(57)【要約】  本願は、ＰＤＥ３／ＰＤＥ４二重阻害剤としての融合三環式化合物、ＰＤＥ３／ＰＤＥ４関連疾患の治療薬物の製造におけるその使用、特に慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）等を治療するためのその使用を開示する。具体的には、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるその塩を開示する。2021532088.tif 000122
2021532088.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【化１】
2021532088.tif 000107
（式中、環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロシクリル基又は５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、＝Ｏ、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
前記環Ｃｙの環原子に少なくとも１つの窒素原子が含まれ、
Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、または単結合から選ばれ、
ｎは１、２、３又は４であり、
Ｅ１は−（ＣＨ２）ｍ−から選ばれ、ここで、ｍは１、２又は３であり、
Ｅ２は−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、または単結合から選ばれ、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換される）
【請求項２】
環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロシクリル基又は５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、＝Ｏ、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、または１つまたは複数のハロゲ
ンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
所望により、環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、又は１つまたは複数のハロゲンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、ここで、前記５員のヘテロシクリル基は所望により１つまたは複数の＝Ｏ基によって置換され、
所望により、環Ｃｙはオキサゾリジン-2-オン基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オ
キサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、又はイソキサゾリル基から選ばれ、ここで、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
所望により、環Ｃｙは５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−３アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−３アルキル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、環Ｃｙはイミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、またはイソキサゾリル基から選ばれ、ここで、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−３アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−３アルキル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、環Ｃｙは５員のヘテロアリール基から選ばれ、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、環Ｃｙはイミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、またはイソキサゾリル基から選ばれ、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
環Ｃｙは構造単位
【化２】
2021532088.tif 000108
から選ばれ、
式中、
【化３】
2021532088.tif 000109
は単結合又は二重結合を表し、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、およびＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、Ｔ１はＣ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
所望により、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
所望により、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
所望により、構造単位
【化４】
2021532088.tif 000110
で、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、またはＮから選ばれ、
所望により、構造単位
【化５】
2021532088.tif 000111
で、Ｔ１はＣ（Ｒ１）２から選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）２、またはＯから選ばれ、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−６アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−６アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれ、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−６アルキル基、またはＣ１−６アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−６アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−３アルキル基、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、
所望により、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基から選ばれ、
所望により、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ又は複数のハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれ、
所望により、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素またはメチル基から選ばれる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
構造単位
【化６】
2021532088.tif 000112
から選ばれ、
所望により、構造単位
【化７】
2021532088.tif 000113
から選ばれ、
所望により、構造単位
【化８】
2021532088.tif 000114
から選ばれ、
所望により、構造単位
【化９】
2021532088.tif 000115
から選ばれ、
所望により、構造単位
【化１０】
2021532088.tif 000116
から選ばれる、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、または単結合から選ばれ、
所望により、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、または単結合から選ばれ、
所望により、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−から選ばれ、
所望により、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−から選ばれ、
所望により、Ｌは−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−若しくは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、または単結合から選ばれ、
所望により、Ｌは−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）−から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
ｎは１、２、または３から選ばれ、
所望により、ｎは１または２から選ばれ、
所望により、ｎは２に選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してハロゲンまたはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してハロゲンまたはメチル基から選ばれ、ここで、前記メチル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してメチル基に選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれ、ここで、前記メチル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換され、
所望により、各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれ、
所望により、各Ｒ６はそれぞれ独立して水素またはヒドロキシ基から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
Ｅ１は−（ＣＨ２）２−または−（ＣＨ２）３−から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
Ｅ２は−Ｏ−または化学結合から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項１１】
式（ＩＩ）の化合物から選ばれ、
【化１１】
2021532088.tif 000117
式中、Ｅ１、Ｅ２及びＬの定義として請求項１、５、９、１０のいずれか１項に記載の定義が適用され、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４及び構造単位
【化１２】
2021532088.tif 000118
の定義として請求項３〜４のいずれか１項に記載の定義が適用される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項１２】
【化１３】
2021532088.tif 000119
【化１４】
2021532088.tif 000120
【化１５】
2021532088.tif 000121
から選ばれる、化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩を含み、薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物。
【請求項１４】
ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害の治療薬物の製造における請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、薬学的に許容されるその塩又は請求項１３に記載の医薬組成物の使用であって、所望により、前記ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害は慢性閉塞性肺
疾患または喘息から選ばれる前記使用。
【請求項１５】
哺乳動物のＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害の治療方法であって、治療を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、薬学的に許容されるその塩又は請求項１３に記載のその医薬組成物を投与することを含み、所望により、前記ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害は慢性閉塞性肺疾患または喘息から選ばれる前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願はＰＤＥ３／ＰＤＥ４二重阻害剤としての融合三環式化合物、その合成方法、当該化合物を含む医薬組成物、及びＰＤＥ３／ＰＤＥ４関連疾患、特に慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は１１のファミリーを含むスーパーファミリー酵素群であり、ファミリーのそれぞれが異なるシグナル伝達に関与し、異なる生理学的プロセスを調節する。ＰＤＥ３はヒト気道平滑筋（ＡＳＭ）中の主なホスホジエステラーゼであり、ＰＤＥ３を阻害すると細胞内のｃＡＭＰ濃度が上昇し、気管支平滑筋が弛緩する。ＰＤＥ４は炎症誘発性メディエーター及び抗炎症性メディエーターの発現で主な調節作用を果たし、ＰＤＥ４阻害剤は炎症性細胞の有害なメディエーターの放出を阻害することができる。したがって、ＰＤＥ３及びＰＤＥ４の両方に阻害効果がある阻害剤はβ−アドレナリン作動性受容体アゴニストの気管支拡張効果（ｂｒｏｎｃｈｏｄｉｌａｔｉｏｎ）及びグルココルチコイドの吸入による抗炎症効果（ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｏｎ）を有する。機能的に互いに補完する二重標的は理論的に単一標的よりも大きな効果を有し、従来薬物の組み合わせでしか得られない治療効果を単一の薬剤で実現し、薬物の組み合わせで成分薬物の物理的及び化学的特性が完全には適合できないという欠点を解消することができれば、投与が容易になり、一定用量での投与に役立つ。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００００５８３０号
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｖｉｃｔｏｒｉａ  Ｂｏｓｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ．Ｅｘｐｅｒｉ．Ｔｈｅｒａｐ．，３１８，８４０−８４８（２００６）
【非特許文献２】Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（４ｔｈ  Ｅｄ）．Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，（２００６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
非特許文献１、特許文献１には化合物ＲＰＬ５５４、化合物ＲＰＬ５６５が報告され、長時間作用型の気管支拡張効果及び抗炎症効果を有し、溶解度が低く、クリアランスが高い等の物理的及び化学的特性を備えるため、吸入投与に適する一方、ＰＤＥ４に対するその阻害活性が満足できず、抗炎症効果は芳しくないことが試験データから判明したため、ＰＤＥ３／ＰＤＥ４阻害活性を兼ね備える化合物の開発が必要になる。
【化１】
2021532088.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願の一態様では、式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩を提供し、
【化２】
2021532088.tif 000004
式中、環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロシクリル基又は５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、＝Ｏ、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
前記環Ｃｙの環原子に少なくとも１つの窒素原子が含まれ、
Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、または単結合から選ばれ、
ｎは１、２、３又は４であり、
Ｅ１は−（ＣＨ２）ｍ−から選ばれ、ここで、ｍは１、２又は３であり、
Ｅ２は−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、または単結合から選ばれ、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、またはＣ１−６アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、
各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換される。
【発明の効果】
【０００７】
本願の化合物はＰＤＥ３及びＰＤＥ４に明らかな二重阻害効果が認められ、ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）中のＴＮＦ−αに明らかな阻害効果が認められる。リポ多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、略称ＬＰＳ）誘発ラット急性肺損傷モデルで優れた抗炎症効果を示す。インビボクリアランスが高く、経口投与の場合に血漿中曝露量が低く生物学的利用能が低く、局所投与経路では安全性が高い。ヒト肝ミクロソーム由来シトクロムＰ４５０の５種のアイソエンザイム（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４）に対する阻害効果が低く、薬物相互作用のリスクはない。ＢＡＬＦ中の白血球総数を減らすなど、明らかな抗炎症効果が認められ、最小有効量が低い。気道抵抗の指標Ｐｅｎｈを低減できる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１はＢＡＬＦ（肺胞洗浄液）中の白血球総数である。
【図２】図２はメタコリン（Ｍｃｈ）誘発モデルに対する肺機能検査（気道抵抗の指標Ｐｅｎｈ）である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
いくつかの実施形態では、環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロシクリル基又は５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、＝Ｏ、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、または１つまたは複数のハロゲンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、環Ｃｙは５員のヘテロシクリル基または５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、又は１つまたは複数のハロゲンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換され、ここで、前記５員のヘテロシクリル基は所望により１つまたは複数の＝Ｏ基によって置換される。いくつかの実施形態では、環Ｃｙはオキサゾリジン-2-オン基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサ
ジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、又はイソキサゾリル基から選ばれ、ここで、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−６アルキル基から選ばれる１つまたは複数の基によって置換される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、環Ｃｙは５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−３アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−３アルキル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、環Ｃｙはイミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、またはイソキサゾリル基から選ばれ、ここで、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、Ｃ１−３アルコキシ基、または１つ又は複数のハロゲンによって置換されたＣ１−３アルキル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、環Ｃｙは５員のヘテロアリール基から選ばれ、ここで、前記５員のヘテロアリール基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、環Ｃｙはイミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基、またはイソキサゾリル基から選ばれ、前記イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、テトラゾリル基、チアジアゾリル基又はイソキサゾリル基は所望によりアミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、環Ｃｙは構造単位
【化３】
2021532088.tif 000005
から選ばれ、
式中、
【化４】
2021532088.tif 000006
は単結合又は二重結合を表し、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、環Ｃｙは構造単位
【化５】
2021532088.tif 000007
から選ばれ、
式中、
【化６】
2021532088.tif 000008
は単結合又は二重結合を表し、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４はそれぞれ独立してＣ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれ、
各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、環Ｃｙは構造単位
【化７】
2021532088.tif 000009
から選ばれ、
式中、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、またはＳから選ばれ、
各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−１２アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、またはＣ１−１２アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−１２アルキル基又はＣ１−１２アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、
各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、Ｔ１はＣ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立
してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｃ（Ｒ１）２、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれる。
【００１４】
いくつかの実施形態では、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、Ｎ、またはＳから選ばれる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化８】
2021532088.tif 000010
で、Ｔ１はＣ（Ｒ１）またはＮから選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ（Ｒ１）、Ｏ、Ｎ（Ｒ２）、またはＮから選ばれる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化９】
2021532088.tif 000011
で、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４で少なくとも１つはＮ（Ｒ２）、Ｎから選ばれる。
【００１８】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化１０】
2021532088.tif 000012
で、Ｔ１はＣ（Ｒ１）２から選ばれ、Ｔ２、Ｔ３、及びＴ４はそれぞれ独立してＣ＝Ｏ、Ｃ（Ｒ１）２、またはＯから選ばれる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−６アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−６アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル
基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基又はＣ１−３アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン、シアノ基、Ｃ１−３アルキル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、フッ素、塩素、シアノ基、メチル基、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、メトキシ基、またはトリフルオロメチル基から選ばれる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−６アルキル基、またはＣ１−６アルコキシ基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−６アルキル基又はＣ１−６アルコキシ基は所望によりハロゲン、アミノ基、またはヒドロキシ基から選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−３アルキル基、またはＣ１−３アルコキシ基から選ばれる。いくつかの実施形態では、各Ｒ１はそれぞれ独立して水素、アミノ基、ヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基から選ばれる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ又は複数のハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれる。いくつかの実施形態では、各Ｒ２はそれぞれ独立して水素またはメチル基から選ばれる。
【００２２】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化１１】
2021532088.tif 000013
から選ばれ、さらに
【化１２】
2021532088.tif 000014
から選ばれ、一層さらに
【化１３】
2021532088.tif 000015
から選ばれ、また一層さらに
【化１４】
2021532088.tif 000016
から選ばれ、またより一層さらに
【化１５】
2021532088.tif 000017
から選ばれる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化１６】
2021532088.tif 000018
から選ばれ、さらに
【化１７】
2021532088.tif 000019
から選ばれ、一層さらに
【化１８】
2021532088.tif 000020
から選ばれる。
【００２４】
いくつかの実施形態では、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、−ＮＨＳ（Ｏ）２−、または単結合から選ばれる。いくつかの実施形態では、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、または単結合から選ばれる。いくつかの実施形態では、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−から選ばれる。いくつかの実施形態では、Ｌは−Ｎ（Ｒ６）−、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−から選ばれる。いくつかの実
施形態では、Ｌは−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−若しくは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ−、または単結合から選ばれる。いくつかの実施形態では、Ｌは−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）−から選ばれる。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ｎは１、２、または３から選ばれる。いくつかの実施形態では、ｎは１または２から選ばれる。いくつかの実施形態では、ｎは２に選ばれる。
【００２６】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化１９】
2021532088.tif 000021
から選ばれ、さらに
【化２０】
2021532088.tif 000022
から選ばれ、一層さらに
【化２１】
2021532088.tif 000023
から選ばれ、また一層さらに
【化２２】
2021532088.tif 000024
から選ばれ、またより一層さらに
【化２３】
2021532088.tif 000025
から選ばれ、さらにまたより一層さらに
【化２４】
2021532088.tif 000026
から選ばれる。
【００２７】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化２５】
2021532088.tif 000027
から選ばれ、さらに
【化２６】
2021532088.tif 000028
から選ばれ、一層さらに
【化２７】
2021532088.tif 000029
から選ばれる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、構造単位
【化２８】
2021532088.tif 000030
から選ばれる。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してハロゲンまたはＣ１−３アルキル基から選ばれ、ここで、前記Ｃ１−３アルキル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してハロゲンまたはメチル基から選ばれ、
ここで、前記メチル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ独立してメチル基に選ばれる。
【００３０】
いくつかの実施形態では、各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれ、ここで、前記メチル基は所望により１つ、２つ又は３つのハロゲン、アミノ基又はヒドロキシ基によって置換される。いくつかの実施形態では、各Ｒ６はそれぞれ独立して水素、ヒドロキシ基、またはメチル基から選ばれる。いくつかの実施形態では、各Ｒ６はそれぞれ独立して水素またはヒドロキシ基から選ばれる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｅ１は−（ＣＨ２）２−または−（ＣＨ２）３−から選ばれる。
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｅ２は−Ｏ−または化学結合から選ばれる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、構造単位−Ｅ１−Ｅ２−は−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−から選ばれる。
【００３４】
本願のいくつかの好ましい実施形態では、前記式（Ｉ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩は、式（ＩＩ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩から選ばれ、
【化２９】
2021532088.tif 000031
式中、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｅ１、Ｅ２及びＬの定義、並びに構造単位
【化３０】
2021532088.tif 000032
の定義として上記の定義が適用される。
【００３５】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物で構造単位
【化３１】
2021532088.tif 000033
の定義として上記の定義が適用される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物で構造単位−Ｅ１−Ｅ２−の定義として上記の定義が適用される。
【００３７】
本願のいくつかの好ましい実施形態では、前記式（ＩＩ）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩は、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）又は式（ＩＩ−３）の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩から選ばれ、
【化３２】
2021532088.tif 000034
式中、Ｒ６は水素、ヒドロキシ基から選ばれ、
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｅ１及びＥ２の定義、並びに構造単位
【化３３】
2021532088.tif 000035
の定義として本願の式（ＩＩ）の化合物での定義が適用される。
【００３８】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）又は式（ＩＩ−３）の化合物で構造単位
【化３４】
2021532088.tif 000036
の定義として上記の定義が適用される。
【００３９】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）又は式（ＩＩ−３）の化合物で構造単位−Ｅ１−Ｅ２−の定義として上記の定義が適用される。
【００４０】
本願の更なる態様では、
【化３５】
2021532088.tif 000037
【化３６】
2021532088.tif 000038
【化３７】
2021532088.tif 000039
から選ばれる化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００４１】
本願の更なる態様では、前記式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）
、式（ＩＩ−３）の化合物もしくは前記特定の化合物、その異性体又は薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本願の医薬組成物は薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤をさらに含む。
【００４２】
本願の更なる態様では、治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトに、治療有効量の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）、式（ＩＩ−３）の化合物もしくは前記特定の化合物、その異性体もしくは薬学的に許容されるその塩、又はその医薬組成物を投与することを含む哺乳動物のＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害の治療方法を提供する。
【００４３】
本願の更なる態様では、ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害を予防又は治療する薬物の製造における前記式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）、式（ＩＩ−３）の化合物もしくは前記特定の化合物、その異性体もしくは薬学的に許容されるその塩、又はその医薬組成物の使用を提供する。
【００４４】
本願の更なる態様では、ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害を予防又は治療するための式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）、式（ＩＩ−３）の化合物もしくは前記特定の化合物、その異性体もしくは薬学的に許容されるその塩、又はその医薬組成物の用途を提供する。
【００４５】
本願の更なる態様では、ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害を予防又は治療するための式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩ−１）、式（ＩＩ−２）、式（ＩＩ−３）の化合物もしくは前記特定の化合物、その異性体もしくは薬学的に許容されるその塩、又はその医薬組成物を提供する。
【００４６】
本願のいくつかの実施形態では、前記ＰＤＥ３及び／又はＰＤＥ４関連障害は喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選ばれる。
【００４７】
関連の用語及び定義
特に説明がない限り、本明細書で使用される下記の用語及び表現は、以下記載の意味を有する。特定の用語又は表現は、特に定義される場合を除き、確定しない又は不明瞭なものとしてではなく、本分野通常の意味で理解されるべきである。本明細書で商品名が記載される場合、対応する製品又はその有効成分を指す。
【００４８】
複数の基が互いに連結して形成された化合物では、各原子の原子価が正常であり、且つ当該化合物が安定的に存在する。
【００４９】
本願で挙げられた連結基に方向が設定される。例えば、
【化３８】
2021532088.tif 000040
で連結基Ｌが−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−である場合には、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）−が左側から右側に記載されるように両端を連結して
【化３９】
2021532088.tif 000041
を構成し、Ｌが−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）−である場合には、左側から右側に記載されるように両端を連結して
【化４０】
2021532088.tif 000042
を構成する。前記連結官能基、置換基及び／又はそのバリアントの組み合わせは、当該組み合わせが安定的な化合物を生成させる場合にのみ認められる。
【００５０】
用語「薬学的に許容される」とは、ヒト及び動物の組織に接触して使用されるのに適し、毒性と刺激性を持たず、アレルギー反応やその他の問題、合併症を引き起こさないと医学的に判断され、利益とリスクが釣り合う化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対して使用される。
【００５１】
薬学的に許容される塩の例としては、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基と形成した塩、無機酸と形成した塩、有機酸と形成した塩、塩基性又は酸性のアミノ酸と形成した塩等が挙げられる。
【００５２】
本願で薬学的に許容される塩は、酸基又は塩基を含む母体化合物から通常の化学方法で合成できる。このような塩は一般に、水、有機溶剤又は両者の混合物において、これらの化合物の遊離酸又は遊離塩基の形態と化学量論的に適切な塩基又は酸を反応させて合成される。
【００５３】
本願の化合物には、特定の幾何異性体又は立体異性体の形態が存在してもよい。本願に係るこの類の化合物には、シス及びトランス異性体、（−）−及び（＋）−エナンチオマー、（Ｒ）−及び（Ｓ）−エナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）−異性体、（Ｌ）−異性体、並びにラセミ混合物及びその他の混合物、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーを豊富に含有する混合物を含み、これらの混合物はいずれも本願の範囲に含まれる。アルキル基等の置換基には、他に不斉炭素原子が存在してもよい。前記異性体及びそれらの混合物は、全てが本願の範囲に含まれる。
【００５４】
本願の化合物及び中間体は異なる互変異性形態として存在してもよく、このような形態の全てが本願の範囲に含まれる。用語「互変異性体」又は「互変異性形態」とは低エネルギー障壁によって相互変換でき、異なるエネルギーを持つ構造異性体である。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体ともいう）にはプロトンの転移による相互変換、例えば、ケトン−エノール異性化、イミン−エナミン異性化が含まれる。プロトン互変異性体の一例はイミダゾールであり、プロトンが２つの環上窒素原子間に転移できる。原子価互変異性体にはいくつかの結合電子の組み替えによる相互変換を含む。
【００５５】
本願の化合物は、例えば、１つ以上の立体異性体があるように、非対称のものであってもよい。特に説明がない限り、エナンチオマー、ジアステレオマーをはじめ全ての立体異性体が含まれる。本願で非対称炭素原子を有する化合物は光学的に純粋な形態又はラセミ形として分離できる。光学的に純粋な形態はラセミ混合物から分離されてもよいし、又は不斉原料もしくは不斉試薬を使用して合成されてもよい。
【００５６】
不斉合成、不斉試薬又はその他の通常技術により、光学活性を有する（Ｒ）−及び（Ｓ）−異性体、並びにＤ及びＬ異性体を合成できる。本願の特定の化合物のエナンチオマーを得るためには、不斉合成、又は不斉助剤の誘導作用によりそれを合成できる。ただし、生成物として得たジアステレオマー混合物を分離し、補助的な官能基を脱去させることにより、所望のエナンチオマーの純粋な形態を得る。あるいは、分子に塩基性官能基（例えば、アミノ基）又は酸性官能基（例えば、カルボキシル基）が含まれる場合には、光学活性を備える適切な酸又は塩基とジアステレオマーの塩を形成し、その後、当分野周知の通常方法でジアステレオマーを分離し回収することで、純粋なエナンチオマーを得る。また、エナンチオマーとジアステレオマーの分離は一般にクロマトグラフィーで行われ、クロマトグラフィーにはキラルな固定相を使用し、所望により化学誘導法と組み合わせる（例えば、アミンからのカルバメート生成）。
【００５７】
本願には、本明細書に記載の化合物と同じ形であり、なおかつ１つ以上の原子は原子量又は質量数が自然的に存在する通常の原子量又は質量数とは異なる原子によって置換された、即ち同位体によって標識された前記化合物をさらに含む。本願の化合物に結合できる同位体の例としては水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、塩素の同位体が挙げられ、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、３６Ｃｌ等である。
【００５８】
本願の化合物は、当該化合物の１つ以上の構成原子に、非天然的な割合で同原子の同位体が含まれてもよい。例えば、放射能同位体、例えば、三重水素（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）又は炭素−１４（１４Ｃ）で化合物を標識する。あるいは、水素を重水素に置換して重水素化薬物を形成させてもよく、重水素と炭素からなる結合は水素と炭素からなる通常の結合よりも強固なもので、非重水素化薬物と比べて、重水素化薬物は毒性や副作用が低減され、薬物安定性及び治療効果が向上し、薬物の生物学的半減期が延長する等の利点を有する。本願の化合物の同位体を含むバリアントは、放射能の有無に関らず、どれもが本願の範囲に含まれる。
【００５９】
また、原子量又は質量数が大きい同位体（例えば、重水素２Ｈ）に置換することでより高い代謝安定性が得られるため、例えば、インビボ半減期の延長又は用量の低減など治療上利点があり、したがって場合によってはこれが好ましい選択になる。ただし、重水素置換は一部置換であってもよいし完全置換であってもよく、一部置換とは少なくとも１つの水素が少なくとも１つの重水素に置換されることである。
【００６０】
「所望により」又はこれに類する表現は、続いて記載される事項又は状況は生じる可能性があるが、必ずしも生じるとは限らないことであり、当該記載には前記事象又は状況が生じる場合及び前記事項又は状況が生じない場合が含まれる。
【００６１】
用語「置換された」とは、特定の原子の原子価が正常であり、且つ置換後に得た化合物が安定的なものであれば、当該原子上の任意の１つ以上の水素原子（重水素及び水素のバリアントを含む）が置換基によって置換されることである。置換基が酸素（＝Ｏ）である場合には、２つの水素原子が置換されることである。酸素置換はアリール基に起きない。
【００６２】
用語「所望により置換された」とは、置換されてもよいし置換されなくてもよいことである。特に規定がある場合を除き、置換基の種類と数量は化学的に実現可能な範囲であれば、特に限定されない。
【００６３】
化合物の組成又は構造で特定の変数（例えばＲ）が１回以上出現した場合には、出現の都度、独立して定義される。したがって、例えば、１つの官能基が０〜２個のＲによって置換される場合には、当該官能基は所望により最大２つのＲによって置換されてもよく、なおかつＲはそれぞれ独立して選択される。置換基及び／又はそのバリアントの組み合わせは、当該組み合わせが安定的な化合物を生成させる場合にのみ認められる。
【００６４】
変数が単結合に指定された場合には、それによって連結された２つの官能基が直接的に連結されるものを表す。例えば、Ａ−Ｌ−ＺでＬが単結合である場合には、当該構造はＡ−Ｚになる。
【００６５】
１つの置換基が結合を介して環の２つの原子に架橋された場合には、前記置換基が当該環の任意の原子に結合されてもよい。例えば、構造単位
【化４１】
2021532088.tif 000043
では、置換がシクロヘキシル基又はシクロヘキサジエンの任意の位置に起きてもよい。
【００６６】
用語「ハロ」又は「ハロゲン」とはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素である。
【００６７】
用語「ヒドロキシ基」とは−ＯＨ基である。
【００６８】
用語「シアノ基」とは−ＣＮ基である。
【００６９】
用語「アミノ基」とは−ＮＨ２基である。
【００７０】
置換基が空である場合、当該置換基が存在しない。例えば、Ａ−ＸでＸが空であれば当該構造はＡになる。置換基で置換先の基に連結される原子が指定されない場合には、置換基は任意の原子によって結合できる。例えば、ピリジル基が置換基になる場合、ピリジン環の任意の炭素原子によって置換先の基に連結されてもよい。
【００７１】
用語「アルキル基」とは一般式がＣｎＨ２ｎ＋１の炭化水素基である。当該アルキル基は直鎖でもよいし分岐鎖でもよい。例えば、用語「Ｃ１−６アルキル基」とは１から６個の炭素原子を有するアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、ネオペンチル基、ヘキシル基、２−メチルペンチル基等）である。同様に、アルコキシ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルスルホニル基及びアルキルチオ基のアルキル基の部分（即ちアルキル基）には前記定義が適用される。
【００７２】
用語「アルコキシ基」とは−Ｏ−アルキル基である。
【００７３】
特に指定がない限り、Ｃｎ−ｎ＋ｍ又はＣｎ−Ｃｎ＋ｍにはｎからｎ＋ｍ個の炭素の任
意の状況を含む。例えば、Ｃ１−１２にはＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２を含み、ｎからｎ＋ｍにおける任意の範囲をも含む。例えば、Ｃ１−１２にはＣ１−３、Ｃ１−６、Ｃ１−９、Ｃ３−６、Ｃ３−９、Ｃ３−１２、Ｃ６−９、Ｃ６−１２、Ｃ９−１２等を含む。同様に、ｎからｎ＋ｍ員とは環原子数がｎからｎ＋ｍ個のことである。例えば、３〜１２員環には３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、１２員環を含み、ｎからｎ＋ｍにおける任意の範囲をも含む。例えば、３〜１２員環には３〜６員環、３〜９員環、５〜６員環、５〜７員環、６〜７員環、６〜８員環、６〜１０員環等を含む。
【００７４】
用語「ヘテロシクリル基」とは、完全に飽和又は部分的に不飽和であり（ただし完全に不飽和の複素芳香族ではない）、且つ単環、架橋環又はスピロ環として存在する非芳香族環である。特に指定がない限り、当該ヘテロシクリル基は一般に硫黄、酸素、窒素から独立してから選ばれる１から３個のヘテロ原子（好ましくは１個又は２個のヘテロ原子）を有する３から７員環である。ヘテロシクリル基の非限定的な例にはオキシラニル基、テトラヒドロフリル基、ジヒドロフリル基、ピロリジニル基、Ｎ−メチルピロリジニル基、ジヒドロピロリル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ピラゾリジニル基、４Ｈ−ピラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、テトラヒドロチエニル基、ジヒドロピリダジン、ジヒドロピリミジン、ジヒドロピリジン、ジヒドロイミダゾール、ジヒドロイソキサゾール、ジヒドロトリアゾール、ジヒドロピリダジン等を含む。５個の環原子を有する単環式ヘテロシクリル基であることが好ましい。
【００７５】
用語「ヘテロアリール基」とは、少なくとも１つの環原子がＮ、Ｏ、Ｓから選ばれ、残りの環原子はＣであり、且つ少なくとも１つの芳香環を有する、単環又は融合多環式環系である。ヘテロアリール基は４から８員環、特に５から８員環を１つ、６から１４個、特に６から１０個の環原子を含む複数の融合環を有することが好ましい。ヘテロアリール基の非限定的な例はピロリル基、フリル基、チエニル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、キノリニル基、イソキノリニル基、テトラゾリル基、トリアゾリル基、トリアジニル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、イソインドリル基、イソキサゾリル基、オキサジアゾリル基、チアジアゾリル基、チアゾリル基等である。
【００７６】
用語「治療」とは、疾患又は前記疾患関連の１つ以上の症状を予防、改善又は解消するために、本願の化合物又は製剤を投与することであり、下記の状況を含む。
（ｉ）哺乳動物における疾患又は病的状態の出現を予防し、特に当該哺乳動物が当該病的状態になりやすいが、当該病的状態になっているとは診断されない時である。
（ｉｉ）疾患又は病的状態を抑制すること、即ちその進行を抑制することである。
（ｉｉｉ）疾患又は病的状態を緩和すること、即ち当該疾患又は病的状態を軽減させることである。
【００７７】
用語「治療有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、症状又は障害を治療又は予防し、（ｉｉ）特定の疾患、病的状態又は障害の１種以上の症状を軽減、改善又は解消し、（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、病的状態又は障害の１種以上の症状の発生を予防又は遅延するための、本願の化合物の用量である。本願の化合物の「治療有効量」は当該化合物自体、適用する病的状態とその重症度、投与形態及び治療対象哺乳動物の年齢によって変わるが、当業者が本分野の常識と本開示の内容を踏まえて決定することができる。
【００７８】
用語「医薬組成物」とは１種以上の本願の化合物又はその塩と薬学的に許容される賦形剤からなる混合物である。医薬組成物は本願の化合物を生体に投与しやすいために製造されたものである。
【００７９】
用語「薬学的に許容される賦形剤」とは生体に明らかな刺激はなく、活性化合物の生物学的活性及び特性を損なわない賦形剤である。適切な賦形剤、例えば、炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は水溶性ポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等は当業者に知られた事項である。
【００８０】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び類する用語、例えば、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ又はｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇは、「…を含むが、これに限定されない」というふうに、開放的で、非排他的な表現と理解される。
【００８１】
本願の医薬組成物は本願の化合物と薬学的に許容される適切な賦形剤を組み合わせて製造されてもよく、例えば、固体、半固体、液体又は気体の製剤として製造されてもよく、例えば、錠剤、丸薬、カプセル、パウダー、顆粒、軟膏、エマルジョン、懸濁剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア、エアロゾル等である。
【００８２】
本願の化合物、薬学的に許容されるその塩又はその医薬組成物の典型的な投与経路には、経口、直腸、局所、吸入、非経口、舌下、膣内、鼻腔内、眼内、腹腔内、筋肉内、皮下、静脈内を含むが、これに限定されない。
【００８３】
本願の医薬組成物は、本技術分野で周知の手法、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠法、粉砕、乳化、凍結乾燥等の通常の方法で製造されてもよい。
【００８４】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は経口投与用である。経口投与用の場合に、活性化合物と本技術分野で周知の薬学的に許容される賦形剤を組み合わせて、医薬組成物を製造することができる。このような賦形剤によって本願の化合物は、患者に経口投与する錠剤、丸薬、糖衣コーティング剤、カプセル、液体剤、ゲル剤、シロップ、懸濁剤等として製剤化することができる。
【００８５】
経口用固体組成物は混合、充填、打錠等通常の手法で製造することができる。例えば、活性化合物と固体賦形剤を混合し、所望により混合物を粉砕するように製造することができる。必要ならば、他の適切な賦形剤を加え、前記混合物を顆粒に加工すれば、錠剤又は糖衣コーティング剤のコアを得る。適切な賦形剤は、結合剤、希釈剤、崩壊剤、潤滑剤、流動促進剤、甘味料、矯味剤等を含むが、これに限定されない。
【００８６】
医薬組成物は非経口投与にも適し、例えば、適切な単位用量の滅菌液剤、懸濁液剤又は凍結乾燥製品である。
【００８７】
本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物の投与形態では、１日の投与量は０．０１から２００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００８８】
本願の化合物は当業者に知られる様々な合成方法であって、下記の各実施形態、他の化学合成方法と組み合わせてなされた実施形態及び当業者に知られる同等な実施形態を含み、好ましい実施形態は本願の実施例を含むが、これに限定されない前記合成方法で製造することができる。
【００８９】
本願に記載の各実施形態の化学反応は適切な溶媒で行われ、前記溶媒は本願に係る化学的変化及び使用する試薬と原料に適する。本願の化合物を得るために、場合によっては当業者が既存の実施形態を踏まえて合成手順又は反応プロセスを選択し又は一部変更する必要がある。
【００９０】
本分野では合成経路を設定する際に考慮すべき要因の１つが反応性官能基（例えば、本
願ではアミノ基）の適切な保護基の選択である。これに関しては、例えば、非特許文献２を参照する。本願に引用される参考文献の全てが全体で本願に組み込まれる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、本願の式（Ｉ）の化合物は当業者が有機合成分野の標準的な手法を用いて下記の経路によって合成することができる。
【００９２】
中間体の合成：
【化４２】
2021532088.tif 000044
【００９３】
式（Ｉ）の化合物の合成：
【化４３】
2021532088.tif 000045
【化４４】
2021532088.tif 000046
【化４５】
2021532088.tif 000047
【化４６】
2021532088.tif 000048
【００９４】
本願で使用される溶媒は市販品である。本願で使用する略語及びその意味は次のとおりである。ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（１種のアミン保護基）、ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｍｅ＝メチル基、ＳＥＭ＝Ｍｅ３ＳｉＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−、ＬＨＭＤＳ＝リチウムヘキサメチルジシラジド、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ＝分取薄層クロマトグラフィー、Ｔ３Ｐ＝プロピルホスホン酸無水物（環状トリマー）、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、ＡＭＰ＝アデニル酸、ＧＭＰ＝グアニル酸、ＴＮＦ−酸＝腫瘍壊死因子α、ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸、ＴＨＰ＝テトラヒドロピラニル基、ＯＴｓ＝ｐ−トルエンスルホニル基、ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＭｅＣＮ＝アセトニトリル、ＰｙＢｏｐ＝１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート、Ｅｔ＝エチル基。
【実施例】
【００９５】
次に、実施例を用いて本願の詳細な説明を行う。これは本願に何らかの限定を加えるためではない。本明細書では具体的な実施形態を含め本願の詳細な説明が記載される。当業者であれば、本願の趣旨から逸脱することなく本願の特定の実施形態に様々な変形や改善を行うことができ、これは自明な事項である。
【００９６】
実施例１：化合物ＢＢ−１の合成
【化４７】
2021532088.tif 000049
【化４８】
2021532088.tif 000050
【００９７】
ステップ１：化合物ＢＢ−１−２の合成
窒素雰囲気下で、１００℃で化合物ＢＢ−１−１（２１．１０ｇ）とシアノ酢酸エチル（１１．００ｇ、１０．３８ｍＬ）の混合物を１６時間攪拌する。反応終了後、混合物を７０℃に冷却し、ゆっくりとエタノール（３０ｍＬ）を滴加すると、大量の固形物が析出する。濾過し、ケーキを減圧乾燥して生成物ＢＢ−１−２を得る。
【００９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝８．２６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），３．３１−３．２３（ｍ，２Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２６３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９９】
ステップ２：化合物ＢＢ−１−３の合成
窒素雰囲気下で、三塩化ホスホリル（３７９．５０ｇ、２３０．００ｍＬ）を８５℃に加熱し、数回に分けて化合物ＢＢ−１−２（２６．００ｇ）を加える。８５℃で反応混合物を２時間攪拌して反応させる。反応終了後、減圧蒸留により三塩化ホスホリルの殆どを除去する。残留物にジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、水で洗浄する（１００ｍＬ×２）。無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥した後、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮する。酢酸エチル（２０ｍＬ）で粗生成物をパルプ化して精製することで、化合物ＢＢ−１−３を得る。
【０１００】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝７．１６（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），４．１２（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２４５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０１】
ステップ３：化合物ＢＢ−１−４の合成
０℃で、数回に分けて９８％濃硫酸（１２．８８ｇ、１２８．６９ｍｍｏｌ、７．００ｍＬ）に化合物ＢＢ−１−３（１．００ｇ）を加える。２７℃で反応混合物を３時間攪拌する。反応終了後、混合物を冷水（１５ｍＬ）に加え、次に水酸化ナトリウム水溶液（４ｍｏｌ／Ｌ、３２ｍＬ）を滴加してｐＨを調節し、中性になると酢酸エチルで抽出する（１００ｍＬ×３）。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＢＢ−１−４を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２６３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０２】
ステップ４：化合物ＢＢ−１−５的合成
０℃で、数回に分けてナトリウム（２．４２ｇ）をエタノール（８０ｍＬ）に加える。２８℃で混合物を３０分間攪拌した後、数回に分けて溶液に化合物ＢＢ−１−４（６．９０ｇ）を加え、８０℃で３０分間攪拌する。次に炭酸ジエチル（９．３２ｇ、９．５１ｍＬ）を加え、引き続き８０℃で当該混合物を５時間攪拌する。反応終了後、混合物を室温に冷却し、ゆっくりと氷水（３０ｍＬ）を加え、次に希塩酸（２ｍｏｌ／Ｌ、５３ｍＬ）でｐＨを調節し、中性になると大量の固形物が析出し、濾過し、エタノール（１０ｍＬ）でケーキをパルプ化して精製することで、化合物ＢＢ−１−５を得る。
【０１０３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝１１．２２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．３５（ｓ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｓ，１Ｈ），４．０９（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），２．８９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２８９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０４】
ステップ５：化合物ＢＢ−１−６の合成
室温で、化合物ＢＢ−１−５（５．００ｇ）を三塩化ホスホリル（３０ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、１００℃で反応混合物を１６時間攪拌する。反応終了後、減圧蒸留により溶媒の殆どを除去する。水（１００ｍＬ）を加え、ジクロロメタンで抽出する（１５０ｍＬ×２）。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＢＢ−１−６を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：３０６．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０５】
ステップ６：化合物ＢＢ−１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１−６（９２５．６７ｍｇ）をイソプロパノール（８ｍＬ）に溶解し、２，４，６−トリメチルアニリン（２．１０ｇ）を加える。窒素雰囲気下で、９０℃で反応混合物を１５時間攪拌する。反応終了後、混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、エタノール（６ｍＬ）で残留物をパルプ化して精製することで、化合物ＢＢ−１を得る。
【０１０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝８．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，２Ｈ），６．４５（ｓ，１Ｈ），４．１０（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｓ，６Ｈ），１．３７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４０６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０７】
実施例２：化合物ＢＢ−２的合成
【化４９】
2021532088.tif 000051
【化５０】
2021532088.tif 000052
【０１０８】
ステップ１：化合物ＢＢ−２−２の合成
室温で、化合物ＢＢ−２−１（８ｇ）、尿素（９．１８ｇ）を水（８０ｍＬ）に溶解し、濃塩酸（１２ｍｏｌ／Ｌ、９．５６ｍＬ）を滴加し、１１０℃に加熱して２４時間攪拌する。反応終了後、反応液を室温に冷却し、濾過し、水でケーキを洗浄し（５０ｍＬ×２）、真空乾燥して、化合物ＢＢ−２−２を得る。
【０１０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝６．８４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．６９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．０２（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．４３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．０４−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．９５（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５０−２．４０（ｍ，２Ｈ），１．６６−１．５９（ｍ，２Ｈ），１．３５−１．２５（ｍ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２５３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１０】
ステップ２：化合物ＢＢ−２−３の合成
窒素雰囲気下で、数回に分けてナトリウム（６．３８ｇ）を無水エタノール（１５０ｍＬ）に加え、攪拌してナトリウムが完全に溶解すると、ナトリウムエトキシド溶液を得る。化合物ＢＢ−２−２（７ｇ）、マロン酸ジエチル（１１．１１ｇ）を加え、加熱して１６時間還流させる。反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮してエタノールを除去し、残留物に水を加えて溶解し、氷浴下で２ｍｏｌ／Ｌの塩酸を滴加してｐＨを５に調整した後、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（１５０ｍＬ×２）で濾液を抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜１：１、ジクロロメタン：メタノール＝５０：１〜２０：１）で残留物から精製することで、化合物ＢＢ−２−３を得る。
【０１１１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝６．９０−６．８２（ｍ，２Ｈ），６．７８−６．７２（ｍ，１Ｈ），４．０７（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８９−３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．３７（ｓ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：３２１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１２】
ステップ３：化合物ＢＢ−２−４の合成
窒素雰囲気下で、三塩化ホスホリル（２６．４０ｇ）に化合物ＢＢ−２−３（２．４ｇ）を加え、８０℃に加熱して１２時間攪拌する。反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮して三塩化ホスホリルを除去して、ＢＢ−２−４を得る。これをそのまま次のステップの反応に使用する。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：３２１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１３】
ステップ４：化合物ＢＢ−２の合成
２０℃で、化合物ＢＢ−２−４（２．４ｇ）のＴＨＦ（２４ｍＬ）溶液に２，４，６−トリメチルアニリン（２．０２ｇ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）を滴加する。滴加完了後、２０℃で３時間攪拌し、５０℃に加熱して２時間攪拌する。反応終了後、反応液を減圧下で濃縮して溶媒の殆どを除去し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で残留物を溶解した後、水（５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮した後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はジクロロメタン：メタノール＝１００：１〜２０：１）で濃縮生成物から精製することで、化合物ＢＢ−２を得る。
【０１１４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝７．２６（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），４．２０−４．１４（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．０１（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．８４−２．８２（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，６Ｈ），１．９０−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．４２（ｍ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４２０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１５】
実施例３：化合物ＢＢ−３の合成
【化５１】
2021532088.tif 000053
【化５２】
2021532088.tif 000054
【０１１６】
ステップ１：化合物ＢＢ−３−２の合成
室温で、化合物ＢＢ−３−１（２ｇ）を１，２−ジクロロエタン（２０ｍＬ）に溶解し、イソシアン酸トリメチルシリル（３．８２ｇ）を滴加し、９０℃に加熱して１８時間攪拌する。反応終了後、反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１０ｍＬ）で残留物をパルプ化して、化合物ＢＢ−３−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２５５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１７】
ステップ２：化合物ＢＢ−３−３の合成
窒素雰囲気下で、数回に分けてナトリウム（１．１３ｇ）を無水エタノール（８５ｍＬ）に加え、攪拌してナトリウムが完全に溶解すると、ナトリウムエトキシド溶液を得る。前記溶液に化合物ＢＢ−３−２（２．５ｇ）、マロン酸ジエチル（３．９４ｇ）を加え、加熱して１２時間還流させる。反応液を室温に冷却し、濃縮してエタノールを除去し、残留物に水を加えて溶解し、氷浴下で２ｍｏｌ／Ｌの塩酸を滴加してｐＨを５に調整した後、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で濾液を抽出し、有機相を合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＢＢ−３−３を得る。
【０１１８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝６．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１９−４．１５（ｍ，２Ｈ），４．１１−４．０９（ｍ，２Ｈ），４．０４−４．００（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｓ，２Ｈ），１．３９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：３２３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１９】
ステップ３：化合物ＢＢ−３−４の合成
窒素雰囲気下で、三塩化ホスホリル（１２．３７ｇ）に化合物ＢＢ−３−３（１．３ｇ）を加え、８０℃に加熱して１２時間攪拌する。反応液を室温に冷却し、減圧下で濃縮して三塩化ホスホリルを除去して、化合物ＢＢ−３−４を得る。これをそのまま次のステップの反応に使用する。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：３２３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２０】
ステップ４：化合物ＢＢ−３の合成
２０℃で、化合物ＢＢ−３−４（１．２ｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に２，４，６−トリメチルアニリン（１．０１ｇ）を滴加する。滴加完了後、２５℃で１２時間攪拌し、４０℃に加熱して３時間攪拌する。反応終了後、反応液を減圧下で濃縮して溶媒の殆どを除去し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で残留物を溶解した後、水（５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮した後、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はジクロロメタン：メタノール＝２００：１〜３０：１）で濃縮生成物から精製することで、化合物ＢＢ−３を得る。
【０１２１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝８．８９（ｓ，１Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１１−４．０４（ｍ，４Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），２．１３（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．３８−１．３２（ｍ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４２２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２２】
実施例４：化合物ＢＢ−４の合成
【化５３】
2021532088.tif 000055
【化５４】
2021532088.tif 000056
【０１２３】
ステップ１：化合物ＢＢ−４−１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（１．００ｇ）を２−ブタノン（３５ｍＬ）に溶解し、２−（２−ブロモエチル）イソインドリン−１，３−ジオン（３．７６ｇ）、炭酸カリウム（３．０７ｇ）、ヨウ化ナトリウム（２．２２ｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、８５℃で反応混合物を７２時間攪拌する。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒の殆どを除去し、水（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１〜
３：１）で残留物から精製することで、化合物ＢＢ−４−１を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５７９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２４】
ステップ２：化合物ＢＢ−４の合成
室温で、化合物ＢＢ−４−１（５００．００ｍｇ）をクロロホルム（３ｍＬ）とエタノール（３ｍＬ）に溶解し、抱水ヒドラジン（１５２．６７ｍｇ、純度８５％）を加える。窒素雰囲気下で、２８℃で混合物を１６時間攪拌する。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒の殆どを除去し、水（１５ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（１５ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＢＢ−４を得る。
【０１２５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．３１（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．９０−２．８６（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．９５（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４４９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２６】
実施例４の合成手順を参照して、下表１の各実施例を合成する。
【表１】
2021532088.tif 000057
【０１２７】
実施例７：化合物ＢＢ−７の合成
【化５５】
2021532088.tif 000058
【化５６】
2021532088.tif 000059
【０１２８】
ステップ１：化合物ＢＢ−７の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（１．０ｇ）を２−ブタノン（５０ｍＬ）に溶解し、３−ブロモプロピオン酸メチル（２．４７ｇ）、ヨウ化ナトリウム（２．２２ｇ）、リン酸カリウム（４．７１ｇ）をこの順に加え、反応液を９５℃に加熱して４０時間攪拌する。室温に冷却し、水（５０ｍＬ）、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、液−液分離を行う。飽和食塩水（５０ｍＬ）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１〜２：１）で残留物から精製することで、化合物ＢＢ−７を得る。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．８５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．７２（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），４．５８−４．５１（ｍ，２Ｈ），４．１３−４．０６（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．００（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），２．９０−２．８３（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．０２（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４９２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３０】
実施例８：化合物ＷＸ００１の合成
【化５７】
2021532088.tif 000060
【化５８】
2021532088.tif 000061
【０１３１】
ステップ１：化合物ＷＸ００１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（１００．００ｍｇ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、４−メチルベンゼンスルホン酸−２−（２−オキサゾリジノン−３−イル）エチル（４２２．１９ｍｇ）、炭酸カリウム（３０６．７６ｍｇ）、ヨウ化ナトリウム（２２１．７９ｍｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、８０℃で反応混合物を７２時間攪拌する。反応終了後、濾過し、濾液を濃縮し、水（６ｍＬ）を加えて希釈し、酢酸エチル（６ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ００１を得る。
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．９３（ｓ，２Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），５．３１（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．１５−４．０１（ｍ，６Ｈ），３．９１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．５２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），２．８４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），２．１５（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５１９．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３３】
実施例９：化合物ＷＸ００２の合成
【化５９】
2021532088.tif 000062
【化６０】
2021532088.tif 000063
【０１３４】
ステップ１：化合物ＷＸ００２−１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（４．５ｇ）を２−ブタノン（１２０ｍＬ）に溶解し、３−ブロモプロピオニトリル（８．９２ｇ）、炭酸カリウム（１３．８ｇ）、ヨウ化カリウム（１１．０５ｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、８５℃で反応混合物を６０時間攪拌する。反応終了後、濾過し、濾液を濃縮し、水（１００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝３：１〜１：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ００２−１を得る。
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．７９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ），５．３９（ｓ，１Ｈ），４．５１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４５９．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３６】
ステップ２：化合物ＷＸ００２的合成
室温で、化合物ＷＸ００２−１（１６０．００ｍｇ）をトルエン（４ｍＬ）に溶解し、トリメチルシリルアジド（１２０．６０ｍｇ）、ジブチルスズオキシド（３００．００ｍｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、１１０℃で反応混合物を１２時間攪拌する。反応終了後、混合物を２５℃に冷却し、濃縮し、水（５ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ００２を得る。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝７．１８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．７６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．１９−４．１２（ｍ，４Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５０２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３８】
実施例１０：化合物ＷＸ００３の合成
【化６１】
2021532088.tif 000064
【化６２】
2021532088.tif 000065
【０１３９】
ステップ１：化合物ＷＸ００１−２の合成
室温で、化合物ＢＢ−４（５００．００ｍｇ）、ＷＸ００３−１（４１３．９１ｍｇ）をｔｅｒｔ−ブタノール（２０ｍＬ）に溶解し、前記溶液にトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（８１．６６ｍｇ）、２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ−３，４，５，６−テトラメチル−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル（８５．７４ｍｇ）、リン酸カリウム（乾燥）（３７８．５８ｍｇ）を加える。窒素保護下で、１１０℃で反応混合物を１２時間攪拌する。反応終了後、室温に戻し、水（３０ｍＬ）、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、液−液分離を行って有機相を得、飽和食塩水（２０ｍＬ）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液はジクロロメタン：メタノール＝５０：１〜１０：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ００３−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：６００．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４０】
ステップ２：化合物ＷＸ００３の合成
室温で、化合物ＷＸ００３−２（０．２２ｇ）、塩酸−酢酸エチル溶液（３ｍＬ、４ｍｏｌ／Ｌ）を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、２５℃で反応混合物を１時間攪拌する。混合物を減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ００３を得る。
【０１４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ＝８．２６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１９（ｓ，２Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｓ，１Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２１−４．１６（ｍ，４Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，６Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５１６．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４２】
実施例１０の合成手順を参照して、下表２の各実施例を合成する。
【表２】
2021532088.tif 000066
【０１４３】
実施例１２：化合物ＷＸ００５の合成
【化６３】
2021532088.tif 000067
【０１４４】
ステップ１：化合物ＷＸ００５−２の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（３．２２ｇ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、ＷＸ００５−１（９．００ｇ）、炭酸カリウム（９．８８ｇ）、ヨウ化ナトリウム（７．１４ｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、８３℃で反応混合物を７２時間攪拌する。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒の殆どを除去し、水（７０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（７０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝４：１〜３：２）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ００５−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４９４．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４５】
ステップ２：化合物ＷＸ００５−３の合成
室温で、化合物ＷＸ００５−２（０．４２ｇ）、濃塩酸（１ｍＬ、１２ｍｏｌ／Ｌ）を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、２５℃で反応混合物を１２時間攪拌する。混合物に飽和炭酸ナトリウムの水溶液（３ｍＬ）を加えてｐＨを７〜８に調整し、水（３ｍＬ）を加え、酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＷＸ００５−３を得る。これをそのまま次のステップの反応に使用する。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４４８．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４６】
ステップ３：化合物ＷＸ００５の合成
室温で、化合物ＷＸ００５−３（１００．００ｍｇ）、２−アミノ−１，３，４−チアジアゾール（４５．１９ｍｇ）をエタノール（２ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、７８℃で混合物を１２時間攪拌した後、室温に冷却し、ＮａＢＨ４（６７．６２ｍｇ）、メタノール（０．５ｍＬ）を加え、７８℃に加熱して引き続き１２時間攪拌する。水（１ｍＬ）を加えて反応液をクエンチし、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ００５を得る。
【０１４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．２６（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，２Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ），５．４１（ｓ，１Ｈ），４．６１−４．５４（ｍ，２Ｈ），４．０８−３．９４（ｍ，４Ｈ），３．８１−３．７３（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，６Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５３３．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４８】
実施例１２の合成手順を参照して、下表３の実施例を合成する。
【表３】
2021532088.tif 000068
【０１４９】
実施例１７：化合物ＷＸ０１０の合成
【化６４】
2021532088.tif 000069
【０１５０】
ステップ１：化合物ＷＸ０１０−１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（５．００ｇ）を２−ブタノン（１００ｍＬ）に溶解し、２−（３−ブロモプロピル）イソインドリン−１，３−ジオン（１３．２２ｇ）、炭酸カリウム（１０．２３ｇ）、ヨウ化ナトリウム（７．３９ｇ）をこの順に加える。窒素雰囲気下で、８０℃で反応混合物を３０時間攪拌する。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒の殆どを除去し、水（５０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜１：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ０１０−１を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５９３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
ステップ２：化合物ＷＸ０１０−２の合成
室温で、化合物ＷＸ０１０−１（１．３０ｇ）をクロロホルム（１０ｍＬ）とエタノール（１０ｍＬ）に溶解し、抱水ヒドラジン（５．１５ｇ、純度８５％）を加える。窒素雰囲気下で、７０℃で混合物を１０時間攪拌する。反応終了後、混合物を濃縮して有機溶媒の殆どを除去し、水（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮して、化合物ＷＸ０１０−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４６３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５２】
ステップ３：化合物ＷＸ０１０−４の合成
室温で、化合物ＷＸ０１０−２（９００．００ｍｇ）、ＷＸ００３−１（９０３．０６ｍｇ）をｔｅｒｔ−ブタノール（５ｍＬ）に溶解し、前記溶液にトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３５６．３２ｍｇ）、２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ−３，４，５，６−テトラメチル−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル（１８７．０７ｍｇ）、リン酸カリウム（乾燥）（８２５．９８ｍｇ）を加える。窒素保護下で、１００℃で反応混合物を１２時間攪拌する。反応終了後、室温に戻し、濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１〜１：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ０１０−４を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：６１４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５３】
ステップ４：化合物ＷＸ０１０の合成
室温で、化合物ＷＸ０１０−４（１．００ｇ）、塩酸−酢酸エチル溶液（５ｍＬ、４ｍｏｌ／Ｌ）を酢酸エチル（５ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、２５℃で反応混合物を１０分間攪拌する。混合物を減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０１０を得る。
【０１５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．２７（ｓ，１Ｈ），７．１８（ｓ，２Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ），４．４９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２５−４．１３（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．６３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．３２−２．１６（ｍ，８Ｈ），１．４５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５３０．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５５】
実施例１８：化合物ＷＸ０１５の合成
【化６５】
2021532088.tif 000070
【化６６】
2021532088.tif 000071
【０１５６】
ステップ１：化合物ＷＸ０１５の合成
室温で、化合物ＢＢ−４（５０．０ｍｇ）、４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボン酸（１２．６ｍｇ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ＨＡＴＵ（５０．８６ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（２８．８１ｍｇ）を加える。２５℃で反応液を２４時間攪拌する。反応終了後、混合物を減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０１５を得る。
【０１５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．３９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．９１（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），５．５０（ｓ，１Ｈ），４．５４−４．５１（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），２．０３（ｓ，６Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５４４．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５８】
実施例１８の合成手順を参照して、下表４−１〜表４−４の各実施例を合成する。
【表４−１】
2021532088.tif 000072
【０１５９】
【表４−２】
2021532088.tif 000073
【０１６０】
【表４−３】
2021532088.tif 000074
【０１６１】
【表４−４】
2021532088.tif 000075
【０１６２】
実施例５７：化合物ＷＸ０５４の合成
【化６７】
2021532088.tif 000076
【化６８】
2021532088.tif 000077
【０１６３】
ステップ１：化合物ＷＸ０５４−２の合成
室温で、化合物ＷＸ０５４−１（１７４．４ｍｇ）をＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ＬＨＭＤＳ（１ｍｏｌ／Ｌ、１．０２ｍＬ）を滴加し、引き続き０℃で３０分間攪拌し、化合物ＢＢ−７（２００ｍｇ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を滴加し、滴加完了後、静置して温度が３０℃に上がると、引き続き２時間攪拌する。水（１０ｍＬ）を加えて反応液をクエンチし、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、水（１０ｍＬ）、飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０５４−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：６７４．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６４】
ステップ２：化合物ＷＸ０５４の合成
窒素雰囲気下で、化合物ＷＸ０５４−２（２０ｍｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１．５４ｇ）を加え、２５℃で３時間攪拌する。反応終了後、混合物を減圧下で濃縮して溶媒の殆どを除去し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０５４を得る。
【０１６５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．７５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１４（ｓ，２Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），４．７０−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．２０−４．１０（ｍ，４Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．２０−３．１０（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．２６（ｓ，６Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５４４．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６６】
実施例５７の合成手順を参照して、下表５の各実施例を合成する。
【表５】
2021532088.tif 000078
【０１６７】
実施例６１：化合物ＷＸ０５８の合成
【化６９】
2021532088.tif 000079
【化７０】
2021532088.tif 000080
【０１６８】
ステップ１：化合物ＷＸ０５８−１の合成
室温で、化合物ＢＢ−１（５．００ｇ）を２−ブタノン（２０ｍＬ）に溶解し、２−ブロモ酢酸エチル（４．１２ｇ）、ヨウ化ナトリウム（０．３７ｇ）、炭酸カリウム（３．４１ｇ）をこの順に加え、反応液を８０℃に加熱して１２時間攪拌する。室温に冷却し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加えて希釈し、濾過する。濾液を減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１００：１〜１０：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ０５８−１を得る。
【０１６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．７７（ｓ，２Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），６．５８（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），４．９３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．１６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０５−３．９６（ｍ，４Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｓ，６Ｈ），１．４０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１７０】
ステップ２：化合物ＷＸ０５８−２の合成
室温で、化合物ＷＸ０５８−１（０．３０ｇ）をエタノール（１０ｍＬ）と水（４ｍＬ）とテトラヒドロフラン（６ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム一水和物（０．１０ｇ）を加え、２５℃で反応液を８時間攪拌する。減圧下で濃縮し、水（１０ｍＬ）を加え、４ｍｏｌ／ＬのＨＣｌで水相のｐＨを３〜４に調整すると、固体が析出し、濾過し、乾燥して、化合物ＷＸ０５８−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４６４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７１】
ステップ３：化合物ＷＸ０５８−３の合成
室温で、化合物５８−１Ａ（２．５０ｇ）を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、（Ｂｏｃ）２Ｏ（９．１９ｇ）、氷酢酸（８ｍＬ）、Ｐｄ／Ｃ（０．２５ｇ、純度１０％）をこの順に加え、２５ｐｓｉの水素雰囲気で、３０℃で反応液を１２時間攪拌する。濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１〜２：１）で残留物から精製することで、化合物５８−２Ａを得る。
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．２０（ｓ，１Ｈ），５．４２−５．３９（ｍ，１Ｈ），５．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０８−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．７４−３．７０（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．０４（ｍ，４Ｈ），１．７０−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。
【０１７３】
室温で、化合物５８−２Ａ（０．６０ｇ）、塩酸−酢酸エチル溶液（１ｍＬ、４ｍｏｌ／Ｌ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に溶解する。窒素雰囲気下で、３０℃で反応混合物を３０分間攪拌する。固体が析出すると、濾過し、酢酸エチル２ｍＬでケーキを洗浄し、乾燥して、化合物ＷＸ０５８−３を得る。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝９．０６（ｓ，１Ｈ），４．３９（ｓ，２Ｈ）。
【０１７４】
ステップ４：化合物ＷＸ０５８の合成
室温で、化合物ＷＸ０５８−２（０．１５ｇ）、化合物ＷＸ０５８−３（０．４３ｇ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（０．１ｍＬ）、ＨＡＴＵ（０．１８ｇ）をこの順に加え、３０℃で反応液を１０時間攪拌した後、水（２０ｍＬ）に注入し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０５８を得る。
【０１７５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．６４（ｓ，１Ｈ），７．１４（ｓ，２Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｓ，１Ｈ），５．１８（ｓ，２Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），４．２８−４．１１（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．５３−１．３９（ｍ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５４４．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７６】
実施例６２：化合物ＷＸ０５９の合成
【化７１】
2021532088.tif 000081
【化７２】
2021532088.tif 000082
【０１７７】
ステップ１：化合物ＷＸ０５９の合成
室温で、化合物ＢＢ−４（３０ｍｇ）、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−５−スルホニルクロリド（２２．４２ｍｇ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１３．５４ｍｇ）を加え、２０℃で攪拌する。反応終了後、混合物を飽和食塩水３０ｍＬにデカントし、酢酸エチル（１５ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水５０ｍＬ、飽和食塩水５０ｍＬで各１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去し、濾液を減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０５９を得る。
【０１７８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），４．５１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．２４−４．１０（ｍ，４Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．０６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，６Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５８０．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７９】
実施例６２の合成手順を参照して、下表６の実施例を合成する。
【表６】
2021532088.tif 000083
【０１８０】
実施例６４：化合物ＷＸ０６４の合成
【化７３】
2021532088.tif 000084
【化７４】
2021532088.tif 000085
【０１８１】
ステップ１：化合物ＷＸ０６４−２の合成
室温で、化合物ＷＸ０６４−１（２０ｇ）をＤＭＦ（３００ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（４．３０ｇ、純度６０％）を加え、３０分間攪拌した後、すぐに１，２−ジブロモエタン（１００．９７ｇ）を加え、６０℃に加熱して１１．５時間攪拌する。室温に冷却し、飽和食塩水（６００ｍＬ）で反応液をクエンチし、酢酸エチル（２００ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、水（６００ｍＬ）、飽和食塩水（６００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液は石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１〜５０：１）で残留物から精製することで、化合物ＷＸ０６４−２を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２３１．８［Ｍ−１００＋２＋Ｈ］＋。
【０１８２】
ステップ２：化合物ＷＸ０６４−３の合成
窒素雰囲気下で、化合物ＷＸ０６４−２（３．６６ｇ）、化合物ＢＢ−１（１．５ｇ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、リン酸カリウム（乾燥）（４．７１ｇ）、ヨウ化ナトリウム（３．３３ｇ）を加えた後、１００℃に加熱して４８時間攪拌する。室温に冷却し、飽和食塩水（１００ｍＬ）で反応液をクエンチし、酢酸エチル（４０ｍＬ×３）で抽出する。有機相を合わせ、水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に入れて５分間攪拌し、濾過して不溶物を除去し、濾液を濃縮した後、分取薄層クロマトグラフィー（溶離液はジクロロ
メタン：メタノール＝１０：１）で精製して、化合物ＷＸ０６４−３を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：６５５．６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８３】
ステップ３：化合物ＷＸ０６４−４の合成
室温で、化合物ＷＸ０６４−３（７００ｍｇ）を塩化水素−酢酸エチル溶液（４Ｍ、７．６７ｍＬ）に溶解し、４０℃に加熱して３時間攪拌する。飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍＬ）で反応液をクエンチし、ジクロロメタン（１０ｍＬ×４）で抽出する。有機相を合わせ、飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物ＷＸ０６４−４を得る。これをそのまま次のステップの反応に使用する。
【０１８４】
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５５５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８５】
ステップ４：化合物ＷＸ０６４−５の合成
窒素雰囲気下で、化合物ＷＸ０６４−４（４１０ｍｇ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、パラジウム炭素の水湿潤品（２００ｍｇ、純度１０％）を加え、室温で水素バルーン（１５ｐｓｉ）において８時間攪拌する。珪藻土で反応液を濾過して触媒を除去し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得る。粗生成物を石油エーテル（１５ｍＬ）と酢酸エチル（０．５ｍＬ）の混合溶媒に入れて３０分間攪拌し、濾過して、化合物ＷＸ０６４−５を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：４６５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８６】
ステップ５：化合物ＷＸ０６４の合成
室温で、化合物ＷＸ０６４−５（１００ｍｇ）、１，２，３−トリアゾール−５−カルボン酸（４８．６８ｍｇ）、トリエチルアミン（６５．３５ｍｇ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、Ｔ３Ｐ（２７３．９７ｍｇ）を加えた後、４０℃に加熱して６時間攪拌する。ジクロロメタン（１３ｍＬ）で反応液を希釈した後、水（２０ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで残留物から精製することで、化合物ＷＸ０６４を得る。
【０１８７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．２５（ｓ，１Ｈ），７．００（ｓ，２Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０４−３．９７（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．１７（ｂｒ  ｓ，６Ｈ），１．４９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５６０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１８８】
実施例６５：化合物ＷＸ０６５の合成
【化７５】
2021532088.tif 000086
【化７６】
2021532088.tif 000087
【０１８９】
ステップ１：化合物ＷＸ０６５−５の合成
室温で、化合物６５−１Ａ（２．００ｇ）とｐ−トルエンスルホン酸（１．１０ｇ）を溶解したテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）にＤＨＰ（２．１５ｇ）を滴加し、滴加完了後、２０℃で混合物を１２時間攪拌する。反応液を減圧下で濃縮した後、濃縮生成物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム（８０ｍＬ）、飽和食塩水（８０ｍＬ）で各１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物６５−２Ａを得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２４１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９０】
０℃で、化合物６５−２Ａ（０．８０ｇ）と炭酸カリウム（２．３０ｇ）を溶解したＤＭＦ（１０ｍＬ）にヨードメタン（０．９５ｇ）を滴加し、滴加完了後、２５℃で混合物を１２時間攪拌する。反応液を水（２０ｍＬ）に注入し、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物６５−３Ａを得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２５５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９１】
０℃で、化合物６５−３Ａ（０．８０ｇ）のテトラヒドロフラン（４ｍＬ）溶液に水酸化ナトリウム（０．３８ｇ）の水（８ｍＬ）溶液を滴加し、滴加完了後、２５℃で混合物を１２時間攪拌する。氷浴で反応液を冷却しながら２ｍｏｌ／Ｌの塩酸でｐＨを４に調整し、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出する。有機相を合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、化合物ＷＸ０６５−５を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：２２７．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９２】
ステップ２：化合物ＷＸ０６５−６の合成
室温で、化合物ＷＸ０６４−５（６０．０ｍｇ）、ＷＸ０６５−５（５８．４４ｍｇ）、トリエチルアミン（６５．３５ｍｇ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ＰｙＢＯＰ（２０１．６４ｍｇ）を加えた後、２０℃で１２時間攪拌する。高速液体クロマトグラフィーで混合物から精製して、化合物ＷＸ０６５−６を得る。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：６７３．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９３】
ステップ５：化合物ＷＸ０６５の合成
化合物ＷＸ０６５−６（４０ｍｇ）を塩化水素−酢酸エチル溶液（４Ｍ、１ｍＬ）に溶解し、２０℃で１時間攪拌する。反応液を減圧下で濃縮した後、高速液体クロマトグラフィーで濃縮生成物から精製することで、化合物ＷＸ０６５を得る。
【０１９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝７．９５（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｓ，２Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ），４．６９−４．６６（ｍ，２Ｈ），４．４５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．２１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．２４（ｓ，６Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
ＭＳ−ＥＳＩ  ｍ／ｚ：５８９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９５】
実施例６５の合成手順を参照して、下表７の各実施例を合成する。
【表７】
2021532088.tif 000088
【０１９６】
各実施例の化合物の１Ｈ  ＮＭＲデータ及びＭＳデータ
【表８−１】
2021532088.tif 000089
【０１９７】
【表８−２】
2021532088.tif 000090
【０１９８】
【表８−３】
2021532088.tif 000091
【０１９９】
【表８−４】
2021532088.tif 000092
【０２００】
【表８−５】
2021532088.tif 000093
【０２０１】
【表８−６】
2021532088.tif 000094
【０２０２】
【表８−７】
2021532088.tif 000095
【０２０３】
【表８−８】
2021532088.tif 000096
【０２０４】
【表８−９】
2021532088.tif 000097
【０２０５】
【表８−１０】
2021532088.tif 000098
【０２０６】
【表８−１１】
2021532088.tif 000099
【０２０７】
【表８−１２】
2021532088.tif 000100
【０２０８】
【表８−１３】
2021532088.tif 000101
【０２０９】
実験例１：ＰＤＥ３Ａ酵素に対する化合物の阻害活性のインビトロ検出
実験目的：蛍光の偏光によるＡＭＰ／ＧＭＰの発現測定、即ちＡＭＰ／ＧＭＰ抗体結合の追跡により酵素活性を示す。
【０２１０】
試薬：
実験バッファー：１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．５）、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％Ｂｒｉｊ  ３５、１ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）、１％ＤＭＳＯ。
酵素：Ｓｆ９昆虫細胞中のバキュロウイルスでＮ末端ＧＳＴタグを用いて組換えヒトＰＤＥ３Ａ（遺伝子アクセッション番号ＮＭ＿０００９２１、アミノ酸６６９末端）を発現し、分子量は８４ｋＤａである。
基質：１μＭのｃＡＭＰ
検出：Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ＡＭＰ２／ＧＭＰ２抗体及びＡＭＰ２／ＧＭＰ２  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３追跡。
【０２１１】
操作手順：
１．組換えヒトＰＤＥ３Ａ酵素及び基質（１μＭのｃＡＭＰ）をそれぞれ新たに調製した実験バッファーに溶解する。
２．前記ＰＤＥ３Ａ酵素バッファーを反応ウェルに移す。
３．音響技術（ｅｃｈｏ  ５５０、精度はナノリットル）を利用してＰＤＥ３Ａ酵素バッファーを含む反応ウェルに、１００％ＤＭＳＯに溶解した化合物を加え、室温で１０分間インキュベートする。
４．基質バッファーを前記反応ウェルに加えて反応を開始させる。
５．室温で１時間インキュベートする。
６．検出混合物（Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ＡＭＰ２／ＧＭＰ２抗体及びＡＭＰ２／ＧＭＰ２  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３追跡）を加えて反応を停止させ、ゆっくりと混合しながら９０分間インキュベートする。蛍光の偏光測定範囲はＥｘ／Ｅｍ＝６２０／６８８である。
【０２１２】
データ分析：ＡＭＰ／ＧＭＰ標準曲線に基づいて、コンピュータソフトウェアＥｘｃｅｌを用いて蛍光の偏光信号からＤＭＳＯに対するパーセンテージ酵素活性を算出し、ｎＭ単位に換算する。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（医学グラフ作成用）で曲線あてはめを行う。実験結果を表１に示す。
【０２１３】
実験例２：ＰＤＥ４Ｂ酵素に対する化合物の阻害活性のインビトロ検出
実験目的：蛍光の偏光によるＡＭＰ／ＧＭＰの発現測定、即ちＡＭＰ／ＧＭＰ抗体結合の追跡により酵素活性を示す。
【０２１４】
試薬：
実験バッファー：１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．５）、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％Ｂｒｉｊ  ３５、１ｍＭのＤＴＴ、１％ＤＭＳＯ。
酵素：Ｓｆ９昆虫細胞中のバキュロウイルスでＮ末端ＧＳＴタグを用いて組換えヒトＰＤＥ４Ｂ（遺伝子アクセッション番号ＮＭ＿００２６００、アミノ酸３０５末端）を発現し、分子量は７８ｋＤａである。
基質：１μＭのｃＡＭＰ
検出：Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ＡＭＰ２／ＧＭＰ２抗体及びＡＭＰ２／ＧＭＰ２  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３追跡。
【０２１５】
操作手順：
１．組換えヒトＰＤＥ４Ｂ酵素及び基質（１μＭのｃＡＭＰ）をそれぞれ新たに調製し
た実験バッファーに溶解する。
２．前記ＰＤＥ４Ｂ酵素バッファーを反応ウェルに移す。
３．音響技術（ｅｃｈｏ  ５５０、精度はナノリットル）を利用してＰＤＥ４Ｂ酵素バッファーを含む反応ウェルに、１００％ＤＭＳＯに溶解した化合物を加え、室温で１０分間インキュベートする。
４．基質バッファーを前記反応ウェルに加えて反応を開始させる。
５．室温で１時間インキュベートする。
６．検出混合物（Ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ＡＭＰ２／ＧＭＰ２抗体及びＡＭＰ２／ＧＭＰ２  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３追跡）を加えて反応を停止させ、ゆっくりと混合しながら９０分間インキュベートする。蛍光の偏光測定範囲はＥｘ／Ｅｍ＝６２０／６８８である。
【０２１６】
データ分析：ＡＭＰ／ＧＭＰ標準曲線に基づいて、コンピュータソフトウェアＥｘｃｅｌを用いて蛍光の偏光信号からＤＭＳＯに対するパーセンテージ酵素活性を算出し、ｎＭ単位に換算する。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（医学グラフ作成用）で曲線あてはめを行う。
実験結果を表９に示す。
【表９】
2021532088.tif 000102
【０２１７】
実験例３：ヒト末梢血単核細胞中ＴＮＦ−αに対する化合物の阻害活性のインビトロ検出
実験目的：ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）中のＴＮＦ−αレベルで、試験化合物の細胞レベルの抗炎症活性を示す。
【０２１８】
操作手順：
１．健常者から全血を採取し、ＥＤＴＡ抗凝固管で抗凝固処理を行う。
２．Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心法でＰＢＭＣを分離した後、カウントし、細胞濃度を２×１０６／ｍＬに調整する。
３．Ｕ底９６ウェルプレートの各ウェルに２×１０５の細胞、１ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ、濃度が１００μＭ、１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭの化合物のＤＭＳＯ溶液を加え、各ウェルは２００μＬである。
４．  ２４時間培養した後、上清を収集する。
５．ＥＬＩＳＡ法で上清中のＴＮＦ−αレベルを検出し、コンピュータソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍで阻害曲線をあてはめしてＩＣ５０を算出する。
実験結果を表１０に示す。
【表１０】
2021532088.tif 000103
【０２１９】
実験例４：ビーグル犬による薬物動態研究
本研究では、試験動物として雄性のビーグル犬を用い、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法でビーグル犬への化合物ＷＸ０３６の静脈注射又は経口投与の異なる経過時間後の血漿中薬物濃度を定量的に測定することで、ビーグル犬の体内の化合物ＷＸ０３６の薬物動態特性を評価する。
【０２２０】
化合物ＷＸ０３６の清澄溶液を頭静脈又は大伏在静脈から１０〜１２ｋｇのビーグル犬２匹の体内に注射し、試験化合物の清澄溶液を１０〜１２ｋｇのビーグル犬２匹（一晩絶食）に胃内投与する。投与後０．０３３３時間、０．０８３３時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、２４時間に、全ての動物は末梢静脈から約５００μＬ採血して０．８５〜１．１５ｍｇのＫ２ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏを含む抗凝固遠心管に移し、４℃で、３０００ｇで１０分間遠心分離した後、血漿を採取する。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法で血中薬物濃度を測定し、薬物動態コンピュータソフトウェアＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標）Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を用いて、ノンコンパートメントモデル×線形台数法で関連の薬物動態パラメータを算出する。
【表１１】
2021532088.tif 000104
【０２２１】
実験例５：ヒト肝ミクロソーム由来シトクロムＰ４５０のアイソエンザイム（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ３Ａ４）に対する活性阻害効果
ＣＹＰの５種のアイソエンザイムの５つの特異的なプローブ基質、フェナセチン（Ｐｈｅｎａｃｅｔｉｎ、ＣＹＰ１Ａ２）、ジクロフェナク（Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ、ＣＹＰ２Ｃ９）、（Ｓ）−メフェニトイン（（Ｓ）−Ｍｅｐｈｅｎｙｔｏｉｎ、ＣＹＰ２Ｃ１９）、デキストロメトルファン（Ｄｅｘｔｒｏｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ、ＣＹＰ２Ｄ６）、ミダゾラム（Ｍｉｄａｚｏｌａｍ、ＣＹＰ３Ａ４）をそれぞれヒト肝ミクロソーム及び試験化合物と共インキュベートし、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元型（ＮＡＤＰＨ）を加えて反応を開始させる。反応終了後、サンプルを処理し、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）法で、特異的な基質が生成した５種の代謝生成物、アセトアミノフェン（Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ）、４’−ヒドロキシジクロフェナク（４’−Ｈｙｄｒｏｘｙｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、４’−ヒドロキシメフェニトイン（４’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｐｈｅｎｙｔｏｉｎ）、デキストロルファン（Ｄｅｘｔｒｏｒｐｈａｎ）、１’−ヒドロキシミダゾラム（１’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｄａｚｏｌａｍ）の濃度を定量的に検出し、それぞれの半数阻害濃度（ＩＣ５０）を算出する。
【表１２】
2021532088.tif 000105
【０２２２】
実験例６：受動喫煙誘発ラット急性肺損傷モデルによる薬力学研究
試験動物：
雄性ＳＰＦ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（提供元：上海斯莱克実験動物有限公司）を用いる。体重は約２００ｇである。
【０２２３】
試験手順：
１．動物を施設に運んだ後、施設環境に適応するように１週間飼育し、体重によってランダムに３群に分ける。
２．試験開始後１〜３日目に、各群に試験対象化合物を３０分間噴霧し、モデル群及び各化合物処理群の動物を１時間受動喫煙に曝露させた後、４時間を経て再び１時間受動喫煙に曝露させる。毎日２回で、３日連続してタバコの煙に曝露させる。対照群動物を室内の空気に曝露させる
３．試験後４日目、各群に試験対象化合物を３０分間噴霧し、モデル群及び各化合物処理群の動物に対して噴霧吸入より１５０μｇ／ｍＬのＬＰＳに１５分間曝露させ、噴霧開始から３時間後、１時間受動喫煙に曝露させ、動物の肺機能（Ｐｅｎｈ）を検出し、ＣＯ２を付与して動物を安楽死した後、肺胞洗浄液を収集して細胞をカウントする。
４．薬物投与：
投与形態：全身曝露用噴霧装置を用いて、最大噴霧量（約１２ｍＬ）で３０分間試験化合物を噴霧する。
投与頻度：毎朝受動喫煙前に３０分間薬物を噴霧投与し又は溶媒を投与し、４日目にＬＰＳ噴霧吸入前に薬物を投与する。
５．薬力学的エンドポイントの測定：
（１）ＢＡＬＦ（肺胞洗浄液）中の白血球総数。
（２）メタコリン（Ｍｃｈ）誘発モデルに対する肺機能検査（気道抵抗の指標Ｐｅｎｈ）。
【表１３】
2021532088.tif 000106
試験結果を図１及び図２に示す。
【図１】
2021532088.tif 000123
【図２】
2021532088.tif 000124
【国際調査報告】
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