書で考察されるフカンの化学的モチーフ及び構造的モチーフを有するポリマー分子を含む。
【０００３】
フコイダンはAdenocystis utricularis、Ascophyllum nodosum、Chorda filum、Cystoseirabies marina、Durvillaea antarctica、Ecklonia kurome、Ecklonia maxima、Eisenia bicyclis、Fucus evanescens、Fucus vesiculosis、Hizikia fusiforme、Himanthalia Elongata、Kjellmaniella crassifolia、Laminaria brasiliensis、Laminaria cichorioides、Laminaria hyperborea、Laminaria japonica、Laminaria saccharina、Lessonia trabeculata、Macrocystis pyrifera、Pelvetia fastigiata、Pelvetia Canaliculata、Saccharina japonica、Saccharina latissima、Sargassum stenophylum、Sargassum thunbergii、Sargassum confusum、Sargassum fusiforme及びUndaria pinnatifidaを含む褐藻類の多様な種から得ることができるが、これらに限定されるものではない。これらの例示的な種は全て分類学上の褐藻綱（Phaeophyceae）から出たものであり、これらの種の大部分は、ヒバマタ科（Fucales）又はコンブ科（Laminariaceae）に入る。
【０００４】
フコイダンを含むフカンは、線維性癒着の形成を抑制、予防、除去、軽減、又は、それ以外の場合、処置することに供するにおいて有効であることが示されている。フカンには他の関連する疾患及び状態の処置への用途も見いだされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、所望の硫酸化レベル及び／又は医学的に生存可能な低エンドトキシンレベルを有するように改変されている（modified）フカンのようなフカンをいくつかの実施形態においては含む、所望の硫酸化レベルのフカンを有するフカン組成物には、まだ満たされていない需要が存在する。フカンは線維性癒着を処置するものであることが知られている。線維性癒着の処置において、低硫酸化レベルのフカンを含む組成物が以前に示されている。本組成物、本システム及び本方法などは、これらの利点及び／又は他の利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
他の利点の中で線維性癒着を抑制する改変フカン、例えば高度硫酸化フカン（high-sulfate fucans）のための、組成物、方法、システム、材料などが提供される。本明細書における前記組成物は、フコースに対する硫酸（sulfate）の比率が高く、且つ総フコース＋ガラクトースに対しての硫酸の比率が高い、高硫酸化フカン（highly sulfated fucans）を含む。
【０００７】
本組成物、本方法、本システムなどは、出発フカン組成物又は初期フカン組成物（すなわち、前記改変フカンが由来し得るフカン組成物。かかる出発フカン組成物は、粗製のものであっても粗製のものでなくてもよく、あらかじめ処理又は精製されたものでもよく、その例としては供給原料フカン組成物（feedstock fucan composition）が挙げられる）から得られた所望の改変高硫酸化フカンを含む医学的に許容しうる組成物、並びにかかる所望の改変フカンを得る方法及びかかる組成物の使用方法を提供する。
【０００８】
いくつかの態様において、本明細書における組成物、システム、方法などは、高度硫酸化フカンを含む医学的に許容しうる組成物を対象とする。
【０００９】
いくつかの態様では、本明細書中の組成物、システム、方法などは、医学的に許容可能な緩衝剤または希釈剤と治療有効量の高度硫酸化フカンとを含み、該高度硫酸化フカンはフコースに対する硫酸のモル比（sulfate to fucose molar ratio）が約１．２以上であり、かつ／または、フコースプラスガラクトースに対する硫酸のモル比（sulfate to fucose plus galactose molar ratio）が約１．１以上でありうる。前記対フコース硫酸モル比（sulfate to fucose molar ratio）は約１．８以上であり、かつ／または、前記対フコースプラスガラクトース硫酸モル比（sulfate to fucose plus galactose molar ratio）は約１．２以上であってもよい。前記対フコース硫酸モル比は約１．９以上であり、かつ／または、前記対フコースプラスガラクトース硫酸モル比は約１．３以上であってもよい。前記対フコース硫酸モル比は１．８１〜２．８５の間であり、かつ／または、前記対フコースプラスガラクトース硫酸モル比は１．３０〜２．２０の間であってもよい。
【００１０】
有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
約３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線に対する定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を、前記フカンは有してよい。
【００１１】
前記フカンは、１００ｋＤａより大きい重量平均分子量；分布の９０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布；２００ｋＤａより大きい重量平均分子量；又は５００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有しうる。前記フカンは、分布の９０％ｗ／ｗ以上が５００ｋＤａより大きい分子量分布；１４％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗ、３５％ｗ／ｗ〜５２％  ｗ／ｗ、４０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、４５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、４０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗ、又は４５％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗの硫酸化レベルを有しうる。前記フカンは、総炭水化物含有率が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗでありうる。前記フカンは、総フコース含有率が総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ以上でありうる。総炭水化物含有率は約５０％ｗ／ｗ以上でありうる。前記フカンは、総フコース含有率が総炭水化物含有率に対する割合として約７０％ｗ／ｗ以上、約８０％ｗ／ｗ以上、約９０％ｗ／ｗ以上又は約９５％ｗ／ｗ以上でありうる。
【００１２】
前記フカンの、総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率は、約６０％ｗ／ｗ未満、約２％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗ又は約１０％ｗ／ｗ未満でありうる。前記フカンの、グルクロン酸、マンノース、ラムノース及びキシロースの含有率の総量は、総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ未満でありうる。医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物は、約４ｃＰ〜５０ｃＰ、約１０ｃＰ〜４０ｃＰ又は、約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有しうる。医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物は、透明無色なものでありうる。
【００１３】
いくつかの態様では、前記組成物、システム、方法などであって、前記方法は動物における線維性癒着を処置することを含む方法であって、前記線維性癒着を抑制するために本明細書に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法である。さらに提供されるのは、本明細書に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤である。さらに提供されるのは、線維性癒着を抑制するために格子柄され組成された本明細書に記載の選択された医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を含み、動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与することを含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤である。さらに本明細書で提供されるのは、線維性癒着のための治療薬の製造のための、本明細書に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物の使用である。
【００１４】
さらなる態様では、前記組成物、システム、方法などは、動物における状態又は疾患を処置することを含むものであって、前記状態又は前記疾患を処置するために本明細書に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法である。前記治療上有効量は約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ又は約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇでありうる。前記状態又は前記疾患は、前記動物における標的部位における線維性癒着であり得、前記投与は、前記標的部位に前記治療上有効量を投与することを含みうる。
【００１５】
さらなる態様では、前記組成物、システム、方法などは、本明細書に記載の高度硫酸化フカンを約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物である。
【００１６】
前記医療組成物は、前記高度硫酸化フカンを約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ又は約２．５ｍｇ／ｍＬ含みうる。
【００１７】
本明細書に記載の前記医療組成物は、医療機器であってよく、前記医療機器には液体医療機器が含まれる。前記医療組成物は医薬組成物であってもよく、前記医療組成物には液体医薬組成物が含まれる。
【００１８】
本明細書に記載の方法は、動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇ、約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇ、約０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇ又は約２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の本明細書に記載の医療組成物の使用を含む。
【００１９】
本明細書に記載の方法は、患者における標的部位に本明細書に記載の医療組成物を投与することを含む、前記患者における線維性癒着を処置することも含む。患者における選択された疾患又は状態の前記処置は、前記選択された疾患もしくは状態を含むか又は前記選択された疾患もしくは状態に罹患しやすいといえる（reasonably susceptible）患者における選択された標的部位を同定すること、及びその後に、前記患者における前記選択された標的部位に本明細書に記載の医療組成物を投与することを含みうる。前記疾患又は前記状態は線維性癒着であり得、前記選択された標的部位は手術部位であり得、前記投与はａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）前記手術創を閉じた後、のうち少なくとも１つにおいて行われうる。前記投与は手術後且つ前記手術創を閉じる前に行われうる。前記投与にかかるのは３分間未満、２分間未満又は１分間未満である。選択された前記標的部位は、病変、擦過傷及び傷害部位のうち少なくとも１つでありうる。選択された前記標的部位は、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹側腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つでありうる。
【００２０】
いくつかの態様では、出発フカン組成物の硫酸レベルを低下させて改変フカンを得る方法も提供される。かかる方法は、前記出発フカン組成物に塩基を添加して反応混合物を生成すること；及び前記反応混合物を反応抑制剤で処理して前記塩基を不活性化し、前記改変フカン及び脱硫酸化残余分子を生成すること、を含み、ここで前記改変フカンの数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量は前記出発フカン組成物の数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量それぞれの約５％変動幅以内である。
【００２１】
前記出発フカン組成物は出発溶液において提供されうる。前記塩基を前記出発フカン組成物に添加することは、前記溶液を加熱することをさらに含みうる。前記塩基はアルカリ金属、アルカリ土類金属及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含みうる。前記反応抑制剤は酸、塩及び水のうち少なくとも１つを含みうる。前記改変フカンは、前記出発フカン組成物より少ない硫酸を含みうる。
【００２２】
前記方法はさらに、
前記出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解させて非水溶液を生成すること；
硫酸化剤を前記非水溶液に添加して反応混合物を生成すること；及び
反応抑制剤を前記反応混合物に添加して、溶液中で改変フカン及び硫酸化残余分子を生成すること、
を含んでもよい。
【００２３】
前記方法は、前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解する前に、前記出発フカン組成物中の硫酸基をプロトン化して酸性化フカン組成物を生成することをさらに含みうる。前記硫酸基をプロトン化することは、前記出発フカン組成物を水溶液に溶解すること、前記出発フカン組成物を酸性陽イオン交換樹脂に接触させること、及び前記酸性化フカン組成物を固体として回収することを含みうる。前記方法はまた、酸性化フカン組成物を固体として回収することを含んでもよく、これは前記水溶液から固体の酸性化フカン組成物を凍結乾燥すること、噴霧乾燥すること、及び沈殿させることのうち少なくとも１つを含んでもよい。前記硫酸化剤は、ＳＯ３−Ｍｅ３Ｎ、ＳＯ３−Ｅｔ３Ｎ、ＳＯ３−ピリジン及びＳＯ３−ＤＭＦのうち少なくとも１つを含みうる。前記非水溶媒は、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、クロロホルム、エタノール、メタノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、イソプロパノール及び１−プロパノールのうち少なくとも１つを含みうる。
【００２４】
前記硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することは、硫酸化助剤を前記溶媒に添加することをさらに含んでもよい。前記硫酸化助剤は酸捕捉剤であり得、前記酸捕捉剤は２−メチル−２−ブテンでありうる。硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することは、前記反応混合物を約５分〜約５０時間又は約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含みうる。硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することは、前記反応混合物を摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートすることをさらに含みうる。前記反応抑制剤は塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含みうる。前記塩は重炭酸塩でありうる。反応抑制剤を前記反応混合物に添加することは、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御することをさらに含みうる。前記改変フカンは、前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含みうる。
【００２５】
硫酸レベルを増加させて改変フカンを生成する方法もまた、
出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を溶媒中に懸濁させること、ここで前記溶媒は前記フカンを溶解することができない溶媒である；
懸濁された前記出発フカン組成物を含有する前記溶媒に硫酸化剤を添加して、前記改変フカン及び前記溶媒を含む反応混合物を生成すること；
固体の前記改変フカンを前記溶媒から分離すること；並びに
前記固体の前記改変フカンを反応抑制剤により反応抑制すること、
を含みうる。
【００２６】
前記硫酸化剤はクロロスルホン酸であってよい。前記溶媒は、０．７６５未満の相対極性を有する溶媒のうち少なくとも１種、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１−プロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、エチルアセテート、ヘプタノール、オクタノール、デカノール及びジオキサン、のうち少なくとも１つを含みうる。前記相対極性の値は、吸収スペクトルの溶媒シフトの測定値から正規化することができる。例えば、Christian Reichardt, Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry, Wiley-VCH Publishers, 3rd ed., 2003を参照のこと。硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することは、前記反応混合物を約５分間〜約５０時間又は約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含みうる。硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物は摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートされうる。前記反応抑制剤は、塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含みうる。固体の前記改変フカンを反応抑制することは、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御すること、並びに／又は０．７６５未満の相対極性を有する溶媒を少なくとも１種含む有機溶媒を用いて固体の前記改変フカンを洗浄することをさらに含みうる。前記改変フカンは前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含む。
【００２７】
これら及び他の態様、特徴、及び実施形態は、以下の発明を実施するための形態及び添付の図面を含む本出願中に記載されている。明示的に別段に述べられない限り、全ての実施形態、態様、特徴などを任意の所望の方法で混合し、調和させ、組み合わせ、変更することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１Ａ】本明細書における方法に従って処理されたある種のフカンが構造的変化を経ることを示すＮＭＲ結果を示す。
【図１Ｂ】本明細書における方法に従って処理されたたある種のフカンが構造的変化を経ることを示す二次元ＮＭＲ結果を示す。
【図２】得られた改変フカンを未分解のままにすると共に、出発フカン組成物からの硫酸の喪失の程度が異なることを示す、一連のゲル透過クロマトグラムを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
図面は、本開示の例示的な実施形態を示している。本明細書におけるシステム、方法などの実際の実施形態は、図面に示されない異なる特徴又は工程をさらに含んでもよい。本明細書に示される例示はシステム、方法などの実施形態を１又は複数の形で示すが、かかる例示は、いかなる方法によっても開示の範囲を制限するとみなされるべきではない。本明細書における実施形態は網羅的なものではなく、開示を例えば、以下の発明を実施するための形態において開示された詳細形態へと制限するものではない。
【００３０】
本明細書に示された組成物、システム、方法などは、改変フカン、例えば、高度硫酸化フカンを含む。本組成物は、医学的処置、手術後の処置、疾患抑制などに有効であり得る。いくつかの実施形態において、前記フカンはフコイダンである。本改変フカンは、それ自体が医療機器、医療材料、組み合わせ製品であり得るか、若しくは医薬的に許容し得る治療的及び／若しくは医学的に有効な組成物中にあり得るか、又は、医療機器、医療材料、組み合わせ製品の上若しくは中に含まれ得るか、若しくは医薬的に許容し得る治療的及び／若しくは医学的に有効な組成物中に含まれ得る。
【００３１】
組成物
本明細書において示される組成物、システムなどは、ある種の実施形態において、フカン並びに外科的癒着、関節炎、乾癬又は所望の他の疾患などの線維性癒着の処置のための治療上有効量の高度硫酸化フカンを含む医学的に許容しうる高度硫酸化フカン及び高度硫酸化フカン組成物を提供する。
【００３２】
本明細書に示される改変フカンは、線維性癒着及び他の標的並びに他の疾患及び／又は状態の抑制、予防、除去、軽減又は他の処置を含む複数の用途のために使用され得る。処置は、前記改変フカンが、典型的には、外科医又は他の専門家によって、線維性癒着（又は他の疾患若しくは状態）を含むと、又は線維性癒着（又は他の疾患若しくは状態）に相当に罹患しやすいと同定された選択標的部位である標的部位における線維性癒着の形成の軽減又は予防など、標的疾患又は他の状態の発現を軽減させるか又は予防することを含み、例えばすでに存在する線維性癒着の除去を含む、存在する疾患又は他の状態の除去も含む。かかる処置のために、前記改変フカンは、典型的には、医学的に許容しうる医療機器、組み合わせ製品、又は結合剤、アジュバント、賦形剤（excipient）並びに、所望により、二次薬物であって前記改変フカンに付加されないが前記組成物中に含まれるもの及び／又は前記改変フカンに付加され得るものなどの、追加的な医学的に有効な物質などの追加的な成分を含む医薬的に有効な組成物において、提供される。
【００３３】
この考察は、前記改変フカンの総フコースに対する総硫酸のモル比及び総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比と手術後の線維性癒着の予防との関係を考察するものである。以下、前記改変フカンの総フコースに対する総硫酸のモル比及び総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比は、硫酸化比（sulfation ratio）と称され得る。いくつかの実施形態において、前記改変フカンは、高度硫酸化フカンでありうる。本明細書における前記高度硫酸化フカンは、１．８１以上又は約１．９以上のフコースに対する硫酸のモル比及び約１．１０以上又は約１．３以上の総フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比のうち少なくとも１つを有することができる。前記高度硫酸化フカンは、線維性癒着の処置において、約１．８１未満又は約１．９未満のフコースに対する硫酸のモル比及び約１．１０未満又は約１．３未満の総フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比のうち少なくとも１つを有するフカンよりも大きな有効性を示す可能性がある。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書におけるフカンは、フコースに対する硫酸のモル比が１．８１、もしくは約１．８５、１．９、２．０、２．１、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４または３．５であるように修飾（modified）される。分子量分布におけるフコースに対する硫酸のモル比の分散度は、分子量が増加するにつれて増加するか、または分子量が増加するにつれて減少する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本明細書におけるフカンは、フコースに対する硫酸のモル比が、所与の分子量分布内の下限と上限との間、例えば約１．８１〜１．９、１．９〜３．５、１．８〜３．０、２．０〜２．５、１．９〜２．３、もしくは２．０〜３．０、または本明細書に記載の比率レベルを別様に組み合わせた範囲（other combinations of the ratio levels herein）にあるように改変される。分子量分布におけるフコースに対する硫酸のモル比の分散度は、分子量が増加するにつれて増加するか、または分子量が増加するにつれて減少する。
【００３６】
前記高度硫酸化フカンの分子量分布は任意の所望の適切な測定システムを用いて測定することができる。異なるシステムは、実質的に同一構成を有する異なる組成物から、又は異なって測定される場合は同一バッチからも、異なる読取値又は結果を生じることが可能である。１つの適切な測定システムは、実質的に、有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａの、ヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａの、ヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が６ｍｍの１つの４０ｍｍガードカラムであって、約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラム、約３０℃の示差屈折率検出器、０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流、並びに、実質的に、ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品からなるピーク分子量標準曲線に対する定量、からなる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成である。前記ピーク分子量標準曲線は、さらに、ピーク分子量が３ｋＤａ〜５ｋＤａのデキストラン標準品を含む。
【００３７】
本明細書中の高度硫酸化フカンの分子量分布は、フカンの５０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａ超の分子量を有するものであってよい。高度硫酸化フカンの分子量分布は、フカンの少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超の分子量を有するものであってよい。
【００３８】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、分布の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超である分子量分布を有していてよい。本明細書中の高度硫酸化フカンは、分布の少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、又は７５％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超である分子量分布を有していてよい。高度硫酸化フカンは、分布の少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、又は４０％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超である分子量分布を有していてよい。
【００３９】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、１００ｋＤａ超の重量平均分子量、例えば約１００ｋＤａ〜約１０，０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約８，０００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ〜約７，０００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａ、約５８０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａ、又は約３００ｋＤａ〜約２，０００ｋｄａの重量平均分子量を有していてよい。
【００４０】
さらに他の実施形態では、本明細書中の高度硫酸化フカンは、約７０ｋＤａ〜７，０００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜６，０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜５，０００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜４，０００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ、又は約３００ｋＤａ〜１，０００ｋｄａのピーク分子量を有していてよい。
【００４１】
さらに他の実施形態では、本明細書中の高度硫酸化フカンは、約５０ｋＤａ〜３，０００ｋｄａ、約１００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ、又は約１００ｋＤａ〜６００ｋＤａの数平均分子量を有していてよい。
【００４２】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、１０％ｗ／ｗ〜７０％ｗ／ｗ、約２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、約３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗ、または約３５％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗの硫酸化レベル（sulfation level）を有していてよい。
【００４３】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、約２７％ｗ／ｗ〜７０％ｗ／ｗ、約３０％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗ、約４０％ｗ／ｗ〜９０％ｗ／ｗ、または約５０％ｗ／ｗ〜９６％ｗ／ｗの総炭水化物含有率（total carbohydrate content）を有していてよい。
【００４４】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、全炭水化物に対する割合として約３０％ｗ／ｗ〜１００％ｗ／ｗ、約４０％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、又は約５０％ｗ／ｗ〜９０％ｗ／ｗのフコース含有率（fucose content）を有していてよい。
【００４５】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、全炭水化物に対する割合として約０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、約２％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ、又は約５％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのガラクトース含有率（galactose content）を有していてよい。
【００４６】
本明細書中の高度硫酸化フカンは、総炭水化物含有率に対する割合として約０％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗのグルクロン酸含有率、総炭水化物含有率に対する割合として約０％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗのマンノース含有率、総炭水化物含有率に対する割合として０％ｗ／ｗ〜４％ｗ／ｗのラムノース含有率、及び総炭水化物含有率に対する割合として０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗのキシロース含有率を有していてよい。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本明細書中の高度硫酸化フカンは、水に５０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解すると、約４ｃＰ〜約５０ｃＰ、約５ｃＰ〜約４０ｃＰ、約１０ｃＰ〜約３０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、又は約２５ｃｐの粘度を有する。ある一定の実施形態では、本明細書中の高度硫酸化フカンは、水に１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬで溶解すると、無色透明、淡黄色透明又は淡褐色透明である溶液を形成する。
【００４８】
方法
供給原料フカン組成物などの出発フカン組成物を改変して前記出発フカン組成物中における前記フカンの硫酸化レベルを増加又は減少させるための方法、システムなどが提供される。これらの方法のうち少なくとも１つを、硫酸化比が前記出発フカン組成物よりも高い又は低い、例えば、フコースに対する硫酸のモル比が約０．７、１．０、１．２、１．５、１．８、１．９、２．０、２．１、２．３、２．５若しくは２．８、及び／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約０．７、１．０、１．２、１．５、１．８、１．９、２．０、２．１、２．３、２．５若しくは２．８のフカンを含む改変フカンの調製において用いてもよい。いくつかの実施形態において、この開示は、医学的適用及び外科的適用、例えば、線維性癒着の予防のために適切な改変フカンを示す。
【００４９】
以下の段落は、本明細書における前記改変フカンを製造するために使用され得る方法論のうちいくらかの簡潔な概略的考察を参照する。
【００５０】
フカン源からのフカンの抽出
フカン源からフカンを得るための方法が知られている。いくつかの供給源からのフカンは、本明細書で検討されたものよりも硫酸レベルが低いものの、他の供給源からのフカンと比較すれば硫酸レベルがより高いことが見出され得る。フカンはAdenocystis utricularis、Ascophyllum nodosum、Chorda filum、Cystoseirabies marina、Durvillaea antarctica、Ecklonia kurome、Ecklonia maxima、Eisenia bicyclis、Fucus evanescens、Fucus vesiculosis、Hizikia fusiforme、Himanthalia Elongata、Kjellmaniella crassifolia、Laminaria brasiliensis、Laminaria cichorioides、Laminaria hyperborea、Laminaria japonica、Laminaria saccharina、Lessonia trabeculata、Macrocystis pyrifera、Pelvetia fastigiata、Pelvetia Canaliculata、Saccharina japonica、Saccharina latissima、Sargassum stenophylum、Sargassum thunbergii、Sargassum confusum、Sargassum fusiforme及びUndaria pinnatifidaのうち少なくとも１つからのフカンの抽出により得ることができる。これらの例示的な種は全て分類学上の褐藻綱（Phaeophyceae）から出たものであり、これらの種の大部分は、ヒバマタ科（Fucales）又はコンブ科（Laminariaceae）に入る。具体的には、Ascophyllum nodosum、Ecklonia maxima、Eisenia bicyclis、Fucus vesiculosis、Laminaria hyperborea、Laminaria japonica、Laminaria saccharina、Macrocystis pyrifera、Pelvetia Canaliculata、Saccharina japonica、Saccharina latissima、Sargassum fusiforme及びUndaria pinnatifidaのうち少なくとも１つからのフカンの抽出により、高度に硫酸化されたフカンを得ることができる。
【００５１】
加溶媒分解性脱硫酸化
フカンを含む多糖類中における硫酸レベルの低減のための例示的な加溶媒分解性脱硫酸化方法は、Ｖｉｌｅｌａ−Ｓｉｌｖａ  Ａ．Ｃ  ｅｔ  ａｌ，２００２，ＤＯＩ：（１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１０８４９６２００）に見出され得る。各種硫酸化比を有するフカンを得るために、ジメチルスルホキシドにおけるフカンの加溶媒分解を用いてもよい。温度を変化させることによって、及び脱硫酸化反応の間のメタノールの添加によって、前記加溶媒分解をさらに制御してもよい。
【００５２】
タンジェンシャルフロー濾過
本明細書において考察される方法のうちいくつかは、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）を利用する。タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタの典型的な識別と同じく、所定のＴＦＦフィルタの名目分画分子量（ＭＷＣＯ）値は、フィルタバリアを越えず、したがって、一般的にバリアを透過物側へ越える／浸透する分子の分子量より大きい分子量及び／又は大きさを有する分子を含む溶液を、選択的にその保留物側（retentate side）に保持する。したがって、ＴＦＦフィルタの分画分子量値は、典型的には、任意の所与のポリマー又は名目分画値について絶対的なもの（absolute）ではない。所与のＴＦＦフィルタは、名目分画分子量値を上回る分子及び下回る分子の両方をいくつか通すか又は保持する。特定のポリマーのための名目ＴＦＦフィルタの実際の分画／選択値（selectively values）及び効果は、前記特定のポリマーについてルーチン的に決定され得る。
【００５３】
多くの因子が前記ＴＦＦフィルタの透過挙動に影響を及ぼしうる。これらの因子は、ＴＦＦフィルタ自体に依存していることも、又は標的ポリマーの属性に依存していることもあり、例えば、標的ポリマーの折りたたみ挙動及び折りたたみ構造は、ＴＦＦフィルタのＭＷＣＯバリアを越える／越えないという標的ポリマーの挙動に影響を及ぼしうる。ＴＦＦフィルタ自体に関しても、知られているように、多くの因子がＴＦＦフィルタの透過挙動に影響を及ぼしうる。例えば、製造方法によって、特定のＴＦＦフィルタの中において多様な孔サイズが生じさせることができ、かかる多様さには、名目ＭＷＣＯより大きい孔及び小さい孔の両方が含まれ得る。したがって、名目分画分子量値を有するＴＦＦフィルタは、実質的に名目分画分子量値で分子を通す／保持するが、かかる値を下回る分子及び／又は上回るいくつかの分子を通す／保持し得る。
【００５４】
ゲル浸透クロマトグラフィー
実験例について得られた分子量分布を評価するためにゲル浸透クロマトグラフィーを用いた。ゲル浸透クロマトグラフィーにおける使用のために利用可能な多数の異なるパラメータ、カラム及び標準品があり、分子量の分析に利用できる多様な計器装備構成がもたらされる。本明細書における分子量測定のために、以下のパラメータを用いてＧＰＣを行った。移動相は、０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム流であった。カラムコンパートメント及び検出器は３０℃であった。検出のためにＷａｔｅｒｓ２４１４示差屈折率検出器を用いた。
【００５５】
適切なＧＰＣカラムとしては、水性溶媒と適合性のあるＧＰＣカラム、例えば、スルホン化スチレンジビニルベンゼン、ＮＨ官能基を有したアクリレートコポリマー網、変性シリカ及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルのうち少なくとも１つが充填されたカラムが挙げられる。本明細書における分析のために、６μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された内径（ＩＤ）が６ｍｍの長さ４０ｍｍの１つのガードカラム、続いて、排除限界が約７，０００ｋＤａで、有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａの１２μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍの第１の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、続いて、排除限界が約７，０００ｋＤａで、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａの１０μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍの第２の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラムを含む３つのカラムを直列で用いた。カラム構成の総有効分子量範囲は、約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａであった。このカラム構成の例は、直列に接続されたＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）ガードカラム−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）２０００カラム−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｌｉｎｅａｒカラムでありうる。
【００５６】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのトレース可能な標準品、すなわち、ＤＸＴ３７５５Ｋ（ピーク分子量＝２１６４ｋＤａ）、ＤＸＴ８２０Ｋ（ピーク分子量＝７４５ｋＤａ）、ＤＸＴ７６０Ｋ（ピーク分子量＝６２１ｋＤａ）、ＤＸＴ６７０Ｋ（ピーク分子量＝４０１ｋＤａ）、ＤＸＴ５３０Ｋ（ピーク分子量＝４９０ｋＤａ）、ＤＸＴ５００Ｋ（ピーク分子量＝３９０ｋＤａ）、ＤＸＴ２７０Ｋ（ピーク分子量＝１９６ｋＤａ）、ＤＸＴ２２５Ｋ（ピーク分子量＝２１３ｋＤａ）、ＤＸＴ１５０Ｋ（ピーク分子量＝１２４ｋＤａ）、ＤＸＴ５５Ｋ（ピーク分子量＝５０ｋＤａ）、ＤＸＴ５０Ｋ（ピーク分子量＝４４ｋＤａ）及びＤＸＴ５Ｋ（ピーク分子量＝４ｋＤａ）（これらの標準品のピーク分子量は約４ｋＤａ〜約２，２００ｋＤａである）を含む標準曲線に対して試料流を定量した。用いられる標準曲線は、例えば、Ｄｅｘｔｒａｎ３７５５ｋＤａ、Ｄｅｘｔｒａｎ５０ｋＤａ及びＤｅｘｔｒａｎ５５ｋＤａのうち少なくとも１つ並びに本明細書において考察される３〜６つの追加的なトレース可能な標準品を含んでもよく、較正点は、用いられる検量体のピーク分子量である。例示的な較正曲線は、ＤＸＴ３７５５Ｋ、ＤＸＴ８２０Ｋ、ＤＸＴ５３０Ｋ、ＤＸＴ５００Ｋ、ＤＸＴ２２５Ｋ及びＤＸＴ５５Ｋからなることができる。本明細書において用いられたカラムは、フカンの定量のために用いられた標準品のピーク分子量範囲を包含し且つそれを超えて拡張された総有効分子量範囲を有するものであった。
【００５７】
本明細書におけるフカン／フコイダンポリマーについて述べられた分子量は、分子量が特定の分子量から離れて増加又は減少するにつれて量又は割合が増加又は減少する、より高い及びより低い分子量の分子の分布が常にある分子量の値である。前記分布は、一般的なガウス形状又は歪んだガウス形状を有してよいが、それが必要であるわけではない。
【００５８】
本明細書中の表の結果は、分子量分布の特定の特性について使用される略語を含む。ゲル浸透クロマトグラフィーはＧＰＣ、ピーク保持時間はＰＲＴ、ピーク分子量はＰＭＷ、重量平均分子量はＷＡＭＷ、数平均分子量はＮＡＭＷ、百分率分布は％ｄｉｓｔ、分子量はＭＷ、多分散指数はＰＤＩ、分画分子量はＭＷＣＯと表される。
【００５９】
化学的脱硫酸化
供給原料フカン組成物などの出発フカン組成物の硫酸化レベルは、化学的脱硫酸化を介して改変され得る。例えば、方法は、出発フカン組成物を提供すること、塩基を有する前記出発フカン組成物中の前記フカンを脱硫酸化して前記所望の改変フカンを生成すること、前記所望の改変フカンを反応抑制剤（quenching agent）で処置して前記脱硫酸化を終了させること、及び前記所望の改変フカンを脱硫酸化残余分子から分離することを含むことができる。前記出発フカン組成物を脱硫酸化することは、前記出発フカン組成物を加熱することを含んでもよい。
【００６０】
適切な塩基としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム及び水酸化亜鉛が挙げられるが、これらに限定されない。適切な反応抑制剤としては、酸、塩および水、例えば塩酸が挙げられるが、これらに限定されない。出発官能性組成物を提供することは、出発物質を出発溶液中に提供することを含みうる。溶液中の出発官能性組成物の例示的な濃度は０．０１％ｗ／ｖ〜３０％ｗ／ｖである。塩基の例示的な濃度は０．０１Ｍ〜１０Ｍである。
【００６１】
所望の改変フカンを脱硫残余分子から分離することは、脱硫残余分子を超える分画分子量、例えば、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａまたは１００ｋＤａの分画分子量を有する適切な分画分子量（ＭＷＣＯ）ＴＦＦフィルタを介して、所望の改変フカンを溶液中で限外濾過することを含んでもよい。
【００６２】
前記方法は、フカンを脱硫化する前に出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでもよい。脱塩は、例えば、蒸留水を用いて、ＴＦＦフィルタを介して溶液中で出発フカン組成物を限外濾過することを含んでもよい。ＴＦＦフィルタは、所望の改変フカンのために、所望の分子量分離点またはターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、または５００ｋＤａの分画分子量を有しうる。前記方法は、望ましくない粒子状物質を除去するために、適切なプレフィルタを介して出発フカン組成物を予備濾過することをさらに含んでもよい。
【００６３】
化学的硫酸化
供給原料フカン組成物などの出発フカン組成物の硫酸化レベルは、化学的硫酸化を介して改変され得る。例示的方法は、水性出発溶液中に出発フカン組成物を提供すること、前記フカン上の前記硫酸基をプロトン化して酸性化フカン組成物を得ること、固体として前記酸性化フカン組成物から得ること、非水溶媒であってもよい適切な溶媒中で前記固体の酸性化フカン組成物を再可溶化して前記硫酸化のための再可溶化溶液を提供すること、前記酸性化フカン組成物を含有する前記再可溶化溶液に硫酸化剤を加えること、所望の反応温度で、適切な時間、前記反応混合物をインキュベートすること、前記所定の時間の後、前記反応混合物を反応抑制すること、及び前記改変フカンを前記硫酸化反応残余分子から分離することを含むことができる。
【００６４】
前記方法は、フカンを硫酸化する前に出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでもよい。脱塩は、例えば、蒸留水を用いて、ＴＦＦフィルタを介して溶液中で出発フカン組成物を限外濾過することを含んでもよい。ＴＦＦフィルタは、所望の改変フカンのために、所望の分子量分離点またはターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、または５００ｋＤａの分画分子量を有しうる。前記方法は、望ましくない粒子状物質を除去するために、適切なプレフィルタを介して出発フカン組成物を予備濾過することをさらに含んでもよい。
【００６５】
「硫酸化剤」は、その通常の意味に従って用いられ、限定されるものではないが、ＳＯ３−Ｍｅ３Ｎ、ＳＯ３−Ｅｔ３Ｎ、ＳＯ３−ピリジン及びＳＯ３−ＤＭＦのうち少なくとも１つを含む。適切な量の硫酸化剤は、１：０．０１（フカン：硫酸化剤）〜１：１００（フカン：硫酸化剤）、例えば、１：０．１（フカン：硫酸化剤）、１：１（フカン：硫酸化剤）及び１：１０（フカン：硫酸化剤）であることができる。
【００６６】
前記フカン上の前記硫酸基をプロトン化することは、前記フカンを酸性化陽イオン交換樹脂及び酸性化混合チャージ樹脂（ａｃｉｄｉｆｉｅｄ  ｍｉｘｅｄ  ｃｈａｒｇｅ  ｒｅｓｉｎ）のうち少なくとも１つに接触させることを含んでもよい。前記接触は、前記樹脂と共に前記出発フカンを含有する溶液を撹拌することを含んでもよい。前記接触は、前記樹脂上において前記出発フカンを含有する溶液を再循環させることを含んでもよい。
【００６７】
固体の酸性化フカン組成物を得ることは、限定されるものではないが、溶液から固体の酸性化フカン組成物を凍結乾燥し、噴霧乾燥し、沈殿させることを含んでもよい。固体の酸性化フカンを再可溶化することは、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、クロロホルム、エタノール、メタノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、イソプロパノール及び１−プロパノールのうち少なくとも１つを含む溶媒中において固体の酸性化フカン組成物を可溶化することを含んでもよい。前記硫酸化剤を加えることは、前記再可溶化溶液に硫酸化助剤を加えることをさらに含んでもよい。前記硫酸化助剤は酸捕捉剤（acid scavenger）であってもよい。前記酸捕捉剤は、例えば、２−メチル−２−ブテンであってもよい。
【００６８】
所望により前もって決定され得る所望の時間、前記反応混合物をインキュベートすることは、５分間〜３０分間、１時間、４時間、１０時間、２４時間及び５０時間、前記反応混合物をインキュベートすることを含んでもよい。前記反応混合物をインキュベートするための適切な温度は、摂氏２０度〜摂氏４０度、摂氏５０度及び摂氏６０度、例えば、摂氏約３０度、摂氏約３５度又は摂氏約４０度であることができる。前記インキュベーションは、限定されるものではないが、前記反応混合物を撹拌すること、振盪すること、揺動させること、又は、それ以外の場合、かき混ぜることを含んでもよい。
【００６９】
反応混合物の反応を抑制することは、反応抑制剤を添加することを含んでもよい。適切な反応抑制剤としては、塩及び／又は緩衝剤、例えば重炭酸ナトリウム、重炭酸アンモニウム及び重炭酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。反応混合物の反応を抑制することは、反応混合物のｐＨを適切な酸、塩基及び／又は緩衝液で制御することをさらに含んでもよい。
【００７０】
前記改変フカンを前記硫酸化反応残余分子から分離することは、例えば適切な分画分子量タンジェンシャルフロー濾過フィルタによる濾過を含んでもよい。前記改変フカンを前記硫酸化反応残余分子から分離することは、前記反応混合物からの前記フカン又は前記硫酸化反応残余分子の沈殿を含んでもよい。
【００７１】
化学的硫酸化の他の例示的な実施形態は、前記硫酸化のための適切な溶媒中で懸濁される固体出発フカン組成物を提供すること、ここで前記溶媒は前記フカンを溶解することができない溶媒である；硫酸化剤を加えること；所定の反応温度で、所定の時間、前記反応混合物をインキュベートすること；前記溶媒から前記固体の改変フカンを分離すること；前記固体の改変フカンを洗浄してあらゆる溶媒残余物を除去すること；前記固体の改変フカンを反応抑制すること；及び前記硫酸化反応残余分子から前記改変フカンを分離すること、を含む。
【００７２】
好適な硫酸化剤としては、例えばクロロスルホン酸が挙げられる。好適な溶媒としては、相対極性が０．７６５未満の有機溶媒、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１−プロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、デカメチルシクロペンタシロキサン、酢酸エチル、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、及びジオキサン等が挙げられる。
【００７３】
反応混合物を所定の時間量の間（for a predetermined amount of time）インキュベートすることは、反応混合物を５分〜３０分、１時間、４時間、１０時間、２４時間又は５０時間インキュベートすることを含み得る。反応混合物をある温度（a temperature）でインキュベートすることは、反応混合物を２０℃〜４０℃、５０℃〜６０℃、例えば約３０℃で、約３５℃で又は約４０℃で、インキュベートすることを含み得る。インキュベーションは、これらに限定されないが、攪拌、振盪、ロッキング、またはその他の方法で、反応混合物を攪拌することを含んでもよい。
【００７４】
固体の改変フカンを溶媒から分離することは、例えば、遠心分離、濾過、沈降および流体力学的流体分離のうちの１つを含むことができる。固体の改変フカンを洗浄することは、相対極性が０．７６５より小さい溶媒又は１種以上の有機溶媒からなる溶媒混合物、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、イソプロパノール、1-プロパノール、n-ブタノール、2-ブタノール、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、デカメチルシクロペンタシロキサン、エチルアセテート、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、ジオキサンを用いて洗浄することを含み得る。
【００７５】
反応混合物を反応制御すること（quenching）は、適切な反応制御剤と共に固体の改変フカンを水性溶媒中で可溶化することを含み得る。好適な反応制御剤としては、塩及び／又は緩衝剤、例えば重炭酸ナトリウム、重炭酸アンモニウム及び重炭酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。反応混合物を反応制御することは、可溶化された改変フカンのｐＨを適切な酸、塩基及び／又は緩衝液で制御することをさらに含み得る。
【００７６】
硫酸化反応の残留分子から改変フカンを分離することは、例えば、適切な分画分子量タンジェンシャルフロー濾過フィルタを介して濾過することを含み得る。改変フカンを硫酸化反応の残留分子から分離することは、反応混合物からフカン又は硫酸化反応残留分子を沈殿させることを含み得る。
【００７７】
化学構造の改変
本明細書に記載された方法、システムなどは、フカン組成物、特にフカン組成物中のフカンの化学構造を改変することを含んでもよい。化学構造の改変は、フカン構造から、例えばＯ−アセチル基、Ｎ−アセチル基、メトキシ基、ヒドロキシ基、カルボン酸基及び／又は硫酸官能基から官能基を除去することを含みうる。化学構造の改変は、例えば、酸、塩基、洗浄剤及び／又は酸化剤のような、多種多様な化学試薬を使用することを含みうる。
【００７８】
疾患及び状態
線維性癒着
線維性癒着は、通常は手術（外科的癒着）後に、身体の２つの部分の間に形成される瘢痕のタイプである。線維性癒着は、深刻な問題を引き起こす可能性がある。例えば、雌性生殖器官（卵巣、卵管）を巻き込んだ線維性癒着は、不妊、性交疼痛症、および重度の骨盤痛を引き起こす可能性がある。腸に生じる線維性癒着は、腸の閉塞（obstruction）または閉鎖（blockage）を引き起こす可能性があり、また線維性癒着は、心臓、脊椎、および手のような他の場所でも形成されうる。手術に加えて、線維性癒着は、例えば子宮内膜症、感染、化学療法、放射線、外傷およびがんにより生じることもある。
【００７９】
本明細書では、様々な線維性癒着が議論されている。外科的癒着（surgical adhesion）、外科手術後癒着（post-surgical adhesion）、術後癒着（postoperative adhesions）、骨盤炎症性疾患による癒着、機械的損傷による癒着、放射線による癒着、放射線治療による癒着、外傷による癒着、異物の存在による癒着などの用語は全て、同様のメカニズムによる組織同士の相互の付着を意味し、全てが線維性癒着という用語に包含される。
【００８０】
線維性癒着形成は、通常は身体内で分離している組織同士が互いの組織内に侵食成長する（grow into each other）複雑なプロセスである。外科的癒着（手術後癒着としても知られている）は、外傷に対する組織の、さもなければ正常であったであろう創傷治癒反応から進展し、全腹腔部手術患者の３分の２超（over two-thirds）に生じることが報告されている（Ｅｌｌｉｓ，Ｈ．，Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔ．１３３：４９７（１９７１））。これらの線維性癒着の転帰は多様であり、関係する手術部位や疾患部位など他の部位によって異なる。問題としては、慢性疼痛、腸の閉塞、さらに心臓手術の後の死亡のリスクの増加も挙げられうる（ｄｉＺｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．３８１：１−１８（１９９３）；ｄｉＺｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．６１：２１９−２３５（１９９４）；Ｄｏｂｅｌｌ，Ａ．Ｒ．，Ｊａｉｎ，Ａ．Ｋ．，Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．３７：２７３−２７８（１９８４））。生殖可能年齢の女性においては、全不妊症例の約２０％は子宮、卵管又は卵巣を含む線維性癒着が原因であると推定される（Ｈｏｌｔｚ，Ｇ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４１：４９７−５０７（１９８４）；Ｗｅｉｂｅｌ，Ｍ．Ａ．及びＭａｊｎｏ，Ｇ．Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．１２６：３４５−３５３（１９７３））。
【００８１】
線維性癒着形成のプロセスは、最初に、フィブリンフレームワークの確立及び正常組織の修復が関与する。正常修復プロセスでは中皮の修復に伴い線維素分解が起こる。しかし、線維性癒着形成においては、線維芽細胞の組織網内における増殖の際に線維素のマトリックスが成長して血管形成させ、約３〜５日間以内に組織化された線維性癒着が確立線維される（Ｂｕｃｋｍａｎ，Ｒ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．２１：６７−７６（１９７６）；Ｒａｆｅｒｔｙ，Ａ．Ｔ．，Ｊ．Ａｎａｔ．１２９：６５９−６６４（１９７９））。炎症プロセスには、外傷組織内における好中球の活性化、線維素沈着及び隣接組織同士の結合、マクロファージ浸潤、前記領域内への線維芽細胞増殖、コラーゲン沈着、血管形成並びに永続的線維性癒着組織の確立が含まれる。
【００８２】
外科的癒着を予防するために様々な方法が試されてきた。これらには、手術性外傷を伴う生物化学及び細胞作用に影響を及ぼすことを目的とした薬理的アプローチ並びに患部組織を分離する隔壁法が含まれる。例えば、腹腔洗浄、ヘパリン化溶液、凝血原（procoagulants）の使用、例えば顕微鏡外科手技又は腹腔鏡外科手技の使用など外科手技の改変、手術用手袋からのタルクの除去、さらに細い縫合糸の使用、及び漿膜表面の付着（apposition）を最小限に抑える物理的バリア（フィルム、ゲル又は溶液）の使用が全て試みられてきた。現在のところ、予防的治療には、線維素沈着の予防、炎症の軽減（ステロイド性抗炎症薬及び非ステロイド性抗炎症薬）並びに線維素沈着物の除去も含まれている。
【００８３】
術後癒着の形成を予防するための介入的試みには、ハイドロフローテーション（ｈｙｄｒｏｆｌｏｔａｔｉｏｎ）手法又はバリア器具の使用が含まれてきた。ハイドロフローテーションは、関与する器官を分離状態にしておくように大量のポリマー溶液、例えばデキストラン（Ａｄｈｅｓｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４０：６１２−６１９（１９８３））又はカルボキシメチルセルロース（Ｅｌｋｉｎｓ，Ｔ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４１：９２６−９２８（１９８４））などを手術部位へ点滴注入することを含む。酸化再生セルロース（例えば、Ｉｎｔｅｒｃｅｅｄ（商標））やポリテトラフルオロエチレン（Ｇｏｒｅ−ｔｅｘ手術用膜体）から製造された合成バリア膜及び変性ヒアルロン酸／カルボキシメチルセルロース（ＨＡ／ＣＭＣ）のの組み合わせ（Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商標））から製造された完全再吸収膜も、動物及びヒトの両方における術後癒着形成を軽減させるために用いられてきた（Ｂｕｒｎｓ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｓｕｐｐｌ．５７７：４０−４８（１９９７）；Ｂｕｒｎｓ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．６６：８１４−８２１（１９９６）；Ｂｅｃｋｅｒ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．１８３：２９７−３０６（１９９６））。これらＨＡ／ＣＭＣ膜の成功は、線維性癒着が形成される際の腹膜傷部修復プロセス中に組織を分離させる膜の能力によるものであろう。前記膜は適用後の３〜５日間をかけて損傷組織上に透明粘性コーティングを形成することが観察された。この修復期間は手術後の癒着形成期間と合致する（Ｅｌｌｉｓ，Ｈ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．５０：１０−１６（１９６３））。残念なことに、これらの方法で認められる成功は限定的であった。
【００８４】
腹膜炎には腹膜の炎症が関与する。腹膜炎は激しい症状を引き起すことがある。例えば、腹痛、腹部圧痛及び腹壁防御などがある。腹膜炎には、特発性炎症、解剖に伴う（anatomic）炎症及び／又は腹膜透析関連に伴う炎症が関与する場合がある。腹膜炎には感染が関与する場合もあり、例えば、管腔臓器の穿孔、腹膜の破損、特発性細菌感染腹膜炎及び全身感染によって感染及び腹膜炎が生じることがある。腹膜炎には感染が関与しないこともあり、例えば、腹膜内への滅菌体液の漏出及び滅菌腹部手術によって腹膜炎が生じうる。腹膜炎の予防及び／又は処置のために、様々な試みがなされてきた。例えば、経静脈補水、抗生剤及び手術などの一般的対症療法である。腹膜炎をさらに効果的に、しかも少ない副作用で抑制又はそれ以外の場合処置及び／若しくは予防するための化合物、組成物、方法及び同種のもの（送達アプローチを含む）に対する未だ満たされない需要が存在する。
【００８５】
本明細書において考察される高度硫酸化フカンは、患者における線維性癒着を処置するために使用することができ、線維性癒着を処置するために構成され且つ組成される高度硫酸化フカン医療機器、高度硫酸化フカン組み合わせ（combination）若しくは高度硫酸化フカン医薬品の成分として含まれるか、又は線維性癒着を処置するために構成され且つ組成される高度硫酸化フカン医療機器、高度硫酸化フカン複合物若しくは高度硫酸化フカン医薬品であり得る。例えば、生理的塩類溶液に溶解された本明細書に記載の高度硫酸化フカンを約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、又は７．５ｍｇ／ｍＬで含む高度硫酸化フカン医療機器でありうる。前記生理的塩類溶液は、例えば、乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）、生理食塩液又は生理的デキストラン溶液であってよい。
【００８６】
本明細書に記載の高度硫酸化フカン医療機器は、液体医療機器（liquid medical device）であってもよいものであり、医薬的に許容し得る賦形剤、例えば、緩衝剤、安定剤、保存剤、アジュバントなどを含んでもよい。かかる高度硫酸化フカン医療機器は、前段落におけるフカン医療機器を約０．０１ｍＬ／ｋｇ（患者又は標的の体重１キログラム当たり）〜約１０ｍＬ／ｋｇ又は１５ｍＬ／ｋｇ投与することによって手術前、手術中又は手術後の線維性癒着を処置するために使用され得る。前記高度硫酸化フカン医療機器の患者の手術部位への投与量としては、例えば、約０．０３ｍＬ／ｋｇ、０．１ｍＬ／ｋｇ、０．２ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ、０．５ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ、１．２ｍＬ／ｋｇ、２ｍＬ／ｋｇ、３ｍＬ／ｋｇ、４ｍＬ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ、８ｍＬ／ｋｇ、１０ｍＬ／ｋｇ又は１５ｍＬ／ｋｇが挙げられる。さらなる実施形態において、かかる高度硫酸化フカン医療機器は、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は５０ｍｇ／ｋｇを投与することによって、任意の選択された標的部位、例えば、病変、擦過傷、傷害部位、手術部位及び手術後の部位における線維性癒着を処置するために使用され得る。かかる投与量のいくつかの例としては、例えば、患者の手術部位への、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの、例えば本明細書に記載の高度硫酸化フカンを含む、本明細書に記載のフカンが挙げられる。
【００８７】
前記投与は、例えば、前記標的領域の全体にわたって液体医療機器を点滴すること；前記標的領域の中の（１又は複数の）特定位置に前記液体医療機器を仕向けること；前記標的領域の中の全体若しくは（１又は複数の）特定位置に液体医療機器を噴霧すること、又は、特に線維性癒着しやすい若しくは線維性癒着の発現の懸念があると外科医又は他の専門家が同定した（１又は複数の）特定位置上へ、トロカール、カテーテル、内視鏡若しくは他の侵襲性が最小限である装置を通じて噴霧塗布器であり得る塗布器を介して、液体医療機器を噴霧する若しくはそれ以外の場合送達すること、によって達成され得る。別の態様において、前記投与は、手術創が開いた後でありかつ外科的手技の前、外科的手技の間、又は外科的手技の後でありかつ手術創が閉じる前、に為され得る。所望により、液体医療機器を、（例えば注射器及び針によって）手術が完了した後で投与することも可能であり、また同様に非外科的標的部位に投与することも可能である。患者の手術部位は、例えば、骨盤腔、腹腔、背側腔（ｄｏｒｓａｌ  ｃａｖｉｔｙ）、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節又は筋肉のうち少なくとも１つでありうる。患者の手術部位内への高度硫酸化フカン医療機器の投与は、約１５分未満、約１０分未満、約８分未満、約６分未満、約５分未満、約４分未満、約３分未満、約２分未満、約１分未満、約４５秒未満、約３０秒未満、約２０秒未満、約１５秒未満、約１０秒未満又は約５秒未満で達成され得る。
【００８８】
手術部位への高度硫酸化フカン医療機器での投与の例としては、手術創を開いた後、手術の間、手術創を閉じる前及び／又は手術創を閉じた後における、帝王切開外科的手技、微小血管遊離皮弁再建外科的手技、全層植皮外科的手技、Ｖ−Ｙ伸展皮弁外科的手技、筋膜回旋皮弁外科的手技、関節形成外科的手技、乳房切除外科的手技、腐骨摘出外科的手技、杯形成外科的手技、骨切断外科的手技、骨形成外科的手技、膝蓋骨切除外科的手技、滑膜切除外科的手技、被膜切除外科的手技、腱又は靭帯を修復する外科的手技、腱剥離外科的手技、外科的腱切除、筋膜切開外科的手技、半月板修復外科的手技、脊椎切除外科的手技、篩骨切除外科的手技、コールドウェル・ルック手術外科的手技、涙嚢鼻腔吻合外科的手技、溶解鼻癒着外科的手技（ｌｙｓｉｓ  ｎａｓａｌ  ｓｙｎｅｃｈｉａ  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）、胸腺摘出外科的手技、肺剥離外科的手技、肺切除外科的手技、胸形成外科的手技、二肺葉切除外科的手技、門脈圧亢進手術外科的手技、脾摘出外科的手技、食道切除外科的手技、腹膜炎手術外科的手技、胃切除手術外科的手技、空腸吻合手術外科的手技、腹腔鏡下胆嚢切除手術外科的手技、腹腔鏡下総胆管検査外科的手技、胃腸吻合外科的手技、肥満手術外科的手技、腸切除及び吻合外科的手技、分節的（ｓｅｇｅｍｅｎｔａｌ）肝除去外科的手技、肺葉切除外科的手技、膵切開外科的手技、膵十二指腸切除外科的手技、腫瘍切除外科的手技、腹腔鏡下腎切除外科的手技、膀胱切除外科的手技、腹部又は骨盤の癒着溶解外科的手技、子宮卵管造瘻外科的手技、卵管形成外科的手技、子宮外妊娠腹腔鏡下手術外科的手技、関節置換外科療法外科的手技、骨折修復外科的手技、子宮摘出外科的手技、胆嚢除去外科的手技、心臓バイパス外科的手技、血管形成外科的手技、粥腫切除外科的手技、乳房生検外科的手技、頚動脈内膜切除外科的手技、白内障手術外科的手技、冠状動脈バイパス外科的手技、子宮内膜掻爬術外科的手技、ヘルニア修復外科的手技、腰痛手術外科的手技、結腸部分切除外科的手技、前立腺切除外科的手技及び扁桃摘出外科的手技の手術部位における高度硫酸化フカン医療機器での投与が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８９】
がん一般
がんは、米国における２番目に多い死因であり、全死亡者数のうち２０％超（over 20%）の原因である。がんは、増殖性疾患であり、１又は複数の腫瘍の形成につながり得るある種の細胞の無制御の分裂によって特徴づけられる。がんを処置するために、手術、放射線療法、化学療法及びそれらの併用を含む多くの方法が用いられている。手術は、いくつかの限局性腫瘍のために用いられる比較的一般的な方法であるが、腫瘍切除後の腫瘍再発の可能性は依然として顕著である。
【００９０】
がん及び他の増殖性疾患の処置は、非がん性健常組織に対する損傷又は毒性の可能性により制約を受けていた。放射線療法及び外科的処置において、手技は、一般的に腫瘍部位に限られ、また腫瘍部位の近位で行われてきた。しかし、がん組織の外科的除去を受ける患者には著しいリスクがありうる（例えば、前立腺腫瘍又は脳腫瘍の除去においては、例えば非腫瘍組織の切除の必要が潜在的に低いことによって、周囲の主要組織に対して修復不能な傷害を与える著しいリスクの可能性がある）。さらに、前立腺がんのための第１選択の処置として行われてきた集束放射線による処置でも同様のリスクがある。がんの化学療法による処置において、薬物は全身投与されてきたが、その結果、全身が前記薬物に曝露される。これらの薬物は、がん細胞に対して毒性があるように設計されているが、非がん性細胞に対しても（一般的には）毒性があり、その結果、患者は、がんのための薬物処置を受ける場合に非常に不調になる。経験を通して、腫瘍医は、ある程度の患者が忍容性を示しうる投与量でこれらの薬物を投与することが可能である。しかしながら、これらの投与量では、多くの場合、がんの処置に成功しない。
【００９１】
がんを処置するあらゆる方法に伴う１つの問題は、当該疾患の局所再発であった。例えば、毎年およそ７００，０００人のアメリカ人が限局性がんと診断され（全がん患者のおよそ６４％）、約５００，０００人が、外科的方法を用いて処置される。残念ながら、手術で処置された患者の３２％が初期処置後に再発する（およそ２１％が初期手術部位で再発し、１１％が遠隔転移部位で再発する）。毎年約１００，０００人の患者ががんの限局性再発によって死亡する。このことは、とりわけ乳がんで当てはまったが、乳腺腫瘤摘出を受ける患者の３９％が前記疾患の局所再発を経験することになる。
【００９２】
ステージ分類は、患者におけるがん（固形腫瘍）の進行を判断する方法である。簡略化されたアプローチによって、がんがどの程度進行したのかに基づいて、患者は３つの群又はステージに入れられる。
【００９３】
ステージ１：器官の一部を外科的に除去することによってがんを処置することができる。これは、切除が可能なステージとしても知られている。
【００９４】
ステージ２：がんは、切除が可能なポイントを過ぎて進行したが、依然として器官自体に限定される。
【００９５】
ステージ３：腫瘍が他の器官に広がっている。
【００９６】
多くのがんは、例えば、５−フルオロウラシル（Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）））、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標））、塩酸ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、メトトレキセート及びパクリタキセルを含む抗増殖剤で処置される。抗増殖剤であるメトトレキセート及びパクリタキセルに関連した毒性のいくつかの例は、本明細書において他の箇所で考察される。メトトレキセートは、例えば、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、頭頚部がん、肝がん、肺がん及び精巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた。パクリタキセルは、例えば、卵巣がん、乳がん及び非小細胞性肺がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
【００９７】
５−フルオロウラシルによる毒性としては、心筋虚血などの心臓血管毒性；多幸感、急性小脳症候群及びおよび運動失調などの中枢神経系毒性；脱毛症及び皮膚炎などの皮膚病学的毒性；悪心、嘔吐及び口腔内潰瘍又は胃腸潰瘍などの胃腸毒性；白血球減少症、血小板減少症及び貧血などの血液学的毒性；過敏症及び接触過敏症などの過敏症毒性；流涙増加、羞明及び結膜炎などの眼毒性；並びに発熱などの他の毒性を挙げることができる。５−フルオロウラシルは、例えば、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、肝がん、膀胱がん、頭頚部がん、非小細胞性肺がん、卵巣がん、膵がん及び前立腺がんを含む多くのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
【００９８】
ビンクリスチンによる毒性としては、子供の発作や幻覚などの中枢神経系毒性；脱毛症などの皮膚病学的毒性；発疱（ｖｅｓｉｃａｎｔ）などの血管外遊走毒性；悪心、嘔吐、便秘及び口内炎などの胃腸毒性；骨髄抑制などの血液毒性；末梢神経障害及び自律神経ニューロパシーなどの神経性毒性；複視、一過性失明及び視神経萎縮などの眼毒性；尿閉、高尿酸血症及び膀胱弛緩などの腎臓／代謝毒性；息切れなどの呼吸器毒性；並びに子供の発熱などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えばホジキン病、小細胞肺がん、ウィルムス腫瘍及び精巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
【００９９】
ドキソルビシンによる毒性としては、心電図異常及び心筋症などの心臓血管毒性；脱毛症や爪の変化などの皮膚病学的毒性；発疱などの血管外遊走障害毒性；悪心、嘔吐及び口内炎などの胃腸毒性；尿の赤色着色などの尿生殖器毒性；骨髄抑制などの血液毒性；過敏症及び皮膚発疹などの過敏症毒性；結膜炎などの眼毒性；不妊症などの繁殖毒性；並びに高尿酸血症などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えば、乳がん、肺小細胞がん及び卵巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
【０１００】
シスプラチンによる毒性としては、心電図変化などの心臓血管毒性；色素沈着過剰などの皮膚病学的毒性；刺激（ｉｒｒｉｔａｎｔ）などの血管外遊走障害毒性；悪心及び嘔吐などの胃腸毒性；骨髄抑制及び溶血性貧血などの血液学的毒性；過敏症などの過敏症毒性；末梢神経障害及び急性変性脳疾患などの神経筋毒性；球後視神経炎などの眼毒性；聴力損失及び耳鳴などの耳科学的毒性；中毒性ネフロパシー及び低カリウム血症などの腎臓／代謝毒性；並びに不妊症などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えば、膀胱がん、肺小細胞がん、卵巣がん、精巣がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、頭頚部がん、肝芽腫及び甲状腺がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。塩酸ゲムシタビンによる毒性としては、例えば、骨髄抑制などの血液学的毒性；悪心、嘔吐及び口内炎などの胃腸毒性；血清トランスアミナーゼの一過性上昇などの肝毒性；蛋白尿、血尿、溶血性尿毒症症候群及び腎不全などの腎毒性；発疹及び脱毛症などの皮膚病学的毒性；浮腫及び末梢性浮腫などの浮腫毒性；並びに発熱などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、膵がん及び非小細胞性肺がんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
【０１０１】
本考察は、前立腺、乳房、膵臓、肝臓、腎臓、泌尿生殖器系、脳、胃腸系、呼吸器系及び頭頸部の限局性がん又は固形腫瘍など、処置することが可能な限局性がん又は固形腫瘍の予防又は処置を含む。本明細書における前記組成物等は、拡散又はさらに全身輸送により有効濃度の高度硫酸化フカンを前記腫瘍及び／又は転移に到達させ、前記標的腫瘍からいくらか遠隔部位における高度硫酸化フカンの制御放出を可能にすることによって、転移を含むがんを予防又は処置しうる。以下の段落において、これらのがんのうちいくつかをさらに考察する。
【０１０２】
前立腺がん
前立腺がんは、前立腺を覆う細胞で起こる悪性腫瘍である。米国では、推定で２００，０００人の患者が、今年、前立腺がんを発症し、３０，０００人超が前記疾患で死亡する。前立腺がんは、新たな症例に対する死亡の比率が約１５％である。前記がんは、前立腺の中に残る可能性があるか、又はそれは、周囲組織若しくは遠隔部位（ほとんどの場合、リンパ節及び骨）に広がる。通常、前立腺がんは静かに広がり、それが前立腺を越えて進行した場合のみ症候を生じる。前立腺がんが診断されて早期ステージの間に処置された場合、いくつかの研究において、患者の５年生存率は９４％であった。
【０１０３】
前立腺がんは、多くの場合、５０歳を過ぎた（over age 50）男性の疾患として考察される。実際、前立腺がんの男性の８０％が６０歳以上である。男性が生涯の間に前立腺がんと診断される可能性は、１０の内、約１であり、女性が乳がんになる可能性とおおむね同じである。前記疾患を、多くの場合症候が発現するずっと前に、その発現の早期に検出し得る試験の向上の結果として、新規症例が報告される数は、近年著しく上昇した。ある年に前立腺がんを発症する可能性は、年齢と共に増加するが、５０歳以降で著しく上昇する。
【０１０４】
前立腺がんのための現行の処置の選択肢は、疾患進行の程度、患者の年齢及び全体的健康に依存する。早期ステージのがんだけに罹患しているか、又はさらなるより重篤な疾患に罹患している高齢患者は、保存的に処置され得るが、がんが進行している高齢患者は、より積極的な処置を受けうる。前立腺がんは、放射線治療（外部ビーム放射又は近接照射療法）、ホルモン消退又は去勢（外科的又は化学的）、抗増殖剤、手術、待期的治療（すなわち、「注意深い経過観察」）を含む各種方法によって処置されてきた。処置は、完治を保証するものではなく、一部にはかなりの副作用がある。
【０１０５】
早期ステージの前立腺がん（すなわち、腫瘍が前立腺に限局性である）は、「注意深い経過観察」で扱われてもよい。前立腺がんの手術は、それ以外の面で全体的健康が良好であり、腫瘍が前立腺に限定される患者について推奨されてきた。７０歳未満の男性の前立腺の限局性がんのための一般的処置は、根治的前立腺切除（すなわち、前立腺の外科的除去）であった。
【０１０６】
がんが前立腺領域内において限局性である患者は、一般に、外部ビーム放射（ＥＢＲ）で処置される。前記放射は、がん細胞を死滅させ、腫瘍を縮小させる。ＥＢＲは、限局性前立腺がん処置の２０％未満を占め、これらの患者のおよそ５０％が前記疾患の放射後再発を経験する。早期ステージの前立腺がんの検出及び患者からの需要増大に相まって、近接照射療法（すなわち、局所放射線治療）の使用が増えることが予測されている。１９９５年には、近接照射療法を用いて処置されたのは新規に診断された患者のわずか２．５％であった。近接照射療法は、前立腺腫瘍内に放射性金属の「種」を埋め込むことを含む。
【０１０７】
広まった前立腺がんの処置には、精巣を除去すること又はホルモン治療が含まれる。がんの増殖を引き起こしてきたテストステロンの生成を抑制又は止めるには両方が用いられる。ホルモン消退治療を受けるのは全ての前立腺がん患者のおよそ２０％である。ホルモン治療は、酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））又は酢酸ロイプロリド（Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））を含む。前立腺がんを処置するために用いる抗増殖剤としては、５−フルオロウラシルが挙げられている。
【０１０８】
乳がん
米国において、乳がんは、女性の間で最もよくみられるがんであり、毎年約１８０，０００件の新規症例が診断される（男性の乳がんは、全ての診断された乳がんの約５％を占める）。女性の死因として乳がんを超えるのは肺がんのみであり、乳がんは、毎年およそ５０，０００の死亡の原因となった。アメリカ人の女性において、その生涯の間に乳がんを発症する可能性があるのは８人のうち１人（又は約１３％）である。過去１０年にわたって、最も報告された乳がんは、小さい、原発性の（独立して生じる；転移によって引き起こされない）腫瘍であった。新規に診断された患者のおおむね７０％〜８０％が早期疾患（ステージ１又は２）を示し、大多数には腋窩（わきの下）リンパ節の併発がなかった。
【０１０９】
ほとんどの乳がんは、がん腫（すなわち、上皮組織から増殖する悪性腫瘍）である。肉腫又は結合組織、骨、筋肉若しくは脂肪から生じる腫瘍は乳房がんの１％未満である。また、ほとんどの乳がん（約７５％）は、乳管を覆う組織内で生じる腺管がんである。ずっと少ない数のがん（約７％）が乳腺小葉内で認められ、小葉がんと呼ばれる。他の形態の乳がんのほとんど全ての原因はページェット病（小室及び乳首のがん）及び炎症性がんである。
【０１１０】
乳がんの処置は、複雑になっており、多くの因子に依存する。２つの重要な因子は、腫瘍の型及び進行のステージである。腫瘍の特性は、特に、個々を、２つの群、すなわち、（１）がん再発のリスクが低い個体、及び（２）がん再発のリスクが高い個体、に分けるのに役立つ。特定の予後因子によって、患者はこれらの群のうちいずれかに入る。これらの因子としては、腫瘍の大きさ；女性ホルモンエストロゲン及びプロゲステロン（ＥＲ／ＰＲ）受容体の存在；細胞の増殖周期（腫瘍細胞が活発に分裂しているのか、又は「Ｓ期」であるのかどうか）；「ｈｅｒ−２−ｎｅｕタンパク質」として知られているタンパク質の存在；腫瘍悪性度、すなわち、腫瘍細胞の分化又は変化の指標；及び腫瘍倍数性、すなわち、腫瘍細胞内の遺伝物質の組の数、が挙げられる。
【０１１１】
著しいリンパ節併発のない原発疾患の処置は、乳腺腫瘤摘出及び放射線治療によるものである。より著しいリンパ節併発は、乳房切除及び補助的リンパ節の除去の根拠となり得る。このステージにおいて、転移及び局所再発の可能性は高い。転移性疾患の処置は症状緩和目的であり、放射線治療及び化学療法を含むものであって、これらは免疫を抑制し、細胞を障害し白血球を減少させる。乳がんに対する使用のために、例えば、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、メトトレキセート及びパクリタキセルを含む抗増殖剤が承認されている。
【０１１２】
膵がん
膵臓は、胃及び小腸の近くに位置する消化器系の器官である。それは、２つの主要な機能、すなわち、酵素及びホルモンの生成を有する。膵臓のがんは、外分泌（すなわち、酵素）膵臓内で生じ得（例えば、古典的な膵臓腺がん）、又は内分泌（すなわち、ホルモン）膵臓内で生じ得る。
【０１１３】
外分泌膵臓のがんは、非常に重篤な健康問題である。米国において、およそ２８，０００人の患者が膵がんと診断されるが、一方でほぼ同じ数が毎年この疾患で死亡する。膵がんは、男性及び女性で同程度に生じる。診断における困難、膵がんの固有の攻撃的性質、及び利用可能な全身処置の選択肢が乏しいことのため、膵臓腺がん診断後に５年間生存するのは診断された患者のおよそ４％のみである。膵がんは、乳がん、肺がん、結腸がん及び前立腺がんに続く、がんによる死亡の５番目の原因である。
【０１１４】
膵がんの処置の選択は、腫瘍のステージに大きく依存する。可能な処置としては、手術、抗増殖剤、放射線及び生物学的療法が挙げられる。手術は、通常、がんが切除可能であると考えられるステージ１の患者のために確保されている。場合によっては、手術の前又は後に投与される放射線及び抗増殖剤などの治療の併用によって、患者の生存可能性が増加しうる。切除不能であると考えられる膵がん（通常、ステージＩＩ以降）は、臨床試験における抗増殖剤を用いて処置されうる。例えばゲムシタビン又は５−フルオロウラシルなどの抗増殖剤は、膵がんに対して多少の効果を有し、ゲムシタビンは、症状緩和目的の剤として用いられてきた。これらの抗増殖剤による毒性は、本明細書の別の箇所において考察される。放射線治療は、化学療法と併用して用いられる場合、膵がんに対する多少の効果を有する。放射線治療単独で症候が抑えられることがある。この形態の処置は、ステージＩＩ以降の膵がんにおいても用いられている。
【０１１５】
膀胱がん
１９９８年には、米国で膀胱がんの新規症例が５４，０００件超診断され、該疾患に起因する死亡は約１５，０００件と推定された。膀胱がんは、アメリカ人の男性の中で４番目に多いがんであり、アメリカ人の女性の中で９番目に多いがんである。膀胱がんは女性よりも男性に３倍頻繁に起こる。より高齢の男性の主要な疾患である膀胱がんは、疾病及び死亡の著しい原因である。膀胱がんのリスクは、年齢と共に急激に増加し（症例の８０％が５０歳を過ぎた人々に起こる）、膀胱がんでの全死亡の半分超が７０歳以降で起こる。６５歳を過ぎた白人において、膀胱がんの年間疾病率は、１，０００人当たりおよそ２症例であり、このことは、６５歳未満では１，０００人当たり０．１症例の割合であることと対照をなす。一人が生涯の間において膀胱がんを発症する確率は３％より高いが、膀胱がんで死亡する確率は小さい（＜１％）。膀胱がんが４０歳より若い人々に起こることは稀である。
【０１１６】
最近の研究は、ある種の遺伝子及び遺伝性の代謝能力が膀胱がんにおいて役割を果たす可能性があることを示唆する。移行上皮がん（ＴＣＣ）は、膀胱がんの最もよくみられる形態である。ＴＣＣは、通常、茎状基部上の表在性（表面）腫瘤、乳頭状（疣状）腫瘤、外方増殖性（外側に増殖する）腫瘤として生じる。しかし、場合によっては、ＴＣＣは、広範な基部に付着する可能性があるか、又はそれは、（窪んだ病変内で）潰瘍化したようにみえる可能性がある。乳頭状ＴＣＣは、多くの場合、後に脱分化するか又は個別細胞の特性を喪失する過形成の領域として開始する。乳頭状ＴＣＣの約１０％〜３０％のみが浸潤がんに進行する。対照的に、ＴＣＣの非乳頭状形態は浸潤性になる可能性が高い。記載したように、かかるＴＣＣは、潰瘍化しているか又は平坦にみえることがある。未分化上皮から構成された平坦で非乳頭状のＴＣＣは、上皮内がん（ＣＩＳ又はＴＩＳ）として分類されている。ＣＩＳの組織は、大きく、顕著な核小体（細胞内の丸い実体；タンパク質合成に関与する）を有し、正常な極性を欠いた細胞を含んでいる。
【０１１７】
膀胱がんの処置は、多くの因子に依存する。これらの因子で最も重要なものは、存在する腫瘍の型及びそのステージである。一般的な処置としては、経尿道的切除（ＴＵＲ）、電気外科手術、レーザー外科手術、膀胱内治療、抗増殖剤、外科的治療、膀胱切除及び放射線治療が挙げられる。膀胱がんを処置するために用いられる抗増殖剤の例としては、例えば、５−フルオロウラシル、シスプラチン及びメトトレキセートが挙げられる。延期抗増殖剤である５−フルオロウラシル、シスプラチン及びメトトレキセートによる毒性は、本明細書において他の箇所で考察される。
【０１１８】
脳がん
脳腫瘍は、手術不能であることがしばしばであり、患者の８０％超が診断から１２ヵ月以内に死亡する。米国では原発性頭蓋内（脳）がんの新規症例が毎年およそ１８，０００件診断される。脳腫瘍は、全ての成人がんの約２パーセントを示す。脳腫瘍のうち５０パーセント超は、高悪性度神経膠腫（すなわち、多形性神経膠芽細胞腫及び退形成星細胞腫腫瘍）である。これらの腫瘍の患者は、しばしば、運動機能障害、発作及び視力障害などの重度の障害に苦しむ。
【０１１９】
脳組織内で発生する腫瘍は、原発性脳腫瘍として知られている。原発性脳腫瘍は、それらが発生する組織の型によって分類される。最も一般的な脳腫瘍は、神経膠（支持）組織内で発生する神経膠腫である。他のものとしては、星細胞腫、脳幹部神経膠腫、上衣腫及び乏突起神経膠腫が挙げられる。
【０１２０】
脳腫瘍の外科的除去は、ほとんどのタイプについて及びほとんどの位置において推奨されるが、神経機能の保存の制約の中でできるだけ完全であるべきである。この規則の例外は、臨床的エビデンスに基づき診断され、およそ５０％で（approximately 50% of the time）初期手術なしで処置される、脳橋神経膠腫などの深在腫瘍の場合である。しかしながら、多くの場合は、生検による診断が行われる。到達し且つ切除することが困難な病変については、定位生検を用いることができる。治癒がまれであるか又は切除不能な脳腫瘍に罹患している患者は、前記腫瘍の局所的制御を向上させるために外部ビーム放射線治療と併用して用いられる放射線増感剤、温熱療法若しくは組織内近接照射療法を評価する臨床試験又は新しい薬物及び生体応答調節剤を評価する研究のための候補と考えられるべきである。
【０１２１】
放射線治療は、ほとんどの腫瘍タイプの処置において主要な役割を有し、治癒率を上昇させること又は無病生存期間を延長させることが可能である。放射線治療は、最初に手術単独で処置された患者における再発の処置においても有用であり得る。手術及び放射線治療の前、間又は後に、化学療法を用いてもよい。同様に、再発性腫瘍も化学療法で処置される。脳がんの処置で用いられる抗増殖剤としては、シスプラチンが挙げられる。この抗増殖剤に関連した毒性の例は、本明細書において他の箇所で考察される。
【０１２２】
再狭窄
再狭窄は、血管壁肥厚と、血管により組織へ供給される血流の喪失とにつながる、慢性血管損傷の形態である。この炎症性疾患は、血管閉塞を軽減する任意の操作を含む血管再建手技に応答して生じることがある。したがって、再狭窄は、これらの手技の有効性を限定する主要な制限的因子である。
【０１２３】
本考察は、例えば治療上有効量のオリゴヌクレオチド治療薬と抗炎症剤との配合物を血管に投与することによる再狭窄の予防又は処置を含む。適切な組成物は、再狭窄部位若しくは潜在的再狭窄部位で外科的に埋め込まれ得るポリマー担体を含むか、又はポリマーペースト若しくはポリマーゲルとしてカテーテルを介して注入され得る。適切な組成物は、本明細書において考察される高度硫酸化フカンを含んでもよい。
【０１２４】
関節炎
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節組織の疼痛、腫脹、滑膜細胞増殖（パンヌス形成）及び破壊を特徴とする消耗性慢性炎症性疾患である。進行期において、前記疾患はしばしば重要な器官を損傷し、致死的となり得る。前記疾患は、免疫系（マクロファージ／単球、好中球、Ｂ細胞及びＴ細胞）複合的サイトカイン相互作用並びに滑膜細胞の機能不全及び増殖の複数の要素を含む。メトトレキセートなどの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）による早期の積極的処置が推奨されており、該薬物は、本明細書において他の箇所で考察される。
【０１２５】
結晶誘発性関節炎は、関節内におけるマクロファージ及び好中球の結晶誘発性活性化を特徴とされてきたものであり、その後、何日間も激痛が生じる。前記疾患は、発症の間の間隔が短くなり、患者が病的状態であることが増えるように進行する。この疾患は、概して、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））などの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）で対症的に処置されてきた。この抗炎症剤は、浮動性めまい及び頭痛などの中枢神経系毒性；発疹及びそう痒などの皮膚病学的毒性；悪化した潰瘍性大腸炎及びクローン病などの胃腸毒性；急性腎不全及び腎乳頭壊死などの尿生殖器毒性；無顆粒球症、白血球減少症及び血小板減少症などの血液学的毒性；肝トランスアミナーゼ上昇及び肝炎などの肝毒性；並びに喘息及び過敏症などの他の毒性を含む毒性を有する。
【０１２６】
本考察は、例えば治療上有効量のオリゴヌクレオチド治療薬及び所望により抗炎症剤を患者に投与することによる、関節リウマチの予防又は処置を含む。適切な組成物は、前記抗炎症剤の制御放出担体として関節に注入され得るポリマー担体と、（前記ポリマー担体中に組み込まれた）前記オリゴヌクレオチド治療薬の制御放出担体としての微粒子とを含む。適切な組成物は、本明細書において考察される高度硫酸化フカンを含みうる。かかるポリマー担体は、ポリマー微小球、ペースト又はゲルの形態を取りうる。
【０１２７】
炎症状態
本明細書に記載の前記組成物などは、例えばオリゴヌクレオチド治療薬及び抗炎症剤を含む組成物を患者に投与することを含む、好中球が関与する炎症状態の抑制又は処置を、所望により行うことができる。かかる状態の例としては、結晶誘導性関節炎、骨関節炎、非リウマチ様炎症性関節炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、サルコイドーシス、乾癬、湿疹、炎症性大腸疾患、慢性炎症性肺疾患、神経障害及び多発性硬化症が挙げられる。これらの疾患の一部は、以下の段落でさらに考察される。
【０１２８】
慢性炎症性皮膚疾患（乾癬及び湿疹を含む）
乾癬は、痒みがあり、ひりひりし、チクチクし、容易に出血する、隆起し、肥厚し、鱗片状である病変を特徴とする一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。これらの疾患は、前記疾患の後期に細胞増殖成分及び血管形成成分を有するが、患者は、多くの場合、付随的な関節炎状態を有する。症状は、プレドニゾンなどのステロイド性抗炎症剤又はメトトレキセートなどの抗増殖剤によって処置されてもよく、それらの剤は、本明細書において他の箇所で考察される。慢性炎症性皮膚疾患、例えば、乾癬及び／もしくは湿疹の抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防のために、本明細書における前記組成物を用いてもよい。
【０１２９】
以下は、本明細書において考察される組成物で処置することが可能な、例えば、動静脈奇形（血管奇形）における動脈塞栓術；月経過多；急性出血；中枢神経系障害；脾機能亢進；乾癬などの炎症性皮膚疾患；湿疹様疾患（アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹）；免疫水疱性疾患；並びに関節リウマチ、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、サルコイドーシス、結晶誘発性関節炎及び骨関節炎（それらの全ては、顕著な症候として、炎症を起こした、痛みを伴う関節を特徴とする）を含む様々な状態を含む炎症性関節炎を含む炎症性疾患のいくつかのさらなる代表的例を提供する。
【０１３０】
虚血
虚血（ｉｓｃｈｅｍｉａ）又は乏血（ｉｓｃｈａｅｍｉａ）には血液供給における制限が関与し、前記制限としては、適切な組織機能のために必要な酸素、グルコース及び他の成分の供給の不足が挙げられ、組織の傷害及び／又は機能障害を引き起こす。虚血は、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、組織が無酸素化して壊死したりする可能性があり、血液凝固が発生する可能性がある。虚血の予防及び／又は処置を行うために各種試みが行われてきた。例えば、血流復活治療あるいは再灌流治療がある。しかし、血液復活治療には酸素の再導入が関与し、これはフリーラジカルの生成によるさらなる損傷を引き起こす可能性があり、再灌流による傷害を発生させる可能性がある。再灌流傷害は深刻な問題を引き起こす可能性がある。本明細書に記載の組成物は、虚血及び／もしくは再灌流傷害を抑制するか又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３１】
内毒素血症
内毒素血症は、血液中にエンドトキシンが存在することである。内毒素血症は深刻な問題を引き起こす可能性がある。例えば、内毒素血症は敗血症性ショックにつながる可能性がある。本明細書に記載の組成物は、内毒素血症を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３２】
ケロイド瘢痕
ケロイド形質は、創傷を、隆起した瘢痕を伴って治癒させる。ケロイド形質の隆起瘢痕には異常な線維性瘢痕化が含まれる。ケロイド形質は、重度の問題、例えば疼痛や外観上の問題（disfigurement）を引き起こす。本明細書に記載の組成物は、ケロイド形質及びその結果として生じる隆起瘢痕を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３３】
ケロイド（ケロイド瘢痕）は、正常な皮膚の上に増殖して広がるタイプの瘢痕である。ケロイドにはＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの異常増殖を含む異常コラーゲン増殖が関与する。ケロイドは、重度の問題、例えば、疼痛、そう痒を引き起こし、感染した場合は潰瘍化する可能性がある。ケロイドを処置又は予防するために、外科手術、包帯、ステロイド注入及びレーザー治療の使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、ケロイドを抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３４】
皮膚炎
皮膚炎にはアトピー性皮膚炎及び接触性皮膚炎を含む皮膚の炎症が含まれる。例えば、接触性皮膚炎には、皮膚の異物との接触の後に発症する局所的発疹及び／又は皮膚の刺激が関与する。例えば、アトピー性皮膚炎は、慢性的に再発性である掻痒性皮膚疾患である。アトピー性皮膚炎は時にベニエー痒疹、神経皮膚炎、内在性湿疹、屈面性湿疹、乳児皮膚炎、小児期湿疹及び急性単純性痒疹（ｐｒｕｒｉｇｏ  ｄｉａｔｈｓｉｑｕｅ）と称される。湿疹は、皮膚炎の形態の疾患である。他のタイプの皮膚炎としては、海綿状皮膚炎、脂漏性皮膚炎（ふけ）、汗疱状皮膚炎（汗疱）、蕁麻疹、小疱性皮膚炎（水疱性皮膚炎）及び丘疹性蕁麻疹（ｐｏｐｕｌａｒ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ）が挙げられる。皮膚炎は、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、乾燥肌、皮膚発疹、皮膚浮腫、皮膚発赤、皮膚掻痒、痂皮形成、ひび割れ、水膨れ、滲出及び出血である。皮膚炎を処置又は予防するために、コルチコステロイド及びコールタールの使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、アトピー性皮膚炎、湿疹、接触性皮膚炎、海綿状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、蕁麻疹、小疱性皮膚炎及び丘疹性蕁麻疹を含む皮膚炎を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３５】
酒さ
酒さは、典型的には顔面紅斑を特徴とする慢性疾患又は慢性状態である。酒さは、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、酒さは典型的には額、鼻又は頬上の発赤として発生し、頸部、耳、頭皮及び胸部上の発赤を引き起こすこともある。例えば、酒さは、毛細血管拡張、丘疹、膿疱、痛痒感を含むさらなる症候を引き起こし、進行した場合には鼻瘤（赤色の分葉状の鼻）を発症しうる。酒さのサブタイプとしては、紅斑毛細血管拡張型酒さ、丘疹膿疱性酒さ、瘤腫型酒さ（ｐｈｙｍａｔｏｕｓ  ｒｏｓａｃｅａ）及び眼型酒さが挙げられる。酒さを処置又は予防するために、抗炎症剤及び抗生剤の使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、紅斑毛細血管拡張酒さ、丘疹膿疱性酒さ及び眼性酒さのサブタイプを含む酒さを抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防するために用いられてもよい。
【０１３６】
医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬品
本明細書における考察は、医療機器、医療材料、組み合わせ生成物又は医薬的に許容し得る容器内に本明細書において考察される組成物を含む、医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬品も提供する。前記製品（products）は前記容器に添付された注意事項をさらに含んでもよい。注意事項は典型的には、医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬又は生物医薬の製造、使用又は販売を規制する所管官庁によって規定された形態であり、これによって注意書きは、例えば、高度硫酸化フカンが、例えば、増殖性疾患又は炎症性疾患（例えば、炎症性関節炎、再狭窄、外科的癒着、乾癬及び腹膜炎など）の処置のためにヒト又は動物に投与するための抗増殖剤又は抗炎症剤として承認されている旨など、官庁による前記組成物の承認を反映するものとなる。本明細書に記載の高度硫酸化フカンの使用のための説明書も含まれてよい。かかる説明書は、患者の投与及び投与方法に関する情報を含んでもよい。
【０１３７】
本出願は、前記フカン及び組成物自体を製造することを含む、本明細書において考察される前記高度硫酸化フカン、システムなどの各種要素の製造方法、並びにその使用方法、例えば、本明細書に記載の状態、前記疾患などの処置をさらに対象とする。
【０１３８】
本出願は、線維性癒着、関節炎、乾癬又は所望の他の疾患を処置するための、本明細書に示された高度硫酸化フカン及び高度硫酸化フカン組成物を含む医療機器、医療材料、医薬組み合わせ製品及び医薬品を含む。前記材料などは、外科的癒着、関節炎、乾癬又は他の所望の疾患などの線維性癒着を処置するための医薬において使用することができる。医薬的に有効な量の、本明細書において考察されるフコイダンなどのフカンを医薬的に許容し得る賦形剤又は緩衝剤と併用することを含む、ヒト患者を含む患者における線維性癒着、関節炎及び乾癬のうち少なくとも１つに関連した症状を軽減させることが可能なかかる医薬の製造方法及び使用方法も提供される。
【実施例】
【０１３９】
以下の実施例は、本明細書におけるある種の実施形態の例示的考察を提供するが、本開示及び請求項は、それらに限定されるものではない。
【０１４０】
実施例１：化学的構造的改変
ラミナリア・ヒペルボレア（Ｌａｍｉｎａｒｉａ  Ｈｙｐｅｒｂｏｒｅａ）から滲出物−抽出物を得た。前記滲出物−抽出物を濾過し、１００ｋＤａフィルタを用いた(over）タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によって小分子を除去した。改変させられないかぎり未改変の試料Ａ（otherwise unmodified sample A）を得るために、得られた保留物（retentate）の試料を凍結乾燥した。得られた保留物を、１０ＭのＮａＯＨ溶液の添加によって０．２５ＭＮａＯＨとし、室温で１６時間静置した。次いで、得られた試料を５０ｋＤａのフィルタを用いて遠心濾過し、得られた保留物を回収して凍結乾燥し、塩基処理試料Ｂを得た。陽子磁気共鳴分光法（１Ｈ−ＮＭＲ）によって未改変試料Ａ及び塩基処理試料Ｂの両方を分析した。得られた１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図１Ａに示す。
【０１４１】
図１Ａは、達成された前記フカンの化学的構造的改変を示すが、前記未改変試料Ａに存在する約２．０ｐｐｍのケミカルシフトを伴うブロードピークは、前記塩基処理試料Ｂには存在しない。
【０１４２】
さらに、２Ｄ１Ｈ−１３Ｃ異核多量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ）によって未改変試料Ａ及び塩基処理／改変試料Ｂを分析した。図１Ｂに示されるＨＭＱＣスペクトルを、５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計によって、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で取得した。前記ＨＭＱＣスペクトルの多くの走査を、２５６〜５１２回の走査の内で８回の増分ずつで、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で取得し、かかる走査を組み合わせて図１Ｂの前記スペクトルを作製した。
【０１４３】
未改変試料Ａについての前記ＨＭＱＣスペクトルは、図１Ｂにおいて円で囲まれたシグナルによって示されるＯ−アセチル基に対応するクロスピークを有する。このクロスピークは、塩基処理試料Ｂについての前記スペクトルには存在しない。このことは、前記フカンからアセチル基が除去されたことを示しており、ひいては、前記ＮａＯＨ処置により塩基処理試料Ｂにおいて前記フカンが化学的構造改変していることを示している。
【０１４４】
実施例２：化学的脱硫酸化
供給原料フコイダン組成物を蒸留水に１００ｍｇ／ｍＬで溶解して出発溶液を得た。前記供給原料フコイダン組成物を含有する前記出発溶液をホットプレート上で６０℃とした。前記供給原料フコイダン組成物を含有する前記出発溶液に１０ＭのＮａＯＨを添加し、ＮａＯＨ終濃度を０．２５ＭＮａＯＨとして、脱硫酸化プロセスを開始した。アリコートを０．５時間、１時間及び後続の時間毎に得た。各アリコートは直ちに塩酸（ＨＣｌ）で中和して、前記脱硫酸化プロセスを停止させた。反応抑制されたアリコートをｐＨ紙上に約０．１ｍＬブロットすることによって、塩基の反応抑制を確認した。
【０１４５】
各アリコートをゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）に供して、分解及び脱硫酸化をモニターした。得られた結果のサブセットを、図２の曲線上の標識の一部が同定される表１に示す。分子量決定のためのゲル浸透クロマトグラフィー分析は全て以下のカラム構成を用いて行った：Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｇｕａｒｄを伴う直列の２×Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｌｉｎｅａｒ。移動相は、０．６ｍＬ／分の０．１Ｍの硝酸ナトリウム流であった。前記カラム及び検出器は３０℃で保持された。検出はＷａｔｅｒｓ２４１４示差屈折率検出器により行われた。
【０１４６】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのトレース可能な標準物質：ＤＸＴ３７５５Ｋ（ピーク分子量＝２１６４ｋＤａ）、ＤＸＴ８２０Ｋ（ピーク分子量＝７４５ｋＤａ）、ＤＸＴ７６０Ｋ（ピーク分子量＝６２１ｋＤａ）、ＤＸＴ６７０Ｋ（ピーク分子量＝４０１ｋＤａ）、ＤＸＴ５３０Ｋ（ピーク分子量＝４９０ｋＤａ）、ＤＸＴ５００Ｋ（ピーク分子量＝３９０ｋＤａ）、ＤＸＴ２７０Ｋ（ピーク分子量＝１９６ｋＤａ）、ＤＸＴ２２５Ｋ（ピーク分子量＝２１３ｋＤａ）、ＤＸＴ１５０Ｋ（ピーク分子量＝１２４ｋＤａ）、ＤＸＴ５５Ｋ（ピーク分子量＝５０ｋＤａ）、ＤＸＴ５０Ｋ（ピーク分子量＝４４ｋＤａ）及びＤＸＴ５Ｋ（ピーク分子量＝４ｋＤａ）（これらの標準物質のピーク分子量は約４ｋＤａ〜約２，２００ｋＤａであった）を含む標準曲線に対して試料流を定量した。用いられる標準曲線は、例えば、Ｄｅｘｔｒａｎ３７５５ｋＤａ、Ｄｅｘｔｒａｎ５０ｋＤａ及びＤｅｘｔｒａｎ５５ｋＤａのうち少なくとも１つ、並びに本明細書において考察される３種〜６種のさらなるトレース可能な標準物質を含み、較正点は、用いられる較正物質のピーク分子量であってもよい。例示的な較正曲線は、ＤＸＴ３７５５Ｋ、ＤＸＴ８２０Ｋ、ＤＸＴ５３０Ｋ、ＤＸＴ５００Ｋ、ＤＸＴ２２５Ｋ及びＤＸＴ５５Ｋからなってもよい。ここで用いられたカラムは、フカンの定量のために用いられる標準物質のピーク分子量範囲を包含し且つそれを超えて拡張された総有効分子量範囲を有するものであった。
【０１４７】
０．１Ｍの硝酸ナトリウム中に１０ｍｇ／ｍＬの硫酸マグネシウムの試料を溶解させた。硫酸の一部をナトリウム形態へ平衡化することで硫酸ナトリウムが生じる。改変フコイダンクロマトグラムにおける保持時間約３３．１分での、前記硫酸ナトリウムに相関したピークの存在によって、前記供給原料フコイダン組成物の脱硫酸化が質的に同定された。硫酸ナトリウムの存在は、図２の曲線上の標識の一部が同定される表２に示される。
【０１４８】
以下の表の結果は、分子量分布のある種の特性について用いられる略語を含む。ゲル浸透クロマトグラフィーはＧＰＣと表され、ピーク保持時間はＰＲＴと表され、ピーク分子量はＰＭＷと表され、重量平均分子量はＷＡＭＷと表され、数平均分子量はＮＡＭＷと表され、百分率分布は％ｄｉｓｔ．と表され、分子量はＭＷと表され、多分散性指標はＰＤＩと表される。
【０１４９】
【表１】
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【０１５０】
【表２】
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【０１５１】
表１、表２及び図２は、水酸化ナトリウムなどの塩基を用いて供給原料フコイダン組成物の脱硫酸化が達成されたことを示す。水酸化ナトリウムを用いた処理によって、フコイダンを著しく分解することなく、且つ所望の改変フカンに望ましくない添加剤を導入することなく、フカン組成物の脱硫酸化が制御可能となる。上記の方法の結果として、前記供給原料フコイダン組成物の重量平均分子量は、充分にＧＰＣ計装の誤差の範囲内である２％を超えて変化することはない。
【０１５２】
実施例３：化学的脱硫酸化
０．５ＭのＮａＯＨに供給原料フコイダン組成物を５０ｍｇ／ｍＬで溶解して出発溶液を得た。前記供給原料フコイダン組成物を含有する前記出発溶液を水浴中で６０℃とし、脱硫酸化プロセスを開始した。アリコートを１時間後、４時間後及び２４時間後に得た。各アリコートは直ちに塩酸（ＨＣｌ）で中和して、前記脱硫酸化プロセスを停止させた。反応抑制されたアリコートをｐＨ紙上に約０．１ｍＬブロットすることによって、塩基の反応抑制を確認した。
【０１５３】
中和された各アリコートを１０ｋＤａ遠心フィルタを用いて６倍量の５ｍＭのＮａＣｌに対して限外濾過した。得られたアリコート保留物（aliquot-retentates）３部を２０部の蒸留水中に希釈した。希釈された各アリコート保留物中における改変フコイダンの濃度を総固体含有率によって決定した。結果を以下の表３に示す。希釈されたアリコート保留物を総硫黄含有率について誘導結合プラズマ光学放出分光法によって分析し、以下の表３に示す。硫黄含有率に硫黄に対する硫酸のモル比を掛けて前記改変フコイダンの％ｗ／ｗ硫酸含有率を得ることによって、硫黄含有率を硫酸含有率に変換した。
【０１５４】
【表３】
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【０１５５】
実施例４：化学的硫酸化
蒸留水中に出発フカン組成物を１０ｍｇ／ｍＬで溶解して約５００ｍＬの出発溶液を得る。出発フカンを含有する出発溶液を、約３０分間、酸性化Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ１２０樹脂上に再循環させることによってプロトン化する。溶液中の得られた酸性化フカン組成物を凍結乾燥して、固体の酸性化フカン組成物を得る。約１５ｇのＳＯ３−ＤＭＦ硫酸化剤錯体を含有する４０ｍＬのホルムアミドと１６０ｍＬのジメチルホルムアミドとの溶媒混合物中に前記固体の酸性化フカン組成物を溶解する。４０ｍＬの２−メチル−２−ブテンを反応混合物に添加する。反応混合物を、撹拌しつつ、３０℃で２時間インキュベートする。２時間後、２００ｍＬの５％ｗ／ｖ重炭酸ナトリウムの添加によって反応物を反応抑制する。得られた改変フカンを、５ｋＤａのＴＦＦフィルタを用いたタンジェンシャルフロー濾過によって硫酸化残余分子から分離する。
【０１５６】
実施例５：化学的硫酸化
約２００ｍＬのジクロロメタン中に約５ｇの出発フカン組成物を懸濁する。約１．６ｍＬのクロロスルホン酸を懸濁液に添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌する。懸濁液を紙フィルタにより濾過し、得られた固体の改変フカンを、まず約１００ｍＬのジクロロメタンで洗浄し、次いで約１００ｍＬのエタノールで洗浄し、その後１００ｍＬのジオキサンで洗浄する。洗浄された固体の改変フカンを５％ｗ／ｖ重炭酸ナトリウム溶液に溶解し、得られた改変フカンを、５ｋＤａのＴＦＦフィルタを用いたタンジェンシャルフロー濾過によって硫酸化残余分子から分離する。
【０１５７】
様々な硫酸化比の改変フカンの作成
フカン組成物中におけるフカンの硫酸化レベルの制御及び／又は改変を行うために、化学的硫酸化方法、化学的脱硫酸化方法又は加溶媒分解性脱硫酸化方法を用いることができる。
【０１５８】
実施例６：改変フカンのフコースレベル、ガラクトースレベル及び硫酸レベルの測定
褐海藻から抽出された１１の異なるフカン組成物は、フカンを実質的に含んでいた。ここで示される１１の改変フカンは、以下、フカン１〜フカン１１と称される。フカン１〜フカン３、フカン６及びフカン８は、白色の固体であった。フカン４、フカン５、フカン７及びフカン９〜フカン１１は、淡褐色の固体であった。前記改変フカンを７２％ｗ／ｗ硫酸に４０ｍｇ／ｍＬで溶解し、水浴中で４５℃で３０分間インキュベートした。次いで、酸加水分解物を、高圧チューブ中において４％ｗ／ｗ硫酸に希釈し、１２０℃で６０分間インキュベートした。得られた第２酸加水分解物を、蒸留水で１／３３３の濃度に希釈し、パルス化電流滴定検出により設定された高性能アニオン交換カラムクロマトグラフィー上に流す。Ｃａｒｂｏｐａｃ（登録商標）ＰＡ２０分析カラムを用い、アイソクラティックポンプを用いて１０ｍＭのＮａＯＨ溶出剤を１．０ｍＬ／分で流すことによって、分析物の分離を完遂した。
【０１５９】
前記改変フカンのフコース含有率を、フコースについての標準曲線上の補間によって決定した。前記改変フカンのガラクトース含有率を、標準物質添加の方法によって決定した。
【０１６０】
前記改変フカンを、脱イオン水に溶解し、酸性条件で加水分解し、ブリティッシュコロンビア州バーナビーのＡＬＳ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって実施された％ｗ／ｗ総硫黄含有率についての誘導結合プラズマ質量分析（ＩＣＰ−ＭＳ）によって分析した。硫黄に対する硫酸のモル比を硫黄含有率に掛けて前記改変フカン中の％ｗ／ｗ硫酸含有率を得ることによって、硫黄含有率を硫酸含有率に変換した。
【０１６１】
総フコース成分、総ガラクトース成分及び総硫酸成分についての％ｗ／ｗの結果を、それぞれの分析物のモル質量で割ることによってモル比に変換する。総フコースに対する総硫酸のモル比、総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比、及び１１の異なる改変フカンについての硫酸化レベルを、以下の表４に示す。
【０１６２】
【表４】
2021531305.tif 000006
【０１６３】
表４は、硫酸化の各種比を有する改変フカンを示す。前記改変フカンは、総フコースに対する総硫酸のモル比が約０．６〜約２．９であり、総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比が約０．５〜約２．０である。
【０１６４】
実施例７：改変フカンの分子量分布、炭水化物含有率及び単糖成分の測定
ジョージア大学の複合炭水化物研究センターによって行われたガススペクトロメトリー−質量スペクトロスコピー（ｇａｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ−ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＧＣ−ＭＳ）によって、総炭水化物及び単糖組成物について改変フカン（フカン１、フカン９、フカン１０及びフカン１１）を分析した。酸性メタノリシスによって前記改変フカン組成物を誘導体化して、Ｏ−トリメチルシリル（Ｏ−ＴＭＳ）誘導体を生成した。誘導体化の後、Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ｅｑｕｉｔｙ−１溶融シリカ毛管カラム（３０ｍ、内径０．２５ｍｍ）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ５９７５Ｃ質量スペクトロメトリー検出器に連結したＡｇｉｌｅｎｔ７８９０Ａガスクロマトグラフィーシステムで前記改変フカン組成物を分析した。前記改変フカンの前記総炭水化物含有率及び前記単糖組成物についての結果を以下の表５に示す。以下の表における炭水化物は、「ｃａｒｂ．」と略記される。
【０１６５】
【表５】
2021531305.tif 000007
【０１６６】
前記改変フカン（フカン１、フカン２、フカン３、フカン６、フカン８、フカン９、フカン１０及びフカン１１）について得られた分子量分布を評価するために、ゲル浸透クロマトグラフィーを用いた。ゲル浸透クロマトグラフィーにおける使用のために利用可能な異なるパラメータ、カラム及び標準物質が多数あるため、分子量の分析に利用可能な計装構成も多様となる。ここでは分子量決定のために、以下のパラメータを用いてＧＰＣを行った。移動相は、０．１Ｍの硝酸ナトリウム流を０．６ｍＬ／分とした。カラムコンパートメント及び検出器は３０℃とした。検出にはＷａｔｅｒｓ２４１４示差屈折率検出器を用いた。
【０１６７】
適切なＧＰＣカラムとしては、水性溶媒と適合性のあるＧＰＣカラム、例えば、スルホン化スチレンジビニルベンゼン、ＮＨ官能基を有したアクリレートコポリマー網状組織、変性シリカ及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルのうち少なくとも１つが充填されたカラムが挙げられる。ここでは分析のために、粒径６μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された内径（ＩＤ）が６ｍｍであり長さ４０ｍｍであるガードカラム１つ、続いて排除限界が約７，０００ｋＤａであり有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａである粒径１２μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍである第１の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、続いて排除限界が約７，０００ｋＤａであり有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａである粒径１０μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍである第２の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、を含む３つのカラムを直列に用いた。前記カラム設定の総有効分子量範囲は、約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａであった。このカラム設定は例えば、直列に接続されたＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）ガード−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）２０００−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｌｉｎｅａｒカラムであってよい。
【０１６８】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのトレース可能な標準物質であるＤＸＴ３７５５Ｋ（ピーク分子量＝２１６４ｋＤａ）、ＤＸＴ８２０Ｋ（ピーク分子量＝７４５ｋＤａ）、ＤＸＴ７６０Ｋ（ピーク分子量＝６２１ｋＤａ）、ＤＸＴ６７０Ｋ（ピーク分子量＝４０１ｋＤａ）、ＤＸＴ５３０Ｋ（ピーク分子量＝４９０ｋＤａ）、ＤＸＴ５００Ｋ（ピーク分子量＝３９０ｋＤａ）、ＤＸＴ２７０Ｋ（ピーク分子量＝１９６ｋＤａ）、ＤＸＴ２２５Ｋ（ピーク分子量＝２１３ｋＤａ）、ＤＸＴ１５０Ｋ（ピーク分子量＝１２４ｋＤａ）、ＤＸＴ５５Ｋ（ピーク分子量＝５０ｋＤａ）、ＤＸＴ５０Ｋ（ピーク分子量＝４４ｋＤａ）及びＤＸＴ５Ｋ（ピーク分子量＝４ｋＤａ）（これらの標準物質のピーク分子量は約４ｋＤａ〜約２，２００ｋＤａである）を含む標準曲線に対して試料流を定量した。用いられる標準曲線は、例えば、Ｄｅｘｔｒａｎ３７５５ｋＤａ、Ｄｅｘｔｒａｎ５０ｋＤａ及びＤｅｘｔｒａｎ５５ｋＤａのうち少なくとも１つ、並びに本明細書において考察される３種〜６種のさらなるトレース可能な標準物質を含み、較正点は、用いられる較正物質のピーク分子量であってもよい。例示的な較正曲線は、ＤＸＴ３７５５Ｋ、ＤＸＴ８２０Ｋ、ＤＸＴ５３０Ｋ、ＤＸＴ５００Ｋ、ＤＸＴ２２５Ｋ及びＤＸＴ５５Ｋからなってもよい。ここで用いられたカラムは、前記フカンの定量のために用いられる前記標準物質のピーク分子量範囲を包含し且つそれを超えて拡張された総有効分子量範囲を有するものであった。
【０１６９】
以下の表６の結果は、分子量分布のある種の特性について用いられる略語を含む。ゲル浸透クロマトグラフィーはＧＰＣと表され、ピーク分子量はＰＭＷと表され、重量平均分子量はＷＡＭＷと表され、数平均分子量はＮＡＭＷと表され、百分率分布は％ｄｉｓｔ．と表され、分子量はＭＷと表される。
【０１７０】
【表６】
2021531305.tif 000008
【０１７１】
実施例８：硬膜外線維性癒着の処置
フカン１〜フカン４、フカン７及びフカン９〜フカン１１から乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の１００ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製した。フカン８から乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の５００ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製した。スプラーグ・ドーリー・ラットにラミネクトミー手術を施した。ラットの平均体重及び１キログラム当たりのミリグラム表示の投与量を以下の表７に示す。ブピバカイン溶液を用いて腰椎に沿ったラインブロック（line block）を作製した。ラットの背部を洗浄し、次いで滅菌ドレープで覆った。正中皮膚切開によって腰筋膜を開き、腰仙筋膜を切開し、傍脊柱筋を切開して下にある椎弓板を露出させた。椎骨の中心の骨を除去した。手技の全体にわたって、乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）の灌注及び綿棒による圧力によって止血を維持した。露出させた硬膜を、直接、１５マイクロリットルのＬＲＳ対照によって、又はフコイダンによって処理した。筋層及び皮膚層を縫合糸で閉じ、前記ラットを１週間回復させた後、癒着の定量のために屠殺した。硬膜上の癒着の存在及び大きさを書きとめた。癒着及び露出硬膜の寸法を記録し、用いて、総露出硬膜面積に対する癒着面積の割合である癒着被覆率を算出した。
式１：癒着被覆率（％）＝１００×硬膜癒着面積（ｍｍ２）÷総露出硬膜面積（ｍｍ２）
【０１７２】
ＬＲＳの投与を受けた対照群は、式１を用いて算定したところ癒着被覆率は６５％であった。表４に開示される１０種の改変フカンについての癒着被覆率を以下の表７に示すが、対照群に対して癒着被覆率は低下している。
【０１７３】
【表７】
2021531305.tif 000009
【０１７４】
表７の結果から分かるように、総フコースに対する総硫酸のモル比が約１．７０超であり（comprising）総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比が約１．３０超であるフカンは、総フコースに対する総硫酸のモル比が約１．７０未満であり総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比が約１．３０未満であるフカンと比較して、線維性癒着の処置においてより大きい有効性を示す。
【０１７５】
実施例９：フカン６及びフカン７で処置された子宮角線維性癒着
合計２匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって手術のために準備した。
【０１７６】
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の０．０７ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を洗浄し、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。切開を閉じる前に、ウサギ体重あたり１５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した。前記手術の２週後に癒着を評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。総損傷子宮角長に対する癒着の長さの割合である子宮角癒着被覆率を、
式２：癒着被覆率（％）＝１００×子宮角癒着長÷総損傷子宮角長
として算出した。
【０１７７】
対照群として３匹のニュージランドホワイト種ウサギに同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに１５ｍＬ／ｋｇの乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳの投与を受けた対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は４１％であった。表８は、硫酸化比がより高いフカンと硫酸化比がより低いフカンの代表的な例であるフカン６及びフカン７について、上記の方法を用いて得られた結果を示す。以下の表の結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
【０１７８】
【表８】
2021531305.tif 000010
【０１７９】
表８の結果から分かるように、総フコースに対する総硫酸のモル比が約１．９０超であり総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比が約１．７０超であるフカンは、総フコースに対する総硫酸のモル比が約１．９０未満であり総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸のモル比が約１．７０未満であるフカンと比較して、線維性癒着の処置においてより大きい有効性を示す。
【０１８０】
実施例１０：フカン８で処置された子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における高度硫酸化フカン８の有効性を測定するために、合計３匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって手術のために準備した。
【０１８１】
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の５ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を洗浄し、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。筋肉切開の上から１／３及び下から１／３を閉じ、ウサギ体重あたり５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した。筋肉切開を一時的に閉じ、前記フコイダン溶液を腹腔内に３０分間静置した。筋肉切開を再び開き、１０ｍＬ／ｋｇのＬＲＳで腹腔を洗浄した。切開を閉じる前に、腹腔内の大部分の液を吸引除去した。前記手術の２週後に癒着形成を評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。総損傷子宮角長に対する癒着の長さの割合である子宮角癒着被覆率を、式２を用いて算出した。
【０１８２】
表９は、高度硫酸化フカンの代表的な例であるフカン８について、上記で考察された方法を用いて得られた結果を示す。以下の表の結果は、評価された６つの子宮角にわたる平均癒着長として示される。
【０１８３】
表９は、６つの子宮角をフカン８で処理した結果を提供する。
【０１８４】
【表９】
2021531305.tif 000011
【０１８５】
表９の結果から分かるように、高度硫酸化フカンは、手術後の子宮角癒着を、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するために使用することができる。
【０１８６】
実施例１１：フカン５で処置された子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制におけるフカン５の有効性を測定するために、合計４匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって、手術のために準備した。
【０１８７】
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の０．３３ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を洗浄し、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。切開を閉じる前に、ウサギ体重あたり約１５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した。前記手術の２週後に癒着を評価した。調製された各フコイダン濃度で３匹のウサギを評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。式２を用いて子宮角癒着長を算出した。
【０１８８】
４匹のニュージランドホワイト種ウサギに、同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに約１５ｍＬ／ｋｇの対照乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳの投与を受けた対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は７６％であった。表１０は、フカン５について、上記で考察される方法を用いて得られた結果を示す。以下の表の結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
【０１８９】
表１０は、８つの子宮角をフカン５で処置した結果を提供する。
【０１９０】
【表１０】
2021531305.tif 000012
表１０の結果から分かるように、前記対照群と比較して線維性癒着の著しい軽減はないので、総フコースに対する総硫酸の比が１．３未満で且つ総フコース＋ガラクトースに対する総硫酸の比が０．８未満であるフカンの例であるフカン５は、線維性癒着の処置において有効ではない。
【０１９１】
実施例１２：高度硫酸化フカンで処置された子宮角線維性癒着
４５％ｗ／ｗの総硫酸を含む高度硫酸化フカンの、外科的癒着の抑制における有効性を測定するために、合計２０匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ミダゾラム及びデクスメデトミジンの前投薬によって手術のために準備した。
【０１９２】
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は２．５ｍｇ／ｍＬの各濃度のフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を洗浄し、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。切開を閉じる前に、ウサギ体重あたり約２ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した。前記手術の２週後に癒着を評価した。調製された各フコイダン濃度について５匹のウサギを処置し、評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。式２を用いて子宮角癒着長を算出した。
【０１９３】
対照のために５匹のさらなるニュージランドホワイト種ウサギに同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに各々が約２ｍＬ／ｋｇの対照群乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳの投与を受けた対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は１００％であった。表１１は、異なる濃度及び用量における高度硫酸化フカンについて、上記で考察される方法を用いて得られる結果を示す（合計で４０の子宮角を処置したが、高度硫酸化フカンの各濃度についてそれぞれ１０であった）。前記結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
【０１９４】
【表１１】
2021531305.tif 000013
【０１９５】
表１１の結果から分かるように、高度硫酸化フカンは、手術後の子宮角癒着を、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するために使用され得る。
【０１９６】
本明細書において用いられる全ての用語は、特に文脈又は定義が明確に指示しない限り、それらの通常の意味に従って用いられる。また、特に明示的に示されない限り、本開示において、「又は」の使用は「及び」を含み、且つ、逆もまた同じである。非限定的な用語は、明示的に述べられない限り、又は特に文脈が明確に指示しない限り、限定的なものとして解釈されるものではない（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、典型的には、「含むが、これに限定されるものではない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）」を示す）。単数形、例えば、「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、請求項におけるものを含め、明示的に述べられない限り、又は特に文脈で明確に別途示されない限り、複数の参照（ｐｌｕｒａｌ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を含む。
【０１９７】
特に断らない限り、実施形態の１つの特徴又は複数の特徴の条件又は関係特性を修飾する「実質的に」及び「約」などの本明細書における形容詞は、前記条件又は特性が、それが意図される適用のための実施形態の実施のために許容し得る許容範囲内に規定されることを示す。
【０１９８】
本方法、本組成物、本システムなどの範囲は、ミーンズ・プラス・ファンクション概念及びステップ・プラス・ファンクション概念の両方を含む。しかし、請求項は、「手段」という語が請求項において具体的に記載されない限り「ミーンズ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈されるものではなく、「手段」という語が請求項において具体的に記載される場合には「ミーンズ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈される。同様に、請求項は、「ステップ」という語が請求項において具体的に記載されない限り「ステップ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈されるものではなく、「ステップ」という語が請求項において具体的に記載される場合には「ステップ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈される。
【０１９９】
上文から、具体的な実施形態が例示の目的のために本明細書において考察されたが、本明細書における考察の精神及び範囲から逸脱することなく各種修正を為してもよいことは理解されよう。したがって、前記システム及び前記方法などは、かかる修正並びに本明細書において記載される主題の全ての順列及び組み合わせを含むものであって、添付の請求項又は本明細書における考察及び図における適切な裏付けを有する他の請求項によるものを除き、限定されるものではない。
【図１Ａ】
2021531305.tif 000014
【図１Ｂ】
2021531305.tif 000015
【図２】
2021531305.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月20日(2021.1.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を含む、動物における線維性癒着の処置のための剤、ここで前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物は、医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤と、フコースに対する硫酸（sulfate）のモル比が１．２以上、及び／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が１．１以上である、治療上有効量の高度硫酸化フカンとを含む。
【請求項２】
医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を含む、動物における線維性癒着の処置のための剤、ここで前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物は、医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤と、フコースに対する硫酸（sulfate）のモル比が１．２以上、及び／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が１．１以上である、治療上有効量の高度硫酸化フカンとを含み、前記動物の創傷の部位に投与するための前記高度硫酸化フカンを０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲含む。
【請求項３】
線維性癒着のための治療薬の製造のための、請求項１に記載の剤の使用。
【請求項４】
請求項１に記載の剤の医学的に許容しうる高度硫酸化フカンを０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
【請求項５】
ヒト以外の動物における疾患又は状態を処置するための０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項４に記載の医療組成物の使用。
【請求項６】
出発フカン組成物の硫酸レベルを低下させて改変フカンを得る方法であって、
前記出発フカン組成物に塩基を添加して反応混合物を生成すること；及び
前記反応混合物を反応抑制剤で処理して前記塩基を不活性化し、前記改変フカン及び脱硫酸化残余分子を生成すること、ここで前記改変フカンの数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量は前記出発フカン組成物の数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量それぞれの５％変動幅以内である、
を含む方法。
【請求項７】
前記出発フカン組成物が出発溶液において提供される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記塩基を前記出発フカン組成物に添加することが、前記出発溶液を加熱することをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記塩基がアルカリ金属、アルカリ土類金属及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含む、請求項６又は請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記反応抑制剤が酸、塩及び水のうち少なくとも１つを含む、請求項６又は請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記改変フカンが、前記出発フカン組成物より少ない硫酸を含む、請求項６又は請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記高度硫酸化フカン組成物がフコースに対する硫酸のモル比が１．８１〜２．８５である高度硫酸化フカンを含む、請求項１又は請求項２に記載の剤。
【請求項１３】
有効分子量範囲が５０ｋＤａ〜５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、有効分子量範囲が１ｋＤａ〜６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの１つの４０ｍｍガードカラム、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が７２０ｋＤａ〜７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が４７０ｋＤａ〜５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が３７０ｋＤａ〜４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が１８０ｋＤａ〜２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線に対する定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、前記高度硫酸化フカン組成物が少なくとも分布の６０％ｗ／ｗが１００ｋＤａより大きい分子量分布を有する高度硫酸化フカンを含む、請求項１又は請求項２に記載の剤。
【請求項１４】
前記高度硫酸化フカン組成物が１４％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗの硫酸化レベルである高度硫酸化フカンを含む、請求項１又は請求項２に記載の剤。
【請求項１５】
前記高度硫酸化フカン組成物が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗの総炭水化物含有率である高度硫酸化フカンを含む、請求項１又は請求項２に記載の剤。
【請求項１６】
前記高度硫酸化フカンが、前記総炭水化物含有率に対する割合として少なくとも３０％ｗ／ｗの総フコース含有率である、請求項１５に記載の剤。
【請求項１７】
前記高度硫酸化フカンが、前記総炭水化物含有率に対する割合として６０％ｗ／ｗ未満の総ガラクトース含有率である、請求項１５に記載の剤。
【請求項１８】
前記高度硫酸化フカンが、前記総炭水化物含有率に対する割合として３０％ｗ／ｗ未満のグルクロン酸、マンノース、ラムノース及びキシロースの含有率の総量である、請求項１５に記載の剤。
【請求項１９】
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解される場合に４ｃＰ〜５０ｃＰの粘度を有する、請求項１又は請求項２に記載の剤。
【請求項２０】
線維性癒着のための治療薬の製造のための、請求項１２〜請求項１９のいずれか一項に記載の剤の使用。
【請求項２１】
請求項１２〜請求項１９のいずれか一項に記載の剤の高度硫酸化フカンを０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における線維性癒着を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
【請求項２２】
ヒト以外の動物における線維性癒着を処置するための、０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項２１に記載の医療組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
実施例７：改変フカンの分子量分布、炭水化物含有率及び単糖成分の測定
ジョージア大学の複合炭水化物研究センターによって行われたガスクロマトグラフィー−質量スペクトロスコピー（ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＧＣ−ＭＳ）によって、総炭水化物及び単糖組成物について改変フカン（フカン１、フカン９、フカン１０及びフカン１１）を分析した。酸性メタノリシスによって前記改変フカン組成物を誘導体化して、Ｏ−トリメチルシリル（Ｏ−ＴＭＳ）誘導体を生成した。誘導体化の後、Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ｅｑｕｉｔｙ−１溶融シリカ毛管カラム（３０ｍ、内径０．２５ｍｍ）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ５９７５Ｃ質量スペクトロメトリー検出器に連結したＡｇｉｌｅｎｔ７８９０Ａガスクロマトグラフィーシステムで前記改変フカン組成物を分析した。前記改変フカンの前記総炭水化物含有率及び前記単糖組成物についての結果を以下の表５に示す。以下の表における炭水化物は、「ｃａｒｂ．」と略記される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７０】
【表６】
2021531305.tif 000017
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
【表７】
2021531305.tif 000018
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９９】
上文から、具体的な実施形態が例示の目的のために本明細書において考察されたが、本明細書における考察の精神及び範囲から逸脱することなく各種修正を為してもよいことは理解されよう。したがって、前記システム及び前記方法などは、かかる修正並びに本明細書において記載される主題の全ての順列及び組み合わせを含むものであって、添付の請求項又は本明細書における考察及び図における適切な裏付けを有する他の請求項によるものを除き、限定されるものではない。
本発明の例示的な態様を以下に記載する。
＜１＞
医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤と、フコースに対する硫酸（sulfate）のモル比が約１．２以上、及び／又はフコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．１以上である、治療上有効量の高度硫酸化フカンとを含む、医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２＞
前記フコースに対する硫酸のモル比が約１．８１以上、及び／又は前記フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．２以上である、＜１＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３＞
前記フコースに対する硫酸のモル比が約１．９以上、及び／又は前記フコース＋ガラクトースに対する硫酸のモル比が約１．３以上である、＜１＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜４＞
前記フコースに対する硫酸のモル比が１．８１〜２．８５である、＜１＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜５＞
前記フコースに対する硫酸のモル比が１．３０〜２．２０である、＜１＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜６＞
有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
約３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線に対する定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を前記フカンが有する、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜７＞
前記フカンが１００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜６＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜８＞
前記フカンは、分布の９０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を有する、＜６＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜９＞
前記フカンが２００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜６＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１０＞
前記フカンが５００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜６＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１１＞
前記フカンは、分布の９０％ｗ／ｗ以上が５００ｋＤａより大きい分子量分布を有する、＜６＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１２＞
前記フカンの硫酸化レベルが１４％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１３＞
前記フカンの硫酸化レベルが３０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１４＞
前記フカンの硫酸化レベルが３５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１５＞
前記フカンの硫酸化レベルが４０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１６＞
前記フカンの硫酸化レベルが４５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１７＞
前記フカンの硫酸化レベルが４０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１８＞
前記フカンの硫酸化レベルが４５％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜１９＞
総炭水化物含有率が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２０＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２１＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約５０％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２２＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約７０％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２３＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約８０％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２４＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約９０％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２５＞
総フコース含有率が前記総炭水化物含有率に対する割合として約９５％ｗ／ｗ以上である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２６＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約６０％ｗ／ｗ未満である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２７＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約２％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗである、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２８＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有率に対する割合としての総ガラクトース含有率が、約１０％ｗ／ｗ未満である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜２９＞
グルクロン酸、マンノース、ラムノース及びキシロースの含有率の総量が前記総炭水化物含有率に対する割合として約３０％ｗ／ｗ未満である、＜１９＞に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３０＞
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約４ｃＰ〜５０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜２９＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３１＞
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約１０ｃＰ〜４０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜２９＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３２＞
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜２９＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３３＞
前記医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物が、透明無色なものである、＜１＞〜＜３２＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物。
＜３４＞
動物における線維性癒着を処置する方法であって、前記線維性癒着を阻害するために＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法。
＜３５＞
＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択することを含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤。
＜３６＞
線維性癒着を阻害するために＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤。
＜３７＞
線維性癒着のための治療薬の製造のための、＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物の使用。
＜３８＞
動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうる高度硫酸化フカン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの治療上有効量の前記高度硫酸化フカンを投与すること、を含む方法。
＜３９＞
前記治療上有効量が約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、＜３７＞又は＜３８＞に記載の方法。
＜４０＞
前記治療上有効量が約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、＜３７＞又は＜３８＞に記載の方法。
＜４１＞
前記治療上有効量が約１．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、＜３７＞又は＜３８＞に記載の方法。
＜４２＞
前記治療上有効量が約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、＜３７＞又は＜３８＞に記載の方法。
＜４３＞
前記状態又は前記疾患が、前記動物における標的部位における線維性癒着であり、前記投与が、前記標的部位に前記治療上有効量を投与することを含む、＜３７＞又は＜４２＞に記載の方法。
＜４４＞
＜１＞〜＜３３＞のいずれか一項に記載の高度硫酸化フカンを約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
＜４５＞
前記高度硫酸化フカンを約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ含む＜４４＞に記載の医療組成物。
＜４６＞
前記高度硫酸化フカンを約２．５ｍｇ／ｍＬ含む＜４４＞に記載の医療組成物。
＜４７＞
前記医療組成物が医療機器である、＜４４＞〜＜４６＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜４８＞
前記医療組成物が液体医療機器である、＜４４＞〜＜４６＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜４９＞
前記医療組成物が医薬組成物である、＜４４＞〜＜４６＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜５０＞
前記医療組成物が液体医薬組成物である、＜４４＞〜＜４６＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜５１＞
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、＜４４＞〜＜５０＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜５２＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜５３＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜５４＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜５５＞
動物における疾患又は状態を処置するための約２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜５６＞
患者における標的部位に＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む、前記患者における線維性癒着を処置するための方法。
＜５７＞
患者における選択された疾患又は状態を処置するための方法であって、前記選択された疾患もしくは状態を含むか又は前記選択された疾患もしくは状態に罹患しやすいといえる（reasonably susceptible）患者における選択された標的部位を同定すること、及びその後に、前記患者における前記選択された標的部位に＜４４＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む方法。
＜５８＞
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、＜５７＞に記載の方法。
＜５９＞
前記選択された標的部位が手術部位であり、前記投与がａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）前記手術創を閉じた後、のうち少なくとも１つにおいて行われる、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６０＞
前記投与が手術後且つ前記手術創を閉じる前に行われる、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６１＞
前記投与が３分間未満かかる、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６２＞
前記投与が２分間未満かかる、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６３＞
前記投与が１分間未満かかる、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６４＞
選択された前記標的部位が、病変、擦過傷及び傷害部位のうち少なくとも１つである、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６５＞
選択された前記標的部位が、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つである、＜５７＞又は＜５８＞に記載の方法。
＜６６＞
出発フカン組成物の硫酸レベルを低下させて改変フカンを得る方法であって、
前記出発フカン組成物に塩基を添加して反応混合物を生成すること；及び
前記反応混合物を反応抑制剤で処理して前記塩基を不活性化し、前記改変フカン及び脱硫酸化残余分子を生成すること、ここで前記改変フカンの数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量は前記出発フカン組成物の数平均分子量、重量平均分子量及びピーク平均分子量それぞれの約５％変動幅以内である、
を含む方法。
＜６７＞
前記出発フカン組成物が出発溶液において提供される、＜６６＞に記載の方法。
＜６８＞
前記塩基を前記出発フカン組成物に添加することが、前記溶液を加熱することをさらに含む、＜６６＞又は＜６７＞に記載の方法。
＜６９＞
前記塩基がアルカリ金属、アルカリ土類金属及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含む、＜６６＞又は＜６７＞に記載の方法。
＜７０＞
前記反応抑制剤が酸、塩及び水のうち少なくとも１つを含む、＜６６＞又は＜６７＞に記載の方法。
＜７１＞
前記改変フカンが、前記出発フカン組成物より少ない硫酸を含む、請＜６６＞又は＜６７＞に記載の方法。
＜７２＞
出発フカン組成物の硫酸レベルを増加させて改変フカンを生成させる方法であって、
前記出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解させて非水溶液を生成すること；
硫酸化剤を前記非水溶液に添加して反応混合物を生成すること；及び
反応抑制剤を前記反応混合物に添加して、溶液中で改変フカン及び硫酸化残余分子を生成すること、
を含む方法。
＜７３＞
前記出発フカン組成物中の硫酸基をプロトン化して、酸性化フカン組成物を生成した後、前記出発フカン組成物を適切な非水溶媒に溶解することをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜７４＞
前記硫酸基をプロトン化することが、前記出発フカン組成物を水溶液に溶解すること、前記出発フカン組成物を酸性陽イオン交換樹脂に接触させること、及び前記酸性化フカン組成物を固体として回収することを含む、＜７３＞に記載の方法。
＜７５＞
酸性化フカン組成物を固体として回収することが、前記水溶液から固体の酸性化フカン組成物を凍結乾燥すること、噴霧乾燥すること、及び沈殿させることのうち少なくとも１つを含む、＜７４＞に記載の方法。
＜７６＞
前記硫酸化剤が、ＳＯ３−Ｍｅ３Ｎ、ＳＯ３−Ｅｔ３Ｎ、ＳＯ３−ピリジン及びＳＯ３−ＤＭＦのうち少なくとも１つを含む、＜７２＞に記載の方法。
＜７７＞
前記非水溶媒が、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、クロロホルム、エタノール、メタノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、イソプロパノール及び１−プロパノールのうち少なくとも１つを含む、＜７２＞に記載の方法。
＜７８＞
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、硫酸化助剤を前記溶媒に添加することをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜７９＞
前記硫酸化助剤が酸捕捉剤である、＜７８＞に記載の方法。
＜８０＞
前記酸捕捉剤が２−メチル−２−ブテンである、＜７９＞に記載の方法。
＜８１＞
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約５分〜約５０時間インキュベートすることをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８２＞
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８３＞
硫酸化剤を前記非水溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートすることをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８４＞
前記反応抑制剤が塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８５＞
前記塩が重炭酸塩である、＜８４＞に記載の方法。
＜８６＞
反応抑制剤を前記反応混合物に添加することが、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御することをさらに含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８７＞
前記改変フカンが、前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含む、＜７２＞に記載の方法。
＜８８＞
出発フカン組成物の硫酸レベルを増加させて改変フカンを生成する方法であって、
出発フカン組成物を固体として提供すること；
前記出発フカン組成物を溶媒中に懸濁させること、ここで前記溶媒は前記フカンを溶解することができない溶媒である；
懸濁された前記出発フカン組成物を含有する前記溶媒に硫酸化剤を添加して、前記改変フカン及び前記溶媒を含む反応混合物を生成すること；
固体の前記改変フカンを前記溶媒から分離すること；並びに
前記固体の前記改変フカンを反応抑制剤により反応抑制すること、
を含む方法。
＜８９＞
前記硫酸化剤がクロロスルホン酸である、＜８８＞に記載の方法。
＜９０＞
前記溶媒が、０．７６５未満の相対極性を有する溶媒を少なくとも１種含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９１＞
前記溶媒が、ジクロロメタン、クロロホルム、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１−プロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ジエチルエーテル、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、エチルアセテート、ヘプタノール、オクタノール、デカノール及びジオキサンのうち少なくとも１つを含む、＜９０＞に記載の方法。
＜９２＞
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約５分間〜約５０時間インキュベートすることをさらに含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９３＞
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を約１時間〜約２４時間インキュベートすることをさらに含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９４＞
硫酸化剤を前記溶媒に添加して反応混合物を生成することが、前記反応混合物を摂氏約２０度〜摂氏約６０度の温度でインキュベートすることをさらに含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９５＞
前記反応抑制剤が、塩及び緩衝剤のうち少なくとも１つを含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９６＞
固体の前記改変フカンを反応抑制することが、酸、塩基及び緩衝剤のうち少なくとも１つにより前記反応混合物のｐＨを制御することをさらに含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９７＞
固体の前記改変フカンを反応抑制することが、０．７６５未満の相対極性を有する溶媒を少なくとも１種含む有機溶媒を用いて固体の前記改変フカンを洗浄することをさらに含む、＜８８＞に記載の方法。
＜９８＞
前記改変フカンが前記出発フカン組成物より多くの硫酸（sulfate）を含む、＜８８＞に記載の方法。
【国際調査報告】
2021531305.tif 000019
2021531305.tif 000020
2021531305.tif 000021
2021531305.tif 000022
2021531305.tif 000023
2021531305.tif 000024
2021531305.tif 000025