(57)【要約】  本発明は、治療的および診断的用途を有するヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアント、ならびにそれを作製する方法に関する。本発明はまた、ヒトＩＬ−１５バリアントを含む融合タンパク質を提供する。哺乳動物における免疫応答を刺激または抑制する方法、およびＩＬ−１５バリアントまたはこのようなＩＬ−１５バリアントの融合タンパク質を使用して障害（例えば、がん）を処置する方法もまた提供される。【選択図】図１Ａ
2021516045.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含み、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）およびヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合せず、Ｖ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されている、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアント。
【請求項２】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；
ｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｃ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；
ｄ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｅ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｆ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；
ｇ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｈ）Ｎ１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｉ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｊ）Ｓ７、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｋ）Ｋ１０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｌ）Ｋ１１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｍ）Ｓ２９、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｎ）Ｖ３１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｏ）Ｈ３２、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｐ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｑ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；
ｒ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；
ｓ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１；
ｔ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｕ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｖ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｗ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｘ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｙ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｚ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ａａ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｂｂ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；
ｃｃ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ならびに
ｄｄ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項３】
アミノ酸置換が、
ａ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、Ｖ４９ＱもしくはＶ４９Ｒ；
ｂ）Ｉ５０ＡもしくはＩ５０Ｇ；
ｃ）Ｓ５１Ｔ；
ｄ）Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｇ、Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、もしくはＮ１Ｄ；
ｅ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；
ｆ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；
ｇ）Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；
ｈ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；
ｉ）Ｄ３０Ｎ；
ｊ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；
ｋ）Ｅ５３Ｎ；
ｌ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；
ｍ）Ｅ８９Ｎ；
ｎ）Ｌ９１ＳもしくはＬ９１Ｔ；
ｏ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；
ｐ）Ｓ２９Ｎ；
ｑ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；
ｒ）Ｈ３２Ｇ；
ｓ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；
ｔ）Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；
ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／または
ｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄ
において１つまたは複数の特定の置換を含む、請求項１から２のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項４】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；
ｃ）Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｄ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｅ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；
ｆ）Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ならびに
ｇ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項５】
配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と結合せず、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少している、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアント。
【請求項６】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｂ）Ｎ４、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｃ）Ｓ７、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｄ）Ｋ１０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｅ）Ｋ１１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｆ）Ｓ２９、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｇ）Ｖ３１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｈ）Ｈ３２、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｉ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｊ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ６８；
ｋ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＬ６９；
ｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ１１１；
ｍ）Ｎ４、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；
ｏ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｐ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｑ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｒ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｓ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｔ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｕ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｖ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｗ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｘ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｙ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８；
ｚ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＬ６９；
ａａ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ１１１；
ｂｂ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｃｃ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｄｄ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｅｅ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｆｆ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｇｇ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｈｈ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｉｉ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ６９、およびＭ１０９；
ｊｊ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｍ１０９、およびＩ１１１；
ｋｋ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｌｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｍｍ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｎｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｏｏ）Ｄ２２、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ８９、およびＥ９３；ならびに
ｐｐ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項５に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項７】
アミノ酸置換が、
ａ）Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、Ｎ１Ｄ、もしくはＮ１Ｇ；
ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；
ｃ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；
ｄ）Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；
ｅ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；
ｆ）Ｄ２２Ｎ；
ｇ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；
ｈ）Ｓ２９Ｎ；
ｉ）Ｄ３０Ｎ；
ｊ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；
ｋ）Ｈ３２Ｇ；
ｌ）Ｅ４６ＧもしくはＥ４６Ｑ；
ｍ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、もしくはＶ４９Ｒ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、もしくはＶ４９Ｑ；
ｎ）Ｅ５３Ｑ；
ｏ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ
ｐ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；
ｑ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；
ｒ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；
ｓ）Ｅ８９Ｑ；
ｔ）Ｅ９３Ｑ；
ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／または
ｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄ
において１つまたは複数の特定の置換を含む、請求項５または６に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項８】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｃ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｄ）Ｓ７Ｔ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｅ）Ｖ３１Ｓ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｆ）Ｖ３１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｇ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｈ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｊ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｋ）Ｎ１Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｌ）Ｎ１Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｍ）Ｎ４Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｎ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｏ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｐ）Ｓ７Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｑ）Ｓ７Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｒ）Ｓ７Ｔ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｓ）Ｋ１０Ｄ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｔ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ａ；
ｕ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｖ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｗ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；
ｘ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｋ；
ｙ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｚ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ａａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｂｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｃｃ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；
ｄｄ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、およびＩ６８Ｓ；
ｅｅ）Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ならびに
ｆｆ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項５から７のいずれか一項に記載の単離されたＩＬ−１５バリアント。
【請求項９】
１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、配列番号１のＶ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されており、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含み、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質。
【請求項１０】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；
ｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｃ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；
ｄ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｅ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｆ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；
ｇ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｈ）Ｎ１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｉ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｊ）Ｓ７、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｋ）Ｋ１０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｌ）Ｋ１１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｍ）Ｓ２９、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｎ）Ｖ３１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｏ）Ｈ３２、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｐ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｑ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；
ｒ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；
ｓ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１；
ｔ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｕ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｖ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｗ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｘ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｙ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ｚ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；
ａａ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；
ｂｂ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；
ｃｃ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ならびに
ｄｄ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
アミノ酸置換が、
ａ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、もしくはＶ４９Ｒ；
ｂ）Ｉ５０ＡもしくはＩ５０Ｇ；
ｃ）Ｓ５１Ｔ；
ｄ）Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｇ、Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、もしくはＮ１Ｄ；
ｅ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、もしくはＮ４Ｑ；
ｆ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；
ｇ）Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；
ｈ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；
ｉ）Ｄ３０Ｎ；
ｊ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；
ｋ）Ｅ５３Ｎ；
ｌ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；
ｍ）Ｅ８９Ｎ；
ｎ）Ｌ９１ＳもしくはＬ９１Ｔ；
ｏ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；
ｐ）Ｓ２９Ｎ；
ｑ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；
ｒ）Ｈ３２Ｇ；
ｓ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；
ｔ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；
ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／または
ｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄ
において１つまたは複数の特定の置換を含む、請求項９または１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｂ）Ｙ２６Ｋ、Ｖ４９Ｒ、Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、およびＥ６４Ｑ；
ｃ）Ｙ２６Ｋ、Ｖ４９Ｋ、Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、およびＥ６４Ｑ；
ｄ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；
ｅ）Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｆ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；
ｇ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；
ｈ）Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ならびに
ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質。
【請求項１４】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｂ）Ｎ４、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｃ）Ｓ７、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｄ）Ｋ１０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｅ）Ｋ１１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｆ）Ｓ２９、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｇ）Ｖ３１、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｈ）Ｈ３２、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｉ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｊ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ６８；
ｋ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＬ６９；
ｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ１１１；
ｍ）Ｎ４、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；
ｏ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｐ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｑ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｒ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｓ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｔ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｕ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｖ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｗ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；
ｘ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；
ｙ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８；
ｚ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＬ６９；
ａａ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ１１１；
ｂｂ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｃｃ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｄｄ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｅｅ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｆｆ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；
ｇｇ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｈｈ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｉｉ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ６９、およびＭ１０９；
ｊｊ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｍ１０９、およびＩ１１１；
ｋｋ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｌｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；
ｍｍ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；
ｎｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；
ｏｏ）Ｄ２２、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ８９、およびＥ９３；ならびに
ｐｐ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、Ｎ１Ｄ、またはＮ１Ｇ；
ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、またはＮ４Ｑ；
ｃ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、またはＳ７Ｔ；
ｄ）Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ｇ；
ｅ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、またはＫ１１Ｗ；
ｆ）Ｄ２２Ｎ；
ｇ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、またはＹ２６Ｈ；
ｈ）Ｓ２９Ｎ；
ｉ）Ｄ３０Ｎ；
ｊ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、またはＶ３１Ｋ
ｋ）Ｈ３２Ｇ；
ｌ）Ｅ４６ＧまたはＥ４６Ｑ；
ｍ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、またはＶ４９Ｒ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、またはＶ４９Ｑ；
ｎ）Ｅ５３Ｑ；
ｏ）Ｇ５５ＳまたはＧ５５Ｔ；
ｐ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、またはＥ６４Ｒ；
ｑ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８ＥまたはＩ６８Ｈ；
ｒ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、またはＬ６９Ｖ；
ｓ）Ｅ８９Ｑ；
ｔ）Ｅ９３Ｑ；
ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、またはＭ１０９Ｋ；および
ｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、またはＩ１１１Ｄ
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項１３または１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
ＩＬ−１５バリアントが、
ａ）Ｎ１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｃ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｄ）Ｓ７Ｔ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｅ）Ｖ３１Ｓ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｆ）Ｖ３１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｇ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｈ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｊ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｋ）Ｎ１Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｌ）Ｎ１Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｍ）Ｎ４Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｎ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｏ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｐ）Ｓ７Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｑ）Ｓ７Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｒ）Ｓ７Ｔ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｓ）Ｋ１０Ｄ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；
ｔ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ａ；
ｕ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｖ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｗ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；
ｘ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｋ；
ｙ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ｚ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；
ａａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｂｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；
ｃｃ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；
ｄｄ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、およびＩ６８Ｓ；
ｅｅ）Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ならびに
ｆｆ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ
からなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
配列番号８６、８７、８９、または９０のアミノ酸配列を含む、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４ΔｂＳ２２８Ｐ、およびＩｇＧ４ΔｃＳ２２８Ｐからなる群から選択されるアイソタイプを有する、請求項９から１７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
ａ）抗体がＩｇＧ２であり、抗体可変ドメインが、ヒンジ領域における２２３、２２５、および／もしくは２２８位において、ならびにヒトＩｇＧ２（配列番号３）のＣＨ３領域における４０９および／もしくは３６８位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含み；ｂ）抗体がＩｇＧ１であり、抗体可変ドメインが、ヒンジ領域における２２１および／もしくは２２８位において、ならびにヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における４０９および／もしくは３６８位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含み；またはｃ）抗体がＩｇＧ１であり、抗体可変ドメインが、ヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における３４９、３５４、３６６、３６８、および／もしくは４０７位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
抗体が、ａ）ヒトＩｇＧ２（配列番号３）の１つもしくは複数の２６５、３３０、および／もしくは３３１位；またはｂ）ヒトＩｇＧ１（配列番号２）の１つもしくは複数の２３４、２３５、および／もしくは２３７位においてアミノ酸修飾をさらに含む、請求項１９に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗ＩＬ−７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ＫＬＲＧ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体からなる群から選択される、請求項９から２０のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
抗体が、配列番号１４、１５、８０、８１、９１、もしくは９２のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６、１７、８２、もしくは８３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１８もしくは６２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに／または配列番号１９もしくは３１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号２０もしくは３２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号２１もしくは３３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含むＰＤ−１抗体である、請求項２１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
抗体が、配列番号１２、３４、７８、もしくは３６のアミノ酸配列を有するＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに／または配列番号１３、３５、７９、もしくは３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含むＰＤ−１抗体である、請求項２１に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
ＩＬ−１５バリアントが、ポリペプチドリンカーおよび／またはポリペプチドタグによって抗体と共有結合している、請求項９から２３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアントまたは請求項９から２４のいずれか一項に記載のＩＬ−１５融合タンパク質を産生する単離された細胞株。
【請求項２６】
請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアントまたは請求項９から２４のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする単離された核酸。
【請求項２７】
請求項２６に記載の核酸を含む組換え発現ベクター。
【請求項２８】
請求項２６に記載の単離された核酸または請求項２７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアントまたは請求項９から２４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の医薬組成物を含む、がんを処置するためのキット。
【請求項３１】
がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、がんに関連する１つまたは複数の症状が対象において改善されるように、有効量の請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアント、請求項９から２４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、または請求項２９に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項３２】
がんが固形がんまたは液体がんである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
固形がんが、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、頭頸部がん、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、腎がん、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、大腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、膠芽腫、脳腫瘍、骨がん、眼がん、および黒色腫からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
液体がんが、多発性骨髄腫、悪性形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーラー病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ  ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｅｎｅｍｉａ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ  ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症を伴うびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病で発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、および他の造血細胞関連がんからなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
がんが、再発性、難治性、または転移性である、請求項２９から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む、ここにおいて、任意選択で、前記投与は、別々、連続、または同時である、ステップをさらに含む、請求項２９から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
第２の治療剤が、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ−７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＩＬ−７Ｒ抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ＫＬＲＧ１抗体、ＢＴＮ１Ａ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体からなる群から選択される抗体である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
第２の治療剤が、サイトカイン、免疫サイトカイン、ＴＮＦα、ＰＡＰ阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、キナーゼ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＧＬＳ１阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＣＡＲＴ細胞もしくはＴ細胞療法、ＴＬＲアゴニスト、または腫瘍ワクチンである、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
任意選択で固形がんもしくは液体がんであり、および／または再発性、難治性、もしくは転移性であるがんの処置に使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアント、請求項９から２４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、または請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
使用が第２の治療剤との併用であり、任意選択で併用が、同時、並行してまたは同時に投与するためである、請求項３９に記載の使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ−１５バリアント、請求項９から２４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、または請求項２９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療的および診断的用途を有するインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアント、ならびにそれを作製する方法に関する。本発明はまた、このようなＩＬ−１５バリアントを含む融合タンパク質を提供する。哺乳動物における免疫応答を刺激または抑制する方法、およびＩＬ−１５バリアントまたはこのようなＩＬ−１５バリアントの融合タンパク質を使用して障害（例えば、がん）を処置する方法もまた提供される。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインは免疫応答の強力なモジュレーターであり、免疫腫瘍学的治療アプローチに対する転帰に劇的に影響を及ぼす可能性を保持している。しかしながら、ヒト対象においてサイトカインを利用するこれまでの取り組みでは、わずかな有効性および有意な毒性しか得られていない。最近の研究は、抗体−サイトカイン融合タンパク質などの「標的化サイトカイン」が末梢曝露およびしたがって毒性を最小限にしながら、所望の細胞型にサイトカインを送達し得ることを示唆している。例えば、Ｇｕｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．３８：１０〜２１ページ（２０１７）；Ｊａｋｏｂｉｓｉａｋ  Ｍら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．２２（２）：９９〜１０８ページ（２０１１）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｔ．  ＆  Ｓｃｈｌｕｎｓ，Ｋ．Ｓ．、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１９０：１５９〜１６８ページ（２０１７）；Ｒｈｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．４（１）：４９〜６０ページ（２０１６）；Ｃｏｎｌｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３３（１）：７４〜８２ページ（２０１５）を参照のこと。したがって、標的化サイトカインに基づく治療剤の開発は、がんなどの種々の疾患の処置において大きな価値がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本明細書に開示されている本発明は、ヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントおよびそれを含む融合タンパク質に関する。本発明のＩＬ−１５バリアントは、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体アルファ（ＣＤ２１５）への結合が減少しているかもしくはそれと結合せず、ならびに／またはＩＬ−１５と、ＩＬ−２受容体ベータ（ＣＤ１２２）および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）から構成される、そのシグナル伝達受容体との相互作用が低減していることが実証される。本発明の第２の側面では、抗体融合キメラタンパク質として提示される場合、これらの親和性が低減したＩＬ−１５バリアントは、所望の細胞型（抗体標的を発現するそれらの細胞）に選択的に標的化される。ＩＬ−１５受容体複合体を発現するが、抗体標的を発現しない細胞型は、両方の成分を発現するそれらの細胞と比較して、ほとんど活性化されないか、または活性化されない。したがって、本発明のＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、抗腫瘍活性などの生物活性を効果的かつ安全に促進するために細胞サブセットの活性化を選択的にモジュレートする。本発明の第３の側面では、これらの親和性が低減したＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、分泌型または膜係留（ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｔｅｔｈｅｒｅｄ）型のいずれかとして、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）Ｔ細胞においてポリヌクレオチドとして発現される場合、活性および増殖を含むＣＡＲ  Ｔ機能を増強するために使用される。
【０００４】
したがって、一つの側面では、本発明は、配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含み、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）およびヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合せず、Ｖ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されている、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを提供する。
【０００５】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、配列番号１のＶ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されており、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含み、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。
【０００６】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントはＶ４９Ｎにおいてアミノ酸置換を含み、Ｖ４９Ｎはグリコシル化されている。一部の態様では、配列番号１のＥ５３および／またはＥ８９におけるアミノ酸置換もまた、グリコシル化されている。
【０００７】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｃ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｄ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｅ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｆ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｇ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｈ）Ｎ１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｉ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｊ）Ｓ７、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｋ）Ｋ１０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｌ）Ｋ１１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｍ）Ｓ２９、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｎ）Ｖ３１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｏ）Ｈ３２、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｐ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｑ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｒ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ｓ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１；ｔ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｕ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｖ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｗ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｘ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｙ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｚ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ａａ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｂｂ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｃｃ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ならびにｄｄ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１からなる群から選択される位置において配列番号１のアミノ酸置換を含む。
【０００８】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、Ｖ４９ＱもしくはＶ４９Ｒ；ｂ）Ｉ５０ＡもしくはＩ５０Ｇ；ｃ）Ｓ５１Ｔ；ｄ）Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｇ、Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、もしくはＮ１Ｄ；ｅ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、もしくはＮ４Ｑ；ｆ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｇ）Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｈ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｋ）Ｅ５３Ｎ；ｌ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｍ）Ｅ８９Ｎ；ｎ）Ｌ９１ＳもしくはＬ９１Ｔ；ｏ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｐ）Ｓ２９Ｎ；ｑ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｒ）Ｈ３２Ｇ；ｓ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｔ）Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｃ）Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｄ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｅ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｆ）Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ならびにｇ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む。
【０００９】
別の側面では、配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と結合せず、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少している、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントが提供される。
【００１０】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。
【００１１】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｂ）Ｎ４、Ｅ４６、およびＶ４９；ｃ）Ｓ７、Ｅ４６、およびＶ４９；ｄ）Ｋ１０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｅ）Ｋ１１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｆ）Ｓ２９、Ｅ４６、およびＶ４９；ｇ）Ｖ３１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｈ）Ｈ３２、Ｅ４６、およびＶ４９；ｉ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｊ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ６８；ｋ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＬ６９；ｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ１１１；ｍ）Ｎ４、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｏ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｐ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｑ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｒ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｓ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｔ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｕ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｖ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｗ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｘ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｙ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８；ｚ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＬ６９；ａａ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ１１１；ｂｂ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｃｃ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｄｄ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｅｅ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｆｆ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｇｇ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｈｈ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｉｉ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ６９およびＭ１０９；ｊｊ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｍ１０９、およびＩ１１１；ｋｋ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｌｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｍｍ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｎｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｏｏ）Ｄ２２、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ８９、およびＥ９３；ならびにｐｐ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４からなる群から選択される位置において配列番号１におけるアミノ酸置換を含む。
【００１２】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、Ｎ１Ｄ、もしくはＮ１Ｇ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；ｃ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｄ）Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｅ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｆ）Ｄ２２Ｎ；ｇ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｈ）Ｓ２９Ｎ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｋ）Ｈ３２Ｇ；ｌ）Ｅ４６ＧもしくはＥ４６Ｑ；ｍ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、もしくはＶ４９Ｒ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、もしくはＶ４９Ｑ；ｎ）Ｅ５３Ｑ；ｏ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｐ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｑ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｒ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｓ）Ｅ８９Ｑ；ｔ）Ｅ９３Ｑ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｃ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｄ）Ｓ７Ｔ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｅ）Ｖ３１Ｓ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｆ）Ｖ３１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｇ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｈ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｊ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｋ）Ｎ１Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｌ）Ｎ１Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｍ）Ｎ４Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｎ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｏ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｐ）Ｓ７Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｑ）Ｓ７Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｒ）Ｓ７Ｔ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｓ）Ｋ１０Ｄ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｔ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ａ；ｕ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｖ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｗ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｘ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｋ；ｙ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｚ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ａａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｂｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｃｃ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｄｄ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、およびＩ６８Ｓ；ｅｅ）Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ならびにｆｆ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む。
【００１３】
別の側面では、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換を含む単離されたヒトＩＬ−１５バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）および／またはヒトＩＬ−２受容体ベータ（ＩＬ−２Ｒβ）および／またはＩＬ−２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合しない、単離されたヒトＩＬ−１５バリアントが提供される。
【００１４】
別の側面では、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む単離されたヒトＩＬ−１５バリアントが提供される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは膜貫通ドメインをさらに含む。
【００１５】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが、野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。
【００１６】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含むＩＬ−１５抗体；およびｂ）配列番号１のヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）タンパク質を含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５が抗体のＦｃドメインと共有結合している、単離された融合タンパク質が提供される。
【００１７】
一部の態様では、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質における抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または二重特異性抗体であってもよい。
一部の態様では、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質における抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４ΔｂＳ２２８Ｐ、およびＩｇＧ４ΔｃＳ２２８Ｐサブクラスのものである。
【００１８】
一部の態様では、ａ）本発明のＩＬ−１５融合タンパク質の抗体はＩｇＧ２であり、抗体可変ドメインは、ヒンジ領域における２２３、２２５、および２２８位において、ならびにヒトＩｇＧ２（配列番号３）のＣＨ３領域における４０９もしくは３６８位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含み；ｂ）本発明のＩＬ−１５融合タンパク質の抗体はＩｇＧ１であり、抗体可変ドメインは、ヒンジ領域における２２１および２２８位において、ならびにヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における４０９もしくは３６８位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含み；またはｃ）本発明のＩＬ−１５融合タンパク質の抗体はＩｇＧ１であり、抗体可変ドメインは、ヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における３４９、３５４、３６６、３６８、および／もしくは４０７位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、抗体は、ａ）ヒトＩｇＧ２（配列番号３）の１つもしくは複数の２６５、３３０、および／もしくは３３１位；またはｂ）ヒトＩｇＧ１（配列番号２）の１つもしくは複数の２３４、２３５、２３７、および／もしくは３２２位においてアミノ酸修飾をさらに含む。一部の態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ１（配列番号７４および７５）の１つまたは複数の２３４、２３５、２３７、３４９、３５４、３６６、３６８および／または４０７位においてアミノ酸修飾をさらに含む。
【００１９】
一部の態様では、ＩＬ−１５融合タンパク質に対する抗体は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ−７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ＫＬＲＧ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体からなる群から選択される。
【００２０】
一部の態様では、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ポリペプチドリンカーおよび／またはポリペプチドタグによって抗体と共有結合している。
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されている治療有効量のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。別の側面では、本発明はポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【００２２】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を組換えにより産生する単離された宿主細胞または細胞株を提供する。一部の態様では、宿主細胞または細胞株は操作された免疫細胞であり、操作された免疫細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。一部の態様では、ＣＡＲ発現細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞は、分泌型または膜係留型において本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を発現する。
【００２３】
別の側面では、本発明は、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を産生する方法であって、タンパク質バリアントまたは融合タンパク質が産生される条件下で、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を組換えにより産生する細胞株を培養するステップ、およびタンパク質バリアントまたは融合タンパク質を回収するステップを含む方法を提供する。
【００２４】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されている有効量の医薬組成物を、状態の処置を必要とする対象に投与するステップを含む、対象における状態を処置する方法を提供する。一部の態様では、状態はがんである。一部の態様では、がんは液体がんまたは固形がんである。一部の態様では、がんは、再発性、難治性、または転移性である。
【００２５】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されている有効量の医薬組成物を、対象に投与するステップを含む、腫瘍を有する対象における腫瘍成長または腫瘍進行を阻害する方法を提供する。
【００２６】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されている有効量の医薬組成物を、がん細胞の転移の阻害または阻止を必要とする対象に投与するステップを含む、対象におけるがん細胞の転移を阻害または阻止する方法を提供する。
【００２７】
別の側面では、本発明は、本明細書に記載されている有効量の医薬組成物を、対象に投与するステップを含む、腫瘍退縮の誘導を必要とする対象における腫瘍退縮を誘導する方法を提供する。
【００２８】
一部の態様では、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、対象において非経口的に投与され得る。一部の態様では、対象はヒトである。
【００２９】
一部の態様では、方法は、有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含み得る。一部の態様では、第２の治療剤はバイオ治療剤である。
一部の態様では、第２の治療剤は、サイトカイン、免疫サイトカイン（例えば、抗ＥＤＡ−ＩＬ１０融合タンパク質）、ＴＮＦα、ＰＡＰ阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、キナーゼ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤（例えば、スニチニブまたはクリゾチニブ）、ＭＥＫ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、ＧＬＳ１阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、アキシチニブまたはパルボシクリブ）、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）−Ｔ細胞もしくはＴ細胞療法、ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）などのＰＲＲ（パターン認識受容体）アゴニスト、または腫瘍ワクチンである。
【００３０】
また、がんの処置または腫瘍成長もしくは腫瘍進行の阻害を必要とする対象におけるがんを処置するためまたは腫瘍成長もしくは腫瘍進行を阻害するための医薬の製造における、本明細書に提供されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかの使用も提供される。
【００３１】
一つの側面では、本発明は、第１の治療剤および第２の治療剤を含む併用療法を対象に投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法であって、第１の治療剤がＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質である、方法を提供する。
【００３２】
一部の態様では、第１の治療剤はＩＬ−１５バリアントである。一部の態様では、第１の治療剤はＩＬ−１５融合タンパク質である。一部の態様では、第１の治療剤は本発明のいずれかのＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質である。一部の態様では、第１の治療剤は、配列番号８４、８５、８６、８７、８９、または９０に示されるアミノ酸配列を含む。
【００３３】
一部の態様では、第２の治療剤は免疫サイトカインである。一部の態様では、第２の治療剤は、サイトカインとコンジュゲートまたは融合している、抗体、またはその断片を含む免疫サイトカイン（例えば融合タンパク質）である。一部の態様では、抗体、またはその断片は、フィブロネクチンのエクストラドメイン−Ａ（ＥＤＡ）アイソフォームに結合している（例えば抗ＥＤＡ抗体）。一部の態様では、抗ＥＤＡ抗体、またはその断片は、配列番号９４に示される重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに／または配列番号９６に示される軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＥＤＡ抗体、またはその断片は、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ領域および／または配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含む。一部の態様では、サイトカインはＩＬ−１０である。一部の態様では、ＩＬ−１０は配列番号９８のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、免疫サイトカインは少なくとも１つのリンカーを含む。一部の態様では、リンカーは配列番号９５および／または９７を含む。一部の態様では、免疫サイトカインは、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含む抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質である。
【００３４】
一部の態様では、本発明は、第１の治療剤および第２の治療剤を含む併用療法を対象に投与するステップを含む、対象におけるがんを処置する方法であって、第１の治療剤はＩＬ−１５融合タンパク質であり、第２の薬剤は抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質である、方法を提供する。一部の態様では、ＩＬ−１５融合タンパク質は、配列番号８４、８５、８６、８７、８９、または９０に示されるアミノ酸配列を含み、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含む。
【００３５】
一部の態様では、併用療法は、１、２、３、４または５種のさらなる治療剤をさらに含んでもよい。一部の態様では、併用療法は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体をさらに含む。一部の態様では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢＣＤ−１００、カムレリズマブ（ＳＨＲ−１２１０）、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ゲノリムズマブ（ｇｅｎｏｌｉｍｚｕｍａｂ）（ＣＢＴ−５０１）、ＭＥＤＩ０６８０、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ＰＦ−０６８０１５９１（ＲＮ８８８）、シンチリマブ（ＩＢＩ−３０８）、スパルタリズマブ（ＰＤＲ−００１）、ＳＴＩ−Ａ１１１０、チスレリズマブ（ＢＧＢ−Ａ３１７）、またはＴＳＲ−０４２である。一部の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５）、またはＬＹ３３０００５４である。
【００３６】
一部の態様では、併用療法における各治療剤は、同時に（例えば、同じ医薬中でまたは一緒に）、並行して（すなわち、任意の順序で次々と投与される別個の医薬中で）、または任意の順序で連続して投与され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】ターゲティング抗体アームとしてＮ末端に二価Ｆａｂ；ＣＨ２およびＣＨ３（Ｄ２６５Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ）でのＦｃγＲ結合を無効にする突然変異、ヒンジ上の二重特異性突然変異（Ｃ２２３Ｒ／Ｅ、Ｅ２２５Ｒ／Ｅ、およびＰ２２８Ｒ／Ｅ）、ならびにフレキシブルグリシン−セリン（ＧＳ）−リンカーを介するＣ末端におけるＩＬ−１５突然変異タンパク質分子の一価連結のためのＣＨ３（Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ）を有するヘテロ二量体Ｆｃを含む完全ヒトｈＩｇＧ２Δａを含む抗マウスＰＤ１抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質構築物を示す概略図である。ＩＬ−１５タンパク質における突然変異には、（配列番号１の）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１ＴおよびＥ６４Ｑが含まれ；Ｖ４９Ｎ−Ｉ５０Ａ−Ｓ５１Ｔは、Ｎ−結合型グリコシル化部位（Ｖ４９Ｎ位から突き出る概略的な炭水化物モチーフで示される）である。
【図１Ｂ】図１Ａに示されるように抗体上に同じ突然変異を有する別の抗マウスＰＤ１抗体−ＩＬ−１５突然変異体融合タンパク質構築物、ならびにＮ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ（またはＹ２６Ｋ）、Ｖ４９Ｒ（またはＶ４９Ｋ）およびＥ６４Ｑを含むＩＬ−１５タンパク質における突然変異の相違を示す図である。
【図１Ｃ】ターゲティング抗体アームとしてＮ末端に二価Ｆａｂ；ヒンジ上の二重特異性突然変異（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ）ならびにフレキシブルグリシン−セリン（ＧＳ）−リンカーを介したＣ末端でのＩＬ−１５突然変異タンパク質分子の一価連結のためのＣＨ３（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ）を有する完全ヒトＩｇＧ１を含む抗マウスＰＤ１抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質構築物（「Ｍ２」）を示す概略図である。ＩＬ−１５タンパク質における突然変異には、（配列番号１の）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、およびＮ１Ｇが含まれる。
【図１Ｄ】図１Ｃに示されるように抗体上に同じ突然変異を有する別の抗マウスＰＤ１抗体−ＩＬ−１５突然変異体融合タンパク質構築物（「Ｍ１」）を示す図であり、（配列番号１の）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｄ３０Ｎ、およびＮ１Ａを含むＩＬ−１５タンパク質における突然変異に相違がある。
【図２Ａ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）、および一部の場合では同様にＰＤ−１を発現する細胞への抗体または抗体−サイトカイン融合分子の直接結合を示す。分子には、抗マウスＰＤ−１抗体（図２Ａ）；アイソタイプ対照抗体（Ａｂ８．８）−ａＳｕ−ＩＬ−１５（図２Ｂ）；抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（図２Ｃ）；および抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５  ＮＱ（図２Ｄ）が含まれる。
【図２Ｂ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）、および一部の場合では同様にＰＤ−１を発現する細胞への抗体または抗体−サイトカイン融合分子の直接結合を示す。分子には、抗マウスＰＤ−１抗体（図２Ａ）；アイソタイプ対照抗体（Ａｂ８．８）−ａＳｕ−ＩＬ−１５（図２Ｂ）；抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（図２Ｃ）；および抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５  ＮＱ（図２Ｄ）が含まれる。
【図２Ｃ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）、および一部の場合では同様にＰＤ−１を発現する細胞への抗体または抗体−サイトカイン融合分子の直接結合を示す。分子には、抗マウスＰＤ−１抗体（図２Ａ）；アイソタイプ対照抗体（Ａｂ８．８）−ａＳｕ−ＩＬ−１５（図２Ｂ）；抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（図２Ｃ）；および抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５  ＮＱ（図２Ｄ）が含まれる。
【図２Ｄ】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、および図２Ｄは、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）、および一部の場合では同様にＰＤ−１を発現する細胞への抗体または抗体−サイトカイン融合分子の直接結合を示す。分子には、抗マウスＰＤ−１抗体（図２Ａ）；アイソタイプ対照抗体（Ａｂ８．８）−ａＳｕ−ＩＬ−１５（図２Ｂ）；抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（図２Ｃ）；および抗マウスＰＤ−１−ＩＬ−１５  ＮＱ（図２Ｄ）が含まれる。
【図３Ａ】図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃは、フローサイトメトリー分析によりｐＳＴＡＴ５に対して陽性としても染色された所与のアッセイにおいてＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）のいずれかである細胞のパーセンテージをプロットすることによって、レポーターアッセイにおける非標的化ＩＬ−１５、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（野生型ＩＬ−１５）、およびｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱバリアントの比較を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃは、フローサイトメトリー分析によりｐＳＴＡＴ５に対して陽性としても染色された所与のアッセイにおいてＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）のいずれかである細胞のパーセンテージをプロットすることによって、レポーターアッセイにおける非標的化ＩＬ−１５、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（野生型ＩＬ−１５）、およびｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱバリアントの比較を示す。
【図３Ｃ】図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃは、フローサイトメトリー分析によりｐＳＴＡＴ５に対して陽性としても染色された所与のアッセイにおいてＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）のいずれかである細胞のパーセンテージをプロットすることによって、レポーターアッセイにおける非標的化ＩＬ−１５、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５（野生型ＩＬ−１５）、およびｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱバリアントの比較を示す。
【図４Ａ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｂ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｃ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｄ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｅ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｆ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｇ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図４Ｈ】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、および４Ｈは、様々な突然変異タンパク質（突然変異体またはバリアントは交換可能に使用される）のプロットを示し、これらの全てはｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に基づく。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ａ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｂ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｃ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｄ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｅ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｆ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図５Ｇ】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、および５Ｇは、様々な突然変異タンパク質のプロットを示し、これらの全てはＩＬ−１５ＲａＳｕドメインを欠き、ＩＬ−１５Ｒａへの結合を低減させるかまたは断ち切る突然変異を含有する。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ａ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｂ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｃ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｄ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｅ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｆ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図６Ｇ】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、および６Ｇは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ａ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｂ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｃ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｄ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｅ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｆ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｇ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図７Ｈ】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、および７Ｈは、ＩＬ−１５野生型と比較して変化した活性（ｐＳＴＡＴ５活性化）を有する様々な突然変異タンパク質のプロットを示す。アッセイした特定の分子を各プロットに示す。
【図８Ａ】図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、および８Ｄは、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスの生存率および体重に対する効果を示す。より具体的には、図８Ａは、矢印で示した日（ｄ０、４、７）に２、１、または０．２ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｂは、これらの同じ動物の全生存率を示す。図８Ｃは、０、３、および６日目に１、０．８、または０．５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｄは、０、３、および６日目に３、２、または１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱを投与した動物についての体重の変化を示す。
【図８Ｂ】図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、および８Ｄは、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスの生存率および体重に対する効果を示す。より具体的には、図８Ａは、矢印で示した日（ｄ０、４、７）に２、１、または０．２ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｂは、これらの同じ動物の全生存率を示す。図８Ｃは、０、３、および６日目に１、０．８、または０．５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｄは、０、３、および６日目に３、２、または１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱを投与した動物についての体重の変化を示す。
【図８Ｃ】図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、および８Ｄは、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスの生存率および体重に対する効果を示す。より具体的には、図８Ａは、矢印で示した日（ｄ０、４、７）に２、１、または０．２ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｂは、これらの同じ動物の全生存率を示す。図８Ｃは、０、３、および６日目に１、０．８、または０．５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｄは、０、３、および６日目に３、２、または１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱを投与した動物についての体重の変化を示す。
【図８Ｄ】図８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、および８Ｄは、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスの生存率および体重に対する効果を示す。より具体的には、図８Ａは、矢印で示した日（ｄ０、４、７）に２、１、または０．２ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｂは、これらの同じ動物の全生存率を示す。図８Ｃは、０、３、および６日目に１、０．８、または０．５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を投与した動物についての体重の変化を示す。図８Ｄは、０、３、および６日目に３、２、または１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱを投与した動物についての体重の変化を示す。
【図９Ａ】図９Ａおよび９Ｂは、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋細胞またはＮＫ細胞としてゲートされ、ＰＤ−１＋としてスコア化された脾細胞または腫瘍浸潤リンパ球のパーセンテージをプロットしている（図９Ａ）；図９Ｂは、実際の平均蛍光強度としてプロットされた同じ試験を示す。
【図９Ｂ】図９Ａおよび９Ｂは、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋細胞またはＮＫ細胞としてゲートされ、ＰＤ−１＋としてスコア化された脾細胞または腫瘍浸潤リンパ球のパーセンテージをプロットしている（図９Ａ）；図９Ｂは、実際の平均蛍光強度としてプロットされた同じ試験を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、５、３、１、もしくは０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、または０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５により処置したマウスを用い、対照（ＰＢＳ処置）群と比較した、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。より具体的には、図１０Ａでは、原発腫瘍体積を全ての群についてプロットしている。図１０Ｂでは、試験群における動物の全生存率をプロットしている。図１０Ｃでは、体重変化（試験開始体重に対する）を各群についてプロットしている。
【図１０Ｂ】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、５、３、１、もしくは０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、または０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５により処置したマウスを用い、対照（ＰＢＳ処置）群と比較した、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。より具体的には、図１０Ａでは、原発腫瘍体積を全ての群についてプロットしている。図１０Ｂでは、試験群における動物の全生存率をプロットしている。図１０Ｃでは、体重変化（試験開始体重に対する）を各群についてプロットしている。
【図１０Ｃ】図１０Ａ、１０Ｂ、および１０Ｃは、５、３、１、もしくは０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、または０．３ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５により処置したマウスを用い、対照（ＰＢＳ処置）群と比較した、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。より具体的には、図１０Ａでは、原発腫瘍体積を全ての群についてプロットしている。図１０Ｂでは、試験群における動物の全生存率をプロットしている。図１０Ｃでは、体重変化（試験開始体重に対する）を各群についてプロットしている。
【図１１Ａ】図１１Ａおよび１１Ｂは、各々１または０．３ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ−１抗体、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、またはアイソタイプ対照（Ａｂ８．８）−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｂ】図１１Ａおよび１１Ｂは、各々１または０．３ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ−１抗体、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、またはアイソタイプ対照（Ａｂ８．８）−ＩＬ１５  ＮＱのいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｃ】図１１Ｃ、１１Ｄ、１１Ｅおよび１１Ｆは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれか（それぞれ図１Ｄおよび１Ｃに示されている）により処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｄ】図１１Ｃ、１１Ｄ、１１Ｅおよび１１Ｆは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれか（それぞれ図１Ｄおよび１Ｃに示されている）により処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｅ】図１１Ｃ、１１Ｄ、１１Ｅおよび１１Ｆは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれか（それぞれ図１Ｄおよび１Ｃに示されている）により処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｆ】図１１Ｃ、１１Ｄ、１１Ｅおよび１１Ｆは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれか（それぞれ図１Ｄおよび１Ｃに示されている）により処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｇ】図１１Ｇおよび１１Ｈは、各々１ｍｇ／ｋｇにて、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｈ】図１１Ｇおよび１１Ｈは、各々１ｍｇ／ｋｇにて、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ１６Ｆ１０腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｉ】図１１Ｉ、１１Ｊ、１１Ｋおよび１１Ｌは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＣ３８腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｊ】図１１Ｉ、１１Ｊ、１１Ｋおよび１１Ｌは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＣ３８腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｋ】図１１Ｉ、１１Ｊ、１１Ｋおよび１１Ｌは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＣ３８腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１１Ｌ】図１１Ｉ、１１Ｊ、１１Ｋおよび１１Ｌは、各々０．１、０．３、１または５ｍｇ／ｋｇのいずれかにて、抗ＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１またはＭ２のいずれかにより処置したマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＣ３８腫瘍有効性試験からのデータを示す。図１１Ａ、１１Ｃ、１１Ｅ、１１Ｇ、１１Ｉおよび１１Ｋは、各群についての原発腫瘍塊の体積を経時的にプロットしており、Ｘ軸の下の矢印は投与スケジュールを示している。図１１Ｂ、１１Ｄ、１１Ｆ、１１Ｈ、１１Ｊおよび１１Ｌは、各群について、ベースライン（投与開始時、ｄ＝０）からの体重の平均変化をプロットしている。
【図１２Ａ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ＩＬ−１５薬物投与に起因する脾臓およびＴＩＬリンパ球の変化を分析するための実験からの結果を示す。図１２Ａは、抗ヒトＦｃを介した、上述の分子により処置した動物由来の細胞における抗ＰＤ−１、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ、またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの検出を示す。上段：示したように、ＴＩＬ  ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。下段：示したように、脾臓ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。図１２Ｂは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、脾臓Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｃは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、ＴＩＬ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｄは、図１２Ｂおよび１２Ｃから算出した脾臓および腫瘍由来のＣＤ８  Ｔ細胞対ＣＤ４  Ｔ細胞の比をプロットしている。
【図１２Ｂ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ＩＬ−１５薬物投与に起因する脾臓およびＴＩＬリンパ球の変化を分析するための実験からの結果を示す。図１２Ａは、抗ヒトＦｃを介した、上述の分子により処置した動物由来の細胞における抗ＰＤ−１、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ、またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの検出を示す。上段：示したように、ＴＩＬ  ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。下段：示したように、脾臓ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。図１２Ｂは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、脾臓Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｃは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、ＴＩＬ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｄは、図１２Ｂおよび１２Ｃから算出した脾臓および腫瘍由来のＣＤ８  Ｔ細胞対ＣＤ４  Ｔ細胞の比をプロットしている。
【図１２Ｃ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ＩＬ−１５薬物投与に起因する脾臓およびＴＩＬリンパ球の変化を分析するための実験からの結果を示す。図１２Ａは、抗ヒトＦｃを介した、上述の分子により処置した動物由来の細胞における抗ＰＤ−１、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ、またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの検出を示す。上段：示したように、ＴＩＬ  ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。下段：示したように、脾臓ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。図１２Ｂは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、脾臓Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｃは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、ＴＩＬ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｄは、図１２Ｂおよび１２Ｃから算出した脾臓および腫瘍由来のＣＤ８  Ｔ細胞対ＣＤ４  Ｔ細胞の比をプロットしている。
【図１２Ｄ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ＩＬ−１５薬物投与に起因する脾臓およびＴＩＬリンパ球の変化を分析するための実験からの結果を示す。図１２Ａは、抗ヒトＦｃを介した、上述の分子により処置した動物由来の細胞における抗ＰＤ−１、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ、またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの検出を示す。上段：示したように、ＴＩＬ  ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。下段：示したように、脾臓ＣＤ８＋（左）またはＣＤ４＋（右）細胞からのヒストグラム。図１２Ｂは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、脾臓Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｃは、示した化合物の３回の投与の１日後にサンプリングした動物由来の、示したように、ＴＩＬ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、およびＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１２Ｄは、図１２Ｂおよび１２Ｃから算出した脾臓および腫瘍由来のＣＤ８  Ｔ細胞対ＣＤ４  Ｔ細胞の比をプロットしている。
【図１３Ａ】図１３Ａおよび１３Ｂは、６日目における末梢血または腫瘍浸潤リンパ球中のＮＫ、ＣＤ８＋  ＴおよびＴｒｅｇ細胞の絶対数を示し、それぞれｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１およびｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ｍ２によって最大効果を有することを示した。
【図１３Ｂ】図１３Ａおよび１３Ｂは、６日目における末梢血または腫瘍浸潤リンパ球中のＮＫ、ＣＤ８＋  ＴおよびＴｒｅｇ細胞の絶対数を示し、それぞれｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１およびｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ｍ２によって最大効果を有することを示した。
【図１３Ｃ】図１３Ｃおよび１３Ｄは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍有効性モデルに対する、ＣＤ８  ＴおよびＮＫ１．１＋細胞を枯渇させることのそれぞれの効果を示す。試験の間のマウスの処置レジメンおよび平均体重も示す。
【図１３Ｄ】図１３Ｃおよび１３Ｄは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍有効性モデルに対する、ＣＤ８  ＴおよびＮＫ１．１＋細胞を枯渇させることのそれぞれの効果を示す。試験の間のマウスの処置レジメンおよび平均体重も示す。
【図１３Ｅ】図１３Ｅは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍有効性モデルに対する、Ｔ細胞放出を阻害する、ＦＴＹ４２０処置の効果を示す。試験の間のマウスの処置レジメンおよび平均体重も示す。
【図１４Ａ】図１４Ａおよび図１４Ｂは、ＩＬ−１５含有化合物を与えられたマウスからのｉｎ  ｖｉｖｏでのサイトカイン産生に対する効果を示す。図１４Ａは、示したＩＬ−１５化合物の単回投与の６、２４、４８、７２、９６、および１２０時間後の平均ＩＦＮｇレベル（ｎ＝３の動物）を示す。図１４Ｂは、示したＩＬ−１５化合物の単回投与の６、２４、４８、７２、９６、および１２０時間後の平均ＩＬ−６レベル（ｎ＝３の動物）を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび図１４Ｂは、ＩＬ−１５含有化合物を与えられたマウスからのｉｎ  ｖｉｖｏでのサイトカイン産生に対する効果を示す。図１４Ａは、示したＩＬ−１５化合物の単回投与の６、２４、４８、７２、９６、および１２０時間後の平均ＩＦＮｇレベル（ｎ＝３の動物）を示す。図１４Ｂは、示したＩＬ−１５化合物の単回投与の６、２４、４８、７２、９６、および１２０時間後の平均ＩＬ−６レベル（ｎ＝３の動物）を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１５Ｂ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１５Ｃ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１５Ｄ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１５Ｅ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１５Ｆ】図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１５Ｄ、１５Ｅおよび１５Ｆは、ヒト末梢血単核細胞に対する標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５  Ｍ１もしくはＭ２または非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子を添加する効果を示し、それらは、それぞれ、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリーＴ細胞に対して異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。
【図１６Ａ】図１６Ａ、１６Ｂおよび１６Ｃは、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質と組み合わせたＰＤ−１標的化ＩＬ−１５分子（ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１）のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性試験を示す。図１６Ａは、０．３ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｂは、１ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｃは、試験全体を通した各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。
【図１６Ｂ】図１６Ａ、１６Ｂおよび１６Ｃは、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質と組み合わせたＰＤ−１標的化ＩＬ−１５分子（ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１）のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性試験を示す。図１６Ａは、０．３ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｂは、１ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｃは、試験全体を通した各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。
【図１６Ｃ】図１６Ａ、１６Ｂおよび１６Ｃは、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質と組み合わせたＰＤ−１標的化ＩＬ−１５分子（ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１）のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性試験を示す。図１６Ａは、０．３ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｂは、１ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１および５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ  １０）の抗腫瘍有効性を示す。図１６Ｃは、試験全体を通した各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本明細書に開示されている本発明は、ヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントおよびそれらを含む融合タンパク質に関する。本発明のＩＬ−１５バリアントは、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体アルファ（ＣＤ２１５）への結合が減少しているかまたはそれと結合せず、ＩＬ−１５と、ＩＬ−２受容体ベータ（ＣＤ１２２）および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）から構成される、そのシグナル伝達受容体との相互作用が低減していることが実証される。本発明の第２の側面では、抗体融合キメラタンパク質として提示される場合、これらの親和性が低減したＩＬ−１５バリアントは、所望の細胞型（抗体標的を発現するそれらの細胞）に選択的に標的化される。ＩＬ−１５受容体複合体を発現するが、抗体標的を発現しない細胞型は、両方の成分を発現するそれらの細胞と比較して、ほとんど活性化されないか、または活性化されない。さらに、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞よりもヒト末梢ＣＤ８  Ｔ細胞において下流のバイオマーカーｐＳＴＡＴ５を優先的に活性化し、ヒトＣＤ８腫瘍浸潤Ｔリンパ球（ＴＩＬ）の強力かつ優先的な活性化を有することも実証される。したがって、本発明のＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、抗腫瘍活性などの生物活性を効果的かつ安全に促進するために細胞サブセットの活性化を選択的にモジュレートする。本発明の第３の側面では、これらの親和性が低減したＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、分泌型または膜係留型のいずれかとして、ＣＡＲ  Ｔ細胞においてポリヌクレオチドとして発現される場合、活性および増殖を含むＣＡＲ  Ｔ機能を増強するために使用される。
一般的技術
本発明の実施は、別段の指示がない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術を利用し、これらは当業者の技術の範囲内である。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）、Ｊ．ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献に十分に説明されている。
定義
以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである：「単離された分子」という用語は、その起源または誘導の供給源によって分子（ここで、分子は、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である）を指す場合、（１）そのネイティブ状態でそれに伴う天然付随成分が付随しない、（２）同じ供給源、例えば、種、それが発現される細胞、ライブラリーなどからの他の分子を実質的に含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、または（４）天然に存在しない。したがって、化学的に合成された、またはそれが天然に起源する系とは異なる細胞系において発現される分子は、その天然付随成分から「単離される」。分子はまた、当該分野で周知の精製技術を使用する単離によって、天然付随成分を実質的に含まなくされ得る。分子の純度または均一性は、当該分野で周知のいくつかの手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチド試料の純度は、当該分野で周知の技術を使用してポリペプチドを可視化するために、ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルの染色を使用してアッセイされ得る。特定の目的のために、より高い分解能が、ＨＰＬＣまたは精製のための当該分野で周知の他の手段を使用することによって提供され得る。
【００３９】
本明細書で使用されている場合、「ＩＬ−１５」という用語は、ＩＬ−１５の活性の少なくとも一部を保持するＩＬ−１５およびそのバリアントの任意の形態を指す。別に示されない限り、例えばヒトＩＬ−１５に対する特定の参照により、ＩＬ−１５は、ネイティブ配列ＩＬ−１５の全ての哺乳動物種、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシを含む。１つの例示的な野生型ヒトＩＬ−１５は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ４０９３３（配列番号５）として見出される。
【００４０】
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸の鎖を指すために、本明細書で相互交換可能に使用される。この鎖は、直鎖でも分岐鎖でもよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、および／または非アミノ酸によって中断されてもよい。これらの用語はまた、天然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸鎖；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは修飾、例えば、標識化成分とのコンジュゲーションも包含する。例えば、アミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ならびに当該分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドもまた、この定義に含まれる。ポリペプチドは、単一の鎖として、または会合した鎖として存在し得ることが理解される。
【００４１】
「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどに特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用されている場合、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけではなく、他に特定しない限り、特異的結合についてインタクトな抗体と競合するその任意の抗原結合部分、抗原結合部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成もまた包含する。抗原結合部分には、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ、例えば、サメおよびラクダ科抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む断片、単鎖可変断片抗体（ｓｃＦｖ）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ｖ−ＮＡＲおよびｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ならびにポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが含まれる。抗体には、任意のクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）の抗体が含まれ、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラスに割当てられ得る。５つの主要なクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２へとさらに分割され得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は周知である。
【００４２】
抗体の「可変領域」とは、単独または組合せのいずれかでの、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。当該分野で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。特に、ＣＤＲ領域の外側（すなわち、フレームワーク領域中）のアミノ酸残基において置換を有する、対象可変領域のバリアントが所望される場合、適切なアミノ酸置換、好ましくは、保存的アミノ酸置換は、対象可変領域を、その対象可変領域と同じカノニカルクラスのＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を含有する他の抗体の可変領域と比較することによって同定され得る（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６（４）：９０１〜９１７ページ、１９８７）。
【００４３】
ある特定の態様では、ＣＤＲの明確な描写および抗体の結合部位を含む残基の同定は、抗体の構造を解析することおよび／または抗体−リガンド複合体の構造を解析することによって達成される。ある特定の態様では、それは、当業者に公知の種々の技術のいずれか、例えば、Ｘ線結晶解析によって達成され得る。ある特定の態様では、分析の種々の方法が、ＣＤＲ領域を同定または近似するために利用され得る。ある特定の態様では、分析の種々の方法が、ＣＤＲ領域を同定または近似するために利用され得る。このような方法の例には、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、接触定義、およびコンフォメーション定義が含まれるがこれらに限定されない。
【００４４】
Ｋａｂａｔ定義は、抗体中の残基を番号付けするための標準であり、典型的には、ＣＤＲ領域を同定するために使用される。例えば、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、２０００、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２８：２１４〜８ページを参照のこと。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、Ｋａｂａｔ定義と類似しているが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、特定の構造的ループ領域の位置を考慮に入れる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜１７ページ；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８３ページを参照のこと。ＡｂＭ定義は、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐによって作成されたコンピュータープログラムの一体的スイートを使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎら、１９８９、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ）、８６：９２６８〜９２７２ページ；「ＡｂＭＴＭ，Ａ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照のこと。ＡｂＭ定義は、ＰＲＯＴＥＩＮＳ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｕｐｐｌ．、３：１９４〜１９８ページ中でＳａｍｕｄｒａｌａら、１９９９、「Ａｂ  Ｉｎｉｔｉｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」によって記載されているものなどの、知識データベースおよびａｂ  ｉｎｉｔｉｏ法の組合せを使用して、一次配列から抗体の三次構造をモデル化する。接触定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、５：７３２〜４５ページを参照のこと。ＣＤＲの「コンフォメーション定義」と本明細書で称される別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として同定され得る。例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６ページを参照のこと。なお他のＣＤＲ境界定義は、上記アプローチのうちの１つに厳格に従わない場合があるにもかかわらず、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するが、それらは、特定の残基または残基の群が抗原結合に顕著に影響しないという予測または実験的知見の観点から短縮または延長することもできる。本明細書で使用されている場合、ＣＤＲは、アプローチの組合せを含む、当該分野で公知の任意のアプローチによって定義されたＣＤＲを指し得る。本明細書で使用されている方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用し得る。１つよりも多いＣＤＲを含有する任意の所与の態様について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張型、ＡｂＭ、接触、および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従って定義され得る。
【００４５】
当該分野で公知のように、抗体の「定常領域」とは、単独または組合せのいずれかでの、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
本明細書で使用されている場合、「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から取得される抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対するものである。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。修飾語「モノクローナル」は、抗体の特徴を、抗体の実質的に均一な集団から取得されるものとして示し、任意の特定の方法による抗体の産生を要求すると解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５ページによって最初に記載されているハイブリドーマ法によって作製され得るか、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているような組換えＤＮＡ法によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４ページに記載されている技術を使用して生成されたファージライブラリーから単離され得る。本明細書で使用されている場合、「ヒト化」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合性サブ配列）である非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲ（ドナー抗体）由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも見出されないが、抗体の性能をさらに精緻化および最適化するために含まれる残基を含み得る。
【００４６】
「ヒト抗体」は、本明細書で開示されているように、ヒトによって産生された抗体および／またはヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。
【００４７】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図する。
【００４８】
当該分野で公知のように、「ポリヌクレオチド」または「核酸」とは、本明細書で相互交換可能に使用されている場合、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらのアナログ、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによって鎖中に取り込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾されたヌクレオチド、例えば、メチル化されたヌクレオチドおよびそれらのアナログを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、鎖のアセンブリの前または後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、標識化成分とのコンジュゲーションによって、重合後にさらに修飾され得る。他の型の修飾には、例えば、「キャップ」、アナログによる、１つまたは複数の天然に存在するヌクレオチドの置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電連結（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄａｔｅ）、カルバメートなど）および荷電連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）によるものなど、ペンダント部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなど）などを含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）によるもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｍｅｔａｌ）など）を含有するもの、アルキル化薬を含有するもの、修飾された連結によるもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、ならびに未修飾の形態のポリヌクレオチドが含まれる。さらに、糖中に通常存在するヒドロキシル基のいずれかは、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置き換えられ得、標準的な保護基によって保護され得るか、もしくはさらなるヌクレオチドへのさらなる連結を準備するために活性化され得るか、または固体支持体にコンジュゲートされ得る。５’および３’末端のＯＨは、リン酸化され得るか、または１〜２０個の炭素原子のアミンもしくは有機キャップ基部分で置換され得る。他のヒドロキシルはまた、標準的な保護基へと誘導体化され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖アナログ、アルファ−またはベータ−アノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログおよび脱塩基ヌクレオシドアナログ、例えば、メチルリボシドを含む、当該分野で一般に公知の類似の形態のリボースまたはデオキシリボース糖もまた含有し得る。１つまたは複数のホスホジエステル連結は、代替的連結基によって置き換えられ得る。これらの代替的連結基には、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃ���ｔａｌ）」）によって置き換えられた態様が含まれるがこれらに限定されず、式中、各ＲまたはＲ’は独立して、Ｈ、またはエーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルもしくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を任意選択で含有する置換もしくは未置換のアルキル（１〜２０Ｃ）である。ポリヌクレオチド中の全ての連結が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含む、本明細書で言及されている全てのポリヌクレオチドに当てはまる。
【００４９】
エピトープに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で相互交換可能に使用されている）抗体は、当該分野で十分理解される用語であり、このような特異的または優先的結合を決定するための方法もまた、当該分野で周知である。分子は、それが代替的な細胞または物質と反応または会合する場合よりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより大きい親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体は、それが他の物質に結合する場合よりも、より大きい親和性、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、標的（例えば、ＰＤ−１）エピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、それが他の標的エピトープまたは非標的エピトープに結合する場合よりも、より大きい親和性、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間で、このエピトープに結合する抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいこともまた理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を必ずしも必要としない（それを含み得るが）。一般に、必ずではないが、結合に対する言及は、優先的結合を意味する。
【００５０】
本明細書で使用されている場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋、より好ましくは、少なくとも９５％純粋、なおより好ましくは、少なくとも９８％純粋、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である材料を指す。
【００５１】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物の取り込みのためのベクターのレシピエントであり得るまたはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、この子孫は、天然の、偶発的な、または計画的な突然変異に起因して、元の親細胞に対して（形態学的にまたはゲノムＤＮＡ補完的に）必ずしも完全に同一でない場合がある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【００５２】
当該分野で公知のように、「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位におけるアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０位におけるアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔと同様ＥＵインデックスのものである。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。当該分野で公知のように、Ｆｃ領域は、ダイマーまたはモノマー形態で存在し得る。
【００５３】
当該分野で使用されている場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載している。好ましいＦｃＲはネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライシングされた形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、その細胞質ドメインにおいて主に異なる同様のアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、１９９１、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７〜９２ページ；Ｃａｐｅｌら、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４ページ；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、１９９５、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０〜４１ページに概説されている。「ＦｃＲ」はまた、母体ＩｇＧの胎児への転移に関与する新生児受容体、ＦｃＲｎを含む（Ｇｕｙｅｒら、１９７６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７ページ；およびＫｉｍら、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９ページ）。
【００５４】
「競合する」という用語は、抗体に関して本明細書で使用されている場合、第１の抗体のその同族エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下での第１の抗体の結合と比較して、第２の抗体の存在下で検出可能に減少されるように、第１の抗体、またはその抗原結合部分が、第２の抗体、またはその抗原結合部分の結合と十分に類似した様式でエピトープに結合することを意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合もまた、第１の抗体の存在下で検出可能に減少される別の可能性もあり得るが、必ずしも当てはまらない。すなわち、第１の抗体は、第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害できるが、第２の抗体は、第１の抗体のそのそれぞれのエピトープへの結合を阻害しない。しかしながら、各々の抗体が、同じ程度までであれ、より高い程度までであれ、またはより低い程度までであれ、他方の抗体のその同族エピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、これらの抗体は、それらのそれぞれのエピトープの結合について互いと「交差競合する」と言われる。競合性抗体および交差競合性抗体は共に、本発明によって包含される。このような競合または交差競合が生じる機構（例えば、立体障害、コンフォメーション変化、または共通のエピトープ、もしくはその部分への結合）にかかわらず、当業者は、本明細書で提供されている教示に基づいて、このような競合性抗体および／または交差競合性抗体が包含され、本明細書で開示されている方法にとって有用であり得ることを理解する。
【００５５】
「機能的Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節などが含まれる。このようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当該分野で公知の種々のアッセイを使用して評価され得る。
【００５６】
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によってネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むが、ネイティブ配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能をなおも保持する。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域において約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
【００５７】
本明細書で使用されている場合、「処置」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、以下のうちの１つまたは複数が含まれるがこれらに限定されない：新生物性もしくはがん性細胞の増殖を低減させること（または新生物性もしくはがん性細胞を破壊すること）、新生物性細胞の転移を阻害すること、腫瘍のサイズを収縮もしくは減少させること、がんの寛解、がんから生じる症状を減少させること、がんに罹患している人の生活の質を増加させること、がんを処置するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、がんの進行を遅延させること、がんを治癒すること、および／またはがんを有する患者の生存を延長させること。
【００５８】
「改善する」は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を投与しないことと比較した１つまたは複数の症状の緩和または好転を意味する。「改善する」はまた、症状の持続時間における短縮または低減も含む。
【００５９】
本明細書で使用されている場合、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効投薬量」または「有効量」は、任意の１つまたは複数の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。より具体的な側面では、有効量は、処置されている対象の疾患の症状を予防、軽減もしくは改善する、および／または処置されている対象の生存を延長する。予防的用途について、有益なまたは所望の結果には、疾患の発達の間に存在する、疾患、その合併症および中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／または挙動的症状を含む、疾患のリスクを排除もしくは低減させること、疾患の重症度を軽減すること、または疾患の発症を遅延させることが含まれる。治療的用途について、有益なまたは所望の結果には、例えば、限定されないが、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、小腸がん、肉腫、頭頸部がん、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、甲状腺がん、肺がん、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛腫、大腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、膠芽腫、脳腫瘍、骨がん、眼がん、および黒色腫、多発性骨髄腫、悪性形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーラー病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ  ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｅｎｅｍｉａ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ  ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症を伴うびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病で発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、および他の造血細胞関連がんを含む、例えば、固形がんおよび液体がんなどの疾患の１つまたは複数の症状を低減させること、疾患を処置するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を増強すること、ならびに／または患者におけるがんの進行を遅延させることなどの臨床結果が含まれる。有効投薬量は、１回または複数の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、直接的または間接的のいずれかで予防的処置または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的文脈において理解されるように、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、１つまたは複数の治療剤を投与するという観点から検討され得、単一の薬剤は、１つまたは複数の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るかまたは達成される場合、有効量で与えられたとみなされ得る。
【００６０】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくはヒトである。また、哺乳動物には、限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリなど）、競技用動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが含まれる。
【００６１】
本明細書で使用されている場合、「ベクター」は、宿主細胞において１つまたは複数の目的の遺伝子または配列を送達し、好ましくはそれらを発現させることができる構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と会合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、ならびに特定の真核生物細胞、例えば産生細胞が含まれるがこれらに限定されない。
【００６２】
本明細書で使用されている場合、「発現制御配列」は、核酸の転写を指示する核酸配列を意味する。発現制御配列は、プロモーター、例えば、構成的もしくは誘導性プロモーター、またはエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結される。
【００６３】
本明細書で使用されている場合、「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」は、活性成分と組み合わせた場合に、その成分が生物学的活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である、任意の材料を含む。例には、標準的な薬学的担体のいずれか、例えば、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水エマルジョン、および種々の型の湿潤剤が含まれるがこれらに限定されない。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）または生理（０．９％）食塩水である。このような担体を含む組成物は、周知の従来法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照のこと）。
【００６４】
「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、限定されないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、Ｆｃ受容体結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ファゴサイトーシス、Ｃ１ｑ結合、および細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御が含まれる。例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照のこと。このようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、このような抗体エフェクター機能を評価するための当該分野で公知の種々のアッセイを使用して評価され得る。エフェクター機能の例示的な測定法は、Ｆｃγ３および／またはＣ１ｑ結合によるものである。
【００６５】
本明細書で使用されている場合、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、次いで標的細胞の溶解を生じさせる、細胞媒介性の反応を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または米国特許第５，８２１，３３７号において記載されているものなどの、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣアッセイを使用して評価され得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２〜６５６ページにおいて開示されているものなどの動物モデルにおいて評価され得る。
【００６６】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、同族抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）への、補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３ページ（１９９６）に記載されているようなＣＤＣアッセイが実施され得る。
【００６７】
「ｋｏｎ」または「ｋａ」という用語は、本明細書で使用されている場合、抗原への抗体の会合についての速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎまたはｋａおよびｋｏｆｆまたはｋｄ）および平衡解離定数は、抗体全体（すなわち、二価）およびモノマータンパク質を使用して測定される。
【００６８】
「ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」という用語は、本明細書で使用されている場合、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての速度定数を指す。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用されている場合、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指す。
【００６９】
本明細書での「約」値またはパラメーターに対する言及は、その値またはパラメーター自体に関する態様を含む（および記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。数的範囲は、その範囲を規定する数字を含む。一般に言って、「約」という用語は、変数の示された値、および示された値の実験誤差内（例えば、平均についての９５％信頼区間内）または示された値の１０パーセント以内のいずれか大きい方の、変数の全ての値を指す。「約」という用語が、期間（年、月、週、日など）の文脈内で使用される場合、「約」という用語は、その期間に、次の下位の期間の量を１つ分加えたもしくは引いた期間を意味し（例えば、約１年は、１１〜１３カ月を意味し；約６カ月は、６カ月プラスもしくはマイナス１週間を意味し；約１週間は、６〜８日間を意味する；など）、または示された値の１０パーセント以内のいずれか大きい方を意味する。
【００７０】
「免疫エフェクター細胞エンハンサー」または「ＩＥＣエンハンサー」という用語は、哺乳動物の免疫エフェクター細胞の１種または複数の型の数、品質、または機能を増加または増強することができる物質を指す。免疫エフェクター細胞の例には、細胞溶解性ＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＢ細胞が含まれる。
【００７１】
「免疫モジュレーター」という用語は、宿主哺乳動物の自然、液性または細胞性免疫系のいずれかの成分の免疫応答（本明細書で記載されているような）または働きを変更（例えば、阻害、減少、増加、増強、または刺激）することができる物質を指す。したがって、「免疫モジュレーター」という用語は、本明細書に定義されている「免疫エフェクター細胞エンハンサー」および本明細書に定義されている「免疫抑制性細胞阻害剤」、ならびに哺乳動物の免疫系の他の成分に影響を与える物質を包含する。
【００７２】
「免疫応答」という用語は、自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナル伝達カスケードの活性化）、細胞媒介性免疫応答（例えば、抗原特異的Ｔ細胞などのＴ細胞、および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）、および液性免疫応答（例えば、抗体の生成ならびに血漿、リンパ液および／または組織液への分泌などの、Ｂ細胞によって媒介される応答）などの、宿主哺乳動物の免疫系による特定の物質（抗原または免疫原など）に対するいずれかの検出可能な応答を指す。
【００７３】
「免疫原性」という用語は、単独であれ担体に連結された場合であれ、アジュバントの存在または非存在下での、特定の抗原に対する、免疫応答を引き起こす、誘発する、刺激する、もしくは誘導する、または既存の免疫応答を好転する、増強する、増加する、もしくは延長する物質の能力を指す。
【００７４】
「免疫抑制性細胞阻害剤」または「ＩＳＣ阻害剤」という用語は、哺乳動物の免疫抑制性細胞の数または機能を低減または抑制することができる物質を指す。免疫抑制性細胞の例には、調節性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）、骨髄系由来サプレッサー細胞、および腫瘍関連マクロファージが含まれる。
【００７５】
「皮内投与」または「皮内投与される」という用語は、ヒトを含む哺乳動物に物質を投与する文脈では、哺乳動物の皮膚の真皮層中への物質の送達を指す。哺乳動物の皮膚は、表皮層、真皮層、および皮下層から構成される。表皮は皮膚の外層である。皮膚の中間層である真皮は、神経終末、汗腺および油（皮脂）腺、毛包、ならびに血管を含有する。皮下層は、より大きい血管および神経を収容する脂肪および結合組織から構成される。皮内投与とは対照的に、「皮下投与」とは、皮下層中への物質の投与を指し、「局所投与」とは、皮膚の表面上への物質の投与を指す。
【００７６】
「新生物性障害」という用語は、細胞が、異常に高い制御されない速度で増殖し、この速度が、周囲の正常組織の速度を超え、その速度と協調されない、状態を指す。これは通常、「腫瘍」として公知の固形の病変または塊を生じる。この用語は、良性および悪性の新生物性障害を包含する。「悪性新生物性障害」という用語は、本開示で「がん」という用語と相互交換可能に使用され、身体中の他の位置に腫瘍細胞が広がる能力（「転移」として公知）を特徴とする新生物性障害を指す。「良性新生物性障害」という用語は、腫瘍細胞が転移する能力を欠く新生物性障害を指す。
【００７７】
「予防すること」または「予防する」という用語は、（ａ）障害が発生しないようにすること、または（ｂ）障害の発症もしくは障害の症状の発症を遅延させることを指す。
「腫瘍関連抗原」または「ＴＡＡ」という用語は、腫瘍細胞によって特異的に発現される、または同じ組織型の非腫瘍細胞によって発現される頻度もしくは密度よりも、腫瘍細胞によってより高い頻度もしくは密度で発現される、抗原を指す。腫瘍関連抗原は、宿主によって通常は発現されない抗原であり得る；これらは、宿主によって通常発現される分子の、突然変異した、トランケートされた、ミスフォールディングした、もしくは他の形で異常な顕在化であり得る；これらは、通常発現されるが異常に高いレベルで発現される分子と同一であり得る；またはこれらは、異常である状況もしくは環境において発現され得る。腫瘍関連抗原は、例えば、タンパク質もしくはタンパク質断片、複雑な炭水化物、ガングリオシド、ハプテン、核酸、またはこれらもしくは他の生体分子の任意の組合せであり得る。
【００７８】
「ワクチン」という用語は、哺乳動物における特定の抗原に対する免疫応答を誘発するための、哺乳動物への投与のための免疫原性組成物を指す。ワクチンは典型的に、疾患を引き起こす微生物または腫瘍細胞などの免疫応答の標的に類似するか、または由来する薬剤（「抗原」または「免疫原」として知られている）を含有する。がんなどの腫瘍の処置を意図するワクチンは典型的に、標的腫瘍上に見出されるＴＡＡに由来し、標的腫瘍上のＴＡＡに対する免疫原性を誘発することができる抗原を含有する。
【００７９】
態様が「含む」という言葉を用いて本明細書に記載されている場合には、「〜からなる」および／または「〜から本質的になる」の用語で記載されている他の点では類似の態様もまた提供されることが理解される。
【００８０】
本発明の側面または態様が、マーカッシュ群または選択肢の他のグループ分けの観点から記載されている場合、本発明は、全体として列挙された群全体だけでなく、その群の各メンバーを個々に、および主群の全ての可能な下位群、群メンバーのうちの１つまたは複数が存在しない主群もまた包含する。本発明はまた、特許請求された発明中の群メンバーのいずれかのうちの１つまたは複数の明示的な排除も想定する。
【００８１】
特に定義しない限り、本明細書で使用されている全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。本明細書および特許請求の範囲を通じて、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」またはバリエーション、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられた整数または整数の群を含むが、任意の他の整数または整数の群を排除しないことを意味すると理解される。文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。用語「例えば（ｅ．ｇ．）」または「例えば（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」の後の任意の例は、徹底的でも限定的でもない意味である。
【００８２】
例示的な方法および材料が本明細書に記載されているが、本明細書に記載されている方法および材料と類似または等価な方法および材料もまた、本発明の実施または試験において使用され得る。材料、方法および例は、例示に過ぎず、限定を意図しない。
ＩＬ−１５バリアント
実施例の段落下の表１〜２に例示されているように、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体アルファ（ＣＤ２１５）への結合が減少しているかもしくはそれと結合せず、ならびに／またはＩＬ−１５と、ＩＬ−２受容体ベータ（ＣＤ１２２）および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）から構成される、そのシグナル伝達受容体との相互作用が低減しているＩＬ−１５バリアント（例えば、ヒトＩＬ−１５バリアント）が本明細書に提供される。
【００８３】
一つの側面では、本発明は、配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含み、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）およびヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合せず、Ｖ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されている、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを提供する。
【００８４】
ＩＬ−１５バリアントのグリコシル化は典型的にＮ−結合型またはＯ−結合型のいずれかである。Ｎ−結合型とは、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への付着を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−トレオニン、およびアスパラギン−Ｘ−システイン（ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的付着のための認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ−結合型グリコシル化とは、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた、使用され得る。
【００８５】
したがって、一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントはＶ４９Ｎにおけるアミノ酸置換を含み、Ｖ４９Ｎはグリコシル化されている。一部の態様では、配列番号１のＥ５３および／またはＥ８９におけるアミノ酸置換もまた、グリコシル化されている。
【００８６】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｃ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｄ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｅ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｆ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｇ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｈ）Ｎ１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｉ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｊ）Ｓ７、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｋ）Ｋ１０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｌ）Ｋ１１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｍ）Ｓ２９、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｎ）Ｖ３１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｏ）Ｈ３２、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｐ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｑ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｒ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ｓ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１；ｔ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｕ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｖ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｗ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｘ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｙ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｚ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ａａ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｂｂ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｃｃ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ならびにｄｄ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１からなる群から選択される位置において配列番号１のアミノ酸置換を含む。
【００８７】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、Ｖ４９ＱもしくはＶ４９Ｒ；ｂ）Ｉ５０ＡもしくはＩ５０Ｇ；ｃ）Ｓ５１Ｔ；ｄ）Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｇ、Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、もしくはＮ１Ｄ；ｅ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；ｆ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｇ）Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｈ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｋ）Ｅ５３Ｎ；ｌ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｍ）Ｅ８９Ｎ；ｎ）Ｌ９１ＳもしくはＬ９１Ｔ；ｏ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｐ）Ｓ２９Ｎ；ｑ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｒ）Ｈ３２Ｇ；ｓ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｔ）Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｃ）Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｄ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｅ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｆ）Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ならびにｇ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む。
【００８８】
別の側面では、配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と結合せず、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−２受容体ベータ／ガンマ（ＩＬ−２Ｒβγ）への結合が減少している、単離されたヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントが提供される。
【００８９】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｂ）Ｎ４、Ｅ４６、およびＶ４９；ｃ）Ｓ７、Ｅ４６、およびＶ４９；ｄ）Ｋ１０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｅ）Ｋ１１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｆ）Ｓ２９、Ｅ４６、およびＶ４９；ｇ）Ｖ３１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｈ）Ｈ３２、Ｅ４６、およびＶ４９；ｉ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｊ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ６８；ｋ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＬ６９；ｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ１１１；ｍ）Ｎ４、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｏ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｐ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｑ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｒ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｓ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｔ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｕ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｖ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｗ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｘ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｙ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８；ｚ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＬ６９；ａａ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ１１１；ｂｂ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｃｃ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｄｄ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｅｅ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｆｆ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｇｇ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｈｈ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｉｉ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ６９およびＭ１０９；ｊｊ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｍ１０９、およびＩ１１１；ｋｋ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｌｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｍｍ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｎｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｏｏ）Ｄ２２、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ８９、およびＥ９３；ならびにｐｐ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４からなる群から選択される位置において配列番号１におけるアミノ酸置換を含む。
【００９０】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、Ｎ１Ｄ、もしくはＮ１Ｇ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；ｃ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｄ）Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｅ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｆ）Ｄ２２Ｎ；ｇ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｈ）Ｓ２９Ｎ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｋ）Ｈ３２Ｇ；ｌ）Ｅ４６ＧもしくはＥ４６Ｑ；ｍ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、もしくはＶ４９Ｒ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、もしくはＶ４９Ｑ；ｎ）Ｅ５３Ｑ；ｏ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｐ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｑ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｒ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｓ）Ｅ８９Ｑ；ｔ）Ｅ９３Ｑ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｓ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｃ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｄ）Ｓ７Ｔ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｅ）Ｖ３１Ｓ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｆ）Ｖ３１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｇ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｈ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｊ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｋ）Ｎ１Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｌ）Ｎ１Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｍ）Ｎ４Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｎ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｏ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｐ）Ｓ７Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｑ）Ｓ７Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｒ）Ｓ７Ｔ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｓ）Ｋ１０Ｄ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｔ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ａ；ｕ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｖ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｗ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｘ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｋ；ｙ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｚ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ａａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｂｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｃｃ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｄｄ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、およびＩ６８Ｓ；ｅｅ）Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ならびにｆｆ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む。
【００９１】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、配列番号８４または８５のアミノ酸配列を含む。
別の側面では、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換を含む単離されたヒトＩＬ−１５バリアントであって、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドまたは野生型ＩＬ−１５受容体アルファ−ＩＬ−１５融合ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）および／またはヒトＩＬ−２受容体ベータ（ＩＬ−２Ｒβ）および／またはＩＬ−２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合しない、単離されたヒトＩＬ−１５バリアントが提供される。例えば、特定の置換には、限定されないが、Ｎ１Ｋ、Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｑ、Ｓ７Ｔ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１１Ｓ、Ｄ２２Ｎ、Ｙ２６Ｆ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ３１Ｓ、Ｈ３２Ｇ、Ｍ１０９Ａ、および／またはＩ１１１Ａが含まれ得る。
【００９２】
一部の態様では、単離されたヒトＩＬ−１５バリアントは、Ｄ２２Ｎ、Ｙ２６Ｆ、Ｅ４６Ｑ、Ｅ５３Ｑ、Ｅ８９Ｑ、およびＥ９３Ｑ位（例えば、配列番号７６を参照のこと）においてアミノ酸置換を含み、ＩＬ−１５バリアントが、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ヒトＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）および／またはヒトＩＬ−２受容体ベータ（ＩＬ−２Ｒβ）および／またはＩＬ−２受容体ガンマ（ＩＬ−２Ｒγ）への結合が減少しているかまたはそれらと結合しない。
【００９３】
別の側面では、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む単離されたヒトＩＬ−１５バリアントが提供される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは膜貫通ドメインをさらに含む。
ＩＬ−１５融合タンパク質
ＩＬ−１５受容体アルファ（ＣＤ２１５）への結合が減少しているかまたはそれと結合せず、ＩＬ−１５と、ＩＬ−２受容体ベータ（ＣＤ１２２）および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）から構成される、そのシグナル伝達受容体との相互作用が低減している、ＩＬ−１５融合タンパク質（例えば、抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質）が本明細書において提供される。このようなＩＬ−１５融合タンパク質は、末梢曝露（例えば、主要な作用部位であるＮＫ細胞）を最低限にし、したがって毒性を最低限にしながら、所望の細胞型にサイトカインを送達することができる。さらに、本発明のＩＬ−１５融合タンパク質は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞よりもヒト末梢ＣＤ８  Ｔ細胞において下流のバイオマーカーｐＳＴＡＴ５を優先的に活性化し、ヒトＣＤ８腫瘍浸潤Ｔリンパ球（ＴＩＬ）の強力かつ優先的な活性化を有する。したがって、一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、抗原特異的腫瘍常在ＣＤ８＋細胞に対するマーカーとして作用するＰＤ−１抗体に結合することができ、それによって抗腫瘍効力を最大化し、末梢免疫細胞サブセットへの曝露を最小化する。
【００９４】
一つの側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；およびｂ）ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合している、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントのいずれか１つを含む単離された融合タンパク質が提供される。
【００９５】
一部の態様では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のａ）Ｖ４９およびＩ５１位またはｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１位においてアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、配列番号１のＶ４９位におけるアミノ酸置換がグリコシル化されており、配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｌ９１、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含み、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが、野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントはＶ４９Ｎにおいてアミノ酸置換を含み、Ｖ４９Ｎがグリコシル化されている。一部の態様では、配列番号１のＥ５３および／またはＥ８９におけるアミノ酸置換もまた、グリコシル化されている。
【００９６】
一部の態様では、ＩＬ−１５融合タンパク質は、Ｆｃドメインを含む抗体を含み、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｂ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｃ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｄ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｅ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｆ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｍ１０９；ｇ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｈ）Ｎ１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｉ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｊ）Ｓ７、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｋ）Ｋ１０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｌ）Ｋ１１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｍ）Ｓ２９、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｎ）Ｖ３１、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｏ）Ｈ３２、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｐ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｑ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｒ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ｓ）Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１；ｔ）Ｎ４、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｕ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｖ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｗ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｘ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｙ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ｚ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、およびＳ５１；ａａ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＥ６４；ｂｂ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ６８；ｃｃ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＬ６９；ならびにｄｄ）Ｄ３０、Ｖ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、およびＩ１１１からなる群から選択される位置において配列番号１のアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、Ｖ４９ＱもしくはＶ４９Ｒ；ｂ）Ｉ５０ＡもしくはＩ５０Ｇ；ｃ）Ｓ５１Ｔ；ｄ）Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｇ、Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、もしくはＮ１Ｄ；ｅ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｗ、Ｎ４Ｔ、もしくはＮ４Ｑ；ｆ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｇ）Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｈ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｋ）Ｅ５３Ｎ；ｌ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｍ）Ｅ８９Ｎ；ｎ）Ｌ９１ＳもしくはＬ９１Ｔ；ｏ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｐ）Ｓ２９Ｎ；ｑ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｒ）Ｈ３２Ｇ；ｓ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｔ）Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。
【００９７】
一部の態様では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）抗体のＦｃドメインと共有結合しているＩＬ−１５バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが、ａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｃ）Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｄ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ｅ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、およびＳ５１Ｔ；ｆ）Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑ；ならびにｇ）Ｎ４Ｑ、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、単離された融合タンパク質が提供される。
【００９８】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のＥ４６およびＶ４９位におけるアミノ酸置換、ならびに配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ５３、Ｇ５５、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９および／またはＩ１１１位における少なくとも１つまたは複数のアミノ酸置換を含むヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）バリアントを含む、単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが、野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。
【００９９】
一部の態様では、ＩＬ−１５融合タンパク質は、Ｆｃドメインを含む抗体を含み、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｂ）Ｎ４、Ｅ４６、およびＶ４９；ｃ）Ｓ７、Ｅ４６、およびＶ４９；ｄ）Ｋ１０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｅ）Ｋ１１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｆ）Ｓ２９、Ｅ４６、およびＶ４９；ｇ）Ｖ３１、Ｅ４６、およびＶ４９；ｈ）Ｈ３２、Ｅ４６、およびＶ４９；ｉ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｊ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ６８；ｋ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＬ６９；ｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、およびＩ１１１；ｍ）Ｎ４、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４；ｏ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｐ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｑ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｒ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｓ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｔ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｕ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｖ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｗ）Ｓ２９、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９；ｘ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４；ｙ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８；ｚ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＬ６９；ａａ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９Ｒ、およびＩ１１１；ｂｂ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｃｃ）Ｎ４、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｄｄ）Ｓ７、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｅｅ）Ｋ１０、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｆｆ）Ｋ１１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＭ１０９；ｇｇ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｈｈ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｉｉ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ６９およびＭ１０９；ｊｊ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｍ１０９、およびＩ１１１；ｋｋ）Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｌｌ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、およびＩ６８；ｍｍ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、およびＭ１０９；ｎｎ）Ｅ４６、Ｖ４９、Ｄ３０、Ｅ６４、Ｉ６８、およびＭ１０９；ｏｏ）Ｄ２２、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ８９、およびＥ９３；ならびにｐｐ）Ｎ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４からなる群から選択される位置において配列番号１のアミノ酸置換を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントは、ａ）Ｎ１Ｑ、Ｎ１Ｋ、Ｎ１Ｒ、Ｎ１Ｅ、Ｎ１Ａ、Ｎ１Ｄ、もしくはＮ１Ｇ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｎ４Ｇ、Ｎ４Ａ、Ｎ４Ｓ、Ｎ４Ｄ、Ｎ４Ｅ、Ｎ４Ｌ、Ｎ４Ｉ、Ｎ４Ｒ、Ｎ４Ｔ、Ｎ４Ｗ、もしくはＮ４Ｑ；ｃ）Ｓ７Ｅ、Ｓ７Ｇ、Ｓ７Ｄ、Ｓ７Ｋ、Ｓ７Ｎ、Ｓ７Ｒ、Ｓ７Ｈ、もしくはＳ７Ｔ；ｄ）Ｋ１０Ｄ、Ｋ１０Ａ、Ｋ１０Ｓ、Ｋ１０Ｅ、Ｋ１０Ｌ、Ｋ１０Ｍ、Ｋ１０Ｄ、もしくはＫ１０Ｇ；ｅ）Ｋ１１Ｄ、Ｋ１１Ｓ、もしくはＫ１１Ｗ；ｆ）Ｄ２２Ｎ；ｇ）Ｙ２６Ｋ、Ｙ２６Ｒ、もしくはＹ２６Ｈ；ｈ）Ｓ２９Ｎ；ｉ）Ｄ３０Ｎ；ｊ）Ｖ３１Ｓ、Ｖ３１Ｄ、もしくはＶ３１Ｋ；ｋ）Ｈ３２Ｇ；ｌ）Ｅ４６ＧもしくはＥ４６Ｑ；ｍ）Ｖ４９Ｎ、Ｖ４９Ｋ、もしくはＶ４９Ｒ、Ｖ４９Ｅ、Ｖ４９Ｈ、もしくはＶ４９Ｑ；ｎ）Ｅ５３Ｑ；ｏ）Ｇ５５ＳもしくはＧ５５Ｔ；ｐ）Ｅ６４Ｑ、Ｅ６４Ｋ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ｎ、Ｅ６４Ｈ、Ｅ６４Ｔ、もしくはＥ６４Ｒ；ｑ）Ｉ６８Ｓ、Ｉ６８Ａ、Ｉ６８Ｒ、Ｉ６８Ｔ、Ｉ６８Ｋ、Ｉ６８Ｎ、Ｉ６８Ｍ、Ｉ６８Ｆ、Ｉ６８Ｙ、Ｉ６８Ｅ、もしくはＩ６８Ｈ；ｒ）Ｌ６９Ｓ、Ｌ６９Ａ、Ｌ６９Ｄ、Ｌ６９Ｔ、Ｌ６９Ｍ、Ｌ６９Ｇ、Ｌ６９Ｑ、Ｌ６９Ｉ、Ｌ６９Ｅ、もしくはＬ６９Ｖ；ｓ）Ｅ８９Ｑ；ｔ）Ｅ９３Ｑ；ｕ）Ｍ１０９Ａ、Ｍ１０９Ｓ、Ｍ１０９Ｄ、もしくはＭ１０９Ｋ；および／またはｖ）Ｉ１１１Ａ、Ｉ１１１Ｋ、Ｉ１１１Ｓ、もしくはＩ１１１Ｄにおいて１つまたは複数の特定の置換を含むアミノ酸置換を含む。
【０１００】
一部の態様では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）抗体のＦｃドメインと共有結合しているＩＬ−１５バリアントを含む単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが、ａ）Ｎ１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｂ）Ｎ４Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｃ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｄ）Ｓ７Ｔ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｅ）Ｖ３１Ｓ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｆ）Ｖ３１Ｋ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｇ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｈ）Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｉ）Ｎ４Ｑ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｊ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｋ）Ｎ１Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｌ）Ｎ１Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｍ）Ｎ４Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｎ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｏ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｐ）Ｓ７Ｅ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｑ）Ｓ７Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｒ）Ｓ７Ｔ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｓ）Ｋ１０Ｄ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ｔ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ａ；ｕ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｖ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｗ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｘ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｋ；ｙ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ｚ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｋ；ａａ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｂｂ）Ｎ４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ；ｃｃ）Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＩ６８Ｓ；ｄｄ）Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、およびＩ６８Ｓ；ｅｅ）Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ；ならびにｆｆ）Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑからなる群から選択される位置においてアミノ酸置換を含む、単離された融合タンパク質が提供される。
【０１０１】
一部の態様では、単離された融合タンパク質は、配列番号８６、８７、８９、または９０のアミノ酸配列を含む。
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含む抗体；ならびにｂ）配列番号１のＮ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｄ２２、Ｙ２６、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｅ４６、Ｅ５３、Ｅ６４、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｅ８９、Ｅ９３、Ｍ１０９、および／またはＩ１１１位において１つまたは複数のアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含む、単離された融合タンパク質であって、ＩＬ−１５バリアントが、抗体のＦｃドメインと共有結合し、Ｆｃドメインが、野生型Ｆｃと比較して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が減少しているかまたは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有さない、単離された融合タンパク質が提供される。一部の態様では、ヒトＩＬ−１５バリアントは、Ｄ２２Ｎ、Ｙ２６Ｆ、Ｅ４６Ｑ、Ｅ５３Ｑ、Ｅ８９Ｑ、およびＥ９３Ｑ位（例えば、配列番号７６を参照のこと）においてアミノ酸置換を含み、抗体は抗ＰＤ−１抗体である。
【０１０２】
別の側面では、１）Ｆｃドメインを含むＩＬ−１５抗体；ならびにｂ）配列番号１のヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）タンパク質を含む、単離された融合タンパク質であって、ＩＬ１５が抗体のＦｃドメインと共有結合している、単離された融合タンパク質が提供される。
【０１０３】
一部の態様では、１つまたは複数のポリペプチド（例えば、異種または相同配列）が、抗体と、本明細書に記載されているＩＬ−１５融合タンパク質のＩＬ−１５バリアントとの間に挿入され得る。一部の態様では、ポリペプチドは、抗体のアミノ末端、カルボキシル末端、またはアミノ末端およびカルボキシル末端の両方において挿入またはコンジュゲートされ得る。一部の態様では、ポリペプチドは、図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄに示されるように、抗体およびＩＬ−１５バリアントをコンジュゲートするポリペプチドリンカーを含む。例えば、ポリペプチドリンカーは、配列番号６、２３、２４、２５、または７７に示されるグリシン−セリン（ＧＳ）−リンカーである。
【０１０４】
一部の態様では、ポリペプチドは１つまたは複数のリンカーおよびタグを含む。ポリペプチドタグの例には、限定されないが、ＦＬＡＧタグ、６Ｈｉｓタグ（すなわち、配列番号２７）、８Ｈｉｓタグ（すなわち、配列番号２６）、またはＡＶＩタグ（例えば、配列番号７）が含まれる。
【０１０５】
ポリペプチドリンカーおよびポリペプチドタグを有する例示的なヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）バリアントが以下に提供される。
ｈＩＬ−１５  Ｖ４９Ｒ−ＧＳ−リンカー−８ｘＨｉｓ−Ａｖｉタグ（配列番号９）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫ  ＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨ  ＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤ  ＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭ  ＫＣＦＬＬＥＬＱＲＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨ  ＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡ  ＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶ  ＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥ  ＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬ  ＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦ  ＩＮＴＧＧＧＧＳＧＨ  ＨＨＨＨＨＨＨＧＧＧ  ＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩ  ＥＷＨＥ
ｈＩＬ−１５  Ｖ４９Ｎ／Ｉ５０Ａ／Ｓ５１Ｔ−ＧＳ−リンカー−８ｘＨｉｓ−Ａｖｉタグ（配列番号１０）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫ  ＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨ  ＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤ  ＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭ  ＫＣＦＬＬＥＬＱＮＡＴＬＥＳＧＤＡＳＩＨ  ＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡ  ＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶ  ＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥ  ＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬ  ＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦ  ＩＮＴＧＧＧＧＳＧＨ  ＨＨＨＨＨＨＨＧＧＧ  ＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩ  ＥＷＨＥ
ｈＩＬ−１５  Ｖ４９Ｎ／Ｉ５０Ａ／Ｓ５１Ｔ／Ｎ７９Ｑ−ＧＳ−リンカー−８ｘＨｉｓ−Ａｖｉタグ（配列番号１１）
ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫ  ＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨ  ＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤ  ＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭ  ＫＣＦＬＬＥＬＱＮＡＴＬＥＳＧＤＡＳＩＨ  ＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡ  ＮＮＳＬＳＳＮＧＱＶ  ＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥ  ＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬ  ＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦ  ＩＮＴＧＧＧＧＳＧＨ  ＨＨＨＨＨＨＨＧＧＧ  ＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩ  ＥＷＨＥ
＊下線を引いた配列は、リンカー、８ＸＨｉｓ、およびＡＶＩタグを表し、太字はｈＩＬ−１５タンパク質配列上のアミノ酸突然変異を表す。
【０１０６】
本発明のＩＬ−１５融合タンパク質において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合により修飾された抗体を含む、必要とされる特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構造を包含し得る。抗体は、ネズミ、ラット、ヒト、または任意の他の起源（キメラまたはヒト化抗体を含む）であってもよい。
【０１０７】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４ΔｂＳ２２８Ｐ、およびＩｇＧ４ΔｃＳ２２８Ｐからなる群から選択されるアイソタイプを有する。
【０１０８】
一部の態様では、記載されているＩＬ−１５融合タンパク質の抗体はＦｃドメインを含む。一部の態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４であってもよい。
【０１０９】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒンジ領域における２２３、２２５、および２２８位（例えば、（Ｃ２２３ＥまたはＣ２２３Ｒ）、（Ｅ２２５Ｒ）、および（Ｐ２２８ＥまたはＰ２２８Ｒ））、ならびにヒトＩｇＧ２（配列番号３）のＣＨ３領域における４０９または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ）（ＥＵ番号付けスキーム））においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は二重特異性抗体である。
【０１１０】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒンジ領域における２２１および２２８位（例えば、（Ｄ２２１ＲまたはＤ２２１Ｅ）および（Ｐ２２８ＲまたはＰ２２８Ｅ））、ならびにヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における４０９または３６８位（例えば、Ｋ４０９ＲまたはＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付けスキーム））においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は二重特異性抗体である。
【０１１１】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ１（配列番号２）のＣＨ３領域における３４９、３５４、３６６、３６８、および／または４０７位（ＥＵ番号付けスキーム）においてアミノ酸修飾を含む。例えば、アミノ酸修飾は、Ｙ３４９Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、および／またはＹ４０７Ｖを含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は二重特異性抗体である。
【０１１２】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒンジ領域における２２８位（例えば、（Ｓ２２８Ｄ、Ｓ２２８Ｅ、Ｓ２２８Ｒ、またはＳ２２８Ｋ））、およびヒトＩｇＧ４（配列番号４）のＣＨ３領域における４０９または３６８位（例えば、Ｒ４０９Ｋ、Ｒ４０９、またはＬ３６８Ｅ（ＥＵ番号付けスキーム））においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は二重特異性抗体である。
【０１１３】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ２（配列番号３）の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）のうちの１つもしくは複数；またはヒトＩｇＧ１（配列番号２）の２３４、２３５、２３７、および／もしくは３２２位のうちの１つもしくは複数においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ２の２６５位（例えば、Ｄ２６５Ａ）、３３０位（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１位（例えば、Ｐ３３１Ｓ）の各々においてアミノ酸修飾を含む。
【０１１４】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ１（配列番号２）の２３４位（例えば、Ｌ２３４Ａ）、２３５位（例えば、Ｌ２３５Ａ）、および２３７位（例えば、Ｇ２３７Ａ）のうちの１つまたは複数においてアミノ酸修飾を含む。一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ１（配列番号２）の２３４位（例えば、Ｌ２３４Ａ）、２３５位（例えば、Ｌ２３５Ａ）、および２３７位（例えば、Ｇ２３７Ａ）の各々においてアミノ酸修飾を含む。例えば、本明細書に記載されている抗体は配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＩｇＧ４（配列番号４）のアミノ酸修飾Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５（ＩｇＧ４Δｃ）を含む。さらに別の態様では、アミノ酸修飾は、ヒトＩｇＧ４（配列番号４）の欠失Ｇ２３６（ＩｇＧ４Δｂ）を有するＥ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５である。
【０１１６】
本発明のために使用される例示的な抗体には、限定されないが、以下に記載される配列が含まれる。
【０１１７】
【表１】
2021516045.tif 000003
【０１１８】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、ヒトＦｃガンマ受容体に対して増加または減少した結合親和性を有し、免疫学的に不活性または部分的に不活性であり、例えば、補体媒介性溶解を誘発せず、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激せず、もしくはミクログリアを活性しない；または以下：補体媒介性溶解を誘発すること、ＡＤＣＣを刺激すること、もしくはミクログリアを活性化することのいずれか１つまたは複数において低減した活性（非修飾抗体と比較して）を有する修飾された定常領域を含む。定常領域の異なる修飾が、エフェクター機能の最適なレベルおよび／または組合せを達成するために使用され得る。例えば、Ｍｏｒｇａｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６：３１９〜３２４ページ、１９９５；Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３〜９ページ  １５７：４９６３〜４９６９ページ、１９９６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８〜４１８４ページ、２０００；Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１ページ、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６ページ、１９９８を参照のこと。一部の態様では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９９、２９：２６１３〜２６２４ページ；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９９／０５８５７２に記載されているように修飾される。
【０１１９】
一部の態様では、抗体定常領域は、Ｆｃガンマ受容体ならびに補体および免疫系との相互作用を回避するように修飾され得る。このような抗体を調製するための技術は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。例えば、定常領域は、抗体がヒトにおける臨床試験および処置において使用される場合、免疫応答を回避するために、ヒト定常領域により類似するように操作され得る。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および同第５，８６６，６９２号を参照のこと。
【０１２０】
さらに他の態様では、定常領域はＮ−結合型グリコシル化のためにアグリコシル化されている。一部の態様では、定常領域は、定常領域におけるＮ−グリコシル化認識配列の一部である、オリゴ糖付着残基および／または隣接残基を突然変異させることによって、Ｎ−結合型グリコシル化のためにアグリコシル化されている。例えば、Ｎ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、例えば、Ａ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異され得る。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１ページ、１９８９；およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６ページ、１９９８を参照のこと。一部の態様では、定常領域はＮ−結合型グリコシル化のためにアグリコシル化されている。定常領域は、Ｎ−結合型グリコシル化のために酵素的に（例えば、酵素ＰＮＧａｓｅによる炭水化物を除去すること）、またはグリコシル化欠損宿主細胞における発現によってアグリコシル化され得る。
【０１２１】
他の抗体修飾には、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように修飾された抗体が含まれる。これらの抗体は、標的分子に対する結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域の全てまたは一部と実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、顕著な補体依存性溶解、または標的の細胞媒介性破壊を誘発することなく、標的分子に結合することができる。一部の態様では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合することができる。これらは典型的に、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づく。このように修飾された抗体は、従来の抗体療法に対する炎症および他の有害反応を回避するために、長期抗体療法における使用に特に適している。
【０１２２】
一部の態様では、抗体は、非修飾抗体と比較して、ＦｃＲｎに対する結合親和性が増加し、および／または血清半減期が増加した修飾された定常領域を含む。
本発明のＩＬ−１５融合タンパク質に使用される抗体には、限定されないが、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ−７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ＫＬＲＧ１抗体、抗ＢＴＮ１Ａ１抗体、および抗ＧＩＴＲ抗体が含まれる。
【０１２３】
一部の態様では、ＩＬ−１５融合タンパク質における抗体はＰＤ−１抗体である。例えば、ＰＤ−１抗体は、（ｉ）配列番号１４、１５、８０、８１、もしくは９１のアミノ酸配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号１６、１７、８２、もしくは８３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号１８もしくは６２に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびに／または配列番号１９もしくは３１に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号２０もしくは３２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、ならびに配列番号２１もしくは３３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。一部の態様では、ＰＤ−１抗体は、配列番号１２、３４、７８、もしくは３６のアミノ酸配列を有するＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨ領域ならびに／または配列番号１３、３５、７９、もしくは３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０１２４】
例示的なＩＬ−１５融合タンパク質には、限定されないが、以下に記載される配列が含まれる。ＩＬ−１５バリアントは太字であり、リンカーは下線を引いている。
【０１２５】
【表２−１】
2021516045.tif 000004
【０１２６】
【表２−２】
2021516045.tif 000005
【０１２７】
【表２−３】
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【０１２８】
【表２−４】
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【０１２９】
【表２−５】
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【０１３０】
【表２−６】
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【０１３１】
【表２−７】
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【０１３２】
【表２−８】
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【０１３３】
【表２−９】
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【０１３４】
【表２−１０】
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【０１３５】
【表２−１１】
2021516045.tif 000014
【０１３６】
本明細書に記載されているＩＬ−１５融合タンパク質は、当該分野で公知の方法によって、例えば、合成的にまたは組換え的に作り出され得る。典型的に、本発明の融合タンパク質は、本明細書に記載されている組換え法を使用して、それらをコードするポリヌクレオチドを調製し、発現することによって作製されるが、それらはまた、例えば、化学合成を含む、当該分野で公知の他の手段によって調製され得る。
【０１３７】
本明細書に記載されている抗体はまた、当該分野で公知の任意の方法によって作製され得る。ハイブリドーマ細胞株の産生のために、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般的に、本明細書にさらに記載されているように、抗体刺激および産生のための確立された従来の技術と一致する。ヒトおよびマウス抗体の産生のための一般的な技術は当該分野で公知であり、および／または本明細書に記載されている。
【０１３８】
ヒトを含む任意の哺乳動物対象またはそれ由来の抗体産生細胞は、ヒトおよびハイブリドーマ細胞株を含む、哺乳動物の産生のための基礎として役立つように操作され得ることが企図される。典型的に、宿主動物は、本明細書に記載されているものを含む免疫原の量を腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、および／または皮内に接種される。
【０１３９】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７ページ、１９７５の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を使用して、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７〜３８１ページ、１９８２によって改変されているように、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製され得る。限定されないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡからのものを含む、利用可能な骨髄腫系が、ハイブリダイゼーションに使用され得る。一般的に、この技術は、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって、骨髄腫細胞およびリンパ球様細胞を融合することを含む。融合後、細胞を融合培地から分離し、ハイブリダイズしていない親細胞を取り除くために、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択増殖培地中で増殖させる。血清を補充したまたは補充していない本明細書に記載されている培地のいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用され得る。細胞融合技術の別の代替として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞が対象発明のモノクローナル抗体を産生するために使用され得る。ハイブリドーマを増殖させ、所望の場合、サブクローニングし、上清は、従来のイムノアッセイ手順（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性についてアッセイされる。
【０１４０】
抗体の供給源として使用され得るハイブリドーマは、モノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの全ての誘導体、子孫細胞を包含する。
本発明のために使用される抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させ得る。モノクローナル抗体は、所望の場合、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または体液から単離され得る。存在する場合、望ましくない活性は、例えば、調製物を、固相に付着した免疫原から作製された吸着剤上に流し、所望の抗体を免疫原から溶出または放出させることによって除去され得る。抗体標的（例えば、ＰＤ−１）、ヒト標的タンパク質（例えば、ＰＤ−１）を発現する細胞、または二機能性もしくは誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２もしくはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である）を使用して免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、もしくはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートされた標的アミノ酸配列を含有する断片による、宿主動物の免疫化は、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を生じ得る。
【０１４１】
所望の場合、目的の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）が配列決定され得、次いでポリヌクレオチド配列が発現または増殖のためにベクターにクローニングされ得る。目的の抗体をコードする配列は宿主細胞におけるベクター内で維持され得、次いで宿主細胞は将来の使用のために増殖および凍結され得る。細胞培養における組換えモノクローナル抗体の産生は、当該分野で公知の手段による、Ｂ細胞からの抗体遺伝子のクローニングを介して実施され得る。例えば、Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２９、１１２ページ、２００８；米国特許第７，３１４，６２２号を参照のこと。
【０１４２】
一部の態様では、抗体はハイブリドーマ技術を使用して作製され得る。ヒトを含む任意の哺乳動物対象またはそれら由来の抗体産生細胞は、ヒトを含む哺乳動物ハイブリドーマ細胞株の産生のための基礎として役立つように操作され得ることが企図される。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般的に、本明細書にさらに記載されているように、抗体刺激および産生のための確立された従来の技術と一致する。典型的に、宿主動物は、本明細書に記載されているものを含む、免疫原の量を腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、および／または皮内に接種される。
【０１４３】
一部の態様では、本明細書に記載されている抗体は、それらの定常領域中の保存された位置においてグリコシル化されている（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、１９９７、Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１〜１２８ページ；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、１９９７、ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６〜３２ページ）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Ｂｏｙｄら、１９９６、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１〜１３１８ページ；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ、１９９０、Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５〜４１８０ページ）ならびに糖タンパク質のコンフォメーションおよび提示される三次元表面に影響し得る糖タンパク質の部分間の分子内相互作用に影響する（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ、上記；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ、１９９６、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９〜４１６ページ）。オリゴ糖はまた、特異的認識構造に基づいて、特定の分子に所与の糖タンパク質を標的化するようにも機能し得る。抗体のグリコシル化はまた、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響することも報告されている。特に、二分岐性のＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼである、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）のテトラサイクリン調節される発現を有するＣＨＯ細胞によって産生される抗体は、改善されたＡＤＣＣ活性を有することが報告された（Ｕｍａｎａら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６〜１８０ページ）。
【０１４４】
抗体のグリコシル化は典型的にＮ−結合型またはＯ−結合型のいずれかである。Ｎ−結合型とは、炭水化物部分のアスパラギン残基の側鎖への付着を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン、アスパラギン−Ｘ−トレオニン、およびアスパラギン−Ｘ−システイン（ここで、Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素的付着のための認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ−結合型グリコシル化とは、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンもまた、使用され得る。
【０１４５】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、好都合には、アミノ酸配列を、それが上記のトリペプチド配列（Ｎ−結合型グリコシル化部位）のうちの１つまたは複数を含有するように変更することによって達成される。変更はまた、元の抗体の配列（Ｏ−結合型グリコシル化部位について）への１つまたは複数のセリン残基またはトレオニン残基の付加または置換によってもなされ得る。
【０１４６】
また、抗体のグリコシル化パターンは、基底にあるヌクレオチド配列を変更せずに変更され得る。グリコシル化は、抗体を発現させるために使用される宿主細胞に大きく依存する。潜在的な治療剤として組換え糖タンパク質、例えば抗体を発現させるために使用される細胞種は、ネイティブ細胞であることが稀であるため、抗体のグリコシル化パターンの変動が予測され得る（例えば、Ｈｓｅら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２〜９０７０ページを参照のこと）。
【０１４７】
宿主細胞の選択肢に加えて、抗体の組換え産生の間にグリコシル化に影響を与える要素には、増殖様式、培地配合、培養密度、酸素化、ｐＨ、精製スキームなどが含まれる。特定の宿主生物で達成されるグリコシル化パターンを変更するために、オリゴ糖の産生に関与する特定の酵素の導入または過剰発現を含めた、様々な方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号、同第５，５１０，２６１号および同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、または特定の種類のグリコシル化は、糖タンパク質から、例えば、エンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ）、Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３を使用して、酵素的に除去され得る。さらに、特定の種類の多糖のプロセシングが欠損しているように、組換え宿主細胞を遺伝子操作することができる。これらおよび類似の技術が当該分野で周知である。
【０１４８】
他の修飾方法には、限定されないが、酵素的手段、酸化的置換およびキレート化を含む、当該分野で公知のカップリング技術の使用が含まれる。修飾は、例えば、イムノアッセイ用の標識の付着に使用され得る。修飾されたポリペプチドは、当該分野で確立された手順を使用して作製され、当該分野で公知の標準的なアッセイを使用してスクリーニングされ得、それらの一部は以下および実施例に記載されている。
【０１４９】
本発明のＩＬ−１５融合タンパク質またはＩｌ−１５バリアントは、蛍光分子、放射性分子または当該分野で公知の任意の他の標識などの標識剤に連結され得る。一般的に（直接または間接のいずれかで）シグナルを提供する標識は当該分野で公知である。
ポリヌクレオチド、ベクター、および宿主細胞
本発明はまた、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。一つの側面では、本発明は、本明細書に記載されているポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法を提供する。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の手順によって作製および発現され得る。
【０１５０】
別の側面では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物（医薬組成物など）を提供する。一部の態様では、組成物は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
【０１５１】
別の側面では、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質を産生する単離された細胞株が提供される。一部の態様では、細胞株は操作された免疫細胞であり、操作された免疫細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、分泌型または膜係留型のいずれかとして、ＣＡＲ  Ｔ細胞においてポリヌクレオチドとして発現される場合、活性および増殖を含むＣＡＲ  Ｔ機能を増強するために使用される。一部の態様では、Ｉｌ−１５バリアントまたはそれを含むＩＬ−１５融合タンパク質は、Ｄ２２Ｎ、Ｙ２６Ｆ、Ｅ４６Ｑ、Ｅ５３Ｑ、Ｅ８９Ｑ、およびＥ９３Ｑの位置においてアミノ酸置換を含む（例えば、配列番号７６を参照のこと）。
【０１５２】
本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質を産生する免疫細胞は、ＣＡＲを免疫細胞に導入し、細胞を増殖させることによって作製され得る。例えば、免疫細胞は、細胞を準備し、細胞の表面において本明細書に記載されている少なくとも１つのＣＡＲおよび少なくとも１つのＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を発現することによって操作され得る。免疫細胞を操作するための方法は、例えば、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ／２０１４／０３９５２３、ＷＯ／２０１４／１８４７４１、ＷＯ／２０１４／１９１１２８、ＷＯ／２０１４／１８４７４４、およびＷＯ／２０１４／１８４１４３に記載されており、それらの各々は、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。一部の態様では、細胞は、ＣＡＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質をコードする１つのポリヌクレオチドにより形質転換され得、続いて、細胞中でポリヌクレオチドを発現し得る。
【０１５３】
任意のこのような配列に相補的なポリヌクレオチドもまた、本発明によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コードまたはアンチセンス）または二本鎖であってもよく、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子には、イントロンを含有し、一対一の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子が含まれる。さらなるコード配列または非コード配列が、本発明のポリヌクレオチド内に存在してもよいが存在する必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料に連結されてもよいが連結される必要はない。
【０１５４】
ポリヌクレオチドは、ネイティブ配列（すなわち、抗体またはその断片をコードする内因性配列）を含み得るか、またはそのような配列のバリアントを含み得る。コードされたポリペプチドの免疫反応性がネイティブ免疫反応性分子と比較して減少されないように、ポリヌクレオチドバリアントは、１つまたは複数の置換、付加、欠失および／または挿入を含有する。コードされたポリペプチドの免疫反応性に対する影響は、一般に、本明細書に記載されているように評価され得る。バリアントは、好ましくは、ネイティブ抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも約７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約８０％の同一性、なおより好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、最も好ましくは、少なくとも約９５％の同一性を示す。
【０１５５】
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、以下に記載されているように最大の対応を求めてアラインした場合に２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」は、本明細書で使用されている場合、少なくとも約２０連続する位置、通常は３０〜約７５または４０〜約５０連続する位置のセグメントを指し、そこで、配列が、２つの配列を最適にアラインした後に、同じ数の連続する位置の参照配列に対して比較され得る。
【０１５６】
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを使用して、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイート中のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラムを使用して実施され得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載されているいくつかのアラインメントスキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．５、補遺３、３４５〜３５８ページ；Ｈｅｉｎ  Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ６２６〜６４５ページ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１〜１５３ページ；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１〜１７ページ；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５ページ；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６〜４２５ページ；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６〜７３０ページ。
【０１５７】
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、２つの最適にアラインされた配列を、少なくとも２０個の位置の比較ウインドウにわたって比較することによって決定され、このとき、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常は５〜１５パーセントまたは１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一な核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得、一致した位置の数を参照配列中の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算し、結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。
【０１５８】
バリアントはまた、またはあるいは、ネイティブ遺伝子、またはその一部分もしくは相補体に対して実質的に相同であり得る。このようなポリヌクレオチドバリアントは、ネイティブ抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補的な配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる。
【０１５９】
適切な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中での事前洗浄；５０℃〜６５℃、５×ＳＳＣで一晩のハイブリダイゼーション；その後の、０．１％ＳＤＳを含有する２×、０．５×および０．２×のＳＳＣの各々で６５℃にて２０分間の洗浄２回を含む。
【０１６０】
本明細書で使用されている場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高いストリンジェンシーの条件」は、（１）洗浄のために、低いイオン強度および高い温度、例えば、５０℃にて、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを利用するもの；（２）ハイブリダイゼーションの間に、４２℃にて、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含むｐＨ６．５の０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液と共に、変性剤、例えば、ホルムアミド、例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを利用するもの；または（３）０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃および５０％ホルムアミド中５５℃での洗浄、その後の、５５℃でのＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高いストリンジェンシーの洗浄と共に、４２℃にて、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％デキストラン硫酸を利用するものである。当業者は、プローブ長さなどの因子に合わせるために必要に応じて、温度、イオン強度などを調整する方法を認識している。
【０１６１】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されているポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者によって理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意のネイティブ遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン用法における差異に起因して変動するポリヌクレオチドが、本発明によって具体的に企図される。さらに、本明細書で提供されているポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本発明の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つまたは複数の突然変異、例えば、欠失、付加および／または置換の結果として変更された内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有してもよいが、その必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較）を使用して同定され得る。
【０１６２】
本発明のポリヌクレオチドは、化学的合成、組換え方法またはＰＣＲを使用して得られ得る。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当該分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を産生するために、本明細書で提供されている配列および市販のＤＮＡ合成機を使用することができる。
【０１６３】
組換え方法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、本明細書でさらに議論されているように、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なベクター中に挿入され得、このベクターは次いで、複製および増幅のために適切な宿主細胞中に導入され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の手段によって、宿主細胞中に挿入され得る。細胞は、直接的取込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ接合（Ｆ−ｍａｔｉｎｇ）またはエレクトロポレーションによって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター（例えば、プラスミド）として細胞内に維持され得るか、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。そうして増幅されたポリヌクレオチドは、当該分野で周知の方法によって宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照のこと。
【０１６４】
あるいは、ＰＣＲが、ＤＮＡ配列の再生成を可能にする。ＰＣＲ技術は、当該分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
【０１６５】
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを適切な宿主細胞中に挿入することによって得られ得る。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡに転写されると、このＲＮＡは、次いで、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、ｓｕｐｒａ、において上記に示されているように、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。
【０１６６】
適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得るか、または当該分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に従って変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有し得、および／またはベクターを含有するクローンを選択する際に使用され得るマーカーについての遺伝子を有し得る。適切な例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８が含まれる。これらおよび多くの他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、ＳｔｒａｔｅｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの業者から入手可能である。
【０１６７】
発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般に、本発明に従うポリヌクレオチドを含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの統合された一部として、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが含意される。適切な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ出願公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示されている発現ベクターが含まれるがこれらに限定されない。ベクター成分には、一般に、以下のうちの１つまたは複数が含まれ得るがこれらに限定されない：シグナル配列；複製起点；１つまたは複数のマーカー遺伝子；適切な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーおよびテーミネーター）。発現（すなわち、翻訳）のために、１つまたは複数の翻訳制御エレメント、例えば、リボソーム結合部位、翻訳開始部位および終止コドンもまた、通常必要とされる。
【０１６８】
目的のポリヌクレオチドを含有するベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストランまたは他の物質を利用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）を含むいくつかの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞中に導入され得る。導入するベクターまたはポリヌクレオチドの選択は、宿主細胞の特徴に依存する場合が多い。
【０１６９】
本発明はまた、本明細書に記載されているポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞も提供する。異種ＤＮＡを過剰発現させることができる任意の宿主細胞が、目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的で使用され得る。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例には、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＣＨＯ細胞が含まれるがこれらに限定されない。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ８７／０４４６２もまた参照のこと。適切な非哺乳動物宿主細胞には、原核生物（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）または枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ））および酵母（例えば、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、分裂酵母（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）またはクリベロマイセス・ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ））が含まれる。好ましくは、宿主細胞は、存在する場合、宿主細胞中の目的の対応する内因性抗体またはタンパク質のｃＤＮＡよりも、約５倍高い、より好ましくは、１０倍高い、さらにより好ましくは、２０倍高いレベルで、ｃＤＮＡを発現する。ＩＬ−１５またはＩＬ−１５ドメインへの特異的結合についての宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣＳによってもたらされる。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞が同定され得る。
【０１７０】
発現ベクターが、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の発現を指示するために使用され得る。当業者は、ｉｎ  ｖｉｖｏで外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号；同第６，４１３，９４２号；および同第６，３７６，４７１号を参照のこと。発現ベクターの投与には、注射、経口投与、粒子銃またはカテーテル投与、および局所投与を含む、局所または全身投与が含まれる。別の態様ででは、発現ベクターは、交感神経幹もしくは神経節に、または冠状動脈、心房、心室もしくは心膜に直接投与される。
【０１７１】
発現ベクターまたはサブゲノムポリヌクレオチドを含有する治療的組成物の標的化された送達もまた、使用され得る。受容体媒介性ＤＮＡ送達技術は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１９９３、１１：２０２ページ；Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ、Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編、１９９４；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８８、２６３：６２１ページ；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４、２６９：５４２ページ；Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９０、８７：３６５５ページ；Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９１、２６６：３３８ページに記載されている。ポリヌクレオチドを含有する治療的組成物は、遺伝子治療プロトコールにおいて、局所投与のために、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇの範囲のＤＮＡで投与される。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇおよび約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲もまた、遺伝子治療プロトコールの間に使用され得る。治療的ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを使用して送達され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源のものであり得る（一般に、Ｊｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９４、１：５１ページ；Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９４、５：８４５ページ；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９９５、１：１８５ページ；およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１９９４、６：１４８ページを参照のこと）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物プロモーターまたは異種プロモーターを使用して誘導され得る。コード配列の発現は、構成的であり得るかまたは調節され得る。
【０１７２】
所望のポリヌクレオチドの送達および所望の細胞における発現のためのウイルスベースのベクターは、当該分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルには、限定されないが、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９０／０７９３６；ＷＯ９４／０３６２２；ＷＯ９３／２５６９８；ＷＯ９３／２５２３４；ＷＯ９３／１１２３０；ＷＯ９３／１０２１８；ＷＯ９１／０２８０５；米国特許第５，２１９，７４０号および同第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；および欧州特許第０３４５２４２号を参照のこと）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９；ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４およびＷＯ９５／００６５５）が含まれる。Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、１９９２、３：１４７ページに記載されている死滅したアデノウイルスと連結しているＤＮＡの投与もまた、利用され得る。
【０１７３】
限定されないが、死滅したアデノウイルスと連結しているか、または連結していない単独のポリカチオンの縮合ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、１９９２、３：１４７ページを参照のこと）；リガンド連結型ＤＮＡ（例えば、Ｗｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８９、２６４：１６９８５ページを参照のこと）；真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９５／０７９９４；ＷＯ９６／１７０７２；ＷＯ９５／３０７６３；およびＷＯ９７／４２３３８を参照のこと）ならびに核電荷中和（ｎｕｃｌｅｉｃ  ｃｈａｒｇｅ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）または細胞膜との融合を含む、非ウイルス送達ビヒクルおよび方法もまた、利用され得る。裸のＤＮＡもまた、利用され得る。例示的な裸のＤＮＡ導入法は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９０／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９５／１３７９６；ＷＯ９４／２３６９７；ＷＯ９１／１４４４５；およびＥＰ０５２４９６８に記載されている。さらなるアプローチは、Ｐｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１９９４、１４：２４１１ページ、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９４、９１：１５８１ページに記載されている。
組成物
本発明はまた、本明細書に記載されている有効量のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。このような組成物の例、および製剤化する方法もまた、本明細書に記載されている。一部の態様では、組成物は１つまたは複数のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含む。一部の態様では、組成物は、ＰＤ−１抗体を含むＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＶ４９、Ｉ５０、Ｓ５１、Ｎ４、Ｄ３０、およびＥ６４位（例えば、Ｖ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、およびＥ６４Ｑ）においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含み、ヒトＩＬ−１５バリアントは抗体のＦｃドメインと共有結合している。一部の態様では、組成物は、ＰＤ−１抗体を含むヒトＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＥ４６、Ｖ４９、Ｅ６４、Ｄ３０、およびＮ４位（例えば、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、およびＮ４Ｋ）においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含み、ＩＬ−１５バリアントは抗体のＦｃドメインと共有結合している。一部の態様では、組成物は、ＰＤ−１抗体を含むヒトＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＮ１、Ｄ３０、Ｅ４６、およびＶ４９位（例えば、Ｎ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ）においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含み、ＩＬ−１５バリアントは抗体のＦｃドメインと共有結合している。一部の態様では、組成物は、ＰＤ−１抗体を含むヒトＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＮ１、Ｄ３０、Ｅ４６、Ｖ４９、およびＥ６４位（例えば、Ｎ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ）においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含み、ＩＬ−１５バリアントは抗体のＦｃドメインと共有結合している。
【０１７４】
組成物は、１つより多いＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質（例えば、異なるＩＬ−１５バリアントおよび／または異なる抗体を含むＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合物の混合物）を含み得ることが理解される。例えば、組成物は、１）ＰＤ−１抗体を含むヒトＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＥ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、Ｅ６４Ｑ、Ｄ３０Ｎ、およびＮ４Ｋ位においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアント；ならびに２）ＰＤ−１抗体を含むＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＶ４９Ｎ、Ｉ５０Ａ、Ｓ５１Ｔ、Ｎ４Ｋ、Ｄ３０Ｎ、およびＥ６４Ｑ位においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含む。別の例では、組成物は、１）ＰＤ−１抗体を含むヒトＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＮ１Ａ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、およびＶ４９Ｒ位においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアント；ならびに２）ＰＤ−１抗体を含むＩＬ−１５融合タンパク質、ならびにＮ１Ｇ、Ｄ３０Ｎ、Ｅ４６Ｇ、Ｖ４９Ｒ、およびＥ６４Ｑ位においてアミノ酸置換を含むヒトＩＬ−１５バリアントを含む。
【０１７５】
本発明において使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含み得る。許容される担体、賦形剤または安定剤は、その投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム（ｏｃｔａｄｅｃｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｙｌ  ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン；グルコース、マンノースもしくはデキストランを含む、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。薬学的に許容される賦形剤はさらに本明細書に記載されている。
【０１７６】
ＩＬ−１５バリアント、ＩＬ−１５融合タンパク質、およびそれらの組成物はまた、薬剤の有効性を増強および／または補完するように機能する他の薬剤と併せて使用され得るか、またはそれと別々に、同時に、もしくは連続的に投与され得る。
【０１７７】
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む医薬組成物を含む組成物も提供する。一部の態様では、組成物は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。他の態様では、組成物は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む。
ＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質を使用して状態を予防または処置する方法
本発明のＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質は、限定されないが、治療的処置方法および診断的処置方法を含む種々の用途において有用である。
【０１７８】
一つの側面では、本発明は、がんを処置する方法を提供する。一部の態様では、対象におけるがんを処置する方法は、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントおよびＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物（例えば、医薬組成物）を、がんの処置を必要とする対象に投与するステップを含む。本明細書で使用されている場合、がんは固形がんであっても液体がんであってもよい。固形がんには、限定されないが、胃がん、小腸がん、肉腫、頭頸部がん（例えば、扁平上皮頭頸部がん）、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝がん、胆管がん、神経内分泌腫瘍、胃がん、甲状腺がん、肺がん、中皮腫、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、腎がん（例えば、腎細胞癌）、膀胱がん、子宮頸がん、子宮がん、外陰がん、陰茎がん、精巣がん、肛門がん、絨毛癌、大腸がん、口腔がん、皮膚がん、メルケル細胞癌、膠芽腫、脳腫瘍、骨がん、眼がん、および黒色腫が含まれる。
【０１７９】
液体がんには、限定されないが、多発性骨髄腫、悪性形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、カーラー病および骨髄腫症、形質細胞白血病、形質細胞腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ヘアリー細胞白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、縦隔（胸腺）原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、Ｔ細胞／組織球豊富型大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発性皮膚びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（脚型）、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、炎症を伴うびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病で発生する大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との間の中間的な特徴を有する分類されないＢ細胞リンパ腫、および他の造血細胞関連がんが含まれる。
【０１８０】
一部の態様では、がんは、再発性、難治性、または転移性である。
一部の態様では、対象における腫瘍成長または進行を阻害する方法であって、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含む有効量の組成物を、腫瘍成長または進行の阻害を必要とする対象に投与するステップを含む方法が提供される。一部の態様では、対象におけるがん細胞の転移を阻害する方法であって、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物を、がん細胞の転移の阻害を必要とする対象に投与するステップを含む方法が提供される。他の態様では、対象における腫瘍の退縮を誘導する方法であって、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかを含む有効量の組成物を、腫瘍の退縮の誘導を必要とする対象に投与するステップを含む方法が提供される。
【０１８１】
別の側面では、がんを検出し、診断し、および／またはモニタリングする方法が提供される。例えば、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、画像化剤および酵素−基質標識などの検出可能な部分により標識化され得る。本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質はまた、ｉｎ  ｖｉｖｏ画像化（例えば、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ）などのｉｎ  ｖｉｖｏ診断アッセイ、または染色試薬のために使用され得る。
【０１８２】
一部の態様では、本明細書に記載されている方法は、さらなる形態の治療により対象を処置するステップをさらに含む。一部の態様では、さらなる形態の治療は、限定されないが、化学療法、放射線、手術、ホルモン治療および／またはさらなる免疫療法を含むさらなる抗がん治療である。
【０１８３】
本明細書で記載されている全ての方法に関して、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質に対する言及はまた、１つまたは複数のさらなる薬剤を含む組成物も含む。これらの組成物は、当該分野で周知である、緩衝液を含む薬学的に許容される賦形剤などの適切な賦形剤をさらに含み得る。本発明は、単独で、または処置の他の方法と組み合わせて使用され得る。
【０１８４】
本明細書で記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、任意の適切な経路を介して対象に投与され得る。本明細書で記載されている例が、利用可能な技術の限定ではなく例示を意図することは、当業者に明らかなはずである。したがって、一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、公知の方法、例えば、静脈内投与に従って、例えば、ボーラスとして、または一定期間にわたる継続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、経皮、皮下、関節内、舌下、関節滑液嚢内、吹送を介する、くも膜下腔内、経口、吸入または外用経路によって、対象に投与される。投与は、全身、例えば静脈内投与、または限局性であり得る。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含む液体製剤のための市販のネブライザーが、投与に有用である。液体製剤は、直接噴霧され得、凍結乾燥粉末は、復元後に噴霧され得る。あるいは、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、フルオロカーボン製剤および定用量吸入器を使用してエアロゾル化され得るか、または凍結乾燥および製粉された粉末として吸入され得る。
【０１８５】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、部位特異的または標的化された局所送達技術を介して投与される。部位特異的または標的化された局所送達技術の例には、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の種々のインプラント可能なデポー供給源、あるいは局所送達カテーテル、例えば、注入カテーテル、留置カテーテルもしくは針カテーテル、合成グラフト、外膜ラップ（ａｄｖｅｎｔｉｔｉａｌ  ｗｒａｐ）、シャントおよびステントもしくは他のインプラント可能なデバイス、部位特異的担体、直接注射、または直接適用が含まれる。例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ００／５３２１１および米国特許第５，９８１，５６８号を参照のこと。
【０１８６】
ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の種々の製剤が投与に使用され得る。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、ストレートで投与され得る。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質および薬学的に許容される賦形剤は、種々の製剤中にあり得る。薬学的に許容される賦形剤は、当該分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する、比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは一貫性を与え得るか、または希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤には、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変動させるための塩、封入剤、緩衝液、ならびに皮膚浸透増強剤が含まれるがこれらに限定されない。非経口および経口（ｎｏｎｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）薬物送達のための賦形剤ならびに製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００に示されている。
【０１８７】
一部の態様では、これらの薬剤は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために製剤化される。したがって、これらの薬剤は、薬学的に許容されるビヒクル、例えば、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液などと組み合わされ得る。特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の病歴に依存する。
【０１８８】
本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）によるものを含む、任意の適切な方法を使用して投与され得る。ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質はまた、本明細書で記載されているように、外用でまたは吸入を介しても投与され得る。一般に、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の投与に関して、候補投薬量は、毎日、毎週、隔週、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、１０週間毎、１２週間毎、または１２週間より長い期間毎に投与され得る。数日以上にわたる反復投与に関して、状態に応じて、症状の所望の抑制が生じるまで、または例えば、がんに関連する症状を低減させるために十分な治療レベルが達成されるまで、処置は維持される。この治療の進展は従来の技術およびアッセイによって容易にモニターされる。投薬レジメン（使用される特定のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含む）は経時的に変動し得る。
【０１８９】
一部の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで３００μｇ／ｋｇまで３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上までのいずれかの範囲の投薬量で毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、および約２５ｍｇ／ｋｇの１日投薬量が使用され得る。
【０１９０】
一部の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで３００μｇ／ｋｇまで３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上までのいずれかの範囲の投薬量で毎週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの毎週の投薬量が使用され得る。
【０１９１】
一部の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで３００μｇ／ｋｇまで３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上までのいずれかの範囲の投薬量で隔週投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、および約３０ｍｇ／ｋｇの２週間に１回の投薬量が使用され得る。
【０１９２】
一部の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで３００μｇ／ｋｇまで３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上までのいずれかの範囲の投薬量で３週間毎に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの３週間に１回の投薬量が使用され得る。
【０１９３】
一部の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで３００μｇ／ｋｇまで３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまでまたはそれ以上までのいずれかの範囲の投薬量で毎月または４週間毎に投与される。例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、および約５０ｍｇ／ｋｇの毎月の投薬量が使用され得る。
【０１９４】
他の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約０．０１ｍｇから約１２００ｍｇまたはそれ以上までの範囲の投薬量で毎日投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、または約１２００ｍｇの１日投薬量が使用され得る。
【０１９５】
他の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約０．０１ｍｇから約２０００ｍｇまたはそれ以上までの範囲の投薬量で毎週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの毎週の投薬量が使用され得る。
【０１９６】
他の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約０．０１ｍｇから約２０００ｍｇまたはそれ以上までの範囲の投薬量で隔週投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、または約２０００ｍｇの２週間に１回の投薬量が使用され得る。
【０１９７】
他の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約０．０１ｍｇから約２５００ｍｇまたはそれ以上までの範囲の投薬量で３週間毎に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、または約２５００ｍｇの３週間に１回の投薬量が使用され得る。
【０１９８】
他の態様では、候補投薬量は、上述の因子に依存して、約０．０１ｍｇから約３０００ｍｇまたはそれ以上までの範囲の投薬量で４週間毎または毎月に投与される。例えば、約０．０１ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１ｍｇ、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、または約３０００ｍｇの毎月の投薬量が使用され得る。
【０１９９】
一部の態様では、本発明の治療薬は、約１μｇ／ｋｇから約６００μｇ／ｋｇもしくはそれ以上まで、約６μｇ／ｋｇから約６００μｇ／ｋｇまで、約６μｇ／ｋｇから約３００μｇ／ｋｇまで、約３０μｇ／ｋｇから約６００μｇ／ｋｇまで、または約３０μｇ／ｋｇから約３００μｇ／ｋｇまでの用量範囲で投与される。例えば、用量は、約１μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約３μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約６μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ、約８μｇ／ｋｇ、約９μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ、約４０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約５５μｇ／ｋｇ、約６０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ、約７０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約８０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ、約９０μｇ／ｋｇ、約９５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ、約１１０μｇ／ｋｇ、約１２０μｇ／ｋｇ、約１３０μｇ／ｋｇ、約１４０μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１６０μｇ／ｋｇ、約１７０μｇ／ｋｇ、約１８０μｇ／ｋｇ、約１９０μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２１０μｇ／ｋｇ、約２２０μｇ／ｋｇ、約２３０μｇ／ｋｇ、約２４０μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約２６０μｇ／ｋｇ、約２７０μｇ／ｋｇ、約２８０μｇ／ｋｇ、約２９０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇまたは約６００μｇ／ｋｇで投与され、使用され得る。
【０２００】
本発明の目的のために、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ１５融合タンパク質の適切な投薬量は、利用されるＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質（またはその組成物）、処置される症状の種類および重症度、薬剤が予防目的で投与されるかまたは治療目的で投与されるかどうか、以前の治療、患者の臨床歴および薬剤に対する応答、投与される薬剤についての患者のクリアランス速度、ならびに担当医の裁量に依存する。典型的に、臨床医は、所望の結果を達成する投薬量に達するまで、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を投与する。用量および／または頻度は、処置の過程にわたって変動し得る。経験的考慮事項、例えば半減期は一般に、投薬量の決定に寄与する。投与の頻度は、治療の過程にわたって決定および調整され得、必ずではないが一般に、症状の処置および／または抑制および／または改善および／または遅延に基づく。あるいは、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の継続的徐放性製剤が適切であり得る。徐放を達成するための種々の製剤およびデバイスは当該分野で公知である。
【０２０１】
一態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の投薬量は、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の１回または複数回の投与を与えられている個体において経験的に決定され得る。例えば、個体には、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の増分投薬量が与えられる。有効性を評価するために、疾患の指標に従われ得る。
【０２０２】
本発明における方法に従って本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の投与は、例えば、レシピエントの生理的状態、投与の目的が治療的であるかまたは予防的であるかどうか、および熟練した医師に公知の他の因子に応じて、連続的であっても断続的であってもよい。ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であり得るかまたは一連の間隔をあけた用量であり得る。
【０２０３】
一部の態様では、１つより多いＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質が存在し得る。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つの異なるまたはそれ以上のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質が存在し得る。一般に、これらのＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、互いに悪影響を与えない補体活性を有し得る。
【０２０４】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、１つまたは複数のさらなる治療剤の投与と組み合わせて投与され得る。これらには、限定されないが、バイオ治療剤、化学療法剤、ワクチン、ＣＡＲ−Ｔ細胞ベースの治療、放射線療法、別のサイトカイン療法（例えば、免疫応答を刺激する種々のシグナル伝達タンパク質を含む免疫刺激性サイトカイン、例えば、インターフェロン、インターロイキンおよび造血成長因子）、ワクチン、他の免疫抑制経路の阻害剤、血管新生の阻害剤、Ｔ細胞活性化因子、代謝経路の阻害剤、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの機構的標的）阻害剤（例えば、ラパマイシン、ラパマイシン誘導体、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムスおよびデフォロリムス）、アデノシン経路の阻害剤、インライタ、ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）阻害剤（例えば、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、およびスニチニブ）を含むがこれらに限定されないチロシンキナーゼ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブおよびダブラフェニブ）、エピジェネティック改変因子、Ｔｒｅｇ細胞および／または骨髄由来サプレッサー細胞の阻害剤または枯渇剤、ＪＡＫ（ヤヌスキナーゼ）阻害剤（例えば、ルキソリチニブおよびトファシチニブ、バリシチニブ（ｖａｒｉｃｉｔｉｎｉｂ）、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、およびウパダシチニブ）、ＳＴＡＴ（シグナル伝達兼転写活性化因子）阻害剤（例えば、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５阻害剤、例えば、フルダラビン）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、免疫原性剤（例えば、弱毒化がん性細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞、例えば、腫瘍由来抗原または核酸でパルスした樹状細胞、ＭＥＫ阻害剤（例えば、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、およびセルメチニブ）、ＧＬＳ１阻害剤、ＰＡＰ阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、ＩＤＯ（インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ）阻害剤、ＰＲＲ（パターン認識受容体）アゴニスト、ならびに限定されないがＧＭ−ＣＳＦなどの免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトされた細胞）の投与が含まれる。
【０２０５】
一部の態様では、例示的な免疫賦活性サイトカインには、限定されないが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＦＮα；ＩＬ−２（例えば、デニロイキン・ディフティトックス（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ  ｄｉｆｉｔｏｘ））、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、およびＴＮＦαが含まれる。一部の態様では、サイトカインはペグ化される（例えば、ペグ化されたＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＦＮγ、およびＩＦＮα）。
【０２０６】
パターン認識受容体（ＰＲＲ）は、免疫系の細胞によって発現され、病原体および／または細胞損傷もしくは細胞死に関連する様々な分子を認識する受容体である。ＰＲＲは自然免疫応答および適応免疫応答の両方に関与している。ＰＲＲアゴニストは、対象における免疫応答を刺激するために使用され得る。ＰＲＲ分子には、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＲＩＧ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、およびインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）タンパク質を含む、複数のクラスが存在する。
【０２０７】
「ＴＬＲ」および「ｔｏｌｌ様受容体」という用語は、任意のｔｏｌｌ様受容体を指す。ｔｏｌｌ様受容体は免疫応答を活性化するのに関与する受容体である。ＴＬＲは、例えば、微生物において発現される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、および死細胞または死にかけの細胞から放出される内因性損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）を認識する。
【０２０８】
ＴＬＲを活性化する（およびそれによって免疫応答を活性化する）分子は、本明細書で「ＴＬＲアゴニスト」と称される。ＴＬＲアゴニストには、例えば、小分子（例えば、約１０００ダルトン未満の分子量を有する有機分子）、および大分子（例えば、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質）が含まれ得る。ＴＬＲアゴニストの中には、単一の型のＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ３またはＴＬＲ９）に特異的なものもあれば、２つ以上の型のＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方）を活性化するものもある。
【０２０９】
本明細書で提供されている例示的なＴＬＲアゴニストには、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９のアゴニストが含まれる。
【０２１０】
例示的な小分子ＴＬＲアゴニストには、例えば、米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，３８９，６４０号；同第５，４４６，１５３号；同第５，４８２，９３６号；同第５，７５６，７４７号；同第６，１１０，９２９号；同第６，１９４，４２５号；同第６，３３１，５３９号；同第６，３７６，６６９号；同第６，４５１，８１０号；同第６，５２５，０６４号；同第６，５４１，４８５号；同第６，５４５，０１６号；同第６，５４５，０１７号；同第６，５７３，２７３号；同第６，６５６，９３８号；同第６，６６０，７３５号；同第６，６６０，７４７号；同第６，６６４，２６０号；同第６，６６４，２６４号；同第６，６６４，２６５号；同第６，６６７，３１２号；同第６，６７０，３７２号；同第６，６７７，３４７号；同第６，６７７，３４８号；同第６，６７７，３４９号；同第６，６８３，０８８号；同第６，７５６，３８２号；同第６，７９７，７１８号；同第６，８１８，６５０号；および同第７，７０９１，２１４号；米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号、同第２００４／０１７６３６７号、および同第２００６／０１００２２９号；ならびに国際公開番号ＷＯ２００５／１８５５１、ＷＯ２００５／１８５５６、ＷＯ２００５／２０９９９、ＷＯ２００５／０３２４８４、ＷＯ２００５／０４８９３３、ＷＯ２００５／０４８９４５、ＷＯ２００５／０５１３１７、ＷＯ２００５／０５１３２４、ＷＯ２００５／０６６１６９、ＷＯ２００５／０６６１７０、ＷＯ２００５／０６６１７２、ＷＯ２００５／０７６７８３、ＷＯ２００５／０７９１９５、ＷＯ２００５／０９４５３１、ＷＯ２００５／１２３０７９、ＷＯ２００５／１２３０８０、ＷＯ２００６／００９８２６、ＷＯ２００６／００９８３２、ＷＯ２００６／０２６７６０、ＷＯ２００６／０２８４５１、ＷＯ２００６／０２８５４５、ＷＯ２００６／０２８９６２、ＷＯ２００６／０２９１１５、ＷＯ２００６／０３８９２３、ＷＯ２００６／０６５２８０、ＷＯ２００６／０７４００３、ＷＯ２００６／０８３４４０、ＷＯ２００６／０８６４４９、ＷＯ２００６／０９１３９４、ＷＯ２００６／０８６６３３、ＷＯ２００６／０８６６３４、ＷＯ２００６／０９１５６７、ＷＯ２００６／０９１５６８、ＷＯ２００６／０９１６４７、ＷＯ２００６／０９３５１４、およびＷＯ２００６／０９８８５２に開示されているものが含まれる。
【０２１１】
小分子ＴＬＲアゴニストのさらなる例には、特定のプリン誘導体（例えば、米国特許第６，３７６，５０１号および同第６，０２８，０７６号に記載されているもの）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（例えば、米国特許第６，０６９，１４９号に記載されているもの）、特定のイミダゾピリジン誘導体（例えば、米国特許第６，５１８，２６５号に記載されているもの）、特定のベンゾイミダゾール誘導体（例えば、米国特許第６，３８７，９３８号に記載されているもの）、５員窒素含有複素環と縮合した特定の４−アミノピリミジン誘導体（例えば、米国特許第６，３７６，５０１号；同第６，０２８，０７６号および同第６，３２９，３８１号；ならびにＷＯ０２／０８９０５に記載されているアデニン誘導体）、および特定の３−ベータ−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号に記載されているもの）、および例えば、米国特許出願公開第２００５／０１３６０６５に記載されているものなどの特定の小分子免疫増強化合物が含まれる。
【０２１２】
例示的な大分子ＴＬＲアゴニストには、オリゴヌクレオチド配列が含まれる。いくつかのＴＬＲアゴニストオリゴヌクレオチド配列はシトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；および同第６，４０６，７０５号に記載されている。いくつかのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第６，４２６，３３４号および同第６，４７６，０００号に記載されているものなどの合成免疫調節構造モチーフを含み得る。他のＴＬＲアゴニストヌクレオチド配列は、ＣｐＧ配列を欠き、例えば、国際特許公開番号ＷＯ００／７５３０４に記載されている。さらに他のＴＬＲアゴニストヌクレオチド配列には、例えば、Ｈｅｉｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第３０３巻、１５２６〜１５２９ページ、２００４年３月５日に記載されているものなどのグアノシンリッチおよびウリジンリッチ一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）が含まれる。
【０２１３】
他のＴＬＲアゴニストには、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）などの生体分子が含まれ、例えば、米国特許第６，１１３，９１８号；同第６，３０３，３４７号；同第６，５２５，０２８号；および同第６，６４９，１７２号に記載されている。
【０２１４】
ＴＬＲアゴニストはまた、複数の異なる型のＴＬＲ受容体を活性化し得る、不活性化された病原体またはその画分を含む。例示的な病原体由来ＴＬＲアゴニストには、ＢＣＧ、マイコバクテリウム・オブエンス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｂｕｅｎｓｅ）抽出物、タリモジーン・ラハーパレプベック（Ｔ−Ｖｅｃ）（ＨＳＶ−１由来）、およびＰｅｘａ−Ｖｅｃ（ワクシニアウイルス由来）が含まれる。
【０２１５】
一部の態様では、ＴＬＲアゴニストはＴＬＲに特異的に結合するアゴニスト抗体であり得る。
一部の態様では、バイオ治療剤は、限定されないが、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＩＬ−７Ｒアルファ（ＣＤ１２７）抗体、抗ＩＬ−８抗体、抗ＩＬ−１５抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ１抗体、抗ＩＬ−７Ｒ抗体、抗ＭＡＲＣＯ抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＴＮＦＲ１抗体、抗ＴＮＦＲ２抗体、抗ＣＤ３二重特異性抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０、抗Ｈｅｒ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＣＲ８抗体、抗ＣＤ２００Ｒ抗体、抗ＶＩＳＧ４抗体、抗ＣＣＲ２抗体、抗ＬＩＬＲｂ２抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗ＣＤ２０６抗体、抗ＣＤ１６３抗体、抗ＫＬＲＧ１抗体、抗ＦＬＴ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ＫＬＲＧ１抗体、ＢＴＮ１Ａ１抗体、ＢＣＭＡ抗体、または抗ＧＩＴＲ抗体を含む、抗体である。
【０２１６】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は免疫サイトカインと組み合わせて使用される。一部の態様では、免疫サイトカインは、サイトカインとコンジュゲートまたは融合している抗体またはその断片（例えば、融合タンパク質）を含む。一部の態様では、抗体またはその断片は、フィブロネクチンのエクストラドメイン−Ａ（ＥＤＡ）アイソフォーム（例えば、抗ＥＤＡ抗体）に結合している。例えば、抗ＥＤＡ抗体またはその断片は、配列番号９４に示される重鎖可変（ＶＨ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに／または配列番号９６に示される軽鎖可変（ＶＬ）領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。一部の態様では、抗ＥＤＡ抗体またはその断片は、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨ領域、および／または配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＬ領域を含む。一部の態様では、サイトカインはＩＬ−１０である。例えば、ＩＬ−１０は配列番号９８のアミノ酸配列を含み得る。一部の態様では、免疫サイトカインは少なくとも１つのリンカーを含む。例えば、リンカーは配列番号９５および／または９７を含み得る。一部の態様では、免疫サイトカインは配列番号９９のアミノ酸配列を含む抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質である（表１．３、下線を引いたＣＤＲ）。
【０２１７】
【表３】
2021516045.tif 000015
【０２１８】
したがって、一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト抗体；例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ｍＡｂ７（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１６０１５９９０５に記載されている）、およびピディリズマブなどの抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体；例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））などの抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト抗体；ＢＭＳ−９８６０１６およびＩＭＰ７０１などの抗ＬＡＧ−３アンタゴニスト抗体；抗ＴＩＭ−３アンタゴニスト抗体；例えば、ＭＧＡ２７１などの抗Ｂ７−Ｈ３アンタゴニスト抗体；抗ＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体；抗ＴＩＧＩＴアンタゴニスト抗体；抗ＣＤ２８アンタゴニスト抗体；抗ＣＤ８０抗体；抗ＣＤ８６抗体；抗Ｂ７−Ｈ４アンタゴニスト抗体；抗ＩＣＯＳアゴニスト抗体；抗ＣＤ２８アゴニスト抗体；自然免疫応答モジュレーター（例えば、ＴＬＲ、ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａ）、ならびにＩＤＯ阻害剤と併用して使用される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、ＰＦ−０５０８２５６６またはウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）などの４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと併用して使用される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、抗ＯＸ−４０アゴニスト抗体などのＯＸ４０アゴニストと併用して使用される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、ＴＲＸ５１８などのＧＩＴＲアゴニストと併用して使用される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質はＩＤＯ阻害剤と併用して使用される。一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、限定されないが、（ペグ化または非ペグ化）ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−３３、ＣＳＦ−１、ＭＣＳＦ−１などのサイトカイン治療と併用して使用される。
【０２１９】
一部の態様では、本発明のＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質との併用使用のための抗体の他の例は、５Ｔ４；Ａ３３；アルファ−葉酸受容体１（例えば、ミルベツキシマブソラブタンシン）；Ａｌｋ−１；ＣＡ−１２５（例えば、アバゴボマブ）；カルボアンヒドラーゼＩＸ；ＣＣＲ２；ＣＣＲ４（例えば、モガムリズマブ）；ＣＣＲ５（例えば、レロンリマブ）；ＣＣＲ８；ＣＤ３［例えば、ブリナツモマブ（ＣＤ３／ＣＤ１９二重特異性）］、ＰＦ−０６６７１００８（ＣＤ３／Ｐ−カドヘリン二重特異性）、ＰＦ−０６８６３１３５（ＣＤ３／ＢＣＭＡ二重特異性）、ＣＤ２５；ＣＤ２８；ＣＤ３０（例えば、ブレンツキシマブベドチン）；ＣＤ３３（例えば、ゲムツズマブオゾガマイシン）；ＣＤ３８（例えば、ダラツムマブ、イサツキシマブ）、ＣＤ４４ｖ６；ＣＤ６３；ＣＤ７９（例えば、ポラツズマブベドチン）；ＣＤ８０；ＣＤ１２３；ＣＤ２７６／Ｂ７−Ｈ３（例えば、オンブルタマブ）；ＣＤＨ１７；ＣＥＡ；ＣｌｈＣＧ；デスモグレイン４；ＤＬＬ３（例えば、ロバルピツズマブテシリン）；ＤＬＬ４；Ｅ−カドヘリン；ＥＤＡ；ＥＤＢ；ＥＦＮＡ４；ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、デパツキシズマブマホドチン、ネシツムマブ、パニツムマブ）；ＥＧＦＲｖＩＩＩ；エンドシアリン；ＥｐＣＡＭ（例えば、オポルツズマブモナトクス）；ＦＡＰ；胎児型アセチルコリン受容体；ＦＬＴ３（例えば、ＷＯ２０１８／２２０５８４を参照のこと）；ＧＤ２（例えば、ジヌツキシマブ、３Ｆ８）；ＧＤ３；ＧｌｏｂｏＨ；ＧＭ１；ＧＭ２；ＨＥＲ２／ｎｅｕ［例えば、マルゲツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アド−トラスツズマブエムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、トラスツズマブデュオカルマジン、ＰＦ−０６８０４１０３（ＵＳ８８２８４０１を参照のこと）］；ＨＥＲ３；ＨＥＲ４；ＩＣＯＳ；ＩＬ−１０；ＩＴＧ−ＡｖＢ６；ＬＡＧ−３（例えば、レラチリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｍａｂ））；ルイス−Ｙ（Ｌｅｗｉｓ−Ｙ）；ＬＧ；Ｌｙ−６；Ｍ−ＣＳＦ［例えば、ＰＤ−０３６０３２４（ＵＳ７３２６４１４を参照のこと）］；ＭＣＳＰ；メソテリン；ＭＵＣ１；ＭＵＣ２；ＭＵＣ３；ＭＵＣ４；ＭＵＣ５ＡＣ；ＭＵＣ５Ｂ；ＭＵＣ７；ＭＵＣ１６；Ｎｏｔｃｈ１；Ｎｏｔｃｈ３；ネクチン−４（例えば、エンホルツマブベドチン）；Ｐ−カドヘリン［例えば、ＰＦ−０６６７１００８（ＷＯ２０１６／００１８１０を参照のこと）］；ＰＣＤＨＢ２；ＰＤＧＦＲＡ（例えば、オララツマブ）；形質細胞抗原；ＰｏｌｙＳＡ；ＰＳＣＡ；ＰＳＭＡ；ＰＴＫ７［例えば、ＰＦ−０６６４７０２０（ＵＳ９４０９９９５を参照のこと）］；Ｒｏｒ１；ＳＡＳ；ＳＣＲｘ６；ＳＬＡＭＦ７（例えば、エロツズマブ）；ＳＨＨ；ＳＩＲＰａ（例えば、ＥＤ９、Ｅｆｆｉ−ＤＥＭ）；ＳＴＥＡＰ；ＴＧＦ−ベータ；ＴＩＧＩＴ；ＴＭＰＲＳＳ３；ＴＮＦ−アルファ前駆体；ＴＲＯＰ−２（例えば、サシツズマブゴビテカン）；ＴＳＰＡＮ８；およびＷｕｅ−１に対するものであり得る。
【０２２０】
化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパおよびウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（とりわけ、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトセシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、とりわけカリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンｐｈｉＩ１、例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３〜１８６ページ（１９９４）を参照のこと；ジネミシンＡを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝薬、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎薬（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；フロリン酸などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけ、Ｔ−２トキシン、ベラキュリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドキセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ類似体、例えば、カルボプラチン；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。また、腫瘍上でホルモン作用を調節するかまたは阻害するように作用する、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（フェアストン）を含む、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）などの抗ホルモン剤；副腎においてエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、メゲストロールアセテート、エクセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール、レトロゾールおよびアナストロゾール；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、フルリジル、アパルタミド、エンザルタミド、シメチジンおよびゴセレリン；ＫＲＡＳ阻害剤；ＭＣＴ４阻害剤；ＭＡＴ２ａ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ、アキシチニブ；ａｌｋ／ｃ−Ｍｅｔ／ＲＯＳ阻害剤、例えば、クリゾチニブ、ロルラチニブ；ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、テムシロリムス、ゲダトリシブ；ｓｒｃ／ａｂｌ阻害剤、例えば、ボスチニブ；サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤、例えば、パルボシクリブ、ＰＦ−０６８７３６００；ｅｒｂ阻害剤、例えば、ダコミチニブ；ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、タラゾパリブ；ＳＭＯ阻害剤、例えば、グラスデギブ、ＰＦ−５２７４８５７；ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ阻害剤、例えば、ＰＦ−０６７４７７７５；ＥＺＨ２阻害剤、例えば、ＰＦ−０６８２１４９７；ＰＲＭＴ５阻害剤、例えば、ＰＦ−０６９３９９９９；ＴＧＦＲβｒ１阻害剤、例えば、ＰＦ−０６９５２２２９；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も含まれる。
【０２２１】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、例えば、限定されないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ８、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２、ＣＤ４７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＣＤ２２６、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、ＬＡＩＲ１、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ１、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ４、ＶＩＳＴＡ（ＰＤ−Ｈ１）、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、４−ＢＢＬ、ＤＲ３、ＴＬ１Ａ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０）、ＳＬＡＭＦ２（ＣＤ４８）、ＳＬＡＭＦ３（ＣＤ２２９）、ＳＬＡＭＦ４（２Ｂ４、ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ５（ＣＤ８４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ）、ＳＬＡＭＣＦ７（ＣＳ１）、ＳＬＡＭＦ８（ＢＬＡＭＥ）、ＳＬＡＭＦ９（ＣＤ２Ｆ）、ＣＤ２８、ＣＥＡＣＡＭ１（ＣＤ６６ａ）、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７、ＣＥＡＣＡＭ８、ＣＥＡＣＡＭ１−３ＡＳ  ＣＥＡＣＡＭ３Ｃ２、ＣＥＡＣＡＭ１−１５、ＰＳＧ１−１１、ＣＥＡＣＡＭ１−４Ｃ１、ＣＥＡＣＡＭ１−４Ｓ、ＣＥＡＣＡＭ１−４Ｌ、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＣＣＲ２、ＣＤ３９−ＣＤ７３−アデノシン経路（Ａ２ＡＲ）、ＢＴＫ、ＴＩＫ、ＣＸＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、ＣＣＲ５、ＶＥＧＦ経路、ＣＳＦ−１または自然免疫応答モジュレーターを標的とする薬剤などの、免疫チェックポイントモジュレーターを標的とする１つまたは複数の他の治療剤と併せて使用される。
【０２２２】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質は、バイオ治療剤および化学療法剤と併せて使用される。例えば、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、有効量の記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質、ここでは、抗ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト抗体、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサートまたはプラチナ類似体）を対象に投与するステップを含む方法が提供される。一部の態様では、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、有効量の記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質、ここでは、抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体（例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ｍＡｂ７（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開番号ＵＳ２０１６０１５９９０５に記載されている）またはペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサートまたはプラチナ類似体）を対象に投与するステップを含む方法が提供される。一部の態様では、がんの処置を必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、有効量の記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質、ここでは、抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト抗体（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、および化学療法剤（例えば、ゲムシタビン、メトトレキサートまたはプラチナ類似体）を対象に投与するステップを含む方法が提供される。
【０２２３】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質治療は、数分から数週間の範囲の間隔で他の薬剤処置に先行しても後続してもよい。他の薬剤および／またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドが別々に投与される態様では、一般に、各々の送達の間に有意な期間が過ぎないことを確実にし、その結果、薬剤および本発明の組成物が対象に対して有利に組み合わされた効果をなおも発揮することができる。このような場合、両方の様式を、互いに約１２〜２４時間以内、より好ましくは、互いに約６〜１２時間以内に投与し得ることが企図される。一部の状況では、投与期間を有意に延長することが望ましい場合があるが、数日（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）がそれぞれの投与の間に経過する。
【０２２４】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質組成物は、クリゾチニブ、パルボシクリブ、ゲムシタビン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、ＦＯＬＦＯＸ、フォリン酸、オキサリプラチン、アキシチニブ、スニチニブリンゴ酸、トファシチニブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、およびトラスツズマブから選択される第２の薬剤を含む。
【０２２５】
一部の態様では、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質組成物は、手術、放射線治療、化学療法、標的化療法、免疫療法、ホルモン療法、血管新生阻害および苦痛緩和治療からなる群から選択される従来の治療をさらに含む処置レジメンと組み合わされる。
製剤
本発明に従って使用されるＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の治療製剤は、所望の純度を有するタンパク質を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００）と混合することによって貯蔵のために調製される。許容される担体、賦形剤または安定剤は、利用される投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。
【０２２６】
ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含有するリポソームは、当該分野で公知の方法、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８ページ（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０ページ（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されている方法によって調製される。増進された循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、定められた孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームを生成する。
【０２２７】
有効成分はまた、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）において、またはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術により、または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に捕捉され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に開示されている。
【０２２８】
徐放性製剤が調製され得る。徐放性製剤の適切な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、形作られた物品、例えば、薄膜またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸および７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用マイクロスフェア）、スクロース酢酸イソブチル、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。
【０２２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に成し遂げられる。治療用ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質組成物は、一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって突き刺し可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアル中に配置される。
【０２３０】
本発明に従う組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくはガス注入による投与のための単位剤形、例えば錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁液、または坐剤であり得る。
【０２３１】
固体組成物、例えば、錠剤を調製するために、主要な有効成分が、医薬用担体、例えば、従来の打錠用成分、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、および他の医薬用希釈剤、例えば、水と混合されて、本発明の化合物またはその非毒性の薬学的に許容される塩の均質な混合物を含有する固体前配合組成物（ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を形成する。これらの前配合組成物が均質であると言及する場合、その組成物が等しく有効な単位剤形、例えば、錠剤、丸剤およびカプセル中にすぐに細分され得るように、有効成分が組成物全体にわたって均等に分散していることが意味されている。次いで、この固体前配合組成物は、約０．１〜約５００ｍｇの本発明の有効成分を含有する上記の型の単位剤形中に細分される。新規組成物の錠剤または丸剤は、延長された作用の利点を与える剤形を提供するために、コートされるか、または他の方法で調合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬成分および外部投薬成分を含むことができ、後者は前者を覆う外膜の形態である。２つの成分は、胃における崩壊に耐える役目を果たし、内部の成分が完全な状態で十二指腸中へと通過することまたはその放出が遅延することを可能にする腸溶層により隔てられ得る。様々な材料が、そのような腸溶層またはコーティングのために使用され得、そのような材料は、いくつかのポリマー性の酸ならびにポリマー性の酸の、シェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料との混合物を含む。
【０２３２】
適切な表面活性剤には、特に、非イオン性薬剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）が含まれる。表面活性剤を含む組成物は、好都合には０．０５から５％の間の表面活性剤を含み、それは０．１から２．５％の間であり得る。他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に許容されるビヒクルが、必要に応じて添加されてもよいことは、理解される。
【０２３３】
適切なエマルジョンは、商業的に入手可能な脂肪エマルジョン、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）を使用して調製され得る。有効成分は、予め混合されたエマルジョン組成物中で溶解させることができるか、あるいはそれは油（例えば、ダイズ油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油またはアーモンド油）中で溶解させることもでき、リン脂質（例えば、卵リン脂質、ダイズリン脂質またはダイズレシチン）および水との混合の際にエマルジョンが形成される。エマルジョンの張性を調節するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースが添加されてもよいことは、理解される。適切なエマルジョンは、典型的に、２０％までの、例えば、５から２０％の間の油を含有する。脂肪エマルジョンは、０．１から１．０μｍの間、特に０．１から０．５μｍの間の脂肪液滴を含むことができ、５．５〜８．０の範囲のｐＨを有することができる。
【０２３４】
エマルジョン組成物は、ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することにより調製されたエマルジョン組成物であり得る。
【０２３５】
吸入またはガス注入のための組成物は、薬学的に許容される水性もしくは有機性溶媒中の溶液および懸濁液、またはそれらの混合物、ならびに粉末を含む。液体または固体組成物は、上記で述べられたような適切な薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。一部の態様では、組成物は、局所または全身作用のために、経口または経鼻呼吸経路により投与される。好ましくは無菌の薬学的に許容される溶媒中の組成物は、ガスの使用により噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接呼吸され得るか、または噴霧デバイスは、フェイスマスク、テントもしくは断続的陽圧呼吸模擬装置に取り付けられ得る。溶液、懸濁液または粉末組成物は、好ましくは経口または経鼻で、製剤を適切な様式で送達するデバイスから投与され得る。
キット
本発明はまた、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質のいずれかまたは全てを含むキットも提供する。本発明のキットは、本明細書に記載されているＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質を含む１つまたは複数の容器および本明細書に記載されている本発明の方法のいずれかに従う使用のための説明書を含む。一般に、これらの説明書は、上記の治療的処置のためのＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の投与の記載を含む。一部の態様では、キットは、単一用量の投与単位を産生するために提供される。ある特定の態様では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有し得る。ある特定の態様では、単一および複数チャンバーの事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含有するキットが含まれる。
【０２３６】
ＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質の使用に関する説明書は、一般に、投薬量、投薬スケジュール、および意図した処置のための投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）またはサブ単位用量であり得る。本発明のキット中で提供される説明書は、典型的に、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による説明書であるが、機械可読指示書（例えば、磁気記憶ディスクまたは光学記憶ディスク上で運搬される説明書）もまた許容される。
【０２３７】
本発明のキットは適切な梱包材料中にある。適切な梱包材料には、バイアル、ビン、ジャー、可撓性梱包材料（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが含まれるがこれらに限定されない。特定のデバイス、例えば、吸入器、鼻孔投与デバイス（例えば、アトマイザー）または注入デバイス、例えばミニポンプと組み合わせた使用のための包装もまた企図される。キットは、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって突き刺し可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。容器もまた、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって突き刺し可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤はＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５融合タンパク質である。容器は第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含んでもよい。
【０２３８】
キットは、任意選択に、さらなる成分、例えば、緩衝液および解釈情報を提供してもよい。通常、キットは、容器および容器上または容器に付随したラベルまたは添付文書を含む。
生物学的寄託
本発明の代表的な材料を、２０１９年１月２３日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０−２２０９、米国に寄託した。ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２５６８６を有するベクターＶＫ１−３９は、抗体ＶＫ１−３９軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１２５６８５を有するベクターＶＨ１−６９ｂ−ホール−ｍ２は、ＶＨ１−６９重鎖可変領域およびＩＬ−１５バリアントＭ２をコードするポリヌクレオチドである。寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項とその下の規制（ｔｈｅ  ｐｒｏｖｉｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ  ｔｈｅｒｅｕｎｄｅｒ）（ブダペスト条約）の下で行った。これは、寄託の日から３０年間の寄託物の生存培養の維持を保証する。寄託物は、ブダペスト条約の条項の下で、かつＰｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間の同意に従ってＡＴＣＣにより入手可能にされることになり、この同意は、関連する米国特許が発行された際または任意の米国もしくは外国特許出願が公衆に公開された際のいずれか早い方に、公衆に寄託物の培養物の子孫の永続的かつ非制限的利用可能性を保証し、米国特許法第１２２条およびそれに従う長官規則（連邦規則法典第３７巻第１．１４条を含み、８８６ＯＧ６３８を特に参照して）に従って資格を与えると米国特許商標庁長官が決定した者に子孫の利用可能性を保証する。
【０２３９】
本出願の譲受人は、寄託されている材料の培養物が、適切な条件下で培養された場合に死滅し、または喪失もしくは破壊された場合、材料を別の同じものと通知後即座に置き換えることに同意している。寄託された材料の利用可能性は、任意の政府の権限下でその特許法に従って付与された権利に違反して発明を実施するライセンスとして解釈されるべきでない。
【０２４０】
以下の実施例は、例示目的のためにのみ提供され、本発明の範囲を限定することは決して意図しない。実際、本明細書に示され、記載されているものに加えた、本発明の種々の修飾は、上述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る。
【実施例】
【０２４１】
実施例１
条件培地におけるヒトＩＬ−１５バリアントの調製および抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質の精製
この実施例は、条件培地におけるヒトＩＬ−１５バリアントの産生および本明細書に記載されている種々のＩＬ−１５融合タンパク質の精製を例示する。
【０２４２】
表１〜２に示しているような突然変異を有する各々のカルボキシル末端８−ヒスチジン−ＡＶＩタグ化ＩＬ−１５突然変異体の４マイクログラムのＤＮＡを、２４ウェルブロックの各ウェルにおいて約３×１０６細胞／ｍＬの密度にてＥｘｐｉ−２９３細胞に一過性にトランスフェクトした。トランスフェクション後の５日後、分泌したＩＬ−１５突然変異体を含有する細胞の条件培地上清を遠心分離によって回収し、９６ウェルブロックに移し、続いて濾過し、動態および親和性決定の準備をした。
【０２４３】
抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質（例えば、表１〜２に示すようなＩＬ−１５突然変異を有するＰＤ−１抗体）を、約３×１０６細胞／ｍＬの密度にてＥｘｐｉ−２９３細胞において抗体重鎖−ＩＬ−１５キメラ、抗体重鎖および抗体軽鎖のＤＮＡプラスミドによる一過性トランスフェクションによって産生した。トランスフェクション後の５日後、分泌した抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質を含有する細胞の上清を遠心分離によって回収し、続いて濾過した。次いで抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅカラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）上のプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、ニッケルアフィニティークロマトグラフィー、Ｍｏｎｏ  Ｓ  ５／５０  ＧＬまたはＭｏｎｏ  Ｓ  １０／１００  ＧＬカラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）上のイオン交換クロマトグラフィー、およびＨｉＬｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００分取グレードまたはＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００分取グレードカラム（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）上のサイズ排除クロマトグラフィーを使用して細胞上清から精製した。
【０２４４】
実施例２
３７℃でのヒトＩＬ−１５バリアントまたは抗ＰＤ−１−ｈＩＬ−１５融合タンパク質／ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβ相互作用の動態および親和性の決定
この実施例は、３７℃でヒトＩＬ−１５ＲαおよびヒトＩＬ−２Ｒβに結合する種々のヒトＩＬ−１５バリアントの動態および親和性を例示する。
【０２４５】
全ての実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ８ＫまたはＢｉａｃｏｒｅ  ４０００表面プラズモン共鳴ベースのバイオセンサ（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）で実施した。抗ＡＶＩタグセンサチップを、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４のランニング緩衝液を用いて２５℃にて調製した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ＣＭ４センサチップの全ての表面を、１０μＬ／分の流速にて７分間、４００ｍＭ  ＥＤＣおよび１００ｍＭ  ＮＨＳの１：１（ｖ／ｖ）混合物を用いて活性化した。抗Ａｖｉ試薬（ウサギ抗Ａｖｉタグ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔカタログ番号Ａ００６７４−２００）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中で３０μｇ／ｍＬに希釈し、２０μＬ／分にて７分間、全てのフローセル上に注入した。全てのフローセルを、１０μＬ／分にて７分間、２００ｍＭのホウ酸塩緩衝液ｐＨ８．５中の１００ｍＭのエチレンジアミンを用いてブロックした。
【０２４６】
全てのタンパク質相互作用実験は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４、１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのランニング緩衝液を使用して３７℃にて実施した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００で実施した実験に関して、Ａｖｉタグ化ＩＬ−１５バリアントを、１０μＬ／分の流速にて２分間、フローセル１、２、３および４上のスポット１および５上に、希釈していない上清から捕捉した。異なる突然変異体を各スポット上に捕捉した。フローセル１、２、３および４上のスポット２および４を参照表面として使用した。ＩＬ１５バリアントの捕捉後、分析物（緩衝液、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭおよび１μＭ濃度のヒトＩＬ−１５ＲαまたはヒトＩＬ−２Ｒβ）を、３０μＬ／分の流速にて２分間、全てのフローセル中に注入した。各分析物の注入後、解離を５分間モニターし、続いて７５ｍＭリン酸の３回の３０秒の注入により全てのフローセルを再生した。緩衝液サイクルを、二重参照目的（Ｍｙｓｚｋａ、Ｄ．Ｇ．、Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１２、２７９〜２８４ページ（１９９９）に記載されている二重参照）のために、各々の捕捉したＩＬ−１５Ｖ４９Ｒ突然変異体について収集した。動態分析のために、二重参照センサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して、マストランスポート結合モデルを用いた単純な１：１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）に全体的に適合させた。定常状態親和性分析のために、二重参照平衡結合応答を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００評価ソフトウェアバージョン１．１を使用して１：１ラングミュア定常状態モデルに適合させた。
【０２４７】
Ｂｉａｃｏｒｅ  ８Ｋで実施した実験に関して、Ａｖｉタグ化ＩＬ−１５バリアントを、各チャネルにおけるフローセル２上で１０μＬ／分にて２分間、希釈していない上清から捕捉し、一方で、フローセル１を参照表面として使用した。異なるＩＬ−１５バリアントを各チャネルにおいて捕捉した。ＩＬ−１５Ｖ４９Ｒ突然変異体の捕捉後、分析物（緩衝液、３．２ｎＭ、１６ｎＭ、８０ｎＭ、４００ｎＭ、１８４０ｎＭのヒトＩＬ−１５Ｒαおよび０．８ｎＭ、４ｎＭ、２０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭのヒトＩＬ−２Ｒβ）を、３０μＬ／分の流速にて２分間、両方のフローセル上に注入した。各分析物の注入後、解離を１０分間モニターし、続いて７５ｍＭのリン酸の３回の３０秒の注入により全てのフローセルを再生した。緩衝液サイクルを、二重参照目的（Ｍｙｓｚｋａ、Ｄ．Ｇ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１２、２７９〜２８４ページ（１９９９）に記載されている二重参照）のために、各々の捕捉したＩＬ−１５バリアントについて収集した。動態分析のために、二重参照センサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ  ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１．１．７４４２を使用して、マストランスポート結合モデルを用いた単純な１：１ラングミュアに全体的に適合させた。定常状態親和性分析のために、二重参照平衡結合応答を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ８Ｋ評価ソフトウェアバージョン１．１．１．７４４２を使用して１：１ラングミュア定常状態モデルに適合させた。
【０２４８】
試験したＩＬ−１５バリアントについての動態および親和性パラメーターを表１〜２に示す。「ＩＬ−１５Ｒａｓｕ」という用語は、ＩＬ−１５Ｒアルファｓｕｓｈｉドメインを指す。
【０２４９】
以下の実施例は、３７℃でヒトＩＬ−１５ＲαおよびヒトＩＬ−２Ｒβに結合する種々の抗ＰＤ−１−ｈＩＬ−１５融合タンパク質の動態および親和性を決定する。実験は、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００表面プラズモン共鳴ベースのバイオセンサ（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）で実施した。
【０２５０】
抗ヒトＦｃセンサチップを、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４のランニング緩衝液を用いて２５℃にて調製した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ＣＭ４センサチップの全ての表面を、１０μＬ／分の流速にて７分間、４００ｍＭ  ＥＤＣおよび１００ｍＭ  ＮＨＳの１：１（ｖ／ｖ）混合物を用いて活性化した。抗ヒトＦｃ試薬（ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−γ特異的、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ、カタログ番号２０１４−０１）を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中で５０μｇ／ｍＬに希釈し、２０μＬ／分にて７分間、全てのフローセル上に注入した。全てのフローセルを、１０μＬ／分にて７分間、２００ｍＭのホウ酸塩緩衝液ｐＨ８．５中の１００ｍＭのエチレンジアミンを用いてブロックした。
【０２５１】
全てのタンパク質相互作用実験は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．４、１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡのランニング緩衝液を使用して３７℃にて実施した。抗ＰＤ−１−ｈＩＬ−１５融合タンパク質を、１０μＬ／分の流速にて２分間、１０μｇ／ｍＬにて捕捉した。異なる融合タンパク質をフローセル２、３および４中に捕捉した。参照表面として使用したフローセル１上にタンパク質は捕捉されなかった。融合タンパク質の捕捉後、分析物（緩衝液、１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、１０００ｎＭおよび３０００ｎＭ濃度のヒトＩＬ−１５ＲαまたはヒトＩＬ−２Ｒβ）を、３０μＬ／分の流速にて２分間、全てのフローセル中に注入した。各分析物の注入後、解離を５分間モニターし、続いて７５ｍＭリン酸の３回の６０秒の注入により全てのフローセルを再生した。緩衝液サイクルを、二重参照目的（Ｍｙｓｚｋａ、Ｄ．Ｇ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１２、２７９〜２８４ページ（１９９９）に記載されている二重参照）のために、各々の捕捉した融合タンパク質について収集した。動態分析のために、二重参照センサーグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０を使用して、マストランスポート結合モデルを用いた単純な１：１ラングミュアに全体的に適合させた。定常状態親和性分析のために、二重参照平衡結合応答を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０を使用して１：１ラングミュア定常状態モデルに適合させた。
【０２５２】
抗ＰＤ−１−ｈＩＬ−１５バリアント融合タンパク質についての動態および親和性パラメーターを表３〜５に示す。
【０２５３】
【表４】
2021516045.tif 000016
【０２５４】
【表５−１】
2021516045.tif 000017
【０２５５】
【表５−２】
2021516045.tif 000018
【０２５６】
【表５−３】
2021516045.tif 000019
【０２５７】
【表５−４】
2021516045.tif 000020
【０２５８】
【表５−５】
2021516045.tif 000021
【０２５９】
【表６】
2021516045.tif 000022
【０２６０】
【表７】
2021516045.tif 000023
【０２６１】
【表８】
2021516045.tif 000024
【０２６２】
実施例３
ＩＬ−１５受容体の構成的発現およびＰＤ−１の誘導的発現を伴うレポーター細胞株の構築
この実施例は、ＩＬ−１５ベースの分子の生物活性を評価するために有用なレポーター細胞株を確立するための方法を実証する。
【０２６３】
本明細書に記載されているＩＬ−１５ベースの分子をアッセイするために、ＩＬ−１５に対する機能的応答を有するレポーター細胞株を生成し、ＰＤ−１−標的駆動活性の効果をアッセイするために使用した。この目的のために、以下の特性：（１）機能的ＩＬ−１５シグナル伝達受容体の構成的発現：ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２としても知られている）、および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２としても知られている）；ならびに（２）ヒトまたはマウスＰＤ−１のいずれかの誘導的発現を伴うレポーター細胞株を構築した。
【０２６４】
レンチウイルス系を、Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｔ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７月１日；７６（１３）：３６８４〜９ページ（２０１６））によって以前に記載されているように使用した。全長ヒトＩＬ−２Ｒβを発現させるために、プラスミドｐＲＦ７９１も生成した。簡潔に述べると、ＴｕｒｂｏＧＦＰ蛍光タンパク質をコードするｃＤＮＡ配列、続いて短いグリシン−セリンリンカー配列、ウイルスＴ２Ａ配列、および全長ヒトＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）配列を、それらがＥＦ１アルファプロモーターの制御下で発現されるように、レンチウイルストランスファーベクターにクローニングした。ｐＲＦ７９１を使用して、Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｔ．ら（２０１６）に記載されているようにレンチウイルス粒子を生成し、得られたウイルスを使用して、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に記載されているように通常、培地中で増殖させるネズミ３２Ｄ細胞株を形質導入した。この細胞株を、それがマウスＩＬ２ＲｂまたはマウスＩＬ−１５Ｒアルファではなく、共通ガンマ鎖のみを発現するために選択し、以前にＩＬ−１５生物活性をアッセイするための宿主としても使用した（例えば、Ｚｈｕ，Ｘ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９年９月１５日；１８３（６）：３５９８〜６０７ページを参照のこと。形質導入細胞を、１００μｇ／ｍＬのブラストサイジンに対する耐性およびＧＦＰ蛍光によって同定した。細胞のブラストサイジン耐性、ＧＦＰ発現集団を選択し、系統ポリクローナル株３２Ｄ［ｐＲＦ７９１］として維持した。
【０２６５】
ドキシサイクリン誘導性ＴｅｔＯｎ３ｇプロモーターの制御下でヒトまたはマウスＰＤ−１を発現させるために、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質をコードするｃＤＮＡ配列、続いて短いグリシン−セリンリンカー配列、ウイルスＴ２Ａ配列、および全長ヒトまたはマウスＰＤ−１を、レンチウイルストランスファーベクターｐＬＶＸ−ＳＦＦＶ−Ｐｕｒｏ−Ｐ２Ａ−ＴｅｔＯｎ３Ｇにクローニングした（例えば、Ｍｅｔｚｇｅｒら（２０１６）を参照のこと）。得られたベクターである、ｐＲＦ７６８（ヒトＰＤ−１を発現する）およびｐＲＦ７７０（マウスＰＤ−１を発現する）を各々使用して、Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｔ．ら（２０１６）に記載されているようにレンチウイルス粒子を生成し、得られたウイルスを使用して３２Ｄ［ｐＲＦ７９１］細胞株を形質導入した。形質導入細胞を、１００μｇ／ｍＬのブラストサイジン＋１０ｕｇ／ｍＬのピューロマイシンに対する耐性、ならびにＧＦＰおよびｍＣｈｅｒｒｙ蛍光によって同定した。細胞のブラストサイジン耐性、ピューロマイシン耐性、ＧＦＰ発現集団を選択し、それらがｐＲＦ７６８またはｐＲＦ７７０由来のウイルスを形質導入したかどうかに応じて、それぞれ、ポリクローナル株３２Ｄ［ｐＲＦ７６８＋ｐＲＦ７９１］または３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋［ｐＲＦ７９１］として維持した。
【０２６６】
ｍＣｈｅｒｒｙ−ＰＤ−１の誘導的発現を、ドキシサイクリン（１ｕｇ／ｍＬ最終濃度まで）を１２〜１６時間添加し、続いてフローサイトメトリーによるｍＣｈｅｒｒｙ発現の分析によって、３２Ｄ［ｐＲＦ７６８＋ｐＲＦ７９１］および３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］において確認した。ＩＬ−２ＲｂおよびＰＤ−１の発現もまた、それぞれ、ＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）またはＰＤ−１に特異的な抗体による染色によって確認した。
【０２６７】
クローン細胞株を確立するために、３２Ｄ［ｐＲＦ７６８＋ｐＲＦ７９１］または３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］細胞を１ｕｇ／ｍＬのドキシサイクリンにより１２〜１６時間誘導し、次いでＧＦＰおよびｍＣｈｅｒｒｙ蛍光についてフローサイトメトリーによって分析した。蛍光強度の上位十分位数内に入る各細胞株の単一細胞を９６ウェルプレートの特有のウェルに選別し、細胞の小さなコロニーが現れるまで２週間培養した。これらのコロニーを増殖させて単一細胞クローン株を生成し、これを導入遺伝子発現についてフローサイトメトリーによって確認した。
【０２６８】
実施例４
レポーター細胞株に対する抗体−ＩＬ１５キメラ分子の結合アッセイ
この実施例は、抗体結合標的の発現を伴うかまたは伴わないいずれかの、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）を発現する細胞に対する抗体−サイトカイン融合分子の直接結合をアッセイするための方法を記載している。
【０２６９】
細胞に対する抗体−ＩＬ−１５分子の結合を検出するために、精製した組換え分子の各々約２００マイクログラムを、Ｃｌｉｃｋ−ＩＴ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７  ｓＤＩＢＯ  Ａｌｋｙｎｅキットを使用し、製造業者のプロトコールに従ってＡｌｅｘａ６４７フルオロフォアにより標識した。この実施例および後の全ての実施例に記載されている抗体およびキメラ分子を以下の表６にまとめる：
【０２７０】
【表９−１】
2021516045.tif 000025
【０２７１】
【表９−２】
2021516045.tif 000026
【０２７２】
以下の細胞株を増殖培地中で０．７＊１０＾６細胞／ｍＬまで懸濁し、１６時間培養した：１）未形質導入３２Ｄ（親株）；２）３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］；および３）１ｕｇ／ｍＬのドキシサイクリンの存在下で増殖させてＰＤ−１発現を誘導させた３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］。次いで培養物を１．０＊１０＾６細胞／ｍＬの最終濃度に再懸濁し、各懸濁液０．１ｍＬを実験に必要とされる十分な数の９６ウェル丸底プレートの別個のウェルに播種した。次いで各Ａｌｅｘａ６４７標識化抗体または抗体−サイトカインキメラタンパク質を特有のウェルに添加して、所与のウェルにおいて５００ｎＭ、１００ｎＭ、１０ｍＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭの最終濃度を得た。プレートを４℃にて３０分間インキュベートし、次いで細胞を遠心分離（３００×ｇ、５分）によってペレット化し、０．２ｍＬのＰＢＳに再懸濁した。この洗浄ステップを２回繰り返した。最後の再懸濁後、細胞をＬＳＲＩＩフローサイトメーターで分析した。データを、ＦｌｏｗＪｏバージョン１０を使用して分析した。バックグラウンドより上のＡｌｅｘａ６４７チャネルにおいて蛍光を示した細胞（標識化抗体−サイトカインキメラが添加されていない細胞によって定義される）を、結合について陽性としてスコア化した。添加した標識化タンパク質濃度の関数としてＡｌｅｘａ６４７陽性細胞のパーセントを図２Ａ〜２Ｄに示す。
【０２７３】
抗マウスＰＤ−１部分を特徴とする各々の標識化分子は、低ピコモルの最終濃度でさえ、濃度依存的にＰＤ−１発現細胞（「［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］＋Ｄｏｘ」）に結合することができた。ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ−１５融合分子（図２Ｃ）はまた、ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２のみを発現する細胞（「［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］」）へのより少量の結合を示した；対照的に、抗マウスＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱバリアントは、これらの同じ種類の細胞への低減した結合を示した（図２Ｄ）。アイソタイプ対照抗体型（Ａｂ８．８−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５）は、最も高い試験した最終タンパク質濃度にて細胞のいずれかへの結合のみを示した（図２Ｂ）。試験した４つ全ての組換えタンパク質は、比較的高濃度（１０ｎｍ以上の各化合物）にて同様に３２Ｄ親株への結合のバックグラウンドレベルも示した。
【０２７４】
この実施例は、抗体−ＩＬ−１５キメラタンパク質の抗ＰＤ−１抗体部分がタンパク質の細胞への結合を導く重要な決定因子であることを実証する。このアッセイはまた、（抗体またはＰＤ−１非依存的に）ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２を発現する細胞へ結合する各々の能力における野生型ＩＬ−１５とＮＱ突然変異タンパク質との相違を明らかにする。
【０２７５】
実施例５
レポーター細胞株を使用した抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５キメラ分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能アッセイ
この実施例は、抗体結合標的の発現を伴うかまたは伴わないいずれかの、ＩＬ−１５受容体（ＣＤ１２２＋ＣＤ１３２）を発現する細胞に対する抗体−サイトカイン融合分子の機能的活性アッセイを記載している。
【０２７６】
この実施例では、レポーター細胞株３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］における下流の細胞内シグナル伝達を誘発する抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５キメラ融合タンパク質の能力を測定した。細胞株３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］は内因性マウスＣＤ１３２（共通ガンマ鎖）と共にヒトＣＤ１２２を発現し、ドキシサイクリン誘導性マウスＰＤ−１を発現することができる。ＣＤ１２２／ＣＤ１３２下流シグナル伝達の活性化を、ＩＬ−１５シグナル伝達の下流の結果であることが知られているリン酸化ＳＴＡＴ５（ｐＳＴＡＴ５）の相対変化をモニタリングすることによって測定した（例えば：Ｓｔｅｅｌ  ＪＣ、Ｗａｌｄｍａｎｎ  ＴＡ、Ｍｏｒｒｉｓ  ＪＣ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．２０１２年１月；３３（１）：３５〜４１ページを参照のこと）。３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］細胞を、増殖培地中で０．４〜０．８＊１０ｅ６細胞／ｍＬの濃度に再懸濁し、１μｇ／ｍＬの最終濃度のドキシサイクリンの存在下または非存在下のいずれかで一晩（１２〜１６時間）増殖させた。細胞を遠心分離（２３０×ｇ、５分）によって収集し、ＩＬ−３および子牛の血清を欠く増殖培地中で一度洗浄し、次いで１．０＊１０＾６細胞／ｍＬの最終濃度にて再懸濁し、３７℃にて４時間インキュベートした。単一細胞クローン株のうち、ドキシサイクリン誘導細胞の約４０，０００〜５０，０００個および非ドキシサイクリン細胞の１５０，０００〜１６０，０００個を合わせ、各ウェルに添加した。非単一細胞選別株については、本発明者らは、ドキシサイクリン誘導時に、フローサイトメトリー分析によって約２０〜３０％の検出可能なｍＣｈｅｒｒｙ発現を実証した細胞集団を慣例的に利用した。目的の組換えタンパク質化合物を、各々の最終濃度が５００ｎＭから０．１ｐＭの間であるように各ウェルに添加した。各条件について三連のウェルを同様に設定した。プレートを３７℃にて３０分間、細胞培養インキュベーター内でインキュベートし、次いで細胞を遠心分離（２３０×ｇ、５分）によってペレット化した。次いでパラホルムアルデヒドを各ウェルに直ちに添加し（ＰＢＳ中で最終濃度４％）、細胞を、凝集を阻止するために１回上下にピペッティングすることによって穏やかに混合し、次いで３７℃にて１５分間インキュベートした。次いで細胞を遠心分離（２３０×ｇ、５分）によってペレット化し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液で洗浄した。このステップをさらに２回繰り返した。残留ＰＢＳを注意深く吸引し、０．１ｍＬの冷（−２０℃）メタノールを添加し、続いて凝集を阻止するために１回穏やかにピペッティングした。プレートを箔で密封し、すぐに−２０℃の冷凍庫に少なくとも１時間および数日間（通常、１２〜１６時間）まで置いた。分析の日に、細胞をＰＢＳまたはＦＡＣＳ緩衝液で３回を洗浄した（細胞を３００×ｇのＲＣＦにて回転させてペレットを確保した）。最終細胞ペレットを、抗ｐＳＴＡＴ５抗体（抗Ｓｔａｔ５（ｐＹ６９４）−Ａ６４７（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃｌｏｎｅ：４７／Ｓｔａｔ５（ｐＹ６９４））の１：５０希釈液５０ｕｌ中に再懸濁した。細胞を暗所において室温にて１時間インキュベートした。次いでプ��ートを遠心分離し、上記のようにＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。細胞をウェル当たり１２５〜１５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、細胞をＬＳＲＩＩフローサイトメーターで分析した。ＦｌｏｗＪｏバージョン１０を使用してデータを分析した。
【０２７７】
プラスミドｐＲＦ７７０は、ｍＣｈｅｒｒｙのドキシサイクリン誘導性発現のためのカセット、続いてマウスＰＤ−１（ウイルス２Ａ切断配列によって分離され、２つの独立したポリペプチドを生じる）を含有するので、ｍＣｈｅｒｒｙを発現する細胞（ＰＥ−Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄチャネルを使用して適切に装備されたフローサイトメーター上で検出される）は、「ＰＤ−１＋」として確実にスコア化され；バックグラウンドより上のこのチャネルにおいて蛍光を発しない細胞が「ＰＤ−１−」または「ＰＤ−１（低）」とみなされた。したがって、ｐＳＴＡＴ５陽性細胞の分析は、同じ実験反応内に存在するように、ＰＤ−１＋またはＰＤ−１−（またはＰＤ−１（低））細胞上でゲートされた。
【０２７８】
図３は、上記の方法に従って、いくつかのＩＬ−１５含有分子をアッセイするための３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］レポーター細胞株の使用を示す。図３Ａは、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］ＰＤ−１＋およびＰＤ−１（低）レポーター細胞の混合集団にＡｂ８．８−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を添加した効果を示し、ここで、それはＰＤ−１＋およびＰＤ−１（低）細胞の両方の同等のｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。図３Ｂは、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］ＰＤ−１＋およびＰＤ−１（低）レポーター細胞の混合集団にｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を添加した効果を示す。この場合、ＰＤ−１＋細胞は、ｐＳＴＡＴ５レベルによって測定した場合、ＰＤ−１（低）細胞と比較して、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に対してはるかに高い感度、およびより低いＥＣ５０を示す。図３Ｃは、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］ＰＤ−１＋（すなわち、ドキシサイクリン誘導性）およびＰＤ−１（低）（すなわち、非ドキシサイクリン誘導性）レポーター細胞の混合集団にｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱを添加した効果を示す。ＰＤ−１＋細胞は、ｐＳＴＡＴ５レベルによって測定した場合、ＰＤ−１（低）細胞と比較して、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱに対してはるかに高い感度、およびより低いＥＣ５０を示す。さらに、抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱに対するＥＣ５０値は、ＰＤ−１＋およびＰＤ−１（低）細胞の両方で、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５に対するＥＣ５０値と比較して約１０倍大きく、このことは、ＣＤ２１５（ＩＬ−１５受容体アルファ）への検出可能な結合を排除する特性を有することに加えて、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱが、（ＣＤ１２２／ＣＤ１３２依存性ｐＳＴＡＴ５活性化によって測定した場合）低減した活性を有する突然変異タンパク質バリアントを表すことを示す。以下の表７は、上述の分子について計算したＥＣ５０値をまとめ、また、ＰＤ−１＋細胞とＰＤ−１（低）細胞との間のＥＣ５０の比としての倍率変化を示す。
【０２７９】
【表１０】
2021516045.tif 000027
【０２８０】
ＩＬ−１５部分が、様々な機能的活性またはＣＤ１２２および／もしくはＣＤ１３２への結合をもたらす突然変異を含有する、抗体標的化ＩＬ−１５のさらなるバリアントを同定するために、以下の実験を行った：
表８（下記）に記載し、図４に示したように、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５の種々のＩＬ−１５突然変異タンパク質形態を生成し、上記に詳述した３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋ｐＲＦ７９１］レポーター細胞株を使用してアッセイした。各突然変異タンパク質について、野生型成熟ヒトＩＬ−１５タンパク質配列と比較して存在する突然変異（元のアミノ酸の形式では、配列番号１に存在するアミノ酸残基番号、その位置での新たなアミノ酸）が示されることに留意されたい。ｐＳＴＡＴ５について陽性であったＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）細胞のパーセンテージ（フローサイトメトリー分析による）を図４Ａ〜Ｈにプロットし、得られたプロットを使用して以下の表８に示したようにＥＣ５０値を計算する。
【０２８１】
【表１１】
2021516045.tif 000028
【０２８２】
したがって、本発明のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ法は、野生型ＩＬ−１５配列を含有する対応するキメラタンパク質とは異なる非標的駆動活性または抗体標的駆動活性のいずれかを有するそれらの突然変異体を同定することができる。
【０２８３】
図５は、この実施例における上記の方法に従って、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］レポーター細胞株を使用していくつかのさらなる抗体−ＩＬ−１５分子をアッセイした実験の結果を示す。この例では、分子のいずれもＩＬ−１５受容体アルファＳｕｓｈｉドメイン（ＩＬ−１５ＲａＳｕ）を含まなかった。ｐＳＴＡＴ５について陽性であったＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）細胞のパーセンテージを図５Ａ〜Ｇにプロットし、得られたプロットを使用して以下の表９に示したようにＥＣ５０値を計算する。
【０２８４】
【表１２】
2021516045.tif 000029
【０２８５】
したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ法を使用して、ＩＬ−１５ＲａＳｕを欠き、比較基準ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱとは異なる非標的駆動活性または抗体標的駆動活性のいずれかを有するそれらの突然変異体を同定した。
【０２８６】
図６は、この実施例における上記の方法に従って、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］レポーター細胞株を使用していくつかのさらなる抗体−ＩＬ−１５分子をアッセイした、さらなる実験の結果を示す。この例では、分子の大部分はＩＬ−１５受容体アルファＳｕｓｈｉドメイン（ＩＬ−１５ＲａＳｕ）を欠き；ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５はＩＬ１５ＲｓＳｕ含有対照比較基準として含まれた。ｐＳＴＡＴ５について陽性であったＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）細胞のパーセンテージを図６Ａ〜Ｇにプロットし、得られたプロットを使用して以下の表１０に示したようにＥＣ５０値を計算する。
【０２８７】
【表１３】
2021516045.tif 000030
【０２８８】
図７は、この実施例における上記の方法に従って、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］レポーター細胞株を使用していくつかのさらなる抗体−ＩＬ−１５分子をアッセイしたさらなる実験の結果を示す。この例では、分子の大部分は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒアルファとの間の相互作用をモジュレートしたＶ４９位において突然変異を含有した。ｐＳＴＡＴ５について陽性であったＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）細胞のパーセンテージを図７Ａ〜７Ｅにプロットし、得られたプロットを使用して以下の表１１に示したようにＥＣ５０値を計算する。
【０２８９】
【表１４】
2021516045.tif 000031
【０２９０】
図７Ｆ〜７Ｈは、３２Ｄ［ｐＲＦ７７０＋７９１］レポーター細胞株を使用して、ＩＬ−１５  ＮＱと比較してＩＬ−１５とＩＬ−２Ｒベータ−ガンマとの間の相互作用をモジュレートしたＮ１、Ｄ３０およびＥ６４位において突然変異を含有する分子を含む、いくつかのさらなる抗体−ＩＬ−１５分子をアッセイしたさらなる実験の結果をさらに示す。ｐＳＴＡＴ５について陽性であったＰＤ−１＋またはＰＤ−１（低）細胞のパーセンテージを図７Ｆ〜７Ｈにプロットし、得られたプロットを使用して以下の表１１Ａに示したようにＥＣ５０値を計算する。
【０２９１】
【表１５】
2021516045.tif 000032
【０２９２】
実施例６
非担腫瘍マウスにおける最大耐量（ＭＴＤ）の決定
この実施例は、本明細書に記載されている抗体−ＩＬ−１５融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ最大耐量の決定を記載している。
【０２９３】
健常なメスの６〜８週齢のＣ５６／Ｂｌ６マウスを、示したように、ｘｍＰＤ−１−ＩＬ−１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５、またはｘｍＰＤ−１−ＩＬ−１５  ＮＱのいずれか各３用量により処置した。実験の０、３および６日目に、マウスに、各動物の体重に基づいて、示した濃度の各分子を生じるのに十分な組換えタンパク質を皮下（首の後ろ）に注射した。各化合物を１０匹の動物のコホートに投与した。各動物の体重変化（試験開始時のその体重と比較して）を測定し、各群についての平均値を記録した。図８Ａおよび８Ｂは、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または０．２ｍｇ／ｋｇを投与したｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５群の動物の体重の変化および全生存率をそれぞれプロットしている。２ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇを投与したマウスでは、突然の体重減少およびその後の死亡が認められたので、試験の８日目までに、これらの群の全ての動物が死亡したか、または屠殺する必要があった。図８Ｃに示したさらなる試験では、最終投与濃度１ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、または０．５ｍｇ／ｋｇにてｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５によりマウスを処置した。１ｍｇ／ｋｇ群および０．８ｍｇ／ｋｇ群のマウスでは、それらの開始時の体重の１５〜１８％が減少し、背中を丸め、苦痛を感じているようであった；０．５ｍｇ／ｋｇ投与群の動物では、より軽度の一過性の体重減少が認められた。ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５についてのＭＴＤは０．５ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満と定めた。図８Ｄは、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇの最終濃度でのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの投与後の体重の変化を示す。全ての群の動物では、一過性の体重減少（投与停止後にリバウンド）が認められたが、これはより低い用量のｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５で見られたものよりも軽度であり、明らかな苦痛の徴候は全く見られなかった。したがってｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱについてのＭＴＤは、３ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満と定め、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５よりも良好な耐容性が示された。
【０２９４】
実施例７
Ｂ１６Ｆ１０ネズミ同系腫瘍モデルの特徴付け
種々のマウス腫瘍細胞株は一般に入手可能であり（例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション、ＡＴＣＣから）、免疫細胞浸潤プロファイルがこれらの多くについて評価されている（例えば、Ｍｏｓｌｅｙ，Ｓ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１７年１月；５（１）：２９〜４１ページを参照のこと）。Ｍｏｓｌｅｙらおよびその他の者は、腫瘍細胞株Ｂ１６Ｆ１０は、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスに皮下移植されると、比較的少ない量のＴ細胞（全免疫細胞浸潤の一部として）を含有し、抗ＰＤ−１抗体療法にもほとんど反応しない腫瘍を発生することを示している。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）ならびに末梢免疫細胞でのＰＤ−１の発現を評価するために、以下の実験を実施した：
メスのＣ５７／Ｂｌ６マウスに、単一の（１＊１０＾７細胞の）低継代バイアルから新たに解凍した約５００，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を大腿上部に皮下移植し、移植に十分な細胞を確立するのに必要とされる最小限の時間培養した。３００〜４００ｍｍ３（（長さ×幅２）／２によって定義される）の目に見える腫瘍塊を有する動物のコホートを得ると、マウスを安楽死させ、屠殺し、各動物の脾臓および原発腫瘍塊を得た。４０ｕＭメッシュフィルターを通して脾臓をすりつぶし、続いて１０ｍＬのＰＢＳを添加し、遠心分離（２５０×ｇ、５分）により収集することによって脾細胞を得た。細胞を２ｍＬのＡＣＫ緩衝液に５分間再懸濁し、続いて１０ｍＬのＰＢＳを添加し、上記のように遠心分離によって収集した。細胞ペレットを２ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、４０ｕＭメッシュフィルターに通し、全細胞を計数した。１／１０の量の酵素「Ｒ」を利用したことを除いて、製造業者のプロトコールに従ってＭｉｌｔｅｎｙｉマウス腫瘍解離キットおよびＯｃｔｏｍａｘディソシエーター（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ）を使用して腫瘍細胞懸濁液を得た。解離後、細胞をＰＢＳ中で洗浄し、遠心分離によって収集し、次いで上記のように計数した。次いで各マウス由来の約５００万個の脾細胞および収集した腫瘍細胞の全量（典型的に、１〜５００万個）を、以下の表１２に記載している抗体のカクテルを使用して染色した：
【０２９５】
【表１６】
2021516045.tif 000033
【０２９６】
フローサイトメトリー分析のために、細胞を、生、一重項、ＣＤ４５＋リンパ球と定義した後、Ｔ細胞をＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかとしてゲートした；ＮＫ細胞をＮＫｐ４６＋細胞と定義した。図９Ａは、上述の細胞集団の各々における抗ＰＤ−１染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す；図９Ｂは、陽性を染色した各集団のパーセントを示す（ＦＭＯ対照試料に対するゲーティングによって定義される）。
【０２９７】
したがって、Ｂ１６Ｆ１０  ＴＩＬの中で報告された少量のＴ細胞にもかかわらず、ＴＩＬおよび末梢Ｔ細胞でのＰＤ−１発現パターンは、ＩＬ−１５部分のＰＤ−１駆動ターゲティングの効果を評価する機会を提示した。
【０２９８】
実施例８
ネズミ同系Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍モデルにおける標的化ＩＬ−１５分子の抗腫瘍有効性
この実施例は、ネズミ同系Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍モデルにおいて、マウスの腫瘍成長、体重変化、および全生存率に対する３つのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質を含む、種々の化合物の効果を実証する。この腫瘍モデルにおけるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質の効果を評価するために、以下の実験を実施した：
メスのＣ５７／Ｂｌ６マウスに、単一の（１＊１０＾７細胞の）低継代バイアルから新たに解凍した約５００，０００個のＢ１６Ｆ１０細胞を大腿上部に皮下移植し、移植に十分な細胞を確立するのに必要とされる最小限の時間培養した。６０〜１００ｍｍ３（（長さ×幅２）／２によって定義される）の目に見える腫瘍塊を有する十分な動物を得ると、マウスを投与直前に（ｎ＝１０の動物の）群に無作為化した。目的の各化合物を、３〜４日ごとに、合計３回の用量（０日目を初回投与日と定義した）を所与の群の各動物に皮下注射した（首の後ろ）。腫瘍体積、体重、および動物生存率を、実験の過程を通して追跡した。動物を、それらの腫瘍体積が少なくとも２０００ｍｍ３に測定された時点で屠殺した。各処置群におけるマウスの全生存率、および各処置群内の動物の体重を記録した。
【０２９９】
図１０は、担腫瘍マウスに、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱを５、３、１、もしくは０．３ｍｇ／ｋｇの濃度にて；またはｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５を０．３ｍｇ／ｋｇにて；またはＰＢＳをビヒクル対照として投与した試験の結果を示す。図１０Ａは、０日目（薬物注射の初日）から始まる移植腫瘍のサイズをプロットしている。５、３、１、または０．３ｍｇ／ｋｇの抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱを投与した群の動物では、個々の動物あたりの平均腫瘍体積および腫瘍体積において用量依存的阻害が認められた。さらに、様々な群の動物では、持続的な腫瘍退縮（薬物投与の完了から４５日を超えて検出可能な腫瘍塊なし）が認められ、以下の表１３に示したような長期生存が認められた：
【０３００】
【表１７】
2021516045.tif 000034
【０３０１】
ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱ処置後に長期生存した動物に、この実施例に記載されているようにＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を再チャレンジした。長期生存動物のいずれにおいても検出可能な腫瘍は成長しなかった（Ｂ１６Ｆ１０細胞を並行して移植したナイーブマウスの１００％における腫瘍成長とは対照的である）。
【０３０２】
図１０Ｂは、試験期間中の生存動物の割合をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱ処置群では、１０匹の動物のうち４匹が５００ｍｍ３未満の腫瘍体積で試験中に死亡した。図１０Ｃは、試験期間中の各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの処置群の動物では、一過性の体重減少（０日目と比較して最大１５％の減少）が認められ、投与完了時にはベースラインに戻った（図９Ｃ）。ｘｍＰＤ−１−ＩＬ１５  ＮＱの最大耐量を３ｍｇ／ｋｇまたはそれ未満と定義した（実施例６に記載されている観察と一致する）。
【０３０３】
抗ＰＤ−１抗体；非標的化ＩＬ−１５  ＮＱ化合物；およびＰＤ−１標的化ＩＬ−１５  ＮＱの担腫瘍マウスに対する効果を比較し、対比するために以下の実験を行った：
Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデル試験を本明細書に前に記載したように確立した。この試験は、以下の表１４にまとめているようにｎ＝１０の動物の群を含んだ：
【０３０４】
【表１８】
2021516045.tif 000035
【０３０５】
図１１は、担腫瘍マウスに表１４に記載されている化合物を投与した試験の結果を示す。図１１Ａは、０日目（薬物注射の初日）から開始した移植腫瘍のサイズをプロットしている。抗ＰＤ−１抗体、または非標的化ＩＬ−１５  ＮＱ（Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ）のいずれかによる処置は、ＰＢＳ処置動物と比較して腫瘍成長特性を有意に変化させなかった。対照的に、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱにより処置したマウスは用量依存的に有意な腫瘍成長阻害を示した。図１１Ｂは、試験期間中の各処置群の動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。１ｍｇ／ｋｇにてｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱまたはＡｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱにより処置したマウスは、３回目の投与を受ける直前の６日目にわずかな体重減少（ベースラインから１０％未満）を示した。この体重減少は一過性であり、処置停止により動物はベースラインの体重に戻った。
【０３０６】
したがって、等価用量では、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱは、ｘＰＤ−１またはＡｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱよりも優れた腫瘍成長阻害をもたらし、耐容性は良好であった。
ｘｍＰＤ１−ＩＬ−１５  Ｍ１の単回用量の効果を決定するために、以下の実験を行った。各化合物の３回の用量を以前に与える代わりに、以下に記載されている実験において単回用量のみを投与したことを除いて、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデル試験を本明細書に前に記載したように確立した。この試験は、以下の表１５にまとめられているようにｎ＝１０の動物の群を含んだ。
【０３０７】
【表１９】
2021516045.tif 000036
【０３０８】
図１１Ｃおよび１１Ｄは、担腫瘍マウスに、表１５に記載されているｘｍＰＤ１−ＩＬ−１５  Ｍ１のいずれかの濃度、またはビヒクル対照としてのＰＢＳを単回投与した試験の結果を示す。図１１Ｃは、ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１が用量依存的にＢ１６Ｆ１０腫瘍成長を低減させることを実証する。試験した全てのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１用量（０．１〜５ｍｇ／ｋｇ）は、対照と比較して腫瘍成長の有意な阻害を実証した。以下の表１５は、各処置と比較して腫瘍がないと決定された試験終了時のマウスの数をまとめている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１により、試験終了時までに最大数の腫瘍がないマウス（６／１０）が生じた。図１１Ｄは、試験期間中の各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１の単回用量により処置したマウスは、６日目にベースラインから１３．５％の平均体重減少を示した。この体重減少は一過性であり、体重は次の測定（３日後）までに上昇し、処置停止によりベースラインに戻った。試験期間の間、他の処置群は全く体重減少を示さなかった。
【０３０９】
【表２０】
2021516045.tif 000037
【０３１０】
ｘｍＰＤ１−ＩＬ−１５  Ｍ２の単回用量の効果を決定するために、以下の実験を行った。各化合物の３回の用量を以前に与える代わりに、以下に記載されている実験において単回用量のみを投与したことを除いて、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデル試験を本明細書に前に記載したように確立した。この試験は、以下の表１７にまとめられているようにｎ＝１０の動物の群を含んだ。
【０３１１】
【表２１】
2021516045.tif 000038
【０３１２】
図１１Ｅおよび１１Ｆは、担腫瘍マウスに、表１７に記載されているｘｍＰＤ１−ＩＬ−１５  Ｍ２のいずれかの濃度、またはビヒクル対照としてのＰＢＳを単独で投与した試験の結果を示す。図１１Ｅは、ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２が用量依存的にＢ１６Ｆ１０腫瘍成長を低減させることを実証する。試験した全てのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２用量（０．１〜５ｍｇ／ｋｇ）は、対照と比較して腫瘍成長の有意な阻害を実証した。以下の表１８は、各処置と比較して腫瘍がないと決定された試験終了時のマウスの数をまとめている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２により、試験終了時までに最大数の腫瘍がないマウス（４／１０）が生じた。図１１Ｆは、試験期間中の各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２の単回用量により処置したマウスは、６日目にベースラインから２．９％の平均体重減少を示した。この体重減少は一過性であり、体重は３日後の次の測定までにベースラインに戻った。試験期間の間、他の処置群は全く体重減少を示さなかった。
【０３１３】
【表２２】
2021516045.tif 000039
【０３１４】
ｘｍＰＤ１−ＩＬ−１５  Ｍ１の単回用量の効果をｘｍＰＤ１単独と比較するために、以下の実験を行った。各化合物の３回の用量を以前に与える代わりに、以下に記載されている実験において単回用量のみを投与したことを除いて、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデル試験を本明細書に前に記載したように確立した。この試験は、以下の表１９にまとめられているようにｎ＝１０の動物の群を含んだ。
【０３１５】
【表２３】
2021516045.tif 000040
【０３１６】
以前に実証したように、Ｂ１６Ｆ１０担腫瘍マウスに単回用量として与えた１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１は全く体重減少を示さない有意な腫瘍阻害を実証した。図１１Ｇは、１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１の単回用量がＢ１６Ｆ１０腫瘍成長を弱め得る一方で、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１がｘｍＰＤ１単独のものよりも有意に大きな好転を示すことを実証する。図１１Ｈは、試験期間中の各処置群における動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１、または１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１の単回用量により処置したマウスのいずれもベースラインからの体重減少を全く示さなかった。
【０３１７】
実施例９
ネズミ同系ＭＣ３８結腸腺がん腫瘍モデルにおける標的化ＩＬ−１５分子の抗腫瘍有効性
この実施例は、ネズミ同系ＭＣ３８結腸腺がん腫瘍モデルにおけるマウスの腫瘍成長および体重変化に対する、２つのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質を含む、種々の化合物の効果を実証する。この腫瘍モデルにおけるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質の効果を評価するために、以下の実験を実施した。
【０３１８】
メスのＣ５７／Ｂｌ６マウスに、単一の（１＊１０＾７細胞の）低継代バイアルから新たに解凍した約５００，０００個のＭＣ３８細胞を大腿上部に皮下移植し、移植に十分な細胞を確立するのに必要とされる最小限の時間培養した。６０〜９０ｍｍ３（（長さ×幅２）／２によって定義される）の目に見える腫瘍塊を有する十分な動物を得ると、マウスを投与直前に（ｎ＝１０の動物の）群に無作為化した。目的の各化合物を、所与の群の各動物に１回（０日目、初回投与日として定義される）、皮下注射した（首の後ろ）。腫瘍体積および体重を、実験の過程を通して追跡した。動物を、それらの腫瘍体積が少なくとも２０００ｍｍ３に測定された時点で屠殺した。
【０３１９】
図１１Ｉおよび１１Ｊは、担腫瘍マウスに、５、１、０．３、または０．１ｍｇ／ｋｇの濃度にてｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１を投与した；またはビヒクル対照としてＰＢＳを投与した試験の結果を示す。図１１Ｉは、０日目（薬物注射の初日）から開始した移植腫瘍のサイズをプロットしている。５、１および０．３ｍｇ／ｋｇの抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５  Ｍ１を与えた群の動物では、個々の動物あたりの平均腫瘍体積および腫瘍体積において用量依存的な阻害が認められた。以下の表２０は、各処置と比較して腫瘍がないと決定された、試験終了時のマウスの数をまとめている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１により、試験終了までに最大数の腫瘍がないマウス（９／１０）が生じた。図１１Ｊは、試験期間中の各処置群の動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１を与えた動物は、Ｄ０から一過性の１３．２％の体重減少が生じ、試験終了時までにベースラインレベルに戻った。
【０３２０】
【表２４】
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【０３２１】
図１１Ｋおよび１１Ｌは、担腫瘍マウスに、５、１、０．３、または０．１ｍｇ／ｋｇの濃度にてｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２を投与した；またはビヒクル対照としてＰＢＳを投与した試験の結果を示す。図１１Ｋは、０日目（薬物注射の初日）から開始した移植腫瘍のサイズをプロットしている。５、１および０．３ｍｇ／ｋｇの抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５  Ｍ２を与えた群の動物では、個々の動物あたりの平均腫瘍体積および腫瘍体積において用量依存的な阻害が認められた。以下の表２１は、各処置と比較して腫瘍がないと決定された、試験終了時のマウスの数をまとめている。５ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２により、試験終了までに最大数の腫瘍がないマウス（４／１０）が生じた。図１１Ｌは、試験期間中の各処置群の動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。上記の用量でのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ２は試験期間中に全く体重減少を生じなかった。
【０３２２】
【表２５】
2021516045.tif 000042
【０３２３】
実施例１０
ネズミ免疫細胞集団に対する標的化ＩＬ−１５の効果の特徴付け
この実施例は、脾臓および腫瘍浸潤リンパ球の免疫細胞フェノタイピングを使用して、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質をマウスに投与することの機能的結果を評価するための方法を記載している。
【０３２４】
Ｂ１６Ｆ１０担腫瘍マウスを、処置群あたりｎ＝４または５のマウスを用いて、本質的に実施例８、表１４に記載されているように確立した。表２２に、各群に与えた化合物および群あたりの動物の数を記載している：
【０３２５】
【表２６】
2021516045.tif 000043
【０３２６】
脾細胞および腫瘍細胞懸濁液を、実施例７に記載されているように各動物から得た。次いで得られた細胞懸濁液を、以下の表２３に示しているように、以下の蛍光標識化抗体または生存性色素のカクテルにより染色した：
【０３２７】
【表２７】
2021516045.tif 000044
【０３２８】
フローサイトメトリーによる細胞の染色、洗浄、および分析を、実施例７に記載されているように実施した。
図１２Ａは、単離された脾細胞または腫瘍浸潤リンパ球上のＡｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ、またはｘＰＤ−１のいずれかを検出するように設計した実験からの結果を示す。腫瘍（ヒストグラム、上段に示す）または脾臓（下段に示す）のいずれかからのＴ細胞（生存可能、一重項、ＣＤ９０．２＋）を、ＣＤ８＋（左列）またはＣＤ４＋（右列）にさらに細分した。各細胞集団についての重ね合わせたヒストグラムは、各プロットの隣に記載している化合物により処置した動物からの抗ヒトＦｃ（組換え分子の各々に存在する共通のヒトＩｇＧ  Ｆｃ部分を検出するため）でこれらの細胞を染色した結果を示す。ｘｍＰＤ１−ＮＱ分子をＣＤ８＋  ＴＩＬ上で検出し、ＣＤ４＋  ＴＩＬ上ではわずかな程度で検出し、より低い強度ではあるが、ｘｍＰＤ１分子の検出を反映している。Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ分子は、ＣＤ８＋  ＴＩＬ上でバックグラウンドレベルを超えて検出されなかった。分析時にＣＤ４＋またはＣＤ８＋脾細胞由来の全ての分子についてバックグラウンド染色を超えるシグナルはほとんど観察されなかった。表２４は、この実験を含む全ての動物からの脾細胞およびＴＩＬを染色することから得られた結果をまとめている。
【０３２９】
【表２８】
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【０３３０】
要約すると、抗ＰＤ１およびｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱは同様のターゲティングのパターンを示す：特に、それらは腫瘍常在性ＣＤ８＋  Ｔ細胞上に豊富にある。
さらに、これらの同じ染色した脾細胞およびＴＩＬを分析して上述の処置に起因する免疫細胞頻度の変化を評価した。図１２Ｂおよび図１２Ｃは、それぞれ脾細胞またはＴＩＬにおける種々の処置に起因する免疫細胞サブセットの変化を示す。図１２Ｄは、脾臓および腫瘍におけるＴ細胞のＣＤ８：ＣＤ４比をプロットしている。注目すべきことに、腫瘍におけるＣＤ８：ＣＤ４  Ｔ細胞比はｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ処置で増加したが、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱまたはｘｍＰＤ１処置では増加しなかった。処置群のいずれにおいても脾臓のＣＤ８：ＣＤ４比に変化はなかった。したがって、ＩＬ−１５  ＮＱ突然変異タンパク質のＰＤ−１標的化型を使用すると、ＣＤ８：ＣＤ４比に有意な変化が生じ、同様に抗腫瘍有効性にも有意な相違が生じた（図１０Ａ）。
【０３３１】
図１３は、末梢血および腫瘍浸潤リンパ球の免疫細胞フェノタイピングを使用して、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質Ｍ１およびＭ２をマウスに投与することの薬力学的効果を評価するための方法を記載している。
【０３３２】
Ｂ１６Ｆ１０担腫瘍マウスを、処置群あたりｎ＝５のマウスで、本質的に実施例８の表１５に記載されているように確立した。表２５に、各群に与えた化合物および群あたりの動物の数を記載している：
【０３３３】
【表２９】
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【０３３４】
末梢血および腫瘍細胞懸濁液を、実施例７に記載されているように、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５処置後の３、６または９日目に各動物から得た。次いで得られた細胞懸濁液を、表２３に示しているように、蛍光標識化抗体または生存性色素のカクテルにより染色した。フローサイトメトリーによる細胞の染色、洗浄、および分析を、実施例７に記載されているように実施した。
【０３３５】
図１３Ａおよび１３Ｂは、６日目における末梢血または腫瘍浸潤リンパ球中のＮＫ、ＣＤ８＋  ＴおよびＴｒｅｇ細胞の絶対数を示し、これにより、それぞれｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１およびｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ｍ２によって最大効果を有することが示された。両方のｘｍＰＤ１−ＩＬ１５突然変異タンパク質は末梢血および腫瘍中のＴｒｅｇ細胞を増殖させなかった。ＮＫ細胞は、末梢血、特により高い用量でＣＤ８＋  Ｔ細胞よりも多く増殖した。このことは、ＮＫ細胞はＩＬ−２受容体のより高い発現レベルを有する一方で、ＣＤ８＋  Ｔ細胞はＰＤ−１の発現が全くないか、または低いという事実に起因する。しかし、ＣＤ８＋  Ｔ細胞は腫瘍内でＮＫ細胞より多く増殖し、両方のｘｍＰＤ１−ＩＬ１５突然変異タンパク質はＮＫ細胞よりＣＤ８＋  ＴＩＬ上のＰＤ−１を介して腫瘍に標的化されていることが示唆される。
【０３３６】
ｘｍＰＤ１−Ｍ１の抗腫瘍有効性にどの免疫細胞型が必要とされるか、ならびにＴ細胞移動が有効性：ＮＫ１．１＋枯渇、ＣＤ８  Ｔ細胞枯渇、およびＴ細胞移動の阻害剤であるＦＴＹ７２０による処置に必要とされるかどうかを決定するために３つの試験を実施した（図１３Ｃ、１３Ｄおよび１３Ｅに示す）。ＣＤ８  Ｔ細胞はＣＤ８ｂ抗体により枯渇させた（クローン５３−５．８、Ｍ１注射の３日前および１日前ならびにその後毎週３５０ｍｇをｉ．ｐ．投与した）。ＮＫ細胞はＮＫ１．１抗体により枯渇させた（クローンＰＫ１３６、１ｍｇ／ｋｇのＭ１注射の２日前およびその後毎週２００□ｇ  ｉ．ｐ．）。対照群は、ＩｇＧ２ａアイソタイプ（クローンＣ１．１８．４）およびＩｇＧ１アイソタイプ（クローンＴＮＰ６Ａ７）を含んだ。ＦＴＹ７２０化合物を、１ｍｇ／ｋｇのＭ１注射の３日前および１日前に１ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐ．投与し、その後３日ごとに投与した。
【０３３７】
図１３Ｃおよび１３Ｄは、１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１の処置後のＢ１６モデルにおける抗腫瘍有効性に対するＣＤ８  ＴおよびＮＫ１．１＋細胞の枯渇のそれぞれの効果を示す。ＮＫ１．１＋細胞はＮＫ細胞およびＮＫ  Ｔ細胞の両方を含有する。これらの試験により、ｘｍＰＤ１−Ｍ１の有効性はＣＤ８  Ｔ細胞の非存在下では喪失したが、ＮＫ１．１＋細胞では喪失しなかったことが示唆された。
【０３３８】
図１３Ｅは、１ｍｇ／ｋｇのｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１の処置後のＢ１６モデルにおける抗腫瘍有効性に対する、Ｔ細胞放出を阻害するＦＴＹ４２０処置の効果を示す。結果は、Ｔ細胞移動が有効性には必要とされないことを示す。
【０３３９】
実施例１１
ｉｎ  ｖｉｖｏでのサイトカイン産生に対する標的化ＩＬ−１５の効果の特徴付け
この実施例は、末梢血中に存在するサイトカインを評価することによって、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５突然変異タンパク質をマウスに投与することの機能的結果を評価するための方法を記載している。
【０３４０】
メス（８週齢）のＣ５７Ｂ６／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）に、以下の表２６に記載している化合物および用量を皮下投与した：
【０３４１】
【表３０】
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【０３４２】
顎下腺静脈穿刺（生存中）によって、または即座の心臓穿刺（ＣＯ２による安楽死後）によって、投与後０時間、２時間、４時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間および１２０時間（時点ごとにｎ＝３のマウス）に血液を採取し、マイクロ１．１ｍｌ  Ｚ−ゲルチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）中で処理して血清を得た。各マウスにおいて採血のための適切な体積は、マウスおよびラットの生存採血に関するＮＩＨガイドライン（ＮＩＨ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｂｌｅｅｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｉｃｅ  ａｎｄ  Ｒａｔｓ）ｈｔｔｐ：／／ｏａｃｕ．ｏｄ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＡＲＡＣ／ｓｕｒｖｉｖａｌ．ｐｄｆに従った。全ての動物をＡＡＡＬＡＣ公認施設に維持し、実験動物のケアおよび使用に関するガイド（Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）に記載されている推奨に従って使用した。
【０３４３】
ＩＦＮガンマおよびＩＬ−６を含む複数の血清サイトカインを、マルチスポット電気化学発光Ｕ−プレックスアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用して測定した。各マウスの試料からの総血清の１：５希釈物をアッセイ緩衝液中で作製し、４℃で一晩のインキュベーションのためにプレートに添加した。残りのステップは製造業者が記載している通りに従った。ＳＥＭを用いてデータを群としてプロットし、２群または２−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡを比較した場合、統計をｔ検定によって行い、続いてＴｕｋｅｙの多重比較検定（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を行った。
【０３４４】
図１４は、種々の処置群動物における血清サイトカインレベルの分析から得られた結果を示す。図１４Ａは測定したＩＦＮγのレベルを示す。注目すべきことに、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５処置群の動物は、投与後４８時間まで他の処置群からの動物よりも有意に高いＩＦＮγを有した。７２時間では、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ処置動物は、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５  ０．３ｍｇ／ｋｇ群からの動物よりもわずかに高いＩＦＮγを示し、９６時間では、両方のｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱ群からの動物は他のどの群からのマウスよりもわずかに高いＩＦＮγを有した。この相違は試験終了時（投与後１２０時間）まで持続した。対照的に、非標的化、ＮＱ突然変異体ＩＬ１５を与えた動物（すなわち、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ動物）は、４８および７２時間の時点で有意に低いＩＦＮｇを産生した。したがって、ＩＦＮγ生成の動態および最大応答は試験した分子間で異なり、ＮＱバリアントは、等価用量で野生型ＩＬ−１５含有分子と比較して低減したレベルのＩＦＮｇを生成する。さらに、抗ＰＤ−１ターゲティングアームの存在はＩＦＮｇ産生において有意な相違をもたらし、標的駆動サイトカイン様式を使用する価値が強調される。
【０３４５】
図１４Ｂは、種々の処置群において測定したサイトカインＩＬ−６のレベルを示す。１ｍｇ／ｋｇで試験した３つ全ての群を比較すると、ｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５処置群の動物は、投与後４８時間まで、他の処置群からの動物よりも有意に高いＩＬ−６を有した。７２〜１２０時間の時点の試料では、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱの群は、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５  １ｍｇ／ｋｇ処置群からのものに匹敵するＩＬ−６レベルを生成した。対照的に、Ａｂ８．８−ＩＬ１５  ＮＱ群からの動物は一貫した量のＩＬ−６を生成し、これはＰＤ−１標的化型によって生成されたレベルと常に同等かまたはそれ未満であった。ＩＬ−６産生の同様のパターンが０．３ｍｇ／ｋｇ群において見られ、ｘｍＰＤ１−ＩＬ１５ＲａＳｕ−ＩＬ１５は、より早く、より高いピークを生じ、続いてｘｍＰＤ１−ＩＬ１５  ＮＱは、より遅く出現し、より長く持続するピークを生じた。したがって、ＮＱバリアントは、同等の用量でｉｎ  ｖｉｖｏで産生される２つの炎症性サイトカインの動態および最大出力においてその野生型ＩＬ−１５部分対応物とは異なり；標的化ＮＱは、非標的化よりも複数の時点にわたってより多くのＩＦＮγおよびＩＬ−６を産生した。
【０３４６】
実施例１２
ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）を使用した抗ヒトＰＤ−１−ＩＬ１５  Ｍ１およびＭ２分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの機能アッセイ
この実施例では、ｐＳＴＡＴ５の誘導に対する標的化抗ヒトＰＤ−１−ＩＬ１５の効果を、ｈＰＢＭＣ由来のヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋エフェクターメモリー（ｅｍ）Ｔ細胞およびＣＤ８＋中枢メモリー（ｃｍ）Ｔ細胞に対する非標的化アイソタイプ対照−抗体−ＩＬ１５キメラ分子の効果と比較する。
【０３４７】
健常ボランティアから血液を採取し、フィコール−パーク（ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）勾配を使用してｈＰＢＭＣを単離し、ＰＢＳで洗浄して血小板を除去し、ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）を使用して赤血球を取り除いた。次いで細胞を、５０ｕｌの無血清ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）中で２＊１０ｅ６細胞／ウェルにて播種し、３７℃にて２〜４時間静置させた。静置後、細胞を、３７℃で３０分間、所与の濃度にて記載した分子（表１８）により処理した。次いで細胞を、室温にて１０分間、２％ＰＦＡ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で即座に固定し、その後、それらを、４℃にて３０分間、表面マーカーについて染色した。次いで細胞を、室温にて１０分間、２％ＰＦＡで再び固定し、次いで冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（ＢＤ）に再懸濁し、−２０℃にて一晩保存した。翌日、細胞を、４５分間、透過化緩衝液（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中で抗体（以下の表２７に記載されている）を使用して細胞内マーカーについて染色し、次いでフローサイトメトリーによって分析した。
【０３４８】
【表３１】
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【０３４９】
図１５Ａ〜１５Ｆは、標的化抗ヒトＰＤ−１（ｘｈＰＤ１）−ＩＬ１５および非標的化アイソタイプ対照抗体−ＩＬ１５キメラ分子をｈＰＢＭＣに添加する効果を示し、それらは、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ８＋ｅｍ  Ｔ細胞およびＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞上で異なるｐＳＴＡＴ５活性化を引き起こす。ＮＫ細胞はＰＤ−１発現を有さないかまたは低いＰＤ−１発現を有するので（表２８）、ＮＫ細胞では、アイソタイプ対照−ＩＬ１５のターゲティング活性と比較して、ｘｈＰＤ１−ＩＬ１５に対する有意なターゲティング活性は存在しない（図１５ＡのＭ１および図１５ＤのＭ２）。ＣＤ８＋ｅｍ  Ｔ細胞およびＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞はＰＤ−１発現を有するので（表２８）、ＣＤ８＋ｅｍ  Ｔ細胞およびＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞では、アイソタイプ対照−ＩＬ１５のターゲティング活性と比較して、ｘｈＰＤ１−ＩＬ１５に対する有意なターゲティング活性が存在する（図１５Ｂ〜１５ＣのＭ１および図１５Ｅ〜１５ＦのＭ２）。ＮＫ細胞上のアイソタイプ対照−ＩＬ１５についてのＥＣ５０値は、ＣＤ８＋ｅｍ  Ｔ細胞およびＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞上のＥＣ５０値と比較して３〜４倍低く、ＮＫ細胞は、それらがより高いレベルのＣＤ１２２／ＣＤ１３２発現を有するという事実に起因して、一般にＩＬ１５活性化に対してより感受性であることが確認される。しかしながら、ＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞およびＣＤ８＋ｃｍ  Ｔ細胞は、これらの細胞型でのＰＤ−１発現によって駆動されるターゲティング活性のために、ｘＰＤ１−ＩＬ１５活性化に対してより感受性である。この実施例は、ｘＰＤ１−ＩＬ１５がまた、以前の実施例に示されるように、ヒト系およびマウス系において、ＰＤ−１（低）細胞よりもＰＤ−１＋細胞を優先的に活性化し得ることを示す。以下の表２８は、上述の分子についての計算したＥＣ５０値をまとめ、また、アイソタイプ対照−ＩＬ１５とｘｈＰＤ１−ＩＬ１５とのＥＣ５０の比としての倍率変化を示す。
【０３５０】
【表３２】
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【０３５１】
実施例１３
ＭＣ３８モデルにおける抗マウスＰＤ−１−ＩＬ１５  Ｍ１および抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験
この実施例は、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ１０）と組み合わせてＰＤ−１標的化ＩＬ−１５分子（ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１）を投与することの抗腫瘍有効性を評価するための方法を記載している。マウスに以下のように投与した：ｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１を０日目に０．３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇで投与し、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ１０）を０日目およびその後週に２回、合計５回、各用量５ｍｇ／ｋｇで投与した。図１６Ａおよび１６Ｂに示すように、抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ１０）と組み合わせて投与したｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１の両方の用量において、特に、より低い用量（０．３ｍｇ／ｋｇ）のｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１において相乗効果を観察した。
【０３５２】
図１６Ｃは、試験期間中の各処置群の動物の（０日目のベースラインからの）平均体重変化をプロットしている。５ｍｇ／ｋｇの抗ＥＤＡ−ＩＬ−１０融合タンパク質（ｘＥＤＡ−ＩＬ１０）と組み合わせた１ｍｇ／ｋｇのｘＰＤ１−ＩＬ１５  Ｍ１の単回用量で処置したマウスは、６日目にベースラインから１２％の平均体重減少を示した。この体重減少は一過性であり、体重は３日後の次の測定までにベースラインに戻った。試験期間中、他の処置群は全く体重減少を示さなかった。
【０３５３】
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変更および修飾が、本明細書の教示および以下の特許請求された本発明から逸脱することなしになされ得ることが理解される。上述の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定する意図はない。本明細書の教示は、これらの例示的な態様に関連して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な態様の多数のバリエーションおよび修飾が、過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのこのようなバリエーションおよび修飾は、本明細書の教示の範囲内である。
【０３５４】
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用された全ての参考文献、およびそれらの中で引用された参考文献は、まだ引用されていない範囲まで、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない、組み込まれた文献および同様の資料のうち１つまたは複数が、本出願とは異なる場合または本出願と矛盾する場合には、本出願が優先する。
【０３５５】
上述の説明および実施例は、本発明のある特定の具体的な態様を詳述し、本発明者らが企図する最良の形態を記載している。しかしながら、上述の詳細がいくら本文中に現れていても、本発明が多くの方法で実施され得、本発明が、添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈されるべきであることが、理解される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2021516045.tif 000062
【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１１Ｇ】
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【図１１Ｈ】
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【図１１Ｉ】
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【図１１Ｊ】
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【図１１Ｋ】
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【図１１Ｌ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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