(57)【要約】  式（I)のベンズイミダゾール誘導体：（式（I)）式中:R1は、-(CH2)m-R7、（式（II)）または（式（III)）であり;R2は、H、ハロ、-(CH2)m-NH2、-(CH2)n-C(=NH)-NH2または-(CH2)n-NH-(CH2)m-NHR9であり;R3は、H、FまたはClであり;R4、R5およびR6のそれぞれは、独立してHまたはFであり;R7は、C1-C6アルキル、CF3、-SO2R11、-NH-(CH2)2-(NH)r-R8、-NH-CH(R8R9)または下記式(A):（式（A)）の基であり:Wは、-(CH2)m-、-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり;mは、１〜３の整数であり;nは、1または2であり;pは1でありかつVはCHであり;またはpは0でありかつVはNであり;qは、0または1であり;rは、0または1であり;R8は、H、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-C(O)OR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;R9は、HまたはC1-C6アルキルであり、各R9は、２個存在する場合同一または異なり;R10は、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;およびR11は、C1-C6アルキルである;およびその医薬上許容し得る塩は、RSVの阻害剤であり、従ってRSV感染を治療もしくは予防するために使用され得る。2021508341.tif 000042【選択図】なし
2021508341.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I)のベンズイミダゾールである化合物：
【化１】
2021508341.tif 000037
式中:
R1は、-(CH2)m-R7、
【化２】
2021508341.tif 000038
であり;
R2は、H、ハロ、-(CH2)m-NH2、-(CH2)n-C(=NH)-NH2または-(CH2)n-NH-(CH2)m-NHR9であり;
R3は、H、FまたはClであり;
R4、R5およびR6のそれぞれは、独立してHまたはFであり;
R7は、C1-C6アルキル、CF3、-SO2R11、-NH-(CH2)2-(NH)r-R8、-NH-CH(R8R9)または下記式(A):
【化３】
2021508341.tif 000039
の基であり、
Wは、-(CH2)m-、-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり;
mは、１〜３の整数であり;
nは、1または2であり;
pは1でありかつVはCHであり;またはpは0でありかつVはNであり;
qは、0または1であり;
rは、0または1であり;
R8は、H、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-C(O)OR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;
R9は、HまたはC1-C6アルキルであり、各R9は、２個存在する場合同一または異なり;
R10は、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;および
R11は、C1-C6アルキルである;
またはその医薬上許容し得る塩。
【請求項２】
R1が-(CH2)m-R7であり、ここでmが2または3であり、およびR7が:
(i)  -NH-(CH2)2-(NH)r-R8、式中、rは0または1であり、およびR8は-SO2Me、-SO2Etおよび-SO2CF3から選択される;
(ii)  C1-C6アルキル、CF3または-SO2R11;
(iii)  -NH-CH(R8R9)、式中、R8は-CONH2または-CONMe2であり、およびR9はC1-C6アルキルである
(iv)  式（A)の基、ここでpは1であり、qは0であり、VはCHであり、およびWは-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり、ここでrは0であり、およびR8は-SO2Meまたは-SO2Etである;
(v)  式（A)の基、ここでpは0であり、VはNであり、Wは-(CH2)m-であり、ここでmは１〜３の整数であり、qは1であり、およびR10は-SO2Me、-SO2Et、-CONH2または-CONMe2である;および
(vi)  式（A)の基、ここでpは0であり、VはNであり、qは0であり、およびWは-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり、ここでrは0または1であり、およびR8は-SO2Me、-SO2Etまたは-COMeである
から選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1が
【化４】
2021508341.tif 000040
であり、ここでR8がH、-SO2R11、-COMe、-C(O)OR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11である、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
-SO2R11が-SO2Meまたは-SO2Etであり;
-CON(R9)2が-CONH2または-CONMe2であり;および
-(CH2)nSO2R11が-CH2CH2SO2Meである、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
R2がClまたは-CH2NH2である、請求項１〜３のいずれか1項記載の化合物。
【請求項６】
式（A)の基が以下の構造:
【化５】
2021508341.tif 000041
から選択される、請求項１または２記載の化合物。
【請求項７】
1-{[5-クロロ-1-(4,4,4-トリフルオロブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[3-(4-メタンスルホニルピペラジン-1-イル)プロピル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-[(5-クロロ-1-{3-[(2-メタンスルホニルエチル)アミノ]プロピル}-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル)メチル]-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[3-(3-メタンスルホニルピロリジン-1-イル)プロピル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(3-メタンスルホニルプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
tert-ブチル 4-{5-クロロ-2-[(3,3-ジフルオロ-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-1-イル)メチル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル}ピペリジン-1-カルボキシレート;
1-{[5-クロロ-1-(ピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[1-(エタンスルホニル)ピペリジン-4-イル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,6-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,7-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,4-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-4-クロロ-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;および
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,5-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
ならびにその医薬上許容し得る塩
から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物および医薬上許容し得る担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項９】
療法によるヒトもしくは動物体の治療における使用のための、前記請求項のいずれか1項記載の化合物。
【請求項１０】
RSV感染の治療もしくは予防における使用のための、請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物。
【請求項１１】
RSV感染の治療もしくは予防における使用のための医薬の製造における請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物の使用。
【請求項１２】
有効量の請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物を被検体に投与することを含む、RSV感染に罹患したまたはかかりやすい被検体の治療方法。
【請求項１３】
RSV感染に罹患したまたはかかりやすい被検体の治療における同時、別個もしくは連続使用のための、
(a)請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物;および
(b)1つ以上のさらなる治療剤;
を含有する製品。
【請求項１４】
さらなる治療剤が:
(i)RSVヌクレオカプシド(N)-蛋白質インヒビター;
(ii)ホスホプロテイン(P)蛋白質および/または巨大(L)蛋白質を阻害するような別の蛋白質インヒビター;
(iii)F-蛋白質抗体などの抗RSVモノクローナル抗体;
(iv)免疫調節toll様受容体化合物;
(v)抗インフルエンザおよび/または抗ライノウイルス化合物などの呼吸器系ウイルス抗ウイルス;および/または
(vi)抗炎症化合物
である、請求項１３記載の製品。
【請求項１５】
(a)請求項１〜７のいずれか1項記載の化合物、および(b)請求項１４に記載の1つ以上の治療剤を医薬上許容し得る担体もしくは希釈剤と共に含む医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１記載の式（I)のベンズイミダゾールを適切な溶媒中適切な酸で処理することを含む、請求項１記載の医薬上許容し得る塩の製造プロセス。
【請求項１７】
酸が、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸およびグルタミン酸から選択される、請求項１６記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ベンズイミダゾール化合物および呼吸器合胞体ウイルス(RSV)感染の治療もしくは予防におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
RSVは、パラミクソウイルス科のマイナスセンス一本鎖RNAウイルスである。RSVは、表面もしくは手から手への移動を介して感染した人々からの分泌物によって容易に伝染される。それは、インフルエンザと異なり、小粒子エアロゾルによって伝染されない。成功した接種後、インキュベーション期間は４日と６日との間であり、その時間の間、ウイルスは、感染した細胞の感染していない細胞との融合により、および壊死上皮の腐肉形成により、鼻咽頭から下気道に広がる。幼児において、これは、増加した粘液分泌物および浮腫と相まって、過膨張を引き起こす粘液閉塞および細気管支炎を示す遠位肺組織の破綻に至り得る。低酸素症は一般的であり、そして呼吸困難のために供給能力はしばしば損なわれる。RSV肺炎において、気道の炎症性湿潤は単核細胞からなり、そして細気管支、気管支および肺胞を含んでより一般化される。ウイルス排出の持続時間および程度は、臨床兆候および疾患の重篤度と相関していることが見い出された。
【０００３】
RSVは、世界中で、幼児および小児における重篤な呼吸器感染症の主な原因である。最も高い罹患率および死亡率は早産で生まれた幼児および小児および肺または心臓疾患を持って生まれた幼児および小児において生じるが、RSV感染のために入院した多くの幼児はその他の点で健康である。幼年期における重篤なRSV感染は、数年間の再発性喘鳴に至り得、そして後の喘息の発症に関連する。
【０００４】
RSVはまた、老人ならびに免疫不全の子供および成人ならびに慢性閉塞性肺疾患(COPD)および鬱血性心不全(CHF)を有するこれらの人々における罹患率および死亡率の主要な原因である。
【０００５】
RSVは、特定の季節に発生する;それは高度に予測可能であり、そして両半球の冬において、欧州および北米において９月〜５月に発生し、１２月および１月にピークに達し、そして熱帯国において年中発生し得る。それは２歳までに>90%の幼児および小児に影響を及ぼし、そして自然免疫は短命である;多くは毎年再感染する。インフルエンザのように、高齢者において、RSVは、10%の死亡率を伴って約10%の冬の入院を引き起こす。
【０００６】
現在の抗-RSV治療は、パリビズマブと呼ばれるRSVに対するモノクローナル抗体の使用を含む。そのようなパリビズマブの使用は、治療的よりもむしろ予防的なRSVの治療である。この抗体はしばしば効果的であるが、その使用は早産児および危険が高い幼児に対して制限される。実際、その限定された有用性は、抗-RSV治療を必要とする多くの人々にとって利用できないことを意味する。従って、既存の抗-RSV治療に対する効果的な代替物の緊急の必要性がある。
【０００７】
さらに、ベンズイミダゾール系化合物を含むいくつかの化合物がRSVの阻害剤として提案されている。例えば、K D Combrink et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17 (2007), 4784-4790は、化合物BMS-433771およびその変形体を開示する。さらなるベンズイミダゾール系化合物がWO-02/062290、WO-03/053344およびWO-10/103306に開示されている。
【０００８】
WO 2013/068769およびWO2016/055780は、RSVに対する活性を有するベンズイミダゾール化合物を開示する。しかしながら、さらなる化合物、および特に好ましい薬物動態プロファイルを有する化合物を同定する必要が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
今回、好ましい薬物動態を有するRSV阻害剤として活性である新規な一連のベンズイミダゾール系化合物が見い出された。従って、本発明は、式（I)のベンズイミダゾールである化合物：
【００１０】
【化１】
2021508341.tif 000003
【００１１】
式中:
R1は、-(CH2)m-R7、
【００１２】
【化２】
2021508341.tif 000004
【００１３】
であり;
R2は、H、ハロ、-(CH2)m-NH2、-(CH2)n-C(=NH)-NH2または-(CH2)n-NH-(CH2)m-NHR9であり;
R3は、H、FまたはClであり;
R4、R5およびR6のそれぞれは、独立してHまたはFであり;
R7は、C1-C6アルキル、CF3、-SO2R11、-NH-(CH2)2-(NH)r-R8、-NH-CH(R8R9)または下記式(A):
【００１４】
【化３】
2021508341.tif 000005
【００１５】
の基であり、
Wは、-(CH2)m-、-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり;
mは、１〜３の整数であり;
nは、1または2であり;
pは1でありかつVはCHであり;またはpは0でありかつVはNであり;
qは、0または1であり;
rは、0または1であり;
R8は、H、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-C(O)OR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;
R9は、HまたはC1-C6アルキルであり、各R9は、２個存在する場合同一または異なり;
R10は、-SO2R11、-SO2CF3、-COR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11であり;および
R11は、C1-C6アルキルである;
またはその医薬上許容し得る塩を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
本明細書中で定義した任意の基、環、置換基もしくは部分が置換されている場合、典型的には、以下に定義されるQによって置換されている。
【００１７】
C1-6アルキル基もしくは部分は、直鎖状もしくは分枝状である。C1-6アルキル基は典型的には、C1-4アルキル基、もしくはC4-6アルキル基である。C1-6アルキル基および部分の例は、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、i-ペンチル(すなわち3-メチルブト-1-イル)、t-ペンチル(すなわち2-メチルブト-2-イル)、ネオペンチル(すなわち2,2-ジメチルプロパン-1-イル)、n-ヘキシル、i-ヘキシル(すなわち4-メチルペンタン-1-イル)、t-ヘキシル(すなわち3-メチルペンタン-3-イル)およびネオペンチル(すなわち3,3-ジメチルブタン-1-イル)を含む。疑義を避けるために、２個のアルキル部分が基に存在する場合、アルキル部分は同一でも異なっていてもよい。C1-6アルキル基は未置換であるか、もしくは典型的には、以下に定義される1個以上の基Qによって置換されている。例えば、C1-6アルキル基は未置換であるか、もしくは以下に定義される1、2もしくは3個の基Qによって置換されている。
【００１８】
Qはハロ、ニトロ、-CN、OH、C1-6アルコキシ、C1-6ヒドロキシアルキル、C1-6アルキルチオ、C1-6ハロアルキル、C1-4ハロアルコキシ、-CO2R'''、-NR'''2、-SR'''、-S(=O)R'''、-S(=O)2R'''、C3-C10シクロアルキル、5〜10員ヘテロシクリル、5〜12員アリールもしくは5〜12員ヘテロアリールであり、ここで各R'''は独立してH、C1-6アルキル、C3-10シクロアルキル、5〜10員ヘテロシクリル、5〜12員アリールおよび5〜12員ヘテロアリールから選択される。
【００１９】
C1-6アルコキシ基は直鎖状もしくは分枝状である。それは典型的には、C1-4アルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、i-プロポキシ、n-プロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシもしくはtert-ブトキシ基である。C1-6アルコキシ基は未置換であるか、もしくは典型的には、定義される1個以上の基Qによって置換されている。
【００２０】
C1-6アルキルチオ基は直鎖状もしくは分枝状である。それは典型的には、C1-4アルキルチオ基、例えばメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、i-プロピルチオ、n-プロピルチオ、n-ブチルチオ、sec-ブチルチオもしくはtert-ブチルチオ基である。C1-6アルキルチオ基は未置換であるか、もしくは典型的には、上記で定義される1個以上の基Qによって置換されている。
【００２１】
ハロゲンもしくはハロ基はF、Cl、BrもしくはIである。好ましくは、それはFもしくはClである。ハロゲンによって置換されたC1-6アルキル基は、「C1-6ハロアルキル」で示され得、これは、1個以上の水素がハロによって置き換えられている上記で定義されたC1-6アルキル基を意味する。同様に、ハロゲンによって置換されたC1-6アルコキシ基は、「C1-6ハロアルコキシ」で示され得、これは、1個以上の水素がハロによって置き換えられている上記で定義されたC1-6アルコキシ基を意味する。典型的には、C1-6ハロアルキルもしくはC1-6ハロアルコキシは、1、2もしくは3個の該ハロゲン原子によって置換されている。ハロアルキルおよびハロアルコキシ基は、-CX3および-OCX3（ここで、Xはハロゲンである）、例えば-CF3 -CCl3-OCF3および-OCCl3などのパーハロアルキルおよびパーハロアルコキシ基を含む。
【００２２】
C1-6ヒドロキシアルキル基は、1個以上のOH基によって置換された、上記で定義されたC1-6アルキル基である。典型的には、それは１、２もしくは３個のOH基によって置換されている。好ましくは、それは単一のOH基によって置換されている。
【００２３】
5〜12員アリール基は、5〜12個の炭素原子、例えば6〜10個の炭素原子、6もしくは10個の炭素原子などを含む芳香族炭素環式基である。それは単環式であるか、もしくは芳香環が別の芳香族炭素環式環に縮合した縮合二環式環系である。5〜12員アリール基の例は、フェニルおよびナフチルを含む。置換されている場合、アリール基は典型的には、C1-4アルキルもしくは上記で定義された基Q、例えば、C1-4アルキル基および上記で定義された基Qから選択される1、2もしくは3個の基によって置換されている。
【００２４】
C3-10シクロアルキル基は、３〜１０個の炭素原子を有する飽和の炭化水素環である。C3-10シクロアルキル基は、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、もしくはシクロヘプチルなどのC3-C7シクロアルキルであり得る。典型的には、それはC3-C6シクロアルキル、もしくはC4-C6シクロアルキル、例えばシクロブチル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシルである。１つの態様において、それはシクロブチルである。C3-10シクロアルキル基は未置換であるか、もしくは典型的には、上記で定義される1個以上の基Qによって置換されている。
【００２５】
5〜12員ヘテロアリール基もしくは部分は、O、NおよびSから選択される1、2、3、もしくは4個のヘテロ原子を含む5〜12員芳香族複素環基である。それは単環式もしくは二環式である。典型的には、それは１個のN原子およびO、SおよびNから選択される0、1、2もしくは3個の追加のヘテロ原子を含む。それは、例えば、5〜７員ヘテロアリール基、例えば５員或いは６員のN-含有ヘテロアリール基であり得る。例は、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、フラニル、チエニル、ピラゾリジニル、ピロリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イミダゾリルおよびピラゾリル基を含む。フラニル、チエニル、ピリジルおよびピリミジル基が好ましい。置換されている場合、ヘテロアリール基は典型的には、C1-4アルキルおよび上記で定義された基Q、例えば、C1-4アルキル基および上記で定義された基Qから選択される１個以上、例えば1、2もしくは3個の基によって置換されている。
【００２６】
５−１０員ヘテロシクリル部分は、環中の少なくとも１個、例えば1、2もしくは3個の炭素原子がO、S、SO、SO2、COおよびNから選択される原子もしくは基によって置き換えられている、単環式もしくは二環式の非芳香族の飽和もしくは不飽和C5-10炭素環式環である。典型的には、それは、環中の1、2もしくは3個の炭素原子がO、S、SO、SO2、COおよびNHから選択される原子もしくは基で置き換えられている、飽和C5-10環である。より典型的には、それは単環式環、好ましくは単環式C5-C6環である。例は、ピペリジル、ピペリジン-2,6-ジオニル、ピペリジン-2-オニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、S,S-ジオキソチオモルホリニル、1,3-ジオキソラニル、ピロリジニル、イミダゾール-2-オニル、ピロリジン-2-オニル、テトラヒドロフラニルおよびテトラヒドロピラニル部分を含む。
【００２７】
疑義を避けるために、ヘテロアリールおよびヘテロシクリル基の上記定義は環中に存在し得る「N」原子に言及するが、それが単結合を介して隣接する各環原子に結合する場合、熟練した化学者に明らかであろうように、N原子はプロトン化される(もしくは上記で定義された置換基を有する)。このようなプロトン化された形態は、本願のヘテロアリールおよびヘテロシクリル基の定義内に含まれる。
【００２８】
式（I)のベンズイミダゾールの１つの態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7は-NH-(CH2)2-(NH)r-R8であり、式中、rは0または1であり、およびR8は-SO2Me、-SO2Etおよび-SO2CF3から選択される。
【００２９】
式（I)のベンズイミダゾールの別の態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7はC1-C6アルキル、CF3または-SO2R11である。この態様において、-SO2R11は、典型的には-SO2Meまたは-SO2Etである。
【００３０】
さらなる態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7は-NH-CH(R8R9であり、式中、R8は-CON(RH2または-CONMe2であり、およびR9はC1-C6アルキルである。
【００３１】
別の態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7は式（A)の基であり、ここでpは1であり、qは0であり、VはCHであり、およびWは-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり、ここでrは0であり、およびR8は-SO2Meまたは-SO2Etである。
【００３２】
なおさらなる態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7は式（A)の基であり、ここでpは0であり、VはNであり、Wは-(CH2)m-であり、ここでmは１〜３の整数であり、qは1であり、およびR10は-SO2Me、-SO2Et、-CONH2または-CONMe2である。
【００３３】
別の態様において、R1は-(CH2)m-R7であり、ここでmは2または3であり、およびR7は式（A)の基であり、ここでpは0であり、VはNであり、qは0であり、およびWは-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-であり、ここでrは0または1であり、およびR8は-SO2Me、-SO2Etまたは-COMeである。
【００３４】
あるいは、R1は
【００３５】
【化４】
2021508341.tif 000006
【００３６】
であり、ここでR8はH、-SO2R11、-COMe、-C(O)OR11、-CON(R9)2または-(CH2)nSO2R11である。この態様において、-SO2R11は、典型的には-SO2Meまたは-SO2Etである。-CON(R9)2は、典型的には-CONH2または-CONMe2である。-(CH2)nSO2R11は、典型的には-CH2CH2SO2Meである。
【００３７】
式（I)においてR7が式（A)の基であり、およびqが1である場合、環置換基R10は任意の利用可能な環炭素原子に結合していてもよい。
【００３８】
式（A)におけるWが-(CH2)r-NR8-CH2-である場合、qは、典型的には0である。
【００３９】
式（A)の基の例は、下記構造を含む:
【００４０】
【化５】
2021508341.tif 000007
【００４１】
式（I)における基R2は、典型的には、H、F、Clまたは-CH2NH2である。より典型的には、それはClまたは-CH2NH2である。
【００４２】
基R8は、例えばH、-SO2Me、-SO2Et、-SO2CF3、-COMe、-CONMe2、-CONH2または-CH2CH2SO2Meであり得る。
【００４３】
基R10は、例えば-SO2Me、-SO2Et、-SO2CF3、-COMe、-CONMe2、-CONH2または-CH2CH2SO2Meであり得る。
【００４４】
式（I)の１つの態様において、置換基は以下の通りである:
-  R1は、-(CH2)m-R7、
【００４５】
【化６】
2021508341.tif 000008
【００４６】
である;
-  R2は、H、ハロ、-(CH2)m-NH2、-(CH2)n-C(=NH)-NH2または-(CH2)n-NH-(CH2)m-NHR9である;
-  R3は、H、FまたはClである;
-  R4、R5およびR6のそれぞれは、独立してHまたはFである;
-  R7は、C1-C6アルキル、CF3、-NH-(CH2)2-(NH)r-R8、-NH-(CHR8R9)または下記式(A):
【００４７】
【化７】
2021508341.tif 000009
【００４８】
の基である
-  Wは、-(CH2)m-、-CH2-O-CH2-、-CH2-S-CH2-、-(CH2)r-S(O)2-CH2-または-(CH2)r-NR8-CH2-である;
-  mは、１〜３の整数である;
-  nは、1または2である;
-  pは、1であり、かつVはCHである;またはpは、0であり、かつVはNである;
-  qは、0または1である;
-  rは、0または1である;
-  R8は、H、-SO2Me、-SO2Et、-SO2CF3、-COMe、-CONMe2、-CONH2または-CH2CH2SO2Meである;
-  R9は、HまたはC1-C6アルキルである;および
-  R10は、-SO2Me、-SO2Et、-SO2CF3、-COMe、-CONMe2、-CONH2または-CH2CH2SO2Meである。
【００４９】
本発明の具体的な化合物は以下を含む:
1-{[5-クロロ-1-(4,4,4-トリフルオロブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[3-(4-メタンスルホニルピペラジン-1-イル)プロピル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-[(5-クロロ-1-{3-[(2-メタンスルホニルエチル)アミノ]プロピル}-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル)メチル]-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[3-(3-メタンスルホニルピロリジン-1-イル)プロピル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(3-メタンスルホニルプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
tert-ブチル 4-{5-クロロ-2-[(3,3-ジフルオロ-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-1-イル)メチル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル}ピペリジン-1-カルボキシレート;
1-{[5-クロロ-1-(ピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-({5-クロロ-1-[1-(エタンスルホニル)ピペリジン-4-イル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,6-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,7-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,4-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-4-クロロ-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,5-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン;
およびその医薬上許容される塩。
【００５０】
本発明の化合物は不斉中心もしくはキラル中心を含み得、従って異なる立体異性体形態で存在し得る。ジアステレオマー、エナンチオマーおよびアトロプ異性体、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物を含むがこれらに限定されない本発明の化合物の全ての立体異性体形態が、本発明の一部を形成することが意図される。1つ以上のキラル中心を含有する式(I)の化合物は、エナンチオマー的もしくはジアステレオ異性体的に純粋な形態で、もしくは異性体の混合物の形態で使用され得る。
【００５１】
本発明は、上記で定義された本発明の化合物の全ての幾何異性体および位置異性体を含む。例えば、本発明の化合物が二重結合もしくは縮合環を組み込む場合、シス-およびトランス-形態、ならびにそれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。また、単一の位置異性体および位置異性体の混合物の両方とも、本発明の範囲内である。
【００５２】
本発明の化合物は、非溶媒和形態ならびに水、エタノールなどの医薬上許容し得る溶媒との溶媒和形態で存在し得、そして本発明は溶媒和形態および非溶媒和形態の両方を含むことが意図される。
【００５３】
本発明の化合物は、異なる互変異性形態で存在し得、そして全てのこのような形態は本発明の範囲内に含まれる。用語「互変異性体」もしくは「互変異性形態」は、低いエネルギー障壁を介して相互変換可能な異なるエネルギーの構造異性体をいう。例えば、プロトン互変異性体(プロトトロピー互変異性体としても知られる)は、ケト-エノール互変異性化などのプロトンの移動を介する相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合電子のいくつかの再編成を介する相互変換を含む。
【００５４】
本発明の化合物は、以下の実施例に記載された合成法もしくはこのような方法の類似方法によって調製され得る。
【００５５】
常法によって、式（I)のベンズイミダゾールはその医薬上許容し得る塩に変換され得、そして塩は遊離化合物に変換され得る。例えば、式（I)のベンズイミダゾールは、医薬上許容し得る酸と接触させて医薬上許容し得る塩を形成し得る。医薬上許容し得る塩は、医薬上許容し得る酸もしくは塩基との塩である。
【００５６】
医薬上許容し得る酸は、塩酸、硫酸、リン酸、二リン酸、臭化水素酸もしくは硝酸などの無機酸、およびクエン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸もしくはp-トルエンスルホン酸などの有機酸の両方を含む。医薬上許容し得る塩基は、アルカリ金属(例、ナトリウムもしくはカリウム)およびアルカリ土類金属(例、カルシウムもしくはマグネシウム)ヒドロキシドならびにアルキルアミン、アラルキルアミンおよび複素環アミンなどの有機塩基を含む。
【００５７】
本発明の化合物は、生物学的試験において呼吸器合胞体ウイルス(RSV)の阻害剤であると見い出された。本化合物は、従って治療上有用である。従って、本発明は、療法によるヒトもしくは動物体の治療方法における使用のための、上記で定義された式（I)のベンズイミダゾールである化合物もしくはその医薬上許容し得る塩をさらに提供する。本発明はまた、RSV感染の治療もしくは予防方法における使用のための、上記で定義された本発明の化合物を提供する。なおさらに、本発明は、RSV感染の治療もしくは予防における使用のための医薬の製造における、本発明の化合物の使用を提供する。RSV感染に罹患したもしくはかかりやすい被検体は、従って上記で定義された本発明の化合物の投与を含む方法によって治療され得る。被検体の状態は、それによって向上または改善され得る。
【００５８】
RSV感染は、典型的には呼吸器感染である。RSV感染は、子供、例えば10歳以下の年齢の子供もしくは２歳以下の年齢の幼児における感染であり得る。１つの態様において、本発明は、小児患者におけるRSV感染の治療もしくは予防における使用のための、上記で定義された本発明の化合物を提供する。あるいは、感染は、老人もしくは高齢者、例えば60歳を超える年齢の成人、70歳を超える年齢の成人、もしくは80歳を超える年齢の成人における感染であり得る。本発明は、高齢患者におけるRSV感染の治療もしくは予防における使用のための化合物をさらに提供する。
【００５９】
RSV感染は、免疫不全の個体もしくはCOPDまたはCHFを罹患する個体における感染であり得る。別の態様において、RSV感染は、易感染性でない個体、例えばその他の点では健康である個体における感染である。
【００６０】
本発明の化合物は、多様な剤型で、例えば錠剤、カプセル、糖衣錠もしくはフィルムコーティング錠、液体溶液もしくは懸濁液の形態などで経口で、もしくは非経口、例えば筋肉内、静脈内もしくは皮下で投与することができる。本化合物は、従って注射剤、点滴によって、もしくは吸入もしくは噴霧によって与えられ得る。本化合物は、好ましくは経口投与によって与えられる。
【００６１】
投薬量は、患者の年齢、体重量および状態ならびに投与経路を含む多様な因子に依存する。１日投薬量は、幅広い制限内で変化し得、そして個々において個々の要件に適応される。しかしながら、典型的には、化合物が単独で成人のヒトに投与される場合の各経路に適合された投薬量は、0.0001-650 mg/kg、最も一般的には0.001〜10 mg/kg、体重、例えば0.01〜1 mg/kgの範囲である。このような投薬量は、例えば、１日１〜５回与えられ得る。静脈内注射について、適切な１日の用量は、0.0001〜1 mg/kg体重、好ましくは0.0001〜0.1 mg/kg体重である。１日投薬量は、１回の投薬量としてもしくは分割投与計画に従って投与され得る。
【００６２】
錠剤もしくはカプセルなどの単位用量形態は、通常1-250 mgの活性成分を含む。例えば、式(I)の化合物は、100-250 mgの間の用量で１日１回、１日２回もしくは１日３回のいずれかでヒト患者に投与され得た。例えば、式(I)の化合物は、100-250 mgの間の用量で１日１回、１日２回もしくは１日３回のいずれかでヒト患者に投与され得た。
【００６３】
式(I)の化合物およびその医薬上許容し得る塩は、そのまま使用され得る。あるいは、それらは医薬組成物の形態で投与され得る。本発明は、従って、医薬上許容し得るアジュバント、希釈剤もしくは担体とともに、本明細書中上記で定義された式(I)の化合物もしくはその医薬上許容し得る塩を含む医薬組成物もまた提供する。適切な医薬処方物の選択および調製のための従来の手順は、例えば、"Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載されている。
【００６４】
投与の様式に依存して、医薬組成物は、好ましくは0.05〜99 %w(重量％)、より好ましくは0.05〜80 %w、なおより好ましくは0.10〜70 %w、およびさらにより好ましくは0.10〜50 %wの活性成分を含有し、全ての重量％は合計の組成物に基く。
【００６５】
本発明は、本明細書中上記で定義された式(I)の化合物もしくはその医薬上許容し得る塩を医薬上許容し得るアジュバント、希釈剤もしくは担体と混合することを含む、本発明の医薬組成物の調製プロセスをさらに提供する。
【００６６】
本発明の化合物は、多様な剤型で投与され得る。従って、それらは、例えば錠剤、トローチ、ドロップ、水性もしくは油性懸濁液、溶液、分散性粉末もしくは顆粒として経口投与され得る。本発明の化合物はまた、皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内、経皮的であろうとなかろうと、輸液技術によってもしくは吸入または噴霧によって非経口投与され得る。本化合物はまた、坐剤として投与され得る。
【００６７】
本発明の医薬組成物の固体経口形態は、活性化合物と共に、希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、蔗糖、セルロース、トウモロコシデンプンもしくは馬鈴薯デンプン;潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および/またはポリエチレングリコール;結合剤;例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースもしくはポリビニルピロリドン;非凝集剤、例えばデンプン、アルギン酸、アルギネートもしくはデンプングリコール酸ナトリウム;発泡混合物;染料;甘味料;湿潤剤、例えばレシチン、ポリソルベート、ラウリルサルフェート;および一般的に医薬処方物に使用される非毒性および薬理学的に不活性な物質を含み得る。このような医薬製剤は、公知の方法において、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖衣、もしくはフィルムコーティングプロセスによって製造され得る。
【００６８】
経口投与のための液体分散剤は、シロップ、乳剤および懸濁剤であり得る。シロップは、担体として、例えば、蔗糖もしくはグリセリンおよび／またはマンニトールおよび/またはソルビトールとともに蔗糖を含み得る。
【００６９】
懸濁剤および乳剤は、担体として、例えば天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、もしくはポリビニルアルコールを含み得る。筋肉内注射のための懸濁剤もしくは溶液は、活性化合物と共に、医薬上許容し得る担体、例えば無菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えばプロピレングリコール、および所望であれば、適切な量のリドカイン塩酸塩を含み得る。懸濁剤のためのさらに適切な担体は、無菌水、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)、ポリソルベート80、ポリビニルピロリドン(PVP)、エアゾールAOT(すなわち1,2-ビス(2-エチルヘキソキシカルボニル)エタンスルホン酸ナトリウム)、プルロニックF127および/またはカプチソル(すなわちスルホブチルエーテル-ベータ-シクロデキストリン)を含む。
【００７０】
本発明の化合物は、例えば、以下から選択される担体中の水性懸濁剤として処方され得る:
(i) 0.5% w/v ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)/0.1% w/v ポリソルベート80;
(ii) 0.67% w/v ポリビニルピロリドン(PVP)/0.33% w/v エアゾールAOT(1,2-ビス(2-エチルヘキソキシカルボニル)エタンスルホン酸ナトリウム);
(iii) 1% w/v プルロニックF127;および
(iv) 0.5% w/v ポリソルベート80。
【００７１】
担体は、当業者に公知の標準的な手順によって調製され得る。例えば、担体(i)〜(iv)のそれぞれは、必要量の賦形剤を適切な容器中に量り取り、最終容積の約80%の水を加え、そして溶液が形成されるまで磁気撹拌することによって調製され得る。次いで、担体は水で規定の容積にされる。式Iの化合物の水性懸濁剤は、必要量の式Iの化合物を適切な容器中に量り取り、必要容積の100%の担体を加え、そして磁気撹拌することによって調製され得る。
【００７２】
注射剤もしくは輸液のための溶液は、担体として、例えば、無菌水を含み得、または、好ましくは、それらは無菌の水性の等張の生理食塩水溶液の形態であり得る。
【００７３】
本発明の化合物はまた、ウイルス感染症の治療に使用される他の化合物とともに投与され得る。従って、本発明はさらに、本発明の化合物、またはその医薬上許容し得る塩、あるいは本発明の化合物を含有する医薬組成物もしくは処方物が、ウイルス感染、特にRSVによる感染の治療もしくは予防のための別の治療剤と同時にまたは連続してあるいは組み合わせ製剤として投与される組み合わせ療法に関する。
【００７４】
本明細書中、用語「組み合わせ」が使用される場合、これは同時の、別個のもしくは連続の投与をいうことが理解されるべきである。本発明の１つの局面では、「組み合わせ」は、同時投与をいう。本発明の別の局面では、「組み合わせ」は、別個の投与をいう。本発明のさらなる局面では、「組み合わせ」は、連続投与をいう。投与が連続もしくは別個である場合、第２の成分の投与の遅延は、組み合わせの有益な効果を喪失するようなものではないべきである。
【００７５】
組み合わせにおいて使用するための適切な治療剤は
(i)RSVヌクレオカプシド(N)-蛋白質阻害剤;
(ii)ホスホプロテイン(P)蛋白質および巨大(L)蛋白質を阻害するような他のRSV蛋白質阻害剤;
(iii)F-蛋白質抗体などの抗RSVモノクローナル抗体;
(iv)免疫調節toll様受容体化合物;
(v)抗インフルエンザおよび抗ライノウイルス化合物などの他の呼吸器系ウイルス抗ウイルス;および/または
(vi)抗炎症化合物
を含む。
【００７６】
RSVヌクレオカプシド(N)-蛋白質は、ウイルス転写および複製において極めて重要な役割を果たし、ゲノムRNAとウイルスコードされたRNA-依存性のRNAポリメラーゼとの間の相互作用を仲介する。RSV P-およびL-タンパク質は、RSVのウイルスコードされたRNA-依存性のRNAポリメラーゼの成分である。
【００７７】
本発明のさらなる局面によれば、RSVの治療において使用するための、(i)〜(vi)として上記で列挙した1つ以上の治療剤と組み合わせた、本明細書中上記で定義された式（Ｉ）の化合物もしくはその医薬上許容し得る塩が提供される。
【００７８】
下記実施例は本発明を例示する。しかしながら、それらは本発明をいかようにも限定しない。
【００７９】
実施例
試薬は、商業的供給源から得、そしてさらに精製せずに用いた。全ての温度は℃である。TLCは、アルミニウム支持シリカゲルプレート(平均孔径60Å)上、蛍光指示薬を用いて254 nMで行った。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、BiotageIsolera Oneシステムを用い、KP-Sil、UltraもしくはKP-NHカラムを用いて行った。NMRスペクトルは、400 MHz分光計上、周囲プローブ温度(名目295K)で記録した。化学シフト(δ)は、ppmで与え、そして内部基準として溶媒の残渣ピーク(CDCl3, δH = 7.26 ppm, δC = 77.16 ppm; DMSO-d6, δH = 2.50 ppm, δC = 39.52 ppm)を用いることによって較正した。カップリング定数はヘルツ(Hz)で与える。LRMSは、APCIもしくはESIイオン源を備えたAdvion Plate Express expressionL小型質量分光計を用いて記録した。
【００８０】
【表１】
2021508341.tif 000010
【００８１】
調製例
1A: 3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【００８２】
【化８】
2021508341.tif 000011
【００８３】
Singh et al, J Org. Chem. 2001 Sep 1; 66(19):6263-7によって報告された脱酸素フッ素化手順の採用によって調製した。イサチン(3.05g, 20.72 mmol)を不活性雰囲気下で無水CH2Cl2(50 mL)に溶解し、そして0℃まで冷却した。三フッ化ジエチルアミノ硫黄(8.29 mL, 62.74 mmol)を加え、そして反応物をrtで23 h攪拌した。0℃まで冷却後、反応物をさらなる発泡が観察されなくなるまで飽和NaHCO3水溶液で注意深くクエンチし、そしてCH2Cl2(3×50 mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和NaHCO3水溶液、水および食塩水(各50 mL)で連続して洗浄し、乾燥(MgSO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO2; EtOAc/ヘプタン; 10-32%)により精製して黄色固体を得、これをヘプタンで粉末化して生成物を灰白色固体(2.637 g, 75%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.95 (br s, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 7.48-7.42 (m, 1H), 7.17 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.96-6.92 (m, 1H). LRMS (APCI-) m/z 167.9 [M-H]-
【００８４】
以下の中間体化合物を同じ一般的脱酸素フッ素化手順によって調製した。
【００８５】
【表２】
2021508341.tif 000012
【００８６】
2A: 4-クロロ-N-(3,3-ジエトキシプロピル)-2-ニトロアニリン
【００８７】
【化９】
2021508341.tif 000013
【００８８】
N,N-ジイソプロピルエチルアミン(3.397 mL, 19.5 mmol)、続いて3,3-ジエトキシプロパン-1-アミン(3.154 mL, 19.5 mmol)を4-クロロ-1-フルオロ-2-ニトロベンゼン(1.765 mL, 15 mmol)のiPrOH(35 mL)溶液に加え、そして80℃で4.5 h加熱した。rtまで冷却後、反応混合物をEtOAc(100 mL)で希釈し、H2O(0.01 M水性HClで〜pH 6まで酸性化した、4×)および食塩水(1×、各100 mL)で連続して洗浄し、乾燥(MgSO4)し、そして溶媒を減圧下で除去して粗生成物を橙色固体(4.308 g, 97%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.29 (br s, 1H), 8.17 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 9.2, 2.6, 0.6 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.65 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 3.76-3.65 (m, 2H), 3.59-3.49 (m, 2H), 3.44-3.37 (m, 2H), 2.07-2.01 (m, 2H), 1.24 (t, J = 7.0 Hz, 6H). LRMS (ESI+) m/z 324.9 [M+Na]+
【００８９】
2B: tert-ブチル 4-[(4-クロロ-2-ニトロフェニル)アミノ]ピペリジン-1-カルボキシレート
【００９０】
【化１０】
2021508341.tif 000014
【００９１】
中間体2Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.19 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.40-7.35 (m, 1H), 6.84 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.09-3.95 (m, 2H), 3.69-3.60 (m, 1H), 3.09-2.98 (m, 2H), 2.09-2.00 (m, 2H), 1.57-1.50 (m, 2H), 1.47 (s, 9H). LRMS (APCI-) m/z 353.9 [M-H]-
【００９２】
3A: 4-クロロ-N1-(3,3-ジエトキシプロピル)ベンゼン-1,2-ジアミン
【００９３】
【化１１】
2021508341.tif 000015
【００９４】
250 mL丸底圧力フラスコ中、4-クロロ-N-(3,3-ジエトキシプロピル)-2-ニトロアニリン(中間体2A)(4.050 g, 13.38 mmol)をEtOH(100 mL)に溶解し、そして炭素上白金(5 wt.%担持、393 mg)を加えた。反応容器を50 psiの圧力まで水素で満たし、そして3h攪拌した。反応混合物をガラスマイクロファイバーフィルターを通して濾過し、EtOHで洗浄し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー[SiO2;CH2Cl2/(CH2Cl2:EtOH:NH4OH 80:20:1); 0-25%]により精製して表題化合物を暗褐色オイル(3.440 g, 94%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.74 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.65 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 3.83-3.64 (m, 3H), 3.57-3.47 (m, 2H), 3.40 (br s, 2H), 3.17 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.02-1.96 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.0 Hz, 6H). LRMS (ESI+) m/z 273.1 [M+Na]+
【００９５】
3B tert-ブチル 4-[(2-アミノ-4-クロロフェニル)アミノ]ピペリジン-1-カルボキシレート
【００９６】
【化１２】
2021508341.tif 000016
【００９７】
中間体2Bから、中間体3Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.75-6.69 (m, 2H), 6.57 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.03 (br s, 2H), 3.54-3.26 (m, 3H), 3.00-2.86 (m, 2H), 2.04-1.96 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.42-1.30 (m, 2H). LRMS (ESI+) m/z 326.3 [M+H]+
【００９８】
4A: 5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(3,3-ジエトキシプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール
【００９９】
【化１３】
2021508341.tif 000017
【０１００】
中間体2A(2.524 g, 9.27 mmol)および2-クロロ-1,1,1-トリエトキシエタン(2.499 mL, 18.54 mmol)のEtOH(90 mL)溶液を75℃で7.5 h加熱し、次いでrtで12 h攪拌した。揮発物を減圧下で除去し、そして反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー(SiO2; EtOAc/石油エーテル 60/80; 0-60%)により精製して生成物を褐色固体(1.537 g, 50%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.74-7.72 (m, 1H), 7.34-7.26 (m, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.48 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.68-3.58 (m, 2H), 3.49-3.39 (m, 2H), 2.21-2.14 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 6H). LRMS (APCI+) m/z 331.1 [M+H]+
【０１０１】
4B: tert-ブチル 4-[5-クロロ-2-(クロロメチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル]ピペリジン-1-カルボキシレート
【０１０２】
【化１４】
2021508341.tif 000018
【０１０３】
中間体3Bから、中間体4Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.52-4.27 (m, 3H), 2.98-2.81 (m, 2H), 2.46-2.31 (m, 2H), 2.03-1.93 (m, 2H), 1.52 (s, 9H). LRMS (APCI+) m/z 383.9 [M+H]+
【０１０４】
5A: 1-{[5-クロロ-1-(3,3-ジエトキシプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１０５】
【化１５】
2021508341.tif 000019
中間体4A(293 mg, 0.885 mmol)、3,3-ジ-フルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン(中間体1A, 150 mg, 0.885 mmol)およびK2CO3(300 mg, 2.167 mmol)の無水MeCN(6 mL)溶液を不活性雰囲気下、70℃で1 h 45分加熱した。rtまで冷却後、反応物をEtOAc(30 mL)で希釈し、そしてH2O(10 mL)で洗浄した。水層をEtOAc(2×20 mL)で抽出し、合わせた有機抽出物をH2Oおよび食塩水(各10 mL)で連続して洗浄し、乾燥(MgSO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, SiO2, ヘプタン中12-65% EtOAc)により精製して生成物を白色固体(303 mg, 74%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.74 (dd, J = 1.9, 0.6 Hz, 1H), 7.56-7.51 (m, 2H), 7.49-7.43 (m, 1H), 7.33-7.29 (m, 1H), 7.29-7.24 (m, 1H), 7.17 (t, J = 7.7, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.48 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.35 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.66-3.55 (m, 2H), 3.48-3.39 (m, J, 2H), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 6H). LRMS (APCI+) m/z 463.9 [M+H]+
【０１０６】
以下の5-アミノメチレン中間体化合物を、中間体4Cで示されるtert-ブチルN-{[2-(クロロメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-5-イル]メチル}カルバメートから、中間体5Aについて記載したのと同じ一般的手順によって調製した(以下の表２を参照)。
【０１０７】
【表３】
2021508341.tif 000020
【０１０８】
6A: 3-{5-クロロ-2-[(3,3-ジフルオロ-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-1-イル)メチル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル}プロパナール
【０１０９】
【化１６】
2021508341.tif 000021
【０１１０】
HCl(2 M水溶液, 3 mL)を中間体5A(288 mg, 0.621 mmol)のテトラヒドロフラン(5 mL)溶液に加え、そしてrtで7 h攪拌した。反応物を飽和NaHCO3水溶液(〜10 mL)でクエンチし、そしてEtOAc(3×15 mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水(各15 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO2, ヘプタン中20-100% EtOAc)により精製して白色固体(216 mg, 89%)を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.74 (s, 1H), 7.76-7.72 (m, 1H), 7.57-7.45 (m, 3H), 7.35-7.25 (m, 2H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.61 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 6.4 Hz, 1H). LRMS (APCI+) m/z 390.1 [M+H]+
【０１１１】
実施例
1: 1-{[5-クロロ-1-(4,4,4-トリフルオロブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１１２】
【化１７】
2021508341.tif 000022
【０１１３】
1Aおよび5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(4,4,4-トリフルオロブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾールから、5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.78-7.77 (m, 1H), 7.59-7.45 (m, 3H), 7.33-7.23 (m, 2H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.34-4.28 (m, 2H), 2.27-2.14 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 444.0 [M+H]+
【０１１４】
2: 1-({5-クロロ-1-[3-(4-メタンスルホニルピペラジン-1-イル)プロピル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１１５】
【化１８】
2021508341.tif 000023
【０１１６】
1-(メチルスルホニル)ピペラジン(26 mg, 0.156 mmol)を中間体6A(61 mg, 0.156 mmol)の1,2-ジクロロエタン(3 mL)溶液に加え、そしてrtで7.5 h攪拌した。次いでNaBH(OAc)3(46 mg, 0.219 mmol)を加え、そして反応物をrtで18 h攪拌した。反応物をNaOH(1 M水溶液, 5 mL)でクエンチし、CH2Cl2(4×10 mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水(5 mL)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(SiO2、ヘプタン中50-100% EtOAc、次いで1% NH4OHを含むCH2Cl2中0-5% MeOH)により精製して生成物を白色固体(50 mg, 60%)として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.78-7.74 (m, 1H), 7.68-7.64 (m, 2H), 7.61-7.55 (m, 1H), 7.32-7.23 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 4.36 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.11-3.04 (m, 4H), 2.86 (s, 3H), 2.44-2.37 (m, 4H), 2.34-2.26 (m, 2H), 2.01-1.91 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 538.2 [M+H]+
【０１１７】
本発明の以下の化合物を、中間体6Aを用いて、実施例２の化合物について記載した一般的還元的アミノ化手順によって調製した。
【０１１８】
【表４】
2021508341.tif 000024
【０１１９】
5: 1-{[5-クロロ-1-(3-メタンスルホニルプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１２０】
【化１９】
2021508341.tif 000025
【０１２１】
1Aおよび5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(3-メタンスルホニルプロピル)-1H-1,3-ベンゾジアゾールから、5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.79-7.74 (m, 1H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.61-7.55 (m, 1H), 7.32 (dd, J = 8.7, 2.0 Hz, 1H), 7.28-7.23 (m, 2H), 5.34 (s, 2H), 4.47 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.29-3.23 (m, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.27-2.17 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 453.7 [M+H]+
【０１２２】
6: tert-ブチル 4-{5-クロロ-2-[(3,3-ジフルオロ-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-1-イル)メチル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル}ピペリジン-1-カルボキシレート
【０１２３】
【化２０】
2021508341.tif 000026
【０１２４】
1Aおよび4Bから、5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.76 (d, J = 2.0, 1H), 7.55-7.38 (m, 4H), 7.21 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.19-7.15 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.70-4.58 (m, 1H), 4.40-4.18 (m, 2H), 2.97-2.83 (m, 2H), 2.37-2.21 (m, 2H), 1.70-1.60 (m, 2H), 1.50 (s, 9H). LRMS (APCI+) m/z 516.6 [M+H]+
【０１２５】
7: 1-{[5-クロロ-1-(ピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１２６】
【化２１】
2021508341.tif 000027
【０１２７】
TFA(2 mL)を化合物6(549 mg, 1.06 mmol)の冷却したCH2Cl2(8 mL)溶液(0℃)に加え、そしてrtで2 h撹拌した。反応物を0℃まで冷却し、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、そしてCH2Cl2(3×20 mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水(25 mL)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー[CH2Cl2中0-100% EtOH:CH2Cl2:NH4OH (50:8:1)]により精製して生成物を白色固体(427 mg, 96%)として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.76 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55-7.49 (m, 2H), 7.48-7.43 (m, 1H), 7.26 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.20-7.15 (m 1H), 5.23 (s, 2H), 4.77-4.68 (m, 1H), 3.45-3.37 (m, 2H), 3.03-2.94 (m, 2H), 2.71-2.59 (m, 2H), 1.80-1.72 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 416.8 [M+H]+
【０１２８】
8: 1-{[5-クロロ-1-(1-メタンスルホニルピペリジン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１２９】
【化２２】
2021508341.tif 000028
【０１３０】
塩化メタンスルホニル(23.0 μL, 0.297 mmol)をN2下、化合物7(62 mg, 0.149 mmol)およびトリエチルアミン(42.5 μL, 0.305 mmol)の冷却した(0℃)無水CH2Cl2(2.5 mL)溶液に加え、そしてrtで17 h撹拌した。反応物をCH2Cl2(20 mL)で希釈し、飽和NH4Cl水溶液、水および食塩水(各10 mL)で連続して洗浄し、乾燥(MgSO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(ヘプタン中30-100% EtOAc)により精製して白色固体(32 mg, 43%)を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): 7.77 (d, J = 2.0, 1H), 7.56-7.44 (m, 4H), 7.26 (dd, J = 8.7, 2.0 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.74-4.64 (m, 1H), 4.03-3.96 (m, 2H), 2.93-2.83 (m, 5H), 2.61-2.48 (m, 2H), 1.82-7.72 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 494.7 [M+H]+
【０１３１】
9: 1-({5-クロロ-1-[1-(エタンスルホニル)ピペリジン-4-イル]-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル}メチル)-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１３２】
【化２３】
2021508341.tif 000029
【０１３３】
化合物7から、化合物8について記載したのと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58-7.46 (m, 4H), 7.29-7.26 (m, 1H), 7.23-7.18 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.77-4.67 (m, 1H), 4.07-4.00 (m, 2H), 3.10-2.98 (m, 4H), 2.61-2.48 (m, 2H), 1.81-1.73 (m, 2H), 1.44 (t, J = 7.4 Hz, 3H). LRMS (APCI+) m/z 508.8 [M+H]+
【０１３４】
10: 1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１３５】
【化２４】
2021508341.tif 000030
【０１３６】
中間体1Aおよび5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾールから、中間体5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.77 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55-7.48 (m, 3H), 7.47-7.41 (m, 1H), 7.27-7.22 (m, 1H), 7.17 (t, J = 7.6, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.80-4.70 (m, 1H), 4.11 (dd, J = 11.7, 4.6 Hz, 2H), 3.59 (td, J = 12.0, 1.9 Hz, 2H), 2.55-2.42 (m, 2H), 1.67-1.62 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 418.0 [M+H]+
【０１３７】
11: 1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,6-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１３８】
【化２５】
2021508341.tif 000031
【０１３９】
1Eおよび 5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾールから、中間体5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.79-7.78 (m, 1H), 7.55-7.48 (m, 2H), 7.37-7.33 (m, 1H), 7.27-7.24 (m, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.78-4.68 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 11.9, 4.6 Hz, 2H), 3.59 (td, J = 12.0, 1.9 Hz, 2H), 2.57-2.43 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 435.8 [M+H]+
【０１４０】
12: 1-{[5-クロロ-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3,7-トリフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１４１】
【化２６】
2021508341.tif 000032
【０１４２】
1Fおよび5-クロロ-2-(クロロメチル)-1-(オキサン-4-イル)-1H-1,3-ベンゾジアゾールから、中間体5Aと類似の手順によって調製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.43-7.39 (m, 1H), 7.23-7.13 (m, 3H), 5.31 (s, 2H), 4.65-4.56 (m, 1H), 4.19 (dd, J = 11.9, 4.6 Hz, 2H), 3.60 (td, J = 12.0, 1.9 Hz, 2H), 2.62-2.49 (m, 2H), 1.88-1.81 (m, 2H). LRMS (APCI+) m/z 435.8 [M+H]+
【０１４３】
13: 1-{[5-(アミノメチル)-1-(3-メチルブチル)-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル]メチル}-3,3-ジフルオロ-2,3-ジヒドロ-1H-インドール-2-オン
【０１４４】
【化２７】
2021508341.tif 000033
【０１４５】
中間体5B(107 mg, 0.215 mmol)のTFA(1 mL)およびCH2Cl2(1 mL)溶液をrtで7 h撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、そして残渣を飽和NaHCO3水溶液(10 mL)とCH2Cl2(10 mL)との間で分配し、そして分離した。水層をCH2Cl2(2×10 mL)、次いでCH2Cl2:iPrOH(〜3:1, 3×20 mL)で抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水(10 mL)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、そして溶媒を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィー(1% NH4OHを含むCH2Cl2中0-15% MeOH)により精製して白色固体(71 mg, 83%)を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77-7.72 (m, 1H), 7.61-7.51 (m, 2H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.34-7.19 (m, 3H), 5.28 (s, 2H), 4.30-4.22 (m, 2H), 3.78 (s, 2H), 1.72-1.61 (m, 1H), 1.59-1.50 (m, 2H), 0.95 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LRMS (APCI+) m/z 398.9 [M+H]+
【０１４６】
以下の化合物を実施例13について記載した一般的BOC脱保護手順によって調製した。
【０１４７】
【表５】
2021508341.tif 000034
【０１４８】
実施例17: インビトロにおける薬効
化合物を、以下のプロトコルに従ってRSV融合アッセイおよびプラーク減少アッセイに供した。
【０１４９】
RSV融合アッセイ
HEK 293T((ECACC 12022001)細胞を、10%胎児ウシ血清(FBS)、mLあたり50単位のペニシリンおよび50 μg/mLストレプトマイシンを含むDulbecco’s培地(DMEM)中、T75培養フラスコ中で培養し、そして使用前に37℃に温めた。細胞をまず5 mlのリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で簡単に洗浄することによって継代し、続いて2 mLのトリプシンエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を添加して細胞を剥離した。細胞をフラスコから剥離した後、次いで8 mLの培地を加え、そして細胞をフラスコの底部に対してピペッティングによって分散させた。
【０１５０】
細胞を計数し、そして新鮮な媒体中で3 x 105細胞/mlまで希釈した。２つのT75フラスコにそれぞれ15.6 mLの希釈した細胞を播種し、また細胞を1:2と1:10との間の比で二次培養し、ストックを継続した。次いで、フラスコを37℃および5% CO2で24 hインキュベートした。
【０１５１】
HEK 293T細胞にトランスフェクトすべきプラスミドDNA(pFR-LucおよびpcDNA3. 1_Gal4/NFKBについて)をまずトランスフェクション試薬FuGENE（登録商標）6(Promega)を含む血清を含まない培地(Opti-MEM, Invitrogen)中で調製した。血清を含まない培地を1.5 mLエッペンドルフチューブ中に置き、次いで培地にFuGENE 6を加えた。チューブを1秒間ボルテックスし、RTで5分間インキュベートした。7.79ngのpFR_lucおよびpCDNA3.1_A2_FプラスミドDNAの両方をチューブ1に加え、そして7.79ngのpCDNA3.1_GAL4-NF-κBプラスミドをチューブ２に加えた。チューブを1秒間ボルテックスし、次いで、室温で15分間インキュベートした。次いで、各トランスフェクション混合液を293Ｔ細胞のT75フラスコのうちの１つの培地に加えた。細胞を、加湿インキュベーター中、37℃、5% CO2で24h培養した。
【０１５２】
化合物を１２点希釈曲線で1:3に希釈して(ポリプロピレン丸底９６穴プレート中)、25 μM、3 μM、1 μMもしくは500 nMのいずれかの最上[最終]を得た。対照化合物を3 μMの最上濃度で全てのアッセイに含めた。トランスフェクトされた細胞を計数し、そして新鮮な媒体中で4 x 105細胞/mlまで希釈した。50 μLのトランスフェクション集団1を９６穴平底白色不透明アッセイプレートの全てのウェルに加えた。100 μLの希釈した化合物(化合物あたり２列)、対照化合物(１列)およびコントロール(DMSO(0%阻害、４ウェル)、3 μM陽性コントロール(100%阻害、４ウェル)および培地(トランスフェクション集団1のみ、４ウェル)を適切なウェルに加えた。次いで、追加の50 μLのこの細胞集団を加えたトランスフェクション集団1のみの４つのウェルを除いて、50 μLの希釈した(4×105細胞/mL)集団2細胞を全てのウェルに加えた。
【０１５３】
次いで、プレートを37℃および5% CO2で24 hインキュベートした。この時間の後、全てのウェルから100 μLを取り出し、そして室温まで予備平衡させた60 μLのONE-GloTM(Promega)試薬を加えた。次いで、プレートを室温で3分間インキュベートし、ONE-Gloプロトコルを用いてGloMax Explorerシステム(Promega)マルチモードリーダー上で発光を読み出した。Dotmaticsソフトウエアにおいて分析を行った。全ての生データはバックグラウンドを差し引き(平均3 μMの陽性コントロール値の差し引き)、IC50を計算した。
【０１５４】
プラーク減少アッセイ:
プラーク減少アッセイを典型的には次の通り行った。HEp-2細胞(ATCC, CCL23)をフラスコ中で継代し、そして抗生物質を含むDMEM中96-ウェルプレートに播種し、そして10% FBSを補充した。接種およびそれに続くインキュベーションの間、細胞を3% FBSを含むDMEM中で培養した。100プラーク形成単位(PFU)/ウェルのRSV(RSV A2 VR-1540)を化合物の１０段階希釈と混合した。続いて、100 μLのウイルス/化合物混合物をコンフルエントなHEp-2細胞単層に加えた。細胞およびウイルス/化合物混合物を加湿5% CO2インキュベーター中、35℃で1日インキュベートした。
【０１５５】
細胞をPBSで２回洗浄し、50% v/v EtOH/MeOHを加え、次いで-20℃で保存した。染色の日、まず固定液をプレートから除去した。プレートをPBSで３回洗浄した。予備滴定した量の一次抗体を60 μL PBS/2%ミルク粉末中に加え、そしてプレートをrtで1 hインキュベートした。プレートをPBS/0.05% Tween20で３回洗浄し、ヤギ抗マウス西洋ワサビペルオキシダーゼを60 μL PBS/2%ミルク粉末に加え、そしてrtで1 hインキュベートした。PBS/0.05% Tween20での３回の洗浄工程、60 μLのすぐに使用できるTrueBlueを加え、そしてプレートをrtで10-15分間インキュベートし、MilliQ水を加えた。プレートを水で１回洗浄し、30-60分間インキュベートし、水の除去後、暗所で風乾した。
【０１５６】
免疫染色されたプラーク(ビロスポット)のためのBioSpot分析ソフトウエアを備えたImmunospot S6 UV分析器を用いてプレートをスキャンおよび分析した。プラーク計数を用いてRSVについてのウイルス対照ウェルにおけるスポット計数(SC)の平均に対する%感染を計算した。IC50/IC90値を、GraphPad 5.0(Prism)における可変勾配を用いた4-パラメーター非線形回帰に適合させた阻害曲線の内挿によって、それぞれ50%もしくは90%の信号の減少として計算した。
【０１５７】
あるいは、注記した場合、プラーク減少アッセイを次の通り行った。Hep G2細胞(ECACC, 85011430)をフラスコ中で継代し、そして抗生物質を含むDMEM中12-ウェルプレートに播種し、そして接種前に10% FBSを補充した。接種およびそれに続くインキュベーションの間、細胞を2% FBSを含むDMEM中で培養した。75プラーク形成単位(PFU)/ウェルのRSV(RSV A2, 0709161v)を化合物の８段階希釈と混合した。続いて、200 μLのウイルス/化合物混合物をコンフルエントなHep G2細胞単層に加え、2 hの感染のために15分毎に手動で振盪した。次いで、感染性上清を除去し、そして0.25% DMSOを含む4部のDMEM + 2% FBSおよび1部の4% CMCを含む2 mLのオーバーレイで置き換えた。細胞を加湿5% CO2インキュベーター中、37℃で5日インキュベートした。
【０１５８】
オーバーレイを除去し、そして細胞をPBSで洗浄し、75%アセトン 25%メタノールの混合物で3分間固定化し、そして新鮮なPBSで置き換えた。染色が直ちに開始しなかった場合、プレートを0.05% Tween20(PBS-T)を含むPBS中、4℃で保存した。37℃で振盪する間、染色を行った。最初に、プレートをウェルあたり500 uL PBS-T/2%ミルク粉末で１時間ブロックした。次いで、これを予備滴定した量の一次抗体(ab1128)を含む250 uL PBS-T/2%ミルク粉末で90分間置き換えた。プレートをPBS-Tで3×5分洗浄し、250 μL PBS-T/2%ミルク粉末中ウサギ抗ヤギ西洋ワサビペルオキシダーゼ(AP106P)を加え、そして１時間インキュベートした。PBS-Tでの３回の洗浄工程後、250 μLのTrueBlueを加え、そしてプレートを10分でインキュベートし、水道水で洗浄した。次いで、プレートを風乾し、そして暗所で保存した。
【０１５９】
免疫染色されたプラークを計数するためのBioSpot分析ソフトウエアを備えたImmunospot S6 Macro分析器を用いてプレートをスキャンおよび分析した。プラーク計数をドットマティクス(dotmatics)中に入力し、ここで、それらを用いてDMSO対照ウェルにおけるスポット計数の平均に対する%感染を計算した。IC50値を、0%の最小値および最大100%で、信号の50%減少として曲線適合から計算した。
【０１６０】
【表６】
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【０１６１】
実施例18: インビトロ薬物動態
化合物を以下のアッセイに供し、肝ミクロソーム安定性および浸透性を調査した。
【０１６２】
ミクロソームインキュベーション:実験手順
プールした肝ミクロソームを信頼できる商業的供給業者から購入し、そして使用前に-80℃で保存する。ミクロソーム(最終タンパク質濃度0.5 mg/mL)、0.1 Mリン酸緩衝液pH 7.4および試験化合物(最終基質濃度3 μM;最終DMSO濃度0.25%)を、NADPH(最終濃度1 mM)を加えて反応を開始する前に37℃で予備インキュベートする。最終インキュベーション体積は50 uLである。コントロールインキュベーションは、各試験した化合物について含まれ、ここで0.1 Mリン酸緩衝液pH 7.4はNADPHの代わりに加えられる(NADPHを引く)。２つのコントロール化合物は、各種を含む。全てのインキュベーションは、各試験化合物について単数で行う。
【０１６３】
各化合物を0、5、15、30および45分間インキュベートする。コントロール(NADPHを引く)は、45分間のみインキュベートする。反応は、適切な時間点で20 μLのインキュベートを60 μLのMeOHに移すことによって停止させる。停止プレートは、2,500 rpm、4℃で20分間遠心分離し、タンパク質を沈殿させる。
【０１６４】
タンパク質の沈殿後、サンプルの上清を4つの化合物までのカセット中で合わせ、内部標準を加え、そしてサンプルをLC-MS/MSによって分析する。時間に対するlnピーク面積比(化合物ピーク面積/内部標準ピーク面積)のプロットから、線の勾配を決定する。続いて、半減期および固有クリアランスを計算する。
【０１６５】
MDR1-MDCK浸透性: 実験手順
NIH(Rockville, MD, USA)から得たMDR1-MDCK細胞を6 - 30の間の継代数で使用する。細胞をMillipore Multiscreen Transウェルプレート上に3.4 x 105細胞/cm2で播種する。細胞をDMEM中で培養し、そして培地を3日目に交換する。4日目に浸透性研究を行う。細胞培養およびアッセイインキュベーションを5% CO2の雰囲気中、95%の相対湿度で37℃で行う。アッセイの日に、側底面および先端面の両方を37℃に温めた所望のpHでハンクス平衡塩類溶液(HBSS)で２回すすぐことによって単層を調製する。次いで細胞を所望のpHで先端区画および側底区画の両方において40分間HBSSと共にインキュベートし、生理学的パラメーターを安定化させる。
【０１６６】
投薬溶液は、試験化合物をアッセイ緩衝液で希釈し、10 μM(1% v/vの最終DMSO濃度)の最終試験化合物濃度を得ることによって調製する。蛍光完全性マーカーであるルシファーイエローもまた投薬溶液に含まれる。分析標準は、試験化合物DMSO希釈液から調製され、そして緩衝液に移され、1% v/v DMSO濃度を維持する。
【０１６７】
A-B浸透性の評価のために、HBSSを先端区画から取り除き、そして試験化合物投薬溶液で置き換える。次いで先端区画インサートは、新鮮な緩衝液(1% v/v DMSOを含む)を含むコンパニオンプレートに置かれる。B-A浸透性の評価のために、HBSSをコンパニオンプレートから取り除き、そして試験化合物投薬溶液で置き換える。新鮮な緩衝液(1% v/v DMSOを含む)を先端区画インサートに加え、次いでこれをコンパニオンプレートに置く。60分で、先端区画インサートおよびコンパニオンプレートを分離し、そして先端および側底サンプルを分析のために希釈する。試験化合物の浸透性を２回評価する。公知の浸透性特性の化合物を各アッセイプレート上でコントロールとして行う。
【０１６８】
試験およびコントロール化合物を、サンプルの適切な希釈で8-点較正を用いてLC-MS/MSカセット分析により定量する。開始濃度(C0)を投薬溶液から決定し、そして実験回復をC0ならびに先端および側底区画の両方の濃度から計算する。実験を通しての単層の完全性を、蛍光分析を用いてルシファーイエロー浸透をモニターすることによりチェックする。ルシファーイエロー浸透は、単層が損傷している場合、高い。
【０１６９】
【表７】
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【０１７０】
実施例19: 水性処方物
実施例1の化合物を、以下の手順に従ってpH4で30% w/v captisol(すなわちスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン)中の溶液として処方する。
【０１７１】
30% w/v captisol(すなわちスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン)の担体を、必要量のcaptisolを適切な容器に量り取り、最終体積の水の約80%を加え、そして溶液が形成されるまで磁気攪拌することによって調製する。次いで担体を水で所定の体積にする。
【０１７２】
実施例1の化合物の水溶液を、175 mgの化合物を適切な容器に量り取り、そして必要な体積の担体の約80%を加えることによって調製する。塩酸の水溶液を用いて、pHをpH2に調節し、そして得られる混合物を、溶液が形成されるまで磁気攪拌する。次いで処方物を担体で所定の体積にし、そして水酸化ナトリウムの水溶液を用いてpHをpH4に調節する。
【０１７３】
実施例20: 錠剤組成物
それぞれ0.15 gの重量でありかつ25 mgの本発明の化合物を含む錠剤を以下の通り製造する:
【０１７４】
10,000錠剤についての組成
本発明の化合物(250 g)
ラクトース(800 g)
コーンスターチ(415 g)
タルク粉末(30 g)
ステアリン酸マグネシウム(5 g)
【０１７５】
本発明の化合物、ラクトースおよびコーンスターチの半分を混合する。次いで混合物を0.5 mmメッシュサイズの篩に通す。コーンスターチ(10 g)を暖かい水(90 mL)に懸濁する。得られるペーストを用いて粉末を顆粒化する。顆粒を乾燥し、そして1.4 mmメッシュサイズの篩上で小さなフラグメントに粉砕する。残りの量のスターチ、タルクおよびマグネシウムを加え、注意深く混合し、そして錠剤に加工する。
【０１７６】
実施例21: 注射可能処方物
本発明の化合物  200 mg
塩酸溶液0.1Mまたは
pH 4.0〜7.0に十分な水酸化ナトリウム溶液0.1M
10 mLに十分な滅菌水
【０１７７】
本発明の化合物を大部分の水(35℃-40℃)に溶解し、そして必要に応じて塩酸または水酸化ナトリウムでpHを4.0と7.0との間に調節する。次いでバッチを水で所定の体積にし、そして滅菌細孔フィルターを通して滅菌10 mL琥珀ガラスバイアル(タイプ1)中にろ過し、そして滅菌クロージャーおよびオーバーシールを用いて密封する。
【０１７８】
実施例22: 筋肉内注射
本発明の化合物  200 mg
ベンジルアルコール  0.10 g
グリコフロール75  1.45 g
3.00 mlに十分な注射用水
【０１７９】
本発明の化合物をグリコフロールに溶解する。次いでベンジルアルコールを加えそして溶解し、そして水を加えて3 mLにする。次いで混合物を滅菌細孔フィルターを通してろ過し、そして滅菌3 mLガラスバイアル(タイプ1)に密封する。
【０１８０】
実施例23: シロップ処方物
本発明の化合物  250 mg
ソルビトール溶液  1.50 g
グリセロール  2.00 g
安息香酸ナトリウム  0.005 g
香味料  0.0125 mL
5.00 mLに十分な精製水
【０１８１】
本発明の化合物を、グリセロールと大部分の精製水との混合物に溶解する。次いで安息香酸ナトリウムの水溶液を溶液に加え、続いてソルビトール溶液を加え、そして最後に香味料を加える。精製水で所定の体積にし、そしてよく混合する。
【国際調査報告】
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