(57)【要約】オリゴヌクレオチドの経口投与のための方法が本明細書に提供される。マイクロＲＮＡを標的とする修飾オリゴヌクレオチドの経口投与のための方法が本明細書にさらに提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロＲＮＡの活性を阻害する方法であって、前記マイクロＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜２５個の連結ヌクレオチドの長さを有し、前記投与が、経口投与である、前記方法。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、前記マイクロＲＮＡに完全に相補的である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マイクロＲＮＡが、腎臓で発現し、前記化合物が、前記修飾オリゴヌクレオチドからなる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記マイクロＲＮＡが、肝臓で発現し、前記化合物が、コンジュゲート部分に連結した前記修飾オリゴヌクレオチドを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜１３個の連結ヌクレオシド長であるか、または８〜１２個の連結ヌクレオチド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、８個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１１個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１３個の連結ヌクレオシド長である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、修飾糖部分を含む少なくとも１つのヌクレオシドを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドが、修飾糖部分を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
各修飾糖部分が、独立して、２’−Ｏ−メチル糖部分、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部分、２’−フルオロ糖部分、及び二環式糖部分から選択される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
各二環式糖部分が、独立して、ｃＥｔ糖部分及びＬＮＡ糖部分から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｃＥｔヌクレオシドが、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、複数の非二環式ヌクレオシド及び複数の二環式ヌクレオシドを含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
各非二環式ヌクレオシドが、独立して、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、及び２’−フルオロヌクレオシドから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
各二環式ヌクレオシドが、ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｃＥｔヌクレオシドが、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結が、修飾ヌクレオシド間連結である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記修飾ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結である、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記コンジュゲート部分が、コレステロール部分または炭水化物部分を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項２５】
前記炭水化物部分が、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、及びＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が、以下の構造を有し、
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ
式中、各Ｌが、独立して、リガンドであり、ｎが、１〜１０であり、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１が、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、Ｘ２が、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、請求項４に記載の方法。
【請求項２７】
以下の構造を含み、
【化１】
2021531278.tif 000033
式中、
Ｂが、―Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ１−、及び―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ２−から選択され、
ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
ＲＮが、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、及びベンジルから選択され、
Ｚ、Ｚ’、及びＺ”が、各々独立して、Ｏ及びＳから選択され、
各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、
ｍが、１〜５であり、
Ｘ１が、ホスホジエステル連結及びホスホロチオエート連結から選択され、
Ｘ２が、ホスホジエステル連結であり、
波線が、残りのリンカー及びリガンド（複数可）との結合を示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ｎが、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項２９】
ｎが、３であり、各リガンドが、Ｎ−アセチルガラクトサミンである、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３０】
ｎが、１であり、前記リガンドが、コレステロールである、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物が、以下の構造を有し、
【化２】
2021531278.tif 000034
式中、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１及びＸ２が、各々独立して、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物が、以下の構造を有し、
【化３】
2021531278.tif 000035
式中、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１及びＸ２が、各々独立して、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項３３】
Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも１つが、ホスホジエステル連結である、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
Ｘ１及びＸ２の各々が、ホスホジエステル連結である、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３５】
ｍが、１である、請求項２６〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ｍが、２、３、４、または５である、請求項２６〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
Ｎｍが、Ｎ’ｐＮ”であり、各Ｎ’が、独立して、非修飾ヌクレオシドであり、ｐが、０〜４であり、Ｎ”が、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである、請求項２６〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ｐが、０である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記非修飾糖部分が、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記β−Ｄ−デオキシリボースが、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記化合物が、医薬組成物中に存在する、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記医薬組成物が、薬学的に許容される希釈剤を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記薬学的に許容される希釈剤が、水溶液である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記水溶液が、生理食塩水である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記水溶液が、重炭酸ナトリウムを含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月２０日に出願された米国仮出願第６２／７０１，３１７号の優先権の利益を主張するものであり、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
オリゴヌクレオチドの経口投与のための方法が本明細書に提供される。
【背景技術】
【０００３】
現在、抗ｍｉＲオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの好ましい投与経路は、皮下注射によるものである。経口投与がより便利であり得るため、オリゴヌクレオチドの経口投与に関するいくつかの研究が行われている。例えば、浸透促進剤とともに製剤化された修飾オリゴヌクレオチドの経口投与は、皮下注射と比較して、健康なボランティアにおいて９．５％の平均バイオアベイラビリティをもたらした（Ｔｉｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９７（１）：２２５−３６）。初期の肯定的な結果にもかかわらず、オリゴヌクレオチドの経口送達に対する課題は残っており、アンチセンスメカニズムを介して作用する化合物は、疾患の治療のための開発に進んでいない。
【発明の概要】
【０００４】
実施形態１  標的ＲＮＡの活性を阻害する方法であって、前記標的ＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜２５個の連結ヌクレオチドの長さを有し、前記投与が、経口投与である、前記方法。
【０００５】
実施形態２  前記標的ＲＮＡが、マイクロＲＮＡである、実施形態１に記載の方法。
【０００６】
実施形態３  前記標的ＲＮＡが、プレメッセンジャーＲＮＡである、実施形態１に記載の方法。
【０００７】
実施形態４  前記標的ＲＮＡが、メッセンジャーＲＮＡである、実施形態１に記載の方法。
【０００８】
実施形態５  前記標的ＲＮＡが、長鎖非コードＲＮＡである、実施形態１に記載の方法。
【０００９】
実施形態６  前記標的ＲＮＡが、腎臓で発現し、前記化合物が、前記修飾オリゴヌクレオチドからなる、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法。
【００１０】
実施形態７  前記標的ＲＮＡが、肝臓で発現し、前記化合物が、コンジュゲート部分に連結した前記修飾オリゴヌクレオチドを含む、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法。
【００１１】
実施形態８  前記対象が、前記標的ＲＮＡによって媒介される疾患を有する、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【００１２】
実施形態９  前記化合物の前記経口投与が、前記疾患の１つ以上の症状を改善する、実施形態８に記載の方法。
【００１３】
実施形態１０  マイクロＲＮＡの活性を阻害する方法であって、前記マイクロＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜２５個の連結ヌクレオチドの長さを有し、前記投与が、経口投与である、前記方法。
【００１４】
実施形態１１  前記修飾オリゴヌクレオチドが、前記マイクロＲＮＡに完全に相補的である、実施形態１に記載の方法。
【００１５】
実施形態１２  前記マイクロＲＮＡが、腎臓で発現し、前記化合物が、前記修飾オリゴヌクレオチドからなる、実施形態１または２に記載の方法。
【００１６】
実施形態１３  前記マイクロＲＮＡが、肝臓で発現し、前記化合物が、コンジュゲート部分に連結した前記修飾オリゴヌクレオチドを含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の方法。
【００１７】
実施形態１４  前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜２１個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００１８】
実施形態１５  前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜１８個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００１９】
実施形態１６  前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜１５個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２０】
実施形態１７  前記修飾オリゴヌクレオチドが、６〜１２個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２１】
実施形態１８  前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜１２個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２２】
実施形態１９  前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜１３個の連結ヌクレオシドの長さを有する、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２３】
実施形態２０  前記修飾オリゴヌクレオチドが、６個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２４】
実施形態２１  前記修飾オリゴヌクレオチドが、７個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２５】
実施形態２２  前記修飾オリゴヌクレオチドが、８個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２６】
実施形態２３  前記修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２７】
実施形態２４  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２８】
実施形態２５  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１１個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００２９】
実施形態２６  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【００３０】
実施形態２７  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１３個の連結ヌクレオシド長である、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【００３１】
実施形態２８  前記修飾オリゴヌクレオチドが、修飾糖部分を含む少なくとも１つのヌクレオシドを含む、実施形態１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
【００３２】
実施形態２９  前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドが、修飾糖部分を含む、実施形態２８に記載の方法。
【００３３】
実施形態３０  各修飾糖部分が、独立して、２’−Ｏ−メチル糖部分、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部分、２’−フルオロ糖部分、及び二環式糖部分から選択される、実施形態２８または２９に記載の方法。
【００３４】
実施形態３１  各二環式糖部分が、独立して、ｃＥｔ糖部分及びＬＮＡ糖部分から選択される、実施形態３０に記載の方法。
【００３５】
実施形態３２  前記ｃＥｔヌクレオシドが、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、実施形態３１に記載の方法。
【００３６】
実施形態３３  前記修飾オリゴヌクレオチドが、複数の非二環式ヌクレオシド及び複数の二環式ヌクレオシドを含む、実施形態１〜２７のいずれかに記載の方法。
【００３７】
実施形態３４  各非二環式ヌクレオシドが、独立して、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、及び２’−フルオロヌクレオシドから選択される、実施形態３３に記載の方法。
【００３８】
実施形態３５  各二環式ヌクレオシドが、ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択される、実施形態３４に記載の方法。
【００３９】
実施形態３６  前記ｃＥｔヌクレオシドが、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、実施形態３５に記載の方法。
【００４０】
実施形態３７  前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む、実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法。
【００４１】
実施形態３８  前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結が、修飾ヌクレオシド間連結である、実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法。
【００４２】
実施形態３９  前記修飾ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結である、実施形態３７または３８に記載の方法。
【００４３】
実施形態４０  前記コンジュゲート部分が、コレステロール部分または炭水化物部分を含む、実施形態７または１３に記載の方法。
【００４４】
実施形態４１  前記炭水化物部分が、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、及びＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、実施形態４０に記載の方法。
【００４５】
実施形態４２  前記化合物が、以下の構造を有し、
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ
式中、各Ｌが、独立して、リガンドであり、ｎが、１〜１０であり、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１が、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、Ｘ２が、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、実施形態７または１３に記載の方法。
【００４６】
実施形態４３  ｎが、１より大きい場合、Ｌｎ−リンカーが、以下の構造を有し、
【化１】
2021531278.tif 000002
式中、各Ｌが、独立して、リガンドであり、ｎが、１〜１０であり、Ｓが、足場であり、Ｑ’及びＱ’’が、独立して、連結基である、実施形態４２に記載の方法。
【００４７】
実施形態４４  Ｑ’及びＱ’’が、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される、実施形態４３に記載の方法。
【００４８】
実施形態４５  前記足場が、２、３、４、または５個のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに連結する、実施形態４３または４４に記載の方法。
【００４９】
実施形態４６  前記足場が、３個のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに連結する、実施形態４３または４４に記載の方法。
【００５０】
実施形態４７  以下の構造を含み、
【化２】
2021531278.tif 000003
式中、
Ｂが、―Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ１−、及び―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ２−から選択され、
ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
ＲＮが、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、及びベンジルから選択され、
Ｚ、Ｚ’、及びＺ”が、各々独立して、Ｏ及びＳから選択され、
各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、
ｍが、１〜５であり、
Ｘ１が、ホスホジエステル連結及びホスホロチオエート連結から選択され、
Ｘ２が、ホスホジエステル連結であり、
波線が、残りのリンカー及びリガンド（複数可）との結合を示す、実施形態４２〜４６のいずれか１つに記載の方法。
【００５１】
実施形態４８  ｎが、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である、実施形態４２〜４７のいずれか１つに記載の方法。
【００５２】
実施形態４９  ｎが、３である、実施形態４２〜４８のいずれか１つに記載の方法。
【００５３】
実施形態５０  少なくとも１つのリガンドが、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、及びカチオン性脂質から選択される、実施形態４２〜４９のいずれか１つに記載の方法。
【００５４】
実施形態５１  少なくとも１つのリガンドが、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、及びＮ−アセチルガラクトサミンから選択される、実施形態４２〜５０のいずれか１つに記載の方法。
【００５５】
実施形態５２  少なくとも１つのリガンドが、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、及びＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、実施形態４２〜５０のいずれか１つに記載の方法。
【００５６】
実施形態５３  各リガンドが、Ｎ−アセチルガラクトサミンである、実施形態４２〜５０のいずれか１つに記載の方法。
【００５７】
実施形態５４  前記化合物が、以下の構造を有し、
【化３】
2021531278.tif 000004
式中、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１及びＸ２が、各々独立して、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、実施形態４２〜５０のいずれか１つに記載の方法。
【００５８】
実施形態５５  前記化合物が、以下の構造を有し、
【化４】
2021531278.tif 000005
式中、各Ｎが、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍが、１〜５であり、Ｘ１及びＸ２が、各々独立して、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯが、前記修飾オリゴヌクレオチドである、実施形態４２〜５０のいずれか１つに記載の方法。
【００５９】
実施形態５６  Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも１つが、ホスホジエステル連結である、実施形態５４または５５に記載の方法。
【００６０】
実施形態５７  Ｘ１及びＸ２の各々が、ホスホジエステル連結である、実施形態５４または５５に記載の方法。
【００６１】
実施形態５８  ｍが、１である、実施形態４２〜５７のいずれか１つに記載の方法。
【００６２】
実施形態５９  ｍが、２、３、４、または５である、実施形態４２〜５７のいずれか１つに記載の方法。
【００６３】
実施形態６０  Ｎｍが、Ｎ’ｐＮ”であり、各Ｎ’が、独立して、非修飾ヌクレオシドであり、ｐが、０〜４であり、Ｎ”が、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである、実施形態４２〜５９のいずれか１つに記載の方法。
【００６４】
実施形態６１  ｐが、０である、実施形態６０に記載の方法。
【００６５】
実施形態６２  ｐが、１、２、３、または４である、実施形態６０に記載の化合物。
【００６６】
実施形態６３  前記非修飾糖部分が、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである、実施形態６０〜６２のいずれか１つに記載の方法。
【００６７】
実施形態６４  前記β−Ｄ−デオキシリボースが、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンである、実施形態６３に記載の方法。
【００６８】
実施形態６５  前記化合物が、医薬組成物中に存在する、実施形態１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【００６９】
実施形態６６  前記医薬組成物が、薬学的に許容される希釈剤を含む、実施形態６５に記載の方法。
【００７０】
実施形態６７  前記薬学的に許容される希釈剤が、水溶液である、実施形態６６に記載の方法。
【００７１】
実施形態６８  前記水溶液が、生理食塩水である、実施形態６７に記載の方法。
【００７２】
実施形態６９  前記水溶液が、重炭酸ナトリウムを含む、実施形態６７または６８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】様々な化合物の経口（上部パネル）または皮下（下部パネル）投与後の平均ＡＬＤＯＡ抑制解除を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。特別な定義が与えられない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び製薬化学に関連して用いられる命名法、ならびにそれらの手順及び技法は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されるものである。本明細書の用語に複数の定義がある場合は、本項の定義が優先される。標準的な技法が、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化及び送達、ならびに患者の治療のために使用され得る。特定のそのような技法及び手順は、例えば、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４、及び“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０に見ることができ、これは、任意の目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本明細書の開示全体を通して参照されるすべての特許、特許出願、公開出願及び公報、ＧＥＮＢＡＮＫシーケンス、ウェブサイト、ならびに他の公開された資料は、特に明記しない限り、それらの全体が参照により組み込まれる。ＵＲＬまたは他のそのような識別子またはアドレスを参照する場合、そのような識別子は変わる可能性があり、インターネット上の特定の情報は変わる可能性があることが理解されるが、同等の情報は、インターネットを検索することによって見つけることができる。それらへの参照は、そのような情報の入手可能性と一般への普及を証明するものである。
【００７５】
本発明の組成物及び方法を開示及び記載する前に、本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないことを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上、別途明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含むことに留意されなければならない。
【００７６】
定義
「対象」とは、治療または療法のために選択されたヒトを意味する。
【００７７】
「それを必要としている対象」とは、特定の療法または治療を必要としていると特定された対象を意味する。
【００７８】
「有することが疑われる対象」とは、疾患の１つ以上の臨床的指標を呈する対象を意味する。
【００７９】
「投与すること」とは、対象に医薬剤または組成物を提供することを意味し、限定されないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。
【００８０】
「経口投与」とは、対象の口からの投与を意味する。
【００８１】
「非経口投与」とは、注射または注入を介した投与を意味する。非経口投与としては、限定されないが、皮下投与、静脈内投与、及び筋肉内投与が挙げられる。
【００８２】
「皮下投与」とは、皮膚の直下への投与を意味する。
【００８３】
「静脈内投与」とは、静脈内への投与を意味する。
【００８４】
「同時に投与される」とは、各薬剤の薬理学的効果が対象に存在する、任意の方法での、対象への２つ以上の薬剤の同時投与を指す。同時投与は、両方の薬剤が、単一の医薬組成物で、同じ剤形で、または同じ投与経路によって投与されることを必要としない。両方の薬剤の効果は、同時に存在する必要はない。効果は、ある期間重なることのみを必要とし、同一の広がりを有する必要はない。
【００８５】
「期間」とは、活性または事象が継続している期間を意味する。特定の実施形態では、治療期間とは、ある用量の医薬剤または医薬組成物が投与される期間である。
【００８６】
「療法」とは、疾患の治療方法を意味する。特定の実施形態では、療法としては、限定されないが、化学療法、放射線療法、または医薬剤の投与が挙げられる。
【００８７】
「治療」とは、疾患の治癒または改善のために使用される１つ以上の特定の手順を適用することを意味する。特定の実施形態では、特定の手順は、１つ以上の医薬剤を投与することである。
【００８８】
「改善」とは、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度が低下することを意味する。特定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行を遅延させることまたは減速させることを含む。指標の重症度は、当業者に既知である主観的尺度または客観的尺度によって決定され得る。
【００８９】
「発症のリスクがある」とは、対象が状態または疾患を発症する素因がある状態を意味する。特定の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクのある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、状態または疾患を有すると診断されるのに十分な数の症状を呈さない。特定の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクのある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、状態または疾患を有すると診断される必要がある程度は低い。
【００９０】
「発生を予防する」とは、疾患または状態を発症するリスクのある対象において、状態または疾患の発症を予防することを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクのある対象は、疾患または状態をすでに有する対象が受ける治療と同様の治療を受ける。
【００９１】
「発生を遅延させる」とは、疾患または状態を発症するリスクがある対象において、状態または疾患の発症を遅延させることを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクのある対象は、疾患または状態をすでに有する対象が受ける治療と同様の治療を受ける。
【００９２】
「治療剤」とは、疾患の治癒、改善、または予防に使用される医薬剤を意味する。
【００９３】
「用量」とは、単回投与で提供される医薬剤の特定の量を意味する。特定の実施形態では、用量は、２回以上のボーラス、錠剤、または注射で投与され得る。例えば、特定の実施形態では、皮下投与が所望される場合、所望の用量は、単回注射では容易に対応できない体積を必要とする。そのような実施形態では、２回以上の注射を使用して、所望の用量を達成し得る。特定の実施形態では、用量は、個体における注射部位反応を最小化するために、２回以上の注射で投与され得る。特定の実施形態では、用量は、緩徐な注入として投与される。
【００９４】
「投薬単位」とは、医薬剤が提供される形態を意味する。特定の実施形態では、投薬単位は、凍結乾燥されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態では、投薬単位は、再構成されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００９５】
「治療有効量」とは、動物に治療的利益をもたらす医薬剤の量を指す。
【００９６】
「医薬組成物」とは、個体への投与に好適な物質の混合物を意味し、医薬剤を含む。例えば、医薬組成物は、滅菌水溶液を含み得る。
【００９７】
「医薬剤」とは、対象に投与される場合に治療的効果をもたらす物質を意味する。
【００９８】
「有効医薬成分」とは、所望の効果をもたらす医薬組成物中の物質を意味する。
【００９９】
「薬学的に許容される塩」とは、本明細書に提供される化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ対象に投与される場合に望ましくない毒物学的効果を有さない塩を意味する。本明細書に提供される化合物の非限定的な例示的な薬学的に許容される塩としては、ナトリウム及びカリウムの塩形態が挙げられる。本明細書で使用される場合、「化合物」、「オリゴヌクレオチド」、及び「修飾オリゴヌクレオチド」という用語は、特に明記しない限り、その薬学的に許容される塩を含む。
【０１００】
「生理食塩水」とは、塩化ナトリウムの水溶液を意味する。
【０１０１】
「臓器機能の改善」とは、正常範囲に向けた臓器機能の変化を意味する。特定の実施形態では、臓器機能は、対象の血液または尿中に見出される分子を測定することによって評価される。例えば、特定の実施形態では、肝機能の改善は、血中の肝トランスアミナーゼレベルの低下によって測定される。特定の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の減少、タンパク尿の減少、アルブミン尿の減少などによって測定される。
【０１０２】
「許容可能な安全性プロファイル」とは、臨床的に許容可能な範囲内にある副作用のパターンを意味する。
【０１０３】
「副作用」とは、所望の効果以外の、治療に起因する生理学的応答を意味する。特定の実施形態では、副作用としては、限定されないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、及びミオパシーが挙げられる。そのような副作用は、直接的または間接的に検出され得る。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１０４】
「注射部位反応」とは、個体の注射部位での皮膚の炎症または異常な発赤を意味する。
【０１０５】
「対象の服薬遵守」とは、対象が推奨または処方された療法を遵守することを意味する。
【０１０６】
「遵守する」とは、対象が推奨された療法を遵守することを意味する。
【０１０７】
「推奨された療法」とは、疾患を治療する、改善する、遅延させる、または予防するために医療専門家によって推奨された治療を意味する。
【０１０８】
「オリゴヌクレオチド」とは、各々が互いに独立して、修飾または非修飾であり得る、複数の連結ヌクレオシドを含む化合物を意味する。
【０１０９】
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、天然に存在する末端、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結と比較して１つ以上の修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含み得る。
【０１１０】
「抗ｍｉＲ」とは、マイクロＲＮＡに相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
【０１１１】
「標的化」とは、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセスを意味する。
【０１１２】
「を標的とする」とは、標的核酸へのハイブリダイゼーションが可能になる核酸塩基配列を有することを意味する。
【０１１３】
「変調」とは、機能、量、または活性の変動を意味する。特定の実施形態では、変調とは、機能、量、または活性の増加を意味する。特定の実施形態では、変調とは、機能、量、または活性の低下を意味する。
【０１１４】
「発現」とは、遺伝子のコード化された情報が、細胞内に存在し、かつ細胞内で作動する構造に変換される任意の機能及びステップを意味する。
【０１１５】
「核酸塩基配列」とは、オリゴマー化合物または核酸における隣接する核酸塩基の順序を意味し、典型的には、任意の糖、連結、及び／または核酸塩基の修飾とは関係なく、５’から３’の配向で列挙される。
【０１１６】
「隣接する核酸塩基」とは、核酸内で互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【０１１７】
「核酸塩基相補性」とは、２つの核酸塩基が水素結合を介して非共有結合的に対合する能力を意味する。
【０１１８】
「相補的」とは、１つの核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができることを意味する。特定の実施形態では、相補的とは、標的核酸にハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドを指す。
【０１１９】
「完全に相補的」とは、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、標的核酸中の対応する各位置において、核酸塩基と対合できることを意味する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的（１００％相補的とも呼ばれる）であり、すなわち、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、マイクロＲＮＡ中の対応する位置において、核酸塩基に相補的である。修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的であり得、かつマイクロＲＮＡの長さよりも短い複数の連結ヌクレオシドを有し得る。例えば、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基がマイクロＲＮＡ中の対応する位置において核酸塩基に相補的である、１０個の連結ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的である。
【０１２０】
「パーセント相補性」とは、標的核酸の等長部分に相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の割合を意味する。パーセント相補性は、標的核酸中の対応する位置において核酸塩基に相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチド中の核酸塩基の総数で割ることによって計算される。
【０１２１】
「パーセント同一性」とは、第２の核酸中の対応する位置において核酸塩基と同一である第１の核酸中の核酸塩基の数を、第１の核酸中の核酸塩基の総数で割ったものを意味する。特定の実施形態では、第１の核酸は、マイクロＲＮＡであり、第２の核酸は、マイクロＲＮＡである。特定の実施形態では、第１の核酸は、オリゴヌクレオチドであり、第２の核酸は、オリゴヌクレオチドである。
【０１２２】
「ハイブリダイズする」とは、核酸塩基の相補性によって起こる相補的な核酸のアニーリングを意味する。
【０１２３】
「ミスマッチ」とは、第２の核酸の対応する位置において、核酸塩基とワトソンクリック対合することができない第１の核酸の核酸塩基を意味する。
【０１２４】
核酸塩基配列の文脈における「同一」とは、糖、連結、及び／または核酸塩基修飾とは関係なく、かつ存在する任意のピリミジンのメチル状態とは関係なく、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。
【０１２５】
「マイクロＲＮＡ」とは、長さが１８〜２５核酸塩基である内因性非コードＲＮＡを意味し、酵素ダイサーによるプレマイクロＲＮＡの切断の産物である。成熟したマイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅとして既知であるマイクロＲＮＡデータベースに見られる（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡは、「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略される。
【０１２６】
「マイクロＲＮＡ調節転写物」とは、マイクロＲＮＡによって調節される転写物を意味する。
【０１２７】
「シード配列」とは、成熟マイクロＲＮＡ配列の５’末端の核酸塩基２〜７を含む核酸塩基配列を意味する。
【０１２８】
「シードマッチ配列」とは、シード配列に相補的であり、かつシード配列と同じ長さである、核酸塩基配列を意味する。
【０１２９】
「天然に存在するヌクレオシド間連結」とは、ヌクレオシド間の３’から５’へのホスホジエステル連結を意味する。
【０１３０】
「天然糖」とは、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。
【０１３１】
「ヌクレオシド間連結」とは、隣接しているヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【０１３２】
「連結ヌクレオシド」とは、共有結合によって結合されたヌクレオシドを意味する。
【０１３３】
「核酸塩基」とは、別の核酸塩基と非共有結合的に対合することができる複素環部分を意味する。
【０１３４】
「ヌクレオシド」とは、糖部分に連結された核酸塩基を意味する。
【０１３５】
「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合しているホスフェート基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１３６】
複数の連結ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」とは、特定の数の連結ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。したがって、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含み得る。特に明記しない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのものを超える任意の追加のヌクレオシドを含まない。
【０１３７】
「修飾ヌクレオシド」とは、天然に存在するヌクレオシドからの任意の変化を有するヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有し得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、非二環式ヌクレオシドである。
【０１３８】
「２’−修飾ヌクレオシド」とは、位置が２−デオキシリボースまたはリボースで番号付けされているように、フラノシル環の２’位に相当する位置に任意の修飾を有する糖を含むヌクレオシドを意味する。２’−修飾ヌクレオシドとしては、限定されないが、二環式糖部分を含むヌクレオシドが挙げられることを理解されたい。
【０１３９】
「修飾ヌクレオシド間連結」とは、天然に存在するヌクレオシド間連結からの任意の変化を意味する。
【０１４０】
「ホスホロチオエートヌクレオシド間連結」とは、非架橋原子のうちの１つが硫黄原子であるヌクレオシド間の連結、すなわちＯＰ（Ｏ）（Ｓ）Ｏ−を意味する。疑義を避けるために、硫黄原子は、プロトン化され得るか、またはＮａ＋、Ｋ＋などの対イオンと会合され得る。
【０１４１】
「ホスホジエステル連結」とは、構造−ＯＰ（Ｏ）２Ｏ−を有するヌクレオシド間の連結を意味する。疑義を避けるために、非架橋酸素のうちの１つは、プロトン化され得るか、またはＮａ＋、Ｋ＋などの対イオンと会合され得る。
【０１４２】
「非修飾核酸塩基」とは、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然に存在する複素環式塩基を意味し、プリンは、アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）をベースとし、ピリミジンは、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンなど）、及びウラシル（Ｕ）をベースとする。
【０１４３】
「５−メチルシトシン」とは、シトシン環の５位に付着しているメチル基を含むシトシンを意味する。
【０１４４】
「非メチル化シトシン」とは、シトシン環の５位に付着しているメチル基を有さないシトシンを意味する。
【０１４５】
「修飾核酸塩基」とは、非修飾核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。
【０１４６】
「糖部分」とは、天然に存在するフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
【０１４７】
「修飾糖部分」とは、置換糖部分または糖代理物を意味する。
【０１４８】
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」とは、２’位にＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。
【０１４９】
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」とは、２’位にＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。
【０１５０】
「２’−Ｏ−フルオロ」または「２’−Ｆ」とは、２’位のフルオロ修飾を有する糖を意味する。
【０１５１】
「二環式糖部分」とは、４〜７員環の２個の原子を結合して第２の環を形成し、二環式構造をもたらす架橋を含む、４〜７員環（限定されないが、フラノシルなど）を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、４〜７員環は、糖環である。特定の実施形態では、４〜７員環は、フラノシルである。特定のそのような実施形態では、架橋は、フラノシルの２’−炭素と４’−炭素を結合する。非限定的な例示的な二環式糖部分としては、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ、及びＲ−ｃＥｔが挙げられる。
【０１５２】
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」とは、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間に（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１５３】
「ＥＮＡ糖部分」とは、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間に（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１５４】
「拘束エチル（ｃＥｔ）糖部分」とは、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ配向に拘束されている。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｒ配向に拘束されている。
【０１５５】
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」とは、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＳ拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１５６】
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」とは、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子の間にＲ拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１５７】
「２’−Ｏ−メチルヌクレオシド」とは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。
【０１５８】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」とは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１５９】
「２’−フルオロヌクレオシド」とは、２’−フルオロ糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１６０】
「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を有する修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を有し得る。
【０１６１】
「ｃＥｔヌクレオシド」とは、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。
【０１６２】
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」とは、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６３】
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」とは、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６４】
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」とは、天然に存在するＤＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１６５】
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」とは、天然に存在するＲＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１６６】
「ＬＮＡヌクレオシド」とは、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６７】
「ＥＮＡヌクレオシド」とは、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「連結基」は、１つ以上の共有結合を介して第１の化学成分を第２の化学成分に付着させる原子または原子の群を指す。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、「リンカー」は、１つ以上の共有結合を介して１つ以上のリガンドを修飾または非修飾ヌクレオシドに付着させる原子または原子群を指す。修飾または非修飾ヌクレオシドは、本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドの一部であり得るか、またはホスホジエステルもしくはホスホロチオエート結合を介して修飾オリゴヌクレオチドに付着され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に付着させる。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に付着させる。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に付着している修飾または非修飾ヌクレオシドに付着させる。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に付着している修飾または非修飾ヌクレオシドに付着させる。リンカーが、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端または修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に付着している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに付着させる場合、いくつかの実施形態では、リンカーの付着点は、修飾または非修飾糖部分の３’炭素であり得る。リンカーが、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端または修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に付着している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに付着させる場合、いくつかの実施形態では、リンカーの付着点は、修飾または非修飾糖部分の５’炭素であり得る。
【０１７０】
概要
オリゴヌクレオチドの経口投与は、皮下投与に対して有利であり得るいくつかの特徴、例えば、患者の服薬遵守の改善、投与の利便性の改善、及び皮下注射部位の反応の欠如を有する。
【０１７１】
今日まで、抗ｍｉＲ化合物を含むオリゴヌクレオチドの経口投与は、十分に特性評価されていない。したがって、修飾オリゴヌクレオチドの経口投与を、実験動物モデルで評価した。修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列、長さ、化学修飾パターン、及びコンジュゲート部分の存在が異なっていた。予期せぬことに、特定の修飾オリゴヌクレオチドの経口投与は、皮下投与後に観察されたものに匹敵する薬力学的活性を示すことが観察された。さらに、標的組織で検出された修飾オリゴヌクレオチドの量が、皮下投与された同じ化合物で検出された量と比較して比較的少ない場合、強力な薬力学的活性が観察された。
【０１７２】
したがって、標的ＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の対象への経口投与の方法が本明細書に提供される。標的ＲＮＡは、例えば、マイクロＲＮＡ、プレメッセンジャーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、または長鎖非コードＲＮＡであり得る。
【０１７３】
特定の方法
標的ＲＮＡの活性を阻害する方法が本明細書に提供され、方法は、標的ＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜２５個の連結ヌクレオチドの長さを有し、投与は、経口投与である。特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、マイクロＲＮＡである。特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、プレメッセンジャーＲＮＡである。特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡである。特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、長鎖非コードＲＮＡである。
【０１７４】
特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、腎臓に存在し、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドからなる。特定の実施形態では、標的ＲＮＡは、肝臓に存在し、化合物は、コンジュゲート部分に連結された修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１７５】
特定の実施形態では、対象は、標的ＲＮＡによって媒介される疾患を有する。特定の実施形態では、化合物の経口投与は、標的ＲＮＡによって媒介される疾患の１つ以上の症状を改善する。
【０１７６】
マイクロＲＮＡの活性を阻害する方法が本明細書に提供され、方法は、マイクロＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜２５個の連結ヌクレオチドの長さを有し、投与は、経口投与である。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡは、腎臓に存在し、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドからなる。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡは、肝臓に存在し、化合物は、コンジュゲート部分に連結された修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０１７７】
特定の実施形態では、対象は、マイクロＲＮＡによって媒介される疾患を有する。特定の実施形態では、化合物の経口投与は、マイクロＲＮＡによって媒介される疾患の１つ以上の症状を改善する。
【０１７８】
特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、肝細胞を本明細書に提供される化合物と接触させることを含む。特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、腎細胞を本明細書に提供される化合物と接触させることを含む。
【０１７９】
治療に使用するための、標的ＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の経口投与のための方法が本明細書に提供される。
【０１８０】
治療に使用するための、マイクロＲＮＡに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の経口投与のための方法が本明細書に提供される。
【０１８１】
特定の化合物及び組成物
特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物の経口投与を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物の経口投与を含む。
【０１８２】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜２５個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜２１個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜１８個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜１５個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６〜１２個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１０個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１２個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１３個の連結ヌクレオシドの長さを有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、６個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、７個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、８個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、９個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１１個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１３個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１４個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１５個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１６個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１７個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１８個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２１個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２２個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２３個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２４個の連結ヌクレオシド長である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２５個の連結ヌクレオシド長である。
【０１８３】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、標的ＲＮＡの核酸塩基配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、または１００％相補的である。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡに対して少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０１８４】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡの核酸塩基配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０１８５】
修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結（例えば、各ホスホロチオエート連結及び各ホスホジエステル連結）において、非架橋ヘテロ原子（例えば、Ｓ−またはＯ−）は、プロトン化される得か、またはＮａ＋、Ｋ＋などの対イオンと会合され得る。化合物の薬学的に許容される塩は、分子あたりのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル連結が存在するよりも少ないカチオン性対イオン（Ｎａ＋、Ｋ＋など）を含み得る（すなわち、いくつかのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル連結は、プロトン化され、いくつかは、対イオンと会合される）。例えば、９個の連結ヌクレオチド長である修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたり８個未満のカチオン性対イオン（Ｎａ＋、Ｋ＋など）を含み得る。すなわち、いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、平均して、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたり１、２、３、４、５、６、または７個のカチオン性対イオンを含み得、残りのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル連結は、プロトン化されている。
【０１８６】
本明細書に提供される化合物、及び薬学的に許容される希釈剤を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、水溶液である。特定の実施形態では、水溶液は、生理食塩水である。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される希釈剤は、滅菌希釈剤であると理解される。
【０１８７】
特定の修飾
修飾オリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結に対する１つ以上の修飾を含み得る。例えば、細胞取り込みの増強、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の増強、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増大などの望ましい特性のために、非修飾形態よりも修飾核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結のほうが選択され得る。
【０１８８】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例は、２’−修飾ヌクレオシドである。
【０１８９】
特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。特定の実施形態では、修飾糖部分を含む修飾ヌクレオシドは、非修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾糖は、修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’−修飾ヌクレオシドである。
【０１９０】
特定の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分を含む。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、アルファ配置のＤ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、ベータ配置のＤ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、アルファ配置のＬ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、ベータ配置のＬ糖である。
【０１９１】
特定の実施形態では、二環式糖部分は、２’−炭素原子と４’−炭素原子との間の架橋基を含む。二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。特定の実施形態では、以下に示すように、二環式ヌクレオシドとしては、限定されないが、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも称される）、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡが挙げられる。
【化５】
2021531278.tif 000006
式中、Ｂｘは、核酸塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０１９２】
特定の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０１９３】
特定の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０１９４】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド間修飾を含む。特定のそのような実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、リン原子を含む。
【０１９５】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。
【０１９６】
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、２−アミノピリジン、及び２−ピリドンから選択される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、及び５−プロピニルシトシンを含む、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、及びＯ−６置換プリンから選択される。
【０１９７】
特定のコンジュゲート構造
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチド及びコンジュゲート部分を含む化合物が本明細書に提供され、コンジュゲート部分は、ある標的細胞タイプへの化合物の送達を改善する。
【０１９８】
コンジュゲート化合物は、以下の構造Ｃによって記載され得、
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ
式中、各Ｌは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり、各Ｎは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり、Ｘ１は、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、Ｘ２は、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１９９】
例えば、抗ｍｉＲ−１２２化合物ＲＧ６６５０は、構造Ｃの以下の実施形態によって記載され得、
【化６】
2021531278.tif 000007
式中、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ構造ＵＳＣＳＡＣＳＡＣＳＴＣＳＣＳ（ＲＧ４７７３）を有し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結であり、Ｘ１は、ホスホジエステル連結であり、ｍは、１であり、Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｘ２は、ホスホジエステル連結であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に連結されている。
【０２００】
特定の実施形態では、構造Ｃの１つ以上のリガンドは、ＧａｌＮＡｃ部分のように、肝臓への取り込みを促進するリガンドであり得る。そのようなリガンドとしては、コレステロール、及び限定されないが、ガラクトースまたはガラクトース誘導体などのアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に対して親和性を有する他のリガンドが挙げられる。特定の実施形態では、ＡＳＧＰＲに対して親和性を有するリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、またはＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンである。
【０２０１】
特定の実施形態では、ｎが１より大きい場合、リンカーは、化合物の残りの部分（すなわち、修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）、Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ、Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯなど）に２つ以上のＬを連結することができる足場を含む。いくつかのそのような実施形態では、化合物（構造Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤの化合物など）のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｅを含み、
【化７】
2021531278.tif 000008
式中、各Ｌは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり、Ｓは、足場であり、Ｑ’及びＱ’’は、独立して、連結基である。
【０２０２】
特定の実施形態では、各Ｑ’及びＱ’’は、独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。
【０２０３】
特定の実施形態では、足場は、２、３、４、または５個のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに連結する。特定の実施形態では、足場は、３個のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに連結する。
【０２０４】
非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉ）であり、
【化８】
2021531278.tif 000009
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２０６】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉ）であり、
【化９】
2021531278.tif 000010
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈまたはメチルである。
【０２０８】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉｉ）であり、
【化１０】
2021531278.tif 000011
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２１０】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｖ）であり、
【化１１】
2021531278.tif 000012
式中、Ｌ１及びＬ２は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２１２】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖ）であり、
【化１２】
2021531278.tif 000013
式中、Ｌ１及びＬ２は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２１４】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉ）であり、
【化１３】
2021531278.tif 000014
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２１６】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉ）であり、
【化１４】
2021531278.tif 000015
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され、Ｚ及びＺ’は、各々独立して、Ｏ及びＳから選択される。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＰ原子上のＺまたはＺ’は、Ｓであり、他方のＺまたはＺ’は、Ｏである（すなわち、ホスホロチオエート連結）。いくつかの実施形態では、各−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、Ｚ及びＺ’は、両方とも、少なくとも１つのＰ原子上のＯである（すなわち、ホスホジエステル連結）。いくつかの実施形態では、各−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホジエステル連結である。
【０２１８】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉｉ）であり、
【化１５】
2021531278.tif 000016
式中、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３は、各々独立して、リガンドであり、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、連結基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、及びＱ’’は、各々独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びブチルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、各々、Ｈ及びメチルから選択される。
【０２２０】
非限定的な例示的な足場及び／または足場を含むリンカー、ならびにそれらの合成は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３２３０号、米国特許第８，１０６，０２２  Ｂ２号、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５０９  Ａ１号、米国特許第５，９９４，５１７号、米国特許第７，４９１，８０５  Ｂ２号、米国特許第８，３１３，７７２  Ｂ２号、Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１，３９１−４６９に記載されている。
【０２２１】
特定の実施形態では、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｆを含み、
【化１６】
2021531278.tif 000017
式中、
Ｂは、―Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、及び―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ”）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され、
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり、
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、及びベンジルから選択され、
Ｚ、Ｚ’、及びＺ”は、各々独立して、Ｏ及びＳから選択され、
各Ｎは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、
ｍは、１〜５であり、
Ｘは、ホスホジエステル連結及びホスホロチオエート連結から選択され、
Ｙは、ホスホジエステル連結であり、
波線は、残りのリンカー及びリガンド（複数可）との結合を示す。
【０２２２】
特定の実施形態では、波線は、上記の構造Ｅとの結合を示す。
【０２２３】
特定の実施形態では、ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。特定の実施形態では、ｎは、１である。特定の実施形態では、ｎは、２である。特定の実施形態では、ｎは、３である。特定の実施形態では、ｎは、４である。特定の実施形態では、ｎは、５である。
【０２２４】
特定の実施形態では、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｇを含み、
【化１７】
2021531278.tif 000018
式中、
Ｂは、―Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、及び―Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され、
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり、
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、及びベンジルから選択され、
Ｚ、Ｚ’、及びＺ’’は、各々独立して、Ｏ及びＳから選択され、
各Ｎは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、
ｍは、１〜５であり、
Ｘは、ホスホジエステル連結及びホスホロチオエート連結から選択され、
Ｙは、ホスホジエステル連結であり、
各Ｌは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり、Ｓは、足場であり、Ｑ’及びＱ’’は、独立して、連結基である。
【０２２５】
特定の実施形態では、各Ｑ’及びＱ’’は、独立して、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、及び６−アミノヘキサン酸から選択される。
【０２２６】
化合物の非限定的な例示的なＬｎ−リンカー部分（例えば、構造ＦまたはＧの）は、以下の構造Ｈに示され、
【化１８】
2021531278.tif 000019
式中、波線は、修飾オリゴヌクレオチドへの、例えば、構造ＢにおけるＸ１への、または例えば、構造ＣもしくはＤにおけるＸもしくはＹへの付着を示す。
【０２２７】
特定の実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ａを有し、
Ｌｎ−リンカー−ＭＯ
式中、各Ｌは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、化合物は、構造Ｊを有し、
【化１９】
2021531278.tif 000020
式中、各Ｎは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり、Ｘ１及びＸ２は、各々独立して、ホスホジエステル連結またはホスホロチオエート連結であり、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０２２９】
特定の実施形態では、Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも１つは、ホスホジエステル連結である。特定の実施形態では、Ｘ１及びＸ２の各々は、ホスホジエステル連結である。
【０２３０】
特定の実施形態では、ｍは、１である。特定の実施形態では、ｍは、２である。特定の実施形態では、ｍは、３、４、または５である。特定の実施形態では、ｍは、２、３、４、または５である。特定の実施形態では、ｍが１より大きい場合、Ｎｍの各修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間連結またはホスホロチオエートヌクレオシド間連結によって、Ｎｍの隣接する修飾または非修飾ヌクレオシドに結合され得る。
【０２３１】
本明細書に記載の実施形態のいずれにおいても、Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり得、各Ｎ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｐは、０〜４であり、Ｎ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである。
【０２３２】
特定の実施形態では、ｐは、０である。特定の実施形態では、ｐは、１、２、３、または４である。特定の実施形態では、ｐが１、２、３、または４である場合、各Ｎ’は、非修飾糖部分を含む。
【０２３３】
特定の実施形態では、非修飾糖部分は、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである。特定の実施形態では、β−Ｄ−デオキシリボースは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンである。
【０２３４】
ｐが１、２、３、または４である特定の実施形態では、Ｎ’は、プリン核酸塩基を含む。特定の実施形態では、Ｎ’’は、プリン核酸塩基を含む。特定の実施形態では、プリン核酸塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、及び７−メチルグアニンから選択される。特定の実施形態では、Ｎ’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。特定の実施形態では、Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。
【０２３５】
特定の実施形態では、ｐは、１であり、Ｎ’及びＮ’’は、各々、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’及びＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結によって連結されている。特定の実施形態では、ｐは、１であり、Ｎ’及びＮ’’は、各々、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’及びＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結によって連結されている。特定の実施形態では、ｐは、１であり、Ｎ’及びＮ’’は、各々、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’及びＮ’’は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結によって連結されている。
【０２３６】
ｐが１、２、３、または４である特定の実施形態では、Ｎ’は、ピリミジン核酸塩基を含む。特定の実施形態では、Ｎ’’は、ピリミジン核酸塩基を含む。特定の実施形態では、ピリミジン核酸塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、及び５，６−ジヒドロウラシルから選択される。
【０２３７】
特定の実施形態では、各Ｎの糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、及び二環式糖部分から選択される。特定の実施形態では、各二環式糖部分は、独立して、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、及びＥＮＡ糖部分から選択される。特定の実施形態では、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。特定の実施形態では、ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である。
【０２３８】
特定の実施形態では、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に連結されたコンジュゲート部分を含む。特定の実施形態では、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に連結されたコンジュゲート部分を含む。特定の実施形態では、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に連結されたコンジュゲート部分を含む。特定の実施形態では、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に連結された第１のコンジュゲート部分と、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に連結された第２のコンジュゲート部分とを含む。
【０２３９】
特定の代謝産物
インビトロまたはインビボでのエキソヌクレアーゼ及び／またはエンドヌクレアーゼへの曝露時に、化合物は、化合物全体の様々な位置で切断を受け得る。そのような切断の生成物は、親化合物のある程度の活性を保持し得るので、それ自体が、活性代謝物と見なされる。したがって、化合物の代謝産物は、本明細書に記載の方法で使用され得る。特定の実施形態では、（非コンジュゲートまたはコンジュゲート）修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端及び／または３’末端で切断を受け、親修飾オリゴヌクレオチドと比較して、５’末端及び／または３’末端に１、２、または３つ少ないヌクレオチドを有する代謝産物をもたらす。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端で切断を受け、５’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドと比較して、５’末端に１つ少ないヌクレオチドを有する代謝産物をもたらす。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端で切断を受け、２つの５’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドと比較して、５’末端に２つ少ないヌクレオチドを有する代謝産物をもたらす。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端で切断を受け、３’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドと比較して、３’末端に１つ少ないヌクレオチドを有する代謝産物をもたらす。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端で切断を受け、２つの３’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドと比較して、３’末端に２つ少ないヌクレオチドを有する代謝産物をもたらす。
【０２４０】
コンジュゲート部分に連結された修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物はまた、修飾オリゴヌクレオチドとリガンドとの間のリンカー内の部位でも切断を受け得る。特定の実施形態では、切断により、コンジュゲート部分の一部を含む親修飾オリゴヌクレオチドが生じる。特定の実施形態では、切断により、修飾オリゴヌクレオチドとリガンドとの間のリンカーの１つ以上のサブユニットを含む親修飾オリゴヌクレオチドが生じる。例えば、化合物が、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯを有する場合、いくつかの実施形態では、切断により、Ｎｍの１つ以上のヌクレオチドを含む親修飾オリゴヌクレオチドが生じる。いくつかの実施形態では、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの切断により、親修飾オリゴヌクレオチドが生じる。いくつかのそのような実施形態では、例えば、化合物が、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯを有する場合、いくつかの実施形態では、切断により、Ｎｍのヌクレオチドをいずれも含まない親修飾オリゴヌクレオチドが生じる。
【０２４１】
特定の核酸塩基配列
実施例及び配列表に見られるものを含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の任意の核酸塩基配列は、核酸へのいかなる修飾からも独立している。したがって、配列番号によって定義される核酸は、独立して、１つ以上の糖部分、１つ以上のヌクレオシド間連結、及び／または１つ以上の核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含み得る。
【０２４２】
本出願に添付される配列表は、必要に応じて、各核酸塩基配列を「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして特定するが、実際には、それらの配列は、化学修飾の任意の組み合わせによって修飾され得る。当業者は、修飾オリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」などの指定がいくらか恣意的であることを容易に理解するであろう。例えば、２′−ＯＨ糖部分及びチミン塩基を含むヌクレオシドを含む修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖を有するＤＮＡ（ＤＮＡの天然２′−Ｈの場合は、２′−ＯＨ）、または修飾塩基（ＲＮＡの天然ウラシルの場合は、チミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして記載することができる。
【０２４３】
したがって、配列表中のものを含むがこれらに限定されない、本明細書に提供される核酸配列は、修飾核酸塩基を有するような核酸を含むがこれらに限定されない、天然または修飾ＲＮＡ及び／もしくはＤＮＡの任意の組み合わせを含有する核酸を包含することが意図されている。さらなる例であり、限定するものではないが、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、限定されないが、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものなどのＲＮＡ塩基、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの、ならびに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ここで、ｍｅＣは、５−メチルシトシンを示す）などの他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物など、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含する。同様に、核酸塩基配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、限定されないが、配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するものなどのＤＮＡ塩基、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの、ならびに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ここで、ｍｅＣは、５−メチルシトシンを示す）などの他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物など、そのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含する。
【０２４４】
特定の合成方法
修飾オリゴヌクレオチドは、当該技術分野で既知である自動化された固相合成方法を用いて作製し得る。固相合成中、ホスホルアミダイトモノマーは、固体支持体に共有結合しているヌクレオシドに順次結合する。このヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシドである。典型的には、カップリングサイクルは、４つのステップ：脱トリチル化（酸による５’−ヒドロキシル保護基の除去）、カップリング（支持体結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドへの活性化ホスホロアミダイトの付着）、酸化または硫化（酸化剤または硫化剤による新しく形成されたホスファイトトリメスターの変換）、及びキャッピング（未反応５’−ヒドロキシル基のアセチル化）を含む。最終カップリングサイクルの後、固体支持体に結合したオリゴヌクレオチドを、脱トリチル化ステップに供し、続いて切断及び脱保護ステップに供し、同時にオリゴヌクレオチドを固体支持体から放出し、保護基を塩基から除去する。固体支持体を濾過により除去し、濾液を濃縮し、得られた溶液を同一性及び純度について試験する。次いで、オリゴヌクレオチドを、例えば、アニオン交換樹脂が充填されたカラムを使用して精製する。
【０２４５】
ＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、非コンジュゲートオリゴヌクレオチドを生成した固相合成と同様に、自動化された固相合成を用いて作製し得る。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートオリゴヌクレオチドの合成中、ホスホルアミダイトモノマーは、固体支持体に共有結合しているＧａｌＮＡｃコンジュゲートに順次連結する。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートとＧａｌＮＡｃコンジュゲート固体支持体の合成は、例えば、米国特許第８，１０６，０２２号、及び国際出願公開第ＷＯ２０１３／０３３２３０号に記載されており、これらの各々は、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分を含むコンジュゲートなどの炭水化物含有コンジュゲートの合成、及び固体支持体に共有結合しているコンジュゲートの合成の説明のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４６】
特定の医薬組成物
本明細書に提供される化合物、及び薬学的に許容される希釈剤を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、水溶液である。特定の実施形態では、水溶液は、生理食塩水である。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される希釈剤は、滅菌希釈剤であると理解される。好適な投与経路としては、限定されないが、経口投与が挙げられる。
【０２４７】
特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物及び重炭酸ナトリウムを含む医薬組成物が、本明細書に提供される。
【０２４８】
特定の実施形態では、医薬組成物は、好適な希釈剤中で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整され、次いで滅菌条件下で凍結乾燥されている、本明細書に提供される化合物である。その後、凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドは、好適な希釈剤、例えば、水などの水溶液、または生理食塩水、ハンクス液、もしくはリンゲル液などの生理学的に適合性のある緩衝液で再構成される。特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、重炭酸ナトリウムの溶液で約９．０に調整される。再構成された生成物は、皮下注射または静脈内注入として投与される。凍結乾燥された医薬品は、２ｍＬのＩ型の透明なガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）にパッケージされ、ブロモブチルゴムクロージャーで栓をされ、アルミニウムのオーバーシールで密封され得る。
【０２４９】
特定の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位（例えば、錠剤、カプセル、ボーラスなど）の形態で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ〜２５０ｍｇから選択される範囲内の用量で本明細書に提供される化合物を含む。特定の実施形態では、そのような医薬組成物は、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、または２５０ｍｇから選択される用量で存在する本明細書に提供される化合物を含む。
【０２５０】
医薬組成物は、好適な安定剤、または高度に濃縮された溶液の調製を可能にするための医薬剤の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
【０２５１】
本明細書に提供される医薬組成物は、経口投与のために調製される。そのような実施形態のいくつかでは、医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む１つ以上の化合物を１つ以上の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって製剤化される。そのような担体のいくつかは、医薬組成物を、対象による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することを可能にする。
【０２５２】
特定の実施形態では、経口使用のための医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物と１個以上の固体賦形剤を混合することによって得られる。好適な賦形剤としては、脂肪酸、胆汁酸、キレート剤、及び非キレート性非界面活性剤などの浸透促進剤が挙げられる。特定の実施形態では、脂肪酸は、アラキドン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸、カプリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル１−モノカプレート、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカミチン、アシルコリン、及びモノグリセリド、またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。特定の実施形態では、胆汁酸は、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、グルコール酸、グリコール酸、グリコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、タウロ−２４，２５−ジヒドロフシジン酸ナトリウム、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウム、及びポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。特定の実施形態では、キレート剤は、ＥＤＴＡ、クエン酸、サリチル酸塩、コラーゲンのＮ−アシル誘導体、ラウレス−９、及びベータ−ジケトンのＮ−アミノアシル誘導体、またはそれらの混合物から選択される。特定の実施形態では、浸透促進剤は、カプリン酸ナトリウム（Ｃ１０）及び／またはカプリル酸ナトリウム（Ｃ１２）を含む。
【０２５３】
追加の好適な賦形剤としては、限定されないが、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。特定の実施形態では、そのような混合物は任意に粉砕され、補助剤が任意に添加される。特定の実施形態では、医薬組成物は、錠剤または糖衣錠コアを得るために形成される。特定の実施形態では、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど））が添加される。
【０２５４】
特定の実施形態では、糖衣錠コアは、コーティングされて提供される。特定のそのような実施形態では、任意に、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル、ポリエチレングリコール、及び／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含有し得る、濃縮糖液が使用され得る。染料または顔料は、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。
【０２５５】
特定の実施形態では、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチンでできた押し込み嵌めカプセルである。そのような押し込み嵌めカプセルのいくつかは、１つ以上のラクトース等の充填剤、デンプン等の結合剤、及び／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ならびに任意に安定剤と混合して、本発明の１つ以上の医薬剤を含む。特定の実施形態では、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチン及びグリセリンまたはソルビトールなどの可塑剤でできた軟性の密封カプセルである。特定の軟性カプセルでは、本発明の１つ以上の医薬剤は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体中で溶解または懸濁される。加えて、安定剤が添加され得る。
【０２５６】
特定の実施形態では、医薬組成物は、口腔投与のために調製される。そのような医薬組成物のいくつかは、従来の方法で製剤化された錠剤またはロゼンジである。特定の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、それらの当該技術分野で確立された使用レベルで、医薬組成物に従来見られる他の補助成分をさらに含有し得る。したがって、例えば、組成物は、例えば、鎮痒剤、収斂剤、局所麻酔薬、または抗炎症剤などの、追加の適合性のある薬学的に活性な材料を含有し得る。
【０２５７】
特定のキット
本発明は、キットも提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に提供される１つ以上の化合物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される化合物は、バイアル内に存在する。複数（１０個など）のバイアルは、例えば、分配パック内に存在することができる。いくつかの実施形態では、バイアルは、注射器で利用できるように製造されている。キットは、本明細書に提供される化合物を使用するための説明書も含有することができる。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に提供される化合物を対象に投与するために使用され得る。そのような事例では、本明細書に提供される少なくとも１つの化合物を含むことに加えて、キットは、以下：注射器、アルコールスワブ、綿球、及び／またはガーゼパッドのうちの１つ以上をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡに相補的な化合物は、バイアル内よりむしろ、事前に充填された注射器（例えば、ニードルガードを有する２７ゲージ、１／２インチのニードルを備えた単回投与注射器など）内に存在し得る。複数（１０個など）の事前に充填された注射器は、例えば、分配パック内に存在することができる。キットは、本明細書に提供される化合物を投与するための説明書も含有することができる。
【０２５９】
特定の実験モデル
特定の実施形態では、本発明は、実験モデルにおいて本明細書に提供される化合物を使用及び／または試験する方法を提供する。当業者は、そのような実験モデルのプロトコルを選択及び改変して、本明細書に提供される化合物を評価することができる。
【０２６０】
抗ｍｉＲ化合物の投与後のマイクロＲＮＡのアンチセンス阻害の効果は、当該技術分野で既知である様々な方法によって評価し得る。特定の実施形態では、これらの方法を使用して、インビトロまたはインビボでの細胞または組織中のマイクロＲＮＡレベルを定量化する。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化は、マイクロアレイ分析によって測定される。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓブランド）などのいくつかの市販のＰＣＲアッセイのうちの１つによって測定される。
【０２６１】
抗ｍｉＲ化合物のインビトロ活性は、ルシフェラーゼ細胞培養アッセイを使用して評価し得る。このアッセイでは、マイクロＲＮＡルシフェラーゼセンサー構築物は、ルシフェラーゼ遺伝子に融合した目的のマイクロＲＮＡの１つ以上の結合部位を含有するように設計されている。マイクロＲＮＡがルシフェラーゼセンサー構築物内のその同族部位に結合する場合、ルシフェラーゼの発現が抑制される。適切な抗ｍｉＲが細胞に導入される場合、それは標的マイクロＲＮＡに結合し、ルシフェラーゼ発現の抑制を緩和する。したがって、このアッセイでは、目的のマイクロＲＮＡの効果的な阻害剤である抗ｍｉＲが、ルシフェラーゼ発現の増加を引き起こす。
【０２６２】
抗ｍｉＲ化合物の活性は、マイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルを測定することによって評価し得る。マイクロＲＮＡは、１つ以上の標的ＲＮＡ内の相補的部位に結合して、標的ＲＮＡの抑制をもたらすため、マイクロＲＮＡの阻害は、マイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルの増加（すなわち、抑制解除）をもたらす。１つ以上の標的ＲＮＡの抑制解除は、インビボまたはインビトロで測定し得る。例えば、ｍｉＲ−１２２の標的は、アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）である。ｍｉＲ−１２２の阻害はＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡのレベルの上昇をもたらすため、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを使用して、抗ｍｉＲ−１２２化合物の阻害活性を評価し得る。
【実施例】
【０２６３】
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態をより完全に例示するために提示されている。しかしながら、それらは、本発明の広い範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。当業者は、本発明の趣旨から逸脱することなく、様々な化合物を設計するために、この発見の基礎となる原理を容易に採用するであろう。
【０２６４】
実施例１：
オリゴヌクレオチドの経口投与は、皮下投与に対して有利であり得るいくつかの特徴、例えば、患者の服薬遵守の改善、投与の利便性の改善、及び皮下注射部位の反応の欠如を有する。今日まで、抗ｍｉＲ化合物の経口投与は、十分に特性評価されていない。したがって、抗ｍｉＲ化合物の経口投与を、実験動物モデルで評価した。
【０２６５】
表１は、マイクロＲＮＡに相補的な非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの配列及び糖部分を示す。ＲＧ５１１６は、ｌｅｔ−７のヌクレオチド１〜１９に１００％相補的である。ＲＧ５３６５は、ｌｅｔ−７のヌクレオチド１〜９に１００％相補的である。ＲＧ７４４３は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオチド２〜１０に１００％相補的である。下付き文字「Ｄ」が続くヌクレオシドは、β−デオキシリボヌクレオチドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドは、２’−Ｏ−メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドは、２’−フルオロヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。特に明記しない限り、すべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、すべてのシトシンは、非メチル化シトシンである。
【０２６６】
【表１】
2021531278.tif 000021
【０２６７】
表２は、修飾オリゴヌクレオチド及びコンジュゲート部分を含む、化合物の構造を示す。
【０２６８】
【表２】
2021531278.tif 000022
構造Ｃ：
【化２０】
2021531278.tif 000023
構造Ｊ：
【化２１】
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【０２６９】
抗ｌｅｔ−７化合物の薬力学的活性
抗ｌｅｔ−７化合物の薬力学的（ＰＤ）活性を、多重遺伝子のＰＤシグネチャを使用して評価した。抗ｍｉＲを用いて治療した後、１４〜１８個の検証済みｌｅｔ−７標的遺伝子の発現の変化を、ＲＴ−ＰＣＲで測定する。選択したｌｅｔ−７標的遺伝子の倍率変化のｌｏｇ２を平均化し、その平均を、薬力学的活性の指標として使用されるｌｅｔ−７  ＰＤシグネチャスコア（ｌｅｔ−７  ＰＤ  ｓｉｇ）と見なす。
【０２７０】
各５匹のマウス群を、抗ｌｅｔ−７化合物を用いて治療した。投与量及び投与経路を表３に示す。ここで、「ｓ．ｃ．」は皮下投与を示し、「ｐ．ｏ．」は経口投与を示す。抗ｍｉＲ化合物は、皮下投与の場合、ＰＢＳ中で送達した。経口投与される抗ｍｉＲ化合物は、ＰＢＳ溶液中で調製し、ｐＨ９．５になるまで０．３Ｍ重炭酸ナトリウム（ＢＣ）を添加した。経口投与の場合、動物は、事前に１２時間絶食させた。すべての治療群において、マウスに単回投与し、４日後に屠殺した。肝臓、腎臓、及び結腸組織を、薬力学的及び薬物動態学的分析のために収集した。ＲＮＡを各組織から単離し、各群の平均ｌｅｔ−７  ＰＤシグネチャスコアを決定した。
【０２７１】
【表３】
2021531278.tif 000025
【０２７２】
表３に示すように、腎臓では、経口投与された１００ｍｇ／ｋｇの９−ｍｅｒのＰＤ活性は、皮下投与された３０ｍｇ／ｋｇの９−ｍｅｒのＰＤ活性に匹敵する。肝臓では、９−ｍｅｒのＰＤ活性は皮下投与後のほうが高いが、経口投与した場合にも９−ｍｅｒはＰＤ効果を示す。特に、経口投与後の強力なＰＤ効果は、より短い９−ｍｅｒの化合物で観察されるが、１９−ｍｅｒまたはコレステロールコンジュゲート１９−ｍｅｒでは観察されない。
【０２７３】
抗ｌｅｔ−７化合物の薬力学的活性−用量応答
経口投与された抗ｍｉＲのＰＤ活性をさらに評価するために、３〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のＲＧ５３６５で追加の実験を行った。
【０２７４】
表４に示すように、各５匹のマウス群を、抗ｌｅｔ−７化合物を用いて治療した。ここで、「ｓ．ｃ．」は皮下投与を示し、「ｐ．ｏ．」は経口投与を示す。抗ｍｉＲ化合物は、皮下投与の場合、ＰＢＳ中で送達した。経口投与される抗ｍｉＲ化合物は、ＰＢＳ溶液中で調製し、ｐＨ９．５になるまで０．３Ｍ重炭酸ナトリウム（ＢＣ）を添加した。経口投与の場合、動物は、事前に１２時間絶食させた。すべての治療群について、マウスに単回投与し、４日後に屠殺した。肝臓、腎臓、及び結腸組織を、薬力学的及び薬物動態学的分析のために収集した。ＲＮＡを各組織から単離し、各群の平均ｌｅｔ−７  ＰＤシグネチャスコアを決定した。
【０２７５】
【表４】
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2021531278.tif 000027
【０２７６】
この実験では、治療後に肝臓及び腎臓に存在する抗ｍｉＲの量も評価した。
【０２７７】
抗ｍｉＲ化合物の組織濃度を、溶解緩衝液中でのタンパク質消化を使用して化合物を抽出し、続いて、化合物に対して配列相補性を有する蛍光プローブに抗ｍｉＲ化合物をハイブリダイズさせることによって測定した。ハイブリダイゼーション後、化合物の同一性及び濃度を、蛍光と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＦＬ）を使用して評価した。
【０２７８】
【表５】
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【０２７９】
この実験では、経口投与後、９−ｍｅｒは、腎臓において統計的に有意な用量依存性のＰＤ効果を示した。統計的に有意なＰＤ効果は、肝臓において最高用量の９−ｍｅｒで観察されたが、３つの最低用量ではＰＤ効果は観察されなかった。以前の実験と同様に、経口投与後、肝臓及び腎臓におけるＰＤ効果は、９−ｍｅｒで観察されたが、１９−ｍｅｒでは観察されなかった。興味深いことに、９−ｍｅｒの経口投与後に腎臓で検出された抗ｍｉＲの量は、皮下投与後に検出された量よりも少なかったが、ＰＤ効果は相当なものであった。この観察は、経口投与後、比較的少量の抗ｍｉＲ化合物に腎臓が曝露されることによって、強力なＰＤ効果が達成できることを示唆している。
【０２８０】
抗ｍｉＲ−１２２化合物の薬力学的活性
追加のマイクロＲＮＡであるｍｉＲ−１２２を標的とする抗ｍｉＲのＰＤ効果を評価するために、実験を行った。ｌｅｔ−７を標的とするＲＧ５３６５は、本明細書に記載の他の実験と比較するために含んだ。
【０２８１】
表６に示すように、各５匹のマウス群を、抗ｌｅｔ−７化合物及び抗ｍｉＲ−１２２化合物を用いて治療した。ここで、「ｓ．ｃ．」は皮下投与を示し、「ｐ．ｏ．」は経口投与を示す。抗ｍｉＲ化合物は、皮下投与の場合、ＰＢＳ中で送達した。経口投与される抗ｍｉＲ化合物は、ＰＢＳ溶液中で調製し、ｐＨ９．５になるまで０．３Ｍ重炭酸ナトリウム（ＢＣ）を添加した。経口投与の場合、動物は、事前に１２時間絶食させた。すべての治療群について、マウスに単回投与し、４日後に屠殺した。肝臓及び腎臓組織を、薬力学的及び薬物動態学的分析のために収集した。ＲＮＡを肝臓及び腎臓から単離した。
【０２８２】
抗ｌｅｔ−７化合物については、ｌｅｔ−７  ＰＤシグネチャスコアを、肝臓組織及び腎臓組織の両方について生成した。抗ｍｉＲ−１２２化合物については、肝臓及び腎臓におけるＡＬＤＯＡ抑制を、ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【０２８３】
【表６】
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【表７】
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【０２８４】
肝臓におけるＲＧ６６５０（＊）については、１匹を除くすべての動物の結果が定量化できなかったため、平均ｕｇ／ｇは報告しない。
【０２８５】
この実験では、経口投与後、ｌｅｔ−７を標的とする９−ｍｅｒは、腎臓及び肝臓において統計的に有意なＰＤ効果を示した。抗ｍｉＲ−１２２化合物を用いた治療後のＰＤ効果は観察されなかったが、ｍｉＲ−１２２阻害によるＡＬＤＯＡの抑制解除は、腎臓におけるＰＤ活性の最適な指標ではない場合がある。特に、非コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２化合物ＲＧ７４４３の経口投与では、肝臓において実質的なＰＤ効果をもたらさなかったが、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化合物ＲＧ６６５０の経口投与では、皮下投与後に観察されたものに匹敵するＰＤ効果をもたらした。
【０２８６】
抗ｌｅｔ−７及び抗ｍｉＲ−１７化合物の薬力学的活性
追加のマイクロＲＮＡであるｍｉＲ−１７を標的とする抗ｍｉＲのＰＤ効果を評価するために、実験を行った。ｌｅｔ−７を標的とするＲＧ５３６５は、本明細書に記載の他の実験と比較するために含んだ。
【０２８７】
表５に示すように、各５匹のマウス群を、抗ｍｉＲ化合物の単回投与で治療した。動物は、経口投与の前に１２時間絶食させた。動物は、投与の４日後に屠殺した。腎臓組織を、薬力学的及び薬物動態学的分析のために収集した。
【０２８８】
化合物のＰＤ効果を、相補的な抗ｍｉＲによるマイクロＲＮＡ標的の関与を直接測定するマイクロＲＮＡポリソームシフトアッセイ（ｍｉＰＳＡ）を使用することによって決定した（Ａｎｄｒｏｓａｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，４４：ｅ１３）。このアッセイを使用して、抗ｍｉＲ化合物が、正常なマウス及びＰＫＤマウスの腎臓においてマイクロＲＮＡ標的に直接関与する程度を決定した。ｍｉＰＳＡは、活性ｍｉＲＮＡが並進的に活性な高分子量（ＨＭＷ）ポリソームにおいてそれらのｍＲＮＡ標的に結合するのに対し、阻害されたｍｉＲＮＡは低ＭＷ（ＬＭＷ）ポリソームに存在するという原理に依存する。抗ｍｉＲを用いた治療により、マイクロＲＮＡのＨＭＷポリソームからＬＭＷポリソームへのシフト、すなわち、マイクロＲＮＡのＨＭＷポリソームからＬＭＷポリソームへの変位をもたらす。ｍｉＰＳＡアッセイから、変位の測定値、すなわちＰＳＡスコアを決定する。
【０２８９】
腎臓組織中の平均ＰＳＡスコア、及び腎臓組織中で検出された抗ｍｉＲの平均量を表８に示す。
【０２９０】
【表８】
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【０２９１】
表８に示すように、ＰＳＡ変位スコアで測定した場合、各９−ｍｅｒの抗ｍｉＲは、腎臓において有意なＰＤ効果を示した。興味深いことに、各９−ｍｅｒの経口投与後に腎臓で検出された抗ｍｉＲの量は、皮下投与後に検出された量よりも少なかったが、ＰＤ効果は相当なものであった。この観察は、経口投与後、皮下投与後よりも少量の抗ｍｉＲに腎臓が曝露されることによって、実質的なＰＤ効果を達成できることを示唆している。
【０２９２】
まとめると、これらの実験は、比較的低い組織レベルが検出されたにもかかわらず、標的組織（コンジュゲート抗ｍｉＲの場合は肝臓、非コンジュゲート抗ｍｉＲの場合は腎臓）において経口投与されたコンジュゲート及び非コンジュゲートの短い抗ｍｉＲ化合物の強力なＰＤ効果を示した。
【０２９３】
実施例２：追加の抗ｍｉＲ−１２２化合物
経口送達及び皮下送達された化合物の相対活性をさらに評価するために、様々な長さ、コンジュゲート部分、及びヌクレオシド間連結の追加の抗ｍｉＲ−１２２化合物を試験した。化合物を、表９に示す。ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートしている化合物は、実施例１における構造Ｃに示されるような構造を有し、ここで、Ｘ２は、ホスホジエステル連結であり、ｍは、１であり、Ｎｍは、β−Ｄ−デオキシヌクレオシド（ｄＡ）であり、Ｘ１は、ホスホジエステル連結であり、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。コレステロール部分とコンジュゲートしている化合物は、実施例１における構造Ｊに示されるような構造を有し、ここで、Ｘ２は、ホスホジエステル連結であり、ｍは、１であり、Ｎｍは、β−Ｄ−デオキシヌクレオシド（ｄＡ）であり、Ｘ１は、ホスホジエステル連結であり、ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０２９４】
この化合物のセットでは、試験された最長のオリゴヌクレオチドを含む化合物は、ＲＧ−１０１としても既知である１８−ｍｅｒのＲＧ２４５９であった。ＲＧ２４５９の一連のトランケーションを生成し、それぞれ１５、１４、１３、及び９個の連結ヌクレオシドの修飾オリゴヌクレオチドを有する化合物ＲＧ７４４１、ＲＧ３３９６、ＲＧ７４４２、及びＲＧ６６５０をもたらした。これらの４つの化合物の各々は、ホスホジエステル連結β−Ｄ−デオキシリボアデノシンを介して修飾オリゴヌクレオチドにコンジュゲートしているＧａｌＮＡｃ部分を含む。ＲＧ６３８６はＲＧ２４５９に類似しているが、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端の糖修飾が変更されている。ＲＧ８２１０は、ＲＧ６６５０と同じ化学修飾を有する修飾オリゴヌクレオチドを含むが、代わりに、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンを介したホスホジエステル連結を介してコレステロール部分とコンジュゲートしている。ＲＧ７４４３は、ＲＧ６６５０及びＲＧ８１２０の修飾オリゴヌクレオチドと同じ化学修飾パターンを有するが、コンジュゲートしていない。ＲＧ２６３４及びＲＧ３０５９は、両方とも、ホスホジエステル連結β−Ｄ−デオキシリボアデノシンを介してＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートしている、均一にｃＥｔ修飾された修飾オリゴヌクレオチドを含む。ＲＧ２６３４の修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結はホスホロチオエートであるが、ＲＧ３０５９のヌクレオシド間連結はホスホジエステルである。ＲＧ４４７４の修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−１２２の配列とのミスマッチを含み、ミスマッチ対照化合物として使用した。
【表９】
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【０２９５】
下付き文字「Ｄ」が続くヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し、下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し、下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドを示す。ホスホジエステルヌクレオシド間連結は、上付き文字「Ｏ」で示され、他のすべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートである。「Ｍｅ」は、ヌクレオシドの塩基上の５−メチル基を示す。
【０２９６】
化合物ＲＧ２４５９、ＲＧ６６５０、ＲＧ６３８６、ＲＧ７４４１、ＲＧ２６３４、及びＲＧ７４４２は、第１の実験で試験した。化合物ＲＧ７４４３、ＲＧ６６５０、ＲＧ４４７４、ＲＧ３０５９、ＲＧ３３９６、及びＲＧ８１２０は、第２の実験で試験した。各３匹のマウス群に、１００ｍｇ／ｋｇの用量を経口投与（ｐ．ｏ．）するか、または１０ｍｇ／ｋｇの用量を皮下投与（ｓ．ｃ．）した。抗ｍｉＲ化合物は、皮下投与の場合、ＰＢＳ中で送達した。経口投与される抗ｍｉＲ化合物は、ＰＢＳ溶液中で調製し、ｐＨ９．５になるまで０．３Ｍ重炭酸ナトリウム（ＢＣ）を添加した。経口投与の場合、動物は、事前に１２時間絶食させた。すべての治療群について、マウスに単回投与し、２、４、または７日後に屠殺した。肝臓組織を、薬力学的及び薬物動態学的分析のために収集した。ＲＮＡを肝臓から単離し、肝臓におけるＡＬＤＯＡ抑制をＲＴ−ＰＣＲを介して測定し、ハウスキーピング遺伝子ＲｐｌｐＯ（これもまたＲＴ−ＰＣＲによって測定した）に対して正規化した。
【０２９７】
ＡＬＤＯＡの抑制解除は、研究終了２日目、４日目、及び７日目でほぼ同様であったため、２日目、４日目、及び７日目の各治療の平均ＡＬＤＯＡ抑制解除を計算し、図１に示す。
【０２９８】
皮下投与した場合、化合物は、同様の活性を示した。しかしながら、経口投与後、化合物活性の差異は明らかであった。特に、経口投与後、より短い抗ｍｉＲ長を有する化合物は、より高い活性に向かう傾向を示した。例えば、１８、１６、及び１４個の連結ヌクレオシドの抗ｍｉＲを含むＲＧ２４５９、ＲＧ６３８６、及びＲＧ７４４１は、ＰＢＳ処理と比較してＡＬＤＯＡの実質的な抑制解除をもたらさなかった。さらに、非コンジュゲート９−ｍｅｒのＲＧ７４４３及びホスホジエステル連結８−ｍｅｒを有するコンジュゲート化合物ＲＧ３０５９は、ＡＬＤＯＡを実質的に抑制解除しなかった。陰性対照ＲＧ４４７４は、ＡＬＤＯＡを抑制解除しなかった。１２−ｍｅｒの抗ｍｉＲを含むＲＧ７４４２、及び１３−ｍｅｒの抗ｍｉＲを含むＲＧ３３９６は、より活性であった。それぞれ９−ｍｅｒ及び８−ｍｅｒの抗ｍｉＲを含むＧａｌＮＡｃコンジュゲート化合物ＲＧ６６５０及びＲＧ２６３４は、ＡＬＤＯＡの抑制解除を示した。同様に、９−ｍｅｒの抗ｍｉＲを含むコレステロールコンジュゲートＲＧ８１２０は、ＡＬＤＯＡの抑制解除を示した。したがって、コンジュゲート化合物の活性は、抗ｍｉＲの長さが減少するにつれて増加し、より短い長さのコンジュゲート化合物が経口投与後により活性であることを示している。
【０２９９】
本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。また、そのような改変が、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることも意図されている。本出願に引用された各参考文献（ジャーナル記事、米国及び米国以外の特許、特許出願公報、国際特許出願公報、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号などを含むがこれらに限定されない）は、その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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